hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
認知症高齢者の秘めた力を引き出す医療・介護従事者による音楽療法実践モデルの開発

平成28年には、前年からの活動を継続し、特別養護老人ホームで実施している介護スタッフによる音楽活動への参加介入とビデオ振り返りと話しあいを繰り返しながら、参加者の変化、あ類は介護者の変化の要因を抽出し、それらの項目の整理を試みた。特に変化が怒る直前の瞬間に何が起こっているのかを、介護者の立場から分析した。重要な点としてあげられたのは、音楽的かつ身体的な「同期:シンクロナイセーション」の重要性であった。その同期の性質を深く分析したところ、単に行動が「共にある」というだけでなく、その背後にある「感性」においても同期する瞬間は、大きな変化の要因になることがあきらかとなった。なお、10月22日(土)には、公開研究中間報告会を北海道医療大学サテライトキャンパスにて開催し、認知症高齢者ケアにかかわる医療・リハビリ・介護職の方々約50人が参加された。研究協力者である介護スタッフたちの熱心な研究協力により、冬季の風邪やインフルエンザがあったものの、それ以外の定期的な音楽活動の実施や振り返りが行われている。また、10月22日の中間報告会では、昨年に引き続き英国で認知症高齢者ケアの音楽療法にかかわる講師を迎え、「同期」に関するワークショップも実施した。本研究の目的は、認知症高齢者の「秘めた力」を最大限に引き出す音楽療法の介入スキルを明らかにし、それに基づいた医療・介護従事者による実用的かつ効果的な音楽療法モデルを開発することである。平成29年には、前年までに積み上げられた事例から効果的な介入の重要な要素として「同期(シンクロナイゼーション)」が抽出され、様々な「同期」を分類し、身体的同期や言語的同期、そして音楽的同期が存在することがわかった。また、介入する側にも内的な「同期」が起きている必要があることが判り、当事者だけでなく、介入する側の者が、当事者と向き合う姿勢が問われることになった。なお、これまでの分析結果は、第18回日本認知症ケア学会(2017年5月26日)にて発表し、石崎賞を受賞した。また、介護者自身の気づきと介入への影響について、the 15th World Congress of Muisc Therapy(2017年7月7日)に発表した。研究協力施設にてインフルエンザや風邪により、最終のデータ収集が困難であったことから、1年間の延長を申請した。本研究の目的は、重度認知症高齢者の「秘めた力」を最大限に引き出す音楽療法の介入スキルを明らかにし、それに基づいた医療・介護従事者による実用的かつ効果的な音楽療法モデルを開発することである。平成30年には、効果的な介入の重要な要素である「同期」が、実は様々な人間のコミュニケーションの場面においても相互的交流の重要な鍵となることがわかった。それは当事者だけに問うものでなく、介入者の内的同期がどのように起こるのか、それが相互的交流の中でどのように発展するのかを詳細に解明する=マイクロアナリシスの必要があると結論づけられた。また「同期」する音楽とは、私たち一人一人に潜在的に内在する音楽性=communicative musicalityであることが推測された。今年度は、北海道内の認知症高齢者の音楽療法に関わる医療・介護従事者2030名を対象(約5つの高齢者施設)に調査する予定であったが、ひとつの研究協力施設での音楽療法実践の調査に予定をはるかに超える時間がかかる事がわかった。
長鎖ノンコーディングRNAによる葉形成の分子機構の研究

我々はAS2と長鎖ノンコーディング(linc)RNAを基軸としてシロイヌナズナの葉の表・裏が形成される仕組みを研究したが、linc RNAの同定は不成功だった。一方、linc RNAと関連している次の様な研究が進んだ。1. AS2は核小体近傍で顆粒(AS2 body)を形成する。AS2のCxxCジンクフィンガー様配列(ZFL配列)は、AS2 body形成と葉の発生に必要だった。2. AS2はZFL配列依存的に標的遺伝子であるETTのエキソン1に結合した。3. ETTのエキソン6にあるCGは90%以上メチル化されていた。AS2と3つの核小体蛋白質はCGのメチル化の維持に必要だった。[I]Linc RNAの構造の研究:(1) FliとRli linc RNAの長さは約500ヌクレオチドであり、位置はETTの翻訳開始点から約2.5 kb上流であることが確認された。また、PCR法により、二本鎖RNAが存在していることが明確になった。(2) Linc RNAsの転写の仕組みは、まだ不明な点が多い。(3) Fli Rliと相同な配列の検索:シロイヌナズナゲノム上には存在していないことがわかった。[II]ETT遺伝子発現と葉の形態形成におけるLinc RNAの役割の研究:(1) Linc RNAsのETT発現への影響:FliとRliに対応するゲノムDNAへのT-DNA挿入変異体を分離した。その結果、1つの変異体ではRliの量が減少した。葉の発生に異常が見られ、ETT発現に対する正の因子である可能性が示唆された。(2) Linc RNAsの葉形成に対する役割:上記変異体の表現型を詳細に検討した。その結果、幼若葉的葉形成と栄養成長期の葉形成が長く続くことがわかった。[III] Linc RNAとタンパク質複合体の構造の研究:Linc RNAが存在する可能性がある核内顆粒(AS2 body:AS2タンパク質を含む顆粒)の細胞周期依存性を調べた。その結果、細胞周期のM期に蓄積し、それぞれがM期中期以降に倍化し、倍化したそれぞれが娘細胞に分配された。このように、正確に同じ数のAS2 bodyが分配されることから、何らかの分配の維持機構(non-stochastic distribution)が存在すると期待される。栄養成長期の成長点から調整したRNA標品からは分子クローニングができなかった。(3) Fli Rliと相同な配列の検索:ETTの上流域以外には存在していないことがわかった。変異体解析により、ETT発現に対する正の因子である可能性が示唆された。(2) Linc RNAsの葉形成に対する役割:変異体では花芽形成に至るまでの栄養成長期が長いらしい。さらに微小管との関連性が指摘された。また、昨年度の計画の中で遅れていたETTメチル化の研究に関して進展があった。その結果、1つの変異体ではRliの量が減少していた。(2) Linc RNAsの葉形成に対する役割:上記変異体解析で、幼若葉的葉形成と栄養成長期の葉形成が長く続くことがわかった。[III]Linc RNAとタンパク質複合体の構造の研究:核小体近傍に存在するAS2bodyとLinc RNAの関連は不明であるが、その形成が細胞周期に依存していることがわかった。つまり細胞周期のM期に蓄積し、中期に倍化し、それぞれが正確に娘細胞に分配された(non-stochastic distribution )。一方、微小管の重合阻害剤処理により、AS2 bodiesの形成が抑制されることがわかった。最近核小体機能に関わる遺伝子の変異体ではETT配列内部のDNAメチル化が低下していることがわかった。

これは、Linc RNAがDNAメチル化を介してETTの発現を制御している可能性を示す。以上総合すると、達成レベルは60%くらいであると考えられる。[I]Linc RNAの構造の研究:(1)相補的なFliとRliのRNA分子の5'末端と3'末端の構造を決定するために、栄養成長期の頂芽からRNA分子を精製したが、結論が得られなかった。再度、花芽からRNAを抽出して実験を試みたが、Fli, Rliに対応するRNA分子は検出されなかった。[II]ETT遺伝子発現と葉の形態形成におけるLinc RNAの役割の研究:昨年度の予備的研究により、Linc RNAコード領域のT-DNA挿入変異体では、Rli RNAの蓄積レベルが減少し、さらに標的遺伝子であるETT mRNAレベルも減少し、開花時期が遅れていると報告した。サンプル個体の量を増やした定量実験の結果、ETT mRNAレベルの減少と開花時期の遅れは正しと判断されたが、Rli RNAの蓄積の減少結果は再現性に乏しいことがわかった。[III] Linc RNAとタンパク質複合体の研究:我々は、AS2 body(AS2タンパク質を含む核小体近傍の顆粒)にLinc RNAが存在すると仮定し、その実証実験をしてきた。(1)酵母を用いたTwo-hybrid systemにより、AS2に結合する可能性がある多くのタンパク質のcDNAクローンを得た。その中には、ヒストンH3.1やサイクリンなどが含まれていた。(2)遺伝学的手法によりAS2 body形成に必要なAS2のアミノ酸配列としてジンクフィンガー様モチーフを同定した。このモチーフはDNAまたはRNA分子に結合する可能性がある。さらにAS2 bodyの研究に関しては、下記のような興味深い進展があった。[I]Linc RNAの構造の研究: Linc RNAの検出とそれらの末端部位の同定には至らなかったが、文献などによれば、世界で2ヵ所の研究グループが、我々と同じLinc RNAを検出し報告している。我々も当初は検出できたが、再現的ではなくなった。[II]ETT遺伝子発現と葉の形態形成におけるLinc RNAの役割の研究:FliとRliのLinc RNAがコードされるゲノム領域は、ETT転写の制御領域であり、AS1(AS2と複合体を作り機能する分子)の結合部位の近傍である。T-DNAの挿入変異体を用いた遺伝学的研究により、Linc RNAがコードされるゲノム領域が花芽形成を促進している可能性が示唆された。[III] Linc RNAとタンパク質複合体の研究:AS2bodyの精製を試みたが、成功しなかった。しかし、(1)酵母を用いたTwo-hybrid systemにより、AS2に結合する可能性があるタンパク質のcDNAクローンを多数得た。現在分子を同定しつつある。また、(2) AS2body形成に必要なAS2のアミノ酸配列を同定し、これらのアミノ酸配列と葉の形態形成との関連性を調べた。その結果、AS2のジンクフィンガー様モチーフの変異体などではas2-1変異植物を相補できなかった。AS2 body形成と葉の形態形成との間には密接な連関がある。(3) AS2
遺伝子工学による高汎用性iPS細胞の開発

iPS細胞ストック用いた他家移植では、移植細胞に対する免疫拒絶反応の制御が重大な問題となる。全HLAタイプを網羅するiPS細胞のストックを作成することは不可能であり、将来多くの患者に適用可能とするために様々なアプローチが必要である。CRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を用い、容易にHLA遺伝子の一部を改変できたが、場合により改変を起こした細胞を選択するための選択ベクターの利用が有効と思われた。樹立したベータ2m欠損iPS細胞はNK細胞の標的となる可能性が危惧されたため、HLA-Aなど単座の欠失細胞の作成を行うとともにこれらのT,NK細胞への免疫原性を評価する系の開発が重要を指摘した。1. HLA class I全欠損iPS細胞の作製(木村・大塚・佐藤)-「すでに樹立したiPS細胞用い、Tap1もしくはβ2mを標的としたsgRNAおよびCas9 mRNAをelectroporationにより導入する。Tap1もしくはβ2mの欠失によりHLA clas sI発現を失ったiPS細胞を分離、増殖させてHLA class I欠失iPS細胞を樹立する」という計画であったが、ヒトiPS細胞にCRISPR/Cas9システムを適用してβ2-microglobulin (β2m)遺伝子のExon1にゲノム編集を行い、β2m欠失iPS細胞の樹立に成功した。また、iPS細胞であるというためには、3胚葉への分化能力の保持が重要となるが、得られたβ2m欠失iPS細胞クローンを免疫不全マウスの腎皮膜下に移植し、神経細胞、骨格筋細胞、消化管上皮細胞など3胚葉すべてに分化する多分可能を保持している事を確認した。2. iPS細胞及びこれに由来する分化細胞のsyngeneicNK細胞感受性の評価(佐藤・木村)をin vitro, in vivo系で行う予定であったが、NOGマウスの準備等など、その準備段階にとどまった。3 .高汎用性(HLA class I部分欠損)iPS細胞の作製と評価(木村・佐藤)-(1)と同様にして、iPS細胞よりCRIS PR/Cas9システムにより、HLA-A、-B、-DRそれぞれを欠失した細胞を作製、分離し、HLA単座を欠失したiPS細胞の樹立に着手する予定としていたが、計画立案ができた。4.改良型Cas9を利用して標的配列をDNA両鎖に設定しoff targetを少なくする手法に着手する、としていたが、1で確立したβ2m欠失iPS細胞クローンのゲノム塩基配列を調べ、4塩基ミスマッチまでを許す条件では問題となるような変異(off target効果)が起こっていない事を確認した。しかし、今後は特異抗体の存在しないHLA遺伝子の編集、ノックアウトを効率よく行う必要が生じる。このため、抗体によらない選別方法を確立する必要が考えられる。そこで、CRISPR/Cas9法を実施する際、targeting sequenceを共存させ、標的となる場所に薬剤選択マーカー並びに蛍光色素を導入するシステムを構築した。この場合、当該配列に変異導入した細胞を薬剤により選択することができる。挿入配列は、選択後PiggyBac transposaseによって、痕跡なく除去することが可能なデザインとなっている。本法は、本研究計画における高汎用性iPS細胞の作成に限らず、様々な細胞株の自由なゲノム編集に有効な技術であると考える。また、点突然変異を導入するシステムも並行して進行しており、今年度に2つの遺伝子で点突然変異マウスを取得することに成功している。まだ条件はつかめないがいくつかの個体はホモ点突然変異個体である。末梢血T細胞よりCRISPR/Cas9システムにより、ClassI遺伝子を発現しないiPS細胞を昨年度樹立し、その成果を公表することができたが、一番懸念されるNK細胞への感受性(NK細胞のtargetとなるか否か?)をin vitroおよびin vivo系で評価する点での進捗はやや少なかったため。ベータ2m欠損iPS細胞より内皮細胞、網膜色素上皮細胞を分化誘導し免疫原性を検討したところ、NK細胞による攻撃が懸念された。また、未分化iPS細胞に対しては自己T細胞による反応がアロT細胞によるものより大きかった。後者については、成体では発現しない胎児性蛋白が自己MHCに提示されたものをT細胞が認識したものと推測される。前者についてはNK細胞がHLA分子を介した抑制シグナルから解除されたことによると考えられた。現在これらのリスクは試験管内の反応のみで評価せざるをえないが、ヒトT細胞、NK細胞を完全に再現するヒト化マウスの作成が行われれば、より生理的な条件で評価をすることが可能となる。このようなモデル動物を用いた評価系の開発が、今後の展開のために重要な方向性と考える。CRISPR/Cas9システムによるゲノム編集は極めて高効率であるが、欠失に成功した細胞の選別は必要である。ベータ2m欠損の場合は全てのHLA classI分子の発現が失われ、pan-HLA class I抗体による染色・フローサイトメーターによる分離で容易であった。しかし、HLA単座欠失細胞の場合、当該アロタイプを認識する優れた抗体が利用できないケースもあり得る。そこで、標的遺伝子部位の相同組換えを起こした細胞を選択し、選択後、不要配列を痕跡なく除去するシステムの開発を行った。これにはPiggyBac(PB)システムを用いた。700-1000bpのarmにpCAG-GFP-(IRES)-PuroRを挿入したコンストラクトを持つPBベクターを作成、CRISPR/Cas9適用時に共存させ、薬剤選択により相同組み換えを起こした細胞を選択。

続いてPB transposaseの導入により、痕跡なく不要配列を除去した細胞を得ることができた。さらにマウス受精卵を用いてこのシステムを点突然変異導入に応用する技術を開発し、すでに2遺伝子、複数のアレル導入にも成功した。HLA遺伝子におけるアレル変換が容易に実現可能なことを示せた。iPS細胞ストック用いた他家移植では、移植細胞に対する免疫拒絶反応の制御が重大な問題となる。全HLAタイプを網羅するiPS細胞のストックを作成することは不可能であり、将来多くの患者に適用可能とするために様々なアプローチが必要である。CRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を用い、容易にHLA遺伝子の一部を改変できたが、場合により改変を起こした細胞を選択するための選択ベクターの利用が有効と思われた。樹立したベータ2m欠損iPS細胞はNK細胞の標的となる可能性が危惧されたため、HLA-Aなど単座の欠失細胞の作成を行うとともにこれらのT,NK細胞への免疫原性を評価する系の開発が重要を指摘した。NK活性の実験まではいたらなかったが、Off targetのない分化能力の高いiPS細胞を樹立出来たことは、所期の目的を十分に果たしたと言えるから。CRISPR/Cas9系の有効性は本年度に十分に示されたため、今後はNK活性のassay系を中心にin vitroでのアッセイ系をまず確立する。H27年度に専門家から十分な情報を得ているため、系の確立そのものは十分可能である。一方in vivoでは直接的に移植する方法を含めてどのようなアッセイ系が考えられるかを十分検討したい。28年度が最終年度であるため、記入しない。分子生物学、実験動物学、発生工学、分子遺伝学1.HLA-A, B, DRなどの移植片拒絶に関すると思われる他の遺伝子に対して、CRISPR技術を駆使して遺伝子改変(多くは欠失)を引き続きiPS細胞に導入する。(佐藤、木村)2。HLA-A, B, DRホモ型の臍帯血を取得し、これらの他のMHC遺伝子型を同定する(木村)3。この臍帯血からiPS細胞を樹立するための細胞を増殖させる(佐藤)4。CRISPR技術によるHLA遺伝子発現欠失を引き続き試み、Off targetの可能性も塩基配列レベルで追究する(佐藤、木村)確定金額が概算金額をほんの少し下回ったため。廉価で消耗品を提供する業者があったため、2014年度の支出が減じたため消耗品費等に加算して使用する。2015年度の試薬購入等に充当し、十分な成果をあげたい。
地下水汚染浄化対策の実施による水質回復の影響について

本研究では,長期間の現場観測を通して地下水汚染浄化対策の一つであるエアースパージング技術(空気注入技術)の評価を行った.エアースパージング技術は,地下水中に空気を吹き込み,地下水を攪拌することで溶解している物質を注入空気に揮発させ,不飽和帯からガスとして除去するものである.この技術は,従来から行われている土壌ガス吸引・地下水揚水処理(二重抽出技術)と比べると,(1)汚染された地下水の処理が不要になる,(2)地上設備の設置が簡単,(3)費用が安くなる,(4)実施期間が短くなるなどの経済的利点がある.しかし,空気を吹き込むことで地下水が乱されるため,地下水や土壌ガス中の物質回収量に影響が生じる.また,汚染物質を周辺へ拡散させる危険性もある.すなわち,エアースパージング技術を効率的に実施するためには,地下環境中における異なる2つの流体(地下水と注入空気)の移動過程だけでなく,地下水中と注入空気中の物質輸送過程,および気液界面における物質の揮発過程を明らかにしておく必要がある.そこで,本研究ではエアースパージング技術が実施されている現場で長期間にわたって地下水圧力,土壌ガス圧力,汚染物質濃度を計測することで,注入空気の流路や影響範囲,空気注入による汚染物質濃度変化,および注入空気への汚染物質の揮発効果を確認し,水理学的視点から浄化対策技術の評価を行った.トリクロロエチレンやテトラクロロエチレンなどの揮発生物質で汚染された地下環境の修復技術として,土壌ガス吸引法やエア-スパージング法が考案され,現地に適用されつつある.土壌ガス吸引法は不飽和帯に負圧をかけて(土壌ガスの吸引を行い)ガス態の物質を除去する.この方法では地下水の揚水を同時に行う場合が多く(二重抽出法),地下水中に溶解している物質も除去できる.ただし,揚水した地下水は地上でばっ気処理を行う必要があり,処理水の処分方法が問題である.一方,エア-スパージング法は地下水中に空気を吹き込み,地下水の流れを攪乱することで溶解している物質を揮発させ,不飽和帯でガスとして除去する.この方法は二重抽出法と異なり,汚染された地下水の処理が不要になる利点がある.しかし,空気を吹き込むことで地下水の流れが乱されるので,地下水や土壌ガス中の物質の回収量に影響が生じる.また,汚染物質を周辺へ拡散させる危険性もある.すなわち,エア-スパージング法を適用するためには,注入空気の移動特性や空気の通過による地下水中の物質濃度変化を明らかにしておくことが重要である.そこで本現場実験では,トルエンやテトラクロロエチレンなどの揮発性物質で汚染された地下水中に空気を注入して,地下水圧力,土壌ガス圧力,物質濃度を計測し,注入空気の移動特性,影響範囲,および地下水浄化効果を検討した.本研究では,長期間の現場観測を通して地下水汚染浄化対策の一つであるエアースパージング技術(空気注入技術)の評価を行った.エアースパージング技術は,地下水中に空気を吹き込み,地下水を攪拌することで溶解している物質を注入空気に揮発させ,不飽和帯からガスとして除去するものである.この技術は,従来から行われている土壌ガス吸引・地下水揚水処理(二重抽出技術)と比べると,(1)汚染された地下水の処理が不要になる,(2)地上設備の設置が簡単,(3)費用が安くなる,(4)実施期間が短くなるなどの経済的利点がある.しかし,空気を吹き込むことで地下水が乱されるため,地下水や土壌ガス中の物質回収量に影響が生じる.また,汚染物質を周辺へ拡散させる危険性もある.すなわち,エアースパージング技術を効率的に実施するためには,地下環境中における異なる2つの流体(地下水と注入空気)の移動過程だけでなく,地下水中と注入空気中の物質輸送過程,および気液界面における物質の揮発過程を明らかにしておく必要がある.そこで,本研究ではエアースパージング技術が実施されている現場で長期間にわたって地下水圧力,土壌ガス圧力,汚染物質濃度を計測することで,注入空気の流路や影響範囲,空気注入による汚染物質濃度変化,および注入空気への汚染物質の揮発効果を確認し,水理学的視点から浄化対策技術の評価を行った.
訪問看護師の主観的責任の様相と勤務継続意志の関連

本研究は、訪問看護領域で働く看護職特有の主観的責任と勤務継続意志との関連を明らかにすることを目的とした。現役の訪問看護師への面接調査(2009年度)から、責任は、利用者のニーズに対し看護師が引き受ける範囲を決定し対応するときに認識されることが示された。質問紙調査(2010年度)の結果、「訪問看護継続意思あり」は81.7%であった。訪問看護師は、自らが負う責任は重いとしながらも、仕事は続けていきたいと考えている者が多いことが明らかになった。訪問看護領域で働く看護職特有の主観的責任と勤務継続意志、ストレスとの関連を明らかにし、職場環境の改善、離職低減、人材育成の方途を探究することを最終目的に、本年度は、「訪問看護領域で働く看護職特有の主観的責任の概念の抽出」、「抽出された概念に基づく理論的枠組みの構築」を目標とし、現役の訪問看護師(以下、看護師)16名(女性15名、男性1名)に面接調査を行った。対象者の平均年齢±標準偏差(以下、SD)は、41.18土8.22歳、看護職平均経験年数±SDは、18.13±9.56年、うち訪問看護職経験年数±SDは、6.00±4.34年、現事業所は、訪問看護ステーション15名、病院・診療所1名、勤務形態は、常勤14名、非常勤2名、職位は、スタッフ11名、管理職3名、主任1名であった。面接において「訪問看護師として感じている責任」を問うたとき、言葉では表現しがたいと沈黙する場面、一方では、ひとつのケア実践を示し、そこでの訪問看護利用者(以下、利用者)-看護師間の呼応を滔々と語る場面が看取された。このことは、そもそも看護師の責任に対する認識レベルの違いが影響しているのではないかと推察する。また、責任というものが、訪問看護師と名乗れば賦課される義務のイメージではなく、利用者-看護師間の信頼関係が基盤としてあり、利用者の求めに看護師が反応する、つまり、利用者からの求めに対し、看護師が引き受ける範囲を決定し対応しようとする状況を示しているものと考える。主観的責任の概念については現在分析中であるが、引き続き分析をすすめ概念モデルを構築する。次年度は、そのモデルに基づき調査票を作成し、訪問看護ステーションの看護職を対象とした調査を計画している。本年度は、訪問看護師の主観的責任と勤務継続意志や職務満足などとの関連を明らかにすることを目的に、自記式質問紙票を用いたアンケート調査を以下の要領で実施した。調査対象は、札幌市内の指定訪問看護事業所79カ所において訪問看護業務に従事する看護職546名。質問紙は、属性および訪問看護業務に関する18項目、主観的責任3項目、勤務継続意思2項目、健康状態2項目、ソーシャルサポート9項目、職務の現状認識65項目の計99項目で構成した。回収した質問調査票から表型計算ソフトを用いてデータセットを作成し、統計パッケージIBM SPSS Statistics 18によって集計解析を行った。質問紙は546名に配布し294名から回答を得た(回収率53.8%)。対象者の性別は、女性288名、男性6名であった。平均年齢±標準偏差(以下、SD)は44.47±7.84歳、看護職平均経験年数±SDは21.66±8.61年目、うち訪問看護職経験年数±SDは6.90±5.02年目、現職場経験年数±SDは5.07±3.96年目、現職場は、1.60±1.24箇所目であった。「訪問看護生涯勤務継続意思あり」は、一生続けたい」、「一時退職しても再就職したい」を合わせて219名(81.7%)、「現職場勤務継続意思あり」は250名(86.8%)であった。「訪問看護師の負う責任は重い」と回答した者は288名(99.7%)、「訪問看護師の責任は病院看護師より重い」と回答した者は236名(81.7%)であった。今後、さらに分析を進めていくが、現状では、訪問看護師の負う責任が重いとしながらも、この仕事は続けていきたいと考えているものが多いことが明らかになった。
続発性アミロイドーシスにおける血清アミロイドA蛋白C末端の動態に関する研究

ラットに精製ヒト血清アミロイドA(SAA)を免役し、4種(反応パターンから)のモノクロナル抗体(MoAb)を作製した。合成ペプチドを用いたエピトープマッピングで2種が同定された(SAAの15位,30位に反応することからそれぞれanti-SAA15,anti-SAA30と命名)が、他は同定できなかった。そこで終末コドンを挿入しC末端を欠損したSAAcDNAを発現ベクターに組み込み、大腸菌にていく種かのC末端部分欠損SAAを作製した。これら修飾蛋白に対し、イムノブロット法で各MoAbの反応性を検討した結果、SAA90位とSAAC末端に反応するクローン(anti-SAA90とanti-SAA100)の存在がわかった。この2種類の抗体で、ヒトAAアミロイド組織を免疫染色したが,anti-SAA90は陽性染色されるものがあったが、anti-SAA100に染色される例はなく、ヒトAAアミロイド組織においてはSAAC末端が欠如していることが確認された。ヒトAAアミロイドの形成においては、SAAが線維化する以前またはその過程中にC末端の蛋白分解が起こることが示唆された。一方、アミロイド誘発中のマウスにヒトSAAを投与したところ、SAAが全分子のままでアミロイド沈着に取り込まれた。このことから、SAAC末端分解ひいてはSAAに対する異化作用がマウスモデルとヒトでは異なることが示唆された。今回得られた抗体は、アミロイド線維化のメカニズムを追及するうえで、また臨床的にもアミロイドの成熟度を知るうえで有用と考えられた。
乳児人形モデルによる再呼吸シュミレートからみた寝具の危険性の検討

再呼吸という観点から乳幼児突然死症候群(SIDS)の危険因子の一つであるうつ伏せ寝と寝具との関連について、乳児モデルとして乳児救命訓練用ベビー人形を用いた検討を行った。寝具には実際の死亡症例を含め、バスタオルやオネショシーツなどの組み合わせでも行った。その結果、以下の結論を得ることができた。1)うつ伏せ寝、特に顔が真下になった状態ではいかなる寝具を用いても、再呼吸の危険性は高まる。よって仰向け寝を推奨すべきとの厚生省の見解は、再呼吸を防ぐ意昧からも支持される。2)寝返りの可能性を考慮し、仰向け寝の場合であっても寝具に対し十分な配慮が必要である。3)たとえ硬い布団であってもバスタオル1枚の使用がCO2拡散性に悪影響を及ぼす。今回の実験では、「新しくて固い乳児専用の布団の上にせいぜいシーツ1枚」が、うつ伏せ寝におちいった場合でも再呼吸の危険が少ない寝具環境であった。4)再呼吸の起こしやすさは寝具自体の特性により決まり、寝具の外観のみからは判断することは困難である。「固い、柔らかい」、「通気性が良い、悪い」といった単純で主観的な判断に基づく使用は危険である。5)実際の死亡事例におけるCO2拡散性の低下は、11例中10例で仰向けの1.5倍から2倍程度であり、再呼吸だけをもって、乳児突然死との直接的因果関係を述べるまでは出来なかった。6)乳児突然死の診断には、状況調査の中に寝具環境の客観的評価を含めることが望ましい。1.寝具における二酸化炭素拡散性の程度、即ちうつ伏せ寝乳児における特定寝具使用時の再呼吸の危険性について、救急蘇生用乳児人形、二酸化炭素アナライザー、100mlシリンジという簡単な機器の組み合わせで十分な評価が可能であった。2.各寝具の評価は、5%二酸化炭素を満たしたシリンジを一定間隔で前後運動を繰り返し、この模擬呼吸中に生じるシステム内の二酸化炭素の減少曲線から数値データとして算出した。算出にはコンピュータを用い、計算中に入力ミスのチェック可能なプログラムを作成した。3.二酸化炭素拡散性は寝具の柔らかさにある程度影響されるものの、柔らかさたけで決定されるわけでもなかった。また基本となる布団の性状だけではなく、その上に敷くシーツやタオルが拡散性に大きく影響することがあった。このことは硬い寝具でもタオル1枚の使用により、再呼吸の問題が生じる可能性を示唆している。4.仰向け状態に比べると、顔が真下のうつ伏せではどのような寝具でも二酸化炭素の拡散性は延長し、即ち再呼吸の影響を受けることが判った。当然のことながら、再呼吸の影響を防ぐ一番の睡眠体位は仰向け寝である。5.実際の死亡事例の寝具の解析は現在数例にとどまっているが、これらを調べた限りでは、二酸化炭素拡散性の延長は仰向け状態のせいぜい2倍程度であった。現在の結果からでは、これら死亡例については、その乳児の死に再呼吸現象だけが関与しているとは考えにくいと思われる。よって仰向け寝を推奨すべきとの厚生省の見解は、再呼吸を防ぐ意味からも支持される。3)たとえ硬い布団であってもバスタオル1枚の使用がCO_2拡散性に悪影響を及ぼす。

4)再呼吸の起こしやすさは寝具自体の特性により決まり、寝具の外観のみからは判断することは困難である。「固い、柔らかい」、「通気性が良い、悪い」といった単純で主観的な判断に基づく使用は危険である。5)実際の死亡事例におけるCO_2拡散性の低下は、11例中10例で仰向けの1.5倍から2倍程度であり、再呼吸だけをもって、乳児突然死との直接的因果関係を述べるまでは出来なかった。6)乳児突然死の診断には、状況調査の中に寝具環境の客観的評価を含めることが望ましい。
口腔扁平苔癬の病因と各種肝炎ウイルス感染との関連

病理組織学的に口腔扁平苔癬と確定診断を得た患者および対照症例として口腔癌患者,のう胞性疾患などにおけるHBS抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウィルス)の陽性率を検討した.その結果,口腔扁平苔癬の患者ではHBS抗原,HCV抗体ともに,口腔癌患者やのう胞性疾患の患者より高い陽性率が得られた.また,唾液中のHCV抗体を測定すると,血清中HCV抗体陽性患者と唾液中のHCV抗体陽性患者の一致率は95%以上であったが,唾液中のC型肝炎ウィルスは検出できなかった.これに対しB型肝炎ウイルスが検出できたことから,B型肝炎ウイルスのほうが,口腔粘膜や口腔扁平苔癬に影響を与えていたものと考えられる.さらに,新しい肝炎ウイルス(G型およびTTV型)感染と口腔粘膜病変との関連では,G型肝炎ウイスルが数%前後,TTV型肝炎ウイルスが20%前後の感染率を示していた.一方,口腔扁平苔癬の患者のG型肝炎ウイルスは検出できなかったが,TTV型肝炎ウイルスは50%検出率を示し,他の口腔粘膜疾患より高い感染率を示していた.病理組織学的に口腔扁平苔癬と確定診断を得た患者および対照症例として口腔癌患者,のう胞性疾患などにおけるHBS抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウィルス)の陽性率を検討した.その結果,口腔扁平苔癬の患者ではHBS抗原,HCV抗体ともに,口腔癌患者やのう胞性疾患の患者より高い陽性率が得られた.また,唾液中のHCV抗体を測定すると,血清中HCV抗体陽性患者と唾液中のHCV抗体陽性患者の一致率は95%以上であったが,唾液中のC型肝炎ウィルスは検出できなかった.これに対しB型肝炎ウイルスが検出できたことから,B型肝炎ウイルスのほうが,口腔粘膜や口腔扁平苔癬に影響を与えていたものと考えられる.さらに,新しい肝炎ウイルス(G型およびTTV型)感染と口腔粘膜病変との関連では,G型肝炎ウイスルが数%前後,TTV型肝炎ウイルスが20%前後の感染率を示していた.一方,口腔扁平苔癬の患者のG型肝炎ウイルスは検出できなかったが,TTV型肝炎ウイルスは50%検出率を示し,他の口腔粘膜疾患より高い感染率を示していた.平成15年度では,病理組織学的に口腔扁平苔癬と確定診断を得た患者におけるHBs抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウイルス)の陽性率を血清および唾液において検討した.対象として口腔癌患者,口腔内嚢胞患者も同時に測定した.口腔扁平苔癬患者ではHBs抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウイルス)ともに,口腔癌患者,口腔内嚢胞患者よりも陽性率が高い傾向が認められた.なお,それぞれの疾患の血清GOT, GPT,γ-GTPの肝機能の差異は認められなかった.以上のように,口腔扁平苔癬患者では肝炎ウィルスによる感染が影響を与えていることが示唆された.一方,唾液中のHBV抗体とHCV抗体をそれぞれHBV-DNA, HCV-DNAのPCR産物で定量した.その結果,血清中HCV抗体陽性者と唾液中HCV抗体陽性者の一致率は95%以上であったが,唾液中にはC型肝炎ウィルスは検出できなかった.これに対しB型肝炎ウィルスは唾液中にも存在することが判明した.したがって,B型肝炎ウィルスの方がC型肝炎ウィルスよりも口腔粘膜や口腔扁平苔癬に影響を与えているものと推測された.さらに,これまでに歯科疾患との関連を明らかにした新しい肝炎ウィルス(G型,TTV型)感染と口腔扁平苔癬との関連を検討中である.平成15年度,16年度において,病理組織学的に口腔扁平苔癬と確定診断を得た患者および対象として口腔癌患者,口腔内嚢胞患者におけるHBs抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウイルス)の陽性率を血清および唾液において検討した.その結果,口腔扁平苔癬患者ではHBs抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウイルス)ともに,口腔癌患者,口腔内嚢胞患者よりも陽性率が高い傾向が認められた.また,血清中HCV抗体陽性者と唾液中HCV抗体陽性者の一致率は95%以上であったが,唾液中にはC型肝炎ウィルスは検出できなかった.これに対しB型肝炎ウィルスは唾液中にも存在することが判明した.一方,唾液中のHBV抗体とHCV抗体をそれぞれHBV-DNA,HCV-DNAのPCR産物で定量した.したがって,B型肝炎ウィルスの方がC型肝炎ウィルスよりも口腔粘膜や口腔扁平苔癬に影響を与えているものと推測された.さらに,新しい肝炎ウィルス(G型,TTV型)感染と口腔病変との関連では,G型が3%前後,TTV型が20%前後の高い感染率を示していた.現在,口腔扁平苔癬と各種肝炎ウィルスとの関連を検討中である.研究期間において,病理組織学的に口腔扁平苔癬と確定診断を得た患者,および,対照症例として口腔癌患者,口腔のう胞性疾患などにおけるHBS抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウィルス)の陽性率を血清および唾液において検討した.その結果,口腔扁平苔癬の患者ではHBS抗原(B型肝炎ウィルス),HCV抗体(C型肝炎ウィルス)ともに,口腔癌患者や口腔内のう胞性疾患の患者より高い陽性率が得られた.また,唾液中のHBV抗体とHCV抗体をそれぞれHBV-DNA,HCV-DNAのPCR産物で定量すると,血清中HCV抗体陽性患者と唾液中のHCV抗体陽性患者の一致率は95%以上であったが,唾液中のC型肝炎ウィルスは検出できなかった.これに対し,B型肝炎ウィルスは唾液中に検出することができた.

したがって,B型肝炎ウィルスの方がC型肝炎ウィルスよりも口腔粘膜や口腔扁平苔癬に影響を与えているものと考えられた.さらに,新しい肝炎ウィルス(G型およびTTV型)感染と口腔粘膜病変との関連では,G型肝炎ウィルスが数%前後,TTV型肝炎ウィルスが20%前後の感染率を示していた.一方,口腔扁平苔癬の患者のG型肝炎ウィルスは検出できなかったが,TTV型肝炎ウィルス50%前後の検出率を示し,他の口腔粘膜疾患の患者より高い感染率を示していた.
脂溶性ビタミンと運動に着目したアンドロゲン低下に伴う肥満とうつ状態の改善

近年、加齢とともにテストステロンが減少し、不定愁訴を訴える男性が増えており、「男性更年期障害」という言葉も一般的に認知されるようになってきている。このような加齢に伴うテストステロンの減少によって惹起された男性の症状は「加齢男性性腺機能低下症候群(LOH: Late-Onset hypogonadism)」と定義され、精神的・心理的症状、身体症状、性機能関連症状などを呈することが明らかとなっている。LOH症候群の治療法としては、テストステロンの補充が有効とされているが、少ないながらも副作用などが報告されている。本研究の最終年度において、LOH症候群を呈した中高年男性に「充分な脂溶性ビタミン摂取」と「低強度運動」を促すことにより、うつ状態と記憶力低下の緩和効果を明らかにすることを目的として研究を実施する予定であったが、依頼していた研究協力機関との間で研究を遂行することができなかった。そのため、他の研究協力機関を精力的に探したが、年度内に研究実績を得るまでに至っていない。上述したとおり、依頼していた研究協力機関との間で研究が遂行できなかった。2019年度まで研究期間の延長を申請している。2019年度は非侵襲的保健介入研究を行うことにより、LOH症候群を呈した中高年男性に対して、「充分な脂溶性ビタミンの摂取」と「低強度運動量」が、うつ状態および記憶力の低下を緩和できるかどうかを検証する予定である。そこで本研究では、アンドロゲンを低下させ、うつ状態を呈した男性更年期モデルマウスを用いて、「充分な脂溶性ビタミン摂取」と「低強度運動」によって、うつ状態と記憶力の低下を改善できるかどうかを検討する。また、最終年度には、LOH症候群を呈した中高年男性に「充分な脂溶性ビタミン摂取」と「低強度運動」を促すことにより、うつ状態と記憶力低下の緩和効果を明らかにすることも目的とする。平成28年度は、アンドロゲンを低下させた男性更年期モデルマウスを作製し、グルココルチコイド(コルチコステロン)を投与してうつ状態を惹起させ、うつ状態を呈した男性更年期モデルマウスの妥当性の検討と「脂溶性ビタミン」と「自発運動」によるうつ状態の改善効果を検討した。C57BL/6Jマウスに精巣摘出術(ORX)を行い、アンドロゲンを低下させた男性更年期モデルマウスとした。この男性更年期モデルマウスに、コルチコステロンを投与してうつ状態を惹起させ、うつ状態を呈した男性更年期モデルマウスのうつ病モデルとしての妥当性を検討した。その結果、コルチコステロンを投与すると、マウス脳海馬のBDNF mRNAが減弱傾向を示すことが明らかとなった。また、「脂溶性ビタミン」と「自発運動」によるうつ状態の改善効果については、既にうつ状態を呈した男性更年期モデルマウスを用いた実験を終えており、現在その結果を解析中である。平成29年度は、アンドロゲンを低下させた男性更年期モデルマウスを作製し、グルココルチコイド(コルチコステロン)を投与してうつ状態を惹起させ、うつ状態を呈した男性更年期モデルマウスの「脂溶性ビタミン」と「自発運動」によるうつ状態の解析方法を検討した。ORXによってアンドロゲンを低下させ、うつ状態を惹起た男性更年期モデルマウスの「脂溶性ビタミン」と「自発運動」によるうつ状態の改善効果については、当初の予定通りに解析することができず、解析方法を再度検討したため、やや遅れている。しかし、新たな解析方法を導入し、現在解析中である。

このような加齢に伴うテストステロンの減少によって惹起された男性の症状は「加齢男性性腺機能低下症候群(LOH: Late-Onset hypogonadism)」と定義され、精神的・心理的症状、身体症状、性機能関連症状などを呈することが明らかとなっている。LOH症候群の治療法としては、テストステロンの補充が有効とされているが、少ないながらも副作用などが報告されている。本研究の最終年度において、LOH症候群を呈した中高年男性に「充分な脂溶性ビタミン摂取」と「低強度運動」を促すことにより、うつ状態と記憶力低下の緩和効果を明らかにすることを目的として研究を実施する予定であったが、依頼していた研究協力機関との間で研究を遂行することができなかった。そのため、他の研究協力機関を精力的に探したが、年度内に研究実績を得るまでに至っていない。上述したとおり、依頼していた研究協力機関との間で研究が遂行できなかった。LOH症候群を呈した中高年男性に対して、非侵襲的保健介入研究を行うことにより、「充分な脂溶性ビタミンの摂取」と「低強度運動量」が、うつ状態および記憶力の低下を緩和できるかどうかを検証する予定である。男性更年期症状を呈している人ボランティア男性に「充分な脂溶性ビタミン摂取」と「低強度運動」の相加効果を検討する。さらに「充分な脂溶性ビタミン摂取」と「低強度運動」の介入により、うつ状態と記憶力低下の緩和効果を明らかにすることも検討している。2019年度まで研究期間の延長を申請している。2019年度は非侵襲的保健介入研究を行うことにより、LOH症候群を呈した中高年男性に対して、「充分な脂溶性ビタミンの摂取」と「低強度運動量」が、うつ状態および記憶力の低下を緩和できるかどうかを検証する予定である。平成29年度当初の予定からやや遅れているため、次年度使用額が生じてしまった。平成30年度は、男性更年期症状を呈している人ボランティア男性の相加効果の検討に使用する予定である。本研究の遂行にあたり、研究協力機関から内諾を得ていたが、研究の実施には至っていないため、本年度の実支出額はない。既に研究期間の延長を行っており、次年度以降に本研究を完結するために使用したい。
分散システムにおける独立性の観点からの資源分散方式に関する研究

分散システムにおいては,あるノードが全体システムから独立して動作するためには,他の部分が提供している情報処理機能およびその情報保持機能を補完させることが必要となる。本研究では,その中で後者の情報保持機能,すなわち,データ特性に応じた全体データの複製のところに焦点を当て,複製量を限定しつつも,業務の独立遂行を実用的に可能とする場合における新アルゴリズムの提案とその評価を行うことを目的としている。本研究の目的のために,(1)データ特性の研究,(2)継続運転指標の研究,(3)仮装分散システム維持コストと継続運転指標との関係研究の観点から研究を進めた。具体的には,SQLサブセットをベースとしたリレーショナルモデルに基づく分散データベース評価システムを実際に構築し,データ複製に関する諸指標を入手するとともに,並列に実行し,資源を共有する場合に有効なシミュレータを開発した。更に,待ち行列解析により,近似的に更新処理の応答時間を求める方法についても検討した。また,実現機構として,全体データベースを特性データに基づき,部分データベース化を行い,その各部分データベースに特性データをパラメータとして算入し,かつ応答時間性能の低下を避けるために,全複製にわたる広範囲なロックおよび更新処理を行わないアルゴリズムを考案し,提案した。この方式は,データの内容の意味を用いているので,適用分野には制限があるが,応答時間の改善とネットワーク分断時のデータ更新に対して有効であることが,分散データベース評価システム,シミュレータ及び解析によって確認された。
新規ハイブリッド型足場材料を用いた間葉系幹細胞の分化制御

タンパク質吸着層を介して擬似体液中にてポリスチレン(PS)をヒドロキシアパタイト(HAp)により被覆する手法を確立し、複雑な構造体への適用および種々のタンパク質の利用が可能となった。HAp被覆PS上では細胞培養用PSと比較して間葉系幹細胞から骨芽細胞への分化が促進され、脂肪細胞や軟骨細胞への分化が抑制された。一方、熱プレス法により作製される多糖複合フィルムでは用いるアニオン性多糖の種類により細胞の接着、増殖挙動に差異が生じ、その要因として力学物性の影響と構成糖と細胞受容体との相互作用を介したシグナル伝達が考えられた。アニオン性多糖の種類による間葉系幹細胞の分化制御の可能性が示唆された。本年度はまず、ヒドロキシアパタイト(HAp)被覆ポリスチレン(PS)プレートの作製手法の改良を行うと共に、得られたHAp被覆PS上でのヒト間葉系幹細胞(hMSC)の接着・増殖挙動および分化挙動の解析を行った。従来はPSプレートに対してタンパクとしてヒト血清アルブミン(HSA)を吸着させ、塩化カルシウム水溶液で24時間前処理した後に1.5倍濃度の擬似体液(1.5SBF)に24時間浸漬させることでHAp層を析出させていたが、前処理を塩化カルシウム溶液とリン酸二水素ナトリウム溶液を用いた交互浸漬にすることで、およそ半分の時間、かつ少量のSBFで作製する手法を確立した。次に、得られた表面がマイクロメートルスケールで平滑なHAp被覆PSプレートを用いてhMSCの培養を行い、接着・増殖挙動をWSTアッセイ、DNA定量およびホルマリン固定後のヘマトキシリン染色により評価した。その結果、HAp被覆PSプレート上にhMSCは接着・伸展し、接着細胞数は細胞培養用PS(TCPS)プレートとほぼ同程度であった。さらにHAp被覆PSプレート上のhMSCはTCPSと同様の増殖挙動を示した。足場上に播種したhMSCを各細胞系列への分化誘導因子を含む培地で所定期間培養し、骨芽細胞、脂肪細胞、軟骨細胞への分化について解析したところ、TCPSと比較してHAp被覆PSプレート上では骨芽細胞への分化が促進され、脂肪細胞や軟骨細胞への分化が抑制されていることがわかった。多糖複合フィルムについては、キトサンとアニオン性多糖としてコンドロイチン硫酸Cに加えてヒアルロン酸、ヘパリン、アルギン酸からなるフィルムを作製し、物性評価を行うとともに、予備検討としてマウス胎児線維芽細胞の接着挙動の解析を行った。キトサンと組み合わせるアニオン性多糖の種類によって細胞接着性が大きく異なることが明らかになった。本研究は骨類似アパタイト被覆ポリスチレンおよび多糖複合フィルムという2種類のハイブリッド型細胞足場におけるヒト間葉系幹細胞(hMSC)の接着・増殖挙動と各細胞系列への分化特性を明らかにするとともに、得られた知見を材料設計へフィードバックし、hMSCの分化を制御可能な材料の開発を目的としている。本年度は前半部分、すなわちハイブリッド型細胞足場におけるhMSCの接着、増殖、分化挙動の解析を中心に行い、骨類似アパタイト被覆ポリスチレン上におけるhMSCその分化特性を明らかにした。本年度、real-time PCRを用いた分化マーカー遺伝子の発現解析や染色による分化特性の解析手法を確立したことで、次年度以降に予定する多糖複合フィルム上でのhMSC分化特性の解析および分子修飾による分化制御はスムーズに進行するものと期待される。当初予定していたキトサン/コンドロイチン硫酸複合フィルム上でのhMSC分化特性については、アニオン性多糖間での比較が重要であると考え、先に2年目に予定していた多糖複合フィルムの作製、物性評価、モデル細胞を用いた接着評価を行った。以上の通り、実験計画と順番の前後はあるものの、おおむね順調に進展している。タンパク吸着層を介した擬似体液(SBF)中でのポリスチレン(PS)へのヒドロキシアパタイト(HAp)被覆法に関し、多孔質材料への応用とタンパク吸着層の影響について検討した。従来は平面PS基板を用いてHAp被覆を行なってきたが、溶液ベースの本手法では多孔質など複雑な形状の材料表面に対してもHApによる被覆を行えると考えられる。そこで、市販の多孔質PS細胞足場材料を用い、HApによる被覆を試みた。タンパク吸着、交互浸漬処理、SBF処理条件を最適化することで、多孔質構造を保持したまま骨類似HApにより均一に被覆することができた。HApにより被覆した多孔質PS足場にヒト間葉系幹細胞(hMSC)を播種、培養すると、材料内部まで細胞が進展している様子が観察された。未処理の多孔質PS材料での培養と比較して細胞周囲により多く線維状細胞外マトリックスが存在しており、HAp被覆多孔質材料中での培養により細胞の活性化が示唆された。タンパク吸着層として従来用いてきたヒト血清アルブミン(HSA)以外にも1型コラーゲンや酵素、酸性タンパク質アナログとしてポリグルタミン酸を用いた場合にもHAp析出が誘起され、HAp層からの生理活性分子の徐放などへの利用も考えられた。多糖複合フィルムにおいては、昨年度見出した構成アニオン性多糖の種類による線維芽細胞の接着、増殖性の違いについて、ELISA法を用いたフィブロネクチン吸着量の定量やレオメーターを用いた貯蔵弾性率の測定を行うことでそのメカニズムの解明を目指した。結果、アニオン性多糖の種類によって貯蔵弾性率が大きく異なっており、多糖の化学構造に基づいた細胞-多糖間の相互作用に加えてフィルムの機械的特性の細胞接着、増殖への関与が示唆された。

さらに、フィルム上での間葉系幹細胞hMSCの分化特性の解析にむけ、細胞接着、増殖性評価について予備的検討を行なった。本研究は骨類似アパタイト被覆ポリスチレンおよび多糖複合フィルムという2種類のハイブリッド型細胞足場におけるヒト間葉系幹細胞(hMSC)の接着、増殖挙動と各細胞系列への分化特性を明らかにするとともに、材料作製へフィードバックし、分化を制御可能な材料作製の開発を目的としている。初年度、骨類似アパタイト被覆ポリスチレン上でのhMSCの分化挙動を解析し、骨芽細胞への分化が顕著に亢進し、脂肪、軟骨細胞への分化が抑制されることを見出した。本年度は、多孔質材料もHApにより被覆が可能であること、ヒト血清アルブミン以外のタンパク質も吸着層に利用できることを明らかにし、これらの知見はhMSCの分化の制御に向けた材料設計の重要な指針となるものである。一方、多糖複合フィルムについては、初年度アニオン性多糖により線維芽細胞の接着、増殖性が大きく変化することを明らかにし、本年度はそれが細胞-多糖間の相互作用に加えてフィルムの機械的特性の影響であることを示した。基材への接着性は幹細胞の分化を左右する大きな因子であることから、アニオン性多糖の種類によりhMSCの分化挙動が大きく異なることが予想される。以上より、本研究課題はおおむね順調に進展しているものと考えている。昨年度までに、骨類似アパタイト被覆ポリスチレン上においてhMSCの骨芽細胞への分化が顕著に亢進し、脂肪、軟骨細胞への分化が抑制されること、多孔質材料もHApにより被覆が可能であること、ヒト血清アルブミン以外のタンパク質も吸着層に利用できることを明らかにした。本年度は、より簡便なヒドロキシアパタイト複合化法として接着細胞培養用ポリスチレンプレートの被覆法を開発した。また、ヒドロキシアパタイト中へのタンパク質担持方法についても検討し、アパタイト層への分化誘導因子の担持によるhMSCの分化の制御のために必要な知見を得た。一方、多糖複合フィルムにおいては、昨年度までに構成するアニオン性多糖により細胞の接着、増殖性が大きく変化することを見出し、これはフィルムの力学的特性や細胞-多糖間の相互作用の違いに起因すると推測された。本年度は、hMSCにも発現しヒアルロン酸やコンドロイチン硫酸と相互作用するCD44に注目し、CD44の発現の異なる細胞間での接着、増殖挙動の比較を行った。結果、CD44の発現は接着性に影響せず、主に増殖性に影響したことから、細胞の接着には主にフィルムの力学的特性が関与し、接着細胞に対して受容体介在増殖シグナルが誘導されていることが推測された。以上の知見をもとに、各種フィルム上においてhMSCからの骨・軟骨分化誘導を行なったが、長期培養による細胞の回収率の低下が課題であった。タンパク質吸着層を介して擬似体液中にてポリスチレン(PS)をヒドロキシアパタイト(HAp)により被覆する手法を確立し、複雑な構造体への適用および種々のタンパク質の利用が可能となった。HAp被覆
fMRI 脳波 拡散MRI同時計測による統合失調症connectivityの検討

統合失調症の病態にfunctional connectivityの異常が大きく関わっていることが報告されているが、依然一定の見解は得られていない。本研究においては、各計測モダリティの空間・時間解像度の利点を生かして双補的に用い、統合失調症のFCの統合的評価を目的とする。また複数の計測モダリティを組み合わせる場合、データを統合的に解釈するには同時計測が理想的である。fMRI・脳波・拡散MRIの同時測定はそれぞれのニューロイメージング手法の持つ利点を最大に生かせる組み合わせと考えられる。特に本研究においては、神経発達障害の観点からネットワーク間分離不全による相互制御の障害の解明に重点を置く。