hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
筋性疼痛における各種神経栄養因子の関与と筋における産生・作用機構

運動後遅れて現れる筋性疼痛(遅発性筋痛)のモデルを中心に、ほかのモデルも作成し、各種神経栄養因子がどのように関与しているか調べ、その筋性疼痛に関与している範囲を明確にすること、これら神経栄養因子の痛み受容器に対する作用機構を明らかにし、さらにはこれら因子の筋における産生に関わる因子を明らかにすることを目的として実験を行った。1)遅発性筋痛をトリガーするブラジキニン様物質を遊離するATPの放出が、短縮性収縮や伸張のみよりも伸張性収縮で大きいことを明らかにした。2)単独では筋機械痛覚過敏を引き起こさない用量の神経成長因子(NGF)とGDNF(グリア細胞由来神経栄養因子)を同時に筋注すると、強くかつ2日間も持続する筋機械痛覚過敏が生じることを明らかにした。4)遅発性筋痛状態の筋の侵害受容器は、機械刺激に対しては感作されているが熱には感作されていない。しかし、筋侵害受容器の熱反応に対してもNGFは感作を生じることを明らかにした(投稿中)。NGFが痛覚過敏を起こしている遅発性筋痛状態で熱に対する感作が見られないのは、おそらくNGFの濃度が低いためか、または協同的に働く物質が熱に対する感作を引き起こさないためであろうと考えられる。4月に研究室を中部大学に移動したため、研究室のセットアップに時間がかかった。そのため、実験の進行が遅れた。25年度が最終年度であるため、記入しない。1)虚血モデル作成は試みたもののうまく機能しなかった。2)運動形態によるATP放出量の違いは明らかにできたが、ブラジキニン遊離量の測定にまで広げることができなかった。3)NGFによる筋侵害受容器の感作機構では、熱による感作があることを明らかにした。培養後根神経節細胞におけるパッチクランプ記録は開始した。3週令の若い動物を使用できないか試みたが、結局生後2週令までの新生動物を使用したほうが良いという結果をえた。現在NGFの30分投与で、機械感受性電流を示す細胞の割合、機械感受性電流の型の変化、機械感受性電流の大きさなどに違いが生じないか調べ、多少の増加傾向はみられるものの、まだ結論を得るところまでにいたっていない。4)NGFとGDNFの相互作用に関しては、単独では筋機械痛覚過敏を引き起こさない用量のNGFとGDNFを同時に筋注すると、強くかつ2日間も持続する筋機械痛覚過敏が生じることを明らかにした。間にCGRPが介在している可能性を調べたが、結論を得るまでの例数を集めることができなかった。5)当初の実験予定にはなかったが、遅発性筋痛におけるTRPV1とTRPV4の役割を調べ、論文発表する段階までにこぎつけた。6)NGFの筋侵害受容器の熱に対する反応も感作することを明らかにした。研究室のセットアソプは完了し、実験の遂行に支障はなくなった。今後次の点について解析を進める(1)虚血モデルの完成をめざす。また労作性筋痛のモデル作成に取り掛かる。それらにおける機械痛覚過敏におけるNGF,GDNFの関与の有無を調べる(2)筋の収縮形態による遅発性筋痛発現の有無の原因を探るため、ATP遊離量の測定、ブラジキニン遊離量の測定を実施する。(3)NGFとGDNFの相互作用の可能性を検討する。(4)NGFによる侵害受容器の感作機構を培養後根神経節細胞からのパッチクランプ記録により解析を始める25年度が最終年度であるため、記入しない。1)ラットを用いた虚血モデル、労作性筋痛モデルの作成を継続して行う。このモデルの機械痛覚
合体銀河中の活動銀河核の探査と多波長追求観測による銀河ブラックホール共進化の解明

銀河中心には普遍的に巨大ブラックホールが存在し、銀河とブラックホールは互いに影響しあって「共進化」してきた。本研究では、共進化の物理を解明するため、ガスの豊富な銀河同士の合体に着目する。特に、ブラックホールへの質量降着が活発な銀河は中心部が非常に明るい活動銀河核として観測される。我々は、合体銀河が持つ「ガスやダストに埋もれた活動銀河核」を調査するため、ダスト減光を受けにくいX線と中間赤外線を用いて活動銀河核の構造や質量降着率の進化過程を調査する。さらに、ALMAによる高感度電波観測や、京大3.8m望遠鏡を用いて、重力エネルギー開放によるアウトフロー(質量放出)や星形成の成長メカニズムを解明する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドに関する製剤学的研究

二ヶ年にわたりカチオン性リポソームをキャリアーとするアンチセンスオリゴヌクレオチドの細胞への効率的導入とその活性の促進を目指し研究を進めてきた。初年度はHeLaS3細胞にCAT遺伝子をトランスフェクションしたCAT発現細胞を用いた。アンチセンスは、mRNAのタンパク合成開始点から下流域の塩基配列に相補的な15merのフォスフォジエステル結合を持つオリゴヌクレオチドを合成した。このオリゴヌクレオチドをカチオン性コレステロール誘導体を含むリポソームと共にCAT発現HeLaS3細胞に加え、アンチセンス効果を調べた。アンチセンス及びセンスとリポソームを加えた細胞に較べ、遺伝子発現は約3倍抑制された。このことから、コレステロールアミン誘導体を含むリポソームは、アンチセンスの細胞内導入のための高効率、低毒性の優れたキャリアーであることが判った。また、共焦点レーザー顕微鏡でアンチセンスの取り込み過程を観察し、細胞とのインキュベーション約1、2時間後、アンチセンス/リポソーム複合体は細胞内へ取り込まれ、約3時間後、細胞核内に輸送されることが判った。次年度では、内在性の遺伝子の発現に対しアンチセンス/リポソーム系がどのような影響を及ぼすかを調べた。細胞として炎症性サイトカインであるインターロイキン6(IL6)を分泌するA375-6細胞にアンチセンス/リポソームを加え、IL6産生に及ぼす影響を調べた。アンチセンス効果と共にリポソームによると思われる結果も見出され、細胞の種類によってはアンチセンスやリポソームなどの外界からの刺激が、細胞の情報伝達系や遺伝子発現系に種々の影響を及ぼすことが示唆された。これまで得た結果は、アンチセンス効果の評価は、単一の一般性を付与した細胞だけでなく、標的とする組織、臓器の細胞について、細胞内の発現系、代謝系など総合的な影響を評価しながら検討する必要があることを示唆している。アンチセンスキャリアーとして新たに合成した3級アミノ基を持つコレステロール誘導体から成るカチオン性リポソームを薄膜法により調製した。リポソームの細胞毒性及びトランスフェクション能力を、LDH法及び色素排除法、更に、CAT遺伝子の発現量により調べた結果、細胞毒性及びトランスフェクション能力共に市販のリポフェクチン試薬より優れていた。アンチセンス活性のアッセイ系として、CAT遺伝子をトランスフェクションしたHeLa3細胞を用いることにより評価した。この系で、カチオン性リポソームとCAT遺伝子の翻訳開始点からの15merのアンチセンス(5′-GATCCCCCCCTCCAT-3′)の併用により、アンチセンス効果をアンチセンス単独投与に較べ数倍増強することができた。次にアンチセンスとカチオン性リポソームとの相互作用について蛍光エネルギー移動法及び動的光散乱法で調べた。アンチセンスとリポソームは複合体を形成し、その粒子径はリポソームに較べ数10倍の大きさ(1-3μm)であった。共焦点レーザー顕微鏡での観察では、この大きな複合体が細胞表面に結合しているのが観測され、インキュベーション1時間後に細胞内に取り込まれることが判った。2.5時間後、リポソームを構成する脂質は核周辺に集積する一方、アンチセンスはこの時点で核に集積していた。これらは、低温度条件下(25°C。4°C)では観測されず、カチオン性リポソーム-アンチセンス複合体の取り込みは温度依存性の生理的取り込み機構が関与していることが示唆された。蛍光ラベルアンチセンスのみの添加では細胞内及び核の何れでも観測されず、カチオン性リポソームによりアンチセンスの細胞内への導入及びその遺伝子発現抑制効果が著しく促進されることが判った。

サイトカインは、細胞間相互作用を媒介するタンパク質性因子で、免疫応答の制御、抗腫瘍作用などがある。インターロイキン6(lL6)は炎症性サイトカインの一つであり、劇症肝炎患者の血清で多く見い出され、細胞性免疫反応を介して肝障害に対して影響を及ぼすことが指摘されている。本研究で用いたA-375-6細胞は、human melanomacell lineで、インターロイキン1(lL1)の刺激により、lL6を細胞外へ放出する。そこで、lL1刺激後の細胞にlL6のアンチセンスDNAを作用させ、lL6の産生に及ぼす影響について検討した。lL6に対するアンチセンスは、mRNA翻訳開始領域に相補的な18-merのアンチセンスDNA(5'-TGTGGAGAAGGAGTT-3')を合成し用いた。合成アンチセンスはホスホジエステル体で、Tmは48°Cであった。A-375-6細胞のlL1感受性を、細胞増殖度により調べ、1unit/ml以上の濃度で顕著な細胞増殖抑制を観測した。アンチセンスのキャリアーとして用いるカチオン性リポソームは、DMPA-コレステロール誘導体とDOPEより調製した。A375-6をwellで48時間培養後、あらかじめ調製したアンチセンス/リポソーム混合液を細胞に添加し、3時間インキュベーションした。新たな培地にlL1を加え、18時間後に培地中に放出されたlL6量をMH60・BSF-2細胞に対する増殖促進性を利用してアッセイした。lL6の放出は、lL1で促進されると共にリポソームの共存下で更に増大した。これは、ある種の細胞に於いてリポ多糖の刺激によりサイトカインの分泌が促進されることと関連している可能性がある。特にカチオン性リポソームは細胞表面に結合し、構成脂質が細胞内へ取り込まれ易いことから起こりうる現象と思われる。リポソームと共にアンチセンスを同時に加えると、lL6の放出は抑制された。ただしその抑制率は不十分であり、今後更に最適投与条件について検討していく必要がある。
四万十帯変成変形岩のK-Ar年代学

本研究おいて年代測定に供する地質学試料はゼオライト相程度の低度変成岩の極微細変成白雲母鉱物である。この種の極微細鉱物の分離濃集技術を確立した。それを使って微細白雲母を分離濃集しK-Ar年代測定を実施した。それによって,変成白雲母鉱物は2ミクロン以下サイズであることが分かった。それより大きいサイズでは化石年代より古くなることがあるので砕屑性白雲母が混入する可能性がある。そこで砕屑性白雲母が年代にどのように影響するかの検討も実施した。ジュラ紀の付加体の中から砕屑性白雲母を見つけその年代への影響とそれを軽減させる方法を検討した。この種の微細白雲母は断層破砕帯でも生じているし,熱水変質火山岩中にも生じている。付加体の低変成度岩のそれと比較する意味でそれらの鉱物学的年代学的研究も行った。断層破砕帯の微細白雲母は付加体低変成度岩中のそれと比較して結晶度が低いことが分かった。しかし,その場合でもK-Ar年代学的に有効であることも明らかになった。極微細鉱物の分離濃集には量が限られることから極微少量でのK-Ar年代測定技術を確立する必要がある。そのために,レーザーによるAr抽出装置を開発し,その基礎実験も実施した。将来Ar-Ar法による年代測定を考え,段階加熱によるアルゴン抽出実験を行った。それによって,500-1500度の温度範囲で相対誤差1度で温度制御が可能となった。付加体の逆転温度構造の回復速度の数値実験を行い,島弧-海溝系の造山プロセスの新しい制約条件を検討した。それによって,付加体低変成度岩は海洋プレートの定常的な沈み込み作用で成長するが高圧変成岩の上昇は海嶺の沈み込み等の非定常的に起こる事件によって生じる可能性が示唆された。本研究おいて年代測定に供する地質学試料はゼオライト相程度の低度変成岩の極微細変成白雲母鉱物(数ミクロン以下)である.この種の極微細鉱物の分離濃集技術を確立することが先決である.そこで,粘土鉱物研究に利用される水簸法を厳密に実施する方法を開発した.それは,温度環境を一定に保ちストークス法による粒径と沈降速度の関係を厳密に取り扱う方法である.それによって,数ミクロン以下を幾つかのフラクションに分けることができた.また,試料量が非常に少ない場合,分離後の乾燥と回収ロスをなくす必要がある.そのために,ドライフリーズ法を応用し成功した.現在,一連の処理が短期間に多数できるようになっている.この方法を利用して行った低度変成岩の年代学的研究成果は一部公表されてきた.極微細鉱物の分離濃集には量が限られることから極微少量でのKーAr年代測定技術を確立する必要がある.そのために,レーザーによるAr抽出装置を開発した.既存の通電加熱型炉によるとルツボからの脱ガスのためにブランクが高くなり微少量アルゴンの定量が難しい.レーザーによれば試料自身のみを加熱することができることからブランクを極端に小さくできる.レーザー装置はNd:YAG連続レーザーである.既に、微細白雲母の加熱脱ガス実験は終了しており,数ミリグラムの白雲母は一分間以内で完全に溶融することがわかっている.微少量試料のカリウム定量分析のための超低ブランク化学分析システムを既に開発し,分析に利用している.1ミリグラム以下でも5%の誤差で定量分析が可能である.

これについても,既に学会発表がなされた.本研究において年代測定に供する地質学試料はゼオライト相程度の低度変成岩の極微細変成白雲母鉱物である。この種の極微細鉱物の分離濃集技術を確立した。それを使って微細白雲母を分離濃集しK-Ar年代測定を実施した。それによって,変成白雲母鉱物は2ミクロン以下サイズであることが分かった。それより大きいサイズでは化石年代より古くなることがあるので砕屑性白雲母が混入する可能性がある。そこで砕屑性白雲母が年代にどのように影響するかの検討も実施した。ジュラ紀の付加体の中から砕屑性白雲母を見つけその年代への影響とそれを軽減させる方法を検討した。この種の微細白雲母は断層破砕帯でも生じているし,熱水変質火山岩中にも生じている。付加体の低変成度岩のそれと比較する意味でそれらの鉱物学的年代学的研究も行った。断層破砕帯の微細白雲母は付加体低変成度岩中のそれと比較して結晶度が低いことが分かった。しかし,その場合でもK-Ar年代学的に有効であることも明らかになった。極微細鉱物の分離濃集には量が限られることから極微少量でのK-Ar年代測定技術を確立する必要がある。そのために,レーザーによるAr抽出装置を開発し,その基礎実験も実施した。将来Ar-Ar法による年代測定を考え,段階加熱によるアルゴン抽出実験を行った。それによって,500-1500度の温度範囲で相対誤差1度で温度制御が可能となった。付加体の逆転温度構造の回復速度の数値実験を行い,島孤-海溝系の造山プロセスの新しい制約条件を検討した。それによって,付加体低変成度岩は海洋プレートの定常的な沈み込み作用で成長するが、高圧変成岩の上昇は海嶺の沈み込み等の非定常的に起こる事件によって生じる可能性が示唆された。
大腸癌肺転移における肺サーファクタント蛋白d

本研究は端的には「肺転移はなぜ起こるのか?」あるいは「ほかの臓器,例えば肝臓への転移や腹膜播種との違いは何か」といった学術的な問いに答えるものである.そもそも転移は癌そのものの性質に加え,「場」の影響が大きい.つまり臓器特異的な転移のメカニズムを理解するうえでは,転移臓器の「場」の癌免疫を理解することは非常に重要と考えられる.そこで肺に特異的に存在するSP-Dに着目し,培養細胞レベルではあるが,SP-Dが肺癌の発症に関与していることが報告されたことから,我々は大腸癌肺転移の形成,増悪にもSP-Dが関与していることを明らかにするために本研究を行う.本研究は端的には「肺転移はなぜ起こるのか?」あるいは「ほかの臓器,例えば肝臓への転移や腹膜播種との違いは何か」といった学術的な問いに答えるものである.そもそも転移は癌そのものの性質に加え,「場」の影響が大きい.つまり臓器特異的な転移のメカニズムを理解するうえでは,転移臓器の「場」の癌免疫を理解することは非常に重要と考えられる.そこで肺に特異的に存在するSP-Dに着目し,培養細胞レベルではあるが,SP-Dが肺癌の発症に関与していることが報告されたことから,我々は大腸癌肺転移の形成,増悪にもSP-Dが関与していることを明らかにするために本研究を行う.
マグネシウム合金におけるベークハード性発現の原理解明と高強度高成形性合金の開発

平成30年度は、まずG.P.ゾーンが強化相として析出するMg-0.5Ca-1.6Zn-0.5Zr合金圧延材を作製し、BH性が発現することを明らかにした。BH性は、溶体化処理材に対して2%の引張ひずみを導入した後、170°Cで20分の時効処理を行い、2%ひずみ導入時の応力と時効材の0.2%耐力の差から評価した。その結果、BH処理によって0.2%耐力が20MPa程度増加することが分かった。さらに、Zn添加量の異なるMg-xZn-0.3Ca-0.3Zr(x=1-6)合金圧延材を作製し、BH量を評価したところ、Zn添加量が2%より増加するにつれBH量が低下する傾向にあることが分かった。そこで、TEMと3次元アトムプローブを用いてBH処理を施したZKX200合金とZKX600合金の微細組織を比較したところ、ZKX200合金では、2%ひずみを導入した際に活動されたと思われる転位に溶質元素のCaとZnが偏析し、母相にCaとZnよりなる溶質クラスタが形成していることが明らかになった。一方、ZKX600合金では、ひずみ導入時に活動した転位には明確な溶質元素の偏析は見られず、母相にZnよりなるクラスタの形成がみられたことから、大きなBH性は溶質元素の転位芯への偏析と溶質クラスタの形成によりもたらされることが明らかになった。一方、フェーズフィールドシミュレーションにより、母相の組成がMg-0.3Ca-0.3ZnまたはMg-0.3Ca-0.7Al(at.%)のときの170°C時効処理における溶質元素の転位偏析を解析した。Mg-Ca-Zn合金では、10-100秒の時効処理でCaとZnの偏析量が最大値を示す結果が得られた。一方、Mg-Ca-Al合金では、Caの偏析量は10-100秒の時効処理で最大値を示すのに対し、Alの偏析量は10000-100000秒の時効処理で最大値を示す結果が得られた。平成3031年度は、析出強化や溶質元素のふるまいがBH性に及ぼす影響を明らかにすることを目標として、種々の組成を有する合金のBH性の評価を行い、さらにTEMや3DAPを用いた精緻な微細組織を行った。BH性の評価の結果、時効硬化を示すMg-Zn-Ca系合金において、強化相としてGuinier Preston (G.P.)ゾーンが析出する希薄合金がMgZn2相の析出する高濃度合金に比べてより大きなBH性を示すことを明らかにすることができた。そして、微細組織解析の結果、溶質クラスタの形成と転位芯への合金元素の偏析の両者によって、BH性が最大化できることが明らかになった。一方、フェーズフィールドシミュレーションについては、母相がMg-Ca-Zn系またはMg-Ca-Al系のときの溶質元素の転位偏析をモデル化し、解析に必要なギブスエネルギーや溶質元素の拡散係数のパラメータを収集した。これにより、母相組成や時効処理の温度・時間条件が溶質元素の偏析に及ぼす影響を解析することが可能になった。Mg-Ca-Zn合金とMg-Ca-Al合金に対する解析結果から、合金種によって溶質元素の偏析の時間スケールに違いが現れることが明らかになった。以上のとおり、当初予定していた時効硬化型マグネシウム合金のBH性の評価のほとんどが終了しつつあること、フェーズフィールド法を用いた転位芯への溶質元素の偏析に関するシミュレーションに目途が立ち、合金種の違いによって転位芯への溶質元素の偏析メカニズムに違いがみられる可能性が示唆されるなど、新たな知見が得られつつあることから、研究は順調に進んでいると考えることができる。今後も当初の計画に沿って研究を進める。まず、BH性評価を行う上で、固溶体合金のBH性評価を行えていないことから、Zn、Caの添加量を最小限に抑えた固溶体合金の特性評価を進める。それによって、BH処理による溶質元素の転位芯への偏析の有無に注目しながら、BH性の評価を進める。次に、フェーズフィールドシミュレーションについては、Mg-Ca-Zn系またはMg-Ca-Al系において、母相組成や時効処理条件が溶質元素の偏析に及ぼす影響を系統的に調査する。また、溶質元素が偏析した転位に外部せん断応力をかけて転位動力学計算を実施することで臨界分解せん断応力の値を算出し、溶質元素の偏析量との関係を調査する。さらに、平成31年度は、連携研究者の大村と変形挙動のTEM内その場観察を進める。具体的には、TEM内ナノピラー圧縮試験を行い、析出物や溶質元素の偏析した転位と、変形中に導入される転位や双晶との相互作用の様子をその場観察する。その際、底面すべりと引張双晶について観察を行うため、FIB/SEMを用いて圧縮中にそれらの変形モードが活動するよう結晶方位を配向させたナノピラー試料を作製する。ナノピラー試料は、平成30年度中に予備調査として作製方法の検討を進め、すでに試験可能なサイズのピラー上試料を作製することができるようになっていることから、試験を行う試料を選定すれば、すぐに試験を開始することができる。

以上に述べた直接観察とシミュレーションから、析出物や溶質元素が偏析した転位の強化への寄与の大小を明らかにして、Mg合金におけるBH性発現のメカニズムを確立することを目指す。平成30年度は、まずG.P.ゾーンが強化相として析出するMg-0.5Ca-1.6Zn-0.5Zr合金圧延材を作製し、BH性が発現することを明らかにした。BH性は、溶体化処理材に対して2%の引張ひずみを導入した後、170°Cで20分の時効処理を行い、2%ひずみ導入時の応力と時効材の0.2%耐力の差から評価した。その結果、BH処理によって0.2%耐力が20MPa程度増加することが分かった。さらに、Zn添加量の異なるMg-xZn-0.3Ca-0.3Zr(x=1-6)合金圧延材を作製し、BH量を評価したところ、Zn添加量が2%より増加するにつれBH量が低下する傾向にあることが分かった。そこで、TEMと3次元アトムプローブを用いてBH処理を施したZKX200合金とZKX600合金の微細組織を比較したところ、ZKX200合金では、2%ひずみを導入した際に活動されたと思われる転位に溶質元素のCaとZnが偏析し、母相にCaとZnよりなる溶質クラスタが形成していることが明らかになった。一方、ZKX600合金では、ひずみ導入時に活動した転位には明確な溶質元素の偏析は見られず、母相にZnよりなるクラスタの形成がみられたことから、大きなBH性は溶質元素の転位芯への偏析と溶質クラスタの形成によりもたらされることが明らかになった。一方、フェーズフィールドシミュレーションにより、母相の組成がMg-0.3Ca-0.3ZnまたはMg-0.3Ca-0.7Al(at.%)のときの170°C時効処理における溶質元素の転位偏析を解析した。Mg-Ca-Zn合金では、10-100秒の時効処理でCaとZnの偏析量が最大値を示す結果が得られた。一方、Mg-Ca-Al合金では、Caの偏析量は10-100秒の時効処理で最大値を示すのに対し、Alの偏析量は10000-100000秒の時効処理で最大値を示す結果が得られた。平成3031年度は、析出強化や溶質元素のふるまいがBH性に及ぼす影響を明らかにすることを目標として、種々の組成を有する合金のBH性の評価を行い、さらにTEMや3DAPを用いた精緻な微細組織を行った。BH性の評価の結果、時効硬化を示すMg-Zn-Ca系合金において、強化相としてGuinier Preston (G.P.)ゾーンが析出する希薄合金がMgZn2相の析出する高濃度合金に比べてより大きなBH性を示すことを明らかにすることができた。そして、微細組織解析の結果、溶質クラスタの形成と転位芯への合金元素の偏析の両者によって、BH性が最大化できることが明らかになった。一方、フェーズフィールドシミュレーションについては、母相がMg-Ca-Zn系またはMg-Ca-Al系のときの溶質元素の転位偏析をモデル化し、解析に必要なギブスエネルギーや溶質元素の拡散係数のパラメータを収集した。これにより、母相組成や時効処理の温度・時間条件が溶質元素の偏析に及ぼす影響を解析することが可能になった。Mg-Ca-Zn合金とMg-Ca-Al合金に対する解析結果から、合金種によって溶質元素の偏析の時間スケールに違いが現れることが明らかになった。以上のとおり、当初予定していた時効硬化型マグネシウム合金のBH性の評価のほとんどが終了しつつあること、フェーズフィールド法を用いた転位芯への溶質元素の偏析に関するシミュレーションに目途が立ち、合金種の違いによって転位芯への溶質元素の偏析メカニズムに違いがみられる可能性が示唆されるなど、新たな知見が得られつつあることから、研究は順調に進んでいると考えることができる。今後も当初の計画に沿って研究を進める。まず、BH性評価を行う上で、固溶体合金のBH性評価を行えていないことから、Zn、Caの添加量を最小限に抑えた固溶体合金の特性評価を進める。
前近代日本における理念的鎌倉幕府像の形成と展開―その言説史的再構成―

研究機関最終年度に当たる本年は、以下の3つの研究を行った。第1に、昨年に引き続き、吾妻鏡と平家物語諸本との比較検討から、吾妻鏡の記述のバイアスを測定する作業を行った。すなわち、A小笠原氏などの武田一族と諏訪社に関する、治承寿永年間の記事のバイアス測定を行った。平家からの離反の際に、源氏の一門であることを強調する記述を有する箇条を中心に、平家物語諸本や説話集の平行記事との比較対象を行った。B頼朝挙兵時に敵対した伊東一族の末路に関して、吾妻鏡および平家物語諸本に見える顕著な相違を、父子関係・主従関係理解の相違に起因するものと捉えて整理し直す試みを行った。第2に、吾妻鏡を取り巻く言説世界を拠り広く俯瞰し、南北朝以降の武家に関する言説研究に繋げるため、鎌倉中後期の京都に於ける歴史叙述相互間に於ける伝承の相違について検討した。その端緒として、平家物語に先行する愚管抄が吾妻鏡に(そしてもちろん平家物語に)与えた影響を計るため、その写本に関する基礎的研究を行った。その一端を、坂口太郎氏の近業を紹介するかたちで、国家学会雑誌第132巻第1・2号に学界展望として掲載した。第3に、昨年度本年度の研究の副産物として、法制史学者・中田薫の学問の全体像を、彼の土地法・親族法についての見解を主軸として概観する論文を執筆し、山口道弘「私有と自主立法権(Autonomie)ー法制史家中田薫の学問形成」佐藤健太郎・荻山正浩・山口道弘編・公正から問う近代日本史(吉田書店)として公刊した。本年度の中心的な研究は、4年間の研究機関の基礎となるべき基礎的研究、すなわち、研究史の整理と、基礎的な史料の採訪、閲読とである。先ず第1に、国文学研究に於ける『平家物語』の諸本成立史について、主として1990年代以降の業績を対象として研究史の整理を行った。その結果、現在の研究水準では、読み本、語り本という大まかな区分の存在と、読み本系、語り本系の内部での大まかな写本の先後関係は認められるものの、それ以上の全体的な系統樹の探究は難しい、若しくは不可能であることが判った。斯かる研究史の整理に基づき、吾妻鏡頼朝将軍記と読み本系平家物語のうちの延慶本系統の物との読み合わせを行い、特に佐々木氏と渋谷氏との姻戚関係を述べる部分を野田文書と比較検討し、また、東国の神社縁起に反映されたる土着伝承をも横目で見ながら、鎌倉幕府御家人制成立に際して、幕府が選択したと考えられる姻戚関係の特質の対外を明らかにした。次に第2には、上記平家物語等の国文学系ないし、民俗学系研究史の整理、批判的読解作業の中で、今日では余り注目されることのない佐野一彦の業績に行き当たり、佐野一彦が遺した講義録、書簡等の一部を2回にわたって現地調査した。現時点では未だ膨大な資料の全てを整理し切れていないが、佐野の業績は、基本的にはドイツ文芸学の流れを汲み、これに民俗学(柳田・折口)を加味しつつ、日本の国文学、歴史学の複合的領域を切り拓いたもので、同時代の保田与重郎や和辻哲郎などとも大まかな指向を共有するものであるように推測される。斯かる佐野の遺産は、今後の歴史学、国文学(史)、民俗学史、史学史等の研究の推進に大いなる好影響を与えるものであると考えられる。この研究成果の一部は、平成27年11月17日、藝林会第9回研究会大会で「南北朝正閏論争と神皇正統記」と題して報告した。現在、吾妻鏡と平家物語、そして野田文書とを比較した研究成果を論文に纏める最中である。本来は本年度にこの論文を公刊する予定であったが、佐々木氏の系図の考証が難物であったため、刊行が遅れてしまった。ただし、その他は研究計画書に概ね従って研究が進展している。鎌倉幕府の御家人制度成立過程については、上記の佐々木氏関係の論文の完成によって一段落となるし、その他の史料蒐集については、国文学系統のもの、歴史学系統のもの、共に計画通りに進んでいる。その他に特筆すべき異常な事態は存在しなかった。本年度は、頼朝挙兵譚の一部をなす、佐々木氏関係記事について、吾妻鏡と読み本系平家物語諸本との比較検討作業を通じて、吾妻鏡の持つ偏差の1つを明らかにする事が出来た:当時の一般的社会通念を構成すると考えられる読み本系平家物語諸本では、姻族の結合と主従の結合とを二項対立の図式で捉えていた。忠義の士は、舅や妻子を振り捨てて主君に忠義をつくす「べき」ものとされていたのである。之に対し、鎌倉幕府は、吾妻鏡の頼朝記編纂の際に、読み本系平家物語(延慶本に近い)の一本を利用したにも拘らず、御家人の上記の二項対立図式に敢て触れず、恐らくは参照した平家一本に載せていたであろう「舅を捨てる」記述を採用しなかった。従者の忠義を重んじたいはずの鎌倉幕府が、そのような記述を採用したのは何故か?当時の御家人社会では、姻族の結合が重要な役割を担って居た(そもそも北条氏が将軍の後見となったのは姻族結合による)が、その結合関係は十分に定式化されておらず、動もすれば御家人の家の間に支配従属関係をもたらしかねなかった。

鎌倉幕府は、姻族の結合が現実に大きな役割を担っていたことを理解していたから、過去に於けるその働きを無視は出来なかったが、しかし、舅と聟とのどちらかに肩入れすれば、御家人の家の間の隠微なマウンティングを助長し、御家人社会の不安定を助長することになる、だからこそ、鎌倉幕府は、姻族の結合の果たした役割に就いて、吾妻鏡の中で価値中立的な態度を採った。そして、姻族関係ではなく、個々の御家人同士の「傍輩」関係こそが、御家人社会を結ぶ紐帯として機能していたかのような、鎌倉初期の歴史像を新たに作り上げ、之を長く参照されるべきものとして、「家門草創」記事の初めに置いたのであった。昨年度の研究の遅れを取り戻し、蒐集した史料の整理読解に力め、鎌倉幕府の主従制度と歴史理解との関係に就き、見解を論文に纏めて公表し、且つ、2回の報告を行うことが出来た。先年度は吾妻鏡頼朝挙兵譚に含まれる佐々木氏関係記事の層位学的分析を行ったが、これに引き続き、本年度は、吾妻鏡全般に点在する渋谷氏関係記事の層位学的分析を行った。分析の結果、以下の三点を明らかにすることができた。渋谷氏関係の記事は、第一に、軍奉行人の記録、京都鎌倉の官僚の日記、渋谷氏の家伝を用いた部分(これには疑偽文書を含む)のほかに、現存する読み本系平家物語そのものではないが、読み本系平家物語諸本と基本的筋書を共有し、しかし、個々のエピソードに対する評価に於いては鋭く対立する一本から引用した部分があること、第二に、御家人の家同士の姻族関係、御家人家内の父子関係、並びに御家人と将軍との主従関係との間の価値付けを繞って、読み本系平家物語諸本の間で、A《「姻族的結合の尊重」と「家父長権の優位」との価値的優位》を主張する物と、B《「(主従関係の強調に因る)姻族的結合の切断」と「家父長支配からの子(たる御家人)の独立」との価値的優位》を主張する物とが、吾妻鏡編纂の背景に存していたこと、第三に、将軍と御家人との主従関係に立脚する鎌倉幕府は、Bの系統に属する平家物語一本を吾妻鏡編纂に際して用いていること(少なくとも、寿永三年二月二日条は、そうであること)、ただし、その際には「姻族的結合の切断」モメントを薄めていたこと、以上である。先年明らかにした所では、鎌倉幕府は御家人の家同士の姻族的結合への介入には極めて謙抑的であり、その謙抑性の理由は傍輩制度の維持にあった。これに対し、鎌倉幕府は、末端の権力基盤とも云うべき御家人の家内部関係への介入には、それほど謙抑的でなかった。その理由は、父子の筋で継承される家の構造が堅固であった、ないし、堅牢であると認識されていたためである、と推測した。研究は、内容的には概ね順調に進んでおり、鎌倉後期から南北朝室町期の史料収集と分析、および、江戸時代への見通しも、おおよそ得られている。ただし、研究の過程で、中世における領域支配と親族構造との関係について、理解を深める必要を感じ、そのために研究史の洗い直し、史料の読み直しを進めたため、当初予定よりも、若干作業が遅れている。研究機関最終年度に当たる本年は、以下の3つの研究を行った。第1に、昨年に引き続き、吾妻鏡と平家物語諸本との比較検討から、吾妻鏡の記述のバイアスを測定する作業を行った。すなわち、A小笠原氏などの武田一族と諏訪社に関する、治承寿永年間の記事のバイアス測定を行った。平家からの離反の際に、源氏の一門であることを強調する記述を有する箇条を中心に、平家物語諸本や説話集の平行記事との比較対象を行った。B頼朝挙兵時に敵対した伊東一族の末路に関して、吾妻鏡および平家物語諸本に見える顕著な相違を、父子関係・主従関係理解の相違に起因するものと捉えて整理し直す試みを行った。第2に、吾妻鏡を取り巻く言説世界を拠り広く俯瞰し、南北朝以降の武家に関する言説研究に繋げるため、鎌倉中後期の京都に於ける歴史叙述相互間に於ける伝承の相違について検討した。
ブラキシズムの歯周疾患におよぼす影響と客観的診査法の研究

ブラキシズムが歯周組織の破壊の進行にどのような役割を果たしているかを明らかにする目的で、睡眠中のブラキシズムによる下顎運動を記録する装置を開発し研究を行っている。現在まで、睡眠中のグラインディングには各被験者に個性的な顎運動パターンが存在し、出現することが観察された。今回は下顎運動を前後・左右の二次元的動きとして再現できるように改良した装置を用い、下顎運動を比較検討した。各被験者のブラキシズムは、グラインディングタイプ、クレンチングタイプ、その他に分類し、さらにクレンチングタイプではICP(咬頭嵌合位)でのクレンチング、ICP以外(偏心位)でのクレンチングに分類した。各被験者毎に、数種類のタイプが観察され、実際に運動方向を分析すると、睡眠中の顎運動は、習慣的な運動方向が存在し、運動量は異なるが同一軌跡上を移動している傾向が見られた。この結果から、下顎の動き方にも個性があり、その習慣的顎運動路に咬合干渉が存在する場合には歯周組織の局所的破壊を進行させる原因となるのではないかと示唆された。一方、樹脂性塗料を咬合面に均一に塗り睡眠中のブラキシズムによる咬合接触状態、滑走状態を観察する研究では、咬合接触状態の規格撮影法の確立と、規格撮影にて撮影した歯の咬合面の接触状態を、意識下での接触状態と睡眠中の接触状態とを比較している。さらに、その時の咬合接触面積をデジタイザーにより分析、計測する方法を確立中である。
下肢骨格筋血管のα1アドレナリン受容体サブタイプの生理的意義に関する研究

研究の背景として、末梢動脈疾患患者の数は著しく増加しており、重症下肢虚血へ進行する症例は510 %と下肢切断においては23 %に至る。これらより糖尿病時における下肢の循環調節機構の変化を解明することは急務である。下肢の動脈と静脈には多くのα1-アドレナリン受容体(α1-AR)サブタイプが発現しており、サブタイプ受容体特異的に血流調節を行っていると考えられているが、その詳細な生理的意義は明らかではない。糖尿病は下肢の閉塞性動脈疾患の危険因子であるが、糖尿病時の動脈と静脈のα1-ARサブタイプの発現量や機能変化は明らかではない。本研究課題ではモデル動物の膝窩動脈および静脈を用いて、糖尿病におけるα1-ARサブタイプの機能変化を明らかにし、下肢閉塞性疾患における循環調節機構の変化を検討することを目的としている。実験には8週齢のWistar系雄性ラットを用い、膝窩動脈と静脈を摘出し輪状血管標本を作成した。α1-作動薬であるフェニレフリン(PE: 0.1 μM-30 μM)の濃度依存性反応を取得後、α2-AR選択的拮抗薬(ラウオルシン)存在下で、プラゾシン、5-MU、シロドシンの効果について等尺性張力を記録し検討した。プラゾシンは膝窩動脈と静脈でのPE収縮をともに抑制した。一方、シロドシンと5-MUは膝窩動脈でのPE収縮を抑制したが、膝窩静脈のPE収縮に影響を与えなかった。さらに、膝窩動脈においてプラゾシンおよび5-MU存在下でシロドシンは、PE収縮を競合性に抑制した。以上の結果より、ラット膝窩動脈平滑筋では、α1L-ARがPE収縮に関与していることが示唆された。
細胞膜受容体の小胞体品質管理を介した花粉成熟過程のストレス耐性機構の解析

本研究では、細胞膜の受容体様キナーゼ(LRR-RLK)に着目した解析によって、小胞体品質管理因子であるAtERdj3BやUGGTといった小胞体分子シャペロンの花粉成熟過程における役割を明らかにするとともに、小胞体分子シャペロン・品質管理装置によるLRR-RLKの認識と機能発現の特異性の解明を目指している。本年度は、昨年度に引き続き領域内の共同研究を進め、花粉形成過程で機能するLRR-RLKの細胞外ドメインと小胞体Jタンパク質との相互作用の解析を行った。そして、昨年度見いだしたLRR-RLK細胞外ドメインとAtERdj3Bとの特異的な相互作用は、熱ストレスによって増加することを示す結果を得た。また、LRR-RLK細胞外ドメインに関する部分断片を用いた解析で、AtERdj3Bが特に認識する領域の推定を行った。本年度はまた、葯1個を用いた遺伝子発現解析系を用いた解析を進めた。そして、定量的解析に適した組織量の検討を行うとともに、定量PCR実験の標準化でこれまで利用されてきたハウスキーピング遺伝子でも、葯の発達ステージによって発現量が大きく異なるものがあることを示した。また、発達中の葯におけるUGGTなどの発現時期および組織の解析を行い、UGGTが花粉成熟期の葯で特異的に発現していること、タペート組織で特異的に発現するAtERdj3Bとは異なり、UGGTはタペート組織崩壊後の葯でも発現していることを示した。26年度が最終年度であるため、記入しない。研究代表者らは、小胞体品質管理において異常タンパク質の選別過程で機能する因子である、小胞体Jタンパク質AtERdj3Bや、糖タンパク質特異的品質管理因子UGGTに関するシロイヌナズナ変異株が、高温ストレス下で花粉成熟過程に異常を示すこと、その原因が花粉成熟過程に必要な細胞膜の受容体様キナーゼ(LRR-RLK)の細胞膜輸送の欠損によることを見いだした。本研究では、LRR-RLKに着目した解析によって小胞体品質管理因子の花粉成熟過程における役割を明らかにするとともに、小胞体分子シャペロン・品質管理装置によるLRR-RLKの認識と機能発現の特異性の解明を目指している。本年度は、領域内の共同研究によって、花粉形成過程で機能するLRR-RLKの細胞外ドメインと3種類の小胞体Jタンパク質を無細胞タンパク質合成系を用いて合成し、これらの間の相互作用解析を行った。この結果、LRR-RLKと小胞体Jタンパク質間の相互作用には特異性が存在すること、これがAtERdj3Bに関する変異株の示す花粉成熟の特異的な過程の欠損と関連していることを示唆する結果を得た。本年度は、昨年度までに見いだしたaterdj3b uggt二重変異株が示す矮性と不稔の表現型の原因についても解析を進めた。その結果、この表現型がLRR-RLKのひとつであるBri1の機能欠損と関連していることが示された。一方で、uggt単独変異株が示す高温ストレス下での不稔は、Bri1の機能欠損によるものではないことが示唆された。本年度は、次年度以降の解析の準備として、LRR-RLK-GFP発現ラインを構築するとともに、領域内の共同研究によって発達中の葯1個を用いた遺伝子発現解析実験系を確立した。本年度の目標の一つであった、LRR-RLKと小胞体分子シャペロンの相互作用解析について結果が得られつつあること、次年度の解析のための準備が進んでいることから、当初予定していた目的はおおむね達成できていると考えられる。LRR-RLKと小胞体Jタンパク質間相互作用解析の結果、Jタンパク質の変異株の組み合わせで単独欠損株とは異なる花粉成熟異常の表現型が生じることが予想されることから、本年度は二重変異株を用いた解析も進めていく。

また、LRR-RLKの細胞内輸送について、GFP融合タンパク質発現ラインを利用して検討し、機能欠損との関連を明らかにしていく予定である。花粉成熟異常がどのようにして生じるかについては、葯における遺伝子発現解析に加えて、質量顕微鏡を用いた葯表面の脂質組成解析を進めることで検討していく予定である。
骨粗鬆症の病態生理に関する分子生物学的研究

骨粗鬆症の分子的基盤を明らかにする目的で,骨芽細胞並びに破骨細胞についてその細胞分化を制御する液性因子並びに細胞内において細胞の機能を調節する転写因子を中心に解析を行った.骨芽細胞においてはその分化と機能を制御する転写因子としてHelix-Loop-Helix型転写因子であるIdが発現することを明らかにし,その遺伝子制御がBMPによって調節を受けること,またレチノイン酸によって修飾を受けることを明らかにした.骨芽細胞に特異的に発現するオステオカルシンの上流にもHelix-Loop-Helix型転写因子が結合し,制御する機構が存在することを発見した.骨芽細胞の機能を調節する転写因子として,Helix-Loop-Helix型のADD1並びにHES1の存在とそれぞれのレチノイン酸並びにビタミンDによる制御機構が存在することを明らかにした.また骨芽細胞と共に軟骨細胞の研究を推進し,軟骨細胞株としてTC6細胞を樹立し,軟骨細胞を含む骨格系細胞において軟骨特異的な遺伝子の制御を制御するScleraxisの存在を明らかにした.更にこのScleraxisがTGFβ並びにFGFによって制御を受けることを示し,また軟骨の分化に重要な働きをするhedgehogが骨芽細胞でもTGFβによって制御されることを見出した.また骨芽細胞において,骨芽細胞の産生する主要な骨形成性のサイトカインであるTGFβのIII型受容体が骨芽細胞において糖質コルチコイドにより制御を受けることを明らかにし,新しいサイトカインであるプライオトロフィンがビタミンDによって制御を受けることを明らかにした.破骨細胞においてはその分化機構を支持する細胞の確立が重要であるが,SV40-largeT抗原を持つトランスジェニックマウスを用いて破骨細胞分化を支持し得る細胞株を樹立し,その細胞において発現する遺伝子群の詳細を解析した.以上骨芽細胞並びに破骨細胞の両面,及びこの2つの細胞を繋ぐシグナルとしてのサイトカインについてそれぞれの分子レベルの調節機構を本研究において明らかにすることができ,今後の骨粗鬆症の治療手段の確立に向け,分子レベルでの知見の基盤が確立できた.骨粗鬆症の分子的基盤を明らかにする目的で,骨芽細胞並びに破骨細胞についてその細胞分化を制御する液性因子並びに細胞内において細胞の機能を調節する転写因子を中心に解析を行った.骨芽細胞においてはその分化と機能を制御する転写因子としてHelix-Loop-Helix型転写因子であるIdが発現することを明らかにし,その遺伝子制御がBMPによって調節を受けること,またレチノイン酸によって修飾を受けることを明らかにした.骨芽細胞に特異的に発現するオステオカルシンの上流にもHelix-Loop-Helix型転写因子が結合し,制御する機構が存在することを発見した.骨芽細胞の機能を調節する転写因子として,Helix-Loop-Helix型のADD1並びにHES1の存在とそれぞれのレチノイン酸並びにビタミンDによる制御機構が存在することを明らかにした.また骨芽細胞と共に軟骨細胞の研究を推進し,軟骨細胞株としてTC6細胞を樹立し,軟骨細胞を含む骨格系細胞において軟骨特異的な遺伝子の制御を制御するScleraxisの存在を明らかにした.更にこのScleraxisがTGFβ並びにFGFによって制御を受けることを示し,また軟骨の分化に重要な働きをするhedgehogが骨芽細胞でもTGFβによって制御されることを見出した.また骨芽細胞において,骨芽細胞の産生する主要な骨形成性のサイトカインであるTGFβのIII型受容体が骨芽細胞において糖質コルチコイドにより制御を受けることを明らかにし,新しいサイトカインであるプライオトロフィンがビタミンDによって制御を受けることを明らかにした.破骨細胞においてはその分化機構を支持する細胞の確立が重要であるが,SV40-largeT抗原を持つトランスジェニックマウスを用いて破骨細胞分化を支持し得る細胞株を樹立し,その細胞において発現する遺伝子群の詳細を解析した.以上骨芽細胞並びに破骨細胞の両面,及びこの2つの細胞を繋ぐシグナルとしてのサイトカインについてそれぞれの分子レベルの調節機構を本研究において明らかにすることができ,今後の骨粗鬆症の治療手段の確立に向け,分子レベルでの知見の基盤が確立できた.平成5年度には骨芽細胞の特異的な発現タンパクであるオステオカルシンについて検討し、このオステオカルシンの発現にHelix-Loop-Helix型のタンパク因子の関与する可能性について検索を行った。この結果、骨芽細胞様細胞ROS17/2.8に対し、塩基性アミノ酸配列を欠いたHelix-Loop-Helixタンパクであるld遺伝子を形質導入し、過剰発現を行う事によりオステオカルシン遺伝子の転写産物の量が著減する事が明らかとなった。この実験では3つの独立したld遺伝子の導入細胞について同様の結果が得られ、また一方でアンチセンスのld遺伝子の形質導入を行った細胞ではオステオカルシンの転写産物は、やや増加を示した。この様なことから骨芽細胞の分子機能の発現においては少なくともHelix-Loop-Helix型のタンパク質が関与する可能性が示唆された。また、オステオカルシン遺伝子の上流部分プロモーター領域に対し、これをレポーター遺伝子に結合したコンストラクトを作製し、トランジェントトランスフェクションを行ってld遺伝子の同時発現の影響を検討したところ、この系においてもレポーター遺伝子発現の抑制がセンス型Idによって生ずる事が判明し、転写制御が直接HLH型のタンパクを介して起こる事が示唆された。オステオカルシンの遺伝子の上流にはHelix-Loop-Helix型の認識DNA配列であるE-Boxが約1kbに5つ存在し、プロモーターの欠失変異を作製して、このE-Boxのそれぞれの役割を検討したところ、最も転写開始位置に近いE-Boxがldの抑制性の働きを受けている事が判明した。

そこで現在、このDNA配列に結合する遺伝子の詳細について検討を行っている。また、破骨細胞の分化実験系について現在のところ細胞株としての破骨細胞様細胞は得られていないところから初代培養が主となっており、この点が分化の機構の解析に大きな障害となっている。そこで、Large T抗原を過剰発現するトランスジェニックマウスより得た細胞を用い、破骨細胞を株細胞の培養により分化誘導し得る系を開発し、特に破骨細胞形成を支持する永久細胞株を樹立する事に成功した。今後これらの細胞を用い破骨細胞の分化機能に関わるHelix-Loop-Helix型の遺伝子の発現と、その制御を検討する予定である。これまでの研究によって骨芽細胞に特異的に発現するタンパクであるオステオカルシンについて、その上流の1kb以内におけるHLH型タンパク質の結合のコンセンサス配列であるE-boxを検討し、5つのE-boxを同定し、そのうち最も下流の転写開始部位に近いE-boxであるOCE1がhelix-loop-helix型の抑制型遺伝子であるldの発現ベクターによって調節を受けることを明らかにした。このOCE1の結合配列に結合するタンパク群は骨芽細胞の分化を促進するサイトカインであるBMP2(骨形成因子)によって分化を誘導された線維芽細胞C3H10T1/2の核内に存在するタンパク因子として検出でき、これがBMPで処理していない対象群の核内の存在量に比べ40倍の増加が観察されるものであった。また、何らかの分化促進性の結合因子の存在があるものと、この事から推測された。このOCE1のDNA配列をプローブとして用い、サウスウエスタンスクリーニングを行った。現在これに結合する遺伝子の探索とその性状の解析が進行中である。また、これに加え正の制御作用を及ぼすB-HLHロイシンジッパ一形の分子である新たにクローニングされた転写因子ADD1についても検討し、ADD1が様々の骨芽細胞様細胞、即ちROS17/2.8、MC3T3E1やラット胎児カルバリアより酵素によって得られた正常ラット骨芽細胞において発現していること。また、その遺伝子発現が分化促進作用を持つことが知られているレチノイン酸の処理によって、正の制御を受けることを明らかにした。ADD1の遺伝子発現は、時間依存性で4時間以内でその発現が増加することが明らかであり、その増加作用はレチノイン酸の容量に依存して、10^<-6>Mによって最高値を示した。レチノイン酸のADD-1への作用は転写レベルで起こることが、転写阻害剤アクチノマイシンDの共存による実験により明らかとなり、またその転写活性の促進には新しいタンパクの合成の必要がないことが、サイクロヘキシミドを用いた実験から明らかとなった。ADD1が結合するDNA配列に対するROS17/2.8細胞の核内タンパクによる結合活性がE/C配列を用いて確認された。この結合活性はROS17/2.8細胞のレチノイン酸の処理によって増加することが観察された。
L-asparaginaseの体内薬物動態と至■投与法の検討

l-asparaginase投与における血中濃度の検討について症例数を加えることで、以下の様なことが明らかとなった。隔日投与群と連日投与群での、血中のアスパラギン値は血中trough値に差があるものの、アスパラギンの枯渇効果は、いずれの群でも速やかに出現、連続投与群では、3日間の休薬後の効果は持続、血中濃度が低かった隔日投与群でも、アスパラギンの枯渇は、持続した。隔日投与群で、グルタミンの枯渇効果が出現したが、血中trough値が低かった隔日投与群では、グルタミンの枯渇効果は軽度。隔日投与群と連日投与群でのプロトロンビン時間と、フィブリノーゲン値の推移は両群で差はなく、投与開始7日から14日で50mg/dlのレベルまで減少。PT時間は、隔日投与群が投与期間中徐々に延長する傾向を示しますが、連日投与群では、投与により延長傾向が認められるものの、3日間の休薬後は、一旦回復投与開始とともに再び延長という傾向がみられた。この結果、PT延長は、隔日投与群でより強い傾向がある。線溶系因子のα2-ブラスミンインヒビターと、凝固阻害因子のAT-IIIは、両群とも投与開始後7から14日に低下し、投与終了後も回復が遅れた。l-asparaginaseの薬理効果を明らかにするうえで、アスパラギン等のアミノ酸の測定は重要である。しかしながら、その測定を困難にしているのは、生理的な状態では細胞から供給されているごくわずかのアスパラギンが検体採集後、血清中にごくわずかに残存するアスパラギナーゼにより加水分解され、測定上枯渇を示す可能性があることである。Asselinら5)は、5-diazo-4-oxo-L-norvaline(DONV)を用いて、l-asparaginase活性を中和させる方法を報告している。その後Donatella6)らは、DONV自身の安定性が悪いことや、HPLC法にて測定する際の問題から、実際の測定に使用することは困難と考え、DONVを用いずにsulphosalicylic acidを加えることにより除蛋白を行うことでl-asparaginasによる加水分解を阻害する方法を利用した測定法を検討している。詳細は省略するが、実際の測定上は、この方法が実際的であると述べている。最近の報告では、このDonatellaらの報告した方法で測定されているものが多い。測定法が困難であれば、血中動態を明らかにすることも困難となるため、この点については今後の検討課題と言える。この点を、明らかにしたうえで、l-asp存在化における培養系の検討を加えていく予定である。
木材糖化残渣リグニンの有効利用に関する基礎的研究

グアヤシル核およびシリンギル核を有する簡単なリグニンモデル化合物を用いた実験により、縮合型グアヤシル核および縮合型シリンギル核は低分子フェノール類と容易に核交換反応を行うことが知られた。一方、広葉樹リグニン中に約50%存在するシリンギルリグニンの硫酸処理中におきる化学的変質について検討するために、シリンギルグリセロール-β-シリンギルエーテルをグアヤシルモデルと同様に処理した。その結果、一般的な加水分解や縮合反応に加えて、特に濃硫酸中ではより立体障害の受けているメトキシル基が分解して水酸基となり、次いでβ-エーテル結合を開裂して環状エーエル体を与えることが明らかとなった。この低分子化反応がシリンギルリグニンは72%硫酸に溶解するという事実に大きく関与しているものと推測される。一般に硫酸リグニンは高度の縮合構造のために有機溶媒に不溶であるが、化学成品として有効利用するには有機溶媒に可溶化し化学反応を行わせる必要がある。前述したように縮合型芳香核は簡単なフェノール類と核交換し低分子化することが明らかにされたが、針葉樹硫酸リグニンも濃硫酸および塩化アルミニウムを触媒としてフェノールと反応させるとほぼ完全に5%アルカリや含水ジオキサンに溶解することが知られた。従って、硫酸リグニンの化学成品変換への途が開らかれたと思われるが、他の触媒や核交換反応以外の方法についても検討する予定である。加水分解リグニンの一つである塩酸リグニンについては、フェニルクマランをモデル化合物として塩酸処理を行なうと少量の縮合物に加えて多くは原料として回収された。β-アリールエーテル型モデル化合物の結果も考慮すると、塩酸リグニンはプロトリグニンに比べ約20%縮合構造の多いリグニンとなり、硫酸リグニンに比べると変質の少ない反応性に富むリグニン試料と言えよう。なお、硫酸リグニンよりの化成品の変換について検討中である。