hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
レンチウイルスベクターによる子宮内表皮遺伝子治療

表皮における遺伝子機能の補充、変異遺伝子の矯正など、遺伝子レベルの治療については、遺伝子の送達効率、導入した遺伝子の安定性、ベクターの免疫原性、発現効率の問題などにより、未だに理想的な表皮遺伝子治療用ベクター系は得られていない。しかし、vesicular stomatitis virusのエンベロープをウイルス表面にもつ組換えpseudotypeレンチウイルスベクターを用いれば、遺伝子が非分裂細胞のゲノムに組み込まれ、遺伝子導入後持続的に長期の遺伝子発現(6ヶ月以上)が期待できる。そこで、まず、HIV-1のプロウイルスゲノムをパッケージング、エンベロープ、ベクターの3つに分けてプラスミドを構築した。パッケージングプラスミドは、gag、pol、env以外に、修飾遺伝子であるvif、vpr、vpu、nefと制御遺伝子tat、revをもつようにデザインし、エンベロープにはVSV-G遺伝子を組換えて角化細胞にも感染可能にした。ベクターは、LTR、パッケージングシグナル、逆転写プライマー結合部位、マーカーとしてGFP遺伝子をもつように構築し、転写されたGFP mRNAはウイルス粒子内に取り込まれ、感染後、逆転写されて、角化細胞の染色体に組み込まれるようにデザインした。これらのプラスミドを293T細胞に導入し、感染細胞にGFPを発現するpseudotypeレンチウイルスベクターを得、妊娠15日マウスの羊水中に投与した。その結果、アデノウイルスと異なり、母体への影響はなく、18。5日目の胎児上皮におけるGFPの発現が確認された。しかし、分化した角化細胞には感染可能であるが、早期に脱落することから、今後、表皮幹細胞へ感染させる方策について検討が必要と思われた。表皮における遺伝子機能の補充,変異遺伝子の矯正など,遺伝子レベルの治療については,遺伝子の送達効率,導入した遺伝子の安定性,ベクターの免疫原性,発現効率の問題などにより,未だに理想的な表皮遺伝子治療用ベクター系は得られていない.しかし,vesicular stomatitisのエンベロープをウイルス表面にもつ組換えpseudotypeレンチウイルスベクターを用いればレンチウイルスベクターは,遺伝子が非分裂細胞のゲノムに組み込まれ,遺伝子導入後持続的に長期の遺伝子発現(6ケ月以上)が期待でき,表皮細胞にも感染させることが可能と考えられる.本研究は表皮遺伝子治療用ベクターとしてpseudotypeレンチウイルスを作成し,臨床的意義のある表皮遺伝子治療プロトコルを作成するための基本的データを提供することを目的としている.平成13年度は,HIV-1のプロウイルスゲノムをパッケージング,エンベロープ,ベクターの3つに分けてプラスミドを構築した.パッケージングプラスミドは,gag, pol, env以外に,修飾遺伝子であるvif, vpr, vpu, nefと制御遺伝子tat, revをもつようにデザインし,エンベロープにはVSV-G遺伝子を組換えて角化細胞にも感染可能にした.ベクターは,LTR,パッケージングシグナル,逆転写プライマー結合部位,マーカーとしてGFP遺伝子をもつように構築し,転写されたGFP mRNAはウイルス粒子内に取り込まれ,感染後,逆転写されて,角化細胞の染色体に組み込まれるようにデザインした.これらのプラスミドを293T細胞に導入し,感染細胞にGFPを発現するpseudotypeレンチウイルスベクターの作製に成功した.表皮における遺伝子機能の補充、変異遺伝子の矯正など、遺伝子レベルの治療については、遺伝子の送達効率、導入した遺伝子の安定性、ベクターの免疫原性、発現効率の問題などにより、未だに理想的な表皮遺伝子治療用ベクター系は得られていない。
肥満におけるアディポカイン分泌異常による高血圧・腎障害発症機序の解明

肥満は増加傾向に有り、高血圧や心血管病及び慢性腎臓病発症と密接に関連している。肥満が高血圧を来しやすい原因として、血圧に対する食塩感受性が亢進していることが臨床試験で示されているがその機序は不明である。申請者らは、肥満に特有のアディポカイン異常が腎尿細管におけるナトリウム輸送体の異常亢進を惹起して食塩感受性高血圧発症の原因になると推察した。食塩感受性高血圧モデルラットの肥満型と非肥満型を比較において、同量の食塩摂取でも肥満型で高血圧及び腎障害を生じやすいことを認め、肥満型では高食塩摂取時に腎尿細管のあるナトリウム輸送体異常が生じていることを発見し、原因となるアディポカインの異常を検討している。肥満は増加傾向に有り、高血圧や心血管病及び慢性腎臓病(CKD)発症と密接に関連している。肥満に高血圧を来しやすい原因として、肥満では血圧に対する食塩感受性が亢進していることが臨床試験で示されているがその機序は不明である。また、肥満者においては、白色脂肪細胞から放出されるアディポカインの合成、分泌の異常が認められ、例えば2型糖尿病や肥満者の血漿では、レプチンが上昇し、腎保護的に働くアディポネクチンは低下している。申請者らは肥満者ではTNF-αやPAI-1、IL-6、CRPF等、炎症やインスリン抵抗性を惹起、増強するアディポサイトカインが増加していることに注目し、肥満に特有のアディポカイン異常と関連した腎尿細管におけるNa輸送体の異常があると推察し、解析を行っている。申請者らは、食塩感受性高血圧モデルラットの肥満型と非肥満型では、同量の食塩を負荷しても、肥満型で高血圧及び腎障害を生じやすいこと、すなわち血圧の食塩感受性が亢進していることを発見した。また、肥満型と非肥満型の腎尿細管のNa輸送体の発現を比較解析し、その異常があることを確認した。既に慢性的な高レプチン血症によるNa-K-ATPase亢進のようなアディポカイン異常による尿細管Na再吸収機能の亢進が知られているが、そのほかのNa輸送体については報告がまだなく、血圧の食塩感受性を上昇させる機序も不明であり、本研究による解明を目標としている。理由:肥満型とやせ型ラットの比較において、同量の食塩を負荷しても、肥満型で高血圧及び腎障害を生じやすいこと、すなわち食塩感受性が亢進していることを発見し、その責任となりうる腎尿細管Na輸送体を確認できたため。また、肥満者では、白色脂肪細胞から放出されるアディポカインの合成、分泌の異常が認められており、例えば2型糖尿病や肥満者の血漿では、レプチンが上昇し、腎保護的に働くアディポネクチンは低下している。申請者らは肥満者では、炎症やインスリン抵抗性を惹起、増強するアディポサイトカインが増加していることに注目し、肥満に特有のアディポカイン異常が腎尿細管におけるNa輸送体の異常を惹起して食塩感受性高血圧発症の原因になると推察し、解析を行った。まず、食塩感受性高血圧モデルラットの肥満型と非肥満型を比較において、同量の食塩を負荷しても、肥満型で高血圧及び腎障害を生じやすいこと、すなわち血圧の食塩感受性が亢進していることを発見した。また、肥満型では高食塩摂取時に腎尿細管のNa輸送体異常が生じていることを認めた。そこで、肥満において、高食塩摂取時に腎尿細管の責任Na輸送体を活性化しうる血中アディポカインの異常が存在するかににつき、検討をすすめた。様々なモデルラットやマウスを用いて、食塩感受性高血圧に関連する血中のアディポカインを含めたホルモンや分子を検討する過程において、抗加齢因子klothoが食塩感受性高血圧と強い関連を示すことが分かった。また、腎および血液中のklotho発現が低下したマウスは食塩感受性高血圧を示すが、ある腎尿細管Na輸送体の機能異常が原因の1つであることを明らかにした。肥満や加齢において血圧の食塩感受性が亢進する分子機序は未解明であり、本研究による解明を目標としている。理由:肥満型と非肥満型ラットの比較において、同量の食塩を負荷しても、肥満型で食塩感受性が亢進して高血圧を発症することを発見し、その責任と考えられる腎尿細管Na輸送体を確認した。さらに、抗加齢因子klothoの発現低下が食塩感受性高血圧発症と強く関連し、その分子機序として特定の腎Na輸送体の機能亢進を介することを明らかにした。申請者らは肥満者では、炎症やインスリン抵抗性を惹起、増強するアディポサイトカインが増加していることに注目し、肥満に特有のアディポカイン異常が腎尿細管におけるNa+輸送体の異常を惹起して食塩感受性高血圧発症の原因になると推察し、解析を行った。

まず、食塩感受性高血圧モデルラットの肥満型と非肥満型を比較において、同量の食塩を負荷しても、肥満型で高血圧及び腎障害を生じやすいこと、すなわち血圧の食塩感受性が亢進していることを発見した。また、肥満型では高食塩摂取時に腎尿細管のNa+輸送体異常が生じていることを認めた。さらに、肥満において、高食塩摂取時に腎尿細管の責任Na+輸送体を活性化しうる血中アディポカインの異常が存在するかににつき、検討をすすめた。また、様々なモデルラットやマウスを用いて、食塩感受性高血圧に関連する血中のアディポカインを含めたホルモンや分子を検討する過程において、抗加齢因子klothoが食塩感受性高血圧と強い関連を示すことが分かった。腎および血液中のklotho発現が低下したマウスに高食塩食を与えると高血圧を示すが、その原因として血管平滑筋でRhoの異常活性化が生じていることが分かった。現在更にその分子機序につき検討を行っている。肥満や加齢において血圧の食塩感受性が亢進する分子機序は未解明であり、本研究による解明を目標としている。肥満は増加傾向に有り、高血圧や心血管病及び慢性腎臓病発症と密接に関連している。肥満が高血圧を来しやすい原因として、血圧に対する食塩感受性が亢進していることが臨床試験で示されているがその機序は不明である。申請者らは、肥満に特有のアディポカイン異常が腎尿細管におけるナトリウム輸送体の異常亢進を惹起して食塩感受性高血圧発症の原因になると推察した。食塩感受性高血圧モデルラットの肥満型と非肥満型を比較において、同量の食塩摂取でも肥満型で高血圧及び腎障害を生じやすいことを認め、肥満型では高食塩摂取時に腎尿細管のあるナトリウム輸送体異常が生じていることを発見し、原因となるアディポカインの異常を検討している。肥満モデルにおいて想定している腎尿細管の責任Na輸送体が脂肪細胞由来のアディポカインにより活性化し、食塩感受性高血圧の発症に関与していることを示す実験を予定している。また、責任アディポカインおよび制御因子の同定を予定している。肥満では脂肪細胞が内分泌器官として腎尿細管Na再吸収を制御するという視点のもとに、尿細管だけではなく、アディポカイン制御異常を治療標的としてあげることは、肥満分化を適切に導く新規肥満治療の開発としても期待される。今後は肥満において高食塩摂取時に腎尿細管の責任Na輸送体を活性化しうるアディポカイン異常の探索を予定している。肥満では脂肪細胞が内分泌器官として腎尿細管からのNa再吸収制御に関わることが想定され、アディポカイン異常の是正は食塩感受性高血圧症の新たな治療標的として期待される。また、klotho発現低下に伴う食塩感受性高血圧の発症は、特定の腎Na輸送体の異常が原因の1つであることを示したが、その分子機序を明らかにし、高齢者の高血圧治療の新たな標的としたい。腎臓・高血圧研究の進行に伴い、研究に使用する検査や試薬の修正等あり、生じたものと考えている。研究に使用する検査や試薬、解析機器の変更が生じたため。使用動物の育成が遅れたため。ラットや遺伝子解析関連の試薬、抗体の購入の他、食塩を負荷した肥満モデル及びコントロールの非肥満モデルラットの白色脂肪組織から遺伝子を抽出し、遺伝子発現の網羅的解析を行う(D-REAM法)。ラットやマウスの購入、抗体、試薬、購入を行う。
Tヘルパー1細胞の血管内皮透過におけるCD44-PKCζシグナル経路の解明

種々の慢性炎症に重要な役割を果たすTh1細胞の組織遊走過程、血管内皮透過過程を詳細に解析するために、試験管内において均一な抗原特異性を有するマウス由来のTh1細胞株を樹立し、マウス血管内皮細胞株F-2を用いた再現性のある経内皮透過実験系を確立した。この実験系を用いた解析により、Th1細胞にはケモカインに依存した経内皮透過能と依存しない経内皮透過能があり、両活性がTh1細胞優位な組織浸潤の悪循環を引き起している可能性を示した。また、Th1細胞細胞が発現するLFA-1やCD44といった接着分子を介した血管内皮細胞への接着が重要であり、特に細胞表面のCD44分子架橋刺激がTh1細胞形態を大きく変化させ、細胞遊走を誘導していることが明らかになった。Th1細胞に対する種々の薬剤処理により、この過程にはPI3K、PLC、SrcPTK等のシグナル伝達分子が関与し、アクチン細胞骨格の再編を引き起すことが示唆された。さらに、CD44分子架橋刺激は、特に細胞極性が際立った特有の細胞伸長変化をもたらし、実際の血管内皮透過におけるTh1細胞の遊走にも細胞極性の形成が極めて重要な過程であることがはっきりした。したがって、ケモカイン非依存的かつ接着依存的なシグナルがTh1細胞の経内皮透過過程に重要な役割を担っていることが示唆された。一方で、実験的に扱い易いリンフォーマ細胞株に対して安定遺伝子導入を行い、シグナル伝達経路に関係する分子の様々な変異体について、細胞遊走や形態変化への影響をを観察する系を確立するした。種々の慢性炎症に重要な役割を果たすTh1細胞の組織遊走過程、血管内皮透過過程を詳細に解析するために、試験管内においてマウス由来の均一な抗原特異的Th1細胞株を樹立し、マウス血管内皮細胞株F-2を用いた再現性のある経内皮透過実験系を確立した。この実験系を用いた解析により、Th1細胞はケモカイン刺激に依存しない経内皮透過能があり、この活性がTh1細胞優位な組織浸潤の悪循環を引き起している可能性を示した。現在、Th1細胞への安定遺伝子導入系の構築を進め、この極性形成機構を明らかにしようとしている。
植物１９Ｓプロテアソームによるヒストン修飾を介した環境応答制御機構の解析

近年,植物は環境ストレスに対し,ヒストン修飾やDNAメチル化といったエピジェネティックな制御系によって遺伝子発現を変化させ,適応していることが明らかになってきた。一方,プロテアソームは,能動的タンパク質分解によって細胞周期をはじめとした様々な生命現象を制御するタンパク質複合体である。これまでの申請者の研究から,シロイヌナズナにおいてプロテアソームが,エピジェネティックな遺伝子発現制御に関与することを明らかにした。本研究では,植物プロテアソームによるエピジェネティック制御の分子メカニズムの解明を目的として研究を実施した。当該年度は次世代シークエンサーを用いた全ゲノムのDNAメチル化レベルの解析を実施した。その結果,プロテアソーム変異体においてトランスポゾン領域のCHG配列のDNAメチル化が増加することを見出した。CHG配列のDNAメチル化は植物特異的なメチル基転移酵素CMT3によって付加されることが報告されている。実際にプロテアソーム変異体でメチル化レベルが増加した領域はCMT3によって制御される領域と一致した。また,免疫沈降法によってプロテアソームとCMT3との相互作用を検証した結果,プロテアソームはCMT3と相互作用することを明らかにした。さらに,CMT3がプロテアソームによって分解制御を受けることも示された。以上の結果から,植物プロテアソームはCMT3を適正に分解制御することによって,ゲノムが過剰なDNAメチル化を受けることを抑制している可能性が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は,植物プロテアソームによるピストン修飾機構の解明を通し,植物の新規環境応答機構の解明を目指すものである。近年,植物は環境ストレスに対し,ピストン修飾によるクロマチン構造変換によって遺伝子発現を変化させ,適応していることが明らかになってきた。一方,プロテアソームは,能動的タンパク質分解によって様々な生命現象を制御するタンパク質複合体である。これまでの申請者の研究から,シロイヌナズナ19Sプロテアソームが,エピジェネティックな遺伝子発現制御に関与することが明らかになった。本研究では,植物プロテアソームによるエピジェネティック制御の分子メカニズムの解明を目的として研究を実施する。当該年度は植物19Sプロテアソームによるピストン修飾制御機構を明らかとするために,逆遺伝学的解析および生化学的解析を実施した。これまでに19SプロテアソームがDNAメチル化を制御することを明らかにしているが,DNAメチル化はH3K4トリメチル化と拮抗的に働くことが示唆されている。さらに,酵母や動物において,プロテアソームがピストン修飾制御に関与する可能性が示唆されている。しかし,その詳しいメカニズムはわかっていない。本研究では,プロテアソームによるピストン修飾制御機構を明らかとするために,プロテアソームサブユニットRPT2aの相互作用因子を探索した。その結果,メチル化CpG結合タンパク質MBD1を同定した。MBD1の機能を明らかとするために,生化学的な解析を行った結果,MBD1はピストンへの結合能をもつことを明らかにした。さらに,逆遺伝学的解析を行ったところ,MBD1欠損変異体は,RPT2a欠損変異体同様に,糖ストレスに対して高感受性となることが示された。これらの結果から,プロテアソームがMBD1を介して,ピストン修飾制御に機能し,糖応答時の遺伝子発現制御に関与する可能性が予測できた。本研究は,植物プロテアソームによるエピジェネティック制御機構の解明を通し,植物の新規環境応答機構の解明を目指すものである。近年,植物は環境ストレスに対し,ヒストン修飾によるクロマチン構造変換によって遺伝子発現を変化させ,適応していることが明らかになってきた。これまでの申請者の研究から,シロイヌナズナ26Sプロテアソームが,エピジェネティックな遺伝子発現制御に関与することを明らかにした。これまでにプロテオミクス解析によって, 26Sプロテアソームがメチル化CpG結合タンパク質MBD1と相互作用することを明らかにしている。当該年度は植物26Sプロテアソームによるエピジェネティック制御機構を明らかにするために, MBD1の機能解析を行った。その結果, MBD1はin vitroで無修飾のヒストンH3およびヘテロクロマチン領域に特徴的にみられるヒストン修飾であるメチル化ヒストンH3と結合することが示された。これらの結果から, MBD1がヘテロクロマチン形成に関与する可能性が考えられた。また, MBD1が26Sプロテアソームによって分解されることを明らかにした。以上の結果から, 26SプロテアソームはMBD1のタンパク質量を分解によって制御することにより,ヘテロクロマチン形成を制御していることが考えられた。

その結果,プロテアソーム変異体においてトランスポゾン領域のCHG配列のDNAメチル化が増加することを見出した。CHG配列のDNAメチル化は植物特異的なメチル基転移酵素CMT3によって付加されることが報告されている。実際にプロテアソーム変異体でメチル化レベルが増加した領域はCMT3によって制御される領域と一致した。また,免疫沈降法によってプロテアソームとCMT3との相互作用を検証した結果,プロテアソームはCMT3と相互作用することを明らかにした。さらに,CMT3がプロテアソームによって分解制御を受けることも示された。以上の結果から,植物プロテアソームはCMT3を適正に分解制御することによって,ゲノムが過剰なDNAメチル化を受けることを抑制している可能性が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。当該年度は計画していた遺伝学的解析と生化学的解析を行い,次年度につながる成果が得られたため。本年度は相互作用因子の機能解析において一定の成果を挙げることができたため。今後は,植物プロテアソームによるピストン修飾制御機構を明らかとするために,rpt2a変異体およびmbd1変異体を用いたマイクロアレイ解析を行い,プロテアソームによって遺伝子発現制御を受ける遺伝子の同定を試みる。また標的遺伝子を同定後は,その遺伝子のピストン修飾状態について検討を行う。さらに,MBD1の機能を解析するために,ノックアウト変異体のみならず,過剰発現変異体を作製し,遺伝学的,生化学的解析を試みる。今後は,生化学的および遺伝学的手法を用いて, 26Sプロテアソームによるヘテロクロマチン制御機構の解明を試みる。また,全ゲノムのメチル化DNAレベルの検出など網羅的解析を取り入れ,プロテアソームによるエピジェネティック制御機構の解明を目指す。
半導体融液の音波物性

本研究では、高精度の測定法によりシリコン融液の音速を測定し、NFE(nearly free electron)モデルに基づく構造因子の計算結果との比較を行うことによりシリコン融液の構造を評価した。これらの実験及び計算から得られた結果は以下のように要約される。(1)高温融体の音速測定に耐え得る装置及び高精度音速測定技術の開発を行い、位相比較法によるシリコン融液音速測定に初めて成功した。(2)シリコン融液の音速は温度の上昇に対して非直線的に増加することが明らかとなった。また、測定した音速から算出した等温圧縮率は、融点から1550°Cまでの間で温度の上昇と共に減少するという異常を示した。(3)錫及びゲルマニウム融液の音速のデータの比較から、錫、ゲルマニュウム、シリコンの順に原子量が小さくなるにしたがって等温圧縮率に見られる異常が大きくなることが明らかとなった。錫融液の弾性的振る舞いは、単純液体金属の振る舞いと一致する。(4)NFEモデルに基づく計算により求められた融点におけるS(0)の値は、ゲルマニウム融液では音速から求められたものとほぼ一致するのに対し、シリコン融液では音速から求めたS(0)の方が25%程度大きくなった。このことは、NFEモデルでは表現できない何らかの融点近傍における軟化の機構がシリコン融液で実現している可能性を示す。(4)NFEモデルに基づく計算により求められたシリコン融液の等温圧縮率は、温度の増加に対して直線的に増加し、実験から得られたシリコン融液の異常は再現されなかった。(5)以上により、シリコン融液は融点近傍で軟化を示すと考えられる。この軟化は、熱ゆらぎとは異なる原因の新たな密度ゆらぎが融点近傍で起こることによるものと考えられる。
高密度居住環境下における児童の遊び生活環境整備に関する基礎的研究(居住地区内の遊び場配置形態と遊び生活形態との関連について)

平成元年度及び平成2年度の研究計画は以下のようである。平成元年度は、(1)調査対象地区の選定、(2)調査の実施、(3)調査票からのデ-タ-計測、(4)自宅内遊び・自宅外遊びの発生の解明、平成2年度は、(5)遊び行為の広がりと児童をとりまく遊び場配置パタ-ンとの関連分析、(6)居住地区遊び場利用傾向と地区内遊び場配置パタ-ンとの関連分析、(7)児童の遊び生活領域の変動と居住地区内遊び場配置パタ-ンとの関連分析、をそれぞれの年度の研究計画としていた。それぞれの結果の概要は以下のようである。1.調査対象地区、杉並区の杉並第十小学校以下4小学校区、仙台市の連坊小路小学校以下3小学校区の計7地区を選定した。2.平成元年10月中旬から11月中旬に、35年生全員に対して調査を実施した。調査票配布2.742、回収数2.340、回収率85.3%であった。3.調査票からのデ-タ-計測は、(1)基礎デ-タ-、(2)遊び行為デ-タ-、(3)周辺遊び場状況デ-タ-、(4)遊び場評価デ-タ-を中心にった。4.遊び行為の自宅外化に関しては、1日の遊び時間が1時間以内では遊びは自宅外化しにくく、遊び相手がなく1人遊びの場合や遊び相手が家族である場合も自宅外化しにくいとの基礎的関連を明らかにした。5.個々の児童の自宅をとりまく遊び場配置の類型化及び個々の遊び行為をとりまく遊び場配置の類型化を行い、先ず、遊び場配置類型と遊びの戸外化との関連を捉え、次いで、遊び場配置類型と遊び行為の広がりとの関連を捉えた。今後、個々の遊び場の質・機能の分析が必要である。6.遊び場配置類型と利用する遊び場の種別の関連を捉え、遊び場利用傾向は、遊び行為をとりまく遊び場配置類型に関連を持つ事を把握した。7.遊び場配置類型と遊び行為の広がりでは、遊び場配置類型による違いは明確ではなくほぼ一様に遊び行為の広がりが狭いことが把握された。本年度研究計画は、(1)資料収集・予備調査の基に杉並区内及び仙台市内より調査対象地区を選定し、(2)選定した地区の小学校生児童を対象に『児童の遊び生活に関する調査』を実施し、(3)調査票からのデ-タ-計測を行い、(4)遊びの戸外化分析により自宅からの遊び行為の広がりがない戸内遊び(自宅内遊び)の発生の仕組みの解明を目的とした。1.調査対象小学校区は、杉並区の杉並第十,西田、馬橋,高井戸東の4地区、仙台市の連坊小路、芦口、長命ヶ丘の3地区、計7地区を選定し、調査対象児童は、3年生5年生全員とした。2.調査対象の各学校に調査票を配布し、遊び及び遊び場についての基本的認識及び実態、また、平日・土曜日・日曜日の3日間の生活の記録、遊び行為の地図上への記録、遊び場評価について調査を実施した。3.調査票からのデ-タ-計測は、(1)各児童の基礎デ-タ-、(2)各児童の家及び各遊び行為をとりまく遊び場配置デ-タ-、

(3)遊び場評価デ-タ-、等を、地図上からの計測作業を中心に行った。4.児童の遊びの戸外化について、(1)児童の主体側の遊び及び遊び場についての基本認識状況から、戸外遊び及び友達との遊びに対する積極型と消極型(戸内遊び志向型を含む)に分けて把握され、遊び行為実態に対応しており、積極型では戸外遊び傾向が、消極型では戸内遊び傾向が指摘された。(2)また、各遊び行為における遊び相手の構成から、次のような対応関係にあることが把握された。即ち、一人遊びまたは家族の構成員との遊びにおいては戸内遊びとなる傾向にあり、友達との遊びにおいては戸外遊びとなる傾向にある。(3)周辺遊び場空間の状況と戸外化についての直接的関連は不明瞭であり、児童の主体側の基本認識・各遊び行為における遊び相手の構成との関連で把握する必要があると指摘された。昨年度実施した『児童の遊び生活に関する調査』の調査票からのデ-タ-計測に基づく遊びの戸外化分析をうけ、(1)遊び行為の広がりと児童をとりまく遊び場配置パタ-ンとの関連分析、(2)居住地区内遊び場利用傾向と地区内遊び場配置パタ-ンとの関連分析、(3)児童の遊び生活領域の変動と居住地区内遊び場配置パタ-ンとの関連分析を、本年度の研究計画としていた。それぞれの結果の概要は以下のようである。1.個々の児童の自宅をとりまく遊び場配置の類型化及び個々の遊び行為をとりまく遊び場配置の類型化を行い、遊び場配置類型と遊びの戸外化との関連を捉え、自宅や遊び行為の拠点から40m以内に公園・空き地が存在するパタ-ンにおいては戸外遊びが展開しやすいことが把握された。また、遊び場配置類型と遊び行為の広がりとの関連を捉え、公園・空き地が40m以内に存在する場合は、遊び行為は距離的広がりを見せにくいが、公園・空き地が40m以上120m以内に存在する場合は、遊び行為は距離的広がりを見せるが、公園・空き地の存在範囲以上には広がりにくいこと、また、公園・空き地が120m以内には存在しない場合には、遊び行為は距離的広がりを見せにくくなることが把握された。2.居住地区内の児童の遊び場利用傾向を把握し、地区内遊び場配置の類型化を行い、地区内遊び場配置類型と地区内遊び場利用傾向との関連を捉え、公園・空き地の地区内の分布状況によって利用する遊び場の割合が変動を見せることが把握された。3.地区内遊び場配置類型と遊びの戸外化との関連を捉え、遊びの自宅外化は、児童の交友関係によるものと把握されるものの、遊びの戸外化は地区内の公園・空き地の分布状況によって影響を受けることが把握された。また、地区内の遊び場配置類型と遊び行為の地区的広がりとの関連は明確に表れず、遊び行為の広がりが狭いことが把握された。
ヒトEB virus発癌の動物モデル:サルEBV関連virusによる家兎悪性リンパ腫発生機構

家兎の脾臓や末梢血リンパ球にサルEBVをミリセルを用いてin vitroで感染させて形質転換した2株のcharacterizationの結果、これらはB cell系の形質を有し、EBVの潜伏感染遺伝子のEBNA1とEBNA2の両方が陽性のtype IIIのEBV潜伏感染型を示した。2.EBV関連ウイルスDNAのシークエンス分析重要なヒトEBVの遺伝子EBNA1と相同領域DNAを、三種類のカニクイザル由来EBV(Cyno-EBV, Si-IIA-EBV, HVMF1)を用いてPCRで増幅し、sequencingを行い、ヒトEBVとの相同性をDNAとアミノ酸配列で比較した(Intervirology2000,43:102-106)。3.長期生存感染家兎におけるEBV関連病変の検討現在使用しているウイルスの感染では、ウサギはほとんど長期生存できないので、別のEBV関連ウイルス(HVP)による潜伏感染ウサギモデルの作製を試みた結果、予期せずに、致死的なEBV関連血球貪食症候群の良い動物モデルになるところのHVPによるウサギの血球貪食症を伴う高率な致死的リンパ球増殖異常のモデルを確立して、Am J Pathol(158(4):1533-1542,2001)に報告した。長期生存感染家兎1匹の末血によるSCID日和見腫瘍はできなかった。しかし、SCIDマウスにHVP感染増殖リンパ球増殖病変を移植し、SCIDマウス移植腫瘍を作製できた。4.ヒトへのサル由来EBV関連ウイルスの感染性の検討多数のヒト症例(悪性リンパ腫等)のDNAを用いて,サル由来EBV関連ウイルス(Cyno-EBVやHVP)のDNAの存在の有無を検討したが、人体材料におけるサル由来EBV関連ウイルスのDNAの存在は証明できなかった。1.in vitroのEBV関連ウイルスによる家兎リンパ球immortalization/transformation系の確立とその性状の検討家兎の脾臓や末梢血リンパ球にサルEBVをミリセルを用いてin vitroで感染させて形質転換した2株のcharacterizationの結果、これらはB cell系の形質を有し、EBVの潜伏感染遺伝子のEBNA1とEBNA2の両方が陽性のtype IIIのEBV潜伏感染型を示した。培養液に各ウサギの実験前の正常血清を加えて樹立した2株以外には追加の株を樹立させることはできなかった(学会発表準備中)。2.EBV関連ウイルスDNAのシークエンス解析重要なヒトEBVの遺伝子EBNA1と相同領域DNAを、三種類のカニクイザル由来EBV(Cyno-EBV,Si-IIA-EBV,HVMF1)を用いてPCRで増幅し、sequencingを行い、ヒトEBV-EBNA1や他種のサルのもつえEBV関連ウイルスのEBNA1 homologueとの相同性をDNAとアミノ酸配列で比較した結果、Si-IIA-EBVとCyno-EBVはヒトEBV-EBNA1とそれぞれ53%、58%のアミノ酸の相同性を示した。これらをデータベースに登録(DNA Data Bank of Japan,AB037275:AB037276;AB037277)するとともに、ヒトEBVと種々のサル関連EBVのEBNA1の相互の相同性に基づく系統樹を作製して、論文に投稿中である。3.ヒトへのサル由来EBV関連ウイルスの感染性の検討多数のヒトの悪性リンパ腫や反応性リンパ節症例のDNAを用いて,サル由来EBV関連ウイルスのみを検出するEBNA1領域のprimersでPCRを行った結果、人体材料におけるカニクイザル由来EBV関連ウイルスのDNAの存在は証明できなかった。1.EBV関連ウイルスDNAのシークエンス解析2長期生存感染家兎におけるEBV関連病変の検討

現在使用しているウイルスの感染では、ウサギはほとんど長期生存できないので、別のEBV関連ウイルス(HVP)による潜伏感染ウサギモデルの作製を試みた結果、予期せずに、致死的なEBV関連血球貪食症候群の良い動物モデルになるところのHVPによるウサギの血球貪食症を伴う高率な致死的リンパ球増殖異常のモデルを確立して、Am J Pathol(2001,in press)に報告した。本来の長期生存感染家兎モデルは作製できなかったため、SCIDマウスにEBV関連ウイルス潜伏感染ウサギのリンパ組織を移植して、日和見リンパ腫の動物モデルも作製することもできなかった。3.ヒトへのサル由来ウイルスの感染性の検討大学に保存しれている多数のヒト症例(悪性リンパ腫等)のDNAを用いて,サル由来EBV関連ウイルス(Cyno-EBVやHVP)のみを検出してヒトEBVを増幅しないPCRのprimersを設定してPCRを行い、人体材料にサル由来ウイルスのDNAが存在するかどうかを検討したが、人体材料におけるサル由来EBV関連ウイルスのDNAの存在は証明できなかった。1.EBV関連virus(HVP)によるEBV関連血球貧食症候群ウサギモデルの解析HVP感染細胞のHVP-EBER1をISHで検出する独自のシステムを確立して、感染細胞の局在を正確に検出できた。IL-2依存性HVP感染細胞株を6株樹立した。これらは、T-cellで、その一部はCD8+の表現系を示し、in vitroでは潜伏感染II型であるが、ウサギに静注すると感染性を示した。また、HVP感染ウサギの経時的な血液やリンパ節、脾臓の病理学的変化を調べて、さらにcell sortingにより採取した各種の細胞における感染率をHVP-EBER1 ISHで明らかにした。これらの成果は投稿準備中であり、一部は著書(Research Advances in Virology 2002,2)に公表した。2.長期EBV関連ウイルス潜伏感染ウサギ(1年以上)を用いた実験モデル(1)長期生存感染家兎におけるEBV関連病変の検討EBV関連ウイルス(HVP)による潜伏感染ウサギモデルの作製を試みたが、感染ウサギは数ヶ月以内にすべて死亡してしまい、長期生存感染家兎モデルができなかった。(1)長期生存感染家兎におけるEBV関連病変の検討(2)日和見腫瘍の動物モデルの作製SCIDマウスにHVP感染細胞を移植し、日和見リンパ腫モデルを作製することができた。これらもT-cell, CD8+であった。3.ヒトへのサル由来ウイルスの感染性の検討大学に保存されている多数のヒト症例DNAを用いて,サル由来EBV関連ウイルス(Cyno-EBV, HVP)のみを検出してヒトEBVを増幅しないPCRを行ったが、人体材料にサル由来ウイルスの感染症例は認められなかった。
再生医療開発にむけた間葉系幹細胞様の毛細血管周細胞の機能解明

生体組織中に存在する毛細血管細胞から、多分化能を有する周細胞の分離に成功した。同細胞は、毛細血管形成や神経などの分化能を有し、従来の再生細胞にくらべ、高い組織再生能をもつことを確認した。同細胞を毛細血管幹細胞(Capillary stem cells; CapSCs)と命名した同細胞を利用した再生医療にむけて、新しいプロジェクトへ発展している。本研究の目的は、目的1 MSC-PCsの幹細胞特性に関わる因子の探索と、同細胞の機能解析目的2 MSC-PCsの特異的マーカーの探索と、同細胞の同定、分離法の開発目的3 MSC-PCsの下肢虚血病態下での役割評価である。本研究初年度において、我々は、MSC-PCs細胞株を用いた網羅的mRNAアレイ解析を行い、多分化能の機能に連関する15個の候補因子を選定した(上記目的1、および2)。現在、その中から5つの候補因子に絞り、該当因子のSiRNAおよび過剰発現ベクターを作成し、MSC-PCsに導入し、その分化能に与える影響を評価している。同時に、同細胞の表面マーカー候補として、上15個の候補因子の中から、細胞膜に局在している因子を選び、現在、その一つが表面マーカーとして有力な結果を挙げている。現在、同細胞マーカー抗体を用いて、皮下脂肪や骨格筋などの組織から、細胞を分離し、その特性解析を行っている。目的1 MSCPCの幹細胞機能に関わる因子の探索と機能解析目的2MSCPCの特異的マーカーの探索と細胞分離法の確立目的3MSCPCの下肢虚血病態における役割我々は、新規に樹立した毛細血管細胞株を利用して、MSCPCの幹細胞機能に関わる候補因子の中から、血管新生能に関わる因子を選定し、その機能解析を行っているところである(目的1)。さらに、MSCPCに特異的に発現する(特に、細胞表面に局在する)因子を見いだし、これを細胞マーカーとして、正常マウス組織(皮下脂肪など)から、MSCPCの精製に成功した。現在、この細胞の機能解析をおこなっている。平行して、ヒト皮下脂肪組織からもMSCPCの精製に成功し、現在、これらのprimary MSCPCの下肢虚血あるいは骨格筋挫滅マウスモデルを用いて、その組織再生能について評価している。目的1 MSC-PCsの幹細胞特性に関わる因子の探索と、同細胞の機能解析目的2 MSC-PCsの特異的マーカーの探索と、同細胞の同定、分離法の開発本研究の最終年度で、MSC-PCsを分離・同定する因子を見出し、これによってマウスおよびヒト組織から精製調整された細胞について、細胞機能やマウス疾患モデルなどを用いて組織再生能について評価してきた。概ね、本研究の計画は目的通り達成し、その研究成果について学術論文投稿中である。また、その成果の一部について特許申請および取得し、臨床応用にむけたオープンイノベーションプロジェクトに採用され、基礎研究を展開している。毛細血管細胞株を用いて、最大の目標であるMSCPCを分離精製を可能にする表面マーカーを同定することに成功し、その後のin vitroおよびin vivo機能解析が、おおむね予定通り進んでいる。血管新生マウスおよびヒト組織から分離精製したMSCPCを用いて、下肢虚血モデルなど各種の疾患モデルにおいてin vivo組織での再生能および病態改善効果を評価し、臨床応用へに基盤データを集積していく。目的とする細胞機能あるいは細胞を同定する候補因子のいくつかに、機能変化を示す因子を同定することに成功しており、研究計画どおり、次のステップに進んでいくことができる状況である。新規因子探索の結果、予想より多くの候補因子が抽出され、この機能解析などで必要経費が予定以上となった。目的とする細胞機能あるいは細胞を同定する候補因子について、細胞における機能解析および、候補表面マーカーにより正常組織からの分離した細胞の特性解析をおこなっていく。解析実験に移す候補因子の絞り込みの程度は、今後の進捗状況で変更していく。研究は順調であり、申請計画において大きな変更なく進んでいけると考えている。本講座の他研究資金を適正にもちいて、本研究について予定通り遂行していく。予定した解析する実験量が、期限年度内で消化できなかった。次年度において、大学院生もあらたに一人加わり、ひきつづき、計画どおり研究遂行し、過不足なく予算を利用していく予定である。
高圧による分子の変形と反応経路制御へのアプロ-チ

(1)1,2ージクロロエタンー1ー^<13>C、1,2ージブロモエタンー1ー^<13>C、クロロシクロヘキサンーd_<10>、ブロモシクロヘキサンーd_<10>を合成し、前二者についてはスピン結合定数の圧力変化、後二者についてはαープロトンのNMR化学シフトの圧力変化を精密測定した。これらのうち、ジクロロエタンのJ_<VIC>は加圧と共に明らかに減少することが認められ、高圧力下ではゴ-シュの配座異性体が増加することがわかった。後二者のプロトンは高磁場への圧力シフトを示し、それらの解析によって、高圧力下でハロゲン原子がアキシャルに位置する配座異性体が増加することが示された。今後は大口径高圧セル(現在開発中)の使用により希薄溶液下での高圧実験を計画中である。赤外分光光度計は主として試料物質の合成プロセスにおける中間体及び目的物質の同定用として活躍中であるが、高圧実験用には合成石英管を使用して、熱膨張及びオイルポンプによる2種の昇圧法式を試験中である。いずれもセルの固定位置の再現性が重要であるため、特殊なセルホルダ-を設計準備中である。(2)(i)β,γー不飽和ーαーケトエステル(ヘテロジエン)とオレフィンとのヘテロディ-ルス・アルダ-反応により3,4ージヒドロー2Hーピラン誘導体を合成する。(ii)グリオキシル酸メチルとβーピネンのエン反応により2種のアルコ-ル(ディアステレオマ-)の片方を優先的につくり分ける。以上の2点について実験をこころみ、ルイス酸触媒下、常圧において好結果を得ているが、顕著で有用な圧力効果を見いだすにはいたっていない。
血流量測定による感覚麻痺の診断法の確立と歯科臨床応用

歯科臨床において、局所麻酔による神経損傷、嚢胞等の神経圧迫で、歯や歯周組織に、感覚麻痺を生じることがある。しかし現在、麻痺の評価は麻痺領域の判定に留まり、神経自体の機能や麻痺の予後の判定は殆どなされていない。近年、感覚神経は情報を中枢へ伝達するほかに、末梢の血管拡張を起こすことが報告されている。そこで本研究では、痛み刺激によって惹起される感覚神経による血管拡張反応をパラメータとして、(1)感覚麻痺の程度と(2)麻痺の予後を定量的に測定する方法を確立することを目的とした。当該年度は、動物実験によって口腔内の痛みが感覚神経由来に血管拡張を発現する領域を確認し、さらにヒトにおいて、痛み刺激の測定を行うために、痛みの測定基準を設定し、歯科疾患による痛みの臨床応用を試みた。その結果、A.動物実験によって上顎犬歯の侵害性電気刺激により刺激側と同側の上下顎歯肉、頬粘膜、口蓋、舌および下唇などの種々の組織に、感覚神経由来の血管拡張反応が観察された。B.ヒトボランティアによって1)歯髄の痛みをvisual analogue scale(VAS)を用いて測定したところ、同一人の痛みの測定には有効であったが、異なる人同士の間で痛みの比較は難しいことが判明した。そこで、(1)VASの最大値を"想像した最強の痛み"とし、(2)"これまでに経験した最強の痛み"をVAS上に比較基準としてのせることにより、安定したVAS値が得られるようになった。2)上記方法に従って、舌の痛みを主訴とした患者の痛みの定量を行った結果、疾患の診断と治療効果の判定にVASは非常に有効であった。
ハイデッガーと京都学派を軸とする「場所的‐情意的知」の検討

ハイデッガー哲学と京都学派とりわけ西田幾多郎と西谷啓治の哲学を、「場所的-情意的知」という共通の観点から捉え、相互に比較対照することで、各哲学的立場の特性を考察し、さらに現象学的運動の展開と照らし合わせながら、現代における哲学知の可能性を探ることを試みた。本研究の独自性は、国内外で注目されているハイデッガーと西田両者の思想を、あえて共時的に突き合わせるところにある。また、西谷哲学は前二者に比べると研究が遅れているが、申請者の研究が嚆矢となる可能性を持っていると自負している。研究成果はすべて、日本語、ドイツ語、英語による論文や発表で公開し、毎年ドイツに出張して研究者との交流に努めた。第一年目に掲げた3つの課題と予定していた海外出張に即して説明する。研究課題の第一は、ハイデッガーのギリシア悲劇解釈の検討である。既発表の3本の論文をもとにソポクレス解釈の整理に携わるとともに、新たに刊行された『黒ノート』と1930年代の覚書きの読解を進めながら、アイスキュロスの『縛られたプロメテウス』についての言及とその思想的背景の考察に着手した。その研究の一部は、共編著として取り組んだ『続・ハイデガー読本』の寄稿論文の執筆にも活かした。第二の課題、西田の場所論の掘り下げについては、前期のテクストの読解を中心に、場所概念に至る過程を改めて検討した。具体的には、『善の研究』と『自覚に於ける直観と反省』をもとに、純粋経験から自覚(絶対自由の意志)に向かう展開を、特に「意志」に留意して検討するとともに、同じく前期ハイデッガーの思想において「意志」が際立った位置を占めることに着目し、一昨年度から「哲学の家郷」のタイトルのもとハイデッガーと西田を比較対照する論考として連載を開始したシリーズの第2回目分として発表した。また、同じくハイデッガーと西田それぞれの「場所」概念を位置づける論文(未公刊)を執筆した。第三に、ハイデッガーと三木・西谷の関係の考察については、上記『続・ハイデガー読本』への寄稿論文執筆に向けて、三木と西谷それぞれのアリストテレス論と構想力論を取り上げ、ハイデッガーの立場との比較対照を行なった。とりわけ、三木と西谷両者の取り組みの背景に西田の場所論との対決があることが明らかになり、ハイデッガーと西田という主題に対しても大きな光を投げかけることになったのは、大変有益であった。海外出張としては、当初の予定通り、テュービンゲン大学で資料調査を行うとともに、メスキルヒ市で開催されたハイデッガー哲学シンポジウムに参加して、ドイツの研究者たちと研究交流を行なった。上記のように、第一課題については、既発表分の内容の再検討と新たなテクスト読解を通して、「ハイデッガーのギリシア悲劇論」として計画している研究の全体像がいっそう明らかになり、そのことによって既発表分を全体のなかに位置づける展望、さらに今後の課題も明らかになった。第二、第三課題については、いずれも研究成果を論文執筆の形で実行できた。以上のことから、計画している研究は、ほぼ順調に進展していると判断できる。平成28年度の研究実績として挙げるべきは、欧語論文の執筆に複数携わったことである。まず、研究計画の一つに掲げていたハイデッガーのギリシア悲劇論を、近年刊行の『黒ノート』をもとに検討、これまで発表したソポクレス解釈とは別の悲劇作品『縛られたプロメテウス』を軸とするアイスキュロス解釈と絡めてドイツ語論文に仕上げた。これは、ドイツでのハイデッガー研究文献としてシリーズで刊行中の"Heidegger Jahrbuch"の『黒ノート』特集の巻に論文として寄稿したものである。この寄稿のために『黒ノート』を読み込めたことはもちろん、それと関連するテクストに触れられたことも、本主題をめぐる諸々の観点に気がつけたという意味で、科研研究計画の進展に大きな意義があったと思っている。次に、西田哲学の場所論について、アメリカのSpringer社から刊行予定の西田幾多郎についての英語論文集の「場所」をめぐる章を担当、『善の研究』から論文「場所」に至る思想的展開を執筆、寄稿した。海外出張としては、オックスフォード大学出版会から近く刊行予定の日本哲学ハンドブックに寄稿した論考との関係で、代表編者であるロヨラ大学のブレット・デービス教授を訪問する予定にしていたが、先方と私との日程調整がうまく進まないために断念、ドイツ出張に切り替え、次年度に予定していたヒルデスハイム大学のロルフ・エルバーフェルト教授を訪問し、ドイツでの研究状況についての情報収集を行なった。その他、日本シェリング協会と立正哲学会での依頼発表で、それぞれ西田と西谷を扱った。また平成28年度内に進めた仕事ではないが、平成28年度に公刊された関連実績として、京都産業大学世界問題研究所を中心に進められたプロジェクトの研究成果『日本発の「世界」思想』(藤原書店)に「問題としての世界ー西田幾多郎とハイデッガー」が掲載された。「場所」をめぐるハイデッガー、西田、西谷についての個別研究は着実に進んでおり、ハイデッガーのギリシア悲劇論についても、上記のように新しいテクストの扱いを通して新たな解釈の観点を抽出、それぞれの思想がもつ場所論的性格と情意的知という本研究の主題についても考察を進め、個別の研究発表や論文執筆に活かすことができた。

特に、依頼発表として要請された二つの成果は、当初予定していなかった主題をめぐるものであっただけに、それらを本研究課題と結びつけて取り組むことで、研究課題に含まれる別の側面に光を当てることが出来たことは大きな収穫であった。しかし他方、それぞれの研究を通して主題の広がりを受け止めた分、付随する諸問題も新たに見出され、それらをどのように取り込んでいくかという課題に直面することとなった。とりわけ、上述のように、二つの論文が欧語論文であったために、執筆に予想以上の時間を費やしてしまい、研究全体をまとめる方向について言えばやや遅れていることを認めざるを得ない。特に、ハイデッガーのギリシア悲劇解釈の総括を行なおうとしていたことについては、上記のドイツ語論文が予想していた以上の展開をすることになったため、計画達成には至らなかった。とは言え、当初予定していた計画以外の個別成果を挙げられたことも事実であるので、それらの意義をしっかりと受け止め、これからの計画との連繋を取って行くことが重要であると考えている。平成29年度は、本計画の最終年度でもあるが、従来通り、ハイデッガーと京都学派(西田、西谷)をめぐってテクスト読解を中心に考察を進め、それらを論文や講演として発表した。まず、西田とハイデッガーを対照させて継続して発表している論考としては、年度末に「哲学の家郷(4)」として、西田の場所的論理とハイデッガーの論理の問題を照らし合わせることで、これまで考察を重ねてきた両者の前期思想の対照にいったんの区切りをつけた。この作業は同時に、両者の比較対照に対してフッサール現象学に着目する必要性を改めて自覚できたという意味で大きな意味を持った。事実、フッサール現象学の再読解がその後の研究の一つの課題になっている。また、西谷哲学についても、年度末の明治大学での現象学シンポジウムで、「世界とものー後期ハイデッガー現象学と西谷宗教哲学」という表題のもと、空の立場を軸とする宗教哲学を、後期ハイデッガーにおける現象学的思惟と対照させる提題を行なった。この観点はもともと双方の思想理解にとって重要な意味を持つものとして課題に掲げていたので、その作業に着手できたことは有意義であった。ただ、その広がりは思っていた以上に大きく、今回の作業はその着手に過ぎない。なお、主に上記三者の思惟についての場所論的な視点からの考察を通して、改めて「住むこと」という主題が浮上した。これについては、今後さらに主題として練り上げる必要性を感じている。一方、海外の学術調査としては、ドイツのデュッセルドルフとミュンヘンを訪問して資料収集を実施し、相応の成果を収めたが、大学での新たな役職との兼ね合いで、スケジュール調整の不慣れのため、十分な日程を取ることが出来ず、予定していた研究者訪問が叶わなかったこと、昨年度に続き再度マールバッハの資料館を訪問する時間が取れなかったことが、反省点として残る。ハイデッガー哲学と京都学派とりわけ西田幾多郎と西谷啓治の哲学を、「場所的-情意的知」という共通の観点から捉え、相互に比較対照することで、各哲学的立場の特性を考察し、さらに現象学的運動の展開と照らし合わせながら、現代における哲学知の可能性を探ることを試みた。本研究の独自性は、国内外で注目されているハイデッガーと西田両者の思想を、あえて共時的に突き合わせるところにある。また、西谷哲学は前二者に比べると研究が遅れているが、申請者の研究が嚆矢となる可能性を持っていると自負している。研究成果はすべて、日本語、ドイツ語、英語による論文や発表で公開し、毎年ドイツに出張して研究者との交流に努めた。
技術の高度化と交通輸送システムの適応に関する研究

今年度は、(1)技術自体の可能性を「軌道系」について、(2)交通技術の進歩の実情を「航空」について、(3)システムとしての問題を「物流」いついて、(4)交通と地域との関連を仙台地域について研究した。また、問題点の摘出に主眼を置いた。軌道系では、在来方式の枠内での改良と浮上方式の開発がなされている。在来方式では、高速化と共に、特に都市圏内で混雑緩和のため列車運行間隔の短縮が試みられている。省力・省エネ対策では、電車の場合、回生電力の利用、車両の軽量化、性能の向上等により、一定の効果を得ている。浮上方式実用化の問題は、SST超音速機に似た課題である。交通手段の進歩には、高コスト・高速=高所得者利用→技術進歩・輸送量増加→単位輸送量当りコスト低下→大衆化という段階がある。しかしSSTには、コストの高さや、環境問題、時間短縮効果が短距離に限られる等の問題がある。一般に航空は、(1)社会的(空港周辺地域の騒音)、(2)空間(空域・航空路の空間の限界)、(3)人間的(パイロット、管制官などの人的要素の問題)、(4)国際的(既存の国家体制との調整)摩擦を抱えている。物流では、空間不足への対応が重要な問題である。一つの方法は、トラックから他の交通手段への転移である。しかし、大都市内では、他手段への転移は難しい。公共交通への転換も殆ど望めない。残る道は物流量の抑制になる。それには他の生産・消費技術や方式の改善か、能力に余裕がある地域への諸機能の移転が求められる。その一つが仙台である。現在仙台地域は、高速道路の開通により工業化が進みつつある。対東京の関係では、トラックへの依存度が高い。問題は、東京-仙台間の結びつきが強まって南関東に発生する混雑である。その解決が困難ならば、今後は東京に依存しない地域発展とならざるをえない。交通能力の追随を当然の前提とする従来の経済計画、地域計画では実行は望めない。
筋細胞の脱分化の機構

C2SVTts11細胞(マウス骨格筋細胞株C2に誘導性のメタロチオネイン遺伝子プロモーターにつないだSV40largeT抗原遺伝子をトランスフェクトして得た形質転換細胞株)に,あらかじめ最終分化を起こして筋管細胞を形成させた後,largeTを発現させると,増殖を不可逆的に停止していると考えられていた細胞が再び細胞周期にはいり,細胞質分裂が起こる.この現象は脱分化とみなすことができる.そこで最終分化をした細胞が,血清刺激によっては分裂しないが,largeTを発現させると分裂する機構を明らかにするために,細胞の増殖を調節していると考えられている次のいくつかの因子の発現量と活性を,最終分化と脱分化の過程で調べた.(1)増殖の抑制にかかわっている癌抑制遺伝子産物Rb;(2)転写因子AP-1(c-Jun/c-Fos);(3)S期の誘導にかかわっているcdk2/cyclinA;(4)M期の誘導にかかわっているMPF(cdc2/cyclinB);(5)およびS期とM期の誘導にかかわっているMAPキナーゼ.Rbは未分化筋芽細胞ではほとんど発現しておらず,最終分化の過程で発現量は著しく増大した.しかし脱分化の過程ではその量は低下していった.また脱分化の際,largeTの発現と非常に協調的にc-Junが誘導された.cdc2/cyclinBとcdk2/cyclinAの発現量ならびにそれらのヒストンH1キナーゼ活性は,最終分化の過程で低下し,脱分化の過程で再び誘導された.MAPキナーゼ活性にも同様の変動がみられた.したがって血清刺激によってはもたらされないが,largeTによってもたらされるこれらの現象を介して,最終分化筋管細胞は再び細胞周期にはいりうると推定される.またlargeTによって誘導されたc-JunのもつAP-1活性により,cdk2,cdc2,cyclinA,cyclinBの転写がもたらされる可能性が考えられる.C2SVTts11細胞(マウス骨格筋細胞株C2に誘導性のメタロチオネイン遺伝子プロモーターにつないだSV40largeT抗原遺伝子をトランスフェクトして得た形質転換細胞株)に,あらかじめ最終分化を起こして筋管細胞を形成させた後,largeTを発現させると,増殖を不可逆的に停止していると考えられていた細胞が再び細胞周期にはいり,細胞質分裂が起こる.この現象は脱分化とみなすことができる.そこで最終分化をした細胞が,血清刺激によっては分裂しないが,largeTを発現させると分裂する機構を明らかにするために,細胞の増殖を調節していると考えられている次のいくつかの因子の発現量と活性を,最終分化と脱分化の過程で調べた.(1)増殖の抑制にかかわっている癌抑制遺伝子産物Rb;(2)転写因子AP-1(c-Jun/c-Fos);(3)S期の誘導にかかわっているcdk2/cyclinA;(4)M期の誘導にかかわっているMPF(cdc2/cyclinB);(5)およびS期とM期の誘導にかかわっているMAPキナーゼ.Rbは未分化筋芽細胞ではほとんど発現しておらず,最終分化の過程で発現量は著しく増大した.しかし脱分化の過程ではその量は低下していった.また脱分化の際,largeTの発現と非常に協調的にc-Junが誘導された.cdc2/cyclinBとcdk2/cyclinAの発現量ならびにそれらのヒストンH1キナーゼ活性は,最終分化の過程で低下し,脱分化の過程で再び誘導された.MAPキナーゼ活性にも同様の変動がみられた.したがって血清刺激によってはもたらされないが,largeTによってもたらされるこれらの現象を介して,最終分化筋管細胞は再び細胞周期にはいりうると推定される.またlargeTによって誘導されたc-JunのもつAP-1活性により,cdk2,cdc2,cyclinA,cyclinBの転写がもたらされる可能性が考えられる.