hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
エタノール発酵糸状菌の二形性化を利用した単細胞化制御と糖化発酵同時進行への応用

その結果、溶存炭酸ガスのレベル、Ergosterolおよび脂肪酸の合成抑制のみならず、胞子発芽初時の細胞内cAMPレベルが二形性変化に大きく関与していることを見出した。さらに、cAMP合成酵素であるAdenylyl cyclaseおよびcAMP分解酵素であるcAMP phosphodiesteraseの活性化剤や阻害剤を添加した培養を行った結果、カフェ酸がcAMPの蓄積を促し、容易に単細胞化を達成できることを見出した。この酵母化糸状菌は、糸状菌状態よりエタノール耐性が高く、各種セルラーゼも良好に分泌生産できることを見出した。最終的に、単細胞型エタノール発酵糸状菌のみを活用したCBPを実施し、セルロース系バイオマスである稲わらから1%以下であるがエタノールを直接生産できることを実証した。生物反応工学研究代表者が開発を進めているエタノール発酵糸状菌を実用化させるために、本糸状菌の二形性現象を解明し、安定な単細胞型エタノール発酵糸状菌を構築すること、さらに、この糸状菌のみを用いたセルロース系バイオマスからの糖化発酵同時進行(CBP)プロセスを開発することを目指し、平成24年度より、二形性の制御に取り組んできた。我々が発見したMucorcircinelloides株は、N2/CO2は7/3の嫌気環壌下で確実に単細胞化すること、単細胞化した細胞膜中の成分である脂肪酸含量の減少や流動性に関与するErgostero1量が減少することを明らかにした。さらに、細胞内のcAMPのレベルが、二形成変化に大きく関係し、cAMP合成酵素促進剤の添加やcAMP分解酵素阻害剤の添加により、単細胞状態が維持できることを新規に見出した。本研究成果は、二形性を示す病原性糸状菌の感染抑制などにつながる大きな成果であると考えられる。また、細胞内のcAMPのシグナル伝達により、脂肪酸生合成やErgosterol生合成の阻害が生じ、糸状化への抑制を行ったいる可能性かが示唆された。。平成25年度は、形態変化に関わる細胞内成分、cAMPを見出し、二形性に係わるそれら代謝酵素群を生化学的に解明できたことから、おおむね順調に研究は進展しているといえる。さらに、本メカニズムを活用することで、通常の単細胞型エタノール発酵微生物である"酵母"と同様な発酵プロセスが構築できる可能性があることが示唆された。研究代表者が開発を進めているエタノール発酵糸状菌を実用化させるために、本糸状菌の二形性現象を解明し、安定な単細胞型エタノール発酵糸状菌を構築すること、さらに、この糸状菌のみを用いたセルロース系バイオマスからの糖化発酵同時進行(CBP)プロセスを開発することを目指し、平成24年度は、エタノール発酵糸状菌の単細胞化の現象解明を主に検討した。我々が発見したMucor属の菌株は、N2/CO2 =7/3の嫌気環境下で確実に単細胞化すること実証した。また、単細胞化した細胞膜中の成分である脂肪酸含量の減少や流動性に関与するErgosterol量が減少することを明らかにした。これらの成果は、研究開始当初の計画通りの成果である。
新規follistatin様蛋白質の各種消化管病変における機能解析

EGF/NRGファミリー増殖因子の生物学的重要性から私共はEGF様構造を有する全く新しい蛋白質のcDNAクローニングを試みた。今回、私共はRT-PCR法によりヒト胃線維芽細胞RNAを用いて2つのfollistatinドメインと1つのEGFドメインを有する新たなcDNAのクローニングに成功した。この新規クローンを私共はtomoregulin(TR)と命名し、このTRの消化管における細胞生物学的役割を明らかにしつつある。私共は平成11年度にTRの組織発現分布や細胞生物学的作用について論文発表を行った(Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602,1999)。この論文で以下のことが明かとなった。1.TRは細胞膜よりN端側で分離して細胞外ドメインが放出され、さらにEGFドメインが切断されることが推定された。2.TRはerbB4のリガンドである可能性が示唆された。3.組織発現分布に対する検討ではTRmRNA発現が胃線維芽細胞以外に脳、骨格筋、神経膠芽腫などに認められ、またマウスの胎生11日目から発現していた。4.免疫組織学的検討では肺胞壁の線維芽細胞、糸球体メサンギウム細胞、グリア細胞にもTRの発現が認められた。以上のことからTRはその構造、組織発現分布より発生、細胞増殖・分化、組織修復、癌発生などにおいて多彩な機能を有する新しい因子である可能性が示唆された。さらに現在私共はELISAアッセイシステムを用いた生体内TRの測定やTRフラグメント蛋白質を用いてTRの細胞増殖抑制作用などの生理作用を検討中である。私共はヒト胃粘膜線維芽細胞よりEGF様構造およびfollistatin様構造を有する新しい蛋白質TRのcDNAクローニングに成功した。私共はこのTRの消化管における細胞生物学的役割を明らかにしつつあり、今年度にTRの組織発現分布や細胞生物学的作用について論文発表を行った(Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602,1999)。この論文で私共はTRが細胞膜よりN端側で分離して細胞外ドメインが放出され、さらにEGFドメインが切断されることを報告し、またTRがMKN28胃癌細胞株においてEGF受容体ファミリーの一つであるerbB4のリン酸化を刺激することを確認している。さらに組織発現分布などからもTRの組織発生、細胞増殖・分化等への関与が示唆されている。現在、私共はTRのEGFドメインおよびfollistatinドメインに対する2種類の抗体を用いたELISAによりTRの測定系を確立している。この測定系を用いて患者血清中のTR濃度の測定を試みたところ数例の潰瘍性大腸炎を含む炎症性疾患において陽性反応を認めており今後、症例数を増やしての再測定を予定している。またTR ERISA測定系のさらなる感度の向上に関する検討やTR陽性反応の患者血清を用いたウェスタンブロット法による血清中のTRの検出を現在試みている。TRのEGFドメインおよびfollistatinドメインの各細胞生物学的作用を検討するために私共はFcを付けた各フラグメントcDNAの発現ベクターへの組み込みを完了しており、今後COS-7細胞やCHO細胞に導入して各フラグメント蛋白質を精製する予定である。さらにこの精製TRfollistatinドメイン蛋白質を用いてTGF βファミリー各種蛋白質との相互作用を検討する予定である。私共がヒト胃線維芽細胞よりcDNAクローニングに成功した新しい蛋白質Tomoregulin(以下TR)は、EGF様ドメインと2つのFollistatin様ドメインで構成されるユニークな構造を有している。これまでに私共はTRの消化管における細胞生物学的役割を明らかにするためにTRの組織発現分布や細胞生物学的作用について検討し、論文発表を行っている(Biochem.Biophys.Res.Commun.266:593-602,1999)。

この論文で私共はTRが細胞膜よりN端側で分離して細胞外ドメインが放出され、さらにEGFドメインが切断されることを見い出し、またTRがMKN28胃癌細胞株においてEGF受容体ファミリーの一つであるerbB4のリン酸化を引き起こすことを報告している。さらに組織発現分布などからもTRの組織発生、細胞増殖・分化等への関与が示唆されている。現在、私共は全長TRおよびTR-Follistatin様ドメインを組み込んだベクターを作成し、バキュロウイルス発現系を用いてSF9細胞の大量培養上清より抗体カラムで各蛋白質の精製を行っている。全長TR精製蛋白質を用いてMKN1胃癌細胞株を刺激したところ濃度依存性に増殖の抑制が観察された。また、TRのEGF様ドメインに関しては、Fcを付けたフラグメントcDNAを発現ベクターへ組み込み、それをCOS-7細胞に導入してフラグメント蛋白質を精製した。このEGF様ドメインのフラグメント蛋白質刺激においても同様にMKN1細胞の増殖抑制作用が認められた。従って、TRのMKN1細胞に対する増殖抑制作用はそのEGF様ドメインを介するものであることが示唆された。Follistatin様ドメイン蛋白質の効果に関しては現在検討中である。さらにこの増殖抑制作用がアポトーシスを介したものである可能性も示唆され、cell death detection ELISA法やDNAフラグメンテーション法にてアポトーシスの関与を検討予定である。
retinoic acidによる子宮頚部腺癌の治療の可能性の検討

それぞれの細胞にInterferon-αを1000IU単独あるいはall-trans-retinoic acid 1 μmol/Lと併用して添加培養し、その増殖能に及ぼす影響を調べた。IFN-α単独では扁平上皮由来不死化細胞株で約40%増殖を抑制したが、円柱上皮由来不死化細胞株では15%しか抑制できなかった。RAとの併用では、それぞれ90%、95%抑制され、その併用効果は特に扁平上皮由来化細胞株で著名に認められた。扁平上皮癌細胞株では、IFN-α単独でも80%程度増殖を抑制し、RAとの併用効果も認められた。一方、腺癌株では、IFN-αはRAに抵抗性を示した細胞でも30-40%の増殖抑制効果が認められ、併用効果も認められた。それぞれの細胞にIFN-αあるいはRAを培地に添加して、三次元培養を行った。培養終了後、collagen gelを回収しH-E染色で組織像の変化を調べた。扁平上皮由来不死化細胞株では、RAで分化の抑制が認められたが、IFN-αではその三次元構築の抑制が認められるのみだった。円柱上皮由来不死化細胞株でも同様の傾向が認められた。3.アポトーシスとの関連三次元培養で得られた組織標本において、in situ apoptosis detection kitでアポトーシスを検討した。どちらの不死化細胞株においてもIFN-α添加によりアポトーシスの誘導が確認された。RAでは、その効果は認めなかった。*このようにIFN-αとRAを併用することで、前癌病変同様、腺癌にもその治療効果が期待できるものと思われた。IFN-αの作用機序にはアポトーシスの関与が示唆された。子宮頚部由来初代培養細胞(円柱上皮由来、扁平上皮由来)、HPV16、HPV18-DNAによる不死化細胞株(円柱上皮由来、扁平上皮由来)、子宮頚部腺癌株(OMC-4、CAC-1、TMCC-1、HeLa)、子宮頚部扁平上皮癌株(SiHa、ME180、HT-3)のそれぞれの細胞1×10^5個にall-trans retinoic acidを0、1μmol/L添加培養し4日目、7日目、10日目に細胞数を計測した。初代培養細胞株にはいずれも強い増殖抑制効果を認めた。不死化細胞株においても、円柱上皮由来、扁平上皮由来いづれも増殖が抑制された。子宮頚部扁平上皮癌株も、いづれも強い増殖抑制効果が認められた。一方、子宮頚部腺癌株においては、その増殖抑制効果は弱く、また分化度の高いものほど抵抗性を示した。これらのことより、腺系の細胞においては、その悪性化の途中においてretinoic acidに対する抵抗性が獲得されたものと思われた。
不斉表面の設計と応用

電極や触媒の表面に不斉な有機分子を固定して立体選択的な反応を誘起させる研究は数多いが、表面におけるこれらの分子の配列構造は明らかになっていない。一方、不斉分子が物理吸着した単分子層の二次元不斉構造については最近いくつかの報告がある。ここでは、共有結合により表面に固定した分子が形成する二次元不斉構造すなわち「不斉表面」の構築をめざして自己組織化法による電極表面の修飾を行った。(R)あるいは(S)一BNSHで修飾した金表面をSTMで観察すると、規則的配列構造を持つ最大25nm四方程度のドメインが認められた。明るい丸い粒と空孔と思われる黒い部分の規則的な配列が存在する。この配列構造における単位格子はR体、S体のどちらを修飾した場合でも1辺が約1.6nm程度の菱形であった。白い粒状の像の大きさはBNS口中のひとつのナフチル基に相当する。丸い粒6個を含む三角形3つが空孔をとり囲んでいると考えると、三角形の配置はR体では左回り、S体では反対方向の右回りと互いに鏡像関係にあり、二次元の不斉構造が形成されていることが明らかになった。三角形はスクリュー状にナフチル基が重なりあうように配列した三つのBNSH分子で構成されており、R体とS体ではナフチル基が重なる方向が逆方向であることがわかった。ラセミ体で修飾すると上でのべたR体とS体のドメインが混在することがわかった。
プレート間巨大地震による大都市域の長周期地震動に関する研究

近い将来発生する南海トラフでの巨大プレート境界地震によって引き起こされる長周期地震動の精度良い予測を目的として,地震動計算手法の高度化と大阪堆積盆地を対象とした盆地構造と長周期地震動の関係を精査した.震源から観測点までがある程度の距離のある場合に,全領域をモデル化し,計算を行うことは時間的なロスが大きいため,震源領域を含む対規模な領域と,堆積盆地周辺の小領域の計算をハイブリッドすることによって精度を落とすことなく短時間で計算ができる方法を提案し,論文としてまとめた.大阪堆積盆地で観測されている堆積層内で生成した表面波の特徴を調べるために,深発地震によって生成した表面波に着目し,ハイブリッド法による波形モデリングを行った。既往研究において,このイベントの後続動の特徴が分析されているが,2次元の構造モデルでは振幅に関して定量的な説明には成功しそいなかった。本研究においては,3次元の速度構造モデルによって説明を試みた。そこでは2次元構造モデルでは十分に説明できなかった後続動の振幅の成因の議論を行うことができ,大阪堆積盆地構造モデルと後続波群生成の特徴に関する関係を議論することができた。これらの分析とシミュレーションは,大阪堆積盆地で生成する長周期地震動の特徴を把握し,予測地震動の高度化につながる。現時点までは本研究成果は学会発表等にとどまっているが,今後も継続的に研究を行い,論文へ取りまとめる予定にしている。地震調査研究推進本部の調査により,高い発生確率が予想されている東南海地震・南海地震によって大規模堆積盆地である大阪平野が受ける長周期地震動の特徴を知るために,これまで調べられてきた地盤情報をもとに作成される堆積盆地構造モデルによる地震波シミュレーションを行う。平成18年度は研究分担者のOprsal博士が後期に来日したため,研究環境を整えるとともに,大阪盆地を対象とした地盤情報,及び既往の堆積盆地構造モデルをレビューするとともに,次年度以降に研究をすすめるための観測地震記録の整理等を行った,・大阪堆積盆地における堆積盆地構造モデルの調べ,Oprsal博士の開発した地震波シミュレーションプログラムコードに移植を行った.・大阪堆積盆地における堆積盆地構造モデルの調べ,Oprsal博士の開発した地震波シミュレーションプログラムコードに移植を行った.・大阪堆積盆地におけるこれまでの長周期地震動に関する研究をレビューし,到達点と問題点を議論した.これまでの分析が主として2次元モデルによって行われていることから,ここでのモデルの高度化が有効であることを確認するとともに,地震観測データの収集を行った.・構造モデルの妥当性の検証のため,盆地において生成される後続動が明瞭である深発地震記録の再現を目指して,その地震波シミュレーションができるようにプログラムを改良し,シミュレーションを開始した.地震波の入射方位や入射波の震動卓越方向による後続動生成,特に盆地端部における生成の違いについて系統的な分析を開始した.最新の知見に基づく地下構造モデルに関する論文を,国際シンポジウムで報告した.発生確率の高い南海地震・東南海地震によって引き起こされる大規模堆積盆地における長周期地震動の計算手法の高度化と評価を継続している.今年度においては,大阪堆積盆地を対象として,深発地震の記録を収集し,その特徴を検討した.深発地震においては,岩盤サイトにおいて単純な波形が観測されているが,堆積層サイトにおいては盆地生成表面波が生成して複雑な波形記録となっている.とくに,大阪盆地北東部にあたる河内盆地から上町台地上においては,S波直達波到達後約30秒後に,S波振幅を超える大きな後続動が現れるが,それらの特徴を説明するために,大阪堆積盆地構造モデルを考慮した波動計算を行った.観測に見られている地盤震動特性は,大阪堆積盆地構造モデルによって説明されるものの,十分に説明されているわけではない.観測とシミュレーション結果の違いを明確にするために,盆地域におけるスナップショットを作成し,盆地内における波群の生成伝播に関する特徴を精査するとともに,堆積盆地構造モデルをいくつか変更して,この後続動を説明する領域の精査を行った.この後続動には,大阪堆積盆地の東側の境界形状が重要であるとともに,上町台地の南側の地下構造が主として関係していることが示された.また,数値シミュレーションにおいては,震源域がやや遠いイベントに対して効率的な計算ができるハイブリッド法に用いる一般化された境界条件の与え方を定式化し,数値計算方法の高度化を行った.近い将来発生する南海トラフでの巨大プレート境界地震によって引き起こされる長周期地震動の精度良い予測を目的として,地震動計算手法の高度化と大阪堆積盆地を対象とした盆地構造と長周期地震動の関係を精査した.震源から観測点までがある程度の距離のある場合に,全領域をモデル化し,計算を行うことは時間的なロスが大きいため,震源領域を含む対規模な領域と,堆積盆地周辺の小領域の計算をハイブリッドすることによって精度を落とすことなく短時間で計算ができる方法を提案し,論文としてまとめた.大阪堆積盆地で観測されている堆積層内で生成した表面波の特徴を調べるために,深発地震によって生成した表面波に着目し,ハイブリッド法による波形モデリングを行った。
企業が成熟期から衰退期に陥るのを防ぐミドルマネジャーの自律的行動とその経営管理

本研究では衰退期に陥る前に戦略的に意思決定し、再び成長軌道に乗った企業2社に着目し、そのプロセスの分析を行った。半導体製造装置産業に属するA社は機械系技術が強みだったが、1980年代に化学系の事業に進出し、業績が急落した。この際、ミドルマネジャーであった技術担当者が本来の機械系分野で画期的新商品を開発し、全社的に「本業回帰」するのに決定的な役割を果たした。また、臨床検査産業に属するB社は1990年代、産業全体として将来性の低い同産業に見切りをつけ、調剤薬局企業へと「業態変更」し、業界一位へと急成長した。本研究ではこれらの事例を分析することで、トップとミドルマネジャーの役割を明確にした。2013年度は、企業の衰退を避けるために、ミドルマネジャーがどのような意識を持ち、どのような自律的行動をとるのかについての実証研究を行った。アンケート対象としたのは、株式会社アインファーマシーズの薬剤師であり、各店舗の経営責任者でもある350名ほどのミドルマネジャーであった(同社は売上高1500億円ほどの調剤薬局業界最大手で、日経平均株価を算出する際に基準となる225社のうちの1社である)。アンケート調査は、各店舗の店長兼薬剤師の自律的行動を中心に、その内容に関して同社担当者と入念な打ち合わせを行い、2012年11月10日、「第86回全国薬局長カンファレンス」(於札幌コンベンションセンター)の場で実施された。その結果を単純集計・分析したものが、「組織コミットメントと不正の許容」という論題で、2013年11月に『大阪経大論集』に掲載された。当研究ではまた薬剤師にインタビューも行い、定性研究も行った。特に、1)大谷喜一社長に企業再生時の経験をインタビューし、企業再生時に必要な手法や哲学について考察した。また、2)売手市場にある(転職が極めて容易)にもかかわらず、地方で働いている三大都市圏出身の薬剤師にインタビューを行い、彼らを株式会社アインファーマシーズに留まらせる要因について考察した。1)は第30回経営哲学学会で報告済みであり、2)に関して学会報告する予定で、現在インタビューデータをまとめている。本研究は、ライフサイクルの成熟期にある企業が新たな成長を求めて新事業に進出する、又は既存事業から撤退する際、ミドルクラスの現場が新戦略に大きな事業リスクを認識しつつも、それをトップに認識させるのが困難な場合、衰退回避のために如何なる「自律的行動」を取るかを明らかにすることを目的としている。2012年度は、先行研究から得られた仮説を念頭に、ミドルを中心としたリスク回避行動や戦略的事業撤退の質的調査から構成構造主義的に仮説立案し、その後、アンケート調査を実施する段階まで研究を進める予定であった。そのため、先行研究の分析とその結果に基づくアンケート内容の作成、ならびにアンケート調査に注力した。研究会のメンバーとともに夏ころまでにアンケートの叩き台を作成した後、調査先企業の担当者と複数回の協議を重ねた。その際、アンケート調査の結果で個人名が特定されないよう、質問内容や文章を修正しつつアンケート項目を決定した。11月10日(土)、東京証券取引所一部上場企業の株式会社アインファーマシーズの「第86回薬局長会議」の場で、日本各地から集まったミドルマネジャー約300名に経営戦略・経営管理に関するアンケート調査を実施した。現在、収集したデータを整理し、定量分析を行っている。また副産物として、代表取締役社長や大阪支店長に複数回のインタビューも実施し、A社が1990年代に直面した経営危機・企業再生に関する論文も執筆・公表した。本研究は、成熟期にある企業が衰退期に陥るのを防ぐことを目的とした、組織のミドルマネジャー層の自律的行動ならびにその経営管理に焦点を当てた。調査企業には、半導体製造装置産業のA社、調剤薬局企業のB社の2社を選出した。A社は、半導体製造装置産業の後工程で強みを発揮する企業であったが、1980年代から90年代にかけて、事業の多角化を目的に前工程の装置にも進出した。しかし、強みの工程は物理系の技術がメインであり、進出した前工程で求められる技術は化学系であったため、研究開発は難航し、経営状況は悪化していった。そうした事態を反転させたのが、当時、開発部門の責任者(ミドルマネジャー)であった。研究では、彼を中心とした事業再生の詳細を分析し、理論的考察を行った。B社は、1980年代には臨床検査事業が主事業であったが、多角化を目的として、90年代に家電量販事業、ホームセンター事業など、様々な事業に矢継ぎ早に進出した。その結果、売上高は急伸したが、財務状況も急速に悪化した。

この事態を立て直すため、B社は当時、産業全体が成熟期にあった臨床検査事業(売上高の60%くらいを占める主事業)を同業他社に大胆に売却し、産業全体として成長の見込まれる調剤薬局事業に進出した。その後、B社はM&A等によって急速に成長し、2014年度現在、業界を代表する企業のひとつとなっている。研究では、業態変更に伴う内部の動向の詳細を分析し、理論的考察を行った。また、B社に所属する管理薬剤師(ミドルマネジャー)350名ほどに、企業戦略に関するアンケート調査を行った。A社とB社を比較すると、一方で、採算性の低い事業・将来性のあまり無い事業から「戦略的事業撤退」を実施したという共通点が見いだされた。他方、撤退後の新ドメインの設定に関しては、それぞれ「本業回帰」と「業態変更」という手法が選択されるなど、差異も見受けられた。経営学2012年度に実施したアンケート調査の分析を行い、単純集計・分析をした論文を執筆し、2013年度に『大阪経大論集』に掲載された。加えて、第30回経営哲学学会全国大会(於沖縄コンベンションセンター)において、「企業再生時の経営哲学の考察ー(株)アインファーマシーズの事例からー」という題目の学会報告を行った。当初の予定通り、民間企業に経営戦略・経営管理に関するアンケート調査を実施することができた。現在、収集したアンケートデータの単純集計を終え、複数の方法で定量分析を行っている。また、アンケートで尋ねる項目を精査していく過程で行ったインタビューから、副産物として「企業再生理論の検証ー株式会社アインファーマシーズ(旧第一臨床検査センター)の事例ー」『大阪経大論集』第63巻.第4号(pp.151-173)を執筆・公表することができた。また、11月には株式会社アインファーマシーズの協力のもと、改めてアンケート調査を実施する予定であり、現在、研究者仲間・同社担当者と共にアンケート内容について打ち合わせしている。今後は、収集したアンケートデータを詳細に定量分析し、研究結果を学会報告や論文といった仕方で公表していく。研究成果の公表とともに生じる様々な批判や意見を踏まえ、さらにブラッシュアップしていくことで、本研究の課題に対する一定水準以上の解を導き出したい。2013年度からの繰越金は27,492円となった。発生理由は、当該年度の研究旅費として想定していた額の一部を、所属機関の研究費で賄うことができたためであり、それゆえ、若干の繰越金が発生した。2014年度は、本研究の最終年度となる。改めてアンケート調査をするため、研究者仲間との打ち合わせ、調査実施、研究内容の学会報告等の旅費を計画している。また、アンケート結果を集計する際のアルバイト代も計画している。2013年度は、アンケート調査のデータを詳細に分析し、ミドルマネジャーの経営戦略への関わり方と彼らの経営管理手法に関する論文を執筆する予定である(投稿先未定)。また、上記の内容に関して学会報告を行う予定である(経営哲学学会の全国大会で検討中)。
植物病原菌由来のシグナル物質により発現が変動する宿主遺伝子の解析

本研究では、植物病原菌由来のシグナル物質(エリシター・サプレッサー)によって発現が変動する植物遺伝子を数多く単離し、発現のカイネティクスを解析するとともに、遺伝子産物の宿主-病原菌相互作用における機能を解明することを目的とした。その結果、エリシター応答性遺伝子として、既知のPRタンパク質遺伝子や細胞壁の強化に関わる遺伝子、ファイトアレキシン合成系酵素遺伝子のcDNAの他、転写因子のcDNAを始め、ポリアミン合成系酵素のcDNA、HRに関連すると報告されているタンパク質のcDNAなど多数の新規遺伝子が単離された。これらのうちいくつかの遺伝子については更に遺伝子産物の機能解析を進めている。特にエリシター応答性の転写因子についてはそのDNA結合配列を明らかにし、本結合配列が既知の防御遺伝子プロモーターに存在することを見い出した。本転写因子はエリシターによりその発現が誘導されることから、病原菌シグナルの受容から防御遺伝子発現に至るカスケードにおいて極めて重要な分子であると考えている。また、サプレッサーによって発現が誘導される遺伝子としては、細胞壁の分解酵素遺伝子、根粒形成初期に発現されるノジュリン遺伝子、ジャスモン酸合成系酵素のホモログなどが単離された。これら遺伝子の中でジャスモン酸合成系酵素のホモログは実際に病原菌接種の場においても特異的に発現が誘導されることが明らかにされた。植物が罹病化していく過程で発現が誘導される遺伝子の同定は、植物罹病化の分子機構解明に繋がるもの重要な成果と考えている。1.エリシターにより発現が誘導される遺伝子の単離と構造解析2.サプレッサーにより発現が誘導される遺伝子の単離と構造解析サプレッサー応答性遺伝子の候補は、サプレッサーを5時間処理したエンドウ上胚軸から作成されたcDNAライブラリーから、エリシター応答性遺伝子のcDNA単離と同様にdifferential hybridization法によって単離された。20個の候補cDNAについて塩基配列を部分的に決定したところ、ダイズで根粒菌の感染により初期に発現が誘導されるearly nodulin(Enod93)遺伝子や植物細胞壁の分解酵素(cellulaseやpectinmethylesterase)の遺伝子と相同性を示すcDNAの存在が明らかとなった。サプレッサー応答性遺伝子の機能は未だ不明であるが、親和性の確立や病原菌の侵入、蔓延、増殖の補助が推察される。1.エリシターにより発現が誘導される遺伝子の単離と構造解析differential hybridization法によって単離されたエリシター応答性遺伝子のcDNAのうち、PRタンパク質とS-adenosylmethionine(SAM)の関連酵素のcDNAについて全塩基配列を決定した。これらのcDNAは今後エンドウの防御応答を評価する分子マーカーとして用いることが可能である。hsr(hypersensitivity-related)203Jに相同性を示したE86はタンパク質を生産させた結果、エステラーゼ活性を有することが、明らかとなった。また、新規DNA結合性Zn fingerタンパク質のcDNA E84はAAAA(A)G配列に結合すること、この結合配列は既単離のエリシター応答性遺伝子であるPSPAL1,2やPSCHA1,2,3,4,5のプロモーターにも存在することが明らかとなった。2.サブレッサーにより発現が誘導される遺伝子の単離と構造解析differential hybridization法によって単離されたサブレッサー応答性遺伝子の20個の候補cDNAをナイロンメンブランにスポットし、サブレッサー5時間処理、エリシター5時間処理、水5時間処理、サブレッサーとエリシターの混合5時間処理及び、コントロールとして無処理の上胚軸から調製されたRNAから作成されたDIG-cDNAプローブを用いてドットブロットハイブリダイゼーションを行った。その結果、クローンS64の遺伝子発現は、サブレッサー単独及びサプレッサーとエリシターの混合処理区においてのみ増高した。また、ノーザン解析によってもS64はドットプロットでの発現パターンが再現された。S64の全塩基配列を現在決定している。

1.エリシターにより発現が誘導される遺伝子の単離と構造解析differential hybridization法によって単離されたエリシター応答性遺伝子のcDNAの中で、特にDofドメインというCys4タイプの新規DNA結合性Zn fingerタンパク質のcDNA E84に焦点を絞りE84の発現、遺伝子構造、E84タンパク質のDNA結合能、転写活性可能について解析を進めた。その結果、E84 mRNAは傷処理並びにエリシター処理で発現が誘導されること、E84遺伝子はエンドウゲノム上に1コピーしか存在していないこと、短い1個のイントロンを有すること、E84タンパク質はAAAGをコアとするDNA配列に結合することが明らかにされた。更に、この結合配列は既単離のエリシター応答性遺伝子であるPSPAL1,2やPSCHA1,2,3,4,5のプロモーターにも存在し、PSCHS1のAAAG配列にin vitroで結合することが確認された。E84タンパク質の転写活性可能については現在解析中であるが、その研究の過程でAAAG配列が新規エリシター応答性配列である可能性が示唆された。2.サプレッサーにより発現が誘導される遺伝子の単離と構造解析differential hybridization法により単離されたサプレッサー応答性cDNAクローンS64の全塩基配列を決定したところ、本遺伝子はジャスモン酸合成経路のOPDA還元酵素を始め、フラボプロテインファミリーと高い相同性を示すことが明らかにされた。また、本cDNAをプローブとしてノーザンプロットハイブリダイゼーションを行った結果、本遺伝子はサプレッサーによって誘導されるだけで無く、親和性病原菌の接種、乾燥処理、葉っぱの切り取りによっても誘導されることが明らかになった。
ロジウム触媒による炭素－ケイ素結合の切断を経るシロール合成反応の開発

本研究では、これまでにわれわれが見出した「ロジウム触媒による炭素-ケイ素結合切断を経るシロール合成反応」という新たな手法をもとに、従来合成が困難とされていた新たな環状有機ケイ素化合物を合成することを目的としている。ケイ素を含む環状共役化合物は、有機電子材料のビルディングブロックとしての応用が期待されている。今年度は、炭素-ケイ素結合切断の特長を活かした、シロール以外の新しい環状有機ケイ素化合物合成反応の開発に取り組んだ。初めに、以前の研究と同様のロジウム触媒を用い、炭素-ケイ素結合の切断を伴う六員環状有機ケイ素化合物合成反応の検討を行ったが、この条件では目的の反応は進行しなかった。そこで、有機リチウム種による類似の反応を検討したところ、期待していた環化反応が進行することを見出した。さまざまなリンカーを持つ基質を用いて検討を行った結果、窒素をリンカーとする場合に効率良く環化反応が進行し、フェナザシリン誘導体が得られることがわかった。本反応を用いることで、種々の官能基を有するフェザシリン誘導体を合成することが可能である。本反応の反応機構に関する知見を得るためにケイ素上の置換基効果の検討を行ったところ、本反応は、類似の五員環形成反応と同様に五配位シリケート中間体を経て反応が進行していることが示唆された。この反応を二つの反応点を持つ基質に対して適用することで、これまでに合成例のない、二つの六員環シラサイクルを有する新規π-共役化合物を合成することができた。本研究では、これまでにわれわれが見出した「ロジウム触媒による炭素-ケイ素結合切断を経るシロール合成反応」という新たな手法を用い、従来合成が困難とされていた新しいシロール骨格の構築を目的としている。本年度はその中でも特に、不斉ケイ素中心を有するキラルシロール合成反応の開発について取り組んだ。原料であるボロン酸誘導体、ロジウム触媒前駆体、キラル配位子や溶媒およびその他の添加剤について種々の条件を検討したところ、配位子としてQuinoxP^*と呼ばれるキラルホスフィン配位子を用いることにより、60%と中程度の収率ではあるものの、98%の鏡像体過剰率という高い立体選択性をもって目的とするキラルシロールが得られることが分かった。この結果は、「ロジウムによる炭素-ケイ素結合の切断」というわれわれのオリジナルな反応の特長が十二分に生かされたものである。このような第四級ケイ素中心を構築する触媒反応はこれまでに報告例の無い新しい反応であり、類似の量論反応と比較しても、立体選択性および官能基許容性の面で優れている。さらに、今回合成した第四級不斉ケイ素中心を持つシロール骨格は、強塩基性条件を必要とする従来の方法論では合成ができない全く新しいシロール骨格である。シロール誘導体は、有機材料化学の分野において有機ELや太陽電池のような素子のビルディングブロックとして注目されている。今回新規に合成したキラルシロール骨格は、これまで用いられてきた光学活性を持たないシロールには無い新しい物性を示す可能性を持っており、特に固体状態で蛍光発光を示すことから、円偏光発光材料への応用が期待できる。本研究では、これまでにわれわれが見出した「ロジウム触媒による炭素-ケイ素結合切断を経るシロール合成反応」という新たな手法を用い、従来合成が困難とされていた新しいシロール骨格を構築することを目的としている。今年度は、昨年度新たに見出したエナンチオ選択的な炭素-ケイ素結合の切断を経るキラルシロール合成に関して、収率の向上および基質適用範囲の拡大を目指して研究を行ってきた。実際には、種々のルイス酸や、塩基、水等の添加剤や新しく合成した配位子の検討、および反応温度、溶媒、その他反応条件の検討を行ってきた。また、基質適用範囲の拡大を目指し、アルキルアルキンや種々の置換基を持つジアリールアルキンを用いて反応を行った。これらの検討を通じて得られた知見は、今後さらに本研究を展開させていくための重要なデータになると考えている。一方で、当初の研究計画には無かったが、本反応の高い官能基許容性を生かした新規二重縮環型のシロール誘導体の合成を達成することができた。ここで得られたシロール誘導体は、われわれが見いだした手法でのみ合成することができると考えられる。さらに、上記の研究と並行して、ロジウムによる炭素-ケイ素結合切断の機構を調べるための実験も行った。その結果、われわれの反応における炭素-ケイ素結合の切断は、従来知られていた炭素-ケイ素結合切断のメカニズムとは異なる反応機構で進行しているという興味深い結果が得られた。

さまざまなリンカーを持つ基質を用いて検討を行った結果、窒素をリンカーとする場合に効率良く環化反応が進行し、フェナザシリン誘導体が得られることがわかった。本反応を用いることで、種々の官能基を有するフェザシリン誘導体を合成することが可能である。本反応の反応機構に関する知見を得るためにケイ素上の置換基効果の検討を行ったところ、本反応は、類似の五員環形成反応と同様に五配位シリケート中間体を経て反応が進行していることが示唆された。この反応を二つの反応点を持つ基質に対して適用することで、これまでに合成例のない、二つの六員環シラサイクルを有する新規π-共役化合物を合成することができた。キラルケイ素中心を有するキラルシロールの合成に関して、種々の条件検討および基質展開の研究を通じて、今後の研究に役に立つ知見が得られた。一方で、別のアプローチからも従来に無いシロール誘導体の合成を達成することができた。新規シロール合成反応に関しては、キラルシロール以外のシロール誘導体合成反応の開発を検討する。例えば、異なる四つの置換基を有する「非対称四置換シロール」の合成などが挙げられる。その他に、炭素-ケイ素結合の切断という本反応の最も興味深い特長を生かした、全く新しい含ケイ素化合物合成反応の検討も行っていきたいと考えている。
インスリン抵抗性発症における腸管マクロファージFoxo1の機能的解析

当該研究者は、肥満・高脂肪食負荷に伴い大腸で慢性炎症が生じる事に着目し、腸管マクロファージを質的・量的に変化させるモデルとして腸管上皮特異的タモキシフェン誘導型Ccl2欠損マウスとマクロファージ特異的Ccr2欠損マウス、マクロファージ特異的Foxo1活性化マウスを作製した。腸管上皮特異的にCcl2分泌を抑制すると、マクロファージFoxo1の下流遺伝子であるCcr2陽性腸管マクロファージ浸潤が抑制され、インスリン感受性と耐糖能が改善した。以上の結果より高脂肪食負荷に伴うインスリン抵抗性発症機序において腸管上皮Ccl2-マクロファージCcr2を介した腸管の慢性炎症が重要である可能性が示唆された。高脂肪食負荷に伴う腸管の免疫変化を検討するために、C57Bl6/Jマウスに各週数高脂肪食負荷して腸管の表現型を解析したところ、高脂肪食4週早期の段階で炎症性腸管マクロファージの浸潤を認め、高脂肪食負荷に伴う腸管の慢性炎症の存在が示唆された。高脂肪食負荷に伴うマクロファージを中心とした腸管の慢性炎症が全身の糖・エネルギー代謝に及ぼす影響を検討するために、腸管上皮特異的タモキシフェン誘導型CCL2欠損マウスとマクロファージ特異的CCR2欠損マウスを作製・解析した。2つの遺伝子改変マウスの代謝表現型の結果から、腸管上皮特異的にCCL2を欠損させると、CCR2陽性マクロファージの腸管への浸潤が抑制され、2次的に脂肪組織における慢性炎症が是正され、耐糖能およびインスリン感受性が改善する事を見出した。腸管の慢性炎症を是正することで肝臓のインスリン感受性が改善したメカニズムを調べたところ、門脈内の炎症性サイトカインおよび、腸管バリア機能の改善に伴う腸内細菌由来の内毒素が軽減しており、それらが一因と考えられた。以上より腸管上皮CCL2を欠損させると糖代謝およびインスリン感受性が改善する可能性があり、「高脂肪食負荷に伴う腸管上皮CCL2の分泌機構」を明らかにすることで、新しい糖尿病の治療標的になる可能性が示唆された。高脂肪食負荷に伴う腸管の慢性炎症の分子メカニズムを解明する為、腸管上皮の培養細胞であるHT29を用いて、各種脂肪酸およびLPSの刺激実験とJNK、NFKbをはじめとしたシグナル解析を行うと同時に、これまで我々がマクロファージの活性化調節を担う遺伝子として報告してきたPDK1, Foxo1に着目し。マクロファージ特異的PDK1, Foxo1遺伝子改変マウスを作成している段階である。当該研究者は、高脂肪食負荷に伴い大腸マクロファージによる慢性炎症が生じる事に着目し、インスリン抵抗性発症における役割を明らかにすることを目的に、鍵分子としてマクロファージ誘導ケモカインCcl2,受容体Ccr2、転写因子Foxo1に着目し解析を行った。研究計画として、腸管マクロファージを質的・量的に変化させる腸管上皮特異的タモキシフェン誘導型Ccl2欠損マウス、マクロファージ特異的Ccr2欠損マウス、マクロファージ特異的Foxo1活性化マウスを作製した。腸管上皮でCcl2を欠損すると、マクロファージFoxo1の下流遺伝子Ccr2陽性の腸管マクロファージ浸潤が抑制され、バリアタンパクClaudin-1の発現が上昇し、endotoxemiaが是正され、インスリン感受性と耐糖能が改善した。以上より高脂肪食負荷に伴う腸管上皮Ccl2-マクロファージCcr2を介した大腸へのマクロファージ浸潤を抑制する事で、インスリン感受性が改善する事が示唆された。Foxo1活性化モデルのマクロファージ特異的PDK1欠損マウスは通常食下でコントロールと比較して、体重に差はないが耐糖能が有意に悪化した。しかし腸管炎症を示唆する腸管の長さの差は認めず、大腸においてマクロファージ関連遺伝子F4/80, CD68, TNFa, IL1b, Ccr2に関して有意な変化は認めず、腸管においてはマクロファージPDK1欠損によるFoxo1の活性化では、腸炎は惹起しない事が示唆された。一方、T細胞特異的Foxo1-/-Foxo3-/+マウスは高脂肪食負荷下でコントロールと比較し、体重が有意に低下し、耐糖能・インスリン感受性が有意に改善し、パイエル板においてIL4,13の発現が増加しており、腸管T細胞Foxo1/3の活性調節により、腸管免疫に影響を与え、全身の糖代謝を改善させる可能性が示唆され、今後検討を進めていく当該研究者は、肥満・高脂肪食負荷に伴い大腸で慢性炎症が生じる事に着目し、腸管マクロファージを質的・量的に変化させるモデルとして腸管上皮特異的タモキシフェン誘導型Ccl2欠損マウスとマクロファージ特異的Ccr2欠損マウス、マクロファージ特異的Foxo1活性化マウスを作製した。平成26年度解析予定の腸管上皮特異的CCL2欠損マウスとマクロファージ特異的CCR

2欠損マウスの解析に関しては、研究実施計画に概ね沿う形で実験は進捗しているマクロファージ特異的Ccr2欠損マウスは、高脂肪食10週においてインスリン感受性と耐糖能が有意に改善し、腸管マクロファージ浸潤の低下とIL1β発現の低下を認め、それに伴い門脈内IL1β低下、腸管バリア蛋白Claudin-1の発現増加と門脈LPS低下を認めた。一方で同時期の肝臓と脂肪組織における炎症性マクロファージに差異を認めなかった。これらのデータから腸管マクロファージ浸潤の抑制により全身のインスリン感受性が改善する可能性が示唆された。腸管上皮特異的Ccl2タモキシフェン誘導型欠損マウスは、高脂肪食12週においてインスリン感受性が改善し、腸管マクロファージ浸潤抑制に伴い、脂肪組織の慢性炎症が是正された。以上のデータより、腸管上皮Ccl2-腸管マクロファージCcr2の抑制により、門脈内の炎症性サイトカインの低下や腸管バリアの改善により、全身のインスリン感受性が改善する可能性がある事が示唆された。その研究実績は平成26年日本肥満学会で口頭発表を行い、若手研究奨励賞を受賞した。また平成27年の内分泌学会および糖尿病学会においても若手研究奨励賞の3次審査まで進んでいる状況である。平成27年度解析予定のマクロファージFoxo遺伝子改変マウスに関しては未だ作製段階であり、平成27年度の研究計画を勧めると同時に、平成26年度の研究実績に関して論文作製を行っている段階である内分泌代謝内科腸管上皮Ccl2が全身のインスリン感受性の調節に重要である可能性がある事から、今後は高脂肪食負荷に伴う腸管上皮におけるCcl2分泌の調節因子およびその分子メカニズムを解明していく。現在は腸管上皮培養細胞HT29を用いて、各種脂肪酸(パルミチン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸)や腸内細菌内毒素LPS、活性酸素を用いて刺激実験を行い、腸管上皮Ccl2分泌調節に重要な刺激因子を同定すると同時に、腸管上皮細胞内における高脂肪食負荷時のシグナルに関しても解析を進めている。高脂肪食負荷に伴い、腸管の活性酸素濃度の上昇と、JNKシグナルの活性化を認める。腸管上皮細胞において脂肪酸刺激がJNKシグナルに影響を与えて、Ccl2分泌に関与するかどうか検討していく予定である。またこれまでに我々は、マクロファージにおける転写因子FoxO1がマクロファージ浸潤や活性化に重要である事を報告(Diabetes, 2012)しており、これらの遺伝子改変マウスにおいて腸管の表現型がどのように変化し、それらがどのように全身のインスリン感受性、糖代謝に影響を与えるかを検討していく予定である。現在、マクロファージ特異的PDK1欠損マウス、マクロファージ特異的Foxo1欠損マウス、マクロファージ特異的PDK1Foxo1欠損マウスを作製している段階である
出土文字資料を用いた古代日本地方支配の実態的研究

2本年度は、本研究課題の最終年度にあたり、前年度までに調査できなかった資料や新出資料を中心に調査を計画・実施し、その総括を目指した。調査の際は出来るだけ現物資料にあたるとともに、可能な限り出土遺跡も見学し、その立地条件などを把握するように心がけた。調査は、科学研究費基盤研究(A)「古代文字文化形成過程の総合的研究」(代表:平川南)における調査および研究会に合わせて実施した。国内では、奈良県藤原宮跡出土の弘仁年間の木簡を調査した。また、鳥取県岩吉遺跡出土木簡や岩吉市大御堂廃寺出土木簡などを実見調査した。さらに、福岡県太宰府市の国分松本遺跡で出土した七世紀代の戸籍関係木簡を熟覧調査する機会を得た。同時に福岡市元岡G6古墳出土の鉄刀、元岡桑原遺跡出土木簡・鴻臚館跡出土木簡についても調査を行った。また、茨城県嶋名熊の山遺跡出土墨書土器、神奈川県居村B遺跡出土木簡などの調査にも携わった。国外では、韓国国立伽耶文化財研究所にて城山山城木簡の調査を実施し、城山山城の現地調査も行った。さらに木浦国立海洋文化財研究所にて高麗沈没船出土の荷札木簡を調査した。また、このうち、韓国城山山城木簡調査の成果は、歴博における研究会「古代文字文化形成過程の総合的研究」第二回共同研究会(2012.10.28実施)において口頭発表し、シンポジウム「古代日本と古代朝鮮の文字文化交流」(2012.12.15・16実施)における議論に参加することにより、より知見を深めることが出来た。さらに、研究論文としては第57回国際東方学者会議シンポジウムにおけるコメントをもとに「古代日本における贓贖物の特徴」(『東方学』125輯、2013.1刊)を発表した。また、本研究課題の三年間の総括として、博士論文「日本古代倉庫制度と地方支配構造の研究」を提出した(2013.3於東京大学)当初の研究計画のとおり、3年間の調査研究を通じて得た所見を博士論文としてまとめることができた。また、今後の研究活動において必要な国内外の資料について調査検討を行うことができた。本研究課題は、本年度をもって終了である。今後は研究期間内に調査した資料所見などをもとに、新たな古代日本地方支配構造について、研究を鋭意進めていきたい。本年度は、主に古代日本の地方支配に関わる出土文字資料および出土遺跡の調査を中心に実施した。調査では現物資料の精査にくわえ、可能な限り出土遺跡を踏査して立地条件などを把握した。国内では島根県出雲国庁跡出土漆紙文書・宮城県多賀城跡多賀城碑および出土文字資料・宮城県市川橋遺跡出土漆紙文書・福島県荒田目条里遺跡出土木簡・七世紀代の飛鳥地方木簡および滋賀近江木簡の実見調査、千葉県栄町龍角寺瓦窯群出土文字瓦、市川市北下遺跡出土墨書土器の調査・石川県津幡町文字資料の調査を行った。また、韓国においても同様に調査を行った。具体的には、韓国扶余木簡および周辺史跡調査、韓国初の地方官衙関連遺跡での出土木簡である羅州伏岩里遺跡出土木簡の調査、慶州雁鴨池関連の出土文字資料(土器関連を中心に)の調査検討、韓国国立中央博物館にて墨書土器・石碑の調査に従事した。このほか、上総国分寺墨書土器の再釈読や宮城県市川橋遺跡出土の漆紙文書の調査レポートを作成した。このうち、出雲国府跡出土漆紙文書については、平川南・武井紀子「島根県史跡出雲国府跡出土漆紙文書」(『史跡出雲国府跡7』、島根県埋蔵文化財調査センター、査読無し、2011.3刊行)として発表した。本年度に行った日韓の文字資料の基礎的調査により、地方支配に関わる日韓の具体的な比較検討の素地が整った。さらに、年次計画に沿い、倉からの稲の出し入れに関わる出納木簡、穀物の換算に関係する木簡などを『木簡研究』や各報告書から収集している。これらの収集した資料は次年度考察を加える予定である。加えて、「2009年の歴史学会の動向-回顧と展望-」(『史学雑誌』110編第5号、2010年)古代社会経済史部分を分担執筆し、自身の研究テーマにも関わる学会動向の整理・紹介を行った。研究論文としては、文字資料の検討と平行して行っている倉庫令を中心とした法制史料研究の一環として、「律令財政構造と軍事」(『唐代史研究』13号)を発表した。本稿は、2009年8月の唐代史研究会での報告を成稿したもので、律令財政における軍事財源の位置づけについて明らかにした。本年度は、昨年度に引き続き、日本学術振興会特別研究員(PD)にかかる自身の研究テーマである「出土文字資料を用いた古代日本地方支配の実態的研究」の研究計画に従って、主に古代日本の地方支配に関わる出土文字資料および出土遺跡の調査を中心に実施した。調査は、科学研究費基盤研究(A)「古代文字文化の総合的研究」(代表:平川南)における調査および研究会に合わせて実施し、国内では長野県千曲市屋代遺跡群、石川県金沢市上荒屋遺跡および石川県津幡町文字資料の調査、熊本県宇城市浄水寺石碑、福岡県久留米市・小郡市・太宰府市などの出土文字資料、大分県国東市飯塚遺跡、兵庫県神戸市・明石市内遺跡の出土文字

資料調査などを行った。また、韓国国立中央博物館特別展示「文字で分かる古代人の暮らし」にあわせ、古代朝鮮関係史料調査に参加、中国湖南省長沙市湖南省博物館・長沙簡牘博物館にて走馬楼呉簡の調査にも参加した。今年度は、特に倉庫の出納業務に関わる大型木簡に調査対象を絞った。これらの国内の主だった資料の実見調査ができたことは、木簡の形状を考察する上で大きな成果であった。調査成果の一部は、「倉の出納と穀物収取-春米作業を中心として-」と題し早稲田古代史研究会〔2011.12.10実施〕において研究報告した。これは現在執筆中の博士論文の一部として位置づけられる。加えて、これらの調査とは別に、年次研究計画に沿い、さらに日本古代地方支配に関わる出土文字資料の収集を引き続き行った。研究論文では、昨年度受理されていた「義倉の成立とその意義」が公刊された(『国史学』205)ほか、「律令と古代財政史研究」(大津透編『律令制研究入門』名著刊行会、2011年12月)により日唐財政史研究の研究史整理をおこなった。2本年度は、本研究課題の最終年度にあたり、前年度までに調査できなかった資料や新出資料を中心に調査を計画・実施し、その総括を目指した。調査の際は出来るだけ現物資料にあたるとともに、可能な限り出土遺跡も見学し、その立地条件などを把握するように心がけた。調査は、科学研究費基盤研究(A)「古代文字文化形成過程の総合的研究」(代表:平川南)における調査および研究会に合わせて実施した。国内では、奈良県藤原宮跡出土の弘仁年間の木簡を調査した。また、鳥取県岩吉遺跡出土木簡や岩吉市大御堂廃寺出土木簡などを実見調査した。さらに、福岡県太宰府市の国分松本遺跡で出土した七世紀代の戸籍関係木簡を熟覧調査する機会を得た。同時に福岡市元岡G6古墳出土の鉄刀、元岡桑原遺跡出土木簡・鴻臚館跡出土木簡についても調査を行った。また、茨城県嶋名熊の山遺跡出土墨書土器、神奈川県居村B遺跡出土木簡などの調査にも携わった。国外では、韓国国立伽耶文化財研究所にて城山山城木簡の調査を実施し、城山山城の現地調査も行った。さらに木浦国立海洋文化財研究所にて高麗沈没船出土の荷札木簡を調査した。また、このうち、韓国城山山城木簡調査の成果は、歴博における研究会「古代文字文化形成過程の総合的研究」第二回共同研究会(2012.10.28実施)において口頭発表し、シンポジウム「古代日本と古代朝鮮の文字文化交流」(2012.12.15・16実施)における議論に参加することにより、より知見を深めることが出来た。さらに、研究論文としては第57回国際東方学者会議シンポジウムにおけるコメントをもとに「古代日本における贓贖物の特徴」(『東方学』125輯、2013.1刊)を発表した。また、本研究課題の三年間の総括として、博士論文「日本古代倉庫制度と地方支配構造の研究」を提出した(2013.3於東京大学)本研究課題遂行の大きな成果の一つとして、博士論文の作成を挙げている。論文執筆に際しては、研究テーマの性質上、木簡などの出土文字資料を多く扱う必要がある。これらの資料は、可能な限り実見調査することが望ましい。昨年度・今年度とも、論文執筆を進めながらこれらの扱う資料についてはほぼ実見調査を済ませることが出来ている。当初の研究計画のとおり、3年間の調査研究を通じて得た所見を博士論文としてまとめることができた。また、今後の研究活動において必要な国内外の資料について調査検討を行うことができた。
観察に基づいた知識形成のためのフィールドワーク型発見学習の統合支援基盤

初等中等教育のフィールドワーク型発見学習を対象とし,学習者に深い試行錯誤を促すとともに,発見学習の成果を習得させたい単元の知識の理解に活用することのできる,統合的な発見学習支援環境の枠組みを明らかにする.具体的には以下の課題を解決する.1学習者自身で観察した内容から仮説の生成を支援するための仮説生成支援システムを開発する.2一般的な仮説を生成するために多様な観察を実現するための観察増幅プラットフォームを開発する.3導出した仮説と正しい知識体系との関連を整理する仮説構造化プラットフォームを開発する.最後に4これらのシステムを活用した初等中等教育のための発見学習カリキュラムを開発する.初等中等教育のフィールドワーク型発見学習を対象とし,学習者に深い試行錯誤を促すとともに,発見学習の成果を習得させたい単元の知識の理解に活用することのできる,統合的な発見学習支援環境の枠組みを明らかにする.具体的には以下の課題を解決する.1学習者自身で観察した内容から仮説の生成を支援するための仮説生成支援システムを開発する.2一般的な仮説を生成するために多様な観察を実現するための観察増幅プラットフォームを開発する.3導出した仮説と正しい知識体系との関連を整理する仮説構造化プラットフォームを開発する.最後に4これらのシステムを活用した初等中等教育のための発見学習カリキュラムを開発する.