hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
機能解明を目指した双頭型スフィンゴ脂質の合成研究

本研究は、最近になって初めて単離された双頭型スフィンゴ脂質および双頭型スフィンゴ糖脂質の合成法を確立し、それを基盤として種々の双頭型スフィンゴ(糖)脂質を合成し、その化学的・生化学的機能を明らかにすることを目的としている。双頭型スフィンゴ(糖)脂質は、長鎖アルキルの両末端に極性基を備えた分子であり、その極性基には2-amino-1,3-diol構造と2-amino-3-ol構造の2種類がある。昨年度確立した合成法に基づき、末端オレフィンを有する1級アルコールを出発原料として酸化・Wittig反応・還元によりアリルアルコールへ導いた後、Sharpless不斉エポキシ化・カーバメイト化・エポキシドの開環を伴うカーバメイトの環化反応により、anti-2-amino-1,3-diol構造を有するセグメントを立体選択的に不斉合成することができた。一方、末端オレフィンを有するアルデヒドに対し、Evans不斉アルドール反応・不斉補助基の除去・Curtius転位により、anti-2-amino-3-ol構造を有するセグメントを立体選択的に不斉合成することができた。また、いずれのセグメントについても、2級水酸基の反転によりsynの立体配置に変換できることから、光学異性体を含む全ての立体異性体の合成法を確立した。上記の方法で合成した2-amino-1,3-diol構造あるいは2-amino-3-ol構造を有するセグメントに対してクロスメタセシスを適用することにより、2つのセグメントを結合できることを明らかにし、両末端に極性基を有する双頭型スフィンゴ脂質の一般的合成法を確立することに成功した。本合成法を用いることにより、双頭型スフィンゴ脂質であるoceaninを合成するとともに、化学的・生化学的機能を明らかにするためにその誘導体を合成した。そこでまず本年度は、海綿から単離された天然物であるoceanapisideの全合成を行い、未知であるその絶対立体配置を確定することを計画した。双頭型スフィンゴ(糖)脂質の極性基には2-amino-1,3-diol構造と2-amino-3-ol構造の2種類がある。まず、9-decen-1-olを出発原料として酸化・Wittig反応・還元により2,11-dodecadien-1-olへ導いた後、Sharpless不斉エポキシ化・カーバメイト化・エポキシドの開環を伴うカーバメイトの環化反応により、2-amino-1,3-diol構造を立体選択的に構築することに成功した。また、末端オレフィンをオゾン酸化によりアルデヒドとした後、3-butenyl基の1,2-付加・生じた2級水酸基の酸化により、13位ケトン基を構築した。以上により、oceanapisideの1位から14位までのセグメントの不斉合成に成功した。一方、cyclododeceneを出発原料としてオゾン酸化・Wittig反応により12-tridecenalへ導いた後、Evans不斉アルドール反応・不斉補助基の除去・Curtius転位により、2-amino-3-ol構造を立体選択的に構築し、oceanapisideの15位から28位までのセグメントの不斉合成に成功した。閉環メタセシスを用いた両セグメントの結合により、oceanapisideの全合成が達成できるものと期待される。
弦の場の理論とDブレイン

弦の場の理論と近い関係にある行列模型を用いた低次元の量子重力(=弦理論)の研究を行った。特にDブレーンが本質的な役割を働く開弦セクターについて研究を行った。行列模型は行列を用いた量子力学系として定義されておりこれまでは主にその閉弦セクターが研究されてきた。これらの自由度は波動方程式の対称性が一重項の場合に対応していて、その場合は自由フェルミオンに帰着されることが昔から知られていたため解析が非常に進んでいた。一方Dブレーンがからむ開弦セクターはnon-singlet項で記述されそれに伴ってCalogero方程式の相互作用が低次元の場の理論に現れる。この相互作用のため解の性質を調べるのは遙かに難しくなり、これまであまり深い研究がなされてこなかった。この問題に取り組むため、本研究では系の持つ無限個の保存演算子に注目し、それらを同時対角化する状態の構成に成功した。これによりこれまで知られていなかった開弦セクターの可解性が明らかとなった。また関連する話題の研究として、3階反対称場の背景の元でのM理論(膜理論)の研究も行った。これは上で述べた行列模型が2階反対称場中の弦の運動を記述していることの一般化に当たる。元来この問題はいわゆる南部積を用いて研究されてきたが、本研究では点状の膜の運動を考えそれが自然に反対称場中で広がることを見いだし、それを用いて膜の場の間の積を定義した。またこの積の性質を用いてUV/IR混合など非可換空間中の弦理論で典型的に見られる性質を膜理論の場合に拡張した。弦理論のソリトンであるDブレーンを、弦理論の運動方程式の解として理解するのが本研究の主な目標である。ただ弦理論の場合、ハミルトニアンに相当している概念がまだ確立していないので、ある程度試行錯誤で運動方程式を見つける必要がある。昨年度我々はDブレーンを記述する境界状態が閉弦に対する非線形方程式(べき等方程式)をある程度普遍的に満たすことを発見した。ここで閉弦理論における積構造としては以前提案されていたいくつかの弦場の理論の積を用いており、振動子により書かれる具体的な形を用いて証明を行った。一方Dプレーンは任意の弦の背景に対して存在する概念であるので、平坦な真空を仮定する振動子の言葉に依らない証明が望ましかったが、本年の研究では共形写像の言葉を用いた新しい証明を与え、この目標を達成した。特に境界状態に対するべき等方程式の起源が、共形場理論の公理である因子化の現象と直接対応することが理解されたので、整合的な共形場理論で記述される弦理論の背景であればいつでも境界状態はべき等方程式を満たすことがわかった。また、特にB場と呼ばれる弦理論特有の反対称場があるとき、Dブレーン上では非可換性が生じることが知られていた。この考えを我々の提唱している方程式に適用すると、いわゆるMoyal積と呼ばれる典型的な非可換構造の代わりに、可換で結合則を破る積が自然に現れ、特にDブレーンはこの積に対するべき等元である必要があることがわかった。以上のように今年の研究により、背景が任意の場合でもDブレーンの満たす方程式は同じであることが理解されたので、研究は次のステップ、すなわちこのDブレーンの方程式が、弦の摂動論を正しく再現するか、さらに非摂動的な性質(タキオン凝縮)などをどの程度理解することができるのかが、現在の研究内容となっている。我々は以前境界状態が閉弦の場の理論で用いられるスター積に関してべき等方程式を満たすことを示した。これはDブレーンの弦の場の理論による普遍的な特徴付けと考えることができる。今年はこの考え方を拡張し、べき等方程式に対応する作用からどのようにして弦の摂動展開が導かれるかについて考察した。

これは今の段階ではまだ不完全なものであり、Feynman図を全て一意的に導くことに成功はしていないが、そのための条件として場の理論の頂点演算子がパラメータ依存性を持つ必要があることが理解された。また一つの副次的な産物として開弦に対応する境界状態が存在し、同じく開弦場の頂点演算子に対してべき等方程式を満たすことを示した。この開弦場に対する境界状態はDブレーンが交叉しているときに一方のDブレーン上から生成された開弦がもう一方のDブレーン上を伝播する過程を表す状態である。また関連するプロジェクトとして、低次元量子重力を記述するc=1の行列模型におけるソリトン的な状態(長い開弦)を記述する随伴表現のセクターの研究を行った。通常の短い弦はsinglet表現により記述されることが知られており自由場に帰着するが、随伴表現の場合はCalogero方程式という可解ではあるが自由ではない場の理論に帰着する。このCalogero方程式を厳密に解きソリトン的な状態の動力学を理解することが目標である。本年度は方程式の厳密解の積分系を導くことに成功した。現在large N極限をとってLiouville方程式から得られる予言と矛盾しないかどうかについて検討を行っている。弦の場の理論と近い関係にある行列模型を用いた低次元の量子重力(=弦理論)の研究を行った。特にDブレーンが本質的な役割を働く開弦セクターについて研究を行った。行列模型は行列を用いた量子力学系として定義されておりこれまでは主にその閉弦セクターが研究されてきた。これらの自由度は波動方程式の対称性が一重項の場合に対応していて、その場合は自由フェルミオンに帰着されることが昔から知られていたため解析が非常に進んでいた。一方Dブレーンがからむ開弦セクターはnon-singlet項で記述されそれに伴ってCalogero方程式の相互作用が低次元の場の、理論に現れる。この相互作用のため解の性質を調べるのは遙かに難しくなり、これまであまり深い研究がなされてこなかった。この問題に取り組むため、本研究では系の持つ無限個の保存演算子に注目し、それらを同時対角化する状態の構成に成功した。これによりこれまで知られていなかった開弦セクターの可解性が明らかとなった。また関連する話題の研究として、3階反対称場の背景の元でのM理論(膜理論)の研究も行った。これは上で述べた行列模型が2階反対称場中の弦の運動を記述していることの一般化に当たる。元来この問題はいわゆる南部積を用いて研究されてきたが、本研究では点状の膜の運動を考えそれが自然に反対称場中で広がることを見いだし、それを用いて膜の場の問の積を定義した。またこの積の性質を用いてUV/IR混合など非可換空間中の弦理論で典型的に見られる性質を膜理論の場合に拡張した。本年は主に3種類の観点から弦理論の非摂動的な定式化についての研究を行った。まずM理論という弦理論の背景にある理論の定式化についてはまだ定まった知見が無いが、3形式の背景場がある場合に点粒子の場の理論がどのような補正を受けるかについての研究を行った。2形式の背景場がある場合は非可換性が現れることが知られているが、3形式の場合には結合則の破れに伴った定式化が必要となる。この研究ではこの破れに対応する位相因子を定め、そのような空間上の最も簡単な場の理論を提案した。また3次元格子重力理論との間の関係を示唆した。次に低次元の量子重力ではFZZTブレインに端点を持つ長い開弦の2体の散乱振幅について詳しい計算を行い
母語別に対応できる音声指導用教材の開発に向けて

昨年度の研究成果を踏まえ、今年度は具体的な音声教材の作成に取りかかった。具体的な教材の作成にあたってこれまでに収集したサンプルの分析結果、それに先行研究、特に文部省の重点領域研究(199193年、音声教育、DI班)及び創成的基礎研究「国際社会における日本語についての総合的研究」(研究班3-音声言語の韻律的特徴に関する研究)等を基礎資料として教材の内容方法と検討した。これまでにも繰り返し述べてきたが、どの母語話者にとっても日本語の韻律特徴の習得はコミュニケーションを円滑に進める上で最も必要度が高いと言える。個々の音声要素である長音、撥音、促音などの特殊音の習得についても、アクセント、リズムとの関わりで捉え、練習につなぐべきだと考えるし、発話意図の微妙なニャンスを的確に捉えるにはイントネーションの使い方に慣れることが必要になる。そこで、今回の教材化の試みでは、英語、韓国語、中国語母語話者に対して、内容、方法ともに共通したアクセント、リズム、イントネーションの習得のための教材例を紹介し、さらに各母語別の習得上の問題をまとめた報告書に必要に応じて教材例の補足説明を行った。教材はアナウンサー三人に協力を依頼し、テープとビデオテープに音声または音声と画像および文字資料を収めたもので、全体としては完成していないが、部分的なサンプルとして考えている。本研究は今年度で終了となるが、引き続き、教材の完成に向けて作業を進めるつもりである。本年度の研究目標は日本語学習者による母語別(英・韓、中国語)の発話のサンプルを収集し、問題点を整理することだった。単音レベルの問題については、特に新しい成果があったとは思われないが、イントネーション、アクセント、リズムといった韻律的特徴の視点からいくつか今後の研究に示唆を与える問題点が得られたと思う。イントネーション、リズムに関しては上述の三言語ともそれぞれに日本語とは異なる特徴をもち、学習者の発話を自然な日本語に"修正"するにはいかに外国語話者による日本語の音の高低、強弱、長短のばらつきを母語の影響から守れるかということになる。例えば、英語話者は日本語の音声に強弱、長短の顕著なイントネーションをつけたりする。韓国語話者は、リズム、テンポの速さと強弱、それに有気、無気の音により非常にメリハリのある発声、発話を行う。中国語話者は日本語の平板アクセントやイントネーションの高さや長さの保持が難しく、また中国語の声調の影響でアクセントの高低の差が不自然に大きくなったり、2段階の高さの変化をしたりという傾向が見られる。イントネーション、リズムの重要性は、サンプルを分析すればするほど一層強く感じられる。それぞれの言語話者に合う効果的な練習方法を研究、開発していくことを、今後の課題として取り組んでいきたいと思う。また、音声教育について地元の日本語教師35名を対象に2回目のアンケートを行った結果、体系的に音声教育を行っている教師は相変わらず皆無に等しかった。必要性は感じるが教材もなく、教授法もわからないとの反応が多かった。具体的な教材の作成にあたって、これまでに収集したサンプルの分析結果、それに先行研究、特に文部省の重点領域研究(199193年、音声教育DI班)及び創成的基礎研究「国際社会における日本語についての総合的研究」(研究班3-音声言語の韻律的特徴に関する研究)等を基礎資料にして、教材の内容と方法を検討した。これまでにも繰り返し述べてきたが、どの母語話者にとっても、日本語の韻律特徴の習得はコミュニケーションを円滑に進める上で最も必要度か高いと言える。個々の音声要素である長音、擬音、促音などの特殊音の習得についても、アクセント・リズムとの関わりで捉え、練習につなぐべきだと考えるし、発話意図の微妙なニュアンスを的確に捉えるにはイントネーションの使い方に慣れることが必要になる。そこで、今回の教材化の試みでは、英語、韓国語、中国語母語話者に対して、内容、方法ともに共通したアクセント、リズム、イントネーションの習得にための教材例を紹介し、さらに、各母語別の習得上の問題をまとめた報告書に、必要に応じて教材例の補足説明を行った。

教材は、アナウンサー三人に協力を依頼し、テープとビデオテープに音声または音声と画像および文字資料を収めたもので、全体としては完成していないが、部分的なサンプルとして考えている。本研究は今年度で終了となるが、引き続き、教材の完成に向けて作業を進めるつもりである。
新しい腸内細菌叢マーカーとしての末梢血胆汁酸誘導体分析と消化器疾患診療への応用

肝臓で生合成された一次胆汁酸は,ヒトの腸内細菌によって二次胆汁酸へと代謝される。従って,個人の便中および血中の胆汁酸組成を調べると,その人の腸内細菌叢がわかるのではないかと考えた。我々は,健常者および各種消化器疾患患者の便と血清を収集し,便中の腸内細菌組成を末端標識制限酵素断片多型分析(T-RFLP)法にて,また便および血清の胆汁酸分画分析を高速液体クロマトグラフィー・タンデムマススペクトロメトリー(HPLC-MS/MS)法にて分析した。その結果,便中,さらには血中胆汁酸のうち,ある種の腸内細菌クラスターの比率を反映するものが見出され,臨床的に有用なバイオマーカーになることが明らかになった。胆汁酸は様々な腸内細菌によって腸管内で特徴的な構造変換を受け,再吸収されることによってその一部が血液中にも存在する。本研究はそれらの多様な胆汁酸および胆汁酸誘導体に着目し,ヒトにおける腸内細菌叢の経時的なモニター方法としての胆汁酸分析の有用性を検討する。さらに胆汁酸分析によって,腸内細菌叢の異常が関与すると考えられている各種病態の解明と,腸内細菌叢の改善を目指した新たな治療法の開発に寄与することを目的とする。3年間の目標は,1)HPLC-MS/MSを用いた高速で簡易な胆汁酸・胆汁酸誘導体一斉分析法の確立,2)NASH,肝癌,炎症性腸疾患など消化器疾患での胆汁酸および胆汁酸誘導体分画の変化を明らかにすること,さらに3)各胆汁酸誘導体を生成する責任細菌群の解明の3点である。平成26年度は,1)HPLC-MS/MSを用いた高速で簡易な一斉分析法の確立を目的として,まず胆汁酸誘導体の標準品と内部標準として使用する重水素標識された胆汁酸誘導体を購入または合成によって準備した。次にれらを用いてHPLC-ESI-MS/MSによる高感度一斉分析法を確立し,30分でヒトの27種類の胆汁酸および胆汁酸誘導体の一斉定量を可能にした。さらに従来報告されている血清サンプルからの胆汁酸前処理方法を改良し,本目的に合った胆汁酸の分離精製方法を確立した。以上により,平成27年度以降の各種疾患,病態における胆汁酸分析の基礎が完成した。胆汁酸は様々な腸内細菌によって,腸管内で特徴的な構造変換を受けた後に再吸収され,その一部が末梢血液中にも存在する。本研究は,それらの多様な胆汁酸および胆汁酸誘導体に着目し,ヒトにおける腸内細菌叢の経時的なモニター方法としての胆汁酸分画分析の有用性を検討することを目的としている。以上より,これらの血中胆汁酸が,便中の胆汁酸ひいては腸内細菌叢をある程度反映する可能性が示唆された。血中,便中の胆汁酸分析が順調に進み,最後の課題である腸内細菌分析にも既に着手している。従来,腸内細菌叢の解析は培養法によって行われていたが,7080%が培養困難な嫌気性菌であることが明らかになった。従って現在は,便中細菌の16SリボソームRNA遺伝子解析が行われることが多い。しかし,便の均一化,煩雑性やコストの面から臨床現場で容易に利用できる状況ではない。肝臓で生合成された一次胆汁酸は,ヒトの腸管に生息する特殊な細菌によって二次胆汁酸,さらには三次胆汁酸へと代謝される。従って,個人の便中および血中の胆汁酸組成は,その人の腸内細菌叢を反映するバイオマーカーになる可能性があると考えた。我々は,平成26年度に高速液体クロマトグラフィー・タンデムマススペクトロメトリー(HPLC-MS/MS)法による胆汁酸誘導体の一斉分析法を開発した。それを用いて平成27年度には,ヒトの血清および便中の胆汁酸分画を測定し,両者に有意な正の相関を認める胆汁酸誘導体が存在することから,血中胆汁酸分画が便中胆汁酸分画のある程度の指標となりうることを明らかにした。そこで平成28年度は,健常者および各種消化器疾患患者の便と血清を収集し,便および血清の胆汁酸分画分析と共に,便中の腸内細菌組成を末端標識制限酵素断片多型分析(T-RFLP)法にて分析した。その結果,便中,さらには血中の胆汁酸誘導体で,腸内細菌のうち疾患との関連が強く疑われているClostridium subcluster XIVaの比率と有意な正の相関をするものが見出された。分析に必要な血清量は20μL,糞便量は綿棒で肛門を拭ってわずかに黄色い色が付着する程度で十分である。サンプル採取から最短60分で結果が得られることより,臨床的にClostridium subcluster XIVaの増減を評価する簡易的なバイオマーカーとして有望であることが明らかになった。

その結果,便中,さらには血中胆汁酸のうち,ある種の腸内細菌クラスターの比率を反映するものが見出され,臨床的に有用なバイオマーカーになることが明らかになった。胆汁酸分析方法の確立が,ほぼ予定通り1年間で完了した。平成28年度前半(9月まで)に,以下の2つを並行して進める。1)各種消化器疾患患者の血清サンプル収集と血清胆汁酸分析を行い,疾患別のデータを収集する。2)平成27年度に血清と便中の胆汁酸を分析したものと同一サンプル(n=30)について,便中の腸内細菌叢分析を完了させ,腸内細菌叢と便中胆汁酸分画,および腸内細菌叢と血中胆汁酸分画との関係を明らかにする。平成28年度後半(10月以降)は,総括としてそれまでのデータをまとめ,論文作成を行う。消化器内科学平成27年度以降は,2)NASH,肝癌,炎症性腸疾患など消化器疾患での胆汁酸および胆汁酸誘導体分画の変化を明らかにすること,さらに3)各胆汁酸誘導体を生成する責任細菌群を解明することの2点を予定通り進める計画である。注文した試薬の納品が遅れて,年度をまたいでしまったため。胆汁酸誘導体の標準品で,発注したが国内に在庫がなく平成26年度末までに納品されていないものがある。生じた次年度使用額分は,試薬の納品を待って請求予定である。平成28年度の直接経費は,胆汁酸分析用のカラム,試薬のほか,腸内細菌叢分析,腸内細菌による胆汁酸代謝酵素研究に係わるshRNAとPCRプライマー等の購入に使用する。また,研究成果の発表を目的とした学会出張を予定している。平成27年度に納品され次第支払いを行い,それを用いて胆汁酸分析方法の改良を行う予定である。
神経細胞の極性形成を制御する新規シグナル伝達経路の解明

神経細胞は高度に極性化した細胞であり、1本の軸索と複数の樹状突起を形成する。しかしながら、神経細胞がいかにして極性を獲得し維持するか、その分子機序は未だ限定的なものであった。我々は、神経栄養因子NT-3の局所活性に応答して、軸索から長距離Ca2+伝播が引き起こされ、CaMKIが活性化することを見出した。さらに、リン酸化プロテオミクスによりCaMKIの新規基質としてRhoAの活性化因子RhoGEFを同定した。以上の結果より、長距離Ca2+伝播を介してCaMKI/Rho GEF/RhoA/Rho-kinase経路が複数の軸索形成を抑制することで樹状突起への運命決定を制御している可能性が示唆された。神経細胞は脳内において複雑なネットワークを形成するが、その基本機能は信号を受け取り統合して他の細胞に伝えることである。そのため、神経細胞は分化の過程で、通常1本の軸索と複数の樹状突起を形成する。これまでの知見より、軸索も樹状突起も共通の未成熟な神経突起から形成されることが知られている。しかしながら、どのようにして未成熟な神経突起のうち一本のみが軸索になり、複数の軸索形成が抑制されるのかなどについては未だに判っていない。そこで本研究では、一本のみの軸索形成を制御する分子機序(ネガティブフィードバック機構)を明らかにすることを目的とする。本年度は、軸索以外の未成熟な神経突起において、複数の軸索形成を抑制する因子を同定するために単一の神経突起のみに刺激を与える局所刺激法を用いて阻害剤のスクリーニングを行った。その結果、Rho-kinaseの阻害剤(Y-27632)によって未成熟な神経突起が急速に伸長し、複数の軸索が形成されることが明らかとなった。さらに、RhoAの阻害剤(C3)によっても同様の効果が認められたことから、複数の軸索形成を抑制する分子機構としてRhoA/Rho-kinase経路が関与していることが示唆された。神経細胞は高度に極性化した細胞であり、通常分化の過程で1本の軸索と複数の樹状突起を形成する。しかしながら、神経細胞がいかにして極性を獲得し維持するか、その分子機序の理解は未だ限定的なものであった。これまでの知見より、軸索も樹状突起も共通の未成熟な神経突起から形成されることが明らかになっている。しかしながら、どのようにして未成熟な神経突起のうち一本のみが軸索となり、他の未成熟な突起の軸索への分化が抑制されることで樹状突起へと分化するのかその分子機序については未だに判っていない。そこで本研究では、一本のみの軸索が形成される分子機序を解明することを目的とする。前年度では、複数の軸索形成を抑制する分子機構としてRhoA/Rho-kinase経路が関与していることが示唆された。今年度は、神経栄養因子NT-3の局所活性に応答して、軸索から細胞体にかけて長距離Ca2+伝搬が引き起こされること、またそれによってCaMKK/CaMKI経路が細胞体で活性化することを見出した。さらに、新規に開発したリン酸化プロテオミクス解析によってCaMKIの基質を網羅的に同定した。その中には、RhoAの活性化因子Rho GEFも含まれていた。以上の結果より、軸索での細胞外因子NT-3の増幅によって、長距離のCa2+伝搬を介してCaMKI/Rho GEF/RhoA/Rho-kinase経路が複数の軸索形成を抑制することで樹状突起への運命決定を担っている可能性が示唆された。さらに今年度は、神経細胞の極性形成に関する分子機序についての総説を発表した(髙野ら., Development, 2015)。当初の計画通り、神経細胞において一本のみの軸索形成を制御する分子機序(ネガティブフィードバック機構)を明らかにしつつある。局所刺激法を用いたスクリーニング系により、未成熟な神経突起にて複数の軸索形成を抑制する分子機構として、RhoA/Rho-kinase経路が関与していることを明らかとした。さらに、このRhoAの活性化制御機構についても現在取り組んでいるところであり、Ca2+シグナリングが関与している等、既にいくつかの予備的知見を得ている。従って、神経細胞の極性形成を制御するネガティブフィードバック機構の理解が進みつつある。神経化学今年度のスクリーニングで得られたRhoA/Rho-kinase経路やCa2+シグナルを中心に、時空間的な局在や活性化機構について検討する。具体的には、RhoAのFRET (蛍光共鳴エネルギー転移)プローブを用いて神経細胞でのRhoAの時空間的な活性化動態と神経細胞の極性化との相関を検討する。

また、軸索からの細胞体や未成熟な突起に向けてのCa2+の時空間的動態を検討するために、Oregon Green 488 BAPTA-1やCal520などの蛍光プローブを用いたイメージング解析を行う。さらに、Ca2+シグナルの下流で機能するRhoAの活性化因子(GEF)についても阻害剤を用いたスクリーニングや質量分析(LC/MS/MS)を用いて同定を行う。分子生物学、細胞生物学の実験用の試薬について現在あるものを使用したために、未使用額が生じたため。神経細胞におけるRhoAの活性化動態を検討するために、神経細胞発現用のFRETプローブを作製する。さらに、神経細胞におけるCa2+動態をモニターするために、Oregon Green 488 BAPTA-1やCal520などの蛍光プローブを購入し解析を行う。また、上記の実験計画によって得られた結果を国内学会及び国際学会にて発表を行う。
有理型写像の空間と除外指数の研究

平成12年度から平成14年度の研究成果は次の導りである.代表者の森は、P^n(C)への任意の超越的有理形写像あるいは正則曲線は,少し変形することにより除外超平面,除外超曲面および有理的動標的に対する除外値を全く持たない写像に変形でき,除外値を全く持たない写像が超越的有理形写像の空間で稠密であることも示した.また,分担者の相原との共同研究で,P^n(C)の次数dの任意の超曲面に対し,dで定まる範囲の1より小さい任意の実数を除外指数に持つ代数的に非退化な有理形写像が常に構成できることを示した.分担者の相原は,有理形写像が因子の逆像に関する条件下で代数的に従属するための様々な十分条件を写像の増大度に関する条件なしで与えた.また除外値の存在が一意性に問題にどのように寄与するか研究し,いくつかの一意性定理をあたえた.戸田はC0からP^n(C)への超越的な正則曲線の値域がN-劣一般位置にあり,除外指数の総和が極大である場合,1)N>n=2m(m:自然数)のとき,除外指数が1となるものが必ずある.2)N>nのとき,ある種の正則曲線に対しては除外指数が1となるものが少なくともN-n+1個あることを示した.力学系に関連して,仲田は不連続群の極限集合上の作用および有理関数のジュリア集合上の作用に関するエルゴード理論について研究した.関川は有理関数の不変でないファトゥー成分について任意のπ【greater than or equal】3に対して,連結度nのファトゥー成分をもつ有理関数の例を構成した.河村はカオス的に見えるカオス構造も確率論的に見ると,顕著な規則性をもち,確率密度関数の収束という現象が現れることを示した.一方,関数空間や測度論の観点から,佐藤は局所コンパクト・アーベル群のローレンツ空間上の平行移動不変な作用素のなす空間の構造を研究し、水原はハーディ空間の,Morrey関数とブロック関数およびリース・ポテンシャルに関連した弱分解定理を示した.平成12年度から平成14年度の研究成果は次の導りである.代表者の森は、P^n(C)への任意の超越的有理形写像あるいは正則曲線は,少し変形することにより除外超平面,除外超曲面および有理的動標的に対する除外値を全く持たない写像に変形でき,除外値を全く持たない写像が超越的有理形写像の空間で稠密であることも示した.また,分担者の相原との共同研究で,P^n(C)の次数dの任意の超曲面に対し,dで定まる範囲の1より小さい任意の実数を除外指数に持つ代数的に非退化な有理形写像が常に構成できることを示した.分担者の相原は,有理形写像が因子の逆像に関する条件下で代数的に従属するための様々な十分条件を写像の増大度に関する条件なしで与えた.また除外値の存在が一意性に問題にどのように寄与するか研究し,いくつかの一意性定理をあたえた.戸田はC0からP^n(C)への超越的な正則曲線の値域がN-劣一般位置にあり,除外指数の総和が極大である場合,1)N>n=2m(m:自然数)のとき,除外指数が1となるものが必ずある.2)N>nのとき,ある種の正則曲線に対しては除外指数が1となるものが少なくともN-n+1個あることを示した.力学系に関連して,仲田は不連続群の極限集合上の作用および有理関数のジュリア集合上の作用に関するエルゴード理論について研究した.関川は有理関数の不変でないファトゥー成分について任意のπ【greater than or equal】3に対して,連結度nのファトゥー成分をもつ有理関数の例を構成した.河村はカオス的に見えるカオス構造も確率論的に見ると,顕著な規則性をもち,確率密度関数の収束という現象が現れることを示した.一方,関数空間や測度論の観点から,佐藤は局所コンパクト・アーベル群のローレンツ空間上の平行移動不変な作用素のなす空間の構造を研究し、水原はハーディ空間の,Morrey関数とブロック関数およびリース・ポテンシャルに関連した弱分解定理を示した.研究代表者の森は、ネヴァンリナ除外値の消去の問題で、これまでの結果のうち超曲面に関するものを多変数に拡張しC^mからP^n(C)への任意の超越的有理型写像を少し変形し、除外超曲面に対する除外値を全く持たない写像に変形できることを証明した。また、有理型写像の全体の空間にある距離を導入し、除外値を全く持たない写像がこの空間で稠密であることも示した。ここでは、有理的と超越的とをはっきり識別する距離の導入した。戸田は、(1)有限平面での超越的有理形関数が重複を無視して5つの値を共有するとき、これらは一致しているというネヴァンリナの一意性の定理の一般化についての研究、(2)有限平面からn次元複素射影空間への超越的な正則曲線の値域の一般位置でない超平面で、除外指数の総和が最大であるときの除外指数についての研究を行った。仲田は、リーマン球面上の有理関数の複素力学系において、そのジュリア集合のハウスドルフ次元の評価について考察した。またファトウ集合の非前方不変な連結成分の連結度について、臨界点などを用いて考察した。河村は、カオス力学系における確率密度関数の収束、および作用素環を用いて状態関数の収束の研究を行った。また、1次元カオス力学系において、同相カオス写像が存在するための相空間の特徴付けを行った。

水原は、一般の増大関数を持つモーリー空間上で、カルデロン=ジグムント作用素との交換子、およびリースポテンシャルとの交換子の有界性を示した。相原は、有理型写像に関する逆像の条件下での一意性・有限性問題について研究し、ネヴァンリナの意味での除外因子に関する条件の下で一意性定理を証明した。また有理型写像が代数的に従属するための条件を与えた。その応用として楕円曲線上に値を持つ2つの正則写像が自己準同型でうつり合う条件を与えた。研究代表者の森は、有理型写像f:C^<rn>→P^n(C)の除外値の消去の問題に関して、定義域が1次元の場合、一般次元の場合、標的がP^n(C)の超平面の場合、超曲面の場合および有理的動標的の場合について、ここ何年か研究してきた。さらに、有理型写像の全体の空間に有理写像と超越的写像の区別ができる一つの距離を導入し、この距離に関し除外値を全く持たない写像が超越的写像の空間で稠密であることも示した。現在、多変数有理型写像と有理的動標的の組合せに対する除外値消去問題以外は解決した。また非ユークリッド的数体上の正則曲線に対する除外値の消去問題も扱った.一方、P^n(C)への正則曲線あるいは有理型写像に対して、どのくらいの除外値を持ちうるかという問題に関連しGriffithsによるP^n(C)内のd次の滑らかな超曲面達に対し除外指数はある定数の1/d倍で押さえられるという予想がある。この問題に関連し、最近、相原氏との共同研究で、P^n(C)内の任意のd次の超曲面D_dに対し、ある区問(0,q(d)]内の任意の正数αに対してfのD_dに関する除外指数がαに等しい正則曲線あるいは、有理型写像が構成できることを示した。また、ある特異点をもつ超曲面に対し、特異点でBlow upして滑らかになった超曲面に対しての除外値の評価も行った。分担者の戸田は、正則曲線f:C→P^n(C)(n:偶数)の除外指数が最大となるとき、必ず除外指数が1に等しいものが存在することを示した。佐藤は、測度空間上の線形作用素の性質にについての結果を得た。上で述べた距離は実際に計算をする場合困難を生じるので佐藤氏との討論によりより良い距離を見つけられることを期待している。相原は、有理型写像の代数的従属性などの結果も得た。平成14年度の研究内容は次の通りである.有理形写像の値分布論の立場から,代表者の森は分担者の相原との共同研究で除外因子を持つ複素射影空間に値を持つ有理形写像の構成を行い,任意の効果的因子に対してその因子より定まるある範囲にある1より小さい任意の実数を除外指数に持つ代数的に非退化な有理形写像が常に構成できることを示した.これを用いてグリフィスの除外関係式が正規交差でない特異点を持つ因子の場合には成立しない例を構成した.更に特異点を解消した場合には除外関係式が成立することを示した.分担者の相原は,有理形写像が因子の逆像に関する条件下で代数的に従属するための様々な十分条件を写像の増大度に関する条件なしで与えた.その応用として非特異楕円曲線への正則写像が自己準同型で写りあう十分条件を与えた.また除外値の存在が一意性に問題にどのように寄与するか研究し,いくつかの一意性定理をあたえた.戸田は,からn次元複素射影空間への超越的な正則曲線の値域がN-劣一般位置にあり,除外指数の総和が極大であるときの除外指数について調べ,1)N>2n=2m(m:自然数)のとき,除外指数が1となるものが必ずある.2)N>
ホリスティックな教育改革の実践と構造に関する総合的研究

今年度においては、私たちは、全国的規模で実施された公立中学校の校長と教員を対象とする調査によって得られたデータをより深く分析するとともに、ホリスティックな教育改革の概念と社会的意義について吟味した。その上で、(1)地域・学び舎、(2)小学校・中学校、(3)高校、というの3領域ごとに学びの場を構築する具体的な改革実践を取り上げ、若干の考察を行った。最終報告書の中で導かれた主な知見は、以下の通りである。1.新自由主義的で新保守主義的な教育改革が進められることによって、結果的に制度的な差別が拡大していった。こうして、日本の教育がもっていた機能が犠牲となり、学習や生活や成長にかかわるさまざまな社会的基盤がどんどん崩されていった。2.従来、改革を積極的に受け入れていた層までもが、教育改革の計画自体に異議を唱えるようになっている。政策を立案する側と教育実践に携わる側との間で、信頼関係が損なわれ始めている。およそ3000名に及ぶ教員たちが書いたかれらの悩みを質的に分析することを通して、昨今の教育改革が教員の多忙化をもたらし、協働的な同僚性がやせ細っていく実態が浮き彫りになった。3.中学教育のさまざまな「ゆらぎ」を分析することによって、私たちは次のような結論に到達した。すなわち、多くの人々がしがみつく教育改革をめぐる支配的な物語や縮こまった実践に終止符を打ち、構造的な病を克服しなければならないということである。そのためには、「人が育っていくこと」の本質をしっかりと見極め、柔らかい対話を試みることが重要である。4.すでに、わが国に固有のホリスティックな教育改革の萌芽が確実に育てられている。本研究は、これらの実践と教育社会の構造的な現実に丁寧に耳を傾けることが不可欠であることを示した。今後、さまざまな改革領域の実践に共通する要因を取り出し、当事者同士が互いに連帯できるような方策を考えていくことが鍵を握る。それは、私たち一人ひとりが、社会や人間について、自分たちとの関係を問いながら、もっと深く知っていくことによってはじめて可能になる。本年度はホリスティックな教育改革の実践と構造を多面的に考察するために、以下の3つの点に焦点を合わせて研究を実施した。1.<ホリスティックな知>に関する文献研究教育社会の近代性を批判的に捉えなおしつつ<ホリスティックな知>を突破口として取り上げている文献をレビューし、その到達点を確認する作業を行った。<いのち>、ホロン、自己組織性、共生の経済学、臨床の知など関連する諸概念を抽出し、教育現実と照らし合わせながらリファインしていった。2.ホリスティックな教育改革の実践事例の収集と分析<ホリスティックな知>自体を鍛え上げるとともに改革の可能性と限界を見極めるために、ホリスティックな教育改革の実践事例を抽出しその特徴と文脈を整理した。さらに、「国際交流」に焦点を合わせて、実践校間の情報交換の場を設け、研究と実践の有意義な架橋の一助とした。3.「中学校の学校運営の実態と教育改革のあり方に関する調査」の実施公教育において最も深刻な困難を引き受けている中学校段階に焦点を合わせ、全国の公立中学校513校(20分の1の抽出確率で等間隔無作為抽出)の校長・一般教員を対象に郵送自記式質問紙調査を実施した(平成14年3月)。

具体的な質問項目は、学校の社会的文脈、個人属性、教育改革観、教育活動、教員の同僚性、困難事例の発生と経過、教育改革実践、教員としての悩み(自由記述)など多岐にわたる。次年度は、本調査データを構造的に分析し、ホリスティックな教育改革の可能性と条件について分析を深めていく予定である。今年度は、全国公立中学校校長・教員調査データの分析とホリスティックな学校づくりの現地調査を中心に研究を進めた。中間報告書記載の主な知見は、以下の通りである。(1)とくに町村部では「つながり」が切れておらず、比較的ポジティブな状況にある。(2)教員の仕事時間は部活動指導時間を加味すれば約13時間に及ぶ。女性の場合、家事・育児時間が加わる。全般的に、生徒とかかわる時間を奪う雑務への不満が大きい。(3)「総合的な学習の時間」が生徒にポジティブな影響を与えていると評価されるのは、「他校にはない特色」「地域とのつながり」等を旨とする場合である。(4)元気を増進する学級づくりは、「保護者と親しく交流する機会」「生徒の関心を尊重する動き方」「家庭環境などの丁寧な把握」を特徴とする運営方法と関連している。(5)「ゆらぎ」という点では、準大都市の中学校の状況が最も困難である。校内暴力や「学級崩壊」などの回復率の点で言えば、「地域のつながり」「教員同士の関係性」「子どもへのまなざし」「複数担任制などのシステム面での工夫」などが力を発揮する。(6)不登校の発生にも、「子育て環境に恵まれない」など地域の困難さ(「つながりの切断状況」)が関わっている。学校という場全体の関係のありようも影響を及ぼす。(7)校長・教員ともに、教育改革が現場の現実と乖離していることを鋭く指摘している。改革への不満は、熱心な教員ほど大きい。ここに今次の改革の重要な特徴がある。(8)現在の教育改革は個人主義・操作主義的な流れに乗るか、学校の機能をスリム化するか...いずれかに傾く傾向がある。しかし、生徒に元気をもたらすのはいまの困難さと丁寧に向き合う教員たちの試みである。多忙感と虚無感が蔓延しつつある中で、こうした構えをサポートしていくことが行政や研究に期待される。本年度は、公立中学校校長・教員全国調査のデータの分析を深めるとともに、ホリスティックな教育改革の意味と社会的意義について検討を加えた。さらに、(1)地域づくり・学び舎づくり、(2)小学校・中学校づくり、(3)高校づくり、の3領域それぞれについて、具体的な改革実践事例を取り上げ、若干の考察を行った。最終報告書で紹介された主な知見は、以下の通りである。1.新自由主義・新保守主義的な教育改革の結果として制度的差別化が進み、日本の教育の機能が歪められ、さまざまな学習・生活・成長の基盤が浸蝕されつつある。2.従来改革をポジティブに受け止めていった層が教育改革のデスク・プラン自体に異議を唱えており、政策立案サイドと教育現場の信頼関係に深刻な影響を及ぼしかねない状況がある。約3千名に及ぶ「教員の悩み」の質的分析からも、教育改革に伴う「多忙化」の中で協働的な同僚性がやせ細っていく様子が浮かび上がった。
テトラドラル異性からアトロプ異性への不斉変換と軸性不斉化合物合成への応用

gem-ジハロシクロプロパン化合物は,官能基変換可能なジハロゲノ基を有すと同時にシクロプロパン特有の種々の性質を持ち合わせており,様々な有機合成への応用展開が期待できる.申請者らは,gem-ジハロシクロプロパンの骨格変換をカチオン的・アニオン的・ラジカル的と多面的にアプローチする骨格変換反応を研究してきた.特に,カチオン的ベンズアヌレーションに注力してきた(田辺・西井「gem-ジハロシクロプロパンの特徴を活かした反応と合成:カチオン的ベンズアヌレーション」有機合成化学協会誌,1999,57,170-180).しかし,その合成化学的潜在力は,不斉合成に殆ど活用されてはいない.つまり,不斉合成は非常に困難と予想された.最近,この一つを可能にし,sp^3不斉からアトロブ異性への"Chirality Exchange".と命名した(JACS,2004,126,5358).軸性不斉化合物を合成する新しいコンセプトであり,これを駆使して,光学活性生理活性軸性天然物・機能分子の斬新な不斉合成法になると期待される.このベンズアヌレーションを詳細に検討すると,ベンゼン環の置換様式の微妙な違いで,非常に特異な環化モードが高位置選択的に進行し,これを"ipso-Type Benzannulation"と名づけた.多くの反応中間体を経由するトリッキーな反応にもかかわらず,2,3の例外を除いて,"Chirality Exchange"を伴って進行する.様々な有機合成への応用展開が期待できるgem-ジハロシクロプロパン化合物のカチオン的・アニオン的・ラジカル的と多面的にアプローチする骨格変換反応を研究中である(田辺・西井「gem-ジハロシクロプロパンの特徴を活かした反応と合成:カチオン的ベンズアヌレーション」有機合成化学協会誌,1999,57,170-180).特に,カチオン的ベンズアヌレーションに注力し,非常に困難と予想される不斉合成への展開を行った.すなわち最近,これを可能にし,sp^3不斉からアトロプ異性への"Chirality Exchange"と命名した(JACS,2004,126,5358).軸性不斉化合物を合成する新しいコンセプトであり,これを駆使して,光学活性生理活性軸性天然物・機能分子の斬新な不斉合成法になると期待される.さらにこれまで未知であった物理的性質を分析し,天然物のアーカイブとし,生理活性試験を行い,医農薬のリード化合物とする.さらに,ベンゼン環の置換様式の非常に特異な環化モードが,高位置選択的に進行することを見出した.これを"ipso-Type Benzannulation"と名づけた.しかも興味深いことに,ipso-Type Benzannulationは,多くの反応中間体を経由する複雑でトリッキーな反応にもかかわらず,2,3の例外を除いて,"Chirality Exchange"を完全に伴って進行する.様々な有機合成への応用展開が期待できるgenr-ジハロシクロプロパン化合物のカチオン的・アニオン的・ラジカル的と多面的にアプローチする骨格変換反応を研究中である(田辺・西井「genrジハロシクロプロパンの特徴を活かした反応と合成:カチオン的ベンズアヌレーション」有機合成化学協会誌,1999,57,170-180).特に,カチオン的ベンズアヌレーションに注力し,非常に困難と予想される不斉合成への展開を行った.すなわち最近,これを可能にし,Sp^3不斉からアトロブ異性への"Chirality Exchange"を提起した(JACS,2004,126,5358,).軸性不斉化合物を合成する新しいコンセプトであり,これを駆使して,光学活性生理活性軸性天然物・機能分子の斬新な不斉合成法になると期待される.さらにこれまで未知であった物理的性質を分析し,天然物のアーカイブとし,生理活性試験を行い,医農薬のリード化合物とする.さらに,ベンゼン環の置換様式の非常に特異な環化モードが,高位置選択的に進行することを見出した.これを"ipso-Type Benzannulation"と名づけた.興味深いことに,この反応は,多くの反応中間体を経由する複雑でトリッキーな反応にもかかわらず,"Chirality Exchange"を完全に伴って進行する.今年度は,基質となる光学活性genrジハロシクロプロパンの実用的光学分割法を確立した.gem-ジハロシクロプロパン化合物は,官能基変換可能なジハロゲノ基を有すと同時にシクロプロパン特有の種々の性質を持ち合わせており,様々な有機合成への応用展開が期待できる.申請者らは,gem-ジハロシクロプロパンの骨格変換をカチオン的・アニオン的・ラジカル的と多面的にアプローチする骨格変換反応を研究してきた.特に,カチオン的ベンズアヌレーションに注力してきた(田辺・西井「gem-ジハロシクロプロパンの特徴を活かした反応と合成:カチオン的ベンズアヌレーション」有機合成化学協会誌,1999,57,170-180).しかし,その合成化学的潜在力は,不斉合成に殆ど活用されてはいない.つまり,不斉合成は非常に困難と予想された.最近,この一つを可能にし,sp^3不斉からアトロブ異性への"Chirality Exchange".と命名した(JACS,2004,126,5358).軸性不斉化合物を合成する新しいコンセプトであり,これを駆使して,光学活性生理活性軸性天然物・機能分子の斬新な不斉合成法になると期待される.

このベンズアヌレーションを詳細に検討すると,ベンゼン環の置換様式の微妙な違いで,非常に特異な環化モードが高位置選択的に進行し,これを"ipso-Type Benzannulation"と名づけた.多くの反応中間体を経由するトリッキーな反応にもかかわらず,2,3の例外を除いて,"Chirality Exchange"を伴って進行する.
適応スイッチング制御理論とその応用に関する研究

まず,線形レギュレーション制御問題に対して,構造化されたパラメータ誤差及びノイズがある場合に,状態変数フィルタの有無による,Supervisorにおける切換時間間隔の下限を与える式を導いた.それを用いて切換時間間隔が短いSupervisorと適応スイッチングサーボ制御系の設計法を確立した.そのために付随システムを導入し,状態変数フィルタを設計し,スイッチングするための評価値を作り,コントローラの間の切換を行うためのアルゴズムを作った.この設計法を適応スイッチングレギュレーション制御問題(ロープ長が未知のクレーンの防振制御)と適応スイッチングトラキング制御問題(非線形補償付き手先荷重が未知のロボットの軌跡制御)に適用した.シミュレーシュン及び実機試験を行い,満足な結果を得られた.次にrigidロボットのトラッキング制御問題における非線形適応スイッチングトラッキング制御問題を考えた.いくつかの新しい結果を得た.1.アーム角とアーム角速度を用いた非線形適応トラッキングコントローラを提案した.2.アーム角だけを用いた非線形適応トラッキングコントローラを提案した.アーム角速度を推定するために非線形オブザ-バを提案した.3.1と2で得た非線形適応トラッキングコントローラの漸近安定性や指数安定性などの性質及びそれらの成立条件が分かった.4.適応スイッチング手法を用いると,1と2で開発した非線形適応トラッキングコントローラの性能を大幅に改善できることがわかった.最後に柔軟関節を持つロボットのトラッキング制御問題においても非線形適応スイッチングトラッキング制御問題を考えた.そのためモータ角とモータ角速度だけを用いて非線形適応トラッキングコントローラを提案した.シミュレーシュンによって,その有効性を確認できた.まず,線形レギュレーション制御問題に対して,構造化されたパラメータ誤差及びノイズがある場合に,状態変数フィルタの有無による,Supervisorにおける切換時間間隔の下限を与える式を導いた.それを用いて切換時間間隔が短いSupervisorと適応スイッチングサーボ制御系の設計法を確立した.そのために付随システムを導入し,状態変数フィルタを設計し,スイッチングするための評価値を作り,コントローラの間の切換を行うためのアルゴズムを作った.この設計法を適応スイッチングレギュレーション制御問題(ロープ長が未知のクレーンの防振制御)と適応スイッチングトラキング制御問題(非線形補償付き手先荷重が未知のロボットの軌跡制御)に適用した.シミュレーシュン及び実機試験を行い,満足な結果を得られた.次にrigidロボットのトラッキング制御問題における非線形適応スイッチングトラッキング制御問題を考えた.いくつかの新しい結果を得た.1.アーム角とアーム角速度を用いた非線形適応トラッキングコントローラを提案した.2.アーム角だけを用いた非線形適応トラッキングコントローラを提案した.アーム角速度を推定するために非線形オブザ-バを提案した.3.1と2で得た非線形適応トラッキングコントローラの漸近安定性や指数安定性などの性質及びそれらの成立条件が分かった.4.適応スイッチング手法を用いると,1と2で開発した非線形適応トラッキングコントローラの性能を大幅に改善できることがわかった.最後に柔軟関節を持つロボットのトラッキング制御問題においても非線形適応スイッチングトラッキング制御問題を考えた.そのためモータ角とモータ角速度だけを用いて非線形適応トラッキングコントローラを提案した.シミュレーシュンによって,その有効性を確認できた.
微少残存白血病細胞(MRD)の生物学的特性(MRDの質と白血病再発との関連)

1、対象症例と白血病細胞の精製対象は白血病特異的マーカーCD15+CD117+芽球または、CD34+CD56+芽球が初診時に陽性であった成人急性骨髄性白血病患者25例である。二重陽性細胞をCell sorterを用いて分離し、得られた残存病変に対し、以下の検討を行った。2、免疫細胞化学マーカー染色体が得られた5例で上記2でFISH法によってclonalityを検討した。5例中2例で残存病変のclonalityが確認された。4、mRNA解析4、Apoptosis解析Fas発現率は、0.000.10%であった。また、抗Fas抗体によるApoptosis誘導を行い、6例中1例でapoptosis誘導が認められた。5、再発との関連微少残存病変の特性と再発に関して統計学的検討を行った。解析可能な22例中5例で再発を認め、再発と有意な関連を示したのはMRDのclonatity、BCL-2の低発現であった。1、対象症例と白血病細胞の精製対象は白血病特異的マーカーCD15+CD117+芽球または、CD34+CD56+芽球が初診時に陽性であった成人急性骨髄性白血病患者である。本年度は18例が対象となった。うち、2例はCD15+CD117+芽球、D34+CD56+芽球ともに陽性であった。寛解導入療法終了後、寛解判定時に採取した骨髄液から単核球を分離、抗CD15抗体及び、抗CD117抗体、または抗CD34抗体及び抗CD56抗体で二重染色を行い、微少残存病変として二重要性細胞をCell sorter(FACSVantage,またはFACSort)を用いて分離した。得られた残存病変に対し、以下の検討を行った。2、免疫細胞化学芽球のサイトスピン標本を作成し、抗PGP抗体、抗LRP抗体、抗Bcl-2抗体、抗c myc抗体を用いて染色し、これらの蛋白発現を検討した。PGP発現率は、0.00 25.32%、LRP発現率は0.00 15.50%、BCL-2発現率は0.00 3.20%、c-myc発現率は0.05 2.00%であった。微少残存病変のclonalityをFISH法で確認した。マーカー染色体(例:trisomy8)は6例で得られた。上記2で抗体染色した標本を脱色し、FISh probeでhybridizationを行った。6例中4例で残存病変のclonalityが確認された。4、mRNAの解析微少残存病変から抽出したRNAを用いて、RT-PCR法で、MDR1mRNA,LRP mRNA,WT-1 mRNAの半定量を行った。MDR1 mRNAは、10例で検討し、6例で検出された。LRP mRNAは、6例で検討し、2例で検出された。WT-1 mRNAは、10例で検討し、8例で検出された。5、Apoptosisの解析微少残存病変を抗Fas抗体で染色してFas発現を解析した。Fas発現率は、0.00 0.10%であった。また、抗Fas抗体を作用させ、AnnexinV染色、7AAD染色を行い、Apoptosis誘導の検討を行った。抗Fas抗体の作用によるapoptosisの誘導は、18例中6例で認められた。1、対象症例と白血病細胞の精製:対象は白血病特異的マーカーCD15+CD117+芽球または、CD34+CD56+芽球が初診時に陽性であった成人急性骨髄性白血病患者である。本年度は22例を対象とした。寛解判定時の骨髄液から単核球を分離、抗CD15抗体及び、抗CD117抗体、または抗CD34抗体及び抗CD56抗体で二重染色を行い、微少残存病変として二重陽性細胞をCell sorter(FACSVantage)を用いて分離、得られた残存病変に対し以下の検討を行った。2、免疫細胞化学:サイトスピン標本を作成、抗PGP抗体、抗LRP抗体、抗Bcl-2抗体、抗Bax抗体、抗c-myc抗体を用いて染色した。PGP, LRPは高頻度に発現、C-myc, Baxは低発現、Bcl-2は中等度の発現であった。3、FISH:微少残存病変のclonalityをFISH法で確認した。マーカー染色体が確認できる14例で解析を行い、13例でclonalityを確認した。4、mRNAの解析:微少残存病変から抽出したRNAを用いて、RT-PCR法MDR1mRNA, LRPmRNA, WT1mRNAの半定量を行った。WT-1半定量により微少残存病変の追跡も行った。5、Apoptosisの解析:微少残存病変を抗Fas抗体で染色してFas発現を解析し、また、坑Fas抗体を作用させ、AnnexinV染色、7AAD染色を行い、Apoptosis誘導の検討を行った。Fas発現は低く、Apoptosis誘導はされにくい傾向を認めた。6、細胞周期解析:7-AAD/PY法による細胞周期解析を行った。芽球特異的表面マーカー(例CD15+CD117+芽球)を用いて4重染色を行い微少残存病変における細胞周期解析を行った。8症例において解析を行い、非白血病芽球に比較してG0-G1の細胞比率が高い傾向を認めた。