hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
公正使用の法理に関する総合的研究-著作権の侵害主体の観点から

著作権の侵害主体の事例において、公正使用法理を、イノベーションや文化政策の視点から根拠づけた。具体的には、サーチエンジンのおこなっているビジネスや電子図書館、プロバイダー、私的複製機器の事例を、比較法・経済学・歴史の点から検討した。また、特許権の間接侵害の事例と比較により、ソフト化とインターネットの発達により同様の問題が生じていることが明らかとなった。これらの分析の結果、著作権の侵害主体の問題において、財産権→不法行為→著作権制限規定による積極的外部経済の保護という視点が反映していた。著作権の侵害主体と対比させる意味で、特許権の間接侵害について、ドイツ、アメリカ、わが国の比較法的考察を行い、かつ、有体物と離れたソフトウェアにおける間接侵害の問題点を包括的に分析し、「間接侵害」専門訴訟講座(民事法研究会)を脱稿した。2009年度内に刊行予定であったが、他の執筆者の遅れから未刊行である。直近の論文「サーチエンジンにおける著作権侵害主体・フェアユースの法理の変容-noticeおよびGoogle Book Search Projectにおけるopt-out制度を中心に」筑波法政46号21-57頁(2009年2月)で検討した、Google Book Search Projectのその後の動向を調査した。アメリカを中心とする英語圏以外で著作権者の大きな反発をもたらしたものの、その理念の正しさは各国とも理解されているようであり、欧州では異なる形で同様のプロジェクトが開始されている。ドイツなどの大陸法国においても、著作権の財産権としての考えが見直され、著作権の制限の一般規定(公正使用の法理)に関する議論がおいても盛んになっていることが判明した。Time-shiftingおよびspace-shifting目的の録音録画機器の提供者の侵害主体性についてわが国の裁判例の立場が分かれているが、アメリカ法の比較調査研究を行なった。また、ドイツ法において、著作権以外の他の不法行為における侵害主体との比較調査研究をおこない、一定の知見を得た。地図やデータベースなど事実著作物における新しいビジネスにおける公正使用(フェアユース)の法理の必要性について法理論的検討をおこなった。引き続き、特許法の間接侵害規定、共同直接侵害について検討した。さらに、引用規定などの個別制限規定をサムネイルのほかインターネットやデジタル著作物における新しい利用形態に拡大適用することの限界と弊害を主張した。その際、わが国と同様に個別制限規定を採用するドイツにおいて引用規定の拡大適用を否定したサムネイルのBGH判決、およびわが国の近時の裁判例を素材として検討した。これまでのわが国の学説が裁判例の引用の2要件への批判に集中し「引用の目的」を定義せず一般条項のように解釈しようとしてきた点を批判的に検討した上で、すでにわが国の裁判例も引用規定について一般条項における諸要素を勘案する経験をつんでいること、著作権の一般制限規定を導入したからといって、個別の権利制限規定とあわせて考えると、必ずしも著作権制限の範囲が広がるわけではないことを明らかにした。むしろ、インターネット上のさまざまな利用行為に関わる利益状況-技術的保護手段が容易かなどの技術環境によって変わりうる-が変化しているにもかかわらず、著作権の支分権は一般規定のままであり、あらゆる著作物の多様な利用について権利制限の一般規定による適切な利益考量の機会がもうけられることの必要性が高くなっていることを主張した。以上の成果を筑波法政50号で公表した。本年度は、まず、ヨーロッパ法において、著作権制限の一般規定に関する議論、および、著作権の侵害主体の議論を調査・検討した。とりわけ、筑波法政50号の論文で、ドイツの最高裁判決(Googleのサムネイル)を契機に、個別制限規定(引用規定)をサムネイルに適用することの限界がドイツの判例・学説で認識され、ドイツ法のような大陸法においても一般的制限規定(フェアユース)の必要性が主張されていることを明らかにした。その上で、わが国の引用規定に関して、「引用」を定義せずに柔軟ないし拡張的解釈を主張する学説・判例の解釈論を批判的に検討した。個別制限規定の拡張解釈は、一般的制限規定が立法された場合以上に著作権の制限の範囲が広がりうることを論証した上で、個別制限規定と一般的制限規定(フェアユース)を一体として解釈すべきことを主張した。また、特許権の間接侵害についてアメリカ法、日本法、ヨーロッパ法を調査した。そのうちのアメリカ法、日本法の成果が、知財研フォーラム87号の論文である。特許権の間接侵害規定、教唆・幇助規定、共同直接侵害行為についても、アメリカ法を中心に、著作権法の侵害主体の問題(著作権の間接侵害)と比較しつつ検討を行った。その結果、同じネットワーク技術に関する著作権侵害行為についても、間接侵害行為と直接侵害行為の区別が困難となりつつあるという知見を得た。また、ヨーロッパ法において、不法行為との関係が問題となるため、この点についても調査・研究を行った。本年度も引き続き、ヨーロッパ法における、著作権制限の一般規定に関する議論、および、著作権の侵害主体の議論を、アメリカ法の議論と比較しつつ調査・検討し、以下の3点について分析・考察をおこない、一定の成果を得た。

第1に、著作権の侵害主体についてはさまざまな行為類型があるが、私的複製規定が関係する類型について検討をおこなった。これについては、私的録音・録画補償金の問題も含めて考察をすすめ、4月の著作権法学会で報告する予定である。第2に、特許権の間接侵害についてアメリカ法、日本法、ヨーロッパ法を調査し、その成果を、「間接侵害」『特許訴訟』(専門訴訟講座6)(民事法研究会)265-322頁(2012年4月)に公表した。特に、著作権法の侵害主体の問題(著作権の間接侵害)と比較しつつ検討を行った。その結果、同じネットワーク技術に関する著作権侵害行為についても、間接侵害行為と直接侵害行為の区別が困難となりつつあること、同じソフトウェアについても、特許法の間接侵害と同じ問題が生じうることを検証した。第3に、準拠法についてである。その成果が、「職務著作制度およびその準拠法の新たな展開」高林龍・三村量一・竹中俊子編『知的財産法の理論的探求』(現代知的財産法講座1)231ー249頁日本評論社である。これは、直接には、権利の帰属の準拠法について論じた論稿であるが、侵害行為の準拠法と区別すべきか同じとすべきかという議論において関連性を有しており、この部分についても検討を進めている。著作権の侵害主体のみならず、特許権の間接侵害の問題に広げて検討した結果、さまざまな侵害行為態様とともに、著作権侵害主体の問題についてもさまざまな新たな重要な理論的問題を発見することができたからである。また、欧州滞在の成果として、この問題は重要な問題でありながら、世界中が悩んでおり結論がでていないことが判明した。24年度が最終年度であるため、記入しない。公正使用および侵害主体の問題は著作権法のみならず、特許法の重要問題にも関わるため、一つ一つの個別問題についての検討を地道に積み上げていく予定である。
微分方程式の総合的研究

微分方程式論を、常微分方程式から偏微分方程式まで、かつ線形理論から非線形理論までを日本の研究者を総合する形で研究を行った。また、研究の大きな企ての一つとして、日本数学会函数方程式分科会と共同して、日本の研究者を網羅する形での研究集会を開催した。その結果、現在の研究の各分野での動向を研究者達がはっきりと認識することが出来た。その中で、具体的な項目をいくつか取り上げると、退化した問題を含む非線形問題を発展方程式の枠内で取り扱う広範な手法が生み出され、世界にその成果を問う形で八木より著書が英語で出版された。これは、長年に亘る研究の成果として、意味あることである。散乱理論の研究成果は近く著書の形で纏められるべく準備が進んでいる。また、方程式の準楕円性を、解析的枠内であるいはGevreyの枠内で取り扱うことをを通して、これまで課せられてきた条件の意味が明解にすることが出来た。常微分方程式論では、物理や工学でも重要な合流型の超幾何級数の階層構造が解の漸近挙動を通して調べるられた。逆散乱問題に関しては、Dirac作用素にたいする問題を固定エネルギーにおける情報より解決する理論が打ち立てられた。複素領域における初期値問題に関しては、その解析接続公式がより明確な形で作り出された。以上のように、それぞれの分野の最先端の状況が明らかにされ,それを互いに共有して議論する準備は出来たが、真の意味で総合して新しい世界を生み出すにはまだ時間がかかりそうであるが、致し方ないことと言わざるを得ない。(i)流体力学方程式における解の滑らかさについて、その限度と限度を超えた場合の付加条件が明確になった。(ii)Schroedinger方程式の解の滑化作用のメナニズムが解き明かされた。(iii)可積分系とそのもとにある代数群の役割の解明、特に物理との関連の解明。(iv)双曲型方程式系の適切性のための作用素の幾何学的必要条件の明示。(v)低エネルギーにおけるシュタルク効果の具体的表示。(vi)力学系に周期軌道が存在するための新しい十分条件とその具体例。そのほかに、小規模の研究集会を多く催し、分野を越えた新しい課題を探る試みも積極的に行った。工学との関わりにおいて、極めて重要な偏微分方程式の逆問題についても、具体的問題に多くの進展をもたらすことができた。例えば、地下資源の探索のための数学的枠組みの設定と、問題解決のための計算手順などは、多くの討論と研究によって、非常な広がりを持つことが出来た。

以上のように、それぞれの分野の最先端の状況が明らかにされ,それを互いに共有して議論する準備は出来たが、真の意味で総合して新しい世界を生み出すにはまだ時間がかかりそうであるが、致し方ないことと言わざるを得ない。
テーラーメイド治療を指向した抗真菌薬の血中濃度簡易測定法の開発と遺伝子多型解析

抗真菌薬であるボリコナゾール(VRCZ)およびミカファンギンのカラムスイッチングHPLCを用いる簡便な定量法を確立した。この測定法を実サンプルに応用したところ、肝機能障害の発生が危惧される血中濃度のトラフ値4.5・g/mL以上を越える症例が約25%あり、副作用予防の観点から、VRCZ血中濃度測定の臨床的意義が明らかとなった。さらに、薬物代謝酵素CYP2C19のサイクリングプローブを用いる遺伝子多型解析法を開発した。医療技術の進歩に伴う易感染患者の絶対数増加により、深在性真菌症が発症する機会が以前より急速に増加しており,その迅速で適切な治療が,患者の生命予後を左右している。治療薬として用いられる抗真菌薬においては、腎機能や肝機能状態、薬物吸収能のばらつきによって血中濃度に差が生じ、十分な血中濃度に達していない患者のいることも指摘されている。また、最近の薬物動態学(PK)/薬力学(PD)に基づく投与方法の検討では、ピーク依存性なのかトラフ依存性なのか必ずしも解明されていない。本研究では、実検体における測定結果を背景に、臨床現場において簡便かつ迅速に血液中の抗真菌薬を一斉分析できる定量法を開発し、血液内科領域で望まれている抗真菌薬の投与量、投与法について新たな提案を行う。また、CYP2C19の薬物代謝酵素遺伝子(薬物反応関連遺伝子)の変異(SNPs解析)と血中薬物濃度の結果からPK/PD理論に基づくテーラーメイド治療を提案する。簡便かつ迅速な定量法として、カラムスイッチングHPLC法あるいはダイレクトインジェクション法を用いる。カラムスイッチング法を用い、オンラインで除タンパク、分離および定量を行うことで、簡易な測定法を確立できる。本年度は、ボリコナゾールおよびミカファンギンに対する定量法を検討し、従来法との値の相関性に関する検討および臨床検体への応用を行い、その結果から血中濃度測定の臨床的意義について報告した。さらに、ダイレクトインジェクション法については分析カラムに充填剤表面の極性が高く、細孔が小さいものを用いて、オンラインで除タンパクを行い、血中ミカファンギンの定量法について検討し、臨床サンプルに応用した。CYP2Cl9の遺伝子多型については、インベーダー法を用いて測定し、解析を行った。CYP2C19の遺伝子多型および血中濃度との関係などについては検体を増やして詳細に解析中である。一般に血中薬物濃度を測定する際には、除タンパクなどの前処理が必要であるが、カラムスイッチング法を用いると煩雑な前処理が不要で迅速かつ簡便に測定できる。そこで、ミカファンギンのカラムスイッチング法を用いる血漿中濃度定量法を開発した。前処理カラムに内面逆相系のShim-pack MAYI-ODSを用い、測定後0.5分で前処理カラムから血漿中のタンパクが約97%排出され、目的薬物がトラップされた。バルブを切り替えてバックフラッシュモードにすると、1分で目的薬物が前処理カラムから溶出され、分析カラムでの分離を可能とした。さらに分析カラムで分離中、移動相に酢酸アンモニウムを用いることで前処理カラム内をオンラインで十分に洗浄し、除タンパクが可能であった。このように、迅速かつ簡便でカラム耐久性にも優れたカラムスイッチング法は、臨床現場で有用な分析法であると思われる。一方、ボリコナゾールの主な代謝酵素である薬物代謝酵素CYP2C19には、遺伝子変異が認められている。変異による代謝活性が欠損または著しく低いPoor Metabolizer(PM)の割合は、約20%と報告されている。PM患者は薬物の代謝能が低いため、血中濃度の上昇につながり、ボリコナゾール投与の際に注意が必要となる。本研究では非侵襲的な試料である口腔粘膜細胞および毛髪を用いて、サイクリングプローブによるCYP2C19の一塩基多型(SNPs)測定法の開発を行った。変異部位をRNAに変換したサイクリングプローブを用いてリアルタイムPolymerase Chain Reaction(PCR)を行った。さらに末梢血DNAにっいても同様に検討を行い、口腔粘膜細胞および毛髪と比較した。CYP2C19*3のSNP部位を測定したところ、ボランティアの口腔粘膜細胞、毛髪および末梢血はすべて同一の結果が得られた。7名のボランティアのうち、2名がホモ型のwildタイプ、5名がヘテロ型であった。さらに、既知のTaqManプローブ法と比較したところ、同様の結果をえた。末梢血の採取は患者の苦痛を伴うが、口腔粘膜細胞および毛髪を用いることで非侵襲的に試料を採取でき、サイクリングプローブを用いるSNPs解析ができることを認めた。
全ゲノムをカバーするBACDNAマイクロアレイを用いた疾患関連遺伝子の探索と解析

全ゲノムをカバーするBAC-DNAマイクロアレイを作製するため、慶應BACクローンの収集を行った。まず患者の多くにおいて数十数百kbにわたる欠失変異が見出される若年性パーキンソン病の原因遺伝子Parkin(ゲノムサイズ1.4Mb)をカバーする51個のBACクローンを単離しスポットしたマイクロアレイを作製した。また癌関連遺伝子の増幅や欠失を検出するため、206種類の癌関連遺伝子/領域をカバーする506個のBACクローンを単離しマイクロアレイを作製した。さらにダウン症の診断のため21番染色体をカバーするBACクローン、猫目症候群や22q11.2欠失症候群の診断のため22番染色体をカバーするBACクローンの単離をほぼ完了した。またSTS/ESTスクリーニングによって4千個の8番染色体特異的クローンを得たので、末端シーケンスを解読してドラフトシークエンス上へ配列している。さらに4万個のBACクローンの末端シーケンスを解読、ヒトドラフト/完成シークエンスに照合して全ゲノムを網羅的にカバーするBACクローンの整列化を進めている。癌関連遺伝子のマイクロアレイについては、EGF受容体遺伝子の増幅などいくつかの癌遺伝子の増幅を培養細胞や臨床検体で確認することができた。これらの増幅はFISH法などの結果と一致した。LOHやParkin遺伝子の欠失、22番染色体の欠失などのヘミ接合領域の検出については現在検討中である。シグナル検出上の課題として感度やダイナミックレンジを改善することが求められた。そこでニトロセルロース膜固定化スライドガラス上にBAC-DNAを固定したところ、高いS/N比で検出する手法を確立することができ、さらに、金属粒子を用いた標識法を導入することにより、蛍光色素を使う方法と比べ高感度の検出を可能にした。その結果一桁低いプローブ濃度でも同等のS/N比のシグナルを可能にした。
ユニット連結式内航貨物船の開発に関する研究

本研究は、「推進操船ユニット」、「貨物倉ユニット」、「船首部ユニット」からなる構造を持ち、これらが適宜連結・分離できるという新形式の内航貨物船の開発を目指したものである。このような貨物船が実現すれば輸送効率の向上が期待できるが、そのためにはユニット間連結装置の結合・切り離しが容易で、結合性能の信頼性が高く、波浪中においても安全であることが必要である。そこで、本研究では波浪中において連結部に働く剪断力及び曲げモーメントを理論的に推定するとともに、模型実験結果と比較しながら,最適な連結方法を検討した。研究結果より得られた知見は以下の通りである。1)ユニット連結部に作用する波浪剪断力及び曲げモーメントを、Lumped Mass Matrix法、Strip法を用いて数値計算により求めるための計算プログラムを作成した。2)2連結浮体模型ならびに4連結浮体模型を用いて模型実験を行い、波浪中連結部に働く荷重及び浮体の上下変位を計測し数値計算法の有用性を確かめた。3)4ユニットからなる内航貨物船の概念設計をもとに模型船を製作し、模型実験により得られた連結船の上下変位とユニット間の連結ワイヤー張力の計測値を数値計算結果と比較したところ、概ね良い対応が得られ、推定法の実用性が確認できた。4)しかし、ユニット連結船の固有周期と出会い周期がほぼ一致する状態では模型実験によるユニット連結船の上下変位や連結ワイヤー張力が大きくなった。今後非線形計算法も考慮しながら数値計算結果の精度向上が必要である。5)連結部の曲げ剛性を考慮した最適化法についても検討しその連結方法を提案した。本研究の目的は、沿岸海域を航行する内航貨物船を主要なユニットに分割し、必要に応じてそれらを結合分離することによりその輸送効率の向上を図るための新型式の内航貨物船の開発にある。そのために、波浪中において連結部に働く剪断力及び曲げモーメントを理論的、実験的に考察しながら,最適な連結方法の設計を行うことである。本研究において開発を目指す内航貨物船は、「推進操船ユニット」、「貨物倉ユニット」、「船首部ユニット」からなる構造を持ち、これらが適宜連結・分離できるという新形式の貨物船である。また、連結部を柔構造にすることで、波浪に基づく外力をできるだけ小さくし、最適な連結方式を提案することに特色がある。本年度の研究から得られた主な結果は以下の通りである。1)ユニット連結部に作用する波浪剪断力および曲げモーメントを数値計算によって求めるための計算プログラムを作成した。計算は簡単のため、梁理論によって求めた。2)簡単な例として、2連結浮体模型を用いて波浪中連結部に働く荷重を計測し、数値計算結果と比較しながら計算プログラムの有用性を確認した。その成果は論文として公表した。3)次に、4連結浮体模型を用いて波浪中連結部における浮体の変位を斜め規則波中において計測し、数値計算結果と比較しながら計算プログラムの有用性を確認した。4)連結式ユニットから成る内航貨物船の主要目を決定し、その試設計を行った。5)連結式ユニットから成る内航貨物船模型と運動計測用治具を製作し、正面向波中、前進速度を持つ場合の模型実験を行った。実験結果の考察並びに数値計算については次年度実施する。

また、連結部を柔構造にすることで、波浪に基づく外力をできるだけ小さくし、最適な連結方式を提案することに特色がある。本年度の研究から得られた主な結果は以下の通りである。1)模型船曳航実験により得られた連結船の上下変位とユニット間の連結ワイヤー張力の計測値を前年度作成した計算プログラムによる推定値と比較したところ、概ね良い対応が得られ、推定法の実用性が確かめられた。ただし、運動が大きくなると、連結状態が計算で仮定している初期設定と異なるため、両者に相違が見られた。2)ユニット連結船の固有周期と出会い周期がほぼ一致する状態では模型実験によるユニット連結船の上下変位や連結ワイヤー張力が最大となった。推定値と計測値の比較では、1)の理由により、両者に相違が見られた。3)連結部の曲げ剛性の最適化法についても検討し、その連結方法を提案した。これらの研究成果は、正面向波中に関するものを英文論文として、斜め波中に関するものを和文論文として、現在、日本船舶海洋工学会に投稿中である。
Retinoic acidによる高トリグリセライド血症の発症機序に関する研究

All-trans-retinoic acid(ATRA)は最近前骨髄球性白血病の分化誘導療法に用いられており、高率の寛解率が得られている。しかし、その副作用として高トリグリセライド血症が高頻度に認められている。この高トリグリセライド血症の発症機序は未だ不明だが、我々はlipogenesisの充進が重要な役割を果たしていると考え、肝臓、白色・褐色脂肪組織での、malic enzyme(ME)、fatty acid synthase(FAS)の活性を測定し、血清総コレステロール、トリグリセライド値との関連を検討した。ATRA(0.011mg/100gBW)をラットに投与したところ、腹腔内・経口投与にかかわらず、血清トリグリセライド値の濃度依存性の上昇が認められ、ヒトで認められた結果と同様の結果が得られた。さらに、ATRA投与後白色脂肪組織においてFAS活性の濃度依存性の増加が認められ、肝臓、褐色脂肪組織においても同様にFAS活性の濃度依存性の増加の傾向が認められた。今までにラットの肝臓でトリグリセライドの合成が亢進することは証明されていたが、lipogenesisの亢進が酵素レベルで起こっていることが今回新たに証明された。また、脂肪細胞の分化やインスリン抵抗性と深い関わりをもつPPARγのligandであるTroglitazoneも単独投与では、血清トリグリセライド、総コレステロール、肝臓、白色・褐色脂肪組織におけるFAS.ME活性いずれもほとんど変化を及ぼさなかったが、ATRAと同時に投与した場合、ATRA投与による高トリグリセライド血症を濃度依存性に抑制し、さらに肝臓におけるFAS活性を抑制する傾向が認められた。本研究は、ATRA投与中の患者の高トリグリセライド血症の予防法の確立、さらにはRetinoic acidによる脂肪代謝調節の機序の解明に大きく寄与すると考えられる。ビタミンAの誘導体である、all-trans retinoic acid(以下ATRA)は、近年前骨髄性白血病の分化誘導療法に用いられていますが、投与にて高トリグリセライド血症が出現することが知られています。我々は、ATRAによる高トリグリセライド血症の発症機序として、lipogenesisの亢進が重要と考え、肝臓、白色脂肪組織、褐色脂肪組織での、malic enzyme、fatty acid synthaseの活性を測定し、血清総コレステロール、トリグリセライドとの関連を検討しました。<方法>体重が150グラム前後の雄のSDラットにATRAを7日間腹腔内投与し、白色脂肪組織、褐色脂肪組織でのmalic enzyme、fatty acid synthaseの活性を測定し、同時に血清総コレステロール、トリグリセライド値を測定しました。<結果>1.ATRAの投与にて血清総コレステロール値は不変でした。2.ATRAの投与にて血清トリグリセライド値は0.75mg/100gBW投与群まで濃度依存性の上昇が認められました。4.malic enzymeは肝臓、白色脂肪組織で濃度依存性の上昇傾向がみられました。<まとめ>今までにラットの肝臓で、トリグリセライドの合成が亢進することは証明されていますが、酵素レベルでの検討はされていませんでした。今回我々はATRAの投与により白色脂肪組織でのfatty acid synthase、肝臓、白色脂肪組織でのmalic enzymeの活性の増加を認め、lipogenesisの亢進が酵素レベルで起こっていることを証明しました。2.troglitazoneの投与にて血清トリグリセライド値は0.1mg/100gBW投与群まで濃度依存性の低下が認められましたが、9-cis RA投与では血清トリグリセライド値は不変でした。<まとめ>ATRAによるlipogenesisの亢進はRXRやPPAR γとは関係のないことが示唆された。ビタミンAの誘導体である、all-

trans retinoic acid(ATRA)は、近年前骨髄性白血病の分化誘導療法に用いられているが、投与にて高トリグリセライド血症が出現することが知られている。昨年までに我々は、in viv0において肝臓、白色・褐色脂肪組織でのlipogenesisの亢進が酵素レベルで起こっていることを証明し、これがATRAによる高トリグリセライド血症の原因と考えている。今回、我々はin vitroにおけるATRAのlipogenesisへの影響を検討した。<結果> 1. ATRA投与後のラット肝細胞におけるトリグリセライド産生量は濃度依存性に減少が認められた。2. ATRA投与後のラット肝細胞におけるfatty acid synthase活性は不変だった。3. ATRA投与後のCHO細胞におけるS14遺伝子活性は抑制が認められた。<まとめ>in vivoの結果とは異なり、in vitroでの肝細胞におけるATRAのlipogenesisへの影響は抑制的なものであった。
遺伝性侏儒症ラットrdwの病因解析と有用性

rdwは当初下垂体性の侏儒症である亡報告されが,その後甲状腺機能低下症であると推測されるに至った.当該年度では,原因遺伝子の探索のためrdw甲状腺の形態学的・タンパク質解析を行い,併せてモデル動物としての有用性について検討した.rdw甲状腺を電顕レベルで解析した結果,濾胞上皮細胞は分泌穎粒の形成が認められず,濾胞上皮細胞の小胞体が著しく膨らんでいた.膨らんだ小胞体内には免疫組織化学的に高密度のサイログロブリンが検出されるが,管控内には極めて少なく-膜破片に沿って存在する.従って合成されたサイログロブリンの大部分が濾胞腔に放出されず,小胞体に蓄積されると推測される.二次元電気泳動を用いたrdwの各組織のタンパク解析の結果,下垂体と甲状腺のみで特徴的な差がみられた.rdw下垂体ではGHとPRLで有意な減少と,未同走の28kDaタンパクの増加がみられた.rdw甲状腺では,正常に比べて少なくとも15種類のタンパクの増加がみられた.これらの15種類のタンパクのうち、熱ショックタンパク(hsp70)は免疫学的手法で,Ig重鎖結合タンパク(BiP/GRP78),エンドプラスミシ(GRP94)はマイクロアミノ酸解析により同定された.エンドプラスミン,Bipは小胞体に存在するタンパクであることから,rdwは小胞体蓄積病(ERSD)である可能性が示唆された.rdwはこれまで報告されているマウス,ラットの株儒症とは異なるタイプのモデル動物であり,原発性甲状腺機能低下症(Primary hypothyroidism)と考えられた.また,興味あるモデル動物として種々の面で有用性であることがわかった.rdwは当初下垂体性の侏儒症である亡報告されが,その後甲状腺機能低下症であると推測されるに至った.当該年度では,原因遺伝子の探索のためrdw甲状腺の形態学的・タンパク質解析を行い,併せてモデル動物としての有用性について検討した.rdw甲状腺を電顕レベルで解析した結果,濾胞上皮細胞は分泌穎粒の形成が認められず,濾胞上皮細胞の小胞体が著しく膨らんでいた.膨らんだ小胞体内には免疫組織化学的に高密度のサイログロブリンが検出されるが,管控内には極めて少なく-膜破片に沿って存在する.従って合成されたサイログロブリンの大部分が濾胞腔に放出されず,小胞体に蓄積されると推測される.二次元電気泳動を用いたrdwの各組織のタンパク解析の結果,下垂体と甲状腺のみで特徴的な差がみられた.rdw下垂体ではGHとPRLで有意な減少と,未同走の28kDaタンパクの増加がみられた.rdw甲状腺では,正常に比べて少なくとも15種類のタンパクの増加がみられた.これらの15種類のタンパクのうち、熱ショックタンパク(hsp70)は免疫学的手法で,Ig重鎖結合タンパク(BiP/GRP78),エンドプラスミシ(GRP94)はマイクロアミノ酸解析により同定された.エンドプラスミン,Bipは小胞体に存在するタンパクであることから,rdwは小胞体蓄積病(ERSD)である可能性が示唆された.rdwはこれまで報告されているマウス,ラットの株儒症とは異なるタイプのモデル動物であり,原発性甲状腺機能低下症(Primary hypothyroidism)と考えられた.また,興味あるモデル動物として種々の面で有用性であることがわかった.rdwの病因究明に関する研究1.甲状腺の光顕、電顕、免疫組織化学検討2.125Iの取込み能の検討rdwラットの甲状腺を解析した結果,濾胞上皮細胞は分泌顆流の形成が認められず,濾胞上皮細胞の小胞体が著しく膨らんでいた.膨らんだ小胞体内には免疫組織化学的に高密度のサイログロブリンが検出されるが,管腔内には極めて少なく,膜破片に沿って存在する.従って,合成されたサイログロブリンの大部分が濾胞腔に放出されず,小胞体に蓄積されると推測される.rdw甲状腺では角の管腔側への移動が特徴的であった.これは核下部に存在する小胞体内にサイログロブリンが蓄積し互いに融合して大きな空胞を形成するためと推測された.125Iの投与実験では,正常に比べてrdwの取込み能が極端に低下していた.125Iは小胞体で合成されたサイログロブリンと濾胞腔に放出されるときに結合し,サイログロブリンとして濾胞空に蓄えられると考えれている.従って,rdwの125I取込み能の現象はサイログロブリンが小胞体より濾胞腔に輸送される過程が障害いされているものと強く示唆される.rdw甲状腺の微細構造の監察により,ゴルジ装置は正常な形態を示すが,分泌顆流が認められなかった.従って,rdw甲状腺の分泌顆流の形成過程に何らかの異常があると推測される.rdwのモデルとしての有用性に関する研究1.rdwの卵巣移植実験:rdw個体の卵巣を対照正常ラットに移植し,卵巣を移植された個体が繁殖性を有することが確かめられた.2.rdwと正常ラットについてミエリン形成に関与する2',3'-cyclicnucleotide3'-phosphodiesterase (CNPase)を脳を大脳,小脳,脳幹部に分けて調べた.rdwの大脳でのみCNPase活性の低下が認められた.この成績から,rdwが知能発育研究のモデル動物になると推測された.侏儒症のモデル

動物には、マウスではSnell,Ames,Pigmy,Little等が、ラットでは、GH単独欠損株儒症(dw),the Dwarf rat(Dw)の報告がある。rdwは1988年に報告された遺伝性侏儒症ラットである。rdwは、下垂体の免疫組織学的検索から当初下垂体性の侏儒症であると報告された。しかし、その後の研究により、rdwは甲状腺機能低下症であると考えられている。本年は、rdwの病因を探索する一助として、2次元電気泳動を用いてrdwの種々の臓器タンパク質を解析した。各種臓器のタンパク解析の結果、甲状腺と甲状腺のみで対照とrdwで差がみられた。rdw下垂体ではGHとPRLで有意な減少と、未同定の28kDaタンパクの増加がみられた。rdw甲状腺では、正常に比べて少なくとも15種類のタンパクの増加がみられた。これらの15種類のタンパクのうち、熱ショックタンパク(hsp70)は免疫学的方法で、Ig重鎖結合タンパク(Bip/GRP78)、エンドプラスミン(GRP94)はマイクロアミノ酸解析により同定された。エンドプラスミン、Bipは小胞体に存在するタンパクであることから、rdwは小胞体蓄積病(ERSD)である可能性が示唆された。本病はこれまでのモデル動物としては報告されておらず、興味あるモデル動物であることがわかった。
水分摂取習慣が脳梗塞再発及び認知機能低下に与える影響：画像評価を含めた観察研究

上記目的達成のために、脳梗塞既往者、認知症患者、健常者の水分摂取習慣を含めた生活習慣、血液浸透圧、頭部MRI、体水分量、認知機能を評価して、1脳梗塞既往者における水分摂取習慣と脳梗塞早期再発の関係、2認知症患者における水分摂取習慣と認知機能の早期低下及び画像変化の関係、3高齢健常者における水分摂取習慣と認知機能の早期低下の関係を縦断的研究によって明らかにするとともに、4健常者の水分摂取習慣と無症候性脳梗塞発症及び認知機能低下の頭部MRI画像による長期的観察研究を行うためのベースラインを構築する。
比較ゲノム的アプローチを用いた真核生物ヘリカーゼ様遺伝子群の体系的機能解析

真核生物におけるヘリカーゼ様タンパク質ファミリーの機能を網羅的に解明する目的で、単細胞生物としては出芽酵母を、多細胞生物としては線虫を、各々モデルとして機能解析研究を進めた。まず出芽酵母の解析については、以下のような研究成果を挙げた。1.機能未知の10個の非必須ヘリカーゼ様遺伝子について、遺伝子破壊株の表現型の解析を進め、3個のミトコンドリア機能に関与すると思われる遺伝子(YDR332W,YGL064C,YOL095C)を新たに同定した。2.組換えに関与することが示唆されているYnl218wpについて、相互作用する酵母蛋白質を同定するためのタグ融合蛋白質の発現株を作成した。Ynl218wpについては、これまでに酵母two-hybrid法により同定した複数の蛋白質との相互作用についても、詳細な解析を進めた。また線虫については、ゲノムに存在するほぼ全てのヘリカーゼ様遺伝子について網羅的なRNAi解析を進め、次に示す成果を挙げた。1.現時点(2002年2月)までの段階で、125個のヘリカーゼ様遺伝子のRNAi解析を完了した。その結果、テストした遺伝子の約40%のRNAi変異体において、細胞増殖や初期発生、個体成長、あるいは形態形成に明らかな欠損が認められた。2.RNAiを利用した機能遺伝子のスクリーニング系を確立した。具体的に、紫外線やX線の照射に感受性を示すようなRNAi変異体のスクリーニングを進めた。その結果、新たに複数の候補遺伝子が同定され、RNAiを用いた機能遺伝子の有効性を実証することができた。
リン酸化TDP-43の測定系の確立と免疫電顕による細胞内局在の検討

TDP-43およびFUSなどのDNA/RNA関連蛋白に関して研究を施行した.その結果,新規のTARDBP遺伝子変異を見いだし,その臨床病理像の詳細な報告をした.さらにFUS遺伝子変異を有するALSの報告,FUS陽性封入体を有する孤発性ALSの報告,ALSモデル動物の神経細胞変性に関する報告,TDP-43とFUSの関連についてなど広く研究を行い国際誌,国際学会で発表した.TDP-43およびFUSなどのDNA/RNA関連蛋白に関して研究を施行した.その結果,新規のTARDBP遺伝子変異を見いだし,その臨床病理像の詳細な報告をした.さらにFUS遺伝子変異を有するALSの報告,FUS陽性封入体を有する孤発性ALSの報告,ALSモデル動物の神経細胞変性に関する報告,TDP-43とFUSの関連についてなど広く研究を行い国際誌,国際学会で発表した.1.20例のALS剖検例を用いてリン酸化TDP-43(pTDP-43)の異常を病理学的に検討した結果,運動ニューロン以外の神経細胞とグリア細胞およびneuropilにも陽性所見を得た.このことから,ALSのpTDP-43の異常は中枢神経内に広く存在すること,さらに,今回作成したpTDP-43抗体は異常構造物だけを認識し,TDP-43 proteinopathyの病態解明に寄与する抗体であることを確認した.現在,この抗体を用いてALS例の脳ホモジェネートサンプルを用いた検体からpTDP-43の測定を試みており,この結果を確認後に,患者から得られた髄液での検討にはいることを考えている.2.ALSの基礎研究としてラットの顔面神経引き抜き損傷モデルのGolgi装置(GA)の形態変化を検討した.その結果,顔面神経核神経細胞のGAはALSと同様に微細化していることを確認した.このことからこのモデルラットはALSの病体解明に役立つ有用なモデル動物と考えられた(Fujita et al. Neuropathology, in press).3.家族性ALSの遺伝子異常の一つとしてfused in sarcoma(FUS)が同定された.我々は20例の孤発性ALSおよび2例の好塩基性封入体(BIs)を有する運動ニューロン疾患(MND)について同抗体を用いて検討した.この結果,BIsは明瞭にFUS抗体で染色されること,TDP-43陽性封入体を有するALSではFUSの異常を認めないことを確認した.この結果,FUSの異常による封入体形成にはTDP-43と異なる機序があることを示唆された.1.新規のTARDBP遺伝子変異(A315E)を有する家族性ALSの一家系を見いだした.本家系中4例にALS症状が認められ,内2例ではパーキンソニズムを合併していた.また,2例の剖検所見では脊髄前角細胞など運動神経細胞の脱落とTDP-43陽性の細胞質内・グリア細胞内の封入体を広範囲に認める点は共通した病理所見であったが,内1例では後索病変を合併し,もう1例では著明な黒質病変が認められた.同一家系内で同じTARDBP遺伝子変異を有していてもその臨床症状,病理所見に差異があることはこれまで報告がなく,現在論文投稿中である.2.家族性ALSの遺伝子異常の一つとしてfused in sarcoma (FUS)が同定され,FUS遺伝子変異を有するALSでは神経細胞,グリア細胞に抗FUS抗体陽性の封入体を認めることが報告された.一般にFUS陽性封入体を有するALSは若年発症であることが多いが,我々は,FUS遺伝子変異のない高齢発症のALS患者で多数のFUS陽性の封入体を認める例を報告した.この例では臨床的には古典的ALSとの違いはほとんどなく,病理学的検索によってはじめてFUS関連ALSと診断された.FUS遺伝子変異のない高齢発症のALSにおいてFUS陽性封入体が認められた報告は極めてまれである.このことは臨床的に古典的ALSと考えられる例でもその病因となる蛋白は異なることがあり,今後の原因蛋白をターゲットとする治療を考えていく上で貴重な報告と考えている.また,本例ではHE染色で多数の好塩基性封入体が認められており,FUSと好塩基性封入体形成の関連について今後さらに検討が必要であると考えている.1.新規のTARDBP遺伝子変異(A315E)を有する家族性ALSの一家系を見いだし,その臨床症状と病理所見について詳細に検討し報告した(Neuろlogy77;1427-31,2011).本家系では2世代にわたり4例にALS症状が認められ,内2例ではパーキンソニズムを合併していた.また,2例の剖検所見では通常のALSの病理所見に加えて後索病変を合併する例や著明な黒質病変が認められる例が見られた.同一家系内で同じ遺伝子変異を有しながら,その臨床症状と病理所見に差異があることはこれまで報告がない.TARDBP遺伝子変異はALS発症に関与するが,様々な他の因子がALSに臨床症状を決める可能性を示唆しており,今後のALS研究に有用な研究である.2.ALSの病因蛋白として現在,TDP-43に加えてFUSが注目されている.FUSは主に核内に存在するDNA/RNA結合蛋白であり,機能的にはRNAの転写,輸送,スプライシング,翻訳などのRNA代謝に関与するなどTDP-43と機能的に共通する.そこで本年度は孤発性ALS20例およびFUS陽性封入体を有するALS4例の剖検例に対してFUS抗体,TDP-43抗体,ユビキチン抗体を用いて病理学的に検討した.

その結果,FUS陽性封入体を有するALSで見られる好塩基性封入体はFUS抗体に陽牲であること,FUS陽性封入体を有する神経細胞においてその核の染色性は低下するものから保たれるものまで存在していることが証明された.一方,通常の孤発性ALSで見られるTDP-43陽性封入体はFUSで陽性であるとの報告があるが今回の我々の検討では,それはFUS抗体に陰性であり,共存することは確認できなかった.また,ユビキチン抗体による検討では同じFUS陽性封入体をでも,遺伝子変異の存在の有無によりその染色性に差が認められた.
X線結晶構造解析による土壌細菌由来チオシアネート分解系酵素の触媒機構の解明

地球の気候変動に影響を及ぼしている気体の一つである硫化カルボニルを加水分解する酵素の立体構造を決定し、基質選択機構について検討した。この酵素の全体構造や触媒部位の構造は、二酸化炭素を水和し炭酸と水素イオンを生成する反応を触媒する酵素に非常に類似していたが、基質の酵素への侵入口に違いが見られたことから、この部位が基質の選択性に関わっている可能性が示唆された。本研究成果を基に、この酵素の基質選択性、安定性、反応性を改良することにより、硫化カルボニルの効率的な除去法の開発につながることが予想される。チオシアネート(SCN-)は工業廃水に多量に含まれる汚染物質であり、その分解系の研究は環境保全のために重要な課題の一つである。多くの植物はSCN-基を含む化合物を有しており、植物が枯死した後のSCN-の分解には土壌細菌が関わっている。従って、土壌細菌のもつSCN-分解系を利用した環境浄化が注目を集めているが、分解を行う酵素系の詳細はあまり明らかにされていない。本研究では、SCN-を硫酸イオン(SO_4^<2->)にまで分解する代謝系を有している土壌細菌Thiobacillus thioparus THI115由来チオシアネート加水分解酵素(SCNase)、および、硫化カルボニル分解酵素(COSase)について、SCN-分解系酵素の変異体、基質複合体、モデル錯体の結晶構造解析を行い、これら酵素の触媒機構を原子レベルで明らかにすることを目的として研究を進めている。平成22年度は、T.thioparus THI115由来COSaseとその基質類似化合物であるSCN-(チオシアン酸ナトリウム等)の複合体の結晶化に成功した。高エネルギー加速器研究機構フォトンファクトリーで放射光回折実験を行った結果、分解能1.35Aの回折データを収集することができた。複合体構造の解析結果から、COSaseはβ炭酸脱水酵素と類似した触媒機構を有することが予想されたが、触媒ポケット中での基質認識に関与するアミノ酸残基には違いがあることが判った。そこで、COSaseの基質分子の認識や、反応サイクルに関与する可能性が高いアミノ酸残基について部位特異的変異体の作製を行い、その活性評価、および結晶化に取り組んだ。また、SCNaseモデル錯体についても結晶化、および、X線結晶構造解析に成功し、現在結晶中で観察された水分子の役割について検討を進めている。本研究では、SCN-を硫酸イオン(SO_4^<2->)にまで分解する代謝系を有している土壌細菌Thiobacillus thioparusTHI115由来チオシアネート加水分解酵素(SCNase)、および、硫化カルボニル分解酵素(COSase)について、SCN_分解系酵素の変異体、基質複合体、モデル錯体の結晶構造解析を行い、これら酵素の触媒機構を原子レベルで明らかにすることを目的として研究を進めている。平成22年度に結晶化、および、分解能1.35AのX線回折データの収集に成功したCOSaseと基質類似化合物であるSCN-の複合体について、平成23年度は結晶構造の精密化を進め、最終的にR=0.177,R(free)=0.212の構造モデルを得た。最終構造モデルは、登録番号(PDB ID)3VQJとしてProtein Data Bankへ登録した。そこで、基質の認識に関与すると予想される11e33、Ala68、11e82、Leu87を、それぞれ、Ala、Gly、Tyr、Glyに置換した変異体、反応サイクルに関与すると予想されるMet45とHis63を、それぞれ、AlaとPheに置換した変異体を作製し、COS分解活性、および、CA活性の評価を進めている。従って、土壌細菌のもつSCN-分解系を利用した環境浄化が注目を集めているが、分解を行う酵素系の詳細は明らかにされていない。

本研究では、SCN-を硫酸イオン(SO42-)にまで分解する代謝系を有している土壌細菌Thiobacillus thioparus THI115由来チオシアネート加水分解酵素(SCNase)、および、硫化カルボニル分解酵素(COSase)について、SCN-分解系酵素の変異体、基質複合体の結晶構造解析を行い、これら酵素の触媒機構を原子レベルで明らかにすることを目的として研究を行った。前年度までに終了した野生型COSase、および、COSaseと基質類似化合物であるSCN-の複合体の構造解析の結果より、COSaseの全体構造はβ炭酸脱水酵素に非常に類似しているが、6本のα-ヘリックスのうちN末端から5番目のα-ヘリックスが活性部位への基質の進入経路を狭めている点がこれまでに結晶構造解析されたβ-CAとは立体構造的には大きく異なる点であることを明らかにした。したがって、COSaseの基質選択には基質経路が大きな役割を果たしていると考えられた。さらに、触媒ポケット中での基質認識に関わるアミノ酸残基としてIle33、Met45、His63、Ala68、Ile82、Leu87などが予想されたが、最近結晶構造が報告された二硫化炭素(CS2)やCOS分解活性を有するAcidianus sp. strainA1-3由来二硫化炭素加水分解酵素の立体構造との比較から、Ile33が最も関与する可能性が高いことが示差された。研究開始当初から予定していたCOSaseと基質類似化合物であるSCN一の複合体の結晶解析は終了し、その結果をもとに、触媒機構や基質認識に関して具体的な検討を始めている。平成23年度から開始した部位特異的変異体を用いた活性評価、結晶解析を今年度中に行うことにより、当初の研究目的は達成できると考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。前年度までに行った結晶構造解析により、COSaseの全体構造は6本のα-ヘリックスと5本のβ-ストランドから形成されていることを明らかにしたが、この結果から、5番目のα-ヘリックスが活性部位への基質の進入経路を狭めていることがわかった。これまでに結晶構造解析されたβ-CAにはこのような特徴は見られなかったことから、基質経路がに質選択に大きな役割を果たしていると考えられた。そこで今年度は、COSaseの5番目のヘリックスを削除した変異体も作製し、その立体構造と触媒活性についても検討を行う予定である。
災害時の画面表示における聴覚障害者に配慮したモーショングラフィックスの研究

聴覚障害者は災害時に音声によるアナウンスが聞き取りづらいため、直接人に聞くことが難しい緊急性の高い状況において、デジタルサイネージやパーソナルメディアの画面表示に依存する可能性がある。災害時のデジタルサイネージの活用については2018年に第2版「デジタルサイネージ災害コンテンツガイドライン」が公開されているが、動きに関する言及はされていない。本研究はモーショングラフィックスを用いた画面表示のモデルを作成し注視点計測等の評価実験を行うことで、動きと情報伝達効率の相関を明らかにする。これによりモーショングラフィックスにおけるユニバーサルデザインを推し進める。
歯周病原性細菌由来LPSが接合上皮における細胞間ギャップ結合に与える影響

実験動物には6週令ルイス系雄性ラットを使用し、LPSには歯周病原性細菌であるActinobacillus actinomycetemcomitansより精製したLPSを使用した。実験方法はラット左側下顎臼歯部舌側の歯肉溝より防湿下にてLPSを30分間滴下した。これを連日繰り返し1,3,7,10,15日後、エーテル麻酔下にて屠殺後下顎骨を採取し、PLP固定液によって4°Cで6時間固定後、EDTAで脱灰を行った。そしてそれぞれをAMeX包埋し、そのパラフィンブロックより連続切片を作製した。また一方でLPSをウサギに免疫し、その血清より抗LPS抗体を精製した。この精製抗体とFITC標識抗体を用いた蛍光抗体法による免疫染色とH・E染色から、滴下したLPSの歯周組織内の局在と接合上皮の組織学的変化を観察した。その結果3日滴下後で接合上皮内にFITC陽性細胞が確認され、7日滴下後では接合上皮内で根面にそってさらに根尖側方向にまで観察され、10、13日滴下後では深部結合組織内にも陽性細胞は確認された。H・Eによる組織所見と合わせて考えると、繰り返し滴下したLPSは接合上皮内の細胞間を進入し、その上皮細胞の変性を引き起こし、さらに深部の結合組織にまでLPSは進入し、結合組織の変性や壊死を起こしていることが推測された。歯周炎発症の初期段階に破壊されるといわれる接合上皮に着目した。本実験の目的は、その上皮細胞間融合(ギャップ結合)が歯周病原性細胞由来LPSの侵入により影響される組織学的変化について明らかにすることである。実験動物に6週令ルイス系雄性ラットを使用した。またLPSにはsigma社製のE.coli由来LPSと歯周病原性細胞由来LPSとしA.actinomycetemcomitans由来LPSを使用した。ラット左側下顎臼歯部舌側の歯肉溝より防湿下にてLPSを30分間滴下した。これを連日繰り返し1、3、7日後、エーテル麻酔下にて屠殺後下顎骨を採取し、ザンボニ固定液およびPLP固定液によって4°Cで6時間固定した。つぎにEDTAにて脱灰後PBSで洗浄し上昇エタノール系列にて脱水し、ザンボニ固定を行った試料は、キシレン処理後、パラフィン包埋を行った。これより連続切片を作製し、ラットのgap-junctional proteinに対する特異的抗体(ZYMED社製)によるFITCを用いた蛍光抗体法とH.E.染色をあわせて行い光顕的な病理組織観察を行った。その結果、蛍光抗体法では接合上皮細胞間のgap-junctional proteinを抗原として検出することはできなかった。しかしH.E.染色による病理組織学的観察ではLPS滴下の1日後で接合上皮直下結合組織に好中球の浸潤が観察され、7日経過後ではさらに接合上皮細胞間隙の拡大や変性がみられた。これらの所見は滴下したLPSが歯肉溝より侵入し、接合上皮細胞を破壊しながら、深部結合組織に浸潤していくことを示唆するもので、歯周炎発症過程のメカニズムを解明する上で重要な所見であると考えている。そこで平成10年度は9年度同様の方法で滴下したLPSが、組織内のどの範囲まで浸潤しているかを知るため蛍光抗体法によりその局在を明らかにする予定である。
アンジオテンジンII受容体拮抗薬による肺癌制御

ロサルタン及びカンデサルタンという2種類のアンジオテンシンII受容体拮抗薬とACE阻害薬であるエナラプリルを投与してC57BL6マウスの皮下腫瘍(LLC)の増大に対する効果を、何も投与しない群(コントロール群)と比較したところ、この3種類の薬剤はどれも有意さがなかった。しかし、たまたま投与してみたNSAIDであるロキソプロフェンが有意に腫瘍の増大を抑制したのでそれについて詳細に調べてみた。まず、ロキソプロフェン投与群とコントロール群の腫瘍中血管新生の具合を第8因子で免役染色することにより調べた。するとロキソプロフェン投与群の腫瘍のするとロキソプロフェン投与群の腫瘍には有意に血管が存在していた。次に我々はロキソプロフェン投与群のVascular Endotherial Growth Factor(VEGF)のmRNAの発現をPCR法で調べたところ、コントロール群に比べて優位に低下していた。さらにELISA法により蛋白も定量してみると、ロキソプロフェン投与群にて有意に蛋白濃度も低下していた。マウスの血清を調べてみると、VEGF蛋白の濃度は有意に皮下腫瘍のあるマウスで上昇していて、それがロキソプロフェンを投与することにより抑制されていた。以上のことよりロキソプロフェンはVEGFの産生を抑制することにより腫瘍の血管新生を阻害し抗腫瘍効果を表している可能性が示された。さらに臨床応用を視野に入れて我々は実際の肺癌患者にて血中のVEGF濃度をELISA法により調べた。すると血中VEGF濃度は患者によってばらついていたが、同一肺癌患者においてロキソプロフェン投与の前後で血中VEGF濃度を調べた所、有意にロキソプロフェン投与中に血中VEGF濃度は低下していた。このことはマウスで確認されたロキソプロフェンの腫瘍を制御する効果が、人の肺癌患者においても発揮しうる強い可能性が示唆された。平成13年度はアンジオテンシンII受容体拮抗薬の腫瘍増大に対する作用をACE阻害薬と比較した。C57BL/6マウスにLewis lung carcinoma(LL/2)細胞を2x10^5個皮下注して、原沫が入手可能であったACE阻害薬:イミダプリルと同じく入手可能であったアンジオテンシンII受容体拮抗薬:カンデサルタンをそれぞれ常用量である0.2mg/kg/dayおよび0.5mg/kg/day飲料水より投与した。腫瘍径、生存曲線をイミダプリル群、カンデサルタン群、そしてそれらを含まない飲料水のみのコントロール群とで比較したところ、腫瘍径、生存曲線には3群間で有意差がなかった。そこでマウスと人間の代謝能の違いから、イミダプリルおよびカンデサルタンの投与量が足りないのではと考え、それぞれ2mg/kg/dayおよび5mg/kg/dayを投与したところ、カンデサルタン群ではコントロール群と比較して有意差はないものの、イミダプリル群では腫瘍径がコントロールに比べ有意に大きくなり、生存曲線が有意に短縮した。腫瘍組織の血管新生を第8因子にて免疫染色して、定量したところイミダプリル群では有意に血管新生が亢進していることが観察された。これまで、ACE阻害薬は腫瘍の血管新生を抑制する報告が多々なされているが、ACE阻害薬の種類によりそれが異なることが判明した。さらに、臨床的な疫学情報システム調査の面で方法論の確立において大きな進展があった。東北大学医学部附属病院の医療情報システムの完全電子カルテ化に際して、独自のシステムを立ち上げ、使用薬剤から患者を検索するシステムを確立した。その際、CTなどの画像のデーターや病名とリンクさせ、瞬時に肺癌対象患者を進行期別に検索することが可能となった。この成果はelectrical publicationとしてBritish Medical Journalのon-line journalにて発表した(http://bmj.com/cgi/letters/323/7325/1344)。また在宅看護の中央管理システムと我々のデーターベースをリンクさせ在宅看護の面から患者情報をフォローアップするシステムの準備段階を立ち上げた。その成果の一部をLancet誌上に発表した(Lancet 2001 ; 357 : 1451)。現在、さらにシステム構築中である。

すると血中VEGF濃度は患者によってばらついていたが、同一肺癌患者においてロキソプロフェン投与の前後で血中VEGF濃度を調べた所、有意にロキソプロフェン投与中に血中VEGF濃度は低下していた。このことはマウスで確認されたロキソプロフェンの腫瘍を制御する効果が、人の肺癌患者においても発揮しうる強い可能性が示唆された。