hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生殖腺と脳における性分化機構の解明

1遺伝子の転写調節に関する研究について進展があったので報告する。(1)Dax-1遺伝子の転写調節へのWntシグナルの関与これまでの我々の研究からDax-1遺伝子の転写はAd4BP/SF-1によって調節されていること,またAd4BP/SF-1がDax-1遺伝子の転写には不可欠な因子であることが,Ad4BP/SF-1遺伝子破壊マウスの検討から明らかにされてきた。今回Wntシグナルの関与を検討した。Wntシグナルは細胞内でb-cateninの安定化をもたらし,最終的にb-cateninとLEF/TCFとの2量体形成を経て標的遺伝子の転写を活性化することが知られている。実験では安定化b-cateninを用い,Dax-1遺伝子の転写に対する影響を検討した。b-cateninは量依存的にDax-1遺伝子の転写を活性化し,かつAd4BP/SF-1の存在下に両者は相互依存的に転写活性の上昇をもたらすことが明らかになった。このことは特に雌生殖腺におけるDax-1の発現上昇を説明するものである。(2)Ad4BP/SF-1遺伝子の転写調節領域の検討Ad4BP/SF-1遺伝子はその遺伝子破壊マウスの解析より生殖腺の形成に不可欠な因子であることが明らかにされてきた。また本因子が生殖腺の形成初期から発現していることやその発現量に性差を示すことは,本因子の発現調節機構の解明が性分化のメカニズムを理解する上で不可欠なものであることを示す。これまで培養細胞系に加え,トランスジェニックマウスを作製することでAd4BP/SF-1遺伝子プロモーターを解析してきたところ,Ad4BP/SF-1遺伝子の上流20Kb以内に別の遺伝子が存在することが判明した。この遺伝子は生殖細胞で発現することが分かっている遺伝子であったことから,これら二つの遺伝子間にはインシュレーターの存在が推測された。実際に遺伝子間の配列を用い,インシュレーター活性を検討したところ,その存在が確認された。現在,インシュレーター活性を示す領域を狭めているところである。本研究では性分化の分子メカニズムを解明するために,主に未分化生殖腺から性分化時期の生殖腺に発現する転写因子に焦点を当て,その機能と発現調節機構を明らかにすることを目的に行なわれた。我々は既にAd4BP/SF-1と相互作用する因子を酵母two-hybrid screeningによって単離してきた。これらの因子の中で胎仔生殖腺に特異的に発現するもののうち,構造上転写因子であることが期待される因子に付いて検討を行なった。そのうちの一つがPaired type homeo boxを有するaristalessと類似のArxであった。本因子は生殖腺の性分化時期には間質細胞に発現し,後に間質細胞の他にperitubular cell,血管内皮細胞などに発現するが,.ライディッヒ細胞にはその発現は認められなかった。Arx遺伝子破壊マウスの生殖腺を調べたところ,野生型マウスに比べ小型で,間質に形態上の異常が観察された。
レーザー蒸着法による半導体ダイヤモンド薄膜作製に関する研究

プラズマCVD法、及びレーザーアブレーション法によりn型ダイヤモンド薄膜の作製を行ってきたが、ダイヤモンド薄膜のプラズマCVD中にリンを導入する方法やイオン注入法により強制的にリンを注入する方法では低抵抗n型化を達成することはできなかった。そこで、n型化の期待できるワイドギャップ半導体の窒化アルミニウム(AIN)薄膜を作製し、p型ダイヤモンドとpn接合を形成することを試みた。そのために、まず、レーザーアブレーション法を用いて窒化アルミニウム薄膜の高品質化の研究を行った。従来の方法では、窒素の活性化率が低いため化学量論組成のAIN作製が困難であったが、今回の実験方法ではプラズマ発生器をチャンバー内に装着し、焼結体AINをターゲットに用いて窒素プラズマ中でAIN薄膜を作製したところ、ターゲットの組成よりも化学量論組成に近いAIN薄膜がSi基板上に配向成長することが分かった。また、窒素プラズマ中で金属AIターゲットをアブレーションすることにより、焼結体AINをターゲットに用いた場合よりも高品質なAIN薄膜を作製することに成功した。AIN薄膜は低品質だとノンドープでも低抵抗を示すが、今回得られたAIN薄膜はいずれも絶縁体であった。ダイヤモンド薄膜を基板に用いて、AINを成長させることでヘテロ接合の作製を行った。ダイヤモンド薄膜上に基板処理なしで均一なAIN薄膜の作製に成功した。次のステップとしてはド-ピングが重要となる。平成6年度の研究において以下の結果が得られた。(1)レーザーアブレーション装置の作製申請設備であるレーザーアブレーション用真空蒸着チャンバーを作製した。到達真空度は10^<-8>Torrであり、窒素や水素の導入により雰囲気制御が可能で、高速電子線回折装置、質量分析装置を装備することができ、さらにレーザーの2ビーム化も行える仕様になっている。固体レーザーであるYAGレーザーに申請者が開発したセシウム・リチウムボレート結晶を組み合わせることで、高出力の4倍高調波(266nm)、5倍高調波(213nm)が発生でき、固体紫外線レーザーによるレーザーアブレーションが可能となった。(2)ダイヤモンド薄膜作製用基板の作製ヘテロエピタキシャル成長、及びn型化の困難なダイヤモンド薄膜を実用化するためには、広い禁制帯幅(5eV以上)を持ち、n型化が可能でダイヤモンドと格子定数が近い基板材料を開発する必要がある。その候補となるのが、窒化アルミニュウム、窒化ホウ素、及びその混晶である。申請者は窒素雰囲気中でアルミニュウムをレーザーアブレーションすることにより、窒化アルミニュウムを作製した。これはX線回折法とラマン分光法により確認した。そこで、n型化の期待できるワイドギャップ半導体の窒化アルミニウム(AlN)薄膜を作製し、p型ダイヤモンドとpn接合を形成することを試みた。従来の方法では、窒素の活性化率が低いため化学量論組成のAlN作製が困難であったが、今回の実験ではプラズマ発生器をチャンバー内に装着し、焼結体AlNをターゲットに用いて窒素プラズマ中でAlN薄膜を作製したところ、ターゲットの組成よりも化学量論組成に近いAlN薄膜がSi基板上に配向成長することが分かった。また、窒素プラズマ中で金属Alターゲットをアブレーションすることにより、焼結体AlNをターゲットに用いた場合よりも高品質なAlN薄膜を作製することに成功した。AlN薄膜は低品質だとノンドープでも低抵抗を示すが、今回得られたAlN薄膜はいずれも絶縁体であった。ダイヤモンド薄膜を基板に用いて、AlNを成長させることでヘテロ接合の作製を行った。ダイヤモンド薄膜上に基板処理なしで均一なAlN薄膜の作製に成功した。
頭頸部癌SEREX抗原の同定と、理想的ながん抗原の選択

CCDC62-2はCT抗原性を有しており、各種がん患者での液性免疫応答が認められているが、新たに頭頸部癌患者でもこのことが確認され、頭頸部癌に対する腫瘍マーカーとなりうる可能性が示唆された。またCCDC62-2特異的モノクローナル抗体を作製、免疫組織化学染色を行い、頭頸部癌でCCDC62-2タンパクが核あるいは細胞質に不均一に発現していることを明らかにした。さらにSEREX同定抗原であるGKAP1についても頭頸部癌を含む各種がん患者で液性免疫応答を認めており、GKAP1は腫瘍マーカーの候補である。頭頸部癌のSEREX解析に先立ち、我々がすでに同定しているSEREX抗原coiled-coil domain containing 62,variant 2(CCDC62-2)についてタンパクレベルでの発現解析を行った。がん・精巣(CT)抗原はがん免疫療法の標的分子として適していると考えられているが、CCDC62-2は遺伝子レベルにおいて頭頸部癌を含む各種がんで発現がみられCT抗原性を有していたこと、さらに各種がん患者での液性免疫応答が証明されたことから、がん免疫療法の標的分子として有望であることを報告してきた。1. CCDC62-2モノクローナル抗体の作製とCCDC62-2タンパクの発現解析CCDC62-2特異的モノクローナル抗体(C6212)を作製し、CCDC62-2タンパクの発現を免疫組織化学的に解析した。CCDC62-2遺伝子を導入したHT1080細胞では、CCDC62-2タンパクが細胞質に顆粒状に発現していることを明らかにした。正常精巣では精細間上皮の精母細胞に陽性反応がみられ、支持細胞、間細胞は染色されなかった。さらに頭頸部癌組織の解析では43例中20例に陽性反応がみられた。多くの症例で細胞質を主体とするシグナルの分布がみられたが、核を中心とするシグナルの分布がみられる症例も含まれ、詳細については検討中である。2.その他のCT抗原遺伝子の発現解析SEREX解析により効率的に頭頸部癌よりCT抗原を同定するための症例の選択の目的で、代表的なCT抗原遺伝子の頭頸部癌での発現解析を行なった。MAGE-A3は24%、MAGE-A4は32%の頭頸部癌に発現がみられたが、NY-ESO-1の発現は3%であった。MAGEファミリー、NY-ESO-1など複数のCT抗原が同時に発現している頭頸部癌患者を選択し、この患者血清を用いたSEREX解析を行なう予定としている。CCDC62-2はCT抗原性を有し、また各種がん患者での液性免疫応答が認められている(Domae et al.,Int J.Cancer,2009).特に頭頸部癌において、免疫組織化学染色を行ないタンパクレベルでの発現を確認したことを昨年度より報告してきた。さらに今回頭頸部癌患者での液性免疫応答が確認されたことで、頭頸部癌に対する抗体検出型腫瘍マーカーとなりうる可能性も示唆された。同様にSEREX同定抗原、GKAP1も頭頸部癌を含む各種癌患者で抗体陽性の結果を得ており、腫瘍マーカー候補である。詳細な結果は以下に示す。CCDC62-2特異的モノクローナル抗体(C6212)を作製し、CCDC62-2タンパクおよび代表的なCT抗原タンパク発現を免疫組織化学的に解析した。CCDC62-2が24/40例(60%)、MAGE-A(6C1)が12/40例(30%)、XAGE-1b(US09-13)が6/40例(15%)、NY-ESO-1(E978)が1/40例(2%)の頭頸部癌組織で発現が認められた。CCDC62-2のタンパク発現と臨床病理学的因子との相関は認められなかった。CCDC62-2組換えタンパクを用いたELISA法により頭頸部癌患者の液性免疫応答を解析した結果、3/18例(17%)が抗体陽性であった。ウェスタンブロット法にて、ELISA陽性患者血清中の抗体はCCDC62-2タンパクに特異的であることを確認した。またわれわれはCCDC62-2と同じ胃癌のSEREXスクリーニングでG kinase anchoring protein 1 (GKAP1)を同定している。遺伝子レベルでの発現解析を行ったところ、CT抗原性を有しており頭頸部癌では5/28例(18%)に発現していた。さらにGKAP1組換えタンパクを用いたELISA法により頭頸部癌患者の液性免疫応答を解析したところ、2/15例(13%)が抗体陽性であった。

その他の癌種では肝細胞癌で7/60例(12%)、膀胱癌で5/39例(13&)、悪性黒色腫で3/20例(15%)でGKAP1に対する抗体産生が認められた。また頭頸部癌由来の新規がん抗原の同定を目的に、複数のCT抗原遺伝子発現陽性であった頭頸部癌患者血清を用いてSEREXスクリーニングを行なっているが、現在までのところ腸性クローンの単離には至っていない。今後、CCDC62-2、GKAP1抗体陽性の頭頸部癌患者血清を用いたSEREXスクリーニングなどで新規がん抗原を検索する。
βアミロイド症におけるアミロイド形成促進因子の解明

平成11年度より様々な年齢層のイヌより脳脊髄液および脳組織が収集され、脳脊髄液については、脳組織に対する自己抗体の有無の検討が行われた。ヒトでは、アルツハイマー病患者等の高齢者に神経細胞や神経膠細胞に対する自己抗体が形成され、これらがβアミロイド症の病理発生や老年期痴呆に関与する可能性が指摘されている。しかしながら、イヌでの検索の結果、老齢犬に脳に対する自己抗体が形成されているとの結果は得られず、組織検索により重度の血管アミロイド症や老人斑形成が見られる症例においても、特に自己抗体が検出される傾向は認められなかった。なお、この研究の副産物としてイヌ特有の炎症性疾患である壊死性脳炎罹患症例については、共通して神経膠細胞にたいする自己抗体が検出され、様々な定性により、この抗体が星状膠細胞のグリア繊維性産生タンパク(GFAP)を認識している可能性が高いことが明らかになり既に学術雑誌に公表した(Vet.Pathol.1999.K.Uchida et.al.)。本年度も東京大学ベテリナリーメデイカルセンター等の外部組織の強力を得て、脳脊髄液収集、自己抗体検索を進めたが、結論として加齢あるいはβアミロイド症の有無と脳脊髄液性状あるいは自己抗体の検出率の間に有意な相関関係は認められなかった。また平成12年度にはイヌを含む各種動物の老人斑についてフラクタル解析が行われ、老人斑の形態が、動物間で極めて異なっており、特にラクダとネコの老人斑については、イヌ、クマ、サルと明確な差異があることを示した。このことは老人斑を形成するコアタンパクであるβアミロイドや、その他の老人斑関連タンパク(アミロイドβ前駆タンパク等)の代謝、もしくは構造的差異が動物種間に存在し、老人斑の形成過程やその形態に影響を及ぼしていると考えられた。この結果についても海外の学術雑誌に公表した。またこの研究では、老人斑内におけるβアミロイドタンパクとその前駆タンパクの位置的関係も検索されたが、老人斑の成熟には、前駆タンパクの局所における代謝が深く関与することを示唆するデータが得られている。平成11年度は、主に症例の収集と症例の病理検索が行われた。収集された症例については、詳細な臨床検査が行われ、一定の神経学的所見が明らかにされているものを対象とした。これらの症例については、剖検時に脳脊髄液を採取・保存し、脳組織については一般病理検索の他、老人斑検出のため過ヨウ素酸メセナミン銀染色(PAM)染色、血管アミロイド検索のためアルカリコンゴレッド染色を施し、脳におけるβアミロイド沈着程度を数値化している。これまでの検索では、臨床的に神経学的異常のみられたイヌ剖検例の病理学的診断は、(1)脳腫瘍、(2)内臓諸臓器腫瘍の脳転移、(3)加齢による運動失調、等に大別され、このうち(2)、(3)の群でβアミロイド沈着指数が高く、(2)の症例群で比較的βアミロイド沈着率が高く、かつ年齢が若齢であるという傾向が認められている。平成12年度は本検索を継続し、より多数例による検討をすすめ本傾向の有意性を明らかにしたいと考える。また平成11年度には、過去に収集されていた脳脊髄液の検索も平行して進められた。本年度は、モルモットへの脳内接種実験、電気泳道による検索、脳組織やアミロイドβ蛋白に対する脳脊髄液内抗体について検索がおこなわれたが、現段階までには特記すべき結果が得られていない。ただし、本研究の遂行中に偶発的に原因不明の神経疾患であるイヌ壊死性脳炎の数症例に星状膠細胞に対する事故抗体が脳脊髄中に存在することが初めて明らかにされ、米国の学術雑誌にその内容を公表した。脳脊髄液の研究については、平成11年度に収集された症例の脳脊髄液についてさらに検索して行う予定にしている。

このことは老人斑を形成するコアタンパクであるβアミロイドや、その他の老人斑関連タンパク(アミロイドβ前駆タンパク等)の代謝、もしくは構造的差異が動物種間に存在し、老人斑の形成過程やその形態に影響を及ぼしていると考えられた。この結果についても海外の学術雑誌に公表した。またこの研究では、老人斑内におけるβアミロイドタンパクとその前駆タンパクの位置的関係も検索されたが、老人斑の成熟には、前駆タンパクの局所における代謝が深く関与することを示唆するデータが得られている。
理研RIビームを用いた中間エネルギー陽子散乱による不安定核の核子密度分布の抽出

理化学研究所で建設が進みつつある不安定核ビームファクトリー(RIBF)からの、核子あたり数百MeVの中間エネルギー不安定核ビームを水素標的に照射し、弾性散乱によって反跳された陽子の角度分布を測定する逆運動学の手法により、不安定核の構造を探る上での基礎的な情報である核子密度分布を系統的に抽出することができる。本研究では、反跳粒子のエネルギーと散乱角を高精度で測定する反跳粒子スペクトロメータ(RPS)の開発を進めている。反跳粒子の散乱角を必要な精度で測定するためには、水素標的から測定器までの間を真空に保ち、空気の多重散乱による角度精度の劣化を防がねばならない。大気中に置かれる測定器との間は、1気圧の気圧差に耐える強度を持ちながら、多重散乱による影響が測定に影響を与えない程度に薄いという、相反する要求を満たす膜で真空を遮断する必要がある。大気圧を支える細長い桟を5cmで張り巡らした金属製の窓を用意し、いくつかの種類・厚さの膜を検討して、本実験と同じ仕様の真空容器でテストした結果、充分薄い膜でも真空を保つことを確認した。また、昨年度のビームを使ったテストにより、RPSに必要な性能を達成できることが示されたNaI(Tl)カロリメータの試作機をもとに、本実験用の量産機を設計し、製作依頼を可能にした。我々は弾性散乱の解析に核媒質効果による相互作用の変化を取り入れた相対論的インパルス近似を開発し、用いている。^<58>Niの陽子弾性散乱データを用いて決めた核内での核子核子相互作用は、ρ中間子の効果を評価することが困難であったが、抽出された^<120>Snの中性子密度分布はρ中間子の影響をほとんど受けないことを確かめた。また、^<208>Pbの弾性散乱データもよく説明することを確かめた。これらの結果から、少なくともNiからPbに至る中重核においては、我々の手法による核子密度分布の抽出は有効であると思われる。
発達障害児における認知発達-発達指数と知能指数の連続性に関する検討-

【研究目的】発達障害児および定型発達児における,新版K式発達検査2001(新K式)の発達指数(DQ)とWISC-IVの知能指数(IQ)の関連を明らかにすることを目的とした。【研究方法】愛媛大学医学部附属病院子どものこころセンターおよび小児科,精神科を受診した510歳の患者のうち, DSM-5の診断基準を用いて自閉スペクトラム症(ASD)と診断され,本研究への参加同意が得られた9名(男児:女児=8:1,平均月齢99.7±21.3ヶ月)をASD群とした。うち5名は注意欠如・多動症の併存があった。定型発達群は通常学級に通う児童6名(男児:女児=3:3,平均月齢86.2±16.7ヶ月)とした。両群に新K式とWISC-IVを1ヶ月以内に実施し,各指数の比較検討を行った。比較には,全検査領域(全領域DQと全検査FSIQ),言語性領域(言語・社会DQと言語理解,ワーキングメモリー),非言語性領域(認知・適応DQと知覚推理,処理速度)の3領域を用いた。統計にはSpearmanの順位相関係数を用い,有意水準はBonferroniの補正を行った上でp<.002とした。【研究結果】1ASD群内の新K式とWISC-IVの比較ASD群内の比較では,言語・社会DQと言語理解に強い相関を認めた。ASD群9名のうち7名が言語・社会DQ>言語理解であった。他の指標においては相関を認めなかった。2定型発達群内の新K式とWISC-IVの比較定型発達群内の比較では,いずれの指標においても相関を認めなかった。【考察】ASD児においては,言語発達面においてのみ新K式とWISC-IVに相関が認められたが,新K式DQがWISC-IVIQよりも高く算出されやすいことが推測された。新K式とWISC-IVは異なる背景を持つ検査であり,縦断的な評価には慎重を期す必要があることが示唆された。今後も症例数を増やし,更に検討する予定である。
C型肝炎ウイルス粒子の精製と構造蛋白の解析

HCV粒子の精製を進める過程で、HCV持続感染者の血中ウイルス粒子の大多数がβ-lipoproteinやγ-globulinと結合した状態にあることが明らかになった。前者が結合しているウイルス粒子は軽く、後者が結合した粒子は重くなる傾向にあり、粒子密度も1.06-1.21g/cm^3の幅で分布しているが、比重のピークは概ね1.09-1.11g/cm^3の値であることが分かった。感染成立に関係したHCVのゲノムRNAとその血清中の抗体の解析から、エンベロープ糖蛋白(E2/NS1領域)のN末端側に位置する超可変部位に対する抗体が感染阻止に役立ち、中和抗体として働きうることを明らかにした。このエンベロープ蛋白に対する抗体がHCV粒子の免疫電顕による特異的な観察にも役立つことが分かった。精製ウイルス粒子の界面活性剤処理によって比重1.241.25g/cm^3のコア粒子が得られ、HCV持続感染者の血中IgGを反応させた免疫電顕によって凝集像を観察できた。金コロイド標識した抗エンベロープ抗体および抗コア抗体との反応性も検討し、それらの抗体のウイルス粒子、コア粒子への特異的な結合を観察できた。血中ウイルス量が多く、精製に適するHCV RNA陽性血液は約30検体に1検体程度の頻度で認められるに過ぎなかった。上述のように、血中HCV粒子の大多数がlipoproteinやγ-globulinと結合した状態にあり、安定な状態でそれらを特異的に乖離することが困難であることから、精製度の高いHCV粒子の大量回収には現時点では限界があり、残念ながらnativeのHCV構造蛋白のアミノ酸組成およびアミノ酸配列解析には至らなかった。しかし、電子顕微鏡上、形態がよく保たれたウイルス粒子を1視野に数10個の割合で認めることはできた。世界的にも、このレベルまで精製が成功した報告は未だない。C型肝炎ウイルス(HCV)は血中ウイルス濃度が低く、不安定なウイルスであり、しかも組織培養系での効率のよいウイルス増殖系が確立されていないこともあり、ウイルス粒子の大量精製にも未だ成功していないのが現状である。そこで、HCV粒子の物理化学的な性状を調べ、確かな電子顕微鏡像として観察し、大量精製によりnativeのウイルス蛋白の性状を明らかにすることを本研究の目的とした。HCV粒子の精製を進める過程で、無症候性キャリア(供血者)やC型肝炎患者の血中ウイルス粒子の大多数がβ-lipoproteinやγ-globulinと結合した状態にあることが明らかとなった。前者が結合した粒子は軽く、後者が結合した粒子は重くなる傾向にあり、粒子密度も1.06-1.21g/cm^3の幅を持っているが1.09-1.11g/cm^3をピークとしていることがわかった。また、感染成立に関係したのHCVゲノムとその血清中の抗体の解析から、エンベロープ糖蛋白(E2/NS1領域)のN末端側に位置する超可変部位が中和に関係するepitopeを担っている可能性が強く示唆された。このエンベロープ蛋白に対する抗体がHCV粒子の免疫電顕による観察にも役立ちうるものと期待され、実験を継続中である。小規模での精製操作により電子顕微鏡で1視野に数個から数10個のウイルス様粒子を観察できるレベルまでに至った。しかし、HCVは極めて不安定なウイルスであり、また血液中には精製を困難にする多くの血清蛋白やlipidが混在しており、精製過程での回収率が低下を克服すべく、大量精製に向けての工夫を続けている。

C型肝炎ウイルス(HCV)コアペプチドに対して特異的に反応する2種類のマウスモノクローナル抗体を作製し、それらを用いたtwo-site sandwich-ELISA法により、HCV粒子をコア抗原活性として検出できる系を確立した。そのことにより、精製過程でのHCV粒子の追跡が比較的容易になり、より適した精製条件の検討を短時間に行うことができ、大量精製に向け期待を持てる状況になった。また、nativeのコア蛋白の解析も可能になりつつある。PCR法によるHCVRNAの検出およびELISA法によるHCVコア抗原の測定により、予め高力価のウイルス粒子を含むことが確認された100mLの血漿を用い、ショ糖および臭化カリを用いた超遠心法による精製操作によって、電子顕微鏡で1視野に数個から数10個のウイルス様粒子を観察できるレベルまでに至った。界面活性剤処理によって精製ウイルス粒子から比重1.241.25g/cm^33のコア粒子が得られ、HCV持続感染者の血中IgGを反応させた免疫電顕によって凝集像を観察することも可能となった。前年度までに得られた研究成果および確立できた方法に準拠し、予めreverse transcription-polymerase chain reaction(RT-PCR)法によるHCVRNAの測定、およびコア抗原に対する2種類のモウスモノクローナル抗体を用いたELISA法によるHCVコア抗原の測定を行うことによってウイルス粒子精製に適した供血者血漿を選別した。血中ウイルス量が多く、精製に適する供血者血漿はHCVRNA陽性血液約30検体に1検体程度の頻度で認められるに過ぎなかった。以上のようにして選んだ高力価の供血者血漿(3000ml)よりHCV粒子、およびコア粒子の大量精製を試み、発現エンベロープ蛋白および合成ペプチド(E2領域のN末端に位置する超可変領域の合成ペプチドや合成コアペプチド)を免疫原として得られた抗エンベロープ抗体、抗コア抗体を用い、免疫沈降法、免疫電顕法により得られた粒子の特異性を確認した。金コロイド標識した抗体との反応性も検討し、その特異的な結合を観察できた。血中ウイルス粒子の大多数がlipoproteinやγ-globulinと結合した状態にあり、安定な状態でそれを特異的に乖離することが困難であることから、精製度の高いウイルス粒子の大量回収には現時点では限界があり、当初の実験計画に含まれていたnativeのエンベロープ糖蛋白やコア蛋白のアミノ酸組成およびアミノ酸配列解析には至らなかった。しかし、電子顕微鏡上、形態がよく保たれたウイルス粒子を1視野に数10個の割合で認めることはできた。世界的にも、このレベルまで精製が成功した報告は未だない。
カイコの変異体を用いた動物の小胞輸送システムの解明と創薬モデルへの展開

ポジショナルクローニングにより,突然変異「ヴァル斑油」(ov)および「ヴァル斑油-p」(ovp)の原因遺伝子は,リソソーム関連オルガネラ(LRO)の形成に必要なタンパク質複合体BLOC-1のサブユニットであるディスビンディンをコードするBmdysbであることが判明した。これら油蚕では,Bmdysbの転写量が顕著に低下していた。また,別の油蚕変異体「B8斑油(obt)」および「t-斑油(otm)」の原因遺伝子も,BLOC1のサブユニットをコードしていた。BLOC-1の成分が不足すると尿酸顆粒の形成が不完全になり,油蚕形質が現れると考察される。カイコ幼虫の真皮細胞には尿酸塩が結晶化して顆粒を形成し、皮膚が白色となる。近年の研究により、カイコ真皮の尿酸顆粒は、真核細胞に共通する「小胞輸送」の機構を介して生成することが示されている。一方、カイコの突然変異体のなかには、幼虫皮膚が白くならず透明になる系統が多数存在し、それらは油蚕と総称される。ヒトや哺乳類では、小胞輸送の異常による疾患が多く知られているが、小胞輸送を標的にした創薬は進んでいない。カイコでは尿酸顆粒の形成を指標にして病態モデルを構築できる可能性がある。そこで、本研究では、油蚕の原因遺伝子の単離、RNAiによる遺伝子ノックダウンによる油蚕形質の誘導、および小胞輸送を撹乱する薬剤による油蚕のフェノコピー作成、の3つの手法によって、尿酸顆粒形成の分子機構を解明するとともに、それを制御する手法の開発を試みた。ポジショナルクローニングにより、突然変異「ヴァル斑油(ov)」の原因遺伝子は、ディスビンディンをコードするBmdysbであることが判明した。これら油蚕では、Bmdysbの転写量が顕著に低下していた。ディスビンディンはLRO(Lysosome-related organelles)の生成に必要な複合体BLOC1のサブユニットである。また、別の油蚕変異体「B8斑油(obt)」および「t-斑油(otm)」の原因遺伝子も、BLOC1のサブユニットをコードしていた。BLOC1のサブユニットが欠けてると尿酸顆粒の形成が不完全になり、油蚕形質が現れると考察される。さらに、BLOC1以外にも、やはりLROの形成に関与するBLOC3やAP-3のサブユニットも、尿酸顆粒の形成に必要であることが分かった。なぜなら、それらのサブユニットのmRNAをRNAiでノックダウンすると、油蚕形質が現れたからである。一方で、小胞輸送を標的にする化合物であるブレフェルディンAをカイコ幼虫に与える実験を行ったが、いまのところ明らかな形質の変化は観察されない。より多くの薬剤を試してみる必要がある。カイコ幼虫の皮膚が白色に見えるのは、真皮細胞で尿酸が結晶化して多数の顆粒を形成するからである。カイコの突然変異体には、幼虫の皮膚が白くならず透明になる系統が存在し、油蚕(あぶらこ)と総称される。油蚕形質を支配する遺伝子は数10個が知られており、その一部は細胞の小胞輸送のシステムに関与することが知られている。本研究では未解明の油蚕の原因遺伝子を解明することで動物の小胞輸送のモデルを確立することをめざす。ヴァル斑油を支配するovおよびovpは互いに複対立形質である。連鎖解析で第20染色体の179kbの範囲に原因を絞った。ここにある1つの遺伝子Bmdysbは、ov・ovp両系統でのmRNAの発現量が正常蚕よりも顕著に少なく、油蚕形質の原因であると考えられた。Bmdysbは、哺乳動物のディスビンディンに相同なタンパク質をコードしている。金鵄竜油と大草油は透明度が高い油蚕である。両者は独立に発見され、第5連関群4.7に占座する遺伝子okの複対立形質である。大草油と正常系統との間で戻し交雑を行い、連鎖解析を実行した結果、原因領域を700kbの範囲に絞り込んだ。最終的に、ABC(ATP-Binding Cassette)トランスポーターをコードする遺伝子"Bm-ok"が原因であることが判明した。Bm-okのmRNAの構造を調べたところ、金鵄竜油でも大草油でも異常な終止コドンを生じる変異が起きていた。一方、Bm-okのsiRNAを正常系統の初期胚に注射したところ、注射した卵から孵化した1齢幼虫の皮膚が透明になり、油蚕形質が再現された。よって、Bm-okの構造の異常がokの油蚕形質の原因であると結論した。Bm-okは、カイコ幼虫の真皮細胞に存在する尿酸トランスポーターであると予想される。

多数の油蚕変異体を用いて小胞輸送に関与する遺伝子を探索しており、早くもdysbindinの変異体を発見することができた。また、膜トランスポーターを原因とする変異体も得られたので、尿酸顆粒の形成過程の全体像を解明することができると期待される。他にも多数の油蚕変異体を用いた連鎖解析およびトランスクリプトームに着手しており、次年度にはそれらの成果を獲得する。小胞輸送のモデルシステムとして確立できるように尿酸顆粒形成の分子機構を明らかにする。連鎖解析、トランスクリプトーム解析、生化学的解析のために消耗品費が必要であり、おもにそこへ充当する。
環境埋め込み型「アイカメラ」に関する研究

1)目の画像から視線推定部分については、人間が遠いところに注視するとき、両目の視線がほぼ平行であると仮定し、カメラキャリブレーショのために提案しているTwo-circle法を拡張し、両黒目の輪郭を利用した頭部の姿勢によらない視線推定法を提案している。この研究成果は国際会議(ECCV'04, FG'04, ICPR'04)に、国内会議(PRMU'0402, MIRU'04)に発表・報告された。黒目の輪郭を自動的・連続的・正確に検出するために、追跡用の3次元アイモデルを提案し、それを用いてCondensationによるビデオレートで黒目を追跡する方法を提案している。この研究成果は国内会議(PRMU'0502, CVIM'0509, MIRU'05)に発表・報告された。MIRU'05のインタラクティブセッション優秀賞を受賞した。分離度フィルタとPaLM-Treeを用いた事例ベースの視線推定法も提案し、(MIRU'06)に発表・報告予定している。2)観測対象が一人である場合、一台の視点固定型アクティブカメラの制御法については、高速かつ自由に運動している非剛体の物体をぶれなく常に画像の中心に撮影するための単眼アクティブカメラの制御法を提案する。知覚モジュールでは、改良型にmean shift法より対象の重心位置を追跡している。行動モジュールでは、ビデオレートで対象追跡における制御の特殊性を考慮しながら、PID制御によってパン・チルトユニットの速度制御を行っている。対象の速度をP成分、位置をI成分、加速度をD成分に対応付けることにより、対象の運動予測を行いながら、カメラの回転速度を対象の速度に合わせると同時に、対象を画像の中心でとらえるというカメラ制御を実現している.この研究成果は国内会議(CVIM'0405卒論セッション・最優秀賞、第9回知能メカトロニクスワークショップ)に報告された。3)観測対象が一人である場合、両眼の視点固定型アクティブカメラの制御法については、高速かつ自由に運動している非剛体の物体を一定の大きさで鮮明に、かつ常に画像の中心に撮影するための2眼アクティブカメラの制御法を提案している。提案するK-meansトラッカより対象の重心位置を追跡し、信頼度を計算する.カメラ間の相対信頼度とエピポーラ拘束を利用して2台のカメラの視線を3D空間中の一点に交わらせる制御を実現している。この研究成果は国内会議(MIRU'04デモセッション、ICCV'05デモセッション、CVIM'0511など)に発表・報告された。(MIRU'06)に発表・報告予定している。

この研究成果は国際会議(ECCV'04,FG'04,ICPR'04)に、国内会議(PRWU'0402,MIRU'04)に発表・報告された。さらに、黒目の輪郭を自動的・連続的・正確に検出するために、追跡用の3次元アイモデルを提案し、それを用いてCondensationによるビデオレートで黒目を追跡する方法を提案している。この研究成果は国内会議(PRMU'0502)に発表・報告され、(MIRU'05)に発表・報告予定している。2)観測対象が一人である場合、一台の視点固定型アクティブカメラの制御法については、高速かつ自由に運動している非剛体の物体を鮮明に,かつ常に画像の中心に撮影するための単眼アクティブカメラの制御法を提案する.知覚モジュールでは,改良型にmean shift法より対象の重心位置を追跡している.行動モジュールでは,ビデオレートで対象追跡における制御の特殊性を考慮しながら,PID制御によってパン・チルトユニットの速度制御を行っている.対象の速度をP成分,位置をI成分,加速度をD成分に対応付けることにより,対象の運動予測を行いながら,カメラの回転速度を対象の速度に合わせると同時に,対象を画像の中心でとらえるというカメラ制御を実現している.この研究成果は国内会議(CVIM'0405卒論セッション・最優秀賞、MIRU'04デモセッション、第9回知能メカトロニクスワークショップ)に発表・報告された。3)観測対象が一人である場合、両眼の視点固定型アクティブカメラの制御法については、二台のカメラ間同士で常にお互いのカメラの視線情報を通信しあい,対象の大きさ情報を含む追跡,あるいは対象までの距離を計測することが可能になっている.この研究成果は国内会議(MIRU'04デモセッション)た発表・報告予定している。1)目の画像から視線推定部分については、人間が遠いところに注視するとき、両目の視線がほぼ平行であると仮定し、カメラキャリブレーショのために提案しているTwo-circle法を拡張し、両黒目の輪郭を利用した頭部の姿勢によらない視線推定法を提案している。この研究成果は国際会議(ECCV'04,FG'04,ICPR'04)に、国内会議(PRMU'0402,MIRU'04)に発表・報告された。次に、黒目の輪郭を自動的・連続的・正確に検出するために、追跡用の3次元アイモデルを提案し、それを用いてCondensationによるビデオレートで黒目を追跡する方法を提案している。この研究成果は国内会議(PRMU'0502,CVIM'0509,MIRU'05)に発表・報告された。MIRU'05のインタラクティブセッション優秀賞を受賞した。更に、分離度フィルタとPaLM-Treeを用いた事例ベースの視線推定法も提案し、(MIRU'06)に発表・報告予定している。2)観測対象が一人である場合、一台の視点
環境における表現の可能性-偶発的な動きがつくりだすイメージフェノメナン-

「環境における表現の可能性」をテーマとし、25年度は、瀬戸内国際芸術祭2013において、海洋環境を利用し、海に巨大なあぶくを出現させる作品を発表した。26年度は、文化庁&東京藝術大学主催の「平成26年度次代の文化を創造する新進芸術家育成事業」に新進芸術家として参加し、水田環境を利用した作品を制作した。前年度の海洋環境における作品制作の経験を踏まえ、装置の改良点や、設置・撤去の効率化、メンテナンス性について検証した。作品は、写真および映像に記録し、広く一般に公開した。また、今後は、素材として水以外の物質も利用することを考え、どこまで表現方法やテーマを展開させることが可能かを検証した。【瀬戸内国際芸術祭】アーティストインレジデンス及び出品■会期春:2013年3月20日4月21日夏:2013年7月20日9月1日秋:2013年10月5日11月4日■会場香川県小豆島■作品について小豆島の神浦という海に壮大なスケールのインスタレーション作品を出品しました。海に巨大な泡ぶくを出現させる作品です。巨大な泡は波紋へとカタチを変え、海面はまるで動く枯山水のようになります。揺らぐ海面に陽の光が反射することにより、周囲の環境や時間の変化を取り込みます。この展示場所は国指定天然記念物でもある皇子神社の麓に位置する海辺であり、また背後の2つの山を借景とすることができました。環境における表現の可能性を追求する場所としては最も適切であったと考えています。来場者数も瀬戸芸全体では100万人を超え、小豆島のみでは約19万人が来場しました。文化、芸術、経済と様々なプラスの効果が現れました。また作家である私自信と地元の方との強い絆も生まれ、微力ながらもアートの魅力を津々浦々にまで浸透させることができたと感じています。■滞在制作を通して地理的な要因もありますが、美しい環境はその土地に暮らしている人の努力の賜物であります。この集落は高齢化が進んでおり環境美化もけして容易なことではありません。しかしここに暮らす人々はこの土地に愛着を持っており、海岸や公民館の清掃、草刈り、そして瀬戸内国際芸術祭のボランティア活動も積極的に行っていました。私も制作にあたり多くの方のご協力を頂きました。環境を利用して表現を行う以上、その土地とそこに暮らす人への敬意は最も重要であると感じています。【環境芸術学会第14回大会/環境と芸術と都市の未来】口頭発表およびパネル発表、冊子発表瀬戸内国際芸術祭2013での活動報告をベースに、今後の展開プランを発表しました。「環境における表現の可能性」をテーマとし、26年度は、水田環境(福島県喜多方市の休耕田)を活用した作品を制作した。田んぼの土中に空気噴出装置を沈め、水面にあぶくと波紋を出現させる作品である。25年度に実施した海洋環境での設置施工のノウハウを活かし、環境を水田に移し、表現の展開を試みた。水の出し入れが可能な場所での作品制作の経験は、装置の小型化、メンテナンス性、作品の建築環境へのインストールのために必要な改善点を知ることができる有意義なものとなった。また26年度には、文化庁&東京藝術大学主催の「平成26年次代の文化を創造する新進芸術家育成事業」に新進芸術家として参加した。本事業のプログラムにおいて、水田環境で、あぶくのライトアップ実験や装置の改良点の模索、素材として水だけではなく、粘性の高い液体の動きや水面に浮かべた物質の動きを見せることで、物理的にどこまで表現方法を展開させることが可能かを実験することができた。さらに、素材を変えることで、作品テーマをどこまで展開させることが可能かの検証のきっかけとなり、今後の研究に繋げることができた。芸術表現当初の計画では、1作品をベースとした2年間の研究を計画していましたが、ウェブサイトの開設を含めた成果物の作成が予想以上に順調に進んだため、平成26年度に新たにもう1作品、展開することを計画しています。具体的には海洋における表現で得たノウハウを今年度は陸地(休耕水田)に活用する作品計画をたて、平成26年4月現在、福島県喜多方市在住の農家の方をはじめとする地元の協力者とともに現地調査を開始しています。前年度の海洋設置で得たノウハウを活かし、今年度は日本の原風景ともいえる水田環境を作品に取り込む事を計画し、現在実行段階に入っております。具体的には福島県喜多方市にある休耕田を利用し、田んぼの水面に泡と波紋を出現させるインスタレーション作品であります。ヴィジュアルとしては、周囲の山麓や陽光、月光、稲の成長を水面に取り込むことを考えています。

技術的には海洋設置に比べ、設置撤去、メンテナンスが容易であり、実現性の高いプランであると考えています。小額ではありますが、想定額との不一致によるもの。制作活動費に補填します。
『祖書綱要』の註釈的研究

『祖書綱要』全二十三巻六十四章は一妙院日導(172889)の著作であり、教相勝劣・教旨一致の古典宗学を大成したものであって、いわゆる日蓮教学の大系化を為し得たと後代高く評価されているものである。しかし、その分量厖大にして引文が煩鎖であり、しかも頗る難解な文体・内容をもつものであるため、いまだに書き下ろし和訳文の作成や科段・注釈の作成という基礎研究はなされていない。何より古典宗学を体系づけ、現今の宗学に与えた影響を鑑みても、本書の研究は強く望まれこれらの諸事情を鑑み、今後の宗学研究の展開を期するためにも、基礎研究が急務であり、また本研究に関し、代表者は既にその基礎研究に着手しており、その成果は書き下し文や科段・語註と共に一部公表しており、一層の研究の進展を図らんとした。1)出来得る限り資料(版本・写本)を蒐集したが、その際必要に応じて諸大学図書館及び国会図書館等に調査の為に出張した。また諸本を対校してヴァリアントを抽出し、テクスト・クリティークを行った。2)活字化することを前提に、原漢文の本書全文について訓読して書下ろし、意味の不明瞭な語句・字句に関しては適宜補註した。3)活字化した場合、その煩雑な引文、議論に対し意味の明瞭を期し、異解の可能性を示し、また問題の所在を示唆するため、適宜括弧等を設けて補註した。4)引用される祖書は「昭和定本日蓮聖人遺文」を以てその出所等を確認し、異本中のヴァリアントにも留意し、それを指示した。5)また現代的要請に配慮し、コンピューターを利用してデータベース化を計り、「祖書綱要」中に引用される日蓮遺文の索引化、または項目化して、研究者に公開した。『祖書綱要』広本全二十三巻に関し、代表者は、その活字化・公開を前提にした基礎作業を行った。これまでの研究成果を踏まえ、研究を継続し、殊に本年度は『祖書綱要』第五巻より講読を開始し、適宜、新収の資料との比較研究、またその周辺資料をも参照し、註釈を充実化させる作業を行った。研究実績1)出来うる限りの資料(版本・写本)を蒐集するが、その際必要に応じて諸大学図書館および国会図書館等に、調査のため出張した。また諸本を対校してヴェリアントを抽出し、テクスト・クリティークを行った。2)活字化することを前提に、原漢文の本書全文について訓読して書下し、意味の不明瞭な語句・字句に関して適宜補註を試みた。3)引用された祖書は『昭和定本日蓮聖人遺文』を以てその出所等を確認し、異本文のヴァリアントにも留意し、それを指摘した。4)また現代的要請に配慮し、コンピューターを利用してデータベース化を計り、『祖書綱要』中に引用される日蓮遺文の索引化、または項目化する作業では、研究補助を依頼し、作業を遂行した。「祖書網要」全二十三巻六十四章は一妙院日導(1728-89)の著作であり、教祖膀劣・教盲一致の古典宗学を大成したものであって、いわゆる日蓮教学の大系化を為し得たと後代高く評価されているものである。しかし、その分量膨大にして引文が煩鎖であり、しかも顔る難解な文休・内容をもつものであるため、いまだに書き下し和釈文の作成や科段・注釈の作成という基礎研究はなされていない。

何より古典宗学を休系づけ、現今の宗学に与えた影響を鎖みても、本書の研究は強く望まれよう。これらの諸事情を鍛み、今後の宗学研究の展開を期するためにも、基礎研究が急務である。また本研究に関し、代表者は既にその基礎研究に着手しており、その成果は書き下し文や科段・語註と共に一部公表しており、一層の研究の進展を図らんと目するものである。1)出来得る限り資料(版本・写本)を蒐集するが、その際必要に応じて諸大学図書館及び国会図書館等に調査の為に出張した。また諸木を対校してヴァリアントを抽出し、テクスト・クリティークを行った。2)活字化することを前提に原漢文の木書全文について訓読して書下し、意味の不明瞭な語句・字句に関しては適宣捕註した。3)活字化した場合、その煩雑な引文、議論に対し、意味の明瞭を期し、書解の可能性を示し、また問題の所在を示唆するため、適宣括弧等を設けて捕註した。4)引用される祖書は「昭和定本日蓮聖人遺文」を似てその出所等を確認し、書木中のヴァリアントにも留意し、それを指示した。5)また現代的要請に配慮し、コンピューターを利用してデータベース化を計り「祖書網用」中に引用される日蓮遺文の索引化、または項目化して、研究者に公開した。
活性酸素生成酵素Noxを標的とした頭頸部扁平上皮癌の治療法の開発

頭頸部癌と活性酸素生成酵素Nox、甲状腺癌と活性酸素生成酵素Duoxに関する研究を行った。頭頸部癌ではNoxやDuoxによる活性酸素生成能が低下し、貪食細胞による殺細胞力の低下が癌の進行に影響する、という仮説を立てた。頭頸部扁平上皮癌ではNox2が発現しているが、初期癌と進行癌で発現量に差を認めなかった。甲状腺癌では進行癌でDuoxの発現低下を認め、Duoxが癌の進行度に影響していることが示唆された。頭頸部癌では、食細胞による貪食能やアポトーシス関連サイトカインが低下してる、という仮説を立てた。貪食能やサイトカインの低下はなく、sTNF-R1型と2型が有意に上昇ているという結果が得られた。頭頸部扁平上皮癌症例、甲状腺癌症例の病理組織を用いて免疫組織染色による実験を行う。用いる抗体は、Nox1抗体(78016)、Nox2抗体(139371)、Nox3抗体(111148)、Nox4抗体(79971)、p22phox抗体(75941)、p47phox抗体(111855)、p67phox抗体(109366)、NOXO1抗体(77092)、DUOX1抗体(78919)、DUOX2抗体(97266)である。活性酸素生成酵素Nox14、調整蛋白質p47phoxやp67phoxの発現を扁平上皮癌症例組織と正常症例組織の間で発現量の差を比べる。また、治療効果と活性酸素生成酵素や調整タンパク質の発現を比較する事により、活性酸素生成能が悪性腫瘍治療効果に及ぼす影響について検討する。治療抵抗性扁平上皮癌症例において活性酸素生成能が低下していることを示すことができれば、今後治療を開始する前に治療効果の推測が可能となると考えられる。甲状腺には活性酸素生成酵素Duoxが発現していることが知られている。甲状腺癌症例と甲状腺良性腫瘍症例のDuoxの発現量を免疫組織染色を用いて評価する。甲状腺悪性腫瘍症例において活性酸素生成酵素の発現低下、活性酸素生成能低下を示すことができれば、制御された活性酸素は発癌を予防するために生体内に必要なものであることが示唆されると考えられる。頭頸部扁平癌症例および甲状腺癌症例の血液を用いて好中球の活性酸素生成能と悪性腫瘍症例の治療効果や予後の関係を検討する。活性酸素生成能低下症例において治療抵抗性が高まっていることを示すことができれば、活性酸素生成能が癌治療の効果に深く影響していることを強く示唆する根拠となるはずである。1.頭頸部扁平上皮癌と活性酸素生成酵素NOXに関する研究。頭頸部扁平上皮癌症例では白血球活性酸素生成能が低下して殺腫瘍細胞能が低下していること、腫瘍細胞におけるNOX関連蛋白質の発現低下により活性酸素生成能が低下していることが予想された。頭頸部扁平上皮癌患者と健常者の白血球貪食能や殺菌能を比較したが、有意差を認めなかった。頭頸部扁平上皮癌症例の病理組織を用いてNOX関連蛋白質(NOX2、p22phox、p47phox、p67phox)の発現を免疫染色法により検討した。難治性症例におけるNOX関連蛋白質の発現低下の可能性はあるが有意差は認められない。今後症例数を増やして検討を続ける必要がある。2.甲状腺癌と活性酸素生成酵素DUOXに関する研究。甲状腺組織ではDUOXが発現しており甲状腺ホルモン生成の際にDUOXによる活性酸素生成が必要である事が知られている。甲状腺癌患者と健常者では白血球貪食能や殺菌能の差を認めなかった。甲状腺癌と甲状腺良性腫瘍のDUOXの発現量を調べたが有意差を認めなかった。3.唾液腺癌と活性酸素生成酵素DUOXに関する研究。唾液腺組織ではDUOXが発現しており、DUOXによる活性酸素生成能が発癌や癌治療の難治性と関与していると予想した。唾液腺癌症例ではDUOXの発現が低下している可能性があるが有意差は認められない。4.慢性中耳炎と活性酸素生成酵素NOXに関する研究。内耳ではNOX3が発現しており難聴に関与していると言われている。慢性中耳炎症例ではNOX3が過剰発現しており中耳炎の難治性と関与していると予想した。中耳粘膜ではNOX3の発現は認めず、難治性中耳炎症例ではNOX2の発現を認めた。NOX2は中耳炎の慢性化に関与していることが示唆される結果となった。頭頸部扁平上皮癌症例では活性酸素生成酵素NOXによる活性酸素生成能が低下しており、癌治療の難治性と関与している事を予想して研究を開始した。NOX2は白血球に発現しており、頭頸部癌症例と健常者の白血球機能を比較したが有意差を認めなかった。研究対象を頭頸部扁平上皮癌症例に限らず、甲状腺癌や唾液腺癌症例も研究対象とした。甲状腺や唾液腺では活性酸素生成酵素DUOXが発現しており、発癌や癌治療の難治性に関与していることが予想された。進行唾液腺癌症例においてDUOXが発現低下してる可能性を示唆する結果を得られた。NOX3は内耳で発現しており、難聴に関与していると言われている。慢性中耳炎症例におけるNOXの発現を調べたところ、NOX3の発現は認めずNOX2が中耳炎の慢性化に関与していることが示唆された。

当初、頭頸部扁平上皮癌腫例に限局して研究を行う予定であったが、予想された結果が得られなかったため研究対象を甲状腺癌、唾液腺癌、慢性中耳炎と拡大した。研究対象を変更したことが研究が遅れる原因となった。頭頸部扁平上皮癌でNox発現量を比較すると、初期癌ではNox1(0.6)、Nox2(2.0)、Nox3(0.6)、Nox4(0.3)、進行癌ではNox1(0.8)、Nox2(2.8)、Nox3(0.6)、Nox4(0.8)であり、Nox2の発現量が一番多いが、進行癌でNox2の発現が低下しているという仮説は正しくなかった。甲状腺癌ではDuox発現量を比較すると、初期癌でDuox1(0.4)、Duox2(1.4)、進行癌でDuox1(0.0)、Duox2(1.0)と、進行癌でDuox2の発現低下を認め、仮説を支持する結果が得られた。唾液腺癌では、初期癌及び進行癌でDuox1とDuox2の発現を認めなかった。癌によって発現が低下したのか、元々発現がなかったのか、両者の可能性が考えられた。頭頸部癌症例における食細胞の貪食能やアポトーシスに関連するサイトカイン等について調べた。頭頸部癌症例の好中球貪食能60.2%(健常者61.8%)、好中球殺菌能99.2%(健常者99.5%)、IL-1β0.2(健常者0.2)、IL-2 5(健常者5)、IL-8 9(健常者13)、IL-12 8(健常者8)、CD11b 98.4(健常者98.1)、CD11c 98.6(健常者98.7)、NK活性11.5(健常者12.8)、GM-CSF 5.0(健常者5.0)と健常者との差を認めなかった。一方、頭頸部癌症例ではM-CSF 633pg/ml(健常者302)、TNF-α1.3pg/ml(健常者0.6)、sTNF-R1型1664pg/ml(健常者705)、sTNF-R2型3674pg/ml(健常者1476)の4項目が有意に上昇していた。頭頸部癌症例における陽性率は、sTNF-R1型(カットオフ値1100pg/ml)62%(健常者3%)、sTNF-R2型(カットオフ値2050pg/ml)81%(健常者3%)であった。当科の頭頸部癌症例で調べると、既存の腫瘍マーカーの陽性率がSCC 61%、Tg(サイログロブリン)55%、抗Tg抗体40%、シフラ40%であった。sTNF-R1型及びsTNF-R2型は感度の高い新たな頭頸部癌の腫瘍マーカーとして有効であると考えられた。頭頸部癌と活性酸素生成酵素Nox、甲状腺癌と活性酸素生成酵素Duoxに関する研究を行った。頭頸部癌ではNoxやDuoxによる活性酸素生成能が低下し、貪食細胞による殺細胞力の低下が癌の進行に影響する、という仮説を立てた。頭頸部扁平上皮癌ではNox2が発現しているが、初期癌と進行癌で発現量に差を認めなかった。甲状腺癌では進行癌でDuoxの発現低下を認め、Duoxが癌の進行度に影響していることが示唆された。頭頸部癌では、食細胞による貪食能やアポトーシス関連サイトカインが低下してる、という仮説を立てた。貪食能やサイトカインの低下はなく、sTNF-R1型と2型が有意に上昇ているという結果が得られた。平成26年4月祐愛会織田病院勤務、九州大学へ通って実験を開始する予定であった。6月より佐世保共済病院へ異動となり、九州大学へ通うことは断念した。9月佐世保共済病院に倫理委員会に実験計画を申請したが「前例がない、書類の不備がある」との理由で却下となった。平成27年1月頭頸部癌症例の病理組織を用いて免疫組織染色を行うため病理医と相談、実験に協力していただけることとなった。