hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
卵巣癌の初期発生過程におけるBRCA1遺伝子の異常と機能的意義

平成16年度(平成17年3月31日)の実績報告書<目的>散発性の卵巣癌における病理組織学的なheterogenietyに着目し、これにBRCA1遺伝子変化とりわけエピジェネティックな変化を解析することで、卵巣癌の初期発生過程を分子病理学的に解明する。すなわち卵巣表層上皮細胞のBRCA1発現の検討、卵巣癌細胞におけるBRCA1の機能に関するin vitro解析を行うことを目的とした。<方法>当科で得られた手術摘出標本を用い、卵巣上皮性腫瘍119症例(良性19例、境界悪性24例、悪性76例)について検討を行った。BRCA1領域のアリル欠失(LOH)は、BRCA1蛋白の発現とBRCA1遺伝子変化の間の関連性を解析するための3つのmicrosatellite markerを用いて調べた。BRCA1 promoterのメチル化の有無はmethylation-specific PCRで解析した。同一腫瘍内でBRCA1のheterogeneous expressionが認められる卵巣癌では、BRCA1陽性部分と陰性部分をそれぞれmicrodissection法を用いてDNAを抽出し、LOHとメチル化の有無を解析した。さらに、BRCA1発現あるいはBRCA1遺伝子変化の臨床病理学的パラメーターと患者の予後への関与を解析した。<結果>卵巣表層上皮細胞にBRCA1蛋白の発現を認めた。BRCA1発現の低下は良性腫瘍で16%、境界悪性で38%、癌で72%に認められた。BRCA1のLOHは良性では認めず、境界悪性の15%、癌の66%に認められた。BRCA1のメチル化は良性と境界悪性で認められなかったが、癌の31%に存在した。BRCA1発現の低下はBRCA1遺伝子のメチル化の存在の有無と関係していた。BRCA1のメチル化とLOHの頻度は他の組織型に比し漿液性癌で高かった。BRCA1のheterogenous expressionを示した3例の漿液性癌のうち1例では、BRCA1蛋白発現陽性の境界悪性様の所見を呈する細胞がLOH陽性、メチル化陰性であった一方で、近接したBRCA1蛋白発現陰性の癌細胞はLOH陽性、メチル化陽性であった。卵巣癌患者の予後はBRCA1発現や遺伝子の状態には関係していなかった。<結論>BRCA1の遺伝子変化にそったBRCA1蛋白発現の低下は、散発性の卵巣癌の発生において重要な役割を果たし、特に組織型別では漿液性腺癌で重要であることが示唆された。BRCA1遺伝子は家族性乳癌/卵巣癌症候群の原因遺伝子の一つで、ゲノム安定性、細胞周期制御、DNA損傷とりわけ二本鎖DNA切断時の修復に重要な役割を果たしている。本研究では、散発性上皮性卵巣腫瘍組織においてBRCA1蛋白発現を検討し、良性、境界悪性および癌での発現を比較した。更に、BRCA1遺伝子領域のLOHおよびpromotor領域のメチル化の有無を検討した。手術標本より採取された上皮性卵巣癌119例を対象にBRCA1の免疫組織染色を行い、組織型別、gradeと進行期別に検討した。次にBRCA1発現低下の分子機序を解明する目的で上皮性卵巣腫瘍のパラフィン包埋切片からDNAを抽出し、BRCA1遺伝子特異的マイクロサテライトマーカーを用いてLOHを検討した。最後にmethylation specific PCR(MSP)法にてプロモーター領域のメチル化の有無を検討し、次の結論を得た。1)上皮性卵巣腫瘍においてBRCA1が陰性となる頻度は、良性腫瘍で16%、境界悪性腫瘍で38%、癌で72%と、癌においてBRCA1蛋白の発現低下が有意に高頻度であった。BRCA1発現と組織型、gradeおよび進行期との有意差はなかった。2)LOHは良性腫瘍の15例では認めず、境界悪性腫瘍の13例中2例で、癌では64例中38例(66%)が陽性であった。漿液性腺癌では、LOH陽性が85%と有意に高頻度であった。またBRCA1蛋白発現とLOHの有無の間に相関関係は認められなかった。3)メチル化陽性は良性及び境界悪性腫瘍ではいずれも認められず、癌ではメチル化は64例中20例31%に検出された。漿液性腺癌ではメチル化が50%と有意に高頻度であった。また、BRCA1メチル化陽性と蛋白発現との間に有意な相関関係が認められた。4)癌の同一症例中、境界悪性病変はメチル化陰性でBRCA1発現陽性、癌病変ではメチル化陽性でBRCA1発現陰性であった。以上の結果より、散発性卵巣癌においてBRCA1遺伝子の両方のアリルの抑制がLOHとメチル化により生じることで漿液性腺癌の発生に関与している可能性が示された。lまた、漿液性腺癌の一部には、境界悪性腫瘍から続発性に癌化する経路も存在する可能性が示された。<方法

>当科で得られた手術摘出標本を用い、卵巣上皮性腫瘍119症例(良性19例、境界悪性24例、悪性76例)について検討を行った。BRCA1領域のアリル欠失(LOH)は、BRCA1蛋白の発現とBRCA1遺伝子変化の間の関連性を解析するための3つのmicrosatellite markerを用いて調べた。BRCA1 promoterのメチル化の有無はmethylation-specific PCRで解析した。同一腫瘍内でBRCA1のheterogeneous expressionが認められる卵巣癌では、BRCA1陽性部分と陰性部分をそれぞれmicrodissection法を用いてDNAを抽出し、LOHとメチル化の有無を解析した。さらに、BRCA1発現あるいはBRCA1遺伝子変化の臨床病理学的パラメーターと患者の予後への関与を解析した。<結果>卵巣表層上皮細胞にBRCA1蛋白の発現を認めた。BRCA1発現の低下は良性腫瘍で16%、境界悪性で38%、癌で72%に認められた。BRCA1のLOHは良性では認めず、境界悪性の15%、癌の66%に認められた。BRCA1のメチル化は良性と境界悪性で認められなかったが、癌の31%に存在した。BRCA1発現の低下はBRCA1遺伝子のメチル化の存在の有無と関係していた。BRCA1のメチル化とLOHの頻度は他の組織型に比し漿液性癌で高かった。BRCA1のheterogenous expressionを示した3例の漿液性癌のうち1例では、BRCA1蛋白発現陽性の境界悪性様の所見を呈する細胞がLOH陽性、メチル化陰性であった一方で、近接したBRCA1蛋白発現陰性の癌細胞はLOH陽性、メチル化陽性であった。卵巣癌患者の予後はBRCA1発現や遺伝子の状態には関係していなかった。<結論>BRCA1の遺伝子変化にそったBRCA1蛋白発現の低下は、散発性の卵巣癌の発生において重要な役割を果たし、特に組織型別では漿液性腺癌で重要であることが示唆された。
セラピストフォーカシング法の開発に関する研究

1本方法の実施方法:事例に行き詰まりを感じたときの単発的実施、一人のセラピストとの継続的実施(扱う事例は複数)、継続スーパービジョン中での本方法の挿入的実施、の3つの実施様式がそれぞれ有効である。2本方法が心理療法に及ぼす効果と意義:本方法によりセラピストに体験的変化が起こり、それが治療関係に反映されることによって、心理療法過程に変化が生じることが期待できる。本方法がさほど効果を持たない例は見られたが、マイナスの影響が生じた例は見出されなかった。3主体感覚の観点から見た本方法の意義:心理療法中にセラピストが強い感情に圧倒されたり振り回されたとき(すなわち主体感覚の損なわれた体験状態のとき)、本方法で自らの体験を吟味することは、問題を整理し問題からの体験的距離を置く効果をもつ。それによりセラピストの主体感覚が回復する事例が複数見出された。4本方法のスーパービジョンとの比較:スーパービジョンはセラピストの外部のスーパーバイザーからのコメントを得る機会であるのに対し、本方法はセラピストの内部のフェルトセンスからのメッセージを得る機会である。本来はこの両者はしっかり組み合わさったときに十分な機能を果たす。その意味で、本方法はスーパービジョンとは異なる独自の機能を有するが、一方でスーパービジョンを補完する方法としても有効である。5本方法の意義の精神分析・イメージ療法の観点からの検討:(1)精神分析においては治療的に生じた人間関係の吟味と言語化が重視されるが、本方法により、治療関係を概念的のみならず具体的体験的に検討するための素材を得ることが可能である。(2)本方法の発想をイメージ療法に応用することにより、セラピストが事例についてイメージを用いて吟味する方法の開発が可能である。1研究実施経過吉良・池見・伊藤による研究打合せ後、各自が本方法を継続実施した。平成17年1月89日に研究代表者・研究分担者・研究協力者(東京女子大学・近田輝行氏)による研究会議を開催し、上記3名の実践報告にもとづき、主に実施方法、スーパーヴィジョンとの比較、心理療法への効果を討議した。2研究結果3名の研究者の実践は、セラピストを対象に、心理療法過程についてフォーカシングを継続的に実施した点で共通したが、本方法のねらいや期待される効果については若干の強調点の違いがあった。その点に関する討議により、本方法の実践における3つの様式が整理された。(1)様式A:クライエントとしてのセラピストとのフォーカシング。セラピストフォーカサーがその都度もっとも扱いたいケースを取り上げてフォーカシングを行う様式(池見による実践報告)。本様式は、臨床指導を主眼としたスーパーヴィジョンとは異なる独自のセラピスト援助の方法となること、初心者セラピストにクライエント体験を提供するトレーニング・セラピーの要素が見られることを確認した。(2)様式B:心理療法過程でのセラピストの行き詰まりについてのフォーカシング。特定のケースを取り上げて単発ないし数回継続してフォーカシングを行う様式(吉良による実践報告)。セラピストの行き詰まり感の吟味の結果として、セラピストの主体感覚の賦活化、心理療法過程の進展が確認された。(3)様式C:心理療法過程に関するフォーカシング。継続的なスーパーヴィジョンの中での数回のフォーカシング・セッションにより、セラピストの心理療法過程への理解を深めることをねらう様式(伊藤の実践報告)。本実践により、心理療法過程がセラピストに明確になること、すなわちスーパーヴィジョンの一環としての本方法の意義が確認された。1研究実施経過吉良・池見・伊藤は各所属機関において、各自のスタイルで本方法を実施した。平成17年12月1718日に福岡にて、研究代表者、研究分担者、研究協力者(東京女子大学・近田輝行氏、帝京平成大学・村里忠之氏、京都市南青少年活動センター・辰巳朋子氏)による研究会議を開催し、それぞれの実践を報告するとともに、本方法によりセラピストおよび心理療法にどのような影響があるか、それはスーパービジョンとどのように異なるか、等について討議を行った。討議をもとに、吉良・池見・伊藤はそれぞれ、本方法に関する研究論文をまとめた。2研究結果セラピストフォーカシングの実施スタイルは多様であるが、いずれのスタイルにおいても、セラピスト、心理療法への以下のようなポジティブな影響が見られた。[セラピストへの影響]本方法で、セラピストは自身が面接過程で感じていることをフェルトセンスとして体験することにより、自らの感情を対象化し、それから体験的距離をとることが可能になる。それはセラピストの主体感覚を賦活する臨床的意義をもつ。[心理療法への影響]セラピストの主体感覚の賦活化により面接関係に変化が生じる。またフェルトセンスの吟味から生じる気づきを手掛かりにして、心理療法過程の理解が促進されるとともに、心理療法の今後の方向性が見出しやすくなる。スーパービジョンとの相違点としては、スーパーバイザーは事例全体のことを把握して助言する責任があるのに対して、本方法のガイド(リスナー)は、セラピストに主観的に感じられたことについてのみ関わっている。スーパービジョンと比較して、指導の要素は少なく、体験過程促進の要素の大きい方法と言える。

3主体感覚の観点から見た本方法の意義:心理療法中にセラピストが強い感情に圧倒されたり振り回されたとき(すなわち主体感覚の損なわれた体験状態のとき)、本方法で自らの体験を吟味することは、問題を整理し問題からの体験的距離を置く効果をもつ。それによりセラピストの主体感覚が回復する事例が複数見出された。4本方法のスーパービジョンとの比較:スーパービジョンはセラピストの外部のスーパーバイザーからのコメントを得る機会であるのに対し、本方法はセラピストの内部のフェルトセンスからのメッセージを得る機会である。本来はこの両者はしっかり組み合わさったときに十分な機能を果たす。その意味で、本方法はスーパービジョンとは異なる独自の機能を有するが、一方でスーパービジョンを補完する方法としても有効である。5本方法の意義の精神分析・イメージ療法の観点からの検討:(1)精神分析においては治療的に生じた人間関係の吟味と言語化が重視されるが、本方法により、治療関係を概念的のみならず具体的体験的に検討するための素材を得ることが可能である。(2)本方法の発想をイメージ療法に応用することにより、セラピストが事例についてイメージを用いて吟味する方法の開発が可能である。
PFIのVFM計算における公共事業の公共と民間コスト比較に関する研究

1.わが国及び海外諸国のVFMの考え方、具体的計算方法について研究を行った。2.日本のPFIの実例におけるVFMの計算の考え方及び現実の計算方法については、これまでの実例を公表資料及び自治体からの資料により調査を行った。他方、イギリスのVFM計算については、文献調査および現地調査によりその骨格および現実の運用のあり方について調査を行った。3.この結果、日本と海外のPFIおけるVFMの計算は、次の比較特徴があることが分析された。(1)公共セクターのコスト即ちPSCの計算については、海外諸国が現実の数値にかなり近づける様々な工夫を試みているのに対し、日本の場合、現実のコスト計算が行われていることは稀で推計値の域を出ていないケースが多いこと。(2)日本の民間事業者のコストであるLCCの計算においては民間事業者の意向調査を基に事前調査としてはかなり現実の近い数値が取られていること。(3)現在価値換算率については、イギリスは貨幣価値の現在価値化という概念が強く、大蔵省で統一的に出しているのに比べ、日本の場合はリスクフリーレートを採用し、国債金利の平均を取っているケースが多いこと。(4)イギリスにおいてはVFMの数値はこれをベースに議会、行政等で議論する素材となっており、現実的に活用されていること。(5)海外諸国については、会計検査院等が事後の数値評価を行っていることに比べ、日本の場合はまだ、検証する体制が取れていないこと。4.また、民間事業者の提案を総合評価一般競争入札方式で評価する際の加算と除算方式の比較計算について実例を基に検討を加え、その問題点及び今後の公共と民間とのコスト比較の方式を作成した。以上1.わが国及び海外諸国のVFMの考え方、具体的計算方法について研究を行った。また、イギリス及びアメリカのVFMの計算方法については、文献調査を中心に行った。特に、イギリスのVFMの計算方法が2003年度から大幅に変更されているため公表されている資料から可能な限り情報収集を行った。3.この結果、日本と海外のPEIおけるVFMの計算は、次の比較特徴があることが分析された。(1)公共セクターのコスト即ちPSCの計算については、海外諸国が現実の数値にかなり近づける様々な工夫を試みているのに対し、日本の場合、推計値の域を出ていないケースが多いこと。(2)現在価値換算率については、イギリスは貨幣価値の現在価値化という概念が強く、大蔵省で統一的に出しているのに比べ、日本の場合はリスクフリーレートを採用し、国債金利の平均を取っているケースが多いこと。(3)海外諸国については、会計検査院等が事後の数値評価を行っていることに比べ、日本の場合はまだ、検証する体制が取れていないこと。2.また、民間事業者の提案を総合評価一般競争入札方式で評価する際の加算と除算方式の比較計算を作業中である。3.これらを踏まえて、平成16年度はわが国におけるVFMの計算方法について研究を行っていく計画である。他方、イギリスのVFM計算については、文献調査および現地調査を行い、現実にVFMを活用している政府及び地方自治体関係者からヒアリングを行い、その骨格および現実の運用のあり方について調査を行った。

(1)公共セクターのコスト即ちPSCの計算については、海外諸国が現実の数値にかなり近づける様々な工夫を試みているのに対し、日本の場合、現実のコスト計算が行われていることは稀で推計値の域を出ていないケースが多いこと。(2)日本の民間事業者のコストであるLCCの計算においては民間事業者の以降調査を基に事前調査としてはかなり現実の近い数値が取られていること。(3)ほぼ現在価値換算率については、イギリスは貨幣価値の現在価値化という概念が強く、大蔵省で統一的に出しているのに比べ、日本の場合はリスクフリーレートを採用し、国債金利の平均を取っているケースが多いこと。(4)イギリスにおいてはVFMの数値はこれをベースに議会、行政等で議論する素材となっており、現実的に活用されていること。(5)海外諸国については、会計検査院等が事後の数値評価を行っていることに比べ、日本の場合はまだ、検証する体制が取れていないこと。4.また、民間事業者の提案を総合評価一般競争入札方式で評価する際の加算と除算方式の比較計算について実例を基に検討を加え、その問題点及び今後の公共と民間とのコスト比較の方式を作成した。
家族経営協定締結事例にみる親世代・子世代の共同と分離

家族経営協定締結から10年以上が経過し、世代交代の時期に差し掛かった女性農業者へのフォーカス・グループ・インタビューから、親世代と子世代との世代関係、経営継承の方向性を質的に分析した。直系家族規範が緩み、世代間で生活が分離することで、双系的なサポート関係が生じていた。規範的な男子による継承は困難になり、親世代の引退は遅れ、オールタナティブな経営へのシフトは、女子による継承の可能性を生み出していた。家族経営農業における家族員相互のパートナーシップ経営をめざして、1995年から家族経営協定が普及推進されている。普及推進から15年以上が経過し、次世代への経営継承にむけた家族経営協定の役割が期待される。家族農業経営においては、農業経営の世代継承を要件とし、親世代と子世代との共同が求められる。しかし、わが国の家族形成理念は、すでに直系家族制から夫婦家族制へと移行し、家族生活においては、親世代と子世代との分離が予想される。本研究の目的は、家族経営協定締結事例より、農家生活における親世代と子世代の世代関係の変化、それぞれのライフコースの世代変化を実証的に把握し、夫婦家族制における世代継承のあり方を考察することにある。これまで家族経営協定締結事例は、普及を推進してきた地方農業改良普及センターはじめ都道府県や地方農政局を通して特定することができた。しかし、2004年の農業改良助長法改正、2005年からの強い農業づくり交付金によって普及体制が変わり、それが困難になったことが、岩手県、愛知県、熊本県でのヒアリング調査から明らかになった。そこで、日本農業新聞で1995年以降に掲載された家族経営協定の事例をデータベースにしてまとめ、先行研究で紹介されている事例と照合して、家族経営協定普及推進のモデル的な地域とみなすことができる岩手県水沢地方、愛知県刈谷市・岡崎市、熊本県玉名市において、家族経営協定締結事例の個別インタビュー調査を実施した。また岩手県水沢地方では、水沢地方農業担い手女性塾のメンバーを対象にグループインタビューを実施した。これらのインタビュー調査によって、長寿化によって世代交代のタイミングが遅れる傾向にある中、引退後の親世代の自立と生きがい、子世代の早期の独立をめざした、新しい世代関係の事例を確認することができた。本研究では、家族経営協定を締結している農家世帯を対象とした事例調査を通じて、夫婦家族制のもとでの親世代・子世代の共同と分離について実証的に考察する。平成15年度から家族経営協定の普及推進体制が大きく変わり、地域農業改良普及センターでは管内の家族経営協定締結事例を十分に把握できなくなった。そこで、平成7年度から始まった家族経営協定普及推進の比較的早い時期に協定を締結したモデル世帯・モデル地域について、フォローアップ調査を実施するという方法を取った。まず、全員が平成13年までに協定を締結した水沢地方農業担い手女性塾のメンバーを対象に、平成22年2月に実施したフォーカスグループ・インタビュー(参加者9名)と個別インタビュー(6事例)について、インタビューの録音を文字に起こし、テキスト分析に必要な質的データを整理した。ついで、昭和41年から家族協定農業を普及推進している群馬県高崎市にて、協定農家の組織である高崎市家族協定研究協議会の婦人部の協力を得て、平成23年2月にフォーカスグループ・インタビュー(参加者13名)を実施した。ここでは、夫婦家族制にもとづく欧州の家族経営農業と女性農業者に関する調査研究の成果を資料として提示し、それをもとに自らの生活課題について世代関係を中心に語り合ってもらった。なお、欧州での比較研究は、平成22年11・12月にデンマーク・オーデンセ市(2事例)とフランス・ボーヌ市(5事例)にて、平成23年1月にオーストリア・ウィーン市(5事例)にて現地調査を実施し、平成23年1月ベルン大学にて、スイスの農家女性のキャリア形成に関する事例調査の分析結果を報告した。わが国では長寿化によって、親世代と子世代とが共存する期間が長期化し、世代交代のタイミングが遅れる傾向にある。引退後の親世代の自立と生きがい、子世代の早期の独立を考えるための質的データを収集・整理した。家族経営協定締結事例を調査対象として、農家生活における親世代と子世代の世代関係の変化を実証的に把握し、夫婦家族制の下での家族農業経営の継承を考察した。研究最終年度は、岩手県水沢地方農業担い手女性塾(以下、女性塾と記す)メンバー9名を対象として初年度末に実施したフォーカス・グループ・インタビュー(FGI)での語りをテキスト分析し、さらに語りの背景にある個々の経験を確認するため、FGI参加者に対して個別訪問調査を実施した。女性塾は1992年に40代の女性農業者リーダー15名(1944年1952年生)によって結成された。全員が夫婦で農業に従事し、1996年から2001年にかけて家族経営協定を締結した。FGI実施時にはほぼ向老期にあった。親世代とは一貫同居だったが、後継者が定着して直系家族を再生産しているのは2名だけで、嫁との同居経験者は少数派になった。

同居する場合、家族経営協定によって早期から嫁の地位を明確にし、緊張関係を回避していた。しかし、同居経験がない場合は、嫁姑関係をネガティヴに評価していた。世代間のサポート関係は、双系的になっていた。自らの育児期には、育児は姑の担当だった。ところが今日、対象者の育児対象は、主として婚出した娘の子どもである。娘であれば育児方法について率直に意見を述べる。FGIで最も強調された世代ギャップは育児方法だった。後継者が定着している場合、経営部門がより専門化し、生産技術・経営技術を持つ男性と持たない女性とで性別分業が世代継承されていた。しかし、後継者が定着してない場合、向老期の農業者に適合的なグリーン・ツーリズムやグリーン・ケアといったオールタナティヴな農業へのシフトが見られ、他産業に従事した娘が継承しうる新たな経営部門が創出されていた。伝統的な男子による家族農業経営の世代継承が困難になる今日、女子による経営継承にも着目する必要があろう。
自己集積的手法による原子膜複合体の形成

原子膜物質に異種化学種を導入する研究を行い,以下の成果を得た.1)超高真空下で水分圧を厳密に制御し,グラフェンFETへの酸素分子の曝露を行い,電気伝導度のゲート電圧依存性の測定により曝露時間とEfのシフトの相関を調べたところ,酸素吸着時におけるグラフェンのEfの位置と水分子の分圧に依存して酸素からの電荷移動速度が決まることを見出し,グラフェンへの分子吸着によるキャリア注入プロセスが電気化学的メカニズムによって進行することを明らかにした.また,担持基板表面の分子膜修飾とゲート電圧印加により,酸素吸着時のグラフェンフェルミエネルギー大きくシフトさせることにより,別の電気化学反応を誘起して酸素吸着によるグラフェンへの電子ドーピングを実現できることを示した.一方,二硫化モリブデンにおいても酸素への曝露時間の増加に伴う系統的なホールキャリア注入が実現できたが,電極界面の効果など半導体である二硫化モリブデンではグラフェンよりもさらに複雑なメカニズムによって電荷移動が生じていることがわかった.2)Brodie法により磁性不純物を含まない酸化グラフェンを合成し,酸化グラフェンの本質的な磁性を実験的に観測することができた.また,芳香族アミンのカップリング反応やキサンテン誘導体の水中合成反応において,酸化グラフェンが触媒活性を持ち,これがスピン濃度で示される局在状態密度だけでなく,伝導性を持つπ共役の存在割合にも依存していることを明らかにした.3)ナノダイヤモンド表面上でのエピタキシャル成長により合成したナノグラフェンに酸素分子を導入することにより,エッジ状態スピンと酸素分子スピンの反強磁性ダイマーが形成することを静磁化率とESRにより見出し,第一原理計算を行うことにより吸着酸素との電荷移動に由来する磁気スイッチング現象が起きていることを解明し,この成果を取りまとめた論文を投稿中である.27年度が最終年度であるため、記入しない。27年度が最終年度であるため、記入しない。既存の原子膜物質と自己集積的手法により導入した種々の異種化学種との組み合わせによる新たな原子層複合体の合成を行い,原子層間の相互作用を調べることを通じて,新規機能性を発現する物質系の開拓を目的として研究を行い,以下の成果を得た.1)グラフェンへの分子吸着による原子層複合体の形成と界面相互作用の解明:グラフェンFETへのヒドラジン吸着により,ヒドラジン吸着層とグラフェンの間の電荷移動相互作用により,グラフェンへの電子ドープが起こることを明らかにした.2)大面積グラフェンを用いた複合原子層構造の構築:高品質大面積グラフェン試料であるSiC上に形成されたエピタキシャルグラフェン(EG)にヒドラジン分子を導入することにより,表面のみならずバルクSiC基板とEGとの間の界面にもヒドラジン分子が分解される形で挿入され,電荷移動によるドーピングに加えて基板からのデカップリングが生じ,界面におけるひずみが解消されることがわかった.3)基板表面上に形成した自己集積化単分子層の構造制御によるグラフェンの電子物性の変調:グラフェンを支持するSiO2基板上に自己集積化単分子膜を形成することにより原子膜複合体を合成し,下層である分子膜の構造を親水化処理やアニール処理により制御することにより,分子膜と上層のグラフェンとの間の電荷移動相互作用によるグラフェンへのキャリア注入量を向上させることができることがわかった.この他の成果として,層状カルコゲナイドへのインターカレーションによる複合原子層の形成を目指して,TiS2およびTaS2を合成しCu原子の挿入反応の試行,理論班草部グループとの共同研究により,Ar照射によるエピタキシャルグラフェンへの原子空孔の導入とXPSによる評価を行い,空孔に由来する状態と終端化学構造との相関の理論的解明などを行った.原子膜物質に異種化学種を導入する研究を行い,以下の成果を得た.1)超高真空下で水分圧を厳密に制御し,グラフェンFETへの酸素分子の曝露を行い,電気伝導度のゲート電圧依存性の測定により曝露時間とEfのシフトの相関を調べたところ,酸素吸着時におけるグラフェンのEfの位置と水分子の分圧に依存して酸素からの電荷移動速度が決まることを見出し,グラフェンへの分子吸着によるキャリア注入プロセスが電気化学的メカニズムによって進行することを明らかにした.また,担持基板表面の分子膜修飾とゲート電圧印加により,酸素吸着時のグラフェンフェルミエネルギー大きくシフトさせることにより,別の電気化学反応を誘起して酸素吸着によるグラフェンへの電子ドーピングを実現できることを示した.一方,二硫化モリブデンにおいても酸素への曝露時間の増加に伴う系統的なホールキャリア注入が実現できたが,電極界面の効果など半導体である二硫化モリブデンではグラフェンよりもさらに複雑なメカニズムによって電荷移動が生じていることがわかった.2)Brodie法により磁性不純物を含まない酸化グラフェンを合成し,酸化グラフェンの本質的な磁性を実験的に観測することができた.また,芳香族アミンのカップリング反応やキサンテン誘導体の水中合成反応において,酸化グラフェンが触媒活性を持ち,これがスピン濃度で示される局在状態密度だけでなく,伝導性を持つπ共役の存在割合にも依存していることを明らかにした.3)ナノダイヤモンド表面上でのエピタキシャル成長により合成したナノグラフェンに酸素分子を導入することにより,エッジ状態スピンと酸素分子スピンの反強磁性ダイマーが形成することを静磁化率とESRにより見出し,第一原理計算を行うことにより吸着酸素との電荷移動に由来する磁気スイッチング現象が起きていることを解明し,この成果を取りまとめた論文を投稿中である.分子吸着,基板表面修飾などの当初計画した手法による複合原子層の形成が達成されており,電荷移動によるキャリア注入に関する詳細な知見などが得られつつある.

また,層状カルコゲナイド層間やエピタキシャルグラフェンにおける基板界面への異種物質挿入など新たな手法による複合原子層の構築にも着手している.さらに他班との共同研究による成果も出始めている.27年度が最終年度であるため、記入しない。1)ゲート電圧を印加した状態で分子吸着を行い,グラフェンと分子吸着層との層間相互作用の詳細を明らかにする.2)本課題の開始後に新たに見出されたエピタキシャルグラフェンへの基板界面への異種物質挿入による複合原子層構築の可能性について,臭素などの電子吸引性の分子や光架橋反応を起こす有機分子などを導入することにより探る.3)カルコゲナイド系原子膜に対して自己集積化手法を適用して複合原子層の構築を試みる.27年度が最終年度であるため、記入しない。
がんの遺伝子治療に向けた超機能性人工オリゴヌクレオチドの創製

我々は、天然ヌクレオシドの糖部を架橋構造化することでN型或いはS型と呼ばれる立体配座に固定した新しい人工核酸(Bridged Nucleic Acid:BNA)の開発を進め、これら人工核酸をオリゴヌクレオチド中に導入することで、そのアンチセンス効果が飛躍的に向上することを見いだしてきた。ここでは、細胞のアポトーシス死に関する遺伝子として知られるbcl-xLおよび原ガン遺伝子として知られるc-mycに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドに2',4'-BNAを導入しその評価解析を行った。その結果、bcl-xLを標的とした2'、4'-BNA修飾アンチセンスオリゴヌクレオチド(BNA-oligo)は、培養細胞系においてbcl-xLのmRNAレベルを大幅に低下させ、細胞をアポトーシスへと導いた。その効果は配列特異的であった。これに対し同配列のホスホロチオアートオリゴヌクレオチド(S-oligo)はbcl-xL以外にも多くの遺伝子のmRNAレベルを低下させた。一方、これまで天然オリゴヌクレオチド(D-oligo)による細胞増殖抑制効果が認められていたc-mycに対するアンチセンス配列を用い、S-oligo、D-oligo及びBNA-oligoの効果を評価したところ、S-oligoでは配列非特異的な効果を示した。また、D-oligoは強い細胞増殖抑制を示した。これに対し、意外にもBNA-oligoは増殖抑制を全く示さなかった。この結果を詳細に解析したところ、c-mycを標的とした場合のD-oligoによる細胞増殖抑制効果が、配列中に含まれる、CpGモチーフに由来するものであることが強く示唆された。このことより、BNA-oligoではCpGモチーフによる細胞増殖阻害を回避できることが明らかとなった。
血管内皮増殖因子スプライシングアイソフォームを制御する筋ジストロフィー治療の検証

Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)は、ジストロフィンタンパクの異常に発症する進行性の筋萎縮症であり、2010年頃より本疾患に対する新規治療法の治験が全世界で行われている。しかし、明らかな臨床効果を示した治療法は未だ報告されていない。近年、血管内皮増殖因子(VEGF)のスプライシングアイソフォームの一つであるVEGF-A165aが、本疾患の病態を改善する可能性が報告された。この研究では、VEGFのスプライシングを修正し、スプライシングアイソフォームをVEGF-A165a優位にシフトすることで、新規治療を開発することを目的にする。
高温超伝導アンテナ・フィルターの設計と試作に関する共同研究

超伝導フィルタ、アンテナに関して、ドイツブッパタール大学のProf.HeintzChaloupkaと共同研究を行い、次の様な成果を得ている。1.平成9年度楠正暢助手がProf.HeintzChaloupkaの研究室に3週間滞在し、超伝導フィルタの設計・試作に関して共同研究を行ってきた。山形大学では高温超伝導薄膜(YBa_2Cu_3O_7-δ)の作製とその評価、超伝導フィルタの設計について主に研究し、ドイツブッパタール大学では、超伝導フィルタの設計・試作・評価を主に研究した。2.平成10年度Prof.Heintz Chaloupkaが山形大学工学部大嶋研究室に3週間滞在し、超伝導フィルタに関する共同研究を行った。Prof.HeintzChaloupkaが山形大学に滞在している期間に、日独超伝導フィルタシンポジウムを開催し、Prof.Heintz Chaloupka、移動体通信先端技術研究所、松下電器、山形大学から最近の研究成果を発表してもらった。超伝導フィルタの開発を目的とした、山形大学とブッパタール大学との研究交流は、平成10年度以降も継続される。現在、高温超伝導体をマイクロ波デバイスに応用しようとする研究が世界的に活発に行なわれている。中でも超伝導フィルター、超伝導アンテナは、最も実用化の可能性が高いデバイスとして活用されている。本国際研究は、ドイツブッパタール大学のキャロウプカ教授と山形大学工学部大嶋重利教授の間で、超伝導フィルターや超伝導アンテナの共同開発を行なうものである。平成9年度は、山形大学工学部楠助手が、ドイツブッパタール大学に約3週間滞在し、次の様な研究を行なってきた。1.超伝導フィルターの設計2.超伝導フィルターの特性評価1.に関しては、現在活用されている小型平面フィルターの最適設計について、キャロウプカ教授とディスカッションを行ない設計法について新たな知見を得てきた。2.に関しては、超伝導フィルターやアンテナを実用化する為には小型冷凍機による冷却が重要となり、その点の問題点を議論してきた。以上の点を踏まえ、超伝導フィルターや超伝導アンテナの実用化に対する問題点を明確にし、平成10年度への研究の道を開いたことが平成9年度の成果である。1平成9年度楠正暢助手がProf.HeintzChaloupkaの研究室に3週間滞在し、超伝導フィルタの設計・試作に関して共同研究を行ってきた。山形大学では高温超伝導薄膜(YBa_2Cu_3O_<7-δ>)の作製とその評価、超伝導フィルタの設計について主に研究し、ドイツブッパタール大学では、超伝導フィルタの設計・試作・評価を主に研究した。2平成10年度Prof.Heintz Chaloupkaが山形大学工学部大嶋研究室に3週間滞在し、超伝導フィルタに関する共同研究を行った。
プリオンタンパク質の銅イオン酸化還元作用メカニズムの解明と機能性素子への応用

プリオンタンパク質のアミノ末端側領域には、Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Glnという8個のアミノ酸からなる配列(プリオンオクタペプチド,OP)が4回繰り返して現れる領域(OP4)があり、この配列は種間で良く保存されている。OP4は銅イオンに高い親和性を示し、Cu(II)をCu(I)に還元する活性を持つ。本研究は、酸化還元の反応中心として、また構造制御装置としてもユニークなOP4の作用メカニズムを明らかにすることを目的とした。OP4による銅還元の速度論的解析およびラマンスペクトルによる複合体の構造解析から、OP4がCu(II)還元活性を示すためには、OP配列が少なくとも4回繰り返され、4個のHis残基のイミダゾール窒素が1個の銅イオンに配位する必要があることがわかった。この構造は、特にpH6付近の弱酸性条件で形成され、中性よりアルカリ性側のpHでは、OPのHisだけでなくアミド基の窒素も配位子となる。このため、OP4のCu(II)還元活性は弱酸性で最も高くなる。プリオンタンパク質は細胞膜表面に結合し、エンドソームに取り込まれるが、Cu(II)還元活性は細胞膜表面よりもエンドソーム内の方が高いと考えられる。プリオンタンパク質は細胞表面においてCu(II)と結合し、エンドサイトーシスによりエンドソーム内に取り込まれてCu(II)を還元し、生じたCu(I)を銅輸送タンパク質に受け渡す役割を持つと予想される。OPがCu(II)還元活性を示すためには、この配列が少なくとも4回繰り返され、4個のHis残基のイミダゾール窒素が1個の銅イオンに配位する必要がある。一方、OP4領域のC末端側に隣接するOPと類似する配列Gly-Gly-Gly-Thr-His-Ser-Gln-Trpまでペプチド鎖を延長したところ、還元活性がOP4のみのときと比べて顕著に高くなることがわかった。延長領域のHisまたはThrを、それぞれアラニンに置換すると還元活性が減少することから、これらの残基のイミダゾール基と水酸基が軸配位子として銅との複合体形成に関与し、還元活性を高めている可能性がある。昨年度までに、(1)OP4は銅イオンに高い親和性を示し、Cu(II)をCu(I)に還元する活性を持つこと、(2)OP4がCu(II)還元活性を示すためには、4個のHis残基のイミダゾール窒素が1個の銅イオンに配位する構造を取る必要があること、および、(3)この構造はエンドソーム内のpHに近い弱酸性条件で形成されることを明らかにした。本年度は、細胞内への銅イオン取り込みにおけるプリオンタンパク質の役割を明らかにすることを目的として、copper transporterタンパク質細胞外ドメインの銅結合に関する研究を行った。

copper transporterはプリオンタンパク質と同様に細胞膜表面に存在し、1価の銅イオンCu(I)を選択的に細胞内に送り込むイオンチャネルを形成すると考えられている。銅輸送の初期過程に重要な役割を持つと考えられるcopper transporterの細胞外ドメイン(N末端領域)の銅結合様式について調べた。その結果、銅結合部位、結合様式およびCu(I)とCu(II)に対する選択性はpHに依存して大きく変化することがわかった。特に、弱酸性条件では、メチオニンを主な配位子としてCu(I)を選択的に捕捉する複合体が形成される。プリオンタンパク質とcopper transporterは、共同的に銅の細胞内輸送を行っている可能性がある。
黄色ブドウ球菌由来スーパー抗原性毒素に対する牛乳腺上皮細胞の免疫応答機構解明

牛乳房に感染した黄色ブドウ球菌が産生するスーパー抗原が乳房炎症あるいはその重症化に関与している可能性が示唆された。実際の黄色ブドウ球菌感染では、乳房内で感染巣を形成した細菌がスーパー抗原を産生し、そこに存在するT細胞がスーパー抗原によって非特異的に活性化され、その刺激により産生されるサイトカイン(特にIFN-γ)の作用を受けてBMECのIL-15遺伝子の発現上昇が起こり、その結果として炎症の誘導あるいは重篤化が起こるという機序の可能性が示唆された。黄色ブドウ球菌を原因とする乳房炎では、感染菌が免疫系の破綻を惹起するスーパー抗原を高率に産生することから、菌由来スーパー抗原が炎症発症あるいは症状の重篤化に関与している可能性がある。本研究では炎症時主に傷害を受けるとされる乳腺上皮細胞を用いたin vitro実験細胞培養実験系を用い、乳腺上皮細胞の活性化におよぼす細菌性スーパー抗原の直接的あるいは免疫系の細胞の刺激を介した間接的な影響を解析した。その結果本年度以下の研究成果を得ることが出来た。1、陽性コントロール(大腸菌リポ多糖)を用いた乳腺上皮細胞への直接刺激実験では、いくつかの特異的なサイトカイン遺伝子の発現上昇が見られたのに対し、スーパー抗原刺激ではいずれのサイトカイン遺伝子の変化も見られなかった。2、スーパー抗原で刺激した末梢血リンパ球の培養上清を乳腺上皮細胞に添加した間接刺激においては、特徴的にインターロイキン-15mRNAの発現上昇が見られた。3、遺伝子組換え型ウシインターフェロン-g(IFN-g)の単独刺激においても、スーパー抗原で刺激した末梢血リンパ球の培養上清を乳腺上皮細胞に添加した間接刺激と同様にインターロイキン-15mRNAの発現上昇が見られた。以上のことから、黄色ブドウ球菌由来のスーパー抗原は免疫系細胞の反応(特にIFN-g)の作用を介してBMECを活性化することが示唆された。今後は介在した免疫細胞の特定とその機能分子を明らかにするとともに、BMECが産生するIL-15の機能との炎症発症との関係をさらに明らかにしていく必要があると考えている。乳房炎発症時主に障害を受ける細胞は乳腺上皮細胞(BMEC)であるが、この細胞に及ぼす細菌性スーパー抗原の間接的な影響を検討することを本年度の目的とした。免疫細胞を介したスーパー抗原が及ぼす乳腺上皮細胞の障害機序を明らかにすることができれば、大動物臨床において切望されている黄色ブドウ球菌性乳房炎の治療法の開発および予防法の開発に繋がる。本年度の研究により、以下の成果を得ることが出来た。1、細菌性スーパー抗原で刺激した免疫細胞由来の液性因子をBMECに作用させることにより、BMECのIL-15mRNAの発現が誘導されることが明らかにされ、免疫細胞由来のサイトカイン遺伝子プロファイルによりそれを誘導する因子がIFN-γである可能性が示唆された。2、遺伝子組換え型ウシIFN-γ単独でBMECを刺激しても同様にIL-15mRNAの発現上昇が見られたことから、BMECのIL-15mRNAの発現上昇を誘導する主な因子はIFN-γであることが示唆された。3、T細胞をスーパー抗原で刺激するとIFN-γmRNAの発現上昇がみられたことから、BMECのIL-15mRNAの発現上昇を誘導するIFN-γの主な産生細胞はT細胞であることが示唆された。4、BMECとT細胞の共培養の実験により、スーパー抗原の刺激がT細胞の反応を介してBMECに伝達されるのは6時間以内に起こることが明らかにされた。以上のことから、乳房に感染した黄色ブドウ球菌が産生するスーパー抗原は、乳腺の炎症に関与している可能性が強く示唆された。実際の黄色ブドウ球菌感染では、乳房内で感染巣を形成した細菌がスーパー抗原を産生し、そこに存在するT細胞がスーパー抗原によって非特異的に活性化される。そのとき産生されるサイトカイン(特にIFN-γ)の作用を受けてBMECのIL-15遺伝子の発現上昇が起こり、その結果として炎症の誘導あるいは重篤化が起こるという機序の可能性が示唆された。
糸状菌由来リボソーム・ペプチド合成遺伝子のバイオインフォマティクス解析による探索

前年度までに同定したustYaホモログ遺伝子近傍に存在するRiPS前駆体候補遺伝子1641個の遺伝子産物のシグナルペプチド部分を除くアミノ酸組成の解析を行った。芳香族アミノ酸(Phe、His、Trp、Tyr)は、平均9.2%となり、ustiloxin前駆体ustAの8.2%と同程度、Asperipin-2a前駆体の17.5%よりは少ない数値となったが、ustYaホモログ遺伝子が作用するのが芳香族アミノ酸なので、妥当な含有量があると考えられる。塩基性アミノ酸(Lys、Arg)は、13.1%で、ustA(16.1%)、Asperipin-2a前駆体(18.2%)よりは少ない数値であるが、Kex2切断部位を含む筈なので、妥当な含有量であると考えられる。酸性アミノ酸(Asp、Glu)は、17.7%で、ustA(22.4%)、Asperipin-2a前駆体(21.3%)よりは少ないものの、塩基性アミノ酸の含有量よりも多かった。酸性アミノ酸は、Kex2切断部位の塩基性アミノ酸を中和する働きがある可能性がある。更に顕著な傾向は、硫黄原子を含むアミノ酸・CysとMetの含有量がそれぞれ0.6%、0.8%と低かった。ustA(Cys;0.0%、Met;0.0%)、Asperipin-2a前駆体(Cys;0.0%、Met;0.8%)共に、硫黄原子を含むアミノ酸の含有量が低いことから、CysとMetは、RiP生合成を妨げる可能性が高いと考えられる。こうしたアミノ酸組成の傾向は、Pezizomycotina由来の前駆体遺伝子とAgaricomycotina前駆体由来遺伝子で比較しても、差は見られなかった。また、ustYaホモログ遺伝子近傍にないRiPS前駆体候補遺伝子(27,391個)と比較すると、芳香族アミノ酸、塩基性アミノ酸、酸性アミノ酸の含有量が多く、CysとMetが少ないことも判明した。また、ドメイン予測の結果に基づき、Pfamの機能既知の領域を含む遺伝子は、RiPS前駆体候補遺伝子から外すことにしたので、RiPS前駆体候補遺伝子は1479個に絞られた。菌類のリボソーム・ペプチド(RiP)を合成する二次代謝系遺伝子を探索するために、631種類の(糸状菌だけでなくキノコ類を含む)菌類ゲノム・データをJGI(米国・DOE Joint Genome Institute)のデータベースから取得し、AspGDのフォーマットに基づいて、遺伝子情報のデータを作成し、更に下記の解析を行った。1ドメイン予測;蛋白質ファミリーデータベース・Pfam(ver.30)を用いて、全遺伝子配列に対するドメイン予測(hmmsearch)を行い、Pfam-A全ドメインを対象に行った。2全遺伝子の膜貫通領域予測;TMHMM-2.0cというプログラムを用いて、膜貫通領域の予測を行った。3シグナルペプチド解析;SignalP-4.1というプログラムを用いて、全遺伝子のシグナル配列解析を行った。631ゲノムから、RiPを環状化させる酵素遺伝子(UstYa/Yb)のホモログ遺伝子は、7,245個検出され、1ゲノム当り、11個のUstYaホモログ遺伝子が存在する事が判明した。また、ゲノムによって、UstYaホモログ遺伝子のない生物種もあることが判明し、偏りが存在する事が判明した。また、631ゲノムのうち、約40ゲノムに対して、RiP前駆体遺伝子の前提条件である繰返し配列の検出とKex2プロテアーゼに切断されるサイトの検出などの解析を行っている。上記のドメイン予測、TMHMM解析により、これまでのAspergillus糸状菌類の解析では除けなかった偽陽性(false positives)のデータを排除することができると考えられる。予備的な解析では、各ゲノムにRiP前駆体遺伝子候補は数十個、存在すると予測された。当初の予定よりも遥かに多い数(631)のゲノム・データを扱い、キノコ類のゲノムも入れて比較解析することにしたので、時間は掛かっているが、ドメイン解析など、概ね予定通りに進んでいると考えられる。菌類625ゲノムに対して、Kex2プロテアーゼに切断され得るサイト、繰り返し配列を含む遺伝子の解析することにより、RiPS(リボソーム・ペプチド)前駆体候補遺伝子の探索を行い、29032個のRiPS候補遺伝子を見出した。更に、ustiloxin型のRiPS候補を探索するために、ustYaホモログ遺伝子近傍に存在するRiPS前駆体候補遺伝子1641個を絞り込んだ。RiPS候補遺伝子の近傍20kbp以内にある遺伝子についても、Pfamデータベースに含まれる蛋白質との相同性解析を行った。また、菌類の分類学(Taxonomy)に基づいて解析を進めた結果、ustiloxin型のRiPS遺伝子クラスターは、DikaryaのAscomycota/PezizomycotinaとBasidiomycota/Agaricomycotinaにのみ観られることが判明した。Ascomycota/Saccharomycotina(44ゲノム)では、ustYa遺伝子を持つゲノムが1ゲノムに1遺伝子だけあるが、ustYa遺伝子は、RiPS候補遺伝子の近傍には存在しないことが判明した。Pezizomycotina(297ゲノム)とAgaricomycotina(178ゲノム)に分類して、ustYaと共役したRiPS遺伝子の周辺遺伝子を解析した。ustYa遺伝子がPezizomycotinaとAgaricomycotinaいずれの場合も、最も頻繁に観られた。

それ以外の遺伝子では、Pezizomycotinaでは、Pfamで同定された遺伝子としては、酵素、トランスポーター、転写遺伝子が頻繁に出現し、その他、Ankyrin繰り返しモチーフが頻繁に観られた。それに対して、Agaricomycotinaでは、Pezizomycotinaとは傾向が異なり、Pfamで転写遺伝子に分類される遺伝子は上位に観られなかった。当初より解析するゲノム数は増えたが、その後、解析方法を改良するなどにより、後れを取り戻したと考えている。前年度までに同定したustYaホモログ遺伝子近傍に存在するRiPS前駆体候補遺伝子1641個の遺伝子産物のシグナルペプチド部分を除くアミノ酸組成の解析を行った。芳香族アミノ酸(Phe、His、Trp、Tyr)は、平均9.2%となり、ustiloxin前駆体ustAの8.2%と同程度、Asperipin-2a前駆体の17.5%よりは少ない数値となったが、ustYaホモログ遺伝子が作用するのが芳香族アミノ酸なので、妥当な含有量があると考えられる。塩基性アミノ酸(Lys、Arg)は、13.1%で、ustA(16.1%)、Asperipin-2a前駆体(18.2%)よりは少ない数値であるが、Kex2切断部位を含む筈なので、妥当な含有量であると考えられる。酸性アミノ酸(Asp、Glu)は、17.7%で、ustA(22.4%)、Asperipin-2a前駆体(21.3%)よりは少ないものの、塩基性アミノ酸の含有量よりも多かった。酸性アミノ酸は、Kex2切断部位の塩基性アミノ酸を中和する働きがある可能性がある。更に顕著な傾向は、硫黄原子を含むアミノ酸・CysとMetの含有量がそれぞれ0.6%、0.8%と低かった。ustA(Cys;0.0%、Met;0.0%)、Asperipin-2a前駆体(Cys;0.0%、Met;0.8%)共に、硫黄原子を含むアミノ酸の含有量が低いことから、CysとMetは、RiP生合成を妨げる可能性が高いと考えられる。こうしたアミノ酸組成の傾向は、Pezizomycotina由来の前駆体遺伝子とAgaricomycotina前駆体由来遺伝子で比較しても、差は見られなかった。また、ustYaホモログ遺伝子近傍にないRiPS前駆体候補遺伝子(27,391個)と比較すると、芳香族アミノ酸、塩基性アミノ酸、酸性アミノ酸の含有量が多く、CysとMetが少ないことも判明した。また、ドメイン予測の結果に基づき、Pfamの機能既知の領域を含む遺伝子は、RiPS前駆体候補遺伝子から外すことにしたので、RiPS前駆体候補遺伝子は1479個に絞られた。繰返し配列の解析に、当初の予定よりも時間が掛かっているので、計算に利用するサーバーの数を増やすなど、対策を講じる予定である。また、RiP前駆体遺伝子の周辺の遺伝子、UstYaホモログ遺伝子周辺の遺伝子について解析するプログラムを作成し、RiP前駆体候補遺伝子の解析、ustYa/Yb環状化酵素遺伝子が共役しているRiP候補遺伝子の解析を行う予定である。ustYaホモログ遺伝子と共役しているustiloxin型のRiPS前駆体候補やそれ以外のRiPS前駆体候補のアミノ酸組成等を解析することにより、RiPS前駆体遺伝子の特徴を捉える予定である。また、RiPS前駆体候補