hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自閉症におけるミトコンドリア機能異常の分子機構解明

ミトコンドリア機能障害は、自閉症スペクトラム障害を持つ子どもの約5パーセントに認められる。ミトコンドリアの機能が障害されると、神経発達のような高度にエネルギー依存的な生体プロセスが損なわれる可能性があり、したがって、自閉症の発症に寄与している可能性がある。そこで、本研究では、多様なミトコンドリア機能に関連する遺伝子の発現解析と関連解析を含む詳細な分析を行った。その結果、複数の遺伝子が自閉症の死後脳で部位特異的な発現変化を示すことが明らかとなり、関連解析の結果もこれを支持していた。本研究の結果から、ミトコンドリアの機能調整にかかわる遺伝子群が自閉症の新たな感受性遺伝子であることが示された。本研究の目的は、自閉症の病態基盤に想定されるミトコンドリア機能不全について、死後脳におけるmRNA発現解析やゲノムサンプルを用いた関連解析により明らかにすることにある。平成24年度は、以下の実験を行った。1前年度に引き続き、ミトコンドリアの機能に関わる遺伝子上の突然変異スクリーニングを行った。2前年度の自閉症者の死後脳解析の結果、有意な発現変化が示唆された遺伝子について、白人と日本人のトリオサンプルを用いた関連解析を行った。上記1、2については、現在、結果をまとめ、論文作成中である。また、前年度の死後脳解析結果については、Brain pathology誌とMolecular Autism誌に公表した。平成25年度は、前年度に引き続き、自閉症者の死後脳解析の結果、有意な発現変化が示唆された遺伝子について、白人と日本人のトリオサンプルを用いた関連解析を行った。ミトコンドリア異常は自閉症者の5%未満に観察されており、エネルギー代謝の面から重要視されている。そのため自閉症の遺伝学的研究ではミトコンドリア遺伝子の精査がなされているが、核内遺伝子にあってミトコンドリア機能に関与するタンパク質の機能については報告がほとんどない。このため、我々は独自に保持する臨床検体を用いて核内にあるミトコンドリア関連遺伝子の解析を行った。1.死後脳を用いたミトコンドリア関連遺伝子の発現解析:我々はすでに米国Autism Tissue Projectの厳正な審査を通過し、本邦初の自閉症者の死後脳(8例)および健常対照者の死後脳(13例)を取得している。これらのサンプルを用いて84遺伝子のアレイ解析を施行した結果、Metaxin 2 (MTX2),neurofilament,light polypeptide (NEFL),solute carrierfamily 25 member27 (SLC25A27)が自閉症者脳の前帯状回、皮質運動野、視床で有意な発現低下を示した。2.ミトコンドリア遺伝子の変異解析:上記の4遺伝子を疾患関連分子候補とし、これらについて患者から得られたDNAサンプルの解析を行い、健常者の遺伝子と比較して危険因子となる一塩基遺伝子多型を検索した。遺伝子サンプルは米国Autism Genetic Resource Exchangeから得たコーカサス系人種のDNAトリオサンプル(854家族)および我々が収集した日本人のDNAトリオサンプル(250家族)を用いた。その結果、NEFLおよびSLC25A27がコーカサス人、および日本人の自閉症者の双方において、それぞれ特異的な相関を示した。我々の知る限り、この経過は自閉症におけるミトコンドリア関連遺伝子を包括的に探索した初めての成果であり、現在得た内容をまとめて論文の投稿準備中である。当初の研究計画どおりに研究が進められている。当初の計画に沿った計画が推進され、期待した結果が得られている。研究計画どおりに進める方針であるが、自閉症脳において異常を示すミトコンドリア遺伝子が予想以上に多いことが明らかとなってきているため、さらなる経費を要する検討が必要になるかもしれない。新たに見出されたNEFL、SLC25A27の二つについてさらなる研究を進めたい。ミトコンドリアのエネルギー産生は電子伝達系を介して行われるため、今後はこの点に注目した死後脳解析も進めたい。また、当初の予定通り、今年度は所有する遺伝子サンプルをもとに伝達不平衡テスト(Transmission Disequilibrium Test:TDT)を行い、当該遺伝子の一塩基多型と自閉症家系との相関を調べる。最終年度までには動物モデルについても検討したい。遺伝子解析実験にかかる消耗品の購入と成果発表にあてる予定である。
トロトラスト被注入例の解析を中心としたα線発がんの分子機構の解析

第二次世界大戦中に用いられた血管造影剤トロトラストは、自然α線放射性物質であり、注射後大半が肝に沈着し数十年して肝癌の発生をみる。トロトラスト被注入者(ト症)肝癌は組織学的に肝内胆管癌(ICC)が多いが、血管肉腫(AS)の相対リスクが最も高いことが知られている。ヘテロ接合性の消失(LOH)は癌抑制遺伝子の存在が推定されるゲノム部位に起こる。放射線発癌に特異的な遺伝子変異の存否を明らかにすべく、ト症(9例)・非ト症(12例)のASにおいてマイクロサテライトを利用して、168ローカス(25cM刻み)の包括的LOH解析を行い、ト症ICCと比較した。その結果、157ローカス(93%)においてLOHが解析可能であった。全体にLOH頻度はト症ASの方が非ト症に比して高く、大きい染色体で、しかも短腕よりも長腕に高い傾向がみられた。しかし、染色体19q,21q,22qにもLOH頻度は高かった。ト症ICCもASも投与後発癌までの潜伏期は約40年、トリウム沈着量は2m/g、集積線量は8Gyと両者に有意差は認めなかった。以上からト症ASはICCと発癌段階の数はほぼ等しく、共通の遺伝子変異も存在するが、ICCよりも強く、放射線の被ばくによる直接影響も発癌に関与している可能性が考えられる。染色体8qと13qにト症ICCとASに共通して高LOH頻度を認めるローカスが存在し、放射線発癌特異的な候補となる責任遺伝子を同定中である。また、ミトコンドリアDNAの欠失が被ばくと直接関係するかを検討し、ト症への応用を図っている。ト症発癌に被ばく後の肝細胞の反応が関与していると考えられるため、マウスを使用して、クッパー細胞と血管内皮に個別にα線照射し、発現変化する遺伝子をDNAアレイによって網羅的に検討した。その結果、細胞周期に関係する遺伝子の発現抑制がみられた。今までの結果から、放射線によって癌化する細胞と被ばくの標的細胞は異なり、放射線発癌は複雑な生物反応の結果と考えられる。第二次世界大戦中に使用された血管造影剤トロトラストは、投与後、主に肝に沈着して成分の232Thの放出するα線によって被ばくし、数十年して肝癌、特に肝内胆管癌(ICC)を惹起する。α線による体内被ばくの影響を知るため、トロトラスト症(ト症)患者のICCにおける遺伝子変化を検討している。昨年度は非トロトラスト症ICCと肝細胞癌(HCC)についてヘテロ接合性の消失(LOH)解析をゲノム全体にわたって網羅的に行った。その結果ICCに特異的にLOH頻度の高い14ローカス、HCC特異的にLOH頻度の高い22ローカス、両者に共通してLOH頻度の高い9ローカスを見出した。これらのローカスのLOHをトロトラスト症ICC31例と細胆管癌5例について検討した。D4S1538、D16S2624、D17S1303の3ローカスはトロトラスト症か否かに拘わらず全ての肝癌で高頻度のLOHを認めた。

他の肝癌でLOH頻度の高いD4S1652はトロトラスト症において高く無かった。今回の研究から発癌要因に無関係に肝胆管系発癌に関与した癌抑制遺伝子ローカスと、放射線肝癌に関与しないローカスが明らかとなった。トロトラスト症ICCはLOHパターンからHCCとICCの中間で、ICC寄りであることが明らかとなった。また、B型肝炎ビールス(HBV)感染は発癌よりも肝細胞癌としての形質発現に関与している可能性が強く、HBV感染の少ないトロトラスト症肝癌はICCが多い理由であることも示唆された。第二次世界大戦中に用いられた血管造影剤トロトラストは、自然α線放射性物質であり、注射後大半が肝に沈着し数十年して肝癌の発生をみる。ト症肝癌は組織学的に肝内胆管癌(ICC)が多いが、血管肉腫(AS)の相対リスクが最も高いことが知られている。ヘテロ接合性の消失(LOH)は癌抑制遺伝子の存在が推定されるゲノム部位に起こる。放射線発癌に特異的な遺伝子変異の存否を明らかにすべく、トロトラスト症(9例)・非トロトラスト症(12例)のASにおいてマイクロサテライトを利用して、168ローカス(25cM刻み)の包括的LOH解析を行い、トロトラスト症ICCと比較した。その結果、157ローカス(93%)においてLOHが解析可能であった。全体にLOH頻度はトロトラスト症ASの方が非トロトラスト症に比して高く、大きい染色体で、しかも短腕よりも長腕に高い傾向がみられた。しかし、染色体19q,21q,22qにもLOH頻度は高かった。トロトラスト症ICCもASも投与後発癌までの潜伏期は約40年、トリウム沈着量は2mg/g、集積線量は8Gyと両者に有意差は認めなかった。染色体8qと13qにトロトラスト症ICCとASに共通して高LOH頻度を認めるローカスが存在した。以上からトロトラスト症ASはICCと発癌段階の数はほぼ等しく、共通の遺伝子変異も存在するが、ICCよりも強く、放射線の被ばくによる直接影響も発癌に関与している可能性が考えられる。第二次世界大戦中に用いられた血管造影剤トロトラスト(ト)は、自然α線放射性物質であり、注射後大半が肝に沈着し数十年して肝癌の発生をみる。放射線発癌に特異的な遺伝子変異の存否を明らかにすべく、昨年に引き続き、ト症・非ト症ASにおいて、マイクロサテライトを利用して、解析可能な157ローカスについてLOHを解析中である。全体として、LOH頻度はトロトラスト症ASの方が非トロトラスト症に比して高く、大きい染色体で、しかも短腕よりも長腕に高い傾向がみられた。ASでは放射線の被ばくによる直接影響も発癌に関与している可能性が考えられるため、現在、ミトコンドリアDNAの欠失が被ばくと関係するかを検討し、ト症への応用を図っている。ト症発癌に被ばく後の肝細胞の反応が関与していると考えられるため、マウスを使用して、クッパー細胞と血管内皮に個別にα線照射し、発現変化する遺伝子をDNAアレイによって網羅的に検討した。その結果、細胞周期に関係する遺伝子の発現抑制がみられた。今までの結果から、放射線によって癌化する細胞と被ばくの標的細胞は異なり、複雑な生物反応の結果と考えられるが、ひとつずつ丁寧に解析し、放射線発がん機構を明らかにしたい。
シングルナノサイズのミクロ相分離構造を実現するブロック共重合体デザイン

本研究では、ミクロ相分離構造の周期間隔を5 nm程度に制御する新規方法論の確立を目的として、分岐構造や環状構造などの特殊構造を有する単分散ブロック共重合体を精密合成し、各ポリマー構造とミクロ相分離構造の詳細な相関関係を系統的に明らかにする。最終的には、ミクロ相分離構造の周期間隔を制御するための普遍的な分子設計を提案し、ミクロ相分離構造の周期間隔が5 nm程度の微細化が可能な技術を提供することで、期限内に次世代ナノリソグラフィー技術の開発を目指す。
CGRPはPTSDの治療ターゲットになる得るか？

カルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)は強力な血管拡張作用を持つ神経伝達物質であり、末梢と中枢神経系に広く存在している。これまでに、CGRPを脳室内投与することで、抗うつ作用があることをマウスで報告してきたが、恐怖記憶行動における報告はまだない。そこで、本研究はCGRP脳室内投与によりマウスの恐怖記憶行動への影響を検討した。マウスに与える恐怖の記憶とは、足元に電気ショックを与えることで行う。電気ショックを与え、24時間後におなじ場所にマウスをいれると、電気ショックの恐怖記憶を想起し、すくみやふるえ行動を起こす。ショック体験後時間が経過しても、強い恐怖を感じることから人における心的外傷後ストレス障害(PTSD)のモデルとしても考えられている。我々は、恐怖記憶を与えたマウスにCGRPを脳室内注射したところ、24時間後のすくみ行動が有意に減少することを見出した。このCGRPによる作用はドパミン神経系によるものではないかと考え、実験を行なったが、脳海馬のドパミンは逆に減少し、ドパミン代謝酵素であるドパデカルボキシラーゼが有意に増加していた。これらのことから、CGRPによるドパミン量の変化は二次的なものであると考えられた。そこで、次に我々はCGRP脳室内投与による脳海馬のマイクロアレイ解析を行なった。この解析により、CGRP投与により3から4倍に増加したNpas4, 6倍に増加したArc遺伝子がうつ病や神経疾患と関連のある遺伝子であった。今後は、CGRP投与によりなぜNpas4が変化するのか、Arcが変化するのか、恐怖記憶保持の抑制にこれらの遺伝子が関与しているのかどうか実験を行う予定である。カルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)は強力な血管弛緩作用をもつ神経伝達物質であり、近年では中枢神経系に関する報告が増加してきている。しかしながら、CGRPと恐怖記憶行動における報告はまだない。記憶は、学習→獲得→保持→想起により形成されることが明らかとなっている。恐怖記憶を形成するには、記憶を思い出し、恐怖を感じることで、脳内に記憶が固定化(貯蔵)される。その後、記憶の想起により恐怖を感じる必要がなくなれば、恐怖感が薄れる。これを「恐怖記憶消去」という。この流れを条件付け文脈学習試験においてC57BL6/J雄性マウスを用いて実験を行なった。その結果、恐怖記憶を与えた1週間後に、記憶を想起させる前にCGRPを脳室内投与しても恐怖記憶の保持に変化は見られなかった。一方、恐怖記憶を想起させた直後にCGRPを脳室内投与すると、恐怖記憶消去作用が有意に抑制されていた。つまり、恐怖記憶を長く覚えていた。この効果はCGRPを投与してさらに1週間経っても持続が見られ、生理食塩水投与群と比べて有意な差が見られた。恐怖記憶消去抑制作用のメカニズムを検討した結果、Γアミノ酪酸作動性神経受容体阻害薬であるpicrotoxin投与によりCGRPの作用の抑制が見られた。平成28年度の研究でCGRPが恐怖記憶に関与しているという結果が得られたこと、さらにCGRPがどのように恐怖記憶に関与しているかについて、GABA神経系が関与している可能性が明らかとなったことが理由である。しかし、これまでに恐怖記憶を与えた直後にCGRPを脳室内投与すると、むしろすくみ行動の有意な低下が見られた。つまりCGRP投与により恐怖記憶を覚えていなくなったという逆の結果が得られていた。この矛盾について、全く違った神経系に投与時期によって異なる作用を示すのかどうか検討する必要があると考えられる。これまで、条件付け文脈学習試験において、恐怖記憶を与え、1週間後に記憶を想起させた後にCGRPを投与するとすくみ行動の延長が見られた結果が得られていた。これはGABA神経系が関与することを前年度の研究により明らかにしてきた。また同様に条件付け文脈学習試験において、恐怖記憶を与えた直後にCGRP脳室内投与を行うと、すくみ行動の有意な低下が観察された。このCGRPの作用機構において、ドパミン神経系に着目して検討を行なった。その結果、ドパミン受容体拮抗薬であるハロペリドールを投与するとすくみ行動の延長が見られた。脳海馬におけるドパミン代謝酵素の遺伝子発現変化をリアルタイムで解析した結果、ドパデカルボキシラーゼの有意な増加がCGRP脳室内投与により見られた。しかしながら、海馬中のドパミン量を測定するとCGRPにより減少する傾向(P=0.052)となった。これらの結果よりCGRP脳室内投与によるすくみ行動の減少はドパミン量が変化したために起こったのではなく、別の機構が働いた結果、二次的にドパミン代謝酵素が変化したのではないかと考えられる。平成29年度の研究でCGRP脳室内投与によるすくみ行動減少作用がドパミン神経系ではないかと仮説を立て、実験を行なったが、最終的にドパミン量が減少していたため、ドパミン神経系ではなく別の機構が関与していることが示唆された。

今後は別の神経系の関与の探索を行う必要があると考えられる。カルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)は強力な血管拡張作用を持つ神経伝達物質であり、末梢と中枢神経系に広く存在している。これまでに、CGRPを脳室内投与することで、抗うつ作用があることをマウスで報告してきたが、恐怖記憶行動における報告はまだない。そこで、本研究はCGRP脳室内投与によりマウスの恐怖記憶行動への影響を検討した。マウスに与える恐怖の記憶とは、足元に電気ショックを与えることで行う。電気ショックを与え、24時間後におなじ場所にマウスをいれると、電気ショックの恐怖記憶を想起し、すくみやふるえ行動を起こす。ショック体験後時間が経過しても、強い恐怖を感じることから人における心的外傷後ストレス障害(PTSD)のモデルとしても考えられている。我々は、恐怖記憶を与えたマウスにCGRPを脳室内注射したところ、24時間後のすくみ行動が有意に減少することを見出した。このCGRPによる作用はドパミン神経系によるものではないかと考え、実験を行なったが、脳海馬のドパミンは逆に減少し、ドパミン代謝酵素であるドパデカルボキシラーゼが有意に増加していた。これらのことから、CGRPによるドパミン量の変化は二次的なものであると考えられた。そこで、次に我々はCGRP脳室内投与による脳海馬のマイクロアレイ解析を行なった。この解析により、CGRP投与により3から4倍に増加したNpas4, 6倍に増加したArc遺伝子がうつ病や神経疾患と関連のある遺伝子であった。今後は、CGRP投与によりなぜNpas4が変化するのか、Arcが変化するのか、恐怖記憶保持の抑制にこれらの遺伝子が関与しているのかどうか実験を行う予定である。CGRPを投与する時期によって、異なる結果が得られたことから、今後は恐怖記憶を与えた直後にCGRPを脳室内投与した時の生体内反応のメカニズムについて詳細な検討をしていく予定である。CGRPの新たな関与を探索するため、網羅的に遺伝子発現変化を解析できるマイクロアレイ方にて解析を行う。その後、候補遺伝子をターゲットとして行動解析、タンパク発現量の変化の確認をWestern blottingにて行う。
水泳による体力育成のための牽引泳の有用性に関する研究

本研究では、牽引泳を新たな水泳の持久力トレーニング(体力育成)法として活用するため、水泳技能レベルの異なる被験者に対していくつかの牽引負荷および牽引方法による牽引泳を行わせ、その際の生理学的応答、知覚的応答およびストロークメカニクスへの影響について調査した。その結果、水泳選手において牽引泳がストロークメカニクスに影響することなく持久的トレーニングレベルの運動負荷を確保することが可能な負荷量を確認した。また、日常的に水泳を実践している者に対しても適切な牽引負荷を設定することにより、試技として用いた牽引泳がストロークメカニクスへ影響することなく、体力育成をねらったトレーニング処方として有意義であることを示唆した。本研究では、牽引泳を新たな水泳の持久力トレーニング(体力育成)法として活用するため、被験者に対していくつかの牽引負荷、牽引方法で牽引泳を行わせ、その際の生理学的応答(心拍数;HR,血中乳酸濃度;BLA)、知覚的応答(主観的運動強度;RPE)およびストロークメカニクスの変化(映像;VTR,筋電図;EMG)について調査した。牽引泳は、一定の負荷(女子;2kg,3kg,4kg,男子;3kg,4kg,5kg)を加えた後方(レジステッド、その場泳ぎ)および前方(アシステッド)からの牽引によって泳ぐ方法を用い、牽引泳中のストロークメカニクスへの変化と運動負荷を測定した。初年度の研究成果は、得られた牽引負荷による牽引泳の筋電図と映像の分析およびストロークメカニクスの分析を行ったが、対象とした被験者の水泳能力レベルにおいてストロークメカニクスを崩壊することなく心拍数、血中乳酸濃度および主観的運動強度において持久的トレーニングレベルの運動負荷を確保することが可能な牽引泳の負荷量を確認することができた。また、持久的トレーニングとして活用することは避けた方が望ましい負荷量についても確認することができた。すなわち、本実験の水泳能力レベルには、女子の4kg負荷、男子の5kg負荷のその場泳ぎの牽引泳は運動成就できなかったが、運動成就した者でも筋電図様相が通常泳に比較して大きく異なり、運動技術の崩壊と考えられる様相を呈した。以上のことから、今後(次年度)さらに継続的に検証を進める必要があるが、本研究における水泳技能レベルの者が牽引泳を持久的トレーニングとして安全かつ効率的に活用するために参考となる有意義な基礎資料として提供することができるものと考えられた。本研究は、水泳選手の水泳トレーニング法および日常的に水泳を行っている水泳実践者の体力育成法として牽引泳を活用する際の基礎的資料を得ることを目的とした。そのため、牽引泳中の心拍数、血中乳酸濃度、筋電図、主観的運動強度、ストロークメカニクスについて調査、分析を行い、水泳選手および日常的に行っている水泳実践者を対象にフリー(通常)泳、その場泳、インターバル、アシステッド、レジステッドおよび最大努力泳の各牽引泳について調査を行った。その結果は、以下の通りであった。1.水泳選手および水泳実践者において、持久的トレーニング効果を期待できる牽引負荷が明らかとなり、特に牽引負荷により水泳実践者にはその場泳ぎの牽引泳およびインターバル牽引泳が体力育成法として有用であることが示唆された。2.アシステッド泳、レジステッド泳、最大努力泳をフリー泳と比較すると、最大努力泳のみ各筋の活動放電において有意差が見られた。よって、通常行われているアシステッド泳やレジステッド泳は牽引負荷を適切に設定することによって、水泳練習あるいは水泳トレーニング(体力育成)法としての効果が期待できる。3.その場泳ぎの牽引負荷による筋の活動放電は、牽引負荷が大きくなるほど躯幹部の筋に比較して上腕部の筋の活動が顕著であった。なお、全体的に水泳選手に比較して水泳実践者の筋の活動放電が顕著であった。以上のことから、本研究で試技として用いた牽引泳は、適切な負荷設定により、ストロークメカニクスを阻害することなく、水泳の体力育成として活用することが可能であると考えられた。
遺伝子リテラシーを生徒の公衆関与力につなげていく中学校理科カリキュラムの開発

1研究目的科学技術が私たちの将来の生活の質を決定するに至っている現代社会において,公衆関与は,各人それぞれの科学的リテラシーが十分に高められた市民によるものでなければならない。本研究では,未来の社会のよき担い手となる市民を育成するため,生徒が公衆関与をする力=公衆関与力を高めることを目指し,中学校3年生「遺伝の規則性と遺伝子」において,実感を伴った遺伝子理解ができるような教科カリキュラムの開発を目指した。2研究方法教科カリキュラムを開発するにあたって,ショウジョウバエを用いた形質遺伝実験を行いながら,形質の伝わり方を,実験に基づいて見出していく学習を教科カリキュラムに組み込んだ。また,組換え遺伝子を用いた大腸菌形質転換実験を中学生対象に行うために,静岡大学浜松キャンパスの教員の協力を得て,中学生にふさわしい器具の選定や操作方法,手順の見直し,複数時間にわたる実験の時間配分・教授形態の設定を行った。また,教科から総合的な学習の時間へと無理なく発展できるような学習課題の設定を行った。3研究成果実感を伴った遺伝子理解のために,ショウジョウバエを用いた形質遺伝実験は非常に有効であった。その際,縮退翅と黒檀色では,縮退翅の方が授業に適していることも明らかとなった。大腸菌形質転換実験は,遺伝子リテラシーを身につけさせるためには非常に有効であることが確認された。全ての操作を中学生に行わせるには,多くの問題があることも明らかとなり,操作法の改善や教授法の工夫が必要であることが分かった。さらに,総合的な学習の時間に引き続き追究学習を行い,社会に対して行動していこうとする生徒に対し,思考の受け渡しを継ぎ目無く行うためには,適切な学習課題をあらかじめ与えておくことが必要であり,そのための課題設定に浜松中版タキソノミーの活用が非常に有効であった。
横隔膜血流から見た人工呼吸モードの影響

空気自発呼吸下の犬を用い敗血症時の呼吸機能と臓器血流分布の変化を検討した.敗血症モデルは少量エンドトキシン静脈内投与(2μg/kg)により作成した.臓器血流は横隔膜,呼吸補助筋,腎血流,消化管血流をカラードマイクロソフィア法で測定し,肺血流量は熱希釈法で測定した.呼吸機能は呼吸数,一回換気量,胸腔内圧,容量圧曲線から求めた呼吸仕事量を測定した.その他血圧,心拍数,尿量,体温を測定した.エンドトキシン投与後(1)心拍出量は一時的に増加し,その後50%にまで減少した.血圧はエンドトキシ投与後から低下した.(2)呼吸数の増加と呼吸仕事量の増加が認められ,(3)心拍出量が減少したにもかかわらず横隔膜および呼吸補助筋の血流は約3倍に増加した.(4)腎血流量,消化管血流量,尿量は約60%に減少した.以上のことから細菌感染症が認められる時には臨床症状が軽度でも比較的早期から臓器間の血流分布の変化が発生しており,特に呼吸筋に分布する血流増加のために腎臓,消化管が相対的に低潅流状態となっていると考えられる.低潅流状態が持続すれば腎臓,消化管,肝臓などの臓器機能不全が起こり,多臓器不全に発展する可能性を示唆している.今後はこのような状態でどの様な呼吸補助,人工呼吸が適切であるか,どの様な薬物療法が効果的であるかを検討する予定である.空気自発呼吸下の犬を用い敗血症時の呼吸機能と臓器血流分布の変化を検討した.敗血症モデルは少量エンドトキシン静脈内投与(2μg/kg)により作成した.臓器血流は横隔膜,呼吸補助筋,腎血流,消化管血流をカラードマイクロソフィア法で測定し,肺血流量は熱希釈法で測定した.呼吸機能は呼吸数,一回換気量,胸腔内圧,容量圧曲線から求めた呼吸仕事量を測定した.その他血圧,心拍数,尿量,体温を測定した.エンドトキシン投与後(1)心拍出量は一時的に増加し,その後50%にまで減少した.血圧はエンドトキシ投与後から低下した.(2)呼吸数の増加と呼吸仕事量の増加が認められ,(3)心拍出量が減少したにもかかわらず横隔膜および呼吸補助筋の血流は約3倍に増加した.(4)腎血流量,消化管血流量,尿量は約60%に減少した.以上のことから細菌感染症が認められる時には臨床症状が軽度でも比較的早期から臓器間の血流分布の変化が発生しており,特に呼吸筋に分布する血流増加のために腎臓,消化管が相対的に低潅流状態となっていると考えられる.低潅流状態が持続すれば腎臓,消化管,肝臓などの臓器機能不全が起こり,多臓器不全に発展する可能性を示唆している.今後はこのような状態でどの様な呼吸補助,人工呼吸が適切であるか,どの様な薬物療法が効果的であるかを検討する予定である.イソフルレン麻酔下の犬を用い敗血症時の呼吸機能と臓器血流分布の変化を検討した.敗血症モデルはエンドトキシン静脈内投与により作成した.臓器血流は横隔膜,呼吸補助筋,腎血流,消化管血流をカラードマイクロソフィア法で測定し,肺血流量は熱希釈法で測定した.呼吸機能は呼吸数,一回換気量,胸腔内圧,容量圧曲線から求めた呼吸仕事量を測定した.その他血圧,心拍数,尿量,体温を測定した.エンドトキシンは血行動態に影響が出ない程度の少量から投与し,徐々に投与量を増加させた.エンドトキシン投与後(1)心拍出量は増加し,(2)呼吸数の増加と呼吸仕事量の増加が認められ,(3)横隔膜および呼吸補助筋の血流増加が認められた.(4)腎血流量,消化管血流量,尿量は減少した.以上のことから細菌感染症が認められる時には臨床症状が軽度でも比較的早期から臓器間の血流分布の変化が発生しており,特に呼吸筋に分布する血流増加のために腎臓,消化管が相対的に低潅流状態となっていると考えられる.低潅流状態が持続すれば腎臓,消化管,肝臓などの臓器機能不全が起こり,多臓器不全に発展する可能性を示唆している.今後はこのような状態でどの様な呼吸補助,人工呼吸が適切であるか,どの様な薬物療法が効果的であるかを検討する予定である.空気自発呼吸下の犬を用い敗血症時の呼吸機能と臓器血流分布の変化を検討した.敗血症モデルは少量エンドトキシン静脈内投与(2μg/kg)により作成した.臓器血流は横隔膜,呼吸補助筋,腎血流,消化管血流をカラードマイクロソフィア法で測定し,肺血流量は熱希釈法で測定した.呼吸機能は呼吸数,一回換気量,胸腔内圧,容量圧曲線から求めた呼吸仕事量を測定した.その他血圧,心拍数,尿量,体温を測定した.エンドトキシオン投与後(1)心拍出量は一時的に増加し,その後50%にまで減少した.血圧はエンドトキシン投与後から低下した.(2)呼吸数の増加と呼吸仕事量の増加が認められ,(3)心拍出量が減少したにもかかわらず横隔膜および呼吸補助筋の血流は約3倍に増加した.

(4)腎血流量,消化管血流量,尿量は約60%に減少した.以上のことから細菌感染症が認められる時には臨床症状が軽度でも比較的早期から臓器間の血流分布の変化が発生しており,特に呼吸筋に分布する血流増加のために腎臓,消化管が相対的に低灌流状態となっていると考えられる.低灌流状態が持続すれば腎臓,消化器,肝臓などの臓器機能不全が起こり,多臓器不全に発展する可能性を示唆している.今後はこのような状態でどの様な呼吸補助,人工呼吸が適切であるか,どの様な薬物療法が効果的であるかを検討する予定である.
都市における中高年層ネットワーキングの実証的研究

本研究は、都市における中高年男性のネットワーキングを実証的にとらえようとしたものである.事例研究の対象は、男性の料理と食文化のサークルである「男子厨房に入ろう会」である.本研究の焦点は三つある.一つは、この「男子厨房に入ろう会」の誕生とそのネットワーキングの展開の社会的背景を、日本の戦後の高度経済成長とそれと密接に関連した食生活の変化という歴史的視野からとらえること.二つは、「男の料理」本の分析を通して「男の料理」言説の創出と対抗言説との相克を分析すること.三つは、「男子厨房に入ろう会」の結成とその後のネットワーキングを明らかにすること.日本人の食生活のスタイルは、この時期劇的な変化を遂げた.多くの人々は食品産業や外食産業にますます依存するようになり、他方その中で手作りや健康な食事に志向する人々もいた.これまで、「男子厨房に入るべからず」は、言説の一つであった.この言説は、家庭内での料理は女性の仕事であるということだけではなく、食事や料理に興味を示すことすら男性らしくないとみなされることを意味した.1970年半ばになって、東京で敢えて「男子厨房に入ろう」という対抗言説を提示する男性たちが現れた.彼らは、趣味として男性の料理のクラブを結成した.その活動はやがて仙台市、札幌市、盛岡市、秋田市、一関市、松本市などの地方に伝播し、職業や地域の社会的区分を越えて、中高年男性のネットワーキングを展開させた.このネットワーキングは、日本社会のジェンダー分化を反映している.典型事例として仙台男子厨房に入ろう会を取り上げた.15年間の活動で、構成員の高齢化が進んでおり、高齢化社会に向かう中での中高年男性の生活の自立への対応の一つとして注目できる.こうしたネットワーキングは、未だ家庭内で料理をする男性が少ない中では、既存の状況を突破するために重要な存在である.本研究は、都市における中高年男性のネットワーキングを実証的にとらえようとしたものである.事例研究の対象は、男性の料理と食文化のサークルである「男子厨房に入ろう会」である.本研究の焦点は三つある.一つは、この「男子厨房に入ろう会」の誕生とそのネットワーキングの展開の社会的背景を、日本の戦後の高度経済成長とそれと密接に関連した食生活の変化という歴史的視野からとらえること.二つは、「男の料理」本の分析を通して「男の料理」言説の創出と対抗言説との相克を分析すること.三つは、「男子厨房に入ろう会」の結成とその後のネットワーキングを明らかにすること.日本人の食生活のスタイルは、この時期劇的な変化を遂げた.多くの人々は食品産業や外食産業にますます依存するようになり、他方その中で手作りや健康な食事に志向する人々もいた.これまで、「男子厨房に入るべからず」は、言説の一つであった.この言説は、家庭内での料理は女性の仕事であるということだけではなく、食事や料理に興味を示すことすら男性らしくないとみなされることを意味した.1970年半ばになって、東京で敢えて「男子厨房に入ろう」という対抗言説を提示する男性たちが現れた.彼らは、趣味として男性の料理のクラブを結成した.その活動はやがて仙台市、札幌市、盛岡市、秋田市、一関市、松本市などの地方に伝播し、職業や地域の社会的区分を越えて、中高年男性のネットワーキングを展開させた.このネットワーキングは、日本社会のジェンダー分化を反映している.典型事例として仙台男子厨房に入ろう会を取り上げた.15年間の活動で、構成員の高齢化が進んでおり、高齢化社会に向かう中での中高年男性の生活の自立への対応の一つとして注目できる.こうしたネットワーキングは、未だ家庭内で料理をする男性が少ない中では、既存の状況を突破するために重要な存在である.本研究は、都市社会の中高年層が、どのような第一次的社会関係を基礎にしたネットワークを形成していのかを、余暇サークル活動に焦点をあてて、その活動の展開の場である都市社会の構造と関連づけて調査することを目的とするものである。典型事例として取り上げたのは、消長浮沈の激しい中で比較的歴史のある男性を中心とした料理と食文化のグループの「男子厨房に入ろう会」である。初年度では、このグループの歴史、組織形態、活動状況、抱えている問題について聞き取り調査を実施した。対象とする都市環境として東京、仙台、札幌、松本を取り上げ、次の知見を見いだした。1.地方都市の成熟の兆候が見いだせた。東京を本部とした全国組織が解体され各支部が独立した形態で活動を行うようになった。それは活動の活性化と衰退をもたらしている。東京で最初に始まり東日本の各都市に広がったこの活動も、それぞれの地域単位での活動に収斂していった。2.中高年層を中心としたメンバーの職業的背景の関わりの大きさが顕著に見られる。時には自営業層とサラリーマン層の問題関心や期待の対立軸となって現れている。仙台のグループでは、比較的時間の持てる自営業層がリーダーシップをとり、定年近傍のサラリーマン層がにわかに加入増を示している構図である。3.長いもので20年近くの歴史を持ち、初期メンバーの持ち上がりと近年になっての定年年齢層の新規加入によって会のメンバーの高年齢化が進んでいる。活動の性格もメンバーの加齢とともに変容してきている。4.料理や食文化を当初のテーマにして始まった活動も、それを基盤にしてボランティア活動などに新たな場を見いだし性格を変えつつあり、地域によって異なった動きを示している。

中高年層の男性の余暇活動グループとして比較的歴史のある男性を中心とした食文化と料理のグループである「男子厨房に入ろう会」(以下「男厨会」)を典型事例として取り上げた。その活動グループの内、特に活発な仙台と東京を中心に事例調査を行った。この会の活動の経緯を戦後日本の時代背景の脈絡に置き考察した。次の知見を見いだした。1.男厨会は、1977年東京でジャーナリストの中村勝彦が著した『男子厨房に入れ!女の台所術を告発する』に賛同する人々によって結成された。彼らの活動は、1960年代の高度経済成長を経て日本人の食生活が大きく変化する時期と対応している。インスタント食品、冷凍食品の登場、外食産業の発展と相まって、より豊かな食生活への関心が高まった時期であった。余暇時間が増える中で男性による料理や食を媒介にした仲間の集まりの基盤ができつつあった。2.1970年代は、料理情報が広く氾濫する端緒の時期であった。主婦の料理とは一味違う「男の料理」の言説が生まれ、わが国独自の世界を作った。男性を主な読者にした「男の料理」本が数多く出版に如実に示されている。3.料理についての社会的性別役割(ジェンダー)の中で、「男の料理」言説は、男性が料理を嗜む機会を開くのに貢献した。4主に男性を中心とした余暇活動のグループの形成は、日本のジェンダー化された関係形成の枠組みの中に組み込まれたものである。男厨会は、都市における中高年男性のグループ形成のそうした典型例である。5.二十年に及ぶ男厨会の活動は、人と人の連なりを基礎にネットワーキングのそのものである。創設の核となるメンバーは少なからず変化を示したものの、基本的にはそのまま持ち上がってきている。新規参加メンバーに高齢者が多く会のメンバーの高齢化が最近の目だった傾向である。高齢者の生活の自律の一つとして料理への関心の高まりに新たな展開を垣間見せている。
遺伝性眼疾患に対する分子遺伝学的研究

本研究で,約200家系の角膜変性症患者および約150家系の遺伝性網膜疾患患者より,承諾を得て,原因遺伝子の解析の目的で,染色体DNAを抽出した。各疾患の候補遺伝子の解析を行った結果,以下の大きな成果を得た。1.角膜疾患の遺伝子解析...(1)ケラトエピセリン関連角膜変性症...1997年3月,ケラトエピセリンという蛋白の変異が原因で4つの異なるタイプの角膜変性症がおこると報告された。われわれは本邦の角膜変性症患者92家系を対象としてケラトエピセリンを候補遺伝子として解析を行い,以下の新知見をえた。(1)臨床的に顆粒状角膜変性と診断されていた症例の90%以上が,遺伝子レベルではアベリノ角膜変性の変異を持っていた(Cornea,2000 in press)。(2)格子状角膜変性症III型の原因遺伝子変異を発見した(Am J Hum Genet,1998)。(3)重症型の非定型的な角膜変性症例の中に,血族結婚に起因するホモ接合体が存在することを分子レベルで解析した(Am J Ophthalmol,1998&IOVS,1998)。(4)1917年に報告されたオリジナルタイプのReis-Buckler's角膜変性症の原因遺伝子変異を発見した(Am J Ophthalmol,1998)。...(2)膠様滴状角膜変性症...膠様滴状角膜変性症は,日本人特有の最も重篤な角膜変性症である。我々は,この変性症の原因遺伝子座が,第一染色体短腕に存在することを発見し(Am J Hum Genet 1998),原因遺伝子がMISTであることを,発見した(Net Genet,1999)。初期病変の確定診断や将来の遺伝子治療に有用であると考えられた。2.遺伝性網膜疾患の原因遺伝子解析...(1)X連鎖性若年性網膜分離症は,車軸状の黄斑分離や周辺部の網膜剥離をおこす遺伝性網膜ジストロフィで,若年より視力低下を来す疾患である。8家系の遺伝子解析を行い,全家系で,XLRS1遺伝子上に原因遺伝子変異を同定した(Arch Ophthalmol,2000)。(2)網膜色素変性症については,約100家系の遺伝歴のある家系の染色体DNAを収集することができた。1997年,ケラトエピセリン(βig-h3)という物質の変異が原因で,4つのタイプの異なる角膜変性症がひきおこされることが報告された。われわれは本邦の角膜変性症患者78家系を対象としてケラトエピセリンを候補遺伝子とした分子遺伝学的解析を進めていく過程で,本邦特有の多くの新知見を得ることができた。(1)臨床的に顆粒状角膜変性症と診断されていた症例の90%以上が,遺伝子レベルでは,アベリノ角膜変性症の変異R124H(124番のアルギニンがヒスチジンに変異)を持っていた。(2)本邦に戦前に多いとされたいとこ

結婚に起因する臨床的に重症なホモ接合体症例を発見し報告した(Am JOphthalmol,1998.Invest Ophthalmol Vis Sci,1998.)。(3)格子状角膜変性症III型の原因遺伝子変異P501T(501番めのプロリンがスレオニンに変異)を発見し報告した(Am JHum Genet,1998.)。本症はI型に比べて,格子の線が太くて,縄状にうねっているのが特徴で本邦には症例数が多いが,欧米では稀である。(4)従来,ライスビュックラーズ角膜変性症とひとまとめにされていた疾患では,遺伝子解析の結果,全く異なる2つのタイプがあることを発見し,報告した(Am J Ophthalmol,1998.)。その他,これまで全く原因不明とされてきた膠様滴状角膜変性症という最も重篤な遺伝性角膜変性症患者の原因遺伝子座が,第一染色体短腕にあることを発見するに至った(AmJ Hum Genet,1998.)。網膜疾患に関しては,現在のところ症例を集積している段階で,遺伝子解析を施行するに至っていない。これまでに,網膜色素変性症および類縁疾患を約100家系から染色体DNA抽出用の採血に協力いただいた。1.角膜変性症の分子遺伝学(1)ケラトエピセリン関連角膜変性症大阪大学医学部附属病院を受診し,遺伝子解析の承諾を得た角膜変性症患者92家系の原因遺伝子解析を行った。ケラトエピセリンの124番目のアミノ酸のアルギニンがヒスチジンに変異する。(R124H)アベリノ型が最多で62家系,格子状角膜変性症I型(R124C)と格子状角膜変性症II型(P501T)が10家系ずつ存在した。その他R555Wの変異を持つ顆粒状角膜変性症が6家系,非定型的な格子状角膜変性症(L527R),ライスビュックラーズ角膜変性症(R555Q,R124L)が1家系ずつ発見した(Cornea,2000 in press)。このうち,124番目のアルギニンがロイシンに変異した症例は,1919年に報告されたオリジナルタイプのライス・ビュックラーズ角膜変性症の原因遺伝子であることが判明した。(2)膠様滴状角膜変性症膠様滴状角膜変性症は,日本人特有の最も重篤な角膜変性症である。我々は,この変性症の原因遺伝子座が第一染色体短腕に存在することを発見し(Am J Hum Genet 1998),その後,原因遺伝子がM1S1であることを,つきとめた(Nature Genetics 1999)。初期病変の確定診断や将来の遺伝子治療に有用であると考えられた。2.遺伝性網膜疾患の原因遺伝子検索X連鎖性若年性網膜分離症は,車軸状の黄斑分離や周辺部の網膜剥離をおこす遺伝性網膜ジストロフィで,若年より視力低下を来す疾患である。8家系の患者の原因遺伝子解析をおこない,すべての家系で,XLRS1遺伝子上に原因遺伝子変異を同定した(Archives of Ophthalmology,2000)。(2)網膜色素変性症については,約100家系の染色体DNAを抽出し,解析中である。
古文書学の再構築―文字列情報と非文字列情報の融合―

本研究では、室町時代の幕府発給文書に焦点を絞り、古文書がその「もの」として有する料紙などの非文字列情報と、古文書の上に書かれた文字列情報との間に、どのような有機的関連性があるのかを検討した。具体的には透過光を用いた古文書の顕微鏡撮影などによって、不純物をきれいに除去した紙と不純物の残る紙、わざと米粉を入れた紙と入れなかった紙に大別できること、その二つの組み合わせから、4種類の料紙に分類できることを確定した。これら4種類の紙が、それぞれ文字列情報としてどのような古文書に使用されているかの確定にまでは至らなかったが、一定の見通しを得ることはできた。本研究は「古文書学の再構築ー文字列情報と非文字列情報の融合ー」と題し、古文書上に書かれ、多くの場合活字化されて歴史学の「史料」として活用されている文字列情報と、和紙としての古文書そのものが本来有する非文字列情報とを融合した、新たなる古文書学を提唱するために、古文書学とアーカイブス学(文書保存学)との対話の可能性を探ることを目的とする。上記の目的を達成するため、平成24年度はまず5月に、USBカメラとミクロメータースコープを組み合わせた顕微鏡デジタルカメラを購入し、これを用いて6月3日と9月34日に京都市で古文書調査と研究会を実施し、25年の3月910日に米沢市で展示見学会と研究会を実施した。6月の調査では、東寺宝物館所蔵東寺文書のうち、上島有の提唱する第I類の料紙を顕微鏡で撮影したところ、その中にわずかな墨痕が認められることから、これが再生紙である可能性を発見した。次いで9月の調査では、京都府立総合資料館所蔵東寺百合文書のうち、同じく上島の提唱する第I類第IV類の料紙を顕微鏡で撮影したところ、第II類と第IV類には米粉の添加が認められるものの、第I類と第III類には認められず、また第III類と第IV類には非繊維物質(柔細胞)の含有が認められるものの、第I類と第II類には認められないことが判明した。これらの成果に基づき、9月の研究会では岡野友彦が「あらためて「宿紙」とは何か」という研究報告を、25年3月の研究会では高島晶彦が「古文書料紙の自然科学的手法による調査・研究ー東寺百合文書料紙の検討ー」という研究報告を行い、併せて米沢市上杉博物館でコレクション展「上杉家文書国宝への道ー修復と紙の世界ー」展を拝観した。これらの調査・研究を通じて、上島の提唱する第I類第IV類の科学的区別について、一定の見通しを得ることができた。本研究は「古文書学の再構築ー文字列情報と非文字列情報の融合ー」と題し、古文書上に書かれ、多くの場合活字化されて歴史学の「史料」として活用されている文字列情報と、和紙としての古文書そのものが本来有する非文字列情報とを融合した、新たなる古文書学を構築するために、古文書学とアーカイブス学(文書保存学)との対話の可能性を探ることを目的とした。上記の目的を達成するため、最終年度に当たる平成25年度には、7月31日と9月17日に京都府立総合資料館で東寺百合文書の調査を、また12月2223日には京都で報告書論文集作成に向けた研究会を実施し、26年3月にはこれらの成果を載せた報告書『古文書学の再構築ー文字列情報と非文字列情報の融合ー』(以下『報告書』と称する)を刊行した。7月と9月の調査では、京都府立総合資料館所蔵東寺百合文書のうち、足利将軍家発給文書の正文60通を熟覧し、その内、裏打ち等が施されていない11通について、顕微鏡撮影等による料紙分析を行った。その調査結果は『報告書』に高島晶彦「古文書料紙の自然科学的手法による調査・研究ー東寺百合文書料紙の検討ー」として発表した。また12月の研究会では、新見康子「東寺所蔵学衆方評定引付の伝来と現状について」、花田卓司「南北朝期における守護・大将発給安堵状」、神野潔「足利尊氏・直義の「祈祷御教書」について」、生駒哲郎「足利尊氏発願一切経の特徴について」、岡野友彦「尊氏を高氏と表記すること・再論」という5つの研究報告を行い、上記の高島論文ならびに漆原徹「相良家文書にみる足利尊氏の「御判紙」について」と併せて、7本の論文を『報告書』に収録することができた。本研究は「古文書学の再構築ー文字列情報と非文字列

情報の融合ー」と題し、古文書上に書かれ、多くの場合活字化されて歴史学の「史料」として活用されている文字列情報と、和紙としての古文書そのものが本来有する非文字列情報とを融合した、新たなる古文書学を提唱するとともに、古文書学とアーカイブス学(文書保存学)との対話の可能性を探ることを目的とする。上記の目的のため、7月2324日に伊勢市で、11月2324日に京都市で、24年の3月2224日には東京で、調査と研究会を実施した。7月の伊勢での調査では、神宮徴古館所蔵文書の閲覧と、今後の研究の進め方についての打合せを行い、11月の京都での調査では、東寺宝物館所蔵東寺文書の熟覧と、花田卓司「「国宝東寺百合文書の魅力」を読む」、神野潔「「かたまり」・「かさなり」と『熊谷家文書』」という二本の研究報告を行った。また3月の東京での調査では、国立公文書館内閣文庫所蔵「徳川家判物并朱黒印」の熟覧を行うとともに、上島有による「国立公文書館内閣文庫所蔵『徳川家判物并朱黒印』について」という研究報告を行った。これらの調査・研究を通じ、上島有が提唱している第I類第VII類という料紙の区別について、研究メンバー全員の共通認識を得ることができた。また同じく上島が提唱する「かたまり」「かさなり」論についての共通認識を得るとともに、今後の研究の進め方について、一定の見通しを立てることができた。交付申請に際し、私たちは京都府立総合資料館所蔵の東寺百合文書に収められる室町幕府文書を素材として研究を進める予定であった。しかし、交付の決定を受けた平成23年度に入り、特に重要文化財指定を受けた古文書については、その保存の観点から、熟覧・撮影の機会が限られることが判明した。そこで東寺宝物館所蔵の東寺文書などへと調査の対象を切り替えたところ、平成24年度の後半に入り、改めて京都府立総合資料館の協力が得られることとなった。素材とする研究対象が二転したことで、研究計画に若干の遅れが出てしまったが、本来予定していた研究対象に戻って来ることができたとも言える。また「和紙としての古文書そのものが本来有する非文字列情報」の中で、特に難解かつ重要な料紙についての研究が、顕微鏡デジタルカメラを用いた科学的手法として急速に発展していたため、適切な顕微鏡デジタルカメラの購入も含め、その研究手法に追いつく必要があり、本来の目的である「文字列情報との融合」、すなわち料紙と古文書様式との有機的関連性にまで進めなくなっていたことも、若干の遅れが出てしまった原因の一つと言える。しかし交付の決定を受けた平成23年度に入り、特に重要文化財指定を受けた古文書については、その保存の観点から、熟覧の機会が限られ、必ずしも京都府立総合資料館の全面的な協力が得られないことが判明した。そのため私たちは、神宮徴古館・東寺宝物館・国立公文書館など、研究メンバーの熟覧の許可が得やすい機関所蔵の古文書へと研究対象を変更し、23年度の調査を行ってきた。当初の予定から、素材とする研究対象を大きく変更したということで、研究計画に若干の遅れが認められるが、残りの二年間で、研究目的は充分に達成可能なものと考えている。平成24年度までの調査・研究により、近年急速に進歩した顕微鏡デジタルカメラを用いた料紙研究の手法を学習し、またその手法によって上島有の提唱する第I類第IV類の科学的分類がある程度可能となり、さらに京都府立総合資料館の協力も得られることとなったので、最終年度となる25年度は、京都府立総合資料館所蔵の東寺百合文書の中から、室町将軍家の御判御教書や寄進状などといった、一定の様式の古文書を、一定の年代に限って抽出し、その料紙を科学的に分析することで、古文書の様式(文字列情報)と古文書の料紙(非文字列情報)にどの程度の有機的関連性があるのか、明確にしていこうと考えている。
IAPタンパク質分解による細胞死制御機構の解明

IAP分解制御遺伝子群を同定するために、申請者はショウジョウバエのゲノムの一部を欠く染色体欠失系統を用いた網羅的なスクリーニング法を採用した。これは、ショウジョウバエ個体内の生理的遺伝子量を半減させるという機能欠失法をベースにしており、欠失系統個体内での細胞死誘導時における表現型の変化を観察することで、生理的な細胞死制御遺伝子をスクリーニングすることが出来る優れた手法である。まず、IAP分解依存性細胞死実行遺伝子であるReaperを複眼特異的なプロモーター(GMR)制御下で発現させたトランスジェニックフライ(GMR-Reaper)準備した。このReaper強制発現系統は複眼にReaperが発現することで、過剰な細胞死を誘導されて複眼のサイズが縮小する。この系統とゲノムの80%以上をカバーする既存の染色体欠失系統を交配し、その子供の複眼を観察すると、欠失領域にIAP分解依存性細胞死に関する1.促進・実行に関与する遺伝子が含まれる場合は複眼サイズの縮小が抑制され、2.抑制に関与する遺伝子が含まれる場合は複眼サイズがさらに縮小する。この観察を行い非常に効率良く機能欠失系統のスクリーニングを実行した。また、さらに狭い領域を欠失した染色体欠失系統を用いて、細胞死制御遺伝子を含む候補領域を絞り込み、その絞り込んだ領域に含まれる新規のIAP分解制御遺伝子群の同定を試みた。既にゲノムの80%以上をカバーする既存の染色体欠失系統のスクリーニングを終了し、現在までに15個のIAP分解制御因子の候補を抽出することに成功している。候補因子のうち1つであるAPTX7はほ乳類でも保存されたキナーゼをコードしておりIAP分解能を持つことを明らかにした。