hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
嚥下障害を惹起させる義歯および口腔内組織の要因に関する検討

我々の日常生活においてQOLにもっとも解りやすい形で関連するのは「食生活の質」であると考えられるが,嚥下障害により満足に食物を摂取できない高齢者が数多く存在している.嚥下障害の原因の一つとして挙げられているのが嚥下機能の低下であるが,咽頭部の神経および筋の障害によるものと考えられている.しかし,食物が口腔内に接取されると,まず口腔内組織の働きにより食塊にされた後,咽頭に送り込まれる.このいわゆる「口腔期」においては舌はもちろんのこと,口唇も重要な働きをしており,これらの組織の機能の低下は嚥下機能の低下にもつながる.我々は発音機能の評価法であるディアドコキネシス(単音の急速反復法)と,舌の口蓋への接触圧を計測した.その結果,〔パ〕,〔カ〕,〔タ〕の単音の発音時間に若年者群,高齢者義歯装着群,非装着群に有意差はなかったが,三音とも若年者より義歯非装着群のほうが発音間隔が延長することがわかった.特に舌を調音体として発音する〔タ〕においてその差が最も著名であり,加齢による影響が示唆された.また,舌と口蓋の接触圧については,若年者群と比較して高齢者義歯装着群の最大舌圧は有意に小さかった.また,空口嚥下時の舌骨上筋群の筋放電開始から舌接触開始までの時間および最大舌圧までの時間は,高齢者義歯装着群で遅れる傾向にあったが,舌接触開始から最大舌圧間での時間は,両群に有意差は認められなかった.以上の結果より,加齢が嚥下機能へ影響することが示唆されたが,その全貌を解明するには至っておらず,さらなる検討を加える予定である.我々の日常生活においてQOLにもっとも解りやすい形で関連するのは「食生活の質」であると考えられるが,嚥下障害により満足に食物を摂取できない高齢者が数多く存在している.嚥下障害はさらに誤嚥の可能性を含んでおり,誤嚥に伴う肺炎の問題も指摘されている.よって嚥下障害の予防と治療は重要なテーマである.嚥下障害の原因の一つとして挙げられているのが嚥下機能の低下であるが,咽頭部の神経および筋の障害によるものと考えられている.しかし,食物が口腔内に摂取されると,まず口腔内組織の働きにより食塊にされた後,咽頭に送り込まれる.このいわゆる「口腔期」においては舌はもちろんこと,口唇も重要な働きをしており,これらの組織の機能の低下は嚥下機能の低下にもつながる.一方、咀嚼機能回復に必要な義歯に適応できず、満足に食事を摂れない高齢者は多く、その原因として舌機能の低下が挙げられる.今回、発音機能の評価法であるディアドコキネシス(単音の急速反復法)と舌の口蓋への接触圧を計測し高齢者の舌機能の簡便な評価法となりうるかを検討した.その結果,若年者群、高齢者義歯装着群、非装着群それぞれにおいて〔パ〕〔カ〕〔タ〕の単音の発音間隔に有意差はなかった.しかし、三音とも若年者より義歯非装着群の方が発音間隔が有意に延長した.特に舌を調音体として発音する〔タ〕においてその差が著名であり、加齢による影響が考えられた.舌と口蓋の接触圧には若年者群と高齢者群との間に有意差はなく、接触圧とディアドコキネシスの間にも関係は認められなかった.今後、被験者を増やし、咀嚼機能との関連を含め詳細な検討を加えていく予定である.我々の日常生活においてQOLにもっとも解りやすい形で関連するのは「食生活の質」であると考えられるが,嚥下障害により満足に食物を摂取できない高齢者が数多く存在している.嚥下障害の原因の一つとして挙げられているのが嚥下機能の低下であるが,咽頭部の神経および筋の障害によるものと考えられている.しかし,食物が口腔内に接取されると,まず口腔内組織の働きにより食塊にされた後,咽頭に送り込まれる.このいわゆる「口腔期」においては舌はもちろんのこと,口唇も重要な働きをしており,これらの組織の機能の低下は嚥下機能の低下にもつながる.我々は発音機能の評価法であるディアドコキネシス(単音の急速反復法)と,舌の口蓋への接触圧を計測した.その結果,〔パ〕,〔カ〕,〔タ〕の単音の発音時間に若年者群,高齢者義歯装着群,非装着群に有意差はなかったが,三音とも若年者より義歯非装着群のほうが発音間隔が延長することがわかった.特に舌を調音体として発音する〔タ〕においてその差が最も著名であり,加齢による影響が示唆された.また,舌と口蓋の接触圧については,若年者群と比較して高齢者義歯装着群の最大舌圧は有意に小さかった.また,空口嚥下時の舌骨上筋群の筋放電開始から舌接触開始までの時間および最大舌圧までの時間は,高齢者義歯装着群で遅れる傾向にあったが,舌接触開始から最大舌圧間での時間は,両群に有意差は認められなかった.以上の結果より,加齢が嚥下機能へ影響することが示唆されたが,その全貌を解明するには至っておらず,さらなる検討を加える予定である.
ヒトゲノム時代における科学教育のあり方とその具体化に関する基礎的研究

学校教育における教育課程やその内容については,国や社会が必要とする人物像を描き,その育成を図るという形で決定されてきている。とはいえ具体的には,伝統的な教育実績を受け継ぐことが中心となっており,新しい分野や内容を組み入れていくことは非常に難しい状況にある。この状況は,自然科学教育において,深刻な問題を発生させている。つまり,戦後,自然科学が急速に発展し,その成果が日常生活に活用されるようになった現在,学習内容だけでは日常生活にごく普通に用いられている機器や食品を話題にできないようになっているのである。言い換えれば,日常生活で必要な科学的知識が学校教育レベルを越えてしまっているのである。この状況を改善しなければ,自然科学に対する正常な理解やその充実が図れない。本研究ではこの状況の改善のために,遺伝子工学を取り上げ,学校教育段階でのその組み込みを検討した。ただこの分野の成果は,単なる自然科学の知識として学習するという単純なものではない。そこで自然科学教育だけではなく,倫理教育等を含めた形で検討を行った。その結果,小学校や高等学校の実践を通して現在の理科教育の中にゲノムやクローンといった遺伝子工学がもたらした知識の組み込み,或いはDNAなどの実験教材の作成は可能であることが判明した。また,先端科学の成果をどのように市民が評価するかについての教育は,その方向性の段階から十分に議論する必要性が残っていることも明らかにした。近年、自然科学が急速に発達し、その応用的な技術が社会や市民の生活に非常に大きな影響を与え始めている。特に、遺伝子操作やゲノム分析等を駆使する技術は産業面のみならず、医療面での活用が広がり、市民生活の改善に役立てられている。しかし、それらの技術がもたらす功罪については、十分な解析がなされたとは言い難く、様々な形での議論が続いている。これら自然科学の進歩をどのような形で社会に還元すべきかは、これからの社会では常に求められる判断でもある。このためには科学の進歩に関する知識が一般市民に一定レベル以上獲得されなければならない。この視点から言うならば、自然科学の進歩を見据えた学校教育のあり方についての検討が幅広く継続的に行われる必要がある。そこで、本研究では、「遺伝子」に焦点を当て、ゲノム分析や遺伝子操作等を学校教育、特に科学教育の中に組み込むべきかを追究したいと考えた。本年度はその基礎的な調査段階と位置づけ、現行の理科学習の小学校から高等学校までの順序性と広がりを改めて調査した。この結果を歴史学や倫理学等を専門とする研究分担者と共有するために学習会を開き、課題の抽出に務めた。さらに、小学校レベルではどの程度の内容が学習可能なのかを探るために、小学校6年生を対象として「クローン人間」を学習材とした授業を行った。この実践の分析はまだ十分に行っていないが興味・関心の喚起や生活への技術の応用等についての児童レベルでの思考の喚起などは行えるのではないかとの感触を得た。今後は、これらの成果とより多くの実践を通して、目標にせまりたい。
メン羊後追い放牧によるウシ放牧草地の牧草季節生産性の平準化

東北地方の肉牛の飼養形態は,夏山冬里方式が主流であり,これを実現するために山間部に多くの大規模な公共育成牧場が造成された。このような公共育成牧場では,草地をいくつかの牧区に区切り,数十頭単位の牛群で輪換放牧していることが多い。しかしここの放牧頭数は,年や季節によって変動したり,放牧の開始時期が遅くなってしまい,牧草の生産量が菜食量よりも多すぎて,牧草が過剰になってしまう。そのためこのような牧場では、ウシの放牧だけでは放牧強度が不十分な放牧地に対して,ウシを放牧した後にメン羊を後追い放牧することによって,スプリングフラッシュによって過剰になる牧草量をコントロールし,牧草の季節生産性を平準化しようとしている。青森県十和田市における牧草の現存量は,6月中旬から急増し,7月下旬に最大値となった。この間の牧草の生長量は,50kg/ha/dayから100kg/ha/dayへと急増していた。これだけの牧草生産量を採食させるためにはかなりの放牧頭数が必要であるが,公共牧場では畜産農家からの預託牛の減少にともない,放牧頭数が減っている。秋田県森吉町の公共牧場で植生をしたところ,地形が平坦で管理舎に近い牧区は,よく維持され高密度短草型で雑草の侵入も少なかったが、山頂付近の牛の移動が困難で傾斜がきつい牧区では,裸地が多く雑草の侵入が目立っていた。このような放牧地での牧草管理指標として以下の点を明らかにした。(1)牧草緑部現存量が4,000kg/haになる前にウシの放牧を開始し,少なくとも2,000kg/haまで放牧する。(2)その後メン羊を後追い放牧するが,メン羊はウシよりも部位に対する選択が多いので,茎部を残させないようにする。(3)放牧後の再生牧草種のマメ科を多くするにはウシの放牧強度を,イネ科を多くするにはメン羊の放牧強度を,それぞれ高めてコントロールする。山間部の公共牧場の現況青森県や秋田県の公共牧場を対象としたが,その中でも秋田県森吉町で最も詳細に調査した。この地域は,古くから牛馬の放牧地として有名であり,林間放牧が行われてきた。そのような歴史的な背景の中で公共牧場が造成されたが,近年では放牧頭数が減少しており,放牧地よりも草地の保健保養機能を重視した利用への転換が迫られている。平成7年度には,総面積425haを約19haで22の牧区に区切り,6月1日からの4か月半に,成牛203頭と子牛106頭を放牧していた。各牧区へは,成牛を約50頭ずつ子牛と共に4つの牛群に分け,平均12日間ずつで牧区を移動する輪換放牧を行ったいた。ここの植生は,5草種の牧草を含む20種類が確認された。牧場全体の積算優占度の平均値では,牧草種が25%から85%の間でいずれも高い値を示したが,牧区ごとに詳細に調べるとアザミやエゾノギシギシ,スゲなどが優占しているところもあった。また放牧圧の弱い牧区では,オ-チャードグラスの枯死個体が多くみられ,草地が荒廃していた。牛とめん羊の採食特性のちがい大学付属農場において,放牧めん羊の採食部位などについて調査した。

めん羊は,放牧初期には葉よりも茎を,雑草よりも牧草をより多く採食し,選択性が牛よりも強かったが,放牧日数の経過と共に牧草の低い部位まで採食するようになり,雑草の採食量も多くなった。再生したきた群落には枯死部が少なく,とくにシロクローバの分げつ数の増加が特徴的であった。東北地方の肉牛の飼養形態は,夏山冬里方式が主流であり,これを実現するために山間部に多くの大規模な公共育成牧場が造成された。このような公共育成牧場では,草地をいくつかの牧区に区切り,数十頭単位の牛群で輪換放牧していることが多い。しかしここの放牧頭数は,年や季節によって変動したり,放牧の開始時期が遅くなってしまい,牧草の生産量が採食量よりも多すぎて,牧草が過剰になってしまう。そのためこのような牧場では,ウシの放牧だけでは放牧強度が不十分な放牧地に対して,ウシを放牧した後にメン羊を後追い放牧することによって,スプリングフラッシュによって過剰になる牧草量をコントロールし,牧草の季節生産性を平準化しようとしている。青森県十和田市における牧草の現存量は,6月中旬から急増し,7月下旬に最大値となった。この間の牧草の生長量は,50kg/ha/dayから100kg/ha/dayへと急増していた。これだけの牧草生産量を採食させるためにはかなりの放牧頭数が必要であるが,公共牧場では畜産農家からの預託牛の減少にともない,放牧頭数が減っている。秋田県森吉町の公共牧場で植生を調査したところ,地形が平坦で管理舎に近い牧区は,よく維持され高密度短草型で雑草の侵入も少なかったが,山頂付近の牛の移動が困難で傾斜がきつい牧区では,裸地が多く雑草の侵入が目立っていた。このような放牧地での牧草管理指標として以下の点を明らかにした。(1)牧草緑部現存量が4,000kg/haになる前にウシの放牧を開始し,少なくとも2,000kg/haまで放牧する。(2)その後メン羊を後追い放牧するが,メン羊はウシよりも部位に対する選択が強いので,茎部を残させないようにする。(3)放牧後の再生牧草種のマメ科を多くするにはウシの放牧強度を,イネ科を多くするにはメン羊の放牧強度を,それぞれ高めてコントロールする。
胎児胸腺由来幼若造血幹細胞の純化とその株化及びその多能性分化能の解析

Abelsonマウス白血病ウイルス(AーMuLV)温度感受性変異株にて確立した胎児胸腺由来幼宿造血細胞株C10ー7,42はILー1刺激にてIーA^-Mφ中に分化し、T細胞の増殖を支持する。新たに確立した分化前のC10ー7に対するモノクロナル抗体を3Fー7A1を用い、上記細胞の正常組織でのcounterpartの存在を検討した。胎生期胸腺ではCD4^-CD8^-細胞群の3Fー7AI陽性細胞の頻度は胎生14,15ー16,17日でそれぞれ3.3,0.6,0.2%と急激に減少し成熟胸腺では認められなかった。これらの細胞群は比較的大きい芽球様細胞であることも示唆された。胎生期の主要な造血組織である肝組織における3Fー7AI陽性細胞の頻度は胎生14,15ー16,17日で0.5,0.1,1.6%と胎生15ー16日で一過生の減少が観察された。胎生14日胸腺では肝蔵より6.6倍多い事実はこの時期の胸腺中CD4^-CD8^-3F7ーAI^+群が血流を介して各組織に均等に分布しているものでないことを示唆する。一方県リンパ球胸腺へのクロ-ン42の移入により形態的にマスト様細胞が産生された。この細胞を株化し性状をFcεRI遺伝子発現にて解析した。その結果FCεRIβ鎖遺伝子の発現が認められ機能的にもマスト細胞であることが確認された。一方AーMuLVproviral DNAの解析結果より得られたマスト細胞株はAーMuLVによって株化されたことが判明したものの親株である42とは異なるproviral DNAの挿入部位を有しコピ-数の減少も認められた。この結果42が分化する過程でproviral DNAが欠失し新たに挿入されたのか、無リンパ球胸腺作製過程中に残留したマスト細胞あるいはその前駆細胞が42の産生するAーMuLVにより株化されたのか杏かにつき今後検討する必要が残された。細胞株レベルで観察された胎児胸腺非リンパ球前駆細胞活性の生理学的意義に関する検討が必要であるが3Fー7AI抗体を用いた解析より絶対数そのものが非常に少数であることが推察され単離精製にはCD4^-CD8^-3F7ーAI^+細胞群の成長因子等の検討を含めて新たな工夫が必要であると考えられた。
力学系理論における関数解析的方法の研究

力学系理論やエルゴード理論における関数解析的な手法の研究を行った.双曲的または部分双曲的な力学系において,系に適合した相空間上の関数空間を調和解析の方法で構成し,転移作用素の作用がその関数空間上で良いスペクトル的な性質を持つことを示した.応用として,特に拡大的な半流や負曲率多様体上の測地流について,Ruelle-Pollicott共鳴や力学系のゼータ関数の解析的な性質について精密な結果を得た.本研究の目的は力学系理論における関数解析的な手法,特に超関数やフーリエ解析を用いた方法について研究することである.基礎理論を構築するとともに,その応用として「相関の減衰」,「部分双曲的力学系のエルゴード的性質」や「力学系のゼータ関数」などの関連する力学系の課題を研究する.基礎理論については非等方的ヘルダー・ソボレフ空間をより一般化した(超)関数の空間について考察を進める.また,相関の減衰については特に双曲的な連続力学系の場合について深く研究し,セルバーグの負定曲率閉曲面の測地流についての結果に対応する結果を示し,さらにそれを一般化することを目標とする.また,部分双曲的な力学系の物理測度について,生成的な条件の下で,その一般化した意味での特異台の構造についての研究を進める.特に, Shubによる安定エルゴード性についての予想を肯定的に解決することを目指す.さらに,九州大学および日本国内における力学系理論研究の基盤を整えることは今後の研究の持続的な発展を考える上で重要であり,若手研究者の支援と他分野の研究者の交流を進める.力学系理論やエルゴード理論における関数解析的な手法の研究を行った.双曲的または部分双曲的な力学系において,系に適合した相空間上の関数空間を調和解析の方法で構成し,転移作用素の作用がその関数空間上で良いスペクトル的な性質を持つことを示した.応用として,特に拡大的な半流や負曲率多様体上の測地流について,Ruelle-Pollicott共鳴や力学系のゼータ関数の解析的な性質について精密な結果を得た.本研究は力学系のエルゴード的性質の研究に関数解析的な方法を応用するというものである.初年度である本年度はこれまで得られていた離散力学系についての結果をまとめて公開するとともに,より本質的な困難を伴う連続力学系の場合にその結果がどのように拡張されるかを考察した.離散力学系についてはこれまでBaladi(CNRS, France)と共同研究を進めてきたが,その結果を論文「Dynamical determinants and spectrum for hyperbolic diffeomorphisms」(preprint, Math.ArXiv DS/0606434)としてまとめた.主な結果はアノソフ微分同相写像のような一様双曲的な離散力学系について,引き戻し作用素またはその双対であるペロン・フロベニウス作用素の非等方的ヘルダー・ソボレフ空間と呼ばれる関数空間への作用を考察し,その本質的スペクトル半径について写像の微分可能性と双曲性の強さによる精密な評価を与えるものである.さらにこの評価から力学系のルエル・ゼータ関数の有理型関数としての拡張についての良い評価を得た.これらは解析的なアノソフ写像についてRughやFriedによって得られていた結果の拡張になっている.一方,連続力学系についてはアノソフ流について直接考察することは難しいことから,まずアノソフ流の単純化されたモデルとしてこれまでも研究されてきた円周上の拡大写像の懸垂半流について考察して次のような結果を得た:ある非等方的ソボレフ空間についてその上のペロン・フロベニウス半群の生成作用素の本質的スペクトルは実部が最小拡大率の対数の半分以下になるような左半空間に含まれる.また流れのゼータ関数は実部が最大拡大率の対数の半分以上になる右半空間に有理型に拡張できる.これらの結果は既にプレプリントとして公表した.また,今後の研究の基盤とするため計算機の環境を整え,力学系研究集会(2006年度1月6日-9日,東京大学)を開催し力学系の研究の交流を図った.本年度は負曲率多様体上の測地流などを含むアノソフ流のクラスである接触アノソフ流について研究を進めた。結果としてそのようなアノソフ流に対する転移作用素がある超関数のなすヒルベルト空間上で擬コンパクトというスペクトル的な性質を満たすことを示した。さらにそのときの本質的スペクトル半径がアノソフ流の不安定部分空間上の体積の拡大率の-1/2乗で評価できることを示した。この成果はこれまでDolgopyatなどによる相関の減衰の評価を大幅に改良するものである。この成果を2月にマルセイユで開催された国際研究集会"FROM DYNAMICALSYSTEMS TO STATISTICALMECHANICS"での連続講演で証明の概略を含めて発表した。現在、結果を論文"Quasi-compactness of transfer operators for contact Anosov flows"として取りまとめて、本年度中に公開を予定している。さらに昨年度の研究で得られていた円周上の拡大写像の懸垂流に対するゼータ関数についての結果を接触アノソフ流に対して拡張できることを確かめた。また、九州大学において力学系についてのセミナーを九州大学における分担者である新居、石井および岩崎教授とともに立ち上げ、国内外から優秀で特徴のある研究を行っている研究者を招いて研究情報の交換を行った。さらに1月に日本大学軽井沢研修所(長野県)において国内の力学系研究者を集めて研究集会を行った。これらは本研究課題の研究を推進するとともに、研究成果を広く知らせるためにも非常に有意義であった。

昨年度の研究では,接触アノソフ流(特に,負曲率多様体上の測地流)に対するKoopman作用素について,適切な関数空間を設定する事で良いスペクトル的な性質(擬コンパクト性)を実現する事に成功した.本年はその成果を応用して,力学系のゼータ関数の零点の分布について研究を行った.まず,スメールによって定義された古典的な力学的なゼータ関数について考えたが,困難にぶつかり思ったような結果が得られなかった.そのことから,ゼータ関数の定義そのものに疑問を持ち,より根本的な部分から考察を進めた.その結果,数理物理学者のGutzwillerとVorosによって定義された半古典ゼータ関数と呼ばれる対象は,例えば負の定曲率多様体の測地流の場合には古典的なゼータ関数と(1/2だけの平行移動を除いて)一致するが,そうでない場合には一般には異なることや物理的な背景を持っている事からより意味のある研究対象である事がわかった.半古典ゼータ関数に対して,昨年度の研究成果を当てはめたところ,接触アノソフ流の特異点(零点と極)は虚軸の近傍の右側には有限個しかない事を示す事ができた.これはセルバーグの古典的な結果の可変曲率の場合へのある種の一般化になっている.さらにセルバーグの結果との比較によれば,虚軸の近傍にある零点は測地流の場合には多様体のラプラシアンの固有値と関係する事が予想される.年度後半はこの点について研究をすすめている.転移作用素の性質を精密に分析する事で虚軸の近傍に無限個の零点が存在し,弱い意味でのワイルの法則をみたす事についてはほぼ解明できたと考えている.また,その過程でそれらの零点に関係した転移作用素の部分の性質を取り出した,「量子馬蹄写像」とでも呼ぶべき対象を考案した.本研究は力学系理論における関数解析的な手法を発展させる事を目標としているが,特に後半(平成20年,21年度)においては負曲率多様体上の測地流とそのゼータ関数に焦点を当てて研究をすすめている.本年度の研究の最も大きな展開は,これまで発展させてきた議論が本格的に半古典解析や量子カオスの問題と関係している事がより明らかになってきたことである.本年度の前半(9月)は前年度に得られた接触アノソフ流の転移作用素のスペクトル的な性質をより精密化するとともに,その情報を(半古典)ゼータ関数に結びつけることを目標に進め,ほぼ予想されていた結果を得る事ができた.しかし,証明は極めて複雑な議論を含み,直感的なアイデアの単純さとはかけ離れたものになっていた.これは今後の発展を考えるともう少し基本的な部分から議論を発展させる必要を示唆していた.そして,技術的な困難がいわゆる半古典解析(または幾何光学)の中心的な課題と結びついている事から,9月から11月に欧州(ローマ,グルノーブル,パリ)において,関係する研究者と議論する事にした.特に,フーリェ研究所(グルノーブル)の数理物理学者のF. Faure氏との議論により,これまで進めて来た議論について半古典解析の議論が非常に有効に働くことがわかった.Fuare氏については3月にも九州大学に招聘して2週間議論を続け,測地流や前量子化アノソフ写像(測地流のモデル)について共同で研究をすすめる事にした.
肺癌・乳癌臨床検体中の腫瘍内浸潤B細胞を用いた腫瘍特異的モノクローナル抗体の作製

SCIDマウスに移植した癌組織はそれ自体が腫瘍内浸潤リンパ球を含んでいる(tumor/TIL graft)。我々はSCIDマウスに移植したヒト癌組織の腫瘍内浸潤B細胞に由来するヒト抗体を検出し、その腫瘍特異性について検討し、以下の結果を得た。1) SCIDマウスの皮下に新鮮ヒト癌組織(肺癌、乳癌)を移植し、2週毎に眼窩採血を行ってマウス血清中のヒトIgGおよびIgMをラテックス凝集免疫測定法にて測定した。移植後2週目よりマウス血清中にヒトIgGが検出され、10週目まで40-1400μg/mlのヒトIgG濃度が維持された。IgMは検出感度以下であった。2)検出されたヒトIgGの特異性を調べるため、高抗体価の得られた症例(肺癌2例、乳癌1例)につき自己腫瘍ならびに周囲正常組織、肺癌細胞株および乳癌細胞株のcell lysateを用いてWestern blotを行った。Westem blotの結果、肺癌移植SCIDマウスでは自己肺癌組織ならびに数種の肺癌細胞株に共通に存在し正常肺組織にはほとんど存在しない51kDa(症例1)および55kDa(症例2)のタンパクを認識するヒトIgGが、また乳癌移植SCIDマウスでは自己乳癌組織ならびに数種の乳癌細胞株に共通に存在し自己正常乳腺組織にはほとんど存在しない50kDaのタンパクを認識するヒトIgGが存在することが示された。未処置SCIDマウス血清、健常人血清では上記蛋白は検出されなかった。以上より、腫瘍内浸潤リンパ球のなかには腫瘍細胞のcomponentを認識するIgGを産生するB細胞が存在する可能性が示唆された。
H-pyloriにおけるコレステリールグルコシドの生態的研究

我々はH.pylori(HP)の膜に細菌・動物には非常に希なコレステリールグルコシド(CGs)が3種大量に存在することを見出し、構造を決定した。3種のCGsはcholesteryl glucoside(CGL;基本構造物)、CGLに脂肪酸が結合したCAG、CGLにphosphatidyl基が結合したCPGである。5%ウマ血清添加液体振盪培養(微好気チャンバー内)での増殖各時期における脂質変化を検討した。中期増殖期菌体ではCGsのうちCGL・CAGは検出されたが,CPGはほとんど検出されなかった。CPGは後期対数増殖期もしくは定常期初期(これらの時期では菌体はラセン状)から検出されはじめ,減衰期(球状化期)が進行するに従い,大幅に増加した。主要リン脂質であるphosphatidyl ethanolamineは減衰期には大幅に減少していた。HPでは後期対数増殖期以降は脂質代謝に大きな変化が起こっており,正常増殖ラセン状菌体としては中期増殖期菌体を用いることが必要と考えられる。HP生菌でのsterolと関連物質の取り込みおよびglucosidesの合成能を検討した。HPはfree cholesterol以外の多くのsterolを取り込みglucosideを合成した。しかし,cholesterol esterは全く取り込まず,CGsも合成しなかった。この結果からHPはsterolの3β-ol構造を認識して取り込むと考えられた。さらに3β-ol構造を持つがsterolの骨格部分が開裂しているcholecalciferol(Vitamin D3)を用いて検討した。HPはVitamin D3を取り込んだが,glucosideは合成しなかった。従って,HPのsteryl glucosides合成には骨格部分が重要と思われる。また,このVitamin D3はHPに抗菌性を示し,MICは無血清培地では12.5μg/mlであった。我々はH.pyloriの膜に細菌・動物には非常に希なコレステリ-ルグルコシド(CGs)が3種大量に存在することを見出し、構造を決定した。3種のCGsはcholesteryl glucoside(CGL;基本構造物)、CGLに脂肪酸が結合してCAG、CGLにphosphatidyl基が結合してCPGである。今回、まず5%ウマ血清添加液体振盪培養(微好気チャンバー内)での増殖各時期における菌体状況・脂質変化を検討した。H.pyloriは早期対数増殖期(8-12時間培養)では菌体は短いが、後期対数増殖期(24時間培養)では菌体は長くなり、定常期(2日培養)では長い菌体の小凝集塊を形成した。その後、凝集塊は大きくなり、一週間後にはほとんどの菌体は球状化した。脂質は早期・後期対数増殖期ではCPGはほとんど検出されずCGL:CAGはほぼ1:1であり、定常期(我々が現在まで検討してきた菌体)ではCGL:CAG:CPGは約1:2:0.5であった。球状体ではCPGが主要となりCGLは少なく、CGL:CAG:CPGは約1:3:4となった。従って、増殖期の菌体と定常期以降の菌体ではCGsに大きな変化があり、CPGは増殖期ではほとんど産生されておらず、CPGの形成・増加が球状化と関連することが示唆された。また、他の脂質で増殖期と定常期以降の菌体で大きく異なっているものも検出されており、定量を含めて現在詳細に検討中である。Cholesterol(Ch)を含まない無血清培養ではCGsは形成されないことはすでに判明していたが、free Ch添加無血清培養ではCGsは形成された。

しかし、Chester添加ではCGsはほぼ形成されなかった。従って、H.pyloriは外環境にChが存在すると、free Chを選択的に取り込みCGsを形成すると考えられた。我々はH.pylori(HP)の膜に細菌・動物には非常に希なコレステリールグルコシド(CGs)が3種大量に存在することを見出し、構造を決定した。3種のCGsはcholesteryl glucoside(CGL;基本構造物)、CGLに脂肪酸が結合したCAG、CGLにphosphatidyl基が結合したCPGである。5%ウマ血清添加液体振盪培養(微好気チャンバー内)での増殖各時期における脂質変化を検討した。中期増殖期菌体ではCGsのうちCGL-CAGは検出されたが,CPGはほとんど検出されなかった。CPGは後期対数増殖期もしくは定常期初期にれらの時期では菌体はラセン状)から検出されはじめ,減衰期(球状化期)が進行するに従い,大幅に増加した。主要リン脂質であるPhosphatidyl ethanolamineは減衰期には大幅に減少していた。HPでは後期対数増殖期以降は脂質代謝に大きな変化が起こっており,正常増殖ラセン状菌体としては中期増殖期菌体を用いることが必要と考えられる。HP生菌でのsterolと関連物質の取り込みおよびglucosidesの合成能を検討した。HPはfree cholesterol以外の多くのsterolを取り込みglucosideを合成した。しかし,cholesterol esterは全く取り込まず,CGsも合成しなかった。この結果からHPはsterolの3β-ol構造を認識して取り込むと考えられた。さらに3β-ol構造を持つがsterolの骨格部分が開裂しているcholecalciferol(Vitamin D3)を用いて検討した。HPはVitamin D3を取り込んだが,glucosideは合成しなかった。従って,HPのsteryl glucosides合成には骨格部分が重要と思われる。また,このVitamin D3はHPに抗菌性を示し,MICは無血清培地では12.5μg/mlであった。
腸管小胞体ストレスに対する免疫応答と腸炎発症メカニズム解明

腸管上皮のXbp1欠損が小胞体(ER)ストレスを誘発し、マウスにおいて自然発症腸炎が生じることを報告してきた。本研究で、Xbp1欠損がNKG2Dリガンドの一つであるMULT1を誘導し、group1自然リンパ球/NK細胞のNKG2Dを介した細胞傷害を受けることが明らかとなり、Xbp1欠損マウスの自然発症腸炎がこのNKG2D/NKG2Dリガンドを介したものであることを証明した。他の自然免疫細胞として知られる肥満細胞におけるERストレスが炎症や線維化に関与するTNFやAmphiregulinを誘導することも明らかとなった。ヒト肥満細胞株を用いたERストレス刺激実験で、刺激時間依存性にAmphiregulinのmRNAと蛋白発現が誘導されることが確認された。その誘導メカニズムとして、各種核内転写因子のノックダウン実験・クロマチン免疫沈降アッセイ・レポーターアッセイから、ERストレス応答で誘導される核内転写因子ATF4がAmphiregulinの開始コドン0-374bpの領域に存在するATF motifに直接結合することで誘導されることが示唆される結果が得られた。手術標本の解析から、このAmphiregulin陽性細胞数はクローン病の小腸粘膜固有層で有意に高値である結果を得た。液性免疫であるIgAについては、腸管上皮Xbp1欠損がT細胞や炎症、腸内細菌叢非依存的にIgA産生を誘導することを証明した。このIgAは自然発症腸炎においては腸炎保護的に働くことも明らかにした。A.腸管の小胞体(ER)ストレスによる自然免疫リンパ球誘導ERストレス腸管上皮細胞株による自然免疫細胞の活性化にIL-15が関与することが推測されたため、Xbp1ノックダウン腸管上皮細胞株(MODE-K細胞)のIL-15発現を比較検討したが、Xbp1ノックダウン細胞における発現亢進は認められなかった。そこで、Xbp1欠損マウス腸管上皮細胞において発現亢進がみられるMULT1 (NKG2Dのリガンドの一つ)が、自然免疫細胞の誘導や活性化に関与していることが推測されたたえめ、エフェクター細胞としてrecombinant IL2刺激後のNK細胞を、標的細胞としてXbp1ノックダウンMODE-K細胞を用いて細胞傷害アッセイを行ったところ、Xbp1ノックダウン細胞はNKG2Dを介した細胞傷害を受けることが明らかとなった。また、共同研究先であるBrighum and Women's Hospitalの研究室の実験結果から、Xbp1ノックアウトマウスの自然発症腸炎がNK細胞・NKG2Dを介したものであることを、NK細胞depletion実験とNKG2D阻害実験で明らかとなった。他の自然免疫細胞として知られる肥満細胞に対するERストレスの影響を見るため、ヒト肥満細胞株であるLUVA細胞をタプシガルギン刺激して、Amphiregulin発現をqPCRとELISAにて検討したところ、刺激時間依存性にmRNAと蛋白発現が誘導されることが確認された。このAmphiregulinは創傷治癒・線維化に関与すると考えられるために、次年度以降にクローン病病態における役割を明らかとしていく。腸管上皮細胞株であるMODE-K細胞を用いた実験、及び共同研究室(Brigham and Women's Hospital)によるin vivo実験は概ね計画どおりにすすんでいる。しかし、ERストレスの関与した腸炎発症の自然免疫細胞の誘導・活性化経路として想定される樹状細胞の機能解析を試みたが、樹状細胞株・骨髄幹細胞由来樹状細胞の活性化実験を行ったが、現時点ではERストレス下における活性化因子の同定に至らなかった。そこで他の自然免疫細胞として知られる肥満細胞に注目し、ERストレス刺激の影響をqPCRやELISAによる実験を行っている。A.小胞体(ER)ストレスによる肥満細胞活性化2016年度の研究で、ヒト肥満細胞株であるLUVA細胞に小胞体ストレスを誘導すると、Amphiregulin発現が誘導されることが確認された。2017年度研究から、発現誘導は転写レベルで起こっていることが明らかとなったため、その誘導にERストレス応答で誘導される核内転写因子が関わると考えられたため、各種核内転写因子のノックダウン実験い、ATF4が候補蛋白となった。Amphiregulinのプロモーター領域を含むレポータープラスミドを用いたルシフェラーゼアッセイから、開始コドン0-374bpの領域にプロモーター領域が含まれることが示唆された。また、ChIPアッセイからも同領域に存在するATF motifにATF4が直接結合している可能性が示唆された。B.クローン病とAmphiregulin発現コントロールとクローン病切除小腸を用いてAmphiregulinの免疫染色を行ったところ、Amphiregulin陽性の粘膜固有層細胞数がコントロールに比較してクローン病患者では有意に高値を示した。また発現細胞は肥満細胞を含む粘膜固有層内細胞などであった。C.腸管のERストレス下における液性免疫応答2016年度までの研究成果から、腸管上皮特異的Xbp1ノックアウトマウスは腸管で小胞体ストレスが亢進し、自然発症腸炎を有することが明らかとなった。2017年度は共同研究先であるBrighum and Women's Hospitalの研究室の実験結果から、Xbp1ノックアウトマウスでIgA産生が亢進することが明らかとなった。このIgAは自然発症腸炎においては腸炎保護的に働くことが、IgAノックアウトマウスとB細胞ノックアウトマウスなどの実験結果から明らかとなった。

前年度成果報告で予定した、肥満細胞へのERストレス刺激の影響の研究は概ね予定していた実験(siRNA実験、クロマチン免疫沈降、ルシフェラーゼ実験)やクローン病における発現についての研究は行えた。しかし、クローン病サンプルを用いた自然リンパ球解析や可溶性NKG2Dリガンド濃度測定がまだ行えていない。腸管上皮のXbp1欠損が小胞体(ER)ストレスを誘発し、マウスにおいて自然発症腸炎が生じることを報告してきた。本研究で、Xbp1欠損がNKG2Dリガンドの一つであるMULT1を誘導し、group1自然リンパ球/NK細胞のNKG2Dを介した細胞傷害を受けることが明らかとなり、Xbp1欠損マウスの自然発症腸炎がこのNKG2D/NKG2Dリガンドを介したものであることを証明した。他の自然免疫細胞として知られる肥満細胞におけるERストレスが炎症や線維化に関与するTNFやAmphiregulinを誘導することも明らかとなった。ヒト肥満細胞株を用いたERストレス刺激実験で、刺激時間依存性にAmphiregulinのmRNAと蛋白発現が誘導されることが確認された。その誘導メカニズムとして、各種核内転写因子のノックダウン実験・クロマチン免疫沈降アッセイ・レポーターアッセイから、ERストレス応答で誘導される核内転写因子ATF4がAmphiregulinの開始コドン0-374bpの領域に存在するATF motifに直接結合することで誘導されることが示唆される結果が得られた。手術標本の解析から、このAmphiregulin陽性細胞数はクローン病の小腸粘膜固有層で有意に高値である結果を得た。液性免疫であるIgAについては、腸管上皮Xbp1欠損がT細胞や炎症、腸内細菌叢非依存的にIgA産生を誘導することを証明した。このIgAは自然発症腸炎においては腸炎保護的に働くことも明らかにした。現在上記のごとく、他の自然免疫細胞として知られる肥満細胞に注目し、ERストレス刺激の影響を検討している。上記の如く、肥満細胞においてERストレスがAmphiregulinを誘導していることが明らかとなったため、平成29年度以降はその発現誘導メカニズム解明のために、ERストレスで誘導される転写因子であるNK-kB、ATF4やCHOPについて、siRNA実験、クロマチン免疫沈降、ルシフェラーゼ実験を行う予定である。また、クローン病における発現を明らかとすべく、クローン病手術標本を用いて、肥満細胞のAmphiregulin発現とERストレス関連蛋白発現を評価する予定である。現在上記のごとく、他の自然免疫細胞として知られる肥満細胞に注目し、ERストレス刺激の影響と、腸炎への関連を検討している。クローン病サンプルを用いた肥満細胞のより詳細な検討として、単離肥満細胞のマイクロアレイ解析や、肥満細胞ノックアウトマウスやamphiregulinノックアウトマウスを用いた腸炎モデルでの腸炎発症メカニズムを解明することを目標とする。
膵線維化の発症、進展のメカニズムについての研究-膵潅流モデルを用いた実験的検討

本研究の目的は、慢性膵炎および膵線維化の発症、進展のメカニズムをラット膵摘出潅流モデルを用いて、生化学的に解明することであった.1.ラットにアルコール+低蛋白+高脂肪食を12週摂取させ、膵において組織学的に間葉系細胞が増生することを観察できた.2.ラットの胃、小腸、大腸、膵を摘出し、腹部大動脈の中枢側を結紮、末梢側からカニューレを挿入(Aチューブ)、肝動脈および総肝管は肛門部にて結紮し門脈および総胆膵管にカニュレ-を挿入した(V、Pチューブ).Aチューブより潅流液を持続注入し、V、Pチューブより膵液、潅流液を回収した.(膵潅流モデルの作成)3.膵潅流モデルの作成における問題点:(1)膵の完全単離を試みたが、膵に流入する全動脈を結紮し膵組織全体を潅流することは困難であったためin situの実験系となった.(2)潅流液注入速度(圧)の調節が微妙で、注入後短時間で膵組織の浮腫が出現した.(3)Vチューブからの潅流液の回収率は、組織への漏出や血液の混入等により約70%前後と低値であった.(4)Pチューブからの膵液流出は非常に少なく、分泌刺激物質注入後もほとんど反応が認められなかった.(5)アルコール+低蛋白+高脂肪食を摂取させ、膵線維化の前段階の病態群ラットにおいては、栄養状態が極度に不良で膵潅流モル自体の作成が非常に困難であった.以上より、当初期待された研究成果は得られなかった.4.今後のapproach法について:(1)膵完全単離法についての技術の上達および工夫.(2)ラットの栄養状態を悪化させずに膵線維化を惹起できるようなモデル作成の検討等が必要であると考えられる。
肝炎ウイルスと肝癌発生

班としての重要な成果として, 1.Transfection系が確立し, HBVウイルスの増殖とゲノム遺伝情報の解析が画期的に進む可能性が生まれた.2.肝炎ウイルス遺伝子の発現の検討を行い,特に関心が持たれるX遺伝子産物単離と抗体の作製が進むと共に,培養細胞系でのX遺伝子発現により,増殖促進効果を示唆する結果をえた.また肝炎ウイルスエンハンサーと相互作用する蛋白因子についての解析が開始された.3.癌細胞で活性化したがん遺伝子について単離と解析により, lca遺伝子の検討が進んだ.4.組み込み様式の解析を進め, HBV, WHV, DHBVの多くの例で宿主側の再編成を含む複雑な構造をとっていることが示され,組み込み近傍の宿主側DNAの特長についての解析を進めた.5.Transgenic Mouse系の実験が進み,組み込みによる再編成とウイルス遺伝子の発現と効果についての実験が着手された.班では先述の如く肝発癌作用を持つ肝炎ウイルス遺伝子の検索と,活性化される宿主側遺伝子の検索の両方向を中心に進め,各々の分野で新しい知見を得ている.また組み込みの解析は肝細胞の発癌に多段階な過程を想定させており,今後感染から組み込み,及び再編成と癌の進展についての検討が必要である.これらのウイルス発癌研究の基礎となるのはウイルス増殖過程に関与する複製,転写,遺伝子蛋白の機能の分子的解析であり, Transfection系等により基礎的解析を更に進める.班としての重要な成果として, 1.Transfection系が確立し, HBVウイルスの増殖とゲノム遺伝情報の解析が画期的に進む可能性が生まれた.2.肝炎ウイルス遺伝子の発現の検討を行い,特に関心が持たれるX遺伝子産物単離と抗体の作製が進むと共に,培養細胞系でのX遺伝子発現により,増殖促進効果を示唆する結果をえた.また肝炎ウイルスエンハンサーと相互作用する蛋白因子についての解析が開始された.3.癌細胞で活性化したがん遺伝子について単離と解析により, lca遺伝子の検討が進んだ.4.組み込み様式の解析を進め, HBV, WHV, DHBVの多くの例で宿主側の再編成を含む複雑な構造をとっていることが示され,組み込み近傍の宿主側DNAの特長についての解析を進めた.5.Transgenic Mouse系の実験が進み,組み込みによる再編成とウイルス遺伝子の発現と効果についての実験が着手された.班では先述の如く肝発癌作用を持つ肝炎ウイルス遺伝子の検索と,活性化される宿主側遺伝子の検索の両方向を中心に進め,各々の分野で新しい知見を得ている.また組み込みの解析は肝細胞の発癌に多段階な過程を想定させており,今後感染から組み込み,及び再編成と癌の進展についての検討が必要である.これらのウイルス発癌研究の基礎となるのはウイルス増殖過程に関与する複製,転写,遺伝子蛋白の機能の分子的解析であり, Transfection系等により基礎的解析を更に進める.
FISH法による癌悪性度判定法の開発

発ガンの過程で複数の遺伝子異常が多段階的に起こり、その蓄積ががんを生物学的にも臨床的にもより悪性の形質獲得へと導く。したがって、既知の癌遺伝子や癌抑制遺伝子の変異に加え、癌抑制遺伝子の存在が推定されている染色体領域の欠失、更に多彩な染色体の過剰変化を検出することで、正確ながん診断が可能となることを意味する。このことからFISH法の技術改良を進め腫瘍に生じたゲノム異常を明らかにし、これらの情報に基づく日常の臨床に応用可能なFISHがん診断法の開発を進めた。頭蓋内腫瘍の一つである髄膜腫(meningioma : MG)の中で、高悪性度群(WHO分類、gradeIII,悪性髄膜腫)において1番染色体短腕(1p)の高頻度欠失を確認し、FISH法による1p欠失判定がMGの悪性度判定に応用可能であることを示した。Comparative genomic hybridization (CGH)法の技術的な標準化をはかり、種々の固形腫瘍、さらに成人性T細胞性白血病(ATL)でのゲノム異常のスクリーニングを行い、新規のゲノム異常を見出し、胃癌において悪性度判定のマーカーに有用である可能性を示した。病理組織学的異型度の確定した乳癌において高頻度の第1番染色体長腕(1q)過剰を見いだし、同領域に乳癌の発生に関わる"優性"のがん関連遺伝子の存在を示し、これが乳癌発症の早期変化であることを明らかにした。本研究によりFISH癌細胞診断法が、乳癌、膀胱癌、神経膠腫(特に稀突起膠腫)、髄膜腫の癌診断に実地臨床で十分に応用できる遺伝情報に基づいた癌診断技術であることを示された。また、従来の方法では決して容易ではなかった、全染色体を対象にしたゲノム異常のglobal assayが可能となり、新規の病型特異的な染色体異常や遺伝子増幅領域の同定、さらに同領域からのがん関連遺伝子の単離への新しいアプローチに期待がもてる。また、その行程で見出されてくる病型や悪性度に関連したゲノム変化の情報が、新たな癌の染色体・遺伝子異常のマーカーとして利用できる可能性が今回の研究でも示された。FISH法の技術改良を行うとともにFISH法により、微量がん細胞の間期核を対象に染色体・遺伝子異常診断法を開発し、FISHによるがん悪性度判定システムを完成させ、実地の臨床に応用可能ながん診断法を確立することを目的に研究を実施した。結果、伸展プロフェーズ染色体、DNAファイバーを材料に高解像FISHゲノム解析システムを確立した。本システムでは、オーバーラップするクローンから染色体レベルの距離にあるクローンまでの配列決定が行え、癌特異的染色体転座切断点や癌抑制遺伝子単離に向けて強力なゲノム解析ツールの一つとなる。さらに、神経膠腫の中で、第1番染色体短腕1p36の欠失がoligodendroglioma(OL)に特異的に出現し、1pにOLの癌抑制遺伝子が存在することを明らかにした。また、乳癌、尿路系腫瘍(腎盂、尿管、膀胱癌)を対象に、針穿刺吸引細胞や尿中に脱落する細胞を材料に日常のがん臨床に応用可能なFISH法がん診断技術を確立することができた。本手技による診断は現状の病理細胞診によるがん診断の精度をはるかに凌ぐものであり、乳癌では、解析全例でがん診断が可能であった。また膀胱洗浄液、自然尿中の細胞を試料に移行上皮癌細胞で第8番染色体長腕の過剰が高頻度に出現することを明らかにし、本異常を指標に尿中の癌細胞を高感度に同定できることを示した。発がんの過程で複数の遺伝子異常が多段階的に起こり、その蓄積ががんを生物学的にも臨床的にもより悪性の形質獲得へと導くことが明らかにされている。これらの知見は、既知の癌遺伝子や癌抑制遺伝子の変異に加え、癌抑制遺伝子の存在が推定されている染色体領域の欠失、更に多彩な染色体の過剰変化を捉えることで、正確ながん診断が可能になる。同時にがん細胞が多段階発がん過程の「どのステップにあるか」を知ることで、その悪性度判定も行える。したがって、がん生検材料や外科切除標本で多彩なゲノムの異常を迅速かつ正確に検出できる染色体・遺伝子診断技術の開発と実地癌臨床への応用に期待が集まる。このことから、(1)FISH法の技術改良を進めながら、種々の固型腫瘍で病型に特異的な染色体欠失、過剰を検出し、がん進展過程における特定染色体異常の出現と生物学的、臨床的がん悪性度との関連を詳細に検討し、これを基盤に(2)微量がん細胞の間期核を対象にした染色体・遺伝子異常診断法を開発し、実地臨床に応用可能な遺伝情報に基づくがん診断法を確立することを目的に研究を行った。結果を以下に記す。(1)脳腫瘍の中で神経膠腫(グリオーマ)は病理組織学的にastrocytoma(AS),oligodendroglioma(OL),ependymoma(EP)の3型に大別される。OLの癌抑制遺伝子が第1番染色体短腕に存在することを明らかにし、その1p欠失地図から共通欠失領域が1p32-1pterであることを明らかにした。さらに、脳腫瘍の中でも髄膜腫(meningioma:MG)で、病理組織学的に悪性度の高い群(WHO分類gradeIII,悪性髄膜腫)で高頻度に1p-を検出し、1pにMGの悪性化に関わる抑制性遺伝子の存在を明らかにした。

(2)ゲノム不安定化の指標となるマイクロサテライト領域の複製時エラー(RER)を解析し、low-grade ASに高頻度のRERを検出した。これに対して、AS gradeIII,IV例やOLでは低頻度であった。この事実から、グリオーマの発生、進展機構が必ずしも多段階的なステップを踏むものではないとの可能性が示唆された。(3)穿刺吸引サンプルを利用したFISH法乳癌細胞診断法を確立した。染色体第1番,11番,17番染色体に特異的なプローブを用いて針穿刺吸引細胞を材料にマルチカラーFISH法で染色体異常の有無を106例の乳腺腫瘤で検討し、乳癌において1,11,17染色体のいずれかの数的異常(aneusomy)を(71)/(74)(95.7%)に検出した。一方、良性腫瘤、葉状肉腫で異常は検出せず、FISH法による乳癌細胞診断が、臨床で実用できる正診率の高い遺伝情報に基づいた癌診断技術であることを示した。(4)乳癌の発生早期に第1番染色体異常が高頻度に出現することを明らかにし、この異常の意義が“1qの量的効果"である可能性を示すとともに、1qに乳癌の優性癌遺伝子の存在を示唆した。発ガンの過程で複数の遺伝子異常が多段階的に起こり、その蓄積ががんを生物学的にも臨床的にもより悪性の形質獲得へと導く。したがって、既知の癌遺伝子や癌抑制遺伝子の変異に加え、癌抑制遺伝子の存在が推定されている染色体領域の欠失、更に多彩な染色体の過剰変化を検出することで、正確ながん診断が可能となることを意味する。このことからFISH法の技術改良を進め腫瘍に生じたゲノム異常を明らかにし、これらの情報に基づく日常の臨床に応用可能なFISHがん診断法の開発を進めた。頭蓋内腫瘍の一つである髄膜腫(meningioma : MG)の中で、高悪性度群(WHO分類、gradeIII,悪性髄膜腫)において1番染色体短腕(1p)の高頻度欠失を確認し、FISH法による1p欠失判定がMGの悪性度判定に応用可能であることを示した。Comparative genomic hybridization (CGH)法の技術的な標準化をはかり、種々の固形腫瘍、さらに成人性T細胞性白血病(ATL)でのゲノム異常のスクリーニングを行い、新規のゲノム異常を見出し、胃癌において悪性度判定のマーカーに有用である可能性を示した。病理組織学的異型度の確定した乳癌において高頻度の第1番染色体長腕(1q)過剰を見いだし、同領域に乳癌の発生に関わる"優性"のがん関連遺伝子の存在を示し、これが乳癌発症の早期変化であることを明らかにした。本研究によりFISH癌細胞診断法が、乳癌、膀胱癌、神経膠腫(特に稀突起膠腫)、髄膜腫の癌診断に実地臨床で十分に応用できる遺伝情報に基づいた癌診断技術であることを示された。また、従来の方法では決して容易ではなかった、全染色体を対象にしたゲノム異常のglobal assayが可能となり、新規の病型特異的な染色体異常や遺伝子増幅領域の同定、さらに同領域からのがん関連遺伝子の単離への新しいアプローチに期待がもてる。また、その行程で見出されてくる病型や悪性度に関連したゲノム変化の情報が、新たな癌の染色体・遺伝子異常のマーカーとして利用できる可能性が今回の研究でも示された。