hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生殖系列キメラを形成するブタ胚性幹細胞株の樹立

胚性幹細胞を介した遺伝子導入による形質転換動物の作出法は、標的遺伝子改変ができることなどから、従来の前核へのマイクロインジェクション法(染色体のどの位置に導入遺伝子が挿入するかコントロールすることがむずかしい)に比べてきわめて有効であり、方法の確立が望まれているか、ブタおにいて研究を進めるためには胚性幹細胞、特に生殖系列キメラを形成する肺性幹細胞の樹立が必要である。本研究では生殖系列キメラを形成する胚性幹細胞の樹立を目的として実験を行ったが、成果は次の通りである。(1)卵母細胞の体外成熟、体外受精、体外発生により、成熟未受精卵、胚盤胞期胚を安定して作出する培養敬を開発した。(2)体外で作出した胚盤胞期胚からマウスの胚性幹細胞と形態の一致する多分化能をもつ細胞株を樹立した。(3)樹立した細胞株は脱出胚盤胞に接着させるとキメラを形成した。(4)胚性幹細胞の維持に必要な生理活性物質(白血病抑制因子誘導体など)を同定した。(5)胚性幹細胞を除核未受精卵に移植する方法を開発し、再構築胚の培養法を考案した。1)ブタ胚性幹細胞株樹立素材の調整卵巣から分離した卵を体外で成熟、受精、発生させ、胚盤胞を効率的に作出するための技術開発を行い、次のような結果を得た。a)卵胞液や血清から卵成熟の促進因子を同定した。b)ブタ卵の成熟とMAPキナーゼの活性化に強い相関を認めた。c)卵成熟にともない周囲の細胞(卵丘細胞)にprostaticsecretory protein(PSP)に低いながらもホモロジーをもつ新しい遺伝子が発現することを認め、卵に対する影響を解析している。d)卵の受精過程をを同期化させる方法を考案した。e)胚の性判別の方法を考案するとともに、発生速度に雌雄差のあることを明らかにした。2)胚性幹細胞を用いた効率的な生殖系列キメラ形成法の開発すでに樹立されているマウスの胚性幹細胞をモデルとして生殖系列キメラ形成法について検討した。a)胚性幹細胞を生殖細胞系列への定方向の分化を誘導する技術開発を目指し、胚性幹細胞表面抗原のフローサイトメトリーによる解析方法を確立した。b)ハンギングドロップによる共培養法を改良し効率的なキメラ形成術を開発した。c)1個の胚性幹細胞を用いて生殖系列キメラを作る技術を開発した。体外成熟/体外受精/体外発生により作出した胚盤胞から、生殖系列キメラを形成し、さらに遺伝子ノックアウトブタの作出に使用しうるようなブタ胚性幹細胞株の樹立を目的として実験を行い、今年度、次のような成果を得た。1)胚様体に胚性幹細胞が存在し、キメラ形成能をもつことを示した。またin vitro分化試験法を開発した。2)卵の体外成熟、体外受精、体外発生により胚盤胞を形成させる培養方法を開発した。3)単精子侵入を高率に誘導する体外受精法を開発した。4)倍地を改良し、脱出胚盤胞を体外で高率に得る方法を開発した。5)脱出胚盤胞をフィーダー細胞上で増殖させることに成功したが、増殖の程度は弱かった。各種フィーダー細胞の影響を解析し、有効な細胞を見つけつつあるが、更なる検索が必要である。7)異種キメラを用いた胚性幹細胞の生殖系列への分化能解析の方法を検討した。8)異種臓器移植開発における胚性幹細胞の役割を明らかにした。胚性幹細胞を介した遺伝子導入による形質転換動物の作出法は、標的遺伝子改変ができることなどから、従来の前核へのマイクロインジェクション法(染色体のどの位置に導入遺伝子が挿入するかコントロールすることがむずかしい)に比べてきわめて有効であり、方法の確立が望まれているが、ブタにおいて研究を進めるためには胚性幹細胞、特に生殖系列キメラを形成する胚性幹細胞の樹立が必要である。(1)卵母細胞の体外成熟、体外受精、体外発生により、成熟未受精卵、胚盤胞期胚を安定して作出する培養系を開発した。

(3)樹立した細胞株は脱出胚盤胞に接着させるとキメラを形成した。(4)胚性幹細胞の維持に必要な生理活性物質(白血病抑制因子誘導体など)を同定した。(5)胚性幹細胞を除核未受精卵に移植する方法を開発し、再構築胚の培養を考案した。
胎土分析による土器および陶器の移動・流通に関する基礎的研究

本研究の中心は、縄文時代以降絶えず存在した物資の交流の中で、とくに土器の移動を明らかにすることにある。その目的のひとつは、生活に密着した土器の動きから人の移動を復原し、当時の文化の伝播の様子を知ることである。本年度の研究は、稲作農耕文化の東日本への伝播の状況を明らかにすることに重点をおいた。従来から弥生時代前期前半には、稲作農耕技術を伴なう文化の東限は、伊勢湾沿岸部と丹後地方とされていたが、近年この地域以東でも、この文化を特徴づける遠賀川式土器が、中部,関東,東北地方で発見されはじめている。とくに東北地方,秋田,青森県下からもこの種の土のルートも注目されはじめている。太平洋沿岸地域を含めて、これら東北地方での遠賀川式土器が、製作技法の模倣から生れたものか、人の手によって運ばれたものかを判別することを土器の胎土の分析からおこなった。これまでに伊豆諸島新島の田原遺跡の遠賀川系土器は、搬入品であり、長野県林里遺跡の遠賀川系土器も、昭和59年科学研究費(奨励研究(A)の成果として、伊勢湾沿岸部から持ち運ばれた土器であることが明らかにできている。本研究では青森県下で出土した遠賀川系土器について製作地の同定を岩石学的分析によっておこなった。その結果三戸市松石橋遺跡や剣吉荒町遺跡出土の土器は、製作技法の模倣による在地の土器であることが判った。一方、八戸市是川中居遺跡の遠賀川系土器のうち、1点だけが搬入品であり、その製作地として日本海沿岸部では、最上川下流域,信濃川中下流域,糸魚川下流域,丹後半島周辺部である可能性が高いことが判明した。このようにして、稲作技術を伴なう弥生文化の東日本への伝播には、大きく2つのルートが認められた。次年度からは、これらの地域の遺跡での検証例を増して、より具体的な姿を復原することに努める。
オーキシン応答因子ARFの生理機能

[目的]ARF(オーキシン応答因子)のモティーフを持つ二つのタンパク質の特徴づけをおこなう。イネの生長を制御するOsARF1、および傷害応答WIPKに相互作用するNtWIF1である。OsARF1はイネ子葉鞘で発現しており、オーキシン情報伝達系に連動した転写因子である可能性が高い。NtWIF1は500アミノ酸からなり、C末端側にWIPK結合領域を、N末端側にARFを持つ転写因子である。それぞれの転写制御の機構などを明らかにし、生長やストレス応答の情報伝達系の解明を目指した。[実績]平成14年度には以下の結果を得た。NtWIF1について(1)転写制御をプロモーターアッセイによって調べた。(2)細胞内局在をGFPを利用して明らかにした。(3)センス組換えタバコを作成した。(4)組換えタバコは常時、ストレス応答遺伝子群を発現していた。(5)大腸菌でタンパク質を大量発現した。(6)オーキシン応答エレメント(AUXRE)に対する結合を調べた。OsARF1について(7)OsARF1を組み込んだトランスジェニックイネを作製した。(8)大腸菌でタンパク質を大量発現した。(9)オーキシン応答エレメント(AUXRE)に対する結合を調べた。
結晶性高分子とグラフト化超微粒子とのナノ複合体の合成と環境応答機能

前年度,申請者は,結晶性ポリマーグラフトカーボンブラックから作成したナノ複合体の抵抗値は,各種溶媒蒸気中で急激に増大し,新規のセンサーとして利用できることを見出した。本年度の研究目的は,結晶性ポリマーグラフトカーボンブラックから作成したナノ複合体による常温で機能する新規ガスセンサー,臭いセンサー,さらに溶質センサーの創製である。その結果,本年度は以下のような研究成果が得られた。1.カーボンナノチューブ表面への結晶性ポリマーの放射線グラフトカーボンナノチューブ表面への各種の結晶性ポリマー,及びブロック共重合体の新規グラフト反応を検討した結果,結晶性ポリマーを吸着させたカーボンナノチューブにγ線を照射することにより,カーボンナノチューブ表面へ容易に結晶性ポリマーをグラフトできることを明らかにした。2.ポリマーグラフト化カーボンナノチューブからのナノ複合体の創製結晶性ポリマーをグラフトしたカーボンナノチューブは容易にマトリックスとなる結晶性ポリマー中へ均一に分散し,ナノオーダーでの複合化が可能であることを明らかにした。3.カーボンナノチューブナノ複合体のセンシング機能カーボンナノチューブナノ複合体のガスセンシング機能を追跡し,結晶性ポリマーの構造やブロック共重合体のポリマー組成及び分子量が,センサー感度に大きな影響を及ぼすことを明らかにした。ブロック共重合体のブロック組成を制御することにより,カーボンナノチューブナノ複合体は,NOxなどの有害ガス,ベンゼンなどの有機溶媒蒸気,含ハロゲン化合物,さらには,溶液中の有機溶媒,重金属,生理活性物質などのセンシングが可能であることを見出した。4.センシング機能究明このようなカーボンナノチューブナノ複合体のガスセンシング機構は,グラフト鎖やマトリックスポリマーが溶媒等を吸収したときに起こる,僅かな結晶構造の変化によることを究明した。
障害者の学習を事例とした変容的学習論の理論的拡張

変容的学習論は、他者との対話を通じて自己の置かれた状況に向き合い、より柔軟な認識枠組みを獲得する過程を描く。しかし、先行研究の多くは同質な集団内での学習を想定し、構成員の流動性を前提とした場での学習に対する検討は不十分であった。そこで、本研究では、異質な集団たる健全者(健常者)に働きかけながら、地域で暮らす権利の獲得を図ってきた障害者を事例に、異質な他者同士が日常生活の延長として出会い、相互承認に至るための条件を導く。
フランス民事法学における「基礎用語」の研究

フランス民事法学研究上,重要と思われる「基礎用語」を,その類語を通して考察してきた。本研究は平成3年度科学研究費補助金の崩芽的研究で試みた研究を,さらに深化し,対象領域を広めた。類似する言葉の異同,法典等にみられる実例,教科書等で示された定義を基礎に分析し,それに加えてフランス人の法学関係者に,それぞれの語感の相異について助言をいただいた。平成3年度の研究目的で示したのと同じように言葉を表現のコンテクストの中で理解しうるように心がけ又この言葉を実際に用いることが,できるよう注意点を示した。本年度は,さらに表現を超え実生活や社会のコンテクストでの解説も加えた。このようにして完成した原稿を法律雑誌に連載し,順次公表している。本年度は,法律家の問題の中で弁護士と公証人を公表している。本年度の研究は,契約に関連する用語の範囲を広め,書面による証拠を重視するフランス法に注意をはらい,いかに契約上書かれた言葉が重要であるか,また実際にどのような言葉が重要であるかについて,言葉の用い方とならんで明らかにした。その他,裁判外での紛争解決方法,合意の解消に関しては,用語のレベルでの研究を終了した。これらのテーマについて,さらに実生活上,社会のコンテクストの中での分析を加える作業が残っている。原稿完成後順次連載の中で公表する予定である。
震災に強い地域社会の実現に向けた科学コミュニケーションの実践的研究

平成30年度内に学内倫理審査の承認を得た上で、防災科学情報の収集と研究動向の把握を目的とするシステマティックレビューを実施した(研究1)。最初に行ったのは日本国内における科学コミュニケーション研究の動向と主要キーワードを抽出するためのシステマティックレビューである。本研究を通して以下の5点を明らかにした:1科学コミュニケーション研究のアクティビティは2007年をピークに停滞していること、2科学コミュニケーション研究の主流は事例研究であること、3主要テーマは「科学教育(科学、コミュ二ケーター、技術、能力、等)」、「高等教育(大学、教育、高等、等)、「初等・中等教育(学校、訪問、図書館、博物館、等)」、「研究開発(研究、開発、等)」、「コミュニティ形成(学習、支援、コミュニティ、社会、市民、等)」の5領域に大別できること、4科学、教育、災害の領域に貢献してきたこと。次に、災害科学情報(心理学系)のシステマティックレビューを行い、以下3点を明にした:1阪神淡路大震災と東日本大震災の直後に研究のアクティビティが高まっていること、2主要テーマは「災害支援」、「避難行動」、「メンタルケア」、「災害教育」、「復興支援」の5領域に大別できること。さらに、災害科学情報を共有することを目的とする科学コミュニケーションイベントの事例研究も行った。「どうしたら人は災害時に本気で非難するか?」についてアイデアを出し合いながら、人間工学の研究知見を共有するイベントを開催し(第1回エルゴノミクソン)、参加者のニーズと満足度を調査した。平成31年度以降に実施する質問票調査(研究2)とアプリ開発(研究3)のための地域協力体制の整備にも着手した。共同研究者と連携をはかりながら、伊豆市と名古屋市の地域住民に協力を要請するための準備を行った。平成30年度は倫理審査の承認、システマティックレビューの実施、科学コミュニケーションイベントの事例研究を展開することができたが、同年度に開始予定であった質問票調査(研究2)に着手することがでなかった。システマティックレビューの情報をもとに質問項目を作成し、研究者が伝えたい防災科学情報、地域住民が知りたい防災科学情報のマッチングをはかるための質問票調査に着手する必要がある。平成31年度前半に質問票調査を終えることができれば、研究計画に記載したスケジュールを順守できることから、「おおむね順調に進展している」と判断した。平成31年度の4月8月中に平成30年度内に終えることのできなかった研究2の質問票調査を実施する。9月12月は伊豆市と名古屋市の調査協力者(地域住民)と科学コミュニケーションのアプリ開発のための意見交換会を実施する。同時に、業務委託を行う企業を選定しながら、平成32年1月以降にアプリ開発に着手できるよ研究を進めていく。平成32年度はアプリのユーザビリティと科学コミュニケーションの効果測定を実施する(研究4)。

同時に、業務委託を行う企業を選定しながら、平成32年1月以降にアプリ開発に着手できるよ研究を進めていく。平成32年度はアプリのユーザビリティと科学コミュニケーションの効果測定を実施する(研究4)。質問票調査(研究2)の開始が平成31年度となったため、調査参加者謝礼とデータ入力者謝金の執行を次年度とした。平成31年度内に、伊豆市と名古屋市の地域住民との協働によるアプリ開発に伴う協力者謝礼、交通費、業務委託費等を執行し、研究を推進する予定である。次年度に使用する主な研究費の細目は次の通りである:1質問票調査ための謝礼およびデータ入力費、2アプリ開発のための意見交換会の参加者謝礼と交通費、3アプリ開発の業務委託費、4インフォグラフィックスなどの情報デザインを行うアプリケーションをはじめとする物品購入費、4研究成果発表のための学会参加費および旅費。
無限次元確率解析と確率数値解析の研究

無限次元確立解析における研究実績代表者杉田は分担者谷口との共同で,抽象ウィナー空間上の振動積分について次のような結果を得た:振動積分の位相関数に2重ウィナー積分を,振幅関数に多重ウィナー積分を考えた場合,振幅関数は原点0での値をうまく定められないときは,振動積分が有限次元の場合とは全くことなる挙動を示す.また,杉田は研究協力者高信との共同研究で,∞-次元トーラスT^∞=[0,1)^∞上のWeyl変換(無理数回転)に関して,関数列f^<(m)>をm変数の対称統計量とするとき,{f^<(m)>(x+nα)}nは多重wiener積分の独立コピーに分布収束することを示した.確率数値解析に関する研究実績平成10年1月27日30日,九州大学で研究集会「確率論と計算数学」,および平成10年11月9日11日,金沢大学で研究集会「確率数値解析の理論と手法」を主催した.参加者の主な研究文野は次の通り:疑似乱数生成,確率微分方程式の数値積分,準モンテカルロ法,マルコフ連鎖の応用,暗号理論の確率論的基礎,ネットワーク安全性のモンテカルロ的検証,など.杉田は第一の研究集会では,「無理数回転による疑似乱数生成法ーフーリエ級数展開によるアプローチ」,第二の研究集会では「準モンテカルロ法のロバスト性」という研究発表を行った.無限次元確立解析における研究実績代表者杉田は分担者谷口との共同で,抽象ウィナー空間上の振動積分について次のような結果を得た:振動積分の位相関数に2重ウィナー積分を,振幅関数に多重ウィナー積分を考えた場合,振幅関数は原点0での値をうまく定められないときは,振動積分が有限次元の場合とは全くことなる挙動を示す.また,杉田は研究協力者高信との共同研究で,∞-次元トーラスT^∞=[0,1)^∞上のWeyl変換(無理数回転)に関して,関数列f^<(m)>をm変数の対称統計量とするとき,{f^<(m)>(x+nα)}nは多重wiener積分の独立コピーに分布収束することを示した.確率数値解析に関する研究実績平成10年1月27日30日,九州大学で研究集会「確率論と計算数学」,および平成10年11月9日11日,金沢大学で研究集会「確率数値解析の理論と手法」を主催した.参加者の主な研究文野は次の通り:疑似乱数生成,確率微分方程式の数値積分,準モンテカルロ法,マルコフ連鎖の応用,暗号理論の確率論的基礎,ネットワーク安全性のモンテカルロ的検証,など.杉田は第一の研究集会では,「無理数回転による疑似乱数生成法ーフーリエ級数展開によるアプローチ」,第二の研究集会では「準モンテカルロ法のロバスト性」という研究発表を行った.無限次元確率解析に関する研究業績本研究分担者の谷口説男氏と代表者杉田洋は,抽象ウイナ-空間上の振動積分について,次のような結果を得た:振動積分の位相関数に2重ウイナ-積分を,振幅関数に多重ウイナ-積分を考える.振動数のパラメータを無限に大きくすると,有限次元の場合の類推より,振動積分の減少のオーダーは原点(いまの場合,唯一の位相関数の停留点)付近の積分によって決定されるだろう.このことが,振幅関数が連続な多重ウイナ-積分の場合に正しいことを示した.同時に,一般の多重ウイナ-積分は連続でないため,有限次元からの類推は必ずしも正しくないことを示した.確率数値解析に関する研究業績平成10年1月27日1月30日,九州大学で研究会「確率論と計算数学」を開催した.旅費の必要な参加者には本研究の科研費より支出した.参加者の主な研究分野は次の通り:擬似乱数生成,確率微分方程式の数値積分,暗号理論の確率論的基礎,ネットワーク安全性のモンテカルロ法的検証など.本研究の代表者杉田洋は,この研究会で「無理数回転による擬似乱数生成法-フーリエ級数展開によるアプローチ」という研究発表を行った.これは,確率数値解析に用いられる擬似乱数の計算量的性質を解析的道具でもって明らかにしようという試みである.なお,この研究会に関する詳しい研究成果を来年度の報告書に纏める予定である.無限次元確率解析における研究実績∞-次元トーラスT^∞=[0,1)^∞上のWeyl変換(無理数回転)の軌道{x_n=x+nα}_nを考える.ここに,xは初期値,αは無理数ベクトルである.これを関数f:T^∞→Rに代入してできる列{f(x_n)}_nを(T^∞、P^∞)上の確率過程と見なす.ここでP^∞はLebesgue測度の無限直積.もちろん,これは独立確率変数列ではない.しかし,関数列{f^<(m)>}_mを関数がどんどん複雑になるように取ると,しばしば{f^<(m)>(x_n)}_nがm→∞で独立確率変数列に分布収束することがある.とくに,金沢大学の高信敏氏と代表者杉田の共同研究で,f^<(m)>としてm変数の対称統計量を取ってきたとき,多重wiener積分の独立なコピーに分布収束することを示した.確率数値解析に関する研究実績

平成10年11月9日11日に金沢大学で研究集会「確率数値解析の理論と手法」を開催した.旅費の必要な参加者には本科研費より支給した.参加者の主な研究分野は次の通り:疑似乱数生成,確率微分方程式の数値積分,準モンテカルロ法,マルコフ連鎖の応用,などであった.この研究集会で,杉田は複雑な関数の数値積分法について「準モンテカルロ法のロバスト性」という講演を行った.複雑な関数の数値積分のためにはランダムなサンプル方法が不可欠であるが,独立確率変数列によるサンプリング(古典的モンテカルロ法)ほどランダム性がなくても十分ロバストなサンプリングが可能であり,実際,ランダム化されたWeyl変換が現時点ではもっとも適切であるとした.この結果は,近々,学術誌に投稿する予定である.
児童心身症の学校精神衛生学的研究

小学生における心身症状,行動の問題などの出現状況を,高学年と低学年,性差などで比較した.また生活と遊びの内容さらにそれらと心身症状との関係について検討した.対象は奈良県下-小学校全生徒704名(男子337名,女子367名)と大阪府下-小学校1570名(男子824名,女子746名)を選び,心身症状・生活状況全般に亙るアンケート調査をおこなった.その結果,遊びについては,男女差があり,多様であるが,特徴的なことは女子ではゴムとび,人形遊び,バトミントンなどが目立つが,男子では野球,ソフトボール,釣り,虫とり,サッカーのほかゲームコンピュータが圧倒的に多く, 6年生では男女とも遊びのトップを占めている.性差では頭痛,乗物酔,腹痛,便秘の各項目で女子に多く,下痢,夜尿,鼻漏など7項目について,男子の方に有意に高い出現が認められた.年令差では,男子低学年では夜尿,昼尿など8項目で男子高学年より多く,頭痛,肩こり,乗物酔,寝つきが悪いで高学年男子に高い出現頻度が示された.一方女子では,下痢,食欲がないなど7項目で低学年の出現率が高く,頭痛,肩こり,乗物酔の各項目で高学年に出現が高かった.睡眠と心身症では,寝おきの悪い子どもに便秘,夜尿など10項目で有意に高い出現頻度が示された.寝つきの悪い子どもでは,乗物酔,長い間立っていると倒れる,食欲がない,偏食,疲れやすいなど15項目に有意の差が認められた.食事動作では遅い子どもに食欲がない,偏食,寝起きが悪い,無気力,甘えたなど13項目で高い出現頻度が示された.友達では少ない子どもに食欲がない,神経質など7項目で有意な差がみられた.なおゲームコンピュータについても毎日する子にそれ以外の子どもと比較して目をパチパチさせるなど6項目について有意差が指摘できた.小学生における心身症状,行動の問題などの出現状況を,高学年と低学年,性差などで比較した.また生活と遊びの内容さらにそれらと心身症状との関係について検討した.対象は奈良県下-小学校全生徒704名(男子337名,女子367名)と大阪府下-小学校1570名(男子824名,女子746名)を選び,心身症状・生活状況全般に亙るアンケート調査をおこなった.その結果,遊びについては,男女差があり,多様であるが,特徴的なことは女子ではゴムとび,人形遊び,バトミントンなどが目立つが,男子では野球,ソフトボール,釣り,虫とり,サッカーのほかゲームコンピュータが圧倒的に多く, 6年生では男女とも遊びのトップを占めている.性差では頭痛,乗物酔,腹痛,便秘の各項目で女子に多く,下痢,夜尿,鼻漏など7項目について,男子の方に有意に高い出現が認められた.年令差では,男子低学年では夜尿,昼尿など8項目で男子高学年より多く,頭痛,肩こり,乗物酔,寝つきが悪いで高学年男子に高い出現頻度が示された.一方女子では,下痢,食欲がないなど7項目で低学年の出現率が高く,頭痛,肩こり,乗物酔の各項目で高学年に出現が高かった.睡眠と心身症では,寝おきの悪い子どもに便秘,夜尿など10項目で有意に高い出現頻度が示された.寝つきの悪い子どもでは,乗物酔,長い間立っていると倒れる,食欲がない,偏食,疲れやすいなど15項目に有意の差が認められた.食事動作では遅い子どもに食欲がない,偏食,寝起きが悪い,無気力,甘えたなど13項目で高い出現頻度が示された.友達では少ない子どもに食欲がない,神経質など7項目で有意な差がみられた.なおゲームコンピュータについても毎日する子にそれ以外の子どもと比較して目をパチパチさせるなど6項目について有意差が指摘できた.大阪府下小学校児童1570名(うち女子746名)を対象として、42項目の心身症状項目とゲームコンピュータ,養育態度,周生期の状況などに関する総合的な調査をおこなった。その結果、心身症状項目については、乗物酔,鼻漏,便秘などについて性差が認められた。また高学年と低学年とでは男子で鼻漏,甘えた,乗物酔,頭痛に、女子では指しゃぶり,乗物酔,甘えた,頭痛などで有意差が指摘されれた。またゲームコンピュータについては、保有している児童は60.1%(男子66.9%,女子54.0%)であったが、使用回数では、毎日すると回答した子どもで、疲れやすい,咳をよくする,奇妙なくせがある,目をパチパチさせる,肩こり,無気力,反抗的,やせすぎ,目が疲れやすいの各項目で、しない子どもと比較して有意に高い出現頻度がみられた。友達が多く、毎日ゲームをしている子どもだけについては、じんましん20.3%,よく風邪をひく15.9%,夜尿8.7%と多く、友達が少なくて毎日している子どもには、反抗的35%,短気20%など行動の問題が指適された。さらに親が過干渉の子どもで、ゲームを毎日している場合、鼻汁がよく出る34.5%,疲れやすい27.6%,指しゃぶり13.8%,無気力13.8%と症状発現に母子関係も影響することが明らかになった。なお高頻度にゲームを続けている子どもについてCFF中心フリッカー検査などの精密検査を実旋したが、右眼について眼性精神疲労などの症状が有意に高いことが示され、成人のVDTテクノストレスと関連したストレスが児童期にも発症しうることが示唆された。
低分子量G蛋白質M-Rasによる神経細胞分化と高次神経機能の分子機構

本研究では,当研究室で発見したM-Rasについて次の2点を解明することを目的とする.(1)M-Rasによる神経細胞分化誘導の詳細なシグナル伝達経路を解明する.(2)M-Rasは記憶をはじめとした高次脳機能を制御していると推測されるので,このような高次神経機能にかかわるM-Rasの標的蛋白質を同定して,その分子機構を解明する.PC12細胞において内在性のM-Rasならびに外来性のM-RasはNGFおよびFGF2によって活性化されることが標的蛋白質のNorelを用いたbull-downアッセイによって示された.しかしdbcAMPによって活性化されることはなく,またadenylyl cyclaseのアゴニストであるPACAPによる活性化の程度も低かった.したがってM-RasはNGFにより活性化され,神経細胞分化を誘導するが,PACAP→adenylyl cyclase→cAMPの経路で誘導される神経細胞分ににはかかわっていないと考えられる.一方,活性変異体のM-Ras(G22V)を導入したPC12細胞では,分化にかかわっているCREBのリン酸化が約80%の細胞でみれらた.この結果は,NGFにより活性化されたM-RasはCREBをリン酸化して活性化することによりPC12細胞の分化を誘導する可能性を示している.またin situハイブリダイゼーションによりM-Rasはマウス脳の海馬と小脳に顕著に発現していることが示された.M-Rasの結合蛋白質として酵母two-hybridスクリーニングによりADARを同定した.M-RasはGTP依存的にADARのC末端側に結合することが,two-hybrid結合アッセイとpull-downアッセイにより示された.これらの結果は,M-RasがADARを標的蛋白質として神経伝達物質受容体のRNA編集を制御することにより,高次神経機能にかかわっていることを示唆している.本研究では,当研究室で発見したM-Rasについて次の2点を解明することを目的とする.(1)M-Rasによる神経細胞分化誘導の詳細なシグナル伝達経路を解明する.(2)M-Rasは記憶をはじめとした高次脳機能を制御していると推測されるので,このような高次神経機能にかかわるM-Rasの標的蛋白質を同定して,その分子機構を解明する.PC12細胞において内在性のM-Rasならびに外来性のM-RasはNGFおよびFGF2によって活性化されることが標的蛋白質のNorelを用いたbull-downアッセイによって示された.しかしdbcAMPによって活性化されることはなく,またadenylyl cyclaseのアゴニストであるPACAPによる活性化の程度も低かった.したがってM-RasはNGFにより活性化され,神経細胞分化を誘導するが,PACAP→adenylyl cyclase→cAMPの経路で誘導される神経細胞分ににはかかわっていないと考えられる.一方,活性変異体のM-Ras(G22V)を導入したPC12細胞では,分化にかかわっているCREBのリン酸化が約80%の細胞でみれらた.この結果は,NGFにより活性化されたM-RasはCREBをリン酸化して活性化することによりPC12細胞の分化を誘導する可能性を示している.またin situハイブリダイゼーションによりM-Rasはマウス脳の海馬と小脳に顕著に発現していることが示された.M-Rasの結合蛋白質として酵母two-hybridスクリーニングによりADARを同定した.M-RasはGTP依存的にADARのC末端側に結合することが,two-hybrid結合アッセイとpull-downアッセイにより示された.これらの結果は,M-RasがADARを標的蛋白質として神経伝達物質受容体のRNA編集を制御することにより,高次神経機能にかかわっていることを示唆している.
共役型リノール酸の生理機能解析(とくに免疫機能に及ぼす影響)

反芻動物の体脂肪に特異的に存在する共役型リノール酸(CLA)は、きわめて低レベルの摂取で乳癌の抑制、動脈硬化の軽減など特徴的な生理機能を有することが示されてきている。本研究では、CLAの新しい機能性として、その代謝的効果を考慮し、免疫機能への影響を検討した。In vitroでのラット腸間膜リンパ節(MLN)および脾臓リンパ球によるカルシウムイオノフォア刺激に伴う抗体産生や肥満細胞によるロイコトリエンB4(LTB_4)産生に対しては、CLAはまったく影響しなかった.しかし、CLAを0.5および1.0%含む食餌を3週間与えたラットでは、対応するリノール酸食群に比べ、MLNによるIgGおよびIgM産生が増加し、IgE産生が抑制された.脾臓ではさらにIgA産生増加が認められた。腹腔滲出細胞および脾臓と肺によるLTB_4とLTC_4の産生は減少傾向を示した.血清および脾臓のプロスタグランジンE_2濃度も低下した.これらの組織のリン脂質の脂肪酸組成を分析した結果、ロイコトリエン産生の基質となるアラキドン酸の割合はほとんど変化せず、n-3系多価不飽和脂肪酸の割合がCLAの食餌レベルに依存して増加する傾向にあった.一方、本研究で購入した化学発光検出装置による組織リン脂質中の過酸化物の測定の結果、CLAはとくに脂質過酸化物の生成を促進しないことが観察された。このことは組織のTBA値からも支持された.なお、CLAの腸管吸収率はリノール酸より低く、かつその構成脂肪酸により差があること、各種組織への取り込みにも差があり、かつ、肝臓リン脂質構成成分へも不均一に取り込まれることが確認された.これらの結果は、CLAが免疫賦活作用および抗アレルギー活性を有することを指摘している.さらに、CLAの発癌抑制作用に免疫系への影響が関与する可能性も示唆された.反芻動物の体脂肪に特異的に存在する共役型リノール酸(CLA)は、きわめて低レベルの摂取で乳癌の抑制、動脈硬化の軽減など特徴的な生理機能を有することが示されてきている。このことは組織のTBA値からも支持された.なお、CLAの腸管吸収率はリノール酸より低く、かつその構成脂肪酸により差があること、各種組織への取り込みにも差があり、かつ、肝臓リン脂質構成成分へも不均一に取り込まれることが確認された.これらの結果は、CLAが免疫賦活作用および抗アレルギー活性を有することを指摘している.さらに、CLAの発癌抑制作用に免疫系への影響が関与する可能性も示唆された.
1930年代日本の「企業グループ」化現象と財閥の変質

現在日本の大企業のほとんどはその傘下に数多くの子会社を擁して、全体として一個の有機的な事業統合体、すなわち「企業グループ」の形態で存在している。また、複雑な企業間のネットワークを形成し、それは「系列」問題として注目されてきた。本研究は、そうした企業グループや企業系列の本格的な出現の時期を戦前1930年代に求め(仮説)、実証的にデータを作成しながら、事実関係や時代背景を分析しようとしたものである。また、かかる企業グループの出現と、当時の新興コンツェルンの台頭、あるいは既成財閥コンツェルンの変質問題などとの関連をも視野に含めて、新たな歴史像を描くことを目的としていた。つまり、30年代に注目された新興コンツェルンとは上の「企業グループ」概念で捉えられること、あるいはまた、30年代後半の既成財閥の組織変質の問題も同じく財閥内部における「企業グループ」の形成過程として把握できることが明かとなった。それらの全体的なフレームは、とりあえず昨年秋に出版した著書『日本の系列と企業グループ』(有斐閣)の中で論じたが、さらに現在、発表予定の論文原稿としては、別紙記載の3論文がある。本年度の研究の結果、上記の仮説はほぼ正当なものと確認された。ただし、個別ごとのデータは膨大であり、また種々雑多でもあるため、相当の例外的事象をも見いだすことがきた。今後、さらに具体的なデータを分析しながら、上の仮説をより豊かなものに再検討していく作業が必要であろう。なお、1,2年後には、全体を完成させて、書物の形で出版を計画している。
持続可能な社会構築のための環境計画策定過程のあり方に関する研究

2012年度は本研究計画の最終年度であり、研究計画で位置づけられるところの「事例研究」の取りまとめが行われた。これは、2011年度より行われていた、京都市などにおける再生可能エネルギー普及のための市民団体の役割分析、および埼玉県小川町における有機農業を中心とした民間主導のまちづくりの取り組みの分析を中心に行われたものである。また、掲載されるのは2013年度となってしまうが、研究計画1年目より推進してきた、愛知県日進市における調査結果を元に、環境基本計画の推進における市民ネットワークの機能分析についても取りまとめられた。京都市および神奈川県における研究では、再生可能エネルギーの普及促進に取り組む市民団体は、行政の掲げる政策方針に応じて活動内容や資源調達の方法を変化させていたが、その方法として共通しているのが政策提案のネットワークを自ら形成しているということであった。また、小川町における研究では、創成期に活動した1人の農家を中心として有機農業を支援するコミュニティの輪が広がっていったが、そこには有機農業支援の担い手教育のシステムが組み込まれていたことが確認された。そして、日進市における研究では、設立当初はごみ問題、流水域の緑地保全、農業問題などといった分野横断的に計画を総合的に推進してゆくことを目的としたNPO団体であったが、徐々に各分野内での事業連携を行う上での拠点へと機能が変容していったことが明らかになった。2010年度は研究計画で掲げた「事例研究を通した仮説モデル構築」「参与観察を通したモデルの適用」の二目的に則って、研究作業を推進した。前者の目的については、計画策定段階の関係主体の把握と、プロセスにおける主体間のコミュニケーションについて整理をし、計画づくりを通じて行政と様々な市民団体の間で信頼関係を形成したメカニズムを示した。この研究成果は学会誌に論文として投稿され、査読の後掲載された。続いて、事例における市民の組織化および組織の運営のいきさつについて整理を行った。こちらは学会発表を通して各方面の研究者と意見を交わした後、投稿論文として取りまとめているところである。後者の目的については、静岡県沼津市における計画策定プロセスと市民の組織化のための会合、ワークショップに参与観察し、適宜事例研究の報告および情報提供を通して組織化に向けての提案を行った。こちらについては研究成果としてはまとめられていないものの、組織がいかなる動態をもって変化していっているかのデータを蓄積しているところである。とりわけ、組織化を行ったものの各主体がメンバー間のネットワークを活用しづらい環境をいかに打破してゆくか、ネットワークの「見える化」についてニーズ、および研究上の問題意識が深まってきており、事例と既存研究の整理を通して提案を行いつつ、研究成果としてまとめてゆく。2011年度は、当初の研究計画での「事例研究」「参与観察研究」に加えて、「全国調査」に着手した。「事例研究」においては、分析対象事例である愛知県日進市における、環境基本計画の実行段階における各主体のインタラクションを調査し分析を行った。また、昨年度までの研究成果を元に、計画策定プロセスの分析を投稿論文にまとめ、5月に学術雑誌に掲載されるに到った。以上の成果は9月に発行した博士論文にて編集され、発表されている。加えて「参与観察研究」では、静岡県沼津市におけるこれまでの参与観察を踏まえて、行政職員や市民など、これまで計画推進に携わってきたメンバーによる、プロセス評価の場である「振り返りワークショップ」を企画し、実施した。このワークショップは、計画の策定および協働プロジェクトの立案までを行ったこれまでの経緯を踏まえて、これまでに参加者らが達成してきたポイントを確認し、これからの活動につなげられるように設計された。また、昨年度は「全国的な文献調査」にも取り掛かった。これは当初の研究計画においては位置付けられていなかったが、当初事例として掲げていた愛知県日進市の事例のようなタイプの市民と行政の協働を相対化するプロセスが必要であると判断されたため実施した。全国調査を通して解決すべき課題として、(1)「計画策定の中で市民の特別な組織化を経ずに、計画推進での協働を実現している事例の分析」、および(2)「計画推進での協働の類型化」を掲げたが、昨年度は(1)の課題について、埼玉県比企郡小川町における事例研究を推進した。この研究は、当事例における有機農業プロジェクトと環境計画の関係を示したものであるが、リーダーのもと形成された強固であるが閉鎖的なコミュニティを形成していた有機農業支援者らが、環境基本計画の策定などの場によって他分野のメンバーとの交流が深まり、価値が多様化してゆくプロセスが確認された。

そして、日進市における研究では、設立当初はごみ問題、流水域の緑地保全、農業問題などといった分野横断的に計画を総合的に推進してゆくことを目的としたNPO団体であったが、徐々に各分野内での事業連携を行う上での拠点へと機能が変容していったことが明らかになった。研究はおおむね期待通りに進展したと評価する。昨年度は愛知県日進市の事例研究を、環境基本計画の実行段階までの分析を完成させる計画を立てていたが、これをおおむね完了させ、博士論文としてまとめ、学位を取得した。また、静岡県沼津市における環境基本計画の参与観察研究においても、計画の事後評価のための「振り返りワークショップ」の企画に精力的に参加し、分析データの収集に努めた。この成果を発表するため、現在参加者へのヒアリングを準備している。以上二点を鑑み、この研究はおおむね順調に進捗していると考える。「事例研究」「参与観察研究」および、2011年度から始めている「全国調査」研究のなかでも、全国調査を中心的に推進し、事例研究の中で得られた知見の相対化を試みる。具体的には、全国における環境基本計画の策定状況を調査し、構築されている推進体制の状況を整理する。その際の視点としては、先の研究実績概要で説明したような、計画推進において市民と行政が協働を行ってゆく際、計画策定の中で市民の特別な組織化を経たか否かに着目する。これは、市民活動が計画策定までにどのような高まりを見せていたかなどの、地域固有の要素にも影響を受けると考えられるが、類型化を試みてゆきたい。
テロメア構成因子による染色体の統合的制御機構

真核生物の染色体末端領域であるテロメアやサブテロメアに着目し、その新規機能や新規制御のメカニズムを探った。その結果、テロメアタンパク質Rap1が細胞分裂期にCdc2によってリン酸化され、それによってテロメアが核膜から一時的に解離し、染色体が正常に分配されることを明らかにした。また、Rap1を中心としたテロメア結合タンパク質複合体の形成メカニズムや、その生理学的意義についても解析を行った。一方、テロメアに隣接するサブテロメアに関する解析も行った。シュゴシンタンパク質Sgo2が細胞周期の間期特異的にサブテロメアに局在し、複製タイミング制御など様々な機能を果たしていることを発見した。線状染色体の末端に存在するテロメアは、染色体の代表的な機能を持った非コードDNA領域であり、世代を超えた染色体の維持、細胞老化のタイミング等に深く関与している。近年、テロメア結合蛋白質のテロメアにおける機能の理解は飛躍的に深まった。一方、テロメア蛋白質が非テロメア領域にも局在することや、テロメア以外の機能性非コードDNA領域で働く蛋白質がテロメアにもリクルートされることが明らかにされつつある。そこで、本研究ではゲノムワイドなヘテロクロマチンネットワークの一員としてのテロメアの新機能の解明を目的とした。23年度はまず、テロメアと核膜蛋白質との機能ネットワークについて解析を行った。分裂酵母のテロメア結合蛋白質Rap1は、細胞周期の間期において核膜蛋白質Bqt4と結合する。それによって、テロメアは普段核膜近傍に配置されている。生細胞観察によって、テロメアは細胞周期のM期において一時的に核膜から解離することがわかった。さらに、その解離はM期における正確な染色体分離に必要であることが明らかになった。次に、テロメアが核膜から解離するメカニズムを探った。その結果、Rap1がM期にCdc2キナーゼなどによって高度にリン酸化され、それによってRap1とBqt4との相互作用が阻害され、テロメアが核膜から解離することがわかった。以上のことから、染色体末端のテロメアが細胞分裂において重要な役割を果たしていることが明らかになった。真核生物の線状染色体末端に存在する構造体であるテロメアを中心とした蛋白質機能ネットワークについて研究を行った。中でも、当該年度においては、分裂酵母のテロメア蛋白質複合体の中枢であるRap1の新規な機能を明らかにすることに焦点を当てて研究を進めた。1)カゼインキナーゼ2(CK2)によるRap1のリン酸化の解析質量分析により、Rap1の多数のアミノ酸残基が細胞増殖期にリン酸化される可能性が示唆された。それらの中にCK2のリン酸化ターゲット配列と一致するものが存在するため、CK2によるRap1のリン酸化の意義について解析している。これまでに、Rap1の7つのアミノ酸残基がin vitroでCK2によってリン酸化されることがわかった。それらを非リン酸化型であるアラニンに置換したRap1を発現させると、Rap1と核膜蛋白質Bqt4との相互作用が阻害され、テロメアの核膜局在が異常になった。さらに、テロメア近傍のヘテロクロマチン状態にも異常が生じていることが示唆された。現在、これらの詳しい分子メカニズムについて解析を行っている。2)Rap1とDDKサブユニットDfp1の相互作用の生理学的意義の解明Yeasttwo-hybrid法により、Rap1と相互作用する新規な因子を検索した結果、DNA複製開始に必要なDDKキナーゼ複合体のDfp1を同定した。Dfp1は分裂酵母細胞内でRap1と相互作用する活性を持ち、Rap1のC末側領域と直接相互作用することが示唆された。この相互作用の生理学的意義を探るため、Dfp1と相互作用できないRap1変異体を発現させたところ、DNA複製タイミングの異常が見られた。現在、DNA複製タイミング制御におけるRap1-Dfp1相互作用の役割について解析している。真核生物の線状染色体末端に存在する構造体であるテロメアを中心としたタンパク質機能ネットワークについて解析を行った。特に、分裂酵母テロメア結合タンパク質であるRap1の新規機能を探る研究を行った。1)Rap1のカゼインキナーゼ2によるリン酸化の生理学的意義の解明:これまでにRap1がCK2によってリン酸化され、そのリン酸化がRap1と核膜タンパク質Bqt4との相互作用に重要であることを示した。リン酸化部位を非リン酸化型であるアラニンに置換したところ、他のテロメア結合タンパク質であるPoz1との相互作用やテロメア近傍におけるgene silencingが異常になっていた。従って、Rap1のCK2によるリン酸化はテロメアの核膜との相互作用および、Poz1との相互作用、すなわちテロメア近傍のクロマチン状態の維持に重要であることがわかった。2)Rap1と結合する新規タンパク質の機能解析:Dfp1はDNA複製の開始に必須な因子である。Dfp1が結合するRap1のサイトをyeast two-hybridアッセイによって決定したところ、Poz1と相互作用するドメインとオーバラップしていた。現在、この領域に変異を導入してDNA複製にどのような影響が出るかを調べている。また、Rip6はまだ解析されていない新規なタンパク質である。Rip6を破壊すると、Rap1やPoz1のタンパク質量が激減したことから、Rip6はこれらのタンパク質の安定性に重要であることがわかった。

また、同じくRap1のタンパク質安定性に重要であることが報告されているCay1との二重欠損株を作製したところ、さらに2つのタンパク質量が減少したことから、Rip6とCay1は全く同じ経路ではないが、非常に近くで機能していることが示唆された。現在、さらに詳しく解析を進めている。1)テロメアに隣接するサブテロメアの特殊なクロマチン構造の形成メカニズムや機能を探った。様々な解析の結果、M期にセントロメアに局在して正確な染色体分配に貢献しているSgo2タンパク質が間期にサブテロメアに局在し、サブテロメアの特徴的な高次クロマチン構造形成に必須であると同時に、サブテロメア領域の遺伝子群の発現維持、サブテロメア領域のDNA複製タイミングを制御することがわかった。2)Rap1のカゼインキナーゼ2によるリン酸化の意義を調べるため、in vitro kinase assayによって同定した7箇所のリン酸化部位をアラニンに置換した株を作製し、表現型を解析した。rap1-7A株では、Rap1と核膜タンパク質Bqt4との相互作用が阻害されており、間期においてテロメアが核膜から遊離していた。また、shelterin複合体におけるRap1とPoz1との相互作用にも異常が生じており、サブテロメアにおけるshelterinタンパク質の局在が減少し、サブテロメアのgene silencingに異常が見られた。Rap1の7つのリン酸化の中で、496/497番目のアミノ酸のリン酸化が重要であることもわかった。順調にデータが出ており、現在、論文投稿準備中である。真核生物の線状染色体末端に存在する構造体であるテロメアの新規機能を探った。分裂酵母のテロメア結合タンパク質Rap1は、テロメア複合体のハブであり、中心的機能を果たす。そのRap1と結合するタンパク質をtwo-hybridアッセイによってスクリーニングしたところ、新規遺伝子を発見し、Rip6と命名した。Rip6を欠損させると、増殖は可能であったが、テロメアDNAのわずかな異常伸長が見られた。さらに、rip6破壊株では、テロメア結合タンパク質であるRap1やPoz1のタンパク質量が激減していた。そこで、その原因を探るため、rap1遺伝子、poz1遺伝子のRNAを解析したところ、イントロンの集積が見られたことから、RNAのスプライシングに異常が生じていることが示唆された。さらに、Pull-down assayにより、Rip6はスプライシングタンパク質の一部と相互作用する活性を有していることが明らかになった。一方、Cay1の欠損株は、Rip6欠損株と同様の表現型を示すことが報告されている(Lorenzi et al., 2015)。そこで、Rip6とCay1との関係を探った。Rip6とCay1を同時に欠損させると、テロメアDNAの付加的な異常伸長が観察され、Rap1, Poz1タンパク質の量も付加的に減少した。さらに、減数分裂期の進行の異常も観察されるようになった。また、Cay1もスプライシング因子と相互作用する活性をもつことがわかった。以上のことから、Rip6はCay1と部分的に協調しながらRNAのスプライシング制御を行うことにより、テロメア結合タンパク質の安定性を寄与していることが示唆された。
神経芽腫におけるNLRR1のシグナル伝達制御機構の解明と分子標的治療法の開発

難治性の小児固形腫瘍である神経芽腫における新規治療法の開発を目指すべく、がんの発生・進展に関与すると考えられる膜タンパク質であるNLRR1の作用機序の解析を行った。NLRR1は脂質ラフトと呼ばれる膜構造を介して増殖シグナルと細胞分化シグナルを制御することが明らかとなった。また、NLRR1を認識する抗体を作製し、細胞増殖を抑制する機能を持つ抗体が発見されたことから、NLRR1ががん治療における標的分子となり得ることを示した。本研究では、神経芽腫関連遺伝子であるNLRR1がEGFやIGFによるシグナル伝達を増強し細胞増殖を増加させるメカニズムを明らかにし、それを標的とした新規治療法の開発を大きな目的としている。これまでに、NLRR1の機能には脂質ラフトの構造が必要であり、密度勾配法による解析によりNLRR1が細胞膜の脂質ラフト分画に存在することが示唆されていた。本年度では、GFP標識したNLRR1を細胞で発現させ、脂質ラフトマーカーである膜ガングリオシドGM1に結合するコレラトキシンサブユニットBを用いて解析を行った。その結果、NLRR1が脂質ラフトに局在することが視覚的にも確認された。また、NLRR1による他の受容体機能に及ぼす影響を検索した結果、bFGFやPDGFに対する増強効果は認められなかったことから、NLRR1は主な増殖シグナルであるEGFやIGFを選択的に制御することが示唆された。今後はNLRR1機能の責任領域を明らかにし、その部位に対するモノクローナル抗体を作製し、細胞増殖抑制効果を持つクローンのスクリーニングを試みる。一方、これまでに作出したNLRR1ノックアウトマウスに関してはC57BL/6への戻し交配を行いつつ、その表現型解析を行った。その結果、NLRR1ノックアウトマウスは低体重であり、そのマウス胎仔線維芽細胞の増殖能は著しく減少していたことから、NLRR1の細胞増殖における機能が生体内においても確認されたと考えている。今後もさらなる詳細な表現型解析を行っていく予定である。これまでに、NLRR1が細胞膜の脂質ラフト分画に存在し、NLRR1の機能にはこの脂質ラフトの構造が必要であることがわかってきた。また、NLRR1によるbFGFやPDGFに対する増強効果は認められなかったことから、NLRR1は主な増殖シグナルであるEGFやIGFを選択的に制御することが示唆されてきている。本年度では、GFP標識したNLRR1を細胞で発現させ、脂質ラフトマーカーである膜ガングリオシドGM1に結合するコレラトキシンサブユニットBを用いて解析を行ったところ、NLRR1が脂質ラフトに局在することが視覚的にも確認された。また、細胞増殖効果を抑制するNLRR1抗体のスクリーニングを試みた結果、その候補クローンが得られた。今後、部分欠損型発現ベクターを利用した抗体認識エピトープの検索や抗体の可変領域のうち相補性決定領域についてその遺伝子配列の検討を行っていくことにより、NLRR1抗体の性状を明らかにする。一方、これまでに作出したNLRR1ノックアウトマウスに関して、ノックアウトマウスは低体重であり、そのマウス胎仔線維芽細胞の増殖能は著しく減少することが分かってきている。本年度では神経細胞初代培養を行い、神経細胞においてもNLRR1欠損により増殖シグナルが影響を受けることが示された。ただ、その表現型のため、成体における影響を検討するための個体数が確保できていないことから、今後は個体数を増やして成体における表現型解析を行っていく予定である。平成24年度では、前年度までのスクリーニングの結果得られた細胞増殖効果を抑制するNLRR1抗体の認識エピトープを同定するために、NLRR1の部分欠損型発現ベクターを用いて検討した結果、NLRR1の細胞外領域における抗体認識ドメインが明らかとなった。そのドメインを含むペプチドアレイを用いてさらなる検討を行った結果、NLRR1抗体の認識エピトープが明らかとなった。また、抗体の可変領域のうち相補性決定領域についてその遺伝子配列の決定も行い、NLRR1抗体の性状を明らかにした。細胞増殖抑制効果については、神経芽腫以外の細胞株を用いてさらなる検討を行った結果、乳癌由来細胞株、肺癌由来細胞株及び骨肉腫由来細胞株においても、増殖抑制効果が認められた。以上の結果をもとに、特許出願を行う。一方、NLRR1ノックアウトマウスは低体重であり、神経細胞のみならずマウス胎仔線維芽細胞の増殖能も著しく減少することから、様々な器官・組織においてNLRR1欠損の影響を受けていることが考えられる。その表現型のため、前年度において成体における影響を検討するための個体数の確保が計画通り進まなかったが、平成24年度では個体数を増やすことができた。

オスのノックアウトマウスのうち、野生型と同程度に成長を示した個体を用いて生殖能力を検討したところ、生殖能力に対してノックアウトが直接的に影響を及ぼさないことが示唆された。そこで、神経芽腫モデルであるN-mycトランスジェニックマウスとのコンパウンドKOマウスの作出を開始した。今後、NLRR1欠損が神経芽腫の発生に与える影響を検索する予定である。NLRR1の機能解析は順調に進んでおり、抗体のスクリーニングの結果、候補となるクローンも得られていることから、順調に進んでいると考えられる。ノックアウトマウスの発生・発達期における表現型についても進展している。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後もNLRR1の機能の詳細な解析、およびNLRR1抗体の性状の解析をさらに進めていく。ノックアウトマウスの表現型解析において、その表現型のために成体における解析が困難となっているが、個体数を確保できれば進めることができると考えている。