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植民地のモダニズム的世界観から大西洋を経て出現する南アフリカ人作家の国家意識

2018年10月6日に立命館大学で行われた黒人研究学会の例会にて「20世紀初頭南アフリカ文学における戦争・モダニズム的世界観・国家意識」という題目で発表し、19世紀後半のケープ植民地で人種的平等を保証する近代国民国家的制度を経験したOlive SchreinerとSol Plaatjeが「近代国民国家を希求する植民地主体」として、20世紀に南アがアパルトヘイトへの道を進む「モダニスト的状況」に抗して、それぞれの立場からその想定する「英国のリベラルな読者」に向けて、ボーア戦争や第一次世界大戦を経て表現した「国家意識」の変遷を論じた。2019年2月に作品社から刊行した『国民国家と文学』に収められた「国民国家を希求する人びと」では、Plaatjeの少し後の世代のH. I. E. Dhlomoを扱い、アパルトヘイト体制で「二級市民」に貶められ民衆から分断されたアフリカ人知識人の国家意識の変遷を、汎アフリカ主義やマルクス主義と関連させて論じた。さらに、2019年3月に刊行された『東京女子大学英米文学評論』65巻の論文"Reimagining South African Modernity through the World War in Sol Plaatje's Native Life in South Africa"においては、Plaatjeが第一次世界大戦中に、南アの原住民土地法に苦しむアフリカ人同胞の苦しみを訴えた書において、いかに第一次世界大戦の描写が、彼がボーア戦争で経験した「伝統的共同体の破壊を前提とした「自由で平等な」近代国家の形」を再現しているかを論じた。また2019年9月12-14日に青山学院大学で開催される国際学会Modernist Studies in Asia 2019Tokyo Conferenceで"Reimagining Modernity in the Battlefield: Multiple Temporalities in Sol Plaatje's Mhudi"というタイトルで発表が確定している。また、10月に日本英文学会関東支部第11回大会にて行なわれたシンポジウム「カリブ・アフリカ文学と「民衆」」にて「「国民未満」から対自的民衆へーH. I. E.ドローモの作品を中心に」というタイトルで発表した。この発表では「国民意識」に近い「帝国臣民」意識を持っていた南アフリカのアフリカ系知識人3名の思想を、汎アフリカ主義の影響を含めて論じた。2016年3月には、論文"The Life and Death of South African Emerson in Olive Schreiner's The Story of an African Farm"を東京女子大学の『英米文学評論』(62巻)で発表した。この論文では「植民地的近代とモダニズム的要素」「米国思想の影響」「国家意識の涵養」の3点と関連して、南アの白人知識人および作家のアメリカとの関係を、白人女性作家Olive Schreinerの小説The Story of an African Farmについて論じた。特に、Emersonが独立国アメリカ人として持っていた国民的identityおよび理想主義から深く影響を受けていたSchreinerが、この作品では彼の理想が南ア(英国の植民地でしかも白人入植地であるがアメリカと異なり人口の大多数が非白人)で機能しないことを明示していることを明らかにした。また「国民的identity」が成立せず幾重にも分裂していることがモダニズム的世界観を提示していることも示唆した。「植民地的近代とモダニズム的要素」「米国思想の影響」「国家意識の涵養」の3点と関連して、南アフリカの白人知識人および作家がアメリカ社会をどう捉えていたかを論じる際に、当時の南アフリカの白人知識人がどうアメリカを意識したかという背景に関しての資料収集がまだ不足しており、白人女性作家Olive Schreinerの小説The Story of an African Farmについて研究論文にその部分の知見を含めることができなかった。また、彼女のもう一つの小説Undineについて論文で論じるところまで至らなかった。28年度に取り組むべきSchreinerとPlaatjeの第二次ボーア戦争を扱った著作の比較は関連資料の収集が思ったほどに進展しなかったため、論文の形にするにはまだ時期尚早と判断し、資料が揃いつつあった29年度の計画、すなわち「白人国家」南アフリカにおける「性と人種の問題」についてのSchreinerとPlaatjeの取り組みについての研究を先に進めた。Plaatjeの「性と人種」についての著書The Mote and the Beam (1921)は米国滞在中に書かれ、当時のアフリカ系米国知識人の影響を深く受けていることが、先行研究によって判明していた。そこでPlaatjeと比較しつつSchreinerの死後出版された小説From Man to Man (1926)について、その「性と人種」の表象についてアフリカ系米国知識人W. E. B. Du Boisの著書The Soul of Black Folk (1903)が与えた影響について研究を行った。その結果、アフリカ人を植民地主義の犠牲者ととらえつつも彼らを生物学的他者としてみなしていたSchreinerが、Du Boisの影響によって白人男性による黒人女性への性的搾取および暴力、そしてその結果誕生する子どもという看過できない「黒人と白人が家族として存在する」問題を再検証した痕跡を証明することができた。その結果は紀要論文"Transatlantic Re-writing of South African Sexual/Racial Violence in Olive Schreiner's From Man to Man "にまとめた。尚、南アフリカ国家理解に書かせないその多言語状況を考察した論文"What Languages Do Aliens Speak?"も国際学術雑誌に掲載された。28年度のボーア戦争に関するプロジェクトに関連した資料収集がなかなか進まず、そしてツワナ語の翻訳者の仕事もかなり遅れたため、より資料が揃っていた29年度の「南アフリカの性と人種の問題」に関する研究遂行に途中で切り替えた。

それによって29年度の研究はそれなりに形にはできたものの、結果的に全体的に論文のその質と量に影響を与えてしまった。Sol Plaatjeの第二次ボーア戦争および第一次世界大戦を扱った著作における国家意識創出について、資料を読み込み基礎的な研究を行なった。その際に、彼が英語と自分の母語であるツワナ語を通して自分が発行した新聞( Koranta ea Becoana、Tsala ea Becoana、そしてTsala ea Batho)において、同胞の間にアパルトヘイトへの批判精神や近代的な国家意識の涵養をいかに試みたかに注目し考察した。また同時に彼が母語の書き言葉を「南アフリカの白人専門家」の手を借りずに確立し同胞に浸透させることで、植民地主義に抗する形での彼らの近代化を促進させようとしていたこと(シェイクスピア作品の母語への翻訳もその一環)にも注目した。その結果の一部を『東京女子大学比較文化研究所紀要』(第79巻)に掲載された論文「ソル・プラーキのシェイクスピア劇『間違いの喜劇』のツワナ語翻訳『間違いの上の間違い』を巡る政治学」(2018)として発表した。また、この時期に彼が自分の同胞を、南アフリカ国家の「前近代的な国民未満」的存在として表象し、共闘する「おなじ人民」としてはみなさなかったこと、他の植民地における大英帝国臣民の参戦状況を見据えつつ戦争を同胞の「国民への昇格手段」として捉えていたことにも注目した。そこに存在する彼自身の階級意識が生み出す政治的限界を考察し、彼の後に続く南アフリカの他のアフリカ人作家とも比較して包括的に考察した。その成果を論文「「国民未満」から対自的民衆へ」として完成させ、月曜社の『多様体』1号(2018)に掲載された。研究を進めるうちに、Sol PlaatjeやSchreinerの国家意識創出はボーア戦争体験だけでなく第一次世界大戦の間接的な体験も大きく影響しており、当初考えていたよりはるかに大きなテーマであり必要とされる文献も膨大であることが判明した。その膨大な文献(Plaatjeが発行した新聞を含む)に関しては収集が進み、それを読み込み、その一部を論文の形で発表しつつあるが、さらに多くの文献を読み込み推敲を重ねる必要がある。それゆえに、当初目的とした、最終的な包括的な考察まで至り、それを論文の形にするまでには至っていないのが現状である。2018年10月6日に立命館大学で行われた黒人研究学会の例会にて「20世紀初頭南アフリカ文学における戦争・モダニズム的世界観・国家意識」という題目で発表し、19世紀後半のケープ植民地で人種的
CALMは細胞内輸送と白血病発症にどのように関与しているのかを解明する

染色体転座により生じる融合遺伝子CALM-AF10のCALM領域による新たな白血病発症メカニズムの解明を目指し、以下の研究成果を得た。これまでにCALMの核外移行シグナルNESと推定される配列の変異体を作製し、CALM-AF10は大部分が細胞質に存在するのに対し、CAIM-AF10のNES機能を消失させた変異体(CALM^<NES4A>-AF10は核に局在すること、CALM^<NES4A>-AF10導入骨髄細胞はCALM-AF10で認められる増殖付与活性が消失し、Hoxa遺伝子群やMeis1遺伝子の発現上昇が認められなかったことから、増殖付与活性にはCALMのNESが必要であることを発見していた。さらに、CALMのNES配列のみを付加したAF10 (NES-AF10)を作製したところ、この変異体がCALM-AF10と類似の局在パターンを示したことから、CALMの機能的なNES配列を特定した。このNES-AF10を導入した骨髄細胞ではCALM-AF10が有す増殖付与活性が認められ、Hoxa遺伝子群およびMeis1遺伝子の発現が上昇していた。そこで、CALM-AF10およびNES-AF10を導入した骨髄細胞をマウスに移植した結果、CALM-AF10およびNES-AF10が白血病の発症を示したことから、白血病の誘導にCALMのNESが必要十分であることが明らかとなった。またNES-AF10陽性白血病マウスは、CALM-AF10陽性白血病マウスと同様な症状を示すことを確認している。以上の結果より、CALM-AF10になることでCALMのNESを獲得し、CALM-AF10が細胞質に存在するあるいは細胞質と核内の間を移行することで、相互作用を示す因子の機能に影響を及ぼし、白血病の誘導に起因するというCALM-AF10のNESによる新たな白血病誘導モデルが示唆された。(抄録なし)CALMの機能解明及びCALM-AF10のCALM領域による白血病発症メカニズムの解明を目指し、以下の研究成果を得た。1.これまでにCALMホモ欠損マウスの赤血球系細胞及び樹立したMEF細胞においてCALMがTransferrinのエンドサイトーシスに関与し、赤血球造血に重要であることを明らかにしていた。他のクラスリン依存的にエンドサイトーシスされる因子としてEGFを検討した結果、CALMホモ欠損MEF細胞はEGFの取り込みには影響がなかったことから、リガンド-レセプター特異的にCALMが作用していることが示唆されたが、取り込まれたEGFの分解経路に障害が生じている可能性が明らかとなった。2.白血病を誘導する融合遺伝子CALM-AF10については、これまでにCALMの核外移行シグナルNESと推定される配列の変異体を作製し、CALM-AF10は大部分が細胞質に存在するのに対し、CALM-AF10のNES欠損変異体(CALMΔNES-AF10)は核に局在すること、CALMΔNES-AF10導入骨髄細胞にはCALM-AF10が有す増殖付与活性が消失していたことから、増殖付与活性にはCALMのNESが必要であることを発見していた。そこで、CALMのNES配列のみを付加したAF10を作成し(NES-AF10)、この変異体がCALM-AF10と類似の局在パターンを示したことから、CALMの機能的なNES配列を特定した。さらにNES-AF10導入骨髄細胞は増殖付与活性が認められた。そこで、CALM-AF10及びCALMΔNES-AF10、NES-AF10導入骨髄細胞をマウスに移植した結果、CALMΔNES-AF10は白血病を発症せず、CALM-AF10及びNES-AF10が白血病の発症を示したことから、白血病の誘導にCALMのNESが必要十分であることが明らかとなった。

以上の結果より、CALM-AF10になることでCALMのNESを獲得し、CALM-AF10が細胞質に存在するあるいは細胞質と核内の間を移行することで、相互作用を示す因子の機能に影響を及ぼし、白血病の誘導に起因するというCALM-AF10のNESによる新たな白血病誘導モデルが示唆された。これまでほとんど報告されていなかった分解経路へのCALMの関与を示唆する結果が得られたこと、また融合遺伝子CALM-AF10のCALM領域の白血病発症への意義、CALM-AF10のCALMが保持するNESによる新たな白血病誘導モデルを見出したことは大きな成果だと思われる。CALMの小胞輸送経路の関与については、今後はさらにCALMホモ欠損MEF細胞を用いて、TransferrinやEGF等の細胞内の取り込みやその後のリサイクリングや分解経路等の小胞輸送にCALMがどのような機能を果たしているのか、その分子機序を明らかにすることを検討している。また、融合遺伝子CALM-AF10については、今回報告したCALMのNESによる新たなCALM-AF10白血病の誘導モデルを証明するために、実際に核外へ輸送されている相互作用因子等の検討等を行っていくことを考えている。(抄録なし)
自然免疫応答を制御する新規ｃＧＭＰ経路の解析

受容体型グアニル酸シクラーゼであるGyc76Cは、自然免疫応答を制御する新規受容体である。Gyc76Cは、cGMP産生を介して液性免疫応答を、cGMP産生を介さずに細胞性免疫応答を制御する。本研究では、cGMP産生を介して液性免疫応答を制御する、Gyc76C下流で働く因子をゲノムワイドに探索し同定した。さらに、cGMP産生を介さずに細胞性免疫応答を制御する、Gyc76C下流で働く因子を同定した。近年、自然免疫系が、感染症のみならず、当初その関連性が予想されることもなかった、慢性炎症疾患や、ガン転移、生活習慣病などとも深い関わりがあることが示されてきている。したがって、それらの疾患の理解と、それを標的とした創薬を考える際には、自然免疫系の理解が不可欠である。研究代表者は、ショウジョウバエの遺伝学を利用した網羅的解析から、自然免疫系を制御する新規受容体Gyc76Cを同定した。Gyc76Cは受容体型グアニル酸シクラーゼであり、Tol1受容体とは独立して機能するものの、cGMP産生を介してTol1受容体の下流に位置するdMyD88依存に抗菌ペプチドの産生などの液性免疫を誘導する。そこで、本研究では、自然免疫系を制御するこの新規cGMP経路の制御機構を明らかにすることを目的とした。加えて、同じGyc76CがcGMPに依存しない経路で細胞性免疫応答を誘導することから、その分子基盤をも明らかにすることにした。本年度は次のように研究を実施した。ショウジョウバエDL1細胞を用いて、dMyD88依存の抗菌ペプチド産生が、DG2の過剰発現により増強されることを確認した。そして、このDG2によるdMyD88依存の抗菌ペプチド産生の増強にDG2のリン酸化活性が必要であることを、リン酸化活性に必要なアミノ酸を置換した変異体DG2を用いて示した。dMyD88のC末端側には、cGMPキナーゼによりリン酸化を受けるコンセンサス配列が存在しており、DG2が直接dMyD88をリン酸化し、dMyD88からのシグナルを活性化する可能性が高いと予想したが、dMyD88のリン酸化を受けるコンセンサス配列は必要ないことが明らかとなった。Gyc76Cは受容体型グアニル酸シクラーゼであり、Toll受容体とは独立して機能するものの、cGMP産生を介してToll受容体の下流に位置するdMyD88依存に抗菌ペプチドの産生などの液性免疫を誘導する。昨年度は、cGMPキナーゼがdMyD88をリン酸化し、dMyD88からのシグナルを活性化する可能性を考えたが、dMyD88のリン酸化を受けるコンセンサス配列はシグナルの活性化には必要ないことが明らかとなった。そこで、今年度はGyc76Cによる抗菌ペプチド産生誘導に必要な因子を同定するために、DL1細胞を用いたゲノムワイドRNAiスクリーニングを開始した。さらに、Gyc76Cによる抗菌ペプチド産生誘導に伴い、dMyD88と複合体を形成しているpelleに対する抗体を作成し、pelleがリン酸化を受けているかどうか調べた。近年、自然免疫系が、感染症のみならず、慢性炎症疾患や、ガン転移、生活習慣病などとも深い関わりがあることが示されてきている。Gyc76Cは受容体型グアニル酸シクラーゼであり、Tol1受容体とは独立して機能するものの、cGMP産生を介してToll受容体の下流に位置するdMyD88依存に抗菌ペプチドの産生などの液性免疫を誘導する。

昨年度までに、ショウジョウバエDL1細胞を用いて、dMyD88依存の抗菌ペプチド産生が、cGMP依存性プロテインキナーゼ(cGK)の過剰発現により増強されることを確認した。そして、このcGKによるdMyD88依存の抗菌ペプチド産生の増強にはcGKのリン酸化活性が必要であるが、dMyD88は直接的な基質ではないことが示唆された。そこで、DL1細胞を用いたゲノムワイドRNAiスクリーニング系を確立し、今年度そのスクリーニングからプロテインフォスファターゼ(PP)複合体を同定した。そして、PP複合体は、Gyc76Cに依存した抗菌ペプチドの発現誘導と、Gyc76CやcGKと同様に、グラム陽性菌に対する宿主の感染抵抗性の発現に必要であった。この結果は、PP複合体が、cGKと同様に、新規cGMP経路の制御に関わっていることを示している。また、Gyc76Cによる細胞性免疫応答に関わる低分子量Gタンパク質を同定した。26年度が最終年度であるため、記入しない。生物系薬学26年度が最終年度であるため、記入しない。年度初めに提出した交付申請書に記載した研究実施計画はすべて達成されているから。平成24年度にdMyD88がDG2の標的因子でないことが示唆されたので、これまでの研究推進方策に従い、DL1細胞を用いてDG2によりリン酸化される因子の同定を行う。さらに、Gyc76Cが活性化するcGMP非依存の経路の解明をGyc76Cと共免疫沈降する因子に着目して進める。dMyD88がcGMPキナーゼの直接的な標的ではないことが明らかとなったため、これまでの研究推進方策に従い、DL1細胞を用いたゲノムワイドRNAiスクリーニングを行い、Gyc76Cによる抗菌ペプチド産生誘導に必要な因子を同定する。今年度作成したショウジョウバエ変異体が蛹期で致死となったため、その変異体を用いた解析を行えなかったため。次年度は、Gal80システムを用いて、この致死性を克服する変異体を作成する。作成したショウジョウバエ変異体が、蛹期で致死となったために、解析ができなかったため。Gal80システムを用いて、蛹期の致死性を回避して、予定した解析を行う。
特発性腎症の宿主要因としてのHLAクラスI、II、III領域遺伝子連鎖の解明。

1.日本人の特発性膜性腎症については、HLAクラスII遺伝子のDRBI*1501、DRB5*0101、DQA1*0102、DQB1*0602と強い相関を有することを既に報告し、今回は、クラスII遺伝子の近傍に存在するクラスIII遺伝子について、その相関を検討した。クラスIIIには、BF、C2、C4A、C4B、のアリルが存在し、それぞれの頻度をもとめたが、正常対照と比較して、有意に頻度が上昇及び低下しているものはなく、またクラスII遺伝子との連鎖も見られなかった。また白人患者には、C4A遺伝子の欠失したものが多いが、日本人では正常対照者と比較して、頻度に変化はなかった。2.微小変化型ネフローゼ症候群については、DQB*0302との強い相関が有り、高令者及び小児のいわゆるステロイド反応性ネフローゼ症候群について、より相関が強かった。3. IgA腎症については、DRB4*0101との相関が最も強く、腎障害を有する例に関して、DRB1*0405及び、DQB1*0401との相関が強かった。以上、特発性膜性腎症についての腎生検による病理的診断につぐ補助診断としてHLAクラスII遺伝子タイピングが有用であった。
パラメトリックX線の空間的および時間的均一性に関する研究

結晶と相対論的荷電粒子の相互作用によるX線放射現象であるパラメトリックX線放射(PXR)の特性を調べるため、前年度に引き続き日本大学電子線利用研究施設で開発された2結晶型PXR発生装置からのX線ビームの空間プロファイルと時間構造を調べた。空間プロファイルの一様化は、ターゲット結晶内での電子多重散乱によるものと考えられ、反射用の第2結晶での回折曲線も含めてモンテカルロ計算とおおむね整合する。しかしながら、単純な運動学的な描像に基づく光線追跡では第3結晶回折後の均一性の説明が困難であり、PXRを用いて回折強調型の位相差イメージングが可能となっている実験結果とは整合しない。これらの結果は、PXRの波面形成についてより本質的な研究の必要性の示唆している。また、小型のNaIシンチレータと光電子増倍管を組み合わせて数10ns程度の時間分解能のX線検出器を製作し、PXRマクロパルスの計測を行った。その結果、パルスの前半と後半では第2結晶回折曲線の振舞いなどで違いが認められた。原因として電子ビームのパルス内での変動や、ターゲット結晶が受ける熱衝撃の影響が考えられる。電子ビームの集束条件に強く依存する傾向が見られ、パルス前半のみX線が強くパルス後半の電子ビームの寄与が少ない状況が生じることが判明した。この状態ではPXRの点光源性が高まり、エネルギー分解能やX線イメージの解像度が向上するという結果も得ている。これらの成果より、PXRの品質の電子ビーム集束条件への依存性が確認されるとともに、リニアックのようなパルス駆動型の加速器を用いる場合においてはパルスの時間構造の最適化が重要となることが明らかになった。結晶と相対論的荷電粒子の相互作用によるX線放射現象であるパラメトリックX線放射(PXR)の特性を調べるため、日本大学電子線利用研究施設で開発された2結晶型PXR発生装置からのX線ビームのプロファイルなどを調べた。PXR発生装置側の第2結晶および大気中にX線ビームを取り出した後の3番目の分光結晶でスキャニングを行い回折曲線の測定をしたところ、その回折幅はPXRの運動学的理論とX線動力学回折の組み合わせによる光線追跡シミュレーションの結果と良く一致し、測定されたX線がPXR起源であることが示された。しかしその反面、X線のビームプロファイル(断面の形状)に関しては、理想的な電子ビームについての計算で得られるドーナツ状にはならずに、均一な分布となる傾向が認められた。様々なエネルギーのPXRビームのプロファイルをイメージングプレート(IP)で測定したところ、67keV程度の低エネルギーではドーナツ状の形状が僅かに認められたが、10keV以上のエネルギーだとほぼ均一なビームとなっていた。これは結晶内部で電子ビームが多重散乱を受けて発散した影響であると示唆されるが、一方でX線の単色性や指向性はほとんど影響を受けていない。この現象を説明することを目指して、従来のシミュレーションコードにマクロ粒子モデルを導入し、電子ビームのエミッタンスの寄与を扱えるようにした。今後、結晶内でビームが発散していく効果を導入していく予定である。時間的な振る舞いについては、電子ビーム照射の熱負荷に起因する歪の変化による長期変動を観測した。また、20μsのマクロパルス内でのPXR強度の均一性を調べるため、シンチレータなどの測定系の準備を進めた。
我が国のインバウンド戦略における「おもてなし」に対する評価の多面性に関する研究

インバウンド戦略を検討するために定量的調査を実施し、外国人が意識する日本のイメージや強み、及びおもてなしを含めた日本における観光の魅力等について把握するとともに、同じ日本を対象とした日本人による国内観光旅行がどのような需要によって生じているかに把握を試みた。特に、今年度の分析では訪日人数が欧米において最も多く、長期に渡って安定的に多いアメリカ人を対象に調査を実施した。その結果、アメリカ人が思う日本人の強みは、文化・人・食にあることが示さ、その一方で日本人が思う日本の強みがおもてなし・安全・治安というように両者で一致しないことが明らかとなった。本研究は、わが国のインバウンド観光を国際的な視座より展開していくために、受け手である消費者のコンテクストに応じた「おもてなし」をはじめとするわが国独自の様々な観光コンテンツの充実とその提供による、訪日観光客の満足度を高める国家レベルでの政策展開、さらには組織レベルでのマネジメント戦略が必要であるとの基本設定に基づき、未だ明らかにされていない「おもてなし」の概念の定義と規定要因を明らかにし、測定手法の開発とそれを用いた国際比較を通して、国際社会におけるわが国の現状とその特徴を定量的に明らかにすることを目的とするものである。そこで本年度においては、前年度に引き続き「おもてなし」の概念化、およびその定量的把握の検討を行った。具体的には経営学、商学、社会学、地理学、経済学、健康科学などの各領域における研究成果を踏まえ、さらには観光業に関わる国内外の関係者へのヒヤリングおよびインタビュー調査を実施した。さらに上記の検討によって抽出された「おもてなし」の概念構成やその規定要因などに基づき調査票の検討を行った。なお、本調査においては、国際比較を視座に入れているため、当該研究課題において関連する、先行研究および当該課題に関しての研究実績を要し、データの構築が進められている諸機関などとも意見交換を実施し、国際比較研究により活用しうるデータ構築の方法と内容の検討を行った。また実施する調査準備として、既存データを加味した形で、調査対象国の絞り込み、調査項目の検討、および比較対象国における観光の独自性およびそのコンテクストの検討を行った。そこで本研究においては、「おもてなし」の概念化、およびその定量的把握の検討を行った。具体的には先行する各領域における研究成果を踏まえ、さらには観光業に関わる国内外の関係者へのインタビュー調査を実施し、最終的に「おもてなし」の概念構成やその規定要因などに関する調査票による調査を実施し、定量的なデータ構築を行った。本研究の結果としては、日米間における「おもてなし」の概念には、明確な違いが見られた。またその構成要素として位置づける事のできる「文化」、「食」、「人」の融合をどのように位置づけていくかが、「おもてなし」を概念的に検討していく上で重要となる。課題としては、本研究の結果を実践活動につなげていくことが重要であり、そのことにより、日本の各地域のブランド構築戦略の検討が可能となる。本研究は、アメリカ人を対象としたものであり、今後は、アジア圏や欧州の消費者を対象に同様な研究を進める必要がある。そこで本年度においては、「おもてなし」の概念化、およびその定量的把握の検討を行った。

なお、本調査においては、国際比較を視座に入れているため、当該研究課題において関連する、先行研究および当該課題に関しての研究実績を要し、データの構築が進められている諸機関などとも意見交換を実施し、国際比較研究により活用しうるデータ構築の方法と内容の検討を行った。また次年度において実施する調査の準備を行った。インターネット調査では、専門の業者への委託によりどの国の対象者について実施するかに関しての検討を行った。現時点では、日、米、中の三カ国を想定している。さらに次年度必要に応じて財団法人静岡県コンベンション協会との共同により、在日旅行者を対象とした半構造化インタビュー調査、もしくはアンケート調査の企画を検討した。本年度においては、当該研究の国際比較を可能とするための検討を中心に行った。具体的には、本研究において実施する予定の定量的なデータ構築に際して、国際比較可能な形での「おもてなし」の概念規定に関する検討、当該概念の把握に際しての定量化に向けた調査ツールの確定、調査実施に向けた準備がほぼ完了した。国際比較を可能とする「おもてなし」の概念規定に関する検討に関しては、本年度において、国内外の文献、および国内外の関連する専門家、および機関、組織に対するヒヤリングおよびインタビュー調査などを実施することによりほぼ終了している。調査ツールに関しても、調査対象国において国際比較可能な形での項目検討が終了しており、また調査項目の確定とチェック、作業段取りの選定、データ解析なども終了し、実際に調査を実施する外部機関との調整作業も終了している状態にある。平成23年度における実施予定の内容は、「おもてなし」の概念規定に関する検討、当該概念の把握に際しての定量化に向けた調査ツールの確定、および次年度の調査実施に向けた準備であった。「おもてなし」の概念規定に関する検討に関しては、本年度において、国内外の文献、および国内外の関連する専門家、および機関、組織に対するヒヤリングおよびインタビュー調査などを実施することによりほぼ終了している。調査ツールの確定に関しても、基本的にその内容に関する骨子に関しては、大きな項目の検討が終了しており、次年度以降、より具体的な調査項目の確定とチェック、作業段取りの選定、データ解析などの手順を明確化する。また、これらの作業に関して、実際にそれを実施する外部組織に関しても既に選定を終えており、最終的な確定が終了次第、作業を実施できる状態にある。次年度は、最終年度にあたるため、本研究の取りまとめを行うために、本年度に準備が終了している、「おもてなし」概念を軸とした、国際比較調査を実施することを予定している。また、得られたデータに関しては、定量的な解析が可能となるようデータセットを構築し、取りまとめに向けて解析を進める。次年度は、本年度に検討を行った調査ツールに基づいて調査を実施することを予定している。また、得られたデータに関しては、定量的な解析が可能となるようデータセットを構築し、解析を進める。次年度は、国際比較調査を外部の専門機関に委託して実施するための費用を予定している。
繁栄の後 - フリーターと新中産階級の限界

本研究は日本における「フリーター」現象を、グローバルな若者文化とポスト産業主義社会の時代性との関連のなかで理解しようとするものであった。その目的は以下の三点であった。まず、日本社会における過去15年から20年のフリーターの増加を、労働市場と若者の文化の価値観の変容から考察すること。さらにフリーターが低収入と不安定な雇用状況にいかに対処し、正規雇用へ移っていく過程を捉えるとともに、政府の政策がかれらのキャリア作りにいかなる動機を与えているかを検討すること。最後にポスト産業主義社会のなかで、日本の若者の生活の変化を考えること。とりわけグローバルな消費文化、および日本独自の若者のサブカルチャーとの関連のなかでそれを捉え、分析することを重視した。本年度は前年度に引き続き、日本のフリーター・若者文化の理解を深めるため、東京と大阪の各地で主に若者ブリーターのフィールドワークを行った。その結果、フリーターと呼ばれる人びとの多様性を具体的に把握することができた。とりわけ、今日の経済状況のなかでやむなくフリーターや派遣社員になっている若者のみならず、自らの選択でフリーターになっていると主張する若者たちと出会うことができた。かれらはボスト産業主義の時代において、近代社会で当然のごとく受けいれられてきた「良い仕事」や「良いキャリア」と呼ばれるものとは別のものに価値を見出している。かれらにとって「大人」の定義も従来と異なるものであることが判明した。変貌する日本社会におけるフリーターの存在は、単なる経済問題としてのみならず、若者の価値観の変容という点からも考察する必要があることが明らかとなった。本研究は日本における「フリーター」現象を、グローバルな若者文化とポスト産業主義社会の時代性との関連のなかで理解しようとするものである。その目的はまず、日本社会における過去15年から20年のフリーターの増加を、労働市場と若者の文化の価値観の変容から考察することである。初年度は、フリーターが低収入と不安定な雇用状況にいかに対処し、正規雇用へ移っていこうとしているか、そして政府の政策がかれらのキャリア作りにいかなる動機を与えているかについて検討した。また、ポスト産業主義社会のなかで、日本の若者の生活の変化を考えるため、スミスが東京の下北沢を中心に継続的にフィールドワークを行った。かれらの生活がグローバルな消費文化、および日本独自の若者のサブカルチャーといかなる関係があるのかをインタビューを通して考察した。この調査を通して、フリーターの労働者としての権利の確保・擁護をするために、フリーターの組織化・組合化を進めようとしている若者たちに出会うことができた。かれらは正規雇用へ移行しないままで、自らの雇用状況を安定させようとしており、このような活動を目の当たりにしたことは、今後の研究に新しい方向性を与えるものであった。さらに京都と大阪の関西方面でのフリーターの実態を調べるために、現地でフィールドワークとインタビューを行い、東京の実態との比較・対照も行った。さらに「フリーター」の登場を歴史的にとらえるため、さまざまな二次文献を収集し、調査を行った。
糖脂質および糖脂質を構成するオリゴ糖の化学合成と生理作用

スフィンゴ糖脂質の構造と機能との関係を分子レベルで研究するために、「化学変換法」によるスフィンゴ糖脂質の化学合成について研究してきた。出発物質としてヒト赤血球膜中の主要糖脂質であるグロボシドを用いた。実際には、まずそのモデル物質としてベンジルβーラクトシドについて水酸基の選択的保護法およびグリコシル化の最適反応条件を確立し、その結果を糖脂質に適用するというアプロ-チをとった。その結果、グロボシドの末端にNーアセチルガラクトサミン残基の3,4位がイソプリデン化されたグロボシド誘導体(収率68%)がほぼ選択的に生成する条件が見い出された。イソプロピリデン基の結合位置は、生成物のアセチル体とグロボシドの完全アセチル体のNMRデ-タとの比較により決定した。次に、常法に従ってベンジル化、脱イソプロピリデン化を行ない、末端Nーアセチルガラクトサミン残基の3,4位の水酸基だけがフリ-の「ベンジルグロボシド糖受容体」へと変換した。この糖受容体にNーアセルチガラクトサミンまたはガラクト-ス残基を位置・アノマ-選択的に導入することにより、フォルスマン抗原、パラフォルンマン抗原、SSEAー3抗原などのグロボ系列糖脂質を合成することができる。目下、それぞれのグリコシル化反応を検討中である。一方、糖質の選択的イソプロピリデン化と糖脂質を構成するオリゴ糖の簡便な合成法を開発した。すなわち、ガラクト-ス、Nーアセチルグリコサミン、クラト-スなどをイソプロピリデン化することにより水酸基が1または2個だけフリ-の直鎖状糖誘導体を高収率で得た。それぞれの生成物について、αーフコシル化反応を行いガラクト-スからは2ーαーLーFucosylgalactoseを合成する最短ル-トを開発した。また、クラト-スからは、2',6'ーDiーαーLーFucosyllactoseおよび2'ーαーLーFucosyllactoseを合成した。さらに、糖脂質を構成するオリゴ糖の合成に拡張中である。第3に、Nーアセチルヘキソサミンの簡便なグリコシド化法を開発した。すなわち、Pyridinium pーtolueneーsulphonateまたはtriflateを触媒として、アミノ酸の完全アセチル体とアルコ-ル類または二糖性糖受容体との反応により相当するアルキルβーグリコシドおよび三糖類を高収率で生成する条件を見い出した。この方法によりAminoCTHおよびアシアロGM2などの糖脂質を構成する三糖類を合成した(この結果は、XIth International Synposium on Glycoconjugates,1991,Torontoで発表予定)。
水のクラスター構造が植物の生長・分化・増殖に与える影響

機能水とよばれる物理的あるいは物理化学的処理を施した水の植物生育などへの影響を調べた。主に、電気分解と電場処理(高周波電場)を対象とした。得られた結果の大要は以下の通りである。1.ニンジン不定胚培養では電気分解によるアルカリ水は生体重の増加を阻害し、奇形胚の割合を増した。2.ホウレンソウの葉に電場処理水を散布した直後の気孔開度は、無処理水散布に較べ若干大きかった。培養液に電場処理水を使ったときの蒸散量は、無処理水に較べ有意な差はなかった。3.サラダナの養液栽培では、電場処理水による影響は、生体重、乾物重、クロロフィル含量のいずれにおいても対照区と比較して有意な差はなかった。4.カイワレダイコンの発芽・生育試験では、原水として蒸留水を用いた場合、電場処理(活性炭処理を含む)、活性炭処理、電気分解アルカリ水で顕著に対照区と比較して生育が促進されたが、電気分解酸性水、電場処理(活性炭処理を含まない)では生育は抑制された。しかし、原水として水道水を使用した場合は電場処理(活性炭処理を含まない)でも生育が促進された。電場処理の電圧の影響を調べたところ、4390Vで、顕著な生育促進効果がみられたが、実験の再現性には問題があった。カイワレダイコン種子の吸水率は電気分解酸性水が他の処理に較べて高かったが、糖含量の変化には大きな差はなかった。6.水をミキサ-で攪拌するという単純な物理的衝撃のホウレンソウの発芽・初期生育への影響は結果が実験ごとに異なり再現性のある結論は得られなかった。以上、再現性に問題のある実験結果が多く、追試を含めて実験を継続中である。機能水あるいは活性水(以後、機能水)とよばれる水の農業などへの応用が注目されている。機能水とは、水に電場処理、磁気処理、光照射などの処理を施したもので、植物生育の促進効果などが報告されているが、その効果を疑問視する人達もいる。本研究は、機能水の効果(あるいは無効果)を科学的に明らかにし、その効果の発現機構を解明することを第一の目的としている。初年度には、機能水の植物培養・栽培への影響の現象論的な把握を主な目的とした。電気分解水と電場処理水を用いて、次のような実験と結果を得た。1)ニンジン不定胚の培養では、水の電気分解によるアルカリ水(pH無調整)、同(pH調整)、無処理水で実験を行い、アルカリ水(pH調整)、同(pH無調整)、無処理水の順に生体重は小さく、奇形胚の割合も高かった。この結果は、アルカリ水が不定胚培養には適していないことを示している。また、アルカリ水のROPは、培養開始後急速に通常の値に戻り、処理の効果が長続きしないことが示唆された。2)カイワレ大根の発芽試験では、第1回目には電場処理水、電気分解アルカリ水、無処理水、電気分解酸性水の順に、生体重も大きく、発芽率もよかった。この差は一目で確認できるほど大きかった。第2回目の実験では電場処理水、(電場処理+オートクレーブ)水、活性炭処理水、電気分解アルカリ水、電気分解酸性水、無処理水の順で生体重も大きく、発芽率もよかったが、その差は大きくなかった。3)ホウレンソウを使い、電場処理水を葉に散布した直後の気孔開度は、無処理水散布に較べ、若干大きかったが、統計的な有為差検定は今後の課題である。

培養液に電場処理水を使ったときの蒸散量は、無処理水に較べ有為な差はなかった。以上のように、電場処理水、電気分解水ともに、その効果の最終的な確認には、さらなる実験の積み重ねが必要であり、今後、継続して実験を行う予定である。機能水の植物生育などへの影響をまず現象面で確認するために、前年度に引き続き種々の実験を行った。実験は電場処理と電気分解による水処理に限定し、サラダナ養液栽培実験、カイワレダイコンの発芽および初期生育実験、カイワレダイコンの種子発芽時の吸水率および糖含量の経時変化の測定などを行った。1.サラダナの養液栽培では、水の電場処理による影響は生体重、乾物重、クロロフィル含量のいずれにおいてもコントロールと比較して有意な差は認められなかった。2.カイワレダイコンの発芽試験では、原水として蒸留水を用いた場合、電場処理(活性炭処理を含む)、活性炭処理、電気分解によるアルカリ水で顕著にコントロールと比較して生育が良かったが、電気分解酸性水、電場処理(活性炭処理を含まない)では生育が抑制された。しかし、原水として水道水を使用した場合は電場処理(活性炭処理を含まない)でも生育が促進された。電気分解アルカリ水の効果に及ぼす電気分解電圧の影響を調べたところ、実験を行うたびに異なった結果がでて統一的な見解は得られなかった。酸性水の場合は、電圧が高いほど生育抑制効果は大きかった。電気分解アルカリ水を様々な濃度で希釈した場合は希釈率による生育の差は有意ではなかった。電場処理の電圧の影響を調べたところ4390Vで顕著な生育促進効果がみれた。この実験は現在追試験中である。3.カイワレダイコンの吸水率は、電気分解酸性水が、合吸水開始後10時間以降他の実験区にくらべて高い値を示した。糖含量の変化は大きな差はなかった。以上のように、機能水の効果がみられる場合もあるが、その再現性には問題がありさらなる実験が必要である。昨年度まで、水の電場処理、電気分解処理などの植物生育への影響評価を中心に検討してきた。しかし、これらの処理では、水のクラスターなどの物理的構造の変化だけでなく、溶解しているイオンなどの微量要素も変化する。そこで、本年度は、純粋に水の構造だけを変化させる目的で、物理的衝撃による処理の影響評価を中心に検討した。具体的には、水をミキサ-で強力に撹拌し、この水を使って、ホウレンソウの発芽および初期生育の実験を行った。得られた結果の数例を次に述べる。1.イオン交換水を30分連続して、ミキサ-(容量1200ml、回転数9、200/min)で撹拌し、対照区として30分バブリングした水を用意し、発芽試験をした。その結果、ミキサ-処理により発芽率は向上した(播種後6日:ミキサ-区78%、対照区60%)。この結果は、単純な物理的衝撃だけでも植物生理に関係する水の構造が変化することを示唆するものである。2.ほぼ同様の実験を繰り返した結果、ミキサ-処理により発芽率は低下した(播種後6日:ミキサ-区58%、対照区67%)。3.同様に、発芽率と初期生育を調べた。その結果、対照区と比較して発芽率には大きな差はなかったが、播種後15日の生体重は低下した(ミキサ-区49.9mg、対照区74.8mg)このように、ミキサ-撹拌により単純に物理的衝撃を与えるだけの処理により、植物生理に影響を与える水の構造の変化が示唆されたが、影響の方向性・程度は実験ごとに異なり、統一的な方向性を示すものではなかった。今後は同様の実験を繰り返し、結果の再現性の低さの原因を含め、さらに検討する予定である。
延髄孤束核に於ける神経伝達機構の形態学的研究

孤束核に豊富に分布する神経ペブタイド作動性神経入力の内、サブスタンスP(SP)及びカルチトニン関連物質(CGRP)含有線維に焦点を当て、その形態学的特徴について、光顕及び電顕的観察を行なった。SP及びCGRPの一部は、圧及び化学受容器からも孤束核内へ送られている事から、血圧調節機構を考える上で、両ペブタイドは、重要な神経活性物質として注目を受けている。まず光顕的に、免疫組織化学二重標識法を用い両物質の関連を調べた所、尾側孤束核内で、両者を共存する線維が、多数分布する事を証明出来た。この共存は、孤束核の吻側部では、ほとんど認められなかった。心血管系機能の中枢が孤束核の尾側部に集中している事から、血圧調節にSP/CGRP共存線維が、大きく関与している事が示唆された。次に光顕レベルで確認されたSP/CGRP共存線維が、どの様なシナプス接着様式を示すのかを、教室で開発した方法を用い、検討した所、共存線維終末は、他の神経細胞体、樹状突起のみならず、他の線維終末(非SP,非CGRP作動性)ともシナスプを形成していた。この事から共存線維は、孤束核内在細胞や軸索成分と多様な関係を有している事が明らかとなった。
戦前農家経済調査の体系的保存と活用方法の基盤確立

本研究の目的は、戦前期に実施された「農家調査」の体系的保存とその有効活用方法について、その基盤確立を図ることである。対象となるのは、京都大学農林経済学教室が実施した農家調査を始めとした戦前期の農家調査資料である。本研究ではそのような統計資料論的な検討を踏まえた上で、個別農家調査票の画像も含めたデータベース化と、同一農家が連年にわたって調査されている場合も鑑み、そのパネルデータ化の可能性も検討する。それらのサンプルについて、コンピュータ技術の最先端の成果を取り入れつつ、研究上の参入障壁を出来るだけ取り除き、多くの研究者によって利用されるようなデジタルアーカイブを構築し、これらのデータを用いた実証分析の基盤を形成することが、本研究の基礎をなす。今年度は、前年度の研究成果をふまえつつ、以下の研究を実施した。第一に、前年度に継続して農業経営実態調査,家計費実態調査の資料論的検討とデジタルアーカイブ化に取り組んだ。ここでは、1件の学会報告を実施した。第二に、京都大学に所蔵されている資料の中から,また戦前期に実施された各種の農家調査のデータベース化を実施した。第三に、前年度に実施した帝国農会による農業経営調査のデータベースを用いて、昭和恐慌の農家対処行動、農家のリスク回避度の計測などの実証分析を行った。これらは2件の学会報告として行い、そのうち1件が査読付き論文として刊行された。また、帝国農会が実施した「養蚕経営実績調査」についてもデジタルアーカイブ化に向けた準備を行い、!件の学会報告を実施し、後に査読付き論文として受理された。本研究の目的は,戦前期に実施された「農家調査」の体系的保存とその有効活用方法について,その基盤確立を図ることである。対象となるのは,京都大学農林経済学教室が実施した農家調査である。本研究ではそのような統計資料論的な検討を踏まえた上で,個別農家調査票の画像も含めたデータベース化と,同一農家が連年にわたって調査されている場合も鑑み,そのパネルデータ化の可能性も検討する。それらのサンプルについて,コンピュータ技術の最先端の成果を取り入れつつ,研究上の参入障壁を出来るだけ取り除き,多くの研究者によって利用されるようなデジタルアーカイブを構築し,これらのデータを用いた実証分析の基盤を形成することが,本研究の基礎をなす。今年度は,研究開始以前までに実施してきた成果をふまえ、保管されている個票の保存状態を把握しつつ、本研究の対象とする府県の絞り込みを行った。一方で、デジタルアーカイブの際に必要となる、統計資料としての位置づけの明確化を、経済統計的側面と農業経営学的側面の両者から実行した。具体的には,京都大学に所蔵されている資料の中から,農業経営実態調査,家計費実態調査の資料論的検討とデジタルアーカイブ化に着手した。また戦前期に実施された各種の農家調査の中から,帝国農会が実施した農業経営調査にかんしてデータベース化を行い,そのデータ特性の把握と数量分析を実施した。今年度の成果について,京都大学学術情報メディアセンターセミナー「歴史経済資料の復元と利用」として開催した。
IκB遺伝子導入による自家静脈グラフト内膜肥厚の制御に関する基礎的研究

血管形成術後の再狭窄病変などの血管平滑筋細胞(VSMC)の増殖性病変に、アポトーシスが重要な役割を果たしている可能性が示唆されている。本研究では、NF-kBがVSMCのアポトーシスを制御している可能性に着目し、アデノウイルスベクターを用いた安定型IkBa遣伝子導入によるNF-kBの特異的抑制が、サイトカイン刺激下でのVSMCのアポトーシスとCaspase-3様プロテアーゼの活性化に及ぼす影響を検討した。【方法】NF-kBの制御タンパクであるIkBaの安定体(IkBDN)を発現する非増殖型アデノウイルスベクター(AdexIkBDN)を作製し、Polyethylenimine(PEI)存在下でMOI=10にてVSMCに感染させ、以下の実験を行った。細胞内のIkBaおよびIkBDNの発現をウエスタンブロッテイング法にて、IkBDN強制発現によるNF-kB抑制効果をゲルシフトアッセイおよびルシフェラーゼアッセイにて検討した。次にHoechst-33258染色にてアポトーシス細胞を検出、ELISAにて断片化DNA量を測定し、IkBDN強制発現によるTNF-a刺激下でのアポトーシス誘導効果を検討した。さらに、TNF-a刺激後のCaspase-3およびCaspase-2活性を経時的に測定した。【結果と考察】AdexIkBDNによるIkBDNの発現は、感染6時間後より認められ、48時間以上持続した。またIkBDNは、TNF-a刺激による分解を受けず、NF-kBを特異的かつ強力に抑制した。さらに、TNF-a刺激のみではVSMCのアポトーシスは誘導されなかったが、AdexIkBDN感染により、TNF-a刺激後の著明なアポトーシスとCaspase-3様プロテアーゼの活性化が認められた。一方、IL-1b刺激下ではAdexIkBDN感染によるアポトーシスは誘導されなかった。以上より、VSMCへのIkBDN遺伝子導入は、NF-kBの特異的抑制と、Caspaseカスケードの活性化により、TNF-a依存性のアポトーシスを誘導することが明らかとなった。【目的】血行再建術後自家静脈グラフトの内膜肥厚は中膜平滑筋細胞の内膜への遊走と増殖がその成因であるとされ、この過程にはNF-κBの関与が指摘されている。そこで、NF-κBの機能抑制因子である変異体IκBα(IκBΔN)のcDNAを組み換えアデノウイルスを用いて培養血管平滑筋細胞に導入し、その感染効率とTNF-α刺激下での平滑筋細胞のアポトーシスに与える影響について検討した。【方法】組み換えアデノウイルス(Adex IκBΔN)を培養血管平滑筋細胞に感染させた群をIκBΔN遺伝子導入群、LacZ遺伝子発現組み換えアデノウイルス(AdexLacZ)感染群をLacZ遺伝子導入群、通常培養群をコントロール群とし、以下の実験を行った。(1)LacZ遺伝子導入群にてX-gal染色を行い、組み換えアデノウイルスによる血管平滑筋細胞へのLacZ遺伝子導入効率を検討した。(2)NF-κB活性の抑制効果を各群で検討した。(3)TNF刺激下でのアポトーシス誘導を各群で検討した。(4)TNF刺激下でのcaspase-3活性を各群で検討した。【結果】(1)MOI(multiplicity of infection)=10にて導入効率は約10%であったが、ウイルス感染時にPolyethylenimine(PEI)を加えることにより導入効率は飛躍的に向上した。(2)IκBΔNの過剰発現はTNF刺激によるNF-κBの活性化を有意に抑制した。(3)IκBΔN遺伝子導入群で著明なアポトーシスが認められた。(4)IκBΔN遺伝子導入群でcaspase-3活性の上昇を認めた。【結語】変異体IκBαの過剰発現によりTNF-α刺激下での平滑筋細胞のアポトーシスが誘導された。

【結果と考察】AdexIkBDNによるIkBDNの発現は、感染6時間後より認められ、48時間以上持続した。またIkBDNは、TNF-a刺激による分解を受けず、NF-kBを特異的かつ強力に抑制した。さらに、TNF-a刺激のみではVSMCのアポトーシスは誘導されなかったが、AdexIkBDN感染により、TNF-a刺激後の著明なアポトーシスとCaspase-3様プロテアーゼの活性化が認められた。一方、IL-1b刺激下ではAdexIkBDN感染によるアポトーシスは誘導されなかった。以上より、VSMCへのIkBDN遺伝子導入は、NF-kBの特異的抑制と、Caspaseカスケードの活性化により、TNF-a依存性のアポトーシスを誘導することが明らかとなった。
動脈硬化症における血中ニトロチロシン含有リポタンパク質測定の臨床的意義

昨年度に引き続き、研究計画に沿ってELISAによるニロヒタンパク質測定法の確立」を優先的に検討した。ウエスタンブロッティングにより確認したニトロ化蛋白質を標準物質として、市販の抗ニトロチロシン抗体を用いてサンドイッチ法、直接吸着法および競合法を行った。サンドイッチ法では作成した標準物質の一部が測定できなかったが、直接吸着法および競合法では全ての標準物質が測定可能であった。ヒト血清サンプルはサンドイッチ法および直接吸着法では非常に低値であり、競合法では抗体の非特異反応の影響が示唆された。市販のELISAキットを使った測定でもヒト血清サンプルでは有意なシグナルを検出できなかった。しかし、血清サンプルを還元・アルキル化処理することにより直接吸着法の測定感度を高めることができ、健常者群と冠動脈疾患群を比較すると疾患群が有意に高かった(P=0.03)。また、高速液体クロマトグラフィー-電気化学的検出法(HPLC-ECD法)によるニトロチロシン定量においても、冠動脈疾患群が有意に高値であった(P=0.0003)。ニトロチロシン含有リポタンパク質測定では、抗ニトロチロシン抗体および各種アポリポタンパク質に対する抗体を用いてサンドイッチEL ISAの分析条件を詳細に検討したが、サンプルの前処理や超遠心でのリポタンパク質分画の分離を行った後の分析でも、ニトロチロシン含有リポタンパク質が血清中に存在していることを示す有意なデータは得られなかった。また、ニトロ化リポタンパク質に対する自己抗体についても、その存在を確認するまでには至らなかった。したがって、冠動脈疾患での血清ニトロチシン高値は、リポタンパク質粒子に存在するアポタンパク質がニトロ化の主要なターゲットタンパク質になっているはではなく、他の血漿タンパク質がトロ化を受けている可能性が示唆された。今年度の研究計画に沿って、「ELISAによる血中ニトロ化リポタンパク質測定の確立」を中心に研究を進めた。ELISAで用いるニトロ化標準物質は、超遠心法で分離したリポタンパク質をペルオキシナイトライト処理して調製し、SDS-PAGE後のウエスタンブロッティングで確認した。その結果、リポタンパク質がニトロ化されていること示す有意なバンドを得ることができたが、検出バンドはブロードであった。このため、ヘミン、ミエロパーオキシダーゼなど他のニトロ化試薬を導入して検討を行ったが問題の解決には至らなかった。しかし、アガロース電気泳動後のブロッテイングでは、リポタンパク質の位置に一致してニトロチロシンを検出でき良好な結果が得られた。ELISAでのニトロ化リポタンパク質測定では、捕捉抗体に抗アポB抗体(または抗アポA1抗体)を使用し、検出にはビオチン標識抗ニトロチロシン抗体を用いた。また、血中総ニトロチロシン測定では、捕捉抗体および検出抗体に抗ニトロチロシン抗体を使用した。いずれの場合も血清サンプルのシグナルが極めて小さく、ブランク値付近の値で検出できなかった。ニトロ化標準物質の測定値もモル吸光係数から算出した測定値と相関が認められなかったことから、使用した抗体の特異性に問題があると考え、数社より市販されているモノクローナル抗体およびポリクローナル抗体を使用し、さらに、非特異的反応の影響を考慮して、サンプル希釈液やブロッキング液組成も検討に加えたが大きな改善は認められなかった。現在、ELISA競合法による測定系にて検討を継続している。また、ニトロ化ウシ血清アルブミンを抗原にしたニトロ化リポタンパク質自己抗体検出の検討では、有意なシグナルを検出することはできなかったが、今後、ニトロ化リポタンパク質やニトロ化アポリポタンパク質などに抗原を変更して検討する必要がある。