hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アフリカの「自然保護という名の土地収奪」をめぐる重層的ポリティクス

●研究目的:本研究では、「よきもの」と考えられている「自然保護」が、実は「土地収奪」となっているアフリカでの実態(自然保護という名の土地収奪:green grab)に着目し、地域コミュニティに生じている影響および、それに対するコミュニティの対応を明らかにする。そのために、1自然保護が土地収奪となっている/いないの度合いが異なる4地域の事例(国名・地域:タンザニア・セレンゲティ、ケニア・アンボセリ、ケニア・サンブル、ボツワナ・カラハリ)を比較分析し、2コミュニティの内部およびそれを取り巻く外部アクターとの重層的なポリティクスを動態的に考察する。さらに、3土地権利の問題は、現在のみならず将来世代にも影響をおよぼす重要課題であるため、研究成果を調査地の住民およびローカルNGOに速やかに共有する場(利害関係者間対話:ISD)を創出する。このように本研究は、研究成果の社会還元を志向するものである。●研究方法と成果:タンザニア・セレンゲティ地域における研究では、国立公園(動物保護区)と村(人間活動エリア)の境界線にゆらぎがあることに着目し、ゆらぎの動態性を生み出す要因を抽出する実験をおこなった。具体的には、農作物を荒らす害獣となっているアフリカゾウが村に侵入してくる問題に対して、農民たちが実施する対策を協働でおこなった。また、他の3カ所の調査地でも、土地権利に対する住民の動きを超下。ケニア・サンブル地域では、国際環境NGOによるコミュニティの土地を自然保護区化する提案に対して、反対する住民の言説を収集し、ケニア・アンボセリ地域では、NGOが推進して設立した保護区のその後の展開を調査した。ボツワナ・カラハリ地域では、土地権を獲得た後のコミュニティ内の新しい連携の動向を分析した。研究計画にある14地域の事例調査、2コミュニティの内部とそれをとりまく外部アクターとの関係性に関する調査は、順調に進んでいる。それぞれの地域コミュニティで、土地に対する多様な働きかけが観察できており、その背景にある論理には、地域の歴史的経済的社会的な文脈が影響した固有性が観察できている。タンザニアの事例では、ゾウ・農民・保護区レンジャー・セレンゲティ県野生動物官といったアクターが、境界線を越境する行為とそれを阻止する行為をおこなっていることが明らかになった。村の畑に侵入するゾウ、それを保護区に戻そうと追い払う農民、保護区にまでゾウを追って入ってくる農民を排除したいレンジャーと動物官、という構図である。このように、「自然保護という名の土地収奪」に対し、現場で発生するミクロな攻防戦の観察と記録を引き続きおこなう。しかしその一方で、共通する点を見いだす萌芽も見られるので、さらなるデータを収集して、比較検討を深めていく計画である。2018年度は、4事例を比較検討する研究会を開催し、共通点や類似の傾向を研究チームで分析する。その内容をまとめ、日本アフリカ学会2019年度大会で発表するために準備を進める。フィールドワークは、引き続き4事例でそれぞれ実施する。また、2019年度に実施予定の3利害関係者対話の準備も進める。

しかしその一方で、共通する点を見いだす萌芽も見られるので、さらなるデータを収集して、比較検討を深めていく計画である。2018年度は、4事例を比較検討する研究会を開催し、共通点や類似の傾向を研究チームで分析する。その内容をまとめ、日本アフリカ学会2019年度大会で発表するために準備を進める。フィールドワークは、引き続き4事例でそれぞれ実施する。また、2019年度に実施予定の3利害関係者対話の準備も進める。
Intravital Cell Imagingによる脳内カルシウム信号の検討

【研究目的】培養細胞と個体レベルでの知見のギャップを埋めるためIntravital Cell Imaging法を開発し、個体レベルでニューロンおよびグリアのカルシウムシグナルをイメージ化するシステムを構築、虚血時のグリア・ニューロンにおけるグルタミン酸を介したシグナル伝達を検討することを目的とした。【方法および結果】SDラット(体重300g)にてイメージングに適する4血管閉塞モデルを作成。カルシウムイオン指示性蛍光色素であるfluo-3/AM(440μM、2.5μl)を海馬CA1および大脳皮質にmicroinjectionし、ファイバー共焦点顕微鏡(imaging fiberを共焦点スキャナ[CSU21,Yokogawa]とカップルさせたもの)で虚血前後の蛍光像を観察した。一過性(10min)前脳虚血負荷により、脳血流は海馬および大脳皮質共に約30%まで低下。海馬CA1領域では前脳虚血により虚血中からおよび血流再開後20分まで持続的に細胞内Ca^<2+>濃度が上昇していたが、大脳皮質では細胞内Ca^<2+>濃度の上昇は虚血中のみであった。この海馬の特殊性は虚血に対する脆弱性の原因の一つである可能性があり今後の検討を要する。また、electroporation法(10mA、30-40V、2ms-on 98ms-off x 10)によりadult ratにおいて、脳内の任意の部位にin situでCameleon(カルシウムイオン指示性の蛍光蛋白)を発現させることが可能になった。またGFAP陽性細胞に選択的にCameleonが発現するようベクターの組み替えを行った。これらにより、グリア特異的には発現したCameleonによりカルシウムイオン濃度の変化を観察できるようになった。今後、虚血時におけるグリア細胞のカルシウム反応を検討し、上記の海馬の特殊性の原因をグリア細胞に求め検索する予定である。【研究目的】培養細胞と個体レベルでの知見のギャップを埋めるためIntravital Cell Imaging法を開発し、個体レベルでニューロンおよびグリアのカルシウムシグナルをイメージ化するシステムを構築、正常時と虚血時のグリア・ニューロンにおけるグルタミン酸を介したシグナル伝達を検討する。【研究実施計画】脳の標識方法(脳へのin situ lipofection法による蛍光蛋白発現法と蛍光色素投与法)の開発および観察方法(共焦点蛍光顕微鏡とファイバー共焦点顕微鏡による蛍光観察法)の開発を今年度の目標とした。【方法および結果】全麻下のラットで、正立顕微鏡(BX50WI, Olympus)、共焦点Unit (CSU21,Yokogawa)、Image IntensifierおよびCCD Cameraにより画像を取得し解析した。ラットに慢性脳室カニュラを設置し、Plasmid DNA[Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET)をベースにしたカルシウムセンター蛍光蛋白であるCameleon:50μg/kg]をLiposomeと共に1日2回2日間投与後2日目に観察、または1回投与後48時間後に観察すると、両側の大脳皮質・基底核・海馬に観察可能な発現が見られた。またcranial windowを設け、硬膜外からCalcium Orange (1mMx1h)を投与し硬膜外にカバーガラスを固定し共焦点顕微鏡で観察できた。10分間の前脳虚血を顕微鏡観察下に負荷し、脳表カルシウムイオン濃度の持続的上昇が観察できた。引き続きファイバー共焦点顕微鏡(横河電機と共に新規開発)による観察、超音波照射による遺伝子導入促進について検討中である。【まとめ】硬膜外からの蛍光色素投与、脳室内へのPlasmid DNA投与により、生きているラットで脳表からの共焦点蛍光像の観察が可能になった。
自然免疫を担う病原体センサー蛋白質の構造基盤の解明

自然免疫受容体のTLR7、TLR8、TLR9およびNOD2に関して構造生物学的研究を進めた。TLR7およびTLR8については、ssRNAとの複合体の結晶構造を、TLR9に関してはCpG DNAとの複合体の結晶構造を明らかにし、これらのTLR受容体が核酸をリガンドとして活性化する機構を明らかにした。NOD2に関しては、不活性化型のADP結合型の結晶構造を明らかにした。な病気の治療薬のターゲットとして注目されている。本申請課題では,自然免疫系の受容体によるリガンド認識機構やシグナル伝達機構を主にX線結晶構造解析により明らかにすることを目的する。2.細胞内NLRs (Nod1,Nod2など)とリガンドの複合体(クローン病,アレルギー)本年度は、1に関してはTLR8とRNA複合体の結晶構造解析に成功した。この結果により、これまでTLR8はRNAの受容体だと考えられていたが、実際にはRNA存在下でウリジンを認識する受容体であることが明らかになった。さらに、CpG DNAを認識するTLR9の構造解析にも成功した。これにより、TLR9によるCpGモチーフを有するDNAの認識機構やTLR9の活性化機構、またアンタゴニストDNAの認識機構を明らかにすることができた。2に関してはNod1とNod2の大量調製法の検討を前年度に引き続き行った。その結果、高純度試料の調製に成功し、Nod2に関して構造解析可能な結晶を得ることができた。1.Toll-like receptor (TLRs) (エンドトキシンショック,抗ウイルス薬,ワクチン)2.NOD-like receptor (NLRs) (クローン病,アレルギー)本年度は、1に関してはTLR7の結晶構造決定に成功した。TLR7と合成リガンド複合体の構造、TLR7と一本鎖RNAの複合体の結晶構造から、TLR7のリガンド認識機構と活性化機構が明らかになった。2に関しては、NOD2受容体の不活性化型構造の結晶構造解析に成功した。これにより、NOD2の不活性化を維持するためのドメイン間の相互作用や、疾患変異との関連を明らかにすることができた。引き続き活性化状態を再構成する条件を検討し、活性化状態の構造解析に取り組む予定である。TLR7およびNOD2の構造解析に成功した。1.Toll-like receptor (TLRs) (エンドトキシンショック,抗ウイルス薬,ワクチン)2.NOD-like receptor (NLRs) (クローン病,アレルギー)本年度は、1に関して決定したTLR7の結晶構造をもとに各種の生化学実験などを行い、TLR7のリガンド認識機構と活性化機構が明らかにし原著論文として報告した(Zhang et al., immunity, 2016)。さらに、TLR8とアンタゴニスト複合体との結晶構造解析に成功した。2に関しても、決定したNOD2受容体の不活性化型構造をもとに各種の変異体実験を行い、NOD2の不活性化を維持するためのドメイン間の相互作用や、疾患変異との関連を明らかにすることができた。本成果は原著論文として発表した(Maekawa et al., Nature Commun., 2016)。さらに、NLRP3やNLRP6などほかのNLRに関して、発現と精製に成功しており、現在結晶化条件の検討中である。TLR8については低分子リガンド複合体構造に加えて、RNA複合体の構造解析に成功した。TLR9については、CpG DNAとの複合体の構造解析に成功した。引き続きTLR7と各種リガンドとの複合体の構造解析、NLRの活性化型の構造解析に取り組む。28年度が最終年度であるため、記入しない。構造生物学TLRに関しては、TLR8とTLR9の構造解析に成功したため、今後はTLR7について重点的に研究を進める。NLRについては、現在得られている結晶について構造解析を進める。
KINECTを活用した新しい上肢機能評価・訓練システムの有用性の検討

安価且つ簡便にモーションキャプチャが可能なKINECTを活用して,3次元VR環境下で上肢機能障害に対する評価及び訓練が可能な上肢機能評価・訓練システムを開発した.本システムにおけるKinect計測値の妥当性については,実測値との比較において十分に妥当性があることが示された.さらに,本システムによる上肢機能訓練の効果を検証するため,脳梗塞右片麻痺患者に対して,AB法のシングルケースデザインによる介入を行った.その結果,効果判定指標として用いたBBT得点は,介入期の全ての評価ポイントにおいてベースライン期の平均+2SDを上回る結果が得られ,本システムによる上肢機能訓練が有効であることが示唆された.本研究は,対象者がPCモニタ上に映し出されるターゲットに向かって上肢を動かすことで,対象者の上肢機能の評価と訓練を行うシステムの製品化に向けて,評価モードを用いた上肢機能評価の信頼性と妥当性の検証及び訓練モードを用いたリハビリテーション介入の効果検証を行い,総合的に本システムの有用性を検討することを目的としている.本システムは,安価なKINECTセンサを用いることにより,これまで開発されてきたリハビリテーションロボット等に比べ,格段に安価でシステムを構成できること,バーチャルリアリティ環境において,視覚フィードバックを与えながら,ターゲットの色の変化や音などで対象者を飽きさせることなく訓練できること.さらに,評価モードにおいては,肩関節や肘関節の複合運動を数量しようとするものであり,肩関節や肘関節の随意運動がわずかながらでも可能であればグレーディングできること等を特徴としている.本研究の成果は,脳卒中患者に対する効果的なリハビリテーションに寄与するものと考える.平成26年度は,科学研究費補助金の採択を受けたことにより,現行システムをより3次元表示能力が高いものにグレードアップするため,3D対応モニタ,液晶シャッター型3D眼鏡を購入し,システムの再構築を行った.この作業は,計画書の段階では,平成26年度の前半で終了する予定であったが,予想以上にプログラムの調整に時間を行い,臨床試験に入ることができなかった.現在,訓練モードはほぼ完成,評価モードが最終調整中である.本研究は,KINECTを活用した3次元のバーチャルリアリティー環境で上肢機能障害に対する評価及び訓練が可能な新しい上肢機能評価・訓練システムの有用性を検討することである.本システムは,対象者がPCモニタ上に映し出されるターゲットに向かって上肢を動かすことで,対象者の上肢機能の評価と訓練を行うシステムである.リーチ運動の目標となるターゲットは,対象者の上肢機能レベルに合わせて,3次元空間上で自由に設定が可能であり,視覚や音の変化の活用により対象者を飽きさせることなく訓練できる.今年度は,3D強化のためのプログラム改変と,臨床試験の前段階として予備的にKINECTによる測定値の妥当性の検証を行った.健常成人10名を対象とした.実験に先立ち,本研究の趣旨を充分説明した上で同意を得た.方法は,KINECTによって取得される手掌の三次元座標の妥当性を確認するために,錘付きの凧糸を右手に装着し,床面に敷いた方眼紙上で基準点から,横方向,上下方向(高さ),奥行き方向に基準点から5cm間隔で035cm移動し,KINECTで測定された値との比較検討を行った.その結果,3方向の測定それぞれで実際に掌を移動した距離に近い数値の分だけ測定値も変化し測定値と3次元空間の座標値は比例関係にあった.以上の結果より,本システムは充分に妥当性を有していることが示唆された.平成28年度は実際の脳卒中患者を対象とした臨床研究を実施する.本研究は,KINECTを用いたバーチャル環境で,上肢機能の評価・訓練を行うシステムの有用性を検討するものである.申請書にも記述したように本研究の独自性を高めるために3Dモニタ,3D眼鏡を使用して3D機能を強化したプログラム改変を行ったが,このプログラムの改変作業に予想した以上に時間を要したため.今回,反射マーカー等の装着を必要とせずに簡便にモーションキャプチャーが可能なセンサであるKINECTを活用して,3次元のVR環境で上肢機能障害に対する評価及び訓練が可能な新しい上肢機能評価・訓練システムを開発した.本システムの特徴は,1リーチ運動の目標となるターゲットを対象者の上肢機能レベルに合わせて3次元空間上で自由に設定できる, 2訓練の経過を逐次データとしてPCに保存できる,3視覚フィードバックやBGM等によって対象者を飽きさせることなく訓練できる,4パソコンを置けるスペースがあればどこでも実施できる,53D対応モニタと3D眼鏡により,ステレオ立体視を実現している等である.本システムの妥当性を検証する目的で,健常成人10名を対象に,KINECTによって取得される手掌の三次元座標の妥当性を検証した.その結果,基準点から横方向,上下方向(高さ),奥行き方向に手掌部を移動した際,KINECTで測定された値もその値に比例して変化することが確認され,十分に妥当性があることが確認できた.さらに,本システムを用いた脳卒中患者に対する上肢機能訓練の効果を検証するため,脳梗塞により右片麻痺を呈し,発症後5か月が経過した回復期リハ病棟に入院中の40歳代男性に対して,AB法のシングルケースデザインによる検証を行った.介入期間は2週間,訓練時間は1回10分とし,1日2回の訓練を通常の作業療法とは別に行った.効果判定指標には,BBTを用いた.その結果,BBT得点はベースライン期の平均が43.0,介入期の平均が58.0であり,介入期の2回目と3回目の評価ポイントは,ベースラインの平均値+2SDの56.4を上回っており,本システムの有用性が示唆された.

今後は,継続して本システムの有用性を検証するため,評価指標の信頼性と妥当性の検証および,多施設間の無作為化比較試験についても実施する予定である.安価且つ簡便にモーションキャプチャが可能なKINECTを活用して,3次元VR環境下で上肢機能障害に対する評価及び訓練が可能な上肢機能評価・訓練システムを開発した.本システムにおけるKinect計測値の妥当性については,実測値との比較において十分に妥当性があることが示された.さらに,本システムによる上肢機能訓練の効果を検証するため,脳梗塞右片麻痺患者に対して,AB法のシングルケースデザインによる介入を行った.その結果,効果判定指標として用いたBBT得点は,介入期の全ての評価ポイントにおいてベースライン期の平均+2SDを上回る結果が得られ,本システムによる上肢機能訓練が有効であることが示唆された.現行システムをより3次元表示能力が高いものにグレードアップするため,3D対応モニタ,液晶シャッター型3D眼鏡を購入し,システムの再構築を行った.このシステム再構築作業は申請時においても想定していたものであったが,このプログラミングが予想以上に時間を要したため.研究計画の遅れを取り戻すために,プログラム担当の共同研究者及び,臨床研究を依頼する研究協力者と密に連絡を取り合いながら進めていく.リハビリテーション科学・福祉工学当初の予定では,本システムの評価モードの信頼性と妥当性の検証を終えてから,訓練モードを用いた上肢機能訓練の効果検証を行う予定であった.しかしながら,できる限り早く臨床試験に入るために,順序を入れ替え先にプログラムの再構築が終了している訓練モードを用いた上肢機能訓練の効果検証を行うこととする.今年度は本システムのプログラム修正に時間を要してしまったために,本格的な臨床試験の開始ができなかった.そのために,関連した物品費や成果報告に関する支出ができなかった.現行システムをより3次元表示能力が高いものにグレードアップするため,3D対応モニタ,液晶シャッター型3D眼鏡を購入し,システムの再構築を行った.この作業は,計画書の段階では,平成26年度の前半で終了する予定で後半より,臨床試験に入る予定であったが,予想以上にプログラムの調整に時間がかかり臨床試験に入ることができなかったため.共同研究者と研究協力者との連携を図り,次年度中の研究終了に向けて研究を推進し,計画的な助成金の使用に努める.平成26年度予定していて実行できなかった内容も含め,本年度は遅れを挽回すべく努力する.遅れをカバーするため,実験補助の人件費を予定より多く計上する予定である.
ステムセルエイジングの制御に向けた間葉系幹細胞未分化性維持機構の解明

間葉系幹細胞(MSCs)は,多分化能,造血支持能,免疫調整機能など多彩な能力を有することが知られているが,老化によりこれらの能力が低下し,加齢変化が引き起こす疾患群(骨粗鬆症,歯周病,サルコペニア等)に関与することが明らかになりつつある.したがって,このMSCsの未分化性維持に関わるメカニズムを明らかにし,その誘導法を開発することが,幹細胞老化をターゲットとする創薬に繋がると考える.我々は,これまでに,DNAメチル基転移酵素DNMT3aがMSCsの未分化性維持に関与すること,Prx1・Sca1共陽性MSCsが最も幹細胞性が高い幹細胞であることを解明してきた.本申請研究では, DNMT3aによるMSC未分化性維持機構の分子基盤を解明するため,DNMT3aによってメチル化が制御される遺伝子を網羅的に解析する.また,未分化マーカー(Prx1+Sca1+)のレポーターアッセイ,若齢マウス由来MSCsの方が未分化性が高いという研究成果から,若齢マウスMSCsでより活発に機能する関連遺伝子を抽出する.これら候補遺伝子に対し,iPS細胞樹立技術を逆手に取ったマスター遺伝子同定法を駆使して,未だ誰もなし得ることのできなかったMSCsの未分化性制御に関わるマスター遺伝子を同定する予定である.2018年度は,若齢マウスMSCsと高齢マウスMSCsを間葉系幹細胞マーカーの一つであるCXCL12を指標にフローサイトメーターを用いて単離し,RNA-Seqにて若齢マウスMSCs特異的に発現している転写因子の探索を行った.また,iPS干渉法に用いる予定のヒト骨髄由来間葉系幹細胞(以下, hBMSC)を効率よくiPS細胞へと誘導する培養条件を検討し,効率よくiPS細胞へと誘導される条件を見出した.骨髄内の間葉系幹細胞の老化に関わっている転写因子の抽出,hBMSCのiPS細胞への誘導法の条件検討が終了しており,概ね順調に進んでいると考える.線維芽細胞に山中4因子を遺伝子導入することで,iPS細胞が樹立可能であるが,山中4因子と他の転写因子を同時に遺伝子導入すると,細胞の運命決定を支配するマスター遺伝子を同時に遺伝子導入した時のみ,iPS細胞が樹立されないことが最近明らかとなった.そこで,2019年度は,2018年度に抽出した候補因子を,hBMSCに山中4因子と共に遺伝子導入し,iPS細胞の樹立を阻害する転写因子を抽出することで,MSCの運命決定をするマスター遺伝子を探索する.そして,MSCsの未分化性維持に関わるマスター遺伝子の発現を制御可能な薬剤をケミカルバイオロジーやDrug Repositioningの概念に基づき探索し,体内で進行する老化や免疫異常を制御することが可能な薬剤やコンパウンドを同定する.間葉系幹細胞(MSCs)は,多分化能,造血支持能,免疫調整機能など多彩な能力を有することが知られているが,老化によりこれらの能力が低下し,加齢変化が引き起こす疾患群(骨粗鬆症,歯周病,サルコペニア等)に関与することが明らかになりつつある.したがって,このMSCsの未分化性維持に関わるメカニズムを明らかにし,その誘導法を開発することが,幹細胞老化をターゲットとする創薬に繋がると考える.我々は,これまでに,DNAメチル基転移酵素DNMT3aがMSCsの未分化性維持に関与すること,Prx1・Sca1共陽性MSCsが最も幹細胞性が高い幹細胞であることを解明してきた.本申請研究では, DNMT3aによるMSC未分化性維持機構の分子基盤を解明するため,DNMT3aによってメチル化が制御される遺伝子を網羅的に解析する.また,未分化マーカー(Prx1+Sca1+)のレポーターアッセイ,若齢マウス由来MSCsの方が未分化性が高いという研究成果から,若齢マウスMSCsでより活発に機能する関連遺伝子を抽出する.これら候補遺伝子に対し,iPS細胞樹立技術を逆手に取ったマスター遺伝子同定法を駆使して,未だ誰もなし得ることのできなかったMSCsの未分化性制御に関わるマスター遺伝子を同定する予定である.2018年度は,若齢マウスMSCsと高齢マウスMSCsを間葉系幹細胞マーカーの一つであるCXCL12を指標にフローサイトメーターを用いて単離し,RNA-Seqにて若齢マウスMSCs特異的に発現している転写因子の探索を行った.また,iPS干渉法に用いる予定のヒト骨髄由来間葉系幹細胞(以下, hBMSC)を効率よくiPS細胞へと誘導する培養条件を検討し,効率よくiPS細胞へと誘導される条件を見出した.骨髄内の間葉系幹細胞の老化に関わっている転写因子の抽出,hBMSCのiPS細胞への誘導法の条件検討が終了しており,概ね順調に進んでいると考える.線維芽細胞に山中4因子を遺伝子導入することで,iPS細胞が樹立可能であるが,山中4因子と他の転写因子を同時に遺伝子導入すると,細胞の運命決定を支配するマスター遺伝子を同時に遺伝子導入した時のみ,iPS細胞が樹立されないことが最近明らかとなった.そこで,2019年度は,2018年度に抽出した候補因子を,hBMSCに山中4因子と共に遺伝子導入し,iPS細胞の樹立を阻害する転写因子を抽出することで,MSCの運命決定をするマスター遺伝子を探索する.そして,MSCsの未分化性維持に関わるマスター遺伝子の発現を制御可能な薬剤をケミカルバイオロジーやDrug Repositioningの概念に基づき探索し,体内で進行する老化や免疫異常を制御することが可能な薬剤やコンパウンドを同定する.

従来、iPS干渉法には市販の試薬を用いて行う予定であったが、自作の試薬等と比較検討した結果、自作の試薬を用いた場合の方が遺伝子導入効率が明らかに良かった.そのため、高額の試薬を購入する必要が無くなった.節約することができた経費に関して、2019年度に行う遺伝子スクリーニングを効率よく行うための試薬購入費に用いる予定である.
中学校における一般意味論と論証構造図を用いたクリィティカル・リーディングの指導法

研究目的:「一般意味論と論証構造図を用いたクリティカル・リーディングの指導法の研究および、その有効性について」研究方法:教育学部附属中学校国語部による指導案の検討および、授業公開・事後検討会ビデオ記録・生徒のノート、作文の分析。定期試験における「読む力」「書く力」の評価問題からの分析研究のまとめについて、国語部での検討。研究成果:論理的に読む力の向上が見られた。「根拠と論拠の妥当性」を判断する際に、一般意味論を用いた視点を持つことで、合理的な考え方による判断ができるようになっていく様子があった。授業中に課題となる文章の検討を行う際に、「部分を全体として語っている。論理に飛躍がある」「決めつけ(総称的態度)がある」「他の可能性を無視している」といった、一般意味論を読みのツールとして用いることが有効に働いていると考えられる発言が多く見られた。「真に持続可能な社会」という表現から「それはどのような社会か」「『真である』ということは『真ではない』があるということだが、違いは何か」というところに気づくなど、言葉が意味する具体的内容についての指摘が出てくるようになるといった、表現の論理性についての読解力や思考力が向上する様子が見られた。論証構造を図にして、結合論証・合流論証の構造と捉えることで、主張を支える根拠の範囲を正確に捉えることができた。それにより主張を支える根拠の妥当性を検討しやすくなった。また、根拠の不足や根拠となるデータの出所から、筆者がどのような立場から、どういった意図をもって書いたかというところまで、考えることができた。以上のような生徒の状態から、一般意味論と論証構造図を用いたクリティカル・リーディングの指導には、論理的思考力の向上に有効であると考えられる。なお、作文課題においても文章の論理性が向上していったことを付記しておく。
ハイブリットMRI造影剤創製と動物実験による他の造影剤との性能の基礎的比較検討

間質におけるリンパ流の評価は鉄剤にて可能であったが、粒子径や希釈濃度の選択によっては造影されない場合もあり、適切な選択の必要性がある。また我々は、肝機能を評価する材料として、NASHモデルのマウスを作成し正常マウスとの比較を行った。我々は、両マウス群に、ICGを投与した。我々はその後5分毎にIVISにて撮影し解析を行った。検討の結果ICGによる蛍光からNASHの進行を検出することができた。新規結合体であるPHG10色素は、細胞毒性を目標にしてコラーゲンペプチドと近赤外線反応色素を用いて合成された。生体高分子PPGを出発物質とし、多段階の合成過程を経てGd-PPGを得た本研究の目的は、コラーゲンペプチドの温度応答性を利用して全く新しい温度応答性MRI造影剤を創製し、動物実験によって他の造影剤との性能を比較検討して本造影剤の有用性を明らかにすることである。平成26年度は、コラーゲンペプチドを導入した新しい造影剤の設計と合成を実施した。コラーゲンペプチドH-(Pro-Hyp-Gly)n-OHには、安定な三本鎖のらせん構造をとることができる長さであることが明らかになっているn = 10の鎖長であるH-(Pro-Hyp-Gly)10-OH (PHG10)を用いることしした。また、このペプチドのアミノ基末端側に、蛍光物質700DXを、カルボキシル基末端側にはGdキレートを導入した分子を設計した。この分子を得るための第一段階として、PHG10と700DXを反応させて、700DX-PHG10を得た。PHG10は、ヒートブロックを用いてアニーリングした後に700DXと混合して使用した。25°Cで3日間反応させた後、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)で精製した。HPLCの精製条件を最適化し、C18カラム使用した最適な展開液を決定した。目的物である700DX-PHG10はca. 15minで溶出され、未反応の700DXとPHG10は、それぞれca. 1minと9minで溶出することが、吸光度測定から明らかになった。平行して我々は、マウスを用いて皮下投与にてミセル化造影剤のGPと細胞外液性のGd造影剤のDTPAと細胞外液性のGd造影剤の中でも肝胆道特異性を持つEOBを同一固体マウスに投与することでそれぞれの造影剤のマウス体内での動態が把握できた。このことにより本研究が今後、マウスにおける間質性MRリンパ造影の分野において、現在開発中のく新しい温度応答性MRI造影剤の動態調査のための基礎データとして有用なデータとなる。本研究の目的は、コラーゲンペプチドの温度応答性を利用して全く新しい温度応答性MRI造影剤を創製し、動物実験によって他の造影剤との性能を比較検討して本造影剤の有用性を明らかにすることである。平成27年度は、平成26年度に未完了であったコラーゲンペプチドへのGdキレートの導入法について検討し、コラーゲンペプチドを導入した新しい造影剤の再合成を実施した。具体的には、アミノ基を付加したキレート試薬(NH2-DTPA)にGdを結合させた後に、コラーゲンペプチドに結合させた。Gdのキレート試薬への結合は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)と質量分析(ESI-MS)で同定し、目的の物質が得られたことを確認した。また、平成26年度までに確立した方法で得た、蛍光物質をコラーゲンペプチドに結合させた分子の蛍光特性を、顕微鏡で評価した。蛍光特性は、コラーゲンペプチドに導入する前後で顕著な変化は無かった。また、この合成した分子が、コラーゲンペプチドの集積能を利用してがん細胞に集積することを、確認できた。比較動物実験研究では、鉄剤を間質に投与し、リンパ流の評価を検討した。そのためにファントムによる至適濃度の算出とマウスに鉄剤を後脚の皮下に注射して粒子径と濃度の違いによるリンパ節の描出能を比較した。1.0T MRIを用いてT1強調3D-FLASHにて撮像を行い、鉄剤は20,50,100nmの粒子径を使用した。ファントム実験では、それぞれの粒子径に対して20倍から100倍までの希釈濃度のファントムを作成し、撮像した画像から求めたSNRにおいて、いずれの粒子径においても60倍希釈が至適濃度であった。マウスを用いた実験では、鉄剤の粒子径それぞれに対して10倍,20倍,60倍希釈を用いて3回ずつ、投与前,5分後,15分後,30分後,1時間後,3時間後に撮像した。膝窩・仙骨リンパ節での造影効果を比較したところ、投与側のリンパ節のみ陰性に造影され、リンパ流の評価を鉄剤にて行うことが確認できた。平成27年度は、キレート試薬を導入したコラーゲンペプチドにGdを導入した新しい造影剤の合成を完了した。平成26年度は、コラーゲンペプチドに蛍光物質を導入した物質700DX-PHG10の合成は完了したが、計画していたGdキレートの導入まで達成できなかった。この部分を、達成できた点で進捗は順当であるが、MRによるシグナル取得は、最終年度に実施し、他の造影剤と比較検討する。

昨年度までの化学合成実験をふまえて、新しい造影剤を得る合成方法を確立した。この方法によって得られたGd造影剤(以降、Gd-PPG)には、マグネスコープ(Gd-DOTA)に類似の構造を持つGd-DO3Aと、繊維状タンパク質に集積能を持つペプチドを導入した。得られたGd造影剤は、高速液体クロマトグラフィー(C18カラム)で精製し、質量分析(ESI-TOF)で同定した。リン酸緩衝性生理食塩水に合成した造影剤を溶解してMRシグナルを測定し、Gd-DOTA(マグネスコープ)と比較した。ICGは肝機能評価に用いられる緑色の色素である。臨床では、静注後採血し、残留度を測ることで肝機能を診断する。蛍光マーカーとしても利用が可能で、近赤外蛍光造影による表在性血管の観察などに用いられている。そこで、ICGの特性をICGからの蛍光をイメージングとして捕らえ、肝機能評価に応用することで機能低下部位の特定が期待できると考え、動物実験にて検討を行った。肝機能を評価する対象として、NASHモデルのマウスを作成し、正常マウスとの比較を行った。NASHはアルコールを原因としない脂肪性肝疾患の総称である。両マウス群に、ICGを投与した後5分毎にIVISにて撮影し解析を行った。腹部の肝臓の領域にROIを設置し、蛍光量を測定。ICG投与前との相対値を取り込み率、投与後5分との相対値を洗い出し率として正規化し、肝機能評価を行った。解析の結果、NASHマウスでは週の経過に伴う取り込み率の低下が認められた。一方8週齢にて、正常マウスよりも3倍以上も高い取り込み率を示した。これは8週齢のNASHモデルマウスでは炎症が強く現れ血流が亢進したと考える。さらに週の経過に伴いNASHが進行すると、炎症から繊維化へと移行し取り込み率が低下したと考える。検討の結果、ICGによる蛍光からNASHの進行を検出することができた。間質におけるリンパ流の評価は鉄剤にて可能であったが、粒子径や希釈濃度の選択によっては造影されない場合もあり、適切な選択の必要性がある。また我々は、肝機能を評価する材料として、NASHモデルのマウスを作成し正常マウスとの比較を行った。我々は、両マウス群に、ICGを投与した。我々はその後5分毎にIVISにて撮影し解析を行った。検討の結果ICGによる蛍光からNASHの進行を検出することができた。新規結合体であるPHG10色素は、細胞毒性を目標にしてコラーゲンペプチドと近赤外線反応色素を用いて合成された。生体高分子PPGを出発物質とし、多段階の合成過程を経てGd-PPGを得た平成26年度は、造影剤の合成を完了する計画であった。コラーゲンペプチドに蛍光物質を導入した物質700DX-PHG10の合成は完了したが、Gdキレートの導入まで達成できなかった。これは、700DX-PHG10の精製条件の最適化に予定よりも時間を要したからである。現時点では、精製条件の最適化に成功したので、平成27年度にGdキレートを導入した700DX-PHG10-Gdの合成まで実施する計画である。比較するマウスのMR造影剤(DTPA、GP、EOB)による間質性MRリンパ造影検査は先に終了している。平成28年度は、計画していたGdキレートの導入した新しいMR造影剤を合成し、この新しい造影剤と従来のGd系造影剤およびMRI鉄剤とのファントム比較実験とマウスを用いた各種造影剤の比較実験を行なう。マウスを用いた各種造影剤の比較実験では、各種造影剤間質性投与に於ける肝臓、リンパ節、腎臓、血管系、筋肉などの造影効果を比較する。
新型半導体光検出器PPDの性能向上のための内部物理の解明と開発手法の確立

Pixelated Photon Detector(PPD)は,ガイガーモードで動作し,単光子検出能力を持つ新型の半導体光検出器である.極薄型,常温での低電圧動作など優れた性能を持つPPDは,2009年に開始したニュートリノ振動の精密測定を行うT2K実験において世界で初めて本格的かつ大規模に導入されたほか,高エネルギー物理学実験における今後の応用が強く期待され,各実験ごとに研究が進行中のデバイスである.PPDは今後の開発によって光電子増倍管を凌駕しうる可能性を秘めるが,そのためにはさらなるダイナミックレンジの確保や低ノイズ化・感度波長領域の拡充などが求められる.しかしこれらは高増倍率化・高検出効率化と両立しえないことがPPD開発における課題となっており,この課題を解決することでPPDの基本性能を向上させるのが本研究の目的である.前年度までで半導体デバイスシミュレータTCADを用いてPPDの内部構造から基本特性を予測することに取り組み,定常的な解析においては,実機のPPDの性能を半定量的に再現し,TCADが実用に耐えうることが確認できているが,クェンチング機構を再現するために必要な動的な解析ではさらなるシミュレーションの開発が必要である.また,筆者らの提案する3次元積層キャパシタについての実現可能な形状についての考案を,特にプロセスの容易さと電場構造の一様性の観点でTCADを用いて進めた.採用終了に当たる当該年度の時点では,試作品の製作に足る構造と制作プロセスの決定までには至らなかったが,TCADを用いた構造設計の試行を通じて,具体的な3次元の積層キャパシタ構造のために必要な要件について知見を得ることができた.目標に挙げた積層構造のキャパシタの試作品の製作には至らなかったため.TCADを用いたPPDのクェンチングについての動的なシミュレーションを急ぐ必要があり,並行して3次元キャパシタの積層構造についての設計を進めていくことが求められる.できるだけ早期に実際の製作に移行することが望ましく,製作を行うメーカーとの踏み込んだ提携を行うべきである.Pixelated Photon Detector(PPD)は,ガイガーモードで動作し,単光子検出能力を持つ新型の半導体光検出器である.極薄型,常温での低電圧動作など優れた性能を持つPPDは,高エネルギー物理学実験における今後の応用が強く期待されているデバイスである.PPDは今後の開発によって光電子増倍管を凌駕しうる可能性を秘めるが,そのためにはさらなるダイナミックレンジの確保や低ノイズ化が求められる.しかしこれらは高増倍率化・高検出効率化と両立しえないことがPPD開発における課題となっている.次世代のPPDを開発するにあたって,開発速度の向上と具体的構造の探索を目的として,3次元プロセス・デバイスシミュレータTCADを用いた開発を本格的に開始した.現在までにTCADを用いたデバイスの基本性能を予測するために必須の定常解析では,IV特性とCV特性,およびそれぞれの温度依存性について,実機のPPDの性能を半定量的に再現し,TCADが実用に耐えうることが確認できた.また動的なデバイスの応答を計算する過渡解析を用いた研究も進めている.特にアバランシェ増幅の時間変化を内部の物理現象の時間スケールであるピコ秒オーダーで計算することで,信号の生成過程のうち増倍の発生の機構についてシミュレーションで再現することができるようになった.増倍率を決定する信号生成の全体的な再現のためにはクェンチング抵抗という受光部に接続する素子のシミュレーションが不可欠である.現在この部分の計算においてシミュレータの動作が不安定であり,次年度以降の課題となっている.Pixelated Photon Detector (PPD)は,ガイガーモードで動作し,単光子検出能力を持つ新型の半導体光検出器である.極薄型,常温での低電圧動作など優れた性能を持つPPDは,高エネルギー物理学実験における今後の応用が強く期待されているデバイスである.PPDは今後の開発によって光電子増倍管を凌駕しうる可能性を秘めるが,そのためにはさらなるダイナミックレンジの確保や低ノイズ化が求められる.しかしこれらは高増倍率化・高検出効率化と両立しえないことがPPD開発における課題となっている.次世代のPPDを開発するにあたって,開発速度の向上と具体的構造の探索を目的として,当該年度は3次元プロセス・デバイスシミュレータTCADを用いてクェンチング抵抗の存在によってアバランシェ増幅が一定の出力で止まる現象の動的な過程を明らかにすることと,研究代表者らが提案している3次元の積層キャパシタの具体的な構造のシミュレーションに基づく考案を中心に研究を行った.さらにSeleteのアカデミック委員会に参入し,TCAD自体の改良などにもコミットできる環境が整ったので,今後はより本格的なシミュレーションが可能になることが期待される.成果発表としては日本物理学会誌にPPDの解説記事を上梓したほか,国内の高エネルギー物理・宇宙物理学関係の研究者の集まる光検出器のワークショップにてPPDのレビュートークを行った.Pixelated Photon Detector(PPD)は,ガイガーモードで動作し,単光子検出能力を持つ新型の半導体光検出器である.極薄型,常温での低電圧動作など優れた性能を持つPPDは,2009年に開始したニュートリノ振動の精密測定を行うT2K実験において世界で初めて本格的かつ大規模に導入されたほか,高エネルギー物理学実験における今後の応用が強く期待され,各実験ごとに研究が進行中のデバイスである.PPDは今後の開発によって光電子増倍管を凌駕しうる可能性を秘めるが,そのためにはさらなるダイナミックレンジの確保や低ノイズ化・感度波長領域の拡充などが求められる.

しかしこれらは高増倍率化・高検出効率化と両立しえないことがPPD開発における課題となっており,この課題を解決することでPPDの基本性能を向上させるのが本研究の目的である.前年度までで半導体デバイスシミュレータTCADを用いてPPDの内部構造から基本特性を予測することに取り組み,定常的な解析においては,実機のPPDの性能を半定量的に再現し,TCADが実用に耐えうることが確認できているが,クェンチング機構を再現するために必要な動的な解析ではさらなるシミュレーションの開発が必要である.また,筆者らの提案する3次元積層キャパシタについての実現可能な形状についての考案を,特にプロセスの容易さと電場構造の一様性の観点でTCADを用いて進めた.採用終了に当たる当該年度の時点では,試作品の製作に足る構造と制作プロセスの決定までには至らなかったが,TCADを用いた構造設計の試行を通じて,具体的な3次元の積層キャパシタ構造のために必要な要件について知見を得ることができた.目標に挙げた積層構造のキャパシタの試作品の製作には至らなかったため.TCADを用いたPPDのクェンチングについての動的なシミュレーションを急ぐ必要があり,並行して3次元キャパシタの積層構造についての設計を進めていくことが求められる.できるだけ早期に実際の製作に移行することが望ましく,製作を行うメーカーとの踏み込んだ提携を行うべきである.
男性2型糖尿病患者の心筋梗塞予防に向けた職場のソーシャルサポートに関する研究

本研究の目的は、2型糖尿病患者の職場のソーシャルサポート、職場環境、糖尿病自己管理の調査をし、心筋梗塞を予防できる職場のソーシャルサポートにおける糖尿病自己管理改善プログラムの提案をすることである。これまで論文をもとに質問紙を作成した。質問紙の妥当性の検証は、糖尿病看護の研究者および心筋梗塞の研究者を含む、9名にて行った。今後、調査・分析、論文作成予定である。本研究の目的は、男性2型糖尿病患者が心筋梗塞に罹患することを予防するために、職場のソーシャルサポート、職場環境、糖尿病の自己管理の実態を調査し、心筋梗塞を予防できる職場のソーシャルサポートの効果と改善の方法の提案をすることである。今年度は、男性2型糖尿病患者の職場のソーシャルサポート、職場環境、糖尿病自己管理の実態を調査するための、調査票の作成を行っている。調査票は、実態調査だけではなく、実態調査をもとに行う本研究の最終目的である心筋梗塞を予防できる職場のソーシャルサポートの効果と改善の方法を提案するための基礎となるため特に重要である。そのため、科学研究費補助金申請の計画書を踏まえ、更に文献検討を重ね、調査票を作成した。調査票の調査項目は、職場のソーシャルサポートおよび職場環境はN1OSH職業ストレス調査票(原谷, 1998 ; 2004)および文献をもとに作成した質問項日(病気への理解、病気であることの不利益など)、糖尿病自己管理については糖尿病自己管理尺度(木下, 2002)および文献をもとに作成した質問項目(喫煙習慣、塩分を控える工夫など)属性(年齢、職種など)、疾患的属性(糖尿病罹病期間、治療法など)、検査値(HbA_<1c>,随時血糖など)、自由記述とした。自由記述は、仕事をもちながら糖尿病の自己管理を継続するために、工夫している点、困っている点などについて記載する欄とした。現在、調査項目の妥当性を検討するために、藤田保健衛生大学衛生学部客員教授佐藤栄子氏および愛知県立大学看護学部内科学教授橋本秀和氏から助言を得ている段階である。昨年度は、実態調査のために作成した調査票を専門的知識の提供者に提示し、指導を受けた。本年度は、専門的知識の提供者からの指導をもとに文献を再検討し、調査票を含む研究計画の見直しを行った。見直した主な内容は、本研究の対象者を男性限定から性別を問わないことにしたことである。これまで男性対象としていたのは、職場のソーシャルサポートや自己管理に性差が明らかになっていたためである。職場のソーシャルサポートの文献の再検討をしてみると、一例では職場のソーシャルサポートと虚血性心疾患と関連がなかった女性対象の先行文献(Kuper et al., 2006)は、職場のソーシャルサポートの質問の合計と虚血性心疾患との関連を統計学的に検討していた。一方、本研究は心筋梗塞を予防するために少しでも糖尿病自己管理を円滑に行えるよう職場のソーシャルサポートに関する改善案を提示することを目的とした調査であるため、ソーシャルサポートの質問項目ごとに分析を行う予定である。そのため、上記の文献のような調査結果では本研究において対象を男性限定にする根拠となる文献とはいえないことが再検討の結果わかった。また、自己管理における性差は、職業の有無を調整せず検討を行っている文献もあった。そのため、本研究では性差の影響を統計的に調整することとし、性差を問わずデータ収集をすることにした。以上の見直しにより、対象を男性に限定した場合と比較して性差を含めより詳細に職場のソーシャルサポートの改善案が提示でき、さらに対象者を限定しないことにより、より早く目標人数のデータ収集ができると考えられる。本年度の実施計画は、質問紙の完成、調査施設の確保、予備調査による質問紙の検証と総仕上げ、本調査および調査結果の分析であった。本年度実施した内容は、文献をもとに質問紙を作成し、妥当性の検証を目的に、糖尿病の看護の研究者および心筋梗塞の研究者(専門的知識の提供者を含む)計9名にてプレテストの依頼を行った。現在、プレテストの結果をもとに質問紙を修正中である。以下、前記の内容を詳細に述べる。

本研究の質問紙は、職場のソーシャルサポートにおいては、信頼性・妥当性が検証されたNIOSH職業ストレス調査票(原谷、1998;2004)に加え糖尿病患者対象であることを考慮し糖尿病の病気への理解などの質問項目を追加し、職場環境に関しては、NIOSH職業ストレス調査票(原谷、1998;2004)に加え糖尿病患者対象であることを考慮し受動喫煙などの質問項目を追加し、糖尿病の自己管理に関しては、信頼性・妥当性が検証された糖尿病自己管理尺度(木下、2002)に加え、心筋梗塞予防の生活習慣である喫煙習慣などの質問項目を追加した。その後、糖尿病看護の研究者および心筋梗塞の研究者にて、表面妥当性および内容妥当性の検証をした。質問紙作成時における妥当性の証明は、自明性を証明することにある。自明性の証明は、表面妥当性および内容妥当性の証明と等しい。そのため、本年度実施した内容で、質問紙作成時の妥当性の証明がなされたと言える。今後、研究計画書および質問紙を倫理審査委員会に提出し、承認後、本調査、結果の分析、論文作成を行う予定である。
コーチングを活用した医学生向けレジリエンストレーニングプログラムの作成

本研究課題へのアプローチとして、コーチングおよびレジリエンスの両面から進めている。まず、コーチングについては、これまでの研究および実践を継続・発展させており、医療系学生の授業に取り入れ、その効果測定を行っている。今回はレジリエンス尺度を用いた測定も行い、有意な変化を確認した。成果発表として、日本教育心理学会第60回総会にて「コーチングを活用した授業実践の効果」および「医学生に対するピア・コーチングの効果」を発表し、さらに同学会においてシンポジウム「教育に活かすコーチング:コーチングは学生・生徒のレジリエンスを高めるか」を、レジリエンス研究の第一人者である永岑光恵先生を指定討論者にお迎えして開催した。また雑誌「心身医学」に、『医療・健康分野におけるコーチングの学術的進展』を発表した。さらに、近年成長著しいポジティブ心理学との関連に着目し、Palmer & Greenによる編著書Positive Psychology Coaching in Practiceの翻訳版権を取得し、日本語版を出版すべく、翻訳に取りかかっている。本書は次年度中の刊行を予定している。翻訳担当者として参加しているPositive Psychietryの訳書『ポジティブ精神医学』が金剛出版より刊行された。2章「ポジティブな心理的特性」の翻訳を担当した。第19回ヨーロッパポジティブ心理学会においては、学校教員に対するポジティブ心理学的介入の効果に関する発表を行った。レジリエンスについては、看護学生を対象としたコーチング授業の効果の測定を行い、分析をおこなっている。また、医学生に対するマインドフルネス授業においても、レジリエンスの変化を測定し、分析を行った。それらの成果は次年度に発表の予定である。レジリエンストレーニングの理論的基礎となるREBTのセラピスト資格を取得した。研究計画の実施順が一部入れ替わった部分があるが、ほぼ順調に進展している。本課題研究は代表者1名で担当しているが、これまでの研究で培った研究協力者とも協力しながら進めており、学会発表やシンポジウムを共同で実施することができた。ポジティブ心理学コーチングの翻訳も順当に進んでいる。コーチングおよびレジリエンスのどちらも、今年度中に予備的な研究を実施することができた。研究課題に関するウェブページを作成し、研究成果やさまざまな情報発信を随時進めていく予定にしていたが、これは次年度に持ち越すことになった。当年度に実施した研究の成果発表を次年度行う。また、「ポジティブ心理学コーチング」の翻訳を完成し、出版に合わせてシンポジウムや講演などを企画する予定である。レジリエンスについては、レジリエンスプラクティショナーとしてのトレーニングコースを受講し、医学生向けのプログラム開発の参考とする。今年度実施できなかった、ウェブページの作成も次年度中に行うつもりである。予算は残金ゼロとして使い切っていたが、支出伝票の処理上の誤りがあり、修正時期がすでに年度を越えていたため、結果として2280円余剰が出た。
グルコ-ス ー6ー リン酸脱水素酵素変異種を指標としたわが国への遺伝子移子移込の検討

グルコ-スー6ーリン酸脱水素酵素(G6PD)異常は、薬剤惹起性溶血発作ないし慢性溶血を伴うことのある赤血球酵素異常症であるが、大半は何ら臨床症状は呈さない。本酵素異常はアフリカ、地中海沿岸、東南アジアにおいて特に頻度が高く、世界で4億人以上が本酵素の異常遺伝子をもつと考えられている。G6PD異常症の病因解明は世界各国で進んでおり、既に20種の変異酵素遺伝子で塩基置換が同定されている。今年度はわが国で比較的頻度が高いG6PD UbeとG6PD Konanなどの変異酵素遺伝子が既知の塩基置換を有しているかどうかをpolymerase chain reaction法(PCR法)を用いて検索し、わが国で発見した変異G6PDと諸外国、特に東南アジアで頻度が高い変異酵素との異同を遺伝子レベルで検討し、わが国への遺伝子移入を明かにする事を目的に研究を進めた。G6PD Konan、G6PD Tokyoおよび未同定の2例の変異酵素を有するG6PD異常症患者白血球より染色体DNAを精製し、塩基置換により制限酵素切断部位の変化しているG6PD A^+、G6PD A^ー、G6PD Mahidol、G6PD Metaponto、G6PD Riverside、G6PD Tomah、G6PD Beverly Hillsの7種の変異酵素に特異的な各塩基置換部位を含む80400bpの塩基配列を、合成オリゴヌクレオチドプライマ-(22ーmer)を用いたPCR法にて増幅した。増幅DNAは各変異部位に特異的な制限酵素で処理したのち、ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて分離、銀染色法により検出し、制限酵素切断パタ-ンより各塩基置換の有無を判定した。今回、対象とした4種の日本人G6PD変異酵素遺伝子DNAは、検索した7種の変異酵素遺伝子DNAに特異的な制限酵素切断パタ-ンは見られず、既知の塩基置換を有していない事が明らかになった。すなわち、これら4種の日本人G6PD異常症の病因は未知の部位の塩基置換で、日本人に固有の変異酵素である事が強く示唆された。現在、これら日本人の変異G6PD遺伝子について、変異部位の決定を進めている。