hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
網膜静脈閉塞に伴う黄斑浮腫の機能・形態・分子生物学的解析

我々は、網膜中心静脈閉塞症(CRVO)眼における網膜静脈蛇行度と眼内血管内皮増殖因子濃度との相関を明らかにした。また、皮膚電極小型網膜電図記録装置(RETeval)を国内施設で先駆けて導入し、CRVO眼におけるラニビズマブ注射後の網膜機能の回復について報告している。さらに、抗VEGF治療前後において繰り返しフリッカERGを記録を行って網膜虚血のモニタリングをする手法について、報告した。網膜電図(ERG)が網膜虚血の指標として有用であることが知られている。以前に我々は、網膜中心静脈閉塞(CRVO)眼において、フリッカ網膜電図(ERG)の潜時が眼内の血管内皮増殖因子(VEGF)濃度と有意に相関することを報告した。しかし、VEGF療法前後の網膜機能の変化についてはほとんど知られていなかった。近年皮膚電極でフリッカERGを記録することができる小型の装置レチバルが発売された。この装置を用いることでより低侵襲にERGを記録することが可能となり、経過中に繰り返しERGを記録するのに有用と考えられた。そこで我々は、レチバルを用いてCRVOに対するラニビズマブ療法前後のフリッカERGについて検討した。名古屋大学病院にてCRVOの黄斑浮腫に対してラニビズマブ療法を施行した15例15眼を対象とした。ラニビズマブ療法前には、レチバルと、従来のコンタクトレンズ電極を用いた装置でフリッカERGを記録し、両者のERG所見を比較した。ラニビズマブ注射1か月後に、レチバルを用いたフリッカERGを記録し、注射前のERG所見と比較した。治療前に記録したレチバルと従来法のフリッカERGとの比較では、振幅・潜時とも有意に相関がみられた。ラニビズマブ注射前後で振幅には差はみられなかったが、潜時は治療後に有意に短縮した。CRVOに対するラニビズマブ療法後にフリッカERG潜時の短縮がみられたことは、治療後の網膜機能の改善を示唆すると考えられた。網膜静脈閉塞(RVO)眼に特徴的な構造変化の一つに、網膜静脈の蛇行がある。CVO studyでは、網膜静脈の程度を定性的に評価し、中等度から高度の静脈蛇行が新生血管発生のリスク上昇と有意に関連する因子の一つであると報告されている。そこで我々は、CRVO32眼において網膜静脈の蛇行度と眼内VEGF濃度との相関について検討した。静脈蛇行度と、眼内VEGF濃度、視力、中心窩網膜厚との間には有意な相関がみられた。今回の結果は静脈蛇行の評価が新生血管発生の危険性が高い症例を判別するのに有用であることを裏付けるものと考えられた(ProsOne 2015)。またCRVOにおいては、フリッカ網膜電図(ERG)の潜時が、網膜虚血の程度推定に有用であることが知られており、我々は以前に、眼内VEGF濃度が高いほどフリッカERGの潜時が延長していることを報告した(IOVS 2011)。今回我々は、皮膚電極による小型フリッカERG装置(RETeval)を用いて、CRVO15眼に対するラニビズマブ療法前後のフリッカERGについて検討し、ラニビズマブ注射1ヵ月後に振幅には差はみられないが、潜時は治療後に有意に短縮することを報告した(Acta Ophthalmol 2015)。RVOの重症な合併症は眼内VEGF上昇に伴う血管新生が原因となるため、RVOの経過中に眼内VEGF濃度を予測するということが臨床上重要であると考えられる。VEGF濃度との相関がみらるフリッカERGや、網膜蛇行などの形態・機能異常は、非侵襲的に眼内VEGF濃度や網膜虚血の程度を予測する因子として有用である可能性があると考えられた。網膜中心静脈閉塞眼の眼内VEGF濃度と形態変化との関係や、網膜電図を用いた網膜虚血の程度評価について解析を進め、研究発表を行うことができた。我々は、皮膚電極小型網膜電図記録装置(RETeval)を用いて網膜中心静脈閉塞症(CRVO)眼におけるラニビズマブ注射後の網膜機能の回復について報告した。(Yasuda et al. Acta Ophthalmol.2015)さらに、RETevalがより低侵襲に網膜電図記録が可能である利点を生かし、抗血管内皮増殖因子(VEGF)治療前後において繰り返しフリッカ網膜電図記録を行ってCRVO眼における網膜虚血のモニタリングをする手法について、第120回日本眼科学会総会およびARVO anuual meeting 2016において学会発表を行い、現在論文投稿準備中である。また、CRVO眼に対する抗VEGF治療後の黄斑浮腫消失に関わる治療前の予後予測因子を検討し、第70回日本臨床眼科学会およびARVO-Asia 2017にて学会発表を行い、現在論文印刷中である。網膜静脈分枝閉塞眼についても同様の検討を進めており、近く学会発表および論文発表を行う予定である。さらに、超広角走査レーザー検眼鏡(Optos)を用いたフルオレセイン蛍光眼底造影(FA)での無灌流域の範囲と、angiography機能を備えた光干渉断層計(OCT angiography)及び全視野網膜電図のパラメータとの対比を行い、FAよりも低侵襲な検査である網膜電図やOCT angiographyによって網膜虚血を正確に評価することが可能であるかの検討を進めている。

また、皮膚電極小型網膜電図記録装置(RETeval)を国内施設で先駆けて導入し、CRVO眼におけるラニビズマブ注射後の網膜機能の回復について報告している。さらに、抗VEGF治療前後において繰り返しフリッカERGを記録を行って網膜虚血のモニタリングをする手法について、報告した。網膜中心静脈閉塞(CRVO)に対する抗VEGF療法前後の網膜機能の変化についてERGを用いて検討し、抗VEGF療法後に網膜機能の改善がみられることがわかった。抗VEGF療法時には前房水を採取しており、前房水中のサイトカイン濃度との関連についても解析を進めている。今後も眼内サイトカインの変化、OCTを用いた網膜形態評価、ERGを用いた網膜機能評価について症例の長期経過との関連を検討する予定である。また、最近使用可能となった造影剤不要のOCT angiographyとの関連についても検討することを考えている。眼科学今後もCRVO,hemiCRVO, BRVOについて症例数を増やして解析を進めていく。アフリベルセプトがCRVOに伴う黄斑浮腫に対して承認されたため、ラニビズマブ・アフリベルセプトでの治療に伴う比較も可能となったために、行っていく予定である。また、BRVOに伴う黄斑浮腫に対するアフリベルセプトの使用も今後承認される可能性があり、その場合にはBRVOについても比較を行う。学会出席のための旅費を計画よりも削減することができたため。次年度に予定していた研究計画を実行するために使用する。具体的には、繰越金は論文作成のため英文校正費用にあてることを考えている。
炎症性疾患・感染における細胞外ＨＭＧＢ１役割

ERT2-Cre Hmgb1cKOマウスを用いてLPS誘導性致死性ショックを行った。HMGB1 cKOマウスでは、早期炎症応答の特徴的症状である好中球細胞の炎症損傷部位への浸潤に減弱が認められた。つまり、細胞外HMGB1には好中球などの炎症性細胞の遊走・浸潤に機能することが示唆された。Hmgb1 cKOにおける好中球細胞の炎症部位への集積が少ないという異常は、HMGB1を欠失させたことによる好中球細胞自体の異常であることが考えられた。そこで、野生型マウスとERT2-Cre Hmgb1 cKOの好中球細胞を骨髄から収穫し、好中球遊走に関わる遺伝子発現と細胞遊走能の検討を行った。ERT2-Cre Hmgb1 cKO由来の好中球細胞を調べたところ、HMGB1の発現量は有意に抑制されていることを確認した。しかしながら、ERT2-Cre Hmgb1 cKO由来の好中球細胞では、細胞特異的マーカー及び細胞遊走に関わるケモカイン受容体遺伝子の発現に異常は見られなかった。さらに、様々なケモカイン分子に対する細胞遊走能も正常であることが確認された。これらの結果から、ERT2-Cre Hmgb1 cKOにおける炎症性細胞の集積異常は、細胞自体の異常ではなく、やはり細胞外に放出されたHMGB1の機能によるものであると考えられた。また、致死性ショック時に産生されたHMGB1は、組換えHMGB1タンパクと構造的・機能的に異なり、特異的な修飾を受けているという知見を得た。様々な刺激によって細胞外に放出されたHMGB1タンパクは、異なる化学修飾基を持ち、これらの修飾によって、HMGB1タンパク自体の分子機能が変化することが報告されている。今後、様々な敗血症モデル、また他の炎症性疾患モデルにおいて、修飾型HMGB1が検出されるかどうか、さらに、修飾型HMGB1の生理的機能について検討を行う予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。近年、細胞外に放出されたHMGB1分子は、敗血症など様々な炎症性疾患の病態の増悪に関与すると考えられており、我々は、作製したHMGB1コンディショナルノックアウトマウス(Hmgb1 cKO)を用いて、炎症性疾患におけるHMGB1の役割を明らかにすることを目的とし、解析を進めている。これまでの解析から、タモキシフェン誘導性の全身性Hmgb1 cKOを用いて、LPS誘導性敗血症ショックを行ったところ、野生型マウスと比較し、Hmgb1 cKOでは血中のHMGB1レベルが有意に抑制されると同時に、致死性ショックに抵抗性を示すという予備知見を得た。しかしながら、Hmgb1 cKOマウスでは炎症性サイトカインやケモカインの産生量には異常は見られなかった。一方、Hmgb1 cKOマウスにおいて、好中球を代表とする白血球細胞の各組織への早期遊走に異常があることが分かり、HMGB1は好中球などの炎症性細胞の遊走・浸潤を促進する機能があることが示唆された。Hmgb1 cKOマウスにおける好中球細胞の炎症部位への集積が少ないという異常は、HMGB1を欠失させたことによる好中球細胞自体の異常であることが考えられた。そこで、野生型とHmgb1 cKOマウスの好中球細胞を骨髄から収穫し、好中球遊走に関わる遺伝子発現と細胞遊走能の検討を行った。Hmgb1 cKO由来の好中球細胞を調べたところ、HMGB1の発現量は有意に抑制されていることを確認した。しかしながら、Hmgb1 cKO由来の好中球細胞では、好中球細胞特異的マーカー及び細胞遊走に関わるケモカイン受容体遺伝子の発現に異常は見られなかった。HMGB1がどのように好中球の遊走に関与しているのか、現在その詳細を解析中である。ERT2-Cre Hmgb1 cKOマウスを用いてLPS誘導性致死性ショックを行った。

これらの結果から、ERT2-Cre Hmgb1 cKOにおける炎症性細胞の集積異常は、細胞自体の異常ではなく、やはり細胞外に放出されたHMGB1の機能によるものであると考えられた。また、致死性ショック時に産生されたHMGB1は、組換えHMGB1タンパクと構造的・機能的に異なり、特異的な修飾を受けているという知見を得た。様々な刺激によって細胞外に放出されたHMGB1タンパクは、異なる化学修飾基を持ち、これらの修飾によって、HMGB1タンパク自体の分子機能が変化することが報告されている。今後、様々な敗血症モデル、また他の炎症性疾患モデルにおいて、修飾型HMGB1が検出されるかどうか、さらに、修飾型HMGB1の生理的機能について検討を行う予定である。近年、自然免疫応答において、また炎症が関与する病態において、重要な役割を果たすことが示唆されているHMGB(High-mobility group box)ファミリーだが、特に細胞外に放出されたHMGB1は、様々な炎症性疾患の病態の増悪に関与すると考えられており、実際、抗HMGB1中和抗体はこれらの病態を顕著に抑制できることが報告されている。従って、細胞外に放出されたHMGB1の炎症における役割について詳細を明らかにすることは、これらの炎症病態を抑制する分子基盤を確立することに重要であると考えられる。しかしながら、Hmgb1遺伝子欠損マウスが生後致死性を示すため、個体レベルでの、さらには炎症性疾患における役割については解析が為されていない。そこで、我々の研究室において、Hmgb1コンディショナルノックアウトマウス(Hmgb1 cKO)が作製された。我々は独自に作製したHmgb1 cKOを用いて、マウス炎症性疾患モデルにおけるHMGB1の役割を明らかにすることを目的とした。我々はタモキシフェン誘導性の全身性Hmgb1 cKOを用いて、LPS誘導性敗血症ショックを行ったところ、野生型マウスと比較し、Hmgb1 cKOは致死性ショックへ抵抗性を示すことを見出した。さらに、HMGB1は好中球などの炎症性細胞の遊走・浸潤を促進する機能があることが示唆された。現在、HMGB1と好中球の遊走との関係について解析を進めている。これまで、実験進行に必要である遺伝子改変マウスが十分に確保でき、また、実験試料に支障がなく、当初の計画通りの実験を遂行している。これらのことから、本研究は順調に進展しているものと考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。細胞外HMGB1の好中球等の白血球細胞遊走・浸潤における機能について引き続き検討を行う。今までの結果から、HMGB1は好中球に直接機能するのではなく、間接的に作用していることが考えられる。今後、HMGB1の作用について、受容体の同定を含め、マイクロアレイ解析、分子生物学的手法、種々の遺伝子欠損マウスを用いて明らかにする。一方、細胞外HMGB1は様々ながんの発生及び転移に深く関わることが報告されている。これまでHmgb1 cKOを用いた結果から、HMGB1は炎症を促進する機能が示唆され、今後マウスがん発症、転移モデルを用いて、それらにおけるHMGB1の役割を検討する予定である。今年度の研究経費に関して、同じく欠損マウスを用いた検討が必須なため、マウスの飼育費用および解析費用が必要となる。また、消耗品に関しては、細胞培養用の血清、培地および試薬をはじめ、DNA及びRNA精製試薬、RT-PCR用酵素・試薬、抗体などが不可欠となる。さらに、HMGB1分子機能の解析のため、マイクロアレイ解析費用を消耗品費として計上している。
統語部門と音韻部門のインターフェイスから見る言語の随意性に関する研究

本研究はこれまで随意性が指摘されてきた言語現象を、特に音韻論的な重さ(強勢、イントネーション句や韻律語の数)の観点から分析し、語順の選択において真の随意性は存在しないという仮説の妥当性を検証してきた。平成23年度までは英語の前置詞残留を伴う移動・削除(swiping)と、日英語の動詞句内イディオムを中心にその音韻特性を分析し、平成25年度以降は日英語のInterwoven Dependency Constructionsに注目し、重い要素が文端に移動し、それが文処理を容易にする効果があることを主張した。(平成23年24年度にかけて、一年間の研究中断あり。)本研究はこれまで随意性が指摘されてきた言語現象を、特に音韻論的な重さ(強勢、イントネーション句や韻律語の数)の観点から分析し、語順の選択において真の随意性は存在しないという仮説の妥当性を検証してきた。)本年は日本語と英語の動詞句イディオムを中心とした語順に係る制限について資料の見直しを行い、その結果を2学会(FAJL5,日本英語学会第28回大会)で発表した。まず、動詞句イディオムの音韻特性を分析するため、日本語と英語の動詞句イディオムをそれぞれ母国語話者に読み上げてもらい、音声ファイルとして保存し、ピッチやイントネーションを見ることを始めた。分析はまだ途中であり、上記2学会での発表の時点では、それらについて十分な議論を提示するまでには至らなかったが、「動詞句イディオムは、韻律上の卓立を含み、最小の韻律句内になければならない」という仮説を立てて、先行分析の問題点を解決する方向性を示すことができた。これは、これまで主に統語的な説明を与えられてきた日本語と英語の動詞句内イディオムを音韻・韻律の観点から再分析したもので、研究課題である「統語部門と音韻部門のインターフェイスから見る言語の随意性に関する研究」に直接的な係わりを持つ。FAJL5では1時間という十分なポスター発表の時間が設けられており、参加者より有意義なフィードバックを得ることができた。また、日本英語学会での発表内容は、同学会同ワークショップで発表した札幌大学の時崎教授、東北学院大学の那須川教授の論文とともに、日本英語学会の学会誌(English Linguistics)の特集号にて2011年度に発表される予定であり、その後さらなるフィードバックが期待される。本研究はこれまでに、「随意性」が指摘されてきた言語現象(動詞句内語順、前置詞残留・随伴を伴う移動・削除など)を、特に音韻論的な重さ(強勢、イントネーション句や韻律語の数)の観点から分析し、語順の選択において真の随意性は存在しないという仮説の妥当性を検証する。これにより、今まで生成文法理論に基づく統語論や最適性理論等で、それぞれ素性の導入や制約の並べ替えのメカニズム等により許容されてきた複数の可能な語順が、統語部門と音韻部門のインターフェイスの観点からは真に同一ではないことを示し、さらには、語順の随意性の研究が最終的には人間の脳内の言語機能全体の在りようの解明に貢献することを目指す。平成23年度は、平成22年度に行った日英語の動詞句イディオムを中心とした動詞句内語順と、前置詞残留・随伴を伴う移動・削除現象の分析結果を通言語的に検証し、理論的意義についての検討を始めることを目指した。より詳しくは、分析結果を考察し、語順の選択において真の随意性は存在しないという仮説の検証を始める予定であったが、平成23年8月の時点では、平成22年11月に日本英語学会で発表した提案を論文としてまとめるところに留まっている(論文は投稿中)。平成23年度後半で日英語の韻律の分析を始めたり、11月の日本英語学会で関連するシンポジウムに出席して知見を深めたりする予定であったが、育児休業の開始により一時研究を中断することとなった。本研究はこれまでに「随意性」が指摘されてきた言語現象(特に、動詞句内語順、前置詞残留・随伴を伴う移動・削除など)を、主に音韻論的な重さ(強勢、イントネーション句や韻律語の数)の観点から分析し、語順の選択において真の随意性は存在しないという仮説の妥当性を検証している。これにより、今まで生成文法理論に基づく統語論や最適性理論等で、それぞれ素性の導入や制約の並べ替えのメカニズム等により許容されてきた複数の可能な語順が、統語部門と音韻部門のインターフェイスの観点からは真に同一ではないことを示し、さらには、語順の随意性の研究が最終的には人間の脳内の言語機能全体の在りようの解明に貢献することを目指している。平成25年度は、これまでに行った日本語・英語の動詞句イディオムを中心とした動詞句内語順と、前置詞残留・随伴を伴う移動・削除現象の分析結果を、日英語の資料を量的質的にを広げるとともに通言語的に検証し、理論的意義についての検討を始めた。

あわせて、平成23年24年に一年間の研究中断があったため、平成25年度は近年の関連トピックを扱う論文や書籍の確認を進め、その中で興味深かった論文の内容を基に、複数の依存関係(特にInterwoven Dependency Constructionを含むwh-movement, scrambling, XP-shift, Extrapositionfrom NP)を含む文の資料を集め、その音韻・統語上の性質を分析する研究論文の執筆を開始した。本研究はこれまでに「随意性」が指摘されてきた言語現象(動詞句内語順、前置詞残留・随伴を伴う移動・削除など)を、特に音韻論的な重さ(強勢、イントネーション句や韻律語の数)の観点から分析し、語順の選択において真の言語学的随意性は存在しないという仮説の妥当性を検証する。そしてこのことにより、今まで生成文法理論に基づく統語論や最適性理論等で、それぞれ素性の導入や制約の並べ替えのメカニズムにより許容されてきた複数の可能な語順が、統語部門と音韻部門のインターフェイスの観点からは真に同一ではないことを示し、さらには語順の随意性の研究が最終的には人間の脳内の言語機能全体の在りようの解明に貢献することを目指す。平成24年度は研究開始当初の計画よりも研究の進行が遅れた。統語部門と音韻部門のインターフェイスに関わる研究は近年特に盛んであるため、24年度は当分野にかかわる大著、Tobias Scheer (2011) A Guide to Morphosyntax-Phonology Interface Theoriesを読んでそのReviewを執筆することから研究を再開した。(ReviewはEnglish Linguistics 30-2において発表される予定。)Scheerをreviewすることにより、インターフェイス理論とそれにとって問題となる言語現象について、特に音韻論方面からの知見を得ることができたため、それを平成25年度の研究に生かしていきたい。具体的には、これまでに発表した前置詞残留・随伴を伴う移動・削除に関する論文(in NELS 33)と、動詞句内イディオムの語順に関する論文(in MIT WPL 62, EL 28-2)について、その音韻論的特徴を見直し、分析の理論的意味について再考したい。本研究はこれまでに随意性が指摘されてきた言語現象(動詞句内語順、前置詞残留・随伴を伴う移動・削除など)を、特に音韻論的な重さ(強勢、イントネーション句や韻律語の数)の観点から分析し、語順の選択において真の随意性は存在しないという仮説の妥当性を検証してきた。また、このことにより、今まで生成文法理論に基づく統語論や最適性理論で、それぞれ素性の導入や制約の並べ替えのメカニズム等により許容されてきた複数の可能な語順が、統語部門と音韻部門のインターフェイスの観点からは真に同一ではないことを示し、さらには語順の随意性の研究が最終的には人間の脳内の言語機能全体の在りようの解明に貢献することを目指してきた。その後の分析の過程で、IDCを含む文の容認可能性の判断には、これまでの研究では指摘されていないような個人差が存在することが明らかになり、現在の研究においてはその個人差も統語と音韻のインターフェイスの観点から分析することを試みている。26年度が最終年度であるため、記入しない。言語学26年度が最終年度であるため、記入しない。育児休業による研究中断のため、分析の準備が遅れており、出席する予定であった関連する学会やシンポジウムにも出席できなくなったため。平成23年度24年度の育児休暇による研究中断、平成25年度の転職(所属先変更)に伴う教育・学内業務従事による研究遅延のため。平成23年度後半から平成24年度前半にかけて、育児休暇による研究中断があったため。
組織構築による細胞微小環境と放射線感受性:メダカを用いた分子遺伝学的解析

癌幹細胞および組織幹細胞の放射線感受性・耐性は様々な要因により制御されている。それらの要因の中でも特に「細胞系譜」と「細胞微小環境」による制御は重要であり、しかもその制御の一端をDNA損傷チェックポイントが担っていることがこれまでに示唆されている。そこで我々は、組織幹細胞において、ゲノム損傷シグナルと「微小環境」からの増殖シグナルのクロストークを解析する系の確立を目指し、本研究において、「細胞微小環境」形成において重要な役割を果たすWntシグナル受容体遺伝子Frizzled及びDNA損傷応答制御因子(DNA-PKcs)の変異体の作出を行い、ナンセンス変異体を樹立することに成功した。ゲノムDNAに損傷が生じた時、細胞では細胞周期チェックポイントが働くことによりゲノム安定性が維持されている。この「細胞周期チェックポイント」機構は、あらゆるタイプのゲノム損傷に対する生物の基本戦略である事が幅広く受け入れられている。一方、、個体、体組織での損傷応答では、組織を構成する各細胞は、各々の「細胞系譜」と「微小環境」により固有の増殖制御(細胞周期制御)を受けており、各細胞の損傷応答はゲノム損傷シグナルと細胞固有の増殖制御シグナルとのクロストークとして理解されなければならない。組織幹細胞は、各組織・臓器への多分化能を持ち、組織全体のホメオスタシス維持の機能を担っている。当然の事ながら、損傷からの組織レベルの回復においても重要な役割を果たしている。本研究では、組織幹細胞における、ゲノム損傷シグナルと「微小環境」からの増殖シグナルのクロストークを解析する系の確立を目指している。まず、組織幹細胞をマーキングするためのコンストラクトを作製した。これまでに腸幹細胞マーカーとして報告のあるMusashi遺伝子全長を含むメダカBACクローンを入手し、その第2エキソンにrecombineeringの手法を用いてKusabira Orangel(MBL)を導入したコンストラクトを作製した。現在このコンストラクトを用いてTGメダカを作成中である。また微小環境制御系解析のために、Wnt経路のFrizzled2遺伝子の変異体作製を開始した。変異体の作製はTILLING法でおこなった。第2エキソンの一部を、HRM法を用いてスクリーニングを行ったが有意な変異は得られなかった。現在Frizzled遺伝子の変異体を、次世代シークエンサーを用いて網羅的にスクリーニングする準備を開始している。一方、個体、体組織での損傷応答では、組織を構成する各細胞は、各々の「細胞系譜」と「微小環境」により固有の増殖制御(細胞周期制御)を受けており、各細胞の損傷応答はゲノム損傷シグナルと細胞固有の増殖制御シグナルとのクロストークとして理解されなければならない。組織幹細胞をマーキングするために、腸幹細胞マーカーとして報告のあるMusashi遺伝子全長を含むメダカBACクローンの第2エキソンをrecombineeringでKusabira Orange 1(KOr,MB2)に組み替えたコンストラクトを導入したメダカ胚に導入した。現在、KOr陽性胚を育成中で、これらの魚が産卵を開始しだい組織幹細胞マーカーTGメダカのスクリーニングを開始する。微小環境制御系解析のための、Wnt経路のFrizzled遺伝子群の変異体作製を開始した。変異体の作製はTILHNG法でおこなった。次世代シークエンサーを用いたメダカTILLINGライブラリーの一時スクリーニングはライブラリーの半数まで完了し、現在、ダイレクトシークエンシングによる二次スクリーニングを進めている。微小環境制御系解析のための、Wnt経路のFrizzled遺伝子群の変異体作製を行った。

変異体の作製にはTILLING法を用いた。Frizzled遺伝子群はデータベース上、現在までに10個確認されている。これらの遺伝子群について網羅的にスクリーニングするため次世代シークエンサーを用いたメダカTILLINGライブラリーのスクリーニング系を立ち上げを行い、成功した。その結果これまでにFrizzled3-2のY170およびC295、Frizzled10のY328のナンセンス変異体を得ることができた。組織幹細胞マーカーメダカラインの作製の際、遺伝子導入したメダカが育成中に集団で水かび病にかかり、遺伝子導入からのやり直しをしたが、おおむね予定通り進んでいる。また、Frizzled遺伝子群の変異体作製ではTILLIHNGライブラリーの次世代シークエンサーによるスクリーニングで、次世代シークエンサーのデータ解析に時間がかかっているが、おおむね予定通りに進んでいる。24年度が最終年度であるため、記入しない。Frizzled遺伝子群の変異体作製は変異体特定後、ゲノムのクリーンアップのために4代以上の継代が必要で時間を要するため重点的に進めていく。組織幹細胞マーカーラインができ次第、腸管の凍結切片を作成し腸管内での発現パターンを観察し、マーカーラインとして使用できるかの評価を行う。同時に、ATMATR,p53変異体との掛け合わせも進めておく。また、このマーカーラインを用いてレーザーDissectionの技術習得も進めておく。もし、このラインがマーカーラインとして使用できなかった場合CD133(Promimin-1),Nucleostemin Sox2, Lgr5についても、同様なコンストラクトを作製し同様の作業を行う。
血管内皮細胞由来弛緩因子の産生機序とその制御に関する研究

血管内皮細胞由来弛緩因子(EDRF)が一酸化窒素であることが示唆されている。私どもはEDRF産生阻害薬であるニトロアルギニンを見いだした。本研究ではニトロアルギニンを用い、EDRFの産生機構とその制御ならびに生理的意義を検討した。1.EDRFの反応を抑制する酸化ヘモグロビンが一酸化窒素を吸収し吸光度変化をおこすことを確認した。また一酸化窒素供与体SINー1の血管弛緩作用を検討し、脳血管も弛緩させること、ニトロアルギニンが影響しないことを観察した。2.血管部位による差異については臨床的に重要な脳血管、冠動脈と股動脈摘出標本の比較をイヌでおこなった。ニトロアルギニンは脳、冠動脈摘出標本で濃度依存性に収縮を示したが股動脈では示さず、イヌ脳血管、冠動脈摘出標本ではEDRFが自然放出されていることが示唆された。一方P物質によりEDRFを介した弛緩反応を比較すると脳血管がもっともニトロアルギニンに対し感受性の高いことをが示唆された。これら血管の特性を今後の治療薬の開発に応用していくことが重要であろう。3.一方ニトロアルギニン前投与がノルアドレナリンなどの収縮を増強すること、交感神経終末刺激による収縮反応も増強することを見いだした。これらのことは交感神経系による血圧調節をEDRFが修飾している可能性を示すもので交感神経ー内皮の相関を今後検討していく必要がある。4.さらにEDRFの生理的意義を検討するためニトロアルギニンの経口投与をおこない、血圧上昇を見いだした。これらはEDRFが生体における血圧調節に重要な役割を持つことを示唆する。脳卒中易発ラットでも昇圧が見られ、高血圧発症後も血圧調節にEDRFが関与していることが示唆された。
フォトクロミック分子単結晶表面における光誘起物質移動

アゾベンゼン系アモルファス材料を用いる光誘起表面レリーフ回折格子(SRG)形成が注目を集めている。これに対し、申請者はごく最近、4-(ジメチルアミノ)アゾベンゼン(DAAB)の単結晶の(001)面にも光誘起SRG形成が可能であることを明らかにしている。本研究は、さまざまなフォトクロミック化合物について、その単結晶を育成し、それらを用いる光誘起SRG形成を検討して、単結晶を用いる光誘起SRG形成の一般的な特徴を明らかにするとともに、SRG形成機構を解明することを目的としている。本年度は以下の成果を得た。4-(ジメチルアミノ)アゾベンゼン(DAAB)の単結晶の(100)面における光誘起SRG形成を検討し、(001)面と同様に(100)面でも光誘起SRG形成が可能であること、光誘起SRG形成の書込み光偏光依存性がアモルファス系とは異なることなどを明らかにするとともに、物質移動方向が明部から暗部に向かって誘起されていること、形成されたSRGの凸部に存在する分子がもとの結晶の配向と同様に配向していることを示唆する結果を得た。また、アモルファス形成能を有する4-[ビス(9,9-ジメチルフルオレン-2-イル)アミノ]アゾベンゼンの酢酸エチルとの共結晶を用いる光誘起SRG形成の検討を行い、光照射によって結晶表面にアモルファス層が形成されて、SRG形成能がアモルファス系と類似していることを明らかにした。さらに、別のアゾベンゼン系誘導体単結晶の表面にもSRGを形成させることができることを明らかにし、単結晶表面における光誘起SRG形成が一般的な現象であることを示した。
CPSに基づいた自律分散ロボット群に対する理論的モデル化とその計算限界の解明

従来の自律分散ロボット群モデルにロボットがライト(状態)を搭載することによる計算能力の限界を明らかにした.特に,ライトが自身と他のロボットがともに認識できる場合(full-light),他のロボットのみが認識できる場合(external-light)に対して,ライトの色数最小のランデブーアルゴリズムを開発した.また,ロボットの動作仮定に関して,移動位置まで必ず到達する場合(rigid),必ずしも移動位置まで到達しない場合(non-rigid)を考慮している.non-rigidの場合は全く移動しないと問題が解けなくなるため,最小移動距離(δ>0)は移動するものと仮定している.このδの値をロボットが知っている場合(non-rigid+δ)も考察している.具体的に得られた成果は以下の通りである.(1)ロボットが非同期に動作する(ASYNC)とき,ランデブーはnon-rigid+δを仮定した場合,2色のfull-lightで解ける.非同期を少し制限したモデル(LCatomicASUNC)の場合,ランデブーはnon-rigidの下で2色のfull-lightで解ける.(2)アルゴリズムの動作をライトの状態だけで決定するアルゴリズムをL-アルゴリズムと呼ぶ.L-アルゴリズムを用いた場合は,ASYNCにおいては任意の色数を持つexternal-lightを用いてもランデブーは解けないことが示されていた.ここでは,LC-atomic ASYNCにおいて,external-lightにおける色数最適なL-アルゴリズムが構成できることを示した.特に,非自己安定,擬似自己安定,自己安定のそれぞれの場合について,色数が最適なL-アルゴリズムを示した.自律分散ロボット群の理論モデルの構築のためのCPSの分析の結果,自己安定性,自律適応性はこのモデル構築に関して,最重点項目である.動的に変化する環境の下での自律的な秩序形成・機能発現のための進化・適応能力を有するシステム・現象(創発システム,創発現象)に関して十分な検討を行ってきた.それらの解明の糸口として2018年度明らかにした結果をさらに推し進め,特に,ロボットがロボットの状態のみで動作を決定するL-アルゴリズムはロボットが持つ座標系がいつも正しいとは限らない場合にも正しく動作できる重要なアルゴリズムであるL-アルゴリズムに関して,新しい知見を得た.ロボットが持つライトがexternal-lightの場合,非同期な状況(ASYNC)では色数をいくら用いても,2台のロボットの集合問題(ランデブー)さえ解けないことが分かっている.ここでは,非同期を少しだけ条件を付けた場合(LC-atomic ASYNC),external-lightを持つロボットのランデブー問題が自己安定に動作する場合としない場合において必要な色数が異なること,また,その色数が最適であることを示した.これらの結果はCPSを取り入れた新しい自律分散ロボット群のモデル化に有用であると考えられる.CPSを取り入れた自律分散ロボット群の理論モデル化をするにあたり,さらに検討を加える.特に,これまで解明されている創発現象や創発システムをCPSとみなした時,CPSにとって本質であるものはなにかを明らかにする.また,CPSにおいては,動作する物理環境に依存してソフトウエアだけなく,ハードウエア,オペレータや利用者ともインターフェースをもつので,CPSのシステム境界をどのように定めるかによって,問題設定がかわるため,これらも意識しながら,分析をしなければならない.引き続き自律分散ロボット群に対する理論モデルの構築を意識しながら,CPSを分析するために必要な調査と考察,従来の分散モデルをCPSとしてとらえたときの問題点の解明を引き続き行う.また,平成29ー30年度に得られたライトを搭載したロボットに対するアルゴリズムをさらに推し進め,ランデブーだけではなく3台以上の集合問題を含む様々な問題に対するアルゴリズムの開発を行うが,CPSを取り入れたモデル化に有用な結果をめざす.特に,ロボットが搭載するライトの種類(full, external, internal)により問題解決能力がどのように変わるのか,自己安定性,自己組織化を如何にロボットモデルに散りこむか,任意の故障(ビザンチン故障)に耐性のあるアルゴリズムの開発を重点的に行う予定である.これまでの自律分散ロボット群の理論モデルでは一般には不可能であったロボットが2台の集合問題(ランデブー)をロボットにライト(状態)を搭載することによって,ランデブーを可能にできることを示した.特に,ライトが自身と他のロボットがともに認識できる場合(full-light),他のロボットのみが認識できる場合(external-light)に対して,ライトの色数最小のランデブーアルゴリズムを開発した.また,ロボットの動作仮定に関して,移動位置まで必ず到達する場合(rigid),必ずしも移動位置まで到達しない場合(non-rigid)を考慮している.non-rigidの場合は全く移動しないと問題が解けなくなるため,最小移動距離(δ>0)は移動するものと仮定している.このδの値をロボットが知っている場合(non-rigid+δ)も考察している.具体的に得られた成果は以下の通りである.(1)ロボットが非同期に動作する(ASYNC)とき,ランデブーはnon-rigid+δを仮定した場合,2色のfull-lightで解ける.非同期を少し制限したモデル(LC-atomic ASUNC)の場合,ランデブーはnon-rigidの下で2色のfull-lightで解ける.(2)アルゴリズムの動作をライトの状態だけで決定するアルゴリズムをL-アルゴリズムと呼ぶ.L-アルゴリズムを用いた場合は,ASYNCにおいては任意の色数を持つexternal-lightを用いてもランデブーは解けないことが示されていた.ここでは,LC-atomic ASYNCにおいては,external-lightにおける色数最適なL-アルゴリズムが構成できることを示した.

自律分散ロボット群の理論モデルの構築のためのCPSの分析に関しては,(a)ペタスケールを含む巨大規模,(b)構成エレメントや環境の空間的,及び,時間的多様性,(c) CPS内部または外部環境に内在するダイナミクス,(d)構成要素の動作や入力の不確実さを取り上げ,これらを反映できるよう,分散計算としての枠組みの検討を行っている.特に,自己安定性と自律適応性はこのモデル構築に関して,最重点項目であるので,動的に変化する環境の下での自律的な秩序形成・機能発現のための進化・適応能力を有するシステム・現象(創発システム,創発現象)に関して十分な検討を行ってきた.それらの解明の糸口の一つを今年度は明らかにした.ロボットがロボットの状態のみで動作を決定するL-アルゴリズムはロボットが持つ座標系がいつも正しいとは限らない場合にも正しく動作できる重要なアルゴリズムである.しかしながら,ロボットが持つライトがexternal-lightの場合,非同期な状況(ASYNC)では色数をいくら用いても,2台のロボットの集合問題(ランデブー)さえ解けないことが分かっている.我々は,非同期を少しだけ条件を付けた場合(LC-atomic ASYNC),external-lightを持つロボットのランデブー問題が自己安定に動作する場合としない場合において必要な色数が異なること,また,その色数が最適であることを示した.これらの結果はCPSを取り入れた新しい自律分散ロボット群のモデル化に有用であると考えられる.従来の自律分散ロボット群モデルにロボットがライト(状態)を搭載することによる計算能力の限界を明らかにした.特に,ライトが自身と他のロボットがともに認識できる場合(full-light),他のロボットのみが認識できる場合(external-light)に対して,ライトの色数最小のランデブーアルゴリズムを開発した.また,ロボットの動作仮定に関して,移動位置まで必ず到達する場合(rigid),必ずしも移動位置まで到達しない場合(non-rigid)を考慮している.non-rigidの場合は全く移動しないと問題が解けなくなるため,最小移動距離(δ>0)は移動するものと仮定している.このδの値をロボットが知っている場合(non-rigid+δ)も考察している.具体的に得られた成果は以下の通りである.(1)ロボットが非同期に動作する(ASYNC)とき,ランデブーはnon-rigid+δを仮定した場合,2色のfull-lightで解ける.非同期を少し制限したモデル(LCatomicASUNC)の場合,ランデブーはnon-rigidの下で2色のfull-lightで解ける.
手術後患者の生活の質改善因子の検討

1)日帰り手術後回復遅延の主要原因は第一に術後不快症状(主に術後痛,術後嘔気嘔吐(PONV),嗜眠・目眩・疲労感),次いで社会的問題および組織運営上の問題であった。回復遅延患者では術後痛発症頻度が高く,日常活動性回復度自己評価(RNA)および日帰り手術受容度が低かった。短期滞在手術に対する満足度の低い患者では,術後不快症状が多く,RNAが低く,受容度が低かった。短期滞在手術後約20%の患者に中等度以上の術後痛があった。乳癌短期滞在手術において,フェンタニル(Fen)併用セボフルラン(Sev)麻酔ではPONV頻度が高く回復が遅延した;全静脈麻酔(TIVA)ではSev麻酔に比べ術中の心拍変動(HRV)抑制・循環動態変動が少なく,PONV頻度が低く術後回復が早かった;Sev麻酔にデクスメデトミジン(Dex)を併用すると,術中低血圧・徐脈発症頻度が上昇し,PONV・術後痛発症頻度は変わらないが術後回復が遷延した;Sev「浅」麻酔は「深」麻酔に比べ,PONV頻度に差がないが,HRV抑制が少なく,覚醒が早かった。3)ラット培養気管繊毛上皮細胞において,チオペンタール,ミダゾラム,Dexには繊毛運動抑制はみられず,ケタミン・Fen大用量で方進がみられた。ペントバルビタールは強力に繊毛運動を抑制した。ハロタン,イソフルラン(Iso)は強力に繊毛運動を抑制したが,Sevではほとんど抑制しなかった。イソプレテレノールによる繊毛運動亢進をISOは抑制したが,cAMP量増加は抑制しなかった。Isoは細胞内ATP量に影響を与えなかった。1)成人日帰り手術患者を対象とし術後回復遅延因子について検討した。回復遅延の主要原因は術後不快症状,社会的および組織運営上の問題であった。回復遅延患者では術後痛発症頻度が高く,日常活動性回復度自己評価および日帰り手術受容性が低かった。小児日帰り手術患者もほぼ同様であった。乳癌手術後の夜間一過性低酸素血症についてセボフルラン麻酔とプロポフォール麻酔で検討した。手術当日夜間に一過性低酸素血症発症が高率(約40%)に観察された。麻酔法による発症頻度に差はなかった。低酸素血症発症患者では肥満指数が高かった。セボフルラン全身麻酔下乳癌手術患者におけるα_2アドレナリン作動薬デクスメデトミジンの術中循環動態,術後嘔気嘔吐,術後痛,術後回復,自律神経活動などへの効果を検討した。デクスメデトミジンは,術中低血圧・徐脈発症頻度を上昇させ,術後交感神経活動を低下させたが,術後嘔気嘔吐・術後痛発症頻度を低下させず,術後歩行再開を遷延させた。2)Bispectral index (BIS)を指標とした静脈麻酔薬プロポフォール自動投与システムを開発し,Monitored anesthesia careへ臨床応用した。BIS値維持の安定性に問題があり,さらに改良を進めている。3)ラット気管繊毛上皮細胞を用いて麻酔薬・鎮静薬の繊毛運動への影響を検討した。静脈麻酔薬チオペンタール,ミダゾラム,デクスメデトミジンには繊毛運動抑制作用が見られなかった。ケタミン,フェンタニル大用量で繊毛運動亢進がみられた。揮発性麻酔薬イソフルランは強力に繊毛運動を抑制したが,細胞内cAMP濃度には影響を与えなかった。生体ラットを用いて通常の麻酔用量のイソフルランとペントバルビタールの気道浄化能を比較した。ペントバルビタールはイソフルランに比べ気道浄化抑制が強力であった。

1)全身麻酔またはMonitored anesthesia care(MAC)にて日帰り手術を受けた患者を対象として,手術翌日に,術後不快症状,日常生活回復度自己評価(RNA),患者満足度,目帰り手術受容度などを調査した。何らかの不満を表明した患者(24%)での不満原因は,術後不快症状(主に術後痛およびPONV)に関連するものが最も多く,続いて運営に関連するもの(主に説明不足),麻酔手技関連(主に点滴時の痛み)などであった。不満患者では,術後不快症状が多く,RNAが低く,受容度が低かった。乳癌短期滞在手術におけるセボフルラン麻酔と全静脈麻酔(TIVA)の術中心拍変動(HRV)・循環動態,術後回復,術後嘔気嘔吐(PONV)について検討した。TIVAはセボフルラン麻酔に比べ,術中HRV・循環動態変動が少なく,PONV頻度が低く,術後回復が早かった。2)Bispectral index(BIS)を指標とした静脈麻酔薬プロポフォール自動投与システムを開発し,MACへ臨床応用した。MACではBIS値およびプロポフォール投与速度が振動し適切な制御が困難であったため,モデルの再構築を行う必要がある。BIS値および脳波エントロピーRE/SE値に及ぼす瞬目運動の影響を検討した。覚醒しているにもかかわらず,瞬目運動はBIS値およびRE/SE値を著明に低下させた。3)ラット培養気管繊毛上皮細胞を用いてβ受容体刺激による繊毛運動亢進作用および細胞内cAMP量増加作用に及ぼす吸入麻酔薬の影響を検討した。吸入麻酔薬イソフルランはβ刺激薬イソプレテレノールによる繊毛運動亢進を抑制したが,cAMP量増加は抑制しなかった。また,イソフルラン投与は細胞内ATP量に影響を与えなかった。
膵癌幹細胞及び癌幹細胞ニッチ相互作用を標的とした新規膵癌治療戦略の確立

現在までに、膵癌癌幹細胞を同定するため、手術切除標本より採取した膵癌組織からCD133陽性細胞、CD44陽性細等をFACS解析、およびセルソーティングにより純化し、その細胞中の発現解析をFACSおよびqRT-PCRにより進め、有望な新規癌幹細胞マーカーを幾つかリストアップしている。また、膵癌細胞株においても、既存マーカーによる純化をセルソーティングにより行い、その機能解析を進め、in vivo、in vivo、in vitroにおいてそのphenotypeの違いを検討した。さらに、この純化した細胞集団の細胞増殖能やゲムシタビンを含む複数の抗癌剤に対する治療抵抗性、放射線照射に対する治療抵抗性などを検討し、その細胞集団の特性の違いを複数の評価手法で認めた。現在さらに、そのphenotypeの相違の原因となる責任分子をマイクロアレイ解析の結果に基づいて選択し、その機能的役割を明らかにすべくRNAiにより抑制実験を行っている。また、癌幹細胞に影響を与えると考えられる周囲間質細胞のprimary cultureをルーチンで行い、10種類以上の培養細胞樹立してきた。また、特に癌幹細胞と強い相互作用をしめす間質細胞の同定を共培養実験を利用して進め、その表面マーカーの発現をFACSにて解析した。その結果、複数の表面マーカーがリストアップされており、今後さらにその表面マーカーに基づいて、間質細胞を純化し、その細胞集団と癌幹細胞との相互作用を検討する。
マングローブ樹種の機能性成分について

マングローブ樹種の抗酸化活性、抗腫瘍活性、抗菌活性について検討した。各樹種の中で抗酸化活性の高いヤエヤマヒルギ樹皮メタノール抽出物から抗酸化物質として9種類のフラボノイド化合物を単離、同定しそのなかでglabrosideAがEGCgと同程度の活性を示した。抗腫瘍活性はヤエヤマヒルギ樹皮メタノール抽出物中の酢酸エチル画分に見られ、マウスの延命効果はないが、腫瘍のサイズや臓器への転移を抑制した。木材腐朽菌に対する抗菌活性はオヒルギ幹メタノール抽出物で最も高かった。1.マングローブ樹種の抗菌活性木材腐朽菌のカワラタケ、オオウズラタケに対するオヒルギ、樹皮、幹、葉、根メタノール抽出部、ヤエヤマヒルギ、マヤプシキ根メタノール抽出部の阻害活性はオヒルギ幹、葉メタノール抽出物で阻害率100であった。オオウズラタケ、他のメタノール抽出物は阻害活性はほとんど見られなかった。阻害活性の大きいオヒルギ幹メタノール抽出物の阻害活性は水可溶部、酢酸エチル可溶部移行した。酢酸エチル画分をカラムクロマトグラフィーで会画すると、活性はフラクション1,2に見られた。TLCの呈色反応からフラクション1,2の構成物質はカテキン類と推定した。2.マングローブ樹種からの抗酸化物質オヒルギ、メヒルギ、ヤエヤマヒルギ樹皮のメタノール抽出物についてDPPH(1,1-diphenyl-2-pycrylhydrazyl)ラジカル消去活性を測定した。DPPHラジカル消去活性はオヒルギ、ヤエヤマヒルギ、マヤプシキとも根より樹皮に強く認められ、ヤエヤマヒルギの樹皮は5μg/ml,10μg/mlでEGCGに匹敵するほど強い活性を示した。このことからヤエヤマヒルギ樹皮の活性物質について検討した。メタノール抽出物を液・液分配により酢酸エチル可溶部、n-ブタノール可溶部、水可溶部に分画した。ラジカル消去活性の高い酢酸エチル画分を種々のカラムクロマトグラフフィーの組み合わせによりラジカル消去活性物質を分離した。この物質はNMR、ESI-MSからカテキンを基本骨格とするフェニルプロパノイド誘導体であると推定した。3.マングローブ樹種の抗腫瘍活性ヤエヤマヒルギ樹皮メタノール抽出物を水に溶解し、酢酸エチル画分、水可溶部をメタノール:水画分、アセトン:水画分に分画した。7周齢雄ICRマウスにSarcoma-180腫瘍細胞を接種した担癌マウスを作成し、分画した4つの試料(試料濃度10mg/ml、30mg/ml)を7日目より1目おきに42日間腹腔内に投与し生存率、腫瘍細胞増殖、臓器への影響を検討した。担癌動物の生存率は処理区間で差は見られなかった。腫瘍面積はコントロール群に比較して各処理図とも小さくなる傾向を示し、その中でも酢酸エチル画分での処理が最も小さかった。また、血清中のサイトカイン(IL-12)は酢酸エチル画分で免疫賦活剤のピシバニールと近い値を示し、宿主の免疫機能を亢進する可能性が示唆された。1)マングローブ樹種の抗酸化活性成分2)マングローブの抗菌活性木材腐朽菌のカワラタケ(T. versicolor),オオウズラタケ(F. palustris)に対して阻害活性の大きいオヒルギ幹メタノール抽出物の阻害活性を検討した.阻害活性はメタノール抽出部,水可溶部,酢酸エチル可溶部に移行した.酢酸エチル可溶部をシリカゲルを用いてカラムクロマトグラフィーを行った.フラクション3,4,5に活性がみられた.フラクションの4のPTLCから活性成分の一つはブルゲオールと推定した。また、木材に変色を引き起こす3)マングローブの抗腫瘍活性ヤエヤマヒルギ樹皮メタノール抽出物の液・液分配で得られた酢酸エチル画分を7週齢雄ICRマウスにSarcoma-180腫瘍細胞を接種した担癌マウスに長期間投与してその影響を検討した.その結果,投与による延命効果は見られなかったが,腫瘍細胞の大きさは酢酸エチル画分が小さかった.また,コントロール群は他の臓器への転移が見られたが作エチル画分はみられなかった.酢酸エチル画分をLH-20で10フラクションに分画し,マウス腹腔より得られたマクロファージの一酸化膣素精生産量を検討した.フラクション2,7,9で生産量が多かった.1)マングローブの抗腫瘍活性マングローブ樹種の中で抗腫瘍活性の高いヤエヤマヒルギ樹皮メタノール抽出物の酢酸エチル画分を7週齢ICRマウスにSarcoma-180腫瘍細胞を接種した担癌マウスの腹腔内に約10週間にわたって投与したところ、マウス〉の生存率では有意な延命効果は得られなかったが、腫瘍の転移および腫瘍容積においては抑制効果が見られた。

メタノール抽出物、酢酸エチル抽出物をカラムクロマトグラフィーで分画した2フラクション、酢酸エチル画分についてRAW-264.7細胞のNO産生量に及ぼす影響を検討した。その結果、高濃度暴露では低濃度暴露にNO産生量は低く、暴露濃度低くなるにつれて生産量は増加した。SephadexLH-20カラムクロマトグラフィーにより分画した10フラクションについて腹腔内マクロファージのNO産生量にに及ぼす影響を検射した。10画分中9画分(Fr.2-9)ではNO産生量はカテキンを上回り、Fr.2.7及び9ではカテキンの約2倍であった。2)マングローブの抗酸化