hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
眼内炎症における遺伝子の発現プロファイリングと治療への応用

マイクロアレイ法による炎症関連遺伝子の検索1)ラットの足底にリポポリサッカリド(LPS)を投与し、投与後2,6,12,24時間めに、虹彩・毛様体組織(各時間8匹16眼)を切り出し、total RNAを抽出した。3)9,911遺伝子中、1,930遺伝子(約20%)の発現がいずれかの時間において2倍以上に増加、または0.5倍以下に減少した。4)いずれかの時間において3、5、10倍以上の増減した遺伝子数はそれぞれ、(991,748),(402,327),(140,95)であった。5)増減遺伝子数は6時間、24時間後に多く、経時的な発現変化のクラスター解析中である。6)既報同様、その遺伝子発現が確認されている炎症性サイトカイン(interleukin(IL)-1beta, IL-6)ケモカイン(RANTES)、iNOS等に関しては、別個体のmRNAを抽出し、リアルタイムRT-PCRを行い、マイクロアレイの結果と同様、2ないし6時間後の発現の著増(正常眼に比し、20から500倍)が確認された。新たにimmediate early genes(Jun B,c-Fos,and c-Jun)の発現が明らかとなり、特にJunBの発現は免疫組織化学染色にて確認された。マイクロアレイ法による炎症関連遺伝子の検索1)ラットの足底にリポポリサッカリド(LPS)を投与し、投与後2,6,12,24時間目に、虹彩・毛様体組織(各時間8匹16眼)を切り出し、total RNAを抽出した。2)total RNA中のpoly(A)+mRNAより、T7RNAポリメラーゼプロモーター配列を含むオリゴdTプライマーを用いた逆転写反応によって、2本鎖cDNAを合成した。このcDNAをテンプレートとして、T7RNAポリメラーゼによるin vitrotranscription反応を行い、ビオチン標識されたcRNAを調整する。このcRNAとgel matrix上のDNAオリゴヌクレオチドプローブ(UniSet Rat I ExpressionBioarraychip ; Motorola Life Sciences)をハイブリダイズさせ、洗浄、streptavidin-Cy5による染色を行う。Axon GenePix Scannerでスキャン後、発現量を解析(CodeLink ; Motorola社)解析した。3)約9,900遺伝子中、1,930遺伝子(約20%)の発現がいずれかの時間において2倍以上に増加、または0.5倍以下に減少した。5)増減遺伝子数は6時間め、24時間めにが多く、経時的な発現変化のクラスター解析中である。6)既報同様、その遺伝子発現が確認されている炎症性サイトカイン(interleukin(IL)-1beta, IL-6:ケモカイン(RANTES)、iNOS等に関しては、別個体のmRNAを抽出し、リアルタイムRT-PCRを行い、マイクロアレイの結果と同様、2ないし6時間後の発現の著増(正常眼に比し、20から500倍)が確認された。A)マイクロアレイ法による炎症関連遺伝子の発現検討2)虹彩・毛様体における前述の遺伝子による蛋白レベルを確認するため、LPS投与24時間後に前房水を採取、ELISA法にて、IL-beta,IL-6の濃度を測定した。いずれも数十数百pg/mlの高濃度であった。またiNOSの最終産物であるnitrateもGriess法にて定量を試み、数十micro Mの濃度を検出でき、前房水中に蛋白レベルでの増加が確認できた。3)c-fos,c-Jun,Jun B,Fra-1は細胞内蛋白なので、灌流固定後の虹彩・毛様体をそれに対する抗体で染色し、経時的変化を免疫組織化学的に検討した。数種の抗体を用いて、染色を行ったが、非特異的染色が多く、Jun BにおいてLPS投与24時間後に明らかな毛様体色素上皮層での染色を認めた。

4)リアルタイムRT-PCR、前房内蛋白の定量、虹彩・毛様体の免疫染色の結果より、マイクロアレイ法の信頼度は高いと再確認したため、経時的発現変化のパターンを5つに分類した。結果として、LPS投与(1)2時問後をピークに増加、以降減少(2)2-6時間後に著増、以降減少(3)6時間後をピークに増加、24時間後にはbase line(4)6時間後をピークに増加、ゆるやかに減少(5)24時間後に向かい、徐々に増加という5群に分けられた。(B)注目した新しい炎症抑制因子に関しての研究マイクロアレイ法の結果をもとに次年度への継続研究となった。
急性期入院患者の活動的生活支援による認知症・動作能力と看護業務負担に関する研究

入院患者に院内デイケアおよびリハビリテーションを実施し、患者を4群(デイケア群、リハビリ群、両者併用群、無介入群)に分けて、FIM(機能的自立度評価法)評価を用いて比較検討した。院内デイケア群、リハビリ群では介入開始6週後に有意なFIM合計点向上はみられなかったが、両者併用群で有意な向上がみられた。FIMの構成要素の中では、移動項目に有意な向上がみられた。リハビリとデイケアの併用は、入院初期の要介護状態を予防しうる手段になると推測される。また、入院時のFIM合計点が40点以下であると、どのような介入でもFIM改善がられないことがわかった。この臨界点は、患者の退院時の状況を予測する一手段になると推測される。患者に対して以下の介入調査を行う。(1)院内デイケア介入と個別対応リハビリテーションの介入の双方を行う群、(2)院内デイケア介入のみの群、(3)個別対応リハビリテーション介入のみの群、(4)院内デイケア介入と個別リハビリテーション介入ともに行わない群。以上それぞれの患者に対して日常生活動作評価、認知症評価、周辺症状評価、看護職の自覚的負担調査をすべて量的に行う。平成21年度は職員の出産、結婚退職なども重なりマンパワー不足で予算を繰り越したが、平成22年度をもって順調にデータ収集が出来ている。すでに院内デイケア介入の日常生活動作に対する効果と個別対応リハビリテーション介入の日常生活動作に対する効果の結果を得、報告を始めた。個別対応リハビリテーション介入は介入3週という比較的早期から日常生活動作に対して効果を示した。一方、院内デイケア介入は6週頃にその効果を示し、持続することがわかった。双方の介入はよりよい効果を示すこともわかった。今後、同時にデータ収集を行っている院内デイケア介入、個別対応リハビリテーション介入の認知機能に対する効果および看護師の業務負担・精神的負担に対する効果を解析していく。(1)院内デイケア介入と個別対応リハビリテーション介入の双方を行う群、(2)院内デイケア介入のみの群、(3)個別対応リハビリテーション介入のみの群、(4)院内デイケア介入と個別対応リハビリテーション介入ともに行わない群。平成22年度をもってデータ収集は完成の方向に向かっており、現時点では院内デイケアも個別対応もない群のデータ収集が少なめなので、その収集を中心にしていく。今後、同時にデータ収集を行っている院内デイケア介入、個別対応リハビリテーション介入の認知機能に対する効果および看護師の業務負担・精神的負担に対する効果を解析し、最終報告としていく。入院中の患者に、院内デイケアによる介入とリハビリテーションによる介入を行い、研究データの蓄積をした。リハビリテーションを行うにあたって、入院前の患者の状態をFIM(機能的自立度評価法)にて評価をしたところ、入院前のFIM総得点により、入院患者の改善の見込みが推測できることを見いだした(田中聡一ら、入院患者の日常生活動作向上に関わるリハビリテーション介入開始前状態に関する研究:日本医療福祉学会論文集(6)45-50(2011))。N病院による研究では、FIM総得点が40点以下では、リハビリテーション介入の有無にかかわらず、機能的自立度の向上は難しい。また、得られたデータの解析を順次行っている。入院中患者へのリハビリテーションによるADL改善は知られているが、院内デイケアの併用で、よりADLの改善が見込まれることがわかった。FIMによる解析ではとくに、移動項目の有意な改善が認められた。日本老年看護学会への発表申請をし、来年度の開催に合わせた報告予定となっている。本研究は入院患者の廃用予防(運動機能、精神機能とくに認知症)をへの介入効果を検証するものを行っているが、その活動が認められ、平成23年7月30日開催(東京大学)のTRONイーブルウェアシンポジウムで認知症に関する招待講演をおこなった。
iPS細胞を用いた神経堤症モデルの作製及び神経堤症に対する創薬を目指した病態解明

われわれは、胎児の間に目、耳、鼻などの感覚器や顔の形成などに重要な役割をもつ神経堤細胞の異常のために、生まれつき目、耳や顔面形成に異常をもつCHARGE症候群患者について、iPS細胞を用いた病気モデルを作成しました。このモデルは細胞の動きを実際に観察することができ、より直接的に障害を観察できる点が優れています。神経堤細胞の障害により生じる多くの他の病気の病態解明に応用できると期待しています。また創薬研究において、このモデルは初期の胎児の神経堤細胞に影響を与える薬剤の安全性スクリーニングにも応用可能と考えています。目的:神経堤細胞は第4の胚葉と呼ばれ、多くの器官の形成に重要な役割を果たしている。iPS細胞を用いたヒト神経堤症に関する研究を通して、神経堤細胞の異常のために視覚、聴覚、嗅覚などに障害を持つ児の治療に役立ちたいと考える。平成26年度は神経堤症の1つであるCHARGE症候群の病態解明を行うために、iPS細胞由来神経堤細胞を用いた患者モデルを試験管内で作成した。成果:我々はすでにCHARGE症候群由来iPS細胞の作成、患者由来iPS細胞より神経堤細胞の作成に成功している。1)遺伝子発現解析:患者由来iPS細胞/神経堤細胞および健常人由来iPS細胞/神経堤細胞を用いてアレイ解析を行った。iPS細胞よりも神経堤細胞で、健常人とCHARGE症候群の差が顕著であった。また細胞遊走に関わる遺伝子に差を多く認めた。2)遊走能解析:健常人iPS細胞由来神経堤細胞とCHARGE症候群iPS細胞由来神経堤細胞それぞれを、小孔(8um)が空いたウェル(上層)に播種し、培地に誘因物質を含む下層のウェルへと細胞が遊走する様子を経時的に調べた。CHARGE症候群由来神経堤細胞は遊走速度、遊走個数の両面において健常人由来神経堤細胞より有意に劣っていた。3)タイムラプスを用いた観察:健常人由来神経堤細胞および患者由来神経堤細胞を別々の色で蛍光ラベル後に混合した。これらを低密度でチェンバーに播種し、経時的に顕微鏡で動きを観察した。患者1ライン、コントロール1ラインを用いて、細胞の動く速度を観察した。細胞の動く速度を画像解析ソフト(Image J)により数値化し、患者由来神経堤細胞で速度の低下が見られた。これより、患者由来神経堤細胞では動きが悪いことがわかった。また、混合した細胞集団において患者由来神経堤細胞に表現型を認めたことより、細胞自立的な遊走障害があることが分かった。目的:神経堤細胞は第4の胚葉と呼ばれ、多くの器官形成に重要な役割を果たしている。iPS細胞を用いたヒト神経堤症に関する研究を通して、神経堤細胞の異常のために視覚、聴覚、嗅覚などに障害を持つCHARGE症候群の治療に役立てたいと考える。2年目である平成27年度は、1神経堤細胞の遊走の方向性に関して、in vitroモデル作成に成功した。2ニワトリ胚へ導した神経堤細胞を移植し、iPS細胞由来神経堤細胞がin vivoで背側から腹側へと遊走する系を確立した。成果:我々はすでにCHARGE症候群由来iPS細胞作成、堤細胞の作成、およびxCelligenceを用いた遊走能解析によりCHARGE症候群神経堤細胞の遊走障害をみる系を確立している。平成27年度は、1)神経堤細胞の遊走方向性の解析:iPS細胞由来神経堤細胞を8wellチェンバーに播種し創傷治癒アッセイを実施した。播種2時間後に細胞固定し、核とゴルジ体の位置より遊走方向性をみた。ゴルジ体の位置が核よりみて創傷部位の120度内にあるときを方向付けられた細胞とカウントし、コントロール由来およびCHARGE由来神経堤細胞を比較したところCHARGE症候群で有意に方向付けられている細胞が少ないことがわかった。(2)タイムラプスを用いた神経堤細胞の遊走解析:健常人iPS細胞由来神経堤細胞および患者iPS細胞由来神経堤細胞を別々の蛍光標識をし、混ぜ合わせたものを8wellチェンバーに5*10^3/wellで播種し、自律的な動きをタイムラプスで解析した。両群を比較し、患者群で有意に移動距離の低下がみられた。3)ニワトリ胚を用いたin vivoでの遊走解析:健常人iPS細胞由来神経堤細胞をHHステージ8-12のニワトリ胚の後脳付近に移植し、iPS細胞由来神経堤細胞がin vivoで背側から腹側へと遊走する系を確立した。iPS細胞より安定した量および高効率(90%以上)でP75(+)HNK1(+)となる神経堤細胞を誘導することができており、また患者の表現型を複数の解析系でみることができている。1)試験管内における遊走能解析(達成度100%):昨年までにみつけたxCelligenceを用いた遊走能解析に加えて、創傷治癒アッセイや個々の細胞の移動能をみる新たな系を作成し、CHARGE症候群で健常人とは異なる表現型を複数認めた。2) in vivoでのiPS細胞由来神経堤細胞の遊走(達成度100%):iPS細胞由来神経堤細胞のニワトリ胚への移植時期および移植部位について、条件を各種検討し、背側より腹側へと遊走する時期を見つけた。この系を用いることで、in vivoでのCHAGE由来神経堤細胞および健常人由来神経堤細胞の遊走を比較することが可能となる。

目的:神経堤細胞は第4の胚葉と呼ばれ、多くの器官形成に重要な役割を果たしている。iPS細胞を用いたヒト神経堤症に関する研究を通して、神経堤細胞の異常のために視覚、聴覚、嗅覚などに障害を持つCHARGE症候群の治療に役立てたいと考える。3年目である平成28年度は、1iPS細胞由来神経堤細胞の分化能について、コントロールiPS細胞由来神経堤細胞およびCHARGE症候群患者iPS細胞由来神経堤細胞について、末梢神経、筋上皮細胞、骨細胞、軟骨細胞、脂肪細胞へin vitroで分化させることに成功した。両群を比較して、分化誘導効率に差異はなかった。2分化誘導したコントロールiPS細胞由来神経堤細胞を用いて、Anti-CHD7抗体によりChIP-seqを実施した。抗体の特異性が低く、合計3種類の抗体を用いて実施した。成果:これまでに我々はすでにCHARGE症候群由来iPS細胞を作成し、これより神経堤細胞を分化誘導し、xCelligenceを用いた遊走能解析、wound scratchによる遊走方向性の解析、ニワトリ胚へのiPS細胞由来神経堤細胞移植によるCHARGE症候群神経堤細胞の遊走障害をみる系を確立している。平成28年度は、1)神経堤細胞の分化能の解析:コントロールおよびCHARGE症候群患者iPS細胞由来神経堤細胞を末梢神経、筋上皮細胞、脂肪細胞、骨細胞および軟骨細胞へ分化誘導した。コントロール由来およびCHARGE由来神経堤細胞について、誘導効率に差異を認めなかった。2) ChIP-seqによるCHD7結合領域の探索:健常人iPS細胞由来神経堤細胞をもちいて、CHD7抗体によりChIP-seqを実施した。最初に用いた抗CHD7抗体の特異性が低かったため、計3種類の抗体を用いてChIP-seqを実施した。iPS細胞より安定して神経堤細胞を分化誘導し、さらにこれらを末梢神経細胞、筋上皮細胞、骨細胞、軟骨細胞、および脂肪細胞へと分化誘導することに成功した。1)神経堤細胞の分化能の解析(達成度100%):コントロールおよびCHARGE症候群iPS細胞由来神経堤細胞より分化誘導できており、分化能に関して両群に差異がないことがわかった。2)iPS細胞由来神経堤細胞を用いたCHD7抗体によるChIP-seq解析(達成度100%):コントロールiPS細胞由来神経堤細胞を用いて抗CHD7抗体によるChIP-seqを実施した。抗体の特異性が低く、計3種類の抗体を用いてChIP-seqを実施した。これらのターゲットにおいて共通する部位に注目して、次年度データ解析を継続する。目的:神経堤細胞は第四の胚葉と呼ばれ、多くの器官形成に重要な役割を果たしている。iPS細胞を用いたヒト神経堤細胞に関する研究を通して、神経堤細胞の異常のために視覚、聴覚、嗅覚などの障害を持つCHARGE症候群の治療に役立てたいと考える。内容:CHARGE症候群患者および健常者由来iPS細胞を樹立し、安定した量および高効率(90%以上)でP75(+)HNK1(+)となる神経堤細胞を誘導することができており、また患者の表現型を複数の解析系でみることができた。
現代日本語の音声・語彙・意味・文法・談話における変異と日本語教育

言語変異に対する関心は、二十世紀後半に世界各地で汚発化した。例えば、日本では「言語生活」という分野名のもとで、日本語の諸相を日本人の社会生活の中で提えようとするアプローチが進んだ。一方、海外特に米国では、それまで体系的な分析の対照とされなかった言語変種(アフリカ系米国人の英語)における規則性の解明を目指す研究が勃興した。本研究はこのような潮流の中で、現代日本語の変異に焦点をしぼり、まずフィールド調査によって収集したデータにもとづいてその実態を明らかにした。具体的に取り上げた項目は、音調、長母音の短母音化、格助詞の脱落、可能形式、文末詞、カタカナ語である。次に、本研究のもう一つの柱として、非母語話者の日本語(中間言語)における変異に着目し、英語・韓国語・中国語母語話者から、中間言語資料を収集した。この資料と、別な研究グループが作成した既存のコーパスを対象として、その変異の実態を分析し、母語話者との異同を検討した。具体的に取り上げた項目は長母音の短母音化、格助詞の脱落、可能形式である。第三に、小笠原諸島欧半系島民の混合言語(英語と日本語)の自然談話資料を収集し、母語話者、中間言語話者との異同を検討した。本研究の目的は、フィールド調査によって収集したデータをもとに、現代日本語における言語変異の実態を明らかにすることである。一口に日本語の変異といっても様々なタイプのものがあるが、今年度は(1)音調(特に文末誌)、(2)動詞の活用(特に尊敬形)、(3)格助詞の脱落(特に「を」)を取り上げ、日本語母語話者から収集した自然談話録音資料を用いて、その諸相を分析した。さらに、本研究のもう一つの柱として、非母語話者の日本語、つまり中間言語における変異に着目し、中間言語資料の収集、及びそのコーパス化の方法について検討した。今年度はオーストラリア人英語母語話者の談話資料を継続的に収集し、縮約現象の一つである長母音短縮について萌芽的な研究を行った。また、別な研究グループが既に作成した「KYコーパス」を利用して、格助詞の脱落についても分析を始めている。さらに比較の対象として、混合言語を取り上げ、小笠原在住の欧米系島民の混合言語の諸特徴を記述した。最後に、非母語話者による日本語の変異の理解という観点から、外来語の理解に関する実験的研究を行った。現代日本語の変異といってもさまざまなタイプのものがあるが、今年度は(1)文末詞(特に鹿児島方言のヨとガ、山形方言のス)、(2)格助詞の脱落(特にヲ)、(3)プロソディー(特に長母音の短縮、文末音調)、(4)スタイル差、に着目して、日本語母語話者から収集した自然談話録音資料を分析し、その諸相を解明した。さらに、本研究のもう一つの柱として、昨年度に引き続き、学習者の日本語、つまり中間言語における変異を取り上げ、中間言語資料を収集した。また、別の研究グループが既に作成した中間言語コーパス(KYコーパス)を利用して、格助詞の脱落の分析を行った。日本語学習者の日本語との比較の対象として、小笠原在住の欧米系島民の混合言語の自然談話資料を収集し、その諸特徴を記述した。昨年度に確立した手法に従い、上記の全資料についてコーパス化を進めた。第一に、自然談話録音資料をもとに、母語話者の日本語における変異の諸相を、音声,・語彙・意味・文法・談話の各レベルで明らかにした。,資料の微細な分析によって、現代日本語の多様性を可能な限り詳細・正確に記述し、教室外で日本語に触れる機会の多い非母語話者の利益に資するような知見を得た。具体的に取り上げた項目は、長母音の短縮、文末音調、外来語の使用実態、文末詞、格助詞の脱落、スタイルシフト、ポライトネスである。第二に、新たに収集した非母語話者(学習者)め日本語、すなわち中間言語の自然談話資料、および既存のコーパスを利用して、その変異の実態を分析して、母語話者との異同を検討した。具体的に取り上げた項目は、長母音の短縮、格助詞の脱落、可能表現である。
在日韓国人女性の社会階層と社会意識に関する実証的研究

本研究の中で実施された調査と、1995年に実施された「在日韓国人の社会成層と社会意識全国調査」および「社会階層と社会移動に関する全国調査」との比較分析に基づき、以下の諸点が明らかになった。(1)[文化資本に関する分析]日本人男性に比べて在日韓国人男性の文化資本は低いこと。父、母の学歴が高いほど出身家庭の文化資本は高まる傾向があること。出身家庭の文化資本が高いほど本人の学歴は高くなる傾向があること。(2)[在日韓国人女性の職業に関する分析]初職の企業規模は、9人以下の小規模の企業がほぼ半分を占めており、周辺セクターの労働市場に追いやられている。現職についても、9人以下の小規模な企業に従事する者が7割近く、さらに小規模企業への集中が強まっている。(3)[社会保障に関する分析]医療保険については、医療保険未加入者は加入者と比較して健康状態がよくない傾向が見られた。年金保険については、在日韓国人高齢者に分析を限定したところ、年金保険未加入者は、加入者より所得が低い傾向も見られた。(4)[母国とのネットワークに関する分析]民族への愛着や伝統への嗜好は、母国に親戚のいる人のほうが強い傾向にあることがわかった。また、母国語の使用や民族団体への参加においても、彼らはより積極的であることがわかった。しかし、母国に親戚をもつ人は日本人との付き合いが弱くなるのかと思われたが、むしろ彼らの間のほうが日本人との付き合いをもつ人が多くみられた。平成13年度は、14年度に実施予定の実査に向けて二度の全体研究会を実施し、研究アーマを吟味するとともに、質問項目を検討した。それにより、ジェンダー、エスニシティ、社会階層という本研究の3大テーマに関連して、家族間題(結婚情報の入手経路、結婚の安定性、家父長制の実態とそれが女性の就業に与える影響)、高齢者問題(高齢者の社会階層、人間関係、健康問題)、社会活動(地域活動と民族団体)、教育問題(民族的資質や文化資本とアスピレーションの因果関係)、ネットワーク(社会関係資本、日本人との関連性)等を重要なサブテーマとすることが決まった。また、メインテーマについても、従来の社会階層研究で等閑視されてきた"母親の影響"を特定する方針が確認された。以上の全体研究会と電子メールでの会議を通じて、質問票の素案が作成された。同質問票は、平成14年度の全体研究会で調整を加え、予備調査を実施した後、実査に用いる予定である。また、研究会とは別に、過去に実施した在日韓国人男性の調査について再整理を行った。具体的には、職業コードを新たに振りなおし、自由回答を電子データ化した。これによって、14年度調査との比較が容易となった。また、質問紙調査と平行していくつかの聞き取り調査を予備的に実施する方針も固まり、その環境整備として可搬型の機器(MDレコーダー、ノート型パソコン、液晶ディスプレイ、無線LAN等)を購入した。今年度は、協力の内諾を得ていた在日本大韓民国民団(以下、民団)が調査対象者名簿の開示を拒否するという重大な態度変更があり、全体のスケジュールに大幅な遅れが生じた。民団が態度を硬化させた理由は、日本の調査請負業者が戸別訪間をするという調査設計について、共通理解が成立していなかったためである。その後の協議の結果、民団の傘下団体である在日韓国学生会が調査を請け負うという条件の下で、ようやく限定的な協力が得られるよう合意が平成15年に入って成立した。そういった不透明な進捗状況を踏まえ、まず平成14年夏に全体研究会を実施して、以後の研究内容について柔軟な対応を想定し、各自が複数の調査企画と調査票を検討することを申し合わせた。また、予備的にのみ行うはずであった聞き取り調査を、一部で本格的に実施することが了承された。

加えて、カリフォルニア大学ロサンゼルス校を訪問し、性、エスニシティ、階級の実証的研究について、研究者、大学院生と意見交換をした。同分野では社会構築主義的研究が主体であり、実証的研究が極めて乏しいということで共通理解があった。が、少ないながらもいくつかの重要な業績を提示してもらった。また、調査項目について有益な示唆を得た。平成15年に入ると、民団との具体的な合意内容を踏まえて、在日韓国学生会と調査請負に関する委託契約を交わし、すぐにサンプリングを開始した。また、本格化することに決まった聞き取り調査に備えて、ノート型パソコンを一台購入した。昨年度はサンプリングが実施できなかったことにより研究計画がほとんど停滞したが、今年度に入ってもしばらくの間は計画の遅延が及んだ。その後、調査設計を変更することによって、おおむね実査に関して所期の目的を達成した。収集されたデータの分析から、まず、日本人男性データと在日韓国人男性データを比較したとき、総じて資産の保有状況は在日韓国人男性のほうが低く、とくに文化資本に関連する項目では著しく格差が大きかった。通俗的な議論とも矛盾する結果ではないが、初めて実証的に確認された意義は大きい。また、社会保障に関しては、1970年代までに各種の公的保障から疎外されてきた状況を反映し、保険や年金などについて制度の対象外となっている割合が他の外国人と比しても高いことが判明した。健康保険への非加入者は健康状態も相対的に悪い。こうした公的保障の欠落に対して、預貯金や家族間の私的な経済援助で対抗している姿も明らかになった。エスニック・アイデンティティについては、母国に親族が存在するかどうかによって変化することがわかった。従来の移民研究とも合致する結果ではあるが、逆に母国に親族がいるケースにおいて日本での社会的ネットワークが発達しているという意外な発見もあった。また、「同胞かどうか」という民族的境界の認識に関しては、「シンボル的側面」、「意識的側面」、「伝統的側面」、「場面的側面」の4つの次元があり、同胞集団の要件を構成していることが明らかになった。ただし、サンプル数が少ないことにより分析に支障をきたすことがあり、追加調査を実施している。今後は追加サンプルを加えて、在日韓国人女性の階層と意識の分析を進めていく。
葉緑体ゲノムの全構造とRNA編集機構に基づく陸上植物のルーツの探索

最初の陸上植物は何かという問題は緑色植物の系統に残された最大の謎であった。そこで,我々は最初の陸上植物とされているコケ植物の葉緑体ゲノム構造を明らかにしてこの謎の解明をめざし,ツノゴケ類ホウライツノゴケの葉緑体ゲノムの全構造を決定した。全構造が知られている葉緑体ゲノムに共通な51のタンパク質遺伝子を選び,それらに含まれる10,854のアミノ酸部位に基づき最尤法で系統樹を構築した結果。高い確率でコケ植物が単系統として陸上に進出し,後にツノゴケ類が分岐したことを示した。陸上植物の直接の祖先は何かという問題はもう一つの重要な課題である。そこで,我々は陸上植物の直接の祖先と目されているシャジクモの葉緑体ゲノムの構造を明らかにしてこの問題を解決しようとしている。ホウライツノゴケのRNA構造を解析した結果,他の植物では想像できない多くの部位においてRNAが編集を受けていた。これらのRNA編集は種子植物ではみられないUからCへの変換を436個も含み,葉緑体遺伝子の半数以上は編集なしには機能しないことを示した。さらに,tRNAのアンチコドンやスプライシングに必須部位におけるRNA編集を実証した。これらの編集は機能あるタンパク質を合成するために必須で,ゲノムの変異を相補している。RNA編集が陸上植物の祖先である緑藻にはなく,ほとんどの陸上植物にはあることから,RNA編集は植物が上陸するために必要とした機能であることを暗示している。RNA編集がおこなわれた配列に相補的な配列(distant cis-recognition element, DCRE)が同じRNAの中に存在した。RNAがDCREと二本鎖構造を取ると編集を受けるヌクレオチドのみがミスペアーとなり,編集酵素はこのミスペアーを修正するというメカニズムを提唱し,これをin vitroで実証しようとしている。コケ植物の中のどのグループが最初の陸上植物か,未だ陸上植物の系統に残された最大の謎とされている。この謎を解くために,最初の陸上植物の候補とされているツノゴケの葉緑体ゲノムの構造と機能を分析した。葉緑体ゲノムのタンパク質遺伝子に基づく系統樹は,ゼニゴケが最初の陸上植物であることを示したが,ゼニゴケとツノゴケの分解能が十分ではなく,決定的な証拠を示すことはできなっかった。ツノゴケの葉緑体ゲノム構造を分析する過程で,いくつかの遺伝子に異常な構造がみつかった。これらの遺伝子には翻訳することのできないナンセンスコドンが含まれていた。そこで,cDNAの構造を分析することにより,mRNAの構造を分析した。その結果,ツノゴケの葉緑体のRNAは非常に多くの部位で編集を受けていることがわかった。葉緑体ゲノムからのすべての転写物を調べたところ,942箇所でRNA編集を受けていることがわかった。これだけ多くの編集部位はこれまでには報告されていない。ツノゴケ葉緑体におけるRNA編集の研究は以下の新しい発見をもたらした。(1)葉緑体遺伝子の半数以上はナンセンスコドンを含むが,これらすべてのナンセンスコドンはUからCのRNA編集を受けセンスコドンとなる。(2)RNA編集を受ける95%以上のコドンは他の植物のものと同じになることにより,機能あるタンパク質がつくられる。(3)tRNA-Lysのアンチコドンは編集を受けて正常なコドンとなる。アンチコドンのRNA編集は植物では例がない。(4)翻訳領域以外のRNA編集として,SD配列での編集をみつけた。(5)タイプ2イントロンにおいて,イントロン切り出しに必須な配列がRNA編集によりつくられた。

(6)編集部位をもつRNA上に部位を指定する可能性のある配列をみつけた。この配列,ガイドタイプRNAが実際に機能するかどうかはin vitro系で証明する必要がある。コケ植物の中のどのグループが最初の陸上植物か,未だ陸上植物の系統に残された最大の謎とされている。この謎を解くために,最初の陸上植物の候補とされているツノゴケの葉緑体ゲノムの構造と機能を分析した。葉緑体ゲノムのタンパク質遺伝子に基づく系統樹は,コケが単系統として上陸したことを示した。ツノゴケの葉緑体ゲノム構造を分析する過程で,いくつかの遺伝子に異常な構造がみつかった。これらの遺伝子には翻訳することのできないナンセンスコドンが含まれていた。そこで,cDNAの構造を分析することにより,mRNAの構造を分析した。その結果,ツノゴケの葉緑体のRNAは非常に多くの部位で編集を受けていることがわかった。葉緑体ゲノムからのすべての転写物を調べたところ,942箇所でRNA編集を受けていることがわかった。これだけ多くの編集部位はこれまでには報告されていない。ツノゴケ葉緑体におけるRNA編集の研究は以下の新しい発見をもたらした。(1)葉緑体遺伝子の半数以上はナンセンスコドンを含むが,これらすべてのナンセンスコドンはUからCのRNA編集を受けセンスコドンとなる。(2)RNA編集を受ける95%以上のコドンは他の植物のものと同じになることにより,機能あるタンパク質がつくられる。(3)tRNA-Lysのアンチコドンは編集を受けて正常なコドンとなる。アンチコドンのRNA編集は植物では例がない。(4)翻訳領域以外のRNA編集として,SD配列での編集をみつけた。(5)タイプ2イントロンにおいて,イントロン切り出しに必須な配列がRNA編集によりつくられた。(6)編集部位をもつRNA上に部位を指定する可能性のある配列をみつけ,この配列をDistant cis-recognition sequence(DCRS)と名づけた。
オートファジーアクセサリー分子群の遺伝学的機能解析

研究目的これまでオートファジーは、自己分解によるアミノ酸供給が主な役割であり、実際、栄養飢餓などで激しく誘導されることが知られていた。一方、マウス遺伝学を駆使した我々の動物オートファジーの発生工学的研究から、恒常的に起こっているオートファジーの積極的な特異的タンパク質の処理機構が生体の恒常性維持・管理に重要であり、その破綻が様々なヒト疾病の発症原因となることが判明した。オートファジーの減弱による病態発症機構は不明であったが、ごく最近、我々は、そのプロセスにおいて中心的な役割を担っている分子群としてp62、Alfy、Nbr1の同定に成功した。この分子群は高等動物にのみ存在し、オートファゴソーム局在タンパク質LC3との相互作用を介してオートファジーによりその存在量が規定される。興味深いことに、これらの分子はユビキチン結合能を持ち、神経変性疾患、肝臓病、癌で確認されるユビキチン陽性封入体の構成成分でもある。本研究ではp62、Alfy、Nbr1(オートファジーアクセサリー分子群と命名)の個体レベルの研究を推進する。研究成果研究期間内に、Nbr1条件付きノックアウト、p62条件付きノックアウト、GFP融合p62ノックインマウス、p62変異体ノックインマウス、Alfy条件付きノックアウトの作成を終了した。これらマウスを基に選択的オートファジーの病態生理的意義の一端を明らかにした。研究目的これまでオートファジーは、自己分解によるアミノ酸供給が主な役割であり、実際、栄養飢餓などで激しく誘導されることが知られていたが、マウス遺伝学を駆使した我々の動物オートファジーの発生工学的研究から、恒常的に起こっているオートファジーの積極的な特異的タンパク質の処理機構が生体の恒常性維持・管理に重要であり、その破綻が様々なヒト疾病の発症原因となることが判明した。一方、オートファジーの減弱による病態発症機構は不明であっ1たが、ごく最近申請者らは、そのプロセスにおいて中心的な役割を担っている分子群としてp62、Alfy、Nbr1の同定に成功した。本研究ではp62、Alfy、Nbr1(オートファジーアクセサリー分子群と命名)の構造・分子から個体レベルの研究を包括的に推進し、これら分子のモニター系の確立およびその代謝制御機構の解明により、難治疾患の発症予防・治療方法の確立を目指す。研究結果現在までに、Nbr1条件付きノックアウト、p62条件付きノックアウト、GFP融合p62モニタリング、p62変異体ノックインマウスが完了し、Alfy条件付きノックアウトおよびGFP融合Nbr1ノックインマウスはキメラマウスを獲得した段階である。作製済みのマウスを順次解析するとともに、オートファジー不能マウスとの交配も行なう予定である。
癌に対するインテグリン・オステオポンチン阻害分子の転移抑制とその制御機構

平成16年度においては癌に対するインテグリンの転移に対する抑制能のアッセイ系と分子機能解析の検討を行った。メラノーマ細胞(B16)において骨への浸潤性がOPNの非存在および存在によって抑制あるいは促進における系についてのin vitroの検討を行いECI社製の細胞移動自動計測装置を用い、B16細胞がOPNを含まない血清あるいは含む血清に対し移動する動的なパラメータの計測が可能であることを明らかにした。さらに骨への悪性黒色腫細胞のin vivoにおける骨膜との関連についてのアッセイ系を確立した。即ち、OPNの存在する野生型および非存在のノックアウトマウスのそれぞれにおいて頭頂骨の骨膜上にB16細胞を播種しこれによる腫瘍形成の元に骨への癌浸潤の抑止モニターを可能とする系を開発した。また骨への癌細胞の増殖に関わると推察される細胞シグナルであるTobのin vivoにおける機能を検討した。即ち、Tob蛋白を欠失する動物においてはBMPに対する抑制活性が減弱し、この結果として骨形成が亢進することを明らかにした(PNAS2004)。
中世南都寺院圏における空間および歴史認識と、その叙述様式に関する文献資料学的研究

本年は三年間の補助金の成果として、南都諸寺社の縁起説や、『建久御巡礼記』『七大寺巡礼私記』といった南都巡礼記、あるいは「人」の歴史である血脈資料や僧伝資料といった、場/事物/人の歴史叙述に関わる資料群を主たる検討対象にすえて、南都寺院圏でおこなわれた歴史叙述の様相、およびそういった言説が規定した南都あるいは個別寺院の空間叙述の様相を、文献的に明確化することを目的として、研究を行った。さらに、積極的に成果を発表するようにこころがけたほか、大橋が主催する巡礼記研究会での討議が活発に行われるよう、差配した。なかでも、従来より最大の課題であった、『建久御巡礼記』の伝本系統を、極めて明確にあとづけることができたことが最大の成果であり、それは「『建久御巡礼記』の基礎的研究・二」として結実した。さらに、そういった諸書にみられる縁起説が、中世の全般を通じていかに展開したのかという問題を典型的にしめすものとして、大谷大学図書館蔵『興福寺縁起』に引かれる「西金堂縁記」を検討した。その結果、治承四年の南都炎上後の寺家においてなされた言説操作が、室町期にかけ、興福寺西金堂の主要法会である修二会の継続問題に関連しつつ、再度改変されていく様相を明確化することができた。また、その他、『建久御巡礼記』に先立つ『七大寺巡礼私記』の成立圏の問題について、特定することができたことは、説話研究はもとより、美術史・仏教史研究にとっても、重要な成果であったと考えられる(ちかく刊行予定の論考)。本年は既に提出した研究計画の1年目の内容にそくして、南都諸寺の縁起テキストについての調査分析を行った。ただ、その成果は未だ公刊しえていないが、平成19年度以後、逐次学会に紹介し、また分析をすすめていく予定である。そのなかでも代表的なものをいくつか掲出しておくと、まず、大谷大学図書館に蔵される、室町後期写の『興福寺縁起』を検討した。これは、私が主たる研究対象にすえている『建久御巡礼記』と類似する縁起言説を持ちながら、興福寺西金堂の修二月会の縁起説たらんと改変をおこなった一本で、南都圏における縁起言説の変容を見る上で極めて重要なものと位置づけられる。さらに、日本大学総合学術情報センター蔵『興福寺流記』を新たに発見、現在も調査検討をすすめている段階である。この一本は、大日本仏教全書におさめられる同名書とは異なり、興福寺の縁起言説を広く収録するもので、学会に知られることはなかった一本であり、同時に、この一本が、教王護国寺(東寺)という京洛の真言寺院を介している点、すでに紹介した同センター蔵『後鳥羽院御順礼記』とあわせて、京洛真言寺院における南都縁起説の重要という点で意義深い発見であると考える。なお『建久御巡礼記』に関しては、この書の注釈書を刊行すべく、鋭意準備をすすめている段階であることも付け加えておく。そのほか、歴史叙述の様相という観点から、「鎌倉・室町の書物と書写活動」および「『平家物語』と民間伝承」の二本の論考を公表した(ただし現段階では校正段階である)。本年度に特に研究を行なった対象は、大谷大学図書館に蔵される『興福寺縁起』である。本書は、これまでに知られていた興福寺縁起と大きく異なり、特に興福寺西金堂の縁起説の展開をあきらかにするにあたって、極めて重要な位置をしめるものである。本書についてはこれまでもいく度か言及されることがあったが、まず、その本文が極めて難読のため、全文が紹介されることはなかった。それをまず『巡礼記研究』誌に翻刻した上で略解題を付したことは特に南都の寺社研究において有用なことであった。それにくわえ、2007年10月に行われた中世文学会において、その意義を詳細に論じた。具体的には、治承四年の南都炎上によって、興福寺西金堂本尊である丈六釈迦像も焼失したのだが、西金堂内における最重要法会である修二会を炎上以後も継続しておこなうために、意図的な言説改変がおこなわれた痕跡を見いだすことができるのである。このような事実は、治承・寿永の内乱という未曾有の危機をのりこえるべく、これまでの歴史的言説を意図的にあらためていこうとする姿と連なるものであり、その具体的一例を呈示しえたことの意義もまた重要である。すなわち、本年度の研究は、研究計画書に記したうち、特に「書物間における改変の様相・関連性のありかた」の考究に重点をおいたものであって、その成果は、現在準備している『建久御巡礼記』を中心とした南都諸寺社縁起説の相互連関性にかんする総合的研究の一階梯となるものである。

さらに、積極的に成果を発表するようにこころがけたほか、大橋が主催する巡礼記研究会での討議が活発に行われるよう、差配した。なかでも、従来より最大の課題であった、『建久御巡礼記』の伝本系統を、極めて明確にあとづけることができたことが最大の成果であり、それは「『建久御巡礼記』の基礎的研究・二」として結実した。さらに、そういった諸書にみられる縁起説が、中世の全般を通じていかに展開したのかという問題を典型的にしめすものとして、大谷大学図書館蔵『興福寺縁起』に引かれる「西金堂縁記」を検討した。その結果、治承四年の南都炎上後の寺家においてなされた言説操作が、室町期にかけ、興福寺西金堂の主要法会である修二会の継続問題に関連しつつ、再度改変されていく様相を明確化することができた。また、その他、『建久御巡礼記』に先立つ『七大寺巡礼私記』の成立圏の問題について、特定することができたことは、説話研究はもとより、美術史・仏教史研究にとっても、重要な成果であったと考えられる(ちかく刊行予定の論考)。
地盤沈下地帯におけるSL杭の地震時繰返し力による鉛直挙動性状に関する研究

建築基礎構造では、地盤沈下地帯の杭基礎に生じる負の摩擦力(NF)を低減させるため、杭表面にアスファルト等のスリップ層を設けたSL杭を用いる例が多い。この場合、地盤が軟弱なため地震時の挙動性状が問題となるが,既往の研究では長期せん断変形に対するNFの低減効果のみが対象とされ、地震時の挙動に関する研究が皆無であった。本研究は、地震時SL杭の鉛直挙動に関する基礎資料を得ることを目的として、建物のロッキングによるSL杭の挙動を想定し、繰返しせん断変位振幅および速度がSL層の応答性状に与える影響について要素実験を通して検討した。実験は、冷水循環装置による恒温水(一般的地中温度15°Cに設定)中に供試体を浸し、二面せん断方式で実施した。実験パラメータとして、せん断変形速度5、10、50%/secの3ケースのそれぞれについて、定振幅(50サイクル)実験ではせん断変形振幅±1.0、±2.5、±5.0、±7.5mmの計12ケース、および漸増振幅(±1.0±7.5mm)実験では3ケースを実施した。結果として、定振幅実験から、1.せん断抵抗力Τせん断歪Yの骨格曲線は歪速度によりグル-ピングできること、またループ曲線では歪速度の増大によるTの増加、サイクル数の増加による抵抗剛性の減少、振幅増大によるソフトニング(紡錘型)からハードニング(逆S字型)への特性変化、および各サイクルにおけるピークT値が減少から一定ループへ収束する傾向のあること等の知見を得た。一方、漸増振幅実験から、2.各サイクルのピーク時におけるT値は、あるサイクル(振幅)で最大値を示し、その後減少する特性のあることを明らかとした。また、3.定振幅実験結果よりサイクル数と各サイクルのピークT値の低下率が一次の双曲線関数で表せること、および漸増振幅実験結果より各サイクルのピーク時のTとYを最大ピーク時の値で無次元化することにより、これらの関係を二次の双曲線関数で表現できることを示した。今後さらに実験を重ね上記3の成果を発展させ、地震時SL杭の鉛直挙動解析用構成式を構築する計画である。
生体防御におけるアディポネクチンの生理的意義およびそのメカニズムの解明

マクロファージあるいは破骨細胞分化におけるアディポネクチンの機能解析を行った。まず、マウス骨髄細胞の破骨細胞分化の系を用いて、精製したヒト血清由来の各種アディポネクチンの効果を検討した。その結果、1ng/ml HMWアディポネクチンで十分破骨細胞分化抑制効果を示すこと、また、5ng/mlの濃度にするとTrimerアディポネクチンでも抑制効果があることを見出した。一方、Hexamarあるはグロブラーアディポネクチンでは分化抑制効果は認められなかった。次に、阻害作用はどの時期に起こるのかを様々な条件で検討した結果、分化抑制作用はアディポネクチン刺激3時間のみで十分なことが明らかになった。すなわち、アディポネクチンによる破骨細胞分化抑制作用はアディポネクチン刺激初期に起こる細胞内変化が重要であることが考えられた。また、破骨細胞分化のマスター転写因子であるNFATc1あるいは破骨細胞分化を抑制する分子として知られるIFN-βの発現変動を検討した。その結果、アディポネクチン刺激によりNFATc1の遺伝子発現の抑制、核内移行の抑制が認められた。一方で、IFN-β発現はアディポネクチン刺激後顕著に増加することを見出した。さらに、髄由来マクロファージをHMW型アディポネクチン単独、RANKL単独、HMW型アディポネクチン+RANKL刺激3時間後の遺伝子発現変化をGeneChip法にて検討した。その結果、IL-1、IL-6、TNFαなどのサイトカインやMIP-1α、CXCL9などのケモカイン、COX-2、mPGES-1などの炎症に関わる遺伝子群がアディポネクチン刺激により顕著に減少していることを見出した。現在、マクロファージにおけるアディポネクチン機能に関わる候補遺伝子あるいは破骨細胞分化抑制作用を有する新規遺伝子の同定および機能解析を行っている。アディポネクチンによるIL-12 P40遺伝子発現調節機構について解析を行った。IL-12 P40遺伝子の5'-flanking regionのデリーションコンストラクトを用いたレポーターアッセイを行った結果、アディポネクチン刺激によるIL-12 p40転写促進を担っている領域は-369 bpから-630 bpに存在していることを明らかにした。本領域には転写因子結合部位としてC/EBPやAP-1などが存在していたため、これらの関与を検討する目的で変異コンストラクトを作製し、同様にプロモーター活性を測定した。その結果、C/EBP部位の変異体はプロモーター活性に影響を及ぼさなかった。一方で、AP-1部位の変異体は、アディポネクチン刺激によるプロモーター活性を顕著に抑制した。次に、主要なMAP kinase阻害剤を用いてアディポネクチンシグナル伝達に関与する分子を検討した結果、JNK(c-jun N-terminal kinase)阻害剤によりIL-12 p40遺伝子発現上昇作用が顕著に抑制されること、また、アディポネクチン刺激12時間後にJNKが活性化することを見出した。以上の結果から、アディポネクチン刺激によるIL-12 P40遺伝子発現上昇はJNK、AP-1の活性化を介した反応であると考えられる。IL-12 p40はIL-12 p35、あるいはIL-23 p19とヘテロダイマーを形成し、それぞれ生物活生を示すことが知られている。そこで、IL-12 p35、IL-23 p19の発現変動を検討した。その結果、アディポネクチン刺激によりIL-23 p19遺伝子発現が顕著に増加することを見出した。このから、アディポネクチンはマクロファージに作用するとIL-23産生を増強し、細胞生免疫を賦活化させることで生体防御において重要な役割を担っている可能性が示唆された。
癌化に於ける蛋白チロシンホスファタ-ゼの役割の酵素学的,分子生物学的解析

がん化に於ける蛋白質チロシンホスファタ-ゼ(以下,PTPと称ぶ)の役割の解明の為に,私共は,平成1年度迄に,基質特異性の異なる4種類のPTP,即ちPTPー1,ー2,ー3,ー4を分離,同定し,その内,PTPー1,ー2を精製した。その分子量は,いずれの場合も36,000と推定された。本年度は,主に,次の2点を明らかにした。1,PTPー1は,従来,得られていたPTPー1よりも数倍高い比活性を持つ分子量67,000の蛋白として精製される事が明らかとなった。これ迄知られている細胞質型のPTPの分子量は,いずれも50,000又は,それ以下であるので,PTPー1は,新しく同定された分子種である可能性が強い。この可能性は,PTPー1が,Zn^<2f>,バナジン酸,酸性化合物に阻害に対して,これ迄,記載のない低い感受性を示す事からも支持される。PTPー1の分子的性質を明らかにする為に,現在,その1次構造を解析中である。予備的な結果ではあるが,GVDGSFLA,ADPLVDLV,NPMVETLGTVL,GFHGHLSGL等の配列を得ている。現在,さらに解析を進めている。PTPー1の1次構造の解明は,PTPー1だけではなく,PTP全体への理解を深めるはずである。2,PTPー2は,その分子量,Zn,バナジン酸等の阻害剤への高い感受性から判断して,人胎盤PTPー1B型の酵素である事が明らかとなった。文献的に考察すると,PTPー2は,精製過程で,既にプロテア-ゼによる修飾を受けている。PTPー2の真の酵素学的,蛋白質化学的性質を明らかにする為には,nativeなPTPー2の精製が必要である。PTPー1,PTPー2共に,その精製に関して新たな問題が生じた為に,今年度中に達成する事を予定していたPTPー1,ー2の抗体やcDNAの単離は出来なかった。来年度は,PTPー1を中心にして解析を進めたい。
DNAポリメラーゼイオタ欠損マウスの作製とその肺発がん感受性の解析

DNAポリメラーゼイオタは、我々が発見した肺発がん抵抗性遺伝子座の有力な候補遺伝子である。この遺伝子の欠損が肺発がんに及ぼす影響を直接的に調べるため、DNAポリメラーゼイオタ欠損マウスの樹立を遺伝子工学技術によって試み、成功した。しかし、樹立の過程は様々な要因により当初計画よりも遅れを生じたため、3年間の研究期間で肺発がん感受性実験の終了にまで至ることができなかった。2009年度以降も外部資金獲得に努め、研究を継続する。マウス第18番染色体上に存在する肺発がん抵抗性遺伝子座Par2(Pulmonary adenoma resistance 2)は、多遺伝子支配下にあるマウスの遺伝的肺発がん感受性を修飾する因子の一つである。平成17年度までの研究により、Par2の有力な候補遺伝子としてPoltを同定することができた。PoltはDNA損傷乗越え能力を有するDNAポリメラーゼをコードしており、発がん物質等によって損傷を受けたDNAの複製や修復に関与しているものと考えられる。よって、このポリメラーゼのアミノ酸多型による機能変化が、肺発がんの第一段階であるイニシエーションの効率に影響するものと推測される。事実、Par2は二段階発がんにおけるイニシエーション感受性を支配することが、我々の研究で明らかになっている。本研究では、Par2のポジショナルクローニングの最終段階として、Poltノックアウトマウスを作製し、その肺発がん感受性を検討する予定である。今年度はノックアウトに必要なターゲティングベクターの設計ならび作製と、その胚幹細胞株への導入を行ったが、ノックアウトマウス創出に適する胚幹細胞クローンを得ることができなかった。既に約600個のクローンをスクリーニングしていることより、同じターゲティングベクターを用いてのノックアウトクローンのスクリーニング継続は成功の可能性が低いと判断された。Polt遺伝子の場合、同遺伝子にnonsense mutationを有する129系統マウスが致死でないことから、ヘテロ状態でPolt遺伝子がノックアウトされた胚幹細胞が致死となってしまう可能性は想定し難い。よって、来年度以降は新たなターゲティングベクターの設計と作製を行い、適切なノックアウトクローンの獲得を目指す。我々が発見したマウスの肺発がん抵抗性遺伝子座Par2 (Pulmonary adenoma resistance 2)は第18番染色体上に存在し、多遺伝子支配下にある遺伝的肺発がん感受性を修飾する主要因子の一つとして働く。これまでの研究により、Par2の有力な候補遺伝子としてPoliを同定することができた。PoliはDNA損傷乗越え能力を有するDNAポリメラーゼをコードしており、発がん物質等によって損傷を受けたDNAの複製や修復に関与しているものと考えられる。このポリメラーゼのアミノ酸多型による機能変化が、肺発がんの第一段階であるイニシエーションの効率に影響するものと推測される。Par2の責任遺伝子がPoliであることを直接証明するためには、Poliノックアウトマウスを作製し、その肺発がん感受性を調べねばならない。昨年度はノックアウトに必要なターゲティングベクターの設計ならび作製と、その胚幹細胞株への導入を行ったが、ノックアウトマウス創出に適する胚幹細胞クローンを得ることができなかった。そこで、今年度は新たなターゲティングベクターの設計と作製を行って実験を進めたところ、幸いにも優良なノックアウト胚幹細胞クローンが得られた。同クローン細胞を正常マウス初期胚と結合させ、偽妊娠させた仮親の雌マウスの子宮に移植した結果、3匹のキメラマウスの出産に成功した。今後はキメラマウスを正常マウスと交配し、目的のPoliノックアウトマウスを獲得する予定である。我々が発見したマウスの肺発がん抵抗性遺伝子座Par2(Pulmonary adenoma resistance2)は第18番染色体上に存在し、多遺伝子支配下にある遺伝的肺発がん感受性を修飾する主要な遺伝因子のとして働く。平成17年度までの逆行遺伝学的研究により、我々はPar2の有力な候補遺伝子としてPoltを同定することができた。Polt々はマウスおよびヒトでアミノ酸変化を伴う著明な多型を示す。この多型よる機能変化が、体細胞遺伝子突然変異をその本質とする肺発がんの第一段階、即ちイニシエーションの効率に影響するものと推測される。しかし、Par2の責任遺伝子がPoltであることを直接証明するためには、Poltノックアウトマウスを作製し、その肺発がん感受性を調べねばならない。19年度前半までにノックアウトに必要なターゲティングベクターの設計ならび作製と、その胚幹細胞株への導入を行ったが、ノックアウトマウス創出に適する胚幹細胞クローンを得ることができなかった。その後新たなターゲティングベクターの設計と作製を行って実験を進めたところ、良好なノックアウト胚幹細胞クローンが得られ、今年度終盤になってようやくノックアウトマウスの樹立に成功した。

ただし、研究途中でターゲティングベクターの再設計を要したことから、当初の計画に比して約1年間の遅れを生じた結果、ノックアトマウスの肺発がん感受性実験を20年度内に終了することができなかった。今後は新たな研究申請による外部資金獲得に努め、本研究の最終目的達成を目指したい。
口内乾燥症をきたす唾液腺疾患の臨床及びに病理学的研究

唾液分泌低下は、自律神経の調節障害や自己免疫疾患であるシェ-グレン症候群、薬物の連用による唾液分泌抑制、唾液腺の炎症、唾液腺症、放射線治療の副作用などがあげられる。またどこの唾液腺が障害をうけるかにより唾液分泌の低下は単に分泌量だけの問題でわなくその粘性、電解質、酵素等の性状に関与すると考えられる。正常耳下腺組織でも加齢に伴い腺実質が萎縮することにより唾液分泌の低下と唾液の性状の変化が起こる。加齢に伴う唾液の分泌量、性質、電解質や酵素についての検索をおこない耳下腺組織での脂肪変性率や年齢別の正常耳下腺組織についてコンピューターグラフィクスを用い立体構築像を作製し比較検討を行なった。さらに正常耳下腺と対比させながらシェ-グレン症候群における浸潤リンパ球の特徴、導管上皮の変性過程や筋上皮島のhistogenesisを明らかにするため免疫組織化学、電子顕微鏡的および三次元構築による検討を行なった。シェ-グレン症候群では、腺房細胞の萎縮や消失そしてリンパ球の浸潤が起きることが知られている。また、上皮性細胞の集合体である筋上皮島はシェ-グレン症候群で特徴的な所見であるが、免疫組織化学的に導管上皮に認められるKL-1やPanT比べ優位に認められるPanB陽性細胞の存在が確認された。電顕的にはトノフィラメントなどを含む導管系上皮細胞が主体であった。三次元構築による観察では導管のように分岐し連続した構造をとりことより、筋上皮島は筋上皮細胞の由来ではなく導管上皮由来の集合体と考えられた。