hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
電子移動により螺旋構造へ折りたたまれるπ共役系オリゴマーの設計と構築

1.両末端に1,4-ジチインを組み込々だm-キンクフェニレン1を合成し、その酸化還元挙動についてサイクリックボルタメトリーにより検討したところ、+0.43 V vs Fc/Fc^+に擬可逆な酸化波が認められ、2個のジチイン環は同時に酸化されるが、その還元波が通常よりやや遅れて現れることがわかった。この現象は部分構造であるジフェニルジチインでは観測されなかったことから、1において生成した2個のジチインラジカルカチオンは分子内で相互作用していると考えられる。2.3,4-ジメチル-2-(2'-フリル)チオフェンの理論計算(B3LYP/6-31G*)の結果から、フランとチオフェンがcisoid型に結合したコンフォマーがtransoid型に比べて、0.51kcal/mol安定であることが明らかとなった。このことからチオフェンのベータ位にブチル側鎖にもつチエニルフランオリゴマー2は無極性溶媒中で主鎖が疎溶媒的に折りたたまれることによって、さらにcisoid型が安定化され、緩やかなall-cisoid、すなわち螺旋構造のコンフォメーションをとるものと予想される。このオリゴマーについて段階的なクロスカップリング法により、フランとチオフェンを交互に連結してゆきチエニルフラン4量体までのオリゴマーの合成が可能であることがわかった。また、電子的性質については酸化電位および長波長シフト共に、交互に連結させることにより対応するチオフェンのみ、およびフランのみからなるオリゴマーの中間の性質を示すことが確かめられた。3.オリゴ(フリルチオフェン)の2量体および3量体の合成方法を確率し、特に3量体がオリゴチオフェンにと同程度のFET特性を示すことを明らかにした。1.両末端に1,4-ジチインを組み込んだm-キンクフェニレン1を合成し、その酸化還元挙動についてサイクリックボルタメトリーにより検討したところ、+0.43VvsFc/Fc^+に擬可逆な酸化波が認められ、2個のジチイン環は同時に酸化されるが、その還元波が通常よりやや遅れて現れることがわかった。
近代的「宗教」概念と宗教学の形成と展開-日本を中心とした比較研究-

本研究は現代、世界各地で用いられている「宗教」概念と、それに依拠する宗教学が、時代的な制約のもとに成立したものであることを明確に自覚し、そのことから生じるさまざまな問題を考慮する試みである。現代日本語の「宗教」は西洋の「religion」にあたる語を翻訳して、明治以降に普及したものである。その後の日本の宗教制度の展開や宗教学の形成過程を振り返ると、何が「宗教」とよばれ、何が「宗教」ではないのかについて、混乱を含みながら、事態が展開したことが明確になった。「宗教」と隣接して用いられる「祭祀」や「治教」、あるいは「国家神道」などとの関連を問うことで、日本的な「宗教」概念の特徴をとえる手がかりが得られる。一方、西洋では何の問題も生じないかというとそうではない。西洋でも特定の思考環境の下で「宗教」概念が輪郭づけられてきたことが明確化され。この語を用いることによる難点が指摘されるようになってきており、そうした難点を克服する方途の探求が、従来の宗教学の見直しとからみあいながら、重要な課題として進められていることが明らかになった。また、アジアの諸地域でも西洋風の「宗教」概念との齟齬が自覚されているようになっており、日本との比較により、多くの新たな知見が得られた。このように「宗教」概念が多くの不明瞭さを抱えていることは、宗教学の取り組むべき対象の範囲が今や自明のものではないことを示すものである。では、そのように輪郭が鮮明でなくなってきた「宗教」を、どのように問い直していくかという現代宗教学の方法論的課題への問いが、本研究を通して新たに切実なものとして浮上してきた。今年度は資料の収集を進めるとともに、研究会や聞き取りを重ねて、問題点の明確化と今後力を入れて研究すべき方向性の把握に努めた。日本の「宗教」概念と宗教学の形成の過程については、明治維新から10年代にかけての時期、明治20年代から30年代にかけての時期をそれぞれひとまとめにして考察が進められている。とりあえず、各時期の重要な資料や出来事や人物や書物について確認し、日本的な特徴をとらえる際の、それらの意義について理解が深められた。とくに島地黙雷、井上哲吹郎、加藤玄智、姉崎正治らの著作や行動について、多くの知見が得られた。これらの人物が欧米のどのような学問動向、思想動向に学んだかについて、今後の研究が必要である。清沢満之、綱島梁川、波多野精一らも視野に上ってきている。明治末以後の展開も視野に入れながらの研究ではあるが、それについてはいくつかの方向に限定して集中的な研究を進める方向で合意された。比較の視点を得るために、また、日本に対する影響を正確に把握するために、ヨーロッパやアメリカの状況を理解することの重要性も確かめられた。日本への影響という点でアメリカ合衆国が重要であり、19世紀末から今世紀前半のアメリカ合衆国の「宗教」概念をとらえることに力を注いだ。イギリス、ドイツ、フランス、ロシア、インドなどについても研究の手をつけ、一定の成果が得られている。また、この問題は世界的に注目を浴びているものであるので、世界の現在の研究動向の把握にも努めている。歴史的な研究の意義を照らし出すために、現代日本人の「宗教」観を知ることが重要であることの認識が深まり、現代日本人の「宗教」観についての聞き取り調査をも開始した。本年度は個々の対象や領域について、資料の分析やテクストの読解を進めるとともに、それに基づいて理論的な枠組みを提示してもらい、議論を進めた。まず、日本における「宗教」概念については、諸外国との比較においてその特徴の究明に努めた。研究会においてタイやインドネシアなど、アジア諸国での「宗教」概念の用いられ方について検討し、日本との相違について理解を深めることができたのは有益だった。

文化的背景や近代の歴史が異なると、「宗教」概念の用い方に大きな違いが生じるが、日本について考えるとき、東アジアにおける共通性と日本の独自性をあわせて考えることの重要性と確認された。一方、日本の宗教学の形成過程の考察を深める作業も並行して進めたが、本年は欧米の宗教研究の歴史を振り返りながら、日本の宗教学者が欧米のどのような伝統に影響を受けたか、また、欧米の理論や学派を受容する際、どのような変容が起こったかについての考察を進めた。19世紀の欧米の社会進化論の潮流と近世日本の儒学の伝統が合流して、明治期の進化主義的宗教論が形成される。明治後期になり、それが破綻する過程で、「高等」宗教の独自の意義を強調する考え方と、日本的な宗教性の意義を何とか拾い上げようとする考え方が並行して形成されてくる。現代に至る日本の宗教学や宗教理論の特徴をとらえる際、この明治後期が一つのターニング・ポイントとして注目すべきであるという論点が浮上した。その他にも重要な論点がいくつか現れてきており、個々の対象や領域から提起されてくる諸問題を、総合的な考察の枠組みへと吸収していく作業が始められてkる。本年は本研究のまとめの年にあたり、これまでの蓄積を踏まえて、各自の成果を出し合い、共同研究の到達点を確認しようとした。「宗教」概念の形成過程と現在に至るまでのその変容の過程という問題は、日本を中心としつつ、世界各地の比較において格段に究明が進んだ。日本については、明治期における「国家神道」の形成から、戦後の「神道指令」と「国家神道」の解体に至る経緯を、「宗教」概念の適用ど錯綜のプロセスとしてとらえる視点が明確化してきた。明治以前の関連する諸概念について、またそれらが明治維新以降、どのように再編されていったかについて検討していくと、これまで「国家神道」について十分、明らかにされていなかった論点を示しながら、現代に至る日本の宗教制度や宗教構造の特徴を考察していくことができることが示された。比較という点では、本年度は18世紀以来の欧米の状況について「神秘主義」概念の考察を通して理解がさらに深まるとともに、中国を中心とした東アジア世界の支配的な精神伝統である儒教がそもそも「宗教」であるが否かをめぐる議論への探求が深まり、これまでの成果をさらに多面化し、重層化していくことができた。欧米での「宗教」概念史研究の近年の成果とこの共同研究の成果とのつきあわせの作業も、可能なかぎり行うことができた。宗教学の展開についての考察は、「宗教」概念についての研究と関連づけながら進められ、ここでもかなりの成果をあげることができた。日本の宗教学の歴史について、近代的な「宗教」概念に基本的に寄り添いながら、時にそれとの軋轢を経験してきたプロセスとして、19世紀後半から20世紀後半に及ぶ長期的展望の下で検討を加えることができた。世界的な展望の下でさらにこの成果を深めるべく、その基礎を築くことができた。
細胞融合メカニズムから迫る、ポドソーム形成の新たな意義

細胞融合は、多細胞生物における受精や胎盤、筋肉、骨などの器官形成において重要であるが、近年存在が示唆されているがんー血球系融合細胞が生じる分子機構や融合細胞の性質については不明な点が多い。本研究ではイノシトールリン脂質(PI)による極性形成が細胞融合に重要であることを明らかにし、その下流で働くアダプター分子Tks5が、破骨細胞どうしの融合だけでなく、がんー破骨融合細胞の形成にも関与していることを明らかにした。さらに融合細胞の性状解析を通し、がんー破骨またはがんーマクロファージ融合細胞が、がん悪性化に寄与している可能性を示した。細胞膜イノシトールリン脂質(PI)のなかでも細胞外からの刺激に応じて産生されるPI(3,4,5)P3やPI(3,4)P2は細胞運動やがん細胞の浸潤に重要であるが、マクロファージや破骨細胞が、それぞれ浸潤または骨吸収する際に基質との接着面に形成するアクチンに富んだ構造、ポドソームの形成過程でも、これらのPIは中心的役割を果たしていることが知られる。PIとその下流分子の機能を詳しく解析することで、細胞が持つ浸潤形質の獲得・制御機構を明らかにしたいと考えた。そこで破骨細胞分化をモデル系とし、PIの下流で働く分子をスクリーニングしたところ、アダプター分子Tks5が抽出された。Tks5は、破骨細胞分化の過程で発現量が上昇すること、その発現上昇を抑制すると、破骨細胞への分化は正常に進行するものの、破骨細胞どうしの融合が阻害されることを見いだした。Tks5の局在や細胞極性の解析、Tks5の結合タンパクの網羅的解析から、破骨細胞の融合過程では、細胞膜の融合面における局所的なPI3-キナーゼの活性化→Tks5を含む機能分子群の集積とSrcによるTks5のリン酸化→ポドソーム形成→細胞融合という現象が起きていることが示唆された。Tks5は、がんの悪性化プロセスである上皮-間葉転換でも発現が上昇し、このとき作られる浸潤突起(インベードボディア)の形成にも関与していることから、細胞どうしの融合と細胞外基質への浸潤とには、共通の原理が働いている可能性があることに気がついた。実際、がん細胞がインベードボディアを形成する条件で破骨細胞と共培養すると、破骨細胞-がん細胞のハイブリッド細胞が形成され、このことはがん細胞にできるインベードボディア形成に依存していることが明らかになった。本課題では、生理的な破骨細胞融合と、病理的ながん細胞浸潤との間に共通するメカニズムがあることを示した点に独創性があり、がんの悪性化と細胞融合が密接な関わりがある可能性を示した点で重要である。臨床がん組織の染色観察により、非常に稀ではあるが、マクロファージ-がん融合細胞が存在することが示唆された。こうした融合細胞の性質を調べる始めのステップとして、マクロファージの機能や破骨細胞分化のマスター転写因子であるNFATc1に注目した。NFATc1は破骨細胞またはその前駆細胞において発現及び活性化が必要十分であるが、多くのがん細胞では発現が認められない。融合細胞においては、がん細胞とマクロファージや破骨細胞の核と細胞質が共存するため、がん細胞の核はNFATc1の影響を新たに受けることになる。この状況を模倣するために、恒常的活性化型NFATc1 (NFATc1CA)の発現を薬剤(Dox)により誘導できる乳がん細胞株(MCF7-NFATc1CA)を樹立し、遺伝子発現や浸潤能獲得への影響を調べた。その結果、以下の知見を得た。(1)NFATc1CAの発現を誘導すると、もともと非浸潤性であるMCF7細胞は、浸潤能を獲得する。(2)NFATc1CAは、MCF7細胞にSnailやZeb1などの上皮-間葉転換に関与する転写因子の発現を誘導し、細胞間接着分子であるE-cadherinの発現を転写レベルで抑制する。(3)この細胞をヌードマウスへ皮下移植し、Dox入りの餌を与えNFATc1CAの発現を誘導した個体では腫瘍が皮下に生着し、ある程度まで増殖した。しかし通常の餌を与えNFATc1CAの発現を誘導していない個体ではほとんど生着しなかった。(4) NFATc1CAの発現を誘導したMCF7細胞由来の腫瘍は、腫瘍の辺縁部において周囲の組織への浸潤が認められた。このことは、浸潤能を持たない正常上皮細胞や原発部位のがん細胞は、破骨細胞、マクロファージやその前駆細胞と融合することで生存に有利になったり、浸潤能を獲得する可能性があることを示しているアダプター分子Tks5は破骨細胞分化のプロセスで発現が増加し、破骨細胞どうしの細胞融合に必要であるという知見をH23年度までに得ていた。

がんの悪性化プロセスの一つである上皮ー間葉転換(EMT)の過程でもTks5の発現上昇とポドソーム(またはインベードポディア)形成が見られ、がん細胞の浸潤形質を司っているという及川らの知見(科学技術振興調整費・H20H24による)からアイディアを得、がん細胞がマクロファージや破骨細胞と融合するためには、Tks5に依存したポドソーム形成、浸潤能獲得が必要である可能性について検証した。通常の条件ではがん細胞は融合しないため、破骨細胞と同様に転写因子NFATc1が活性化されることや、炎症性微小環境(Johansson, C. et al., Nat. Cell Biol, 2008) (Nygren, J. et al., Nat. Cell Biol, 2008)のような、"プラスα"の因子が必要であると考え、その条件の検討を行った。その結果、Tks5の恒常的な発現が認められ、Tks5に依存したインベードポディアを形成するメラノーマ細胞株、B16F0において、破骨細胞との融合能を認めた。そしてこのインベードポディア形成能と破骨細胞との融合能は、炎症性サイトカインであるTGF-betaやTNF-alphaの添加により増強した。またRNAi法によりTks5の発現を抑制すると、B16F0と破骨細胞との融合が抑制されることを示した。Tks5の関与する細胞融合メカニズムについて、細胞レベルでの解析は当初の計画以上に順調に進展しているが、破骨細胞特異的なTks5のコンディショナルノックアウトマウス作製に必要なES細胞のスクリーニングが遅れているため。25年度が最終年度であるため、記入しない。破骨細胞、がん細胞にそれぞれ見られるアクチンに富んだ構造物、ポドソームとインベードポディアが細胞融合マシーナリーであることは、当初の計画通りに順調に研究を進め、示すことができた。さらにその後、臨床がん組織の染色によりマクロファージや破骨細胞-がん融合細胞が実際に存在することを見いだし、こうした融合細胞がどのような性質を持つのか、解析を始めることができた。しかし一方で、破骨細胞特異的なTks5ノックアウトマウスの作製に関しては、まだキメラマウスが得られておらず、遅れている。現状の研究計画が妥当と思われるため、研究計画に従い研究を遂行する。・平成24年度までに得られた知見をもとに、補足・追加実験を行う。具体的には、臨床がん組織の染色により存在が判明した、マクロファージや破骨細胞-がん融合細胞がどのような形質を持つのかを解析する。性質を調べる始めのステップとして、マクロファージの機能や破骨細胞分化のマスター転写因子であるNFATc1に注目した。NFATc1は破骨細胞またはその前駆細胞において発現及び活性化が必要十分であるが、多くのがん細胞では発現が認められない。融合細胞においては、がん細胞とマクロファージや破骨細胞の核と細胞質が共存するため、がん細胞の核はNFATc1の影響を新たに受けることになる。この状況を模倣するために、恒常的活性化型NFATc1 (NFATc1CA)の発現を薬剤(Dox)により誘導できる細胞株(MCF7-NFATc1CA)を樹立し、遺伝子発現や浸潤能獲得への影響を調べる。また、この細胞をヌードマウスに皮下移植した際にできる腫瘍についても免疫組織学的に解析する。破骨細胞特異的なTks5ノックアウトマウスの作製に関しては、ターゲティングベクターを保持した相同組換え体クローンからキメラマウスを得るべく作業を継続する。
パイロトーシスの分子機構と役割

パイロトーシスはカスパーゼ1,4,5の活性化によって誘導されるネクローシス様の炎症誘導性プログラム細胞死である。病原体に感染したマクロファージの細胞死として良く知られるが、T細胞や腸管上皮細胞などもパイロトーシスを起こす。我々は、腫瘍細胞にもパイロトーシスを誘導しうることを示してきた。本研究はパイロトーシスの分子機構と役割を明らかにすることを目的とし、以下の成果を得た。1)近年、カスパーゼ1の基質でパイロトーシス実行蛋白として働くガスダーミンD(GSDMD)が同定されたが、GSDMD欠損マクロファージや大腸癌細胞株でもカスパーゼ1を活性化すると野生型細胞より少し遅れて細胞死が誘導された。そこで、カスパーゼ1依存性GSDMD非依存性細胞死の分子機構を解析した。その結果、GSDMD欠損細胞や元々GSDMDの発現が低い神経細胞やマスト細胞ではカスパーゼ1がBid依存性アポトーシスを誘導することが明らかになった(Nat. Commun, 2019 in press)。カスパーゼ1は筋委縮性側索硬化症や虚血性脳損傷などの疾患モデルで神経細胞死に関与するとの報告があり、我々の成果はこれらの疾患の発症機序の解明に寄与する可能性がある。2)パイロトーシスシグナル伝達に関与する遺伝子を探索し、細胞分裂や細胞内分子輸送に関わる遺伝子群を同定した。3)アポトーシス細胞とパイロトーシス細胞が細胞外に放出するメタボライトを比較し、パイロトーシスから選択的に放出されるメタボライトの一種が細菌感染などによるマクロファージのIL-1βの産生を阻害する作用を示すことを見出した。このメタボライトはパイロトーシスに特徴的なダイイングコードと考えられる。4)がん治療モデルを用い、がん細胞にパイロトーシスを誘導するとアポトーシスを誘導した場合よりも強い抗腫瘍免疫を誘導しうることを示した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。パイロトーシスはカスパーゼ1依存性の炎症誘導性細胞死である。本研究はパイロトーシスの分子機構と役割の解明を目的としている。本年度は下記の成果を得た。1)我々が独自に樹立した、パイロトーシスを全細胞に誘導しうる細胞株にshRNAライブラリーを導入し、誘導後に生き残った細胞に濃縮されるshRNAを網羅的に同定した。これらのshRNAの標的遺伝子はパイロトーシスの実行に関与する蛋白をコードしている可能性がある。実際、カスパーゼ1の上流で働くASC(遺伝子名PYCARD)を標的とするshRNAが含まれていたことから、このスクリーニングは機能したと判断した。今後は同定した遺伝子の機能の解析を進める。2)我々は、FKBP-F36V変異体の直列3量体(Fv3)をカスパーゼ1、8、9と融合したcDNAを細胞株に発現させ、FK506誘導体AP20187処理でカスパーゼ1,8,9の多量体化を誘導することで、パイロトーシスやアポトーシスを誘導しうる実験系を確立した。本年度はこれらのcDNAを導入したマウス腫瘍細胞株を樹立した。これらの細胞株をAP20187で刺激したところ、予想どおりFv3-カスパーゼ1発現株はパイロトーシスを、Fv3-カスパーゼ8、9発現株はアポトーシスを起こすことを確認した。現在、これらの細胞株を同系マウスに移植し、腫瘍を形成した後にAP20187を投与することで、生体内で各々に特徴的な細胞死が誘導されるか検討を行っている。3)我々は同一の細胞株に異なる遺伝子を導入することで、同一の刺激でパイロトーシスを起こす細胞株とアポトーシスを起こす細胞株のセットを樹立している。本年度は、ヒト大腸がん細胞株COLO205由来のセットでアポトーシスとパイロトーシスで細胞から放出される物質の網羅的な比較解析を行った。今後他の細胞セットでも同様の解析を行う予定である。パイロトーシスはCaspase-1依存性の炎症誘導性細胞死である。1)昨年度同定したパイロトーシスシグナル伝達因子(PYST)候補分子の内、PYST1はCaspase-1結合蛋白であること、PYST1阻害剤が生理的なパイロトーシスも抑制することが判明した。しかし、PYST1は細胞増殖にも必須の蛋白で、PYST1欠損細胞の樹立は困難であった。2)Fv三量体とCaspase-1、8または9の融合蛋白を発現するマウス腫瘍細胞株を樹立し、同系マウスに形成させた腫瘍内にFv架橋剤AP20187を投与したところ、活性化するカスパーゼの違いによって治療効果や腫瘍免疫誘導効果に大きな違いが認められた。興味深いことに、Caspase-8や9の活性化はどちらもアポトーシスを誘導するのにも関わらず、治療効果には大きな差があった。また、Caspase-1の活性化でパイロトーシスを誘導した場合に腫瘍免疫の誘導効率が最も高いことが判明した。3)PK8ヒト膵がん細胞株由来のアポトーシス細胞とパイロトーシス細胞から放出される物質の網羅的な比較解析を行った。その結果、昨年度COLO205細胞のパイロトーシス

関連放出物質として同定された核酸系のメタボライトが、PK8細胞のパイロトーシスでも放出されることが判明した。また、ポリアミン類など新たな死細胞放出因子が同定された。4)パイロトーシスの阻害剤・誘導剤を探索し、パイロトーシスを阻害する複数の化合物を同定した。この中にPYST1阻害剤が含まれていた。パイロトーシスの誘導剤に今のところ見いだせていない。1) PYST1については、shRNAライブラリースクリーニングでPYST1に対する複数の異なるshRNAが濃縮されたこと、PYST1がCaspase-1に結合すること、PYST1阻害剤が細菌感染等による生理的なパイロトーシスを部分的に抑制することなどから、パイロトーシスの誘導に関わる分子である可能性は高い。しかし、PYST1が細胞増殖にも必須の蛋白であることから、PYST1を安定的にノックダウンした細胞株や、ノックアウトした細胞株の樹立が困難であり、明瞭な検証の障害になっている。その他のPYST候補の中にPYST1と機能的に関連する分子があることから、これらの分子についても生理的なパイロトーシスの実験系で検証が必要である。2)腫瘍治療のマウスモデルで、腫瘍細胞内で活性化させるカスパーゼや細胞死様式の違いが、その後の生対応答にどのように影響するのかを解析するためのプラットフォームがほぼ確立できた。このシステムを利用して、今後、細胞死様式の違いやそれに伴うダイイングコードの違いが、細胞増殖、組織のリモデリング、炎症・免疫応答などに与える影響を個体レベルで解析することが可能になると期待される。3)アポトーシス細胞、パイロトーシス細胞あるいはその両方で細胞外に放出される数種のメタボライトを同定した。4)パイロトーシスを阻害する複数の化合物を同定した。このうちの一つがPYST1阻害剤であったことはパイロトーシスにおけるPYST1の役割を裏付けるものであり、重要な成果である。一方、パイロトーシスの誘導剤に今のところ見いだせていない。さらに大規模なスクリーニングを行うためには、よりハイスループットなアッセイ系の開発が必要と思われる。Caspase-1依存性炎症誘導性細胞死であるパイロトーシスの分子機構と役割の解明を目的とした研究を行い、本年度は下記の結果を得た。1)昨年度見出したパイロトーシスシグナル伝達因子(PYST)候補21種類の内、PYST1はCaspase-1結合蛋白であったため、そのCaspase-1結合領域を絞り込み、さらにアラニンスキャニングを行ったが、Caspase-1結合能を失った変異体は得られなかった。PYST1のカスパーゼ1結合部位は2ヶ所以上存在する可能性が考えられる。また、PYST1がCaspase-1の基質となりうることを見出した。PYST1以外のPYST候補遺伝子を個別にsiRNAでノックダウンを行い、PYST2, PYST4, PYST9, PYST19に対するsiRNAがパイロトーシスを部分的に抑制することを見出した。2)Fv三量体とCaspase-1、8または9の融合蛋白を発現するマウス腫瘍細胞株(EG7-C1, C8, C9)を用い、腫瘍細胞にパイロトーシスやアポトーシスを誘導した際の治療効果と腫瘍免疫誘導効率を比較した。
多施設間の統合退院サマリーデータベースの構築

本研究では複数の医療機関から退院サマリーを抽出し、テキストマイニング技術によって共通の文書ベクトル空間を持つ大型テキストデータベースの構築を進めてきた。これまでに7つの病院から退院サマリーを抽出した。データの収集と基本的処理は各施設内で行い、連結不可能匿名化した情報のみを集約している。DPCを指標としたクロスマッチ自動判定の結果では、自施設のモデルデータでは高い一致率を示し、他施設のモデルデータでは1020%程度低下するものの、全施設統合データでは自施設と同程度の値を示した。また、これまでに構築したデータベースを用いて類似症例検索を行うWEBアプリケーションを開発して千葉大学に設置した。本研究では最初に、各施設及び学会の電子カルテに対応した退院サマリー収集インターフェイスと解析プログラムを作成し、索引語の収集と頻度分析を行う。次いで得られたデータを集積して、全国共通の文書ベクトル空間を構築して自動疾患判定や類似症例の検索を可能とすると共に精度の検証を行う。平行して本手法が一般性を持つものであることを立証する。平成24年度は解析の基礎となるデータの収集を行い、重要語を症例別に抽出してベクトル空間を得る計画である。・データの収集と基本的解析24年度内に千葉大学医学部附属病院、大阪大学医学部附属病院、香川大学医学部附属病院、高知大学医学部附属病院、長崎医学部附属病院の5施設からのデータ収集を行い、総計で約20万件のサマリーを抽出した。形態素解析によって約16万5千種、延べ2722万語の索引語が得られ、各施設ごとにサマリーの特徴や単語出現頻度の分析などを行った。病院情報システムは退院サマリーの外部への一括出力機能を持たないことがある。本研究の参加校では千葉大学と大阪大学、高知大学は研究者自身で作業を行うことが出来たが、長崎大学と香川大学は機能を持っていなかったため、出力機能の整備と抽出作業の外部委託を行った。各大学での倫理審査委員会の審査が年度内に終了しなかったため、本年度は抽出と基本的な解析を各施設内で行い、統計データのみを千葉大学へ集約している。・学会発表第32回医療情報学連合大会において、本研究の構想を発表すると共に、中間報告として、施設間のサマリーの長さ、使われている単語、診断との関連の分析および、DPC判定結果の比較の結果を発表した。また、2013年8月にコペンハーゲンで開催される国際医療情報学会への投稿を行った。論文はアクセプトされており、現在までの成果を発表する予定である。本研究では最初に、各施設および学会の電子カルテに対応した退院サマリー収集インターフェイスと解析プログラムを作成し、索引語の収集と頻度分析を行う。次いで得られたデータを集積して、全国共通の文書ベクトル空間を構築して自動疾患判定を行い、精度を検証すると共に施設間の特徴を分析する。次いで類似症例の検索やDPCのチェックを可能とするアプリケーションを作成する。・データの収集と基本的解析:25年度には前年度までの千葉大学医学部附属病院、大阪大学医学部附属病院、香川大学医学部附属病院、高知大学医学部附属病院、長崎大学医学部附属病院に加えて、佐賀大学医学部附属病院、聖路加国際病院の2施設からのデータ収集を行い、総計で約25万件のサマリーを抽出した。形態素解析によって約17万6語(延べ3200万語)の索引語が得られ、それぞれの施設ごとのサマリーの特徴や単語出現頻度の分析などを行った。・アプリケーション開発:これまでに収集したデータから得た全国共通のベクトルを用いて、類似症例検索を利用可能とするWEBアプリケーションを開発して千葉大学に設置した。・学会発表:第33回医療情報学連合大会および2013年8月にコペンハーゲンで開催された国際医療情報学会において、退院時サマリーのクロスマッチ比較として、施設間のサマリーの長さ、使われている単語、診断との関連の分析および、DPC判定結果の比較の結果を発表した。本年度はこれまでに作成したデータベースを応用し、病歴をそのまま入力して各施設別と全国共通のベクトルを切替えて類似症例を検索することができる機能を備えたWebアプリケーションを開発した。サーバは千葉大学に設置し、インターネットからも利用可能とした。加えて、高知大学病院の退院時サマリーデータを再取得し、参加7病院各々の検証用データとモデルデータの組み合わせによる7対7のクロスマッチ判定および、全病院のデータを統合したモデルデータとの間での自動判定を、DPCコードの14桁全てと上位6桁のそれぞれで行った。対象のサマリー数は千葉大学42690例、大阪大学42867例、香川大学40076例、高知大学13976例、長崎大学41466例、佐賀大学28753例、聖路加国際病院37483例で、総計は247311例であった。

類似症例検索システムのレスポンスは、入力された文章が200文字以下の場合で平均5秒以内、500文字で7秒、1000文字でも10秒程度と速く、精度はオフライン検索と同等で十分な速度と精度を示した。疾病を表すDPC6桁までを用いたクロスマッチ照合の結果では、いずれの病院でも自施設のモデルデータと検証データの組み合わせでは、7782%が一致と高い判定率を示した。異施設との間では5777%の判定率に低下するものの、全施設を統合したモデルデータとの検証では自施設と同等の判定率を示した。DPC14桁全て一致での判定結果では、判定率は自施設同士で6573%、異施設との間でも4460%と6桁よりは下がるものの高率を示した。統合モデルデータとの照合では、6桁の場合と同様に自施設と同等の判定率を示した。今回開発したアプリケーションは参加施設でも設置可能で、その場合は自施設のサマリー原文にもアクセス可能とした。26年度が最終年度であるため、記入しない。医療情報学26年度が最終年度であるため、記入しない。各施設での倫理審査に時間がかかり、抽出作業に遅れが出てしまった。島根大学では病院情報システムのリプレースに伴い、抽出作業を行うことができなかった。(理由)島根大学では病院情報システムのリプレースに続いて特定共同指導を受けて余力が無くなったために予定していた協力が得られず、抽出作業を行うことができなかった。WEBアプリケーションを協力医療機関の一般ユーザーから、セキュリティを保ちつつ利用可能とするための設定が遅れており、外部からのアクセスがまだ利用可能となっていない。平成25年度は第一に、24年度に未収集の施設からデータを抽出して、施設間の比較を行う。また、得られた全国共通のベクトルデータを用いて類似症例検索、DPC判定の機能を利用可能とするアプリケーションの作成を開始する。類似症例検索アプリケーションをパッケージ化して参加施設に配布する。その際、自施設の類似症例検索では元サマリーにアクセス可能にする。加えて、これまでに得られたデータを用いて多数の退院サマリーに対してバッチ処理を行い、付与されているDPCコードの監査を自動的に行うアプリケーションを開発して、協力医療機関に配布する。開発したアプリケーションは協力医療機関で利用してもらい、精度と性能の評価を行うとともに、病院間の診療の差を検証する。新規に参加を希望する医療機関があれば受け入れ、データの収集と解析を追加で行う。平成26年度の研究経費は、アプリケーション開発およびインストール作業に対する謝金、協力医療機関への設置を行うための出張費などが主である。データ解析のための経費としては資料整理の協力者への謝金、研究者との打ち合わせと成果の発表のための会議費・交通費などを予定している。本研究の成果は医療情報学会およびヨーロッパ医療情報学会(MIE2014)等において報告する。2015年にブラジルで開催される国際医療情報学会(MEDINFO2015)でも報告を行う予定である。
微小振動抑制を考慮した機械構造物の振動減衰特性に関する基礎的研究

本研究は,機械構造物の微小振動抑制を目的として行った.一般に構造物は,いくつかの部材が組み合わされて構成されており,これら部材間の接触機構を検討することは,構造物の振動減衰特性を検討する上では重要である.そこで,構造材をホルダを介した精密バイスで締め付け,その先端にインパルス入力を印加したときの振動減衰挙動,接触剛性について検討した.次に,構造部材空洞部に充填物質を挿入した場合の振動減衰特性について実験した.まず,中空構造材または粒子充填構造材をインパクトハンマにより加振し,応答波形などから振動減衰挙動について検討した.さらに,正弦波加振法によりそれらの振動特性についても検討した.その結果,構造部材間の接触剛性,充填構造材の振動減衰特性などの基礎的な実験データが得られた.接触部における振動減衰特性は,印加する入力の大きさ,締め付け力などにより変化し,減衰特性の上からみた最適の締め付け力があることがわかった.また,充填構造材の振動減衰特性は,空洞部に充填する材料,粒度および充填率などにより変化するなどの基礎的な実験結果が得られた.特にセラミックス粒子を充填した場合には,振動減衰特性が大幅に改善された.さらに,構造物空洞部に充填する材質,粒度,充填率などにより,応答特性などの振動特性が大幅に改善されることなどがわかった.今後,これらの成果を基にさらに詳細に検討し,本研究を発展させていく予定である.本研究は,機械構造物の微小振動抑制を目的として行った.一般に構造物は,いくつかの部材が組み合わされて構成されており,これら部材間の接触機構を検討することは,構造物の振動減衰特性を検討する上では重要である.そこで,構造材をホルダを介した精密バイスで締め付け,その先端にインパルス入力を印加したときの振動減衰挙動,接触剛性について検討した.次に,構造部材空洞部に充填物質を挿入した場合の振動減衰特性について実験した.まず,中空構造材または粒子充填構造材をインパクトハンマにより加振し,応答波形などから振動減衰挙動について検討した.さらに,正弦波加振法によりそれらの振動特性についても検討した.その結果,構造部材間の接触剛性,充填構造材の振動減衰特性などの基礎的な実験データが得られた.接触部における振動減衰特性は,印加する入力の大きさ,締め付け力などにより変化し,減衰特性の上からみた最適の締め付け力があることがわかった.また,充填構造材の振動減衰特性は,空洞部に充填する材料,粒度および充填率などにより変化するなどの基礎的な実験結果が得られた.特にセラミックス粒子を充填した場合には,振動減衰特性が大幅に改善された.さらに,構造物空洞部に充填する材質,粒度,充填率などにより,応答特性などの振動特性が大幅に改善されることなどがわかった.今後,これらの成果を基にさらに詳細に検討し,本研究を発展させていく予定である.機械構造物の微小振動を抑制することを目的として,構造物構成材料の振動減衰特性,構成部材間の接触部における接触剛性ならびに構造材料の空洞部に充填する充填材の種類,粒度および充填率などを変化させた場合の振動減衰特性についての基礎的な実験データを得た。まず,機械構造物の骨格材料としては,解析に便利なように鋼製およびステンレス鋼製の中空矩形材を用いた。実験は,中空矩形材または粒子充填材を一次モードの節で吊り,インパクトハンマにより加振したときの振動減衰挙動について検討した。その結果,特に充填物質を挿入した場合には振動減衰特性が大幅に改善されること。また,充填物質の粒度によりかなりその性質が異なることなどが分かった。また,構造物は,いくつかの部材を組み合わせて構成され,これらの部材間の接触面における接触機構を検討することは,構造物の振動減衰特性を検討する上では重要である。この点については,構造材をホルダを介した精密バイスで締め付け,ホルダとの接触面に垂直な法線方向あるいは平行な接線方向に,インパルス入力を印加したとさの振動減衰挙動,接触面の接触剛性について検討した。その結果,印加する入力の大きさ,締め付け力などにより振動減衰特性が変化し,減衰特性の上からみた最適の締め付け力があることが分かった。さらに,充填構造材について加振装置を用いた加振実験を行い,充填材の粒度や加振振動数などが応答特性などの振動減衰特性に及ぼす影響などについて検討している。機械構造物の微小振動を抑制することを目的として,構成部材接触部における接触剛性,構成材料の振動減衰特性,ならびに構造物空洞部に充填する充填材の種類,粒度および充填率などを変化させた場合の振動減衰特性についての基礎的な実験結果を得た.機械構造物モデルの材料としては,解析に便利なように炭素鋼および中空ステンレス鋼矩形材を用いた.構造物は,いくつかの部材を組み合わせて構成されており,これらの部材間の接触面における接触機構を検討することは,構造物の振動減衰特性を検討する上では重要である.この点については,構造材をホルダを介した精密バイスで締め付け,ホルダとの接触面に垂直な法線方向あるいは平行は接線方向に,インパルス入力を印加したときの振動減衰挙動,接触面の接触剛性について検討した.その結果、印加する入力の大きさ,締め付け力などにより振動減衰特性が変化し,減衰特性の上からみた最適の締め付け力があることが分かった.次に,構造部材の振動減衰特性については,まず,インパクトハンマによる加振実験では,中空矩形材または粒子充填材を基準振動一次モードの節で吊り,加振および応答波形などから振動減衰挙動について検討した.

その結果,特にセラミックス粒充填材を挿入した場合には振動減衰特性が大幅に改善されること.また,充填物質の粒度および充填率によりかなりその特性が変化することなどが分かった.さらに,粒子充填構造材を加振装置により正弦波加振した場合には,構造物モデルの空洞部に充填する材質,粒度,充填率などにより,応答特性などの振動特性が大幅に改善されることなどが分かった.今後,これらの成果を基にさらに詳細に検討し,本研究を発展させていく予定である.
細胞認識分子BIG-1/BIG-2/F3/TAG-1の神経回路網形成における役割

神経系の各発達段階におけるBIG-1/BIG-2/F3/TAG-1の発現分布の解析これまでのF3及びTAG-1の発現分布に関しての報告は非常に断片的(発達の特定の時期に特定の領域を解析しただけ)であり、神経系発達過程全体でのこれら分子の局在性及びそこから推定される機能的役割は未だ明らかではなかった。そこで胎生期から成体にいたるまでの神経系の各発達段階におけるこれら4分子の発現分布を詳細に比較・解析した。各遺伝子に対するcRNAを用いてin situ hybridization法を行い、細胞レベルでのより詳細な分布を明らかにし、脳の各部位における神経回路網と4分子の発現とを対応づけることによってそれぞれの分子の神経回路網形成における機能を推定することができた。以下にこの研究によって得られた4分子の発現と神経回路網の対応の興味ある結果の一部を示す。成体の海馬において、BIG-1は歯状回の顆粒細胞に、BIG-2はCA1領域の錘体細胞に、TAG-1はCA3領域の錘体細胞に著明な発現が観察された。また、F3はこれら海馬内のすべての領域の神経細胞に発現していた。海馬の神経回路網は非常によく研究されており、歯状回顆粒細胞→CA3錘体細胞→CA1錘体細胞へとシナプス結合をしており、神経伝達が行われることが知られている。本研究で得られた3分子(BIG-1、BIG-2、TAG-1)の発現パターンは海馬の機能的神経回路を担う3種の神経細胞と非常によく対応し、それぞれのタンパク質ともに各神経細胞の軸索上に発現するAxCAM(軸索性細胞接着分子)であることから、海馬神経回路網の形成、維持及び可塑性に機能している可能性が示唆される。BIG-1とBIG-2が成体の小脳において、異なったプルキンエ細胞のサブセットに発現することを見い出した。BIG-1はlobule9及び10を除くほとんどすべてのプルキンエ細胞に発現していた。一方、BIG-2はlobule10及び9の一部におけるプルキンエ細胞にのみ選択的に発現していた。一般にlobule1-8のプルキンエ細胞の多くは小脳核へと投射し、lobule9及び10のプルキンエ細胞の多くは前底核へ投射し、それぞれが全く異なった機能を司ることが知られている。このように小脳の軸索投射システムにおいてもBIG-1とBIG-2がAxCAMとして機能する可能性が示唆された。上述の2つのシステム以外にも、成体の他の脳部位における神経回路網(嗅球、視床など)、胎生期における運動ニューロンの投射、間脳におけるセグメントの形成などにも4つのAxCAM(BIG-1、BIG-2、TAG-1、F3)が機能している可能性が示唆された。
新規抗GPIb抗体(PP7-5)の抗血栓分子療法としての有用性に関する研究

新規抗血小板膜GPIbモノクローナル抗体(mAb)であるPP7-5の精製およびその抗血小板作用について検討を行なった。PP7-5産生mousehybridoma cellをマウス腹腔内に播種し、腹水からaffinitychromatographyによりPP7-5mAb(IgG1サブクラス)を精製した。次に、得られたPP7-5IgGからFc分画を取り除くためにPP7-5IgGをpepsin処理し、F(ab')_2分画を精製した。PP7-5IgGおよびPP7-5F(ab')_2は牛血清アルブミン加リン酸緩衝液に溶解後、濃縮凍結乾燥して保存した。以上で得られたPP7-5IgGおよびPP7-5F(ab')_2のヒト血小板機能に及ぼす作用を検討した。ヒト多血小板血漿を用いて血小板凝集計でその抑制作用を検討し、PP7-5IgGはristocetinおよびbotrocetin刺激による凝集を強く抑制したが、ADPおよびcollagen刺激による血小板凝集には抑制は見られなかった。このristocetinおよびbotrocetin凝集に対する抑制効新規抗血小板膜GPIbモノクローナル抗体(mAb)であるPP7-5の精製およびその抗血小板作用について検討を行なった。PP7-5産生mousehybridoma cellをマウス腹腔内に播種し、腹水からaffinity chromatographyによりPP7-5mAb (IgG 1サブクラス)を精製した。次に、得られたPP7-5 IgGからFc分画を取り除くためにPP7-5 IgGをpepsin処理し、F(ab')_2分画を精製した。PP7-5 IgGおよびPP7-5 F(ab')_2は牛血清アルブミン加リン酸緩衝液に溶解後、濃縮凍結乾燥して保存した。以上で得られたPP7-5 IgGおよびPP7-5 F(ab')_2のヒト血小板機能に及ぼす作用を検討した。ヒト多血小板血漿を用いて血小板凝集計でその抑制作用を検討し、PP7-5 IgGはristocetinおよびbotrocetin刺激による凝集を強く抑制したが、ADPおよびcollagen刺激による血小板凝集には抑制は見られなかった。このristocetinおよびbotrocetin凝集に対する抑制効果は濃度依存性であり、5μg/ml以上の濃度で完全に抑制された。また、ずり応力惹起凝集においてPP7-5 IgGは高ずり応力下での血小板凝集を著明に抑制した。PP7-5 F(ab')_2を用いて同様の検討を行なったが、PP7-5 IgGと同等の濃度依存性の抑制効果が認められたことから、今後のブタを用いた動物モデルの研究にPP7-5 F(ab')_2分画を用いることが有用であることがあきらかになった。ブタを用いた動物モデルの研究のためPP7-5 F(ab')_2の大量精製を行なっている。このristocetinおよびbotrocetin凝集に対する抑制効
遺伝子変異マウスを用いた尿路結石形成におけるオステオポンチン機能部位の解明

本研究は、尿路結石の形成に係わっているオステオポンチン(OPN)の各機能部位の役割を解明することが目的である。特に(1) OPN機能部位毎の変異トランスジェニックマウスにシュウ酸前駆物質を投与し、それぞれのマウスで結石の形態が異なることから、機能部位毎に結石形成における役割が異なることを明らかにした。その中で、トロンビン切断により機能するSVVYGLR配列(マウスではSLAYGLR配列)の抗体を作成し、結石が予防できることを明らかにした。本研究は、尿路結石の形成に係わっているオステオポンチン(OPN)のトロンビン切断部位に注目し、切断型OPNの役割を解明することと、トロンビン切断にて露出される機能的配列を特異的に認識する抗体を作成し、結石モデルマウスの治療を行うことである。1. OPNトロンビン切断部位欠損トランスジェニックマウスを用いた機能解析:マウスOPNcDNAを変異させ、トロンビン切断領域欠損OPN遺伝子の作製を行っている。変異遺伝子とコントロールプラスミドを作成し、偽妊娠させたC58BL/6の卵管内へ移植した。今後、繁殖を行っていく予定である。2.抗体を用いたOPNトロンビン切断後のSVVYGLR配列の機能解析:OPNはトロンビンで切断されることによって、SVVYGLR配列(マウスではSLAYGLR配列)が、C末端に表れることによって、α9β1integrinとの結合能など、炎症細胞の遊走に機能すると考えられる。合成ペプチド(VDVPNGRGDSLAYGLRS)をウサギに免疫して、精製したIgGを生成し、ポリクロナール抗体を作成した。8週齢C57BL/6マウスに、80mg/kgのグリオキシル酸を連日、腹腔内投与し、0、3、6,9日目に、作成した抗SLAYGLR抗体を経静脈的に投与(150μg、400μg)し、形成された結晶にっき、定量的、形態学的評価を行った。抗SLAYGLR抗体投与によって、モデルマウスの結石形成部位が、対照と異なり、尿細管の末梢に存在し、結石形成量が低下していることが観察された。本抗体投与によって結石形成が抑制される可能性が示唆された。今後、投与マウスを増加し、結石形成量の定量化を行っていく。1.OPNトロンビン切断部位欠損トランスジェニックマウスを用いた機能解析:マウスOPNcDNAを変異させ、トロンビン切断領域欠損OPN遺伝子の作製を行った。変異遺伝子とコントロールプラスミドを作成し、偽妊娠させたC58BL/6の卵管内へ移植し、繁殖を行った。2.抗体を用いたOPNトロンビン切断後のSVVYGLR配列の機能解析:OPNはトロンビンで切断されることによって、SVVYGLR配列(マウスではSLAYGLR配列)が、C末端に表れることによって、α9βlintegrinとの結合能など、炎症細胞の遊走に機能すると考えられる。合成ペプチド(VDVPNGRGDSLAYGLRS)をウサギに免疫して、精製したIgGを生成し、ポリクロナール抗体を作成し、8週齢C57BL/6マウスに、80mg/kgのグリオキシル酸を連日、腹腔内投与し、0,3,6,9日目に、作成した抗SLAYGLR抗体を経静脈的に投与(150μg、400μg)し、形成された結晶につき、定量的、形態学的評価を行った。抗体投与により結石の微細な形態が異なることを電子顕微鏡で確認した。特に、トロンビン切断部位に注目し、トロンビン切断にて露出される機能的配列を特異的に認識する抗体を作成し、結石モデルマウスの治療を行った。1.OPN機能部位変異トランスジェニックマウスを用いた機能解析:マウスOPNcDNAを変異させ、RGD配列、カルシウム結合部位をそれぞれ変異させたマウスを作成した。シュウ酸前駆物質の投与で、それぞれのマウスで結石の形態が異なり、結石形成が抑制された。機能部位毎に結石形成における役割が異なることが示唆された。2.抗体を用いたOPNトロンビン切断後のSVVYGLR配列の機能解析:OPNはトロンビンで切断されることによって、SVVYGLR

配列(マウスではSLAYGLR配列)が、C末端に表れることによって、α9β1integrinとの結合能など、炎症細胞の遊走に機能すると考えられる。合成ペプチド(VDVPNGRGDSLAYGLRS)をウサギに免疫して、精製したIgGを生成し、ポリクロナール抗体を作成し、8週齢C57BL/6マウスに、80mg/kgのグリオキシル酸を連日、腹腔内投与し、0、3、6,9日目に、作成した抗SLAYGLR抗体を経静脈的に投与(150μg、400μg)し、形成された結晶につき、定量的、形態学的評価を行った。抗SLAYGLR抗体投与によって、モデルマウスの結石形成部位が、対照と異なり、尿細管の末梢に存在し、結石形成量が低下していることが観察された。抗体投与により結石の微細な形態が異なることを電子顕微鏡で確認した。
東南アジア熱帯林における一斉開花の究極要因の解明〜捕食者飽食仮説の検証〜

今年度は以下の研究を行った。1.フタバガキ科種子捕食者の継続調査2001年8月から2002年4月にかけて起こった一斉開花由来のフタバガキ科種子を採集・飼育した結果、まだ最終的な同定が終了していないが、今年度はキクイムシ科がフタバガキ科種子食昆虫の中で最も多くを占めることが分かった。2.フタバガキ科種子の物理・化学的特性と種子食昆虫の選好性フタバガキ種子は種によって様々な物理的・化学的特性を持ち、その中で、高濃度のリグニン、縮合タンニン、総フェノールや窒素をもつ特殊なDipterocarpus palembanicusの種子は、特異的な種子食昆虫相を持つことが分かった。また、キクイムシはリグニン、総フェノールや窒素の多い種子を、小型のガはデンプンの少ない種子をそれぞれ好む一方、ゾウムシには明瞭な嗜好性は認められず、種やグループによって異なる選好性を示した。これにより、フタバガキ種子は物理的・化学的防衛のみでは様々な昆虫による捕食を効率的に回避できないでいることが明らかとなった。この成果は、現在投稿論文にまとめている最中である。3.一斉開花の規模と種子の虫害率虫害を受けた種子の割合は、種によって多少ばらつきがあるものの、フタバガキ12種全体でみると一斉開花規模の小さい年(1998年)より大きい年(2001年)に有意に低く、種間結実同調による散布前種子食昆虫の飽食効果が認められた。また一斉開花の進化的要因として、散布前段階における捕食者飽和仮説の可能性を示唆した。
戦後初期の中学校における日常生活課程の実践形態に関する事例研究

戦後初期の中学校における日常生活課程の実践事例として、(1)甲府北中プラン、(2)福井三国中プラン、(3)岩手黒沢尻プランの3つ取り上げ、資料収集、当時の関係者からの聞き取り調査、卒業生を対象にしたアンケート調査などを実施した。(1)については、既に前年度中に調査を行い、それに基づく研究論文を発表しているので今年後は(2)と(3)の研究を中心にして進めた。その研究の成果を平成4年10月に文教大学で行われた日本特別活動学会第一回大会で「戦後初期における教科外活動の教育課程化に関する一考察ー日常生活課程の成立と展開に着目してー」と題して発表するとともに、筑波大学教育学系論集および名古屋学院大学論集に発表した。このような研究活動を通して、およそ次のような知見が得られている。1.日常生活課程の実践は、「個性豊かな民主的実践人」の育成をはかるという戦後の教育の課題に応える学校づくりの過程で生まれてきている。2.小学校の日常生活課程と比較したばあい、中学校の実践では、(ア)教科学習との正別が明瞭である、(イ)生徒会活動との結びつきがつよい、(ウ)個別的なガイダンスとの関係が問題になっている、(エ)職業教育との関連がつよいなどの特色がある。実践的な活動の分野として取り上げやすいものと取り上げにくいものがはっきりとしており、すっきりとする反面、内容のバラエティに欠けるという問題がみられた。3.甲府北中、福井三国中、黒沢尻中のいずれにおいても、地域の中学校におけるカリキュラム改造運動に一定の影響を与えるとともに、今日に至るまで特別活動の指導の分野でその影響が残っている。4.戦後の教科外活動の教育課程化の論理や実践形態を明らかにする上で、日常生活課程に注目することの重要性が改めて確認された。
酵母ミトコンドリアDNAの相同的組換えの機能と制御に関する研究

1)出芽酵母ミトコンドリアDNAの相同的組換えに必須なMHR1遺伝子は、未知の蛋白質をコードし、その生理活性は不明である。これを明らかにするために、既に作成したMHRl蛋白質の抗体を用いて、ウエスタンブロット法で大腸菌と酵母細胞内で発現したMHRl蛋白質をそれぞれ検出し、そのサイズを比較したところ、MHRl蛋白質はミトコンドリアのマトリックスに移行した後、通常のマトリックスに局在する蛋白の場合と違って、ミトコンドリアへのターゲッティング配列が切り離されないことがわかった。2)MHRl蛋白質の生理活性を調べるために、野生型MHR1遺伝子と変異型mhrl遺伝子をそれぞれクローニングし、大腸菌の大量発現ベクターに挿入し大量発現を行い、蛋白質をそれぞれ高純度に精製した。得られた蛋白質を用いて各種のDNAとの相互作用の有無をゲルシフトアッセイで調べたところ、MHRl蛋白質が組換え中間体を初め各種のDNAに対して結合能を示すが、非許容温度下で変異型mhrl蛋白質のDNA結合能がなくなることが明らかとなった。それ以外の酵素活性は見いだせなかった。3)既知のミトコンドリアの組換え中間体解離酵素をコードする遺伝子CCEl.を破壊した突然変異とmhr1突然変異との二重突然変数体はミトコンドリアDNAを全く保持できない。またミトコンドリアプラスミドDNAを持ち、呼吸機能を持たない酵母細胞のMHR1遺伝子、及びCCEI遺伝子を破壊し、酵母細胞の全DNAを抽出し、2次元電気泳動を行い、ミトコンドリアプラスミドDNAをプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを行うことによってMHR1破壊株では、DNA上に組換え中間体が蓄積することを見付けた。このことは、ミトコンドリアには組換え機構が二重に存在すること、及び、組換え機能はミトコンドリアDNAの維持に欠かせないことを示す。独立栄養生物で、DNAの維持が組換え機能を要求している例は本例が最初である。