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現代におけるムスリム女性のヴェールとイスラームの教義・思想に関する比較研究

本年度の調査では、リヤドにある高等学術機関キング・ファイサル・センター(King Faisal Center for Research and Islamic Studies)を受入れ先として、市内における女性の衣服や行動の観察と、図書館や行政機構(Ma'had al-Idara al-'Amma)、書店での文献蒐集を行なった。本研究は、現代の諸国家におけるヴェール着用の制限や強制の動きを事例に、国家と宗教(イスラーム)の関係性を、比較の視点をもって捉えようとするものである。本年度の前半には、2011年4月のフランスにおける公共の場での顔覆い着用禁止法の施行を受けて、同法の主たる根拠-ムスリム女性のヴェール着用は「男性による女性支配の結果」であるという論理や理解-の再考を促すべく、女性の主体的なヴェール着用の選択についての考察と報告を行った。具体的には、1980年代以降のエジプトで、ヴェール着用を決断した芸能人女性の言葉として流布してきたものを事例に、それらの中で何が語られ、その言葉の背後に何を読み取ることができるのかを、イスラームの教義や思想との関わりから明らかにした。本年度の後半には、前年度までに行ってきた調査をもとに、現代エジプト(2011年「革命」以前の体制下)におけるヴェール着用制限の問題についてのまとめ(報告のための準備と論文の執筆)を行った。具体的には、1994年に発布された小・中・高等学校の女子生徒のヴェール着用制限を定めた教育省令[Qarar Wizari no.113]と、1980年代以来、複数の大学で問題となった構内での顔覆い着用禁止措置に関する議論や経過について、詳細に見ていく中で、当時のエジプトにおいて「国家」と総称されるものが、多様な宗教理解を提示する複数の機構によって成り立っていたこと、そして、一つの国家機構の提示するイスラーム理解は可変的であったことを明らかにした。2010年末以降のアラブ諸国における「革命」の連鎖の結果、報告者が注目していたエジプトにおいては、憲法改正や総選挙、大統領選挙の実施を含む、国家体制の見直しが始まった。そうした状況の変化とその後の行方をある程度見極める必要があったため。本研究の当初の計画では、エジプトでのヴェール着用の制限に加えて、サウジアラビアとイランでの国家によるヴェール着用の強制という事例も取り上げ、その構造を明らかにし、それぞれの国家と宗教(イスラーム)の関係性を眺めていくはずであった。ところが、ヴェール着用の強制については、(ある程度の資料収集やサウジアラビアでの予備調査を実施しえたものの、)充分な成果を出すことができなかった。これについては、今後、継続して調査と考察を行い、成果を報告していくつもりである。
有髄神経軸索内ミトコンドリアの機能制御における髄鞘の役割

脊椎動物の神経細胞軸索は周囲を髄鞘(ミエリン)に覆われている。髄鞘は軸索を絶縁することにより跳躍伝導を引き起こすが、髄鞘の役割はそれだけではない。髄鞘と軸索が直接接するパラノード部位では、ジャンクションが形成され軸索と髄鞘の膜タンパク質が結合している。髄鞘がこのジャンクションを形成することが、軸索輸送や軸索内カルシウム濃度調節など軸索恒常性維持に必須であることを明らかにした。軸索周囲を取り囲むミエリンが,軸索内小器官および軸索骨格の機能をどのように調節し,軸索ホメオスタシスに関与しているのかを明らかにする目的で,CST欠損マウス座骨神経および小脳を用いて研究を行った.CST欠損マウスはミエリンと軸索がパラノード部位で形成するパラノーダルaxo-glialジャンクション(PJ)が形成されない.このマウスの座骨神経ランビエ絞輪部に異常に拡大したミトコンドリアが認められることを以前報告している.ミトコンドリア等の膜小器官は軸索内でATP依存性モータータンパク質と結合し微小管に沿って輸送される.微小管のプラス端に向かう順行性輸送はキネシンが、マイナス端に向かう逆行性輸送はダイニンが担っている.PJ崩壊により軸索輸送になんらかの変化を来たし,ランビエ絞輪部にミトコンドリアを集積させている可能性を考え,軸索輸送に関与しているモータータンパク質の変化を調べた.その結果,CST欠損マウス座骨神経では順行性,逆行性輸送ともにモータータンパク質量が有意に減少していた.またミトコンドリア特異的モータータンパク質であるKIF1Bαがランビエ絞輪部に集積していること,微小管結合タンパク質Tauの軸索内局在に変化が生じていることを明らかにした.一方,CST欠損マウス小脳プルキンエ細胞軸索に神経症状に伴い異常膨らみが高頻度に出現し,内部にリン酸化ニューロフィラメントやアミロイド前駆体タンパク質の蓄積が認められた.この軸索の腫脹はコンパクトミエリンに覆われたインターノード部位に存在していた.今年度の研究の結果,ミエリンが軸索機能や輸送を調節する上でPJがその中心的役割を果たしていること,またその役割は末梢神経系と中枢神経系で異なり,PJが形成されかつ維持され続けることが正常な軸索ホメオスタシスに必須であることが明らかとなった.H22年度は培養系を用いてPJの重要性をさらに明らかにして行く予定である.軸索周囲を取り囲む髄鞘が、有髄神経軸索の機能をどのように調節し軸索ホメオスタシスに関与しているのか明らかにしたいと考え研究を行った。特に、ミエリンと軸索がパラノード部位で形成するパラノーダルaxo-glialジャンクション(PJ)に焦点を当てている。PJはオリゴデンドロサイトの突起が直接軸索表面に接することにより、軸索表面の分子局在を変化させている。平成21年度は、このPJが形成されないマウス、CST欠損マウスの小脳プルキンエ細胞軸索に異常な膨らみがあることを報告している。平成23年度は電子顕微鏡で詳細に解析を行った結果、生後6週齢ですでにプルキンエ細胞軸索に細胞内小器官(ミトコンドリアや膜状構造、ER)の局所集積が認められた。さらに40週齢以上になると、軸索変性が顕著に認められた。この変化はパラノーダルジャンクション部分ではなくコンパクトミエリンに覆われているインターノード部位で観察された。軸索腫脹部におけるカルシウム濃度の局所変化が起こっている可能性を考え、免疫組織学的解析により1型IP3R(IP3R1)の局在を調べた結果、正常プルキンエ細胞軸索ではIP3R1は軸索全長にほぼ均一に染色されるのに対して、CST欠損マウスでは、腫脹部に限局的にIP3R1の集積が認められた。局所集積は生後12日にはすでに認められ、ニューロフィラメントや細胞内小器官の集積に先行していた。また、この変化はコンパクトミエリンが形成されていない生後7日では認められなかった。したがって、CST欠損マウスプルキンエ細胞軸索では、PJが形成されないため軸索内カルシウム濃度の不均衡が生じている可能性が示唆された。つまりPJ形成は軸索内カルシウム濃度調節にも重要であることが明らかとなった。脳の他の部位では同様の変化が認められなかったことから、プルキンエ細胞のカルシウム感受性が高いことも示唆された。
生体計測のための赤外光CTに関する研究

1.試料を一定角度ごとに回転させ,赤外光を照射したときの試料の投影像を測定するスキャナを製作した.試料はステッピングモータによって回転し,ステップ角は最小0.9度である.また投影像の測定装置はCCDイメージセンサを用いて製作した.イメージセンサの光蓄積時間は10ms,ホトダイオードの走査速度は2μsである.イメージセンサの出力信号をサンプリング周波数150kHz,分離能8ビットでAD変換し,パーソナルコンピュータに記録した.赤外光の波長は870nmである.2.イメージセンサの受光パワーとイメージセンサ出力電圧との関係を測定した.その結果,光パワーが0.1μWから45μWの範囲で光パワーとイメージセンサの出力電圧は比例関係を示した.3.投影像の測定および画像を再構成するプログラムを製作した.投影像の測定はステップ角0.9度,投影数200である.画像再構成法は重畳積分法を用いた.測定視野は直径10mmの円形である.4.上記システムによる撮像実験の結果,外径5mm,内径4mmのガラス製円筒を試料とした場合,ガラス管円筒の厚さは実寸よりも薄く,外径は実寸よりも大きく描出された.またこの試料の中心部に長軸方向に導線を取付けて撮像したところ,ガラス管円筒および内部の導線が画像化された.直径10mmのアクリル製円柱の中心に直径3mmの穴をあけたものを試料とした場合には,円柱内の穴が描出された.本システムの画像再構成に回折トモグラフィを適用するため,撮像条件として投影像の測定間隔の影響をシミュレーションによって検討した.その結果,投影像の測定間隔が波長よりも長くなると画像の歪みが大きくなり,少なくとも波長程度で測定する必要があることが分かった.1.試料を一定角度ごとに回転させ,赤外光を照射したときの試料の投影像を測定するスキャナを製作した.試料はステッピングモータによって回転し,ステップ角は最小0.9度である.また投影像の測定装置はCCDイメージセンサを用いて製作した.イメージセンサの光蓄積時間は10ms,ホトダイオードの走査速度は2μsである.イメージセンサの出力信号をサンプリング周波数150kHz,分離能8ビットでAD変換し,パーソナルコンピュータに記録した.赤外光の波長は870nmである.2.イメージセンサの受光パワーとイメージセンサ出力電圧との関係を測定した.その結果,光パワーが0.1μWから45μWの範囲で光パワーとイメージセンサの出力電圧は比例関係を示した.3.投影像の測定および画像を再構成するプログラムを製作した.投影像の測定はステップ角0.9度,投影数200である.画像再構成法は重畳積分法を用いた.測定視野は直径10mmの円形である.4.上記システムによる撮像実験の結果,外径5mm,内径4mmのガラス製円筒を試料とした場合,ガラス管円筒の厚さは実寸よりも薄く,外径は実寸よりも大きく描出された.またこの試料の中心部に長軸方向に導線を取付けて撮像したところ,ガラス管円筒および内部の導線が画像化された.直径10mmのアクリル製円柱の中心に直径3mmの穴をあけたものを試料とした場合には,円柱内の穴が描出された.本システムの画像再構成に回折トモグラフィを適用するため,撮像条件として投影像の測定間隔の影響をシミュレーションによって検討した.その結果,投影像の測定間隔が波長よりも長くなると画像の歪みが大きくなり,少なくとも波長程度で測定する必要があることが分かった.
mTOR複合体によるがんDNAメチル化形質の新規制御機構

本研究では、難治性の悪性脳腫瘍である膠芽腫において、エピジェネティクス変化の一つであるDNAメチル化の制御機序およびその生物学的意義を探ることを目的とする。特に、腫瘍の悪性化に関与するとされる、DNAメチル化の減少(低メチル化形質)と、多くのがんで高頻度に起こるmTORC2異常との関連性を探索する。悪性脳腫瘍のDNA低メチル化形質を制御する新規病態の解明を試みることで、未だに有効な治療法がない膠芽腫に対して、新規治療戦略へつながりうる病態の解明を目指す。
複二倍体種形成時の受粉・ゲノム安定性に機能する「鍵と鍵穴」因子の解析

高等植物の生殖過程には、「他の植物種と交雑することなく自らのゲノムを維持するシステム」が存在するとともに、種内の遺伝的多様性を保持する機構である自家不和合性(SI)に雌雄間自他識別システムがあり、これには、リガンド・レセプターという「鍵と鍵穴」が機能している。一方、「鍵と鍵穴」が機能せず、SIを失った複二倍体種も自然界には多く存在する。両親複二倍体種はSIであり、その種から合成した人工複二倍体種もSIを維持するのに対して、栽培化の歴史の中で選抜された自然複二倍体種は自家和合性(SC)に変化している。本研究では、この変化に着目し、倍数性・ゲノム安定性という観点から複二倍体種がSIからSCへと変化できる分子機構に関わる「鍵と鍵穴」を領域内共同研究として展開し、解明することを目的とする。さらに関連した「鍵と鍵穴」分子の機能解析も行う。本年度は、B. napusの受粉システムの変化を理解するために、分離世代でのS対立遺伝子の挙動と表現型の連関を調査し、S遺伝子での説明が困難であることが判明した。新規一側性不和合性については、これまでの研究成果をNature Plantsに発表した。新規な「鍵と鍵穴」分子について、低分子ペプチドについて、in vitroでの実験の再現に可能性を見いだした。アウトリーチ活動も行い、50件を超える出前講義等を行い、講義後の手紙に返事を書き、実施した小学校、高校の教員から高い評価を得た。B. napusの自家和合性については、分離世代でのS対立遺伝子の挙動と表現型の連関を調査し、単純な分離ではないことが判明した。一方で、交雑組合せにより分離比が異なることから、適切な組合せを選ぶことで、遺伝学的な解析が可能になる可能性があると考えた。一側性不和合性については、Nature Plantsに科研費番号が記載された形で、受理・掲載された。また、この研究発表が「日本育種学会優秀発表賞」を受賞した。さらに、この発表の波及効果として、いくつかの日本語での雑誌など(ライフサイエンス新着論文レビュー、アグリバイオ、Nature Plantsインタビュー記事)に発表でき、日本国内の研究者・国民により分かりやすい形で公表できたことは、評価できる。一方、低分子ペプチドの機能解明に向けたin vitroでの実験系がin vivoでの実験と類似の表現型を示したことから、この系を発展させることが有意義であると判断した。アウトリーチ活動については、仙台市教育委員会から感謝状を贈呈され、公式にこうした活動が評価されていると考えられる。B. napusの自家和合性の遺伝学的な解析については、S対立遺伝子上に存在する雌雄S因子であるSP11、SRKの構造を詳細に解析し、エピゲノム情報についても獲得を目指す。また、起源の異なる集団間で生じる一側性不和合性については、多様な起源のB. rapa、B. oleaceaなどを材料として、PUI1, SUI1の対立遺伝子を可能な限り習得し、その多様性と機能との関連を調査する。受粉に関連した因子の解析では、その遺伝子破壊系統と野生型の表現型を比較して、受粉時の機能を解明する。また、アウトリーチ活動を20件以上行い、国民への情報発信、社会貢献にも寄与する。高等植物の生殖過程には、「他の植物種と交雑することなく自らのゲノムを維持するシステム」が存在すると共に、種内の遺伝的多様性を保持する機構である自家不和合性(SI)による雌雄間自他識別システムがあり、これにはリガンド・レセプターという「鍵と鍵穴」が機能している。両親二倍体種はSIであり、その種から合成した人工複二倍体種もSIを維持するのに対して、栽培化の歴史の中で選抜された自然複二倍体種は自家和合性(SC)に変化している。本研究では、この変化に着目し、倍数性、ゲノム安定性という観点から、複二倍体種がSI、SCと変化できる分子機構に関わる「鍵と鍵穴」を領域内共同研究として展開し、解明することを目的とする。本年度は、B. napusの自家和合性へのエピジェネティックな制御の関与の可能性、B. rapaにおける自家不和合性を制御するclass IIに分類されるS対立遺伝子間での優劣性の低分子RNA(smi2)による詳細な分子制御、イネ耐冷性における花粉への低分子RNAの関与、新規「鍵と鍵穴」であるUIのPUI, SUIを単離し、論文投稿を行った。さらに、受粉の場である乳頭細胞にストレス耐性関連因子が関与し、急速な伸長を制御していることを解明し、論文投稿を行った。アウトリーチ活動も行い、80件を超える出前講義などを行い、講義後の手紙に対して、個別の返事を行い、実施した小学校、高校の教員からは高い評価を受けた。B. napusの自家和合性については、交雑分離世代をすすめることで、その新奇な分離パターンと自家不和合性遺伝子の関係を調査しつつあり、計画に沿って、進展している。低分子RNAが関与する受粉に関連した現象に関して、論文発表を行うことができ、1つの論文にはこの科研費番号が記された形で発表でき、貢献できている。

新規「鍵と鍵穴」であるPUI, SUIで制御される論文については、Nature Plantsに投稿して、良好なコメントが来ており、次年度には発表できる見込みであり、この点も計画に沿った研究の展開といえる。一方、未知の受粉関連因子では、乳頭細胞の伸長に関わる因子を同定し、受粉反応に関わる場の解明に向けて、緒をつけることができた。アウトリーチ活動については、仙台市教育委員会、今治市教育委員会から感謝状を贈呈され、公式にこうした活動が評価されていると考えられる。高等植物の生殖過程には、「他の植物種と交雑することなく自らのゲノムを維持するシステム」が存在するとともに、種内の遺伝的多様性を保持する機構である自家不和合性(SI)に雌雄間自他識別システムがあり、これには、リガンド・レセプターという「鍵と鍵穴」が機能している。一方、「鍵と鍵穴」が機能せず、SIを失った複二倍体種も自然界には多く存在する。両親複二倍体種はSIであり、その種から合成した人工複二倍体種もSIを維持するのに対して、栽培化の歴史の中で選抜された自然複二倍体種は自家和合性(SC)に変化している。本研究では、この変化に着目し、倍数性・ゲノム安定性という観点から複二倍体種がSIからSCへと変化できる分子機構に関わる「鍵と鍵穴」を領域内共同研究として展開し、解明することを目的とする。さらに関連した「鍵と鍵穴」分子の機能解析も行う。本年度は、B. napusの受粉システムの変化を理解するために、分離世代でのS対立遺伝子の挙動と表現型の連関を調査し、S遺伝子での説明が困難であることが判明した。新規一側性不和合性については、これまでの研究成果をNature Plantsに発表した。新規な「鍵と鍵穴」分子について、低分子ペプチドについて、in vitroでの実験の再現に可能性を見いだした。アウトリーチ活動も行い、50件を超える出前講義等を行い、講義後の手紙に返事を書き、実施した小学校、高校の教員から高い評価を得た。B. napusの自家和合性については、分離世代でのS対立遺伝子の挙動と表現型の連関を調査し、単純な分離ではないことが判明した。一方で、交雑組合せにより分離比が異なることから、適切な組合せを選ぶことで、遺伝学的な解析が可能になる可能性があると考えた。一側性不和合性については、Nature Plantsに科研費番号が記載された形で、受理・掲載された。また、この研究発表が「日本育種学会優秀発表賞」を受賞した。さらに、この発表の波及効果として、いくつかの日本語での雑誌など(ライフサイエンス新着論文レビュー、アグリバイオ、Nature Plantsインタビュー記事)に発表でき、日本国内の研究者・国民により分かりやすい形で公表できたことは、評価できる。一方、低分子ペプチドの機能解明に向けたin vitroでの実験系がin vivoでの実験と類似の表現型を示したことから、この系を発展させることが有意義であると判断した。アウトリーチ活動については、仙台市教育委員会から感謝状を贈呈され、公式にこうした活動が評価されていると考えられる。B. napusの人工、自然複二倍体同士の交雑後代(F2世代)において、自殖次代の形質評価を行い、S遺伝子座周辺のエピゲノム構造変化との関連性を調査する。起源地の異なるB. rapa系統間での一側性不和合性(UI)現象に関して、リガンドの特性を示す部分ペプチドの有機化学合成を行い、「鍵」分子の機能を有するかを検証する。また、B. rapa品種間でのUI遺伝子(PUI1, SUI1)の多様性とUI現象の関連を調査し、進化との観点で議論を行う。
ジストロフィン遺伝子のエクソンスキッピングを誘導する低分子化合物の探索

私達は、Duchenne型筋ジストロフィーに対し、低分子キナーゼ阻害剤であるTG003を使用したエクソンスキッピング誘導治療法の可能性を報告した。本研究は、より優れた低分子化合物の探索を行うものである。探索の結果、タンパク合成阻害薬であるシクロヘキシミドがエクソンスキッピング作用を持ち、TG003との同時投与により、エクソンスキッピングが相乗的に増加することを見出した。また、キナーゼ阻害薬であるスタウロスポリンがTG003と比し強力にエクソンスキッピングを促進し、ジストロフィンの発現を改善することが明らかになった。これらの化合物は、臨床応用可能な化合物のリード化合物となり得る。Duchenne型筋ジストロフィーはジストロフィン遺伝子の異常によって発症する高頻度の致死的な遺伝性筋疾患であり、治療法は確立されていない。核酸医薬によるエクソンスキッピング誘導が最も有望な治療法とされているが、核酸医薬ゆえの問題も多い。報告者らは低分子キナーゼ阻害剤であるTG003による、特定のエクソンのスキッピング誘導治療法の可能性を世界に先駆けて発表したが、この手法を多くのエクソンへ拡大する必要がある。本研究は、エクソンスキッピングの作用機序を解明し、より優れた化合物を探索するものである。報告者は、新たな候補化合物の手がかりを得ていた。これらの化合物に対し、独自のジストロフィン遺伝子ハイブリッドミニ遺伝子プラスミドとHeLa細胞を使用した解析を行った。その結果、タンパク合成阻害薬であるシクロヘキシミド(CHX)が、TG003と似たエクソンスキッピング作用を持つことを見出した。さらに、TG003とCHXを同時に投与した際に、エクソンスキッピング作用が相乗的に増加することを見出した。また、数種類のタンパク合成阻害薬を試したところ、エクソンスキッピング作用を持たないものが多く、エクソンスキッピング作用は、タンパク合成阻害作用に依存するものではないと考えられる。CHXは毒性を持つため、これをヒントにより優れた化合物を探索中である。なお、上述の研究成果に関し、The 64th Annual Meeting of the American Society of Human Geneticsにおいてポスター発表を行った。また、報告者はエクソンスキッピングの作用機序を解明するため、次世代シーケンサーを用いた解析を行った。しかし、スプライシングに関連する遺伝子への影響は見いだせず、作用機序の解明には至らなかった。ここまでの研究成果をもとに、より優れた化合物の探索を継続する。Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)は、ジストロフィン遺伝子の異常によって発症する致死的な遺伝性筋疾患であり、治療法は確立されていない。報告者らは、低分子キナーゼ阻害剤であるTG003による、エクソンスキッピング誘導治療法の可能性を世界に先駆けて発表した。この成果はDMD患者にとって朗報となるものであった。本研究は、より優れた化合物を探索するものである。ジストロフィン遺伝子ハイブリッドミニ遺伝子プラスミドとHeLa細胞を使用した解析の結果、タンパク合成阻害薬であるシクロヘキシミド(CHX)が、TG003と似たエクソンスキッピング作用を持ち、TG003とCHXを同時に投与により、エクソンスキッピング作用が相乗的に増加することを見出した。このエクソンスキッピング増強効果は、期待以上のものであった。次に、新たな候補化合物として、スプライシングへの影響が報告されている化合物について、先述の方法により、ジストロフィン遺伝子のエクソンスキッピングに対する効果を検証した。その結果、キナーゼ阻害薬であるスタウロスポリン(STS)がTG003よりも強力にエクソンスキッピングを促進することを見出した。さらに、不死化患者筋培養細胞を用い、タンパクレベルでの薬効評価をウエスタンブロットにより行った結果、STSはジストロフィンタンパクの発現を増強することが明らかになった。CHXおよびSTSは、その毒性等を考慮すると臨床応用には適さない。しかしながら、臨床応用可能な化合物を探索するためのリード化合物にはなり得る。報告者は、新たな候補化合物に対し、ジストロフィン遺伝子のハイブリッドミニ遺伝子プラスミドとHeLa細胞を使用した解析を行った。その結果、タンパク合成阻害薬であるCHXが、TG003と同様に、ナンセンス変異型エクソン31のスキッピングを誘導していることを見出した。さらに、TG003とCHXを同時投与した場合、TG003あるいはCHXを単独で投与した場合に比し、エクソンスキッピングが相乗的に増加することを見出した。

また、報告者は次世代シーケンサーを用い、エクソンスキッピングの作用機序の解明を試みた。エクソン31にナンセンス変異をもつ患者由来の筋細胞を不死化した培養細胞にTG003を投与し、Ion Torrent PGM (Life Technologies)による解析を行った。対照には、TG003の溶媒であるDMSOを使用した。TG003による遺伝子発現の変化をCLC-Bio work bench 7.0(Filgen)を用いて解析した結果、スプライシングに関連する遺伝子への影響は見いだせず、作用機序の解明には至らなかった。以上より、新たな候補化合物に関しては一定の成果が得られた一方で、次世代シーケンサーを使用した作用機序の解明については、期待した成果は得られなかった。総合的にはおおむね順調に進展していると考える。分子生物学新たな候補化合物に関し、ジストロフィン遺伝子を組み込んだハイブリッドミニ遺伝子プラスミドとHeLa細胞を用いた独自のin vitroスプライシング解析系を用いた結果、CHXがTG003のエクソンスキッピング効果を強力に増強することを発見した。この増強効果は期待以上のものであったが、CHXは毒性を持ち、臨床への応用は難しいと考えられる。よって、CHXをヒントに新たな候補化合物を絞り込んでいる最中である。次世代シーケンサーを用いた作用機序の解明に関しては、TG003を対象に解析を試みた。しかし、その結果は予想に反し、エクソンスキッピングに関連していると考えられる遺伝子の発現変化は認めなかった。この手法は現段階において、当該目的に適さない可能性がある。そこで、今後の方策としては、より高効率なエクソンスキッピング検出法を確立することが第一に考えられる。また最近、核スペックルの形成に影響を及ぼす化合物が、スプライシングに影響を与えることが報告されている(Biochem Biophys Res Commun. 2014 Mar 28;446(1):119-24.)。これらの化合物についても、新たな候補化合物として、ジストロフィン遺伝子のエクソンスキッピングに対する効果を検証する必要が有る。そして、エクソンスキッピング作用を有する化合物に関し、患者筋培養細胞を用いた、タンパクレベルでの薬効評価を行う。
再発性リンパ腫の多剤耐性能および転移能の獲得機構の解明

本研究では、まず始めに抗がん薬の持続曝露により、耐性および転移能を亢進させた悪性化リンパ腫細胞を作出する。また、この細胞における薬物を細胞外へ掃き出す輸送タンパク質であるP-gp、および転移を促進する因子のひとつであるSnailの発現量が変化するかを確認する。一方、エクソソームと呼ばれる微小な分泌小胞で伝達される物質が、がんの悪性化を促進していることが近年数多く報告されている。本研究においても、作出した悪性化リンパ腫細胞から放出されるエクソソームを回収し、薬物耐性や転移能を亢進させる因子が含まれているかを解析する。以上により、薬物耐性の克服および転移抑制を可能とする、創薬ターゲットを見出す。
免疫抑制機構と腫瘍特異性の両方を制御する遺伝子改変技術を利用した癌免疫療法の開発

がんを認識するキメラ抗原受容体(CAR:Chimeric antigen receptor)を発現したT細胞を投与するCAR-T細胞療法は特に血液悪性腫瘍において優れた臨床効果を示している一方、固形がんに対する効果はいまだ確立していない。その原因の一つとしてがん局所における免疫チェックポイント分子を介した免疫抑制メカニズムが考えられている。本研究において、CAR-T細胞に免疫チェックポイント分子を阻害する能力を付加したところ通常のCAR-T細胞と比較し、より強力な抗腫瘍効果を誘導することを証明できた。一方、癌免疫療法の問題の一つにPD-1分子を介する免疫抑制シグナルがある。PD-1は抗腫瘍免疫反応の抑制機序として重要であり、PD-1の機能阻害により腫瘍反応性T細胞の活性化の促進と強力な抗腫瘍効果の誘導が報告されている。そこで本研究では、CAR-T細胞のPD-1シグナル阻害によるCAR-T細胞の傷害活性機能の増強について検討した。まずRNA干渉法を用いてCAR-T細胞におけるPD-1発現を低下させることが可能かどうかを検討した。PD-1分子に対するRNA干渉は、すでに論文で報告されているsiRNA配列や我々が独自に同定したsiRNA配列などを用いCAR-T細胞に遺伝子導入したがCAR-T細胞上のPD-1発現レベルの低下は認められず、何らかの理由によりCAR-T細胞ではRNA干渉による遺伝子発現制御が困難であることが示唆された。PD-1分子はチロシン脱リン酸化酵素であるSHP-1を誘導してT細胞の活性化を抑制する。そこで、SHP-1の機能を失ったSHP-1ドミナントネガティブ変異体(SHP-1 DN)をT細胞に遺伝子導入しSHP-1 DN発現によりPD-1抑制シグナルを阻害しうるCAR-T細胞を作製したところ、通常のCAR-T細胞に比べSHP-1 DN CAR-T細胞は癌細胞に対し優位に高い傷害活性を示すことが明らかとなった。このように、腫瘍特異性を有すると共にSHP-1DN発現によりPD-1抑制シグナルを阻害しうるCAR-T細胞を作製できた。キメラ抗原受容体(chimeric antigen receptor:CAR)はがん細胞を認識する一本鎖抗体とTリンパ球の活性化を誘導する細胞内シグナル伝達領域を融合させたキメラ蛋白である。CARを発現させたTリンパ球を投与するCAR-T細胞療法は特に血液悪性腫瘍に対し優れた奏効率を示し、がんに対する免疫療法の新たな担い手として期待されている。一方、癌免疫療法の問題の一つにPD-1分子をはじめとする免疫抑制シグナルがある。PD-1分子はチロシン脱リン酸化酵素であるSHP-1またはSHP-2を誘導してT細胞の活性化を抑制すると報告されている。そこでSHP-1またはSHP-2の活性を失ったドミナントネガティブ変異体(SHP-1 DNまたはSHP-2 DN)コンストラクトを作製しT細胞に遺伝子導入させることでPD-1抑制シグナルを阻害しうるCAR-T細胞を作製したところ、SHP-1 DNまたはSHP-2 DN発現CAR-T細胞はin vitroにて抗腫瘍活性が増強することが確認された。次にin vivo効果を検討するためまずSHP-2 DN発現CAR-T細胞を担癌マウスに投与したものの優位な抗腫瘍効果は認めず、その原因としてSHP-1 DN発現CAR-T細胞はアポトーシスを誘導しやすいことが判明した。様々なCARコンストラクトの構造調整をしたものの有意な改善を認めなかったことから現在はSHP-1 DN発現CAR-T細胞のin vivo抗腫瘍効果を検討しているところである。近年、がんを認識するキメラ抗原受容体(CAR:Chimeric antigen receptor)を発現したT細胞を投与するCAR-T細胞療法が注目を集めている。特に血液悪性腫瘍において優れた臨床効果を示しているが、固形がんに対する効果はいまだ確立していない。そこで本研究では免疫チェックポイント分子を阻害する能力を付加したCAR-T細胞を作製しより強力な抗腫瘍効果を誘導することを目的とした。まずCD20に反応するCAR(hCD20 CAR)コンストラクトを作製しこれをT細胞に発現させた。作製したCAR-T細胞に対しRNA干渉やシグナル伝達酵素の阻害により免疫チェックポイント分子の機能阻害を試みたものの十分な抗腫瘍効果の増強は得られなかった。そこで次に免疫チェックポイント分子阻害機能を導入したCARを作製し、これを発現させたT細胞によるがん治療効果の増強について検討した。コントロールのCAR及び免疫チェックポイント分子阻害機能を有するCARコンストラクトをそれぞれマウスT細胞に遺伝子導入しCAR-T細胞を作製したところ、両者とも同程度のCAR発現レベルを示した。次に各CAR-T細胞の複数のがん細胞株に対するin vitro抗腫瘍効果を検討したところ、コントロールCAR-T細胞と比較し免疫チェックポイント分子阻害機能を有するCAR-T細胞において抗腫瘍効果の増強が示された。今後はin vivoにおける効果を検討する予定である。本研究において、CAR-T細胞に免疫チェックポイント

分子を阻害する能力を付加したところ通常のCAR-T細胞と比較し、より強力な抗腫瘍効果を誘導することを証明できた。SHP-1およびSHP-2 DN発現CAR-T細胞はどちらもin vitroにて抗腫瘍効果の増強を認めた。SHP-2 DN発現CAR-T細胞はin vivo抗腫瘍効果の増強を認めなかったため今後はSHP-1 DN発現CAR-T細胞のin vivo効果を検討する。免疫学我々は、CARの発現により腫瘍特異性を誘導したT細胞において、PD-1チェックポイント分子による免疫抑制シグナルを阻害するSHP-1及びSHP-2 DNをさらに導入することにより、高い腫瘍傷害活性が得られることを示した。今後はin vivoの腫瘍増殖試験にて、SHP-1 DN発現CAR-T細胞の腫瘍拒絶効果について検討、解析する予定である。当初予定していたRNA干渉法では期待していた結果は得られなかったものの、別の方法によりCAR-T細胞の機能増強の結果が得られたため。我々は、CARの発現により腫瘍特異性を誘導したT細胞において、PD-1チェックポイント分子による免疫抑制シグナルを阻害するSHP-1 DNをさらに導入することにより、高い腫瘍傷害活性が得られることを示した。このことは本研究により開発された遺伝子改変技術がより効果的な癌免疫療法の基盤となることを示唆している。当初実施計画していたRNA干渉法ではPD-1の発現低下が得られず途中で方法を変更し、siRNAの遺伝子導入のためのレンチウイルス作製等に係る試薬分が使用されなかったため。今年度はドミナントネガティブSHP-1発現によるCAR-T細胞の抗腫瘍効果の増強がin vitroで確認できたことから、次年度は計画通りin vivoでの腫瘍効果を検討すると共に、ドミナントネガティブSHP-1によるCAR-T細胞の機能増強のPD-1やそれ以外の免疫抑制シグナルを介したメカニズムについて解析する予定であり、それらの解析費用に充当する。
近位尿細管細胞エンドサイトーシスとClC-5クロライドチャネルの機能連関解析

Dent病、特発性尿細管性蛋白尿症がClC-5クロライドチャネルの遺伝子変異で起こることが明らかにされ、ClC-5の異常が尿細管における低分子蛋白のエンドサイトーシスに影響していることが想定されている。平成14年度は、エンドサイトーシスとClC-5の機能連関を解析するため、前年度に作成したCLC-5遺伝子変異S270R, R280Pを用いて細胞内小胞輸送がどのレベルにて障害されているのかを検討した。1.変異導入細胞の作成と確認変異点を有するClC-5クローンを作成しベクターへ挿入した。リポフェクション法により、培養細胞への遺伝子形質導入を行い、ウェスタンブロット法、ノーザンブロット解析にて発現を確認した。2.変異導入細胞における細胞内局在変異点S270RおよびR280Pのそれぞれが挿入された培養細胞および野生型において細胞内小器官マーカーとの二重染色を行った。二つの変異導入培養細胞にて、ソーティングに関与する細胞内小器官との二重染色による発現はすべての部位で確認された。これは野生型との差異も認めなかった。この結果より少なくとも今回我々が検討した変異点の異常では細胞内のソーティングの各レベルではClC-5が蛋白として存在することが確認された。今回検討した変異点はTMD5-6ループに存在し、チャネルとしての機能発現に重要な役割を果たしていると考えられているが、ソーティングにおける異常は確認されず、おそらく標的部位におけるアセンブリに影響している可能性が考えられた。平成13年度は、エンドサイトーシスとClC-5の機能連関を解析するため、基本的技術の確立を目指した。1.培養細胞への遺伝子変異導入と強制発現系の確立遺伝子導入培養細胞株のスクリーニング:野生型ClC-5発現の有無をノーザンブロット解析と免疫組織染色で確認し、野生型(一)哺乳類培養細胞株(CHO-KKl)を選択した。変異導入ClC5クローンの作成:本年度は、すでに症例報告されている変異点(20ヶ所程度)の内、S270R, R280Pの作成を行った。クローニングされたClC5-cDNAをテンプレートにPCRにより変異点を有するClC5-cDNAクローンを作成し、ベクターPMAMへ挿入した。変異点の挿入はDNAシーケンスを行い確認した。培養細胞への形質導入:リポフェクション法により、培養細胞へ遺伝子形質導入を行った。2.蛋白発現の確認培養細胞からサンプルを調整し、抗ClC5抗体を使用しウェスタンブロット法で、導入遺伝子の蛋白レベルで発現していることを確認した。以上により、本年度はS270R, R280Pの二ヶ所のClC-5変異点を有するベクターが挿入された培養細胞系が確立された。次年度は、ClC-5クロライドチャネルとエンドサイトーシス機能連関を解析するため、細胞内局在の解析を行い、ソーテイング障害が細胞内小胞輸送のどのレベルで生じているのかを解析予定である。
新しい固体NMR法による膜タンパク質の分子配向解析

同位体ラベル法と固体NMR法を用い、その利点を生かして高活性を有する状態でのメリチンやグラミシジンAのような膜ペプチドの原子レベルでの立体構造解析をするためには、配向した脂質二重層中に膜ペプチドを埋め込み配向を制御する必要がある。本研究では脂質二重層の配向系を作製し、化学シフトが線形を支配するためにリン脂質の状態に線形が極めて敏感である31Pを測定核として、固体31PNMRによりそれをモニターした。ジミリストイルホスファチジルコリン(DMPC)を有機溶媒に溶解、それをガラスプレート上に均一に広げ、サンプルホルダー中に積み重ねた。約60%に水和し、両端をシリコン栓とエポキシ系の接着剤を用いて密封し、45°Cに保ったインキュベータ-中に放置し、配向試料とした。配向試料についてガラス面(脂質のアルキル分子はガラス面に垂直)と磁場方向が垂直もしくは平行となるように設定して固体31PNMR(JEOL GX400 NMR測定モードGated high power decoupling)を測定した。その結果、約60%に水和したDMPCの無配向パウダーパターン(isoは等方ピーク)、約一週間、45°Cに保った配向試料をガラス面が磁場BOに垂直になるように設定し測定、およびガラス面が磁場BOに平行になるように設定し測定した各固体31PNMRスペクトルのピークは、乾燥粉末(運動なし)のパウダーパターンと大きく異なり、アルキル分子軸を中心として回転する軸対象運動を行っていることをを示していること、また、主ピークの位置は著しく異なり、それぞれは(1)におけるσ||σ⊥の値に対応した。このことより本実験条件にて作成された配向試料は、おおむねDMPCのアルキル鎖がガラス面に垂直に配向しており、軸対称運動を行っていることがわかった。さらに、この配向脂質膜に、モデルペプチドを導入することによって、脂質中のペプチド配向を直接観測することに成功した。
フランコ=カンタブリア美術・洞窟壁画における写実的表現の研究

洞窟壁画の動物像がどのような造形原理により極めて写実的な表現になったのかを解明するため、「統合」という概念のもと、フォン=ドゥ=ゴームとアルタミラの両洞窟で独自にデータ収集し、洞窟内の自然の岩面の形状と作者たちが作り出した形態が一致していることを明らかにすることができた。それにより、作者たちは洞窟の暗闇に入り、持ち込んだ簡単なランプの炎の作用により、自然の岩面に動物のかたちを見いだすことで表象行為を行っていたのではないか、という考え方を提出することになった。作者たちにとっては、見ることによる表象が第一義的に重要であり、その後、自分たちが見たかたちを彩色などでなぞることにより、現在の我々が写実的な動物像と見なす作品になったのではないだろうか。このような成果を受けて、内容論的な解釈論にも踏み込み、作者たちにとって見ることの表象にいかなる意義があるのかを考えることになり、「呪術説」などを検討した。この研究は、洞窟壁画の写実的な動物像に対象を絞っており、量的には動物像をしのぐとされる「記号」などの抽象的表現などは射程外ではあるが、「呪術説」に従うなら、「記号」も付加的なものとして位置づけられるのではないだろうか。洞窟壁画の作者たちは、自然が本来有している形状に謙虚に寄り添い、そこに自分たちの必要とする形態を見いだし、最小限の制作行為により、現在の我々をも驚嘆させる写実的な動物像を実現させることができたのである。今年度は、研究期間である3年間の初年度に当たるため、パーソナルコンピュータなど研究遂行上基本的な設備になる備品を整え、さらに国内で情報収集を行い、海外においては第1段階の調査を行った。国内では、前年度の2002年12月に、地域連携推進科研「フゴッペ洞窟・岩面刻画と文化交流のフィールドステーション作りの基礎研究」の研究分担者としてフランスとスペインに現地調査に赴いた際に、共同調査者であった研究者と情報交換を行うために、当該科研研究代表者の所属する北海道開拓記念館(札幌市)に出張した。国外では、フランス南部ロト県に分布するペシュ=メルル洞窟において約2週間にわたって集中的にデータ収集を行った。当該洞窟において確認されているすべて作品に関し、その形象とそれが制作されている岩面の自然の形状との関係を、研究代表者が独自に開発している記録方法により綿密に図表化する作業を行った次第である。当該洞窟においては、確認されている作品数が多く、また、洞窟内は湿度が高いため、長時間継続しての作業が困難であり、相当程度の期間がデータ収集に必要であった。調査結果は現在分析中であり、未だどのようなかたちによっても発表することができていないが、来年度にはインドで開催される国際学会で発表の予定である。その発表のためのデータ収集は来年度も現地において継続して行う予定であり、9月にはスペイン北部のアルタミラ洞窟において、同様の調査を行うべく、現在現地研究者と調整中である。なお、その調査に当たっての方法論などを述べた文章を発表した。3カ年計画の2年目にあたる今年度は、1年目に行った予備調査に基づき、9月から10月にかけて集中的に現地調査を行った。具体的には、スペイン北部のアルタミラ洞窟において、作品とそれが制作されている岩面の形状を、独自に開発した簡易記述法によって記録し、洞窟壁画における動物像などの写実的表現が、その制作されている岩面の自然の形状に一致している事例を確認することができた。これにより、既にデータを収集しているフランス南西部のフォン=ドゥ=ゴーム洞窟の事例と併せて、理論構築のために必要なデータが得られたといえるだろう。上記2洞窟以外の各洞窟の事例に関しては、既に収集している文献その他のデータをもとに事例分析を積み重ねており、今後は理論的考察を重点的に行うこととなる。11月にはインドのアーグラーで開催された国際学会に出席し、「Poetics of Seeing」という理論的見通しを中間段階で総括した研究発表を行った。

すなわち、アルタミラ洞窟等で得られたデータをもとに、また、フランス南部のショーヴェ洞窟の写実的表現システムに見いだされる多様性から、暗闇において簡易ランプを用いて照らし出された自然の岩面を見ることが直接的に動物像等の写実的表現に結びついていることを明らかにしたものである。まだ写実的表現システムが確立していない段階で、紀元前30000年前の制作とされる、現在確認されている最古の芸術作品群であるショーヴェ洞窟において、極めて多様な表現システムの試みがなされたことが明らかになるのではないだろうか。今後は、この理論的考察をより精緻に構築して、最終年度である来年度の研究成果のまとめに向かってゆくことになるだろう。最終年度である今年度は、前年度までに現地調査で得られたデータの分析とその成果発表を中心に事業を行った。前年度にデータを得た、スペイン・アルタミラ洞窟の大天井画に関しては、データを得た20作品の内特徴的な9作品を詳細に分析記述し、それぞれの作品に固有の問題と、それらに共通する「統合」の問題を指摘した。序説的研究としては、スペイン・ラス・チメネアス洞窟の主要作品である「牡ジカ」に対する芸術的直接経験を記述して、道内の暗闇中における自然の岩面の形状が作品へ及ぼす影響について現象学的に考察した。昨年度にインドのアーグラーで開催された国際学会で発表したPoetics of Seeingを、その際の質疑応答の内容を加味して改稿し、10月に慶應義塾大学・三田キャンパスで開催された第56回美学会全国大会において「見ることと作ること:ショーヴェ洞窟壁画における表現の多様性をめぐって」と題して口頭発表した。これは、約30,000年前に制作されはじめた洞窟壁画に先立って、道内の暗闇中でただ見ることによる表象が行われていたのではないかという考えを述べたものである。研究のまとめとしては、統合論にもとづいて解釈を試みた論考を書いた。以上を含めた研究成果報告書(86ページ)を刊行した。
食料需要構造の変化による農産物輸入増加と社会的厚生の変化

本研究では食生活の変化に基づく食料需要の構造変化によって農産物の輸入が増加している状況について社会的厚生の変化を通じて分析している。特に重視したことは、本研究をスタートさせた頃から食品安全性に危惧を生じさせる様々な事件が発生し、「安全性への危惧のもとでの消費者行動」という視点から消費者の「主観的リスク認識」という考え方に基づいて分析を行っていることであり、それによって消費者行動分析の新たな手法となっている。近年日本における食生活は核家族化の進行、単身世帯の増加、さらには女性の社会進出の増加といったライフスタイルの変化により大きく様変わりしており、個々の家庭において調理を行い、消費することは時間的制約により、また費用的にも単身者や少人数の家族のために少量のみ調理することは合理的ではなくなってきている。本研究ではこのような食生活の変化に基づく食料需要の構造変化によって農産物の輸入が増加している状況について社会的厚生の変化を通じて分析を試みている。このような研究を行うためには農産物に関しては数多くの輸入障壁が存在していることについて考察する必要があり、輸入障壁によって多くの農産物市場において多額の社会的厚生損失が生じていることを実証することを試みている。農産物の輸入障壁についてはその多くが非関税障壁である。そこで、本研究では非関税障壁の撤廃の影響について考慮しながら食料需要構造の変化による農産物輸入増加と社会的厚生の変化について計量経済学的分析を行う。そのためにはまずミクロ経済学の理論に基づいた需要関数の推定を行い、さらにその上で需要関数のパラメータより求められた効用関数を食生活の構造変化が起こる前と後に分けて考え、その差を社会的厚生の変化として定義して計測する。このような研究を行うことによって、非関税障壁が消費者の厚生に与える影響、及びその撤廃による効果を分析することが出来、この結果として食料需要構造の変化による農産物輸入増加がどのように社会的厚生への影響をもたらしているのかということが実証的に示されることとなる。平成18年度はこのような研究を行うための基礎的なデータの収集を行っており、その分析を試みている。本研究では近年の生活スタイルの変化に伴う食生活の変化により、食料需要構造にも大きな影響を及ぼしその結果として農産物の輸入が増加している状況について社会的厚生の変化に基づき分析を行う。そのためには近年まで存在した様々な農産物に対する輸入制限についても考察する必要があり、それらの輸入障壁によって多くの農産物市場において多額の社会的厚生損失が生じていたと考えられる。本年度は平成18年度に収集した資料や作成したデータに基づいて様々な分析を行った。特に、近年の幅広い食品安全性に関する問題は食品消費、中でも輸入食品に対して様々な影響を及ぼした。そのような危惧の拡大によって輸入品全体への不安が生じているが、その一方で我が国では既に食料輸入なくして食生活が成り立たなくなっており、そのため安全性と経済性とを如何にバランスをとるかが課題となっている。本年度はこのような消費者の食品安全性に関する認識が政策に与える影響について注目して研究し、(1)消費者は過剰な安全基準を求める傾向にあること、(2)政府は消費者の意向を無視することが出来ず、そのため過剰な安全対策をとる傾向にあること、(3)そのような政策の結果、社会的厚生が低下していること、が示された。このような研究成果の一部については学術雑誌にて「アメリカ産牛肉輸入の政策決定-消費者重視への移行のために-」(『経済政策ジャーナル』)、学会発表にて「安全規制による貿易政策への影響」(日本経済政策学会)としてそれぞれ公表した。近年日本における食生活は核家族化の進行、単身世帯の増加、さらには女性の社会進出の増加によってライフスタイルが変化し、個々の家庭において調理を行い、消費することは時間的制約により、また費用的にも単身者や少人数の家族向けに少量のみ調理することは合理的ではなくなってきている。このような食生活の変化に応じて外食産業等の供給者はデフレ傾向のもとで低価格にて供給することを余儀なくされており、安価な供給を行うためにコスト削減のための様々な努力を行っている。その中でも最も重要なものが原材料費である食材費の削減であり、そのため安価な農産物の輸入が急増している。本研究ではこのような食生活の変化に基づく食料需要の構造変化によって農産物の輸入が増加している状況について社会的厚生の変化を通じて分析している。農産物に関しては規制によって数多くの輸入障壁が存在し、このような輸入障壁によって多くの農産物市場において社会的厚生損失が生じていることが示された。本研究において特に重視したことは、輸入農産物が急増する中で本研究をスタートさせた頃から食品安全性に危惧を生じさせる様々な事件、輸入品の国産への偽装や安全基準を満たさない財の輸入といった不正が頻発し、その結果として消費者の国産品への嗜好を増加させたことから、「安全性への危惧のもとでの消費者行動」という視点から消費者の「主観的リスク認識」という考え方に基づいて分析を行っている。現在は地産地消や農産物の輸出さえも推進しようとしているが、「食の安全」についての関心の高まりが世界的に広がり「高くても安全なものを」という消費者ニーズが高まれば、わが国の食品の高い安全性が認められて世界市場に広がっていく可能性を見出すことが出来、本研究はそのような方策を探るものともなっている。
金属イオンの膜透過性を支配する天然超分子のNMRによる研究

1)Naイオンの脂質二分子膜透過速度定数及びその活性化パラメーターを,^<23>NaNMRにより測定し、キャリヤ-型であるMonensinとLasalocid Aの結果をチャネル型であるGramicidin A,Amphotericin B,Nystatinなどの結果と比較した。チャネル型でポリエン系のイオノホアであるAmphotericin BとNystatinでは透過の活性化エンタルピーは負であり、温度上昇とともに透過速度は抑制されることが分かった。これは温度が上がると膜流動性が上がり、チャネル形成が膜構成分子(コレステロールを含む)の熱運動により撹乱されるためと解釈された。しかし、同じチャネル型であるがペプチド系イオノホアであるGramicidin Aでは、透過の活性化エンタルピーは正となり、この分子がそれ自身で強い自己会合体を形成しチャネルが膜流動性の影響をあまり受けないことが原因と考えられた。2)イオノホアの膜中のコンホメーションがどのようであるかは非常に興味ある情報である。これを得るための方法論を検討する目的も兼ねて、固体高分解能NMRに用いられるMagic Angle Spinning(MAS)法を液晶NMR法に導入することとした。今回の研究では、溶媒として^1H信号を与えないフッ素化液晶を膜モデルとして用い、またスペクトルの簡単化のためにjust-Magic-Angleでの試料回転を行い、二次元roesyスペクトルから構造情報を得た。用いた試料はLasalocid Aである。roesyスペクトルから得られた拘束条件を用いることにより、首尾良くコンホメーションを決定することが出来た。この液晶相中のコンホメーションは、高温の等方相中のそれと同じく疑似環状であるが、それに比べて、平面的に広がっており、液晶の配向場の効果が示唆された。