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北極成層圏オゾン層の化学過程の研究

長期的な成層圏オゾンの減少減少は緯度45度を中心とした中緯度で顕著で、高緯度では更に大きなものとなっている。しかし観測されたオゾンの減少は気相反応過程のみでは説明できない。硫酸エアロゾルや極域成層圏雲などの微粒子上での窒素酸化物が関与した不均一化学反応過程が重用な役割を果たしている可能性が高い。しかし、大気中で実際に起きている不均一化学反応過程を実証した例は極めて少ない。ここではオゾンの破壊が顕著な中緯度と北極でオゾン破壊の化学反応システムを構成する多くの大気組成の高度分布を同時に気球及び地上からのリモートセンシングで測定することにより不均一反応過程を解明することが大きな目的である。まず、北緯44度に位置するフランスの気球実験場で成層圏オゾン破壊の化学反応に関連する大気微量成分の気球観測を実施した。我々は一酸化窒素(NO)、硫酸(HNO_3)、反応性総窒素酸化物(NO_y)、オゾン(O_3)、エアロゾル、を測定する装置準備し、ドイツ側は塩素化合物、一酸化二窒素(N_2O)、メタン(CH_4)の測定器を準備した。フランスのAire surl'AdourにあるCNESの気球実験場で1995年10月12日にこれらの成分の高度10kmから32kmまでの高度分布の観測を行なった。これらの測定結果より、N_2OとNO_y及びCH_4とNO_yの間に極めてよい反相関関係が成り立つことが分かった。この関係は北極域でのNO_yの挙動の解析の解析に有効である。また測定されたNO/NO_<y1>の比は硫酸エアロソル表面上での不均一反応を取り入れた光化学モデルと良く一致した。このことから、中緯度でNOは硫酸エアロソルの不均一反応より大きく低下することが定量的に示された。1995年2月11日にはスウェーデンのキルナ(北緯68度)に位置するエスレンジの気球実験場でフランス気球実験と同じ測定器を用いて大気微量成分の気球観測を実施した。実験は、極渦のキルナが中心付近に入ったときに行われ、高精度のデータが得られた。特にこのフライトでは、総窒素酸化物が極渦の中で大幅に失われる現象(脱窒)が観測されたことが極めて大きな発見的成果である。フランスの実験で観測されたN_2OとNO_yの反相関関係をこの解析で用いている。脱窒は1994年12月から1995年1月にかけて北極域に起きた極低温状態で発生した氷粒子の落下によりもたらされたものと考えられる。得られた観測データはノルウェーの大気環境研究所(NILU)のデータベースに送られた。1995年5月にドイツに於いて本計画の気球実験に参加したフランス、ドイツ、アメリカなどのグループと研究打ち合わせを行なった。これらのグループの全てのデータを検討した結果、脱窒過程の進行に関しては整合性のある結果が得られた。しかし、NO_yを構成する各成分の濃度の比は光化学モデル計算による比の値に比べかなり大きい。この理由は現時点では分かっていない。モデルとの不一致を理解することが今後の大きな課題である。デンバー大学のグループと共同で分光観測のためのソフトウェアーの開発を行なった。特に高度分布を求めるためのアルゴリズムを開発し、試験的なオゾン、HCl,HFの高度分布の導出を行った。またオゾンゾンデにより測定された高度分布と比較し、20%程度で一致することが分かった。今後この比較を数多く行い、高度分布をより高精度で求めるようアルゴリズムを改良する予定である。またスウェーデンのキルナ宇宙空間物理研究所で用いるため高分解能のフーリエ変換型赤外分光器を新規に導入した。この赤外分光器をドイツの原子核研究センターにおいてドイツと共同で調整した。また太陽追尾装置についても同グループと共同で開発した。従来のフーリエ変換型赤外分光器による観測は1995年12月よりキルナのエスレンジで行われている。新規に導入した高分解能のフーリエ変換型赤外分光器の宇宙空間物理研究所への設置を1996年3月に行った。冬から春にかけて極域成層圏雲の発達と共に塩素化合物がどのように再配分されるかということを中心にHCl,HFの挙動を詳しく調べることのできるデータが得られつつある。また同時期北海道で赤外及び可視分光観測データが得られており、北極域と中緯度の化学過程を比較することができるはずである。

我々は一酸化窒素(NO)、硫酸(HNO_3)、反応性総窒素酸化物(NO_y)、オゾン(O_3)、エアロゾル、を測定する装置準備し、ドイツ側は塩素化合物、一酸化二窒素(N_2O)、メタン(CH_4)の測定器を準備した。フランスのAire surl'AdourにあるCNESの気球実験場で1995年10月12日にこれらの成分の高度10kmから32kmまでの高度分布の観測を行なった。これらの測定結果より、N_2OとNO_y及びCH_4とNO_yの間に極めてよい反相関関係が成り立つことが分かった。この関係は北極域でのNO_yの挙動の解析の解析に有効である。また測定されたNO/NO_<y1>の比は硫酸エアロソル表面上での不均一反応を取り入れた光化学モデルと良く一致した。このことから、中緯度でNOは硫酸エアロソルの不均一反応より大きく低下することが定量的に示された。1995年2月11日にはスウェーデンのキルナ(北緯68度)に位置するエスレンジの気球実験場でフランス気球実験と同じ測定器を用いて大気微量成分の気球観測を実施した。実験は、極渦のキルナが中心付近に入ったときに行われ、高精度のデータが得られた。特にこのフライトでは、総窒素酸化物が極渦の中で大幅に失われる現象(脱窒)が観測されたことが極めて大きな発見的成果である。フランスの実験で観測されたN_2OとNO_yの反相関関係をこの解析で用いている。脱窒は1994年12月から1995年1月にかけて北極域に起きた極低温状態で発生した氷粒子の落下によりもたらされたものと考えられる。得られた観測データはノルウェーの大気環境研究所(NILU)のデータベースに送られた。1995年5月にドイツに於いて本計画の気球実験に参加したフランス、ドイツ、アメリカなどのグループと研究打ち合わせを行なった。これらのグループの全てのデータを検討した結果、脱窒過程の進行に関しては整合性のある結果が得られた。しかし、NO_yを構成する各成分の濃度の比は光化学モデル計算による比の値に比べかなり大きい。この理由は現時点では分かっていない。モデルとの不一致を理解することが今後の大きな課題である。デンバー大学のグループと共同で分光観測のためのソフトウェアーの開発を行なった。特に高度分布を求めるためのアルゴリズムを開発し、試験的なオゾン、HCl,HFの高度分布の導出を行った。またオゾンゾンデにより測定された高度分布と比較し、20%程度で一致することが分かった。今後この比較を数多く行い、高度分布をより高精度で求めるようアルゴリズムを改良する予定である。またスウェーデンのキルナ宇宙空間物理研究所で用いるため高分解能のフーリエ変換型赤外分光器を新規に導入した。この赤外分光器をドイツの原子核研究センターにおいてドイツと共同で調整した。また太陽追尾装置についても同グループと共同で開発した。従来のフーリエ変換型赤外分光器による観測は1995年12月よりキルナのエスレンジで行われている。新規に導入した高分解能のフーリエ変換型赤外分光器の宇宙空間物理研究所への設置を1996年3月に行った。冬から春にかけて極域成層圏雲の発達と共に塩素化合物がどのように再配分されるかということを中心にHCl,HFの挙動を詳しく調べることのできるデータが得られつつある。また同時期北海道で赤外及び可視分光観測データが得られており、北極域と中緯度の化学過程を比較することができるはずである。長期的な成層圏オゾンの減少は緯度45度を中心とした中緯度で顕著で、高緯度では更に大きなものとなっている。
Embodied Human Scienceの構想と展開（国際共同研究強化）

Embodied HumanScienceは、自己意識と他者理解のモデル構築を2つの軸としつつ新たな現象学的人間科学の創出を目指すプロジェクトである。この国際共同研究では、自己意識に焦点を絞り、病理的経験との比較からその解明を目指した。具体的には、離人症と呼ばれる精神疾患を取り上げ、その症状に見られる「自己と身体の遊離状態」を当事者の語りに沿って理解することを試みた。明らかになったのは、この症状では、身体所有感が極端に低下して身体が自分のものとして経験できなくなるとともに、身体的経験を俯瞰するパースペクティヴへの同一化が強まり、直接経験の実感がない空虚な自己意識が残されるということである。内定年度:2015本研究は、課題名を「Embodied Human Scienceの構想と展開」と称する。Embodied HumanScience(身体性人間科学)は、代表者が独自に構想する学問領域である。自己、および自己ー他者関係を、身体性の観点を中心にして理論化することに主眼がある。前者については「身体化された自己(embodied self)」、後者については「身体化された間主観性(embodied intersubjectivity)」が重要なキーワードである。理論化のための出発点となる哲学は、E・フッサールおよびM・メルロ=ポンティの現象学的身体論である。今回の国際共同研究は、「身体化された自己」について、精神疾患の症状を手がかりとして現象学的に記述することに目的がある(派遣先のハイデルベルク大学は現象学的精神病理学の世界的な研究拠点である)。申請時の予定では身体醜形障害を研究対象とする予定だったが、後に慎重に検討を重ね、離人感・現実感消失障害(とくに離人症)を対象とすることに変更した。主な理由は、離人症では自己と身体の分離感が生じるが、この点の病態を解明することで、常態における自己と身体の結合の構造まで明らかにできると考えたためである。派遣先での研究は2016年8月下旬から開始した。現地のセミナーや研究会での議論から示唆を得て、離人症を理解するヒントとして、実験によって引き起こされる体外離脱の錯覚(フルボディ・イリュージョン)との現象学的な比較検討を行うことにした。そこで解明できた主な成果は、両者とも、身体の所有感(身体が自分のものであるという感じ)が低下することによって自己と身体の分離感が生じるということである。他方、分離した自己が特定の位置を身体の外部に持つか否かが両者の差異であることも明らかになった。前項で述べた通り、本計画は申請時の予定とは異なる研究対象を題材にすることになったものの、もともとの理論的枠組み(現象学にもとづく身体性人間科学)には変更がなかったため、現在まで比較的順調に研究を進めることができている。具体的な成果については、以下の二点を挙げることができる。(1)本計画の中心課題ではないが、「身体性人間科学」にとって自己と並ぶもう一本の柱である自己ー他者関係についての研究成果を盛り込んだ論文が国際誌Theory & Psychologyに先日掲載された。「Intercorporeality and Aida(間身体性とあいだ)」と題し、社会的認知および他者理解の問題について、身体性を基礎とする理論を展開している。その成果によると、他者理解とは、相手の内面についての推論やシミュレーションである以前に、身体を介した相手への共鳴であり、身体的相互行為を通じた間主観的な「あいだ」の創造である。逆に、心の理論をはじめとする従来の社会的認知の理論は、身体的な「あいだ」から基礎づけられねばならない。(2)本計画の中心課題としては、すでに述べた通り、離人症における自己と身体の分離感の根底に身体所有感の極端な低下があることを明らかにした。やや補足すると、従来の研究では、所有感だけでなく主体感(自分がある行為を引き起こしているという感じ)も低下もしくは消失するとされてきたが、当事者の語りを慎重に検討すると主体感は必ずしも消失していない。このことを明らかにした点も本研究の成果である。実際に生じているのは、主体としてある行為を引き起こせるが、感覚フィードバックが生じないため自分で行為しているように感じられない、という経験である。以上の研究成果を、2017年3月末までに論文化して投稿した。以上の理由により、「おおむね順調に進展している」を選択した。本研究は、課題名を「Embodied Human Scienceの構想と展開」と称する。Embodied HumanScience(身体性人間科学)は、国際的な研究動向を視野に入れつつ代表者が構想する学問領域であり、自己、および自己ー他者関係を、身体性の観点を中心に理論化することに主眼がある。前者については「身体化された自己」、後者については「身体化された間主観性」が重要なキーワードである。理論化の土台となる哲学は、E・フッサールとM・メルロ=ポンティの現象学である。今回の国際共同研究は「身体化された自己」について、精神疾患の症状を手がかりとして現象学的に記述することに目的があった。申請時の予定では身体醜形障害を研究対象とする予定だったが、後に派遣先のフックス教授とも議論して検討を重ね、離人症を対象とすることに変更した。主な理由は、離人症では自己が身体から遊離しているかのように当事者には感じられるが、この点の病態を解明することで、常態における自己と身体の結合の構造を改めて理解できると考えたためである。

離人症における身体からの遊離感を理解する手がかりとして、実験によって引き起こされる体外離脱の錯覚(フルボディ錯覚)との現象学的な比較検討を行った。身体所有感と行為主体感を中心に比較した結果、両者とも身体所有感(身体が自分のものであるという感じ)が低下することによって自己と身体が分離する感じが生じていることが理解できた。他方、身体から分離した自己に特定の空間的位置感覚がともなうかどうかが両者の差異であることも明らかになった(離人症では明確な位置をともなわないのに対してフルボディ錯覚では位置感覚をともなうが、その位置は視覚的に決定されている)。なお、以上の成果を英文でまとめた論文が6月ごろに「Journal of Consciousness Studies」に掲載される。Embodied HumanScienceは、自己意識と他者理解のモデル構築を2つの軸としつつ新たな現象学的人間科学の創出を目指すプロジェクトである。この国際共同研究では、自己意識に焦点を絞り、病理的経験との比較からその解明を目指した。具体的には、離人症と呼ばれる精神疾患を取り上げ、その症状に見られる「自己と身体の遊離状態」を当事者の語りに沿って理解することを試みた。明らかになったのは、この症状では、身体所有感が極端に低下して身体が自分のものとして経験できなくなるとともに、身体的経験を俯瞰するパースペクティヴへの同一化が強まり、直接経験の実感がない空虚な自己意識が残されるということである。この助成にもとづく派遣期間は2016年8月下旬から1年間である。本報告書を作成している現時点ですでに2017年4月末であり、派遣期間全体の3/4以上を終えている。また、当初の達成目標であった国際誌での論文の刊行も、すでに投稿の段階まで終えており、後は査読結果を待って対応するだけの段階にある。したがって、具体的な研究課題に直結する事項について推進すべきことは多く残されていない。残りの時間はむしろ、本助成の趣旨である「国際共同研究強化」という観点に立って時間を有効に使いたい。派遣期間中(またその以前から)、ドイツだけでなく、デンマーク、チェコ、イタリア、アメリカ、イスラエル等の研究者とは各種の交流があり、国際会議やワークショップを通じて連携する場面を多く持ってきている。また、そうした連携の中から英書へ論文を寄稿する機会も増えつつある。そこで、本研究の目標とする「Embodied Human Science」について、現在以上に踏み込んだやりとりを個別の研究者と重ね、論文集を将来刊行できるような共同研究の枠組みを模索する。また、その一方で、現象学と人間科学(もしくは認知科学・精神医学などの心の科学)をめぐる海外の言説を日本に紹介することも重要であると考えている。重要文献の邦訳、海外研究者の招へいなど、関連分野の研究を日本でさらに推進するための準備作業も、残された時間で進める。具体的には、International Human Science Research Conference(国際人間科学研究会議)を日本で開催できる可能性があるので、その事務的な準備を進める。身体性哲学,現象学的心理学,意識科学
イオン注入によるチタン-アルミ系金属間化合物の高温耐酸化性向上に関する研究

寸法15x10x(1or2)mmのTiAl試料に、加速電圧主に50keV、注入量主に10^<21>ions m^<-2>でAr,Al,Si,Cr,Nb,MoおよびZrをイオン注入し、大気圧下の純酸素中、保持温度1200Kでの繰り返し酸化試験および等温酸化試験を行った。注入したままの試料および所定条件下で酸化させた試料について、薄膜X線回折、X線回折、SEM、AES,EPMAなどを用いて、注入元素の深さ方向分布および酸化生成物の組織学性状調査を行った。得られた結果は次のようにまとめられる。Ar,Crの注入は酸化を加速する。Al,Siの注入は酸化初期にその速度を下げるが、その後加速酸化する。Siのほうが効果は大きい。Nb、Moの注入は,Al_2O_3スケールを形成し、耐酸化性を非常に向上させる。Nbの注入量を減らすとその効果は下がる。Mo注入の場合加速電圧をあげても同様の効果がある。Zrの注入は酸化初期に耐酸化性を向上させる。加速電圧の影響は小さいが、注入量を上げると効果は上がる。その後スケールの部分的剥離が繰り返され、スケールの保護性が失われる。寸法15x10x2(mm)で、TiとAlの比がほぼ1のTiAlの板状試料に、Nb、Cr、Si、Ar、Alをイオン注入した。注入量は、Nbについては、10^<18>1.2x10^<21>ions・m^<-2>の4種類で、Cr、Arは1.2x10^<21>ions・m^<-2>他は10^<21>ions・m^<-2>である。これらの試料について、大気圧下の酸素雰囲気中、室温1200Kの範囲における繰り返し酸化試験を行った。さらに、所定時間酸化した試料を作成し、形成されたスケールの性状を、X線回折、EPMA、EDSなどで調査した。Nbを10^<20>および1.2x10^<21>ions・m^<-2>注入すると、Al_2O_3を主体したスケールが形成され、耐酸化性が非常に向上する。300サイクル(1080ks)後でもスケールは剥離しない。酸化前の試料では、注入されたNbは深さ50nmに濃化し、35at%近くに達していた。このNbの濃化が優れた耐酸化性をもたらしたと考えられる。これに対し、より少ないNb注入量では、スケールはTiO_2とAl_2O_3の混合したものとなり耐酸化性は向上しない。Nbの濃化の程度が不十分であったと思われる。CrあるいはSiを注入すると、短時間の間は耐酸化性をある程度向上させるが、スケールはTiO_2とAl_2O_3の混合したものとなり、長時間保護性を維持できない。ArあるいはAlの注入は、酸化初期から大きい酸化増量をもたらし、耐酸化性向上に寄与しない。特に、Arの注入は酸化を加速した.このことは、単なる格子欠陥の導入では、TiAlの耐酸化性が向上しないことを示している。寸法15×10×2(mm)で、TiとAl比がほぼ1のTiAlの板状試料に、Ar、Al、Si、Cr、Nb、Moをイオン注入した。注入量は、Nbについては、10^<18>1.2×1.2×10^<21>ions・m^<-2>の4種類で、Cr.Arは1.2×10^<21>ions・m^<-2>他は10^<21>ions・m^<-2>である。さらに、所定時間酸化した試料を作成し、形成されたスケールの性状を、X線回折、EPMA.EDSなどで調査した。Arの注入は酸化を加速した。このことは、単なる格子欠陥の導入では、TiAlの耐酸化性が向上しないことを示している。AlあるいはSiの注入は、短時間は耐酸化性をある程度向上させるが、その後通常の酸化速度となる。AlよりSiのほうが効果が大きい。

Crを注入すると、短時間の間は耐酸化性をある程度向上させるが、スケールはTiO_2とAl_2O_3の混合したものとなり、長時間保護性を維持できないNbを10^<20>およびl.2×10^<21>ions・m^<-2>注入すると、Al_2O_3を主体としたスケールが形成され、耐酸化性が非常に向上する。300サイクル(1080ks)後でもスケールは剥離しない。酸化前の試料では、注入されたNbは深さ50nmに濃化し、35at%近くに達していた。このNbの濃化が優れた耐酸化性をもたらしたと考えられる。これに対し、より少ないNb注入量では、スケールはTiO_2とAl_2O_3の混合したものとなり耐酸化性は向上しない。姉の濃化の程度が不十分であったと思われる。Moの注入はNb注入と同等の効果がある。
高齢者の閉じこもりやうつを強化する家族特性の解明:支援策検討のための地域縦断研究

研究1では、高齢者の閉じこもりやうつ傾向をもたらす家族機能を測定する尺度を開発することを目的とした。予備調査では,福島県A市に在住する閉じこもり、うつ傾向に該当する二次予防事業対象者10人、同居家族10人を対象に、家族の日頃の関わり等について半構造化面接による訪問調査を実施した。項目選を行った結果14項目を尺度試案とした。本調査では、東京都B区内在住の高齢者、およびその同居家族1人を調査対象とし郵送調査を実施した。調査内容は,尺度項目試案、閉じこもり、うつ傾向の有無、家族サポート等について尋ねた。分析の結果,6項目が抽出された。信頼性係数はα=0.59であった。尺度得点が高い群は閉じこもり、およびうつ傾向が多く基準関連妥当性が確認された。また、尺度の得点が低いほど、家族からのソーシャル・サポート得点や神的健康度が高く、交流している家族の人数も多いことから併存的妥当性が確認された。本家族機能尺度が1年後の追跡調査の結果における閉じこもり、およびうつ傾向の発生との関連、およびその他要因との関連を検討した。以上の結果をもとに、家族に対する閉じこもり、うつ傾向高齢者への支援プログラムを作成した。本研究では、家族がつくりだす閉じこもりの機序を明らかし、さらには、家族に対する閉じこもり改善のための支援プログラムの構築を目指すことを目的とした。まず、外出支援を主とした家族特性に関する尺度作成のための項目収集(予備調査)を実施した。対象者は地域在住の閉じこもり、あるいはうつ高齢者とその同居家族1名の計10組であった。半構造化面接の結果、13項目を収集した。次に、尺度開発および関連要因検討のための地域高齢者とその家族に対する郵送調査を実施した。対象者は、要介護認定を受けていない65歳以上高齢者とその家族計1000組であった。調査の結果、高齢者本人からの回答は1,199人であった。同居家族からも回答が得られたものを対象とした結果,同居家族,高齢者本人ともに最終的な分析対象者はそれぞれ659人であった.女性322人(48.9%),平均年齢は72.6±5.0歳であった.閉じこもりは23人(3.9%),うつ傾向者は139人(21.1%)であった.表には記していないがうつと閉じこもりの重複者は13人(2.0%)であった.同居家族の属性は,女性が416人(63.1%),高齢者本人との続柄は配偶者が最も多く473人(71.8%)であった.要介護認定を受けていた者は23人(3.5%)予備調査の結果から得られた家族特性に関する13項目に対し,リスクあり群とリスクなし群におけるU検定を行った結果,6項目で有意な差が尺度を中央値で高得点群,低得点群に2分類し,閉じこもり,うつ傾向の有無の有無との関連を検討した。併存的妥当性は、その他の変数との関連により求めた。ソーシャル・サポートやネットワークとの優位な関連を示した。以上の結果から開発した尺度の信頼性と妥当性が確認された。高齢者本人に加え、従来全く検討されてこなかった家族に対する縦断研究により、閉じこもりやうつを強化する家族特性を解明し、「家族の在り方」といった新しい視点に基づく、要介護ハイリスク改善のための、家族に対する支援プログラムの検討を目的とした。本年度は以下の2点を実施した。1.外出支援を主とした家族特性に関する尺度作成のための項目収集(予備調査)対象:要介護ハイリスク者の家族計10人、方法:訪問による半構造化面接、内容:閉じこもりやうつのリスクに関する認識、交流頻度・内容等について尋ねた。分析:インタビュー内容を整理し、家族の認識する閉じこもりやうつのリスク、高齢者本人に対する外出の支援を主とした関わり方に関する行動を抽出・整理し、概念構成を確認した。2.尺度開発および関連要因検討のための地域高齢者とその家族に対する郵送調査対象:要介護認定を受けていない65歳以上高齢者とその家族計1000組、方法:郵送法による質問紙調査、内容:<高齢者の家族に対して>基本属性、予備調査による尺度試案、身体・心理・社会環境的要因等。

<高齢者本人に対して>基本属性、外出頻度、うつの他、身体・心理・社会環境要因等。上記のデータを元に、家族特性尺度の開発開発(研究1)、家族特性尺度と閉じこもりやうつの関連要因(研究2)を実施した。【研究1】項目の作成:予備調査を元に、家族特性尺度の項目(40項目程度を想定)を構成、分析する調査内容:上記の家族に対する調査内容、高齢者本人に対するソーシャル・サポート、分析:信頼性と妥当性を検討し尺度を作成した。【研究2】分析する調査内容:上記研究1で作成した尺度、および、高齢者本人に対する調査内容分析:家族特性尺度得点と、閉じこもり及びうつとの関連について、多変量解析を行った。上記については、来年度の学会発表や論文にまとめる予定である。東日本大震災の影響により、当初予定していた福島県内での大規模調査の実施が困難となったため、急遽調査対象地域を変更した。そのたため、計画当初の予定より調査対象人数が減少したものの(自治体との共同事業とならなかったため個人情報については住民基本台帳の転記を実施した。そのため、転記代として予定よりも人件費がかかりった)、計画通りの進捗である。次年度においては、当初の計画通り、本年度の対象者に対する追跡調査を12月頃に実施予定である。調査完了後、速やかに得られた成果から支援プログラム試案を考案する。滞りなく研究が進むよう、本年度末より調査対象地域との打ち合わせを重ねている。有用な支援プログラム確立に向け、本年度の調査データに加え、次年度の追跡調査結果により、研究協力者から助言などを得るための体制を整えている。なお、収支状況報告書における次年度使用額が21479円であるが、これについては本年度3月に支払が発生したものの、会計計上とずれがあったために生じたものであり、現段階において既に支払は完了している。調査対象地域、および、研究協力者との打ち合わせに加え学会参加(日本心理学会)のための旅費(福島-東京間の往復6回)、追跡調査に係る通信費(往復郵送代1000人分)、人件費(研究補助アルバイト代)に使用する予定である。併せて、得られたデータのデータ入力委託費、論文作成のための英文校正費などに使用する。
ファインセラミックスの遠心蝋型成形法の開発

スリップを金型に装填して1020kGの遠心力を作用させて成形する遠心成形法では,均一かつ高充填度の成形体が短時間で得られるがサブミクロンオーダーのセラミックス粉末を含むスリップを使用するので,10kG以上の高い遠心力を作用させた場合,金型の割面からスリップが漏出し易い,このため,特に複雑な形状では割型の使用に難点があり,成形体の形状にかなりの制約がある,本研究は,金型でバックアップした蝋(ワックス)型を用いた遠心成形法の開発を目的とする.蝋の材質は,蝋型の強度や精度などを測定して選定した,次に蝋型を用いて遠心成形し,約φ12×18mmHの成形体を作製,成形体の水分量,粒子充填率,Ig.loss(800°C強熱減量),乾燥・焼成時の寸法変化率などを測定して,蝋型の遠心成形法への適用性を検討した.明らかになったことは以下の通りである.1.高強度及び高靱性(共に日本石油精製製)の蝋を重量比1:1で混合することにより,18kGの遠心力で変形しない蝋型が得られ,模型に対する焼成体の寸法変化率の標準偏差が0.60%と再現性が高い.2.成形体は水分量(14.4%),粒子充填率(61.5%),Ig.loss(0.54%)ともに金型の場合と同等であり,蝋の成形体への影響はない.3.1250°C-2hrの低温焼成で,金型を用いた場合と同等の相対密度99.4%の高密度かつ均質な焼成体を得ることができる.4.蝋型を加熱溶解(融点60°C)して成形体を損傷せず容易に脱型でき,金型で必要な割面が不要で形状の自由度が大きく,かつ割面からの泥漿漏出を防止できる.その結果,歩留まり80%以上が確保できた.スリップを金型に装填して1020kGの遠心力を作用させて成形する遠心成形法では,均一かつ高充填度の成形体が短時間で得られるがサブミクロンオーダーのセラミックス粉末を含むスリップを使用するので,10kG以上の高い遠心力を作用させた場合,金型の割面からスリップが漏出し易い,このため,特に複雑な形状では割型の使用に難点があり,成形体の形状にかなりの制約がある,本研究は,金型でバックアップした蝋(ワックス)型を用いた遠心成形法の開発を目的とする.蝋の材質は,蝋型の強度や精度などを測定して選定した,次に蝋型を用いて遠心成形し,約φ12×18mmHの成形体を作製,成形体の水分量,粒子充填率,Ig.loss(800°C強熱減量),乾燥・焼成時の寸法変化率などを測定して,蝋型の遠心成形法への適用性を検討した.明らかになったことは以下の通りである.1.高強度及び高靱性(共に日本石油精製製)の蝋を重量比1:1で混合することにより,18kGの遠心力で変形しない蝋型が得られ,模型に対する焼成体の寸法変化率の標準偏差が0.60%と再現性が高い.2.成形体は水分量(14.4%),粒子充填率(61.5%),Ig.loss(0.54%)ともに金型の場合と同等であり,蝋の成形体への影響はない.3.1250°C-2hrの低温焼成で,金型を用いた場合と同等の相対密度99.4%の高密度かつ均質な焼成体を得ることができる.4.蝋型を加熱溶解(融点60°C)して成形体を損傷せず容易に脱型でき,金型で必要な割面が不要で形状の自由度が大きく,かつ割面からの泥漿漏出を防止できる.その結果,歩留まり80%以上が確保できた.
深層ニューラルネットワークを用いた細胞形態特徴抽出と疾患変異性形態特徴の可視化

本年度は、前年度までの課題で得られた結果をもとにして、課題3であるグリア細胞の疾患変異性特徴量の可視化と応用に中心的に取り組んだ。この目標達成のために、以下の項目を実施した。(1)グリア細胞の形状特徴量を用いた疾患状態予測と疾患変異性特徴量の同定:グリア細胞画像から抽出した特徴量のうち、どの特徴量が疾患時に大きな影響を受けるのかをスパースモデリングの手法を用いて解析し、ごく一部の特徴量からも疾患状態が予測可能であることを確認した。(2)疾患変異性特徴量の可視化:(1)の方法で同定された特徴量に対応する画像部分がどこであるかを可視化し、形態変異に関与している細胞部位を解釈可能にすることを試みた。結果、疾患予測に重要な特徴量が局在する空間位置を、細胞画像に重ね書きして可視化する技術の開発に成功した。(3)空間特異性の解析:疾患によって強い変化をうける特徴量がどこに局在しているかを解析した。細胞体近辺あるいはその周辺部に局在している場合などが見受けられたが、現時点では体系的に統一した傾向は見られていない。以上の結果より、当初の研究目的であったグリア細胞の形態特徴と病態との連関を示すことに成功し、またその関係性を細胞画像上で可視化する技術の開発に成功したといえる。その一方で、細胞形態変化の特異性に統一的な解釈を与えるには至っていない。こうしたばらつきは、例えば血管との距離や皮質表面からの深さなど、細胞が位置する情報などとの関連を付加的に解析することにより吸収できる可能性もあると考えている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、二光子顕微鏡を用いたグリア細胞画像の計測を行いながら、グリア細胞の形状特徴抽出および疾患変異性特徴量の同定を既存データで先行開始した。この目標達成のため、以下の項目を実施した。(1)マウス大脳皮質におけるグリア細胞画像の計測:健常状態のマウスの大脳皮質内のグリア細胞の形態情報を、二光子顕微鏡を用いて撮像した。生体内で蛍光色素を用いてグリア細胞を染色し、麻酔下で撮像を行った。(2)脳疾患の人工導入とグリア細胞の計測:(1)の実験後、人工的に脳疾患状態を作り出したマウス大脳皮質内のグリア細胞の形態情報を継続的に撮像した。(3)深層ニューラルネットを用いたグリア細胞形状特徴量の抽出:深層ニューラルネットで適切な特徴量を抽出するには大量の画像データを用いたパラメータの学習が必要であるが、実験で撮像するアストロサイト画像のみでは数が足りない。そこで今年度は、日常的な物体画像が大量に集約された画像データベースであるImageNet(Deng et al., CVPR, 2009)で学習されたパラメータを転用し、グリア細胞の形状特徴量を抽出することを試みた。(4)グリア細胞の形状特徴量を用いた疾患状態予測と疾患変異性特徴量の同定:(3)によって抽出された形状特徴量のうち、どの特徴量が疾患時に大きな影響を受けるのかを多変量解析の手法を用いて解析した。深層ニューラルネットワークが抽出する網羅的パラメータを解析対象とすることで、従来法に比べ広い特徴空間を対象にした解析が可能になった。年度当初に設定した4つの研究項目については順調に進行し、グリア細胞からの特徴量抽出とその解析がよい進捗を見せている。こうした手法で抽出した特徴量が何を表しており、どのように機能的影響を与えるのかを次年度以降解析していくにあたっての基盤が整備された状況であり、進捗は良好である。またこれまで得られた結果を論文として公刊する準備にも着手できている。以上の状況から、「(1)当初の計画以上に進展している」の評価が妥当であると考える。

今後は、これまでの課題を継続しつつ、これまで得られた結果をもとにして、課題3であるグリア細胞の疾患変異性特徴量の可視化と応用に着手する。この目標達成のために、以下の項目を実施する。(1)グリア細胞の形状特徴量を用いた疾患状態予測と疾患変異性特徴量の同定:これまでの研究で、抽出されたグリア細胞画像の特徴量のうち、どの特徴量が疾患時に大きな影響を受けるのかを解析してきた。これを更に進め、抽出された特徴量から疾患状態を予測可能かどうかを検証する。この予測モデルを詳細に分析することにより、予測可能性の観点から、疾患に強く関連した特徴量を同定することが可能になると期待される。(2)疾患変異性特徴量の可視化:上述の方法により同定された特徴の次元が高い場合、グリア細胞のどのような見た目の形状変化に対応しているのかを解釈することが難しいという問題が残されることになる。これを解決する方法のひとつが、深層ニューラルネットワークの高次層の出力を低次層の特徴へと対応させる方法である。この手法を応用し、最終的には画像空間で特徴量を可視化することを目指す。(3)空間特異性の解析:疾患によって強い特徴量変化をうける細胞群に特定の共通性があるかどうかを調べる。共通性の指標として、例えば細胞同士の近接性に着目することから開始し、他の共通性も並行して探索する。(4)他の生体画像解析への応用:グリア細胞の解析で得られた知見や開発した手法を、他の生体画像解析へと応用することを試みる。我々の研究グループが保有するヒト脳機能画像や、マウスの神経細胞活動を撮像した画像などに同様の手法を適用し、その有効性を検証する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
ゼブラフィッシュを用いた先天性造血障害および免疫不全モデルの作成とその遺伝子解析

ゼブラフイッシュ研究用の水槽タンクと自動環流システムを研究室内に設置し、先天性造血障害や免疫不全のゼブラフィッシュモデルを製作を試みた。点突然変異を誘発することが知られているN-ethyl-N-nitrosourea(ENU)処理を雄に行い、その雄と野生型の雌とを交配し、ヘテロ接合体の雑種第一代(F1)を作成した。F1の雌から取り出した無受精の卵に、紫外線処理をしDNAを不活性化した精子をかけ、フレンチプレッシャーにて圧をかけるという偽受精・高圧処理を行い単為発生を誘発した。上記処理4日後に幼魚をアルコール固定し、赤血球系に発現するヘモグロビンとリンパ球系に発現するrag1の遺伝子プローブを用いたwhole embryo in situ hybridizationを行い突然変異の有無を調べた。野生型におけるwhole embryo in situ hybridizationではヘモグロビンは心血管系に、rag-1は胸腺に発現するが、それらの発現に異常が観察されたものを突然変異体と考える。心血管系と胸腺ともに遺伝子発現のみられないヘモグロビン(-)/rag1(-)の表現型持つものを造血幹細胞の発生に異常があるもの、胸腺のみに発現のみられるヘモグロビン(-)/rag1(+)のものを赤血球系の発生に異常があるもの、心血管系のみに発現のみられるヘモグロビン(+)/rag1(-)のものをリンパ球系の発生に異常があるものと考える。その結果、F1の215個体から36個体の突然変異が得られた。内訳は、リンパ球系の発生に異常があるヘモグロビン(+)/rag1(-)の19個体、赤血球系の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(+)の14個体、造血幹細胞の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(-)の3個体であった。ゼブラフィッシュ研究用の水槽タンクと自動環流システムを研究室内に設置し、先天性造血障害や免疫不全のゼブラフィッシュモデルを製作を試みた。点突然変異を誘発することが知られているN-ethyl-N-nitrosourea (ENU)処理を雄に行い、その雄と野生型の雌とを交配し、ヘテロ接合体の雑種第代(F1)を作成した。内訳は、リンパ球系の発生に異常があるヘモグロビン(+)/rag1(-)の19個体、赤血球系の発生に異常があるヘモグロビン(-)/mg1(+)の14個体、造血幹細胞の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(-)の3個体であった。

ゼブラフィッシュ研究用の水槽タンクと自動環流システムを研究室内に設置し、先天性造血障害や免疫不全のゼブラフィッシュモデルを製作を試みた。点突然変異を誘発することが知られているN-ethyl-N-nitrosourea(ENU)処理を雄に行い、その雄と野生型の雌とを交配し、ヘテロ接合体の雑種第一代(F1)を作成した。F1の雌から取り出した無受精の卵に、紫外線処理をしDNAを不活性化した精子をかけ、フレンチプレッシャーにて圧をかけるという偽受精・高圧処理を行い単為発生を誘発した。上記処理4日後に幼魚をアルコール固定し、赤血球系に発現するヘモグロビンとリンパ球系に発現するrag1の遺伝子プローブを用いたwhole embryo in situ hybridizationを行い突然変異の有無を調べた。野生型におけるwhole embryo in situ hybridizationではヘモグロビンは心血管系に、rag-1は胸腺に発現するが、それらの発現に異常が観察されたものを突然変異体と考える。心血管系と胸腺ともに遺伝子発現のみられないヘモグロビン(-)/rag1(-)の表現型持つものを造血幹細胞の発生に異常があるもの、胸腺のみに発現のみられるヘモグロビン(-)/rag1(+)のものを赤血球系の発生に異常があるもの、心血管系のみに発現のみられるヘモグロビン(+)/rag1(-)のものをリンパ球系の発生に異常があるものと考える。その結果、F1の215個体から36個体の突然変異が得られた。内訳は、リンパ球系の発生に異常があるヘモグロビン(+)/rag1(-)の19個体、赤血球系の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(+)の14個体、造血幹細胞の発生に異常があるヘモグロビン(-)/rag1(-)の3個体であった。
近接場蛍光共鳴エネルギー転移を用いたナノ構造の分子運動性・温度同時測定法の開発

本研究課題では、機能性高分子試料に化学修飾された2種類の蛍光分子(ドナーおよびアクセプタ)を近接場光によって励起し、その蛍光共鳴エネルギー転移を検知することでナノレベルでの分子構造・温度分布を測定する新しい測定法を提案し、測定装置の構築を目指す。照射する近接場光の波長はドナーのみが吸収する波長域を選択的に用い、数十Å程度に近接したアクセプタに共鳴したドナーの蛍光エネルギーが転移することによってアクセプタは励起される。試料である機能性高分子の分子構造が界面の影響や分子合成過程、温度状態で変化すると、ドナーからアクセプタへの蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)効率が変化する。このFRET効率変化をモニタリングすることで分子レベルでの構造変化や温度変化を測定することが可能となる。H18年度は蛍光共鳴エネルギー転移を安定して検出可能な近接場蛍光分光システムを原理の段階から考案・構築し、以下に挙げる具体的な成果を得るに至った。【近接場蛍光分光法を用いたナノスケール温度計測システムの開発】(1)超微弱光検知システムと蛍光分光システムによって構成される超安定化近接場蛍光分光システムを構築し、ナノプローブの熱的・光学的物性情報を蛍光強度ならびに蛍光寿命から分析する測定技術を確立した。(2)近接場蛍光分光法を用いて、サーマルナノプローブの候補材料であるQdot655蛍光分子の温度特性にっいて評価を行った。蛍光信号の光学特性が温度変化に対して可逆性を示すことを明らかにした。(3)非常に安定したナノスキャンシステムを開発し、回折素子の光学情報を100nmの空間分解能で検出することに成功した。(4)ナノ細線デバイス(線幅:500nm、材質:パーマロイ)を超微細化技術により作製し、開発した近接場蛍光分光法の原理・装置の妥当性を実験的に明らかにした。
乳腺悪性腫瘍患者血小板中mRNAの診断的価値についての検討

本研究では、簡便に乳癌診断を可能とする新規バイオマーカー探索を目的として、乳癌患者と健常群の血小板中に含まれるmRNAの網羅的解析を行い、mRNA発現プロファイルによる癌の診断およびサブタイプ診断が可能かどうか検討した。簡便に採取できる血液検体から乳癌の確定診断およびサブタイプ決定ができれば、乳癌の早期発見、適切な治療方針の決定や適切な薬剤の選択を可能とし、乳癌患者の生命予後の延長に寄与できる可能性がある。健常ボランティア14名、乳癌患者20名に対しEDTA入り採血管で全血15mlを採取し、2回遠心分離ののち血小板を分離した。血小板中mRNAはmiRNeasy kitを用いて抽出した。中間解析として健常ボランティア、乳癌患者4名ずつ、最終解析として健常ボランティア6名、乳癌患者13名に対し、イルミナ社のHiSeq2500を用いてRNA-Seq解析を行った。RNAの品質不良やライブラリー作成不良のため健常ボランティア8名、乳癌患者5名は解析から除外した。中間解析及び最終解析の結果、2群間において統計上、有意差を示す遺伝子を複数同定することはできたが、validationとして行った定量的PCRでは最も発現量に差があった遺伝子においても健常群のほとんどが癌群と同程度の発現量を示しており、発現量が明確に分かれる遺伝子を同定できなかった。原因としてはNGS後の遺伝子のannotationのばらつきが考えられたため、次に健常ボランティア6名、乳癌患者6名に対しDNA microarray解析を行った。発現量が有意差をもって乳癌患者で2倍以上の増加を示した遺伝子は243個あり、定量的PCRでバリデーションを行ったところ、いくつかの遺伝子において有意な遺伝子発現増幅を認めた。健常ボランティアの検体を収集することに難渋し、群間比較解析が遅れてしまったため。また、次世代シーケンサーを用いた解析では乳癌患者群と健常群の比較において有意差を示す遺伝子が抽出できなかった。そのためDNAマイクロアレイ解析に計画変更する必要があった。DNAマイクロアレイ解析で乳癌患者で2倍以上の増加を示し、かつ定量的PCRでも遺伝子増幅を示した遺伝子について、健常ボランティア及び乳癌患者の検体をさらに追加し検討した。バリデーションとして行った定量的PCRにおいて、2群間で有意差を示すことができなかった。血小板中mRNAの遺伝子発現プロファイルは健常ボランティアおよび乳癌患者間で有意差を示す候補遺伝子を同定することが困難であったが、現在乳癌患者の検体をさらに追加し、乳癌患者および各種サブタイプに特異的な血清中mRNAの発現プロファイルを同定する試みを行っている。多くの乳癌患者の検体をもちいることで、TNM分類による病期をmRNAの発現量との関係についても検討を行い、早期診断マーカーとしての有用性、再発との関連性、化学療法の著効性についても確認し、包括的乳癌マーカーとしての有用性についても検討を行う。現在健常ボランティア及び乳癌患者の検体をさらに追加し、乳癌診断への有用性を検討中である。これまで48名の被験者の検体に対し24時間以内に血小板精製を行い、その後mRNA抽出を行っている。採血管内で溶血していた1名を除いたすべての検体において血小板精製が可能であり、遺伝子発現解析を行うに十分量なmRNAを得ることができた。得られたmRNAはイルミナ社HiSeqを用いてRNA-Seq解析を行い、有意差をもって発現量が異なる遺伝子を同定できたものの、候補遺伝子の絞り込みはできなかった。この理由として、NGS後の遺伝子のannotationが解析ソフトにより異なる結果であったことと、一部で極端に過剰発現を示す癌群の検体があったことで癌群の発現量が見かけ上高く見積もられたが、実際には他の検体の発現量は2群間で同程度であったためと考えられる。

このことからannotationが比較的容易であるDNA microarray解析によって乳癌診断のための候補遺伝子を同定しようと考えた。結果、RNA-Seq解析よりも多くの変動遺伝子を同定することが可能であった。定量的Real-time PCR法により、遺伝子Xにおいて2.85倍の遺伝子発現増幅を認めることが明らかとなった。本研究では、簡便に乳癌診断を可能とする新規バイオマーカー探索を目的として、乳癌患者と健常群の血小板中に含まれるmRNAの網羅的解析を行い、mRNA発現プロファイルによる癌の診断およびサブタイプ診断が可能かどうか検討した。簡便に採取できる血液検体から乳癌の確定診断およびサブタイプ決定ができれば、乳癌の早期発見、適切な治療方針の決定や適切な薬剤の選択を可能とし、乳癌患者の生命予後の延長に寄与できる可能性がある。健常ボランティア14名、乳癌患者20名に対しEDTA入り採血管で全血15mlを採取し、2回遠心分離ののち血小板を分離した。血小板中mRNAはmiRNeasy kitを用いて抽出した。中間解析として健常ボランティア、乳癌患者4名ずつ、最終解析として健常ボランティア6名、乳癌患者13名に対し、イルミナ社のHiSeq2500を用いてRNA-Seq解析を行った。RNAの品質不良やライブラリー作成不良のため健常ボランティア8名、乳癌患者5名は解析から除外した。中間解析及び最終解析の結果、2群間において統計上、有意差を示す遺伝子を複数同定することはできたが、validationとして行った定量的PCRでは最も発現量に差があった遺伝子においても健常群のほとんどが癌群と同程度の発現量を示しており、発現量が明確に分かれる遺伝子を同定できなかった。原因としてはNGS後の遺伝子のannotationのばらつきが考えられたため、次に健常ボランティア6名、乳癌患者6名に対しDNA microarray解析を行った。発現量が有意差をもって乳癌患者で2倍以上の増加を示した遺伝子は243個あり、定量的PCRでバリデーションを行ったところ、いくつかの遺伝子において有意な遺伝子発現増幅を認めた。健常ボランティアの検体を収集することに難渋し、群間比較解析が遅れてしまったため。また、次世代シーケンサーを用いた解析では乳癌患者群と健常群の比較において有意差を示す遺伝子が抽出できなかった。そのためDNAマイクロアレイ解析に計画変更する必要があった。DNAマイクロアレイ解析で乳癌患者で2倍以上の増加を示し、かつ定量的PCRでも遺伝子増幅を示した遺伝子について、健常ボランティア及び乳癌患者の検体をさらに追加し検討した。バリデーションとして行った定量的PCRにおいて、2群間で有意差を示すことができなかった。現在健常ボランティア及び乳癌患者の検体をさらに追加し、乳癌患者および各種サブタイプに特異的な血小板中mRNAの発現プロファイルを同定する。転移性乳癌患者においても同様に血液検体から血小板中mRNA発現プロファイルを解析して、初発時の原発巣のプロファイルと比較する。
新規VEGF受容体結合因子に基づく血管新生制御法の検討

本邦においては近年の超高齢化に伴い、失明原因として加齢黄斑変性が急増している。脈絡膜血管新生の原因となる血管内皮増殖因子(VEGF)が加齢黄斑変性の憎悪因子であることはよく知られている。申請者は前年度までに、G蛋白制御因子AGS8がVEGFシグナルを制御することにより、脈絡膜血管新生を制御している可能性を提起した。本年度はさらなる可能性の検証を詳細に行った。C57BL/6N種のマウス眼球より脈絡膜を単離、細切、血管内皮用の培養液中でMatrigelコーティングしたカバーガラス上で培養を行った。Flow cytometer解析の結果、組織片から外側に向かって移動する細胞の70%以上が血管内皮細胞であることを確認している。また、移動中の細胞はAGS8抗体による免疫染色により、ほぼ100%がAGS8分子を発現していることを確認している。そこで、SiRNAを用いてAGS8遺伝子の発現をノックダウンし、組織片から外側に移動する細胞の解析を行った。その結果、対照に比べてAGS8ノックダウンでは、細胞移動が有意に抑制することが明らかになった。これまでの研究成果と合わせて本研究の結論として、1脈絡膜内皮細胞においてAGS8はVEGF受容体と複合体を形成しVEGFシグナルを制御する。2加齢黄斑変性モデルマウスにおいて、AGS8は脈絡膜血管新生を制御しており、その際、AGS8は特に内皮細胞の細胞移動を制御する。3加齢黄斑変性モデルマウスにおけるAGS8分子の発現抑制は脈絡膜血管新生を特異的に抑制する。以上より本研究ではAGS8が加齢黄斑変性治療の新しい標的分子となりうる可能性を示すことができた。高齢化社会の進展に伴い、失明原因として加齢黄斑変性が増加している。日本人に多い滲出型では、脈絡膜から露出した血管が黄斑部で血管新生を起こし、網膜機能を破綻させ視力に異常をきたす。そのため、脈絡膜から派生する血管新生の抑制、血管新生誘導因子である血管内皮増殖因子(VEGF)シグナルの阻害こそが滲出型加齢黄斑変性疾患の治療の鍵となるとされている。我々は以前、三量体G蛋白質の新規制御因子であるActivator of G-protein signaling 8 (AGS8)を同定した。培養血管内皮細胞HUVECにおいてAGS8はVEGF2型受容体と結合してVEGFシグナルを制御する因子であることを報告した。そこで本研究では、加齢黄斑変性におけるAGS8の重要性の解明とその制御を目指した。まず、光凝固レーザー照射によってマウス脈絡膜に血管新生の誘導を行った。Realtime-PCRおよび免疫染色によると、AGS8は術後2ー4日目に有意に発現量が増加しており、その発現部位は脈絡膜由来の新生血管特異的であることが判明した。そこでAGS8 siRNAを硝子体内に投与し脈絡膜におけるAGS8発現を抑制したところ、レーザー照射による脈絡膜新生血管の面積が減少した。また、ex vivo培養系による管腔形成実験において、VEGFが誘導する脈絡膜内皮細胞の管腔形成能はAGS8 siRNAによるknockdownによって有意に抑制された。さらに、脈絡膜由来の培養内皮細胞においては、AGS8 knockdownの結果、VEGFが惹起するVEGFR-2のリン酸化が抑制されるとともに、管腔形成や細胞移動も同時に抑制された。以上のことからAGS8は脈絡膜内皮細胞においてもVEGFシグナルを制御し、生体内で血管新生を制御していること、AGS8発現の抑制は脈絡膜血管新生を特異的に抑制することが明らかになった。予定通り順調であり、脈絡膜血管新生におけるAGS8の特異性、重要性とその機能抑制効果を確認することができた。我々は以前、三量体G蛋白質の制御因子としてAGS8を同定した。AGS8はC末端でGbgサブユニットと結合し、G蛋白共役受容体とは独立して働く分子である。また最近、培養血管内皮細胞による解析により、AGS8はGbgサブユニットとともにVEGF受容体(VEGFR-2)と複合体を形成し、VEGFシグナルを制御することを報告した。ところが現在までのところ生体内の血管におけるAGS8の生理学的意義は明らかでない。そこで本研究では、脈絡膜血管内皮細胞におけるAGS8の意義の解明、およびAGS8発現の制御を目指した。まず、脈絡膜血管内皮細胞由来の培養細胞RF6Aにおいて、siRNAによるAGS8のknockdownを行なった。その結果、VEGFが誘導するRF6A細胞の増殖、細胞移動、管腔形成が抑制されるとともに、VEGF2型受容体(VEGFR-2)リン酸化の抑制が認められた。このことから、脈絡膜血管内皮細胞でのVEGFシグナル伝達におけるAGS8の重要性が示唆された。次に我々は光凝固レーザー照射によって、マウス脈絡膜に血管新生の誘導を行った。同様に、ex vivoマウス脈絡膜片培養において、VEGFが誘導する脈絡膜内皮細胞の管腔形成能は、AGS8 knockdownによって有意に抑制された。