hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
子どものいじめと学級集団の構造に関する実証的研究

これまでのいじめ研究は、たとえば「いじめっ子」の特性といったように、個人的レベルに集中していた。いまのいじめ行為が「集団いじめ」である現実を考えると、集団レベルでのいじめ問題研究が必要であると考えられる。今回は、こうした問題意識に基づいて、主としてアンケート調査の結果から、子どもたちのいじめ行為を総合的に分析した。アンケート調査は、子ども用調査として小・中・高校生をすべて対象にした。また、教師用調査として、小・中学校教師を対象とした。また、アンケート調査と並行して、子どもたちのクラス内の人間関係を把握するために、シソオメトリーによる調査も実施した。これに加えて、小・中学校教師を対象にして、インタビュー調査も行なった。こうした調査研究から得られたいくつかの結論は、以下のようなものであった。いじめが問題にされ、学校現場ではそれなりの取り組みがされているにもかかわらず、小・中・高校生ともいじめ行為はかなり生じている。その特徴は、多くが「集団いじめ」であるうえ、長期におよんでいるものが少なくない。したがって、手口が以前にもまして陰湿、過激であることがうかがえる。また、そのいじめの多くはクラス内で発生しており、しかもいじめ行為が生じている場合は教室に集中している。このことから考えると、いじめには学級集団の在り方、とくに教師の学級経営の在り方と密接に関係していることが明らかでる。たとえば、班競争をさせたり、班を単位にして処罰を加えている(連帯責任)クラスほど、特定の子どもをほかの子どもたちが排除したり、いじめるといったことがよく生じている。これ以外にも、教師の無意識的な言動がいじめ行為を誘発していることもある。事実、教師の言動がいじめに関係があると感じている教師は全体の4割をはるかにこえている。
量子ホール素子を利用したテラヘルツ光近接場顕微鏡開発とそれを用いた物性研究

本研究は、顕微鏡装置開発と、それを利用した基礎的物性及びその背後の物理機構の解明である。装置開発においては、強磁場下電気伝導及びSTM測定用超高真空装置を用い、電気伝導度の温度依存(室温からヘリウム温度)および磁場依存(0テスラから7テスラまで)を測定できることを確認した。次に、昨年度着手した測定試料であるCo吸着Si(111)√7×√3-In表面の電気伝導を統計的に測定した。その結果、Co吸着前後で、電気伝導の温度依存性測定に顕著な違いが存在することを発見した。Co吸着前は通常の金属的な温度依存性を示すのに対し、少量(0.0003ML程度)吸着後は、80K程度以下の温度で抵抗が極小を示し、その後温度低下に伴い対数的な温度依存性を示すことが分かった。さらに吸着量を0.0013MLまで増加すると、温度低下に対して抵抗増大を示したのち、抵抗極大を示すことが観測された。さらに、その抵抗極大の温度は、Co吸着子の被覆率依存性に比例することが分かった。これらの振る舞いは、近藤効果とRKKY相互作用の競合に深く関係することが示唆される。そこで、Si(111)√7×√3-In表面が内因的にdisorderの多い金属表面であることに注目して、disorderにより増大される近藤抵抗を計算し、理論適用可能範囲では実験結果とよく一致することが分かった。さらに、よりCoが高被覆率である試料では、低被覆率試料とは異なり、室温から抵抗が増大することが分かった。これらは金属的な温度依存性を示したのち、対数的な抵抗増大を示すことが観測された。この現象は弱局在や電子間相互作用の効果では説明できず、非常にdisorderの強い系で起こると知られている近藤likeな抵抗であることが分かった。このような表面系における近藤効果やRKKY相互作用の研究を表面敏感電気伝導測定を用いて研究した例は初めてである。本研究は、顕微鏡装置開発と、それを利用した基礎的物性の解明である。装置開発においては、今年度納入された、強磁場下電気伝導及びSTM測定用超高真空装置に組み込む予定であり、今後電気伝導測定用回路の製作を行う。また、近接場達成のために、金属針の設計及び製作が重要であるが、現在電解エッチングにより金属針を製作し、STM用としては問題なく動作することを確認している。次に、測定試料については、従来のGaAs/AIGaAsヘテロ構造以外にも、金属超薄膜、表面超構造に対象を広げるため、今年度はSiを基板とした表面超構造の基礎的構造及び電子状態を調べた。具体的には、以下の二つに集約できる。1.Si(111)7x7表面にNaを吸着することで7x7表面状態s1が消失することを利用して、純粋な7x7表面のs1バンドによる電気伝導度を測定した。さらに、MottのHopping理論にあてはめ、Siadatom間のホッピングで非常によく説明できることを明らかにした。2.Agをシリコン基板上に加熱蒸着して得られるSi(111)√<3>×√<3>-Ag表面にMnを吸着した表面の、原子構造及び電子状態を走査型トンネル顕微鏡及び角度分解光電子分光で調べた。その結果、Mnを低温で少量吸着させたときには、単原子程度のMnが点在し、si(111)√<3>×√<3>-Ag表面の自由電子的な放物線バンドが分裂する様子が観測された。これは、Mnatom周りに束縛された局在状態と混成したためと考えられるが、現在RKKY相互作用が下地の放物線バンドにどの程度変調を与えるかを計算中である。上記の成果は、1.2.いずれも学会及び国際会議で発表を行い、1.は現在投稿論文準備中である。装置開発においては、昨年度納入された、強磁揚下電気伝導及びSTM測定用超高真空装置に組み込める電気伝導測定用の針をテストし、電気伝導度の温度依存を測定できることを確認した。現在は、超高真空対応強磁場下電気伝導の予備測定め段階であり、今後、前年度試作した近接場達成のための金属針の導入を進める予定である。次に、測定試料については、従来のGaAs/AIGaAsヘテロ構造以外にも、表面超構造等に対象を広げるため、昨年度に引き続き、Siを基板とした表面超構造の基礎的構造及び電子状態を光電子分光等により調べた。特に、昨年度に基礎物性を調べた二次元電子ガス表面(Si(111)√3×√3-Ag表面)にMnを吸着した系の磁性情報を得るため、今年度は高エネルギー加速器研究機構の軌道放射光施設で、磁気円二色性測定に取り組んだ。試料ホルダー等の作成・試料移送機構の組立て、などの装置立ち上げを行い、150K,0.2Tのもとで測定可能な装置を立ち上げ、現在予備データを取得した段階である。さらに、今年度は二次元電子ガス表面、Si(111)√7×√3-In表面にCoを吸着した表面の電気伝導度め温度依存性を測定し、15K以下で特徴的な抵抗の増大を観測した。今後、系統的なデータをとり、伝導機構の考察を進める。

また、今年度は前年度に測走した、Si(111)7×7表面電気伝導度について理論計算と比較しながら考察を深め、やはりバンド描像では説明できないことを見出した。この結果は論文にまとめ、現在投稿中である。また、今年度は前年度取り組んだ、GeSnナノドットの量子サイズ効果の論文が出版された。さらに、Mn/Si(111)√3×√3-Ag表面の成長機構をSTM観察した論文を現在投稿中である。本研究は、顕微鏡装置開発と、それを利用した基礎的物性及びその背後の物理機構の解明である。装置開発においては、強磁場下電気伝導及びSTM測定用超高真空装置を用い、電気伝導度の温度依存(室温からヘリウム温度)および磁場依存(0テスラから7テスラまで)を測定できることを確認した。次に、昨年度着手した測定試料であるCo吸着Si(111)√7×√3-In表面の電気伝導を統計的に測定した。その結果、Co吸着前後で、電気伝導の温度依存性測定に顕著な違いが存在することを発見した。Co吸着前は通常の金属的な温度依存性を示すのに対し、少量(0.0003ML程度)吸着後は、80K程度以下の温度で抵抗が極小を示し、その後温度低下に伴い対数的な温度依存性を示すことが分かった。さらに吸着量を0.0013MLまで増加すると、温度低下に対して抵抗増大を示したのち、抵抗極大を示すことが観測された。さらに、その抵抗極大の温度は、Co吸着子の被覆率依存性に比例することが分かった。これらの振る舞いは、近藤効果とRKKY相互作用の競合に深く関係することが示唆される。そこで、Si(111)√7×√3-In表面が内因的にdisorderの多い金属表面であることに注目して、disorderにより増大される近藤抵抗を計算し、理論適用可能範囲では実験結果とよく一致することが分かった。さらに、よりCoが高被覆率である試料では、低被覆率試料とは異なり、室温から抵抗が増大することが分かった。これらは金属的な温度依存性を示したのち、対数的な抵抗増大を示すことが観測された。この現象は弱局在や電子間相互作用の効果では説明できず、非常にdisorderの強い系で起こると知られている近藤likeな抵抗であることが分かった。このような表面系における近藤効果やRKKY相互作用の研究を表面敏感電気伝導測定を用いて研究した例は初めてである。
中皮腫における遺伝子異常検索:細胞診診断応用の可能性

【研究目的】悪性中皮腫の中でも、上皮型悪性胸膜中皮腫は胸水貯留を認めることが多く、胸水細胞診で腫瘍細胞が検出される頻度は約30%と報告されている。そのことからも、日常、我々細胞検査士は体腔液細胞診の中で的確に悪性中皮腫の細胞を拾い上げることが重要である。しかし、胸水中に出現する悪性中皮腫細胞は比較的核、細胞異型乏しく、クロマチン増加も少ないことから反応性中皮細胞との鑑別が容易ではない。また、免疫染色を用いた両者の鑑別についての報告もあるが、的確な鑑別は難しいと考えられている。そこで今回、両者の鑑別に近年、悪性中皮腫の遺伝子異常の一つとしてホモ接合性の9p21欠失の証明が有用であるという報告から、p16の免疫染色による蛋白発現の有無、Fluorescence in Situ Hybridization(FISH)を用いたホモ接合性の9p21欠失の証明を検討した。【研究方法】上皮型悪性胸膜中皮腫と診断された7症例の胸水細胞診標本と同一患者のセルブロック標本を用い、抗p16抗体の免疫細胞・組織化学染色、9p21欠失の証明に関してはFISHを用いおこなった。胸水細胞診標本は、細胞転写法にて細胞診標本を分割し、セルブロック同様に両手法を用い検討した。さらに、悪性中皮腫細胞像の遺伝子異常と特異的形態像を比較検討した。【研究成果】抗p16抗体の免疫染色については細胞転写法、セルブロック法ともに安定した結果を得ることができた。しかし、細胞転写法を用いたFISHでは安定した結果が得られず、セルブロックを用いた手法のみでホモ接合性欠失の証明を確認することができた。ホモ接合性の9p21欠失の証明により中皮腫患者の予後を推測が可能であるとの報告もあり、今回検討した両者の手法による遺伝子異常の検索により細胞形態学のみでは困難であった患者の予後を推測の可能性も期待できる。また、遺伝子異常と中皮腫細胞の形態を探ることを目的とし、細胞転写法を用いたFISHを検討したが、安定した結果(シグナル)が得られず、中皮腫遺伝子異常の特徴的形態変化については検証できなかった。
タイ北部を中心とした学校における環境教育の実態調査と体験型環境学習の導入・実践

これまでの研究成果を基に、2004年8月に、タイ北部の教員を対象に環境教育ワークショップをチェンマイ大学で開催した。水環境を素材とした環境学習は、重要であるとの認識は高いが実践活動は少ないという実態が明らかになった。ワークショップ参加教員は、河川調査の生物学的・化学的モニタリングの手法の研修を受け、教員が所属する学校がパイロット校となり、本研究は開始された。その後、3ヵ年にわたり、パイロット校の教員と研究者が一同に会し、環境教育への体験学習の導入・実践について検討を重ねた。また、いくつかのパイロット校を全員で訪問し、教育現場で実践活動の視察や研究会をもった。子どもたちが参加して行うプログラム(水路マップ作り、簡単な水生昆虫・藻類・水質の調査)が環境学習に有効であることを確認した。そして、生物学的・化学的モニタリングのためのガイドブック作成のニーズが明らかになり、タイ北部のピン川をはじめとする多くの河川.で活用できるガイドブックを作成した。試供品を作った後、教育現場での使用に基づいた意見を聞きながら改善を加え完成させた。隣国のカンボジアでもワークショップを開き、カンボジアにおける環境教育の進展について討議した。その中で、本研究で検討してきた子どもたちが参加する体験学習はカンボジアにおいても有効であるという感触を得た。今後、タイおよび周辺の東南アジア諸国に体験型環境学習を導入し、環境教育の進展に有効な方法論について研究を継続する予定である。これまでに行ってきたタイ北部における環境教育・環境科学研究の総括をし、その結果を踏まえ、2004年8月に、タイ北部・ピン川流域の小・中・高等学校から募集あるいは依頼によって選んだ学校の教員を対象に、環境教育ワークショップ「Workshop on "The Use of Biological and Chemical Monitoring Technique as a Tool for Aquatic Environmental Education in School in Northern Thailand"」を開催した。10校から21名の教員が参加した。本ワークショップでは、研究代表者・分担者等による環境教育の理念・方法論および実践事例のプレゼンテーションだけでなく、参加教員が総合的に水環境調査や水生生物調査ができるようになることに重点をおいて実習およびフィールドワークを取り入れた。参加者から本プログラムについて高い評価を得た。さらに、アンケート調査による環境教育実態調査を始めるとともに、次年度の課題について議論した結果、参加校が引き続き本研究に参加することになり学校周辺の水路マップを児童・生徒と一緒に作ることにした。来年度は、現地を訪問し、各地域の水環境を素材とした環境教育の方法論について深める予定である。1月に海外共同研究者を招聘して開催した研究会で、参加学校は水路マップの作成に精力的に取り組んでいることを確認した。また、次年度にはタイだけでなく、カンボジアにおいても環境教育のワークショップを開くことを決め、対象者、規模、プログラムの作成等の準備に取りかかった。2004年8月にタイ・チェンマイで開催したワークショップ「Workshop on "The Use of Biological and Chemical Monitoring Techniqueasa Tool for Aquatic Environmental Education in School in Northern Thailand"」をきっかけに組織した11校のパイロット校の教員の参加を得て、2005年5月にチェンマイで会議を持ち、昨年度の計画の進捗状況を踏まえ、今年度の計画を作成した。また、予定通りパイロット校を訪問し、現地で行っている水路マップを基にした環境学習の方法について検討を行った。さらに、タイで進めている環境教育を周辺国・地域で応用可能かどうかを検証する目的で、カンボジアの首都プノンペンで2日間のワークショップを開催した。教育省、環境省、周辺地域の教育委員会の関係者等の参加を得ることができ、カンボジアにおける環境教育について一定の情報を得ると同時に、私たちが開発している方法論は将来カンボジアでも有効に活用できる感触を得た。研究代表者が再度3月にタイ・チェンマイで現地の海外共同研究者と会議を持ち、今年度の成果の確認と、本研究の目的の1つである教員と生徒のためのタイ北部の水環境調査ガイドブックの作成を進めた。また、2006年5月にパイロット校の教員と一緒にワークショップを開催し、タイの学校教育において、教科(理科、社会科、家庭科等)や特別プログラムの中で環境教育を進めるための方法論について検討することを計画した。

2006年5月に、本研究の実践活動の場である9校のパイロット校の教員に集まってもらい、2004、2005年度の2年間の環境教育の実践活動の報告会を開催し、学校で環境教育を進める上での促進要因と阻害要因について議論した。その中で予算上の課題は大きいが、各校における教員の工夫、地域の実情にあった方法の開発の重要性が理解できた。そして、今年度の活動計画を作ったが、作成中のガイドブックを試行的に活用し、ガイドブックのバージョンアップを大きな目標に設定した。10月には、研究協力者であるチェンマイ大学理学部のChitchol Phalaraksh講師を招聘し、各パイロット校における活動状況の報告を受けるとともに、ガイドブックについて最終検討を行った。12月には、パイロット校を訪問し、子ども達による河川調査の実態を視察した。これまでに検討してきたプログラムが十分に活かされ、作成しているガイドブックが大変有効であることを確かめた。2007年2月に、研究代表が再度、タイ北部・チェンマイを訪問し、現地の研究協力者と3年間の研究を総括するとともに最終報告書作成のための会合を持った。本研究を通して、ガイドブックが作成できたことと、これまでほとんどおこなわれてこなかった体験学習をべ一スにした環塊学習を導入できたことは大きな成果である。今後とも、タイおよび周辺の東南アジアに体験型環境学習を導入し、環境教育の進展に有効な方法論を研究する予定である。
自己組織化を利用した昆虫の鱗粉構造模倣低摩擦表面材料の開発

摩擦はエネルギーのロスや摩耗による損傷など現代社会において大きな課題である。それは生物にとっても同様であり、高摩擦状態では摩耗によって体表面が損傷してしまうため大きな問題となる。そこで我々は狭い空間に潜るようにして生息しているマダラシミに着目、その体表面を電子顕微鏡で観察し原子間力顕微鏡で摩擦力を測定したところ、マダラシミは全身を覆っている鱗片を利用して摩擦力を低減させているのではないかと示唆された。さらにマダラシミ鱗片は人工物と違いフェイルセーフも確保しており、様々な状況に対応できるようになっていた。これらの知見をもとに、自己組織化を利用することでマダラシミ鱗片模倣材料の作製にも成功した。平成26年度の研究目標は、昆虫体表面の摩擦測定を中心に、昆虫に合わせた摩擦測定系の準備、昆虫体表面の微細構造を模倣した高分子微細構造の作製であった。研究開始直後はサンプルのシミを安定して得られなかったことから、昆虫体表面の摩擦測定や摩擦測定系の準備に時間がかかった。しかし研究室で摩擦測定対象のマダラシミを飼育、増やすことに成功し、サンプルの安定採取が可能となったため、鱗粉表面の構造解析や摩擦測定が加速度的に行えるようになった。走査型電子顕微鏡による鱗粉表面を観察した結果、マダラシミの頭部においては鱗粉の周期が他の部分と比べて大きく、またその周期のばらつきも大きいことが明らかとなった。また尾に向かうにつれて周期は小さくなるとともに、ばらつき自体も小さくなって行った。さらに、新たに購入した原子間力顕微鏡で鱗粉表面の溝構造を詳細に解析したところ、鱗粉によって溝の深さや周期等が完全にランダムに形成していることが示唆された。今後は測定枚数を増やすことで、鱗粉の溝周期と深さにどのような関係があり、どのようにして形成しているかを調査して行く予定である。また、原子間力顕微鏡で粒径の異なる微小球プローブや針状プローブを用いて摩擦力を測定した結果、鱗粉が有ることで摩擦力に異方性が生じ、さらに鱗粉表面の溝構造の周期と微小球プローブの直径に応じて摩擦力が違ってくる結果が得られた。一方模倣材料の作製に関しては、自己組織化現象であるしわを利用した微細構造形成について十分な知見が集まってきたことから、今後は昆虫の摩擦力測定とともに、模倣材料の摩擦力測定を行い、それらを比較することで低摩擦材料の開発を目指して行くう予定である。またある程度成果が出てきたことから、本研究の成果は平成26年度に2件のポスター発表を行ったとともに、今後は論文としてまとめ、発表予定である。平成27年度の研究目標は、平成26年度に引き続き昆虫体表面、特に鱗片表面の摩擦力を原子間力顕微鏡を用いて測定することと、昆虫体表面の微細構造を模倣した高分子微細構造の作製および摩擦力の測定であった。前年度の成果であり、摩擦測定用のマダラシミを順調に飼育することができたため、微小球プローブによる摩擦力測定を十分に行うことができた。また北海道大学との共同研究により、自己相関関数を使った周期検出法を用いて鱗片表面の溝のばらつきを解析した結果、優位な差があることを情報科学的に証明した。これらの結果とマダラシミの生態や鱗片の利用方法等を良く知る昆虫学者との議論により、鱗片の機能や微細構造と摩擦の関係性を明らかにすることができたため、本研究成果は現在原著論文としてまとめ上げ、近日中に投稿予定である。またハイスピードカメラを用いることで、マダラシミがどの程度の速度で移動するかを明らかにした。この結果を受け、マダラシミ鱗片模倣材料がどの速度域で有効に働く可能性があるのか、その指針を得ることができた。さらにシュリンクフィルム表面にナノスケールの金属膜をスパッタリングすることで、表面に自己組織化リンクルを形成させることに成功した。今後はこれらの構造を金属表面に形成させ、摩擦力を測定することを目標に研究を行う予定である。また、摩擦・摩耗試験機(トライボギア)を立ち上げ、原子間力顕微鏡よりも大きな圧子および測定範囲で摩擦力を測定することが可能なことを確かめたため、作製した新規材料についてはこの摩擦力測定装置も用いて測定を行う予定である。本研究の成果は国際会議の口頭発表1件、ポスター発表1件、国内学会で口頭発表2件(内1件は招待講演)、ポスター発表2件を行い、情報の発信にも務めた。昆虫体表面、特に鱗片表面の摩擦力と微細構造の関係性に関しては十分な知見が得られ、原著論文としておおよそ完成し、後は最終チェックと投稿を残すのみではあるものの、平成27年度のもう一つの目標であった微細構造作製に関しては、加工に必要なシュリンクフィルムの入手に手間取り、マダラシミ鱗片表面の模倣材料作製を進めることができなかった。ただし、平成27年度末にシュリンクフィルムを数種類手に入れることができ、金属薄膜をスパッタリングすることでしわを形成させられることが確認できたため、今後は加速度的に模倣材料の作製を行うことが出来る状況にある。また他の研究課題において、無電解メッキによるニッケルリン皮膜の形成方法を確立したため、高分子表面の金属化も可能となった。さらに、溶液エッチングによる金属表面の微細加工方法についてもすでに確立しているため、今後はこれらの技術を利用し、早急に鱗片模倣材料を作製する予定である。摩擦力の測定に関しては、摩擦・摩耗試験機の立ち上げが完了しており、いつでも測定できる状態である。また、マダラシミの移動速度に関してもハイスピードカメラによって測定していることから、マダラシミ鱗片模倣材料の摩擦力測定条件についてもおおよその見込は立っていると言える。

平成28年度の研究目標は、シュリンクフィルム表面にナノスケールの金属膜をスパッタリングすることで形成可能な自己組織化リンクル構造を金属表面に転写し、マダラシミの模倣表面を作製、摩擦力を測定することであった。しかしながら他の研究者から、ワックスなどの分泌物による影響があるのではないか、マダラシミの表面物性をもっとしっかりと解析する必要がある、との指摘を受け、今一度詳細なマダラシミ鱗片の解析を行った。鱗片をクロロホルムやヘキサンで洗浄し、その前後の表面を赤外分光法や水滴の接触角を利用して測定した結果、洗浄の前後で赤外スペクトルや水滴の接触角に変化はなく、特にワックスなどは分泌していないことが明らかとなった。さらに、マダラシミはワックスなしでも微細構造のみで超撥水性を発現していることを確認した。これまでは鱗片表面に形成している溝構造の周期にのみ着目していたが、溝の深さや鱗片の大きさとの相関性についても調査を行なった。その結果、鱗片の溝の高さは根元から徐々に高くなり、鱗片の大きさが大きくなるほど比例して深くなっていることが明らかとなった。これらのことは生物がどのように鱗片を形成させているか、その重要な指針となると考えられる。さらに、マダラシミの表面にはゴミがあまり付着していないことにも着目した。微細構造上における付着防止機能を測定するための指標として海洋付着生物で付着による汚損が大きな問題となっているフジツボを、飼育しながら付着試験を行うための人工気象器を導入し実験系の構築を行った。本研究の成果は解説記事として1件、書籍で1編、国際会議の招待講演1件、ポスター発表1件、国内会議での口頭発表4件(うち招待講演2件、依頼講演2件)を行い、情報の発信にも務めた。マダラシミの鱗片に関して十分な知見を得ていたと考えていたが、発表の際に表面にワックスがあるのかどうか、また、溝構造の深さのばらつきはあるのかなど、さらに詳細な情報を得ることが必要であると指摘されたため、模倣構造を作製する前に再度詳細な解析を行う必要が出てしまった。詳細な解析は終えられたものの、模倣構造の作製については後回しになってしまったため、従来の予定からすると研究の進捗は遅れてしまっている。ただし、生物のマルチファンクション性を確かめるため、機能の一つとして物質の付着防止機能に着目、付着防止機能を測る指標として、マダラシミには直接関係はしていないものの、社会的にその付着防止が必要とされている海洋付着生物の珪藻やフジツボなどを、すでに研究室内で飼育する方法が確立しており、さらにこれらの研究に関しては共同研究者との間で議論することが可能なネットワークも形成しているため、加速度的に成果を上げられると期待される。平成28年度までにマダラシミの鱗片に関してその表面の構造的特徴、ワックスなどを分泌しているか、摩擦力と微細構造の関係性について十分な知見が得られていたため、平成29年度には和書の1章として研究内容を執筆、出版された。その他にも洋書の1章としても脱稿しており、近日中に編集作業が終えられ出版される予定である。このように書籍として研究成果を発表するとともに原著論文としても成果をまとめ、投稿準備中である。
ヒストンメチル基転移酵素SUV39H1を含むヘテロクロマチン様複合体の構造解析

真核生物のゲノムDNAは、ヒストンタンパク質八量体にDNAが巻き付いたヌクレオソームを基本単位としてクロマチン構造を形成している。クロマチンはさらに高次に折り畳まれ、構造的・機能的に異なる区画を形成する。遺伝子を多く含むユークロマチン領域に対し、構成的ヘテロクロマチン領域は、リピート配列やトランスポゾン由来の配列を多く含み、ゲノムの安定性に寄与している。本研究では、構成的ヘテロクロマチン維持の基盤となる複合体を試験管内で再構成し、その立体構造を明らかにする。
Can Tokyo compete as Asia's finance hub?

東京はNYとロンドンのような国際金融のハブとして設立させられるのかというモデルの作成を目的とし、ロンドン・NY・上海・シンガポール・香港・シドニー・東京を比較する際に成果とコストのバランスを、考慮しつつ、2006年3月までに下記の成果に達成した:・国際・国内研究助手の(ア)雇用(イ)養成(ウ)と連携・レターヘッド・封筒・その他のような供給品の供給会社を探し、高質や低コストのバランスを掛け合った・東京・ロンドン・NY・上海・シンガポール・香港・シドニー・に活動を行っている企業のサンブルを決め、適当なメール・リストに関するデータを収集・購入・調査を行った・分類された独立変数・従属変数を分析するための質問表の発展・テストを配布し、検討した・層化した産業セクターから選択した日本内外の企業・海外の企業のサンプルに2万以上の質的・量的なアンケートに基づいた調査が実行された・収集したデータを入力し、予備モデルは作成された上記のタスクを勤勉に実行し、本プロジェクトに関するデータ収集は終了された。東京はNYとロンドンのような国際金融のハブとして設立させられるのかというモデルを構築するために予備研究は2005年3月まで行われていた。ロンドン・NY・上海・シンガポール・香港・シドニー・東京を比較するために効果とコストのバランスを守り、下記の予備研究が行われた:・国際・国内研究助手の1.雇用2.養成と3.連携・レターヘッド・封筒・その他のような供給品の供給会社を探し、高質や低コストのバランスを掛け合った・金融産業に属する日本国内・海外に活動を行っている企業のサンプルを決め、適当なメール・リストのデータの収集・購入・確認がされた・予備インタービューや結果に続くインタービューが行われた・分類された独立変数・従属変数に関する量的な質問表の発展・テスト・作成がされた・層化した産業セクターから選択した金融産業に属する日本内外の企業・海外の企業のサンプルに2万以上のアンケートに基づいた調査が実行された上記のタスクを勤勉に実行し、2005年の3月までに予備研究は終了された。それに基づき、初期の提案に従い2005年に研究を下記のステップで進める予定である。・初期アンケートの入力や分析・手に入れたデータに基づき、質問表の検証や変更・追求調査の実行・手に入れたデータの分析、計量的モデルの作成・要点の追求、研究結果の第二次データとの比較、作成したモデルの検証、追求分析・収集したデータを用い、国際専門基準に該当するトップレベルの国際雑誌記事や学術的なモノグラフを作成する予定である東京はNYとロンドンのような国際金融のハブとして設立させられるのかというモデルの作成を目的とし、ロンドン・NY・上海・シンガポール・香港・シドニー・東京を比較する際に成果とコストのバランスを、考慮しつつ、2006年3月までに下記の成果に達成した:・国際・国内研究助手の(ア)雇用(イ)養成(ウ)と連携・レターヘッド・封筒・その他のような供給品の供給会社を探し、高質や低コストのバランスを掛け合った・東京・ロンドン・NY・上海・シンガポール・香港・シドニー・に活動を行っている企業のサンプルを決め、適当なメール・リストに関するデータを収集・購入・調査を行った・分類された独立変数・従属変数を分析するための質問表の発展・テストを配布し、検討した・層化した産業セクターから選択した日本内外の企業・海外の企業のサンプルに2万以上の質的・量的なアンケートに基づいた調査が実行された・収集したデータを入力し、予備モデルは作成された上記のタスクを勤勉に実行し、本プロジェクトに関するデータ収集は終了された。研究結果発表の準備は、下記のステップで進める予定である。・入手したデータの分析、計量的モデルの作成・期待しなかった背景の検証や確認を第一次的・第二次的なデータの元で追求調査を行う。・要点の追求、研究結果の第二次データとの比較、作成したモデルの検証、追求分析・収集したデータを用い、国際専門基準に該当するトップレベルの国際雑誌記事や学術的なモノグラフを作成する予定である
FOXハンティングシステムを用いたダイズのファンクショナルゲノミックス研究

本研究は、シロイヌナズナ由来の機能遺伝子をランダムに導入した西洋ミヤコグサFOXSR系統を用いて、収量やバイオマスに関連する遺伝子の探索を行い、その機能を明らかにするとともに、作物への応用研究も視野に入れ、ダイズに候補遺伝子を導入し、その作用を検証した。アスパラギニルtRNAシンテターゼ(SYNC1)遺伝子は、上記候補遺伝子の一つであり、本遺伝子が導入されたFOXSR系統では、草丈、分枝節数の増加が認められ、組換えダイズにおいても同様の結果が得られた。また、SYNC1遺伝子の強発現は、ダイズ種子中のアミノ酸代謝にも影響を及ぼし、作物の収量増加やアミノ酸成分の改良に有効であることが考えられた。本研究は、遺伝子機能獲得型変異体の一つであるFOXハンティングシステム(Full-length over expressor gene hunting system)を用いて、シロイヌナズナ由来完全長cDNAアグロライブラリーを西洋ミヤコグサ由来のユニークな根培養系(スーパールート)へランダムに導入するファンクショナルゲノミックスの技術を確立するとともに、シロイヌナズナ由来の遺伝子がマメ科植物における根の成長と分化および根粒形成に対して影響をもたらす新規な遺伝子の探索と、それを用いて生産性を向上させる分子育種を展開するための基盤整備と、有用遺伝子をダイズへアグロバクテリウム法により再導入し、その機能性を確認するものである。これまで、得られた西洋ミヤコグサFOX系統130系統を用いて形態調査を行い、特に地上部および根の生長が旺盛な11系統を選抜している。本年度は、選抜した11系統の導入遺伝子のリシークエンスを行い、遺伝子を同定するとともに、特にダイズなどのマメ科作物の生産性を向上する遺伝子に焦点を絞り、遺伝子組換え用のベクターを作成した。導入遺伝子のシークエンスの結果、生長旺盛なFOX系統においてブラシノステロイド合成遺伝子や光合成関連遺伝子、アスパラギンtRNA合成酵素遺伝子などのバイオマス増加に関する遺伝子の導入が認められた。また、これらの遺伝子をアグロバクテリウム用バイナリーベクター(pB7WG2D )に挿入し、遺伝子組換え用のベクターを構築した。現在、構築したベクターを用いてダイズに形質転換を行っており、モデル植物で明らかとなった遺伝子について作物での機能性を検証していく。本研究は、遺伝子機能獲得型変異体の一つであるFOXハンティングシステム(Full-length over expressor gene hunting system)を用いて、シロイヌナズナ由来完全長cDNAアグロライブラリーを西洋ミヤコグサ由来のユニークな根培養系(スーパールート)へランダムに導入しするファンクショナルゲノミックスの技術を確立するとともに、シロイヌナズナ由来の遺伝子がマメ科植物における根の成長と分化および根粒形成に対して影響をもたらす新規な遺伝子の探索と、それを用いて生産性を向上させる分子育種を展開するための基盤整備と、有用遺伝子をダイズへアグロバクテリウム法により再導入し、その機能性を確認するものである。これまで西洋ミヤコグサFOX系統130系統を用いて形態調査を行い、特に地上部および根の生長が旺盛な11系統を選抜している。また、選抜した11系統の導入遺伝子についてリシークエンスを行ったところ、ブラシノステロイド合成遺伝子や光合成関連遺伝子、アスパラギニルtRNA合成遺伝子などのバイオマスに関する遺伝子の導入が確認された。次に、これらの遺伝子をアグロバクテリウム用バイナリーベクター(pB7WG2D)に挿入し、ダイズに形質転換を行った。現在、形質転換を行ったダイズより、植物体を再分化しており、いくつかの形質転換体が得られている。当初計画していた形質転換体の作製も順調にいき、本年度研究はおおむね順調に進展している。本研究は、遺伝子機能獲得型変異体の一つであるFOXハンティングシステムを用いて、シロイヌナズナ由来完全長cDNAアグロライブラリーを西洋ミヤコグサ由来のユニークな根培養系(スーパールート)へランダムに導入しするファンクショナルゲノミックスの技術を確立するとともに、シロイヌナズナ由来の遺伝子がマメ科植物における根の成長と分化および根粒形成に対して影響をもたらす新規な遺伝子の探索と、それを用いて生産性を向上させる分子育種を展開するための基盤整備と、有用遺伝子をダイズへアグロバクテリウム法により再導入し、その機能性を確認するものである。H28年度は、H27年度に作出したアスパラギニルtRNA合成遺伝子(SYNC1遺伝子)が導入されたダイズ遺伝子組換え体について、導入遺伝子の強発現がダイズの形態および種子のアミノ酸組成に及ぼす影響について調査した。定量PCRにより、導入遺伝子の発現量を確認したところ、組換え体は非組換え体に比べ、4.7倍高い発現量であった。形態調査では、組換え体が分枝数、分枝節数が有意に高く、種子数も増加傾向を示した。アミノ酸含量はダイズの植物体および種子について分析し、植物体では、組換え体のアミノ成分が高い傾向を示し、特に、根において、その傾向が顕著に認められた。種子では、発芽種子で両系統間に有意差を示すアミノ酸が多く認められ、導入遺伝子の作用に関連するアスパラギン酸、アスパラギンなどのオキサロ酢酸群やアラニンとロイシン等を含むピルビン酸群の小計が組換え体で有意に高かった。また、アミノ酸成分の合計も同様の結果を示した。以上のことから、SYNC1遺伝子の強発現は、植物体の形態およびアミノ酸代謝に影響を及ぼし、作物の収量増加やアミノ酸成分の改良に有効であることが考えられる。本研究は、シロイヌナズナ由来の機能遺伝子をランダムに導入した西洋ミヤコグサFOXSR

系統を用いて、収量やバイオマスに関連する遺伝子の探索を行い、その機能を明らかにするとともに、作物への応用研究も視野に入れ、ダイズに候補遺伝子を導入し、その作用を検証した。アスパラギニルtRNAシンテターゼ(SYNC1)遺伝子は、上記候補遺伝子の一つであり、本遺伝子が導入されたFOXSR系統では、草丈、分枝節数の増加が認められ、組換えダイズにおいても同様の結果が得られた。また、SYNC1遺伝子の強発現は、ダイズ種子中のアミノ酸代謝にも影響を及ぼし、作物の収量増加やアミノ酸成分の改良に有効であることが考えられた。当初、計画していた生育旺盛な西洋ミヤコグサFOX系統の選抜およびバイオマス増加に関する候補遺伝子が挿入された遺伝子組換えベクターを構築することができ、本年度の研究はおおむね順調に進展している。現在、FOXハンティングシステムで明かとなった遺伝子について、代表的なマメ科作物であるダイズに形質転換を行っており、得られた形質転換体を用いて、該当遺伝子の作物での機能性および有用性を検証していく。植物遺伝育種学現在、構築したベクターを用いて、ダイズに形質転換を行っており、モデル植物で明らかとなった遺伝子について作物での機能性を検証していく。研究費の計画的な使用のため、次年度に繰り越した。次年度も計画的に使用する。
単一細胞の遺伝子解析による膵管内乳頭腫瘍の悪性度診断に関する研究

2.膵管内乳頭腫瘍の免疫組織学的解析1990年3月1996年4月までに当院外科ならびに関連施設で外科的に切除された膵管内乳頭腫瘍40例を対照とした。材料は全てホルマリン固定、パラフィン包埋切片を用いた。各病変における平均MIB-1 Labeling Index(LI)は,浸潤癌,非浸潤癌,腺腫,過形成でそれぞれ64.65±9.48、42.71±11.84、19.21±6.70、7.48±4.79であった。p53蛋白の発現は、DO-7,PAb1801ともに,浸潤癌10/12例(83.3%),非浸潤癌6/11例(54.5%),腺腫3/11例(27.3%)に見られ,過形成は全例陰性であった。本研究により、KI-67抗原標識率、p53蛋白の発現が膵管内乳頭腫瘍の悪性度と相関する事が明らかとなり、膵管内乳頭腫瘍の成立,進展に関与していることが示唆された。膵管内乳頭腫瘍に於けるアポトーシスとAgNORの発現について検討し、遺伝子解析を行った。平均AgNOR数は、浸潤癌>非浸潤癌>腺腫>過形成の順に高値を示し、各病変間に有意差が認められた。腫瘍細胞のアポトーシスの検索はTUNEL法で行った。TUNEL指数は浸潤癌2.675±1.225、非浸潤癌1.536±0.856、腺腫1.275±0.840、過形成0.500±0.074で、浸潤癌で有意に高値を示した。腫瘍細胞を単離、DNAを抽出、PCRで増幅し、遺伝子解析を行ったが、腫瘍細胞の単離の段階で他の細胞成分を完全に除去することが困難で十分な解析が行えなかった。従って、現在は、DNAを抽出後、DOP-PCR法により増幅した後、Comparative Genomic Hybridization(CGH)法を用いて染色体異常の検索を行っている。膵管内乳頭腫瘍は病理学的には過形成、腺腫、非浸潤癌、浸潤癌が含まれ、従来の組織形態学的診断では良悪性の診断は困難な事が多い。本研究の目的は免疫組織学的又分子生物学的手法により、膵管内乳頭腫瘍の悪性度診断をしようとするものである。本年度は自験例の膵管内乳頭腫瘍の全切除標本につき、連続切片を作成し、H&Eとともに、P-53及びKi-67の免疫組織染色を行い、解析した。1990年3月1996年4月までに当院外科ならびに関連施設で外科的に切除された膵管内乳頭腫瘍40例を対照とした。男性26例,女性14例で年齢平均は65.3才であった。H&E染色による組織学的診断では,過形成11例,腺腫9例,腺癌20例であった。腺癌のうち,間質浸潤は11例,リンパ節転移は2例に認められた。免疫組織染色はKi-67に対する抗体MIB-1,p53蛋白(mutant and wild type)に対する抗体DO-7及びPAb1801を1次抗体として、LSAB法で行った。

Ki-67陽性細胞の評価は,腫瘍細胞核1000個当たりのMIB-1 Labeling Index(LI)を算出し,p53蛋白の発現については,陰性(negative to sporadic positive)および陽性(focal,patchy,and diffuse positive)に分類し検討した。各病変における平均MIB-1LIは,浸潤癌,非浸潤癌,腺腫,過形成でそれぞれ64.65±9.48、42.71±11.84、19.21±6.70、7.48±4.79であった。p53蛋白の発現は,DO-7,PAb1801ともに,浸潤癌10/12例(83.3%),非浸潤癌6/11例(54.5%),腺腫3/11例(27.3%)に見られ,過形成は全例陰性であった。本研究により、Ki-67抗原標識率、p53蛋白の発現が膵管内乳頭腫瘍の悪性度と相関する事が明らかとなり、膵管内乳頭腫瘍の成立,進展に関与していることが示唆された。膵管内乳頭腫瘍は病理学的には過形成、腺腫、非浸潤癌、浸潤癌が含まれ、従来の組織形態学的診断では良悪性の診断は困難な事が多い。本研究の目的は免疫組織学的又分子生物学的手法により、膵管内乳頭腫瘍の悪性度診断をしようとするものである。平成9年度の免疫組織学的研究により、Ki-67抗原標識率、p53蛋白の発現が膵管内乳頭腫瘍の悪性度と相関する事が明らかとなり、膵管内乳頭腫瘍の成立,進展に関与していることが示唆された。平成10年度は膵管内乳頭腫瘍に於けるアポトーシスとAgNORの発現について検討し、遺伝子解析を行った。対象は外科的に切除された膵管内乳頭腫瘍46例である。組織学的には、腺癌23例、腺腫12例、過形成11例であった。平均AgNOR数は、浸潤癌>非浸潤癌>腺腫>過形成の順に高値を示し、各病変間に有意差が認められた。腫瘍細胞のアポトーシスの検索はTUNEL法で行った。TUNEL指数は浸潤癌2.675±1.225、非浸潤癌1.536±0.856,腺腫1.275±0.840、過形成0.500±0.074で、浸潤癌で有意に高値を示した。腫瘍細胞を単離、DNAを抽出、PCRで増幅し、遺伝子解析を行ったが、腫瘍細胞の単離の段階で他の細胞成分を完全に除去することが困難で十分な解析が行えなかった。従って、現在は,DNAを抽出後、DOP-PCR法により増幅した後,Comparative Genomic Hybridization(CGH)法を用いて染色体異常の検索を行っている。
fMRIを用いたワーキングメモリの加齢変化に影響を与える生理的要因の特定

視覚モダリティに焦点を当て、記銘情報の保持にかかわる神経基盤および相互神経連絡を明らかにするとともに、視覚情報を保持する際における脳活動の加齢変化をより正確にとらえる手法を確立することを試みた。電流源推定の結果から、視覚情報の短期的な保持に頭頂ー後頭間溝周辺が関わり、その賦活は記憶負荷量によって亢進することが確認された。またダイナミクス推定による視覚情報処理の時系列変化を視覚化することにより、背側ストリーム、腹側ストリームの明示化を行った。これらの結果はデータおよび手法の開発という点で脳活動推定技術に貢献するものである。加齢変化および個人差の一般化が今後の課題である。本年度は加齢研究に先立ち,若年者を対象とし,fMRIとMEGによる短期記憶課題遂行時の脳情報伝達を捕える手法およびその解析法の確立を行った。視覚的ワーキングメモリを求めるChangedetection paradigmを課題として用い,セットサイズとラテラリティの効果を調べた。また,再現性の検証のため,実験を二度行い(別日),二セットのデータを得た。VBMEG(Sato et al., 2004)を用いた信号源推定の結果,両日データともセットサイズの効果,ラテラリティの効果が頭頂ー後頭領域(IPS, IOS [BA] 7, 19, 39, 40)で見られた。得られた電流データを用いた重回帰分析によって,視覚的ワーキングメモリの処理モデルの作成を行った。その結果,右側のBA7,左側のBA19,両側のBA40によって課題成績が高い精度で予測できた。今後は聴覚刺激を用いて同様の実験を行い,モダリティ間の比較を行う。なお,いくつかの先行研究では,MEGの電流源推定の際,fMRIデータはその推定制度を向上させるとの報告があるが,本研究の結果から,必ずしもfMRIがMEGの電流源推定の精度を向上させるわけではなく,高次認知/知覚機能を要求する課題においては適さない可能性が示唆された。担当研究員の異動により使用機器,実施場所の変更があったが,研究の遂行上の変更はなく概ね順調に行われている。特に,研究の目的である「生理指標によるワーキングメモリの予測」は,時間分解能に優れるMEGを利用した方がより妥当性が高まると判断された。MEGの利用は当初の研究計画には含まれていなかったが,担当研究員の異動によって可能になった。本研究ではfMRIに加えMEGを中心に使用することとする。若年者の視覚刺激を保持する際に共通する脳ネットワークダイナミクスの個人解析を行い、視覚情報処理における背側ストリーム、腹側ストリームの存在を確認した。また、記憶負荷量(セットサイズ)の差によって頭頂および後頭の賦活が亢進することを示した。以上の結果を踏まえたうえで、視覚情報処理時における頭頂および後頭の賦活に着目した高齢者用ワーキングメモリの加齢変化検定プロトコルを作成し、若年者と高齢者とのパタンの差を吟味した。27年度は若年者における視覚的ワーキングメモリの予測モデルを作成し,その実験法,解析法のブラッシュアップを行った。28年度は聴覚刺激で同様の実験を行ったのち,高齢者でのモデル作成し,ワーキングメモリの加齢メカニズムの解明に取り組む。認知心理学研究を進めるうえで必要な物品の購入時期がずれた。計画に基づき購入を進める。
タイ肝吸虫感染による肝内胆管癌発生機序に関する研究

タイ東北地方の2つの湖で、巻貝及び魚における肝吸虫セルカリア及びメタセルカリアの感染率の調査を行ったところ、セルカリアは検出されなかったがメタセルカリアは検出された。これらのメタセルカリア(Ov)をハムスターに与え、肝内胆管癌の誘発実験を試みたところ、(1)Ov抽出粗抗原で免疫後、Ovを感染させ、発癌剤であるジメチルニトロソアミン(DMN)を与えたグループ(G7)及びOvを感染させ、DMNを与えたグループ(G6)の生存率が特に低いこと、(2)結節は他のグループにも少し認められたがG6及びG7に多く認められた。一方、肝臓組織の顕微鏡所見では、発癌剤であるDMNのみを与えたグループでは、投与後23週で30%に肝内胆管癌が発生していたが、事前にOvを感染させたグループでは100%に達した。また事前にOv抽出粗抗原で免疫したものでは制御から進展までいろいろな影響を与えた。Ov感染のみでは胆管の膨張、肝硬変がみられたが癌への進行は見られなかった。細胞外マトリックスのテネイシンの癌胎児性を免疫組織化学で調べたところ、膨張した胆管及び癌間質を取り巻く結合組織、また壊死性癌結節の基質枠に強く反応が現れていた。タイ人と日本人の肝内胆管癌の臨床病理学的比較検討も行なわれた。タイ患者には症状が現れたが日本の患者は無症状であった。腫瘍は日本人では34%が、タイ人では63%が右葉に形成されていた。組織所見では、胆管周囲繊維化や腺腫様過形成はタイ人にしばしばみられた。p53又はc-erbB-2タンパク質の発現には差は見られなかったがMIB1L.I.によって測定された増殖活性はタイの方が明らかに高値を示した。タイ東北地方に分布するOvはを3個所から採取し、r-DNAのITS2の領域の遺伝子配列を調べたところ全て同じ遺伝子配列であった。タイ東北地方農村はタイ肝吸虫の濃厚感染地域であり、一方この地域では肝内胆管癌の発生が極めて高率で、以前から両者の相関が指摘されている。本研究では肝内胆管癌発生と肝吸虫感染の実態調査を行うと共に、寄生虫感染による肝内胆管癌患者より得た癌化組織の病理的変化の特徴を明らかにする。またモデル実験動物を用いて、肝吸虫感染と発癌物質による胆管細胞の腫瘍化過程を病理学的に検討し、癌遺伝子の活性化を免疫組織化学的・分子遺伝学的解析を行って、タイ肝吸虫による肝内胆管癌発生誘導機序を解明するのが本研究の目的である。平成8年度における調査研究で以下の点が明らかになった。1.肝吸虫濃厚感染地域の中間宿主の貝類及び淡水魚の種類及びそれらの感染率を調査をしたところ、住民が食している淡水魚に特に肝吸虫のメタセルカリアの感染率が高いことが判明した。2.動物実験の基礎となる肝吸虫の実験室内飼育技術の確立のため、中間宿主貝の飼育・淡水魚への感染・動物及び人への感染形態であるメタセルカリアの回収などの技術を確立し、このメタセルカリアをハムスター与えると成虫にまで発育することが判明し、今後の実験感染が可能になった。3.肝吸虫感染によるタイ人肝内胆管癌患者組織及び結石が主な原因の(肝吸虫感染が原因ではない)

日本人肝内胆管癌患者組織の病理組織学的、及び免疫染色による癌遺伝子、癌抑制遺伝子蛋白の発現を比較すると、組織型に乳頭状腺癌を含む症例、p53強陽性例がタイ症例に多くみられたが、c-erbB-2蛋白発現には差がなかった。またMIB1L.I.による増殖活性もタイ症例が高かった。これらの結果は、疫学的背景の差による発癌に関与する癌関連遺伝子、癌発生部位の違いを示唆するものと考えている。タイ東北地方はタイ肝吸虫の濃厚感染地域であり、一方この地域では肝内胆管癌の発生が極めて高率で、以前から両者の相関が指摘されている。本研究では肝内胆管癌発生と肝吸虫感染の実態調査を行うと共に、寄生虫感染による肝内胆癌患者より得た癌化組織の病理的変化の特徴を明らかにする。また実験動物を用いて、肝吸虫感染と発癌物質による胆管細胞の腫瘍化過程を病理学的に検討し、癌遺伝子の活性化を免疫組織化学的・分子遺伝学的解析を行って、タイ肝吸虫による肝内胆管癌発生誘導機序を解明するのが本研究の目的である。平成9年度は平成8年度の調査結果に基づき、淡水魚から多数のメタセルカリアを検出し、それらをハムスターに与えて発癌実験を行なった。生後4週のハムスターに肝吸虫のPBS抽出液を注射して免疫し、ついで4週後に肝吸虫50匹を胃内に挿入し、さらに4週後から8週間化学発癌剤DMNを飲料水に混じてのませ、実験終了後26週で標本作成して、肝臓組織の変化を観察した(第1群)。肝吸虫とDMN投与(第2群)、肝吸虫投与(第3群)、無処置対照群(第4詳)を同時に作成した。それらの結果はつぎの通りである。第1詳;8例中2例に肉眼でわかる径約1cmの腫瘍、1例には顕微鏡で見える腫瘍があり、組織学的には細胆管癌である。また明らかな腫瘍形成のないものでも、細胆管の増生、周囲結合織の増生とリンパ球浸潤がかなりの程度に見られ、いろいろな程度に肝硬変が認められた。第2詳;17例中肉眼的腫瘍は2例、顕微鏡的に認められるものは1例であった。組織変化は基本的には第1群と同じであった。第3群;第1,2群と同様に肝吸虫の入っている胆管は拡張し、分厚い結合織に囲まれ、上皮は丈が高く分泌状であるが、細胆管の増生は殆ど見られない。第4群;概ね正常で1、2,3群のような組織の変化は見られない。以上は通常染色標本による結果であるが、細胞外マトリックスを始め各種の抗体を用いた免疫組織化学による解析、解剖時に肝臓から摘出したRNAについても順次解析する。平成10年度は9年度の結果ををふまえて肝吸虫のメタセル力リア(Ov)をハムスターに与え、肝内胆管癌の誘発実験を試みた。ハムスターはOv感染後12、26及び35週目に解剖されたが、(1)Ov抽出組抗原で免疫後、Ovを感染させ、発癌剤であるジメチルニトロソアミン(DMN)を与えたグループ(G7)及びOvを感染させ、DMNを与えたグループ(G6)の生存率が特に低いこと、(2)結節は他のグループにも少し認められたがG6及びG7グループに多く認められたことであった。一方、肝臓組織の顕微鏡所見では、発癌剤であるDMNのみを与えたグループでは、投与後23週で30%に肝内胆管癌が発生していたが、事前にOvを感染させたグループでは100%に達した。また、事前にOv抽出粗抗原で免疫したものでは制御から進展までいろいろな影響を与えた。Ov感染のみでは胆管の膨張、肝硬変がみられたが癌への進行は見られなかった。細胞外マトリックスのテネイシンの癌胎児性を免疫組織化学で調べたところ、膨張した胆管及び癌間質を取り巻く結合組織、また壊死性癌結節の基質枠に強く反応が現れていた。タイ人と日本人の肝内胆管癌の臨床病理学的比較検討も行なわれた。タイ患者には症状が現れたが日本の患者は無症状であった。
TALEの高いDNA配列認識特性を利用した遺伝子変異検査法の開発

TALEの高いDNA配列認識能を利用することで、遺伝子一塩基変異を識別する素子となると考え、一塩基変異が高頻度に生じるKRAS遺伝子をモデルとする検出系の構築を行った。KRAS遺伝子は大腸ガン治療の重要なバイオマーカーである。KRAS遺伝子の一塩基変異を検出するために、蛍光タンパク質YFPVenus(Venus)および発光タンパク質Renilla Luciferase(RLuc)を融合した2種類のTALEを調製し、生物発光共鳴エネルギー転移(BRET)を用いた新たな検出系の作製を行った。Golden Gate法を用いてKRAS遺伝子中の異なる塩基配列に結合する3種類のTALEを作製した。VenusをTALEのC末端に融合したTALE-Venus、RLucをTALEのC末端に融合したTALE-RLucをそれぞれ作製した。作製した融合タンパク質の発光特性および蛍光特性を検討した。rLucは、融合に伴う発光強度の低下とKcat値の低下がみられたが、BRETに充分な発光ドナー特性を示した。また、蛍光タンパク質は融合化による蛍光特性の損失が見られなかった。ターゲット遺伝子存在下において、調製した融合タンパク質をそれぞれ添加した後、発光基質を添加し発光特性を調べた。その結果、ターゲット配列を有する遺伝子において、明らかな蛍光が観測された。一方、一塩基異なる非ターゲット遺伝子においては、特異的な発光は観測されなかった。したがって、三者複合体形成条件において明らかなBRETを生じていることが示された。当初予定の複合タンパク質の合成に成功し、発光特性の損失もほとんどなかった。DNA、融合タンパク質の三者複合体の形成が確認され、BRETによると思われる特異蛍光も観測された。特異蛍光のS/N向上が必要であり、タンパク質間距離やBRETペアの検討を含めた最適化が必要であるTALEの高いDNA配列認識能を利用することで、遺伝子一塩基変異を識別する素子となると考え、一塩基変異が高頻度に生じるKRAS遺伝子をモデルとする検出系の構築を行った。特異蛍光のS/N向上が必要であり、タンパク質間距離やBRETペアの検討を含めた最適化が必要である