hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
植物シスタチンの抗感染効果の検証・工業生産・分子育種

オリザシスタチンは、申請者らが、コメの種子より精製した植物では最初のシスタチンである.オリガシスタチンの標的となるシステインプロテアーゼとして、コメ種子中に存在する内在性システインプロテアーゼ(オリザイン)に関しても、申請者らは、詳細に研究をし、既に報告している。しかし、オリザシスタチンの標的となるプロテアーゼは,内存性のものばかりではなく、外部から侵入してくる外敵に対する防御因子として働いている可能性も孝えられる。そこで、申請者らは、オリザシスタチンのcDNAを用いて、オリザシスタチンを大腸菌で発現させ、大量生産をして、コメの害虫であるRiptortus clavas(カメムシ)と、Sitophilus oryzae(コクゾウムシ)の餌にオリザシスタチンを加えたところ、有意にこれらの虫成長を抑制した。そこで、これらのムシに存在するシステインプロテアーゼを、オリザシスタチンが阻害し、ムシの成長を抑制した可能性が示唆されたので、申請者らは、コクゾウムシの消化管に存在するシステインプロテアーゼのクローニングを行い、オリザシスタチンの作用機作を探ることとした。クローニングは、当研究室でcDNAクローニングに成功したオリザイン(前出)をプローブとして、コクゾウムシのゲノムライブラリーを、スクリーニングして、システインプロテアーゼの活性トライアドであるヒスチジン、アスパラギン、システインの三残基をコードするクローンを得ることができた。現在、このクローンをもとに、コクゾウムシのcDNAライブラリーを、スクリーニング中であり、コクゾウムシのシステインプロテアーゼの解明は、間近になりつつある。植物シスタチンのうちコメ種のオリザシスタチンを供試し、ポリオウィルスに対するCytopathic effect(CPE)をしらべたところ、オリザシスタチン-Iおよび-IIは1nmol/ml以上の濃度でウィルスによる細胞破壊を抑え、抗ウィルス効果があることが判明した。また、N末端を29残基削ったオリザシスタチンは0.25nmol/ml以上の濃度で抗ウィルス効果を発揮した。一方、低分子のシステインプロテイナ-ゼインヒビタ-であるE-64は8μmol/mlの濃度でも阻害効果は観察されず、細胞透過性を高めるようにE-64を修飾したE-64-C、ロキシスタチンも同様に全く阻害効果を示さなかった。次に、CPEテストにおけるオリザシスタチンの抗ウィルス効果を数量的に検討するため、プラ-クアッセイを行った。オリザシスタチン無添加群で3.0×10^7PFUの時、オリザシスタチン-Iおよび-IIを4nmol/ml以上の濃度で添加したときは10^5PFUの桁になった。PFUが2桁下がることは一般に100%の阻害効果を有すると判定されるため、これ以上の濃度では100%の抗ウィルス効果を有すると判断される。また、N末端欠失オリザシスタチンについては1nmol/ml以上の濃度で100%の抗ウィルス活性を有することが判明した。E-64、E-64-C、ロキシスタチンはプラ-クアッセイでも活性は示さなかった。以上のように、オリザシスタチンが抗ウィルス効果を持つことが明らかになったが、ポリオ以外のウィルス(ヘルペスウィルス・ロタウィルス等)についても現在検討中である。オリザシスタチンは,申請者らがコメ種子より精製した植物では最初のシスタチンである。オリザシスタチンの標的となるシステインプロテアーゼとして,コメ種子中に存在する内在性システインプロテアーゼ(オリザイン)に関しても,申請者らは詳細に研究をし,既に報告している。しかし,オリザシスタチンの標的となるプロテアーゼは,内在性のものばかりではなく,外部から侵入してくる外敵に対する防御因子として働いている可能性も考えられる。

そこで,申請者らは.オリザシスタチンのcDNAを用いて,オリザシスタチンを大腸菌で発現させ,大量生産をし,コメの害虫であるRiptortus clavas(カメムシ)と.Sitophilus oryzae(コクゾウムシ)の餌にオリザシスタチンを加えたところ,有意にこれらの虫の成長を抑制した。そこで,これらのムシに存在するシステインプロテアーゼを,オリザシスタチンが阻害し,ムシの成長を抑制した可能性が示唆されたので,申請者らは,コクゾウムシの消化管に存在するシステインプロテアーゼのクローニングを行い,オリガシスタチンの作用機作を探ることとした。クローニングは,当研究室でcDNAクローニングに成功したオリザイン(前出)をプローブとして,コクゾウムシのゲノムライブラリーを,スクリーニングして,システインプロテアーゼの活性トライアドであるヒスチジン,アスパラギン,システインの三残基をコードするクローンを得ることができた。現在,このクローンをもとに、コクゾウムシのcDNAライブラリーをスクリーニング中であり,コクゾウムシのシステインプロテアーゼの解明は,間近になりつつある。
新規C末端特異的誘導体化によるプロテオミクス解析法の開発

タンパク質のC末端アミノ酸配列解析法の開発のために、本研究ではペプチドの選択的C末端誘導体化の反応条件を最適化した結果、簡単なアミド化において収率を平均60%以上にすることに成功した。この誘導体化と新規N末端標識に基づくC末端ペプチド単離法を組み合わせることで、C末端が翻訳後修飾されたペプチドのマトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法(MALDI-MS)によるアミノ酸配列解析を可能にした。初期のC末端標識法は、タンパク質のC末端カルボキシル基を活性エステルの形で求核剤と反応させる反応スキームを用いていた。そこで、アミノ基またはヒドラジノ基を求核性の反応基として含み、同時にマトリックス支援レーザー脱離/イオン化(MALDI)質量分析の検出感度を向上させるための安定な正電荷をもつ基も含む標識試薬が、この反応スキームに適切であると考えられる。実際、その条件を満たす試薬の一つとして、2-ヒドラジノイミダゾリン(Imz-NHNH_2)を用いて、いくつかのタンパク質についてC末端の標識とプロテアーゼ消化を行い、生成物のMALDI質量分析によりC末端ペプチド由来のピークを検出することができた。この成果は論文(Yamaguchi, M.et al.Anal.Chem.78,7861-7869(2006))に報告した通りである。しかし同時にこの反応の問題点もいくつか明らかになった。その一つは活性エステルを用いてもC末端標識の収率が低いことである。そのため、必ずしもすべてのタンパク質でC末端ペプチドのピークは検出できず、方法としての一般性に欠けることになる。第二に、標識の効率が低いと、C末端ペプチドのピークと他のピークを区別することが困難になる欠点がある。この問題は、例えば同位体標識した標識試薬によって、C末端ペプチドのピークに特徴的な形状を与えて解決することが可能であるが、次の第三の問題とともに解決するために、別の種類の標識試薬を探した。第三の問題とは、Imz-NHNH_2を標識したペプチドは比較的感度よく検出できるが、そのPSD(post source decay)スペクトルからアミノ酸配列を読み取ることが極めて困難な点である。そこで、C末端を活性化したタンパク質にヒドラジンを作用させて求核性を持つヒドラジドとした後、これに求電子剤を反応させて標識する改良法を開発した。平成19年度に実施した研究は、特に次の3点において著しい進展が見られた。1.極微量(1l0nmol)のペプチドのC末端修飾(アミド化及びヒドラジド化)反応条件の最適化を種々検討した結果、収率を60%以上にすることに成功した。これにより、質量分析の感度向上効果に依存していた修飾生成物の分析と反応の追跡が高速液体クロマトグラフィーを用いて定量的に行えるようになった。2.ペプチドのC末端に対する臭素(ほぼ1:1の天然同位体比の79Brと81Brからなる)を含む修飾試薬を開発し、反応生成物のアミノ酸配列がピークの特徴的な形状をもとに容易に解析できる明瞭な質量スペクトルが得られた。反応の収率を「1」の成果をもとに向上させれば実用化も見込まれる。3.本研究計画でタンパク質のC末端アミノ酸配列解析法が実現に向かって進展していることに関連して、既存のN末端アミノ酸配列解析法と組み合わせた新しい研究手法、Teminal Proteomics(末端プロテオミクス)を専門誌に投稿した総説(〔雑誌論文〕の4件目)の中で提唱した。すなわち、プロテオミクスの研究の基本である特定の細胞・組織・器官におけるタンパク質の網羅的解析を行うには多種、微量のタンパク質を迅速に同定、定量する必要があるが、そのためには従来のN末端アミノ酸配列解析のみでは不十分で、これに本研究課題の目指すC末端解析法を組み合わせることが最も効果的であることを指摘した。また、本研究の過程で新しい原理に基づくC末端アミノ酸配列解析法を着想し、既に実験を開始している。【内容】ペプチドの選択的C末端誘導体化の反応条件を最適化した結果、簡単なアミド化において収率を平均60%以上にすることに成功した。この誘導体化と新規N末端標識に基づくC末端ペプチド単離法を組み合わせることで、C末端が翻訳後修飾されたペプチドのマトリックス支援レーザー脱離イオン化質量分析法(MALDI-MS)によるアミノ酸配列解析も可能となった。これまで試みていたMALDI-MSシグナルの感度向上がC末端の代わりにN末端の標識で実現でき、C末端は最も簡単なメチルアミド化で標識に伴うC末端ペプチドの質量変化の検出が容易になったことがこの成功の鍵である。【意義】本研究の目的は、プロテオミクスの基本となるタンパク質の同定に有用なタンパク質のC末端解析法の開発である。平成20年度の研究成果はこの目的を達成するばかりでなく、当初の予定になかったC末端が翻訳後修飾されたタンパク質の同定と、修飾している化学種の解析にも対応できる分析法にまで発展した。C末端誘導体化の平均収率60%(10pmol)は高いとはいえないが、反応前後のペプチドのピークが同時に観測できるため、質量の変化の有無が容易に見分けられる利点がある。【重要性】

タンパク質のC末端アミノ酸配列解析に標準的な方法は未だに確立されていない。本研究はこの実現困難な方法の実用化に目処をつけると同時に、より困難なタンパク質のC末端における翻訳後修飾の同定にも威力を発揮することが期待される。すなわち、従来N末端やアミノ酸側鎖に比べてほとんど知られていなかったC末端における翻訳後修飾が、本研究で開発した方法により次々と発見される可能性があり.これによって生体内でのタンパク質の成熟過程の研究の進展が見込まれる。
飛躍型マルコフ過程の確率解析

マルコフ過程は粒子が時々刻々とランダムに状態空間を運動する様子を記述するが、その特徴づけの方法の1つにディリクレ形式が用いられる。最も典型的な例として、状態空間を連続に運動するブラウン運動がディリクレ積分で特徴づけられることが挙げられる。ディリクレ形式にポテンシャルによる摂動項を加えて得られるシュレディンガー形式は、粒子が状態空間を動くと同時に、その個数がランダムに増加・減少するような分枝マルコフ過程と特徴づけることができる。ポテンシャルが十分小さいときには、粒子数が時間無限大でも有限に収まるが(劣臨界的)、ある水準に達すると(臨界的)、粒子数が時間無限大で発散する。粒子数の増え方を知るうえで大きな役割を果たすのが、シュレディンガー形式のスペクトル関数である。研究代表者は、元のマルコフ過程が過渡的な対称安定過程であるときスペクトル関数の漸近評価を具体的に得ており、それはスペクトル関数の微分可能性を論じた先行研究を裏付ける結果であった。より詳しい設定を述べると以下の通りである。臨界的なポテンシャルμと、それとは別のポテンシャルνを考える。λを正の定数とするとき、μ+λνは優臨界的なポテンシャルである。優臨界的なポテンシャルでは粒子数が時間に対して指数関数的に増大し、臨界的なポテンシャルを加えたときは高々多項式のオーダーで増大する。スペクトル関数C(λ)は増大を表す指数の係数で特徴付けられており、C(0)=0である。λを正の方向から0に近づけるとC(λ)は0に収束するが、その漸近的な振る舞いを元のマルコフ過程の状態空間の次元・対称安定過程の指数及びポテンシャルμとνを用いた具体的な関数で確立した。本研究における当初の最も大きな目標は「臨界的なシュレディンガー形式における基本解の具体的挙動」である。この点に関しては、基本解の時間積分の漸近挙動が2017年10月にアクセプト・2019年3月に印刷済みとなった拙著(研究成果を参照)で確立されていること・更には基本解そのものの時間無限大での漸近挙動についても得られていることから、現時点では部分的に解決された状態である。先に述べた2018年度に得られた研究結果は単体で見ると本題から少し離れた周辺事項ではあるが、当初の目標を実現するためのヒントと十分になりうるものと考えられる。当初の目標である臨界的なシュレディンガー形式がもつ基本解の評価を得るための研究と同時に、そのヒントとなるような関連事項の研究についても鋭意進めていく予定である。後者のより具体的な内容としては、分枝マルコフ過程の解析・時間変更によるマルコフ過程の推移確率密度関数の解析などが挙げられる。当初の目標の解決方策にあたっての有力な手筋は複数考えているが、その1つを以下に述べる。臨界的なシュレディンガー形式は、適切に変換することでディリクレ形式にできるが、このディリクレ形式に対応するマルコフ過程では、2点間AとBを移動する頻度が2点間の距離ABのみならず、とある特定の点Oからの各々の距離OAとOBにも依存している。このため、Oを基準に動径方向と球面方向とに分けてマルコフ過程を記述することにより解析が進められるものと思われる。研究を進めるにあたっての情報収集は、シンポジウムや研究会に自ら出向いて行うのみならず、研究代表者が拠点としている南東北地域で研究会やセミナーを開催することでも行う予定である。マルコフ過程は粒子が時々刻々とランダムに状態空間を運動する様子を記述する。最も典型的な例は、状態空間をどの方向にも偏りない確率で連続に運動するブラウン運動があり、もう少し一般化したものは拡散型マルコフ過程と呼ばれる。対して、状態空間を不連続に運動するマルコフ過程は飛躍型と呼ばれ、私が主たる研究対象としているα-対称安定過程(ここでαは2未満の正の数)はその代表例である。一般にマルコフ過程の性質を論じる上で、決められた時間で2点間を移動する頻度を表す推移確率密度関数は大きな役割を果たす。推移確率密度関数はマルコフ過程と対応する作用素を含む時間発展の方程式の基本解と同義であり、次元がdのユークリッド空間を状態空間とするα-対称安定過程の場合は、作用素がラプラシアンの小数乗で表されることから基本解の振る舞いはよく知られている。これを踏まえて私は、過渡的なα-対称安定過程(dがαよりも大きい)の枠組みで、作用素にポテンシャルを付加した際の基本解について、付加する前のそれと比較する研究を行ってきている。直観的には、ポテンシャルが「十分小さい」ときには、付加する前と後で基本解の振る舞いに大きな変化が見られず、その閾値を超えると全く異なる振る舞いをすると考えられる。その直感は正しく、ポテンシャルが「十分小さい」ことを判断する基準は、マルコフ過程に対応するディリクレ形式との比較によって得られる。ポテンシャルの小ささが満たされなくなる閾値のとき、ポテンシャルは臨界的であるという。臨界的なポテンシャルを付加した際の基本解の振る舞いが付加する前とどのように異なるのか、具体的な評価式で立証するべく現在、研究を進めている。現時点では、臨界的なポテンシャルを付加した際の基本解がもつ時間無限大での振る舞いが得られている。それは状態空間の次元dとマルコフ過程の次数αの比、d/αに依存した減衰であり、場合分けは「1<d/α<2」・「d/α=2」・「d/α>2」の3通りでなされる。

尚、一般にポテンシャルを付加した際の基本解そのものはマルコフ過程の推移確率密度関数になるわけではないが、基底状態と呼ばれる適切な関数で重みを付けることにより、基底状態で重みがついた空間におけるマルコフ過程(以下、変換後のマルコフ過程という)の推移確率密度関数が得られる。特にd/α≦2の場合は変換後のマルコフ過程が零再帰的であることが知られていたが、その推移確率密度関数が0に収束する具体的な様子が得られている。以上の結果は元のマルコフ過程がブラウン運動(α=2である対称安定過程)の場合にも適用できる。元のマルコフ過程が3次元ユークリッド空間上のブラウン運動のときには、基本解の評価が全ての時刻と2点間について確立した先行研究が2000年代後半にあり、本結果はそれを裏付けることになった。また、3次元ブラウン運動が含まれる1<d/α<2の枠組みにおいて、変換後のマルコフ過程を考慮した場合、重み付けられた空間における球の体積増大度は半径が十分大きいならば(2αーd)乗で得られる。勿論2αーdは整数になるとは限らないが、もしこれを状態空間の「次元」と捉えた場合には、少なくとも時間無限大での振る舞いについては「(2αーd)次元空間上のα-対称安定過程」のそれと同一視できそうである。マルコフ過程は粒子が時々刻々とランダムに状態空間を運動する様子を記述するが、その特徴づけの方法の1つにディリクレ形式が用いられる。最も典型的な例として、状態空間を連続に運動するブラウン運動がディリクレ積分で特徴づけられることが挙げられる。ディリクレ形式にポテンシャルによる摂動項を加えて得られるシュレディンガー形式は、粒子が状態空間を動くと同時に、その個数がランダムに増加・減少するような分枝マルコフ過程と特徴づけることができる。ポテンシャルが十分小さいときには、粒子数が時間無限大でも有限に収まるが(劣臨界的)、ある水準に達すると(臨界的)、粒子数が時間無限大で発散する。粒子数の増え方を知るうえで大きな役割を果たすのが、シュレディンガー形式のスペクトル関数である。研究代表者は、元のマルコフ過程が過渡的な対称安定過程であるときスペクトル関数の漸近評価を具体的に得ており、それはスペクトル関数の微分可能性を論じた先行研究を裏付ける結果であった。より詳しい設定を述べると以下の通りである。臨界的なポテンシャルμと、それとは別のポテンシャルνを考える。λを正の定数とするとき、μ+λνは優臨界的なポテンシャルである。優臨界的なポテンシャルでは粒子数が時間に対して指数関数的に増大し、臨界的なポテンシャルを加えたときは高々多項式のオーダーで増大する。スペクトル関数C(λ)は増大を表す指数の係数で特徴付けられており、C(0)=0である。λを正の方向から0に近づけるとC(λ)は0に収束するが、その漸近的な振る舞いを元のマルコフ過程の状態空間の次元・対称安定過程の指数及びポテンシャルμとνを用いた具体的な関数で確立した。本研究における当初の最も大きな目標は「臨界的なシュレディンガー形式における基本解の具体的挙動」である。この点に関しては、基本解の時間積分の漸近挙動が2017年10月にアクセプト・2019年3月に印刷済みとなった拙著(研究成果を参照)で確立されていること・更には基本解そのものの時間無限大での漸近挙動についても得られていることから、現時点では部分的に解決された状態である。
心筋梗塞におけるプロスタノイドの役割解明とその治療への応用

プロスタグランジンとトロンボキサンより成るプロスタノイドは、アラキドン酸よりシクロオキシゲナーゼによって変換され、生体内で多彩な作用を発揮する。これらの作用は、標的細胞上に発現しているそれぞれに特異的な受容体(DP,EP.FP,IP,TP)を介してなされる。また、EPにはさらに4つのサブタイプ(EP_1,EP_2,EP_3,EP_4)が存在する。PGE_2は、心臓の虚血-再灌流時に産生される。我々は、PGE_2受容体であるEP_1,EP_2,EP_3をそれぞれ欠損したマウスを用いて心臓の虚血-再灌流障害におけるPGE_2の役割について解析を行った。各マウスに対し、心臓の左冠動脈前下行枝の結紮を一定時間行い、その後再灌流を行った。その結果、EP_3欠損マウスにおいて、心臓の梗塞サイズが、野生型マウスに比較して有意に増大した。一方、EP_1,EP_2欠損マウスについては、野生型との違いを認められなかった。さらにPGE_2の作用が心臓に対する直接作用なのか間接作用なのか明らかにするために摘出灌流心を用いた解析を行った。心臓を摘出し、ランゲンドルフ式に灌流した後、一定時間灌流液を途絶し、その後再灌流を行った。結果、野生型マウス心臓と比較して、EP_3欠損マウス心臓において、再灌流後のdeveloped pressureは有意に低値を示し、心臓からの逸脱酵素であるクレアチンキナーゼの遊出量は有意に高かった。これらの結果は、虚血-再灌流時に産生される内因性PGE_2は、EP_3を介して直接的に心臓保護作用を発揮していることを示している。さらに選択的EP_3アゴニストを心筋梗塞モデル動物へ投与したところ、コントロール群に比較して心臓の梗塞サイズが低下した。これらの結果は、EP_3アゴニストの心筋梗塞治療薬としての可能性を示している。本研究の目的は、心筋梗塞におけるプロスタノイドの役割を解明し、その受容体作用薬の薬物治療への可能性を明らかにすることである。これまでに、4種類存在するPGE_2受容体の一つであるEP_4が、虚血心臓に対し保護作用を持つことを明らかにしてきた。今回、それ以外の3種類のEP受容体(EP_1,EP_2,EP_3)の役割について解析を行った。受容体欠損マウスを用い、急性心筋梗塞の動物モデルで解析を行ったところ、EP_3欠損マウスにおいて心臓の梗塞サイズが有意に増大していることが明らかになった。EP_1,EP_2の欠損マウスについては、野生型マウスと心臓の梗塞サイズに違いは認められず、その関与は低いと考えられた。また、選択的EP_3アゴニストを用いて、その作用を解析したところ、心臓の梗塞サイズを低下させた。さらに、PGE_2が心筋細胞、非心筋細胞のいずれに作用してその作用を発揮するのか、培養細胞を用いた解析を行った。EP_3は、Gタンパク質の中で細胞内cAMP量を抑制するG_iに共役している。よって、イソプロテレノールにより細胞内cAMP量を上昇させ、これを選択的EP_3アゴニストが抑制するかを調べた。しかし、EP_3アゴニストによる細胞内cAMP量の抑制は認められなかった。現在、培養条件、刺激条件を変えた検討を行っている。さらに、心機能評価のためにランゲンドルフ式灌流心を用い、マウス左心室内へカテーテルを入れ、左心室内圧を測定する系の確立をおこなった。来年度はこの系を用いた解析も行っていく。

本研究の目的は、心筋梗塞におけるプロスタノイドの役割を解明し、その受容体作用薬の薬物治療への可能性を明らかにすることである。これまでに、4種類存在するPGE_2受容体を1つずつ欠損させたマウスを用い、虚血心臓に対する各受容体の役割を解析してきた。その結果、内因性のPGE_2が以前から報告していたEP_4に加えてEP_3を介して、虚血心臓に対し保護作用を持つことが明らかとなった。今回、ランゲンドルフ式灌流心を用い、PGE_2-EP_3系の虚血心臓保護作用が心臓に対する直接作用であることをバルーンカテーテルを用いて心機能を測定することにより解析した。マウス左心室内ヘバルーンカテーテルを入れ、虚血-再灌流負荷を加えLVDP (Left Ventricular Developed Pressure)を測定したところ、EP_3欠損マウス心臓のLVDPの回復は、野生型と比較して有意に悪化していた。さらにPGE_2が心筋細胞、非心筋細胞のいずれに作用してその作用を発揮するのか、培養細胞を用いた解析を行った。EP_3は、Gタンパク質の中で細胞内cAMP量を抑制するGiに共役している。よって、cAMPを上げる薬物により細胞内cAMP量を上昇させ、これを選択的EP_3アゴニストが抑制するかを調べた。前年度は、EP_3アゴニストによる細胞内cAMP量の抑制は認められなかった。そこで、EP_3よりも発現量の多いEP_4への交叉反応を考え、EP_4欠損マウスより心筋細胞、非心筋細胞を単離培養し解析を行った。その結果、心筋細胞においてフォルスコリンによる細胞内cAMP量の上昇をEP_3アゴニストは、有意に抑制した。このことより、少なくともEP_3アゴニストが心筋細胞に作用することが確認できた。今回、ランゲンドルフ式灌流心を用い、PGE_2-EP_3系の虚血心臓保護作用が心臓に対する直接作用であることを心臓からのクレアチンキナーゼ(CK)遊出量を指標に解析した。心臓をランゲンドルフ式に灌流後、左心室内にバルーンカテーテルを留置した。そしてペーシングにより心拍数を一定にした後、灌流液を一定時間途絶後再開し、経時的に冠灌流液をサンプリングし、CK濃度を測定した。結果、野生型マウス心臓と比較してEP_3欠損マウス心臓からのCK遊出量は、有意に増大していた。つまり、PGE_2-EP_3系の虚血心臓保護作用の少なくとも一部は、心臓に対する直接作用であることが明らかとなった。さらに培養心線維芽細胞を用い、PGE_2が心線維芽細胞に作用するか解析した。EP_3は、Gタンパク質の中で細胞内cAMP量を抑制するG_iに共役している。そこでフォルスコリンによる細胞内cAMP量の上昇に対するEP_3アゴニストの作用を解析した。結果、EP_3アゴニストは、フォルスコリンによる細胞内cAMP量の上昇を抑制せず、かえって増加した。このことより心線維芽細胞においては、EP_3アゴニストによる刺激は、G_i以外にも存在する可能性が示された。
終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルの作成

本研究は、終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルの作成を目的としている。患者アウトカムの評価指標として「互いの了解」の評価を導き出した。患者アウトカム評価はリフレクションのサイクルを活用し、短期的患者アウトカムの評価と長期的患者アウトカムの評価を継続してすり合わせていくことで可能である。モデルはウィーデンバックの一致・不一致の原理、忍耐、自己拡張を理論的基盤に置き、看護師が常に自己の実践を評価・修正することで目標達成が可能である。患者と看護師の相互作用には、前提として呼吸苦緩和の技術および看護の意図が看護師に求められる。今後、モデルの検証が必要である。本研究課題は「終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルの作成」であり,平成25年度の研究計画として,1)看護実践指標を補強するための国内外の文献の収集,および2)筆者の先行研究である、関東圏で慢性呼吸器疾患患者のケアに従事する8名の看護師のインタビューより明らかとなった終末期にある慢性呼吸器疾患患者・家族と看護師の相互作用から「相互作用を発展・展開させる看護実践」を抽出する,とした.1)の文献収集において,次のことが分かった.すなわち,現在慢性呼吸器疾患患者とケア提供者の間に生じる不適切なコミュニケーションが,良いケアの最大の障壁となっており,看護師は,患者がどうありたいか,どうなれるのかについて相互作用を通じて言語的・非言語的に捉え,ケアを修正していくことが求められる.現在,相互作用に関する看護研究はアドバンス・ディレクティブに代表される医療措置に関する意思決定支援が中心となっていおり,相互作用の中で医療措置だけに限らない広範な患者の意思を捉えケアに反映していくことを可能にする看護技術について未だ探求されていない.しかしながら相互作用を明らかにすることは看護の全てを明らかにすることと等しく,本研究では終末期慢性呼吸器疾患患者への看護実践に特有な概念を中心に設けることとした.文献検討の結果,一つのアイデアとして,相互作用を発展・展開させる患者と看護師の「合意形成」現象に着目することが有益である結論づけられた.2)では1)で設定した「合意形成」現象における看護実践の抽出に至らず,来年度に持ち越して行う.本研究の目的は、終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルの作成としている。この目的を達成するために、平成26年度では、昨年度から引き続き慢性呼吸器疾患患者とその介護者への相互作用看護実践モデルづくりを行った。モデルの作成にあたり今年度の前期には、患者アウトカムを評価する方法として「了解」の概念に着目し、枠組みの開発に着手した。患者アウトカム評価の視点をなぜ「了解」で評価することにしたのかは、相互作用は1回きりのものであり、それは関わる者両者のプロセスであることから、アウトカムがでていない経過段階から看護の方向性がこれで良いのか評価を与えていく必要があると考えたからである。この時、了解とはフーバーマスのコミュニケーション的行為から看護師と患者もしくは介護者との間に生じた、あることがらに対して双方が感覚的もしくは言語的に一致した状態をさす、とした。つまり看護師が患者のニーズに合わない間違えたケアを振り返り評価できるものとして考案した。次に、相互作用看護実践モデルは、熟練看護師へのインタビューを質的帰納的に分析し、6つの諸相からなるものとして示した。6つの諸相は、「応答と追求」「近接と探求」「瞬間一致」「融解と取り成し」「誘因と伴走」「共同創出」であった。そして、それぞれの諸相に35で構成される看護師が行う対人援助方法を導き出した。了解による患者アウトカムの評価方法は、看護師と患者・介護者の相互作用を再分析し、カテゴリー化によって評価の視点を明らかにした。以上から、モデルは、「6つの諸相」、「対人援助方法」、「患者アウトカム評価」で構成するものとした。本年度はこれまでとして、平成27年度に実際にこのモデルを使用し検証を行う予定である。本研究の目的は,終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルの作成としている.この目的を果たすために平成27年度までにモデルの一つの構成要素として6つの諸相からなる35の「対人援助方法」を明らかにした.平成27年度では,「患者アウトカム評価」として「互いの了解」という鍵概念を据えて,看護師が自身の実践を患者・介護者に受け入れられているか評価する15の「互いの了解」の評価項目を作成した.「評価項目」には,〈通じ合い打ち解けたか〉や〈同意可能な妥協点をつくったか〉などを含んだ.モデルの作成に向けて,これらの6つの諸相からなる「対人援助方法」および「互いの了解」の評価項目を構成要素とした.「対人援助方法」は,その内容から,終末期にある慢性呼吸器疾患患者への身体的・心理的・社会的な側面に対する対人援助の実践的アプローチを示しているものと考えられた.「互いの了解」の評価項目は,身体的悪化が連続的に起こり,看護師からのケアや今後の方向性に対して患者・介護者が了解しにくい状況があるという終末期ケアの特性の中で,看護師が了解が得られていないことを知覚し,患者・介護者の了解が得られるように対人援助を改善させる効果があると考えられた.さらに平成27年度では,これらを関東圏3施設の看護師合計5名に,終末期にあると考えられる患者に対し「対人援助方法」および「互いの了解」の評価項目を使用してもらい,使用のしやすさや,使用しての効果についてデータ収集を行った.

終末期の患者を実際にケアしている看護師を研究対象者としているため協力者の確保に時間を要し,平成27年度はデータ収集を終えたところである.1年間の研究課題の期間延長を行い,平成28年度ではモデルの精錬・完成を行う予定である.データ収集において研究対象者の確保に時間を要した.これは研究対象者を3年以上の臨床経験を有する看護師でかつ現在終末期にあると考えられる慢性呼吸器疾患患者をケアしている者としたためである.平成27年度は研究協力施設数を増やし必要な研究対象者数の確保に務めたが,確保に時間を要し,結果全体のスケジュールが遅延した.本研究は、終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルの作成を目的としている。患者アウトカムの評価指標として「互いの了解」の評価を導き出した。患者アウトカム評価はリフレクションのサイクルを活用し、短期的患者アウトカムの評価と長期的患者アウトカムの評価を継続してすり合わせていくことで可能である。モデルはウィーデンバックの一致・不一致の原理、忍耐、自己拡張を理論的基盤に置き、看護師が常に自己の実践を評価・修正することで目標達成が可能である。患者と看護師の相互作用には、前提として呼吸苦緩和の技術および看護の意図が看護師に求められる。今後、モデルの検証が必要である。本研究の目的は、終末期慢性呼吸器疾患患者への患者アウトカム評価を含む相互作用看護実践モデルを作成することである。平成27年度までに、モデルの構成要素となる「対人援助方法」「患者アウトカム評価」、相互作用の「6つの諸相」を明らかにした。平成28年度はモデルの作成を行った。患者アウトカム評価は、患者のニーズが定まりにくい終末期の環境では指標を用いた絶対的評価が困難であるという立場から、その都度患者の反応から評価する仕組みとして、看護師が行う患者ー看護師間の「互いの了解」の評価項目を用いることにした。5名の臨床看護師に「対人援助方法」、「『互いの了解』の評価項目」をケアの場で使用してもらった。看護師の実践内容のインタビューからモデルの要素、関係、アウトカムを導き出し、モデル化した。結果、モデルは、看護師の【援助】が起点となり、患者の【反応】が起こり、その反応への違和感・不協和・不理解などの看護師の【知覚】が頼りとなり、かつ【「互いの了解」の評価】によって看護師に【気づき】が促され、【対人援助方法の参考例】に触発され、看護師に【援助の変化】が起こり、そして実際の援助によって患者の【反応】が引き起こされ、再び循環する円環を有する。アウトカムとして、患者側には、ニーズとケアの一致・ケア満足度の増加・孤立の防止・重要他者との関係の最適化・医療者との信頼の増加などがもたらされる。good deathの観点からもアウトカムが導かれることを一部確認した。看護師側には、看護目標の達成・問題の解決・膠着した援助関係の打開、援助の拡張などが得られ、実践知の獲得に貢献しうると考えられた。患者アウトカム評価として「互いの了解」という視点で相互作用を継続評価することは、患者視点のアウトカムに近づくことが事例研究にて確認した。現在のところまで順調にモデルが作成されている。
酸化グラフェンへのＶＵＶアシスト化学ドーピングによる発光機能発現の研究

本申請課題では,これまでに培った酸化グラフェン(GO)の真空紫外(VUV)光還元技術を踏まえて,GOの化学・光化学修飾により,GOの光電気特性を研究するとともに,GOの構造や電気伝導などに関する学術基盤に寄与することを目的とする.VUV光を基盤とするGOの微細加工・電子物性制御・機能化技術の開発およびデバイスへの応用と展開する.本年度は以下の2つの研究を遂行した.(1)光電気化学や光触媒反応において有望な基板材料であるシリコンは,酸化環境で容易に表面酸化膜が形成し,絶縁となる.この酸化を防止するために,GOを水素終端化シリコン(H-Si)基板表面に担持した.さらに,VUV光またはUV光を照射することでGOを還元した.XPS元素分析によりGOの光還元メカニズムを解明した.さらに,電流計測原子間力顕微鏡(CAFM)によりGO還元体(rGO)の被覆したH-Si領域が導電性を持つことを確認し,rGOの酸化防止効果を証明した.(2)グラフェン光検出デバイスは高速応答特性及び広い応答範囲を有するため,相関研究が盛んでいる.当研究では,グラフェンの代わりにrGOと金ナノ粒子(AuNPs)の複合体をチャネル材料として用い,AuNPsの局所表面プラズモン共鳴により,可視光領域での高いネガティヴ光応答性を有する光検出デバイスを開発した.以上の研究は論文2報投稿した.加えて,CAFMによるGO・rGOの電気特性評価についても論文1報投稿した.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。本課題では,これまでに培った酸化グラフェン(GO)の真空紫外(VUV)光還元技術を踏まえて,GOの化学・光化学修飾により,GOの発光機能を研究するとともに,GOの構造や発光,電気伝導などに関する学術基盤に寄与することを目的とする.それに加えて,VUV光パターニング手法を用いて,GO・酸化グラフェン還元体(rGO)機能分離型発光トランジスタ(LET)を構築し,GO・rGO二次元LETの実現を目指す.そのために,本年度は以下の3つの研究を遂行した.(1)GOのエレクトロルミネセンス発光を実現するための基礎として,GOのフォトルミネセンス及びそれに対応する電子構造の調査を行なった. KMnO4/H+の二次酸化によるGO蛍光の増強と波長の制御を実現した.GOは510 nmを中心ピークとして,400 nmから600 nmまで広い蛍光発光が見られた.さらに,酸化時間に依存した発光波長の短波長シフトも見られ,発光効率は0.5%から5%に上昇した.(2)GO・rGO二次元LETを作製するための高分解能VUV光パターニングを実現した.以前のVUVパターニング法では,長時間照射により,パターンの分解能が劣化する問題点があった.高還元度かつ高分解能を有するrGOパターンを作製するために,VUVエキシマーランプをコリメート化した.この手法を用いて,パターンの鮮明化を実現し,高いコントラストを有する1 / 3 μmのrGO/GOパターンの作製にも成功した.(3)GO・rGO二次元LETにおいて,ホール及び電子を効率的に輸送するのは重要である.そのために,チャネルの導電性を向上する必要がある.rGO面内の分断したπ電子構造を繋がるために,rGOを多層化することで,三次元共役伝導構造を築き,rGOの電気伝導性を向上した.電流計測原子間力顕微鏡(CAFM)を用いて,多層rGOの電気伝導率および局所電気特性を分析した.その結果,多層rGOの層間に三次元の電流パスが形成され,導電性の増強が見られた.本課題はGO・rGOを用い,従来のLETが有する発光効率や作製・修飾プロセス,キャリア移動度などの問題を克服し,高機能なLETを作製するための基盤技術を開発する.今年度は,GO/rGOの電気・電子物性を変調することで,発光機能及びキャリア輸送機能を持つGO・rGOの作製方法を開発する.それに加えて,GOの担持した基板上に発光とキャリア輸送機能を付加する領域のパターニング方法も開発することを目的とした.研究実績の概要に述べたとおり,高い蛍光発光効率を有する二次元GO材料の作製に成功した.このGO材料はチャネルの発光領域として応用できる.一方,GO試料の多層化とVUV光還元を組み合わせて,rGOの電気伝導性の向上も実現した.このような多層化rGO材料は今後LETのキャリア輸送領域として応用できる.さらに,VUVエキシマーランプのコリメート化により,従来のVUV光パターニング分解能は10 μmから1 μmに向上した.この手法を用いて,GO・rGOチャネルの微小化及びLET動作電圧の低減が期待できる.以上述べた三つの研究結果で,GO・rGO機能分離型LETデバイスを構築するための要素が揃えた.これまでの研究結果をまとめて,論文を二報投稿した,アメリカ真空学会(AVS),表面科学会,応用物理学会,関西表面技術フォーラムにおいて発表した.本申請課題では,これまでに培った酸化グラフェン(GO)の真空紫外(VUV)光還元技術を踏まえて,GOの化学・光化学修飾により,GOの光電気特性を研究するとともに,GOの構造や電気伝導などに関する学術基盤に寄与することを目的とする.VUV光を基盤とするGOの微細加工・電子物性制御・機能化技術の開発およびデバイスへの応用と展開する.本年度は以下の2つの研究を遂行した.

(1)光電気化学や光触媒反応において有望な基板材料であるシリコンは,酸化環境で容易に表面酸化膜が形成し,絶縁となる.この酸化を防止するために,GOを水素終端化シリコン(H-Si)基板表面に担持した.さらに,VUV光またはUV光を照射することでGOを還元した.XPS元素分析によりGOの光還元メカニズムを解明した.さらに,電流計測原子間力顕微鏡(CAFM)によりGO還元体(rGO)の被覆したH-Si領域が導電性を持つことを確認し,rGOの酸化防止効果を証明した.(2)グラフェン光検出デバイスは高速応答特性及び広い応答範囲を有するため,相関研究が盛んでいる.当研究では,グラフェンの代わりにrGOと金ナノ粒子(AuNPs)の複合体をチャネル材料として用い,AuNPsの局所表面プラズモン共鳴により,可視光領域での高いネガティヴ光応答性を有する光検出デバイスを開発した.以上の研究は論文2報投稿した.加えて,CAFMによるGO・rGOの電気特性評価についても論文1報投稿した.研究計画は当初の予定通り進捗しており,大きな研究計画の変更はない.KMnO4/H+二次酸化により作製した蛍光性GOを用いて,機能分離型LETの作製へ進む.改良したコリメートVUV光パターニング技術により,多層GO膜の面内に発光領域とキャリア輸送領域を描画する.電子・ホールの注入と輸送特性を向上するために,仕事関数の異なる金属電極をソースドレイン電極にそれぞれ使用することと,自己集積化単分子膜によるrGO輸送層の修飾も検討する.作製したトランジスタ特性および発光特性を評価することで,GO/rGO-LETの発光機能を探索する.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。
統語構造と意味解釈の関係について―日英語の焦点化辞の対照研究からのアプローチ

本研究の主な結論は以下の通りである。1.evenへの作用域付与は必要である。焦点化辞をそのままの位置で解釈する理論は誤りである。2.否定対極表現としてのevenは存在しない。3.焦点化辞そして恐らく数量詞への作用域付与の主たる役割をになうのは、統語規則ではなく意味解釈規則であるとした方がよい。統語構造上隠れた命題が「だけ」の作用域を提供する現象は、この説にとって証拠となる。4.「さえ」の作用域は、それを含む最小の時制文を越えない。5.evenおよびonlyは、PPおよびNPの中に自由に現れることができない。実例の観察から、この制約には多くの要因が働いていることが分かる。動的文法理論の見方によれば、この制約は主に阻止(blocking)の現象であり、それは、言語習得の初期段階で助動詞位置と焦点化辞の間に強い結びつきができることにより生じると考えることができる。焦点化辞の解釈の方法について。1. c統御の概念について作用域に関わる意味解釈においては、焦点化辞の場合を含め、一般にc統御の概念が重要な役割を果たす。このc統御の概念について、Epstein et al.(1998)は、その定義の仕方を派生的に行なうという根本的な改訂を提案した。筆者は、その書評(『月間言語』第28巻6月号pp.96-99)において、Epstein et alの提案は、問題提起及び考え方の方向性の点では高く評価できるが、その具体的な仮説自体は多くの欠陥を抱えていて受け入れ難いことを具体例を挙げて指摘した。2.作用域について焦点化辞の解釈においては、LFで作用域を表示するための非顕在的移動が関与するというのが一つの有力な仮説であるが、筆者は、口頭発表("Scope,LF,and Conceptual Structure"東京英語学談話会、上智大学、1999年12月18日)において、主として日本語のダケを例に用いて、その考え方が誤りであること、及び、より一般的にはLF部門の存在自体が疑わしいことを主張した。主な論点は以下の通りである。(1)ダケをLF移動したのでは意味的に誤った予測をする例が多数ある。(2)ダケの作用域を得るためには、概念構造を見る必要のある例が多数存在する。(3)英語の数量詞についても、(2)と同様の現象が観察される。(4)(1)-(3)からは、LF部門が存在しないというJackendoff(1997)の立場が支持される。(5)ダケとその焦点の相対的位置関係に関する制約を説明するためには、動的文法理論の観点に立って、日本語における基本的な焦点化構造からの派生を考えることが有用と思われる。焦点化辞の作用域について1.evenの作用域否定の文脈において、補文中のAux位置のevenの作用域が主文にまで及んでいるようにみえる例の扱いは長年の懸案である。Rooth(1985)は、この種のevenは否定対極表現であり、evenの作用域はあくまでも補文内であるとしている。これに対してはWilkinson(1996)の反論があり、筆者もWilkinsonと同様、evenに広い作用域を認めるべきという立場にたつ。但し、Roothが証拠としてあげているkeep...fromの例については、筆者が既に指摘したevenの間接的な解釈法(これには独立の根拠がある)で説明できるので、この例に関するWilkinsonの代案は不要であると考える。否定の文脈以外でAux位置のevenが補文を超えた作用域をとり得るかは重要な問題であるが、時のas節内のevenについては一見したところその種の例と見なし得る実例が存在する。as節の意味的・統語的分析との関係を詰める必要があるので、現時点ではRoothの分析に対する決定的な反証となるかどうかは言えないが、注目すべき事例である。2.サエの作用域サエについて、埋め込み時制文を超えて作用域を取り得るとする主張が一部にある(佐野(2000)等)。これが事実であれば、理論上重要な意味合いを持つが、事実判断に大きな疑問がある。提示された例文の、作用域に応じた含意の違いは、語用論的には少しも明瞭ではなく、十分な説得力があるとは言い難い。また、英語の場合、否定の文脈であれば、evenが時制文を超えた作用域を取る実例は容易に見つかるが、日本語の資料では、対応するサエの実例は筆者の調査では見出し得ない。

従って、上記の事実判断に関しては、理論上の分析の都合が無意識に影響を及ぼしている可能性、あるいは、母語話者としての本来の言語能力と、言語学者としての任意の作用域を計算する能力とが混同されている可能性に十分注意すべきである。(1)否定対極表現としてのevenについてRooth(1985)やHerburger(2000)が主張するように、普通のevenとは別に否定対極表現(NPI)としてのevenが存在するかどうかは、単に焦点化辞の分析に止まらず、作用域というものの扱い更には統語部門と意味解釈部門の関係につながる非常に重要な問題である。しかし、LF部門での移動に対する一般制約の性質が明らかではないこともあって、この問題は未だに決着がついていない。筆者は、否定の文脈に生起しているevenの実例を収集、精査することにより、NPIとしてのevenを認める説に立つと正しい意味解釈ができない事例が複数あることを発見した。これが正しければ、NPIとしてのevenは存在しないことになり、evenは広い作用域を取り得るという結論が不可避となる。次の課題は、作用域付与の操作として一般にどのような仕組みが適切かという問題である。(2)PPおよびNP内における英語の焦点化辞の生起に対する制約evenやonlyは、数種の例外を除くと、PPおよびNP内に生起できないということがこれまでに指摘されてきた(Taglicht(1984),Rooth(1985),Kayne(1998))。しかし、当該の環境におけるevenとonlyの生起をコーパスを用いて精査してみると、問題の制約は絶対的なものではなく、事情ははるかに複雑であることが判明した。当該の環境における焦点化辞の分布には、項対付加詞、焦点のタイプなど複数の要因が関係している可能性が高い。分布に対する制約が、絶対的なものではなく、強弱の程度を変えながら働くという事態は、現在主流の言語理論では非常に説明しにくい。動的文法の観点に従い、言語習得の段階を考慮に入れ、最も規範的な生起環境から分布が拡張するという見方が必要ではないかと考えられる。
新規水溶性タンタル錯体を利用した水溶液プロセスによるナノフォトセラミックスの合成

平成20年度は、(1)水溶化が著しく困難とされるタンタルの水溶化を可能とする新しい親水錯体化技術の開発を実施すると共に、(2)新規水溶性タンタル錯体を用いた水溶液プロセスにより様々なタンタル含有複合機能性セラミックスの合成と高機能化を目指した研究を実施した。具体的な成果は以下の通りである。(1)5塩化タンタルのメタノール溶液にアンモニア水を添加して得られるタンタル酸沈殿をアンモニア存在下、過酸化水素水で処理することで透明な水溶液を得た。この水溶液を更に乳酸で処理することにより、水に安定的に溶解する水溶性乳酸タンタル錯体を得ることに成功した。タンタルが溶解している水溶液から単結晶を育成することにより、その結晶構造も明らかにされた。この錯体はタンタル・オキソ・ペルオキソ・乳酸アンモニウムであることが判明した。(2)上記水溶性タンタル錯体を用い、水溶液プロセスにより、カリウムタンタルボレート系ならびにアルカリ金属タンタル酸系水分解光触媒の合成に成功した。カリウムタンタルボレート系酸化物は、ホウ素が有機化合物と化合し揮発性物質になるため、通常の有機系合成法では目的物質を得ることが困難になるが、水溶性タンタル錯体を用いた水溶液法では有機物の量を極小化できるため、目的物質を低温で単一相として合成することができた。低温合成の結果、比表面積の大きい粉体を得ることができ、水分解光触媒活性の向上に成功した。同様に、タンタル酸リチウムやタンタル酸ナトリウムなどの複合酸化物を水溶液プロセスにより簡単に合成することができ、高活性な水分解光触媒として供することに成功した。従来、タンタル含有セラミックスを溶液から合成するためには、高価なタンタルアルコキシドを用いた有機溶媒プロセスが必須であったが、本研究により、安全で環境負荷の低いタンタル含有セラミックス合成への道が切り開かれた点に意義がある。
色素性皮膚疾患の胚性医療学的インターベンション

培養表皮を用いて、外表皮色調異常患者の低侵襲で有効な治療法の確立を試みた。同意を得られた外表皮色調異常患者から、患部周囲正常部位とカラーマッチする部位の皮膚を採取した。醜形部位を薄削後に、培養された表皮シートを移植した。培養表皮は、ほぼ100%生着し、カラーマッチも良好であった。本技術は、既に先天性色素沈着(巨大母斑症)の患者に応用され、有用性が確認されている。同時に顔面の白斑患者に応用されている。外表皮奇型・醜形などの治療には、その範囲がホクロ程度であれば、簡単な縫縮術で治療が可能である。しかし巨大色素性母斑、広範囲色素脱失の場合には植皮が不可欠である。その際醜形の面積が大きいぼど植皮面積が広くなり、そのために必要な採取皮膚の面積も広くなる。従って、健常部位への侵襲が高く、二期的、三期的手術が必要であり、健常部位への侵襲からも患者のQOLを下げる事が大きな欠点である。又、レーザ治療なども考案されているが、広範囲には適応しにくい事、現状では極めて高価であるにも関わらず、その効果は一定しない事から、普及には程遠い現状にある。そこで、この外表皮の色調異常に伴う醜形治療に本講座が日本で始めて臨床応用した培養表皮を用いて、低侵襲で効率的で有効な治療法を確立することを目的にした。臨床試験部会の承認の下に同意書を得られた巨大母斑、広範囲色素脱失(白斑)症の患者より、約1cm2大の皮膚を採取した。得られた皮膚から、各種の酵素消化法を分離した表皮体性幹細胞を当教室が確立した培養法によって大量に拡大培養し、約2週間後に1200cm2程度の表皮幹細胞シートを得た。一方、全麻下1200cm2相当の醜形部を用手法によって薄削し、培養によって得られた表皮幹細胞シートを移植した。移植シートを固定するために、フィブリンジェルを移植創部に散布し、ゲル化を確認後に通常のドレッシングを試みた。術後7日目に包交を実施して、移植創部の表皮幹細胞シートの生着を目視観察した。巨大色素性母斑の患者の場合、色素細胞の分布が正常範囲よりも真皮深部に及ぶことがあり、移植表皮が生着しても再発する可能性もある。本年度実施した患者に於いて、移植7日後に感染を認めない患者については、90%以上の生着を認めた。また、その色調も正常に近づいた。特に色素脱失患者への適用は、極めて有効であった。現在経過を観察中である。本研究はこの外表皮の色調異常に伴う醜形治療に本講座が日本で初めて臨床応用した培養表皮を用いて、低侵襲で効率的で有効な治療法を確立する事を目的とした。生命倫理委員会の承認の下に同意書を得られた患者より、麻酔下無菌的に得られた剃毛後の正常皮膚(15/1000ミクロン)を、2mm角に細切し抗生物質(ペニシリン、カナマイシン、アンホテリシンB)含有PBS中で2回除菌した。その後、0.25%トリプシン含有DME培地(又はF-12培地)中で、酵素消化した。その後、この皮膚を10ng/mlコレラトキシン含有20%FBS加DME培地中で1時間、室温で撹拌し、分離細胞を得た。この細胞浮遊液を、1×10^4cell/cm^2になる様調節し、20%FBS加、10mg/mlコレラトキシン含有DME培地を用いて、37°Cで5%CO2条件下48時間培養し、表皮幹細胞の接着を確認後、無血清Epilife(クラボウ製)に交換し2日に一度同培地を交換し、コンフルエント迄培養した。培養細胞がコンフルエントに到達後、MSH、エンドセリン含有色素細胞増殖用培地に交換し、一定期間培養した後に、培養の継続性を確認するとともに、凍結切片を作成しメラニン色素細胞分布を検討した。その結果、表皮細胞シート完成後にあっても色素細胞増殖用培地で表皮幹細胞の増殖は認められないが分化を制御した状態で維持できた。色素細胞増殖能については、現在組織学的に検討中であるが、培養表皮シートのカラーマッチ方法としての技術を次年度確立する予定である。

その後、0.25%トリプシン含有DME培地(又はF-12培地)中で、酵素消化した。その後、この皮膚を10ng/mlコレラトキシン含有20%FBS加DME培地中で1時間、室温で撹拌し、分離細胞を得た。この細胞浮遊液を、1×104 cell/cm2になる様調節し、20%FBS加、10mg/mlコレラトキシン含有DME培地を用いて、37°Cで5%CO2条件下48時間培養し、表皮幹細胞の接着を確認後、無血清Epilife(クラボウ製)に交換し2日に一度同培地を交換し、コンフルエント迄培養した。培養細胞がコンフルエントに到達後、分化誘導を行い培養表皮シートを作製した。このシートを薄削した患部に移植し、適宜ドレッシングを行った。培養表皮は、ほぼ100%生着し、カラーマッチも良好であった。色素脱失患者に於いては、培養表皮の継代を少なくする方向で、巨大母斑患者に於いては培養表皮の継代を増やす方向で、シート作成を行うことで、色素調整が可能であった。しかしながら、真皮深層に至るまで薄削すると培養表皮の生着とカラーマッチが困難であった。本技術は、既に先天性色素沈着(巨大母斑症)の患者に応用され、有用性が確認されている。同時に顔面の白斑患者に応用されている。培養表皮による白斑治療後の、皮膚色の不一致はPUBA療法で対応できた。
労働者の幸福感格差と相対的剥奪の連関構造の解明

客観的には同じ状況であるのに,格差を感じその格差に苦しむ労働者がいる一方で,格差に対し鈍感で苦しまない労働者がいるのはなぜなのか。収入や労働時間などの社会格差や,個人特性・自己責任だけで,この差はもたらされるのだろうか。この問いに対し本研究では,個々人の準拠集団である「職業」と他者との職業比較による「剥奪感」に着目し,複層的に検討することで,幸福感格差のメカニズムを明らかにする。具体的には,競争社会下で社会や他者との比較をすることにより生じる,現状と理想,自己イメージと他者イメージなど,これらの乖離を計量的に明らかにすることで,見えない社会格差の明示化を試みる。