hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膵島再生を規定する局所ニッチ環境の解明

膵島再生の促進は糖尿病の根治治療となり得る。しかしながら、再生を担う細胞の特性や再生の制御機構などは多くが不明である。我々は新たな膵島再生マウスを用いて再生現象を詳細に解析したところ、膵β細胞の分裂が膵島量の増減を感知して制御されていること、再生が高い増殖性を有する細胞の活発な分裂により維持されること、膵島再生時には幹/前駆細胞ニッチの維持あるいは膵β細胞の発生分化に関わる遺伝子群やの発現が増加することを見出した。糖尿病は膵β細胞から分泌されるインスリンの不足やインスリンの作用障害によって発症する。糖尿病患者では膵β細胞量(膵島量)が減少しており、減少した膵島量を回復させる再生治療は糖尿病の根治治療となり得る。しかしながら、膵島量の調節機構は多くが不明であり、有効な膵島再生法も確立されていない。我々は、膵β細胞傷害後に再生が起こる膵島再生マウスを作製し、膵島量の変化を詳細に解析したところ、正常個体では膵島量は極めて一定であることが示された。膵島量を約5分の1に減少させると、その後急激な膵島再生が起こるものの、約2分の1まで再生すると再生速度は急激に遅くなることを見いだした。さらに、野生型マウスから単離した膵島を膵島再生マウスに移植すると膵島再生が明らかに減弱することを発見した。そこで本研究では膵島量の減少がどのような因子を介して感知され、どのような細胞の増加により膵島再生が起こるのかを解析している。本年度は、膵島内の一部の細胞が活発な細胞分裂を起こし、膵島量が増加することを発見した。さらに、膵島再生マウスへの膵島移植の代わりに過剰なインスリンを投与することによっても膵島再生が抑制された。以上の結果からインスリンあるいは残存膵島の仕事量の増加が膵島再生を促進していることが示された。さらに、膵島再生マウスの再生膵島を単離し、種々の分子発現を定量解析し、膵島再生時に発現が変化する遺伝子群の抽出を進めているとことである。今後、これらの分子の経時的な発現の変化や発現制御を解析する予定である。膵島再生の促進は糖尿病の根治治療となり得るが、再生を担う細胞の特性や再生の制御機構などは多くが不明である。我々は膵β細胞特異的にジフテリア毒素受容体と赤色蛍光蛋白(Tomato)を発現するマウス(膵島再生マウス)を作製し、ジフテリア毒素(DT)投与後の再生現象を詳細に解析した。本マウスの膵島量はDT投与6日後にDT非投与時の34%に減少したが、投与14日後には55%まで増加した。細胞分裂マーカーであるKir67陽性の膵β細胞は投与6日後に著明に増加したものの、14日後以降はKir67陽性率は急激に低下し、膵島量の増加もほとんど停止した。この結果から膵β細胞が活発な細胞分裂により再生することが証明された。また膵島再生マウスの腎皮膜下に膵β細胞を移植した後にDTを投与し、その後の膵島再生を解析したところ、膵島移植により膵島再生は有意に抑制された。従って移植膵島由来の液性因子が膵島再生を抑制的に制御していることが明らかになった。外来性にインスリンを連続投与すると膵島再生は抑制されることからインスリンが再生抑制因子であることが示された。再生後に増殖する膵β細胞はほとんどがTomato陰性であり残存する膵β細胞の増殖が誘導されることが示された。膵β細胞の細胞分裂を標識・定量したところ、膵島再生が進んでも「分裂しない膵β細胞数」は全く減少せず、膵β細胞幹/前駆細胞の存在が証明された。再生中の膵島では、骨髄幹/前駆細胞や癌幹細胞の維持に重要な遺伝子群が再生膵島で発現しており、膵β細胞の幹/前駆細胞のニッチ環境が活性化されていることが示された。通常は胎仔期の未熟な膵β細胞のみに発現する転写因子の発現が認められた。これらの結果から、本マウスでは、残存膵β細胞のなかに含まれている少数の幹/前駆細胞がニッチ環境の活性化を介して脱分化、増殖、再分化し、膵島が再生することが明らかになった。栄養生理学今年度の実験から、膵島量が個体レベルで感知されインスリンあるいは膵島細胞の仕事量を介して再生が規定されていることが示された。また、膵島に増殖の盛んな細胞群が含まれていることを直接的に証明でき、本研究の重要課題の解析に入ったところである。膵島量の感知および膵島再生を担う細胞の解析という2つの課題で、明白な研究の進展がみられており、おおむね順調に進展していると考えている。膵島再生が比較的少数の細胞の増殖によることが示されたので、今後はこの細胞の同定と特性の解析に進みたい。また、膵島制御の遺伝子解析にはレーザーマイクロダイセクションの手法が必要である。

しかし今回使用できた機器は年式が古く、解析に適した試料を収集することが極めて困難であった。従って、新しいレーザーマイクロダイセクションの機器を共同研究で使用させていただく相談を進めている。
転写後レベルでのエピジェネティックな遺伝子調節機構と発癌における役割

DNAメチル化やヒストン修飾異常は癌関連遺伝子の不活化に重要な役割を果たし、転写の開始反応を抑制するとされているが、遺伝子プロモーター以外の遺伝子発現制御機構に関しては未知の点が多い。本研究では、転写伸長反応など転写後レベルの遺伝子発現制御におけるDNAメチル化およびヒストン修飾の役割について明らかにすることを目的とする。本年度は、メチル化シトシン結合タンパク、及びヒストンH3K4、K9、K27、K36のメチル化を特異的に認識する抗体を用いて免疫沈降したクロマチンからDNAを抽出し、次世代シークエンサーにより、癌細胞におけるDNAメチル化、ヒストン修飾の状態についてゲノム網羅的に解析し、癌における遺伝子発現の異常に関連するエピゲノム変化について解析した。癌細胞株を用いた解析では、いずれも安定して5,000万タグ程度の情報を得ることが可能であった。白血病細胞株においてMethylminer法によるDNAメチル化の網羅的解析とメチル化阻害剤で遺伝子発現が誘導される遺伝子について比較したところ、メチル化阻害剤で誘導される遺伝子の中には、プロモーター部位のメチル化だけでなく、H3K27me3により発現抑制されている遺伝子群が同定された。メチル阻害剤によるメチル化解除と遺伝子発現は、必ずしも転写開始点のメチル化の程度と一致しないが、転写開始点がメチル化されていて、メチル化阻害剤で発現上昇する遺伝子は既知の疾患関連遺伝子が多く含まれていた。また、多発性骨髄腫細胞株を用いた検討においては、DNAメチル化はプロモーター部位にCpGアイランドを持つ遺伝子において顕著に遺伝子発現制御と逆相関の関係を示したが、そうでない遺伝子については関連が見られなかった。さらに、Genebody領域のメチル化領域は遺伝子発現と正の相関を持ち、プロモーター領域のメチル化とは違いが見られた。DNAメチル化やヒストン修飾異常は、癌関連遺伝子の不活化に重要な役割を果たし、転写の開始反応を抑制するとされているが、遺伝子プロモーター以外の遺伝子発現制御機構に関しては未知の点が多い。遺伝子制御には、転写伸長などの転写後レベルでの調節機構が関与する可能性が示唆され、癌における遺伝子発現異常の解明と制御は重要な課題と考えられる。本研究では、転写伸長反応など、転写後レベルの遺伝子発現制御における、DNAメチル化およびヒストン修飾の役割について明らかにすることを目的とする。本年度は、抗メチル化シトシン結合タンパク、抗ヒストンH3K4、K9、K27、K36のメチル化を特異的に認識する抗体を用いて免疫沈降したクロマチンからDNAを抽出し、次世代シークエンサーにより、癌細胞における、DNAメチル化、ヒストン修飾の状態についてゲノム網羅的に解析し、癌における遺伝子発現の異常に関連するエピゲノム変化について解析した。癌細胞株を用いた解析で、MethylminerによりDNAメチル化ライブラリーを、クロマチン免疫沈降法により、各ヒストンメチル化に対する特異的な抗体で免疫沈降した産物を、次世代シークエンサーにより解析した。安定して、5,000万タグ程度の情報を得ることが可能に成った。白血病細胞株を用いて、Methylminer法によるDNAメチル化の網羅的解析とメチル化阻害剤で遺伝子発現が誘導される遺伝子、について比較したところ。メチル化阻害剤で誘導される遺伝子の中には、プロモーター部位のメチル化だけでなく、H3K27me3により発現抑制されている遺伝子群が同定された。
NK細胞に関する子宮内膜症の発症と進展の病態解明

本研究の目的は、子宮内膜症とNK細胞の機能(活性性レセプターNCR、サイトカイン産生)との関連を明らかにし、子宮内膜症の病態を解明することである。子宮内膜症の腹水では、NCRのひとつであるNKp46発現の低下、炎症性サイトカインIFN-γ、TNF-αの増加がみられた。すなわち、NK細胞の細胞傷害性が低下することで腹腔内の内膜症性細胞が除去できず、炎症が助長されていると考えられた。その病態は、子宮内膜症の治療薬である低用量エストロゲンプロゲスチンにより改善されることが示唆された。また、子宮内膜症合併不妊症での子宮内膜NK細胞NCRは変化がなく、子宮内膜の着床能低下は関連しないと考えられた。今年度の研究実施計画は、末梢血・腹水・子宮内膜・内膜症嚢胞液中のNK細胞の活性化状態をみる目的で、NCR発現・サイトカイン産生を解明することであった。子宮内膜症での手術患者および子宮内膜症のない良性疾患での手術患者より末梢血・腹水を採取し、これらの解析を行った。その結果、腹水中のNK細胞のNKp46発現が子宮内膜症で低下していることが分かった。すなわち、子宮内膜症患者の腹水中のNK細胞の細胞傷害性が低下している可能性が考えられた。また、サイトカイン産生について、腹水中NK細胞のTNF-αおよびIFN-γ産生が子宮内膜症で増加していることが分かった。すなわち、子宮内膜症患者の腹水中では炎症状態が亢進しており、子宮内膜症細胞の増殖・血管新生を助長している可能性が考えられた。この解析結果について、日本生殖医学会、米国生殖免疫学会および日本エンドメトリオーシス学会にて報告した。子宮内膜・内膜症嚢胞液中のNK細胞に関しては、検体量が少なく、まだ解析するに至っていない。また、来年度の研究実施計画として、術前薬物療法を行った場合のNK細胞NCR発現、サイトカイン産生の変化について解明するということが挙げられる。今年度は、子宮内膜症の治療薬のひとつである低用量ピルを使用した場合の末梢血および腹水中のNK細胞のNCR発現、サイトカイン産生の変化について解析した。その結果、子宮内膜症で低下していたNKp46発現が低用量ピルを使用することで増加傾向にあることがわかった。これについても日本エンドメトリオーシス学会にて報告した。子宮内膜症での手術患者および子宮内膜症のない良性疾患での手術患者より末梢血・腹水を採取し、NK細胞のNCR発現およびサイトカイン産生について解析を行うことができた。しかし、子宮内膜および内膜症性嚢胞液中のNK細胞の解析はまだ十分に行えなかった。来年度の研究実施計画の一部であった、子宮内膜症の治療薬を使用した場合のNK細胞のNCR発現およびサイトカイン産生の変化についても解析を行うことができた。昨年度は、子宮内膜症における腹水中のNK細胞のNKp46発現が低下しており、TNF-α、IFN-γの産生が増加していることを報告した。子宮内膜症患者の腹水中では炎症状態が亢進しており、子宮内膜症細胞の増殖・血管新生を助長している可能性が考えられた。また、子宮内膜症患者が低用量ピルを使用することで、腹水中で低下していたNK細胞のNKp46発現が増加傾向となる可能性について報告し、日本エンドメトリオーシス学会にて報告し、演題発表賞を受賞、論文が掲載された。今年度は、子宮内膜症の治療薬のひとつであるジエノゲストを使用した場合、腹水中で低下していたNK細胞のNKp46発現が低用量ピル使用時よりもさらに増加していることを日本産科婦人科学会、米国生殖免疫学会、日本生殖免疫学会にて報告した。また、子宮内膜症と不妊症との関連を明らかにするため、子宮内膜でのNK細胞NCR発現について検討中である。子宮内膜症治療薬を使用した場合のNK細胞の変化について解析することができた。平成27年度は、子宮内膜症における腹水中のNK細胞のNKp46発現が低下しており、TNF-α、IFN-γの産生が増加していることを報告した。平成28年度は、子宮内膜症の治療薬のひとつであるジエノゲストを使用した場合、腹水中で低下していたNK細部尾のNKp46発現が低用量ピル使用時よりもさらに増加していることを日本産科婦人科学会、米国生殖免疫学会、日本生殖免疫学会にて報告した。

今年度は、子宮内膜症と不妊症との関連を明らかにするため、子宮内膜でのNK細胞NCR発現について報告した。すなわち、原因不明不妊症(着床不全)の子宮内膜NKp46発現は低下しているが、子宮内膜症合併不妊症の子宮内膜NKp46発現の低下はみられず、子宮内膜症合併不妊症の病態は子宮内膜の状態悪化の関連は低いと考えられた。また、体外受精胚移植を施行した子宮内膜症合併不妊症の受精卵の質は、子宮内膜症のない不妊患者の受精卵の質よりも低下しており、子宮内膜症合併不妊症の妊娠率の低下は、子宮内膜より受精卵の質が大きく影響しているものと考えられた。これについて、日本産科婦人科学会、日本受精着床学会、米国生殖免疫学会、日本生殖免疫学会にて報告し、日本エンドメトリオーシス学会誌に論文が掲載された。本研究の目的は、子宮内膜症とNK細胞の機能(活性性レセプターNCR、サイトカイン産生)との関連を明らかにし、子宮内膜症の病態を解明することである。子宮内膜症の腹水では、NCRのひとつであるNKp46発現の低下、炎症性サイトカインIFN-γ、TNF-αの増加がみられた。すなわち、NK細胞の細胞傷害性が低下することで腹腔内の内膜症性細胞が除去できず、炎症が助長されていると考えられた。その病態は、子宮内膜症の治療薬である低用量エストロゲンプロゲスチンにより改善されることが示唆された。また、子宮内膜症合併不妊症での子宮内膜NK細胞NCRは変化がなく、子宮内膜の着床能低下は関連しないと考えられた。子宮内膜症手術患者について、術前に子宮内膜を採取するよう努める。また、手術時に内膜症性嚢胞液を穿刺・吸引した際には、その嚢胞液中のNK細胞の解析を行う。手術後の変化をみるため、手術患者の末梢血のNK細胞を術後3カ月、6カ月、12カ月で解析を行う。また、情報収集のため、積極的に学会参加をする。子宮内膜症と不妊症の関連を明らかにするため、子宮内膜中のNK細胞の解析を行う。さらに、積極的に学会参加をし、情報収集を行う。これまでの研究成果について、英文誌に投稿する。生殖免疫学フローサイトメトリー測定データ解析用コンピュータとフローサイトメトリー測定データ解析用ソフトウェアドングルライセンスを購入予定であったが、本年度は購入しなかったため、次年度使用額が生じた。また、フローサイトメトリー用抗体についても予定より少なく購入したため次年度使用額が生じた。実験物品を予定より安く購入できたため。フローサイトメトリー測定データ解析用コンピュータとフローサイトメトリー測定データ解析用ソフトウェアドングルライセンスを購入し、解析に役立てる。旅費に関しては研究成果発表のため、予定通り学会参加する。学会誌投稿のための投稿費、別刷等で使用する。学会発表や論文投稿により成果を発表する予定であり、そのために必要な経費の補填とする。
６倍体コムギの花成遺伝子経路におけるゲノム間クロストーク機構の解明と育種的利用

1.日長反応性経路遺伝子群の変異解析早生型および晩生型タルホコムギ系統(AT80およびPI508262)における花成ホルモン(フロリゲン)遺伝子WFT (Wheat FLOWERING LOCUS T)のORF構造をPCR法により比較解析した。その結果、両系統間で、第1エキソン内に非同義塩基置換が1箇所あり、1アミノ酸の変異が存在ことが明らかとなった(早生型23I晩生型23V)。このアミノ酸変異が早晩性と関係するのか、早生型×晩生型合成パンコムギNILs(組換え近郊系統)を用いて解析する予定である。また、日長反応性経路でWFTの上流に位置するCO-like遺伝子(TaHd1およびWCO1)についてORF構造を調べたところ、早生型と晩生型のタルホコムギで塩基置換はみられなかった。2.日長反応性経路遺伝子群の発現解析4倍体マカロニコムギLangdon、早生型および晩生型タルホコムギ系統、早生型および晩生型合成6倍体コムギ系統(Syn6239およびSyn6228)におけるCO-like遺伝子(TaHd1およびWCO1)について、A, B, Dゲノムの同祖遺伝子ごとに発現パターンを解析した。その結果、CO-like遺伝子発現パターンは、WFT遺伝子発現パターンと同様、早生型合成パンコムギでは、晩生型合成パンコムギと比較して、Dゲノムの遺伝子だけでなく、AゲノムとBゲノムの同祖遺伝子の発現レベルも上昇していることが明らかとなった。これは、異なるDゲノムの作用による「ゲノム間クロストーク」がCO-like遺伝子に働いていることを示唆する。今後、早生型合成パンコムギにおいて、CO-like遺伝子がなぜ発現上昇するのかを解明する。パンコムギのような倍数体種では、ジェネティックにあるいはエピジェネティックにゲノムを超えた遺伝子間の相互作用「ゲノム間クロストーク」が生じており、これが、倍数体種に多様性を付与し、倍数体種が2倍体種よりも広域適応性、高生産性、高ストレス耐性を示す一要因であると考えられる。本研究は、マカロニコムギ(4倍体、ゲノム構成AABB)に、早生あるいは晩生のタルホコムギ(2倍体、ゲノム構成DD)を交雑して得られた出穂性の異なる2種類の合成6倍体コムギ(ゲノム構成AABBDD)を材料に用い、Dゲノム上の花成(栄養成長から生殖成長への移行)に関与する遺伝子が、どのようにしてAおよびBゲノムの遺伝子を制御し、合成6倍体コムギの花成(出穂性)が決定されるのか、6倍体コムギの花成遺伝子経路におけるゲノム間クロストーク機構の実態を解明し、育種的利用を図ることが目的である。今年度の研究により、異なるDゲノムからの作用が、ゲノムを超えてCO-like遺伝子に働くことが明らかになったことは、大いに進展があったといえる。エピジェネティック作用の解明までは届かなかったが、CO-like遺伝子のエピジェネティック制御機構を解明するという、今後の方向性がつかめた。1.WFTおよびCO-like遺伝子のゲノム遺伝子構造の解明4倍体マカロニコムギLangdon、早生型および晩生型タルホコムギ系統、マカロニコムギとタルホコムギの交雑から作出した早生型および晩生型合成6倍体コムギ系統におけるWFT遺伝子およびCO-like遺伝子(TaHd1/WCO1)のゲノム遺伝子構造を解明する。早生型と晩生型タルホコムギ系統間で変異があるのか、その変異が合成6倍体に引き継がれているのかを明らかにする。これにより、6倍体化によって新たな変異が生じているかを知ることができる。また、合成パンコムギにおけるWFTの発現パターンは日長反応性経路の上流に位置するCO-like遺伝子の発現パターンに制御されていると考えられ、今後、CO-like遺伝子の発現パターンが異なるDゲノムの作用により、どうして変化するのかの解明に注力する。2.WFTおよびCO-like遺伝子の発現制御機構の解明遺伝子発現パターンの変化がエピジェネティック制御(DNAのメチル化、ヒストンの化学的修飾)であるかどうかを調べるため、早生型と晩生型で発現変異のあるCO-like遺伝子について、DNAメチル化解析(バイサルファイト法)およびクロマチン免疫沈降解析(ChIP)を行う。また、エピジェネティックな変異が6倍体化に伴って変化するのかを明らかにする。また、CO-like遺伝子の発現制御がジェネティックに行われている可能性もあるため、CO-like遺伝子の転写因子群であるGIタンパク質やそれと共同で働くFKF1およびCDFs遺伝子の変異、CDFs遺伝子発現を制御するCCA1およびPRR5遺伝子の変異も調査する。この解析により、早生型と晩生型の合成パンコムギ系統間の遺伝子産物アミノ酸変異および遺伝子構造変異といったジェネティックな変異を明らかにする。

また、日長反応性経路でWFTの上流に位置するCO-like遺伝子(TaHd1およびWCO1)についてORF構造を調べたところ、早生型と晩生型のタルホコムギで塩基置換はみられなかった。2.日長反応性経路遺伝子群の発現解析4倍体マカロニコムギLangdon、早生型および晩生型タルホコムギ系統、早生型および晩生型合成6倍体コムギ系統(Syn6239およびSyn6228)におけるCO-like遺伝子(TaHd1およびWCO1)について、A, B, Dゲノムの同祖遺伝子ごとに発現パターンを解析した。その結果、CO-like遺伝子発現パターンは、WFT遺伝子発現パターンと同様、早生型合成パンコムギでは、晩生型合成パンコムギと比較して、Dゲノムの遺伝子だけでなく、AゲノムとBゲノムの同祖遺伝子の発現レベルも上昇していることが明らかとなった。これは、異なるDゲノムの作用による「ゲノム間クロストーク」がCO-like遺伝子に働いていることを示唆する。今後、早生型合成パンコムギにおいて、CO-like遺伝子がなぜ発現上昇するのかを解明する。パンコムギのような倍数体種では、ジェネティックにあるいはエピジェネティックにゲノムを超えた遺伝子間の相互作用「ゲノム間クロストーク」が生じており、これが、倍数体種に多様性を付与し、倍数体種が2倍体種よりも広域適応性、高生産性、高ストレス耐性を示す一要因であると考えられる。本研究は、マカロニコムギ(4倍体、ゲノム構成AABB)に、早生あるいは晩生のタルホコムギ(2倍体、ゲノム構成DD)を交雑して得られた出穂性の異なる2種類の合成6倍体コムギ(ゲノム構成AABBDD)を材料に用い、Dゲノム上の花成(栄養成長から生殖成長への移行)に関与する遺伝子が、どのようにしてAおよびBゲノムの遺伝子を制御し、合成6倍体コムギの花成(出穂性)が決定されるのか、6倍体コムギの花成遺伝子経路におけるゲノム間クロストーク機構の実態を解明し、育種的利用を図ることが目的である。今年度の研究により、異なるDゲノムからの作用が、ゲノムを超えてCO-like遺伝子に働くことが明らかになったことは、大いに進展があったといえる。エピジェネティック作用の解明までは届かなかったが、CO-like遺伝子のエピジェネティック制御機構を解明するという、今後の方向性がつかめた。1.WFTおよびCO-like遺伝子のゲノム遺伝子構造の解明4倍体マカロニコムギLangdon、早生型および晩生型タルホコムギ系統、マカロニコムギとタルホコムギの交雑から作出した早生型および晩生型合成6倍体コムギ系統におけるWFT遺伝子およびCO-like遺伝子(TaHd1/WCO1)のゲノム遺伝子構造を解明する。早生型と晩生型タルホコムギ系統間で変異があるのか、その変異が合成6倍体に引き継がれているのかを明らかにする。これにより、6倍体化によって新たな変異が生じているかを知ることができる。また、合成パンコムギにおけるWFTの発現パターンは日長反応性経路の上流に位置するCO-like遺伝子の発現パターンに制御されていると考えられ、今後、CO-like遺伝子の発現パターンが異なるDゲノムの作用により、どうして変化するのかの解明に注力する。2.WFTおよびCO-like遺伝子の発現制御機構の解明
先天性中枢性低換気症候群の病態解明

先天性中枢性低換気症候群(Congenital central hypoventilation syndrome:CCHS)は,睡眠時の低換気もしくは無呼吸を特徴とし,明らかな循環・呼吸器疾患,神経筋疾患,代謝性疾患,先天奇形などが除外された症候群である.2003年,Amielらは本症の病因をPHOX2B遺伝子の遺伝子異常と同定した.私達のグループも10症例を解析し,CCHSの発症にはPHOX2Bの変異が重要な役割をしていると確認した.さらに平成18年度は16例,平成19年度は13例を解析し,以前に解析した10例と併せ変異と臨床型との関係を検討した.39例中30例に変異を認め,29例は5-13個のポリアラニンの伸長変異であり,1例にframeshiftの変異を確認した.5アラニン伸長例では合併症を伴わず,伸長が長い程,巨大結腸症などの合併を伴い,重症である傾向が確認された.また,25例の両親の遺伝子検索を行い,23例ではde novoの変異であり,6アラニン伸長の母親にモザイク変異を,5アラニン伸長変異の症例では3世代に渡り同変異をもつ家系を認めた.また,我々は平成19年度に6家系においてポリアラニン伸長遺伝子が父親由来であることを証明した.今回の研究から,CCHSの家族検索は,潜在性の罹患者やモザイクの両親を検出する事ができ,治療や遺伝カウンセリングの面から有用と考えられた.先天性中枢性低換気症候群(Congenital central hypoventilation syndrome : CCHS)は,睡眠時の低換気もしくは無呼吸を特徴とし,明らかな循環・呼吸器疾患,神経筋疾患,代謝性疾患,先天奇形などが除外された症候群である.2003年,Amielらは本症の病因をPHOX2B遺伝子の遺伝子異常と同定した.私達のグループも10症例を解析し,CCHSの発症にはPHOX2Bの変異が重要な役割をしていると確認した.平成18年度は,更に16例を解析し,以前に解析した10例と併せ変異と臨床型との関係を検討した.26例中24例に変異を認め,22例は5-13個のポリアラニンの伸長変異であり,1例にframeshiftの変異を確認した.5アラニン伸長例では合併症を伴わず,伸長が長い程,巨大結腸症などの合併を伴い,重症である傾向が確認された.また,18例の両親の遺伝子検索を行い,16例ではde novoの変異であり,6アラニン伸長の母親にモザイク変異を,5アラニン伸長変異の症例では3世代に渡り同変異をもつ家系を認めた.患児は,生後間もなく発症し,母方叔父は31歳時に心不全で発症したlate-onset central hypoventilation syndrome(LO-CHS)であり,母と母方祖母は検査によりLO-CHSと確認された.また,兄には睡眠時無呼吸を認めず,症状の多様性を確認した.今回の研究から,CCHSの家族検索は,潜在性の罹患者やモザイクの両親を検出する事ができ,治療や遺伝カウンセリングの面から有用と考えられた.先天性中枢性低換気症候群(Congenital central hypoventilation syndrome:CCHS)は,睡眠時の低換気もしくは無呼吸を特徴とし,明らかな循環・呼吸器疾患,神経筋疾患,代謝性疾患,先天奇形などが除外された症候群である.2003年,Amielらは本症の病因をPHOX2B遺伝子の遺伝子異常と同定した.私達のグループも10症例を解析し,CCHSの発症にはPHOX2Bの変異が重要な役割をしていると確認した.さらに平成18年度は16例,平成19年度は13例を解析し,以前に解析した10例と併せ変異と臨床型との関係を検討した.39例中30例に変異を認め,29例は5-13個のポリアラニンの伸長変異であり,1例にframeshiftの変異を確認した.5アラニン伸長例では合併症を伴わず,伸長が長い程,巨大結腸症などの合併を伴い,重症である傾向が確認された.また,25例の両親の遺伝子検索を行い,23例ではde novoの変異であり,6アラニン伸長の母親にモザイク変異を,5アラニン伸長変異の症例では3世代に渡り同変異をもつ家系を認めた.また,我々は平成19年度に6家系においてポリアラニン伸長遺伝子が父親由来であることを証明した.今回の研究から,CCHSの家族検索は,潜在性の罹患者やモザイクの両親を検出する事ができ,治療や遺伝カウンセリングの面から有用と考えられた.
生分解性を有する導電性ポリマーの創出と再生医療への応用

エチレングリコール鎖を付加したポリチオフェンと、-OH, -COOH, -NH2基を導入したポリエチレンジオキシチオフェン(PEDOT)を合成し、その生体適合性を評価した。細胞適合性圧政では、線維芽細胞は接着し増殖した。イニシエーターして臭素を含むPEDOTsを電解重合法によりデポジットした後、高分子ブラシをATRP法の応用により調製した。QCMにより、調製した高分子ブラシのタンパク質吸着抑制能を確認した。血中のがん細胞を高感度でキャッチ&リリースできるナノデバイスを開発1.エチレングリコール鎖を付加したポリチオフェンと、-OH, -COOH, -NH2基を導入したポリエチレンジオキシチオフェンを合成し,その生体適合性を評価した。オリゴエチレングリコール鎖で機能化したジブロモオキシチオフェンを合成した。また、これらのポリチオフェンは高い導電性と、水中安定性を示し、一般的なポリアルキルチオフェンより親水性であったが、調製した薄膜表面での細胞接着、増殖の抑制は示さなかった。細胞適合性圧政では線維芽細胞は接着し増殖した。これらの結果により、オリゴエチレングリコール鎖で機能化したポリオキシチオフェンは、バイオエンジニアリングでの応用が期待される。高分子ブラシによるタンパク質吸着抑制能を有する金属製インプラント表面の創出は、人工組織に向けた優れた生体適合性と機械的特性への効果的なアプローチである。2.血中のがん細胞を高感度でキャッチ&リリースできるナノデバイスを開発.血中に存在する循環腫瘍細胞(CTCs)の量を正確に捕捉して検出できると、転移性のがんの経過観察や治療効果の早期判定に有効です。これま研究では、シリコンナノワイヤに、CTCsだけと結合する抗体を付けた、高感度なCTCs検出デバイスを作製しましたが、高い生存率で剥離することはできませんでした。共同研究グループは、捕捉と剥離という異なる機能を両立させるために、UCLAのCTCs検出デバイスに、温度応答性高分子でできた高分子ブラシを組み込みました。その結果、ナノ構造による高い検出能、抗体に由来する高い抗原選択性、温度応答性高分子の伸縮特性を生かした温度変化による細胞の捕捉と剥離を可能にしました。血中のがん細胞を高感度でキャッチ&リリースできるナノデバイスを開発(1)生体適合性を有する導電性高分子ビルディングブロックの合成.エチレングリコール鎖を付加したポリチオフェンと、-OH, -COOH, -NH2基を導入したポリエチレンジオキシチオフェン(PEDOT)を合成し、その生体適合性を評価した。オリゴエチレングリコール鎖で機能化したジブロモオキシチオフェンを合成し、GRIM重合もしくはカップリング重合をした。十分な収率、分子量で高分子が得られ、その分子量分布幅は狭いものであった。細胞適合性アッセイでは、スピンコート膜は若干の細胞毒性を示したが、線維芽細胞は接着し増殖した。C-Hアリール化、縮重合によりの機能化したポリエチレンジオキシチオフェンのライブラリーを作製した。種々のジオキシチオフェンをプロピレンジオキシチオフェン(ProDOT)とエチレンジオキシチオフェン(EDOT)のモチーフに、パラジウム触媒によるアリール化で共役系高分子を得た。(2)生分解性を持つ導電性高分子の合成.ヒドロキシル基末端のマクロモノマーでポリオキシチオフェンを修飾し、ポリ乳酸の開環重合でトリブロックポリマーを取得し、生分解性を持つ導電性高分子を調製した。初年度は、グリニャールメタセスもしくは還元的カップリングによる重合で、両親媒性オリゴエチレングリコールを含む機能性ポリオキシルチオフェン、- OH, -COOH, -NH2基を導入したEDOTを合成した。現在、ポリ乳酸セグメントに代表される生分解性ポリエステルと、今までに得た高分子を融合し、優れた機械、分解特性を有する高分子の取得を目指している。PEDOTとPLAによるトリブロックポリマーのアセンブリにより、導電性バイオインターフェイスを作製する。生分解性を持つ繊維状ネットワーク構造をエレクトロスピニングにより調製する。神経分化のモデルに使われる褐色細胞腫由来細胞を用い、細胞とマテリアルとの相互作用を評価する。電場での褐色細胞腫由来細胞の分化のふるまいを観察する。40万円を褐色細胞腫由来細胞を培養するデバイスの作製に、30万円をバイオ研究での消耗品に充てる。30万円程度を国内・国際学会の参加に見込む。
時間遅れを伴う線形および非線形微分方程式の研究

1998年3月末までの4ケ月半の間、モスクワ大学のラトケビッチ教授が滞在された。この好機をとらえ、多孔質中の水と油の運動を記述するマスカット問題と呼ばれる非線形楕円形偏微分方程式に対する自由境界問題について共同研究を行った。教授の帰国後も継続している。マスカット問題の弱解を遷移層の厚さに対応する微小のパラメータεをもつ非線形放物形偏微分方程式のなめらかな解の弱極限として記述することを考えた。領域が球一殻のように対称をもつ場合あるクラスの初期値から出発した解の列については、このことが正しいことがわかった。結果は共著論文として発表予定である。平成9年度は本科研費の援助のもとに合計9件の研究発表、研究打ち合わせ国内出張を行い、又1件の国内招聘を行った。数値シュミレーション用パソコン、Compaq Armada 7700DMTを購入し、数値実験とマテマティカソフトウェアによる数式処理実験を行った。時間おくれを伴う線形常分積分方程式であるチェンの方程式についてはピュイズ-展開とラプラス展開の方法で基本を構成しその性質を調べた。また、基本解をミッタークレフラ-関数で表示し漸近級数により遠い将来の解の様子を詳しく調べた。チェンの方程式は2種の流体の混合体の運動の素過積を調べる方程式であるが、その発展として、たとえば水と油の2種の流体の運動方程式についても調べた。1998年3月末までの4ケ月半の間,モスクッワ大学のラトケビッチ教授が滞在された。この好機をとらえ多孔質中の水と油の運動を記述するマスカット問題と呼ばれる非線形楕円形偏微分方程式に対する自由境界問題について共同研究を行った。マスカット問題の弱解を遷移層の厚さに対応する微小パラメータεをもつ非線形放物形偏微分方程式のなめらかな解の弱極限として記述することを考えた。領域が球一般のように対称をもつ場合あるクラスの初期値から出発した解の例については、このことが正しいことがわかった。
抑制性シナプスにおける神経伝達物質ライフタイムの定量的解析

抑制性シナプス伝達のシナプス後反応の時間経過を決定する因子を検討するために、脳幹の舌下神経運動神経細胞からグリシンを神経伝達物質とする抑制性のシナプス後電流を記録した。シナプス後電流は興奮性シナプス伝達とGABAによる抑制性シナプス伝達をそれぞれの特異的な拮抗薬で抑制した状態で、運動神経の近傍の抑制性の介在神経を細胞外から電気的に刺激することにより誘発した。さらにこのシナプス後電流はグリシン受容体の特異的拮抗薬部であるストイキニンにより完全に阻害された。この方法により、単一の細胞からの抑制性のシナプス入力を記録することが可能であった。まず、シナプスにおける神経伝達物質の放出量を変化させるために、シナプス前終末に存在するカルシウムチャネルの特異的拮抗薬を投与、神経伝達物質放出のカルシウム依存性とシナプス電流の時間経過を検討した。N-typeカルシウムチャネルの拮抗薬であるw-Conotoxin GIVAはシナプス後電流を65%抑制し、P-/Q-Typeカルシウムチャネルの拮抗薬であるw-Agatoxin IVAはシナプス後電流を85%抑制した。両方の拮抗薬を投与によりシナプス電流は完全に抑制された。この事から、脳幹の介在神経細胞の神経伝達物質の放出に預るカルシウムチャネルはN-typeとP-/Q-Typeのカルシウムチャネルでそれ以外のカルシウムチャネルの参与はほとんどないと結論された。一方、シナプス後電流の時間経過はこれらの拮抗薬で伝達物資放出を減少させても変化しなかった。この結果からシナプス間隙内の神経伝達物質の排出機構は生理的な神経伝達物質の放出においては飽和しておらず、伝達物質の排出機構、つまり伝達物質の濃度の変化がシナプス後反応の時間経過を決定する重要な因子であると考えられた。
爆発的噴火をもたらす浅部火道システムの構造発達過程

三宅島山頂カルデラ内の火道断面に構造について、山頂火口内に20を超える火道断面を識別した。それらを1)非爆発噴火火道、2)弱爆発噴火火道、および3)強爆発噴火火道の3種類に区分した.爆発強度の違いにより火道上部の侵食による火道拡大程度が異なることを見出だした.噴火中のマグマの破砕深度よりも浅いところで火道の拡大が進行しったことを明らかにし、火道の拡大を促す要因は火道内部におけるマグマの破砕であることを見出した。これら三宅島にて得られたモデルを他の火山における火道構造解析に適用し、エトナ火山ほかいくつかの火山において噴火推移と火道形成プロセスを復元した。昨年度に引き続き、イタリアにおけるエトナ火山,ストロンボリ火山、日本における三宅島火山などにおいて、爆発的噴火で形成された火口・カルデラ構造の調査を行ない、火口構造や噴出物の分布やその物質科学的特徴についての野外情報の取得を行った.また,野外観察の結果を補完し、マグマの噴出率や母岩物性等を制御した火道システムの構造発達を再現するため、ローマ第三大学においてゼラチン・砂箱等を用いたアナログ実験を行なった.エトナ火山においては、イタリア地球物理火山学研究所との協力の下,北東リフトゾーンに露出する1809年火口の断面構造の調査を2回実施し,火道の構造の記載や噴出物等の試料採取を行った.その噴火記録と比較することにより、供給ダイクの成長過程やマグマの地表への上昇接近過程、火口の拡大過程やマグマドレインバック過程を復元した.ストロンボリ火山では、短時間の反復観察による画像解析を用いて爆発噴火前後における火口形状の詳細な比較を行うとともに、その噴出物を採取・解析し、爆発による火口壁の侵食過程を明らかにした.三宅島に露出する火道断面構造の画像解析を進め、爆発度の違いを反映した火道成長モデルを提唱した.さらに、マグマの組成等によらない普遍的な火道形成過程のモデル構築を進めるため、より珪長質珪長質マグマの火山として池田カルデラについて,その噴出物の予備調査を実施した.これらの成果は,2013年4月に開催された欧州地球科学関連学会連合(EGU),7月に開催された国際火山学会(IAVCEI)等の国際学会において口頭公表した.また、三宅島の火道断面の発達過程に関する論文をBullten of Volcanology誌に論文投稿し掲載された.エトナ火山の火道断面構造の発達に関する論文を投稿した.三宅島山頂カルデラ内の火道断面に構造について、山頂火口内に20を超える火道断面を識別した。三宅島における野外調査を実施し、山頂陥没カルデラ壁に露出する火道断面の高解像度画像を取得した。これまでの予備調査で取得した画像と合わせて、カルデラ壁の露頭の3次元構造を復元した。復元された3次元情報を使用し、火道の大きさや深さといった基本的なパラメータを決定した。陥没カルデラ壁で20以上の火道断面を認識・抽出した。これらについて、それに付属する噴出物の構造から噴火プロセスを復元するとともに、これらの火道を1)溶岩流出火道、2)スコリア丘構築火道、および3)大規模火砕噴火火道の3種類に分類し、それぞれの発達過程についてモデルを構築した。これらの区分は遷移的であり、噴火の爆発性が高くなるにつれて次第に1)の構造から3)の構造に推移することを示した。特に、火道内部におけるマグマの破砕深度を岩脈の構造から定量的に評価することに成功し、爆発性の高い噴火ではマグマは地表から150m以上深いところですでに破砕していることを示した。破砕深度は噴火の規模や爆発規模が大きくなるにつれて深くなることを示した。また、マグマの破砕が火道壁の侵食に大きく貢献していることも示した。さらに、山麓部における野外調査の結果から、これらの噴火の年代や、噴火を駆動したマグマが基本的にほぼ同じ組成を持つことを明らかにした。三宅島における成果を拡張し、ほかの火山との比較を行うために、エトナ火山においてイタリアの研究者との協力のもと、予察的な調査を行った。火山体崩壊壁や、比較的規模の大きな火口壁に複数の火道断面が露出することを確認し、そのうちのいくつかについては三宅島で行った手法を適応して火道断面構造の定量的な評価を行った。これらの成果については、9月に開催された第四回陥没カルデラワークショップにおいて研究発表を行なうとともに、複数の論文として投稿をおこなった。爆発的噴火によって形成された火道・カルデラ構造の解析を、三宅島およびエトナ火山、ストロンボリ火山などにおいて行い、露頭から得られた火口断面構造とその火口からの噴出物との対比による火道ー火口システムの構造的発達について解析した.その結果、噴火の爆発力の違いを反映した火道ー火口断面構造のバリエーションを明らかにすることができた.火道に残された噴出物の破砕深度から爆発的噴火の発生深度(破砕深度)を見積もることができ、破砕深度と火道の水平規模に正比例

関係があることを見出だした.それを基に、非爆発的噴火では火道出口付近の侵食はほとんど進行しないのに対し、爆発性が高まるとともに火道壁の侵食が側方・下方にそれぞれ拡大し大きな火口を形成することを示した.本年度は、苦鉄質火山における爆発的な噴火の代表例として、富士山宝永噴火の噴出物の解析を実施し、層序に沿った噴出物の垂直変化から噴火プロセスの復元を行った.またマグマの組成によらない普遍的な火道形成過程のモデル化のため、より珪長質マグマの火山として桜島火山や池田火山など南九州の火山群を特に対象とした野外調査を実施した.これら安山岩流紋岩質マグマの爆発的噴火の噴出物の層序やマグマの発泡度、軽石の粒径変化からマグマの上昇破砕過程を解析するとともに、異質岩片の含有量やその種類の変化から火道拡大過程の解析を行った.特に、カルデラ形成噴火に関係する大規模な爆発的噴火である姶良噴火の噴出物について野外調査による噴火推移の復元を行った.また、カルデラ噴火の規模とカルデラ構造との間の相関関係を力学的モデルにより解析した.これらの成果は、平成26年7月に開催された第一回国際火山地質ワークショップで口頭発表したほか、エトナ火山の火道断面構造の発達に関する論文をFrontiers in Earth Science誌に発表した.火山学概当年度は海外長期派遣等で、国内にて実施を予定していた一部の調査が実施できなかったものの、派遣先における新たな調査を実施することができ、全体の研究計画はおおむね当初の予定に沿って展開できている.三宅島における陥没カルデラ壁の構造について、直径約2kmの陥没カルデラ壁のほぼ全面の高分解能写真を取得し、その解析により陥没カルデラ壁に露出するほぼすべての火道断面を抽出することに成功した。また、それらの3次元構造の構築や火道の抽出とその解析についても順調に進めることができた。さらに、山腹部の調査と合わせて、これらの火道を形成した噴火のプロセスについても復元することに成功した。また国際学会においてこれらの成果を発表することにより、国外の研究者との間での情報交換や共同研究を開始することができた。年度途中に、中期派遣制度により約3か月間イタリア共和国に滞在し研究を行ったため、国内の他の火山における野外調査を行うことができなかったが、イタリアのエトナ火山およびベスビオ火山において同様の手法による火道断面の解析を試みることができた。また、本研究テーマについて、イタリア等の研究者との共同研究を推進することができた。また、所属機関における研究業務である桜島の爆発的噴火の観測とも連携し、昭和火口における爆発的噴火の推移やそのメカニズムの解析についても本研究課題の知見を応用することができた。以上の観点から、本研究課題はほぼ順調に推移していると判断した。最終年度についても、引き続き当初の研究計画にそって研究を推進する.とくに、珪長質火山におけるより大規模な爆発的噴火についても、南九州地域や北東北・北海道地域などを中心に調査を進め、総合的な理解を目指す.当初の実施計画に従い、爆発的火道の構造の発達過程のモデルを検証する.噴火推移が明らかにされている最近の噴火によって形成された火道の構造解析を行う。対象としては、桜島昭和火口、エトナ山の複数の山頂火口、ストロンボリ島火口、ベスビオ火山山頂火口などを候補としている。
ＤＢＤプラズマアクチュエータを用いた翼周り剥離流れ制御の研究

今年度ACDBDプラズマアクチュエータのバースト駆動による翼周り剥離流れ制御を中心に研究を行った。本研究では風速毎秒10m、コード長10cmのNACA0015翼周りの剥離流れにおいて、失速角を基準として失速前(失速角ー2度)、失速後(失速角+1度)、大剥離(失速角+3度)の3つの剥離状態に対して、複数のバースト周波数及び複数の電圧を適用し、その剥離制御効果を調査した。その結果印加電圧により最適制御状態となるバースト周波数が異なることを明らかにした。過去の研究においてF+=1付近が最適という主張とF+=6-10付近が最適という主張があったが、同一の迎角であっても電圧及び迎角によって最適なバースト周波数が切り替わることを見出したのは世界において初である。非定常PIVの解析などを通して、このような最適なバースト周波数の切り替わりが、バースト駆動制御の持つ大きな2つの効果、すなわち「バースト周波数に応じた渦生成の効果」と「擾乱印加による乱流遷移促進の効果」によりもたらされることを議論した。上記の結果を基にして、バースト駆動による制御が直接的な運動量を主要因としない事を示すため、従来と逆向き(主流と逆方向に流れを誘起する方向)に設置したアクチュエータによる剥離制御実験を行い、従来のアクチュエータとの比較を行った。その結果、逆向きアクチュエータにおいても剥離制御が行われ、更に電圧・周波数についても上で述べた結果と同様の傾向を示し、バースト駆動制御が周波数駆動を主なメカニズムとしていることを示した。その他に翼型を変化させた条件、流速を変えた条件での調査から、渦構造生成のメカニズムは条件によらず広く存在する一方で、乱流遷移促進の効果を剥離制御に積極的に活用できる条件は非常に限られることを明らかとした。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は広いレイノルズ数領域において、包括的な剥離制御指針を示すことを主目的としており、25年度は高レイノルズ数領域への適用を目指して、ナノ秒パルスプラズマアクチュエータ(以下NSDBDアクチュエータ)の調査を中心に行った。内容は大きく「1 : NSDBDアクチュエータの誘起流れ場の可視化」「2 : NSDBDアクチュエータと従来のACDBDアクチュエータとの剥離制御性能比較」「3 :高レイノルズ数流れにおける剥離制御実験の実施」の3つである。それぞれ成果は以下のとおりである。1 : NSDBDプラズマアクチュエータは高レイノルズ数剥離流れに対し効果があると報告されており、シュリーレン可視化法により、NSDBDアクチュエータの誘起する流れ場の基本性質を調査した。結果、NSDBDアクチュエータからはACDBDアクチュエータのような壁面噴流が発生すると同時に、プラズマ領域から円柱状の圧縮波が発生することが確認された。この圧縮波が高レイノルズ数流れに対し効果を持つものと予測された。2 :低レイノルズ数剥離流れ(Re=63,000)において、NSDBDアクチュエータ及びACDBDアクチュエータによる制御を比較することにより、両者の違いを明確にし、高レイノルズ数流れへの適用に向けた知見の獲得を目的とした。結果、失速直後の迎角では両者による制御は非常によく似た性質を示したが、より失速の進んだ迎角では、NSDBDアクチュエータの方がより良い剥離制御性能を示した。1で示したとおり、両者の誘起する流れ場は大きく異なり、2つの制御メカニズムが異なることを示す結果を得た。3 :中レイノルズ数流れ(Re=260,000)及び高レイノルズ数流れ(Re=1,300,000)に対しNSDBDアクチュエータ及びACDBDアクチュエータを適用した。中レイノルズ数流れでは両者ともに制御性能が認められ、特にNSDBDアクチュエータでは広い周波数領域で効果が見られた。一方高レイノルズ数流れでは効果が非常に軽微であるものの、ACDBDアクチュエータの方が良い効果を得た。

その結果、逆向きアクチュエータにおいても剥離制御が行われ、更に電圧・周波数についても上で述べた結果と同様の傾向を示し、バースト駆動制御が周波数駆動を主なメカニズムとしていることを示した。その他に翼型を変化させた条件、流速を変えた条件での調査から、渦構造生成のメカニズムは条件によらず広く存在する一方で、乱流遷移促進の効果を剥離制御に積極的に活用できる条件は非常に限られることを明らかとした。26年度が最終年度であるため、記入しない。研究実施計画のうち、ナノ秒パルスアクチュエータに関する知見を得る、という項目は概ね達成できたが、PIV計測システム導入の遅れにより、非定常計測の項目はほとんど達成できなかったため。上記の通り、非定常計測の項目について遅れがあり、早急に本項目の計測を行う。25年度中に計測に必要となるシステムの構築が進んだため、現時点で不足している条件について実験を進め、包括的制御指針について議論を進める。
幼児期の対人関係と社会性の発達との関連

本研究では、幼稚園年少児から年長児にかけての3年間において、幼児の対人的自己効力感が母親、保育者とのかかわりの中でどのように発達するのかを検討した。その結果、年少児の対人的自己効力感は母親の自立尊重的なしつけ行動が関連すること、年中児の対人的自己効力感は幼児の保育者への認知が関連すること、年長児の対人的自己効力感は母親の育児不安が関連することが示された。以上のことから、幼児期の3年間の発達の中で、対人的自己効力感に影響を与える母親、保育者の要因はそれぞれ異なる可能性があることが示唆された。本研究では、対人関係が広がり始める幼稚園年少から年中、年長にかけての3年間の縦断研究の中で、子どもの社会性の発達を縦断的に追跡し、それに対する母親、父親、保育者、仲間といった重要な他者との関係性がどのような影響を与えるのかについて、包括的な検討を行うことを目的としている。1年目の平成25年度は、幼稚園に新しく入園した3歳児を対象に、母親の自尊感情、養育態度が子どもの自己評価にどのように影響するか検討を行った。対象は、1つの私立幼稚園に在園する年少クラスの幼児とその母親である。まず、母親47名に幼稚園を通して質問紙の配布・回収を行い、自尊感情、養育態度の測定を行った。因子分析の結果、自尊感情では「対人的自信の無さ」「効力感の高さ」「自己への過小評価」「自己嫌悪」の4つの因子が抽出された。養育態度では、「命令的しつけ」「自立尊重的しつけ」「保護的しつけ」「独立促進的しつけ」の4つの因子が抽出された。子どもに対しては面接調査を行い、40名に対して「対人的自己効力感」の測定を行った。さらに対人的自己効力感の平均点(33.35点)で子どもを高群(22名)、低群(18名)の2群に分け、併せて分析を行った。その結果、母親の自尊感情と子どもの対人的自己効力感との間には関連は示されなかった。一方、母親の養育態度については、母親の「自立尊重的しつけ行動」の因子得点は、対人的自己効力感が高い群の子ども(M=.25, SD=.91)の方が低い群の子ども(M=-.33, SD=.83)よりも有意に高いことが示された(t=2.09, p<.05)。このことから、幼稚園年少児においては、母親が家庭で子どもの自立を尊重する態度をとることは、子どもが自分一人でも色々なことがやるという自信につながり、家庭だけでなく園での仲間関係における自己評価の高さにつながることが示唆された。本研究では、対人関係が広がり始める幼稚園年少から年中、年長にかけての縦断研究の中で、子どもの社会性の発達を縦断的に追跡し、それに対する母親、父親、保育者、仲間といった重要な他者との関係性がどのような影響を与えるのかについて、包括的な検討を行うことを目的としている。2年目の平成26年度は、4歳児を対象に、保育者のかかわり方が子どもと保育者との関係性にどのように関連するかを検討し、さらに保育者との関係性が子どもの自己評価、感情推論能力、向社会的行動とどのように関連するのか検討を行った。幼稚園年中クラスの子ども21名に対して保育者と子どもとのかかわりの観察調査を行い、さらに36名の子どもを加えて計57名の子どもに保育者への認知と自己評価、感情推論能力の面接調査と、向社会的行動の観察調査を行った。その結果、保育者のかかわりの中でも自発的な言葉かけ(用件の連絡、遊びでの話しかけ、一般的言葉かけ)と応答的な言葉かけ(応答的賞賛)が多いことが、子どもの保育者への受容的認知を高めることが示された。また、子どもの保育者への受容的認知が高いことは子どもの自己評価にプラスに、拒否的認知が高いことは自己評価にマイナスに関連することが示された。子どもの保育者への認知と感情推論能力、向社会的行動との間には有意な関連は示されなかった。このことから、日常的な保育場面での保育者の言葉かけに応じて、幼児期の子どもは保育者が自分を受容しているかどうかの認知を形成し、そのような認知が子どもの社会的発達の中でも特に自己評価に影響を与える可能性が示唆された。本研究は、対人関係が広がり始める幼稚園年少児から年中児、年長児にかけての3年間において、子どもの社会性の発達を縦断的に検討し、母親、保育者、仲間といった重要な他者との関係性がどのような影響を与えるかについて明らかにすることを目的とした。3年目の最終年度である平成27年度は、年長児を対象に母親の養育態度、育児感情が子どもの母親への関係性である認知、愛着にどのように関連し、さらに子どもの自己評価の発達にどのような影響を与えるのか検討を行った。幼稚園年長児クラスの子どもの母親81名に対して質問紙調査を行い、養育態度、育児不安について測定した。また、40名の子どもに対しては母親への認知、保育者に対する認知、対人的自己効力感を絵カードを用いた面接調査により測定した。さらに、26名の子どもに対してドールプレイ法により愛着関係の測定を行った。その結果、母親の育児不安の「子どもの発達への不安感」が高いほど、ジュースをこぼすストーリーにおける愛着得点が低いことが示された。また、母親の育児不安の「育児負担感」が高いほど、子どもの対人的自己効力感が低いことが示された。

また、子どもが母親を拒否的であると認知しているほど、子どもの対人的自己効力感が低いことが示された。子どもの保育者への認知については、有意な関連は示されなかった。以上のことから、母親の育児不安は5歳時点での子どもの愛着、仲間に対する効力感にマイナスに影響すること、さらに子どもが自分は母親から拒否されていると認知することは仲間に対する効力感を低めることが示唆された。本研究では、幼稚園年少児から年長児にかけての3年間において、幼児の対人的自己効力感が母親、保育者とのかかわりの中でどのように発達するのかを検討した。その結果、年少児の対人的自己効力感は母親の自立尊重的なしつけ行動が関連すること、年中児の対人的自己効力感は幼児の保育者への認知が関連すること、年長児の対人的自己効力感は母親の育児不安が関連することが示された。以上のことから、幼児期の3年間の発達の中で、対人的自己効力感に影響を与える母親、保育者の要因はそれぞれ異なる可能性があることが示唆された。本研究は、幼稚園年少から年中、年長にかけての3年間の縦断研究を行うことを目的としているが、2年目の本年度は、当初の予定通り幼稚園年少クラスから進級した年中クラスの子どもと、さらに年中時点から追加した子どもを対象に、保育者とのかかわり、子どもの保育者への認知といった子どもと保育者の関係性を測定し、それが子どもの自己評価、感情推論能力、向社会的行動といった社会性の発達とどのように関連するかについて、検討することができた。しかし、本年度は時間と予算の関係上、母親をはじめとする家族が子どもの発達にどのような影響を与えるのかについて検討できなかったため、課題も残る。幼児の社会性今後は、平成26年度に対象となった子どもを引き続き縦断的に追跡し、5歳時点での対人関係と子どもの社会性の発達について検討を行う予定である。その際、平成26年度では対人関係について保育者との関係性のみの検討だったため、今後は母親をはじめとする家族との関係性も含めた上で、幼児期の様々な対人関係が子どもの社会性の発達にどのように影響を与えるのか検討を進めていく。平成25年度は幼稚園年少児を対象に調査を行ったが、測定を行った子どもの数、測定尺度が少ないという課題が残ったため、平成26年度以降は同じ子どもを追跡調査していくとともに、さらに人数、測定尺度を増やしながら詳細な分析を行っていく予定である。