hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ロイシンリッチリピートを分子骨格とした新規抗体の創出とその応用に関する基礎研究

当初の研究計画では、ランダム化したLRRモジュールを逐次追加することでライブラリを発展させる予定であったが、追加するごとにライブラリの質の維持が困難になることが判明し、複数のLRRモジュールを1段階で導入する方法へ変更した。この変更に伴い、平成29年度に組み込み方式と制限酵素サイトの再検討、ベクターの改変をおこなった。平成30年度は、新たな方式でランダム化LRRモジュールを作製し、1段階で1-3個のLRRモジュールを導入する方法でのライブラリ構築を試みた。最適な構築条件を検討後、小規模のLRR抗体ライブラリを作製した。作製したライブラリの規模(diversity)は2.1×10e5程度であった。ライブラリの性状を評価するためランダムに16クローンをDNAシークエンシングしたところ全てのクローンで設計通りの配列であり、終止コドンの挿入、逆位、フレームシフトは見られなかった。ランダム化した配列では同一の配列は現れず、出現するアミノ酸配列も偏りはみられず、本法により設計通りの構築が十分に可能であることがわかった。当初の計画どおりに進捗しなかったものの、ランダム化するモジュールを繰り返すような構造のライブラリ構築において、より最適な構築手法を考案、実現することができた。本法は同様のモジュール構造を有するタンパク質のライブラリ構築にも適応可能であり、これまでの逐次導入する方法と比べ操作の容易さ、ライブラリの質の維持のしやすさの面で重要な成果である。今後は、作製したライブラリを用いモデル抗原に対してスクリーニングをおこない、結合活性を有するクローンの単離が可能かを評価する。また、スケールアップすることでより大きな規模のライブラリを完成させる。今回、考案および実施したライブラリ設計、構築手法については同分野の研究発展に寄与するためにも論文発表を通して公開予定である。これまでに、LRR抗体ライブラリの設計、LRR抗体鋳型遺伝子の人工合成とファージミドベクターへの組み込み、LRR抗体鋳型タンパクの大腸菌での発現確認までが着手済みである。平成27年度は、ライブラリ構築に先立ち、このLRR抗体鋳型遺伝子ファージミドベクターを形質転換した大腸菌にヘルパーファージを感染、LRR抗体鋳型タンパクを表面に提示したファージを調整し、ファージ上に効率よく、抗原に接触できる形で提示されていることを解析した。その後、ライブラリ構築に向け、ファージミドベクターDNAの大量調整、変異導入オリゴの組込み条件の検討をおこなった。校務の関係上、予定した研究時間が確保できなかったため。これまでに、LRR抗体ライブラリの設計、LRR抗体鋳型遺伝子の人工合成とファージミドベクターへの導入、大腸菌でのLRR抗体の可溶性発現およびファージ上でのLRR抗体の提示を確認済みである。平成28年度は、ファージ上に提示されるLRR抗体が適切な立体構造を保持して提示されているかの確認を試みた。そのため、ヤツメウナギのHEL特異的モノクローナルVLR抗体のクローン2Dをもとに、抗原結合部位を解析し、抗原結合部位DNAを人工合成し、LRR抗体の該当箇所に遺伝子レベルで導入した。その後、HEL結合部位を移植したLRR抗体をファージ上に提示させ、HEL結合活性があるかをELISA法で確認した。また、ファージ上への提示率をコントロール群としてLRR抗体鋳型タンパクと比較して解析した。解析の結果、HELへの非常に弱い結合がみられたが、ファージ上への提示率もコントロール群と比べ非常に低いことから、提示率の低さが結合の弱さの原因であることが考えられた。弱い結合活性であるため、立体構造の保持について議論できる段階に至っていない。今後、提示率を向上させる培養条件の検討や、抗体の可溶性発現による解析が必要である。さらに、ライブラリ化に先立ち、LRR抗体鋳型遺伝子を含むファージミドベクターを大量調製した。変異導入用のオリゴをTRIM法で設計、合成した。その後、ライブラリ作成のための制限酵素処理などの条件設定を詳細におこなった。校務の関係上、予定した研究時間を確保できなかった。平成28年度までにLRR抗体の大腸菌における可溶性発現と、M13ファージ上での提示について確認済みである。平成29年度は、ファージ上に提示されるLRR抗体が適切な構造を保持していることを確認するために、ヤツメウナギ抗HELモノクローナルVLR(クローン2D)の抗原結合部位を移植したLRR抗体クローン2Doriを構築し、ファージ上に提示させ、HEL結合活性を測定することで立体構造の保持の確認を試みた。平成28年度は調製したファージの状態が悪くHEL結合活性の評価に至らなかったが、29年度はファージ調製の条件検討を詳細におこない、2DoriがコントロールLRR抗体に比べ有意にHELへ結合することがわかり、ファージ上には適切な立体構造を保持したLRR抗体が提示されることを確認するに至った。またこれらの実験を通してLRR抗体の提示に適した大腸菌株、ヘルパーファージ、培養条件の基礎的データを得ることができた。一部ライブラリ構築に着手したが、当初計画していた3カ所の抗原結合部位を1つずつ3段階で導入する戦略では、段階を経るごとにライブラリの多様性が減少すること、想像以上に労力と時間を要することが明らかとなった。本研究においてライブラリの質はその後の結果に大きく影響を及ぼすため、ライブラリ構築法の大幅な変更を余儀なくされた。使用する制限酵素を工夫し3カ所の抗原結合部位を一度に導入する戦略へ変更し、それに合わせファージミドベクターの改変、変異導入部位の再設計をおこなった。現在、新たな戦略でライブラリ構築中である。

平成28年度までは校務の関係上、予定していた研究時間を確保できなかった。平成29年度は時間をかけて研究を実行できたが、当初計画していたライブラリ構築手法がライブラリの多様性を確保できないことが判明し、構築手法の大幅な変更と使用するファージミドベクターの改変を余儀なくされたため。当初の研究計画では、ランダム化したLRRモジュールを逐次追加することでライブラリを発展させる予定であったが、追加するごとにライブラリの質の維持が困難になることが判明し、複数のLRRモジュールを1段階で導入する方法へ変更した。この変更に伴い、平成29年度に組み込み方式と制限酵素サイトの再検討、ベクターの改変をおこなった。平成30年度は、新たな方式でランダム化LRRモジュールを作製し、1段階で1-3個のLRRモジュールを導入する方法でのライブラリ構築を試みた。最適な構築条件を検討後、小規模のLRR抗体ライブラリを作製した。作製したライブラリの規模(diversity)は2.1×10e5程度であった。ライブラリの性状を評価するためランダムに16クローンをDNAシークエンシングしたところ全てのクローンで設計通りの配列であり、終止コドンの挿入、逆位、フレームシフトは見られなかった。ランダム化した配列では同一の配列は現れず、出現するアミノ酸配列も偏りはみられず、本法により設計通りの構築が十分に可能であることがわかった。当初の計画どおりに進捗しなかったものの、ランダム化するモジュールを繰り返すような構造のライブラリ構築において、より最適な構築手法を考案、実現することができた。本法は同様のモジュール構造を有するタンパク質のライブラリ構築にも適応可能であり、これまでの逐次導入する方法と比べ操作の容易さ、ライブラリの質の維持のしやすさの面で重要な成果である。今後は、作製したライブラリを用いモデル抗原に対してスクリーニングをおこない、結合活性を有するクローンの単離が可能かを評価する。また、スケールアップすることでより大きな規模のライブラリを完成させる。今回、考案および実施したライブラリ設計、構築手法については同分野の研究発展に寄与するためにも論文発表を通して公開予定である。LRR抗体鋳型タンパクの変異導入部に、既知の結合モチーフを導入し、モデル抗原への結合活性を再現できるかを調べ、LRR抗体の提示と構造維持を詳細に検討する。さらに、変異導入オリゴをTRIM法により人工合成し、検討した組込み条件で導入し、ライブラリ構築を進める。変異導入オリゴを1カ所導入するごとに、任意のクローンを解析し、ライブラリの質を確認する。LRR抗体ライブラリの作成を進め、モデル抗原でパンニングをおこない、抗原特異的クローンの単離を試みる。新たな構築手法でLRR抗体ライブラリを作成し、モデル抗原でスクリーニングし、得られたクローンの性状を解析することで、本ライブラリの有効性を評価したい。試薬の価格により端数が生じてしまったため。試薬の価格により端数が生じたため理由:試薬の価格により端数が生じたため使用計画:翌年度分と合わせて物品購入に使用する翌年度分と合わせて、試薬の購入に使用する。
マイクロ流動場の制御による均一巨大単層リポソームの高効率生成法の開発

カバーガラス,あるいは微小な穴パターンを有する単結晶シリコン製のモールドにリン脂質溶液を塗布し,支持液中で振動させると特定の周波数でリポソームの成長速度が高くなることを示した.また,支持液に導電性がある場合,リポソームの生成が極端に阻害されることが判明したため,支持液の導電率とリポソームの生成密度の関係が比較的良く整理できることを示した.さらに,リポソーム周囲の流動場がリポソームの生成に重要であることを明らかにした.マイクロスタンプによるリン脂質の転写と生成GUV(Giant Unilamellar Liposome)の直径測定:本手法により,生成したリポソームが接触振動することで融合していく様子を観察することができ,個々のGUVの成長率の測定をすることはできた.その結果,支持液の粘性によってきまる特定周波数において融合率が高いことが確認できた.GUVの生成率と生成挙動の観察:GUVの生成率を,パターニングした浅い溝に装填したリン脂質に振動流を加えることで発生するGUVを,共焦点顕微鏡で観察すると同時に,その直径分布と数密度の測定をおこなったところ,これまでの予備実験で得られた結果と異なり,イオン濃度に対して強い依存性があることが見出された.そこで,リン脂質を塗布する基板の材質や塗布密度を変えて,GUV生成実験を繰り返したところ,GUVの生成にはリン脂質を塗布する厚さが一定以上必要で厚すぎないこと,基板は疎水性である必要があること,がわかった.さらに,イオンの種類をKClとPBS水溶液として,濃度を幅広く変化させてGUVの生成を観察したところ,イオン種によらず,イオン濃度が1.5mM程度でGUVの生成量が1/10になることが分かった.このことは,高イオン濃度水溶液中のエレクトロフォーメーションでGUVが生成できない理由として,高導電性溶媒によるリポソームへの電気力の喪失以外にも,リン脂質自体がイオンの影響を受けてリポソームのような形態になりにくいことが大きな要因であることが示唆される.以上より,提案した振動流を利用したGUVの生成法では,リポソームが存在すれば融合・合体を促進できる可能性があるが,融合する元となるリポソームを高イオン濃度水水溶液中で多数生成されないことから,研究の本来の目的である"高電解質濃度を内包したリポソーム"の生成を実現することは困難であることがわかった.カバーガラス,あるいは微小な穴パターンを有する単結晶シリコン製のモールドにリン脂質溶液を塗布し,支持液中で振動させると特定の周波数でリポソームの成長速度が高くなることを示した.また,支持液に導電性がある場合,リポソームの生成が極端に阻害されることが判明したため,支持液の導電率とリポソームの生成密度の関係が比較的良く整理できることを示した.さらに,リポソーム周囲の流動場がリポソームの生成に重要であることを明らかにした.GUVの生成率と生成挙動の観察: GUVの原材料として,動物細胞由来のリン脂質(L-a Phosphatidylcholine)を用いた.実験・観察に必要な振動流が印加できるGUVの製造装置は,数百kHzまで応答可能な積層圧電アクチュエータの先端にガラス板を接着し,水溶液を溜めたφ3.5mmの容器に振動面が水平になるように固定した横型タイプと,容器内の水溶液に垂直に浸漬できる縦型タイプの二種類を作製した.メタノールとクロロホルム混合液に実時間レーザー共焦点蛍光顕微鏡観察をするため,リン脂質膜を選択染色する蛍光色素を極微量溶解した媒質にリン脂質を溶解した後,ガラス面に塗布した.周波数を140kHzに変化させGUVの成長率を測定した結果,水、KCl水溶液(100mM)では1kHz,スクロース水溶液33wt%では4kHz,41wt%では10kHzで成長率の増加が見られた.すなわち、ピーク周波数は粘性が高いほど高周波数側へ移動する.GUV生成後の再加振の影響:内包液としてKCl水溶液(1.12wt%,300mOsm)を用い,基準状態として1kHz,10分加振(ピーク周波数:5μm)後,10Hz,100Hz,1kHz,10kHzをそれぞれ10分間加振した.そして、それぞれのGUVの直径分布を粒子計測装置(CDA-500,シスメックス)を用いて測定した.その結果,1kHz,10kHzでは直径分布に変化はなく,100Hzでは7μm,10Hzでは8μm程度にピーク周波数が変化した.平成23年度に計画をしていた「GUVの生成率と生成挙動の観察」,「マイクロスタンプによる脂質の転写と精製GUVの直径測定」に関しては,概ね遂行することができた。積層圧電アクチュエータを用い,脂質塗布面を流体中で振動させることにより、GUVの生成が可能であることが明らかになった.また、この振動には特異の周波数が存在し,流体の粘性や電解質かどうかにより変化することも明らかになった.ただし,実験ごとに生成したGUVが単膜であったり,多重膜であったりする現象が見られた.また,生成したGUVの直径についても実験ごとのバラツキが大きく,安定的に生成する手法が必ずしも確立できたとは言いにくい.さらに,生成したGUVは先端をカットしたピペットチップの吸引により生成面から分離し回収を行っているが,その際に一定の割合で破壊されてしまう現象が見られた.

そのため,現状では単膜のGUVを安定的に生成・分離・回収する手法が必ずしも確立されたとは言いがたい.上述したように,23年度当初の研究計画は概ね達成できていると考えるが,単膜のGUVを安定的に生成・分離・回収する手法が必ずしも確立されたとは言いがたい.そこで,まずGUVの生成・分離・回収を安定的に行うことができるよう,ガラス面に塗布する脂質濃度の最適化,再加振の最適周波数と振幅を求めると共に,ピペットチップでの吸引以外の回収方法を検討することを行う.その後,前年度にひきつづき,水溶液の粘性や導電率を変えたGUV生成率の測定や生成挙動の観察,マイクロスタンプを用いた同種の測定・観察を完了させる.さらに,これらの測定のうち特に水溶液の粘性がGUV生成率に与える影響に注目して生成過程の解明を試みる.現段階では,(1)リポソームを剛体球とみなして,リポソーム全体のマクロな運動の解析,(2)リン脂質二重膜内の変形あるいは変形エネルギーを二枚の相対運動をする膜で隔てられた流体の片側に振動している場合について流体の流れ場とともに解析する.応募内容に記載した様に,研究の中途でレーザーの寿命が尽きる恐れがあったため,初年度に経費の大部分に観察や測定に不可欠な現有のレーザー共焦点走査顕微鏡に用いるレーザの購入を予定していた.しかし,当該年度途中で、現有のレーザー以外の顕微鏡の走査システム全般について共焦点顕微鏡のメンテナンスが必要となった.これにより,当初予定より数箇月遅れが生じたため,レーザーの交換を寿命まで伸ばす計画に変更し,主としてレーザーの経費の繰越を申請した.次年度の研究費の使用計画を以下に示す.GUVの生成・分離・回収が安定的に行うことができるよう,ガラス面に塗布する脂質濃度を変化させた実験や,再加振の最適周波数や最適振幅を求める実験を継続して行う.そのため,リン脂質,蛍光色素など各種の薬品類を今年度も購入する.また、積層圧電アクチュエータは使用するたびに劣化を起こすため,定期的に交換をする必要がある.さらに,(1)GUVを剛体球とみなしてGUV全体のマクロな運動の解析,(2)リン脂質二重膜内の変形や振動がある場合について流れ場とともに解析するするため,汎用のソルバーのアップグレードやソフトライセンス費が必要となる.また、実験データを整理するための人件費,学会発表に必要な参加費,交通・宿泊費,印刷,論文投稿費など当初予定していた平成24年度の金額を使用する.
サル大脳皮質における感覚情報処理機構の電気生理学的解明

本研究の目的は大脳皮質における高次脳機能を明らかにすることであった。特に以下の点に焦点を絞って研究を行った。A)無麻酔下サル大脳皮質からのin vivoパッチクランプ法の確立、B)生理的感覚刺激によって誘起される応答をシナプスレベルで解析し、皮質における情報処理機構を明らかにする。以下の実験は、生理学会や疼痛学会など国内外の学会の研究指針および倫理規定に従って行った。1)一年目の研究実施計画(麻酔下サル大脳皮質からのin vivoパッチクランプ記録法の確立)を継続して行った。サルの大脳皮質からパッチクランプ記録を行う際、呼吸由来の脳の揺れが想像以上に大きかった。その為、現状では記録の確立が困難であると考え、記録法の習練が必要と考えた。2)従って、上記の実験を続けながら、小動物からの記録法も同時に目指した。その結果、幼若から成熟までのラット及びマウスの大脳皮質第一次体性感覚野から、麻酔下でin vivoパッチクランプ記録法を適用した。長時間の安定した記録を確立し、受容野へ生理刺激(ブラシ、熱、ピンチ刺激)を行いその応答を解析した。さらに、アジュバンドを用いて後肢に炎症が生じたモデルラットを作製し、正常状態での皮質深層細胞の膜特性及び生理刺激によって誘起される性質を比較した。炎症モデルラットでは、熱及びピンチ刺激で大脳皮質第一次体性感覚野の深層細胞にはより大きな膜の脱分極が観察された。これは第一次体性感覚野V層の錐体細胞は皮質視床路から入力を受け、視床を主に運動野、第二次体性感覚野、脊髄へ軸索を伸ばしている細胞であることから、痛みの高次統合機能を活性化する出力系と考えられる。これらの結果は、国際疼痛学会で発表した。3)1)の実験途中でサルが死亡し、以降供給ができなかった為、研究を継続することができなくなった。本研究の目的は、大脳皮質における高次脳機能を1と2に焦点を絞って明らかにすることである。1、麻酔下および無麻酔下サル大脳皮質からのin vivoパッチクランプ記録法の確立、2、生理的感覚刺激によって誘起される応答をシナプスレベルで解析し、皮質における情報処理機構を明らかにする。無麻酔下かつ訓練されたサルを用いることによって、アクティブタッチ(自らが能動的に行動する。すなわち、運動系や視覚系からの入力のみでモノの材質の識別が先行して行われる)に起因する皮質の感覚応答の解析を行う。以下の実験は、生理学会や疼痛学会だど国内外の学会の研究指針および倫理規定に従って行った。(1)本年度の計画は、麻酔下サル大脳皮質からのin vivoパッチクランプ記録法の確立であった。カニクイザルをモンキーチェアに少なくとも2時間から3時間は動かないように訓練した。その後、ケタミンおよびペントバルビタール麻酔下に脳固定用のリングおよび記録用チャンバーを取り付ける手術を行い、回復を待って慢性的実験の準備を行った。現在、ケタミンおよびペントバルピタール麻酔下でサルを記録用ステレオに固定し、大脳皮質からのパッチクランプ記録を試みている。(2)さらに現在までに、幼若から成熟までのラット及びマウスの大脳皮質一次体性感覚野からウレタン麻酔下でin vivoパッチクランプ記録法を適用し、長時間安定した記録を確立した。大脳皮質一次体性感覚野の錐体細胞から記録すると、膜電位の周期的な活動が観察された。また、受容野へ触およびピンチ刺激を行い、その応答を解析した。これらのラットおよびマウスの結果と、サル大脳皮質細胞の膜特性及び感覚刺激によって誘発される性質を比較しようとしている。
Gene Gunを用いた脾臓内遺伝子導入による神経芽腫遺伝子治療

平成11年度は、胎児皮膚にGene Gunを用いてEGFP遺伝子の導入が可能であるか否かを検討した。この結果、Gene Gunによる遺伝子導入は、胎児の発達に影響を及ぼさないことが確認された。この研究成果は、日本外科学会、日本小児外科学会において発表し、高く評価された。平成12年度は、EGFP遺伝子を脾臓内に導入して、そのhomingを検討した。その結果、EFGP遺伝子は、脾臓のみならず、門脈系を経由して肝臓、骨髄にまで達し、発現していることが確認され、遺伝子導入臓器として脾臓の有用性が確認された。平成13年度ではInterluekin 12の遺伝子をCMVのプロモーターに接続した遺伝子を、Gene Gunを用いてマウス脾臓内に導入した。このマウスを解析したところ脾臓のみならず,肝臓、骨髄においてもInterluekin 12の発現が認められた。遺伝子を付着させる金粒子の大きさは1μmのものを用い、Gene Gunのヘリウム圧は、100psi140psiに設定して実験を行なった。さらに、マウス神経芽腫細胞C1300を皮下移植したマウスに、腫瘍細胞移植後7日目にInterleukin 12を発現する遺伝子を脾臓内にGene Gunを用いて導入した。コントロールにはInterleukin 12を発現しない遺伝子を導入した。その結果、コントロール群では腫瘍が増殖し、肝転移が認められたが、Interleukin 12の遺伝子を導入したマウスでは、腫瘍増植は認められず、肝転移も認められなかった。現在、この遺伝子発現を検討中である。【学会発表】平成11年度は、胎児皮膚にGene Gunを用いてEGFP遺伝子の導入が可能であるか否かを検討した。【学会発表】【平成11年度の目標】Gene Gunによる遺伝子導入効率の検討【方法】実験動物にはさまざまな発達段階のA/Jマウス(胎児から成熟マウスまで)を用いた.導入遺伝子には,CMV promoterにGFP(Geen Fluorescent Protein Gene)とそのPoly Aを着けたプラスミッドを用いた.金粒子には0.6μと1μの大きさのものを用い,ヘリウムの圧力は100300psiで実験を施行した.胎児への遺伝子導入は,子宮切開し,胎児の腹部を露出して,皮膚内に遺伝子を導入した.遺伝子の発現は蛍光顕微鏡を用いて皮膚内のGFPの蛍光の発色を観察することで行った.【結果】胎児マウスへの遺伝子導入効率:遺伝子導入に最適な条件は,金粒子には0.6μの大きさのものを用い,ヘリウムの圧力を100psiに認定したものであった.遺伝子発現は,ほぼ100%に確認された.遺伝子導入率は,約12%であった.なお,sham operation群と比較して生存率には有意差は認められなかった.成熟マウスへの遺伝子導入効率:遺伝子導入に最適な条件は,金粒子には1μの大きさのものを用い,ヘリウムの圧力は200300psiに設定したものであった.【結語】今年度は,Gene Gunによる遺伝子導入が確認されたので,次年度には機能遺伝子(flt-3-ligand,Interleukin 12)の導入を予定している.なお,結果の一部は,平成12年6月日本小児外科学会総会(福岡)において発表予定である.【学会発表】平成11年度に行なったGene Gunを用いたマウス胎児皮膚への遺伝子導入の結果を、平成12年6月、福岡で行なわれた日本小児外科学会総会において報告した。【平成12年度の研究結果】平成12年度は、成熟マウスの脾臓内へGene Gunを用いてmarker geneであるGFP遺伝子の導入実験を行なった。遺伝子を付着させる金粒子の大きさは1μmのものを用い、Gene Gunのヘリウム圧は、200psi300psiに設定して実験を行なった。遺伝子導入後、3日目に脾臓・肝臓・肺・骨髄を摘出し、OCTコンパウンドに包埋した。

3μmの厚さで組織切片を作製して、GFP蛋白の発色を蛍光顕微鏡下に観察した。これらの条件では、90%以上の確率で遺伝子発現が認められた。さらに、遺伝子の発現は脾臓内にとどまらず、肝臓内および骨髄でも認められた。これらは、血液幹細胞や肝臓を対象とする遺伝子治療において、遺伝子導入部位として脾臓が有効であることを示し、今後の応用に期待できる結果であった。さらに今年度は、Interleukin 12の遺伝子をCMVのプロモーターに接続した遺伝子を作製して、これをマウス皮膚へGene Gunを用いて導入した。現在、この遺伝子発現を検討中である。【今後の学会発表・投稿予定】平成12年度の研究結果は、平成13年4月に仙台で行なわれる日本外科学会総会において発表予定である。またJournal of Pediatric Surgeryへも投稿予定である。【平成13年度の研究結果】平成13年度に作製したInterluekin12の遺伝子をCMVのプロモーターに接続した遺伝子を、Gene Gunを用いてマウス脾臓内に導入した。このマウスを解析したところ脾臓のみならず、肝臓、骨髄においてもInterluekin12の発現が認められた。遺伝子を付着させる金粒子の大きさは1μmのものを用い、Gene Gunのヘリウム圧は、100psi140psiに設定して実験を行なった。さらに今年度は、マウス神経芽腫細胞C1300を皮下移植したマウスに、腫瘍細胞移植後7日目にInterleukin12を発現する遺伝子を脾臓内にGene Gunを用いて導入した。コントロールにはInterleukin12を発現しない遺伝子を導入した。その結果、コントロール群では、腫瘍が増殖し、肝転移が認められたが、Interleukin12の遺伝子を導入したマウスでは、腫瘍増殖は認められず、肝転移も認められなかった。Gene Gunを用いて導入した。【学会発表】
チベット仏教におけるラムリム思想の基盤に関する研究

本研究の最終年度である本年は、ディーパンカラシュリージュニャーナ(982-1054)が築いたラムリム思想のチベット仏教における展開を中心として調査を行った。チベット仏教においてこの思想の基盤を作ったのがディーパンカラシュリージュニャーナとその主著の『菩提道灯論』であり、それを展開したのがタクポ・カギュ派の開祖であるガムポパ・ソナム・リンチェン(1079-1153)とその主著の『ラムリム・タルゲン』であり、それを大成したのがゲルク派の開祖であるツォンカバ・ロサン・タクパ(1357-1419)とその主著の『ラムリム・チェンモ』である。まずガムポパ・ソナム・リンチェンの『ラムリム・タルゲン』におけるディーパンカラシュリージュニャーナのテキストの引用例と彼に対する言及について調査を行った。本論は、ディーパンカラシュリージュニャーナの『菩提道灯論』に対する注釈書ではないものの、同論からの多くの引用が見られることからも、本論は彼の『菩提道灯論』の影響の下で著されていたことがわかる。この研究成果については、5月に韓国の中央僧伽大学において開催された韓国仏教学結集大会において研究発表を行った。つづいて、ツォンカパ・ロサン・タクパの『ラムリム・チェンモ』におけるディーパンカラシュリージュニャーナのテキストの引用例と彼に対する言及について調査を行った。本論は、その冒頭にディーパンカラシュリージュニャーナの小伝を記しており、またその内容構成が『菩提道灯論』とほぼ同じであることから、ツォンカバが同論を下敷きにして本論を著したのは明らかである。しかしながら、本論におけるディーパンカラシュリージュニャーナへの言及とそのテキストの引用を詳細に見てみると、「菩提心」に関するセクションに多く見られるものの、ツォンカバ独自の思想的議論が見られる「観」に関するセクションではあまり言及されていないことがわかる。このことから、ツォンカバは本論を著す上で『菩提道灯論』の影響を受けたものの、彼の思想形成にはあまり影響を受けていないように思われる。またこの他に、チベットにおける『菩提道灯論』の注釈書のうちチョーネ・タクパ・シェードゥップ(1675-1748)とパンチェン・ラマ6世によるものについて研究を行った。前者はその解説がパンチェン・ラマ1世(1570-1662)による注釈とほぼ同一であり、後者もその構成などが一致しており、チベットにおける『菩提道灯論』の多くが注釈がパンチェン・ラマ1世のものに基づいて著されていることが明らかになった。ディーパンカラシュリージュニャーナの著作のテキスト・データベース化の作業を行い、コンピュータへのデジタル・テキストの入力作業を終了した。現在、入力されたテキストに基づいて、諸版間のヴァリアント調査を継続して行っている。

テキスト校訂の終了した文献に関しては、翻訳作業が進行している。次年度以降の作業は、ヴァリアント情報を添えた全集テキストの完成に移る予定である。主として取り上げたテキストは、彼の主著である『菩提道灯論』およびその自注とされる『菩提道灯論細疏』であり、特にその中観思想を論じたセクションを中心に検討した。彼のラムリム思想の基盤が先行する中観論師の諸テキストにあり、中でもボーディバドラの影響が大きいことが解明された。中観思想の主要テーマである無自性性論証はカマラシーラに基づいているものの、彼の『バーヴァナークラマ』の引用は孫引きであることが明かとなり、その関係については慎重な調査を要するものである。今回の和訳の提示により、彼がチベツトにおいて中観論者の一人とされていく発端が解明された。また、ディーパンカラシュリージュニャーナに帰されるスモール・テキストの中でも、中観思想を中心に論じた『中観説示』の思想内容を検討した。同じ著者の『中観説示・開宝篋論』との比較を行い、前者の主題が、三昧に入ることにより諸存在を無自性であると認識することにあることを解明した。また、プラジュニャーモークシャによる注釈書のテキスト校訂・和訳もあわせて完成させた。チベットにおける『菩提道灯論』の受容に関しては、ローサン・ペルデン・テンジン・ニヤンタクによる注釈書を取り上げた。その和訳を完成し、彼が本論をどのように分析していたのかを提示した。ディーパンカラシュリジュニャーナによる基本的なテキストの校訂・和訳を終了したため、本年度は彼の主著である『菩提道灯論』に説かれたラムリム思想が、チベットにおいてどのよう受容されていったのかについて調査を行った。まず、彼の『菩提道灯論細疏』の「タントラ」に関する部分について検討した。本テキストでは、著者はタントラに対して消極的な立場を取っており、ラムリムの立場からのタントラ文献に対する扱い方が解明された。また、同じ著者によるタントラに関する著書と翻訳についても整理し、これらを著者自身とチベット人学者のプトゥンによる二つのタントラ分類に基づいて区分し、著者がどのようなタントラに重点を置いていたのかの一端が解明された。また、ディーパンカラシュリジュニャーナに帰されるスモール・テキストである二つの『大乗道成就摂集』について調査し、両者の関係を解明した。本論は、ツォンカパの『ラムリム・チェンモ』やパンチェンラマ1世による『菩提道灯論』の注釈書にも引用されており、本テキストがラムリム思想を論じる上で重要な文献であることが解明された。続いて、チベットで著わされた『菩提道灯論』の注釈書について調査を行った。現時点で、17の注釈書を確認でき、そのうちパンチェンラマ1世による注釈書について詳細な調査を行った。本テキストは最も大部なテキストであり、そのため彼に先行するチベット人の文献からの引用も多く含まれており、チベットにおいて『菩提道灯論』がどのように読まれてきたのかが解明された。最後に、ディーパンカラシュリジュニャーナがラムリム思想を確立する上で、その根拠とした先行文献が含まれている『大経集』のチベット語校訂テキストを出版した。本研究の最終年度である本年は、ディーパンカラシュリージュニャーナ(982-1054)が築いたラムリム思想のチベット仏教における展開を中心として調査を行った。チベット仏教においてこの思想の基盤を作ったのがディーパンカラシュリージュニャーナとその主著の『菩提道灯論』であり、それを展開したのがタクポ・カギュ派の開祖であるガムポパ
分裂酵母<jun>___ーAPー1様因子<pap^<1+>>___ー遺伝子産物の構造解析と作用機構の解明

分裂酵母pap^<1+>遺伝子は、7残基ごとにロイシンが5回繰り返す典型的なロイシンジッパ-構造をもつタンパク質である。しかもロイシンリピ-トの直前には塩基性アミノ酸(リジン、アルギニン)に富む領域が存在し構造的にホニュウ類のjun,fosといった転写因子に酷似している。pap^<1+>は元来高発現により、Cキナ-ゼ阻害剤スタウロスポリンに対し耐性を付与する遺伝子として単離された。コ-ディング領域の約80%をT7プロモ-タ-下につなぎ、大腸菌で融合タンパク質を発現させた。そのpap^<1+>融合タンパク質を用いた実験から以下のことが明らかになった。1)ゲルシフト法により、pap^<1+>タンパク質がAPー1配列(TGACTC/AA)に効率よく結合すること。2)DNAaseIフットプリント法により、SV40プロモ-タ-のAPー1部位にpap^<1+>タンパク質が確かに結合すること。3)溶液中で二量体を形成していること。以上のことから、pap^<1+>が分裂酵母のAPー1因子であることが証明された。さらに既知の分裂酵母遺伝子の塩基配列をコンピュ-タ-検索した結果、プロモ-タ-部位に完全なAPー1配列(TGACTAA)をもつ遺伝子を発現した。この遺伝子は25kdのタンパク質をコ-ド(p25)し、染色体構造に異常をきたすcrml変異細胞中で異常蓄積するタンパクとして同定されていた。p25の特異的抗体、及びNovthern法による解析から、p25の発現がpap^<1+>に完全に依存していることが明らかになった。すなわち、a)pap^<1+>を高発現している細胞では、p25の量も数倍上昇していた。b)pap^<1ー>欠損細胞では、p25はほとんど検出できなかった。以上のことから、p25はpap^<1+>転写因子のタ-ゲット遺伝子の1つであることが示された。
開心術後心房細動を予防する革新的な心房局所に対する抗炎症薬剤徐放化システムの構築

心臓手術後の心房細動(PoAF)は術後の炎症に起因することが検証されつつある.心房に直接抗炎症を及ぼすように基剤の開発をする.現在まで、術前後のステロイド持続大量全身投与では心房興奮が均一化することが示された.(Ishii Y, et al. Circulation. 2005; 111:2881-8)本研究では、局所投与が効果的かを調べることが目的である。PoAFは臨床において術後10ー20日まで出現しているため,術後早期薬剤放出と共に20日間ほど掛けて徐々に薬剤が放出される2段階の薬剤放出を確立する必要がある.基剤に関して,今までに血管再生医療において、Gelatin hydrogelを使用して血管新生に対する薬物徐放化システムを研究してきたことから、Gelatin hydrogelを使用して徐放化を図り、また,以前から心臓に対する貼付基剤を開発してきた研究分担者らとの共同研究から心房に貼付することで炎症を起こさない基剤を使用した心房貼付剤を開発し,それを用いた抗炎症薬剤徐放化シートを作製しようと試みている。現在,その方法や材料について各施設で検討を行いながら,本研究について学会などで情報収集と意見交換し,多施設研究のため各施設とミーティングを重ねてきた.研究器具のメインテナンスと必要物品を揃えてきた.研究開始の準備中である.さらに、光学マッピングシステム(Brainvision社製MiCAM02-CMOS)を使用しながら,術後5日目に心房興奮伝播を評価するためのメインテナンスと、確実なデータ採取を目標として麻酔、手術操作、データ採取などを行っている。多施設研究のため各施設とミーティングを行いながら,研究器具のメインテナンスを行ってきており,予定より時間が掛かっている.各施設で連携を取りながら,研究を継続してゆく予定である.心臓手術後の心房細動(PoAF)は術後の炎症に起因することが検証されつつある.心房に直接抗炎症を及ぼすように基剤の開発をする.現在まで、術前後のステロイド持続大量全身投与では心房興奮が均一化することが示された.(Ishii Y, et al. Circulation. 2005; 111:2881-8)本研究では、局所投与が効果的かを調べることが目的である。多施設研究のため各施設とミーティングを行いながら,研究器具のメインテナンスを行ってきており,予定より時間が掛かっている.各施設で連携を取りながら,研究を継続してゆく予定である.研究の準備段階のため
心・血管系の機能及び疾患に関するTEF-1転写因子ファミリーの役割

TEF-1ファミリーはSV40などのウイルスエンハンサーに結合してその転写を活性化することが知られているが、筋特異的遺伝子の調節領域に存在するM-CATモチーフにも結合し、またTEF-1変異マウスでは心形成異常のため致死となることから、心筋や血管平滑筋細胞の分化や心血管系の病態の成り立ち、中でも心肥大や動脈硬化に伴う遺伝子発現の変化にも関与していると予測される。我々はETF、ETFR-1、およびETFR-2を見いだして、哺乳類に4種類のTEF-1ファミリーが存在することを明らかにした。本研究では、マウスの発生過程や成体各組織、種々の培養細胞でのこれらの発現を解析した。培養細胞の心筋、骨格筋分化の実験系において分化にともなうETFR-2の発現上昇を観察したことから、マウスのETFR-2遺伝子DNAを単離して、その5'側領域の発現調節活性をルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いて解析した。また、生体においては動脈硬化を促進すると考えられるPDGFやアンギオテンシンIIが培養血管平滑筋細胞においてはその増殖を促すとともにETFR-2mRNAを増加させ、この現象にはMAPキナーゼを介する細胞内信号伝達系が重要であることを明らかにした。一方、TEF-1ファミリーによる転写調節の分子機構について、最近ショウジョウバエの翅の形態形成において明らかにされたTEF-1ホモログであるScallopedとVestigial蛋白の相互作用を手がかりとして、Vestigialと一部アミノ酸配列が一致する噛乳類の蛋白のcDNA単離を試み、307アミノ酸残基からなるマウスVestigial関連因子(mVRF)の全構造を明らかにした。さらにmVRFはN末端側の狭い領域でのみVestigialとの相同性を示し、この部分がTEF-1ファミリーとの相互作用に携わることを明らかにした。マウス諸臓器のRNAを用いたNorthem法により4種類のTEF-1ファミリーのうちTEF-1、ETFR-1、ETFR-2の骨格筋、心臓及び肺、腸、腎臓など平滑筋や血管に富む組織での発現が明らかとなり、これらが筋細胞の分化や機能発現に関与する可能性が示唆された。動脈硬化や高血圧症に見られる心肥大においては筋細胞の脱分化や筋特異的な遺伝子発現の幼若化を伴うことが知られているので、これらの病態の成立における細胞の増殖および分化形質の発現とTEF-1ファミリーの関連を知るために、in vitroの筋分化の実験系および血管平滑筋細胞でのTEF-1ファミリーの発現を解析した。まずマウス筋芽細胞株C2C12や胚性腫瘍細胞株P19を用いて、骨格筋、心筋への分化に伴ってETFR-2のmRNAが増加することを見出だした。そこでETFR-2遺伝子を単離してmRNAの転写開給部位近傍の構造を明らかにし、さらに単離した遺伝子DNAからレポーター遺伝子を作製して解析した結果、転写開始部位を含む0.9kbめ領域に筋細胞における調節領域が存在することが明らかとなった。またその中のよりせまい部分に筋分化に伴う発現調節の責任領域があることが示唆された。次に、無血清培地で培養したラット大動脈由来の血管平滑筋細胞に血清、PDGF、アンギオテンシンIIなどの増殖刺激を加えてTEF-1ファミリーの発現をNorthern法により解析したところ、ETFR-2のmRNAの一過性の増加が観察された。さらにこのmRNA増加は少なくとも部分的には転写レベルでの調節が関与し、それにはMAPキナーゼ経路を介する細胞内信号伝達系と新規蛋白合成を必要とすることが明らかとなった。これらの成果につき現在発表準備をするとともにさらに詳しい分子機構の解析を進めている。骨格筋や神経などの組織

特異的遺伝子の発現にはbasic HLH型転写因子群など様々な転写因子が関与するが、心筋や血管平滑筋細胞における遺伝子発現調節、特に心肥大や動脈硬化に伴う遺伝子発現の変化の機序については不明の点が多い。筋特異的遺伝子の調節領域に存在するM-CATモチーフにはTEF-1ファミリーが結合し、またTEF-1変異マウスが心形成異常を来すことから上記の病態の成立にTEF-1ファミリーが関与することが予測される。マウス諸臓器RNAを用いたNorthern法によりTEF-1ファミリーのうちTEF-1、ETFR-1、ETFR-2が骨格筋、心臓及び肺、腸、腎臓など平滑筋や血管に富む組織で発現することが明らかとなった。また筋芽細胞株C2C12や胚性腫瘍細胞株P19のin vitroの筋分化の実験系では、骨格筋、心筋への分化に伴ってETFR-2のmRNAが増加した。そこでETFR-2遺伝子を単離し、レポーター遺伝子によりETFR-2遺伝子の発現調節領域を同定した。一方、培養血管平滑筋細胞においては、生体においては動脈硬化を促進すると考えられるPDGF、アンギオテンシンIIなどの増殖刺激によりETFR-2mRNAが一過性に増加し、このmRNA増加はMAPキナーゼ経路を介する細胞内信号伝達系と新規蛋白合成を必要とした。これらの成果につき発表を準備中である。また、最近ショウジョウバエにおいてTEF-1ファミリーとVestigialたんぱくとの相互作用が報告され、ほとんど未知であった転写調節の分子機構が明らかにされつつある。哺乳類においてもVestigial様たんぱく群が存在しており、これらがTEF-1ファミリーの機能発現に関与すると考えられ、現在TEF-1ファミリーとVestigial様たんぱく群の相互作用と転写調節の分子機構の解析を進めている。
随意運動の制御における反回抑制の役割

本研究の目的は覚醒行動下のサル頚髄において、脊髄ニューロンの活動を安定的に記録する方法、中枢や末梢神経刺激によってニューロンを同定する方法の確立することであった。さらに、先行研究において麻酔下のネコを用いて同定されてきたレンショウ細胞の活動を記録するための行動課題の開発、そしてそれによってサルを訓練し、随意運動における反回抑制の役割を明らかにすることが究極的な目標であった。そのため、まずサル頸髄のレンショウ細胞の活動を慢性標本において記録するための技術を開発した。つまり、レンショウ細胞記録用に特別に金属電極を作成し、また末梢神経刺激によってニューロンを同定するためにカフ電極を新たに作成した。次にレンショウ細胞の機能的意義の評価に適した運動課題の作成・検討した。運動課題は手首屈曲伸展運動と精密把握課題を用いた。2頭のサルにおいて両課題を用いた訓練を行い、前者については筋電図記録及び反射試験、後者については脊髄ニューロン活動記録が終了した。これらの結果から、両運動課題はレンショウ細胞などのようにニューロンを同定し、同定されたニューロンの随意運動制御における役割を調べる上で有効な事が示唆された。この2年間の研究により、レンショウ細胞など特定の脊髄ニューロンを覚醒サルの行動中に同定する方法、及びそれらの随意運動制御に果たす役割を調べるための運動課題が確立した。現在2頭のサルにおいて、この確立された方法を用いた記録が始まっている。今後同研究を進め、レンショウ細胞だけでなく伸長反射、屈曲反射、および腱反射などに中心となる脊髄介在ニューロンを同定し、それらが随意運動の制御にもつ役割を実験的に明らかにしてゆきたい。申請者はこれまで、覚醒サルの頸随から介在ニューロンを慢性的に記録する方法(後述)、そして末梢神経へカフ電極を慢性的に装着する方法を開発してきた。本研究ではこれらの方法を応用して、随意運動中のレンショウ細胞の活動を世界で初めて直接記録する。まずレンショウ細胞の同定を、カフ電極を用いた運動神経へ逆行性刺激に対する応答、筋電図のspike-trigger averagingによる運動ニューロンへの単シナプス性抑制性出力の有無を用いて行う。また、サルに制御様式の異なる複数の運動課題を行わせ、レンショウ細胞と同定されたニューロンの活動を記録・比較することにより、これまで提唱されてきたレンショウ細胞の機能に関する仮説を検証する。つまり運動出力のゲイン制御・筋出力の安定性・関節stiffnessの制御が必要な運動課題をサルに行わせ、その際にレンショウ細胞の活動を記録・比較する。次に、課題に依存したレンショウ細胞の活動がもたらされる神経経路を知るために、まずレンショウ細胞近傍にアセチルコリン受容体拮抗薬であるmecamylamineを微量注入して運動課題に関連したレンショウ細胞の活動の変化を調べる。運動ニューロンの反回側枝からの入力はコリン性であり、下降路及び求心神経からの入力は非コリン性であることから、mecamylamine注入後の活動は主に下降路及び求心神経の活動を反映していると考えられる。このような実験によって運動制御にレンショウ細胞が貢献しているかを検討し、レンショウ細胞の随意運動制御に果たす役割を初めて実験的に明らかにする。上記のような全体の研究計画に対して、本年度はまず2頭のサルにprecision-grip課題を、2頭のサルに手首屈曲・伸展運動課題を長時間行えるようにトレーニングを施した。またサイズの小さなレンショウ細胞の活動を安定して記録できるような、微小金属電極の作成を行った。さらに、レンショウ細胞の同定に必要なカフ電極を筋神経に装着する方法を確立した。申請者はこれまで、覚醒サルの頸随から介在ニューロンを慢性的に記録する方法、そして末梢神経へカフ電極を慢性的に装着する方法を開発してきた。本研究ではこれらの方法を応用して、入出力先の同定された脊髄介在ニューロン、特にレンショウ細胞の活動を記録する事を目的とした。

ニューロンの同定は、カフ電極を用いた運動神経へ逆行性刺激に対する応答、筋電図のspike-trigger averagingによる運動ニューロンへの単シナプス性抑制性出力の有無を用いて行った。そのために前腕部の主要な感覚神経(橈骨神経浅枝・橈骨神経深枝・正中神経)にカフ電極を装着した。特に橈骨神経深枝・正中神経については世界で初めてカフ電極の装着に成功した。次にサルに制御様式の異なる複数の運動課題(手首の屈曲伸展運動および手指を用いた精密把握運動)を行わせ、同定されたニューロンの活動を記録・比較することにより、これまで提唱されきた脊髄介在ニューロンの機能に関する仮説を検証した。その結果、2頭のサルにおいて検討した結果1)予想より多くの脊髄ニューロンが手首や手指に同期した活動性変化を示すこと、2)それらの活動変化パターンは末梢神経からの入力パターンから考えて合目的的であること、3)末梢神経刺激に対して連続的・持続的な応答というレンショウ細胞に典型的な応答性をしめすニューロンが少数記録できること、が判明した。現在は上記3)の例数を増やすべく実験を継続している。
エキスパートナースの看護の実際に基づく専門分野のスタンダード看護診断と看護介入

本研究は、エキスパートナースによる専門的なケアの実際に基づいた質的・量的データを分析することにより、特定の看護専門領域のスタンダード看護診断と看護介入を明らかにすることを目的とした。その主な成果を挙げると、1)脳血管障害患者の看護記録の分析により、入院から退院に至るまでの看護診断の実態が示唆された。2)糖尿病患者の看護診断として23の看護診断名が示唆された。3)老年看護領域では、排泄障害を伴う高齢者の看護診断と看護介入の特徴が示唆された。4)難病疾患看護領域では、15の看護診断が示唆された。5)ホスピスへ入院したがん患者4事例の看護記録の分析により、心理社会的・スピリチュアル看護診断よりも身体的看護診断を優先する傾向が示唆された。6)ホスピス緩和ケア病棟の全国実態調査において、NANDA分類の診断名の使用は62%で、10の高頻度使用の看護診断ラベルが示唆された。また、エキスパートナース13名による調査から、高頻度使用の看護診断個々の診断指標や関連因子及びリスク因子が示唆された。臨床の現場では電子カルテの導入によりNANDA看護診断用語や共同問題が注目される一方で、入院期間の短縮によるクリティカルパスの導入など、看護記録上の混乱が指摘され、緊急の課題になっている。そこで18年度は、1)先ず看護師の看護診断用語に関連した看護師の態度に関する実態調査を企画した。その上で、本研究の主たる目的である、2)がん看護、成人看護(慢性期)、老人看護、在宅看護、ターミナルケアの5つの特定分野に限定して、エキスパートナース(専門看護師や認定看護師、及び臨床経験5年以上の看護師)が、どのような問題に関心を持ち、いかに対処しているかについて、その実態を面接および調査により究明することを目的に、下記の計画を実行し、一部を学会で発表した。1.末期がん患者に対する患者診断と看護介入に関する質問紙調査:NANDA使用群と共同問題使用群により看護診断が異なること、看護介入では、患者のセルフケアの援助は積極的だがダイイングケアには消極的であったことを、第12回日本看護診断学会(2006)に報告した。2.看護診断入門第2版の「看護診断に挑戦しよう」の執筆:NANDA看護診断分類法13領域の事例をあげ、事例紹介、診断プロセス、ケア計画の立案から校正した。3.NANDA看護診断用語と共同問題の必要性に関する認識に対する調査1)日本の看護診断と共同問題の使用頻度の実態について国際看護診断学会で発表した(2006)。2)1,171名の看護師を対象にした質問紙調査の結果、NANDA使用群はフローチャートを使用すれば共同問題は不要と認識していた。一方、共同問題使用群は術後や病態急変時のクリティカルパスや共同問題は必要と認識していた。これらの成果は第13回日本看護診断学会に発表する。3)脳神経系疾患領域の看護診断に関する300名の患者記録分析による結果は、上記学会で発表する。4.面接調査内容項目の決定とガイドラインの作成とエキスパートナースの面接ターミナルケアと老人看護領域では、エキスパートナースらと面接内容と方法を検討している。本研究は,エキスパートナースによる専門的なケアの実際に基づいたデータを分析することにより,特定の看護専門領域のスタンダード看護診断と看護介入を明らかにすることを目的としている。今年度は,専門分野ごとに調査の実施し,看護診断の重要度や使用頻度などから,各領域における看護診断と看護介入を特定することを計画し実行した。その結果,以下のことが示唆され,日本看護診断学会(2007)において発表した。1.共同問題の必要性に関する看護師の認識について,1,171名の看護師に調査した結果,NANDA使用者はフローチャートの使用により共同問題は不要と認識していた。一方,共同問題使用者は,術後や病態急変時のクリティカルパスや共同問題は必要と認識していた。2.呼吸器循環器分野では,入退院を繰り返すCOPD仮想事例の看護診断ラベルの診断指標の傾向を,呼吸器病棟勤務看護師44名の質問紙調査から分析した結果,「ガス交換障害」の診断指標は呼吸困難,低酸素血症,ガス分析が高頻度であることが示唆された。3.脳血管障害患者の入院時における看護診断の実態を,1病院3年間の入院患者の看護記録を分析した結果,高頻度看護診断ラベルは転倒リスク状態,非効果的組織循環:脳,セルフケア不足シンドローム,皮膚統合性障害であった。

4.終末看護専門分野では,ホスピス入院患者3事例の看護記録を分析した結果,心理社会的、スピリチュアル看護診断よりも身体的看護診断を優先する傾向が示唆され,この結果はNANDA国際学会に受理され2008年11月に発表する。本研究は、エキスパートナースによる専門的なケアの実際に基づいたデータを分析することにより、特定の看護専門領域のスタンダード看護診断と看護介入を明らかにすることを目的としている。今年度は、終末期がん看護と専門分野における看護診断と看護介入について調査研究や事例研究を実施し、得られた成果(下記の1から3)について、NANDAインターナショナルやシグマ・シータ・タウ国際学会で発表した(Ogasawar,2008;Hasegawa,2008)。また、呼吸器・循環器・脳血管・内分泌領域において、また難病疾患患者に高頻度に使用される看護診断を特定しそれらに対する看護介入について検討し、報告書を作成している。1.末期がん患者のケアをしている看護師に対する調査研究で、患者の苦痛となっている診断名は慢性疼痛、活動耐性低下、急性疼痛、不安、皮膚統合性障害、疲労感であり、呼吸不全や出血、悪疫室、貧血、イレウスなどの身体的苦痛との関連性が示唆された。またNICのダイイングケアとの関連性が示唆された看護診断は死の恐怖、意思決定葛藤、不安、誤嚥リスク、介護者役割緊張などの看護診断であった。2.ホスピス入院患者27名の内、心理社会・霊的苦痛のみられた4事例の看護記録を分析した結果、1)心理社会的・スピリチュアル看護診断よりも身体的看護診断を優先する傾向と、2)心理社会・霊的側面の看護診断名として、ボディイメージ混乱、霊的苦痛、抑うつが診断されていたこと、3)介入上の課題を残した看護診断は霊的苦痛と家族介護者役割緊張と全身状態悪化(開発看護診断)などであった。3.ホスピス・緩和ケア病棟における看護診断に関する全国実態調査において、NANDAラベル使用は62%で、高頻度使用の看護診断は転倒リスク状態、慢性疼痛、皮膚統合性障害、不安、悲嘆、活動耐性低下、急性疼痛、便秘、悪心、身体損傷リスク状態であった。
古典群、量子群、ヘッケ環の表現論と組み合せ論

本年度の研究実績としては,ヘッケ環の表現とその組み合わせ論的側面では,有木-小池で対称群と有限巡回群とのレス積として得られる複素鏡映群の系列についてその組み紐関係を保つかたちでヘッケ環にあたるもの(古典型A、B型ヘッケ環の一般化でアファインヘッケ環の商環になっているもの)を定義し,その既約表現を具体的に決定し,その中心も具体的に与えた.更に有木は上記の環が半単純であるための必要十分条件を与え,他の非原始的な複素鏡映群の系列についても同様に"ヘッケ環"を定義し、通常表現を具体的に構成した.また有木は同様のq変形をある種のコクセタ-群の商群の群環に対して与えた.小池は上記複素鏡映群について,Murnaghan-Nakayama typeの公式およびその自然表現をV=C^nとするとき,対称テンソルと交代テンソルのテンソル積の既約表現への分解を各既約表現についてヤング図形を用いて母関数のかたちで与えた。寺田は一般線型群の表現論に現れるRobinson-Schensted対応のSymplectic Group版であるBerele対応に対してT.Robyとの共同研究により,Fomin流の局所則による構成を与えた。また,寺田は有限体上の旗多様体の一般化としてp基本有限アーベル群の集合上に代数幾何のスキームの構造を与えた.小池はD_r型のDynkin図形上のquiverに対してその上の相対不変式環の構造および生成元を具体的に決定した.本年度の研究実績としては,ヘッケ環の表現とその組み合わせ論的側面では,有木-小池で対称群と有限巡回群とのレス積として得られる複素鏡映群の系列についてその組み紐関係を保つかたちでヘッケ環にあたるもの(古典型A、B型ヘッケ環の一般化でアファインヘッケ環の商環になっているもの)を定義し,その既約表現を具体的に決定し,その中心も具体的に与えた.更に有木は上記の環が半単純であるための必要十分条件を与え,他の非原始的な複素鏡映群の系列についても同様に"ヘッケ環"を定義し、通常表現を具体的に構成した.また有木は同様のq変形をある種のコクセタ-群の商群の群環に対して与えた.小池は上記複素鏡映群について,Murnaghan-Nakayama typeの公式およびその自然表現をV=C^nとするとき,対称テンソルと交代テンソルのテンソル積の既約表現への分解を各既約表現についてヤング図形を用いて母関数のかたちで与えた。また,寺田は有限体上の旗多様体の一般化としてp基本有限アーベル群の集合上に代数幾何のスキームの構造を与えた.小池はD_r型のDynkin図形上のquiverに対してその上の相対不変式環の構造および生成元を具体的に決定した.