hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口唇口蓋裂ならびに口蓋裂言語に対する心理的ケアに関する研究

患者や家族が社会に適応して幸福な生活を営むための条件は、ノーマライゼーションや心理的バリアフリーなど生活環境整備と、かれらが抱える葛藤の処理と個人的問題の克服の二つに大別できる。心理的ケアは、口唇口蓋裂とその治療についての正しい情報提供と、信頼関係に基づいた心の支援の提供が必要である。個人的問題は多様化しており、心理的ケアのマニュアル化は困難な作業であるが、患者や家族のニードに即した対応が可能な柔軟性を具備していることが前提となる。そのうえで、症状、年齢や性、パーソナリティなど個人的要因を考慮した包括的な支援が提供されることが重要となる。これまでに受け付けた電話の悩み相談ファイルをもとに、出生以前診断についての悩みの相談内容、出生直後の母親の心理的ケアのポイント、初回手術前後の心理に対する対応、25歳の患児をもつ母親の心理変化について調査するとともに、この時期の患児の本症への認識の実態、学童期の患児に本症が与える影響について母親を通じて調査を行い、いじめの実態、思春期を迎えた患者本人の認識について分析を行った。相談内容の上位3位は、父親は病院紹介、手術方法、セカンドオピニオン、母親は、手術方法、病院紹介、セカンドオピニオン、本人は、遺伝、手術方法、醜形恐怖という順位結果が示された。この結果をもとに対応マニュアル作成のための調査用紙の作成中である。研究成果については、第19回velo-cardio-facial syndrome educational foundation国際学術大会(カナダ・バンクーバー)において、Velo-Cardio-Facial症候群(VCFS)の患者の合併症状ならびに言語症状を調査し、本邦におけるVCFS患者のデーターベース作成の基礎資料となる調査結果を報告した。第52回日本先天異常学会学術集会において、愛知学院大学言語治療部門におけるVelo-Cardio-Facial症候群患者の言語治療に関する報告を行うとともに、日本の先天異常研究者ならびにVCFS臨床研究を行っている大学講座と学術交流を行った。アジア口腔顎顔面外科学会第10回国際会議(インドネシア・バリ)において、愛知学院大学歯学部附属病院を受診するVCFS患者の調査結果を報告するとともに学術交流を諸外国の研究者と行った。第12回アメリカ口唇口蓋裂学会において発表した。この結果をもとに対応マニュアル作成のための調査用紙の作成を準備中である。これまでに受けた電話の悩み相談ファイルをもとに、出生以前診断についての悩み相談内容、出生直後の母親への心理的ケアのポイント、初回手術後の心理に対する対応、25歳の患児を持つ母親の心理変化について調査するとともに、この時期の患児の本症への認識の実態、学童期の患児に本症が与える影響について母親を通じて調査を行い、いじめの実態、思春期を迎えた患者本人の認識について分析を行った。この結果をもとに対応マニュアル作成を準備中である。成果の概要は、まず、Telepracticeにおける高頻度な訓練で軽度VPIが改善し、Telepracticeの症例数を増やした結果、各症例において構音の改善あるいは悪化の予防が可能であった。また、対面診察では訓練の発話が引き出しにくく、時間が短くなってしまっていたが、Telepracticeで実施したところ、訓練環境が自宅であるため患児が気分的にリラックスしており、訓練を行うにあたっての発話を十分に得ることができた。高頻度に行うTelepracticeは、言語治療効果があることが示唆された。VCFS患者において、頻回の介入は重要であるとの結論に達することができた。一方、親はインターネットで情報検索するも有用な、正確な情報が得られていないために不安な状況に置かれていることも示唆された。そして、たまたまかホットラインの存在を知り、そこにわらをもつかむ思いで救いを求めてきた実態が明らかになった。愛知学院大学歯学部付属病院に事務局のある国連認定法人(ロスター)日本口唇口蓋裂協会(NPO)に設置されている無料電話相談(ホットライン)に寄せられた口唇口蓋裂の悩み486件について分析して、口唇口蓋裂に対する心理的ケアの在り方を検討した。電話相談(ホットライン)に寄せられた相談者の半数以上が母親であり、次いで父親、本人の順となり、他より突出していた。父親より母親のほうが多く、母親が不安などの心理的負担を抱えており切羽詰まった状況に追いこまれている実態を垣間見ることができた。

患児(者)を学校制度に即して発達段階別に分類すると、「誕生1歳」が最も多く、次いで「成人(23歳)」、「出生前」の順になった。相談者別の相談内容は、母親、父親、本人の三者に共通するのは「手術方法」と「病院紹介」の2件で、最新の施設で高度な診断・治療を求める要求があるにもかかわらずそれが満たされず、ストレスを強く感じている様子がうかがえた。両親の役割や立場の違いにより事態の認識と対応には違いがみられたが、心理的ケアはとりわけ母親に必要であり、その内容は育児支援と心の安定が中心で、父親には医療情報の提供が必要であった。本人からは、「遺伝」や「結婚」、「醜形不安」の問題が多く寄せられた。青年期から成人期は、将来の配偶者選択の時期であり、結婚、妊娠・出産といった問題はその後の人生を左右する重大事である。したがって、受容や共感を中核とするカウンセリング技法だけの心理的ケアだけではなく、問題解決に適した他の心理療法を導入することも必要である。心理的ケアを行うには、人間の心身のメカニズムや回復を援助する方法について正しい知識を持つこと、人間の心を大切にする心構えが必要と考え、「口唇口蓋裂に対する心理的ケアガイドブック」を作成した。患者や家族が社会に適応して幸福な生活を営むための条件は、ノーマライゼーションや心理的バリアフリーなど生活環境整備と、かれらが抱える葛藤の処理と個人的問題の克服の二つに大別できる。心理的ケアは、口唇口蓋裂とその治療についての正しい情報提供と、信頼関係に基づいた心の支援の提供が必要である。個人的問題は多様化しており、心理的ケアのマニュアル化は困難な作業であるが、患者や家族のニードに即した対応が可能な柔軟性を具備していることが前提となる。そのうえで、症状、年齢や性、パーソナリティなど個人的要因を考慮した包括的な支援が提供されることが重要となる。平成26年度に、患者および家族から寄せられた相談内容のまとめと整理を行い、その結果をもとに学会発表等を行うとともに患者および家族に対するカウンセリングのマニュアルを作成予定であったが、相談内容の分析が十分でなかったため、改めて分析を量・質の二面から行うこととしたために遅れた。臨床心理学研究成果をもとに学会発表等を行うとともに、患者および家族に対するカウンセリングのマニュアルを作成予定である。研究目的の到達度が遅れたのは、研究推進の原資の一つとなる出生前診断に関する実態調査、染色体検査によるVCFSの確定診断に関する実態調査は予備調査の段階にあり、本調査を実施するための調査項目等の確定ができなかった。そのことによる実態調査を実施できなかったことが大きな一因であった。研究目的の到達度が遅れたのは、研究推進の原資となる出生前診断に関する実態調査、染色体検査によるVCFSの確定診断に関する実態調査は予備調査の段階にあり、本調査を実施するための調査項目等の確定ができなかった。そのことによる実態調査を実施できなかったことが大きな一因である。
泡沫化を触媒する動脈壁コレステロールエステル化酵素(ACAT)の活性調節機構

単球マクロファージの分化に伴うACAT-1発現誘導に関与する因子を検討した。ヒト単球白血病細胞、THP-1細胞を単球マクロファージの分化を誘導する因子として知られる1,25-ジヒドロキシビタミンD3および9-シス-レチノイン酸と保温すると、これらの因子によりACAT-1蛋白の発現が誘導されることを見いだした。ACAT活性およびACAT-1 mRNAも同様に増加した。1,25-ジヒドロキシビタミンD3および9-シス-レチノイン酸によるACAT-1発現誘導はマウス腹腔マクロファージにもみられたが、ヒト肝癌由来細胞HepG2細胞、ヒト胎児腎臓由来細胞のA293細胞にはみられなかった。THP-1細胞を1,25-ジヒドロキシビタミンD3と保温するとACAT-1の発現が増加するが、こととき3-ヒドロキシ-3-メチルコエンザイムA(HMG-CoA)還元酵素阻害剤であるセリバスタチンを同時添加しておくとACAT-1発現が抑制された。これはHMG-CoA還元酵素阻害剤のあらたな抗動脈硬化作用として注目される。抗ヒトACAT-1抗体を用いたヒト組織の免疫組織化学的染色により、ACAT-1は、副腎皮質、卵巣顆粒膜細胞、精巣ライディッヒ細胞、などのステロイドホルモン産生細胞、肺胞マクロファージ、肝臓クッパー細胞、皮膚ランゲルハンス細胞などのマクロファージ系の細胞に高発現していることが明らかになった。抗ヒトACAT-2抗体を用いた免疫組織化学的検討により、ACAT-2はヒト小腸上皮細胞に発現していることが明らかになった。ヒトACAT-1のN末端131個のアミノ酸をGST融合蛋白として大腸菌に発現し、ウサギを免疫してポリクローナル抗体を得た。このACAT-1特異抗体を用いて、ヒト大動脈の動脈硬化病変におけるACAT-1蛋白の発現を免疫組織化学的手法により検討したところ、マクロファージ由来泡沫細胞に高度のACAT-1発現がみられた。一方、平滑筋細胞由来泡沫細胞におけるACAT-1の発現は軽度であった。マクロファージ由来泡沫細胞におけるACAT-1発現のメカニズムを検討するため、培養ヒト単球を用いてACAT-1蛋白発現の変化を検討したところ、単球からマクロファージへの分化に伴い、ACAT-1蛋白及びACAT活性は約10倍に増加した。次に、単球マクロファージの分化に伴うACAT-1発現誘導に関与する因子を検討した。ヒト単球白血病細胞、THP-1細胞を単球マクロファージの分化を誘導する因子として知られる1,25-ジヒドロキシビタミンD3および9-シス-レチノイン酸と保温すると、これらの因子にまりACAT-1蛋白の発現が誘導されることを見いだした。ACAT活性およびACAT-1mRNAも同様に増加した。また、マクロファージの泡沫化に伴う、ACAT-1蛋白の細胞内局在を免疫電顕にて検討した。正常のヒトマクロファージではACAT-1蛋白は小胞体に存在しているのに対し、アセチル化しDLにより泡沫化したマクロファージでは、ACAT-1は細胞内によりびまん性に存在していた。さらに倍率をあげて検討したところ、泡沫化マクロファージではACAT-1抗体陽性の多数の小胞が形成されていることが明らかになった。これまでACATは小胞体に存在する酵素であると信じられてきたが、マクロファージの泡沫化によりACAT-1の細胞内局在に変化が生じることが判明した。

ACAT活性およびACAT-1mRNAも同様に増加した。1,25-ジヒドロキシビタミンD3および9-シス-レチノイン酸によるACAT-1発現誘導はマウス腹腔マクロファージにもみられたが、ヒト肝癌由来細胞HepG2細胞、ヒト胎児腎臓由来細胞のA293細胞にはみられなかった。THP-1細胞を1,25-ジヒドロキシビタミンD3と保温するとACAT-1の発現が増加するが、こととき3-ヒドロキシ-3-メチルコエンザイムA(HMG-CoA)還元酵素阻害剤であるセリバスタチンを同時添加しておくとACAT-1発現が抑制された。これはHMG-CoA還元酵素阻害剤のあらたな抗動脈硬化作用として注目される。抗ヒトACAT-1抗体を用いたヒト組織の免疫組織化学的染色により、ACAT-1は、副腎皮質、卵巣顆粒膜細胞、精巣ライディッヒ細胞、などのステロイドホルモン産生細胞、肺胞マクロファージ、肝臓クッパー細胞、皮膚ランゲルハンス細胞などのマクロファージ系の細胞に高発現していることが明らかになった。抗ヒトACAT-2抗体を用いた免疫組織化学的検討により、ACAT-2はヒト小腸上皮細胞に発現していることが明らかになった。
細胞膜の損傷修復により誘起される細胞老化のWhole body解析

健康寿命を延ばし老化を抑制することを最終的な目標として掲げ、細胞が代謝は行うが分裂・増殖を停止している「細胞老化」の新たな誘導機構である細胞膜損傷・修復について、細胞老化の遺伝子パスウェイが膜損傷により誘導される機序を培養細胞を用いて明らかにするとともに、「細胞老化のホットスポット」をマウスの全臓器/器官から探索する。さらに膜損傷に起因する細胞老化と全身の老化を臓器特異的な遺伝子改変マウスで促進/抑制して証明し、細胞老化と全身の老化をコントロールする手法を探索する。
生体高分子膜を利用した高機能センサの開発に関する研究

1.コラーゲン膜被覆電極によるアビジン-ビオチン間相互作用のボルタンメトリー的評価タンパク質は、生体に対して高い親和性を持つため生体機能性材料としで有用である。コラーゲンはリジンなどのアミノ残基を多分に有しており、弱酸性領域ではプロトン化したアミノ基との静電的相互作用により、ストレプトアビジン(pl 5)がコラーゲン膜表面上に固定化される。この修飾コラーゲン膜で被覆した電極を用い、電極活性物質であるドウノマイシンでラベル化したビオチン(LB)とストレプトアビジンとの結合をモニタリングした。その結果LBの電流値は膜の有無によって50%程度減少ずるものの、LBの膜透過性が確認された。また、修飾電極、とLBと混合するとLBの電流値は減少した。これは、LBがストレプトアビジンのビオチンの結合サイトに取り込まれたためであると考えられる。それゆえ、この電極はタンパク質-リガンド間相互作用を評価するための新しいモチーフとなることが期待される。小麦由来のレクチンであるWGAと選択的に結合する糖質をドウノマイシンでラベル化し、ボルタンメトリーによりそれらの相互作用についての検討を行った。二糖類であるセロビオース、キトビオースは、ドウノマイシンとのシッフ塩基反応によりそれぞれラベル化される。同濃度におけるラベル化キトビースのピーク電流値は、ラベル化セロビオースの1.5倍となった。WGAとの結合力はドウノマイシン部位のWGAの被覆による電流値の変化から見積もることができ、ラベル化キトビオースの結合力が強くなっていることがわかった。この挙動の違いは、キトビオースが持つアセチルアミド基の影響によるものと考えられる。1.アビジン/キチン膜被覆電極によるビオチン誘導体のボルタンメトリー的挙動:天然多糖類の一つであるキチンは生体内で起こる反応に対して悪影響を与えることが少ないと言われている。このような生体高分子を介してタンパク質とそれに結合するリガントとの相互作用を評価することは、生体の機能を明らかにするために役立つものである。本研究では、そのモデルとしてアビジン-ビオチン間結合について着目した。その手法は、グラッシーカーボン電極をキチン膜で被覆し、ストレプトアビジン(等電点が5)をプロトン化したキチンのアセチルアミド基との静電的相互作用により固定化した。膜表面におけるアビジン-ビオチン間結合を電極活性物質でラベル化したビオチン誘導体を用いることで、その電極応答の変化からモニタリングすることができた。一方、等電点が1010.5のアビジンにおいては、キチン膜への静電的固定化が不十分であるためストレプトアビジンとは異なる挙動をとった。2.グルコースオキシダーゼ/ケラチン修飾カーボンペースト電極によるグルコースのセンシング:硬タンパク質として知られるケラチン表面へのグルコースオキシダーゼの固定化を試みた。タンパク質の架橋剤であるグルタルアルデヒドについての検討を行ったところ、グルタルアルデヒドを用いない場合において高い固定化率を示すことがわった。すなわち、酵素はケラチンのアミノ基との架橋によらず、プロトン化しているケラチンの官能基との相互作用により固定化されたものと考えられる。酵素被覆ケラチン粉末と白金粉末を修飾剤としたカーボンペースト電極では、10^<-5>Mレベルのグルコースの検出の可能であった。それゆえ、グルコースセンサとしての応用が期待される。
運動イメージと協調運動の脳機構に基づくスキー技術の学習支援システム構築

本年度はスタートアップの時期として。今後必要な機器の購入、基本的な実験系のテストなどを行った。先ず、ゲレンデにおいて自分が滑った映像を直後にチェックできる装置として、ビデオの遅延再生システムを購入し、1月にそのテストを実際にゲレンデで行った。実際には撮影されるスキーヤーをズームも含めて自動追尾する機能が必要であることが明らかになり、今後その改良を加えることとした。また、スキーのターン(特に小回り)時に神経・筋がどのように働くかを明らかにするのがこの研究の1つの目標だが、そのモデル実験を室内でできるように、シミュレータを購入した。設置も完了し、次年度から実際に運動しているときにTMS,末梢刺激などを行ってエキスパートにおける、脳活動を明らかにしたい。ゲレンデにおける測定の予備実験も行った。スキーヤーの足圧、筋電図、ビデオ解析システムを使って実際の滑走時の測定を行ったが、すべて予定通り記録できた。次年度は上級スキー選手での解析をスタートさせるよていである。以前より継続的に行っている、リアルタイムフィードバックシステムを実際にスキーヤーに適用したときの結果についての論文(技術資料)を発表した。次年度からは新たに子どもの初心者に以下にスキーを教えるかを研究に1つのテーマとすることにした。スキーは最初の技術的進歩は他のスポーツに比べてはっきりしており(滑られなかったものが滑れるようにない)、子どもにスポーツの楽しさを教えるには最適である。このような観点から、次年度では初心者を教えるのが旨いスキー指導者の指導を是非分析したい。実験に必要な機器は予定通り購入し、予備的なテストも順調であった。2年目からの実際の実験実施については問題なく進むものと期待される。1.スキーの回転技術のバイオメカニクス的、神経科学的解析については予備実験が順調に行うことができ、2019年度、夏、冬に本実験を行う。2.スキーシミュレータを使った解析は2019年7月から開始。特にTMS,H波などの適用は初めての試みとして期待できる。3.学習システムとしての遅延再生ビデオシステムの本格運用で、新潟の田代スキー場に設置予定である。4.子どものスキー指導についての実験はふじてんスノーリゾートスキースクールの協力を得られる。ここで、上級指導者の指導を記録し、その特徴を解析する。
フィリピン及びタイにおけるヘリコバクター・ピロリの病原因子の多型比較調査

フィリピンにおいては、セントルークス医学センターのNatividad博士、De Guzman博士らにより当付属病院消化器内科で異なる胃疾患38患者の胃から内視鏡により採取された49検体からヘリコバクター・ピロリを分離後、昨年行ったそれらの遺伝子型(16srRNA and glmによる本菌の遺伝学的同定;cagAおよびvacA遺伝子)に加えて、新たにiceA及びBabの遺伝子型を調べた。その結果、胃癌患者の57%にs1b,m1、胃炎患者由来の30%がs1a,m1で、m2はわずか8%と低率であった。cagAは胃癌患者で64%、胃炎患者のそれより高率であった。検体の41%がiceA1であり、bab遺伝子のほとんどがbabA1であった。また、慢性胃炎患者ではVacAが相関するが、cagAおよびiceとは相関せず、約50%の胃炎患者検体が高率にbab遺伝子を有していた。タイにおいては、マヒドール大学熱帯医学部において同様な遺伝子多型の検索を行ったが、タイでの解析は幾つかの技術的な問題もあり、十分な解析と比較が出来なかった。一方、VacAはp38MAPK/ATF-2経路を活性化し、炎症反応に関わる誘導型COX-2の発現を亢進した。この作用が胃のみならず大腸上皮細胞にも認められることを明らかにして、Infection and Immunityに報告した。また、本菌感染局所には多くの炎症細胞の浸潤や活性化が認められ、感染による胃粘膜障害にはIL-8が重要な役割を担っていると考え、VacAが宿主細胞からのIL-8産生を促す可能性とその産生機構の詳細を究明した。その結果、末梢血CD14^+細胞のみならず、単球系株化細胞U937細胞を含む数種の細胞でVacAによるIL-8の産生誘導が著明に認められた。そこで、U937細胞を用いてVacAによるIL-8産生誘導機構を詳細に検討し、その研究成果を、本年4月のJournal of Immunologyに報告した。TSS4およびトランスフェクッションによる細胞内へのcagA遺伝子の導入が、VacAによるp38 MAP kinaseおよびErkの活性化にどのように影響するかを調べている。今回の結果では、m1VacAとm2VacAとの生物学的な差が認められなかった。更に、VacAの細胞毒性にCagAの共存が著明に影響する成績が得られている。フィリピンにおいては、セントルークス医学センターのNatividad博士、De Guzman博士らにより当付属病院消化器内科で異なる胃疾患53患者の胃から内視鏡により採取された69サンプルを用い、ヘリコバクター・ピロリを分離後、それらの遺伝子型(16srRNA and glmによる本菌の遺伝学的同定;cagAおよびvacA遺伝子多型)を調べている。

タイにおいては、マヒドール大学熱帯医学部Manas Chongsa-nguan,教授との共同研究として、種々の胃疾患患者由来のヘリコバクター・ピロリを分離分離し、フィリピンのグループと同様なプロトコールによる遺伝子多型の検索を依頼した。日本においては、H.pyloriが産生する空胞化致死毒素(VacA)によるシグナル伝達系p38 MAPKと、p38 MAPKによる転写因子ATF-2の活性化が、炎症反応に関わるプロタグランジンを産生する誘導型シクロオキシゲナーゼ-2の発現を如何に誘導するかについて究明した。その結果、COX-2 mRNAはVacAの処理時間及び処理濃度に依存して増加した。このVacAによるCOX-2 mRNAの増加は、p38の特異的阻害剤による処理、若しくは、dominant-negative p38(DN-p38)強制発現により顕著に抑制された。次に、VacAによるCOX-2の転写活性に及ぼす影響について、COX-2プロモーターを繋いだルシフェラーゼ遺伝子(COX-2 reporter遺伝子)を用いて詳細に調べた結果、VacA処理により、p38経路を介して活性化したATF-2がCOX-2 promoter領域のCRE配列に結合して転写が亢進し、COX-2の発現が誘導されることが分かった。さらに、細胞培養上清中に産生されるPGE_2の産生量が、VacAの処理時間に依存して増大し、COX-2特異的阻害剤及びDN-p38発現の強制発現により著明に抑制された。また、このようなVacAの作用が胃のみならず大腸由来細胞などにおいても著明に認めらたことから、本菌の長い持続感染の間に胃のみならず下部消化管の疾患ともVacA毒素の毒性が影響する可能性を示唆していた。VacAについてはm1およびm2タイプによる違いを究明している。フィリピンにおいては、セントルークス医学センターのNatividad博士、De Guzman博士らにより当付属病院消化器内科で異なる胃疾患38患者の胃から内視鏡により採取された49検体からヘリコバクター・ピロリを分離後、昨年行ったそれらの遺伝子型(16srRNA and glmによる本菌の遺伝学的同定;cagAおよびvacA遺伝子)に加えて、新たにiceA及びBabの遺伝子型を調べた。その結果、胃癌患者の57%にs1b、m1、胃炎患者由来の30%がs1a、m1で、m2はわずか8%と低率であった。cagAは胃癌患者で64%、胃炎患者のそれより高率であった。検体の41%がiceA1であり、bab遺伝子のほとんどがbabA1であった。また、慢性胃炎患者ではVacAが相関するが、cagAおよびiceとは相関せず、約50%の胃炎患者検体が高率にbab遺伝子を有していた。タイにおいては、マヒドール大学熱帯医学部において同様な遺伝子多型の検索を行ったが、タイでの解析は幾つかの技術的な問題もあり、十分な解析と比較が出来なかった。一方、VacAはp38 MAPK/ATF-2経路を活性化し、炎症反応に関わる誘導型COX-2の発現を亢進した。この作用が胃のみならず大腸上皮細胞にも認められることを明らかにして、Infection and Immunityに報告した。また、本菌感染局所には多くの炎症細胞の浸潤や活性化が認められ、感染による胃粘膜障害にはIL-8が重要な役割を担っていると考え、VacAが宿主細胞からのIL-8産生を促す可能性とその産生機構の詳細を究明した。その結果、末梢血CD14^+細胞のみならず、単球系株化細胞U937細胞を含む数種の細胞でVacAによるIL-8の産生誘導が著明に認められた。
無歪入力形3倍周波数逓倍器の大容量化に関する研究

本研究は筆者等が開発した無歪入力形3倍周波数逓倍器の大容量化に際して生じる諸問題を検討し、設計理論を確立することによりその実用化を計ることを目的にしている。したがって前年度に試作した中容量器(10KVA)の特性を詳細に調べ、容量の増大に伴って生じた特性の変化からその設計理論の妥当性と大容量化の可能性を検討した。さらに本年度も引き続いて他の中容量器(30KVA)の試作を予定していたが、前年度の試作1号器を重複する面もあり、また本研究の過程において本研究に用いた3脚鉄心形逓倍器の接続を変えるだけで簡単に三相-二相変換用3倍周波数逓倍器になることが明らかになった為、予定を変更して中容量の新規な三相-二相変換用逓倍器(20KVA)を試作し、本研究の効率化を計った。以上の研究成果を次に列記する。(A)無歪入力形3倍周波数逓倍器(三相-単相変換用)1.先に試作した小容量器(800VA)と本研究による中容量器(10KVA)の特性を比較検討した結果、基準化した電圧-電流特性はほとんど変わらないが、容量の増加に伴いやゝ損失が増し、入力電流の歪率が大きくなった。これは中容量器の線形リアクトルを小さくした為、飽和リアクトル脚の磁束密度が高くなった事と、その構造上、漂遊負荷損が増加したためと考えられる。2.両試作器の特性を比較した結果、容量増加による特性の変化はなく、設計法の妥当性と大容量化の可能性が明らかになった。(B)三相-二相変換用3倍周波数逓倍器本研究の過程においてその応用例として試作した三相-二相変換用逓倍器は、二相出力に対して三相入力電流が平衡する特長があり、中容量の交流電動機の高速駆動用電源に適していることが明らかになった。
高学習能を有するラットを用いた化学物質の次世代影響に関する研究

農薬として広く使われるフェニトロチオンの1日の通常可食量およびその10倍量を、妊娠9日目から離乳期の28日齢まで母ラット持続的に注入した。仔ラットのシドマン型電撃回避試験及び水迷路試験では、コントロール群と曝露群との間に学習能の差はみられなかった。平衡感覚試験では、高濃度曝露群で有意に低下がみられた。Open field試験では、低濃度、高濃度曝露群ともコントロール群に比べ情動面で不安定であることが示唆された。神経行動学的変化をより鋭敏にとらえるには、個体差が少なく、生得的に一定レベルの学習能力を有し、さらに外的要因の影響を受けにくい動物が必須である。我々はWistar系ラットを母系とし、80世代にわたり兄妹自然交配とSidman型電撃回避学習試験の繰り返しにより、同学習試験において生得的に高回避成績を有し、かつ個体差の少ない近交系のTokai High Avoider(THA)ラットを確立した。今年度は交付申請書に記載した実験計画に基づき、このTHAラットを用いて化学物質として現在我が国で使用されており、残留農薬として基準値が定められているフェニトロチオンの次世代影響、特に中枢神経系の影響について検討した。フェニトロチオンの1日の通常可食量(0.007mg/kg/day)およびその10倍量を、妊娠9日目から離乳期の28日齢まで母ラットの背部にmini-osmotlc pumpを用いて注入して、仔ラット5週齢から神経行動学的試験を実施した。また、内分泌攪乱物質としての作用を検討するため、子宮、卵巣、精巣を採取した。Sidman型電撃回避試験及び水迷路試験では、コントロール群と曝露群との間に差はみられなかったが、平衡感覚試験では高濃度曝露群で有意に低下がみられた。Open field試験では、低濃度、高濃度曝露群ともコントロール群に比べ立ち上がり回数が有意に多く、情動面で不安定であることが示唆された。雌の仔ラットの子宮重量は濃度依存性に増加する傾向が見られ、雄の精巣も濃度依存性に増加した。これらの結果から、残留有機リン系農薬フェニトロチオンは、妊娠ラットに曝露した場合、仔ラットの学習能には影響がみられなかったが、平衡感覚、情動面での影響が認められた。また、内分泌攪乱物質としての作用が示唆された。次年度以降これらの分子機構について解明する予定である。昨年度は高学習能を有するTHAラットを用いて、代表的な残留農薬の一つであるフェニトロチオン曝露による次世代の中枢神経系発達に対する影響を、神経行動学的に調べた。その結果シドマン型電撃回避試験では学習能への影響はみられなかったが、落下試験では軽度の平衡感覚障害が観察された。また、情動性を観察するオープンフィールド試験において、興奮や探索行動の指標である立ち上がり回数がフェニトロチオン曝露群で有意に増加したことから、フェニトロチオン曝露により情動性に影響を及ぼすことが示唆された。また、濃度依存性にメスの子宮重量の増加がみられたことから、内分泌攪乱作用を示すことが明らかとなった。今年度は、フェニトロチオン曝露による次世代の高次脳機能への影響を分子レベルで解明するため、THAラットと母系であるWistarラットにおける脳での遺伝子発現、代謝産物の違いを検討した。遺伝子発現に関しては、両ラットそれぞれ4匹ずつ用いて海馬よりRNAを抽出し、アジレント社のマイクロアレイ解析を行った。代謝産物に関しては、慶応義塾大学先端生命科学研究所所長冨田教授と共同で、各々のラット8匹ずつの海馬、大脳皮質、肝臓、血清のメタボローム解析を、また糞便中の腸内細菌叢についてメタゲノム解析を行った。どちらも現在結果を解析中である。WistarラットとTHAラットを比較しTHAラットの特性を明らかにすることで、フェニトロチオンがTHAラットに特徴的な遺伝子ならびに代謝産物にどのような影響を及ぼしたのかを知る手掛かりになる。本年度の研究結果より明らかとなったTHAラットの特性をもとに、次年度はフェニトロチオン曝露によるこれらの遺伝子、代謝産物の変化を解析する予定である。我々が維持繁殖しているTHAラットは、母系のWistarラットに比べ、シドマン型電撃回避試験において極めて優れた成績を示す系である。これまでTHAラットは、様々な化学物質の次世代における高次脳機能障害の高感度検出に有効であったが、フェニトロチオン曝露による学習能への影響は認められなかった。一方で、フェニトロチオンは情動性に大きな影響を及ぼすことが明らかとなり、これまで知られていた内分泌撹乱作用のみならず、胎生期曝露が次世代の精神発達に極めて重要な役割を担うことが示唆された。今後THAラットを化学物質の生体影響のスクリーニング動物として用いる場合、その特性を明らかにする必要がある。昨年度慶応義塾大学先端生命科学研究所で海馬、大脳皮質、血清のメタボローム解析を行い、いくつかのTHAラットに特徴的なパターンが見いだされた。

今回は、THAとWistarラットの海馬と肝臓における遺伝子発現量の差をマイクロアレイにより解析を行った。THAラットおよび低学習能Wistarラット4匹ずっを学習試験で選抜し、RNAを抽出しマイクロアレイ解析を行った。その結果、遺伝子発現量の差が2倍以上認められるものは61個存在した。有意な発現量を示す遺伝子においてGO Ontology解析を行ったところ、生体防御に関わる遺伝子群の関与が明らかとなった。THAラットとWistarラットの遺伝子発現のパターンは、各群4匹ずつのラット間では差がなく、Wistarとは異なる系が確立されたといえる。興味深いことに、肝臓において発現増加が認められた遺伝子群においても海馬同様、生体防御機構および組織適合抗原に関連するものであった。現在、二次元電気泳動によるタンパク質分離と高感度ゲル画像解析ソフトとの結果から、発現量に優位性のあるタンパク質を網羅的に検討している。トランスクリプトームとプロテオミクスの手法を用いて、THAの高学習能という表現系において中心的役割を担う遺伝子を探索中である。
戦後日本の外国語(英語)教育における学習指導要領と検定教科書の実証的研究

本研究では、文部省が1947(昭和22)年に発行した『学習指導要領一般編(試案)』、『学習指導要領英語編(試案)』を起点として、日本の学習指導要領、教育課程、検定教科書(英語)の関わりを精査しながら、戦後の学習指導要領が今日に至るまでどのように検定教科書(英語)の中で機能してきたのかを検証するために、本年度は以下の調査研究を行った。1)学習指導要領と検定教科書の一次資料の収集・調査、ならびに外国語教育政策に関する研究資料の収集・調査を行った。1951(昭和26)年の試案の中で用いられた「話すこととしての英語(English as speech)」「四技能(four skills)」「機能上の目標(functional aims)」「教育上の目標(cultural aims)」などが、その後の英語教育界の主題となった。パーマー(H.E.Palmer)やホーンビー(A.S.Hornby)の影響が強い。2)戦後の中学校・高等学校学習指導要領をそれぞれの時期における時代背景・社会状況を踏まえて、学習指導要領を分析し、文部省検定中学校外国語科用教科書(英語)ならびに文部省検定高等学校外国語教科書(英語)を学習指導要領・ねらいに照らして内容調査を行った。1958(昭和33)年の学習指導要領では「試案」の文字が消え、教科書に対する法的拘束力が強く打ち出された。この期の主な中学校用英語教科書はオーラル・アプローチのいうsmall steps of contrastive patternsの原則に則り、1学年ではis→has、have→am、are→一般動詞→助動詞→進行形といった動詞の型を中心とした流れになった。2学年では時制を中心とした流れ、3学年では不定詞の形容詞用法→分詞の形容詞用法→接触節→関係詞節といった名詞の後置修飾を中心とした流れになっている。1学年から3学年までを通して各課の冒頭に「導入部」を設け、機能的な絵や言語文脈によって言語使用のsituationを設定し、進出項目の導入後は基本文の習熟に始まり、substitutionやconversionによる機械的なパタン・プラクティスの配置となっているのが特徴である。学習指導要領と検定教科書の第一次資料の収集・調査・分析を行った。今年度は1947(昭和22)年の「学習指導要領・一般編(試案)」を起点として、中学校・高等学校の学習指導要領の収集を行ったが、1947(昭和22)年学習指導要領(試案)、1951(昭和26)年中学校・高等学校学習指導要領(試案)、1956(昭和31)年高等学校学習指導要領、1958(昭和33)年中学校学習指導要領、1960(昭和35)年高等学校学習指導要領については、国立教育政策研究所等の資料を利用した。以下は学習指導要領の主な特徴の分析:1947(昭和22)年試案は英語教授の目的や指導法に重点を置き文型・文法の言及なし。1951(昭和26)年度版試案は教師用参考書としても機能し、英語教育は、教養・機能の観点から知的発達・文化の伝達・品性の発達・社会的能力の発達・職業能力に寄与することを述べる。1956(昭和31)年版は告示され「試案」が消えた。第二外国語が導入され、文型・文法を基本的なものから配列することを示す。1958(昭和33)年度版で初めて「言語材料」(文型・文法事項)を本格的に取り上げ、「学習活動」についての学年別の基準を示し必修語彙の表を付し、指導要領に強制力を付加。1960(昭和35)年版の高等学校学習指導要領で「英語A」(9単位)と「英語B」(15単位)に二分。1969(昭和44)年版は実際に使える英語、「基礎・基本」「精選と集約化」を強調。1970(昭和45)年版では「英語A」「英語B」に加えて「初級英語」「英語会話」を新設した。1977(昭和52)年版で中学校の英語は週3時間となり、過去完了・SVOCの文型などが消えた。1978(昭和53)年版から文法の検定教科書がなくなった。1989(平成元)年版では文法の比重がさらに軽くなり、言語材料は一括指定となった。「オーラル・コミュニケーションA・B・C」の3科目が新設。1998(平成10)年、1999(平成11)年で中学校・高等学校とも外国語が必修。「実践的コミュニケーション能力」を打ち出す。

2)戦後の中学校・高等学校学習指導要領をそれぞれの時期における時代背景・社会状況を踏まえて、学習指導要領を分析し、文部省検定中学校外国語科用教科書(英語)ならびに文部省検定高等学校外国語教科書(英語)を学習指導要領・ねらいに照らして内容調査を行った。1958(昭和33)年の学習指導要領では「試案」の文字が消え、教科書に対する法的拘束力が強く打ち出された。この期の主な中学校用英語教科書はオーラル・アプローチのいうsmall steps of contrastive patternsの原則に則り、1学年ではis→has、have→am、are→一般動詞→助動詞→進行形といった動詞の型を中心とした流れになった。2学年では時制を中心とした流れ、3学年では不定詞の形容詞用法→分詞の形容詞用法→接触節→関係詞節といった名詞の後置修飾を中心とした流れになっている。1学年から3学年までを通して各課の冒頭に「導入部」を設け、機能的な絵や言語文脈によって言語使用のsituationを設定し、進出項目の導入後は基本文の習熟に始まり、substitutionやconversionによる機械的なパタン・プラクティスの配置となっているのが特徴である。
大学の教育評価に関する研究-教育過程における学習者評価の構造化-

昨年度実施した、各大学が発行する自己点検評価報告書の分析結果を踏まえ、本年度は全国1,871学部を対象とした質問紙調査を実施し、その結果を分析することにより、主として次の3点を明らかにした。(1)自己評価方法の採用実態:自律型、応需型、標準化型、成果準拠型という4つの評価方法を設定し、それぞれがどの程度採用されているかを明らかにした。最も広く使われているのは自律型で、評価領域を問わず8割以上の学部が採用していた。これに対し成果準拠型を利用している事例は限られており、成果を根拠として活動の是非を問うという発想は、学士課程教育を対象とした自己評価においては未成熟であることが示された。(2)評価方法採否の規定要因:上記の評価方法の採否がどの様な条件に規定されているかを知るため、ロジスティック回帰分析を行った。結果として、標準化型アプローチは国公立大学で、また成果準拠型の評価方法は卒業生の進路として具体的な職業を想定している学部で、採用されている確率が高くなること等がわかった。(3)自己評価の効果の規定要因:教育の改善傾向の有無を従属変数としてロジスティック回帰分析を行い、自己評価の効果の規定要因を検証した。改善傾向が認められる確率を高める条件は、評価の領域や学部の属性によって異なることが実証されると共に、(1)との関連から、有効な評価方法が必ずしも広く採用されているわけではないことも明らかとなった。本年度は、教育評価の実状、その中でも特に教育成果に関する情報がいかに把握されているかについて、各大学が発行する自己点検・評価報告書を分析することにより明らかにした。得られた知見は、主として次の3点にまとめることができる。(1)教育成果を把握することができる方法として、今日わが国の大学で利用されているものは、収集されている情報の性格(客観的か主観的)と、収集方法(一括か分割)とに基づき、大きく4つに分類できる。これらの内、最も多く利用されているのは、客観×一括の方法で、そこには卒業生の進路や国家試験の合格状況等が含まれる。(2)学部の属性による使われている方法の多寡を検証したところ、客観的情報については設置形態により違いが見られるのに対し、学生や教員による授業評価からなる分割×主観の方法では学部設置年で、卒業生や雇用者に対するアンケートを含む一括×主観の方法では入試難易度によって差が出ることが明らかとなった。(3)上記(1)および(2)での分析対象は、教育成果を把握することが「できる」方法であった。しかし、実際にそれらの方法では、幾つかの先進的な事例を除き、教育成果ではなく教育活動に関する情報が収集されていると考えられる。一例として100種類の授業評価票の項目分析を行ったところ、教育成果について尋ねている項目はわずか12.3%であった。従って今後の研究課題としては、実際にどの様な教育成果に関する情報が把握されているのか、またその情報が教育評価のなかでどの程度活かされているのかを明らかにすることが残されている。
タイプIVポリケタイド合成酵素の発見と触媒メカニズムの解明

SACE_5946は、放線菌Saccharopolyspora erythraeaのゲノム上にコードされる脂肪酸合成酵素FabF/Bの相同蛋白質である。SACE_5946は、スターター基質3-oxooctanoyl-ACPと伸長鎖基質methylmalonyl-CoAをSACE_5946と共に反応させたところ、4-hydroxy-3-methyl-6-pentyl-2-pyroneを与えた。以上より、SACE_5946が新規タイプのポリケタイド合成酵素であることを証明した。放線菌のゲノム上にコードされるFab様蛋白質が新規タイプのポリケタイド合成酵素(PKS)であることを証明する。Streptomyces coelicolor A(3)2の脂肪酸合成酵素(FabFとFabH)、S. coelicolor A(3)2のtype II PKS(actinorhodin KSとCLF)、type I PKS(erythromycin合成酵素eryA1のKS)、S. griseusのtype III PKS(RppA)遺伝子およびFab様蛋白質に対し系統樹解析を行った。その結果、Fab様蛋白質はI型、II型、III型PKSおよび脂肪酸合成酵素とは異なるクレードを形成した。放線菌S. coelicolor M1146をホストとし、Fab様蛋白質を高発現させ、その培養上清をHPLCで分析した。その結果、空ベクターの形質転換体の培養上清にはない化合物のピークが複数検出された。また、これらの化合物はFabFの高発現株の上清にも存在しなかった。これらの化合物を順相および逆相クロマトグラフィーにより精製し、NMRおよび高分解能MS解析を行った。その結果、Fab様蛋白質の形質転換体が生産する化合物の構造を決定した。Fab様蛋白質は放線菌生体内においてβケト酸のアシルキャリアプロテイン(ACP)エステルをスターター基質に用いると考えられる。そこでACPのアナログであるN-acetylcysteamine(NAC)を用い、3-oxo-C8-NACを用いてin vitro試験を行った。スターター基質3-oxo-C8-NACと伸長鎖基質を大腸菌組換えFab様蛋白質と共に反応させたところ、目的のポリケタイドを与えた。放線菌のゲノム上にコードされているFab様蛋白質が新規タイプのポリケタイド合成酵素(PKS)であることを示す。昨年までの研究により、Saccharopolyspora属細菌由来の新規Fab様蛋白質がアルキルピロンを与えることが示された。Fab様蛋白質は放線菌生体内においてβ-ketoacyl-acyl carrier protein(ACP)エステルをスターター基質に用いると考えられる。そこで、3-oxooctanoic acidのACPエステル(3-oxooctanoyl-ACP)を調製した。具体的には、Saccharopolyspora属細菌のACPを大腸菌由来のAcpSでholo化し、生じたholo-ACPから大腸菌由来のMATを用いてmalonyl-ACPを調製した。本malonyl-ACPとhexanoyl-CoAを基質として、Saccharopolyspora属細菌のFabHと反応させることで3-oxooctanoyl-ACPを調製した。スターター基質3-oxooctanoyl-ACPと伸長鎖基質methylmalonyl-CoAをFab様蛋白質と共に反応させたところ、アルキルピロンを与えた。ketosynthase(KS)による縮合反応がPKSの鍵反応であり、PKSは、KSの型と酵素全体の構造で分類されている。type I PKSはモジュール型・FabF/B型であり、type II PKSはサブユニット型・FabF/B型である。Type III PKSは単独型・FabH型とサブユニット型・FabH型の二種類がある。Fab様蛋白質は単独型・FabF/B型であり、新規なタイプのPKSである。平成27年度は、Fab様蛋白質の組換え酵素によるin vitro反応を目的としていた。そのため、複数段階の反応をin vitroで再構築する必要があったが、脂肪酸生合成経路の初期反応をin vitroで再構築することに成功し、Fab様蛋白質のin vitro反応の進行を認めることができた。放線菌のゲノム上にコードされているFab様蛋白質が新規タイプのポリケタイド合成酵素(PKS)であることを証明した。昨年度までの研究により、Saccharopolyspora属細菌由来の新規Fab様蛋白質Aがアルキルメチルピロンを与えることが示された。また、Fab様蛋白質がβケト酸のアシルキャリアプロテイン(ACP)エステルとmethylmalonyl-CoAからアルキルピロンを合成することをin vitro反応により示した。本年度は、Saccharopolyspora属細菌のゲノムにもう1コピー存在するFab様蛋白質Bの機能を解明した。放線菌S. coelicolor M1146をホストとし、Fab様蛋白質Bを高発現させ、その培養上清をHPLC分析した。その結果、空ベクターや脂肪酸合成酵素の形質転換株には見られない化合物のピークが複数観察された。これらの化合物を順相および逆相クロマトグラフィーにより精製し、NMRおよび高分解能MSで構造解析を行った。その結果、Fab様蛋白質Bはベンジルメチルピロンを与えることが判明した。また、in vitro反応により、Fab様蛋白質Bは、phenylacetyl-CoA、malonyl-CoA、methylmalonyl-CoAからベンジルメチルピロンを合成することを示した。SACE_5946は、放線菌Saccharopolyspora erythraeaのゲノム上にコードされる脂肪酸

合成酵素FabF/Bの相同蛋白質である。SACE_5946は、スターター基質3-oxooctanoyl-ACPと伸長鎖基質methylmalonyl-CoAをSACE_5946と共に反応させたところ、4-hydroxy-3-methyl-6-pentyl-2-pyroneを与えた。以上より、SACE_5946が新規タイプのポリケタイド合成酵素であることを証明した。平成26年度はFab様蛋白質の異種発現と組換え放線菌が蓄積する化合物の構造決定を目的としていた。本計画通り、Fab様蛋白質組換え放線菌から6種のポリケタイドを単離し、LC-ESIMS、各種NMR解析により構造を決定した。平成27年度以降はFab様蛋白質のin vitro反応を計画しているが、平成26年度に前倒しで研究をスタートさせた。その結果、基質アナログを用いた反応ではあるが、in vitro反応の再構築に成功した。以上より平成26年度の研究は計画以上に進展していると結論できる。平成27年度の研究によりin vitro反応系を構築できたため、今後はFab様蛋白質の酵素学的性質を精査する。また、何故、Fab様蛋白質がポリケタイドの合成を触媒するかを、結晶構造解析や部位特異的変位導入により解明することを目的とする。応用微生物学平成26年度の研究でin vitro反応の再構築に成功したが、これは基質アナログを用いた反応である。平成27年度は、Fab様蛋白質の生体内における基質を調製し、in vitro反応を再構築する。生体内基質とは、βケト酸のアシルキャリアプロテイン(ACP)エステルのことである。βケト酸のACPエステルは脂肪酸合成酵素により生合成されるため、βケト酸のACPエステルを調製するためには脂肪酸合成経路の一部をin vitroで再構築する必要がある。既に脂肪酸合成経路の再構築に着手しており、必要な酵素群を大腸菌および放線菌から調製している。
高等植物の細胞サイズを制御する26Sプロテアソーム機能の解明

細胞は生物の最小基本単位であり,生物個体の大きさや形態は細胞の数とサイズによって決定されている。植物において,細胞サイズを決定する機構の一つがエンドリデュプリケーションと呼ばれる,細胞質分裂を伴わずにDNAを複製する機構である。しかし,エンドリデュプリケーションを介した細胞サイズの制御機構についてはほとんどわかっていないのが現状である。一方,26Sプロテアソームは,数十のサブユニットからなる巨大なプロテアーゼであり,タンパク質の分解を行うことで様々な生命現象に関与している。本研究ではこれまでに,シロイヌナズナ26Sプロテアソームのサブユニット,RPT2aが,エンドリデュプリケーションを負に制御することで,細胞サイズ制御に関与していることを明らかとした。また逆遺伝学的解析から,rpt2a変異体において過剰な遺伝子サイレンシングが生じることを発見した。当該年度では、これらRPT2aを介したエンドリデュプリケーションおよび遺伝子サイレンシング機構をより詳細に解析するために,核プロテオミクスによる,RPT2a新規相互作用因子の単離を試みた。その結果,遺伝子サイレンシングに関与する可能性のあるタンパク質を同定することに成功した。新規相互作用因子の解析によって,RPT2aの作用機序の解明が期待される。また,RPT2aはエンドリデュプリケーションならびに遺伝子サイレンシングを負に制御することから,これら両現象の関連性について,遺伝学的解析を行った。その結果,エンドリデュプリケーションが遺伝子サイレンシングを促進させる可能性を明らかとした。本研究を進展させることで,26Sプロテアソームによる細胞サイズ制御の完全解明が期待される。細胞は生物の最小基本単位であり、生物個体の大きさや形態は細胞の数とサイズによって決定されている。植物において、細胞サイズを決定する機構の一つがエンドリデュプリケーションと呼ばれる、細胞質分裂を伴わずにDNAを複製する機構である。しかし、エンドリデュプリケーションを介した細胞サイズの制御機構についてはほとんどわかっていないのが現状である。一方、26Sプロテアソームは、数十のサブユニットからなる巨大なプロテアーゼであり、タンパク質の分解を行うことで様々な生命現象に関与している。本研究ではこれまでに、タンパク質の分解を行う26Sプロテアソームのサブユニット、RPT2aが、エンドリデュプリケーションを負に制御することで、細胞サイズ制御に関与していることを明らかとしてきた。当該年度では、26Sプロテアソームによるエンドリデュプリケーションを介した細胞サイズ制御機構の解明を目指し、rpt2a変異体を用いたマイクロアレイ解析を行った。その結果、rpt2a変異体において数百の遺伝子の発現が著しく低下していた。また、抗生物質耐性遺伝子をrpt2a変異体に形質転換したところ、耐性遺伝子のサイレンシングが生じ、抗生物質感受性になることが示された。これらの結果から、rpt2a変異体において遺伝子サイレンシングが起きている可能性が示唆された。本研究からタンパク質分解と遺伝子サイレンシング、細胞サイズが関与している可能性が新たに示唆された。本研究ではこれまでに、タンパク質の分解を行う26Sプロテアソームのサブユニット、RPT2aが、エンドリデュプリケーションを負に制御することで、細胞サイズ制御に関与していること、またrpt2a変異体において過剰な遺伝子サイレンシングが生じることを明らにした。当該年度では、これらRPT2aを介したエンドリデュプリケーションおよびサイレンシング機構をより詳細に解析するために、エピトープタグつきRPT2a発現植物を用いた免疫沈降およびMS解析による、RPT2a新規相互作用因子の単離を試みた。その結果、RPT2aを含む26Sプロテアソームと相互作用する可能性のある分子を4つ同定することに成功した。これら新規相互作用因子の解析によってRPT2aの作用機序の解明が期待される。

また,RPT2aはエンドリデュプリケーションならびに遺伝子サイレンシングを負に制御することから,これら両現象の関連性について,遺伝学的解析を行った。その結果,エンドリデュプリケーションが遺伝子サイレンシングを促進させる可能性を明らかとした。本研究を進展させることで,26Sプロテアソームによる細胞サイズ制御の完全解明が期待される。