hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
腸内細菌叢と全般的健康度の関連性の研究

腸内細菌叢と健康度の関連を検討した。腸内細菌叢はT-RFLP法で測定した。以下の結果が得られた。1.加齢で増加:OTU657・990。2.加齢で減少:OTU940。3.血清アルブミン高値で減少:OUT338。4.米類摂取多い群で増加:OTU124(米類分解に関与)。5.ミルク摂取多い群で増加:OTU919・124(糖分解に関与)。6.生野菜摂取多い群で減少:OTU124(意義不明)。7.睡眠障害ある群で増加:OTU124。8. 65歳以上の女性の体脂肪率25%未満群でOTU332割合が有意に高い。OTU332(乳酸菌)の肥満予防効果が示唆された。平成22岩木健康増進プロジェクト参加者解析対象者200名(男性90名、女性110名)を対象に腸内菌叢の把握を試み、ライフスタイル・健康指標との関係を検討した。腸内細菌叢の測定にはターミナルRFLP解析を応用したNagashima法を用いた。本法ではほぼ同じサイズのフラグメント長のものを"OTU"化し、各系統分類群に大まかな相対比として把握できる。その結果、加齢や生活習慣・健康指標と各OTUとの間に以下のような一定の関連が示唆された。(1)加齢とともに増加:OTU657,990、OTU940→腸年齢の推定に役立つ可能性あり。(2)血清アルブミン高値の群で減少:OUT338(3)呼気水素高値の群で増加し、呼気メタン高値の群で減少:OTU940→大腸における炭水化物の分解に関与し、かつ古細菌と拮抗する立場の菌か。(4)呼気アセトン高値の群で増加:OTU338(5)呼気イソプレン高値の群で増加:OTU955(6)一秒率高値の群で増加:OTU110(7)米類摂取が多い群で増加:OTU124→米類分解に関与する菌か。(8)ミルク摂取が多い群で増加:OTU919、124→乳糖分解に関与する菌か。(9)生野菜摂取が多い群で減少:OTU124(10)睡眠障害がある群で増加:OTU124→睡眠障害に何らかの関連ありか。(11)肥満、糖尿病、喫煙、飲酒、運動、MANO指数(全体的健康度)とは強い関連は見られなかった。本データが今後の当該研究の貴重なデータベースになることが期待される。平成23年度岩木健康増進プロジェクト参加者解析対象者400名(男性150名、女性250名)を対象に腸内菌叢の把握を試み、ライフスタイル・健康指標との関係を検討した。(1)加齢で増加:OTU657,990→腸年齢の推定に役立つ可能性あり。(2)呼気水素高値の群で増加し、呼気メタン高値の群で減少:OTU940→大腸における炭水化物の分解に関与し、かつ古細菌と拮抗する立場の菌か。(3)呼気アセトン高値の群で増加:OTU949(4)一秒率高値(肺機能)の群で増加:OTU110(5)穀類摂取が多い群で増加:OTU124→穀類分解に関与する菌か。(6)ミルク、乳製品摂取が多い群で増加:OTU919→乳糖分解に関与する菌か。(7)睡眠障害がある群で増加:OTU124→睡眠障害に何らかの関連ありか。(8)肥満、糖尿病、喫煙、飲酒、運動、アレルギー(皮膚、鼻、呼吸器など)、MANO指数(全体的健康度)とは強い関連は見られなかった。平成23年度の調査結果は今後のデータベースとして使用することが期待される。また、平成22年度の結果と比較すると、相違する部分もみられ平成24年度にはその検証作業も必要である。青森県弘前市岩木地区(農村地帯)の一般成人住民男女約1,000名を対象に、腸内細菌叢と健康度(とくに肥満度)の関連を疫学的に検討した。腸内細菌叢はT-RFLP法(長島法)で測定した。

検定には共分散分析(喫煙習慣、飲酒習慣で調整し)を用い、以下の結果が得られた。1.加齢で増加:OTU657・990。2.加齢で減少:OTU940。3.血清アルブミン高値で減少:OUT338。4.米類摂取が多い群で増加:OTU124(米類の分解に関与する可能性あり)。5.ミルク摂取が多い群で増加:OTU919・124(糖分解に関与する可能性あり)。6.生野菜摂取が多い群で減少:OTU124(野菜摂取と関連する可能性あり)。7.睡眠障害がある群で増加:OTU124(睡眠障害に関与する可能性あり)。8. 65歳以上の女性の体脂肪率25%未満群でOTU332(乳酸菌が優位)割合が有意に高かった。9. 65歳以上の女性においては、総コレステロールでは、180mg/dL未満の群はそれ以上の群に比べてOTU332の割合が高かった。LDLコレステロールでも100mg/dL未満の群はそれ以上の群に比べてOTU332の割合が高かった。しかし、HDLコレステロールでは有意な関係はみられなかった。女性は、高齢化(65歳以上も含む)により脂質代謝や糖質代謝の悪化が引き起こされ、肥満しやすいことが知られている。以上より、65歳以上の女性で、腸内細菌叢の乳酸菌バランスと脂質代謝および肥満が関連する可能性が示唆された。高齢(とくに65歳以上)女性の肥満および肥満関連疾患の予防のために腸内の乳酸菌バランスを高めるような生活習慣が重要性であることも示唆された。平成24年度岩木健康増進プロジェクト参加者1016名(男性385名、女性631名)を対象に腸内菌叢の把握を試み、ライフスタイル・健康指標との関係を検討した。腸内細菌叢の測定にはターミナルRFLP解析を応用したNagashima法を用いた。本法ではほぼ同じサイズのフラグメント長のものを"OTU"化し、各系統分類群に大まかな相対比として把握できる。その結果、加齢や生活習慣・健康指標と各OTUとの間に以下のような一定の関連が示唆された。1加齢で増加:OTU657,919、加齢で減少:OTU124→腸年齢の推定に役立つ可能性あり。2肥満で増加:OTU110,853、肥満で減少OTU106,469→エネルギー代謝に関連する菌か。3血糖・HbA1cの高い群で増加:OTU520→糖代謝に関連する菌か。4コレステロールの高い群で増加:OTU366,754→脂質代謝に関連する菌か。5喫煙・運動・睡眠・アルコールとは強い関連はみられなかった。6一秒率とは強い関連はみられなかった。7乳酸菌の割合が高いグループで有意に体重が低かった。すなわち乳酸菌の体重減少効果が示唆された。平成24年度の調査結果は今後のデータベースとして使用することが期待される。また、平成23年度の結果と比較すると、相違する部分もみられ平成25年度にはその検証作業も必要である。当初予定された研究計画のうち、時期的なものは順調であるが、予定測定項目の測定が少し不足している。25年度が最終年度であるため、記入しない。ほぼ順調に遂行することができた。腸内細菌の状態が健康度に大きく影響していることが示唆された。研究推進母体と協力組織・対象者の関係は良好であり、次年度からも順調に研究は遂行できると考えられる。予定測定項目の測定が少し不足しているので、次年度は遺漏なきようこれを実施する。乳酸菌の体重減少効果は特筆すべきであり、より詳細な今後の研究が求められる。そのためには岩木健康増進プロジェクトをさらに継続させてより詳細な検討に耐えうる状態にしたい。実際岩木健康増進プロジェクトは弘前市との連携で以後10年間の実施が決定しており、研究の到達点に達しうると考えられる。
超音波バブルフィリング法による臓器容積の自動計測

本研究の目的は、超音波エコー法によって得られる生体内情報から、対象臓器の容積を高精度かつ全自動で計測することである。高精度に容積を計測するためには、対象臓器の形状をあらかじめ正確に抽出する必要があるが、従来は超音波画像の画質の悪さゆえ、全自動の境界抽出は困難であることが多かった。そこで、我々は新たに提案したバブルフィリング法を用いて全自動かつ高精度に対象領域を抽出できる方法を開発した。そして、生体を模擬して作成した実験ファントムに本アルゴリズムを適用した結果、高精度に容積を自動計測することに成功した。今研究期間中には、まず、このアルゴリズムを産科領域の胎児膀胱を対象とした50個の臨床データに適用した。高精度な容積計測を可能にするため、データ収集にはプローブを一定速度かつ平行に移動させることが可能な3次元データ収集システムを用いた。その結果、臨床的に得られる通常の画像に対して、本アルゴリズムが極めて有効であることを確認した。次に、泌尿器領域における残尿量測定を目的として成人膀胱容積を計測した。成人膀胱を対象にすると、スキャナなどのデータ収集装置を用いることは煩わしくなる。そこで、成人膀胱を対象としたアルゴリズムでは、医師がプローブを平行かつ一定速度で手動走査することで多数枚の横断面像を取得し、さらに、それらに直交する縦断面像を1断面取得するだけで、特別なデータ収集装置を用いず、画像処理のみで精度よく膀胱容積を計測できるようにした。このアルゴリズムを残尿状態を模擬した成人膀胱データ、残尿状態にある臨床データに適用した結果、良好に容積計測を行うことができた。その他、今期間中には、膨大な臨床データを保存、処理できる計算機環境を整えた。本研究の目的は、超音波エコー法によって得られる生体内情報をもとに、対象臓器の容積を高精度かつ自動的に計測するアルゴリズムを開発することである。高精度に臓器容積を自動計測しようとすると、対象部位の境界を厳密に決定する必要があるが、超音波画像は低品位であるため、この臓器容積の自動計測は極めて難しい作業となる。そこで、我々は今研究期間、臓器内腔の輪郭決定に既提案のニューラルネットワークを用いた組織境界決定法に加え、新たに提案したバブルフィリング法を適用することにより、高精度の臓器領域決定を行う手法を開発した。まず、0.31mlから49mlまでの範囲で、生体を模擬した7種類の実験ファントムを作成し、本アルゴリズムを適用した。その結果、0.31mlから49mlまでの範囲で、本アルゴリズムが充分信頼できることを確認した。そして引き続き、この手法を産科領域の胎児膀胱を対象とした50個のデータに適用した結果、臨床的に得られる通常の画像に対して、本アルゴリズムが極めて有効であることを確認した。その他、対象部位の3次元データを収集する際、超音波診断装置のプローブの走査方向や走査速度が厳密にわからないと、計測した容積が信頼できないという問題点があったが、プローブを一定速度かつ平行に移動させることが可能な3次元データ収集システムを開発することで、解決した。さらに、バブルフィリング法を適用する際、設定する最小半径が小さすぎれば、バブルフィリング法の効果が発揮されず対象臓器を精度よく決定することができなくなり、大きすぎれば、対象臓器容積を過小評価してしまう問題点があったが、最小半径と各種パラメータの関係を調査することにより、自動的に最小半径を決定することを可能にした。

そして、生体を模擬して作成した実験ファントムに本アルゴリズムを適用した結果、高精度に容積を自動計測することに成功した。今研究期間中には、まず、このアルゴリズムを産科領域の胎児膀胱を対象とした50個の臨床データに適用した。高精度な容積計測を可能にするため、データ収集にはプローブを一定速度かつ平行に移動させることが可能な3次元データ収集システムを用いた。その結果、臨床的に得られる通常の画像に対して、本アルゴリズムが極めて有効であることを確認した。次に、泌尿器領域における残尿量測定を目的として成人膀胱容積を計測した。成人膀胱を対象にすると、スキャナなどのデータ収集装置を用いることは煩わしくなる。そこで、成人膀胱を対象としたアルゴリズムでは、医師がプローブを平行かつ一定速度で手動走査することで多数枚の横断画像を取得し、さらに、それらに直交する縦断画像を1断面取得するだけで、特別なデータ収集装置を用いず、画像処理のみで精度よく膀胱容積を計測できるようにした。このアルゴリズムを残尿状態を模擬した成人膀胱データ、残尿状態にある臨床データに適用した結果、良好に容積計測を行うことができた。その他、今期間中には、膨大な臨床データを保存、処理できる計算機環境を整えた。
大脳皮質脳室帯からの細胞移動の制御メカニズムについて

我々は発生期大脳皮質の脳室帯に発現する新規分子FILIPを同定し、FILIPがFilamin Aと結合し、Filamin Aの分解を促進することにより、脳室帯からの細胞移動の開始を負に制御していることを明らかとしてきた。本年は以下の実験を進めた。FILIPのノックアウトマウスを作製し、その表現型の検討を進めた。当初、FILIPが心臓に幅広く発現し、細胞の移動に抑制的に働くことより、ノックアウトマウスは胎生期の早い時期に死亡する可能性が高いと考えたが、得られたノックアウトマウスは成体にまで成長した。現在、大脳皮質の厚さがコントロールマウスと異なっており、BrdUラベリングなどと併せ細胞移動との関連を検討している。(2)FILIPの活性調節機構を明らかとする。我々の得た結果では、FILIPはアクチンが結合したフィラミンAは分解するものの、アクチンが結合していないフィラミンAには作用しない。この事実は、生物学的には整合性のとれる現象と考えられるが(むやみにフィラミンAを分解しない)、その仕組みは明確に説明できていなかった。そこで、我々は、フィラミンAの細胞内局在がその分解の有無に関連するのではないかと仮定し実験を進めた。その結果、フィラミンAに結合する分子を同定しその分子がPIP3に結合することを観察した。同分子がPIP3のセンサーとしてフィラミンAの細胞内局在に関わっている可能性を考え実験を進めている。なお、平行して行っている細胞生物学的観察では、予備実験の段階であるが、細胞膜近傍のフィラミンAはFILIPと共存しても分解が明確にはすすんでいなかった。
複数の発振器を持つ同期系における相互干渉のメカニズム解明とその低減

近年の高速・高密度の集積回路設計において,電気的ノイズによる基準クロック生成回路の性能劣化のトラブルが問題となっている。特に同じ周波数で動作しあう2つの発振回路がお互いに影響を及ぼし合う相互干渉の現象については,これまでいろんな研究機関でその対策が検討されてきた。本研究では,独自の線形モデルにより相互干渉の現象を解析し,従来あまり知られていなかった同期系における相互干渉の現象を理解すると同時に,その低減について新規回路による手法を提案する。さらに検証用テストチップを設計・試作・評価することでその有効性を確認する。
ゲル紡糸繊維の改質と被服材料への応用

ポリエチレンに関しては、超延伸(高強力-高弾性率)繊維の温度変化にともなう構造及び力学特性を検討した。特にポリエチレンは融点が145°Cと低く、かつヤング率の低下も著しかった。そこでその要因を結晶弾性率及び結晶化度の温度依存性との関連において研究した。その結果、結晶弾性率は温度依存性を持たず、ヤング率の低下は結晶化度の低下によることが判明した。またポリプロピレンについても同様な結論がえられたが、ヤング率の温度による低下はポリエチレンほど顕著でなかった。これは温度上昇による結晶化度の低下がポリエチレンほど顕著ではないことに起因する。次にポリエチレンについて得られた知見をもとにナイロン6のゲルを作成し、乾燥後延伸を行ったが、得られた引っ張り強度並びにヤング率は溶融紡糸(延伸フィルム)試料の値に比べて大きな差はなかった。この原因はナイロン6が結晶構造中に水素結合を保有し、かつ分子鎖長もポリエチレンに比べてずっと短いことに起因することが明らかになった。セルロ-ス系については、ラミ-繊維のマ-セル化、セルロ-ス誘導体であるハイドロオキシプロピルセルロ-ス(HPC)について高強力-高弾力性率化を試みた。ラミ-繊維をマ-セル化して得られた繊維の結晶構造は、ベンベルグ、レ-ヨン繊維と同じセルロ-スII結晶であるが、得られるヤング率と引っ張り強度は天然ラミ-と大差はなかった。しかし、この繊維を用いて下着を作成するには紡糸という手段が介在してしいるので、極めて高価となるため、工業化への展望にはつながらない。購入した光散乱装置により、希薄溶液中で架橋反応を起こさせたハイドロオキシプロピルセルロースの粒子半径、拡散係数、重量平均分子量慣性半径の2乗平均を測定した。その結果、架橋度が増加すると粒子半径は減少した。これは架橋により分子鎖のひろがりが束縛されたことを示唆している。濃度を上昇させてゲル状態にすると、散乱強度が強く、かつ散乱角の低い領域では塵の影響が反映し、正確な自己相関関数を求めることは困難であった。しかし多少の塵の効果を無視すると、ハイドロオキシプロピルセルロースのゲルは興味ある構造を示した。即ちゲル濃度が高くなるにつれて、ストークスの式によって求まる網目の間隔が小さくなり、散乱角依存性を示さなくなった。後者の現象は、ゲル濃度が高くなると、一様相を示唆する自己相関関数が得られていることを示唆しているが、得られたヒストグラム解析によって求められた粒径分布は、かなりの高濃度域まで分布が2つあらわれ、一様相に見えるところでも、実際にはかなり構造が複雑であることが理解しえた。ポリビニルアルコール溶液ならびにポリビニルアルコールとハイドロオキシプロピルセルロース混合溶液についても同様の実験を進行中である。ポリエチレンに関しては、超延伸(高強力ー高弾性率)繊維の温度変化にともなう構造及び力学特性を検討した。またポリプロピレンについても同様な結論が得られたが、ヤング率の温度による低下はポリエチレンほど顕著でなかった。セルロ-ス系については、ラミ-繊維のマ-セル化、セルロ-ス誘導体であるハイドロオキシプロピルセルロ-ス(HPC)について高強力ー高弾性率化を試みた。ラミ-

繊維をマ-セル化して得られた繊維の結晶構造は、ベンベルグ、レ-ヨン繊維と同じセルロ-スII結晶であるが、得られるヤング率と引っ張り強度は天然ラミ-と大差はなかった。しかし、この繊維を用いて下着を作成するには紡糸という手段が介在しているので、極めて高価となるため、工業化への展望にはつながらない。
治療の個別化を視野に入れた新たな卵巣明細胞腺癌治療への可能性

1mTOR阻害剤EverolimusはmTOR-HIF-1経路の抑制に加え、細胞増殖能の抑制さらにHIF-1αの分解経路(VHL)の促進作用を有することから、本薬剤は卵巣明細胞腺癌におけるmTOR-HIF-1経路を通じた新たな治療薬としての可能性が期待された。2in vivoにおいてEverolimus単独群に比較してEverolimus+CDDP群でより抗腫瘍効果を示した。3明細胞腺癌においてHIF-1αの発現部位、p-mTORの発現率の違いから予後推測マーカーとしての役割を果たす可能性が推察された。これまでに、上皮性卵巣癌における微小環境に関心を抱き、この中心的な役割を果たしていると考えられている低酸素誘導因子(Hypoxia inducible factor-1α: HIF-1α)、さらにはHIF-1αの誘導に係る因子(HIF-1関連因子)の発現に着目をし、上皮性卵巣癌の4組織型を中心に様々な解析を行ってきた。これらの解析からHIF-1αおよびHIF-1関連因子の発現は明細胞腺癌で高発現を認めた。また、HIF-1αの発現は必ずしも腫瘍の虚血状態のみを反映していないことが示唆され、mTOR-HIF-1シグナルの活性化がHIF-1を介した腫瘍増殖に影響を与えるものと推察された。実際にphosphorylated-mTOR: p-mTORが他の組織型に比して明細胞腺癌で有意に亢進しており、mTOR-HIF-1経路の活性化が明細胞腺癌における薬剤低感受性および予後不良の一因にもなっていることを報告した(Pathol Int. 2009 59:19-27.)。さらに、これらの結果を背景にmTOR-HIF-1経路の阻害による腫瘍へ与える影響をmTORの阻害剤everolimusを用い検討した。その結果、in vitroにおいて薬剤濃度依存的にHIF-1αはじめ下流因子の抑制効果が認められた。さらに同様の培養株をBALB/cヌードマウス皮下へ移植したモデルマウスにeverolimusを投与すると、有意に腫瘍縮小効果が認められた。以上の結果から上皮性卵巣癌の中でもとりわけ明細胞腺癌はmTOR-HIF-1経路の活性化により様々な薬剤耐性を獲得しているが故に難治性であることが推察された。また、mTOR阻害薬は、これらの活性化経路を阻害することによる抗腫瘍効果から明細胞腺癌の新たな治療薬としての可能性を大きく秘めており、本邦に多い明細胞腺癌患者の予後を改善し得るものと考えられた。平成24年度では、『明細胞腺癌の発生および進行期におけるmTOR-HIFシグナル伝達系関連因子の動態の全容解明と本症発生の分子生物学的背景の追及と解明』を目的に様々な解析を行ってきた。卵巣明細胞腺癌における免疫組織化学によるmTOR-HIF関連因子の発現解析を行ったところ、HIF-1αの発現は、全例で認めるものの、その発現パターンは核優位、細胞質優位、両者発現タイプの3つのパターンに分けられ、とりわけ明細胞腺癌では核優位タイプが多く存在し、HIF-1 DNA binding assayの結果からも核における活性型HIF-1の高発現を認めた。一方でHIF-1αの上流に位置する種々のシグナル伝達系関連因子の発現を解析したところ、卵巣明細胞腺癌では他の組織型に比して、Akt, p-Akt, mTOR, p-mTOR, p-4EBP-1が高発現しており、これらのシグナルの活性化が明細胞腺癌におけるHIF-1の高発現ならびに高転写活性をもたらしているものと推察された。同様にHIF-1αの下流因子(VEGF-A, GLUT-1, EPOなど)の発現も高発現を認めたことからmTOR-HIFシグナル伝達系の活性化は明細胞腺癌における高悪性化を引き起こすとともに薬剤低感受性など腫瘍の悪性形質の獲得の一因となっていることが示唆された。また、real time RT-PCRよるこれらの因子のmRNAの発現ならびにwestern blottingによるタンパクの発現解析からも免疫染色と同様の結果を得られた。さらに、HIF-1の恒常的分解系因子であるpVHLの発現について解析したところ明細胞腺癌ではあまり発現を認めないことから、本組織型ではpVHLが変異もしくは欠損していることもHIF-1の活性化に寄与していることが推察された。『明細胞腺癌の発生および進行期におけるmTOR-HIFシグナル伝達系関連因子の動態の全容解明と本症発生の分子生物学的背景の追及と解明』については、ほぼ達成し、現在さらにこれを発展させるべく臨床病理学的解析を遂行中である。

一方、『DNAマイクロアレイを用いた子宮内膜症明細胞腺癌の発生のメカニズムについての解析』については、結果が未だ出ていないが、これに用いる組織、細胞のサンプリングが終了していることから、現在DNAマイクロアレイを行う最終準備をしており、今年度の早い段階でこれらについては完結できるものと考えられる。今年度では、24年度に終了できなかった『DNAマイクロアレイを用いた子宮内膜症明細胞腺癌の発生のメカニズムについての解析』を完結させるとともに、『in vitroにおけるmTOR-HIF-1シグナル伝達経路抑制による明細胞腺癌治療への基礎的解析』、『モデルマウスにおける腫瘍縮小効果と病理学的解析による治療への応用性への検討』について本格的に進めていく。既に細胞培養などについては一部実験を24年度中にスタートしており、結果も出始めていることから、このペースで進捗させることで25年度中には結果を出せるものと確信している。24年度では次年度使用額が183,879円出ているが、これはDNAマイクロアレイ解析について24年度に実施できなかったことから、これらの解析費用として使用額を繰り越している。
出芽酵母Dpb11のDNA複製とS期チェックポイントに於ける機能

出芽酵母の染色体DNA複製に必須なDNAポリメラーゼII(ε)(PolII)と相互作用するDPB11は、染色体DNA複製とS期チェックポイントに関与している。本年度はまずCHIP(Chromatin mmunoprecipitation)法によりDpb11,PolII,プライマーゼのクロマチンへの結合を調べた。その結果、Dpb11はPolIIとほぼ同時期に複製開始点に結合することがわかった。また、非許容条件下のdpb11-1変異株では、PolII及びプライマーゼの複製開始点への結合が起こらなかった。一方、複製開始点へM期後期から結合し、複製開始に必須な役割をしているMcmは、dpbl1-1変異株では結合したままである。これらのことは、複製酵素が複製開始点に結合する過程でDPb11が機能していることを示唆している。染色体上の複数の複製開始点はそれぞれS期の異なる時期に使われるが、ヒドロキシ尿素で複製を阻害するとS期初期に使われる開始点のみに複製酵素は結合する。しかし、S期チェックポイントに欠損を持つrad53変異では、S期後期に使われる開始点にも初期のもの同様に複製酵素が結合するため、この複製開始点活性化の制御が、S期チェックポイントコントロールの1つであると考えられている。そこで、dpbl1-1変異でPolII,プライマーゼの複製開始点への結合をヒドロキシ尿素存在下で調べると、PolIIもプライマーゼも初期及び後期の複製開始点に結合していた。これらのことは、Dpb11が複製開始点の制御に重要な働きをし、この制御を介してS期チェックポイントに関与していることを示唆するものである。
多文化共生社会における平和教育の概念研究：オキナワ平和学習の事例から

平和学習に含まれる複数の平和の概念の存在を認め、それらの分断・対立関係を明確にしたうえで、調和を図っていくための検証をおこなうことが本研究の課題であった。平和教育という言葉の道徳的正当性ゆえに、独善主義に陥りやすいという点をふまえ、平和の概念を対立から調和へ導くために、多様性を認めながらも折衝することに道徳的価値を置くAffiliational Liberalsの論理的枠組みを用いて、相違点を認めながらも共生しようとする姿勢が、わが国の平和教育において有効であると論証しうる事例としてオキナワ平和学習について検討した。成果は国際学会において発表され、また編著の一章として出版された。当該年度に実施した研究の成果は以下の四点にまとめられる。第一に、四月に締め切りのあった国際学会(American Educational Studies Association:以下AESA)において中間発表をおこなうための論文作成をおこなった。七月に査読の結果として招聘通知が届き、十月末から十一月初旬にかけて、アメリカ合衆国シアトルで開催された学会に参加し、十一月一日に中間発表をおこなった。発表の結果、論理的な視点から多くの有益なフィードバックを受け取ることができた。第二に、最終報告としての発表をおこなうため、七月に締め切りのあった国際学会(American Educational Research Association:以下AERA)のための論文作成をおこなった。十一月に査読の結果として招聘通知が届いたため、来年度五月にアメリカ合衆国サンフランシスコで開催される学会での発表に向けて、最終原稿を現在推敲している。特記すべきこととして、AERAからは、paper sessionとしての招聘を受けたが、学会側の手違いでround tableにおける発表に変更されたことである。第三に、九月にアメリカ合衆国アラバマ大学のジョン・ペトロビック博士より市民教育に関する書籍の一章を担当してほしいとの執筆依頼を受け、本研究の最終報告書の掲載先が決定したことである。5月に開催される予定のAERAにおける最終報告の発表への批判やフィードバックを踏まえたうえで、来年度の八月までに最終論文を作成する予定になっている。第四に、昨年度からの継続として先行研究、関連資料の情報検索および収集を行った。例えば、十月には、教科書図書館において教科書の中での沖縄に関する記述や説明の詳細を確認し、教科書のもつ平和教育の視点(expected audienceが誰なのか)を確認するための資料収集をおこなった。本研究は、「平和の概念は多様である」との前提に立ち、多様な平和の概念を対立関係から調和関係へと導くためには、どのような教育的アプローチが必要とされているのか、という問題に教育哲学の視点からの応答を試みるものである。わが国のみならず多様性を認めてゆくことは市民社会の原則であるが、多様性の間を取り持つ教育的アプローチは何かー沖縄戦と沖縄基地問題に関する学習(以下オキナワ平和学習)の事例を通して「本土の人」「沖縄県民」「アメラジアン」それぞれの視点を手がかりにして見つけだすことーこれが本研究の基本的関心である。最終年度に実施した研究の成果は以下の四点にまとめられる。第一に、5月にアメリカ合衆国、サンフランシスコで開催された国際学会(American Educational Research Association:以下AERA)から招へいされたため、こちらの学会において最終報告を英語でおこなった。特記すべきこととして、AERAの平和教育の研究グループから実際は、paper sessionとしての招聘を受けたが、学会側の手違いでround tableにおける発表に変更されたことである。第二に、昨年度の九月にアメリカ合衆国アラバマ大学のジョン・ペトロビック博士より市民教育に関する書籍(Citizenship Education around the World: Local Contexts and Global Possibilities)の日本の一章を担当してほしいとの執筆依頼を受けたため、本研究の最終報告書としての論文の掲載先は決定していたが、5月に開催されたAERAにおける最終報告の発表への批判やフィードバックを踏まえたうえで、推敲を繰り返し最終稿を提出した。著作は、来年度6月に出版予定である。第一に、四月から十一月の期間は、本研究の基礎を築くため、先行研究、関連資料の情報検索および収集を行った。

第二に、十一月二十一日から二十三日までの期間、さらなる関連資料の収集のための国内調査として、沖縄県平和祈念資料館、沖縄県公文書館、アメラジアンスクールを訪問し、現地でのみ収集可能な資料収集をおこない、文献資料のみならず視覚資料の収集もおこなった。また、訪問先では、展示物や展示物の説明の詳細を確認すると同時に、平和書籍や平和資料として収集されている資料のもつ平和教育の視点(expected audienceが誰なのか)に気をつけながら資料収集をおこなった。第三に、一二月から二月の期間は、収集した資料を整理分類する作業をおこなった。第四に、整理分類された資料の第一次分析検討をおこない、四月に締め切りのある国際学会における中間発表のための論文作成をおこなった。おおむね順調に進展していると評価する理由は以下にあげられる。研究計画書で当初予定されていたのはーV.研究の中間報告としての国内外の学会発表原稿の作成[4月8月]、VI.研究発表の準備と学会発表と最終検討[9月11月]、VII.最終的な研究の総括[12月3月]ーであった。実際には、V、またVIの作業において、国際学会で発表するための英語の発表原稿の準備に時間を要したため、日本語の発表原稿まで準備することができず、日本語での学会等における研究発表が持ち越しになっている。しかし同時に、V,VI,VIIの作業において、国際学会における発表は予定されていた通り終わらせることができた。さらに、来年度の最終報告の執筆先が決定したことから、ほぼ本年度に予定された研究段階はほぼ達成することができたため、おおむね順調に進展していると評価する。研究計画書で当初予定されていたのはーI.先行研究、関連資料の情報検索および収集1 [5月7月]、II.さらなる関連資料の情報検索および収集2:国内調査・沖縄[8月]、III.資料の分類・分析および基礎的研究作業1[9月12月]、IV.資料の分類・分析および基礎的研究作業2[1月3月]ーであった。実際には、Iの作業に予定以上の時間を要し、また、IIの国内調査においても、特にアメラジアンスクール訪問の日程が学校側との調整を要としたことなどから、調査予定が8月から11月へと遅れることとなった。しかし、IVの作業をおおむね予定されていた通り終わらせることができたため(ただし現在作成中である中間報告書において、さらなる考察が必要となっている)、本年度に予定されたすべての研究段階を達成することができたため、おおむね順調に進展していると評価する。第一に、研究の最終成果として四月二十七日に国際学会において論文発表をおこなう予定である。発表予定の学会は、AERA(American Educational Research Association)である。すでに十一月に招聘状が届いていることから、年度をまたいで最終の発表論文を仕上げる予定である。
治る認知症：自己免疫性辺縁系脳炎のバイオマーカー開発

「治る認知症」としての自己免疫性辺縁系脳炎(ALE)を早期に適切に検出するためのバイオマーカーを見出すことを目的とする。認知症ないし軽度認知機能障害を呈するALE例において、長時間ビデオ脳波モニタリング、高磁場MRI、FDG-PET、神経心理検査、髄液検査、及び抗神経抗体を含む血液検査を行い、各検査項目の感度と特異度を算出する。主成分分析を用いて認知機能の障害パターンを捉え、諸検査との相関を検討する。認知機能障害合併ALEの診断・治療について、科学的根拠をもったバイオマーカーを提供でき、早期診断・治療、病勢、予後推定、治療法の確立が期待される。
ナノポアシークエンサーを用いた不明熱病原体ゲノムの同定

本研究ではナノポアシークエンサーを用いて熱帯感染症不明熱病原体を同定する方法論開発を試みた。ランダムプライマーを用いた増幅系については実験ノイズが大きく安定したプロトコールを確立することができなかったが、代表的なウィルス性、細菌性、寄生虫性感染源であるデングウィルス、16S rRNAによる汎細菌性感染源、熱帯熱マラリア原虫については安定した検出系を構築することができた。また開発された実験系を用いて、インドネシアマナド地域で50症例の感染症患者から感染源を同定できた。そのゲノムについて薬剤耐性関連遺伝子の塩基多型を解析することが可能であり患者治療戦略の策定に際し重要な情報を与えると考えられた。本研究は、MinIONを用いて不明熱患者血清における未同定病原性微生物の同定を行う方法論的開発を行うものである。デングウイルス、B型肝炎ウイルス、マラリア原虫感染血清を各10検体づつモデル試料に用い(試料は入手済み)、MinIONシークエンスによってそれぞれの病原体が検出可能であるかを検証する。血清からRandom Primer-MDA法を用いてゲノム全体を増幅し、シークエンスアダプター反応を行った後にMinIONを用いて塩基配列を決定する。反応は乾燥化試薬を用いて等温反応で行い、反応生成物の精製は磁気ビーズを用いて2段階のみ行う。産出された塩基配列を用いて相同性検索を行うことで病原体を同定する。最終的には病原体未同定のインドネシア不明熱患者血清10検体を用いて現地でシークエンスによる病原体の同定を行い、その実行可能性の試験までを視野にいれる。今年度、デングウイルス、B型肝炎ウイルス、マラリア原虫感染血清については、モデル系での解析を行うことができた。またバーコード配列を利用した多検体化の検討を行い、実用化に成功している。引き続き、実験系の頑強性についても検出を行おうと考えている。また、デング、マラリアについては、該当する情報解析パイプラインを整備することができた。これらについては、今年度中の論文化を検討している。また、MDA法によるランダムな核酸増幅系についての予備的検討も並行して行った。来年度以降の検討に向けて、核酸増幅効率およびヒト由来核酸の除去方法について、検討方針を決定するのに重要な予備的データを取集することができたと考えている。当初目的として設定していた、MinIONシークエンサーを用いてデングウイルス、B型肝炎ウイルス、マラリア原虫感染血清について、モデル系での解析を行うことができた。十分な感度と精度で検出を行う実験系を確立することができたと考えている。またバーコード配列を利用した多検体化についても検討に成功、運用を開始している。一方で、肝炎ウィルスについては、当初、予定していた試料の品質が十分でなく、検証を行うことができなかった。引き続き、生物種への拡張性について、基礎的な実験データの収集が必要であると考えている。こちらについては、モデル化合物を用いても、シークエンス反応に用いるに十分な増幅を確認することができず、抜本的な実験系の再構築の検討が必要であると考えている。本研究では、使い捨て簡易型USBシークエンサーMinIONを駆使して、熱帯感染症病原性微生物の種同定とゲノム解析を行う。熱帯熱マラリア原虫、デングウィルス、B型肝炎ウィルス感染患者について、血液から簡易核酸増幅法を用いてそれぞれのゲノムを増幅、単離したのちにMinIONシークエンサーで解読して、その配列相動性から、微生物の同定および薬剤耐性遺伝子等、臨床的に重要な意義を持った遺伝子多型の検出を行った。昨年度までにマラリア、デングに関しては、その研究室環境での試験を完了、引き続きインドネシアマナド市において、その実用試験試験を行った。必要となる情報解析パイプラインも簡略化、ノートPCでの実行を可能とした。また部分的にそれが難しい部分については、ウェブ上で非専門家でも投入が可能な形でのブラウザを整備した。結果、のべ50症例を用いた試験的運用を行い、えられた結果をRT-PCR法、イルミナシークエンス法あるいはサンガーシークエンス法で確認した。上記のいずれの系においても十分な感度と精度で測定が行われていることが確認されたことから、新手法について従来の手法に比較して十分に将来の実用に性能での実用試験に成功したと考えている。また、16S rRNA増幅系を用いることにより細菌感染についても同様の系を構築することができた。実験室環境では、本系により簡便に細菌感染源の同定を行うことが可能であった。ただ、これらのいずれも想定される種ごとに設計したプライマーあるいはそれらのカクテルを用いた増幅によるものであって、ランダムな拡散増幅系を用いた系の確立にはまだ成功してない。最終年度を迎えるにあたり、この系の構築の完了をもって、最終成果としたいと考えている。使い捨て簡易型USBシークエンサーMinIONを駆使して、熱帯熱マラリア原虫、デングウィルス等の熱帯感染症感染患者について、MinIONシークエンサーを用いてゲノムシークエンスを解読して、その配列相動性から、微生物の同定および薬剤耐性遺伝子等、臨床的に重要な意義を持った遺伝子多型の検出を行う方法論について昨年度までにマラリア、デングに関しては、その研究室環境での試験を完了、引き続きインドネシアマナド市において、実用試験試験に成功している。同地区では、のべ50症例を超える症例について、感染する病原体の種同定とゲノム配列の取得に成功した。

なかでも熱帯熱マラリア原虫において、代表的な抗マラリア薬であるアルテミシニン耐性との関連が示唆されるPfK13遺伝子において、同地区に多くのゲノム多型が検出された。現在、この多型にして集約的にイルミナ、サンガーシークエンスによる検証を行っている。多型が確認された場合、研究室環境下でその生物学的活性を測定する予定である。また抗マラリア薬クロロキンについてもPfCRT遺伝子における現地での変異カタログの創出に成功した。これにより当初の計画の第一段階が達成できたと考えている。また、これら、一連の解析から得られたデータについてデータベースとして公開すべく、別途、データ格納システム、表示ウェブブラウザの整備を進めてきたところであるが、それも一定の目途がたっている。産出されたデータについては、今年度、夏以降に順次公開を進める予定である。本研究では、使い捨て簡易型USBシークエンサーMinIONを駆使して、熱帯感染症病原性微生物の種同定とゲノム解析を行う。熱帯熱マラリア原虫、デングウィルス感染患者、細菌感染患者について、血液から簡易核酸増幅法を用いてそれぞれのゲノムを増幅、単離したのちにMinIONシークエンサーで解読し、その配列相動性から、微生物の同定および薬剤耐性遺伝子等、臨床的に重要な意義を持った遺伝子多型の検出を行った。研究室環境での試験の完了後、インドネシアマナド市において、実用試験試験を行った。必要となる情報解析パイプラインを簡略化、ノートPCでの実行を可能とすることができた。のべ50症例を用いた試験的運用を行い、得られた結果をRT-PCR法、イルミナシークエンス法あるいはサンガーシークエンス法で確認した。いずれの系においても十分な感度と精度で測定が行われていることが確認されたことから、新手法は従来の手法に比較して十分に将来の実用に性能での実用試験に成功したと考えている。ただ、いずれも想定される種ごとに設計したプライマーあるいはそれらのカクテルを用いた増幅によるものであって、ランダムな核酸増幅系を用いた系を確立することはできなかった。反応副生物の効率的な除去についてより一層の検討が必要である。得られたシークエンスデータは、ゲノム中のSNPを検出するにも有用であった。なかでも熱帯熱マラリア原虫において、代表的な抗マラリア薬であるアルテミシニン耐性との関連が示唆されるPfK13遺伝子において、インドネシアマナド地区に多くのゲノム多型が検出された。これが同薬剤に対する耐性獲得過程を反映しているとすれば、同様の測定の継続は重要な案件である。データ収集の観点からは当初の計画は概ね達成できたと考えている。本研究ではナノポアシークエンサーを用いて熱帯感染症不明熱病原体を同定する方法論開発を試みた。
近赤外分光技術を基盤とする同時イメージング法を利用した熱物質輸送現象の定量的解明

平成28年度は,(1)近赤外分光分析による濃度イメージングへの応用性の検討,(2)分光イメージングのための波長フィルタリングシステムの改善,(3)濃度イメージングの測定精度の検証,(4)濃度イメージングによる反応拡散現象解析の4項目を実施した.(1)水溶液の近赤外吸収分光特性を調査し,濃度イメージングに応用するための検量実験を行った.また,昨年度取り扱ったHCl,NaOH,NaClに関して,多変量解析手法のひとつであるPLS回帰分析および重回帰分析を行い,3波長成分の吸光度変化を測定することで3成分の溶質濃度をより高精度に定量化することに成功した.(2)より高精度な画像を取得するために,レンズ系や干渉フィルタのスイッチングシステムを改善し,高精度な濃度測定および画像取り込みシステムを完成させた.また,HCl,NaOH,NaClの水溶媒中の相互拡散係数を測定し,十分な測定精度を有することを確認した.さらに,HClとNaOHの中和反応によってNaClが生成する場を観察し,各成分濃度の定量化を行い,3種類の溶質濃度が同時にかつ区別して可視定量化することに成功した.(4)可溶性の水溶液間の界面より生じる流体力学的な不安定性を本イメージングシステムで可視化し,解析を行った.その結果,対流が生じ,界面形状に変化が生じるまでの時間が上下の溶液の組み合わせによって大きく異なることが判明した.さらに,二重拡散対流を生じる条件において,各溶質の濃度イメージングから密度イメージングへと応用させ,2溶液拡散中に発生する局所的な密度低下を生じる現象を実験により確認した.また,化学反応を生じるHClとNaOHの組み合わせで観察したところ,界面より生じるNaClの存在によって,界面を介して2つの異なる対流パターンの発生を確認された.28年度が最終年度であるため、記入しない。28年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度は,2種類以上の溶質が存在する条件下で,含有する溶質濃度の同時定量化および化学反応によって生じる発熱・吸熱による温度変化の観察から,反応拡散による輸送現象の時空間的な変化の観察を行った.これに際し,酸・アルカリ水溶液(HCl, NaOH)の中和反応を対象とした実験を実施した.(1)HClとNaOHおよび両者の反応生成物であるNaClの近赤外吸収スペクトルの測定を行った.HClとNaOHでは,波長1520 nmに溶質の濃度に依存しない等吸収点が出現した.この等吸収点は,NaCl水溶液では観察されず,酸・アルカリ特有のものである可能性が高い.この等吸収波長におけるNaCl濃度と吸光度の較正直線を取得した.(2)流路深さ0.5 mmの矩形流路チップ内にて,HCl水溶液とNaOH水溶液を混合させたときの拡散反応の時空間変化を観察した.測定には,近赤外カメラとチョッパ,狭帯域透過フィルタを組み合わせた2波長同時イメージング装置を用いた.上述の等吸収波長(1520 nm)および温度測定波長(1412 nm),非温度依存の等吸収波長(1442 nm)の3波長の組み合わせで吸収画像を取得した.(3)(1)で得た較正直線をもとに,波長1520 nmの吸収画像の画像構成によってNaCl画像変換を達成した.精度に関しては,今後見積もる必要がある.(4)反応界面および拡散界面と思われる領域において,特異な吸光度変化が見られた.これは,溶液間界面の影響または時間的な溶液混合状態の変化に原因があるものと考えている.この原因を究明するため,溶液界面の観察や混合による吸収スペクトルの時間変化の観察を検討している.平成27年度は,主に酸・アルカリ水溶液の反応拡散場に関して,(1)各成分濃度の同時イメージング法の検討,(2)多波長イメージングのための高速フィルタリングシステムの開発,(3)反応界面近傍の流体不安定性に関する実験および数値解析を実施した.(1)HCl・NaOH・NaCl水溶液の吸収スペクトルから各成分濃度の定量化に必要な因子の調査を行った.取得した吸収スペクトルのデータ群から統計的な手法を使い,成分濃度イメージングに必要な波長の選定と定量化に必要なパラメータの算出を行った結果,塩化ナトリウム濃度に関しては比較的高い精度で求められるが,塩酸と水酸化ナトリウムの濃度に関しては,特に低い濃度でばらつきが多く,定量性という側面ではまだ検討の余地がある.(2)高速で波長変換するシステムの開発を行った.現状,使用したモーターの性能の都合上,目標とする切り替え速度には達していないが,カメラトリガやその他の機器設計は完了した.(3)中和反応によって誘起される流体の不安定性現象の解明に取り組んだ.マイクロ流路内で2つの反応物を合流させ,その界面より生じる生成物が起点となって不安定現象を生じることがある.その要因を濃度または密度とそれらの比,流路寸法やアスペクト比による考察を試みている段階である.また,溶質の種類による違いや反応の有無による寄与も考慮に入れて,この不安定性現象の検討を行っている.本年度当初に予定していた吸収スペクトルの調査は順調に進んでおり,予定していた方法とは違うが,3波長による3成分濃度の定量化に関しては目処がついた.また,高速フィルタリングによる多波長イメージングシステムの開発に関しては,カメラトリガや撮像タイミング制御といった基幹となる部分の開発は完了し,駆動部となるモーターの性能の検討を残すのみである.

今後は,本イメージング法の妥当性や問題点の検証・改善を検討しつつ,本年度より取り組みを始めた流体不安定性の解析を進めていく.平成28年度は,(1)近赤外分光分析による濃度イメージングへの応用性の検討,(2)分光イメージングのための波長フィルタリングシステムの改善,(3)濃度イメージングの測定精度の検証,(4)濃度イメージングによる反応拡散現象解析の4項目を実施した.(1)水溶液の近赤外吸収分光特性を調査し,濃度イメージングに応用するための検量実験を行った.また,昨年度取り扱ったHCl,NaOH,NaClに関して,多変量解析手法のひとつであるPLS回帰分析および重回帰分析を行い,3波長成分の吸光度変化を測定することで3成分の溶質濃度をより高精度に定量化することに成功した.(2)より高精度な画像を取得するために,レンズ系や干渉フィルタのスイッチングシステムを改善し,高精度な濃度測定および画像取り込みシステムを完成させた.また,HCl,NaOH,NaClの水溶媒中の相互拡散係数を測定し,十分な測定精度を有することを確認した.さらに,HClとNaOHの中和反応によってNaClが生成する場を観察し,各成分濃度の定量化を行い,3種類の溶質濃度が同時にかつ区別して可視定量化することに成功した.(4)可溶性の水溶液間の界面より生じる流体力学的な不安定性を本イメージングシステムで可視化し,解析を行った.その結果,対流が生じ,界面形状に変化が生じるまでの時間が上下の溶液の組み合わせによって大きく異なることが判明した.さらに,二重拡散対流を生じる条件において,各溶質の濃度イメージングから密度イメージングへと応用させ,2溶液拡散中に発生する局所的な密度低下を生じる現象を実験により確認した.また,化学反応を生じるHClとNaOHの組み合わせで観察したところ,界面より生じるNaClの存在によって,界面を介して2つの異なる対流パターンの発生を確認された.当初の予定では,水と1種類の溶質の拡散を対象とした温度・濃度の同時イメージングを行う予定であったが,前年度にすでに達成したため,本年度は,2種類以上の溶質存在下の反応拡散系で可視化と現象解析に取り組んだ.対象水溶液(塩酸,水酸化ナトリウム,塩化ナトリウム)の吸収スペクトル測定による各溶液の吸収特性の調査,溶質濃度と光吸収の較正直線の取得,および吸収イメージングシステムを利用した生成塩濃度の可視化と定量化を達成した.反応拡散系の調査に関しては課題も多いが,計画書に記した予定は達成しているため,概ね順調に進展していると判断した.今後の方針としては,密度勾配によって生じる光の屈曲をいかにして排除するかが,このイメージング法の重要課題であるといえる.また,不安定性現象に関しては,溶液の種類,密度,反応の有無による違い,流路寸法(アスペクト比)による比較検討を十分に行っていく必要があると考える.数値流体解析に関しては,摂動により不安定化した場合の記述をプログラムに導入する予定である.28年度が最終年度であるため、記入しない。中和反応系の拡散反応の理解には,中和熱による温度上昇も把握する必要があるため,取得したスペクトルの多変量解析から温度画像構成のための較正曲線の作成および波長の選定を検討する.また,これまでは溶質の拡散という立場からフィックの拡散法則をもとに考察を行ってきたが,酸塩基輸送反応はイオン由来の輸送現象である.
がん細胞膜修飾とマクロファージの選択的活性化による抗腫瘍効果増強に関する研究

マクロファージの抗腫瘍効果を効率よくするためには、マクロファージ-腫瘍細胞の相互関係において、腫瘍側要因としてがん細胞膜を修飾することにより、マクファージの腫瘍細胞に対する親和性を高め、マクロファージの抗腫瘍効果の増強をはかる事が重要である。まず、マクロファージ活性化作用を有する溶連菌製剤OK-432によるマウス腫瘍細胞膜の修飾を検討した。OK-432にて0.1KE/ml、2時間処理した腫瘍細胞に対するOK-432活性化マクロファージの腫瘍細胞増殖抑制活性は、MH134細胞、Meth-A細胞に対して無処置腫瘍細胞に対する活性に比較して有意に活性の増強が認められた。さらに、走査電顕学的に腫瘍細胞に対する活性化マクロファージの結合性、腫瘍細胞障害性を検討すると、結合性はMH-134、Meth-A細胞に対して有意に亢進し、MM102細胞に対してもその傾向が認められ、OK-432により、腫瘍細胞膜の修飾が惹起されマクロファージの抗腫瘍活性が増強されると考えられる。次に、BRMによるマクロファージ活性化の機序をさらに検討する目的でFITC標識OK-432を用いて分画し、形態学的変化を観察した。FITC標識OK-432 1 KEを腹腔内投与4日後の浸出細胞をflow cytometryにて解析すると、マクロファージ分画の占める割合は、非投与群の17%に対してFITC標識OK-432投与群では39.3%を占めた。FITC標識OK-432投与群においてgatingすると、陽性細胞の割合はリンパ球分画2.1%、マクロファージ分画15.8%であり、OK-432はマクロファージに取込まれ、さらに、FITC標識OK-432陽性マクロファージを分離すると、陽性マクロファージは細胞表面が薔薇の花弁状のruffleにより覆われ、lamellipodiaの出現が顕著であり、抗腫瘍性を示すマクロファージに類似した。免疫賦活剤の作用機序の一つとして、マクロファージ(Mф)の活性化が注目されるが、免疫療法の効果を増強向上させるためには、Mфの抗腫瘍活性を効率よく高めることが重要である。本年度においては、Mфの腫瘍細胞への接触性と殺細胞性との関連性及びBiological response modifierによるMф活性化の条件について、走査電顕により形態学的検討をおこなった。活性化M〓はその性状と機能の多様性,変動性,不均一性からlineageの異なる細胞集団の存在、あるいは分化段階による機能の異ったMфの存在が考えられる。走査電顕によりBRM(OK-432,LC-9018,WPG,IL-2,IFN,TNF)刺激によるマウス腹腔Mф表面微細構造を観察し、形態と機能との相関を求めた。免疫賦活剤の作用機序の一つとして,マクロファージ(Mφ)の活性化が注目されている.免疫療法の効果を増強させるにはMφの抗腫瘍活性をより効率よく高め,またがん細胞側においては,がん細胞膜を修飾することによりがん細胞のMφに対する感受性を高めることが必要である.本年度においては, Biolgical response modifier(BRM)を用いた免疫療法におけるMφ活性化の条件について検討を加えた.活性化Mφはその性状を機能の的様性,変動性,不均一性からlineageの異なる細胞集団の存在,分化段階による機能の異なったMφの存在が考えられることから,走査電顕によるマウス腹腔Mφの形態分類と抗腫瘍活性の関連性を求めた.Mφの活性化による形態学的変化を細胞表面のruffle形成をRI無処置群と同等, RII:中等度(12μm), RIII: