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近世土御門家の神道思想と陰陽師支配の諸形態についての研究

研究成果の概要は、以下の通りである。(1)近世の陰陽道の画期とされている土御門泰福の時代の土御門家の活動をできるだけ史料にそくして解明しようとした。とくに土御門泰福と垂加神道との関係、貞享暦をめぐっての土御門家と渋川春海との関係をとりあげ、関係史料の収集につとめた。東京天文台所蔵のマイクロフィルム資料、立教大学図書館・高知県立図書館所蔵の谷泰山関係史料、京都府立史料館所蔵若杉家文書、神宮文庫所蔵の渋川の著作、『兼輝公記』などの公家の日記類を調査し、幕府側と朝廷側の双方からの改暦にたいする対応、土御門家の動向などの把握につとめた。和田光俊氏を研究協力者に迎え、渋川に関する情報を交換し、「渋川春海年譜」を作成することができた。土御門家が提唱した安家神道は、山崎闇斎、渋川との交流の中で形成されて、渋川を介して仙台藩、会津藩の暦学者に及んだことを推定することができた。(2)3年間をかけて地方陰陽師についての史料を収集した。埼玉県、東京都、神奈川県、愛知県、兵庫県の自治体史の編さん室や資料館をまわり、史料を閲覧し、できるだけ多くの史料の複写を行った。研究成果報告書に掲載してある論文は、そうした作業の中で書かれたものである。そのなかで明らかにあった点は、(1)土御門家の地方陰陽師の支配が、画一的な編成であるにもかかわらず、配下の陰陽師の社会的形成は、多様なものであること、(2)貞享年間以降の土御門家の陰陽師支配は、スムーズには進行せずに、他の系列の宗教者・芸能者とのナワバリをめぐる争論をくり返し、内部的にも矛盾と利害の対立をかかえていたこと、(3)寛政三年の触れ以降、土御門家は、地方に取締役を派遣し、地方触頭の中間搾取を禁じ、他の系列の宗教者を取り込みにつとめたが、組織内部の摩擦は激しかったこと、(4)幕末には触頭制が動揺し、土御門家の一元的支配が強化されたこと、などであった。1、土御門家配下の陰陽師・万歳師の資料の閲覧・複写をため、安城市立歴史博物館、知多市民俗資料館、京都府立資料館、奈良県立図書館、高知県立図書館、高知県歴史民俗博物館、国立歴史民俗博物館、小田原市立図書館を訪問し、関係の史料・文献を閲覧し、近世陰陽道の理解を深めることができた。2、中世末の声聞師と近世の陰陽師との連続性を強調する説があるが、その説は史料的な裏づけに欠けている。私は『土御門家記録一』から慶長六(1601)年以降の天曹地府祭奉仕の具官の出身地を検討し、摂津・河内の淀川河川敷の村の民衆が具官となったことを解明した。近世の土御門家がまず支配を始めたのは、これらの村人であった。奈良の陰陽師は、声聞師の系統ではなく、幸徳井家と関係する暦師の集団であったこともわかった。3、近世の三河万歳の成立・展開について。

近世初頭から三河万歳集団が関東で活動していたことが推測されるが、貞亨元(1684)年に寺社奉行の指導によって土御門家江戸役所の支配下になるが、家康以来の由緒を掲げ、江戸役所に対して自立的な存在であったのが、他の芸能者との争論を繰り返す中で、訴訟の仲介者である江戸役所への従属性が宝暦年間ぐらいから強まっていく。4、関東の舞々などの芸能者集団の拠点は、十六世紀に後北条氏の庇護のもとに小田原に形成されるが、近世には分散し、その1つの流れが相模国の神事舞太夫となったこと、そして元禄年間に相模国の芸能者に土御門家の影響が強まったことを明らかにした。近世の神楽集団では、営業のナワバリをめぐって紛争が頻発し、そのために訴訟で有利であることを期待して上位の本所を求める傾向があることが、土御門家や吉田家の支配を受容した社会的な要因であったことを指摘した。1、土御門家配下の陰陽師・万歳師の史料の閲覧・複写をため、神奈川県立図書館、京都府立資料館、伊勢神宮文庫、小坂井町教育委員会、西尾市図書館、竹野町教育委員会を訪問し、関係の史料・文献を閲覧することができた。以下、解明した点を列挙する。2、三河万歳、大神楽の展開史については、小坂井町の大林家文書から、慶長年間以降に西三河の万歳師が小坂井村、宿村に集まり、住み始めたこと、徳川家との特別な関係を主張しながら、関東で万歳の営業を展開させたが、それが限界になった時期に、土御門家配下になったことを明らかにした。また大神楽師は、江戸の伊勢方の支配を受けていたのが文化年間以降、土御門家配下となったこと、宿村は西三河の大神楽師の拠点であったことを明らかにした。そもそも伊勢方は、地方の芸能者を支配する体制を備えていたが、熱田方は、江戸の仲間による合議的組織であったことが、調査の過程で明らかになった。3、相模国の神事舞太夫の展開史を二つの論文にまとめた。それによると、相模国の神事舞太夫には、小田原グループ、六所明神グループ、萩原家グループが併存し、時には祭礼の神事芸能の権利をめぐって抗争があったことを明らかにし、土御門家配下の萩原家グループが、訴訟を通じて勢力を拡大し、神事舞太夫の取締出役になったことを指摘した。平成11年度の研究実績は、以下の通りである。(1)平成10年度に収集した知多陰陽師史料を使って、大高村触頭と知多の万歳師との葛藤と対立の経緯を解明し、研究成果報告書掲載の「土御門家配下の知多の陰陽師と出稼ぎ万歳」を書いた。ここでは、尾張のおける土御門家配下の支配系列を推定することができた。(2)地方陰陽師関係の史料の閲覧・収集のために、兵庫県竹野町安谷家、豊岡市県立文教府、埼玉県立図書館、鶴ヶ島市教育委員会、京都府立資料館、大阪市立図書館などを訪問し、史料・参考文献などを閲覧することができた。安谷家では、安谷家文書の閲覧、一部史料の撮影をし安谷家の由来について話を聞くことができた。安谷家文書を使い、地方触頭の社会的機能について考察し、(1)貢納料の収集という経済的機能、(2)取締役の補助的機能、(3)陰陽師間の紛争を調停する機能があることを指摘した。鶴ヶ島市教育委員会では馬橋家文書を閲覧し、幕末に御嶽講の世話役が、土御門家配下に加入し、地域における御嶽講と土御門家配下の複合的な支配のありかたを知ることができた。(3)土御門泰福と渋川春海との関係を知るために、内閣文庫、神宮文庫の渋川の著作を閲覧し、一部複写を依頼した。これらの成果は、研究成果報告書掲載の「渋川春海年譜」の基本的なデータとして使用している。土御門と渋川との関係は、京都における天文観測、貞享暦作成、渋川の安家新道への帰依、渋川の幕府への天文密奏など複数の濃密な接点をもっていたことが確かめることができた。
Production of mesoporous fullerene (C60) with highly crystalline framework to deal with environment and energy problems

このプロジェクトにおいて、フラーレンC60結晶をゼロ次元から高い次元に構築し、結晶格子をもつメソポーラスフラーレンからなる新しいナノカーボン材料の一群を開発することに成功した。溶媒和したフラーレン結晶からの穏やかな熱条件による溶媒の脱離が孔の形成に重要であった考えられる。極端な高温処理では、フラーレン結晶はπ共役を持つsp2-炭素の堅牢な骨格をもつ新しい類のナノポーラス炭素に変換された。これらの新しいナノポーラス炭素は、市販の活性炭と比して優れた電気化学容量と芳香族化合物のセンシング特性を有する。
担持金属クラスターの3D構造制御と触媒作用の解明

本研究では,担持金クラスターや配位子保護金属クラスター,金属ナノ構造体の幾何構造を3次元で解明し,構造が示す光学特性や触媒作用を幾何構造の観点から解明することを目的とする.担持金クラスター触媒では触媒作用を支配する構造因子として,組成,構成金属原子数(サイズ)が挙げられる.ベンジルアルコール酸化反応活性に対する担持金クラスター触媒の組成・サイズ依存性を幾何構造の点から考察し,組成効果ではPd1原子ドープによるAuへの電子供与が,サイズ効果では100原子以上の金クラスターで結晶性のクラスターの形成が高い酸化触媒活性に寄与することをみいだした.さらに,カーボン上の配位子保護金属クラスターについて,焼成により正二十面体構造の担持金クラスターが生成すること,これに電子線を照射することで面心立方構造の金クラスターが選択的に生成することを明らかにし,幾何構造の制御に成功した.また,高分解能透過型電子顕微鏡を用いることで金ナノロッドの幾何構造を原子レベルで観察することに成功した.構造解析の結果,直径1.8 nmの金ナノロッドは面心立方構造を持つ金クラスターが双晶面を介して連なった連結体であることを明らかにした.本研究の成果である,金属クラスターの幾何構造が触媒作用に及ぼす効果の解明,幾何構造制御法の開発は,革新的な金属クラスター触媒を開発する上で重要であり,クラスター科学および触媒化学の発展に大きく貢献すると考えている.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。粒径が2 nm以下の金属クラスターの幾何構造や電子状態は,そのサイズ(原子数),組成(金属の種類),幾何構造に依存して大きく変化し,対応するバルク物質や原子では見られない特異な性質,反応性を示す.すでにサイズや組成制御は可能となっているが,幾何構造の制御ができていないのが現状である.平成29年度では,ベンジルアルコール酸化反応活性に対して高い活性を示す担持金クラスターの幾何構造を解明・制御するため,加熱中における担持金属クラスターの構造をTEMで調べた.また,非晶質の配位子保護金属クラスターの3D構造を解明するため,HR-TEMによる構造評価を行った.担持金属クラスターのTEM観察では,配位子保護金クラスターを固体上に担持し,加熱しながらその構造をTEMにより観察した.配位子が脱離する温度で担持金クラスターの幾何構造が変化することを見出した.非晶質の配位子保護金属クラスターの3D構造解明では,オレイルアミンで保護した極細金ナノロッドの幾何構造の観察及び,ロッドのアスペクト比や配位子が光学特性に及ぼす効果について研究した.HR-TEMにより,極細金ナノロッドはfcc構造のAu147が双晶面を介して連結した構造体であることを見出した.さらに,極細金ナノロッドはアスペクト比に依存した赤外吸収を示すが,その波長は一般的な金ナノロッドよりもより長波長側にシフトしていることを見出した.また,HR-TEMによる配位子保護金クラスターの原子分解像の観察に成功し,TEM観察条件下でも金クラスターが分解することなく観察できることを見出した.担持金クラスターについて,TEMによる加熱中における幾何構造を解明することが最大の目標であった.本研究により,加熱中の配位子保護金クラスターの構造を観察することに成功し,再現良く幾何構造の変化も明らかにできたので当初の目的は達成した.今回は,本成果に加え,配位子保護金構造体の幾何構造の解明や新しい光学特性を解明でき,計画以上に研究が進展した.本研究では,担持金クラスターや配位子保護金属クラスター,金属ナノ構造体の幾何構造を3次元で解明し,構造が示す光学特性や触媒作用を幾何構造の観点から解明することを目的とする.担持金クラスター触媒では触媒作用を支配する構造因子として,組成,構成金属原子数(サイズ)が挙げられる.ベンジルアルコール酸化反応活性に対する担持金クラスター触媒の組成・サイズ依存性を幾何構造の点から考察し,組成効果ではPd1原子ドープによるAuへの電子供与が,サイズ効果では100原子以上の金クラスターで結晶性のクラスターの形成が高い酸化触媒活性に寄与することをみいだした.さらに,カーボン上の配位子保護金属クラスターについて,焼成により正二十面体構造の担持金クラスターが生成すること,これに電子線を照射することで面心立方構造の金クラスターが選択的に生成することを明らかにし,幾何構造の制御に成功した.また,高分解能透過型電子顕微鏡を用いることで金ナノロッドの幾何構造を原子レベルで観察することに成功した.構造解析の結果,直径1.8 nmの金ナノロッドは面心立方構造を持つ金クラスターが双晶面を介して連なった連結体であることを明らかにした.本研究の成果である,金属クラスターの幾何構造が触媒作用に及ぼす効果の解明,幾何構造制御法の開発は,革新的な金属クラスター触媒を開発する上で重要であり,クラスター科学および触媒化学の発展に大きく貢献すると考えている.今後は担持金クラスターの幾何構造の制御法を確立し,幾何構造が触媒作用に及ぼす効果を明らかにする.また,配位子保護金属クラスターについて,その3D構造をTEMにより直接観察・解明する技術を確立する.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
フローサイトメトリーによる前立腺癌アポトーシス細胞の定量的解析-針吸引生検による内分泌療法前後の経時的変化の検討-

HL60を用いた予備実験において、5×10^5/ml・2mlにcamptothecin (CAM) 2μg/mlを3時間作用させた所、CAMないしTdT不存在の陰性対照では単峰性のピークを示したがCAM及びTdT添加群では2峰性のピークが認められ、フローサイトメトリーによるTdT法のアポトーシス細胞検出能が確認された。前立腺癌の患者数が少なく臨床検体の評価が困難となり、代わりにホルモン感受性ヒト前立腺癌培養細胞株LNCaPを用いた検討を行った。5α-dihydrotestosterone (DHT) 1×10^<-10>M添加及び無添加群に5-FUを13ng/ml130μg/ml添加し、1、3、6、24時間及び6日間接触させMTT法で細胞増殖阻害率を測定し、更にTdT法にてFITC標識しPIにてDNA染色の上二重蛍光分析を行った。5-FUは濃度依存性および時間依存性に作用し、DHTの有無によらず上記各接触時間でのIC50は1.5×10^<-3>M、2.5×10^<-4>M、1.5×10^<-4>M、3×10^<-5>M及び3×10^<-6>Mであった。次いで5-FU1mMを24時間接触させ、直ちにないし24及び48時間培養後固定したものを測定した。各細胞生存率は、DHT添加群で9398%、3547%、1719%、無添加群で9498%、3979%、3045%で両群に差が見られず、DHTは5-FUの感受性に影響を与えないと考えられた。一方、FITC蛍光強度は24時間接触直後では対照と有意差を認めなかったが,更に24時間培養したDHT無添加群で上昇しアポトーシスの誘導が検出された。DHT添加群では不明瞭であった。48時間後では両群とも細胞の変性が見られた。DHT無添加群は、臨床的にはホルモン療法施行例に相当する。本法の針吸引生検検体への応用も可能と思われた。
心血管形成・ヒト血管疾患に関与するシグナル伝達系の下流遺伝子群の意義

血管系のシグナル伝達異常は先天性心疾患・難治性血管病の原因となり、虚血性疾患や癌に認められる病的血管新生においても重要である。私たちはこれまでに、ヒト心血管疾患に重要な意義を有するNotchおよびALK1シグナル伝達系の下流ターゲット因子として、Hey1転写因子・Tmem100膜タンパク質・Sgk1リン酸化酵素を同定した。私たちおよび他の研究者によって、これらの遺伝子の欠損がマウスにおいて重篤な心血管形成異常を引き起こすことが報告され、ヒト病態における重要性も注目されている。そこで今回の研究では、遺伝子組換えマウスモデルと分子生物学的手法を用いて、これらの因子の機能メカニズム・上流発現制御機構・生体における意義を明らかにすることを試みている。Notch受容体やリガンドの遺伝子変異は脳小血管病CADASILやAlagille症候群における先天性心疾患の原因となり、ALK1受容体および関連遺伝子の変異は遺伝性出血性毛細血管拡張症の原因、肺動脈性肺高血圧症の素因として重要である。これらのNotch・ALK1シグナル関連血管病は難病指定疾患であり、病因究明と診断・治療法の開発が強く望まれている。NotchおよびALK1シグナルの下流因子が血管形成・機能制御においてどのように働くかを明らかにすることは、先天性心疾患・難治性血管病の病態生理の解明のみならず、遺伝子変異等によって生ずる遺伝子発現・シグナル伝達の異常を正常化することによる新しい治療ストラテジー開発の基盤となると期待される。第一年度において、Hey1欠損による胎生期咽頭弓動脈形成障害とそれに起因する大血管形成異常(大動脈弓離断症、右大動脈弓など)の機序における血管内皮細胞・平滑筋細胞の重要性について組織特異的遺伝子欠損マウスを用いて検討した。さらにHey1の胎生期血管系における発現を規定するエンハンサーを同定し、その転写調節機構を明らかにした。また、Tmem100は分子機能メカニズムに不明な点が多い小型膜タンパク質であるが、遺伝子欠損によって生ずる重篤な血管形成異常の成り立ちを明らかにするために網膜血管新生系を導入した細胞レベルの血管形成現象観察を行った。Tmem100の胎生期血管内皮細胞特異的発現に働くエンハンサーを同定し、上流で働く転写調節機構を解明した。一方、Sgk1リン酸化酵素は様々な細胞において多数の基質のリン酸化・活性調節に働くことが知られるが、血管内皮細胞における基質については不明な点が多い。第一年度では血管内皮細胞におけるSgk1リン酸化酵素発現によるリン酸化プロテオーム様式の変化をMass Spectrometry法を用いて解析し、新規の基質候補を複数同定した。さらに、Sgk1についても、その胎生期血管内皮特異的発現を規定するエンハンサーの同定に成功した。今後、研究をさらに進め、これらの因子が血管形成・機能制御においてどのように働くかを明らかにする。第一年度に行った研究に引き続き、Hey1の細胞特異的欠損によって生ずる下流のシグナル伝達異常について解析を進めるとともに、Hey1の胎生血管発現を規定するエンハンサーを介した転写調節機構、特に上流の転写調節因子の心血管発生における意義を検討してゆく。また、網膜実験系においてTmem100欠損によって生ずる血管形成現象の異常について、Heyファミリー欠損をはじめとする他の遺伝子欠損系と比較して、内皮細胞分化・増殖・伸長・移動・分枝・高次構造形成などよりTmem100が働く血管内皮生命現象の特定を試みる。また、小型膜タンパク質であるTmem100が複合体を形成する機能因子の探索を進め、Tmem100の膜タンパク質機能の分子メカニズムを明らかにしたい。Tmem100の胎生期血管内皮細胞エンハンサーについても、さらに詳細な転写制御メカニズムを検討する計画である。一方、Sgk1リン酸化酵素の血管内皮細胞における新規基質候補については、さまざまな生化学的・分子生物学的実験を通してSgk1基質であることを検証した後、Sgk1による活性制御の重要性、さらにSgk1と新規基質の血管内皮細胞機能における意義を検討してゆく。Sgk1の血管内皮エンハンサーについて、Hey1、Tmem100のエンハンサーとの比較を行いながら、Sgk1の発現制御機構の解明に努めたい。

第一年度において、Hey1欠損による胎生期咽頭弓動脈形成障害とそれに起因する大血管形成異常(大動脈弓離断症、右大動脈弓など)の機序における血管内皮細胞・平滑筋細胞の重要性について組織特異的遺伝子欠損マウスを用いて検討した。さらにHey1の胎生期血管系における発現を規定するエンハンサーを同定し、その転写調節機構を明らかにした。また、Tmem100は分子機能メカニズムに不明な点が多い小型膜タンパク質であるが、遺伝子欠損によって生ずる重篤な血管形成異常の成り立ちを明らかにするために網膜血管新生系を導入した細胞レベルの血管形成現象観察を行った。Tmem100の胎生期血管内皮細胞特異的発現に働くエンハンサーを同定し、上流で働く転写調節機構を解明した。一方、Sgk1リン酸化酵素は様々な細胞において多数の基質のリン酸化・活性調節に働くことが知られるが、血管内皮細胞における基質については不明な点が多い。第一年度では血管内皮細胞におけるSgk1リン酸化酵素発現によるリン酸化プロテオーム様式の変化をMass Spectrometry法を用いて解析し、新規の基質候補を複数同定した。さらに、Sgk1についても、その胎生期血管内皮特異的発現を規定するエンハンサーの同定に成功した。今後、研究をさらに進め、これらの因子が血管形成・機能制御においてどのように働くかを明らかにする。第一年度に行った研究に引き続き、Hey1の細胞特異的欠損によって生ずる下流のシグナル伝達異常について解析を進めるとともに、Hey1の胎生血管発現を規定するエンハンサーを介した転写調節機構、特に上流の転写調節因子の心血管発生における意義を検討してゆく。また、網膜実験系においてTmem100欠損によって生ずる血管形成現象の異常について、Heyファミリー欠損をはじめとする他の遺伝子欠損系と比較して、内皮細胞分化・増殖・伸長・移動・分枝・高次構造形成などよりTmem100が働く血管内皮生命現象の特定を試みる。また、小型膜タンパク質であるTmem100が複合体を形成する機能因子の探索を進め、Tmem100の膜タンパク質機能の分子メカニズムを明らかにしたい。Tmem100の胎生期血管内皮細胞エンハンサーについても、さらに詳細な転写制御メカニズムを検討する計画である。一方、Sgk1リン酸化酵素の血管内皮細胞における新規基質候補については、さまざまな生化学的・分子生物学的実験を通してSgk1基質であることを検証した後、Sgk1による活性制御の重要性、さらにSgk1と新規基質の血管内皮細胞機能における意義を検討してゆく。Sgk1の血管内皮エンハンサーについて、Hey1、Tmem100のエンハンサーとの比較を行いながら、Sgk1の発現制御機構の解明に努めたい。
各種養殖魚類の薬物代謝酵素活性と投与医薬品の体内持続性に関する研究

(1)主要養殖魚(ブリ,マダイ,アユ,ウナギ,コイ,ニジマス)およびティラピアとチョウザメについて,各薬物代謝酵素の温度・pH特性を調べたところ,最適温度はそれぞれの生息適水温を反映したが,最適pH値については,魚種間に一定の傾向を認めなかった。(2)ブリ,ニジマス,コイにおいて薬物代謝酵素,特に芳香族炭化水素水酸化酵素(AHH)の活性は季節的に著しく変動した。(3)魚類の薬物代謝酵素の活性には近縁魚種間でも顕著な差が認められること,また,一般に魚類の本酵素活性は哺乳類の1/51/10に過ぎないが,PCBや或種の医薬品によって容易に誘導され,特にAHHの活性は哺乳類のそれを超えるレベルに達することを明らかにした。(4)ブリ,マダイ,アユ,コイ,ニジマスを供試し,それらの薬物代謝酵素活性と,病魚に多用されているオキソリン酸(OA),チアンフェニコ-ル(TP),オキシテトラサイクリン(OTC)の体内持続性との関係を調べ,各供試魚のAHHおよびグルクロン酸抱合酵素の活性とOAの体内持続性との間に強い相関を認めた。(5)その相関性を同一魚種で確認するため,予めPCB投与によってAHH活性を対照魚の18倍に誘導したコイにOAを投与し,OAの体内最高濃度および体内持続期間が対照魚の1/21/3に減少することを実証した。近年,養殖対象魚種が著しく増加してきたが,医薬品の投与規制対象魚は生産量の多い7魚種に限定されており,生産量の少ない魚種については,規制魚種における投薬基準が参考にされている。しかし,近縁魚種間でも薬物代謝酵素活性に顕著な差が認められ,またそれらの活性は季節的にも変動する。本研究は,養殖魚に対する医薬品の有効な投与法および適正な休薬期間の設定に当たり,薬物代謝酵素活性が迅速かつ経済的な指標として有用であることを実証したものである。1.薬物代謝酵素活性ブリ,マダイ,アユ,ウナギ,コイ,ニジマス,ティラピアの各肝臓を細胞分画し、そのミクロソームとシトゾル画分を供試し、各薬物代謝酵素活性とそのpH・温度特性を比較検討した。(1)pH・温度特性:各酵素の最適温度は冷水性魚で2530°C、温水性魚で3040°C、熱帯性魚で4045°Cの範囲にあり、各生息適水温を反映する結果を得たが、最適pHについては明確な傾向を認めなかった。(2)酵素活性:シトクロムP-450含量はコイ>ティラピア>ウナギ>ニジマス>マダイ、ブリ》アユの順に減少した。水酸化酵素の活性はブリ>ティラピア>マダイ、ウナギ>ニジマス>コイ、アユ;硫酸抱合酵素の活性はマダイ>ニジマス》ブリ、ウナギ>コイ》ティラピア>アユ;グルタチオン抱合酵素の活性はティラピア》マダイ、ウナギ》ニジマス、ブリ>コイ》アユの順に低下した。グルクロン酸抱合酵素活性は供試魚種のうち、ニジマスとウナギにのみ認められ、他魚種では検出限界以下であった。以上の各活性はラットに比べて著しく低かったが、エステラーゼの活性はラットと同レベルであり、魚種間の差は小さかった。2.医薬品の定量法マダイの肝臓、腎臓、筋肉および血液を試料とし、オキソリン酸、オキシテトラサイクリン、チアンフェニコールの各2ppmを添加し、HPLC(東ソー)を使用してそれぞれ回収試験を行った。

(1)オキソリン酸:回収率は肝、腎、筋、血でいずれも7082%であり、検出限界は2ngであった。ただ、腎臓では妨害ピークが現われ、検出限界は約20ngであった。(2)オキシテトラサイクリン:検出限界は2ngであり、水溶液からの回収率を100%とした場合、肝で68%と低かったが、他の組織では8090%であった。(3)チアンフェニコール:検出限界は1ngであったが、回収率は血液で96%と高かったものの、肝臓と筋肉では65%、腎臓では52%と低く、今後再検討が必要である。(1)投与医薬品の魚体内残留性と薬物代謝酵素活性との関連性コイ、アユ、ニジマス、マダイ、ブリおよびPCBを投与して薬物酸化酵素活性を誘導させたコイを用い、各供試魚にオキソリン酸(OA)20mg、塩酸オキシテトラサイクリン(OTC)およびチアンフェニコ-ル(TP)各50mg/kgb.w.を1回強制経口投与し、それらの筋肉、肝臓、腎臓、血液中濃度の経時的変化を調べた。また、供試魚肝臓の薬物代謝酵素活性を測定し、残留性との関連性について検討した。OAでは、すべての魚種で腎臓が最も高く、腎臓における最高濃度到達時間と生物学的半減期は、供試魚の水酸化酵素(AHH)活性と逆相関を示し、活性が最も高かったブリで最も短く、次いでマダイ、アユ、コイ、ニジマスの順に長くなった。OTCではすべての魚種で肝臓が最高濃度を示し、肝臓における生物学的半減期はコイ、アユで短く、マダイ、ニジマスの順であったが、酵素活性との関連性は認められなかった。TPにおいては組織間に明瞭な差はなく、代謝酵素活性との関連も認められなかった。またPCB処理によってAHH活性が17倍に誘導されたコイでは、OAの体内濃度が対照魚に比べて約1/3に減少し、最高濃度到達時間は26時間から12時間に短縮された。しかし、OTCとTPではその差は認められず、AHH活性は両薬剤の排出に関与しないと考えられる。すなわち、AHH活性はOAの排出に深く関与しており、この活性値からOAの残留性を予測する可能性を示唆する。(2)ニジマス肝臓の薬物代謝酵素活性の季節的変化昨年度から継続して、ニジマスの薬物代謝酵素活性の成長および季節的変動について検討した結果、AHHと硫酸抱合酵素の活性は、季節により最大34倍変動することが明らかになり、これらの酵素活性の変動により薬剤の魚体内保持期間が変化し、画一的な医薬品の投与には、その治療効果や食品の安全性の点で問題があることを示唆している。(1)魚類の薬物代謝酵素活性と投与医薬品の体内持続性との関連性昨年度に実施できなかったブリに対するチアンフェニコ-ル(TP)とオキシテトラサイクリン(OTC)投与実験を行った。ブリに両薬剤をそれぞれ50mg/kg体重の割合で1回強制経口投与し,筋肉,肝臓,腎臓,血液中濃度の経時的変化を調べるとともに,コイ,アユ,ニジマス,マダイにおける両薬剤の残留性とそれらの薬物代謝酵素活性との関連性を比較検討した。ブリにおけるTP最高濃度およびその到達時間はマダイと同レベルであり,アユ,コイにおけるそれらの1/21/3であり,薬物水酸化酵素(AHH)とグルクロン酸抱合酵素(GT)の活性を反映する傾向は認められたが,オキソリン酸(OA)の場合に比べるとその相関はかなり低かった。OTCについては,ブリにおいて最高濃度到達時間が他の魚種に比べて短かく,排出も速やかであったが,最高濃度と薬物代謝酵素活性との関に相関は認められず,これは本薬剤が酵素作用を受け難いためと考えられた。(2)医薬品投与による薬物代謝酵素活性の誘導合成抗菌剤6種と抗生物質8種の各適量を添加した飼料をマダイに12日間投与した後,肝臓の各薬物代謝素活性を測定した。
大脳皮質局所血流に及ぼすマイネルトの基底核からの放射線維の影響

マイネルトの基底核や中隔野に起始するコリン作動性線維は、それぞれ大脳皮質や海馬に投射しており、高齢者やアルツハイマ-患者において変成脱落していることが報告されているが、このコリン作動性線維の機能的意味については明らかにされていない。本研究は、マイネルト核と中隔野に起始するコリン作動性線維の大脳皮質および海馬の局所血流調節への関与及びその機序を検討することを目的とした。人工呼吸下の麻酔ラットを用いて、脳局所血流の測定には、経時的に測定可能なレ-ザ-ドップラ-法あるいは脳の様々な部位の局所血流が同時に測定できるヨ-ドアンチピリン法を用いた。一側のマイネルト核あるいは正中線に近接している中隔野を電気刺激あるいは化学刺激したところ、刺激と同側の大脳皮質局所血流あるいは両側海馬の局所血流がそれぞれ増加した。しかし、刺激中その他の部位では有意な血液の増加は見られなかった。これらのマイネルト核や中隔野刺激によって起こる大脳皮質や海馬の血流増加反応は、いずれもアセチルコリン受容体遮断薬の静脈内投与によって著しく減弱した。また、大脳皮質ならびに海馬内の細胞外液中のアセチルコリンを微小透析法によって測定したところ、それぞれマイネルト核刺激ならびに中隔野刺激によって増加した。以上の事実から、マイネルト核から大脳皮質に、中隔野から海馬にそれぞれ投射するコリン作動性線維が興奮すると、大脳皮質と海馬にアセチルコリンを放出し、大脳皮質と海馬の局所の血管を拡張させて血流を増加させる機序が明らかにされた。コリン作動性神経による血管拡張としては、運動時に骨格筋を支配する交感神経コリン作動性血管拡張神経が活動して、骨格筋が収縮し易い状態を作り上げることが良く知られている。今回明らかにした頭蓋内コリン作動性神経による血管拡張はこの系と類似の脳の準備状態を作り上げる機能を持つと推測される。1)ラット脳局所血流測定法と大脳皮質アセチルコリン(Ach)の測定法の確立脳血流の測定は、これまで確立されている水素クラアランス法、ヨードアンチピリン法(RI型)、光電管法に加えて最近開発されたレーザードップラー法を当研究室に導入し、それぞれの方法について比較検討を行った。レーザードップラー法は大脳皮質の脳血流を経時的に測定するのに適しており、RI法はある一時型ではあるが、脳の様々な部位からの局所血流の絶対値を同時に測定することができる。以上のことから、ヨードアンチピリン法とレーザードラップラー法を主として用いる結論に達した。また、大脳皮質を潅流し、潅流液中のACh濃度をHPLCと電気化学検出器を用いて測定する方法を導入した。実験には、ハロセンあるいはウレタンで麻酔したラットを用い、麻酔中、脳血流に影響を与える血中炭酸ガス濃度を一定に保つ実験システムを確立した。2)前脳基底核のマイネルト核刺激の大脳皮質血流に及ぼす効果前脳基底核のマイネルト核は大脳皮質にコリン作動性線維を投射することが知られている。このマイネルト核を刺激して、大脳皮質の血流に対する効果を調べたところ、大脳皮質血流が増加することが明らかになった。この増加反応は刺激と同側の大脳皮質おいてのみ観察され、アセチルコリン受容体の遮断薬で消失した。さらに、大脳皮質のアセチルコリンの濃度がマイネルト核刺激時によって増加することを示した。

以上のことから、マイネルト核の細胞体が興奮すると大脳皮質に投射するコリン作動性線維が興奮し、皮質血流を増加させることが明らかになった。次年度は、この研究を発展させ、海馬にコリン作動性線維を投射することが知られている中隔野と海馬の局所血流との関係を明らかにしてゆく予定である。1)中隔野刺激の海馬血流に及ぼす効果前年度は、前脳基底核のマイネルト核の刺激によって大脳皮質に投射するコリン作動性線維が興奮し、皮質血流が増加する事を明らかにした。マイネルト核の前内方への延長と考えられる中隔野(内側中核と対角帯核)は、海馬にコリン作動性線維を投射する事が知られている。本年度は第一に、この中隔野を刺激して、海馬血流に及ぼす効果を調べた。。その結果、中隔野の刺激によって海馬血流が増加し、海馬のアセチルコリン濃度も増加する事実、このうち、通過線維も興奮させる電気刺激による海馬血流の増加反応は、アセチルコリン受容体遮断薬で影響を受けないが、細胞体のみを興奮させる化学刺激による海馬血流俣の増加反応はニコチン性アセチルコリン受容体遮断薬で消失する事実を明らかにした。以上の事から、中隔野の細胞体が興奮すると海馬に投射するコリン作動性線維が興奮し、ニコチン性アセチルコリン受容体を介して海馬血流を増加させる事が明らかになった。。2)マイネルト核及び中隔野刺激の、脳の種々の部位の局所血流に及ぼす効果マイネルト核及び中隔野の刺激がコリン作動性線維を介して、それぞれ大脳皮質及び海馬の局所血流を増加させる事が明らかになった。しかし、その際に脳の他の部位の局所血流が変化するかどうかは不明である。そこで本年度は第二に、マイネルト核及び中隔野刺激の、脳の種々の部位の局所血流に及ぼす効果をヨ-ドアンチピリン法を用いて検討した。その結果、マイネルト核の刺激では大脳皮質のみの、中隔野の刺激では海馬のみの局所血流が増加し、脳の他の部位の局所血流は変化しなかった。以上の事からマイネルト核及び中隔野刺激は、それぞれからのコリン作動性線維が投射している部位のみの血流を増加させる事実が明らかになった。
解離性大動脈瘤に対する経皮経大動脈的エントリ-閉鎖法の開発に関する研究

解離性大動脈瘤の治療法として、従来のエントリ-部の人工血管置換術より侵襲の少ないエントリ-閉鎖法の開発は治療成績の向上に大きく貢献すると思われる。本研究は経皮経大動脈的に挿入可能なエントリ-閉鎖用のパッチが装着されたカテーテル(以下、デバイスと略す)を試作し、その有用性を実験的に作成した解離性大動脈瘤モデルで検討することを目的とした。1)解離性大動脈瘤モデルの作成;雑種成犬(体重20Kg)の下行大動脈に人工血管を用いて側副血流路を作り、これを解離性大動脈瘤での偽腔とした。2週間後、1ヵ月後、3ヵ月後に大動脈造影あるいは屠殺を行い、その開存を研究した。大動脈に狭窄をつくることで長期的な開存が得られ、モデルとしての有用性が示唆された。2)デバイスのデザイン;当初真腔側の傘状のパッチと偽腔側の固定用バ-からなるデバイスを考え試作したが、カテーテルの中を通すように折り畳めないために断念した。次に真腔側が扁平な袋状のパッチ、偽腔側が充填硬化剤を注入することで半永久的に形状を維持することができる一方弁付きのラテックス製バルーンよりなるデバイスを考案、試作した。これを使用し、動物実験を行った。3)デバイスの植え込み実験;成犬を使った動物実験レベルのサイズでは、パッチ部分と経大動脈的挿入のためのカテーテルの一体化は困難であったため、下行大動脈切開部から用手的に植え込み実験を行った。2週間後の評価では、偽腔としての人工血管の閉塞が確認されたが、1カ月後の評価ではバルーンが破裂していた。まとめ;解離性大動脈瘤のエントリ-を経皮経大動脈的に閉鎖する治療法の開発を目的に研究を行い、その有用性は示唆されたが、デバイスおよび評価のための実験モデルに一層の工夫が必要と考えられた。1.目的;解離性大動脈瘤の手術成績は向上してきているが、術前状態の不良な高齢者、高度の心臓・肺・腎機能低下例に対する手術成績は不良で時には手術適応からはずれることがあり、従来のエントリ-部の人工血管置換術より侵襲の少ないエントリ-閉鎖法の開発は治療範囲の拡大、成績向上に大きく貢献すると思われる。本研究は経皮経大動脈的に挿入可能なエントリ-閉鎖用のパッチが装着されたカテーテルを試作し、その有用性を実験的に作成した解離性大動脈瘤モデルで検討することを目的としている。2.研究経過;平成6年度はカテーテルの設計および動物実験用サイズでの試作を行った。デバイスは真腔側閉鎖用パッチ・偽腔側固定用バ-あるいはバルーンと、それを病変部に留置するための2重管構造を持つカテーテルより構成されている。真腔側閉鎖用パッチは当初、ダクロン布とステンレスワイヤーからなる傘状のものを設計したが形状および強度に問題があり、パッチ部分を扁平なダクロン布製の袋としその中にワイヤーを同心円状に送り込むことにより形状を維持する新たな構造を考案した。また、偽腔側固定用の構造はバルーンとし、その拡張には液体ポリマー(2-hydroxyethylmethacrylate)を使用する事で永久的な固形化が得られるようにした。3.今後の展開;各パ-ツの試作は終了しているが、それらを一体化するための改良を重ね、解離性大動脈瘤モデルでの挿入実験と急性期および慢性期での評価を行う予定である。1.目的;

解離性大動脈瘤の手術成績は向上してきているが、従来のエントリ-部の人工血管置換術より侵襲の少ないエントリ-閉鎖法の開発は治療範囲の拡大、成績向上に大きく貢献すると思われる。本研究は経皮経大動脈的に挿入可能なエントリ-閉鎖用のパッチが装着されたカテーテルを試作し、その有用性を実験的に作成した解離性大動脈瘤モデルで検討することを目的としている。2.研究経過(1)デバイスのデザイン、試作;平成6年度に続き、エントリ-閉鎖用カテーテルの試作およびデザインの改良を重ねた。真腔側エントリ-閉鎖用パッチ部分は、扁平なダクロン布製の袋の中に形状維持用のワイヤーを同心円状に送り込むことにした。偽腔側固定用バルーンは既存の一方弁付きバルーンを流用し、真腔側パッチと接着剤により一体化させた。最終的に計6組の実験用のデバイスを試作した。バルーンの半永久的固形化のための液体ポリマー(2-hydroxyethylmethacrylate)の調合方法を確定した。(2)解離性大動脈瘤モデルの作成;成犬の下行大動脈に人工血管を用いてバイパスを作成し、2週間後までの開存を大動脈造影および屠殺により確認した。当初の実験では、バイパスの閉塞が見られたが、大動脈を軽く絞扼する工夫により開存が得られるようになった。デバイスの植え込み実験用のモデルとして、有用であると考えられた。(3)植え込み実験;成犬を使った動物実験レベルのサイズで、パッチ部分と経大動脈的挿入のためのカテーテルの一体化は困難であったため、大動脈切開部から用手的に植え込み実験を試みた。手技的な問題で長期生存例が得られていないので、デバイスの効果判定はいまだ行っていない。今後は挿入用のカテーテル部の改良を試み、慢性犬での評価を可能としたい。
ミカンコミバエ類のオスを誘引するメチルユ-ジノールの生物学的意味

メチルユ-ジノール(ME)を用いたオス除去法で、なぜミカンコミバエが容易に根絶できるのかは、長い間の謎であった。オス除去法では、オスが交尾する前に誘因剤に反応することが前提条件である。ウリミバエとカランボラミバエ(ミカンコミバエの複合種)で調べた結果、ウリミバエでは、誘因剤(CL)暴露条件下でも多数の交尾が起こったが、ミカンコミバエでは、ME暴露条件下で交尾はほとんど起こらなかった。従って、MEと異なり、CLでは前提条件がみたされず、有効な防除が出来ないことが判明した。次に、MEによる防除効果を増すと考えられる4つの要因を解析した。第1は強い誘引力である。しかし、これはMEの誘引距離ではなく、ハエの飛翔行動と、誘因剤への長時間反応によった。第2は、配偶システムである。本種のオスは夕方レックを形成し、メスを誘引する。しかし、オスの密度が低下すれば、レックが形成されず、メスは交尾できなくなる。第3はメスの反応である。今回の研究でメスが夕方MEに反応することが判明した。この時刻は丁度オスがメスに求愛する時刻である。この時、メスがオスに定位できないために交尾が阻害される。第4は、オスの反応性と交尾成功との相関である。オスはMEを摂食し、フェロモンとともに放出することで交尾成功を高める。一方、網室実験では、交尾は特定のオスが独占した。これらの結果は、MEへの反応性と交尾成功の相関を示唆している。オス除去法では、MEに反応しやすいスーパーオスの死亡率が高いくなり、交尾率の急激な低下をもたらす、と考えられる。以上の結果より、MEが有効である理由は、オスが交尾前にMEに反応することに加え、上記要因の複合効果によって交尾阻害をもたらし、短期間に根絶が達成させるものと考えられた。14属2種の植物についてメチルユ-ジノール(以後,ME)が含まれる部位を調べたところ,花とそれ以外がほぼ半々であった。植物が授粉を促進させるためにMEを生産するというTan(1992)の仮説に従うなら、花以外の部位でのME生産は説明できない。一方、石川(1980)の寄生-共生仮説は、植物が食植者からの被食を免れるためにMEを生産することを示唆する。この場合、MEは有害かあるいは忌避的作用をもつ物質でなければならない。このことより、ミバエ類によるME摂食は、植物が自身の防衛のために進化させたMEを、偶然に摂食したミバエが、寿命をある程度は犠牲にするが、それを補う被食率の低下を得ることが出来たために生じたと考えられる。この仮説に従うなら、ME摂食はオスだけでなく、メスにとっても有利となるはずである。しかし、これまでメスのME摂食はまったく報告されていない。そこで、メスがMEを摂食するかどうかを、カランボラミバエ(Bactrocera carambolae,ミカンコミバエの複合種の1種)を用い実験的に調べた。約1.5cmの入り口を2個もつスタイナ-型のMEトラップを設置した網室に、約300匹のおすと同数のメスを放した。その結果、羽化16日目後以降、多数のメスが日没直前に一斉にスタイナ-型MEトラップの回りを群飛した。

このうちごく少数がトラップの中に入った。しかし、これらのメスはMEに直接定位せず、口吻を突出させる摂食行動も示さなかった。ここでは大部分の成熟オスがMEトラップで除去されたため、メスは未交尾のまま性成熟し、これらのメスが交尾が生じる日没直前にMEに反応しすることが明らかとなった。次に、5匹のメスを入れた直径9cmのプラスチックシャーレを60個用意し、ここに少量のMEを滴下した濾紙を挿入し、メスの反応を調べた。その結果、約25%のメスがこの濾紙に定位した。また、約10%のメスは濾紙を盛んに嘗めた。これらの実験は午前と午後にそれぞれ行ったが、いずれの場合もメスは同じ行動をしめした。したがって、メスはある条件下では、オスと同様にMEを摂食することがはじめて証明された。これらの結果はME摂食の起源が、被食率の低下にあったとする考えを支持している。メチルユ-ジノール(ME)を用いたオス除去法で、なぜミカンコミバエが容易に根絶できるのかは、長い間の謎であった。オス除去法では、オスが交尾する前に誘因剤に反応することが前提条件である。ウリミバエとカランボラミバエ(ミカンコミバエの複合種)で調べた結果、ウリミバエでは、誘因剤(CL)暴露条件下でも多数の交尾が起こったが、ミカンコミバエでは、ME暴露条件下で交尾はほとんど起こらなかった。従って、MEと異なり、CLでは前提条件がみたされず、有効な防除が出来ないことが判明した。次に、MEによる防除効果を増すと考えられる4つの要因を解析した。第1は強い誘引力である。しかし、これはMEの誘引距離ではなく、ハエの飛翔行動と、誘因剤への長時間反応によった。第2は、配偶システムである。本種のオスは夕方レックを形成し、メスを誘引する。しかし、オスの密度が低下すれば、レックが形成されず、メスは交尾できなくなる。第3はメスの反応である。今回の研究でメスが夕方MEに反応することが判明した。この時刻は丁度オスがメスに求愛する時刻である。この時、メスがオスに定位できないために交尾が阻害される。第4は、オスの反応性と交尾成功との相関である。オスはMEを摂食し、フェロモンとともに放出することで交尾成功を高める。一方、網室実験では、交尾は特定のオスが独占した。これらの結果は、MEへの反応性と交尾成功の相関を示唆している。オス除去法では、MEに反応しやすいスーパーオスの死亡率が高いくなり、交尾率の急激な低下をもたらす、と考えられる。以上の結果より、MEが有効である理由は、オスが交尾前にMEに反応することに加え、上記要因の複合効果によって交尾阻害をもたらし、短期間に根絶が達成させるものと考えられた。
大規模医療・介護関連データベースを用いた臨床疫学・経済学研究基盤構築

本研究の目的は国内に存在する複数の大規模医療・介護関連データベースを統合することで、医療・介護のフィールドを超えた患者縦断データを作成し、それを用いて臨床疫学・経済学研究を行うインフラを整備することである。そのために以下の事項を行うことを目的としている。i)共通IDの存在しないデータベース間のデータ突合手法の開発を行う。ii)医療・介護アウトカムの地理的・経時的変化の可視化と規定要因を明らかにする。iii)医療・介護のフィールドを超えた、患者長期追跡データベースを作成し、診療行為や薬剤・介護サービスと長期的な医療・介護アウトカムとの関連を検証する。本年度は昨年度に引き続き、共通IDの存在しないデータベース間のデータ突合手法の開発に取り組んだ。今年度は特に、レセプトデータベース(NDB)と病院から収集される退院時サマリ情報(DPC)の情報を連携して解析する手法を開発し成果を上げた。肺炎などで入院したあと、リハビリテーションや介護予防等の入院後の介入で患者の予後が改善するかは重要なテーマであり、NDBなどの患者の長期追跡を行うことができるデータベースでの検証が期待されている。しかし、NDBは検証に必要となる疾病重症度を把握することが出来ないという課題を抱えている。今年度は疾患重症度とレセプトデータが両方格納されているデータベース(DPCデータ)を用いてNDB等からも取得可能な情報に対し、深層学習(Deep Learning)を用いてリスクモデルを構築し、既存の疾患重症度との関係を明らかとした。これにより、DPCデータとNDBデータを用い、個人を突合することなく連携した解析を実施する道筋が立った。今年度の進捗により、NDBとDPCデータ間の連携した解析に道筋をつけることが可能となった。今回利用した深層学習を用いたリスクモデル構築は他のデータベース間の連携にも応用が利く手法であり、さらなる進捗が望める。さらに、現在レセプト情報と介護情報が同時に記載されるデータベースへのアクセスの確保を目指し関連機関と折衝を続けている。次年度はNDBとDPCを連携した解析を実施する。具体的には退院後の種々の介入が患者の長期予後を改善しうるかどうかを検討する。さらに、レセプト情報と介護情報の連携に向けてさらなる検討を行う。そのためにi)共通IDの存在しないデータベース間のデータ突合手法の開発を行う。構築したインフラを用いて、以下の課題を明らかにする。本年度は共通IDの存在しないデータベース間のデータ突合手法の開発に取り組んだ。日本には、異なるデータベース間を突合するための共通IDが存在しない。そのため、収集母体の異なるデータベース間の突合は不可能である。しかし、データが同一粒度で集計されていれば、異なるデータベース間でもデータを連結することが可能である。また、Data Fusionなどの統計学的手法を用いることでデータを個票レベルで突合することなく統計情報を取得する手法が開発されている。しかし、データをデータベース間で突合するためには、各データベース間の情報粒度の単位を揃える必要がある。

例えば、DPCデータベースは患者の1入院単位の情報粒度で情報が格納されており、NDBは月単位で情報が格納されている。これらの情報を適切に突合するためには情報粒度を同じ1入院単位に揃える必要がある。本年度、NDBのデータを患者のエピソード(入院・外来・調剤)単位にサマリするプログラムの作成を行い、開発に成功した。現在まで、NDBの疫学研究への活用の遅れの原因であったデータ前処理の課題を解決することが出来た。データの利用申請を行い、今後、作成したアプリケーションを用いた解析を行う。次年度はNDBとDPCを連携した解析を実施する。具体的には退院後の種々の介入が患者の長期予後を改善しうるかどうかを検討する。さらに、レセプト情報と介護情報の連携に向けてさらなる検討を行う。個人情報保護法と倫理指針改正の影響で、データベース間の直接のリンクを行う事は困難となった。計画通り、直接の突合を行わない手法と、NDBと介護レセプトデータベース以外の情報ソースの情報の利用も含め検討を進める。
テーラーメードプロバイオティクスを目指したビフィズス菌属の俯瞰的ゲノム解析

Bifidobacterium adolescentisは,成人大腸内で最優性のビフィズス菌である。この菌種は,多くの多型が存在し,人ごとに異なる株が常在化していると考えられる。我々はこれまでに,この基準株であるB.adolescentis ATCC15703株の完全長ゲノムを決定した。今回は,菌株間の多型を解析することを目指し,JCMの保存菌6株(JCM1251,1275,7042,7044,7045,7046)と健康な6人の成人から分離された菌株の計12菌株のB.adolescentisを対象に,CRISPRの多型解析,7base間隔で29marプローブを用いたタイリングアレイによるゲノムワイドの多型解析を行った。解析を進めた結果,タイリングアレイ解析より,B.adolescentisの菌株間で,基準株と解析した5菌株を比較したときに,共通して欠失している遺伝子が118個確認された。B.adolescentis菌株の分岐において,この欠失した118個の遺伝子が大きく関係していると考えられる。さらにこの118個の中に,11個の連続欠失領域が確認された。この11個の領域は,CRISPR,細胞表層の糖鎖合成系,トランスポーターの遺伝子クラスタであることが示された。これらの欠失が菌株間の多様性,個性の発現に密接に関与していることが推察された。またSOMを用いて解析した結果,B.adolescentisの基準株は,他の生物種からの遺伝子の挿入によって成立していったことが新たに分かった。そして,その成立した始祖株からの主に遺伝子の欠失によってB.adolescentis菌株に分岐していったことが示唆された。これらの結果より,B.adolescentisが定着している腸内環境に応じて進化していると考えられた。Bifidobacterium adolescentis ATCC15703株については、これまで取得していたドラフトゲノム情報をもとに、完全長ゲノム配列2,089,645bpの決定が完了し、DDBJに登録・公開を行った(Accession No. : NC_008618)。その他のビフィズス菌種に関しては、B.pseudolongum ATCC25525, B.animalissubsp.lactis DSM10140 (JCM10602), B.bifidum ATCC29521に関して、プラスミドライブラリの作成を完了した。現在lactisに関し、9,000クローンの配列データを取得した。また、Bifidobacterium属細菌は、形質転換のためのベクターの報告があるが概して形質転換効率が著しく悪い。このため、ゲノム解析の結果得られた情報は、多くの場合、単にホモロジーによるアノテーションに終わることが多く生化学的な解析があまりなされたこなかった。これを回避するためにゲノム情報に基づき形質転換効率を画期的に向上させる方法に突いても検討した。