hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
反応集積化が導く中分子戦略：高次生物機能分子の創製

具体的には,キックオフシンポジウム(9月4日,大阪大学会館),公開国際シンポジウムThe 1st International Symposium on Middle Molecular Strategy(ISMMS-1,2月6日,千里ライフサイエンスセンター),第1回成果報告会開催報告(2月7日,千里ライフサイエンスセンター),日本化学会年会第96春季年会特別企画(3月27日,同志社大学京田辺キャンパス)を開催した.これらのシンポジウムでは本領域をリードする講演者が世界最先端の研究を紹介し,また活発な討論が行われた.また,第1回若手シンポジウム(3月11,12日,シーパル須磨)も開催し,若手の交流を図るとともに,有意義な情報交換がなされた.さらに,計画班員全員が出席しての班会議も2回開催し,今後,本領域を活性化するための指針について活発に議論するとともに,共同研究の推進を図った.本領域の研究促進のために,超高分解能ESI-QTOF/MSシステム(compact-NPC,ブルカー・ダルトニクス株式会社),超伝導核磁気共鳴装置(500 MHz)(JNM-ECZ500R/SIFTNMR,日本電子株式会社),固体核磁気共鳴装置(400 MHz)(JNM-ECZ400R,日本電子)を購入し,共通測定機器として開放した.また,共同研究の促進,本領域研究の推進のために博士研究員1名,および事務補佐員1名を雇用した.本領域研究は、A01高次機能中分子の創製、A02生物機能中分子の高効率合成、A03反応集積化の3班体制で、それぞれ(1)複合機能を有する生物活性中分子の合成、(2)糖鎖や天然物など複雑構造の生物機能中分子の効率的合成法開発、(3)効率的合成プロセスの開拓を目指した触媒反応場とマイクロフロー反応場等を利用した反応集積化をミッションとして、それぞれの研究題目に集中的に取り組む。さらに各班で開拓される「集積反応化学」や「機能分子」を領域内で共有し、横断的共同研究を推進して、有機合成化学を起点とした生物機能中分子を生み出す新学術領域を構築する。領域研究の円滑な実施のために総括班を構築し、全体で有機的に連携した共同研究の推進、全体的な研究方針の策定や見直し、毎年12回のシンポジウムや複数回の若手勉強会の開催,などを通して,研究者間の効率的な連携や共同研究を推進することを目指した。本年度は3回のシンポジウム,1回の公開性か報告会,1回の若手勉強会を開催し,班員同士の交流を図るとともに,有意義な情報交換を行うことで,本領域の活性化に大きく貢献した.また,研究促進のために質量分析計や核磁気共鳴装置といった本領域研究に必須の大型機器を購入し,これを共同利用可能とすることで,研究を推進した.加えて,本研究で雇用した博士研究員と事務補佐員は研究の推進し,共同研究を円滑に進める上で極めて重要な役割を果たしている.本領域では反応集積化などを利用した合成プロセスの飛躍的な効率化により中分子領域の化合物(分子量500-3000程度)の効率合成,さらにはその利用を目的としている.総括班では,研究者の交流,情報交換の促進,共同研究の支援,広報活動などを行った.中分子領域の化合物(分子量500-3000程度)は、多彩な生物作用を示すため、医農薬などの高次生物機能分子として大きな注目を集めているが、実用的な合成が困難であるために十分には開発されていない。
ペットネコからヒトへの猫ひっかき病感染防御を目指したネコに対するワクチン開  発

Bartonella hensela(B. henselae)は猫ひっかき病(Cat scratch disease;CSD)の原因菌である。本症は病態が多彩であり、我が国のペットブームの中、感染予防の重要性が増している.しかしながら、予防策の1つであるワクチンは皆無でありその開発が求められている。さらに、ヒトへのワクチンは臨床実験を行う上で実用化までに時間を要し、公衆衛生的にも万人が摂取する機会が望めない。そこで、B. henselaeの保菌動物であるネコへのワクチンを開発することとした。そのためには本症のIgM抗体解析。さらにはこれに基づく本症のとりわけ感染初期に出現するIgM抗原蛋白質解析が重要である。本研究では、B. henselae IgM抗体についてCSD(疑)患者血清と健常人血清のウエスタンブロット(WB)法による解析を行い、IFA法の成績と比較し、感度・特異度の再検討を行った。さらにこの結果に基づき、先行研究により特異抗原として示唆されたCSD主要バンド(8-10kDa,31-35kDa,70kDa)の内、出現率が最も高い10kDa付近の蛋白質を解析した。B. henselaeをSDS-PAGE後,銀染色し810kDa付近のバンドを切り出し、質量分析を行った。結果12種の遺伝子が得られ、そのうちの8種(8,9,10,20,26,38,44,58kDa)の遺伝子の蛋白質合成を行った。しかし今回解析した8種の遺伝子はCSD患者血清のIgM抗体に特異的な抗原ではなかったことが示唆された。しかしながら、残りの3遺伝子への解析と蛋白質合成法を変えることによりこれらの遺伝子に期待が掛かる。現在、CSD患者血清中のIgMと反応する抗原をウエスタンブロットで解析すると、主要バンドとして8-10kDa,31-35kDa,70kDaがある.その内,出現率が最も高い10kDa付近の蛋白質を質量分析により解析した.結果12種の遺伝子が得られ,そのうちの8種(8,9,10,20,26,38,44,58kDa)の遺伝子の蛋白質合成を行ったが、CSD抗原としては認められなかった.しかしながら、残り3つの解析が残っていることと、今回分子生物学的手法により無生物によるタンパク質合成を行ったため、この手法では作りきれなかったタンパク質がある可能性があるからである.今後は残り4種(6,17,18,99kDa)の遺伝子解析,その他の主要バンド(31-35kDa,70kDa)の解析,および大腸菌を用いたタンパク質合成を行い、B. henselae特異IgM抗原蛋白質の同定を行う必要がある.また、同定ができた場合感染実験として感染可能な齧歯類であるマウスに感染させることにより、その効果を確かめたいと考えている。現在、CSD患者血清中のIgMと反応する抗原をウエスタンブロットで解析すると、主要バンドとして8-10kDa,31-35kDa,70kDaがある.

その内,出現率が最も高い10kDa付近の蛋白質を質量分析により解析した.結果12種の遺伝子が得られ,そのうちの8種(8,9,10,20,26,38,44,58kDa)の遺伝子の蛋白質合成を行ったが、CSD抗原としては認められなかった.しかしながら、残り3つの解析が残っていることと、今回分子生物学的手法により無生物によるタンパク質合成を行ったため、この手法では作りきれなかったタンパク質がある可能性があるからである.今後は残り4種(6,17,18,99kDa)の遺伝子解析,その他の主要バンド(31-35kDa,70kDa)の解析,および大腸菌を用いたタンパク質合成を行い、B. henselae特異IgM抗原蛋白質の同定を行う必要がある.また、同定ができた場合感染実験として感染可能な齧歯類であるマウスに感染させることにより、その効果を確かめたいと考えている。次年度において抗原性を高めるために、ベロ細胞やマウスに感染させるため、培地や感染施設使用料等に使用するため。
トーリックトポロジーと組合せ論

Building setとはある有限集合の部分集合族で一定の条件を満たすものであり,building setから非特異射影的トーリック多様体を構成することができる.昨年度,building setに伴うトーリック多様体がFanoになるための必要十分条件を求めたが,これの証明の議論を改良することにより,今年度はbuilding setに伴うトーリック多様体が弱Fanoになるための必要十分条件を求めた.Higashitaniは有限有向グラフから整凸多面体を構成する方法を与え,それが反射的多面体になるための必要十分条件を求めている.トーリック弱Fano多様体の扇は反射的多面体を定め,特に,トーリックFano多様体の扇は滑らかなFano多面体を定める.昨年度,building setに伴う任意のトーリックFano多様体は,ある有限有向グラフに伴う滑らかなFano多面体から得られるということを示したが,今年度はこの結果とは対照的に,building setに伴うトーリック弱Fano多様体であって,その反射的多面体がいかなる有限有向グラフからも得られないようなものが無限に存在することを示した.有限単純グラフから定まるDelzant polytopeとして,graph associahedronの他にgraph cubeahedronというクラスがある.Graph cubeahedronは,もとのグラフが特別な木である場合を除き,いかなるgraph associahedronとも組合せ的に異なる多面体を定めることが知られており,したがってgraph associahedronからは得られないトーリック多様体を数多く提供する.第1年度目に,graph associahedronに伴うトーリック多様体が(弱)Fanoになるための必要十分条件を求めたが,今年度は,graph cubeahedronに伴うトーリック多様体が(弱)Fanoになるための必要十分条件を求めた.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。トーリック多様体と,様々な組合せ論的対象との間の関係を調べ,次の結果を得た.1.「すべての単体的2球面は,非特異で完備な扇から得られるか」という問題に対し,単体的2球面が18頂点以下ならば正しいということを,コンピューターによる扇のランダム生成を用いて示した論文を出版した.2.トーリック幾何を用いて,3次元単純整凸多面体のEhrhart多項式の1次の係数を具体的に表した.3.有限単純グラフのgraph associahedronに伴うトーリック多様体がファノまたは弱ファノになるための必要十分条件を,それぞれもとのグラフの言葉で記述した.反標準因子とトーラス不変曲線との交点数が,あるグラフの連結成分の個数を数えることで求まることを用いて,グラフ理論の議論により証明した.また,Shareshian-Wachsが与えたHessenberg functionから定まるグラフのchromatic quasisymmetric functionの組合せ的な式を計算するプログラムを開発した.Chromatic quasisymmetric functionの明示的な式は,nが4以下の場合には手計算で求められるが,nが5以上の場合には手計算では時間を要する.このプログラムを実行することにより,nが9以下の場合にchromatic quasisymmetric functionの明示的な式を求めた.Building setとはある有限集合の部分集合族で一定の条件を満たすものであり,building setから非特異で射影的なトーリック多様体を構成することができる.これは有限単純グラフからトーリック多様体を構成する方法の一般化になっており,このようにしてできるトーリック多様体の族は射影空間とpermutohedral varietyをともに含んでいる.本年度の研究では,building setに伴うトーリック多様体がFanoになるための必要十分条件を,もとのbuilding setの言葉で記述した.Building setに伴うトーリック多様体は,反標準因子とトーラス不変曲線との交点数をbuilding setの側で計算できることを用いて,純粋にbuilding setの組合せ論で証明される.昨年度,グラフに伴うトーリック多様体がFanoになるための条件を求めたが,本結果はこれを一般化するものであり,グラフに伴う場合とは対照的に,building setには多くのトーリックFano多様体が対応することがわかった.Higashitaniは有限有向グラフから整凸多面体を構成する方法を与え,それが滑らかなFano多面体(トーリックFano多様体と1対1対応する)になるための必要十分条件を求めた.私はこれに関して,building setに伴う任意のトーリックFano多様体は,ある有限有向グラフに伴う滑らかなFano多面体から得られるということを示した.証明は,対応するトーリック多様体がFanoになるbuilding setを3タイプに分け,各タイプごとに具体的に有限有向グラフを構成することで示される.トーリック幾何に関して一定の結果が得られたものの,当初予定していた位相的性質の研究が遅れているため.Building setとはある有限集合の部分集合族で一定の条件を満たすものであり,building setから非特異射影的トーリック多様体を構成することができる.

昨年度,building setに伴うトーリック多様体がFanoになるための必要十分条件を求めたが,これの証明の議論を改良することにより,今年度はbuilding setに伴うトーリック多様体が弱Fanoになるための必要十分条件を求めた.Higashitaniは有限有向グラフから整凸多面体を構成する方法を与え,それが反射的多面体になるための必要十分条件を求めている.トーリック弱Fano多様体の扇は反射的多面体を定め,特に,トーリックFano多様体の扇は滑らかなFano多面体を定める.昨年度,building setに伴う任意のトーリックFano多様体は,ある有限有向グラフに伴う滑らかなFano多面体から得られるということを示したが,今年度はこの結果とは対照的に,building setに伴うトーリック弱Fano多様体であって,その反射的多面体がいかなる有限有向グラフからも得られないようなものが無限に存在することを示した.有限単純グラフから定まるDelzant polytopeとして,graph associahedronの他にgraph cubeahedronというクラスがある.Graph cubeahedronは,もとのグラフが特別な木である場合を除き,いかなるgraph associahedronとも組合せ的に異なる多面体を定めることが知られており,したがってgraph associahedronからは得られないトーリック多様体を数多く提供する.第1年度目に,graph associahedronに伴うトーリック多様体が(弱)Fanoになるための必要十分条件を求めたが,今年度は,graph cubeahedronに伴うトーリック多様体が(弱)Fanoになるための必要十分条件を求めた.当初の予定にはなかった課題であるが,未解明な部分が多いトーリック弱ファノ多様体,およびグラフに伴うトーリック多様体に関する諸性質を調べる.また,Abe-Harada-Horiguchi-MasudaによるSchubert calculusの研究にも協力していく.引き続き,有限単純グラフやbuilding setに伴うトーリック多様体の代数幾何やトポロジーについて研究していく.特に,グラフに伴うトーリック多様体のChern指標や,building setに伴うトーリック多様体が弱Fanoになるための条件について考察する.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。
くも膜下腔に投与した抗コリンエステラーゼ薬の体性交感神経反射に及ぼす影響

体性交感神経反射を指標として抗コリンエステラーゼ薬である臭化ネオスチグミン(neostigmine bromide : NB)をクモ膜下腔、静脈内投与に投与した時の抗侵害刺激作用、循環系に対する影響を体性交感神経反射を指標として検討した。(方法)全身麻酔下の成ネコの片側大腿神経に最大上刺激を与え、腰部交感神経幹の中枢側切断端から活動電位を導出した。NBのくも膜下投与は、atranto-occipital membraneよりクモ膜下腔尾側に向け約25cm挿入したカテーテルより、静脈内投与は麻酔導入前に前肢に確保した静脈路より行った。くも膜下投与は10μg、50μg、250μg、2mgの4群に、静脈内投与は20μg/kg、100μg/kg、200μg/kgの3群に分類した。各種パラメータに変化が認められた場合には拮抗薬としてアトロピンをNBと同じ経路から投与した。(結果)1.NBのくも膜下投与(1)C反射電位が用量依存性に抑制されたことから、NBのくも膜下投与により抗侵害刺激作用の発現する可能性が客観的、定量的に示唆された。(2)抗侵害刺激作用の発現機序はC反射電位の抑制が、アトロピンのくも膜下投与により完全に拮抗されなかったということからムスカリン受容体以外の機序の存在も示唆された。(3)潜時が延長する機序は今回の研究では明確にできないが、C線維の伝導そのものが抑制されるためと考えられる。(4)NBのくも膜下投与に伴い血圧低下、心拍数の低下などの循環動態の抑制が起こりうる。2.NBの静脈内投与C反射電位の振幅に有意な変化が認められなかったことから、NBの静脈内投与では抗侵害刺激作用が得られないことが示唆された。(結論)NBのくも膜下投与は抗侵害刺激作用を発揮するが、静脈内投与では抗侵害刺激作用は得られない。実験動物には成ネコを使用し、ウレタン、クロラロース麻酔下に人工呼吸し、片側頚動脈にカニュレーションを、また心電図監視を行ない血圧、脈拍数を連続測定した。Atranto-occipital membraneからクモ膜下腔にPE10カテーテルを尾側に向け約25cm挿入した。片側大腿神経20Hz3連発の最大上刺激を与えて、腰部交感神経幹の中枢側切断端から反射性交感神経活動電位を導出した。この活動電位は非侵害性情報に関与する太い有髄神経線維(A線維)によって誘発されるA reflexと、侵害性情報に関与する細い無髄神経線維(C線維)によって誘発されるC reflexから成り、共に延髄性であることが判明している。したがってC reflexの振幅の抑制度を指標とすれば、各種薬物の鎮痛効果を客観的に判断することが可能となる。次に、PE10カテーテルより臭化ネオスチグミン50μgをクモ膜下腔に投与して30分間にわたりこれらの活動電位の振幅、血圧と脈拍の変化を経時的に記録した。(結果)1.臭化ネオスチグミン投与5分後にA reflex、C reflexの振幅はそれぞれコントロール値の89.0%、71.5%に抑制されたものの、これらの変化は有意な変化ではなかった。また、両活動電位の振幅は時間の経過と共にほぼコントロール値に回復した。2.平均動脈圧は投与1分後にコントロール値の109%に上昇したものの有意な変化でなかった。心拍数にもほとんど変化は認められなかった。

(結論)臭化ネオスチグミンによりC reflexの振幅は有意な変化ではなかったものの抑制傾向が認められた。C reflexは侵害刺激による交感神経反射の増強に関与していると考えられていることから、本研究の結果はネオスチグミンのくも膜下投与により鎮痛効果が得られることを客観的に示唆する結果と考えられる。成ネコをウレタン、クロラロース麻酔下に人工呼吸し、観血的等脈圧、心電図を連続測定した。atranto-occipital membraneからクモ膜下腔にPE10カテーテルを尾側に向け約25cm挿入した。片側大腿神経20Hz3連発の最大上刺激を与えて、腰部交感神経幹の中枢側切断端から反射性交感神経活動電位を導出した。この活動電位は非侵害性情報に関与する太い有髄神経線維(A線維)により誘発されるA reflexと、侵害性情報に関与する細い無髄神経線維(C線維)により誘発されるC reflexから成り、共に延髄性であることが判明している。したがってC reflexの振幅の抑制度を指標とすれば、各種薬物の鎮痛効果を客観的に判断することが可能となる。本年度は臭化ネオスチグミンの投与量を10μg、250μg、2mgの3つの投与群に分けて用量依存性の変化が認められるか否かを研究した。(結果)1.Areflexの振幅は用量依存性に抑制される傾向が認められたが有意な変化ではなかった。一方、C reflexの振幅は用量依存性に有意に抑制され、特に250μg投与群、2mg投与群における最低値はそれぞれコントロール値の55.2%、24.0%であった。これらの変化はアトロピンのくも膜下投与により拮抗された。2.平均動脈圧、心拍数も用量依存性に抑制され、特に2mg投与群では有意な抑制が認められそれぞれコントロール値の57.6%、65.2%となった。(結論)臭化ネオスチグミンのくも膜下投与により用量依存性に鎮痛効果が発揮され、その作用にはcholinergic receptorが関与していることが証明された。また、臭化ネオスチグミンのくも膜下投与により血圧低下、徐脈などの循環動態の変動が生じることが明らかとなった。体性交感神経反射を指標として抗コリンエステラーゼ薬である臭化ネオスチグミン(neostigmine bromide : NB)の静脈内投与により抗侵害刺激作用が発揮されるか否かをについて検討した。(方法)実験には2.53.0kgの成ネコを使用した。静脈路を前肢に確保しケタミン、ウレタン、α-クロラロース、ベクロニウムで全身麻酔し、空気吸入下に人工換気した。最初に血圧の変動に伴う交感神経活動への影響をできるだけ少なくし、かつ副交感神経の影響を少なくする目的で、頚部において両側迷走交感神経幹を切断した。その後、仰臥位で片側大腿神経を周囲組織より剥離し、その中枢側切断端を銀線双極電極上に置き刺激用とした。さらに経腹的に腰部交感神経幹を露出し、第4、第5神経節間で切断しその中枢側切断端を銀線双極電極上に置き活動電位導出用とした。全身麻酔下の成ネコの片側大腿神経に最大上刺激を与え、腰部交感神経幹の中枢側切断端から活動電位を導出した。NBの静脈内投与は20μg/kg、100μg/kg、200μg/kgの3群に分類した。各種パラメータに変化が認められた場合には拮抗薬としてアトロピンを同じ投与経路で投与することとした。(結果)
抽出操作における生体分子の高度認識分離を可能とする分子集合系の構築

分子認識を利用して物質を分離する液液抽出技術は工業上も重要な分離手法である。抽出法は、数多くの研究が行われているのも拘らず、バイオ分子の分離に関しては現在でも達成されていない重要な課題の一つである。特に分離対象が生体高分子の場合は、表面構造が複雑なため高度分離は困難となる。本研究では、逆ミセルという分子集合体を利用するDNAの高度分離を目的とした。その結果、逆ミセルに相補的なDNA鎖を有する界面活性剤を組み込むことによって、DNAの配列を認識して高効率に分離が可能なシステムの構築に成功した。本研究では、単一の分子では抽出能力がない分子を,集合化(組織化)することによって、新たな抽出能力が発現する逆ミセル系を構築した。特に、従来型の抽出操作において使用されてきた単一の抽出試薬とは異なり、分離ターゲットに対して高い認識能を示すような分子集合系(複数の分子が集合してはじめて抽出能力を発揮するような逆ミセル系)をタンパク質および遺伝子抽出を例にして実証した。また、イオン液体を媒体とした新たな逆ミセル系の構築に成功した。モデルタンパク質として、チトクロムcを取り上げ、イオン液体中への抽出分離挙動を詳細に検討した。タンパク質の水相から有機相への移動に及ぼす重要な因子を明らかにするために構造がすでに明らかにされているチトクロムcを用い、化学的に表面を改質したたんぱく質を利用して抽出挙動を測定し、抽出機構の本質を議論した。その結果、カチオン残基を多く含むタンパク質は、分子認識試薬としてクラウンエーテルを共存させることによって、高効率の抽出が行えることを明らかにした。さらに、イオン液体中に抽出したチトクロムcに構造変化が生じ、高いペルオキシダーゼ活性が発現することを見いだした。抽出はタンパク質のみならず、鎖長が20程度の短いDNAにおいても効率よく抽出が行えることが明らかとなった。この場合(遺伝子抽出)は、カチン性の界面活性剤を用いる点がポイントであった。さらに、配列選択性を実現させるために、逆ミセル中に1本鎖型のDNAを溶解し、その分子に相補的なDNAのみが選択的に抽出できる系を構築した。環状化合物の空孔サイズは原子ほどの大きさしかないため、それより大きな分子、例えばタンパク質のような生体高分子を認識することはできないと考えられてきた。また、イオン液体を用いた溶媒抽出系においても、タンパク質の抽出は困難であると思われていた。本研究ではクラウンエーテルを用いる分子集合錯体によってタンパク質表面を認識し、イオン液体にタンパク質を抽出することに成功した。対象タンパク質としてヘムタンパク質である馬心筋由来のシトクロムc(Cyt-c)、抽出剤としてクラウンエーテルDCH18C6、イオン液体として水素結合能と高い極性を有する水酸基を組み込んだ[C_2OHmim][Tf_2N]を用いた。Cyt-cを含んだ水溶液とDCH18C6を含んだ[C_2OHmim][Tf_2N]を接触させた結果、DCH18C6の濃度が増加するにつれてCyt-cは水相からイオン液体相へと移動し、最終的には定量的な抽出が可能となった。さらに、この抽出後のイオン液体相を取り出し、数ヶ月経過しても変性・分解することなく安定であることを確認した。また、Cyt-c以外のヘムタンパク質として、ミオグロビン、HRP、グアニジル基修飾Cyt-cを用いて抽出を行った結果、ミオグロビンのみが抽出され、イオン液体への抽出性がタンパク質のLys残基の含有量に基づくことが明らかとなった。DCH18C6の空孔サイズは-NH_3^+の大きさと適合するためサイズ認識効果が働き、また、イオン-双極子相互作用やC_3対象の水素結合を形成するため高い結合力を示す。その結果、液-液界面で1分子のCyt-cに対して複数個のDCH18C6が配位した分子集合錯体を形成するため、Cyt-cのイオン液体への溶解性が増大し、抽出が起こると推察された。本研究ではDNAを分離するために、タンパク質などの生体高分子を有機相へ可溶化することのできる逆ミセルを利用した。逆ミセルを用いた液液接触法による抽出分離は容易にスケールアップが可能であることから、大量処理に適した分離手法であると言える。抽出剤としてDNAの末端に疎水性のオレイル基を結合させたDNA界面活性剤を用い、DNAの相補鎖結合能を抽出の駆動力として利用した。逆ミセルを形成する界面活性剤には核酸と静電的な相互作用が無いリン脂質を用いた。まず、L-α-レシチンを界面活性剤として用い、FITCラベル化DNAの抽出を行った。その結果、DNA界面活性剤を用いることにより、相補的な配列を持つFITCラベル化DNAが有機相へ抽出できることが示された。また、抽出後の有機相の蛍光強度が逆ミセルサイズの増大に伴い増加していったことから、抽出に最も大きな影響を与えているのは逆ミセルサイズであるということが示唆された。

次にDilauroylphosphatidylcholineを界面活性剤として用い、核酸の抽出を行った。FITCラベル化DNAの抽出率を算出したところ、およそ50%であった。さらに、選択性の検討で3種類の異なる配列を有する標的DNAの混合溶液に対し、3つの内のいずれかに相補的なDNA界面活性剤を用いることで相補的な標的DNAのみを選択的に抽出できた。したがって、本研究の目的である配列選択的核酸の抽出が可能であることが確認できた。また、抽出に影響を与える因子としてDNA界面活性剤濃度および標的DNAの塩基長の検討を行ったところ、DNA界面活性剤の疎水性の不足や、逆ミセルとDNA鎖の間の立体障害が抽出率の低下に関与していることが示唆された。また、一度有機相へ抽出された核酸を再び水相へ戻す操作、すなわち逆抽出が可能かどうか検討したところ、2-ブタノールを添加することで逆ミセルが破壊され、逆ミセルに内包されていた核酸が水相へ移動すること、すなわち定量的な回収が可能であることが明らかとなった。
分子生物学的手法を用いた食道癌の抗癌剤感受性:生検でのスコア化を目指して

食道癌細胞株TEシリーズ15種類を用い、まず現在の食道癌の主要な抗癌剤である5FUとCDDP(シスプラチン)、それぞれの抗癌剤に対する耐性を検討した。5FUの濃度の0、5UMOL、10umol、15umol、25umol、50umolの培地に細胞株を培養し、低濃度で細胞死する株と高濃度でも耐性をもつ株とに分けた。CDDPに関しても同様に感受性試験を行い、食道癌細胞株の抗癌剤感受性に対するstatusを調査した。抗癌剤高感受性群の細胞株と低感受性の細胞株群とその中間群にそれぞれを群分けした。それぞれの細胞株群でのマイクロアレイのクラスタリングを行い、抗癌剤感受性に関わる遺伝子群を同定し、解析した。5FUの低感受性群はTE1、10、11,15中間群はKYSE150、TE2、4,5,9,13高感受性群はTE3、8,12,14、KYSE140と同定した。またCDDPは、低感受性群はTE4、高感受性群はTE12とし、残りを中間群とした。食道癌細胞株TEシリーズ15種類から、まずRNAを抽出した。コントロールの細胞株としては、食道正常上皮由来の細胞株であるHet 1Aを用い、cDNAを作成、マイクロアレイを行った。マイクロアレイのクラスター解析をGene Springソフトを利用して行った。それぞれの細胞株に感受性特異的な遺伝子群を同定した。まず5FU感受性に関わる遺伝子群の中でATM、FMO5、C14orf100、NUBPL、LRRC5、ALOXES3、SLC17A1、TNFSF14などが高感受性群で低発現、低感受性群で高発現であった。そこでそれらの遺伝子発現をsiRNAを用いて発現抑制実験を行ったが、どれも5FUの感受性を変化させられなかった。またCDDP感受性に関わる遺伝子群は40遺伝子得られた。その中でまず従来からCDDPに関与するとの報告があるCD44、ERBB2、CAV1、KISS1などについて低感受性細胞株TE4にsiRNAを用いて遺伝子発現の抑制実験を行ったが、CDDPの感受性を変化させることはできなかった。5FUの濃度の0、5umol、10umol、15umol、25umol、50umolの培地に細胞株を培養し、低濃度で細胞死する株と高濃度でも耐性をもつ株とに分けた。それぞれの細胞株群でのマイクロアレイのクラスタリングを行い、抗癌剤感受性に関わる遺伝子群を同定し、解析することとした。当初、trizol regentを使用して、フェノールクロロホルム処理をしたRNAを使用したが、マイクロアレイに使用するqualityに達しないため、Qiagen社のRNA抽出キットを用いて、RNAを抽出した。コントロールの細胞株としては、食道正常上皮由来の細胞株であるHet1Aを用いた。

現在、マイクロアレイのクラスター解析をGene Springのソフトを利用して行っている。それによって、同定された遺伝子群の解析(特にアポトーシスに関わる)をすすめる予定である。またそれらの結果を臨床応用するため、食道癌生検材料30症例よりRNAの抽出を完了した。それらを用いて、マイクロアレイないしRTPCRによって、感受性を判定できるキットつくりを目指している。食道癌細胞株TEシリーズ15種類を用い、まず現在の食道癌の主要な抗癌剤である5FUとCDDP(シスプラチン)、それぞれの抗癌剤に対する耐性を検討した。5FUの濃度の0、5UMOL、10umol、15umol、25umol、50umolの培地に細胞株を培養し、低濃度で細胞死する株と高濃度でも耐性をもつ株とに分けた。CDDPに関しても同様に感受性試験を行い、食道癌細胞株の抗癌剤感受性に対するstatusを調査した。抗癌剤高感受性群の細胞株と低感受性の細胞株群とその中間群にそれぞれを群分けした。それぞれの細胞株群でのマイクロアレイのクラスタリングを行い、抗癌剤感受性に関わる遺伝子群を同定し、解析した。5FUの低感受性群はTE1、10、11,15中間群はKYSE150、TE2、4,5,9,13高感受性群はTE3、8,12,14、KYSE140と同定した。またCDDPは、低感受性群はTE4、高感受性群はTE12とし、残りを中間群とした。食道癌細胞株TEシリーズ15種類から、まずRNAを抽出した。コントロールの細胞株としては、食道正常上皮由来の細胞株であるHet1Aを用い、cDNAを作成、マイクロアレイを行った。マイクロアレイのクラスター解析をGene Springソフトを利用して行った。それぞれの細胞株に感受性特異的な遺伝子群を同定した。まず5FU感受性に関わる遺伝子群の中でATM、FMO5、C14orf100、NUBPL、LRRC5、ALOXES3、SLC17A1、TNFSF14などが高感受性群で低発現、低感受性群で高発現であった。そこでそれらの遺伝子発現をsiRNAを用いて発現抑制実験を行ったが、どれも5FUの感受性を変化させられなかった。またCDDP感受性に関わる遺伝子群は40遺伝子得られた。その中でまず従来からCDDPに関与するとの報告があるCD44、ERBB2、CAV1、KISS1などについて低感受性細胞株TE4にsiRNAを用いて遺伝子発現の抑制実験を行ったが、CDDPの感受性を変化させることはできなかった。
バイオマスを構成する元素割合が発熱量・溶融温度等の熱的特性に及ぼす関係の解明

農業残さ等のバイオマスの発熱量、灰分、溶融温度を簡便迅速に推定する技術の開発を目指し、蛍光X線分析による元素分析から熱的性質を求めるシステムを検討した。収穫残さ、雑草、木質、牛ふん堆肥などについて、元素割合と、発熱量、灰分の関係および溶融程度とK/(Ca+Mg)との関係を明らかにした。さらに温度に対する溶融程度を4段階に分け、ロジスティック回帰分析により回帰式を得た。試料を150μm以下に調製、バックグラウンドを補正することで、蛍光X線分析でそれぞれの熱的特性の説明変数となる元素を定量分析した。これにより元素組成を説明変数として、灰分、発熱量、溶融温度の熱的性質を表す式を得られることを示した。本研究では、これまでに稲ワラ、施設園芸残さ(トマト廃苗、キュウリ廃苗)、丸葉雑草等を対象とした。本年度は供試材料の品目について、森林間伐材として、スギ、サワラなどの針葉樹、竹および堆肥を追加した。これら材料で実際の利用時における荷姿を想定して、各項目の分析を行った。その結果、溶融温度が低かった雑草類に稲ワラを混合させたペレットでは、目標とした溶融温度1000 °C以上を達成した。溶融温度については、実験室での試験に加え、依頼分析をしたところであるが、比較試験での再現性に隔たりがあった。そこでより正確なデータ取得のため、これまでやってきたJISに準拠した、三角錐の試験あるいはTG/DTAによる方法に加え、傾斜させた舟形ボートの流下距離を測定する方法、目視による判定などで実施したが、試験した温度帯では装置によるサンプルの量制限や流動性の点から、材料間の差異を明らかにすることが困難であった。本研究で求めている結果を得るには更なる検討が必要であった。蛍光X線分析装置での分析結果から、発熱量および灰分を推定する算定式については、引き続きデータを追加等により、精度向上に努めた。新たに堆肥の混合物で実施したが、蛍光X線では他の軽元素と判別できない窒素成分が多く、実測値との差が大きい結果となり、今後の課題であった。供試材料として,稲,ムギ,ナタネ,ヒマワリの収穫残さに加え,マツヨイグサ類雑草,ヒルガオ科雑草,ダイズ収穫残さ,トマト廃苗,キュウリ廃苗等を用い,発熱量,灰分等の熱的物性を測定した。溶融状況の調査方法については,JIS M8801に準拠して,試験材料を灰化したものを三角錐に成型し,マッフル炉内で加熱し,変化の様子を観測した。また,予備試験の結果,1,100°C以下で溶融していたサンプルについて,示差熱熱重量同時測定装置(sii TG/DTA6200)により,試料の示差熱を測定した。試料はあらかじめ灰化しておき,室温から850°Cまでは50°C/minで,850°Cから1,000°Cまでは5°C/minで昇温させた。成分分析については蛍光X線分析装置で行った。材料は105°C/24hで乾燥後,ミルで粉砕・調製し,試料容器(φ32mm,8mL)に,ポリプロピレンフィルムで封入したものを,測定試料とした。測定はFP法とし,試料のバックグランドをセルロースと設定して他の元素について測定した。溶融試験の一例として,コムギ残さでは,940°Cで軟化した後,1,050°Cで融点となった。1150°Cでは完全に溶流した。同じサンプルをTG/DTAで測定したところ,融点付近でDTA曲線に緩やかな吸熱ピークが見られたが,その他の温度帯でも見られており,まだ不明な部分があった。発熱量の実測値と,1)灰分量から発熱量を推定する式(文献値)から求めた発熱量と,2)蛍光X線分析装置による灰分量算出値から求めた発熱量を比較して,本手法での発熱量の推定精度を検討した。サンプルのうち最も誤差の小さかったアシでは,その誤差は+6.3%であったが,ヒマワリでは+31.6%であった。傾向的には,全体的に推定値のほうが実測値よりも高い値を示した。農業残さでは、品目、発生時期などで、構成する成分(元素組成)が異なるため、発熱量、灰分、灰の溶融温度の熱的特性が異なる。利用の際にはあらかじめ知ることが、燃焼炉の選択あるいは制御に必要である。そのため、発熱量、灰分、溶融温度を簡便迅速に推定する技術の開発を目指し、蛍光X線分析を用いた元素分析から熱的性質を求めるシステムを検討した。前年に引き続き発熱量、灰分、溶融温度について、さまざまな残さを収集してデータを蓄積した。

蛍光X線分析では、FP法で得られる元素組成の差分をこれまでセルロースとして処理し、灰分、発熱量の推定を行ってきた。試料の調製や灰分については比較的安定して実測値に近い値を得られるようになった。発熱量に関しては、アシやススキなどの立ち枯れした植物残さで実測値に近い値を得ることができたが、収穫直後の稲わら、広葉雑草、堆肥などでは、誤差が大きくなる結果となった。軽元素の内訳についての推定方法に課題があることが分かり、新たな分析手法との組み合わせを検討することとした。灰溶融温度については、アルカリ度など多くの手法が提案されているが、草本ではK/Ca+Mgの値が傾向をよく表していた。測定手法を各種比較した結果、灰分測定皿で加熱した後に、目視と実体顕微鏡により、4段階に判定する、M.Ohmanらの方法で溶融程度を示したのちに、その結果をSASによりロジスティック回帰分析することで、溶融温度の目安を表す式を示すことができた。蛍光X線分析から溶融温度を推定する式の説明変数(K,Ca,Mg)をそろえることができた。農業工学25年度においては、材料品目の追加と、熱分析過程での測定項目の追加、蛍光X線分析での材料調製および現地の実態調査を計画していた。材料品目については、森林間伐材として、スギ、サワラなどの針葉樹、竹および各種の堆肥を追加し、順調に進捗している。熱的な性質の分析に関しては、灰の溶融については、さらに追加で分析や評価の手法について改良が必要であると考えるが、発熱量、灰分については、順調にデータの蓄積をしており、同時に元素組成のデータも蓄積できている。蛍光X線分析での分析精度向上に関しては、新しい粉砕機を導入したことで、材料調製精度が格段に向上し良好な結果を得ていると感じている。全体としては、おおむね順調に進展している。供試材料としては,当初次年度以降に予定していた施設園芸から排出されたトマトやキュウリの廃苗や,雑草等のサンプルを入手し発熱量,灰分等のデータを取得するなど計画よりも進んだ。灰の溶融温度の測定では,手法間で測定値が異なることが分かり,実際の燃焼炉での問題の再現をする方法の決定に至らず,さらなる検討が必要であることが分かった。全体としては,おおむね順調に進展している。目的としていたバイオマスの各種の熱的な性質については、発熱量、灰分、元素組成については、当初の計画である作物残さに加え、木質や竹、堆肥などを追加し、幅広く網羅できている。しかしながら、灰の溶融温度については、軟化点、融点、溶流点の区別が不明瞭な材料や、保有している電気炉では性能が不十分な材料があり、相互の関係を明らかにするところまでに到達していない。その中でも、TG/DTAによる手法と目視による判定が、比較的再現性が高く、また実用面でも利用しやすいことから、実体顕微鏡での判定の数量化とTG/DTAでの分析を併用した方法で試験を進めて行きたい。供試材料品目を追加しながら,各種熱分析および蛍光X線分析装置での元素分析を継続して行う。材料の品目について,発生の実態,ふ存量について現地の実態調査をしながら追加していく。灰の溶融については,実験室での分析値では手法によりばらつきがあることが分かったため,燃焼施設で実際に発生している灰を供試材料とすることを検討する。海外での学会発表および調査費について、日程の短縮や格安航空券の利用等により、当初の見積もりよりも、経費が抑えることができたため。次年度使用額244,375円は、灰の溶融温度測定試験に必要な消耗品(測定皿、熱分析用の測定パン)の購入に使用し、次年度に請求する研究費と合わせて、研究計画遂行のために使用する該当なし
結合組織性毛包内のα-smooth muscle actin陽性線維芽細胞様細胞(in vitroにおける解析と腫瘍診断上の有用性)

毛母腫は毛包由来の良性腫瘍であり、病理組織学的には主として好塩基性細胞と陰影細胞より成る。好塩基性細胞の目立つ腫瘍では腫瘍細胞巣の周囲に線維性の被膜が認められる。一方、陰影細胞が主体で石灰化もみられるような腫瘍ではこの線維性の被膜はみられないことが多い。今回我々は20例の毛母腫の標本を収集し、この線維性の被膜の性状について免疫組織化学的手技を用いて検討した。シグマ社のα-smooth muscle actin(ASMA)に対する抗体を一次抗体として用い、ABC法により染色を行った。その結果、被膜を構成する紡錘形細胞はASMA陽性所見を示した。この紡錘形細胞を電子顕微鏡を用いて観察したところ、その胞体内には多数のアクチンフィラメントが存在することが確認された。更に手術時に得られた腫瘍の被膜を培養したところ、多数の線維芽細胞が生育し、この細胞をカバーグラス上で培養したものを抗ASMA抗体を用い螢光抗体法にて免疫染色を行ったところ、培養細胞の胞体内に多数のフィラメント様の陽性所見が認められた。近年我々は成長期毛包の変動部つまり毛隆起より下方の上皮性毛包周囲に存在する結合織性毛包にASMA陽性細胞があることを示し、この細胞が毛周期に伴い出現消退することを示した。今回の研究にて毛母腫の被膜にみられた紡錘形細胞は免疫組織化学および電顕的観察にて結合織性毛包に存在する細胞と類似していることがわかった。このことは毛母腫が毛包由来の腫瘍であるという考えを更に支持する結果であると思われた。また成長期毛包でみられる結合織性毛包の形成には毛母に存在する好塩基性細胞が重要な役割を演じていることが示唆された。
クリロフ部分空間法の分散共有メモリアーキテクチャ上への並列実装とその性能評価

今年度は,クリロフ部分空間法の分散共有メモリアーキテクチャ及び広域分散クラスタ上への並列実装技術に関して,以下の成果を得た。分散共有メモリアーキテクチャ上での並列数値処理今年度はIntel社のプロセッサを用いた分散共有メモリ型並列計算機であるNEC AzusA Itaniumサーバ及びIBM x440 Xeonサーバを利用し,分散共有メモリアーキテクチャ上での効率的な並列数値処理についての検討を行った。大規模連立一次方程式の反復解法において,計算の大部分を占める低レベルなBLAS演算の並列化を考える場合,レイテンシを小さくするとともに,ノード内,及びノード間のメモリ帯域幅を十分に確保することが必要となる。評価の結果,AzusAで採用されているOSのメモリアフィニティ機能,及びx440で採用されているノードキャッシュが,性能に関してそれぞれ有効な手法であることが分かった。また,Itaniumプロセッサの高いCPU性能を活かすためのアプリケーションとして高速フーリエ変換を取り上げ,キャッシュを有効利用するとともに分散共有メモリ向けのデータ配置を行うことにより,ピーク性能の12%以上にあたる2GFlops以上の性能を出すことに成功した。広域分散クラスタ上での並列数値処理他方,近年広域に分散された世界中の情報資源を統一的に扱うGrid技術に関する研究が多方面で進められている。本研究では,ネットワーク性能のグリッド計算に与える影響に着目し,グローバルコンピューティングのソフトウェアインフラストラクチャに必要とされる様々な要素技術を提供するツール群であるGlobus Toolkitを昨年度に構築したPCクラスタ上に実装し,LU分解を用いてGrid上での並列計算における性能を通信速度の異なる二種類のネットワーク上で比較した。この結果,Globus固有の通信遅延はあるものの,十分な通信帯域幅のある環境では,その影響が無視できる程度であることが分かった。今回の実験はLAN上の理想的な環境で行ったものであり,WAN上に分散した環境においてはより大きな通信遅延を想定しなければならない。しかしながら,本実験の結果は広域環境上での細粒度な科学技術計算について,その可能性を示唆しているといえる。本研究では,離散化された問題を解くために必要となる大規模疎行列の反復解法において,最も中心的な役割を果たしているKrylov部分空間法において,高性能な演算ライブラリを用いた分散共有メモリ型アーキテクチャ上への効率的な並列実装方式を実現することを目的としている.今年度は,並列計算環境として既存設備のSun Microsystems社製Enterprise 10000を用いるとともに,Intel社のXeonプロセッサとギガビットネットワークによりPCクラスタを構築し,以下の成果を得た.まず,Enterprise 10000による予備的な評価では,BLASレベルでの並列化に関して,Level1, 2 BLASについても十分なスケーラビリティが得られることを示した.さらに,これを用いてKrylov部分空間法の一つであるJacobi-Davidson法について,共有メモリ型並列計算機向きのJacobi前処理を適用し,計算時間に関して約2倍の性能向上を得た.BLASレベルでの細粒度な並列化で高い並列化効率を得るためには,扱うベクトルのサイズが十分大きくなければならないため,実験環境での物理メモリ上の制約を考慮すれば,妥当な結果であると考えられる.一方,クラスタ上での分散共有メモリの実現方式については様々な手法が提案されており,現在評価を行っている段階である.なおMPIを用いた予備的な実験では,ネットワーク性能が計算速度に与える影響が大きく,この点に留意した実装が必要であると考えられる.今年度は,クリロフ部分空間法の分散共有メモリアーキテクチャ及び広域分散クラスタ上への並列実装技術に関して,以下の成果を得た。
アルゴリズムエラーの生成過程-作業課題におけるバグをめぐって-

本研究は,ある作業課題を遂行するさいに生じる固有のヒューマン・エラーをとりあげ,そのエラーに内在する特徴,構造特性を明らかにすることを目的とする.これは同時に,そのような特徴的なエラーを生成,発生する認知過程(心理過程)そのものに内在する機能ならびに構造,とくに意味知識情報処理過程を究明することである.このような研究の結果得られる知見は,現代の巨大なマン・マシン・システムでのヒューマン・ファクターによる事故や災害への対処,予防にとって,また,教育的,技術的対策への指針として欠かせない.本研究は,そのための基礎的研究の第一歩となる.なお,ヒューマン・エラーは,決して無作為に生じるのではなく,一貫した意味と論理構造をもつ.それは,課題解決過程における意味的情報処理にともなって生じるものと予測される.このような誤りを,バグないしはアルゴリズムエラーとよぶ.エラーの生成をつかさどるルールの存在することが示唆される.実験1:アルゴリズムエラーの生成過程-再生課題での意味的誤りからみた記憶知識情報の構造特性-.これは,上記の目的のうちの基礎的な知見を得るために試みた.被験者の作業課題は,呈示3単語を記銘することである.語の間には意味的な関連性の有為などが操作された.記銘後,呈示後のうちの1語ないし2語を再生手掛り語として呈示し,残りの語を再生するように求めた.この時に生じた誤りをもとに,誤りの構造が調べられた.その結果,誤りを生成する過程は,意味知識情報処理における特徴的なしくみによることが判明した.いいかえると,知識体系に内在する,その課題に対する意味情報自体の誤り,いわばプログラムミスに相当する手続き誤りである.実験2:知識構造にもとづく誤りの分析は,改めて物理的現象に対する身近かな認識や理解のもとでの誤りをめぐって実験的に検討された.誤りへの対処法や指針についてはなお検討課題である.本研究は,ある作業課題を遂行するさいに生じる固有のヒューマン・エラーをとりあげ,そのエラーに内在する特徴,構造特性を明らかにすることを目的とする.これは同時に,そのような特徴的なエラーを生成,発生する認知過程(心理過程)そのものに内在する機能ならびに構造,とくに意味知識情報処理過程を究明することである.このような研究の結果得られる知見は,現代の巨大なマン・マシン・システムでのヒューマン・ファクターによる事故や災害への対処,予防にとって,また,教育的,技術的対策への指針として欠かせない.本研究は,そのための基礎的研究の第一歩となる.なお,ヒューマン・エラーは,決して無作為に生じるのではなく,一貫した意味と論理構造をもつ.それは,課題解決過程における意味的情報処理にともなって生じるものと予測される.このような誤りを,バグないしはアルゴリズムエラーとよぶ.エラーの生成をつかさどるルールの存在することが示唆される.実験1:アルゴリズムエラーの生成過程-再生課題での意味的誤りからみた記憶知識情報の構造特性-.これは,上記の目的のうちの基礎的な知見を得るために試みた.被験者の作業課題は,呈示3単語を記銘することである.語の間には意味的な関連性の有為などが操作された.記銘後,呈示後のうちの1語ないし2語を再生手掛り語として呈示し,残りの語を再生するように求めた.この時に生じた誤りをもとに,誤りの構造が調べられた.その結果,誤りを生成する過程は,意味知識情報処理における特徴的なしくみによることが判明した.いいかえると,知識体系に内在する,その課題に対する意味情報自体の誤り,いわばプログラムミスに相当する手続き誤りである.実験2:知識構造にもとづく誤りの分析は,改めて物理的現象に対する身近かな認識や理解のもとでの誤りをめぐって実験的に検討された.誤りへの対処法や指針についてはなお検討課題である.
戦前の台湾文化交流史を背景地とした戦後沖縄児童文化・文学の展開と全体像の解明

本研究の目的は歴史的資料の分析をもとに沖縄の児童文学の動向を明らかにすることにある。とりわけ本研究では、戦前の八重山と台湾の文化交流を背景とした戦後沖縄での展開過程に焦点をあてた。3年間の研究成果は以下の通りである。まず初めに川平朝申、古藤実冨や儀間比呂志の作品リストを作成し、次に彼らによって書かれた子どものための文学作品の特徴を明らかにした。以上、今後の戦後沖縄児童文学研究進展のための基盤づくりができたことを踏まえ、当初の計画通りの成果を上げられたものと考える。本研究は、戦後初期の沖縄で児童文化・文学の復興を担った人々が、日本統治下における台湾との文化交流をルーツとしていた点に着目し、その実態を調査し明らかにすることで、戦後沖縄の児童文化・文学活動の展開過程、全体像を解明することを目的としている。とりわけ終戦直後の沖縄本島で文化行政官として活躍し、同時に児童文化活動や児童文学の創作に関わっていた川平朝申(1908-1998)と、八重山で子ども新聞の発行や児童雑誌「青い鳥」の発行など、文芸復興に尽力していた古藤実冨(1906-1961)にフォーカスし、彼らの仕事が戦後史に持つ意味を、作品内容の分析や生育史、教育状況、時代背景、台湾での文化的蓄積等を基軸に解明することを目指している。本年度は、日本統治下の台湾で発行されていた新聞や雑誌の記事の内容を具体的に検討するとともに、沖縄県内で刊行されていた川平朝申の児童書および川平の自伝的記録である「わが半生の記」を調査し、収集した。また、昨年那覇市立博物館が開催した「川平朝申と沖縄文化」展において川平の直筆原稿や児童劇台本等の資料を収集し、年譜を入手することができた。その研究資料を基に、昨年7月に開催された沖縄文化協会研究発表会、今年3月に開催されたシンポジウム「川平朝申とその時代」において研究発表したことが成果としてあげられる。さらに、川平朝申によって戦後初めて出版された絵本『ねむりむしじらぁ』(儀間比呂志・絵、福音館書店、1970年)の原画展示を沖縄県うるま市内で開催し、今では絶版となってしまった川平の児童文学の仕事の一端を一般に公開し、絵本画家の儀間氏から絵本出版に関わる経緯について聞き取りを行った。戦後沖縄児童文学の貴重な資料として地元のマスコミからの関心も高く、6日間で1700名の参観を得たことも、研究の波及効果の一つとしてあげられる。本研究は、戦前の台湾と沖縄の文化交流史を背景地とした、戦後児童文化・文学の沖縄からの発信と展開過程の実態、さらにはその全体像を描くことを目的に行われた。研究期間中はまず第一に、戦後初期、台湾から引き揚げてきて八重山諸島で児童文化・文学活動を展開していた古藤実冨(1906-1961)に着目し、「八重山こども新聞」や『青い鳥』に掲載された作品を中心に、古藤の実践と作品内容を調査した。さらに古藤の三男宅に遺品として残されていた生原稿の整理を行い、未発表作品なども合わせてこれまで未解明であった作品リストの作成を行った。次に、同じく台湾から引き揚げて後、沖縄本島で文化行政に活躍していた川平朝申(1908-1998)の台湾時代の児童文化活動や児童向けの作品調査及び本島で出版した児童文学作品、児童劇脚本などの資料調査を行い、川平の戦前・戦後を網羅した作品リストを作成した。また研究の最終年度には、古藤や川平のライフサイクル研究を通した作品研究を並行して行い、台湾時代との連続性や作品の主題・思想、文学的特徴について考察した。研究期間全体を通して、戦前戦後という最も資料散逸の激しかった時代の資料発掘のみならず、戦後初期の沖縄児童文化運動の胎動期の実態、戦後児童文学創作への歩みを、具体的な作品を通して検証できたことが成果としてあげられる。また、本研究課題から派生した「戦前の南洋を背景地とした児童文化の系譜」についても示唆を得られたため、川平とともに戦後初の沖縄絵本を出版した儀間比呂志の仕事についても、作品の書誌をまとめ、作品分析を行った。今後は両ルートを軸にさらに研究を深めていくことを課題としていきたい。本研究の目的は、まず第一に戦後初期の沖縄の児童文化・文学復興を担った人々が、日本統治期の台湾との文化交流をルーツとしていた点に着目し、その実態を調査し明らかにすることにあった。そこで本年度はまず川平朝申(1909ー1998)に焦点を当てて、川平の台湾滞在中の活動について、台湾中央図書館台湾分館に保管されている資料を中心に調査した。その結果、以下のような事実が確認された。まず「台湾日日新報」では、彼がラジオ児童劇の脚本や演出に関わっており、児童向けの読み物や挿絵(版画)を投稿していたことが明らかになった。