hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
インプットを重視した処理指導の日本語教育現場への応用に関する研究

本研究では、第二言語習得理論に基づく「処理指導」というインプット中心の指導法を取り上げ、この指導法を教育現場に効果的に取り入れる方法について検討するために調査を行った。その結果、文法説明の後に、話す練習をしてから聞く練習をする場合でも、聞く練習を先にしてから、話す練習をする場合でも、どちらも同程度の指導の効果があることが分かった。「処理指導」の理論では、文法説明の後に、まず聞く練習をすることが効果があるとされているが、今回の調査ではそのような傾向は見られなかった。本研究は、第二言語習得研究の成果をもとに考えられ、外国語習得に効果があると言われているインプット理解活動を中心とした「処理指導」という指導法を取り上げ、その「処理指導」を日本語教育の現場へ取り入れる際に、どのように行えばより効果的かについて、実験的な手法を取り入れ明らかにすることが目的である。一般的には、文法説明を行った後口頭練習を行い、最後の確認に聴解練習を行うことが多いと言われるが、この聴解練習をより効果の高い「処理指導」の理解練習に置き換えた場合、理解を定着させるために口頭練習を行う前に行うのと、現在の指導と同様に、確認として授業の最後に行うのとでは、学習者の理解面、産出面で何らかの違いがあるのかどうかという点について明らかにしたいと考えている。3年間の研究計画のうちの初年度である平成25年度は、主に、平成26年度以降に行う実験調査の準備を行った。対象とする文法項目の選定については、先行研究やコーパスなどの分析を行い、いくつかの項目を候補として取り出した。その後、複数の日本語教員に対して聞き取り調査を行い、実際に学習者にとって難しい項目、候補以外に適切な項目について挙げてもらい、最終的に2項目に絞った。調査方法についても、分担者とともに話し合い、PC上でどのような教示で実験を行うのかについて検討を行った。これまで研究代表者が行った処理指導に関する研究において、文法項目により処理指導の効果の大きさに違いがみられる可能性が示唆されている。このため、平成25年度に行った文法項目の選定は、本研究の非常に重要な部分であると考えられる。研究分担者との検討だけではなく、処理指導について専門的な知識のない日本語教員からの意見を取り入れたことは意味があると考えている。本研究は、第二言語習得研究の成果をもとに考えられ、外国語習得に効果があると言われているインプット理解活動を中心とした「処理指導」という指導法を取り上げ、日本語教育の現場へ応用するためには、従来の授業の中にどのような形で取り入れると効果的かという点について、実験的な手法を取り入れて明らかにすることが目的である。3年間の研究計画のうちの2年目である平成26年度は、実験調査の一部実施と実験計画の見直しを行った。平成26年度前半では、調査の方法や内容を確認するために予備調査を行い、その結果について7月にシドニーで行われた日本語教育国際研究大会で発表を行った。後半では、予備調査と学会発表での情報収集により、調査で取り上げる文法項目と調査対象者に修正を加えることとし、そのための準備を行った。具体的には、指導対象とする文法項目を「使役受け身文」と「連体修飾文」から「受け身文」へと変更することにし、実験プログラムをもう一度作成し直すための準備を行った。また、調査対象者については、日本国内の留学生を対象とする予定であったが、条件を統制しやすい海外の日本語学習者を対象に、統制群も設けて調査を行うこととした。調査地についてはすでに決定し、現在実験時期など細部の確認を行っている。当初の研究計画から、文法項目と調査対象者を変更することになったが、学会発表で得られた他の研究者からのアドバイスを計画に反映させることができ、よりよい実験計画で、興味深いデータが得られるようになったと考えている。3年間の研究計画のうちの3年目である平成27年度は、平成26年7月に日本語教育国際研究大会(シドニー)で行った研究発表で得られた意見を参考に、昨年度に引き続き実験プログラムの修正を行い調査のための準備を行った。修正を行った点は、指導の対象とする文法項目を「使役受け身文」と「連体修飾文」から「受け身文」へ変更し、指導のプログラムを作成し直すことであった。当初の予定では、平成27年度は実験調査を行うことになっていたが、指導プログラムの準備が整い、国内で予備調査を行っている段階で、実験ソフトがパソコン上で正常に作動しないトラブルが発生し、その解決に時間がかかってしまった。そのため、予定通り実験調査を行い、期間内に調査を終えることが難しくなり、研究期間を1年延長して実施することになった。学会発表で得られた他の研究者からのアドバイスを計画に反映したこと、また、実験ソフトのトラブルにより、計画通り調査を行うことはできなかったが、指導プログラムの修正は完了し、現在は実験ソフトのトラブルも解決できているため、延長期間内に研究を行うことは可能である。研究発表時に得られたアドバイスに基づき指導プログラムを作成し直し、国内で予備調査を行っている際に、実験ソフトがパソコン上で正常に動かなくなるトラブルが発生し、その対応と解決に時間がかかってしまった。

現時点で、トラブルの解決はできているが、調査開始時期が遅れてしまったため、調査を実施する予定だった学校と調査時期の再調整が必要となったことで、期間内に調査を終えることが難しくなり、研究期間を1年延長して行うことになった。本研究は、第二言語習得研究の成果をもとに考えられ、外国語習得に効果があると言われているインプット理解活動を中心とした「処理指導」という指導法を取り上げ、その「処理指導」を日本語教育の現場へ取り入れる際に、どのように行えばより効果的かについて、実験的な手法を取り入れ明らかにすることが目的である。具体的には、一般的な初級の授業では、文法説明を行った後口頭練習を行い、最後の確認に聴解練習を行うことが多いと言われるが、この聴解練習をより効果の高い「処理指導」の理解練習に置き換えた場合、理解を定着させるために口頭練習を行う前に行う場合と、現在の指導と同様に、確認として授業の最後に行う場合とでは、学習者の理解面、産出面で何らかの違いがあるのかどうかという点について明らかにすることである。調査の実施にあたり以下の3つの段階のことを行った。1コーパス分析から学習者の誤用を分析し、指導の対象とする項目を複数選んだ上で、日本語教師にインタビューを行い、対象項目を2つに絞った2数名の日本語学習者に対して、指導と指導の効果を測定する予備調査を行った。そして、その結果を国際研究大会で発表し、参加者との意見交換を行うことで、最終的に指導の対象項目を「受身」の1つに絞った3文法説明、練習問題と練習問題での回答に対するフィードバックなどが全てPC上で受けられる指導パックを実験ソフトを使って作成し、韓国・中国・日本で日本語を学ぶ学習者30名を対象として、指導とその効果を測定する調査を行った。調査の結果、処理指導を実際の授業の中に取り入れることで、学習者の受身の習得に一定の効果がみられることが明らかになった。また、調査で用いた教材や授業での使用方法について、現役の日本語教師から意見を聞き、教材を実際の授業でより使用しやすく修正し、作成の意図や使用方法などを書いた説明書を作成した。本研究では、第二言語習得理論に基づく「処理指導」というインプット中心の指導法を取り上げ、この指導法を教育現場に効果的に取り入れる方法について検討するために調査を行った。その結果、文法説明の後に、話す練習をしてから聞く練習をする場合でも、聞く練習を先にしてから、話す練習をする場合でも、どちらも同程度の指導の効果があることが分かった。「処理指導」の理論では、文法説明の後に、まず聞く練習をすることが効果があるとされているが、今回の調査ではそのような傾向は見られなかった。平成26年度の計画は、実験調査を行うことであった。当初は、計画通りに調査を進めていたが、2014年7月にシドニーで行われた日本語教育国際研究大会でポスター発表を行った際に、日本国内外で第二言語習得研究を行っている研究者と意見交換を行い、実験の対象者や文法項目に関してアドバイスを受けた。その後、分担者と検討した結果、計画を若干修正して実験を行ったほうがより興味深いデータが収集できそうだとの結論に至り、実験材料をもう一度準備し直すことにした。そのため、従来の計画からは少し遅れてしまったが、調査地も決まっているため、研究の遂行には支障がないと考えている。平成28年度は、修正を行った指導プログラムを用いて実験調査を行う予定である。
聴覚におけるガングリオシドの機能解明

私は、平成26年度から27年度の公募班員として参加し、その間、2度の国際シンポジウムで発表の機会を得た。2014年には、ハワイでの日米合同糖質シンポジウムでGanglioside GM3 is essential for the structural integrity and function of cochlear hair cells.というタイトルで講演し、Human Molecular Geneticsに2015年に掲載された。この研究で、1)マウス蝸牛の聴覚機能は、生後2週間で成熟する。この生後直後から2週の間に蝸牛のガングリオシド発現が著しく増加し、ガングリオシドは聴覚機能の成熟に必須であること。2)GM3合成酵素欠損症のヒトでは聴覚機能が消失することを、米国のClinic for Sick Children(CSC)のKevin Strauss博士の研究グループとの共同研究により明らかにした。2016年1月には、淡路島での本領域の最後の国際シンポジウムで視床下部接触中枢におけるレプチンーメラノコルチンシグナルにおけるガングリオシド関与について、我々の最新の知見について発表した。肥満・糖尿病モデルマウスのKKAyでは、メラノコルチン受容体MC4Rに対して抑制効果を示すAgoutiタンパクの高発現によって、視床下部の食欲中枢におけるレプチンシグナル抑制され、摂餌量の亢進し肥満による糖尿病病態を示す。GM3合成酵素を欠損させたKKAyマウスでは、摂餌量が正常化し、糖尿病の発症が抑制されていることを見出している。これらの結果から。ガングリオシド発現異常は、脂肪組織のインスリン抵抗性発症のみならず、中枢のレプチン抵抗性にも関わっていることを示すことができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。音の受容器官である「蝸牛」では発生あるいは生後成熟期間において,様々な糖鎖構造の発現量・発現部位が変化することから,複合糖質の聴覚機能への関与が示唆されていた。しかし,その報告の多くは糖脂質,プロテオグリカン,糖タンパク質の生合成および代謝に関連する酵素遺伝子群のクローニング以前になされた研究であり,聴覚機能を制御する複合糖質分子種の同定には至っていなかった。申請者らは,ガングリオシドGM3合成酵素(GM3S)欠損マウスが生後間もなく完全に聴力を消失することを見いだした(Yoshikawa et al., PNAS 2009)。蝸牛のコルチ器に存在する有毛細胞の聴毛の選択的変性が起こることがその原因であり,コルチ器の機能および形態の維持に糖脂質:ガングリオシドが必須であることが示した。このGM3S欠損マウスに見られるコルチ器の変性は感音性難聴の病態の一部と類似しおり,本マウスが加齢性難聴のモデルになることが期待される。最近,ヒトのGM3S欠損患者においても難聴が報告されるに至り,我々のマウスにおける発見がヒトの聴覚機能研究に適用できる可能性が強く示唆される(Yoshikawa et al., Hum Mol Genet 2015)。本申請では,「ガングリオシドが形成するマイクロドメインが聴覚機能を制御する」という作業仮説の立証に向けて、GM3を中心とした糖脂質代謝の変化およびマイクロドメイン形成による聴覚機能の調節機構、コルチ器崩壊の分子メカニズムを解明する。さらに,ガングリオシドによる難聴治療法の可能性についても検討を開始する。これらの結果から。GM3S KOマウスでは、生後間もなく内有毛細胞及び外有毛細胞の聴毛の変性が確認され、内有毛細胞では、聴毛間の融合、聴毛内の分子の「局在の変化」がみられる。有毛細胞の細胞膜上およびその細胞質内では、各難聴関連タンパク質がそれぞれ特徴的な局在を示し聴毛の形態・機能を維持している。この不動毛の機能的・形態的維持には同一有毛細胞のシリア間での分子連結が必須である。この分子連結の崩壊に基づく聴毛の融合がGM3S KO

マウスの聴覚機能消失の原因であると考えられる。GM3S KOマウスでは、この連結(shaft connector)を担う分子であるPTPRQ(Protein Tyrosin Phosphatase Receptor Q)の局在変化を確認している(Yoshikawa et al., Hum Mol Genet 2015)。27年度が最終年度であるため、記入しない。1)GM3依存性聴毛膜微小領域を介したシグナル伝達制御機構の解明。2)GM3S欠損症治療および感音性難聴/加齢性難聴治療の基礎実験としてGM3S KOマウス,難聴遺伝子保有マウスおよびそれらのコルチ器の器官培養を用いた,聴覚障害およびコルチ器変性に対するGM3投与によるレスキュー実験。などを実施する。
Fasリガンドに結合する新規の細胞表面蛋白質の同定

Fasリガンド(FasL)はその受容体Fasに結合しアポトーシスを誘導する。FasLはタイプII蛋白質として合成されるが、ある種のmetalloproteinaseによって切断される。この可溶化の役割、すなわち膜型と可溶型のFasLどちらがアポトーシス誘導活性を持つかを検討した。すなわち、ヒトFasLのmetalloproteinaseによる切断部位に変異を導入し、可溶型になりえないFasLを発現する細胞株を樹立し、その細胞のアポトーシス誘導能を可溶型FasLのそれと比較した。その結果、Fasに感受性の高い活性化T-リンパ球細胞とは異なり、マウス肝細胞やnaive T-リンパ球細胞などは、膜結合型FasLによってのみアポトーシスを引き起こした。以上の結果はFasLは本来、膜結合型として作用し、可溶化によりその活性がdown-regulationされることを示している。そして、FasLと同一のファミリーに属するTNFを切断する酵素(TACE,TNF-alpha converting enzyme)の解析からTACEはFasLの切断には関与していないこと,TACEが作用するには,その基質TNFと同一の細胞で発現される必要があることを示した。ところでFasLを構成的に発現する腫瘍細胞をマウスに移植するとinflammationが誘導され腫瘍は速やかに除去された。この際、培養液中には顕著なIL-1βの蓄積が認められ、このIL-1βの放出はカスパーゼの阻害ペプチドz-VADによって阻害された。一方、IL-1を欠質したマウスにFasLを発現する癌細胞を移植したところ、野生型のマウスに比べ好中球によるinflammationは顕著に抑えられた。以上の結果は好中球がアポトーシスを起こして死滅する際に活性化されるcaspaseがIL-1βの産生を誘導し、これがinflammationに関与していることを示している。この可溶化の役割、すなわち、膜型と可溶型のFasLどちらが活性を持つかを検討した。まず、ヒトFasL発現細胞より可溶型FasLを精製しそのN-末端配列より、metalloproteinaseによる切断部位を決定した。次いで、この切断部位に変異を導入し、可溶型になりえないFasLを発現する細胞株を樹立し、その細胞のアポトーシス誘導能を可溶型FasLのそれと比較した。その結果、Fasに感受性の高い細胞は可溶型FasLによってアポトーシスをひきおこしたが、マウス肝細胞や、リンパ球細胞などは、膜結合型FasLによってのみアポトーシスを引き起こした。以上の結果は、FasLは本来、膜結合型として作用し、可溶化によりその活性がdown-regulationされることを示している。ところで、FasLを構成的に発現する腫瘍細胞をマウスに移植するとinflammationが誘導され腫瘍は速やかに除去される。この分子機構を明らかにするため、FasLを発現する細胞を腹腔内細胞と培養した。この細胞はFasLによって死滅したが、その際、培養液中には、顕著なIL-1βの蓄積が認められた。このIL-1βの放出はcaspaseの広範な阻害ペブチドz-VADによって阻止された。一方、IL-1を欠質したマウスにFasLを発現する癌細胞を移植したところ、野性型のマウスに較べ好中球のinflammationは顕著に抑えられた。

以上の結果は、好中球がアポトーシスを起こして死滅する際に活性化されるcaspaseがIL-1βの産生を誘導し、これがinflammationに関与していることを示している。Fasリガンド(FasL)はその受容体Fasに結合しアポトーシスを誘導する。FasLはタイプII蛋白質として合成されるが、ある種のmetalloproteinaseによって切断される。この可溶化の役割、すなわち膜型と可溶型のFasLどちらがアポトーシス誘導活性を持つかを検討した。すなわち、ヒトFasLのmetalloproteinaseによる切断部位に変異を導入し、可溶型になりえないFasLを発現する細胞株を樹立し、その細胞のアポトーシス誘導能を可溶型FasLのそれと比較した。その結果、Fasに感受性の高い活性化T-リンパ球細胞とは異なり、マウス肝細胞やnaiveT-リンパ球細胞などは、膜結合型FasLによってのみアポトーシスを引き起こした。以上の結果はFasLは本来、膜結合型として作用し、可溶化によりその活性がdown-regulationされることを示している。そして、FasLと同一のファミリーに属するTNFを切断する酵素(TACE,TNF-alpha converting enzyme)の解析からTACEはFasLの切断には関与していないこと、TACEが作用するには、その基質TNFと同一の細胞で発現される必要があることを示した。ところでFasLを構成的に発現する腫瘍細胞をマウスに移植するとinflammationが誘導され腫瘍は速やかに除去された。この際、培養液中には顕著なIL-1βの蓄積が認められ、このIL-1βの放出はカスパーゼの阻害ペプチドz-VADによって阻害された。一方、IL-1を欠質したマウスにFasLを発現する癌細胞を移植したところ、野生型のマウスに比べ好中球によるinflammationは顕著に抑えられた。以上の結果は好中球がアポトーシスを起こして死滅する際に活性化されるcaspaseがIL-1βの産生を誘導し、これがinflammationに関与していることを示している。
ラット臼歯形態形成機構におけるカドヘリン.F-アクチンとフィブロネクチンの役割

目的および方法;形態形成における細胞間接着因子と細胞骨格蛋白質群の相互作用および細胞外基質の役割を知る目的で次の実験を行った。ラット下顎第1,2臼歯(胎生20日生後4日)を用いて、歯胚の発生段階(歯冠の形態変化)およびBrdUの取り込みを指標としたエナメル芽細胞の分化段階に伴う、細胞間接着因子の一つであるカドヘリンと細胞骨格系の一つであるF-アクチンと細胞外基質の一つであるフィブロネクチンの局在の経時的変化を免疫組織化学的に調べ,歯冠の形成過程を検討した。結果および考察;1,P-カドヘリンは細胞分裂が行われている内エナメル上皮の周囲に陽性反応が観察され,細胞同志のゆるい流動的な接着に重要な役割を果たしていることが示唆された。2,内エナメル上皮が分化を開始した直後はF-アクチンとP-カドヘリンの陽性反応は細胞の遠位端ではあまり見られないが,近位端では強く現れ,この部位にadherens junctionが形成され,内エナメル上皮の近位端と遠位端での接着の強さに差が生じることが示唆される。また,エナメル器の内エナメル上皮においても部位によって細胞の分化段階が異なるため両端における細胞間接着の強さに差が生じる。したがって,接着の比較的弱い細胞分裂の活発な部位で内エナメル上皮が歯乳頭側へ屈曲し,歯冠の形態を決定すると考えられる。3,フィブロネクチンはどの発生段階においても歯乳頭全体に陽性反応が観察できた。しかし,内エナメル上皮からエナメル芽細胞に分化する期間あるいは未分化間葉細胞から象牙芽細胞に分化する期間にフィブロネクチンの陽性反応が内エナメル上皮の基底膜に顕著に見られた。したがって,フィブロネクチンはエナメル芽細胞もしくは象牙芽細胞の分化に大きな役割を果していることが示唆された。
α5β3インテグリンを介した癌進展メカニズムの解明と増殖抑制法の開発

ANGPTL3遺伝子は口腔癌由来細胞株および口腔癌臨床サンプルにおいて発現増強しており、その発現を抑制した形質転換細胞株を用いた検証から、MAPK経路を介した細胞周期調節によって原発腫瘍の増殖能に強く影響を及ぼすことが示唆された。さらに、ANGPTL3の発現抑制に伴い、様々なインテグリン関連遺伝子が影響を受けることが確認され、ANGPTL3の制御により、口腔癌の進展に関与する可能性が示された。したがって、本研究結果は、ANGPTL3を分子標的とした新たな治療の礎となると考えられ、今後の臨床応用の際に有益なデータになると思われた。癌の進展においてインテグリンが重要な接着因子として、現在盛んに研究されている。インテグリンはシグナル伝達においても重要な役割を担い、その構成ドメインにより、結合因子やシグナル伝達経路、さらには細胞活動への影響などが異なっている。我々は先行研究において、口腔癌細胞において発現増強しているインテグリン構成ドメインはα5とβ3であることを明らかにした。本研究ではα5β3インテグリンに作用する遺伝子群の中で、最も発現増強しているAngiopoietin-like3 (ANGPTL3)遺伝子に着目した。まず、口腔癌細胞株8種についてANGPTL3のmRNAとタンパクの発現状態を正常口腔粘膜上皮細胞と比較したところ、全ての細胞株においてANGPTL3の発現亢進を認めた。また口腔癌臨床検体においても正常口腔粘膜上皮と比較し、mRNAとタンパクの発現は有意に亢進していた。さらに臨床指標との相関関係を調べると、ANGPTL3の発現が高い症例ほど腫瘍径に有意な差を認めた。次に癌細胞株2種にANGPTL3のshRNAを導入し、ANGPTL3発現抑制株(shANGPTL3株)とcontrol株(shMock株)を樹立、細胞増殖能試験、細胞遊走能試験、細胞浸潤能試験を行った。細胞増殖能試験では、2つの細胞株において120時間後より、shANGPTL3株はshMock株と比較し、有意な差を認めた。細胞遊走能試験、細胞浸潤能試験では有意な差は認められなかった。さらにヌードマウスへshANGPTL3株とshMock株を移植したところ、in vitroの実験と同様に、腫瘍径に有意な差を認めた。今後、ANGPTL3が作用するα5β3インテグリンのシグナル伝達経路にある遺伝子群に対する影響を明らかにし、ANGPTL3制御により癌細胞の進展を抑制する治療法や薬剤を検討していく予定である。本年度に予定していた研究計画には十分到達することができた。またこれまでの研究成果は、次年度以降の研究計画に大きく寄与できる内容であり、本年度の実績としては順調に進展している。インテグリンは癌細胞の転移に関与していると既に報告されている重要な接着因子である。本研究に先立ち、口腔癌細胞株2種に対するmicroarray解析を行い、i)口腔癌細胞において発現増強している遺伝子群の中で、最も発現増強しているインテグリンの構成ドメインはα5とβ3であることを明らかにした。ii) α5β3タイプのインテグリンに作用する遺伝子群の中でもっとも発現増強している遺伝子がAngiopietin-like3(ANGPTL3)遺伝子であることを明らかにした。(1) shANGPTL3移植マウスでは、shMock移植マウスと比較して腫瘍増殖が有意に低下したほか、遠隔転移率の低下を確認した。さらに、ANGPTL3遺伝子は口腔癌由来細胞株、口腔癌臨床サンプルにおいて発現増強しており、その発現を抑制した形質転換細胞株を用いた検証から、特に原発腫瘍の増殖能に強く影響を及ぼすことが示唆された。さらに、ANGPTL3の抑制に伴い、様々なインテグリン関連遺伝子、ターゲット遺伝子が影響を受けることが確認され、α5β3タイプインテグリン、特にANGPTL3の制御により、口腔癌の進展を制御する可能性が示された。この結果から、本研究はANGPTL3を分子標的とした新たな分子標的治療の礎となると考えられ、今後の臨床応用の際に有益なデータになると思われた。今後の推進方策ANGPTL3遺伝子の形質転換細胞を用いたマウス移植癌実験により、in vivoにおける腫瘍の増殖、転移実験を行い、転移に関するANGPTL3の役割を確認する。またANGPTL3が作用するα5β3インテグリンのシグナル伝達経路にある遺伝子群の発現状態をreal time PCR法を用い、ANGPTL3によるα5β3インテグリンのシグナル伝達経路に対する影響を明らかにする。さらに、ANGPTL3、α5β3インテグリンのシグナル伝達経路に影響を与える薬剤を検索し、薬剤によるANGPTL3・α5β3インテグリンのシグナル伝達経路制御による癌細胞の進展を抑制する治療法・薬剤を検討する予定としている。医歯薬学
人間による音声情報処理過程の分析とそれを応用した音声対話インターフェイスの構築

人間間の音声コミュニケーションを観測すると、音声の音響情報から様々なパラ言語情報,非言語情報を抽出することで円滑なコミュニケーションを実現していることが分かる。本研究では,パラ言語情報として発話意図に,また,非言語情報として話し手の知覚的年齢情報に着眼してその自動抽出を検討した。特に発話意図の抽出に関しては,音響音声学に立脚した音声工学とは完全に異なる観点からの音声モデリングを行なった。音声の物理現象の中に,話者・収録環境に依存しない普遍構造が存在することを実証しており,その普遍構造とパラ言語情報との関連について検討した。話者認識技術に基づいてユーザの知覚的年齢の推定を試みた。子供音声・成人・老人音声データベース(合計男女約1000人)に対してその音声聴取時に感じる年齢を,大学生30名を対象として聴取実験によりラベリングさせた。その結果より,データベース話者各々に対して知覚的年齢分布が定義される未知入力話者に対する知覚的年齢推定は,未知話者とデータベース話者との距離を尤度という形で求め,各データベース話者に付随する知覚的年齢分布を,この尤度を用いて期待値化することで推定した。実験の結果,機械による推定値と人間による推定値間の相関は0.9となった。音声ストリームを確率論的に状態系列として捉え,次に相対論的に状態間の関係のみに着眼し(構造化し),その関係を情報論的に定量化する。こうして構造化された音声は性別,年齢,話者,マイク,伝送特性などに一切影響を受けず話し手の脳から聞き手の脳にまで到達する。音響音声学が提供する音声表象は「歪んでいない音声は存在しない」と主張し,本研究で提案する新しい音声の物理表象では「人間が発声する限り音声は歪み得ない」と主張する構造を唯一歪ませるのがパラ言語情報であり,本研究では種々の感情・意図によって構造のサイズがどう変化するのか,及び構造そのものがどう歪むのか,について実験的検討を行ない良好な結果を得ることができた。
破骨細胞の発生・機能を基点にしたＡＢＣ輸送体と骨代謝との包括的相互連関解析

世界に先駆け、破骨細胞とABC輸送体との連関に着眼した代表者は、破骨細胞の発生と共にmRNA量が増加するABC輸送体28種を同定し、ABC輸送体遺伝子3種(Abca5, Abcb4, Abcc5)をそれぞれ欠損する動物を本学の動物施設に導入した。そして、興味深いことに、Abcb4とAbcc5が性別依存的に骨代謝を制御することを見出した(投稿準備中)。以上の結果に基づき、代表者は、「ABC輸送体による骨代謝制御機構」という骨代謝制御機構を新たに見出したことを成果として報告する。申請者は、膜輸送体が制御する生命現象と疾患との相互連関解析を行い、疾患の予防に貢献することを研究の全体構想として掲げている。そのために、本研究では、破骨細胞の発生・機能および骨代謝を対象にATP-bindingcassette (ABC)輸送体を起点にし、1膜輸送体と生命現象との連関の解明、2膜輸送体が制御する細胞応答の解明、3生命現象の制御に関わる膜輸送体相互の連関の解明、をマイルストーンとして掲げた。破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abca5遺伝子とAbcb4遺伝子のそれぞれを欠損させたマウスに加え、Abcc5遺伝子を欠損させたマウスを共同研究者から分与してもらい、本学の実験動物センターでの飼育・繁殖を開始した。また、破骨細胞において発現が認められるAbca1遺伝子を欠損させたマウスについても共同研究者から分与してもらい、本学の実験動物センターでの飼育・繁殖を開始した。骨代謝に及ぼすこれらの遺伝子の影響を解析するためにマウスを繁殖し、6週齢の時点で骨密度を測定した結果、Abca5遺伝子の欠損による影響は認められなかったが、Abcb4遺伝子の欠損によって有意に骨密度が低下することを見出した。また、共同研究者から分与してもらった遺伝子欠損マウスの遺伝的背景を全てFVBマウスにコンジェニック化することを開始した。そして、これらと並行して、破骨細胞に発現が認められるABC輸送体と低分子化合物との相互作用解析も行い、そのメカニズムの一端を明らかにした。。破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abca5遺伝子とAbcb4遺伝子のそれぞれを欠損させたマウスを共同研究者から分与してもらい、本学の実験動物センターでの飼育・繁殖を開始した。現在、骨代謝に及ぼす当該遺伝子の影響を解析するためにマウスを繁殖中である。一方、破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abcb9について、ポリクローナル抗体を作成した。この抗体の特異性を評価するために、Abcb9遺伝子をクローニングし、それぞれのタンパク質を安定発現する細胞株を樹立した。Western blottingにて抗体の特異性の評価を行った結果、抗Abcb9抗体が機能することが明らかになった。また、この抗体がヒトABCB9タンパク質も認識すること、および還元条件で試料を調製した方が感度良くタンパク質を検出できることが明らかになった。これらと並行して、破骨細胞に発現が認められるABC輸送体と低分子化合物との相互作用解析も行い、そのメカニズムの一端を明らかにした。破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abca5遺伝子とAbcb4遺伝子、Abcc5遺伝子のそれぞれを欠損させたマウスを共同研究者から分与してもらい、本学の実験動物センターでの飼育・繁殖を開始した。骨代謝に及ぼすこれらの遺伝子の影響を解析するためにマウスを繁殖し、6, 12, 18, 24週齢の時点で骨密度を測定した結果、Abcb4遺伝子欠損マウスの雌とAbcc5遺伝子欠損マウスの雌において、野生型マウスと比して有意に骨密度が低下していることが見出された。また、Abca5遺伝子欠損マウスの遺伝的背景をFVBマウスにするコンジェニック化については、第6世代目のマウスが誕生したところである。

骨代謝学、ABC輸送体学破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abca5遺伝子とAbcb4遺伝子をそれぞれ欠損させたマウスに加え、Abcc5遺伝子とAbca1遺伝子をそれぞれ欠損させたマウスを共同研究者から分与してもらい、本学の実験動物センターでの飼育・繁殖を開始できた点は、今年度の最大の収穫である。また、昨年度に飼育・繁殖を開始したAbca5遺伝子とAbcb4遺伝子をそれぞれ欠損させたマウスを用いて骨密度等の測定まで到達できた点は、本プロジェクトがおおむね順調に進展していることを意味する。破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abca5遺伝子とAbcb4遺伝子のそれぞれを欠損させたマウスを共同研究者から分与してもらい、本学の実験動物センターでの飼育・繁殖を開始できた点は、今年度の最大の収穫である。また、破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体のうち、Abcb9を安定発現する細胞株を樹立し、抗Abcb9抗体を作成することができたことは、Abcb9の機能解析を行うことができるモデル細胞と解析ツールを手元に用意できたという点において評価に値する。実験動物センターで飼育中の遺伝子欠損マウスを繁殖させ、骨代謝に及ぼすそれぞれの遺伝子の影響をX線CT装置を用いて解析する。6週齢の時点における評価が終了した動物については、12週齢および18週齢の時点においても同様の解析を実施する。また、4週齢のマウスから卵巣を摘出し、骨粗鬆症を誘発させた時におけるそれぞれの遺伝子の影響を評価する。さらに、それぞれの遺伝子が破骨細胞における遺伝子発現およびタンパク質発現にどのような影響を及ぼすかについて、マイクロアレイ解析および二次元電気泳動にて解析する。実験動物センターで飼育中のAbca5遺伝子欠損マウスとAbcb4遺伝子欠損マウスを繁殖させ、骨代謝に及ぼすそれぞれの遺伝子の影響をX線CT装置を用いて解析する。また、それぞれの遺伝子が破骨細胞における遺伝子発現およびタンパク質発現にどのような影響を及ぼすかについて、マイクロアレイ解析および二次元電気泳動にて解析する。また、破骨細胞の発生と共に発現量が増加するABC輸送体について、当該ABC輸送体を認識する抗体を作成すると共に、当該ABC輸送体を安定発現する細胞株を樹立する。PCR装置の修理を行う予定であったが、年度末であったため修理依頼を取り下げた。PCR装置の修理見積を依頼し、修理を行う。現在作成中である抗体の支払いのために確保してある。
青年期における養護性獲得の課題(「親になるための教育」についての検討)

本研究は、これから親になる世代である青年期男女が、次世代を健全に育成するための資質である養護性をいかにして獲得していくかについて検討することを目的としている。1.子ども理解の一方法として自己の子ども期を回想することの有効性について大学生を対象として検討したところ、回想後には子どもに対する感情は若干良い方向へと移動する傾向が認められた。特にマイナス項目に対して否定する回答が大幅に増えたことから、漠然と持っていた子どもに対する多少のマイナス感情を打ち消す効果を持つといえよう。2.児童・生徒を対象にイラスト画を提示し、その自発反応を手がかりとして、幼児をどのように捉えかかわろうとしているかについて探った。幼児が困難や失敗に遭遇している場面では、小学生は「助けてあげる」などのストレートなプラス反応が多いが、発達に伴い減少し躊躇や傍観的な態度が増える。幼児からの友好的接近場面では、中学生・高校生は「断る」「逃げる」などのマイナス反応が2割あり男子に多い。さらに大学生では拒否的なマイナス反応は313%と少なく、子ども好きが7割を占め女子に多いが、子ども嫌いは7%いて性差は認められない。「一人っ子政策」を採用している中国の小学生・中学生の場合には、子どもや高齢者が困っている場面で積極的に助けようとするプラス反応が日本の子どもに比べて多く、拒否などのマイナス反応は中学生男子に2割程度あり日本と中国の両国間に差は認められない。3.家庭科教育において保育体験学習が行われることは一般的になってきたが、受入側である幼稚園・保育所側の意見を探ったところ、94%の園は受入経験があり、教育効果として「子どもを好きになる」「保育の重要性を理解する」「自分自身について考える」「子どもの発達を理解する」の回答が多く、「親の役割を理解する」の回答は相対的に少なかった。1.本研究は、これから親になる世代である青年期男女が、次世代を健全に育成するための資質である養護性をいかにして獲得していくかについて、検討することを目的としている。2.まず、「養護性」および近接する概念である「親準備性」「育児性」「次世代育成性」についての先行研究を検索し、整理した。3.子どもを理解する一方法として自分自身の子ども期を回想することの有効性について、短期大学女子学生を対象とした質問紙調査により検討した。その結果、子ども期を回想した後には、概して、子どもに対する感情は若干良い方向へと移動する傾向が認められた。特に「子どもの相手をするのはわずらわしい」などのマイナス項目に対して子ども期を回想後にはそれを否定する回答が大幅に増えていたことから、子ども期を回想することは、青年たちが改めて「子ども」をわが身に引き寄せて考え、それまで無自覚的に漠然と持っていた「子ども」に対する多少のマイナス感情を打ち消したり緩和する効果を持つといえるようである。そして、今後自分がおとなとして子どもと良い関係を形成するには、子どもの目線で子どもと関わることや、親がけじめをつけてしっかりとしつけることの重要性への「気づき」が促されたものと思われる。しかし、回想後にも子どもに対する感情に変化の見られない者も存在し、それらの青年たちが養護性をどのように獲得していくかについては、今後の課題として残されている。4.保育体験実習は保育教育において有効であることは先行研究の指摘するところであるが、体験実習の受け入れ側である幼稚園・保育所の保育者側から見たときの問題点・改善点について検討することは、青年期の養護性獲得に向けての大きな示唆を得ることが出来ると期待される。現在は、幼稚園・保育所の保育者を対象として質問紙調査により資料収集を行っている。

本研究は、これから親になる世代である青年期男女が、次世代を健全に育成するための資質である養護性をいかにして獲得していくかについて、検討することを目的としている。近年、保育体験学習の充実が求められているが、その目的が充分に達成されるためには、児童・生徒の幼児に対する理解の現状を把握することが必要であると考える。そこで、小学生・中学生・高校生を対象に、イラスト画を提示し、それに対する自発反応を手がかりとして、児童・生徒が幼児をどのように捉え、かかわろうとしているかについて探った。その結果、幼児が困難や失敗場面に遭遇している場面画に対しては、小学生は「助けてあげる」といったストレートなプラス回答が多いが、発達に伴い減少し、躊躇や傍観的な態度が増えていく。また、幼児からの友好的接近を描いた場面画に対しては、プラス回答が多いものの中学生・高校生では「断る」「逃げる」といったマイナス回答も2割あり、女子に比べて男子に多かった。したがって、幼児からの直接的なかかわりの要請に対しては戸惑いや一部に拒否的反応も見られ、発達に伴い幼児とのかかわりに多少の距離感を持つようになることがうかがわれることから、特に男子生徒の幼児への親和性の育成が課題といえるようである。調査対象をさらに大学生に広げて資料収集を行い、現在、結果を分析している。また、保育体験学習の受け入れ側である幼稚園・保育所の保育者側から見た問題点や改善点についても資料収集を行い、分析を進めている。1.本研究は、これから親になる世代である青年期男女が、次世代を健全に育成するための資質である養護性をいかにして獲得していくかについて、検討することを目的としている。2.保育体験学習の目的が充分に達成されるためには、児童・生徒の幼児に対する理解の現状を把握することが必要である。そこで、イラスト画を提示しそれに対する自発反応を手がかりとして、乳幼児をどのように捉えかかわろうとしているかについて、大学生を対象に資料収集を行った。その結果、受容的友好的行為を伴うプラス反応が68割と多く、次いで行為を決めかねているプラスマイナス反応で、拒否的なマイナス反応は313%と少ない。「子どもが好き」が7割を占め女子に多いが、「嫌い」は7%で性差は認められない。1/3の学生は中学・高校生の時に保育実習体験があるが、「体験あり」群と「なし」群の間に差はない。幼児からの直接的接近を表す場面では、受容的友好的反応と拒否的反応に比較的分かれるようであり、子ども嫌いの場合には拒否的反応が強まる傾向が認められた。3.保育体験学習の受入側である幼稚園・保育所の保育者側から見た問題点や改善点についての調査研究を行った。94%の園は受入経験があり、教育効果として「子どもを好きになる」「保育の重要性を理解する」「自分自身について考える」「子どもの発達を理解する」の回答が多く、「親の役割を理解する」は相対的に少ない。問題点として、観点やマナーの指導、生徒の意識や態度の変化を見てほしい、協力体制を整える必要がある、の回答が多かった。4.大学生が幼児と関わる行動の観察および学生自身による内省記録を資料として、幼児に対する捉え方や関わり方が回数を重ねるのに伴いどのように変化するかについて、考察を進めている。
固体酸化物形燃料電池材料の開発

ブラウンミレライト型構造を有するBa_2In_2O_5は、高温で欠陥ペロブスカイト構造に転移し、高い酸化物イオン導電性を示すことから、高機能を有する新規固体イオニクス材料として期待されている。本研究ではBa_2In_2O_5を固体酸化物形燃料電池の空気極に適用することを目的とし、遷移金属を添加することによって酸化物イオン導電性と電子導電性とを併せ持つ混合導電性酸化物材料の開発を行なった。BaIn_<1-x>M_xO_<3-δ>(M=Ti,V,Cr,Mn,Fe,Co,Ni,Cu)を固相反応法により950-1300°Cで合成したところ、添加した遷移金属の種類および量にしたがって斜方晶、正方晶、立方晶の酸化物となった。BaIn_<0.8>M_<0.2>O_<3-δ>(M=Ti,V,Cr,Mn,Fe,Co,Ni,Cu)の空気雰囲気における全導電率を600°Cから1000°Cの範囲にわたって測定したとき、M=Coの場合は立方晶-正方晶の構造転移に伴う導電率のアレニウスプロットにおいて不連続な変化が見られたが、その他の場合はBa_2In_2O_5で見られるような導電率の急激な変化は見られなかった。見かけ上の活性化エネルギーは、Ba_2In_2O_5の高温相では115kJmol^<-1>であったが、BaIn_<0.8>M_<0.2>O_<3-δ>(M=Fe,Co)では、925°Cでおよそ60kJmol^<-1>であり、酸化物イオン以外の導電担体の存在が示唆された。P_<O2>=10^2-10^5Paの雰囲気で全導電率を測定すると、M=Mnの場合は電子と酸化物イオンの混合導電であり、また、その他の場合はホールと酸化物イオンの混合導電であることが示された。見かけ上の活性化エネルギーは、Ba_2In_2O_5の高温相では115 kJ mol^<-1>であったが、BaIn_<0.8>M_<0.2>O_<3-δ>(M=Fe,Co)では、925°Cでおよそ60 kJ mol^<-1>であり、酸化物イオン以外の導電担体の存在が示唆された。Po_2=10^2-10^5Paの雰囲気で全導電率を測定すると、M=Mnの場合は電子と酸化物イオンの混合導電であり、また、その他の場合はホールと酸化物イオンの混合導電であることが示された。見かけ上の活性化

エネルギーは、Ba_2In_2O_5の高温相では115kJmol^<-1>であったが、BaIn_<0.8>M_<0.2>O_<3-δ>(M=Fe,Co)では、925°Cでおよそ60kJmol^<-1>であり、酸化物イオン以外の導電担体の存在が示唆された。P_<O2>=10^2-10^5Paの雰囲気で全導電率を測定すると、M=Mnの場合は電子と酸化物イオンの混合導電であり、また、その他の場合はホールと酸化物イオンの混合導電であることが示された。
人体装着ロボットのワイヤレス制御のための高感度人体通信型生体センサーの研究

人体装着ロボットでは,脳から筋肉を通じ発する微弱な電気信号を電極の有するセンサーで検出し,制御マイコンやモーター等を駆使してロボットに必要なさまざまな動作をさせる.本研究では,1生体センサーに重畳する電磁ノイズの発生機構をモード変換理論により解析し,コモン・モードノイズ自動キャンセル技術を開発する;2人体自身を伝送路とする人体通信を利用し,耐電磁干渉性の高い広帯域人体通信技術を開発する.これにより,人体装着ロボットのワイヤレス制御に不可欠な要素技術として,耐ノイズ性高感度人体通信型生体センサー技術を確立させる.また,人体装着ロボット特有の電磁両立性(EMC)問題の解明と試験法の確立を推進する.人体装着ロボットでは,脳から筋肉を通じ発する微弱な電気信号を電極の有するセンサーで検出し,制御マイコンやモーター等を駆使してロボットに必要なさまざまな動作をさせる.本研究では,1生体センサーに重畳する電磁ノイズの発生機構をモード変換理論により解析し,コモン・モードノイズ自動キャンセル技術を開発する;2人体自身を伝送路とする人体通信を利用し,耐電磁干渉性の高い広帯域人体通信技術を開発する.これにより,人体装着ロボットのワイヤレス制御に不可欠な要素技術として,耐ノイズ性高感度人体通信型生体センサー技術を確立させる.また,人体装着ロボット特有の電磁両立性(EMC)問題の解明と試験法の確立を推進する.
トランスジェニックマウスを用いた創傷治癒機構の解明

マクロファージ遊走阻止因子,MIFは活性化T細胞から産生されマクロファージの遊走を阻止する因子として発券された最初のサイトカインであるにも関わらす,今なおその機能に不明な点が多いタンパクである.これまでMIFが皮膚創傷部位で発現が上昇していることが明らかとした.そこで,MIFの機能を追及するため,transgenic(以下Tg)マウスを作成した.このマウスでは血清中のMIFが通常のマウスの510倍の高濃度で存在すること,また心臓,肝臓,腎臓,膵臓および皮膚におけるMIFとそのmRNAが過剰発現していることを確認した.創傷治癒機構におけるMIFの役割を解析するため,新生Tgマウスより初代培養にて得た皮膚線維芽細胞を用い細胞増殖およびFas刺激によるapoptosis誘導試験を行い,正常皮膚の線維芽細胞を対象に検証した.その結果,細胞増殖には有意差を認めなかったが,TgではFas誘導apoptosisに対し耐性を示すことが分かった.一方,ケロイドは過剰な創傷治癒反応により生じると考えられているが,これについて,MIFの発現および病態に果たす役割について検討した.その結果,ケロイドにおいては成熟瘢痕ならびに正常皮膚に比して非常に強いMIFおよびそのmRNAの発現を認めた.ケロイド由来線維芽細胞においても正常皮膚由来線維芽細胞の数倍という強いMIF mRNAの発現が認められた.そこで,siRNAを用い細胞内MIFの抑制を行い,このMIFがケロイドの病態に果たす役割を検討した結果,MIF knockdownにより細胞増殖とI型コラーゲンの発現が有意に抑制された.したがってケロイドにおいて強発現している細胞内MIFが細胞増殖亢進と細胞外基質過剰産生というケロイドの主要病態の形成に深く関与していることが明らかとなり,有効な治療のターゲットとなり得る可能性が期待される.マクロファージ遊走阻止因子,MIFは活性化T細胞から産生されマクロファージの遊走を阻止する因子として発券された最初のサイトカインであるにも関わらす,今なおその機能に不明な点が多いタンパクである.これまでMIFが皮膚創傷部位で発現が上昇していることが明らかとした.そこで,MIFの機能を追及するため,transgenic(以下Tg)マウスを作成した.このマウスでは血清中のMIFが通常のマウスの510倍の高濃度で存在すること,また心臓,肝臓,腎臓,膵臓および皮膚におけるMIFとそのmRNAが過剰発現していることを確認した.創傷治癒機構におけるMIFの役割を解析するため,新生Tgマウスより初代培養にて得た皮膚線維芽細胞を用い細胞増殖およびFas刺激によるapoptosis誘導試験を行い,正常皮膚の線維芽細胞を対象に検証した.その結果,細胞増殖には有意差を認めなかったが,TgではFas誘導apoptosisに対し耐性を示すことが分かった.一方,ケロイドは過剰な創傷治癒反応により生じると考えられているが,これについて,MIFの発現および病態に果たす役割について検討した.その結果,ケロイドにおいては成熟瘢痕ならびに正常皮膚に比して非常に強いMIFおよびそのmRNAの発現を認めた.ケロイド由来線維芽細胞においても正常皮膚由来線維芽細胞の数倍という強いMIF mRNAの発現が認められた.そこで,siRNAを用い細胞内MIFの抑制を行い,このMIFがケロイドの病態に果たす役割を検討した結果,MIF knockdownにより細胞増殖とI型コラーゲンの発現が有意に抑制された.したがってケロイドにおいて強発現している細胞内MIFが細胞増殖亢進と細胞外基質過剰産生というケロイドの主要病態の形成に深く関与していることが明らかとなり,有効な治療のターゲットとなり得る可能性が期待される.MIFは、活性化T細胞から産生されマクロファージの遊走を阻止する因子として1966年に発見された最初のサイトカインであるにもかかわらず、いまなおその機能に不明な点が多いタンパク質である。我々は動物を用いた実験において、MIFが皮膚の創傷部位で発現が上昇しており、抗MIF抗体の投与によって治癒が遷延したことから、創傷治癒において重要な因子として機能していることを明らかとした。そこで、MIFの機能をさらに追及するため、ICRマウスを用いてMIFの遺伝子を導入し過剰発現させたトランスジェニックマウスtransgenic mouse(以下Tgマウス)を作成した。MIFトランスジェニックマウスでは血清中のMIFが通常のマウスの510倍の高濃度で存在することをELISA法にて確認した。また、Western blot法およびNorthern blot法を用いて、心臓、肝臓、腎臓、脾臓、そして皮膚におけるMIF蛋白およびMIFmRNAを同定した結果、いずれも過剰発現していることを確認した。次に、Tgおよびnon-Tgの新生マウスより皮膚線維芽細胞の初代培養をexplant法にて行い、細胞増殖およびFas刺激によるアポトーシス誘導試験を行い比較した。その結果、細胞増殖には有意な差は認められなかったが、抗Fas抗体を用いたアポトーシス誘導では、Tgマウス由来線維芽細胞がnon-Tgマウス由来線維芽細胞に比し、耐性を示すことが分かった。今後、MIFの過剰発現がFasのシグナル伝達系のどの部分に影響を与えているのかを、リン酸化を特異的に認識するモノクローナル抗体を用いたWestern blot法を用いて解析を進めていく予定である。マクロファージ遊走阻止因子,MIFは活性化T細胞から産生されマクロファージの遊走を阻止する因子として発券された最初のサイトカインであるにも関わらず,今なおその機能に不明な点が多いタンパクである.

これまでMIFが皮膚創傷部位で発現が上昇していることが明らかとした.そこで,MIFの機能を追及するため,transgenic(以下Tg)マウスを作成した.このマウスでは血清中のMIFが通常のマウスの510倍の高濃度で存在すること,また心臓,肝臓,腎臓,膵臓および皮膚におけるMIFとそのmRNAが過剰発現していることを確認した.創傷治癒機構におけるMIFの役割を解析するため,新生Tgマウスより初代培養にて得た皮膚線維芽細胞を用い細胞増殖およびFas刺激によるapoptosis誘導試験を行い,正常皮膚の線維芽細胞を対象に検証した.その結果,細胞増殖には有意差を認めなかったが,TgではFas誘導apoptosisに対し耐性を示すことが分かった.一方,ケロイドは過剰な創傷治癒反応により生じると考えられているが,これについて,MIFの発現および病態に果たす役割について検討した.その結果,ケロイドにおいては成熟瘢痕ならびに正常皮膚に比して非常に強いMIFおよびそのmRNAの発現を認めた.ケロイド由来線維芽細胞においても正常皮膚由来線維芽細胞の数倍という強いMIF mRNAの発現が認められた.そこで,siRNAを用い細胞内MIFの抑制を行い,このMIFがケロイドの病態に果たす役割を検討した結果,MIF knockdownにより細胞増殖とI型コラーゲンの発現が有意に抑制された.したがってケロイドにおいて強発現している細胞内MIFが細胞増殖亢進と細胞外基質過剰産生というケロイドの主要病態の形成に深く関与していることが明らかとなり,有効な治療のターゲットとなり得る可能性が期待される.
一酸化窒素合成酵素の眼内血管新生における役割

我々は昨年度でVEGFトランスジェニックマウス(VEGFtg)、レーザー光凝固による脈絡膜新生血管モデル、低酸素網膜症モデルの3つの動物における眼内血管新生モデルを作成して、eNosがKOされた状態ではそれぞれの新生血管が阻害されることを証明した。本年度はiNos KOとnNos KOの上記新生血管の抑制効果を検討た。1)VEGF transgenic mouseとiNos KOとnNos KOを交配してVEGF trans geneを持ったノックアウト動物を作成し、生後21日でフルオレセインデキストランを左心室から注入して屠殺し、眼球を摘出して固定後、網膜を単離してスライドグラス上にフラットマウントし、発生した網膜新生血管の数、大きさ、平均面積を定量してコントロールと比較する。eNos KO同様、iNos KOとnNos KOマウスともに、VEGFによる新生血管が、数、大きさ、平均面積のすべてにおいて有意に抑制された。2)6から8週齢のiNos KOとnNos KOを、全身麻酔下にクリプトンレーザーで眼底に強度光凝固を行って脈絡膜新生血管を誘導し、レーザー後2週で眼球摘出してできた脈絡膜新生血管の大きさを定量して比較する。eNos KOでは有意差はなかったが、iNos KOとnNos KOにおいては脈絡膜新生血管が有意に抑制されることがわかった3)生後7日のiNos KOとnNos KOの新生児マウスを母親とともに75%の高濃度酸素に五日間暴露し、その後、大気酸素濃度に戻して五日間放置して低酸素網膜症を発生させる。生後17日目で屠殺後眼球摘出し、できた網膜新生血管を定量してコントロールと比較する。iNos KOとnNos KOでは有意差はなかったが、eNos KOでは有意に網膜新生血管を抑制することがわかった。一酸化窒素合成酵素(以下NOs)の眼内血管新生に対する影響を調べるためにレーザー光凝固による脈絡膜新生血管、低酸素網膜症、VEGFトランスジェニックマウスによる網膜新生血管の発生の3つの眼内新生血管発生モデルについて検討を行っている。NOsはiNOs,eNOs,nNOs3つのsubtypeからなるが、平成12年度はeNOsについての検討を行った。eNOsのノックアウトマウスを準備し、クリプトンレーザーを使って強度レーザー光凝固を行い、脈絡膜新生血管を発生させ、2週間後に眼球摘出して出来た脈絡膜新生血管の大きさを定量して比較した。対照群としてeNOsのへテロザイゴスを用いた。脈絡膜新生血管の大きさはeNosノックアウトマウスでは対照群と比較して有意に小さかった。次に、低酸素網膜症を誘導して出来た網膜新生血管の大きさを比較したeNosノックアウトマウスでは対照群と比較して網膜新生血管の発生が有意に抑制されていた。さらに、VEGFが網膜視細胞で多量に発現するように遺伝子導入を行ったVEGFトランスジェニックマウス(以下VEGFtg)とeNOsノックアウトマウスをかけあわせる実験をおこなった。VEGFtgはへテロザイゴスでも網膜内層から網膜色素上皮細胞層に向かって網膜新生血管が発生する。eNOsノックアウトマウスではVEGFによる新生血管の発生がその数、面積共に少ない結果であった。これらの事から、eNOsに関する限り、眼内新生血管発生に重要な役割を果たしている事が証明された。今後、他のsubtypeについての検討を行っていく予定である。