hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
運動選手が風邪を引きやすい理由の解明

運動選手は風邪を引きやすいと言われるように,いわゆる行動体力の高い運動選手や活動的な学生の上気道感染率は高い.この状況を免疫で説明することは難しい.むしろ,長期的にはトレーニング実施による防衛体力の向上があったとしても,低温環境下での身体運動という環境への暴露の増加が感染リスクを高めていると予想される.運動選手に風邪の罹患が多いことが,トレーニング時の上気道の血流量低下と関連するとの仮説を検証するために,運動時および運動後に上気道部の血流が低下するかどうかについて検討した.昨年度は,心拍数100140拍/分相当強度の自転車エルゴメータ運動時には上気道部の血流はほとんど変化しないことを観察したことから,今年度は疲労困憊に至る強度での運動時の上気道部の血流を観察した.健常成人男女11名に,自転車エルゴメータ運動を疲労困憊にいたるまで行わせた.運動前および運動終了5分,10分後の上気道部の血流をレーザースペックルフローグラフィーを用いて,計測した.その結果,上気道部の血流は運動前値と比較して,運動終了後10分後まですることはなかった.このことから,本研究では血流減少と上気道感染との関連は明示されなかった.補足的ではあるが,舌部では120, 140拍/分強度の運動時に観察されたのと同様に,高強度運動後にも血流低下が観察されたことを追記しておく.本研究の限界としては,高強度運動時に上気道部の血流を観察することが極めて困難であるため,運動後の観察にとどまる点,また呼吸に伴う気道部温度の影響も微弱ではあるものの観察された.風邪(上気道感染症)は8090%がウィルス感染であり,多くの風邪に抗生物質は無効である.したがって,風邪の罹患率を増減させる要因の解明や予防法の確立は重要である.運動選手は風邪を引きやすいと言われるように,いわゆる行動体力の高い運動選手や活動的な学生の上気道感染率はむしろ高い(Jカーブ説).行動体力の高い者が防衛体力に劣るという一見矛盾した状況を免疫で説明することは難しい.むしろ,長期的にはトレーニング実施による防衛体力の向上があったとしても,低温環境下での身体運動という環境への暴露の増加が感染リスクを高めていると予想される.本年度は,風邪の罹患が運動選手に多いことが,免疫機能の低下よりもむしろトレーニング時の上気道の血流量低下と関連するとの仮説を検証するために,運動時および運動後に上気道部の血流が低下するかどうかについて検討した.まず,レーザースペックルフローグラフィーを用いて運動中に上気道部および舌部の血流を計測する方法を確立した.その後,健常成人男女11名に,心拍数が100,120,140拍/分相当の強度での自転車エルゴメータ運動を20分間行わせ,その際の上気道部および舌部の血流を計測した.その結果,上気道部の血流は100拍/分強度の運動時に増加することはあったが,運動終了10分後までも含めて減少することはなかった.ところが,舌部で120,140拍/分強度の運動時には血流の低下が観察された.舌部では血流が減少したものの,上気道部については血流が減少しなかったことから,本研究では血流減少と上気道感染との関連は明示されなかった.運動選手は風邪を引きやすいと言われるように,いわゆる行動体力の高い運動選手や活動的な学生の上気道感染率は高い.この状況を免疫で説明することは難しい.むしろ,長期的にはトレーニング実施による防衛体力の向上があったとしても,低温環境下での身体運動という環境への暴露の増加が感染リスクを高めていると予想される.運動選手に風邪の罹患が多いことが,トレーニング時の上気道の血流量低下と関連するとの仮説を検証するために,運動時および運動後に上気道部の血流が低下するかどうかについて検討した.昨年度は,心拍数100140拍/分相当強度の自転車エルゴメータ運動時には上気道部の血流はほとんど変化しないことを観察したことから,今年度は疲労困憊に至る強度での運動時の上気道部の血流を観察した.健常成人男女11名に,自転車エルゴメータ運動を疲労困憊にいたるまで行わせた.運動前および運動終了5分,10分後の上気道部の血流をレーザースペックルフローグラフィーを用いて,計測した.その結果,上気道部の血流は運動前値と比較して,運動終了後10分後まですることはなかった.このことから,本研究では血流減少と上気道感染との関連は明示されなかった.補足的ではあるが,舌部では120, 140拍/分強度の運動時に観察されたのと同様に,高強度運動後にも血流低下が観察されたことを追記しておく.本研究の限界としては,高強度運動時に上気道部の血流を観察することが極めて困難であるため,運動後の観察にとどまる点,また呼吸に伴う気道部温度の影響も微弱ではあるものの観察された.
高励起分子スペクトルによる動的収縮期にある高密度分子ガス塊の探査

本年度は「なんてん」を用いていくつかの領域(Orion, Monocles, Carina)において、C^<18>O, HCO^+, H^<13>CO+(J=1-0)分子スペクトルでの高密度分子雲探査を行い、星形成の可能性が高い分子雲をいくつか検出した。また、パイプ星雲内に存在する小規模星団形成領域、B59、に対する野辺山45m望遠鏡のH^<13>CO^+観測から、原始星形成段階以前の10太陽質量程度の超高密度分子雲ガス塊を検出した。そのスペクトルが極めて強いことから、おうし座で発見したMC27の様な、原始星コア形成直前に非常に近いガス塊が存在している可能性が極めて高く、早期のサブミリ波による観測が必要不可欠である。既に形成されている原始星はこのガス塊を取り囲むように存在しており、このことは、同じ分子雲コアの中でも必ずしも星が全て同時期に形成されるわけではないことを示している。また、フランスのP. Andre氏(Service d'Astrophysique, CEA/DSM/DAPNIA)、MPIの立原研吾氏との共同研究で、IRAM 30m鏡を用いたサブミリ波117素子ボロメータMAMBO2による、おうし座、へびつかい座、B59領域の高密度ガス塊方向のサブミリ波連続波観測を始めた。この観測により、MC27に近い段階の候補天体を2,3見つけることが出来た。これらの天体については、高励起の分子スペクトルによる観測を予定している。もともと予定されていた「なんてん」の主鏡交換作業が来年度に再延期になったため、200GHz帯の受信器を同望遠鏡に設置することは出来なかった。しかし、230GHzの受信器については、実験室での開発は終了し、大気観測用の受信器として常時稼働するようになった。主鏡交換作業終了後、直ちに搭載することは可能になった。このような状況のため、高密度分子雲の高励起分子線スペクトルによる観測は出来なかったが、上で述べたように、45m鏡、MAMBO2などを用いた観測により、星形成直前の分子ガス塊の性質を詳しく調べることが可能となった。本年度は最初に、C^<18>O分子雲コア探査のためのガイドマップとなる^<12>COによる分子雲探査を行った。これは、「なんてん」に搭載されている受信機が^<12>COスペクトル用に設定されていたためである。観測は、高銀緯領域にある我々に近い分子雲や、AquilaからCrA領域にアーク状に伸びている分子雲複合体の観測を行ってきた。これらの結果、10個を超える今までにマッピングされていない分子雲を検出でき、さらに、C^<18>Oが検出される可能性の高い^<12>COスペクトルの強度の強い分子雲も何個か見つかった。また、^<12>COスペクトルの強度が比較的強い高銀緯分子雲、MBM53,54,55複合体のC^<18>Oによる分子雲コア探査も行った。その結果、有意なC^<18>Oスペクトルを検出することはできず、この分子雲複合体は、比較的形成初期の分子雲であることが明らかになった。H^<13>CO^+スペクトルでは、へびつかい座ρ星の近傍にあるサイズが0.数パーセク以下と極めてコンパクトなC^<18>Oコアの観測を行った。その中心部はH^<13>CO^+スペクトルにおいても強度が強く、そこで星形成がまもなく起こる、もしくは、既に極めて若い段階の原始星が生まれている可能性が極めて高い。また、ρ星による影響を受けて、密度が高まった兆候が見られる。一方、「なんてん」望遠鏡に搭載予定であった230,280GHz帯受信機は、同時に行う予定であった望遠鏡の主鏡交換作業が来年度のチリの夏に延期されたため、設置することができなかった。新しい主鏡は、200GHz以上の周波数の電波においても減衰が極めて少なく、230,280GHz帯受信機の性能を発揮するには必要不可欠である。

これらの天体については、高励起の分子スペクトルによる観測を予定している。もともと予定されていた「なんてん」の主鏡交換作業が来年度に再延期になったため、200GHz帯の受信器を同望遠鏡に設置することは出来なかった。しかし、230GHzの受信器については、実験室での開発は終了し、大気観測用の受信器として常時稼働するようになった。主鏡交換作業終了後、直ちに搭載することは可能になった。このような状況のため、高密度分子雲の高励起分子線スペクトルによる観測は出来なかったが、上で述べたように、45m鏡、MAMBO2などを用いた観測により、星形成直前の分子ガス塊の性質を詳しく調べることが可能となった。
戦後日本における保育者のライフヒストリーに関する研究

本研究では、方法としてのライフヒストリーを検討した後、戦後の保育所における保育内容や「ララ物資」などの救援物資、保育者養成の実態を文献・資料等によって明らかにした。さらに、全国17都道府県において元保育者への詳細なインタビュー調査を実施して、職業選択の要因、「生きがい」の構成要素、人生の転機や挫折・困難の経験について分析をおこなった。また保育者が考える専門性や保育者にとっての「戦争」の意味を考察した。平成20年度は、以下のような手順で研究が進められた。1)調査の前提となる作業-(1)ライフヒストリー研究の方法論の確認、(2)戦中・戦後の保育所や幼稚園の状況と保育内容、保育者養成に関する歴史的資料の収集と整理、(3)キャリア形成に関する主要文献の整理・検討、をおこなった。その後、2)調査対象者の選定と調査の依頼、調査の目的や方法の説明等を経て、元保育者(現役の保育者を含む)を対象に、全国17都道府県で聞き取り調査を実施した。戦中・戦後の保育を知る元保育者にインタビューすることを目標にしたため、調査対象者の年齢を原則70歳以上と設定し、依頼した対象者の病気や体調不良によるキャンセルもあいついだなか調査実施は困難をきわめたが、33人のケースを収集することができた。3)インタビュー調査と並行して、可能な限り、対象地域の保育関連団体が作成した記念誌などの資料収集もおこなった。また、対象者の平均年齢がおよそ77歳であることから、初めての就労時期である1950年当時の女性の就労状況や賃金等の労働状況、保育所・幼稚園の概況などの基礎データ収集や資料の確認をした。詳しいケース分析は、平成21年度におこなうが、職業選択の動機や要因、他者の影響などについて分析が始まっている。職業選択の動機が、現代に多く見られる「能力や個性を活かすこと」などと比べて、他者からの勧めや戦争など社会的影響を受けていること、保母(保育士)資格の取得方法が、養成校卒業よりも講習会や研修を経ての受験によるものが多かったことなどが、明らかになっている。平成21年度は、各自の課題に即して以下の研究を行なった。1)方法論の検討-ライフヒストリーとライフストーリーとの相違(亀崎)、2)戦後混乱期の保母養成と草創期の保育所の状況-保母資格や講習会に関する歴史的資料の収集と整理、当時の保育実践の確認(松本)、3)保育者にとっての「戦中」と「戦後」の意味の検討(岩崎)などである。それぞれの研究成果が論文として大学の研究紀要に発表された。亀崎は、方法論としてのライフヒストリーとライフストーリーとが持つ共通点と相違点を、桜井厚の文献をてががりとして詳細に分析した。松本は、児童福祉法に示された理念が児童福祉の発展に寄与すると期待されたものの一般の人びとや保育関係者にまで浸透したとは言いがたいこと、戦後草創期の保育所が母親の就労を援助する役割を戦前の託児所から継承してきたこと、保母資格の規定によって保育現場の資格取得への意欲が高かったことなどを明らかにした。岩崎は、インタビュー対象者のなかで比較的年齢の高い4人のライフコースにおける(1)歴史時間(2)社会時間(3)個人時間を検討し、彼女らの語りに表れた戦争に関わる出来事や想いについて考察を加え、戦争による「喪失」から保育者として生きることによって再生を果たした女性たちの姿を描き出した。また、富田による保育者の専門性の研究も現在進行中である。詳しいケース分析は平成22年度におこなうが、中間報告書として、インタビュー調査を質問項目ごとに整理した事例集『保育者30人のライフヒストリー』(全422ページ)を刊行し、調査協力者(対象者と紹介者)に配布した。平成22年度はプロジェクトチームメンバー各自の研究課題に即した内容を定例の研究会で報告し、その後研究紀要等に論文として発表した。亀崎は、保育所関連法規や行政による指導書・参考書を素材として、敗戦から保育所保育指針発行に至る20年間の保育所の保育内容を検討した。結果として、当時の保育の基本原理は自由遊びであること、養護的側面が高い割合を占めていたこと、家庭指導が保育内容として位置づけられていたことが明らかになった。松本は、インタビューデータのなかの保育者の生きがいに着目し分析した。その結果、保育者たちの生きがいの構成要素として、(1)人とのつながり、(2)未来とのつながり、(3)他者からの評価と感謝、(4)自分自身の成長、(5)子どもの傍らにいることの5つが理解された。富田は、保育者の専門性について、全国保育士会による「研修体系」を参考としながら考察を加えた。保育士の専門性の基盤として、愛情、観察力、創造力を答えた回答が多かったこと、専門性としては、ひとりひとりの子どもの発達保障、社会の動向や変化を知ることなどが、インタビュー結果から導き出された。

岩崎は、元保育者たちが直面した挫折や困難が、(1)人間関係、(2)能力・専門性不足、(3)社会変動に伴う困難、(4)低待遇、(5)家庭(子育て)との両立の5種類であり、人とのつながりを生きがいにしているにもかかわらず、それらが阻害されたりかなわなかった場合にもたらされたものであることを明らかにし、あわせて人生の転機についての考察をおこなった。また、8月にスウェーデンで開催されたOMEP世界大会において岩崎と松本が研究成果の一部をポスター発表として報告し、年度末には3年間の研究成果を報告書(メンバー4人による9本の論文を掲載)として刊行した。
ラミニン及びラミニンレセプターmRNA定量による大腸癌転移予知に関する研究

当研究施設において切除された大腸癌切除標本の癌部および非癌部よりmRNAを抽出し、それぞれに対しラミニン(LN)A鎖、B1鎖、B2鎖およびラミニンレセプター(LBP32)のDNAプローブを用いてノーザンブロット法を行った。オートラジオグラフィーで検出されたmRNAはデンシトメーターで数値化し、同一検体におけるβ-actin mRNAに対する比をもって各mRNAの発現量とした。1.LN mRNAの発現(対象17例)LN B1鎖のmRNAが全例の非癌部に検出されたが、癌部ではいずれのプローブによってもmRNAは検出されなかった。2.LBP32 mRNAの発現(対象64例)LBP32 mRNAは全例の癌部および非癌部に検出され、以下の結果を得た。(1)LBP32 mRNAの発現量の平均値は、癌部が非癌部に比し有意に高値であった(p<0.005)。(2)LBP32 mRNAの発現量は、壁深達度においてss、al症例がpm以下の症例に比し有意に多く(p<0.05)、静脈侵襲陽性例と肝転移陽性例は陰性例に比べ多い傾向が認められた。(3)治癒切除がなされたDukes B症例(19例)とDukes C症例(25例)では、LBP32 mRNAの発現量と肝転移再発および肺転移再発との間に相関は認められなかった。結論大腸癌の肝転移再発の予知という点においては、ラミニン、ラミニンレセプターmRNAの定量に比べ、MMPs、TIMPs mRNAの定量がより有用となる可能性があると考えられた。1.大腸癌におけるラミニンmRNAの発現の検討ラミニンA鎖、B1鎖、B2鎖DNAをプローブとして、大腸癌切除症例17例の切除標本における癌部および非癌部より抽出した全RNA、オリゴdTセルロースカラムにてさらに精製したpoly A RNA(mRNA)についてノーザンブロットを行い、同遺伝子の発現の有無について検討した。B1鎖については、検討した17例全例の非癌部に発現が認められたが、癌部においてはその発現は検出されなかった。また、A鎖、B2鎖はいずれも、検討した症例において癌部、非癌部ともにその発現は検出されなかった。これらの結果から、ラミニンmRNAの発現が、癌部において非常に少ないか、その分解速度が亢進している可能性が考えられた。2.大腸癌におれるラミニンレセプターmRNAの発現の検討32kdラミニンレセプター蛋白をコードするDNAをプローブとして、大腸癌切除症例26について1.と同じ方法により、癌部、非癌部における同遺伝子のmRNAの発現を検討した。同mRNAの発現は、検討した26例全例に認められた。その発現量をデンシトメーターを用いて数量化し、癌部と非癌部の比を計算すると、70%の症例で癌部が非癌部に比べ発現量が増していた。26例を、癌部における発現量が多かった20例(+群)と少なかった6例(-群)に群別し、臨床病理学的諸因子との関係を検討した結果、癌の深達度がs,a2以上の症例は+群8例/20例、-群1例/6例、静脈侵襲陽性例は+群6例/20例、-群0/6例、肝転移陽性例は+群4例/20例、-群0/6例と、+群が-群に比べ局所浸潤、肝転移ともに高頻度である傾向が認められた。これらの結果は、大腸癌の肝転移予知因子としてのラミニンレセプターmRNA定量の有用性を示唆しているものと考えられた。大腸癌におけるラミニンレセプターmRNAの発現の検討32Kdのラミニンレセプター蛋白(LBP32)をコードする

DNAプローブおよび対象としてbetaアクチン(beta-actin)のDNAプローブを用いて、大腸癌切除症例64例(平成4年度の26例に平成5年度の38例を加えた)の切除標本の癌部および非癌部より抽出したmRNAについてノーザンブロツトを行い、その発現量をデンシトメーターで数値化し、癌部と非癌部の発現量を比較した。LBP32の発現量(LBP32/beta-actin)の平均値は、癌部で1.395、非癌部で0.896であり、癌部において有意に発現の亢進が認められた(p<0.005)。また、直腸癌は結腸癌に比べ有意に発現量が多かった。(p<0.001)。壁深達度別にみると、ss,a_1症例はpm以下の症例に比べ有意に発現量が多かった(p<0.05)。しかしながら、静脈侵襲、リンパ節侵襲、リンパ節転移および同時性肝転移に関しては、その有無による発現量の差は認められなかった。また、組織型についても差は認められなかった。治癒切除後の肝転移再発に関しては、観察機関が短いため現在の時点では一定の傾向は得られていない。(1)大腸癌の癌部及び非癌部におけるラミニンレセプター(LBP32)mRNAの発現大腸癌切除症例64例の癌部及び非癌部におけるLBP32mRNAの発現量(LBP32mRNA/β-actinmRNA)の平均値は、癌部で1.40、非癌部で0.90で癌部に対して有意に発現の亢進が認められた。(p<0.005)また直腸癌は結腸癌に比べ、有意に発現の亢進が認められた。(p<0.001)。(2)病理学的因子との関係LBP32mRNAの発現量と病理学的諸因子との関係では壁進達度においてss、al症例がpm以下の症例に比べ有意に発現量が多かった(p<0.05)が、組織型、リンパ管侵襲、静脈侵襲、リンパ節転移及び同時性肝転移に関しては、その有無による発現量の差は認められなかった。(3)血行性転移再発との関係DukesB及びCの症例で治癒切除がなされた43例についてLBP32mRNAの発現量と血行性転移再発との関係を検討した。現在までに再発が認められない症例のLBP32mRNAの発現量の平均値は、DukesB症例2.18、DukesC症例1.74、肝又は肺転移再発が認められた症例の平均値は、DukesB症例1.96、DukesC症例1.48であり、非再発、再発例の間でLBP32mRNAの発現量に差は認められていない。
歯の萌出における転写因子活性制御の分子生物学的解析

本研究は、歯の発生の仕組みを明らかにするために、転写調節因子のひとつであるカルシニューリンについて着目し、歯胚形成期におけるカルシニューリンの発現について検索を行った。歯胚の分化期である蕾状期から鐘状期のではカルシニューリンは、歯性上皮由来の細胞、外胚葉性間葉由来の細胞両方において発現が確認された。以上のことからカルシニューリンは、歯の発生・分化過程において必要なシグナル分子として作用していることが示唆された。本年度は、歯の萌出にカルシニューリンがどのように関与しているのかを免疫組織化学法およびin situ hybridization法を用いて検討した。生後1、3、7、14、21、28日齢のマウスを4%パラホルムアルデヒドーリン酸緩衝液にて灌流固定し、歯胚領域を含む顎顔面部を摘出した。得られた試料はそれぞれEDTAによる脱灰過程の後、パラフィンにて包埋し、歯胚領域を含む厚さ5μmのパラフィン切片を作成した。その後、カルシニューリンAサブユニット(Aalpha、Abeta、Agamma)に対するウサギポリクローナル抗体(北海道大学大学院医学研究科解剖発生学講座より供与)を用いて、パラフィン切片の免疫組織化学的染色を行った。すべての発育段階において、歯胚領域を含む広い領域でカルシニューリンAalphaおよびAbetaサブユニットの発現が認められた。しかし、カルシニューリンAgammaサブユニットの発現は認められなかった。一方、未脱灰凍結切片を用いたアイソトープ(P^<33>)によるin situ hybridization法および未脱灰パラフィン切片を用いた免疫組織化学法においては、歯胚領域にカルシニューリンAgammaサブユニットの発現が認められた。しかし、これらの結果は非特異的反応である可能性が否定できないため、カルシニューリンAgammaサブユニットのDIGラベリングcRNAプローブを用いて、脱灰パラフィン切片のin situ hybridization法を行った。その結果、カルシニューリンAgammaサブユニットの発現は確認できなかった。これら未脱灰試料と脱灰試料との発現確認の差異は、試料作成時の脱灰操作による検出感度低下の可能性があるため、試料作成方法の詳細を検討する必要があると考えられた。カルシニューリンは、様々な転写因子の制御を行い、細胞内情情報伝達機構に関わる重要な分子である。本研究ではカルシニューリンが歯の発生・形成過程のどの時期に、また、どの細胞に発現しているかを組織学的に解析することにより、歯の発生・分化過程におけるカルシニューリンの役割を解明することを目的し、以下の実験を行った。硬組織が形成される歯胚の発生段階のマウスから歯胚領域を含む顎体部を摘出し、得られた試料について作成した切片を用いて免疫組織化学法を行い、カルシニユーリンの各subunitの発現解析を行った。カルシニューリンA alpha、カルシニューリンA betaに関してはすべての発育段階において歯胚領域を含む広い領域で発現が認められたが、カルシニューリンAgammaは発現を確認することができなかった。カルシニューリンAgammaに関して脱灰パラフィン切片を用いたアイソトープ(P^<33>)によるin situhybridization法を行ったが、特異的な発現は認められなかった。免疫染色の解析と合わせて、カルシニューリンA gammaは歯胚には発現していないという結論に達した。調節subunitであるカルシニューリンAb1は歯胚領域に発現がみられたが、カルシニューリンA b2に関しては歯胚には発現が認められなかった。発現領域については、細胞や組織の分化期である蕾状期から鐘状期の歯胚ではカルシニューリンA alpha、カルシニューリンAbeta、カルシニューリンA b1は、歯性上皮由来の細胞、外胚葉性間葉由来の細胞両方において発現がみられた。硬組織形成期においてはエナメル芽細胞、中間層細胞、象牙芽細胞、歯髄細胞に発現がみられた。それぞれのsubunitは、同じ細胞に発現していたが、発現している細胞での局在位置は異なっていた。
リソソーム酵素と基質類似体との分子間作用の熱力学的・構造学的研究と新規治療法開発

ファブリー病やポンペ病に対するシャペロン治療薬開発に役立てるため、当該酵素とその基質類似体との分子間作用について、等温滴定カロリメトリーや表面プラズモン共鳴法で解析し、熱力学的および動力学的パラメータを決定した。さらに、構造学的解析を行い、化合物本体は、酵素の活性ポケット内の残基と、その側鎖はポケットの壁を構成する残基と結合することを示した。これらの情報を基に、変異酵素を安定化する新規化合物を見出した。本研究は、シャペロン療法の開発に役立つと期待される。リソソーム酵素とその基質類似体との分子間相互作用について、熱力学的および構造学的解析により両者の結合機構を明らかにして、リソソーム病に対する酵素増強治療薬開発のための基盤を構築することを目的として研究を行った。まず、リソソーム病の中でも最も発生頻度が高く、臨床的重要性が大きいファブリー病をターゲットとして、基礎的検討を行った。チャイニーズハムスター卵巣由来の細胞で生産したヒトα-ガラクトシダーゼ(GLA)と、その基質類似体である1-デオキシガラクトノジリマイシン(DGJ)およびガラクトスタチン・バイサルファイト(GBS)との結合反応を表面プラズモン共鳴法や等温滴定カロリメトリー法で解析した。DGJとGBSは、いずれもGLAとエンタルピー駆動的な反応性を示したが、結合定数はDGJの方がGBSよりも大きく、より強い結合能を示した。また、GLAと基質類似体との結合に関して、in silicoで構造学的に解析した所、DGJは、GLAの活性ポケット内に埋め込まれた形で入り込み、触媒アミノ酸残基を含む活性ポケット構成残基と水素結合すると考えられた。一方、GBSも、その本体はGLAの活性ポケットに入るが、その側鎖は活性ポケットの内壁に沿った形で存在し、この部分がGLAとの結合に影響を与えるものと予想された。次に、GLA変異体と基質類似体との分子間相互作用を調べるため、M51I変異を持つGLA(M51I-GLA)と野性型GLAとをメタノール資化性酵母で生産し、カラムクロマトグラフィー法で精製した。M51I-GLAは、野生型GLAと比較し、特異酵素活性や基質親和性は変わらなかったが、中性および酸性下で急速に活性を失い、不安定であった。リソソーム酵素とその基質類似体との分子間相互作用を解明すると共に、リソソーム病関連変異酵素と結合し、これを安定化する化合物を見つけて酵素増強治療薬を開発する目的で研究を行った。前年度に、野生型a-ガラクトシダーゼ(GLA)と1-デオキシガラクトノジリマイシン(DGJ)およびガラクトスタチン-バイサルファイト(GBS)との結合に関する熱力学的パラメータを決定した。今年度は、ファブリー病の病因遺伝子変異に基づくM51Iアミノ酸置換を持つ変異GLA(M51I-GLA)とDGJおよびGBSとの分子間相互作用を明らかにすべく、研究を進展させた。まず、酵母の発現系でM51I-GLAを大量生産し、酵母の培養液から本酵素をカラムクロマトグラフィーで精製した。この変異酵素は、野生型酵素に比べて、中性および酸性環境下で不安定であったが、DGJおよびGBSの添加により、安定化した。この変異酵素の特異活性やミカエリス定数は、野生型GLAのそれらと変わりはなかったが、in silicoでの構造解析により、触媒部位から離れた分子表面に小さな構造変化が起こっていると考えられた。そのため、この変異酵素は、活性低下は見られないが、コンフォーメーションの異常により不安定化し、細胞内で過剰分解されて病気が惹起されると考えられた。DGJやGBSは、変異酵素の活性ポケットに入り、安定化すると思われた。M51I-GLAとDGJおよびGBSとの分子間相互作用を調べるため、表面プラズモン共鳴法を用いて、中性および酸性条件下での平衡定数、結合速度定数および解離速度定数を測定した。予想に反して、中性および酸性で解離速度定数に大きな違いはみられなかった。今後、リソソーム病治療薬開発のためには、リソソーム内(酸性)で変異酵素と解離し易い化合物の合成が必要になると考えられた。基質類似体ライブラリーを用いて、GLAと結合する化合物の予備的探素を行った。リソソーム酵素とその基質類似体との相互作用機構を解明し、その情報を基に、酵素を安定化する低分子化合物を見つけて、ファブリー病やポンペ病に対する酵素増強治療薬開発に役立てることを目的として研究を行った。前年度までに、ヒト野生型およびアミノ酸置換を伴う変異型α-ガラクトシダーゼ(GLA)を酵母で大量発現し、GLAの基質類似体である1-デオキシガラクトノジリマイシン(DGJ)やガラクトスタチン-バイサルファイト(GBS)との分子間相互作用について、表面プラズモン共鳴法により解析した。

その結果、両分子の結合と解離に関するキネティクス・パラメーターを決定した。また、GLAの結晶構造データを利用して構造学的解析を行い、GLA分子と基質類似体との結合に関係すると考えられる原子を特定した。今年度は、これらの熱力学的および構造学的情報を基に、GLAと結合して、これを細胞内で安定化することが期待される5種類の新規ガラクトノジリマイシン誘導体を合成した。また、その効果を調べるために必要なファブリー病患者由来の培養線維芽細胞株を樹立すると共に、ファブリー病モデルマウスの繁殖を行った。一方、ポンペ病に関しては、多くの日本人ポンペ病患者から得られた培養皮膚線維芽細胞に対して、基質類似体である1-デオキシノジリマイシン、N-ブチル-デオキシノジリマイシンやノジリマイシン-1-スルホン酸を投与し、S529Vアミノ酸置換を伴う酸性α-グルコシダーゼ(GAA)に対して、これらの低分子化合物が安定化効果を発揮すること、S529VはGAAに対して、分子表面の特定領域に限られた小さな構造変化を起こすこと、基質類似体は、GAAの活性ポケット部分に入り込み、GAAとファン・デル・ワールス結合や水素結合を介して相互作用することが示された。これらの解析結果は、ポンペ病に対する酵素増強治療薬の開発に役立つと思われる。ファブリー病の疾患責任酵素であるα-galactosidase A(GLA)と基質類似体との分子間相互作用を明らかにし、ファブリー病の病因遺伝子変異に基づくGLA変異体を安定化する酵素増強治療薬を開発することを目的として研究を行った。基本となるDGJとGBSをファブリー病患者由来の培養線維芽細胞の培養液中に添加した所、前者は10-500 μM、後者は10-100 μMの濃度で、細胞内GLA活性の増加が見られた。次に、DGJ芳香環の1位または6位を修飾した6種類の化合物(新規合成化合物を含む)とM51I- GLAとの分子間相互作用について解析した所、N- (n-Nonyl)deoxygalactonojirimycinとN-Carboxypentyl-1-deoxygalactonojirimycinとが酵素の安定化作用を示した。特に前者は、酵素に対する阻害作用が少なく、今後、本化合物をシーズとした研究により、新たなファブリー病治療薬開発への応用が期待される。当初の計画に基づき、代表的なリソソーム病に関連する野生型および変異型酵素を大量発現し、これらの酵素と基質類似体どの結合に関して、熱力学的および構造学的情報を得ることに成功した。さらに、その情報を基に、リソソーム酵素と結合し、これを安定化する可能性がある低分子化合物を合成し、最終年度に、その効果を判定する段階まで進んでおり、研究は、ほぼ予定通りに進展していると考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。最終年度は、新規に合成した低分子化合物の性状を解析すると共に、当該低分子化合物が実際にリソソーム病関連酵素の安定化効果を有するか否かを、リソソーム病患者由来の培養細胞およびリソソーム病モデルマウスを用いて明らかにする予定である。その結果を基に、さらに優れたリソソーム病酵素増強治療薬を開発するための基盤を構築していく。
基本所得がジェンダー秩序に与える影響に関する研究;脱商品化・脱家族化の観点から

本研究では、ベーシック・インカム(以下、BI)とフェミニズムという二つの福祉国家批判およびその交差を論じた。両者の志向性の中心は各々脱商品化、脱家族化にあると整理できるが、女をめぐる両者の関係はしばしば二者択一的なものとして論じられてきた。そこで本研究では、フェミニズムのシティズンシップ論に依拠し、脱商品化/脱家族化の観点からBIのとりわけ女にとっての含意を考察した。考察の結果、およそ三つの立場に類型化できる従来のフェミニストシティズンシップ・モデルは、いずれも脱商品化・脱家族化を同時には志向しえないことが明らかになった。これに対し、BIのシティズンシップ・モデルであれば、両者の二律背反を解消し、これを同時に志向しうることが明らかになった。こうした作業は、今後の新しいフェミニスト政策構想を考える際の一助にもなりうる。本研究は、基本所得とフェミニズムの交差に立脚しながら、基本所得がジェンダー秩序に与えうる影響を検討し、それをフェミニスト社会政策として練り直していくための予備的作業を行うことを目的としている。基本所得とフェミニズムは各々、福祉国家への批判を異なる仕方で提出してきたが、その志向性の中心は、「脱商品化」「脱家族化」にあるとひとまず整理できるだろう。そこで平成21年度は、以下の二点を作業課題として研究を進めてきた。第一に、社会政策における脱商品化・脱家族化の両概念を再検討するとともに、両者の関係を整理した。しかしながら、女をめぐる両概念の関係はそれほど単純ではない。そればかりか両者はしばしば二律背反的な関係に置かれうる。そこで第二に、基本所得がとりわけ女にとってどのような影響を持ちうるのかについて、脱商品化/商品化、脱家族化/家族化の観点から考察し、新たなフェミニスト社会政策となりうるための条件を探った。以上の研究成果については、査読制論文にまとめた。(「ベーシック・インカムとフェミニスト・シティズンシップ-脱商品化・脱家族化の観点から」『社会福祉学』vol.50-3)本研究は、基本所得とフェミニズムの交差に立脚しながら、基本所得がジェンダー秩序に与えうる影響を検討し、それをフェミニスト社会政策として練り直していくための予備的作業を行うことを目的としている。基本所得(ベーシックインカム:以下、BI)をめぐる議論は近年盛んになりつつあるが、その多くは未だにジェンダーに無自覚だと指摘される。他方でフェミニズムの側も、BIを「家事労働への支払い」と矮小化して捉え、さほど検討しないまま批判的に捉えている向きが多い。こうした事情を反映してか、BIとフェミニズムの交差はこれまであまり論じられてこなかった。その一つの理由に、「口止め料か、解放料か」と言われるような、BIの女にとっての両義性を挙げることができる。それは、性別分業、自律的な所得保障へのアクセス権、女の劣等なシティズンシップ等、多岐に渡って論じられてきた。本年度は、これら多岐に渡る論点を整理し、BIとフェミニズムという二つの主張が生産的に交差していくための予備的考察を行った。とりわけ、性別役割分業に対するBIの含意を、BIの類似政策であるケア提供者手当および参加所得との対比において明らかにし、査読制論文にまとめた(堅田2010)。本研究では、これら多岐に渡る論点を整理し、BIとフェミニズムという二つの主張が生産的に交差していくための予備的考察を行った。

とりわけ今年度は、性別役割分業に対するBIの含意を、既存の制度の中で「女」が経験してきた具体的な不利益との対比において明らかにしたり(2011『ベーシックインカムとジェンダー』、2012『労働再審』)、既存の社会政策をめぐる議論の中に位置づけたり(2011『社会政策の視点』)した。
キマーゼ特異的阻害効果を有する新規核酸製剤の応用

キマーゼはアンジオテンシンIIやMatrix metalloproteinase (MMP)-9、Transforming growthfactor (TGF)-βを産生して様々な疾患と深く関与する可能性が示唆されており、事実、ペプチド性キマーゼ阻害物質や低分子キマーゼ阻害薬による疾患予防および治療効果が示されてきた。本研究では、新規に開発した核酸製剤を用いて心血管障害に対する影響を解析することを目的としており、今年度はハムスターの左冠動脈を完全結紮して作製する心筋梗塞に対する核酸製剤の影響を解析した。ハムスターに対する核酸製剤を皮下投与することにより血中に移行することを確認するため、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの濃度の核酸製剤を皮下投与して24時間後の血中濃度を測定したところ、濃度依存的に上昇し、しかもその濃度はハムスターキマーゼに対するIC50以上の値であった。このことより、1 mg/kg以上の濃度でハムスター心筋梗塞に対する影響を評価することにした。ハムスターの心筋梗塞後3日の時点でキマーゼ活性が有意に増加し、その活性が核酸製剤により濃度依存的にかつ有意に抑制されることが確認された。また、心エコーにより解析した心機能(EFおよびE/A)も心筋梗塞後3日の時点で改善されることが確認できた。本モデルの心筋梗塞後14日までの生存率は、核酸製剤によって有意に高くなり、同時期に生存していたハムスターにおいても核酸製剤による心臓のキマーゼ活性の有意な低下と心機能(EF、FS、E/A)の有意な改善が認められた。一方、心重量/体重比、血圧、心拍数には影響しなかった。また、梗塞部位のMMP-9、TGF-β、コラーゲンの発現の減少が見られた。これらのことより、研究目的の1つであった心筋梗塞後の心不全に対するキマーゼ核酸製剤の予防効果を確認することができた。今年度は、初めにハムスターに対する核酸製剤を皮下投与することにより血中に移行することを確認するため、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの濃度の核酸製剤を皮下投与して24時間後の血中濃度を測定した。その結果、濃度依存的に血中濃度が上昇し、しかもその濃度はハムスターキマーゼに対するIC50以上の値であった。次に、心筋梗塞後1日の時点で1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの核酸製剤を1日1回皮下投与し、心機能および心臓キマーゼ活性に対する影響を解析した。心筋梗塞後3日の梗塞部位でキマーゼ活性が有意に高値を示したが、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの核酸製剤すべてでキマーゼ活性が有意に抑制され、その効果は濃度依存的であった。そのため、心筋梗塞後14日までの生存率に対する核酸製剤の影響は、心筋梗塞後1日より1 mg/kgを1日1回投与することで評価することにした。心筋梗塞後14日までの生存率は、プラセボ群では67%であったが、1 mg/kgの核酸製剤では92%と有意に高くなった。心筋梗塞後14日に生存していたハムスターの心重量/体重比は、正常群のハムスターに比べて心筋梗塞群で有意に増加していたが、核酸製剤はその増加には影響しなく、血圧および心拍数に対しても有意な影響はなかった。一方、キマーゼ活性は心筋梗塞群で有意に高値を示したが、核酸製剤は有意に抑制した。また、キマーゼの遺伝子発現に加え、MMP-9、TGF-β、コラーゲンの遺伝子発現も有意に増加していたが、核酸製剤はそれらを抑制した。心エコーによる心機能(EF、FS、E/A)もすべて核酸製剤によって有意に改善されていた。これらのことより、心筋梗塞後の心不全に対するキマーゼ核酸製剤の予防効果を確認することができ、本年度中に論文発表できた。本年度は、ハムスターの心筋梗塞後1日より1 mg/kgの核酸製剤を1日1回皮下投与することで心筋梗塞後14日までの生存率改善と心機能改善が確認された。次年度は心筋症ハムスターに対する核酸製剤の効果を解析する予定である。雄性5週齢の自然発症の心筋症ハムスター(J2N-n)とそのコントロールハムスター(J2N-k)を日本SLCより購入し、6週齢より心筋症ハムスターには生理食塩水(プラセボ群)または核酸製剤(核酸製剤群)を1日1回皮下投与する。実験開始後4週、8週、12週の時点で体重、血圧、心機能(EF、FS、収縮期末期径および拡張期末期径)を測定する。試験開始後12週の時点で、血中のレニン、アンジオテンシン変換酵素(ACE)活性、アンジオテンシンII値を測定し、心臓のキマーゼ活性、ACE活性、MMP-9活性の測定、キマーゼ、ACE、アンジオテンシンII受容体(AT1受容体)、MMP-9、TGF-β、コラーゲンI、コラーゲンIIIの遺伝子発現量はリアルタイムPCR、蛋白発現量ウェスタンブロットにて測定する。組織学的解析としては、キマーゼの発現細胞である肥満細胞をトルイジンブルー染色にて染色し、キマーゼ発現細胞は我々が作製した抗ハムスターエピトープ抗体を用いて免疫染色し、それぞれ単位面積あたりの発現細胞数を定量する。また、線維化面積の定量のためアザン染色を行い、全心臓面積あたりの線維化面積率を定量する。これらのパラメーターを解析して心筋症の進展に対するキマーゼ阻害核酸製剤の影響を解析する予定である。次年度の研究計画は、本学実験動物センターの動物実験委員会にて承認済みである(2019-095)。

キマーゼはアンジオテンシンIIやMatrix metalloproteinase (MMP)-9、Transforming growthfactor (TGF)-βを産生して様々な疾患と深く関与する可能性が示唆されており、事実、ペプチド性キマーゼ阻害物質や低分子キマーゼ阻害薬による疾患予防および治療効果が示されてきた。本研究では、新規に開発した核酸製剤を用いて心血管障害に対する影響を解析することを目的としており、今年度はハムスターの左冠動脈を完全結紮して作製する心筋梗塞に対する核酸製剤の影響を解析した。ハムスターに対する核酸製剤を皮下投与することにより血中に移行することを確認するため、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの濃度の核酸製剤を皮下投与して24時間後の血中濃度を測定したところ、濃度依存的に上昇し、しかもその濃度はハムスターキマーゼに対するIC50以上の値であった。このことより、1 mg/kg以上の濃度でハムスター心筋梗塞に対する影響を評価することにした。ハムスターの心筋梗塞後3日の時点でキマーゼ活性が有意に増加し、その活性が核酸製剤により濃度依存的にかつ有意に抑制されることが確認された。また、心エコーにより解析した心機能(EFおよびE/A)も心筋梗塞後3日の時点で改善されることが確認できた。本モデルの心筋梗塞後14日までの生存率は、核酸製剤によって有意に高くなり、同時期に生存していたハムスターにおいても核酸製剤による心臓のキマーゼ活性の有意な低下と心機能(EF、FS、E/A)の有意な改善が認められた。一方、心重量/体重比、血圧、心拍数には影響しなかった。また、梗塞部位のMMP-9、TGF-β、コラーゲンの発現の減少が見られた。これらのことより、研究目的の1つであった心筋梗塞後の心不全に対するキマーゼ核酸製剤の予防効果を確認することができた。今年度は、初めにハムスターに対する核酸製剤を皮下投与することにより血中に移行することを確認するため、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの濃度の核酸製剤を皮下投与して24時間後の血中濃度を測定した。その結果、濃度依存的に血中濃度が上昇し、しかもその濃度はハムスターキマーゼに対するIC50以上の値であった。次に、心筋梗塞後1日の時点で1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの核酸製剤を1日1回皮下投与し、心機能および心臓キマーゼ活性に対する影響を解析した。心筋梗塞後3日の梗塞部位でキマーゼ活性が有意に高値を示したが、1 mg/kg、3 mg/kg、10 mg/kgの核酸製剤すべてでキマーゼ活性が有意に抑制され、その効果は濃度依存的であった。そのため、心筋梗塞後14日までの生存率に対する核酸製剤の影響は、心筋梗塞後1日より1 mg/kgを1日1回投与することで評価することにした。心筋梗塞後14日までの生存率は、プラセボ群では67%であったが、1 mg/kgの核酸製剤では92%と有意に高くなった。心筋梗塞後14日に生存していたハムスターの心重量/体重比は、正常群のハムスターに比べて心筋梗塞群で有意に増加していたが、核酸製剤はその増加には影響しなく、血圧および心拍数に対しても有意な影響はなかった。一方、キマーゼ活性は心筋梗塞群で有意に高値を示したが、核酸製剤は有意に抑制した。また、キマーゼの遺伝子発現に加え、MMP-9、TGF-β、コラーゲンの遺伝子発現も有意に増加していたが、核酸製剤はそれらを抑制した。
波紋秩序状態の起源解明および実物質での実現可能性-新たな磁気構造物質の創出-

近年複数の波数qの秩序が共存した多重q秩序状態が注目を集めている。例えば相互作用の競合がある古典ハニカム格子反強磁性体では、基底状態のリング型無限縮退構造を反映する形で、無限個の波数の秩序が共存した波紋秩序状態が実現する。この状態のスピンテクスチャは誘電分極の巨大渦を導く事が可能であり、電子工学的な観点からも興味深い。一方でこの状態の発現機構の詳細は未解明なままである。本研究では大型計算機を用いた大規模数値計算を通して、また結晶学や微分幾何学などの知見を用いつつ、波紋秩序状態の発現機構の解明や実物質での実現可能性を明らかにすることを目指す。
シンタキシン４のアンタゴニストによる表皮角化プロセスの制御

報告者は当該期間に1ヒト表皮におけるシンタキシン4の局在および2シンタキシン2およびシンタキシン4はヘパリン類似物質により活性が制御されるのかを明らかにした。1ヒト表皮におけるシンタキシン4の局在:マウス皮膚組織においてシンタキシン4は表皮ケラチノサイトに強く発現していることが明らかとなっていた。今回、ヒト皮膚組織の切片においてシンタキシン4の発現を調べた結果、ヒト皮膚組織においてもマウス皮膚組織と同様に真皮の線維芽細胞よりも表皮ケラチノサイトに強い発現を確認した。2シンタキシン2およびシンタキシン4はヘパリン類似物質により活性が制御されるのか:シンタキシン2は皮膚では真皮の線維芽細胞に発現しており、細胞外からの刺激により細胞外へ提示されると、表皮ケラチノサイトの角化を抑制する。一方で、シンタキシン4は表皮ケラチノサイトに強く発現しており、刺激により細胞外へ提示されると、表皮ヘラチノサイトの角化を促進する。これらシンタキシン2およびシンタキシン4はヘパラン硫酸および同様の効果が報告されているヘパリン類似物質に結合する。In vitroの実験結果より、シンタキシン2はヘパリン類似物質による制御を受けない。一方で、シンタキシン4の活性がヘパリン類似物質により増強された。これらの結果より、実際に生体においてヘパリン類似物質によりシンタキシン4の活性を増強し角化を促進させることができれば、これにより不全角化などの症状を改善することができるかもしれない。28年度が最終年度であるため、記入しない。シンタキシン4は通常、細胞内で小胞の輸送に関与しているが、一方で細胞が細胞外から刺激を受けるとシンタキシン4は細胞の外へと反転し、そのシンタキシン4が表皮細胞の角化を促進させることを報告者は以前に明らかにした。このことをもとに、当該期間において報告者は、まず、自身が以前作製したシンタキシン4の配列の一部を用いたシンタキシン4の環状型アンタゴニストペプチドの生体皮膚における活性を検証した。その際、シンタキシン4が以前の研究で角質肥厚を誘導したことから、角質肥厚を誘導したマウスを用いてその影響を検証した。その結果、この環状型のペプチドがマウス生体皮膚においても、シンタキシン4の影響でみられるような角質層の肥厚化を抑制する活性を有することを明らかにした。この環状型ペプチドは角質肥厚が起こっている皮膚疾患、例えばアトピー性皮膚炎や乾癬などにおいて効果を発揮する可能性が考えられる。もし、効果を発揮することができれば今後、これらの皮膚疾患の治療薬として用いることができる可能性がある。さらに報告者は、表皮細胞表面や基底膜に存在するヘパラン硫酸が細胞外シンタキシン4と直接結合することで、細胞外シンタキシン4の活性を調節している可能性も示すことができた。そして、これらの成果を、3件の国内学会で口頭発表(そのうち2件は同時にポスター発表も)および2件の国際学会でポスター発表を行い、報告者が自ら発表し反響を得た。加えて、研究で得られた知見が産業応用化の可能性があると判断され、合計3件の特許出願に貢献した。報告者は、当該期間の1生体皮膚におけるシンタキシン4の環状型ペプチドの活性調査、および2表皮角化におけるヘパラン硫酸とシンタキシン4およびシンタキシン2との相関に関する研究を行った。1生体皮膚におけるシンタキシン4の環状型ペプチド(ST4n1)の活性調査;以前の研究で3次元皮膚培養モデルにおいて細胞外シンタキシン4が角質層の肥厚化を誘導したことから、角質層が肥厚化する2種類のモデルマウスを使用し検証した。a)マグネシウムが欠損飼料による角質肥厚化モデル;ST4n1の塗布により、角質層の肥厚化が抑制されると予想していたが、予想に反し、環状型ペプチドST4n1は有意に角質層の肥厚化を抑制しなかった。しかし、これらのマウスの皮膚切片を観察した結果、角化が過剰に促進された際に出現する異常な状態の核を持つ細胞が、ST4n1により抑制されることが明らかとなった。b)テープストリッピングによる角質層肥厚化モデル;ST4n1を塗布すると、テープストリッピングによりできた傷の治りが早い傾向があり、さらに角質層の水分量が高かった。そこでマウスの皮膚を採取し、角質層および表皮の角質層以外の層の厚さを計測し定量化した結果、テープストリッピングにより誘導される角質層および表皮の角質層以外の層の肥厚化が環状型ペプチドST4n1により抑制された。以上の結果より、ST4n1はマウス生体皮膚において効果を発揮することから、ヒト皮膚においても効果を発揮する可能性が高いと考えられた。2表皮角化におけるヘパラン硫酸とシンタキシン4およびシンタキシン2との相関;報告者は、ヘパラン硫酸と構造が類似しており、同じような活性を発揮すると報告されているヘパリン類似物質がシンタキシン4と結合することを明らかにした。2シンタキシン2およびシンタキシン4はヘパリン類似物質により活性が制御されるのか:

シンタキシン2は皮膚では真皮の線維芽細胞に発現しており、細胞外からの刺激により細胞外へ提示されると、表皮ケラチノサイトの角化を抑制する。一方で、シンタキシン4は表皮ケラチノサイトに強く発現しており、刺激により細胞外へ提示されると、表皮ヘラチノサイトの角化を促進する。これらシンタキシン2およびシンタキシン4はヘパラン硫酸および同様の効果が報告されているヘパリン類似物質に結合する。In vitroの実験結果より、シンタキシン2はヘパリン類似物質による制御を受けない。一方で、シンタキシン4の活性がヘパリン類似物質により増強された。これらの結果より、実際に生体においてヘパリン類似物質によりシンタキシン4の活性を増強し角化を促進させることができれば、これにより不全角化などの症状を改善することができるかもしれない。1皮膚疾患モデルマウスにおけるアンタゴニストペプチドST4n1の効果検証;前回はマグネシウム欠損飼料やテープストリッピングによる角質肥厚誘導を行い、これらに対するアンタゴニストペプチドST4n1の活性調査を行った結果、シンタキシン4のアンタゴニストペプチドST4n1が生体皮膚においても活性を発揮することが明らかとなった。そこで次は、実際の角質層が肥厚化するアトピーや乾癬においてアンタゴニストST4n1が活性を発揮するかを調べるために、アトピーモデルもしくは乾癬モデルマウスにおいてアンタゴニストペプチドST4n1を塗布し、その活性を検証する。2ヒト皮膚組織におけるシンタキシン4の発現および局在の確認;現在までの研究結果より、シンタキシン4は通常ほとんどが細胞の内側に局在しているが、外部刺激により一部が細胞の外に提示され、その細胞の外に提示されたシンタキシン4が表皮細胞の角化を促進するという結果を得ている。報告者自身は、マウスの皮膚表皮でシンタキシン4が発現していることは確認しているが、ヒト皮膚においてシンタキシン4の発現および局在を確認していない。さらに、ヒト表皮培養細胞では、シンタキシン4が細胞の外に提示されることを確認しているが、ヒト皮膚組織では確認していない。そこで、ヒト皮膚組織におけるシンタキシン4の発現および局在を確認する。3表皮角化におけるヘパラン硫酸とシンタキシン4およびシンタキシン2との相関;シンタキシン4およびシンタキシン2がヘパリン類似物質に結合することが明らかとなったことから、次にヘパリン類似物質がシンタキシン4およびシンタキシン2の活性を調節しているかを明らかにする。そのために、シンタキシン4あるいはシンタキシン2を強制発現させた表皮培養細胞にヘパリン類似物質を作用させ、その影響を調べる。28年度が最終年度であるため、記入しない。