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電気化学法による神経毒の簡便・迅速な検出法の開発

1生体中のコリンエステラーゼ(ChE)を阻害することにより神経伝達に支障をきたし、中毒を引き起こす有機リン系化合物およびカルバメート系化合物(ChE阻害剤)の検出法を開発した。検体とアセチルコリンエステラーゼ(AChE)および基質(アセチルチオコリン)とを混合し、AChEの作用で生じるチオコリン濃度を測定することで検体中のChE阻害剤を検知することができる。すなわち、生じるチオコリンが少なければ、検体中のChE阻害剤の存在を示す。本研究では、電気化学法を用いてチオコリンを測定する簡便・安価な方法を新たに開発した。上記の検体・酵素・基質の反応液とアセトニトリルを混合したものに金電極を浸漬して表面にチオコリンを結合させ、この電極を用いてフェリシアン化物イオンの酸化還元電流を測定すると、生成したチオコリン濃度(ChE活性)に応じた強度の電流が観測された。本法により、殺虫剤であるDDVP(有機リン系化合物)およびメソミル(カルバメート系化合物)を検出することができ、検出限界はそれぞれ1.0μg/mLおよび0.1μg/mLであった。2本法は、血液中のChE活性(ChE阻害剤による中毒の指標)評価法へも応用可能であった。ヒト血清中のブチリルコリンエステラーゼ(BuChE)活性、すなわち、BuChEの作用によって生じるチオコリン濃度をモニターすることで、DDVPおよびメソミルによるBuChE活性低下を感知することができた。3倫理審査を経てボランティアから提供を受けた血液試料(赤血球、血漿、全血)について、本法から得られたChE活性は、分光光度法による従来のChE活性測定法から得られた結果と良好な相関を示し、血中ChE活性評価法として妥当なものであることが示された。4サリンやVXなども有機リン系化合物であるため、本法はこれらの検出にも応用可能と考えられる。本研究で用いた電気化学法は、簡便・迅速・安価な測定手法であり、可搬型の装置を用いることで、事件・事故現場でのon-site分析への展開が期待できる。
貧栄養耐性細菌を利用したD-アミノ酸発酵法の開発

本研究では,1E. oligotrophica CCA6株に内在する数種の遺伝子を破壊または制御し,ピルビン酸高生産株を作製する.次いで,2得られたピルビン酸高生産株内にグルコース依存的に遺伝子発現可能なグルコース誘導型外来遺伝子発現システムを構築し,D-アミノ酸生産能を付与してD-アミノ酸生産株を作製する.さらに,313C代謝フラックス解析に基づいてD-アミノ酸の生合成経路を最適化し,D-アミノ酸生産能を強化する.最終的には,4非可食性バイオマスである廃糖蜜を培地に利用して,D-アミノ酸を発酵生産する.本研究では,1E. oligotrophica CCA6株に内在する数種の遺伝子を破壊または制御し,ピルビン酸高生産株を作製する.次いで,2得られたピルビン酸高生産株内にグルコース依存的に遺伝子発現可能なグルコース誘導型外来遺伝子発現システムを構築し,D-アミノ酸生産能を付与してD-アミノ酸生産株を作製する.さらに,313C代謝フラックス解析に基づいてD-アミノ酸の生合成経路を最適化し,D-アミノ酸生産能を強化する.最終的には,4非可食性バイオマスである廃糖蜜を培地に利用して,D-アミノ酸を発酵生産する.
α-フルオロメチル置換スチレンの重合反応性

含フッ素ビニル化合物の重合反応性研究の一環としてラジカル重合しないとされているα-フルオロメチルスチレン誘導体のα-トリフルオロメチルスチレン(TFS)およびα-ジフルオロメチルスチレン(DFS)を取り上げた。TFSについては、未だポリマーが生成する重合反応は見いだされていない。ここではTFSおよびDFSを合成し、フルオロメチル基の高い電子吸引性に着目してアニオン重合を試み、TFSおよびDFSが反応する条件を見いだすことを目的とした。また、これらの化合物のラジカル反応についても系統的な検討は行なわれておらず、反応性は未知であるため、過酸化ベンゾイル、アゾビスイソブチロニトリルなどを用いるラジカル反応についても検討した。TFSはフェニルマグネシウムブロミドと1,1,1-トリフルオロアセトンとの反応により生成するカルビノールの脱水により合成した。沸点:48-49°C/20mmHg。またDFSは、ジフルオロ酢酸クロリドとベンゼンとのFriedel-Crafts反応により得られるジフルオロアセトフェノンのWittig反応により得た。沸点76°C/20mmHg。TFSのアニオン開始剤(n-C_3H_9Li、LiZnC_3H_9(C_2H_5)_2、LiAlC_4H_9(C_2H_5)_3、Al(C_2H_5)_3、Zn(C_2H_5)_2)およびZiegler-Natta触媒(TiCl_3/Al(C_2H_5)_3、VCl_3/Al(C_2H_5)_3、VO(CH_3COCHCOCH_3)_2/Al(C_2H_5)_3)を用い、様々な温度で反応させたが、重合体は得られなかった。しかしTiCL_3/Al(C_2H_5)_3を開始剤に用いた場合、反応停止後、エバポレーターにて溶媒を除去し残留物を凍結乾燥しGPCにより分子量を測定した結果、微量ではあるが2-3量体のオリゴマーが認められた。一方、アゾビスイソブチロニトリル(AIBN)を開始剤とするラジカル重合を試みたが、メタノール不溶性のポリマーは得られなかった。そこで反応性を変化させるためにパラ位にメチル基を導入した化合物を合成し、そのラジカル重合を検討した結果、AIBNの添加量を増加させて反応を行なった場合には、分子量が約1800のオリゴマーも生成していることを見いだした。またDFMSの反応をAIBNを用いて検討した結果、メタノール可溶部から低分子量の化合物が得られた。この化合物についてGC-MSを測定した結果、DFMSにシアノメチルエチル基が付加した化合物が得られていることが分かった。以上の結果よりα-トリフルオロメチル置換スチレンは重合しにくいモノマーではあるが、反応条件により低収率ながらオリゴマーを生成することが判明した。

この化合物についてGC-MSを測定した結果、DFMSにシアノメチルエチル基が付加した化合物が得られていることが分かった。以上の結果よりα-トリフルオロメチル置換スチレンは重合しにくいモノマーではあるが、反応条件により低収率ながらオリゴマーを生成することが判明した。
光回路設計のための全く新しい方法の確立

平成17年度は、まず理想フィールド法を用いたMMI(多モード干渉結合器)の設計に取り組んだ。設計対象としてMMIを用いた3x3あるいは4x4結合器を選び、その結像特性を改善することを試みた。MMIにおける理想フィールドは理論的に導出され、クラッドにおいて0となる。そのため、クラッドにおける屈折率分布を算出することが出来ない。結局、理想フィールド法をMMIの設計に適用することは困難であることが判明した。しかし、研究の過程において、MMIの結像特性の劣化は、電力的には僅かな部分しか占めない高次モードの位相誤差が原因であることを解明し、それを改善するための構造をいくつか考案した。考案した新しい構造は多少の改善効果をもたらしたが、大幅な特性改善には至らなかった。次に、理想フィールドを合成する方法として、これまでは入口のフィールドと出口のフィールドを補間する単純な方法を用いていたが、これに座標変換を加えたさらに高度な理想フィールドの生成法を開発した。この座標変換を含む理想フィールドの生成法を用いて、モード変換器、Y分岐導波路を設計した。モード変換器の設計においては、ユニークな形状のモード変換器が設計できたが、モードの変換率が低く、優れた特性とは言えなかった。Y分岐導波路においても、ユニークな構造が得られたが、その特性は既に提案されている構造に対して大きく優れているとは言えなかった。現時点では良い特性は得られていないが、理想フィールドの生成法の改良、パラメータの調節、屈折率離散化における改良など、改善の余地は多く残されているので、今後もこのテーマについて研究を継続する予定である。私が提案する新しい設計法(以後理想フィールド法と呼ぶ)を用いて導波路を設計すると、その屈折率分布は3次元的に変化する分布となる。そのような複雑な屈折率分布を持つ媒質中を光が伝搬する現象をシミュレートするには、ソフトウェアを新規に開発する必要がある。まず、そのための一連のソフトウェアを開発した。ビーム伝搬法に基づいた数値シミュレーションを行うソフトウェア、複雑な3次元構造を持つ屈折率分布とフィールド分布を同時にグラフ表示するソフトウェアなどをUnix上で開発した。次に、理想フィールド法を用いて「3次元構造を持つ広角Y分岐導波路」の設計を行った。その結果、光を滑らかに2等分するための理想的な屈折率分布の一つを明らかにし、極めてユニークな構造でかつ優れた特性を持つ広角Y分岐の設計に成功した。続いて「3次元構造を持つ4分岐導波路」の設計を行った。4分岐の設計においては、4等分配を実現するのが難しいのであるが、新たなパラメータや評価関数の導入によりその問題を解決し、ユニークな構造でかつ光を4等分配する構造を見いだすことが出来た。理想フィールド法は従来の設計方法とは全く異なったアプローチをとるため、本方法で設計された分岐構造は従来の研究では見られなかった新しい構造であった。従って、理想フィールド法は極めて興味深くかつ優れた光導波路の設計法であると思われる。広角Y分岐に関しては電子情報通信学会に論文を投稿し、採録が決定した。
Diopside混合焼成型アパタイトが骨芽細胞様細胞に与える影響について

混合焼成比率が60%のDiopside混合焼成型アパタイトは、物理的強度が増大し(アパタイトの約2.5倍)、生体親和性にも優れた強化型のアパタイトであることはすでに報告済みである(第47回日本口腔科学会総会1993年5月、第15回日本バイオマテリアル学会1993年10月)。この強化型のアパタイトとHydroxyapatite、Diopsideをφ0.2mm0.6mmの顆粒状に調製し、poreサイズ0.45μm、厚さ150μmのMillipore filterを用いた外径14mm、内径10mm、厚さ2mmのDiffusion chamber内に一定量の骨原性細胞株、特にアルカリフォスファターゼ活性および細胞増殖率が高い骨芽細胞様細胞KUSA細胞とともに封入した。それらを1%ペントバルビタール0.5mg/kgの耳静脈注射による全身麻酔下で成熟家兎腹腔内に重なり合わないように自家移植し、4週間後に摘出した。摘出後直ちに10%ホルマリン溶液で1週間固定後、10%蟻酸にて1週間脱灰した。その後、Diffusion chamberよりMillipore filter部をメスでくり抜き、パラフィンに包埋し薄切して、ヘマトキシリンエオジン染色およびトルイジンブルーにて染色を施し、作成された標本から硬組織の形成状態を光学顕微鏡にて観察し、骨芽細胞様細胞に対する強化型アパタイトの親和性について比較検討を行った。その結果、標本ごとにややばらつきは見られるものの60%のDiopside混合焼成型アパタイトはHydroxyapatiteとほぼ同程度の骨形成能を示し、それらはいずれもDiopsideの場合よりも骨形成量は多かった。これにより60%のDiopsideウィスカ-析出型アパタイトは生体活性型といわれるHydroxyapatiteと同程度の生体親和性を持つと推測され、強化型アパタイトとして十分臨床応用可能であることが示唆された。
東アフリカ海岸地方の口承文芸とスワヒリ語諸方言の位相に関する研究

本研究は,東アフリカ海岸地方(いわゆるスワヒリ地方)の文化特性を把握するために,伝統的アフリカ要素と外来のイスラム要素との混合に関して,主として言語学的・民族学的な方法,及び口頭伝承資料の援用によって,その性格を究明しようとするものであった。具体的には,スワヒリ語の方言的種々性を考察し,口承文芸資料の言語学的分析に基づいて,イスラムとアフリカの両文化伝統の交錯の実態を究明しようとしたのである。筆者は,内外の従来の研究成果を再検討するなかで、この間に『スワヒリ文学の風土』『文学から見たアフリカ』`Swahili Manuscripts of Shaaban bin Robert'『ことば・文学・アフリカ世界』『タンザニアの昔ばなし』の四著,ならびに「シャアバン・ビン・ロバ-トの推敲」「現代ナワヒリ文学の伝統と革新」(予定)など,いくつかの論考を発表してきた。広くアフリカ的背景の中でのスワヒリ地方の文化特性の把握に関しては,これらの著作によって,主としてマクロな視点から一定の成果を引き出しえたものと考えている。ただ,口承文芸資料に関しても,スワヒリ諸方言の調査と分析に関しても,内外の従来の研究の蓄積は相当に乏しく,今後は綿密なフィ-ルド調査に基づいた,綜合的かつ豊富な第一次デ-タの収集が緊急の課題である。また,スワヒリ地方における伝統的アフリカ要素と外来のイスラム要素といっても,それぞれの要素は一元的に存在するのではなく,時代毎に,その内部に多様な文化要素をすでに抱え込んでおり,スワヒリの文化特性をアフリカとイスラムの二元論で把握することに限界のあることも明らかである。スワヒリ諸方言の具体的記述こそが今後の展望を切り開く優先課題であると思われる。本年度の目標は、東アフリカ海岸地方の言語的種々性と土俗文化とのかかわりを口承文学資料を通じて明らかにし、スワヒリ文化をイスラムとアフリカの想像力・創造力の混淆として把握し、これを文化変容の観点から説明することであった。これには、イスラムとアフリカの相互比較が前提であり、この方面の専門資料や学際的分野を検討した。この分野では、若干の文化人類学的なフィールド調査の成果をのぞけば、関係分野の成果は、ことに日本では皆無に近く、したがって今年度の研究と調査は以下の点に絞られた。1.文献資料の収集。言語・文化を中心に歴史や社会を扱った専門書・論文などの目録作成。2.従来の研究成果の比判的検討。したがって筆者によるこれまでの研究成果を今日的観点と問題意識から再検討し、今後の幅広い考察のための出発点とした。資料集「スワヒリ文学の風土」はそのための今後の指針となるものである。3.公刊予定の「文学から見たアフリカ」及び「ザンジバルの昔話」の二書は、これまでのフィールドワークと文芸的関心を整理したものであり、この分野の基礎資料となることが期待される。4.今年度の作業により、東海岸地方の文化的基盤の全体像について一応の整理ができたので、年次計画に従って、個別の言語的・文芸的資料について総合的な分析を試みていく予定である。口承文芸、(書かれた)文学作品、および言語の地域的・社会的種々性の解明を通じて、スワヒリ文化におけるイスラム文化要素とアフリカの土俗的文化要素の交錯状態を明らかにするという当初の問題意識は1989年3月発行の単著『スワヒリ文学の風土』でその大筋を明らかにした。これを受けて、本年度は、現代スワヒリ語の文学の創始者とされるタンザニアの作家・詩人シャアバン・ビン・ロバ-ト(Shaaban bin Robert1909ー1962。イスラム化したアフリカ人。スワヒリ語を母語としたわけではないが全著作をスワヒリ語で発表)の作品に見られる言語を分析した。

特にその作品の一部について、草稿から完成稿に至るまでの言語的推敲の跡を辿ることで、スワヒリ語表現の独自性を探ろうとした。以上の結果は、「シャアバン・ビン・ロバ-トの推敲」および英文著書`Swahili Manuscripts of Shaaban bin Robert'としてまとめた。前者はこの作家の小説の一つ『空想の国』(Kufikirika)の、後者は60000語を駆使し3000連の4行詩『自由の戦いの歌』(Utenzi wa Vita vya Uhuru)の草稿と完成稿に見られる表現法の異同を分析して、この詩人・作家のスワヒリ語の文体の性格を明らかにしようとしたものである。アフリカに起源するものとイスラムに起源するもの、アフリカに起源するもののイスラム的変容、イスラムに起源するもののアフリカ的変容を探ろうとする本研究では、つづいてスワヒリ地方に住みついたアラブ人が残したスワヒリ語文献について考察をすすめたい。本研究は、東アフリカ海岸地方(いわゆるスワヒリ地方)の文化特性を把握するために,伝統的アフリカ要素と外来のイスラム要素との混合に関して,主として言語学的・民族学的な方法,及び口頭伝承資料の援用によって、その性格を究明しようとするものであった。具体的には,スワヒリ語の方言的種々性を考察し,口承文芸資料の言語学的分析に基づいて,イスラムとアフリカの両文化伝統の交錯の実態を究明しようとしたのである。筆者は,内外の従来の研究成果を再検討するなかで、この間に『スワヒリ文学の風土』『文学から見たアフリカ』`Swahili Manuscripts of Shaban bin Robert'『ことば・文学・アフリカ世界』『タンザニアの昔ばなし』の四著,ならびに「シャアバン・ビン・ロバ-トの推敲」「現代スワヒリ文学の伝統と革新」(予定)など,いくつかの論考を発表してきた。広くアフリカ的背景の中でのスワヒリ地方の文化特性の把握に関しては,これらの著作によって,主としてマクロな視点から一定の成果を引き出しえたものと考えている。ただ,口承文芸資料に関しても,スワヒリ諸方言の調査と分析に関しても,内外の従来の研究の蓄積は相当に乏しく,今後は綿密なフィ-ルド調査に基づいた,綜合的かつ豊富な第一次デ-タの収集が緊急の課題である。また,スワヒリ地方における伝統的アフリカ要素と外来のイスラム要素といっても,それぞれの要素は一元的に存在するのではなく,時代毎に,その内部に多様な文化要素をすでに抱え込んでおり,スワヒリの文化特性をアフリカとイスラムの二元論で把握することに限界のあることも明らかである。スワヒリ諸方言の具体的記述こそが今後の展望を切り開く優先課題であると思われる。
エンバクいもち病菌のコムギに対する非病原力遺伝子PWT3のクローニング

昨年度、エンバクいもち病菌Br58とコムギいもち病菌Br48の交雑に由来するBC_3F_1集団を用いてPWT3に連鎖したSSRマーカーを見出した。2つのSSRマーカーでほぼPWT3を挟み込んだと考えたが、詳細に検討すると、SSRマーカーの分離パターンと病原性の分離パターンが矛盾する箇所が存在することが判明した。また、本集団においては、PWT3保有菌系とpwt3保有菌系の比が1:1から有意に異なり、これが分離分析を複雑にしていた。そこで、BC_4F_1分子集団、ランダム集団を作成し、これらの菌系を普通系コムギ品種、二粒系コムギ品種、オオムギ品種に接種して、分離分析を行った。その結果、四分子集団では、いずれの植物上でも非病原性菌系を病原性菌系が1:1に明瞭に分離し、かつその分離パターンは品種間で完全に一致した。このことから、PWT3は普通系コムギ・二粒系コムギ・オオムギいずれにも認識されうること、換言すれば、これらの植物がいずれもPWT3に対応する抵抗性遺伝子Rwt3を保有していることが示唆された。ランダム集団においてもほぼ同様の結果が得られたが、若干結果が不安定な菌系があり、さらに継続して検討中である。一方、昨年度二粒系コムギにおいて同定したRwt3をクローニングするため、Rwt3分離F_2集団各個体からDNAを抽出した。現在コムギのSSRマーカーを用いて分子マッピングを行っているところである。さらに、昨年オオムギ品種KobinkatagiにPWT3に対応すると思われる抵抗性遺伝子を見出したが、その効果は不安定で、F3を用いた解析でも、明瞭な1:2:1分離を得るに至らなかった。そこで、他のオオムギ品種をスクリーニングしたところ、品種Kwanと感受性品種を掛け合わせたF_2が明瞭な3:1分離を示すことを見出した。現在この交雑から得られたF_2,F_3を用いて詳細な分離分析を行っているところである。PWT3は、エンバクいもち病菌のコムギに対する非病原性を支配する主働遺伝子として同定された。本遺伝子がイネ科栽培植物いもち病菌Pyricularia oryzaeの菌群-植物属間特異性に関与する遺伝子ならば、その作用範囲は極めて広いはずである。そこでまず、PWT3の作用範囲を明らかにするため、普通系コムギ、二粒系コムギ、オオムギ各30品種に、戻し交雑によりPWT3を導入したコムギ菌Br48near-isogenic lineを接種した。その結果、本遺伝子は普通系コムギのみならず、二粒系コムギ、オオムギにも広く作用することが示唆された。二粒系コムギ品種の中にPWT3に反応しない系統が見つかったので、これを感受性品種として分離分析を行った結果、PWT3に対応する抵抗性遺伝子を見出すことに成功した。これをRwt3と命名した。オオムギ品種の中にも、PWT3に反応しない系統が見つかったので、これを感受性品種とした分離分析を現在行っている。一方、PWT3のクローニングに向けて、連鎖分析を開始した。いもち病菌各染色体から満遍なく選抜したSSRマーカーを用いて分離分析を行った結果、PWT3と連鎖するマーカーを見出した。さらにSSRマーカーを増やした結果、PWT3を二つのSSRマーカーで挟み込むことに成功した。この領域の精密マッピングを行うため、PWT3を持つ菌系にBr48を戻し交雑し、ランダム雑種集団118菌系を得た。これらを上記2つのSSRマーカーを用いてスクリーニングしたところ、16菌系の該当領域recombinantを見出すことができた。現在、これらreconbinantについて、接種試験によるPwt3座遺伝子型の同定を行っている。

そこで、他のオオムギ品種をスクリーニングしたところ、品種Kwanと感受性品種を掛け合わせたF_2が明瞭な3:1分離を示すことを見出した。現在この交雑から得られたF_2,F_3を用いて詳細な分離分析を行っているところである。
心筋症・心不全発症におけるTRPV2チャネルの病態的役割の解明と治療薬の開発

細胞骨格系蛋白質異常による筋ジストロフィー・心筋症筋細胞ではTRPV2の細胞膜発現が亢進し活性化されていること、その活性を抑制することによりCa^<2+>シグナル異常、筋細胞膜TRPV2濃縮、筋変性が緩和されることが明らかになった。TRPV2は筋ジストロフィー・心筋症の優れた治療標的になることが判明した。伸展刺激感受性チャネル(TRPV2)の筋変性疾患における病態的意義を確立するとともに治療創薬標的としての可能性を検討した。恒常的にTRPV2を発現させたHEK293ヘイオン透過部位に変異を導入したチャネル活性のないTRPV2変異体を共発現すると各々TRPV2は細胞膜上でオリゴマーを形成しCa^<2+>および2-APBによるCa^<2+>反応性が減弱した。TRPV2変異体を骨格筋特異的に過剰発現させたマウス(このマウス骨格筋は正常であった)を筋ジストロフィーマウス(mdx)と交配させてmdxのTRPV2活性を抑制したマウス(4,10,22週令)を作製した。このマウスはmdxに比し血中クレアチンキナーゼ活性の有意な減少と組織HE染色で観察される筋変性の減弱、中心核の減少が認められた。グリップテストによっても機能的改善効果が示された。mdx筋fiberは2-APB刺激、外液5mM Ca^<2+>刺激に反応して細胞内Ca^<2+>濃度が上昇しTRPV2の活性化を支持した。そしてこのTRPV活性は変異体導入により顕著に抑制された。変異体の導入によりmdxのTRPV2細胞膜発現も抑制された。mdx筋は細胞内Ca^<2+>濃度の異常上昇を反映してCaMKIIのリン酸化が亢進していたが変異体の導入によりリン酸化の亢進は抑制され、細胞内Ca^<2+>濃度のin vivoにおける正常化が示唆された。細胞骨格系蛋白質欠損による筋ジストロフィー筋細胞はTRPV2の細胞膜発現が亢進し活性化されていること、その活性を抑制することによりCa^<2+>シグナル異常、筋細胞膜TRPV2濃縮、筋変性が緩和されることが明らかになった。TRPV2は筋ジストロフィーの優れた治療標的になることが判明した。TRPV2を特異的に阻害することによりmdxマウス,BIOハムスターの筋ジストロフィーが改善されたのでTRPV2特異阻害剤は筋ジストロフィー、心筋症治療に有効な可能性が高い。そこでTRPV2阻害剤を探索するため、TRPV2発現細胞を用いたハイスループットスクリーニング法(HTS)により、同定した既知化合物A,B(IC_<50>=20μM)の構造をもとにインシリコで類似化合物を探索し、約200種類の化合物を選択し、さらにスクリーニングを行った。その結果、A,Bより低濃度域(IC_<50>=1μM)で阻害活性をもつA3,A48,A63,B6を見出した。これらのうちA3,A48,A63はマウスTRPV2だけでなくヒトTRPV2も阻害した。これらの薬剤は、TRPファミリーチャネルの調べた範囲内で他のメンバーTRPV1、TRPC1をほとんど阻害しなかった。心筋症モデル動物を用いて上記新規TRPV2阻害剤の心筋症病態改善効果を調べた。7週令の動物に2週間あるいは4週間経口投与したところ、TRPV2阻害薬を投与しない対照群に比べて、心エコーにより評価した心機能の有意な改善、心筋変性のマーカーである血中心筋トロポニンI量および心筋組織切片染色により評価した線維化占有率の有意な減少が確認された。対照的に、TRPV2阻害作用を有さないA65、A47、B33は心機能改善を示さなかった。従って、これらTRPV2を阻害する化合物は心筋症の筋変性抑制効果があることが判明した。本研究により探索された新規薬剤はTRPV2を特異的に阻害する実験ツールとして有力であるとともに移殖しか治療手段がない拡張型心筋症などに対する有効な治療薬候補となると思われる。今年度は特異的阻害抗体の作製とその効果の検討をおこなった。細胞外を認識する抗体は一般に免疫寛容のため作製しにくいため、マウスTRPV2発現HEK細胞を免疫疾患マウスに免疫し定法に従い脾臓をミエローマと融合しTRPV

2の外側を認識する抗体を産生するハイブリドーマ上清をflow cytometryにより選び種々のアッセイ、スクリーニング後、モノクローン化した。またTRPV2の5番目と6番目の膜貫通領域の間にある親水性の高い領域のペプチドをウサギに免疫して作製した。各々抗体について、イムノブロット、生細胞を用いた免疫染色を行い、TRPV2外側認識抗体であることを確認した。また阻害活性のスクリーニングを行い、TRPV2活性を抑制する抗体として、マウスモノクローナル抗体11-6および88-2とウサギポリクローナル抗体591、592を得た。これらの抗体は、TRPファミリーチャネルの他のメンバーTRPV1、TRPC1をほとんど阻害しなかった。ヒト心筋症のモデル動物であるJ2N-kハムスターの培養骨格筋細胞を用いて,阻害抗体が細胞内Ca^<2+>代謝異常および筋変性を抑制することを確認した。この抗体はTRPV2を特異的に阻害する実験ツールとして有力であるとともに移殖しか治療手段がない拡張型心筋症などに対する有効な治療手段となると思われる。
強相関ソフトマテリアルの動的エントロピー制御とマクロ相分離

ソフトマテリアルは、自己組織化によりさまざまな空間スケールで多様な構造を形成する。その高次構造を安定化させる力は熱エネルギー程度と小さいため、弱い摂動によっても容易に構造を制御できることがこの物質群がソフトである理由である。こうしたソフトマテリアルの物理的性質を解明し、さらにこれを動的に制御する道を拓くことが本研究の目的である。主な研究成果は次の通りである。(1)高分子溶液系を深く温度クエンチすると粘弾性相分離が起こる。相分離パターンによって相図を区分し、また温度、濃度を規格化すると、それは高分子の分子量に依存しないことが分かった。(2)我々が開発した高速三次元共焦点顕微システムを用いて、内部自由度を持たない動的非対称混合系(コロイド分散系)の相分離構造を観察した結果、この系でも粘弾性相分離が起こることが分かった。これは、粘弾性相分離の普遍性を示している。(3)流体粒子ダイナミクス法を名づけた数値シミュレーション法を開発し、コロイドの凝集構造形成において流体相互作用が重要な役割を果たしていることを示した。(4)対称性のことなる液晶を複合化させることにより、全く新しい液晶相(透明ネマティック相)を発見した。(5)セッケン膜+微粒子混合系において、セッケン膜の構造転移による、微粒子の自発的分別機構を発見した。(6)液体の様々なモードの揺らぎを制御する位相コヒーレント光散乱法を開発し、ソフトマテリアルの動的物性測定を行った。(7)外場(流動場や空間拘束)による、セッケン二分子膜系の相構造の制御法を確立した。(8)レーザマニピュレーション法を用いて、セッケン二分子験系ラメラ相の欠陥構造の意図的な制御法を確立した。粘弾性相分離現象とは、高分子溶液系で発見された新しいタイプの相分離現象であり、相分離の過程で少数相である高分子リッチ相が連結したネットワーク構造が形成されるという、通常の流体系の相分離現象とは全く異なつた特徴を持つ。我々はこれまで、相分離初期に起こる過渡的ゲル化現象こそが、粘弾性相分離現象の本質であることを明らかにしてきた。本研究では、これまでの研究を発展させ、粘弾性相分離の発現機構に関するより詳細な知見を得ることを目的とする。試験管に高分子溶液を入れ相分離を発生させたところ、化学ゲルの体積収縮転移のように高分子リッチ相は全体的に収縮し、さらに時間が経つと重力の影響によつて試験管の底の方へとつぶされていくことが分かつた。これは粘弾性相分離における過渡的ゲルの形成とその形態緩和を表している。そこで、透過光強度の時間変化の測定などにより、高分子リッチ相に変化が生じた時間を決定したところ、それはクエンチ温度に比例し増大することが明らかになった。この関係は粘弾性相分離における弾性的効果の温度依存性を見積もる上で重要な関係となる。また我々は、粘弾性相分離現象は高分子系特有の現象ではなく、コロイド分散系のように成分間の動的性質が大きく異なる系(動的に非対称な系)において起こるものと考えている。このことを示すために、コロイド粒子間の流体力学的相互作用を取り入れた新しい数値シミュレーション手法(流体粒子ダイナミクス法)を開発し、コロイド分散系の凝集過程に関する研究を行った。その結果、コロイド粒子が凝集する際、系はネットワーク構造を形成し、この構造が壊れるまで系はゲル的に振舞うことが分かった。これは、コロイド分散系のような内部自由度の無い系でも粘弾性相分離が起こることを示唆し、我々の提唱する動的に非対称な系における相分離挙動の新しい普遍性クラスの存在を支持する結果である。粘弾性相分離現象は、高分子溶液系で見出される相分離現象であり、少数相である場合にも高分子リッチ相が連結したネットワーク状の相分離構造を形成する新しい相分離現象である。

これまでに我々は、過渡的ゲル化現象が、粘弾性相分離現象に特有のパターン形成において最も重要な役割を果たしていることを示してきた。ところで、通常の相分離現象における発展様式は、しこみの濃度のみで決まる。すなわち、ドロップレット構造における蒸発と凝集、あるいはドロップレット間の衝突と合体という非対称組成における発展と、双連結構造の不安定流体管のモデルによって記述される対称組成付近における構造発展である。しかし高分子溶液系においては、動的非対称性によってもたらされる過渡的ゲルの形成のために、相図における不安定領域での相分離パターンの時間発展は、しこみ濃度では決まらず、通常の2流体混合系とは異なる。そこで、不安定領域内におけるパターン形成過程の動的な特徴の違いから、過渡的ゲルが形成される領域を明確にすることを目的とした研究を行った。実験は、位相差顕微鏡を用い、相分離パターンの時間発展を観測することにより、その構造発展の時空間における特徴を測定した。高分子溶液系としてPS/DEM (polystyrene/diethyl malonate)系を用い、PSの分子量を80万と380万の2種類の系の実験結果について比較した。これにより、相分離の構造発展の特徴に基づいて不安定領域をいくつかの領域に分類し、その境界温度を決定した。このような二つの分子量における相図の特徴は、定性的に一致することが明らかとなった。ただし、分子量の高い380万の相図は、80万のものに比べ境界温度が高く現れる。これらの結果は、分子量をパラメータとして相図をスケールすることにより、分子量に依存しない普遍的な相図が存在するという可能性を示唆している。高分子・液晶混合系は、相分離と液晶化という二種類の相転移現象が競合した系である。そのため、応用面のみならず学術的にも興味深く、相図などの静的な性質に関しては多くの研究がなされてきたが、その一方で、相分離構造や相分離ダイナミクスに関してはあまり研究がなされてこなかった。そこで、まず液晶相の持つFrank弾性が、相分離構造にどのように影響するかを調べるため、数値シミュレーションを用いて研究を行った。また、実験データを詳しく見ると、液晶の配向場に比べ相分離界面の運動が早いことが分かる。このことから、この系の相分離において流れ場が重要な役割を果たしていることが考えられ、高分子・液晶混合系の相分離ダイナミクスに関して流れ場の効果を導入し、その影響についても調べ、次のことが分かった。液晶の弾性場は相分離構造に大きく影響し、例えば、マトリックス相の配向場に依存し、三角形や涙形など様々なドメイン構造が形成する。相分離と液晶化の競合により、二種類のスピノーダル分解が起こり得るが、その中でも液晶化が先に起こる場合には、液晶場の配向状態が相分離構造に特に大きく影響する。例えば、磁場などの外場下で相分離が起こると、液晶化が遅れる場合は通常の等方的な相分離パターンが形成するが、液晶化が先に起こる場合には相分離パターンが外場の影響を受け異方的になることが分かった。
大正・昭和戦前期における民事訴訟の実態的研究(司法統計のデータ化とその分析)

本研究は、大正・昭和戦前期における民事訴訟の実態を解明することを目的として、当該期35年分の民事司法統計の数値をデータ化した。入力したデータは、裁判所数、法曹・裁判所職員数、全審級の訴訟件数(新受件数、終局区分別件数、訴訟種類別件数、訴訟期間、訴訟額等)、準備手続・調停手続での処理件数、訴訟種類小項目数等である。入力作業を終了し、(1)大正15年民事訴訟法改正前後の訴訟利用、(2)裁判所・法曹数、(3)訴訟件数の動向、(4)訴訟種類小項目などの分析を行った。平成19年度は本研究で対象とする大正期と昭和戦前期の民事司法統計のデータ入力作業に従事し、さらにマイクロフィルムにデータのない昭和16年から26年までの司法統計データの調査・収集を行った。データ化作業については、『司法省年報』(マイクロフィルム版)の民事司法統計年報全38巻(日本図書センター刊行、1990年利行)を使用して、大正元年から昭和15年までの民事司法統計につき、データ入力と一回目の校正作業とを終了した。統計採用項目は主として、訴訟件数(新受、旧受、総数)、終局区分、審理期間、訴額、訴訟種類別終局区分、訴訟種類小項日総数、訴訟利害関係人、非訟事件数(地裁および区裁)、地裁における準備手続(昭和5年以降)、調停事件件数、裁判所および裁判所職員数・法曹数等である。大正期から昭和戦前期の民事司法統計をデータ化するにあたって、大正15年の民事訴訟法改正(施行昭和4年)による昭和5年以降の統計項日の変化をどのように取り扱うかが最も重要な問題であった。本研究では、まずは基礎データを作成するために、司法統計資料の項目に沿って入力を行った。その後に、大正15年民事訴訟法改正前後を区分しないで一枚の統計表を作成することが出来るように、項目の読み替え等を行った。なお、最高裁判所図書館、法務図書館、国立公文書館等での調査結果から、昭和16年から26年までの期間については、『司法一覧』、『民事事件の概況』、『明治以降裁判統計要覧』等を用いてデータ入力を行うことに決定し、資料の複写等を行った。本研究の目的は、司法省民事統計年報の分析を通じて、大正・昭和戦前期における民事訴訟の実態を具体的に解明することである。2年間の補助金交付期間に、大正・昭和戦前期35年分の民事司法統計の数値を電子データ化した。入力したデータは、法曹・裁判所職員の人数、裁判所数、全審級の訴訟件数(新受件数、終局区分別件数、訴訟種類別件数、訴訟期間、訴訟額、訴訟関係人等)、準備手続および調停手続での処理件数、訴訟種類小項目別訴訟件数等である。データ入力作業を終了し、(1)新受件数や訴訟種類別件数の動向分析、(2)大正15年の民事訴訟法改正前後(手続法の変化)における訴訟利用の分析、(3)裁判外紛争解決制度の分析、(4)当該期における法曹の分析等を行った。本研究を通じて、林屋礼二=菅原郁夫=林真貴子編著『統計から見た明治期の民事裁判』(信山社、2005年)と、昭和27年から平成期までの司法統計を分林屋礼二=菅原郁夫編著『データムック民事訴訟第2版』(有斐閣、2001年)との双方で扱うことが出来なかった、大正・昭和前期(昭和26年まで)の司法統計の数値の電子データ化を果たし、明治期以降現代に至るまで司法省・法務省が作成してきた民事司法統計のデータ化とその分析を完成させることができた。なお本研究成果は上記書籍と同様の形態で出版することが内定している。
情報銀行の経済分析ー個人の非合理性と便益の多様性への制度的対応ー

本研究の目的は、「情報銀行を中心としたパーソナルデータの取引に関する制度が機能するために必要な政策提言をおこなう」ことである。本研究では「生産費用の概念が通常の財と異なるパーソナルデータについて、個人はその供給者として合理的な意思決定が可能なのか?」という観点から「個人のパーソナルデータに対する金銭評価の非合理性」、「情報銀行が提供する便益の多様性と選好」を分析することで政策提言につなげる。
ペニシリン耐性肺炎球菌感染症の迅速診断に関する研究

ペニシリン耐性肺炎球菌における耐性機構は、βラクタマーゼによるものではなく、ペニシリン結合蛋白(PBP)のペニシリンに対する親和性の低下が原因とされている。これまでの研究でペニシリン耐性肺炎球菌においては、PBP1A、2X/2A、2Bに対する親和性が同時に低下している場合が多いことが明らかになっている。そこで今回の研究ではまずペニシリン感受性菌と耐性菌におけるそれぞれの遺伝子上の違いを検討し、それぞれの遺伝子上には感受性菌には存在しない耐性ブロックがあることを再確認した。この耐性ブロックの遺伝子配列を同定しようと試みたところ、新しい論文で、ペニシリン感受性pbpX遺伝子から生じたモザイクpbpX遺伝子が耐性菌の主要クローンであることが発表された。この論文を参考にして、いくつかのプローブをつくりIn situ hybridizationでこの遺伝子を検出することを試みた。しかし、陽性のシグナルは得られなかった。今後はPCRを用いて検出を行う予定である。
担子菌(キノコ)類におけるオートファジー発現機構の解析

オートファジーとは、真核生物に存在するタンパク質分解機構の一つであり、オルガネラやタンパク質を包み込むオートファゴソームと呼ばれる膜を介したバルクな分解系である。本研究では、担子菌Coprinus cinereusにおけるオートファジーの発現機構について明らかとするため、同機構のマーカーと考えられており、オートファジー誘導時において液胞に取り込まれるオートファゴソーム構成タンパク質Atg8に焦点を当て、その解析を行った。まず、C.cinereus由来のAtg8ホモログ(CcAtgB)の機能について、出芽酵母のATGB破壊株が示す性質を指標に解析を行ったところ、CcAtg8cDNAを導入した破壊株では、出芽酵母野生株と同様の性質が観察され、CcAtg8が出芽酵母内においてAtg8として機能していることが示唆された。また、C.cinereus中におけるCcAtg8遺伝子の転写レベルでの発現解析の結果、同遺伝子は窒素源飢餓条件下でその転写量が増加することが観察された。次に、C.cinereusにおけるオートファジーの誘導条件について、緑色蛍光タンパク質(GFP)を指標としたCcAtg8の局在から解析を行った。C.cinereusより単離したCcatg8プロモーター領域の下流に、GFP遺伝子とCcAtg8cDNAを組み込み、GFP-CcAtg8融合タンパク質を発現させるようなプラスミドを構築し、C.cinereusへ導入した。解析の結果、目的遺伝子が導入された形質転換株では、窒素源飢餓およびラパマイシンの添加により、早い段階での液胞中への緑色蛍光の蓄積(液胞へのGFP-CcAtg8の移行)が観察された。このことは、担子菌C.cinereus中において、オートファジーが窒素源飢餓やラパマイシンの添加で強く誘導されることを示唆するものである。オートファジーとは、真核細胞において、非特異的に細胞内に存在するオルガネラやタンパク質を分解するシステムである。オートファジーに関する研究は、酵母におけるオートファジー関連遺伝子が同定されて以来、その分子機構が急速に解明されつつあり、単に栄養飢餓状態の防御機構というだけでなく、細胞の発達過程などにおいても重要な役割を持つことが考えられている。一方、担子菌(キノコ)類は、顕著な形態変化を伴う生長過程を持ち、その過程は、光、低温、栄養飢餓などの要因により巧みにコントロールされている。本研究では、担子菌類におけるオートファジー発現機構の解明を目的として、平成17年度は以下の研究を行った。まず、ゲノムプロジェクト情報に基づき、オートファジーにおいて重要な役割を果たすAtg8のホモログcDNA(Ccatg8)を担子菌Coprinus cinereusより取得した。解析の結果、取得したホモログ(CcAtg8)は他生物の同タンパク質と極めて高い相同性を有することが明らかとなった。また、Saccharomyces cerevisiaeにおいてAtg8は栄養飢餓状態にシフトすると転写レベルで強く発現することから、CcAtg8についても同様の解析を行った。その結果、Ccatg8のノーザンハイブリダイゼーションシグナルは、C.cinereus菌体を栄養飢餓状態にシフトすると上昇し、その後、6時間後には下降して行くことが確認され、CcAtg8の転写レベルでの発現制御機構の存在が示唆された。さらに、S.cerevisiaeの野生株および胞子形成能を欠損したAtg8破壊株を用いて、CcAtg8の機能解析(胞子形成能の検討および緑色蛍光タンパク質を用いた局在解析)を行った結果、CcAtg8は、S.cerevisiae Atg8の働きを相補することが確認された。
液晶性ナノ空間を用いた新反応場の創出

本研究では、液晶の中に構築したナノ空間を利用した、今までに例を見ない反応場を構築する。我々は、カラムナー液晶性の大環状大環状化合物を作ることで、分子を内包できるナノ空間を液体の中に創り出すことに成功してきた。反応媒体として大環状カラムナー液晶のナノ空間を用いることは、液晶性ナノ空間に反応基質分子を集積・配向することを意味し、空間が規定する精密選択的合成への展開が期待できる。本研究では、この新しいナノ空間を最大限に活用し、様々な新しい反応と、それにより得られる機能物質構築を行う。本課題は、大環状カラムナー液晶の中に構築されるナノ空間における流動性、配向性、相転移性を活用することにより、新規な精密選択的合成や機能性材料合成等の合成反応場、ならびに分子・イオン輸送反応等の反応場としての新規なナノ空間としての有用性を提唱するものである。人工液晶性大環状化合物をナノ空間の反応場として利用するところに独自性があり、液晶の新しい利用法として学術的価値が高い。実施計画事項が多くあるが、各々の系について定量的解析を実行して有用範囲を検証できれば、応用面での波及効果も大きい。
光CVDによる酸化物薄膜の常温合成プロセスの反応解析

本研究の目的はTRIESを原料として、常温で光CVDによりシリカ膜を合成し、その反応解析を行なう事を目的としている。光CVDの予備的知識を得るために、熱CVDによるTRIESからの成膜について研究を行なった。窒素をキャリアガスとし恒温槽の中のTRIESをバブリングして混合したものにさらに窒素と酸素を混ぜ反応管へと運び、シリカを成膜させた。反応管の出口から出てきたガスを四重極質量分析計で測定した。実験条件は反応温度9231173K、操作圧1100Torr、全流量501000ccm、酸素濃度050mol%、TRIES濃度0.0110mol%とし5120min実験を行った。反応管内では、高温部(923K以上)と低温部(370K以下)の2つの成膜部位を持つ。低温部で析出した膜は、膜中に多量の有機成分が存在し実用に適さない。以下、高温部で成膜した膜について記す。1173Kの場合、反応管上流に成膜速度の最大値が生じ、その後方で急激に成膜速度が減少する。1023Kではほぼブロードな成膜速度分布となる。四重極質量分析計の測定の結果、973K以上では反応管出口ではTRIESの分子量以上のピークが多数検出された。TRIESの熱CVDの解析のためには気相中で重合反応により多種の中間体を形成し、それが基板に移動し表面反応を経て膜化する反応モデルを考える必要があると思われる。TRIESの熱CVDにより、低温でシリカの膜を合成する事が可能であるが、析出した膜中には多量の有機成分を含有し、実用には適さない。これは酸化反応が十分に進行していないためであり、低温で有機物を含有しないシリカ膜を合成するには、光CVDが有効であると思われる。現在、オゾンを供給すべく、発生装置の濃度を定量化中である。また、紫外ランプを使用した発光装置を自作中であり、光CVDでの成膜実験を準備中である。
レーザマイクロダイセクションによる染色体特異的DNAライブラリーの構築-コムギ第1同祖群染色体の分子的解析

コムギ第1同祖群染色体に由来するDNAライブラリーを構築するため、六倍性コムギ(栽培種Chinese Spring)の異数体ダイテロソーミックス-1AL、-1AS-1BL、-1BS、-1DLとモノテロダイソーミックス-1DSから染色体標本を作製し、レーザマイクロダイセクションを行った。これまでは、テロ染色体以外の染色体をレーザにより消去し、残ったテロ染色体を鋭利なガラスニードルで削り取る操作を行ってきた。しかし、レーザを照射する際に染色体断片が飛び散り、ターゲットとする染色体上に残ることが考えられたため、レーザ照射を極力省き、直接ガラスニードルで削り取ることにした。その結果、4,5本のテロ染色体からでも十分なDNA増幅が行えた。増幅したDNAをプローブとしてFISH(蛍光in situハイブリダイゼイション)を行ったところ、特異的なシグナルは得られず、すべてのコムギ染色体の全体にシグナルが観察された。これは、増幅DNAに含まれている散在型反復配列(レトロトランスポゾン様配列など)によるものと考えられた。また、特異的に増幅するミニサテライトなども検出された。これまでの解析から、増幅したDNA断片には、ESTや既知遺伝子のコーディング領域とホモロジーを示す配列がかなりの割合(40%)で含まれていることがわかった。そこで、これら遺伝子に相当するcDNAの直接選抜を試みた。プローブには、マイクロダイセクトした染色体からDOP-PCRで増幅したDNAを用い、これをビオチン化した。cDNAは、幼穂からポリA^+mRNAを抽出した後、SMART(クロンテック)により合成した。cDNAには、マイクロサテライトを含むものがあるため、ゲノミックDNAから調整したCot1 DNAをプレハイブリダイゼイションの段階で加えた。2回の直接選抜を行い、PCRを行ったところ、スメアの中に数本のバンドが観察された。現在、増幅したcDNAの解析を進めている。25個のテロ染色体をPCR用チューブに集め、DOP(Degenrated Oligonucleotide Primers)-PCRによってDNAを増幅した。その結果、数十塩基対から2kbほどの増幅が観察された。増幅したDNAの染色体特異性を検定するために、FISHを行ったが、はっきりとした特異性は検出できなかった。これは、増幅DNAにゲノム中に散在する反復配列が多く含まれているためであると推定された。現在、これら反復配列の同定を行っている。また、増幅したDNAの特性を調べるため、1BL、1AL染色体から増幅したDNAをクローン化し、一部について塩基配列を決定した。テロ1BLからのクローンについて、データベースによるホモロジー検索を行った結果、約37%のクローンは、コムギ、オオムギ、イネ、シロイヌナズナ等のゲノム配列と相同性を示した。このうちの1/4は、レトロトランスポゾン様配列であった。ESTや特定遺伝子のコーディング領域とホモロジーを示したのは全体の約37.5%であり、類似性が認められなかった配列も25%あった。相同性を示した遺伝子には、高分子グルテニン遺伝子など第1同祖群染色体にすでにマップされているものもあったが、他の染色体上にマップされている澱粉合成酵素遺伝子なども含まれていた。他の染色体腕由来のクローンについても同様に解析している。

コムギのダイテロソーミックスを用いて、特異的なテロ染色体1ALと1BLをマイクロダイセクションにより切り取り、そのDNAを増幅した。これまでは、テロ染色体以外の染色体をレーザにより消去し、残ったテロ染色体を鋭利なガラスニードルで削り取る操作を行ってきた。しかし、レーザを照射する際に染色体断片が飛び散り、ターゲットとする染色体上に残ることが考えられたため、レーザ照射を極力省き、直接ガラスニードルで削り取ることにした。その結果、4,5本のテロ染色体からでも十分なDNA増幅が行えた。増幅したDNAをプローブとしてFISH(蛍光in situハイブリダイゼイション)を行ったところ、特異的なシグナルは得られず、すべてのコムギ染色体の全体にシグナルが観察された。これは、増幅DNAに含まれている散在型反復配列(レトロトランスポゾン様配列など)によるものと考えられた。また、特異的に増幅するミニサテライトなども検出された。これまでの解析から、増幅したDNA断片には、ESTや既知遺伝子のコーディング領域とホモロジーを示す配列がかなりの割合(40%)で含まれていることがわかった。そこで、これら遺伝子に相当するcDNAの直接選抜を試みた。プローブには、マイクロダイセクトした染色体からDOP-PCRで増幅したDNAを用い、これをビオチン化した。cDNAは、幼穂からポリA^+mRNAを抽出した後、SMART(クロンテック)により合成した。cDNAには、マイクロサテライトを含むものがあるため、ゲノミックDNAから調整したCot1 DNAをプレハイブリダイゼイションの段階で加えた。2回の直接選抜を行い、PCRを行ったところ、スメアの中に数本のバンドが観察された。現在、増幅したcDNAの解析を進めている。
ラット根尖孔外バイオフィルムモデルにおけるアジスロマイシン根管貼薬の有効性の検討

根尖性歯周炎の中には通常の感染根管治療で治癒しないものが一定数存在し、抜歯に至ることも少なくない。難治化の原因のひとつとして、根尖孔外バイオフィルムの存在が挙げられる。一方で、マクロライド系抗生物質のアジスロマイシンは抗バイオフィルム効果を有することが報告されている。そこで本研究では、難治性根尖性歯周炎に対する非外科的な新規治療法の開発を目指し、すでに開発しているラット根尖孔外バイオフィルムモデル上でアジスロマイシンを根管貼薬剤として適用することにより、ラットを用いて根尖孔外バイオフィルムに対するアジスロマイシンの効果を検討する。
組織におけるリ-ダ-シップと意思決定に関する研究

1.リ-ダ-シップ行動変容をもたらす認知心理学的メカニズムの解明:三隅と米谷は10万にのぼるPMサ-ベイのデ-タの解析をもとに、リ-ダ-シップ3要因間の関係、並びにそれらとリ-ダ-シップ効果性に関する行動計量的モデルの構築を試み、説明力も一般性も高い重回帰式を同定し、それに基づくリ-ダ-シップ方略策定の可能性を検討した。佐藤は中学校学級担任教師を対象としたPMサ-ベイを実施し、学級集団のモラ-ルの変化と教師のリ-ダ-シップの変化との関係を調べた。その結果、PM→P、M→pmの学級では有意なモラ-ルの低下がみられるのに対し、M→PM、pm→Pの学級ではモラ-ルの低下がみられず、生徒の学校モラ-ルを高め、それを維持強化する上で、学級担任教師のP、M両指導行動の強化が欠かせないことが示唆された。篠原は養育態度がPM型である父親と母親の下で子供の自己教育力が最も高いことを見出した。2.リ-ダ-シップの計画的変容のための実践的プログラムの開発:吉田と橋口はそれぞれ、集団力学研究所や奈良大学が主催したPMT(PM式リ-ダ-シップ訓練)を担当してプログラムの作成、実施、フォロ-アップを行い、訓練により参加者のリ-ダ-シップ行動や参加者の職場のモラ-ルが有意に向上することを確かめた。ハフシはリ-ダ-とフォロワ-の相互作用をそれぞれにPM、P、M型のフィ-ドバックを与える小集団実験を行い、PM型のフォロワ-シップが他のフォロワ-シップより望ましいことを見出した。3.リ-ダ-シップと意思決定に関する国際比較研究:三隅は海外の共同研究所とこれまでの国際比較研究の総活を論文や英文報告にまとめ、国際シンポジウムで報告した。リ-ダ-シップについて従来のPMサ-ヴェイのデ-タの再分析を通してM行動、及び圧力P行動と計画P行動という2つの下位行動形態を主成分分析によって抽出し、それらの関係を調べた。その結果、M因子と圧力P因子とに一定の関係があることを確かめた(三隅・米谷)。リ-ダ-シップPM論の認知的研究として帰属理論との関連で実験的研究を行うために、大学生を被験者として社会心理学的実験を開発・実施した。その結果、PM型リ-ダ-の下では成員が集団の成果のよさをリ-ダ-シップに帰属させ、悪い成果は成員個々人の能力・努力に帰属させやすく、一方、pm型リ-ダ-の下では逆に成果のよさを個々人に帰属させ、悪い成果をリ-ダ-シップのまずさに帰属させる傾向があることがわかった。その他、多くの集団で一勢ににできる実験技法を開発した(佐藤)。リ-ダ-シップPM論の妥当性検討の一貫として、親子関係の分析にリ-ダ-シップPM論を導入し、両親並びに父親、母親と子供との認知関係を直接バリマックス法による因子分析によって検討した。特に両親の養育行動が児童の自己教育力に及ぼす効果性を吟味した。さらに、兄弟姉妹や友だちが叱られたりほめられたりする場面を見聞することから生じる自己教育力が高く、pm型では低く、P型では女児に低い者が多くM型では父親の下で高いという結果を得た(篠原)。リ-ダ-シップの計画的変容のためのプログラム開発の作業として、リ-ダ-シップトレ-ニングへの参加者のフォロ-アップ研究を行い、研修時に宣言した行動目標の達成度を調査し、研修のあり方について考察を加えた(吉田)。意思決定については実験方法の検討と予備実験を行った。(ハフシ)。PMサ-ヴェイのデ-タの再分析をさらに進め、いくつかの企業に共通するリ-ダ-シップ変数であるMと圧力Pとのダイナミックな関係を強調するあるひとつのモデルを見出し,その妥当性を確かめた。