hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
暑熱によるブロイラーの筋肉成長阻害のメカニズム

本研究では、先ず、市販のエアコン等を利用して環境調節室を二室製作し、次いでこれによってブロイラーを飼育し、環境温度による血中ホルモンと筋肉蛋白質の代謝回転速度等の変化を調べた。自作した環境調節室は首尾よく機能し、15°Cから35°Cまでの範囲で正確に温度調節可能であった。湿度も60±10%に制御可能であった。この環境調節室を用いて、いずれも強制給餌により飼料給与量を一定にして、4回の実験を行った。実験Iでは、増体量、飼料効率、筋肉蛋白質の合成・分解速度に対する高温(34°C)ならびに低温(19°C)の影響を調べた。その結果、増体量は低温により減少したが、高温ではむしろ増加傾向を示した。飼料要求率は低温で増加し、高温で低下する傾向を示した。筋肉蛋白質の合成・分解速度はいずれも低温で増加し、高温で減少傾向を示した。実験IIでは、甲状腺ホルモンに的をしぼり、暑熱とブロイラーの筋肉蛋白質の合成・分解速度との関係を調べた。その結果、暑熱により甲状腺機能が低下し、筋肉蛋白質の合成・分解速度が共に著しく低下することが分かった。実験IIIおよびIVでは、それぞれ環境温度を25°C、28°C、31°Cならびに25°C、22°C、19°Cとして、筋肉蛋白質の合成・分解速度、血中サイロキシン濃度および血中コルチコステロン濃度に対する影響を調べた。その結果、筋肉蛋白質の合成および分解速度はいずれも低温で増加、高温で減少したが、本実験では有意差を示すことはできなかった。血中サイロキシンは、予想どうり、高温で低下、低温で増加した。血中コルチコステロンも高温で低下、低温で有意に増加した。本研究では、先ず、市販のエアコン等を利用して環境調節室を二機自作し、次いでこれによってブロイラーを飼育し、環境温度による血中ホルモンと筋肉蛋白質の代謝回転速度等の変化を調べた。自作した環境調節室は首尾よく機能し、15゚Cから35゚Cまでの範囲で正確に温度調節可能であった。本年度は、二回の動物実験を行って、増体量、飼料効率、筋肉蛋白質の合成・分解速度、血中サイロキシン量および血中コルチコステロン量に対する高温(34゚C)ならびに低温(19゚C)の影響を調べた。対照鶏は適温(25゚C)で飼育した。供試ブロイラーとしては試験開始時15日齢の雄(アーバーエーカー)を使用し、飼料は十分量を強制給餌した。筋肉蛋白質の合成・分解速度はN^τメチルヒスチジン法により測定した。血中サイロキンは市販のキットを用いてEIA法により、血中コルチコステロンはHPLC法によって定量した。血中サイロキシンは、予想に反して、高温で増加し、低温で増加傾向を示した。血中コルチコステロンは、高温、低温いずれによっても増加する傾向を示した。筋肉蛋白質の代謝回転が環境温度によって変化するのは興味ある事実である。甲状腺機能は低温環境で著しく賦活されることなく、高温環境で予想に反してわずかに昂進した。サイロキシンの測定法(キット)に問題があったと考えられる。本年度は、環境温度の変化に伴うブロイラーの成長および筋肉蛋白質の代謝回転の変化と血中ホルモン量の関連を明確にすることはできなかった。

次年度、ホルモン定量法を検討して、再度同様の実験を行う予定である。本研究では、自作した環境調節室を用いて2回の実験を行い、血中ホルモンと筋肉蛋白質の代謝回転速度等に対する環境温度の影響を調べた。環境温度は、実験1では25°C、28°Cおよび31°Cとし、実験2では25°C、22°Cおよび19°Cとした。湿度は60±10%に制御した。供試ブロイラーとしては試験開始時15日齢の雄(チヤンキー)を使用し、飼料は、十分量を供試鶏全てに正しく同量、強制給餌した。筋肉蛋白質の合成・分解速度はNtau-メチルヒスチジン法により測定した。血中サイロキシンは市販のキットを用いてEIA法により、血中コルチコステロンはHPLC法によって定量した。その結果、増体量は低温区に比べ高温区で有意に増加した。飼料要求率は高温区で有意に低下した。筋肉蛋白質の合成・分解速度はいずれも低温で増加、高温で減少したが、本実験では有意差を示すことができなかった。血中サイロキシンは、予想どうり、高温区で低下、低温区で増加した。血中コルチコステロンは、高温により低下、低温により有意に増加した。本実験では有意差が得られれなかったが、筋肉蛋白質の代謝回転が環境温度によって変化することはすでに確認済みである。甲状腺機能は低温環境で賦活されるが、著者らはすでに筋肉蛋白質の合成・分解速度が甲状腺機能と密接に関連することを明らかにしており、低温環境で筋肉蛋白質の合成・分解速度が早くなる事実をよく説明できる。一方、血中コルチコステロンは、高温により低下、低温により有意に増加したが、著者らは甲状腺ホルモンとコルチコステロンが相乗的に筋肉蛋白質の分解速度を高めることを認めており、両ホルモンが共同的に作用するとすれば、暑熱による筋肉蛋白質の合成・分解速度低下を一層よく説明できる。
リン酸化蛋白質のクローニングによる甲状腺ホルモン分泌の細胞内情報伝達機構の解析

ラット甲状腺培養細胞株であるFRTL-5cellを^<32>PでラベルしTSHで刺激して二次元電気泳動で解析すると、約24kdのAcidic proteinのリン酸化と分子量約19kdで中性側の2つのspotの脱リン酸化が見いだされた。これらの反応はC-Kinaseの刺激剤であるTPAでは起こらず、adenylate cyclaseの刺激剤であるForskolinによって完全に再現された。すなわち、これらのproteinはA-Kinase系を介する情報伝達系のカスケードに位置し、TSH刺激による甲状腺ホルモン分泌機構に関与していることが推定された。しかもprotein kinaseのみでなくprotein phosphataseもTSHの情報伝達系に深く関与していることを推定させた。一方、ヒトの甲状腺乳頭腺癌由来の細胞株であるNIMIはIL-1によってその増殖が制御されていることが知られている。NIMIにおいてIL-1_αにより28kdpI約5.5のAcidic proteinがリン酸化され、このスポットはTPAでのみリン酸化されることによりC-Kinase系を介するカスケード上の蛋白質であることが推定された。次に、FRTL-5におけるリン酸化蛋白のfractionation解析では、両者の蛋白とも膜分画優位に存在し、Triton X 100で可溶化しイオン交換クロマトによる部分精製に成功した。現在、二次元電気泳動で単離しProblot membraneにtransferしてmicrosequencingの段階である。今後、得られたpeptide sequenceのデータベース解析により既知の蛋白かどうかを検討し、未知であればdegenerate primerを作成しcDNA libraryをscreeningする予定である。甲状腺培養細胞株であるFRTL-5cellやNIM 1 cellを^<32>PでラベルしTSH、Forskolin、TPAで刺激し二次元電気泳動で解析した。その結果約24kdのAcidic proteinがTSHとForskolinの両者によって有意にリン酸化され、このproteinがA-Kinase系を介する情報伝達系のカスケードに位置し、TSH刺激による甲状腺ホルモン分泌機構に関与していることが推定された。また、TSH刺激にて分子量約19kdで中性側の2つのspotは有意に脱リン酸化されることを同時に発見した。このことはprotein kinaseのみでなくprotein phosphataseもTSHの情報伝達系に深く関与していることを推定させた。現在これらの蛋白質のイオン交換クロマト等を用いた純化のstepにはいっている。純化精製の材料としてはリン酸化反応に用いたcell lineが望ましが、量的な問題を克服するために甲状腺手術材料からの精製の可能性についても検討をおこなっている。今後、甲状腺ホルモン分泌における蛋白燐酸化反応で見いだしたこれら蛋白質の解析を進めることによって、TSH刺激によるA-Kinase系を介したホルモン分泌の機序を明らかにしてゆきたいと考える。甲状腺培養細胞株であるFRTL-5cellを^<32>PでラベルしTSHで刺激して二次元電気泳動で解析すると、約24kdのAcidic proteinのリン酸化と分子量約19kdで中性側の2つのspotの脱リン酸化が見いだされた。しかもprotein Kinaseのみでなくprotein phosphataseもTSHの情報伝達系に深く関与していることを推定させた。リン酸化した細胞蛋白のfractionation解析では、両者の蛋白とも膜分画優位に存在し、Triton X 100で可溶化しイオン交換クロマトによる部分精製に成功した。

現在、二次元電気泳動で単離しProblot membraneにtransferしてmicrosequencingの段階である。今後、得られたpeptide sequenceのデータベース解析により既知の蛋白かどうかを検討し、未知であればdegenerate primerを作成しcDNA libraryをscreeningする予定である。
酸素濃度の感知機構とエリスロポエチン遺伝子の発現制御機構の解明

原核生物の酸素センサーFixLでは、ヘム鉄が酸素の着脱に関与していることが想定されたので、理化学研究所・生体物理化学研究室との共同研究により、ヘムを固定しているアミノ酸残基を決定した(Nakamura et al.,1998)。さらに、ヘム鉄を含んだ酸素センサーFixLを結晶化し(Miyatake et al.,投稿中)、立体構造を解明することに成功した(Miyatake et al.,投稿準備中)。Differential ScreeningやmRNA Differential Display等の技術を用いて、低酸素状態や金属暴露よって発現が誘導される遺伝子群(酸素・金属応答遺伝子スーパーファミリー)の存在を明らかにした。そして、全遺伝子の約1%が、このスーパーファミリーに属するものと考えられ、おそらく数百種類の遺伝子があるものと推定している。さらに、それらの中から新規の遺伝子を見い出した(Okada et al.,投稿中)。エリスロポエチン遺伝子のプロモーター領域が低酸素状態において活性化される現象は、細胞系列に特異的であることを解明した(Kambe et al.,1998)。さらに、エリスロポエチンの遺伝子発現は、2種類の転写因子(HNF-4とHIF-1)の相互作用によって制御されていることを解明した(Zhang et al.,投稿準備中)。本年度は、エリスのポエチン遺伝子のプロモーター領域の解析を行なった。また、低酸素状態において誘導される遺伝子群を、mRNA Differential Display法により、クローニングし、塩基配列を決定した。多くの遺伝子のプロモーター領域の-30baseの領域にはTATA Boxがあり、TATA-Binding Protein(TBP)という基本転写因子が結合し、ある一定レベルの転写が常に起こっている。しかし、エリスロポエチン遺伝子は正常状態で転写活性が抑制されている。その原因として、-30baseの領域がTATA BoxではなくGATA Motifになっているために、TBPが結合しにくくなっており、TBPのかわりに、複雑のGATA-TFが結合していることによって正常状態での転写活性が弱くなっているものと考えられた。ただし、このような突然変異はまだ報告がない。また、低酸素状態において、誘導される遺伝子を約200種類クローニングした。塩基配列を決定し、Honolosy Searchを行なった結果、約20種類の新規の遺伝子がみつかった。現在、cDNA全長のクローニングを行なっている。
デンドリマーリアクターを用いたサブナノ粒子反応場の創出

本研究では、精密金属集積機能を有するデンドリマーを分子リアクターとして利用し、新しい反応場と新しい超微粒子の創成し、触媒応用を目指している。具体的な項目は次の3項目である。1)異種金属原子自在集積法の確立、2)サブナノ合金の合成、3)新触媒機能の解明:1.異種金属原子自在集積法の確立代表者らのフェニルアゾメチンデンドリマーは、置換基や結合様式を変えてポテンシャル勾配を制御できる。現在、30種類の金属イオンの集積を可能とし、錯形成定数の大きい順に飾り付けた異種金属配列させたヘテロ金属集積を実現しており、金属種の拡張を試みた。特に今後の反応系への展開を目指し、触媒特性の広いパラジウム塩の錯形成を実施、精密な金属集積を達成した。2.サブナノ合金の合成サブナノ合金の合成法を汎用性の高い手法として確立する事を目指した。各種金属の酸化還元電位に応じた還元剤の選択、還元条件を検討、など合成条件の検討が必要である。これまで金属塩の還元剤として水素化ホウ素ナトリウムを用いてきたが、系中にコンタミネーションし易い問題点があった。今回、領域内の真島先生ら(阪大)が開発した、有機シリル系還元剤の使用を試みた。水素化ホウ素ナトリウムと同じく、塩化金を還元し、白金サブナノ粒子を得る事に成功した。高純度さブナの粒子を得るための新しい合成法として期待される。また、真島先生に研究室にお越しいただき、御講演と情報交換、共同研究について議論を実施した。今後、真島先生らと共同研究を推進する事を決定した。27年度が最終年度であるため、記入しない。
3次元非構造格子におけるベクトル/スカラー量の高速同時可視化技法の開発

1993年にCabralらによって提案されたLine Integral Convolution(LIC)法は,ホワイトノイズ画像を流れの方向に沿ってぼやけさせることによって流れを表現する.大域的な流れの様子や複雑な渦の可視化ができるといった利点が注目され,多くの拡張が報告されている.本研究において、平成9年度はこのLIC法を非構造格子で表されている3次元物体表面での流れを可視化できるように拡張した.非構造格子LIC法は,3次元のソリッドノイズを入力とし,視点と出力画像の各ピクセルとを通る直線と物体との交点を求め,その点から物体表面に沿って流線を算出し,ソリッドノイズを流線上に定義されているローパスフィルタと畳み込むことで出力画像を生成する.このようにソリッドテクスチャリング技法を用いるため,テクスチャマッピングなどのグラフィックスハードが直接利用できず,表示速度が遅いという欠点も持っていた.平成10年度はこの非構造格子LIC法の高速化を行った.物体と視線との交点の算出はハードウェアZバッファリング機能を利用し,流線および畳み込み計算はStallingらによって提案された高速2次元LIC法を3次元に拡張することにより非構造格子LIC法の処理速度を劇的に早めることに成功した.また,テクスチャマッピングを利用した3次元構造格子のための高速3次元LIC法がFossellらによって提案されている.しかし,この手法では,格子の密度が場所によって極度に異なる場合,3次元曲面にマッピングされたテクスチャに歪みが起きることがある.平成10年度は,このような歪みを補正する新たな手法も提案した.非構造格子は、有限要素法等の計算スキームを利用する多くの応用で必要不可欠である。格子点が規則正しく並ぶ構造格子と比較して、格子の並びに規則性をもたないため、非構造格子データはより高度な可視化技法を必要としている。一方ベクトルとスカラー量の効率的な同時表示法に流線積分畳み込み(LIC)法が現在たいへん注目されている。入力ホワイトノイズ画像を流れの方向にぼやけさせ、流れを示すテクスチャを生成することにより、LIC法は流れの微細な構造や大域的な特徴を直観的かつ効果的に可視化することができる。また、スカラー量もテクスチャの色などを利用して効果的に可視化することができる。しかし、従来のLIC法では、流れ場の格子のセルが入力画像のピクセルと1対1関係にある必要があるため、その適用が構造格子だけに制限されていた。本研究の初年度である平成9年度はまずこのLIC法の3次元非構造格子への拡張を試んだ。そして、CG分野で利用されているソリッドテクスチャンリング技法を借用し、入力画像にソリッドノイズを用い、流線計算を3次元非構造格子上で直接行うことにより、非構造格子で表されている3次元面上の流れを可視化できるLIC法の開発に成功した。また、1995年にドイツで開発された2次元構造格子のためのLIC法の高速化アルゴリズムを非構造子に向けて拡張し、グラフィックスワークステーションの高速レンダリングハードウエアを利用した非構造格子のための高速LIC法も提案、実装した。平成10年度は同技法の非定常流への応用および及び3次元LIC画像の表示法について研究を継続する予定である。1993年にCabralらによって提案されたLine Integral Convolution(LIC)法は,ホワイトノイズ画像を流れの方向に沿ってぼやけさせることによって流れを表現する.大域的な流れの様子や複雑な渦の可視化ができるといった利点が注目され,多くの拡張が報告されている.本研究において、平成9年度はこのLIC法を非構造格子で表されている3次元物体表面での流れを可視化できるように拡張した.非構造格子LIC法は,3次元のソリッドノイズを入力とし,視点と出力画像の各ピクセルとを通る直線と物体との交点を求め,その点から物体表面に沿って流線を算出し,ソリッドノイズを流線上に定義されているローパスフィルタと畳み込むことで出力画像を生成する.このようにソリッドテクスチャリング技法を用いるため,テクスチャマッピングなどのグラフィックスハードが直接利用できず,表示速度が遅いという欠点も持っていた.平成10年度はこの非構造格子LIC法の高速化を行った.物体と視線との交点の算出はハードウェアZバッファリング機能を利用し,流線および畳み込み計算はStallingらによって提案された高速2次元LIC法を3次元に拡張することにより非構造格子LIC法の処理速度を劇的に早めることに成功した.また,テクスチャマッピングを利用した3次元構造格子のための高速3次元LIC法がFossellらによって提案されている.しかし,この手法では,格子の密度が場所によって極度に異なる場合,3次元曲面にマッピングされたテクスチャに歪みが起きることがある.平成10年度は,このような歪みを補正する新たな手法も提案した.
快・不快感情を喚起する言語情報に対する認知特性とその機構に関する研究

快・不快感情を喚起する言語材料として,大学生の自伝的記憶を用いて,それらの項目に対する快・不快判断課題を実施し,判断に要する反応時間を測定した.集団実験に被験者として参加した大学生は,まず10項目から成る抑欝傾向を測定するための検査(CES-D)を受け,次に30分にわたって誕生から高校3年生の3月31日までの期間における自伝的記憶を想起し,その想起項目を書き出すことを求められた.さらに各被験者は自らが想起した想起項目に対する快不快評定を求められた.これらの一連の集団実験が実施された約1ヶ月後に,先に案施されたCES-D検査によって,抑鬱性が高いと判断された被験者(HD群)と低いと判断された被験者(LD)が,快・不快判断実験に参加した.HD群とLD群の被験者に呈示される快・不快項目は,各人が想起した項目と,他人が想起した項目とを同数ずつ含み,それらはCRT上にランダムに呈示された.被験者の課題は,それらの項目に対する快・不快判断をkey押し反応によって行うことであった.実験の結果,本人が想起した項目に対する快不快判断は,他人の想起項目に対するそれよりも速く,両想起項目において,LD群の快・不快判断がHD群のそれよりもが速いことが確認された.しかし,本人の想起項目に対しては,両群において快項目は不快項目よりも速く判断されるが,他人の想起項目に対しては,逆に不快項目が快項目よりも速く判断されることが確認された.以上のことから,自己に関連する快情報の検索は,不快情報よりも速く,この傾向は高抑欝群の被験者における不快項目に対する反応の遅延として顕著に認められる.しかし,高抑欝群の被験者が,自己に関わる不快情報を含む項目の検索処理に時間を要するのか,あるいは不快項目を自らの記憶であると認めるための判断に時間を要するのかについては,なお検討の余地が残されている.快・不快感情を喚起する言語材料として,大学生の自伝的記憶を用いて,それらの項目に対する快・不快判断課題を実施し,判断に要する反応時間を測定した.集団実験に被験者として参加した大学生は,まず10項目から成る抑欝傾向を測定するための検査(CES-D)を受け,次に30分にわたって誕生から高校3年生の3月31日までの期間における自伝的記憶を想起し,その想起項目を書き出すことを求められた.さらに各被験者は自らが想起した想起項目に対する快不快評定を求められた.これらの一連の集団実験が実施された約1ヶ月後に,先に案施されたCES-D検査によって,抑鬱性が高いと判断された被験者(HD群)と低いと判断された被験者(LD)が,快・不快判断実験に参加した.HD群とLD群の被験者に呈示される快・不快項目は,各人が想起した項目と,他人が想起した項目とを同数ずつ含み,それらはCRT上にランダムに呈示された.被験者の課題は,それらの項目に対する快・不快判断をkey押し反応によって行うことであった.実験の結果,本人が想起した項目に対する快不快判断は,他人の想起項目に対するそれよりも速く,両想起項目において,LD群の快・不快判断がHD群のそれよりもが速いことが確認された.しかし,本人の想起項目に対しては,両群において快項目は不快項目よりも速く判断されるが,他人の想起項目に対しては,逆に不快項目が快項目よりも速く判断されることが確認された.以上のことから,自己に関連する快情報の検索は,不快情報よりも速く,この傾向は高抑欝群の被験者における不快項目に対する反応の遅延として顕著に認められる.しかし,高抑欝群の被験者が,自己に関わる不快情報を含む項目の検索処理に時間を要するのか,あるいは不快項目を自らの記憶であると認めるための判断に時間を要するのかについては,なお検討の余地が残されている.
放射線および塞栓術が脳の血管内皮細胞、微小循環に与える影響に関する研究

本研究では、ラットの頚動静脈吻合による脳動静脈奇形モデルおよび臨床例から、radiosurgeryおよび血管内塞栓術後に血管が閉塞するまでの血管構築の変化を、内皮細胞(CD34)、血管平滑筋(SMA)、内弾性板(EVG)、基底膜(Collagen IV)の各障害マーカーで免疫組織学的に検索して同定した。具体的には血管内塞栓術1日後より、またradiosurgery後には3カ月後より内皮細胞でVEGFが発現し、その後、内皮下組織から血管平滑筋に増殖性vasculopathyを生じて血管壁全体に変性が進展する事が確認されたH25年度はラット脳動静脈奇形モデルを作成し、血管内塞栓術の施行後、急性血管内皮障害の評価を行った。体重300gの雄Wister Ratに顕微鏡下に内頚動脈と頚静脈を血管吻合して動静脈シャントを形成し、一ヶ月後高濃度および低濃度のOnyxによる塞栓術を20体づつに行なった。1日後および1,3,6ヶ月後にsacrificeして灌流固定し、血管構築の変化を、内皮細胞(CD34)、血管平滑筋(SMA)、内弾性板(EVG)、基底膜(Collagen IV)の各障害マーカーで免疫組織学的に検索すると、内皮細胞及び血管平滑筋が選択的に細胞死に陥っている所見が得られた。現在、protein kinase C (PKC)およびvascular endotherial growthfactor (VEGF)の発現をin situで免疫組織学的に定量化し、血管新生の程度を評価中である。平成27年度は25年度に作成した脳動静脈奇形モデルを24か月後にsacrificeして塞栓術や放射線治療後の慢性期の血管構築の変化(血管内皮細胞;CD34、血管平滑筋;SMA、内弾性板;EVG、基底膜;collagen IV)を免疫組織学的に定量化し、interventionから2年間の経時的な変化を確認・把握した。また、実際の脳動静脈奇形摘出術で採取した臨床標本の組織像と比較検討した。結果、動物モデルと実際の臨床例の間には血管内皮障害と血管新生の側面から非常に高い類似性があることが明らかになったが、臨床例では脳動静脈奇形の大きさや出血の有無などの他の因子によりintervention後の組織像が強い修飾を受けることも判明した。具体的には血管内塞栓術1日後より、またradiosurgery後には3カ月後より内皮細胞でVEGFが発現し、その後、内皮下組織から血管平滑筋に増殖性vasculopathyを生じて血管壁全体に変性が進展する事が確認された脳血管障害学理由:血管内皮細胞および平滑筋に急性期の細胞死が生じている事は確認されたが、今後慢性期に血管構築がどのように変化し、血管新生が導かれていくかはいまだ不明であり、H26年度以降に評価する予定である。平成25年度に作成した塞栓術後のラット脳動静脈奇形モデルを12,24ヶ月後にsacrificeして同様に照射範囲内の血管構築の変化、PKCおよびVEGFの発現をin situで免疫組織学的に定量化し、引き続き血管閉塞と血管内皮障害の関係を経時的に定量化する。長期的な脳循環障害の程度を定量化する事により、血管閉塞の分子メカニズムと、随伴する脳循環障害発生との関係を考察する。平成25年度に施行予定であった免疫組織染色の一部(VGEF)の一部を平成26年度に繰り越したため、また国際学会への出張を緊急手術他のために取りやめたため、次年度に凝り越すことになった。平成26年度に免疫組織染色(VGEF)を施行し、また国際学会で発表する予定であり、この費用に充てる予定である。
教育的コンテンツを対象とした高度情報統合・配信に関する研究

大学における講義ビデオ、講義資料、教科書等の教育的コンテンツや、研究内容に関するコンテンツを、ネットワークを介して学内外に配信する場合に、各素材を有機的に統合することで、きめが細かく教育効果の高い情報を低いコストで提供することができる。本研究は、講義資料や教材、講義ビデオ等の教育的コンテンツを単にそのままの形態で発信するのではなく、互いに有機的に統合して、教育効果も考慮した付加価値の高い魅力的な利用者ビューを提供することを目指している。本研究では、講義のビデオや、講義に使用したプレゼンテーション資料、さらに講義に関連する教科書や配布資料等を格納し、それらの多様な教育コンテンツを緩く統合するアプローチを取る。統合のための情報はメタデータとして保持し、これによってコンテンツ自体には変更を加えない形でのコンテンツの統合と検索を実現する。このためメタデータには、動画のどの時刻にスライドの切り替えが起こったかという同期情報や、スライドに含まれる文字列へのインデクス、キーワードに対する適合度を含める。動画とスライドの同期情報は、録画時のクリック情報を使う以外に、動画とスライドのパターン認識等を利用することもできる。本年度は、格納と検索のための手法に関して検討を行い、実験システムを試作した。特に、検索にヒットした多量の講義資料をどのように表示するかという点に注目して、キーワードに対するスライドの適合度を提案し、適合度の高いスライドを優先的に表示するというアプローチを取った。適合度の算出には、動画と統合されたプレゼンテーション資料に特有の情報を利用した。本検索手法に関して、特許申請を行った。
看護学生および若手看護師の援助要請行動を促進する教育プログラムの開発

本研究は,看護学生および若手看護師の援助要請行動を促進する要因を特定するために,臨地実習を経験した看護系大学3・4年生および経験年数5年目以下の看護師に対して質問紙調査とインタビュー調査を実施する。そのデータをもとに看護学生および若手看護師の援助要請行動の評価指標,援助要請行動を促進するための「教育プログラム」を作成し,その効果を検証するとともに,ガイドブックを作成してこれらを公開する。
広範囲抗寄生虫薬の開発のための標的治療の分子基盤の確立

我々が抗マラリア薬の候補として開発を進めている環状過酸化化合物N-89はマンソン住血吸虫に対しても有効であり、マウスに感染後2週目の投与で虫体殺滅効果を、5週目の投与で虫卵数の減少とマウス内臓の病変抑制効果を示すことは昨年度までに明らかにした(特許出願済)。今年度はN-89の住血吸虫に対する阻害機構の解明を目的として昨年度に続きプロテオーム解析を行った。また、in vitroにおけるN-89の虫体に対する作用も検討した。感染5週目のマウスにN-89投与による産卵能の抑制効果は投与後4週目以降まで持続していた。このことから、虫体内で不可逆的に阻害されているタンパク質があると考え、N-89投与後2週間目の虫体タンパク質の解析を行った。産卵能抑制時に関わる標的分子探索のため、雌雄の虫体を別々に回収し、それぞれのプロテオーム解析を行った。その結果、雄の虫体で構造タンパク質が多く変動していた。これはN-89作用により雄の虫体が大きな形態変化を起こしていることを反映していると思われる。構造タンパク質以外にもprotease, signal伝達系のタンパク質等が変動していた。また、雌の虫体で変動していたタンパク質は解糖系酵素、ストレス応答タンパク質、シグナル伝達系のタンパク質等であった。これらproteome解析で同定されたタンパク質と産卵能の抑制効果との関連については現在検討中である。一方、in vitroにおいてマンソン住血吸虫成虫にN-89を250nMで直接作用させると虫体の形態変化を起こし、pairingが解消され、さらに殺滅効果のあることが判ったが、成虫虫体表面の形態的な変化は電子顕微鏡で認められなかった。したがって、N-89は住血吸虫成虫のtegmentに障害を与えているのではなく、sexual maturationを妨げることによってpairingを阻害し、産卵能の抑制を起こし〓本研究は「マラリアと住血吸虫症を克服する新しい抗寄生虫薬の開発」を研究目的としている。今年度はこの目標に基づいて、我々の開発した抗マラリア作用のある環状過酸化化合物を用いてマンソン住血吸虫に対する阻害効果を解析した。1.マンソン住血吸虫をマウスに感染させた後、1・2日目,4・5日目,7・8日目,14・15日目及び5週目,6週目,7週目に環状過酸化化合物を投与し、感染9週目に虫体及び虫卵を回収、計数した。その結果、感染2週目に投与したマウスで虫体数がコントロールの14%に減少した。また、感染5週目に投与したマウスでは虫体数は変化なかったが、虫卵数は13%になった。更に、2週目、5週目投与のいずれの場合にもマウス内臓の病変が顕著に抑制されていた。これらの結果からこの環状過酸化化合物は有望な新規抗住血吸虫薬の候補化合物であるといえる。2.環状過酸化化合物の抗住血吸虫効果をタンパクレベルで解明するため、プロテオーム解析を行った。感染2週目投与では虫体数が少なく、必要なタンパク量が得られ癒かったため、感染5週目に環状過酸化化合物を投与した住血吸虫を回収し、超音波破壊して可溶性画分を分画した。この画分を用いて二次元ゲル電気泳動、MALDI-TOF/TOF MSによるプロテオーム解析でコントロールど比べて変動のあったタンパク質を同定した。その結果、構造タンパク質、heat shock protein,シグナル伝達系等,種々の機能を持つタンパク質が同定できた。これらのタンパク質は間接的に産卵能の抑制に関与している可能性がある。しかし、オスのタンパク質が大量にあるため、直接虫卵数の減少に関与していると思われるメスのタンパク質は特定できなかった。そこで次回は雌雄の分離をした上でプロテオーム解析を行う予定である。メスの虫体から得られたタンパク質の変動を調べることで環状過酸化化合物による虫卵能の抑制に直接関与しているタンパク質、すなわち標的分子の特定が可能となると考えられる。

一方、in vitroにおいてマンソン住血吸虫成虫にN-89を250nMで直接作用させると虫体の形態変化を起こし、pairingが解消され、さらに殺滅効果のあることが判ったが、成虫虫体表面の形態的な変化は電子顕微鏡で認められなかった。したがって、N-89は住血吸虫成虫のtegmentに障害を与えているのではなく、sexual maturationを妨げることによってpairingを阻害し、産卵能の抑制を起こし〓
酸化ストレスによる糖尿病性血管障害に対するparaoxonaseの役割

血清paraoxonase(PON1)は血中では高比重リポ蛋白(HDL)上に存在し,低比重リポ蛋白(LDL)の酸化を抑制することにより動脈硬化の進展を防御している.このPON1が酸化ストレスによる糖尿病性血管障害の発症機序に関係していることと,その機序について検討した.PON1の3種類の酵素活性は健常者に比して全て糖尿病患者で低下しており,本疾患ではPON1の機能障害が存在することが明らかとなった.さらにPON1のELISAを開発し,血中濃度を測定した結果,糖尿病患者においてはPON1酵素活性が低下しているにもかかわらず蛋白濃度の低下はみられなかった.糖尿病における酸化ストレスがPON1に遺伝子レベルで作用する可能性をみるため,本遺伝子プロモーター領域を解析したところ新たな遺伝子多型を見いだした.本遺伝子多型はPON1転写活性に影響し,血中濃度に反映されることが示された.さらに,PON1プロモーター領域の解析により,PON1転写活性はIL-1で抑制,IL-6で促進された.また,酸化LDL刺激によりPON1転写活性は抑制された後,亢進した.さらに,PON1プロモーター領域のGCboxがPON1転写に必要で,転写因子Sp1が重要な働きをしていることが示された.糖尿病における酸化ストレスは本疾患の血管障害進展に影響すると考えられるが,それを抑制する可能性のあるPON1の機能が糖尿病では障害され,また,酸化ストレスが遺伝子レベルでPON1発現に影響していることが示唆された.血清paraoxonase(PON1)は血中では高比重リポ蛋白(HDL)上に存在し,低比重リポ蛋白(LDL)の酸化を抑制することにより動脈硬化の進展を防御している.このPON1が酸化ストレスによる糖尿病性血管障害の発症機序に関係していることと,その機序について検討した.PON1の3種類の酵素活性は健常者に比して全て糖尿病患者で低下しており,本疾患ではPON1の機能障害が存在することが明らかとなった.さらにPON1のELISAを開発し,血中濃度を測定した結果,糖尿病患者においてはPON1酵素活性が低下しているにもかかわらず蛋白濃度の低下はみられなかった.糖尿病における酸化ストレスがPON1に遺伝子レベルで作用する可能性をみるため,本遺伝子プロモーター領域を解析したところ新たな遺伝子多型を見いだした.本遺伝子多型はPON1転写活性に影響し,血中濃度に反映されることが示された.さらに,PON1プロモーター領域の解析により,PON1転写活性はIL-1で抑制,IL-6で促進された.また,酸化LDL刺激によりPON1転写活性は抑制された後,亢進した.さらに,PON1プロモーター領域のGCboxがPON1転写に必要で,転写因子Sp1が重要な働きをしていることが示された.糖尿病における酸化ストレスは本疾患の血管障害進展に影響すると考えられるが,それを抑制する可能性のあるPON1の機能が糖尿病では障害され,また,酸化ストレスが遺伝子レベルでPON1発現に影響していることが示唆された.本研究は糖尿病性血管合併症の発症機序の一つとして"糖尿病における酸化ストレスがParaoxonase(PON1)の機能低下により処理できないため"と仮説し証明することと,なぜ,糖尿病でPON1の機能が低下するかを明らかにすることである.これのため1)His-tagをもつPON1融合蛋白PON248(アミノ酸l08-355)を用いて家兎にてポリクロナール抗体を作成し,さらに異なる融合蛋白PON116(アミノ酸223-338)を標準物質として抗原固相化競合EIAを作成し,PON1の蛋白量測定を確立した.2)本EIAを持ちいて2型糖尿病のPON1濃度を測定した結果,健常対照に比してPON1の酵素活性は有意に低下するも濃度は差が無く,酵索のspecific activityの低下であることが分かった.3)PON1には遺伝子多型192Q/Rが存在するが,各遺伝子型から得たPON1含有HDLを精製しLDL酸化能を検討したところ,192QQに対し192RR遺伝子型PON1含有HDLは酸化抑制が低下していることが証明された.4)PON1遺伝子上流(ATG開始コドンより-l08)にT/Cの遺伝子多型を発見したが,同部位はSp1結合配列に一致し,reporter geneassayを用いて転写活性に影響することを明らかにした.さらに,ゲルシフトアッセイにより本配列部位にSp1が結合することを確認し,同部位がPON1の発現に重要であることを証明した.本研究は糖尿病性血管合併症の発症機序の一つとして"糖尿病における酸化ストレスがparaoxonase(PON1)の機能低下により処理できないためと"仮説し証明することであるが,昨年度は糖尿病ではPON1の酵素活性が低下するも蛋白濃度は低下しないことを明らかにした.また,同遺伝子上流に新たな遺伝子多型を見出し,PON1遺伝子の転写活性に影響することを明らかにした.これを踏まえ,本酵素の転写活性と酸化ストレスとの関係,および転写因子の関係をみた.その結果,PON1遺伝子上流を組み込んだluciferase reporter vectorとHepG_2細胞を用いたreporter gene assayにより,IL1刺激で転写抑制,IL6刺激で促進することを証明した.また,低比重リポ蛋白(LDL)および酸化LDLで刺激すると転写活性は48時間後には増加する反応がみられ,酸化LDLによる刺激でより強く反応した.

PON1の転写に影響する転写因子の一つは前年度Sp1であることを推定したが,新たに,Sp1発現vectorを作成し,PON1-luciferase repoter vectorとco-transfectionした結果,PON1転写活性は3-5倍まで増加し,転写因子Sp1がPON1発現に重要な作用していることを証明した.以上のことより,糖尿病ではPON1蛋白の酵素としての働きは著明に減じていること,一方ではPON1蛋白濃度の低下がみられず,酸化ストレスで転写活性がup-regulateされている可能性を示した.その最終転写因子としてSp1が重要であることが推定された.
ドローンを用いた野生ウマにおける個体および群れの行動遷移メカニズムの解明

野生ウマを対象として群れ内での個体の空間配置・動きの規則に関する研究をおこなった。5月から7月まで調査地であるポルトガル、アルガ山にて現地調査をおこなった。群れを終日追跡し、30分に一度ドローンを用いて空撮動画を収集した。前年度までに収集したデータと合わせて解析したところ、次のような重要な進展があった。まず個体間の配置には空間的非対称性が認められた。最近接個体間において、前方個体は相手個体を左後方におき、後方個体は右前方におくことが明らかになった。この結果は、群れによらず、調査期間にもよらない頑健な結果だった。以前より母子間でこのような非対称性は報告されていたが、成熟個体間でもその傾向が継続することを明らかにした。神経・脳科学からの知見によると右脳による社会的情報処理の優位性がこのような空間的非対称性を引き起こしていると考えられる。また、群れ内での個体の配置規則、行動規則を考えるうえでも重要な発見である。現在、論文を投稿し、査読中である。一方で、京都大学学術情報メディアセンターとの共同研究により、数理モデルからウマの個体間における誘引・反発に関する規則の定量化をおこなった。距離のみを変数にもつ関数から誘引・反発を決定する力を再現した。これに関して、現在論文執筆中である。野外での空撮動画から個体を抽出し、トラッキングを可能にするプログラムを作成した。これは、グラスゴー大学との共同研究によりおこなわれた。通常、ドローンのような撮影デバイス自体が動き、野生環境のような背景が一様でなく、日光による影響も大きな条件で個体の自動トラッキングをおこなうことは簡単ではない。これを解決するために、機械学習を用いたプログラムとドローンの動きと個体の動きを識別するプログラムを組み合わせた。現時点で実用レベルに達しており、今後の解析において、非常に重要な準備が整ったと言って良い。現地調査にて、スムーズにデータを収集することができた。群れ構成、環境条件などを比較し、共通性と多様性を発見するうえで、データの収集が期待通り進展したこと自体がフィールドワークにおいては重要な進展である。数値シミュレーションによる個体間における距離の調整原理を再現できたこと、最近接個体間には非対称性があることなど、ウマの群れの配置・動きの規則を考えるうえで基本的知見を発見できたことで、今後の群れにおける複雑な現象を考える準備が整ったと言ってよい。また、解析手法の開発という面でも、苦労することが予測された個体の自動トラッキングプログラムの開発を年度内で完成させらた。これは、今後の解析において間違いなく大きな進展をもたらす。研究発表の面では、空間配置の非対称性と数値シミュレーション結果に関して、2編の論文にて報告することを予定しており、その他の結果も合わせて学会にてすでに発表済み、もしくは発表を予定している。5月-7月まで再度ポルトガルに渡航し、データの収集をおこなう。秋以降にグラスゴー大学との共同研究を進め、動きの同調や意思決定メカニズムといった複雑な現象の定量的理解を目指し解析をおこなう。順調であれば年度内に論文の投稿まで進むことができると予定している。

また、解析手法の開発という面でも、苦労することが予測された個体の自動トラッキングプログラムの開発を年度内で完成させらた。これは、今後の解析において間違いなく大きな進展をもたらす。研究発表の面では、空間配置の非対称性と数値シミュレーション結果に関して、2編の論文にて報告することを予定しており、その他の結果も合わせて学会にてすでに発表済み、もしくは発表を予定している。5月-7月まで再度ポルトガルに渡航し、データの収集をおこなう。秋以降にグラスゴー大学との共同研究を進め、動きの同調や意思決定メカニズムといった複雑な現象の定量的理解を目指し解析をおこなう。順調であれば年度内に論文の投稿まで進むことができると予定している。
バイオ分離プロセスへの液膜およびマイクロエマルション技術の応用

本年度の成果内容を下記に示す。(1)液膜による脱塩法の実用化の観点から乳化液膜を用いた場合の装置形式について検討した。カチオン及びアニオン輸送用の2種類のW/Oエマルションを、互いに接触せずかつ同時に原料相と接触させる必要性があることから、撹拌槽を隔膜(フッ素コーティングを施したステンレス製金網)で仕切る形式が有効であることがわかった。(2)カチオン交換型抽出剤D2EHPAを用いることにより、セファレキシンの分離回収を安定かつ良好に行えることがわかった。また、セファレキシンとD2EHPAの錯形成反応における量論関係は1:2であることを明らかにすると共に、金属抽出で使われる反応と拡散を考慮に入れた速度式を参考にセファレキシンとセファレキシン-D2EHPA錯体の反応が律速段階となる抽出機構を提案した。(3)硝酸銀含浸液膜による高度不飽和脂肪酸エステルの分離において、膜内に温度勾配をつけることにより、温度差を駆動力として溶質を汲み上げ輸送することができた。また、新規に作製した種々の親水性膜は水溶液を膜液とする液膜の支持膜として有用であった。(4)エリスロマイシン(抗生物質)の水相-油相間における分配挙動を明らかにした。支持液膜を透したエリスロマイシンの透過機構を明らかにした。乳化液膜によるエリスロマイシン濃縮における濃縮率の向上法を提案した。(5)新しく構築した逆ミセル溶液が、高活性なタンパク質の高次構造を認識できる可能性が示された。また、逆ミセル溶液の新しい展開として、タンパク質のリフォルディングの場として有効であることが明らかとなった。(6)非イオン性界面活性剤を主体とするマイクロエマルションに機能性分子を組み込むと、分子認識に基づく特定タンパク質の選択分離や、酵素の変性を抑えた高機能反応場の構築が可能となることがわかった。(7)代表的なナノ会合コロイドであるリポソームと変性タンパク質との相互作用では、膜表面の流動性など動的な状態が、変性タンパク質の局所的疎水部位との結合に重要であることを明らかにした。またリポソームは、その膜特性を粒径・表面修飾等で制御することにより、酵素のリフォルディング中に生ずる疎水的な中間体に効果的に作用してシャペロニン機能を発言することが判明した。(8)ケロシン及びシリコンオイルを有機溶媒とした新規な逆ミセル系を調整し、モデルタンパク質lysozymeの正・逆抽出挙動を検討し、有機相中のAOT濃度及び水相のpHとKCl濃度の影響を明らかにした。また、溶媒としてイソオクタンを用いた回転円盤抽出塔によるlysozymeの連続抽出操作を行い、その安定な操作性を示すと共に、実測した濃度分布を基に混合拡散係数と総括物質移動係数を決定した。(9)AOT/イソオクタン逆ミセル系によるリゾチームの正・逆抽出速度に及ぼすAOT濃度、温度、アルコール添加など諸因子の影響を明らかにした。また、撹拌槽抽出操作による迅速な濃縮回収結果を示し、実用化への展開の可能性を示唆した。(10)バイオ分離へのキャリア輸送に基づく液膜分離の適用性を、D2EHPAによるリジン並びにAOT/イソオクタン逆ミセルによるリゾチーム系で検討した。逆抽出速度が経時的に低下し、透過基質が膜液中に蓄積する傾向を認めた。研究組織を、次の二つのグループに分けて研究を行った。その成果を以下に記す。A)従来型液膜を用いるバイオ分離プロセス発酵液からの乳酸抽出に対する最適抽出操作条件の検討を行った。また、カチオン交換体による抗生物質の反応抽出機構および速度の解析を行った(羽野)。硝酸銀含浸液膜を用い、エイコサペンタエン酸エテルエステル(EPA-Et)などの高度不飽和脂肪酸を汲み上げ輸送することができた(寺本)。支持液膜では、透過モデルより各相の境膜における物質移動係数を求めた。乳化液膜透過では解乳化を行い、エリスロマイシンの内部水相への濃縮率を検討した(江頭)。リン酸基を親水部に有する新しい界面活性剤を用いることで、酵素の活性を低下させずに、タンパク質の抽出分離が行えることが明らかとなった(中塩)。B)逆ミセルを用いるバイオ分離プロセスタンパク質を対象に、変性のない状態での抽出や、バイオアフィニティを用いる選択分離を行うためのマイクロエマルションのテ-ラリングを行い、設計指針を得た(原田)。AOT-レシチン混合型ナノ会合コロイドを調整し、これに酵素を可溶化した複合系を固定相とした新規なクロマト型連続向流分配型マイクロ・バイオリアクターを開発した(駒沢)。AOT/イソオクタン系の逆ミセルを用いてシトクロムCとリボヌクレアーゼAの抽出挙動を調べた。シクロデキストリンを介在させてアミログルコシダーゼを抽出させる検討も行った(古崎)。AOT逆ミセル系によるリゾチーム、ミオグロビンの正抽出、逆抽出速度に及ぼす諸因子の影響を明らかにした(西機)。液膜によるリジンの分離に及ぼすキャリア、膜液、pH、塩濃度の影響を検討した。D2EHPAの2-エチルヘキシルアルコール溶液が膜液に最適なことを見い出し、バルク型液膜により良好なリジンの分離が達成できた(竹内)。

カチオン及びアニオン輸送用の2種類のW/Oエマルションを、互いに接触せずかつ同時に原料相と接触させる必要性があることから、撹拌槽を隔膜(フッ素コーティングを施したステンレス製金網)で仕切る形式が有効であることがわかった。(2)カチオン交換型抽出剤D2EHPAを用いることにより、セファレキシンの分離回収を安定かつ良好に行えることがわかった。また、セファレキシンとD2EHPAの錯形成反応における量論関係は1:2であることを明らかにすると共に、金属抽出で使われる反応と拡散を考慮に入れた速度式を参考にセファレキシンとセファレキシン-D2EHPA錯体の反応が律速段階となる抽出機構を提案した。(3)硝酸銀含浸液膜による高度不飽和脂肪酸エステルの分離において、膜内に温度勾配をつけることにより、温度差を駆動力として溶質を汲み上げ輸送することができた。また、新規に作製した種々の親水性膜は水溶液を膜液とする液膜の支持膜として有用であった。(4)エリスロマイシン(抗生物質)の水相-油相間における分配挙動を明らかにした。支持液膜を透したエリスロマイシンの透過機構を明らかにした。乳化液膜によるエリスロマイシン濃縮における濃縮率の向上法を提案した。(5)新しく構築した逆ミセル溶液が、高活性なタンパク質の高次構造を認識できる可能性が示された。また、逆ミセル溶液の新しい展開として、タンパク質のリフォルディングの場として有効であることが明らかとなった。(6)非イオン性界面活性剤を主体とするマイクロエマルションに機能性分子を組み込むと、分子認識に基づく特定タンパク質の選択分離や、酵素の変性を抑えた高機能反応場の構築が可能となることがわかった。(7)代表的なナノ会合コロイドであるリポソームと変性タンパク質との相互作用では、膜表面の流動性など動的な状態が、変性タンパク質の局所的疎水部位との結合に重要であることを明らかにした。またリポソームは、その膜特性を粒径・表面修飾等で制御することにより、酵素のリフォルディング中に生ずる疎水的な中間体に効果的に作用してシャペロニン機能を発言することが判明した。(8)ケロシン及びシリコンオイルを有機溶媒とした新規な逆ミセル系を調整し、モデルタンパク質lysozymeの正・逆抽出挙動を検討し、有機相中のAOT濃度及び水相のpHとKCl濃度の影響を明らかにした。また、溶媒としてイソオクタンを用いた回転円盤抽出塔によるlysozymeの連続抽出操作を行い、その安定な操作性を示すと共に、実測した濃度分布を基に混合拡散係数と総括物質移動係数を決定した。(9)AOT/イソオクタン逆ミセル系によるリゾチームの正・逆抽出速度に及ぼすAOT濃度、温度、アルコール添加など諸因子の影響を明らかにした。また、撹拌槽抽出操作による迅速な濃縮回収結果を示し、実用化への展開の可能性を示唆した。(10)バイオ分離へのキャリア輸送に基づく液膜分離の適用性を、D2EHPAによるリジン並びにAOT/イソオクタン逆ミセルによるリゾチーム系で検討した。逆抽出速度が経時的に低下し、透過基質が膜液中に蓄積する傾向を認めた。本年度の成果内容を下記に示す。(1)液膜による脱塩法の実用化の観点から乳化液膜を用いた場合の装置形式について検討した。カチオン及びアニオン輸送用の2種類のW/Oエマルションを、互いに接触せずかつ同時に原料相と接触させる必要性があることから、攪拌槽を隔膜(フッ素コーティングを施したステンレス製金網)で仕切る形式が有効であることがわかった。
骨髄移植をうける患児、家族の看護システムに関する研究

本研究は、小児の骨髄移植の領域で求められる看護を明らかにすることを目的とし、3つの調査研究から成っている。1.過去に骨髄移植をうけ、退院した外来通院児とその親12事例のふりかえりによる面接調査を行い、親の『気がかり』と『その対処』の概要を明らかにした。2.骨髄移植をうける6事例の患児や家族に関わりながら、母親を対象に、半構成的な面接調査と、1の調査に基づき作成した質問紙調査を行い、わが子が骨髄移植をうけるという体験を母親がどのようにとらえ、対処したかについて詳細に検討した。3.小児の骨髄移植に携わる臨床看護婦302名を対象に、患児や家族の日常ケアの中で、看護婦が困難を感じた内容とその対処および患児、家族への骨髄移植の説明について感じていることを自由記述にて、また、患児、家族のケア、看護業務等の項目を選択肢により回答を求め、分析した。骨髄移植治療の決定は、医師の勧めに親が「治ると信じて」、「やらなきゃ」、「やるしかない」、と同意し、「予測できない状況への不安」を心の底に押しやっていた。骨髄移植前の親の気がかりでは、移植に対する不安が強く、医師から話しを聞く、他の人に相談する、親自身が現在のケア状況、過去の経験から対応を予測することで対処していた。骨髄移植後の気がかりでは、多くの母親が病状予測が不確かなこと、苦痛がある時に内服させること等を強く表現しており、子どもにあわせて内服させる、状態に合わせてケアするなどで対処していた。看護婦の調査結果では、多くの看護婦が内服の問題をとりあげておりその対処は、患児の気分を変えたり、何度も話す、与え方を工夫する・変更するが多く用いられており、患児のペースに合わせるは少なかった。きびしい治療過程のなかでも、患児が主体的に治療に参加できる、親が親としての役割をとれるよう援助していくことが大切である。この研究の目的は、骨髄移植をうける患児や家族の(1)治療選択について、(2)治療中の苦痛について、(3)治療後の諸問題について、これらの実態とその要因をあきらかにし、この過酷な治療をのりこえていくための看護援助の視点を明確にすることである。平成5年度は、過去に骨髄移植をうけた患児とその家族を対象に、患児や家族が骨髄移植前から現在までに体験したことを知るために、半構成的な面接を行った。母親への面接は、同意を得てテープレコーダーに録音した後、録音した内容をそのまま記録し、分析した。患児3名、母親12名の調査結果が得られた。兄弟からの同種骨髄移植7名、自家骨髄移植5名であり、移植年齢は2歳から15歳、移植後5ヵ月から7年経過していた。疾患は再生不良性貧血2名、悪性腫瘍疾患10名であった。移植後、慢性GVHD1例、再発は1例であった。移植の説明から実際の治療までの期間が長いものは、その治療に関する情報を何回も質問できる機会があり多くの情報を得ていた。ほとんどの親はこの治療を「これしかない」と期待と不安の交錯する中で意思決定を行っていた。ドナーとなる兄弟に関して多くの親が不安を抱いており、提供後の成長を案じる両親もみられた。治療中の患児の苦痛は、内服の問題が、特に、年長児に多くみられた。治療後の日常生活は、比較的順調に社会生活が送れているケースが多かったが、体力の問題や友達と違うという身体的・精神的な問題のために学校復帰が困難なケースが2例みられた。