hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
極低温表面マトリックス単離法による表面反応中間体の分光学的研究

本研究では、極低温の遷移金属表面に弱く吸着(物理吸着)した分子,準安定状態の吸着サイトにトラップされた分子,あるいは,化学吸着分子の上に不活性ガスを数層吸着させ光・電子線誘起による表面反応の脱離生成物,解離生成物を赤外反射吸収分光(IRAS)により直接観測することを目的としている.本年度は上記の目的に添って以下の研究を遂行した.(1)Pt(111)表面におけるCO酸化反応素過程の研究.低温表面において酸素原子・分子のさまざまな吸着状態を準備し,CO酸化反応における影響を研究した.さらに,25Kで酸素分子と多層のCO分子を共吸着させ,紫外光を照射することにより生成したCO_2をCOマトリックス中にトラップし,IRASにより同定することに成功した.(一部出版済み)(2)25KのPt(111)表面にNOを吸着さ,1層目はモノマーであること,2層目以降はダイマーが形成されることをIRASで明らかにした.(出版済み)(3)25KのPt(111)表面にメタン分子を吸着させ,ArFレーザー照射による解離反応をIRASで研究した.1層目のメタンの対称性がC_<3v>に低下すること,対称性の低下したメタンのみ光解離することを明らかにした.(出版済み)(4)20KのNi(100)表面に吸着したCO分子の低被覆率領域における吸着状態の変化について研究した.(出版中)(5)20KのNi(100)表面における不活性な原子/分子とCOの共吸着について研究した.(投稿準備中)本研究では、極低温の遷移金属表面に弱く吸着(物理吸着)した分子,準安定状態の吸着サイトにトラップされた分子,あるいは,化学吸着分子の上に不活性ガスを数層吸着させ光・電子線誘起による表面反応の脱離生成物,解離生成物を赤外反射吸収分光(IRAS)により直接観測することを目的としている.本年度は上記の目的に添って以下の研究を遂行した.(1)Pt(111)表面におけるCO酸化反応素過程の研究.低温表面において酸素原子・分子のさまざまな吸着状態を準備し,CO酸化反応における影響を研究した.さらに,25Kで酸素分子と多層のCO分子を共吸着させ,紫外光を照射することにより生成したCO_2をCOマトリックス中にトラップし,IRASにより同定することに成功した.(一部出版済み)(2)25KのPt(111)表面にNOを吸着さ,1層目はモノマーであること,2層目以降はダイマーが形成されることをIRASで明らかにした.(出版済み)(3)25KのPt(111)表面にメタン分子を吸着させ,ArFレーザー照射による解離反応をIRASで研究した.1層目のメタンの対称性がC_<3v>に低下すること,対称性の低下したメタンのみ光解離することを明らかにした.(出版済み)(4)20KのNi(100)表面に吸着したCO分子の低被覆率領域における吸着状態の変化について研究した.(出版中)(5)20KのNi(100)表面における不活性な原子/分子とCOの共吸着について研究した.(投稿準備中)
原腸形成過程においてWntシグナルが制御する新規ユビキチン化・分解経路

脊椎動物をはじめとする多くの動物にとって、内、中、外胚葉の3層からなる構造は、体を形作るための基本構造といえる。この3胚葉構造を作る重要な形態形成運動が原腸形成運動である。両生類胚、魚類胚などの原腸形成運動においては、中胚葉組織が収斂伸長運動とよばれる運動により外胚葉と内胚葉の間に入り込み、伸長しながら移動する。この過程は、Wnt/PCPシグナルによって制御されている。近年、ユビキチン化・分解システムが、シグナル分子の細胞内情報伝達や、細胞極性の制御にも密接に関わっていることが明らかになりつつある。このことから、ユビキチン化システムが原腸形成運動をはじめとする初期発生の形態形成運動の制御に関わるかどうかを検討した。本研究で注目したのはβ-TrCPである。このタンパク質は、E3リガーゼのコンポーネントのひとつとして、基質認識の機能を持つ。このタンパク質の発生における役割を調べるため、アンチセンス・モルフォリノオリゴを作成し、アフリカツメガエル胚にインジェクションして機能阻害実験を行った。その結果、原腸形成運動が強く阻害されることがわかった。また、Wnt/PCP経路との関係を調べたところ、β-TrCPモルフォリノはWnt/PCPシグナルの細胞内伝達を阻害することがわかった。さらにβ-TrCPはWntシグナル伝達において重要な役割を果たすDishevelledタンパク質と結合すること、Wntシグナルによってその局在が制御されていることがわかった。この過程では、細胞接着や細胞運動の制御が重要であると考えられる。そこで、アフリカツメガエルの初期胚を用いて、細胞外基質とアクチン細胞骨格をつなぐ接着斑の構成分子パキシリンに注目して解析を行った。まず私達は、収斂伸長運動を行っている中胚葉細胞でも接着斑が形成されること、また、パキシリンが原腸形成運動い必須なことを証明した。さらにパキシリンはユビキチン化されており、それが非古典的Wntシグナルの阻害により低下することから、非古典的Wntシグナルがユビキチン化を制御しているがわかった。非古典的Wntシグナルがユビキチン化の制御に関与していることはこれまで報告されてかった知見である。そして、パキシリンのユビキチン化と分解の制御にかかわる新規分子XRNF185を同定し、この分子がパキシリンの分解をポジティブに制御していること、その作用機序として、パキシリンとプロテアソームの両方に結合してパキシリンの分解を促進することを明らかにした。さらにイメージングの技術を用いて、接着斑でのパキシリン分解が原腸形成における細胞運動の制御に重要であることを示した。
現代社会における「生きづらさ」に関する芸術社会学研究

現代社会における「生きづらさ」という感情に焦点を当てて、生きづらさを抱える人々が芸術的表現によってどのように解放されていくかに関して芸術社会学のパースペクティブから調査・研究をおこなった。学校における「いじめ」や家族内における「虐待」を体験するなかで自殺未遂をおこない、さまざまな精神的症状を示す人々が、言語的表現と共に映像や絵画、音楽、パフォーマンス等多様なアートの非言語的表現をおこない、その表現に対する他者からの共感によって、生きる意欲を取り戻していくプロセスに関して考察し、支援の在り方に関しても提言をおこなった。国内の自殺者が増えるなか、「生きづらさ」という感情に焦点をあて、その原因の一因として考えられる、学校における「いじめ」や、家族内における「児童虐待」を体験した人の聞き取り調査及び、生きづらさを抱える人々が集うさまざまな場を調査し、そこにおける表現活動、作品分析をおこなった。いじめや家族内における児童虐待体験者が、摂食障害、強迫神経症等の症状等の症状を抱える状態から、自己表現と他者からの共感によって解放されていくプロセスに関して研究をおこなった。また同様に、映像表現においても、自己を映像で撮るなかで問題から解放される「セルフ・ドキュメンタリー」という注目される表現方法に関して調査をおこない、虐待体験に苦しむ若者が自らを対象としたドキュメンタリー制作を通じて解放されていくいろいろなバリエーションを提示した。その研究結果は、「生きづらさと、自己表現によるそこからの解放アートや映像による」として、日本社会学会(於:慶応義塾大学)における研究報告としておこなった。また本研究は、社会学と心理学との学際的研究内容であるので、日本臨床心理学会における大連大学における国際学会における研究発表として「生きづらさの自己表現精神病院内における絵画活動の実践と鑑賞者の共感性について」と題しておこなった。論文における上記研究結果としては、日本社会臨床学会における学会誌である『社会臨床雑誌』(第21巻、査読有)において、「生きづらさと自己表現映像、写真、造形表現による」として発表をおこなった。生きづらさを抱える人々が、絵画、詩、音楽、パフォーマンス等、種々な芸術表現を用いて活動をおこなっているグループに関して調査研究をおこなった。さまざまな「生きづらさ」という感情をもたらす社会的要因間の関連を解明し、その問題的状況を芸術活動を通して解決していく相互作用プロセスに関して探求し、その研究結果は、「精神病院における自己表現としての絵画活動と鑑賞者の共感性」として、日本社会学会(於:札幌学院大学)における研究報告としておこなった。さらにカウンセリングセンターや心療内科、精神科等の医療機関のなかで申請者が現在まで活動に関わるなかで関係を持続しており調査協力を得られる機関に協力を要請し、生きづらさの現状、社会的要因間の関連性、問題的状況の解決に関する芸術活動の役割に関する調査もおこなった。上記研究結果としては、日本社会臨床学会における学会誌である『社会臨床雑誌』(第20巻、査読有)において、「精神科病院における芸術活動」として論文として発表をおこなった。東京都八王子市近郊高尾にある民間の精神科病院の外来デイケアの参加者を対象に生活史と造形作品に関する調査をおこなった。その内容は生活史調査における精神科病院患者の語りと彼らの造形作品に関してのものである。調査結果は、第65回関西社会学会(於:富山大学:五福キャンパス共通教育棟)において「生きづらさを表現する語りと語りと絵にみる」として多くの作品図版とそれに関する表現者の語りを示しながら報告した。この病院を調査対象として選出した理由は、病院における医療的観点からの芸術療法としてではなく、日本においても他の精神科病院において例がみられない100号サイズの油絵等を含め自由に描く方法をとっているからである。また上記精神科病院の患者の他に、精神科病院には通院はしていないが、日常生活の中で被虐待体験や摂食障害等さまざまな精神症状を抱える人々も含めて、生きづらさを抱える人々に関して、特に生育家族における第一次社会化を中心に調査をおこなった。その調査結果をもとに彼らが生きづらさを抱えて、他者とコミュニケーションをおこないにくい生活を送っており、その状態を言語以外の表現手段を使用することによって乗り越えていることを下記の書籍に示した。彼らは、造形表現及び、他の表現形態を用いて自己表現をおこない、その結果、社会的な存在として自らの生がよみがえり、生きづらさの解消が生じていることを『生きづらさの自己表現アートによってよみがえる「生」』(晃洋書房、2014年)のなかで示した。「生きづらさ」は主として臨床心理学や精神医学において研究がすすんできたが、社会学独自の理論的パースペクティブや、医療や臨床の場を持たずして深刻なプライバシーを扱う調査技法の開発が必要であるので、臨床社会学の歴史とその特徴に関して、「臨床社会学のパースペクティブ」日本社会臨床学会学会誌『社会臨床雑誌』(23巻、査読有)を発表した。4年間の研究成果を通じて考察を深めたものであり、今後の「生きづらさ」等の苦難の体験とそこからの解放に関する研究の基盤となる内容である。学会報告としては、そのような社会学研究と臨床心理学との接点や臨床心理学、精神医学、社会福祉学等他分野との学際的研究の可能性の探求の目的で、第25回日本描画テスト・描画療法学会のシンポジウム(於:大正大学)「自己治癒の営みとしての描画」のテーマのなかで、パネラーとして「「生」をよみがえらせる描画平川病院OT科の例より」を報告した。

臨床心理学が個別ケースを「個人の内面」において考察し、描画療法士、芸術療法士のもとでの症状からの回復と捉えるのに対して、同じ精神科病院の外来作業療法科の患者を調査しながら、彼らの人間関係や外部ボランティア、展覧会鑑賞者といった社会のなかでの他者との関わりで、「生きづらさ」から解放されていくプロセスを、個々の患者の描画の変遷、インタビュー調査を中心として報告をおこない、その後シンポジウムにおいて学際的研究方法に関して議論を深めた。現代社会における「生きづらさ」という感情に焦点を当てて、生きづらさを抱える人々が芸術的表現によってどのように解放されていくかに関して芸術社会学のパースペクティブから調査・研究をおこなった。学校における「いじめ」や家族内における「虐待」を体験するなかで自殺未遂をおこない、さまざまな精神的症状を示す人々が、言語的表現と共に映像や絵画、音楽、パフォーマンス等多様なアートの非言語的表現をおこない、その表現に対する他者からの共感によって、生きる意欲を取り戻していくプロセスに関して考察し、支援の在り方に関しても提言をおこなった。関西社会学会報告においては、生きづらさを抱える人々が、表現することに加えて、他者からの共感や反応を得ることで、どのように彼らの生きづらさからの解放につながっていくかという点を芸術社会学的観点から明らかにすることができ、同様に学会報告をもとに、研究成果を書籍の出版(『生きづらさの自己表現アートによってよみがえる生」』)として表すことができていることから、おおむね順調に進展しているといえる。本研究は、プライバシーに関わる内容であるが、調査対象者との良好な関係を構築していたため、調査対象者が、快く学会報告や出版に応じてくれたことが計画の順調な進展の理由の一つである。社会学今後の研究の推進方策としては、さらなる調査の発展をめざし、また本研究は、社会学、心理学、芸術学、精神医学等が交わる学際的分野なので、本年度は9月におこなわれる「日本描画学会シンポジウム」等で報告し、社会学以外の分野と交流することを計画している。また、日本社会臨床学会誌に、現在社会的にも問題になっている青少年の非行に関して、非行臨床の分野の論文発表を予定している。非行臨床の分野においても、第一次社会化の問題、さまざまな自傷行為、自殺未遂等が、生きづらさとして前年度までの研究と共通してみられ、海外では刑務所等における絵画、演劇等の自己表現プログラムと支援が活発におこなわれている。日本国内、海外の比較研究を視野に入れて研究をすすめる。今年度は4年間の最終年度であるので、臨床社会学と芸術社会学の有効な理論枠組み、調査枠組みを示し、あらたな臨床芸術社会学の分野の構築を、調査、理論両面からおこなう。研究の目的の達成度は、おおむね順調に進展している。その理由として、本研究は、生きづらさを抱えた人々の虐待体験やさまざまな症状に関係するという意味でプライバシーに大きく関わり、臨床心理学のように臨床の場がない社会学的研究では調査協力者が得られにくい面があるが、調査主旨の説明と地道な働きかけによって、協力的な精神科病院やインフォーマントを探し出すことができたことがその最大の要因である。また、学会報告や論文報告にも調査対象者の了承を得ることができたことも研究目的の達成が順調に進展した理由である。
レクチンを用いた次世代in situ架橋ハイドロゲルの開発

本研究では創傷治癒で形成されるレクチン/ヒアルロン酸複合体ゲルを模倣したin situ架橋ハイドロゲルを実現し,MSCなどの細胞源を用いずとも,抗炎症効果や増殖効果を持つ組織工学・再生医療用のinjectableな足場材料の開発を目標としている.特にヒアルロン酸に特異的に結合するレクチンである抗炎症性タンパク質TSG-6のLinkモジュールをベースにしたタンパク質を開発し,ゲル開発を行うことを目標とした.最近報告されたCHO細胞を用いたTSG-6の大量生産の論文(Kim, Dong-K et al. PLOS ONE 2016(11) e0147553)を参考に,GenbankよりAccession Number(BC030205)の配列を用い,この目的配列をVector(pcDNA3.4topo)に組み込んだ.JM109 (コンピテントセル)を用いてクローニング,プラスミドの作製を確認した.得られたPlasmidをExpi293細胞にトランスフェクションし,7日間にわたって培養した.発現はウエスタンブロットで確認したものの,His-tag精製が難しく,ヒアルロン酸分解酵素やグアニジン塩酸塩を用いた改良プロトコールでも精製が難しかった.Expi293細胞を用いることで糖鎖修飾が比較的正確に行われるメリットがあるが,精製の難しさから,大腸菌を用いた発現系への方針転換を行った.またHis-tag配列とTSG-6の配列が近すぎることでHis-tag精製がスムーズに進まない可能性も考慮し,間にSUMO-tagを介することでHis-tag精製の効率化を図るとともに,His-tagの除去を行える方針で研究を遂行中である.精製が非常に難しいタンパク質であり当初の目標に対して達成率は100%ではないが,最終目標に至るための多くの知見を獲得することができた.本研究では創傷治癒で形成されるレクチン/ヒアルロン酸複合体ゲルを模倣したin situ架橋ハイドロゲルを実現し,MSCなどの細胞源を用いずとも,抗炎症効果や増殖効果を持つ組織工学・再生医療用のinjectableな足場材料の開発を目標としている.本年はコントロール実験の系を確立するべく,ヒドラジド修飾ヒアルロン酸、及びアルデヒド修飾ヒアルロン酸から成る2液性のシッフ塩基によるin situ架橋するヒアルロン酸ゲル:HAXおよびカルシウムイオンで架橋可能なアルギン酸ゲルに,ラット骨髄由来MSCを封入し,ゲルの外部に放出されるTSG-6の放出量を測定した.HAXから放出されるTSG-6がほぼ濃度ゼロになるのに対してアルギン酸から放出されるTSG-6濃度は封入培養しない系と同等の濃度となった.さらにマクロファージが分泌するTNF-α濃度から,HAX封入MSCではTSG-6を放出しないために抗炎症効果がないのに対して,アルギン酸封入MSCの系では有意なTNF-α濃度の低下が見られ,TSG-6の影響が大きなものと推察された.本研究はコントロール実験にとどまらず,ゲルに封入したMSCからTSG-6を持続的に放出する研究として重要な結果である.さらに本年度は,昨年度から着手しているTSG-6の大量発現系の確立に引き続き取り組み,再生医療用のスキャフォールドとして用いることができる新たなヒアルロン酸系ハイドロゲルの開発を実現する.1年目である本年は,まずコントロール実験の系を確立するべく,2液性のシッフ塩基により架橋するヒアルロン酸ゲルであるHAXおよびカルシウムイオンで架橋可能なアルギン酸ゲルに,ラット骨髄由来MSCを封入し,さらにLPSで刺激したマクロファージRAW246.7とゲル封入MSCを共培養することで,MSC封入ゲルから培養液に放出されるTSG-6濃度とIL-10濃度をELISAで測定した.IL-10の放出濃度に関して2つのゲルの間での差は有意差があるもののそれほど大きくなかった一方で,TSG-6の放出濃度には大きな差が見られた.すなわちHAXから放出されるTSG-6がほぼ濃度ゼロになるのに対してアルギン酸から放出されるTSG-6濃度は封入培養しない系と同等の濃度となった.さらにマクロファージが分泌するTNF-α濃度から,HAX封入MSCではTSG-6を放出しないために抗炎症効果がないのに対して,アルギン酸封入MSCの系では有意なTNF-α濃度の低下が見られ,TSG-6の影響が大きなものと推察された.このMSC封入アルギン酸ゲルをラット腹膜癒着モデルに適用して,癒着防止効果を検討したが,材料の癒着防止効果を凌駕することはなかった.近年の研究ではTSG-6を修飾している糖鎖が,その活性や血中半減期に大きな影響があることがわかってきている.このため,TSG-6及びリンクプロテインを大量発現するにあたって,既存の大腸菌でなく,CHO細胞を利用した大量発現系を組む準備として,TSG-6遺伝子をトランスフェクションし,TSG-6を発現させる準備実験を行った.本研究では創傷治癒で形成されるレクチン/ヒアルロン酸複合体ゲルを模倣したin situ架橋ハイドロゲルを実現し,MSCなどの細胞源を用いずとも,抗炎症効果や増殖効果を持つ組織工学・再生医療用のinjectableな足場材料の開発を目標としている.特にヒアルロン酸に特異的に結合するレクチンである抗炎症性タンパク質TSG-

6のLinkモジュールをベースにしたタンパク質を開発し,ゲル開発を行うことを目標とした.最近報告されたCHO細胞を用いたTSG-6の大量生産の論文(Kim, Dong-K et al. PLOS ONE 2016(11) e0147553)を参考に,GenbankよりAccession Number(BC030205)の配列を用い,この目的配列をVector(pcDNA3.4topo)に組み込んだ.JM109 (コンピテントセル)を用いてクローニング,プラスミドの作製を確認した.得られたPlasmidをExpi293細胞にトランスフェクションし,7日間にわたって培養した.発現はウエスタンブロットで確認したものの,His-tag精製が難しく,ヒアルロン酸分解酵素やグアニジン塩酸塩を用いた改良プロトコールでも精製が難しかった.Expi293細胞を用いることで糖鎖修飾が比較的正確に行われるメリットがあるが,精製の難しさから,大腸菌を用いた発現系への方針転換を行った.またHis-tag配列とTSG-6の配列が近すぎることでHis-tag精製がスムーズに進まない可能性も考慮し,間にSUMO-tagを介することでHis-tag精製の効率化を図るとともに,His-tagの除去を行える方針で研究を遂行中である.精製が非常に難しいタンパク質であり当初の目標に対して達成率は100%ではないが,最終目標に至るための多くの知見を獲得することができた.大腸菌培養でTSG-6を大量に取得することは難しい点,あるいは体内動態が糖鎖修飾によって大きく変化するために,CHO細胞を用いた系が検討されつつある.このため本研究でもTSG-6及び,これを組み替えたリンクプロテインを開発し,既往の報告と同程度である4mg/Lの発現量を目指す.さらにTSG-6とHAあるいはHAXと組み合わせた新たなハイドロゲルを開発する.粘弾性測定やITC(等温滴定型カロリメトリー)を用いて,ヒアルロン酸あるいはヒアルロン酸誘導体とTSG-6の結合状況の詳細な解析を行い,ゲル物性への考察を行っていく.本研究の最終目標である再生医療への応用を実証するために,当初の軟骨細胞からターゲットを変更して,骨再生足場材料への応用を目指す.1年目で実績が得られたMSC封入ゲルと比較を行いながら,本研究の優位性と特徴を明らかにする.
アミノ酸配列特異的糖鎖導入と酵素法による糖蛋白質の精密ハイブリッド合成

糖タンパク質は様々な生理活性を示すことが明らかになっているが、均一なものの調製は現時点では困難である。これまでに正しい折りたたみがなされているタンパク質を得ることは、大腸菌等の原核細胞を用いれば容易であり、これに対して正確に糖鎖負荷する技術を開発すれば、所望の糖蛋白質を得ることが可能である。近年、配列特異的に糖とタンパク質の間でアマドリ転位反応が起こりうる可能性を示唆する報告があり、これに基づき、アマドリ転位反応の解析およびその反応促進について検討した。アマドリ転位反応は緩衝液の種類によってその反応速度が影響を受け、リン酸やホウ酸塩が促進効果が認められたが配列特異性については未解明である。研究初年度である平成22年度は、高効率かつ高選択的にアマドリ転位反応が進行する糖鎖の分子デザイン、及び、酵素的配糖化における諸条件の検討を行った。アマドリ転位反応に関しては、これまでの研究成果により、グルコースの3位のヒドロキシ基の存在が重要であることが明らかになったことをうけて、3位デオキシ体の合成を行った。まずグルコースの3位デオキシ体の合成を試み目的化合物を得たが、水溶液中で相互に変換する異性体が4種存在した。この異性体を用いてアマドリ転位反応の解析を行うことは困難である事が予想されたため、次に、中間体までの合成法が報告されているマルトースの3-デオキシ体の合成に着手した。その結果、4工程を経てグラムスケールでの合成を達成した。次年度では、3-デオキシマルトースの低分子アミンに対する反応性及び生成物の構造ついて検討する予定である。酵素的配糖化の諸条件の検討においては、トリアジン誘導体型活性化糖(DMT化糖)による配糖化反応を検討した。まず、キトサナーゼによる配糖化について検討した。反応収率は10%以下程度と低いものの、酵素的にオリゴ糖に対するグルコサミニル化の進行を確認した。次に、α-N-アセチルグルコサミニダーゼによる配糖化反応について検討した。この反応は収率50%以上となり、優れた反応系であることが示せただけでなく、ムチン型オリゴ糖の簡便な合成法として提供できる。これまで、N-結合型糖鎖のみタンパク質への配糖化が可能であったが、今後、その他の糖蛋白質の合成へと寄与できるものと期待できる。本研究提案においては、これまでの若手研究(B)の研究成果及び前年度までの研究成果を踏まえ、より高度かつ精密な糖蛋白質合成の確立を目指す。そして、新規糖蛋白質の機能特性評価を行い、新規材料への道筋を立てる。これらを達成するために、以下の検討項目について重点的に研究を推進し、以下の結果を得た。1.アマドリ転位反応を高選択的に進行するオリゴ糖の合成及びアミンとの反応性アマドリ転位反応は、一般に制御が困難である。それは、アマドリ転位産物は比較的安定であるものの、酸化反応もしくはレトロアルドール反応により開裂するどいう副反応が多く存在するからである。これは、連続するヒドロキシ基の存在が原因であると考え、副反応を制御しうる構造のデザインを行い,化学合成を試みた。今年度は3-デオキシマルトースの大量合成及び、2-フェネチルアミンとの反応性について検討したところ、3-デオキシマルトースは反応性が高く、同時に分解反応も高効率で起きた。また、水への溶解度が10mM程度と、類縁2糖と比較して非常に低くかった。以上を総合すると、マルトースに関しては3位をヒドロキシ以外の官能基で置換することが望ましいとの判断に至った。2.糖活性化技術を活用したアマドリ化した各種蛋白質への糖鎖導入条件の検討これまでに数々の活性化糖の合成を達成してきたが、酵素との相性についての検討は不十分であった。適応可能な分子に関しての基礎データを得るために、5糖以上、もしくは、分岐を有するオリゴ糖の活性化条件を検討することと、活性化糖を用いた酵素反応の詳細を調べ、糖化蛋白質への配糖化のための基礎データの取得を行った。結果として、N-結合型糖鎖やムチン型糖鎖等、効率的な活性化及び単離条件を確立し、酵素反応による糖タンパク質合成の高効率化への目処が立ったことから、次年度以降の研究の効率的な進行が期待できる。研究最終年度にあたり、1)配列特異性解明のためのペプチドマッピング、2)糖化位置異性体の効率的な分離法の開発、3)糖化反応に対する緩衝液の影響、4)糖化物に対する酵素的配糖化反応の検討を行った。1)配列特異性解明のためのペプチドマッピング。タンパク質上の糖化位置の配列特異性を解明するために、ペプチドマッピングを行った。

MALDI-TOF MS解析によりいくつかの断片の同定はできたが、糖化が最も進行すると予想されるペプチド断片のMS解析による検出ができず、配列特異性の解明には至らなかった。2)糖化位置異性体の効率的な分離法の開発。糖化位置異性体を分離するために、ホウ酸溶液を用いる陽イオン交換クロマトグラフィーを利用したところ、いくつかの異性体の分離が可能になった。しかし、上述のように位置異性体の構造は未解明である。3)糖化反応に対する緩衝液の影響。ホウ酸緩衝液を用いて糖化反応を行ったところ、糖化反応がほとんどしない糖と向上する糖があることが明らかになった。これは、条件次第で糖化反応の制御が可能であることを意味する。4)糖化物に対する酵素的配糖化反応。分離した糖化タンパク質の一つに酵素的糖化反応を行ったところ、所望の糖タンパク質を得ることができなかった。このことにより、酵素的配糖化反応においては、糖化された部位によっては糖受容体化を達成することは困難であると推定できる。また、非特異的な糖化反応も起きていたことから、糖化されやすい部位においては、活性化糖が非酵素的にタンパク質表面で共有結合形成が起こりうる可能性が示唆された。以上、当初の計画通りにはならなかったものの、糖化反応に関する新しい知見が得られたことから、今後はこれら知見を元に複合糖質合成条件の最適化を図る。平成24年度は以下の二点について検討を行い、研究の進捗に重要な知見が得られた。1.糖化タンパク質の効率的分離法の開発これまでは、アマドリ転位反応によるタンパク質への糖化反応においては、導入位置などに関する情報は皆無であった。当該年度において、非糖化タンパク質の除去を目指してクロマトグラフィー分離を行っていたところ、イオン交換カラムの使用により複数の分画に分離することが出来た。個々の分画をMALDI-TOF MS解析を行ったところ、糖化度に応じて分離されていることが明らかになり、個々の糖化タンパク質の特性解析をする事が可能になった。また、これら個々の糖化タンパク質に対してペプチドマッピングのためのプロテアーゼ消化条件検討を行い、糖化されたアミノ酸の位置の特定に向けた知見を取得した。さらに、収率は50%程度と見積もられた。2.糖化タンパク質への酵素的配糖化条件の検討糖化タンパク質への配糖化は、N-結合型糖鎖を脱水縮合剤処理することにより活性化糖である糖オキサゾリン誘導体へと変換し、高活性変異体であるendo-β-acetylglucosaminidase N175Q変異体(Endo-MーN175Q)を用いて行った。生成物の解析はHPLC,MALDI-TOF MS,ゲル電気泳動を用いて行い、所望の糖タンパク質の生成を確認した。収率はおおよそ50%程度と見積もられ、研究初期では測定できない程度の収率から飛躍的に向上した。アマドリ転位反応の選択性を高める糖鎖を見いだすには至っていないものの、糖の反応性に関する情報が多く得られており、蛋白質に導入すべき分子の合理的なデザインが容易になってきている。とりわけ、3位の置換基の有無は、糖がヘミアセタール体になるかアルデヒド体になるかを左右する重要な因子であることが明らかに成り、他の配糖化技術の基礎的知見として非常に有用である。糖活性化技術の向上に伴い、様々なオリゴ糖の導入が現実的になってきた。
合金元素が窒素オーステナイトのフェライト変態へ及ぼす影響の包括的解明

本研究では、低合金鋼のフェライト変態におよぼす窒素および合金元素添加の影響および合金窒化物の析出挙動に関して、変態温度および変態時間の変化に伴う材料の硬さ、微細組織、相分率、析出物の同定およびそれらの定量について系統的に調査することにより、フェライト変態に及ぼす侵入型原子および置換型原子(Cr, Mn, Mo)の影響を明らかにすることを目的として研究を行なった。その結果、いずれの合金においても、α+γ相域にて等温保持を行うことで旧オーステナイト粒界からフィルム状のAFが生成し、AFから二次的に針状のWFの異なる二種類の形態のフェライトが生成した。AFは隣接する母相の内,一方とK-S関係に近い方位を持ち,もう一方とはK-S関係を持たずに生成する傾向にあり,K-S関係を持たない側に成長した.一方,WFは母相とK-S関係を有しており,母相と整合性の良い界面を有していた。また、母相との整合性が高いWFは母相との整合性の低いAFよりもエネルギー散逸が顕著に大きかった.AFのエネルギー散逸の要因は界面摩擦によるものであると考えられ、一方、WFのエネルギー散逸の要因は界面摩擦の他に変態に伴うひずみエネルギーが考えられる。Mn、Moを添加するとフェライトの変態速度が遅れ、初期の変態速度はα/γ定性による変態駆動力の違いとMoの粒界偏析による核生成の抑制によって説明可能であった。1Mn材、1Mo材におけるAFでのエネルギー散逸量は0.3N材よりも大きく、1Mn材では局所分配に伴うスパイク形成によるエネルギー散逸、1Mo材ではMo偏析によるSDEによるエネルギー散逸の影響であると考えられる。一方、Cr添加材では、他の合金とは異なり、等温保持により生成したフェライト中に微細な析出物が等間隔に析出している様子が観察され、相界面析出を伴いながらフェライト変態が進行することが明らかとなった。平成29年度では、純鉄およびFe-M (M : Si, Ti, V, Cr, Mo, Mn)二元系合金を水素・アンモニア混合ガス雰囲気中における浸窒処理により0.3mass%の窒素を固溶させ、直ちに600-750°Cのソルトバス中に投入し、種々の時間等温保持後に氷塩水中に焼入れすることで試料を作製した。得られた試料に対し、OMおよびFE-SEMによる組織観察、ポイントカウンティングによるフェライト体積率測定、X線回折による相同定および残留オーステナイト体積率測定、EBSDによる結晶方位解析およびEPMAによる窒素濃度測定を行った。組織観察結果から、750°C等温保持材では、旧オーステナイト粒界にアロトリオモルフフェライト(AF)が生成しており、長時間保持においてもAFが支配的であった。650°C等温保持材では、粒界にAFが見られたが、全体的にウィドマン-ステッテンフェライト(WF)が支配的であった。600°C等温保持材でもWFの生成が支配的であったが、より微細なWFが生成していた。結晶方位解析では、AFは接している母相の内、一方と5°以内のずれ角でK-S関係を有し、K-S関係を持たない粒側に成長することが明らかとなった。一方、WFは母相と5°以内のずれ角でK-S関係を有しており、母相と整合界面を有していた。これらの結果は、Fe-C系合金で報告されている傾向と同じであった。EPMAによる窒素濃度測定では、750°C等温保持材ではおよそAe3と一致していた。一方、650°C変態材ではAe3に達しておらず、エネルギー散逸が起きていることが示唆された。エネルギー散逸が生じる要因として、fcc→bccの格子変化に伴って界面での原子移動時に生じる界面摩擦やソリュートドラッグ効果、変態に伴うひずみエネルギーなどが挙げられる。今後、より詳細な窒素濃度測定を行い、エネルギー散逸の原因を調査していく。平成29年度の研究計画として、1、窒化物生成傾向が異なる置換型元素を添加したFe-M (M : Si, Ti, V, Cr, Mo, Mn)二元系合金に対し、試料表面から窒素を拡散侵入させる浸窒処理を施すことにより、高窒素オーステナイトを得る。2、ガス窒化炉を用い、窒素ポテンシャルを制御することにより、全合金において0.3 mass%の窒素量を実現する。各合金において同じ窒素含有量となる合成条件の最適化を行うために焼入れを行い、組織観察によるボイド生成状況、組成分析による含有窒素量の評価を行う。3、最適化された合成条件を元に、高窒素オーステナイトをオーステナイト+フェライト二相域にて等温保持することによりフェライト変態させ、変態温度および保持時間を変化させる。4、得られたフェライト変態材に対し、OM、SEMおよびTEMによる組織観察およびX線回折を行い、生成相の形態、サイズおよび分率、析出物の有無を評価する。5、生成するフェライト、マルテンサイトおよび残留オーステナイトの結晶方位関係をEBSD解析にて明らかにし、窒素および置換型合金元素の分布・定量をEPMAおよび3DAPにて評価することを計画としていた。これらの計画のうち、純鉄においては計画通りに実験およびデータの取得が進んでおり、解析を進めている。合金添加材に関しては、浸窒条件の最適化までが終了し、今後フェライト変態材の作製と各種評価が必要であるが、測定方法やデータの解析方法に関しては純鉄にて正確なデータが得られていることが確認されているので、それほど時間を掛けずに実験の遂行が可能である。

以上の点より、本研究は初期の計画通りに進行していると考えられる。本研究では、低合金鋼のフェライト変態におよぼす窒素および合金元素添加の影響および合金窒化物の析出挙動に関して、変態温度および変態時間の変化に伴う材料の硬さ、微細組織、相分率、析出物の同定およびそれらの定量について系統的に調査することにより、フェライト変態に及ぼす侵入型原子および置換型原子(Cr, Mn, Mo)の影響を明らかにすることを目的として研究を行なった。その結果、いずれの合金においても、α+γ相域にて等温保持を行うことで旧オーステナイト粒界からフィルム状のAFが生成し、AFから二次的に針状のWFの異なる二種類の形態のフェライトが生成した。AFは隣接する母相の内,一方とK-S関係に近い方位を持ち,もう一方とはK-S関係を持たずに生成する傾向にあり,K-S関係を持たない側に成長した.一方,WFは母相とK-S関係を有しており,母相と整合性の良い界面を有していた。また、母相との整合性が高いWFは母相との整合性の低いAFよりもエネルギー散逸が顕著に大きかった.AFのエネルギー散逸の要因は界面摩擦によるものであると考えられ、一方、WFのエネルギー散逸の要因は界面摩擦の他に変態に伴うひずみエネルギーが考えられる。Mn、Moを添加するとフェライトの変態速度が遅れ、初期の変態速度はα/γ定性による変態駆動力の違いとMoの粒界偏析による核生成の抑制によって説明可能であった。1Mn材、1Mo材におけるAFでのエネルギー散逸量は0.3N材よりも大きく、1Mn材では局所分配に伴うスパイク形成によるエネルギー散逸、1Mo材ではMo偏析によるSDEによるエネルギー散逸の影響であると考えられる。一方、Cr添加材では、他の合金とは異なり、等温保持により生成したフェライト中に微細な析出物が等間隔に析出している様子が観察され、相界面析出を伴いながらフェライト変態が進行することが明らかとなった。平成30年度も当初の計画通りに実験を進めていく。等温保持時間の増加に伴い析出が予想される合金窒化物の測定として、XAFS、SAXSを予定しているが、測定機器の準備は完了しており、放射光施設への課題申請の採択待ちの状況である。課題が採択されるまでは、測定時間が多少長くなるが、ラボ機での測定を行うことでデータの取得を進めていく。また、変態材の機械特性評価を引張試験にて行うが、実験装置の立ち上げは昨年度末に完了しており、その他のデータの取得がほぼ終了しているFe-0.3N材から引張試験を行い、その他の合金元素添加材も試料ができ次第、機械特性の評価を行う。また、昨年度までで取得したFe-N2元系合金のフェライト変態は、これまでに報告例の無い研究であることから、論文投稿および学会発表等を精力的に行っていく。今年度に前倒し請求を行い作製したXAFS用微動ステージおよびXAFS用試料ホルダが、作製途中段階での仕様変更により当初の予算よりも低価で作製することができたため、その差額分が次年度使用額として生じた。次年度使用料は、放射光施設における施設使用料(例えば、SPring-8における使用料・定額分:1シフト(8時間)あたり10,560円+消耗品代)のための費用として充当し、追加の課題申請を行う。
Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ　ｄｅｎｔｉｃｏｌａの細胞侵入に関する病原性の解明

歯周病原性菌のひとつであるTreponema denticolaの上皮細胞に対する病原性を明らかにするため、培養細胞の破綻機構、細胞への侵入、免疫機能に関する変化の検討を行った。感染30分後から侵入を示唆する像を認め、IL-1発現は野性株での減少が認められた。IL-6発現量は野性株の感染後1時間でピークを示し、HSP70は感染後3時間から増加した。prtPおよびMsp欠損株共にHSP70 mRNA発現は減少した。T. denticolaは感染により上皮細胞のストレスタンパクおよびサイトカイン産生を引き起こし、そのプロセスにMspおよびPrtPが関与する事が示唆された。今回の目的はT.denticolaの病原性を明らかにするため、上皮細胞に対するT. denticolaの影響を検索した。ブタ由来マラッセ上皮遺残細胞を培養後、T. denticolaATCC35405および病原性遺伝子欠損株を感染させた。感染後に培養細胞からmRNAを採取し、PCR法にてInterleukin 1 (IL-1)およびIL-6、heat shock protein 70 (HSP70)の発現量を検索した。また、試料は固定後、走査型電子顕微鏡(SEM)および蛍光抗体法による顕微鏡観察にてIL2、IL-6、HSP70タンパク発現を観察した。さらに培養GFPラット口腔粘膜上皮に感染させてPI染色を行い生細胞のまま蛍光顕微鏡にて観察を行った。SEMによる観察では、感染30分後T. denticolaが細胞内に侵入する像を認めた。蛍光抗体法およびmRNA発現量の解析結果では、IL-6発現量はT. denticolaの感染後1時間をピークに減少し、HSP70は感染後3時間から24時間例まで増加した。病原性遺伝子欠損株ではHSP70 mRNA発現量が減少した、IL発現量に変化が認められた。また、生細胞の観察では、細胞と一部繋がったまま、T.denticolaの脱出が認められた。以上の結果から、上皮細胞の免疫応答に対する回避機能を有する事が示唆された。今回の目的はT.denticolaの病原性を明らかにするため、マラッセ上皮遺残細胞に対するT. denticolaの影響を検索した。歯周病原性菌のひとつであるTreponema denticolaは、Porphyromonas gingivalisおよびTannerella forsythiaとともに慢性歯周炎病巣から高頻度に検出される。T. denticolaの上皮細胞に対する病原性を明らかにするため、病原性遺伝子欠損株を用いてマラッセ上皮遺残細胞に対する細胞間の破綻機構、上皮組織細胞への侵入、免疫機能に関して動的な病態代謝過程における変化の検討を行った。感染30分後から侵入を示唆する像を認め、蛍光抗体法およびmRNA発現量の解析結果では、IL-1発現は野性株での減少が認められた。微生物学現在までに形態学的観察およびPCR法を用いて細菌感染した際の細胞のmRNA発現を検索しており、おおむね良好な結果が得られている。現在までに本年度研究実績の概要に記したように、形態学的観察およびPCR法を用いて細菌感染した際の細胞のmRNA発現を検索しており、おおむね良好な結果が得られている。

平成26年度はIn vitroでの実験を行い、T. denticolaの細胞侵入および細菌感染による細胞内のシグナリング発現を検索する予定である。現在までに得られたmRNA発現および細胞内でのタンパク発現の局在性は明らかにしているので、mRNAの発現の差異が実際にタンパク質の量と相関しているか確認実験を行う。今後、その上流で発現をブロックさせることにより、実際にサイトカイン発現に変化が認められるかを検索する。それにより、T.denticola感染による細胞応答の機序を明らかにすることを今後の研究推進方策とする。平成24年および25年度はin vitroでの実験を行い、T. denticolaの細胞侵入および細菌感染による細胞内のシグナリング発現を検索する予定である。現在までに得られたmRNA発現の結果から、細菌感染によるサイトカイン発現は明らかであり、今後、その上流で発現をブロックさせることにより、実際にサイトカイン発現に変化が認められるかを検索する。上記内容の通り、25年度も引き続きin vitroでの実験を行い、T.denticola感染による細胞の動態検索を行う。サイトカイン産生の一連のカスケードを明らかにするほか、mRNA発現だけではなく、実際にタンパク質の産生が行われているかを検索する。
トンネル施工時の安定性評価に関する総合的研究

施行時のトンネル構造がどの程度の力学的安定性を有しているかを評価する手法について検討した。そして力学的,実験的かつ実証的にこの安定性の評価の方法を提案した.特に、3年間において2つの大きなテーマである「サイドパイルのトンネル安定性に与える効果」と「海底トンネルの施工時から供用後の安定性」について集中的に研究を実施した。前者については、すべり線のブロック効果、後者については水圧上昇に伴う地盤と覆工の剥離現象が、それぞれを支配する重要な要素であることがわかった。1)トンネル下半掘削に伴う「とも下がり」現象の実験土層を用い,トンネルを想定したモデルを設置した後,トンネル下部を落とし戸のように沈下させることで,浅層地盤トンネルの「とも下がり」現象の再現実験を行った.これは,近年,浅層地盤トンネルの掘削時に大きな地表面沈下や,場合によれば,地盤の崩壊が起こっている事例があることに基づく.ここでは,これを防止する1つの方策として「サイドパイル」を取り上げ,その効果を実験的に評価した.2)トンネル下半掘削に伴う「とも下がり」現象の解析的評価上記の実験に対し,数値解析を用いて,実験で得られた観測結果のメカニズムを考察した.その結果,サイドパイルの設置は,地盤内に生じるすべり線の成長を阻止する機能があり,地表面沈下の軽減や地盤の崩壊を防止するのに大きな効果があることが確認できた.また,たとえサイドパイルがトンネル構造と離れて設置されても,一定の効果があることがわかった.3)地下水上昇によるトンネル崩壊解析地盤に地下水を上昇させながら,トンネルがいかなる条件の場合に崩壊するかを検証した.一般に,水位が上昇すると,地盤の単位体積重量が大きくなるとともに,そのせん断強度が減少し,切羽が崩壊しやすくなる.これまで,この崩壊に対する安定性について,定量的な評価はされていなかったが,ここでは剛塑性有限要素方を用いてノモグラムを作製した.4)海底トンネルの安定性に関する評価青函トンネル規模の海底トンネルを想定し,巨大な地下水圧が作用するトンネル掘削の施工時安定性について検討した.このようなトンネルでは,通常,注入工法がとられるが,その範囲と透水係数の適正な設定方法について,いくつかの知見を得た.トンネル工学は,わが国が世界に誇る技術の1つである.山岳の多い国土や,人口の集中する都市部の有効利用を図るために先人たちが営々と育んできた技術の結晶である.特に青函トンネルに代表される長大トンネルや,都市部の未固結地盤に被りの浅いトンネルなど究極に近い条件のもとでトンネルを掘削してきた.しかし一方で技術は確かに大成したが,いまでも大きな問題となっているのは,施行時のトンネルの安定性である.実際,人身事故の至らない範囲ではあるが,近年,トンネル施行現場で地盤の崩壊がしばしば発生している.これほどの技術力の高いわが国で,どうしてこのようなことになるのであろうか.実は,これには1つの明確な事実がある.すなわち,施行時のトンネル構造がどの程度の力学的安定性を有しているかを評価する手法がないのである.この問題を真正面に取り上げ,力学的,実験的かつ実証的にこの安定性の評価の方法を提案しようとするのが本研究の目的である.平成19年において得られた成果は以下の通りである。1)トンネル切羽の崩壊:切羽の3次元的な応力状態の把握が崩壊を支配していること。2)地下水上昇によるトンネル崩壊:砂地盤は地下水の高さが応力状態に大きな影響を与えること。3)実験データと2次元数値解析:ある範囲では2次元解析でもよい予測が可能なこと。4)トンネル崩壊のモデル化:剛塑性有限要素法で崩壊がモデル化できること。5)インバート掘削部の評価:インバート応力がトンネル全体の安定性に大きな効果をもつこと。トンネル工学は,わが国が世界に誇る技術の1つである.山岳の多い国土や,人口の集中する都市部の有効利用を図るために先人たちが営々と育んできた技術の結晶である.特に青函トンネルに代表される長大トンネルや,都市部の未固結地盤に被りの浅いトンネルなど究極に近い条件のもとでトンネルを掘削してきた.しかし一方で技術は確かに大成したが,いまでも大きな問題となっているのは,施行時のトンネルの安定性である.とりわけ今年度は、サイドパイルによるトンネル周辺地盤の沈下と安定性について一連の研究成果をまとめ、土木学会論文集に発表した。それについては、もう1編を現在、投稿中である。これは、東北新幹線での施工実績を踏まえながら、室内実験、数値解析と併せて1つの設計法を提案するにまで至った。さらにトンネル地下水上昇によるトンネル崩壊については、地盤に地下水を上昇させながら,トンネルがいかなる条件の場合に崩壊するかの実験に対して、その数値解析的な検証を実施した。特に近い将来、新幹線が通るとされている青函トンネルを想定し、施工時、施工終了時および現状のトンネル周辺の力学的状態に関し数値解析を用いて評価を行った。

その結果、トンネル湧水量をパラメータにして健全度を考察すると、注入地盤領域と覆工の間で剥離が生じる可能性があることが判明した。この研究については、さらなる検討が必要であると考え、さらなる研究へ引き継ぐ予定である。
高齢者における植物性タンパク質分解酵素摂取と血清アルブミン値増加に関する介入研究

植物性蛋白分解酵素パパインの摂取によって、酸化ストレス抑制効果があるかどうかを二重盲検法による介入研究を用いて検討した。対象者は北九州市に在住の老人会に所属する60歳以上の高齢者である。研究内容を説明し47名から承諾を得た。無作為に2群に分け、介入群はパパイン酵素40mgを含むふりかけを1日3回摂取し、非介入群はパパイン酵素を含まず、他の成分は同一のふりかけを1日3回摂取するようお願いした。研究開始前に1名が入院し、研究期間中に3名が中止したため、摂取完了者は43名であった。摂取状況は、1日ごとに対象者が摂取状況を記入した。摂取期間は40日間で、摂取前後で採血、採尿を行った。2群間で酸化ストレスマーカである尿中の8ハイドロキシグアノシン(8-0HdG)をクレアチニン値で除した8-0HdG/クレアチニン値の変化を比較した。介入群の摂取前後の尿中8-0HdG/クレアチニン値は0.056±0.023、0.056±0.026、非介入群は、0.050±0.017、0.052±0.019であった。変化率はそれぞれの群で5.1±24.7%、6.3±6.06%を示し、両群の間で有意な差はみられなかった。消化酵素摂取により酸化ストレス抑制効果は認められなかったが、これまでの研究では2週間の野菜・果物摂取により酸化ストレスマーカが減少することが報告されており、今回の結果がタンパク質の消化による酸化ストレス抑制への影響が小さいのか、抗酸化食物摂取の絶対量が少ないのか、今後検討する必要がある。60歳以上の対象者を選定するため、福岡県S村の60歳以上の住民に対して、参加者を募集した。募集に応じた人に対して、本研究の趣旨、目的、安全性について説明した。参加の意志を表明した人は40名であった。植物性タンパク質分解酵素パパインを摂取してもらうため、まず、パパイン含有のふりかけを開発した。1回の摂取量は、これまでの急性毒性試験、変異原性試験の結果と大腸検査食で用いられているふりかけの中のパパイン量を検討して20mgとした。1日2回、すなわち、1日量は40mgと決定した。対象者の嗜好性をみるため、梅と鮭と柚子の3種類のふりかけを試作し対象者の一部に試食してもらい、その結果、最終的には梅と鮭の2種類を製造することにした。梅、鮭それぞれ、パパイン含有とパパイン非含有のものを開発し、パパイン以外の食材は同一にした。これらの食材内容は、海苔、昆布、梅、鮭、フィリーズドライの三つ葉、食塩で血清アルブミン値に影響するようなタンパク質はほとんど含んでいないものを選んだ。また、高齢者の血圧を考慮して、1回の食塩量は0.1gと非常に少量に設定した。参加者の中には、朝、昼とご飯を摂取しない人もいることがわかり、スープとしても摂取できるような食品とした。これらのふりかけは既成のふりかけを製造している食品会社に依託し、衛生管理上問題はないようにした。ふりかけ摂取の効果指標として血清アルブミン以外に、骨格筋に重要なアミノ酸、特に分岐アミノ酸、免疫機能して、免疫グロブリン、NK活性、T細胞解析(CD4/CD8)を分析することにした。
癌悪液質に伴う代謝異常-微細形態及び分子生物学より見た機構の解明-

2.悪液質に関与するmediatorの研究TNF alphaおよびIL-2のKey regulatory enzymeに及ぼす効果は、担癌時に認められるそれらとは明らかに異なっており、これらcytokineがcancer cachexiaのmediatorとして作用している可能性は少ないと考えられた。(Surgery Today23:621-625-1993).3.担癌ラットにおけるLPL活性値刺激の効果、prostagrandin cascadeの関与、インダシンによる遮断担癌時にみとめられるLPL活性値の低下は高脂症治療薬であるbezafibrateにより上昇させる事が可能であることが判明した。(日本外科学会雑誌速報93:759,1993)。インダシンによる効果は、著明では無かった。2.悪液質に関与するmediatorの研究TNFalphaおよびIL-2のKey regulatory enzymeに及ぼす効果は、担癌時に認められるそれらとは明らかに異なっており、これらcytokineがcancer cachexiaのmediatorとして作用している可能性は少ないと考えられた。(Surgery Today23:621-625-1993).3.担癌ラットにおけるLPL活性値刺激の効果、prostagrandin cascadeの関与、インダシンによる遮断担癌時にみとめられるLPL活性値の低下は高脂症治療薬であるbezafibrateにより上昇させる事が可能であることが判明した(日本外科学会雑誌速報93:759,1993)。イングシンによる効果は、著明では無かった。1.担癌ラットにおける肝の小器官レベルでの変化これらの知験は日本外科代謝学会、国際消化器外科学会(Greece)にて発表、日本外科学会雑誌速報に採用予定となった(1993)。2.担癌患者の肝細胞における形態学的変化実験動物で認められる程の変化は治癒切除が可能であった患者の肝細胞では認められなかったが、現在更に詳細に検討中である。術前のhyperalimentationが担癌時の代謝異常に如何なる影響を及ぼすかに関し臨床例25例で検討、最も著明な変化がtissue lipoprotein lipase activityの活性化に認められることを突き止め日本癌学会、アメリカ癌学会(San Diego)で発表した(日本外科学会雑誌速報1992)。