hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
11-13世紀ラ・トリニテ修道院領の研究

とくに、当修道院がラ・トリニテと同じ12世紀末という時期に完成させたカルチュレール(未刊行)の古書体学・書冊学的調査を試み、このカルチュレールの構成および作成過程を、修道院による周辺文書群の作成・保管・利用との関係、さらにラ・トリニテカルチュレールおよび実務管理との関係の分析をも交えて考察した。さらに、現地の専門家へ意見を求めるべく、考察結果をGazeau教授の指導を受けつつフランス語論文としてまとめた。なお、この論文を通じて、同教授およびパリ第四大学のM.Parisse教授、さらにル・アーヴル市立図書館のD.Rouet氏から具体的なアドヴァイスを豊富に受けることができたのは、本研究にとって非常に有意義であった。
西部アフリカにおけるHIVおよび肝炎関連・血液由来感染ウイルスの分離解析

今年度の成果1.HIV-2サブタイプに関して、Aタイプのみでなく、1例ではあるがサブタイプBが存在することが確認された(文献1)2.感染性HIV-1A Gリコンビナントウイルス(CRF02-AG)の樹立と解析を行った。その結果2株の感染性クローンを樹立した。p97GH-1株はR5フェノタイプを示し不死化細胞での増殖は認めたがPBMCでの増殖は認められなかった。p97GH-2株は同じくR5フェノタイプであったがPBMCで増殖か可能であり、これははじめての報告である(文献2,4)3.より効率的にHIV感染の検査を行う事は、ウイルス学的解析のみならずHIV/AIDSの感染予防対策を構築するためにも重要である。そのため、近年開発されたHIV抗体の迅速診断薬3種をガーナで評価し、アボット社の診断薬が優れて居ることを見出した。(文献3)考察ガーナにおけるHIVの分子疫学的解析よりこれまで、HIV-1に関してはenv領域の解析からA,DおよびGタイプが確認されており、サブタイプAがマジョリティーである事を報告してきた。しかしながら、今回の解析結果よりいわゆるAGリコンビナントが存在し、さらにそれがガーナにおける感染のメインをなしている事が示唆された。これは隣国の象牙海岸でのHIV-1の蔓延が現在AGリコンビナントによる事からも推察される。また今回の感染性クローンの樹立はワクチン開発の一助となるばかりでなく、サブタイプ間での伝播能や病原性の差異の解析にも有用なツールとなるものと考える。HIV-2の解析では、サブタイプAがマジョリティーではあるがサブタイプBが検出された事は興味深い、また隣国の象牙海岸ではサブタイプBがメインとなって居る事から今後さらなる疫学的解析も必要となろう。
老化の生理学的多型性に関する日米間共同研究の企画調査

高齢化社会を迎えたわが国において、同年齢にもかかわらず、老化の進行に生理的多型性が存在することは明らかであるが、その成因に関しては明らかにされていない。現在のところ我が国では高齢者の老化の進行度を示す指標は老研式老化指標のように日常・社会的活動を点数化して得られるもので、客観的に個人の生理的な老化を示す指標はない。米国では老化度の指標として提唱されているアロスタティック・ロード(恒常性維持付加度)により老化度の計測が試みられている。本研究では高齢者の老化度を示す指標として我が国ではこれまでに使用されていないアロスタティックロードを、老化度の指標として有効であるか、(特にアロスタティックロードの決定に必要な10の身体的・生理的計測値が日本人の老化の進行度を計る指標として適当か否か)検討し、適当であるとされた場合、実際にわが国における老化研究の企画を行うことを目的とした。研究代表者は共同研究者である曽根、原田と共に平成17年8月末に渡米し、オハイオ州立大学人類学教室Crews教授とアロスタティックロード指標の我が国における適用に関して検討を行った。またわが国における生理人類学の研究者や、オーストラリア国立大学アッテンボロー博士(人類学)らと検討を重ねた結果、アロスタティックロード指標の我が国における適用が可能であるという仮説を導き、長年、研究代表者が町の健康づくり事業に参画してきた長崎県西海市大島町在住者を対象とし、アロスタティックロード指標の測定を行う計画を作成した。その結果、西海市役所担当者と数回のミーティングを行い、本研究を行う確約を得た。
米国カリフォルニア州の進学とキャリア双方への準備を目的としたハイスクール改革

本研究では、米国における生徒の「進学及びキャリアへのレディネス」を改善する取組の一つである、カリフォルニア州のLinked Learningの特質を明らかにする。これは、1アカデミック・コア、2専門コア、3職場を基盤とした学習、4個別の生徒支援の4つを要素とするアプローチで、社会的公正の観点から、脱トラッキングと不利な立場にある生徒にも幅広い進学とキャリアの選択肢を与えることを重視する。本研究ではLinked Learningを、1980年代中頃に創設されたキャリア・アカデミーの発展と捉え、進学とキャリア双方を目的としたその他のイニシアティブとの相違点を浮き彫りにしたい。
諸外国における教員評価の「有望モデル」に関する横断的研究

米国における教員評価の「有望モデル」に関する横断的研究を実施した。具体的には、(1)現代米国における教員評価政策並びに制度に関する既存の事例研究及び評価研究のレビューを進めるとともに、(2)9月にミネソタ州ミネアポリス市、3月にニューヨーク州ロチェスター市で実地調査を実施し、教育委員会の担当職員、校長、教員、教職員組合の委員長及び担当職員から教員評価システムの実施状況、成果、課題等について聞き取りを行った。両市の教員評価はともに、同僚からの専門的支援を通じての教員の職能成長を目的とするPAR(Peer Assistance ad Review)をベースにしている。しかし、ニューヨーク州では現在連邦レベルで推進されているRace to the Top政策のもと生徒の学力テスト結果の教員評価への反映、教員評価結果の査定的利用が実施されているのに対し、ミネソタ州ではこのような運用は実施されていない。その結果、米国における教員評価の「有望モデル」の一つと目されるPARの目的、システムを共有していても、異なる政策的文脈のもとでは異なる意味を持ち、成果と課題も異なることを当事者の聞き取りから具体的かつ詳細に明らかにすることができた。また、多くの市において、PARの導入、実施にあたって教職員組合が教育委員会と協同で積極的に取り組んできたことが特徴であり、ミネアポリス市ではこの協同関係が持続されていた。この点は、教員評価の「有望モデル」の日本での応用や一般化可能性を検討する際にきわめて重要であると考えられる。ノルウェーの生徒による授業評価を積極的に組み込んだ教員評価モデルと米国の教員の職能成長と目的とした教員評価のPAR(Peer Assistance and Review:同僚教師による支援と評価)モデルに焦点を絞り、文献の収集及びレビューとともに、それぞれの国での聴き取り訪問調査を実施した。訪問調査の詳細としては、まず、10月20日から22日までオスロに滞在して、オスロ大学のElstad教授、Knowledge CenterのSolvi教授から国レベルでの教育評価政策の現状と課題について、また、Student Union会長のBenjamin Myrstad氏からは、教員評価政策過程及び学校における教員評価実践への生徒参加について詳細な聴き取りを行なった。さらにSandvika High Schoolを訪問し、学校現場における教育評価への生徒参加の実態についても聴き取りを行った。その結果、ノルウェーの教員評価の政策過程と実践過程の両方における民主主義的性格を具体的に解明することができた。次に、米国のPARモデルに関しては、3月にカリフォルニア州立大学フラートン校のGoldstein教授を訪問し、今後の米国での実地調査について協議を行った。米国では、生徒のテスト成績に基づく教員評価のvalue added modelが優勢になっており、これまでPARモデルを積極的に採用してきた州・地域が方針転換するケースがある一方、結果重視のアカウンタビリティモデルに対するオールタナティブとしてPARモデルが新たな注目されるようにもなっている。その政策ダイナミズムの一端を解明できた。昨年度から継続してオスロ大学のElstad教授を中心に進められている研究プロジェクトに海外アドバイザリー・ボードのメンバーとして参画しつつ、ノルウェーの教員評価を日本への示唆にも富んだ「有望モデル」として、その政策・実施に関する研究を進展させた。ノルウェーの教員評価は、いわゆる北欧型民主主義による政策形成の典型例として理解できるとともに、その実践面では生徒による授業評価を起点とする授業改善と教師の専門的成長を志向している点に特徴がある。また、ノルウェーの教員評価に関する研究を進めるとともに、日本の教員評価政策・実践に関する研究成果を発表して、国際共同研究の推進に努めた。さらに諸外国における教員評価についての分析を進めている本研究の成果は、研究者が委員を務めている「教員の地位に関する勧告の適用に関するILO・ユネスコ専門家委員会」の調査・勧告にも反映されている。また、チリの教員評価について、研究分担者として参加している別の科学研究費補助金による研究プロジェクトとの共同により、サンチャゴ大学の研究者を招聘して、講演・研究会を実施した。一方、米国調査については、研究者の疾病のために計画を延期せざるを得なかった。そのため、研究期間1年間延長の承認を受けて、平成28年度に重点的に取り組むことにしている。当初の計画では、南アフリカまたはチリの教員評価についても、現地調査を含む研究を実施する予定であったが、諸情勢に鑑みて計画を変更した。チリの教員評価については、研究分担者として参加している別の科学研究費補助金による研究プロジェクトとの共同により、サンチャゴ大学の研究者を招聘して、講演・研究会を実施したが、現地調査を実施できなかったために十分な研究成果が得られたとは言えない。米国調査については、研究者の疾病のために計画を延期せざるを得なかったため、研究期間延長の承認を受けて、今年度に実施することにしている。昨年度に引き続き、オスロ大学のElstad教授を中心に進められている研究プロジェクトに海外アドバイザリー・ボードのメンバーとして参画しつつ、ノルウェーの教員評価を日本に対する示唆にも富んだ「有望モデル」として、その政策・実践に関する研究を進めた。また、2016年9月にはSchool of Education, Nottingham Universityの学術講演会に招聘され、本研究の成果を報告した。これまでの研究を通じて構築した研究交流ネットワークを基盤として、教員評価に関する国際共同研究グループを形成した。このグループには、ノルウェーのほか、アメリカ、チリ、ベルギー、オーストラリア、カナダの研究者が参加しており、今後、教員評価の政策と実践の改善を目的とする国際共同研究をさらに推進することを予定している。その第一歩として、2017年7月3日7日にスペインのサラマンカ大学で開催されるInternational Study Association on Teachers and Teachingの大会でImproving Teacherevaluation: Key issues forappraisers ina globalized era (教員評価の改善:グローバル時代における評価者にとっての重要問題)をテーマとするシンポジウムを実施する。

ノルウェーの教員評価の政策・実践については、その民主主義的特徴(当事者の十全な参加が保障されていること)が解明できた。本研究は、複数の国おける教員評価の政策と実践について、その文脈固有性を考慮した検討を行うとともに、一般化可能性を志向するものであり、その点、民主性に特徴づけられるノルウェーモデルは、「有望モデル」の一つとして、日本への示唆に富むものである。また、オスロ大学のElstad教授を中心に進められている教員評価の政策・実践に関する研究に協力することになり、今後も継続的に政策過程をフォローすることができるだけでなく、将来のより本格的な共同研究の計画に着手できたことも重要な成果である。米国の教員評価については、結果重視のアカウンタビリティモデルが優勢になるなかで、同僚による支援・評価のPARモデルの意義と限界を考察する好条件が逆説的に整いつつある。本年度は、ノルウェーモデルの研究に予想以上に時間をとられ、米国での掘り下げた調査は来年度に延期せざるを得なくなったことが反省点だが、Goldstein教授をはじめとする研究者ネットワークを生かして、平成25年度に調査を行ったミネソタ州でのフォローアップ調査やカリフォルニア州での調査などを平成27年度に行う準備を進めることができた。ノルウェーについては、共同研究を継続して実施する。オスロ大学のElstad教授との研究打ち合わせを綿密に行っており、研究遂行上、特別な支障は生じないものと思われる。米国調査は6月以降の実施を計画しており、カリフォルニア大学フラートン校のGlodstein教授と打ち合わせを進めている。教育学当初計画では、平成27年度は南アフリカまたはチリの教員評価の「有望モデル」について、現地調査を含む研究を実施する予定であるが、現在、諸情勢を勘案しつつ、研究交流のある研究者と協議を重ね、訪問調査の可能性を探っている。その一方、平成25年度と26年度に進めた米国とノルウェーの教員評価に関する研究が国際的な共同研究に発展しつつあることにも鑑み、両国での研究も継続する。平成25年度の当初計画では、現代米国における教員評価研究の第一人者であるカリフォルニア州立大学フラートン校のJennifer Goldstein教授との研究交流を行う予定であったが、同教授が研究休暇を取得したため、Eメールでのコミュニケーションに限られ、必ずしも十分ではなかった。
塩分応答性分子SIKを標的とした大動脈解離病態解明

近年の研究から大動脈解離病態への炎症応答や細胞外マトリックス(ECM)代謝異常の関与が明らかにされつつある。申請者は塩分過剰がIL-17を介してECM合成を抑制し大動脈解離を増悪させることを明らかにした。しかし、そのメカニズムは不明である。塩分過剰、IL-17、ECM代謝に着目して塩分過剰が大動脈解離を増悪させるメカニズムを明らかにし、大動脈解離病態を解明することを目的に研究を進めた。まず、マウス大動脈組織において塩分過剰が炎症応答やECM代謝に及ぼす影響を検討した。解離刺激は炎症マーカーであるP-Stat3、P-Jnkの発現を亢進させた。塩分過剰は単独ではP-Stat3、P-JNKを変化させなかったが、解離刺激による発現亢進を増強した。また同様の所見が血管平滑筋の合成フェノタイプマーカーであるSMembで認めた。これらの結果から、塩分過剰は解離刺激下で炎症応答の増進、細胞外マトリックス代謝の活性化を引き起こしていることが示唆された。次に、ECM代謝におけるIL-17の役割を血管平滑筋細胞で検討した。TGF-βはSmad2のリン酸化(P-Smad2)を増加させたが、IL-17の存在下ではP-Smad2増加は抑制された。したがって、IL-17は直接的にTGF-β-Smad2経路を抑制すると考えられた。当研究グループで血管強度測定装置を開発し、マウス大動脈組織の物理的特性を解析した。IL-17KOマウスは野生型マウスより大動脈剛性が低い(進展性が高い)ことが明らかになった。これらの実験および過去の知見から、塩分過剰はIL-17感受性を高め、TGF-β-Smad2経路、ECM代謝を抑制し大動脈解離を増悪させていると考えられた。塩分過剰が大動脈解離増悪をきたすメカニズム解明のため、Salt-Inducible kinase(SIK)に着目している。今回の検討から、塩分過剰がIL-17経路を介してTGF-β経路を抑制することがECM合成の変調をきたすことが示された。この知見は、SIKの役割を解明するにあたりIL-17、TGFβ経路およびECM合成系に着目すべきであることを示唆する。今後、これらの分子経路に着目して大動脈解離病態におけるSIKの役割を明らかにし、塩分過剰が大動脈組織の炎症と脆弱性をきたす病態メカニズムを明確にする。塩分過剰が大動脈解離の炎症と脆弱性を来す病態メカニズムを明らかにするために、Salt inducible Kinase(SIK)に着目して解析を継続する。具体的には、マウス大動脈解離モデルを用いて、SIKの各アイソフォームの発現時期、発現細胞を定量的PCRとウェスタンブロットおよび免疫染色で明らかにし、塩分過剰状態での発現変化を検討する。

具体的には、マウス大動脈解離モデルを用いて、SIKの各アイソフォームの発現時期、発現細胞を定量的PCRとウェスタンブロットおよび免疫染色で明らかにし、塩分過剰状態での発現変化を検討する。塩分過剰が解離病態を増悪させる際の分子的作用点を明らかにするために、現有するIL-17ノックアウトマウスを利用した解析を優先した。この方策によりSIKが関与し得る作用点を明らかにすることができ、またSIKの作用を明らかにするための高額な網羅的解析を回避した。次年度は、SIKおよびその作用点に焦点をあてた解析を進め、当該実験に必要なマウスおよび試薬類を購入する。
神経幹細胞の運命決定における神経ペプチドPACAPの役割の解明

これまでに私は、McKayらの5段階を経る、ES細胞からの神経系細胞への分化過程において、ES細胞においても神経ペプチドPACAPおよびその特異的受容体遺伝子がわずかに発現し、神経系細胞分化にともなって、それらの遺伝子が発現上昇することを明らかにしてきた。また、PACAPが増殖因子であるbFGFに拮抗して、初代培養神経幹細胞の増殖を抑制し、神経細胞分化を促進する因子であることを示唆してきた。今回、ストローマ細胞PA6との共培養によるES細胞の神経系細胞分化誘導法によって培養した細胞においても、PACAP遺伝子の発現が顕著に増加していることが示された。また、薬物の短時間処置により細胞の分化系譜が決定するという報告があることから、初代培養神経幹細胞に対して、培養期間の始めの0.5から24時間PACAPを処置し、培養開始5日後に蛍光免疫染色により検討を行った。その結果、MAP2陽性細胞数はPACAP短時間処置では変化は認められなかった。一方、3時間のPACAP処置によってTuJ1陽性細胞数が増加することが示され、24時間処置によってもその増加の割合は同程度であった。PACAPによる神経分化促進作用が、3時間のPACAP処置においても認められたことから、PACAP添加後3時間までの早い段階で、神経細胞への運命決定が行われている可能性があることが示された。これらの知見は、PACAP及びその受容体が発生過程の脳で神経新生の起こる部位に発現していることからも、in vivoにおいてPACAPは幹細胞に対する他の増殖・分化シグナルと相互作用することにより、細胞運命の決定さらには神経系の構築に重要な役割を果たしていることを示唆するものと考えられる。神経幹細胞の増殖・分化に対するPACAPの作用の解明我々はこれまでに、PACAPがbFGF依存性の神経幹細胞増殖を抑制する分化促進因子であることを示唆してきた。そこで、本年度は、神経幹細胞の自己複製能および分化に与えるPACAPの影響について解析を行った。神経幹細胞の選択的培養法であるneurosphere法を用いて、胎生14.5日齢ラット大脳皮質から神経幹細胞を調整した。本培養法において、細胞が自己複製能を持つのであれば継代培養を行っても再びneurosphere形成することを指標として、神経幹細胞の自己複製能に対するPACAPの影響を検討した。その結果、Primary sphere培養時にPACAPを添加することにより、継代後に形成されるsecondary sphereの数は約30%減少することが示された。このことから、PACAPにより神経幹細胞の自己複製能が低下することが明らかになった。また、PACAPが神経幹細胞を神経細胞、アストロサイト、オリゴデンドロサイトのいずれの細胞へ分化誘導するかについて検討を行った。本検討には、胎生14.5日齢ラット大脳皮質より調整し、単層培養系にて培養した神経幹細胞を用いた。増殖因子bFGFを除去した分化条件においてPACAPを処置して6日間培養後、神経系の各種分化マーカーに対する抗体を用いて蛍光免疫染色を行った。その結果、神経幹細胞マーカーnestin、アストロサイトマーカーGFAP、オリゴデンドロサイトマーカーCNPaseの陽性細胞数には大きな変化はみられなかったが、神経細胞マーカーMAP2の陽性細胞数は100nM PACAPにより増加することが明らかになった。これらのことより、PACAPは神経幹細胞から神経細胞への分化を促進することが示唆された。私はこれまでに神経ペプチドPACAPがbFGFに拮抗して神経幹細胞の増殖を抑制する分化促進因子であることを神経幹細胞の選択的培養法であるneurosphere法を用いて明らかにしてきた。そこで本年は、PACAPの神経発生への関与について、より初期の神経発生段階への影響を検討することを目的として、胚性幹(ES)細胞からの神経系細胞分化誘導系を用いて検討を行った。SDIA法による10日間の培養期間のうち前半の4日間PACAPを作用させ、培養10日目に蛍光免疫染色を行った。その結果、100nM PACAPにより神経細胞マーカーMAP2およびアストロサイトマーカーGFAPが増加する傾向が示された。よって、PACAPは未分化なES細胞から神経系の細胞へと分化が進む発生の初期段階においても神経系細胞分化を促進する因子としての役割を持つ可能性が示された。また、私はこれまでにES細胞から神経系細胞への分化が進行するのに伴いPACAP及びその特異的受容体PAC1並びに受容体サブタイプであるVPAC2の遺伝子が発現上昇することを明らかにしてきた(Reg, Pep(2005)126,109-113)。今回monolayer culture法により得られたES細胞由来の神経系細胞において、PACAPの発現が遺伝子レベル並びにタンパクレベルでも確認された。これらのことより、PACAPは神経発生の広範なステージにおいて細胞の分化に影響を与えることが示唆された。

また、薬物の短時間処置により細胞の分化系譜が決定するという報告があることから、初代培養神経幹細胞に対して、培養期間の始めの0.5から24時間PACAPを処置し、培養開始5日後に蛍光免疫染色により検討を行った。その結果、MAP2陽性細胞数はPACAP短時間処置では変化は認められなかった。一方、3時間のPACAP処置によってTuJ1陽性細胞数が増加することが示され、24時間処置によってもその増加の割合は同程度であった。PACAPによる神経分化促進作用が、3時間のPACAP処置においても認められたことから、PACAP添加後3時間までの早い段階で、神経細胞への運命決定が行われている可能性があることが示された。これらの知見は、PACAP及びその受容体が発生過程の脳で神経新生の起こる部位に発現していることからも、in vivoにおいてPACAPは幹細胞に対する他の増殖・分化シグナルと相互作用することにより、細胞運命の決定さらには神経系の構築に重要な役割を果たしていることを示唆するものと考えられる。
血小板膜糖蛋白GPlbを介するoutside-inのシグナル伝達の解析

血小板膜糖蛋白GPIb/IX/V複合体はvonWillebrand因子やトロンビン結合部位があり、血小板の粘着に重要な役割を果たしている。GPIbαにはQ545よりc-末端側の細胞内ドメインにactin-binding protein(ABP)や14-3-3ζと結合する部位があり、vWFがGPIbαに結合後、outside-1nのシグナル伝達との関係が注目される。Bernard-Soulier syndrome(BSS)Tokyo IIと命名した患者はホモ接合体のQ545Xの変異をもち、GPIbαのこのc-末端が欠損している。血小板におけるGPIbα依存性のシグナル伝達の機序を検討するために、患者の血小板を調べた。患者血小板のリストセチン凝集は弱く、1.2mg/mlでは解離性を示した。患者血小板での放出反応であったが、患者血小板はリストセチン凝集が対照に比べ弱く、同凝集の高さを得る対照の血小板凝集では明らかな放出反応が認められたが、患者の血小板ではATPの放出反応が全く認められなかった。これらの結果から、BSS TokyoIIはGPIbαを介するoutside-inのシグナルの伝達が阻害されていることが明らかとなった。BSS Tokyo IIの変異をもつGPIbαを動物細胞に発現するべく,Q545XのGPIbα遺伝子と正常遺伝子を調製し、発現ベクターであるp-TargeTに導入した。患者のVNTRの数を考慮し患者の2回繰り返しに合わせた。GPIbのC-末端で結合し、シグナリング分子として考えられている14-3-3ζはcDNAをPCRで増幅後、P-TargeTに導入した。GPIbαの細胞表面への発現にはGPIbβとGPIXのco-expressionが必要であることがLopezらにより明らかにされている。そこで、彼らが作成したGPIbβ/GIXをCHOに安定に発現した細胞を恵与して頂いた。現在、変異体のGPIbαを発現実験中である。14-3-3ζはubiquitousに発現しており、CHOに発現したGPIb/GPIX複合体は細胞に本来存在する14-3-3ζと結合して発現してくると考えられるので,14-3-3ζの遺伝子の導入は必ずしも必要でなかったかもしれない。本実験で発現ベクターに組み込んだ患者のGPIbαの遺伝子は、今後さらにGPIbα依存性のシグナル伝達を誘発する研究や下流にあるkinaseの解明に応用できると考えられる。血小板膜糖蛋白GPIb/IX/V複合体のGPIbαのQ545よりC-末端側は細胞内にあり、actin-binding protein(ABP)や14-3-3ζと結合する部位がある。vWFがGPIbαに結合した後、outside-inのシグナルを血小板内に伝達するのに重要な役割を果たしていると考えられている。

我々のBernard-Soulier syndrome(BSS)Tokyo IIと命名した患者はホモ接合体のQ545Xの変異をもち、GPIbαのC-末端が欠損している。そこで、血小板におけるGPIbα依存性のシグナル伝達の機序を検討した。BBS Tokyo II患者の血小板のリストセチ凝集を調べたところ、患者の血小板のリストセチン凝集は弱く、1.2mg/mlでは解離性を示し、先の結果を再確認できた。最も興味がもたれたのは、患者血小板からの放出反応がみられるか否かであったが、患者血小板はリストセチン凝集が対照に比べ弱く、同凝集の高さを得る対照の血小板凝集では明らかな放出反応が認められたが、患者の血小板はATPの放出反応が全く認められなかった。これらの結果から、BSS Tokyo IIはGPIbαを介するoutside-inのシグナルの伝達が阻害されていることが分かった。BSS Tokyo IIの変異をもつGPIbαをCHO細胞に発現するべく、Q545XのGPIbα遺伝子と正常遺伝子を調製し、動物細胞の発現ベクターであるp-TargeTに導入した。また、14-3-3ζはシグナリング分子として考えられているので、PCRでcDNAを増幅後、P-TargeTに導入した。GPIbαの細胞表面への発現にはGPIbβとGPIXのco-expressionが必要であることが、Lopezらが作成したGPIbβ/GIXをCHO細胞に安定に発現した細胞を入手した。現在この細胞にGPIbαの遺伝子と14-3-3ζ遺伝子を導入し、GPIbα/IX複合体と14-3-3ζをともに発現させ、機能を検討する計画である。血小板膜糖蛋白GPlb/IX/V複合体はvon Wi11ebrand因子やトロンビン結合部位があり、血小板の粘着に重要な役割を果たしている。GPlbαにはQ545よりC一末端側の細胞内ドメインにactin-binding protein(ABP)や14-3-3ζと結合する部位があり、vWFがGPlbαに結合後、outside-1nのシグナル伝達との関係が注目される。Bernard-Soulier syndrome(BSS)Tokyo 11と命名した患者はホモ接合体のQ545Xの変異をもち、GPlbαのこのc一末端が欠損している。血小板におけるGPlbα依存性のシグナル伝達の機序を検討するために、患者の血小板を調べた。患者血小板のリストセチン凝集は弱く、1.2mg/mlでは解離性を示した。患者血小板での放出反応であったが、患者血小板はリストセチン凝集が対照に比べ弱く、同凝集の高さを得る対照の血小板凝集では明らかな放出反応が認められたが、患者の血小板ではATPの放出反応が全く認められなかった。これらの結果から、BSS Tokyo llはGPlbαを介するoutside-inのシグナルの伝達が阻害されていることが明らかとなった。BSS Tokyo 11の変異をもつGPlbαを動物細胞に発現するべく、Q545XのGPlbα遺伝子と正常遺伝子を調製し、発現ベクターであるp-TargeTに導入した。患者のVNTRの数を考慮し患者の2回繰り返しに合わせた。GPlbのC一末端で結合し、シグナリング分子として考えられている14-3-3ζはcDNAをPCRで増幅後、P-TargeTに導入した。
非線形分散型方程式の大域ダイナミクス

非線形Schrodinger方程式の大域ダイナミクスに関して、2つの大きく異なるソリトン族を含むエネルギー空間領域で分類した。具体的には、線形・非線形ポテンシャルの夫々が主要な相互作用として生成する基底状態ソリトンと第1励起状態ソリトンを含むようなエネルギー制約条件の下で解の大域挙動を分類し、変遷の仕方を記述した。線形ポテンシャルの空間非斉次性により、ガリレイ不変性に対応するソリトン族は失われるが、大域挙動を分ける境界面は維持される。一般化KdV方程式、水面波方程式、Zakharov方程式系、Gross-Pitaevskii方程式についても解の大域挙動分類について部分的結果を得た。エネルギー臨界冪の非線形波動方程式の大域ダイナミクスを解析した。以前の研究で、基底状態よりエネルギーが少し上までの解は、最大存在時刻付近で基底状態近傍に留まるか、時刻大で自由解へ漸近(散乱)するか、基底状態から離れて爆発する事が分かっていた。本年度は、最初の解集合がエネルギー空間で超曲面を形成する事を示し、それらは(3次元球対称なら)基底状態集合へ散乱または有限時間爆縮の意味で漸近する事を示した。基底状態への散乱と爆縮は、従来別々に存在証明されていたが、これらを統一的に扱う事でエネルギー空間で滑らかな超曲面を得た所が重要な新しい視点である。さらに、その超曲面を任意のエネルギーレベルまで拡張する事にも成功した。水面波の方程式に対して多重周波数での非線形Schrodinger方程式近似を調べた。非線形Schrodinger方程式が広汎な非線形波動に対して単一周波に近い解の長時間近似を与える事は良く知られているが、複数の周波数を考える事で、非線形共鳴の大域挙動への影響を調べるのが目的である。表面張力と重力と有限水深が有る場合、分散関係式の凹凸により非自明な共鳴が生じるが、その影響で極限方程式に時間・空間積分を含む非線形項や初期境界層が現れる事を示した。非線形分散型方程式の大域ダイナミクスの重要課題の一つは、様々なソリトンを含む解の分類である。その為に、安定・不安定なソリトンを両方持つモデルケースとしてポテンシャル付き非線形Schrodinger方程式の大域挙動を考察した。詳しくは、解の総質量が小さく球対称という制約下、基底状態はポテンシャルの物に相似して負の小さなエネルギーを持ち、第1励起状態はポテンシャルの無い場合に相似して正の大きなエネルギーを持つが、私は励起状態より低いエネルギーの解全てを、有限時間爆発と基底状態への散乱に分類した。その区別は初期値に対する具体的汎関数で与えられ、ポテンシャルが無い場合に類似するが、後者では安定ソリトンが無く、不安定な基底状態のみが解析対象となるのが重大な違いである。実際証明においても、安定な基底状態が存在する状況でエネルギーの大きな剰余部分の大域分散性を導出する部分が最も重要な部分となる。もう2つの重要課題は、Schrodinger型以外の分散性と、低い冪への拡張である。特に後者については基底状態の安定性によって結果自体が変わるので、まずは境となる質量臨界冪が問題となる。そこで質量臨界冪の一般化KdV方程式の大域挙動をソリトンの周りで調べた。この問題では既にMartel, Merle, Raphaelがソリトンのエネルギー近傍でソリトン進行方向で減衰する初期値に対し、ソリトンの集約爆発か、時間大域解でソリトンへ漸近するか、ソリトンのエネルギー近傍から脱出する事を示していた。私は彼らの研究に合流して上記3つの挙動の関係を調べ、ソリトンへの漸近解集合が余次元1の多様体で残り2つ境となる事を示した。超臨界冪との大きな違いは時間正負の挙動が線形化作用素では区別できず、中心安定・不安定の2多様体がソリトンに沿って接する所で、これらの多様体がどのように交わるかは今後の課題である。主な研究成果として、一つは対象となる解の大きさと種類を拡げる事を目指し、ポテンシャル付非線形シュレディンガー方程式について調べた。空間球対称かつ小質量の制限下で、第一励起ソリトンを少し超えるエネルギーまでの解を時間挙動で完全分類した。但し第一励起ソリトンとは一定質量に対し最小エネルギーの基底状態ソリトンに次ぐ二番目に小さなエネルギーのものを指す。分類はエネルギー空間で9通りの解に分かれ、時刻大で第一励起ソリトンの近傍に留まる解全体が成す余次元1の中心安定多様体と、その時間反転の中心不安定多様体が境になる。更に、安定な基底状態ソリトンに対して空間遠方から大エネルギー放射性波動が撃ち込まれ有限時間爆発するシナリオがこの相空間では安定な挙動で、爆発挙動へ遷移する前には必ず一度だけ第一励起ソリトンの近傍を通過する事も示された。不安定なソリトンから安定なソリトンへの遷移については、小さなソリトンに対して多くの数学的研究があるが、上記の結果は全く大きさの異なるソリトンが有る状況で、ソリトン近傍に限らない一般解の分類として記述し、不安定ソリトンの重要性も明確にした所が特長である。もう一つは方程式の設定を拡げる事を目指したもので、4次元空間でのザハロフ方程式の初期値問題適切性と散乱について調べた所、指数領域の端点で非線形システム特有と思われる興味深い臨界現象を見出した。一つはエネルギー空間に置いて、ソボレフ埋蔵の臨界現象により非線形評価が破綻するにも拘らず、より小さな空間と大きな空間での結果に保存則を組み合わせてエネルギー空間での結果を導出する事ができた。これは指数が端点でも関数空間が中間空間である事が効いており、スカラー方程式における臨界現象では考え難い。

しかし別の端点指数では、解が一瞬で初期値空間から外れてしまうという強い非適切性も得られ、中間空間だけでは無理である事も明示された。非線形分散型方程式の大域ダイナミクスについて、散乱・爆発・安定ソリトン及び不安定ソリトンという4つの典型的挙動を全て含む相空間での分類及び相互関係・遷移現象の記述に成功した。球対称や小質量など、設定に関しては限定的だが、非線形分散型の代表的な方程式である3次元3次の非線形シュレディンガー方程式が対象なので、物理的には自然な設定で有り、数学的には解の多様性に関して重要な進展であると思われる。4次元のザハロフ方程式は物理的には不自然だがエネルギー空間での臨界現象とその対処法は解析的に興味深く今後の発展が期待できる。本研究課題の大きな成果の一つは、非線形Schrodinger方程式の大域ダイナミクスに関して、2つの大きく異なるソリトン族を含むエネルギー空間領域での分類と記述に成功した事である。具体的には、線形と非線形ポテンシャルを両方含む場合について、夫々が主要な相互作用として生成する基底状態ソリトンと第1励起状態ソリトンを含むようなエネルギー制約条件の下で解の大域挙動を分類し、また変遷の仕方を記述した。前年度までの研究では球対称解に制限していたが、最終年度の研究により対称性の制約は外せることが分かった。ここで線形ポテンシャルが導入する空間非斉次性により、ガリレイ変換に対応するソリトンの族は壊れて原点に留まるもののみとなるが、爆発解と基底状態への漸近解を分ける境界面の存在(余次元1の不変多様体)は維持される。この境界面上の解の挙動と、もう一つの制約である小質量を外した場合の状況は、今後の研究の重要課題となる。他方、大域ダイナミクスの解析対象を広げる試みとして、一般化KdV方程式や水面波の方程式、Zakharov方程式系、最終年度にはGross-Pitaevskii (GP)方程式や共形不変非線形波動方程式などを調べた。KdVと波動方程式では挙動境界を構成したが、境界からのずれを記述する線形化作用素が単純な指数的不安定性を示さないのが困難な点である。GPに対する研究では、3次元反発性非線形項のSchrodinger方程式に対する平面波解の漸近安定性を、空間局所的な摂動から球対称性を持つエネルギー空間での摂動へ拡張した。また、4次元のZakharov系について、エネルギー空間での解析を大きな解へ拡張するため、波動方程式で発展するポテンシャルを持つ線形方程式に対する時空大域評価を、基底状態ソリトンの制約下で導出することに成功した。非線形Schrodinger方程式の大域ダイナミクスに関して、2つの大きく異なるソリトン族を含むエネルギー空間領域で分類した。具体的には、線形・非線形ポテンシャルの夫々が主要な相互作用として生成する基底状態ソリトンと第1励起状態ソリトンを含むようなエネルギー制約条件の下で解の大域挙動を分類し、変遷の仕方を記述した。線形ポテンシャルの空間非斉次性により、ガリレイ不変性に対応するソリトン族は失われるが、大域挙動を分ける境界面は維持される。
昆虫嗅覚感覚毛クチクラに学ぶ防水通気性ナノポア構造の形態制御機構

本研究では、表面張力により液体の漏洩を防ぐと同時に気体の透過を促す特性を持つ、昆虫の嗅覚感覚毛の多孔性外骨格(クチクラ)の自律形成機構を分子レベルで解明し、生物規範に基づく機能性新素材開発に役立つ分子の物性及び動態に関する知見を得ることを目指した。クチクラの形態形成過程の詳細な電子顕微鏡観察により、細胞表面に形成される電子密度の高い微細突起構造が分泌直後のクチクラと相互作用することが微細孔(ナノポア)の形成に重要であることが明らかとなった。さらに、遺伝学的なスクリーニングにより同定した新規膜タンパク質Goxが、ナノポアの形成、特に突起の形成に必須だと推定される主要分子であることを明らかにした。生物が織りなすナノメートルスケールの微細構造は生体機能に重要な巨視的な現象を引き起こす。生物由来の微細構造の物性と構造に関する知見が蓄積する一方で、生体内での微細構造の自立形成に関わる分子機構は不明であった。本研究では、表面張力により液体の漏洩を防ぐと同時に気体の透過を促す特性を持つ、昆虫の嗅覚感覚毛の多孔性外骨格(クチクラ)の自律形成機構を分子レベルで解明し、生物規範に基づく機能性新素材開発に役立つ分子の物性・動態に関する知見を得ることを目指した。平成27年度は、ショウジョウバエ遺伝学による微細孔(ナノポア)形成を制御する遺伝子の探索、及びナノポア前駆構造の元素分析を主に行った。その結果、ナノポアの生成に関わる因子として(1)細胞外への脂質膜の切り出し制御因子と(2)細胞表面への脂質膜の供給制御因子を、ナノポアの分布密度に関わる因子として(3)アクチン細胞骨格を同定した。これらの結果は、細胞膜直下の細胞骨格パターンが細胞外に転写され、さらに外骨格の構成成分として細胞膜由来の脂質膜を細胞外に放出することで幾何学的に配置されたナノポアが外骨格に形成されることを示唆する。この様式は、今まで考えられてこなかったユニークなものであり、微細加工技術へ応用する上で模倣すべきポイントと分子種候補が絞られた点で意味深い。さらに、以上の解析と並行して、ナノポア形成細胞で高発現する遺伝子の探索をRNA-seq法により行った。得られたナノポア形成制御遺伝子候補155遺伝子について、現在RNAi法による機能解析を順次進めている。一方で、ナノポア前駆構造の元素分析をSTEM-EDSにより行ったが、クチクラ直下でのバックグラウンドのシグナルが高く、定量が困難であった。現在、代替手法である免疫電子顕微鏡法及び超解像顕微鏡法により成分分析を進めている。形態観察に基づく推測により、実際に多孔性クチクラ上のナノポア形成不全を引き起こす変異体を複数同定し、ナノポア形成に関わる細胞の挙動が明らかとなってきた。また、RNA-seq法に基く網羅的探索についても順調に解析が進行している。STEM-EDSによるナノポア前駆構造の成分分析は技術的に困難であると判明したが、ナノポア形成制御遺伝子が同定されたことで前駆構造の成分が絞られた為、抗体や特異的プローブを用いた手法によって代替可能であると判断した。以上により次年度の研究遂行の基盤が整った。生物が織りなす微細構造は生体機能に重要な特徴的な物性を発現させる。本研究では、防水通気性を有する昆虫嗅覚感覚毛の多孔性外骨格(クチクラ)の自律形成機構を分子レベルで解明し、生物規範に基づく機能性新素材開発に役立つ分子の物性・動態に関する知見を得ることを目指した。平成28年度は、前年度RNA-seq法により同定したナノポア形成制御遺伝子候補155遺伝子の中で、RNAi法による機能阻害で全てのナノポアが消失するgoxと名付けた新規遺伝子に着目して解析を進めた。goxは、昆虫のみに広く保存された新規膜タンパク質遺伝子であり、シグナルペプチドと2つの膜貫通ドメインを持つと予測される以外に既知の機能ドメインを全く持たないタンパク質をコードしていた。ショウジョウバエの発生ステージ別公開RNAseqデータベースによると、クチクラの最外層を作る時期にのみ発現しており、ナノポア形成に特化した遺伝子であることが推測された。実際にゲノム編集ツールCRISPR-Cas9を用いてgox変異体を作成したところ、変異体は生存可能であり、見られた表現型はナノポア数の消失、電気生理学的な嗅覚応答の低下といったナノポア形成に関連したもののみであった。Goxの細胞内での局在を調べるために、GoxのN末及びC末にHAタグもしくはFLAGタグを融合したタンパク質を、S2細胞及びナノポアを形成する嗅感覚毛シャフト細胞で発現させたところ、endosomeを中心とした細胞内小器官及び細胞表面でのドット状の局在を示していた。以上の結果と昨年度の形態形成過程の観察の結果を考え合わせると、Goxは細胞内膜輸送の制御、もしくは細胞膜表面の曲率の制御を介して細胞表面に微細突起構造を形成し、クチクラ最外層に形成されるクチクラ貫通の為の足場を築いていくと考えられた。

さらに、遺伝学的なスクリーニングにより同定した新規膜タンパク質Goxが、ナノポアの形成、特に突起の形成に必須だと推定される主要分子であることを明らかにした。ナノポア形成不全を示す変異体での形態異常を電子顕微鏡レベルで明らかにするとともに、ナノポア形成制御因子を蛍光タンパク質でラベルしたショウジョウバエ系統を用いて、ナノポア形成過程における分子動態及びその制御機構を明らかにする。RNA-seq法で絞られた候補遺伝子の機能検定により新たな制御因子の同定を進める。ナノポア形成制御因子の特性に基づき、ナノポア前駆構造の成分を絞り込む。発生生物学研究所の次世代シークエンサー解析ユニットの努力により、RNA-seq解析に掛かるコストが低減した為。ナノポア形成不全変異体の電子顕微鏡解析において、当初計画になかったFBS-SEMという新装置を利用する必要が生じた為、その受託解析の費用に充てる。
カイコ発生卵における脂肪滴含有状態の超微形態学的検討

昆虫の胚発生を明らかにすることは、動物の胚発生におけるエネルギーや物質の移動を一般化して理解するために極めて重要である。本研究では、胚へのエネルギー供給機構に注目し、脂肪滴含有最の多いカイコ卵を用いて胚発生過程の脂肪滴の局在変化と消費について組織化学的・生化学的解析を行った。特に高圧凍結・凍結置換法を応用し、通常の解析法では観察困難とされてきた発生卵の脂肪滴含有状態の空間的・経時的変化についての超微形態学的観察を行った。胚体外卵黄に含まれる脂肪滴の胚への取り込みには三段階(胚運動期以前、反転完了期、点青期)あり、取り込まれた脂肪滴は孵化直前に消費される事を示した。この成果は日本蚕糸学会77回大会、日本動物学会78回大会で報告した。また、Zoological Scienceに投稿し、論文掲載が決定した。高圧凍結・凍結置換法を用いたカイコ卵の電顕試料作製方法を確立し、日本蚕糸学会76,77回大会、医学生物学電顕技術学会22,23回大会で報告した。上記の結果をふまえ、高圧凍結・凍結置換法を用いてTEM試料を作製し、初期発生過程(反転完了期まで)における胚体外卵黄から胚組織への脂肪滴の取り込みを超微形態学的に検討した。その結果、第一段階では、胚に含まれる大部分の脂肪滴は胚盤胞形成時に表層細胞質ごと取り込まれたものと考えられるが、その後の発生過程で緩やかに細胞表層からの取り込みが起きること、第二段階では脂肪滴は中腸内腔の卵黄細胞から中腸細胞を介して体腔内の脂肪体に蓄積されることが観察された。また、胚細胞や中腸細胞において、細胞内の脂肪滴周辺に発達した粗面小胞体が観察され、一部は脂肪滴と融合しているものも見られた。これらは脂肪滴と小胞体との関連を示唆するものであり、昆虫卵の発生過程の観察のみならず、細胞内における脂肪滴の生成と輸送機構に関して重要な示唆を与えるものであると期待される。この成果の一部は日本動物学会78回大会で報告し、現在論文投稿準備中である。昆虫の胚発生を支える栄養分・エネルギー供給機構を明らかにすることは、胚発生現象全般の理解に極めて重要である。特に栄養分などの発生に伴う位置情報は重要だが、従来の形態学的手法では、試料作製過程での脂肪滴の大量流失等により、卵内の栄養成分の局在を正しく把握できなかった。本研究では、脂肪滴含有率の高いカイコ卵を用い、脂肪滴が保持された状態の発生卵の超微形態観察法を開発し、胚発生における脂肪滴の経時的位置情報を明確にさせる方法を検討している。卵の脂肪滴含有状態を電顕観察するために、高圧凍結・凍結置換法による試料作製方法を検討した。高圧凍結装置は奈良女子大に設置の機器(Leica EM-PACT)を用い、凍結試料を液体窒素に入れた状態で浜松医大に持ち帰り、本科研費補助金で導入した凍結置換装置(Leica EM-AFS)により凍結置換し、樹脂包埋による試料作製を行った。高圧凍結は、試料台等の制約により当初予定した卵殻付きでの卵の凍結は不可能であったが、試料台の改良や凍結前の卵殻除去等、種々の検討の結果、発生卵の卵黄細胞に含まれる脂肪滴とその周辺構造を非常に良好な状態で観察することに成功した。

従って、フリーズフラクチャー・レプリカ法による検討は当面不要となり、高圧凍結・凍結置換法による研究を促進している。上記研究に平行して、カイロ卵の凍結切片を作製し、発生過程での脂肪滴の局在変化についてオイル赤染色法を用いて組織化学的に検討した。胚発生当初、卵黄細胞に含まれていた脂肪滴は、胚に取り込まれた後に発生過程後半で使われることを形態学的に明らかにした。また、脂肪滴は、blastokinesis以前、dorsal closure期、点青期の三段階に分けて胚に取り込まれるが、各段階で異なった取り込み方法をとることを発見した。この成果は目本蚕糸学会第77回大会で報告し、現在、論文投稿準備中である。昆虫の胚発生を明らかにすることは,動物の胚発生現象全般の理解に極めて重要である。本研究では,特に初期胚のエネルギー供給機構に注目し,脂肪滴含有量の多いカイコ卵を用い胚発生過程での脂肪滴の局在変化と消費について組織化学的、生化学的解析を行った。特に高圧凍結、凍結置換法を応用し通常の解析法では観察が難しいとされる発生卵の脂肪滴含有状態の空間的、経時的変化についての超微形態学的観察を行った。胚体外卵黄に含まれる脂肪滴の胚への取り込みには三段階(胚運動期以前,反転完了期,点青期)あり,艀化直前の胚発生後期に消費される事を示した。この成果は日本蚕糸学会第77回大会,医学生物学電顕技術学会第23回大会,日本動物学会第78回大会で報告した。また,Zoological Scienceに投稿し,論文掲載が決定した。上記の結果をふまえ,高圧凍結、凍結置換法を用いてTEM試料を作製し,初期発生過程(反転完了期まで)における胚体外卵黄から胚組織への脂肪滴の取り込みを超微形態学的に検討した。その結果,第一段階では,胚に含まれる大部分の脂肪滴は胚盤胞形成時に表層細胞質ごと取り込まれたものと考えられるが,その後の発生過程で緩やかに細胞表層からの取り込みが起きること,第二段階では脂肪滴は中腸内腔の卵黄細胞から中腸細胞を介して体腔内の脂肪体に蓄積されることが観察された。また,胚細胞や中腸細胞において,細胞内の脂肪滴周辺に発達した粗面小胞体が観察され,一部は脂肪滴と融合しているものも見られた。これらは脂肪滴と小胞体との関連を示唆するものであり,昆虫卵の発生過程の観察のみならず,細胞内における脂肪滴の生成と輸送機構に関して重要な示唆を与えるものであると期待される。この成果の一部は日本動物学会第78回大会で報告し,現在論文投稿準備中である。
読書指導カリキュラム構築の基礎研究――大村はまの読書生活指導の系統性を中心に――

本研究においては、大村はまの行った「読書の方法や技術の習得」をねらった学習指導を対象に、文献や鳴門教育大学附属図書館に所蔵されている学習者の「国語学習記録」をもとに考察を行った。19571959年度、19601962年度には、すでに〈基本〉〈練習〉〈応用〉の段階をふんだ指導が見てとれた。19661968年度、19691971年度には、読書指導の指導事項を解明するために、毎月2、3時間程度の学習が新たに実践されていた。この内容は中学校3年間を見通した読書生活指導の「計画案」につながったとみられる。本研究においては、単元的展開によるさまざまな学習指導法を開拓してきた国語教師・大村はまの読書生活指導に焦点をあてて、情報活用能力の育成とも深く関わる「読書の方法や技術の習得」をねらった学習指導が、1年間及び3年間という枠組みのなかで、どのように行われたのかという点を実証的に究明することを目的とする。当時の大村の学習指導をうかがう資料として、大村の講演記録、実践記録等が収録された『大村はま国語教室全16巻』(筑摩書房)に加えて、鳴門教育大学附属図書館に所蔵されている、大村が指導した当時の学習者の「国語学習記録」(約2,000冊)を参考にして、大村が行った実践の内実を明らかにする。平成24年度は、前年度の取り組みをふまえて、大村が3年間持ち上がりで指導した1960から1962年度を取り上げて資料収集に努めた。鳴門教育大学附属図書館には、1960から1962年度の「国語学習記録」が合計74冊、また、日常の学習指導の内容をうかがうことのできる、個人研究の記録、文集、グループ学習の記録、読書生活の記録が合計72冊所蔵されていた。当時、大村の教室では西尾実が編集した教科書である『国語』(筑摩書房)を用いて、教科書教材を経験単元の向きになるように扱った実践が展開されていた。これら附属図書館所蔵の資料を参考に、「読書の方法や技術の習得」をねらった学習指導がどのように展開されていたか解明を試みたところである。平成25年度は、これまでの取り組みをふまえて、大村が3年間持ち上がりで指導した1966から1968年度及び1969から1971年度を取り上げて資料収集に努めた。鳴門教育大学附属図書館には、1968から1969年度の「国語学習記録」が合計73冊、また、日常の学習指導の内容をうかがうことのできる、個人研究の記録、文集、グループ学習の記録、読書生活の記録が合計98冊、1969から1971年度については、「国語学習記録」が合計40冊、その他の個人研究の記録等が50冊所蔵されていた。本研究においては、単元的展開によるさまざまな学習指導法を開拓してきた国語教師・大村はまの読書生活指導に焦点をあてて、情報活用能力の育成とも深くかかわる「読書の方法や技術の習得」をねらった学習指導が、中学校1年間及び3年間という枠組みのなかで、どのように行われたのか、またそこに見られる指導の原理と方法(〈基本〉〈練習〉〈応用〉の段階をふんだ指導)がいつ頃から大村の指導に見られるようになったのかという点を実証的に究明することを目的とする。当時の大村の学習指導をうかがう資料としては、大村の講演記録、実践記録等が収録された『大村はま国語教室全16巻』(筑摩書房)があるが、その記述について、「授業展開の配当時間を含めた具体的な姿がわかりにくい」(渋谷孝『国語科単元学習は成立するか』明治図書1993.9 pp.67-68)という指摘がある。そこで、本研究では、鳴門教育大学附属図書館に所蔵されている、大村が指導した当時の学習者の「国語学習記録」(約2,000冊)を参考にして、大村が行った実践の内実を明らかにすることとする。