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終戦までのハンセン病患者の「臣民」化における短歌と医療の関係をめぐって

本研究は、日本で最初にハンセン病療養施設がつくられた1889年から1945年の終戦までの期間で、ハンセン病療養施設の患者たちが詠んだ短歌を、療養施設という閉鎖された空間とその外部との双方向的なコミュニケーションを可能とした表現様式として捉え、以下3点の課題を明らかにしようとしている。(1)ハンセン病療養施設で患者たちはいつから、なぜ短歌を詠むようになったのか。(2)患者たちの短歌は療養施設の外でどのように受け入れられたか。そしてそれは、当時の状況とどのような関係性を有するか。(3)医療は、短歌によってどのように天皇制とハンセン病を媒介し、ハンセン病患者たちを「臣民」としたか。平成30年度においては、(1)および(2)について以下の研究の進展があった。(1)については、ハンセン病療養施設を文学研究者のプラットが創出した分析概念「コンタクトゾーン」ー文化間の力関係が均等でない状況で複数の文化が遭遇・衝突・格闘する空間ーと捉えることにより、患者たちが医師が推奨した短歌という新しい表現手段に出会いそれを通して病いを語る経過を明らかにするようになったことを明らかにした。(2)については、キリスト教団体の日本MTLを検討した。ハンセン病撲滅と患者の救済を目的に1925年に賀川豊彦らによって設立された日本MTLは患者に文芸活動を奨励し、その機関誌『日本MTL』には患者が書いた文章や詩、短歌、俳句等が適宜掲載された。ハンセン病療養施設の外で患者たちの短歌がどのように受け入れられたかを検討した。以下の5つの方法によって、本研究を進めている。1病い(研究の対象とする期間における慢性病として、特に結核)の文芸的な表現とその社会性についての文献の収集と読解による病いの文芸的な表現およびその社会性の検討、2研究の対象とする時期のハンセン病患者の短歌とその受容についての文献の収集と分析を前年度から継続して行なった。これらの作業と並行して、3松岡と池田は研究対象期間において患者が多くの短歌を詠んだ国立療養所多磨全生園(東村山市)で数回文献収集を行なった。また、両名で7月に伊東市立木下杢太郎記念館を訪れ、ハンセン病文芸について示唆に富む評論を書いた木下杢太郎(東大皮膚科教授太田正雄のペンネーム)の資料を閲覧するとともに館長からお話を伺った。4分析については、松岡と池田は日常的にメールで意見交換しており、これまで4回(6月、10月、11月、3月)、東京等でミーティングを行なっている。5以下のように成果の発表を行なった。平成30年度は6月上旬に韓国文化人類学会創立60周年記念大会(国際大会)で松岡と池田がそれぞれ英語で発表を行なった。一方、松岡は9月の宗教学会で本研究にもとづく発表を行なっている。また、松岡と池田は共同で企画した市民向けの講演会「よみがえる歌人・明石海人」(平成31年2月23日、於・国立ハンセン病資料館映像ホール共催は池田が所属する大阪大学COデザインセンター)において成果を発表した。初年度の平成29年度から行なってきた1病い(特に慢性病)の文芸的な表現とその社会性についての文献の収集および検討、2研究の対象とする時期のハンセン病患者の短歌とその受容についての文献の収集とその分析、3ハンセン病療養所におけるフィールドワークによるデータ収集、を継続して行なう。3については、令和元年度には以下の施設で調査を行なう予定である。ハンセン病短歌の形成に不可欠な役割を担った医師内田守が勤務した九州療養所(現・国立療養所菊池恵楓園)、内田が寄付した蔵書を内田文庫として所蔵する熊本県立図書館、患者が盛んに文芸活動を行なっていた全生病院(現・国立療養所多磨全生園)、日本初のハンセン病治療および療養のための施設として1889(明治22)年に開設された神山復生病院(静岡県御殿場市)。一方、平成30年度から行なってきた4分析および5成果の発表を、令和元年度も継続して行なう。具体的には5月の第45回日本保健医療社会学会、9月の日本宗教学会第78回学術大会で発表することを予定している。また、論文も積極的に執筆する。2018年度においては、(1)および(2)について以下の結論を得た。(1)「ハンセン病療養施設で患者たちはいつから、なぜ短歌を詠むようになったのか」については、1915年頃から東京の私立の療養施設で患者が短歌を詠んでいたことが明らかになった。その後国公立の療養施設においても、発病前から短歌に親しんでいた患者たちが歌を歌会を開催するようになり、歌を詠むことが広く行なわれるようになった。

一方、管理者側も療養施設の数少ない文化活動のひとつとして短歌を推奨したことがハンセン病療養施設において短歌を詠むことが拡散した理由の一つとして考えられる。(2)「患者たちの短歌は療養施設の外でどのように受け入れられたか。そしてそれは、当時の状況とどのような関係性を有するか」については、1926年に九州療養所から出版された患者たちの合同俳歌集『檜の影第一集』に収められた短歌が、ハンセン病療養施設の外でも読まれた最初の患者たちの短歌であり、少なからぬ反響があったことが明らかになった。当時激しい差別を受けていたハンセン病患者が短歌という文化活動を行えるということが驚きを持って迎えられたと考えられる。以下の三つの方法によって、本研究の基盤をつくりあげつつある。1病い(研究の対象とする期間における慢性病として、特に結核)の文芸的な表現とその社会性についての文献の収集し読解することにより、病いの文芸的な表現およびその社会性を検討している。2研究の対象とする時期のハンセン病患者の短歌とその受容についての文献の収集とその分析としては、ハンセン病患者の短歌で歌集や短歌誌に掲載されたものの現物やコピーを収集し、検討している。これらの作業と並行して、3ハンセン病療養所におけるフィールドワークによるデータ収集を行なった。松岡と池田は研究対象期間、すなわち1899年から1945年の間に患者が多くの短歌を詠んだ国立療養所長島愛生園(岡山県瀬戸内市)と国立療養所多磨全生園(東村山市)で調査を行なった。2017年8月に長島愛生園を訪れ、機関誌である『愛生』を閲覧し必要な部分をコピーした。また、国立療養所多磨全生園およびに同敷地内にある国立ハンセン病資料館を2回訪れ、資料を収集した。4分析については、松岡と池田は日常的にメールで意見交換しており、これまで4回(9月、11月、12月、3月)、東京で(東京医科歯科大学等)でミーティングを行なっている。平成29年度において、ハンセン病療養施設では短歌を詠むことを通して患者が自らの病気を客観的に捉えることと修養が重視されていたことを把握した。以下、進捗状況について述べる。本研究の採択の通知を受けたのが2017年6月末であり、研究の開始が遅れた。また、松岡が2017年9月と2018年3月に手術を受け、それぞれ術後ひと月ほど研究活動に支障をきたしたこともあり、予定していたフィールドワークが行なえなかったり、1の文献で購入すべき書籍の選定が遅れたりしてが、研究はおおむね順調に進展している。本研究は、日本で最初にハンセン病療養施設がつくられた1889年から1945年の終戦までの期間で、ハンセン病療養施設の患者たちが詠んだ短歌を、療養施設という閉鎖された空間とその外部との双方向的なコミュニケーションを可能とした表現様式として捉え、以下3点の課題を明らかにしようとしている。(1)ハンセン病療養施設で患者たちはいつから、なぜ短歌を詠むようになったのか。(2)患者たちの短歌は療養施設の外でどのように受け入れられたか。そしてそれは、当時の状況とどのような関係性を有するか。(3)医療は、短歌によってどのように天皇制とハンセン病を媒介し、ハンセン病患者たちを「臣民」としたか。平成30年度においては、(1)および(2)について以下の研究の進展があった。(1)については、ハンセン病療養施設を文学研究者のプラットが創出した分析概念
専門家としての自己生成プロセスにおける「痛みを伴う臨床体験」がもつ意味の探求

本研究は、精神保健福祉領域におけるソーシャルワーカーの自己生成プロセスにおいて、変容を促す臨床体験、すなわち「痛み」を伴うような「節目」となる体験がもつ意味を探求することを目的とした。「節目」となる体験は、「状況に巻き込まれ」たり、「利用者にふりまわされ」たりといった特徴をもち、受動性や偶然性を伴いながら、援助者をゆさぶり、専門家であることの手間にある「人として」のあり方を問い、それによって専門家としての基軸が形成されることが明らかとなった。本研究は、精神保健福祉領域のソーシャルワーカーの「痛みを伴う臨床体験」に注目し、このような体験が社会福祉専門家としての自己生成プロセスにおいて、どのような意味をもっているのかを解釈し、記述することを目的としている。今年度はまず、本研究テーマが生成されるきっかけとなった研究代表者及び分担者を含んだ共同研究の成果を報告書としてまとめ、さらに日本社会福祉学会にてポスター発表を行い、今後の研究を進行する上での助言を得た。それらを活かしながら、インタビュー調査の計画を再度検討し、改めて倫理委員会に提出して承認を得た。本研究では約20名を対象とし、各2回の調査を実施する予定であるが、今年度は、14名の対象者に、1回ないし2回のインタビューを行った。調査に先立ち、一部の調査対象者には先の報告書を配布したうえで、今回の調査を依頼した。そのうち、学生を対象としたインタビューデータの分析を進め、「素人性」に着目した観点から論文としてまとめた。さらに、現象学を手がかりとしたデータの分析や記述に関するあり方を問う視点でも、他のデータ分析を続けている。分析にあたっては、外部の研究会等の場を活用し、助言・指導を受けながら進めている。以上のプロセスを経て今年度の取り組みとして、次の点が明らかとなった。1つは、ソーシャルワーカーの専門職業的自己の生成プロセスにおいて重要になるのは、「痛み」を伴う臨床体験のみではないため、インタビュー調査の際には「痛み」にのみ焦点をあてて聞き取るのではなく、「節目」となる臨床体験にまで幅を広げて聞き取ることが重要であること。もう1つは、データ分析の結果、専門家としての技能という視点ではなく、「専門家になる手前にある事象」に注目し、木村敏の「時間性」の概念を参考にしながら、今後の分析を続けていく必要があるという点である。本研究は、精神保健福祉領域のソーシャルワーカーの「痛みを伴う臨床体験」に注目し、このような体験が社会福祉専門家としての自己生成プロセスにおいて、どのような意味をもつのかを解釈し、記述することを目的として進めてきた。しかしながら、昨年度に実施したインタビュー調査によって得られたデータを分析した結果、専門職業的自己生成プロセスで重要となる臨床体験は、必ずしも「痛み」を伴うものばかりではないことが明らかとなったため、調査の焦点を「節目」となる臨床体験にまで拡大して取り組むこととした。今年度は、17名の調査協力者に対するインタビュー調査を全て終了した後、データを分析し、総括した。分析にあたっては、現象学の知見を手がかりとしながら事例研究法を用いた。一人の調査協力者の臨床体験を事例として分析する場合には、臨床経験が、135年以上、22034年、3819年、という3つの区分を設定し、データをまずは分類した。次に、物語としての一貫性を担保するために、各区分のデータに示される「節目」の体験、とりわけ「専門家になる手前にある事象」に焦点をあて、それらがいかなる時期にどのように生起しているかを整理しつつ、各体験や事象に通底する概念を検討し、自己生成プロセスの構造を記述した。さらに、複数の調査協力者によって同様に語られる臨床体験については、その体験そのものを事例とし、具体的には、語り口に特徴的な言葉の使い方や言い回しに注目しながら、浮かび上がってきたデータのまとまりを全体の文脈の中で捉えなおし、データのまとまり同士を結びつける概念を検討し、記述した。なお、本研究の成果は、2014年度の『聖隷社会福祉研究』『聖隷クリストファー大学社会福祉学部紀要』などへ投稿する予定である。先行研究の再検討を通じて、今年度に取り組んだ課題は2点ある。主に、P.Bennerらによって著された現象学的アプローチに関する文献を吟味した結果、研究方法として定式化することが困難な本アプローチを用いる際には、諸現象の「『何を』取り上げ、それを『いかに』『記述する』か」が非常に重要になることが明らかとなった。中でも、「記述する」ことを目的とした研究においては、量的にある一定以上のデータを収集することだけではなく、質の良いデータを得ることも重要になる。このようなデータを得るためには、具体的なインタビュー調査の実施方法に関する検討が必要になると考えられた。そこでこれを第1点目の課題とした。現象学的アプローチにおけるインタビュー調査について具体的に書かれた文献は非常に少ない。西村ユミによれば、インタビューでは、「聞き手」と「話し手」という主客関係ではなくなるような関係の形成が重要であると言う。

つまり、インタビューとは、「聞き手」が「話し手」から「聞き出す」のではなく、「話し手」と「聞き手」との関係性における相互作用を活用しながら、物語を紡ぎだす場にならなければならないのである。そのような場を創造するために、「聞き手」はいかなる構えでインタビューに臨めばよいのか。この点について考察した。さらに、本研究ではデータから立ち現われてくる現象を「痛み」「時間性」「受動性」を観点として記述することを目的としている。今年度はフッサールの『デカルト的省察』の文献吟味を通じて、「受動性」に焦点をあてて検討した。これが第2の課題である。そして、インタビュー調査の設計及び調査依頼の実施については、前者がほぼ完成し、倫理委員会の承認を得ることができた。3カ年にわたる研究の2年目となる今年度においては、1年間で取り組むべき課題は達成できた。しかしながら、研究期間全体でいま一度捉えなおしてみると、1年目の進捗状況の遅れがそのまま影響し、やや達成度は遅れていると言わざるをえない。具体的には、約20ケースのインタビュー調査をほぼ全て終了する予定であったが、今年度はそこまで到達することはできなかった。先行研究の再検討については、第2課題の達成が不十分であった。すなわち、現象学に関する「時間性」「受動性」のレビューは後者のみの検討となり、「痛み」にかかわる文献収集も検討半ばとなっている。さらにインタビュー調査に関しては、調査を実際に依頼するところまでは到達することができなかった。両者ともに、体調不良及び学内業務の都合が理由であった。89月には、集中して残りのインタビュー調査を実施する。データが得られたらすぐにテキスト化し、読み込み・解釈を行う。12月までにはデータ分析を終了させ、1月より先行研究と照らし合わせながら検討し、3月は研究全体を総括する予定である。次年度は、今年度の計画の遅れを取り戻す予定である。先行研究の再検討については、残された課題である「時間性」及び「痛み」にかかわる文献を収集し、吟味する。そして、インタビュー調査については、これまでの研究成果を1冊の報告書としてまとめ、67月にそれを依頼者に郵送し調査の依頼をする。実際の調査は、89月及び23月に実施する予定である。なお、調査データはすぐにテキスト化し、読み込み・解釈を行う。先の方策にしたがい、主として、1インタビュー調査にかかる旅費・謝金・テープ起こし代、2文献収集費、3報告書の製本・印刷・郵送費、として使用する予定である。先の方策にしたがい、研究費は主として、(1)先行研究の収集にかかる費用、(2)報告書の製本・印刷、輸送費、(3)インタビュー調査にかかる旅費・謝金・テープ起こし代、として使用する予定である。
ゲノム多型及び遺伝病の成因としての自然DNA酸化損傷とその修復機構の破綻

1.研究の目的と進め方近年のゲノム配列の解析から,ゲノム配列には個体差,すなわち遺伝子多型が存在することが明かとなり,疾患との関連から大掛かりなスクリーニングが展開している。遺伝子多型の中で最も頻度が高いものが一塩基多型(single nucleotide polymorphisim,SNP)であるが,その成因に関する研究はまだほとんど手つかずの状態である。また,遺伝病の原因となる突然変異も多型と同じメカニズムで生じる可能性があるがその解明は全く手付かずである。本研究では,SNPの成因の1つとしてヒトゲノム上に恒常的に存在する8-oxoGの存在様式とその原因を明かにするとともに,SNPデータベースをもとに8-oxoGにより引き起こされうる塩基置換,すなわちG:C toT:A並びにA:T toC:Gトランスバージョンのゲノム上の頻度と分布を解析し,8-oxoGの存在部位との関連を解析した。2.研究の成果我々はヒト末梢血リンパ球の染色体標本上での8-oxoGの免疫学的in situ検出を試み、ゲノムワイドに検出領域の同定と検出頻度の解析を行った。その結果ヒト染色体上には個体間で共通に8-oxoGが高頻度に存在する領域が200ケ所以上存在することが明らかになった。これらの領域の共通の特徴を抽出する目的で、実験結果と各種ヒトゲノム情報との比較解析を行った結果、染色体ごとの8-oxoGの存在頻度と組換え頻度の間に正の相関を認めた。さらに各染色体上の組換え頻度が高い領域に8-oxoGが有意に高頻度に存在する事がわかった。また、8-oxoGの存在と塩基置換頻度との関連を解析するために、SNPデータベースより塩基置換のスペクトル別にSNP頻度を算出し,比較解析を行った。その結果,8-oxoGが存在する領域においてはグアニンが関与する塩基置換の頻度が有意に高いことがわかった。以上の結果は,8-oxoGが生殖細胞の組換え頻度とSNP頻度の両方に影響を及ぼしていることを示しており、定常状態でゲノム上に存在する8-oxoGがヒトゲノムの多様性を生み出す原動力になっている可能性を示唆する。
大型草食動物の歯牙形態に関する進化生態学的研究：遺伝子から時代変化まで

今年度も昨年度に引き続き、現生哺乳類を対象とした、歯の微細磨耗痕(マイクロウェア)の分析を推進した。食性既知の野生動物のマイクロウェアデータの収集・比較を進めながら、同時に化石動物のマイクロウェア分析にも着手した。まず現生種を対象とした分析としては、長野県に生息する現生偶蹄類ニホンカモシカとニホンジカのマイクロウェアの比較を行った。狩猟個体の胃内容物分析や糞分析から、両種の食性が異なり、カモシカはより木本植物に依存的な食性を示すのに対し、ニホンジカはより幅広くイネ科植物も高頻度に採食することが指摘されてきた。両種のマイクロウェアの特徴は、カモシカがより平坦で傷の起伏が浅いのに対し、ニホンジカではより傷の起伏が大きく、また並行する線状痕が多数確認された。こうしたマイクロウェアの特徴は、それぞれ木本植物食者、イネ科植物食者に典型的なものであり、両種の食性の違いがマイクロウェアにも反映されていることが示された。したがって、マイクロウェア分析は、同じ環境に生息しつつも食性の異なる種を分別することが可能であることが明らかとなった。この成果については、国際誌に投稿し、受理された。化石種を対象とした分析については、沖縄本島の更新世末期の洞穴遺跡から出土した、絶滅種リュウキュウジカのマイクロウェアを分析した。本種については、過去に行った炭素・酸素安定同位体分析から、C3植物を中心に採食していたと推定されたが、マイクロウェアの特徴としては、線状痕もそれなりの頻度で観察され、ある程度イネ科植物も採食していた可能性が考えられた。この結果については、現在データを拡充し、国際誌に投稿する予定である。マイクロウェア研究については、期待通りの成果を上げることができたが(査読付き国際誌論文1本、国内学会発表2件)、当初予定していた房総のニホンジカの歯牙欠損個体の標本調査は、調査スケジュールを組むことが難しく進めることができなかった。次年度以降の課題としたい。千葉県立中央博物館での標本調査を進めたいと考えているが、子育て中で実働時間が限られるため、調査補助要員の確保が必要であると思われる。一方で、マイクロウェア分析については本研究課題遂行の過程で、大いに方法論ならびに比較基礎データの構築が進んだため、今後は比較的労力を割くことなく研究を進められるものと期待している。本年度は、現生草食動物を対象とした、歯の微細磨耗(マイクロウェア)を利用した食性復元法の確立を進めた。日本全国に生息する食性が既知のニホンジカ11個体群(244個体)を対象に、歯牙表面の精密印象を作成し、共焦点レーザー顕微鏡で取得した歯の三次元形状データから、微細磨耗の定量的な比較を行った。その結果、イネ科植物を多く採食するニホンジカ個体群では表面の起伏が大きくより「粗い」形状をしていたのに対し、木本植物葉を中心に採食するニホンジカ個体群は、より「スムーズな」表面形状をしていた。またイネ科植物食のニホンジカでは表面の傷の走向がより揃っていた。これらの特性は、表面粗さの国際規格であるISO-25178パラメータ群で表現され、ニホンジカ個体群間でパラメータの値は有意に異なっていた。さらに、胃内容物分析などによる定量的な食性情報と、ISOパラメータの関係を調査したところ、イネ科植物の採食割合といくつかのパラメータに有意な相関関係が認められた。このことは、歯の表面形状を数値化したパラメータにより、その動物のイネ科植物の採食割合を推定することが可能であることを示唆している。したがって、胃内容物分析が実施されていない、過去の捕獲個体について、下顎骨標本からその個体の採食していたものを推定することができると考えられる。本研究成果について、国際ワークショップにて発表(招待講演)を行うとともに、査読付き国際誌に原著論文を発表した。本年度は、歯の微細磨耗の研究に注力したが、国際ワークショップでの招待講演1件、査読付き国際誌への論文発表1件、国内研究集会での招待講演1件、共同研究者による学会発表2件と成果を国内外に発表することができた。一方、育児休業から復帰したばかりで、実働時間を充分に確保することが難しく、房総のニホンジカの標本調査は次年度以降に進めることにした。

化石種を対象とした分析については、沖縄本島の更新世末期の洞穴遺跡から出土した、絶滅種リュウキュウジカのマイクロウェアを分析した。本種については、過去に行った炭素・酸素安定同位体分析から、C3植物を中心に採食していたと推定されたが、マイクロウェアの特徴としては、線状痕もそれなりの頻度で観察され、ある程度イネ科植物も採食していた可能性が考えられた。この結果については、現在データを拡充し、国際誌に投稿する予定である。マイクロウェア研究については、期待通りの成果を上げることができたが(査読付き国際誌論文1本、国内学会発表2件)、当初予定していた房総のニホンジカの歯牙欠損個体の標本調査は、調査スケジュールを組むことが難しく進めることができなかった。次年度以降の課題としたい。平成30年度の前半期で、房総のニホンジカの標本調査に着手し、形態データと歯牙の精密印象の作成を進める。標本調査については、子育て中のため実働時間の不足が最大の障壁となっているので、研究補助者などの雇用も検討しながら研究遂行にあたりたい。千葉県立中央博物館での標本調査を進めたいと考えているが、子育て中で実働時間が限られるため、調査補助要員の確保が必要であると思われる。一方で、マイクロウェア分析については本研究課題遂行の過程で、大いに方法論ならびに比較基礎データの構築が進んだため、今後は比較的労力を割くことなく研究を進められるものと期待している。
疾患保因者は移植ドナーとなりえるか？ハンター病の早期治療による予後改善を目指して

骨髄移植療法を施行されるハンター病患者に対し、より効果的な移植方法に関する情報を寄与すること。そのために、疾患保因者同胞間移植の有用性を明らかにすることが本研究の目的である。研究は動物実験により行われた。組織蓄積グリコサミノグリカン(GAG)への治療効果に関しては、正常移植、保因者移植、両者ともに治療効果を認めたが、肝臓においては正常ドナー移植の治療効果が高かった。オートファジー機能の改善という点では、保因者移植も正常移植と同等の治療効果をもったが、組織GAGを減少させるという点で、現状では正常ドナー移植の方が有用であるという結論に至った。「研究の目的」骨髄移植を施行されるハンター病患者に対し、より効果的な治療法に関する情報を寄与すること。そのために疾患保因者同胞間移植の有用性を明らかにすることが本研究の目的である。「研究実施計画」ハンター病の骨髄移植療法において、保因者がドナーとなりえるかを評価する。そこで疾患モデルマウスに、ヘテロドナーと正常ドナーを用いた骨髄移植療法をそれぞれ行い、諸臓器への治療効果を比較検討する。上記計画に対し、初年度はマウスの実験必要数までの繁殖・飼育、作成マウスの遺伝子診断、同マウスに対する保因者ドナー、正常ドナーを用いた骨髄移植、移植細胞の生着、キメリズムの確認、治療後マウス、コントロールマウスの経時的採血・採尿、臓器採取を予定した。マウスの繁殖、飼育に関しては動物実験施設の協力のもと、計画通りに遂行することができた。疾患モデルマウスの遺伝子診断は、PCR法を用いたDirect Sequenceにより行い、必要数の確保、自家繁殖を行った。使用マウスに関して、移植関連死などの合併症は認めなかった。移植後12週に、フローサイトメトリーを用いたドナー細胞のキメリズムの確認を行い、約90%の生着を確認した。その後、コントロールマウスを含め、治療後4週、8週、12週、16週、20週、24週に採血を行った。最終的にすべてのマウスの臓器採取を行い、試料の生化学的解析を行った。ヘテロドナー移植の血液酵素活性は、正常ドナー移植の約50%に留まった。組織蓄積グリコサミノグリカン(GAG)への治療効果に関しては、両者ともに治療効果を認めたが、肝臓においては正常ドナー移植の治療効果が高かった。以上の結果は、組織GAGを減らすという点では、正常ドナー移植の治療効果が高いということを示している。上記研究結果は、2015年9月に開催されたSSIEM(国際先天代謝異常学会:仏、リヨン)において公表した。疾患モデルマウスの繁殖・維持に関しては、既に当研究室で確立されている技術であり、予期しない問題の発生も認めなかった。また自家繁殖によるモデルマウスの必要数の確保が計画よりも早期に終了した。動物実験に伴うと予想される計画外の動物死に関しても本研究では認めなかった。移植細胞の生着に関しても、既報と同様の結果を得ることができ、その後に続く試料採取も予定通り遂行することができた。以上のことから、次年度予定していた試料の生化学解析の一部を当年で施行することができた。また次年度以降に計画していた学会等による公表に関して、現時点で明らかになったことを中心にヨーロッパ先天代謝異常学会で公表し、早期に情報を発信することができた。「研究の目的」骨髄移植療法を施行されるハンター病患者に対し、より効果的な移植方法に関する情報を寄与すること。疾患モデルマウスに、ヘテロドナーと正常ドナーを用いた骨髄移植療法をそれぞれ行い、諸臓器への治療効果を比較検討する。初年度は、疾患モデルマウスの作成と遺伝子診断、マウスに対する骨髄移植、移植細胞の生着とキメリズムの確認、生化学的・病理学的解析のための経時的な試料採取、採取した試料の解析を行った(グリコサミノグリカン、酵素活性)。ヘテロ移植ドナーの血清酵素活性は正常ドナー移植の約50%程度に留まった。組織蓄積グリコサミノグリカンへの治療効果に関しては、両者ともに治療効果を認めたが、肝臓においては正常移植ドナーの治療効果が高かった。よって、組織グリコサミノグリカンを減少させるという点では、正常ドナー移植の治療効果が高いと考えられた。そこで本年度は、当初計画した病理学的評価に加え、オートファジー機能不全に対する治療効果を比較検討した。ハンター病を始めとするライソゾーム病においては、オートファジー機能障害が、蓄積GAGとともに臓器障害を引きおこす一因とされている。オートファジー機能を評価するため、肝臓のLAMP2、LC3をウェスタンブロット法を用いて解析した。病理学的評価においては、ヘテロ移植、正常移植ともに同様の治療効果を認めた。肝臓のLAMP2、LC3の蓄積は両者で同様に減少しており、オートファジー機能の改善という点では、ヘテロ移植も正常移植と同等の治療効果が期待されると考えられた。以上の研究結果は、2016年9月に開催されたSSIEM(国際先天代謝異常学会、イタリア、ローマ)で公表した。種々の実験、解析課程で予期せぬ問題の発生もなく、予定通り実験計画を遂行できた。また当初の研究計画に加え、オートファジー機能の解析といったさらなる生化学的解析を加えることができた。

前年度に引き続き、現時点までに得られた研究結果をヨーロッパ先天代謝異常学会で公表することができ、研究計画はおおむね順調に進展していると考える。「研究の目的」骨髄移植療法を施行されるハンター病患者に対し、より効果的な移植方法に関する情報を寄与すること。そのために、疾患保因者同胞間移植の有用性を明らかにすることが本研究の目的である。「研究実施計画」ハンター病の骨髄移植療法において、保因者がドナーとなりえるかを評価する。疾患モデルマウスに、ヘテロドナーと正常ドナーを用いた骨髄移植療法をそれぞれ行い、諸臓器への治療効果を比較検討した。初年度は、疾患モデルマウスの作成と遺伝子診断、マウスに対する骨髄移植、移植細胞の生着とキメリズムの確認、生化学的・病理学的解析のための経時的な試料採取、採取した試料の解析を行った。ヘテロ移植ドナーの血清酵素活性は正常ドナー移植の約50%程度に留まった。組織蓄積グリコサミノグリカンへの治療効果に関しては、両者ともに治療効果を認めたが、肝臓においては正常移植ドナーの治療効果が高かった。よって組織グリコサミノグリカンを減少させるという点では、正常ドナー移植の治療効果が高いと考えられた。次年度は病理学的評価に加え、ライソゾーム病に伴うオートファジー機能不全に対する治療効果を比較検討した。病理学的評価においては、ヘテロ移植、正常移植ともに同様の治療効果を認めた。ウェスタンブロット法を用いて解析した肝臓のLAMP2、LC3の蓄積は両者で同様に減少しており、オートファジー機能の改善という点では、ヘテロ移植も正常移植と同等の治療効果が期待されると考えられた。以上の結果は、国際学会での公表を終えている。最終年度は、追加実験としてX染色体skewed inactivationによる酵素活性のばらつきを評価したが、ハンター病ヘテロマウスの酵素活性は正常の約50%であり、予期される活性値であることを確認した。現在、専門学術雑誌への公表を準備中である。骨髄移植療法を施行されるハンター病患者に対し、より効果的な移植方法に関する情報を寄与すること。研究は動物実験により行われた。組織蓄積グリコサミノグリカン(GAG)への治療効果に関しては、正常移植、保因者移植、両者ともに治療効果を認めたが、肝臓においては正常ドナー移植の治療効果が高かった。オートファジー機能の改善という点では、保因者移植も正常移植と同等の治療効果をもったが、組織GAGを減少させるという点で、現状では正常ドナー移植の方が有用であるという結論に至った。本年度の研究によって、我々はハンター病に対する正常ドナー移植と保因者ドナー移植の一部臓器に対する治療効果を比較することができた。肝臓に対するGAGを減少させるという点においては、正常ドナーを用いた骨髄移植療法が、ヘテロドナーを用いた骨髄移植療法に比べてより高い治療効果を持つということが分かった。しかしながら、心臓、脳、脾臓など他の重要臓器における蓄積GAGの減少という点においては、両者に差は見られなかった。
地方都市におけるバス路線網のシビル・ミニマムに関する研究

本研究の成果は以下の通りである。(1).地方都市での「公共交通のシビル・ミニマムの概念の確立」の必要性を公共交通の衰退という側面を中心にして体系化した。(2)公共交通の中核をなす「公営交通」をケース・スタディすることによって、地方都市での「公共交通のシビル・ミニマムの具体化」を検討した。(3)シビル・ミニマムの概念は「公共性」と「効率性」の2つの指標で構成されることを体系付けた。(4)「公共性」を測定する指標体系を作成し、山口市、熊本市、青森市の3都市の公営バス路線網のデータで測定した。(5)「効率性」を測定する指標体系を作成し、山口市、熊本市、青森市の運行データによって測定した。(6)これらの3都市の「公共性」と「効率性」のデータから公共交通のシビル・ミニマムの設定におけるトレード・オフ関係の存在を明確化した。(7)今後の公共交通政策の政策形成における、シビル・ミニマムの取り入れ方が検討された。今年の成果は以下の通りである。(1).バス事業をとりまく環境の整理と問題点の指摘地方都市に焦点を含てて、バス事業をとりまく環境を都市毎に整理し、それぞれの都市での今日的な課題を明確にした。そのなかで共通して指摘されたことは「シビル・ミニマムの確立である。(2).シビル・ミニマムの概念の定義都市の持つべき公共交通--バス事業--を「全交通トリップに占めるバス・トリップの割合」と定義し、都市環境要因によって決定される「持つべき最小の割合」をバス事業のシビル・ミニマムと定義した。(3).対象都市の検討と抽出バス事業のウエイトの高い8都市を詳細に検討し、シビル・ミニマムを検討するための対象都市として、次の3都市を抽出した。青森市......公営バスの独占している都市として選定。シビル・ミニマムを検討し易い都市としての位置付け山口市......バスが急激に衰退しているため、シビル・ミニマム以下にある都市としての位置付け。熊本市......バスが公営と民営で着実にシエアを確保している都市。(4).シビル・ミニマムの測定方式の検討シビル・ミニマムを構成する公共交通の供給要因(路線網、交通利便性)と需要要因(地区別人口分布、職業構成、人口構成)により、シビル・ミニマムを測定する定義式を作成した。(5).定義式の検討青森市のデータに基づいて、シビル・ミニマムを定義し、その実用性を検討した。今年度の成果は以下の通りである。1.青森市、山口市、熊本市のバス需要の経年的推移を明らかにすることにより、公共交通としての果たすべき役割と公営企業としての財政的課題を明確にした。2.地方都市(特に山口市をケース.スタディした)のバス事業に関連するシビル.ミニマムの基準を検討した。3.シビル.ミニマムと補助金・負担金の概念をまとめた。4.青森市での赤字路線に対する補助金の算定方式を詳細に調査し、そこでの方式の妥当性を検討した。5.シビル・ミニマムの考え方から赤字路線に対する今後の補助方式、負担金方式を作成した。
キナウル語の現地調査: 会話文例の収集と動詞形式の分析

2018年度は、ほぼ順調に研究を進めることができた。例年前期に調査の準備、後期に現地調査を実施している。本研究課題では、12月に現地調査を行った。例年のことながら、この時期の調査ではやや期間が短かいため、準備的、補助的な調査になりかねない面があるが、現地で母語話者と会話することで、新たな課題の発見など研究の進展に重要な意味をもつ。動詞の形式については、条件文や時を表す副詞節などの文例を収集しつつある。同じ意味を表すと考えられる形式が複数あることについては、文脈を考慮しなければならないが、会話文の収集については、まだ十分に進展しているとは言えない。2018年9月に京都で国際学会が開かれたので、動詞の非定形の一部について口頭発表を行った。残りの部分については2019年度に発表したいと考えている。動詞形式の分析において、文脈を考慮するため会話文の収集を行わなければならないが、この点で当初の計画ほど進展していないため、全体としてはやや遅れていると言わざるを得ない。今後も当初の予定通り、年度の前半に調査の準備を行い、後期に現地調査に赴く。会話文の収集という点を除けば順調に進んでいるので、明らかになった点については、学会発表や論文の執筆によって公開していく。2017年度は、前期において入院加療となったため、計画を予定どおり遂行することができなかった。例年、後期において調査を行っているが、前期の入院加療の結果、12月にはまだ海外調査に出ることが適切ではないとの判断があり、本科研費によるインドでの現地調査は実施できなかった。年度末に、別に参加しているプロジェクトの科研費でインドでの現地調査をすることが可能となったが、当初予定していた期間は確保できなかった。このため、本科研費では後期において調査の質問項目の準備などに活用した。動詞形式に関しては、とくに使役文や、それに関る自他対応について分析、考察した。この点については、2018年度に提出する論文に反映される予定である。また、反実仮想を表す動詞接辞について分析しつつある。この接辞については、これまで報告されていない。筆者が、動名詞を作ると考えている接辞によく似ているが、これをどのように考えるか、課題となっている。反実仮想を表す接辞は時制接辞と関連していると考えられるが、人称接辞と共起し、定形を構成する。しかし、キナウル語では非定形の分析が不十分である。この点については、筆者の分析はかなり進んできているが、発表にいたっていない。さらに資料を収集し、明確な分析を進める。上記のように、2017年度においては、入院加療のため、進捗状況としては遅れていると言わざるを得ない。しかし、その遅れは今後十分に取り戻すことができる程度であると考える。昨年度は、上記のように、予定通りには進まなかったため資料の収集に遅れが生じた。来年度以降、研究費を節約すれば、支給された研究費で2回の調査が可能であると考えている。昨年度、入院加療のため、予定していた現地調査ができず、翌年度に持ち越した。今年度または来年度に2回の調査を行い、研究費を使用する。2017度入院加療のため、予定していた現地調査ができず、翌年度に持ち越した。2019度、調査のほかにシドニー大学で行われる国際学会に参加し、研究発表を行う。
有機超伝導体の磁気輸送現象

申請者は本助成をふまえ、磁場下での熱起電力測定を整備した。これにより、有機超伝導体のキャリアの性質を理解することができる。有機結晶の中には、試料依存性を示すものが有り同一試料での測定が不可欠であり、結晶に電極をつける熱起電力測定は最後に行う必要がある。現在のところ、研究対象の試料に対しての本測定には至っていない。本課題が遅れた理由は、以下に述べる新しい知見に関しての研究を先に行ったためである。申請者は代表的な有機超伝導体k-(BEDT-TIF)_2Cu(CN)[N(CN)_2]およびk-Cu(NCS)_2でESRのg値が低温で増大することを見いだした。一方、ほぼ同型のk-Cu[N(CN)_2]Brにおいては、そのようなg値の異常は見られない。室温でのBEDT-TIF錯体のg値は、BEDT-TIFカチオンのg値とドナーの配列を考慮すれば理解できることがわかった。しかし、低温でのg値の異常はBEDT-TIFカチオンのg主値の最大値を越えており、一電子の励起では説明できない。何らか集団モードによる共鳴が関与している可能性が示唆される。また、g値の異常を示すものと示さないものとではフェルミ面の形状が微妙に異なることは興味深い。このように、これらの試料では低温で、電子状態の変化が起こっていることが考えられる。また、最近の同位体効果の報告でBEDT-TIF分子の中央部を^<13>Cで置換する簡便な方法が開発された。分子中央部での^<13>C-NMRは多くの電子状態に情報が得られるものと考えられるが、申請者は通常の^<12>Cでこの合成法を用い、NMR用の試料が作成できること確認した。次年度は^<13>C同位体での試料作成を行い、上記の物質群についての電子状態を調べる予定である。またこのg値の異常がフェルミ面の再構築などに関与したものかは、本課題の熱起電力測定で明らかにできる。
胸腺細胞における細胞接着分子発現のT細胞分化及び活性化における意義

胸腺内T細胞分化発達の過程は、自己トレランス、多様性の出現、自己MMCの拘束性の獲得といったいわゆるT細胞抗原レセプタ-分子の発現と選択の過程であるだけでなく、それと協調して働く他の分子による抗原非特異的なT細胞の増殖分化活性化の一過程といえる。特に胸腺という一定の組識構築がこのようなT細胞分化成熟に必須であるという事実に鑑みて、胸腺リンパ球と胸腺上皮細胞あるいは細胞外マトリックスとの相互作用、接着が第一に重要なスラップであるとの視点にたって本研究を開始したのであるが、2つの大きな成果を得ることができた。1つは胸腺リンパ球と胸腺上皮細胞の接着を阻止する抗体を得たことで、これは世界に先がけたものである。もう1つは胸腺リンパ球のフィブロネクチンとの接着を阻止する8H3抗体を得たことである。8H3抗体はフィブロネクチンレセプタ-そのものではないこと、抗体単独でT細胞に増殖刺激が加わることなど接着分子だけでなく活性化分子としての機能も果している。両者の遺伝子クロ-ニングによる一次構造の決定は現在進行中で、特に8H3抗原は精製とペプチド配列を決定に成功しており、全構造の決定は時間の問題である。以上のように胸腺細胞における接着分子の発現が、抗原特異性の獲得すなわちT細胞抗原レセプタ-の高発現に先立って生じており、それによる抗原非特異的増殖がT細胞の初期分化に重要であることを明らかにできたものと考える。我々はTリンパ球細胞表面上に発現される接着分子の、胸腺細胞及びT細胞活性化における機能について研究を行ってきた。本年度における研究活動の成果は以下のごとく大きく2つに大別される。(1)接着分子に対する単クロ-ン抗体の作成:我々は現在まで3種の抗体を得た。8H3抗原はdouble negative thymocyteから末梢成熟T細胞まで、広くT細胞に発現されている。分子量は非還元下で180,000、120,000、及び90,000であり、還元下では120,000及び90,000となる。double negatire thy mocyte上の8H3抗原を8H3抗体と2次抗体で架橋するとCa^<2+>の導入がおこり、細胞増殖が観察された。胸腺細胞はフィブロネクチンと特異的に結合するが、8H3抗体はこの結合を特異的に抑制レインテグリン分子を認識している可能性が強い。さらにRGD配列を含むフィブロネクチン関連合成ペプチドにも胸腺細胞は結合し、やはり8H3抗体で抑制される。7D3抗体は胸腺上皮細胞を免疫することにより得られた抗体で、胸腺細胞及び胸腺上皮細胞の両方と反応する。しかし末梢T細胞とは反応しない。7D3抗体は分子量90,000の抗原を認識し、胸腺細胞と胸腺上皮細胞との結合を抑制する。しかも胸腺細胞のミイト-ジュン誘導細胞凝果をも抑制する。第3の抗体は、インテグリンB1抗原を部分精製し、これに対する単クロ-ン抗体である。(2)8H3抗原の精製とアミノ酸配列の決定:約10^<10>個の胸腺細胞よりアフィニティ-カラムを用いて8H3抗原を精製した。90,000の分子量のものについてN末端より12個の配列を決定した(AlaーArgーGluーThrーPheーHisーThrーMetーHisーSerーArg)。現在この蛋白を分解し、その産物のアミノ酸配列を決定し、N末端よりの情報とあわせて、遺伝子クロ-ニングのためのプロ-ベを合成する予定である。生体内における胸腺細胞の増殖分化の調節機構について,細胞外基質及び接着分子の面から検討を加えた。胸腺組織に主に分布する細胞外基質は,フィブロネクチンであった。正常胸腺細胞中の約10%がフィブロネクチンと結合したが,他の細胞外基質,ラミニン,コラ-ゲン,ビトロネクチンとは結合しなかった。

フィブロネクチンの細胞結合ドメインであるRGD配列を含む合成ペプチドを結合したアフィニティ-カラムを用いると,生化学的にも胸腺細胞膜上にはVLA(very late antigen)としての特徴を有するフィブロネクチン・レセプタ-(FNR)が存在することを明らかにした。FNRを有する胸腺細胞は形態学的にも大型のBlast細胞が多いばかりでなく,細胞周期解析を行うと,FNR陰性の細胞に比して有意にS期に入っている細胞が多かった。一般的に胸腺細胞の中で分化増殖能を有すると言われるCD4陰性CD8陰性のダブルネガティブ細胞もFNR陰性とFNR陽性に2分され,FNR陽性のダブルネガティブ細胞がより高率にS期に入っていることを明らかにした。これらの事実は細胞外基質の1つであるフィブロネクチンがそのレセプタ-を介して増殖の制御を行っていることが明らかとなった。さらに我々は胸腺細胞とフィブロネクチンの結合を阻害する8H3抗体を作製した。8H3抗体によって認識される抗原はFNRそのものではない。しかしながら8H3抗体で胸腺細胞を処理することにより著明な胸腺細胞の増殖を認めた。近年,T細胞抗原受容体(TcR)を介する抗原特異的シグナルが,FNRにより調節されているという報告もあり,我々は今後8H3抗原とTcRの関係を明らかにする予定である。本年度はこのためにもTcRと8H3抗原を強く発現するT細胞ハイブリド-マを樹立した。生体内における胸腺細胞の増殖分化は、単に外来性のリンホカインだけでなく、細胞と細胞の直接の相互作用によって調節されていると考えられる。我々は胸腺細胞が細胞外基質であるフィブロネクチンと接着することにより造殖することを明らかにし、その反応を阻害する8H3抗体を作成した。8H3抗原を精製し、8つの部分ペプチド配列を決定した。それをもとに合成したオリゴヌクレオチドをプロ-ブとして用い、8H3抗原を多量に発現しているT細胞性白血病細胞から作成したcDNAライブリ-をスクリ-ニングし、反応する計72個を単離した。オリゴヌクレオチドとの反応性から4群に分類したcDNAクロ-ンの塩基配列を決定中である。またペプチドを合成し家兔に免疫して、ポリクロ-ナル抗体を作成して上記クロ-ン中に融合蛋白(LacZー8H3)が検出されるか否かを検討している。また胸腺細胞と胸腺上皮細胞との接着を阻害する7D3抗体を作成した。胸腺より真核細胞発現ベクタ-CDM8を用いてcDNAライブラリ-を作成した。ライブラリ-DNAをCOS細胞にトランスフェクションし、一過性発現したものを7D3抗体にて染色しセルソ-タ-によって陽性細胞を回収し、候補クロ-ンを得た。しかしながら確実な陽性クロ-ンはまだ得られておらず、同時にスクリ-ニングした中からCD82鎖は得られているので、cDNAライブラリ-を作成しなおして、再度スクリ-ニングを行なっている。以上のように、胸腺細胞の接着に関与する分子の一次構造決定が進行中であり、まもなく全構造が明らかにされるものと確信している。
シリカ化学種による海域と季節変動の分析および淡水への新しい分析法の開発

東京湾と相模湾の海水を採水し、シリカ化学種の変化から、シリカ(ケイ酸)の消費挙動を検討した。一般には春に相模湾で珪藻の栄養となるシリカ化学種が枯渇するが、2003年の冷夏では、春の時点で、東京湾、相模湾ともに、珪藻の栄養となるシリカ化学種が枯渇することなく余っていた。夏季の影響は秋季には通常の暑さの年と同じ、状況に回復していた。このことから、春にその年の夏の暑さについて珪藻のシリカの摂取のされ方から予測できると考えられる。また、淡水では、このシリカ化学種の測定が難しかった。そこで、まず、淡水に存在するシリカの調製を行った。また、この溶液を用いて、質量分析計によるイオン化方法を変え、測定方法によって生じるシリカの検出される化学種の比較を行った。1.海水の化学的分析-FAB-MSによるシリカの同定東京湾、相模湾のシリカ(ケイ酸)の存在状態をあきらかにした。FAB-MSでシリカ化学種を分析すると、環状4量体cyclic tetramerと、直鎖4量体linear tetramerのピーク強度比は海水塊の性質を反映して大きな変化を生じる。分子の小さいシリカがより珪藻に摂取されやすく、cyclic tetramerよりはlinear tetramer、また2量体であるdimerが摂取されやすいので、これら3つのシリカ化学種に特に注目して測定を行った。夏季の暑い年では、東京湾よりは、相模湾の方が春から夏にかけてlinear tetramerとdimerがかなり摂取されてほとんど無いことがわかった。しかし、冷夏(2003年)では、春の時点でも、linear tetramerやdimerが消費されていないことを明らかした。2.淡水のシリカの化学種を測定するためのESI-MSによる測定法の確立淡水におけるシリカ化学種の同定のために、ESI-MSを用いてその測定方法を検討した。この測定方法は、イオン化を高め、コロイド状シリカの分析が可能になることが期待できる。そこで、シリカゲルを水酸化ナトリウムに溶解し、その溶存状態をFAB-MSとESI-MSによって比較した。その結果、ESI-MSでは、脱水、または水の吸着によってシリカの分子数はわかるが、分子構造式までは明らかにできないことがわかった。そこで、天然の河川であり、シリカの濃度が高い、大分県の大野川のシリカの化学状態を測定した。これまで認められなかった、8量体などの高分子のシリカも同定された。しかし、高分子のシリカの測定には、単にESI-MSで測定するだけでなく、水の脱溶媒などに対する、標準溶液の工夫が必要であると考えられる。1.海水の化学的分析-FAB-MSによるシリカの同定FAB-MSによって東京湾、相模湾のシリカ(ケイ酸)の存在状態をあきらかにした。環状4量体cyclic tetramerと、直鎖4量体linear tetramerのピーク強度比は海水塊の性質を反映して変化を生じる。2002年では、東京湾よりは、相模湾の方が春から夏にかけてlinear tetramerとdimerが摂取されてほとんど存在していなかった。このことから、冷夏を春の時点で予測できる可能性があることがわかった。2003年の秋には、linear tetramerの分布は、2001年と2002年の秋の分布の中間にあった。したがって、珪藻に必要なシリカ化学種は秋にはほぼ補われると考えられる。2.淡水のシリカの化学種を測定するためのESI-MSによる測定法の確立淡水におけるシリカ化学種の同定のため、淡水中のシリカの溶存状態を再現する試料の調製を行った。米作物用の肥料を用い、河川に溶解するシリカの溶存状態を再現させることに成功した。このシリカの濃度は2mol/Lが最高であり、河川中のシリカ濃度とも整合性がとれた。このシリカ溶液を得ることによって、FAB-MSで、これまでに得られなかった熱力学的測定結果を得た。加えて、淡水に溶解するシリカ試料を得ることによってESI-MSでの測定が測定しやすくなった。ESI-MSでは、測定における脱水、または水の吸着の過程を明らかにし、分子構造式は明らかにできないが、1分子中のケイ素の数はわかり、シリカ化学種の定量が可能になることがわかった。さらに、シリカの濃度を測定するモリブデン黄法におけるモリブドケイ酸の発色条件についても明らかにした。

1、海水中のケイ酸(シリカ)の溶存状態を閉塞性海域である東京湾と黒潮の影響の高い外洋の相模湾など他の地域について比較し、季節変化、深度分布などを明らかにした。相模湾では、黒潮の影響を受け、冷夏においては春季の時点においてすでに夏季の珪藻の活性が抑制されることがわかった。この冷夏は秋季にはすでに、通常の夏の年とおなじような分布を示した。冬季には海洋環境は復元しており、また春の「ブルーミング」に対して、ケイ素の供給をしていることがわかった。さらに日本海側の福井の能登半島西側の海水を海水表面にそって採水した。一年を通して、ケイ酸の濃度は東京湾に比べて非常に低く、しかも2月の冬季にシリカの濃度が比較的高くなっていた。このことから、冬から春にかけて供給される「黄砂」がシリカを海水表面に供給しているのではないか、と考えている。2、淡水においては、FAB-MSのイオン化効率が非常に下がり、シリカの溶存状態に関する譲歩が得にくい。そこで、ESI-MSによるシリカの溶存状態を明らかにするために、淡水にシリカを人為的に溶解させる試料を得ることが必要であった。報告者は米用の農業肥料を超純水に溶解させることによって得た。この純水中に含まれるシリカの状態分析を行うと、シリカの飽和濃度は河川や地下水のシリカの飽和濃度と推定される濃度2.3mmol/Lと一致した。このシリカを含む溶液はFAB-MSによって分子の構造の情報が得られたが、ESI-MSでは、脱溶媒反応によってシリカ分子の縮合が生じていた。これらのことから、シリカの濃度測定に用いるモリブデン黄法、さらに高感度でシリカ、リン酸の濃度を測定できる、モリブデン青法の発色過程を明らかにすることもでき、様々な反応を分子レベルで解明できる可能性が示唆された。
神経因性疼痛における細胞間接着因子L1-CAMの役割

本研究の目的は神経因性疼痛モデル動物の痛覚伝導系における接着因子Ll-CAM分子の挙動と疼痛との関連の解明にある。平成17年度末で、LIに関する研究は一段落し、Eur. J. Neurosciに発表した。平成18年度は、脊髄後角の接着因子のダイナミックな変化を惹起する因子として、tPA(tissue type plasminogen activator)に注目し、検討を進めた。1.神経根損傷に伴うtPAの発現変化の詳細な検討ラットのL5神経根損傷モデルを作成し、脊髄後角でのtPA発現の経時的な変化を確認し、その変化を定量した。神経根損傷後、1日目に既に大きく増加し、mRNAレベルでは7日目まで、蛋白レベルでは14日目でも増加が継続していた。2.tPAの発現細胞を明らかにする脊髄後角において、各種のマーカー蛋白などとtPAを組み合わせた多重染色を行い、レーザー共焦点顕微鏡で観察すると、発現細胞はアストロサイトであることが明らかとなった。3.脊髄後角におけるプロテアーゼ活性の変化神経損傷モデルの脊髄後角におけるプロテアーゼ活性の上昇をin situ zymographyで確認出きた。またtPA STOPというtPAの阻害剤を投与すると、その変化が消えることを確認できたので、これらの変化がtPAの変化に由来することがわかった。4.疼痛行動の計測神経損傷モデルに対して、tPA STOPを投与すると、機械的刺激に対する過敏反応(mechanical allodynia)の形成を抑制することがわかった。しかし、過敏反応形成後に投与しても効果がないことより、mechanical allodyniaの維持には関与していないと考えられた。以上の結果は、後根損傷により、脊髄後角表層においてアストロサイトの活性化が起こり、tPAを分泌、その周囲の細胞外マトリクスの修飾や接着因子等の組織分解により、脊髄後角の可塑的変化を引き起こしていると考えることが出来る。この変化が結果的に疼痛行動過敏につながることになると思われる。これらの結果は、まとめてGLIAに発表した。末梢神経損傷において発現の変化を示す細胞接着因子の大規模なスクリーニングを行い、大きな動きを示したL1-CAMに関して、以下の実験を進めて、European Journal of Neuroscienceに発表した。1.ラットを用いた炎症モデルや末梢神経損傷モデルを用いてL1-CAMの発現を免疫組織化学によって検討した。その結果、末梢神経損傷モデルの損傷を受けた後根神経節ニューロンの細部膜上で免疫陽性が上昇していること、また脊髄後角においてはシナプスにおいてL1-CAM陽性が増加していた。2.上記L1-CAMタンパクの変化がL1-CAM mRNAの変化によるものかどうかをin situ hybridizationによって検討した。その結果、L1-CAMの免疫陽性の変化は転写活性の変化ではなく、タンパクの局在・輸送の変化であることが解った。4.L1-CAMの抗体をニューロパチックペインモデルである末梢神経障害モデルに投与すると、痛覚過敏を抑制することを明らかにした。熱性痛覚過敏及び機械的刺激に対する過敏性の両方に対して、効果を示した。以上の結果により、末梢神経障害による接着因子L1-CAMの変化が、脊髄後角及び一次知覚ニューロンの可塑的変化を引き起こし、その結果痛覚過敏へとつながる、という新規メカニズムを解明した。