hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
海馬シナプスにおけるグルタミン酸・GABA共放出のメカニズム

本研究では、幼弱期苔状線維シナプスからのグルタミン酸とGABAが共放出されるとする仮説の妥当性について再検討する目的で、苔状線維刺激により単シナプス性IPSCを惹起する条件について、スライスパッチクランプ法による詳細な電気生理学的検討を行った。生後2ないし3週のマウス海馬スライス標本において、歯状回顆粒細胞層の刺激により生じる応答をCA3野ニューロンからホールセルクランプ法により記録した。同一の刺激電極から強い刺激と弱い刺激を交互に与え、グルタミン酸受容体阻害薬(CNQXとAP5)の効果を比較した。弱い刺激によるシナプス応答はCNQXとAP5の投与により完全に消失したのに対し、強い刺激に対する応答の一部は残存し、この成分はGABA_A受容体阻害薬picrotoxinの追加投与により消失した。また、苔状線維軸索通過部のCA3野透明層の電気刺激による応答は、多くの場合CNQXとAP5により完全に消失せず、picrotoxinの追加投与により消失した。顆粒細胞層の刺激により生じる単シナプス性IPSCは、強い刺激により苔状線維以外、おそらく抑制性介在ニューロンを刺激し、順向性あるいは軸索反射の機構を介してCA3野ニューロンに単シナプス性IPSCを生じたと考えられた。歯状回顆粒細胞層の弱い刺激で選択的に苔状線維を刺激した際には単シナプス性IPSCを生じなかったことから、苔状線維シナプス自身はGABAを放出しない可能性が高い。幼弱期の苔状線維シナプスからグルタミン酸に加えてGABAが共放出されるという仮説は、不適切な実験条件によるアーチファクトであると考えた。
針葉樹人工林の広葉樹への誘導に適応した等高曲帯状画伐システムの適用試験

本研究代表者は、不健全状態にある針葉樹人工林を各地域本来の広葉樹天然林へ逆誘導する森林経営システムとして、画伐方式を基本とした「等高曲帯状画伐システム」の基本設計を終了した現状下にある。この基本設計を現地に適用可能な森林経営システムとして詳細設計するために、このシステムの適用可能性を大きく左右するキーポイント、すなわち等高線に沿った等高曲帯状伐区の画伐による伐出作業が経営上支障無く実行可能か否かを検証するのが本研究の目的である。今年度は、対象として霧島屋久国立公園内のヒノキ人工林で、今後の取り扱い問題の緊急度が高まった霧島国有林のヒノキ若齢人工林を中心に次のような研究を行った。1)帯状伐区の設定:研究対象地のヒノキ若齢人工林に、帯長(等高線に沿った長さ)と帯幅(落水線方向の幅)が異なる複数個の等高曲帯状伐区を設定するために地形測量を行った。2)等高曲帯状伐区内および周辺林分の立木調査:各等高曲帯状伐区内の立木を、伐区内に侵入した広葉樹を含めて調査し、対象林および周辺林分の林分構造と種構成を明らかにした。3)対象地域内の諸データによる施業・搬出方法の解析:対象地域内の地形、林道データならびに諸条件下における搬出に関する資料を収集した。その結果、ヒノキ人工林に接している保護樹帯が、遺伝資源が豊富な天然林と同様の林分構造を示して母樹となりうる樹木が存在し、かつ保護樹帯内ではモミと広葉樹の更新が継続的に行われていることがわかった。さらに、周辺林分の調査から、アカマツとツガについても光条件によっては更新可能であることもわかった。よって、画伐によって光環境の改善をすることで充分に更新可能で、天然林への逆誘導に関しては、自然・地形条件的には伐出作業も含めて実行可能であることが明らかとなった。交付申請に述べたように、鹿児島県と宮崎県の県境に位置する霧島山系の中にある国有林のヒノキ人工林が、伐期に達しているにも関わらず高度が高い山頂付近に成立しているために成長が非常に悪く、その今後の管理が問題となっており、その解決策が求められていることがわかった。さらにその解決策として、天然林への誘導が最も適切なものであると理解されて、以前、営林署の研究的な施業として、通常の帯状間伐が行われていた。しかし、風衝地であるために残された林へのダメージが大きく、更新も十分に行われているとは言えず、一度間伐が実行された後はそのままになっていることが明らかとなったので、本研究の対象地を霧島山系のヒノキ林人工林とした。この研究対象地域で画伐によって天然林への誘導を考えた場合、種子供給源の存在が鍵となる。そのために、まずは空中写真と精密衛星写真を利用して、対象となるヒノキ人工林と周辺天然林の分布状況を把握した。その結果、国有林ではこれまで天然林を伐採する際に保護樹帯を設定しており、この保護樹帯が天然林への誘導を可能にする種子源となる可能性が認められた。よって、対象林分の周辺に広がっている保護樹帯の状態を把握することを目的に現地調査を行った。現在データの最終的な解析を行っている段階であるが、それよれば保護樹帯のなかには母樹となるべき大きな個体がかなり存在しており、その後継樹も確認された。しかし、ヒノキ人工林の林内には全く他の植生が認められず、現状では天然林への誘導は非常に困難であると考えられ、それには画伐等の施業の適用が不可欠である。
悪性黒色腫においてエピジェネテイック発現制御を受ける細胞遺伝子の解析

メラノーマの治療にインターフェロンβが使用されているが無効例が存在する。インターフェロンが奏効しない原因として,インターフェロン誘導性のアポトーシス関連遺伝子の発現が抑制されている可能性が推測される。インターフェロンβ抵抗性の細胞株の一部はインターフェロンβとTRAILによってアポトーシスが誘導されたことより,潜在的にアポトーシス誘導性が保持されていることが示唆された。メラノーマ組織の細胞遺伝子解析より,日本人に多い末端黒子型ではN-ras/BRAFの構造変化は稀で, N-ras/BRAF遺伝子下流のシグナル伝達系が活性化されている可能性が示唆された。メラノーマ細胞でメチル化制御されている細胞遺伝子RASSFIA, XAF1, IRF7, TRAILRIを発現するアデノウイルスベクターを作製し,アポトーシス誘導活性を検討した。一部のメラノーマ細胞のみがインターフェロン存在下で、これら組み換えアデノウイルス感染によってアポトーシスを起こした。この結果より、未知のインターフェロン誘導性・アポトーシス関連性細胞遺伝子がメチル化抑制によって発現制御されている可能性が示唆される。悪性黒色腫(メラノーマ)は高率に転移を起こし、放射線や化学療法に抵抗を示す。メラノーマ細胞は不死化、増殖能、転移能、免疫学的寛容、アポトーシス抵抗性など多数の悪性形質を獲得しているが、メラノーマの増殖抑制やアポトーシス誘導に最も効果的な標的分子あるいはシグナル経路は明らかでない。本研究は、主に、1)メラノーマ細胞株におけるインターフェロン関連アポトーシス誘導遺伝子の同定と発現、2)日本人メラノーマ組織におけるインターフェロン関連遺伝子の発現、3)エピジェネテイック修飾される細胞遺伝子再導入による細胞死誘導の検討を行い、悪性黒色腫においてエピジェネテイックな発現制御を受ける細胞遺伝子を明らかにし、メラノーマ治療に貢献しようとするものである。本年度は、1)メラノーマ細胞株(AK1、MeWo、MM418、TXM18、70W、G361、MMIV、MMAc、SK-mel-23、SK-mel-24、SK-mel-118)にインターフェロンβを加えてアポトーシスが誘導されるか否かの検討を行い、2)メチル化によって発現抑制されるインターフェロン誘導性かつアポトーシス関連遺伝子であるRASSF1A、XAF1、IRF7、TRAIL R1をcDNAクローニングした。組み替えアデノウイルス作製後、これら細胞遺伝子とインターフェロンβによって、メラノーマ細胞がアポトーシスを起こすかどうかを検討する予定である。メラノーマ細胞は不死化、増殖能、転移能、免疫学的寛容、アポトーシス抵抗性など多数の悪性形質を獲得しているが、メラノーマの増殖抑制やアポトーシス誘導に最も効果的な標的分子あるいはシグナル経路は明らかではない。本研究は、1)メラノーマにおけるインターフェロン関連アポトーシス誘導遺伝子の同定と発現、2)日本人メラノーマ組織におけるインターフェロン関連遺伝子の発現、3)エピジェネティック修飾される細胞遺伝子の検索を行い、悪性黒色腫においてエピジェネテイックな発現制御を受ける細胞遺伝子を明らかにし、メラノーマ治療に貢献しようとするものである。平成20年度は以下の研究結果を得た。1)インターフェロンによりアポトーシスの誘導されるメラノーマ細胞では特異的にカスパーゼ2が活性化されることが見い出された。2)メラノーマ細胞においてメチル化阻害されることが報告されたRASSF1A、XAF1、IRF7をアデノウイルスベクターにクローニングし、末端黒子型メラノーマ細胞がインターフェロンとこれら細胞遺伝子発現によりアポトーシスが誘導されるかどうかを検討した。3)メラノーマ細胞株に5-Aza-citydineとインターフェロンβを添加しアポトーシスが誘導される条件を検討し、インターフェロンによって特異的にメチル化阻害される細胞遺伝子の同定と遺伝子クオーニングを行っている。
中心性漿液性脈絡網膜症における感受性遺伝子の同定とその臨床応用

中心性漿液性脈絡網膜症(CSC)は3050歳代の男性に好発する疾患であるが、その病態には不明な点が多い。本研究ではゲノムワイド解析(GWAS)を含む包括的な遺伝子解析からCSCに関連する分子群(感受性遺伝子)を探索することで、同疾患の分子生物学的な病態解明を目指した。まず、CSC患者144人と同じDNAチップを使用して得られた一般集団コントロール1174人のサンプルを用いてGWASを行った。このGWASで有意な関連を示した上位50の一塩基多型(SNP)についてreplication studyを行った。replication studyにおいては新たなCSC患者183人とGWASで使用したものとは別の一般母集団2071人のサンプルから得られたimputation dataを使用した。GWASとreplication studyのメタ解析において特定遺伝子領域にGWASレベルで有意なSNPを同定し、それらのSNPについてはコントロール群においても実際にタイピングを行い、imputation dataがほぼ正確であることを確認した。これら一連の解析の結果、我々が先に報告したCFH遺伝子に加えて16番染色体上のSLC7A5を有意な感受性遺伝子として世界で初めて同定した。SLC7A5はRPEや網膜ミュラー細胞などに発現するアミノ酸トランスポーターであるLAT1をコードする遺伝子であるが、LAT1は胎生期における眼の発生に必須のタンパクであり、生体内においては血液脳関門におけるL-DOPAとアミノ酸の交換輸送に関わるなど重要な役割を果たしている。CSCの病態には血液網膜関門の異常が関与していると考えられている事からLAT1が同疾患の発症に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。本研究の結果は今後のCSCの診断や治療選択において重要な情報を提供すると考える。中心性漿液性脈絡網膜症(CSC)患者144人および対照群144人のゲノムワイド関連解析(GWAS)を施行した。GWASで最も有意な関連を示した上位100個の遺伝子多型(殆どは一塩基多型(SNP)であるので、以後SNPと表現する)を対象に、新たなCSC患者191人のサンプルを用いてreplication studyを行った。またreplicationstudyにおける対照群にはバイオバンクジャパンや東北メガバンクの一般母集団データも使用した。その結果、数個のSNPにおいてreplication studyでも再現性が確認された。これらのSNPは我々も含めて今までに報告がなかった領域に存在し、かつ最も有意な関連を認めたSNPはLOC遺伝子(機能解析が行われていない遺伝子)が存在する領域に存在したことから、CSCの感受性遺伝子探索においてGWASによるアプローチを行った利点が最大限に発揮されたものと考える。さらにその中の一部のSNPに関連する遺伝子と、それがコードするタンパク質が網膜および脈絡膜に局在する事も確認された。GWASに関しては予算の都合上、当初予定していた患者数よりも少ない数での施行となったが、そこで有意な関連を認めたSNPのうち数個がreplication studyでも再現性が確認されており、それらのSNPについてGWASとreplication studyのサンプル数を併せた解析では十分にGWASレベルの有意性を得ることができた。これらは本研究課題における第1段階をクリアできた事を意味する。また、それらの一部は既に局在と機能の解析に進んでいる。前年度に行った中心性漿液性脈絡網膜症(CSC)患者144人と自施設のコントロール144人を使用したゲノムワイド関連解析(GWAS)で得られた結果を受けて、更に統計的パワーを高めてより広く関連遺伝子多型を探求する目的で、中心性漿CSC患者144人と同じDNAチップを使用して得られた一般集団コントロール1174人のデータを用い改めてGWASを行った。GWAS施行にあたっては疾患群およびコントロール群に対してMDS解析などのquality controlを行い、また解析SNPのquality controlを行った。imputation dataについてはquality scoreが0.7を超えるSNPのみを対象とした。その結果、GWASとreplication studyのメタ解析において複数の遺伝子領域にGWASレベルで有意なSNPおよび有意な関連が示唆されるSNPを同定した。さらに、それらのSNPについてはコントロール群においても実際にタイピングを行い、imputation dataがほぼ正確であることを確認した。有意な関連が認められたSNPに関してはregional plotやLDlinkによる連鎖不平衡の解析を行い、D'>0.9かつr-square>0.7を満たす周辺SNPについてfine mappingを行った。同定されたSNPは疾患感受性候補遺伝子のイントロンに位置するもので、現在同SNPの機能解析を施行中である。GWASとreplication studyのメタ解析において特定遺伝子領域にGWASレベルで有意なSNPを同定できたことにより、CSCの感受性遺伝子を同定するという本研究の主目的は達成できたと考える。現在は同SNPの機能解析を進行中である。

このGWASで有意な関連を示した上位50の一塩基多型(SNP)についてreplication studyを行った。replication studyにおいては新たなCSC患者183人とGWASで使用したものとは別の一般母集団2071人のサンプルから得られたimputation dataを使用した。GWASとreplication studyのメタ解析において特定遺伝子領域にGWASレベルで有意なSNPを同定し、それらのSNPについてはコントロール群においても実際にタイピングを行い、imputation dataがほぼ正確であることを確認した。これら一連の解析の結果、我々が先に報告したCFH遺伝子に加えて16番染色体上のSLC7A5を有意な感受性遺伝子として世界で初めて同定した。SLC7A5はRPEや網膜ミュラー細胞などに発現するアミノ酸トランスポーターであるLAT1をコードする遺伝子であるが、LAT1は胎生期における眼の発生に必須のタンパクであり、生体内においては血液脳関門におけるL-DOPAとアミノ酸の交換輸送に関わるなど重要な役割を果たしている。CSCの病態には血液網膜関門の異常が関与していると考えられている事からLAT1が同疾患の発症に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。本研究の結果は今後のCSCの診断や治療選択において重要な情報を提供すると考える。今後は上記で同定されたSNPのうち未解析のものに対して機能解析および関連する遺伝子の局在と機能解析をさらに進めて行く予定である。また、それらとCSCの臨床所見との関連性も検討を重ねて行く。CSC関連として同定されたSNPは当該遺伝子のスプライシングに関与する可能性があり、データベース検索によるSNP機能の解析と発現遺伝子の分子量に変化が起こるかどうかを検証して行く。購入予定のプローブのうち、購入が次年度に持ち越したものがあったため。概ね計画通りの予算使用であったが、消耗品や論文作成費等で若干の残額が生じた。これらは翌年度の研究にそのまま使用される計画である。当該プローブを購入して引き続き研究を進める。
Rho/Ca^<2+>経路を介したアクチン再構築とシナプス可塑性

低分子量G蛋白質Rhoおよびその下流の標的キナーゼp160ROCKは、神経回路網形成・維持に必須な役割を担うと考えられている。そこで本研究計画では、NIE-115細胞でLPA依存性の神経突起退縮反応にp160ROCKが関与している可能性を検討した。p160ROCK阻害剤Y-27632は、用量依存的にN1E-115細胞の突起退縮を完全に抑制することを見出した。また、p160ROCKのドミナント・アクチブ体で突起退縮が刺激非依存性に起こること、p160ROCKのドミナシト・ネガチブ体によって突起退縮が抑制され、逆に突起進展がおこること、などからp160ROCK活性化が突起形成制御に必須の役割を持つことを発見した。(2)グルタミン酸性シナプスにおけるRho標的蛋白CitronとPSD-95の結合の発見我々はRho標的分子Citron(正確には、キナーゼを含まない神経型Citron-N)がそのC末端に典型的なPDZ結合配列を有するPSD蛋白であること、またその免疫原性が初代培養神経細胞にて一部樹状突起スパインと一致すること、等に注目し、CitronとシナプスPSD分画の蛋白、例えばPSD-95と複合体をつくるか検討した。この結果、Citronは多くのグルタミン酸性シナプスにてPSD-95と結合し、NMDA受容体と同一の蛋白複合体に属しうる事が明らかになった。さらに、Citronが、視床や大脳皮質の神経細胞に多く認められ、海馬錐体細胞には発現していないが、海馬のGABA性抑制性介在神経細胞上に存在するグルタミン酸性シナプスに強く発現していることが判明した。
腸管内胆汁酸を介する漢方薬の新しいメタボリックシンドローム改善作用の実証

雌性C57BL/6マウスに9週間に渡って、普通食ならびに高脂肪食を与えた。高脂肪食与えたマウスに対して、五苓散を0.6ならびに2%となるように添加して、さらに5週間飼育した。高脂肪食与えたマウスの糞便中のほとんどの胆汁酸濃度が高くなっていたことを、液体クロマトグラフィー質量分析計にて確認した。高脂肪食に五苓散を添加したマウスの糞便中において、複数の胆汁酸の濃度の増減を見いだした。特に、細胞表面の胆汁酸受容体であるTGR5に対する作用が強いlithocholic acid(LCA)の糞便中濃度が、五苓散の投与で有意に増加していることを見いだした。高脂肪食を与えたマウスに五苓散を投与しても、体重、血中トリグリセリド濃度、血中コレステロール濃度は変化しなかった。当初計画では、腸管における胆汁酸受容体刺激によって誘導されるGLP-1等の発現応答を解析する予定であったが、糞便中胆汁酸に対する五苓散の影響における腸内細菌の役割を明らかにするために、次年度以降に始める予定であった腸内細菌叢の16srRNA解析を前倒しして行った。その結果、様々な菌種の構成比が、五苓散の投与によって変動していることを確認した。また当初の計画にはなかったが、糞便中の遊離飽和脂肪酸の濃度が、五苓散の投与によって低下することも見出した。飽和脂肪酸は複数のGタンパク共役受容体(GPCR)のリガンドであることが知られており、五苓散効果における腸管の飽和脂肪酸依存的応答との関連も示唆された。当初計画では、腸管における胆汁酸受容体刺激によって誘導されるfibroblast growth factor15 (FGF15)やglucagon like peptide-1 (GLP-1)などのペプチドホルモン類の発現応答を解析する予定であった。しかしながら、糞便中胆汁酸に対する五苓散の影響の機構を明らかにするために、次年度以降に始める予定であった腸内細菌叢の16srRNA解析を前倒しして行った。このように初年度の研究において手付かずの部分があったものの、腸内細菌叢の解析結果が得られたために、その部分で補われていると判断している。また肝臓の脂質構成については、五苓散の影響は見出されなかったものの、その解析も完了することができた。この結果は新規なものであり、五苓散の新しい作用機序の解明の糸口になるものと期待できる。以上の状況から、この研究計画はおおむね順調に進展していると判断した。腸内細菌叢の16sRNA解析によって、糞便中胆汁酸の濃度変化に寄与する腸内細菌の種類の推定ができる可能性があり、今後はそのデータ解析を行う。また初年度で行わなかった腸管組織において、胆汁酸に応答する分子の発現解析を今後行う。また初年度において新たに見出された五苓散の糞便中飽和脂肪酸濃度の低下効果に関して、新たな動物実験を遂行したい。また当初計画のように、防己黄耆湯の腸管内胆汁酸代謝、ならびに胆汁酸依存的分子発現応答に及ぼす影響の評価も開始したい。初年度で残した予算と当初計画での次年度予算を合わせることによって、これらの研究が進められると考える。

このように初年度の研究において手付かずの部分があったものの、腸内細菌叢の解析結果が得られたために、その部分で補われていると判断している。また肝臓の脂質構成については、五苓散の影響は見出されなかったものの、その解析も完了することができた。また当初の計画にはなかったが、糞便中の遊離飽和脂肪酸の濃度が、五苓散の投与によって低下することも見出した。この結果は新規なものであり、五苓散の新しい作用機序の解明の糸口になるものと期待できる。以上の状況から、この研究計画はおおむね順調に進展していると判断した。腸内細菌叢の16sRNA解析によって、糞便中胆汁酸の濃度変化に寄与する腸内細菌の種類の推定ができる可能性があり、今後はそのデータ解析を行う。また初年度で行わなかった腸管組織において、胆汁酸に応答する分子の発現解析を今後行う。また初年度において新たに見出された五苓散の糞便中飽和脂肪酸濃度の低下効果に関して、新たな動物実験を遂行したい。また当初計画のように、防己黄耆湯の腸管内胆汁酸代謝、ならびに胆汁酸依存的分子発現応答に及ぼす影響の評価も開始したい。初年度で残した予算と当初計画での次年度予算を合わせることによって、これらの研究が進められると考える。当初の計画では五苓散による腸管における分子発現解析を行う予定であったが、それに先立って行った糞便中胆汁酸の解析から得られた結果から、腸内細菌の解析を優先すべきと考えた。当該年度で腸内細菌の解析のための受託解析費用は当初見込んでいたよりも安価であった。また腸管組織の解析を行わなかったために、その経費を使用することがなかった。これらのことより、結果的に10万円程度の経費が残った。この分と次年度分の経費を合わせて、上述のような次年度の研究を進めたい。
西南諸島に産する両生類絶滅危惧種の遺伝的多様性の解明と飼育繁殖における遺伝的管理

絶滅危惧種の遺伝的多様性を維持することは、その生物の進化の歴史を後世に残し、さらに将来の環境の変化に応じて存続するための能力を与える唯一の方策である。本研究では、西南諸島に固有な9種の絶滅危惧両生類について、集団・個体レベルの遺伝的解析に最適な指標であるマイクロサテライトマーカーを開発し、それらを用いて種内の遺伝的多様性を解明した。その結果、野外集団の効率的な保全、さらには域外保全における遺伝的管理が可能となった。本年度は、以下の3つの項目について研究を行った。(A)イシカワガエル種群における遺伝的多様性及び集団構造の解明:昨年度に引き続き、GISを用いた景観遺伝学的解析をおこなった。その結果、イシカワガエルとアマミイシカワガエルの集団間の遺伝的分化は、基本的には生息適地の連続性と相関があり、特に標高と土壌に依存した分布拡散のパタンによって形作られていることが明かになった。本研究は本邦産両生類において、体系的な景観遺伝学的解析を行った初めての研究であり、また、西南諸島における島嶼内の遺伝的多様性の形成要因を明示的に証明した初の研究成果である。これらの成果はHeredity誌に掲載された。(B)イボイモリにおける遺伝的多様性及び集団構造の解明:昨年度開発した10のSSRマーカーを用いて、集団遺伝学的解析を行った。その結果、各島嶼間で明確な遺伝的分化が見られ、さらに各島嶼内でもいくつかの分集団構造が存在するという、階層的構造が明かになった。ただし、各島嶼内の集団構造は明確ではなく、また一部で遺伝的にかなり異なる集団が隣接したパタンを形成していた。これらの結果は、基本的にはミトコンドリア遺伝子に基づく分子系統樹とも一致することから、大過去における分断イベントと、最近の分布拡大が原因と考えられた。(C)オットンガエルとホルストガエルにおけるSSRマーカーの開発と遺伝的多様性の解明:ホルストガエルについて、姉妹種であるオットンガエルのSSRマーカーによるタイピングを試みると同時に、新規SSRマーカーの開発を行った。その結果、既に報告されているオットンガエルのSSRマーカーがホルストガエルにおいても使用可能であり、また新規に8つのSSRマーカーを開発した。絶滅危惧種の遺伝的多様性を維持することは、その生物種の進化史を後世に残し、さらに将来の環境変動に適応して存続するための進化的可塑性を与える唯一の方策である。本研究では、遺伝的多様性を考慮した持続的な保全と、飼育下繁殖の遺伝的な環境を整備することを目的として、西南諸島に固有な絶滅危惧両生類6種について、マイクロサテライトマーカーの開発と、それらを用いた集団遺伝学的解析を行った。最終年度においては、ハナサキガエル種群におけるマイクロサテライトマーカーの開発を行うとともに、ハナサキガエルの集団構造解析を行い、さらにアマミハナサキガエルにおいて、発生段階における近親交配と温度上昇の影響を検証した。これらの結果は、1報が投稿中、2報が投稿準備中である。また、イボイモリについては、すべての島嶼集団における飼育下繁殖に成功し、国際誌に掲載された。これにより、本研究の研究期間全体を通じて、最終的に対象種すべてに対してマイクロサテライトマーカーの開発を完了するとともに、集団構造解析を行うことができた。その結果として、島嶼内にも明確な遺伝的集団構造が存在し、それらは進化的背景と、それぞれの種の種生態とそれに関連した景観要因を反映して、独自のパターンを形成していた。これらの結果は、本邦産両生類において詳細な集団構造を解明した初めての研究成果であるとともに、当該種の保全活動への基礎的な情報として重要な知見となり得る。本研究は、西南諸島に産する両生類絶滅危惧種について、野外集団の集団構造及び、遺伝的多様性を詳細に解明すること及び、飼育個体間の近縁度に基づいて計画的な繁殖を行い、永続的な継代飼育を実現することを目的として、4つの課題((1)マイクロサテライト(SSR)マーカーの開発、(2)種内の集団構造の解明、(3)集団内の遺伝的多様度の評価、(4)人工繁殖個体群における近縁度評価)について研究を行っている。初年度は(1)の課題である、イシカワガエル種群と、イボイモリについて、12遺伝子座と10遺伝子座のSSRマーカーを開発した。これらの成果は、今後、当該種の遺伝的多様性評価を行う上で有用である。さらに、イシカワガエルについては、(2)、(3)の課題として、SSRマーカーを用いて集団遺伝学的及び、景観遺伝学的解析を行った。その結果、アマミイシカワガエルは、複数の遺伝的クラスターに分けられ、一方、オキナワイシカワガエルには階層的構造は見られなかった。さらに植生、地形などの環境変数に依存した移住に係るコストと遺伝距離を比較したところ高い相関が見られ、イシカワガエル種群における対称的な集団構造は、地形とそれに依存した生息適地の連続性の違いによって形成されたことが考えられた。これらの成果により、イシカワガエル種群の生息環境も含めた持続的かつ包括的な保全計画の提案が可能となる。

また、イボイモリについても、同様にSSRマーカーを用いて解析を行ったところ、少なくとも島嶼間で遺伝的に異なり、さらに沖縄島内にいくつかの階層構造が存在することが分かっている。(4)の課題としては、アマミイシカワガエルの飼育繁殖集団について、SSRマーカーに基づいて近縁度の低い個体を選抜し、次世代を作出した。また、シュミレーションにより、非近縁個体のペア選択によってある程度、遺伝的多様性の低下が抑制できることが分かった。本年度で、研究対象として計画していた7種の西南諸島産両生類絶滅危惧種のうち、5種(イシカワガエル、アマミイシカワガエル、イボイモリ、オットンガエル、ホルストガエル)についてマイクロサテライトマーカーを開発し、そのうち、2種(イボイモリ、ホルストガエル)については集団遺伝学的解析に着手、2種(イシカワガエル、アマミイシカワガエル)については、最終的な研究成果を発表している。最終的な目標の7割は達成しつつあり、最終年度である次年度には研究の総括が可能になると思われる。本年度に計画していた事項は予定どおり達成しており、特に本研究課題を実行するための基盤となるSSRマーカーが開発できたことは、大きな成果である。これにより、今後、さらに研究の進捗を加速することが期待できる。これらの成果は原著論文として、Conservation Genetics Resources誌に1報が掲載済み、1報が掲載予定、Heredity誌において1報が改稿中、一般報文として1報が日本爬虫両生類学会報に掲載されている。次年度は最終年度であることから、現在着手している5種については、包括的な研究成果を発表する予定である。また、これまで着手できていないナミエガエル、ハナサキガエル種群については、サンプル採集及び、マイクロサテライトマーカーの開発を引き続き行っていく予定である。本研究課題では最終的に、西南諸島産の絶滅危惧両生類すべてについて、研究を行うことを計画しており、今年度は2種(イシカワガエル、イボイモリ)について、目的を達成しつつある。残りの種・種群についても、研究に着手し、最終的な目的を達成する。物品費については、遺伝的解析における実験を行うための試薬・消耗品を予定している。旅費については、サンプル採集及び学会における成果発表旅費を予定している。人件費・謝金については、サンプル採集協力者への謝金を予定している。、その他については、実験に掛かる各種受注サービスの利用を計画している。
海底熱水素におけるマグマと熱水の地球化学的研究

本研究では、沖縄トラフの伊平屋凹地と南奄西海丘において、「しんかい2000」の潜航調査で得られた沈殿池の鉱物組成・化学組成を求め、流体包有物の加熱冷乏却実験を行った。伊平屋凹地クラムサイトの熱水系は大量の炭酸塩鉱物の沈殿で特徴付けられるが、その中でピラミッドチムニー周辺の「ひさし」状沈殿物について群しく検討したところ、2.硫化鉱物のうち磁硫鉄鉱は単斜晶系の組成を持ち、アラバンド鉱も産することから考えると、海嶺系の熱水鉱床や黒鉱鉱床よりもかなり環元的な熱水活動であることを示している。伊平屋凹地産の方解石と南奄西海丘産の硬石膏・方解石中の流体包有物の加熱冷却実験を行ったところ、次のような結果となった。均質化温度:伊平屋方解石(186338゚C、平均282゚C)、南奄西硬石膏(231300゚C、平均261゚C)、同方解石(268305゚C、平均282゚C);塩濃度:泰平屋方解石(3.45.7%、均平4.4%)、南奄西硬石膏(3.94.3%、平均4.1%)、同方解石(3.23.9%、平均3.5%)。これらの結果から、伊平屋凹地では過去の炭酸塩チムニーを形成したときの熱水は、現在湧出している熱水(最高温度220゚C)よりもかなり高温であったことと、塩濃度が海水(3.5%よりかなり高いことから、沸謄現象を示すような大規模な熱水系が発達していた可能性がある。また、南奄西海丘では、現在の熱水の温度や流体包有物の均質化温度が同水深での海水の沸点に近いことや、チムニー周辺に破砕性の沈殿物が見られることから、現在も時々爆発を繰り返すような活発な熱水系が発達していると推定される。
自己免疫疾患におけるclassIIMHC抗原の発現と疾病の発症・進展の関連

1 HLAクラス【II】抗原発現に及ぼす因子と発現機構の解明。バセドウ病甲状腺濾胞細胞はHLAクラス【II】抗原を発現していた。HLA-DQ抗原の発現はHLA-DR抗原に比較して弱かった。インターフェロンγ(INF-γ)は健常甲状腺濾胞細胞のクラス【II】抗原の発現を誘導させることができる。一端発現したHLA-DR抗原の維持にはIFN-γの持続的刺激が必要であった。デキサメサゾンやメルカゾールはIFN-γによるHLA-DR抗原の誘導による発現を抑制することができた。2甲状腺濾胞細胞・甲状腺浸潤単核球との細胞間相互作用について。(1)甲状腺浸潤単核球,末梢血単核球の二重染色法による細胞マーカーの解析。甲状腺内浸潤単核球はHLA-D【R^+】T細胞が著明に増加し、これはCD【4^+】細胞(Helper/inducer T細胞)もCD【8^+】細胞(suppressor/cytotoxic T細胞でも認められた。CD【4^+】細胞では、CD【4^+】4B【4^+】細胞(Helper T細胞)が増加し、CD【4^+】2H【4^+】細胞(suppressor-inducer T細胞)は、著明に減少していた。(2)甲状腺内浸潤単核球のsuppressor T細胞機能について。suppressor T細胞機能については、末梢血,甲状腺内浸潤単核球をモノクローナル抗体を用い亜分画に分離し、再構築実験にて測定した。suppressor T細胞機能は、末梢血に比較して、甲状腺内浸潤単核球では、有意に低下し、この異常は、CD【4^+】suppressor-inducer細胞にも、CD【8^+】suppressoreffector細胞機能にも異常が認められた。(3)細胞間相互作用について。バセドウ病濾胞細胞と末梢血T細胞を自己混合培養すると、単独に培養した場合に比較して、両細胞ともHLA-DR抗原陽性細胞が増加し、上清中にはIFN-γが検出された。濾胞細胞の刺激でT細胞は活性化増殖し、IFN-γを産生しこれが濾胞細胞のHLA-DR抗原の発現を増強させる。この細胞間相互作用が自動性悪循環を惹き起こしている。
ビタミンD活性化酵素、1-水酸化酵素発現に対するレプチンの制御機構の解析

レプチンが腎臓の近位尿細管に特異的に存在する1α-水酸化酵素の遺伝子発現を抑制する詳細なメカニズムの解明を試みた。活性型レプチン受容体(Ob-Rb)に異常があり主要なレプチンシグナルが欠損しているdb/dbマウスを用いた実験から、レプチンの1α-水酸化酵素現抑制作用はOb-Rbを介したものであることが見出された。レプチンの腎近位尿細管細胞への直接作用を確認するために、マウス腎臓から近位尿細管細胞の初代培養を行い実験に用いた。しかし、1α-水酸化酵素の遺伝子発現はレプチンにより抑制されなかった。1α-水酸化酵素遺伝子発現は、細胞内cAMPの上昇により誘導されることが知られている。そこで、cAMPの活性化剤であるforskolinを添加して1α-水酸化酵素の発現を亢進させた状態を作りだし、レプチンの作用を調べた。しかし、レプチンは1α-水酸化酵素遺伝子発現を抑制しなかった。細胞内のcAMP量は、レプチン処理を行っても変化しなかった。この細胞におけるカルシウム代謝関連遺伝子の発現を確認した。副甲状腺ホルモン受容体(PTHR)およびVDRの遺伝子発現が認められた。また、近位尿細管細胞に特異的に発現しているメガリンおよび1α-水酸化酵素の遺伝子発現が確認された。しかし、主に遠位尿細管細胞で発現しているカルシトニン受容体遺伝子の発現量は極めて低かった。このことから、この初代細胞株は腎近位尿細管細胞主体であると考えられた。この細胞でのレプチン受容体遺伝子の発現を確認したところ、細胞内ドメインの短いOb-Raの発現は見られたが、Ob-Rbの発現は全く認められなかった。以上のことより、レプチンの1α-水酸化酵素発現抑制は、腎近位尿細管細胞への直接作用によるものではなく、他器官、組織のOb-Rbを介した二次的な作用であることが見出された。レプチンの骨代謝調節作用の一端は、1,25(OH)2D3によるカルシウム代謝調節を介したものであると考えられた。そこで本研究では、レプチンが、腎臓の近位尿細管に特異的に存在する1α-水酸化酵素の遺伝子発現を抑制する詳細なメカニズムの解明を試みた。まず、レプチンの作用がレプチン受容体を介しているかを検索するために、活性型レプチン受容体(Ob-Rb)の異常により糖尿病を発症するマウス(db/dbマウス)を用いて、レプチン投与による1α-水酸化酵素遺伝子発現及び血中の1,25(OH)2D3レベルの変動を調べた。雄C57BL/6J ob/obマウスおよびdb/dbマウスに、Vehicleもしくはレプチン4mg/kg b.w.を12時間おきに1日2回2日間腹腔内投与した。ob/obマウス、db/dbマウス共に、血清カルシウム、1,25(OH)2D3の有意な上昇が見られた。腎臓での1α-水酸化酵素発現の上昇が認められた。ob/obマウスへの高濃度レプチン投与により、血清カルシウム及びリンは正常マウス群のレベルにまで低下した。血清1,25(OH)2D3は、レプチン投与により有意に低下した。腎臓での1α-水酸化酵素発現はレプチン投与により有意に低下した。これに対し、db/dbマウスへのレプチン投与では、血清カルシウム、リン、1,25(OH)2D3に変化はみられなかった。腎臓での1α-水酸化酵素発現もレプチン投与による変化はなかった。次に、腎の初代培養系を確立した。腎の初代培養細胞における1α-水酸化酵素および24-水酸化酵素の発現を確認したところ、両酵素の遺伝子発現が確認された。今後は、レプチンが近位尿細管に直接作用することを確認し、1α-水酸化酵素発現抑制についてのシグナルトランスダクション経路の解明を目指す予定である。

このことから、この初代細胞株は腎近位尿細管細胞主体であると考えられた。この細胞でのレプチン受容体遺伝子の発現を確認したところ、細胞内ドメインの短いOb-Raの発現は見られたが、Ob-Rbの発現は全く認められなかった。以上のことより、レプチンの1α-水酸化酵素発現抑制は、腎近位尿細管細胞への直接作用によるものではなく、他器官、組織のOb-Rbを介した二次的な作用であることが見出された。
風土的野外教育の理論構築と教育実践に関する研究

本研究の目的は、野外教育における理論的な枠組みを関係概念としての「風土」に着目して再構築し、この風土的野外教育における実践上の要点を明らかにすることであった。平成30年度においては、ここまでの研究の成果を総合的に集約したより取り組みやすく且つ客観性の高い、野外教育実践を評価する用具を提出することができた。これは「野外」の軸における風土性を構成する身体(体験)性、空間(場所)性、時間(歴史)性という3つの要素と、「教育」の軸における教の重視(意図的教育)と育の重視(無意図的教育)という2つの観点をそれぞれルーブリックを援用し評価するものであった。つまり、これら3要素ならびに教育における2つの観点は考慮すべき野外教育の実践上の要点といえる。そして、ここまでの研究成果は、野外教育が抽象的な自然とかかわるものではなく、人間の生活と密接に繋がった自然であり、それは人間の営みと自然の相補的な関係から紡ぎだされる「文化」から論じられる必要性を拓き、この観点から野外教育は再構想される必要があること示唆した。野外教育の理論的枠組みは、具体的には文化と関連付けて定義され、それに基づいて体系化され、そして野外教育実践に落とし込まれていく必要があるとの結論に至った。この文化は風土と非常に関係が深い用語であり、定義の仕方によって風土を包括しつつ、しかし「地形や気候」という印象に留まらないイメージを想起させるといった点で風土とは異なる。この視座の獲得により、野外スポーツや芸術的活動、環境教育、冒険教育、森林教育等々から人々の生活における自然との関わりまで広範にわたり包括するものと解釈することが可能になった。本研究の目的は、野外教育の理論的枠組みを関係概念としての「風土」に着目して再構築し、この風土的野外教育における実践上の要点を明らかにすることである。平成27年度はこの研究目的のうち、野外教育の理論的枠組みの構築を実施した。具体的には「風土」概念が野外教育実践に示す方向性と内容を提示するために1)風土的野外教育の定義から基本的原理を明文化する2)風土的野外教育の基本的原理を野外教育の専門家に精査してもらうというものであった。先に土方により提出された野外教育における「野外」概念の再解釈に則り、野外教育の基本的原理の明文化を行った。その結果、野外教育を実践しようとする場合これを除いては(風土的な)野外教育が成立し得ず、必然的に認めねばならないという最小限度の不可欠な論点についての明文化がなされた。以下に記す。I野外教育実践において風土へのまなざしが失われてはならないIー1野外教育実践において身体的な関わり合い(体験、あるいは実存的に外に出ること)が失われてはならないIー2野外教育実践において地域(実践の場)の自然は生活的自然として理解され扱われなければならないIー3野外教育実践において地域社会・人々の自然との関わりにおける共同性・共同関係が理解され扱われなければならないIー4野外教育実践において地域の自然と人々との関わりにおける一体性・身体的関わりが理解され扱われなければならない以上が(風土的な)野外教育の実践において不可欠な論点として提示・明文化された。また、この内容については、野外教育の専門家一名に精査を依頼した最終的な内容である。野外教育実践が行われる場合には、自然と人間の関わり、そして身体を介した一体性について理解がなされ、反映される必要があるとの内容を明文化というかたちで得るにいたった。予定した研究計画に沿い概ね目標を達成している。しかし、研究成果の発表において本研究の前提となる論文の査読に時間を費やし、本研究の成果である学術論文が未だ査読中である。そのため、本年度の研究成果として、現時点では公表することができない(投稿論文標題「野外教育における風土概念に関する基礎的論点」野外教育研究)。この点について進捗の遅れとして申請した。平成28年度はこの目的のうち、構築された理論的な枠組みを野外教育の実践に反映させるべく調査の準備に着手した。昨年度の懸案事項であった野外教育の基本的原理の明文化についての研究論文が受理され、公となったこの原理を基に調査用具の開発が行われた。この評価用具の開発は、野外教育実践についての現状把握を補助し、目標とする教育実践との距離を可視化する可能性を有する。結果として、野外教育を問い直し新たな視座を付与する試みといえる張本の「野外教育における『教育』概念の再検討」及び土方の「『野外』概念再検討による示唆」と先の「野外教育の原理の明文化」による知見を援用して、野外教育実践者が自身の活動を布置(マッピング)可能にする二次元マッピング図が提案された。この図は、「教育」をX軸、「野外」Y軸にとり直交させ、平面上に二つの情報を有する座標(X、Y)として定位可能にする(X軸→教育軸:意図的・無意図的、Y軸→野外軸:風土性・自然科学性)。これにより野外教育という広大な地図を4領域に緩やかに区分可能となった(1風土性×意図的教育2風土性×無意図的教育3自然科学性×意図的教育4自然科学性×無意図的教育)。また、「野外」は風土概念により基礎付けられ、布置図のY軸を担っている。

この軸「野外」は身体性、場所性、歴史性という3契機により成立すると解釈され、軸のベクトル要因「風土性」は、より詳細に3契機の総体とされる必要がある。そこで「X、Y座標の図」に加え,先の風土性を補足する契機を布置の要素とする別の図(正三角形のレーダーチャート)も作成した。そして、これらの内容については、野外教育の専門家一名の精査を受けている。予定した研究計画に沿い概ね目標を達成している。本年度の研究成果として、日本野外教育学会第20回大会にて発表を予定している(2017年6月18日:発表演題「野外教育を可視化するー教育と風土の概念整理に基づく二次元マッピングの試みー」)。また、同学会の研究誌「野外教育研究」への投稿も予定している。しかし、研究成果といえる学術論文の刊行が完全に予定通りの進捗をしているとは言えない。これは昨年度予定していた研究論文の受理が今年度にずれ込んでしまったことが大きな原因といえる。また、開発された評価用具の実践適用に向けた予備調査の実施にも至っていない。そのため、これらの点について進捗の遅れとして申請した本研究の目的は、野外教育の理論的枠組みを関係概念としての「風土」に着目して再構築し、この風土的野外教育における実践上の要点を明らかにすることである。平成29年度はこの研究目的のうち、野外教育実践の現状把握調査が予定されていた。昨年までに検討してきた評価用具について、野外教育の専門家との討議により修正を要する点が見つかった。そこで調査の実施に先立ち、評価用具の改良にとりかかった。具体的には、野外教育実践者が自身の活動を布置(マッピング)可能にする二次元マッピング図について、被調査者が自身の野外教育実践をより評価しやすくするための修正を行った。これは「野外」の軸における風土性を構成する身体(体験)性、空間(場所)性、時間(歴史)性という3つの要素と、教育における意図的・無意図的教育という2つをそれぞれルーブリックの援用により評価するものであった。他方、教育については、人間の内に持っている発達や成長の可能性をはぐくみ引き出すという「育」の方向(こちらの多くは無意図的に結果的にそれがなされる)と、人間の外から必要な知識や技能を教える「教」に重きが置かれる側面(主に意図的になされる)とを相反するベクトルとする5つの間隔(距離)として表象した。これにより野外教育実践を評価する際の基準が設定され、より取り組みやすく且つ客観性の高い評価用具を提出することができた。所属研究機関の変更により研究環境が大きく変化し、また、研究以外の業務(教育)において多忙となり研究計画の遂行に遅れが生じた。また、当初計画では、過去2年間にわたり構築してきた理論を教育実践に還元すべく評価用具の開発及び調査の実施を予定していた。しかし、評価用具の修正が必要となったため教育実践の調査には及んでいない。本研究の目的は、野外教育における理論的な枠組みを関係概念としての「風土」に着目して再構築し、この風土的野外教育における実践上の要点を明らかにすることであった。平成30年度においては、ここまでの研究の成果を総合的に集約したより取り組みやすく且つ客観性の高い、野外教育実践を評価する用具を提出することができた。
細胞集団のフラクタル成長と形態遷移

私たちは最近、大腸菌や枯草菌などごく普通の細菌を寒天板上に培養したときに成長するコロニーのパターンが、栄養濃度と寒天濃度(培地の固さ)という環境を決める二つのパラメータを変えるだけで、多様に変化することを見出した。こうして本研究により、特に枯草菌についてコロニー・パターンの相図を定量的に確立することができた。即ち、細菌コロニーが自己相似フラクタルであるDLAパターンや、全体としてはコンパクトだがパターン界面だけに注目するとそれが荒れていて自己アフィン・フラクタルだと思われるEden的パターン、同心リング状パターン、枝分かれが密集したDBM的パターン、一様等方なディスク状パターンといった、5種類の典型的なパターンを呈する領域があることを明らかにした。また、成長途上のコロニーの顕微鏡観察によって、寒天培地がある程度以上柔らかくなると個々の細菌細胞が寒天培地上を能動的に動き回ることを見出した。この能動的運動がコロニーのパターン変化をトリガーするようである。栄養濃度が低く寒天培地が固めのときには、大腸菌、枯草菌を含む多くの桿菌が栄養の拡散律速による自己相似フラクタルなDLA的コロニーパターンを形成することがわかった。従って、このような環境下ではコロニー形成にDLA機構がかなり普遍的であることが結論される。最も単純なパターンである一様等方なディスク状コロニーについて界面の成長速度、コロニー内の個々の細菌の密度や拡散係数(細菌の動きをブラウン運動とみなして)などを詳しく測定することにより、このようなコロニーの形成が基本的にフィッシャー方程式で記述できることも明らかにした。しかし、Eden的コロニーの自己アフィン性の確認はまだであるし、他の領域のコロニーの形成機構は全く不明で、今後の興味ある課題として残った。桿菌に層する枯草菌、大腸菌、サルモネラ菌などのコロニーが、栄養分の濃度が低く寒天培地が比較的固い場合にDLAパターンに類似した自己相似フラクタルパターンを呈することを確認した。これはある極限的な状況でかなり普編的にフラクタル・コロニーが見られるという、重要な発見である。枯草菌について、栄養濃度と寒天濃度をパラメータとしてコロニー・パターンを観察し、自己相似フラクタルなDLAパターンやコンパクトなEdenパターン、枝別れの密集したDBMパターンなど典型的なパターンの遷移を調ベ、コロニー・パターンの相図を確立した。これらのパターンはいずれも物理・化学系で観測されており、コロニー形成が大局的には物理学的に理解できる可能性があることを示す。また、パターンの遷移はコロニー内で個々のバクテリアが動き回ることができるようになるという、運動性の発現によって誘起されることを運動性のない変異種を使って確認した。現在、栄養濃度が高く寒天培地が柔らかいときに得られる一様に広がる単純なコロニー・パターンは数理生物学で知られるフィッシャー方程式で記述される可能性があることを確認しつつある。私たちは最近、大腸菌や枯草菌などごく普通の細菌を寒天平板上に培養したときに成長するコロニーのパターンが、栄養濃度と寒天濃度(培地の固さ)という環境を決める二つのパラメータを変えるだけで、多様に変化することを見出した。こうして本研究にどり、特に枯草菌についてコロニーパターンの相図を定量的に確立することができた。また、成長途上のコロニーの顕微鏡観察によって、寒天培地がある程度以上柔らかくなると個々の細菌細胞が寒天培地上を能動的に動き回ることが見出された。

栄養濃度が低く寒天培地が固めのときには、大腸菌、枯草菌を含む多くの桿菌が栄養の拡散律速による自己相似フラクタルなDLA的コロニーパターンを形成することがわかった。従って、このような環境下ではコロニー形成にDLA機構がかなり普遍的であることが結論される。最も単純なパターンである一様等方なディスク状コロニーについて界面の成長速度、コロニー内の個々の細菌の密度や拡散係数(細菌の動きをブラウン運動とみなして)などを詳しく測定することにより、このようなコロニーの形成が基本的にフィッシャー方程式で記述できることも明らかにした。しかし、Eden的コロニーの自己アフィン性の確認はまだであるし、他の領域のコロニーの形成機構は全く不明で、今後の興味ある課題として残った。
中国近世の知識人社会と出版文化,とくに科挙関係資料と類書を中心に

本研究では、中国近世の知識人と出版というテーマを、次の角度から研究することとした。(1)『新刊類編歴挙三場文選』を中心とした科挙資料の調査、(2)日用類書、とくに『事林広記』の研究、(3)善書とその出版、(4)石刻資料と石刻書の出版これらの中には、この4年間にいくぶんなりとも前進したものもあるし、準備は進めたものの形を成すに到らなかったテーマもある。(1)科挙資料に関しては、筆者のこの4年間の仕事としては、資料調査や収集の面では進展が見られたものの、公刊した成果としては、2004年春に自著を出版するにあたって、旧稿を再検討するにとどまっている。元朝の科挙そのものに関しては、従前からの明清地方志における元朝科挙資料についての調査収集を継続し、発表を準備中である。(2)『事林広記』については、当初の計画にあった明刊本よりも、和刻本の検討が中心になったが、他本との差異から、元朝時代の出版と社会の問題や、類書と先行文献との関係について、新知見を得ることができた。(3)善書については、漢民族独自の民俗である「惜字」と出版との関係に注目し、資料の収集をおこなったが、成果の取りまとめには至っていない。(4)石刻については、北京、曲阜などの地域における元朝石刻の従前の整理を増補し、地方志所収の石刻資料についての目録化を進めつつある。ところで、この4年間に新たな関心の対象となったものに、「一枚刷り」への印刷出版文化研究の範囲の拡大とその資料としての利用についての検討がある。土地契約書、護符、税金の領収書などの一枚刷りの印刷物は、これまでの出版文化史研究においては関心の対象となることは少なかったが、古文書の現存が限定的である中国においてはその資料的価値は少なくなく、今後の進展が期待される。本年度は、研究計画の基本的な条件を整備すること、課題として申請したいくつかの研究対象について、今後の研究構想を基本的に策定するために、関連分野の文献の整備に主眼を置きつつ研究を進行させた。まず、本来研究の中心として位置付けた、類書、科挙関係文献に関しては、明刊本の事林広記』に関する文献資料の複写を新たに入手することができたので、版本間の相違とその意義についての、調査、研究に着手し、現在進行しつつある。明刊『事林広記』は、これまで資料的な価値が低いとされ、十分な研究がおこなわれてこなかった。同書についての調査の結果がまとまれば、本共同研究の主眼の一つである、中国の商業出版(坊刻)の歴史の解明に資する点があるのではないかと考えている。また、元朝科挙資料については、この共同研究が発足する直前の前年度末にすでに研究論文を発表しているが、本年度になって、同じく元朝の科挙資料についてをテーマにした中国の陳高華氏の論文が公刊された。森田がすでに発表した研究と重なる点も少なくないが、これを機会に、同氏の研究を踏まえて、再度、元朝科挙資料についての検討を進めつつある。それ以外の課題として、中国近世の出版文化事業として重要な意味を持つ、地方志に関して、とくにその芸文、金石関係箇所の編纂についての調査を進行しつつある。現在は、視点を現在の中国における地方志出版にまで広げて、現在は資料の集積の過程にあるが、これについては、問題の探求に適切な地域を選定しつつあるところである。