hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マウス形態形成突然変異遺伝子のポジショナル・クローニング

Tail-short(Ts)は、骨格形成異常を示す優性突然変異である。Tsホモ個体は発生初期段階の桑実期に形態の異常を示し、胚盤胞期にその発生を止める。Tsヘテロ個体は、ホメオティックトランスフォーメーションを含む骨格形成異常に加えて頭部神経管形成異常、多指等が高い頻度で観察される。Ts遺伝子は、第11番染色体の末端側にマップされている。Ts変異の原因遺伝子をポジショナルクローニング胞により単離することを目的として詳細な遺伝子地図を作製した。この結果、Ts遺伝子がマウス11番染色体遠位部に位置する2つのマイクロサテライトマーカーD11Mit128とD11Mit256に挟まれた0.16cMの領域に存在する事を明らかにした。さらに、BACcloneによるこの領域のcontigを完成し、更に詳細な解析を加えた結果、Ts遺伝子は2つのマーカーD11Rin56とD11Nig17に挟まれた約250kbp以内の領域に存在することが明らかとなった。この領域に存在する遺伝子をcDNA直接選択法で単離したところ、5つのTs候補遺伝子が得られた。これらの中で、リボゾーム蛋白のサブユニットをコードするRpI38遺伝子を詳細に解析した結果、Ts変異マウスでは、この遺伝子を含む18kbの領域が欠失することを明らかにした。加えて、Tsマウスのalleleと考えられているTail-short(Tss)マウス及び、Rabo torcido(Rbt)マウスにおいてRpI38遺伝子を調べたところ、Tssマウスでは第3exonと第4exonの間に375bpのinsertionが存在し、Rbtマウスでは翻訳領域に1bpのinsetionが認められた。両変異マウスとも開始コドン近傍でフレームシフトが生じ、正常なタンパクが生成できないと予想される。さらに、RpI38遺伝子がTs変異の原因遺伝子であることを証明するために、野生型のRpI38遺伝子をトランスジェネシスの手法によりTs変異マウスに遺伝し導入したところ、完全に変異表現型が救済されることが分かった。以上の結果より、これらのマウスで観察できるホメオティックトランスフォーメーションを含む中軸骨格形成異常は、RpI38遺伝子の変異によって引き起こされることが示された。今年度は、四肢形態形成異常を示すRim4とHx、中軸系の発生異常を示すTsの三つの突然変異の原因遺伝子のポジショナルクローニングのため、遺伝的地図と物理的地図を作製した。具体的には、これらの突然変異系統を実験用近交系マウス系統とマイクロサテライト座位において大きな遺伝的多型を示す日本産野生マウス系統由来のMSM系統に交配しF1個体を作製した。これにC57BL/6JあるいはC57BL/10J系統のマウスを交配して、連鎖解析用の戻し交配マウス個体を作製し、マイクロサテライト座を指標とした遺伝子地図を作製した。さらに、突然変異遺伝子と連鎖するマイクロサテライトマーカーを指標としてYAC,BACライブラリーをスクリーニングしマーカー陽性のクローンを選択し、各クローンの端末のDNA断片をサブクローニングして、それらを指標にして新たなYAC,BACクローンを選択した。

以降、同様な操作により各クローンを連結し、染色体ウォーキング法により突然変異遺伝子近傍のYAC,BAC Contigを作製して遺伝子地図を作製した。遺伝的地図から得られた組み換え切断点の位置を基にして物理的地図上に突然変異遺伝子の存在する領域を限定した。以上の研究の結果、HxとTsについては、物理的地図が完成し、各々一つのYACクローンと四つのBACクローンでカバーされるDNA断片中に変異の原因遺伝子が存在することが分かった。また、Rim4についても3カ所のギャップはあるものの原因遺伝子近傍の物理的地図の作製が進行中である。(1) Rim4およびHxの二つのマウス四肢突然変異についてそれらの原因遺伝子を単離する目的でポジショナルクローニングを開始した。Rim4は、国立遺伝学研究所で発見され肢芽前端におけるShh遺伝子の異所的発現が最も強い第6染色体上の突然変異である。また、Hxは、従来の遺伝解析によりshh遺伝子と連鎖することが知られている第5染色体上の突然変異である。これらの突然変異遺伝子のポジショナルクローニングのため,Rim4,Hx両突然変異マウスを他の近交系マウスに交配したF1個体を使って大規模な戻し交配実験を行った。これらの戻し交配パネルを基に突然変異遺伝子の高密度マッピングを行い詳細な遺伝子地図を作製した。この結果、両突然変異遺伝子とも強く連鎖するマイクロサテライトマーカーが見出された。それらのマーカーをプローブとしてマウスYAC,BACライブラリーのスクリーニングを行い陽性クロンを複数個同定した。これらのクロンのゲノムDNAインサートについて末端DNAを調製し、それらをプローブとしたライブラリーの再スクリーニングを繰り返して染色体ウォーキングを行った。この結果、Rim4では、一部にギャップがあるもののおよそ2Mbに及ぶ突然変異遺伝子近傍のYAC contigが完成しており、一方、Hxでは、この突然変異の原因遺伝子が600kbの長さの単一のYACクロンに含まれること、また、このクロンの中には含まれないものの、shh遺伝子がHxの近傍少なくとも1.5Mbの範囲に存在することがわかった。最近、shh遺伝子の四肢における発現調節を担う領域は構造領域の近傍にないことが示されており、Hxがshh遺伝子の翻訳領域から離れたところに位置する転写制御に係わるシス因子上の変異である可能性が示された。(2)lxは後肢のみにshhの異所的発現を呈する第5染色体上の突然変異であるが、その表現型は遺伝的背景による影響を強く受ける。第5染色体のみにMSM系統の染色体を導入したコンソミック系統を用いることにより、遺伝的背景による表現型の修飾の効果を廃した上で、lxを詳細にマッピングする試みを開始した。Tail-short(Ts)は、骨格形成異常を示す優性突然変異である。Tsホモ個体は発生初期段階の桑実期に形態の異常を示し、胚盤胞期にその発生を止める。Tsヘテロ個体は、ホメオティックトランスフォーメーションを含む骨格形成異常に加えて頭部神経管形成異常、多指等が高い頻度で観察される。Ts遺伝子は、第11番染色体の末端側にマップされている。Ts変異の原因遺伝子をポジショナル
クロノロジカル・データの相互引用による国際情勢分析システムの作成-日本をめぐる国際関係を用いた実証研究-

最終年度にあたる今年度は、実用に耐えるデータ・ベース作成とその利用ソフトの開発を重点的に進めた。本共同研究で実用化試験のために用いた「クロノロジカル・データ」は東南アジア諸国連合(ASEAN)を中心とした東南アジア国際関係のデータに限定し、ASEAN合意文書、ASEAN会議年表、ASEAN重要人物プロファイルの3種類のデータ・ベース化を進めた。利用ソフトに関しては、構造計画研究所の協力を得て、「相互引用による国際情勢分析」を行うことのできる検索ソフトとして「バックグラウンダー」(仮称)を開発した。この名称は、国際政治や外国事情の専門家が、特定のテーマについて自身の理解のみならず上司や報道機関に説明する際に、必要な情報を有機的に構成して文書化する作業をサポートする機能(背景-バックグランド-説明のための資料作成)をイメージしたものである。すなわち、このシステムは、ある一定分野に関するクロノロジカル・データを所与のものとして、たとえば突発的事件が発生した場合に、その問題に関連する情報をデータ・ベースから引き出し、立体的に構成して関心のある者に示すものである。今後の課題は、ソフトを真の意味で実用的なものにするために既存データ・ベースとのインターフェイス、カスタマイズされたデータ・ベース作成ソフトとの統合、バックグラウンダーに予測(シミュレーション)機能を追加して背景説明用のみならず政策決定支援ソフトに発展させることなど多岐にわたる。なお、本共同研究としての実用完成品は、ASEAN関連のデータ・ベースに検索機能を付加した初歩的なソフトとして、日本国際問題研究所から『ASEAN資料集成』として出版する予定である。本年度の研究活動は以下のとおりである。(1)クロノロジカル・データのデータベース作成作業の計画を作成し分担作業の拠点として浦野、渡辺、田中、山影を位置づけ、田中以外の共同研究者に作業用のパソコンを配備した。(2)データとして取り敢えず浦野が編集した『アジアアフリカ年表』のデータ入力から開始することにし、学生を使っての入力を浦野と山影が担当している。(3)データベースの基本概念を、田中は構築者側の視点から、渡辺は利用者側の視点から検討を開始した。(4)『アジアアフリカ年表』以外の著作権侵害にあたらない年表データの検索を開始するとともに、他のクロノロジカル・データの概念づくりに着手した。(5)渡辺を領域代表者として行ってきた重点領域研究「戦後日本形成」において作成したデータは、渡辺や田中を代表者とする別の研究でデータベース化を進めているが、そのデータを本研究でも利用する可能性の検討を、渡辺と田中を中心に開始した。このように本年度は初年度のため、昨年度までのさまざまな研究活動を、本研究課題のために統合するための準備作業が中心となった。3年計画で進められているので、ほぼ順調な活動と言えよう。本研究は、日本の周囲の国際社会において日々生起する事象の中から、事象間の相互関係に着目して意味ある事象を析出し、その構造を明示化することにより、国際情勢の理解と分析に資するデータ・ベース活用ソフトウェアの開発・実用化をめざしている。第2年度にあたる本年度は、データベース用の資料収集とデータ入力を並行しておこなった。具体的には、分担研究者のひとりである浦野が中心となり、彼が刊行した『アジア・アフリカ年表』(全3巻)の入力を進めた。これは、1945年から1979年までを扱っている。同時に、やはり浦野が中心となり、同書がカバーしてない1980年代以降の資料の収集も進めた。本研究は、重点領域研究「戦後日本形成」プロジェクトにおけるデータベース化作業を一部発展させたものであるので、それとの整合性を持たせるため、そこで用いた各種資料の80年以降の部分を材料にしている。また、年表型以外のクロノロジカル・データの検討と収集作業も開始した。材料としては、第1に浦野の収集している各種資料(特に、国際関係政治社会資料大系)、第2に山影が重点領域研究「総合的地域研究」プロジェクトの一環としてデータベース化を進めているASEAN基本文書を活用することを検討している。第3に、データベース活用のためのソフトウェア開発に関しては、分担研究者のひとりである田中が代表者として進めているプロジェクトとの関連性を検討している。すなわち、そこでは演説データベースの開発を進めているが、検索機能に注目し、それが、本研究における複数のファイルの関係づけに利用可能かどうかを探っている。

今後の課題は、ソフトを真の意味で実用的なものにするために既存データ・ベースとのインターフェイス、カスタマイズされたデータ・ベース作成ソフトとの統合、バックグラウンダーに予測(シミュレーション)機能を追加して背景説明用のみならず政策決定支援ソフトに発展させることなど多岐にわたる。なお、本共同研究としての実用完成品は、ASEAN関連のデータ・ベースに検索機能を付加した初歩的なソフトとして、日本国際問題研究所から『ASEAN資料集成』として出版する予定である。
超省電力デバイスに向けた新奇窒化物スキルミオンの創成

スキルミオンは、100 nmのスケールで閉じた渦状の磁気構造であり、スキルミオンの有無の制御の容易さ・低電流駆動という特徴を持つため、次世代スピンメモリー材料として注目されている。本研究では、材料設計自由度の高い窒化物系を対象として、1.新規窒化物スキルミオンの創成、2.優れた物理特性を生かした新規スピンデバイスの実現を目的としている。本期間中は、反応性マグネトロンスパッタ法によるFe1.5X0.5Mo3N( X =Ni, Pd, Pt )薄膜の作製と添加元素Xが電気磁気特性に及ぼす影響を明らかにすることを目的として実験を行った。格子ミスマッチの観点より、サファイヤAl2O3のC面基板を用いて、基板温度と窒素分圧を作製パラメータとして、エピタキシャル成長条件を探索し、以下の結果を得た。1.基板温度と窒素分圧を最適化することにより、全ての添加元素X( X =Ni, Pd, Pt )において、(110)方向に単一成長したエピタキシャル薄膜作製が可能になった。2.電気抵抗の温度依存性の測定から、X = Ni, Ptでは半導体的な挙動を示したが、X = Pdでは金属的な挙動を示した。この時、X = Pdでは330 K付近で磁気転移に相当する挙動が観測された。3. X = Pdの室温における磁気特性の測定により、面内および面直方向において強磁性的なヒステリシス曲線が観測された。バルクの先行研究では、スキルミオン発現の最高温度が225 Kであることが報告されているが、本研究により、Fe1.5Pd0.5Mo3Nエピタキシャル薄膜において室温でスキルミオンが発現することが明らかとなった。本研究では、材料設計自由度の高い窒化物系を対象として、1新規窒化物スキルミオンの創成、2優れた物理特性を生かした新規スピンデバイスの実現を目的としている。本期間中は、Co2Mo3合金ターゲットを用いた反応性マグネトロンスパッタ法によるCo2Mo3N薄膜の作製とその電気磁気特性の評価を行った。格子ミスマッチの観点より、サファイヤAl2O3のR面、およびC面基板を用いて、基板温度と窒素分圧を作製パラメータとして、エピタキシャル成長条件を探索し、以下の結果を得た。1.R面上ではエピタキシャル成長せず、C面では(220)成長および(221)成長を観測した。さらに、基板温度と窒素分圧を最適化することにより、(221)方向に単一成長したエピタキシャル薄膜作製に成功した。2.磁気特性の測定により、室温から77Kの範囲では、強磁性的なヒステリシス曲線は観測されず、磁場に対して直線的な磁化の挙動が観測され、常磁性、あるいは反強磁性的な磁気特性を持つことが分かった。バルクの先行研究との対比から、反強磁性的な磁気特性を有していると推察される。3.電気的特性評価の結果、温度依存性が小さいものの、金属的な比抵抗を有することが分かった。反応性マグネトロンスパッタ法によるCo2Mo3N薄膜の作製において、格子整合基板の選択、基板温度と窒素分圧の最適化により、エピタキシャル成長技術をほぼ確立したので、当初の第一目標は達成したと考えている。一方で、Co2Mo3Nという単一組成のみの薄膜作製に留まっているので、バルクの先行研究で報告されている、電気磁気特性の組成依存性については、今後の課題である。

これまでの結果を踏まえ、確立したCo2Mo3Nエピタキシャル薄膜技術をベースとして、組成を系統的に制御した窒化物薄膜を作製し、薄膜組成が電気磁気特性に及ぼす影響を解明する。具体的には、バルクの先行研究で、スキルミオンの挙動が観測されている(Fe-M)Mo3N系(M=Pd, Pt, Rh等)に対して、本薄膜技術を適用して、(Fe-M)Mo3N系エピタキシャル薄膜の作製を行い、添加元素M(M=Pd, Pt, Rh)がエピタキシャル薄膜の電気磁気特性に及ぼす効果を明らかにする。これらの実験結果を総合して、Mo窒化物系薄膜におけるスキルミオンの挙動を解明し、新奇窒化物スキルミオンのデバイス化への指針を得る。予定していた消耗品の購入を次年度に繰り越したため。
ロドコッカス・エクイ病原遺伝子群(Vap family)の網羅的探索

ロドコッカス・エクイの病原性プラスミドの発見により、本菌の毒力に関する研究が始まり、現在、3つの毒力型が知られている。15-17kDaの毒力関連抗原を菌体表層に発現する強毒株は85-90kbの病原性プラスミドを保有し、20kDa抗原を発現する中等度毒力株は79-100kbの病原性プラスミドを保有する。これらは、GC含量の違いからPathogenicity islandと呼ばれ、毒力関連遺伝子群(Vap family)をコードしている。これらの遺伝子群の由来を、ミミズなど土壌生物から検索した。Rhodococcus equiは、13ヵ月齢の仔馬の化膿性肺炎の原因となるグラム陽性球桿菌である。強毒株は病原性プラスミドを保有し、プラスミド上のpathogenicity island(PAI)にコードされる毒力関連抗原VapAをマクロファージ内で発現することで毒力を示す。VapAの発現は様々な環境因子によって制御されている。PAIにコードされているLysR型の転写制御因子であるvirRと二成分制御系因子のvirSはVapAの発現を制御すると報告されている。VirRはvirSを含むオペロンの転写を正に制御することが報告された。また、VirSはvapAプロモーター活性に必須であることが明らかになっている。本研究では、VirRの機能に着目し、virRの欠損株とその相補株を用いた実験を行った。virR欠損株では培養条件によらず、vapAプロモーター活性が低下した。virR欠損株でVirSを強制発現させたところ、vapAプロモーター活性が上昇した。これより、VirRはVirSを介して間接的にVapAの発現制御を行っている可能性が示唆された。VirRの機能を調べる目的で、VirRの1アミノ基を別のアミノ基に置換した株を複数作製し、VapAの発現への影響を調べた。過去の研究で、同じLysRファミリーに属する他の転写因子において、置換するとタンパク質が恒常的活性化を示した部位のアミノ基に変異を加えた。その結果、VirRの98番目のロイシンをグルタミン酸に置換した株で、培養条件によらずvapAプロモーター活性の著しい上昇がみられた。これより、VirRの構造がpHと温度の両方の制御に関与している可能性が示唆された。本研究では20種類の強毒株病原性プラスミド型を一つのPCR反応系に複数のプライマー対を同時使用するMultiplex PCRを応用し、より簡便で迅速なPCR型別法を開発した。日本の強毒株に存在する90kbI、III、IV、VI、87IIae型を型別するために作成された4種のプライマー対を同時に使用した反応系では6種類のPCR型が出現し、87kbIIcとIId型が2つの特異的PCR型を示し、残り18種類は4種類のPCR型に大別された。欧米型である85kbIVI、87kbI、III、52kb型と日本、韓国型の90kbII、V型を型別するために作成された6種のプライマー対を同時に使用した反応系では10種類のPCR型が出現し、85kbII、V、90kbII、IV、V、52kb型は6つの特異的PCR型を示し、残り14種類は4種類のPCR型に大別された。20種類中8種の病原性プラスミドは1回のMultiplex PCRにより型別可能となった。この開発により、短時間で簡便な強毒株病原性プラスミド型別が可能となったが、大別された中には点変異のみでの相違を含むものがあり、PCR型別は難しいため制限酵素EcoRI等で型別する必要がある。今後、強毒株病原性プラスミドの遺伝子変異部の解析やプライマーの新規構築により本法の改良を進め、ミミズ腸管内から分離される遺伝子の網羅的解析のためのツールとなるように検討したい。研究計画に沿って、概ね順調に進展している。Rhodococcus equiは13ヶ月齢の仔馬に難治性の化膿性肺炎と腸炎を引き起こす、グラム陽性球桿菌である。本菌は、保有する病原性プラスミドにコードされる毒力関連抗原遺伝子群(PAI)の違いにより、VapAを発現する強毒株、VapBを発現する中等度毒力株、病原性を保有しない無毒株に分類される。R.equiの病原性プラスミドは、制限酵素EcoRI等による切断像の違いから、強毒株では22種類、中等度毒力株では33種類に型別することができる。最近の研究で、vapAおよびvapBの両方を持たない第三のR.equi病原性プラスミドであるpVAPNが、アイルランドのウシの化膿性肉芽性縦隔リンパ節病変より分離された。この新型病原性プラスミドpVAPNは、環状構造を持つpVAPAおよびpVAPBとは異なり、直鎖状構造を持つ。しかし、他の2種類のR.equi病原性プラスミド同様の機能が推察されているが、宿主特異性やプラスミドの種類などの詳細は未だ未知である。

2015年に国内の食肉衛生検査所に一般畜として搬入され、食肉検査後に保留された19ヵ月齢の雌牛に内臓検査にて多発性の腫瘤や肺門や肝門リンパ節の腫大、肝炎が観察され、腫大したリンパ節や肝臓及び腎臓の実質臓器からR.equiが分離され、新たなpVAPNを保有する株であることが国内で初めて発見された。これに加えてこれまでPCRでvapA、vapB陰性であったことから無毒株と判断していた海外のネコ由来14株、ヒト由来23株および牛由来24株についてvapNのPCRを行ったところヒト由来1株(4.3%)、牛由来10株で陽性を示し、これまで知られていた強毒株、中等度毒力株の環状の病原性プラスミド(pVAPA, pVAPB)に加えて、直鎖状病原性プラスミドpVAPNを保有する本菌が我が国並びに世界各国で発生していたことが明らかとなった。ロドコッカス・エクイの病原性プラスミドの発見により、本菌の毒力に関する研究が始まり、現在、3つの毒力型が知られている。15-17kDaの毒力関連抗原を菌体表層に発現する強毒株は85-90kbの病原性プラスミドを保有し、20kDa抗原を発現する中等度毒力株は79-100kbの病原性プラスミドを保有する。これらは、GC含量の違いからPathogenicity islandと呼ばれ、毒力関連遺伝子群(Vap family)をコードしている。これらの遺伝子群の由来を、ミミズなど土壌生物から検索した。本研究は、強毒株が保有する病原性プラスミドpathogenicity island獲得過程を明らかにするもので、現在18種類存在する強毒株の病原性プラスミドの比較検討と機能解析を同時に行っている。研究成果は機能解析について述べているが、病原性プラスミドの比較検討も順調に進展している。28年度が最終年度であるため、記入しない。獣医衛生学平成27年度の実験計画に沿って、研究を進める。現時点では、遺伝子機能解析も順調に進展している。病原性獲得の解析のため環境動物腸内フローラ解析を進める。
トノサマバッタの相変異の生理生態学的研究:群生相を作る

トノサマバッタは、個体群密度の変化に反応して相変異を示し、形態や行動形質を変化させる。典型的な孤独相から群生相への変化には、数世代かかると考えられている。その仕組みを明らかにするために、トノサマバッタの幼虫と成虫を様々な条件で飼育し、形態や行動への影響を詳しく調べた。その結果、トノサマバッタの相の変化には、親世代の成虫期と子世代の幼虫期の密度が重要であることがわかった。トノサマバッタを様々な条件で飼育し、典型的な群生相の特徴と比較する実験を開始した。大発生時または孤独相の野外個体の形態的特徴が判明している中国新疆と日本の系統を用いた。30°Cにて、ケージ当たり11000匹の孵化幼虫を飼育し、羽化後成虫的形態を測定し相変異研究で古典的に用いられているFC値(後腿節長/頭幅)とEF値(前翅長/後腿節長)を求め比較した。1000匹区では死亡率が80%を超えたため処分した。FC値は孤独相で大きく群生相で小さくなることが知られており、一方EFは群生相で小さくなることが知られている。予想通り、1100匹の間で、密度依存的にFC値は減少し、EF値は増加した。しかし、それらの値は、野外における大発生時の値と比べると孤独相的であった。次に、密度を一定(ケージ当たり100匹)にして温度の影響を調べたところ、高温区では夜間に餌が枯渇して死亡率が高くなった。そこで、夜間(12時間)の温度を17°Cにし、昼間(12時間)の温度を様々に設定して形態への影響を調べた。夜間の温度を30、35、38、41°Cにして飼育したところ、高温又は温度変化それ自体は群生相を生じさせる要因としては十分ではないことがわかった。来年度は、飼育方法を工夫して更により高い密度の影響を調査する必要がある。沖縄系統を用いて、形態変化に及ぼす世代の影響についての実験を開始した。世代と効果と飼育条件によるバラツキを区別するために、孤独相(1匹飼育)系統から毎世代群生相条件で飼育する区を作出し、孤独相、群生飼育1世代、2世代、3世代目の幼虫を同時に飼育する実験を準備中である。幼虫の活動性を孤独相と群生相で比較するために60個体の歩行活動を同時に記録できるアクトグラフを作成した。来年度はこの装置で日周リズム、サカーディアンリズムの有無、餌の影響等を調べ、相の違いによる行動の変化に関する実験を行う予定である。バックは、生息密度に応じて形態を変化させるが、孤独相(単独飼育)条件で得られた幼虫を群生相(集団条件)条件で飼育すると成虫の後腿節長(F)と頭幅(C)との割合(F/C値)が減少する。しかし、その変化は小さく、典型的な群生相の値を示すには、その後数世代連続して混み合い条件を経験する必要があると言われている。この現象は総蓄積と呼ばれるが、それを支持する実験的証拠は十分説得力のあるとは言えない。そこで、トノサマバッタにそのような総蓄積が見られるのかどうかを調べた。その結果、F/C値は、群生相条件でも孤独相条件でも、2世代連続して変化するがその後、有意な変化は見られないことが分かった。また、サバクトビバッタでも似たような結果が得られた。サバクトビバックでは、総蓄積の機構として、親世代の混み合いが子(卵と孵化幼虫)の体の大きさを決定し、子の体の大きさが成虫時のF/C値と相関があることが分かった。トノサマバッタでは、孵化幼虫の体の違いだけでは説明ができない部分もあり、更に検討が必要である。つまり、同じ範囲の体重にある群生相と孤独相孵化幼虫を、同じ条件で飼育した場合、群生相幼虫の方が孤独相幼虫よりF/C値が低くかった。アクトグラフを用いた活動性の比較では、孵化幼虫を用いて母性効果の検証を行った。信頼できる測定条件を確保するために、孵化幼虫の日齢、餌の有無、湿度、照度、バックグランドの色などの影響を調べ、検査法を確立した。活動性には母性効果が孵化幼虫の活動性に検出された。測定時間とともに活動と二つの相の間の活動レベルの差は変化することが分かった。今回は、孵化時間の影響を無くすために照明は全明条件で行ったが、明暗周期(光周期)下での活動性の日周リズムやサカーディアンリズムの関与についても明らかにする予定である。尚、アクトグラフによる活動性の結果をまとめた論文は、英国雑誌Physiological Entomologyに先日受理された。

また、比較のために、同様に相変異を示すサバクトビバッタでも実験を行った。サバクトビバッタでは、親世代の密度が、子(孵化幼虫)の体サイズを決定し、それが直接成虫時の形態との高い相関を示すことがわかった。成虫の形態(後腿節長/頭幅の比)に関する限り、相の変化は2世代で完了した。一方トノサマバッタでは、親世代の密度が影響する子の1齢期(孵化幼虫)の体サイズと、その世代が成虫になった時の相に依存的な形態との間には、高い相関が見られなかった。トノサマバッタの1齢幼虫の歩行活動レベルをアクトグラフで調べた結果、親の成虫期の密度によって、孵化直後の活動に違いが見られた。孵化後2日間を単独または集団で飼育すると、活動レベルは集団で飼育した場合の方が高く、特に親世代も集団条件にさらされた群生相幼虫の活動レベルが高かった。同様に相変異を示すサバクトビバッタとの比較研究により、二種の間には顕著な違いが存在することが判明した。これらの結果から、バッタにおける相に依存した形態的、行動的形質は、親と子世代の混み合いが重要な役割を果たしていることが明らかとなった。
中井家所蔵資料の整理と公儀寺社造営における中井家の役割に関する研究

中井家所蔵資料を整理して7, 566点の目録を作成し,その内の5, 195点が, 2011年に国の重要文化財に指定された。大工頭の中井家は,江戸時代を通じて五畿内・近江の6か国に所在する由緒ある寺社の造営に関与した。中井家は,城郭や禁裏の造営では6か国の大工組を介して職人を召集して施工したが,公儀寺社造営である四天王寺と住吉大社では,配下の棟梁を現場に派遣して設計・見積を担当させ,施工は入札で選ばれた大工が行った。京都大工頭中井家は、江戸時代に畿内及び近江の6カ国の大工を支配し、同国内における公儀造営の設計・施工を家職としていた。近世を通じて上方の建築界を主導した中井家の解明は、近世建築史の重要なし着せたテーマである。本研究計画では、中井家の当主である中井正知氏の所蔵資料6,500点(約3,900点は新出資料)の整理と編集を行い、中井家2代目以降の建築作品を抽出し、とりわけ寺社における公儀作事の実態を中井家と中井役所、寺社、大工組の3つの側面から解明することを目的としている。【A】中井家所蔵資料の整理(1)中井家所蔵資料の整理:資料のタイトルを付し、データ入力して、仮目録を作成した。(2)中井家所蔵資料の撮影:整理した資料のうち、絵図、作事関係文書、中井役所関係文書を抽出し、写真撮影を行った。【B】中井家歴代の事績と公儀寺社造営における中井家の役割に関する考察(1)中井家所蔵資料以外の文献史料の検索・収集:中井家が関与した寺社作事のうち、賀茂別雷神社(遷宮と造営関係分)、東寺、高野山、長谷寺、多田神社、四天王寺(京都府総合委資料館所蔵)などから必要な史料を検索し、次年度の写真撮影の準備を行った。(2)中井家歴代の事績に関する研究:中井家系譜から、公儀寺社造営に関する記事を収集、中井家歴代の詳細な事績を作成した。(3)中井役所の棟梁衆の組織と役割に関する研究:中井家所蔵資料から、中井家配下の棟梁組織、内部の役割分担、公儀造営の建物の企画、設計図の作成、現場監理の方法などに関する史料を収集した。(4)寺社側の対応に関する研究:寺社文書から、公儀造営における寺社方の関連史料を検索した。(5)公儀造営に動員された大工組に関する研究:各地の大工組が所蔵する関係文書から、公儀造営の動員に関する史料を収集した。近世を通じて上方の建築界を主導した中井家の解明は、近世建築史の重要な研究テーマである。中井家所蔵資料の整理については、前年度に作成した中井家文書の仮目録を再吟味して、正式な目録を作成し、資料別に最終番号を付し、採寸を行い、木製の棚に収納した。資料整理の場所は、本計画調書の研究代表者が館長をつとめる、大阪市立住まいのミュージアムの協力を得た。また、中井家関係資料の中から、作事関係資料や中井役所の記録類など、前年度に未撮影であった資料の写真撮影を行った。中井家歴代の事績については、中井家所蔵資料の目録から基礎資料を収集し、中井家歴代のうち、2代正侶に関する事績を作成した。公儀寺社造営における中井家の役割に関する考察については、中井家所蔵資料の目録から必要なデータを収集した。また、京都府総合資料館所蔵中井家文書と上賀茂神社文書から、寺院・神社関係の建築指図・造営関係文書を収集し、中井家の造営に関係する古書類を購入した。さらに、昨年末に国宝に指定され、初代中井正清の最晩年の作品である久能山東照宮本殿・拝殿の現地調査を行った。京都大工頭の中井家は、江戸時代に五畿内及び近江の6か国の大工を支配し、同国内における公儀造営の設計・施工を家職としていた。近世を通して上方の建築界を主導した中井家の解明は、近世建築史の重要な研究テーマである。本研究計画では、中井家の当主である中井正知氏の所蔵資料を整理・編集し、その成果に基づいて、寺社における公儀作事の実態を、中井家と中井役所、寺社方、大工組の3つの側面から解明することを目的としている。

中井家資料の整理については、前年度に作成した7,567点の資料目録をもとに、文化庁が編集した目録によって、平成22年6月に「大工頭中井家関係資料」の名称で、5,195点が国の重要文化財(歴史資料)に指定され、研究代表者が館長をつとめる大阪市立住まいのミュージアムに収蔵庫に保管されている。公儀寺社作事については、大坂の陣後に復興された大坂の寺社について、四天王寺と住吉大社を事例に検討した。その結果、大坂の陣後の元和年間に復興された四天王寺の伽藍は、中井家2代目の正侶と後見人の中井利次が差配し、配下の大工棟梁を派遣したことが明らかになった。また住吉大社に関しては、明暦2年の遷宮で、中井家3代目の中井正知が大工を勤め、配下の棟梁・茂左衛門を大坂に派遣し、設計・見積を担当させ、実際の工事は大坂の大工・新左衛門が行っている。宝永6年は大坂御大工の山村与助が大工を勤めており、与助は翌年に中井家4代目の正豊を名乗って、中井家を相続している。すなわち、江戸時代初期の大坂の代表的な建物、大坂城、四天王寺、住吉大社の建築は、中井家の2代正侶、3代正知、4代正豊が深く関与していたことが明らかになった。
Phs1ファミリーによるホスファチジルイノシトールの細胞内輸送機構の解明

酵母Phs1は極長鎖脂肪酸の伸長に関わる3-ヒドロキシアシルCoA脱水酵素である。Phs1は脂質代謝に関わる因子や小胞輸送因子と相互作用し,スフィンゴ脂質合成やホスファチジルイノシトール(PI)輸送を調節していることを明らかにした。Phs1の哺乳類ホモログは未同定であったが,我々はHACD1-4を同定することに成功した。また,哺乳類の極長鎖脂肪酸伸長経路の律速段階を触媒する酵素の基質特異性を明らかにすることにより,極長鎖脂肪酸伸長経路の全貌を解明した。さらに,極長鎖脂肪酸伸長と疾患との関わりについても知見を得た。極長鎖脂肪酸は炭素数20以上の脂肪酸を指し,スフィンゴ脂質の構成成分あるいはプロスタグランジン等の生理活性脂質の前駆体として,炎症,皮膚機能,網膜機能など多彩な生理機能を有する。極長鎖脂肪酸の生合成過程では,アシルCoAとマルニルCoAが縮合・還元・脱水・還元の4ステップを1サイクルとする伸張サイクルにより,炭素数2ずつ伸張したアシルCoAが生成される。これまで哺乳類においてこの3段階目を触媒する3-ヒドロキシアシルCoA脱水酵素が未同定であった。我々は近年酵母において同定されたPhs1とのホモロジーより,これまで機能が未知であったPTPLA, PTPLB, PTPLAd1, PTPLAd2の4つの互いに相同性を示すタンパク質が哺乳類における3-ヒドロキシアシルCoA脱水酵素である可能性を考え,解析を行ない,実際これらが3-ヒドロキシアシルCoA脱水酵素として機能することを実証した。また,これらの細胞内局在,組織特異的発現,他の伸張サイクルの酵素との相互作用, 3-ヒドロキシパルミトイルCoAに対するK_m値/V_<max>値の測定等も行なった。酵母Phs1の発現をシャットオフするとスフィンゴ脂質の代謝に大きな影響を与える。酵母の複合スフィンゴ脂質の合成ではホスファチジルイノシトールからスフィンゴ脂質骨格のセラミドにホスホイノシトールが転移されるが,ホスファチジルイノシトールの小胞体からゴルジ体への輸送が損なわれていることがその原因であった。このことは極長鎖脂肪酸の合成とスフィンゴ脂質代謝・脂質輸送が共役していることを示唆していた。また, Phs1の膜トポロジー,活性中心残基の同定にも成功した。Phs1ファミリーは,極長鎖脂肪酸伸長サイクルの3段階目を触媒する酵素である。極長鎖脂肪酸合成が低下すると,ホスファチジルイノシトールやスフィンゴ脂質の細胞内輸送や代謝が影響を受けることを我々は見出してきた。しかし,この分子機構を明らかにするためには,これまで詳細が不明であった極長鎖脂肪酸伸長サイクルの各ステップの因子の酵素学的性質の詳細な解析が必須であった。そこで本年度の研究では,このサイクルの律速段階を触媒する縮合酵素の解析を行なった。我々はin vitroでの生化学的な解析から哺乳類に7つ存在する縮合酵素(ELOVL1-7)の基質特異性の検討を行い,それぞれの酵素が鎖長・不飽和度の異なるアシルCoAに対して特徴的な基質特異性を示すことを明らかにし,極長鎖脂肪酸伸長経路の全体像を解明した。また,それぞれの縮合酵素の組織特異的な発現パターンも明らかにした。ELOVL1は飽和の極長鎖脂肪酸合成において中心的な役割を果たすことを見出したが,さらに我々はこの飽和極長鎖脂肪酸を基質とするセラミド合成酵素CerS2がELOVL1と相互作用をして活性を調節することを明らかにした。また,固体レベルで極長鎖脂肪酸の合成不全がホスファチジルイノシトールやスフィンゴ脂質の細胞内輸送・代謝に影響を与えるか調べる目的でELOVL1遺伝子及び哺乳類Phs1ファミリ-HACD1遺伝子のノックアウトマウスの作成を開始した。ELOVL1のノックアウトマウスは致死となることが予測されたので,コンディショナルノックアウトマウスの作成を行なっている。現在までにこれらのジーンターゲッティング用のコンストラクトの作成が完了している。Phs1ファミリーは真核生物において保存された3-ヒドロキシアシルCoA脱水酵素であり,極長鎖脂肪酸の伸長ステップの3段階目の反応を触媒する。極長鎖脂肪酸は生体内で多様な機能を有しているため,その合成不全はスフィンゴ脂質やホスファチジルイノシトール等の脂質代謝や輸送に異常を生じ,様々な疾患へと結びつく。遺伝性不整脈源性右室異形性患者においてPhs1ファミリーの哺乳類ホモログであるHACD1遺伝子に変異が観察されたことを踏まえ,我々は変異型HACD1タンパク質の生化学的な解析を行なった。また,極長鎖脂肪酸伸長サイクルの全体像の解明がPhs1ファミリータンパク質の機能解明にも結びつくと考え,極長鎖脂肪酸伸長反応の律速段階である縮合酵素(ELOVL1-7)に関する解析を行ない,それぞれの酵素の基質特異性の解明とスフィンゴ脂質合成との調節機構を明らかにした。また,

黄斑変性疾患である3型シュタルガルト病の原因遺伝子として知られるELOVL4のコードする変異タンパク質が他の縮合酵素とヘテロオリゴマーを形成し,この相互作用が病態へ関与する可能性を示した。さらにELOVLやHACDの精製は既に完了し,プロテオリポソームへの再構成系を用いた活性測定を現在行なっているところである。また,HACD1, ELOVL1のノックアウトマウス作成に関しては,HACD1がES細胞での相同組み替え,ELOVL1についてはヘテロノックアウトマウスの作成が完了し,今後解析していく予定である。
南方熊楠・土宜法龍往復書簡の研究

平成21-22年度の研究課題は、「南方熊楠・土宜法龍往復書簡の研究」である。近代を代表する植物学、博物学の研究者に数えあげられる南方熊楠(1867-1941)は、長年にわたって真言僧、土宜法龍に向けて多くの手紙を書いた。手紙に書き記された内容は、仏教論を皮切りとして、科学論、比較宗教論など様々な話題が豊富に盛り込まれており、熊楠の思想を知るための第一級の資料であると熊楠研究者等によって評価されている。平成22年度は、前年度に刊行された奥山直司・雲藤等・神田英昭編『高山寺蔵南方熊楠書翰-土宜法龍宛1893-1922』(藤原書店)を出版したことを土台にして研究を進めた。まず本書の編集作業を通じて得た研究成果をもとに、研究発表をおこなった。発表の場は、京都・宗教系大学院連合主催院生論文発表会(題目:「南方マンダラの新解釈-高山寺資料を中心に」)、説話文学会・仏教文学会合同12月例会シンポジウム「南方熊楠の説話と仏教-仏性・性・身体」(「真言密教-南方熊楠と真言僧との交流」)である。一方で土宜法龍に関する基礎的研究を進めた。高山寺に所蔵される土宜の米欧日記の解読並びに翻刻をおこない、さらにパリのギメ美術館等で調査をおこなった。その成果の一端は、国際日本文化研究センターの共同研究会「仏教からみた前近代と近代」(研究代表:末木文美士)において報告(「近代仏教史上における土宜法龍-主に1893-1894年における世界一周旅行を中心に」)した。また本年度は、国際日本文化研究センター共同研究員に加わることができた。研究実施計画に沿って、2004年に栂尾山高山寺で発見された南方熊楠から土宜法龍に宛てられた新発見の書翰を出版すべく、奥山直司氏(高野山大学教授)、雲藤等氏(早稲田大学博士課程)と共に原文から翻刻・校訂し、その翻刻原稿に注を付す作業を遂行した。その成果は2010年3月に、奥山直司・雲藤等・神田英昭編『高山寺蔵南方熊楠宛書翰-土宜法龍宛1893-1922』(藤原書店)として結実した(下記第1図書)。本書に収録された南方熊楠から土宜法龍に宛てられた書翰は全部で43通である。今までに知られていた熊楠から法龍に宛てた書翰は全部で29通であるから、それよりも2倍近い量の書翰が新たに紹介されたことになる。本書の刊行後、マスコミによる反響は大きなものであった。書評等に本書を取り上げたメディアは、読売新聞、産経新聞、中外日報、高野山時報であった。このことから本書は、熊楠の思想研究における資料として重要な意義を有すると考えられる。その他に熊楠の研究に関する基礎研究として、植物学における高弟である小畔四郎との往復書簡の編纂グループに加わり、2009年6月に刊行した(下記第2図書)。また編集作業から得た知見をもとに、密教研究会学術大会(高野山大学)、仏教から見た前近代と近代(国際日本文化研究センター)において研究発表並びにコメント発言を行った。研究論文では、熊楠が真言密教のマンダラの思想をどのように吸収していったのか、上述の新出資料の解読による成果を踏まえて考察し、『高野山大学大学院紀要』に寄稿した。(下記第1論文)そして熊楠と法龍の往復書簡を多角的に分析する方法論を学ぶため、他の研究機関との積極的な学術交流を行った。その活動の第一に拳げられるのは、国際日本文化研究センター特別共同利用研究員制度を利用し、同センター准教授、磯前順一氏のもとで研究指導を受けたことである。その研究指導は、主に同志社大学、立命館大学、国際日本文化研究センターにおいて行われ、主に宗教学の理論的枠組みについて学んだ。その成果は、平成22年度に国際日本文化研究センター共同研究員として採用されることに連なる。

その成果の一端は、国際日本文化研究センターの共同研究会「仏教からみた前近代と近代」(研究代表:末木文美士)において報告(「近代仏教史上における土宜法龍-主に1893-1894年における世界一周旅行を中心に」)した。また本年度は、国際日本文化研究センター共同研究員に加わることができた。
スマトラ巨大地震発生後のスマトラ断層：余効変動の収束と新たな歪み蓄積過程の解明

2004年スマトラ島沖巨大地震に見舞われたインドネシア・スマトラ島アチェ州において,GPS連続及び臨時観測により,地震後の余効変動の収束過程を観測した.さらに,内陸長大横ずれ断層であるスマトラ断層の地震発生ポテンシャル評価を行うため,GPS観測や合成開口レーダー干渉解析に加え,衛星ステレオ画像判読による活断層分布図作成,変動地形の現地調査,断層クリープ測定,トレンチ掘削調査などの変動地形学的研究を併せて実施した.これらにより,異なる時間スケールでのスマトラ断層の活動様式を推定した.本研究の目的は,インドネシア国スマトラ島北西部においてGPS観測,地震観測,変動地形調査を実施し,2004年スマトラ島沖超巨大地震に伴う余効変動の収束過程と,内陸のスマトラ断層における歪み蓄積過程を解明することである.4年計画の初年度である今年度は,まず2012年7月に2名が渡航し,現地シアクアラ大学研究者との打ち合わせと,2005年以降に我々のグループが設置した現地GPS観測網の整備を行った.その後11月に5名が渡航し,約10日間に渡ってGPSによる地殻変動観測と変動地形調査を実施した.残念ながら,日本から送った地震計の通関手続きが長引き,11月の観測には利用できなかった.2013年1月に観測網内でM5.9の地震が発生し,数名の死者が出た.3月に3名が渡航し,地震計4台を設置して連続観測を開始するとともに,被害調査とGPSデータの収集を行った.今年度はほぼ計画通りの海外学術調査が実施できた.現地調査以外の面では,2005年以降のGPS観測成果を解析し,2004年スマトラ島沖地震に伴う余効変動,プレート沈み込みによる圧縮変形および内陸スマトラ断層における歪み蓄積過程を分離し,スマトラ断層の固着/すべり分布を議論した.結果をJournal of Geophysical Researchに計16ページの論文として発表した.ただし,データの空間密度と時間長に大きな制約がある状態での暫定的な結果であり,4年間の本研究によって問題の解決を図りたい.また,別経費にてシアクアラ大学研究者1名を2012年9月に日本に招聘し,名古屋大学と高知大学において,約3週間に渡りデータ処理とモデリング技術の教授および今後の研究推進に関する議論を行った.本研究の目的は,インドネシア国スマトラ島北西部においてGPS観測,地震観測,変動地形調査を実施し,2004年スマトラ島沖超巨大地震に伴う余効変動の収束過程と,内陸スマトラ断層における新たなひずみ蓄積過程を解明することである.4年計画の2年目にあたる平成25年度は,まず6-7月に4名によりGPS観測を実施した.観測期間中の7月2日に観測網内でM6.1の直下型地震が発生し,震源近傍では建物の倒壊や大規模地すべりで死者が発生した.幸い観測チームに被害はなく,現地の大学研究者と合同で緊急観測を実施した.これに先立つ平成25年1月21日にも近傍でM6.1の被害地震が発生し,スマトラ断層の活動活発化が懸念され,本研究の果たす重要性を再認識した.9月には3名により地震データ回収と変動地形調査を行い,11月には2名により断層クリープ変位の第1回測定を実施した.さらに,平成26年2月には2名により再度地震データの回収を行った.観測データを詳細に解析した結果,2つのM6.1の地震のうち1月21日のものはスマトラ断層を震源とする右横ずれ地震で,7月2日のものは共役断層を震源とする左横ずれ地震であることが判明した.この地域で共役断層の存在はこれまで知られておらず,今回が初めての発見である.その成果を12月にアメリカ地球物理学連合2014年秋季大会(サンフランシスコ市)で発表した.また,2004年スマトラ沖地震の発生直後から実施している長期の余効変動観測を基に,プレート境界震源域の余効すべりと広域の地殻の粘弾性緩和の両方に起因する余効変動モデルを提唱し,Journal of Asian Earth Sciences誌に発表した.本研究の目的は,インドネシア国スマトラ島北西部においてGPS観測,地震観測,変動地形調査を実施し,2004年スマトラ沖超巨大地震に伴う余効変動の収束過程と,内陸スマトラ断層における新たなひずみ蓄積過程を解明することである.4年計画の3年目にあたる平成26年度は,9月後半に日本から6名が渡航し,5班に分かれてそれぞれの観測を突施した.観測には現地シアクアラ大学の全面的協力を得た.これらは,前年度までの作業を継続するものである.連続観測を実施しているGPS点7点および地震観測点4点は,いずれも高温多湿による計器の劣化が甚だしい.加えて,電源関係のトラブルが頻発し,データの欠落が多く認められた.本研究の残り期間と経費から,根本的な解決を施すことは困難である.そこで,GPS観測点4点は連続観測をあきらめ,他の15点の臨時観測点と同様の観測モードに変更した.地震観測点4点には大きな変更はないが,機器の保守とデータ回収をより頻繁に行うこととし,3月に2名が再度現地を訪問した.本研究の目的は,インドネシア国スマトラ島北西部においてGPS観測,地震観測,変動地形調査を実施し,2004年スマトラ沖超巨大地震に伴う余効変動の収束過程と,内陸スマトラ断層における新たなひずみ蓄積過程を解明することである.平成27年度は6月前半に1名が変動地形調査を,9月後半に4名がGPS観測と地震観測を実施した.観測には現地シアクアラ大学の全面的協力を得た.

これらは前年度までの作業を継続するものであるが,今年は最終年度の4年目にあたることもあり,観測網の一部の整理を行った.2005年以降GPS連続観測を継続していたシアクアラ大学構内の観測点が校舎建替工事のため移転を余儀なくされ,別の建物に新観測点を設営した.スマトラ断層沿いに点在するその他の10点のGPS臨時観測点においては,従来通りそれぞれ2-3日間の観測を行った.3点で実施していた地震観測に関しては,現地機関の地震観測網の充実に伴いその役目を終えたと判断し,機材を撤収した.変動地形調査においては,1ヶ所でトレンチ掘削調査を実施し,過去3回の断層活動履歴を認定した.また2ヶ所においてクリープ測定を行い,年間数mmの断層変位を確認した.地殻変動の進行や地震活動の推移,トレンチ調査で採集した試料の年代測定など,研究課題はまだ残されているものの,最終年度としての研究のとりまとめを行った.国際測地学会が発行するSymposia Seriesに本研究全体に関する内容を紹介した論文が平成27年10月にオンライン発行となった.また,スマトラ断層のクリープ測定結果を日本地質学会(9月,長野市)で発表した.さらに,スマトラ断層に連続して発生した地震のメカニズムをGPS観測に基づいて解析し,Earth Planets, and Space誌に投稿した(平成28年4月にオンライン発行となった).2004年スマトラ島沖巨大地震に見舞われたインドネシア・スマトラ島アチェ州において,GPS連続及び臨時観測により,地震後の余効変動の収束過程を観測した.さらに,内陸長大横ずれ断層であるスマトラ断層の地震発生ポテンシャル評価を行うため,GPS観測や合成開口レーダー干渉解析に加え,衛星ステレオ画像判読による活断層分布図作成,変動地形の現地調査,断層クリープ測定,トレンチ掘削調査などの変動地形学的研究を併せて実施した.これらにより,異なる時間スケールでのスマトラ断層の活動様式を推定した.連続観測データの一部欠落はあるものの,地殻変動解析のための詳細な変位データの蓄積は順調に進んでいる.変動地形調査による活動履歴解明も着実に成果が得られている.暫定的ではあるが,これらをまとめた成果を2つの国際シンポジウムで発表し,投稿論文も受理された.27年度が最終年度であるため、記入しない。測地学一部の連続観測を臨時観測に移行したが,継続的なデータの取得は何より重要であり,GPS,地震,断層クリープなどの観測そのものは今後も継続する.次年度の最終まとめに向け,断層すべり分布の推定と,断層活動履歴決定のためのトレンチ調査を進める.2012年7月に2名による予備調査を,同11月に5名によるGPS観測と変動地形調査を,2013年1月に3月に3名によるGPS観測と地震計設置を行い,当初の計画をほぼ予定通り遂行できた.また,これまでの研究成果を総括し,Journal of GeophysicalResearchに論文を発表した.GPS観測によりスマトラ断層震源近傍の地殻変動場を決定することができ,共役断層の新たな発見につながった.また,変動地形調査を複数個所で実施し,詳細な活動履歴を求めることができた.断層クリープ変位の直接測定という新たな挑戦も開始した.一方,地震観測は継続できているものの,担当する研究分担者が12月に急死してしまったため,データの解析が十分に進んでいない.27年度が最終年度であるため、記入しない。
可溶性のCD40リガンドの前立腺癌治療への応用

本来Bリンパ球系の表面マーカーであるCD40を介したsignalが、ヒト悪性リンパ腫細胞の増殖を抑制する事が知られているこのが,我々はCD40刺激がヒト前立腺癌細胞の増殖も抑制するのではないかと考え、以下の実験を施行した.ヒト前立腺癌細胞株であるPC3及びLNCaPの細胞表面でのCD40の発現を,抗CD40抗体を用いて、flow cytometryにて検索した.これらがCD40陽性である事を確認した後,遺伝子組み替えにより作られた可溶性CD40ligandを用いて,MTT assayにてその抗腫瘍効果を検索した.PC3及びLNCaPは可溶性CD40ligandとともに培養する事により,その増殖が抑制された.このメカニズムを解明するため,現在TUNEL assay,電顕等にてアポプトーシスの存在の有無を検討中である.またin vivo studyのための基礎実験として,我々はこの細胞株の,severe combined immunodeficiensy(SCID)mouseへの移植実験を行った.まず,5X10^6個のPC3をマウスの腹腔内に注入したところ,第25-30日目で腹腔内播種または肝転移にて死亡した.これらの担癌マウスを,腫瘍接種3日後より可溶性CD40ligand10μgにて治療したところ,コントロール群に比べ,有意な生存期間の延長が得られた.今後はこのin vivoのデータを追試し,確認した後に論文とする予定である.本来Bリンパ球系の表面マーカーであるCD40を介したsignalが、ヒト悪性リンパ腫細胞の増殖を抑制する事が知られているこのが,我々はCD40刺激がヒト前立腺癌細胞の増殖も抑制するのではないかと考え、以下の実験を施行した.ヒト前立腺癌細胞株であるPC3及びLNCaPの細胞表面でのCD40の発現を,抗CD40抗体を用いて、flow cytometryにて検索した.これらがCD40陽性である事を確認した後,遺伝子組み替えにより作られた可溶性CD40ligandを用いて,MTT assayにてその抗腫瘍効果を検索した.PC3及びLNCaPは可溶性CD40ligandとともに培養する事により,その増殖が抑制された.このメカニズムを解明するため,現在TUNEL assay,電顕等にてアポプトーシスの存在の有無を検討中である.またin vivo studyのための基礎実験として,我々はこの細胞株の,severe combined immunodeficiensy(SCID)mouseへの移植実験を行った.まず,5X10^6個のPC3をマウスの腹腔内に注入したところ,第25-30日目で腹腔内播種または肝転移にて死亡した.これらの担癌マウスを,腫瘍接種3日後より可溶性CD40ligand10μgにて治療したところ,コントロール群に比べ,有意な生存期間の延長が得られた.今後はこのin vivoのデータを追試し,確認した後に論文とする予定である.