hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
生体内小分子によって成熟が制御されるヒトｍｉＲＮＡ前駆体の探索及び機能解析

本研究では、研究開始以前に構築したヒトsmall non-coding RNAライブラリーを用いてSELEX法を行い、小分子に結合するmiRNA前駆体を探索する事を目的としている。これまでの研究において、S-アデノシルホモシステイン(SAH)及び葉酸をターゲットとしたセレクションを行い、各々のターゲット分子に結合するRNAを発見した。前年度の研究においてSAHに結合するRNAはヒト培養細胞で発現が確認できなかったため、本年度は葉酸に結合するmiRNA前駆体(pre-miRNA)の解析を行った。Pre-miRNAと葉酸の結合定数の測定を、BLI (Bio-layer Interferometry)法によって行った。葉酸をBLI測定用のセンサー表面に共有結合によって固定化し、in vitro転写合成したpre-miRNAをアナライトとして用いることで、結合定数を測定した。その結果、結合定数は約3μMとなった。様々な変異体pre-miRNAを転写合成し、それらの葉酸に対する結合定数を同様の手法を用いて測定した。その結果、pre-miRNAのループ部分の配列が葉酸への結合に必須であることが判明した。この配列はpre-miRNAの前駆体であるpri-miRNAにも存在しているため、pre-/pri-miRNAの両方が葉酸に結合すると考えられる。さらにこの葉酸結合配列は他のmiRNA前駆体には存在しないため、本研究で特定したmiRNA前駆体のみが葉酸に結合することが示唆される。続いてヒト培養細胞を用いた実験を行った。ヒト培養細胞の培地中に葉酸を加え、miRNAの発現変化をTaqmanプローブを用いた定量PCR法によって測定した。その結果、葉酸を50μM加えることでmiRNAの発現量が8割程度に低下することが分かった。ヒト培養細胞を用いたより詳細な機能解析を現在行っている。26年度が最終年度であるため、記入しない。最初にターゲット小分子の第一候補であるS-アデノシルホモシステインを、NHS基が表面にある磁気ビーズにアミノ基を介して固定化し、SELEX法を行った。6ラウンドのセレクションの結果、1種類の新規のncRNA配列が得られ、SAH-1と命名した。ノーザンプロッティング、q-PCR法によって、SAH-1はHeLa S3細胞に発現していることが確認された。またIn-line probing法・変異体解析により、SAHはSAH-1のインターナルループ構造に結合していることが分かった。SAH-1のヒト細胞内での機能解析は現在進行中である。二つ目に、葉酸をターゲットとしたSELEX法も行った。ヒドロキシル基が表面にあるビーズに対し、葉酸のカルボキシル基をエステル結合を介して固定化した。4ラウンドのセレクションの結果、ヒトmiRNA前駆体であるpre-miRNAの配列が得られた。このpre-miRNAの葉酸結合部位や生体内での機能の解析は現在進行中である。以上のことより本年度では、ヒトsmall noncoding RNAライブラリーを用いたSELEX法を確立した。小分子に結合するmiRNA前駆体の報告はこれまでに無く、本年度の研究成果は新規のmiRNA転写後調節機構の発見につながることが期待できる。プロジェクト二年度目である本年度は、前年度のセレクションによって発見した、S-アデノシルホモシステイン(SAH)に結合するRNAであるSAH-1と、葉酸に結合するmiRNA前駆体(pre-miRNA)の解析をそれぞれ行つた。SAH-1は細菌の23SリボソーマルRNA (rRNA)の一部と高い相同性があつたが、In-line probing解析より、細菌の23S rRNAはSAHに対して結合しないことが分かった。SAH-1はHeLa S3細胞で発現していることがノーザンブロッティング法で前年度に確認された。しかし、qPCR法を用いて絶対定量を行った結果、SAH-1の発現量が非常に微量であったため、前年度のノーザンブロッティングの結果は偽陽性の可能性が考えられる。葉酸に結合するpre-miRNAの様々な変異体を転写合成し、葉酸を固定した磁気ビーズに対して結合するか調べた。その結果、pre-miRNAのループ部分が葉酸との結合に重要であることが分かった。また、同様の方法で、pre-miRNAの前駆体であるpri-miRNAも葉酸に対して結合することが分かつた。また、バッファー中の金属イオンの種類・濃度を検討したところ、マグネシウムイオンが結合に重要であることが分かった。また、葉酸がpre-miRNAのプロセシングを制御するかどうかを調べるために、pre-miRNAの切断を行うタンパク質であるDicerを発現、精製した。

様々な変異体pre-miRNAを転写合成し、それらの葉酸に対する結合定数を同様の手法を用いて測定した。その結果、pre-miRNAのループ部分の配列が葉酸への結合に必須であることが判明した。この配列はpre-miRNAの前駆体であるpri-miRNAにも存在しているため、pre-/pri-miRNAの両方が葉酸に結合すると考えられる。さらにこの葉酸結合配列は他のmiRNA前駆体には存在しないため、本研究で特定したmiRNA前駆体のみが葉酸に結合することが示唆される。続いてヒト培養細胞を用いた実験を行った。ヒト培養細胞の培地中に葉酸を加え、miRNAの発現変化をTaqmanプローブを用いた定量PCR法によって測定した。その結果、葉酸を50μM加えることでmiRNAの発現量が8割程度に低下することが分かった。ヒト培養細胞を用いたより詳細な機能解析を現在行っている。26年度が最終年度であるため、記入しない。現在までに、ヒト由来のsmall non-codingRNAライブラリーを用いた小分子に対するセレクションを行う系を確立した。またこの系を用いて葉酸に対して結合するヒトmiRNA前駆体を発見した。これらの成果は当初の年次計画通りである。現在、セレクションによって発見した小分子結合性RNAの解析を行っており、葉酸との結合に重要なpre-miRNAの部位を同定した。Invitroでのpre-miRNAプロセシング実験に必要なタンパク質は発現・精製し、これから実験を行う予定である。当初の年次計画では2年度目でin vitroの実験を終了する予定であり、現状はやや遅れていると言える。今後は、葉酸の結合によってmiRNA前駆体のプロセシング過程に変化があるかをin vitro系を用いて調べていく。miRNAプロセシングに関わるDicer、Droshaの発現・精製を行う予定である。また。葉酸とmiRNA前駆体の結合定数を表面プラズモン共鳴法などを用いて測定する計画である。
前脳基底部コリン作動性神経特異的ノックアウトマウスにおける学習記憶異常

L3/Lhx8遺伝子の機能を解析する目的でホメオドメイン部分を欠失したノックアウトマウスを作成した。このターゲッティングストラテジーはL3/Lhx8蛋白のLIMドメインが細胞で発現し、同一細胞で発現する可能性のあるLhx6蛋白の機能をドミナントネガティブ的に抑制することを狙ったものである。ノックアウトマウスはほぼ95%の割合で口蓋裂を発症し、おそらくこれが原因で出生直後に死亡した。生き残ったマウスにおいて脳を詳細に解析するとMGEに由来する線条体、淡蒼球などの組織に肉眼的な異常は認められないものの、前脳基底部に存在し大脳皮質、海馬などに投射することで知られるアセチルコリン作動性神経が特異的に脱落していることがコリンアセチルトランスフェラーゼ、コリントランスポーター、低親和性NGF受容体などの当該神経特異的マーカーが全て陰性となることから判明した(森ら、論文印刷中)。この「脱落」は神経細胞が発生分化の過程で細胞死に陥っているか、或いは別の神経伝達物質の表現型に分化転換しているかのいずれかの可能性が考えられる。生直後のノックアウトマウスの脳においてはターゲッティングベクター由来のeGFPの遺伝子が発現していることから、L3/Lhx8遺伝子を発現する細胞が細胞死に陥っている可能性は低いと考えられた。現在アセチルコリン作動性神経になるべき細胞が本遺伝子の機能喪失によりGABA作動性神経に分化する可能性を培養系を用いて検討中である。前脳基底部のアセチルコリン作動性神経は従来より学習、記憶などの脳高次機能に深い関わりを持っていることが知られており、アルツハイマー性痴呆患者の脳においても特に脆弱であることが注目されている細胞集団である。我々はこのノックアウトマウスで個体数がまだ少ない状況ではあるが(KOマウス2匹)、野生型との比較で学習実験を行ったところKOマウスでは活動性の亢進、Passive avoidanceにおける学習機能の低下、聴性驚愕反射での馴化の遅延、モリス水迷路試験における空間学習機能の低下などの傾向があることを見出した。前脳基底部のアセチルコリン作動性神経の選択的破壊は192-IgG-ricinなどを用いて達成可能ではあるが、ノックアウトマウスにおける発生過程での本神経系の選択的な脱落は今後学習記憶行動における有用なモデルになると考えられる。また本神経系に種々の遺伝子導入を選択的にできる面からもL3/Lhx8ゲノムの有用性がある。現在L3/Lhx8遺伝子のコンディショナルターゲッティングマウスを作成中である。
医療診断応用を目指した電流測定型X線エネルギー検出器の開発

X綿透過撮影法において,従来の電流測定法より低被曝化を目指して研究している.このため,X線のエネルギー情報に着目し,個々のX線のエネルギーを測定することで,低被曝化,造影剤に対する敏感性が得られることを示してきた。しかし,X線のエネルギー測定を行うと,電流測定を行う場合より長い時間が必要となる.この状況を打開するために,電流モード検出器を発明した.これは,X線の進行方向に複数のX線検出素子を配置し,それぞれからの出力を電流読みだしする検出器である.すなわち,低エネルギーX線は,前方の検出素子で吸収され,後方の検出素子には到達しないが,高エネルギーのX線は後方の検出素子でも測定される.すなわち,検出素子の位置とその出力電流から,大まかなX線のエネルギー分布を求めることができる.この電流モード検出器の原理を実証するために,厚さ3cmのアクリルファントム(水に相当)中に,ヨウ素が15μmから60μmまで存在する場合について,CsI(Tl)シンチレータアレイを用いた6チャンネルの検出器で実験した.用いた管電圧は50,65,80kVである.電流敏感型前置増幅器から6チャンネルの値を同時測定するために,読み出し回路を特注製作した.各検出素子の応答関数を6つのエネルギー範囲について,SAND-IIコードを用いて求める手法を開発した.測定した電流値をアンフォールディングし,フィッティング誤差が最小となるヨウ素厚さが求める値であるとし,ヨウ素厚さを推定することが可能であることを示した.5mm角で厚さ1mmおよび0.1mmのSiおよびCdTeを6個並べた電流モード検出器について,モンテカルロシミュレーションコードEGS4を用いて,応答関数の計算を行った.エネルギー10keVから100keVまで,1keV間隔で光子を入射させ,電流モード検出器のそれぞれへ付与するエネルギースペクトルの計算を行った.次に,厚さ20cmの水ファントム中の1cmの領域に様々な濃度のヨウ素造影剤がある場合について,フィルタX線が水ファントムを通過したあとのエネルギースペクトルを計算した.このエネルギースペクトルに上記の応答関数を掛けることで,電流モード検出器の個々の素子から出力される電流値を求めた.求めるエネルギー領域を4つに分け,そのうち二つをヨウ素のK吸収端の上下のエネルギー領域とし,この領域のX線イベントの比からヨウ素厚さを求めることができる.電流モード検出器の出力電流と応答関数とからなる行列式を解くことで,入射したX線の数を4っのエネルギー範囲について求めた.この結果,負のイベント数がでるなど、不都合な点もあ:るが,ヨウ素K吸収端の上下のエネルギー範囲の比をパラメータとすると,これはヨウ素厚さに従って,ほぼ比例して変化した.今後は,ニューラルネットワークなどの手法を取り入れ,より満足がいく解が求まるようにしていく.X線のエネルギー情報を用いることで,電流測定によるCT画像よりも良い画像が実際に取得できることを示すために,CdZnTe検出器を用いて,測定を行った.用いたファントムは直径3cmのアクリル製であり,この中心に直径1cmの穴があり,ここに種々の濃度のヨウ素を入れて測定した.この結果,エネルギー測定の方がCT値が大きくなることが実際に示された.X綿透過撮影法において,従来の電流測定法より低被曝化を目指して研究している.このため,X線のエネルギー情報に着目し,個々のX線のエネルギーを測定することで,低被曝化,造影剤に対する敏感性が得られることを示してきた。しかし,X線のエネルギー測定を行うと,電流測定を行う場合より長い時間が必要となる.この状況を打開するために,電流モード検出器を発明した.これは,X線の進行方向に複数のX線検出素子を配置し,それぞれからの出力を電流読みだしする検出器である.すなわち,低エネルギーX線は,前方の検出素子で吸収され,後方の検出素子には到達しないが,高エネルギーのX線は後方の検出素子でも測定される.すなわち,検出素子の位置とその出力電流から,大まかなX線のエネルギー分布を求めることができる.この電流モード検出器の原理を実証するために,厚さ3cmのアクリルファントム(水に相当)中に,ヨウ素が15μmから60μmまで存在する場合について,CsI(Tl)シンチレータアレイを用いた6チャンネルの検出器で実験した.用いた管電圧は50,65,80kVである.電流敏感型前置増幅器から6チャンネルの値を同時測定するために,読み出し回路を特注製作した.各検出素子の応答関数を6つのエネルギー範囲について,SAND-IIコードを用いて求める手法を開発した.測定した電流値をアンフォールディングし,フィッティング誤差が最小となるヨウ素厚さが求める値であるとし,ヨウ素厚さを推定することが可能であることを示した.
新しいエンドセリンBレセプターの遺伝子解析とその生理的意義

1.エンドセリン受容体サブタイプの多様性に関する薬理学的研究エンドセリン受容体には,現在2種(ET_A, ET_B)が知られている。従来,ET_A受容体が血管平滑筋上に存在して収縮作用を現わすとされていたが,我々は血管平滑筋,特に静脈にはET_AのみならずET_B受容体が存在し,共に平滑筋収縮に寄与することを示してきた。さらに,我々は,薬理反応の特性解析から,ET_A受容体にもET_B受容体にも,それぞれ2種類のサブタイプ(ET_<A1>, ET_<A2>, ET_<B1>, ET_<B2>と命名)が存在する可能性を示唆してきた。これら複数のサブタイプが実体として存在する可能性を探るために,ET_B受容体ノックアウトマウスを用いて,薬理学的解析を行った。このマウスの摘出組織では,既知のET_B (ET_<B1>)サブタイプを介する反応も,アンタゴニスト抵抗性の新しいET_Bサブタイプ(ET_<B2>)と思われる受容体を介する反応も,ともに消失していることが明らかとなり,ET_<B1>型,ET_<B2>型の両反応が,同一遺伝子に由来する受容体を介して生じていることが判明した。2. Hirschsprung病におけるエンドセリンBレセプター遺伝子の解析Hirschsprung病(HSCR)は先天的な下部消化管の壁内神経節細胞の欠如による蠕動運動の障害のため、消化管内容が停滞し巨大な結腸の拡張を示すことを特徴とし、出生5000に対し1人と比較的よくみられる代表的な小児消化管疾患である。最近、米国の柳沢グループのノックアウトマウスやHSCRモデルマウス、またHSCR多発家系の研究により、ET-3、ET_Bレセプター遺伝子の変異が病因遺伝子の1つに加えられた。今回我々は、本邦のHSCR患者のET_Bレセプター遺伝子の解析を行い、3例の膜貫通部の変異を明らかにした。血管収縮ペプチド、エンドセリンのレセプターにはET_A、ET_Bの2種が知られており、従来、ET_Aは血管平滑筋上に、ET_Bは血管内皮上に存在しているとされていた。本研究において、我々は、血管平滑筋、特に静脈平滑筋には上述の2種のレセプターのほかに、未知のエンドセリンレセプターが複数存在し、すべて平滑筋収縮を引き起こすことを明らかにした。(1)ウサギおよびヒトの静脈に関する薬理学的特性解析から、これらの血管平滑筋にはET_AのみならずET_Bレセプターが存在し、共に平滑筋収縮に寄与すること、そして、ET_Aレセプター、ET_Bレセプターともに、拮抗薬感受性が明らかに異なる2種類のサブタイプが存在する可能性を示した(既知のサブタイプをそれぞれET_<A1>、ET_<B1>として、新しく見出した拮抗薬抵抗性のサブタイプをそれぞれET_<A2>、ET_<B2>と命名)。特に、ヒトの静脈平滑筋においては、この新しく見出されたET_<A2>サブタイプが主要な機能を担っていると考えられた。また、(2)エンドセリンレセプターアゴニストとされている既知のリガンドが、上述の4種類のどのレセプターに作用するかも明らかにした。一方、(3)消化管平滑筋においては、エンドセリンは、平滑筋細胞上のET_<A1>

レセプターを介して、弱い収縮作用をあらわすほか、ET_<A1>、ET_<B1>の両レセプターを介して平滑筋細胞膜上のsmall conductance Ca^<2+>-activated K^+ channelを活性化することにより平滑筋の弛緩作用をもあらわすことを明らかにした。弛緩作用の方が収縮作用よりも低濃度で生じること、また、この平滑筋に存在するエンドセリンレセプターは、大部分ET_B型のレセプターであることから、エンドセリンの消化管平滑筋における生理機能としては、ET_Bレセプターを介する弛緩作用が重要であることが示唆された。1.エンドセリン受容体サブタイプの多様性に関する薬理学的研究エンドセリン受容体には,現在2種(ET_A,ET_B)が知られている。従来,ET_A受容体が血管平滑筋上に存在して収縮作用を現わすとされていたが,我々は血管平滑筋,特に静脈にはET_AのみならずET_B受容体が存在し,共に平滑筋収縮に寄与することを示してきた。さらに,我々は,薬理反応の特性解析から,ET_A受容体にもET_B受容体にも,それぞれ2種類のサブサイプ(ET_<A1>,ET_<A2>,ET_<B1>,ET_<B2>と命名)が存在する可能性を示唆してきた。これら複数のサブタイプが実体として存在する可能性を探るために,ET_B受容体ノックアウトマウスを用いて,薬理学的解析を行った。このマウスの摘出組織では,既知のET_B(ET_<B1>)サブタイプを介する反応も,アンタゴニスト抵抗性の新しいET_Bサブタイプ(ET_<B2>)と思われる受容体を介する反応も,ともに消失していることが明らかとなり,ET_<B1>型,ET_<B2>型の両反応が,同一遺伝子に由来する受容体を介して生じていることが判明した。2.Hirschsprung病におけるエンドセリンBレセプター遺伝子の解析Hirschsprung病(HSCR)は先天的な下部消化管の壁内神経節細胞の欠如による蠕動運動の障害のため、消化管内容が停滞し巨大な結腸の拡張を示すことを特徴とし、出生5000に対し1人と比較的よくみられる代表的な小児消化管疾患である。最近、米国の柳沢グループのノックアウトマウスやHSCRモデルマウス、またHSCR多発家系の研究により、ET-3、ET_Bレセプター遺伝子の変異が病因遺伝子の1つに加えられた。今回我々は、本邦のHSCR患者のET_Bレセプター遺伝子の解析を行い、3例の膜貫通部の変異を明らかにした。
担子菌類に含まれる脂質成分の腸管における免疫活性化およびアレルギー改善効果

高速液体クロマトグラフィーを用いた総脂質からの各種脂肪類の分離と定量、分布の評価から、食用担子菌類子実体の総脂質は1糖セラミドの種類、含有量に大きな差があること、2中性脂質や極性の高い複合脂質の種類、含有量に大きな差があること、キノコの種類により複合脂質の種類は大きく異なり、非常に多種であることが明らかとなった。また、キノコ脂質成分の腸管免疫賦活作用は、1腸管でのパイエル板B細胞のIL-4によるクラススイッチ(IgA+B細胞への変化)、2IL-6によるIgA+B細胞からのIgA産生促進、3IgA+B細胞からのIL-10産生とINF-γの抑制によるものと推察された。担子菌Basidiomycotaの子実体であるキノコは、古くから食用として馴染み深く、アガリクス、ハナビラタケなどは健康食品としても広く販売・消費されている。その機能性について多くの研究が行われ、特にハナビラタケSparassis crispaにおいては、血糖値低下作用、抗アレルギー作用やヒトNK細胞の増加と活性化等、近年に至るまで多数の報告がなされている。これらの多様な生理作用の多くは高濃度に含まれるβ-グルカンによると考察されているが、ハナビラタケのβ-グルカンを含まない低分子画分にも、担癌動物での癌細胞増殖抑制効果が確認されており、β-グルカン以外の微量成分が免疫応答に関与している可能性が示唆される。本研究の研究分担者である水野淨子は菌類の糖脂質に関する研究を長年にわたって実施しており、2011年基盤(C)(課題番号23500980)では、種々の食用担子類におけるGSLの分布と構造について検討を行い、現在までにマイタケ、エノキタケのGSLの詳細な構造を明らかにしている。これらの背景から、本研究ではキノコの脂質成分の解明とin vitroおよびin vivoでの免疫調節における作用機序について検討し、キノコの脂質生化学的・脂質免疫学的側面から体調調節機能である三次機能を解明することを目的として実験を行った。研究実施計画をもとに、平成25年度は1各種キノコに含まれる脂質成分の抽出と単離精製および2HPLCを用いた総脂質からの各種脂肪類の分離と定量、分布および脂肪酸組成の解析を実施した。HPLCを用いた各種脂肪類の定量の結果、エノキダケ、マイタケ、エリンギ、ハナビラタケおよびシメジのいずれにおいても多様な脂質が含まれていること、それらの含有割合は各種キノコにより大きく異なること、他のキノコ類に比べシメジでは多様な糖脂質が含まれていることが明らかとなった。研究実施計画をもとに、平成27年度は1各種キノコ糖脂質のパイエル板培養細胞での免疫賦活作用、2子実体および総脂質のマウスへの投与試験を実施した。ハナビラタケ子実体総脂質添加培地で培養したパイエル板細胞の培養醸成中IgA濃度の上昇、ハナビラタケ子実体総脂質投与マウスのパイエル板でのIL-4、6、10遺伝子発現量の増加が観察され、キノコの免疫賦活作用は糖脂質による腸管免疫を介したものであることが示唆された。本研究の研究分担者である水野淨子は菌類の糖脂質に関する研究を長年にわたって実施しており、2011年基盤(C)(課題番号23500980)ではキノコの脂質生化学的・脂質免疫学的側面から体調調節機能である三次機能を解明することを目的として研究を遂行した。本研究では、研究実施計画をもとに平成25および26年度は1各種キノコからの総脂質の大量調整技術の開発、2各種キノコ糖脂質のパイエル板培養細胞での免疫賦活作用の検討、3子実体および総脂質のマウスへの投与試験を実施した。その結果、ハナビラタケ子実体総脂質添加培地で培養したパイエル板細胞の培養上清中

IgA濃度の上昇、ハナビラタケ子実体総脂質投与マウスのパイエル板でのIL-4、6、10遺伝子発現量の増加が観察され、キノコの免疫賦活作用は糖脂質による腸管免疫を介したものであることが示唆された。また、平成27年度は1HPLCを用いた各種担子菌類の糖脂質の分布と構造解析、2各種キノコ糖脂質のパイエル板培養細胞での免疫賦活作用を再検討した。その結果、エノキタケ、エリンギ、シイタケおよびハナビラタケには非常に極性の高い脂質類が含まれ、その含量は種類により大きく異なること明らかとなった。また、パイエル板培養細胞の結果、各種キノコの総脂質はいずれもパイエル板細胞の培養上清中IgA濃度を上昇させたことから、免疫賦活作用は糖脂質による腸管免疫を介したものであることが示唆された。高速液体クロマトグラフィーを用いた総脂質からの各種脂肪類の分離と定量、分布の評価から、食用担子菌類子実体の総脂質は1糖セラミドの種類、含有量に大きな差があること、2中性脂質や極性の高い複合脂質の種類、含有量に大きな差があること、キノコの種類により複合脂質の種類は大きく異なり、非常に多種であることが明らかとなった。また、キノコ脂質成分の腸管免疫賦活作用は、1腸管でのパイエル板B細胞のIL-4によるクラススイッチ(IgA+B細胞への変化)、2IL-6によるIgA+B細胞からのIgA産生促進、3IgA+B細胞からのIL-10産生とINF-γの抑制によるものと推察された。本研究の平成26年度における達成度を研究実施計画の項目ごとに以下にまとめる。1各種キノコ糖脂質のパイエル板培養細胞での免疫賦活作用26年度に確立したラージスケールでの糖脂質調整法で各種キノコから糖脂質を抽出し、パイエル板培養細胞における免疫調節作用を評価した。培養培地に添加する糖脂質の希釈方法、添加量の調整等の培養条件を確立することで、目的の70%を達成することができた。2子実体および総脂質のマウスへの投与試験本項目は、26年度に確立したラージスケールでの糖脂質調整法で各種キノコから抽出した糖脂質を用いて実施した。糞中IgA濃度、RT-PCRによる遺伝子発現解析の分析系が確立できたことから、目的の60%を達成することができた。食品の三次機能研究としての食用担子菌類をはじめとする食品に含まれる多糖・糖脂質の免疫賦活作用の評価上記にまとめた26年度の実施内容をもとに、27年度の推進方法を研究実施計画の項目ごとに以下にまとめる。1各種キノコ糖脂質のパイエル板培養細胞での免疫賦活作用:25年度に確立した方法を用いて、エノキダケ、マイタケ、エリンギおよびシメジの子実体からの糖脂質を抽出し、26年度にハナビラタケ糖脂質の免疫賦活作用を評価した実験系を用いて、in vitroにおける腸管免疫賦活作用の評価を実施し、目標を達成させる。2子実体および総脂質のマウスへの投与試験:26年度にハナビラタケ糖脂質の免疫賦活作用を評価した実験系を用いて、in vivoにおける腸管免疫賦活作用の評価およびアレルギーモデルマウス(NC/Ngマウス)を用いたキノコ脂質成分のin vivoにおける腸管免疫賦活作用およびアレルギー抑制作用について検討し、目標を達成させる。3キノコ糖脂質成分の構造の解析25および26年度に確立した実験手法を用いてHPLCおよびLC-MSによるエノキダケおよびマイタケのキノコ糖脂質成分の構造の解析を実施し、目標を達成させる。
Ｉｎ　ｖｉｖｏスクリーニングによるがん転移制御分子の同定と機能解析

昨年度の研究で、自然転移能を持たないマウス膀胱がん由来MBT-2細胞にshRNAライブラリーを感染させることで、転移初期過程にかかるブレーキ機構を解除するといったユニークなin vivoスクリーニング系を用いて、自然転移抑制候補遺伝子Tを同定した。そこで本年度は、in vitroにおいて遺伝子Tの機能解析を行った。マウス及びヒト膀胱がん細胞株(それぞれMBT-2及びUM-UC-5)において、遺伝子Tのノックダウンは細胞運動・浸潤能を促進し、逆に過剰発現させると細胞運動・浸潤能を抑制した。遺伝子Tによる運動・浸潤抑制効果がこれらの細胞特有の現象である可能性を排除するために、マウス悪性黒色腫由来B16細胞及びその亜株(B16F10、B16BL6)でも解析を行った。まず、これらの細胞株において、遺伝子Tの発現レベルをウェスタンブロット法によって評価した。興味深いことに、高い自然転移能を有するB16BL6細胞において、遺伝子Tの発現レベルが低自然転移株B16細胞よりも低下していることが分かった。また、B16細胞において遺伝子Tをノックダウンした結果、運動能が亢進することが分かった。逆に、B16BL6細胞に遺伝子Tを過剰発現させると、B16BL6細胞の運動能は抑制された。以上の結果から、遺伝子Tは細胞運動・浸潤能を負に制御していることが示された。さらに、公共データベース解析により、膀胱がん患者において、膀胱がんの悪性度と遺伝子Tの発現量が逆相関している事が明らかとなり、遺伝子Tが膀胱がん患者において転移抑制分子として機能している可能性が示唆された。今後、遺伝子Tの更なる機能解析を行うことで、遺伝子Tの制御下にある転移プロモーターの同定、及びその分子に対する活性阻害薬の創製等を通じて、転移阻害戦略に繋がる可能性が示唆された。29年度が最終年度であるため、記入しない。がん転移は、がんによる死亡率を規定する主因であるため、転移抑制を目的とした転移促進機構の解析は多く行われているが、その一方で転移抑制機構の解析はあまり進んでいない。発がん機構同様に転移機構も促進分子と抑制分子の均衡によって制御されており、転移抑制機構の破綻は転移促進機構の優勢へと繋がる。それ故、転移抑制機構の解明を目的として研究を行った。マウス膀胱がん由来MBT-2細胞は、同系マウスへ皮下移植すると腫瘍を形成するが、肺転移(自然転移)を起こさない。一方で、尾静脈移植すると高頻度に肺転移を呈する。本研究では、転移初期過程である原発巣から血管内へ浸潤する能力を欠いたMBT-2細胞に、ゲノムワイドなshRNAライブラリーを導入し、同系マウス皮下移植モデルにおいて肺転移能を獲得したMBT-2細胞を単離するin vivoスクリーニング系を構築し、転移初期過程を負に制御する分子の同定を試みた。肺転移した細胞集団に組み込まれているshRNA配列をSequence解析した結果、7種類の標的遺伝子がヒットし、これらの遺伝子は自然転移抑制遺伝子である可能性が示唆された。次に、shRNAの導入による自然転移促進効果を再現するために、ヒットした7種類のshRNAをそれぞれMBT-2親株細胞へ再導入し、ノックダウン細胞株を7種類樹立した。そして、それぞれのノックダウン細胞を同細胞数ずつ混合し、再度マウスへ皮下移植した。結果、自然転移抑制遺伝子として既報に有るDdb2(Damage Specific DNA Binding Protein 2)と未知の遺伝子Xを標的としたshRNAが導入されたMBT-2細胞のみが肺転移していることが分かった。そのため、遺伝子Xを新規転移抑制候補分子と仮定し、遺伝子Xによる転移抑制機構の解析を進めている。研究計画通りゲノムワイドなshRNAライブラリーを用いたin vivoスクリーニング系の構築を行い、新規転移抑制分子の探索を行った。本スクリーニング系では7種類の転移抑制候補分子がヒットしたが、その7種類のshRNAをそれぞれMBT-2親株細胞へ再導入し再スクリーニングを行うことで、候補遺伝子を1種類に絞り込めた。また、転移抑制分子として既報にあるDdb2(Roy, et al., Cancer Res., 2013)も同時にヒットしており、本スクリーニング系が的確にワークしていることが確認できた。以上より、本研究は概ね順調に進展していると判断される。

逆に、B16BL6細胞に遺伝子Tを過剰発現させると、B16BL6細胞の運動能は抑制された。以上の結果から、遺伝子Tは細胞運動・浸潤能を負に制御していることが示された。さらに、公共データベース解析により、膀胱がん患者において、膀胱がんの悪性度と遺伝子Tの発現量が逆相関している事が明らかとなり、遺伝子Tが膀胱がん患者において転移抑制分子として機能している可能性が示唆された。今後、遺伝子Tの更なる機能解析を行うことで、遺伝子Tの制御下にある転移プロモーターの同定、及びその分子に対する活性阻害薬の創製等を通じて、転移阻害戦略に繋がる可能性が示唆された。平成28年度の研究実績として同定した転移抑制候補分子Xが、転移抑制分子として機能するかについて、主にin vitroアッセイ系を駆使して検証する。具体的には、マウス膀胱がん由来MBT-2細胞において、遺伝子Xのノックダウンによる細胞運動能の促進効果を検討、逆に遺伝子Xの過剰発現による抑制効果を検討する。また、ヒト膀胱がん細胞における遺伝子X発現株を探索し、ヒト膀胱がん細胞においても遺伝子Xは細胞運動能を負に制御しているか解析を進める。29年度が最終年度であるため、記入しない。
大学個性化のための多元的大学評価法の研究

近年、日本では高等教育の拡大にともなって、高等教育のシステムとしとの多様化、個々の大学にとっては個性ある発展が課題となっているが、実際には同型の大学の多数化と階層化を結果している。そしてその最大の原因は、大学に対する評価が入学者の学力の水準、それも受験産業が提供する情報に偏っていることにある。大学個性化の課題を達成するためには、大学の評価法が多元化されなければならない。この研究では、以上の認識のもとに、学生に対する評価、教育カリキュラムに関する評価、研究業績に関する評価、大学基準のあり方といった観点から、評価そのものの理論的研究とともに、アメリカ、ヨ-ロッパ、日本の大学評価の現状を検討し、大学評価の多元化の方途をさぐった。評価に対する理論的検討では、評価における主体と目的、誰が何のために評価するのかが極めて重要であるという認識が得られた。つまり、受験産業に依存した日本のあり方の危機性が浮き彫りのなったのである。この観点から、大学自信による相互評価、個別大学の自己評価をシステム化したアメリカのアクレディテ-ション、イギリスの大学連合である大学評議会による大学評価が注目された。これらはいずれの場合も、大学の存在に即した評価を自ら打ち出すことによって、政府、社会からの評価の圧力にたいして応えている。また、アメリカのアクレディテ-ションも、イギリスの設置認可であるチャ-タリングも、基準そのものとしては大綱的なもので、そのもとでこそ大学の個性的な発展があるという、今時の大学審議会の答申を支持できる内容の結論がえられた。その他、研究評価の因難性と可能性、大学における教育評価の課題性も、ドイツの教授評価、日本の放送大学における試行の例などをつうじて考察している。近年、日本では、高等教育へのニ-ズの多様化が顕著になりつつあり教育の個性化が問題とされてきている。しかし、高等教育の個性化とその効果の評価に関する知見の積み重ねは少ない。そこで、本研究では、日本・アメリカ・イギリス・ドイツの高等教育の実情を、高等教育へのニ-ズとそれに対応するシステム、さらに、そのシステムを評価する手法などの観点から、文献・資料を中心として検討した。日本では、放送大学の初めての卒業生を中心とした調査から、多岐にわたる学生の関心に応じた生涯学習への期待の強さと共に、高等教育としての水準の維持にその期待の拠り所のあることが浮き彫りにされている。そのような多様なニ-ズに応えるためのヒントとして、卒業がなく、ある地域の大学間で自由に聴講ができるシステムをとっているドイツの例、一般教養科目などに関して放送大学を利用し、それ以外の部分で個性的な教育を導入しようという日本の私学の例、他国に進出することによって異文化交流を通した多様化を図ろうとするアメリカの一部の例などが検討された。個性化に対応した高等教育に関する評価の手法として、アメリカ・イギリスなどの、学生に関する評価(入学者選抜を含む)、教育・カリキュラムに関する評価、研究業績に関する評価、大学基準に参照するところの高等教育機関に関する評価などの観点から、いわば多元的な評価の実践がすでに報告されている。一方で、個性化に際して、高等教育の水準の維持が問題となるが、学位試験などに他大学から評価担当の教官を招聘するシステムをとっているイギリスの例などが一つの可能性として検討された。以上のような検討から、個性化を図りつつ、高等教育の水準を維持するために、どのような方策が実際に考えられ、さらにその効果をどう評価するかなど、各国のかなり異なった高等教育の実情を踏まえた上で、次年度に比較調査する必要性が確認された。近年、日本では、高等教育へのニ-ズの多様化が顕著になりつつあり、教育の個性化が問題とされてきている。

そこで、本研究では、日本・アメリカ・イギリス・ドイツの高等教育の実情を、高等教育へのニ-ズとそれに対応するシステム、さらに、そのシステムを評価する手法などの観点から、多角的に資料を収集し検討してきた。たとえば、卒業という制度がなく、ある地域の大学間で自由に聴講できるシステムをとっているドイツの大学の例、一般教養科目などに関して放送大学を利用し、それ以外の部分で個性的な教育を導入しようという日本の私学の例、他国に進出することによって異文化交流を通した多様化を図ろうとするアメリカの一部の大学の例、多様なニ-ズに対応する際のヒントとなるようないくつかの事例が検討された。これらの事例に対して、学生に関する評価(入学者選抜を含む)、教育・カリキュラムに関する評価、研究業績に関する評価、大学基準による評価といった、多元的な評価の観点からの議論が積み重ねられた。しかし、一方で、個性化に際して、高等教育の水準の維持が問題となるが、アメリカのアクレディテ-ションの実態、大学で行なわれている研究を多少なりとも客観的に、論文数、引用回数などの指標から評価しようと試みたり、学位試験などに他大学から評価担当の教官を招聘するシステムをとっているイギリスの例なども留意すべき点として検討された。以上ような検討を踏まえ、分担者の幅広い専門分野の視点から、大学評価に関するいくつかのアプロ-チの可能性が研究成果報告書にまとめられており、さらに、個性化を図りつつ、高等教育の水準を維持するために、どのような方策が具体的に考えられ、さらに、その効果をどうな方法をもって評価するかといった実践的問題と、それを見据えた上で、各分野の理論的知見をより一層深めていく必要性が確認された。
骨格筋ミトコンドリア異常をきたすエピゲノム変容の修復によるサルコペニア治療の開発

これまで骨格筋ミトコンドリア異常のサルコペニアにおける意義を検討した。ミトコンドリア電子キャリアであるアミノレブリン酸を用いたミトコンドリア活性化によるサルコペニア治療を開発し、そのヒトへの応用を目指した研究課題である、「骨格筋ミトコンドリアとアミノ酸代謝に着目したサルコペニア先制医療の開発」がAMED研究課題に採択された。サルコペニアをきたす代表的な病態として、グルココルチコイド作用の過剰でもたらされるクッシング症候群や、ステロイドの長期内服が知られている。そこで本年度は、新しいサルコペニアモデルとしてデキサメサゾン(DEX)投与マウスにつき検討し、そのエピゲノム変容を調べることとした。皮下埋め込み型ペレットを用いてDEXをC57bl/6マウスに21日間投与したところ、骨格筋量の減少と握力・持久力の低下を認め、また、糖負荷試験で耐糖能の悪化が顕著であった。このマウスにおいて、エピゲノム変容を検討したところ、末梢血単核球において、耐糖能制御に関与する分子のプロモーター領域におけるヒストンアセチル化の亢進を顕著に認めた。そこで骨格筋ミトコンドリア異常の原因となるエピゲノム変容のみならず、DEX投与による耐糖能障害と関連したエピゲノム変容と、その修復の可能性につき検討した。DEX投与マウスでは、インスリン分泌を抑制し血糖上昇に関与するホルモンであるDPP-4の血中濃度が増加しており、このことがステロイド糖尿病での血糖上昇に関与する可能性が考えられた。また、DEXによる血糖上昇とDPP4-活性の亢進は投与終了35日後においても遷延していた。これまでのヒト観察研究の報告で、ステロイド糖尿病がステロイド中止後も遷延し、ステロイド投与の“記憶現象"があるものと認識されている。DEXによる持続的なDPP-4活性亢進がステロイド投与記憶の本体となっている可能性が示された。これまにミトコンドリア電子キャリアであるアミノレブリン酸を用いたミトコンドリア活性化によるサルコペニア治療を開発し、そのヒトへの応用を目指した研究である研究課題である、「骨格筋ミトコンドリアとアミノ酸代謝に着目したサルコペニア先制医療の開発」が本年度AMED研究課題に採択された。また、新しいサルコペニアモデルとしてデキサメサゾン(DEX)投与マウスの検討を行い、骨格筋料の減少と握力・持久力の低下および耐糖能の悪化のメカニズムをエピゲノム変容の観点から検討し、血糖上昇のメカニズムとしてDPP-4活性亢進が関与している可能性を見出した。環境因子の影響を遺伝子に刻みこむメカニズムとして、クロマチンエピゲノム修飾が知られており、ステロイド糖尿病の発症にも、エピゲノム変容が関与しうると考えられる。今後の検討で、グルココルチコイド投与に伴うDPP-4遺伝子のエピゲノム変容の検討を予定している。本研究では、ミトコンドリアで作られるアミノ酸誘導体であるアミノレブリン酸(aminolevulinic acid, ALA)によるサルコペニアならびに身体能力改善効果を検討した。ALAはミトコンドリア電子伝達系の電子担体であるヘムやシトクロムの原料となる重要分子で、加齢性疾患の発症原因となる可能性が注目されている。C57bl6マウスにALA含有飼料を8週齢から8週間与え、ダイナモメーターならびにトレッドミルで身体能力(筋力,持久力)を評価した。評価終了後に筋肉量を評価し、定量的PCR法にてALA投与マウス骨格筋のミトコンドリア関連分子ならびに筋肉量制御因子の発現を検討した。マウスにおいてALA投与により骨格筋ミトコンドリアを活性化するのみならずTORC-1を介したタンパク合成促進およびBCATを介したBCAA分解抑制により骨格筋量を増加させていることが示されたため。

DEXによる持続的なDPP-4活性亢進がステロイド投与記憶の本体となっている可能性が示された。これまにミトコンドリア電子キャリアであるアミノレブリン酸を用いたミトコンドリア活性化によるサルコペニア治療を開発し、そのヒトへの応用を目指した研究である研究課題である、「骨格筋ミトコンドリアとアミノ酸代謝に着目したサルコペニア先制医療の開発」が本年度AMED研究課題に採択された。また、新しいサルコペニアモデルとしてデキサメサゾン(DEX)投与マウスの検討を行い、骨格筋料の減少と握力・持久力の低下および耐糖能の悪化のメカニズムをエピゲノム変容の観点から検討し、血糖上昇のメカニズムとしてDPP-4活性亢進が関与している可能性を見出した。我々がこれまでに骨格筋ミトコンドリアの活性化や身体能力改善効果を報告した消化管ホルモンであるグレリンが、サルコペニア関連遺伝子のエピゲノム修飾に与える影響を検討し、サルコペニア治療への応用の可能性を検討する。環境因子の影響を遺伝子に刻みこむメカニズムとして、クロマチンエピゲノム修飾が知られており、ステロイド糖尿病の発症にも、エピゲノム変容が関与しうると考えられる。今後の検討で、グルココルチコイド投与に伴うDPP-4遺伝子のエピゲノム変容の検討を予定している。
教養小説の主人公の社会階級間移動に関する史的研究

平成四年度においては、当初の予定通り、基礎資料の収集を行い、同時にテキスト電子化の作業を進めると共に、先行研究の批判的再検討と基本的理論の確立のための研究を進めた。具体的には、イギリス、ドイツの教養小説関係図書(電子化テキストを含む)の収集と、文字読みとり装置によるテキストの電子化(ムージルのテキスト)を進めた。また先行研究の再検討と基本理論の確立については、研究代表者と分担者の密接な連絡のもとに、『教養小説の主人公の社会階級間移動に関する史的研究論文集』をまとめ成果を公表した。この中で研究代表者は、ドイツにおける教養小説概念の変遷をこの概念の創設者であるモルゲンシュテルンから、この概念の虚構性を主張するヘーリシュの議論に至るまで、批判的に検証し、そのイデオロギー的性格、特に人格概念のイデオロギー性、さらに小説の問題が同時に近代性の問題である点、教養小説概念がそれについて論じるものをも巻き込む一種の循環構造を持つ点などを明らかにし、今日におけるこの概念の問題性の概要を明らかにした。研究分担者は、英文の論文で、イギリスにおいてロマン主義の影響の強い教養小説概念の代りとなるものとしての「徒弟小説」apprentice novelという概念の有効性を検証し、近代イギリス小説の一つの重要な系譜の存在を指摘し、その展開をデフォーからフォースターにいたる具体的な作品において例示しつつ概観した。また研究代表者は、このほか、ドイツ教養小説の典型を創出したゲーテの晩年の散文と、いわゆる人格概念を否定する二十世紀の小説家ムージルの作品の持つ問題の相似性を、ゲーテとムージルの電子化テキストを利用しつつ検証し、ドイツ語の論文にまとめて、両者の親近性を指摘した。いずれも基礎的な研究であるが、従来のいくつかの考え方に修正を提案するものである。
自然生態系におけるアンモニア参加アーキアの二酸化炭素固定に関する分子生態学の研究

自然生態系における二酸化炭素固定を有するアンモニア酸化アーキアが存在量を調べるため、次の実験を試みた。(1)アンモニア酸化アーキア培養系の確立、」(2)安定同位体DNAプローブ法によるアンモニア酸化アーキアの炭酸固定、(3)低アンモニウムに対するアンモニア酸化アーキアの二酸化炭素固定能関連遺伝子の発見解析。これらの解析により、自然生態系におけるアンモニア酸化アーキアの二酸化炭素固定が示唆された。アンモニア酸化バクテリアの二酸化炭素固定は長年の研究により詳細に調べられ、大気中の二酸化炭素濃度増加に対する応答が認められるといったデータが既に示された。しかしながら、アンモニア酸化アーキアの分離菌株は世界で1菌株のみであることと、その培養方法が確立されていないことから、自然生態系においてアンモニア酸化性アーキアが二酸化炭素の固定にどの程度関与しているのかは、全くの未知である。そこで、本研究では、近年、技術の普及が見られる安定同位体DNAプローブ法を用い、海洋や土壌中の難培養性アンモニア酸化アーキアの二酸化炭素固定能を解明することを目的とした。平成21年度の研究実施計画は次の3点とした。1)安定同位体DNAプローブ法の確立、2)試料採取、3)阻害剤の選定。実施計画1)については、集積培養系を用いて^<13>Cを取込んだDNAを塩化セシウムの密度勾配遠心分離法により分離するといった一連の実験法を確立することができた。この成果は自然生態系からの試料に対しても応用されることが期待される。実施計画2)については、海底砂、森林土壌、水田土壌に対して、NaH^<13>CO_3の取込み実験を実施した。実施計画3)については、アンモニア酸化バクテリアの活性を阻害するが、アンモニア酸化アーキアには効かない物質の探索を行なった結果、抗生物質の1つに効果が確認された。アンモニア酸化アーキアの分離菌株は世界で1菌株のみであることと、その培養方法が確立されていないことから、自然生態系においてアンモニア酸化性アーキアが二酸化炭素の固定にどの程度関与しているのかは、全くの未知である。平成22年度の研究実施計画は次の3点とした。1安定同位体の重い重炭酸ナトリウムを用いたインキュベーション実験と遺伝子定量解析、2遺伝子定量解析、多様性解析、塩基配列の決定、3亜硝酸、硝酸濃度の測定。当初の計画より環境試料への安定同位体DNAプローブ法の適用に時間を要した結果、計画1と2のみ実施した。実施計画1については、森林土壌を試料とし安定同位体DNAプローブ法の超遠心を実施した。^<12>C-DNAと^<13>C-DNAの分別は目視では認められなかった。2遺伝子定量解析等については、アーキアの炭酸固定酵素アセチルCoAカルボキシラーゼを特異的にPCR増幅するプライマーの開発を試みた。自然生態系におけるアンモニア酸化性アーキアの二酸化炭素固定の解明のため、平成23年度の研究計画では、安定同位体DNAプローブ法を用い海洋や土壌中の難培養性アンモニア酸化アーキアの二酸化炭素固定能を解明することを目的とし、次の実験を実施した。実験1)安定同位体の重い重炭酸ナトリウムを用いたインキュベーション実験と遺伝子定量解析試料。実験2)炭酸固定遺伝子の解析。実験1では安定同位体的に重い炭酸と軽い炭酸で別々に培養したアンモニア酸化アーキアNitrosopumilus sp.NM25株を用い、スイング型の超遠心と水平型の超遠心法の比較実験を行った結果、スイング型の超遠心では明瞭な^<13>C-DNA)と^<12>C-DNAのバンドの分画が認められたが、水平型の超遠心法ではバンドの分画は認められなかった。この結果より、環境試料の分析に求められる水平型の超遠心法の適応化には追試が必要であることが明らかとなった。実験2ではアンモニア酸化アーキアの炭酸固定遺伝子の解析を行うため、Nitrosopumilus sp.NM25株と環境試料(アマモ群落の砂)を対象に炭酸固定遺伝子Acetyl-CoA-Carboxylase遺伝子(accA)と4-Hydroxybutyryl-CoA dehydratase遺伝子(hcd)のPCR検出と塩基配列の解読を実施した。その結果、Nitrosopumilus sp.NM25株からはaccAとhcdの両遺伝子が検出されたが、環境試料からはバクテリアのaccA遺伝子も検出された。この結果より、環境試料を対象としてアンモニア酸化アーキアの炭酸固定遺伝子を調査する際はhcdのPCR検出が妥当であることが明らかになった。平成24年度の研究計画では、昨年度までに研究が進んだ炭酸固定遺伝子を利用して、環境中の炭酸固定遺伝子発現量の定量化と発現量と環境因子(特にアンモニウムイオン濃度)の関係を調べることを目的とし、アンモニア酸化アーキア純粋株を用いた新規インキュベーション実験に基づく炭酸固定遺伝子発現量の定量解析を実施した。

新規インキュベーション実験では実際の海洋環境と同レベルのアンモニウムイオン濃度を安定的にアンモニア酸化アーキア純粋株に供給することができた。この結果により、研究室内において海洋環境を模擬したアンモニウムイオン濃度条件下におけるアンモニア酸化アーキア純粋株の遺伝子発現量のモニタリングが可能になった。震災の影響により、超遠心実験に遅れが認められるが、遺伝子解析実施は順調に進んでいるため。24年度が最終年度であるため、記入しない。水平型の超遠心法を用いた安定同位体DNAプローブ法の環境試料への適応には充分な追試が必要と考えられる。そのため、来年度は本年度研究が進んだ炭酸固定遺伝子4-Hydroxybutyry1-CoA dehydratase遺伝子)hcd)を分子指標と用い、環境中のhcd遺伝子発現量の定量化に重点を置く。その際に、コントロールとして既存の分離株や集積菌のアンモニア酸化アーキアを用い、hcd遺伝子やamoA遺伝子の発現量の定量化の技術確立を試みる。
公共圏の重層的多元化と法システムの再編

本共同研究は(1)公共圏の重層的多元化が孕む新たな秩序形成の課題とその困難性を解明する、(2)この課題に対処するために、多様な公共圏の自律性を尊重しつつも、それらを相補的共存に向けて制御する高階の公共性原理を解明する、(3)かかる公共性原理に依拠した法システムの基本構造を、法哲学の基本概念の再定位を通じて解明するという三つの課題の遂行を目的とし、各課題につき次の成果を得た。(1)家族内における性差別や暴力、市場と生活者的公共性、保険医療改革、多文化主義と自由民主主義体制の緊張、ディジタル・エンパワメントと自由の両義的関係など現代社会・現代世界の現実的問題状況に即して、公共圏の重層的多元化がもたらしている従来の公私二元論や公共性形成メカニズムの揺らぎ・破綻と再編の必要性が明らかにされた。(2)伝統的な公共性概念の諸範型を領域的公共性論、主体的公共性論、プロセス的(手続的)公共性論として整理した上で、これらが(1)に関して摘出された諸問題に的確に応答しえていないことが示され、公共圏の重層的多元化が要請する高階の公共性原理として適切なのは、普遍化可能性・反転可能性の要請を核にする公共的正当化要請としての正義理念に立脚する異質な他者の視点に開かれた公共性概念に求められるべきことが明らかにされた。(3)成果(2)として提示された公共性理解の視点から、リベラリズム、共和主義、共同体論、「法と経済学」など、法哲学の従来の支配的諸潮流がいずれも基本概念・基本原理の再編を迫られていることが明らかにされた。そして、私的領域の差別・抑圧を脱政治化して隠蔽するイデオロギーとしての公私二元論ではなく、他者志向的・正義志向的公共性原理に立脚して再編されたリベラルな人権や立憲民主主義の原理を基底におきつつ、市場の公共性担保、公民的自治の開放的な再活性化、文化的多様性の公正な包容等を図る必要が確認された。1公開性と公共性瀧川報告「公共性と責任」によれば、公共性を確保するとは、公共的主題に関して、公共的理由が援用されることである。情報公開によって、初めて公共性が生まれるゆえに、「公開性」こそが「公共性」の中核を担うものと考えられるべきである(「公開性としての公共性」)。しかし、公開性といっても、単に情報公開がなされるのみならず、それが説明責任・アカウンタビリティと接合される必要がある。ただ、説明責任が果たされたという理解の共有が、「異質な他者」同士が接触しあう「重層的な多元性」の下では困難となるということが認識されるべきである。かかる状況の下、説明責任が果たされるためには、その責任過程自体が公開される必要がある。2親密圏と公共性野崎報告「『親密圏』と正義感覚」では、フェミニズムによってもたらされた、「正義」理念は家族にとってもレレヴァントであるという認識を踏まえ、同理念を、家族の内外でいかに適用すべきかが検討された。家族を法的にどのように捉えるかの問題と、家族がいかなる原理に従って運営されるべきかの問題とを分けて、上記の問題を考察すべきであるという認識が、同報告を通じてもたらされた。

3公民的徳性と公共性公共性の理解について、政治参加が人間にとって最も本質的活動であるとみる共和主義的理解と、それを否定するリベラリズム的理解が鋭く対立する。「重層的な多元性」のもとで、いかなる理解が適当かを判断するには、それを基礎付ける人間像がいかなるものであるか、また従来の理論が前提する像との差異はいかなるものかについての検討が不可欠であるとの認識が、東北芸術工科大学教授田島正樹氏の報告、及びこれに関する研究分担者のディスカッションを通じてもたらされた。この検討は、来年度も引き続き行っていくこととしたい。1.公共性概念の他者志向的再編井上報告は、従来の公共性理解を支配した領域的公共性・主体的公共性・手続的公共性の諸理論を批判した上で、公共圏の重層的多元化を最も的確に捉えうる公共性概念は、自己と他者との間の「視点の反転可能性」を基準とする公共的正当化要請であることを論証し、本共同研究を総括する理論的視座を提示した。2.市場と公共性桂木報告によれば、市場を多様な生活価値の交流と創発の場と捉えることで、かかる目的の達成が市場経済に伴う貧富の差を正当化しうるとする。また、この目的にとって、制度としての市場の健全性を維持するには、効率性と多様性とのバランスが公共的観点から模索されねばならないことが指摘された。3.社会の多元化石山報告は、自由や民主主義という普遍的理念と多文化主義の理念との間に生じるジレンマに関して、普遍的価値とその具体的意味や実現方法における多様性の承認により、この問題の解決を試みた。また、集団的自己決定の価値と体制の不正度の比較によって、実践的介入における一定の指針が得られることが報告された。4.権利概念と公共性大江報告では、豊かな価値判断の「原資」への権利として文化を捉えることで、文化に対する公共的支援が正当化されることが指摘された。5.生命倫理と自己決定権奥田報告は、各国の保健医療制度改革における公私機関の役割分担再編の検討を通じて生命倫理領域における「公共圏の重層的多元化」状況を確認した。また、この問題へのドウォーキンの論考を批判的に検討し、人間存在の構造の「重層的多元化」をふまえた公共性概念の構造化の必要を指摘した。6.情報化と社会変容大屋報告は、他者に向けて言説を発表する力が情報化の進展によって広く「普通の人々」にもたらされた状況を、デジタル・エンパワメントとして位置づけたうえで、それが既存の社会運営構造に機能不全を起こす可能性を指摘した。