hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
黄色ブドウ球菌におけるメチシリン高度耐性化機構の解明

MRSAのβ-ラクタム系薬剤耐性はmecA遺伝子の転写とPBP2'の産生量と関係無く、耐性パターンがそれぞれの低度耐性、ヘテロ耐性、Eagle-type耐性と高度耐性がある。このような黄色ブドウ球菌におけるβラクタム耐性の多様化と高度耐性化には、調節遺伝子群に生じる遺伝学的変異が大きな割合を占めていると考え、本研究を実行することにした。実施した研究の成果について、以下の3点を報告する。1)我々が特定した二つの二成分制御系遺伝子群vraSRとgraSRがMRSAのβ-ラクタムとグリコペプチドを含む多くの細胞壁合成障害系薬剤の耐性と関連する事を見出した。前者はβ-ラクタム耐性をポジチブに、後者はネガチブに制御している事を分かった。特にvraSの正常な発現は細胞壁合成障害剤に耐える(耐性なる)必須条件である事を明らかにした。つまり、この遺伝子は抗菌薬の新規ターゲットになりうる事である。2)当教室で発見したhmrA,hmrB,mrgA,msrA3とgraFを含め幾つ遺伝子(aux或いはfem因子など)の発現レベルの相違が耐性の多様化と高度耐性化に関連していることが明らかだが、耐性株にはこれら全ての遺伝子の塩基配列には変異がなかった。これが他の調節遺伝子群の関与を強く示唆することであり、本研究の結果から「中枢」制御遺伝子の一つであるsarH1が上記遺伝子の発現に強く関与していることを明らかにした。この遺伝子の制御機構について、現在研究を進めている。3)研究成果のもう一つ注目するべき点は、全く新たなβ-ラクタム耐性の制御機構を見出したことである。現在、研究は進行中であるが、今回完全なSCmec(mecAを含む)を持つ超β-ラクタム感受性臨床株の分離に成功した。そして、この株から薬剤に選択せずに高度β-ラクタム系薬剤耐性変異株を分離した。特に、この感受性株と耐性株間でお互いに一定頻度で転移することを見出した。そして、この2株の全ゲノム塩基配列を決定しており、現在解析中である。現段階では、ゲノム塩基配列の変異ではなく、ゲノムの大規模のFlip-Flop逆位がこの株に置ける薬剤耐性に関与すると考えている。更に、このゲノム逆位が今まで病原細菌で謎であるSmail colony variant(SCV)の発生の原因であることも示唆されている。
ボエティウスの言語哲学

1.今年度は最近四年間の研究を踏まえ、主にボエティウスの言語哲学全体の特色と重要性を理解し、説明可能にするための研究を進めた。2.ボエティウスの言語哲学の中心概念である"significare"の解明を試み、英語論文を執筆した。3.ボエティウスによるbe動詞の扱いについての英語論文を四月にストゥーベンビル(アメリカ)で開催されたボエティウス学会、及び九月にパレルモ(イタリア)で開催された国際中世哲学会大会で発表し、学会参加者のコメントを参考に改訂を重ねた。更に改訂を加えたものを、近く古代哲学関係の欧文雑誌に投稿する予定である。De Ri jkはAristotle: Semantics and Ontology,Brill,2002,vol.1,pp.235-238で、繋辞(コプラ)としてのbe動詞の概念は「アンモニオス・ボエティウス的意味論(Ammonian-Boethian Semantics)」に起源を有すると主張している。このような主張をするにあたって、De Ri jkは、ボエティウスの『定言推論について』『定言推論入門』と『命題論註解』ではbe動詞の機能に関する論述が相当異なる-前掲論理学諸論文では繋辞の概念は不在なのに対し、『註解』では繋辞の概念が認められる-ことを指摘し、その相違は、ボエティウスがアンモニオスの『命題論註解』を読んだことによるものだとしている。この論文は、(1)ボエティウスはbe動詞の機能に関して首尾一貫した同種の主張をしていること(2)ボエティウスとアンモニオスの『命題論註解』には顕著な相違が認められることを指摘し、De Ri jk説が成立しないことを示すものである。1.今年度は、ボエティウスにおける論理学と自然言語の文法の関係を中心に研究し、その研究成果の一部を、京都で行われた国際中世哲学会年次集会及びヴィラノヴァ(米国)で行われた国際教父・中世・ルネサンス研究国際学会において発表した。口頭発表した英語論文は、若干の改訂を行った後、平成十九年度前半までには、国際中世哲学会年次集会報告論文集の一論文として出版される予定である。これは、ボエティウスが、論理学と文法学をどのような仕方で明確に区別しているかを論じたものである。なお、この論文を執筆するにあたっては、補助金を用いて中世哲学に関する文献を多数購入し、ヴィラノヴァで発表するにあたっては、補助金を用いて渡航した。2.また、ボエティウスのアリストテレス『命題論』冒頭のラテン訳についての考察を行い、来年度中に学会で口頭発表する論文を執筆中である。これは誤訳であると指摘されたこともあるボエティウスのnotaというラテン語の語彙が、実は、もとのアリストテレスのギリシャ語の語彙symbolon、semeionの含意をかなり正確に捉えた訳であることを示すものである。なお、この論文を執筆するにあたって、補助金を用いて古代・中世哲学に関する文献を多数購入した。3.昨年度口頭発表したボエティウスの言語哲学に関する一研究「ボエティウスにおける思考の語り」は、今年度前半に校正作業を終了し、論文として出版された。これは、ボエティウスの「思考の語り」という概念が、現代の言語哲学、認知科学においてしばしば論じられる「思考の言語」説に似た諸要素を持っていることを確認しながらも、思考の自然言語に対する先行性を認めない点において「思考の言語」説とは決定的に異なっていることを示したものである。1.今年度は、ボエティウスのアリストテレス『命題論』冒頭のラテン訳についての考察を行い、その研究その成果の一部を慶応大学で行われた中世哲学会で発表した。また発表後、内容を推敲・改訂し、学会誌『中世思想研究』に投稿した。この論文は、誤訳であると指摘されたこともあるボエティウスのnotaというラテン語の語彙が、実は、もとのアリストテレスのギリシャ語の語彙symbolon、semeionの含意をかなり正確に捉えた訳であり、ボエティウスの理解した言語の自然性と規約性を両立させるために選ばれた語彙であったことを示すものである。2.また、昨年度口頭発表したボエティウスの言語哲学に関する-研究"Logic and Grammar in Boethius"を改訂し、国際中世哲学会年次集会報告論文集の一論文として提出した。その後、この論文の日本語版「ボエティウスにおける論理と文法」を執筆・公表した。これらの英語・日本語論文は、ボエティウスが、論理学と文法学を明確に区別しながらも、論理と文法にある種の連続性を認めていることを論じている。3.ボエティウスによるbe動詞の扱いについての英語論文(草稿)を改訂した。この論文(一部)については、本年九月にパレルモ(イタリア)で行われる国際中世哲学会大会で発表する予定である。4.さらに、近年出版された重要な中世哲学研究書の一つであるC.Pannacio著Ockham on Conceptsの書評を執筆・公表した。ボエティウスにみられる心的言語の概念を発展させたオッカムの心の哲学・言語哲学の斬新な解釈を紹介・検討した。5.また、オッカム『自由問題集』第一巻(一部)の下訳を担当し、この訳書(『自由問題集』第一巻)は、まもなく知泉書館から出版される予定である。

3.ボエティウスによるbe動詞の扱いについての英語論文を四月にストゥーベンビル(アメリカ)で開催されたボエティウス学会、及び九月にパレルモ(イタリア)で開催された国際中世哲学会大会で発表し、学会参加者のコメントを参考に改訂を重ねた。更に改訂を加えたものを、近く古代哲学関係の欧文雑誌に投稿する予定である。De Ri jkはAristotle: Semantics and Ontology,Brill,2002,vol.1,pp.235-238で、繋辞(コプラ)としてのbe動詞の概念は「アンモニオス・ボエティウス的意味論(Ammonian-Boethian Semantics)」に起源を有すると主張している。このような主張をするにあたって、De Ri jkは、ボエティウスの『定言推論について』『定言推論入門』と『命題論註解』ではbe動詞の機能に関する論述が相当異なる-前掲論理学諸論文では繋辞の概念は不在なのに対し、『註解』では繋辞の概念が認められる-ことを指摘し、その相違は、ボエティウスがアンモニオスの『命題論註解』を読んだことによるものだとしている。この論文は、(1)ボエティウスはbe動詞の機能に関して首尾一貫した同種の主張をしていること(2)ボエティウスとアンモニオスの『命題論註解』には顕著な相違が認められることを指摘し、De Ri jk説が成立しないことを示すものである。
フラットな最外内殻準位と反転分布状態を利用したシンチレーション光の高速・高強度化

不純物イオンのd軌道による内殻準位と母体イオンのp価電子帯間でのオージェ・フリー発光(AFL)の発現を目指し、AX:B(A=Rb,K、B=Zn、X=Cl)を中心に結晶の作製を継続し、作製した結晶の光学特性評価をシンクロトロン放射光からの真空紫外光を用いた分光実験により行った。AX:B結晶の光学特性の考察のための、A2BX4結晶での分光実験も行った。また、ナノ結晶の作製にも取組み、試料の評価を行った。ブリッジマン法による試料作製において昨年度課題となった、出発試薬の融点の違いによる試薬の分解の問題を克服するため錠剤形成の手法を用いた結晶作製を試みた。融点の違いによる試薬の分解の抑制はまだ十分ではないものの、不純物としてBイオンを取り込める可能が示唆された。ナノ結晶についてはXRD測定により作製の成功は確認できたが、試料の劣化が早く分光測定までの時間や保存方法を検討しなければならないことが分かった。水溶液法で作製した結晶に対してその電子状態を調べたが、Bの濃度が小さく実験によりその準位の有為な情報は得られていない。今後、濃度の問題を克服し、実験を行う予定である。比較的濃度が小さい場合も、発光測定では電子状態に関する情報が得られる可能性があるため、A2BX4結晶の電子帯構造から考察される不純物Bの浅い内殻準位を励起した際に発生するAFLの観測を行ったが、不純物発光の存在などにより明確な観測には至らなかった。AFLは寿命が短いことから時間分解測定が有用と考えられた。本年度は、計画していた実験はほぼ予定通りに実施したが、まだ目的とする十分な結晶の作製には至っていない。次年度も試料作成法の確立を目指しながら、予定通りの光学測定を実施する。不純物内殻準位を介した不純物イオンのd軌道による内殻準位と母体イオンのp価電子帯間でのオージェ・フリー発光発現に結晶のナノ化が有効であるとの知見を出だしている。このことを追求しつつ目的とするAFLの観測に取組む。研究初年度は、AX:B結晶の作製、分光実験による結晶の質評価、およびAX:B結晶の電子帯構造考察のための、BX2結晶での分光実験を行った。結晶作製については、ブリッジマン法による作製では出発試薬の融点の違いによる試薬の分解が観測され、今のところ分光実験に十分な試料が得られていない。一方、水溶液法による作製では比較的大きな結晶が得られた。ブリッジマン法による作成は今後錠剤形成の手法を用いてBX2試薬をAX試薬内に閉じ込め、融点の違いによる試薬の分解の抑制を試みる予定である。水溶液法により作成した結晶の質評価のため、分子科学研究所UVSORにおいて放射光を用いた分光実験を行った。特に基礎吸収端近傍に注意して光吸収スペクトルを測定した。吸収端より低エネルギー側に吸収帯は観測されなかったが、念のため基礎吸収端励起による発光スペクトルを測定したところ何らかの不純物または格子欠陥によると考えられる発光が観測された。現在発光中心の特定を進めている。A2BX4結晶の電子帯構造から考察される不純物Znの浅い内殻準位を励起した際に発生するAFLの観測を行ったが、まだ観測には至っていない。結晶作成時に不純物としてのZnが導入できていないなどが考えられ、今後は結晶の成分分析を行い試料作製に反省させる。ZnF2において行った分光実験では、非常に強い青色発光が観測された。A2ZnF4でのAFLを考察するための重要の結果と考えられ、今後、青色発光の起源を追究する。本年度は、計画していた実験はほぼ予定通りに進行したが、まだ光学実験に十分な結晶は作成できていない。次年度は試料作成法の確立を目指しながら、予定通りの光学測定を行いたい。

本年度は、計画していた実験はほぼ予定通りに実施したが、まだ目的とする十分な結晶の作製には至っていない。次年度も試料作成法の確立を目指しながら、予定通りの光学測定を実施する。不純物内殻準位を介したオージェ・フリー発光が発現すると推定される結晶の作成法の確立に取り組み、UVSORでの実験によりオージェ・フリー発光の観測と発現原理の考察を進める。不純物内殻準位を介した不純物イオンのd軌道による内殻準位と母体イオンのp価電子帯間でのオージェ・フリー発光発現に結晶のナノ化が有効であるとの知見を出だしている。このことを追求しつつ目的とするAFLの観測に取組む。
森林の加齢に伴う窒素飽和現象の解明とPnET-CNモデルを用いた影響予測

森林生態系内での窒素の動態をより詳細に把握するため、安定同位体希釈法を用い、窒素の動態変化をとらえた。林齢ならびに季節ごとに行った実験から、どの季節においても窒素の形態変化において、アンモニア生成・硝酸生成のどちらをもうわまわった明らかな不動化が生じていることが示された。しかし、不動化を規定する要因は、土壌微生物バイオマス、溶存有機体炭素量など、林齢ならびに季節ごとに異なっていることが明らかになった。また、土壌溶液中の硝酸態窒素の酸素同位体比の変化に基づく負荷された窒素の保持に関するシミュレーションにより、大気から系内に負荷された窒素の不動化にかかる時間はこれまで考えられていたより長い(10cmで数週間以上)ことが明らかになった。これらのことから、大気窒素の急激な不動化には非生物的な固定などを検討する必要が示され、非生物的不動化を考慮し、窒素飽和を検討する必要が示唆された。(1)法正林をはじめとする森林生態系の加齢に関する研究(2)加齢に伴う樹木の養分利用の変化に関する研究(3)加齢に伴う森林生態系の物質循環機構の変化に関する研究森林生態系内での窒素の動態をより詳細に把握するため、安定同位体希釈法を用い、窒素の動態変化をとらえた。今年度は、加齢に伴う森林生態系の成熟過程をとらえるためのデータベースの作成をたちあげた。わが国を代表する森林を対象とし、試験地は、上述の護摩壇山試験地と、天然生林として申請者の所属する京都大学フィールド科学教育研究センターの所有する和歌山研究林(暖温帯針葉樹林)・北海道研究林(冷温帯落葉広葉樹林・冷温帯針広混交林)・芦生研究林(温帯落葉広葉樹林)、および鹿児島大学の高隈演習林(暖温帯照葉樹林)と研究連携者(舘野ら)の維持する徳之島三京地区遺伝子資源保全林(亜熱帯照葉樹林)を用いている。また、高齢人工林として名高い吉野(奈良県)および同じく高齢人工林である秋田杉の調査を行い、データベースに加えるかを検討した。これらの森林生態系において、(1)集水域データベース:徳地と福島(博士課程3年)が水質の分析および解析を行った。(2)土壌データベース:廣部・保原、(3)植物体データベース:舘野、菱、金子、(4)植物酵素活性データベース:小山、などそれぞれが担当のデータベースの作成を行った。近年中国をはじめとするアジア諸国の経済発展に伴い、工業生産や集約的な農業経営により放出される活性窒素が増加している(Galloway)。我が国は季節風などによりこれらアジア諸国からの放出物の影響を受ける。活性窒素は植物をはじめとする生物の生産性を左右する重要な必須元素であるが、一方で生態系内の生物要求量を超えると生態系外へ流出していくことが知られている。この現象は"窒素飽和現象"(Aber et al. 1998など)と呼ばれる。多くの温帯域の森林生態系において窒素は植物の成長を制限する制限因子であり、降下物中に含まれる活性窒素は植物によって吸収、植物体を形成するのに使われる。そのため、窒素は生態系内に保持され渓流水には流出しない。これが森林生態系の生態系サービスのひとつである水質浄化機能と呼ばれるものの主体となっている。下流域のすべての生態系は水質浄化機能が高度に発揮された、安定した水質が供給される状態に依存して存在する。しかし、活性窒素の降下量が増加し、生物要求量を上回った場合余剰の窒素は渓流に流出し、下流域の生態系が依存している河川水に降下物の影響が現れるようになる。水質の変動は降下物に依存して大きくなり、下流域の生態系の物質循環や生物多様性も大きく変化することが予想される。本研究では、窒素飽和の現状の把握とその発生メカニズムについて明らかにすることを目的とした。そのとき、これまでの知見を踏まえ、窒素飽和が通常の制限要因である窒素からリンへと移行することによって生じるという仮説を立てた。まず、本年は土壌のリン酸分解酵素活性の測定を行った。対象とした各試験地で土壌を採取し、酵素活性を測定した。その結果、林玲や地域といった違いは大きくなかった。一方、クロボクはそれ以外の土壌に比較して、リン酸濃度と単位時間あたりの酵素活性の間のミカエリスーメンテン式におけるKm、Vmaxに大きな違いがみられた。このことは、クロボク土壌でリン酸吸着係数が高いというこれまでの知見を支持するものであった。これらのことから、リン酸酵素活性には地質的な違いが大きく、リン欠乏による影響はクロボク土壌で高く、リン欠乏により窒素飽和へ至る可能性が高いと考えられた。

近年中国をはじめとするアジア諸国の経済発展に伴い、工業生産や集約的な農業経営により放出される活性窒素が増加している(Galloway)。我が国は季節風などによりこれらアジア諸国からの放出物の影響を受ける。活性窒素は植物をはじめとする生物の生産性を左右する重要な必須元素であるが、一方で生態系内の生物要求量を超えると生態系外へ流出していくことが知られている。この現象は"窒素飽和現象"(Aber et al. 1998など)と呼ばれる。多くの温帯域の森林生態系において窒素は植物の成長を制限する制限因子であり、降下物中に含まれる活性窒素は植物によって吸収、植物体を形成するのに使われる。そのため、窒素は生態系内に保持され渓流水には流出しない。これが森林生態系の生態系サービスのひとつである水質浄化機能と呼ばれるものの主体となっている。下流域のすべての生態系は水質浄化機能が高度に発揮された、安定した水質が供給される状態に依存して存在する。しかし、活性窒素の降下量が増加し、生物要求量を上回った場合余剰の窒素は渓流に流出し、下流域の生態系が依存している河川水に降下物の影響が現れるようになる。水質の変動は降下物に依存して大きくなり、下流域の生態系の物質循環や生物多様性も大きく変化することが予想される。本研究では、窒素飽和の現状の把握とその発生メカニズムについて明らかにすることを目的とした。今年度は、系内での窒素の動態をより詳細に把握するため、安定同位体希釈法を用い、窒素の動態変化をとらえた。その結果、窒素の形態変化において、アンモニア生成・硝酸生成のどちらをもうわまわった明らかな不動化が生じていることが示された。不動化は系内で窒素を保持するのに重要な役割を果たしている。すなわち、系内にはいった窒素はいったん微生物により不動化され、即座に動かなくなると推察される。その後非生物的な固定なども寄与して、付加された窒素の系外への放出が抑えられるものと考えられた。温帯森林生態系の多くは窒素制限下にあるが、生態系の生物のもつ窒素保持能を超えて負荷されると、窒素は制限要因ではなくなり、"窒素飽和"に至るとされる。森林生態系の窒素保持はおもに土壌と植生によるため、加齢により植生の窒素吸収量が低下すると窒素飽和が生じやすくなると考えられる。そこで、森林生態系内部の窒素動態を詳細に把握するため、今年度は昨年度に引き続き、安定同位体希釈法を用い、窒素の動態変化をとらえた。季節ごとの実験から、どの季節においても窒素の形態変化において、アンモニア生成・硝酸生成のどちらをもうわまわった明らかな不動化が生じていることが示された。しかし、不動化を規定する要因は、土壌微生物バイオマス、溶存有機体炭素量など、季節ごとに異なっていることが明らかになった。また、土壌溶液中の硝酸態窒素の酸素同位体比の変化から、大気から系内に負荷された窒素の不動化にかかる時間はこれまで考えられていたより長い(10cmで数週間以上)ことが示された。これらのことから、大気窒素の急激な不動化には非生物的な固定などを検討する必要が示唆された。また、総速度は若齢で大きく、窒素動態はダイナミックに動く。しかし、加齢に伴い総速度の低下がみられた。
人工血液を用いた高機能型ハイブリッド型人工肝臓の開発研究

ブタ肝臓混合スフェロイドを用いた人工肝臓モジュールを作製し、機能評価を行う事を目標に研究を進めた。(1)ブタ混合スフェロイドの大量作製細胞分散にキレート剤を使用しないと、非実質細胞率が増すが、細胞生存率・収量の低下を認めた。コラゲナーゼにディスパーゼを併用すると、単独より収量・生存率は増すが、スフェロイドの形成率はコラゲナーゼ単独よりも劣っていた。1(リットル)スピナーフラスコを用いたスフェロイド作製は細胞濃度が2.5×10^7cells/mlまで、可能であることが判明した。ブタ肝細胞スフェロイドの作製にはキレート剤を用いた前灌流および、コラゲナーゼ単独の酵素灌流にて細胞分散を行い、1リットルスピナーフラスコに2.5×10^9個の細胞を入れて作成する方法が適していることが判明した。(2)人工血液の人工肝適用への基礎実験人工血液の酸素供給能をvitroの実験系で測定したところ、赤血球と同等の酸素供給能を有していることが判明した。さらに肝細胞の酸素消費速度は人工血液を用いたものが高く、肝細胞を用いた人工肝臓に対する酸素供給の1手段になりうると考えられた。(3)モジュールの作製および機能評価すでに作製している2チャンネル中空糸モジュールには2gの肝細胞スフェロイドが充填可能であった。この一方のチャンネルに人工血液(Pyridoxalated-Hemoglobin-Polyoxyethylene conjugate:PHP)、他方に培地を灌流したところ、コントロール(7.4%/2hr)に比べてアンモニアクリアランスは高値(32%/2hr)であり、尿素の生成・アルブミンの生成も認められた。本モジュールでは、PHPが中空糸から漏出して、他方の回路へ移行してしまい、中空糸の膜素材を変更する必要があることが判明した。また、中空糸外腔に充填したスフェロイドは互いに癒合し、それとともに機能の低下を認めた。スフェロイドが互いに凝集しないように、コーティング・カプセル化などを行う必要性があり、今後の検討課題である。1.肝細胞スフェロイドの大量作成技術の確立短時間で大量の肝細胞スフェロイドを作製する事を目的とし、スピナーフラスコでの48時間の旋回培養にてラット肝細胞スフェロイドを作製した。肝細胞の分離はコラゲナーゼ灌流法で行ったが、その際の灌流液へのEGTA、Ca(EC)添加の有無がスフェロイドの形成率、形成量、尿素合成能に及ぼす影響を検討した。形成率はEC添加の有無で差を認めなかったが、形成量はEC無添加により約2倍に増加し、またEC無添加群は尿素合成能においても優れていた。EC無添加潅流液により高機能の肝細胞スフェロイドを短時間で大量に作成することが可能となった。2.スフェロイド充填型人工肝モジュールの作製ラット肝細胞スフェロイドを小型膜型血漿分離機のextracapillary spaceに1g充填することにより小スケールの人工肝モジュールを作製し、潅流培養条件下での尿素合成能を検討した。灌流培養条件下でも肝細胞スフェロイドは静置条件下と同様の高機能の尿素合成能を発現した。3.人工血液の人工肝への応用のための基礎実験肝細胞を使用した人工肝において、酸素の供給は重要であり、肝細胞への酸素供給の方法の一つとして人工血液の使用が考えられる。

そこで、遊離肝細胞を、培地、人工血液を含む培地、赤血球を含む培地に浮遊させその酸素消費速度を測定し人工血液の効果を検討した。人工血液は、o-raffinoseでヒトヘモグロビンを分子内および分子間架橋したものを使用した。肝細胞の酸素消費速度は、人工血液溶液中、赤血球溶液中、培地の順で高く、人工血液中と培地、赤血球溶液と培地の間で有意差を認めた。人工血液は遊離肝細胞に対し赤血球と同等の酸素供給能を有し、肝細胞を用いた人工肝臓に対する酸素供給の1手段になりうると考えられた。1.肝細胞スフェイロイド作成法とその評価1)細胞分散法の検討昨年度に引き続きスフェロイド作成に適した細胞分散法を検討し、専用の灌流装置を制作した。得られた細胞を回旋培養すると46時間でスフェロイドが形成されることが判明した。2)非実質細胞との混合培養上記分散法では、実質細胞分画にも豊富に非実質細胞が含まれることが判明した。これを用いて作製したスフェロイドは約70μmで、実質細胞に対して約30%の非実質細胞が含まれていた。さらに内皮細胞:kupffer細胞はおよそ10:3であった。共焦点レーザー顕微鏡を用いてスフェロイドの評価を行った。非実質細胞はほとんどが外側に接着、内部は立方体をした肝細胞からなっており、生体内の細胞極性を保っていた。3)スフェロイドの機能評価スフェロイドを長期培養すると、尿素合成能は12日をピークに減少する。それと同時に単層化してゆきスフェロイド形態は消失することが判明した。2.肝細胞スフェロイドの至適細胞外環境評価と機能評価静置培養においてスフェロイドは単層化していき機能の低下を認めるが、コラーゲンゲルを用いることでその機能が高く維持されることが判明した。しかし、長期培養においては、酸素供給不足により、スフェロイド内部に壊死が生じるため、機能は徐々に低下していった。そのため、スフェロイドとコラーゲンゲルを用いた高機能培養形態には、酸素供給のための方法が必要であることが判明し、人工血液の応用が必要と考えられた。3.酸素供給用ファイバーを有する2系統ホローファイバーの作成人工血液を用いた人工肝臓作成のためには、酸素供給(人工血液灌流)のため、2系統のファイバーを組み合わせたホローファイバーを必要とする。そのため、小規模の試作品を作成した。次年度は、コラーゲンゲルと肝細胞のスフェロイドを用いた高機能培養形態の維持のため、作成した2系統ホローファイバーを使用し、人工血液を用いた人工肝臓の作成の実験を行う。臨床使用を目指して、ブタ肝を用いて混合スフェロイドの大量作製、人工血液を用いる2チャンネル型モジュールの開発及びその機能評価について検討した。(1)ブタ混合スフェロイドの大量作製キレート剤を使用しない肝細胞分散法では、非実質細胞の収量が増すが、酵素灌流時間の延長に伴って細胞生存率・収量の低下を認めた。ディスパーゼを用いた細胞分散では、収量・生存率ともに優れていたが、スフェロイドの形成率は、用いないものよりも劣っていた。ブタ肝細胞スフェロイドの作製にはキレート剤を用いた前灌流および、コラゲナーゼ単独の酵素灌流にて細胞分散を行い、1リットルスピナーフラスコに2.5×10^8個の細胞を入れて作成する方法が適していることが判明した。(2)モジュールの作製および機能評価
細胞周期制御におけるサイクリン調節因子とその機能解析

細胞周期M期進行に伴い、サイクリン依存性キナーゼ(CDK)が活性化され、染色体の凝縮、分離、分配が起こる。M期サイクリンはCDKの調節サブユニットとして細胞周期のM期進行を制御する蛋白質因子である。本研究では、M期サイクリンの生理機能をサイクリンの機能ドメインと関連づけて解析することを目的とした。脊椎動物のM期サイクリンを出芽酵母の発現ベクターにつないで酵母細胞で発現させて、サイクリン-CDK複合体の活性レベルを変動させることで生育阻止を引き起こし、細胞周期進行に与える影響を細胞レベルと分子レベルで解析した。サイクリンAを酵母染色体に組み込んでで発現させると酵母の細胞周期が停止し、母娘両細胞に均等に分配されるはずの染色体が、娘細胞に引っ張りこまれた。この現象は発現させたサイクリン-Cdc28の複合体に依存したキナーゼ活性により誘導された。出芽酵母の内在性サイクリンの発現により誘導される染色体挙動を調べた結果、M期サイクリンClb3の過剰発現により娘細胞への核移動と核分裂阻害を引き起こすが、GlサイクリンやClb2では起こらないことがわかった。複製した紡錘体極と紡錘体が核の位置に対応して娘細胞側に局在し、伸張した後期紡錘体はみられなかった。Clb3依存性キナーゼがサイクリンAと同様に、スピンドル機能を介してM期での核の挙動に関与することが示唆される。また、細胞周期停止を抑圧する出芽酵母サプレッサー変異の分離や酵母2-ハイブリッド法により、サイクリンと相互作用する結合因子を同定とその解析を行った結果、CDC28の新規の変異、DEAD1,YDJ1、ユビキチン類似配列を示す新規遺伝子が分離同定された。これら因子の機能解析を通して、サイクリン依存性キナーゼ活性が、スピンドル機能とどのように関連しているかを分子レベルで明らかにすることが、今後の課題である。M期サイクリンは細胞周期のM期進行を調節する蛋白因子である。本研究では、酵母の遺伝解析と両生類ツメガエル卵抽出液による生化学的解析を併用して、サイクリン機能ドメインの構造と機能を対応づけて解析することにより細胞周期進行におけるM期型サイクリン、特にサイクリンAの生理機能の分子実体を明らかにすることを目的として、以下の実験を行った。XenopusサイクリンA及びその変異サイクリンを出芽酵母の発現ベクターに導入して酵母内で発現させて酵母の生育停止を引き起こし、FACScan、核染色、チューブリン蛍光抗体染色により酵母の細胞周期進行にどのような効果を与えるかを解析した。サイクリンAの発現は、M期での正常なスピンドルの働きを乱した結果、染色体DNAが分配されることなく、娘細胞にのみ局在する核の異常な挙動を引き起こした。このような、核の異常な動きはサイクリンBや酵母のB型サイクリンC1bの発現でも同様に誘導された。M期サイクリンがスピンドル機能を介してM期における核の動態に関与することが示唆された。現在、酵母生育阻止を抑制する酵母サプレッサー変異株を分離することによりスピンドル機能調節に関る遺伝子をクローニングを行っている。

脊椎動物のM期サイクリンを出芽酵母の発現ベクターにつないで酵母細胞で発現させて、サイクリン-CDK複合体の活性レベルを変動させることで生育阻止を引き起こし、細胞周期進行に与える影響を細胞レベルと分子レベルで解析した。サイクリンAを酵母染色体に組み込んでで発現させると酵母の細胞周期が停止し、母娘両細胞に均等に分配されるはずの染色体が、娘細胞に引っ張りこまれた。この現象は発現サイクリン-Cdc28の複合体に依存したキナーゼ活性により誘導された。出芽酵母の内在性サイクリンの発現により誘導される染色体挙動を調べた結果、M期サイクリンClb3の過剰発現により娘細胞への核移動と核分裂阻害を引き起こすが、G1サイクリンやClb2では起こらないことがわかった。複製した紡錘体極と紡錘体が核の位置に対応して娘細胞側に局在し、伸張した後期紡錘体はみられなかた。Clb3依存性キナーゼがサイクリンAと同様に、スピンドル機能を介してM期での核の挙動に関与することが示唆される。また、細胞周期停止を抑圧する出芽酵母サプレッサー変異の分離や酵母2-ハイブリッド法により、サイクリンと相互作用する結合因子を同定とその解析を行った結果、CDC28の新規の変異、DEAD1、YDJ1、ユビキチン類似配列を示す新規遺伝子が分離同定された。これら因子の機能解析を通して、サイクリン依存性キナーゼ活性が、スピンドル機能とどのように関連しているかを分子レベルで明らかにすることが、今後の課題である。
エクロジャイト(とくに累進エクロジャイト)の岩石学的研究

揚子・中朝両地塊の境界をなす縫合帯中には、コ-サイトを含むエクロジャイトが点在する。中国東部の山東省および江蘇省から採集されたこれら超高圧エクロジャイトについて、岩石学的検討を行った。これらは、そん母岩の違いによって、片麻岩(タイプI)、超塩基性岩(タイプII)および大理石(タイプIII)中に産するものに大別される。タイプIエクロジャイトは、主にざくろ石+オンファス輝石+角閃石+藍晶石+石英(コ-サイトの仮像)+ルチルの鉱物組み合わせを持ち、およそ30kb以上の超高圧累進変成作用で形成された。タイプIIエクロジャイトは、タイプIに類似し累進変成作用によって形成されたと考えられるものと、上部マントルに由来するものとに大別される。後者は、主にMgに富むざくろ石とオ-ジャイトからなり、石英を含まないことを特徴とする。タイプIIIエクロジャイトは、Caに富むざくろ石とオンファス輝石からなり、キンバレ-岩中に産するグロスピダイトと類似する。これまでに報告されたデ-タを含めて、コ-サイト・エクロジャイトの形成条件を比較すると、西部の大別山地域から東部の栄成地域にかけて、平衡温度は次第に高くなることが明らかとなった。また、エクロジャイトの上昇にともなう後退変成作用の温度条件も、東部ほど高いことが明らかとなった。これらのことに対する解釈として、(1)東部ほどより深部に由来するエクロジャイトが分布する。もしくは(2)東部ほどより高い地熱勾配のもとで変成作用をうけた。ことが考えられる。また、再平衡組織の一つであるシンプレクタイトに着目すると、それが発達するエクロジャイトと認められないものに大別できる。シンプレクタイトは、母岩である片麻岩が被った広域変成作用時に、形成されたと考えられており、それの有無は、エクロジャイトの貫入時期がさまざまに異なっていたことを示唆している。ことが考えられる。
非平衡合金の特性を利用した超微粒子金属分散金属酸化物材料創成に関する基礎的研究

Cu-Zr合金表面の非常に薄い保護性初期酸化ZrO_2膜は湿潤大気中の水分と反応し保護性を失い、合金の酸化が進行し、金属銅とZrO_2層とが交互に数層にわたるサンドイッチ状構造を生じる。生じたZrO_2には正方晶と単斜晶があり、前者は水分との反応で後者へと変態した。Cu-Ta合金は高温湿潤大気中長時間暴露により、明青色、濃赤色等の組成に依存した色を呈した。変色した合金最表面はCuのみの層で、その下に含Ta酸化層等があり、変色は初期酸化皮膜の保護性と強く関わっていた。約20μm厚の非晶質Ni-33Zr合金を高温大気中で酸化するとZrが優先酸化し、Niの酸化開始前に合金中のZrは完全に酸化された。非晶質Ni-65Zr合金の酸化は、表面皮膜の割れにともなう二つの酸化段階を示した。生成したZrO_2は、高Ni合金では正方晶が、高Zr合金では単斜晶が主であった。非晶質Co-Zr系合金は酸化後、NOの分解反応に対して触媒活性を示した。フッ化水素酸処理により試料表面に高濃度の白金族元素が濃縮し、微細な金属粒子が酸化物上に分散担持され、活性なNO分解触媒特性を示した。本合金触媒によるNOの分解反応では、二元Co-Zr合金はNOの分解反応に対して触媒活性を示さず、少量の白金族元素の添加が必要であった。白金族元素の中ではPdが著しく高い触媒活性を示した。また、合金触媒は少量のPd添加でPd黒と同等の触媒活性を示し。非晶質Co-Zr-Pd合金を前駆体とした触媒はCo_3O_4、ZrO_2および金属Pdの協同効果によって高い触媒活性を示すことを明らかにした。平成6年度の実験においては、Ni-Zr系合金およびCu-Zr系合金の酸化挙動を調べ、予想通りバルブメタルが優先酸化され、貴な元素が金属状で残留することを見いだした。しかし、超急冷法を用いて作製したリボン状試料においては、作製時に冷却用ロールに接していたか否かによって酸化挙動等が著しく異なることが明らかになり、アモルファス合金が、X線回折によってハロ-パターンを与えれば全て同等の均一合金として扱えるとするのは危険であることを示した。合金表面の形態が影響するのか、冷却速度が影響するのか、あるいはアモルファス合金自体の中に不均一性が含まれているのかに関し新たな課題を提起した。また、酸化により生じた微細なZrO_2は、合金組成によって結晶構造が異なり、NiあるいはCu含有量が少ない合金においては単斜晶のZrO_2が主であるが、Ni含有量が増加するにしたがって正方晶のZrO_2が増加する結果は同じ合金系でも、触媒反応に関し異なった性質を発揮する可能性を示し、反応生成物のキャラクタリゼーションの重要性を明確にした。また、作製のままのCu-Zr合金およびNi-Zr合金の表面皮膜には、ともにほとんど貴な元素は含まれておらず、ZrO_2のみからなることから、これら合金系の室温大気中における安定性の大きな差は、貴な元素の皮膜安定性に及ぼす影響についても新たな課題を提供することとなった。オージェ電子分光法により酸化の進んだZr-Cu合金表面をイオンエッチしながら深さ方向に分析した結果、金属銅に富む層とZrO_2に富む層とが交互に出現し、酸化は単純な速度則が支配するのではなく、何段階もの過程を繰り返していることが推測された。

平成7年度の実験においては、Cu-Ta系合金の酸化挙動をCu-ZrおよびNi-Zr合金系の場合と比較検討した。Cu-Ta系合金はCu-Zr合金系と類似の挙動を示すが、組成によって酸化速度は大きく異なった。AES分析の結果では、酸化の進行した表面にはOとCuが多く、Taは少なく、酸化皮膜厚さはCu-22at%Taで最大値を示した。一方、酸化初期には、皮膜厚さは合金Ta量の増加とともに単純に増加し、Taが表面皮膜中に濃縮しており、また下地合金表面ではCuが多かった。このことは初期にはTaの優先酸化によりTaに富む皮膜が生成するが、合金のTa量が不十分な場合には保護性の高い皮膜が生成せず、むしろ酸化を促進すると考えられる。酸化されやすい低Ta合金では、酸化が進むにしたがってCuが最表面に拡散してきて、大気に触れ、Cuに富む酸化物/水酸化物を形成すると推測した。次に、Fe-Cr-P合金の9Mの硫酸溶液中における腐食によって生じる黒色の微粉末について検討した。この合金表面のXPSスペクトルは酸化状態のピークとほぼ同じ強度の金属状態のピークを示し、表面皮膜厚さは約2nm程度と計算されたが、この試料の断面の透過電子顕微鏡観察結果は数100nmにわたる腐食生成物層の存在を示し、合金中には微細なbcc結晶相が存在することが確認された。これらの結果を総合的に判断することにより、この合金はX線回折では判別できない微細なbcc結晶を含んでおり、この部分が選択的に腐食を受け、耐食性の高いアモルファス部分が微粉末状に残ったと考えた。さらに、Ni-Nb-白金族系アモルファスのプロパン酸化および亜硫酸塩の酸化に対する電極触媒特性の検討も行った。Cu-Zr合金表面の非常に薄い保護性初期酸化ZrO_2膜は湿潤大気中の水分と反応し保護性を失い、合金の酸化が進行し、金属銅とZrzO_2層とが交互に数層にわたるサンドイッチ状構造を生じる。生じたZrO_2には正方晶と単斜晶があり、前者は水分との反応で後者へと変態した。Cu-Ta合金は高温湿潤大気中長時間暴露により、明青色、濃赤色等の組成に依存した色を呈した。変色した合金最表面はCuのみの層で、その下に含Ta酸化層等があり、変色は初期酸化被膜の保護性と強く関わっていた。約20μm厚の非晶質Ni-33Zr合金を高温大気中で酸化するとZrが優先酸化し、Niの酸化開始前に合金中のZrは完全に酸化された。非晶質Ni-65Zr合金の酸化は、表面被膜の割れにともなう二つの酸化段階を示した。生成したZrO_2は、高Ni合金では正方晶が、高Zr合金では単斜晶が主であった。非晶質Co-Zrz系合金は酸化後、NOの分解反応に対して触媒活性を示した。フッ化水素酸処理により試料表面に高濃度の白金族元素が濃縮し、微細な金属粒子が酸化物上に分散担持され、活性なNO分解媒特性を示した。本合金触媒によるNOの分解反応では、二次Co-Zr合金はNOの分解反応に対して触媒活性を示さず、少量の白金族元素の添加が必要であった。白金族元素の中ではpdが著しく高い触媒活性を示した。また、合金触媒は少量のpd添加でpd黒と同等の触媒活性を示し。非晶質Co-Zr-Pd合金を前駆体とした触媒はCo_3O_4、ZrO_2および金属Pdの協同効果によって高い触媒活性を示すことを明らかにした。
P300と海馬ニューロン発火との関連-ラットを用いた事象関連電位発生源の研究-

Fisher系雄ラットがレバ-押しによる2音弁別oddball課題を遂行中に、脳表面における事象関連電位と同時に背側海馬におけるニューロン発火及び海馬内事象関連電位を記録し、ラットの事象関連電位発現における海馬の関与を検討した。脳表面では標的音に対してN40、P100、N200、P450の事象関連電位成分が観察された。非標的音に対してはP100のみが明らかに誘発され、標的音に対するラットのP450は人のP300に対応することが示唆された。ガラス微小電極を用い海馬のニューン発火を記録した結果、約6割のニューロンにおいて、標的音に対してのみ潜時約100msから550msの間、ニューロン発火が持続的に上昇することがわかった。発火のピークは約290msであり、表面のP450成分のピークよりやや先行していた。ステンレス慢性埋め込み多段電極を用い、脳内の事象関連電位を記録した結果、海馬のCA3領域において他の部位よりも大きな振幅の陽性電位が、表面P450成分に対応して観察されることがわかった。しかし、海馬内での位相の逆転はみられなかった。以上の知見より、ラットの事象関連電位のlate positive成分の形成と海馬の神経活動は関連していることが考えられた。しかし、ニューロン発火とP450のピークのずれがあり、海馬内での位相の逆転の欠如も認められることにより、他の脳部位の関与の可能性も検討する必要があると思われる。Fisher系雄ラットが二音弁別oddball課題を遂行中に、脳表面における脳波記録及び海馬内ニューロン発火と海馬内深部脳波記録を行った。脳表面ではP30,N50、P80、N130、P300が出現することがみいだされ、ラットにおいても人と類似した事象関連電位が記録できることがわかった。その内、P300は課題遂行中に振幅が増加し、人におけるP300に相当することが示された。ガラス電極を用い海馬ニューロンの記録を行った結果、その一部はP300出現に関連して発火することが認められた。現在、発火の潜時及び頻度を解析し、海馬の関連に関して検討を加えている。深部脳波記録では、海馬内においてP300成分の振幅増加が観察され、P300発現における海馬の関与が示唆された。刺激強度の変化は海馬内のP300成分に著明な影響を与えないことより、この事象関連電位は内因性の成分であることが考えられた。以上のごとく、P300成分の形成における海馬の活動変化の役割を示唆する予備的な知見を得ている。現在、ラットを追加し、データを増やすとともに、その解析も進めている。ガラス微小電極を用い海馬のニューロン発火を記録した結果、約6割のニューロンにおいて、標的音に対してのみ潜時約100msから550msの間、ニューロン発火が持続的に上昇することがわかった。ステンレス慢性埋め込み多段電極を用い、脳内の事象関連電位を記録した結果、海馬のCA3領域において他の部位よりも大きな振幅の陽性電位が、表面のP450成分に対応して観察されることがわかった。

以上の知見より、ラットの事象関連電位のlate positive成分の形成と海馬の神経活動は関連していることが考えられた。しかし、ニューロン発火とP450のピークのずれがあり、海馬内での位相の逆転の欠如も認められることにより、他の脳部位の関与の可能性も検討する必要があると思われる。
頭部抜去毛嚢からの培養外毛根鞘細胞シートによる植皮の基礎的研究

培養外毛根鞘細胞シートによる植皮の臨床応用に向けて基礎的な検討を症例数を増やし行った。すなわち、年齢、性、毛包抜去部位、培養方法に関して比較検討を行った。対象は7歳から83歳までの男性11名、9歳から81歳までの女性12名で、頭皮から抜毛後に外毛根鞘細胞の培養を行った。培養方法は4種類のexplant cultureを施行した。培養条件として抜去毛包を(1)静置するのみ、(2)酵素処理のみ、(3)カバーグラス固定のみ、(4)酵素処理後カバーグラス固定の4条件で培養を施行した。その結果(1)および(2)の方法では毛嚢が浮遊し培養には不適と考えた。(3)、(4)の方法では培養の成功率に差はなくほとんどの症例で培養可能であった。また、毛包をカバーグラスにて固定することにより外毛根鞘細胞は付着増殖し、培養皿のcollagen coatは不要であった。年齢、性、毛包抜去部位による培養成功率に有意差はみられなかった。また、重層化と3次元培養による角質形成能について培養表皮細胞との比較も行ったが、いずれも差を認めなかった。培養自己外毛根鞘細胞の長所は何度でも患者から細胞が採取できること、皮膚に傷を残さないことである、今回の検討で年齢、性、毛嚢抜去部位にも影響されないことが判明し、また、酵素処理、培養皿のcollagen coatも不要で、創傷被覆への臨床応用が大いに期待できるものと考えた。抜去毛嚢から培養表皮シートを作製し、臨床応用、基礎研究に供する場合に、いかなる方法が最も効率が良いかを年齢、性別、抜去部位、培養方法に関して検討した。年齢に関しては14歳から81歳までの14症例において施行した。培養方法はexplant cultureとし、plateはtype I collagenをコートしたものを用いた。さらに単に毛嚢を静置したもの、トリプシンで37°C3分処理した後に静置したもの、静置した後にカバーグラスをかぶせたもの、トリプシン処理とカバーグラスを併用したものに分けた。その結果、培養可能であった4症例は、後頭部1例、前頭部1例、頭頂部1例、側頭部1例と部位には関係なく、年齢も19歳男性、34歳男性、74歳男性、81歳で年齢との関連はなかった。方法でも静置のみ1例、カバーグラスのみ2例、酵素処理とがバーグラス併用1例で、どの群でも培養可能症例がみられた。培養可能であった毛嚢を顕微鏡下で観察すると、毛球部からは細胞の遊走はみられず、毛隆起部、すなわち、現在毛嚢の細胞のstem cellがあるとされているbuldge領域から細胞が増殖していった。また、その際、毛隆起部は丸く膨隆していき、その部から細胞が増殖していった。この丸く膨隆した部の細胞は来年度stem cellのマーカーを持っているか否かを検討する必要がある。今回の検討では14症例中4例の培養しか成功せず、未だ良い培養方法が確立出来なかった。毛嚢の大きさや、いかに毛隆起部を損傷なく抜毛し、培養に供する際、いかに毛隆起部をatraumaticに扱うかが重要と考え今後の検討課題と考える。症例を増やし、来年度も引き続き検討を行う予定である。
実験的脳虚血におけるインターロイキン-1の機能について

1.凍結脳損傷との比較により脳虚血モデルの海馬CA-1ではグリオーシスの形成には血中マクロファージよりも早期に反応増生するミクログリアの関与が大であり、ミクログリアの出現が遅延するとアストロサイトの反応増生も抑制がかかり、最終的なグリオーシス、組織修復も遅延することが示された。2.IL-1は虚血再開通後の海馬CA-1では経時的に増加するが、ミクログリアよりもむしろアストロサイトによる産生の方が著明で、30日後でもアストロサイトの増加に比例して、産生が持続し、この経時的変動はIL-1α、β共に同様の傾向を示した。またグリア細胞以外では血管内皮でも産生されており、浮腫との相関が示唆された。3.IL-1 receptorはtype1,2共にアストロサイト、ミクログリア、血管内皮細胞に見いだされ、IL-1と同様に再開通後30日まで、経時的に増加したが、IL-1との違いはCA-1錐体細胞にも陽性反応が認められた点であり、虚血再開通後の海馬CA-1の錐体細胞は自身ではIL-1の産生はなされないが、そのレセプターを有することにより、グリア細胞や血管内皮細胞で産生されたIL-1の持続的な影響を受けることが示唆された。これらの結果は錐体細胞の虚血に対する部位特異的な脆弱性、また遅発性細胞死との関連性を推察させる。脳損傷修復過程におけるIL-1の機能と役割を明らかにすることを目的とする。そのために虚血後の海馬CA-1でのミクログリアを含むIL-1の正確な産生分泌細胞の同定、局在及び、その経時的変化を明らかとし、同時に受容体のmRNA発現細胞の同定、局在についても明らかにすることを目指し、実験を遂行中である。IL-1にはα、β2種類のサブユニット、またレセプターにもtype1,2の2種類の存在が知られているが、この4種類共に抗体を用いた免疫反応陽性細胞は海馬CA1のアストロサイト、ミクログリアに認められている。どちらの反応もグリア細胞であり、光顕での観察では神経細胞には認められていない。いずれも虚血再還流後2日目から出現し、7-14日目をピークとし、数的には減少するが、30日でも残存しており、海馬CA1での比較的長いIL-1の影響が示唆される。脳内でのIL-1はこれら2種類のグリア細胞を通じてオートクライン的に作用し、神経細胞の損傷修復に関与している可能性が考えられる。脳内でのIL-1産生細胞は主にミクログリアであるとされているが、今回の観察ではむしろアストロサイトの方が優勢であった。また虚血再還流後、30日でもアストロサイトには多数の陽性細胞が観察されることから、IL-6など他のサイトカインを同時に産生している可能性がある。続いて、in situ hybridization法により組織でのIL-1β及びその受容体mRNAの発現を検討する目的で、ラット、砂ネズミIL-1βのcDNAを作製している。現在、ラットでは400bp、900bp2種類のcDNAを得ておりin situ hybridizationの準備中である。4種類の抗体を用いた免疫電顕による観察では免疫反応陽性細胞は再還流3-5日後、明らかな浮腫状変化を示していることからIL-1の発現と浮腫液の動態の関連性が示唆される。

またグリア細胞以外では血管内皮でも産生されており、浮腫との相関が示唆された。3.IL-1 receptorはtype 1, 2共にアストロサイト、ミクログリア、血管内皮細胞に見いだされ、IL-1と同様に再開通後30日まで、経時的に増加したが、IL-1との違いはCA-1錐体細胞にも陽性反応が認められた点であり、虚血再開通後の海馬CA-1の錐体細胞は自身ではIL-1の産生はなされないが、そのレセプターを有することにより、グリア細胞や血管内皮細胞で産生されたIL-1の持続的な影響を受けることが示唆された。これらの結果は錐体細胞の虚血に対する部位特異的な脆弱性、また遅発性細胞死との関連性を推察させる。
超音波顕微鏡による木材細胞壁の異方性弾性定数の測定ならびに音響的性質の検討

本研究は、木材の構成要素である繊維(仮道管、真正木繊維など)の細胞壁の弾性定数を、壁中の超音波伝播速度から測定することを目的とした。繊維軸に沿っては、様々な試験方法によってその弾性定数を測定することが可能であり、また、データも公表されているが、細胞壁中の任意方向の弾性定数となると、従来の方法では測定することが出来なかった。ここでは、日立建機の石川らによって開発された。音響レンズ全面に取り付ける特殊フィルタを用いて、z-x軸走査画像を解析することにより得られる1スポットでの音速から、音響画像内の任意の一点での任意の方向の音速を測定する手法を採用した。測定に当たっては、音響レンズと木材との間のカップリングが問題となり、カップリング剤を必要とする。水をカップリング剤としたが、水が木材中に浸透すると弾性定数が変化してしまう不都合があった。これは、スプレー式のシリコン膜を用いることによって解決できることが判明した。音速から弾性定数を決定するには、細胞壁の密度が必要となるが、これには真比重を用いた。供試材としてはスプル-スならびにカツラ材を用いた。仮道管壁での音速のピークは細胞軸に対して、616°傾いた角度で得られた。ピーク音速を与える角度と、ほぼ同じ部位から試料を調製してX線解析を行って測定したフィブリル傾角を比較すると、かなりよく一致した。これより、ピークの音速はミクロフィブリルの方向の音速を反映しているものといえる。すなわち、超音波顕微鏡を用いることにより、ミクロフィブリルの弾性定数を直接的に求めることの可能性が示された。ただ、得られた音速には、5000m/sec強のものと、4000m/sec前後のものの2種類があり、測定部位によって、縦波もしくはレーリー波のどちらかが測定にかかってくるものと思われ、この判別が今後の課題として残された。
メタ倫理学的観点から見た規範倫理学理論の再構築

倫理学は伝統的に善悪や正不正、徳などといった概念を扱ってきたが、20世紀後半に入ると、善悪それ自体の意味について考える基礎分野と、社会の中での現実の倫理問題を考える応用分野とが、それぞれ独立して論じられ、両者の間で乖離が目立つようになってきた。しかし、本来は両者は車の両輪として互いに密接に関係するものであり、そうでなければ実際の私たちの生活の中での倫理の問題を解決する役には立たない。本研究では、二つの分野を再び結びつける理論を探り、そこから遺伝子操作や人工知能開発などがもたらす現実の社会問題に向き合う方法を研究する。