hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
沖縄染織文化の比較研究のための画像データベースの基礎的構築

画像を主体としたデータベースを構築し、研究手段としての画像データベースの有効性について検討した。研究は紅型型紙の分類を目的とした内容に特化させながら検討を重ねた。その結果、次のようなことが分かった。1.紅型型紙資料1414点をもとに,型紙データベースを構築した。さらに,模様データベースを作りながら型紙に使われている模様を抽出したところ,紅型模様が5050あまり蓄積できた。2.データベースの調査フィールドは,個々の細分化せずテキスト形式で一つにまとめる方が良いことが分かった。入力テキストの統一と入力ミスを防ぐためにはテンプレート形式が有効であることがわかった。3.画像を比較検討することが出来るレイアウト作ることにより,画像データベースの有用性が十分に確かめられた。4.紅型の分類基準が明確化できた。さらに,紅型に使われている文様について明確な分類と画像データベース化が行われた。5.沖縄の伝統染織工芸分野の研究において,学術的比較研究が必要なことは明らかであるが,研究方法が確立していなかった。本研究を行うことによって,画像データベースの有効性が確かめられた。画像を主体としたデータベースを作成し,その有効性について検討することが本研究の目的である。本年度は研究1年目として以下のような研究計画を予定した。画像データベース構築のための基本的な機器の導入。画像データベースの構造及び調査項目(フィールド)の検討画像データベースに適した画像デジタルデータの検討1.画像データベース構築のための基本的な機器を導入した。2.画像データベースとして「紅型型紙データベース」を構築した。入力フィールドを選定した。本学所蔵型紙資料1414枚を一次資料として「型紙データベース」を構築した。型紙35ミリポジフィルムをデジタルデータ化し型紙画像データとした。さらに,型紙の模様を構成している一つ一つの個別の文様単位を抽出し「文様データベース」を構築した。3.ネットワーク上での画像データベースとして必要な条件は以下のようであることが判った。画像を主体としたデータベースとして適した扱いやすいレイアウト画像データの大きさについてLAN環境でサーバーから画像を移動させてデータベースを運用する際に,速度を損なわない程度の画像データ量。バックアップ等,まとめてデータを扱う際に適した画像データの大きさ4.次年度の検討課題は以下のとおりである。データの入力およびデータベース活用においてより扱いやすいレイアウトの検討デジタルカメラによるデジタル画像データの直接取り込みの検討染織画像データベースのフィールド検討インターネット上での公開を前提としたデータベースシステム構築画像を主体としたデータベースを構築し、研究手段としての画像データベースの有効性について検討した。本年度は研究2年目として以下のように研究を計画した。1.データの入力およびデータベース活用においてより扱いやすいレイアウトの検討2.デジタルカメラによるデジタル画像データの直接取り込みの検討3.染織画像データベースのフィールド検討研究実績の概要を以下に記す。1.データベースのレイアウト検討画像データベースにデータを入力し,活用しやすい画面構成について検討した。特に,視覚的に画像の比較検討が容易であることに考慮した。2.デジタルカメラによるデジタル画像データの直接取り込みの検討デジタルカメラを利用することで,研究室外での調査時に,直接デジタル画像と調査データをデータベースに入力することが可能であろうと考えた。デジタルカメラによるデジタル画像と従来の銀板式カメラによる写真画像をスキャナでデジタル化した画像との比較を行い,現時点におけるデジタルカメラの有用性について検討を行った。概略的な画像データとしてはデジタルカメラの画像が利用でき得ることがわかった。詳細な画像データについては更に検討の必要があることがわかった。3.染織画像データベースのフィールド検討染織研究に必要な調査項目の中で,特に服飾関係の採寸部位について特に検討した。調査データをどのようなフィールドとしてデータベース化していくかについては次年度の課題としたい。1.染織画像データベースのフィールド項目検討染織資料の調査箇所については検討が進んだ。データベースとしておのおののデータをすべて個別のフィールドとして扱うか,まとめて扱うのかは今後の検討課題としたい。2. 3年間にわたる研究成果概要は以下のとおりである。a)沖縄の染織品の比較研究を行うために必要な画像データベースを基礎的に構築した。特に「紅型型紙画像データベース」については,1414点の資料について入力作業を行った。また,その結果として,新たに,「紅型模様画像データベース」が構築できた。レコード数は5000以上となった。

b)画像データの入力装置としてデジタルカメラの有効性について検討した。大まかな画像についてはデジタルカメラが利用できることが解った。c)画像データベース構造の検討を行った。特に沖縄の「紅型型紙画像データベース」を構築し実際のデータを入力し検討した。その有効性が十分確認できた。より有効な利用のためには,画面レイアウトやデータベース構造などの改良を行う必要があることも明らかとなった。d)より柔軟性が高く,有効に活用できる画像データベースを構築することで,染織文化の研究に十分寄与することが解った。e)今後の検討課題。データを入力し実際に運用してみて,はじめて検討が必要な部分が多く,本課題では紅型型紙の画像データベースの構築だけにとどまってしまった。インターネット上での公開については,機器の導入や環境整備など今後の課題としたい。また,画像データベースの有効性が十分確かめられたので,より柔軟な構造で有効に活用できる「染織品画像データベース」の構築について,検討を進めたい。
成人T細胞白血病における白血病細胞起源に関する研究

12例のATL患者由来新鮮白血病細胞、2種のATL細胞株、4種のHTLV-I感染T細胞株のFoxp3 mRNA量をreal-time PCR法で測定した。その結果、5例の新鮮ATL細胞とHTLV-I感染T細胞株MT-2にFoxp3の高発現を認めた。さらにFoxp3高発現ATL細胞中2例とMT-2細胞にT細胞反応抑制効果を認めた。抑制効果がみられたそれら細胞の抑制効果はTreg細胞と同様に細胞-細胞接触依存的であることが分かった。以上より、Foxp3高発現のATL細胞2例とMT-2細胞がTreg細胞類似であることが明らかになった。他方、ヒトT細胞株Jurkat(Foxp3陰性)にHTLV-I p40taxを誘導したが、Foxp3の発現は誘導されなかった。さらに、IL-2存在下にCD25^+CD4^+T細胞(Treg細胞)およびCD25^-CD4^+T細胞(通常のT細胞)をそれぞれ放射線照射MT-2と共培養し、HTLV-I感染を行ったが、両細胞集団間でウイルス感染効率に有意な差は認めなかった。IL-2非存在下に同一の実験を行ったところCD25^-CD4^+T細胞由来のHTLV-I感染細胞が2クロン、Treg細胞由来のHTLV-I感染細胞が3クロン樹立された。それぞれの由来クロンでのFoxp3発現を測定したところ、CD25^-CD4^+T細胞由来細胞ではFoxp3発現は低値のままであった。HTLV-I感染およびp40tax発現によってT細胞にFoxp3発現が誘導されないことから、Foxp3高発現のATL細胞は、Foxp3高発現T細胞由来すなわちTreg細胞由来であると考えられた。
パーキンソン病原因遺伝子NACP/α-シヌクレインにより神経変性機構

aSynの蛋白質化学的な検討では、aSynのNAC領域がプロテアーゼに切断され難いという蛋白質化学的に特異な点があるという知見を得た。一方、aSyn結合蛋白質の検索ではチューブリンを検出し、チューブリンがaSyn繊維形成のseedとなるという画期的知見を得た。さらに、ヒトaSyn遺伝子をクローニングし、その全構造を解明し、プロモーター領域とイントロン領域に多型を見出した。11年度は、NACP発現ベクターをPC12細胞に導入して、NACPを過剰発現させ、stable transfectantsを40クローン得た。発現ベクターのみのクローンも10得た。蛋白質発現の検出は、独自に開発した抗NACP抗体(MDV2,EQV1,PQE3,REE1)を用いた。ラットPC12細胞は、NGF添加により神経細胞に分化する事が知られており、先ずこの細胞が、NACP(α-synuclein)familyのどのタイプを発現しているかを知るために、RT-PCRで検索した結果、β-synuclein(PNP14)のみを発現している事が判明した。又、NGF添加後の神経分化に伴ってその発現がどのように変動するかを、時間経過を追って検討したところ、蛋白質レベルでは顕著な変化はみられなかった。又、これまでLewy小体等の病理的構造体にβ-synucleinが検出された報告はなく、NACP(α-synuclein)のみが異常構造をとると考えられている。αとβと一番異なる点はNAC配列の有無であり、この疎水性の配列が異常構造形成の鍵と思われる。得られた50クローン(40+10)をWestern blotしたところ、40の中で4クローンにNACPの発現を確認出来、解析を進めている。ラットPC12細胞は、NGF添加により神経細胞に分化する事が知られている。この細胞がNACP/α-synucleinファミリーのどのタイプを発現しているかを知るために、RT-PCRで解析した結果、β-synuclein(PNP14)のみを発現している事を前年度報告した。これまでLewy小体等の病理的構造体にβ-synucleinが検出された報告はなく、NACPのみが異常蓄積すると考えられている。この細胞にNACP発現ベクターを導入して得られた40クローンをWestern blotで解析した。蛋白質の検出は独自に開発した特異抗体(MDV2、EQV1、PQE3、REE1)を用いた。その結果4クローンのみに発現が確認された。次に、PDの動物モデル作成の際に汎用される神経毒であるMPP^+、OHDA、BSO等で細胞を処理してvulnerabilityを検討したところ、BSO存在下でNACP発現細胞はより死にやすくなっていた。この細胞がNACP/α-synucleinファミリーのどのタイプを発現しているかを知るために、RT-PCRで解析した結果、β-synucleln(PNP14)のみを発現している事を前年度報告した。次に、PDの動物モデル作成の際に汎用される神経毒であるMPP^+、OHDA、BSO等で細胞を処理してvulnerabilltyを検討したところ、BSO存在下でNACP発現細胞はより死にやすくなっていた。
「SOL：Safety of Life（生活の安全）」の可視化と行動変容

我が国ではハザードマップの整備と活用促進によって,個人の自然災害に対する「予測力」の向上をはかっている。その一方で,未だに,災害リスク認知の欠如によって避難が行われなかった事例が発生している。そこで,地図に代わる災害リスク空間情報の可視化手法として,「SOL(生活の安全)」の可視化を行う。個人所有の情報端末から得られる位置情報を利用して,生活上の災害危険性を評価し情報提供する実証実験を行い,行動変容が起きるかどうかを確認する。
近赤外線スペクトロスコピーを用いた認知症周辺症状の臨床評価

近赤外スペクトロスコピーを用い表層脳血流と周辺症状との関係を検討した。アルツハイマー型認知症患者、レビー小体型認知症患者、軽度認知機能低下患者に対し、明所、暗所での開閉眼行為、ハンカチテストを行った。結果として各疾患に特有な脳血流パターンを発見することができた。以上より非中核とされる周辺症状(不安・抑うつ・徘徊症・不眠・妄想など)に深部脳血流量とは異なる脳表近くの動的皮質血流が関係することが解った。この結果は認知症周辺症状に対する薬物療法や非薬物療法の効果判定に用いることができ、また早期の介護評価につながる可能性も高く認知症周辺症状治療・介護において極めて意義深い研究結果であると考えられた。認知症高齢者の治療・介護にあたり特に重要なのは、うつ状態、幻覚、不安、依存、俳徊、攻撃的行動、睡眠障害、異食・過食などの周辺症状である。この評価のための画像診断は周辺症状が強いと身体を長時間特定の空間に固定するPETやSPECT,fMRIなどを受けることが極めて困難である。また質問・アンケートといった間接的な評価は質問者や評価者によって主観的なバラつきのあることが問題である。機能的近赤外線スペクトロスコピーは、覚醒状態の脳の活動状態を捉えるの適している。これに総合機能評価を同時に行うことで、各周辺症状に特有な脳血流パターンを発見できうると考えられる。1)対象杏林大学病院もの忘れセンターを受診し、総合機能評価および画像検査にて認知症と診断された患者15例。この中で診察上、総合機能評価上、明らかな周辺症状を表している患者8名と、認知症はあるものの周辺症状が明らかでない患者7名を対象とした。被験者全員に文章によるインフォームド・コンセントを得た。2)方法:初診時に総合機能評価を行った。(基本的日常生活活動度(Barthel Index),手段的日常生活活動度(Lawton),認知機能(MMSE),うつ(Geriatric Depression Scale)・意欲(Vitality Index)、転倒、失禁、頻尿、歩行障害、嚥下障害など認知機能に関連し高齢者以降増加する21項目の調査、血管障害危険因子(年齢、性、DM,HT,高脂血症、喫煙、既往)を必須共通調査項目とした。近赤外線スペクトロスコピーを用い両側前頭部のHb濃度を測定した。3)結果:認知症の疾患としてはアルツハイマー型8例、レビー小体型5例、脳血管性3例であった。この内、特にうつ状態をしめる7例では前頭葉の血流低下が著しく、問診などによる負荷にてさらに低下する傾向が認められた。幻覚、不安、依存、睡眠障害、異食・過食を示した症例は各1例ずつであり、本年度は特定のパターンの検出にはいたっていない。【目的】認知症高齢者の転倒傾向をSPECTでの脳血流量評価から、自覚的不安感の有無に基づくハンカチテストを考案して、小脳を基本血流量との比較で左右前頭葉の血流低下が転倒因子である可能性をしめしてきた。今回我々は新たに障害物の回避行動に際して持続的な脳血流量変化に注目して、認知症疾患別の非中核とされる諸症状(不安・抑うつ・俳徊症・不眠・妄想など)の反応差違を検討することを目的とする。【方法】認知症登録者11名(男性6名平均年齢79.3±4.1歳女性5名78.0±6.3歳)を対象として、アルツハイマー病6名とレビー小体型認知症3名とMCI(mild cognitive impairment)2名正常コントロールとして5名に対してfNIRSを実施し脳表脳血流量の分布変化の検討を行った。タスクとしては障害物として高さ15cmの直方体(横:50cm縦25cm)の乗り越え行為と高さ1m直径20cmの円筒形の障害物を用いて幅30cm、40cmの各空間間隙を歩行ですり抜け行為を事前の行為開始前状態から連続的に前頭部と後頭葉での脳表脳血流量を測定した。【結果】全例16例に対してタスクを実施して全例支障なく実施可能であった。レビー小体病においては障害物またぎ行為・すり抜け行為共に行為開始前に後頭葉外側部の脳表脳血流量が増加し右)前頭部での脳血流量が低下している。アルツハイマー病では前頭葉の脳表脳血流量が各タスクにおいても変化なく右)後頭葉での脳表脳血流量はレビー小体病と同様に低下した。MCI(mild cognitive impairment)では全タスクで前頭葉の脳表脳血流量は左右差なく一貫して増加し、各疾患において異なる脳表脳血流量変化を示した。

(目的):我々はこれまで、fNIRSを用いて認知症高齢者の転倒傾向を検討するなかで、高齢者の移動に際して障害物での回避行動において左)前頭葉と右)後頭葉での脳血流量分布が異なる亊を示してきた。今年度は連続的なタスクの繰り返しでの脳血流量変化の様式を検討することによって、認知症疾患別の反応差違を明らかにすることを目的とした。(方法):当センター認知症登録者(アルツハイマー型認知症4名とレビー小体型認知症4名)および正常コントロールとして10名を対象にfNIRSを実施し、以下のタスク(1から4)を連続的に実施し1座位⇒立位2座位⇒閉眼立位3座位や目標位置で立位・停止4ハンカチテスト(開・閉眼立位でハンカチ把持での安定感の軽減有無)を実施。脳表脳血流量の分布変化の検討を行った。各タスクの間に30秒間の座位・閉眼状態を置いた以外、一連の行為として実施した。(結果):コントロール10例の検討では、20-30歳台はタスクを加わる毎に左)前頭部と右)前頭部は累減的な脳血流分布を示すが、認知症10例に対してタスクを実施した結果、レビー小体病においてはタスク毎の累減現象を認めず、またアルツハイマー型認知症では右)前頭葉の累減現象は認めず、逆に左)後頭葉では累増現象を認めた。(結論):認知症患者は単純な運動タスクの負荷によって、アルツハイマー型認知症では正常者にみられる右)前頭葉での脳血流量の累減現象を認めず、逆に正常者には認めるミラー的な変化を示す左)後頭葉では逆に累増現象を認めた。またレビー小体型認知症(DLB)では左)前頭葉・右)後頭葉共に脳血流量の累減現象を認めなかった。(概要)本年度は、認知症高齢者の転倒傾向をSPECTでの脳血流量評価から、自覚的不安感の有無に基づくハンカチテストを考案して、小脳を基本血流量との比較で右前頭葉の血流低下が転倒因子である可能性を示した。我々は移動に際して障害物での回避行動での脳血流量変化に関して、認知症疾患別の反応差違の検討した。(対象・方法)認知症登録者17名(男性6名:平均年齢78.3±4.9歳、女性11名79.0 ±6.3歳)を対象として、アルツハイマー病10名とびまん性レビー小体病(DLB)7名、正常コントロールとして4名に対してfNIRSを実施し脳表脳血流量の分布変化の検討を行った。実施したタスクとしては1注意注視時間15秒円筒形のまたぎ行為各45秒計1分2高さ円筒形160cmを30センチの間隙で2本設置し、隘路を注視時間15秒と引き続き隘路を通り抜けと一往復実施した45秒間のタスクを実施、設定した。(結果)全例17例に対してタスクを実施して全例支障なく実施可能であった。レビー小体病においては障害物注視時間で右)前頭葉での脳表脳血流量はコントロールで認めた増加を認めず、タスク実施中に低下傾向を示した。アルツハイマー病では注視時間内で右)前頭葉の脳表脳血流量の上昇をみとめるが、右)後頭葉での脳表脳血流量はレビー小体病と同様に低下した。コントロールでは右)前頭葉・左)後頭葉でのタスク前注視時間での上昇とタスク実施時の血流低下をきたした。(結論)認知症患者は障害物注視段階で脳表脳血流分布の差を認め、アルツハイマー病では右)前頭葉の上昇は軽度に留まり、レビー小体病(DLB)では右)前頭葉・左)後頭葉共に上昇を認めなかった。
血管新生におけるユビキチン化タンパク質の網羅的解析

[目的]本研究は、血管新生特異的におこるポリユビキチン化ターゲットタンパク質を網羅的に解析し、癌治療における新規薬剤ターゲットとなるタンパク質を同定することを目的としている。[方法]はじめに申請者は、フィブリンゲル血管新生アッセイと、電気泳動法およびユビキチン化タンパク質濃縮カラムを組み合わせることで、血管新生特異的なユビキチン化タンパク質の発現変動を見積もった。しかし、本システムにより得られる結果は、非常に複雑なバンドパターンを示す他、再現性の取得が非常に困難であったため、次の改良法を用いることとした。(1)血管内皮細胞においてノックダウンを行うと血管伸長が著しく阻害されるユビキチンE3リガーゼ、Cullin3に着目。(2)Flag-tagをN末端に付加させたCullin3のポリユビキチン化アダプタータンパク質結合領域(BTB-BD)を、血管内皮細胞内にレンチウィルスを用いて過剰発現させた。(3)抗flag抗体を用いた免疫沈降法によって、Cullin3に結合する、血管内皮細胞特異的アダプタタンパク質を同定することを試みた。E3リガーゼの基質は、このユビキチン化の基質選択に必須であるアダプタータンパク質から推定出来るものと考えた。[成果]BTB-BDに、特異的に結合するタンパク質を、免疫沈降法を用いて探索したところ、分子量70kDaおよび36kDaをはじめとするいくつかの候補タンパク質を見いだすことに成功した。一方、BTB-BDを血管内皮細胞内に過剰発現させると、コラーゲンゲルを用いたin vitro network formationassayおよびフィブリンゲルを用いたfibrin gel sprouting assayの両アッセイにおいて、その血管新生活性が強力に阻害されることも、併せて見出すことが出来た(前者の方法では30%阻害、後者の方法では50%程度の阻害)。この結果は、BTB-BDがdecoyとして機能し、同定した結合タンパク質を介したユビキチン化システムによる血管新生への関与の重要性を示す。現在、これらのタンパク質の分子生物学的機能解析を進めているところである。
シグナル分子・受容体を輸送する普遍的細胞突起の形成機構と形態形成における機能

CyNはモルフォゲンやFGFなどの効率のよい細胞間シグナル伝達に働いている細胞突起である.本研究では,CyNがFGFだけでなく,他のさまざまな増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカイン,GPCRリガンド,およびShhによっても,RhoDを介して形成されることを明らかにした.これらのシグナル分子のうち,少なくともBMP4については,FGFと同様にRhoDを活性化してCyNを形成した.このRhoDの活性化はSmadシグナリングではなく,non-Smadシグナリングを介していると考えられる.さらにCyNの形成にはdynaminのGTPase活性が必要であることが示された.CyNはモルフォゲンやFGFなどの効率のよい細胞間シグナル伝達に働いている細胞突起である.本研究では,CyNがFGFだけでなく,他のさまざまな増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカイン,GPCRリガンド,およびShhによっても,RhoDを介して形成されることを明らかにした.これらのシグナル分子のうち,少なくともBMP4については,FGFと同様にRhoDを活性化してCyNを形成した.このRhoDの活性化はSmadシグナリングではなく,non-Smadシグナリングを介していると考えられる.さらにCyNの形成にはdynaminのGTPase活性が必要であることが示された.マウス10T1/2間葉系細胞において,FGFによって活性化されたRhoDが,mDia3Cを活性化してアクチン線維形成を引き起こし,FGF源に向かって特徴的な細く長い細胞突起(CyN)が形成されることを明らかにした.またCyNの中をFGF受容体が受容細胞の細胞体に向かって輸送された.そこで本研究では,CyNが多様なシグナル分子の産生・分泌細胞に対して普遍的に形成され,CyNを介した細胞体へのシグナル分子-受容体の輸送が,効率のよい細胞間シグナル伝達に働いていることを実証することを目的とする.FGF以外にもさまざまな増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカインを10T1/2細胞に作用させると,いずれの場合にもアクチン線維を含むCyNが形成された.CyNの先端にはmDia3Cが局在していた.これらのシグナル分子に対する受容体はいずれも10T1/2細胞に発現していた.またこれらのCyN中をエンドソームが受容細胞の細胞体に向かって移動することが示された.したがってCyNはFGFだけでなく多様なシグナル分子により形成されることが明らかになった.これらのシグナル分子のうち,少なくともBMP4については,FGFと同様にRhoDを活性化することが示された.一方,LIFを安定に発現しているSNL76/7細胞においても顕著なCyNの形成がみられた.さらにSNL76/7細胞と10T1/2細胞を共培養すると,10T1/2細胞からSNL76/7細胞に向かってCyNが形成され,10T1/2細胞からのCyNはSNL76/7細胞に,SNL76/7細胞からのCyNは10T1/2細胞に接触していた.これらの結果から,CyNはLIFの受容細胞だけでなく,産生・分泌細胞からも形成され,両細胞がCyNを介して接触することにより,効率のよい細胞間シグナル伝達に働いていると考えられる.マウス10T1/2間葉系細胞において,FGFによって活性化されたRhoDが,mDia3Cを活性化してアクチン線維形成を引き起こし,FGF源に向かって特徴的な細く長い細胞突起(CyN)が形成されることを明らかにした.またCyNの中をFGF受容体が受容細胞の細胞体に向かって輸送された.そこで本研究では,CyNが多様なシグナル分子の産生・分泌細胞に対して普遍的に形成され,CyNを介した細胞体へのシグナル分子-受容体の輸送が,効率のよい細胞間シグナル伝達に働いていることを明らかにすることを目的とした.FGF以外にもさまざまな増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカイン,GPCRリガンド,Shhを10T1/2細胞に作用させると,いずれの場合にもアクチン線維を含むCyNが形成された.CyNの先端にはmDia3Cが局在していた.これらのシグナル分子に対する受容体はいずれも10T1/2細胞に発現していた.したがってCyNはFGFだけでなく多様なシグナル分子により形成されることが明らかになった.これらのシグナル分子のうち,少なくともBMP4については,FGFと同様にRhoDを活性化することが示された.RhoDはSmad1/5/8よりも早く活性化されたので,RhoDはnon-Smadシグナリングにより活性化されると考えられる.一方,LIFを安定に発現しているSNL76/7細胞においても顕著なCyNの形成がみられ,また10T1/2細胞からSNL76/7細胞に向かってCyNが形成された.これらの結果から,CyNはLIFの受容細胞だけでなく,産生・分泌細胞からも形成され,効率のよい細胞間シグナル伝達に働いていると考えられる.さらにCyNの形成にはdynaminのGTPase活性が必要であることが示された.分子細胞生物学本年度の主要な目標であった,FGFだけでなく,多様な細胞外シグナル分子(増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカイン)によってもCyNが形成されることを明らかにすることができた.このことはCyNを介した細胞間シグナル伝達が普遍的な現象であることを示す重要な知見である.

さらにBMP4についてはFGFと同様に,RhoDを活性化してCyNを形成することを明らかにした.またmDia3Cが働いている可能性も示された.これまでは,受容細胞がシグナル分子の産生・分泌細胞に向かってCyNを形成し,シグナル分子-受容体を受容細胞の細胞体に輸送することにより,CyNは効率のよい細胞間シグナル伝達に働いていると考えられていた.しかし本研究により,受容細胞だけがCyNを形成するのではなく,産生・分泌細胞も受容細胞に向かってCyNを形成し,両細胞がCyNを介して接触することにより,より効率のよい細胞間シグナル伝達に働いていることを示唆する結果が得られた.これはCyNの新たな機能を提起する重要な知見である.これらのことから,研究はおおむね順調に進展していると言うことができる.これまでに,増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカインの多様な細胞外シグナル分子によりCyNが形成されることを明らかにしたので,さらにGPCRリガンドによってもCyNが形成されるかどうかを調べ,CyNがより普遍的に細胞間シグナル伝達に働いていることを明らかにする.また受容細胞が形成したCyN中をシグナル分子受容体がエンドソームに乗って細胞体に向かって輸送されることを蛍光ライブイメージングにより示す.各受容体がさらに核内に移行するかどうかについても解析する.一方,産生・分泌細胞が形成したCyN中をシグナル分子が先端に向かって輸送されることを示す.BMP4についてはFGFと同様に,RhoDを活性化してCyNを形成することを明らかにした.他のシグナル分子についても,RhoDを活性化してCyNを形成するのか,それともRhoD以外の蛋白質を介してCyNを形成するのかを明らかにする.さらに産生・分泌細胞におけるCyNは,RhoDとそれによって活性化されるmDia3Cを介して形成されるのか,それとも他の機構により形成されるのかを明らかにする.本研究計画では,多様な細胞外シグナル分子によりCyNが形成されることを明らかにし,それぞれの分子機構を解明することを目的としている.これまでに細胞外シグナル分子として,複数の増殖因子,TGF-βファミリー蛋白質,サイトカインの作用を調べたが,まだGPCRリガンドの作用を調べていない.またこれらのシグナル分子と受容体の動態を蛍光ライブイメージングで解析するために,これらのcDNAを得て発現ベクターを構築する必要があるが,これまでに一部しか行っていない.これらについては次年度行うことになるので,そのための経費を次年度に回すことにした.上述の理由により,GPCRリガンド等によるCyNの形成,およびまだ未解析のシグナル分子と受容体の動態の蛍光ライブイメージングによる解析に使用する.
左室拡張能、圧受容体反射感受性とバイオマーカーによる術後心血管リスク因子の同定

全身麻酔下に歯科・口腔外科手術を予定された患者で、高齢、高血圧症、糖尿病などの心血管リスク因子により、術前に循環器内科を対診し心エコー図検査を実施した患者を対象とした。手術前日、診察室血圧、指尖容積脈波とバイオマーカーの採血を行った。平成29年度は67例(男性41例、女性26例)のデータを得た。年齢68.1±11.8歳、BMI23.0±2.9 kg/m2。高血圧症を有する患者は47例(70.1%)、糖尿病26例(38.0%)、脂質異常症29例(45.3%)であった。心室の圧負荷を反映するBNPは21.9±36.2pg/mL(分布範囲5.8262.8)であり、軽度の心不全を疑う≧40pg/mLの患者は10例(14.9%)、治療対象となる心不全を示唆する≧100pg/mLの患者は2例(3.0%)にみられた。NT-proBNPは157.3±316.7pg/mL(51779)であり、軽度の心不全を疑う≧125pg/mLの患者は13例(19.4%)、治療対象となる心不全を示唆する≧400pg/mLの患者は7例(10.1%)にみられた。心筋細胞障害マーカーである高感度心筋トロポニンT(hsTnT)は0.0095±0.0066pg/mL(0.0030.034)であり、心筋障害が示唆される≧0.014pg/mLの患者は13例(19.4%)であった。高感度心筋トロポニンI(hsTnI)は7.1±12.9ng/mL(498.2、測定値4.0未満は4.0として処理)であり、心筋障害が示唆される≧26.2pg/mLの患者は2例(2.9%)にみられた。心エコー図検査の左室拡張能との関係では、hsTnTとhsTnIはともに僧帽弁輪移動速度(中隔と側壁の平均値)にきわめて良く相関した(R=0.49, 0.30)。歯科においても潜在的な心不全や微小心筋障害を有する患者が存在していた。研究分担者の大野幸が国内留学より復帰したことにより、術前診察時にバイオマーカー採血を行う体制ができた。平成29年度は67例(男性41例、女性26例)についてバイオマーカー値を得ており、歯科においても潜在的な心不全や微小心筋障害を有する患者がいることが明らかになった。引き続き年間80例程度を目標にデータを収集する。心エコー図検査の左室拡張能との関係だけでなく、術後の循環器系合併症との関連も検討する。平成28年4月から平成29年5月までに全身麻酔下に歯科・口腔外科手術を予定された患者で、高齢・高血圧症・糖尿病などの心血管リスク因子により、術前に当院循環器内科を対診した93名の患者を対象とした。循環器内科を対診した患者の全例に心エコー図検査を実施された。手術前日、光電式指尖容積脈波を測定した。心エコー図検査のパラメータ群(E波、A波、E/A比、僧帽弁輪移動速度[e']、E/e'[左房圧の指標]、左房径[LAD]、左室駆出率[EF]、左室内径短縮率[%FS])を記録した。加速度脈波パラメータ群(b/a, c/a, d/a, AGI)、一般的な心血管リスク因子(年齢、BMI、空腹時血糖値(FBS)、トリグリセリド、総コレステロール、クレアチニン、尿酸、推算糸球体濾過量(eGFR)、高血圧症・糖尿病・脂質異常症・喫煙の有無)を記録した。平均年齢は67.4±14.6歳(男性49例、女性44例)、BMIは22.1±4.3kg/m2であった。平均FBSは107±23.0g/dL、トリグリセリド111.4±55.5mg/dL、総コレステロール195.0±35.1mg/dL、BUN 15.1±3.8mg/dL、クレアチニン0.77±0.16mg/dL、UA 5.3±1.5mg/dL、eGFR 67.6±8.4mL/min/1.73m2であった。高血圧症、糖尿病、脂質異常症、1年前までの喫煙習慣を有していたのはそれぞれ65例、35例、32例、17例であった。加速度脈波のAGIは、左室拡張能を反映するE/A比およびe'によく相関した(R=0.32, P=0.0019およびR=0.32, P=0.0025)。しかし左房圧を反映するE/e'(左室側壁)には相関しなかった(R=0.09, P=0.4046)。一方、年齢、性別、BMI、FBS、トリグリセリド、総コレステロール、クレアチニン、尿酸、AGIで補正したところ、標準化偏回帰係数によるe'への寄与は年齢、BMI、AGIの順に大きかった。当科では昨年度に主任教授の交代があり、医局体制の変更があった。さらに共同研究者・大野幸が国内留学したことにより、人員不足が生じた。

その結果、術前診察時にバイオマーカーを採血する体制を得ることができず、それ以外のデータを収集した。全身麻酔下に歯科・口腔外科手術を予定された患者で、高齢、高血圧症、糖尿病などの心血管リスク因子により、術前に循環器内科を対診し心エコー図検査を実施した患者を対象とした。手術前日、診察室血圧、指尖容積脈波とバイオマーカーの採血を行った。平成29年度は67例(男性41例、女性26例)のデータを得た。年齢68.1±11.8歳、BMI23.0±2.9 kg/m2。高血圧症を有する患者は47例(70.1%)、糖尿病26例(38.0%)、脂質異常症29例(45.3%)であった。心室の圧負荷を反映するBNPは21.9±36.2pg/mL(分布範囲5.8262.8)であり、軽度の心不全を疑う≧40pg/mLの患者は10例(14.9%)、治療対象となる心不全を示唆する≧100pg/mLの患者は2例(3.0%)にみられた。NT-proBNPは157.3±316.7pg/mL(51779)であり、軽度の心不全を疑う≧125pg/mLの患者は13例(19.4%)、治療対象となる心不全を示唆する≧400pg/mLの患者は7例(10.1%)にみられた。心筋細胞障害マーカーである高感度心筋トロポニンT(hsTnT)は0.0095±0.0066pg/mL(0.0030.034)であり、心筋障害が示唆される≧0.014pg/mLの患者は13例(19.4%)であった。高感度心筋トロポニンI(hsTnI)は7.1±12.9ng/mL(498.2、測定値4.0未満は4.0として処理)であり、心筋障害が示唆される≧26.2pg/mLの患者は2例(2.9%)にみられた。心エコー図検査の左室拡張能との関係では、hsTnTとhsTnIはともに僧帽弁輪移動速度(中隔と側壁の平均値)にきわめて良く相関した(R=0.49, 0.30)。歯科においても潜在的な心不全や微小心筋障害を有する患者が存在していた。研究分担者の大野幸が国内留学より復帰したことにより、術前診察時にバイオマーカー採血を行う体制ができた。平成29年度は67例(男性41例、女性26例)についてバイオマーカー値を得ており、歯科においても潜在的な心不全や微小心筋障害を有する患者がいることが明らかになった。症例数は十分にあり、共同研究者・大野幸が国内留学より帰任したので、術前診察時にバイオマーカーの採血ができる体制を早急に整え、研究をさらに進めていく予定である。引き続き年間80例程度を目標にデータを収集する。心エコー図検査の左室拡張能との関係だけでなく、術後の循環器系合併症との関連も検討する。主任教授が交代し、新たな医局体制となり人員不足が生じたため、バイオマーカー測定を行う体制をとることができなかった。当科では主任教授の交代があり、昨年度はバイオマーカー採血を行う体制がとれなかったこと、今年度は海外での研究成果発表を行うことができなかったことによる。次年度は新たに大学院生が共同研究者に加わる予定であり、論文の投稿料も必要となるため、当初予定通りの支出を想定している。今年度にはバイオマーカー採血が行える体制が整ったので、計画通り研究を実施できる見込みである。研究代表者は、第44回日本歯科麻酔学会総会・学術集会において演題『左室拡張機能と加速度脈波パラメータ群の関係について』を発表し、日本歯科麻酔学会デンツプライ・シロナ賞を受賞した。
植物の環境適応と細胞死における液胞機能発現のダイナミクス

液胞プロセシング酵素(VPE ; Vacuolar Processing Enzyme)は液胞に蓄積する数多くの液胞タンパク質の成熟化に関わる酵素である。昨年度までの研究で,シロイヌナズナにおける種子貯蔵タンパク質の成熟化にはαVPE,βVPE,γVPE三つのVPEが協調して働いていること等,VPEの役割を明らかにした。本年度はさらに,液胞の機能変換を明らかにする目的で以下の研究を行い,新しい知見を得た。1.ショ糖飢餓による液胞への輸送経路の変換タバコ培養細胞(BY-2)はショ糖飢餓により液胞のプロァアーゼ活性が上昇し,細胞内のオルガネラの数が減少する。そこで,ショ糖飢餓下,プロテアーゼ阻害剤存在下でのBY-2の形態的な変化を観察した。その結果,ショ糖飢餓下で,パパインタイプのプロテアーゼ阻害剤であるE64dを処理した場合には,細胞内に酸性の小胞が蓄積した。蛍光色素であるFM4-64はエンドサイトーシスで細胞内に取り込まれ,液胞まで運ばれる、ショ糖飢餓下,E64d処理下でみられる酸性小胞は、FM4-64で標識された。このことから,この酸性小胞は後期エンドソームであることが示唆された。また,ショ糖存在下ではE64d処理による小胞の蓄積は見られず,蛍光色素は液胞に到達した。このことより,BY-2においてショ糖飢餓下でのエンドサイトーシスにはパパインホモログが関与していることが示唆された。2.種皮特異的に発現するδVPEの解析シロイヌナズナのゲノムには,新しいVPEのホモログ(δVPE)が存在することがわかった。そこでこの新しいVPEの解析をタンパク質レベルで行った。ΔVPEに対する抗体を作成し,組織における発現を調べたところ,胚発生初期の種皮に特異的に発現していることが明らかとなった。種皮は,種子の発育とともに細胞死を起こすことが知られている。このことから,δVPEは種皮の細胞死に伴うタンパク質の分解に関与していると考えられた。
急性期病院における看護師と看護補助者の効果的な協働のあり方の検討

平成30年度は、1急性期病院に勤務する中堅以上の看護師が「業務」と捉える実践および「看護」と捉える実践を明らかにする事を目的としたインタビュー結果の再分析、2急性期病院に勤務する看護師が「忙しい」と感じる状況における実践内容を明らかにするインタビュー調査・分析を実施した。1では次の内容が明らかになった。「業務」という言葉は文脈で使い分けられており、言葉の使い方は人それぞれであるが、仕事の捉え方は共通している。その捉え方とは、自分が行っている仕事には、【非専門的な仕事】と【専門的な仕事】があり、【専門的な仕事】は、自分のやりようによって<看護の要素が含まれていない>仕事と、<看護の要素が含まれている>仕事に分けられるいう事である。この調査の際、<看護の要素が含まれない>実践になる理由として、「忙しい」という言葉が頻回に聞かれ、「忙しい」状況になると、看護の要素が含まれた実践よりも優先されている事があると推測された。当初の計画ではこの調査の後、看護師と看護補助者の業務分担を決定する際の基準の実態調査を行う予定であったが、それらに関する調査報告はなされていた為、忙しさを理由に<看護の要素が含まれている>仕事よりも優先している内容を明らかにする方が研究課題を検討する上で重要であると判断し、2を実施した。2では、「忙しい」と感じる状況では自分が大切だと思う看護の実践や、患者の重症度に関係なく各患者に必要な看護を提供する事よりも、自分の仕事の効率、病棟での決まり事や暗黙の了解、同僚との協調、看護補助者の仕事の補完を看護実践よりも優先している事が明らかになった。研究期間全体を通して、看護の要素が含まれるやりようで看護を実践する事が看護師の専心するべき業務であると看護師は認識している事、しかし、それよりも看護補助者の業務の補完を優先している状況がある事が明らかになった。本研究は、急性期病院における看護師と看護補助者の協働のあり方を、看護師が捉えている「業務」の視点から検討する事を目的としている。平成28年度は、急性期病院に勤務する中堅以上の看護師が「業務」と捉える実践及び「看護」と捉える実践を明らかにする事を目的とし、1)インタビュー調査の事前準備のための情報収集、および、2)急性期病院に勤務する中堅以上の看護師へのインタビューを実施した。2)では、1クリニカルラダーあるいはキャリア開発ラダーを使用している場合、ラダーIII以上、2現在所属している病棟に3年以上在籍しており、看護師として5年以上臨床経験がある、3固定チームナーシングにおけるチームリーダー、臨床実習指導者、新人教育担当者、教育委員のいずれかの役割を経験したことがある、あるいは現在その役割を担っている、4病棟の看護管理者や主任などの職位についていない、の4つの条件を全て満たす看護師を研究協力者とし、半構成的インタビューを実施した。インタビュー内容は、1仕事の中で業務だと思うことと、その具体的な理由、2仕事の中で業務ではないと思うことと、その具体的な理由、3同じ事を実施していても業務と感じる場面と感じない場面があるか、その具体的な理由であった。20名程度にインタビューを行う予定であったが、12名のインタビューを実施した時点で、内容が飽和したと結論付け、インタビューを終了した。現在、インタビュー内容の逐語録から、急性期病院に勤務する中堅以上の看護師がどのような実践を「業務」と認識するのかを明らかにするため、分析方法を再検討しているところである。インタビューの協力者のリクルートを、強制力の排除を目的とし、1)急性期病院の看護部門の長(以下、看護部長とする)に研究協力依頼を行う、2)協力いただける場合、選定条件に該当する看護師に研究協力依頼書を渡していただく、3)研究協力依頼書を受け取った看護師は、研究に関心を持った場合のみ、直接研究者に連絡をする、という方法で実施した。その結果、看護部長の協力を得られたとしても、看護師からの協力を得ることが難しく、インタビューの協力者のリクルートに、想定していたよりも期間がかかり、計画の進行が予定よりも遅れてしまう結果となった。しかし、インタビューは全て終了しているため、当初計画にキャッチアップは可能であると考えている。本研究は、急性期病院における看護師と看護補助者の協働のあり方を、看護師が捉えている「業務」の視点から検討することを目的としている。平成29年度は、急性期病院に勤務する中堅以上の看護師が「業務」と捉える実践および「看護」と捉える実践を明らかにする事を目的としたインタビュー結果の分析を、スーパーバイズを受けながら行った。分析は、研究協力者が何を基準にして実践を「業務」と認識するのかという視点で行った。分析の過程で、中堅以上の看護師は実践を「業務」と「看護」と明確に分けて認識はしていないことが明らかになった。また、実践すべてを単純に「業務」と認識しているのではなく、何らかの判断基準で「業務」を35種類程度に分類して認識していることが明らかになった。その種類は、「何をどうするか」を基準とし「何をどのようにするか」という「やりよう」によって分類されている。そして、「業務」という言葉は、使われる文脈において様々な意味を持つことも明らかになりつつある。この事は、看護師が「業務」という言葉を様々な意味で認識している可能性を示唆していると考えられる。そのため、看護師と看護補助者の協働のあり方を検討する際に、言葉だけではなく看護の本質的な側面から、慎重に検討する必要があると考えられる。

現在、分析結果をより豊かにするため、スーパーバイスを受けながら再分析を行っているところである。看護師が「業務」と捉えている実践の様相が想定よりも複雑であったため、その世界を表現するための分析に想定より時間がかかり、計画の進行が予定よりも遅れてしまう結果となった。平成30年度は、1急性期病院に勤務する中堅以上の看護師が「業務」と捉える実践および「看護」と捉える実践を明らかにする事を目的としたインタビュー結果の再分析、2急性期病院に勤務する看護師が「忙しい」と感じる状況における実践内容を明らかにするインタビュー調査・分析を実施した。1では次の内容が明らかになった。「業務」という言葉は文脈で使い分けられており、言葉の使い方は人それぞれであるが、仕事の捉え方は共通している。その捉え方とは、自分が行っている仕事には、【非専門的な仕事】と【専門的な仕事】があり、【専門的な仕事】は、自分のやりようによって<看護の要素が含まれていない>仕事と、<看護の要素が含まれている>仕事に分けられるいう事である。この調査の際、<看護の要素が含まれない>実践になる理由として、「忙しい」という言葉が頻回に聞かれ、「忙しい」状況になると、看護の要素が含まれた実践よりも優先されている事があると推測された。当初の計画ではこの調査の後、看護師と看護補助者の業務分担を決定する際の基準の実態調査を行う予定であったが、それらに関する調査報告はなされていた為、忙しさを理由に<看護の要素が含まれている>仕事よりも優先している内容を明らかにする方が研究課題を検討する上で重要であると判断し、2を実施した。2では、「忙しい」と感じる状況では自分が大切だと思う看護の実践や、患者の重症度に関係なく各患者に必要な看護を提供する事よりも、自分の仕事の効率、病棟での決まり事や暗黙の了解、同僚との協調、看護補助者の仕事の補完を看護実践よりも優先している事が明らかになった。研究期間全体を通して、看護の要素が含まれるやりようで看護を実践する事が看護師の専心するべき業務であると看護師は認識している事、しかし、それよりも看護補助者の業務の補完を優先している状況がある事が明らかになった。平成29年度は、引き続きインタビューの分析方法を検討し、分析を進める。その後、申請者が公表している、急性期病院の看護師が「業務的」と捉えている実践と、インタビューデータの分析結果を比較検討し、看護師が「業務」と捉える実践を構造化し、看護師が専心するべき「業務」を検討する。そして、看護師と看護補助者の業務分担を決定する際の基準の実態調査を行う。以上の過程においては、国内の専門家の助言を積極的に得て、研究を推進する予定である。平成30年度は、引き続きインタビュー結果の分析を進める。その後、看護師が「業務」と捉えている実践を構造化し、看護師が専心するべき「業務」を検討する。その結果を踏まえて、看護師と看護補助者の業務分担の実態調査を検討する。そして、全ての結果をもとに、看護師と看護補助者の協働のあり方を検討する。当初、インタビュー調査を中部地方、近畿地方、中国地方を想定していたが、リクルートの結果、インタビュー調査は近畿地方圏内で実施となったため、初年度の旅費が予定よりもかからなかった。
βVLDL受容体の精製およびの構造決定

ベータ超低比重リポ蛋白(β・VLDL)は.III型高脂血症患者やコレステロール負荷動物において蓄積することが知られており.マクロファージ(Mφ)に取り込まれてその泡沫化を惹起し.粥状動脈硬化初期巣の形成に寄与することが知られている。家族性高コレステロール血症ホモ接合体のモデル動物であるワタナベウサギは.血清LDLコレステロールが著明に増加しているのみならず,VLDLも増加している。我々は.正常及びワタナベウサギのMφと繊維芽細胞(Fb)におけるβ-VLDLの取り込み機構について検討し.粥状動脈硬化との関連につき解析した。正常及びワタナベウサギ腹腔Mφは.β-VLDLを濃度依存性に取り込み分解し.そのカーブは.飽和曲線を示した。ワタナベウサギMφへの取り込みは.正常と比較してその約30%であった。ワタナベウサギMφは低比重リポ蛋白(LDL)をほとんど取り込まなかった。Fbにおいても.同じ傾向を示した。Mφ及びFbにおいて.β-VLDLの取り込みは.抗LDL受容体抗体を加えることにより.完全に抑制された。これらの結果よりワタナベウサギの腹腔MφとFbにおいては.リガンド結合部位に4アミノ酸欠損した変異LDL受容体がβ-VLDLを取り込むことを示した。抗LDL受容体抗体を用いた免疾沈降実験において.ワタナベウサギMφは.成熟型のLDL受容体を合成することが示された。β-VLDLとワタナベウサギFbの膜分画を用いたリガンドブロッティングにおいては.正常とはぼ同じ大きさの160kDの単一のバンドが検出された。これらの結果より.β-VLDLは.Mφ及びFbにより.変異LDL受容体により正常の約30%程度取り込まれることが明らかとなった。ワタナベウサギのVLDLはβ-VLDL様の性質を持っていることが知られており.Mφの泡沫化に関与して粥状動脈硬化巣の形成に寄与する可能性が示唆された。本年度はまず、実験の基本的手技として重要な膜蛋白の精製方法を確立する意味で、ウサギのLDL受容体の精製を行なった。正常ウザギの肝細胞のLDL受容体をエストラジオ-ルの投与により誘導し、このウサギの肝臓から膜蛋白分画を超遠心法で分離した。これをDEAEセルロ-スカラムに通し、カラムに吸着した蛋白を溶出させる。得られた蛋白をさらにLDLアフィニティ-カラムを通すことによって精製し、LDL受容体蛋白を得た。これをSDSポリアクリルアミド電気泳動した後ニトロセルロ-スペ-パ-にtransferし、ここにβVLDLをアポEを介してLDL受容体に結合させ、その存在をβVLDL表面に存在する別のアポ蛋白であるアポBに対する抗体を用いて検出した。この結果、LDL受容体蛋白が単一のバンドとして検出され、この手技によって受容体蛋白の精製が可能であることが確認できた。本研究に対する科学研究費で購入した各研究機器は、このような蛋白の分離精製に非常に役立っている。この方法を基本として本研究の目的であるβVLDL受容体蛋白の精製を行ないたいと考えている。具体的にはLDL受容体の欠損したWHHLウサギの、しかも粥状動脈硬化病巣にみられる泡沫細胞の起源であるマクロファ-ジを、受容体精製に用いる細胞とする予定である。現在までに研究の基盤となるWHHLウサギの繁殖は順調に進み、その腹腔マクロファ-ジの採取もすでに確立した方法により安定して行なうことが可能になっている。

ただ、βVLDL受容体とLDL受容体の異動については現在議論のあるところであり、WHHLウサギのLDL受容体も完全欠損ではなく、不完全ながらも蛋白として合成されていることが明らかになっており、これらの点に注意を払いつつ今後の実験を進めて行きたいと考えている。昨年度に引き続きβVLDL受容体の精製を進める目的で,今年度はWHHLウサギの線維芽細胞ならびに腹腔マクロファ-ジにおけるβVLDL受容体に関してin vitroの系で実験を行なった。正常ならびにWHHLウサギの線維芽細胞は皮膚から培養,継代したものを実験に用いた。ウサギ腹腔マクロファ-ジは我々がすでに確立した方法,すなわちウサギ腹腔内にパラフィンオイルを注入し,4日後に腹腔洗浄を行なうことによって採取し,これを0.2%ラクトアルブミンを含む培地で培養したものを用いた。これらの細胞におけるβVLDLのdegradationを,〔^<125>I〕で標識したβVLDLを用いて検討した。βVLDLはコレステロ-ル食を負荷したウサギのVLDL分画から得た。その結果,WHHLウサギの線維芽細胞,マクロファ-ジのいずれも,dose response studyで飽和曲線を描くパタ-ンのdegradationを呈した。WHHLウサギの細胞におけるdegradationの絶対量は正常ウサギに比較しておよそ30%だった。リガンドブロット実験で〔^<125>I〕βVLDLが結合する膜蛋白は,非還元条件でSDS/PAGE上およそ130kDのサイズのものだった。一方免疫沈降実験では,WHHLウサギマクロファ-ジは還元条件で分子量およそ160kDの成熟した変異LDL受容体を合成していることが明らかになった。これらの結果からはβVLDLの取り込みがLDL受容体を介して行なわれている可能性も考えられ,この点についてさらに検討を行なっていく予定である。具体的にはウサギLDL受容体に対する抗体を用いてWHHLウサギのβVLDLのdegradationが阻害を受けるかなどについての実験を行ない,βVLDL受容体のcharacterizationを行ないたい。正常及びワタナベウサギ腹腔Mφを〔^<3S>S〕メチオニンと共に2時間培養した後(パルス)、細胞を洗浄し、非標識メチオニンを加えて2時間チェイスしたのち、細胞を可溶化して抗LDL受容体抗体(C7)と反応させて、SDSポリアクリルアミド電気泳動を行い、オートラジオグラフィーを行った。正常Mφにおいては、2時間のパルス直後において、120kdの前駆体と160kdの成熟型がほぼ1:1であり、チェイス後30分でほとんど120kdの前駆体から160kdの成熟型へ移行したが、ワタナベウサギMφにおいては、120分チェイス後もわずかしか成熟型への移行は認められなかった。この結果より、ワタナベウサギMφにおいては、成熟型の受容体は産生されるが、成熟の段階において正常に比ベ遅延が認められることがわかった。正常及びワタナベウサギ線維芽細胞の膜分画を採取し、SDSポリアクリルアミド電気泳動を行った。ニトロセルロース膜にトランスファーしたのち、〔^<12S>I〕β-VLDLとインキュベートしてリガンドブロッティングを行った。