hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
第1次世界大戦-ヴァイマル共和国成立期におけるドイツ社会保障制度の展開

本研究の課題は、第1次世界大戦のドイツ社会保障制度史における意義を明らかにすることにあった。予想をこえて長期化し,全体戦争となった大戦のなかで,それまでに定着していた第2帝政期ドイツの社会政策がどのような問題に直面し,それらをどのまでどのように解決し得たのか,あるいは解決し得なかったのか,残された問題への対処としてどのような政策が打ち出されたのか,それらは総体としてどのような性格・特徴を有していたのか,といったことが解明されねばならなかった。第2帝政期から定着していた社会保険制度と救貧制度については,大戦期には制度の改正も限られており,そうしたなかで,これらの制度はそれぞれの機能をそれなりに果たした。他方では,当初の大量失業への対応としての失業救済から始まって,戦時経済の動きを支えるための職業紹介,労働力の配分統制へと進む労働市場政策がとられ,それを可能にするために,企業や経営のなかでは労働者の団結が認められ,その主張・要求を取り入れる機構もつくられていった。また,出征兵士留守家族の救済や戦傷者・帰還兵士,戦争遺族の扶助に関する新しい制度がつくられたが,これは,従来の救貧制度とは異なって理念に基づくものであった。さらに,家賃の補助や信用供与といった中間層対策も取られたし,深刻化する食糧事情に対応して,食糧供給に関する規制もなされた。このように,戦時期の社会政策はきわめて多様な内容をもっていたが,それら相互間では,実際に運営ですりあわせが必要であったり,理念上の齟齬があったりした。また,国民各階層では,その点を含んで,将来の社会体制をどのように形成していくのかについて,様々な構想が併存し,対立していた。敗戦の混乱のなかで成立したヴァイマル共和国は,そうした問題を解決する課題を背負っていたのである。ここ数年来、研究代表者は、現代福祉国家の歴史的意味を明らかにするという問題関心から、ドイツ社会保障史の展開を辿るという作業を続けてきた。これまでの研究をとおして明らかにされたのは、19世紀後半から第1次世界大戦にいたる時期にドイツでは、総合的な扶助制度として出発した救貧制度は、それが典型的に展開したエルバーフェルトの事例に即してみれば、次第に生活保護に純化する傾向を示した、ということであった。そして、それには、救貧制度を補完するものとして1880年代から社会保険制度が制定され、発展してきたことが大きく影響したものと考えられる。そこで、本研究の出発点は、第1次世界大戦が勃発する直前のドイツにおける社会保障政策を全体として理解しておくことであった。そうした課題に迫るべく、第2帝政期ドイツを代表する社会政策思想家の1人であるルーヨ・ブレンターノの社会保険制度にかかわる考えを手がかりとして、社会保険制度の歴史的性格に対する理解を深めようとする試みがなされた。1999年1月に公表された「ブレンターノの労働者強制保険論」はその成果である。本研究の課題は、第1次世界大戦のドイツ社会政策史における意義を明らかにすることにある。より具体的にいえば,予想をこえて長期化し,全体戦争となった大戦のなかで,それまでに定着していた第2帝政期ドイツの社会政策がどのような問題に直面し,それらをどのまでどのように解決し得たのか,あるいは解決し得なかったのか,残された問題への対処としてどのような政策が打ち出されたのか,それらは総体としてどのような性格・特徴を有していたのか,といったことが解明されねばならなかった。

第2帝政期に定着していた社会政策の主なものは社会保険制度と救貧制度であるが,これらに関する制度の改正は限られており,そうした限定された枠組みのなかで,これらの制度はそれぞれの機能をそれなりに果たした。それに対して,戦争がもたらした直接の問題への対応としては,戦時経済の動きを支える,労働市場の調整・統制がなされ,また,それを可能にするために,企業や経営のなかでは労働者の団結が認められ,その主張・要求を取り入れる機構もつくられていった。他方では,出征兵士留守家族の救済や戦傷者・帰還兵士の扶助に関する新しい制度がつくられ,さらに,食料供給に関する規制,中間層保護もなされた。これらによって,社会政策の内実は多様化したが,それら相互間では理念上の齟齬があったり,実際に運営ですりあわせが必要であったりした。また,国民各階層では,その点を含む将来の社会体制をどのように形成していくのかについて,様々な構想が併存し,対立していた。敗戦の混乱のなかで成立したヴァイマル共和国は,そうした問題を解決する課題を背負っていたのである。
『河海抄』を中心とした室町期源氏学の動向と展開に関する基礎的研究

本研究は、1『河海抄』の伝本調査と注釈内容の分析、2四辻善成の源氏学の形成・展開と他の学問動向との連動・連関に対する考究、3『河海抄』以外の古注釈書・享受資料に関する検討、以上の三点を統合的に扱い、中世源氏学の実態を実証的に解明することを目的とする。1では、これまでの研究者の研究に継続するものとして、現存諸伝本の基礎的文献調査・本文系統の整理を行う。特に、注釈史上最も重要な伝本と捉えている、熊本大学附属図書館北岡文庫蔵本に対する重点的な調査と、その本文データの作成・公開を目指す。本年度は、巻十五に関する論考を発表した。また、当初の計画通り、北岡文庫蔵本の本文データ作成を進めた。2では、具体的な注記や注釈内容から、善成の学問体系における源氏学の位置付けを浮かび上がらせる。背景にある文化圏からの影響を中心に、先行する源氏学の摂取・利用の実態、諸学問の成果との関係等に検討を加える。本年度は、昨年度に引き続き、『李部王記』を引用する注記について、その発生・展開・流入の経緯等の問題を精査した成果をまとめることが出来た。3では、前述の1・2で得られた成果を援用し、『河海抄』以後の源氏学における、周辺諸学との接点に焦点を当てる。具体的には、『伊勢物語』や『古今和歌集』の注釈書、連歌論書等への影響関係を探る。本年度は、宗祇の『伊勢物語』の注釈書である『伊勢物語山口記』の現存諸本に関する論考を公開した。また、宗祇の源氏学の始発としての『花鳥余情抄出』の性格について基礎的な研究を行い、学会での口頭発表による報告と論文公開を行った。これとは別に、三条西実隆の手による注釈書である『弄花抄』についても、陽明文庫蔵本への基礎的調査を中心として、従来説の見直しを迫る問題点を洗い出すことが出来た。本年度の研究は、おおむね当初の計画通りに遂行することが出来た。1に関しては、未見諸本の継続的な調査を行いつつ、諸本の本文系統を把握する上での、基礎的かつ重要な観点を獲得しつつある。昨年度に引き続き、室町期に広く流布していたと考えられる三条西実隆筆本系統の性格・問題点を検討し、その成果をまとめる段階に入りつつある。また、北岡文庫蔵本の本文データ作成については、これまでの調査によって得られた情報を反映させながら、基盤となる本文データの作成に着手した。現在までに、およそ3割程度を完成させることが出来た。2について、昨年度までに残された課題であった、一条兼良の『源氏物語』注釈書である『花鳥余情』との関係性解明に関して、一定の成果を挙げることが出来た。『河海抄』の注釈書としての性格を論じる際に、注釈書の成立と、注釈内容の増補改訂とが連動しない場合があることを指摘し、従来の研究が見落としてきた観点を浮かび上がらせた。当時の両書の存在がどのようなものであったのかについては、今後、更なる検討が必要であると考えている。3においては、宗祇の物語注釈に関する基礎的研究を、当初の年度計画通りに遂行することが出来た。本年度より計画していた、兼良から宗祇・三条西実隆に至る『源氏物語』享受史の動向把握、及び、物語注釈が担う学問的役割の推移変遷に関する実態解明について、宗祇『花鳥余情抄出』の基礎的研究を通して、基幹となりうる一定の成果を出すことが出来た。ただし、より精密な検証を行うためには、未見資料を含めた更なる対象の拡大が必要であることが判明した。具体的対象についての選別は既に終えており、次年度以降に具体的な調査を行うこととする。なお、これらの点については、2の成果とも関わらせながら、より一層の研究の深化を目指すこととする。次年度以降の研究推進については、研究計画、研究方策ともに、当初の計画に基づきながら行うものとする。1においては、最も優先すべきは北岡文庫蔵本の本文データの作成・公開であり、次年度は翻刻を行いつつ、基盤データの完成を目指す。また、翻刻が終了した箇所については、公開に向けた具体的な準備に入るように計画を立てている。また、各地の所蔵機関への調査については、東北大学附属図書館狩野文庫や陽明文庫等を対象とし、国文学研究資料館所蔵のマイクロフィルム・紙焼写真等をも用いることとする。2に関しては、次年度は、これまでの課題であった『花鳥余情』との関係性解明について、中心的な役割を果たす論考をまとめることとする。また、今川了俊を中心として、これまで未解明であった『河海抄』との関係について、基礎的な調査・検討を行っていく。これまでの研究で得られた成果を援用しながら、影響関係の実相を具体的に把握することを目指す。3については、宗祇と三条西実隆を中心とした、『源氏物語』『伊勢物語』の注釈書・享受資料に関する検討を中心的に行う。従来の研究で直線的かつ単線的に捉えられてきた享受史について、室町時代前期の『源氏物語』『伊勢物語』の注釈書・享受資料を扱い、物語注釈がどのように変貌していったのかを通時的変遷を学際的視点から俯瞰する。宗祇・実隆に関する先行研究は十分に蓄積されているため、これら先学の指摘を応用しながら室町期源氏学の様相を掴む。

3年目の具体的な対象としては、『河海抄抄出』『雨夜談抄』『弄花抄』『源氏雑乱抄』を予定している。なお、2と連接する部分については、統合的に扱うものとする。本研究は、1『河海抄』の伝本調査と注釈内容の分析、2四辻善成の源氏学の形成・展開と他の学問動向との連動・連関に対する考究、3『河海抄』以外の古注釈書・享受資料に関する検討、以上の三点を統合的に扱い、中世源氏学の実態を実証的に解明することを目的とする。1では、これまでの研究者の研究に継続するものとして、現存諸伝本の基礎的文献調査・本文系統の整理を行う。特に、注釈史上最も重要な伝本と捉えている、熊本大学附属図書館北岡文庫蔵本に対する重点的な調査と、その本文データの作成・公開を目指す。本年度は、巻十一と巻十五に関する論考をまとめつつ、当初の計画通り、北岡文庫蔵本に対する細かな調査を行い、本文データ作成に向けた基盤を整えた。2では、具体的な注記や注釈内容から、善成の学問体系における源氏学の位置付けを浮かび上がらせる。背景にある文化圏からの影響を中心に、先行する源氏学の摂取・利用の実態、諸学問の成果との関係等に検討を加える。本年度は、『河海抄』で用いられる「可随所好」という文言に着目し、様々な典籍における使用状況を確認した上で、当時の注釈に対する基本的姿勢の一端を明らかにした。また、『李部王記』を引用する注記について、その発生・展開・流入の経緯等の問題を集中的に考察した。3では、前述の1・2で得られた成果を援用し、『河海抄』以後の源氏学における、周辺諸学との接点に焦点を当てる。具体的には、『伊勢物語』や『古今和歌集』の注釈書、連歌論書等への影響関係を探る。本年度は、宗祇の『伊勢物語』の注釈書である『伊勢物語山口記』を対象の中心に据えた。『伊勢物語』注釈史の流れを押さえながら、宗祇が残した数々の『源氏物語』や『伊勢物語』の注釈書との相関関係、また連歌書や歌学の面から見た宗祇の物語注釈の位置付けについて、国際学会(第15回ヨーロッパ日本研究協会国際会議)で詳細な報告を行った。本年度の研究は、おおむね当初の計画通りに遂行することが出来た。1に関しては、未見諸本の継続的な調査も必要ではあるものの、諸本の本文系統を把握する上での、基礎的かつ重要な観点を獲得しつつある。本年度の成果である巻十五に関する論考では、室町期に広く流布していたと考えられる三条西実隆筆本系統の性格・問題点を指摘しており、今後の研究推進に関する一つの指針を得ている。また、北岡文庫蔵本の本文データ作成については、これまでの調査によって得られた情報を反映させながら、基盤となる本文データの作成に着手する段階にある。3においては、宗祇の物語注釈に関する基礎的研究を、当初の年度計画通りに遂行することが出来た。次年度以降に計画している、兼良から宗祇・三条西実隆に至る『源氏物語』享受史の動向把握、及び、物語注釈が担う学問的役割の推移変遷に関する実態解明、以上2点の課題への蓄積とすることが出来た。連歌師の動向・影響については、2とも連動する部分が多いため、今後はそれぞれを並行的に進めつつも、適宜これらを有機的に関わらせながら推進すべきであると考えている。
ドイツにおける音楽科教師の専門性と教授能力育成に関する研究

本研究の目的は、ドイツにおいて音楽科教師の専門性と教授能力がどのように育成されているのかを明らかにすることである。ハンブルク州を対象として、大学における養成(第1段階)および大学修了後の試補勤務(第2段階)の制度と内容を精査した。その結果、第1段階では教科の専門的学習と教育諸科学の学習を専門大学(ハンブルク音楽演劇大学)と総合大学教育学部(ハンブルク大学)で行い、各専門性を高めていること、第2段階では試補勤務校において実践経験を積みながら教員養成ゼミナールで教師としての実践力を高め、第2次国家試験で教師としての資質・能力の最終確認が行われることが明らかとなった。平成25年度は、音楽科教師の専門性と教授能力の育成について、教育学領域における教員養成制度研究に基づきながら、音楽科教育の視点で教員養成の構造を明らかにしようとした。具体的には、ボローニャプロセスの影響を受けて学士・修士制度を導入しているベルリン州をとり上げ、音楽科教員養成を行っているベルリン芸術大学におけるギムナジウム教職課程の修得単位数、および学修内容について精査した。また、各州文部大臣会議(KMK)によって2004年に策定された教員養成における教育学、一般教授学、教育心理学、教育社会学に関するスタンダードである「教員養成スタンダード:教育諸科学」、および2008年に策定された教科専門と教科教授法に関するコンピテンシーを示した「教科プロフィール」の2つの文書を精査し、教育諸科学と音楽科教育の双方におけるコンピテンシーの内容と特徴について分析・考察を行った。これらのことから、ドイツにおける音楽科教師の専門性として次のことが明らかとなった。第1に、教育諸科学に関するスタンダードからは、授業形成や子どもへの教育的関与の諸理論と実践的能力、子どもの学習と教師の指導を評価し、適切な学習を構築する能力、および教師としての職能を継続的に開発する能力が専門性として見い出せた。第2に、音楽科に関するスタンダードからは、学校実践の文脈で子どもに音楽を教授し、子どもの音楽学習を形成・支援するための教科専門的/教科教授法的な知識・技能が専門性として見い出せた。そのなかには、学校教育の実践者・研究者として音楽科授業を研究する視座の獲得も専門性に位置づけられていた。このように本研究は、近年のドイツの教員養成改革において、教師の質的向上を図るために、教育諸科学のスタンダード基盤に、各教科のスタンダードによって教科の専門的な知識・技能を高める構造であることを音楽科の視点で明らかにした点で意義がある。平成26年度は、音楽科教員養成課程を持つ大学の教員養成規程およびシラバスの分析を行い、履修科目とその内容を精査することをとおして、ドイツにおける音楽科教員養成の特徴を大学における学修を中心に明らかにした。具体的には、ボローニャプロセスの影響を受けて2007/2008年から学士課程と修士課程を新設し、それらを一体として教員養成の第1段階とするようになったハンブルク州を調査の対象として選定し、音楽科教員養成に関わるハンブルク大学とハンブルク音楽演劇大学の諸規定の分析・検討、および両大学の現地調査を行った。ハンブルク州では「教育学」に関わる内容を総合大学であるハンブルク大学が担当し、授業科目の内容である「音楽」に関わる内容を専門大学であるハンブルク音楽演劇大学が担当している。これらの大学間の学修を調整し、教育実習を司るのがハンブルク州教員養成・学校開発研究所である。両大学の諸規定およびシラバスを分析したところ、以下のことが明らかとなった。1学士課程では他の教科と比べて音楽科の必要単位数が多く(105単位)、学習期間も長い。2履修科目は関連する講義やゼミナールを包括してモジュール化されている。3音楽に関わる科目は、ハンブルク大学では教科教授法と基礎学校における学習領域、教育実習に限定され、音楽演劇大学では演奏に関わる学習が集中的に行われる。4教育実習が学士課程と修士課程を通して綿密かつ集中的に配置され、重視されている。5ハンブルク大学における「教育学」の部分課程においては音楽科教授法よりも一般教育学の割合が高く、教育実習と関連してこれらの知識と能力の獲得がより重視されている。6音楽演劇大学における学修は、音楽の内容に関する専門的学習であり、学校教育の場を想定したものは少数に限定される。7これらの学びはその後に行われる18か月の試補勤務においてさらに実践的に補足・強化される。平成27年度は、これまでの研究結果に基づき、ハンブルク州を対象として音楽科教員養成課程を置くハンブルク大学およびハンブルク音楽演劇大学の教員養成カリキュラムを精査した。両大学の音楽科教員養成課程担当の教授2名と面会し、制度的側面について詳細な情報を得るとともに、教員養成における大学の役割と位置づけを明らかにした。ハンブルク州は総合大学であるハンブルク大学と専門大学であるハンブルク音楽演劇大学の2大学にまたがって音楽科教員養成を行う特徴的な州であり、このことによって音楽の高い専門性と後の試補勤務につながる教育学的な専門性の獲得の両立を可能としている。質の高い教員養成の第1段階として、このような体制がとられていることが明らかとなった。それぞれの大学のカリキュラムはボローニャプロセスの影響を受けて、学習のまとまりであるモジュールで構成されている。教育実習もその中に効果的かつ集中的に組み入れられており、バチェラーとマスターの通算6年間で試補となる基礎を培っている。その中では音楽の専門的な学びを学校実践の文脈に変化・適合させることに重点が置かれている。

さらに、教員養成第2段階である大学修了後の試補勤務の実態について、ハンブルク州教員養成・学校開発研究所の教科指導者と面会し、その制度的側面と学習内容および第2次国家試験の基準について明らかにした。その結果、大学における養成と試補勤務における養成の全てを教員養成・学校開発研究所が統括し、各大学、各試補勤務校、教員養成ゼミナールとの連携を図り、教師の資質・能力の最終的な判断の場である第2次国家試験の実施と評価を極めて詳細な基準のもとで実施していることが明らかとなった。このように、6年間の大学における養成、18か月の試補勤務、および試補勤務中の評価と第2次国家試験の成果全てが積み重なり、指導力と実践力の高い音楽科教師を養成しているのである。本研究の目的は、ドイツにおいて音楽科教師の専門性と教授能力がどのように育成されているのかを明らかにすることである。ハンブルク州を対象として、大学における養成(第1段階)および大学修了後の試補勤務(第2段階)の制度と内容を精査した。その結果、第1段階では教科の専門的学習と教育諸科学の学習を専門大学(ハンブルク音楽演劇大学)と総合大学教育学部(ハンブルク大学)で行い、各専門性を高めていること、第2段階では試補勤務校において実践経験を積みながら教員養成ゼミナールで教師としての実践力を高め、第2次国家試験で教師としての資質・能力の最終確認が行われることが明らかとなった。平成26年度に研究の中心としていた、大学における音楽科教員養成にかかわる制度の全体的把握、および調査対象のハンブルク州における具体的事例の精査・分析が達成された。音楽教育学今後は、平成25・26年度の研究結果に基づき、ハンブルク州を主要な調査対象としながら、大学修了(修士課程)後または第1次国家試験合格後に行われる、教員養成における第2段階である試補勤務の制度とその具体的内容について明らかにする予定である。そのために、各州文部大臣会議(KMK)によって公表されている関連資料の整理を行うとともに、現地調査を通して音楽科教員養成の内容と方法について具体的な把握を試みる予定である。平成25年度の研究の中心としていた、ドイツの各州文部大臣会議(KMK)が策定した教員養成にかかわる文書の精査・分析が達成された。現地調査の場所が集約され、また調査日程が限定されたため、次年度使用額がプラスとなった。今後は、平成25年度の研究結果に基づき、音楽科教員養成課程をもつ大学の教員養成規程およびシラバスの分析を行うことによって、履修科目とその内容を明らかにすること(平成26年度)と、大学卒業後の試補勤務期間における音楽科教員養成の構造と内容を明らかにする(平成27年度)予定である。これらを遂行するために、引き続き資料の収集と分析、および必要に応じて現地調査を行う予定である。当初の計画ではボローニャプロセスに基づいてすでに教員養成を学士・修士制度化している州のなかから、芸術大学で養成を行っているベルリン州と、総合大学および音楽大学を連動させて養成を行っているハンブルク州をとり上げる予定であるが、調査の進展に応じて、対象を適宜変更・選択することも想定している。次年度も引き続き現地調査を計画しており、旅費・謝金と合わせて使用する。
動物細胞rRNA遺伝子の転写調節因子の解析

対数増殖期(L期)のマウスFM3A細胞から調製したS100は,in vitro rDNA転写活性を有するが,定常期(S期)からのS100には転写活性がない。これが何に起因するのかを、リン酸セルロ-スカラムクロマトによりS100を分画化し再構成実験により調べた結果、RNAポリメラ-ゼI(polI)を含むTFIC画分の活性の有無によることが分かった。S100をNAD^+と前処理することにより,S期S100によるrDNA転写活性が著しく回復し,一方L期S100に対してはむしろ抑制的に働くことを見い出した。このNAD^+の作用は,ポリADPーリボシル化酵素に対する特異的阻害剤である3ーアミノベンズアミド(3AB)および抗polI抗体を用いた解析から,polIの195Kdaの最大サブユニットをモノADPーリボシル化することにより活性型とし,一方ポリADPーリボシル化することにより不活性型とすることが示唆された。^<32>PーNADにより修飾されたpolIの195Kdaおよび130KdaのバンドをSDSーPAGE後のゲルから抽出し,ホスホジエステラ-ゼ処理後PEI薄層クロマトにより解析した結果から,タンパクが実際にADPーリボシル化されていることが確認された。また,S100タンパクをSDSーPAGEで展開後,ウエスタンブロット法によりニトロセルロ-スに転移し, ^<32>PーNADとインキユベ-トすることによりタンパクがラベルされるかどうかを調べた。その結果, ^<32>PーNADだけの存在ではフィルタ-上のタンパクは修飾されないが,S100を添加することにより,195Kおよび130Kdaのバンドがラベルされた。このことから,タンパクのラベルは単なるNAD^+の結合ではなく,酵素的に修飾されることが明らかとなった。以上のことから,polIのADPーリボシル化による修飾化反応が,マウスrDNAの転写調節に関与していることが強く示唆された。
魚類好中球を用いた水質汚染物質の免疫毒性評価と毒性発揮機構の解明

1.17β-エストラジオール(E2)曝露後のティラピア好中球の性差による感受性E2を用いた免疫毒性評価法を開発するにあたり、魚の雌雄差を考慮する必要があるのかどうかを確認した。E2に曝露させた好中球は、雌雄に関係なく有意に貪食率を低下させた。よって本評価法は、用いる魚の性差を考慮する必要はないことが明らかとなった。2.ティラピア鰾好中球と頭腎白血球を用いたE2曝露による貪食能と再現性本評価法に、頭腎白血球を用いた場合と鰾好中球を用いた揚合とで、どちらが操作の簡便性、再現性に優れているのかを検討した。貪食率は鰾好中球では有意な低下が見られたが、頭腎白血球では有意な低下は認められなかった。また、得られたデータの再現性は鰾好中球が明らかに優れていた。さらに、細胞を調整することの容易さにおいても、鰾好中球が簡便であった。3.エストロジェン核内レセプター(ER)α、β鎖をプローブにした白血球での発現E2の免疫毒性評価において、その作用機構を解明する一環として、好中球を含む白血球集団におけるERの発現をin situハイブリダイゼーションを用いて行った。α鎖は雌雄共に発現が認められたが、その発現量はメスの方が強く、β鎖は雄で強かった。また、赤血球においては両鎖とも発現は認められなかった。4.E2の好中球曝露後の化学発光能測定の為のプロトコールの作成E2の好中球曝露に対し、スーパーオキシドアニオン(O_<2^->)を指標とした評価が可能であるかどうかを検討するため、測定用プロトコールを作成した。好中球(1.0x10^6細胞/50μl、100ppbのE2で2時間曝露)に、40μMのCLAを100μl、PBSを300μl加えた。PMA(1μg/ml)を50μl加えて攪拌後、28°Cで測定(15分間)を開始した。以上の方法により、化学発光能のピーク値を指標として好中球のスーパーオキシドアニオン産生能測定が可能となった。平成15年度は、ティラピア好中球を用いた外因性内分泌攪乱化学物質による免疫毒性評価法の確立を目的とし、下記の研究を行った。1.鰾からの好中球単離法の確立、2.好中球におけるエストロジェンレセプター(ER)の発現解析、3.エストロジェン様化学物質(17β-エストラジオール)が好中球のザイモサン貪食活性に与える影響、4.17β-エストラジオールのアンタゴニスト(ICI-182.780)による貪食能低下への阻害効果1.OD550nmで2.0の濁度に調整した大腸菌死菌1mlを魚体重80-140gのティラピアの体側から鰾内に注射し、24時間後に開腹、2mlのPBSの注射、液体成分の回収を行った。

鰾内に侵出した細胞について詳しく顕微鏡観察した結果、得られた総細胞数は1.0×10^<7-8>個であり、95%以上が貪食能を持つ好中球であった。2.ティラピアERαおよびβを特異的に増幅するプライマーを設計し、RT-PCRによって好中球の発現解析を行った。ERαおよびβいずれも、好中球において発現が認められた。3.好中球(1.5x10^5細胞)に17β-エストラジオールを2時間曝露させた結果、濃度100ppbの時に有意に好中球の貪食能が低下した。10ppbおよび1ppbにおいては有意な低下は認められなかった。4.3の条件で、ICI-182.780(終濃度1x10^<-6>M)を加え、同様に貪食活性を測定した。濃度100ppbにおいて、貪食活性の低下を有意に抑制した。以上のことより、17β-エストラジオールはティラピア好中球の貪食能を抑制し、さらにその作用は、好中球に存在するレセプターを介しているということが明らかとなった。また、鰾からの好中球採取法は、細胞の組成、成熟度が一様で、実験の再現性に優れていことが示された。今後、各種エストロジェン様化学物質の免疫毒性評価を行う予定である。1.17β-エストラジオール(E_2)曝露後のティラピア好中球の性差による感受性E_2を用いだ免疫毒性評価法を開発するにあたり、魚の雌雄差を考慮する必要があるのかどうかを確認した。E_2に曝露させた好中球は、雌雄に関係なく有意に貪食率を低下させた。よって本評価法は、用いる蕉の性差を考慮する必要はないことが明らかどなった。2.ティラピア鰾好中球と頭腎白血球を用いたE_2曝露による貪食能と再現性本評価法に、頭腎白血球を用いた場合と鰾好中球を用いた場合とで、どちらが操作の簡便性、再現性に優れているのかを検討した。貪食率は鰾好中球では有意な低下が見られたが、頭腎白血球では有意な低下は認められなかった。また、得られたデータの再現性は鰾好中球が明らかに優れていた。さらに、細胞を調整することの容易さにおいても、鰾好中球が簡便であった。3.エストロジェン核内レセプター(ER)α、β鎖をプローブにした白血球での発現恥の免疫毒性評価において、その作用機構を解明する一環として、好中球を含む白血球集団におけるERの発現をin situハイブリダイゼーションを用いて行った。α鎖は雌雄共に発現が認められたが、その発現量はメスの方が強く、β鎖は雄で強かった。また、赤血球においては両鎖とも発現は認められなかった。4.E_2の好中球曝露後の化学発光能測定の為のプロトコールの作成E_2の好中球曝露に対し、スーパーオキシドアニオン(O_2)を指標とした評価が可能であるかどうかを検討するため、測定用プロトコールを作成した。好中球(10x10^6細胞/50μl、100ppbのE_2で2時間曝露)に、40μMのCLAを100μl、PBSを300μl加えた。PMA(1μg/ml)を50μl加えて攪拌後、28°Cで測定(15分間)を開始した。以上の方法により、化学発光能のピーク値を指標として好中球のスーパーオキシドアニオン産生能測定が可能となった。
イオンチャンネル機能の構造的基盤に関する研究

(1)ウシ骨格筋ニコチン性アセチルコリン受容体αサブユニトットをバキュロウィルス発現系により昆虫細胞に大量発現させた。αサブユニットは昆虫細胞の全蛋白質の2-3%を占めており,Zwittergent3-14により効率的に可溶化された。カラムクロマトグラフィーを用いて精製したαサブユニットは,高マンノース型糖鎖の付加を受けており,αブンガロトキシンに対して高い結合親和性を有した。以上の結果から,バキュロウィルス発現系により生産されたイオンチャンネル蛋白を精製することは,組織において発現量の低いイオンチャンネル蛋白を大量に得ることを可能とすることをが実験的に示された。(2)イオンチャンネルの構造と機能に関するこれまでの研究をさらに発展させ,下記の成果を得た。ナトリウムチャンネルcDNAに部位特異的に変異を導入し,発現させた変異チャンネルの機能解析から,ナトリウムチャンネルのイオン選択フィルターの部分を形成するアミノ酸残基を同定した。これらのアミノ酸残基は疎水性領域S5とS6の間のいわゆるSS2領域にあり,リピートIIIのリジン,リピートIVのアラニンをカルシウムチャンネルで見られるグルタミン酸に置換することにより,ナトリウムチャンネルのナトリウム選択性を低下させ,カルシウム透過性を増加させることを示した。また,脳と心筋のナトリウムチャンネルのテトロドトキシン感受性の差異は,リピートIのSS2領域にあるフェニルアラニンとシスチンの差によることを明らかにした。チャンネルの狭小部を形成するアミノ酸残基に変異を加えたニコチン性アセチルコリン受容体の有機カチオンに対する透過性を検討し,本受容体の透過性に狭小部のアミノ酸残基の大きさと電荷がともに重要であることを示すとともに,電荷の変化がチャンネル孔の大きさを規定する因子でありうることを示した。ウサギ脳より新たに2種のカルシウムチャンネルのcDNAクローニングをおこなった(BII,BIII)。これらのカルシウムチャンネルは,以前にクローニングされたBIカルシウムチャンネルと比較的類似しており,非Lタイプのサブファミリーを形成していると考えられた。BIチャンネルが主に小脳に発現しているのに対し,BIIは大脳に多く分布し,BIIIはBIとBIIの中間的な分布を示した。BIIIチャンネルをmuscular dysgenesisのマウス骨格筋細胞に発現させたところ,ωコノトキシンに感受性のあるNタイプのカルシウムチャンネル活性が観察された。細胞内カルシウム貯蔵部位よりカルシウムを放出させる,リアノジン受容体/カルシウム放出チャンネルに関するこれまでの研究をさらに発展させ,新たに脳タイプのリアノジン受容体のcDNAクローニングを行い,その一次構造を明らかにした。本受容体は骨格筋・心筋のリアノジン受容体と類似した構造をしていると考えられる。脳タイプのリアノジン受容体は海馬,線条体,視床に多く発現し,また平滑筋組織にも発現していることが明かとなった。
利得収支を最適化する行為選択過程:鳥類大脳線条体の機能

早成性鳥類は、孵化直後から精確な視覚弁別に基づく選択行動を示す。雛のこの特性を利用して、意思決定過程、特に利得収支の計算過程について一連の実験的検討を加えた。個体レベルの行動学的解析・局所脳破壊実験などに加え、覚醒自由行動下・課題遂行中における大脳単一ニューロン活動の解析を総合的に行うことにより、以下の知見を得た。1基底核(側坐核相同領域):予期される報酬の時間的接近の脳内表現遅延報酬によって強化された色弁別オペラント課題を、艀化後1-2週齢の雛は数時間のトレーニングによって速やかに学習する。線条体内側部の破壊によって、時間的・空間的に近い報酬を選び取ろうとする衝動的選択へのシフトが見出された。報酬の量に基づく選択は正常だった。ニューロン活動の解析の結果、予期報酬の接近と量とを特異的に符号化する2群のニューロンが同定された。さらに比較解剖学的検討の結果、この領域は哺乳類の側坐核(コア)と完全に相同とみなしうることが判明した。2弓外套連合野(大脳皮質前頭前野相同領域):予期されるコストの脳内表現単一ニューロン解析によって、弁別記憶の細胞表現と共に、餌の音源定位に関する作業記憶と考えられる活動を見出した。この領域の選択的な破壊によって、処理コストを嫌うcost-averseな行為選択へのシフトが見出された。3収益逓減と喪失機会:生態的採餌状況の実験的再構成系の開発最適採餌理論(最適パッチ利用モデル)を実験室内で再構成する行動課題を新たに開発した。特に、喪失機会に対する選択の感受性を定量的に計ることが可能となった。早成性鳥類は、孵化直後から高い認知に基づく行動を示す。この特性を利用して、意思決定過程、特に利得収支の計算過程について一連の実験的検討を加えた。1基底核:予期される報酬の時間的接近の脳内表現とその働き遅延時間を繰り込んだ報酬強化色弁別学習課題を、孵化後1-2週齢の雛鳥に学習させた。基底核の尾側部破壊によって、より早く与えられる報酬を選び取ろうとする衝動的選択へのシフトが見出された。報酬の時間的な近さ(temporal proximity)に基づく行動選択のみが阻害され、報酬の有無および量に関する行動選択は正常だった。基底核ニューロンにおいて将来の大きな利益の存在を告知されている限り、動物は目前の小さな利益を求める行動を抑え得て、結果として長期的利益を最大化することができる。さらに、基底核ニューロンには、予期される報酬の時間的接近の度合いに応じて、発火頻度を変えるものが見出された。2扁桃体・前頭前野相同領域:予期される報酬の量とコストの脳内表現とその働き単一ニューロン解析によって、弁別記憶の細胞表現と共に、音に関する一時的作業記憶と考えられる活動を見出した。さらに、この領域の選択的な破壊によって、より少ないコストによって報酬を獲得しようとするcost-averseな行為選択へのシフトが見出された。この領域には予期される報酬の量と、それに伴うコストの情報が表現されているものと考えられる。

1基底核:予期される報酬の時間的接近の脳内表現とその働き遅延時間を繰り込んだ報酬強化色弁別学習課題を、孵化後1-2週齢の雛鳥に学習させた。線条体内側部の破壊によって、空間的に近い報酬を選び取ろうとする衝動的選択へのシフトが見出された。報酬の時空間的な近さ(proximity)に基づく行動選択のみが阻害され、報酬の有無および量に関する行動選択は正常だった。さらに、線条体ニューロンには、予期される報酬の近さを特異的に符号化するものが見出された。餌への到達までに要する時間とコストの計算に関わり、行動の収支を最適化する。2扁桃体・前頭前野相同領域:予期される報酬の量とコストの脳内表現と働き単一ニューロン解析によって、弁別記憶の細胞表現と共に、音に関する一時的作業記憶と考えられる活動を見出した。さらに、この領域の選択的な破壊によって、より大きな処理コストを嫌うcost-averseな行為選択へのシフトが見出された。この領域には予期される報酬の量と、それに伴うコストの情報が表現されているものと考えられる。到達した後の、餌の処理に要する時間の計算に関わり、行動の収支を最適化する。早成性鳥類は、孵化直後から精確な視覚弁別に基づく選択行動を示す。雛のこの特性を利用して、意思決定過程、特に利得収支の計算過程について一連の実験的検討を加えた。個体レベルの行動学的解析・局所脳破壊実験などに加え、覚醒自由行動下・課題遂行中における大脳単一ニューロン活動の解析を総合的に行うことにより、以下の知見を得た。1基底核(側坐核相同領域):予期される報酬の時間的接近の脳内表現遅延報酬によって強化された色弁別オペラント課題を、孵化後1-2週齢の雛は数時間のトレーニングによって速やかに学習する。線条体内側部の破壊によって、時間的・空間的に近い報酬を選び取ろうとする衝動的選択へのシフトが見出された。報酬の量に基づく選択は正常だった。ニューロン活動の解析の結果、予期報酬の接近と量とを特異的に符号化する2群のニューロンが同定された。さらに比較解剖学的検討の結果、この領域は哺乳類の側坐核(コア)と完全に相同とみなしうることが判明した。2弓外套連合野(大脳皮質前頭前野相同領域):予期されるコストの脳内表現単一ニューロン解析によって、弁別記憶の細胞表現と共に、餌の音源定位に関する作業記憶と考えられる活動を見出した。この領域の選択的な破壊によって、処理コストを嫌うcost-averseな行為選択へのシフトが見出された。3収益逓減と喪失機会:生態的採餌状況の実験的再構成系の開発最適採餌理論(最適パッチ利用モデル)を実験室内で再構成する行動課題を新たに開発した。特に、喪失機会に対する選択の感受性を定量的に計ることが可能となった。
巨核球分化におけるNotch シグナルが担う造血制御機構

造血幹細胞から巨核球へ分化する分化経路を明らかにし、その経路におけるNotchシグナルが担う造血制御機構を明らかにするため、新規マウス巨核球前駆細胞分画を明らかにし、そのNotchシグナル分子を含む遺伝子発現パターンを明らかにした。まず、造血幹細胞から未熟巨核球へと分化運命が決定する過程と未熟巨核球が多核化し成熟した多倍体巨核球、最終的に血小板放出へと向かう巨核球成熟過程の経路を詳細に捉えるために、フローサイトメトリーを用いた多重染色法による骨髄中の未分化細胞における最も未熟かつ巨核球へ分化運命が決定した細胞(Megakaryo-Progenitor ; MKP)の同定を行った。その結果、従来骨髄球共通前駆細胞(CMP)分画と考えられていたCD34+/c-Kit+/Sca1-/Lin-分画の一部で巨核球分化抗原の一つであるGPIbα(CD42b)の発現が見られ、この分画の細胞は芽球様の形態であるものの巨核球への排他的な分化能を有しており、純粋なMKPと考えられた。造血幹細胞からこのMKP分画の細胞へと分化する過程(分化運命決定段階)とMKP細胞が多倍体巨核球へと成熟する過程(巨核球成熟過程)にわけ、本研究の目的であるNotchシグナルの役割を明らかにする事とした。Notchシグナル分子であるRBP-JまたはHES1ノックアウトマウス由来の巨核球分化能の評価及び当該遺伝子の強制発現系を構築するために、ノックアウトマウスのコロニー及び高力価かつ低障害性のレトロウイルスとセンダイウイルスを作製し、解析を進める予定である。まず、造血幹細胞から未熟巨核球へと分化運命が決定する過程と未熟巨核球が多核化し成熟した多倍体巨核球、最終的に血小板放出へと向かう巨核球成熟過程の経路を詳細に捉えるために、フローサイトメトリーを用いた多重染色法による骨髄中の未分化細胞における最も未熟かつ巨核球へ分化運命が決定した細胞(Megakaryo-Progenitor;MKP)の同定を行った。この細胞は従来考えられていた、赤血球・巨核球共通前駆細胞(MEP)を介さない分化経路上にあり、長期骨髄再建能を有する造血幹細胞を多く含むCD150陽性c-Kit+Sca1+Lin-分画から直接的に分化する事が、短期液体培養とコロニーアッセイの結果示唆された。また、この分画の細胞では、Notchシグナルの下流因子であるHes1が高発現していることがRT-PCR法で明らかとなり、骨髄凍結切片の蛍光免疫染色の結果、Delta4を発現する血管内皮・間質細胞と近接しており、Notchシグナルが造血幹細胞からこのMKP分画の細胞へと分化する過程(分化運命決定段階)またはMKP細胞が多倍体巨核球へと成熟する過程(巨核球成熟過程)において、何らかの役割を担っている事が示唆された。造血幹細胞分画にレトロウイルスを用いてHes1を強制発現すると、Gr1/Mac1陽性の顆粒球系細胞への分化が抑制される一方、c-Kit陽性CD41陽性の造血前駆細胞の著明な増加が認められる一方当GPIbα陽性細胞への分化は抑制されていた。しかし、その一方でHes1のC末欠損変異体(ドミナントネガティブ変異体)を巨核球前駆細胞由来のセルラインUT7/TPOに導入すると、成熟巨核球への分化は抑制された。この結果から正常な巨核球分化においては、Notch-Hesシグナルの時間的量的な綿密な制御が必須である事が考えられ、これらの破綻が急性巨核芽球性白血病をはじめとする疾患発症の原因となりうる事が示唆された。
筋発揮張力維持法を取り入れたレジスタンストレーニングが動脈・血管系に与える影響

横断研究結果30歳-50歳の男性中年者層の、(1)主にLSTに近い形態でのレジスタンストレーニングを十年以上続けている競技ボディビルダー(BB群)、(2)主に高負荷を用いたレジスタンストレーニングを十年以上続けている競技パワーリフター(PL群)、(3)定期的な運動習慣のない対象群(CON群)の3グループにおける動脈硬化度等の測定を行った。動脈硬化度を示す動脈スティッフネスはBB群、PL群においてCON群よりも有意に高かった。運動介入研究結果定期的な運動習慣・喫煙習慣のない男子大学生を用いて、(1)LST法を用いた全身のレジスタンストレーニングプログラムを行う群(LST群)、(2)高負荷を用いた通常の全身のレジスタンストレーニングプログラムを行う群(HN群)、(3)運動を行わない対象群(CON群)の3群を用いて週2回・3ケ月間の運動介入を行った。LST群においてHN群と同等の有意な筋肥大と筋力増強効果を認めた。動脈硬化度の指標である脈波伝播速度(PWV)はLST群においてのみ有意な低下(硬化度の改善)が認められた。CON群においてはいずれの測定指標においても実験期間前後に有意な変化は見られなかった。以上より、運動介入実験から、LSTでは通常の高負荷を用いたHNと同等の筋肥大・筋力増強を達成しながら、動脈硬化度に望ましくない影響を与えないことが確認された。横断研究において、LST的なトレーニングを主に行うBB群において動脈硬化度が高かったことは、BB群がLST的なトレーニング以外のトレーニングにもこ高負荷重量を用いたトレーニングも行っているためと考えられる。被験者および運動介入被験者は定期的な運動習慣・喫煙習慣のない男子大学生(2)高負荷を用いた通常の全身のレジスタンストレーニングプログラムを行う群(HN群)(3)運動を行わない対象群(CON群)の3群、各12名、計36名を用いて週2回・3ヶ月間の運動介入を行った。結果LST群においてHN群と同等の有意な筋肥大と筋力増強効果を認めた。動脈の硬化度の指標である頸動脈、大腿動脈のコンプライアンス、スティッフネスは介入期間前後でいずれの群においても有意な変化は認められなかった。また動脈硬化度の別の指標である脈波伝播速度(PWV)はLST群においてのみ有意な低下(硬化度の改善)が認められた。PWVは末梢動脈の要素も含むため、頸動脈、大腿動脈のスティッフネスの結果と一致しなかったものと考えられる。抹消の血流量は、大腿動脈の血流量がLST群ではHN群と同等の有意な増加を認めた。また、CON群においてはいずれの測定指標においても実験期間前後に有意な変化は見られなかった。以上より、週2回・3ヶ月の運動介入では、LST、HNともに末梢血流を改善するとともに筋肥大・筋力増強を達成できると考えられる。現在、上記結果を数本の論文にとりまとめ、学術雑誌に投稿準備を進めているところである。
小脳皮質の葉形成過程における時空間的に制御されたＧＡＢＡの役割とその変遷

生後初期の小脳における葉形成期にはGABA-A受容体の発現分布とGABA-A受容体を介する応答性(興奮性)がダイナミックに変化するが、その発達過程における役割についてはよく分かっていない。我々は共同開発した細胞外GABAイメージング法を用いて十葉構造が出現する時期(生後0週齢)に合わせて一過性に細胞外GABAが小脳外顆粒層に著増することを見出し、この作用がin vivoで小脳顆粒前駆細胞の増殖に関与することを明らかにした。また、小脳顆粒前駆細胞の増殖に関わる分子であるSonichedgenogシグナルとの関連性について、免疫組織学的およびカルシウムイメージング法にて検討した。小脳に特徴的な十葉構造は胎生期後期から新生仔期にかけて形成する。この葉形成には小脳顆粒細胞の前駆細胞の分裂が関与する。この細胞の産生は小脳外顆粒層で長期間にわたり持続して行なわれているが、葉構造形成のためには生後直後に顕著な分裂が促進する必要があり、この機序に細胞外GABAが関わるという仮説を立てて、本研究課題で検証している。これまでに我々は豊橋科学技術大学と共同で小脳皮質より放出される細胞外GABA量の放出を可視化する技術を開発し、新生仔期に特異的に小脳外顆粒層に細胞外GABAが増え、小脳顆粒前駆細胞の分裂に寄与することを見出してきた。平成24年度は小脳皮質領域と細胞外GABAの関係をより明確にするために、本イメージング法の技術的な改善をめざし詳細な条件検討を行い信頼性を高めてきた。その結果、より定量的に小脳皮質に分布する細胞外GABAの撮像をすることが可能になり、小脳では少なくともGABAは容量依存性アニオンチャネルから放出されることを確認することができた。次年度はさらに詳細な葉構造と細胞外GABA量の分布の関係性について検討する予定である。平成26年度は本研究課題のメカニズムの詳細を検討するために、in vitro培養系とカルシウムイメージング法を用いた実験を中心に検討した。SonicHedgehogは小脳小脳顆粒前駆細胞の分裂に寄与することが広く知られる分子である。近年、このSonic Hedgehogが細胞内カルシウム変動に影響を与えることが報告されている(Belgacem YH & Borodinsky, 2011)ことから、細胞分裂を調節する共通経路の存在を仮定して研究した。検証する培養系の条件設定を行いながらカルシウムイメージングを行ってきたが、これまでのところ、Sonic Hedgehogを投与しても著しい細胞内カルシウムイオン濃度の変化自体は認められていない。しかし、GABAA受容体・Sonic Hedgehog共にカルシウム変動のリズムに影響を及ぼすことが報告されていることから、より長期にわたる培養・観察が重要である事が考えられる。現在、より長期的な培養かつ観察できる系を確立しつつあり、詳細を検討する予定である。小脳顆粒細胞は中枢神経系で最も数の多い神経細胞であり、胎生期から生後にかけて長期間に渡り前駆細胞が分裂・分化して生じる。本研究は、小脳の葉形成期である生後初期の小脳外顆粒層の分裂における細胞外GABAの役割を明らかにすることを目的とする。昨年度は以下の1)細胞外GABAを放出する細胞の同定、2)ソニックヘッジホッグ(Shh)との関係について検討した。生後初期の小脳外顆粒層における細胞外GABAを放出するソースの同定ラット小脳外顆粒層ではGABAニューロンがまだ存在しないにも関わらず、生後初期に一過性に細胞外GABA量の増加が認められる。これまでの予備研究からバーグマングリアがこの細胞外GABA量の増加に関与することを見いだした。グリア細胞によるGABAの産生を証明するために本年度は免疫組織法や二重in situ hybridization法などにより詳細な検討を行った。その結果、バーグマングリアが一過性にGAD65遺伝子を発現し、細胞外GABAのソースとなることを明らかにした。Sonic hedgehog( SHH)シグナリングとGABAA受容体シグナリングの関係の評価Shhシグナリングは小脳顆粒前駆細胞の分裂に関わる重要なカスケードとして知られる。GABA

受容体拮抗作用による小脳顆粒前駆細胞の分裂阻害におけるShhシグナリングの関与について検討した。Elvax投与法によるGABA受容体機能をin vivoで抑制したが、Gli-1やGli-2などのShhシグナルの下流分子の発現には影響が出なかった。GABAによる分裂制御はShh-Gliシグナルとは異なる可能性を見いだした。申請者らは既に1)GABAニューロンがまだ存在しない生後初期のラット小脳外顆粒層で細胞外GABA量の増加すること、2)この時期におけるGABA-GABAA受容体シグナリングは小脳外顆粒層外層における小脳顆粒前駆細胞の分裂に関与することを明らかにしてきた。この画期的な結果を見出し現在論文に投稿準備中である。投稿に当たり現行のイメージング法をより客観的に信頼性の高いシステムへ改善していく必要があった。論文投稿への準備およびより定量的に空間分解能の高い技術を得たという観点から、一部計画より遅れる課題もあるが、おおむね順調に進展している、とした。申請者らは、本研究課題申請時に1)GABAニューロンがまだ存在しない生後初期のラット小脳外顆粒層で細胞外GABA量の増加すること、2)この時期におけるGABA-GABAA受容体シグナリングは小脳外顆粒層外層における小脳顆粒前駆細胞の分裂に関与することを明らかにした。さらに驚くべき事に、この細胞外GABAのソースはグリア細胞である可能性が見えてきた。本研究課題では上記の新たな発見・知見を検証し、そのGABAによる細胞分裂制御のメカニズムと小脳の葉形成との関係を明らかにすることを狙いとする。昨年度、まず申請者らは、研究実績の概要に示すように組織染色法を用いた詳細な検討により少なくともバーグマングリアがGABAを産生する酵素を発現し、GABAのソースとなることを明らかにすることができた。現在申請者らは、これまでに蓄積した知見をまとめ、論文投稿準備中である。また、GABAの小脳顆粒前駆細胞の分裂に関与するメカニズムについては既知のShh-Gliシグナルとは異なる可能性を見いだした。しかしながら、この可能性を提唱するには、単一の手技で得られた結果だけでは不十分である。今後、細胞培養や遺伝子発現など様々なアプローチで検証していく必要がある。一方、現行のイメージング機器の改良の遅れのため、GABAの時空間的な変化と小脳の葉形成の関係についての検討は今年度以降の課題として残った。この課題を検討するため、昨年度使用する予定であった予算を今年度に繰り越すことを決めた。一部計画より遅れる課題もあるが、全体として計画は順調に進んでいると考えられる。細胞外GABAイメージング法により小脳各葉間の細胞外GABA量の空間分布を調査する。薬理学的な実験と合わせて小脳各葉における細胞外GABA量の調節機構について検討する。培養系を用いて小脳顆粒前駆細胞の分裂と細胞外GABAの関係について調査する。本課題申請時の予備実験に昨年度の研究成果により新たな知見が加わり、一連のまとまりのある重要な結果(1:GABA
運動学習における自発的練習方略の持つ意味-練習スケジュールの観点からの分析-

本研究の目的は、学習者が自発的に採用する学習方略が運動学習に及ぼす効果について明らかにすることである。具体的には、学習者が運動課題を練習するときに採用するKR情報の利用方略を、KRの頻度と運動学習に関する近年の発見と比較すること、複数の運動課題を練習するときに学習者が採用する練習スケジュールに関する方略を、最近の文脈干渉効果に関する研究の成果と比較することである。これらに関する二つの実験では、学習者が採用する方略と従来明らかにされてきた発見との関係という点において異なる結果が得られた。KR利用方略に関する実験では、従来の研究は毎回KRを提供するよりもKR提供の頻度を少なくしたほうが学習を促進すると報告しているが、今回の実験で学習者が採用したのは悉皆利用方略であった。練習スケジュール方略の実験では、ブロック練習方略を採用する人はほとんど見られなかった。この結果は、ランダム練習のほうがブロック練習より保持と転移において勝れているという従来の研究結果と矛盾しない。ただし、典型的なランダム練習を採用する人も少なく、多くの被験者はランダム練習とブロック練習の中間型のさまざまなタイプの練習方略を採用していることがわかった。また文脈干渉に関して、本研究では全身の協応方略のちがいという観点からの解釈を試みたが、予想に反してこの実験では文脈干渉効果そのものが見られなかった。したがって、当初の目的通りの分析をすることはできなかったが、全身協応が要求される運動課題を学習するときの協応性の変化に関して、きわめて興味深い結果を得ることができた。近年の運動学習研究では、認知心理学の理論を基にした練習スケジュールと学習効率との関連に関する研究が盛んに行われている。そこでは、認知理論から導き出された練習スケジュールに関する仮説を実験的に検証するという、理論依存型の研究が中心となっている。このことは逆に、学習者の個人的状況との関連で学習現象を捉えるという、もう一方の重要な視点での研究努力が十分には行われていないという結果も引き起こしている。本研究では、学習者の学習行動の観察を中心に据え、それとの関連で運動学習という現象を捉えることを大きな目的としている。本年行った研究は、運動学習における学習者のKR利用方略を調べ、認知心理学の理論から導き出された効果的KRスケジュールと比較することである。最近のKRスケジュールに関する研究によると、毎試行度にKRを提供するより、間欠的に与えた方が学習は促進されることがわかっている。これは、効果的な学習のためにはできるだけ毎回KRを提供すべきであるとする従来の考え方の反する現象である。今回調べたのは、KRの利用の仕方をすべて学習者の判断に任せた場合、学習者はどのようなKR利用方略を採用するのかを明らかにすることである。KR利用方略には、当然学習課題の難易度が影響すると考えられる。そこで本研究では難易度の異なる2つの運動学習課題を設定し、それぞれについてのKR利用方略を調べた。その結果、難易度にかかわらず、学習者は「悉皆利用方略」を選択することがわかった。また、実験者側が設定した「間欠的KR条件」と比較すると、従来報告されているように、学習者が選択した「悉皆利用方略」は「間欠的KR条件」と比べ練習パフォーマンスでは差がなく、テストパフォーマンスでは劣るという、きわめて興味深い結果が得られた。

KR利用方略に関する実験では、従来の研究は毎回KRを提供するよりもKR提供の頻度を少なくしたほうが学習を促進すると報告しているが、今回の実験で学習者が採用したのは悉皆利用方略であった。練習スケジュール方略の実験では、ブロック練習方略を採用する人はほとんど見られなかった。この結果は、ランダム練習のほうがブロック練習より保持と転移において勝れているという従来の研究結果と矛盾しない。ただし、典型的なランダム練習を採用する人も少なく、多くの被験者はランダム練習とブロック練習の中間型のさまざまなタイプの練習方略を採用していることがわかった。また文脈干渉に関して、本研究では全身の協応方略のちがいという観点からの解釈を試みたが、予想に反してこの実験では文脈干渉効果そのものが見られなかった。したがって、当初の目的通りの分析をすることはできなかったが、全身協応が要求される運動課題を学習するときの協応性の変化に関して、きわめて興味深い結果を得ることができた。