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中世真言宗における「東寺」教団の宗教的活動についての研究

本研究では、東寺・醍醐寺・仁和寺を主軸とする「東寺一門」のあり方について、教相(教義)と事相(教義に基づく実践としての祈祷)の二面から検討した。醍醐寺・仁和寺によって支えられた教相により、中世社会における一大勢力となった「東寺一門」がいかに発展を遂げていったのか、その「実態」を辿り、真言宗としての基盤形成の一端を明らかにした。その上で、弘法大師の行状の延長上に真言宗の歴史を語った絵巻「弘法大師行状絵」によりながら、真言宗の歴史がいかに「叙述」されたのかということについても検討した。平成25年度には、西弥生「中世寺院社会における「東寺」意識」(『史学』第81巻、2012年)において一部検討した「東寺」意識の萌芽の内実をふまえ、真言宗諸寺院において共有された「東寺」僧としての意識が、いかなる過程で社会的に定着したのか、跡づけを行った。また、「東寺」概念の定着と密接な関係をもつ問題として、真言宗の事相(祈祷)の基礎確立までの過程についても一体的に検討を行った。具体的な研究内容としては、12世紀に活躍した醍醐寺勝賢の「東寺」僧としての活動実態を検証した。勝賢は醍醐寺僧の中でも比較的早い段階で「東寺」僧を称した人物である。勝賢は醍醐寺の発展に寄与したのみならず、東寺長者として真言宗の事相の発展にも尽力し、さらには東大寺別当として南都における真言密教の布教にも貢献したが、本研究ではその内実について明らかにした。また、勝賢から仁和寺守覚への事相伝授の実態に注目する中で、「東寺」という概念の形成に重要な意味をもつ守覚撰『追記』の内容と撰述背景についても検証した。「東寺」は中世真言宗における一大勢力となった集団である。真言宗内外における幅広い活動を通じて、勝賢が「東寺」概念の社会的定着に果たした役割を明らかにしたことは、真言宗史の解明において重要な意味をもつ。また、東寺を拠点とした教相(教義)の内実についても検討を行い、教相を主な内容とする「大日経疏」が、論義や日常的な修学の場でいかに活用されていたのかについても明らかにした。従来の歴史学において、真言宗の事相と教相との関係性については等閑視されてきたが、事相に軸足をおく聖教と、教相を主体する聖教とが内容的にいかなるつながりをもっているのか、本研究では具体的な跡づけを行った。このことにより、真言宗の事相が教相によっていかに教学的に裏づけられていたのかが明らかになり、事相と教相との関連性の一端を提示することができた。平成26年度は特に、「東寺一門」の教相(教学)に注目して研究を進めた。その際、東寺観智院に伝来する「東寺観智院金剛蔵聖教」から関係史料を検出する作業を行った上で、東寺の学僧として著名な杲宝・賢宝の功績を重点的に検討することで、東寺教相の発展過程の解明を目指した。具体的には、1東寺西院を拠点とした杲宝・賢宝の修学実態、2のちに東寺教学の重要拠点となった観智院の創建の内実、3杲宝・賢宝以来の観智院院主代々による修学の実績および観智院の発展過程、4醍醐寺をはじめとする他寺院に対する東寺教学の普及の実態、といった観点から考察を試みた。加えて、先行研究では明らかにされていないが重要な問題である、西院と観智院との関係性についても検討した。以上の検討結果については、今後、論文を執筆し発表する予定である。東寺の教相は「東寺一門」を構成する諸寺院からも注目されており、一例として醍醐寺に伝存する史料群からは、教相を通じた両寺僧の交流の一端がうかがえた。東寺教学を確立させた杲宝・賢宝による諸説を、その後の観智院院主がいかにして東寺外に普及しようとしたのかを明らかにするために、特に観智院宗海や宗杲と、醍醐寺の重要院家である三宝院・報恩院との関わり方について検討した。なお、購入した史料は「東寺一門」の宗教的活動の実態を解明する上で重要な史料であり、今後も引き続きこれらを活用して研究の発展を図っていく予定である。「東寺一門」という概念は、東寺一寺のみならず、諸寺院の僧侶が多彩な宗教的活動を通じて関わる中で形成され、社会的に定着していったことをふまえ、本研究では、事相を主体とする醍醐寺・仁和寺と、教相を主体とする東寺の活動実態から、真言宗の基礎確立過程の一端を明らかにした。26年度が最終年度であるため、記入しない。日本中世史26年度が最終年度であるため、記入しない。

平成25年度における当初の計画としては、1「東寺」概念の定着過程についての検討と、2「東寺」教団の事相に基づく活動実態の解明とを掲げており、両者は密接な関連をもつ問題として、一体的に検討を進めてきた。研究の前提として、事相に関わる重要な聖教を多く伝存する醍醐寺における史料調査を行い、その中で本研究課題の遂行に有効な多くの情報を得ることができた。平成25年度の課題をより具体的に示すと、第一に醍醐寺勝賢の「東寺」僧としての活動実態を検証することと、第二に仁和寺守覚撰『追記』の内容と撰述背景を検証することであったが、これらの問題については相互に関連づけながら考察を進め、研究発表を行ったほか、学会誌『古文書研究』に論文を投稿した。特に醍醐寺勝賢については、醍醐寺に伝存する文書・聖教の調査により、重要な史料が見いだされ、これらの史料を最大限に活用することで、勝賢の「東寺」僧としての活動実態を検討することができた。第三の課題として挙げていた、後宇多法皇と事相との関わりをめぐる分析については、必ずしも十分な検討ができなかったが、後宇多法皇は真言宗の教相の発展にも寄与した人物であることから、平成26年度の課題として掲げている、東寺の教相をめぐる問題と一体的に、引き続き分析をしていく予定である。以上のように、平成25年度はおおむね当初の計画に沿って研究を進めてきた。もともと確固たる定義をもたない「東寺」という概念の形成過程を具体的に明らかにするのは必ずしも容易なことではないが、「醍醐寺史料」や「東寺観智院金剛蔵聖教」からの史料収集を行い、その分析を進める中で、解明の方向性を見出すことができつつある。また、西弥生「中世寺院社会における「東寺」意識」(三田史学会『史学』第81巻、2012年)の内容を深化させる成果が得られた点からも、現時点においてはおおむね順調に進展していると考える。研究計画に関して大きな変更はなく、今後も当初の計画に沿って、1「東寺」教団の教相に基づく活動実態の解明と、2事相と教相との包括的検討を行う予定である。研究の前提として、醍醐寺における史料調査および「東寺観智院金剛蔵聖教」の閲覧を今後も継続して行う。具体的にはまず、「東寺観智院金剛蔵聖教」から東寺における教相修学の実態を検討することにより、醍醐寺や仁和寺が主導した事相に対し、東寺はいかなる教相を打ち出したのかを考察する。また、醍醐寺における史料調査の成果に基づき、真言宗における東寺教相の普及の実態を検討する。最終的には事相と教相という二面から、中世真言宗における一大勢力であった「東寺」集団について包括的に評価することを目指している。これまでの寺院史研究は、東寺史・醍醐寺史・仁和寺史などというように個別寺院研究という枠にとどまってしまっていたが、本研究では、諸寺院からなる教団史研究としての「東寺」研究という新たな視点から、真言宗の構造を抜本的に見直すことで、個別寺院を対象とする限定的視野に立った従来の研究が直面している壁を打破したい。また、歴史学では真正面から扱われることの少なかった絵巻を積極的に活用することにより、歴史の「実態」と「叙述」された歴史との二面性をふまえて中世真言宗を評価したい。但し、上記のような問題意識のもとで、東寺や醍醐寺といった畿内の大寺院を主として考察していくにあたり、見落としがちとなるのが地方寺院との繋がりである。こうした問題を克服すべく、神奈川県立金沢文庫などにおける史料調査に今後も継続して参加することで、畿内に視野を限定せず地域的な広がりをもって真言宗寺院の法会のあり方を考えるよう心がけるつもりである。絵巻や教義内容も研究対象として積極的に取り扱うことで、日本中世史のみならず、仏教学や美術史などの関連諸分野にも新たな知見を提供していきたい。
繊維強化複合材料の高温疲労破壊過程のその場顕微鏡観察

本研究では,以下について検討した.(1)シリコンカーバイトウィスカ(短繊維)強化アルミニウム合金(6061T6)の一定高温度(300°C)下の疲労過程.(2)一方向カーボン長繊維強化耐熱プラスチック(CF/PEEKおよびCF/PMR-15:いずれも耐熱性に優れ,高温での使用が期待されている材料である)の高温疲労過程における層間はく離伝ぱおよび繊維架橋の影響.(1)で用いた材料は,日本材料学会高温強度部門委員会の共同研究として実施中のラウンドロビンテスト用のものであり,他機関において静クリープや高温引張り試験等が行われており,特性が比較的よく把握できている.本研究では,クリープ疲労変形挙動を明らかにするとともに微小き裂の発生・成長について顕微鏡観察を行った.その結果,微小き裂の発生数はきわめて少なく,発生時期も寿命中期から後期であることが判明した.また,他機関の結果と総合して,疲労寿命に及ぼすクリープの影響などを系統的に明らかにすることができた.(2)の研究では,まず,高温層間破壊じん性について検討し,温度が高くなるとともにじん性が上昇することを明らかにした.つぎに,高温クリープ疲労下におけるはく離き裂伝ぱについて実験観察し,高温疲労における破壊力学の適用性を明らかにした.さらに,室温および高温において応力拡大係数範囲一定の疲労試験を実施し,はく離き裂先端近傍を顕微鏡にて繊維架橋の様相を観察した.この結果より,クラック・シールディングによるはく離き裂伝ぱの抑制の効果について定量的に明らかにするとともに,繊維架橋状態とクラック・シールディングの関係についても明らかにした.本研究では,以下について検討した.(1)シリコンカーバイトウィスカ(短繊維)強化アルミニウム合金(6061T6)の一定高温度(300°C)下の疲労過程.(2)一方向カーボン長繊維強化耐熱プラスチック(CF/PEEKおよびCF/PMR-15:いずれも耐熱性に優れ,高温での使用が期待されている材料である)の高温疲労過程における層間はく離伝ぱおよび繊維架橋の影響.(1)で用いた材料は,日本材料学会高温強度部門委員会の共同研究として実施中のラウンドロビンテスト用のものであり,他機関において静クリープや高温引張り試験等が行われており,特性が比較的よく把握できている.本研究では,クリープ疲労変形挙動を明らかにするとともに微小き裂の発生・成長について顕微鏡観察を行った.その結果,微小き裂の発生数はきわめて少なく,発生時期も寿命中期から後期であることが判明した.また,他機関の結果と総合して,疲労寿命に及ぼすクリープの影響などを系統的に明らかにすることができた.(2)の研究では,まず,高温層間破壊じん性について検討し,温度が高くなるとともにじん性が上昇することを明らかにした.つぎに,高温クリープ疲労下におけるはく離き裂伝ぱについて実験観察し,高温疲労における破壊力学の適用性を明らかにした.さらに,室温および高温において応力拡大係数範囲一定の疲労試験を実施し,はく離き裂先端近傍を顕微鏡にて繊維架橋の様相を観察した.この結果より,クラック・シールディングによるはく離き裂伝ぱの抑制の効果について定量的に明らかにするとともに,繊維架橋状態とクラック・シールディングの関係についても明らかにした.本研究では,(1)シリコンカーバイト短繊維強化アルミニウム合金の一定高温度下の疲労過程のその場観察,と(2)一方向カーボン長繊維強化ポリエーテルケトン(PEEK:熱可塑性樹脂)とポリイミド(PMR:熱硬化性樹脂)積層板の高温破壊過程のその場観察を行っている.(1)の材料は日本材料学会高温強化度部門委員会の共同研究として実施中のラウンドロビンテストで使用されているものであり,他機関で実施された静クリープや高温引張り等の結果を参考にして,金属基複合材料の高温破壊過程について基礎的な検討を行っている.クリープ疲労試験を開始し,変形特性等の基礎的データを取得した。300°Cにおける試験より,少数の微少なき裂の発生・成長により疲労破壊がもたらされることが判明した.さらに,高温疲労試験装置付き走査型電子顕微鏡の調整を行った.試験装置については基本的な問題はないが,試験中に加熱体が試験片表面に蒸着するため,長時間の試験には問題があることが判明した.(2)の研究はCFRP(炭素繊維強化プラスチックス)に関する基礎研究の一つであって,PEEKについて高温条件下で疲労試験およびじん性試験を行い,はく離進展の観察実験を行った.200°Cにおける疲労試験結果より,時間依存性と繰返し数依存性のはく離進展が確認された.前者の成長速度はエネルギ解放率によって,後者のそれはエネルギ解放率の変動幅によって支配されていることが判明した.また,試験温度が高くなるとともに破壊じん性は上昇する傾向があるが,150°C以上になるとクリープの影響によってじん性が低下する.ただし,これらのはく離進展には繊維架橋が大きな影響を及ぼしていることが判明し,現在はこの点についての検討を開始している.本研究では,以下について検討した.(1)シリコンカーバイトウィスカ(短繊維)強化アルミニウム合金(6061T6)の一定高温度(300°C)下の疲労過程.(2)一方向カーボン長繊維強化耐熱プラスチック(CF/PEEKおよびCF/PMR-15:いずれも耐熱性に優れ,高温での使用が期待されている材料である)の高温疲労過程における層間はく離伝ぱ

および繊維架橋の影響.(1)で用いた材料は,日本材料学会高温強度部門委員会の共同研究として実施中のラウンドロビンテスト用のものであり,他機関において静クリープや高温引張り試験等が行われており,特性が比較的よく把握できている.本研究では,クリープ疲労変形挙動を明らかにするとともに微小き裂の発生・成長について顕微鏡観察を行った.その結果,微小き裂の発生数はきわめて少なく,発生時期も寿命中期から後期であることが判明した.また,他機関の結果と総合して,疲労寿命に及ぼすクリープの影響などを系統的に明らかにすることができた.(2)の研究では,まず,高温層間破壊じん性について検討し,温度が高くなるとともにじん性が上昇することを明らかにした.つぎに,高温クリープ疲労下におけるはく離き裂伝ぱについて実験観察し,高温疲労における破壊力学の適用性を明らかにした.さらに,室温および高温において応力拡大係数範囲一定の疲労試験を実施し,はく離き裂先端近傍を顕微鏡にて繊維架橋の様相を観察した.この結果より,クラック・シールディングによるはく離き裂伝ぱの抑制の効果について定量的に明らかにするとともに,繊維架橋状態とクラック・シールディングの関係についても明らかにした.
生体と金属材料の相互作用による金属イオン溶出機構の解明

金属系生体材料からの金属イオンの溶出は医療機器自体の劣化や生体毒性に繋がるが、その詳細なメカニズムは未解明な部分が多い。本研究では、Niイオンによる炎症応答に着目し、生体内での金属溶出の分子機構の解明、および金属溶出を抑制するための創薬標的の提案を目的とした。本研究の成果として、以下の知見を得た。1マウス背部皮下にNi線もしくはNiTi線を埋入すると、Niイオンの溶出と炎症応答が誘発された。2ステロイド性抗炎症薬dexamethasone(Dex)の経口投与により、Ni線からのNiイオン溶出が抑制された。3Ni含有金属もしくはNiイオンによりCOX-2およびmPGES-1の発現が誘導された。4COXの非選択的阻害薬indomethacin(Ind)、もしくはCOX-2の選択的阻害薬celecoxib(Cel)の経口投与によりNi線からのNiイオン溶出が抑制された。5Ni線埋入により乳酸産生経路の遺伝子発現が増加し、その発現はDex、Ind、Celの投与により抑制された。6Dex、Ind、Celの投与は、Ni線埋入周囲組織への白血球浸潤を抑制し、また好中球減少マウスではNi線からのNiイオン溶出が抑制された。これらよりNiにより誘導されるCOX-2は、乳酸産生による金属周囲微小環境のpHの低下および好中球の浸潤増加を介して金属溶出を引き起こすことが示唆された。以上より、COX-2は薬理学的に金属溶出を抑制するためのターゲットになりうると考えられた。工学、医工学分野が中心となって行われていた既存の金属溶出研究に対し、本研究では薬学的戦略でアプローチした。このような学際的研究により、金属溶出抑制のための新たな治療・予防概念を創出できたと考える。27年度が最終年度であるため、記入しない。C57BL/6Nマウスの背部皮下にニッケル線を埋入したところ、ニッケル線表面の腐食、ニッケルイオンの溶出、皮膚の肥厚、発赤等が観察された。また、COX-2をはじめとする炎症性遺伝子の発現誘導が見られた。これらの発現は、鉄・アルミニウム・チタン線の埋入ではほとんど誘導されず、ニッケル線に特異的な応答であった。さらに、チタン線埋入群と比較してニチノール(ニッケル・チタン合金)線の埋入によっても、血清中ニッケル濃度が増加し、埋入周囲組織でのCOX-2 mRNA発現が増加した。また、ニッケル線埋入により各ケモカイン遺伝子の発現増加とそれに伴う白血球浸潤が観察された。これらの結果は生体が金属、特にニッケルを異物として認識して炎症応答を誘導する機構が存在することを示唆する。ステロイド性抗炎症薬dexamethasone、COXの非選択的阻害薬indomethacin、もしくはCOX-2の選択的阻害薬celecoxibの経口投与により、背部皮下に埋入したニッケル線からのイオン溶出量が抑制された。従って、ニッケルにより誘導されるCOX-2は金属溶出の増悪化に関与する可能性が示唆された。また、免疫染色により、ニッケル線埋入初期では線維芽細胞が、後期では浸潤白血球がCOX-2を発現することが分かった。実際にC57BL/6Nマウスの皮膚より単離した線維芽細胞、骨髄細胞から分化誘導したマクロファージ、およびマクロファージ様細胞株RAW264では塩化ニッケル刺激によりCOX-2 mRNAが誘導された。本年度の研究より、生体は金属から溶出したニッケルイオンを認識し、COX-2を誘導することで異物である金属を排除しようとする積極的な腐食機構が存在することが明らかとなった。なお、以上の研究成果は「日本薬学会第135年会」をはじめとする学会等において発表した。

このような学際的研究により、金属溶出抑制のための新たな治療・予防概念を創出できたと考える。ニッケルに応答して炎症を誘導する因子の探索では、マウス背部皮下にニッケル線を埋入し炎症関連蛋白質の遺伝子発現やリン酸化の挙動を網羅的に解析することを予定していた。しかしながら、in vivoでのニッケル線に対する炎症応答は、多種多様な細胞の関与や二次的三次的な応答の関与が疑われてきた。そのため、in vitroにおけるより単純な系での網羅的解析を行うことで、さらに有益なデータが得られると考え、解析を延期した。一方で、ニッケル線埋入周囲組織での定量的PCRの結果より、金属イオンの中でもニッケルイオンに特異的に応答してCOX-2が誘導されることを明らかにし、さらにこのCOX-2が金属溶出の増悪化に寄与しうる因子として見出されてきた。また、in vitroにおいて線維芽細胞やマクロファージを塩化ニッケルで刺激するとCOX-2を誘導する結果が得られている。そこで今後、このin vitro系を用いてニッケルイオンに応答してCOX-2の発現誘導に関与する因子を明らかにする予定である。ニッケル線もしくはニッケルイオンに応答して誘導されるCOX-2が金属溶出に及ぼす影響、およびCOX-2発現細胞の探索についてはおおむね計画通りに解析を実施した。結果、COX-2が金属溶出の増悪化に関与すること、およびニッケル線埋入初期では線維芽細胞が、後期では浸潤白血球がCOX-2を発現することが明らかとなった。また、ニッケル線埋入時の浸潤白血球の挙動に関してもおおむね計画通りに解析を実施した。ニッケル線埋入4時間後からマクロファージの浸潤に関与するMCP-1や好中球等の浸潤に関与するKC、MIP-2などのケモカイン遺伝子発現が誘導され、金属溶出が急激に増加する埋入8時間後にはマクロファージや好中球の浸潤が誘導されていることが明らかとなった。27年度が最終年度であるため、記入しない。ニッケルイオンによるCOX-2の発現誘導機構について:現在、C57BL/6NおよびBALB/cマウスそれぞれから単離した線維芽細胞において、塩化ニッケル刺激によるCOX-2誘導能に系統間差がある結果が一部得られている。そこで、線維芽細胞におけるニッケルイオンに応答する転写因子活性化や遺伝子発現等を網羅的に解析し、二系統細胞間での結果を比較することで、ニッケルイオンにより活性化するCOX-2発現誘導経路を明らかにする予定である。COX-2が金属溶出の増悪化に寄与する機序について:COX-2産物の中でどのメディエーターがどのような受容体や機能を介して金属溶出に寄与するかについては不明である。そこで、COX-2産物の各種受容体阻害薬等を用いて関与するメディエーターおよび受容体を明らかにするとともに、COX阻害薬投与マウスにニッケル線を埋入した際の表現型をより詳細に解析することで、COX-2が金属溶出を増悪化する機構についての解明を目指す。現在、COXの産物の内PGE2が、好中球の浸潤や嫌気性解糖系を亢進させることで乳酸の産生を増加させ、金属溶出の増悪化に関与することを想定した検討を計画している。浸潤白血球の金属溶出に与える影響について:ニッケル線埋入8時間後ではマクロファージや好中球の浸潤が誘発された。
硝子体の研究:環境解析とその制御およびそれを利用した治療開発

網膜硝子体疾患の病態解析、治療法開発を様々な点から行った。硝子体内のHMGB-1などのdamage associated molecular pattern物質との作用を解析した。その結果、網膜硝子体疾患の病態形成には、サイトカインなど従来考えられていた生理活性物質だけではなく細胞崩壊産物などが積極的に関与していることが分かった。この知見を基に、ノックアウト動物を使った研究を行い、網膜疾患などにおける炎症や細胞死の制御には、細胞崩壊産物の制御が有効であることが分かった。硝子体は単なる透明な結合組織ではなく、眼内の環境維持に重要な働きをすることを、硝子体内のサイトカインのみでなく、蛋白分解産物(デグラドーム)を解析することで解明する。そのことで硝子体内の環境維持の新たな局面を解明し「硝子体学」を確立するための基礎データを収集することが本研究の目的である。硝子体細胞網膜硝子体疾患の病態解析、治療法開発を様々な点から行った。硝子体内の環境コントロールの実態を調べるためにin vitro実験、動物実験、臨床研究を行った。In vitro実験では、網膜剥離の時に産生されるHMGB-1,SDF-1が網膜色素上皮細胞ARPEや網膜細胞R28の細胞遊走を強めることを見出し、細胞内シグナルの点からもそれを支持するデータが得られた。硝子体疾患である、ラット増殖硝子体網膜症モデルにおいては、網膜剥離部に一致してHMGB-1,MPC-1,SDF-1が産生され、これらはアポトーシスよりもネクローシスに強く関連していることをつかんだ。一方SDF-1抗体を網膜下に注入することで、網膜剥離後の細胞死が著しく増加したが、HMGB-1には、特異的抗体を用いてもその作用は見られなかった。このことから、HMGB-1とSDF-1はともに網膜剥離時に剥離網膜から出されるが、その作用は大きく異なり、特にSDF-1は網膜保護作用があることが分かった。そこで実際の臨床における変化を、網膜硝子体疾患手術時に得られた臨床検体において検索した。その結果、網膜剥離範囲とSDF-1は強い相関を示していたが、HMGB-1は関連がなかった。ただし、HMGB-1は感染性眼内炎などの組織破壊性疾患では濃度が極端に増加していた。HMGB-1のようなdamage-associated蛋白は従来組織環境維持に積極的に関与していないと思われていたが、組織破壊産物であっても眼内の環境維持に積極的に関与していることがわかった。現在は、これらが免疫系にどのように働くかについて検討する予定である。本年度は、実験動物の硝子体内の分子解析、臨床検体における硝子体内の分子解析に大きな進歩があった。従来CD9は細胞遊走の際の細胞の突起形成に重要であることが示唆されていた。CD9をsiRNAで強制消去することにより、培養血管内皮細胞の遊走のみならず増殖を抑制した。一方内皮細胞のアポトーシスも誘導した。このことに基づいて、CD9を角膜血管新生モデル、網膜下血管新生モデルにCD)siRNAを発現させることで、in vivo血管新生を有意に抑制した。このことはCD9をターゲットとした治療薬開発の可能性を示した。いっぽう、硝子体内のサンプルを200検体以上収集して解析を行った。その結果、網膜障害とIL-6は有意に相関するが、血管内皮増殖因子(VEGF)は必ずしも相関しないことが分かった。また、糖尿病網膜症などの病的硝子体には、蛋白変性を抑制する働きがあるようである。そのメカニズムに関して現在検討しているが、硝子体手術が奏功するメカニズムの解明に大きく寄与するものと期待される。さらにNon-steroidal anti-inflammatory drug(NSAID)が網膜に及ぼす影響について検討した。In vitroで網膜色素上皮細胞にNSAIDを投与すると、網膜グリア細胞、網膜色素上皮細胞のHOlが活性化して、強い細胞保護効果が得られることが分かった。NSAIDは多くの点眼薬がすでに市販されているので、これを用いることで臨床的に有意義な網膜疾患治療が可能になる。本年度は、多くの検討を行ったが、特に無菌性眼内炎の検討について重要な発見があった。近年の、硝子体手術の発展は、器械、観察系の発展に負うところが大きいが、それだけでなく手術時生体染色などの手術方法の進歩にも負っている。特に、トリアムシノロン(TA)による染色は現在我が国の硝子体手術の半数で用いられている方法であり、未熟児の手術などでも用いられている。その一方で、眼内にTAを入れると、一定の割合で、無菌性眼内炎が発生することが知られるようになった。無菌性眼内炎自体は予後良好であるが、極めて予後不良な感染性眼内炎と臨床症状が酷似しており、臨床上の鑑別は不可欠である。ところが、この疾患については、特徴的症状はおろか、発生メカニズムについても不明である。硝子体手術などに用いるTA眼内投与後に発生する無菌性眼内炎の臨床症状を調査し、そのメカニズムを培養細胞で調べた。

投与後24時間以内に無痛性の好中球主体の炎症がおこりインターロイキン8を中心としたサイトカイン上昇が前房液に認められる。一時的に視力は低下するが、短期間のうちに炎症は消退し、視力予後は良好である。原因としてはTA製剤に含まれる添加剤に加えて、TA顆粒による物理的刺激が誘因となる可能性が示唆された。現在、物理的刺激とHMGB-1などのdamage associated molecular pattern物質との作用を解析しているが、硝子体内の新しい環境制御機の新しいメカニズムが明らかになりつつある。これ以外に、極性をもったより生体に近い細胞培養系を確立しており、実験を進めている。
軟骨内骨化の一次骨形成に関する実験的研究

B6C3Hマウスに生後3日から14日間連日石灰化阻害剤1-hydroxyethane-1, 1-diphosphonic acid (HEDP)を投与し、大腿骨骨端における石灰化軟骨から、一次海綿骨への転換の過程を組織化学的に検討した。なお同時に対照としての生食投与同腹仔マウスおよび大理石骨秒マウス(oc/oc)の所見との比較を行った。1.HED投与群では、HED投与5日から7日にかけて骨端部軟骨細胞の配列の乱れと石灰化軟骨層の延長が特徴的に観察された。これらの所見はocマウスに類似していたが、ocマウスに特徴的な軟骨の過剰形成は見られなかった。このような変化は日時の経過とともに目立たなくなり、14日目には対照群との間に明らかな差は見られなかった。2.von Kossa染色で、石灰化軟骨先端部では対照群同様のカルシウム沈着が認められるのに対し、近位側では明らかな低下が観察された。3.酒石酸耐性酸性ホスファターゼ陽性破骨細胞は石灰化軟骨先端部でも多く、低石灰化が示された近位では少なかった。4.類骨の形成は石灰化軟骨先端部に限られており、近位ではほとんど観察されなかった。その量は対照群に比べ少なかった。以上の所見から、1)破骨細胞の出現は石灰化軟骨における石灰化の程度と相関しており、2)石灰化の阻害により破骨細胞の出現が遅延したため、石灰化軟骨層の延長が生じたものと推測される。
ドイツにおける外国人文学の系譜と現状

1.現代ドイツの文化のなかで、ドイツ語を母語としない作家の作品が、ドイツ文学として一定の認知を得ていることを確認した。2.それらの作品で扱われるテーマは、ドイツにおける外国人の状況にもはや限定されない。その意味で「外国人文学」というカテゴリーは意味を失いつつある。3.ただし、それを受容するドイツ人読者の側では、本来ドイツ文化に属さない者が書いた作品という意味で、「外国人文学」という意識は根強い。4.「ドイツ文学」に属するかどうかという基準は、宗教的基準(キリスト教とイスラム教の対立)にしたがって求められる傾向がある。これは、異文化を「原理主義」として排斥する、ヨーロッパ社会に広まりつつある傾向と関連していると考えられる。1.資料の収集(1)トルコ人作家を中心として、外国人作家の作品、およびそれらの作品に対する批評、新聞記事、インタビュー等の資料を収集整理し、データベース化した。(2)主としてベルリン、ミュンヘンの外国人協会、外国人向けの教育団体等と連絡をとり、その活動状況に関する資料を収集整理し、データベース化した。(3)ミュンヘンの小学校における二ヵ国語教育実践に関する資料を収集した。(4)ドイツ政府および各州外国人担当部局が発行した外国人問題に関する資料類やパンフレットを収集整理氏、データベース化した。(5)代表的な外国人作家に対してドイツの文化状況に関する質問状を送付した結果、幾人かから回答を得た。2.収集資料の評価(1)外国人作家の主観的位置づけと客観的状況の乖離:外国人作家が自分の活動に対して与えている評価は、批評その他のメディアによる位置づけと一致していない。客観的には外国人文学は周辺的存在にとどまっている。(2)外国人作家のような外国人の中でも特権的な層と数多くの外国人労働者をとりまく文化状況との間に接点が見られない。これは外国人文学の読者層を確定する必要性を提起している。(3)外国人作家の受容はドイツの(文化的)アイデンティティーのあり方と密接に関連している。そのため、そのつどの政治状況の文脈のなかで観察する必要がある。1資料の収集に関して:以下の諸点はほぼ本年度の研究実施計画通りの実績を挙げた。(1)外国人作家の作品に関する批評,記事,インタビュー等の収集とデーターベース化(2)外国人作家に対するアンケートの実施(3)外国人協会および外国人向け教育機関の活動状況に関する資料収集(4)小学校における「二カ国語教育」に関する資料収集(5)各自治体における外国人の状況を示す一般的資料の収集(6)極右グループ(主として旧東ベルリン地区)の活動状況に関する資料収集2資料の分析に関して:以下の問題点が明らかとなった。(1)外国人作家の中でもとくにトルコ人作家のおかれた状況の解明には,いわゆる「イスラム問題」の検討が必要である。(2)したがって,ドイツとトルコ人移民の関係ばかりではなく,フランスとマグレブ移民,イギリスと新コモンウェルスからの移民の関係を比較項として導入し,現代ヨーロッパにとってイスラム教徒移民がもつ意味を検討する必要がある。3今後の研究の展開に関する補足:当初の研究計画に以下の点を補足する。フランスとイギリスにおけるイスラム教徒移民とかれらを取り巻く文化状況に関する資料の収集と分析1資料の収集・整理(1)平成7年度までに収集した外国人作家に関する批評、新聞記事、インタビュー、パンフレットなど資料のデータベース化と評価をひきつづきおこなった。2資料の分析(1)フランスやイギリスにおけるムスリム系住民の扱われ方と比較しつつ、ドイツにおけるトルコ人問題を、イスラム問題として考察した。(2)現代の外国人作家を、ドイツ文学史の外国人作家の系譜上にどのように位置づけ得るかを考察した。(3)外国人文学を含む非ドイツ系文化のドイツ社会における広がりと、外国人文学の伝統が現在の多文化状況に対してもつ意味を明らかにするため、外国人文学を取り巻く社会的条件についての考察を論文として発表するために準備中である。
ＡＬＳにおけるＲＮＡ結合蛋白質／ＲＮＡ蓄積による毒性獲得仮説のｉｎ　ｖｉｖｏ検証

本研究は、筋萎縮性側索硬化症(ALS)においてRNAの異常蓄積がRNA結合蛋白質の凝集・蓄積を引き起こして神経毒性を獲得するという仮説に基づき、1)異常伸長GGGGCCリピートを発現し、ALS病態を再現する新規ALSモデルショウジョウバエの樹立に成功した。2)さらに上記新規ショウジョウバエとRNA結合蛋白質を発現するショウジョウバエを用いた遺伝学的解析から、異常伸長GGGGCCリピート毒性に影響を与えるRNA結合蛋白質を同定した。本研究の結果から、異常RNAの蓄積による神経変性にはRNA結合蛋白質が関与してALS発症に寄与する可能性が示唆された。近年、筋萎縮性側索硬化症(ALS)はTDP-43/FUSなどRNA結合蛋白質の凝集・蓄積、核内からの消失により発症すると考えられるようになったが、ごく最近RNA内のGGGGCCリピート配列の異常伸長が多くのALSの原因遺伝子異常として発見された。本研究では、遺伝子異常あるいはRNAストレスなどによるRNAの異常蓄積がRNA結合蛋白質の凝集・蓄積を引き起こして神経毒性を獲得するという仮説に基づき、ALSの発症分子メカニズム解明を目指して、以下の研究を行った。1)異常伸長GGGGCCリピートを発現するALSモデルショウジョウバエの樹立とその病態解析前年度に樹立したGGGGCCリピート配列(野生型:9リピート、異常伸長:50、100リピート)を発現するトランスジェニックショウジョウバエGGGGCCn Flyについて、詳細な解析を行った。異常伸長GGGGCCリピートRNAの神経系での発現により発生段階での致死、寿命短縮、複眼での発現により顕著な複眼変性を生じることが明らかとなった。一方、GGGGCC9リピートの発現ではこれらの症状は生じなかった。FISH解析により異常伸長GGGGCCリピートRNAの蓄積、免疫染色によりGGGGCCリピートRNAから翻訳されたと考えられる異常リピートペプチドの蓄積を認めた。2)GGGGCCリピート発現ALSモデルショウジョウバエ病態へのTDP-43/FUSの関与上記GGGGCCn FlyとTDP-43/FUSなどRNA結合蛋白質を発現するショウジョウバエとの遺伝学的交配を行った結果、上記の表現型に影響を与えるRNA結合蛋白質を同定した。以上の結果から、本研究で樹立した異常伸長GGGGCCリピート発現ショウジョウバエは新規ALSモデルとして有用であり、さらに異常RNAとRNA結合蛋白質による神経毒性が関連してALS発症に寄与する可能性が示唆された。本研究ではALSの発症メカニズムとして、遺伝子異常あるいはRNAストレスなどによるRNAの異常蓄積がRNA結合蛋白質の凝集・蓄積を引き起こして神経毒性を獲得するという仮説に基づき、1)異常伸長GGGGCCリピートを発現する新規ALSモデルショウジョウバエを樹立、その病態メカニズムを解明し、さらに病態への2)TDP-43/FUSの関与を調べ、あるいは3)RNAストレスがGGGGCCリピートRNAおよびTDP-43/FUSへ及ぼす影響を明らかにすることで、ALSの発症分子メカニズム解明を目指す。上記目的達成のため、今年度は以下の研究を行った。1)異常伸長GGGGCCリピートを発現するALSモデルショウジョウバエの樹立とその病態解析まず、GGGGCCリピート配列の野生型(9リピート)もしくは異常伸長(50リピート、100リピート)をショウジョウバエ用pUASTベクターに挿入し、ショウジョウバエ胚にマイクロインジェクションにより導入して、トランスジェニックショウジョウバエを作製した。そして、GGGGCCリピートを含むRNAを神経系に発現させたところ、異常伸長リピートでは発生段階での致死を呈した。次に複眼で発現させたところ、異常伸長リピートでは顕著な複眼変性を生じることが明らかとなった。一方、野生型GGGGCCリピートの発現ではこれらの症状は生じなかった。以上のことから、異常伸長したGGGGCCリピートRNAはin vivoにおいて神経毒性を発揮することが明らかとなった。異常伸長GGGGCCリピートは、GC含有率が高くかつリピートが長いためにPCRなどの分子生物学的操作が非常に困難であるが、合成DNAを連結することにより異常身長GGGGCCリピートの作製に成功し、さらにin vivoにおいても異常身長GGGGCCリピートが維持された世界初の新規ALSモデルトランスジェニックショウジョウバエの樹立に成功した。そして、異常伸長GGGGCCリピートがin vivoにおいて神経変性を惹き起こすことを世界で初めて明らかにした。特に、本研究計画の中で一番の懸念事項であったGGGGCCリピートRNAの神経毒性を見出すことに成功したことから、当初の計画以上に進展していると評価した。今後、前年度に樹立に成功したGGGGCCリピート発現新規ALSモデルショウジョウバエについて、GGGGCCリピートRNAの発現量をRT-PCRにて、GGGGCCリピート長をRepeat Primed PCRにて確認する。そして、in situハイブリダイゼーションおよび免疫染色にて、神経細胞内のRNA蓄積およびRNA結合蛋白質などの蓄積の有無を明らかにする。

一方、神経系での異常伸長GGGGCCリピートRNAの発現では、発生段階で致死に至り成虫における進行性の神経症状などの解析を行うことができなかったため、今後、薬剤依存的に異常伸長GGGGCCリピートRNAを発現するコンディショナルモデルを樹立し神経症状の解析を行う。トランスジェニックショウジョウバエの購入および作製。免疫染色などに必要な抗体の購入および作製。ショウジョウバエの飼育/維持費。必要に応じて飼育用インキュベーターの購入。
骨・軟骨再生への筋からのアプローチと疾患治療への展開

本研究では筋組織が骨・軟骨再生を誘導する機序を明らかにすることを目的として、筋組織での異所性骨化を破骨細胞形成の観点から検討した。筋組織では皮下組織と比較して、筋芽細胞とBMP-2の移植による異所性骨化が増加し、また破骨細胞の増加が見られた。さらに、進行性骨化性線維異形成症の原因遺伝子である活性型BMP受容体を強制発現させた筋芽細胞はin vivoおよびin vitroにおいてTGF-βの発現を増加させ破骨細胞分化を促進することが明らかとなった。以上より、筋芽細胞が破骨細胞形成を促進して骨・軟骨再生を誘導することが示唆された。筋組織が骨・軟骨再生に支持的に働く知見が集積されてきたが、その機序の詳細は不明である。本研究課題では筋組織が骨・軟骨再生を誘導する機序と骨吸収系細胞の破骨細胞やマクロファージなどの周辺の細胞が果たす役割を明らかにし、筋組織の骨・軟骨再生誘導に重要な因子を同定することを目的とした。本年度はまず、マウス筋芽細胞とBMP-2をコラーゲンスポンジと共に免疫不全マウスの皮下および筋組織内に移植し、異所性骨化と破骨細胞形成について検討した。その結果、筋組織内移植において皮下よりも有意に異所性骨化および骨芽細胞の増加が見られた。さらに、皮下組織と比較し、筋組織で誘導した異所性骨において破骨細胞の増加が見られた。そこで破骨細胞形成における筋組織の作用を明らかにするために、破骨細胞分化因子RANKLをもちいたマウス単球・マクロファージ系細胞の破骨細胞分化誘導系において、筋芽細胞または皮膚線維芽細胞の培養上清添加をおこなった。その結果、線維芽細胞と比較して、筋芽細胞の培養上清は有意に破骨細胞形成を促進した。以上より、筋組織から破骨細胞形成を促進する液性因子が産生されていることが示唆された。さらに、筋に骨化をきたす進行性骨化性線維異形成症(FOP)を手がかりに、FOPの原因変異である、恒常活性型BMP受容体[ALK2 (R206H)]を発現させた筋芽細胞をもちいて、筋による破骨細胞分化促進機序を検討した。マウス単球・マクロファージ系細胞の破骨細胞分化誘導系へのALK2 (R206H)発現筋芽細胞の共培養、さらにはALK2 (R206H)発現筋芽細胞の培養上清の添加により、破骨細胞分化が促進することが明らかとなった。そこで、筋芽細胞にALK2 (R206H)導入することで発現が誘導される破骨細胞誘導因子を同定するために、DNAマイクロアレイをもちいていくつかの候補因子を抽出し、解析中である。昨年度の研究により、in vivoおよびin vitroにおいて筋芽細胞に破骨細胞形成促進作用があることが示された。さらに、FOPの原因遺伝子である恒常活性型BMP受容体[ALK2 (R206H)]の導入により筋芽細胞の破骨細胞形成促進作用が亢進することが示された。またその因子が液性因子であることが示唆された。今年度は筋芽細胞から産生される破骨細胞形成促進因子の同定とその機序について検討した。破骨細胞形成促進作用のある因子の筋芽細胞における発現について、ALK2 (R206H)の導入による影響をDNAマイクロアレイデータより解析した。さらに定量的リアルタイムPCR解析により、ALK2 (R206H)の導入は筋芽細胞においてTGF-βの発現を増加させることが示された。ALK2 (R206H)導入筋芽細胞の培養上清による破骨細胞形成促進作用は、TGF-βシグナル阻害剤およびTGF-β中和抗体により抑制された。さらに阻害剤をもちいた検討により、TGF-βはALK5およびp38 MAPキナーゼを介して破骨細胞形成を促進することが示された。それらの阻害剤による破骨細胞形成促進作用はin vitroおよびin vivoでも観察された。今回の検討により、活性型ALK2シグナルは筋芽細胞からのTGF-βの発現を増加させ、ALK5およびp38 MAPKを介して、破骨細胞分化を促進することが示唆された。医歯薬学本年度はマウス筋組織内および皮下組織における異所性骨化モデルをもちいて、筋内において異所性骨化および破骨細胞形成が有意に亢進することを明らかにした。また、培養細胞をもちいた実験においても、筋による破骨細胞形成促進を支持する結果が得られた。現在、筋から産生される破骨細胞形成促進因子を同定するために、筋に骨化をきたす進行性骨化性線維異形成症(FOP)を手がかりとして、筋芽細胞にFOPの原因

変異ALK2 (R206H)を導入することで発現が誘導される破骨細胞形成促進因子をDNAマイクロアレイ解析のデータから抽出済みで、詳細な検討をおこなっている。本年度の研究成果の一部は第32回日本骨代謝学会学術集会などにおいても成果の発表予定である。これらのことを総合的に判断して、おおむね順調に進展しているとした。本年度の検討により抽出された、筋芽細胞から産生される破骨細胞形成を促進する候補因子の関与を明らかにし、その破骨細胞形成促進機序を検討する。また、筋による骨化促進作用における破骨細胞の役割を明らかにするために、筋組織における異所性骨化モデルにおいて骨吸収抑制剤等の投与実験をおこなう。こられの実験結果に基づき、破骨細胞を標的としたFOP治療法についてもマウスをもちいて検討する。来年度は本研究課題の最終年度であるため、すべての実験を12月までに終了し、それ以降は研究のまとめや成果発表を行う予定である
アラビア海における中国陶磁貿易の考古学調査

大量の物資を安価に運ぶことができる海上交通路の利用は、中世に盛んとなる。多くの物資はすでに腐食し使用され残らないが、陶磁器は腐らないため遺跡に残る。遺跡に散在する陶磁器からは、文献資料では知ることが困難な具体的な貿易量まで推定できる。東西海上貿易の実態を、具体的な考古学資料から復元することが可能となる。インド洋西域(アラビア海)沿岸の遺跡から発見される中国陶磁器の種類や器種、量、生産地、年代などを調べることによって、中世の中国と西アジア・アフリカとの海上貿易の実態と変遷を明らかにし、同時に出土する多くのイスラム陶器との比較研究によって、中国陶磁器が西方世界に及ぼした技術的な影響の程度を研究したい。中世の東西世界の結びつきを、考古学資料で描きだすことが本研究の目的である。研究計画の円滑な遂行を目的として、昭和62年度に予備調査を行って準備した。昭和63年度には、アラブ首長国連邦のジュルファ遺跡、バ-レ-ン国のアリ遺跡の発掘調査を行い、平成元年度にも同じ遺跡の第二次発掘調査を行った。ジュルファ遺跡はアラビア湾に面する中世の港町遺跡である。ホルムズ海峡に近い、アラビア湾の入り口部に立地し、メソポタミアおよびアラビア半島とインド・東南アジアとを結ぶ中継貿易港遺跡であった。昭和63年度にはメイン・トレンチを掘り、遺跡の堆積状況をとらえ、そのうちの第一層から第三層までを層位的に広げて発掘した。続く平成元年度には同じ場所を掘り下げ、第四層、第五層、第六層の三層を発掘した。これによって、14世紀から16世紀の建物跡、カマド、円形穴などの生活跡を発見した。この地方に独特と思える掘立柱跡が並ぶ建物、アラブ独特の建築様式の中庭を中心とした道路で囲まれた建物などの生活跡、ペルシアや中国から運ばれた陶磁器、ガラス、現地産が多い彩文土器や無文土器など、大量の生活用具の破片が出土した。層位的な違い、すなわち時代的な違いが明確になり、貿易圏の時代的変遷をたどる資料を得ることができた。アリ遺跡はアラビア湾に浮かぶバ-レ-ン島の中央部にあるイスラ-ム時代初期の町跡である。昨年度の発掘場所と70メ-トル離れた同じ遺跡内を発掘し、9ー10世紀の石積み壁の建物跡と、アラビア湾を運ばれた貿易品、とくにイラクと中国の陶磁器、かなりの数量のガラス、青銅製品、土器片を発見した。アラビア湾の二個所の遺跡発掘により、メソポタミアと東南アジア・中国との海上貿易が盛んになり始めた9世紀の実態、および中国陶磁器が大量に西方世界に運ばれた14世紀から16世紀の実態を示す出土品を資料化した。当初の目的にそう研究資料を層位的に入手し、研究成果をあげることができた。しかし、なお、調査した遺跡は広大であり、未調査部分がまだ多く残る。現地政府は遺跡を保存し、継続的調査を許可している。さらに資料を増加させ、現地の国立博物館内に残してきた資料を整理・研究することが必要である。

アラビア湾の二個所の遺跡発掘により、メソポタミアと東南アジア・中国との海上貿易が盛んになり始めた9世紀の実態、および中国陶磁器が大量に西方世界に運ばれた14世紀から16世紀の実態を示す出土品を資料化した。当初の目的にそう研究資料を層位的に入手し、研究成果をあげることができた。しかし、なお、調査した遺跡は広大であり、未調査部分がまだ多く残る。現地政府は遺跡を保存し、継続的調査を許可している。さらに資料を増加させ、現地の国立博物館内に残してきた資料を整理・研究することが必要である。
IRF-4 (interferon regulatory factor-4)を標的とした1型糖尿病の新規治療の開発

IRF-4を介した1型糖尿病の治療開発を目的として、IRF-4欠損NODマウスの作成・解析を行った。IRF4ホモ欠損NODマウスのみではなく、ヘテロ欠損NODマウスにおいても、自己免疫性糖尿病・膵島炎・インスリン自己抗体の産生の強い抑制が認められた。養子移入実験ではCD4+T細胞とCD8+T細胞の両サブセットのエフェクター機能にIRF4が必須であることが証明された。IRF4の発現はCD4+細胞においてmemory T細胞やIL-17産生細胞の低下と関連した。また、CD8+T細胞ではエフェクター分子であるGranzyme Bの発現低下と関連した。IRF4はNODマウスの自己免疫性糖尿病の病態においてT細胞のエフェクター機能に必須であり、ヒト1型糖尿病の治療標的として重要な分子である可能性を見出した。1型糖尿病の病態におけるIRF4の関与を明らかにすることを目的として、IRF4遺伝子欠損NODマウスの解析を施行している。本研究により、IRF4の発現減弱に伴い、膵島炎・唾液腺炎・自己抗体産生が高度に抑制( IRF-4ホモ欠損マウス(irf-4nullNOD)では完全抑制)され、IRF4が膵島炎をはじめとした自己免疫現象の形成に必須の因子であることが証明された。また、養子移入によるin vivoの検討ではその障害はCD4陽性T細胞・CD8陽性T細胞、両方の機能異常に伴うことが明らかにされた。CD4陽性T細胞のFACSによるサイトカインの細胞内染色では、irf-4nullNODではactivated T cellの分画の低下・IL17産生障害・regulatory T cellの低下が認められ、CD4陽性T細胞の機能異常の一部を説明しうる可能性があると考える。実験開始当初より目的としていた、(1)臨床的フェノタイプ解析(糖尿病累積発症率・膵島炎重症度・自己抗体の評価)(2)免疫学的フェノタイプ解析(養子移入実験によるリンパ球のin vivoの機能解析・FACSによるCD4T細胞の機能解析(activated T cell / regulatory T cell等)・FACSによるCD4T細胞のサイトカイン分泌解析)等を既に終了している。上記の臨床的・免疫学的フェノタイプ解析が大きく進行しており、本研究は概ね順調に進展していると判断している。
抗原誘発気道過敏性時の摘出気管支平滑筋収縮におけるカルシウム感受性の変化

平滑筋収縮時の収縮エレメントのカルシウム感受性を生理学的・薬理学的に解析するために,まず,ラット肺肉細気管支平滑筋のスキンドファイバー標本の作製を試みた.本標本の作製には一般的に,β-escin,α-toxin等が用いられるが,数多くの検討を行った結果,幅0.1mm,直径0.5mmの肺内気管支切片に対して10μMβ-escinを23°Cにて30分間処置することにより,再現性の良いCa^<2+>収縮が得られることが明かとなった.また,本スキンドファイバー法を用いて,正常群と気道過敏性群の肺内気管支平滑筋のCa^<2+>収縮を比較したところ,両群間で著明な差は認められなかった.この結果より,気道過敏性時において,少なくともベースラインレベル(すなわちアゴニスト等の刺激がない場合)の収縮エレメントのカルシウム感受性には変化がないことが明かとなった.また,アセチルコリン誘発カルシウム感受性亢進については,正常群と比較して気道過敏性群ではより大きく発現することが明らかとなった.さらに,このアセチルコリン誘発カルシウム感受性亢進現象は低分子量GTP結合蛋白質であるRhoの阻害薬であるC3により完全に抑制された.一方,Western blot法を用いて定量を行った結果,気道過敏性時に気管支組織のRho A含量が著明かつ有意に増大していることが明かとなった.以上の結果より,ラット気管支平滑筋において,Rho Aがアゴニスト誘発カルシウム感受性亢進に関与しており,気道過敏性時にこのRho Aを介したメカニズムが大きく亢進しており,その結果より強い収縮が惹起される可能性が示唆された平滑筋収縮時の収縮エレメントのカルシウム感受性を生理学的・薬理学的に解析するために,まず,ラット肺内細気管支平滑筋のスキンドファイバー標本の作製を試みた.本標本の作製には一般的に,β-escin,α-toxin等が用いられるが,数多くの検討を行った結果,幅0.1mm,直径0.3mmの肺内気管支切片に対して10μMβ-escinを23°Cにて30分間処置することにより,再現性の良いCa^<2+>収縮が得られることが明かとなった.また,本スキンドファイバー法を用いて,正常群と、気道過敏性群の肺内気管支平滑筋のCa^<2+>収縮を比較したところ,両群間で著明な差は認められなかった.この結果より,気道過敏性時において,少なくともベースラインレベル(すなわちアゴニスト等の刺激が無い場合)の収縮エレメントのカルシウム感受性には変化がないことが明かとなった.現在,このスキンドファイバー標本を用いて,気道過敏性時におけるアゴニスト誘発カルシウム感受性亢進の変化について検討中である.上記の生理学的・薬理学的検討と平行して生化学的手法を用いて,平滑筋収縮エレメントのカルシウム感受性に寄与していると考えられている細胞内情報伝達物質について,気道過敏性時における量的変化の検討を行った.カルシウム感受性亢進現象に,アゴニスト刺激により活性化されるプロテインキナーゼC(PKC)あるいは低分子量GTP結合蛋白質であるPhoの関与が報告されているが,これらをWestern blot法を用いて定量した.その結果,気道過敏性時に気管支組織のPhoAが著明かつ有意に増大していることが明かとなり,ラット気管支平滑筋において,PhoAがアゴニスト誘発カルシウム感受性亢進に関与しており,気道過敏性時にこのPhoAを介したメカニズムが大きく亢進しており,その結果より強い収縮が惹起される可能性が示唆された.一方,PKCについてはそのいずれのサブタイプについても,気道過敏性時には有意に減少していることが明かとなり,その役割についてさらに検討していく必要があるものと考えられる.平滑筋収縮時の収縮エレメントのカルシウム感受性を生理学的・薬理学的に解析するために,まず,ラット肺肉細気管支平滑筋のスキンドファイバー標本の作製を試みた.本標本の作製には一般的に,β-escin,α-toxin等が用いられるが,数多くの検討を行った結果,幅0.1mm,直径0.5mmの肺内気管支切片に対して10μMβ-escinを23°Cにて30分間処置することにより,再現性の良いCa^<2+>収縮が得られることが明かとなった.また,本スキンドファイバー法を用いて,正常群と気道過敏性群の肺内気管支平滑筋のCa^<2+>収縮を比較したところ,両群間で著明な差は認められなかった.この結果より,気道過敏性時において,少なくともベースラインレベル(すなわちアゴニスト等の刺激がない場合)の収縮エレメントのカルシウム感受性には変化がないことが明かとなった.また,アセチルコリン誘発カルシウム感受性亢進については,正常群と比較して気道過敏性群ではより大きく発現することが明らかとなった.さらに,このアセチルコリン誘発カルシウム感受性亢進現象は低分子量GTP結合蛋白質であるRhoの阻害薬であるC3により完全に抑制された.一方,Western blot法を用いて定量を行った結果,気道過敏性時に気管支組織のRho A含量が著明かつ有意に増大していることが明かとなった.以上の結果より,ラット気管支平滑筋において,Rho Aがアゴニスト誘発カルシウム感受性亢進に関与しており,気道過敏性時にこのRho Aを介したメカニズムが大きく亢進しており,その結果より強い収縮が惹起される可能性が示唆された