hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
前骨転移ニッチ仮説に基づく癌の骨選択的転移メカニズムの解析

本研究課題では、担癌状態における骨髄の構成変化と骨転移形成との関連を検討した。その結果、担癌マウスの骨髄、および骨転移巣においては、腫瘍増殖と比例してGr-1+/CD11b+細胞の割合が増加することが示された。また、担癌マウス骨髄から単離したGr-1+/CD11b+細胞は、腫瘍増殖を促進させる傾向を示した。しかし、担癌による骨転移形成の明らかな促進は認められなかった。今後、骨髄Gr-1+/CD11b+細胞と骨転移形成に対するさらなる検討が必要である。「前転移ニッチ(pre-metastatic niche)」の概念をもとに、平成24年度(第2年度)は、平成23年度に得られた担癌状態における骨髄の構成変化と、癌の骨への選択的転移との関連を明らかにするために、骨転移巣における骨髄細胞の構成変化についての解析、および骨髄Gr-1+/CD11b+細胞画分の人為的操作モデルマウスの確立を試みた。1.骨転移巣における骨髄細胞の構成変化平成23年度、我々は、癌細胞皮下移植モデルマウスの骨髄においてGr-1+/CD11b+細胞が著明に増加することを見出した。平成24年度は、骨転移モデルマウスを用いて、骨転移巣における骨髄細胞の構成変化について、フローサイトメーターを用い、検討を行った。その結果、骨転移巣においてもGr-1+/CD11b+細胞が増加していることが確認された。これらの結果から、Gr-1+/CD11b+細胞と骨転移形成との関連の可能性が推測される。2.骨髄Gr-1+/CD11b+細胞画分の人為的操作モデルマウスの確立骨髄Gr-1+/CD11b+細胞の骨転移に対する関与についての解析を進める方法の一つとして、同分画をマウスで減少させる手法を試みた。その結果、抗癌剤の一つである5-フルオロウラシル(5-FU)の投与が、同分画を著明に減少させることが確認された。この方法を用い、5-FUを前投与した動物で骨転移がどのように変化するかを検討することにより、骨髄Gr-1+/CD11b+細胞の骨転移に対する関与の解明に繋げていきたい。研究期間最終年度である本年度は、担癌状態における骨髄の構成変化と、癌の骨への選択的転移との関連を明らかにするために、担癌状態において骨髄内で著明に増加することが明らかにされたGr-1+/CD11b+細胞の腫瘍増殖に対する作用および骨転移に対する作用についてin vivoでの検討を行った。骨髄からセルソーターにより単離したGr-1+/CD11b+細胞を腫瘍細胞とともにヌードマウスに接種し、腫瘍増殖に対する作用を検討した。その結果、正常マウスから単離したGr-1+/CD11b+細胞は、腫瘍増殖に影響を与えなかった。一方、担癌マウスから単離したGr-1+/CD11b+細胞は、腫瘍増殖を促進させる傾向を示した。2. Gr-1+/CD11b+細胞の骨転移に対する作用腫瘍細胞をあらかじめヌードマウス乳腺内に接種し、その4週後に再度、腫瘍細胞の左心室内移植を行うという方法を用い、Gr-1+/CD11b+細胞の骨転移に対する作用について検討を行った。その結果、乳腺部腫瘍の有無による骨転移形成の明らかな差異は認められなかった。1の実験から、担癌マウスの骨髄Gr-1+/CD11b+細胞には腫瘍増殖の促進作用が示唆されることから、本実験系ではGr-1+/CD11b+細胞以外の要素が関与した可能性が推測され、異なる系による検証が必要と思われる。癌の骨への選択的転移メカニズムの1つとして、癌細胞と骨髄微小環境との相互作用が重要であることが示唆されている。本研究課題では、近年提唱された「前転移ニッチ(pre-metastatic niche)」の概念をもとに、転移成立以前の骨微小環境の変化が骨転移を促進するとの仮説を立て、担癌状態における骨髄の構成変化を検討することにより、癌の骨への選択的転移メカニズムを解明することを目的としている。初年度は、担癌状態における骨髄細胞の経時的構成変化、増加の見られた骨髄細胞画分の分離、および同画分のin vivoでの局在についての解析を行った。1.担癌状態における骨髄細胞の構成変化:我々は予備検討において、癌細胞皮下移植モデルマウスの骨髄においてGr-1+/CD11b+細胞が著明に増加することを見出していることから、腫瘍増殖と骨髄内でのGr-1+/CD11b+細胞の構成変化について、フローサイトメーターを用い経時的な観察を行った。その結果、腫瘍増殖と比例してGr-1+/CD11b+細胞の割合が増加することが示され、担癌状態の関与が強く示唆された。

2.骨髄Gr-1+/CD11b+細胞画分の分離:1で増加が確認されたGr-1+/CD11b+細胞画分を以降のin vitroおよびin vivo実験で用いるため、Fluorescence-Activated Cell Sorter (FACS)による分離を試み、成功した。3. Gr-1+/CD11b+細胞のin vivo局在:担癌状態の骨髄内での著明な増加が確認されたGr-1+/CD11b+細胞のin vivoでの局在を免疫組織化学的に検討した。その結果、皮下移植腫瘍や担癌マウスの脾臓内でも局在が確認され、また、増加していることが明らかにされた。平成24年度は、交付申請書に記載した研究実施計画に沿って実験を行い、計画の目標はほぼ達成されたと評価している。昨年度は、交付申請書に記載した研究実施計画に沿って実験を行い、計画の目標はほぼ達成されたと評価している。平成25年度は、平成24年度に得られた研究結果もとに、Gr-1+/CD11b+細胞の腫瘍増殖および骨転移に対する作用について、モデルマウスを用いたin vivoでの検証を中心に検討を進めていく。具体的には、単離したGr-1+/CD11b+細胞を癌細胞とともにマウスに移植し、腫瘍増殖および骨転移に対する影響について解析する。本年度は、昨年度に得られた研究結果もとに、当初の研究経過に従い、「骨髄細胞の構成変化と骨転移形成との関連」についてin vivoでの検証を行う。具体的には、あらかじめ癌細胞を原発部位に移植したマウスに、骨転移モデルを応用し、原発腫瘍の骨転移成立・進展に対する影響について検討する。平成24年度は、ほぼ計画通りの研究を行い、予算を執行したが、平成23年度の繰越金にほぼ相当する額が繰越金となった。平成25年度は、充実した動物実験を行うための十分数の動物の確保、細胞の分離、培養、調整、解析に必要な細胞培養関連用品・試薬、分子細胞生物学実験試薬の購入、および成果発表のための旅費、論文印刷代に当てる予定である。昨年度は、当初計画していたより、実験に用いる動物数が少なく済んだため、繰越金が生じた。本年度は、動物実験が中心になるため、より充実した数の動物実験を行うために充当する予定である。その他の予算は、細胞の分離、培養、調整、解析に必要な細胞培養関連用品・試薬、分子細胞生物学実験試薬の購入に当てる予定である。
分子の高次組織化による材料機能設計

1.高分子液晶/液晶複合膜は低周波電界により光散乱状態、高周波電界により光透過状態となり、光散乱ー光透過状態は電界を切ってもメモリ-される双安定型光スイッチング特性を示すことを初めて観測するとともに、複合膜の光散乱機構と光メモリ-能に対する構造因子を明らかにした。2.認識・応答機能を持つ分離・輸送系構築を目的とした研究を引き続き展開し、剛直なスペ-サ-を持つサンドイッチ型分子認識素子が電荷移動錯体の自発的高次組織化をひきおこすこと、および光応答性キャリアを用いた分離・輸送系に関する基礎的な知見を明らかにした。3.生体機能を模した新しい高次組織化したLB膜の構築に関し、(1)サンドイッチセルによる光応答、(2)BAMによる膜の安定性評価、(3)SーD間電子移動の距離依存性、(4)剛直結合鎖で連結したSーD化合物内の電子移動及び(5)LB膜内におけるプロトン移動、を検討した。4.ITO電極上に数種のフェロセンスルフィドおよびスルホン長鎖誘導体のLB膜を構築し、可逆的な酸化還元反応を実現した。一方、芳香環を含むアミノ酸長鎖エステルのLB膜中で、π電子系相互の配向・充填状態を制御することにより、光物性、化学反応性に配列状態の相違が反映されることを見出した。5.水晶発振子をLB膜の水平付着累積基板として用い、その振動数変化から累積挙動をin situで評価した。その結果、水平付着累積法は従来の垂直浸積法に比べて多くの利点を持つことを明らかにした。6.新しい原理に基づくフォトクロミズムを示す有機固体材料の開発を目指して、光励起によって相転移を起こす可能性を検討した。アルキルウレタンを側鎖基にもつポリジアセチレン単結晶試料を使用して、ナノ秒パルス光照射による可逆的な超高効率の光誘起相転移現象を見出した。
大阪の出版文化の研究-大阪著述家書目の作成-

大阪出身の著述家、大阪で活躍した文学者の著者別の書目である。明治から現代までを取り扱っている。対象とした著述家は、宇田川文海、渡辺霞亭、村上浪六、西村天囚、角田浩々歌客、菊池幽芳、河井酔茗、中村吉蔵、小林天眠、久津見蕨村、木崎好尚、高安月郊、上司小剣、斎藤弔花、薄田泣菫、奥村梅皐、食満南北、今中楓渓、石丸梧平、直木三十五、宇野浩二、渡辺均、北條秀司、長谷川幸延、藤沢桓夫、武田麟太郎、井上友一郎、織田作之助、河野多恵子、谷沢永一、向井敏、開高健の33名である。大阪の文人や著述家がどのような書目を出版したか、明治から現代までを対象として調査する本研究課題において、平成二十年度は、上司小剣、大宅壮一、武田麟太郎、小野十三郎、藤沢桓夫の五名の作家・詩人・評論家の書目を作成し、『浦西和彦著述と書誌第四巻』(平成二十一年一月二十日発行、和泉書院)に公表した。上司小剣は、自然主義的写実小説「鱧の皮」で、大阪道頓堀のうなぎ屋「讃岐屋」を舞台に、情味豊かな筆致で大阪商家の情緒と結び合い、京阪の情話ものを書いた。大宅壮一は、「駅弁大学」や「緑の待合」など戦後の時流をずばり言い表す新造語を次々とつくり、マスコミのあらゆるメディアで活躍した。マスコミの三冠王といわれた評論家である。武田麟太郎は、大学時代セツルメントの仕事を通じて労働運動に参加した。出世作「暴力」「反逆の呂律」など発表し、新感覚派的手法とマルクス主義的思想による新鮮な作風を示した。戦争中、散文精神によるファシズムへの抵抗を示した。小野十三郎は、アナキースト詩人として活躍し、短歌的抒情の否定で、鋭い批判精神を持つ詩人として、「大阪」「小野十三郎詩集」などを刊行した。藤沢桓夫は、新感覚派の影響を受け、その後プロレタリア文学運動に参加した。大正・昭和という時代や社会における文学・文化・思想を俯瞰する時、この書目はその研究の基盤となり、文学研究だけでなく、現代思想研究、文化研究においても必須のものとなっている。大阪で活躍した著述家や大阪出身の文学者がどのような書物を出版したか、明治から現代までを対象とし、宇田川文海(作家・ジャーナリスト)、渡辺霞亭(小説家・劇作家)、村上浪六(大衆作家)、西村天囚(ジャーナリスト・漢学者)、角田浩々歌客(文芸時評家)、菊池幽芳(小説家)、河井酔茗(詩人)、中村吉蔵(劇作家・小説家)、小林天眠(文筆家・実業家)、久津見蕨村(思想家・評論家・ジャーナリスト)、木崎好尚(ジャーナリスト・金石文研究家)、高安月郊(詩人・劇作家)、上司小剣(小説家)、斎藤弔花(ジャーナリスト・小説家)、薄田泣菫(詩人・随筆家)、奥村梅皐(ジャーナリスト・評論家)、高須梅渓(評論家・水戸学研究家)、食満南北(劇作家・座付作者)、今中楓渓(歌人)、石丸悟平(小説家・評論家)、直木三十五(小説家)、宇野浩二(小説家・評論家)、渡辺均(小説家・ジャーナリスト)、北條秀司(劇作家)、長谷川幸延(劇作家・小説家)、藤沢桓夫(小説家)、武田麟太郎(小説家)、井上友一郎(小説家)、織田作之助(小説家)、河野多恵子(小説家)、兄沢永一(近代文学研究者・評論家・書誌学者)、向井敏(文芸評論家)、開高健(小説家)の三十三名の書目を作成した。その一部は『浦西和彦著述と書誌』全四巻に公表した。明治・大正・昭和という時代や社会における文学・文化・思想を俯瞰する時、この書目はその研究の基盤となり、文学研究だけでなく、現代思想研究、文化研究においても必須のものとなっている。研究成果として『大阪文学書目』(平成22年8月10日発行、遊文舎)、『谷沢永一博士書目』(平成22年8月10日発行、遊文舎)の二冊を刊行することが出来た。『大阪文学書目』はA5判、二段組、520頁の大著である。明治期の宇田川文海から現代作家として活躍した開高健まで、33名の大阪出身者あるいは大阪で活動した小説家、評論家、詩人、劇作家を対象として取り上げている。例えば、その書目の冊数を明治期だけでもあげると、宇田川文海5冊、漢辺霞亭187冊、村上浪六219冊、西村天囚43冊、角田浩々

歌客7冊、菊池幽芳81冊、河井酔茗31冊、中村吉蔵41冊、小林天眠3冊、久津見蕨村18冊、木崎好尚21冊、高安月郊25冊、上司小剣43冊、斎藤弔花27冊、薄田泣董50冊、奥村梅皐10冊、.高須梅渓89冊である。『大阪文学書目』全体では、2737冊もの著書を扱っている。これまで埋もれていた多数の書物を発掘した。この書目によってその著者の活動の全容が初めて明らかになった人々も多数ある。この書目の特徴は収録作品まで一冊一冊記された詳細な書誌的データである。発行年月日や出版社名、判型、頁数などの書誌的記述だけでなく、その一冊一冊の著書の本文の内容がわかるように目次を記載している。この書目によって出版文化研究の基礎基盤が確立したといえよう。また、この書目によってその時代の文化や思想や風俗を見ることができるであろう。
HSVの脊髄後根感覚神経節への急性・潜伏感染による感覚神経細胞機構の修飾の解析

単純ヘルペスウイルス(HSV)は、皮膚・粘膜などのでの急性感染に引き続き脊髄後根神経節や三叉神経節に潜伏感染する。しかし、潜伏感染機構とは対照的に、HSV感染による潜伏感染している感覚細胞機能に関しては知られていない。HSVは、初感染後に感覚神経節神経細胞に潜伏感染し、再活性化により病変を生じる。しかし、このような感覚神経細胞への急性・潜伏HSV感染に伴う感覚異常に関しては知られていない。そこで、この研究の第一歩として、HSV感染に伴う感染部位の痛覚閾値が上昇することを報告した(Neur osci Lett 190:101-104,1995)。そして、この痛覚閾値の上昇と感覚神経節の神経細胞のHSV感染との関係や痛覚閾値の薬剤に関する反応性を検討し、HSV感染に伴う後根神経節の感覚神経細胞の機能に関する評価を行った(Neur osci Res 31:235-240,1998)。そして、本研究ではマウスのHSV皮膚感染モデルを用いて,HSV感染に伴い,感染部位の神経支配領域で,allodyniaとhyper algesiaが認められることを証明した(Pain in press)。このような変化は,後根感覚神経節でHSVゲノムの検出と一致していることから,HSV感染に伴う感覚神経機能の修飾によるものと考えられた。この実験系の開発により,帯状庖疹後に認められる帯状庖疹後神経痛のモデルとして薬効の評価系となりうることが示された。HSVの神経細胞での潜伏感染時にゲノムから特異的に転写されるLatency Associated Transcripts(LAT)のプロモーターを利用して、その下流にβ-ガラクトシダーゼ(β-gal)遺伝子を組込み(Neur osci Lett 245:69-72.1998)、このウイルスの末梢および中枢神経系への急性期と潜伏感染時に、組織破壊を認めずに、神経細胞特異的に、β-galを発現する事を示した。そして,このウイルスをラットの右腓腹筋に接種すると5-7日後に両側の脊髄前角神経細胞にβ-galの発現を認め始め,14日頃まで発現領域が拡大し,それ以降182日以上前角神経細胞中でβ-galの発現が持続し,潜伏感染の持続とともに、発現が増強することを確認した。そして,炎症や,神経細胞の破壊を認めず,導入遺伝子を長期にわたり発現できることを確認した。このことは,前角細胞の変性による筋萎縮性脊髄硬化症の疾患モデル及びその治療モデル動物の作成がこのウイルスベクターによって可能であることを示した(Gene Ther apy in press)。
高機能自閉症スペクトラム障害における共感の神経基盤の解明と育成に関する研究

特定の課題に取り組んでいない時に脳内で活性化されているデフォルトモードネットワークの活動と、自閉症傾向や共感傾向との関連を明らかにするための研究を実施した。デフォルトモードネットワークは社会脳との関連が想定されており、自閉症スペクトラム障害では活動が低下されていると報告されているが、その詳細は明らかになっていない。そこで、脳血流を測定できる光トポグラフィ(near infra-red spectroscopy: NIRS)でデフォルトモードネットワークの活動が捉えられるかを検討し、その活動と、自己記入式質問紙で測定する自閉症傾向や共感傾向との関りを明らかにする研究を行った。上記の研究を進めるために、学内の倫理審査委員会に申請書類を提出し、承認を得て、講義後の時間等で被験者募集を行った。その結果、およそ20人の被験者候補が集まったため、実験を開始し、データの蓄積を進めた。集団解析の結果、デフォルトモードネットワークと自閉症傾向の間に有意な結果を認めることができなかったが、今後、ノイズ除去の方法をより精緻なものにし、さらに機械学習などの手法をもちいて分析を行い、まとめ次第発表したいと考えている。27年度が最終年度であるため、記入しない。広く社会的に発達障害が注目されるにつれ、今まで見過ごされてきた大人から診断を求めるケースも増えている。しかし、自閉症スペクトラム障害の診断においては健常とされる状態と区別しにくいレベルの人が存在し、見過ごされやすい現状がある。そこで今後、神経生物学的なマーカーが診断に活用されていくことが必要と考えられる。自閉症スペクトラム障害の神経生物学なマーカーを明らかにすることで、1)従来の診断と組み合わせにより正診率を上げることができ、2)その個人の障害の程度から、どのレベルの対処や支援が必要なのかを補助できるのではないかと考えられる。本研究では、高機能自閉症スペクトラム障害の共感の障害について神経基盤の解明と育成を目的とした研究をすすめている。さらに、ニューロフィードバックの研究につなげ、新しい個別的な支援方法の開発の可能性を開くと考えられる。共感の主要な障害としては、視点取得や感情への気づきといった側面があげられ、この2点についての論文の投稿を準備をしている。視点取得の研究では、より基本的な能力である視空間的視点取得が他者の心的な視点の取得と関連していることが明らかとなった。また、感情への気づきの研究では、自閉傾向と表情認知課題との関連を検討し、社会的スキルもしくは細部への注意と表情に対する敏感性との間の関係が示唆された。共感の構成要素を明らかにしていくことにより、今後支援の枠組みが広がることが期待される。視線追跡装置を用いた研究にて研究課題を作成し予備実験を実施し検討したが、課題の変更や計測の変更が必要になったため、研究計画がやや遅れている。今後、視点取得と感情への気づきの研究に関して論文投稿する。また、近年注目されているデフォルトモードネットワークと自閉傾向との関連をNIRSを用いて明らかにしていく予定である。さらに、デフォルトモードネットワークの変化が可能かを検討していく。
バイオインフォマティクス的手法によるナノバイオ磁性粒子生成機構の解明

前年度までの成果として得られた、磁性細菌Magnetospirillum magneticum AMB-1株の全塩基配列及び全遺伝子情報を利用して以下のような解析を行った。1.磁性細菌-非磁性細菌種間での遺伝子レベルの比較解析公共ゲノムデータベースに登録されている168種の原核微生物の全ゲノムデータを利用して、AMB-1を含む磁性細菌3種と非磁性細菌種168種間で遺伝子レベルでの比較解析を行い、磁性細菌種に特徴的な488個の遺伝子を同定した。それら遺伝子のうち約70%が、データーベースに登録されていない新規な遺伝子であった。また残り30%の遺伝子中では、シグナル伝達系の機能を有する遺伝子がほとんどを占めており、磁性細菌種に特異的なシグナル伝達系路すなわち磁石を合成する為の経路の存在が示唆された。2.磁性細菌種間特異的遺伝子のマッピングによるgenomicislandの同定1.により同定した488の遺伝子座標をゲノムマップにマッピングしたところ、それらの遺伝子が有意に集中している領域が存在していた。その領域のGC含量は、他の領域に比べ低くなっており、この領域が外来性であることを示唆している。この100kbの領域は、菌体の培養中に突然変異的に生じる磁石合成能欠損株中で抜け落ちていることが観察されていることを考慮して、この領域が磁石合成にクリティカルな機能を持つgenomicislandである可能性が示唆された。また、この領域の塩基配列を精査したところ、この領域を挟むように存在する1.1kbの繰り返し領域と、その一つに近接する組み換え酵素インテグラーゼ遺伝子の存在が確認された。このことから、この領域は、この1.1kbの繰り返し配列を基点としインテグラーゼ活性によってゲノムから遊離するといった機構が考えられた。磁性細菌Magnetospirillum magneticum AMB-1株の磁性細菌粒子(BMPs)生成メカニズムの解明に向けてそのゲノム配列を決定し、ORFの同定、特徴付け等数種々の解析を行った。AMB-1ゲノムは、4967148塩基からなり、原核微生物として一般的な長さであった。予測される遺伝子は4574あり、その内、公共データベース(DDBJ, NCBI)に対するホモロジー解析結果、既知のタンパク質と高い相同性を示す遺伝子は、2184と全体の47%であった。また、ゲノム配列決定の際、ショットガン法を用いたが、BMPs生成能のスポンティーニアスな変異株においてゲノム配列から完全に欠落した領域が見いだされた。この領域には、BMPs膜局在タンパク質の遺伝子が集中しており、他の磁性細菌種(MS-1、MC-1)と遺伝子の並び方が保存されていたことから、BMPs生成に重要な領域と考えられる。これまでに同定されていたBMPs生成関連遺伝子(magA、mms16、mms6等)はそれぞれクラスターを形成しており、オペロンのように近隣の遺伝子と協調してBMPs生成に機能する可能性が示唆された。また、BMPs生成能欠損株におけるトランスポゾン挿入部位のマッピングは、局所的に集中する領域もみられたが、多くはゲノムの全領域に散らばる結果を示した。これは、BMPs生成機能がゲノム上の特定領域に記述されているのではなく、全体に散在していることを示しており、かつては集中していた遺伝子が進化の中でアレンジメントされたのか、もとからあった遺伝子を代謝中で独特に組み合わせることで、BMPs生成という能力を獲得したのかの2つの可能性が考えられた。現在は後者の可能性に重点をおいた解析を行っており、AMB-1株は窒素固定能は有するが、脱窒素能は持たないことが明かとなっている。
小児白血病におけるマトリックスメタロプロテアーゼと予後:新たな予後因子の発見

【研究目的】a.乳児急性リンパ性白血病(ALL)における白血病細胞に発現しているマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)および内因性MMP阻害因子(TIMP)の遺伝子の発現と細胞生物学的特徴との関連を検討することにより、MMPおよびTIMPの予後因子としての意義を解明する。b.白血病細胞株におけるMMPおよびTIMPの遺伝子発現量とタンパク量および機能との関連を検討する。【結果-a】初診時に肝脾腫を認める症例においては認めない症例に比較して、白血病細胞より産生されるMMP2/TIMP1比およびMMP2/TIMP2比が有意に高値であった(p=0.005,p=0.009)。また、初診時に中枢神経浸潤を認める症例においては認めない症例に比較して、MMP2/TIMP2比が有意に高値であることが明らかになった(p=0.01)。白血病細胞より産生されるMMPおよびTIMPは髄外浸潤の成立に関与していることが示唆された。【結果-b】リンパ球系細胞株(L)は骨髄球系細胞株(M)に比べて、TIMP2遺伝子発現量が有意に高値(p=0.024)、MMP2/TIMP2,MMP9/TIMP2遺伝子発現量比は有意に低値であった(p=0.001,p=0.01)。また、LはMに比べて、上清MMP2およびTIMP1タンパク量が有意に低値(p=0.036,p=0.0082)、TIMP2タンパク量は有意に高値(p=0.013)であった。遊走率<20%の細胞では>20%の細胞に比べて、TIMP2遺伝子発現量が有意に低値であり(p=0.01)、MMP2/TIMP2,MMP9/TIMP2遺伝子発現量比は有意に高値であった(p=0.024,p=0.029)。【研究目的】a.乳児急性リンパ性白血病における白血病細胞に発現しているマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)および内因性MMP阻害因子(TIMP : tissue inhibitors of metalloproteinases)の遺伝子の発現と細胞生物学的特徴との関連を検討することにより、MMPおよびTIMPの予後因子としての意義を解明する。さらに、従来の予後因子と組み合わせることにより、より正確な予後予測法を確立する。【研究実施方法-a】(1)乳児急性リンパ性白血病における初診時骨髄細胞より腫瘍細胞を分離しmRNAを抽出、cDNAを合成する。(3)既知の予後因子すなわち患者の性、発症年齢、診断時白血球数、診断時肝脾腫、診断時中枢神経浸潤もしくは再発の有無により、MMPおよびTIMPの遺伝子発現量に有意差があるかを検定し、白血病の臨床的特徴との相関を解析する。【研究実施方法-b】(1)白血病細胞株におけるMMP2/MMP9/TIMP1/TIMP2遺伝子各々の発現を定量する。(2)白血病細胞株の細胞融解物および細胞上清におけるMMPおよびTIMPタンパク量をELISAにて測定する。(3)白血病細胞株における組織浸潤能をBoyden chamber及びMatrigelを用いたInvasionアッセイにて測定する。【結果】a.白血病細胞より産生されるMMPおよびTIMPは肝脾腫や中枢神経浸潤などの髄外浸潤の成立に関与していることが示唆された(有意差あり)。b.白血病細胞株におけるMMPおよびTIMPの遺伝子発現量とタンパク量および機能との間に一部有意な相関を認めた。遊走率<20%の細胞では>20%の細胞に比べて、TIMP2遺伝子発現量が有意に低値であり(p=0.01)、MMP2/TIMP2,MMP9/TIMP2
胸腺発癌の年齢依存性とマクロファージの加齢変化

scidマウスは、2本鎖切断を修復できない放射線感受性のミュータントマウスである。このマウスは、遺伝子再構成ができないため成熟したT細胞が分化できない。このマウスを用い、放射線とエチルニトロソウレア(ENU)による胸腺リンパ腫発生の年齢依存性を明かにし、発癌の過程におけるマクロファージの関与を検討することを目的とする。「結果」(1)発生率:新生児期に放射線を1GY照射することで、100%胸腺リンパ腫を誘発できるが、8週齢では、30%しかできない。ENU(400ppmの飲料水)場合も、5週齢では70%の個体に発生するが、8週齢では、25%にしかでない。処理年齢が若いほど、胸腺リンパ腫発生の感受性は高い。(2)発生した胸腺リンパ腫の表現形をフローサイトメトリーで解析した。対照群のsicdマウスの胸腺T細胞は、IL-2R+、CD4-8-の末分化な細胞が多かった。しかし、誘発された胸腺リンパ腫は、CD4+8+の分化した性質を示した。しかし、膜表面上にT細胞受容体(TCR)、CD3抗原の発現は認められなかった。しかし、DNAレベルでは、TCRの再構成が起こっていた。恐らく、異常なTCRの再構成が起こっているために、正常な抗原が膜に発現されないのだろうと考えられる。(3)マクロファージに関しては、膜腔内マクロファージ、骨髄マクロファージ、肺胞マクロファージについては検討済みであるが、胸腺内マクロファージの加齢変化については、時間の都合上検討できなかった。
パルス霧化法を用いた塩類電解質クラスターの研究

われわれはパルス霧化法と同様な手法を用いて大きくそして熱緩和したクラスターを生成するガス中レーザー蒸発源の開発に成功した。ガス中レーザー蒸発法は従来超微粒子の生成手法である真空蒸発法をパルス化した手法である。真空蒸発法はサイズが100万を超え、しかも熱緩和した超微粒子を生成する優れた手法であるが、多量の冷却気体を使用し、また、高沸点物質の超微粒子を生成するのが困難であるという欠点を持っていた。ガス中レーザー蒸発源は真空蒸発法の優れた点をそのまま保持しながら、高沸点物質を取り扱え、また、使用冷却気体が少ないため高真空を必要とする質量分析器に直接接続することなどが可能である。この装置は冷却ガス導入バルブと超音速分子線バルブの二つのバルブと蒸発質を使用して、超微粒子生成法である真空蒸発法をパルス化することに成功した。まず、冷却ガス導入バルブから110TorrのHeを蒸発室に導入し真空蒸発法と同様な冷却条件を実現する。次に532nmのレーザーを導入し、炭素などの試料を蒸発させ、既に導入してある冷却気体によって穏やかに冷却し、大きく熱緩和したクラスターを生成する。生成したクラスターを超音波分子線バルブからのジェットでクラスタービームを作り、質量分析などの測定器の導入する。この方法で、われわれはC_<2000>以上の巨大クラスターを初めて生成することに成功した。この手法を用いると従来のレーザー蒸発源に比べ5倍以上のサイズのクラスターを生成できる。また、金属過剰アルカリハライドクラスター、およびアンモニウムハライドラクスターを生成することに初めて成功した。これらのクラスターは、総合力が弱く不安定なため通常のレーザー蒸発法では生成できない。このように、このガス中レーザー蒸発源ではこれまで生成できなかった。大きく熱緩和したクラスターを生成することができる。クラスター生成過程や生成したクラスターの応用についての研究を現在進めている。
ユビキチン鎖の空間配向制御を指向した非水解性アルケン型ユビキチン結合等価体の創出

ユビキチン分子間をつなぐユビキチン結合は,ユビキチン鎖の立体構造や機能発現を支配する重要な部分構造であり,ユビキチン結合を自在に制御する機能性分子の開発はユビキチンの作動機構の理解を可能にする.本研究では,構造的相同性,加水分解耐性,アミド配座制御能を付与したアルケン型ユビキチン結合等価体を開発し,それらを起点としたユビキチン研究を加速化する次世代型化学プローブを創出する研究課題である.ユビキチン分子間をつなぐユビキチン結合は,ユビキチン鎖の立体構造や機能発現を支配する重要な部分構造であり,ユビキチン結合を自在に制御する機能性分子の開発はユビキチンの作動機構の理解を可能にする.本研究では,構造的相同性,加水分解耐性,アミド配座制御能を付与したアルケン型ユビキチン結合等価体を開発し,それらを起点としたユビキチン研究を加速化する次世代型化学プローブを創出する研究課題である.
イネの高ＣＯ２応答に関与するｍｉＲＮＡの探索

1)高CO2環境を伝達する長距離シグナルの受け手であるP4葉(発達中の葉;完全展開葉=P6)のSmall RNAseq解析を行い、高CO2で存在量が2倍以上変動するmiRNAを18種類同定した。そのうち17種類の存在量をRT-qPCRで確認し、葉の発達(分裂と伸長)に関与するmiR396ファミリー5種類の存在量が2倍以上増大することがわかった。miR396の前駆体のP4葉での存在量をRT-qPCRで調べたところ、5種類のうち4種類の前駆体の存在量も高CO2処理で増大することが明らかにされた。2)既に取得済みのマイクロアレーデータを用い、miR396のターゲットと予想される転写因子Growth Regulating Factor(GRF)ファミリーの発現量を調べた。10種類のGRF遺伝子のうち、発現量が有意に低下した4種類の発現をRT-qPCR法で調べ、高CO2処理によってGRF3, 6, 10の発現量が1/3から1/2に低下することを確認した。3)高CO2処理でP4葉での存在量が増大するmiR396の添加実験を行った。完全展開葉葉身先端からカスタム合成したmir396e(ssDNA)を吸引させると、高CO2処理同様、葉面積が縮小することを明らかにした。1)3)の結果は、高CO2処理がmiR396の存在量を増大させ、GRFの発現抑制ひいては葉面積の縮小を引き起こす可能性を示している。4)P4葉のSmall RNAseq解析により、上述の18種類以外にも、高CO2で存在量が変動するmiRNAを21種類見いだした。5)完全展開葉葉身の先端から糖を吸引させると、高CO2同様の応答が引き起こされる(新たに展開する葉の面積が縮小)。高CO2処理とスクロース添加で発現変動を受けるmiRNAの比較解析に向け、サンプリングを行った。当初計画では、30年度中にシグナルの送り手(P6葉)とシグナルの受け手(P4葉)両方のSmall RNAseq解析を行う予定であった。しかし、最初に行ったP4葉のSmall RNAseq解析で興味深いmiRNAが数多く同定されたため、P4葉の解析を中心に研究を進めた。特に、葉の発達(分裂と伸長)に関与するmiR396について詳細な解析を行い、ターゲットと予想されるGRF遺伝子のP4葉での発現が高CO2で抑制されることを見いだした。また、P4葉ではmiR396の成熟型のみでなく、前駆体の存在量も増大することがわかった。miR396がシグナルとして機能しうるか検討するため、miR396の成熟型と前駆体のP6葉での存在量の解析(RT-qPCR解析)を進めている。以上のように、P6葉のSmall RNAseq解析には至らなかったものの、miR396に関しては当初計画以上に研究が進展していることから、「おおむね順調に進展している」と判断した。miR396の解析を継続して進めるとともに、P6葉のSmall RNAseq解析を行う。1)miR396の解析:高CO2でP4葉での存在量が2倍以上に増大する5種類のmiR396の解析を行う。RT-qPCR解析により、P6葉でのmiR396の成熟型と前駆体の存在量を調べる。引き続き、シグナル伝達経路に沿って、すなわち、P6葉の葉身、P6葉の葉鞘上部・下部、および、発達中のP4葉についても解析を行い、miR396が高CO2環境を伝達するシグナルとして機能するか検討する。また、前駆体がシグナルとして働く可能性が示された場合、前駆体の添加実験によりその可能性を検証する。2)P6葉のSmall RNAseq解析:高CO2処理でP6葉のmiRNA存在量がどのように変化するか、Small RNAseq解析で網羅的に調べる。P4葉のSmall RNAseq解析で、上述の18種類以外にも、高CO2で存在量が変動するmiRNAを21種類見いだしている。P4葉とP6葉のmiRNA存在量を比較することにより、シグナルとして機能しうるmiRNAを絞り込む。引き続き、シグナル候補miRNAについて、上記1)同様、シグナル伝達経路に沿って存在量を調べるとともに、添加実験を行い、シグナルとして機能するか検討する。3)高CO2処理と糖添加との比較解析:取得済みのサンプルを用い、スクロース添加でP6葉とP4葉のmiRNAの存在量がどのように変化するか調べ、高CO2処理と比較解析を行う。10種類のGRF遺伝子のうち、発現量が有意に低下した4種類の発現をRT-qPCR法で調べ、高CO2処理によってGRF

3, 6, 10の発現量が1/3から1/2に低下することを確認した。3)高CO2処理でP4葉での存在量が増大するmiR396の添加実験を行った。完全展開葉葉身先端からカスタム合成したmir396e(ssDNA)を吸引させると、高CO2処理同様、葉面積が縮小することを明らかにした。1)3)の結果は、高CO2処理がmiR396の存在量を増大させ、GRFの発現抑制ひいては葉面積の縮小を引き起こす可能性を示している。4)P4葉のSmall RNAseq解析により、上述の18種類以外にも、高CO2で存在量が変動するmiRNAを21種類見いだした。5)完全展開葉葉身の先端から糖を吸引させると、高CO2同様の応答が引き起こされる(新たに展開する葉の面積が縮小)。高CO2処理とスクロース添加で発現変動を受けるmiRNAの比較解析に向け、サンプリングを行った。当初計画では、30年度中にシグナルの送り手(P6葉)とシグナルの受け手(P4葉)両方のSmall RNAseq解析を行う予定であった。しかし、最初に行ったP4葉のSmall RNAseq解析で興味深いmiRNAが数多く同定されたため、P4葉の解析を中心に研究を進めた。特に、葉の発達(分裂と伸長)に関与するmiR396について詳細な解析を行い、ターゲットと予想されるGRF遺伝子のP4葉での発現が高CO2で抑制されることを見いだした。また、P4葉ではmiR396の成熟型のみでなく、前駆体の存在量も増大することがわかった。miR396がシグナルとして機能しうるか検討するため、miR396の成熟型と前駆体のP6葉での存在量の解析(RT-qPCR解析)を進めている。以上のように、P6葉のSmall RNAseq解析には至らなかったものの、miR396に関しては当初計画以上に研究が進展していることから、「おおむね順調に進展している」と判断した。miR396の解析を継続して進めるとともに、P6葉のSmall RNAseq解析を行う。1)miR396の解析:高CO2でP4葉での存在量が2倍以上に増大する5種類のmiR396の解析を行う。RT-qPCR解析により、P6葉でのmiR396の成熟型と前駆体の存在量を調べる。引き続き、シグナル伝達経路に沿って、すなわち、P6葉の葉身、P6葉の葉鞘上部・下部、および、発達中のP4葉についても解析を行い、miR396が高CO2環境を伝達するシグナルとして機能するか検討する。また、前駆体がシグナルとして働く可能性が示された場合、前駆体の添加実験によりその可能性を検証する。2)P6葉のSmall RNAseq解析:高CO2処理でP6葉のmiRNA存在量がどのように変化するか、Small RNAseq解析で網羅的に調べる。P4葉のSmall RNAseq解析で、上述の18種類以外にも、高CO2で存在量が変動するmiRNAを21種類見いだしている。P4葉とP6葉のmiRNA存在量を比較することにより、シグナルとして機能しうるmiRNAを絞り込む。引き続き、シグナル候補miRNAについて、上記1)同様、シグナル伝達経路に沿って存在量を調べるとともに、添加実験を行い、シグナルとして機能するか検討する。3)高CO2処理と糖添加との比較
導電性高分子によるテラヘルツ機能メタマテリアルの創製

従来の光学の常識をはるかに超えたまさに夢のような光学材料・素子を実現する技術としてメタマテリアルに関する研究が近年活発化している。そのような中、本研究では導電性高分子を用いた新規機能メタマテリアルの創製を目的とし、ポリピロールを用いたリライタブル・メタマテリアルの創製についての研究を遂行してきた。本研究助成により、本研究のスタートアップとして十分な合成システムを構築することができた。今後さらに進展させ様々なテラヘルツデバイスの提案につなげていく所存である。従来の光学の常識をはるかに超えたまさに夢のような光学材料・素子を実現する技術としてメタマテリアルに関する研究が近年活発化する中,本研究では導電性高分子を用いた新規機能メタマテリアルの創製を目的とし,(1)ポリピロールを用いたリライタブル・メタマテリアル(2)へリカルポリアセチレンを用いた超階層的カイラル・メタマテリアルの創製についての研究を遂行している。研究計画(1)については,導電率の高い良質なポリピロールの合成法として低温(マイナス40度程度)での電解重合が有効であることが知られていることかち,まずは低温恒温槽などを入手しシステム構築に努め,次年度への研究への足がかりとしている。そのー方で,Indian Institute ofScienceのMenon教授よりドーピングレベルの異なる,つまり導電率の異なる(220,200,180,140,60 S/cm)ポリピロ一ル試料の提供を受け,まずは室温でのテラヘルツ時間領域分光解析を行った。これはリライタブルなデバイスの作製に先駆けて,脱ドープ時におけるポリピロールの光学的特性に関する知見を深めることを目的に行ったものである。テラヘルツ時間領域分光測定については本学の研究協力者(卒研学生)を同行させ,大阪大学レーザーエネルギー学研究センターの萩行教授の研究室にて共同で行った。これらドーピングレベルの異なる試料において対象としているテラヘルツ周波数領域(0.12THz)においてその誘電的特性に顕著な違いが見られ,次年度以降に予定しているリライタブルなデバイスの創製にむけて十分期待の持てる知見が得られたと考えている。研究計画(2)については現在進行が滞っており,次年度へと持ち越す予定である。従来の光学の常識をはるかに超えたまさに夢のような光学材料・素子を実現する技術としてメタマテリアルに関する研究が近年活発化する中、本研究では導電性高分子を用いた新規機能メタマテリアルの創製を目的とし、ポリピロールを用いたリライタブル・メタマテリアルの創製についての研究を遂行してきた。導電率の高い良質なポリピロールの合成法として低温(マイナス40度程度)での電解重合が有効であることが知られていることから、前年度に引き続き合成システムの構築に努め、現在では導電率の異なった導電性高分子薄膜を再現性良く合成することが可能となっている。テラヘルツ時間領域分光測定については本学の研究協力者(卒研学生)を同行させ、大阪大学レーザーエネルギー学研究センターの萩行教授の研究室にて共同で行った。ドーピングレベルの異なる試料において対象としているテラヘルツ周波数領域(0.12THz)においてその誘電的特性に顕著な違いが見られたが、未だ説明のつかない部分が残っており、論文投稿するには至っていない。現状においては、原理デバイスの提案と特許出願するに止まったが、近年産学界において注目度の高いテラヘルツ周波数帯における光学素子の提案は、非常に意義深いものであると考える。本研究のスタートアップとして十分な合成システムを構築することができた。
無鉛圧電セラミックス材料の開発

廃棄処理問題に関して有害性が指摘されている酸化鉛(PbO)を含まない環境にやさしい無鉛圧電セラミックスの実用化に貢献できる圧電材料開発の一貫として、チタン酸ビスマスナトリウム(BiI/2NaI/2)TiO_3[BNT]系各種固溶体組成からなる強誘電体セラミックスの物理的および電気的諸特性を詳細に調査し、圧電諸特性に及ぼす固溶体や添加物の効果を考察することによって、圧電性と置換イオンとの関係を系統的に調べることを,目的とした。次に示すチタン酸ビスマスナトリウム(Bi1/2Na1/2)TiO_3[BNT]3成分系固溶体強誘電体(Bil/2Nal/2)TiO_3-KNbO3-1/2(Bi_2O_3・Sc_2O_3)[KTNS](Bil/2Nal/2)TiO_3-BaTiO_3-BiFeO3[BNBTF]のセラミックス試料をそれぞれ通常のセラミックス焼成技術により作製した。得られたセラミックス試料の物理的および電気的諸特性を詳細に調べた結果、次のことがわがった。KTNS系では、BNT近傍組成の結晶系は菱面晶のべロブスカイト構造単一相で、菱面晶から斜方晶への相境界(MPB)は観察されなかった。キュリー温度Tcは、BNTに対してl/2(Bi2O3・Sc2O3)の固溶量が増加すると高温側にシフトし、KNbO_3の固溶量が増加すると低温側にシフトした。抗電界Ecは、1/2(Bi_2O_3・Sc_2O_3)が増加すると上昇し、KNbO_3が増加すると低下する傾向がみられ、Tcの結果と相関がみられた。また、縦結合の電気機械結合係数k_<33>は、組成に応じて、0.420.47を示した。一方、BNBTF系では共振周波数温度係数が低減した。このように、BNT系セラミックスは、縦結合の圧電性が横結合よりも大きく、従来のPZT系に比べて誘電率が比較的小さいなどの特長を有し、環境にやさしい無鉛圧電セラミックスとしての有力な候補になると考えられる。廃棄処理問題に関して有害性が指摘されている酸化鉛(PbO)を含まない環境にやさしい無鉛圧電セラミックスの実用化に貢献できる圧電材料開発の一貫として、我々がこれまで長年取り組んできたチタン酸ビスマスナトリウム(Bi_<1/2>Na_<1/2>)TiO_3[BNT]系各種固溶体組成からなる強誘電体セラミックスの物理的および電気的諸特性を詳細に調査し、圧電諸特性に及ぼす固溶体や添加物の効果を考察することによって、圧電性と置換イオンとの関係を系統的に調べることを目的とした。次に示すチタン酸ビスマスナトリウム(Bi_<1/2>Na_<1/2>)TiO_3[BNT]系固溶体強誘導体のセラミックス試料を通常のセラミックス焼成技術により作製した。一部、微粉砕技術等の最近の高度なセラミックス作製技術も用いた。得られたセラミクス試料の物理的および電気的諸特性を詳細に調べた結果、次のことがわかった。BNT近傍組成の結晶系は菱面晶のペロブスカイト構造単一相で、菱面晶から斜方晶への相境界(MPB)は観察されなかった。

次に、キュリー温度Tcは、BNTに対して1/2(Bi_2O_3・Sc_2O_3)の固溶量が増加すると高温側にシフトし、KNbO_3の固溶量が増加すると低温側にシフトした。一方、抗電界Ecは、1/2(Bi_2O_3・Sc_2O_3)が増加すると上昇し、KNbO_3が増加すると低下する傾向がみられ、Tcの結果と相関がみられた。また、縦結合の電気機械結合係数k_<33>は、組成に応じて、0.420.47を示した。このように、BNT系セラミックスは、縦結合の圧電性が横結合よりも大きく、従来のPZT系に比べて誘電率が比較的小さいなどの特長を有し、環境にやさしい無鉛圧電セラミックスとしての有力な候補になると考えられる。廃棄処理問題に関して有害性が指摘されている酸化鉛(PbO)を含まない環境にやさしい無鉛圧電セラミックスの実用化に貢献できる圧電材料開発の一貫として、チタン酸ビスマスナトリウム(Bi_<1/2>Na_<1/2>)TiO_3[BNT]系各種固溶体組成からなる強誘電体セラミックスの物理的および電気的諸特性を詳細に調査し、圧電諸特性に及ぼす固溶体や添加物の効果を考察することによって、圧電性と置換イオンとの関係を系統的に調べることを目的とした。次に示すチタン酸ビスマスナトリウム(Bi_<1/2>Na_<1/2>)TiO_3[BNT]3成分系固溶体強誘電体のセラミックス試料をそれぞれ通常のセラミックス焼成技術により,作製した。得られたセラミックス試料の物理的および電気的諸特性を詳細に調べた結果、次のことがわかった。KTNS系では、BNT近傍組成の結晶系は菱面晶のペロブスカイト構造単一相で、菱面晶から斜方晶への相境界(MPB)は観察されなかった。キュリー温度Tcは、BNTに対して1/2(Bi_2O_3・Sc_2O_3)の固溶量が増加すると高温側にシフトし、KNbO_3の固溶量が増加すると低温側にシフトした。抗電界Ecは、1/2(Bi_2O_3・Sc_2O_3)が増加すると上昇し、KNbO_3が増加すると低下する傾向がみられ、Tcの結果と相関がみられた。また、縦結合の電気機械結合係数k33は、組成に応じて、0.420.47を示した。一方、BNBTF系では共振周波数温度係数が低減した。
脳動脈瘤モデルを用いた磁気共鳴血管撮影による脳動脈瘤抽出向上に関する研究

次に動脈瘤の形態が3D TOF MR angiography (MRA)の抽出能にどのように関与するかを検討し、能動脈瘤抽出のための最適な撮像法を探究した。3D TOF MRAでは頚部径の小さなものよりも大きなものの方が、LS typeよりもTS typeのものの方が動脈瘤モデル内の信号強度は強かった。上記の2つの実験から頚部径が大きいほど、またLS typeよりTS typeの方が脳動脈瘤モデル内の流れは速く、3D TOF MRAでの信号が強かった。従って3D TOF MRAの動脈瘤抽出能は瘤内の流速に依存していると考えられた。3D TOF MRAで抽出不良な脳動脈瘤モデルは瘤内の流れが遅いものであり、MRAで良好に抽出する解決策として造影3D MRAと長いTRを用いた非造影3D TOF MRAの可能性が示唆された。そこで臨床で応用可能な短時間で撮像できる造影3D MRAを脳動脈瘤モデルに施行し、非造影2D,3D TOF MRAと比較した。その結果、脳動脈瘤モデルの抽出は非造影2D,3D TOF MRAよりも造影3D MRAが優れていた。瘤内に流入、瘤内から流出する造影剤の動態が動脈瘤の形態により異なるため、超高速3D SPGRによる造影3D MRAの経時的な撮像で脳動脈瘤モデルが良好に抽出できた。この造影MRAは脳動脈瘤抽出に有望な方法であると思われた。目的方法脳動脈瘤モデルはテフロン製の高さ、径が10mm、頸部径が2.5mm,10mmの2つのLS typeと2つのTS typeであり、血管モデルはテフロン製の内径10mmのチューブであった。蛇腹ポンプ、定常流ポンプとシークエンサを用いて1.5秒周期の拍動流をモデルに流した。撮像装置は1.5TMR装置で頭部用コイル内に各々の瘤モデルを置いた。血管モデルの流速測定は2D Cine Phase Contrast法を用い、最高流速は110cm/sであった。MRTは2dfastspamm法にて撮像し、模擬心周期における瘤モデル内のtagの動きを観察した。3D TOF MRAはパラメータを変化させたFISP法で撮像し、瘤モデルごとに内部の信号強度を測定した。結果MRTでは瘤モデル内のtagの動きは頸部径の小さなものよりも大きなものが、また、LS typeよりもTS typeが速かった。MRAでは瘤モデル内の信号強度は頸部径の小さなものよりも大きなものの方が、また、LS typeよりもTS typeの方が信号が強かった。また、長いTRで瘤モデル内の信号は上昇した。結論頸部径が大きいほど、またLS typeよりTS typeの方が脳動脈瘤モデル内の流れは速く、3D TOF MRAでの信号が強かった。MRAの瘤描出能は瘤内の流速に依存していると考えられた。また、TRを比較的長くした方が脳動脈瘤モデルは描出されやすくなった。目的方法撮像は1.5T MR装置と頭部用コイルを用いた。直径10mmのテフロン製血管モデルに高さ,径が10mm,頸部径が2.5mmと10mmのLS typeの脳動脈瘤モデルを連結した。FSE法にて静止画像を撮像した後、1.5秒周期の拍動流(最高流速約84cm/sec、平均流量29ml/sec)をモデルに流し、2D TOF MRA、3D TOF MRA、造影3D MRAにて撮像した。TOF MRAの撮像時間は2分32秒7分33秒であり、造影3D MRAの撮像時間は5秒9秒であった。得られた画像をMIP処理し、モデルの形態をFSE画像と比較した。結果脳動脈瘤モデルの描出は造影3D MRAが非造影2D,3D MRAよりも優れていた。造影3D MRAでは造影剤注入から撮像までの時間が動脈瘤モデル描出能に影響した。造影3D MRAを経時的に連続撮像したものは親動脈モデルに遅れて脳動脈瘤モデルが描出され、親動脈モデルの信号が低下した後も動脈瘤モデルの信号強度は残存していた。特に頸部径の小さいもので目だった。

結論脳動脈瘤モデルの描出は非造影2D,3D TOF MRAよりも造影3D MRAが優れていた。動脈瘤の形態により瘤内に流入、瘤内から流出する造影剤の動態が異なるため超高速3D SPGRによる造影3D MRAの経時的な撮像で脳動脈瘤モデルが良好に描出できた。
C型慢性肝炎での肝線維化進行と宿主の機能的遺伝子多型との関連

C型慢性肝炎での肝線維化進行には、ウイルス側の因子と共に、宿主側の要因が挙げられその速度は患者間で大きく異なっている。宿主因子を明らかにするため、マトリックス分解酵素MMP-1 -1607 1G/2G、MMP-2 -1306 C/T、MMP-3 -1171 5A/6A、MMP-7 -181 A/G、MMP-9 -1562 T/C、線維化促進性サイトカインTGF-β1 +819 T/C、炎症性サイトカインIL-1β-511 C/T、IL-1RN VNTRの遺伝子多型を解析し、横断的および縦断的に検討した。まず、C型慢性肝炎群とC型肝硬変群で遺伝子多型の頻度を比べると、MMP-1では2G/2Gホモが、MMP-9ではC/Cホモが肝硬変で有意に高頻度であった。ただ、他の遺伝子多型では両群で明らかな差は認められなかった。次に5年間観察し得たC型慢性肝炎患者を肝線維化指標により肝線維化速度緩徐群と迅速群に分けて遺伝子多型頻度を比較検討すると、MMP-3 5AキャリアとTGF-β1 +819 Tキャリアの割合が迅速群で高いことが示された。今回の研究で、遺伝子多型の解析が患者管理のうえで有用となる可能性が確認された。この点を明らかにするため、本年度は、マトリックス分解酵素matrix metalloproteinase(MMP)のうち、MMP-1(間質コラゲナーゼ)1G/2G、MMP-3(ストロメリシン-1)5A/6A、MMP-9(ゼラチナーゼB)T/C、炎症性サイトカインであるインターロイキン(IL)-1BC/Tの遺伝子多型を解析し検討した。その結果、長期間(5年間)観察し得たC型慢性肝炎患者を肝線維化指標により肝線維化速度緩徐群と迅速群に分け、その遺伝子多型頻度を比較検討すると、MMP-1、MMP-9では両群で差が認められなかったが、MMP-3とIL-1βでは転写活性が高いとされているMMP-3 5Aキャリア、IL-1B Cキャリアの割合が肝線維化速度迅速群で有意に高いことが示され、これら遺伝子多型の解析が患者管理のうえで有用となる可能性が示唆された。宿主因子を明らかにするため、本年度はマトリックス分解酵素MMP-1(間質コラゲナーゼ)1G/2G、MMP-3(ストロメリシン-1)5A/6A、MMP-9(ゼラチナーゼB)T/Cとともに、線維化促進性サイトカインTGF-B1 +819 T/C、炎症性サイトカインIL-1B C/T、IL-1RN VNTRの遺伝子多型を解析し検討した。まず、C型慢性肝炎群とC型肝硬変群で遺伝子多型の頻度を比べた。その結果MMP-1とMMP-9では転写活性の高い遺伝子アレルを有するものが肝硬変で有意に多かったが、他の遺伝子多型では明らかな差は認められなかった。次に長期間(5年間)観察し得たC型慢性肝炎患者を肝線維化指標FibroIndexにより肝線維化速度緩徐群と迅速群に分けその遺伝子多型頻度を比較検討した。MMP-1、MMP-9、IL-1B、IL-1RNでは関連が認められなかったが、MMP-3とTGF-B1では、転写活性が高いとされているMMP-3 5Aキャリア、TGF-B1 +819 Tキャリアの割合が肝線維化速度迅速群で高いことが示され、これら遺伝子多型の解析が患者管理のうえで有用となる可能性が示唆された。

なおMMP-2(ゼラチナーゼA)-1306 C/T多型をcross-SeCtionallyおよびlongitu dinallyに検討したが、肝線維化進行との関連は認められなかった。現在TIMP-1、TIMP-2の遺伝子多型解析に挑戦しているが、解析が難しく現時点では出来ていない。成果