hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フラロデンドロンを光触媒として用いる有機合成反応

アミドとカルボキシル基をもつフラロデンドロンは、水中で一重項酸素発生能力を持ち、光線力学療法剤として利用可能なことがわかった。すなわち、HLE(ヒト肝癌由来の肝細胞)を用いたin nitro実験では、レーザー光照射下で癌細胞抑制効果がみられた。次に、デンドリマー末端に糖鎖をもち、アントラセンとフラーレンを連結したフラロデンドロンを合成した。このフラロフラロデンドロンと炭酸カルシウムとの有機無機複合化をはかり、新規な不均一触媒の開発に成功した。このものの存在下、アントラセンデンドリマーに光照射を行うとアントラセン環の光二量化反応がおこり、光触媒作用をもつことが明らかとなった。また、この糖鎖を有するフラロデンドロンは球状分子の周囲が光学活性な結合でできており、不斉合成触媒としての応用が期待される。一方、このフラロデンドロン-炭酸カルシウム複合体は、一重項酸素による光酸化反応のよい光触媒となり、フランカルボン酸からヒドロキシ不飽和ラクトンを、各種オレフィンからヒドロペルオキシドを、スルフィドからフルホキシドを収率よく与えることが判明した。
ノンヘム遷移金属酵素活性中心の精密モデル化

金属-酸素錯体を用いたフェノールの重合反応は工業化学的立場からも非常に注目を集めている。今回、ピリジルエチルアミン系の2座および3座配位子を用いて調製したペルオキソ錯体とビス-μ-オキソ錯体によるフェノールの二量化反応機構の解明をした。それぞれの酸素錯体に各種フェノールを加えると反応は速やかに進行し、対応するフェノールの二量体を与えることが分かった。速度論的解析から反応は酸素錯体濃度および加えたフェノールの濃度に対しそれぞれ一次で進行することがわかった。各種フェノールとの反応の二次反応速度定数をフェノールの酸化電位に対しプロットすると、いずれの酸素錯体の場合にも直線関係が得られ、その傾きから反応は電子移動に続くプロトン移動で進行していることが判明した。さらに、本研究ではガラクトース酸化酵素モデル錯体の物性や酸化還元挙動に及ぼす金属配位場の効果について検討した。ピリジン配位子の電子ドナー性が増大するにつれて金属中心のルイス酸性が減少し、フェノラート部位の酸化電位が負側にシフトすることがわかった。一方、一電子酸化体であるフェノキシルラジカル錯体においては金属配位場の変化による物性や反応性の違いはほとんど認められなかった。これは、ラジカル部位と金属イオンとの間の相互作用はフェノラート錯体に比べてかなり弱いことが原因であることが共鳴ラマンスペクトルの測定により明らかとなった。さらに、細胞内における亜鉛イオンの挙動を新規に設計・合成したプローブにより追跡した。合成したプローブはベンゾオキサゾールを骨格として有しており、亜鉛イオン濃度の変化により蛍光の極大波長がシフトするという新しいタイプのものである。蛍光のシフトは亜鉛イオンに特異的であり、その感度はナノMレベルであることがわかった。本プローブは実際に細胞内の亜鉛の濃度変化を感知することが出来、海馬やすい臓のβセル内の亜鉛イオン検出にも成功した。
日本における資産分布の決定要因に関する理論的・実証的分析

本研究は,資産分布の決定要因として,景気循環およびインフレーションの影響について考え,理論モデルに基づきながら,日本のデータを用いて実証的に分析した.まず,景気循環の影響について,三本の論文を作成した.第一に,産業間の生産性のSpilloverが,産業ごとの生産性の分布をもたらす経路として,R&Dの効果と産業連関による中間投入の効果を識別した「R&Dおよび中間投入を通じた産業間のSpillover:道路資本ストックの生産性効果」である.第二に,家計,企業,政府の保有する金融資産の分布が,景気循環および金融政策によって受ける変動に関する「景気循環と資金循環」である.第三に,子供の人的資本への教育支出が,親の教育・所得・資産にどのように依存しているかについて,「家計における教育支出の決定要因分析-『消費生活に関するパネル調査』個票データを用いて」を書いた.次に,インフレーションの影響については,インフレーションが経済厚生を高めるというトービン効果に関する“A Note on the Robustness of the Tobin Effect in Incomplete Market",および消費者物価指数・鉱工業生産指数の予測および公表,あるいは物価の安定を第一義的目標に掲げた日本銀行の政策決定会合の公式会見それぞれが,資産価格の変動にもたらす効果について実証した「金融市場との対話-新法下の日本銀行のケース」を作成した.本研究は,資産分布の決定要因として,景気循環およびインフレーションの影響について考え,理論モデルに基づきながら,日本のデータを用いて実証的に分析した.まず,景気循環の影響について,三本の論文を作成した.第一に,産業間の生産性のSpilloverが,産業ごとの生産性の分布をもたらす経路として,R&Dの効果と産業連関による中間投入の効果を識別した「R&Dおよび中間投入を通じた産業間のSpillover:道路資本ストックの生産性効果」である.第二に,家計,企業,政府の保有する金融資産の分布が,景気循環および金融政策によって受ける変動に関する「景気循環と資金循環」である.第三に,子供の人的資本への教育支出が,親の教育・所得・資産にどのように依存しているかについて,「家計における教育支出の決定要因分析-『消費生活に関するパネル調査』個票データを用いて」を書いた.次に,インフレーションの影響については,インフレーションが経済厚生を高めるというトービン効果に関する“A Note on the Robustness of the Tobin Effect in Incomplete Market",および消費者物価指数・鉱工業生産指数の予測および公表,あるいは物価の安定を第一義的目標に掲げた日本銀行の政策決定会合の公式会見それぞれが,資産価格の変動にもたらす効果について実証した「金融市場との対話-新法下の日本銀行のケース」を作成した.本研究は,資産分布の決定要因として,i)予算制約とは独立に働く所得制約,ii)不確実性の下での過少な投資,この二つの仮説について,理論モデルに基づきながら,日本のデータを用いて実証的に分析する.1.人的資本への教育投資について(1)親の経済状態が子の教育投資に所得制約として働いているのか,あるいは子の人的資本としての不確実性が過少な教育投資をもたらしているのかについて,Dynamic Discrete Decision Modelに基づいて,財団法人家計経済研究所の「消費生活に関するパネル調査」の個票データを用いて実証的に分析する.(2)当該データの利用申請を行い,2007年3月に許可が下りたところである.2.家計の金融資産選択について(1)家計の貯蓄行動に関する借入制約および予備的貯蓄動機の動学的理論モデルにSimulated Method of Momentsの手法を適用し,「消費生活に関するパネル調査」の個票データ,あるいは日本経済新聞社の「金融行動調査」(RADAR)のデータを用いて,実証分析を行う.(2)後者のデータの購入を昨年度行い,現在,分析に取り掛かっている.3.企業の設備投資について(1)日本政策投資銀行の「企業財務データバンク」の上場企業の財務データを用いて,企業の設備投資に関する借入制約および不可逆性の二つの仮説につき,Simulated Method of Momentsの手法を適用する.(2)当該データ・セットは,既に整えられた.本研究はi)借り入れ制約,ii)将来不安,iii)不確実性に着目し,資産分布の決定要因となる家計の教育支出,家計の世代間の格差継承,金融市場の情報集約機能について実証的に分析してきた.1.家計の教育支出(出島・竹田・上田)「消費生活に関するパネル調査」個票データを用いて,日本の家計における子供への教育支出に対して,親の教育,所得や資産が影響しているかどうかについて分析した.借り入れ制約のない人的資本モデルとは整合的ではないが,借り入れ制約のある人的資本モデルや消費としての教育モデルとは矛盾しない.2.世代間の所得格差の継承・将来不安と所得格差認識(上田)同調査データを用いて,親の所得や教育水準が子ども時代の教育選択に与える影響と,教育選が学卒後の所得に影響しているかを検証した.教育を媒介とした経路は,主として短大・大学進学に親の所得が影響し,さらにこれら高学歴の揚合に子が高所得を得るという経路に集約される.また早稲田大学「21世紀日本人の社会・政治意識に関する調査」平成17年個票データを用いて,家計の将来不安と格差拡大に関連する認識について分析を行った.所得が低いあるいは生活レベルが低いと感じている人の方がより所得格差が拡大していると考え,格差が生じる理由としてより出身家庭や周囲の環境が関係すると考える傾向にある,3.金融市場の情報集約機能(竹田・矢嶋康次(ニッセイ基礎研究所))

流動性の民にある日本経済において,金融市場における「情報集約機能」が著しく低下し,ケインズの「美人投票」のメカニズムにしたがって,投資家の期待形成が同質化したという仮説について実証分析を行った.量的金融緩和が強化される中で,美人投票のメカニズムにより,金融資産価格が公共的なシグナルに過度に依存する状態の下で,市場の期待は同質化した.「情報効率性」から見て,金融市場の情報集約機能は著しく低下してきた.
歯根吸収に関する因子の解明(特にPGEk吸収組織内の局在について)

本研究の目的は,生理的な乳歯の歯根吸収時に生じる歯根吸収組織中のプロスタグランディンE_2(以下PGE_2)の局在について検討することであり,その実験として有効なウサギの歯根吸収組織に適した免疫組織学的手法を確立することであった.まず,適切な免疫染色法を検討するために,本研究のRIAを用いた予備実験によってウサギの上顎乳切歯歯根吸収組織において最も多くPGE_2が生合成される時期であることが認められている9日齢の仔ウサギを用いて実験を行った.上顎乳切歯を摘出し,4°C,24時間緩衝ホルマリンで固定し,4°CでEDTAにより3日間脱灰した後,液体窒素において0.T.C compoundに包埋した.クリオスタットを用いて6μmの切片とした.免疫組織学的染色はニチレイ社製のHistfine(R)を用いてABC法にて行った.モノクロナール抗体にはCayman Chemical社の抗PGE_2を用い,PBSで1/10希釈,1/100希釈,1/500希釈および1/1000希釈して,染色の至適濃度について検討した.その結果,抗PGE_2の4種類のどの濃度においても歯根吸収組織は良好な染色性を示した.ただ,多くの標本は非特異的な染まり方をしておりPGE_2の局在の同定までには至らなかった.これにはこの抗体がウサギを用いて作られており,そのため一次抗体が非特異的な反応をしているのではないかと考えられる.一次抗体をかけるまでにウサギの正常血清の抗体をかけてブロックしておくなどの工夫が必要であると考えられ,現在も抗体,固定,脱灰,染色性等の吟味を継続して行っている.本研究は歯根吸収組織におけるプロスタグランジンEの局在部位を明らかにする目的で行っている平成9年度および10年度2年間の研究の1年目である.経歴の正確な母ウサギ(ニユ-ジーランド白色種)を徳島大学歯学部動物舎において交配した.母ウサギの出産は容易ではなく,特に夏期においては交配は可能であったが,ほとんど出産は成功しなかった.ウサギは一年中出産可能との記載があるが時期的なものがあることがわかった.また,育仔においても個体差があり,仔を途中で踏み殺す親もあり,また,出産後授乳しない母ウサギもあった.このような育仔の下手な母ウサギは出産を繰り返しても育仔はうまくならなかった.このような場合は仔ウサギを隔離し,育仔の上手い母ウサギに養仔にだすことを行った.生後4日目に産仔数の確認を行ったが,母ウサギにより産仔数は410羽の範囲で個体差が認められた.したがって,本実験では2羽以上の母ウサギを同時に交配・出産させ,産仔の多いものは養仔に出したりして各母ウサギが授乳する仔ウサギの匹数をほぼ同数となるように工夫した(78羽).これにより,各個体における体重差を少なくし,本研究で最も重要である発育のバラツキを最小限にすることが可能となった.このようにして現在までに,生後9,11,13日目に工一テル屠殺した上顎乳切歯部を含む顎骨を各56体づつ得,ホルマリン固定を行いパラフィン包埋を行った.平成10年度にこれらの試料をAvidin Biotin Complex(ABC法)により,蛍光顕微鏡観察を行う.また生後5,17,23日目の試料も得る予定である.本研究の目的は,生理的な乳歯の歯根吸収時に生じる歯根吸収組織中のプロスタグランディンE_2(以下PGE_2)の局在について検討することであり,その実験として有効なウサギの歯根吸収組織に適した免疫組織学的手法を確立することであった.まず,適切な免疫染色法を検討するために,本研究のRIAを用いた予備実験によってウサギの上顎乳切歯歯根吸収組織において最も多くPGE_2が生合成される時期であることが認められている9日齢の仔ウサギを用いて実験を行った.上顎乳切歯を摘出し,4°C,24時間緩衝ホルマリンで固定し,4°CでEDTAにより3日間脱灰した後,液体窒素において0.T.C compoundに包埋した.クリオスタットを用いて6μmの切片とした.免疫組織学的染色はニチレイ社製のHistfine(R)を用いてABC法にて行った.モノクロナール抗体にはCayman Chemical社の抗PGE_2を用い,PBSで1/10希釈,1/100希釈,1/500希釈および1/1000希釈して,染色の至適濃度について検討した.その結果,抗PGE_2の4種類のどの濃度においても歯根吸収組織は良好な染色性を示した.ただ,多くの標本は非特異的な染まり方をしておりPGE_2の局在の同定までには至らなかった.これにはこの抗体がウサギを用いて作られており,そのため一次抗体が非特異的な反応をしているのではないかと考えられる.一次抗体をかけるまでにウサギの正常血清の抗体をかけてブロックしておくなどの工夫が必要であると考えられ,現在も抗体,固定,脱灰,染色性等の吟味を継続して行っている.
新しい骨形成タンパク質(BMP-3b)の生体における生理作用及び作用機序の解明

1.昨年申請者らが同定した新規骨形成タンパク質BMP-3bの機能解明を目的に、リコンビナントタクパク質を調製を試みた。(1)一過性発現によるリコンビナントタンパク質の調製COS1細胞にて発現を試み、ウエスタンブロッティングにて発現を確認した。(2)安定発現系によるリコンビナントタンパク質の調製(1)の結果、発現タンパク量が非常に少ないことが判明したので、5種類の宿主細胞の発現を試み、ウエスタンブロッティングにてリコンビナントタンパク質の発現量を検討した。その結果、CHO細胞によるリコンビナントタンパク質が最も多く発現していた(40マイクログラム/リットル)。(3)リコンビナントタンパク質の精製リコンビナントタンパク質をCHO細胞の5リットルの培養上清よりヘパリンセファロース、ConAセファロース、および逆相HPLCにて精製を行った。成熟タンパク質として30マイクログラムおよびプロセッシングの不完全なプロ体タンパク質として170マイクログラムを得た。(4)リコンビナントタンパク質の構造決定リコンビナントタンパク質のN末端アミノ酸配列およびトリプシンにより切断した生成したペプチド断片のアミノ酸配列を解析した。その結果、リコンビナントタンパク質の一次構造はcDNA構造から予想されるアミノ酸配列と完全に一致し、成熟体部分はダイマーを形成していることを確認した。また、C末端の糖鎖の有無によるヘテロダイマーの存在を明らかにした。2.リコンビナント標品を用いてBMP-3bのin vivoでの骨形成活性を検討した。(1)1で調製したリコンビナントタンパク質を用いてラット皮下における異所性骨形成活性を検討した。その結果、9マイクログラムもの大量のリコンビナントタンパク質でも骨形成活性は示さなかった。(2)新生仔ラット頭蓋骨骨膜下における同所性骨形成活性についても検討を行ったが、活性は示さなかった。上記の結果を踏まえて、今後はin vivoの系および骨以外の組織(脳、血管など)における生理作用さらには本因子とBMP-2,4,7などとのヘテロダイマーでの生理活性の検討によりBMP-3bの生理作用解明に取り組んでいきたい。
葉緑体型ATP合成酵素の回転を酸化・還元制御する分子機構の解明

本申請研究の目的は、植物葉緑体型ATP合成酵素に特徴的な酸化・還元調節の分子機構を明らかにすることである。特に、酸化時の阻害機構に注目すると、酵素の回転軸に存在するレドックススイッチが酸化されてジスルフィド結合を形成し、それによって誘導される構造変化が引き金となって物理的な回転阻害が起こることが考えられる。そこで、この回転阻害が起こる角度を正確に求めるためには、回転を可視化した時の角度分解能を向上する必要があった。初年度は、シアノバクテリア由来のATP合成酵素に新たに導入したレドックス制御領域の大きさ及び回転プローブを固定するシステインの位置の探索によって、これらの条件をクリアした。得られた酵素変異体を用いて、倒立型位相差顕微鏡で回転を観察した結果、酸化条件ではADP阻害と考えられる長い回転停止の停止時間が、還元条件の時よりもより長くなっていたことが分かった。そして酸化条件において停止角度の特定に成功し、長い回転停止がATP結合の位置から約80゚ずれた位置であることを明らかにした。この80゚ずれた位置は、ATP合成酵素の回転時に特徴的に見られるいわゆるADP阻害の位置の近傍である。ADP阻害との関係をより詳しく調べるため、ADP阻害を解除する試薬LDAOを用いて、酸化・還元制御時のATP加水分解活性を測定した。その結果、ADP阻害が解除されるにつれ酸化・還元制御の効率が低下することが分かった。この結果を回転観察の結果と会わせ、「植物葉緑体型ATP合成酵素の持つ酸化・還元制御は、ATP合成酵素が本来持つADP阻害の度合いを調整し活性を制御する」ということが分かった。併せて、顕微鏡下の回転観察条件において、溶液交換によってレドックス状態を変化させ、それに対して回転の変化の応答が見られることも必須である。本年度は、シアノバクテリア由来のATP合成酵素に新たに導入したレドックス制御領域の大きさ及び回転プローブを固定するシステインの位置の探索によって、これらの条件をクリアした。次に、得られた酵素変異体を用いて、倒立型位相差顕微鏡で回転を観察した。その結果、酸化条件ではADP阻害と考えられる長い回転停止の停止時間が、還元条件の時よりもより長くなっていたことが分かった。そして酸化条件において停止角度の特定に成功し、長い回転停止がATP結合の位置から約80°ずれた位置であることを明らかにした。現在までのところ、角度の決定にまで至った測定例は1例のみであるので、この結果の信頼性を上げるためには、繰り返し実験を行い、同様の観察例を増やす必要がある。また、上記の基準点から80°ずれた位置は、ATP合成酵素の回転時に特徴的に見られるいわゆるADP阻害の位置の近傍である。今後、長くなった回転停止とADP阻害との関係を明確にし、葉緑体型ATP合成酵素における酸化・還元制御の分子メカニズムを明らかにしたい。昨年度は、シアノバクテリア由来のATP合成酵素に新たに導入したレドックス制御領域の大きさ及び回転プローブを固定するシステインの位置の探索によって、これらの条件をクリアした。今年度は、角度の決定した測定例を5例ほど増やしたが、統計処理を用い信憑性を高める為に更なるデーター収集を行う予定である。長くなった回転停止とADP阻害との関係を明確にするため、ATP阻害に影響与える変異体を作成した。ADP阻害に陥りにくい変異体やADP阻害を解除する試薬LDAOを用いた回転観察実験を行い、ADP阻害と酸化・還元制御の関係を明らかにしたい。そして最終的には葉緑体型ATP合成酵素における酸化・還元制御の分子メカニズムを明らかにしたい。

そこで、この回転阻害が起こる角度を正確に求めるためには、回転を可視化した時の角度分解能を向上する必要があった。初年度は、シアノバクテリア由来のATP合成酵素に新たに導入したレドックス制御領域の大きさ及び回転プローブを固定するシステインの位置の探索によって、これらの条件をクリアした。得られた酵素変異体を用いて、倒立型位相差顕微鏡で回転を観察した結果、酸化条件ではADP阻害と考えられる長い回転停止の停止時間が、還元条件の時よりもより長くなっていたことが分かった。そして酸化条件において停止角度の特定に成功し、長い回転停止がATP結合の位置から約80゚ずれた位置であることを明らかにした。この80゚ずれた位置は、ATP合成酵素の回転時に特徴的に見られるいわゆるADP阻害の位置の近傍である。ADP阻害との関係をより詳しく調べるため、ADP阻害を解除する試薬LDAOを用いて、酸化・還元制御時のATP加水分解活性を測定した。その結果、ADP阻害が解除されるにつれ酸化・還元制御の効率が低下することが分かった。この結果を回転観察の結果と会わせ、「植物葉緑体型ATP合成酵素の持つ酸化・還元制御は、ATP合成酵素が本来持つADP阻害の度合いを調整し活性を制御する」ということが分かった。
DNA,ウイルスの変形能を利用した膜分離精製法の確立

ウイルス並びにDNAのバイオ医薬品からの膜分離・精製を基礎的に検討した。本研究により以下のことが研究成果として得ることができた。1.DNAと蛋白質複合体形成に伴う変形能と膜透過能の変化を検討した。DNA単独では、多孔膜をす抜けて拡散するが、DNAが複合体を形成するとほぼ100%多孔膜により排除されることが明らかとなった。また、膜内部でのDNA複合体の観察を干渉顕微鏡を適用して明らかにした。さらに、2.モデルバイオ製剤中に残留するDNAの膜透過流量に与える影響を検討した。特に、ガンマグロブリンをモデルバイオ製剤として用い、様々な濃度のガンマグロブリン水溶液の膜透過特性を検討した所、不純物として混入しているDNAが透過流量の低下に著しい影響を与えていることを初めて明らかとした。3.蛋白質膜透過流量を向上させるために、塩をバイオドラッグ中に添加して、DNAと蛋白質との静電相互作用を遮蔽することにより、DNAを蛋白質から解離させて蛋白質透過流量の向上を可能とすることができた。4.蛋白質とDNAの凝集体をDNA切断酵素を用いてバイオドラッグを処理することにより蛋白質透過流量の向上を可能とすることができた。以上のバイオドラッグ中の蛋白質のコンフォメーションを動的光散乱測定により定量した。さらに、5.各種DNAとヒストンとの複合体(クロマチン)の排除率をウイルス除去用中空糸膜透過評価装置を用いて測定して、共存タンパク質のDNA排除性に与える影響を明らかとした。また、膜内部でのDNA/ヒストン複合体の観察を干渉顕微鏡を適用して定量した。6.DNAの変形能を利用して、各分子量のDNA分子の拡散性の違いを利用してDNA分子の分離・精製を行なうための膜分離装置を試作し、性能を評価した所、DNAの分子量の差により膜透過性が顕著に異なることを明らかとした。ウイルス除去膜並びに多孔性平膜を用い、DNA並びにウイルスを含む水溶液のろ過特性を明らかにした。さらに、DNA分子のコンホメーションと変形能、膜透過性との関連性を明らかにし、膜内部でのDNAの変形状態を明らかにした。具体的には、1.平均孔径15,35,75nmのウイルス除去膜を用い、各種のDNA(Calf thymus DNA(一本鎖DNA並びに二本鎖DNA),Salmon DNA(一本鎖DNA並びに二本鎖DNA)並びに再構築クロマチンの排除率をウイルス除去用中空糸膜透過評価装置を用いて測定し、孔径とDNA排除性との関連を検討した。特にDNA分子のコンホメーション(二本鎖と一本鎖DNA並びにクロマチン状等)と変形能、膜透過性との関連性を明らかにした。さらに、膜内部でのDNAの変形状態の観察を干渉顕微鏡を適用して明らかにした。2.平均孔径15,35nmのウイルス除去膜並びに多孔性平膜を用い、蛋白質(免疫グロブリン)共存下並びに塩存在下におけるDNAの排除率を測定し、孔径とDNA排除性との関連を検討した。塩濃度が0.4M以上では、膜の孔径に関わらずDNAはほぼ100%排除することができた。蛋白質共存下でも、膜の孔径に関わらずDNAはほぼ100%排除することが観察されたため、塩存在下並びに、蛋白質存在下では、DNAは球状のコンホメーションを取ることが示唆された。3.平均孔径15,35,75nmのウイルス除去膜を用い、各種のウイルス(日本脳炎ウイルス、エイズウイルス、ポリオウイルス等)の排除率をウイルス除去用中空糸膜透過評価装置を用いて測定し、孔径とウイルス除去性との関係を検討した。

DNAとタンパク質との複合体をモデル的に作製し、(1)複合体形成に伴う変形能と膜透過能の変化を測定し、両者の相関関係を検討した。(2)DNAの変形能を支配する共存タンパク質の影響を明らかにした。(3)膜内部でのDNA複合体の観察を干渉顕微鏡を適用して検討した。具体的には、1. DNA(Calf thymus)とヒストンとの複合体(クロマチン)を調製した。クロマチン状態であることを、原子間力顕微鏡により確認した(直径30mm繊維状であることを確認)。平均孔径15,35,75nmのウイルス除去膜を用いて、DNA/ヒストン複合体の排除率をウイルス除去用中空糸膜透過評価装置を用いて無菌室内にて測定した。この時の共存タンパク質のDNA排除性に与える影響を検討した所、クロマチン状DNAの排除性は、DNA単独系に比べて顕著に向上していた。また、膜内部でのDNA/ヒストン複合体の観察を干渉顕微鏡を適用した所、繊維状に拡散していることが、明らかとなった。2.平均孔径15,35,75nmのウイルス除去膜を用いて、グロプリン共存下におけるDNA(Calf thymus)の排除率を計測し、DNAの排除性に与える共存タンパク質の影響を明らかにした。膜内部でのDNA/グロプリン複合体の観察を干渉顕微鏡を適用して、DNAの形態を観察した。3.純水中および緩衝液中のDNA分子は、再生セルロース製ウイルス除去膜には、吸着されなかった。さらに、緩衝液を含浸させた多孔膜中のDNAの拡散系数は、バルク中の拡散系数の約1.4倍であった。従ってDNA分子は、多孔膜中を糸状に形状を変化させることにより、その分子径よりも小さな孔中を拡散して透過することが明らかとなった。DNAとタンパク質との混合体並びに複合体をモデル的に作製し、(1)複合体形成に伴う変形能と膜透過能の変化を測定し、両者の相関関係を明らかにした。また、(2)DNAの変形能を支配する共存タンパク質の影響について検討した。具体的には、1.各種DNAとヒストンとの複合体(クロマチン)を調整した。平均孔径10,15,35,75nmのウイルス除去膜を用い、各種のDNA/ヒストン複合体の排除率をウイルス除去用中空糸膜透過評価装置を用いて測定した。その結果、タンパク質(γ-グロブリン)共存下では、ほぼ完全にDNA/ヒストン複合体を排除することが可能であった。2.γ-グロブリンをモデルバイオ製剤として用い、様々な濃度のγ-グロブリン溶液の膜透過特性を検討した。この時不純物として混入しているDNA量を蛍光法により定量し、残留DNA量と透過流量との相関性を検討した。その結果、DNA量の減少とともに透過流量は上昇することを見いだした。様々な孔径を有する多孔膜を用いてγ-グロブリンを透過させたところ、DNAを排除する孔径の膜は、γ-グロブリンも排除してしまうことが明らかとなった。これは、DNAとγ-グロブリンが大きな会合体(凝集体)を作るためであることを動的光散乱法により明らかとした。3.DNAの変形能を利用し、DNA分子の膜透過を任意に制御する装置の確立を試みた。4.バイオ製剤中の微量混在するDNA並びにウイルスを効率良く除去するためには、バイオ製剤中のDNAを(透過液中のバイオ製剤濃度が高い状態で)いかに除去するかが問題であることが明らかとなった。
沿岸性カイアシ類における卵休眠の地理的変異：個体群比較によるアプローチ

沿岸性カイアシ類Acartia hudsonicaの休眠卵生産の季節性と休眠卵の生理的特性を明らかにすることを目的として、岩手県大槌湾において野外調査と産卵実験を実施した。また、当初計画には含まれていないが、近縁種であるAcartia omoriiも同所的に出現したため、本研究の対象とした。野外調査は大槌湾の湾奥において毎月実施し、水温等環境要因の測定とプランクトンネット採集を行った。産卵実験は、野外調査時の水温と光周期を模した疑似現場環境下で24時間実施し、急発卵と休眠卵の産卵数を計数した。A. hudsonicaとA. omoriiの急発卵と休眠卵は外部形態で識別することが困難なため、孵化時間を指標として識別した。A. hudsonicaの休眠卵生産には明瞭な季節性があり、4月7月と12月に確認された。特に57月には実験に供した個体の5587%が休眠卵を産み、雌1個体の産卵数に対する休眠卵の割合は3166%と高かった。一方、A. omoriiの休眠卵生産は7月にのみ認められ、休眠卵を産んだ雌の割合も5.6%と低かった。A. hudsonicaの休眠卵は現場水温下(916°C)で高い割合(>80%)で孵化し、さらに低水温(5°C)および高水温下(20°C)でも同様に孵化したことから、休眠覚醒に特別な温度刺激を必要としないことが分かった。また、卵の休眠期間は高水温ほど短い傾向が見られた。A. hudsonicaの休眠卵の孵化は同一ブルード内でも非同調的であり、孵化が数十日間に渡って散発的に生じる孵化遅延卵(Delayed hatching eggs)と呼ばれるタイプであることが分かった。こうした休眠卵の生理的特性から判断すると、大槌湾のA. hudsonicaは、不規則で予知困難な環境変化への対応として休眠卵を生産していると考えられた。本研究は、カイアシ類における卵休眠の地理的変異を、異なる地域に生息する個体群の比較から明らかにすることを目的としている。そのため、主たるフィールドである大槌湾におけるAcartia hudsonicaの休眠卵生産の季節性を明らかにできたことは、今後比較研究を進める上で重要な基盤となる。また、当初計画になかったAcartia omoriiについても、A. hudsonicaと同様に大槌湾における結果が得られたため、卵休眠の地理的変異を複数種で検討することが可能になった。さらに、大槌湾のA. hudsonicaが、孵化遅延卵と呼ばれる休眠卵を産むことが明らかになったが、同様の休眠卵はこれまでにわずか数例しか報告されていないため、その孵化特性を詳細に明らかにしたことは、カイアシ類休眠卵の生理的特性を広く理解する上で重要な知見となり得ると考えられる。大槌湾におけるAcartia hudsonicaとAcartia omoriiの休眠卵生産の季節性は明らかになったが、これを誘導する環境要因を野外調査のみから明確にすることは困難である。そこで、次年度は、両種の休眠卵生産の誘導要因を、環境条件をコントロールした飼育実験から明らかにする。飼育実験では、休眠卵生産を誘導すると推定される環境条件(水温、光周期、餌など)を数段階設定し、これらに対する応答性を比較する。また、大槌湾では、A. hudsonicaとA. omoriiに加えて、Acartia steueriが休眠卵を生産することが予備的実験によって明らかになっているため、本種の休眠卵生産の季節性を把握するための野外調査と産卵実験についても毎月実施する。さらに、大槌湾の個体群との比較のために、A. omoriiが優占する東京湾において予備的な試料採集を実施する予定である。

また、卵の休眠期間は高水温ほど短い傾向が見られた。A. hudsonicaの休眠卵の孵化は同一ブルード内でも非同調的であり、孵化が数十日間に渡って散発的に生じる孵化遅延卵(Delayed hatching eggs)と呼ばれるタイプであることが分かった。こうした休眠卵の生理的特性から判断すると、大槌湾のA. hudsonicaは、不規則で予知困難な環境変化への対応として休眠卵を生産していると考えられた。本研究は、カイアシ類における卵休眠の地理的変異を、異なる地域に生息する個体群の比較から明らかにすることを目的としている。そのため、主たるフィールドである大槌湾におけるAcartia hudsonicaの休眠卵生産の季節性を明らかにできたことは、今後比較研究を進める上で重要な基盤となる。また、当初計画になかったAcartia omoriiについても、A. hudsonicaと同様に大槌湾における結果が得られたため、卵休眠の地理的変異を複数種で検討することが可能になった。さらに、大槌湾のA. hudsonicaが、孵化遅延卵と呼ばれる休眠卵を産むことが明らかになったが、同様の休眠卵はこれまでにわずか数例しか報告されていないため、その孵化特性を詳細に明らかにしたことは、カイアシ類休眠卵の生理的特性を広く理解する上で重要な知見となり得ると考えられる。大槌湾におけるAcartia hudsonicaとAcartia omoriiの休眠卵生産の季節性は明らかになったが、これを誘導する環境要因を野外調査のみから明確にすることは困難である。そこで、次年度は、両種の休眠卵生産の誘導要因を、環境条件をコントロールした飼育実験から明らかにする。飼育実験では、休眠卵生産を誘導すると推定される環境条件(水温、光周期、餌など)を数段階設定し、これらに対する応答性を比較する。また、大槌湾では、A. hudsonicaとA. omoriiに加えて、Acartia steueriが休眠卵を生産することが予備的実験によって明らかになっているため、本種の休眠卵生産の季節性を把握するための野外調査と産卵実験についても毎月実施する。さらに、大槌湾の個体群との比較のために、A. omoriiが優占する東京湾において予備的な試料採集を実施する予定である。当初計画で導入する予定であった大型機器(インキュベーター類)は、実験を実施した研究機関から既設機器の使用を許可されたため、購入しなかった。また、震災によって使用不可となっていた併設の宿泊施設が再建され、今年度より利用可能となったため、当初計画と比べて旅費の使用額が大幅に少なくなった。繰越金については、次年度も毎月継続する岩手県大槌町での調査の旅費、実験に使用する物品の消耗品費ならびに国内学会旅費として使用する予定である。
中国における文化政策とポピュラー文化の変容

中国のアニメ国産化政策下におけるアニメの視聴実態を解明するため、アンケート調査を広州市と上海市で実施した。調査結果によると、依然として日本アニメを好む者が多数であり、多くはインターネット(海賊版)で接触していた。中国アニメは、子供向けを除くと人気が低かった。アニメの好みは、年齢および愛国心強さと関係があった。アニメ視聴者やインターネット利用者は情報規制に対して否定的な傾向があったが、日本アニメの好みは親日的な態度とは結びついていなかった。また、日本アニメが日本製品のポジティブなイメージを高めるという、「ソフトパワー論」が想定する方向の効果は支持されなかった。中国のメディアの影響に注目した従来の研究の多くは、暗黙のうちに中国が「欧米化」することを前提としていた。言い換えると欧米的な価値観がメディアによってどのように強まるのか、という視点からの研究がほとんどであったといえる。しかし、改革開放から30年経過し、最近の中国の文化政策は欧米化とは反対の方向を目指しているように見える。アニメの国産化を目標とした政策の発表は、その一つの例である。本研究は、そうした問題意識に立って、文化政策がメディア利用にどのように影響を与えているのか、またその影響は新しい意識やライフスタイルとどのように関係しているのかを見出そうとした。つまり、欧米的な価値観がメディアによってどのように強まるのか、という視点からの研究がほとんどであったといえる。しかし、現在の中国の文化政策は欧米化とは反対の方向を目指しているように見える。したがって中国における規制された状况下でのメディア利用が中国人の意識やライフスタイルにどのような影響を与えているのかを検証する必要がある。本研究は、メディア利用が新しい意識やライフスタイルをたらしているのか、また新しい変化をもたらすための条件は何かという点を解明するため調査を実施したいと考えている。まだ一年目であるので具体的な研究成果はあげていないが、この研究目的を達成するため、次年度以降のフィールド調査の準備している。平成19年度は関連文献の収集を行ない、現地での文献収集と調査の実施条件を確認するため上海市を訪問した。違法コピーソフトが大量に流通している状況は把握したが、さらに上海市で市民のメディア利用と意識に関する調査を平成20年度以降に計画している。また、本テーマに関連する研究として、中国の反日意識に関する既存の調査データの分析を行い、論文を執筆した。この論文では、中国政府の愛国主義宣伝が必ずしも期待した効果を上げていないことを検証している。中国政府は国内のコンテンツ産業を育成し、中国のソフトパワーを高めることを目ざして、アニメの国産化を推進している。そのため、中国では2006年から外国アニメの輸入をほぼ停止し、放送される外国アニメの数は激減している。本年度は、このような政策下における中国人のアニメの利用実態を、筆者が2008年に広州市で街頭調査によって実施したアンケート調査から分析した。アンケート調査の結果から、外国アニメへの規制が強化される中で、インターネットを通して目本アニメに接触している中国のアニメファンの独特な利用状況が浮き彫りになった。一部の日本アニメ番組は中国では正式に放送されていないにもかかわらず、日本以上の高い人気を博していた。そうした視聴者の多くはインターネットで日本アニメに接触していた。ロジスティック回帰分析の結果では、日本アニメの好みに対して年齢が低いことと学歴が高いことが有意に効いていた。学歴が高いという点は、過去の日本コンテンツの利用者とは異なる特徴である。また、中国アニメは、幼児向けで一定の競争力はあったが、キャラクターの魅力では劣っていた。一方、日本アニメの愛好者が日本製品に対してポジティブなイメージを持つという、ソフトパワー論が想定する方向の効果は支持されなかった。また、日本アニメと中国アニメの代表作を内容分析で比較したところ、中国アニメの方が架空の場を想定したものが多く、日本は現実的な場を想定したものが多かった。これは、中国アニメが低年齢層の子供をターゲットとしでいるためと考えられる。本研究成果は3月に北京の中央民族大学で発表したほか、学会誌にも投稿し審査を経て既に掲載されている。中国のポピュラー文化政策においてソフトパワー論に基づいたコンテンツ政策が導入されていることを把握し、中国のポピュラー文化への文化政策の影響を上海と北京で実施したアンケート調査により考察した。中国では、海外アニメを禁止することにより、海賊版(特にインターネット経由)のアニメ視聴が増加していることが明らかになった。中国ではアニメ国産化政策によって大量の国産アニメが製作されているにもかかわらず、国際アニメの人気は低く海外のアニメとは異なる位置づけがされていた。

また、アニメが「オタク」文化の一つとして30歳以上の年齢層にも受容されている日本とは異なり、中国にとおけるアニメの視聴者は低年齢層に集中していた。また、コンテシツの接触がその国への魅力度を高めるという「ソフトパワー」効果についても検証したが、分析結果は、日本のアニメに多く接触するからといって、日本への好意度を高める効果たあるとは言えないことが明らかになった。また、中国政府の情報規制への態度はナショナリズム的な意識、集団主義や物質主義という価値観と関係していたが、アニメの視聴者とインターネットの利用者では規制に対して否定的な傾向が強かった。中央電視台のチャンネルの好みは規制と正の相関関係があった。また、中国政府のインターネット規制や文化政策に対する替否においても好みのアニメのタイプによって統計的な有意差がみられ、日本アニメのファンと比べてアメリカアニメのファンは規制に対して肯定的な傾向がみられた。
ユイスマンス初期作品にみる自然主義の受容と超克ー『薬味箱』から『さかしま』まで

本年度はゾラの初めての小説『クロードの告白』(1865)を以下の三つの観点から分析した。二つの文学潮流、ロマン主義とレアリスムの間に生まれたこの小説は、1862年の時点では、あくまでロマン主義の文脈内における理想と現実の対立という中心主題を持っていた。執筆が中断していた1864年に作家は、実証主義者の著作を学び紹介することで、科学的手法に裏打ちされた自らの文学、絵画理論を温める。1865年の加筆箇所を推定し、その生成過程を分析することでゾラのロマン主義脱却と自然主義理論構築の過程が見えてくる。『クロード』第21章の春のパリ郊外への散歩の場面は、同様の場面を描いたゴンクール兄弟の『ジェルミニー・ラセルトゥー』(1865)第12章との類似が複数の研究者によって指摘されている。無数の地理的類似点にもかかわらず、『ジェルミニー』読書がゾラに「病んだ郊外」という着想を与えたという素朴な仮説は退けられる。モンルージュの荒廃した風景描写は時評文「老いた馬」の中でゾラが既に行っていた描写からの自己流用である。荒野モンルージュをゾラが郊外発見の場所として選択したことついては、地理的観点から二つの仮説が立てられる。第一に、人骨の詰まった旧地下採石場を美しい大通りの下に隠すオスマン大改造の偽善性への批判であり、第二に、その地で城壁建設に参加した作家の父、技師フランソワ・ゾラへのオマージュである。下水のように汚いビエーヴル川を遡り、緑の谷間にたどり着くことでクロードは恋人ローランスの更生を果たすが、それは束の間の幻想であった。川辺に広がる汚い「堆肥」から目を逸らしたクロードは、逆説的に郊外の堆肥の持つ「腐敗と豊穣さ」の両義性を掘り下げるルーゴン=マッカール叢書を準備していたのだ。これらの問題について日本フランス語フランス文学会で口頭発表および論文投稿を行った。29年度が最終年度であるため、記入しない。『薬味箱』(1874)において、ユイスマンスが絵画的な描写を散文詩に組み込む手法について研究した。モデルとされるレンブラントらの絵画を、いつ、どこでユイスマンスが鑑賞しえたのかという点について検証し、これまで指摘されてこなかったテニールスの《フランドルのケルメス祭》が、一つの散文詩の源泉となっていることを発見した。この問題について、10月に大阪大学フランス語フランス文学会において研究発表を行い、論文を当会の機関紙ガリアに投稿した。『パリ・スケッチ』(1880)において、ユイスマンスが挿絵画家たちと行った文学と絵画の共同作業について研究した。フランス国立図書館において、1880年の初版、および1886年の増補改訂版を調査し、各種展覧会カタログと照らし合わせることで、6枚がフォラン、4枚がラファエリのものであることを確認した。加えて、フォランの描いた二枚のエッチングが、1880年の初版の一部においては、出版社が自主的に削除していたことを発見した。それらの調査結果を待兼山論叢にて論文にまとめた。ユイスマンスの自然主義小説における画家の理想像の変遷について研究した。『ヴァタール姉妹』(1879)で登場する画家シプリアン・チバイユはベルギーの画家フェリシアン・ロップスや、印象派のドガ、フォランの影響を感じさせており、現代のヴィーナスとしてのパリ娘のみを好んで描いていた。しかし『所帯』(1881)においてチバイユが再登場した際には、それらに加えてラファエリの影響が、パリ郊外の工業化しつつある風景への関心として、その芸術上の傾向に現れている。それらの異なる二つの要素を結ぶのが、病への比喩であり、それはユイスマンスの絵画批評に当初から通底するものだった。この問題を12月の日本フランス語フランス文学会関西支部会で発表し、論文掲載を認められた。概ね順調に研究は進んでいる。8月に4週間弱の日程でフランス国立図書館に置いて資料調査を行い、それまでに準備していた、散文詩集『薬味箱』と『パリ・スケッチ』に関する二つの論文における仮説を裏付ける資料を多数調査することが出来た。10月に行われた大阪大学フランス語フランス文学会で、『薬味箱』に含まれている絵画の描写について発表を行った。その際に、会場から提起されたユイスマンスがモデルとなった絵画を実際に見た可能性について調査を深め当会機関誌Galliaにおいて論文として発表した。平成26年度に提出した修士論文においては、十分な資料的裏付けを行うことが出来なかった点について論証を深めることが出来た。『パリ・スケッチ』に挿絵として含まれているラファエリ、フォランの版画についてはこれまでほとんど研究されていなかった。フランス国立図書館に所蔵されている初版を確認することで、初めて版画の帰属と削除された版画の特定を行い、待兼山論叢において論文にまとめた。またフランス国立図書館での調査中に、ユイスマンスの自然主義小説と当時の印象派絵画との関わりについて新たな論点を発見し、12月の日本フランス語フランス文学会関西支部会において発表し、論文にまとめることが出来た。これまでの研究ではユイスマンスの美術批評と文学作品との隔たりに注目されることが多かったが、実際にはユイスマンスの美術批評はあくまで自然主義擁護の一環として行われており、小説においても自然主義の絵画への応用が模索されていることを示した。

多くの一次資料を現地にて分析し、三本の論文を執筆することが出来たため、研究は予定通りに進行していると考える。本年度は主に二つの問題に取り組んだ。第一に、ユイスマンスがゾラの下の自然主義グループに加わった直後に書かれた評論「エミール・ゾラと『居酒屋』」(1877)がその直前に書かれていたバルベー・ドールヴィイによるゾラ批判に対してどのように反論したのかという問題である。バルベーは『パリの胃袋』(1873)などの作品において、ゾラがあまりにも俗悪な対象を長々と詳細に描くことへと傾倒し過ぎていると批判するが、ユイスマンスはバルベーが難詰する腐ったチーズの長大な描写に、匂いが音楽を喚起する共感覚的描写の理想を見る。ユイスマンスはその後、『さかしま』(1884)において味覚が音楽を、嗅覚が幻覚を生み出す奇妙な場面を描くことになるが、それはこれまで指摘されてきたように、ボードレールの「万物照応」だけでなく、ゾラの作品に想を得たものであると考えられる。第二に、ゾラがゴンクール兄弟の『ジェルミニー・ラセルトゥー』(1865)をどのように受容し、その後出版される自らの処女小説『クロードの告白』(1865)へと生かしたのかという点について考えた。文壇に受け入れられなかったゴンクール兄弟のこの小説に対して、ゾラは数少ない好意的書評を行なった。同年秋に出版されるゾラの小説には『ジェルミニー』からの明白な影響を示す章が存在しているが、そこでゾラがどのようにゴンクールを模倣し、そしてどのような独自性を付与したのかという点について考察した。ゴンクール兄弟の『ジェルミニー』にゾラが認めた長所は、1870年代末にユイスマンスが自然主義的詩を模索するときに依拠することにもなる。第一の点については、大阪大学フランス語フランス文学会『ガリア』に論文を投稿し、掲載が認められた。第二の点については、平成29年度に日本フランス語フランス文学会等で発表することを予定している。1870年代におけるユイスマンスの自然主義受容について、バルベー・ドールヴィイなどの当時の批評家との比較を通して多角的に分析することができた。またユイスマンスの自然主義受容を考えるうえでは、彼が必ずしも似ていない作家、ゴンクールとゾラ双方から強い影響を受け、独自の作風を模索していたことを見過ごすことができない。ユイスマンスが両作家に認めた共通点こそが、彼が試みた自然主義の詩の源泉となる。1865年に出版された両作家の小説に現れているゴンクール兄弟からゾラへの影響を分析することで、ユイスマンスの自然主義受容を自然主義全体の発展のなかに正確に位置付けることができた。本年度はゾラの初めての小説『クロードの告白』(1865)を以下の三つの観点から分析した。二つの文学潮流、ロマン主義とレアリスムの間に生まれたこの小説は、1862年の時点では、あくまでロマン主義の文脈内における理想と現実の対立という中心主題を持っていた。執筆が中断していた1864年に作家は、実証主義者の著作を学び紹介することで、科学的手法に裏打ちされた自らの文学、絵画理論を温める。1865年の加筆箇所を推定し、その生成過程を分析することでゾラのロマン主義脱却と自然主義理論構築の過程が見えてくる。『クロード』第21章の春のパリ郊外への散歩の場面は、同様の場面を描いたゴンクール兄弟の『ジェルミニー・ラセルトゥー』(1865)第12章との類似が複数の研究者によって指摘されている。
腫瘍血管由来miRNAの同定とがん診断・治療への応用

本研究は,腫瘍血管の異常性獲得メカニズムに関与するmiRNAを同定し,それらのがんの浸潤・転移との関連などを明らかにし,新たながんの診断・治療法の開発につなげることを目的とした.がん細胞由来exosomeを血管内皮細胞に処理し発現が亢進するmiRNAについて機能解析をおこなった.そのうえで腫瘍血管内皮のmiRNAの標的分子の同定をmiRNAの標的分子の候補をデータベースによりピックアップしその標的分子の機能を調べ,これらの遺伝子の発現低下が腫瘍血管の特性にどのように関わるのかについて解析を行った.近年,がん微小環境を構成する血管(腫瘍血管)は,がんの進展ならびに治療の経過と共にダイナミックに変化し,正常血管とは異なる多様な性質をもつことが知られている.本研究では,これらの腫瘍血管の異常性獲得メカニズムに関するmiRNAを同定し,がんの浸潤・転移との関連などを明らかにすることを目的としている.まず初めに,悪性度の異なる2種類のがん細胞をマウスに皮下移植し,形成された腫瘍塊からそれぞれ腫瘍血管内皮細胞を,磁気ビーズ細胞分離法ならびにフローサイトメトリーにより,CD31陽性CD45陰性細胞分画として分離した.分離・培養した腫瘍血管内皮細胞が,血管内皮マーカーが陽性で,かつ血球マーカーが陰性であることを,フローサイトメトリーおよびPCR法にて解析し,血管内皮細胞としての純度を確認した.その後,それらの分離培養した腫瘍血管内皮細胞からそれぞれmiRNAを抽出し,miRNAアレイにて網羅的発現解析を行った.次に,悪性度の異なる2種類のがん細胞のそれぞれの培養上清から,exosomeを超遠心法により回収した.回収したexosomeがexosomeマーカーCD63を発現していることをWestern blotting法で確認した.その後,これらのexosomeからmiRNAを抽出し,miRNAアレイにて網羅的発現解析を行った.現在,がん細胞由来exosomeを血管内皮細胞に処理することにより,miRNAの発現が亢進するかどうか,アレイで見出したいくつかのmiRNAについて検討を行っている.miRNAアレイにて網羅的な発現解析を行い,有望なmiRNAを比較検討している.近年,がん微小環境を構成する血管(腫瘍血管)は,がんの進展ならびに治療の経過と共にダイナミックに変化し,正常血管とは異なる多様な性質をもつことが知られている.本研究では,これらの腫瘍血管の異常性獲得メカニズムに関するmiRNAを同定し,がんの浸潤・転移との関連などを明らかにすることを目的としている.昨年度は悪性度の異なる2種類のがん細胞の培養上清から,それぞれexosomeを回収し,そこからmiRNAを抽出し,miRNAアレイにて網羅的発現解析を行った.今年度はがん細胞由来exosomeを血管内皮細胞に処理しmiRNA発現が亢進するmiRNAについて機能解析をおこなった.そのうえで腫瘍血管内皮のmiRNAの標的分子の同定をmiRNAの標的分子の候補をデータベースmiRandaによりピックアップした.さらに当該miRNAのアンチセンスによる阻害,pre-miRNAの導入などに標的分子のmRNAの発現レベルが低下するのかについて検証し,網羅的なシグナル解析ソフトウェアであるIngenuity Systems Pathway Analysis (IPA)を用いてがん間質細胞miRNAの標的分子の機能を調べ,これらの遺伝子の発現低下が間質細胞の機能にどのように関わるのかについて解析を行った.遺伝子発現上昇にどのように関わるのかを細胞増殖能,遊走能,アポトーシスアッセイにより解析をおこなった.また,がん由来exosomeによって運搬されるmiRNAの解析として,がんの培養上清による血管内皮のmiRNAならびに標的分子の発現変化について,それががん由来のexosome中のmiRNAの取り込みによるものなのか,血管内皮側の転写亢進によるものかなどを検討した.本研究は,腫瘍血管の異常性獲得メカニズムに関与するmiRNAを同定し,それらのがんの浸潤・転移との関連などを明らかにし,新たながんの診断・治療法の開発につなげることを目的とした.がん細胞由来exosomeを血管内皮細胞に処理し発現が亢進するmiRNAについて機能解析をおこなった.そのうえで腫瘍血管内皮のmiRNAの標的分子の同定をmiRNAの標的分子の候補をデータベースによりピックアップしその標的分子の機能を調べ,これらの遺伝子の発現低下が腫瘍血管の特性にどのように関わるのかについて解析を行った.悪性度の異なるがん細胞由来exosomeに含まれるmiRNAの違いと,それぞれのがん組織由来の腫瘍血管内皮におけるmiRNA発現,ならびにそれらのmiRNAの標的分子について検討する.その後,これらの分子の発現変化が血管内皮細胞に及ぼす影響について検討する.さらに,着目したmiRNAががん由来exosomeにより運搬されるかどうか,in vivoで検討する.ヒト臨床検体を用いて,がんの悪性度や治療経過などの臨床病理学的因子とmiRNAの発現について検討する.口腔外科学exosomeを処理した血管内皮細胞miRNA検討のに時間がかかっているため次年度に繰り越すことになったフローサイトメトリー解析やmiRNAのPCRに必要な試薬や抗体に充てる予定である