hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
キチン誘導体の示す特異的金属イオン吸着性の発現機構の研究

1.置換度0.9,分子量7万のCM-キチン準希薄溶液について,以下の結果が得られた.(1)動的光散乱測定結果:CM-キチンのCaイオンとNaイオンに対する結果と, Caイオンに対して特異性を示さないカルボキシメチルセルロースに対する結果との比較より,準希薄溶液では, CM-キチンのCaイオンに対する作用は, Naイオンなどの一価カチオンに対すると同じ高分子電解質溶液に特有な静電的作用が主であると考えられる.(2)X線小角散乱散乱測定結果:無塩系CM-キチン溶液,カルシウムイオン添加溶液, 2価の鉄イオンが酸化して3価のイオンを含む溶液の散乱図形はそれぞれのキチン分子の集合状態を反映して,大きく変化する. CM-キチン濃度と鉄イオン(2価と3価)濃度とを広く変えた測定から,二価の鉄イオン添加時の散乱プロファイルに及ぼすCM-キチン濃度と添加塩の効果は全く異なる.前者の効果は理論の予測と一致するが,後者の効果は理論の予測と逆の傾向にある.小角散乱測定で観測している量がキチン分子に比べ小さな領域を反映しているものと考えるなら説明可能である.また,三価の鉄イオン添加時の散乱プロファイルは,二価の鉄イオンを含む溶液が十分酸化した時の散乱関数の振る舞いと一致する.このことは,断面の回転半径の結果の比較とも一致する.またCM-キチン分子のCaイオンに対する作用が特異的なものかどうか確かめるために,さらにCM-キチンの置換度をかえて,二価の鉄イオン添加時とCaイオン添加時との散乱関数の詳細な比較研究が志向される.2.試作EXAFS装置は,鉄箔を用いて徹底的にテストされた.カーブフイッテングのR因子は, 7%となり,完成してものと考えられる.鉄イオンを含むCM-キチン粉末の予備的実験がなされた. Caイオンを含むCM-キチン測定のために, EXAFS装置全体の見直しがなされた.このラインに沿って装置の改良が進んでいる.1.置換度0.9,分子量7万のCM-キチン準希薄溶液について,以下の結果が得られた.(1)動的光散乱測定結果:CM-キチンのCaイオンとNaイオンに対する結果と, Caイオンに対して特異性を示さないカルボキシメチルセルロースに対する結果との比較より,準希薄溶液では, CM-キチンのCaイオンに対する作用は, Naイオンなどの一価カチオンに対すると同じ高分子電解質溶液に特有な静電的作用が主であると考えられる.(2)X線小角散乱散乱測定結果:無塩系CM-キチン溶液,カルシウムイオン添加溶液, 2価の鉄イオンが酸化して3価のイオンを含む溶液の散乱図形はそれぞれのキチン分子の集合状態を反映して,大きく変化する. CM-キチン濃度と鉄イオン(2価と3価)濃度とを広く変えた測定から,二価の鉄イオン添加時の散乱プロファイルに及ぼすCM-キチン濃度と添加塩の効果は全く異なる.前者の効果は理論の予測と一致するが,後者の効果は理論の予測と逆の傾向にある.小角散乱測定で観測している量がキチン分子に比べ小さな領域を反映しているものと考えるなら説明可能である.また,三価の鉄イオン添加時の散乱プロファイルは,二価の鉄イオンを含む溶液が十分酸化した時の散乱関数の振る舞いと一致する.このことは,断面の回転半径の結果の比較とも一致する.またCM-キチン分子のCaイオンに対する作用が特異的なものかどうか確かめるために,さらにCM-キチンの置換度をかえて,二価の鉄イオン添加時とCaイオン添加時との散乱関数の詳細な比較研究が志向される.2.試作EXAFS装置は,鉄箔を用いて徹底的にテストされた.カーブフイッテングのR因子は, 7%となり,完成してものと考えられる.鉄イオンを含むCM-キチン粉末の予備的実験がなされた. Caイオンを含むCM-キチン測定のために, EXAFS装置全体の見直しがなされた.このラインに沿って装置の改良が進んでいる.1)カルボキシメチルキチン(CMキチン)がCaイオンに対し特異的に吸着されることは当研究分担者の一人によってすでに見出されている。この原因解明の一助として、非弾性光散乱法を用いて希薄溶液中のCMキチン分子の拡散定数を測定し、NaイオンおよびCaイオンの添加にともなう分子形態の違いを調べた。また化学構造は似ているがCaイオンへの作用は異なるカルボキシメチルセルローズ(CMセルローズ)に対する同様な測定結果とも比較検討した。この結果希薄な溶液状態ではCMキチンとCMセルローズとの間に差は認められなかった。このことはCMキチンのCaイオンに対する特異的な作用はCMキチン分子単独のものでなく、その分子集合の状態にもとづいてあらわれるものと考えられる。この結果は先の分担者の金属イオンの吸着測定の結果とも一致する。従って濃厚溶液状又は膨潤状態にあるCMキチン集合体の局所構造が重要な役割りをはたしているものと思われる。2)EXAFS測定用試料の製作の目的で第一鉄イオンをCMキチンの2%水溶液に添加したところ著じるしいゲル化を示した。Caイオンの添加ではゲル化は示さない。Caイオンと第一鉄イオンの添加によるCMキチンの会合状態の違いを調べる目的で、これら溶液のX線小X散乱測定を行ない、イオン添加にともなう状態を調べた。Caイオン添加によっても明らかに会合によると思われる状態の変化は認められるが、第一鉄イオン添加の場合にはこれが著じるしい。現在この測定値を解析中である。

3)EXAFSの測定は超強力X線装置のマシンタイムの制約によりいまだ本格的な測定を行なうまでには至っていない。しかし購入したモノクロメーターによって測定可能なエネルギーの範圍および標準試料の鉄箔を用いての測定精度及び分解能の検討を行ない、実際の測定に際しての條件を調べた。また第一鉄イオンを添加した0.5%CMキチン溶液を用いて初歩的な測定を行ない試料として適応する條件を調べた。
悪性グリオーマ特異的遺伝子治療の開発的研究

脳特異的に発現するMBPプロモータで制御された殺細胞遺伝子を組み込んだレトロウイルスベクターを用いて、悪性グリオーマに特異的な遺伝子治療法の研究を続けてきた。そして、Polyoma ori発現遺伝子をパッケージング細胞に導入することで、高力価な脳特異的レトロウイルスベクターの開発に成功した(Hum Gene Ther 9:161-172,1998)。そして、現在マウス脳腫瘍モデルを用いて、適切な治療プロトコールを検討中である。また、ウイルス産生細胞を腫瘍内に移植する場合には、それ自体は移動性に大変乏しいが、腫瘍内で産生されたウイルスベクターを取り込んだグリオーマ細胞は腫瘍内をよく移動するので、bystander効果が最も有効に作用する時点にganciclovir等の後療法を行うことが賢明であることも実証されている(Hum Gene Ther 8:381-391,1997:Gene Ther,in submitted)。一方、マウスモノクローナル抗体(ONS-M21)が認識するグリオーマ関連抗原がintegrin α3であると同定され(Br J Cancer,in revised)、この抗原の発現メカニズムを現在解析中である。また、ONS-M21抗体のみならず、そのヒト型化や単鎖抗体が細胞膜表面上の腫瘍関連抗原と結合すると、グリオーマ細胞や髄芽腫細胞によく取り込まれることから(Cancer Lett,in press)、殺細胞遺伝子導入法や、免疫複合体を用いたバイオターゲッティングへの応用が期待されている。さらにレトロウイルスレセプターを有しないグリオーマを対象にして、ONS-M21抗体やそのヒト型化抗体とHVJリポソームとの併用によるグリオーマ特異的イムノリポソーム法の開発にも着手している(Gene Ther 4:768-772,1997)。なお、SAGE(Serial analysis of gene expression)法による、悪性グリオーマ普遍発現遺伝子やそのプロモータの検索は現在も研究途上である。
線画の立体視におけるエントロピー最小化原理とその応用

コンピュータグラフィックスが身近になっている現在においても,工業製品や建築物の機能や形状を説明する文書で用いる図は線画であることが多い.これは,写真やコンピュータグラフィックスで作成したリアルな画像よりも線画のほうが製作コストが安いからではなく,線画のほうが3次元物体形状の的確な伝達に適しているからであると考えられる.このように,形状情報伝達の手段として使われる線画について,人間がこれをどのように3次元的に理解しているか,どのような線画が3次元的に理解しやすいかを定量的に明らかにすることは,人間とコンピュータの通信において重要である.本研究では,まず,線画の3次元知覚の原理を提案した.線画の3次元知覚の原理は,線分間角度の標準偏差最小化などで説明あるいはシミュレートされてきた.本研究では,T.Marill(1992)が提案した視覚内部表現コード長の最小化原理を具体化させ,図形の幾何学的測度の分布のエントロピー最小化原理を提案した.次に,このエントロピー最小化原理に基づき線画の3次元知覚をシミュレートするプログラムを実装した.このプログラムを様々な線画に適用した結果,人間の3次元知覚と類似した3次元ワイヤーフレームを得ることができた.最後に,対象とする線画の範囲を広げるため,線画中に3次元物体の稜線として含まれる単純閉曲線を対象として,その閉曲線の3次元知覚モデルを提案した.閉じた稜線の3次元知覚は,2つの見え方に大別できる.そこで,この2つの見え方に基づいた評価関数を定義し,3次元知覚をシミュレートするプログラムを実装した.線画中に3次元物体の稜線として含まれる単純閉曲線にこのプログラムを適用した結果,人間の3次元知覚と類似した3次元曲線を得ることができた.コンピュータグラフィックスが身近になっている現在においても,工業製品や建築物の機能や形状を説明する文書で用いる図は線画であることが多い.これは,写真やコンピュータグラフィックスで作成したリアルな画像よりも線画のほうが製作コストが安いからではなく,線画のほうが3次元物体形状の的確な伝達に適しているからであると考えられる.このように,形状情報伝達の手段として使われる線画について,人間がこれをどのように3次元的に理解しているか,どのような線画が3次元的に理解しやすいかを定量的に明らかにすることは,人間とコンピュータの通信において重要である.本研究では,まず,線画の3次元知覚の原理を提案した.線画の3次元知覚の原理は,線分間角度の標準偏差最小化などで説明あるいはシミュレートされてきた.本研究では,T.Marill(1992)が提案した視覚内部表現コード長の最小化原理を具体化させ,図形の幾何学的測度の分布のエントロピー最小化原理を提案した.次に,このエントロピー最小化原理に基づき線画の3次元知覚をシミュレートするプログラムを実装した.このプログラムを様々な線画に適用した結果,人間の3次元知覚と類似した3次元ワイヤーフレームを得ることができた.最後に,対象とする線画の範囲を広げるため,線画中に3次元物体の稜線として含まれる単純閉曲線を対象として,その閉曲線の3次元知覚モデルを提案した.閉じた稜線の3次元知覚は,2つの見え方に大別できる.そこで,この2つの見え方に基づいた評価関数を定義し,3次元知覚をシミュレートするプログラムを実装した.線画中に3次元物体の稜線として含まれる単純閉曲線にこのプログラムを適用した結果,人間の3次元知覚と類似した3次元曲線を得ることができた.コンピュータグラフィックスが身近になっている現在においても、工業製品や建築物の機能や形状を説明する文書で用いる図は線画であることが多い。これは、写真やコンピュータグラフィックスで作成したリアルな画像よりも線画のほうが製作コストが安いからではなく、線画のほうが3次元物体形状の的確な伝達に適しているからであると考えられる。このように、形状情報伝達の手段として使われる線画について、人間がこれをどのように3次元的に理解しているか、どのような線画が3次元的に理解しやすいかを定量的に明らかにすることは、人間とコンピュータの通信において重要である。本年度は、まず、線画の3次元知覚の原理を提案した。線画の3次元知覚の原理は、線分間角度の標準偏差最小化などで説明あるいはシミュレートされてきた。本研究では、T.Marill(1992)が提案した視覚内部表現コード長の最小化原理を具体化させ、図形の幾何学的測度の分布のエントロピー最小化原理を提案した。次に、線画の3次元知覚をシミュレートするアルゴリズムを構築した。線画は、頂点の2次元x-y座標と頂点間の接続関係を表す頂点番号対で与えられる。線画の3次元的理解とは、評価関数を最大にする各頂点のz座標を求めることとみなす。評価関数は、線分間角度分布のエントロピーとする。すなわち、線画の頂点にz座標が付加された3次元ワイヤーフレームにおいて、各頂点で接続された2本の3次元線分間の角度のヒストグラムを求め、これより、エントロピーを算出し、これを評価関数とする。この評価関数が最大となる3次元ワイヤーフレームを遺伝的アルゴリズムにより探索する。このアルゴリズムを様々な線画に適用した結果、人間の3次元知覚と類似した3次元ワイヤーフレームを得ることができた。以上の結果を、コンピュータビジョン分野の主要な国際会議の一つであるCVPR2001で発表した。コンピュータグラフィックスが身近になっている現在においても、工業製品や建築物の機能や形状を説明する文書で用いる図は線画であることが多い。

これは、写真やコンピュータグラフィックスで作成したリアルな画像よりも線画のほうが製作コストが安いからではなく、線画のほうが3次元物体形状の的確な伝達に適しているからであると考えられる。このように、形状情報伝達の手段として使われる線画について、人間がこれをどのように3次元的に理解しているか、どのような線画が3次元的に理解しやすいかを定量的に明らかにすることは、人間とコンピュータの通信において重要である。初年度である前年度は、直線から構成されている線画の3次元知覚のエントロピー最小化原理を提案し、この3次元知覚をシミュレートするアルゴリズムを構築した。2年目である本年度は、対象とする線画の範囲を広げるため、単純閉曲線を含む線画を対象として、その閉曲線部分の3次元形状復元を行う手法を提案した。一般に、3次元物体形状を陰影のない線画として表現する場合、線画を構成する直線や曲線は稜線と先端線の2つに大別できる。稜線とは、どの方向からも見える物体表面上のエッジのことである。先端線とは、視線と物体表面の接点の集合のうち、稜線ではない部分である。本研究で形状復元の対象とする曲線を稜線に限定し、さらに問題を簡単化するため、単純閉曲線に限定した。閉じた稜線を3次元曲線として知覚するとき、それが柱状物体の平面による切断面として見える場合と、円筒の曲面による切口として見える場合に大別できる。そこで、この2つの見え方に基づいた評価関数を定義し、評価関数が最大となるような3次元曲線を復元結果とした。遺伝的アルゴリズムを用いて評価関数最大となる3次元曲線の探索を行った結果、7枚の線画中の6枚は人間の知覚と一致すると判断できる復元結果を得ることができた。
アンジオテンシン受容体AT1aノックアウト細胞骨髄移植による新制癌療法の検討

アンジオテンシン(Ang)-II AT1a受容体KO細胞骨髄移植による腫瘍増殖の抑制AT1a.KOマウスの骨髄細胞を放射線9.5Gy照射Wild typeマウスに静注したAT1aKO骨髄移植マウスを作成大した.また、Wild typeマウスの骨髄細胞を放射線9.5Gy照射Wild typeマウスに静注したWild type骨髄移植マウスを作成した。これらのマウスとcontrolとしてWild type、マウスにLLC細胞を皮下移植した腫瘍モデルを作成し。腫瘍移植14日目に腫瘍を摘出し、腫瘍体積と重量を測定したところ、Atla KO骨髄移植マウスにおいて腫瘍重量および腫瘍体積は有意に抑制されていた。免疫組織化学標本Ang-II Atla受容体および血管新生を促す血管内皮増殖因子vascular endothelial growthfactor (VEGF)の発現を評価したところ、同モデルにおいてAng-II Atla受容体およびVEGFの発見は抑制されていた。これらのことから、腫瘍周囲のstromaには骨髄からの細胞が誘導され、その細胞にAtla受容体が存在しない場合にはVEGFの抑制による腫瘍増殖抑制が示唆されていた。1.AT1a受容体ノックアウト(以下、AT1a KO)マウスの皮膚を1mm四方の細かくし、コラゲナーゼ含有細胞培養液で分離培養してAT1a KO線維芽細胞を採取し、これを2X106から2X1088cells/mlに調節した。Lewis lung carcinoma cell(以下、LLC)腫瘍を皮下増殖させたワイルドタイプ(以下、WT)マウスに、腫瘍移植後0日から14日まで腫瘍周囲にこのAT1a KO線維芽細胞を連日局所投与した。コントロールとしてWT場合にはマウスにLLC腫瘍を移植し整理食塩水を連日局所投与したモデルと比較した。AT1a KO線維芽細胞を局所投与した群と生理食塩水群では、腫瘍体積と重量に差はなかった。つまり、腫瘍増殖の抑制は起きなかったと考えられる。また、血管新生の指標として血管内皮細胞マーカーであるCD-31抗体による免疫染色標本で、血管密度および血管面積の測定を画像解析ソフトNIH imageを用いて行ったが、これらも2群間に血管新生の差はなかった。血管新生に最も関与すると考えられている血管内皮成長因子(以下、VEGF)の発現をRT-PCR法で検討したが、これら2群間に明らかな差はなかった。2.同様にして分離培養したAT1a KO線維芽細胞とLLC腫瘍細胞を混合してマウスに移植した群と腫瘍のみをWTマウスに移植した群においても腫瘍体積と重量に差はなかった。つまり、腫瘍増殖の抑制は起きなかった。先と同様に血管密度および血管面積の測定を行ったが、血管新生の差も認められなかった。RT-PCR法によるVEGFの発現も差はなかった。3.これらのことから、腫瘍細胞増殖において、AT1a KO線維芽細胞の局所投与では血管新生抑制および腫瘍増殖抑制効果は得られなかったと考えられた。
骨形成制御におけるイオンチャネル発現・活性変動の役割と創薬への応用

前骨芽細胞の細胞増殖・細胞分化は骨組織恒常性維持において重要な役割を果たしている。我々は、マウス前骨芽細胞MC3T3-E1を用いて細胞増殖・細胞分化におけるイオンチャネルの役割を検討した。これまでの検討により、MC3T3-E1細胞には中コンダクタンスCa活性化KチャネルKCa3.1が機能発現することを明らかにしている。今検討により、細胞増殖に対するKCa3.1の役割を検討したところ、細胞周期依存的にKCa3.1発現・活性が変動し細胞内Caシグナルを修飾することによって細胞増殖の制御に関与することが明らかになった。細胞分化に対するイオンチャネルの役割を検討したところ、骨芽細胞への分化成熟過程において内向き整流性KチャネルKir2.1の発現が亢進し、骨芽細胞分化の制御に関連することが示された。Kir2.1は活性化により深い静止膜電位の形成に寄与することが考えられたため、細胞膜電位に対するKir2.1阻害作用を検討したところ、骨芽細胞分化によりKir2.1依存的な膜電位成分が増加した。骨芽細胞分化マーカー(ALP及びBSP)の発現およびALPの酵素活性を評価したところ、Kir2.1の阻害により発現・活性の有意な低下が認められたことからKir2.1は骨芽細胞分化を正に制御する因子であることが予想された。以上の結果より、KCa3.1及びKir2.1は骨芽細胞増殖及び細胞分化の制御において重要な役割を果たすことから、骨形成制御を目的としたイオンチャネル創薬の標的分子としての可能性を検討していきたい。前骨芽細胞、骨芽細胞を含む骨芽細胞関連細胞の細胞増殖は骨形成において重要な役割を果たしていると考えられている。これまでの検討により、KCa3.1がマウス前骨芽細胞MC3T3-E1の細胞増殖を正に制御することが明らかになった。今検討においてKCa3.1の前骨芽細胞増殖に対する役割を詳細に検討するために、細胞周期依存的なKCa3.1の発現・活性を検討した。その結果、S/G2/M期と比較してG0/G1期の細胞群において有意にKCa3.1の発現・活性が亢進することを明らかにした。さらに、KCa3.1選択的阻害薬であるTRAM-34の投与により、G0/G1期の細胞集団の割合が増加した。以上の結果より、KCa3.1はG1期からS期の細胞周期進行に関与することで細胞増殖の制御に関与する可能性を明らかにすることができた。骨芽細胞の成熟には、骨芽細胞分化も重要なプロセスである。これまでの検討から骨芽細胞分化に伴い、内向き整流性カリウムチャネルKir2.1の発現が亢進することを示してきた。今検討では骨芽細胞分化によるKir2.1の役割を評価するために、Kir2.1発現亢進に由来する膜電位変化及び細胞内カルシウムシグナルへの影響を検討した。その結果、骨芽細胞分化によりKir2.1が発現だけではなく機能レベルにおいても亢進することが骨芽細胞分化に大きく寄与することが明らかとなった。MC3T3-E1における細胞周期依存的なイオンチャネル活性をより詳細に検討することで、細胞周期進行におけるKCa3.1の寄与を明らかにする。細胞周期同調培養により各細胞周期におけるKCa3.1膜電流、Ca2+動態、静止膜電位、イオンチャネル発現を比較する。さらに、KCa3.1の細胞周期依存的な発現変動のメカニズムを明らかにするために、KCa3.1転写制御因子であるActivator protein 1 (AP-1)や負の制御因子であるREST等の細胞周期依存的な発現変動を検討する。細胞増殖制御に関わるKCa3.1に加えて、細胞分化に関わるKir2.1の転写制御機構をレポーターアッセイで検討するとともに、microRNAを介したKir2.1 mRNAの分解機構についても検討することで、骨芽細胞分化におけるKir2.1発現亢進機構について明らかにする。これまでの検討は培養細胞を用いた実験だったため、より生理的な条件における骨芽細胞分化に対するKir2.1の役割を検討するために、マウス中足骨を用いた軟骨内骨化モデルを用いて骨芽細胞分化に対するKir2.1の寄与を検討する。細胞増殖・分化の制御におけるCa2+シグナルの役割を明らかにするために、骨芽細胞が分泌するサイトカインや細胞間因子について検討する。特に骨芽細胞の産生するインスリン様成長因子(IGF)や線維芽細胞成長因子(FGF)の発現変化や各因子に対する感受性変化に関して検討する。

骨芽細胞分化マーカー(ALP及びBSP)の発現およびALPの酵素活性を評価したところ、Kir2.1の阻害により発現・活性の有意な低下が認められたことからKir2.1は骨芽細胞分化を正に制御する因子であることが予想された。以上の結果より、KCa3.1及びKir2.1は骨芽細胞増殖及び細胞分化の制御において重要な役割を果たすことから、骨形成制御を目的としたイオンチャネル創薬の標的分子としての可能性を検討していきたい。前骨芽細胞、骨芽細胞を含む骨芽細胞関連細胞の細胞増殖は骨形成において重要な役割を果たしていると考えられている。これまでの検討により、KCa3.1がマウス前骨芽細胞MC3T3-E1の細胞増殖を正に制御することが明らかになった。今検討においてKCa3.1の前骨芽細胞増殖に対する役割を詳細に検討するために、細胞周期依存的なKCa3.1の発現・活性を検討した。その結果、S/G2/M期と比較してG0/G1期の細胞群において有意にKCa3.1の発現・活性が亢進することを明らかにした。さらに、KCa3.1選択的阻害薬であるTRAM-34の投与により、G0/G1期の細胞集団の割合が増加した。以上の結果より、KCa3.1はG1期からS期の細胞周期進行に関与することで細胞増殖の制御に関与する可能性を明らかにすることができた。骨芽細胞の成熟には、骨芽細胞分化も重要なプロセスである。これまでの検討から骨芽細胞分化に伴い、内向き整流性カリウムチャネルKir2.1の発現が亢進することを示してきた。今検討では骨芽細胞分化によるKir2.1の役割を評価するために、Kir2.1発現亢進に由来する膜電位変化及び細胞内カルシウムシグナルへの影響を検討した。その結果、骨芽細胞分化によりKir2.1が発現だけではなく機能レベルにおいても亢進することが骨芽細胞分化に大きく寄与することが明らかとなった。MC3T3-E1における細胞周期依存的なイオンチャネル活性をより詳細に検討することで、細胞周期進行におけるKCa3.1の寄与を明らかにする。細胞周期同調培養により各細胞周期におけるKCa3.1膜電流、Ca2+動態、静止膜電位、イオンチャネル発現を比較する。さらに、KCa3.1の細胞周期依存的な発現変動のメカニズムを明らかにするために、KCa3.1転写制御因子であるActivator protein 1 (AP-1)や負の制御因子であるREST等の細胞周期依存的な発現変動を検討する。細胞増殖制御に関わるKCa3.1に加えて、細胞分化に関わるKir2.1の転写制御機構をレポーターアッセイで検討するとともに、microRNAを介したKir2.1 mRNAの分解機構についても検討することで、骨芽細胞分化におけるKir2.1発現亢進機構について明らかにする。これまでの検討は培養細胞を用いた実験だったため、より生理的な条件における骨芽細胞分化に対するKir2.1の役割を検討するために、マウス中足骨を用いた軟骨内骨化モデルを用いて骨芽細胞分化に対するKir2.1の寄与を検討する。細胞増殖・分化の制御におけるCa2+シグナルの役割を明らかにするために、骨芽細胞が分泌するサイトカインや細胞間因子について検討する。
全ゲノム操作が拓く難培養細菌の遺伝子工学（国際共同研究強化）

本国際共同研究では、全ゲノムクローニングの技術を発展させることで難培養細菌の機能解析を行うことを目的とする。本研究では独自に複製可能なプラスミドを用い、ここに対象となる細菌のゲノムを挿入する系を新たに用いた。これにより、巨大なゲノム断片をより簡便にハンドリングできるとともに、扱うゲノム全体のサイズを小さくすることが可能となる。まずはこのプラスミドについての性状および導入法を検討し、効率よく導入できる方法を確立した。加えて酵母内においてYAC(酵母人工染色体)ベクター内の配列を自在に操作(挿入や欠失、変異など)する技術を確立・習得した。内定年度:2015難培養性細菌(難培養細菌・未培養細菌)と呼ばれる細菌は、培養が不可能もしくは非常に困難な細菌である。難培養性細菌は決して珍しいものではなく、近年のメタゲノム解析などの台頭により、環境中の微生物の99%以上は培養できないことが明らかとなり、これにより新たな微生物像が浮き彫りとなった。これらの難培養性細菌は、その全ゲノム配列を決めることで多くの知見が得られる一方で、遺伝子のノックアウトや過剰発現ができないという技術的な欠陥のため、その遺伝子の機能についての確実な証明はほとんどされていないのが現状である。本研究は、近年開発された「全ゲノム操作技術」を応用することで、難培養細菌の培養および遺伝子操作系の開発を目指し、難培養細菌の持つ多様な機能を解明することを目的とする。これには、全ゲノム操作、全ゲノムクローニング、全ゲノム移植などが可能でかつ培養可能な細菌であるマイコプラズマ(Mycoplasma capricolum)を用いる。マイコプラズマゲノムと難培養性細菌ゲノムを融合させるアプローチのほか、マイコプラズマのゲノム複製起点であるOriCを導入する難培養性細菌ゲノムに組み込み、これをマイコプラズマ細胞へと導入することで、難培養性細菌ゲノムを細胞内でメガプラスミドのように共存させるデュアルゲノムの構想を得て、これを実現すべく研究を行う。本年度は難培養性細菌の全ゲノムをクローニングし、そこへOriC配列を導入する系の検討を行った。用いたベクターは、YAC(酵母人工染色体)ベクターに、マイコプラズマ用の耐性マーカーを加え、かつ、マイコプラズマの複製起点OriCを保持したものと、OriC領域を持たないものの2種類を作成した。これにより今後の研究の進展に向けた準備ができた。全ゲノムをクローニングする系を確立するため、ベクターを新たに開発し、これをテストすることができた。また、マイコプラズマでの複製に必要なOriC領域を導入することで、デュアルゲノムの作成に向けた研究を進展させることができた。本国際共同研究では、全ゲノムクローニングの技術をベースとして、その技術を発展させることで難培養細菌の機能解析を行うことを目的とする。培養できるマイコプラズマのゲノムに他の細菌のゲノムを付加することで、大規模なゲノムのハンドリング技術を確立すると共に、各細菌の持つ機能を解析する技術の確立を目指す。難培養細菌ゲノムを操作・導入する系について、本研究では独自に複製可能なプラスミドを用い、ここに対象となる細菌のゲノムを挿入する系を新たに用いた。これにより、巨大なゲノム断片をより簡便にハンドリングできるとともに、扱うゲノム全体のサイズを小さくすることが可能となるため、ゲノムの物理的な断片化等のリスクを軽減させ、効率的にゲノム断片を扱うことが可能となる。次にここに各種のDNA断片を挿入し、それが複製可能であることを確認した。加えて本国際共同研究では、酵母内においてYAC(酵母人工染色体)ベクター内の配列を自在に操作(挿入や欠失、変異など)する技術を確立・習得した。具体的には、Recombinase-mediated cassette exchange (RMCE)法や、Tandem repeat coupled with endonuclease cleavage (TREC)法、Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeat-Cas9(CRISPR-Cas9)などの手法を用いることで、より簡便に酵母内のインサート配列を改変することが可能であった。今後も引き続き研究を推進し、デュアルゲノムの作成に向けた系の開発を行う。加えて、難培養性細菌ゲノムをマイコプラズマ細胞へと導入する手法の改良も行う。細菌学
RNA干渉作用によるネコ伝染性腹膜炎ウイルス複製制御機構の解析

fcwf-4細胞のFIPV感染実験においてウイルス複製に影響を与えるncRNAの分離・同定を試みた.マイクロDNAアレイによるmiRNAの解析を行い, hsa-miR-494がウイルス感染時に2.1倍上昇することが明らかとなったが, hsa-miR-593, hsa-miR-193a-3p, hsa-miR-17はそれぞれ0.11倍, 0.34倍, 0.44倍と発現が減少した.現在,生理学的機能,解析中である.fcwf-4細胞のFIPV感染実験においてウイルス複製に影響を与えるncRNAの分離・同定を試みた.マイクロDNAアレイによるmiRNAの解析を行い, hsa-miR-494がウイルス感染時に2.1倍上昇することが明らかとなったが, hsa-miR-593, hsa-miR-193a-3p, hsa-miR-17はそれぞれ0.11倍, 0.34倍, 0.44倍と発現が減少した.現在,生理学的機能,解析中である.ネコ伝染性腹膜炎(FIP)はワクチン開発が未だ成功しておらず,効果的な治療法も確立されていない疾患で,一度発症すると致死的な経過をたどる.近年,転写RNAのうち,約53%ものRNAが蛋白質をコードしないノンコーディングRNA(ncRNA)であることが明らかとなった.この中にはRNA干渉に関わるsiRNA,miRNAも存在する.ncRNAは発生,分化,細胞増殖制御に重要な役割を担っていることが明らかとなっており,細胞内在性RNAiによってある種のウイルスの複製が抑制されることが示されている.このシステムは免疫系・インターフェロン系を介さない新たな生体防御系と位置づけられる.さらにウイルスがコードしているmiRNAも発見され,直接的あるいは間接的にウイルス自身の遺伝子複製を調節していることも報告されている.すなわち,ある種のウイルス因子は,細胞のRNA干渉作用を巧みに阻害し,ウイルスを効率的に増殖あるいは持続感染状態に維持できるよう調節しているものと考えられる.このため,ウイルス複製制御に影響を与える細胞内在性あるいはウイルス由来の因子(siRNAおよびmiRNAあるいはそれらを不活性化する因子)を分離・同定し,ウイルス複製制御機構を解析することで病原性発現機構を明らかにすることを目的とした.平成19年度はルシフェラーゼ遺伝子発現組換えFIPウイルスの作成を行った.現在,細胞およびウイルス由来のmiRNA・siRNAライブラリーの作成と発現細胞のクローニングをおこなっている.ネコ伝染性腹膜炎ウイルス(FIPV)によるネコ伝染性腹膜炎(FIP)は,ワクチン開発が未だ成功しておらず,効果的な治療法も確立されていない疾患で,一度発症すると致死的な経過をたどる.近年,転写RNAのうち,約53%ものRNAが蛋白質をコードしないノンコーディングRNA (ncRNA)であることが明らかとなった.この中にはRNA干渉に関わるsiRNA, miRNAも存在する.さらにウイルスがコードしているmiRNAも発見され,直接あるいは間接的にウイルス自身の遺伝子複製を調節していることも報告されている.本年度は平成19年度に引き続き,ウイルス複製に影響を与える細胞内在性あるいはウイルス由来のncRNAの分離・同定を行った,ネコのncRNAデータバンクは未だ確立されていないため,すでに報告されているヒトのデータバンクを利用し, miRNAマイクロDNAアレイによるmiRNAの解析を行った.ネコ腎臓由来細胞株fcwf-4細胞によるFIPV感染実験の結果, hsa-miR-494がウイルス感染時に2.1倍上昇することが明らかとなった.また,hsa-miR-593, hsa-miR-193a-3p, hsa-miR-17が0.11倍,0.34倍,0.44倍と発現が減少した.現在,Sanger Institute miRBaseTargetsを用いて生理学的意義を解析中である.さらにfcwf-4細胞を用いたFIPV感染細胞由来のncRNAライブラリーを構築した.この遺伝子プールからランダムに遺伝子シーケンスを行い,現在までに1種類の新規のncRNAを得ている.このncRNAはデータベースに存在しないものなので,ネコ特異的,あるいはFIPV特異的なものである可能性が高い.今後,感染における本遺伝子の生理学的意義を解析していく必要性がある.
高耐久性および波長変換機能を有する太陽電池用窒化物セラミックスパッケージの開発

従来にない高耐久性と入射光波長変換機能を具備した太陽電池用セラミックスパッケージの実現に向けた基盤技術の創出を目標に、独自のアルミナ還元窒化法(GRN)を駆使した易焼結性窒化アルミニウム超微粒子原料の合成プロセス確立と新規焼結プロセスの検討、および2価マンガンイオンの付活によるフォトルミネッセンス特性の発現と発光特性向上に関する基礎的研究を推進した。従来にない高耐久性を具備した太陽電池用AlNセラミックスパッケージの実現に向けた基盤技術の創出を目標に、独自のアルミナ還元窒化法を駆使した易焼結性AlN超微粒子合成プロセスの確立、およびMnドーピングによるフォトルミネッセンス特性の発現に関する基礎的研究を推進した。遷移アルミナのナノサイズ粒子にMn硝酸塩水溶液を含浸し、NH_3-CH_4混合ガスを用いて1200-1400°Cの低温で還元窒化処理を行うことにより、低濃度のMn (0.01-0.40mol%)の均一分散が達成されたMnドープAlNナノ粒子を合成することが可能となった。本合成条件によりWurtzite型構造のAlN単相が得られ、X線回折により評価した1次粒子径は29nm、比表面積径は59nmと極めて微細高活性なナノサイズ粒子が得られた。ICP-AESによる化学分析結果から、Mnドープによる母体化学組成の顕著な差違は認められず、不純物炭素含有量が0.1%以下の低いレベルに抑制されていること、および理論組成に一致したMnドープが達成されていることが確認された。合成されたMnドープAlNナノ粒子のフォトルミネッセンス特性の測定を行った結果、波長約230-320nmのブロードな励起帯により約600mm (2.1eV)をピークとするMnイオンの3d電子遷移に由来する赤色発光を示すことが確認され、太陽光スペクトル紫外成分の有効利用とシリコン太陽電池素子の波長感度特性に適合した波長変換機能が発現可能となることが確認された。従来にない高耐久性を具備した太陽電池用AlNセラミックスパッケージの実現に向けた基盤技術の創出を目標に、独自のアルミナ還元窒化法を駆使した易焼結性AlN超微粒子原料の合成プロセス確立と新規焼結プロセスの検討、およびMn付活によるフォトルミネッセンス特性の発現と発光特性向上に関する基礎的研究を推進した。NH_3流通下の強還元雰囲気中において常圧焼結を行う新規焼結手法により、合成したAlN:Mnナノサイズ粒子の焼結特性評価を行った。本手法によりMn非ドープ試料では1700°C-2hの条件により完全緻密化を達成し、従来法に比較して150°C以上の低温焼結が実現されたが、Mnドープ系試料では焼結性の低下が見られた。対策として希土類弗化物系助剤の添加を試行することにより、Mnドープ試料(濃度1x10^<20>cm^<-3>)の同プロセス温度における完全緻密化の達成とMn賦活による発光特性の発現を両立させることに成功した。また合成したAlN:Mnナノ粒子の発光強度のMn賦活濃度依存性および合成温度依存性に関する系統的検討を行うことにより、Mn濃度5x10^<19>cm^<-3>、還元窒化温度1250-1300°Cにおいて条件最適化を達成した。従来にない高耐久性を具備した太陽電池用AlNセラミックスパッケージの実現に向けた基盤技術の創出を目標に、独自のアルミナ還元窒化法(GRN)を駆使した易焼結性AlN超微粒子原料の合成プロセス確立と新規焼結プロセスの検討、およびMn付活によるフォトルミネッセンス特性の発現と発光特性向上に関する基礎的研究を推進した。紫外-可視拡散反射スペクトル測定の結果から、GRNプロセスにより合成されたAlNナノ粒子はMn付活の有無およびドープ濃度に依らず、フォトルミネッセンススペクトルにおける励起帯に対応する5 eVを中心とするエネルギー領域に強い光吸収を示すことが確認され、AlN格子中の酸素不純物欠陥準位に由来する吸収帯であることが明らかとなった。電子線励起によるカソードルミネッセンス測定を実施した結果、Mn中心による赤色発光に加えて3.2 eV(390nm)付近の固溶酸素由来の欠陥準位による紫発光帯が明瞭に観察された。紫発光帯の強度はMnドープ量の増大に従い低下することが確認され、欠陥準位からMn発光中心への励起エネルギーの移動が生じることを直接的に示す実験結果が得られた。前年度までに実施したフォトルミネッセンス測定データを含む多角的なスペクトル測定結果の解析により、不純物酸素欠陥準位による励起エネルギー吸収・移動を利用した発光機構が明らかとなり、本材料における波長変換効率向上の指針となる基礎データの構築が達成された。
子どもの睡眠調節に対する睡眠恒常性機能と概日リズム機能の寄与

本研究の目的は、子どもの年齢変化に伴う睡眠調節の機能変化に対する要因としての睡眠恒常性機能諸側面(主観的眠気、脳波検査)と概日リズム機能諸側面(放熱反応、概日リズム位相後退、夜型化)の寄与の検証である。本年度は児童における概日リズム位相、睡眠のタイミング、夜間の光曝露(照明環境、メディア使用)の関係に対する年齢の影響を検証した。研究協力者は47名の男女児童及びその養育者である(平均年齢10.1±2.9歳、範囲615歳、男女比53%:47%)。養育者は在宅で7日間にわたり児童の睡眠日誌を記録した。また、子どもの朝型ー夜型質問票日本語版(CCTQ-J)と自宅の照明環境及び就寝時のメディア使用に関する質問紙に回答した。在宅での記録ののち、児童は隔離実験施設での低照度環境で唾液を採取され、メラトニン分泌開始時刻(DLMO)が決定された。睡眠日誌の就床時刻とDLMOとの時間差を個人の位相角差として算出した。就床時刻は年齢とともに後退を示したが(r=.717, p<.001)、DLMOは相関せず(r=-.028, p=.866)、結果的に位相角差は年齢が上がるほど増大する関係を示した(r=.631, p<.001)。低年齢の児童(611歳)でのみ、DLMOとクロノタイプ(休日の睡眠中央時刻)に相関が認められた(r=.411, p=.046)。多変量解析の結果、低年齢群では入眠時刻の決定要因としてDLMO(β=.538, p<.001)と就寝前のメディア使用時間(β=.203, p=.036)が抽出されたが、高年齢群では認められなかった。本研究の結果から、低年齢の児童は高年齢の児童と比較して体内時計と睡眠の結びつきが強く就寝時のメディア使用の影響を受けやすいことが示された。当初予定通り、実験を遂行している。引き続き実験を遂行する。年度末の3月に予定していた出張予定が次年度へと変更となったため、次年度使用額が生じた。次年度の旅費として使用する。
初期根面う蝕病巣に対する過再石灰化治療法の開発

う蝕予防や知覚過敏治療を目的として各種歯科用バーニッシュ等が開発され注目されている.中でもS-PRGフィラーを含有する多種イオン徐放性バーニッシュや同歯面コーティング材は,フッ化物イオンをはじめとする6種類のイオンリリース,およびフッ化物のリチャージ能を発揮し,周辺環境を中性領域に移行させる酸緩衝能を有する.本研究では,バーニッシュの経時的口腔内劣化を考慮に入れた象牙質脱灰抑制能,およびコーティング材適用面下の象牙質脱灰抑制能を探求し,その有効性を明らかにした.また,同フィラーを10%もしくは20%含有するレジン系仮封材が,その隣接する象牙質の脱灰抑制能を向上させることを英語論文にて発表した.多種イオン徐放性の歯面被覆材3材料について、その脱灰試験を象牙質試料において行いミネラル喪失量を検討したところ、同等で効果的な脱灰抑制が得られた。しかし,ミネラル喪失量と材料からのフッ化物イオン徐放量に相関関係は見られなかった.各材料群すべてにおいて,脱イオン水1日,3日,7日浸漬でのフッ化物イオン徐放量に有意差は認められなかった.これは,1日後においてフィラーのリリース、リチャージの平衡状態に達したためであると考えられた.特に、多種イオン徐放性のバーニッシュは、従来のコーティング材と同程度の脱灰抑制効果を示していたが,これはコーティング材に比較して歯面停滞性は劣るものの,フッ化物イオンをより多く徐放することによるものと考えられた.さらに、口腔内での経時的変化を想定しての2種類のバーニッシュ(多種イオン徐放性、従来型)を比較した。具体的には、ウシ象牙質試料面に3×1 mmに窓開けしたマスキングテープを貼付し,2種類のバーニッシュを専用チップにて塗布後,プラスチックスパチュラにて成形した.テープ除去後,材料塗布部に隣接して新鮮象牙質試験面が3×1mm露出するように耐酸性ネイルバーニッシュを塗布した上で、再石灰化溶液に3日間浸漬した群を設けた。その後50mM酢酸ゲルを使用して脱灰試験を37°Cで1週間行った.分析としては、厚さ300μmの薄切片を切り出し,TMR撮影(PW3830,管電圧25kV,管電流15mA,照射時間20分),ミネラルプロファイルの作成後,平均ミネラル喪失量(IML: vol%×μm)を測定した。その結果、多種イオン徐放性材料群においては、再石灰化液浸漬後も顕著な脱灰抑制能の低下は認められなかったが,今回使用した再石灰化液に含まれるフッ化物が比較的高濃度であったために,材料の劣化影響が十分に反映されなかった可能性が考えられた.初期根面象牙質齲蝕の過再石灰化対象は表層が破壊されていない象牙質齲蝕であるが、局所に適用できる歯科材料が、病巣に対して最も有効に効果を作用させられるものと考えている。その一方で、フッ化物の効果は、低濃度のフッ化物イオンが長期間齲蝕に作用することが最も有効とされており、必ずしも単純に濃度が高ければ有効というものでもない。フッ化物イオンのみならず、多種類のイオンによる緩衝作用も重要である。さらに、長期間の作用という点を考えると、材料の停滞性は非常に重要な要素と考えられ、その上で歴史もあるバーニッシュという停滞性のある材料に改めて注目した次第である。ただし、初年度の結果では、材料は経時的に顕著な脱灰抑制能の低下は示さなかったことを確認するにとどまっており、さらなる検討が必要な状況である。我々はこれまで,多種イオン徐放性バーニッシュの歯根象牙質脱灰抑制能をin vitroにて明らかにしてきた.昨年度は,フッ化物濃度を0.1ppmFに設定した再石灰化液中にバーニッシュを浸漬し,その後の象牙質脱灰抑制能を明らかにした.今年度は口腔内での材料劣化の影響を反映した実験系として,その口腔液中フッ化物濃度を唾液中フッ化物濃度とされる10の-2乗ppmオーダーの低値に設定し,その検討を行った.象牙質試験面に3×1 mmに窓開けしたマスキングテープを貼付し,バーニッシュを塗布した.テープ除去後,塗布材料に隣接する部位に新鮮象牙質試験面が3×1 mm露出するように耐酸性ネイルバーニッシュ処理を行った.その上で,材料を100%湿潤下で1時間静置した群を0日経過群とした.一方,再石灰化溶液(1.5mM CaCl2, 0.9mM KH2PO4, 130mM KCl, 20mM Hepes, 0.01 ppm F, pH7.0)に3日間浸漬した群を3日経過群とした.脱灰試験は50mM酢酸ゲルを使用して37°Cで1週間行った.その後,厚さ300μmの薄切片を切り出し,TMR撮影(PW 3830,管電圧25 kV,管電流15 mA,照射時間20分),ミネラルプロファイルの作成後,表層および病巣体部のミネラル密度(vol%),ミネラル喪失量(IML: vol%×μm)を測定した.両群とも,深さ約10μm付近にミネラル密度30vol%を越える明瞭な表層が観察され,病巣体部の軽微なほぼ同様な平均ミネラルプロファイルを示した.

表層や病巣体部の平均ミネラル密度,平均IMLも両群において有意差が見られなかったのは,そのフッ化物リチャージ能により,フッ化物イオンが再徐放されているためと考えられ,多種イオン徐放性バーニッシュは,3日間の再石灰化液浸漬後もその象牙質脱灰抑制能を十分維持していた.多種イオン徐放性バーニッシュは,歯面だけでなく,義歯に塗ることも考慮に入れた新しいコンセプトを有するバーニッシュと考えている.今後も引き続きこの多種イオン徐放性材料に注目していくが,対照群として,同量のフッ化物イオンを徐放するNaF配合バーニッシュを用意することで,比較検討し,その多種イオン徐放の効果,特性を明らかにしていく所存である.実験自体はおおむね順調に進んでおり,象牙質脱灰抑制能に関する知見は得られてきているが,初期根面う蝕の過再石灰化という最終的な大きな目標に向けてはまだ多くの課題が残されているのも事実であるため,やや遅れている,とさせていただいた.歯根面の齲蝕予防や知覚過敏症治療を目的とした歯面コーティング材料が開発されているが,摩耗・脱離した後も,露出象牙質に浸みこんだフッ化物等が脱灰抑制にどのように寄与するかについて検討することは重要である.多種イオン徐放性歯面コーティング材であるPRGバリアコート(松風),およびレジン添加型グラスアイオノマーセメントであるクリンプロXTバーニッシュ(3M ESPE)に注目し,材料を塗布しない場合と比較検討を行った.ウシ下顎中切歯の歯根部を歯頚部直下およびそれより5 mm根尖側の位置で水平断し円筒状象牙質歯片を作製後,ワイヤー式精密切断機にて歯軸方向に2分割し,象牙質試料とした.グループは,1材料を塗布しない群(=CONT群)2PRGバリアコート塗布後7日間100%湿度下で静置した群(=PRG群)3クリンプロXTバーニッシュを同様に静置した群(=XT群)を用意した.その後,歯根面を損傷しないよう材料のみをエバンス彫刻刀を用いて慎重に除去した.作製された試料を,群別に,プラスチック製円筒容器のふたの裏に固定した.そして,1×3mmの象牙質表面部分が窓開け(試験面)となるように耐酸性バーニッシュを塗布した後,50mM酢酸ゲルにて1週間脱灰を行った(37°C).試験面中央より厚さ300μmの薄切片を歯軸と垂直方向に切り出し,Transverse Microradiography (TMR)分析を行い,ミネラルプロファイルの作成および平均ミネラル喪失量(IML)を計測した.レジン添加型グラスアイオノマーセメントであるクリンプロXTバーニッシュならびに多種イオン徐放性歯面コーティング材であるPRGバリアコートは,塗布面下の象牙質に対し材料を塗布しない場合と比較して,有意な象牙質脱灰抑制効果を示していた.う蝕予防や知覚過敏治療を目的として各種歯科用バーニッシュ等が開発され注目されている.中でもS-PRGフィラーを含有する多種イオン徐放性バーニッシュや同歯面コーティング材は,フッ化物イオンをはじめとする6種類のイオンリリース,およびフッ化物のリチャージ能を発揮し,周辺環境を中性領域に移行させる酸緩衝能を有する.本研究では,バーニッシュの経時的口腔内劣化を考慮に入れた象牙質脱灰抑制能,およびコーティング材適用面下の象牙質脱灰抑制能を探求し,その有効性を明らかにした.また,同フィラーを10%もしくは20%含有するレジン系仮封材が,その隣接する象牙質の脱灰抑制能を向上させることを英語論文にて発表した.現状では、従来のバーニッシュと比較し若干の有効性は認められたものの、著しく有効という結果が得られているとは言い難い。その原因としては、材料の歯面停滞持続性にあると考えられる。その一方で、多種イオンの徐放性、フッ化物イオン自体の効果についてはほぼ満足のいくものが得られていると考えているため、今後は材料の基質成分に改良を加え、有効成分がより長期間歯面に作用できる材料の開発に焦点を向けていく予定である。
コミュニケーション能力育成のための演劇的方法を用いたカリキュラムの開発研究

1年目の2010年度は、国語科教育学や演劇学など諸学問を精査してコミュニケーション能力を定義付け、諸学問の精査と諸外国のコミュニケーション教育の知見を生かして、コミュニケーション能力育成の目標設定を行った。2年目の2011年度は、国語科教育や演劇教育などで行われてきた演劇的方法によるコミュニケーション育成の方法を探求してきた。3年目の2012年度は、ここまでの研究成果を生かし学会でのラウンドテーブルや論文などで成果を発表した。平成22年度は、次のようなプロジェクトを立ち上げ研究計画に従って研究を行った。(1)コミュニケーション能力定義付けプロジェクト(プロジェクトI)このプロジェクトでは、諸学問領域の研究成果を整理し、言語と非言語(身体)一体のものとしてコミュニケーションをとらえた上で、国語科教育として生かすことができる知見を整理し定義づけた。このプロジェクトでは研究者を各分野に分けて調査を行い討議する。このプロジェクトは全員が参加した。(2)演劇と(国語)教育関連研究プロジェクト(プロジェクトII)このプロジェクトでは、教育そのものや国語教育と演劇との関連を考えるための基盤として、教育と演劇が今までどのように関わってきたのかをより掘り下げる研究を行った。具体的には、・演劇と教育とが関連する理論的実践的成果の洗い出し・教育の持つ演劇的要素、演劇の持つ教育的要素と、上の成果との関連・演劇人が行う、教育にコミットしたワークショップへの参加と討論などの研究を行った。このプロジェクトも全員が参加した。(3)コミュニケーション能力育成の方法探索プロジェクト(プロジェクトIII)コミュニケーション能力の育成に関わる古今東西の演劇的な方法を、国語科教育の授業実践や演劇教育の実践、さらに、心理学やコミュニケーション学の実践から、精査してその効果を評価し整理した。以上、三つのプロジェクトの結果、次年度に向けて、演劇と教育をどのように関わらせればいいかについての見通しを持つことができた。具体的には、演劇的方法を(国語)教育に取り入れるのではなく、(国語)教育そのものを、演劇本来が持つ教育的機能に関連させるということである。次年度からはこれをふまえて、コミュニケーション教育を演劇的に組み替えるにはどうしたらいいかについて考究する。本年度は、以下の目的達成のために研究を行った。A.コミュニケーション能力を言語と非言語(身体)一体のものとして国語科の文脈で定義付けるB.コミュニケーション能力育成の目標を国語科の中に設定するC.国語科教育や演劇教育などで行われてきた演劇的方法によるコミュニケーション育成の方法を精査して整理するD.コミュニケーション能力育成の目標と方法を系統化したカリキュラムを開発するE.カリキュラムの一部を試行して評価し修正して精度の高いカリキュラムを作成するこの目的達成のために、(1)コミュニケーション能力育成の目標設定プロジェクト(プロジェクトI)と(2)コミュニケーション能力育成の方法探索プロジェクト(プロジェクトII)という二つのプロジェクトを行った。その結果、以下の点について研究チーム全体の合意を得ることができた。・本研究で目指すべきコミュニケーション能力とは何か/・演劇的方法の意義は何か/・コミュニケーション能力達成のために演劇的方法が関与できる部分はどこか/・演劇的方法によるコミュニケーション能力育成の方法としてどのようなことが具体的に考えられるか以上のことを踏まえた上で、演劇的方法を用いたコミュニケーション能力育成のための仮説的な実践カリキュラムを作成した。以上のように、本年度設定した研究の目的のうち、ABCは達成し、Dの半ばまでの達成を得た。3年目の2012年度は、ここまでの研究成果を生かして、学会でのラウンドテーブルや論文などで成果を発表した。本科研で合意した点は以下のことである。Aコミュニケーションとは何か(シンボルを創造し、そのシンボルを介して意味を共有するプロセス)Bコミュニケーション能力とは何か(シンボルを創造し、そのシンボルを介して意味を共有する力(能力))Cコミュニケーション力(能力)の内実(・コミュニティーに参加する力・コミュニティーや他者、自己と信頼(ラポール)を結ぶ力(意欲(勇気)/知識/スキル/コンピテンシー・・・以下同じ)・<よくわかっているよくわからない>他者や自己とかかわる力・他者や場、コミュニティー、自己のようすが想像できる力・(コミュニケーション)観の保持とそのメタ認知ができる力・自分のコミュニケーション観を変えることができる可塑性・自分のコミュニケーションスタイル(バーバル、ノンバーバル、プレゼンスなど)などのメタ認知と他者の認知の認知ができる力・自分のコミュニケーションスタイルを変えることができる可塑性D演劇的方法の一番の力は、異化作用である(ブレヒト的な意味であり、今まで当たり前に見えていたこと思っていたことを、未知のものに変えていく効果(作用))これらの合意を、本年度の研究成果としたい。

研究の目的で設定したABCDEのうち、ABCは達成し、Dの半ば(仮説設定)まで達成したので、おおむね70%の達成と考えたため。なお、Dの後半(仮説の精度をあげるための検討)は、既に行っている最中である。24年度が最終年度であるため、記入しない。来年度は、現在提案されている演劇的方法を用いたコミュニケーション能力育成の仮説的な実践カリキュラムの精度を上げ、また、複数のカリキュラムを作成し、実際に試行し、フィードバックを行って、完成度の高い実践カリキュラムに仕上げていきたい。