hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マウス掌蹠皮膚紋理を指標とした,四肢形態形成に係わる遺伝子の解析

1.四肢腹側構造の背側化を来す突然変異マウスmeromelia(mem)の解析(1) meromelia肢芽における遺伝子発現パターンを全載in situハイブリダイゼーション法にて調べた.その結果,肢芽の腹側決定因子En-1と背側決定因子Wnt-7aの発現に強く異常が見られたにもかかわらず,外胚葉性頂堤(AER)のマーカーFgf-4,-8の発現に異常は見られなかった.これらの結果は従来のどの変異マウスとも異なっており,En-1とWnt-7aがAERの位置決定に関与するという最近主流の説に異を唱える結果となった.(2)多型解析により,mem遺伝子は13番染色体の末端近くにマッピングされた.この付近に四肢形成に関わる他の遺伝子は知られていないため,memが新規遺伝子であることが確認された.現在,mem遺伝子のクローニングを目的としてファインマッピンクを進めている.2.催奇形物質投与による四肢奇形と細胞死・遺伝子発現パターンの解析(1) 5-FUを妊娠10.5日及11,5日のマウスに投与し,胎仔肢芽における細胞死と遺伝子発現パターンを調べた所,10.5日投与では肢芽全体の強い細胞死が誘起され早期に多指が形成され,11.5日投与では指部分のみ細胞死が誘起され欠指が形成されることがわかった.しかしShh,Fgf-4,-8の発現に異常はみられなかった.(2)同様にカドミウムを妊娠10.5日マウスに投与し胎仔肢芽を調べた所,Shh,Fgf-4-8の発現に強い異常が見られたにもかかわらず細胞死と指列パターンに異常はみられなかった.1.四肢腹側構造の背側化を来す突然変異マウスmeromelia(mem)の解析(1)meromelia肢芽における遺伝子発現パターンを全載in situハイブリダイゼーション法にて調べた.その結果,肢芽の腹側決定因子En-1と背側決定因子Wnt-7aの発現に強く異常が見られたにもかかわらず,外胚葉性頂堤(AER)のマーカーFgf-4,-8の発現に異常は見られなかった.これらの結果は従来のどの変異マウスとも異なっており,En-1とWnt-7aがAERの位置決定に関与するという最近主流の説に異を唱える結果となった.(2)多型解析により,mem遺伝子は13番染色体の末端近くにマッピングされた.この付近に四肢形成に関わる他の遺伝子は知られていないため,memが新規遺伝子であることが確認された.現在,mem遺伝子のクローニングを目的としてファインマッピングを進めている.2.催奇形物質投与による四肢奇形と細胞死・遺伝子発現パターンの解析(1)5-FUを妊娠10.5日及び11.5日のマウスに投与し,胎仔肢芽における細胞死と遺伝子発現パターンを調べた所,10.5日投与では肢芽全体の強い細胞死が誘起され早期に多指が形成され,11.5日投与では指部分のみ細胞死が誘起され欠指が形成されることがわかった.しかしShh,Fgf-4,-8の発現に異常はみられなかった.(2)同様にカドミウムを妊娠10.5日マウスに投与し胎仔肢芽を調べた所,Shh,Fgf-4,-8の発現に強い異常が見られたにもかかわらず細胞死と指列パターンに異常はみられなかった.これらについて新たにプローブを入手したHoxa-11,13,Hoxd-10,11,12,13の発現パターンを調べる予定である.1.四肢腹側構造の背側化を来す突然変異マウスmeromelia(mem)の解析(1) meromelia肢芽における遺伝子発現パターンを全載in situハイブリダイゼーション法にて調べた.その結果,肢芽の腹側決定因子En-1と背側決定因子Wnt-7aの発現に強く異常が見られたにもかかわらず,外胚葉性頂堤(AER)のマーカーFgf-4,-8の発現に異常は見られなかった.これらの結果は従来のどの変異マウスとも異なっており,En-1とWnt-7aがAERの位置決定に関与するという最近主流の説に異を唱える結果となった.(2)多型解析により,mem遺伝子は13番染色体の末端近くにマッピングされた.この付近に四肢形成に関わる他の遺伝子は知られていないため,memが新規遺伝子であることが確認された.現在,mem遺伝子のクローニングを目的としてファインマッピンクを進めている.2.催奇形物質投与による四肢奇形と細胞死・遺伝子発現パターンの解析(1) 5-FUを妊娠10.5日及11,5日のマウスに投与し,胎仔肢芽における細胞死と遺伝子発現パターンを調べた所,10.5日投与では肢芽全体の強い細胞死が誘起され早期に多指が形成され,11.5日投与では指部分のみ細胞死が誘起され欠指が形成されることがわかった.しかしShh,Fgf-4,-8の発現に異常はみられなかった.(2)同様にカドミウムを妊娠10.5日マウスに投与し胎仔肢芽を調べた所,Shh,Fgf-4-8の発現に強い異常が見られたにもかかわらず細胞死と指列パターンに異常はみられなかった.
遺伝子改変動物を用いた関節由来の疼痛ストレスにおける中枢および末梢応答の病態解明

成熟雄性Wistar系ラットを用いて右膝関節内に3%カラゲニン100 μLを投与し単関節炎モデルを作成し、投与後3、6および12時間でvon Freyテストによる痛覚閾値の確認、免疫組織学的染色法による視床下部および第4腰髄(L4)におけるFos陽性細胞数を確認した。その結果、痛覚閾値はカラゲニン投与後3および6時間では対照群と比較し有意に低値であったが、12時間では回復傾向であった。視床下部におけるFos陽性細胞数はカラゲニン投与後3および6時間で対照群と比較し有意に高値であったが、12時間では対照群と同等の値まで低下していた。L4におけるFos陽性細胞数はカラゲニン投与後3、6および12時間で対照群と比較し有意に高値であったが、12時間ではかなり減少していた。カラゲニン投与後3および12時間でオキシトシン(OXT)ならびにバゾプレッシン(AVP)ニューロンにおけるFos陽性率を測定したところ、両ニューロンともカラゲニン投与後3時間では対照群と比較し有意に高値であった。続いて、カラゲニン投与後2および6時間でラットを断頭し、視床下部および下垂体前葉を含む脳切片を作成し、in situハイブリダイゼーション法を用いてOXT mRNA, AVP hnRNA, CRH mRNA, POMC mRNAの発現レベルを測定した。また、断頭で得られた血液中のOXT, AVP,コルチコステロン(CORT)濃度を測定した。その結果、OXT mRNA, AVP hnRNA, CRH mRNA, POMC mRNAの発現レベルと血中OXT, AVP, CORT濃度はカラゲニン投与後2および6時間とも対照群と比較し有意に高値であった。以上から、関節炎に対する抗侵害受容ならびに抗炎症作用のためにオキシトシン、バゾプレシン、CRHニューロンが一斉に活性化したと考えられた。平成28年度は、c-fos遺伝子にenhanced Green Fluorescent Protein(eGFP)遺伝子をトランスフュージョンさせたc-fos-eGFPトランスジェニックラットを用いて膝関節炎モデル(単関節炎モデル)を作成した。齧歯類において、その投与により局所炎症を惹起することが知られている海藻由来成分のカラゲニンを用いて3%カラゲニン溶液を作成し、成熟雄性c-fos-eGFPトランスジェニックラット(体重430-670g)の右膝関節内に100μL投与した。投与前、投与後6時間および投与後24時間で膝関節横径を計測し、投与前と比較した投与後の増加量を指標に関節炎の程度を評価した。その結果、投与6時間および24時間後において、右膝関節横径は投与前と比較して有意な増加を認め、3%カラゲニン溶液の膝関節内注射により膝関節炎が惹起されることを確認できた。また、3%カラゲニン溶液の膝関節内注射24時間後にラットを灌流固定して脳および脊髄を採取し、ミクロトームを用いて視床下部視索上核(SON)、視床下部室傍核(PVN)および第4腰髄(L4)レベルの脊髄後角を含む厚さ30μmの切片を作成し、蛍光顕微鏡((DS-QiMc (Nikon))を用いてeGFPの発現を観察した。また、対照群として成熟雄性c-fos-eGFPトランスジェニックラット(体重430-670g)の右膝関節内に100μLの生理食塩水を注射し、上記と同様にeGFPの発現を観察した。その結果、3%カラゲニン関節内投与24時間後では、観察したすべての領域で、膝関節炎群におけるeGFP陽性細胞数の有意な増加は認めなかった。現在、投与後6時間後でのeGFPの発現増加の有無を確認中である。計画初年度は、c-fos-eGFPトランスジェニックラットを用いて膝関節炎モデルを作成した。しかし、当初計画していた、脳および脊髄におけるc-fos-eGFPの蛍光発現の観察やc-fos mRNAの定量評価に至っていない。平成29年度は、成熟雄性c-fos-eGFPトランスジェニック(Tg)ラットの右膝関節内に3%カラゲニン100μLを投与した単関節炎群における投与後3時間、6時間および12時間の視床下部視索上核(SON)、視床下部室傍核(PVN)および第4腰髄(L4)レベルでの患側脊髄後角IーII層におけるeGFP陽性細胞の発現を確認し、無処置群と右膝関節内に生理食塩水100μLを投与した生理食塩水群と比較した。その結果、右膝関節横径変化量は投与後3時間、6時間および12時間で無処置群ならびに生理食塩水群と比較し単関節炎群で有意に増加していた。eGFP陽性細胞数は投与後3時間、6時間および12時間で観察した全ての領域において無処置群ならびに生理食塩水群と比較し単関節炎群で増加していたが、蛋白の発現が弱かったため、免疫組織化学的染色(IHC)により抗Fos抗体を用いてFosタンパク(Fos-LI)陽性細胞の発現を確認した。その結果、eGFP陽性細胞数よりもFos-LI陽性細胞数の方が有意に多く、c-fos-eGFP Tgラットを利用する利点を示すことができなかった。単関節炎では痛み刺激が不十分と考え、両膝関節に3%カラゲニン100μLを投与し同様の実験を行った。

その結果は単関節炎モデルの実験と同様で、無処置群ならびに生理食塩水群と比較し両膝関節炎群で観察した全ての領域においてeGFP陽性細胞数は増加していたが、片側カラゲニン投与を行ったラットにおけるIHCによるFos-LI陽性細胞数の方が多い結果となった。そのため、今回の実験ではc-fos-eGFP Tgラットを利用する利点がないと考え、成熟雄性Wistar系ラットを用いて単関節炎モデルを作成し、同様の実験を行い、投与後3時間、6時間および12時間におけるSON、PVNおよびL4におけるFos-LI陽性細胞の発現を確認している。c-fos-eGFP Tgラットを用いた膝関節炎モデルの実験を行ったが、Tgラットを利用する利点を示すことができなかったため、現在Wistar系ラットを用いての実験を継続している。そのため当初計画していた、モノヨード酢酸(MIA)を両膝関節内投与する実験には至っていない。成熟雄性Wistar系ラットを用いて右膝関節内に3%カラゲニン100 μLを投与し単関節炎モデルを作成し、投与後3、6および12時間でvon Freyテストによる痛覚閾値の確認、免疫組織学的染色法による視床下部および第4腰髄(L4)におけるFos陽性細胞数を確認した。その結果、痛覚閾値はカラゲニン投与後3および6時間では対照群と比較し有意に低値であったが、12時間では回復傾向であった。視床下部におけるFos陽性細胞数はカラゲニン投与後3および6時間で対照群と比較し有意に高値であったが、12時間では対照群と同等の値まで低下していた。L4におけるFos陽性細胞数はカラゲニン投与後3、6および12時間で対照群と比較し有意に高値であったが、12時間ではかなり減少していた。カラゲニン投与後3および12時間でオキシトシン(OXT)ならびにバゾプレッシン(AVP)ニューロンにおけるFos陽性率を測定したところ、両ニューロンともカラゲニン投与後3時間では対照群と比較し有意に高値であった。続いて、カラゲニン投与後2および6時間でラットを断頭し、視床下部および下垂体前葉を含む脳切片を作成し、in situハイブリダイゼーション法を用いてOXT mRNA, AVP hnRNA, CRH mRNA, POMC mRNAの発現レベルを測定した。また、断頭で得られた血液中のOXT, AVP,コルチコステロン(CORT)濃度を測定した。その結果、OXT mRNA, AVP hnRNA, CRH mRNA, POMC mRNAの発現レベルと血中OXT, AVP, CORT濃度はカラゲニン投与後2および6時間とも対照群と比較し有意に高値であった。以上から、関節炎に対する抗侵害受容ならびに抗炎症作用のためにオキシトシン、バゾプレシン、CRHニューロンが一斉に活性化したと考えられた。次年度(平成29年度)においては、c-fos-eGFPトランスジェニックラットを用いて膝関節炎モデルを作成し、脳および脊髄におけるc-fos-eGFPの蛍光発現の観察やc-fos mRNAの発現を調べることを予定している。また、モノヨード酢酸(MIA)の関節内投与による変形性関節症モデルラットの作成を行う予定である。本研究の成果は、日本生理学会、日本整形外科学会などの国内学会および国際学会に発表し、国際専門誌に英文論文として発表する予定である。次年度(平成30年度)においては、Wistar系ラットを用いての膝関節炎モデルにおける脳および脊髄におけるFos-LI陽性細胞の発現の観察や、SONならびにPVNにおける炎症反応に伴い増加することが予想されるホルモンであるオキシトシン、バゾプレッシンならびに副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモンのmRNAの発現を調べることを予定している。
離散時間力学に基づく離散構造を考慮した非線形制御理論の構築

本研究課題では、非線形力学システムの新しい離散化手法であり、様々な長所を持っている「離散時間力学」を制御工学へと応用し、計算機との親和性の高い制御手法の確立を目的とした。その結果、従来の手法とは全く異なる、離散時間力学に基づいた解析法や制御系設計法を提案し、数値シミュレーション・実機実験で提案手法の有効性を示すことができた。さらに、「離散構造を考慮した非線形制御理論」という、これまでに意識されていなかった新しい問題を提起することができた。2009年度においては,離散時間力学の制御工学への応用を目指し,基礎と応用の両面から以下のような研究を行った.(1)離散時間力学でモデリングされた台車型倒立振子に対して,離散時間最適レギュレータを用いた制御系設計法,ならびに0次ホールド型連続時間入力への変換手法を提案し,通常の連続時間台車型倒立振子の安定化制御をシミュレーション,さらに実機実験で確認することができた.(2)離散時間力学でモデリングされた台車型倒立振子に対して,エネルギー法と安定化手法を用いた振り上げ制御法を提案し,通常の連続時間台車型倒立振子の振り上げ制御を行うことができた.(3)離散時間力学を用いてコンパス型2足歩行ロボットのモデルを定式化し,その歩容生成問題を逐次2次計画法に帰着させることによって,効率的にコンピュータで解くことができた.これによって「離散時間歩容」という新しい概念を提案した.(4)一般的な離散時間Euler-Lagrange方程式が平衡点において陽関数となるための十分条件を導出し,通常の整形制御理論が適用できる場合の判定が容易になった.以上の結果は,国際・国内学会において発表を行っており,さらに学術論文として投稿を行っている.そしてこれら一連の研究は,コンピュータが必要不可欠な昨今の非線形制御理論において,コンピュータと親和性の高い制御系設計のツールを提供するための基礎的な研究であり,今後,様々な非線形システムへの応用可能性を持っていると言える.平成22年度においては,離散時間力学の制御工学・ロボット工学への応用を目的とし,主に以下の研究テーマに取り組んだ.1.台車型倒立振子システムに対して,離散時間力学を用いた振り上げ制御アルゴリズムの提案を行った.制御則は離散時間リアプノブ関数に基づく振り上げ制御と,線形近似システムに対する離散時間最適レギュレータ理論に基づく安定化制御の2段階で構成され,数値シミュレーションによってその有効性が確認できた.2.コンパス型2足歩行の安定な歩容を生成する問題に取り組んだ.まず離散時間力学モデルに対して,離散時間歩容生成問題を定式化し,逐次2次計画法を用いて解くことによって離散時間入力を求める.そして,離散時間Lagrange-d'Alembertの原理を用いて,離散時間入力から連続時間0次ホールド型入力へと変換する手法を提案した.シミュレーション結果によって,平地だけではなく,下り坂・上り坂などの難易度の高い場所での安定な歩容生成が確認できた.3.離散時間力学において重要な役割を果たす離散時間Euler-Lagrange方程式に対し,制御理論の立場から可解性・受動性などの理論的解析を行った.以上の結果は,国際・国内学会において研究発表を行っており,さらに学術論文としてすでに投稿を行っている状況である.本研究課題の結果によって,コンピュータと親和性の高い制御系設計が可能となり,より複雑化・大規模化するシステムに対する,コンピュータベースの新しいアプローチを提供するものと考えられる.本研究課題の最終年度に当たる平成23年度においては,非線形力学システムの新しい離散化手法である「離散時間力学」の制御工学ならびにロボット工学への応用を目指し,主に以下のような研究テーマに取り組んだ.1.離散時間力学システムの数学的構造の解析を行い,陰関数方程式として表される離散時間力学システムならびにその線形近似システムが陽関数となるための条件を導き,従来の制御理論が適用できるかどうか検討を行った.2.連続時間システム,さらに実機への適用を目指すため,離散時間力学システムに対して得られた離散時間入力から連続時間零次ホールド型入力へ変換するための新しい方法を提案した.3.非線形制御理論のベンチマーク的システムである「台車型倒立振子」の離散時間力学システムに対し,入力の二乗和などの評価関数を設定した最適制御問題を定式化すると,それは有限次元非線形最適化問題に帰着できるので,逐次二次計画法などの方法で解くことができる.その方法を応用して台車型倒立振子の振り上げ制御を行い,シミュレーションによって有効性を示した.4.ヒューマノイドロボットの簡易的モデルである「コンパス型2足歩行」に対し,これまでに行ってきた平地・下り坂・上り坂での安定歩容生成手法を応用して,不整地での安定歩容生成問題に取り組み,シミュレーションによって有効性を確認した.5.非ホロノミックシステム・時変システムなど,より広いクラスに対する離散時間力学の拡張・モデリング・制御理論的解析を行い,これまでに知られていなかった新しい結果を導出した.本研究課題たよって,「非線形システムの離散構造」という,これまでほとんど考えちれていなかった問題に取り組み,様々な新しい知見を得ることができた.
がん診断のための陽電子放出核種標識単糖類の合成に関する研究

1.【^(18)F】-2-デオキシ-2-フルオロ-D-ガラクトースについて。サイクロトロンを用いて、【^(20)Ne】(d,α)【^(18)F】の核反応を利用して製造した陽電子放出核種の【^(18)F】で標識した2-デオキシ-2-フルオロ-D-ガラクトース(【^(18)F】DGal)の改良合成法の完成で、この薬剤の基礎と臨床の研究が容易になった。【^(18)F】DGalを靜脈内投与すると肝臓に選択的に取り込まれ、観察時間の範囲ではそのままトラップされる。肝細胞内代謝物として【^(18)F】DGal-6-燐酸と【^(18)F】DGal-6-UDPを同定した。この薬剤は肝に於ける代謝の初期段階でトラップされることが判明し、現時点での唯一の肝糖代謝の定量的指標になりうることが判った。【^(18)F】DGalの肝臓への選択的集積性を考慮し人体への投与量を3mciとした。正常肝への集積は予想通り極めて高く、時間的に集積型であった。それに対して肝硬変では集積が低く、肝内は班点状で再生肝を反映する形態であった。原発性肝細胞がんや転位性肝がんへの【^(18)F】DGalの取り込み量の検討から肝腫瘤性病変の鑑別診断を可能にすることが示唆された。肝機能診断薬剤としての評価に加えこの薬剤の有用性を一段と高める結果になり、今後症例を多くして、これらの関係をもっと明瞭にしたい。2. [1-【^(11)C】]-D-ガラクトースについて生理的に重要な[1-【^(11)C】]-D-ガラクトースを前年度に完成したジボランを用いる新規迅速化学合成法を応用して合成することが出来た。【^(11)C】核種は、サイクロトロンを用いて【^(14)N】(p,α)【^(11)C】の核反応で製造し、【^(11)C】-シアンに変換し合成に供した。放射化学的収率は約15%であり、その純度は95%以上であり合成時間は約1時間であった。本化合物の生体投与後の動態解析は、目下進行中であり、継続して検討する。
言語接触が語彙・文法構造に与える影響に関する言語類型論的研究:日・韓・越語の対照

本研究は、日本語、韓国語、ベトナム語という「漢字文化圏」に属し、「膠着語」(日韓語)、「孤立語」(ベトナム語)という異なる形態類型論的特徴を持つ3つの言語における、語彙・文法構造に反映した言語接触現象の実態を明らかにすることを目的として3年間の研究を行ってきた。3年間の研究活動は、(I)「ベトナムにおける現地調査」(II)「国内、国際学会における研究発表」(III)「国内外の学術誌、論文集における成果発表」という3点を中心に行われた。(I)に関しては、SARSの流行などのため、当初の計画通り毎年共同で実施することはできなかったが、平成17年3月には代表者(堀江)、分担者(村上)でホーチミン、フエにおいて共同調査、資料収集を行うことができた。(II)に関しては平成15年11月8日に「東アジア言語・東南アジア言語の多機能化の共通性と相違点」フランス語談話会ワークショップ「文法化をめぐって」(京都会館)で共同の研究発表(招聘)を行った。また、この他に、関西言語学会、日本言語学会、社会言語科学会、言語処理学会、言語科学会(JSLS)、日本認知言語学会(JCLA)等での研究発表(招請を含む)を行った。国際学会としては、国際日韓言語学会(JK)、概念構造・談話・言語学会(CSDL)、国際認知言語学会(ICLC)、国際語用論学会(IPrA)、国際文法化学会(NRG3)、国際実用日本語学会(ICPLJ)等での研究発表を行った。(III)に関しては、「11.研究発表」にあげたものをその一端とする論文発表を国内、国外において行った。これらの研究活動の結果、日韓語とベトナム語の間には、言語接触、借用語、文法化に関して形態類型論的な相違を反映した顕著な相違が見られることが分かった。他動性(transitivity)という現象を例に取ると、日韓語は「対格助詞」という助詞に関して「対象」である名詞(句)をマークする用法から「逆接」の名詞節をマークする用法を派生するプロセスが見られるのに対して、ベトナム語や中国語においては、基本的には語順によって目的語をマークするが、それに加えて、「物理的動作」を表す他動詞が「介詞」的な品詞に機能的に転じるという現象が見られるという平行性が観察された。この研究成果は「11.研究発表」の最後にあげた「堀江・村上(印刷中)」として公表することになった。1.本年度は、言語接触(Language Contact)、地域言語学(Areal Linguistics)の観点から、漢字文化圏としての共通の歴史を有する日本語・韓国語・ベトナム語の文法・語彙構造がどのような共通の特徴、相違点を持っているかを解明するための基礎的な文献収集、研究打ち合わせを行い、具体的には2、3に述べる研究活動を行った。

2.日本語、韓国語、ベトナム語の文法・語彙構造が、言語接触、地域言語学の観点からどのような特徴を持っているかを対照言語学の観点から分析し、第39回フランス語談話会「文法化をめぐって」において「東アジア言語・東南アジア言語の多機能化の共通性と相違点」という題目で共同の招聘研究発表を行った(2003年11月08日、京都大学)。また、東北大学において堀江が主催した公開講演会において、村上は「ベトナム語の文法化-日本語や中国語との対照」という題目の発表を行った(2004年1月19日)。本年度は2年目を迎え、ベトナムにおける共同資料収集(平成17年2月末-3月下旬)をはじめ、以下のような研究活動を行った。1.ベトナムにおける共同資料収集(堀江は平成17年2月27日-3月4日、村上は2月26日-3月4日、ホーチミン市、(ベトナム国立大学)、フエ市(フエ師範大学)4.堀江は、共編著として日韓語、日越語など、アジア言語の対照言語学的研究論文を収録した『対照言語学の新展開』という論文集を刊行した。村上はこの中に日越語の文法化に関する対照研究論文を発表した(村上2004a)。この他に日韓語、日越語の文法化、文法・談話構造に関する研究論文を発表した(堀江2004,Horie and Kondo 2004,Yap, Matthews, and Horie 2004,村上2004b)。平成17年度は、本課題の共同研究の最終年度を迎え、以下の学会研究発表を行った。堀江薫:堀江薫「日韓語の動詞と名詞の連続性」第4回日韓対照研究会(東京大学駒場キャンパス)2005年11月5日村上雄太郎:「移動動詞の越・中対照研究:直示方向のカテゴリー化と「着く」の文法化を中心に」,日本言語学会第131回大会,2005年11月20日,広島大学,共同発表「ベトナム語の直示移動動詞:その用法と文法化」,東京大学21世紀COE「心とことば-進化認知科学的展開」ワークショップ:移動事象の概念化とその類型,東京大学,2005年12月3日また、3年間の共同研究の締めくくりとして、『角田太作教授還暦記念論文集』に堀江、村上で「膠着型言語と孤立型言語における他動性のマーキングと多機能性-日韓中越語の対比を通じて-」を提出する。
未踏数学の開拓と情報発信の高度化

本研究課題は,現在世界の第一線で指導的立場にある研究者を,個々の専門分野の境界を越えて有機的に結集し,共同研究や研究情報の交換を集約的に行うことにより,「未踏数学」(すなわち二十世紀後半に残された未解決問題や,二十一世紀の諸科学を結びつける要となる新理論)の研究の基盤を築くことを目的に遂行された.とくに,Advanced Studies in Pure Mathematicsのシリーズの刊行を軸に,わが国で得られたこのような未踏数学に関する研究成果を,高度な研究情報として迅速に世界に発信し,基礎科学としての数学の新しい展開に向けて,問題提起を継続的に行うことを目指した.この目的のために,本研究課題で行った主要なプロジェクトは次の通りである.1.未踏数学の開拓に関して(a)4つの国際研究集会の開催(b)4つの国内研究集会の支援(c)「$21$世紀の数学-幾何学の未踏峰-」の出版2.情報発信の高度化に関して(a)12の国際研究集会のプロシーディングスの刊行(b)数学ジャーナルの電子化を推進するためのワークショップの開催(g)幾何学分科会のホームページの整備とサーバーの更新本研究課題は,現在世界の第一線で指導的立場にある研究者を,個々の専門分野の境界を越えて有機的に結集し,共同研究や研究情報の交換を集約的に行うことにより,「未踏数学」(すなわち二十世紀後半に残された未解決問題や,二十一世紀の諸科学を結びつける要となる新理論)の研究の基盤を築くことを目的に遂行された.とくに,Advanced Studies in Pure Mathematicsのシリーズの刊行を軸に,わが国で得られたこのような未踏数学に関する研究成果を,高度な研究情報として迅速に世界に発信し,基礎科学としての数学の新しい展開に向けて,問題提起を継続的に行うことを目指した.この目的のために,本研究課題で行った主要なプロジェクトは次の通りである.1.未踏数学の開拓に関して(a)4つの国際研究集会の開催(b)4つの国内研究集会の支援(c)「$21$世紀の数学-幾何学の未踏峰-」の出版2.情報発信の高度化に関して(a)12の国際研究集会のプロシーディングスの刊行(b)数学ジャーナルの電子化を推進するためのワークショップの開催(g)幾何学分科会のホームページの整備とサーバーの更新本研究の目的は,世界の第一線で指導的立場にある研究者を,個々の専門分野の境界を越えて有機的に結集し,共同研究や研究情報の交換を集約的に行うことにより,「未踏数学」(すなわち二十世紀後半に残された未解決問題や,二十一世紀の諸科学を結びつける要となる新理論)の研究の基盤を築くと共に,得られた研究業績を「Advanced Studies in Pure Mathematics」のシリーズの刊行を軸に,我が国からの高度な学術情報として迅速に世界に発信し,数理科学の新しい展開に向けての問題提起を主導的に行うことにある.この目的に沿って,今年度は次のような研究活動を行った.1.未踏数学に関する研究プロジェクト「フィンスラー多様体への調和写像の理論の構築」を立ち上げ,平成15年8月から9月にかけて東北大学において共同研究を行い,その成果をもとに平成16年3月に国際研究集会「Workshop on Differential Geometry」を開催した.2.平成15年8月に開催された「第50回微分幾何学シンポジウム」のプロシーディングスを編集した.(出版は平成16年5月の予定)4.我が国から多くの重要な学術雑誌が数学分野において発行されているが,その電子ジャーナル化は遅れている.このような現状を打開するため,国立情報学研究所ならびに東北大学付属図書館および同大学院理学研究科数学専攻と共催で,数学分野の学術雑誌の電子ジャーナル化を促進するための研究集会「Workshop on Project Euclid」を,平成16年1月に東北大学において開催した.(図書館関係者を含め国内の主要な数学雑誌編集担当者54名が参加)本研究の目的は,世界の第一線で指導的立場にある研究者を,個々の専門分野の境界を越えて有機的に結集し,共同研究や研究情報の交換を集約的に行うことにより,「未踏数学」(すなわち二十世紀後半に残された未解決問題や,二十一世紀の諸科学を結びつける要となる新理論)の研究の基盤を築くとともに,得られた研究業績を「Advanced Studies in Pure Mathematics」のシリーズの刊行を軸に,我が国からの高度な学術情報として迅速に世界に発信し,数理科学の新しい展開に向けての問題提起を主導的に行うことにある.この目的に沿って,今年度は次のような研究活動を行った.1.幾何解析学の分野で目覚しい業績を上げている国内外の若手研究者を招聘し,未解決問題の今後の展望を検討するための国際研究集会「Workshop on Geometric Analysis」を,平成16年2月21日から24日にかけて東北大学において開催した.2.幾何学の分野における未解決問題をまとめた「21世紀の数学-幾何学の未踏峰」を編集し,出版した.5.数学の学術雑誌においては,電子ジャーナル化だけではなく,バックファイルについても遡及的にデジタル化しインターネット上で自由に利用できるように公開することが喫緊の課題である.そこで東北大学付属図書館および同大学院理学研究科数学専攻と共催で,研究集会「Open Forum on Digital Publication and Digital Library」を,平成17年1月に東北大学において開催した.

本研究の目的は,世界の第一線で指導的立場にある研究者を専門分野を越えて有機的に結集し,「未踏数学」の研究の基盤を築くとともに,得られた研究業績を我国からの高度な学術情報として迅速に世界に発信し,数理科学の新しい展開に向けての問題提起を行うことにある.この目的に沿って,今年度は次のような研究活動を行った.3.AdvancedStudies in Pure Mathematicsシリーズの既刊42巻のうち,初期に出版されたものは現在すでに入手不可能な状態にある.これら初期に出版されたものをpdfファイルとしてデジタル化し,インターネット上で利用できる形に整えた.4.幾何学の分野における研究情報の発信を高度化するため,研究者メーリングリストおよびウェブサイトとして利用されている幾何学分科会のホームページのサーバーを更新し,ホームページのデザインを一新するとともに,英語版ホームページを立ち上げた.5.複素フィンスラー幾何学の他分野への応用に関する総合研究「複素フィンスラー幾何学とその応用」を推進するため,研究集会「Differential Geometry, Sendai 2006」を開催した.6.部分多様体論の分野における未解決問題を検討するため,研究集会「部分多様体論・湯沢2005」を開催した.7.第52回幾何学シンポジウムの開催を支援した.本研究の目的は,世界の第一線で指導的立場にある研究者を専門分野を越えて有機的に結集し,「未踏数学」(すなわち二十世紀後半に残された未解決問題や,二十一世紀の諸科学を結びつける要となる新理論)の研究の基盤を築くとともに,得られた研究業績を「Advanced Studies in Pure Mathematics」のシリーズとして編纂し,我国からの高度な学術情報として迅速に世界に発信することにより,数理科学の新しい展開に向けての問題提起を主導的に行うことにある.この目的に沿って,今年度は次のような研究活動を行った.1. AdvancedStudies in Pure Mathematicsシリーズの編集作業の効率化を図るため,TeXによる原稿入力のガイドラインを更新し,そのためのクラスファイルを新規に作成した.4.未踏数学に関する研究プロジェクト「フィンスラー多様体への調和写像の理論の構築」を推進するため,国際研究集会「Geometric Analysis, Sendai 2007」を,平成19年1月13日から1月15日にかけて仙台国際センターにおいて開催した.5.部分多様体論の分野における未解決問題を検討するため,研究集会「部分多様体論・湯沢200」を,平成18年11月29日から12月1日にかけて開催した.6.幾何学の分野における研究情報の発信を高度化するため,研究者メーリングリストおよびウェブサイトを管理している幾何学分科会のサーバーの更新を完成した.
西洋の歴史叙述にみる「危機」の諸相

・過去4年間、研究メンバー全員が、定期的な研究会において報告を行い、西洋の歴史叙述における「危機」の諸相について一緒に検討してきた。研究の都合上、メンバーは3グループに分けられていた。すなわち、(1)古代地中海世界と歴史叙述における「危機」を検討するグループ、(2)中世ヨーロッパ世界と歴史叙述における「危機」を検討するグループ、(3)近世近代ヨーロッパ世界と歴史叙述における「危機」を検討するグループである。・歴史的に、文化的接触や民族的征服が引き起こされるとき、多くの歴史叙述がなされ、また危機意識が現れた。本研究では、西洋の歴史上の主要な歴史叙述を取り上げて分析し、共同で危機の諸相を明らかにしてきた。現代の歴史家は、過去の歴史的叙述を通じて危機の状況を理解することができる。過去において、民族や国家が危機に直面したとき、歴史家たちは危機をどのように描いたのか。・メンバー全員は、自分の研究分野の特定のテーマを選んで、「危機」について研究してきた。そして、共同で古代、中世、近世・近代における、また、地中海、北部・中部ヨーロッパにおける、時代的・地域的危機の特性が発見できるか追究してきた。・本研究をつうじて、メンバー全員は、未来における危機にどのように対処し、また克服するかといういくつかの手がかりを提供できたものと確信している。今年度は最初の年であるので、各メンバーがどのような論点から研究テーマにかかわることが可能かを探るための言わば見通し報告を中心に行った。1.97年6月22日と23日に広島県立生涯学習センターにおいて第一回研究会を開催した。第一日目に、研究会の運営方法および今後の研究方針について協議し、第二日目に、古代史と中世史から一人ずつ個別報告を行った。2.97年8月2日と3日に広島県立生涯学習センターにおいて第二回研究会を開催した。第一日目に、古代史と近代史から一人ずつ個別報告を行い、第二日目に、中世史から一人個別報告を行った。3.97年10月25日と26日に広島大学文学部において第三回研究会を開催した。第一日目に、中世史から一人個別報告を行い、第二日目に、古代史から一人個別報告を行った。4.97年12月23日と24日に広島大学文学部において第四回研究会を開催した。第一日目に、古代史と近代史から一人ずつ個別報告を行い、第二日目に、古代史と中世史から一人ずつ個別報告を行った。まだ未報告者が3人残っているが、それらを済ませた後、二順目の報告を行い、論点をさらに煮つめると同時に、98年度末に計画している中間報告に向けて、まとめの作業を進める。また、山代宏道は代表として97年10月1日から10月11日にかけて、フランス共和国カーン博物館、連合王国ロンドン大学及びケンブリッジ大学において、研究計画のレヴュ-を受け、前野弘志は同年10月17日から19日にかけて大韓民国江原大学校において行われた第5回韓日西洋古代史国際シンポジウムで成果の一部を発表した。研究をテーマにそくしての各研究分担者による個別報告を、昨年度にまだ終了していない3名が行った。各研究分担者の見通し報告を終了し、全員が本研究の研究目的を再確認、問題点を指摘し、今後の研究計画の修正を行った。本年度はその後、古代地中海世界、中世ヨーロッパ世界、近世・近代ヨーロッパ世界の各グループごとに分かれて会合し、研究分担者による研究報告を行いながら、時代的また地域的な「危機」認識の特徴が抽出できるのかどうかを検討してきた。平成10年6月13・14日(広島大学文学部)今年度の研究の進め方を全員で議論した。その後、昨年度に残されていた3名の個別報告を行った。7月18日(広島県立生涯学習センター)近世・近代史分科会で外部からの研究者2人を招いて報告を受け、本共同研究を遂行するのに役立つ関連テーマを議論した。8月3日(同上センター)古代史分科会で個別報告を行い、科研報告書の企画内容を中心に議論した。

8月8日(同上センター)中世史分科会で5名の個別報告を行い、危機叙述に関する中世的特徴が見いだせるのかどうかを検討した。10月31日(同上センター)中世史分科会で1名の個別報告を行い、中世の聞き認識について議論した。11月26日(同上学部)近世・近代史分科会で中間報告のとりまとめの打ち合わせを行った。11月27日(同上文学部)全体研究会で中間報告書の発行計画、共同研究の進め方、各分科会での研究の進捗状況について報告し、今後の研究計画について意見交換を行った。12月21日(上智大学文学部)古代史分科会で科研報告書の作成状況を報告しあった。12月28日(北九州大学)近世・近代史分科会で個別報告を行い議論した。平成11年3月には、4年間にわたって行われる本研究の2年目の共同研究終了時における研究成果の一部を『西洋の歴史叙述にみる「危機」の諸相(中間報告書)』として発行した。当初の研究計画にしたがって、各メンバーは各自の分担研究を進めるとともに、本年度中に開催した3回の全体研究集会において、成果報告を行い、メンバー全員による批判・意見交換を行った。1)第1回研究集会(6月5・6日、広島大学文学部)豊田浩志「夢の中にあらわれた古代的危機意識-『ペルペトゥアとフェリキタス殉教者行伝』をめぐって」小河浩「傭兵化した市民と市民権機能」宮地啓介「アテナイ海軍の人的資源に関する危機認識」堀井健一「アリストテレス『政治学』にみる民主制ポリスの内紛と危機」2)第2回研究集会(8月26・27・28日、かんぽの宿竹原)長田浩彰「第3帝国下のドイツ・ユダヤ人の危機意識-<ドイツ先遣隊>のハンス=ヨアヒム・シェープスの事例を通じて-」大宅明美「13世紀都市ラ=ロシェルの<危機>」前野弘志「<理想国家>論に見るポリス的危機」水田英実「危機意識を伴う行為の意味」山代宏道「異文化接触と危機認識--ノルマン征服とエドマー」宮城徹「<ノルマン征服>と北部反乱-11世紀イングランドに見る危機の諸相-」佐藤眞典「中世イタリア都市国家形成期の危機の諸相の考察方法」3)第3回研究集会(12月23・24日、広島大学文学部)小崎閏一「シュジェール『ルイ6世伝』に見る王国の危機」友田卓爾「レヴェラーズの権力論と危機意識」岡本明「ナポレオン支配下のドイツとイタリア官僚の危機意識」・第1回研究集会(4月28日・29日・30日広島大学文学部)長田浩彰「『ユダヤ人』とされた人々-第三帝国下のユダヤ系キリスト教徒の動向-1933-1939年-」前野弘志「古典期ギリシアの理想国家論にみるポリス統合の危機意識」豊田浩志「紀元三世紀前半のローマ帝国とキリスト教にみる危機意識」山代宏道「ノルマン征服をめぐる「危機」の諸相」岡本明「ナポレオン支配下ドイツの官僚の危機意識」堀井健一「ポリスの内乱と危機-前411年アテネについての若干の考察」佐藤眞典「都市コムーネの終末をめぐって」・第2回研究集会(8月18日・19日広島県立生涯学習センター)小河浩「前四世紀アテナイの弁論家と一般市民の傭兵意識」井内太郎「テユーダー王朝による支配の正統性の創出-危機克服の試み-」
高脂血症マウスを用いた生活習慣病重責モデルの作成と応用

ヨ-ロッパモリネズミ(Apodemus sylvaticus)には普通食でも血中コレステロ-ル値が高い個体群が出現するためヒトの高脂血症モデルとして使用できる。このマウスに高コレステロ-ル添加食を負荷しヒトの動脈硬化モデルとして有効かを検討した。高コレステロ-ル添加食を5週間負荷すると血中コレステロ-ル値の上昇が認められ、その上昇の程度は高コレステロ-ルマウス群で有意に大きく、脂肪肝や肝硬変などの病理的変化がみられた。血中コレステロ-ル値の増加に伴い内皮依存性弛緩反応の有意な減弱が認められた。高コレステロ-ル血症では血管内皮細胞の血管保護に関与する機能を障害し、それが動脈硬化を引き起こす-因となることが示唆された。ヒトの高脂血症と同レベルの血中コレステロール値上昇変化を示すヨーロッパモリネズミApodemus sylvaticus自然発症高脂血症(AHL)マウスに着目して、高脂血症と動脈硬化成立の因果関係を、特に血管内皮の機能異常の面から検討し、新しい病態モデルとして確立することを目的とする。生活習慣病モデルとして、摂取する栄養素がその機能異常にどのような影響を与えるかを検討するために、AHLマウスに高コレステロール食餌を与え飼育し、血中総コレステロール、中性脂肪などの変化を測定すると共に、コレステロール負荷が血管内皮機能へどのような影響をおよぼすのか、摘出血管の内皮を介する弛緩作用と血管の組織学的変化を観察した。AHLマウスを高コレステロール食餌で飼育することにより、血中コレステロール値と中性脂肪値の上昇が認められた。普通食餌においてもAHLマウスの血管内皮を介する弛緩反応は対象の正常マウスに比べ低下が認められていたが、高コレステロール食餌により更なる血管内皮機能の低下傾向が認められ、この傾向は正常マウスにおいても同様に血管内皮機能低下が認められた。高コレステロール食餌負荷によりAHLマウスの肝臓では、脂肪肝あるいは肝硬変様所見が認められたが、正常マウスにおいては一部マウスでのみ脂肪肝が認められた。さらに現在は食餌栄養成分として、高フルクトース負荷をした食餌でAHLマウスと正常マウスを飼育して血中コレステロール、脂肪値の変化と血糖値におよぼす影響を観察中である。高脂血症は、動脈硬化症の主な危険因子であり、心筋梗塞や脳血管障害の発症に関与する。ヨーロッパモリネズミ(Apodemus sylvaticus)には普通食で血中コレステロール値が200mg/dl以上と高い値を自然発症する個体群が出現するため、家族性高脂血症モデルとして使用できる。このマウスを用いて、血中コレステロール濃度が血管機能に与える影響を検討した。普通食で高コレステロール血症を自然発症するApodemus hyperlipidemic(AHL)マウスと、対照群として正常コレステロール値を示すApodemus normolipidemic(ANL)マウス(200mg/dl以下)の内皮を介する弛緩反応を観察したところ、AHLマウスではANLマウスに比べ有意な内皮依存性弛緩反応の減弱が認められた。さらに高コレステロール負荷が血管機能に及ぼす影響を観察する目的で両マウスに高コレステロール食を5週間負荷した後、内皮依存性弛緩反応を観察したところ、高コレステロール食により両群の血中コレステロール値は増加し、その増加の程度はANLマウスよりAHLマウスで有意に大きかった。また肝重量も増加し、その体重量比はAHLマウスで有意な増加が示され、さらにAHLマウスでは脂肪肝や肝硬変などの病理的変化がみられた。内皮依存性弛緩反応は、高コレステロール食負荷後では両群で弛緩反応の有意な減弱が認められたが、その程度はAHLマウスの方が大きかった。内皮非依存性の弛緩反応は、AHL、ANLマウスの間で差は認められなかった。高コレステロール食負荷による血中コレステロール値の増加と内皮依存性の弛緩反応の減弱の結果から、血中コレステロール値の上昇と内皮依存性弛緩反応の減弱が相関していることが認められた。この弛緩反応は内皮からのNOの合成遊離によるもので、コレステロール値とNO合成減弱の関連をさらに検討していく。高脂血症は、動脈硬化症の主な危険因子であり、肥満症や糖尿病の併発によりメタボリックシンドロームの発症に関与する。ヨーロッパモリネズミ(Apodemus sylvaticus)は普通食による飼育でも血中コレステロール値が200mg/dl以上と高い値を自然発症する個体群が出現するため、高脂血症モデルとして使用できる。

普通食でも高コレステロール血症を自然発症するApodemus hyperlipidemic(AHL)マウスと、対照群の正常コレステロール値を示すApodemus normolipidemic(ANL)マウス(200mg/dl以下)の血管内皮を介する弛緩反応を観察したところ、AHLマウスではANLマウスに比べ有意な弛緩反応の減弱が認められた。さらに血中コレステロール濃度の上昇が血管機能に及ぼす影響を観察する目的で両マウスに高コレステロール食を5週間負荷した後、内皮依存性弛緩反応を観察したところ、コレステロール負荷により血中コレステロール値は増加し、その増加はANLマウスに比べAHLマウスで有意に大きかった。また肝重量の増加が認められ、体重量比はAHLマウスで有意な増加が示され、またAHLマウスでは脂肪肝や肝硬変などの病理的変化もみられた。内皮依存性弛緩反応は、高コレステロール食負荷後では両群で弛緩反応の有意な減弱が認められたが、その程度はAHLマウスの方が大きかった。内皮非依存性の弛緩反応は、AHL、ANLマウスの間で差は認められなかった。内皮依存性の弛緩反応の減弱と血中酸化ストレス濃度の上昇が関連する可能性を検討したところ、AHLマウスでは酸化ストレスの値が高い傾向を示した。以上のことから、血中コレステロール値の増加が酸化ストレスによる酸化コレステロールの増加を引き起こして血管内皮細胞の機能に障害を引き起こすことにより動脈硬化の一因となる可能性が示唆された。
経皮的肝潅流門注化学療法の臨床応用にむけた薬物血中動態に関する研究

本研究の目的は、膵癌肝転移疾患への臨床応用を目標としており、経門脈的PIHPのシステムを構築することである。2018年10月24日に、鹿児島の株式会社新日本科学・安全性研究所の試験施設において、ビーグル犬2匹を用い経皮的灌流化学療法(PIHP)の手技の習得を行った。今回は、手技の習得と安定のため、PIHP原法であるIA-Callの肝動注によるPIHPシステム(実際手技は、以下に記載)を施行した。・実際の手技開腹後胃十二指腸動脈に肝動脈内投与用カテーテルを留置。右大腿静脈より脱血用カテーテルを挿入し,先端を腎静脈分岐部より尾側の下大静脈に誘導固定を行った。左外頸静脈より送血用カテーテルを留置した。左大腿静脈よりもう一本の脱血用カテーテルを肝部下大静脈内に留置した。その際に,両側腎静脈頭側の下大静脈及び右側肋間開胸下に肝上部下大静脈を全周性に剥離し,2ヵ所での下大静脈のcross clampに備えた。下大静脈を部分的に遠心血液ポンプを用いて誘導し、肝部下大静脈内脱血用カテーテルに活性炭吸着筒を装着した後,尾側の脱血用カテーテルと遠心血液ポンプの手前で合流させ,左外頸静脈より送血を行った。肝上部及び肝下部下大静脈の2ヵ所でcross clampを施行し,肝静脈灌流をその他の下大静脈系から分離した。循環動態が安定した時点で被験物質の肝動脈内投与を行い、活性炭除去は肝動脈内投与中の20分間施行した。採血検査にて、適時、薬物濃度測定、生化学検査を施行し、ビーグル犬を安楽死後、肝臓と左腎臓の組織を採取した。今回の実験により、従来のPIHPシステムをイヌにおいて安定して再現可能であり、また試料のサンプリングも可能であることが分かった。今後、薬剤をL-OHPに変更し、また経門脈的な薬剤投与を行うことでL-OHPの経門脈的PIHPの薬物動態及び組織に与える影響を調査する予定である。当初の計画通り、前年度ではイヌにおける従来の経動脈的PIHPが安定して再現可能であることが証明できた。本年度では、イヌにおける従来の経動脈的PIHPをもとに、薬剤の変更(IA-CALLからL-OHP)や薬剤投与経路の変更(動注から門注)を行い、経動脈的PIHPと比較することで経門脈的PIHPの確立に向け基礎的なデータを蓄積する。ほぼ計画通りに運用できており、次年度使用額はほとんど生じていない
染色体構造と挙動の分子生物学的アプロ-チ

本研究の目的は3つの研究項目、1.染色体編成と人工染色体、2.染色体ドメインの機能構造、3.染色体の動態制御の研究の総括と推進にある。平成2年5月に総括班、計画研究班、公募研究の各班員に「連絡メモ」を発送し、平成2年度の班会議、公開シンポジウム、総括班会議の予定を知らせた。8月27日ー29日に宮城県蔵王ハイツで第1回合同班会議を開催した。ハ-ドスケジュ-ルであったが、全班員が一堂に会して研究成果の発表と活発な討論を行なった。参加者は56名であった。班員相互の交流を大いに促進した。1.領域内の研究開始状況、2.領域を促進するための問題点、3.今後の推進方策の3項目からなる報告書を作成し、文部省に提出するとともに総括班員に送付した。11月15日(木)名古屋大学農学部水野猛教授を世話人として、愛知厚生年金会館で公開シンポジウム「染色体ダイナミズム」を開催した。参加者は58名であった。総括班会議の開催:8月28日(火)蔵王ハイツにて総括班幹事会を開き、研究開始状況報告書の作成、公開シンポジウム、染色体ワ-クショップ等につき相談を行なった。また11月15日愛知厚生年金会館にて第1回総括班会議を開催し、平成2年度の研究経過の報告の後、成果とりまとめの様式、染色体ワ-クショップの後援、平成3年度の研究計画について討議の上、それぞれ了承された。サ-キュラ-の発行:No1、No2、No3を発行し、全班員に配布するとともに文部省に送付した。ワ-クショップの後援:平成3年2月18ー20日に三重県湯の山希望荘で開催された第8回ワ-クショップ「染色体の構築」を共催、講演要旨集を作成した。研究成果報告:総括班会議での決定により、初年度の研究成果報告は、各班員の研究成果の概要、主要な論文の標題とサマリ-、学会、シンポジウム等の講演要旨をもって構成することとし、各研究の最近の状況を把握することを主たる目的とした。
アンジオテンシン受容体シグナルクロストークのプロテオームの解析

肥満・糖尿病・高血圧・脂質代謝異常の病態が密接に関連するメタボリック症候群において、レニン・アンジオテンシン系の関与が指摘されている。治療薬を開発するには、互いに影響しあい複雑に絡み合う細胞内情報伝達のクロストークを網羅的に解析することが重要である。そこでシグナノ伝達分子Aktにエピトープタグを付加し、アンジオテンシン受容体刺激を介するシグナル伝達をプロテオーム解析することで、正常時、病態時の蛋白質相互作用、シグナル伝達のクロストークを明らかにすることを目的とした。ラット胸部大動脈由来血管内皮細胞にAkt-strepを一過性に遺伝子導入し、アンジオテンシンII、アンジオテンシンII受容体拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬で10分から30分間、刺激を加えた。strep法によるアフィニティー精製、二次元電気泳動、銀染色の結果、30種類以上の分子の結合を確認した。さらに20種以上のスポットにおいて結合量の変化を認めた。これらを質量分析により同定したところ、その大半は骨格系分子、酵素、分子シャペロンであった。うち、3種類の分子に関して機能阻害を行い、内皮細胞の遊走能、生存能、管腔形成能を評価した。併せてシグナル経路をウエスタンブロット法にて検討した。さらにマウス下肢虚血モデルにて血管新生能の評価を行った。Aktを中心に複数のシグナル伝達系がクロストークし、それらは互いに干渉しあうことで内皮機能に関わっていることが示唆された。近年、肥満・糖尿病・高血圧・脂質代謝異常の病態が密接に関連すると考えられるメタボリック症候群においてもレニン・アンジオテンシン系の関与が指摘されている。治療薬を開発するには、互いに影響しあい複雑に絡み合う細胞内情報伝達のクロストークを網羅的に解析することが非常に重要である。本研究では、TAPタグ付き蛋白を発現させアンジオテンシン受容体刺激を介する細胞内情報伝達系のクロストークを、プロテオーム解析することにより蛋白質相互反応を捕らえることにより各病態に特有な蛋白質相互作用ならびに遺伝子相互作用を明らかにする。(1)遺伝子導入用TAPタグ付きベクターの作成(Erk1,ASK1,Akt)と組み換えアデノウイルス作成:マウスゲノミックDNAをBACライブラリーから遺伝子を得る。pBluescripts (BSK)に遺伝子の翻訳開始部位前後を含む約10kbをプローブとして導入する。遺伝子の翻訳終止点の直前にタグ構造を挿入する。同様にC末端にTAPタグを結合させた後、発現ベクターに挿入する。293細胞にトランスフェクションし組み換えアデノウイルスを作製し増殖させ、組み換えウイルスを精製する。(2)培養血管平滑筋ならびに内皮細胞への遺伝子導入:TAPタグ付き遺伝子組換えアデノウイルを血管平滑筋ならびに内皮細胞に遺伝子導入する。導入後に各種刺激を行い経時的にプロテオーム解析を行う。(3)プロテオーム解析:病態モデルより、経時的に標的臓器からタンパク粗分画液を調製し2段階のアフィニティー精製を行う。アフィニティー精製を行ったタンパク群をMALDI-MS/MSにより網羅的に会合タンパクのアミノ酸配列を決定する。メタボリック症候群の発症機序、治療を考える場合、アンジオテンシンの細胞内情報伝達の解析は必須である。本研究ではエピトープタグ付き蛋白を発現させ、アンジオテンシン受容体刺激を介する細胞内情報伝達系のクロストークをプロテオーム解析することにより、病態時の蛋白質相互作用、細胞内情報伝達のクロストークを明らかにすることを目的とした。まず、ERK1を標的分子とし、ERK1タンパク質複合体の精製を目指してトランスジェニックマウスの作成を試みた。タンパク質複合体の精製法としてTAP法を用いた。ERK1の他にコントロールとして緑色蛍光タンパク質(EGFP)にTAPタグを付加した発現ベクターも同時に作製した。細胞レベルでTAP法の有用性を確認した後、EGFP-CTAP、ERK1-CTAPをマウス受精卵に導入した。その結果、ERK1-TAPの染色への挿入が一例でのみ認められた。