hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
進学前の期待便益と卒業後に得た便益に見る、女性に固有な大学進学の効用に関する研究

2018年3月、高校3年生とその母親を対象とする質問紙調査を実施した。この調査は、高校1年生とその母親を対象に2016年3月に実施した質問紙調査の追跡調査として位置付けられるもので、同一個人の回答の変化を明らかにできるよう設計されている。本研究の最終年度となる2018年度は、上述の質問紙調査の回収を終えて、データセット(パネルデータ)を完成させた。こうして得たパネルデータに基づいて昨年度の研究から得た知見を精査することが、本研究の最終年度となる2018年度の主な課題である。2018年度の研究を通じて得られた主な知見は以下の通りである。(1)2年前に回答した希望進路が高校卒業時に実現しなかった人(進学を希望していたが就職した人、大学進学を希望していたが短大や専門学校に進学した人)は6.5%(n=33)、2年前に希望していたよりもさらに進学することになった人(就職を希望していたが進学した人、短大や専門学校への進学を希望していたが大学に進学または浪人した人)は3.1%(n=16)を占めていた。(2)高校3年生が選択した卒業後の進路は、2年前に回答した希望進路と概ね一致していたと判断できる。高校1年生の3月時点における希望進路の規定要因は概ね、高校卒業後の進路の規定要因に重なると考えられる。このことから、昨年度の研究から得た知見の適切性が示唆される。(3)上の(1)から派生した問いとして、進路希望が実現しづらい人は誰かというテーマを取り上げ、計量分析を試みた。その結果、1高校1年次に返済不要の奨学金を受けていた人や、2高校3年次に高校生等奨学給付金を受けていた人ほど、希望進路が統計的に有意に実現しづらいことが分かった。大学等進学を希望する低所得層への切れ目ない支援が不足している様子が示唆される。ただしサンプルの大きさに難があり、(3)の知見は繰り返し検証されるべきである。本研究課題を達成するためには、教育に関する女性の事後的効用の推計方法の開発が、きわめて重要である。妹尾・日下田(2011)が示唆するように、女性に固有な効用を踏まえた教育の事後的効用(事後的収益率)の測定は、先行研究上の課題であり続けている。そこで本研究は質問紙調査を利用して、女性が当該調査への回答時点までに獲得してきた生涯所得を年齢ごとに直接尋ねることにした。そのような生涯所得を学歴別に推計し、これを、教育に関する女性の事後的効用として捉えようという訳である。さらに、調査票の配付対象を高校1年生の男女とその母親というペアとして、1高校1年生(子供)が想定する教育の期待効用、2その母親が現に獲得してきた教育の事後的効用、3子供の進路選択という3変数の関係を実証的に解明するための質問紙調査を企画した。質問紙調査の企画に際して、先行研究との比較可能性を確保するため、過去に実施されてきた各種質問紙調査を参考にした。そして、高校1年生の男女とその母親というペアが暮らす世帯を調査会社が保有するアクセスパネルから抽出し、高校1年生の男女比と地域構成比が母集団に近似するようなサンプルの確保(計画サンプルサイズ1000)を目指した。調査票の配付・回収方法としては、ウェブ調査を中心にしながら不足するケース数を郵送法で補完するというやり方を用いた。このような質問紙調査を平成27年度3月(平成28年3月)に実施した。本欄執筆時点で調査票の回収は完了しており、計画サンプルサイズが確保されている。なお、この質問紙調査はパネル調査の一部としても設計されていて、第二回調査は平成29年度3月(平成30年3月)の実施予定である。教育に関する女性の事後的効用に係る計測可能な指標を特定の上、1年度目にパネル調査の企画・実施が可能となったため。昨年度3月に高校1年生とその母親を対象に実施した質問紙調査から得られた回答に基づき、データセットを作成した。このデータセットを利用して基礎集計表を作成した。基礎集計から得られた結果を先行研究・各種調査結果と比較するなどして、このデータセットの有用性について確認することができた。こうして、所期の調査目的(1高校1年生(子供)が想定する教育の期待効用、2その母親が現に獲得してきた教育の事後的効用、3子供の進路選択という三者の関係の実証)を果たすための基盤を構築することができた。つづいて、データセットを活用した仮説検証に資する統計的分析の方法論について、共分散構造分析(構造方程式モデリング)を中心に、検討を重ねた。そして、先に述べたような統計的分析の方法を前述のデータセットに適用する形で、実証分析を行った。その結果、平成29年度以降に学会や雑誌などにおいて研究成果を発表することを見据えた基礎的な実証結果を得ることができた。このような研究の過程で、これまでほとんど計測が行われてこなかった女性の事後的収益率の推計も行った。以上のような研究成果は、平成29年度3月(平成30年3月)に行う予定の第2回質問紙調査(パネル調査)計画の修正・改善に資する知見でもある。なお、情報公開が求められていることを踏まえて、質問紙(基礎集計結果を含む)はresearch map上で公表した。質問紙調査にご協力頂いた方々をはじめ、research map上の基礎集計結果には自由にアクセスすることができる。

そのほか、データセットは、様々な研究関心を受けた二次分析に活用されることを期待して作成されたものでもある。こうした関心を念頭に置き、当該データセットを活用した二次分析を行うことができた。統計的分析のためのデータセットが完成した。このデータセットを活用した実証研究の知見は、今後の発表を見据えた基礎的な成果として位置付けることができる。また、当該データセットを用いた二次分析も行うことができた。第一に、女性の大学教育にかかる事後的収益率の計測を行った。その結果、(1)学歴の主効果が最も高いのが高卒であるということ、(2)短大卒と働き方(ライフコース)との交互作用項は統計的に有意でないということ、(3)大卒と就業継続型のライフコース(育休含む)との交互作用項は統計的に有意であるということ、(4)就業継続型のライフコース(育休含む)の大卒女性の事後的収益率は、調査への回答時点で、1.025%だと推計されるということが、それぞれ明らかとなった。第二に、以上のような女性の経験や認知が、その子供(高校1年生)の認知と希望進路に対して如何なる影響を与えているのか検討するため、実証分析を行った。その結果、(1)母親の学歴や配偶者の年収は、母親が認識する教育上の様々な便益への認知を促し、それが子供に伝播するということ、(2)教育上の様々な便益に関する母子の認知のうち、子供の希望進路に有意な影響を与えるのは、母親のそれのみであるということ、(3)子供の認知が希望進路に影響を及ぼすという構図があるとすれば、それは母親の認知が無視されることによって生じる見かけの相関であるということが、それぞれ明らかとなった。以上の成果は後述の学会発表の形で公開されるともに、博士論文に反映された。第三に、母子を対象とする追跡調査を実施した。実施時期は、子供が高校3年生の3月(すわなち2018年3月)という、卒業後の進路が概ね確定したと思われる頃合いとした。「進学前の期待便益と卒業後に得た便益」というテーマを直接受けた事後的収益率の計測を行い、当事者の事前的収益率との含意を検討することができたため。さらには、母親が経験した卒業後の便益と、子供が期待する便益との関係について、実証的に検討することができたため。2018年3月、高校3年生とその母親を対象とする質問紙調査を実施した。この調査は、高校1年生とその母親を対象に2016年3月に実施した質問紙調査の追跡調査として位置付けられるもので、同一個人の回答の変化を明らかにできるよう設計されている。本研究の最終年度となる2018年度は、上述の質問紙調査の回収を終えて、データセット(パネルデータ)を完成させた。こうして得たパネルデータに基づいて昨年度の研究から得た知見を精査することが、本研究の最終年度となる2018年度の主な課題である。2018年度の研究を通じて得られた主な知見は以下の通りである。(1)2年前に回答した希望進路が高校卒業時に実現しなかった人(進学を希望していたが就職した人、大学進学を希望していたが短大や専門学校に進学した人)は6.5%(n=33)、2年前に希望していたよりもさらに進学することになった人(就職を希望していたが進学した人、短大や専門学校への進学を希望していたが大学に進学または浪人した人)は3.1%(n=16)を占めていた。(2)高校3年生が選択した卒業後の進路は、2年前に回答した希望進路と概ね一致していたと判断できる。
アルツハイマー病態における糖鎖変化の網羅的解析

1.ヒト脳脊髄液中におけるβセクレターゼ産物の検出βセクレターゼは病原ペプチドであるアミロイドβの産生にかかわり、アルツハイマー病の発症に中心的な役割を果たしているプロテアーゼである。我々は、βセクレターゼがゴルジ装置内でα2,6シアル酸転移酵素を生理的基質として切断することを報告した。切断を受けたシアル酸転移酵素は細胞外に分泌されるが、その際のN末端としてEFQ...のアミノ酸配列を持つことを明らかにした。本年度は、ヒトシアル酸転移酵素の切断端に対する抗体を作製した。この抗体により、ヒト脳脊髄液における抗原(シアル酸転移酵素)の検出を試みたところ、わずか15μlの試料で明瞭なシグナルを得ることができた。この抗原量を測定することによって、ヒトの脳内のβセクレターゼ活性をモニターできる可能性がある。最近、アルツハイマー病患者脳では、βセクレターゼ活性が上昇することが報告されている。今回開発された抗体を用いて、アルツハイマー病の早期診断を目指している。2.シアル酸転移酵素のアミノプロテアーゼによるプロセッシング3.シアル酸転移酵素のin vivoの切断1.ヒト脳脊髄液中におけるβセクレターゼ産物の検出βセクレターゼは病原ペプチドであるアミロイドβの産生にかかわり、アルツハイマー病の発症に中心的な役割を果たしているプロテアーゼである。2.シアル酸転移酵素のアミノプロテアーゼによるプロセッシング3.シアル酸転移酵素のin vivoの切断
ネグレクトのハイリスク家族支援における「保健師が介入するタイミング」に関する研究

本研究では、ネグレクトのハイリスク家族に対する保健師の「介入するタイミングを図る技術」を明確化する。この技術は「アセスメントや支援の機会」、「機会の作り方」、「認識・判断」の三つを構成要素とする。さらに、介入するタイミングを逃さず必要な支援ができるように、実践モデルを作成し、現場での実用化を目指す。
シロイヌナズナを用いたアブラナ科自家不和合性機構の解明

重要な育種形質の1つである自家不和合性は、近交弱勢を回避し種内の多様性を維持する遺伝的機構としてダーウィンによる発見以来精力的に研究が行われている。本研究は、遺伝学および乳頭細胞トランスクリプトーム解析によって、遺伝資源・ゲノム情報などで優れるアブラナ科モデル植物シロイヌナズナでの本機構崩壊の歴史・過程と自家不和合性ネットワークに関与する遺伝子群を明らかにした。シロイヌナズナが自家不和合性を失った原因を解明するために、シロイヌナズナと同じ遺伝子型を有する近縁自家不和合性種ハクサンハタザオ(Arabidopsis halleri)を選抜し、自家不和合性雄側認識因子SP11/SCRについて単離・比較を行った。その結果、シロイヌナズナSP11/SCRにおいて推定されている第2エキソン内の翻訳を妨げる逆位はハクサンハタザオには存在せず、終止コドンまで正常なアミノ酸情報を有していた。またアミノ酸コード領域外では、第1・第2エキソン間に存在する1157bpのイントロン内にシロイヌナズナゲノムには存在しない258bpのハクサンハタザオ特異的挿入配列が存在していた。RT-PCRによりSP11/SCRの遺伝子発現を比較すると、花発達ステージに沿った発現プロファイルは両種でほぼ同じであったが、シロイヌナズナのSP11/SCRの転写量はハクサンハタザオのそれに比べて約1/10まで低下していた。プロモーター領域の塩基配列を比較すると、翻訳開始点上流262bpまでは両種でほぼ共通していたが、それより上流領域では相同性は極めて低かった。以上の結果より、シロイヌナズナとハクサンハタザオのSP11/SCRには、1.第2エキソンの逆位の有無、2.イントロン内の258bpの挿入・欠失、3.転写量の差異(プロモーター配列の違い)があり、正常なSP11/SCRタンパク質を生成するための遺伝子情報と発現制御機構の両方に違いがあることが明らかになった。これらが自家不和合性機構の維持あるいは崩壊の原因と推測される。今後はこれら3点の違いを修復したSP11/SCRを人工的に作成しシロイヌナズナに遺伝子導入することで、自家不和合性崩壊との直接的な関連を明らかにする予定である。アブラナ科自家不和合性の分子ネットワーク基盤構築のために、レーザーマイクロダイセクション(LM)と次世代シーケンサー(NGS)を用いたArabidopsis属乳頭細胞特異的LM-NGSトランスクリプトーム解析を行った。研究材料にはシロイヌナズナ(自家和合性)と近縁種ハクサンハタザオ(自家不和合性)を用いた。最初に、NGSに用いるための乳頭細胞mRNA調整法を確立するために、以下の2点の実験条件検討を行った。乳頭細胞をパラフィン包埋するための組織固定液は、エタノールやアセトン等の収縮作用のあるアルコールのみではなく膨潤作用のある酢酸との混合液が適しており、シロイヌナズナはエタノール:酢酸=3:1溶液、ハクサンハタザオはエタノール:酢酸=3:2溶液が最適と規定した。またLM単離した極微量の組織片からのmRNA単離・調整は、Pico Pure RNA isolation kitとRiboAmp HS plus RNA amplification kit(共にApplied Biosystems)の併用が適切と規定した。これら方法を組み合わせ、NGSに適するシロイヌナズナおよびハクサンハタザオの乳頭細胞mRNA調整法を確立した。次に、本法により各サンプルから乳頭細胞mRNAを調整し、次世代シーケンサーSOLiD 5500xl (Applied Biosystems)を用いてシーケンス解析を行った。その結果、シロイヌナズナからは65,690,858個、受粉前ハクサンハタザオからは101,509,267個、受粉後ハクサンハタザオからは180,513,651個のシーケンスリードを獲得した。これらシーケンスリードをゲノム配列にマッピングしTAIRデータベースの遺伝子情報と比較した結果、シロイヌナズナおよびハクサンハタザオの乳頭細胞ではそれぞれ17,240種、19,260種の遺伝子が発現していることを明らかにした。これら遺伝子の大部分(14,859種)はすべてに共通するものであったが、種々のバイオインフォマティック解析により自家不和合性関連886種、花粉の吸水促進569種、吸水阻害713種、花粉発芽・誘導569種に関与遺伝子を絞り込み、自家不和合性を含む乳頭細胞における様々な機能を制御する遺伝子群を明らかにした。
赤痢アメーバの貪食特異性を制御する因子の解析

腸管内寄生原虫赤痢アメーバの貪食特異性を解析するために、細胞内の分子スイッチRab8細胞内局在を検討した結果、Rab8はBiPと最も高い共局在を示し、小胞体に局在することが分かった。また、ER exit siteマーカーのSec13とは局在が一致せず、COPII小胞には組み込まれないことが示唆された。よって、Rab8が細胞外に輸送する細胞表面レセプターは、COPIIを介していないことが予測された。赤痢アメーバが宿主細胞や細菌を貪食する際には、異なる細胞表面レセプターが貪食の対象を認識することが必要である。しかし、細胞表面レセプターの細胞膜への輸送調節や貪食対象物の認識機構は殆ど解明されていない。申請者は、ファゴソームに局在する14種の膜輸送因子Rabを手がかりにし、それらの発現抑制株を作製したところ、特定の餌に対して貪食阻害を示すRabがあることを明らかにした。すなわち、Rab8A発現抑制株では、複数の表面タンパク質がRab8A発現抑制株では細胞膜に提示されず、赤血球や大腸菌の貪食阻害の原因となっていることが分かった。Rab8Aは哺乳動物細胞や酵母では、トランスゴルジネットワーク(TGN)に局在し、TGNから細胞表面へのレセプターの輸送に関与していることが報告されている。しかし赤痢アメーバでは、Rab8AはTGNには局在せず、小胞体近傍に局在することが分かった。マクロファージでは貪食初期に小胞体が細胞膜に融合し、貪食胞の膜の供給を行っていることが報告されている。赤痢アメーバでは、小胞体からの細胞表面レセプターの選別輸送にRab8Aが機能している可能性を示している。しかし、細胞表面レセプターの細胞膜への輸送調節や貪食の対象物の認識機構は殆ど解明されていない。中でも、Rab7B発現抑制株は赤血球の貪食が特異的に低下し、またRab8A発現抑制株は赤血球だけでなくラテックスビーズや大腸菌など複数の対象物の貪食効率が低下した。このことはRab7BとRab8Aが異なる表面分子を輸送していること、また貪食物の認識と取り込みに別々の細胞内輸送機構が貪食を調節していることを示している。さらに、Rab8A発現抑制株と野生型の細胞表面タンパク質の分布を比較したところ、複数の表面タンパク質がRab8A発現抑制株では細胞膜に提示されていないことが分かった。これらのタンパク質は、赤痢アメーバの貪食を調節する新規のレセプターの可能性があり、現在同定を試みている。また、赤痢アメーバでは、リソソームやエンドソームのオルガネラマーカーは確立されているが、小胞体やゴルジ体など輸送の初期段階のマーカーは存在しない。そのため、次年度以降にRab8Aの局在を解析するツールを確立する為に、小胞体マーカーとしてBipとSec13、ゴルジ体マーカーとしてSed5とGalT1の抗体を作製し、赤痢アメーバで初めて小胞体とゴルジ体の可視化を行った。Rab8の局在を解析する目的で、さらなる小胞体ーゴルジ体マーカーを確立するために、小胞体残留シグナルKDEL receptorであるErd2をクローン化し、GFP融合タンパク質として発現する形質転換アメーバ株を作成した。前年度に作成した小胞体内腔シャペロンであるBiP抗体との共染色を行った結果、両者の局在はほぼ一致したほか、シスゴルジに局在する繋留因子SNAREであるSed5ホモログとの共局在は観察されなかった。このことは、Erd2の大量発現がシスゴルジでなくERへの蓄積を引き起こしていることが考えられた。そこで、これまでに確立したERとゴルジマーカーを用いてRab8の詳細な局在を検討した結果、Rab8はBiPと最も高い共局在を示し、広く小胞体に局在すると考えられた。よって、Rab8が細胞外に輸送する細胞表面レセプターは、COPIIを介していないことが予測できる。Rab8を介する輸送が小胞体からの小胞を介していないなら、今後、Rab8の機能を欠損した変異株が、小胞体ーゴルジ体間の輸送を介するシステインプロテアーゼの輸送には影響を与えないことを確認する必要があるだろう。興味深いことに、ヒトのRab8とRab10はアミノ酸で66%の同一性を示し、同一のRab8サブファミリーに属している。ヒト

Rab8はTGNから形質膜への輸送を制御するのに対し、Rab10は小胞体の脂質形成のサブドメインに局在していることが報告されている。おそらく、赤痢アメーバのRab8も小胞体上の脂質形成サブドメインに局在し、脂質代謝の異常がメンブレンラフトに局在する細胞表面レセプターの輸送に影響を与えたと推測している。細胞生物学赤痢アメーバが宿主細胞や細菌を貪食する際には、異なる細胞表面レセプターが貪食の対象を認識することが必要である。しかし、細胞表面レセプターの細胞膜への輸送調節や貪食対象物の認識機構は殆ど解明されていない。申請者は、ファゴソームに局在する14種の膜輸送因子Rabを手がかりにし、それらの発現抑制株を作製したところ、特定の餌に対して貪食阻害を示すRabがあることを明らかにした。すなわち、Rab8A発現抑制株では、複数の表面タンパク質がRab8A発現抑制株では細胞膜に提示されず、赤血球や大腸菌の貪食阻害の原因となっていることが分かった。Rab8Aは哺乳動物細胞や酵母では、トランスゴルジネットワーク(TGN)に局在し、TGNから細胞表面へのレセプターの輸送に関与していることが報告されている。しかし赤痢アメーバでは、Rab8AはTGNには局在せず、小胞体近傍に局在することが分かった。マクロファージでは貪食初期に小胞体が細胞膜に融合し、貪食胞の膜の供給を行っていることが報告されている。赤痢アメーバでは、小胞体からの細胞表面レセプターの選別輸送にRab8Aが機能している可能性を示している。ファゴソームに局在する14種のRabの全ての発現抑制株を作製し、そのうちRab7A,Rab5, RabC1, RabC2は形質転換株が得られず、生育に必須な役割をしていることが分かった。また、作製した発現抑制株について貪食への影響を検討したところ、貪食効率に影響を与えたのはRab7BとRab8Aだけであった。よって、交付申請書に記載した貪食初期に機能するRabのスクリーニングは終了した。それだけでなく、次年度以降にRab8Aの局在解析に必要となる、赤痢アメーバで小胞体とゴルジ体のマーカータンパク質も確立した。H25年度はRab8Aの細胞内局在を勢力的に推進させたため、最終年度はRab8Aが輸送する未同定な細胞表面レセプターを同定するとともに、Rab8Aの機能特異性を明らかにするために結合タンパク質の同定を試みる。まず、Rab8A発現抑制株で細胞表面への提示が低下した表面タンパク質の同定を試みるために、細胞表面をビオチン化し、細胞膜を分画することにより、Rab8A発現抑制株で提示が低下している表面タンパク質を質量分析によって同定する。同定した表面タンパク質にタグを付加した形質転換株を作製し、質量解析で同定したタンパク質が細胞膜に輸送されるか、またその発現抑制株を作製すると貪食効率が低下するのかを確認する。結合タンパク質の同定では、Rab8Aのアフィニティカラムを作製し、GTP型またはGDP型のRab8A特異的に溶出されるタンパク質を単離する。他種生物ではRab8Aの結合タンパク質として複数のタンパク質の存在が報告されているが、そのホモログは赤痢アメーバゲノムには存在せず、赤痢アメーバ特異的な結合タンパク質が単離できると期待している。複数の対象物の貪食効率が低下したRab8Aの機能解析を中心に進める。まず、Rab8A発現抑制株で細胞表面への提示が低下した表面タンパク質の同定を試みる。
肥満の長期減量効果を維持する因子-特に満腹液性因子と中枢機能の役割

1995年度から1997年迄3カ年間に福岡市周辺地域より肥満の是正を試みるクリニック教室に応募された肥満者の中から、研究の目的に沿う合計145名(うち男性10名)ついて検討し以下の成績を得た。1)肥満と中枢機能との関係肥満者では時間認知能の異常と食行動の異常が再確認され、肥満の是正に成功した者では、それらの異常が正常に近づく傾向を認めた。a)視床下部満腹中枢刺激因子のひとつと考えられている血中3-ヒドロキシ酪酸(3-hydroxybutyric acid以下3-HBと略す)の濃度は、クリニック開始1.5月後、体重減少につれて著しく上昇した。この上昇はその後次第に減少した。肥満遺伝子ob遺伝子のcDNAをコードするレプチンは摂食抑制作用とエネルギー消費量増加作用を持つことが近年明らかになりつつあるので、本研究でも血中レプチン濃度と体重の推移との関連を1997年より検討した。その結果、肥満者78名の血中レプチン濃度(ng/ml)は平均14.9±0.66であり、血中レプチン濃度とBMI(kg/m^2)、体重(kg数を対数変換した)、体脂肪率(%),体脂肪量(kg),MRIにより測定した腹部皮下脂肪(面積cm^2),内臓脂肪(cm^2)総脂肪(cm^2)との間に高い正相関を認めた(すべてP<0.001)。しかし、血中レプチン濃度は体重の再上昇(いわゆるリバウンド)に伴って再上昇した。即ち、ヒトの肥満者では肥満ラットやマウスの研究結果と異なり、レプチン抵抗性があると考えられた。b)食行動に関するアンケート調査を行い,ひずみの程度を得点化した。BMIと食行動得点との間に正の相関を認めた。食行動の得点は肥満クリニック開始時に比して4ヵ月後有意に減少し、24ヵ月後も減少傾向を続けていた。c)グラフ化体重日記は肥満者の減量と維持に有効であるとする坂田らグループの報告がある。本研究でもグラフ化体重日記法をとり入れ内科指導に用いた。記録を全くしない、1日4回測定せず13回に止めた、途中で記録を中止した等、不十分な体重日記を記録したものでは体重の5%以上の減量に成功したものは4%に止まったのに対し、ほぼ記録をしたものでは70%であった。従って減量とその維持には、グラフ化体重日記法は有用であると考えられた。2)肥満者ではインスリン抵抗性が亢進していた。このインスリン抵抗性の亢進は肥満の是正に伴い正常化した。インスリン抵抗性の改善度と腹部脂肪面積の減少度との間に正相関を認めた。3)リバウンドを予測しうる因子を種々検討したが、グラフ化体重日記法以外に明らかな因子を確定する事は出来なかった。4)日本人の肥満者では、(イ)食事と運動の指導のみでは減量しにくく、食行動異常の治療を中心とした内科的指導により初期に少しでも減量に成功させることが重要であること、(ロ)滅量指導には1日4回の体重測定記録法を用いて食行動異常を自ら認識させ体験させることが重要であること、(ハ)2ヵ年以上肥満是正を維持し続けるには知識よりも、体験による認識など脳機能の関与が大きいこと、(ニ)リバウンドの防止に関する因子としてレプチン抵抗性が考えられるが、レプチンや3HBのみではリバウンドを予測する事は困難であること等の結果を得た。1995年度には、福岡市周辺の地域より肥満の是正を試みるクリニックへの応募者約200名の中から研究の目的に沿う46名を選び、それらについて以下の検討を行い次の様な成績を得た。1.対象者の平均年齢は45歳、Body Mass Index(以下BMIと略す)の平均は30、インピーダンス法で測定した%Fatの平均は37%、収縮期血圧127mmHg、拡張期血圧74mmHgであった。2.運動に伴う心拍数増加度と心電図記録から各個人の適正運動と考えられる目標心拍数を決定して歩行を中心に指導するとともに、3日間秤量法による食事調査を行って食事指導を個別に行った。3.5カ月後、体脂肪量と除脂肪量はそれぞれ有意に減少した。高血圧を有した者10名と、正常血圧の者29名を比較したところ、高血圧者においてのみ体重の減少に伴って収縮期血圧、拡張期血圧ともに有意に減少した。これに反し、正常血圧者では体重の減少に伴う有意の血圧低下は認められなかった。高血圧群の血清マグネシウム濃度は正常群のそれに比し有意に低値であった。3.肥満と中枢機能との関係について、肥満者では程度の差はあれ、全体において体重の減少に伴って視床下部満腹中枢刺激因子のひとつと考えられている血中3-ヒドロキシ酪酸の濃度は明らかに上昇した。特にBMI 26以下の群でその上昇程度が著しかった。BMIと血中3-ヒドロキシ酪酸濃度との間に負の相関を認めたが、今後更に経過を追跡して検討する必要があると考えられる。時間認知能の異常は肥満の是正に伴ってそのバラツキと異常程度が改善傾向を示した。更に肥満者では食行動の異常が明らかに認められ、肥満の是正に伴って異常度が改善する傾向を示した。4.食事性産熱は肥満の程度、甲状腺機能と無関係にバラツキが大であった。平均的食事性産熱とされる10%を越える群と、10%以下の群に2分される傾向が認められたので、今後それらの特徴を見出すことにより食事性産熱の意義と役割を明らかにしたい。

5.今後、200症例を目標に症例数を増加し追跡調査を続けることにより、多変量解析を行い、肥満の是正の維持に果たす独立因子とその役割を明らかにしたい。1995年度から1997年迄3カ年間に福岡市周辺地域より肥満の是正を試みるクリニック教室に応募された肥満者の中から、研究の目的に沿う合計145名(うち男性10名)ついて検討し以下の成績を得た。1)肥満と中枢機能との関係肥満者では時間認知能の異常と食行動の異常が再確認され、肥満の是正に成功した者では、それらの異常が正常に近づく傾向を認めた。a)視床下部満腹中枢刺激因子のひとつと考えられている血中3-ヒドロキシ酪酸(3-hydroxybutyric acid以下3-HBと略す)の濃度は、クリニック開始1.5月後、体重減少につれて著しく上昇した。この上昇はその後次第に減少した。肥満遺伝子ob遺伝子のcDNAをコードするレプチンは摂食抑制作用とエネルギー消費量増加作用を持つことが近年明らかになりつつあるので、本研究でも血中レプチン濃度と体重の推移との関連を1997年より検討した。その結果、肥満者78名の血中レプチン濃度(ng/ml)は平均14.9±0.66であり、血中レプチン濃度とBMI(kg/m^2)、体重(kg数を対数変換した)、体脂肪率(%),体脂肪量(kg),MRIにより測定した腹部皮下脂肪(面積cm^2),内臓脂肪(cm^2)総脂肪(cm^2)との間に高い正相関を認めた(すべてP<0.001)。しかし、血中レプチン濃度は体重の再上昇(いわゆるリバウンド)に伴って再上昇した。即ち、ヒトの肥満者では肥満ラットやマウスの研究結果と異なり、レプチン抵抗性があると考えられた。b)食行動に関するアンケート調査を行い,ひずみの程度を得点化した。BMIと食行動得点との間に正の相関を認めた。食行動の得点は肥満クリニック開始時に比して4ヵ月後有意に減少し、24ヵ月後も減少傾向を続けていた。c)グラフ化体重日記は肥満者の減量と維持に有効であるとする坂田らグループの報告がある。本研究でもグラフ化体重日記法をとり入れ内科指導に用いた。記録を全くしない、1日4回測定せず13回に止めた、途中で記録を中止した等、不十分な体重日記を記録したものでは体重の5%以上の減量に成功したものは4%に止まったのに対し、ほぼ記録をしたものでは70%であった。従って減量とその維持には、グラフ化体重日記法は有用であると考えられた。2)肥満者ではインスリン抵抗性が亢進していた。このインスリン抵抗性の亢進は肥満の是正に伴い正常化した。インスリン抵抗性の改善度と腹部脂肪面積の減少度との間に正相関を認めた。3)リバウンドを予測しうる因子を種々検討したが、グラフ化体重日記法以外に明らかな因子を確定する事は出来なかった。4)日本人の肥満者では、(イ)食事と運動の指導のみでは減量しにくく、食行動異常の治療を中心とした内科的指導により初期に少しでも減量に成功させることが重要であること、(ロ)滅量指導には1日4回の体重測定記録法を用いて食行動異常を自ら認識させ体験させることが重要であること、(ハ)2ヵ年以上肥満是正を維持し続けるには知識よりも、体験による認識など脳機能の関与が大きいこと、(ニ)リバウンドの防止に関する因子としてレプチン抵抗性が考えられるが、レプチンや3HBのみではリバウンドを予測する事は困難であること等の結果を得た。
虚血による心臓の痛みに関わる心臓知覚神経へのＡＳＩＣ３の関与

Isoによる心臓痛にASIC3が関与することを明らかにすることを目的とした。虚血の評価は血清CK-MB、心電図、組織学的解析を用いた。疼痛の評価はIso、モルヒネ(Mor)、ASICs非特異的拮抗薬アミロライド(Ami、30 mg/kg)による行動変化と脊髄後角のc-Fos発現を解析した。CK-MBは有意な上昇はみられず、心電図は特徴的波形がみられた。組織学的には炎症と虚血による低酸素を示した。Iso投与により特異的行動・c-Fos発現はいずれも上昇するが、MorやAmiの前投与によっていずれも有意に減少した。よってIsoによる心臓痛にはASIC3を含むASICsが関与することが示された。【目的・方法】昨年度は先行研究に基づきイソプロテレノール(Iso)を2回投与する方法を行ったが、痛みの評価が複雑になり、作成方法の再検討を要した。本年度はIsoまたは溶媒である生理食塩水(Sal)を1回投与し、投与前後の動物の特徴的行動の変化(Rona et al., 1959)、および脊髄(C7T5)で神経興奮を示すc-fosの発現を検討した。虚血の確認は心電計を用いた(Hiramatsu et al., 1970)。また、その行動が痛みを反映するかの確認のために、モルヒネ投与下でIsoを投与し、特徴的行動の変化を検討した。【結果】Iso投与後ST低下がみられた。Sal投与では投与前後で特徴的行動の変化は見られなかったが、Iso投与では投与後1530分の間が最も特徴的行動回数が多く、その後徐々に減少した。またC7T5でのc-fos発現はC7からT1にかけて発現数が増え、T1が最も多く、その後徐々に発現数は減少した。さらにモルヒネ投与下でIsoを投与すると、特徴的行動は抑制される傾向にあった。【考察】Isoによる虚血条件下でラットは特徴的行動をとり、その行動がモルヒネにより抑制傾向にあるため、痛みへの関与が行動学的に示された。また、Iso投与下で神経興奮のおこる脊髄レベルがラットの心臓での知覚神経の分布に一致することから、形態学的にIsoによる神経興奮が心臓の知覚に関与することが示唆された。現在、この特徴的行動とc-fos発現の変化を指標に、ASIC3がIso投与による心筋虚血によっておこる疼痛に関与するかを明らかにすることを計画しており、本年度の結果は本研究計画を推進する上で重要である。【結論】特徴的行動とc-fosの発現を指標としたIsoによる虚血モデルは、痛みのモデルとして有用である。【目的・方法】昨年度の研究では、虚血性心筋傷害を惹き起こすことが報告されている。イソプロテレノール(Iso)を50 mg/kg単回投与すると、特異的行動と脊髄後角におけるc-Fos発現が増加することが分かった。そこで、Iso投与時に起こるこれらの反応が心臓痛を反映するものなのか、そしてそれらに関与する分子を明らかにすることを今年度の目的とした。心臓虚血の確認は心電図およびTTC染色で行った。モルヒネ前投与下がIso投与による特徴的行動と、c-Fos発現に変化を起こすか調べた。また、心臓痛への関与が報告されているASIC3が本モデルに関与しているかを確認するために、ASICsの拮抗薬Amiloride(Ami)を投与し、行動解析とc-Fosの発現を調べた。【結果】Iso投与によりげっ歯類の心筋虚血に特徴的な波形(ST低下)が見られた。TTC染色は例数が少ないため、今までのところ明確な結果は得られていない。モルヒネ前投与により、Isoによる特異的行動と、脊髄後角におけるc-Fosの発現が有意に減少した。また、Amiの前投与でもIsoによる特異的行動とc-Fosの発現が減少する傾向にある。【考察】Isoによる虚血は心電図にて確認できた。一方心臓痛に関しては、Iso投与後に特異的行動や、c-Fosが有意に上昇し、さらにモルヒネで抑えられる点から、Iso投与によって心臓痛が起っていると考えられる。また、現在のところAmiにより特異的行動とc-Fos発現が減少する傾向にあることから、Isoによる心臓痛にはASIC3が関わっていることが示唆される。【結論】Iso投与により虚血を引き起こされ、心臓痛が生じる。この心臓痛にはASIC3が関与していることが示唆される。【目的・方法】本年度は、虚血心疾患における心臓痛モデルの作成に取り組んだ。

ラットにβ刺激薬であるイソプロテレノール(ISO)を投与すると心筋の壊死が起こり、心筋梗塞のモデルとして報告されている(Rona et al., 1959)。そこで、ラットにISOまたは溶媒である生理食塩水を2日間皮下投与し、投与前後の動物の行動の変化を解析し、心臓痛モデルとしての妥当性を検討した。【結果】ISOを投与した実験群では、投与前に比べて、また溶媒である生理食塩水を投与した対照群に比べて、投与後3060分で自発行動時間が有意に減少することが分かった(P<0.05)。また、すでに報告されているような(Rona et al., 1959)、虚血時に体を横たえるような特徴的な姿勢がみられた。現在、ISO投与後に見られた自発行動時間の減少が、心臓の虚血による疼痛に関与しているかどうか検証するために、自発行動時間が減少しているときに、疼痛の指標として用いられるc-fosの発現が増加していないか検討している。【考察】これまで、心臓の痛みを解析するための有用な動物モデルはほとんど確立されていない。本年度の研究によって、ISOを投与すると心臓の虚血にともなってラットの自発行動が抑制され、虚血時に特徴的な姿勢がみられることが明らかとなった。この自発行動の抑制や特異的な姿勢が心臓の痛みに直接関わっているか、c-fosの発現を検討中である。また、拮抗薬を投与し、自発行動の変化や、c-fosの発現に変化が見られるかどうか確認することで、ASIC3がISO投与による心筋虚血による疼痛に関与しているかを明らかにすることを計画しており、本年度の結果は本研究計画を推進する上で重要である。【目的】本研究では虚血性心疾患での心臓痛動物モデル作成と、このモデルを用いて、in vitroでは虚血による知覚神経の興奮への関与が報告されているASIC3が、個体レベルで心臓の虚血による疼痛に関与しているか明らかにすることを目的とした。【方法・結果】SDラット(200ー400g)にイソプロテレノール(Iso、50mg/kg)を皮下投与したところ、血圧はIso投与1分後から有意な低下を、心拍数は増加傾向を示し、時間とともに回復した。心筋梗塞の肉眼的染色であるTTC染色では明らかな変化は見られず、心筋梗塞の血清マーカーであるCK-MBも変化がみられなかった。組織学的にはIso投与24時間後から心筋内に軽度の炎症性細胞の浸潤がみられた。Iso投与3分後には心電図上特異的な波形(ST低下)を示した。また組織の低酸素を検出できるHypoxyprobe-1を用いたところ、左室心筋では陽性反応がみられた。この反応は右室ではほとんどみられなかった。Iso投与により体幹を伸ばしたり、四肢を伸ばして横たえるといった特異的行動がみられた。この行動はモルヒネ(1mg/kg)を前投与すると有意に減少した。また、神経の興奮を示すc-Fosを脊髄後角で免疫組織化学染色したところ、Iso投与により有意な増加を示し、モルヒネにより有意な減少を示した。ASIC3を含むASICsの非選択的拮抗薬であるAmilorideを前投与すると、この特異的行動とc-Fosのいずれも有意に抑えられることがわかった。【まとめ】Iso投与により急性のβ作用を示し、心筋組織及び心電図から梗塞はみられないものの虚血及び軽度の炎症を示すことがわかった。Iso投与による特異的行動や脊髄でのc-Fosの発現は虚血による痛みを反映することが示唆された。
有機無機ハイブリッド高効率光二次電池の開発

色素増感太陽電池などの有機系太陽電池と蓄電池を一体化した「光二次電池」の高性能化に向けた研究を行った。太陽電池構成部材の薄膜化や、メッシュ電極上に導電性高分子薄膜を形成した電荷蓄積電極を複数組み込むなどの工夫により、光充放電効率や放電容量を改善させた。また、酸化タングステンを電荷蓄積電極材料とすることで、光二次電池の放電初期電圧の向上に成功した。太陽電池システム開発に向け、種々の光照射条件で出力安定性を評価し、光二次電池の有用性を実証した。初年度は、高効率充放電が可能な光二次電池の開発をめざした。電荷蓄積電極部分には導電性高分子の他、さまざまな二次電池材料を検討した。今回採用した三極式セルでは、光アノードから供給されうる電子数が対極での酸化還元反応速度を超え電流値が対極で制限される場合や、電流出力をせずに光照射を行なった場合に、電荷蓄積電極に電子が流れ光充電が行われる。例えば電荷蓄積電極にホールドープした導電性高分子を用いた場合には、電子は脱ドープによって蓄積される。一方、負荷をかけた場合には通常の色素増感太陽電池と同様の光電流電圧曲線が得られる。したがって高効率充放電を達成するには色素増感太陽電池部分の高効率化が不可欠である。本研究では、まず光アノードにFTO上に焼結した酸化チタンナノ粒子に各種の色素を吸着した電極を用いるが、さらなる高効率化を目指し近赤外領域に強い吸収を持つ有機色素の開発を行った。これまで高効率の電子移動を実現できる色素はカルボン酸基のついたルテニウム系色素だけであり、重金属を使わない高効率色素の開発が望まれている。そこで、ポルフィリン二量体やドナーアクセプター分子系の利用も試みた。次に、光エネルギー貯蔵型色素増感太陽電池の電荷蓄積電極部分の大容量化と高効率化を検討した。また、光充電のさらなる高速化なども検討した。なかでも電荷蓄積電極の基板構造を変更することでその特性を著しく向上させることに成功した。また、基板構造を含むセル全体の構造について検討を加え、充放電サイクルについては充放電を100サイクルにわたり行っても、放電電気量に低下が起こらない材料を開発した。太陽エネルギーを直接電気に変換する太陽電池は,自然エネルギー利用の中でも最も実用的なエネルギー生産システムといえる。しかしながら,既存のシリコン系太陽電池は生産コストがかかりすぎる上,シリコン資源の制約もあり,これに代わる低コストで高性能な次世代太陽電池の開発が緊急の課題となっている。こうした中,「色素増感太陽電池」が発表され,次世代太陽電池として期待されるようになった。しかしながら太陽電池には本質的に光強度に依存する出力変動があり,色素増感太陽電池ではその変動が一層大きいことが指摘されている。さらに,エネルギー変換効率が低いため,その高効率化の研究とともに出力安定化対策が必要になっている。われわれは,こうした問題点を解決するため,太陽電池と蓄電池を一体化した「光二次電池」の開発を行った。具体的には,湿式太陽電池の一つである色素増感太陽電池の主要な過程が光エネルギーの化学エネルギーへの変換反応であるという点に着目し太陽電池そのものに蓄電池の機能(エネルギー貯蔵機能)を付与する方法を考え,導電性高分子電極を組み合わせることで充放電が可能な光エネルギー貯蔵型色素増感太陽電池を開発した。太陽電池と蓄電池を一体化したものでは,エネルギー変換効率が低い欠点を蓄電によって補うことができる。本研究では,これまでの研究で得られた基礎的な知見を発展させ,(1)高効率充放電が可能な光二次電池の開発,(2)光量子収率の高い光二次電池の開発,(3)全固体化を目指した有機太陽電池を用いた光二次電池システムの開発,の以上3項目の研究を進めている。本年度は,光量子収率の高い光二次電池の開発を行った。この研究では,色素増感太陽電池に用いる新規ドナーアクセプター色素の合成,色素増感太陽電池部分の近赤外光利用効率のIPCE測定装置での検討,色素の光励起状態のピコ秒時間分解分光の3項目を行った。また,全固体化を目指した有機太陽電池を用いた光二次電池システムの開発の一つとして電子輸送層への導電性高分子の利用を行った。最終年度は、有機無機ハイブリッド素材を用いた高性能光二次電池の構築を目指し、(1)高効率充放電が可能な二次太陽電池、(2)光量子収率の高い光二次電池の開発、(3)全固体化を目指した有機太陽電池を用いた光二次電池システムの開発に関する研究を行った。(1)に関しては、無機系蓄電材料として酸化タングステンに着目し、研究を実施した。酸化タングステンを用いることで、これまで検討を行ってきたポリピロールを蓄電材料とした場合と比較して、放電初期電圧を向上させることが可能となった。

さらに、種々の酸化タングステンの結晶構造と充放電特性との関係を調べ、六方晶酸化タングステンにおいて放電特性を向上させることができた。(2)については、キノイド構造を主鎖骨格とするプッシュプル型色素や、エチニル連結ポルフィリン多量体および縮環ポルフィリン誘導体について検討し、近赤外領域での光量子収率の改善を達成した。またポルフィリンJ会合体を用いた太陽電池について検討した。(3)については、導電性高分子の一つであるポリチオフェン誘導体と酸化チタンナノ構造体からなる有機無機ハイブリッド構造の構築とその基礎物性を検討した。酸化チタンナノ構造体への高分子への均一充填および酸化チタン/ポリチオフェン誘導体界面での高効率電荷分離を狙いとし、新規可溶性ポリチオフェン誘導体を合成した。ポリチオフェン誘導体の平均分子量、共重合比、置換基の種類などを最適化することで、高性能な電荷輸送層を構築できることが分かった。最終的に最も高い効率を得た六方晶酸化タングステンを用いた光二次電池を4直列でつないだモジュールを作成し、出力安定化効果を実証した。
セルエンジニアリングデバイスの研究

生体内部において細胞は高度に組織化され、かつ3次元的な構造を形成している。例えば肝臓の構造を考えると、複数の種類の細胞が構造化されており、また血管や胆管などのマイクロスケールの物質輸送機能が組織内部に集積されている。一般にペトリディッシュなどを用いて行われる細胞培養においては、栄養物や老廃物ならびに酸素などの物質輸送は、主として拡散によって行われるため、ある規模以上に培養組織を大きくできない、あるいは3次元的に組織を構築することが困難である、などの問題が指摘されている。これに対して、マイクロ流体デバイスを用いて、血管に対応するようなマイクロスケールの流れを能動的に作れば、こうした物質輸送の問題が解決できると同時に、マイクロ構造自体が組織を3次元的に構築する際のサポート構造になりうるので、従来の方法では不可能であった大規模な組織構築が可能になると考えられる。本研究では、マイクロ流体環境をうまく制御することにより、組織構築を行うことができるようなデバイスの実現を目指す。特に内部に膜構造を有するようなマイクロ流体デバイスを製作し、複数種の細胞を共培養することによって、膜を隔てて細胞を組織化し、具体的な生体機能を発現するような系について検討行った。平成15年度は、マイクロ流体デバイス内部で肝組織の培養を行うことを想定し、1)肝細胞を長期にかつ生理的な活性を維持しながら培養するための条件の最適化2)内部に膜を有する構造のマイクロ流体デバイスの設計と製作を中心に研究を進める。具体的には、一般に市販されているような肝細胞培養のための培地を用いて培養実験を行い、培養された細胞についてDNAの現存量やアルブミンの生産量、ならびにチトクロームP450などの活性を測定することによって、長期的に肝細胞の活性を保ちながら培養を行うための条件把握を行う。これと並行して、数ミクロン程度のポアサイズを有する膜を流体デバイス内部に作り込むためのマイクロファブリケーション法について検討を行い、製作したデバイス上での培養を試みた.生体内部において細胞は高度に組織化され、かつ3次元的な構造を形成している。これと並行して、数ミクロン程度のポアサイズを有する膜を流体デバイス内部に作り込むためのマイクロファブリケーション法について検討を行い、製作したデバイス上での培養を試みた.
動脈硬化病変におけるS100A13の発現機序と動脈硬化スクリーニング検査の構築

動脈硬化のスクリーニング検査の構築のため、様々な疾患の残余検体でS100A13を測定したが、冷蔵保管の期間が長いほどS100A13の値が高くなることが認められた。すでに有意差が出ている動脈硬化とS100A13の関連に関しては、数日以内に回収し、-80°Cで保存した事からデータに問題ないことを確認した。腎機能低下の患者においても採血後数日以内のサンプルのみで測定したところ、腎機能低下群で有意に上昇した。正常マウスと動脈硬化モデルマウスである高脂肪食給餌ApoE欠損マウスの血清についてS100A13を測定した。これまで使用したマウス用のS100A13キットでは、測定できないことがわかっていたが、新たなマウス用のS100A13測定キット(Pikokine社)が発売されたため、高脂肪食給餌ApoE欠損マウスの血清についてS100A13の測定を行ったが、正常マウスと比べて著明なS100A13濃度の上昇は認められなかった。血清の希釈系列の測定やS100A13のスタンダード用リコンビナントを使ったスパイク試験を行った結果、本キットを使ったマウス血清S100A13の測定は困難であるとの結論に達した。血管平滑筋細胞表面へのS100A13の発現機序に関して、酸化ストレスである過酸化水素刺激によるヒト血管平滑筋細胞の100A13のmRNA発現をRT-PCRを用いて定量的に測定したが、有意な相関は認められなかった。S100A13の発現が確認できなかったため、平滑筋細胞に活性化血小板上清を加えた影響については検討できなかった。動脈硬化進展のマーカーとしてS100A13が有用か検討するために、健常者(20名)及び、動脈硬化症群(頚動脈エコー検査で頚動脈血管壁1mm以上、64名)、高脂血症群(30名)の血中S100A13濃度を測定した。昨年度得られた結果から、キットはR&D社のS100A13 ELISAキットを使用し、サンプルは血清とした。結果、健常者群:74.7 pg/ml、動脈硬化群:129.4 pg/ml、高脂血症群:122.0 pg/mlであった。統計解析により、健常者群ー動脈硬化症群、健常者群ー高脂血症群のp値はそれぞれ0.014、0.080であり、S100A13濃度が健常者群に比べ動脈硬化症群で有意に高いという結果を得た。動脈硬化の他にも血中S100A13濃度が上昇する疾患がないかスクリーニングを行った。S100A13は正常組織では子宮や甲状腺に強い発現が認められることが知られている。そこで、子宮頸がん、子宮体がん、子宮内膜症等の婦人科疾患、あるいは甲状腺がんやバセドウ病、橋本病等の甲状腺疾患で血中S100A13濃度が上昇するのではないかと考え、それらの患者血清についてS100A13濃度を測定したが、健常者との明らかな差は認められなかった。一方、昨年度、S100A13濃度の上昇傾向を報告した腎機能低下の患者についてサンプル数を増やしたところ、やはりS100A13の上昇傾向が見られた。ただ、現時点では糖尿病や腎炎など様々な腎疾患全体で見ているため、有意差検定は行っていない。今後各種腎疾患別のS100A13濃度を調査する予定である。現在使用しているキットは、昨年度の検討により、血漿では測定不能で血清でのみ測定可能であることは判明していたが、さらに冷蔵保存期間が長くなるとS100A13濃度が上昇することが新たに判明した。実際にS100A13濃度が上昇しているのか非特異的反応が強くなっているのかは不明だが採血後数日以内に冷凍保存しなければならないことがわかった。今回調査した婦人科疾患、甲状腺疾患については外科手術前後で比較することも目的としていたが保存条件がサンプルごとに異なったため、正しい数値を得られず、そのためサンプルを収集し直すこととなり時間がかかってしまった。マウスに関するS100A13測定を行っていいないこと,血管平滑筋細胞のS100A13発現に関して正確なデータを取得することができていないなど,課題の進行が送れている.遅れている課題を早急に実施したいと考えている.動脈硬化のスクリーニング検査の構築のため、様々な疾患の残余検体でS100A13を測定したが、冷蔵保管の期間が長いほどS100A13の値が高くなることが認められた。これまで使用したマウス用のS100A13

キットでは、測定できないことがわかっていたが、新たなマウス用のS100A13測定キット(Pikokine社)が発売されたため、高脂肪食給餌ApoE欠損マウスの血清についてS100A13の測定を行ったが、正常マウスと比べて著明なS100A13濃度の上昇は認められなかった。血清の希釈系列の測定やS100A13のスタンダード用リコンビナントを使ったスパイク試験を行った結果、本キットを使ったマウス血清S100A13の測定は困難であるとの結論に達した。血管平滑筋細胞表面へのS100A13の発現機序に関して、酸化ストレスである過酸化水素刺激によるヒト血管平滑筋細胞の100A13のmRNA発現をRT-PCRを用いて定量的に測定したが、有意な相関は認められなかった。S100A13の発現が確認できなかったため、平滑筋細胞に活性化血小板上清を加えた影響については検討できなかった。ヒト血中S100A13濃度を測定できるELISAキットの有効性を評価した.検体は健常ボランティア数名の血清を用い,検体の希釈直線性及び添加回収試験を行った.当初使用したCirculexのキットでは,同一検体内では希釈直線性は認められたものの,標準品の希釈系列から算出した傾きと大きく異なった.標準品を4倍希釈すると吸光度が約1/4に減少するが,血清によっては4倍希釈しても吸光度は約3/4にしかならなかった.また,個体間で希釈倍率による吸光度の変化率が大きく異なった.R&D社のキットを用いた場合,希釈直線性,添加回収率は良好であり個体間の変化率は小さくなった.希釈倍率は416倍が適切であった.検体の種類としては血清が適切でEDTA血漿は不適であった.また,本キットはマウスS100A13も交差するとされているため,動脈硬化モデルマウスApoE欠損マウスの評価もできると考え,通常食野生型マウス,通常食ApoE欠損マウス,高脂肪食ApoE欠損マウスの血清のS100A13量を計測した.しかしながら4倍希釈血清と16倍血清の値がほぼ一致し,3種のマウス間でも顕著な差は認めなかった.血管内皮傷害が疑われる心筋梗塞,HbA1c 10%以上,腎機能低下の患者各5名の血清S100A13量を測定した結果,心筋梗塞,腎機能低下患者においてS100A13濃度が上昇傾向にあった(それぞれp=0.063,p=0.111).検体数が5名と少ないため今後さらに検体数を増やしたい.血管平滑筋細胞表面へのS100A13の発現機序に関しては,今後実施する予定である.当初使用していたキットではS100A13の測定ができなかったが,別のキットで測定できることを示し,ヒト検体を測定する基盤が整った.健常者,心筋梗塞,HbA1c 10%以上,腎機能低下の患者について検体数は少ないものの,血管内皮傷害が疑われる疾患との関連を示すデータが得られた.マウスに関しては正確に計測できているとはいえない結果であった.血管平滑筋細胞表面へのS100A13の発現機序に関しては,大学病院検査部から大学教員となったため,日常の仕事が180度変更したため,思うように研究する時間を取ることができなかった.また,新しい職場になったため,研究環境の構築に時間がかかった.今年度は研究環境を構築できたことから,遅れている課題を早急に実施したいと考えている.S100A13と動脈硬化進展の関連については、ヒトではさらに例数を増やす予定である。動脈硬化モデルであるApoE欠損マウスを用いて血中S100A13濃度が上昇するメカニズムについて解析を行う予定であったが、ヒト用のキットがマウスでは不適であることが去年度の研究で明らかになっていた。最近、いくつかのメーカーからマウス用のS100A13測定ELISA kitが発売されたため、それを用いて野生型マウス、ApoE欠損正常食マウス、ApoE欠損高脂肪食マウスの血清でS100A13濃度を測定する予定である。