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ソシュール言語学とロマンス言語学

早稲田大学・ローマ《ラ・サピエンツァ》大学間交換協定[昭和61年締結]に基づく共同研究計画(言語学部門およびロマンス言語学部門)を科学研究費国際学術研究(大学間協力)によりさらに発展させることに努めた。ソシュール言語学部門:今年度は研究代表者がローマ大学言語科学科デ・マウロ教授とともに共編者として、ソシュール言語理論の現代性を追求し、現代言語学におけるソシュールの再評価の必要性を説く国際シンポジゥム(早稲田大学主催にて開催、1992年4月2日4日)の論文集(プロシ-ディングズ)を1995年9月15日にローマのブルツォ-ニ社から出版できたことを報告しておきたい。出版後改めてこの論文集の総括に当たった。研究代表者はさらに、近年注目されている生成形態論を発展させるためにはソシュールの理論が有効であることをこれまで指摘してきたが、日本ロマンス語学会第33回大会(於青山学院大学、1995年5月20・21日)において「ロマンス語の語形成の論点」と題して具体例とともにこの点をも論じた。『一般言語学講義』のなかの論点の究明に関しては、引続き言語記号の恣意性の絶対および相対的側面と語彙的言語および文法的言語との相関性を語形成研究の視点から見直しながら、いわゆる文法化(A.メイエにより名付けられた)および語彙化現象を改めて追求することにした。この点については第30回イタリア言語学会(於パヴァア大学、1996年9月2628日)において「ロマンス諸言語における語彙化の論点」(原文はイタリア語)と題して研究発表する予定である。ロマンス言語学部門:ローマ大学ロンカリア教授の指導のもとに、少数ロマンス語のひとつであるサルジニア語の現地調査を継続した。今年度は研究代表者が前年度後半(1994年12月)に海外にても活用できるようにイタリア語による説明部分を併用して出版した『サルジニア語基礎語彙集』(大学書林)が、サルジニア島で注目され、各新聞、テレビ・ラジオで報道され、その出版記念会が1995年8月28日オリエ-ナ市で催され、現地の多くの学者との情報交換が可能となった。なお不定詞の特殊用法について調査を開始したところである。第21回国際ロマンス言語学会(於パレルモ大学、1995年9月18日24日)に研究分担者(小畑明)とともに出席、研究代表者は「ロマンス諸言語にみられる地中海起源要素-語頭のC>Gなどをめぐって」(原文はイタリア語)と題してロマンス諸言語の形成過程において従来欧米の学者が例外的な現象としたものの多くが少なくとも音変化の領域では地中海起源要素の反映としてうまく解釈できる由提案する研究発表を行った。研究分担者(小畑明)は、さらにル-マニアにおいて特殊な母音変化が時代的に途切れて起こる現象に注目した。なお、本年度後半においては言語学部門のデ・マウロ教授とともに日本ロマンス語学会(現在会長=研究代表者)の30周年を記念すべく地域(少数)ロマンス語に関する国際シンポジゥムを早稲田大学主催にて同大学で1997年4月17日18日開催するための準備を開始したことも付け加えておきたい。

第21回国際ロマンス言語学会(於パレルモ大学、1995年9月18日24日)に研究分担者(小畑明)とともに出席、研究代表者は「ロマンス諸言語にみられる地中海起源要素-語頭のC>Gなどをめぐって」(原文はイタリア語)と題してロマンス諸言語の形成過程において従来欧米の学者が例外的な現象としたものの多くが少なくとも音変化の領域では地中海起源要素の反映としてうまく解釈できる由提案する研究発表を行った。研究分担者(小畑明)は、さらにル-マニアにおいて特殊な母音変化が時代的に途切れて起こる現象に注目した。なお、本年度後半においては言語学部門のデ・マウロ教授とともに日本ロマンス語学会(現在会長=研究代表者)の30周年を記念すべく地域(少数)ロマンス語に関する国際シンポジゥムを早稲田大学主催にて同大学で1997年4月17日18日開催するための準備を開始したことも付け加えておきたい。早稲田大学・ローマ《ラ・サピエンツァ》大学間交換協定〔昭和61年締結〕に基づく共同研究計画(言語学部門およびロマンス言語学部門)を継続・発展させることに努めた。ソシュール言語学部門:1.ローマ大学T.デ・マウロ教授とともに、ソシュール言語理論の現代性を追求する共同研究を継続した。研究代表者の研究テーマのひとつである語形成に関して、今年度は生成形態論学者たちが指摘する、形態素の概念をめぐる論点が、すでに『講義』の別の弟子のノート(Engler版)にみられることが、ソシュールの現代性を支える新しい発見となった。2.ソシュール国際シンポジウム('92.早稲田大学)の『論文集』の校正も終え、1995年夏出版(ローマにて)される予定である。3.当研究計画にて招へい予定のデ・マウロ教授が国際交流基金により来日されたが、「多言語性とこんにちの言語学」と題する講演('95.3.13於早稲田大学)とともに、多言語の存在理由を検討する機会を得た。ロマンス言語学部門:1.ローマ大学A.ロンカリア教授とともに、第21回国際ロマンス言語学会('95)における研究発表者の研究発表の準備のほか、ロマンス言語学方法論の改善のために少数派ロマンス語に関する国際会議の開催計画(於早稲田大学)についても検討した。2.少数派ロマンス語の現地調査においては、15年前から取組んでいるサルジニア語の基礎語彙を最終的に検討し、出版('94.12)した。さらに人称不定詞の調査も開始した。なお、両研究部門に関し、新しい研究資料の収集を継続した。
乳酸菌ＤＮＡのナノカプセル体を用いた新規食品および飼料素材開発のための基盤構築

オリゴDNA(ODN・短いDNA断片)は、感染症の予防や抗アレルギー作用など優れた免疫機能が期待される機能性分子素材として知られている。これまでに様々な動物試験が行われ、その投与方法としては、1腹腔内投与(i.p.)、2鼻腔に滴下などの手法が一般的で、3尾静脈からの投与(i.v.)例もある。しかしながら、薬剤や食品素材の動物試験において通例となっている、経口投与による報告例はほとんど無く、経口投与による価値を見出すまでには至っていない。本研究において、我々は、ODNのシンプルかつ、低コストな経口投与システムの構築を進め、「DNAナノカプセル(DNanocap)」の開発に成功した。微生物のゲノム配列に由来するオリゴ核酸(ODN)は、感染症の予防やアレルギーの予防など優れた免疫機能が期待される次世代の機能性素材である。免疫機能性ODNには、「免疫増強型(CpG ODN)」と「免疫抑制型(inhibitory ODN, iODN)」が知られている。免疫増強型は、抗体産生能力を高める作用があり、ワクチンアジュバントとして研究が進められている。免疫抑制型iODNは、CpG ODNの受容体として知られるTLR9の細胞内シグナリングを阻害することが知られている。しかし、研究代表者らの研究グループは、昨年iODNの2次構造モデルと免疫機能性の関係を明らかにするとともに、Th2型免疫応答を強く抑制するiODN(iSG3と命名)を発見した(Ito et al., FEBS Open bio 2013)。そこで平成25年度は、「経口摂取により免疫機能性を発揮するODN素材を提案したい」というアイディアに基づき、CpG ODNとiSG3の経口投与試験を計画した。ODNの経口デリバリーシステムとして、ODNカプセル化技術を用いた。すなわち、CpG ODNをカプセル化したCpGcapと同じくカプセル化iSG3(iSG3cap)を、疾病モデルの一つとしてアトピー性皮膚炎モデルマウスに長期連続経口投与し、アレルギー性皮膚炎の発症に与える影響について検証した。その結果、CpGcap群は、NA(無投与)群、Cap(カプセル単独)群と比較して、激しい皮膚炎を誘導し、アレルギー症状を悪化させた。一方、iSG3cap群は、すべての試験で優れた抗アレルギー効果を示した。【目的】微生物由来のゲノムDNAや、その配列に基づき化学合成された、非メチル化CpGオリゴ核酸(CpG ODN)は、感染症、ガン、アレルギー、炎症性疾患の予防および治療などを目的としたワクチンアジュバントとして期待されている。しかしながら、CpG ODNは優れた免疫機能を有しながら、経口的に摂取すると、胃酸や消化酵素の影響により分解されてしまうという最大の弱点がある。本研究では、この課題に取り組み、炭酸カルシウム粒子へODNを包摂したODN-炭酸アパタイト粒子複合体「ODNマイクロカプセル(ODN cap)」を開発した。さらに、ODN capの化学的および免疫学的特性を解析し、ODN capの経口投与試験に向けた基礎的知見を得ることを目的とした。【方法】ODN capとカプセル化していないNaked ODNを、DNA分解酵素、強酸(pH 2.0)、強アルカリ(pH 12.0)、超音波、高温・高圧条件下で処理した。さらに、ODN capとNaked ODNを用いてマウス脾臓細胞を刺激し、各種免疫関連遺伝子の発現量についてリアルタイムPCR法により定量解析した。【結果と考察】ODN capはNaked ODNと比較して、DNA分解酵素、高温・高圧処理に対して非常に高い耐性を示し、強酸処理により緩やかに分解された。すなわち、ODN capを経口的に摂取した場合、腸管局所に到達する可能性が示唆された。また、ODN capはNaked ODNと同様にIL-1α, IL-1β, IL-6, TNF-αmRNAの発現を誘導したことから、カプセル化によるODNの免疫刺激性は失われないことが明らかとなった。今後は、ODN capの腸管粘膜における局在性と標的細胞を明らかにし、疾病モデルマウスを用いたin vivo経口トライアル試験を実施する予定である。しかしながら、ODNは経口的に摂取すると、胃酸や消化酵素の影響により分解されてしまうという弱点があり、これまで経口投与による試験はほとんど行われていない。本研究では、「食べる核酸」の実現に向けて「経口摂取により免疫機能性を発揮するDNA素材を提案したい」というアイディアに基づき、ODNをカルシウム性ナノ粒子に包摂する手法の構築に取り組んだ。

主な成果として、ODNを50-200 nm程度のカルシウム性ナノ粒子に包摂する手法を確立し、胃酸耐性DNAナノカプセル(DNanocap)の開発に成功した。また、DNAナノカプセルが腸管免疫組織に到達し、免疫機能を発揮することを証明した。さらに、強力な免疫抑制機能を有するDNAナノカプセルを用いてアトピー性皮膚炎モデルマウスへ経口投与試験を実施し、皮膚におけるアレルギー性炎症反応が抑制されることを発見した。本研究で示したDNAナノカプセルによる経口デリバリーシステムは、シンプルかつ低コストであることから、優れた腸管DSS手法の一つとして医薬分野のみならず、機能性食品や家畜飼料の開発分野において注目される成果である。以上の成果は、学術論文として米国遺伝子治療学会の機関誌に発表し、特集論文に選定された(Molecular Therapy, 23(2):297-309, 2015.)。動物生命科学研究計画の2年次は、ODNカプセル(ODNcap)のin vivo経口投与試験を進めるとともに、アレルギーモデルマウスにおける機能発揮の有無について調査することを最大目的とした。当初1年半かかることを想定していたin vivo試験は順調に終了し、あとは生体内におけるODNcapの挙動、機能発揮機序を明らかにすることが課題として残っている。研究計画は、順調に進展していると判断した。研究計画初年度(平成24年度)では、オリゴ核酸カプセルの構築を最大目標とした。炭酸アパタイトナノ粒子にオリゴ核酸を包摂した「オリゴ核酸カプセル」の構築に成功し、その化学的特性を明らかにした。また、カプセル化によるオリゴ核酸の免疫機能性が失われないことも明らかにしたことから、in vitroの系で、オリゴ核酸の有用性について一定の評価を得ている。以上のことから、おおむね順調に進展していると判断した。ODNcapのアレルギーモデルマウス経口投与試験において、免疫増強型CpGcapと免疫抑制型iSG3capが全く逆の結果が得られた。この発見を、生体内における細胞分子レベルで明らかにすることが26年度の目的となる。具体的には、ODNcapの短期投与試験を実施し、生体内とくに腸管リンパ組織や脾臓組織における免疫関連分子の発現・抑制解析を進める。以上の研究成果については、速やかな発表(原著論文発表・学会発表)につなげてゆく。1.オリゴ核酸カプセルは優れた免疫調節作用を有しているのか?強い抗アレルギー作用を有していることが明らかとなっているオリゴ核酸を単体で用いた場合と比較して、オリゴ核酸カプセルの抗アレルギー効果について評価する。オリゴ核酸カプセルを腸管免疫細胞に直接処理する他、研究代表者が開発したDNA免疫評価システムを用いて免疫機能の評価を行う。2.オリゴ核酸カプセルは実験動物においてアレルギー症状の軽減効果があるか?アレルギーモデルマウスを作出し、オリゴ核酸カプセルを経口投与した場合のアレルギー症状の軽減・改善効果についてアレルギースコア法、クリニカルスキンテストにより評価する。細胞培養試験によるオリゴ核酸カプセルの免疫機能性解析が平成26年度にずれ込んだため、残額(118,295円)が発生した。オリゴ核酸カプセルの免疫機能性
組織特異的に発現するCa^<2+>制御蛋白質レギュカルチン遺伝子の転写調節機構

本研究は,肝細胞内におけるCa^<2+>に関連した情報伝達系の制御蛋白質レギュカルチン(RC)遺伝子の転写制御機構を解明することを目的とした。RC-RNAは,肝臓に著明に発現しており,臓器特異性がみられる。まず,ラット肝がん細胞(HgIIE)を用いた実験において、RC-RNAの発現,肝細胞内へのCa^<2+>流入により増大され,その情報伝達に関連したプロテインキナーゼCやCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロティンキナーゼ,さらにはプロティンチロシンキナーゼを介した蛋白質リン酸化により増進され,核内転写因子のリン酸化が重要であることを推察した。さらに,肝細胞核に存在する核蛋白質がRC遺伝子のプロモーター領域に結合し,転写活性を高めることを見出し,その核蛋白質のRC遺伝子への特異結合がCa^<2+>シグナリングを介して増進することを明らかにした。そこで,RC遺伝子プロモーター領域における転写因子結合性のコンセンサスシークシンスを解析し,転写因子NFI結合領域が存在することを見出した。肝細胞核蛋白質がNFI結合領域に結合してるのかつについて究明したところ,NFI結合領域に関連したTTGGC配列がその結合に関与することが見出された。さらに,RC遺伝子プロモーター領域のTTGGC配列に結合する核内蛋白質をワンハイブリッド法により検索し,NF-I(AII)と新規の転写因子が結合することを明らかにした。この新規の転写因子のcDNAはクリーニングに成功した。本研究は、細胞内におけるCa^<2+>に関連した情報伝達系の制御蛋白質レギュカルチン(RC)遺伝子の転写制御機構を解明することを目的とした。RCmRNAは、肝臓に著明に発達しており、他の臓器ではわずかで、臓器特異性がみられる。このRC遺伝子(DNA)には組織特異的に結合する核内蛋白質の存在が確認されている。そこで、本年度の研究は、肝細胞内におけるRC遺伝子(mRNA)の発現調節因子と肝細胞核に存在するRC遺伝子に結合する蛋白質のcDNAクローニングを行なった。ラット肝がん細胞(H4IIE)を用いた実験において、RCmRNAの発現は、肝細胞内へのCa^<2+>流入により増大され、その情報伝達にプロテインキナーゼCやカルモデュリン依存性キナーゼの活性化を介しており、また一方、血清刺激によるRCmRNA発現増大にはチロシンキナーゼの活性化が関与することを見出した。RCmRNAの発現は、これらプロテインキナーゼを介した核内転写因子のリン酸化が重要であると推察された。さらに、肝細胞核に存在する核蛋白質のRC遺伝子(DNA)の同定を、そのS^1-上流域DNAフラグメントを用いて検索した。その結果、RC遺伝子に結合する蛋白質を発現する2つのクローンを単離し、約1kbの塩基配列を同定し、新規蛋白質であることを認めた。肝臓に特異的に発現するレギュカルチンの遺伝子は、X染色体に位置し、エクソン構造6個を有する。レギュカルチン遺伝子(ラット)の5'上流のプロモーター領域には、転写因子NFI結合領域が存在し、肝細胞核蛋白質がレギュカルチン遺伝子5'上流域のNFI consensus sequenceに特異結合することがゲルシフトアッセイ法によって明らかにされた。さらに、このNFI結合モチーフは、レギュカルチンmRNAの転写を促進するために重要であることが、ルシフェラーゼアッセイ法によって明らかになった。さらに、ラット肝がん細胞(H4IIE)を用いた実験から、Bay K 8644(Ca^<2+>流入促進剤)の存在下で、核蛋白質のレギュカルチン遺伝子プロモーター領域NFI結合モチーフへの結合が増大し、転写活性が有意に増加することが見出された。このように、レギュカルチン遺伝子の転写活性はCa^<2+>シグナリングを介した機構によって高められることが判明した。実際に、H4IIE細胞培養系において、Bay Kの添加はレギュカルチンmRNAの発現を増大することを認めた。本研究は、肝臓に特異発現するCa^<2+>

シグナリングの制御蛋白質レギュカルチン(regucalcin;RC)の遺伝子の発現調節機構を究明することを目的にしている。特に,RC遺伝子プロモーター領域のNF-1結合配列を認識する肝細胞核因子の結合がプロテインキナーゼによるリン酸化によって変化するのかについて,クローン化ラット肝がん細胞(Hg-II-E)を用いて調べた。その結果,RC遺伝子プロモーター領域のNF-1結合配列(TTGGC)に特異結合する核蛋白質は、プロテインキナーゼC,チロシンキナーゼ及びCa^<2+>/カルモデュリン依存性プロテインキナーゼによってリン酸化を受けることが,それらキナーゼの特異的阻害剤を用いて明らかにした。そこでさらに,RC遺伝子のプロモーター領域に特異結合する転写因子の同定を行なうために、ワンハイブリッド法によってクローニングを行なった。その結果、RC遺伝子プロモーター領域のTTGGC配列に結合する核内蛋白質として、NF-1(IIa)と他の転写因子が関与することが見出された。他の転写因子のcDNAクローニングの結果、新規蛋白質であることが判明した。これまでの知見から、RC遺伝子の発現は、Ca^<2+>シグナリングによって調節されており、核内の転写因子をリン酸化することにより、RC遺伝子のプロモーター領域の、TTGGC配列に結合することにより増進されることが解明された。
単一細胞内質量イメージング実現へのチャレンジ

単一細胞内の質量イメージングを実現するために自作MALDI-FTICRMSの紫外パルスレーザー集光光学系を大幅に改良した。対物レンズの倍率とビームエキスパンダーの倍率及び真空チャンバーの設計も見直すことにより、従来10ミクロンにとどまっていた試料表面でのレーザースポットサイズを5ミクロン以下に縮小し、質量イメージングの空間分解能を格段に向上させることに成功した。また、異なるレーザーを同軸で異なるタイミングで照射することにより、これまで測定が困難であった非常に厚い非導電性試料に対する測定感度を大幅に向上させることに成功した。単一細胞内の質量イメージングを実現するために、2015年度、紫外パルスレーザーの集光光学系の大幅な改良を行った。具体的には、紫外レーザーを集光するための対物レンズの倍率の見直しと新しい対物レンズに光を入射するためのビームエキスパンダー倍率の見直しを行った。従来、倍率3倍のUV対物レンズを使用していたが、これを倍率5倍のUV対物レンズに置き換えた。また、対物レンズに入射するレーザービーム径を対物レンズの瞳径ギリギリにまで拡大し、スポット径を設計限界に近づけるため、ビームエキスパンダーの倍率を10倍とし、再設計したビームエキスパンダーを対物レンズとレーザーとの間に配置した。これにより、集光焦点におけるレーザースポット径を従来の10ミクロンから5ミクロンに改善することに成功した。レーザースポットサイズを2分の1に縮小したため、試料のイオン化に最低限必要なレーザー強度を4分の1に低減できることを確認した。この分、後の微小アパチャーを介して試料表面にレーザー光を照射する際に見込まれるレーザー共同低下を補償するに十分なレーザー強度を確保できる見通しである。レーザースポットサイズを微小化したのちに、シロイヌナズナの葉の切片を作成して、DHBAを表面に蒸着した試料の質量イメージングを実施した。その結果、空間分解能10ミクロン設定で行ったイメージング結果に関して、スポット径10ミクロンの場合と比較してスポット径5ミクロンで行ったイメージングの方が、空間解像能が高い事を確認した。しかしその一方で、スポット径を小さくした影響で、シグナル強度が減少していることも観察された。今後、微小アパチャーを介してレーザー光を照射した場合にどの程度感度が低下するのかを評価し、必要に応じてイオンの引き出し光学系の改良を行わなければならない可能性も生じた。交付申請書に記載した通りの進捗状況である。当初予期していた通りの結果が得られた。単一細胞内の質量イメージングを実現するために2015年度、紫外パルスレーザーの集光光学系を大幅に改良し、従来、倍率3倍のUV対物レンズを使用していたところを倍率5倍のUV対物レンズに置き換えるとともに、ビームエキスパンダーの倍率を10倍とし、再設計したビームエキスパンダーを対物レンズとレーザーとの間に配置することにより、集光焦点におけるレーザースポット径を従来の10ミクロンから5ミクロンに改善することに成功した。2016年度は、厚みを持つ非導電性植物組織の質量イメージング分析において致命的な分析感度低下の原因となるチャージアップを防止する目的で、アブレーション能力の高い波長266nm(Nd:YAG4倍波)パルスレーザーを同軸照射し、物質のイオン化とアブレーションによる厚みを持つ非導電性組織への貫通孔形成によるチャージアップ防止により、植物組織の単一細胞質量イメージングに向けての基礎技術の開発に成功した。波長266nmの強力なパルスレーザー光を試料や生成した分子イオンに照射すると、その高い光子エネルギーに起因して断片化イオンを生成することが明らかになった。これを防止するために、イオン化用の355nmパルスレーザーと266nmパルスレーザーの照射タイミングをマイクロ秒オーダーで精密に制御するなどの工夫を行い、断片化イオンの生成を抑制したうえで、厚い非導電性試料によるチャージアップを効果的に抑え、分析感度を大幅に向上することに成功した。レーザー集光光学系の改良により、当初予期していた通りの結果を得ることに成功した。スポット径を小さくした事により、イオン化に必要なレーザー強度を下げることが出来ることを確認した一方で、当初予期通り、一回のレーザー照射に伴いイオン化する物質量が減り、シグナル強度も減少することが確認できた。28年度は、先端に微小アパチャーを形成したAFMプローブを用いてのイオン化実験を予定していたが、その前に、測定感度を向上させるための方策を推進すべきであると考えられる。質量分析学購入物品の消費税に関して端数が生じたため。28年度の物品購入時に合わせて使用する。
長波長紫外線照射リボフラビンの障害作用と弾力繊維変性

リボフラビンにUVA照射すると強い細胞障害性が出現し、この細胞障害性はカタラーゼにより消失した。従って、この細胞障害性のほとんどの部分は過酸化水素によるものと思われた。このことは、産生された過酸化水素と同濃度の過酸化水素溶液で細胞を処理した場合の細胞障害性とほぼ同程度であったことからも確認された。過酸化水素濃度の定量は、西洋わさびペルオキシダーゼへの過酸化水素の結合がその吸収波長の変化をもたらすことから測定し得た。低酸素条件下でリボフラビンへのUVA照射を行うと細胞障害性は強く現れた。リボフラビンへのUVA照射による過酸化水素産生は、低酸素下では大気下でよりも早いが、照射初期での産生が多いことによるものであることが明らかとなった。十分量のUVA照射を行うと、酸素条件にかかわらずほぼ同量の過酸化水素産生が見られた。リボフラビンにガラスフィルターを通して水銀ランプを照射し、発生するラジカルをスピン捕捉剤DMPOを用いて検出すると、ヒドロキシラジカル・リボフラビンラジカル・スーパーオキシドが検出された。ヒドロキシラジカルは照射初期に多く、リボフラビンラジカルは照射後2分以降ほぼ一定の産生が見られた。リボフラビン存在下でエラスチンをUVA照射あるいはエラスチンを過酸化水素処理すると、エラスターゼの分解速度で見る限りこれらの処理による作用は認められなかった。エラスチンをエラスターゼで分解した後に一ヶ月間過酸化水素処理すると、可溶性エラスチンは構造変化を示した。この速度は、過酸化水素濃度の高い方が速かった。この変化は無処理の可溶性エラスチンの自然的変化を速める方向に作用した。皮膚の皺は主として光老化により発生する。皺は弾力線維の変性破断によるとされている。弾力線維の変化は、長期大量の日光照射により真皮上中層に人を選ばず生ずる。従って、普遍的に存在する生体内物質がクロモフォアであり、作用光はUVAやそれより長波長の光であると考えられる。本研究ではクロモフォアをビタミンB2(リボフラビン)、光をUVAに限ってこれらの作用による弾力線維の変性をin vitroで検討している。リボフラビンにUVA照射した場合にラジカルの産生が予想されるが、電子スピン共鳴を用いた実験ではこれを示唆するデータが出つつある。ラジカルから過酸化水素が形成される経路は今の所不明であるが、カタラーゼ処理の有無によるUVA照射リボフラビン溶液の、コロニー形成能を用いた細胞障害性の検討から、その液にはかなり高濃度の過酸化水素の発生していることが知られた。この過酸化水素の定量がhorseradish peroxidase(HRP)によって可能かどうかを検討したところ、過酸化水素の濃度に比例して、HRPの結合量の増加が見られた。従って、HRPによる過酸化水素の濃度測定が可能であることが分かった。一方、低酸素下でリボフラビン溶液中の細胞にUVAを照射すると、予想に反し空気中より強い細胞障害性が生じた。興味ある現象と考え、詳しく検討に入る予定である。エラスチンに対する本クロモフォアとUVAの作用を見るために、短命な活性酸素と長命な活性酸素の両者が存在し、より強い作用が期待できる条件で検討した。リボフラビン存在下でエラスチンにUVAを照射し、エラスチンの変化をエラスターゼによる分解速度で検討したところ、少量のUVA照射では分解速度には変化が無かった。1、UVA照射リボフラビン溶液中の過酸化水素量を西洋ワサビペルオキシダーゼを用いて測定した。リボフラビンからは過酸化水素産生はあまり見られないというのが一般的な説であるが、本研究で用いた条件では、リボフラビン1分子から約半分子の過酸化水素が産生されることが分かった。2、生体の酸素濃度は大気中の約1/4である。

生体に近い条件でリボフラビンにUVA照射された場合の意義を評価するため、低酸素下でリボフラビンにUVAを照射し、細胞障害性を調べた。低酸素下では照射初期により強い細胞障害性が発生したが、長時間照射では細胞障害性に差はなかった。この理由は低酸素下では早期に過酸化水素が発生することによると分かった。3、リボフラビンに水銀ランプを照射し、発生するラジカルをスピン捕捉剤DMPOを用いて検出した。ヒドロキシラジカル付加物とリボフラビンラジカルの産生が明瞭に捕らえられた。その他にスーパーオキシド付加物も認められたが、明瞭なスピン像としては捕らえることはできなかった。4、10^<-2>から10^<-7>モルの過酸化水素を8分あるいは16分細胞に曝露し、細胞障害性を調べた。8分処理では10^<-5>を越える、16分処理では10^<-6>を超える濃度の場合に細胞障害性が出現した。ここで得られた結果は、光線照射によりボフラビンから発生する過酸化水素の細胞障害性の強度と一致していた。5、弾力繊維は過酸化水素処理にて大きな変化を受けず、処理の有無にかかわらずエラスターゼによる分解に差を認めなかった。6、エラスチンをエラスターゼで分解した可溶性エラスチンに過酸化水素処理を行うと、より高濃度あるいはより長時間処理を行うと、可溶性エラスチンにより速く構造変化をもたらした。その構造変化は可溶性エラスチンを無処理で長期間放置した変化と同じものであった。
吐き出し行動で見られる摂食神経回路網のシナプス修飾の研究

アメフラシは、海藻のアオサを好んで食べ、マクサなどを嫌って吐き出す。摂食と吐き出し口の運動パターンの違いは、閉口運動ニューロン(JC)の放電時期の推移により発現する。摂食時のJC放電パターンを形成するMAの活動をマクサ吐き出し時に調べると、放電活動は変わらないが、MAがJCの放電を抑制するシナプス電位が減少することを見いだした。このシナプス修飾には脳神経節に存在するニューロンが寄与すると考えられた。本研究ではこの種の修飾ニューロンを探索することを主な目的とした。実験ではまず、脳神経節と口球神経節を結ぶ神経の断端から逆行性に染色し、脳神経節M、Eクラスターに10個以上の細胞体を確認した(CBニューロン)。これらのうちマクサ味刺激のみに応答するものが目的ニューロンの可能性が高い。これら細胞体は小さくニューロパイルに埋っており、微小電極での長時間記録は困難であった。そこでスパイク活動の検出に使われているカルシウムイメージング法を試みた。同定済みニューロンにCalcium Green-1を導入し、放電に伴う蛍光強度変化を調べると放電頻度、期間をよく反映した。そこで動物の脳神経節、口球神経節、口唇、前触角からなる試料を用い、CBに色素導入後、口唇、前触角部への味刺激に伴うニューロンの蛍光強度変化からその応答性を調べた。味刺激には海藻からの抽出液を用いた。味刺激による応答からMクラスターのものは3タイプに分類された。I;アオサ、マクサともに蛍光強度が増大するもの。II;アオサに比べマクサのほうが蛍光強度が大きく増大するもの。III;アオサ、マクサともにほとんど変化しないもの。またEクラスターのものはいずれの刺激でも蛍光強度はほとんど変化しなかった。以上の結果、MクラスターのタイプIIが目的を満たすニューロンである可能性が高く、今後このニューロンの機能、入力経路などを明らかにする。
鍼鎮痛と拮抗薬の関係について

鍼鎮痛は、中枢および末梢に介在するオピオイドレセプターが関与し鎮痛を引き起こすと考えられている。また、炎症組織でオピオイドの遊離が確認されている。そこで、ラット逃尾潜時(Tail Flick Latency:TFL)および加圧式鎮痛効果測定装置(Randall Selitto Test)を指標にオピオイド拮抗薬を用いて、鍼鎮痛時のオピオイド物質が最も効果的に作用している鍼通電条件を検討した。鍼鎮痛法は、ラットにカラゲニンを左後肢足底に皮下投与し、痛覚過敏を生じさせ、経穴(足三里)の皮下前脛骨筋に直径0.20mmの鍼を約10mm刺入し、低頻度(3Hz)および高頻度(100Hz)通電を行った。その結果、低頻度(3Hz)通電では両側で鎮痛効果が見られたが、100Hz通電では、左後肢でのみ鎮痛効果が出現した。また、オピオイド拮抗薬ナロキソンの腹腔内投与により3Hz鍼通電による痛覚過敏の回復は通電終了3時間後に部分的に拮抗され、100Hz鍼通電では5時間後に部分的に拮抗された。一方、3Hz鍼通電による左後肢の痛覚過敏の回復は、ナロキソンの炎症局所への投与により有意に拮抗された。このことから、末梢でのオピオイドレセプターが関与した可能性が考えられた。鍼鎮痛は、下行性疼痛抑制系の賦活や種々の内因性オピオイド物質を遊離させ鎮痛を引き起こすものと考えられている。その結果、平成11年度は、ラットにカラゲニンを左後肢足底に皮下投与し、両後肢の痛覚過敏を生じさせ、経穴(足三里)の皮下前脛骨筋に直径0.20mmの鍼を約10mm刺入し、低頻度(3Hz)および高頻度(100Hz)通電を行った。このことから、末梢性オピオイドレセプターが関与した可能性が考えられた。
骨髄微少環境と形質細胞の相互作用に基づいたPOEMS症候群の発症機構の解明

POEMS症候群は単クローン性形質細胞を背景とした稀な傍腫瘍症候群であり、その形質細胞の意義は不明である。我々は本症候群患者骨髄形質細胞を純化し、網羅的遺伝子解析を行った。全エクソン解析では14例に334遺伝子,359体細胞変異が同定された。MMで高頻度に検出されるMAPK経路やp53遺伝子には変異は検出されなかった。51遺伝子に絞りターゲットシーケンスを行ったところ、10遺伝子に重複する変異が同定された。RNAシーケンスによる主成分分析ではPOEMSとMGUS,MMを明確に分類することが出来た。今回の結果から、POEMSの遺伝学的背景はMMやMGUSとは明らかに異なることが示された。本研究では、POEMS症候群患者の骨髄細胞の遺伝子変異を網羅的に解析し、これを正常体細胞の遺伝子配列と比較する事により、POEMS症候群発症のメカニズムをゲノムレベルで解明することを目的とする。そこで我々はこれまでに本症候群患者骨髄細胞からMACS法を用い、CD138陽性形質細胞,陰性細胞(骨髄間質細胞を含む)をそれぞれsortingし、CD138陰性細胞からin vitroにおける骨髄間質細胞培養系を確立した。現在,8名の患者からこれらの試料を作成してDNAを抽出し、まず骨髄形質細胞の網羅的ゲノム遺伝子解析を開始した。その結果、形質細胞にいくつかの遺伝子に変異を認めており、現在それらの遺伝子変異についてさらに詳細に解析を行っている。また同様の方法で得られた形質細胞もしくは骨髄間質細胞からRNAを抽出し、遺伝子発現解析を行う準備を行っている。また我々は以前本症候群のモノクローナル形質細胞の再構成λ鎖はわずか2種類のgermlineに由来することを見出した。そこで,より詳細に解析するために,次世代シークエンサー(NGS)を用いて免疫グロブリン重鎖,軽鎖を網羅的に解析するとともに,微小残存病変の評価法を確立する方法を現在構築中である。患者骨髄細胞からDNAを抽出し、免疫グロブリンλ鎖のCDR framework領域にプライマーを設定することによりNGSで解析が可能となり、今後診断時、および治療後の検体を用いて解析を行っていく。本研究ではPOEMS症候群患者の骨髄細胞の遺伝子変異を網羅的に解析し、これを正常体細胞の遺伝子配列と比較することにより、POEMS症候群発症のメカニズムをゲノムレベルで解明することを目的とした。そこで我々はこれまで本症候群患者骨髄細胞からMACS法を用い、CD138陽性形質細胞、陰性細胞(骨髄間質細胞を含む)をそれぞれsortingし、CD138陰性細胞からin vitroにおける骨髄間質細胞培養系を確立した。現在までに18名の初発あるいは増悪時の患者からこれらの試料を作成してDNAを抽出し、次世代シークセンサーを用いてwhole exome sequence解析を行った。その結果、CD138陽性形質細胞からは1症例あたり平均15の遺伝子変異が認められ、そのうちPCDH10、EML4などを含むいくつかの遺伝子がrecurrent mutationとして同定された。現在deep sequencingを行ってさらに詳細に検討を進めている。また、POEMS症候群のモノクローナル軽鎖はほとんどがλ鎖であり、しかもIGLV1-40とIGLV1-44というわずか2種類のgermlineに由来することが報告されている。そこで、次世代シークエンサーを利用してこのλ鎖レパトアを臨床経過とともに詳細に解析した所、POEMS症候群のモノクローナル形質細胞クローンサイズは血清VEGF値と相関し、再発時にはclonal evolutionを示している症例も求められた。以上の結果から、特徴的なgermlineに起因するモノクローナルλ鎖は疾患の発症と進展に密接に関係していることが示された。現在まで18例の解析を終了し、ほぼ予定した症例の解析を終了し、多くの遺伝子変異を同定で来た。また、λ鎖レパトア奇跡により、モノクローナルλ鎖クローンが本症候群疾患発症・進展に大きく関わっていることを示すことが出来た。本研究では、POEMS症候群患者の骨髄形質細胞の遺伝子変異を網羅的に解析し、これを正常体細胞の遺伝子配列と比較することにより、POEMS症候群発症のメカニズムをゲノムレベルで解明することを目的とした。そこで我々はこれまで本症候群患者骨髄細胞からMACS法を用い、CD138陽性形質細胞をsortingし、CD138陰性細胞からin vitroにおける骨髄間質細胞培養系を確立した。現在までに20名の初発あるいは増悪時の患者からこれらの試料を作成してDNAを抽出し、次世代シークセンサー(NGS)を用いてwhole exome sequence解析を行った。その結果、1症例あたり平均15の形質細胞の遺伝子変異が認められ、そのうちPCDH10、EML4などを含むいくつかの遺伝子がrecurrent mutationとして同定された。これらの同定された遺伝子と血液腫瘍にて変異頻度の高い遺伝子についてdeep sequencingによる解析を行い,さらに詳細に解析した。また,POEMS症候群患者骨髄形質細胞からRNAを抽出し,RNAシークエンスを行い,多発性骨髄腫,MGUSと比較した所,これらの疾患とは異なる遺伝子発現プロファイルを有していることが明らかとなった。そこで、NGSを利用してこのλ鎖レパトアを臨床経過とともに詳細に解析した所、POEMS症候群のモノクローナル形質細胞クローンサイズは血清VEGF値と相関し、再発時にはclonal evolutionを示している症例も求められた。以上の結果から、特徴的なgermlineに起因するモノクローナルλ

鎖は疾患の発症と経過に密接に関係していることが示された。POEMS症候群は単クローン性形質細胞を背景とした稀な傍腫瘍症候群であり、その形質細胞の意義は不明である。我々は本症候群患者骨髄形質細胞を純化し、網羅的遺伝子解析を行った。全エクソン解析では14例に334遺伝子,359体細胞変異が同定された。MMで高頻度に検出されるMAPK経路やp53遺伝子には変異は検出されなかった。51遺伝子に絞りターゲットシーケンスを行ったところ、10遺伝子に重複する変異が同定された。RNAシーケンスによる主成分分析ではPOEMSとMGUS,MMを明確に分類することが出来た。今回の結果から、POEMSの遺伝学的背景はMMやMGUSとは明らかに異なることが示された。すでに8例の診断時の患者骨髄細胞から形質細胞を分離し、そのゲノム解析を行うことが出来た。また、次世代シークエンサーを用いたモノクローナルλ鎖の解析の方法もほぼ確立出来ている。さらにdeep sequenceによって遺伝子変異をより詳細に解析する。Recurrent mutationとして同定されたPCDH10やEML4などのPOEMS症候群発症における役割について機能解析を行う。血液内科さらに症例数を増やしてゲノム解析を行う。そして同定された遺伝子変異について、当科で保存されている70例のPOEMS症候群患者サンプルを用いてその遺伝子頻度について検討を行う。また、骨髄間質細胞の培養系はすでに確立したが、その細胞を用いて網羅的エクソーム解析を行う。さらに骨髄微小環境の病態への関与の解析するため、患者骨髄細胞を用いて、骨髄微小環境において骨髄間質細胞が産生するサイトカイン、増殖因子を網羅的に解析し、さらにexosome, miRNAを同定して、疾患への関与を解析する。
複数の金融危機が併発する理論的枠組みの構築・政策の解明

一つ目の研究として、預金取り付けと債務危機の両方が起こる二国モデルを構築し、二国間において危機の伝染がどのような状況で起こるのか、どのようなときに他国への資金援助が両国の厚生を改善するのかを分析した。二つ目の研究は、銀行の預金取り付けおよび金融危機が伝染するもとでの負債の規律付けの効果に関する研究を行った。さらに、情報の精度が金融危機に及ぼす影響も探った。これらの研究成果は、英国の王立経済学会などにおいて発表された。未曾有の大規模な金融危機に見舞われる近年、金融危機が併発するメカニズムを明らかにし、それに対処する望ましい政策を模索することが求められている。既存研究では理論モデルを構築するにあたって簡便化を図るために金融機関を一種類だけしか扱っていないものが多く、金融危機の相互作用を分析したものは希少である。また、それを扱っていても預金取り付けといった今日の金融危機に特徴的な現象を明示的に分析したものはさらに少ない。銀行やそれと類似した役割を持つ投資会社が中心的な役割を果たし、尚且つそれらが相互に作用している昨今の金融危機において、その分析を行う必要性は非常に大きい。本研究では複数の金融危機が同時に起こる理論的枠組みを構築し、政策含意を探る。具体的には以下の3つに焦点を当てる。1近年においてギリシャをはじめとする欧州各国では、公的債務がデフォルトに陥る危険が高まると同時にそれらの国において銀行危機が発生した。ここでは、複数の国において公的債務危機と預金取り付けが同時に起こるような枠組みを構築し、自国による公的資金の注入や他国による資金援助の効果について分析する。2金融機関が一種類しか扱われていない従来の理論環境下では、短期負債あるいは要求払い預金が投資家を規律付けるとされてきた。ここでは、複数の金融危機が相互に関連しあうモデルを構築し、この下で規律付けの効果を再検討する。3投資家の行動と多くの金融機関や債券市場に影響を及ぼす資産価格の情報構造との関係について分析する。現在のところ預金取り付けと債務危機に関する研究、および金融危機が伝染するもとでの負債の規律付けの効果に関する研究を進めている。一つ目の研究については、預金取り付けと債務危機が互いに影響しあい、ある種の悪循環があることを示すモデルを過去に構築している。本プロジェクトでは、このモデルを2国モデルに拡張した。ある国の銀行・債務危機は、もう一方の国に伝染する。両国の危機を防ぐには、財政的に余裕のある国が他国に金融支援を行うことで回避することができる。しかしながら、両国の資金が十分になければこのような2国間の資金の融通が必ずしもうまくはいかない。限られた資金で両国の銀行・債務危機を防ぐには、両国のファンダメンタルズに関する情報の精度が大きく影響することが分かった。二つ目の研究では、短期負債が銀行を規律づけるとする先行研究を再検討した。先行研究では、要求払い預金あるいは短期負債といった形で銀行が借り入れをおこなっていると、ひとたび銀行経営者が債権者の意に反する行動をとると銀行から預金が引き出される。これを危惧する銀行経営者は債権者の利益にかなった行動をとろうとする。しかしながら、本研究のように金融危機が伝染するもとでは、ある銀行の収益は銀行以外の金融市場からも影響を受ける。従って、銀行経営者のインセンティブは金融市場の状態に依存する。このような環境においては、ある条件のもとでは要求払い預金および短期負債が銀行経営者を規律付けないことがあることが示された。予定通り、現在のところ2本の論文を完成に近い形にしている。現在のところ預金取り付けと債務危機に関する研究、および金融危機が伝染するもとでの負債の規律付けの効果に関する研究を行い、学会や研究会において発表した。本プロジェクトでは、このモデルを2国モデルに拡張し、さらなる分析を行い望ましい政策を探っている。先行研究では、要求払い預金あるいは短期負債といった形で銀行が借り入れを行うと、ひとたび銀行経営者が債権者の意に反する行動をとると銀行から預金が引き出される。また、資産価格と情報の精度に関する研究にも着手しつつある。2本の論文を作成済みであるが、その改訂作業が長引いている。そのため、3つ目の研究課題への着手が遅れている。預金取り付けと債務危機に関する研究、および金融危機が伝染するもとでの負債の規律付けの効果に関する研究を行い、英国の王立経済学会などにおいて発表した。本プロジェクトでは、このモデルを2国モデルに拡張し、さらなる分析を行い望ましい政策を探った。

しかしながら、本研究のように金融危機が伝染するもとでは、ある銀行の収益は銀行以外の金融市場からも影響を受ける。従って、銀行経営者のインセンティブは金融市場の状態に依存する。このような環境においては、ある条件のもとでは要求払い預金および短期負債が銀行経営者を規律付けないことがあることが示された。さらに、情報の精度が金融危機に及ぼす影響も探った。どの投資家の得る情報がより正確か、あるいは、いずれの金融市場の情報がより精度が高いかといったことが、公的債務危機、預金取り付け、金融危機の伝染、規律付けなどに影響を及ぼすことが分かった。これらの知見は、情報開示の是非や金融規制に関して今後分析していくにあたって有益な示唆を与える。一つ目の研究として、預金取り付けと債務危機の両方が起こる二国モデルを構築し、二国間において危機の伝染がどのような状況で起こるのか、どのようなときに他国への資金援助が両国の厚生を改善するのかを分析した。二つ目の研究は、銀行の預金取り付けおよび金融危機が伝染するもとでの負債の規律付けの効果に関する研究を行った。これらの研究成果は、英国の王立経済学会などにおいて発表された。現在のところ研究概要における1と2について研究をすすめている。1については、公的債務危機と銀行危機が同時に複数国において起こる理論モデルを構築し、政策含意の導出を試みている。2に関しても予定通りの理論的枠組みを構築して論文の形にまとめ上げ、ワークショップにおいて発表し得られたコメントをもとに加筆・修正を行った。完成させた2本の論文を学会や研究会において発表し、学術誌へ投稿する。さらに、3つ目の研究課題についても取り組む。既に作成した論文を海外の著名な学会において発表し、さらに改訂を行う。3つ目の研究課題についても着手する。国際金融研究概要における1と2をさらに完成度の高いものに仕上げつつ、随時それらを学会・ワークショップにおいて発表する。また、3についてもとりかかる。初年度において他の研究費を獲得し、それに伴って本研究費の使用が一部削減されたため。当初は海外での研究発表を予定していたが、次年度に持ち越すこととしたため。当初は国際学会参加にかかる旅費に本予算の一部を使用する予定であったが、他の研究費から使用したため。国際学会・研究会にかかる旅費、論文の英文校正費などにあてる予定である。海外での研究発表を行うための旅費に充てる。次年度は、論文発表のため学会・研究会に参加する。その旅費にあてる。また、数式処理ソフトとPCを購入する予定である。
自覚的認知機能低下患者における臨床的アルツハイマー病発症前診断法に関する検討

もの忘れを主訴に慶應義塾大学病院メモリー外来、ないしは精神神経科を受診したが認知機能にあまり低下が認められなかった患者の中で、本研究における(Subjective Cognitive Decline: SCD)SCDの選択基準に合致し、文書で同意が得られた42例(アミロイドPET検査陽性10例、陰性32例)について、アミロイドPET検査、認知機能検査、心理検査等の結果から、SCDの臨床的・神経心理学的特徴などを解析・評価した。アミロイドPET陽性群と陰性群ではおおむね神経心理学的検査上の差はないが、論理性記憶検査の遅延再生課題の結果では陽性群で成績に低下傾向がみられた。もの忘れの自覚の程度は抑うつ気分・不安や神経心理学的検査の結果とは関係しないが、アミロイド陰性群ではもの忘れの自覚の程度が言語の流暢性の低下や意欲低下と相関することを確認した。以上の結果について論文投稿し、受理された。(Funaki et al. Psychogeriatrics, doi: 10.1111/psyg.12397)アミロイドPET検査の結果については、実施した全例から結果告知の希望があったため全例に告知を行った。SCD全42例に対して、気分・不安の評価尺度であるCES-D,IES,STAIをPET検査前、告知後6週間、6ヶ月、1年後に実施し、告知による長期的な気分・不安の変化を解析・評価した。アミロイドPETの結果告知については、告知後6週間、6ヶ月、一年後の気分・不安尺度で両群に気分や不安に関する差がないことを確認し、国際アルツハイマー学会(Wake et al. AAIC 2019, Chicago)で発表した。また現在アミロイドPETの結果告知により心理的影響について、論文を投稿中である。もの忘れを主訴に慶應義塾大学病院メモリー外来、ないしは精神神経科を受診したが認知機能低下があまりみられなかった症例のうち、文書にて同意が得られた48例(2017年3月まで)に対してアミロイドPET検査、認知機能検査、心理検査等を実施した。気分・不安の評価尺度であるCES-D,IES,STAIについては、PET検査の告知後6週間後、6ヶ月後に再実施しており、さらに1年後に再実施の予定である。これらの結果から、PET検査結果告知後の気分・不安の変化を評価した。本研究における「認知機能正常な自覚的認知機能低下患者」の選択基準に合致した42例中10例においてアミロイドPETで陽性所見が得られた(発症前アルツハイマー病と診断された)。またアミロイドPETを実施した全例から告知の結果告知の希望があり、希望された全例に告知を行った。アミロイドPET陽性群と陰性群では、MMSEなどのスクリーニング検査や、全般性知能や注意機能検査などの結果に有意差はみられなかったが、論理性記憶検査の遅延再生課題の結果に有意差を認めた(陽性群で有意に成績が低下していた)。また陽性群・陰性群で、検査前の抑うつ気分・不安・意欲などに関する尺度の結果に関して、有意差はみられなかった。アミロイドPETの結果告知、および告知後6週間の気分・不安尺度の調査が終了した27例について、陽性群・陰性群について告知後の気分や不安に関して差がないこと、有意差はないがむしろ陽性群で告知後に不安が軽減されたことなどを国際学会で報告した。本年度末時点で48例にアミロイドPET検査を実施し、48例中42例が解析の対象となった。またアミロイドPET検査告知後6週間、6ヶ月、1年後のフォローアップもほぼ脱落することなく順調に実施できている。研究参加者には特に有害事象も発生していない。以上から、現状では当初の研究計画通り、ほぼ順調に経過していると思われる。メモリー外来では現在も研究対象となる外来患者さんが多く来院しており、また本研究への参加希望者が比較的高率であることから、今後の対象者リクルートも順調に進むことが予想される。告知の結果の心理的影響(告知前と6週間後の気分・不安の変化)については、まだ限られた例数であるが、論文投稿中である。対象者のベースラインにおける認知機能の状態等についても、中間報告として論文投稿の準備をしている。また、グループスタディの解析対象とはならなかったが、アミロイドPET検査を実施した結果、陽性であった非認知症患者1例について、非典型的な臨床症状を認めたことから、本人・家族の同意を取得し、国際学会での症例報告を予定している。もの忘れを主訴に慶應義塾大学病院メモリー外来、ないしは精神神経科を受診したが認知機能にあまり低下が認められなかった患者の中で、文書で同意が得られた48例の中で、本研究における(Subjective Cognitive Decline: SCD)SCDの選択基準に合致した42例にアミロイドPET検査、認知機能検査、心理検査等を実施した。42例中10例においてアミロイドPETが陽性であった(発症前アルツハイマー病と診断された)。諸検査の結果から、SCDの臨床的・神経心理学的特徴などを解析・評価している。また両群で、検査前の抑うつ気分・不安・意欲などに関する尺度の結果に関して、有意差はみられなかった。アミロイドPET検査の結果については、実施した全例から結果告知の希望があったため、結果的に全例に告知を行った。

SCD全42例に対して、気分・不安の評価尺度であるCES-D,IES,STAIをPET検査前、告知後6週間、6ヶ月、1年後に実施し告知による長期的な気分・不安の変化を解析・評価している。現在のところアミロイドPETの結果告知については、告知後6週間、6ヶ月、一年後の気分・不安尺度で両群に気分や不安に関する差がないことを確認した。以上の結果は今後、国際学会での発表や、論文発表を予定している。さらに、SCDの対照群として、もの忘れの自覚がない健常高齢者についても、研究の同意が得られた対象者について、アミロイドPET・頭部MRI・認知機能検査等の実施を開始した。本年度末時点で48例のSCDにアミロイドPET検査を実施し、48例中42例が解析の対象となった。またSCDと判断された42例については、アミロイドPET検査告知後6週間、6ヶ月、1年後のフォローアップについて、全例で脱落することなく実施できた。研究参加者に特に有害事象も発生していない。以上から、現状では当初の研究計画通り、ほぼ順調に経過していると思われる。現在、ベースラインにおけるSCD患者の認知機能等の状態について、臨床的に得られたMRI検査やSPECT検査の結果も利用して、論文投稿の準備をしている。また、アミロイドPET検査の結果告知の心理的影響についても告知6ヶ月後、1年後のデータが得られたため、解析を行っており、成果については平成30年7月にシカゴで開催される国際アルツハイマー学会での発表を予定しており、論文投稿の準備をしている。もの忘れを主訴に慶應義塾大学病院メモリー外来、ないしは精神神経科を受診したが認知機能にあまり低下が認められなかった患者の中で、本研究における(Subjective Cognitive Decline: SCD)SCDの選択基準に合致し、文書で同意が得られた42例(アミロイドPET検査陽性10例、陰性32例)について、アミロイドPET検査、認知機能検査、心理検査等の結果から、SCDの臨床的・神経心理学的特徴などを解析・評価した。アミロイドPET陽性群と陰性群ではおおむね神経心理学的検査上の差はないが、論理性記憶検査の遅延再生課題の結果では陽性群で成績に低下傾向がみられた。もの忘れの自覚の程度は抑うつ気分・不安や神経心理学的検査の結果とは関係しないが、アミロイド陰性群ではもの忘れの自覚の程度が言語の流暢性の低下や意欲低下と相関することを確認した。以上の結果について論文投稿し、受理された。(Funaki et al. Psychogeriatrics, doi: 10.1111/psyg.12397)アミロイドPET検査の結果については、実施した全例から結果告知の希望があったため全例に告知を行った。SCD全42例に対して、気分・不安の評価尺度であるCES-D,IES,STAIをPET検査前、告知後6週間、6ヶ月、1年後に実施し、告知による長期的な気分・不安の変化を解析・評価した。アミロイドPETの結果告知については、告知後6週間、6ヶ月、一年後の気分・不安尺度で両群に気分や不安に関する差がないことを確認し、国際アルツハイマー学会(Wake et al. AAIC 2019, Chicago)で発表した。また現在アミロイドPETの結果告知により心理的影響について、論文を投稿中である。