hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ラット脳ドーパミン代謝の調節機構

本研究の目的は、精神分裂病におけるド-バミン(DA)過剰伝達の成立機構を解明することにある。精神分裂病では、海馬傍回の機能的・形態学的変化が報告されていることから、ラットで、海馬傍回前方部に相当する嗅内皮質を傷害させ、とくに扁桃体のDA代謝の変化を検討した。1.成熟ラットの嗅内皮質ニューロンの傷害によるDA代謝の変化。Wistar系雄性成熟ラットの左嗅内皮質神経細胞をキノリン酸で傷害させ、脳内5部位についてDAとその代謝産物(DOPACとHVA)の組織濃度を電気化学検出器付き高速液体クロマトグラフで測定するとともに、DA放出量の変化を脳内微小透析法にで測定した。傷害4週後には、扁桃体のDA濃度は、対照の120%にまで増加し、メタンフェタミン腹腔内投与によるDA放出量も、対照群よりも有意に上昇した。2.幼若ラットの嗅内皮質ニューロンの傷害が、成熟期のDA代謝に及ぼす影響。Wistar系雄性ラット生後1週目の左嗅内皮質の神経細胞を傷害させた後、生後5週と8週に脳を取りだし、脳内5部位でのDAとその代謝産物(DOPACとHVA)の組織濃度を測定した。その結果、傷害群の生後5週では、両側の外側扁桃体のDA濃度は、偽手術群に比べて有意に増加した。傷害群の生後8週では、左の外側扁桃体でDAの増加が持続し、両側の側坐核のDA濃度とHVAも増加した。本研究ではじめて示された扁桃体DA濃度の増加は、分裂病死後脳での報告と一致し、嗅内皮質傷害ラットが、分裂病のDA過剰伝達の動物モデルになり得ることを示唆する。(1)抗精神病薬慢性投与におけるラット脳ドーパミン(DA)代謝の耐性現象デカン酸ハロペリドール(ハロペリドールとして40mg eq/kg)またはその溶媒をラットに筋注し、1、3、6と11日後に、前頭前野、線条体と外側扁桃体のDA代謝の変化を電気化学検出器付高速液体クロマトグラフで測定した。その結果、1日後には3部位とともにDA代謝産物(HVA)の著しい増加がみられたが、3日後にはいずれも有意に減衰し、11日後では、対照群の115-133%にまで戻った。この間のハロペリドール血中濃度は6.53.3ng/mlで臨床的治療濃度に対応していた。以上のように、前頭前野でもDA代謝の耐性が他の部位と同程度に認められた。(2)左嗅内皮質損傷ラットのドーパミン(DA)代謝の変化ラット左嗅内皮質にキノリン酸75nM0.7μlを脳定位装置で注入し、その皮質ニューロンを破壊し、2週と4週後の脳DA代謝の変化を5部位で測定した。その結果、2週後には、前頭前野、側坐核、および扁桃体のDOPACまたはHVAが減少したが、4週後には元に戻った。扁桃体では2週後にDAが減少したが、4週後には逆に対照の120%にまで増加した。線条体に有意な変化はなかった。以上の所見は、嗅内皮質のニューロンがとくに扁桃体のDA活性に影響を及ぼしていることを示唆する。(1)左線条体ニューロン破壊ラットのドーパミン(DA)代謝成熟ラットの左線条体にキノリン酸120nMを注入し、そのニューロンを破壊した。その1週後にデカン酸ハロペリドール(ハロペリドールとして60mgeq/kg)またはその溶媒を筋注し、その1日後と21日後の左右線条体におけるDA代謝(組織濃度)の変化を高速液体クロマトグラフにより測定した。その結果、左線条体においても、ハロマンス投与1日後のDA代謝の亢進と21日後のその減衰は、右側と同程度に認められた。

このことから、ハロペリドール慢性投与によるDA代謝の減衰には、後シナプス側のニューロンの関与は乏しく、DA神経終末の自己受容体が主な役割を果たしていることが示唆された。(2)嗅内皮質傷害ラットのDA代謝の変化前年度は、左嗅内皮質傷害の4週間後に、扁桃体DA濃度が上昇することを報告した。今年度は比較のために、両側の嗅内皮質にキクリン酸75nMを注入し、2週と4週後に、両側の内側前頭前野、前部帯状回、背外側線条体、側坐核、および外側扁桃体のDAとその代謝産物(DOPACとHVA)の組織濃度を測定した。また、その4週後のラットについて、左の扁桃体基底外側核に透析プローブを装入し、メタンフェタミン(2mg/kg)腹腔内投与によるDA放出量の変化を脳内微小透析法により測定した。その結果、両側嗅内皮質障害によるDAとその代謝産物の組織濃度に有意の変化は生じなかったが、メタンフェタミン投与によるDA放出量は、対照群の約2倍の値を示した。以上の結果は、両側の嗅内皮膚傷害により組織濃度に変化はなくてもDAの過剰放出がされやすくなってることを示唆している。目的:ラットを用いて、幼若期の嗅内皮質損傷が成熟期の辺縁系ドーパミン(DA)代謝にどのような変化をもたらすかを検討した。対象と方法: Wistar系雄性ラット生後1週目の左嗅内皮質の神経細胞を、キノリン酸で傷害させた後、飼育し、生後5週と8週に脳を取りだし、左右の外側扁桃体、側坐核、線条体、および内側前頭前野のDAとその代謝産物(DOPACとHVA)の組織濃度を、電気化学検出器付き高速液体クロマトグラフで測定した。結果:傷害群の生後5週では、偽手術群に比べて、両側の外側扁桃体のDAが有意に増加した(左130%,右113%)。傷害群の生後8週では、左の外側扁桃体でDAの増加が持続し(118%)、両側の側坐核のDAは増加し(左,114%;右,116%)、HVAも増加した(左,130%;右,130%)。また、両側の線条体のDAが増加し(左,147%;右,130%)、HVAも増加した(左,187%;右,181%)。考察:幼若期ラットの嗅内皮質の神経細胞に損傷を加えると、成熟期に辺縁系や基底核のDA代謝に変化が生じることが、本研究ではじめて示された。とくに、扁桃体で認められたDA濃度の増加は、分裂病死後脳での報告(Reynolds,1983)と一致する。以上の所見は、精神分裂病患者の内側側頭葉構造の形態学的変化が、思春期にDA代謝の変化をもたらすという仮説の実験的根拠を提供すると思われる。
広島・長崎の原爆線量再評価に関する研究

研究は以下の2つの項目にわけて行なわれた。1.原爆爆発地点からの中性子の自由空気中の輸送現象の評価中性子の空中伝播特性を線量評価の観点から、主として大型計算機による中性子輸送計算法により評価した。計算に際してはレイエフェクト等の計算法に基づく誤差をさけるため最近のモンテカルロコードMCNPを用いた。2.広島の残留放射能の測定結果の解析評価広島の岩石中に残留する【^(152)Eu】の放射能測定を広島大学グループと共同でおこない、この結果を解析し原爆爆発時の中性子情報を得た。これらの結果は(1)広島大との共同の論文(1)形で米国Health Physics誌に投稿,印刷中(2)米国政府NCRP(放射線防護審議会)第23回年会で招待講演(1987年4月)(3)解析結果を中心とした論文とし米国Health Physics誌に投稿準備中である。(3)の論文の要旨を示すと....「広島原爆の中性子線量再評価を元安橋橋柱の花崗岩中41.5cm深さの【^(152)Eu】残留放射能を用いておこない、爆心よりSSW方向1.32m地点における中性子線量(空気中ティシュカーマ)を15.5Gyであると実験的に評価した。これは従前のT65Dの値121Gy/12.5kt,Loeweらの値65.2Gy/15kt,Kerrらの値24.6Gy/12.5kt,DS86システムの値31.4Gy/15ktよりもさらに小さいものであった。これに対して広島原爆の弾頭部からの放出中性子の異方性を示す【IV】halenの実測データを用いた補正をおこなえば、これらは各々60.3Gy,27.1Gy,12.3Gy,13.1Gyとなることがわかり、地上での線量評価にはソース点での非等方効果を正しく評価する必要性が示された。また、ここでの実測値に元づくデータ、15.5Gyと、DS86のデータとから広島原爆の線源強度を推定すると17.7ktとなり、Kaulの最近の推定値17ktに近い数値となった。」....となっている。
自然史系資料の適切な３Dデジタル標本化の指針及び標本データベースの構築

本年度は自館での調査に加え海外1機関,国内3機関において調査を実施した.また4編の論文を出版した.具体的には下記のとおりである.初年度である本年度は研究計画に沿って特に実際の博物館資料(クジラ類標本)についての3Dスキャンの実施を進めることで,実際に3Dデジタル標本を取得する際の技術的な点についてのノウハウの蓄積に主眼をおいて研究を進めた.この過程では自館収蔵標本の3Dスキャンに加えて,南オーストラリア博物館(オーストラリア・アデレード)及び足寄動物化石博物館(北海道),かごしま水族館(鹿児島県),日野市郷土資料館(東京都)において収蔵標本の3Dスキャンを実施した.対象とした標本は現生クジラ類の骨格標本に加えて,化石標本についても3Dスキャンを実施した.さらに標本自体も収蔵庫での収蔵標本のみではなく,一般の展示エリアで交連骨格として展示されている標本についても対象とした.また基本的には自館所蔵の光投影方式のスキャナによるスキャンを実施したが,これ加えて南オーストラリア博物館では先方の協力によりCTスキャンもあわせて実施した.また足寄動物化石博物館ではフォトグラメトリについても情報の収集を行った.また他館での調査においては標本の3Dスキャンのみならず,3Dデジタル標本の取り扱いについて他館の担当者への聞き取り調査を進めた.これによって自然史系博物館資料としての3Dデジタル標本についてのコンセンサス醸成に向けての基礎情報の蓄積を図った.これらを通し各館で3Dデジタル標本についての認識・考え方には大きな多様性があることが明らかとなり,今後もより多くの機関との連携を進めることで情報の蓄積を図る必要があると考えられる.研究初年度については特に実際の博物館資料(クジラ類標本)についての3Dスキャンの実施を進めることで,3Dデジタル標本を取得する際の技術的な点についてのノウハウの蓄積に主眼においた作業を予定していたが,これまでのところ当初の計画通りの進捗である.標本の3Dスキャンと同時に各機関における3Dデジタル標本についての考え方・取り扱いについて,実際に他館に赴き,標本の3Dスキャンを行う過程において担当者らからの聞き取り調査を行うことで,現在の各機関における3Dデジタル標本の現状についての情報蓄積をはかっている.これらはいずれについても次年度以降も継続して取り組む.ただし収蔵機関ごとにその標本を取り巻く環境が異なり,そのため3Dデジタル標本への対応についても様々な考えがあることが判明した.当初の計画ではパイロットケースとしてクジラ類化石タイプ標本データベースの構築を想定していたが,今後の各標本収蔵機関との調整の経過によっては対象等の変更についても継続的に検討していく必要があると考えている.次年度以降も計画通り他館における調査を実施し,自然史系標本の3Dスキャンに関連して,データ及び経験の蓄積,さらには担当者への聞き取り調査などを通して自然史系博物館資料としては3Dデジタル標本についてのコンセンサスの醸成に向けた基礎情報の蓄積を図る.パイロットケースとしてクジラ類標本を対象としたデータベースの作成に向けて標本データの蓄積を進める.本年度は自館での調査に加え海外1機関,国内3機関において調査を実施した.また4編の論文を出版した.具体的には下記のとおりである.初年度である本年度は研究計画に沿って特に実際の博物館資料(クジラ類標本)についての3Dスキャンの実施を進めることで,実際に3Dデジタル標本を取得する際の技術的な点についてのノウハウの蓄積に主眼をおいて研究を進めた.この過程では自館収蔵標本の3Dスキャンに加えて,南オーストラリア博物館(オーストラリア・アデレード)及び足寄動物化石博物館(北海道),かごしま水族館(鹿児島県),日野市郷土資料館(東京都)において収蔵標本の3Dスキャンを実施した.対象とした標本は現生クジラ類の骨格標本に加えて,化石標本についても3Dスキャンを実施した.さらに標本自体も収蔵庫での収蔵標本のみではなく,一般の展示エリアで交連骨格として展示されている標本についても対象とした.また基本的には自館所蔵の光投影方式のスキャナによるスキャンを実施したが,これ加えて南オーストラリア博物館では先方の協力によりCTスキャンもあわせて実施した.また足寄動物化石博物館ではフォトグラメトリについても情報の収集を行った.また他館での調査においては標本の3Dスキャンのみならず,3Dデジタル標本の取り扱いについて他館の担当者への聞き取り調査を進めた.これによって自然史系博物館資料としての3Dデジタル標本についてのコンセンサス醸成に向けての基礎情報の蓄積を図った.これらを通し各館で3Dデジタル標本についての認識・考え方には大きな多様性があることが明らかとなり,今後もより多くの機関との連携を進めることで情報の蓄積を図る必要があると考えられる.研究初年度については特に実際の博物館資料(クジラ類標本)についての3Dスキャンの実施を進めることで,3Dデジタル標本を取得する際の技術的な点についてのノウハウの蓄積に主眼においた作業を予定していたが,これまでのところ当初の計画通りの進捗である.標本の3Dスキャンと同時に各機関における3Dデジタル標本についての考え方・取り扱いについて,実際に他館に赴き,標本の3Dスキャンを行う過程において担当者らからの聞き取り調査を行うことで,現在の各機関における3Dデジタル標本の現状についての情報蓄積をはかっている.

これらはいずれについても次年度以降も継続して取り組む.ただし収蔵機関ごとにその標本を取り巻く環境が異なり,そのため3Dデジタル標本への対応についても様々な考えがあることが判明した.当初の計画ではパイロットケースとしてクジラ類化石タイプ標本データベースの構築を想定していたが,今後の各標本収蔵機関との調整の経過によっては対象等の変更についても継続的に検討していく必要があると考えている.次年度以降も計画通り他館における調査を実施し,自然史系標本の3Dスキャンに関連して,データ及び経験の蓄積,さらには担当者への聞き取り調査などを通して自然史系博物館資料としては3Dデジタル標本についてのコンセンサスの醸成に向けた基礎情報の蓄積を図る.パイロットケースとしてクジラ類標本を対象としたデータベースの作成に向けて標本データの蓄積を進める.
流体力学的アプローチによる瞬目時摩擦刺激に対する角膜上皮細胞の応答

平行平板型流れ負荷装置を用いた水流シェアストレスによって培養角膜上皮細胞に定量的に長時間にわたって機械的刺激を負荷し、細胞表面のマイクロビライを走査型電子顕微鏡で観察したが、細胞間かつ細胞内の部位による不均一性のため、定量的な評価は困難であった。機械的負荷後の角膜上皮細胞の網羅的遺伝子解析を行ったところ、2016年に発表したTGF-βのシグナル伝達経路以外にもさまざまな遺伝子発現が変化しており、中でもANGPTL4(アンギオポエチン様蛋白4)の遺伝子発現が圧倒的に上昇していた。ANGPTL4は蛋白レベルでも有意な増加が認められた。正常マウス角膜の免疫染色においても角膜上皮細胞にANGPTL4が高発現しており、ANGPTL4は角膜上皮において何らかの機能を持っている蛋白であることが示唆された。しかし、現在のところ、角膜上皮細胞においてANGPTL4がどのような役割を担っているかは不明である。そこで、我々は生体において角膜上皮に機械的刺激を負荷してANGPTL4の発現変化を検討する方針とし、角膜上皮に機械的刺激を負荷するモデルとしてドライアイモデルマウスを用いることとした。マウスを筒状の閉鎖環境に入れ、乾燥環境で送風し、強制的にドライアイにするモデルである。除湿器や送風機を購入、マウスを入れる装置なども作成し、実際にマウスを用いて角膜上皮障害が生じ、ドライアイモデルが出来ていることが確認出来ている。現在、ドライアイモデルマウスにおけるANGPTL4の遺伝子発現変化や蛋白変化を解析中である。角膜表面を形成する角膜上皮は瞬目によって涙液を供給され健全性を保っているが、同時に絶えず上眼瞼の摩擦による機械的刺激を受けている。瞬目による機械的刺激は物理的に角膜上皮を障害するだけでなく、何らかのシグナル伝達に関与している可能性も考えられるが、その詳細は未解明な点が多い。上眼瞼結膜上皮と角膜上皮の間に涙液が存在することから、瞬目による摩擦は流体力学的に剪断応力(シェアストレス)として捉えることが可能である。そこで、今回我々は水流シェアストレスを用いて角膜上皮細胞に機械的刺激を定量的に長時間負荷することにより、瞬目の摩擦による角膜上皮細胞への慢性的な機械的刺激を再現し、瞬目時の摩擦刺激に対する角膜上皮細胞の応答を調査した。ヒト角膜上皮細胞にシェアストレスを24時間細胞に負荷し、経時的に撮影後、負荷後の細胞、培地上清を採取した。Wound healing assayにて創傷治癒を、BrdU assayにて細胞増殖を評価した。また、real time PCRにて増殖因子のmRNA発現を、ELISAにて培地上清中のTGFβ1蛋白濃度を、ウエスタンブロッティングにてSMAD2のリン酸化を検討した。静置した細胞と比較し、創傷治癒は負荷後の細胞で有意に遅延し、細胞増殖も有意に低下した。増殖因子のうちTGFβ1が最も著明な変化を示し、mRNA発現は負荷後の細胞で有意に増加した。TGFβの下流であるSMAD2のリン酸化は負荷後の細胞で有意に増加した。TGFβreceptor inhibitorであるSB431542を用いて同様の実験を行ったところ、負荷後の細胞でもSMAD2のリン酸化は認めず、創傷治癒遅延や細胞増殖低下も見られなかった。これらの内容はInvestigative Ophthalmology & VisualScience誌(2016)に掲載された。培地などの経費が想定していた以上にかかったこと、想定よりやや早く実験が進んだことにより、研究費を前倒し申請を行った。そこで、我々は水流シェアストレスを用いて角膜上皮細胞に機械的刺激を定量的に長時間負荷することにより、瞬目の摩擦による角膜上皮細胞への慢性的な機械的刺激を再現し、瞬目時の摩擦刺激に対する角膜上皮細胞の応答を調査した。マイクロアレイにて網羅的に遺伝子を解析し、最も発現が変化していたANGPTL4(Angiopoietin-like growth factor)に関して、real time PCRにて増殖因子のmRNA発現を、ウエスタンブロッティングにて蛋白発現を検討した。静置した細胞と比較し、ANGPTL4のmRNA発現は負荷後の細胞で有意に増加し、蛋白発現も負荷後の細胞で有意に増加していた。これらの内容は日本角膜学会総会(2018)にて発表した。2017年度は研究以外の仕事が忙しく、進捗が遅れたため、2018年度まで継続して取り組むこととした。

機械的負荷後の角膜上皮細胞の網羅的遺伝子解析を行ったところ、2016年に発表したTGF-βのシグナル伝達経路以外にもさまざまな遺伝子発現が変化しており、中でもANGPTL4(アンギオポエチン様蛋白4)の遺伝子発現が圧倒的に上昇していた。ANGPTL4は蛋白レベルでも有意な増加が認められた。正常マウス角膜の免疫染色においても角膜上皮細胞にANGPTL4が高発現しており、ANGPTL4は角膜上皮において何らかの機能を持っている蛋白であることが示唆された。しかし、現在のところ、角膜上皮細胞においてANGPTL4がどのような役割を担っているかは不明である。そこで、我々は生体において角膜上皮に機械的刺激を負荷してANGPTL4の発現変化を検討する方針とし、角膜上皮に機械的刺激を負荷するモデルとしてドライアイモデルマウスを用いることとした。マウスを筒状の閉鎖環境に入れ、乾燥環境で送風し、強制的にドライアイにするモデルである。除湿器や送風機を購入、マウスを入れる装置なども作成し、実際にマウスを用いて角膜上皮障害が生じ、ドライアイモデルが出来ていることが確認出来ている。現在、ドライアイモデルマウスにおけるANGPTL4の遺伝子発現変化や蛋白変化を解析中である。マイクロビライは機械的刺激の受容に関与している可能性が考えられる。水流シェアストレスを負荷した角膜上皮細胞の細胞表面マイクロビライを走査型電子顕微鏡にて観察し、マイクロビライの分布、数、長さを解析し、機械的刺激への反応を解析する。Nーアセチルシステインを用いてマイクロビライを除去することも可能であり、マイクロビライを除去した場合の反応も検討する。マイクロビライの検討に関しては安定した結果が得られなかったため、実験方法を再検討する。また、遺伝子網羅的解析によってANGPTL4という蛋白の発現が大きく変化していることがわかったため、それらを中心に検討していく方針へ変換する。想定より実験計画が早まったため、予算の前倒し申請を行った。しかし、年度末は研究があまり進捗せず、前倒し申請した予算が余った。2017年度は研究の進捗が遅れたため。予定通り研究を進捗させる。
がん看護領域における認定看護師の看護実践の効果

がん看護領域における認定看護師に認定看護師の実践の効果を明らかにするために半構成化面接を行った。本研究は名古屋大学医学部保健学科倫理委員会の承諾を得た。本研究に同意を得られた看護師に対して、電話にて連絡の上、所属施設に訪問。再度研究の主旨を説明して研究の承諾を確認した上で、同意書の署名を得てから面接を開始した。質問内容は、1対象者の属性2認定看護師の役割等である。対象者は同意を得られた、ホスピスケア認定看護師10名について面接を実施し、対象者のは、がん専門特定機能病院3名、総合病院6名、大学病院1名であった。看護師の平均通算経験年数は17.9±4.51年で、認定看護師資格取得後の平均年数は3年あった。面接内容から全1220コード、101サブカテゴリー、30カテゴリーが抽出され、1)ホスピスケアの理念の浸透、2)実践、3)指導、4)相談、5)調整と組織への働きかけ、6)ホスピスケア認定看護師としての役割を遂行するための姿勢6つの枠組で構成した。ホスピスケア認定看護師は、ホスピスの理念を核として、実践、指導、相談活動を行っており、その対象は施設内にと留まらず、地域にまで役割が拡大していた。また、実践、指導、相談の3つの機能だけでなく、調整と組織への働きかけ行っていることが明らかとなった。得られたデータの信頼性と妥当性と確認するために、カテゴリーをもとにアンケートを作成し、量的側面からの調査を実施した。ホスピスケア認定看護師278名と東海北陸地区緩和ケア病棟の看護師を対象にアンケート調査を行った。回収率64.7%であり、因子分析をしたとこと、認定看護師は質的研究と類似した構造になり、一方緩和ケア病棟の看護師は5因子であった。認定看護師は、ホスピスケアの理念を現場の看護師に浸透させていくことで、患者・家族、またケアを提供する看護師のQOLの向上に貢献していることが明らかとなった。質問内容は、1対象者の属性(所属施設の概要、所属部署、役職、資格取得年数、認定看護師としての活動時間)2認定看護師の役割である。実践内容と実践時に大切にしていること。3指導活動内容と指導時に大切にしていること。4相談活動の内容との相談時に大切にしていること。5活動に関しての効果。6領域において大切にしていること。7資格取得後の自己の変化。以上7領域である。対象者は同意を得られた、ホスピスケア認定看護師10名について面接を終了している。面接は一人45分10時間であった。承諾を得てから、テープに録音し、面接後逐語録を作成した。逐語録作成後、分析の焦点を「認定看護師の活動」に定め、これに沿って分析を実施した。また、活動を看護過程の展開にそって、情報収集、アセスメント、計画、実施、評価の順に時系列に沿って分析中である。また、「認定看護師のもつ特定の技術」についても分析していく予定である。今後、得られたデータの信頼性と妥当性と確認するために、カテゴリーをもとにアンケートを作成し、量的側面からの調査を行っていく予定である。対象者はホスピスケア認定看護師10名である。勤務施設は、がん専門特定機能病院3名、総合病院6名、大学病院1名であった。

本研究は名古屋大学医学部保健学科倫理委員会の承諾を得た。本研究に同意を得られた看護師に対して、電話にて連絡の上、所属施設に訪問。再度研究の主旨を説明して研究の承諾を確認した上で、同意書の署名を得てから面接を開始した。質問内容は、1対象者の属性2認定看護師の役割等である。対象者は同意を得られた、ホスピスケア認定看護師10名について面接を実施し、対象者のは、がん専門特定機能病院3名、総合病院6名、大学病院1名であった。看護師の平均通算経験年数は17.9±4.51年で、認定看護師資格取得後の平均年数は3年あった。面接内容から全1220コード、101サブカテゴリー、30カテゴリーが抽出され、1)ホスピスケアの理念の浸透、2)実践、3)指導、4)相談、5)調整と組織への働きかけ、6)ホスピスケア認定看護師としての役割を遂行するための姿勢6つの枠組で構成した。ホスピスケア認定看護師は、ホスピスの理念を核として、実践、指導、相談活動を行っており、その対象は施設内にと留まらず、地域にまで役割が拡大していた。また、実践、指導、相談の3つの機能だけでなく、調整と組織への働きかけ行っていることが明らかとなった。得られたデータの信頼性と妥当性と確認するために、カテゴリーをもとにアンケートを作成し、量的側面からの調査を実施した。ホスピスケア認定看護師278名と東海北陸地区緩和ケア病棟の看護師を対象にアンケート調査を行った。回収率64.7%であり、因子分析をしたとこと、認定看護師は質的研究と類似した構造になり、一方緩和ケア病棟の看護師は5因子であった。認定看護師は、ホスピスケアの理念を現場の看護師に浸透させていくことで、患者・家族、またケアを提供する看護師のQOLの向上に貢献していることが明らかとなった。
食物連鎖と住み込み連鎖をつなぐ相互作用網の構築とその定式化

この研究では、生物群集の2大基本構造である食物連鎖関係と住み込み連鎖関係を結合させ、群集構造の新しい認識方法を探ることを目的とした。岩礁性潮間帯の二枚貝床群集を対象として、食物連鎖と住み込み連鎖及びその相互関係を室内及び野外実験によって明らかにしながら、両連鎖を結合させた新たな相互作用網の描出様式を定式化させるための方法論を模索した。その結果、1.和歌山県白浜町の岩礁性潮間帯のムラサキインコガイとヒバリガイモドキの2種の二枚貝床群集の組成と、各種個体数の変動は、二枚貝床の密度や被度の年変動に応じて変化しており、二枚貝床の構造と密接に関わっていることがわかった。2.二枚貝床生物群集の主要構成種の、二枚貝床内での行動観察と室内実験によって、各種の食物選択性と捕食者・乾燥回避行動を明らかにした。また、二枚貝床内に蓄積されている砂泥の有無によって、各構成種の行動が異なり、また2種の二枚貝床内での摂食行動や捕食者回避行動も異なっていることがわかった。3.二枚貝床群集の地理的な変異を調べた結果(和歌山県白浜町、宮崎県宮崎市青島、沖縄県石垣島名蔵湾)、ヒバリガイモドキの二枚貝床の密度も被度も大きく異なっており、それに応じて群集組成や各摂食ギルドに属する種の密度も大きく異なっていることが、明らかとなった。4.この二枚貝床群集について、2つ以上の捕食被食関係の直接的な連鎖を介した間接的な相互作用と、住み込み共生を介した間接的な相互作用を区別し、捕食被食関係の食物網の中に、住み込み共生を介した間接的な相互作用を加えることによって、群集の中での各種の食と住を合わせたニッチを描出でき、食物連鎖と住み込み連鎖をつないだ相互作用網の構築が可能となり、さらに、食と住を含んだ総合的な群集像を描くことができることがわかった。1.和歌山県白浜町の京都大学理学部付属瀬戸臨海実験所付近の岩礁性潮間帯で、ムラサキインコガイとヒバリガイモドキの2種の二枚貝床の生物群集の調査を行った。1997年4月より3ヶ月おきに、各種の二枚貝床の上部・中部・下部でそれぞれ3つづつの方形枠(5cm×5cm)を使い、存在した全ての動物を採集した。その結果、(1)潮間帯上・中部に位置するムラサキインコガイの二枚貝床では、個体数においては微小二枚貝類・等脚類・フジツボ類がこの順で優占し、重量では多毛類・フジツボ類・腹足類が優占。(2)一方、潮間帯下部にあるヒバリガイモドキの二枚貝床では、個体数・重量ともに多毛類が圧倒的に優占していることが明らかになった。(3)このパターンは四季を通して変わらないこともわかった。2.2種の二枚貝床生物群集の両方で数的に優占していた多毛類のセグロイソメとウスズミゴカイについて、食物選択性の室内実験を行った。その結果、(1)セグロイソメは、二枚貝床の空隙に生息して活発に動き回る等脚類や端脚類に対しては殆ど摂食行動を示さず、もっぱらヒバリガイモドキ・ムラサキインコガイ・イワフジツボ・クロフジツボなどの固着性動物をこの順に選択的に好むことが明らかとなった。

(2)ウスズミゴカイでは、上記の固着性動物を生きた状態では全く摂食せず、摂食行動も示さなかったが、殻を取り去った軟体部を与えた所、それを摂食することが明らかとなった。また、活発に動き回る等脚類や端脚類の死体に対しては摂食行動を示したが、生きた状態の個体に対しては全く摂食行動を示さない、という事実も確認された。(3)つまり、二枚貝床生物群集で優占的な2種の多毛類の摂食習性は全く異なり、セグロイソメは固着性動物を生食する捕食者、ウスズミゴカイは動物の死骸を摂食することが明らかとなった。1.和歌山県白浜町の京都大学瀬戸臨海実験所付近の岩礁で、二枚貝床群集と海藻マット群集内の主要構成種を四季にわたって採集し、その消化管内容物を分析した。この調査は、前年度に引き続いて行ったもので、主要構成種の季節的な変動は、前年度とは異なるパターンを示した。昨年度には冬季に量的に多くなった多毛類のセグロイソメとウスズミゴカイの両種が、今年度の冬季にはかなり少なく、一方、等脚類の密度が前年度に比べてかなり増加していた。この原因は不明であるが、冬季の気温・水温の違いが2年間の主要構成種の量的変異をもたらしていた可能性が考えられた。2.実験室内で、各生物の摂食行動をビデオ撮影した。その際、二枚貝の殻の上にEpifaunaを付着させたものに対するセグロイソメの摂食行動が、Epifaunaのない二枚貝に比べて有意に減少することが明らかとなった。二枚貝の殻の上のEpifaunaの存在が、捕食者から攻撃される確率を低くしていることが推察された。また、ファイバースコープを用いた観察によって、二枚貝床の中に住み込んでいる等脚類や多毛類の詳細な行動が明らかとなった。3.二枚貝床群集の地理的な変異を調べるために、宮崎県と沖縄県に存在するイガイ科二枚貝2種(ムラサキインコガイとヒバリガイモドキ)の二枚貝床群集を調査した。宮崎県では、和歌山県白浜町のものと大変に似通った群集が見られたが、沖縄県のヒバリガイモドキ床では二枚貝の密度が大変に低く、内在生物の種数も密度も大変に少ないことがわかった。沖縄県でヒバリガイモドキ床の二枚貝の密度が低く、稠密な床を作らない原因を探るための調査を来年度は実行したい、と考えている。種の違い、あるいは亜種の違い、という分類学的な分析も必要になってくるかもしれない。この調査項目は過去2年間にも行っているが、3年間の群集組成と各種の個体群動態を把握するために、今年度も実施した。本年度は1996年に着底したヒバリガイモドキの二枚貝床が、個体群の寿命のために大量に剥がれ始めて二枚貝床の被度が大幅に減少し、二枚貝床群集にも大きな変化が生じた。床内に蓄積された砂泥が、二枚貝床の被度の減少によって大幅に減少し、砂泥の多い場所を好む多毛類の密度が大きく落ち込み、砂泥に潜掘できない等脚類や笠貝などの巻貝類が増加した。二枚貝床の密度や被度の変化が、二枚貝床群集の組成や各構成種の密度にも大きな変化を与えていることが、予想された。2.実験室内で、二枚貝床の中に住み込んでいる各種動物の摂食行動をビデオ撮影した。過去2年間で、既に主要な捕食者2種やデトリタス食者・藻類食者2-3種の摂食行動と捕食行動を調査したが、今年度は、二枚貝の表面を生息場所とするコガモガイなどの笠貝類の摂食行動と捕食者回避行動を調査した。3.二枚貝床群集の地理的な変異を調べ、和歌山県白浜町での定期的な調査結果と比較するために、石垣島名蔵湾のヒバリガイモドキの二枚貝床とその群集を調査した。二枚貝床の中の二枚貝の被度は、和歌山県白浜町などと比べて非常に低く、「すかすか」の二枚貝床であることがわかった。そして、二枚貝床群集の種組成も大きく異なっており、デトリタス食者が殆どおらず、小型巻貝類が優占する群集であることがわかった。
規則充てん物を用いた充てん精留塔の流動特性

本研究は、規則充てん物を用いた充てん精留塔の流動特性を検討する目的で、スルザ-社製規則充てん物、「ラボパッキングEX」を充てんしたガラス製充てん塔を用いて、水-空気、水-炭酸ガス、グリセリン-空気および灯油-空気系の4つの系で圧力損失および液ホールドアップの測定を行い、それらのデータをもとに規則充てん物に対するロ-ディング点、フラッディング点および充てん物の濡れ特性について実験的立場から検討したものである。圧力損失はガス流量および液流量の増加にともない増加することがわかった。一方、液ホールドアップは低ガス流量域で一定の値をとり、その値は液流量の増加にともない増加することがわかった。両者のデータを比較したところ、ロ-ディング点は液ホールドアップのデータから容易に決定できることがわかった。また、規則充てん物のロ-ディング点およびフラッディング点をそれぞれ不規則充てん物に関する大竹の式およびEckertの式と比べたところ、いずれも規則充てん物の場合の方が不規則充てん物に比べて大きくなることがわかった。このことから、規則充てん物の流動特性は不規則充てん物のそれに比べて高性能であることがわかった。液ホールドアップが一定の領域のデータについて、液が充てん物表面を均一に流れていると仮定して得られる液膜厚さの実測値とNusseltモデルによる理論値と比較したところ、液膜厚さの実測値は理論値よりも大きな値を示していることがわかった。このことから、充てん塔内を流れる液は充てん物上を均一に流れていると判断された。
宋代の経済政策及び関連する諸政策の総合的研究

本プロジェクトは作業内容を勘案して、(1)宋史食貨志研究班、(2)宋会要輯稿研究班、(3)朝野類要研究班の3判に分けて事業を推進させた。(1)班は、塩・茶篇の『宋史食貨志訳注(5)』を刊行し(平成16年3月)、最終巻『宋史食貨志訳注(6)』については、平成17年度内刊行を目指し、その酒・坑冶・礬・香・商税・市易・均輸・互市舶法の諸篇の正確な訓読と詳細な注釈を施す作業にあたり、ほぼ各篇の原稿を作成することができた。われわれの『宋史食貨志訳注』(1)(6)に匹敵する徹底・詳細な注釈書は他にないと自負している。また平成14年12月に『宋史食貨志訳注(1)(4)語彙索引』を刊行した。(2)班は、『宋会要輯稿食貨索引(地名篇)』と『宋会要輯稿食貨索引(一般語彙篇)』の刊行を目指した。前者は3万余りの語彙について逐一原典に当たり、アイウエオ順に並べたものであり、今回の報告書に収録した。後者の語彙数は10万に近いが、その編集作業をほぼ完了させることができた。平成17年度内刊行を目指している。(3)班の研究対象『朝野類要』5巻は、官僚制度研究に不可欠の文献であるにかかわらず、短編であるためか単独で研究対象とされることがなかった。今回われわれは上海図書館及び南京図書館所蔵明刊本を入手し、その書誌学的研究を行い、逐条訓読し詳細な注釈を施すこととした。典拠に乏しい条文が多く作業は難渋したが、半ば以上作成することができたので、今回『朝野類要訳注稿』として書誌学的研究を付して報告書に収録した。また訳注作業の進捗を目指し『叢書集成本朝野類要語彙索引稿』を作成した。また研究代表者は平成15年3月米国アジア学会の年次大会に出席し本プロジェクトの研究状況を発表し、将来の国際協力についても協議を行った。(1)『宋史食貨志訳註』(四)(会計、銭幣、会子)を刊行した。(全530頁平成14年5月)(2)『宋史食貨志訳註(一)(四)語彙索引』を刊行した。(全123頁平成14年12月)(3)『宋史食貨志下35塩』及び『同下56茶』の訳註成稿について合同検討会を東洋文庫、電通会館、無窮会図書館等において開催した。(4)『宋会要輯稿食貨語彙(地名)索引稿』(A4版314枚)を作製し、その点検を開始した。(5)続いて『宋会要輯稿食貨語彙(一般)索引稿』を作成中である。(6)『朝野類要』の訳註稿についての合同検討会を、東洋文庫、学習院大学東洋文化研究所、早稲田大学、青山学院大学等において行った。(7)文淵閣『四庫全書』CD-ROM(全文検索版)第1部及び第2部(139枚)を購入し、研究に多大な便宜を得ている。(8)『朝野類要』の版本調査を北京大学(清恵棟校、四庫全書原本)及び中国国家図書館(清抄本2種)において行った。

(9)研究代表者は米国でアジア学会(ニューヨーク)の年次大会に参加して、本プロジェクトの研究状況を発表し、併せて欧米の研究状況を調べ、また今後の国際協力事業内容について意見交換をした。平成15年度研究実績の概要・『宋史食貨志訳註(巻五)塩・茶』を刊行した。・『宋史食貨志下七八(酒、防冶、礬、香、商税、市易、均輸、互市舶法』の訳註稿の検討会を東洋文庫、電通会館、無窮会図書館などにおいて開催した。・『宋会要輯稿食貨語彙索引(地名篇)』(約400頁、A4版)の校正をほぼ完成させ、出版の準備を終えた。・『宋会要輯稿食貨語彙索引(一般語彙篇)』の原稿をほぼ完成させた。・『朝野類要』の明代版本の調査を上海図書館、南京図書館において行った。・『朝野類要』の書誌学的研究を行った。・『朝野類要訳註稿』の検討会を東洋文庫、学習院大学東洋文化研究所、早稲田大学、青山学院大学などにおいて開催した。以上本プロジェクトは作業内容を勘案して、(1)宋史食貨志研究班、(2)宋会要輯稿研究班、(3)朝野類要研究班の3班に分けて事業を推進させた。(1)班は、塩・茶篇の『宋史食貨志訳注(5)』を刊行し(平成16年3月)、最終巻『宋史食貨志訳注(6)』については、平成17年度内刊行を目指し、その酒・坑冶・礬・香・商税・市易・均輸・互市舶法の諸篇の正確な訓読と詳細な注釈を施す作業にあたり、ほぼ各篇の原稿を作成することができた。われわれの『宋史食貨志訳注』(1)(6)に匹敵する徹底・詳細な注釈書は他にないと自負している。また平成14年12月に『宋史食貨志訳注(1)(4)語彙索引』を刊行した。(2)班は、『宋会要輯稿食貨索引(地名篇)』と『宋会要輯稿食貨索引(一般語彙篇)』の刊行を目指した。前者は3万余りの語彙について逐一原典に当たり、アイウエオ順に並べたものであり、今回の報告書に収録した。後者の語彙数は10万に近いが、その編集作業をほぼ完了させることができた。平成17年度内刊行を目指している。(3)班の研究対象『朝野類要』5巻は、官僚制度研究に不可欠の文献であるにかかわらず、短編であるためか単独で研究対象とされることがなかった。今回われわれは上海図書館及び南京図書館所蔵明刊本を入手し、その書誌学的研究を行い、逐条訓読し詳細な注釈を施すこととした。典拠に乏しい条文が多く作業は難渋したが、半ば以上作成することができたので、今回『朝野類要訳注稿』として書誌学的研究を付して報告書に収録した。また訳注作業の進捗を目指し『叢書集成本朝野類要語彙索引稿』を作成した。また研究代表者は平成15年3月米国アジア学会の年次大会に出席し本プロジェクトの研究状況を発表し、将来の国際協力についても協議を行った。
甲状腺結節に対する経皮的レーザー焼灼法の研究

甲状腺結節に対する低侵襲治療としての経皮的組織内レーザー照射法の臨床応用の可能性を検討するために、ヒト摘出甲状腺および実験動物(ブタ)の甲状腺を材料に基礎実験を行った。レーザー装置は830nmの光を発振するダイオードレーザーを使用し、穿刺針を介して甲状腺組織内にファイバーを導入して組織内照射を行った。出力と照射量の変化による甲状腺の組織学的変化を検討するとともに、甲状腺組織内および表面温度の経時的変化を測定することにより、甲状腺隣接臓器への影響を予測し、甲状腺結節に対する至適レーザー照射条件を明らかにすることを目的とした。(1)ヒト摘出甲状腺に対するレーザー照射平均壊死直径は1.7mm(出力5W、照射量1500J)であった。出力や照射量を増加させても壊死範囲は増大せず、結果の再現性もなかった。最高組織内温度は49°Cで、サーモグラフィではいずれの出力でも照射開始前と比較して甲状腺表面温度の変化は認めなかった。(2)ブタ甲状腺に対するレーザー照射出力2Wでは、総照射量と壊死の大きさに再現性がなかった。3W、5Wの出力では、照射量の増加に従って壊死の大きさは増大した。同じ照射量では、出力3Wでは5Wと比較し大きな壊死を形成した。一方、照射時間を一定とすると、出力の違いにより形成される壊死範囲の大きさに有意差はなかった。平均壊死直径の最大値は12.3mm(3W・1500J)であった。甲状腺組織内温度はレーザー照射点から5mm(壊死に陥る点)、10mm(壊死の境界点)、15mm(壊死を来さない点)の点で測定し、最高温度は出力3Wでは順に159.9°C、80.8°C、54.4°C(照射開始時34.7°C)、出力5Wでは154.2°C、64.1°C、46,4°C(照射開始時37.7°C)であった。いずれも照射開始より300秒後に最高温度となった。サーモグラフィで計測した甲状腺表面の最高温度は、3Wの照射では38.1°C、5Wの照射では55.2°Cであった。出力3Wにて約300秒のレーザー照射を行うことにより甲状腺組織の炭化や表面温度の上昇を生じることなく径1cmの壊死を形成することが可能であった。小型でポータブルであるダイオードレーザーを用いた本治療は、甲状腺結節に対する外来でも施行可能な低侵襲治療となる可能性が示唆された。実験装置:レーザー照射は810nmの光を発振するダイオードレーザー(オリンパスUDL-60)、φ600μmの石英ファイバーを使用した。16Gエラスター針の外筒を介してファイバーを組織内へ導入し、表面から1cmの深さで照射を行った。(1)ヒト摘出甲状腺に対するレーザー焼灼レーザー照射により、どのような形状・大きさの壊死が得られるかを調べるためには、厚みのある甲状腺組織が必要である。

このため、基礎実験としてバセドウ病甲状腺腫(正常甲状腺の数倍の厚みを持つ)患者から摘出した正常甲状腺組織を使用した。照射後は直ちにホルマリン固定を行い、ファイバー刺入面に平行に割面を作成した。最大壊死割面の縦径と横径を測定し、その平均を平均壊死直径とした。照射条件は照射量1000J・出力2W又は5Wとした。甲状腺片葉につき、異なる出力を使用し2点で照射を行った。甲状腺片葉は2ヶ使用した。結果は2Wでは平均壊死直径は1.5mmで、5Wでは6mmであった。5Wの照射での壊死は、ファイバーの先端から紡錘形に形成され、2Wではファイバー先端周囲であった。以上より、以前肺実質内で施行した実験(波長630nm・100-200mWの照射)ではファイバー先端から刺入点に向かって反射するようにファイバーに沿って紡錘形に形成された壊死と異なり、今回の条件ではファイバーの先端部から遠位部に向かって壊死が形成されることがわかった。(2)ブタ正常甲状腺に対するレーザー焼灼生後3ヶ月のブタを2匹使用して実験を行った。全身麻酔の下、ブタを背臥位とし、胸骨上2横指の高さで切開をおき、組織を剥離して気管前に位置する甲状腺を露出した。ブタ甲状腺は一葉からなり、厚みはヒト甲状腺よりやや薄い約1.5cmであった。このため、ファイバーは甲状腺側面より刺入した。2W、3W、5Wの各出力で照射を行った。5Wの照射では168秒(840J)で煙が発生したため、その時点で照射を終了した。2Wで500秒(1000J)、3Wで500秒(1500J)の照射は各2点で行った。平均壊死直径は2Wで1.2cm、3Wで0.9cm、5Wで1.0cmであった。3W照射時には、熱電対によりファイバー先端より1cm離れた部での組織内温度を測定した。照射開始と同時に急激な温度上昇(60秒で50°Cまで上昇)、途中安定部が見られ(50°Cで50秒間)、その後再び温度上昇が見られ、最大85°Cまで上昇した。正常甲状腺実質に対するレーザー光組織内照射による壊死部の大きさは、照射出力(W)や照射量(J)とは相関関係がない可能性がある。ファイバー先端周囲組織の壊死が進むと、レーザー光の透過が妨げられ、周囲に熱が伝わらなくなるのではないかと考えられた。ヒト摘出甲状腺とブタ正常甲状腺に対し、波長830nmの光を発振するダイオードレーザーを用いた組織内照射を行い、甲状腺実質内に形成される壊死の大きさ(平均壊死直径)と周囲の温度上昇、組織学的変化を検討した。(1)ヒト摘出甲状腺バセドウ病甲状腺腫患者から摘出した正常甲状腺組織に対し、出力2W、3W,5W、総照射量5001500Jの照射を行ったが、照射条件と壊死の大きさに再現性がなかった。ファイバー先端部から5mmの点に熱伝対を刺入して、レーザー照射中の紺織内温度を計測したところ、最高温度は出力5Wにおける49°Cであった。摘出後の時間経過により、組織内酸化ヘモグロビンの減少に伴って甲状腺実質の色調が赤褐色から白色調に変化したため、レーザー光が十分に吸収されず、再現性のある壊死を形成できなかったと考えられた。(2)ブタ正常甲状腺に対する組織内レーザー照射出力を2W、3W、5W、総照射最を250J、500J、1000J、1500Jとして実験を行った。2Wでは再現性のある壊死は形成されなかった。一方、3Wおよび5Wでは総照射最に比例して壊死の大きさは増大した。平均壊死直径の最大値は12mm(3w・300秒)であった。総照射量一定の下では、3Wの照射が5Wよりも大きな壊死を形成しる傾向にあった。
ヒト甲状腺癌(特に低分化癌)の分子病理学的研究

われわれは臨床病理学的手法により、甲状腺乳頭癌・濾胞癌中の一亜型として予後不良な低分化癌の存在を明らかにした(Sakamoto,A.,etal:Cancer,52:1849,1983)。今日ではその考えは広く認められるところとなり、わが国においては「外科・病理甲状腺癌取扱い規約」(第4版)でも組織亜型としてとり入れられている。この甲状腺低分化癌の生物学的態度を多面的に解析することを目的として本研究をすすめた。主に用いた手法は癌細胞より発現されるたん白質の免疫組織化学的検索、DNAの変異を検討する分子病理学的検索である。免疫組織化学ではケラチン、ビメンチンなどの細胞骨格たんぱくが高分化癌により高い頻度で発現されていることを確認した。また癌遺伝子c-erbB_2,癌抑制遺伝子p53などのたんぱく、PCNAたんぱくの検討では未分化癌での過剰発現が高率に見い出され、甲状腺癌の組織学的分化度は細胞骨格たんぱくの発現、癌遺伝子、癌抑制遺伝子産物の発現様態と密接な関連があることが示された。特にp53遺伝子たんぱくの検討からは未分化癌で60%、低分化癌で40%の症例に過剰発現がみられたことより、低分化癌は乳頭癌、濾胞癌(いずれも過剰発現率は約10%)の一亜型としてではなく、未分化癌に類縁の予後の悪いタイプとして捉えることの妥当性が明らかにされた。p53遺伝子の点突然変異の検索ではSSCP法、ダイレクト・シークエンス法により未分化癌でのエクソン58領域の高頻度の変異を確認した。また、従来報告のなかった低分化癌においても点突然変異症例を見い出した。なお、未分化癌では変異を認めた4例中3例では1塩基の置換、1例では2塩基の挿入によるフレームシフトがみられた。以上の結果は高分化癌が低分化癌を経ての未分化癌へと悪性度を増してゆく脱分化の過程でのp53遺伝子の関与を強く示唆した。今年度、我々はヒト甲状腺癌に関して、免疫組織化学を中心とした病理形態学、p53遺伝子をタ-ゲットとした分子病理学、並びに染色体分析による細胞遺伝学の3方面から研究を進めた。本研究の目的は我々は提唱し、病理学的には広く認められた低分化癌を含めた甲状腺癌各種病型における臨床病理学的生物学的特性の究明にある。免疫組織化学的検討では、以下の結果を得た。Thyroglobulinは従来報告されてきたように高分化癌ではほぼ全例で陽性、未分化癌ではほとんどが陰性、低分化癌では約40%が陽性であった。PCNAでは高分化癌、低分化癌の合計陽性率が20%、未分化癌では60%と有意な差を得た。またcーerbBー2でも高分化癌が16%、低分化癌19%、未分化癌30%と、分化度との逆相関を認めた。これらの結果から、種々の免疫組織化学マ-カ-は組織型とある程度密に関連し、また、低分化癌の存在もより確実なものとして促える事ができた。p53遺伝子蛋白の検討では、変異型蛋白の発現と組織型とが逆相関する事が明らかとなった。免疫組織化学的

染色で、その発現を調べると乳頭癌で33例中4例(12%)、濾胞癌17例中3例(16%)、低分化癌9例中4例(44%)、未分化癌8例中5例(52%)と、分化度が低いものほど発現率は高かった。症例数が不十分であるため、この差異に統計学的有意差はないが、こうした結果は現在まで報告されていない。またp53遺伝子に関しては未分化癌の1例で、エクソン7に点突然変異が1ヶ所認められたが、乳頭癌2例ではエクソン5ー8のいずれにも認められなかった。染色体分析は東京医科歯科大・細胞遺伝学教室と共同で平成3年12月より開始したところである。本年度は甲状腺癌の免疫組織化学的検索・染色体分析、癌抑制遺伝子の検索を前年度より継続して行ない、以下の様な研究結果を得た。免疫組織化学では、前年度迄に、ケラチン、ビメンチン等の細胞骨格蛋白が高分化癌に、より高い頻度で発見されている事を確認した。本年度は更に、癌遺伝子(C-erb-B2)、癌抑制遺伝子(p53)等の蛋白、PCNA蛋白について検討した。その結果未分化癌で過剰発現の頻度が高かった。したがって、このことと細胞骨格蛋白の発現減弱、あるいは発現消失とが密接に関連しているものと考えられた。特にp53遺伝子蛋白の検討の結果、未分化癌で60%、低分化癌も40%の症例で過剰発現が認められた事より、低分化癌は乳頭癌、濾胞癌(過剰発現率は約10%の症例)の一亜型というより、予後の悪い、むしろ未分化癌に近縁の独立した一組織型として捉える事もできると考えられた。p53遺伝子の点突然変異の検索では、すでに報告されている様に未分化癌ではエクソン58の領域に高頻度で変異が起きている事を確認できた。検索を終了した7例中、4例に変異を認め、その内訳はエクソン5に1例、エクソン7に1例、エクソン8に2例であった。また、従来報告されていない低分化癌に於いても点突然変異を有している症例が1例見い出された。現在、さらにその確認と、多症例での検索を行なっている。染色体分析は乳頭癌8例について行なったが、この癌に特異的と考えられる染色体変異は見出せなかった。研究期間の最終年度にあたり、「甲状腺低分化癌」という概念を生物学的立場、とくに遺伝子(genotype)の観点から確証することに焦点をしぼった。昨年度までに免疫組織化学的検索から、ケラチン、ビメンチンなどの細胞骨格たん白、サイログロブリン、PCNA、あるいはerbB-2、p53などの癌関連遺伝子たん白の発現が病理組織型によって有意に異なること、とくにその中で低分化癌が1つの独立した疾患単位としてとらえうることを報告してきた。本年度はp53遺伝子の点突然変異という点に着目し、甲状腺癌各組織型において、免疫組織化学染色陽性例のp53遺伝子のエクソン5-8に関する変異をSSCP(single-stranded conformation polymorphism)法、ダイレクト・シークエンス法によって検索した。その結果、(1)高分化癌においては抗p53抗体を用いた免疫染色陽性例(7例)のいずれにもSSCP法、ダイレクト・シークエンス法による変異の同定はできなかった。(2)低分化癌では免疫染色陽性剤6例中2例(33.3%)は点突然変異をみとめた。(3)未分化癌では6例中4例(67%)に変異をみとめ、内3例には1塩基の置換、1例には2塩基の挿入によるフレームシフトを見い出した。以上のように、甲状腺癌においては分化度の低い、すなわち悪性度の高い組織型を示すものにp53遺伝子の変異の頻度が高いことが示された。このことは、高分化癌から未分化癌への脱分化の過程におけるp53遺伝子の関与を強く示唆していると考えられる。また同時に低分化癌にも点突然変異が同定されたことにより、従来は高分化癌と同類に扱われていた低分化癌は、未分化癌に近い性質を持つもので、高分化癌とは別のカテゴリーに属することを示す有力な根拠がえられた。
内耳奇形ノックアウトマウスを用いた特異的脳内物質の遺伝子発現の同定

本研究では内耳奇形ノックアウトマウスと聴覚正常マウスの脳幹聴覚路、大脳、大脳辺縁系で発現に差を認める遺伝子についてマイクロアレイ法を用いて同定、聴覚障害に関与する特異的タンパクを検出することで、中枢における聴覚障害の機序について遺伝子レベルでの解明を主眼としている。内耳奇形ノックアウトマウスは多数存在し、その選択について種々の検討を行っている。内耳奇形ノックアウトマウスは聴力障害だけでなく、前庭障害を伴っているものが多いことが、本研究の主旨に基づいた適切なマウスの選択を難しくしている。並行して進めている研究として、昨年度、我々は内耳奇形ノックアウトマウスを用いた実験に進む前段階で行った聴覚正常マウスの中枢聴覚路における加齢性の遺伝子発現について報告した。早期加齢難聴を示すC57/BL6マウスを生後4週齢の若年群、50週齢の老年群に分け、cDNAマイクロアレイ法で解析を行った。蝸牛神経核・下丘においてそれぞれup regulate, downregulateしている遺伝子が数百認められた。その結果を元にリアルタイムPCRにて追証したところ、同様にdown regulateしている2つの遺伝子に着目した。蝸牛神経核では神経可塑性との関連が示唆されている遺伝子Pkcε、下丘ではグルタミン酸の受容体遺伝子Grin1(NMDAR1)であった。Grin1(NMDA1)の局在についてin situ hybridizationを行った結果、下丘においてその発現を認めた。さらに老年群では若年群に比べGrin1のmRNAの有意な低下を認めた。グルタミン酸は重要な聴覚伝達物質であり、老年マウスの下丘でのGrin1の発現低下はGrin1が加齢難聴の進行に関与していることを示唆する結果と考えられた。本研究では内耳奇形ノックアウトマウスと聴覚正常マウスの脳幹聴覚路、大脳、大脳辺縁系で発現に差を認める遺伝子についてマイクロアレイ法で同定、聴覚障害に関与する特異的タンパクを検出すし、中枢における聴覚障害の機序を遺伝子レベルで解明することを主眼としている。内耳奇形ノックアウトマウスを用いた実験に進む前段階として、聴覚正常マウスの中枢聴覚路における遺伝子発現について調べた。実験動物はC57/B16マウスで、生後4週齢を若年群、50週齢を老年群とした。ABR測定で2,4,8,16kHzの周波数における聴力閾値を測定後、蝸牛神経核および下丘を摘出し、total RNAを抽出した。その後、total RNAのquality checkを行い、total-RNAを増幅し、cDNA microarray mouse chipへのhybridizationを行った。chipのスキャニング後、ImaGene発現データ解析ソフトウェア(現有設備)を使用し、microarray data解析を行った。また、その結果を元にreal time PCRdで追証した。蝸牛神経核・下丘においてそれぞれup regulate, downregulateしている遺伝子を数百認め、上記の実験を3度施行し、三回ともdown regulateしている遺伝子に着目した。その結果、神経可塑性との関連が示唆されている遺伝子Pkcεと聴覚神経の神経保護因子と関連している遺伝子NMDA1に注目した。real time PCRの結果もマイクロアレイ実験結果と同様であった。現在、蝸牛神経核及び下丘で同定された遺伝子PkcεとNMDA1の中枢聴覚路での局在についてin situ hybridization法を行う予定である。また遺伝子Pkcεのサブタイプについてもreal time PCRを用いて定量解析を行っている。