hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
有機合成手法を基にした新規蛋白質検出法の開発および蛋白質プロファイリングへの応用

インドリルマレイミド誘導体IM-54は当研究室で開発された細胞死抑制剤であり、ヒト白血病細胞HL60において、エトポシドなどにより誘導される典型的なアポトーシスは抑制せず、過酸化水素などの酸化的ストレスにより誘導される細胞死を強力に抑制することが見出されている。細胞死は、古くはその形態によりアポトーシスとネクローシスに区別され、アポトーシスは不要になった細胞などを排除する生体にとって必須の細胞死として位置づけられた。そのため、アポトーシス研究が精力的に行われ、カスパーゼと呼ばれるプロテアーゼファミリーを中心とする制御機構が存在することが明らかにされてきた。これら一連の研究に対してカスパーゼ阻害剤が果たした役割は大きい。一方、ネクローシスは過剰な外的ストレスなどにより生ずる受動的な細胞死と考えられていたが、近年になり、何らかの制御機構の存在が推定され、IM-54の作用機序の解明は新たな細胞死の制御機構の解明につながるものと期待される。昨年度は構造活性相関により得られた知見を基にインドリルマレイミド誘導体の細胞内局在を調べるための蛍光標識化誘導体合成、結合蛋白質同定のためのアフィニティーゲルおよび光親和性官能基を有するビオチン標識体を合成した。本年度は昨年度合成した蛍光標識化誘導体およびビオチン標識体を用いた細胞内局在および結合蛋白質の同定を進めた、その結果、ビオチン標識体を用いた検討による蛋白質結合部位の同定には至らなかったが、蛍光標識化誘導体が局在する小器官を明らかにし、さらに、アフィニティーゲルによる結合蛋白質候補の同定にも成功した。IM-54は当研究室で開発された細胞死抑制剤であり、ヒト白血病細胞HL60において、エトポシドなどにより誘導される典型的なアポトーシスは抑制せず、過酸化水素などの酸化的ストレスにより誘導される細胞死を強力に抑制することが見出されている。本年度はIM-54をプローブ化するための基盤となる構造活性相関を得るべく種々の誘導体合成を行いIM-54よりも高い活性を有するIM-93の創製に成功した。このIM-93は非常に高い水溶性も有しているため、今後、動物実験への展開も期待される。さらに、構造活性相関で得られた知見を基に、ビオチン標識化された光アフィニティープローブを設計し、その合成ルートを確立した。現在、合成したプローブを鍵として、IM誘導体の結合蛋白質および結合部位の同定を進めている。昨年度は作用機序の解明のためにIM-54をプローブ化するための基盤となる構造活性相関を行った。本年度は構造活性相関により得られた知見を基にインドリルマレイミド誘導体の細胞内局在を調べるための蛍光標識化誘導体、さらに、結合蛋白質および結合部位を同定するための光親和性官能基であるアジド基を分子内に有する誘導体の合成に成功した。さらに、これら誘導体が細胞死抑制活性を有することも確認した。現在は蛍光標識化誘導体を用いた細胞内局在の検討および光親和性プローブをもちいた結合蛋白質の同定を進めている。一方、ネクローシスは過剰な外的

ストレスなどにより生ずる受動的な細胞死と考えられていたが、近年になり、何らかの制御機構の存在が推定され、IM-54の作用機序の解明は新たな細胞死の制御機構の解明につながるものと期待される。昨年度は構造活性相関により得られた知見を基にインドリルマレイミド誘導体の細胞内局在を調べるための蛍光標識化誘導体合成、結合蛋白質同定のためのアフィニティーゲルおよび光親和性官能基を有するビオチン標識体を合成した。本年度は昨年度合成した蛍光標識化誘導体およびビオチン標識体を用いた細胞内局在および結合蛋白質の同定を進めた、その結果、ビオチン標識体を用いた検討による蛋白質結合部位の同定には至らなかったが、蛍光標識化誘導体が局在する小器官を明らかにし、さらに、アフィニティーゲルによる結合蛋白質候補の同定にも成功した。
糖鎖バイオマーカーを用いた癌の総合力評価により前立腺癌の過剰治療を回避する方法

まず、前立腺全摘で得られたパラフィン包埋切片を用いた免疫組織学的検討では、C2GnTの染色性は術後のPSA再発の独立した予測因子であった。さらに、前立腺マッサージ後尿を検体とするドットブロット法によるアッセイ系を開発し、前立腺癌の被膜外浸潤を予測する新規悪性度マーカーとしての有用性を確認した。個々の前立腺癌症例に対して適切な治療選択を行う上で、前立腺癌の悪性度を反映するバイオマーカーの開発は重要な研究課題となっている。糖転移酵素Core2-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase (C2GnT)は糖タンパク質に分岐型コア2糖鎖構造を形成する酵素であり、私達の研究グループは、その発現が肺癌、大腸癌、精巣腫瘍、膀胱癌、前立腺癌の悪性度と相関することを報告してきた。しかしながら、これまでの報告はC2GnTの検出にウサギに免疫することにより得られたポリクローナル抗体を使用しており、その特異性、抗体の安定性に欠ける部分もあった。そこで、新たにマウスに免疫することで得たC2GnT特異的なモノクローナル抗体を作製し、前立腺癌の悪性度とC2GnT発現の相関を免疫組織化学的に検討した。新規に作製した抗C2GnTモノクローナル抗体により前立腺全摘除術で得られた前立腺癌パラフィン切片を用いて組織染色を行ったところ、正常前立腺組織ではC2GnT発現は見られず、前立腺癌組織においてはC2GnT発現陰性例と陽性例が存在した。そこで、C2GnTの染色性により2群に分け、臨床データと照らし合わせたところ、C2GnT陽性例は癌の前立腺外への進展率が優位に高く、腫瘍サイズが有意に大きいことが明らかとなった。さらに、C2GnT陽性群は陰性群に比べ術後PSA再発率が有意に高く(p<0.001)、切除縁癌陽性、iPSA、High Riskと共に独立した術後PSA再発の危険因子であることが明らかとなった。本研究では、前立腺癌の生物学的悪性度の指標となる新規バイオマーカーとして、O-グリカン合成に関与するC2GnT(core2 N-acetylglucosaminyltransferase)を取り入れた前立腺癌悪性度診断ツールを開発する。私共の予備研究によってC2GnTの発現は癌の総合的悪性度を反映していることが判明している。前立腺癌の総合的悪性度を個別に判定し、治療介入が必要な「臨床的に意義のある」前立腺癌を鑑別し、「過剰治療」を回避することが最終目標である。交付申請書に記載した当該年度の計画は1抗C2GnTモノクローナル抗体の作製、2抗C2GnTを用いた免疫組織染色、3血清、前立腺圧出液をサンプルとするC2GnTの定量アッセイ系の樹立であった。1に関しては、予定通り抗C2GnTモノクローナル抗体を樹立した。このモノクローナル抗体はWestern blot、パラフィン切片での免疫組織染色、ELISAで使用可能であることを確認した。当該モノクローナル抗体に関する特許を申請した。2に関しては、抗C2GnTモノクローナル抗体を使用して、前立腺全的標本(パラフィン切片)の免疫組織染色を行った。その結果、C2GnT陽性率はGleason score、pT、PSA再発率と強い関連性を示した。3に関しては、前立腺マッサージ後の尿を検体として、ドットブロット法でC2GnTの検出を試みた。その結果、前立腺癌におけるC2GnTの発現率は良性前立腺疾患に比して有意に高いことを確認した。前立腺癌は個々の症例によって悪性度が大きく異なり、過剰治療を回避して患者個別の治療計画を立案するシステムを構築することが世界的な課題となっている。糖転移酵素Core2 beta-1,6-N-acetylglucosaminyltransferase (C2GnT)は糖タンパク質に分岐型コア2糖鎖構造を形成する酵素であり、我々は本酵素の発現が前立腺癌、膀胱癌、精巣腫瘍などにおいて悪性度と極めて密接に関連することを見出した。しかし、この抗体はポリクローナルであったため、特異性、再現性の点で標準的悪性度診断法として臨床応用するには大きな問題を抱えていた。そこで、我々は新たに抗C2GnTモノクローナル抗体を作成して以下の検討を行った。次に、血清レベルでのC2GnTの検出を試みたが、ドットブロット法の検出能力では血清C2GnTの定量は困難であった。そこで、前立腺マッサージ後尿を検体とするドットブロット法によるアッセイ系を開発した。このアッセイ系では、C2GnTの発現は前立腺癌の被膜外浸潤を予測する新規悪性度マーカーとして有用な方法であった。今後は、C2GnTの検出限界をさらに改善したアッセイ系を開発し、血清レベルでのC2GnT定量を試みたい。前立腺マッサージ後尿を検体とするアッセイ系は外部サンプルを用いたvalidation studyを予定している。泌尿器科学新規開発を試みたモノクローナル抗体の樹立が予想よりも早く達成できた。

さらに、このモノクローナル抗体の用途が広く、パラフィン切片でも使用可能であることが確認されたため、前立腺癌組織におけるC2GnT発現の意義に関する検討が予定よりも早期に実行可能であった。交付申請書に記載した当該年度の計画は1抗C2GnTモノクローナル抗体の作製、2抗C2GnTを用いた免疫組織染色、3血清、前立腺圧出液をサンプルとするC2GnTの定量アッセイ系の樹立であった。Western blot、免疫組織染色、ELISAで使用できる抗体を樹立し、前立腺癌における悪性度を反映するマーカーとしての有用性を確認したので、当該年度の目標を100%達成したと判断している。新規に開発した抗C2GnTモノクローナル抗体を使用して、前立腺組織におけるC2GnTの発現の意義をさらに明確化していく。これまでは前立腺全摘標本のみであったが、生検標本、血清、尿、前立腺圧出液、精嚢液も対象に含めて検討する。今後の研究推進方策として、以下の事項を計画している。1前立腺癌の悪性度マーカーとしてC2GnT発現の意義を明確にする。1)前立腺針生検および前立腺全摘除標本に対して抗C2GnTモノクローナル抗体による免疫組織染色を行い、術後のPSA再発との関係を明確にする。2)血清および前立腺圧出液をサンプルとしてC2GnTのアッセイ系を確立し、予後因子としての有用性を確認する。2PSA、臨床病期、Gleason score、C2GnTから構成される前立腺癌悪性度ノモグラムの作成。1)ノモグラムの検証2)キャリブレーション3海外共同研究施設からの臨床サンプルの提供を受け、人種間の差を考慮に入れた「前立腺癌悪性度診断ツール」を確立する。「該当なし」
新規合成法による銀ナノ粒子と担体との複合化による抗微生物化衛生・医療材料の創製

銀ナノ粒子合成時の銀イオン含有ガラス粉末とグルコース水溶液をオートクレーブすることで銀ナノ粒子(粒径:約5 ±2 nm)が形成する。この新たな銀ナノ粒子合成及び粒径制御技術と適切な担体の使用により、抗微生物活性を有した衛生材料、或いは医療用材料の開発が可能となった。特に、ナノ線維様或いはナノ多孔性表面構造を有するキチン・キトサン微粉末やシートは、銀ナノ粒子をその表面に効率的に吸着し、安定な複合体を形成する。この複合体は、銀ナノ粒子の吸着量に応じた強い抗微生物活性を発現した。さらに、複合体の細胞毒性についての検討で、活性酸素ラジカルの発生による強い酸化ストレスに起因することが示唆されている。(1)ナノ線維様の表面構造を有するキチン担体を用いて、約5 ±2 nmの均一な粒径を有する銀ナノ粒子の吸着性及び安定性について検討した。キチンは正の弱電荷を有するため、表面に塩化物及び酸化物が形成されて負の弱電荷を有する銀ナノ粒子と結合することができる。特に、粒子径が小さく(100 μm以下)ナノ繊維状模様表面構造を有するキチン微粉末は、銀ナノ粒子を含むコロイド溶液に混合することで、銀ナノ粒子と効率的に結合し、キチン/銀ナノ粒子複合体粉末の製造がキロスケールで可能となった。一方、滑らかな表面構造を有するキチンは銀ナノ粒子の吸着性は悪いことが明らかになった。さらに抗感染性創傷被覆材料として、ナノ線維様表面構造を有するキチンスポンジ等のキチン製剤へ銀ナノ粒子を直接吸着させる試みを実施した。(2)本研究ではさらに、抗真菌(A. Niger)や抗ウィルス活性(A型インフルエンザ)も検討し、抗微生物活性スペクトルを確立した。さらに、感染性微生物に対する各種衛生・医療用材料として適用するため、有効な抗微生物活性に要求されるキチンへの銀ナノ粒子吸着量及び用途に応じた汎用材料に混合或いは被覆するキチン/銀ナノ粒子複合体微粉末の濃度を決定し、論文発表を行った。3.キチン/銀ナノ粒子複合体を適用した抗感染性創傷被覆材の創製と抗微生物活性のメカニズム解明の研究を実施中である。我々はすでに、キチン/銀ナノ粒子複合体がin vitroで緑膿菌に対しても強い殺菌効果を有することを確認している。そこで本研究では、糖尿病発症(db/db)マウスの背部に全損傷をつくり、緑膿菌を滴下して作る化膿性創傷モデルに対するキチン/銀ナノ粒子複合体の抗菌活性及び創傷治癒促進効果を肉芽組織形成、表皮組織形成及び新生血管形成を基に、組織学的に評価している。本研究の特色は、銀ナノ粒子合成時の銀イオン供給剤として銀イオン含有ガラス粉末(1%)、還元剤としてグルコース(0.8%)水溶液をオートクレーブし、銀イオン含有ガラス界面からの銀イオンの拡散及び還元による銀ナノ粒子の形成を伴う不均一な系を用いることにある。従来の金属ナノ粒子合成法のほとんどは薬剤を均一に分散させた系に関したもので、10 nm以下の粒径制御は困難であり、粒径分布が広くなりがちである。しかし、本調製法では5±2 nmの均一な銀ナノ粒子が、銀イオン含有ガラス微粒子の銀イオン重量に対して70%以上の収率で得られる。この際、還元剤として添加したグルコースは高温、高圧下で、副産物である褐色のあめ状物質(カラメル)に変化し、銀ナノ粒子コロイド溶液中では銀ナノ粒子の保護剤として作用する。この新たな銀ナノ粒子合成および粒径制御技術と適切な担体の使用により、最終的には抗真菌、抗菌性に加えて抗ウィルス性、すなわち総合的抗微生物活性を有した衛生材料、或いは医療用材料の開発が可能となった。また、キチン・キトサン微粉末は、銀ナノ粒子をその表面に効率的に吸着し、複合体を形成する。生成した銀ナノ粒子/担体複合体微粉末は、副産物であるカラメルを水洗浄により除去した後、乾燥させることで、kgスケールで簡便に調製することができる。この銀ナノ粒子/担体複合体は、担体として各種繊維、紙、コットン、ゴム類、プラスチック類、木材、樹脂、塗料等の汎用材料に混合・塗布・被覆することで抗衛生材料として種々の用途に供することが可能となっている。さらに安全性の検討の結果、銀ナノ粒子の添加により生じる細胞毒性は主として酸化ストレスの効果であることが判明し(論文準備中)、銀ナノ粒子の強い抗微生物活性も酸化ストレスによることが示唆されている。単純でマクロな金属単体の塊状での物性とは全く異なった金属ナノ粒子は、そのサイズや形状に依存した抗微生物学的、光学的、電磁気的、化学的特性を生じることが知られている。

その中でも、銀ナノ粒子は安定な貴金属としては比較的安価に製造ができ、その物理的及び化学的性質から抗微生物剤、消臭剤、ドラッグデリバリーシステム等に応用することが可能であることを実証し、大きな注目を集めている。一例を挙げると、確立した粒径及び形状を制御する技術により製造した粒径が10 nm以下の銀ナノ粒子は、HIV-1やインフルエンザウィルスのエンベロープに選択的に吸着し、ウィルスを不活化させることを実証した。さらに銀ナノ粒子はナノ線維様表面構造を有するキチン微粉末の表面に効率的に吸着し、安定したキチン/銀ナノ粒子複合体を形成する。そのキチン/銀ナノ粒子複合体微粉末のキログラムスケールでの製造法を確立し、それら複合体の抗微生物(抗真菌、抗菌、抗ウィルス)活性及び安定性は銀ナノ粒子単独よりもはるかに高いことを実証し、汎用衛生材料及び抗感染性創傷被覆材料への適用により実用化の可能性を認めた。加えて、感染性微生物に対する除染剤、各種汎用衛生材料、抗感染性創傷被覆材として適用するために、有効な抗微生物活性に要求されるナノ線維様表面構造を有するキチン担体への銀ナノ粒子最適吸着量、及び添加するそれぞれのキチン/銀ナノ粒子複合体微粉末の濃度についても検討した。しかし、銀ナノ粒子の抗微生物活性のメカニズムについての検証が十分行われてなく、細胞培養を用いた細胞毒性や小動物を用いた急性炎症性等を評価・検討も不十分であり、平成27年度の課題としている。生体材料1.平成26年に引き続いて、最適化したキチン/銀ナノ粒子複合体の製造基準を確立し、キログラムスケールでの製造を実施し、共同研究者に分配し、評価を受ける。この際必要に応じて、細胞培養を用いた細胞毒性や小動物を用いた急性炎症性等を評価・検討する。銀ナノ粒子の吸着性の悪いキチンは酢酸処理後摩砕することで微粒子化とともにナノ線維表面構造を獲得し、銀ナノ粒子の吸着性は大きく改善した。さらに、銀ナノ粒子を全く吸着しない滑らかな表面構造を有するプラスチックをプラズマ表面処理することで銀ナノ粒子の吸着性を大きく改善させる手法を確立する。したがってキチンに加えて、各種用途に応じた銀ナノ粒子の担体として適する物質の探索と担体表面構造の改変を検討する。2.キチン以外の各担体/銀ナノ粒子複合体についても抗微生物(抗菌、抗真菌、抗ウィルス)活性について評価し、抗微生物活性スペクトルを確立する。さらに、感染性微生物に対する汎用除染剤や各種衛生材料として適用するために、抗微生物活性に要求されるそれぞれの担体への銀ナノ粒子吸着量、及び汎用材料に添加するそれぞれの銀ナノ粒子/担体複合体微粉末の濃度についての検討を実施する。3.キチンに加えて、ゼオライト、アパタイト、キトサン、生石灰、活性炭等の担体/銀ナノ粒子複合体について、抗微生物衛生材料及び抗感染性創傷被覆材としての安全性、安定性、優位性を評価・検討する。また、創傷被覆材としての適用の可否を検討するため、必要に応じて培養細胞を用いた細胞毒性や小動物を用いた急性炎症性等を評価・検討する。さらに、各担体/銀ナノ粒子複合体に抗酸化剤の添加により得られると考えられる酸化ストレスの軽減についての検討も合わせて実施する。抗微生物活性のメカニズムについての研究進展と論文執筆について、少し遅れが出ており、次年度使用額が生じた。現在すでに試薬・動物等の購入準備が進められている。論文については、2報の論文をオープンアクセスのジャーナルに提出済み(1報採択、1報メジャーレビジョン)で、さらに1報準備中である。
ハイパー核ガンマ線分光法を用いた核内ラムダ粒子の磁気モーメントの研究

ハイパー核精密γ線分光により、ハイパー核のΛスピン反転M1遷移の換算遷移確率B(M1)を測定して核内Λ粒子の磁気モーメントを求め、バリオンの核媒質効果を調べる。そのためJ-PARC E13実験を進めた。γ線検出器Hyperball-J、K1.8/SKSスペクトロメータ検出器、液体標的の開発・製作・調整を行い、実際のビームで装置全体の性能確認を行った。(K-,π-)反応断面積の新しいデータも得た。Ge検出器超高計数用読出し回路も開発した。J-PARCの事故のためビームタイムが中断し期間内に物理データが取れなかったが、H27年4月の運転再開後直ちに実験を行い、19ΛF等の成果が出る予定である。H24年度から実施予定のJ-PARC E13実験に向けて、Ge検出器群Hyperball-Jの調整を東北大学で行った。Hyperball-Jの心臓部分である低温型Ge検出器とバックグランド抑止用PWOカウンターについては、東日本大震災で一部が被害を受けたため、テスト・修理を行った。また、検出器の詳細な個別性能チェックを行うとともに、HVやGe検出器冷凍機等の制御システムを完成させ、Hyperball-Jの磁気シールドやケーブル類などの周辺装備を整えた。Hyperball-Jの耐計数率を向上させるため、PWOカウンターについては、高品質のロシア製PWO結晶を購入して日本で加工し、これを用いて4台のPWOカウンターを製作した。これらは計数率が特に高いHyperball-Jの下流箇所に組み込んでテストする予定である。今後J-PARCのビーム強度が上がった場合に備え、波形読出しとそのオフライン解析によるHyperball-Jの高計数率読出し法の開発を進めた。リセット型プリアンプを使用しているため、waveform digitizerの前段にpick-off回路を入れてリセット時のoverloadを急速に回復することとし、試作回路をつくってテストを行い、良好な見通しが得られた。B(M1)測定のために必要な低密度の19F標的として、フッ化水素標的を使用することとし、専門家の助言を受けながら、安全性に配慮してテフロン製の標的容器の設計を行った。また、液体ヘリウム標的を設計し、製作を進めた。E13実験の現実的なsimulationを行い、標的物質やビーム運動量の最適化を行った。7Li標的によるB(M1)測定では、K1.1ラインにおいて運動量1.1GeV/cのK-ビームを用いる場合が最も測定精度がよいことが分かった。H24年度3月からビームタイムが割当てられたJ-PARC E13実験に向け、東北大学にてHyperball-Jを架台に組み込む試験と、線源による全体の性能試験を行ったが、Ge検出器とPWOカウンターの性能はほぼ予想(simulation)通りであった。その後6月にJ-PARC K1.1BRラインに2組のGe検出器とPWOカウンターを設置して、本番と同じ中間子ビームを用いてテスト実験を行ったところ、Ge検出器の検出効率と分解能の大強度ビームに対する性能は、過去の経験から予想される性能を若干上回った。PWOカウンターの性能も良好であった。夏にHyperball-Jを分解して東北大からJ-PARCハドロン施設に移動し、実験を行うK1.8ラインの標的位置に組み上げた。高圧線、信号線、冷却ライン等を配線・配管し、回路系、データ収集系を構築した。その後全体の動作確認テストを行った。K1.8/SKS磁気スペクトロメータの検出器については、E13実験に合わせた設置位置の変更や調整、動作確認を行った。また、K1.8ライン上流と標的直後の位置検出器として、東北大で開発したシンチレーティングファイバー飛跡検出器を設置し、121月のK1.8ラインの実験(E10)において性能を調べ、従来の510倍の大強度ビーム中で動作することが分かった。昨年度製作した液体ヘリウム標的の動作試験を行い良好な結果を得た。またテフロン製フッ化水素標的容器を製作した。E13前半のビームタイムでは、3月にK1.8ラインのK-ビーム調整を行い、ほぼ予想通りの強度が得られた。また、実験に用いるすべての検出器をテストし、並行してデータ解析用プログラムを開発した。ビーム強度アップに備えたGe検出器の高計数読出し回路系の開発では、信号前段処理回路の試作品のテスト実験を行い、改良すれば実用化できる見込みが得られた。H25年4月よりJ-PARC E13実験の最終調整とビームを用いたコミッショニングを行った。K-ビームの調整を行い、十分な強度とK/π比が得られた。

また、ビームラインや磁気スペクトロメータのすべての検出器の性能を実際のK中間子ビームで調べて確認し、炭素標的を用いた(K-,π-)反応のテスト的なデータを取ったところ、スペクトロメータの性能(質量分解能や検出効率)が十分良いことが確かめられた。さらに、ガンマ線検出器Hyperball-Jのメンテナンスと最終テストを行い、実際のK中間子ビームでデータをとり、検出効率やビームオンでの分解能などの性能が十分であることを確かめた。本番のデータをとる準備がほぼ整った5月23日に、ハドロン施設の放射能漏洩事故が発生し、ビームが停止し、長期にわたり実験が中断することとなった。そこで、テスト的に収集したデータから、1.8 GeV/c, 1.5 GeV/cでの(K-,π-)反応による陽子からのΣ+粒子の生成断面積、およびこれらの運動量での12C(K-,π-)反応でのハイパー核12ΛCの生成スペクトルを求めて、学会で発表した。これらは新しいデータであり、今後のハイパー核研究にとって有用なものとなる。さらに、安全なフッ化水素標的の開発を進めた。ビーム強度アップに備えたGe検出器の高計数読出し回路系の開発では、試作した信号前段処理回路を改良し、さらにこれをアルゴンヌ研究所製の波形デジタイザ回路に接続して、ガンマ線エネルギーの分解能悪化などの実用上の問題点を洗い出し、実装を改良するなどして一層の性能向上に取り組んだ。核内Λ粒子の磁気モーメントを調べるためのハイパー核γ線分光実験として、H26年度までに4ΛHe、19ΛFハイパー核のγ線分光実験(J-PARC E13)を実施する予定であった。H25年5月に起きたJ-PARC事故により施設の運転が中断し、事故対策として進められたハドロン施設の改修が予想より遅れ、H26年度内には運転が再開しなかった。だた、必要な実験装置の設置、調整、性能テストをすべて完了したため、H27年度4月の施設再開直後にデータが取れ、結果が出せることとなった。H26年度の成果は以下の通り。○J-PARC K1.8ラインに設置したHyperball-Jの検出器の真空引き等のメンテナンスを行い、再び設置して動作確認を行った。また、製作した液体ヘリウム標的の性能確認を行った。フッ素標的として、HFにかわりCF4の低温液体標的を開発し、完成させた。○H25年度の事故前に収集したテストデータを解析し、1.8, 1.5 GeV/cのK-ビームによるK-p→Σ+π-反応の微分断面積を導出すると共に、1.8 GeV/c(K-,π-)反応における12ΛCハイーパ核の生成の微分断面積を得た。これらは、(K-,π-)反応を理解するための貴重なデータとなった。さらにK1.8/SKS磁気スペクトロメータの性能も確認した。○磁気スペークトロメータ系とHyperball-Jの解析プログラムを開発・改良した。目的のハイパー核γ線ピークにドップラーシフト減衰法を適用してγ線放出の寿命を求め、そこから核内Λ粒子のg因子を導出するための解析プログラムも開発した。○将来のJ-PARCビーム強度向上に備えて開発してきた波形読出しによるHyperball-J高計数読出し回路系について、信号前段処理回路の開発に成功し、米国アルゴンヌ研究所製の波形デジタイザシステムと接続して使用可能となった。26年度が最終年度であるため、記入しない。
神経変性疾患におけるグリア細胞由来神経栄養因子受容体の分子病理学的研究

グリア細胞由来神経栄養因子(Glialcell line-derived neurotrophic factor、GDNF)はドパミン作動性神経細胞の栄養因子として同定されたグリア細胞由来の神経栄養因子である。現在ではドパミン神経細胞のみなく、脳神経細胞や脊髄前角細胞などの運動神経に対しても栄養因子として作用することが明らかにされている。最近,GDNFの受容体GFRα1がクローニングされた。本研究では抗GFRα1抗体を作製し、この抗体を用いてヒト剖検脳を免疫組織化学的に検索した。GFRα1のアミノ酸配列のN末端とC末端部分からGFRα1に特異的な部分配の合成ペプチドを作製し、これをKLHとコンジュゲートして免疫原とした。この免疫原を家兎に免疫注射して抗血清を得た。得られた抗血清を合成ペプチドをもちいてアフィニティー精製した後、抗体の特異性検定と免疫組織化学的検索を行った。精製抗体はラット全脳とヒト剖検脳のホモジェネートをサンプルとしたイムノプロットにて、いずれも80kDaの単一バンドを認識した。これは予想される分子量とほぼ一致し、また染色性は免疫原の合成ペプチドにより吸収された。免疫組織化学により、ラット脳ではGFRαlは神経細胞のみに局在することを明らかにした。その分布は広範であり、従来考えられていた以上に多くの神経細胞に栄養因子として作用していることが推測された。大脳皮質、前脳基底部、基底核、脳幹ドパミン神経、運動脳神経核、脊髄前角細胞などの神経細胞にGFRα1免疫活性を観察し、これらの神経細胞において栄養因子として作用していることが推測された。本年度はGlial cell line-derivedneurotrophic factorレセプター(GDNFR)のアミノ酸配列のN末端部分からGDNFRに特異的な配列部分を選択し、合成ペプチドを作製した。この合成ペプチドとKeyhole limpethemocyanineをMBS法によりコンジュゲートを作製し、これを免疫原として、家兎に免疫した。10回余りの追加免疫のすえ、高力価の抗血清をえた。抗血清は抗原として用いた合成ペプチドを担体としたアフィニチカラムをもちいて精製した。得られた精製抗体はラット全脳とヒト剖検脳大脳皮質のホモジェネートをサンプルとしたウェスタンブロットにより、いずれについても80kDA付近に単一バンドを検出した。この分子量はアミノ酸配列から予想される分子量に近いものである。したがって、本精製抗体はラット脳とヒト大脳皮質のGDNFR蛋白を特異的に認識すると推測された。この抗体をもちいて、ラット脳の凍結切片について免疫組織化学染色を行った。その結果、ラット脳の神経細胞の一部に免疫活性を観察した。グリア細胞は全く染色されなかった。陽性神経細胞は、大脳皮質、マイネルト基底核、黒質、基底核などに観察された。さらに、神経細胞のみならず、軸索と考えられる神経突起にも免疫活性を認めた。陽性神経突起の分布は限局的であり、大脳皮質、基底核、黒質、中脳被蓋などに観察された。これらの結果からラット脳でのGDNFRの分布図を作製した。さらに、ヒト脳でも免疫染色を行い、すでに陽性神経細胞を特定の領域に観察している。今後、ヒト脳での分布とパーキンソン病などの神経変性疾患剖検脳での変化を追究する予定である。

GFRα1のアミノ酸配列のN末端とC末端部分からGFRα1に特異的な部分配の合成ペプチドを作製し、これを免疫原として、家兎に免疫して抗血清を得た。得られたを精製した後、特異性の検定と免疫組織化学的検索を行った。精製抗体はラット全脳とヒト剖検脳のホモジェネートをサンプルとしたイムノブロットにて80kDaの単一バンドを認識した。これは予想される分子量とほぼ一致した。免疫組織化学によりラット脳ではGFRα1は神経細胞のみにきよくざいすることを明らかにした。その分布は広範であり、従来考えられていた以上に多くの神経細胞に栄養因子として作用していることが推測された。現在、ヒト剖検脳での局在を検討しており、ヒト脳においてもGFRα1が神経細胞に存在することを観察している。今後、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、多系統萎縮症、アルツハイマー病などの各種神経変性疾患でのGFRα1の局在の変化を検討することにより、GDNFとこれらの神経変性疾患との因果関係の有無を調査する計画である。
ミクロスフィアを用いた走査型電気化学顕微鏡による局所塩濃度測定

ポリスチレンスルフォン酸から成るミクロスフィアを水に分散し、その懸濁液の陽イオンを水素イオンに置換した後に徹底的に脱イオンを行う。この液は塩濃度が低いために電気化学的測定をしにくいが、微小電極を用いれば測定可能となり、対イオンである水素イオンの電極電流が測定できる。つまり、大部分の水素イオンはミクロスフィアに捕捉されている。ところが懸濁液に塩を入れると捕捉が解け、全水素イオンが電極反応する。還元電流値は塩の濃度、正確にはイオン強度に極めて敏感であるため、微小電極による還元電流の測定は塩の検出器となりうる。本研究ではポリスチレンスルフォン酸ミクロスフィアの捕捉した水素イオンが電極還元する電流を測定し、塩の濃度に対する変化を単純なモデルを用いて検討する。その結果を走査型電気化学顕微鏡の方法に応用することによって、塩の局所検出に応用する。初年度には基礎実験に取り組み、ミクロスフィアに捕捉された水素イオンは弱酸と同じように活性化過程であるか調べた。これは物理過程である静電相互作用による結果を化学反応と同等に扱えるかどうかを問題にする。検量線による分析ではなく、化学の本質に関わる課題である。(1)溶媒として2メチルピロリドンを用いることにより、大きなミクロスフィアを合成した。TEMによる測定では、直径が0.7μmの球であり、大きさの分布幅はきわめて小さかった。(2)ミクロスフィアの支持塩を含まない懸濁液において、微小電極を用いた定常電流電位曲線を測定した。S字型の典型的な曲線が得られた。(3)セルに液を回転する装置を取り付け、電流値が流動の影響をどのくらい受けるか検討した。(4)ピエゾ素子でできた走査型電気化学顕微鏡を自作した。単純な酸化還元系を用いて、自作品の性能を検討したところ、ほぼ満足のできる結果が得られた。現在、光の干渉と電気化学の同時測定行い、ミクロスフィアの構造化と電極反応との関連を調べている。ミクロスフィアを用いた類似の研究で、ミクロスフィアの表面をポリアニリンによって被覆して電極活性をもたせると、電流に振動が見られた。空間分解能のある本装置を応用して、電極と絶縁壁との間を変化させ、電極反応電流の時間応答を測定した。データの検討中である。本申請ではポリスチレンスルフォン酸ミクロスフィアの捕捉した水素イオンが電極還元する電流を測定し、塩の濃度に対する変化を単純なモデルを用いて検討する。

これは物理過程である静電相互作用による結果を化学反応と同等に扱えるかどうかを問題にする。検量線による分析ではなく、化学の本質に関わる課題である。(1)溶媒として2メチルピロリドンを用いることにより、大きなミクロスフィアを合成した。TEMによる測定では、直径が0.7μmの球であり、大きさの分布幅はきわめて小さかった。(2)ミクロスフィアの支持塩を含まない懸濁液において、微小電極を用いた定常電流電位曲線を測定した。S字型の典型的な曲線が得られた。(3)セルに液を回転する装置を取り付け、電流値が流動の影響をどのくらい受けるか検討した。(4)ピエゾ素子でできた走査型電気化学顕微鏡を自作した。単純な酸化還元系を用いて、自作品の性能を検討したところ、ほぼ満足のできる結果が得られた。ただし、空間分解能は使用する電極の大きさに強く依存するため、今後の課題である。ポリスチレンスルフォン酸から成るミクロスフィアを水に分散し、その懸濁液の陽イオンを水素イオンに置換した後に徹底的に脱イオンを行う。この液は塩濃度が低いために電気化学的測定をしにくいが、微小電極を用いれば測定可能となり、対イオンである水素イオンの電極電流が測定できる。つまり、大部分の水素イオンはミクロスフィアに捕捉されている。ところが懸濁液に塩を入れると捕捉が解け、全水素イオンが電極反応する。還元電流値は塩の濃度、正確にはイオン強度に極めて敏感であるため、微小電極による還元電流の測定は塩の検出器となりうる。本研究ではポリスチレンスルフォン酸ミクロスフィアの捕捉した水素イオンが電極還元する電流を測定し、塩の濃度に対する変化を単純なモデルを用いて検討する。その結果を走査型電気化学顕微鏡の方法に応用することによって、塩の局所検出に応用する。初年度には基礎実験に取り組み、ミクロスフィアに捕捉された水素イオンは弱酸と同じように活性化過程であるか調べた。ミクロスフィアを用いた類似の研究で、ミクロスフィアの表面をポリアニリンによって被覆して電極活性をもたせると、電流に振動が見られた。空間分解能のある本装置を応用して、電極と絶縁壁との間を変化させ、電極反応電流の時間応答を測定した。データの検討中である。
抗精子モノクローナル抗体を用いた免疫的不妊症の解明とその実験動物モデルの開発

我々は、ヒト精子を特異的に凝集する抗体を免疫的不妊症の女性患者血清から分離、精製した。この杭体は射精ヒト精子の後アクロゾーム部に存在する分子量80KDaの蛋白と反応する。又、我々はイムノアフィニテ-カラム、FPLCカラム等でこの反応蛋白を精製し、その性質を調べた。我々が発見したヒト抗精子抗体は免疫蛍光抗体法で射精ブタ精子アクロゾームと強力に反応した。また精巣上体体部と尾部及び精管より得られた精子とも全く同様の反応を示した。免疫ブロッティング法によって、この抗体は射精精子、精巣上体体部、尾部および精管より得られた精子蛋白と強力に反応し、その分子量はいずれも45KDaであることが判明した。この抗体はヒト精子のみならず、ブタ射精精子、精管内精子をも強力に凝集させる能力を持っていた。ブタ射精精子蛋白をCon-A-セファロースカラムにアプライし、通過分画の蛋白を分離し、免疫ブロッティング法で検討しても反応陽性の蛋白は検出されなかった。結合した蛋白をメチールマンノースで溶出すると反応陽性の蛋白が検出された。ところがこの溶出蛋白をSDS-PAGEで展開しクマジ-ブルーで染色しても相当するバンドは認められなかった。このことは反応蛋白はごく微量に存在する糖蛋白であり、ある種のグリコシレーションにより抗原性を獲得したものと考えられる。我々はブタ精子蛋白を抗原とするモノクローナル抗体を作製した。この抗精子抗体は種々の点で我々が発見した不妊症女性患者血液中に見られる抗体と類似点があった。この特異的な蛋白とそれに対する抗体の性質を調べる事は抗精子抗体の産生に起因する不妊症の基礎的解明に有益であるとともに、その実験動物モデルを作製することにより臨床的にも有益であると考えられる。我々は、ヒト精子を特異的に凝集する抗体を免疫的不妊症の女性患者から分離、精製した。この抗体は射精ヒト精子の後アクロゾーム部に存在する分子量80KDaの蛋白と反対する。又、我々はイムノアフィニテーカラム、FPLCカラム等でこの反対蛋白を精製し、その性質を調べた。これらの結果の一部は現在投稿準備中である。ところが、精巣から得られた精細胞及び精子との反応は蛍光抗体法で認められなかった。さらに精巣上体頭部より得られた精子との反応も認められなかった。免疫ブロッティング法によって、この抗体は射精精子、精巣上体体部、尾部および精管より得られた精子蛋白と強力に反応しその分子量はいずれも45KDaであることが判明した。ところが精巣蛋白および精巣上体頭部精子蛋白との反応は全く認められなかった。また、この抗体とブタの肝臓、腎臓、心臓、血清及び骨格筋の蛋白との反応は見られなかった。この抗体はヒト精子のみならず、ブタ射精精子、精管内精子をも強力に凝集させる能力をもっていた。結合した蛋白をメチルマンノヘースで溶出すると反応陽性の蛋白が検出された。ところがこの溶出蛋白をSDS-PAGEで展開しクマジーブルーで染色しても相当するバンドは認められなかった。このことは反応蛋白はごく微量に存在することを意味する。

反応抗原は糖蛋白であり、ある種のグリコレーションにより抗原性を獲得したものと考えられる。この蛋白は精巣上体内での精子成熟過程に関係し、免疫的不妊症の原因に関係があると思われる。これらの結果の一部はすでに印刷公表されているが(T.Haneji et. al.,J.Exp.Zool.259:109-116,1991)、他の部分は現在投稿準備中である。現在はブタ精子蛋白を分離精製してこの抗原に対するモノクローナル抗体を作成中である。我々は原因不明の不妊症女性患者血液のスクリーニングを行い、特異的なヒト精子凝集能を有する抗体を女性患者から分離した。免疫蛍光抗体法と免疫ブロッテング法によりこの抗体と反応するヒト抗原は後アクロゾーム部位に存在する分子量80KDaの精子蛋白であった。ヒト精子蛋白をイムノアフィニテ-カラムを通過させ、結合した蛋白からこの80KDaの蛋白を分離精製した。この蛋白をSDS-PAGEで展開すると80KDaの蛋白以外に18KDaの蛋白を含んでいることが判明した。我々はまたHPLCカラムにより反応陽性蛋白を分離、精製した。溶出された蛋白のピークは80KDaと120KDaと推定された。これらのピークを濃縮してSDS-PAGEで展開すると80KDaと18KDaのバンドが認められた。このことは120KDaの蛋白は還元されて18KDaのバンドに泳動することを意味する。我々が発見したヒト抗精子抗体は免疫蛍光抗体法で射精ブタ精子アクロゾームと強力に反応した。また精巣上体体部と尾部及び精管より得られた精子とも全く同様の反応を示した。ところが、精巣から得られた精細胞及び精子との反応は蛍光抗体法で認められなかった。さらに精巣上体頭部より得られた精子との反応も認められなかった。免疫ブロッティング法によって、この抗体は射精精子、精巣上体体部、尾部および精管より得られた精子蛋白と強力に反応しその分子量はいずれも45KDaであることが判明した。この蛋白は精巣上体内での精子成熟過程に関係し、免疫的不妊症の原因に関係あると思われる。ブタ精子から抗原蛋白を大量に精製してこの蛋白を抗原に用いて数種の陽性ハイブリドーマが得られたので現在、ハイブリドーマのさらなるスクリーニングを試みている。我々は、ヒト精子を特異的に凝集する抗体を免疫的不妊症の女性看者から分離、精製した。この抗体は射精ヒト精子の後アクロゾーム部に存在する分子量80KDaの蛋白と反応する。又、我々はイムノアフィニテ-カラム、FPLCカラム等でこの反応蛋白を精製し、その性質を調べた。これらの結果の一部は現在投稿準備中である。免疫ブロッティング法によって、この抗体は射精精子、精巣上体体部、尾部および精管より得られた精子蛋白と協力に反応しその分子量はいずれも45KDaであることが判明した。ところが精巣蛋白および精巣上体頭部
代謝安定型糖鎖を基盤とする高次生物機能複合糖質アナログの創製

本研究では、一般的な糖鎖構造のグリコシド結合のO原子をCHF基に置き換えた化合物の合成法開発、特に2,6-sialylgalactose構造とGal-β(1,3)-GalNAc構造のアナログを、効率的に合成する手法の開発に取り組んだ。まず、2,6-グリコシド結合は、糖ドナーのアノマー位がアクセプターの6位と連結したものであり、1,6-グリコシド結合と同様である。そこで、まず1,6-連結型のCーグリコシドを、効率的に構築するため、分子間カップリング反応を基盤とし、さらにアノマー位をsp3炭素のまま連結する手法開発を目指した。昨年度までに、ラジカル反応を基盤とした原子移動型カップリング反応が進行しうることを見出していた。そこで、これを立体選択的に、またより高効率で進行させるドナーを探索した。その結果、αー選択的に2糖構造を構築できるドナーを見出すことに成功し、これを選択的なイソマルトースアナログの合成に適用することができた。また、立体選択性の改善は必要であるが、2,6-sialylgalactoseアナログも合成できた。一方で、同じ手法でCHF基の構築を検討したが、予想外にも反応効率の著しい低下が見られた。このことから、本手法でのCHF基構築は困難であり、別の手法開発が望ましいことがわかった。一方で、1,3-グリコシド結合などは、原子移動型カップリングが適用しにくい結合様式であることから、sp3-sp2のクロスカップリング反応を適用することを考え、モデル反応を種々検討した。その結果、光レドックス触媒を利用して発生させたラジカル種と芳香族化合物のクロスカップリング反応が進行することを見出した。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、生体内の代謝酵素に分解されず、かつオリジナルの糖鎖機能を細胞内で、保持・増幅できるポテンシャルを持つ「高次生物機能中分子」の創製を目指している。その鍵設計コンセプトは、当研究グループで見出したグリコシド結合のO原子をCHF基に置き換えるというシンプルなものである。しかし、これまでに天然型糖鎖の炭素連結型アナログを効率的に合成できる手法は限られており、さらにフッ素原子を導入した例はほとんどなかった。一方、当研究グループでは以前に、2,3-シアリルガラクトース構造の炭素連結型アナログの効率的な合成法を見出しているが、本手法を他の一般的な糖鎖構造に適用することは困難であった。そこで本研究では、生物学的に重要な糖鎖構造である2,6-シアリルガラクトース構造、およびGal-β(1,3)-GalNAc構造の炭素連結型アナログの合成法を開発することを目的としている。本年度は、2,6-シアリルガラクトース構造を合成すべく、その前段階としてGlc-α(1,6)-Glc構造を有するイソマルトースの炭素連結型アナログ創製を検討した。効率的に2糖を炭素で連結するには、ドナー糖の1位と1炭素増炭したアクセプター糖をアトムトランスファー型のラジカルカップリングを実現することが望ましいと考えた。しかし、容易に合成できるグルコースのキサンテート体からのカップリング反応は全く進行しなかった。本原因を精査し、最終的に周辺保護基をチューニングすることで、中程度の収率で単純な末端オレフィンとのカップリング反応が進行することを見出した。さらに、糖骨格を有するアクセプター分子とのカップリングも進行することをごく最近確認した。今後、さらに条件を最適化し、2,6-シアリルガラクトース構造の炭素連結型アナログ合成に展開していく。難易度が高いと考えられていたラジカルカップリング反応を進行させる要件の1つを見出したことは、本研究において非常に重要な成果であり、28年度中に解決出来たことから、順調に進展していると捉えている。

見出したカップリング反応の条件をさらに最適化し、2,6-シアリルガラクトース構造の炭素連結型アナログ合成に展開する。また、より合成が難しいと考えられるGal-β(1,3)-GalNAc構造の炭素連結型アナログ合成に必要な素反応開発にも取り組む。29年度が最終年度であるため、記入しない。
医学系留学生のための医学専門語の調査分析とリスト化

先行研究で選定された基本的な医学術語のリスト(約7400語。以下「リスト」とする)では、漢字で表記されている術語が最も多い。その中で2字からなる漢字熟語(2漢字語)が複数の医学術語の構成要素として現れる、すなわち、造語力がある点に着目して調査を行った。リスト中の全語を1つ以上の構成要素に分割して2漢字語を抽出し、2漢字語がリスト中でどのような頻出度を持つかを調査し、2漢字語がリスト中の漢字からなる語の基幹的な構成要素であることを明らかにした。2漢字語に次いで強い造語要素である3字からなる漢字熟語についても分析を行った。次に、抽出された2漢字語について、インターネット上の「チュウ太の道具箱」(川村よし子,・北村達也、2002年8月4日)を用いた日本語能力試験出題基準(語彙)への対応の調査と、「NTTデータベースシリーズ日本語の語彙特性第7巻単語頻度」(天野成昭・近藤公久、2000)を用いた朝日新聞の過去14年間の記事中の出現への対応の調査を行い、両者の結果をリスト化した。さらに、リスト中で2回以上の出現頻度を持つ2漢字語について、医師国家試験出題基準中および歯科医師国家試験出題基準中での出現頻度との相関をみた。この結果から、医学教育における基本的な語は歯学教育においても基本的であるが、歯学教育の基本語には独自のものがあることが示唆された。研究の結果、医学術語中の漢字熟語特に漢字語が一般の日本語教育の語彙および医歯学教育の語彙とどのような関連をもつかが明らかになった。この結果のリスト化は、基礎資料として、医学専門日本語語彙教育の効率化に寄与すると考えられる。先行研究(注)で選定された約7400項目の基礎・臨床分野の基本的な医学専門語のリスト(以下「リスト」)について,漢字熟語を中心とした語構成分析を行うための基礎資料を作成した。2字の漢字熟語にはリスト中の複数項目に現れるものが多い。例えば,感染経路,感染源,クレブシエラ感染症,感染防御,混合感染の5項目における「感染」である。どの2字漢字熟語がどの程度複数項目に現れるかが明らかになればその漢字熟語の医学学習のための必要度・基本度が明らかになると考えられる。この点に注目し,7400項目を2字漢字熟語を中心に構成要素ごとに分割した。ここで構成要素とは,2字以上の漢字熟語,およびかたかな,ひらがな,アルファベットからなるもので,リスト中での造語力を持つものとする。例えば「果粒層ルテイン細胞」という項目は,「果粒+層/ルテイン/細胞」と3分割され(/が各構成要素の境を示す),「果粒+層」は,「果粒」が他の項目(「基底果粒細胞」)に存在するので,造語力を持つ2字の漢字熟語「果粒」に「層」が付いたものとなる。もし,「果粒」が他の項目に存在しなければ、リスト中での造語力を持つものとはされず「果粒層」と3字で一塊の分割できない構成要素とする。以上が、分割作業ルールの概要だが,詳細は複雑になるので省略する。分割作業ルールに基づき,研究補助者を使って,7400項目の分割・入力を終えた。分割結果は約12000項目となり,現在,この見直しを行っている。つぎに,これらの漢字熟語のリスト中に占める割合と,複合・派生などの語結合の関係を明らかにする予定である。(注)平成79年度文部省科学研究費補助金「留学生のための専門用語辞典・医学系・作成に関する研究」。

研究者氏名:増田光司(研究代表者),佐藤千史,エカタクシン・ウィチャイ留学生のための日本語専門語彙教育の効率化という発想から次のような研究を行った。先行研究で選定された基本的な医学術語のリスト(約7400語。リストの1項目が術語1語である。以下「リスト」とする)では、漢字で表記されでいる術語が最も多い。それらは漢字熟語から構成されるものがいちばん多いが、その中で2字からなる漢字熟語が複数の医学術語の構成要素として現れる、すなわち、造語力がある点に着目した。2字からなる漢字熟語(以下、「2字漢字熟語」とする)がリスト中の語の基幹的な構成要素となっていることを明らかにするために、造語力を持つ2字漢字熟語を基本の単位として、リスト中の全語を1つ以上の構成要素に分割し、2字漢字熟語を抽出し、リスト中の漢字からなる語において、どのような頻出度を持つかを明らかにした。さらに、抽出された2字漢字熟語について、一般の日本語および日本語教育の語彙とどのように対応するかを調査した。まず、インターネット上の「チュウ太の道具箱」(川村よし子・北村達也、2002年8月4日(最終更新日)、http://language.tiu.ac.jp/tools.html)により、日本語能力試験出題基準(語彙)への対応を調査した。次に、「NTTデータベースシリーズ日本語の語彙特性第7巻単語頻度」(天野成昭・近藤公久、2000)を用いて、朝日新聞の過去14年間の記事中の出現との対応をみた。そして、両者の結果をリスト化した。構成要素分割の過程で明らかになった、2字漢字熟語に次いで強い造語要素と考えられる3字からなる漢字熟語についても分析を行った。研究の結果、医学術語中の漢字熟語が一般の日本語教育の語彙とどのような関連をもつかが明らかになった。この結果の出現頻度などの数値化を伴うリスト化は、基礎資料として、医学専門日本語語彙教育の効率化に寄与するであろうと考えられる。
近世日本の商人集団に関する理論と実証分析

江戸商人3939人についてのデータベースを作成して解析した結果、平均存続年数15.7年ときわめて参入退出が激しく、かつ血縁相続ではなく金銭で営業権(「株」)をやりとりするという、通説とは大きく異なる江戸商人像を得た。さらに業種や店舗の場所についての分析により、米や炭などの生活必需品を商う店舗は広く江戸全域に展開し、呉服や薬などの奢侈品の店舗は日本橋付近に集中するという二極化構造が明らかになった。本研究は、江戸の商人の業態について、各商人の個票データをデータベース化して計量的に分析するという、従来試みられなかった新しい手法で斬り込み、三井という大商人にのみ依拠して構築されてきた通説を覆すことを企図して立案したものである。計画初年度の本年度は、分析の基盤となるデータベースを構築し、それにさまざまな観点から分析を加えることに注力した。具体的には『江戸商家・商人名データ総覧』をもとに約4000名の江戸商人について業種・営業期間・店舗立地等の要件を網羅した個票データを作成し、それをもとに分析をおこなった。業種ごとの営業権(「株」と呼ばれる)の流動性、同業者同士の商圏分割(「番組」と呼ばれる)の様相といった独自の商慣行に着目し、さらに店舗立地や開業時期、営業規模なども視野に入れて分析を重ねた結果、江戸商人は以下のように、全域型と都心型という2つの類型に大きく分けられるという見通しを得た。全域型:株の流動性が激しく存続期間が短い。営業規模は零細で、地域ごとにブロック割りして江戸全域をカバーする番組編成をおこなっている。1740年頃から開業。米や炭薪といった必需品を扱い江戸商人全体の8割と大多数がこのタイプに属する。都心型:株が固定的で存続期間が長く、営業規模は大きい。店舗は日本橋付近の繁華街に集中。1800年頃から開業。薬種問屋・呉服問屋など専門性の高い奢侈品を扱う業種が中心で、江戸商人全体の1割程度が属する。初年度に構築されたデータベースをもとに分析を進めた。情報源としては『江戸商家・商人名データ総覧』全7巻(2010年刊行)を用いつつ、必要に応じて周辺資料を参照した。個々の商人の同定作業を経て、4000件ほどの個票データベースを構築し、それをもとに、個々の商人の存続期間や株の継承原理、業種と店舗分布、番組編成の基準など、江戸商人の実態解明につながると思われる切り口を、さまざまに工夫して分析を加えた。その結果、平均存続年数が15.7年と一代にも満たない短さで参入と退出を繰り返す大店の商人たちの様相が浮かび上がり、通説のイメージと大きく異なる不安定さが検出された。かつ株の相続は金銭を媒介とした譲渡が半数を占め、血縁原理と程遠いことも判明した。さらに、それぞれの商人の特性を地域分布など他の要素も勘案して分類してゆくと、江戸の商人は以下の三類型にまとめられるという結論に至った。一つめは全域型。江戸全体の店舗数の八〇%を占める。扱う商品は米や炭薪などの生活必需品。利益率が小さく、店舗の参入退出も激しいので存続期間は短命。江戸の全域へと広く店舗展開し、同業者仲間で番組を編成して担当する地域を分割する地区割り営業を特徴とする。二つめは都心型。店舗数シェアは一〇%ほど。扱う商品は薬・呉服・小間物などの贅沢品。利益率が大きく、店舗の参入退出は比較的ゆるやかなので存続期間は長寿。狭い日本橋地区に集中立地し、同業者どうしで激しく顧客を奪い合う自由競争を特徴とする。三つめが特化型。武家が顧客の金融業(札差)と人材斡旋業からなり、札差は長寿だが他は短命。蔵前など武家相手の営業に便利な特定地域に立地する。武家の町江戸に特化した特殊業種と言えよう。これらの類型分けをベースとし、なぜこのような分布となったのか、個々の店舗の規模や特性に着目して原因の究明を試みた。ゲーム理論特定の商人を深掘りするのではなく、広く浅く多数の商人を網羅した個票データベースを作成するという新しい切り口が予想以上に功を奏した。たとえば店舗存続期間。全体平均は15.7年、中央値はさらに下がって13年程度である。せいぜい10数年。江戸の各店舗の平均寿命はこんなにも短いことが初めて判明した。代々暖簾を受け継ぐといったイメージからはほど遠く、それこそ一代ぶんにも満たない短さで交替しているのである。あるいは株の移動事由。個々の商人が「株」と呼ばれる営業権をどう入手し、どう継承したかが判明する1567件について集計すると、親から子へといった封建社会に一般的な血縁相続は1割に満たず、ほぼ半分は金銭を媒介とした他人への譲渡が占め、あとは新規参入と退出となる。そうした新知見がつぎつぎと見出されており、それらを統合することによって、当初計画以上に大きな成果が上がることが期待できる。