hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
酸化ストレスによるミネラルコルチコイド受容体のユビキチン化修飾の変化と心血管障害

ミネラルコルチコイド受容体MRは、リガンドであるアルドステロンにより、ユビキチン化修飾を受け、プロテアソームにより分解される。酸化ストレスにより、このMRのユビキチン化修飾が変化し、その結果、MR転写活性も変化する可能性がある。MRの分解を制御するユビキチンE3リガーゼはUBR2である可能性があり、酸化ストレス条件下でUBR2がMRの分解も変化させる可能性がある。アルドステロン(Aldo)はミネラルコルチコイド受容体(MR)の活性化を介し、原発性アルドステロン症における血管合併症を惹起する。一方、血中Aldo濃度が正常でもMR拮抗薬により治療抵抗性高血圧が改善するAldo関連高血圧が存在することから、Aldo非依存性のMR活性化が示唆される。我々はMR活性化の下流シグナルであるEGF受容体やPI3キナーゼが、MR自身を蛋白修飾することで、MR転写系の上流に影響を及ぼす可能性について検討した。我々はMRのユビキチン化について報告しており、ユビキチン化を代表とする種々の蛋白修飾について検討していく。1)MRの転写活性: COS-7細胞におけるMR転写活性を既報のレポーターアッセイで検討した。EGF、LY294002(PI3キナーゼ阻害薬)、spironolactone、eplerenone(MR拮抗薬)を用いた。2)MRの細胞内局在の変化: HEK293細胞にMR遺伝子を一過性に発現させ、核移行に対する上記薬剤の影響を免疫蛍光染色にて検討した。結果は、EGF(10ng/ml)、LY294002(10μM)の添加は、10^<-11>10^<-9>M AldoによるMR転写活性化をいずれも濃度依存性に増強した(10^<-10>Maldoの時、EGFで1.9倍、LY294002で3.2倍)。100nM cortisolによるMR転写活性に対しても同様の影響を認め、MR転写活性はspironolactone(10^<-7>M)及びeplerenone(10^<-6>M)で阻害された。MRの細胞内局在では、EGF及びLY294002の添加によりAldoによるMRの核移行の促進を認めた。EGF受容体及びPI3キナーゼは、MR自身の修飾により分解を抑制したり、MRの細胞内局在を変化させ、MR転写活性を正及び負に制御する可能性が示され、さらなる分子機構につき検討を進めていく予定である。アルドステロン値正常下でMR活性化を引き起こす因子を探索・同定し、その因子を中心にMRタンパク修飾を介したMR活性化と生体における臓器障害への関与の解明を行うこととし、MR活性化因子のスクリーニングとしては、インスリン、IGF-1、TNF-α、IL-1β、EGFなどを用いて検討を行った。するとEGFは、MRのmRNA量は変化させずにMRタンパク発現量を増加させ、またMR転写活性の増強作用が、レポーターアッセイに加え内因性MR標的遺伝子(SGK)に対する作用でも確認された。EGFのMRタンパク発現量増加作用が、MR遺伝子の転写の発現亢進によるものなのかを検討するために、定量的PCR法を用いてMRのmRNA量確認したところ、EGFはMRのmRNA量に影響を与えなかった。一方で、ユビキチンプロテオソーム系の阻害剤MG132を使用した実験から、EGFによるMRタンパク量の増加作用はユビキチン-プロテオソーム系によるMRタンパク分解の抑制であることが判明した。さらに、EGFRのRNAiや、EGFR下流シグナルの阻害剤を用いた研究により、EGFはその下流のMAK kinase経路を介して、MRの分解を抑制し、MRの転写を増強していることが明らかとなった。生体における臓器障害との関与については、EGF作用は未解明な部分が多い。興味深いことに、MR作用でEGFR発現が上昇するという報告はあり、MRとEGFR間で局所的に負の連鎖サイクルを作り、高血圧症や臓器障害の増悪因子である可能性が示唆される。
明示的・暗示的言語知識テスト開発と個人差－脳科学的アプローチによる検討－

言語学では、無意識的で直観的な暗示的知識のおかげで、日本人は日本語を流暢に使えていると考えられている。一方、日本人が第二言語(英語)を正しく流暢に話したり聞いたりできないのは、暗示的知識を習得しておらず、意識的に学習した明示的知識に頼らざるを得ないためであると考えられている。本研究は、脳機能イメージングの手法を用いて、第二言語学習者の暗示的知識と明示的知識の習得プロセスの脳メカニズムの解明を目的とした。平成27-28年度には日本人英語学習者の文法知識における暗示的・明示的知識と英語母語話者のそれとはどのように異なるのか、習熟度が上がるにつれて学習者の暗示的・明示的知知識はどのように変化するのかをfMRIを用いて検証した。実験では、33名の日本人英語学習者と30名英語母語話者が参加し、暗示的知識が測定可能な事実判断課題と明示的知識を測定する文法性判断課題をfMRIの中で遂行し、それぞれの課題遂行時の脳活動を測定した。その結果、日本で英語を学習している英語学習者のほとんどは明示的知識が司る領域で英語の文法を処理しており、暗示的知識の処理に関連する脳領域の関連はほとんど認められなかった。この結果を受け、平成29-30年には、第二言語環境で第二言語を学習している学習者は暗示的知識を有しているのかを検討するために、日本に滞在しながら日本語を学習している中国語母語話者を対象に暗示的知識と明示的知識を測定すると言われているワードモニタリングテストと内容判断を伴う模倣テストを用いて課題遂行中の脳活動を測定した。その結果、日本で日本語を習得している中国語母語話者は、暗示的知識が司る脳領域が関与していることが検出された。環境(教室外でも学習言語を使用するかしないか)が暗示的・明示的知識の質と量に影響を与える重要な要因であることがわかった。現在、論文投稿を準備している。社会の急速なグローバル化の進展に伴って、情報や考えなどを相手に発信していくための外国語能力を今後一層高めていくことが緊迫の課題である。文部科学省も、日本人に「アジアの中でトップクラス」の英語力を育成する必要があると提言している。日本人に高度な英語力を育成するためには、正確な言語運用を支える分析的な明示的知識(explicit knowledge)だけではなく、流暢な言語運用を支える直感的な暗示的知識(implicit knowledge)を育成するための指導法やその評価法を開発し、研究成果を現場へと還元しなければならない。しかし、それを支える明示的(言語)知識と暗示的(言語)知識の育成法やその評価法に関する研究は大幅に遅れている。正答率や反応時間を用いた研究は散見されるが、それらの方法的限界が指摘されており、この分野でのイノベーションが待たれている。本研究は、脳機能イメージングの手法を用いて、日本人英語学習者の暗示的知識と明示的知識の習得プロセスの脳メカニズムの解明と、そのメカニズムに影響を及ぼす個人差要因の特定を目的とする。平成27年度は、暗示的知識と明示的知識を測定するテスト(時間制限無し文法性判断課題)を30名の英語学習者に実施し、予備実験を行った。予備実験で得られたデータをもとに、平成28年度には脳機能画像法を用いた実験を実施する。本研究を通して、暗示的知識と明示的知識の脳科学的データの提供や、脳科学に基づいた外国語学習評価法の開発が期待できる。今年度は、課題の選別、課題数や実験手法を適確に設定するために、予備実験を行った。予備実験は順調に進み、それらの手続きやデータに基づいて、平成28年10月3月に本実験を行うことが可能になった。高度な英語力を養成することが日本の英語教育の課題であるが、それを支える明示的(言語)知識と暗示的(言語)知識の育成法やその評価法に関する研究は大幅に遅れている。本研究は、脳機能イメージングの手法を用いて、第二言語学習者の暗示的知識と明示的知識の習得プロセスの脳メカニズムの解明と、そのメカニズムに影響を及ぼす個人差要因の特定を目的とする。平成27年度には暗示的知識と明示的知識を測定するテスト(時間制限無し文法性判断課題)を30名の英語学習者に予備実験を実施した。平成28年の3月から9月までは客員研究員として、アメリカのペンシルベニア州立大学、心理学、神経言語学研究室(Ping Li教授)に滞在しながら、言語の暗示的知識と明示的知識の脳内メカニズムに関する理論的検討と情報収集を行った。また、第二言語習得や明示的・潜在的知識の脳メカニズムの世界的研究を行っているジョージタウン大学にも2016年9月と2017年3月に訪問し、情報取集も行った。平成29年には、実験の実施とデータの分析、そして研究全体のまとめを行う予定である。今年度は、半年間、アメリカのペンシルベニア州立大学で客員研究員をしながら、第二言語に関与する脳内メカニズムと最近の研究手法を学ぶことに専念した。そのため、平成28年には新たな実験は行えなかったが、平成27年度に行ったfMRI実験の脳データの分析と議論が進み、その結果をもとに、平成29年度に行う追加実験の準備が完成している。

本研究は、脳機能イメージングの手法を用いて、第二言語学習者の暗示的知識と明示的知識の習得プロセスの脳メカニズムの解明と、そのメカニズムに影響を及ぼす個人差要因の特定を目的とした。平成27年度には暗示的知識と明示的知識を測定するテスト(文法性判断課題)を30名の英語学習者に予備実験を実施した。平成28年の3月から9月までは客員研究員として、アメリカのペンシルベニア州立大学の心理学・神経言語学研究室(PingLi教授)に滞在しながら、言語の暗示的知識と明示的知識の脳内メカニズムに関する理論的検討と情報収集を行った。また、第二言語習得や明示的・潜在的知識の脳メカニズムの世界的研究を行っているジョージタウン大学にも9月と3月の合計2回招待講演を行い、最近の研究情報と解析手法に関する情報を取集した。平成27年度のデータを分析した結果、日本で英語を学習している英語学習者のほとんどは明示的知識が司る領域で英語の文法を処理しており、暗示的知識の処理に関連する脳領域の関連はほとんど認められなかった。この結果を受け、平成29年には、研究結果が他の言語学習者にも当てはまるのか、また、第二言語環境で第二言語を学習している学習者は暗示的知識を有しているのかを検討するために、日本に滞在しながら日本語を学習している中国語母語話者を対象に暗示的知識と明示的知識のそれぞれを測定する課題を用いて課題遂行中の脳活動を測定する追加実験を行った。現在、追加実験は継続中で、目標の半分のデータの収集ができた。30年度にはデータを分析し、これまでの研究成果をまとめ、論文として投稿する予定である。今年度は、平成27年と28年に行ったMRI実験データを分析した。その結果、日本で英語を学習している多くの学習者は明示的知識に依存しながら英語を処理していることが明らかになった。その結果を追試することと、暗示的知識に関連する第二言語処理を検証するため、日本で日本語を第二言語として学習している中国語母語話者を対象とした追加実験を平成29年度に実施した。現在、30名の学習者データの測定が終了した。平成30年度には比較対象の日本語母語話者のデータの測定も行う予定である。言語学では、無意識的で直観的な暗示的知識のおかげで、日本人は日本語を流暢に使えていると考えられている。一方、日本人が第二言語(英語)を正しく流暢に話したり聞いたりできないのは、暗示的知識を習得しておらず、意識的に学習した明示的知識に頼らざるを得ないためであると考えられている。本研究は、脳機能イメージングの手法を用いて、第二言語学習者の暗示的知識と明示的知識の習得プロセスの脳メカニズムの解明を目的とした。平成27-28年度には日本人英語学習者の文法知識における暗示的・明示的知識と英語母語話者のそれとはどのように異なるのか、習熟度が上がるにつれて学習者の暗示的・明示的知知識はどのように変化するのかをfMRIを用いて検証した。実験では、33名の日本人英語学習者と30名英語母語話者が参加し、暗示的知識が測定可能な事実判断課題と明示的知識を測定する文法性判断課題をfMRIの中で遂行し、それぞれの課題遂行時の脳活動を測定した。その結果、日本で英語を学習している英語学習者のほとんどは明示的知識が司る領域で英語の文法を処理しており、暗示的知識の処理に関連する脳領域の関連はほとんど認められなかった。
固体酸化物形燃料電池用Ni-セリア固溶YSZアノードの触媒および電気化学特性

ペロブスカイト酸化物の還元処理を行いNi-Co合金アノード触媒を合成した。次に、グリコサーマル法を用いて表面水酸基を多く持ったYSZを合成しNiを担持したNi/YSZを合成した。これらの知見を生かして、固体酸化物形燃料電池用Ni-セリア固溶YZSアノードの触媒および電気化学特性の検討を行なった。内部改質型SOFCの課題である炭素析出は、YSZアノードへセリアの固溶により大幅に抑制され、電気化学特性も向上した。新規Ni/Y_2O_3-CeO_2-ZrO_2アノードの検討を行なった。内部改質型SOFCの課題である炭素析出について検討したところ、Ni/8Y8CeSZ ((Y_2O_3)_<0.08>(CeO_2)_<0.08>(ZrO_2)_<0.08>)>Ni/8Y4CeSZ>Ni/8YSZの順で炭素析出は抑制された。XPS測定をしたところ、アノード触媒表面にCeO_2が析出してきていることがわかった。この表面CeO_2量が多いほど炭素析出抑制効果は高いことがわかった。また、触媒活性にっいても検討を行ったところ、炭素析出抑制効果および、表面CeO_2量と同様に、Ni/8Y8CeSZ>Ni/8Y4CeSZ>Ni/8YSZの順となった。このことより、Ni近傍の表面CeO_2は、Ni表面への水の吸着を促し、Ni表面でできたCH_<x->種をすばやく水が覆うことができるため、改質反応が優先的に進み、メタン分解反応が抑制されることで炭素析出速度が遅くなると考えられる。また、それらの触媒について発電性能について検討したところ、燃料ガスにH_2を用いた場合も、CH_4を用いた場合も、反応温度1000°CでNi/8Y8CeSZ>Ni/8Y4CeSZ>Ni/8YICeSZ>Ni/8YSZの順で発電性能が向上することがわかった。これは、YSZにCeO_2が固溶することでCeO_2の持つ高温における酸素イオン伝導性および電子伝導性が付与されること、およびアノード表面に存在するCeO_2によりNiの分散度が上がることで、CH_4が活性化されて生成される水素原子が速やかに、反応場である三相界面に移動するためであると結論した。それとは別に、SOFC条件で炭素析出を抑制するために、貴金属添加の役割と劣化挙動も検討した。Niをハイドロタルサイト構造中に取り込み、その後の処理によってNiを表面に析出させた場合には、Niが高分散状態になり、メタンの水蒸気改質反応において活性の劣化が起こらない。同様に、Niをペロブスカイト構造中に取り込み、その後析出させることにより、メタンのCo_2改質反応に高活性なNi触媒が得られるという報告もある。そこで、昨年度に開発された新規Ni/Y_2O_3-CeO_2-ZrO_2アノードの性能と耐炭素析出能を向上させるために、触媒調整法を検討した。LaNixCo_<1-x>O_3を形成した後に還元処理を行いNi-Co合金アノード触媒を合成した。XRD測定より、LaNi_xCo_<1-x>O_3の還元によって得られた金属(Ni_xCo_<1-x>)の回折ピークの中で、最もはっきりと現れている(111)面のピークから算出したd値は、xの増加に伴いd値は直線的に減少した。このことからNi-Co合金が形成されたことが確認された。XRD, TPR測定より、Co^<3+>もNi^<3+>と同様に、2段階の還元(Ni^<3+>→Ni^<2+>→Ni^0)によって、Ni-Co合金が生成したことがわかった。本研究の結果、LaNi_xCo_<1-x>O_3前駆体は1000°Cで還元すると、ペロブスカイト構造が完全に壊れ、Ni-Co/La_2O_3として存在するようになることがわかった。Ni-Co合金は、SOFCアノードとしての触媒活性をもった。このアノード触媒はCo含有量が少ないほど電流密度が高くなった。NiO-CeO_2-YSZナノ粒子サーメットの調製法を検討した。ディスクへのアノードを塗布する方法について最適化を行った。具体的には、サーメットの調整法の改良を、SEM・TEMを用いた観察、SOFC発電実験、インピーダンスダンス測定により行った。それをフィードバックするサイクルを繰り返すことにより、800°C程度の温度域でも、水蒸気/炭素=1.2程度で安定にSOFCの発電が継続することを確認した。そこで、その技術を通常の8YSZにフィードバックした。グリコサーマル法により8YSZを合成した。合成した8YSZに、Niを含浸担時することで、SOFCで代表的なアノードであるNi/YSZを調製した。

Ni/8YSZの調製の際、8YSZ担体の焼成温度を、焼成なし、600°C焼成、1000°C焼成と変えてNiを含浸担持した。調製した各Ni/8YSZアノード(Ni/8YSZ-non,Ni-/8YSZ-600およびNi/8YSZ-1000)の炭素析出速度、TPR測定および、発電性能の測定を行った。炭素析出速度は、Ni/8YZ-non>Ni/8YSZ-600>Ni/8YSZ-1000の順で抑制された。これは、TPRにて測定したNiと8YSZの相互作用の強い順に対応した。この相互作用の違いは、8YSZの焼成温度の違いによる表面水酸基の量ではないかと考えられる。このことから、8YSZの表面水酸基の量の制御を行い、Niと8YSZの相互作用の制御を行うことで、炭素析出の抑制につながると考えられる。発電性能は、燃料にH_2を用いたときもCH4を用いたときも、各アノード間でほとんど違いが見られなかった。このことより、アノード触媒の水蒸気改質の触媒活性と電気化学触媒活性には、Niと8YSZの相互作用は影響しなかったと考えられる。グリコサーマル法を用いて表面水酸基を多く持ったYSZを合成し、Niを担持してNi/YSZとして用いると、炭素析出が抑制でき、発電性能も一定に保たれた。このことから、本研究を通じて、現在のSOFCのアノードの中で最も使われているNi/YSZについても有効な調製法を提示できたと考えられる。
食道切除術を経験した食道がん患者の新たな嚥下方法獲得のプロセスを促進する看護介入

本研究の目的は,食道がんのために食道切除術を受け,自宅で生活する患者が直面している,嚥下障害をはじめとする生活上の困難及びそれらへの対処の実態を明らかにすることである。対象者は,研究参加に同意が得られた外来通院中の30名で,その内訳は男性26名,女性4名であった。年齢は,39歳81歳で,平均年齢は66.1歳であった。食道切除術後の再建方法は,胸壁前皮下経路再建術を受けた患者が17名,後縦隔内経路再建術を受けた患者が12名,胸骨後経路再建術を受けた患者が1名であった。インタビュー時における術後経過日数は,2ヶ月9年8ヶ月であった。29名の患者から面接に対する録音許可が得られ,総面接時間は1272分,平均面接時間は約40分であった。録音許可の得られなかった1名に関しては,面接内容を筆記するとともに,面接終了後速やかに面接内容を記録した。面接内容を逐語訳し,内容分析の手法を用いて,質的・帰納的分析を行った。分析の結果,食道がんのために食道切除術を受けた患者が抱える術後の生活上の困難は,【予想をはるかに超えて苦痛と化した摂食行動】【生活圏の狭小化】【ボディ・イメージの変化】【胃液・食物の逆流に伴う苦痛感】【再発・転移の不安】【社会生活継続への懸念】の6の大表題に集約された。また,食道がんのために食道切除術を受けた患者が抱える術後の生活上の6つの困難に対する対処法は,《生きるために自分流の食べ方を体得する》《時間をかけて変化に慣れる》《命と引き換えに変化を受け入れ行動する》《逆流を防ぐための方策を捜し求める》《定期的に病院を受診しながら用心して生活する》の5つの大表題に集約された。本年度は,食道がん術後患者がどのような困難体験をしているかを明らかにする目的で,胸壁前皮下経路での再建術を受けた食道がん患者6名(男性5名,女性1名)に,食道癌であることを告げられた時の気持ち,胸壁前皮下経路再建術の必要性について説明を受けたときの気持ち,術後の生活上の困難さ等について,11項目からなる半構成的質問紙を作成し,それを用いて自由回答法によるインタビューを実施した.面接時の対象者の会話を逐語的に記述したものをデータとし,内容分析の手法を用いて分析を実施した.その結果,胸壁前皮下経路再建で食道切除術を受けた食道がん患者が抱える困難体験は,【再建部膨隆に起因した差恥心がもたらす生活圏の狭小化】【予想をはるかに超えて苦痛と化してしまった摂食行動】【生きるために自分に見合った食べ方を体得する】の3つのカテゴリーが抽出された.【再建部膨隆に起因した差恥心がもたらす生活圏の狭小化】は,食事摂取後に再建部が膨隆することに対する周囲の人の目が気になり,再建部の膨隆に対して毒恥心を感じ,人との接触を少なくしたり,家の中に閉じこもるなと,患者が手術前に持っていた生活圏が狭まってしまったことを表している.

【予想をはるかに超えて苦痛と化してしまった摂食行動】は,手術により食事摂取に多少の影響が出ると予測はしていたものの,1回摂取量の減少,食事摂取後の再建部のなでおろしの必要性,なでおろしても,摂取したものが下へおりていかない苦痛感などのために,食事摂取が苦痛と化してしまったことを表している.【生きるために自分に見合った食べ方を体得する】は,食事が苦痛と化しても,患者は生きていくために,毎日の食事を通して,自分流の食べ方を見つけていることを表している.次年度は,対象者数を増やすとともに,胸壁前皮下経路以外の再建術を受けている患者の術後の困難体験について,インタビューを継続していく予定である.食道切除術後,後縦隔経路再建術を受けた患者6名(男性6名)に対して,昨年同様,食道がんであることを告げられた時の気持ち,術後の生活上の困難さ等について11項目からなる半構成的質問紙を用いて自由回答法によるインタビューを実施した。昨年インタビューを実施した,胸壁前皮下経路再建術を受けた患者6名のデータと合わせ,内容分析の手法を用いて分析を行い,再建術式の違い(胸壁前皮下経路再建術とそれ以外の再建術)により,患者の自覚する術後の日常生活上の困難さについての違いを明らかにした.分析の結果,食道切除術が食道がん患者の術後生活に及ぼす影響として,【予想をはるかに超えて苦痛と化した摂食行動】【生活圏の狭小化】の2つの大表題に集約された.これには,[細心の注意を払って食べる][摂取量の減少][持続する食事摂取後の下痢][逆流の苦痛感][家族からの励ましへの負担感][再建部をなでおろすことへの恐怖感]の6つの表題が含まれた.中でも[再建部をなでおろすことへの恐怖感]は,胸壁前皮下経路再建術受けた患者に特有の体験であった.また,【生活圏の狭小化】には,[大幅な体重減少に起因する体型の変化に対する差恥心][自分の病状を聞かれることに対する嫌悪感][再建部の膨隆に対する差恥心][再建部の膨隆に対するボディー・イメージの変化]が含まれた.[再建部の膨隆に対する差恥心][再建部の膨隆に対するボディー・イメージの変化]は,胸壁前皮下経路再建術を受けた患者に特有の体験であった.【予想をはるかに超えて苦痛と化した摂食行動】【生活圏の狭小化】に対して患者は,《生きるために自分に見合った食べ方を体得する》《命と引き換えに変化を受け入れる》《時間をかけて変化に慣れる》という対処方法で術後生活の再構築を図っていた.平成17年度の研究目的は,食道がんのために食道切除術を受け,胸壁前皮下経路再建術を受けた患者が,術後の生活にいてどのような困難を抱え,その困難に対してどのように対処して生活しているかについて,質的,帰納的に明らかにすることである。胸壁前皮下経路再建術を受けた食道がん術後患者で,口頭および文書にて研究参加に同意の得られた患者に,1人につき1回,プライバシーの保持できる環境で半構成面接を実施した。面接内容を逐語訳したものをデータとし,内容分析の手法を用いて分析を行った。対象者は15名で,その内訳は男性12名,女性3名(56歳74歳),平均年齢は,66.8歳であった。平均面接時間は,45.5分であった。分析の結果,胸壁前皮下経路再建術が食道がん切除術後患者にもたらす生活上の影響として,【再建部膨隆への羞恥心,食後の下痢がもたらす生活圏の狭小化】【再建部膨隆,大幅な体重減少,手術侵襲に伴う体力低下がもたらすボディー・イメージの変化】【予想をはるかに超えて苦痛と化した摂食行動】【予期せぬ症状出現時の動揺】【胃液・食物の逆流に伴う苦痛】【再発・転移の不安】【社会生活継続への心配】の7つが明らかとなった。そしてこれらの生活への影響に対して,《命と引き換えに変化を受け入れ行動する》《時間をかけて変化に慣れる》《生きるために自分流の食べ方を体得する》《情報を集める》《逆流を防ぐための方策を捜し求める》《定期的に病院を受診しながら用心して生活する》
新規ミエリンミュータントで同定した原因遺伝子のミエリン形成・維持における役割解明

1.オリゴデンドロサイト(OL)の分化・成熟に関わる因子の動態:OLの分化・成熟において重要な因子に対するリアルタイムPCR法により、脊髄白質におけるOL前駆細胞(OPC)の動態を経時的に解析した。VFラットのOlig2 mRNA発現量は、10週齢で有意な上昇が、Nkx2.2 mRNA発現量は全週齢において低下傾向を示した。Olig2に強陽性を示すOPC数は、10週齢以降で明らかに増加した。以上の結果から、VFラットのOLの成熟異常が示唆され、ミエリン低形成やミエリン再生障害に関与すると考えられた。2. OLにおけるDOPEY1発現:免疫染色により、脊髄白質におけるDOPEY1発現を経時的に解析した。その結果、いずれの週齢においても、DOPEY1がOPCと成熟OLの細胞質に強く発現していることが示され、またその局在はトランスゴルジネットワークと一致することが明らかとなった。DOPEY1とトランスゴルジネットワークとの共局在は、神経細胞においても認められた。3.中枢性ミエリン再生におけるDopey1の発現動態:臭化エチジウム投与により作製した実験的脱髄・再ミエリン化モデルを用いた。投与後5日(OPC動員)から、多数のOPCおよび少数のOLが病変部に出現し、OLは投与後14(OPC分化)、21(OL成熟とミエリン形成)日においてさらに増加した。これらの病変部に出現したOPC、OLは全てDOPEY1陽性であり、その染色強度は正常部位よりもやや増強していた。以上の結果より、ミエリン再生時において、Dopey1がOLの分化・成熟において重要な役割を担っている可能性が示された。本研究によって、Dopey1がミエリン低形成に関わることを明らかにし、VFラットがミエリンの形成・維持・再生に関わるグリア細胞の役割を調べる上で非常に有用なモデル動物となることを示した。26年度が最終年度であるため、記入しない。1.遺伝子X・タンパクXの発現細胞・細胞内局在の同定:抗タンパクX抗体と細胞小器官マーカーとの二重染色、抗タンパクX抗体を用いた免疫電子顕微鏡法により、タンパクXがゴルジ装置などの細胞内輸送に関わる細胞内小器官に局在していることを明らかにした。また、RT-PCR法や抗タンパクX抗体に対する免疫染色の結果、遺伝子X・タンパクXは、中枢神経系以外にも、副腎髄質、膵臓の膵島、下垂体、精巣においても発現していることが示されたが、詳細な発現動態については今後検討予定である。2.オリゴデンドロサイトの機能評価:ミエリン構成タンパクに対する抗体を用いた免疫染色・免疫電子顕微鏡法により、ホモ型ラットのオリゴデンドロサイトでは、MAG (myelin associated glycoprotein)やPLP (proteolipid protein)が、異常拡張したゴルジ装置に蓄積し、ミエリンには殆ど発現していないことが明らかとなった。各種ミエリン構成タンパクの発現動態をReal-time PCR・ウエスタンブロッティングにより解析したところ、ホモ型ラットの脊髄白質では、ミエリン形成期におけるミエリン構成タンパク発現の低下が認められた。これらの結果より、VFラットでは、オリゴデンドロサイトの分化・成熟、細胞内輸送に異常が生じていること、遺伝子X・タンパクXが中枢神経系のミエリン形成・維持に重要な役割を果たしていることが示唆された。VFラットの原因遺伝子の細胞内局在を同定し、現在、VFラットの原因遺伝子に関する論文を投稿中である。

また、VFラットのオリゴデンドロサイトの機能評価も行うことで、VFラットのミエリン異常のメカニズムの一端を明らかにすることができた。したがって、当初研究計画どおりに概ね順調に研究が進展している。今後は、オリゴデンドロサイトの分化・成熟に関わる転写因子の動態、ミエリンと軸索との相互作用に着目した解析を進めることで、VFラットで認められるミエリン異常の病理発生の解明、中枢神経のミエリン形成・維持に関わる新たなメカニズムの解明を目指す。
磁性微粒子鎖配向型多次元プリンタによる外部磁場駆動構造の構築

磁性粒子を分散させた弾性樹脂材料を用いた新たな3次元プリンタを開発した.このプリンタでは3次元構造を出力するのみならず,構造の各箇所に(θ,φ)の2つの角度で方向を指定する磁気異方性を府よすることができる.本研究課題において,紫外線平行光源を用いた装置,およびUVレーザ光源を用いた装置を開発し,実際に造形体を駆動させることに成功した.同一の形状の構造であっても,異なる内部磁気異方性を有する造形体を出力したところ,同一の磁場内でも全く反対の変形挙動を示すことが確認できた.磁性粒子分散弾性樹脂(エラストマー)は外部磁場駆動型アクチュエータのためのキーマテリアルである.本研究では,内部構造として粒子鎖状構造を有する材料に注目し,このような内部構造までも含めた3次元プリンタを開発することを目的としている.本年度は紫外線硬化樹脂としてシリコーンゴム系の材料(ポリジメチルシロキサン)を用い,磁性粒子として微細な純鉄粉末(平均粒径5μm)を用いた.予備実験的な項目として以下を試した.(1)磁場中での磁性粒子鎖の成長状態の確認,(2)粉末を混合した樹脂内にどこまで紫外線が透過するか.(3)粒子による散乱による精度の影響はどの程度か,(4)紫外線硬化範囲の境界での粒子鎖状態の確認,(5)積層硬化実験,(6)3次元構造の作製実験,である.これらより基礎的な知見が得られ,翌年度のプリンタ開発につながる結果となった.磁性粒子分散弾性樹脂(エラストマー)は外部磁場駆動型アクチュエータのためのキーマテリアルである.本研究では,内部構造として粒子鎖状構造を有する材料に注目し,このような内部構造までも含めた3次元プリンタを開発することを目的としている.本年度は紫外線硬化樹脂としてシリコーンゴム系の材料(ポリジメチルシロキサン)を用い,磁性粒子として微細な純鉄粉末(平均粒径5μm)を用いた.予備実験的な項目として以下を試した.(1)磁場中での磁性粒子鎖の成長状態の確認,(2)粉末を混合した樹脂内にどこまで紫外線が透過するか.(3)粒子による散乱による精度の影響はどの程度か,(4)紫外線硬化範囲の境界での粒子鎖状態の確認,(5)積層硬化実験,(6)3次元構造の作製実験,である.これらより基礎的な知見が得られ,翌年度のプリンタ開発につながる結果となった.これらはすべて計画通りのものである.磁性粒子を分散させたゴム材料は外部磁場駆動型アクチュエータのためのキーマテリアルである.ゴム材料中を固化する際に磁場を印加することにより,得られた磁性ゴム材料に磁気的な異方性を付与できることがアクチュエータの設計自由度を飛躍的に増大させることを提案してきた.本研究では,このような磁気異方性を構造内に「3次元」パターニングする手法を開発してきた.具体的には紫外線硬化型のゴム状樹脂材料を用いることにより,従来の3次元プリンタを拡張したプロセスを開発した.ゴム材料を紫外線で硬化させる際に,材料に外部磁場を印加しておくことにより,硬化する微小なエリアに対し磁気異方性が付与される.積層3次元造形中に設計通りに磁場を変化させながら印加することにより,自在に異方性パターニングが可能となる.本研究実績としては2種類の造形装置の開発が挙げられる.ひとつは平行紫外線光源を用いたものであり,もうひとつはガルバノスキャナを組み込んだ紫外線レーザ光源を用いたものである.特に後者はマスクを用意することなく,3次元CADデータをから直接造形するために有効な装置となった.現在,得られた構造の駆動実験を進めており,興味深い挙動を示す,さらに複雑な造形体の構築も目指しているところである.具体的なアプリケーションとして,他プロセスで開発を進めていた磁場駆動型の人工繊毛をこのプリンタにより実現する計画も波及的に進行している.磁性粒子を分散させた弾性樹脂材料を用いた新たな3次元プリンタを開発した.このプリンタでは3次元構造を出力するのみならず,構造の各箇所に(θ,φ)の2つの角度で方向を指定する磁気異方性を府よすることができる.本研究課題において,紫外線平行光源を用いた装置,およびUVレーザ光源を用いた装置を開発し,実際に造形体を駆動させることに成功した.同一の形状の構造であっても,異なる内部磁気異方性を有する造形体を出力したところ,同一の磁場内でも全く反対の変形挙動を示すことが確認できた.前項に示したとおり,基礎的な知見が十分に得られてきたため,まずはプリンタ装置として完成させる.現在は磁場印加を手作業で行っている.つまり,永久磁石を決まった位置に決まった時間だけ手で配置している.磁石を2軸に回転する機構を作製し,プリンタが自動運転可能となるように,現在作製中の装置に組み込む予定である.また,実際に磁性粒子鎖を配向させた構造を作りこみ,構造の駆動実験を行い,本手法の有効性を示す予定である.粉末プロセスおおむね計画通りの支出であったため,7万円程度の次年度使用額である.ほぼ計画通りの使用計画を続ける.
排斥における集団移行可能性認知の影響

本研究では、排斥および排斥の観察が、集団評価(集団への愛着・集団成員への評価)に及ぼす影響を検討した。場面想定法による検討の結果、集団移行可能性が低いと見積もられる場合において、排斥の観察後に、排斥が行われた集団への愛着が高まることが示された。また、実験室実験による検討の結果、集団移行可能性が低いと認知している場合、排斥が行われた集団に対する評価が下がりにくいことが示された。加えて、これらの過程は拒絶感受性によって調整された。また、排斥後の初期的認知の検討では、参加者の性別・拒絶感受性によって表情刺激への反応が異なる傾向が認められたが、先行研究と一貫しない結果であった。本研究では、排斥行為を受けた人及び排斥行為に加担する人の心理過程について所属調整モデルに基づき検証することを目的とする。ある集団の成員に対する排斥行為の可能性を認知した時、1.排斥されたその成員の集団評価、2.その成員を観察していた他の集団成員の集団評価が、透過可能性によってどのように異なるかについて場面想定法、および実験的な検討を試みた。透過可能性が低い場合、つまりその集団から抜け出す可能性を低く見積もる場合には、被排斥者および排斥観察者は共に排斥の予期によって所属集団をより高く評価する可能性が考えられる。ある集団における排斥行為はその集団の魅力を低下させる要因となりうるが、欠乏した(するかもしれない)受容感を得たいと動機づけられるためである。場面想定法における検討において、所属集団において誰かが仲間はずれをされている場面もしくは仲間から人気のある場面のいずれかを思い浮かべてもらった後、集団への評価に回答を求めた。その結果、集団の優位性が低い場合よりも高い(透過性が低い)場合、排斥場面想起後の集団評価が高いことが示された。次に、実験的に検証するため予備実験を行った。パーソナルコンピュータを介したキャッチボールを行う際に、ある成員にボールが回らない条件を設定した。仮説は十分に支持されなかった。排斥の予期の認知において個人差があるためだと考えられる。そこで来年度はデータ数を追加し、自己観・拒否感受性・一般的信頼などの調整効果を検討する。関係性の構築と排他行動を明示するために、Cyber tossing ball課題(William, Cheung, & Choi,2001)を援用する実験を行った。集団移行の可能性(高-低)をした後、排斥の操作を行った。6人グループのうち1名が排斥されるという場面の観察がそのグループに対する愛着にどのような影響を与えるかについて検討した。その結果、排斥の観察の結果は、集団愛着を低下させた。しかしながら、その程度は集団移行可能性によって調整される可能性が示唆された。移行不可条件においては、排斥の前後で有意な差が認められたが、移行可能条件ではその差は傾向にとどまった。また、排斥がもたらす初期反応の測度(顔ドットプローブ課題)の妥当性を検討した。先行研究により排斥後には、受容を求めために笑顔への注意が高まるとされている(DeWall,et al.,2009)。そこで、曖昧な排斥の後にも同様の傾向が認められるかを検討した。その結果、先行研究と異なり、特定の表情への注意は示されなかった。刺激およびその呈示時間等を今後検討する必要があると考える。次に、否定と親密の意味を含有しているからかいが集団愛着に影響するかを検討した。結果、からかいの主効果は示されなかったが、アタッチメントスタイルによって調整されることが示された。他の型に比べ回避型においては、からかい後における仲間集団への愛着が低いことが示された。さらに、会社組織における人間関係(上司・部下)と信頼的関係を持つことが、給与体制や仕事のやりがいを考慮した上でも、集団移行の欲求(離職や部署移動)に少なからぬ影響を及ぼすことが、確認された。1.昨年度に引き続き,関係性の構築と排他行動を明示するために,Cyber tossing ball課題(William, Cheung, & Choi, 2001)を援用する実験を行った。集団移行の可能性(高一低)を操作した後,排斥の操作を行った。その結果,他集団に移行できないと思っていた人ほど,排斥の観察後に愛着を低めにくいことが示された。排斥を観察した後においても,その他の集団に移行できないと思えば(実際にどうであるかに関わらず),その集団に居続ける可能性が示唆された。2.顔ドットプローブ課題を用い,排斥がもたらす初期反応について,刺激呈示時間等を改善して検討した。

先行研究により排斥後には,受容を求めるために笑顔への注意が高まるとされていた(DeWall, et al., 2009)が,同様の傾向は認められなかった。しかし,排斥がない条件において,拒絶感受性が高い人が嫌悪顔を回避すること,排斥後に拒絶感受性が低い男性において,嫌悪顔を回避することが示された。さらに課題後,内集団(同大学)の他者受容を検討したところ,拒絶感受性が高い男性・拒絶感受性が低い女性は,その他者に対する受容が高いことが示された。整合的な結果は得られなかった。3.受容・排斥後の外集団成員の受容について検討した。外集団として,移行可能性が低く,その外集団成員からの拒絶を予期する集団(日本人における中国)を扱った。その結果,受容条件よりも排斥条件において,外集団成員を受け入れないことが示された。排斥後は受容を求め関係構築に動機づけられるとされる(Gardner, et. al., 2005)一方で,新たな関係構築が容易でないと判断される場合には,関係形成に積極的にならない可能性が示唆された。仮説が十分には支持されておらず、他の要因等も含めて検討する必要がある。実験においてはデータ数を増やし、再度検討していく予定である。また、より客観的な指標を用いて検討する予定である。
動脈硬化病態形成のメカニズム解明によるプラーク破裂予測因子の新規探索

ApoE欠損マウスを用いて6週間のニコチン持続投与による動脈硬化プラークの検討を行った。ニコチン群はコントロール群に比べ、プラーク形成の増加、Angptl2の発現上昇を認めた。さらにマウス初代培養血管内皮細胞にニコチン添加を行い、Angptl2の発現上昇を認めた。ニコチンによるプラーク形成がAngptl2を介するか確認のためApoE;Angptl2欠損マウスを用いて6週間ニコチン持続投与を行った。ニコチン群とコントロール群はプラーク形成について差異を認めなかった。以上よりニコチンは血管内皮細胞のAngptl2を発現させ、Angptl2を介してプラーク形成を促進させる可能性が示唆された。平成26年度の研究は、生体において動脈硬化病態形成におけるAngptl2の機能解析を主に行った。アンジオテンシンII(AngII)投与による動脈硬化モデルについてApoE KOマウス(16-20週齢, ♂)、通常食にて浸透圧ポンプを利用してControl群とAngII群(1.44mg/kg/day)で4週間投与し、大動脈よりmRNAを抽出しqRT-PCRにより発現解析を行った。AngII群では、control群に比べ、大動脈において明らかなプラーク部の増加を認め、Mmp2、CD68のmRNA発現の明らかな上昇を認めたが、Angptl2の発現については有意な差を認めなかった。近年、Angptl2は喫煙者の内胸動脈において発現が上昇することが知られており、タバコによるAngptl2発現誘導の可能性が報告されている(Nada F., Can. J. Physiol. Pharmacol., 2008)。AngIIと同様に浸透圧ポンプを利用してControl群とNicotin群( 1mg/kg/day )で6週間投与し、解析を行った。Nicotin群は、control群に比べ、大動脈において明らかなプラーク部の増加を認め、かつAngptl2、Mmp2、CD68、TNFa mRNAの明らかな発現上昇を認めた。Angptl2の血管における発現誘導の一つとしてNicotinが示唆された。また、ヒト冠動脈サンプルの免疫染色において、ANGPTL2はプラーク部の血管内皮細胞およびCD68陽性細胞で発現を認めた。前年度の研究結果において、マウスの解析よりAngptl2の血管における発現誘導の一つとしてNicotinが示唆されたため、本年度は、マウス血管内皮細胞初代培養を樹立し、in vitroにおいてNicotinのAngptl2の発現誘導について検討を行った。その結果、Nicotin投与群においてAngptl2 mRNAの発現の明らかな上昇を認めた。現在、NicotinによるAngptl2の発現誘導の詳細な分子機構解明について検討中である。また、Angptl2の発現制御機構に関わる分子についてデータベースを検索したところ、Angptl2を標的とするmiRNAの候補を複数見出した。それぞれのmiRNA発現ベクターを用いて培養細胞にtransfectionさせ検討を行ったところ、miR-A, miR-Bに関してAngptl2のタンパク発現低下を認めた。さらにAngptl2結合部位の確認のため、Angtl2-3'UTR(通常配列とmiRNA結合予想部位を欠損させた配列)をLuc cDNAの後に結合させたベクターを作製し、miRNA発現ベクターとともに培養細胞にtransfectionさせルシフェラーゼレポーターアッセイを行った。その結果、miR-A及びmiR-BともにAngptl2-3'UTRに結合することを認め、miR-A及びmiR-BのそれぞれがAngptl2の翻訳調節に関与していることが明らかとなった。また、Angptl2 conditional KOマウスを作製し、Tie2-Creトランスジェニックマウスとの交配を行い、血管内皮特異的Angptl2欠損マウスの樹立を行った。マウスの交配により産仔数が予想よりも少なく、実験に必要な匹数が足りず、解析時期に遅れが生じている。今年度の初めには、それらの解析を行う予定である。それ以外については予定通りに進んでいる。分子生物学平成27年度については、平成26年度の結果に基づいて研究を進め、当初の計画通りである。主な研究としては、Angptl2 conditional KOマウスや血管内皮細胞特異的Angptl2強制発現マウスを用いて生体において動脈硬化病態形成におけるAngptl2の機能解析とin vitroによるAngpgl2の発現制御解析を行う。
原発性胆汁性肝硬変における免疫応答の解析

1.抗ミトコンドリア(PDC)抗体遺伝子の決定ならびに抗体産生Bリンパ球の由来の解析PBC患者より樹立した抗ミトコンドリア(PDC, OGDC)抗体産生B細胞株よりmRNAを精製し, cDNAを作成した.このcDNAより免疫グロブリンIgV geneに特異的なprimerを用いてIg遺伝子をPCR法を用いて増幅後,増幅されたIg遺伝子をplasmid vectorにクローニングし,その塩基配列を決定し,既知の免疫グロブリン遺伝子ファミリーと比較した.その結果,抗ミトコンドリア(PDC, OGDC)抗体に特異的な遺伝子ファミリーの使用はなく,抗原で刺激されたBリンパ球がクローナルに増殖した可能性を明らかにした.2.自己抗原(PDC-E2)特異的T細胞のクローニングとT細胞エピトープの解析PBC患者末梢血を自己抗原提示細胞と各種ミトコンドリア抗原(PDC, OGDCおよびPDC-E2コンポーネントを網羅する合成ペプチド)の存在下で培養し,ミトコンドリア抗原で刺激を繰り返すことによってミトコンドリア抗原特異的T細胞クローンを樹立した.得られたT細胞クローンについてT細胞エピトープ・マッピングを行った.その結果,T細胞エピトープもBリンパ球の近傍に存在し, minimmum epitopeはペプチドPDC-E2 (163-176)であることを明らかにした.このT細胞エピトープの各々のアミノ酸を他のアミノ酸と置換したペプチドでT細胞クローンを刺激することにより, EXDK配列がMHCあるいはT細胞レセプターとの結合に必須の部位であることを明らかにした.さらに,T細胞クローンのひとつが大腸菌のPDC-E2に反応したことにより,T細胞による認識においてもmolecular mimicryが存在し, PBCの発症にも大腸菌が関与している可能性があることを初めて明らかにした.PBC患者のHLAの検索1.抗ミトコンドリア(PDC)抗体遺伝子の決定ならびに抗体産生Bリンパ球の由来の解析PBC患者より樹立した抗ミトコンドリア(PDC, OGDC)抗体産生B細胞株よりmRNAを精製し, cDNAを作成した.このcDNAより免疫グロブリンIgV geneに特異的なprimerを用いてIg遺伝子をPCR法を用いて増幅後,増幅されたIg遺伝子をplasmid vectorにクローニングし,その塩基配列を決定し,既知の免疫グロブリン遺伝子ファミリーと比較した.その結果,抗ミトコンドリア(PDC, OGDC)抗体に特異的な遺伝子ファミリーの使用はなく,抗原で刺激されたBリンパ球がクローナルに増殖した可能性を明らかにした.2.自己抗原(PDC-E2)特異的T細胞のクローニングとT細胞エピトープの解析PBC患者末梢血を自己抗原提示細胞と各種ミトコンドリア抗原(PDC, OGDCおよびPDC-E2コンポーネントを網羅する合成ペプチド)の存在下で培養し,ミトコンドリア抗原で刺激を繰り返すことによってミトコンドリア抗原特異的T細胞クローンを樹立した.得られたT細胞クローンについてT細胞エピトープ・マッピングを行った.その結果,T細胞エピトープもBリンパ球の近傍に存在し, minimmum epitopeはペプチドPDC-E2 (163-176)であることを明らかにした.このT細胞エピトープの各々のアミノ酸を他のアミノ酸と置換したペプチドでT細胞クローンを刺激することにより, EXDK配列がMHCあるいはT細胞レセプターとの結合に必須の部位であることを明らかにした.さらに,T細胞クローンのひとつが大腸菌のPDC-E2に反応したことにより,T細胞による認識においてもmolecular mimicryが存在し, PBCの発症にも大腸菌が関与している可能性があることを初めて明らかにした.PBC患者のHLAの検索I.抗ミトコンドリア(PDC)抗体遺伝子の決定ならびに抗体産生Bリンパ球の由来の解析PBC患者より樹立したAMA産生B細胞株3株よりmRNAを精製し,cDNAを作成した.このcDNAより免疫グロブリンIgV geneに特異的なprimerを用いてIg遺伝子をPCR法を用いて増幅後,増幅されたIg遺伝子をplasmid vectorにクローニングし,その塩基配列を決定し,既知の免疫グロブリン遺伝子ファミリーと比較した.その結果,抗ミトコンドリア(PDC)抗体に特異的な遺伝子ファミリーの使用はなく,抗原で刺激されたBリンパ球がクローナルに増殖した可能性を明らかにした.II.抗ミトコンドリア(PDC)抗体特異的T細胞のクローニングと抗原エピトープの解析PBC患者末梢血を自己抗原提示細胞と各種ミトコンドリア抗原(PDC,OGDC,合成ペプチド)の存在下で培養し,ミトコンドリア抗原の刺激を繰り返すことによりミトコンドリア抗原特異的T細胞株あるいはクローンを樹立した.この目的のために,PDC-E2componentを網羅する合成ペプチドを作製した。得られたT細胞ラインあるいはクローンのT細胞エピトープ・マッピングを行った.その結果判明したT細胞エピトープを含むオリゴペプチドのアミノ酸を,他のアミノ酸と置換することによりペプチドのMHC結合性(アグレトープ)や,T細胞レセプターとの結合に必須の部位(エピトープ)を決定した.この結果,T細胞のエピトープもBリンパ球の近傍に存在することを明らかにした.さらに,エピトープの認識に,molecular mimicryが成立することを初めて明らかにした。1.抗ミトコンドリア(PDC)抗体遺伝子の決定ならびに抗体産生Bリンパ球の由来の解析PBC患者より樹立した抗ミトコンドリア(PDC,OGDC)抗体産生B

細胞株よりmRNAを精製し,cDNAを作成した.このcDNAより免疫グロブリンIgVgeneに特異的なprimerを用いてIg遺伝子をPCR法を用いて増幅後,増幅されたIg遺伝子をplasmid vectorにクローニングし,その塩基配列を決定し,既知の免疫グロブリン遺伝子ファミリーと比較した.その結果,抗ミトコンドリア(PDC,OGDC)抗体に特異的な遺伝子ファミリーの使用はなく,抗原で刺激されたBリンパ球がクローナルに増殖した可能性を明らかにした.自己抗原(PDC-E2)特異的T細胞のクローニングとT細胞エピトープの解析PBC患者末梢血を自己抗原提示細胞と各種ミトコンドリア抗原(PDC,OGDCおよびPDC-E2コンポーネントを網羅する合成ペプチド)の存在下で培養し,ミトコンドリア抗原で刺激を繰り返すことによってミトコンドリア抗原特異的T細胞クローンを樹立した.得られたT細胞クローンについてT細胞エピトープ・マッピングを行った.その結果,T細胞エピトープもBリンパ球の近傍に存在し,minimmum epitopeはペプチドPDC-E2(163-176)であることを明らかにした.このT細胞エピトープの各々のアミノ酸を他のアミノ酸と置換したペプチドでT細胞クローンを刺激することにより,EXDK並列がMHCあるいはT細胞レセプターとの結合に必須の部位であることを明らかにした.さらに,T細胞クローンのひとるが大腸菌のPDC-E2に反応したことにより,T細胞による認識においてもmolecular mimicryが存在し,PBCの発症にも大腸菌が関与している可能性があることを初めて明らかにした.3.PBC患者のHLAの検索PBC患者48名のHLA-DR,DQ,DP座位を336の健常者を対照として,SSOP法によってDNAタイピングを行った.その結果,PBCの疾患感受性はHLA-DRBllocusによって,一方,PBCへの疾患抵抗性はHLA-DQlocusによて制御されている可能性を明らかにした.
薬食同源の視点から香辛料食品を素材とした生活習慣病の予防,治療成分の開拓

本研究では,薬食同源の視点から薬効が伝承されている天然薬物の中から香辛料食品に焦点を絞り,新規機能性成分の開拓を行った.この研究過程で,特にローズヒップ(Rosa canina)やナガコショウ(Piper chaba,果実)の含有成分に強い抗肥満作用・抗糖尿病を有することを見いだすともに,活性発現のための必須構造および作用機序の一部を明らかにした.また,種々の香辛料食品から新規機能性成分を見いだした.本研究では,薬食同源の視点から薬効が伝承されている天然薬物の中から香辛料食品に焦点を絞り,新規機能性成分の開拓を行った.この研究過程で,特にローズヒップ(Rosa canina)やナガコショウ(Piper chaba,果実)の含有成分に強い抗肥満作用・抗糖尿病を有することを見いだすともに,活性発現のための必須構造および作用機序の一部を明らかにした.また,種々の香辛料食品から新規機能性成分を見いだした.本研究では,薬食同源の視点から研究対象とする薬用資源として,医学体系が確立されている中国や東南アジアの伝統医学やインドのアーユル・ウェーダ医学,ユナニー医学などにおいて薬効が伝承されている天然薬物の中から香辛料食品に焦点を絞り,in vitroやin vitro系アッセイを組み合わせた評価系を構築応用して,1)抗糖尿病・抗肥満作用成分,2)抗炎症・抗アレルギー作用成分,3)胃粘膜保護作用成分および4)肝保護作用成分を探索,解明することによって新規機能性成分の開拓を行うことを目的とする.今年度は,当研究室が保有する香辛料食品のバイオアッセイを実施し,有効な抗糖尿病・抗肥満作用,抗炎症・抗アレルギー作用,胃粘膜保護成分を探索した.この研究過程で,ジャワナガコショウ(Piperchaba,果実)から得られたアミド成分が抗糖尿病および肝保護作用を有することを明らかにした.さらに,香辛料の西洋ワサビ(Armoracia rusticana)から得られたイソチオシアネート類に胃粘膜保護作用を見いだした.その他,ローズヒップ(rosa canina)の含有成分tilirosideが強い抗肥満作用を有することを見いだすとともにtilirosideについて活性発現のための必須構造および作用機序の一部を明らかにするなど,平成19年度の当初計画をほぼ達成したものと考える.本研究では,薬食同源の視点から研究対象とする薬用資源として医学体系が確立されている中国や東南アジアの伝統医学やインドのアーユル・ウェーダ医学,ユナニー医学などにおいて薬効が伝承されている天然薬物の中から香辛料食品に焦点を絞り,in vitroやin vivo系アッセイを組み合わせた評価系を構築応用して新規機能性成分の開拓を行うことを目的とする.平成19年度において当研究室が保有する香辛料食品のバイオアッセイを実施し,ナガコショウ(Piper chaba,果実)から得られるアミド成分が肝保護作用および抗糖尿病を有することを明らかにした.今年度は,ナガコショウから得られるアミド成分の抗糖尿病作用についてさらに検討を行ったところ,retrofractamide Aやpiperlongminineが強い活性を有することを見出すとともに,活性発現のための必須構造および作用機序の一部を明らかにした.さらに,香辛料として食用に供されるタイ伝承薬物Curcuma comosa(根茎)から得られるセスキテルペン類に抗腫瘍壊死因子α(TNF-α)活性を見出した.その他,タイ産香辛料Zingiber cassumunar(根茎)にがん浸潤抑制およびNO産生抑制活性を見出すとともに,フェニルプロパノイド1'S-1'-acetoxychavicol acetateの低分子プローブの創製を試みるなど平成20年度の当初計画をほぼ達成したものと考える.