hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞内ロジスティクス機構による細胞侵入性細菌感染症の制御

細胞内ロジスティクス機構と歯周病菌と細胞侵入の関連について検討を加えた。歯周病菌Porphyromonas gingivalis(Pg)は歯周細胞に侵入する.歯肉上皮細胞内に侵入したPgはまず初期エンドソームのマーカーであるFYVEと共局在を示し,その局在は経時的に減少した.その後,細胞内のPgの約半数がLAMP1(ライソソームマーカー)と共局在を示した.また,同じく感染1時間後,細胞内のPgの約70%はトランスフェリンレセプターと共局在を示し,その局在は経時的に減少した.このことから,歯肉上皮細胞内に侵入したPgはまず初期エンドソームに存在し,ライソソームで分解を受ける菌がいる一方,エンドサイトーシス経路へとソーティングされる菌がいる可能性が示された.また,エンドソームから細胞膜へのリサイクリングを制御するRabファミリーGTPaseであるRab11,およびアクチン細胞骨格系の再構成を制御するGTPaseであるRalAとPgとの共局在が観察された.RabllとRalAのドミナントネガティブ型(Rabll^<25N>,RalA^<27N>)とPgとの共局在を検討したところ,野生型と比較し,その共局率は減少した.さらに,RabllとRalA遺伝子のRNAiノックダウンにより,細菌の細胞培養液中への脱出の減少と細胞内の生菌数の増加がみられた.さらに,リサイクリング小胞の細胞膜への繋留因子であるエキソシスト複合体の1つであるSec5,Sec6およびExo84遺伝子のRNAiノックダウンを行ったところ,細胞培養液中の生菌数の減少,並びに細胞内の生菌数の増加がみられた.これらの結果より,歯肉上皮細胞に侵入したPgの一部はRabllとRalAが制御するリサイクリング経路ならびにエキソシスト複合体利用して細胞外へ脱出し,さらに近接細胞へ再侵入し,歯周組織の感染拡大を果たしていることが示唆された.宿主細胞への細菌の侵入は、細胞内寄生細菌だけに限られると考えられていた。しかし、多数の病原性細菌は上皮細胞などの非免疫系宿主細胞に侵入し、免疫システムによる攻撃を回避しつつ感染の進行と慢性化を図ることが判ってきた。これら細菌種は、エンドサイトーシス経路を利用して細胞内に侵入し、endosome/lysosomeの分解機能の阻害、あるいはendosomeから細胞質への脱出によって、細胞内殺菌作用に抵抗する術を有しているようである。さらに、autophagyがendosomeから細胞質へと逃れた細菌[A群連鎖球菌(Group A Streptococcus : GAS)]を捕獲・分解することが報告されて以後、autophagyと細胞侵入微生物に関する報告が相次ぎ「細胞内ロジスティクス機構による細菌感染症の制御」という研究領域に関心が集まるようになった。我々は前述のautophagy/GASの研究に関与して以来、侵入細菌の細胞内動態の解析を行っている。autophagosomeに捕獲されたGASはautophagosomeとlysosomeが融合した小胞内で分解される。この融合にはRab familyに属するRab7の関与が示されているものの、融合機構の詳細は不明であった。我々は、3種のSNARE分子(VAMP7, VAMP8, Vtilb)がautophagosome膜と高頻度に共局在を示すことを見出した。さらにVAMP8,Vtilbをノックダウンさせた細胞では、autophagosomeとlysosomeとの共局在率の低下、GASの細胞内生存率の増加が確認されautophagosome/lysosome融合にはVAMP8とVtilbが関与していることを示した。本年度は研究計画に沿った進捗が得られ良好な成果を残せた。歯周病菌Porphyromonas gingivalis(Pg)は歯周細胞に侵入する.歯肉上皮細胞内に侵入したPgはまず初期エンドソームのマーカーであるFYVEと共局在を示し,その局在は経時的に減少した.その後,細胞内のPgの約半数がLAMP1(ライソソームマーカー)と共局在を示した.また,同じく感染1時間後,細胞内のPgの約70%はトランスフェリンレセプターと共局在を示し,その局在は経時的に減少した.このことから,歯肉上皮細胞内に侵入したPgはまず初期エンドソームに存在し,ライソソームで分解を受ける菌がいる一方,エンドサイトーシス経路へとソーティングされる菌がいる可能性が示された.また,エンドソームから細胞膜へのリサイクリングを制御するRabファミリーGTPaseであるRab11,およびアクチン細胞骨格系の再構成を制御するGTPaseであるRalAとPgとの共局在が観察された.RabllとRalAのドミナントネガティブ型(Rabll^<25N>,RalA^<27N>)とPgとの共局在を検討したところ,野生型と比較し,その共局率は減少した.さらに,RabllとRalA遺伝子のRNAiノックダウンにより,細菌の細胞培養液中への脱出の減少と細胞内の生菌数の増加がみられた.

さらに,リサイクリング小胞の細胞膜への繋留因子であるエキソシスト複合体の1つであるSec5,Sec6およびExo84遺伝子のRNAiノックダウンを行ったところ,細胞培養液中の生菌数の減少,並びに細胞内の生菌数の増加がみられた.これらの結果より,歯肉上皮細胞に侵入したPgの一部はRabllとRalAが制御するリサイクリング経路ならびにエキソシスト複合体利用して細胞外へ脱出し,さらに近接細胞へ再侵入し,歯周組織の感染拡大を果たしていることが示唆された.
成熟マスト細胞におけるGATA2の機能解析

マスト細胞におけるGATA2の役割を明らかにするために、骨髄由来マスト細胞(BMMCs)を用いてCre-LoxPシステムによりGata2遺伝子を欠失し、性状解析を行った。その結果、GATA2の機能欠失によりマスト細胞の分化形質が失われ、次いで骨髄球のマーカーであるCD11bとLy-6G/Cおよび骨髄球の分化決定に重要なC/EBPαの発現上昇を伴い脱分化が引き起こされることを明らかにした。本解析によりGATA2によるCebpaの発現抑制が、マスト細胞分化形質の維持にきわめて重要であることが示唆された。申請者は、マスト細胞における転写因子GATA2の役割を明らかにする為に、先行研究でマウス骨髄由来マスト細胞(BMMCs)を用いてGATA2の機能欠損を行い解析した。その結果、GATA2機能欠失BMMCs(G2ΔCF-BMMCs)は細胞内顆粒が消失し、未熟な骨髄球様の形態を呈していた。さらにCebpaや、M-/G-/GM-CSFRなどの発現上昇が認められた。本申請課題では、より詳細に解析を進め、骨髄球系細胞の分化と細胞系列決定機構を明らかにする事を目的とした。平成25年度は性状解析を中心に解析を行った。まず、発現上昇が認められた受容体に対するサイトカインを添加し形質転換能の有無を検討した。G2ΔCF-BMMCsをIL3/GM-CSF/G-CSF存在下で培養したところ、Ly6G/Ly6CG両陽性となり、形態的に分葉核を有し、大腸菌貪食活性を有する機能的な好中球様細胞へと分化した。IL3/GM-CSF/M-CSF存在下では蛍光Beadsを貪食する機能的なマクロファージへと分化した。一方で、IL3とIL5存在下でSiglecF陽性の好酸球は認められなかった。以上の結果から、G2ΔCF-BMMCsは系統が制限された分化能を保持する脱分化した細胞であることが明らかとなった。次に、脱分化の原因となり得る遺伝子を同定する為にRNA-Sequencing解析を行った。その結果、マスト細胞内顆粒に含まれる複数の遺伝子が大きく減少していたが、マスト細胞および他系統の分化進行に関与する転写因子に優位な発現変動は認められなかった。この結果から、GATA2機能欠失を介した脱分化の主な原因はCebpaの発現上昇である可能性が示唆された。またGene Ontology解析の結果「metabolic process」に分けられる遺伝子群が上昇しており、この結果は脱分化をサポートすると考えている。転写因子GATA2はマスト細胞への分化決定に必要であることが知られているが、分化決定後におけるGATA2の機能についての詳細な解析は行われていなかった。本研究では、Cre-LoxPシステムによってGATA2のDNA結合ドメイン(C-finger:CF)を欠失する遺伝子改変マウスから骨髄由来マスト細胞(BMMCs)を調整し、十分にマスト細胞の形質を保持していることを確認したうえで4-Hydroxytamoxifen処理によりGATA2を欠失させ(G2DCF-BMMCs)、詳細な解析を行った。その結果以下の研究成果を得た。1. GATA2欠失により、マスト細胞に特徴的なc-KitとFceRIaの発現が減少すると同時に骨髄球のマーカーであるCD11bとLy6-G/Cの発現上昇がした。2. G2DCF-BMMCsではG-/GM-/M-CSFR等の発現が上昇し、各受容体に対応する増殖因子を含むサイトカインカクテルによって機能的な好中球様またはマクロファージ様の細胞に分化転換した。3. G2DCF-BMMCs用いてRNA-Seq解析を行った結果、対照と較べてマスト細胞関連遺伝子の発現が広範に減少し、Cebpaの発現が顕著に増加した。4.野生型BMMCsにCebpaを過剰発現した結果、G2DCF-BMMCsの表現型はほぼ再現され、さらにGATA2・Cebpaの二重欠損によりマスト細胞の形質は失われたがCD11b/Ly6-G/Cの発現上昇は認められなかった。以上の結果から、GATA2によるCebpaの発現抑制が、マスト細胞分化形質の維持にきわめて重要であることが示唆された。高崎健康福祉大学・大学院薬学部分子生体制御学研究室分子生物学平成25年度に予定していた1G2ΔCF-BMMCsの性状解析と2RNA-Sequencingによるトランスクリプトーム解析は予定通り実行し解析を進める事ができた。しかしながら、トランスクリプトーム解析に関しては、さらに詳細な解析が必要であり今後引き続き行いたいと考えている。1.GATA2の機能補完実験とCebpaの欠損実験GATA2機能欠失がBMMC脱分化の直接の原因であるのかどうか確認する為に、レトロウイルスを用いて機能補完実験を行う。

結果はフローサイトメトリーを用いた発現解析(c-Kit、FceRIa、Mac1、Gr1の発現の有無)とサイトスピン標本による細胞形態の観察によって評価する。また、BMMCsの脱分化にはC/EBPaの発現上昇が必要であるか否かを調べるために、CebpaとGata2の二重欠損BMMCsを作製する。初年度からはじめていたマウスの交配は順調に予定通り進行しており、作出され次第解析を行う予定である。2.GATA2によるCebpa遺伝子制御解析これまでに、Cebpa遺伝子の発現制御は1Promoterのメチル化(Ruscio et al., 2013)、2IKAROSを介した3'UTRのクロマチン修飾(Rao et al., 2013)、3骨髄球の細胞株である32Dcl3細胞における+37Kエンハンサーを介したRUNX1による正の制御(Guo et al., 2012)が報告されている。申請者は、まず3に着目しその配列を調べた結果、RUNXの他にGATAとEtsの結合配列があることを見いだした。BMMCsでRUNX1、GATA2、PU.1のChIP assayを行った結果、3因子の結合が認められた。従ってこの3因子を中心に、re-ChIP assayや3C assay、Reporter assay等を駆使し、引き続きGATA2によるCebpa転写抑制メカニズムの解析を行う。平成25年度に行ったRNA-Seq解析の外部委託解析、および新たなChIP-Seq解析を行う為のサンプル調整に要する期間が年度を越えたため、平成26年度に繰り越した。平成25年度に行ったRNA-Seq解析のデータ処理(外部委託解析)を行う。またGATA2ノックアウトマウスからBMMCを樹立し、ChIP-Seq解析(外部委託解析)を行う事で、マスト細胞における直接のターゲット遺伝子を網羅的に同定する。
日本の城下町都市における近世近代の都市住宅に関する研究

本研究は,近世の武士住宅の配置平面の原理が,敷地入口方位の違いに関係なく。道側に玄関-座敷の接客空間を面し,その反対側に茶の間,居間などの家族生活空間を配置するという正面型が主流であったことを実証することを第1の目的としている。これは南方位を重視する現代の都市独立住宅の考え方とは大きく異なるものであった。そして,明治以降の近代の都市独立住宅において,近世の武士住宅にみられる正面型の原理が如何に継承され,またはどのように変化したかを明らかにすることを第2の目的としている。これらの目的は,全国の36の城下町都市における住宅調査によって実証されたと思っている。さらに,近世の武士住宅を地域的視意からみれば,東日本と西日本で平面が異なることを明らかにすることも重要な課題とした。すなわち,近世の武士住宅は城下町都市の地域性,風土性によって様々な形が成立しており,それが近代の住宅まで継承されていた。そしてさらに,明治以降の建築家および住宅研究者によって近世の武士住宅とその様式を受け継いだ近代の都市独立住宅は接客本位であると批判されてきたが,しかし実態においては乖離があったことを明らかにし,在来住宅批判論は誤謬であったと論じている。本研究は、日本の城下町都市における近世の武士住宅と近代の都市独立住宅の実態とその展開過程を明らかにすることを目的としている。本年度は、東北地方の秋田県秋田市と岩城町、新潟県村松町、山形県米沢市と鶴岡市の5市町を調査することが出来た。調査戸数は秋田市21戸、岩城町3戸、村松町10戸、米沢市22戸、鶴岡市20戸の計76戸である。これらの調査によって、本研究の仮説の主な部分は実証できた。すなわち、正面型の原理を含めた武士住宅の3つの原理がこの市町の住宅においても貫かれていることが判明したのである。又、藩(市町)独特の住宅形式も存在していることも明らかとなった。この中間分析結果は東北支部研究報告会(2000年6月17日)にて、発表する予定である。本年度の研究計画は、東日本の太平洋側と中部地方の城下町都市の近世近代の都市住宅の調査であった。そこで、それらの地域の各都市を予備調査した結果、仙台市、八戸市、松本市、飯田市の4市に対象とする住宅の史料または現存住宅があり、その4都市を調査した。その結果、八戸市、松本市、飯田市の旧城下町に存在した武士住宅は、仮説1の通り、道に座敷を面する正面型であることが判明した。また、仮説2の表庭と裏庭の2つの庭を設けていること、さらに仮説3の道路を基点として、表庭-表空間(座敷)-裏空間(居間など)-裏庭、といったタテ方向の空間の連続性も確かめられた。ただし、仙台市の武士住宅については、1例の史料が残っているだけであり、その平面は仮説1に反する背面型であった。次に、近代の都市住宅は、全ての都市で北入りであれば南に座敷を設ける背面型に変化していた。江戸時代の武士住宅の正面型の原理は、この4都市では継承されてはいなかったのである。また、中廊下は仙台市の住宅の半数程度にみられるだけで、ほとんど導入されていないというのが実態である。しかも、その仙台市の住宅にしても、中廊下の半数は地方都市独自のタテ中廊下である。したがって、木村氏が示した近代都市住宅の中廊下型の学説は、この東北の地方都市においてはまったく実証されず、東北地方の近代住宅の実相は、その学説とは違って、別のところにあったとみるべきである。それは広間型の原理の継承である。以上の調査分析は、2001年6月の建築学会東北支部研究報告に発表している。昨年度までに東日本の16の城下町都市における近世近代の都市住宅を調査した。研究仮説の正面型は、13の都市で実証された。平成13年度の研究は西日本の近畿地方に焦点をあて、大和郡山市、大津市、彦根市、上野市の4都市の調査を行った。これらの都市においても、近世近代の残存住宅は仮説の正面型の傾向にあることが分った。

また、道に面して座敷を構えるという平面原理の他に、道を基点として、表庭→表空間→裏空間→裏庭、というタテ方向の空間の連続性も確かめられた。さらに、その平面的特徴は、東日本のそれとは異り、東日本の広い茶の間文化に比べ、狭い茶の間文化の様相がみられる事が分った。それは、農家住宅における東日本の広間文化の継承と考えられる。本年度の研究課題は(4年間での最終年度)、中国地方と四国地方の城下町都市における近世近代の都市住宅を対象としたものである。所謂、本研究の仮説である「方位に関係なく、道に面して住宅を構える正面型が主流である」ことの実証が基本課題であった。そこで中国と四国地方の城下町都市を全て訪問し、近世と近代の住宅が残存しているかどうか、またそれに関する史料の収集の調査を行った。その結果、多くの都市で、すでに住宅は残っておらず、残存住宅と史料の収集の調査ができたのは、徳島市、吉田町、萩市、松江市、高梁市のみであった。その調査の結果、中国四国地方の城下町都市においても、ほぼ仮説とおりに正面型が主流であることが確認できた。また、本年を含む4年間の近世近代の住宅調査で得られた日本の近世住宅の特徴(正面型と開放性)の意味とその源流を考察するために、中国の古代住宅との関係を明らかにすることが新たな課題となり、それらの中国古代の住宅史料の収集も行った。その結果、近世住宅の源流である日本古代の寝殿造と中国古代の貴族住宅との緊密な関連が明らかとなった。
古代日本語書記法における和歌表記の位置づけ

万葉集は、古代日本語資料として資料的価値の高いものであるが、現存する写本は11世紀を遡らない。本研究は、万葉集中に残る異伝を、成立以前に存した校合資料の痕跡をとどめるものと捉え、編纂当初から平安中期頃までの万葉集の姿を部分的にではあるが、明らかにした。木簡等の資料に残る歌と万葉集という文学作品の間を埋める資料として、異伝に注目することで、資料的な制限のあった古代日本語研究に新たな資料を供することができたと考える。万葉集収載の異伝注記の性格を明らかにすべく、異伝系本文に用いられる仮名の字母をデータ化し、本文系本文に用いられる仮名の字母と比較した。その結果、万葉集の巻1から巻4の異伝系本文に関しては、仮名書き傾向が強く看取され、特に奈良朝後期の歌人である大伴家持歌の仮名字母との共通性が見られることが判明した。奈良朝後期の仮名用例は大伴家持作歌に集中するため、それが家持特有の字母と言えるのか、あるいは当時一般に見られた用字なのかの判断については慎重を要するが、上代文献における特殊な語句が大伴家持と巻1から巻4の異伝系本文に共通して現れる点を考慮すると、異伝系本文と家持との関わり、具体的には、巻1から巻4の異伝注記を記したのが大伴家持であったことは動かないと思われる。この点に関しては、現在、論文公表の準備中であり、本年度中に『和歌文学研究』に公表する予定である。また、調査の過程で明らかになった成果を援用して、本文系本文の表記から句の意味を改め、人麻呂作歌の歌の読み変えを図った(「「柿本朝臣人麻呂羈旅歌八首」の主題」『国文学叢録』笠間書院、2014.3)。なお、仮名の使用と助辞に関わる意識とは不可分の関係にある。これまで奈良時代にはすでに助辞についての文法的自覚が確認されると考えられてきたが、その点誤りがあることを個人研究の成果である「「ものはてにを」を欠く歌の和歌史における位置づけ」(『萬葉語文研究』第9集、2013.10)において指摘した。今後、従来、詞と辞の区別に対する自覚と正訓字仮名交じり表記の成立との関係を個人研究の成果を踏まえつつ明らかにしていきたい。万葉集は、木簡等の出土資料と並ぶ最大の古代日本語資料として資料的価値の高いものだが、現存写本は11世紀を遡らない。今年度は、11世紀以前の言語資料として、主として万葉集中に残る異伝注記の表記と表現に注目し、古代日本語表記史における位置づけを試みた。結果、1.万葉集巻13収載の柿本人麻呂作歌に残る異伝注記の一部が、奈良朝に書き加えられたものである可能性を明らかにした。この成果は、学術雑誌へ投稿したが掲載が見送られたため、2016年度刊行の著書で公表する予定である。2.万葉集巻10の異伝注記が、10世紀に流布した万葉集の面影を伝えている可能性について、赤人集や非仙覚本の訓と比較することで明らかにした(「赤人集と次点における万葉集巻十異伝の本文化」『上代文学』114号、2015年4月)。3.また、表記の方法を調査する過程で次の万葉歌(3254)の解釈を改めた(「柿本朝臣人麻呂羈旅歌八首の主題ー巻三・二五四番歌の解釈を通じて」『国文学叢録論考と資料』、2014年4月、笠間書院)。人文学万葉集の注記に用いられる仮名の字母のデータ化と本文系本文の字母の差異についての調査は進んでおり、異伝系本文が、作歌時点とは異なる段階で記された校合の跡である可能性がほぼ確認できた。研究計画では昨年度中に、学術雑誌に論文公表する予定であったが、事前の研究会での発表の際、さまざまな意見を頂戴し、論を補強すべく、補足調査をする必要が生じた(具体的には、異伝系本文の語句・用字と他の歌の本文系本文との比較を中心に行っていたが、頂いた指摘は、異伝系本文の該当する本文系本文と他の歌の本文系本文との関係も行うべきだというものである)。結果、調査、加筆を行い現在に至っている。現在、投稿原稿の準備がほぼ完了しており、投稿前に専門家の意見を仰ぐ予定である。昨年度中に作成したデータ集成から、本文系本文とは異なり、異伝系本文に独自に見られる文字について、文学作品以外の資料、具体的には、正倉院文書・木簡資料との共通性を調査する。また、異伝系本文の性格を明らかにすべく、異伝系本文が平安期以降に万葉歌として享受された例がないかを調査する。既に、人麻呂集、伊勢物語をなど平安期の仮名万葉の一部についての調査を終えている。中間成果を、研究会飛ぶ鳥(2015.6)

美夫君志会8月例会(2015.8)で発表し、専門化の意見をふまえて修正する予定である。購入する予定であった万葉集古写本の写真版が近々公開されるとの情報を得たので購入を控えた。今年度中に公開されれば、万葉古写本の写真データ購入費用に充てたい。
Na^+イオンによるHERGカリウムチャネルの制御機構を探る

本研究では,HERGカリウムチャネルを哺乳類の培養細胞に発現し,パッチクランプ法を用いて細胞外Na^+がHERGチャネルに及ぼす効果を解析した。本年度に得られた知見は以下のとおりである。1.野生型HERGチャネルでは,[K^+]o【less thanor equal】2mMとすると,トレイン刺激により誘発されるHERG電流は,初期(I_<1st>)と5分後定常電流(I_<SS>)で著しく異なり,チャネルの使用依存性に電流が増大する。この現象は正常K^+液中では認められず,低K^+かつ細胞外Na^+の存在が必要である。2.野生型HERGチャネルでは低K^+低Na^+条件とすると,同一イオン環境にも関わらず,刺激頻度により定常電流が大きく異なった。生理的範囲の2mM[K^+]o/144mM[Na^+]oのTyrode溶液中においても,0.017Hz刺激時定常電流(I_<SS(0.017Hz)>)は,0.2Hz刺激時定常電流(I_<SS(0.2Hz)>)の88.4±4.0%であった。この定常電流は刺激頻度を変えると可逆的に変化した。3.チャネルpore変異型HERGチャネル(G628C/S631C:不活性化しない)では,細胞外Na^+存在下,[K^+]o=010mMの範囲では,トレイン刺激により誘発されるHERG電流I_<1st>とI_<SS>に変化は認められなかった。4.変異型HERGチャネル(G628C/S631C)では,刺激頻度を変化させても定常電流に変化は認められなかった。上記実験結果より,細胞外Na^+イオンがHERGチャネルouter poreと相互作用を有し,この相互作用はチャネルの不活性化のメカニズムと密接な関連を有すると考えられた。上記1,2に関しては雑誌「心電図」に発表済みである。本研究により低K^+血症の状態でHERG電流が抑制される分子機構,HERGチャネルouter poreにおけるK^+とNa^+の分子相互作用とその意義が明らかとなった。本研究では,HERGカリウムチャネルを哺乳類の培養細胞に発現。パッチクランプ法を用いて解析を行った。現在までに得られた新知見は以下のとおりである。1)細胞外K^+濃度([K^+]o)を低下させることにより,一定頻度で刺激を開始すると徐々に電流が増加し定常状態に達する現象が観察された。すなわち,初期電流量(I_<1st>)と定常電流量(I_<ss>)が低K^+条件では異なることが明らかとなった。この現象は[K^+]o=2mM以下で出現し,2mM<[K^+]o【less than or equal】5.4mMでは認められなかった。3)Na^+イオンをLi^+イオンに置換,あるいは[K^+]o=1[Na^+]o=0mMとした溶液中では,上記の現象は認められず,I_<1st>とI_<ss>はほとんど同じであった。4)上記の過渡現象が定常状態に至るまでの時定数は,0mM[K^+]o/低[Na^+]o溶液中では3060秒程度であり,0.5mM[K^+]oでは180±17秒と延長していた。5)低K^+低Na^+条件下では刺激頻度により定常電流量に大きな違いが認められた。0mM[K^+]o/20mM[Na^+]o溶液中では,0.008Hz刺激時定常電流(I_<ss(0.008Hz)>)は,0.1Hz刺激時定常電流(I_<ss(0.1Hz)>)の32.4±3.8%であった。

3.チャネルpore変異型HERGチャネル(G628C/S631C:不活性化しない)では,細胞外Na^+存在下,[K^+]o=010mMの範囲では,トレイン刺激により誘発されるHERG電流I_<1st>とI_<SS>に変化は認められなかった。4.変異型HERGチャネル(G628C/S631C)では,刺激頻度を変化させても定常電流に変化は認められなかった。上記実験結果より,細胞外Na^+イオンがHERGチャネルouter poreと相互作用を有し,この相互作用はチャネルの不活性化のメカニズムと密接な関連を有すると考えられた。上記1,2に関しては雑誌「心電図」に発表済みである。本研究により低K^+血症の状態でHERG電流が抑制される分子機構,HERGチャネルouter poreにおけるK^+とNa^+の分子相互作用とその意義が明らかとなった。
細胞溶解毒素遺伝子の伝搬とその発現による口腔連鎖球菌の病原性化機構

本研究では口腔連鎖球菌:ミチス群(MGS)やアンギノーサス群(AGS)における,溶血性細胞溶解毒素(HL)の未知分子の探索,HL発現調節と病原性の関連性,またS. mitis(SM)においてHL遺伝子伝搬を介した病原性化機構を検討した。MGSのS. infantisではHL遺伝子の菌種間伝搬を示唆する,SMの5ドメイン型HL(5D-CDC)と最も近縁で活性も類似したHLを見出した。また5D-CDC遺伝子直後にISを持つ5D-CDC保有SM株ゲノムと形質転換促進ペプチドの存在下にHL非保有株を培養すると5D-CDCが伝搬し,ISが関わるHL伝搬機構でSMは病原性化する可能性が示唆された。我々が解析した、あるいはデータバンクに公開された口腔連鎖球菌のアンギノーサス群(AGS)とミチス-肺炎球菌群(MGS)の各菌種/亜菌種のゲノムを系統的に比較解析した結果、これらの菌群の内、溶血性を示す菌株群から幾つか新規の溶血毒素/細胞溶解毒素の候補遺伝子が見出された。大別してMGSにはコレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)が、AGSにはストレプトリシンS類縁毒素(SLS)が多く分布していた。これらの候補遺伝子をPCRクローニングし、S. infantisで見出されたCDCについては大腸菌で組換え体を発現・精製し、その特性を解析した。SLSについては不安定なペプチド性因子で組換え体の精製が困難なことから、これを発現する菌株での遺伝子欠失と相補の実験により、その機能を解析した。その結果、S. infantisのCDCは細胞膜タンパク質とコレステロールの2つを受容体とするヒト細胞指向性の動物種依存的溶血活性を示し、また興味深い事に酸性pHでより強い活性を示した。またこのCDCをヒト口腔扁平上皮癌細胞に作用させると細胞死が誘導されることも確認された。次に、既に報告した2亜菌種以外のAGSの2亜菌種(S. anginosus subsp. whileyiとS. constellatus subsp. viborgensis)において見出されたSLS候補遺伝子を欠失させると、その株の溶血性は消失し、遺伝子相補すると溶血性が回復した。さらにヒト口腔扁平上皮癌細胞に対し、それらの野生株、欠失変異株、相補株によるin vitro感染実験を行った結果、SLS依存的に顕著な細胞毒性が確認された。これらの結果から、今回解析した候補遺伝子産物は、実際にその菌種/亜菌種の溶血活性や細胞毒性を担う毒素であることが確認され、それを生産するAGSやMGSの病原因子となることが示唆された。当初の計画通りに口腔連鎖球菌のアンギノーサス群(AGS)とミチス-肺炎球菌群(MGS)の各菌種/亜菌種におけるゲノムの比較解析を行った結果、これら菌群に属する溶血性の菌株群から機能が未解析の5種の溶血毒素/細胞溶解毒素候補遺伝子が見出され、その過半数については各遺伝子産物の溶血活性の確認やその作用特性、またin vitroでの細胞感染実験などからヒト培養細胞に対する毒性などについても明らかにすることができた。しかしまだ未解析の遺伝子があることから、さらにこれらの解析を継続することが必要である。データバンクに登録された口腔連鎖球菌に属するミチス-肺炎球菌群(MGS)のS. oralis subsp. tigurinusゲノムにコレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)の候補となるtly遺伝子が見出されたため,大腸菌でその組換え体を作製し,溶血活性を解析した。その結果,ヒト赤血球への結合性も溶血性も確認されなかった。この毒素候補タンパク質の細胞膜コレステロールとの接触残基と推定されるアミノ酸には,通常のCDCと異なる2残基の置換があり,これが溶血毒素活性を示さない原因であることが考えられた。次に,これまでの解析から,S. mitis(SM)では,単数あるいは複数のCDC遺伝子をゲノムの特定の遺伝子座に持つ病原性の高い菌株群とCDC遺伝子を全く持たない菌株群が菌種内に存在することから,同一菌種あるいは菌群の株間でCDC遺伝子の伝搬が起こり,病原性の異なる株が生じている可能性が示唆されていた。そこでCDC保有パターンが異なるSM高病原性株にスペクチノマイシン(SPCM)耐性を,またCDCなどの溶血毒素(HL)を全く持たないSM基準株にクロラムフェニコール(CP)耐性を導入し,CDC保有株とHL非保有株の組み合わせで共培養して,ヒト血液寒天上でβ溶血性を示すCR耐性かつSPCM感受性のSM株の分離を試みた。しかし通常の共培養では該当株は得られず,1.生育状態の異なるCDC保有株とHL非保有株での組み合わせ,2. SM株が分泌する感受性促進ペプチドフェロモン共存の有無,3. CDC保有株のゲノムDNAとHL非保有株の組み合わせなど,条件を変えて解析を継続中である。本年度の主要な研究内容は,ミチス-肺炎球菌群で見出された新規コレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)遺伝子産物の特性解析を継続すると共に,CDCなどの溶血毒素(HL)遺伝子のS. mitis(SM)株間での伝搬を実験的に確認し,そこで得られる伝搬株を用いてそのメカニズムの解析を進める計画であった。本年度中に,新たなCDC候補であるtly遺伝子産物の解析を実施し,また遺伝子伝搬解析に用いるCDC遺伝子保有パターンの異なる複数の株及びHL遺伝子非保有株の抗生物質耐性株を調製する事はできたが,年度内にCDC遺伝子伝搬株を得ることができなかった。

遺伝子伝搬の条件はその設定自体が伝搬メカニズムの解明に直結するものと考えられ,試行錯誤のステップが多いことから,CDC遺伝子伝搬の検討は予想よりも長引くことになった。S. mitis(SM)の中には,単数あるいは複数のコレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)遺伝子を持ち,その遺伝子産物によりヒト細胞に障害性を示す株が確認されている。これらCDC遺伝子の伝搬によるSMの病原性化機構の解析を進め,SMのCDC遺伝子保有株では各CDC遺伝子がSMゲノムの特定のホットスポットに挿入されていることが判明した。本年度はさらに,CDC遺伝子ローカスの詳細な解析を進めた結果,解析した19株の5ドメイン型CDC(5D-CDC)遺伝子保有株の4株において,5D-CDC遺伝子の直後にトランスポゾンISL3遺伝子を持つことを見出した。また別の1株では5D-CDC遺伝子の上流12kbp付近にISL3遺伝子を持っていた。しかも5D-CDC遺伝子非保有株における5D-CDC遺伝子挿入箇所に該当するローカスには,5D-CDC遺伝子保有株のISL3上流配列と相同性を示す配列が見出された。従って,ISL3遺伝子が関与する大きな遺伝子組換えが起こり,その際に5D-CDC遺伝子がトランスポゾンを介して挿入されてきた可能性が示唆された。そこで5D-CDC遺伝子保有株と非保有株間でのCDC遺伝子の伝搬を,共培養あるいは5D-CDC遺伝子保有株のゲノム存在下に非保有株を培養して検討を行った結果,共培養実験ではコンピテンス刺激ペプチド(CSP)の有無に関わらず5D-CDC遺伝子伝搬株が現在まで得られていないが,5D-CDC遺伝子直後にISL3遺伝子を持つ2株の5D-CDC遺伝子保有株ゲノムと5D-CDC遺伝子非保有株をCSP共存在下で培養した場合には,5D-CDC遺伝子が伝搬した株が出現した。しかしこの遺伝子伝搬株の薬剤耐性によるスクリーニングが困難なため,5D-CDC遺伝子伝搬株を含むポピュレーションからコロニーPCRや5D-CDC遺伝子発現を指標にクローニングを継続している。本研究では口腔連鎖球菌:ミチス群(MGS)やアンギノーサス群(AGS)における,溶血性細胞溶解毒素(HL)の未知分子の探索,HL発現調節と病原性の関連性,またS. mitis(SM)においてHL遺伝子伝搬を介した病原性化機構を検討した。MGSのS. infantisではHL遺伝子の菌種間伝搬を示唆する,SMの5ドメイン型HL(5D-CDC)と最も近縁で活性も類似したHLを見出した。また5D-CDC遺伝子直後にISを持つ5D-CDC保有SM株ゲノムと形質転換促進ペプチドの存在下にHL非保有株を培養すると5D-CDCが伝搬し,ISが関わるHL伝搬機構でSMは病原性化する可能性が示唆された。1昨年度までに見出された新規の溶血毒素/細胞溶解毒素(HL)候補遺伝子の内、まだ解析ができていないものについては、機能確認や病原性への寄与について解析を引き続き実施する。2これまでの解析から、S. mitis(SM)では、HL遺伝子をゲノムの特定の遺伝子座に持つ病原性の高い菌株群とHL遺伝子を持たない菌株群が菌種内に存在することから、同一菌種/菌群の株間でのHL遺伝子の伝搬によって、同一菌種内で病原性の異なる株が生じている可能性が指摘されている。
脊髄損傷における細胞性免疫反応を制御するマイクロRNA-amplifierの開発

ベバシズマブは、神経領域ではグリオーマや放射線壊死に用いられる血管内皮細胞増殖因子(VEGF)の阻害薬である。今回われわれは、脊髄損傷急性期にベバシズマブを全身投与する動物実験を行い、損傷部位において血管からの血漿成分の漏出が減少することで二次損傷の急性期における炎症性浮腫が抑えられ、またそれにより神経機能が改善することが分かった。今後、ベバシズマブの脊髄損傷治療への応用が期待される。本研究の目的は、損傷脊髄において、regulatory T cellの活性化を介する細胞性免疫の発現機序とその環境因子としてのマイクロRNAとCTLA4の機能を解明することである。当初、坐骨神経引き抜き損傷マウスモデルを用いた実験を計画したが、個体間のばらつきを生じたため、clip-compressionによる脊髄損傷マウスモデルを用いている。脊髄損傷後急性期にCTLA4-Igを投与し、損傷後8週まで下肢運動機能評価を行った。結果、有意な機能改善は得られなかったが、治療介入の時期により効果が異なることが明らかとなった。すなわち、損傷脊髄における細胞性免疫発現は急性期ではなく、亜急性期により強くみられるため、治療介入の時期に注意が必要である。本結果は、脊髄損傷後の炎症がmultiphasicに発現するという過去の報告と一致するもので大変興味深く、我々は2014年に既に学会発表を終了している。その後、よりヒトに近い免疫形態を有するラットを用いた追加実験を実行中である。臨床応用を目指した場合、亜急性期での治療介入は現実的ではなく、急性期治療と組み合わせた治療計画が必要である。我々は、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)に対するモノクローナル抗体であるベバシズマブに注目し、研究を開始している。Clip-compressionによる脊髄損傷マウスモデルにおいて、急性期にベバシズマブを投与することで、下肢運動機能の有意な改善を得ている。ベバシズマブは血管新生や血管透過性亢進を抑える作用を持つ分子標的治療薬であり、脊髄損傷後急性期の浮腫に対する効果が期待できる。また、炎症細胞浸潤を抑制するため、CTLA4-Igとの併用効果も期待できる。現在、ベバシズマブによる急性期浮腫抑制効果について組織学的、放射線学的検討を行っており、2015年6月に学会発表を行う予定である。本研究の目的は、損傷脊髄においてregulatory T cellの活性化を介する細胞性免疫の発現機序とその環境因子としてのマイクロRNAとCTLA4の機能を解明することである。坐骨神経引き抜き損傷ラットモデルを用いた実験を計画したが、個体間のばらつきを生じたため、clip-compressionによる脊髄損傷モデルを採用した。CTLA4-Igを用いた実験では、損傷脊髄におけるT細胞性免疫が急性期ではなく亜急性期に強く発現する結果であり、臨床応用という観点から細胞性免疫を標的とした治療計画には限界があった。そこで、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)に対するモノクローナル抗体であるベバシズマブを用いた新たな研究を計画した。ラット脊髄損傷急性期にベバシズマブを全身投与することで、下肢運動機能(BMS scale、inclined-plane test)は有意に改善し、組織学的には損傷中心部における神経細胞脱落、空洞形成が減少した。CD3/CD68/GFAPによる免疫染色では、炎症細胞浸潤および反応性アストロサイト発現の抑制が確認された。また、急性期にトマトレクチンを用いた微小血管評価を行うと、新生血管増生および血管透過性亢進が抑制されていた。以上より、脊髄損傷急性期においてVEGFは、血管新生や血管透過性亢進を介して炎症細胞浸潤や浮腫を惹起することで二次損傷を拡大する可能性が示唆された。本結果については、2015年に学会発表を行っている。坐骨神経引き抜き損傷マウスモデルでは、個体が小さく技術的エラーにより個体間のばらつきを生じてしまったため、clip-compressionによる脊髄損傷マウスモデルを採用した。ラットのclip-compressionモデルは既に確立されているが、今回我々は、ラットモデルを参考にマウスのclip-compressionモデルを作製した。動物種の相違があり、マウスモデルの確立にやや時間を要した。本研究において、脊髄損傷後の細胞性免疫発現は急性期より亜急性期に強くみられることが明らかとなったが、これは我々の研究仮説とはやや異なる結果であった。このため、CTLA4-Igの至適投与時期、投与量の検証に多くの追加実験を要した。脳神経外科、脊髄脊椎分野坐骨神経引き抜き損傷ラットモデルにおけるCTLA4-Igの効果を検証する。よりヒトに近い免疫形態を有するラットでの知見を得ることで、臨床応用を目指す。Clip-compressionによる脊髄損傷マウスモデルにおけるベバシズマブの急性期浮腫抑制効果について、組織学的、放射線学的検討を行う。免疫組織学的には、Neu-N、GFAP、CD68、CD3、Caspase-3、VEGF等による染色を行う。また、経時的に7T-in vivo MRIを撮影し、放射線学的に浮腫の変化を評価する。

VEGFは血管新生や血管透過性亢進を抑える作用を持つ一方で、神経保護作用も持つため、VEGFサブタイプごとの詳細な検討が必要となる。その後、ベバシズマブとCTLA4-Igの併用効果についても検証し、最終的に損傷後8週での軸索再生を組織学的、放射線学的に評価する。これらの治療効果を受けて、CTLA4とそれが作用するregulatoryTcellの脊髄損傷における自己免疫性炎症の場での機能解析を行う。次いで、マイクロアレイ、qRTPCRを用いて脊髄損傷の部位におけるマイクロRNAのプロファイリングを行う。当初予定していた坐骨神経引き抜き損傷マウスモデルでは、個体が小さく技術的エラーにより個体間のばらつきを生じてしまったため、clip-compressionによる脊髄損傷マウスモデルを採用した。既に確立しているラットモデルを参考に、マウスのclip-compressionモデルを作製したが、動物種の相違があり、試行錯誤を重ねたためモデルの確立にやや時間を要した。本来、脊髄損傷部位での自己免疫性の細胞性免疫の機能解明まで進んでいるはずであったが、やや遅れが見られ、このため支給された使用額を満額使用することなく、前年度を終えてしまったが、この遅れを取り戻し、本年度は予定通りの使用が可能と考えている。脊髄損傷部位での自己免疫性細胞性免疫の機能解明とそれに対するCTLA4-Igの効果の評価、作用機序の解明を継続して行う。また、臨床応用を視野に入れたベバシズマブによる急性期抗炎症効果の評価と機能解明を同時に進め、これらの知見を総合し、micro RNAレベルでのより上位での新しい作用点を有する製剤の開発を進めたい。前年度繰越金を含め、これらの実験で満額使用する予定である。
経口摂取したサケグレリンの吸収評価と機能性食品としての安全性に関する研究

本研究の目的は、心不全抑制効果を示すグレリン含有サケ胃抽出物(sSE)の機能成分本体がグレリンであることを特定し、経口摂取後のサケグレリンが消化を免れ吸収されること、食品として摂取しても安全であることを明らかにすることである。今年度は、遅れていたサケグレリンC末端側抗体を用いたサケグレリン特異的測定系(salmon C-RIA)の構築、およびサケグレリンの吸収、被消化性の確認に取り組んだ。作成したサケグレリンC末端側抗体を用いて胃組織を免疫染色したところ、サケ胃組織では染色されラット胃組織では染まらず、また、ラットグレリンのN末端側抗体ではサケ、ラットともに胃組織が染まっていたこと、およびサケグレリンのラット腹腔内投与15分後の血中からsalmon C-RIAでサケグレリンを定量可能であったことから、C末端側抗体を用いたsalmon C-RIAの構築を確認した。いっぽうで、わずかながら異種抗原と交叉反応している可能性もあり今後の課題である。サケグレリンの被消化性を確認するため、ブタペプシン、パンクレアチンで合成サケグレリンをin vitro消化し、N-RIAおよびsalmon C-RIAにより消化耐性を確認した。胃内消化を模したペプシン消化により、N-RIAの測定値(相対値)は消化60分後にはおよそ40%に低下し、その後4時間目までその値で推移した。salmon C-RIAの測定値(相対値)はイニシャルから消化4時間目までほとんど変化しなかった。腸内消化を模したパンクレアチン消化によるN-RIAの測定値(相対値)は消化4時間目までほとんど変化しなかった。salmon C-RIAの測定値(相対値)は急減して5%以下になった。胃腸消化を受けたサケグレリンのN末端側構造がある程度残存している可能性が考えられた。サケグレリンの吸収、被消化性は本研究の核心部分でもあり実験数を増やす必要があるが下記の理由により中断している。2018年9月の北海道胆振東部地震による停電の影響で、冷凍・冷蔵サンプル、試薬類に損害を受けた。また、国立循環器病研究センターの移転に伴い、2019年3月からRIA実験が中断している。以上の理由からサケグレリンの吸収および被消化性実験の進捗に遅れが生じている。グレリン含有サケ胃抽出物(sSE)の機能成分本体がグレリンであることを特定するためのグレリン受容体(GHSR1a)ノックアウトマウスを使用した飼育実験、および震災の影響を受けたサケグレリンのin vitro消化実験系ならびに経口摂取後のサケグレリンの吸収については必要な試薬類を揃え、国立循環器病研究センターの移転完了後実施予定である。サケグレリンの長期摂取の安全性については今年度結果をまとめることができると考えている。現在の活性型グレリン測定は、グレリン分子のN末端側の脂肪酸修飾を含めた配列が動物種を越えて保存性が高いことを利用した放射免疫測定系(N-RIA)である。しかしながら共通性の高いこの方法を、マウスを使ったサケグレリン吸収実験に用いると、血中に現れたグレリンが吸収されたサケグレリンなのかマウスのグレリンなのかが不明確である。そこで、サケグレリンC末端側抗体を用いたサケグレリン特異的測定系(salmon C-RIA)を考案した。現在、抗体作製が完了しサケグレリンC末端側配列14アミノ酸を合成してsalmon C-RIAを構築中である。ノーマルマウスにAIN-93Gを基礎配合として、sSE 1%、sSE 2%、sSE 4%配合飼料を8週間与えたところ、死亡や行動の異常などは認められなかった。体重増加や摂餌量はsSE配合飼料を与えた3区がControl区よりも高く、グレリンの生理作用である体重増加や摂餌量増加が認められたことから、sSE中に含まれるグレリンが経口的に作用していることが強く示唆された。内臓脂肪重量はControl区よりsSE 1%区が有意に大きく、また有意な差は見られなかったがsSE 2%区、sSE 4%区の重量はControl区よりも大きくなっていた。肝臓脂肪重量や大腿部筋肉脂肪重量は区間差がなかった。ブタペプシン、パンクレアチンで合成サケグレリンをin vitro消化する系を検討した。現在そのグレリン被消化性を測定しながら、生体試料分析へ応用するための条件を検討中である。サケグレリン特異的測定系(salmon C-RIA)、ならびにサケグレリンのin vitro消化実験系はいずれも新規手法の構築のため、抗体作成や消化条件の設定に時間を要しており遅れ気味である。

作成したサケグレリンC末端側抗体を用いて胃組織を免疫染色したところ、サケ胃組織では染色されラット胃組織では染まらず、また、ラットグレリンのN末端側抗体ではサケ、ラットともに胃組織が染まっていたこと、およびサケグレリンのラット腹腔内投与15分後の血中からsalmon C-RIAでサケグレリンを定量可能であったことから、C末端側抗体を用いたsalmon C-RIAの構築を確認した。いっぽうで、わずかながら異種抗原と交叉反応している可能性もあり今後の課題である。サケグレリンの被消化性を確認するため、ブタペプシン、パンクレアチンで合成サケグレリンをin vitro消化し、N-RIAおよびsalmon C-RIAにより消化耐性を確認した。胃内消化を模したペプシン消化により、N-RIAの測定値(相対値)は消化60分後にはおよそ40%に低下し、その後4時間目までその値で推移した。salmon C-RIAの測定値(相対値)はイニシャルから消化4時間目までほとんど変化しなかった。腸内消化を模したパンクレアチン消化によるN-RIAの測定値(相対値)は消化4時間目までほとんど変化しなかった。salmon C-RIAの測定値(相対値)は急減して5%以下になった。胃腸消化を受けたサケグレリンのN末端側構造がある程度残存している可能性が考えられた。サケグレリンの吸収、被消化性は本研究の核心部分でもあり実験数を増やす必要があるが下記の理由により中断している。2018年9月の北海道胆振東部地震による停電の影響で、冷凍・冷蔵サンプル、試薬類に損害を受けた。また、国立循環器病研究センターの移転に伴い、2019年3月からRIA実験が中断している。以上の理由からサケグレリンの吸収および被消化性実験の進捗に遅れが生じている。グレリン含有サケ胃抽出物(sSE)の機能成分本体がグレリンであることを特定するために、グレリン受容体拮抗物([D-Lys3]-GHRP-6)を投与することによる心不全改善効果の打ち消し作用を確認することを計画していたが、グレリン受容体ノックアウトマウスの使用は、機能成分がグレリンであることを特定するために極めて効果的な方法である。当初計画にはないが、研究推進のための代替手法として検討中である。遅れ気味のサケグレリン特異的測定系、ならびにサケグレリンのin vitro消化実験系は構築できしだい遅れを取り戻すべく努力したい。グレリン含有サケ胃抽出物(sSE)の機能成分本体がグレリンであることを特定するためのグレリン受容体(GHSR1a)ノックアウトマウスを使用した飼育実験、および震災の影響を受けたサケグレリンのin vitro消化実験系ならびに経口摂取後のサケグレリンの吸収については必要な試薬類を揃え、国立循環器病研究センターの移転完了後実施予定である。サケグレリンの長期摂取の安全性については今年度結果をまとめることができると考えている。先にも述べたとおり、サケグレリン特異的測定系(salmon C-RIA)、ならびにサケグレリンのin vitro消化実験系が新規手法のため構築が遅れ気味であることから、分析用消耗品等の費用に未使用が生じてしまった。今年度、遅れている手法構築が整えば計画通り使用することになる。
住宅における整容行為に適切な光環境に関する研究

本研究では住生活行為の中で整容行為に着目し、自身の顔を見る作業が含まれる整髪、化粧、髭剃りの3行為を対象として、男女計200名を対象としたアンケート調査を実施した。化粧行為に着目し、洗面室および居室化粧を行う際に要求される光環境条件について主観評価実験結果に基づき検討した。その結果、顔面鉛直面照度が高く、顔面に四方または左右から高色温度で照射される条件が好ましいことが示された。実生活で整容行為が行われる空間は、洗面室に限定されてはおらず、居間、食事室、寝室など様々である。また、住宅内の室内照度に関して、生活行為とその行為が行われる室ごとに照度基準範囲が示されているJIS Z9110-1979においては、「髭剃り」行為は浴室/脱衣室、「化粧」行為は浴室/脱衣室・居間・寝室の各室における生活行為とされており、補助照明を含めて200750lxの平均照度が推奨されている。しかし、本来これらの推奨値は、整容行為が自身の顔を見る作業を伴うことに基づいて決定されるべきであり、行為が行われる空間の設定についても再検討する必要がある。本研究では、外出前に自宅内で行う整容行為として整髪・髭剃り(男性)・化粧(女性)の3種の行為に着目し、行為に要する用品の使用状況、行為が行われる空間の把握などを目的としたアンケート調査を行った。男子大学生、女子大学生、男性会社員、女性会社員を調査対象とし、計401件の回答を得た。調査結果より、社会人、大学生に関わらず、7割以上の男性が洗面室の鏡を使用し、洗面室で整髪・髭剃りを行っていることが示された。また、女性社会人の約半数が洗面室の鏡を使用し、洗面室で整髪行為を行っているのに対し、女子大学生の約4割は卓上鏡などを使用して、自室で化粧行為行っていることがわかった。更に、社会人、大学生に関わらず、半数以上の女性が自室で化粧を行い、卓上鏡や手鏡などの持ち運び可能な鏡を使用していることが示された。整容行為に必要な用品や空間の特性を明らかにすることにより、快適な住宅内衛生空間を提案することができると考えられる。また、住宅内の室内照度に関して、生活行為とその行為が行われる室ごとに照度基準範囲が示されているJIS Z9110-1979においては、「髭剃り」行為は浴室/脱衣室、「化粧」行為は浴室/脱衣室・居間・寝室の各室における生活行為とされており、補助照明を含めて200750 1xの平均照度が推奨されている。そこで、外出前に自宅内で行う整容行為として整髪・髭剃り(男性)・化粧(女性)の3種の行為に着目し、行為に要する用品の使用状況、行為が行われる空間の把握などを目的としたアンケート調査を行った。調査結果より、社会人、大学生に関わらず、7割以上の男性が洗面室の鏡を使用し、洗面室で整髪・髭剃りを行っていること、女性社会人の約半数が洗面室の鏡を使用し、洗面室で整髪行為を行っているのに対し、女子大学生の約4割は卓上鏡などを使用して、自室で化粧行為行っていることがわかった。れらの結果を踏まえ、化粧行為が行われる場所である洗面室において、化粧を行う際に必要となる光量・光色・光の方向・指向性などの照明環境に関する要因を明らかにすることを目的として、洗面台を模した鏡と種々の照明条件が実現可能な照明器具からなる実験装置を製作し、主観評価実験を行った。その結果、化粧行為に関する明視性・作業性は、顔面の明るさに大きく影響を受け、鉛直面照度として8001x程度が必要であること、四方からある一定量以上の照度が得られる光環境が化粧行為には望ましいことが示された。実生活で整容行為が行われる空間は、洗面室限定されてはおらず、居間、食事室、寝室など様々である。

そこで、外出前に自宅内で行う整容行為として整髪・髭剃り(男性)・化粧(女性)の3種の行為に着目し、行為に要する用品の使用状況、行為が行われる空間の把握などを目的としたアンケート調査を行った。調査結果より、社会人、大学生に関わらず、7割以上の男性が洗面室の鏡を使用し、洗面室で整髪・髭剃りを行っていること、女性社会人の約半数が洗面室の鏡を使用し、洗面室で整髪行為を行っているのに対し、女子大学生の約4割は卓上鏡などを使用して、自室で化粧行為行っていることがわかった。これらの結果を踏まえ、化粧行為が行われる場所である洗面室において、化粧を行う際に必要となる光量・光色・光の方向・指向性などの照明環境に関する要因を明らかにすることを目的として、洗面台を模した鏡と種々の照明条件が実現可能な照明器具からなる実験装置を製作し、主観評価実験を行った。その結果、化粧行為に関する明視性・作業性は、顔面の明るさに大きく影響を受け、鉛直面照度として800lx程度が必要であること、四方からある一定量以上の照度が得られる光環境が化粧行為には望ましいことが示された。
PCBをはじめとする有機塩素化合物の口腔粘膜に及ぼす影響

PCBをはじめとする有機塩素化合物は、環境汚染物質で、特にPCBはカネミ油症の主たる原因物質として知られている。そしてこれらの化合物は、口腔粘膜に影響を与えることが、疫学調査よりわかっている。一方、臨床で出会う難治性口腔粘膜疾患には原因不明なものが多く、この原因に有機塩素化合物が関与しているのではないかと考え、以前の実験により変化のおこることの分かっている唾液腺とともに実験を行った。まずビタミンAについてであるが、口腔粘膜に関しては、上皮組織を正常に保つ働きを持っている。PCB等の投与にて、HPLCにより、唾液腺でビタミンAが減少することを確認したが、口腔粘膜においてもベータ-カロチンが減少することを確認した。又、唾液腺においては薬物代謝酵素の誘導により、ビタミンAが減少することを確認したが、口腔粘膜に関しては、組織量が少なかったためか、薬物代謝酵素に関する明確なデータを出すことができなかった。カテプシン類の酵素については、唾液腺では、有意な上昇がみられたが、口腔粘膜組織では、やや高い値ではあるものの、有意な差は今回の実験ではみられなかった。形態学的には、唾液腺では、空胞素性、糖タンパク合成子の変化がみられたが、口腔粘膜に関しては角化異常が、しばしばみられた。これらのことより、さらに、他の動物での実験等を行わなければ明確に言及できないが、口腔粘膜疾患と有機塩素化合物に何らかの関係があることを示唆する結果と思われた。さらに検討を行う予定である。