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新規な含ケイ素三重結合化合物の合成と物性解明

高周期14族元素間多重結合化合物は、アルケン、アルキン類の高周期類縁体として興味が持たれる。アルケンの高周期類縁体(ジメタレン)は、かさ高い置換基による速度論的安定化の手法により種々安定な化合物として合成・単離されている。一方、アルキン高周期類縁体(ジメタリン)も近年合成が達成され、その性質が解明されつつある。本研究では、未だ報告例のないケイ素-炭素間三重結合化合物であるシリンの合成を目的とし、まずはその前駆体となりうるケイ素および炭素上に脱離基を有するケイ素-炭素間二重結合化合物シレンの合成を目的とした。今年度は、その前駆体となるハロシランの合成および反応性について検討した。かさ高い置換基としてBpq基(2,6-[3,5-Dip_2C_6H_3]_2-C_6H_3, Dip=2,6-diisopropylphenyl)を有するベンジルブロミドBpqCH_2Brとt-BuSiCl_3のMgを用いたカップリング反応によりジクロロシラン[BpqCH_2SiCl_2(t-Bu)]1を合成することに成功した。次いで1のフッ化反応によりジフルオロシラン[BpqCH_2SiF_2(t-Bu)]2を得ることに成功した。化合物2に対し、THF中室温で2当量のt-BuOKを作用させることで、対応するベンジルアニオン種3を合成・単離することに成功した。この生成物の^<19>F,^<29>Si,^<13>C NMRスペクトル測定の結果、およびDMEからの再結晶により得られた単結晶のX線結晶構造解析の結果から、得られた3は、溶液中および結晶構造において、シリル置換ベンジルアニオン種の構造的特徴ではなく、対応するシレン(t-Bu)(F)Si=C(H)Bpq4にF-およびK^+が配位した「シレン-KF錯体」といえる特異な構造を有するという、新規かつ重要な知見を得た。本研究では、新規な含ケイ素三重結合化合物の合成と物性解明を目的とし、未だ報告例のないケイ素-炭素間三重結合化合物であるシリンの合成・単離を行い、その性質の解明を目指している。今年度は、まずケイ素-炭素間二重結合化合物であるシレンの合成を目的とし、その前駆体の合成および反応性について検討した。具体的には、ケイ素上に立体保護基としてBbt(2,6-[CH(SiMe_3)_2]_2-4-[C(SiMe_3)_3]-C_6H_2)基を導入したジクロロシラン(BbtSiHCl_2 1)と、TipCH_2TeMes(Tip=2,4,6-triisopropylphenyl,Mes=2,4,6-trimethylphenyl)を前駆体としてLi-Te交換により発生させたベンジルリチウム種との反応によりかさ高いベンジル置換クロロシラン(BbtSiHClCH_2Tip 2)を得ることに成功した。化合物2に対し、塩基による脱HCl反応を行いジヒドロシレン(BbtSiH=CHTip 3)の発生を試みたところ、^1H NMRその他分析手法により原料の消失は確認されたものの、目的化合物と思われるスペクトルを確認することはできなかった。各種試剤による捕捉反応を試みたが、最終的には3の水付加体であるシラノール[BbtSiH(OH)CH_2Tip 4]が得られた。4の構造は各種スペクトルおよびX線結晶構造解析によっても支持されている。今後の展開として、ケイ素上および炭素上の脱離基の検討、および炭素上の置換基をチューニングすることで反応性を変換し目的化合物の合成を試みる。

化合物2に対し、THF中室温で2当量のt-BuOKを作用させることで、対応するベンジルアニオン種3を合成・単離することに成功した。この生成物の^<19>F,^<29>Si,^<13>C NMRスペクトル測定の結果、およびDMEからの再結晶により得られた単結晶のX線結晶構造解析の結果から、得られた3は、溶液中および結晶構造において、シリル置換ベンジルアニオン種の構造的特徴ではなく、対応するシレン(t-Bu)(F)Si=C(H)Bpq4にF-およびK^+が配位した「シレン-KF錯体」といえる特異な構造を有するという、新規かつ重要な知見を得た。
タバコ属の種間雑種の致死性をアポトーシスの観点から検証する

(1)シクロヘキシミド処理によるアポトーシスの抑制タバコ属種間雑種(Nicotiana suaveolens x N.tabacum)の実生由来の培養細胞を36°C条件に維持すると正常に増殖するが、これを28°C条件へ移すとアポトーシスを起こして細胞が死滅する。細胞を薄い層にして静置する薄層培養に対して、シクロヘキシミド(翻訳阻害剤)を100μg/mlの濃度で添加して培養した。種々の検査法でアポトーシスの進行状況を調査したところ、アポトーシスが高い程度で抑制されたことを確認した。この雑種細胞におこるアポトーシスにはタンパク質の合成が必要であることが判明した。また、アポトーシス誘導後、一定時間経過してからシクロヘキシミドを処理した。誘導開始2時間目以前に処理すると細胞死が抑制されるが、誘導開始4時間目以降に処理すると抑制されなかったことからこの反応が不可逆になるポイントがアポトーシス誘導後約3時間目に存在していることが明らかになった。タバコ属種間交雑(Nicotiana debneyi x N.tabacum)で得られる雑種実生は致死性を示すことが知られていた。この致死性は高温(34°C)条件では、発現せず、致死性を回避できることがわかった。また、28°Cへ移すと致死するが、この際、アポトーシスの種々の特徴を示すことがわかった。また、複二倍体であるN.tabacumの祖先種の1つN.sylvestrisとの交雑を実施したところ、N.debneyi x N.sylvestrisとの交雑により得られた雑種実生は致死し、その細胞死の過程はアポトーシスであることが判明した。(1)アクチノマイシンンD処理によるアポトーシスの抑制タバコ属種間雑種(Nicotiana suaveolens x N.tabacum)の実生由来の培養細胞を36°C条件に維持すると正常に増殖するが、これを28°C条件へ移すとアポトーシスを起こして細胞が死滅することをかつて報告した。また、この培養細胞を薄層培養し、アポトーシスを起こさせると細胞群はきわめて高い同調性も示すことも報告した。本実験では、この薄層培養系に対して、アクチノマイシンD(RNAポリメラーゼによる転写を阻害する物質)を100μg/mlの濃度で添加した。種々の検査方法でアポトーシスの進行状況を調査したところ、アポトーシスが高い程度で抑制されていることが認められ、この雑種細胞におこるアポトーシスにはmRNAの合成が必要であることが判明した。上記の交配組合せには致死現象があらわれることが知られていた。本実験では、この致死が細胞レベルではいわゆるアポトーシスであることを見い出した。すなわち、細胞および核の凝縮、核の断片化などが定性的に確認され、フローサイトメイトリーにより定量的にも確認された。
固体表面ー分子相互作用への磁場効果

1.鉄酸化物や酸化ニッケルにNOを吸着させたのち,静磁場(17.6KG)を印加するとαー,γーFe_2O_3,Fe_3O_4,NiOでは吸着が,αー,βー,γー,δーFeOOHでは脱着が起こった。NOは常磁性(不対電子をもつ)であるから,NOの脱着は興味深い。固体磁性はNOの磁気吸・脱着には重要ではなく,固体の表面欠陥や官能基および細孔ー言いかえれば,NOの吸着状態が重要であることが明らかとなった(論文1)。2.1をふまえ,固体の表面官能基や細孔の役割を調べるために活性炭類へのNO磁気吸着性を調べた。無孔性カ-ボンブラックでは磁気応答せず,細孔をもつカ-ボンブラックでは磁気応答した。また,細孔径の異なる活性炭(素繊維)への磁気吸着は細孔が小さいほど顕著であり,1.10.7nmで最も著しかった。また,炭素上の酸性基量とともに磁気吸着量が増えることがわかった。これら両因子の寄与を分離して調べることは難しいが,炭素系での磁気吸着現象をMagnetoーmicropore filling(MMF)と命名した(論文2)。3.MMFにおける細孔効果のみを抽出するため,ゼオライト類とピッチ系炭素繊維を用いてMMFを調べた。(これらの調料は官能基が少ない。)その結果,MMFは0.5と1.0nmで顕著に起こり,これはNOのマイクロポア中での二量体化によることがわかった。4.水の固体への磁気吸着についても調べた。現在のところ,磁場強度に依存して,吸着←→脱着の変化があること,吸着1層目の水は磁場に応答しないことなどがわかりつつある。
薬剤性腎障害における尿中バイオマーカーの調節分子機構の解明と臨床応用に関する研究

薬剤性腎障害は医薬品の使用によって引き起こされる有害反応であり、薬剤の中止や治療の変更のほか、腎予後や生命予後にも大きく影響することから、臨床現場における重要な課題の一つとされている。本研究では、薬剤性腎障害の発現やバイオマーカーの変動に関わる分子機構の解明と共に、保護薬物の探索や臨床応用に関する検討を行った。分子機構解明のためにブタ近位尿細管由来LLC-PK1細胞を用いて行った検討では、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌(MRSA)感染症治療薬バンコマイシン(VCM)が、尿細管上皮細胞にカスパーゼ-3/7依存性のアポトーシスを惹起する際に、ミトコンドリア機能異常や活性酸素種(ROS)の産生増加に加えて、MAPKであるJNKを活性化することが明らかとなり、またJNK活性化はROSに非依存的であることが示された。加えて、VCMによる尿細管上皮細胞アポトーシスには、ミトコンドリア標的抗酸化薬が有効であると共に、cAMPアナログはJNK活性化を抑制して保護効果を示すことが明らかになった。一方、ラットにVCMを連日投与すると、投与開始5日後の腎組織において尿細管の空洞化や刷子縁の欠落が認められたが、尿細管上皮細胞に多く存在するN-acetyl-β-D-glucosaminidase(NAG)の尿中における活性はVCM投与開始1日後から有意に上昇したことから、尿中NAG活性を指標とすることでVCMによる腎障害を早期に検出できる可能性が示された。一方、特異的抗体を用いた蛍光マイクロビーズ法により、腎障害バイオマーカーの新規測定系構築を実施した結果、10項目(KIM-1、MCP-1、IL-18、uPAR、BMP-7、EGF、TNF-R1、TNF-R2、TGF-β1、フィブロネクチン)について、数数十μLという少量の尿検体や血漿検体にて、短時間での同時評価が可能になった。(研究目的)薬剤性腎障害は、診断もしくは治療のために使用した医薬品による有害反応であり、その発現により治療の継続が困難になると共に、予後が極めて不良になることから、実臨床において解決すべき問題の一つとされている。本研究では、臨床現場において腎障害を高頻度で引き起こす抗がん薬や抗菌薬、ヨード造影剤、免疫抑制薬等の薬剤を対象とし、各薬剤による腎障害の発現機序やバイオマーカーの調節分子機構を解明し手がかりにすることで、有用な尿中バイオマーカーの同定や評価を行い、早期の臨床応用へと発展させることを目的とする。初年度においては、尿細管上皮細胞障害に着目し検討を行った。(研究方法)ブタ腎由来培養上皮細胞LLC-PK1に、抗MRSA(メチシリン耐性黄色ブドウ球菌)薬バンコマイシン(VCM)を曝露して細胞障害を誘導し、PrestoBlue試薬による生存率の評価およびTUNEL染色法による細胞死の評価を行った。各種タンパク質の発現は特異的抗体を用いたWestern blot法にて評価した。ミトコンドリア機能は、ミトコンドリア膜感受性試薬JC-1を用いて評価した。(研究成果)VCMをLLC-PK1細胞に処置すると活性酸素種(ROS)の産生増加やミトコンドリア機能障害に基づくアポトーシスが引き起こされ、それらの障害はミトコンドリア脱共役薬の併用によって抑制されたことから、VCMによる尿細管上皮細胞障害にはミトコンドリアが重要な役割を担うことが明らかとなった。加えて、脂溶性抗酸化薬ビタミンEやミトコンドリア標的抗酸化薬mitoTEMPOを前処置すると、VCMによるLLC-PK1細胞の障害は有意に抑制されたが、水溶性抗酸化薬であるビタミンCやNアセチルシステイン、グルタチオンは効果を示さないことが明らかになった。初年度は薬剤性腎障害の分子機構の解明を目的として尿細管上皮細胞障害に着目し、培養尿細管上皮細胞を用いたin vitroの検討を主として実施した。その結果、抗MRSA薬バンコマイシンによる尿細管上皮細胞障害の発現機序の詳細が明らかとなり、特に、ミトコンドリア機能障害や活性酸素種の産生増加が、尿細管上皮細胞障害発現の起因として重要であることを見出だした。加えて、抗酸化薬の中でも脂溶性抗酸化薬やミトコンドリア標的抗酸化薬が障害の低減に有効であるという保護薬物に関する新たな知見が得られた。また、in vivoでの検討についても、計画通りマウスやラットを用いて薬剤性腎障害のモデル動物の作製を実施し、特にバンコマイシンについては、in vitroでの成果を基にした分子機構の解明や保護薬物の評価、さらには尿細管上皮細胞障害に着目した尿中バイオマーカーの検討に着手している。以上のことから、初年度における進捗状況はおおむね順調であることが考えられる。本研究では、抗MRSA(メチシリン耐性黄色ブドウ球菌)薬バンコマイシン(VCM)によって引き起こされる尿細管上皮細胞障害の発現機序の詳細を解明すると共に、腎障害の早期検出に有用なバイオマーカーに関する検討を行った。(研究方法)ブタ腎由来培養上皮細胞LLC-PK1にVCMを曝露して細胞障害を誘導し、ミトコンドリア膜リン脂質カルジオリピンはNAO染色法を、ミトコンドリア膜電位はJC-1染色法を用いてそれぞれ評価した。

雄性Wistarラット(200-300g)にVCM(100-200mg/kg)を1日2回、5日間腹腔内投与した際の腎障害を、PAS染色法および尿中N-acetyl-β-D-glucosaminidase(NAG)活性を指標として評価した。(研究成果)VCMをLLC-PK1細胞に処置するとNAO染色の蛍光強度が時間依存的に低下した。VCM処置後24時間におけるNAO蛍光強度の低下およびミトコンドリア膜電位の変化は、ミトコンドリア脱共役薬FCCP(0.5μM)の併用によっていずれも有意に抑制されたことから、VCMによる尿細管上皮細胞障害には、カルジオリピンの過酸化およびミトコンドリア機能障害が重要な役割を担うことが明らかとなった。ラットにVCMを連日投与すると、投与開始5日後の腎組織において尿細管の空洞化や刷子縁の欠落が認められた。一方、尿中NAG活性は、VCM投与開始1日後から有意に上昇したことから、尿中NAG活性を指標とすることで、VCMによる腎障害を早期に検出できる可能性が示された。当該年度は、初年度において明らかにした抗MRSA薬バンコマイシンによる尿細管上皮細胞障害の発現機序について、さらなる検討を行い、バンコマイシンがミトコンドリア膜リン脂質カルジオリピンの過酸化を引き起こすことを見出だした。加えて、ミトコンドリア脱共役薬FCCPが、バンコマイシンによるカルジオリピンの過酸化やミトコンドリア機能障害、活性酸素種の産生増加をいずれも有意に抑え、尿細管上皮細胞障害を抑制することが明らかとなった。また、in vivoでの検討についても計画通り、ラットを用いて薬剤性腎障害のモデル動物の作製を実施し、バンコマイシンによって生じる尿細管細胞の障害を、尿中N-acetyl-β-D-glucosaminidase(NAG)活性を指標とすることで早期に検出できる可能性を見出だした。一方で、ヒトを対象とする尿中バイオマーカーの有用性評価については、測定系構築等の検討を実施したものの、臨床試験による評価検討には至らなかった。(研究目的)本研究では、薬剤性腎障害の発現機序の解明と保護薬物の探索および、腎障害を早期に検出するためのバイオマーカーの測定系構築を目的として検討を行った。(研究方法)ブタ腎由来培養尿細管上皮細胞LLC-PK1にバンコマイシン(VCM)を曝露して細胞障害を誘導し、TUNEL染色法にて評価した。細胞内の活性酸素種(ROS)はDCF染色法、MitoSOX染色法およびDPPP染色法にて評価した。各種タンパク質は特異的抗体を用いたWestern blot法にて評価した。腎障害バイオマーカーの評価は特異的抗体を用いた蛍光マイクロビーズ法にて行った。(研究成果)VCMをLLC-PK1細胞に処置すると、細胞内ROS産生の増加ならびにMAPKのp38、JNK、ERKの活性化が生じた。VCMによるTUNEL陽性細胞の増加は、JNK阻害薬SP600125の併用により顕著に抑制され、p38阻害薬SB203580の併用では僅かながらも有意に抑制されることが明らかになった。一方、ERK上流キナーゼであるMEKの阻害薬U0126を併用すると、VCM単独群よりもTUNEL陽性細胞が有意に増加した。加えて、細胞内ROSの増加に対してSP600125、SB203580、U0126は効果を示さず、脂溶性抗酸化薬ビタミンEやミトコンドリア脱共役薬
日系アメリカ文学にみる環境思想―食と農業を中心に―

本研究では、マスモトやオゼキを中心とする日系アメリカ人作家の作品を食と農業に関連するエコクリティシズムを援用して分析した。研究成果は、本研究テーマに関する論考を含む特別記事2本、マスモトとオゼキの食や農業へのオルタナティヴな視点とその可能性を探る論考を掲載した『変容するアメリカの今』(2015)の共著出版、国際学会での発表を含む5回の口頭発表、日系カナダ人作家の招聘として結実した。今年度は、アメリカの食と農業をめぐる諸問題についての資料を収集し、それに関連するエコクリティシズムの理解を深め、作品分析に援用することを目標とした。研究成果としては、昨年度のエコクリティシズム研究学会年次大会におけるワークショップ「American Literatureのエコクリティシズム特集号をめぐって」で、ジャネット・フィスキオのフードシステム境界の往来者たちの可能性を探求した論文を取り上げ、検討した原稿を改稿し、『エコクリティシズム・レヴュー』No.7に特集の一部「エコクリティシズムを揺るがす」として掲載された。また、最新のエコクリティシズムを実践するヘザー・ハウザーの論文を纏め、同ジャーナルに特集の一部「驚異的な馴染みなさ」として掲載された。さらに、フィスキオの議論を借用してオゼキの作品分析を試みた。オゼキの描く登場人物がフードシステムの往来者として支配する側にどのように抵抗しているかを考察する発表「アメリカの不自然な食べものをめぐって」(第113回アジア系アメリカ文学研究会例会於名古屋大学5月17日)および「アメリカのフードシステムとオゼキの作品」(第27回エコクリティシズム研究学会年次大会於神戸市立外国語大学8月9日)を行った。加えて9月には、本研究課題達成のための現地調査として、アメリカの大学図書館や関連施設を訪れた。この調査中にアイダホ大学のスコット・スロヴィック教授を訪ね、アメリカが直面している食の問題や現代環境文学の傾向と特徴、日系を含むアジア系作家と食との関わりについて教示いただいた。また、オゼキが在籍しているブルックリン・禅センターでは、同館のスタッフの協力を得てオゼキの作品に影響を与える禅思想の資料を得た。11月には、オゼキとデイヴィッド・マスモトの食への意識を比較する発表「日系アメリカ人作家における桃の象徴性」(中・四国アメリカ学会第42回年次大会於広島修道大学11月29日)を行った。今年度は当研究課題への取り組み最終年度ということもあり、これまで二年間の研究成果を発表し、論文として纏めることを目標とした。発表としては以下の2点を行った。まず昨年度、論文としては次の1点を執筆した。ASLEでの発表した原稿を改稿した「現代の日系アメリカ文学に見る農業の風景ーマスモトとオゼキが描く桃の象徴性をめぐてー」を『変容するアメリカの今』(2015年12月、大阪教育出版)に掲載することができた。さらに日系カナダ人作家Hiromi Gotoを招聘し、いくつかの学会や大学で講演をしていただいた。特にエコクリティシズム研究学会では、Goto氏の独自の視点で食と女性の身体との結びつきや、生き物や環境との関わり等について語っていただいた。この講演やGoto氏との議論を通して、エコロジカルな視点からの日系文学研究において、作家のセクシュアリティの問題への意識を探ることの必要性を見出した。アメリカでの現地調査は、アイダホ大学のスロヴィック教授との面談だけでなく、ブルックリン・禅センターへの訪問等計画していた以上に進み、収穫を得た。またスロヴィック教授をはじめとするエコクリティークとの交流が深まり、次年度アメリカで開催されるEleventh ASLE Biennial Conference, 2015で発表することとなった。これも渡米の成果である。アメリカ文学次年度は今年度に引き続き、広島大学図書館や国会図書館で資料収集を行う。また研究代表者が今年度訪れ、次年度に学会発表が決定しているEleventh ASLE Biennial Conferenceの開催地アイダホ大学モスコー校でも、最新のエコクリティシズムおよび環境文学に関する資料の調査・収集を行う。さらに今年度学会等で発表したものを論文として書き直すとともに、次年度の調査結果を学会等で発表する。作家へのインタヴューについては、作家と研究代表者の都合が合わないことと体調不良の関係で、当初の計画を変更し、日系作家ヒロミ・ゴトー氏を日本へ招聘する。日本カナダ文学会やエコクリティシズム研究学会、広島大学等の協力を得て、ゴトー氏の特別講演等を企画する。
アデノ随伴ウィルスベクターを用いた血友病Aに対する遺伝子治療の基礎的検討

ヒト第VIII因子を搭載するベクター構築に先立ち標的組織に対するAAVベクター投与法の基礎実験として、至適プロモーター及び血清型の検討を行った。肝臓に対しては`CMV、CAG、PGK、EF-1α等のプロモーターを用い、マウス由来のエリスロポエチン(Epo) cDNAを搭載した2型AAVベクターを構築・作製した。以上をマウスに経門脈的に投与し、血清エリスロポエチン濃度及び血液学的指標を用いて遺伝子発現効率を系時的に比較した。その結果、CAG、CMV、PGK、EF-1αの順に強い発現が得られた。次にCAGプロモーターでマウスEpoを発現するユニットを用いてAAVセクレチン遺伝子をβ-galactosidaseおよびNeomicine耐性遺伝子と置換したコンストラクトおよびSCRC遺伝子のエクソン1を同様に置換したコンストラクトを作製し、各遺伝子のノックアウトマウスを作製した。SCRC遺伝子はホモのノックアウトマウスで、RT-PCRにて、遺伝子が発現していないことを確認した。今後病理学的、生化学的解析および行動解析を行う計画である。また、セクレチン遺伝子のノックアウトマウスも出生し、今後系統を確立していく。の1型から5型までの血清型の違いによる遺伝子発現を比較検討した。その結果、5型を用いた場合に最も高い発現が見られた。骨格筋に対しては実績のあるCMVプロモーターを使用し骨格筋内への注入による血清型の比較を行ったところ、1型が最も高く、5型がこれに次ぎ、それ以外が2型とほぼ同程度とする結果が得られた。以上の結果は長期にわたる観察によっても同じ傾向を示した。以上の成果に基づきヒト凝固第VIII因子遺伝子を搭載したAAVベクターの構築を行った。第VIII因子遺伝子を重鎖と軽鎖の二つのベクターに分けて標的細胞に共感染させることで第VIII因子活性の発現を目指している。肝臓に対してはCAGプロモーターと5型キャプシドを、骨格筋に対してはCMVプロモーターと1型キャプシドを各々用いて作製した。in vitroの実験系で培養上清における第VIII因子活性が確認出来たため、in vivoで検討を行うべくベクターの大量調整を行った。凝固第VIII因子ノックアウトマウスも既に入手済みであり、現在注入に向けた準備を行っている。今後は注入と共に経過観察、治療効果の確認を行い、有効であれば更に大型の動物における治療実験を指向する予定である。本年度は準備及び基礎的検討として、ベクター構築・発現の確認を行った。第VIII因子のcDNAを入手し、当初の計画に従って重鎖・軽鎖を発現するベクターを各々構築した。しかしながら本研究課題においては骨格筋及び肝臓を標的臓器にすることから各々に最適なプロモーターを選ぶ必要があり、最初にこの点の検討を行った。すなわち、肝臓特異的なプロモーターとしてEF-1及びPGKを、骨格筋に特異的なものとしてCKを,また特定の臓器を対象としないCAG及びCMVプロモーターを用いてプロモーター活性の比較を行った。検出系としては測定が容易なエリスロポエチン遺伝子を用い、同じバックボーンを用いてこれらのプロモーターを挿入したAAVベクターの作製を行った。

今後はこれらのベクターを動物個体に投与し、各臓器別に発現の良好なプロモーターを選び出す。この結果を第VIII因子の重鎖・軽鎖を発現するベクターに反映させ、動物個体レベルにおける治療効果の検討を行う。一方、AAVには6つの血清型が知られているが、これまで主に検討がなされたAAV-2以外の血清型を用いてベクターを作製することで遺伝子発現効率が大きく異なる可能性が報告されつつあることから、他の血清型のウイルスベクター作製システムについても入手し、LacZ遺伝子などをマーカーとするベクターを各々作製し発現効率の違いを検討している。よってプロモーター及びキャプシドの違いの2つの次元から第VIII因子の発現を検討することになる。また、動物個体における検討においてはCTL及び抗体産生の有無などの点からも評価を行い、本治療法の実用化に向けた基礎データの蓄積にもつとめる予定である。ヒト第VIII因子を搭載するベクター構築に先立ち、骨格筋に対するAAVベクター投与法の基礎実験として、至適プロモーター及び血清型の検討を行った。肝臓に対してはCMV、CAG、PGK、EF-1α等のプロモーターを用い、マウス由来のエリスロポエチン(Epo)cDNAを搭載したベクターを構築・作製した。以上のAAVベクターを経門脈的に投与し、遺伝子発現効率を血清エリスロポエチン濃度及び血液学的指標を用いて系時的に比較した。その結果、CAG、CMV、PGK、EF-1αの順に強い発現が得られた。至適と考えられるCAGプロモーターでマウスEpoを発現するユニットを用いてAAVの1型から5型までの血清型の違いによる遺伝子発現を比較検討した。その結果、5型を用いた場合に最も高い発現が見られた。骨格筋に対しては実績のあるCMVプロモーターを使用し骨格筋内への注入による血清型の比較を行ったところ、1型が最も高く、5型がこれに次ぎ、それ以外が2型とほぼ同程度とする結果が得られた。以上の結果は長期にわたる観察によっても同じ傾向を示した。以上の結果をふまえてヒト凝固第VIII因子遺伝子を搭載したAAVベクターの構築を行った。第VIII因子遺伝子を重鎖と軽鎖を二つのベクターに分けて標的細胞に共感染させることで発現を目指している。肝臓に対してはCAGプロモーターと5型キャプシドを用いて、また、骨格筋に対してはCMVプロモーターと1型キャプシドを用いて各々作製した。このストラテジーの有用性はin vitroの実験系で確認が出来たため、in vivoで検討を行うべくベクターの大量作製を行った。凝固第VIII因子ノックアウトマウスも既に入手できており、現在注入に向けた準備を行っている。今後は注入と共に経過観察、治療効果の確認を行い、有効であれば更に大型の動物における治療実験を指向する予定である。
慢性関節リウマチ滑膜細胞活性化におけるフィブロネクチンとVLA抗原の関与

本年度はVLA-4のリガンドであるVCAM-1(vascular cell adhesion molecule-1)の慢性関節リウマチ滑膜組織での発現を検討した。VCAM-1は、表層、表層直下のほとんどの滑膜細胞に発現していた。また、滑膜組織では、通常のVCAM-1分子の他に選択的スプライシングによるものが存在することが確かめられた。さらに、滑膜細胞を培養し、VCAM-1の発現を検討したところ、DR(-),nonspecific esterase(-),CD14(-)の樹状突起をもつ線維芽細胞様細胞に強く発現していた。また、これらの細胞のVCAM-1の発現は、IL1β,TNFαの刺激により、さらに増強した。次に、VCAM-1の発現を、変形性関節炎、慢性関節リウマチ滑膜組織で比較検討したところ、変形性関節炎滑膜組織では表層直下のVCAM-1の発現はほとんどみられないことが示された。慢性関節リウマチ滑膜表層・表層直下の多くの細胞はVLA-4を発現しており、これらの細胞間のinteractionにVLA-4,VCAM-1の結合が重要であることが示唆される。次に、VLA-4の発現を末梢血、慢性関節リウマチ滑膜、関節液Tリンパ球間で比較したところ、関節液Tリンパ球でのVLA-4の発現が著明であった。末梢血T細胞を、マイトゲンで刺激しても、VLA-4の発現増強は軽度であることより、慢性関節リウマチ関節液中に、VLA-4発現増強因子が存在することが示唆された。慢性関節リウマチ滑膜組織凍結切片を用いて、VLA2、VLA3、VLA4、VLA5、の発現の酸素抗体法にて観察した。滑膜表層細胞はVLA3、VLA4、VLA5、を発現し、表層下細胞も同様であった。一方、リンパ球ではVLA4の発現のみみられた。リンパ球表面のVLA量が少ないことが予想されたので、滑膜組織よりTリンパ球を分離し、VLA抗原の発現を末梢血Tリンパ球のそれと比較した。慢性関節リウマチ滑膜Tリンパ球はIa抗原を発現することが知られているので、合わせて、Ia抗原の発現も検索した。末梢血Tリンパ球に比べて、慢性関節リウマチ滑膜組織より得られたTリンパ球は、Ia抗原、VLA2、VLA3、の発現頻度が高かった。VLA2発現は、T細胞を12週間刺激してみられるので、このことは慢性リウマチ滑膜T細胞の1020%は長期に活性化されていることを示している。VLA3抗原の発現増加の意義は不明であるが、VLA3発現T細胞は遊走し易いとの報告があるので、今後、滑膜Tリンパ球の遊走能の検討をおこないたい。本年度の結果から、RA滑膜ではリンパ球より、滑膜細胞が多種、多量のVLAを発現していることが明らかになった。また、VLA3、4、5の機能の一つであるフィブロネクチンとの結合能を検討して成績でも、滑膜Tリンパ球の結合はみられなかったが、滑膜細胞は有意に結合した。今後、慢性関節リウマチ滑膜組織でのフィブロネクチンの細胞活性化への影響を検討する際、Tリンパ球を用いるより、滑膜A、B細胞を用いる方が、病態解明に有用であると考えられた。平成3年度において、慢性関節リウマチ滑膜細胞におけるvery lateantigenの分布を検討し、RA滑膜A細胞、リンパ球は、フィブロネクチンレセプターであるVLA3、VLA4、VLA5を発現していることがわかった。そこで、平成4年度において、フィブロネクチン、そのフラグメントの1)RA滑膜細胞増殖に及ぼす影響、2)RA滑膜細胞の形態変化に及ぼす影響3)RA滑膜細胞膜抗原のチロシンリン酸化に及ぼす影響について検討した。その結果1)について、[H^3]thymidineの取り込みを7日間にわたって測定した。

この系での主な構成細胞はマクロファージ系の細胞であるが、この細胞の増殖への影響はみられなかった。今後、サイトカイン発現等の活性化を指標に、影響を検討する予定である。2)について、フィブロネクチンをcoatしたplateにてRA滑膜細胞を培養すると、樹状細胞様細胞の増加が目立った。しかし、actinfilamentに特異的に結合するFITCphalloidinにて、染色をおこなうと、これらの細胞は染色性に乏しく果たして、フィブロネクチンレセプター、actin polymerizationの一連の反応がこれらの細胞でおこっているか疑わしい。これらの細胞が樹状細胞なのか、他系細胞の形態変化によるものか、今後、検討する予定である。3)について、フィブロネクチンをcoatしたplateにRA滑膜細胞を加え、経時的に、膜チロシンリン酸化を検討したが、一定の成績は得られなかった。今後、症例を重ねて検討する予定である。最近、我々や他のグループによって末梢血リンパ球や単球は、表面に存在するVLA(verylate、antigen)を通して、細胞外マトリックス蛋白やそのフラグメントによって活性化されることが証明された。本研究は、炎症の場のモデルとして慢性関節リウマチ滑膜を用い、フイブロネクチンや滑膜内に存在するその分解産物が、炎症において、リンパ球やその他の細胞の活性化に実際関与しているか否かを検討するのが目的であった。先ず、VLA2,3,4,5,に対する抗体を用い慢性関節リウマチ滑膜組織でのこれらの抗原の局在を決定した。表層滑膜細胞では、VLA3,4,5の発現が、表層下滑膜細胞でも、VLA3,4,5の発現がみられたが、表層細胞に比し、VLA4陽性細胞の比率が高かった。リンパ球は主にVLA4を、内皮細胞ではVLA2,3,5の発現がみられた。滑膜Tリンパ球を純化し、VLA-4の発現を末梢血リンパ球のVLA-4の発現と比較しても差はみられなかった。しかし、慢性関節リウマチ関節液リンパ球でのVLA4の発現は、末梢血、滑膜に比較して有意増加していた。次に、VLAを発現しているこれらの滑膜細胞、リンパ球が、フイブロネクチン、フイブロネクチンフラグメントに活性化されるか否かを〔^3H〕thymidine、uptakeにて検討した。しかし、有意な変化はみられなかった。興味ある事実として、滑膜A細胞に著明な形態の変化がみられた。次に、これらの細胞の細胞内リン酸化の変化を検討した。種々のリン酸化蛋白の増加がみられる症例であったものの、一定の見解は得られなかった。次に、VLA-4の他のリガンドであるVCAM-1の発現を慢性関節リウマチ滑膜組織にて検討したところ、表層・表層直下の細胞に限局して多量に発現しており、表層、表層直下の細胞の細胞間interactionに、VLA-4とVCAM-1分子の結合が関与している可能性が示唆された。
アミロイドーシスの統合病理学：伝播現象の把握から新たな治療法を探る

アミロイドーシスとは蛋白質がアミロイド線維に重合、沈着することによって生体に障害を与える疾患群である。『プリオンと類似した伝播メカニズムの解明』と『線維形成に関与する蛋白質恒常性維持機構の解析』が各種アミロイドーシスに共通する重要研究課題と考え、独自のモデル動物によるin vivo解析とin vitroでの線維形成解析システムを駆使して、蛋白質分子、動物、臨床までのアミロイドーシスの統合的把握を達成する。平成30年度は、1老化を抑制する運動処方と抗酸化剤投与のアミロイドーシス抑制効果をマウスモデルを用いて明らかにし、そのメカニズムの解析を行った(論文掲載と学会発表)。一方、抗酸化作用とアミロイド形成阻害作用が報告されていたクルクミンでは予想外にアミロイドーシス促進効果が確認され、メカニズムを検討した(学会発表)。老化研究の標準系統であるC57BL/6系統の若齢老齢マウスを用いて、老化がアミロイドーシスの自然発症と伝播よる発症誘発に与える影響を解析した。2アミロイド蛋白質の末端の除去による線維形成仮説を検証するために、C末端にMyc-tagをつけたApoA-IIトランスジェニック(TG)マウスを用いて、小腸でC末端のMycが切断されたApoA-IIが形成した線維が肝臓や肺での全長蛋白質の沈着を誘発するという仮説の検証を進めた(29年度からの継続)。3新たなアミロイドーシスの動物モデルとして家族性β2Mアミロドーシスの変異β2M (D76N)のTGマウスを作成し、内在性β2Mノックアウト(KO)マウスとの交配を進め、アミロイドーシスの発症を検討した。4in silicoでアミロイド線維形成を阻害すると考えられる化合物(βシクロデキストリン)のアミロイド抑制効果をマウスで検討した。5マクロファージ様培養細胞を用いてアミロイド線維の分解及び形成の解析システムの開発を検討した。理由: 30年度は29年度に退職した研究分担者が担当していた1線維伸長の末端をブロックするペプチドの開発の研究に遅れが生じた。しかし2抗老化処方によるアミロイドーシス治療法の開発に関しては、運動や抗酸化剤の投与によるアミロイドーシスの抑制効果やそのメカニズムの解析が順調に進んでおり、論文掲載( Dai J et al. Oxid Med Cell Longev. 2019)や国内外での学会発表を行ったのは計画以上の進捗であった。運動での効果に関しては、マウスの匹数を増加して再現性の確認を行っている。従来アミロドーシス抑制効果が報告されてきたクルクミンのアミロドーシス促進作用が明らかになったことは、予想外で興味深く、肝臓でのRNA発現解析(RNA-Seq)など詳細なメカニズムの解析を行っている(学会発表予定)。また老化研究で標準的に用いられている系統である市販のC57BL/6マウスでのAApoAIIアミロイドーシスの発症が飼育環境で大きく異なることが明らかになり、自然発症や伝播による誘発へ、老化が及ぼす効果を解析している。3末端が除去されたアミロイド蛋白質による線維形成仮説の検証については、Myc-tag-ApoA-IITGマウスを用いた解析が順調に推移し、戻し交配による遺伝的に均一/内在性ApoA2遺伝子欠損のマウスを安定して供給できる状態になった。しかしホモ個体を得ることが難しく、血中Myc-tag-ApoA-II濃度が比較的低く、アミロイド沈着までに予想より時間がかかり、解析に計画よりも長時間を要している。4血液による伝播現象など、アミロイドーシスに関連する3つの論文が掲載され、またアミロイドーシス関連の国際ミニシンポジウムや全国学会を主催した。5新たな動物モデルの作成は変異β2M-TGマウス作成は順調であるが、ゼブラフィッシュモデルの作成は遅れている。29年度に主要な2人の研究分担者(生化学的解析と質量分析を担当)が研究組織から離れたたため、30年度に新たに宮原助教を研究分担者に加えた。2人の研究を補完するのに時間を要しているが、令和元年(平成31年)度には、生化学的解析やプロテオーム解析を加速できると考えている。最も進捗している運動や抗酸化剤の投与によるアミロイドーシスの抑制及び促進効果については、メカニズム解析を中心に実施する。すでに抗酸化ストレス物質の再現性確認実験を実施し、抑制効果に関しては論文にまとまり、令和元年に掲載される予定である。抗酸化ストレス物質のアミロイドーシス促進効果や、運動処方の抑制効果の再現実験も令和元年には完了し、昨年度までに実施した結果と合わせて詳細な解析を行う。具体的にはアミロイドーシスを抑制/促進効果のメカニズム解明のために、前駆蛋白質代謝や蛋白質恒常性、オートファジー、小胞体ストレスなどに関与が予想される遺伝子の解析に加えて、網羅的なRNA発現解析(RNA-seq)をすでに実施しており、そのデータ解析に基づいた新規のメカニズムの発見に努力する。老齢マウスでのアミロイドーシス伝播現象の促進についてはマウスの匹数を増加し詳細な解析を行う。3末端が除去されたアミロイド蛋白質による線維形成仮説の検証については、TGマウスの繁殖が軌道に乗ってきたために、マウスの匹数を増加して詳細な解析を行うのと同時に、ホモマウスの利用によって、前駆蛋白質の濃度増加を図る。4血液による伝播現象に関しては、血漿中に存在するアミロイド促進効果を持つ物質の特定を行う予定である。5新たな動物モデルの作成に関しては、完成した変異β2M-TGマウスのアミロイド沈着の解析を行う。

またアミロイドーシスの解析システムとして、モノサイト/マクロファージ系細胞を用いた細胞モデルの作成と解析を実施し、ゼブラフィッシュの作成を目指す。アミロイドーシスとは蛋白質がアミロイド線維に重合、沈着することによって生体に障害を与える疾患群である。『プリオンと類似した伝播メカニズムの解明』と『線維形成に関与する蛋白質恒常性維持機構の解析』が各種アミロイドーシスに共通する重要研究課題と考え、独自のモデル動物によるin vivo解析とin vitroでの線維形成解析システムを駆使して、蛋白質分子、動物、臨床までのアミロイドーシスの統合的把握を達成する。平成29年度は、1線維伸長の末端をブロックするペプチドの開発:AAアミロイドーシスの前駆蛋白質であるSAA蛋白質のアミロイド線維形成予測プログラムでアミロイド形成に関与する領域に、アミロイドーシス沈着を起こさないマウス系統(CE/J)の変異を持つ、部分ペプチドを作成した。In vitroアミロイド線維形成解析への準備を進めた(合成ペプチドと蛍光プレートリーダーを購入)。2食餌制限、抗酸化剤などの抗老化処方による治療法の開発:老化を抑制する運動処方と抗酸化剤投与のアミロイドーシス抑制効果をマウスモデルを用いて明らかにし、そのメカニズムの解析を行った(学会発表)。その他に老齢と若齢マウスにアミロイドーシスを発症させ、老化がアミロイドーシス発症を促進することを明らかにした。3末端が除去されたアミロイド蛋白質による線維形成仮説の検証:C末端にMyc-tagをつけたApoA-IIトランスジェニックマウスを用いて、C末端のMycがまず小腸で切断され、沈着し、肝臓や肺では全長が沈着することをWestern blotや質量解析で明らかにした。4血液による伝播現象の解明:血球や血清によるアミロイドーシスの伝播の可能性を明らかにし論文発表を行った。5新たな動物モデルの作成:家族性β2Mアミロドーシスの変異β2M (D76N)トランスジェニックマウスを作成した。平成29年度は1)研究分担者である澤下が12月に退職した。2)当初購入を予定していた蛍光・発光プレートリーダーが期待通りの性能を示さなかったため、数種の機種の性能検証後に購入するのに時間を要した。これらの事情で、1線維伸長の末端をブロックするペプチドの開発の研究、に遅れが生じた。2食餌制限、抗酸化剤などの抗老化処方による治療法の開発に関しては、運動や抗酸化剤の投与によるアミロイドーシスの抑制効果について国内学会や国際学会(熊本:第16回国際アミロイドーシスシンポジウム)での発表を行ったのは計画以上の進捗であった。また老齢マウス(18ヶ月齢)で伝播現象が有意に促進することを明らかにしたことは大変興味深く、詳細な解析を計画している。さらに従来アミロドーシス抑制効果が報告されてきた、クルクミンのアミロドーシス促進作用が明らかになり、詳細な解析を行っている。3末端が除去されたアミロイド蛋白質による線維形成仮説の検証については、Myc-tagApoA-IIトランスジェニック(TG)マウスを用いた解析は順調に推移したが、TGマウスのアミロイド線維形成能が予想以上に低く、解析に計画よりも長時間を要している。4血液による伝播現象に関しては、アミロイドーシスを発症したマウスの白血球と赤血球がアミロイドーシス伝播能を持つことを明らかにして論文発表を行った。
社会的認知能力としての痛みの理解と表出の発達

今年度は獣医師を加えて痛みについての話し合いを重ねた。動物の痛みと人の比較を行うにあたり、事例をあげ、動物と人の共通点、相違点を確認するところから始める必要があった。基礎的な研究としては、発達障害児と定型発達児の情報処理の違いについてアイトラッカーを用いた調査を行った。情報処理の違いが他者の痛みの理解に及ぼす影響について今後検討を重ねていく。臨床事例からは、痛みの表出が発達的な視点、障害別の比較、また養育者との関係によって変化することが報告された。また裏付けとして、盲腸の悪化、中耳炎の悪化などが障害によって異なるかを調べることとなった。動物との比較からは、野生動物は痛みの表出が少ない、家畜では人であれば痛みを伴う侵襲的な作業にも耐えられることが指摘された。動物は人とは大きく異なる一方で、痛みを表出しない特定のタイプの子どもたちとの共通点も明らかになった。家畜の中でも、人が意識的に育種交配を重ねた家庭犬においては、犬種によって飼い主が犬の痛みや痒みに対してする反応が異なることが指摘された。大学病院受診例では、皮膚病が軽症で受診する傾向がある犬種(例えばプードル)と、悪化するまで受診しない犬種(シーズーやダックスなど)に分かれることが判明。さらに、犬種によって飼い主の行動(例えば受診頻度)が変化することが示唆された。3月に開催された発達心理学会では共同研究者の財部盛久、百田豊、研究協力者の高橋桃子が話題提供を行い、発達障害を専門とする小児科医の宮島祐が指定討論でラウンドテーブルを開催した。今年度は痛みの表出に関する事例検討と動物との比較について話し合いを重ねた。その成果は3月に開催された発達心理学会のラウンドテーブルで報告した。基礎的な定型発達児と発達障害児の情報処理に関する調査も実施した。これは他者の痛みの理解につながるものとしてアイトラッカーを用いて行った。発達障害児の場合、アイトラッカーのキャリブレーションの段階ですでに定型発達とは異なる部分が見られ、視覚的情報処理の困難さも示唆された。今年度は複数回に渡り事例検討会を実施し、動物と人の比較を通し、痛みの表出の機能について検討した。野生動物、牛などの家畜は人であれば無言ではいられない状態でも反応しない。特に家畜は侵襲的な行為に対しての反応が低い。同様に家庭犬も痛みの表出は少ないが、体を触れられることに抵抗を示す場合が多い。例外としては、トリミングが必要な犬種(例えばプードル)は長時間のシャンプーやトリミングに耐えられる。プードルはハンドリングに対しては寛容であるが、一方で、痒みに関してはかなり表出が激しいことも指摘されている。発達障害児や被虐待児、知的障害児の事例からは、本人の認知特性だけでなく、養育者との関わりも影響していることが伺えた。つまり、器質的なものだけでなく、経験などの環境要因も痛みの表出に影響することが示唆された。小児科と動物病院には共通点がある。それは受診のタイミングを決めるのは当事者ではなく、養育者や飼い主であることだ。本研究ではこの点に注目し、犬と飼い主の関係から、犬の行動が飼い主にどのような影響を及ぼすかを明らかにし、小児科を受診する養育者と子どものモデルになりうるかを検討する。特に痛みに関してはこれまでの話し合いから、犬と子どもでは共通する部分もあるため、人の特性を明らかにするうえで有効だと考える。具体的には、平成31年度は家庭犬の表出がどのように飼い主の行動に影響を及ぼすかを動物病院およびwebで調査を行う。内容としては、犬種による痛みや痒みなどの不快な状態の表出の比較、飼い主の犬の行動に関する感受性、病院受診や知り合いに相談するといった社会的行動に及ぼす影響を調査する。子どもの調査は中耳炎、虫垂炎、アトピーなどに関する表出、養育者の反応、受診時の症状の進行状況について検討する。主に養育者、医療関係者への聞き取りやアンケートを予定している。他者の痛みの理解に関しては、アイトラッカーを用いた調査を定型発達および発達障害等の児童を対象に実施する。

3月に開催された発達心理学会では共同研究者の財部盛久、百田豊、研究協力者の高橋桃子が話題提供を行い、発達障害を専門とする小児科医の宮島祐が指定討論でラウンドテーブルを開催した。今年度は痛みの表出に関する事例検討と動物との比較について話し合いを重ねた。その成果は3月に開催された発達心理学会のラウンドテーブルで報告した。基礎的な定型発達児と発達障害児の情報処理に関する調査も実施した。これは他者の痛みの理解につながるものとしてアイトラッカーを用いて行った。発達障害児の場合、アイトラッカーのキャリブレーションの段階ですでに定型発達とは異なる部分が見られ、視覚的情報処理の困難さも示唆された。今年度は複数回に渡り事例検討会を実施し、動物と人の比較を通し、痛みの表出の機能について検討した。野生動物、牛などの家畜は人であれば無言ではいられない状態でも反応しない。特に家畜は侵襲的な行為に対しての反応が低い。同様に家庭犬も痛みの表出は少ないが、体を触れられることに抵抗を示す場合が多い。例外としては、トリミングが必要な犬種(例えばプードル)は長時間のシャンプーやトリミングに耐えられる。プードルはハンドリングに対しては寛容であるが、一方で、痒みに関してはかなり表出が激しいことも指摘されている。発達障害児や被虐待児、知的障害児の事例からは、本人の認知特性だけでなく、養育者との関わりも影響していることが伺えた。つまり、器質的なものだけでなく、経験などの環境要因も痛みの表出に影響することが示唆された。小児科と動物病院には共通点がある。それは受診のタイミングを決めるのは当事者ではなく、養育者や飼い主であることだ。本研究ではこの点に注目し、犬と飼い主の関係から、犬の行動が飼い主にどのような影響を及ぼすかを明らかにし、小児科を受診する養育者と子どものモデルになりうるかを検討する。特に痛みに関してはこれまでの話し合いから、犬と子どもでは共通する部分もあるため、人の特性を明らかにするうえで有効だと考える。具体的には、平成31年度は家庭犬の表出がどのように飼い主の行動に影響を及ぼすかを動物病院およびwebで調査を行う。内容としては、犬種による痛みや痒みなどの不快な状態の表出の比較、飼い主の犬の行動に関する感受性、病院受診や知り合いに相談するといった社会的行動に及ぼす影響を調査する。子どもの調査は中耳炎、虫垂炎、アトピーなどに関する表出、養育者の反応、受診時の症状の進行状況について検討する。主に養育者、医療関係者への聞き取りやアンケートを予定している。他者の痛みの理解に関しては、アイトラッカーを用いた調査を定型発達および発達障害等の児童を対象に実施する。(理由)研究チームとの話し合いの中で調査の方向性の変更が生じたため、2018年度は実験計画を一部変更し話し合いに時間をかけた。(使用計画)2019年度にweb調査及び動物病院、クリニックを対象に面接調査等を行う。
内生的成長理論を用いた世界の二極化構造の動学的解明

内生的成長理論に資本のR & D投入を入れて資本蓄積主導から研究開発主導へのレジームスウィッチが発生するモデル,内生的成長理論に国際間の知識のスピルオーバーを入れそれが教育及び成長にマイナスに効く逆説的な結果を説明するモデル,資産蓄積への選好が成長に正へも負にも利く可能性を示してヴェーバーの予想した結果がなかなか実証的には示されない理由の一つの可能性を示唆した論文などを作成した。本研究は長期の成長の源泉たる技術進歩を内生的に組み込んで長期の成長率の要因を分析する内生的成長理論に,様々なこれまで検討が不十分であった要因,資本の働きや貨幣的性質,企業の参入・退出,知識の海外への漏出等を新たに入れて,多様な成長率,特に成長する国と貧困の罠に沈む国の二極化や複数均衡性,レジーム変化モデル分析し,更にはそのモデル分析から帰結される有効な政策を提言しようとするものである。レジーム転換と複数均衡に関する資本蓄積の果たす役割の研究に関しては,完成させて海外ジャーナルに投稿するも受理には至らず,先行研究との言及を見直しながら投稿準備中である。本研究では研究開発のメカニズムが成長のエンジンが資本蓄積単独であるか研究開発も含んだ持続的成長が可能なものかを決定する重要な役割を果たす事を示し,更に独占価格付けの部分に関して政策的な介入の有効性を示すとともに長期の持続的成長の為に有効なODA政策の枠組みに関しても論じる事が出来た論文である。人的資本蓄積の成長パターンに与える影響に関しては,共同研究として人的資本蓄積の外部性の存在が非決定性発生の可能性を,従って人的資本蓄積に於ける家庭教育の外部性がマクロ経済に与える重要性を示唆する論文を完させてディスカッション・ペーパーとして公開,海外ジャーナルへ投稿した。計画していた貨幣的内生的技術進歩モデルに関しては離散モデルでは解析的な分析が困難であることが判明したため,連続型に設定し直す事でより分析が容易になりそうであるという展望を得た所である。その他,全体計画の前倒しをして,企業のライフサイクルを入れて失業や倒産と長期の成長に関する分析や世代重複モデルに高齢期の労働供給を導入して高齢化社会の家計行動と長期的な成長を巡る分析等を共同研究として積極に着手した。前者はこれ迄十分に取り入れてこなかった企業の退出独自の性質を入れて論じた部分に意義があり,ディスカッション・ペーパーとして公開した。更に研究計画に沿って以下のごとく研究は進展した。まず,内生的技術進歩モデルの貨幣的側面に関する研究も完成には至らなかったもの連続型への設定の変換とそれに伴う再計算を進めることができた。次ぎに企業を明示的に導入した内生的成長理論モデルの構築に関しては一昨年度完成させた基本モデルに含まれる経済主体の最適化の若干の不具合と,参入退出が直接的にはTFP上昇をもたらさないと云うやや本質的な短所を改善する基本モデルの計算に着手,ほぼモデルを書換え完成した。引き続き本文の完成に22年度は取り組む予定である。これらの研究はいずれも既存の内生的成長理論にこれまで余り扱われてこなかった要素や問題意識を持ち込み新しい展開を付与する重要なものとなっていると云える。これらによって研究目標である,内生的成長理論に資本の蓄積水準の成長レジームへの影響や国際的な知識のスピルオーバーの負の影響の可能性など様々な重要且つこれまで手薄だった要素を入れて世界の二極化,成長する経済と低迷する経済を多面的に内生的説明すると云う方向に研究を進めることが出来た。平成22年度に実施した研究の成果は以下の通りである。先に開発した企業の参入・退出に関するモデルの欠点を受け新たに組み立て直し,定常状態と政策効果を分析し,その内容を"Entry, Exit, and Entrepreoual Grwoth"としてマクロ研究会で研究報告会した。またこれまで作成した論文を改訂して積極的に投稿しするなど活溌な研究活動を行った。まず,内生的技術進歩モデルの貨幣的側面に関する研究はモデルの結果が予想通りには出なかったため,様々な要素を組み込み分析し直しを図った。幾つかのバージョンに関しては作成が完了し現在も引き続き望ましい結果が出るかの検討を進めているところである。資本の機能に関する研究では,動学的分析に対して新たなインプリケーションを見出して書き直しに着手した。これらによって研究目標である,内生的成長理論に資本の蓄積水準の成長レジームへの影響や国際的な知識のスピルオーバーの負の影響の可能性など様々な重要且つこれまで手薄だった要素を入れて世界の二極化,成長する経済と低迷する経済を多面的に内生的説明すると云う方向に,まだその到達度が不十分ながらも研究を進めることが出来た。