hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口腔扁平上皮癌細胞のシスプラチン耐性に関する研究-耐性細胞の樹立と耐性機構の解析-

1.シスプラチン(CDDP)耐性細胞の樹立CDDP(0.11.0μg/ml)存在下で継代培養した結果、耐性度20倍以上のCDDP耐性KB-CDDPrを樹立した。KB-CDDPrはMMC、CBDCA、5-FU、BLMに対し2倍以上の交差耐性を示した。2. CDDP耐性機構の解析KBとKB-CDDPrのPt細胞内含有量、P糖蛋白、グルタチオン(GSH)、グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)-π)、熱ショック蛋白(HSP)、メタロチオネイン(MT)について比較検討した。(1)両細胞のPt細胞内含有量は、CDDP処理時間、処理濃度に比例増加した。耐性細胞はKBに比べて約1/3のPt含有量であった。(2) P糖蛋白の免疫組織染色では両細胞は陰性であった。(3)両細胞のGSH量はCDDP処理、非処理に関わらず有意な差はなかった。(4)両細胞間のGST-πの免疫組織染色性、蛋白質レベル、mRNAはCDDP処理、非処理に関わらず有意な差はなかった。(5) HSPの免疫組織染色をした。HSP27は耐性細胞でより強く発現しCDDP処理で増強した。HSP60は両細胞とも強陽性であった。HSP70ではHSP27と同様耐性細胞に強く発現しCDDP処理で増強した。蛋白質レベルではHSP27ではKBに比べ耐性細胞に約3.5倍、CDDP処理したKBはKBに比べ2.5倍に増強した。HSP60では両細胞間に差はなかった。HSP70ではKBに比べ耐性細胞に約1.2倍、CDDP処理の両細胞は1.5倍に増強した。(6) MTを免疫組織染色した。両細胞間にCDDP処理、非処理に関わらず有意な差はなかった。以上の結果より、KB-CDDPrのCDDP耐性にはPt細胞内含有量、HSP27、70の発現増強が関与していることが示唆された。今後、Ptの細胞内含有量の低下の解析、すなわちCDDPの排出機構を検討していきたい。今回われわれはすでに分離、樹立したCDDP耐性KB-CDDP^rを用いてCDDP耐性機構を解明するために以下の実験を行った。原子吸光分析(フレームレス)装置によりPt取り込み量と排出量を測定した。KBとKB-CDDP^rのPtの取り込み量は処理時間、処理濃度に比例して増加したが、KB-CDDP^rはKBに比較し、約1/3の細胞内蓄積量しか示さなかった。2)重金属に対し解毒作用をもつグルタチオン(GSH)濃度を測定し、GSHによる解毒機構を検討した。細胞内GSH量をGSH測定キット(GSH-400)を用いて吸光度計(400nm)で測定した。KB、KB-CDDP^rの細胞内GSH量はCDDP処理、非処理に関わらず有意な差は認められなかった。3)HSP(熱ショック蛋白)の関与を検討した。各種HSP(27、60、72)に対する抗体を用いて免疫組織染色およびウェスタンブロット法でHSPの発現を定量した。ウェスタンブロット法ではhsp27ではKBに比べKB-CDDP^rで約3.5倍、KBとCDDP処理したKBではCDDP処理細胞に2.5倍の増強を認めた。hsp60では著名な変化はなかった。

hsp72ではKBに比べKB-CDDP^rで約1.2倍、CDDP処理の両細胞においても1.5倍の増強を認めた。1.シスプラチン(CDDP)耐性細胞の樹立CDDP(0.11.0μg/ml)存在下で継代培養した結果、耐性度20倍以上のCDDP耐性KB-CDDPrを樹立した。KB-CDDPrはMMC、CBDCA、5-FU、BLMに対し2倍以上の交差耐性を示した.2. CDDP耐性機構の解析KBとKB-CDDPrのPt細胞内含有量、P糖蛋白、グルタチオン(GSH)、グルタチオンS-トランスフェラーゼ(GST)-π)、熱ショック蛋白(HSP)、メタロチオネイン(MT)について比較検討した。(1)両細胞のPt細胞内含有量は、CDDP処理時間、処理濃度に比例増加した。耐性細胞はKBに比べて約1/3のPt含有量であった。(2) P糖蛋白の免疫組織染色では両細胞は陰性であった。(3)両細胞のGSH量はCDDP処理、非処理に関わらず有意な差はなかった。(4)両細胞間のGST-πの免疫組織染色性、蛋白質レベル、mRNAはCDDP処理、非処理に関わらず有意な差はなかった。(5) HSPの免疫組織染色をした。HSP27は耐性細胞でより強く発現しCDDP処理で増強した。HSP60は両細胞とも強陽性であった。HSP70ではHSP27と同様耐性細胞に強く発現しCDDP処理で増強した。蛋白質レベルではHSP27ではKBに比べ耐性細胞に約3.5倍、CDDP処理したKBはKBに比べ2.5倍に増強した。HSP60では両細胞間に差はなかった。HSP70ではKBに比べ耐性細胞に約1.2倍、CDDP処理の両細胞は1.5倍に増強した。(6) MTを免疫組織染色した。両細胞間にCDDP処理、非処理に関わらず有意な差はなかった。以上の結果より、KB-CDDPrのCDDP耐性にはPt細胞内含有量、HSP27、70の発現増強が関与していることが示唆された。今後、Ptの細胞内含有量の低下の解析、すなわちCDDPの排出機構を検討していきたい。
複数の酵素を固定した電極を用いるバイオセンサーの創成

(1)コレステロールオキシダーゼおよびコレステロールエステラーゼを固定したバイオセンサー金電極表面にアミノエタンチオールを化学吸着させて、その自己集合単分子膜を形成させた。それへ、グルタルアルデヒドを架橋剤に用いて、コレステロールおよびコレステロールエステラーゼを固定した電極を作製した。この電極を、デンシメディエーターとしてチオニンを溶解した電解液に入れ、OV vs. SCEの電位を印加した状態で、電解液に遊離のコレステロールおるいは各種のコレステロールエステルを添加すると、その量に応じて酸化電流が観測された。そして、酸化電流から遊離のコレステロールおよびコレステロールエステルの各々の濃度が正確に求める方法論を確立し、実用的なコレステロールセンサーを作製することに成功した。(2)ウリカーゼ複合酵素を固定したバイオセンサー(1)と同じ手法でウリカーゼ(尿酸酸化酵素)も固定できることを見出し、電子メディエーターを電解液に溶解させた方法に加えて、レドックス高分子を酵素とともに電極に固定することによっても尿酸の濃度を正確に求めることのできるバイオセンサーとなることを明らかにした。さらに、金電極表面にアルカンチオールの自己集合単分子膜を形成し、それへ、リン脂質を融合した人工二分子膜を形成し、その膜に膜タンパクであるウリカーゼを電子メディエーターとともに固定する方法も確立した。この場合、尿酸以外の物質(例えばアスコルビン酸)には全く応答しない、極めて基質選択制の高いバイオセンサーとなり、実用的な意義は極めて高いものである。1.ウリカーゼを用いた尿酸センサーの構築アミノエタンチオールの自己集合単分子膜で被覆した金電極に、グルタルアルデヒドを架橋剤に用いてウリカーゼ(尿酸オキシダーゼ)を固定した。電子メディエーターとしてFe(CN)_6^<3+>を溶解した電解液(リン酸緩衝液)を用いて、それへ調製した電極を浸けてFe(CN)_6^<2+>を酸化する電位を印加した。この状態で電解液に尿酸を入れると、酸化電流が観測されて約30秒で一定値に達した。添加する尿酸の量を増やすと、それに伴って酸化電流の増加が見られ、調製した電極はFe(CN)_6^<2+/3+>が電子メディエーターとして機能することによって、尿酸センサーとして機能することが明らかとなった。2.コレステロールオキシダーゼおよびコレステロールエステラーゼを用いたコレステロールセシサーの構築1の場合と同様の手法を用いて、コレステロールオキシダーゼおよびコレステロールエステラーゼの二種類の酵素を固定した電極を調製した。電子メディエーターとしてチオニンを用い、それを溶解した電解液に調製した電極を浸けてOVvsSCEの電位を印加したところ、コレステロールおよびコレステロールエステルの両者に対してセンサー応答を示すことを見いだした。すなわち、コレステロールはコレステロールオキシダーゼにより酸化される電流が検知され、またコレステロールエステルの場合は、コレステロールエステラーゼによってコレステロールへと加水分解され、それがコレステロールオキシダーゼによって酸化されるという反応機構により検出される。そして、コレステロールおよびコレステロールエステルそれぞれについて検量線を求め、それを用いるとコレステロールとコレステロールエステルの両方が存在する検体中における、両成分それぞれの濃度を正確に測定する方法を確立した。1.コレステロールオキシダーゼおよびコレストロールエステラーゼを固定した電極による全コレストロール量測定センサーの構築アミノエタンチオールの自己集合単分子膜で被覆した金電極に、グルタルアルデヒドを架橋剤に用いてコレストロールオキシダーゼおよびコレステロールエステラーゼのに種類の酵素を固定した電極を調製した。電子メディエーターにチオニンを用い、電極に電位を印加しながらコレストロールおよびコレステロールエステルを検査溶液に入れると、両者に対して酸化電流が検知されることを見出した。そして、その酸化電流の大きさと基質の濃度との関係を明らかにすることにより、コレストロールおよびコレストロールエステルの個々の濃度と総濃度とを容易に調べる方法を確立した。2.ウリカーゼ複合酵素を固定した電極の作製と尿酸センサーへの応用蒸気の同様の方法、ならびに電極表面にに人工二分子膜を形成させ、それへ固定する方法により、ウリカーゼ複合酵素(数種の酵素の複合体)をデンシメディエーターとともに電極に固定した。それを検査溶液に入れ、尿酸を添加するとその濃度に対応して酸化電流が増加し、尿酸センサーとして作用することを明らかとした。人工二分子膜を用いて構築
癌関連タンパク質GGCTを標的とした前立腺癌治療の検討

癌関連タンパク質GGCTを標的とした前立腺癌治療の検討を行った。Tissuemicroarrayを用いた免疫組織化学的検討では、ヒト正常前立腺組織9切片のうち2切片(22%)で高発現であったのに対し、ヒト前立腺癌組織では40切片のうち35切片(78%)で高発現であった。前立腺癌細胞株へのGGCT siRNA投与実験では有意な細胞増殖抑制効果を認めた。またドセタキセルとの併用群ではドセタキセル単独群と比較して細胞増殖抑制効果の増強が認められた。以上より、GGCTを標的とした前立腺癌治療は有用な方法となりえる可能性があると思われた。今後もどのようにGGCTが細胞増殖に関与しているのか機能の解明をすすめ前立腺癌治療へとつなげていく。In vitroでの研究はおおむね順調に進捗しているものの、In vivoでの研究まで到達していない状況であるため。また、前立腺癌患者における臨床検体を試料としたGGCTの発現の検討については遅れを生じているため。当研究室では尿路上皮癌の診断・治療の標的となる特異タンパク質を求めて長年研究してきた。このようなタンパク質をスクリーニングする目的で、尿路上皮癌組織と正常尿路上皮組織とを試料として、プロテオーム解析を行ってきた。本研究の対象にしているGGCT(別名C7orf24, CRF21)も尿路上皮癌で高発現しているタンパク質群のひとつとして同定したものである。前立腺癌細胞株PC-3、LNCaPを用いた予備検討ではGGCTの高発現が観察されたため、前立腺癌治療としてGGCTを標的とした治療が期待できるのではと考え研究を行った。前立腺癌細胞株LNCaP, PC-3, DU145におけるGGCTの発現をウエスタンブロット法を用いて検討した。それぞれの前立腺癌細胞株においてGGCTの高発現が観察された。ヒト前立腺癌組織におけるGGCTの発現程度を観察するため、Tissue microarray (TMA)を用いて免疫組織化学的検討を行った。TMAにはヒト正常前立腺組織9切片と、ヒト前立腺癌組織40切片とが1枚の同じプレパラートに含まれており、同じ条件下に免疫染色を行うことでGGCTの発現程度を観察し比較検討を行った。ImageJを用いて代表的病巣でのGGCT高発現領域の割合を測定したところ、ヒト正常前立腺組織9切片のうち2切片で高発現領域の割合が高かったのに対し、ヒト前立腺癌組織では40切片のうち35切片で高発現領域の割合が高かった。前立腺生検や手術摘出で得られた検体を集めてさらなる検討を行うことを計画したが、本研究期間内に試料を集めることができず、検討することができなかった。癌関連タンパク質GGCTの機能の解明を進めていく。GGCTの発現を抑制することにより細胞増殖抑制効果が観察されており、細胞周期の変化に関する観察をさらに進めて、機能の解明を行う。前立腺癌の臨床検体におけるGGCTの発現を観察し、臨床病期とGGCTの発現の関連性について検討する。前立腺癌皮下移植マウスを作成し、GGCT抑制による腫瘍増殖抑制効果について検討する。研究を継続し、論文発表という形で成果を報告する。泌尿器癌以前より購入していた細胞株や試薬を用いて研究を行ったため。研究の進捗状況に合わせて実験機器を購入するための準備を要したため。次年度は動物実験を行うための準備や物品、機器の購入による支出を予定している。
流れによる粘着性微細底泥の巻き上げ特性に関する基礎的研究

底泥の初期沈積状態と巻き上げ限界底面剪断応力以下での密度分布変化から底泥硬化および単位時間単位面積当たりの質量変化率で定義する巻き上げ速度等の特性を把握するために、実際底泥とカオリナイト泥を比較した。実験装置には円形回流水槽を、底泥試料にはカオリナイトおよび諌早湾泥を用いた。カオリナイトと蒸留水、諌早湾泥と海水の各懸濁液を3時間沈降させ沈積高さ50mmとした。深さ方向に5mm間隔で採土し密度を測定した。まず、ある大潮下げ潮流れにおける巻き上げ速度のピークは、諌早湾泥がカオリナイト泥の3分の1と小さかった。底泥設置直後の初期鉛直密度分布は、カオリナイト泥と比較して諌早湾泥の密度分布幅が2倍と大きかった。カオリナイト泥の密度分布幅が小さいために巻き上げ発生時に侵食する底泥層が厚く巻き上げ速度が大きくなった。諌早湾泥では密度分布幅が大きく巻き上げ発生時の侵食層が薄く巻き上げ速度が小さくなったと考えられる。次に、大潮下げ潮流れでは、巻き上げ発生が顕著となるまでに巻き上げの限界底面剪断応力以下の作用期間がある。そこで、巻き上げ速度のピークを含む3時間までを考察対象として巻き上げの限界底面剪断応力以下での密度変化を検討した。その結果、諌早湾泥ではカオリナイト泥よりも底泥層の密度増加率が大きく、硬化現象の進行が大きいことがわかった。なお、いずれの泥も流送時の密度増加は静水時の場合よりも若干大きかった。以上から諌早湾泥のような実験底泥では初期鉛直密度分布の幅は大きく、さらに密度増加率も大きいので、硬化の進行によって顕著な巻き上げ発生時までの上層部の侵食量は少なく巻き上げ速度が小さくなった。底泥層の密度分布の違いは、泥の粒径分布の違いに起因する。本カオリナイトでは粒径分布がほぼ均一で、実際底泥では不均一である。粒径分布の相違で底泥の初期沈積状態が異なり、底泥層の密度変化に影響したと考えられる。
中部および東北日本の山間村落における林野利用の変化

本研究の目的は、明治以降、今日に至る約百年間にわたる変化を村落単位の空間で明らかにし、変化過程のメカニズム分析と林野における環境変化をそれの及ぼす空間的な潜在影響力を把握することにあり、地域比較の意味から、研究対象地域に多様性をもたせた。まず、群馬県藤岡市尾根の場合は、製炭不況後においても植林は積極的に行われず、林野利用に大きな変化はなく推移したが、若年層の人口流出が続く中、集落の存続のためにゴルフ場を誘致することによって,林野利用に大きな変化が生じた。これに対して、戦前から製炭が盛んであった福井県今庄町杉谷の場合は、戦後、製炭が衰退した後も薪炭材採取地として利用されていた林野に大きな変化はなく、林野利用が放棄された状況が明らかになった。また、福岡県太宰府市観世音地区の場合は、戦前からの入会林野的な秣場が近年まで共有林野としての性格を有していたが、福岡都市圏の拡大に対応するように地区住民に分割され、一部は、住宅団地へと変化した。さらに、大分県玖珠郡玖珠町の日出生台の場合は、軍事演習場の設置により林野利用および入会形態に大幅な変化が生じたことが明らかになった。本研究で明らかになった林野利用の変化は、軍事演習場の設置という特殊な事例が含まれるものの、集落側の対応によって多様性のあることが理解されるとともに、首都圏に外接した藤岡市や、福岡都市圏に隣接した太宰府市の事例にあるように、その地理的条件が林野利用を変化させる潜在的な条件となっていることもうかがわれた。このことは、福井県今庄町の事例のように、大都市圏の影響を直接受けない過疎地域では、従前の林野利用が景観的には温存されていることからも理解された。
高齢者の医療需要と介護需要を判別する新しい総合的機能評価方法の開発とその応用

高齢者の医療需要と介護需要を判別する新しい総合的機能評価方法の開発とその応用東京大学大学院医学系研究科加齢医学/老化制御学助教授鳥羽研二1.項目の初期選定:内外の老年医学教科書に「老年症候群」や「老年者に特有な病態、徴候」として記載されている項目を選出し、徴候のありを1点、なしを0点とし、これらの総計数をGeriatric Scaleとした。2)Geriatric Scaleには施設差が存在し、在宅介護では平均6個、急性疾患の多い東大老年病科では6.5個なのに対し、慢性疾患の多い老人病院では9個であった。さらに、症状が安定しているが介護需要が高い老人保健施設では、平均9.5個と高値であった。3)老年症候群の新しい分類:東大老年病科症例で各症候の出現頻度を各年代別に調べると、加齢変化の見られないもの、65歳以降の老年前期から徐々に増えるもの、80歳以降の老年後期から急速に増加するものの3群に分けられることが判明した。老年症候群の定義の見直しも必要である。4)老人保健施設においては、前期老年者からすでに、老年後期から急速に増える症候群が非常に多く、これらはADLの低下に密接に結びついていることが知られており、在宅復帰を目指す施設という性格より、在宅では介護困難な症例を多く抱えている現状が示唆された。5)縦断的研究で、緊急入院症例のGeriatric Scaleはむしろ少なく、症状の乏しい症例が突然緊急入院になることが少なくないことが示された。6)Geriatric Scaleの個人別の縦断変化では、全体では加齢変化を示さなかったが、老年後期から急速に増える症候群は、横断研究で得られた80歳台の急速な増加が、個人で再現された。介護に直結するこれらの症候群が、疾患の急性増悪をベースに1年以内に複数持つようになることが判明した。1.項目の初期選定:内外の老年医学教科書に「老年症候群」や「老年者に特有な病態、徴候」として記載されている項目を選出し、今回は徴候のありを1点、なしを0点とし、これらの総計数をGeriatric Scaleとした。2GeriatricScale:GeriatricScaleには施設差が存在し、在宅看護では平均6個、急性疾患の多い東大老年病科では6.5個なのに対し、慢性疾患の多い老人病院では軽症病棟で8個、重症病棟では10個であった。施設の種類と関係なく年齢とGeriatric Scaleの散布図を描くと、年齢とGeriatric Scaleのあいだに指数関数的な正の相関がみらた。生理的老化と病的老化の総和を示すものとして、老化度を表す物差しとなる可能性がある。3老年症候群の新しい分類:東大老年病科症例で各症候の出現頻度を各年代別に調べると、加齢変化の見られないもの(例:肥満)、65歳以降の老年前期から徐々に増えるもの(例:痴呆)、80歳以降の老年後期から急速に増加するもの(例:嚥下困難)の3群に分けられることが判明した。老年症候群といわれてきたものが、年齢によって重点的な評価項目が異なることを示唆し、老年症候群という用語の定義の見直しも必要である。4老人保健施設における検討:老人保健施設においては、前期老年者からすでに、老年後期から急速に増える症候群が非常に多く、これらはADLの低下に密接に結びついていることが知られており、在宅復帰を目指す施設という性格より、在宅では介護困難な症例を多く抱えている現状が示唆された。

高齢者の医療需要と介護需要を判別する新しい総合的機能評価方法の開発とその応用東京大学大学院医学系研究科加齢医学/老化制御学助教授鳥羽研二1)項目の初期選定:内外の老年医学教科書に「老年症候群」や「老年者に特有な病態、徴候」として記載されている項目を選出し、徴候のありを1点、なしを0点とし、これらの総計数をGeriatric Scaleとした。2)Geriatric Scaleには施設差が存在し、在宅介護では平均6個、急性疾患の多い東大老年病科では6.5個なのに対し、慢性疾患の多い老人病院では9個であった。さらに、症状が安定しているが介護需要が高い老人保健施設では、平均9.5個と高値であった。3)老年症候群の新しい分類:東大老年病科症例で各症候の出現頻度を各年代別に調べると、加齢変化の見られないもの、65歳以降の老年前期から徐々に増えるもの、80歳以降の老年後期から急速に増加するものの3群に分けられることが判明した。老年症候群の定義の見直しも必要である。4)老人保健施設においては、前期老年者からすでに、老年後期から急速に増える症候群が非常に多く、これらはADLの低下に密接に結びついていることが知られており、在宅復帰を目指す施設という性格より、在宅では介護困難な症例を多く抱えている現状が示唆された。5)縦断的研究で、緊急入院症例のGeriatric Scaleはむしろ少なく、症状の乏しい症例が突然緊急入院になることが少なくないことが示された。6)Geriatric Scaleの個人別の縦断変化では、全体では加齢変化を示さなかったが、老年後期から急速に増える症候群は、横断研究で得られた80歳台の急速な増加が、個人で再現された。介護に直結するこれらの症候群が、疾患の急性増悪のペースに1年以内に複数持つようになることが判明した。
大平正芳関係文書の整理・公開・保存および研究基盤の創出に関する調査研究

大平正芳記念館所蔵大平正芳関係文書の整理を行い、平成16年に中間報告書『大平正芳関係文書目録』を作成した。そして、現地保存体制を整備し、限定的ではあるが、現地での公開ができるよう最低限度のシステムを構築した。同時に、web上での公開を目指して、jpg形式で撮影等を行い、データ整理を行ったが、記念館および大平正芳記念財団との間で合意が成立できず公開までにはいたっていない。そのうえで、最終年度に論考5本と解題・史料紹介からなる最終報告書を作成した。本研究により、地方に散在する史料を単に中央に移管して公開するだけでなく、現地で保存する体制を構築しうることを明らかにしえたと考えている。整理・保存・公開という流れを、現地における合意形成とともに進め、ネットワーク的に公開を行うことができることを証明しえたと考えている。このような方向性を普及させるうえで、一つのモデルとなるとともに、今後のため、多くの問題点も得ることができたと考えている。戦後政治史上、歴史研究が資料面で1960年代までが中心となっているが、7080年代の資料群を整理しえたことは、今後、研究を進展させるうえで戦後史の新たな研究基盤を形成しえたと考えている。同時に、歴史と現在の架け橋となる大平正芳関係文書の存在は、歴史研究のみならず現代政治を過去から照射する視座も提供し、時間的問題のみならず、歴史学と政治学との架け橋にもなったと考えている。今回の研究成果を背景に、地方に散在する個人文書の発掘、調査と整理・保存・公開という一連の作業について普及させ、これに基づく多角的な研究領域と研究視座を開拓したことを、最終報告書によって明らかにできたことは幸いであった。同時に、下記の個人的な研究成果も含めて、本研究は、学会に新たな資料情報とともに、資料の発掘から、整理・保存・公開という一連の流れから研究にいたる過程を戦後史においても提示しえた、ということができる。今年度、大平正芳記念館所蔵大平正芳関係文書について整理を一応終了し、保管作業も合わせて行った。同時に、中間報告書として大平正芳関係文書目録を作成(再校校正中)。本目録では、小池が解題を執筆した。このなかで、大平正芳関係文書の生成過程、大平正芳文書中の政策文書「潮の流れを変えよう」の文書学的考察、採録文書の概要、史料紹介を行った。本目録は、解題部分50頁、録部分157頁、3802文書分のデータを収録している。今後、大平正芳関係文書については、PDF化してweb上での公開、ないしは、保存を中心としたマイクロフィルム化を企画・検討している。中間報告書については、多数印刷し、二年後の完全公開に向けて各方面に配布し、史料の活用に関する広報ともなると考えている。同時に、最終報告書の作成にむけて、関連史料の収集をはじめ、坂出市郷土資料館所蔵の津島寿一関係文書の収集を行った(津島は元蔵相、大平郷土の先輩)。また、関係史料の収集のため、沖縄および伊勢市等に出張し、沖縄関係文書と藤波孝生関係文書の調査をおこなった。また、次年度の本格調査のため、国立国会図書館憲政資料室、政策研究院政策情報センター等において予備的な調査を行った。今後の最終報告書にむけて報告書執筆者を増やし、出版も目途に入れた研究活動に移行すべく、研究打合せを行った。

具体的には、有馬が大平の思想と文章、伊藤と武田が政治史・政局を担当、小池が外交と選挙を担当し、他に外交・財政・派閥(宏池会)で各一名を追加する予定である。これに伴い、大平関係者からインタビューも予定し、その人選等も行っている。昨年度作成した「大平正芳関係文書目録」にもとづき、最終報告書にむけた資料の収集を行うとともに、関係文献の収集を行った。具体的に、関係文書中、報告書に向けた大平正芳関係文書中重要資料を電子媒体化して撮影した。他に、坂出市郷土資料館所蔵津島寿一関係文書についてマイクロフィルムで収集。関係する文献資料、特に自由民主党関係、大平正芳個人関係の論文・書籍、新聞記事などについても電子複写で収集した。今回、撮影した大平文書については、文書番号による整理を行いホームページ等で公開できるよう準備中である。なお、当初計画では、PDFでのweb上での公開を考えていたが、細かな書き込み等もあるため、jpg形式での公開を想定している。さらに、聞き書き等について文書化・テキスト化を行った。同時に、大平文書を所蔵している大平正芳記念館で現地保存ができるように、紫外線カット等の保存処理を行った。具体的には、蛍光灯の紫外線カット処理、窓のシールド等、および整理袋の中性紙化等である。これにより、現地公開にむけた保存体制を整えることができた。研究面では、最終報告書に向けて研究分担者を中心に研究会を開催し、調整を行った。具体的な内容としては、大平正芳個人の思想については有馬が担当。選挙、日中国交回復、「首相による所信表明」の文書学を小池が担当。政局史は、「三木おろし」を伊藤が、最晩年については武田が担当。武田は、1970年代の二大政党制問題について分析を開始している。また。佐道は、総合安全保障について防衛政策と外交政策の両面から研究を進めている。福永は、「大平正芳と宏池会」と題する報告書掲載論文の執筆にとりかかっている。この他、最終報告書にむけて財政問題、瀬戸大橋架橋等の諸問題についても研究分担者間での研究会において報告を各々行っている。一昨年度作成した「大平正芳関係文書目録」にもとづき、最終報告書にむけた資料の関係文献の収集を行うとともに、具体的な報告書作成作業に入っている。現在、小池が日中国交回復問題および「政策の文書学」と題する論文を作成。また、選挙については、笹部真理子が論文を作成している。小池は、日中国交回復の過程を日本側から、大平文書を含めて駆使して分析するとともに、施政方針演説の作成過程を、昭和54年9月3日の第八十八回国会の冒頭におこなわれた所信表明演説の文書学的考察を含めて執筆している。笹部は、首相となる必要条件であった安定的な選挙を行うための基盤形成がいかなるものであったかを選挙形態を含めて分析した。また、大蔵大臣期の大平については、石田雅春が、「三木内閣の経済政策と大平正芳蔵相の役割」と題して、「三木おろし」の政策的側面、すなわち、財政政策と政局との関連から分析した。さらに、福永文夫は、大平正芳と宏池会との関係について詳細な論考を執筆している。最終報告書では、上記五本論文とともに、目録の解題を採録するとともに、巻末に、大平正芳関係文書の翻刻を掲載する予定である。また、大平正芳記念館側の問題もあり、現地公開体制が未整備であるが、保存体制を促進するとともに、web上でのjpg形式での公開を想定して準備を進めている。しかし、ホストコンピューターの問題等があり、再度の調整がひつようと考えている。
1970年代から80年代の日本のポピュラー音楽にみるアメリカ文化の影響

本研究では、1970年代から80年代の日本のポピュラー音楽において、アメリカ文化がどのように影響していたかについて考察する。具体的には、はっぴいえんど解散以降に活躍した荒井由実、シュガーベイブ(山下達郎、大貫妙子)、吉田美奈子、竹内まりやなどを擁するニュー・ミュージックと呼ばれるジャンルの成立や、YMO(細野晴臣、坂本龍一、高橋幸宏)の活動を検証することで、「安定成長期」の日本がいかに環太平洋的な影響関係のもとで音楽文化を創出したかを解明する。その作業を通し、急速に世界的な評価が進む日本の「シティポップ」の起源を検証し、この時期の日本の音楽文化をグローバルなポピュラー音楽史に位置付けたい。
可溶性レセプターLR11により診断する病的トランジション幼弱細胞の同定

可溶性レセプターLR11により診断する幼弱細胞の病的トランジションを同定する。高LR11血症3病態の細胞変化における可溶性LR11の役割と意義を探索した。1血液病がん細胞トランジションはリンパ腫患者DLBCLにおける検査診断に有用であることが明らかになった。2肺高血圧症における病的平滑筋細胞のマーカーとして重要であることが示された。3アルツハイマー病早期診断における意義についてさらに組織検体解析を発展させる見込みを得た。以上より、可溶性LR11は、多様な病気の病的細胞へのトランジッションのキーレギュレータであり、また検査マーカーとなることが明らかになった。高分化した成熟細胞は発現せず病的な幼弱細胞へと脱分化することで転写を開始する遺伝子LR11はプロテアーゼにより分断され可溶性レセプターとして血中に放出される。この放出された可溶性LR11はELISAにより測定することが可能である。本研究の目的は、代謝血管病における脂肪細胞のフェノタイプトランジッションを反映するのか、アルツハイマー病の髄液と組織発現LR11は病態を反映するのか、血液病で血中LR11値はがん細胞の病態を反映するのか、を明らかにすることである。マウスおよびヒト由来前脂肪細胞から褐色脂肪および対照として白色脂肪条件で分化誘導した成熟脂肪細胞を誘導することに成功した。両者で明らかな熱産生エネルギー消費に関連する遺伝子発現レベルが異なり、分化条件により白色脂肪、褐色脂肪に成熟させることができたと考えられた。平滑筋細胞のトランジッションをあらわす病態として冠動脈疾患血管構築術後野患者を対象にその予後(再狭窄)と血中LR11値を解析し、高LR11血症患者のリスクが高いことが明らかになった。神経細胞における検討は、米国ワシントン大学より今年度、米国ADNI研究剖検検体脳組織切片が送られることとなり、そのための抗LR11抗体をもちいた基礎検討を行い染色条件を設定した。また、血液病では、悪性リンパ腫患者の高LR11血症と病態と予後を検討し、両者が密接に関連することを明らかにした。モデル解析から予想された病態変化とその起因となる遺伝子変化を生理学的及び細胞生物学的解析により同定でき、初代培養をもちいたアッセイも確立できたことから計画通り進むことができた。本研究目的は、新規検査マーカー可溶性レセプターLR11により診断する幼弱細胞の病的トランジションを同定しその分子基盤を解明することである。高LR11血症が細胞病態をとらえる可能性が明らかになった3病態の病的細胞の同定にチャレンジし、細胞機能変化における可溶性LR11の役割と意義を、おもに患者検体の病理組織学および細胞生物学的アプローチにより探索した。1血液病がん細胞の多能性獲得トランジションにおける役割について、新規に診断したリンパ腫患者DLBCL(diffuse large B-cell lymphoma)においてその診断学的有用性を明らかにした。2代謝血管病細胞の脱分化誘導トランジションにおける役割について、肺高血圧症における病的平滑筋細胞のマーカーとして重要であることを明らかにした。3神経病変性細胞の細胞内転送異常トランジションにおける役割を、米国ワシントン大学と共同でアルツハイマー病早期診断について検討し病理検体解析を中心に一層発展させる見込みを得た。さらに、LR11は眼科領域の増殖性疾患である黄斑前膜の病態にも関わることがわかり、さまざまな病的細胞へのトランジッションのキーレギュレータであり、また検査マーカーとなることが明らかになった。以上より、可溶性LR11は幼弱な病的細胞に共通した分子基盤を担うことが推測された。1)代謝血管病における脂肪細胞のフェノタイプトランジッション解析前年度成功した初代培養脂肪細胞のLR11発現、細胞外放出など、とりわけ、褐色脂肪に関わる熱産生機能の解析を行う。培養細胞分化成熟能に対するLR11中和抗体とリコンビナントLR11の効果を検証する。2)アルツハイマー病の髄液と組織発現LR11の関連解析米国ADNI研究剖検検体脳脊髄液のLR11測定を行い、組織切片の免疫染色の結果と比較検討を行う。アルツハイマー病発症(ステージ)におけるLR11蛋白発現強度および局在化異常、さらに、登録されているアミロイド、タウ濃度との関連を解析する。3)血液病における血中LR11値の病態検査学的意義悪性リンパ腫患者の高LR11血症、LR11正常患者の病因細胞を解析し、血中LR11値と臨床解析データの相関解析により、ステージおよび予後との関わりを検討する。これらの本研究で対象とする3疾患領域における病的

トランジッション幼弱細胞を血中可溶性LR11が反映するのか、またどのような病態を反映する可能性があるのか総合的に解析し、新規の可溶性レセプターバイオマーカーの検査学的意義を提示したい。検査医学
神経組織の分化発達過程におけるIRKチャネル・ファミリーの解析-発現と分布およびサブユニット構成様式について-

内向き整流Kチャネル(IRKチャネル.IRK1-3)は主に,中枢神経細胞,心臓骨格筋などに分布し静止膜電位の形成と安定化に関与するチャネルとして機能している。また,IRKチャネルと近縁のファミリーであるGIRKチャネル(GIRK1-4)は心臓,脳,膵臓などに主に分布し,G蛋白質を介した受容体刺激によって活性化されるチャネルである。1.これらの内向き整流Kチャネルがマウスの中枢神経細胞において,どのような状態で存在し機能しているかを明らかにするために,TRK1およびGIRK1の抗体を用いて解析を行なった。(1)マウス大脳粗膜画分のIRK1およびGIRK1の分子量はそれぞれ約83Kと約65Kであった。N-glycosidaseF処理ではIRK1の分子量には変化がなく,GIRK1は約58Kにシフトした。(2)マウス大脳粗膜画分からのIRK1とGIRK1の界面活性剤による可溶化を試みた。GIRK1は界面活性剤で約40%が可溶化されたが,IRK1はほとんど抽出されなかったIRK1はPSD-95に結合する可能性が指摘されており,この結果はそれを支持する。(3)ラット胎児脳の初代神経培養細胞で検討を行なった。神経細胞粗膜画分を調製後,界面活性剤によるIRK1とGIRK1の抽出を行なうと,上記(2)の場合と異なりいずれのチャネルも約70-80%が可溶化された。この結果は初代培養神経細胞ではシナプス形成が不完全で,それぞれのチャネルが正しく局在できないために生じたと思われる。2.心筋においてIRK1は低濃度の細胞内Mg存在下で,外向き電流に単位電流の1/3と2/3の大きさのサブレベルが見られクローン化したIRK1遺伝子をCOS細胞に導入・発現させたチャネルにおいても観察される。我々はIRK1の172番目のアスパラギン酸をアスパラギンに置換するとこのサブレベルが消失することを見出した。次いで更に,172番目に突然変異を持つ種々のIRK1遺伝子を作製し,COS細胞に導入・発現後,電気生理学的解析を行ない,サブレベル出現機序について新たなモデルを考案した。内向き整流Kチャネル(IRKチャネル)は静止膜電位の保持や活動電位時間の調整などに関与している。1.マウス内向き整流Kチャネル(IRK1)のcDNAをCOS細胞に導入し、発現されるKチャネルの性質を検討した。(1).野生型IRK1では心筋のnative channelと同様に低濃度のMg存在時に、外向き電流に単位電流の1/3と2/3の大きさのサブレベルがみられる。しかし、2番目の膜貫通部位のAspをAsnまたはGlnに置換(D172N,D172Q)するとサブレベルが消失した。また、Glu(D172E)では野生型と同じであった。この結果より172番目の陰性荷電がサブレベル出現に重要であることが明らかになった。(2).IRK1のH5領域はチャネルのポアを形成している。138番目のGluをGlnに置換(E138Q)するとコンダクタンスは消失する。

ポアの性質を調べるため更に検討をおこなった。140番目のGlnをGluに置換(Q140E)した場合は野生型と同様であったが、Asp(Q140D)およびE138Q/Q140Eではコンダクタンスが消失した。また、140番目をArg(Q140R)とLys(Q140K)に置換した場合もチャネルの活性はみられなかった。2.IRKチャネルのサブユニット構造を調べるため、野生型IRK1およびN末端側にポリヒスチジンのタッグを持った変異型IRK1のcDNAをバキュロウイルスに導入し、昆虫細胞(Sf9)に感染させた。感染したSf9は野生型、変異型いずれもnative channelと同様の電気生理的特性を示し、感染2日目に47Kのチャネル蛋白質を発現した。変異型蛋白質はニッケルカラムに結合し、imidazoleで溶出された。3.ラット副腎褐色細胞腫(PC12)はNGF添加によって神経細胞へと分化する。PC12におけるIRKチャネル蛋白質の存在をイムノブロット法で調べた。IRKI蛋白質はNGFの有無にかかわらず認められなかった。しかし、G蛋白質結合型IRKチャネル(GIRK1)蛋白質は61Kで存在し、NGF添加で増加傾向を示した。内向き整流Kチキネル(IRKチャネル:IRK1-3)は主に,中枢神経細胞,心臓,骨格筋などに分布し静止膜電位の形成と安定化に関与するチャネルとして機能している。また,IRKチャネルと近縁のファミリーであるGIRKチャネル(GIRK1-4)は心臓,膵臓などに主に分布し,G蛋白質を介した受容体刺激によって活性化されるチャネルである。これらの内向き整流Kチャネルがマウスの中枢神経細胞において,どのような状態で存在して機能しているかを明らかにするために,IRK1およびGIRK1の抗体を用いて解析を行なった。1.マウス大脳粗膜画分のIRK1およびGIRK1の分子量はそれぞれ約83Kと約65Kであった。N-glycosidase Fで処理するとIRK1の分子量には変化が見られなかったが,GIRK1は約58Kにシフトした。脳のIRK1が本来の大きさ(約57K)よりも大きい原因はN-結合型糖鎖の付加のためではなく,O-結合型糖鎖付加による可能性がある。2.マウス大脳粗膜画分からのIRK1とGIRK1の界面活性剤による可溶化を試みた。GmK1は界面活性剤で約40%が可溶化されたが,IRK1はほとんど抽出されなかった。神経細胞のシナプス後膜には,界面活性剤で抽出困難な細胞骨格蛋白質であるPSD-95が局在している。IRK1はIRK3同様,PSD-95に結合する可能性のあることが既に指摘されているが,この結果はこれを支持している。3.上記の結果を踏まえて培養神経細胞において検討を行なった。ラット胎児脳の初代神経細胞培養を行ない,神経細胞粗膜画分を調製後,界面活性剤によるIRK1とGIRK1の抽出を行なった。IRK1もGIRK1も培養神経細胞でよく発現しており,分子量の大きさはマウス脳組織と同じであった。界面活性剤存在下では,上記1.の場合と異なりいずれのチャネルも約70-80%が可溶化された。この結果は,初代培養神経細胞ではシナプス形成が不完全で,それぞれのチャネルが正しく局在できないために生じたと思われる。神経細胞では,IRK1もGIRK1もシナプス形成に関与する細胞骨格蛋白質との相互作用の下に機能していることが示唆される。
レジリエンス・プロセスモデルに基づく医療安全のゲーミングシミュレーション法の開発

平成30年度の目標は、総合研修プログラムや対応する評価尺度を整備すること及び専門職研修版のシステム開発を行うために、ベテランNsのリスク事態の対応や事故防止要素(ストッパー)を抽出することであった。今年度は、課題となっていた総合測定尺度を整備することに力を注ぎ、これまで得られたデータ分析を実施した。その結果、医療事故抑止力の高い看護師の特性に関し、8つのテーマ、19のカテゴリーが抽出された。さらに人とモノによる事故防止という枠の中で個人としての事故予防の特性と、同時に日常的にスタッフ教育を実践して事故予防を行っているという2つの局面があることが明らかになった。そしてこれら2つの局面は、互いに絶えず関連していることも示唆された。また【エラーに至る落とし穴】については、看護師の<指示受け間違い>、医師からの指示や患者の状況に関して2名の看護師で確認しているにもかかわらず<ダブル思い込み>や、2名でチェックしているという過信による<ダブルチェックの落とし穴>があることが明らかになった。それゆえ、医療事故抑止力の高い看護師は、確認しているつもりでも《完全はない》ことを、常に意識して作業を行っている実態が明らかになった。これら事故防止要素(ストッパー)の抽出により、レジリエンス・エンジニアリングに着目した医療事故対策ゲームを作成への基盤体制を構築することが出来た。今後は質問紙作成を行い、実用化に向けた尺度開発を目指していく予定である。本研究の目的は、想定外の事態への柔軟な対応力を事故防止の鍵とみる「レジリエンスエンジニアリング」を具現化することであった。また、心理教育としての緻密な構成と効果測定法、介入実践の縦断パラダイムでの検証を整え、評価ー体験ー訓練の多層構造で、徹底した新たな医療安全教育体系を提案することを目指していた。《平成28年度》の目標は、「特性ゲーム」の充実化に焦点を当てて、構造化を目指すことであった。<ゲーム試行:学内1>事例構造と背景要因を模してエラー発生を疑似体験するゲームとして、先輩看護師への声かけや質問等の要素を取り入れた薬剤選択の「ゲーミングシミュレーション」(以下,ゲームと略)を試み、ゲーム実施による看護学生の「医療安全に対する意識変容」について明らかにし、加えてアサーティブなコミュニケーションが薬剤選択に与える影響についても、検証を行った。その結果、ゲーム実施による「医療安全の意識」変容が明らかになった。さらにゲーム実施は、医療事故防止対策への動機づけ,エラー防止の知識獲得,エラーを起こす可能性への喚起に繋がったことが示唆された。<ゲーム試行:学内2 >ゲームのおける不成功体験者については、実施後に対策を加えたゲームを再体験させ、対策の有効性に気づかせる試みも行い、今後の自信に繋がったとの感想が聞かれている。<ゲーム試行:学外>臨床Ns48人を対象とする研修において、薬剤選択ゲームと講義と振り返りをセットに、研修プログラムを試行した。その結果、ゲームの正解率は25%であった。その中でも全問正解のNsがいることが分かり、正解に至った要因を聞き出すことに成功した。このことは「レジリエンスエンジニアリング」具現化のヒントに繋がった。<目標>は、エラーに関わる個人の心理特性を取り上げた「特性ゲーム」と、エラー誘因に満ちた環境を体験する「状況ゲーム」を実施することであった。H28年度は「特性ゲーム」の充実化に焦点を当てて、構造化を目指してきた。ゲームの実施については、予定通りに進んでいる。また研修におけるゲームの振り返りにおいて、予想外の「レジリエンスエンジニアリング」具現化へのヒントも得られている。本年度は,「レジリエンス・プロセスモデルに基づく医療安全のゲーミングシミュレーション法の開発」において,看護学生を対象とした薬剤選択のゲーミングシミュレーション(以降ゲームと略)を行い,ヒューマンエラーが医療安全に与える影響について検証を試みた。加えてゲームにおける成功体験学生に関し,成功に結びついた理由について調査を行った。【方法】1.調査対象:A大学看護学専攻の現役3・4年生50名2.調査時期:平成29年9月15日3.実施内容:被験者へ指示書を渡し,3種類の薬剤を20秒以内に選択させた。また時間切迫を促すために,3グループでチーム戦を行わせた。その後,ゲームでの体験等についてディブリーフィングを行った。加えて後日,正解率の高かった2名について,成功の要因や背景に関する聞き取り調査を行った。【結果及び考察】薬剤を正確に選択できた者の内,1種類の正解者は50名中7名(14.0%),2種類の正解者は2名(4.0%)であり,3種類の正解者はいなかった。予想以上に正解率が悪かったことについて,間違いやすい表記や時間切迫等の環境下では,人はエラーを起こしやすいことが示唆された。不正解者は理解していないことでも,指示があればその通り行動する傾向がみられた。この黙従性は医療事故防止の観点からは非常に危険であり,今後,対象者への啓発や対策を行っていく必要がある。正解者は不正解者よりも作業に集中し,薬剤と指示簿を確認することを意識し選択していた。なお,成功体験学生のインタビューの結果,1名はアルバイト経験があり,薬だしの際に看護師から「時間がかかってもいい,薬剤の数・種類・患者の名前をしっかり確認するよう」言われていた。もう1名はアルバイト経験はないが名前が違ったため,他もひっかけがあるのではないかと予測したことが成功に繋がったことが,明らかになった。

本年度は、「レジリエンス・プロセスモデルに基づく医療安全のゲーミングシミュレーション法の開発」において、看護学生を対象とした薬剤選択のゲーミングシミュレーション(以降ゲームと略)を行い,ヒューマンエラーが医療安全に与える影響について検証した。加えてゲームにおける成功体験学生に関し、成功に結びつく秘訣についても検討を行うことができたことから、概ね順調に進展していると思われる。平成30年度の目標は、総合研修プログラムや対応する評価尺度を整備すること及び専門職研修版のシステム開発を行うために、ベテランNsのリスク事態の対応や事故防止要素(ストッパー)を抽出することであった。今年度は、課題となっていた総合測定尺度を整備することに力を注ぎ、これまで得られたデータ分析を実施した。その結果、医療事故抑止力の高い看護師の特性に関し、8つのテーマ、19のカテゴリーが抽出された。さらに人とモノによる事故防止という枠の中で個人としての事故予防の特性と、同時に日常的にスタッフ教育を実践して事故予防を行っているという2つの局面があることが明らかになった。そしてこれら2つの局面は、互いに絶えず関連していることも示唆された。また【エラーに至る落とし穴】については、看護師の<指示受け間違い>、医師からの指示や患者の状況に関して2名の看護師で確認しているにもかかわらず<ダブル思い込み>や、2名でチェックしているという過信による<ダブルチェックの落とし穴>があることが明らかになった。それゆえ、医療事故抑止力の高い看護師は、確認しているつもりでも《完全はない》ことを、常に意識して作業を行っている実態が明らかになった。これら事故防止要素(ストッパー)の抽出により、レジリエンス・エンジニアリングに着目した医療事故対策ゲームを作成への基盤体制を構築することが出来た。今後は質問紙作成を行い、実用化に向けた尺度開発を目指していく予定である。H28年度の実施予定として、【教材】1)DVDゲームのビジュアル教材を作成2)マニュアルゲームの手順リストと教示文の用意が挙がられていたが、この点についてはまだ着手できていない。その理由として、実験計画と結果の乖離があり、ビジュアル化までには至らないことにある。計画と結果乖離の原因の一つとして、参加人数が少ないことが挙げられるため,今後は人数を増やしての実験を試みたい。さらに今後の目標として、「状況ゲーム」に焦点を当てて構造化した内容を、一部病院で試行することになっている。そこでフィールドを病院(病棟)へ移し、継続して「レジリエンスエンジニアリング」具現化への確証を得るためのゲーム(実験を)進めていく予定である。基盤モデルにおける個人とチームと環境レベルの情報伝達,知覚スキル,および自己点検教育の開発を行う予定である。<目標>本年度は、ゲームを組み合わせて実施するモザイクプログラムを作成する。【1教材】・【2試行】基盤モデルの構成単位ごとに、各ゲームの教育効果を評価し、弱い部分を補強する追加ゲームと教材を作成。
尿路上皮癌微小転移に対するAKR1C1を標的とした治療法の開発

AKR1C1阻害効果のあるフルフェナム酸やメフェナム酸といったフェナム酸系の非ステロイド性抗炎症薬には、膀胱癌細胞のシスプラチン感受性増大効果と細胞浸潤能抑制効果を認めた。臨床検体を用いた検討では、尿路上皮癌転移巣で原発巣に比べAKR1C1は有意に発現亢進しており、AKR1C1阻害剤による転移抑制効果、転移巣に対する抗癌剤治療効果増強が期待される結果であった。現在、マウスに両剤併用投与観察中であり、フェナム酸の適用量を検討している。本研究の目的は、術前抗癌剤治療にAKR1C1を標的とした治療を追加することによって、原発巣に対する効果増強のみならず、リンパ行性あるいは血行性微小転移を減らせる可能性があることから、AKR1C1を標的とした尿路上皮癌に対する新しい治療法の基盤を築くことである。以下にこれまでの研究実績の概要を示す。1.膀胱癌細胞株におけるAKR1C1阻害剤の抗癌剤増強効果マウス同所性移植転移モデルを用いて分離培養した膀胱癌細胞株の肝・骨転移細胞において、AKR1C1阻害剤であるフルフェナム酸10μM投与によるシスプラチンの効果増強を確認している。また、マトリゲルインベージョンアッセイによって細胞浸潤能を抑制することを確認している。一方他のAKR1C1阻害剤であるフェノールフタレイン投与では、シスプラチンの効果増強は認めなかった。現在メフェナム酸をはじめ数種のAKR1C1阻害剤を購入して、膀胱癌細胞株に対する抗癌剤増強効果を検討する準備を進めている。2.尿路上皮癌におけるAKR1C1発現変化に関する研究尿路上皮癌に対して根治手術を行いリンパ節転移を認めた症例と転移巣切除を施行した症例、計25例に免疫組織化学染色によるAKR1C1発現の評価を行った。結果25例中17例で転移巣でのAKR1C1発現亢進を認め、Mann-Whitney U-testを用いて検討した結果統計学的有意差を認めた。今後、術前化学療法が行われた症例の臨床検体を用いて、化学療法に伴うAKR1C1の発現変化についても調べる予定である。膀胱癌細胞株および膀胱癌シスプラチン耐性株に対してシスプラチンといくつかのAKR1C1阻害剤の併用効果を検討する予定であったが、薬剤の準備ができておらず当初の研究計画よりは遅れているのが現状である。以下に当該年度の研究実績の概要を示す。1)膀胱癌細胞株におけるAKR1C1阻害剤の抗癌剤増強効果:膀胱癌細胞株におけるAKR1C1阻害剤の抗癌剤増強効果の確認を行った。フェノールフタレイン投与では、シスプラチンの効果増強は認めなかったが、フルフェナム酸およびメフェナム酸投与で膀胱癌細胞株に対するシスプラチンの効果増強を確認することができた。2)尿路上皮癌におけるAKR1C1発現変化に関する研究:尿路上皮癌に対して根治手術に伴いリンパ節転移を認めた症例と転移巣切除を施行した症例に免疫組織化学染色によるAKR1C1発現の評価を行った結果、転移巣でのAKR1C1発現亢進を有意に認めた。また、尿路上皮癌の抗癌剤治療前後でのAKR1C1の発現変化について免疫組織化学染色法で検証し抗癌剤投与の影響について確認すると、抗癌剤治療後にAKR1C1の発現は亢進していた。3)同所性移植モデルにおけるシスプラチンおよびAKR1C1阻害剤の投与スケジュールの検討と併用効果の検討:膀胱癌細胞株を用いたヌードマウス同所性移植モデルに対してシスプラチン週1回投与で膀胱癌の治療効果とその後の進展を認めた。フルフェナム酸およびメフェナム酸単独投与では移植後7週間で肺への微小転移が確認された。現在、AKR1C1阻害剤の抗癌剤増強効果をin vivoで確認するためのシスプラチンとAKR1C1阻害剤の最適な投与法を検討中である。Luciferase-2が組み込まれた浸潤性膀胱癌細胞株による同所性移植マウスモデルを用いて、シスプラチンとAKR1C1阻害剤の併用効果を検証する実験を予定している。具体的には、適切な投与スケジュールを確認した後に薬剤併用効果を検討したいと考えている。泌尿器科当初予定していた細胞実験が予定通り進んでおらず、使用予定の薬剤を購入していないため。次年度にその実験を予定しており、そのため次年度使用額が生じている。