hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
動的ラマン分析を用いた血中ブドウ糖濃度の非侵襲定量研究

本年度は、Hbの共鳴メカニズムの解明と動的ラマン分析法の応用、およびスペクトル測定精度向上のためのレーザー光源の改良を行った。前年度に行った励起波長変化に伴う強度変化の動的解析に続き、Oxy-,Deoxy-ヘモグロビン(Hb)のラマンスペクトルの振動モードの動的変化を解析した結果、500-550nm付近のQバンド電子遷移への共鳴によって増強される非対称的な振動モードの強度が、対称的な振動モードに比較して、励起波長が長くなるに従って急速に減衰し、860nmの励起波長では共鳴効果が非常に小さくなることが示された。従って、Hbの近赤外励起ラマンスペクトルはQバンドに共鳴しており、共鳴のメカニズムがAlbrechtのB項に従うことが確認された。また従来、Hbの1064nm励起FT-ラマンスペクトル中でヘム色素に由来する振動モードが強く観測される理由として、近赤外域の弱い吸収バンドへの共鳴が議論されてきたが、本研究により、共鳴ではなくヘムの持つ強い分極率によりヘムの振動モードが強く観測されることが結論づけられた。本年度新たに、非共鳴分子種によるスペクトルへの寄与を抽出する目的で、全血スペクトルの動的ラマン分析を行ったが、ノイズ成分が強すぎて非共鳴分子種であるグルコースのバンドを抽出することはできなかった。スペクトルノイズの低減のため、ポンプレーザーを新開発して電子制御波長可変レーザーの高出力化を試みたが、ポンプレーザーに用いるミラーマウント等の機械的安定性に問題があり、改良を行っている。また、ノイズの原因となるレーザー波長の不安定性を解消するために、温度制御機構を取り入れた波長可変レーザーを設計しており、現在試作器を制作中である。本研究の成果は、装置開発およびOxy-,Deoxy-Hbの動的ラマン分析に関して、2編の論文として準備中である。本年度はまず、励起波長可変ラマンシステムの改良を行った。本システムは電子制御波長可変チタン:サファイアレーザーを光源として用いているが、本年度行った生体試料の測定において、レーザーの自発蛍光成分がラマンスペクトル測定の妨害となることが分かった。従って、レーザー光源に改良を加え、世界で初めて自発蛍光を発しない新型チタン:サファイアレーザーを開発することに成功した。次に、改良したシステムを用いて、血液中の主成分であるヘモグロビン(Hb)のラマン励起波長依存性の測定を行った。従来の可視励起ラマン分光法で全血のスペクトルを測定すると、カロテノイド(Car)のバンドが非常に強いため、その他のバンドを観測することが難しい。一方、新型レーザーを用いて測定した全血およびHb溶液のラマン励起プロファイル中には、Carによるバンドは認められず、両者は互いによく似ており、近赤外(700900nm)の励起光を用いると、全血中でHbが主に共鳴効果を示すことが分かった。励起波長に対してスペクトル変化をほとんど示さない血中グルコースバンドを分離抽出するために、Hbおよび酸素化(Oxy)-Hbラマンスペクトルの励起波長依存性を測定し、共鳴によるスペクトル強度変化を解析した。その結果、近赤外の励起光に対して共鳴しているHb中のヘム色素の電子遷移は、従来考えられていたような近赤外域の吸収バンドではなく可視域の吸収バンド(αおよびβバンド)に相当する遷移であることが、初めて示唆された。Hbの近赤外励起ラマンスペクトルが共鳴による増強を示すメカニズムについてはこれまで研究されておらず、更なる解析を行う必要がある。ラマンスペクトルの形状は複雑な励起波長依存性を示しており、動的ラマン解析を行うためのスペクトル強度の規格化などについて、現在検討を行っている。
ワイマール文化再読-エリート・大衆・「半エリート」-

ワイマール時代は、教育・文化史のたちばからみるならば、周期的に訪れる学生過剰に教育機会の拡大が追い討ちをかけ、ドイツ史上空前の就職難の時代となった。その結果大量に出現した「大卒ブロレタリアート」が、ワイマール文化のひとつの特徴をなす文土やジャーナリストといった知的自由業の成立に寄与していた。今年度はこのような学生過剰問題が芸術家養成教育におよぼした影響を考察してきた。伝統的な芸術家養成機関であるアカデミーは学生の職業機会を拡大するために国家の大規模な造営事業に積極的に関与していた。たとえば、1870年代以降活気づく記念碑や記念塔などの歴史的な建造物の建立や再建がそれである。このような事業への参加によってアカデミーは卒業生に職業機会を提供し、それによって入学志願者を安定的に確保することができた。しかし、すでに1900年頃には早くもこのような造営事業は頭打ち状態に入り、卒業生の職業機会は確実に減少した。いっぽう、時代の趨勢である学生過剰問題はアカデミーをも襲い、職業機会にありつけない卒業生の数は日増しに増加の一途をたどった。職業機会に恵まれない学生や卒業生のあいだにアカデミーの教育体制にたいする批判がたかまる。ワイマール文化のひとつの特徴とされるモダンアートの成立に寄与したのはこのようなアカデミー出身者であったという仮説を立て、アヴァンギャルドと総称される芸術家たちのうちの数名の伝記的な研究に取り組み、研究方針の正しさを確認することができた。今後の課題としては、さらに事例研究の数を増やし、学生過剰問題とモダンアートの成立のあいだにある因果関係を明らかにしていきたい。ドイツ史上最初の大衆文化とよばれるワイマ-ル文化の性格を再検討している。ワイマ-ル時代は、教育・文化史の観点からみるならば、周期的に訪れる学生過剰に教育機会の拡大が追いうちをかけ、ドイツ史上空前の就職難の時代であった。伝統的な教養理念は大きな危機にさらされ、それをささえる制度的な基盤も激しく揺いだ。大卒者や博士号取得者が肩書きにみあった職につけるチャンスは可能なかぎり減少した。かれらは、同時代の史料のなかで、しばしば「大卒プロレタリアート」とよばれている。「大卒プロレタリアート」のもたらす社会不安は、議会においても重大な危機と受けとめられていた。この時代に発展した文化産業に人的資源を提供したのは、これら「大卒プロレタリアート」とよばれる人たちであった。つまり、ワイマ-ル文化の仕掛け人は大衆とよばれる人たちではなかったのである。この点をげんざい筆者は伝記的な研究からあきらかにしつつある。また、伝記的な研究は、この文化の仕掛け人たちの屈折した心情をも浮きぼりにする。かれらは教養市民層にたいして激しい敵意を燃やしながらも、強烈なエリート意識から大衆に接近することはできないし、またその意志もない。結果的に、この文化は受容者の側からみても大衆文化とはよびがたいのである。ワイマ-ル文化は、国際的な名声を博したにもかかわらず、国内においては共和国同様だれひとり愛するもののない文化であった。今後はワイマ-ル文化をさらに多角的に検討するために、伝統的なエリートのこの文化にたいする態度、また大衆の態度に考察の範囲をひろげてゆきたい。
特筆すべき植物病害防除活性を有するバチラス属細菌の特性と防除機構の解明

ブドウを含めた果実は「見た目」がそのまま商品価値に繋がるため、農薬散布回数は他の作物に比べ圧倒的に多い。そのような環境の中、「農薬は身体にも環境にも悪いもの」という一般消費者の認識の中から注目され始めたのが、微生物農薬である。これまでの研究により、ブドウの果皮から分離したBacillus subtilisの新規分離株であるKS1株は、市販微生物農薬と異なり、ブドウ晩腐病やブドウべと病に効果があることが示された。また、それらの病害菌に有効な抗生物質を生産することが示唆された。本年度は、KS1株の抗性物質の解明、安全性試験を行うとともに、大規模圃場散布試験を行なった。KS1株が生産する抗性物質として、環状ペプチド型抗生物質イツリンAを同定した。KS1株が培養液中に分泌するイツリンAの濃度は、ブドウ病害菌の菌糸生育を抑制する濃度よりはるかに高かった。大規模圃場散布試験により、定期的にKS1株をブドウに散布することで、ブドウべと病、灰色かび病および晩腐病を抑制することが示された。ブドウに使用可能な市販微生物農薬はすべて、晩腐病およびべと病には効果が無いとされる。特にべと病は多くの化学農薬やボルドー液による防除が一般的に行われるため、KS1株がそれらの代替品になり得る可能性が考えられた。ラットを用いた経口投与試験において、イツリンAを含有するKS1培養液は、病原性および毒性を有しないことが示唆された。試験を行った雌雄5匹のラットのうち、投与後14日目に雌1例(動物番号:50104)が死亡したが、剖検結果から、いずれの機関および組織にも異常が認められなかった。以上の安全性試験の結果から、KS1株は微生物農薬の資材として安全であることが示唆された。
軽くてしなやかで強い超伝導フラーレンナノウィスカーの開発

本研究は、1フラーレンナノウィスカー(FNW)にアルカリ元素を添加して超伝導化させること、2液ー液界面析出法(LLIP法)によるFNWの成長機構を明かにすること、3FNWの機械的強度の向上を目的とした。その結果、カリウム、ルビジウム、セシウム添加によるC60FNWの超伝導化とパウダー・イン・チューブ法によるカリウム添加C60超伝導細線の作製に成功した。C60FNWの合成に用いた手振り強制混合LLIP法においては、C60FNWの大きさが溶液体積に依存して変化することを見出し、その機構を明かにした。また、C60FNWのレーザー光重合の研究とC70添加によるC60FNWの機械的性質の向上を行った。本研究は、細長くてしなやかな超伝導フラーレンナノウィスカー(FNW)の合成を目的とする。C60飽和トルエン溶液とイソプロピルアルコール(IPA)を用いた手振り混合による強制混合液ー液界面析出法により、C60ナノウィスカー(C60NW)の長さと直径が、溶液体積の関数として変化することと、溶液中の単位体積あたりのC60NWの数(数密度)が溶液体積のほぼ平方根に反比例して変化することを発見した。手振り混合において液ー液界面が周期的に波打ち、液ー液界面が円筒状に引き延ばされることにより相互拡散領域が形成される。この相互拡散領域は薄い厚みをもつ円筒殻を形成するが、この円筒殻体積中に発生する結晶核数が溶液体積の平方根に反比例して減少する結果が得られた。C60分子にC70分子を混合した合金ナノウィスカーを合成し、ヤング率の組成依存性を調べた。合金ナノウィスカーのヤング率は、C70の添加量(最大15 mass%)が増えるほど高くなった。すなわち、C70分子の添加による固溶硬化現象を発見した。また、長繊維C60NWの合成を、静置液ー液界面析出法によって行い、C60飽和ジクロロベンゼン溶液にIPAを重層させることによって5mm以上の長いC60針状晶を合成した。この長いC60NWは、ラマン散乱・XRD分析では短いC60NWに比べて欠陥が少なく結晶性が良い。この長いC60NWの場合、アルカリ金属(K、Rb、Cs)添加C60NWは、24時間以内の加熱だけで超伝導体積分率が最大となるが、高磁場(5T)の実験から臨界電流密度Jcは短いFNWより、2桁小さい。これは、アルカリ金属の分散の不均一性に由来すると考えられ、熱力学的な安定相であるA3C60への転移のバリアが高い。また、後者の実験ではC70が入ってもTcはほぼ変化せず、また、アルカリ金属の分散均一性が悪くなり超伝導体積分率は低くなったが、Jcは低下しなかった。本研究は、細長くてしなやかに変形する超伝導フラーレンナノウィスカーの合成を行うことを目的としている。フラーレンナノウィスカーの強度を高める方法として、光照射による重合が有効である。そこで、ラマン装置のレーザー光(波長532nm)を用いてC60フラーレンナノウィスカー(C60FNW)を重合する研究を行った。重合の様子は、透過電子顕微鏡(TEM)による電子線エネルギー損失分光分析法によって評価した。その結果、重合により、反結合パイ軌道への電子遷移によるバンド幅が広くなることが判明した。これは、従来のC60結晶の報告と矛盾しない結果である。一方、C60FNW母相を強化する方法として、C70をわずかに添加するとC60FNW母相が添加しない場合に比べて数倍高いヤング率となり、C60FNWの強度が向上することが判明した。C70添加は、C60FNW母相の固溶強化のみならず、C60FNWの長波長側の可視光吸収能を増大させる作用があることが明かになり、C70添加が光物性の向上にも寄与することがわかった。すでにC60FNWにアルカリ金属を添加することにより超伝導化させることに成功しているが、アンモニア溶媒にカリウム(K)とC60を溶解し、毛細管現象により黄銅などのパイプ内に充填したものを延伸し、さらに、200°Cで加熱して超伝導化を行った。この方法によりC60ワイヤーを作製して、超伝導臨界電流密度を測定することに世界で初めて成功し、長尺フラーレンワイヤによる軽い超伝導線材の作製のための基礎が築かれた。平成26年度の目標のひとつは、1cm以上の長さのフラーレンナノウィスカー(FNW)を合成することであった。これまで5mm程度以上の長さのFNWの合成に成功しており、長さコントロールはおおむね順調に推移している。

1cm以上に成長させる目的の中空フラーレンナノウィスカー(フラーレンナノチューブ、FNT)の合成研究においては、不純物水分量が多くなると、FNTの合成ができないことが判明した。これは従来知られていない成果である。C60-C702成分FNWを合成し、そのヤング率を複合型透過電子顕微鏡により調べ、C70の添加量が多いほうがヤング率が増加することが判明しており、機械的に強いFNWの合成に成功し、順当な結果を得た。超伝導化については、金属パイプへの粉末充填法による線材化を進めており、目的とする長尺超伝導フラーレン細線の合成に向かって研究を進めている。炭素材料今後は、粉末充填法による長尺超伝導フラーレンナノ細線の合成、長繊維フラーレンナノチューブの大量合成、透過電子顕微鏡によるフラーレンナノウィスカーの強度測定を行う。特に、超伝導転移温度の上昇を目指して、ルビジウムやセシウムをドープしたフラーレンナノウィスカーもしくはフラーレンナノチューブの超伝導化の実験や、電気抵抗の直接測定による臨界電流密度の測定を行うことを目指す。また、真空熱処理によるフラーレンナノチューブが形状変化するのかしないのかについては明らかでない。熱処理による変化があるばあいは、繊維構造を維持することができなくなる恐れがあるので、超伝導線材を合成するための重要な研究課題となる。人件費(研究業務員)の当初使用予定額と実支出額との差による。消耗品の購入に用いる。
理科授業における構成主義に基づいた新しい指導と評価のプログラムの開発と試行

研究の目的は学習者の認知構造を起点とする構成主義からの新しいっ指導と評価のプログラムを理科授業で開発し、試行してその妥当性を検証することであった。研究結果は以下の6点である。1。理論的研究。英米の構成主義論に関する主要な文献を分析した結果、科学知識を学習者自らが先行知識、経験を基に能動的に構成していく捉え方を総称して、構成主義と呼び、その歴史的起源は18世紀のイタリアのビコに発することが明らかになった。その後、様々な学派に発展したが、大きく次の五つに大別できた。知識の構成のプロセスで、学習者自身に焦点化した『根源的構成主義』、知的矛盾に焦点化した『概念変換派』、社会との関連に焦点化した『社会的構成主義』、ピアジェの認識論に焦点化した『ネオピアジェ派』である。また、STSアプローチとこれら構成主義とは学習者中心の理念で同根であることも解明された。2。基礎研究。上記の構成主義の一つとして類別された概念変換論を地域矛盾の焦点化か否かで二つに分け、それらに基づいた指導モデルを明らかにした。3。理論的、実戦的研究。学習者の科学知識の構成のプロセスを図式化する有効な手段としてNovak & Gowinの開発した概念地図法の理論を解明した。さらに、この概念地図法を活用した指導と評価の具体化プログラムを開発、試行して、実践を行ない、妥当性を明らかにした。4。STSアプローチと構成主義との同根性の解明を基に、この構成主義に基づく指導と評価の事例として、カナダのSTSアプローチの中等学校段階のテキストであるSciencePlus.と米国のそれとも比較して、構成主義の指導方策の展開例を明らかにした。5。現在、構成主義とも関連している米国で出来上がったばかりの『全米科学教育標準』を事例にそこで展開されているアセスメントの理論と実際の事例を解明した。6。構成主義に基づく評価にはポートフォリオ評価に代表されるオ-センティックアセスメントと称される学習者に対する質的評価法があることを明らかにした。1。理論的研究。2。基礎研究。3。理論的、実戦的研究。4。5。6。構成主義学習論に基づいた科学テキスト"SciencePlus"を取り上げ,そのオリジンであるカナダ版と,それらを基に作成された米国版との比較分析を行った.その結果,カナダ版には,オンタリオ州版,太平洋諸州版,そして中央諸州版の3種類があり,それら3種類を統合したのが米国版であることが判明した.また学習論の根拠は,いずれも構成主義学習論に置いており,その具体的展開事例も明らかになった.さらに従来の探究学習との比較により,STSカリキュラムに最もふさわしい学習論が構成主義学習論であることを解明した(日本科学教育学会第18回年会論文集;筑波大学教育学系論集).これらの理論的側面からの分析を基礎に,学習者の認知構造を知る有効,有益な手法であるコンセプトマップ法を用いて,実際に中学生に試行してみた.現在分析中であるが,学習者の認知構造を把握するのに最適な手法であった.現在この試行結果の詳細な分析と考察を行い,来年度に発表の予定である.1、理論的研究。英国の構成主議論に関する主要な文献を分析した結果、科学知識を学習者自らが先行知識、経験を基に構成していく捉え方を有する人たちを総称して、構成主義者と見做すことが明らかになった。知識の構成のプロセスで、学習者自身に焦点化した『根源的構成主義』、社会との関連に焦点化した『社会的構成主義』、ピアジェの認識論に焦点化した『従来的構成主義』の三つに大別できた。

2、論理的、実践的研究。学習者の科学知識の構成のプロセスを図式化する有効な手段としてNovak&Gowinの開発した概念地図法の理論を解明した。さらに、この概念地図法を活用した実践を行ない、有効性を明らかにした。3、学習者が科学知識を構成する際に、学習者が本来有している知識や理解が必ずしも科学者の専門概念と対応しない時に、知的矛盾を有するか否かに異なるが、いずれにしても概念変換を経て、科学の専門概念を構成する指導過程の重要性を解明した。4。従来の探究学習との比較をして、STS(Science/Technology/Soviety)の重要な指導法として構成主義を位置づけていることを解明した。さらにこの構成主義に基づく指導と評価の事例として、米国のSTSの中等学校段階のテキストであるSciencePlusの展開例を明らかにした。5,現在、米国で出来上がったばかりの『全米科学教育標準』を事例にそこで展開されているアセスメントの理論と実際の事例を解明した。6、構成主義に基づく評価にはポートフォリオ評価に代表されるオ-センティックアセスメントと称される学習者に対する質的評価法があることを明らかにした。
高齢者の転倒に関する前向き調査および運動機能との関係

二年間に亘る研究の二年目に当たる今年度は、昨年度から引き続き追跡調査を実施した。〔追跡調査〕昨年度と同様の、毎月一度の頻度で行う転倒に関する追跡調査を引き続き継続した。調査方法は昨年度と同様で、電話、郵送、ファックスおよびEメールのいずれかとした。全12回中昨年度に4回の調査を完了していたため、今年度は残りの8回の調査を実施した(最終月11月)。〔結果および考察〕入院、死亡、そして連絡不能等による調査中止者12名を除き、1年間(12回調査)全完了者は322名であった。複数転倒者を含む各月ののべ転倒者数(%)は、14(4.3)、16(5.0)、18(5.6)、8(2.5)、10(3.1)、7(2.2)、11(3.4)、5(1.6)、8(2.5)、5(1.6)、9(2.8)、7(2.2)であり、毎月の平均転倒者割合は約3.1%であった。年間の複数転倒者を含む転倒は118名(全体の36.6%)であった。そのうち複数転倒者は27名であり、転倒者の34.17%を占めた。一年間のうち一回のみ転倒者は52名であった。高齢者運動機能と転倒との関連については集計中である。召集型の健康調査に参加できる70歳以上高齢者を一年間の転倒経験を追跡した結果、全体の3割以上の高齢者が転倒しており、転倒者のうちの3割以上が2回以上転倒していることが分かった。このことから、高齢者の転倒防止対策の緊急性が改めて確認された。二年間に亘る研究の初年度である今年度は、研究計画の通りにベースライン調査と追跡調査を行った。A.ベースライン調査1)対象者東京都老人総合研究所が一昨年に実施した「お達者健診」を受診した東京都1区1地区在住70歳以上の高齢者438名を対象とした。そのうち19名は入院、転居または死亡などにより調査不能であった。調査の案内状を対象者に送付し、会場招集型ベースライン調査の受診意思の有無を確認した。また、招集型ベースライン調査非受診者(132名)のうち追跡調査への参加に同意の得られた者(53名)は、追跡調査の参加者とした。2)ベースライン調査招集型ベースライン調査における運動機能測定として高齢者用バッテリーテストを実施した。同時に転倒に関する質問を含む設問について面接聞き取り調査にて回答を得た。追跡調査参加の同意を再確認した結果、招集型ベースライン調査受診者287名のうち参加者279名、拒否者7名および連絡不能者1名であった。参加者に追跡調査に関する説明をし、忘却防止用の転倒手帳を渡した。会場招集型ベースライン調査非受診者かつ追跡調査参加者には、郵便による質問紙調査を実施し、追跡調査の説明書きと転倒手帳を郵送した。B.追跡調査ベースライン調査の一カ月後(12月)より、一ヶ月に一度の頻度の転倒に関する追跡調査を開始した。調査方法は電話、郵送、ファックスおよびEメールのいずれかとした。今年度は12回中4回の調査を完了した。C.ベースラインおよび追跡調査(4回)の結果会場招集型ベースライン調査の「過去一年間の転倒経験」の設問に"有り"と回答した者は、14.75%(41/278)であった。追跡調査における「過去一ヶ月間の転倒」の発生率は、第1回目調査4.20%、第2回目調査4.81%、第3回目調査5.18%であった。第4回目調査については集計中である。
細胞外圧による間葉系幹細胞の分化運命制御機構の解明

多能性を有する間葉系幹細胞は,中胚葉性組織に由来し,骨芽細胞,脂肪細胞,筋細胞,軟骨細胞等に分化できる細胞で,骨や血管,心筋の再構成を期待した再生医療への応用が開始されている。近年では,神経(外胚葉),肝細胞(内胚葉)などと胚葉を超えた分化能も報告され,体のあらゆる組織に存在することから再生医療における細胞ソースとして大きな期待がかかっている。しかしながら,細胞特性についてはまだ不明な点が多い。本研究では細胞外環境の一つである圧環境に着目し,細胞外圧が間葉系細胞の分化および維持に関わる分子制御機構を明らかにすることを目的とした。これまで,圧受容体として,ピエゾ型圧受容体(PIEZO1)が他の圧受容体と比較して,骨髄由来間葉系幹細胞に有意に発現し,骨芽細胞の分化に重要であることを見出して研究成果をまとめ報告したた。今年度の研究期間は主として,唾液腺の器官培養を独自に作成した加圧培養装置内で培養する条件を決め,加圧培養を行ったところ,その分化が促進することを見出した。また,脱落乳歯由来間葉系幹細胞におけるPIEZO1の発現解析をRT-PCR法,Real-time PCR法,Western blotting法,免疫組織学的検討を行い,その発現を見出した。また,象牙質再生モデルマウスの作成に取り掛かり,マウス第一臼歯に人為的に窩洞を形成し,直接覆髄,間接覆髄モデルの構築を行った。現在,同部にPIEZO1活性化剤を貼付し,修復象牙質の形成が2週間後,1ヶ月後,2ヶ月後に促進されるかどうかの検討をX線CT撮影および組織学的に評価を行っている途中である。当初の計画通り唾液腺の器官培養を開始することができ,唾液腺における圧受容体PIEZO1の発現ならびに加圧に培養による影響を実施することができた。また,モデル動物の作成として,象牙質再生モデルマウスの作成に取り掛かることができた。マウス第一臼歯に人為的に窩洞を形成し,直接覆髄,間接覆髄モデルの構築を行っている。以上のことから当初予定した計画から概ね順調に実験を遂行できていると考えられるが,直接覆髄,間接覆髄の位置決めがやや困難を極めていることから,今後その主義の安定性が今後の進捗の鍵になると思われる。最終年度となる今年度はその成果として,脱落乳歯歯髄幹細胞によって得られた治験について今年度中に成果発表をする予定である。また,唾液腺の器官培養方法を安定かしてきたことから,唾液腺における加圧培養の成果についてもまとめていきたいと考えている。また,象牙質再生モデルマウスの作成は手技的には問題ないことは確認できているか,各個体ならびに手技によるばらつきがやや多い側面があり,評価として困難を極める可能性があり,手技を安定かさせる条件の統一が今後の課題である。最終年度にあたるためできる限り成果方法を行えるよう努めていきたい。多能性を有する間葉系幹細胞は,骨芽細胞,脂肪細胞,筋細胞,軟骨細胞等に分化できる細胞で,骨や血管,心筋の再構成を期待した再生医療への応用が開始されている。そこで,本研究では細胞外環境の一つである圧環境に着目し,細胞外圧が間葉系細胞の分化および維持に関わる分子制御機構を明らかにすることを目的とした。独自に作成した加圧培養装置を用いて,その中で間葉系幹細胞(UE7T-13細胞およびSDP11)を培養し,圧力負荷の環境下での骨芽細胞分化マーカーの発現(BMP2, RUNX2, OSX, ALP)をreal time PCR法を用いて検討を行った。さらに,遺伝子発現を最も誘導した圧力で骨芽細胞へ分化誘導したところ,圧力を付加しない通常の培養と比較し,劇的に骨芽細胞分化を促進させることがわかった。次に,加圧環境下における細胞内シグナル伝達経路の解析をウエスタンブロティング法を用いて解析したところ,MAPKファミリーのERK1/2およびp38 MAPKが有意に活性化することを見いだした。さらに,この圧受容体として,機能する受容体の検索を行ったところ,ピエゾ型圧受容体(PIEZO1)がその役割を担っていることを明らかにした。間葉系幹細胞におけるPIEZO1の発現をsiRNA法を用いて遺伝子の発現抑制を行ったところ,圧刺激によって誘導される骨芽細胞の分化が抑制されることがわかり,間葉系幹細胞の圧刺激による分化にPIEZO1が重要な役割を担っていることを明らかにした。当初の計画通り細胞株を用いて至適圧の検索を行った。予想通り間葉系幹細胞は加圧刺激に応答し,骨芽細胞分化マーカーの発現が上昇し,最も遺伝子発現を誘導する圧を同定することができた。さらにその刺激圧は遺伝子発現を誘導するために,細胞内シグナル分子の活性化を引き起こすこと,さらに骨芽細胞の石灰化を促進した。また,圧受容体としてPiezo1の発現を見出すことに成功した。以上のことから当初予定した計画から概ね順調に実験を遂行することができた。

近年では,神経(外胚葉),肝細胞(内胚葉)などと胚葉を超えた分化能も報告され,体のあらゆる組織に存在することから再生医療における細胞ソースとして大きな期待がかかっている。しかしながら,細胞特性についてはまだ不明な点が多い。本研究では細胞外環境の一つである圧環境に着目し,細胞外圧が間葉系細胞の分化および維持に関わる分子制御機構を明らかにすることを目的とした。これまで,圧受容体として,ピエゾ型圧受容体(PIEZO1)が他の圧受容体と比較して,骨髄由来間葉系幹細胞に有意に発現し,骨芽細胞の分化に重要であることを見出して研究成果をまとめ報告したた。今年度の研究期間は主として,唾液腺の器官培養を独自に作成した加圧培養装置内で培養する条件を決め,加圧培養を行ったところ,その分化が促進することを見出した。また,脱落乳歯由来間葉系幹細胞におけるPIEZO1の発現解析をRT-PCR法,Real-time PCR法,Western blotting法,免疫組織学的検討を行い,その発現を見出した。また,象牙質再生モデルマウスの作成に取り掛かり,マウス第一臼歯に人為的に窩洞を形成し,直接覆髄,間接覆髄モデルの構築を行った。現在,同部にPIEZO1活性化剤を貼付し,修復象牙質の形成が2週間後,1ヶ月後,2ヶ月後に促進されるかどうかの検討をX線CT撮影および組織学的に評価を行っている途中である。当初の計画通り唾液腺の器官培養を開始することができ,唾液腺における圧受容体PIEZO1の発現ならびに加圧に培養による影響を実施することができた。また,モデル動物の作成として,象牙質再生モデルマウスの作成に取り掛かることができた。マウス第一臼歯に人為的に窩洞を形成し,直接覆髄,間接覆髄モデルの構築を行っている。以上のことから当初予定した計画から概ね順調に実験を遂行できていると考えられるが,直接覆髄,間接覆髄の位置決めがやや困難を極めていることから,今後その主義の安定性が今後の進捗の鍵になると思われる。今後の2年間は主に器官培養法および動物モデル実験を計画している。器官培養法については手技手法は確立しているが,加圧培養装置内での培養条件について検討が必要とされる。また,動物実験ではメダカやマウスを用いての実験を計画している。メダカは短期間の飼育条件は問題ないことは確認できているが,長期飼育においては餌の投与経路,水の循環経路の確立がやや困難を極める可能性があり,時間を要する可能性が考えられる。また,マウスモデルについてもこれまで用いられている方法を応用するが条件の設定等要検討課題である。以上より,細胞実験とは異なり,この2年間は予備実験を重ね,確実に進めていきたい。最終年度となる今年度はその成果として,脱落乳歯歯髄幹細胞によって得られた治験について今年度中に成果発表をする予定である。また,唾液腺の器官培養方法を安定かしてきたことから,唾液腺における加圧培養の成果についてもまとめていきたいと考えている。また,象牙質再生モデルマウスの作成は手技的には問題ないことは確認できているか,各個体ならびに手技によるばらつきがやや多い側面があり,評価として困難を極める可能性があり,手技を安定かさせる条件の統一が今後の課題である。最終年度にあたるためできる限り成果方法を行えるよう努めていきたい。
TNF(腫瘍壊死因子)の基礎研究および臨床応用への研究

本研究ではTNFの生産、精製に始まり、作業機序の解明、臨床応用への基礎研究までの広域な研究を行い、目的とした成果をあげることができた。家兎TNFを用いて作用機序の解明を行うことを目的とした。家兎TNFは精製法も確立され、アミノ酸配列も明らかとなり、抗家兎TNFモノクローナル抗体の作成にも成功しているために有利であった。1.悪性細胞選択的障害性腫瘍細胞表面のreceptorの存在を考えて吸収試験などを行ったが、TNFの感受性とTNF消費量との間に相関性は認められず、TNF感受性細胞ではTNF添加により酸素消費量が著明に増大し、腫瘍細胞内のリソソーム酵素活性の上昇が認められた。ただし、in vitroでのTNFの細胞障害に必要な濃度はin vivoでの効果を示す濃度の10100倍量を必要とすることがわかった。2.In vivoでのTNFの作用機序病理組織学的所見からはTNFの出血性壊死はLPSのそれと酷似している。抗TNFモノクローナル抗体を用いることにより、TNFの作用を、polymyxin Bを用いることによりLPSの作用をブロックし、違いを証明した。TNFの作用機序として血管内皮細胞への影響が考えられるが、in vitroでTNFは低濃度でも血管内皮細胞の細胞間解離、分裂抑制を引き起こすことが判明した。in vitroでTNFに比較的抵抗性の細胞でもin vivoでは感受性のある細胞株と同様の出血性壊死が認められることからも、血管内皮に対する作用が考えられる。さらに肉芽組織においてもTNFが出血性壊死の組織変化を引き起こすことから、主たる作用部位は未熟な血管にあることが考えられる。TNF投与による生体内の変化としては、腫瘍局所に好中球、単球などの細胞浸潤が認められるが、他の臓器には病理組織学的にも障害性は認められていない。
低酸素環境下の胎児循環とマグネシウムの役割

ヤギ胎仔を用いた生理的慢性実験モデルを作成し、低酸素血症に対する胎仔循環系の反応と、その反応に対するマグネシウムの影響を検討した。低酸素血症に陥ると胎仔は心拍数を低下させ同時に血圧を上昇させた。マグネシウム投与下では低酸素血症に対する胎仔反応が変化し、心拍数は減少せず、血圧も有意な変化を示さなかった。マグネシウムの投与により基準心拍数は低下し、一過性頻脈の頻度も減少し、心拍数細変動も減少した。しかし低酸素血症になるとマグネシウムの有無にかかわらず細変動は増加した。カテコラミンは低酸素血症に伴い有意に増加したが、マグネシウム投与下でも同様の反応を示した。Colored microsphere法を用いて血流量を測定したところ低酸素血症で大脳皮質、脳幹、小脳、延髄、ならびに心筋への血流量が有意に増加した。マグネシウム投与により脳と心臓への血流量はさらに増加した。特に大脳皮質では低酸素血症単独に比しマグネシウム投与により血流量が有意に増加した。そこでラットを用いて低酸素性虚血性脳障害とマグネシウムの関連を調査した。その結果、低酸素虚血を負荷する前にマグネシウムを投与すると脳神経細胞の障害が減少し、特に大脳皮質では有意差をもって脳保護作用が認められた。以上の結果から、マグネシウムは低酸素血症時の胎児循環を変化させ、胎児の脳と心臓への血流量を増やし、大脳皮質の神経保護作用を有することが明らかとなった。また、この反応にはカテコラミンの放出量は関与していないと推測された。在胎12013日のヤギ胎仔を用い、生理的慢性実験モデルを作成し、約4日間の回復ののち実験を行った。まず硫酸マグネシウムを4時間投与後、1時間の低酸素負荷を加えた。硫酸マグネシウム投与群では、胎仔血中濃度が0.5mmol/Lから1.4mmol/Lへと有意に上昇した。一方、生食を投与した対照群では変化を認めなかった。胎仔心拍数は低酸素刺激により対照群では有意に低下するのに対し、硫酸マグネシウム投与群では低下せず、両者間に明らかな差が生じた。胎仔血圧には両群間で有意な差はなかった。カテコラミンの胎仔血中濃度は、低酸素で有意に上昇した。硫酸マグネシウムを投与された胎仔でも、カテコラミンは対照群と同等に上昇した。以上の成績より、硫酸マグネシウムは低酸素環境下の胎児循環を変化させる可能性が示唆された。
精巣由来の幹細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパクの同定

精子幹細胞の長期培養法が確立され、発生工学、不妊治療および再生医療への利用が期待されている。マウス神経幹細胞やマウス精子幹細胞の長期培養系(GS細胞)を用いたこれまでの研究によって、遺伝子発現制御、DNA修復、染色体の安定性などとの関連が知られているタンパク質翻訳後修飾、ポリ(ADP-リボシル)化がこれら組織幹細胞の増殖や細胞死、DNAのメチル化などに関与する可能性があることを明らかにした。本研究の目的は、GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を同定し、GS細胞におけるポリ(ADP-リボシル)化の役割をさらに詳細に解明することである。本年度は、これまでに引き続き、マウス胎児線維芽細胞と比較してGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を同定するために、それぞれの細胞から抽出したタンパク質を、ポリ(ADP-リボース)に対する種々の抗体を用いた免疫沈降法ならびに、ポリ(ADP-リボース)親和性レジンを用いてポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の分離を種々の条件で試みたが、GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を明確に同定するには至らなかった。一方、定常状態下で、マウス胎児線維芽細胞に比較して、マウス神経幹細胞やマウス精子幹細胞でポリ(ADP-リボシル)化が亢進状態であることに着目した実験を展開し、ポリ(ADP-リボシル)化を触媒する酵素であるPARP1について、組織幹細胞における転写調節領域の同定と細胞周期関連タンパク質の発現に与える影響について明らかにした。そのうち、マウス神経幹細胞に関する成果を本年度公表した。本年度は、マウス胎児線維芽細胞と比較してGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を同定するために、それぞれの細胞から抽出したタンパク質を、ポリ(ADP-リボース)に対する種々の抗体を用いた免疫沈降法ならびに、ポリ(ADP-リボース)親和性レジンを用いてポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の分離をするための条件検討を実施した。この分離したタンパク質を質量分析ならびに二次元元気泳動法を用いて解析し、GS細胞特有の(ADP-リボシル)化タンパク質の候補を絞り込むためには、この分離ステップが重要である。それを踏まえ、培養条件など種々の条件を加味しながら再現性のあるポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の分離条件の決定を目指し、検討を進めた。本年度中に、質量分析および二次元電気泳動を用いてGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の候補を絞り込むことを目的にしていたが、再現性のあるポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の単離条件の検討が必要で、そこまでに至っていない。前年度に引き続き、マウス胎児線維芽細胞と比較してGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を同定するために、それぞれの細胞から抽出したタンパク質を、ポリ(ADP-リボース)に対する種々の抗体を用いた免疫沈降法ならびに、ポリ(ADP-リボース)親和性レジン、その他の方法を用いてポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の分離条件の検討を行った。さらに、マウス精子幹細胞由来の多能性幹細胞(多能性精子幹細胞:mGS細胞)の抽出タンパク質もサンプルとして用いた検討も行い、精子幹細胞の多能性獲得とポリ(ADP-リボシル)化の関係を明らかにしようとした。それぞれの細胞の培養条件、タンパク質抽出のタイミング、タンパク質抽出法などについての条件も変えながら、この分離したタンパク質から、GS細胞もしくはmGS細胞特有に働く、ポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の候補を絞り込むための解析法の検討についても進めた。GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の明確な候補を絞り込むことを目的にしていたが、そこまでに至っていない。

本研究の目的は、GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を同定し、GS細胞におけるポリ(ADP-リボシル)化の役割をさらに詳細に解明することである。本年度は、これまでに引き続き、マウス胎児線維芽細胞と比較してGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を同定するために、それぞれの細胞から抽出したタンパク質を、ポリ(ADP-リボース)に対する種々の抗体を用いた免疫沈降法ならびに、ポリ(ADP-リボース)親和性レジンを用いてポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の分離を種々の条件で試みたが、GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質を明確に同定するには至らなかった。一方、定常状態下で、マウス胎児線維芽細胞に比較して、マウス神経幹細胞やマウス精子幹細胞でポリ(ADP-リボシル)化が亢進状態であることに着目した実験を展開し、ポリ(ADP-リボシル)化を触媒する酵素であるPARP1について、組織幹細胞における転写調節領域の同定と細胞周期関連タンパク質の発現に与える影響について明らかにした。再現性のあるポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の単離条件を定め、質量分析および二次元電気泳動を用いてGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の候補を絞り込む。同定したGS細胞特有のポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の候補分子について、遺伝子ノックダウンまたは過発現系、さらにはタンパク機能に関連した種々の変異体を構築し、GS細胞の増殖やDNAのメチル化などの表現型に変化が生じるかについて解析する。GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の明確な候補を絞りこむことができれば、その候補分子について、遺伝子ノックダウンまたは過発現系、さらにはタンパク機能に関連した種々の変異体を構築し、GS細胞の増殖やDNAのメチル化などの表現型に変化が生じるかについて解析する。上記の研究がうまく進まない場合は、体細胞に比べてGS細胞でPARP発現が高いことがストレス耐性に関与するかについて、これまでに構築しているPARPの活性および発現を制御したGS細胞と野生型GS細胞とを比較することによって、各種ストレス下におけるポリ(ADP-リボシル)化反応の役割について解析する。本年度中に、質量分析および二次元電気泳動を用いてGS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の候補を絞り込むことを目的にしていたが、再現性のあるポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の単離条件の検討が必要で、そこまでに至らなかった。このように実験計画がやや遅れ、予定していた実験が実施できなっかたため。本年度中に、GS細胞特有に働くポリ(ADP-リボシル)化タンパク質の明確な候補を絞り込むことを目的にしていたが、そこまでに至らなかった。このように実験計画が遅れ、予定していた実験が実施できなっかたため。この研究費と次年度請求する研究費を合わせて、主にタンパク質解析、細胞培養および一般研究用の試薬、培養用のプラスチック器具などの消耗物品費に使用し、一部、成果発表のための旅費および投稿料などに使用する予定である。この研究費と次年度請求する研究費を合わせて、主に質量分析、細胞培養および一般研究用の試薬、培養用のプラスチック器具などの消耗物品費に使用し、一部、成果発表のための旅費および投稿料などに使用する予定である。
組織酸素代謝からみた敗血症性多臓器不全の治療に関する関する研究

本研究は、敗血症性多臓器不全における細胞障害の一因となっている組織酸素代謝障害を的確に評価し、これを改善する方法を見いだすことにより、敗血症性多臓器不全に対する新しい治療法を確立することを目的とした。まず、敗血症性多臓器不全における組織酸素代謝障害の評価法を検討した。その結果、従来われわれが細胞障害度の指標として用いてきた細胞障害度指数(cellular injury score;CIS)を全身酸素代謝の指標である酸素供給能、酸素消費量と同時に測定することにより組織酸素代謝障害を的確に評価可能であると考えられた。さらに、より早期に組織酸素代謝障害を検出できる臨床応用可能な方法として、tonometerによる胃粘膜内pH(gastric pHi)測定の有用性について検討を加え、gastric pHiは重症患者において組織酸素代謝障害を早期にreal timeに評価できる方法であるとの結論を得た。次に、敗血症性多臓器不全における組織酸素代謝障害を改善する治療法について検討した。重症敗血症症例において組織酸素代謝の指標を目標とした循環管理を行い、その結果、細胞障害が軽度な敗血症性ショック早期の症例においては、ショックからの離脱と細胞障害度の改善が認められた。しかし、すでに高度細胞障害を呈している症例に対しては、これらの循環管理のみでは改善が認められず、これら症例においては各種のhumoral mediatorが、組織での酸素摂取障害に関与していると考えられた。本研究によって、組織酸素代謝障害を改善すること目的とした治療は、敗血症性多臓器不全に対する新しい治療法となりうるが、組織酸素代謝の指標を目標とした循環管理のみでは、いったん重症多臓器不全に陥った症例に対しては効果がなく、組織での酸素摂取障害に関与していると考えられている各種humoral mediatorに対する対策を含めた新たな治療法を確立する必要があると考えられた。平成6年度はラットを用いたエンドトキシンショックモデルおよび敗血症モデルにおける血行動態と細胞内代謝の指標の測定を行った。とくに盲腸結紮穿孔モデルにおいては、輸液の投与により、臨床の敗血症性ショックに類似した高心拍出量状態を呈し、初期補液により、生存率は有意ではないが改善することが示唆された。当初予定していた、NIROSCOPYの導入が遅れており、本装置による組織酸素代謝の測定はいまだ行えておらず、今年度には導入し、引き続きさらなる動物実験を行い、その有用性を検討する予定である。臨床研究においては、組織酸素代謝の指標を目的とした循環管理の効果を検討中である。具体的には、重症敗血症例において、酸素供給能係数、酸素消費量係数の現在までに検討した救命例の平均値を目標として、初期補液とカテコラミン投与による循環管理を行い、その効果を検討するprospective studyを実施中である。また、トノメーターによる胃粘膜内pH(gastric pHi)を測定し、他の組織酸素代謝の指標と比較検討およびその有用性を検討中である。平成7年度は臨床研究を中心に行った。敗血症症例をはじめとする多臓器不全症例においてトノメータを用いて胃粘膜内pH(gastric pHi)を測定し、他の組織酸素代謝の指標と比較検討することで、gastric pHiの有用性を評価した。Gastric pHiは、現在まで臨床的に組織酸素代謝の評価に用いられてきた各種の指標と異なり、消化管の酸素需給状態を鋭敏に反映し、組織酸素代謝障害の評価法として優れた方法であると考えられた。これらの結果をまとめて論文2編を発表した。また、組織酸素代謝障害に対する治療として、重症敗血症症例において酸素供給能係数、酸素消費量係数を目標として初期補液とカテコラミン投与による循環管理を行い、その効果を検討するprospective studyを施行し、現在データを解析中である。さらに敗血症性多臓器不全の組織

酸素代謝障害の一因と考えられるcytokineをはじめとする各種humoral mediatorの血中濃度を測定し、その血中濃度と組織酸素代謝障害との関係につき検討を開始した。本研究は、敗血症性多臓器不全における細胞障害の一因となっている組織酸素代謝障害を的確に評価し、これを改善する方法を見いだすことにより、敗血症性多臓器不全に対する新しい治療法を確立することを目的としている。本年度は、現在までの敗血症性多臓器不全の病態における組織酸素代謝障害の検討をふまえ、臨床例において、組織酸素代謝障害の新しいモニタリング法としてのgastric pHiの有用性を検討するとともに、重症敗血症症例において組織酸素代謝の指標を目標とした循環管理を行い、その効果を検討した。その結果、gastric pHiは敗血症性ショックによる低血圧や嫌気性代謝による血中lactateの上昇がおこる以前に、compensated shockの状態を検出可能であり、敗血症における組織酸素代謝モニターとしてきわめて有用であることが示唆された。一方、敗血症性ショック早期よりの組織酸素代謝改善をめざした循環管理の効果を検討するため、重症敗血症例において、酸素供給量600ml/min/m^2、酸素消費量170ml/min/m^2の目標値を設定し、十分な初期補液と積極的なカテコラミン投与による循環管理を施行した。その結果、細胞障害が軽度な敗血症性ショップ早期の症例においてはショックからの離脱と細胞障害度の改善が認められた。しかし、すでに高度細胞障害を呈している症例に対しては、これらの循環管理のみでは改善が認められず、組織での酸素摂取障害に関与していると思われる各種のhumoral mediatorに対する対策が重要であると考えられた。本年度の研究によって、gastric PHiが敗血症における組織酸素代謝障害を早期に知りうる有用なモニタリング法であること、組織酸素代謝の指標を目標とした循環管理は、敗血症早期の細胞障害の予防や治療に有効であるが、いったん重症多臓器不全に陥った症例に対しては組織での酸素摂取障害を改善するための新たな治療法を確立する必要があるとの結論を得た。
FAAP20によるK63結合型ポリユビキチン鎖特異的認識の構造的基盤

ファンコニ貧血の原因遺伝子として見つかったFanconi anemia (FA)タンパク質群は、DNA損傷の一つであるDNA鎖間架橋を修復する。DNA損傷が生じると、その近傍にはK63結合型Ub鎖が付加される。FAAP20のubiquitin-binding zincfinger (UBZ)ドメインはK63結合型Ub鎖と特異的に相互作用することでFAタンパク質群をDNA損傷箇所へと集積させ、これによりFAタンパク質群がDNA損傷を修復する事が、近年いくつかのグループから報告された。一方、FAAP20はUb化されたDNAポリメラーゼRev1をDNA鎖間架橋箇所へと集積させるために必要という報告もある。いずれにせよ、DNA鎖間架橋修復メカニズムの解明にはFAAP20によるUb結合メカニズムを明らかにする必要があった。本研究ではFAAP20のUBZドメインとK63結合型Ub2量体の複合体の結晶構造解析、さらに変異体を用いた解離定数の測定を行った。26年度が最終年度であるため、記入しない。DNA損傷が生じると、その近傍にはUbが付加されるが、FAAP20がUbと結合することでFAタンパク質群をDNA損傷箇所へと集積し、修復を行うことが明らかとなっている。従って、FAタンパク質群のDNA損傷箇所集積メカニズムの解明にはFAAP20によるUb結合メカニズムを明らかにする必要がある。本研究ではFAAP20のubiquitin-binding zincfinger (UBZ)ドメインとK63結合型Ub2量体の複合体の結晶構造解析、さらに変異体を用いた解離定数の測定を行うことで、FAAP20によるUbの認識機構を明らかにする。昨年度の研究成果として、FAAP20とLys63結合型Ub2量体の複合体の結晶構造を決定した。得られた結晶構造から、FAAP20によるUbの認識機構を明らかとした。さらに、得られた結晶構造を元にした点変異体を用いて、FAAP20とUbおよびM1-、K48-、K63-結合型Ub2量体との解離速度定数の解析を行った。その結果、FAAP20のUBZドメインにはUb鎖特異性は存在しないことが明らかとなった。目的の結晶構造を決定した他、変異体を用いた解離速度定数の測定にも成功したため必要な実験データはすべて得られたため、論文にまとめ、科学雑誌に投稿する。査読者からの追加実験の指示があれば、それに応える。
Japanese Shakespeare in the New Millennium（国際共同研究強化）

上記の国際学会における英語発表4本に加えて、女性と演劇と社会に関わる論考、翻訳と批評の3本、合計7本を業績に挙げた。国際共同研究の課題を研究してきた上で、日本と英国を中心にした視座に加え、第二次世界大戦前後、日本の植民地であった台湾と、日本を実質的に植民地化した米国における米国を加える必要性がでてきたため、2018年後期から台北とニューヨークにて研究を行なっている。当初予定していた日英間の研究プロジェクトより多様なアプローチを選択した結果、新たな環境に順応する必要性が生まれた。加えて台湾では,、日本・台湾・中国を中心とする東アジアのシェイクスピアを考察する際に必要不可欠となる中国語の習得に時間と労力を費やし、出版プロジェクトにやや遅れが出たので、補助事業期間延長を申請した。2019年7月頭までニューヨーク市立大学大学院演劇学科の客員研究員として滞在し、ニューヨークを中心とした劇場、舞台芸術アーカイブを中心に、アメリカにおけるアジア・シェイクスピア・女性の表象と関係性についてリサーチを行う。7月9日から13日までイタリアのローマ・トリ大学で行われるEuropean Association of Shakespeare Researchにおいて、セミナー・共同コンヴィーナーとして、'Shakespeare on the Intercultural Edge: Adaptation, Translation, Acculturation and Hybrid Strategies'をリードする。その後、『オセロ』を筆頭にシェイクスピア劇の舞台となり、アルメニア・シェイクスピア学会とヴィエンナーレが行われているヴェニスに滞在する。8月から始まる愛知トリエンナーレと利賀村シアターオリンピックについての記事をThe Japan Timeに寄港し、字幕翻訳を行いながら、シェイクスピア作品を中心に現地調査を行う。秋からはヨーロッパ、アジア、アメリカの演劇祭の訪問を織り込みつつ、共同研究者であるリズ・シェイファーとミーティングを重ね、ロンドン大学を中心とする学会、シンポジウム、勉強会に出席し、現地の劇場・アーカイブを活用しながら、英語書籍プロジェクトを推進させる予定である。内定年度:20152017年3月に英国・ロンドンへ海外出張に1週間赴き、ブリティッシュ・ライブラリー、ナショナル・シアター、グローブ・シアターを中心に、資料収集、演劇鑑賞、現地調査を行った。加えて、2018年3月から研究代表者が渡英し、本格的に開始される国際共同研究強化プロジェクトについてのミーティングを、ロンドン大学ローヤルホロウェイ校の演劇学科のエリザベス・シェイファー教授と持った。教授が主宰する「女性を舞台の中心に挙げる」(“Putting women in the Centre Stage")プロジェクトに参画することによって、未だ西洋男性中心主義が根強いシェイクスピア研究のパラダイムを女性の視点から軌道修正する(“Re-orienting")目的と方法論を話し合った。その際、アメリカの漫画家アリソン・ベクデルにちなんで命名されたベクデル・テストというジェンダー・バイアス測定のために用いられるテストを、演劇に応用する際の有用性と問題点について議論が交わされた。ベクデル・テストでは2人以上の女性が登場するか、女性に名前がついているか、女同士の会話はあるか、その会話の中で男性に関する話題以外が出てくるかなどが問われるが、現代映画でも半分以下しかこれらの条件をパスしない。映画産業で働く女性の比率が低いことや、男性中心の嗜好の反映とされているが、少年俳優が女性役を演じたシェイクスピア時代の演劇についてはさらにパス率が低下する。現在進行形ゆえに把握し難い2000年以降、特に2005年のロンドン同時爆破事件、2011年の東日本大震災、2016年のEU離脱、2017年の英国国会議事堂テロ後における日本と英国のシェイクスピア翻訳・翻案作品の具体的な舞台例を交えつつ、お互いの意見を交換した。2017年3月からプロジェクトを開始したため、1週間の成果を判断することが難しいが、ロンドンにおける海外リサーチが予定通り進んだことから、上記の評価とした。2017年12月に2週間渡英し、2018年3月半ばから始まるロンドン大学との国際共同研究の準備を行いながら、2018年5月に開かれる日本英文学会全国大会第一シンポジアShakespeare and British Culture since 1960にて発表する"The Bard, Britain, and Brexit"のリサーチを、長年対立してきたイングランドとスコットランドの首都たるロンドンとエディンバラの二都市のアーカイブを使って行った。ロンドンでは、英国図書館、ローヤル・シェイクスピア・カンパニー(RSC)、ナショナル・シアター(NT)、シェイクスピア・グローブ座(SG)の三柱に加えて、新設されたブリッジシアターで観劇した。エディンバラでは、古代から現代に至る膨大な展示物をスコットランド国立博物館、国立ギャラリー、国立図書館を訪れ、スコットランドの近代から現代に至る歴史が、いかに展示・表象・説明されているのか、EU離脱とスコットランド独立の機運が高まる昨今、現代英国の舞台芸術においてどのように表象されているかについて現地調査を行った。2018年3月から再び1ヶ月ほど渡英し、ロンドン大学の受入研究者であるリズ・シェイファー教授とのミーティングを持ち、今後のプロジェクトの進め方について話し合いながら、リサーチを進めている。書籍出版のプロポーザルを作成しながら、先に挙げた"The Bard, Britain and Brexit"に加えて、Asia Shakespeare Association(ASA)で発表する山の手事情社の『テンペスト』論、黒澤明のシェイクスピア飜案映画についての論文(共著書籍出版予定)の調査と執筆を中心に行なった。パリに移動し、島国英国と大陸ヨーロッパの間を常に揺れてきたシェイクスピアのフランス演劇界における位置性に触れる機会ともなった。