hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
人工社会における秩序形成の分析

成果を上げることができたのは次の点である。1.コンピュータ上で単純な反応を行うエージェントを作り出し、そのエージェントに状況的制約(コミュニケーションネットワーク)を課したときに経験的結果と符合する集団構造が創出されることを示した。(『社会心理学研究』論文)2.エージェントが利他性に基づく基礎社会(Communal Societoes)を形成しているとき、その基礎社会の中では社会的ディレンマを解決しやすくなる可能性がある。この可能性が妥当することを、同様のエージェントを用いたコンピュータシミュレーションによって示した(Solving SociaI Dilemma収録の論文)。3.上記の研究、および文献研究に基づき、コンピュータシミュレーションが社会科学の中でいかなる可能性と問題点を持っているかを議論した(『オペレーションズ・リサーチ』および『日本ファジィ学会誌』論文)。4.食糧が降ってわく空間(Nutscape)の中で複数のエージェントがどのように社会秩序を作るかを分析した。食糧を多く確保したエージェントは子孫を残せ、確保できなかったエージェントは淘汰される。エージェントの戦略は、他のエージェントとの境界領域にある資源を、「与える(譲る)」、「奪う」、「折半する」の何れかの反応を導く。エージェントは争ったときの「強さ」のパラメータを持つ。概ね次の結果を得た。資源が豊富なときは相互に資源を折半する戦略が進化する。しかし資源が乏しくなると、「冨者に資源を譲り貧者からは奪う」という戦略が一般化し、略奪的な秩序が掲載される。この略奪的秩序は貧富の差を拡大する方向に働いている。この結果は自発的な相互作用が協カ的な秩序を導くという従来の信念の反例になるといえる。現在公表の仕方を検討している。この研究のテーマは人工社会における秩序形成である。社会の「統合」と「分化」の側面を焦点として秩序を議論する。申請時に想定した作業は次の3つである。a.人工社会の仮想エージェントの作成、b.背景状況の作成、c.人工社会シミュレーション。そのうち平成9年度に予定していたのはaとbだった。aについては、認知ルーチンと計画ルーチンからなる単純戦略モデルのエージェントをデザインし、集団実験事態(コミュニケーションネットワーク実験)のシミュレーションに適用した。その成果は「11.研究発表」の第一として公表した。なおこの報告は加筆訂正の上、現在投稿中である。bについては、社会空間を升目のある2次元空間とし、升目ごとに資源が一定の関数で再生される状況(狩猟採集社会モデル)を作成した。Conte, R.による人工社会での規範のシミュレーションの状況を参考にした。cの人工社会のシミュレーションは平成10年度の課題である。だが予備的作業は、以前からの「一般交換シミュレーション」の継続という形で既に進行させている。今年度に入ってからの研究分を含め、一連のシミュレーション結果は人工社会の秩序形成に関し、概ね次の結果を示した。利他性に基づく社会は統合の側面で次の傾向を示す。(a)弱者のサポートシステムの成立。(b)分配正義の創出。(c)社会的ディレンマの解決。また社会の分化の側面では次の傾向が生じる。(d)成員の集団標識別の下位社会への分割。(e)つきあいの階層化。以上の点については次の論文によりconferenceで報告した。上記論文は加筆訂正の上、Social Dilemmasに関する本のchapterとしてsubmitしている。また以上のシミュレーション結果の社会学的含意を「11.研究発表」の第2としてまとめた。以上のシミュレーション結果は非現実的な仮想に基づく面がある。そこで今年度作成した背景状況で以上の結果を再吟味するのが次年度の課題となる。概ね次の結果を得た。
植物細胞質型チオレドキシン標的膜タンパク質の検索と調節機構の解明

生体内で還元調節を仲介する分子の一つであるチオレドキシンは、分子量1万2千の小さなタンパク質で、他の酵素のジスルフィド結合を還元することで活性を制御する。これまでに、チオレドキシン変異体の固定化担体モを用いたスクリーニング法を、高等植物の葉緑体や細胞質タンパク質に適用することで、チオレドキシンにより調節される分子が次々と明らかにされている。本研究は、膜輸送体やレセプターといった細胞機能に重要な分子を含む細胞膜画分に着目し、チオレドキシンにより調節を受ける膜タンパク質分子を探索する。そして、得られた分子のレドックス制御機構を生化学的に解析することで、チオレドキシンによる活性制御に共通の仕組みを見出すとともに、その生理的役割を明らかにすることを目的とした。シロイヌナズナ培養細胞から調製した細胞膜画分をカオトロピックイオン洗浄後、界面活性剤で可溶化し、チオレドキシン変異体固定化担体カラムに供与して、アフィニティークロマトグラフィーを行った。捕捉されたチオレドキシン標的分子の候補については、MALDI-TOF/TOF MSを用いた質量分析で分子種を同定した。そして、細胞内信号伝達に関わる膜分子を、新たにチオレドキシン標的分子の候補に加えることができた。新たに同定した分子のうち、特に重要な生理機能が予測された分子について、リコンビナントタンパク質を作製・精製し、チオレドキシンによるレドックス制御機構を生化学的に解析した。その結果、細胞膜アンカー型のカルシウム依存キナーゼが、チオレドキシンで還元調節することを証明した。さらに、この分子の還元調節が生体内で実際に起きるのか、起きるならばその生理機能は何かを明らかにする研究を現在行っている。これまでに、チオレドキシン変異体の固定化担体を用いたスクリーニング法を、高等植物の葉緑体や細胞質タンパク質に適用することで、チオレドキシンにより調節される分子が次々と明らかにされている。本研究では、膜輸送体やレセプターといった細胞機能に重要な分子を含む膜画分に着目し、チオレドキシンにより調節を受ける膜タンパク質分子を探索し、得られた分子の還元調節機構を生化学的に解析することで、チオレドキシンによる活性制御に共通の仕組みを見出すとともに、その生理的役割を明らかにすることを目指す。本年度は、シロイヌナズナ培養細胞から調製したポストミトコンドリア画分をアルカリ洗浄後、界面活性剤で可溶化し、チオレドキシン変異体固定化担体カラムに供与して様々な条件でスクリーニングを行った。捕捉されたチオレドキシン標的分子の候補については、MALDI-TOF/TOF MSを用いた質量分析で分子種の同定を行った。本研究で同定した分子には、生理機能が重要な新規チオレドキシン標的分子の候補が含まれ、今後、これらの生化学解析を進める。一方、ポストミトコンドリア画分を用いたスクリーニングでは、情報伝達や細胞機能に重要な分子が多数存在すると考えられる細胞膜の分子を捕捉することが出来なかった。ERやゴルジなど構成的かつ多量にタンパク質を含むオルガネラ由来の膜が存在するために、細胞膜の分子が捕捉されなかったと考えられる。そこで、この解決策として、培養細胞から収率・純度良く細胞膜を調製する方法を検討し、得られた膜標品をスクリーニングに供与した。結果、複数のタンパク質分子が捕捉され、分子の同定を進めている。本研究では、膜輸送体やレセプターといった細胞機能に重要な分子を含む細胞膜画分に着目し、チオレドキシンにより調節を受ける膜タンパク質分子を探索する。そして、得られた分子のレドックス制御機構を生化学的に解析することで、チオレドキシンによる活性制御に共通の仕組みを見出すとともに、その生理的役割を明らかにすることを目的としている。本年度は、シロイヌナズナ培養細胞から調製した細胞膜画分をカオトロピックイオン洗浄後、界面活性剤で可溶化し、チオレドキシン変異体固定化担体カラムに供与してアフィニティークロマトグラフィーを行った。その結果、細胞内信号伝達に関わる生理機能が重要な膜分子が、新たにチオレドキシン標的分子の候補に加えることができた。現在、これらの分子の一つ一つのリコンビナントタンパク質を作製・精製し、チオレドキシンによるレドックス制御機構を解析している。これまでに、チオレドキシン変異体の固定化

担体モを用いたスクリーニング法を、高等植物の葉緑体や細胞質タンパク質に適用することで、チオレドキシンにより調節される分子が次々と明らかにされている。本研究は、膜輸送体やレセプターといった細胞機能に重要な分子を含む細胞膜画分に着目し、チオレドキシンにより調節を受ける膜タンパク質分子を探索する。そして、得られた分子のレドックス制御機構を生化学的に解析することで、チオレドキシンによる活性制御に共通の仕組みを見出すとともに、その生理的役割を明らかにすることを目的とした。シロイヌナズナ培養細胞から調製した細胞膜画分をカオトロピックイオン洗浄後、界面活性剤で可溶化し、チオレドキシン変異体固定化担体カラムに供与して、アフィニティークロマトグラフィーを行った。捕捉されたチオレドキシン標的分子の候補については、MALDI-TOF/TOF MSを用いた質量分析で分子種を同定した。そして、細胞内信号伝達に関わる膜分子を、新たにチオレドキシン標的分子の候補に加えることができた。新たに同定した分子のうち、特に重要な生理機能が予測された分子について、リコンビナントタンパク質を作製・精製し、チオレドキシンによるレドックス制御機構を生化学的に解析した。その結果、細胞膜アンカー型のカルシウム依存キナーゼが、チオレドキシンで還元調節することを証明した。さらに、この分子の還元調節が生体内で実際に起きるのか、起きるならばその生理機能は何かを明らかにする研究を現在行っている。
立体保護を利用した安定な含ゲルマニウム累積二重結合化合物の合成とその構造

有機化学において非常に重要な役割を果たしている累積二重結合化合物の高周期14族元素類似体の化学に関しては、その構造と性質の解明が世界的な興味の的となっている。しかし、これら高反応性化学種の安定な合成例は非常に少なく、本研究の合成目標であるl-ゲルマアレンについては、安定な単離例はもとより未だスペクトル観測の例もない。本研究では、申請者らがこれまで種々の高反応性化学種の安定化に応用してきた有用な立体保護基である2,4,6-トリス[ビス(トリメチルシリル)メチル]フェニル(Tbt)基の導入による速度論的安定化の手法を用いて最も基本的な含ゲルマニウム累積二重結合化合物であるl-ゲルマアレンを安定に合成し、その分子構造ならびに基本的な物性を明らかにすることを研究の目的とした。ゲルミレン1[Tbt(Mes)Ge:;Mes=mesityl)と9-(dichloromethylene)fluoreneとの反応溶液に対し、ホスフィンテルリドを作用させることにより、対応する1-ゲルマアレン1,2-テルリド2を合成することに成功した。2のへキサメチル亜リン酸トリアミドによる脱テルル化反応を行ったところ、l3CNMRにおいて243ppmに目的化合物である1-ゲルマアレン3[Tbt(Mcs)Ge=C=CR2]のsp炭素に由来すると考えられるシグナルを観測した。またこの溶液にメタノールを加えたところ、Ge=C二重結合にメタノールが付加した化合物であるメトキシゲルマンが生成し、l-ゲルマアレン3の生成が確認された。また、ゲルミレン1と9-(dichloromethylene)fluoreneとの反応により、ビニル置換クロロゲルマン化合物5を合成し、5に2.2当量のt-BuLiを作用させることによっても、1-ゲルマアレン3が生成することを確認した。
分子シャペロン誘導抑制活性を有する微生物代謝産物の合成研究

医学が発展した今日でもがんの治療は已然として困難で、副作用などの患者への苦痛が少ない新しい治療法の開発が求められています。ベルシペロスタチンと呼ばれる化合物は、がん細胞が生存するために必要なタンパク質の一種、分子シャペロンの生成を抑える働きがあり、新たな抗がん剤の候補物質として期待されています。本研究ではベルシペロスタチンがどのような仕組みで分子シャペロンの生成を抑えるのかを調べ、より良い抗がん剤を開発するためにこれを化学的に合成する研究を行いました。ベルシペロスタチンは非常に複雑な構造をもつ物質ですが、その中でも特徴的な部分を合成することに成功し、化学や医学の発展に役立ちました。ガンは先進国における三大死因の一つであり、医学が発展した今日でもその治療は困難を極める。したがって有効かつ安全な新規治療法の開発が望まれている。本研究ではガンの仕組みを分子レベルで解明しその根源から治療を行う分子標的治療薬を開発するため、その第一段階となる有機化学的研究を実施している。固形ガンは治療が困難なガンのひとつであるが、特殊な環境に適応するため種々のストレスに対する耐性を獲得している。このなかでも重量な役割を果たしていると考えられているのが分子シャペロンGRP78である。本研究ではガン細胞でのGRP78の誘導を阻害する化合物、versipelostatin(VST) Aに着目し、その化学合成および構造活性相関研究を通じてどのように活性が発現するのかを調べ、またより有用な活性を有する物質の創製を目的とし、3年間での本化合物アグリコン部の全合成を目指している。本研究において合成の標的としたVST Aは分子量約1100からなる複雑な構造を持った化合物である。その特徴としてスピロテトロン酸部分やオクタリン環などの特徴的な構造を含む17員環化合物であり、これにさらにジギトキソースを含む三糖が結合している点があげられる。本研究グループではVSTアグリコンの合成に際して、3つのセグメントに分割して合成した後に最終的に結合形成を行う集約的合成法を採用している。平成23年度までにこのうち二つのセグメントの合成を完了していることから、平成24年度には残る左側ユニット(C-10-C21)部分の合成等の実験をを計画した。平成24年度の研究実績として、計画通りVST Aの左側、糖鎖結合部位を不斉転写を伴う[2,3]-Wittig転位反応などを用いて合成することに成功し、VST合成に必要となるすべてのセグメントを合成することに成功した。本研究ではガンの仕組みを分子レベルで解明しその根源から治療を行う分子標的治療薬を開発するためその第一段階となる有機化学的研究を実施している。今回合成研究の標的としたVST Aは分子量約1100からなる複雑な構造を持った化合物である。筆者らは本化合物を合成するにあたり、VSTアグリコンを3つのセグメントに分割して合成した後に最終的に結合形成を行う集約的合成法を採用している。平成24年度までにこれらの各セグメントの合成法の開発に成功しており、平成25年度にはこれらの連結実験によるVSTアグリコンの合成を計画した。平成25年度の実績として、天然型の立体化学を有するこれらすべてのユニットを合成することに成功した。VSTアグリコンの合成には至っていないものの、VSTのC10-C21を除く部分の骨格を構築することに初めて成功し、VST合成における極めて重要な知見を得るに至った。

このなかでも重量な役割を果たしていると考えられているのが分子シャペロンGRP78である。本研究ではガン細胞でのGRP78の誘導を阻害する化合物、versipelostatin(VST) Aに着目し、その化学合成および構造活性相関研究を通じてどのように活性が発現するのかを調べ、またより有用な活性を有する物質の創製を目的とし、3年間での本化合物アグリコン部の全合成を目指している。今回合成研究の標的としたVST Aは分子量約1100からなる複雑な構造を持った化合物である。その特徴としてスピロテトロン酸部分やオクタリン環などの特徴的な構造を含む17員環化合物であり、これにさらにジギトキソースを含む三糖が結合している点があげられる。筆者らは本化合物を合成するにあたり、VSTアグリコンを3つのセグメントに分割して合成した後に最終的に結合形成を行う集約的合成法を採用している。実施計画において平成23年度にはこのうちオクタリン前駆部分の合成等の実験をを計画した。平成23年度の研究実績として、計画通りVST Aのオクタリン前駆部位をホウ素エノラートを用いた不斉アルドール反応およびE-選択的Wittig反応などを用いて合成することに成功した。また、閉環反応のモデル実験としてのオレフィンメタセシス反応を用いた25員環形成反応や、スピロテトロン酸部分と他ユニットとの結合形成に関する知見も得ることができた。本研究の進度は、平成23年度終了時点で当初の計画と現在の進展状況が一致していることから順調に進展しているものと思われる。平成24年度における本研究の進度は当初の実施計画どおりであり、平成24年度においても当初の計画通りの進展が見込まれる。これまでの研究によりVST Aの合成に必要な3つのセグメントの合成法の開発に成功した。従って本年度はまずはこれらの各セグメントをVSTアグリコンの合成に必要な量、具体的にはグラムスケールにて供給することが急務である。続いて各セグメントの連結と環形成を経てVSTアグリコンの合成を達成する計画である。なおVSTの分子シャペロン誘導阻害活性の発現には、三糖からなる側鎖とのグリコシル結合が必須であるため、VSTアグリコンはグリコシル化に供することが可能な部分保護体として合成する予定である。本研究では平成23年度には当初の実施計画にしたがって研究を遂行できたことから、平成24年度においても当初の計画通りの進展が見込まれる。すなわちVST Aの合成に必要となるもう一つのセグメントである糖鎖結合部位の合成を達成する計画である。また、モデル化合物などを用いてマクロ環やオクタリン環の形成といったVSTの骨格形成における重要な反応に関する実験を実施し、知見を得る計画である。本研究で合成ターゲットとしているVSTは低分子化合物としては非常に大きな分子量を有する。このため合成に多段階を必要とするとともに、多量の合成中間体の供給が必要となり、必然的に初発原料や合成初期段階に要する試薬の量が多くなる。したがって平成24年どの研究費については必要な試薬代を中心に支出する計画である。
ドイツ語圏における極右主義に関する研究

統一後、ドイツ人の外国人に対する寛容さが減ったと言われる。本研究では様々な極右事件に関する資料を収集し、極右暴力事件の実態を解明しながら、この最終的な目標に関する分析を行った。1998年のフランクフルト書籍見本市におけるマルティン・ヴァルザーの演説は、統一後のドイツの変化を象徴する事例であると言える。極右暴力事件そのものに関しては、統一後、劇的に増えた。統一前の1980年代と比較すると何倍にも増加している。しかし、1993年をピークにして1994年には、劇的に減少した。その結果、ボンのドイツ連邦政府を始め関係当局は一過性の減少であると胸をなでおろした。連邦憲法擁護庁の「憲法擁護報告」は、その後も、全体として減少傾向が続いているとしている。しかし、子細に憲法擁護報告書を検討すると、違った結果に到達する。憲法擁護報告書は器物損壊事件を1996年まで暴力事件に分類してきた。ところが、1997年の報告書からは別の方式を採用している。つまり、もはや器物損壊を暴力事件として取り扱っていない。従来方式で、つまり一貫性のある統計処理にもどると、暴力事件は減少傾向にあるとはいえない。特に、1998年は大副に増えていることが分かる。極右暴力を含め、ドイツの状況は関係者が安堵できる状況からは程遠いのである。ドイツ語圏(ドイツ、オーストリア、スイス)の極右現象のうち、特にドイツ連邦共和国を中心に研究をした。ドイツ統一後の極右暴力の劇的増加は80年代から極右を観察してきた専門家にとっても予想外であったが、一連の極右事件は一つの歴史上のエピソードか、それとも新しい右翼的ナショナルな動きとして理解すべきか。分析の結果、後者であること、すなわち、統一後、ドイツ人の意識に大きな変化が起こり、それが定着し始めていることが判明した。かつてに比べて、ドイツ人の人権意識が後退し、ナショナルな要素が政治を動かし始めている。異質なものに対する寛容度が減少し、その結果、外国人にとって、とりわけ非欧米人にとって住みにくい国になってきている。激しい極右暴力は今日、確かに減少したが、極右事件の件数は依然として統一前とは比較にならないほど頻発している。しかし、事件をマスメディアが取り上げない傾向にあるので、一般には極右事件は劇的に減少し、ドイツ社会は正常化したとの印象が生まれている。このような中で、昨年、ドイツ連邦軍内における極右事件が次々に発覚した。現在、連邦議会に特別委員会設置され調査が開始されているが、驚いたことにこの3月、連邦軍大学の歴史学大学教授が極右グループ主催の会で講演した。ある新聞の報道で明るみに出たが、進歩的と言われる日刊紙も含め、大半の新聞はこのことを報道しなかった。また、さらに例をあげれば、今年始めには、体制批判的言われている作家がCSUの党大会に招かれている。ところが、ジャーナリズムはこのことを殆ど問題にしない。このような事実はドイツが変質したとの印象を強める。今後の研究において、この変質の原因を多面的に徹底的に究明する必要がある。1.極右犯罪の現状:この2年間、再び増加に転じており、1997年は11,720件で、前年に比べて大幅に増加している(1996年:8,730)。そのうち暴力犯罪は791件(前年:624)。すなわち、極右犯罪は前年比実に34%増、その暴力犯罪は27%増である。暴力犯罪以外の極右犯罪は、その大半が禁止された文書の配布とか、憲法に反する組織の記章を使用した犯罪である。ただ、政治の道具として暴力を考えている極右は少ない。現状では国民の支持がテロでは得られないことを知っているからである。2.極右主義はとりわけドイツ東部において顕著である。若者の間に相当浸透している。2月に起こったブランデンブルク州での外国人殺害事件は、今日の東部を象徴する事件であるとの見方もある。

また、ザクセン・アンハルト州では、極右が1998年4月から州議会に進出しているが、これはこの州のイメージを傷つけ、海外の投資家の間に「極右に対する不安が」起こり、州はそれを打ち消すのに苦労している。3.極右に対する知識人・作家などの姿勢:知識人の「ホロコーストの記念碑」問題に対する態度やドイツの過去に対する作家Walserの発言などには、かつてドイツ人には見られないような苛立ちが感じられる。これが何らかの前兆なのか、慎重に観察・分析する必要がある。4.全体的には昨年の選挙で分かるように、現在のドイツでは極右を拒否する姿勢が強い。しかし、分析には慎重さが必要。現在の「赤緑政権」が、前政権の施策をどの程度一新し、社会福祉などの新しい政策を打ち出せるか、失業問題をいかに解決できるか。これはドイツの今後を占う重要な材料である。
姉妹染色分体合着制御機構の解明を目指した新規遺伝子の同定、解析

本研究では姉妹染色分体合着制御機構の解明を目的とし、そのために姉妹染色分体合着制御にかかわる新規遺伝子の同定、解析を行っている。今年度は昨年度の研究より得られた、姉妹染色分体の分離に障害を示していると考えられる変異株の中の一つ、ts858株についてより詳細な解析を行った。ts858変異原遺伝子は広く種間で保存されたタンパク質をコードしており、そのタンパク質の機能については不明であった。光学顕微鏡や電子顕微鏡による観察により、ts858株ではM期紡錘体の形態に顕著な異常がみられ、単一の紡錘体極から複数の紡錘体が形成されたものや、紡錘体極と接続していない紡錘体末端が観察された。そこで、M期紡錘体の状態を監視しているM期紡錘体チェックポイント機構とこの遺伝子の機能の関連を調べるために遺伝学的解析を行った。ts858変異遺伝子とM期紡錘体チェックポイント遺伝子mad2遺伝子欠損変異との二重変異株を作成したところ、この株は生存可能であり、制限温度下での表現型が変化した。脱凝縮した染色体が多数確認されたため、ts858株ではM期紡錘体チェックポイント機構の活性化が起きていたものと考えられる。ただし、脱凝縮した核の大多数は1核もしくは異常に近接した2核であったため、この二重変異株ではM期後期における染色体の分配移動が正常に行われていないと考えられた。これらの観察は紡錘体、および紡錘極体の運動に関係するモータータンパク質の欠損株の表現型に似ていた。電子顕微鏡による観察では紡錘極体の大きさには顕著な異常が見られなかったことや、ts858株は紡錘体の複製が行われるS期ではなく、M期に生存率が低下したことから、ts858変異株変異原因遺伝子はM期での紡錘極体分離段階特異的に重要な機能を果たしていると考えられる。現在に至るまでに、制限温度下での表現型が既知である、新規に作成された1025株からなる高温感受性変異株のライブラリーより、姉妹染色分体合着制御機構に異常を示していると考えられる株10株を選び出した。これらの株に対して、高温感受性を抑制するゲノム断片を分裂酵母ゲノム断片ライブラリー中より取得し、さらに既知の遺伝子座位と変位原因遺伝子との遺伝学的距離の解析によって、6株の原因遺伝子の同定が完了した。他の株については同定作業が継続中であるが、不稔性、形質転換効率の問題から、やや作業が困難である。同定された遺伝子はそれぞれ、gtb1^+(γ-tubulin)(2株)、nuc1^+(RNA polymerase l)、rae1^+/cut21^+(mRNA exportに関与)、cut20^+(APC/cyclosomeの構成因子)、および、機能未知の新規遺伝子であった。この、機能未知の遺伝子変異株(ts858)について詳しい解析を行った。ts858株は制限温度下で姉妹染色分体の分離に障害を示していると考えられる凝縮した染色体の固まりを示し、この時、M期紡錘体の形態に顕著な異常を示した。単一の紡錘体極から複数の紡錘体が形成されたものや、紡錘体末端が紡錘体極と接続していないものが観察された。また、同時に、核膜の形態にも異常が観察された。これらの現象は、電子顕微鏡による観察によっても確認された。これらの観察と、窒素源枯渇によるG1期からの同調培養を制限温度下で行うと、ts858株はM期を通過後に生存率が低下することなどから、ts858株ではM期における紡錘体極の分離に異常が生じているのではないかと考えている。

これらの観察は紡錘体、および紡錘極体の運動に関係するモータータンパク質の欠損株の表現型に似ていた。電子顕微鏡による観察では紡錘極体の大きさには顕著な異常が見られなかったことや、ts858株は紡錘体の複製が行われるS期ではなく、M期に生存率が低下したことから、ts858変異株変異原因遺伝子はM期での紡錘極体分離段階特異的に重要な機能を果たしていると考えられる。
細胞内でのクロスリンク過程を可視化する発蛍光型光親和性標識基の開発

単分子で白色の蛍光を示す新規蛍光分子を開発した。この単分子白色蛍光分子は約数分の光照射によって分解し、青色蛍光を示す分子へと変換されたことから、本蛍光分子はタンパク質の標識化の過程を蛍光色の変化で検知できる有用な光親和性標識基となることが示唆された。また、黄色や赤色を示すコンパクトな蛍光分子、チオールのみと特異的に反応し、蛍光を大きく増大するチオールセンサーの開発にも成功した。前年度までに、1,3a,6a-トリアザペンタレン(TAP)の光照射による分解性を精査し、TAPにアルキル基を直接連結した誘導体が光照射による分解が最も早いことを見い出した。現在、TAPの光分解によって生じるナイトレンを補足する検討を行っている。一方、光照射に最も安定な官能基がケトンであることを見いだし、ケトンで連結したTAP誘導体を最小の蛍光標識試薬として展開した。すなわち、チオールのみが選択的に付加反応を起こすビニルケトン型のTAP誘導体(TAP-VK1)を開発し、TAP-VK1が種々のチオールと高収率で反応することを明らかにした。また、TAP-VK1は、チオールが付加することによって、その蛍光強度が10倍以上に増強されることから、標識化が進行したことを蛍光で確認できる優れたチオール標識基であることが分かった。また、TAP-VK1は水中でも種々のチオール残基と収率よく反応し、システインやグルタチオンを水中で効率良く標識できた。さらに、システインを有する8残基ぺプチドにおいても、システイン残基のみを定量的に標識することが明らかとなった。現在、この新規チオール標識試薬TAP-VK1を用いてタンパク質および機能性ペプチドの標識化を検討中である。前年度までに、独自の蛍光分子1,3a,6a-triazapentalene (TAP)を基盤として、最もコンパクトなチオール標識試薬TAP-VK1を開発した。今年度では、TAP-VK1の一般性とチオール特異性の精査を行い、TAP-VK1が幅広い基質適用範囲を有すること、また分子内に様々な官能基を有する基質においてもチオールのみを選択的に標識できることを明らかにした。さらに、TAP-VK1はチオール基と反応した後に蛍光を大幅に増強させることから、チオールセンサーとしての機能も有していることが明らかとなった。この性質を利用して、細胞内での染色実験や気体に含まれるチオール成分の検出などにも適用可能であることを明らかにした。一方、光照射によりナイトレンを発生させるTAPの誘導体探索を引き続き行った。その結果、ナフタレン環に直結したTAPが、光照射により容易にナイトレンを生じることが明らかとなった。容易にナイトレンを生じる基質は、365nmの光照射により白色蛍光を示した。すなわち、白色蛍光体は、424 nmと576 nmの二つの蛍光極大を有しており、これらの蛍光が可視光領域をカバーしているため白色となる。このうち、576 nmの蛍光は連続的な光照射と共に消失し、424 nmの蛍光極大を持つ化合物へと収束した。以上より、白色蛍光から青色蛍光への変化を追跡することで、ナイトレンの発生を肉眼で観測できる光親和性標識基となることが示唆された。今後は、ナフタレン直結TAPから生じたナイトレンを他の分子で補足することが可能かについて検証を行う予定である。昨年度までに、アルキル基で連結した1,3a,6a-トリアザペンタレン(TAP)誘導体が光照射による分解が最も早いことを見い出している。その一方、本研究課題の検討からビニルケトン型の安定な新規蛍光標識基が開発されたため、前年度ではこのチオール標識試薬の開発に重点が置かれた。これはビニルケトン型のチオール標識基(TAP-VK1)が極めて興味深い蛍光特性を示していたために、いち早くその一般性と基質適用範囲を調べる必要があったためである。既に、TAP-VK1の蛍光特性や基質適用範囲は明らかとなっており、また生体機能分子の標識へと展開もしていることから、今年度では、再度ベンゼン環直結型のTAPとアルキル基で連結させたTAPを共存させたハイブリット型蛍光標識の作製を試みる。有機合成化学研究計画に則り、今年度中にハイブリット型光親和性標識基の合成を達成する。ついで、合成した発蛍光型光親和性標識基が実際にタンパク質とのクロスリンクに適用可能であるかを確かめる。受容体が既知のcolcemidおよびcholic acidにTAP型標識基を導入し、標的受容体を直接的・選択的に標識できるかについて検証を行う。また、これと平行して、新たに見いだされたTAP-VK1を種々の機能性生体分子に導入し、実際に生きた細胞内での挙動追跡に適用可能かについても検討を行う。この検討は、TAP-VK1を導入した生体機能分子を共同研究先に提供することによって行われるため、本来のクロスリンク試薬の開発には支障をきたさずに進行できる。繰越分については、次年度の開始時期において迅速に使用可能であるため、4月に使用する消耗品等に用いた。
介護職員のチームケアを阻害する組織行動学的要因および、介護学的要因

本研究は、介護サービス現場において報告されている、介護職員の他職員との「ケアの考え方」の違いに注目し、その具体的内容を捉えるとともに、そのことが、介護現場に肯定的な「成果」をもたらしているのか否かについて、組織論のコンフリクト理論の観点から検討することを目的としたものであった。調査方法はインタビュー法を用い、その対象は、介護サービス現場においてリーダー的な役割を担っている(担っていた)者であり、介護の方法や考え方を巡って職員同士が対立した職場での勤務経験をもつ者とした。有意抽出した結果、16名から協力が得られた。質的分析を行った結果、「ケアの考え方」を巡るコンフリクトによって、良い「成果」を得たとした職場には、以下の共通点があることが示唆された。1)コンフリクトの内容として、「身体拘束を外していくかどうか」、「ナースコールを頻回に押す利用者にその都度対応するかどうか」等、提供するケアの方向性が明確にされやすいものが多い傾向にあった。2)コンフリクトによる良い「成果」の内容として、「視野の広がり」や「生活時間の個別化」、「行動制限しない」等、職員の成長および、利用者個々に応じたケアの実現に関するものが語られた。3)コンフリクトが起こった際に、リーダーが、意図的に場を設定して職員皆の意見を引き出すともに、「リレーションシップ・コンフリクト」を高めない働きかけを行い、「タスク・コンフリクト」として活用していた。また、介護職員として利用者を主体において考える視点に立ち戻らせる働きかけを行うことによって、職員間の「価値の一致」を創りだそうとしていた。介護サービス現場のなかでのコンフリクトが、職員の成長やサービスの質的向上において有用であったことや、その際の条件が示唆されたことは、これからの介護サービスの発展を図っていく上において意義深い結果と考えられる。組織論におけるコンフリクト理論を活用することにより、研究目的がさらに焦点化され、そこから得られた結果も介護サービス現場や介護福祉学・社会福祉学のみならず、コンフリクト研究に対しても一定の知見の貢献に資することができたと考える。したがって、「当初の計画以上に発展した」と評価した。今後は、本研究から示された結果を基にした量的調査を行い、結果の信頼性・妥当性を高めていくことが必要である。わが国においては質の高い介護サービスの提供が期待され、それを担う人材とは専門的な知識を備えるとともに、実践を通じて成長・成熟していくことが重要である。ところが、他職員と「ケアの考え方が合わない」ことによる離職実態等、職場のなかでの「ケアの考え方」の違いにより実践者としての成長、ひいては、より良い介護実践がうまく行われていない可能性が考えられる。コンフリクト研究においては、従業員同士の意見や考え方の違いとは、組織の適切なマネジメントにより従業員の成長やパフォーマンスと肯定的な関連があることが明らかにされているが、こうした可能性も含めて、介護職場における「ケアの考え方」の違いとはこれまで深めて検討されてこなかった。そこで、本研究は、高齢者介護職場内の職員同士の「ケアの考え方」の違いに焦点をあて、その具体的内容、そのことによる職員の成長やより良い介護実践の可能性、それらの背景等について検討を行うこととした。平成23年度は、6名の介護職員(介護職経験者を含む)に「『ケアの考え方』が合わない」経験に関する面接調査を行い、以下の可能性が示唆された。1、「ケアの考え方」の違いの具体的内容として、利用者の自立支援や尊厳の尊重に関する違い、省察しながら仕事するかどうかの違い、業務を効率的に手早くやるかどうかの違い等が挙げられた。2、対象者は「合わない」と感じたとしても「何も言わなかった」傾向にあり、この背景には、職場での「言いにくさ」を感じていたことがあった。また、「合わない」ことを相手個人に伝えた場合には、言い争った等の感情的な対立となり、ストレスや相手への否定的な感情を高めていた。3、一方、「合わない」と感じたことを職場で共有し、それぞれの見解を述べて話し合いを行った結果、職員がそれまでの介護実践を再考するきっかけになり、問題解決につながった場合もあった。

3)コンフリクトが起こった際に、リーダーが、意図的に場を設定して職員皆の意見を引き出すともに、「リレーションシップ・コンフリクト」を高めない働きかけを行い、「タスク・コンフリクト」として活用していた。また、介護職員として利用者を主体において考える視点に立ち戻らせる働きかけを行うことによって、職員間の「価値の一致」を創りだそうとしていた。介護サービス現場のなかでのコンフリクトが、職員の成長やサービスの質的向上において有用であったことや、その際の条件が示唆されたことは、これからの介護サービスの発展を図っていく上において意義深い結果と考えられる。当初の計画では、平成23年度は20名程度への面接調査を予定していたが、具体的な仮説の生成および、質問項目を精査するために、6名の対象者に複数回の調査を行った。それらを踏まえて、平成24年度は、20名程度を目標に調査する予定である。本テーマをより焦点化して考えていくうえで、平成23年度の過程は、必要なものであったことから、研究全般としては、おおむね順調に進展していると考える。組織論におけるコンフリクト理論を活用することにより、研究目的がさらに焦点化され、そこから得られた結果も介護サービス現場や介護福祉学・社会福祉学のみならず、コンフリクト研究に対しても一定の知見の貢献に資することができたと考える。したがって、「当初の計画以上に発展した」と評価した。平成23年度に得られた知見を基に、質問項目等を修正・精査し、面接調査を継続する。職場特性の観点からも本研究テーマを検討することから、平成24年度は、職場内での「ケアの考え方」の違いを通じて、職員が成長し、より良い介護実践がなされた職場での勤務経験を有する者に、その経験や背景等について調査を行うことを予定している。今後は、本研究から示された結果を基にした量的調査を行い、結果の信頼性・妥当性を高めていくことが必要である。
小児の腹膜硬化症におけるインテグリンの役割の解明

腹膜硬化症モデルラットで腹膜の細胞外基質蛋白(ECM)の蓄積とともに各種インテグリンの発現が増強した。Tumor growthfactor-β(TGF-β)で培養線維芽細胞を刺激するとECMの増加とともにインテグリンの発現が増強した。以上よりTGF-βにより誘導される腹膜線維芽細胞のインテグリンの発現増強が異常なECM再構築などに関与し、腹膜硬化症の発症・進展に関連することが示唆された。1)腹膜硬化症モデルラットでの組織学的検討Sprague-Dawley(SD)ラットに0.1%クロルヘキシジン+15%エタノールを1週間に3回腹腔内投与することによって腹膜硬化症モデルを作成した。コントロール群へはオリーブオイルを腹腔内投与した。PAS染色で、エタノール注入群で腹膜中皮細胞の剥離や腹膜中皮下結合織の肥厚を認めた。免疫組織染色学的検討により、インテグリンの発現増強に伴って、コラーゲンやファイブロネクチンの細胞外基質蛋白の増加や炎症細胞浸潤、細胞増殖の指標であるPCNAやcyclin関連蛋白の発現増加が認められた。2)ラット腹膜硬化症モデルでのインテグリンの発現解析腹膜硬化症モデルラットから採取した腹膜組織でのインテグリンの発現をウェスターンブロット法、リアルタイムPCR法を用いて解析したところ腹膜硬化症の進行とともにインテグリンの発現も増強した。TGFβ、ECM蛋白、間葉系のマーカーであるα-smooth muscle actinの発現も同様に増強していた。3)培養中皮細胞、培養線維芽細胞を用いたインテグリンの発現解析TGF-β刺激したところフローサイトメトリー、免疫沈降法でインテグリンの発現増強が認められた。以上から組織線維化に関連するサイトカインTGF-β刺激による中皮細胞・線維芽細胞のインテグリン増強した表現型への変化が腹膜硬化症の進展に関連していると考えられた。被嚢性腹膜硬化症(EPS)の発症は透析効率の低下とさらにイレウスなど重篤な合併を引き起こし腹膜透析継続ができなくなる。小児の腹膜透析てもEPSを発症することがあり、その病態解明や治療方法の検討は重要てある。EPSは漫性炎症による腹膜中皮細胞なとの腹膜構成細胞の増殖、細胞外基質蛋白(ECM)の産生亢進を介して腹膜肥厚が起こり、また腹膜構成細胞の接着機能亢進により癒着を来たすものと考えられている。一方細胞外基質受容体のインテグリンはECMへの細胞接着、ECMからの情報伝達及び細胞増殖・細胞機能の変化に関与する。腹膜線維化の過程てのインテグリンの役割は不明であり、これを明らかにするため腹膜硬化症動物モデルを作成し、インテグリンの発現と役割を検討した。1.エタノールを腹腔内投与して作成したEPSモデルラットては腹膜にECM蛋白か増加し、炎症細胞の浸潤が見られた。ECMの蓄積とともに各種インテグリンの発現か増強し、細胞接着斑蛋白も増加した。TGF-βにより誘導される腹膜中皮細胞のインテグリンの発現増強が異常なECMリモデリングや細胞増殖に関与し、EPS発症に関連することが示唆された。今後はさらにベクターを用いたインテグリン過剰発現実験での腹膜中皮細胞のECM蓄積状況や細胞接着能の変化などを検討し、インテグリンのEPS発症における役割を明らかにしていく。
有機リン殺虫剤による脂質代謝かく乱：生殖・神経発達への新奇標的の寄与

作物保護や衛生害虫駆除に汎用される有機リン系(OP)殺虫剤は、神経のアセチルコリンエステラーゼ(AchE)をリン酸化阻害し、神経中毒症状を誘起する。近年、OP殺虫剤がAchE同様の触媒構造をもつ酵素にも作用することが分かってきた。中でも、生殖機能調節や脳の高次機能制御等に関与する脂質分解酵素の阻害が、OP殺虫剤による精子毒性と神経発達毒性の原因であることが動物実験で明らかになってきた。そこで本研究では、“動物実験で観察されたOP殺虫剤による精子毒性と神経発達毒性が、実際にヒトでも観察されるか?"に焦点を当てて研究を展開する。
新規NASH誘導モデルマウスを用いたGPR43によるNASH発症抑制の検討

本研究では、新たに開発したNASHモデル動物を用いて動物実験を実施する。NASHモデル動物は、6週齢の雄性C57BL/6マウスにgold-thioglucose(GTG) 0.2mg/kgを腹腔内投与することで過食を誘発し、さらに高脂肪高ショ糖食(HF/HSD)による飼育を行うことによって作成する。肥満、インスリン抵抗性に加え、肝における脂肪沈着、肝細胞の風船様腫大、炎症と線維化の出現を認めた場合NASH発症と判断する(Matteoni分類による組織学的評価)。GTG投与群では非投与群と比較して過食、体重増加を認め、HF/HSD投与にてさらに体重増加の加速を認めた。GTG投与+HF/HSD投与にて明らかなインスリン抵抗性の出現も認め、投与開始24週間後のマウスにおいてNASH発症(肝における脂肪沈着、肝細胞の風船様腫大、炎症と線維化の出現)を確認した。NASHモデル動物の作成が予定していたよりも遅れてしまったため、計画が全体的に遅れている。GTG投与後の過食誘導などが上手くいかない個体を認めておりGTG投与量の調整を行っている。また、24週間と長期間の投与期間を設定しているため、解剖後の評価に至っていない。平成31年度に以下の123、平成32年度に234の評価を行う。1GTG投与による過食を誘発したC57BL/6マウスを高脂肪高蔗糖食にて飼育することによりNASHモデルマウスの作成を引き続き行う。2短鎖脂肪酸によってNASHの発症が抑制されるか評価する。GTG投与とHF/HSD飼育を開始する6週齢より短鎖脂肪酸(酢酸塩または酪酸塩)の経口投与を開始し、24週間後に解剖を行い、体重・摂餌量、耐糖能、血清AST、ALT、T-CHO、TG、HDL-C、LDL-Cの測定、内臓脂肪重量、肝重量、肝臓における炎症マーカー(TNFα、MCP1など)や線維化マーカー(TGFb1、Col1a1、αSMAなど)、肝臓の形態学的な評価、星細胞の老化の評価、肝腫瘍発生の評価を行う。3すでに形成されたNASHの進展や、肝腫瘍発生が短鎖脂肪酸投与にて抑制されるか評価する。短鎖脂肪酸の経口投与を14週齢または30週齢から開始し、4ヶ月から1年後まで長期間飼育し検討する。評価項目は2と同様とする。4短鎖脂肪酸によるNASHへの進展抑制効果がGPR43依存性であるか評価する。GPR43ノックアウトマウスにNASHモデル動物と同様にGTG投与とHF/HSD飼育を行い、短鎖脂肪酸によるNASH進展抑制効果が消失することを確認する。評価項目は2と同様である。次年度使用額が発生したが、少額であり使用計画に大きな変更はない。
ダスト・トレイル理論による流星群と母彗星-小惑星活動史の研究

流星群を生み出す母天体である彗星あるいは小惑星の活動史を、流星群の活動から推定する新しい方法を確立し、いくつかの実例について研究を行った。また、枯渇彗星の可能性のある近地球小惑星の中から、既知の流星群と軌道が一致する天体を抽出し研究した。特に2003WY25とほうおう座流星群について研究し、この小惑星が枯渇彗星であることを明らかにし、その上で19世紀には彗星活動が少なくなった活動史を、実際の観測を踏まえて明らかにした。流星群の活動から、母天体である彗星あるいは小惑星の活動史を解明することを目的とし、初年度は枯渇彗星の可能性のある近地球小惑星の中から、地球に接近するものや、既知の流星群と軌道が一致するような天体をピックアップすることに注力した。この中では複数個の候補を見いだすことに成功した。また、過去に彗星活動があったと仮定した上でダスト・トレイル理論(彗星から流星体が近日点通過毎に放出され、それらがそれぞれの塵の流れ、すなわちダスト・トレイルを形成するという理論)を適用し、地球への流星群の活動の強弱を理論計算し、その結果を実際の観測や過去の流星群観測記録と照合することで、当該天体の過去の彗星活動を探る手段を探った。例としては、周期彗星であるジャコビニ・ジンナー彗星とジャコビニ流星群の関連を探り、その彗星の活動度と流星雨の規模との間に相関があることを見いだした。さらに翌年度から流星の光学観測に用いるため、増倍管を利用したシステムに代わる、高感度・高時間分解能をもつ光学ビデオカメラシステムをくみ上げることができた。次年度では、このシステムを利用していくつかの注目する流星群について観測を行う予定である。流星群の活動から、母天体である彗星あるいは小惑星の活動史を解明することを目的とし、初年度に引き続き、枯渇彗星の可能性のある近地球小惑星の中から、地球に接近するものや、既知の流星群と軌道が一致するような天体をピックアップしった。この中の複数個の候補について、詳細な計算を行った。また、過去に彗星活動があったと仮定した上でダスト・トレイル理論(彗星から流星体が近日点通過毎に放出され、それらがそれぞれの塵の流れ、すなわちダスト・トレイルを形成するという理論)を適用し、地球への流星群の活動の強弱を理論計算し、その結果を実際の観測や過去の流星群の出現に関する観測記録と照合することで、当該天体の過去の彗星活動を探る手段を探った。例として、ポン・ウインネッケ彗星とその関連するポン・ウインネッケ流星群や、2003WY25(ブランペイン彗星)と関連流星群について研究した。初年度の本研究によって開発した、流星の光学観測に用いるための、増倍管を利用したシステムに代わる、高感度・高時間分解能の光学ビデオカメラ・システムを活用して、上記の計算結果から予測される、ほうおう座流星群の出現について、2008年11月にハワイ島マウナケア山の山麓で観測を行った。観測は成功し、ほうおう座流星群に関する出現についてのデータを得ることができた。最終年度には、彗星の活動度と流星雨の規模との間に相関について、およびほうおう座流星群の活動についてデータ解析を含めて研究を行う予定である。流星群の活動から、母天体である彗星あるいは小惑星の活動史を解明することを目的とし、昨年度に引き続き、枯渇彗星の可能性のある近地球小惑星の中から、地球に接近するものや、既知の流星群と軌道が一致するような天体をピックアップし、複数個の候補につき、詳細な計算を行った。例として、ボン・ウインネッケ彗星とその関連するボン・ウインネッケ流星群や、2003WY25(ブランペイン彗星)と、その関連流星群であるほうおう座流星群について研究を行い、後者は論文としてまとめている。初年度に開発した流星の光学観測に用いる、高感度・高時間分解能の光学ビデオカメラ・システムを活用し、引き続きいくつかの流星群の出現について、観測を試みたが、悪天候により昨年度ほどの成果は得られていない。2009年のしし座流星群については、別途、電波観測のデータを用いることで、ダスト・トレイル理論との整合性を調査した。これらの研究のまとめとして、彗星の活動度と流星群の規模について、ジャコビニ流星雨とジャコビニ・ジンナー彗星を例として、その手法の有効性を確認できた。
肺損傷後のリモデリングにおけるシクロオキシゲナーゼ発現の分子生物学的解析

肺の線維化は肺組織の非可逆的変化であり、炎症に引き続く治癒過程とも考えられ、進行性の場合は予後不良の因子となる。このため、肺線維化の病態解析や治療法の開発は重要な研究課題の一つである。プロスタグランディン(PG)E2は線維芽細胞増殖やコラーゲン産生を抑制し線維化に対しては抑制因子の一つと考えられている。一方、肺線維芽細胞や肺胞マクロファージ/単球からのPGE2産生はTh細胞から産生されるサイトカインで調節を受けている。これらの知見を基にPGE2産生とサイトカインの関係を解析し治療法開発の基礎的検討をおこなった。得られた結果は以下の通りである。(1)肺胞マクロファージ・単球のPGE2産生はTh1サイトカインであるIFN-γでは影響を受けなかった。一方Th2サイトカインであるIL-4,IL-10,IL-13はPGE2産生を抑制した。Th2サイトカインはCOX-2発現を抑制しシクロオキシゲナーゼ活性を低下させた。この抑制の程度はIL-4>IL-10>IL-13の順であった。また、IL-4は抗炎症作用を有するアラキドン酸代謝物である15-HETEやLipoxinなどの律速酵素15-lipoxygenase産生を増強した。従来の報告を考慮するとTh2サイトカインは線維化の過程では抗炎症に作用するが線維化に対してはむしろ増強的に作用する可能性が示唆された。また、特異的なサイトカイン産生抑制薬(FR167653)は単球・マクロファージからの炎症性サイトカイン産生を抑制するのみならず、COX-2発現を制御しPGE2産生を抑制し、新しい抗炎症薬となる可能性が示唆された。(2)ブレオマイシン肺線維症動物モデルから採取した線維芽細胞のPGE2産生能は対照に比し低下し、PGE2産生低下が線維化に関与している所見を確認した。肺の線維化は肺組織の非可逆的変化であり、組織傷害に引き続く治癒過程とも考えられ、進行性の場合は予後不良である。線維芽細胞増殖は繊維化の過程において重要な変化であり、増殖調節の解明は治療法確立のため重要である。PGE2は線維芽細胞増殖を抑制する代表的メディエーターであることより、繊維化発症の機序解明を目的とし、線維芽細胞、単球/肺胞マクロファージ(AM)からのPGE2産生をTh1,Th2様細胞産生のサイトカインによる調節の面より検討した。LPS刺激単球/AMからのPGE2産生は、COX2の発現量に依存的に増加し、その産生量はAMが単球に比し高値であった。Th2様サイトカイン(IL-4,10,13)をこの系に加えるとPGE2産生は抑制され、その程度はIL-4が最も強かった。単球に比べAMでは抑制の程度は軽度であった。一方Th1様サイトカインであるIFNγを加えてもPGE2産生に影響を与えなかった。またTh2様サイトカインはPGE産生と同様にCOX2の発現をmRNA、蛋白レベルで抑制した。これらの結果よりTh1様,Th2様細胞由来のサイトカインは単球/AMからのPGE2産生調節を介して線維芽細胞増殖に関与し線維化病態形成に重要な役割を演じている可能性が示唆された。

次に病変部の線維芽細胞のPGE2産生を含む機能変化を検討するため、ラットにブレオマイシン肺臓炎を作成し線維芽細胞採取を行い細胞株を樹立した。肺臓炎モデルから採取した線維芽細胞は対象に比べ強い増殖能を示した。肺の線維化は肺組織の非可逆的変化であり、進行性の場合は予後不良の因子となる。PGE2は線維芽細胞の増殖やコラーゲン産生を制御し線維化の過程では抑制因子として位置付けられている。線維化の機序解明及び治療法開発を目的に肺線維芽細胞、単球・マクロファージからのPGE2産生に及ぼすTh1、Th2サイトカインの影響について検討した。まt、線維化病巣に集積した線維芽細胞の機能変化をPGE2産生能の面から解析した。さらに近年開発されているサイトカイン産生抑制薬のPGE2産生に対する効果について検討した。(1)単球・マクロファージからのPGE2産主に及ぼすTh1、Th2サイトカインの影響:Th1サイトカイン(IFN-γ)はPGE2産生に影響を及ぼさなかったが、Th2サイトカイン(IL-4、IL-10、IL-13)はシクロオキシゲナーゼ(COX)-2合成を制御することによりPGE2産生を抑制した。抑制の程度は単球の方がマクロファージに比べ強く、Th2サイトカインではIL-4が最も強かった。同時にIL-4は抗炎症性アラキドン酸代謝物(15-HETE)の律速酵素である15-lipoxygenase産生を増強した。これらの結果からTh2サイトカインは炎症には抑制的に働き、線維化には促進的に作用している可能性が示唆された。(2)ブレオマイシン肺線維症モデルラット肺から得た線維芽細胞の機能変化:線維化肺から得た線維芽細胞の増殖能は亢進していた。一方PGE2産生能は対照に比べ低値であり、PGE2産生能の低下が線維化に関与している可能性が示唆された。(3)サイトカイン産生抑制薬のPGE2産生に及ぼす影響:サイトカイン産生抑制薬(FR167653)はLPS刺激単球・マクロファージのCOX-2発現を制御することでPGE2産生を抑制し、新しい抗炎症薬となる可能性が示唆された。以上、これらの結果に基づいて、サイトカイン調節の面から線維化の治療法開発を試みる。肺の線維化は炎症に引き続く治癒過程とも考えられ、進行性の場合は予後不良の因子となる。このため、肺線維化の病態解析や治療法の開発は重要な研究課題の一つである。プロスタグランディン(PG)E2は線維芽細胞増殖やコラーゲン産性を抑制し線維化に対しては抑制因子の一つと考えられている。一方、肺線維芽細胞や肺胞マクロファージ/単球からのPGE2産生はTh細胞から産生されるサイトカインで調節を受けている。我々は従来より肺線維化とPGE2について検討を進めており、肺線維症患者の肺胞マクロファージのPEG2産生能は対照に比し低下していることを報告している。これらの知見から、PGE2産生調節の機序をTh1及びTh2サイトカインの関連から検討した。結果は以下の通りである。(1)肺胞マクロファージ・単球のPGE2産生はTh1サイトカインであるIFN-γでは影響を受けなかった。一方Th2サイトカインであるIL-4,IL-10,IL-13はPGE2産生を抑制した。Th2サイトカインはCOX-2発現を抑制しシクロオキシゲナーゼ活性を低下させた。この抑制の程度はIL-4>IL-10>IL-13の順であった。