hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
網膜色素変性の遺伝的免疫学的手法を中心とした多面的解析による病態解明の試み

これらの自己抗体保持者の中には遺伝子変異をもつものもあり、遺伝的背景による色素変性と自己免疫網膜症との関連についてはさらに今後検討を要する。また、臨床面においてはGDXを用いて色素変性患者の神経節細胞層の定量的評価を行ったところ、視野障害の進行例においても神経節細胞層は保たれている可能性が示唆された。さらに現在、OCT、HRAによる自発蛍光などのデーターを蓄積中であり、遺伝的背景との相互的比較解析は今後行っていく予定である。網膜色素変性患者250名の採血を行い、優性遺伝形式の原因遺伝子について237名、劣性遺伝形式の原因遺伝子について156名までほぼ解析を終了し、34名において疾患原因候補の遺伝子変異を検出した。これらの患者の多くで血清中抗リカバリン抗体価は中等度上昇し、特に抗体価が有意に高いと思われる症例について検討すると通常の色素変性では眼底の色素沈着を伴う変性領域と視野が良く相関するのに対し、抗体価の高い症例では色素沈着領域を超える視野狭窄進行例が散見され、急速な病期進行のみられた症例等も含まれていた。このことから抗体価の高い症例では自己免疫網膜症の要素が含まれていることが推察された。これら抗体価の高い症例の中に遺伝子診断にて遺伝的背景が判明しているものもあり、変性網膜の自己蛋白に対する免疫反応が惹起され病態の進行が修飾された可能性も考えられた。また、色素変性患者の高解像度網膜光干渉断層像(OCT)と視野及び自発蛍光を総合的に解析し、正常な色素上皮機能を反映するとされる通常の自発蛍光を示す領域が、(1)OCT上で健常視細胞外節の存在を示唆する領域とほぼ一致する症例と(2)同様の健常視細胞外節存在領域の方が小さいと思われる症例があることがわかった。(1)では自発蛍光領域がほぼ一様であるのに対し、(2)では健常な視細胞外節が残存すると思われるほぼ境界領域に特に自発蛍光輝度の強い輪状領域があることが観察され、(1)では色素上皮と視細胞の変性がほぼ同時進行していると考えられるのに対し、(2)においては視細胞の変性が先行し、変性の激しい領域で色素上皮からの自発蛍光が高輝度となっている可能性が考えられた。これらは色素変性において相互依存的である「視細胞-色素上皮」コンプレックスとしての変性過程が一様でないことを示唆していると思われた。
GLUT4(糖輸送体)発現調節エレメントの分析

糖輸送体の1つであるGLUT4は、筋肉や脂肪組織に特異的に発現し、細胞内への糖の取り込みの律速段階となり、血糖の恒常性に重要な役割を果たしている。GLUT4は、様々な刺激によって発現調節を受けている。中でも、運動は筋肉におけるGLUT4の発現を増加させ、高脂肪食摂取は脂肪組織におけるインスリン抵抗性の主要な成因であるGLUT4の発現減少を引き起こす。また、運動とは逆に、下肢の除神経はGLUT4の発現を減少させる。これまでの研究により、運動及び高脂肪食の反応するシスエレメントが転写開始点から-1000-442に存在することを明らかにしている。そこで、GLUT4遺伝子上流-701bp、-551bp、-423bpを導入したトランスジェニックマウスを作成し、運動、高脂肪食に反応するシスエレメントをさらに狭い領域において同定したところ、高脂肪食及び運動に反応するシスエレメントが-701-551、-551-442に存在することがわかった。また、除神経に反応するシスエレメントが-423より下流に存在し運動とは異なることを明らかにした。次に、-551-442の領域内で、GLUT4-1:-556-527、GLUT4-2:-531-502、GLUT4-3:-506-470、GLUT4-4:-476-438のフラグメントを作成し、ゲルシフトアッセイを行った結果、GLUT4-3にスイミング運動により結合の増加する因子が存在した。また、-701-551の領域を含むフラグメントF1:-751-552を作成し、フットプリントを行った結果、-706-683と-674-652に蛋白質の結合領域が認められた。そこで、WF1:712-688、WF2:-690-650、WF3:-656-617、WF4:-621-582、WF5:-586-547のフラグメントを用いてゲルシフトアッセイを行ったところ、WF4とWF5に高脂肪食によって結合の減少する因子が存在した。これらの結果より、-506-470(GLUT4-3)、-621-582(WF4)、-586-547(WF5)に結合する因子が、GLUT4の運動による発現増加、高脂肪食による発現減少に関与している可能性が示唆された。糖輸送体の1つであるGLUT4は、筋肉や脂肪組織における糖の取り込みに重要な役割を果たしている。そこで、発現調節エレメントを明らかにする目的で、GLUT4遺伝子上流-700bp、-550bp、-423bpを導入したのトランスジェニックマウスを作成し、生理的因子による影響について検討した。

-700、-550、-423のトランスジェニックマウスに約2週間のスイミング運動を行ったところ、運動に反応するシスエレメントが-550-442にあることを明らかにした。運動とは逆にマウスの座骨神経を切除して足が動かないようにした場合に反応するシスエレメントを検討したところ、-423より下流に存在し、運動と除神経に反応するシスエレメントは異なることがわかった。また、-550-442の領域内で、GLUT4-1:-555-526、GLUT4-2:-530-501、GLUT4-3:-505-469、GLUT4-4:-475-438の4つのフラグメントを作成し、筋肉から抽出した核蛋白を用いてゲルシフト・競合アッセイを行った結果、F1とF2では弱いが、F3とF4には強く結合する特異的な蛋白質が存在することがわかった。さらに、-700のトランスジェニックマウスに高脂肪食を約3ヶ月間摂取させたところ、-700-442に高脂肪食に反応するシスエレメントが存在することがわかった。-700-442の領域内でF1:-750-551とF2:-593-394の2つのフラグメントを作成し、脂肪組織から抽出した核蛋白を用いてフットプリントを行った結果、F1のWF1:-706-681とWF2:-675-653に蛋白質の結合領域が認められた。F1を用いてゲルシフトを行ったところ、蛋白質の結合が認められ、WF1とWF2によって競合する特異的な結合であることがわかった。GLUT4は、筋肉や脂肪組織に特異的に発現し、血糖の恒常性に重要な役割を果たしている糖輸送体で、様々な因子によって発現調節を受けている。中でも、運動は筋肉におけるGLUT4の発現を増加させ、高脂肪食摂取は脂肪組織におけるインスリン抵抗性の主要な成因であるGLUT4の発現を減少させる。運動に反応するシスエレメント(-551-442)に結合している因子をゲルシフトアッセイによって解析し、運動の有無によって結合に差があるかどうかの検討を行った。また、高脂肪食に反応するシスエレメント(-701-442)をさらに狭め、その領域に結合する因子をゲルシフトアッセイによって解析した。運動に反応するシスエレメント内で、GLUT4-1:-556-527、GLUT4-2:-531-502、GLUT4-3:-506-470、GLUT4-4:-476-438の4つのフラグメントを作成し、非運動群、運動群(30分、4セットのスイミング運動を8日間)の各々のマウスの筋肉から抽出した核蛋白を用いてゲルシフトアッセイを行った。その結果、GLUT4-3にスイミング運動により結合の増加する因子が存在した。また、高脂肪食に反応するシスエレメントの同定を行った。-551ミニジーントランスジェニックマウスに高炭水化物食または高脂肪食を約4ヶ月間摂取させたところ、-551ミニジーンGLUT4の発現は変化しなかった。このことより、高脂肪食に反応するシスエレメントが-701と-551の間に存在していることがわかった。この領域内で、WF1:-712-688、WF2:-690-650、WF3:-656-617、WF4:-621-582、WF5:-586-547の5つのフラグメントを作成し、高炭水化物食群、高脂肪食群の各々のマウスの脂肪組織から抽出した核蛋白を用いてゲルシフトアッセイを行った。その結果、全てのフラグメントに蛋白質の結合が見られたがWF4とWF5に高脂肪食によって結合の減少する因子が存在した。
混合栄養性有毒渦鞭毛藻と餌生物との動的関係

伊勢湾内に設けた調査点から混合栄養性有毒渦鞭毛藻Dinophysis acuminataを採取して,その細胞の食胞内に残存する遺伝子を解析し餌生物の特定を試みた。その結果,いずれのD. acuminata細胞からも繊毛虫Mesodinium rubrumが検出された。さらに,調査点においてD. acuminataとM. rubrumの出現関係を季節的に調べたところ, D. acuminataの増減は,やはり餌生物であるM. rubrumの出現により左右されている場合があることを示し得た。なお,本研究ではD. rotundataについても,D. acuminataと同様の研究を行った。渦鞭毛藻Dinophysis属の中には下痢性貝毒を産生し,二枚貝類を毒化させる有毒種が知られている。それら有毒種の中で特に警戒を要するD. fortiiやD. acuminataをはじめとする混合栄養種では,これまでの培養実験により,いずれの種においても繊毛虫Mesodinium rubrumを餌としていることが明らかにされた。しかし,自然界においては,このM. rubrumと混合栄養性Dinophysis属との出現関係について調べられた例はない。そこで本研究課題では,高頻度の現場調査を行うとともに,現場から得られたDinophysis属細胞の食胞内に残存する遺伝子を解析して餌生物の特定を試みる。これらにより餌生物との関係から混合栄養性Dinophysis属の発生機構を解明することを目的とする。平成25年度は、三重県白塚漁港内に一調査点を設け、冬季はほぼ隔週で、春季から秋季にかけては基本的に週一回の頻度で採水調査を行った。得られた試水をブアン溶液で固定し、倒立顕微鏡によるD. acuminataとM. rubrumの観察・計数に供した。これまでの調査により、M. rubrumの細胞数が増加した後、D. acuminataの細胞数が増加し,反対にM. rubrumが減少した後にD. acuminataが減少する場合が多いことが明らかとなった。このことは、自然水域においてもD. acuminataとM. rubrumの間には捕食ー被捕食の関係が成り立っていることを示唆するものである。なお、白塚港の海水から単離したD. acuminataの食胞中遺伝子(すなわち餌生物の遺伝子)の抽出と解析を行うべく、制限酵素処理法を適用したところ成功し、M. rubrumの遺伝子が検出された。これは、自然水域のD. acuminataも餌としてM. rubrumを捕食している直接的な証拠となる。渦鞭毛藻Dinophysis属の中には下痢生貝毒を産生し、二枚貝類を毒化させる有毒種がいることが知られている。それらの有毒種の中でD. acuminataやD. fortiiをはじめとする混合栄養性種では、これまでの培養実験により、いずれの種においても繊毛虫Mesodinium rubrumを餌としていることが明らかにされた。しかし、自然界においては、Dinophyisis属とM. rubrumとの出現関係について調べられた例はほとんどない。そこで、本研究課題では、高頻度の現場調査を行うとともに、現場から得られたDinophysis属細胞の食胞内に残存する遺伝子を解析して餌生物の特定を試みる。これらにより餌生物との関係からDinophysis属の発生機構を解明することを目的とする。これまで三重県津市白塚漁港内に設けた調査点において、冬季はほぼ隔週で、春季から秋季にかけては基本的に週一回の頻度で採水調査を行った。得られた海水からD. acuminataを単離し、細胞内の食胞に残存する餌生物の遺伝子を、制限酵素を用いた処理方法で抽出・解析したところ、M. rubrumの遺伝子が検出された。さらに現場に出現した従属栄養性の有毒種であるD. rotundataの食胞中の遺伝子解析も同様の方法で行ったところ、M. rubrumの他に数種の繊毛虫の遺伝子が検出された。これらは、Dinophysis属の餌生物が現場で明らかになった初めての結果となる。また試水の検鏡により、D. acuminataならびにD. rotundataと、それぞれ食胞中の遺伝子解析の結果明らかとなった餌生物との間の数的増減関係を時系列で調べたところ、どちらのDinophysis属においても餌生物との間には確かに捕食ー被捕食の動的関係があることが示唆された。このことは、これらDinophysis属2種の出現はそれら判明した餌生物に依存するところが大きいことを示している。渦鞭毛藻Dinophysis属の中には下痢性貝毒を産生し,二枚貝類を毒化させる有毒種がいることが知られている。それら有毒種の中でD. acuminataやD. fortiiをはじめとする混合栄養種では,これまでの培養実験により,いずれの種においても繊毛虫Mesodinium rubrumを餌としていることが明らかにされている。しかし,自然界においては,Dinophysis属とM. rubrumとの出現関係について調べられた例はほとんどない。そこで,本研究課題では,高頻度の現場調査を行うとともに,現場から得られたDinohysis属細胞の食胞内に残存する遺伝子を解析して餌生物の特定を試みる。これらにより餌生物との関係からDinophysis属の発生機構を解明することを目指した。平成27年度も三重県津市白塚漁港内に設けた調査点において採水を行った。

得られた海水からD. acuminataを単離し,細胞内の食胞に残存する餌生物の遺伝子を,制限酵素を用いた処理方法で抽出・解析を行ったところ,これまでと同様にM. rubrumの遺伝子が検出された。さらに,現場に出現した従属栄養性の有毒種であるD. rotundataの食胞中の遺伝子も同様の方法で解析したところ,今年度は,これまで確認されていたM rubrumと数種の繊毛虫遺伝子以外の繊毛虫遺伝子もいくつか検出された。このように,現場におけるDinohysis属の餌生物が広く判明した。また平成27年度も,同調査点において行った高頻度調査により得た試水を検鏡し,D. acuminataならびにD. rotundataと,それぞれ食胞中の遺伝子解析の結果明らかとなった餌生物との間の数的関係を時系列で調べたところ,どちらのDinohysis属においても餌生物との間には確かに捕食ー被捕食の動的関係があることが示唆された。伊勢湾内に設けた調査点から混合栄養性有毒渦鞭毛藻Dinophysis acuminataを採取して,その細胞の食胞内に残存する遺伝子を解析し餌生物の特定を試みた。その結果,いずれのD. acuminata細胞からも繊毛虫Mesodinium rubrumが検出された。さらに,調査点においてD. acuminataとM. rubrumの出現関係を季節的に調べたところ, D. acuminataの増減は,やはり餌生物であるM. rubrumの出現により左右されている場合があることを示し得た。なお,本研究ではD. rotundataについても,D. acuminataと同様の研究を行った。現場調査では天候に恵まれ、予想以上の数のサンプルを採集でき、顕微鏡観察も順調に行われた。また、Dinophysis属の細胞内食胞中に残存する餌生物の遺伝子抽出と解析を行う方法がほぼ確立された。浮遊生物学これまで行ってきた現場における高頻度採水調査を継続して行い、Dinophysis属と餌となる繊毛虫の出現関係をより詳細に観察する。さらに、今後は現場水域から食胞を持つDinophyisis属細胞をできるだけ多く単離して、食胞中の遺伝子を解析することにより、餌生物の多様性についても明らかにする。なお、平成27年度後半においては、それまでに得られたデータを総合的に取りまとめ、餌生物との関係からDinophysis属の発生機構を解明する予定である。また、Dinophyisis属の細胞内食胞中に残存する餌生物の遺伝子解析を行う方法の適用に目処がついた。これまで行ってきた現場における高頻度採水調査を継続して行ない、Dinophyisis属と餌生物となる繊毛虫の出現関係をより詳細に観察する。また、平成25年度は、Dinophyisis属の細胞内食胞中に残存する餌生物の遺伝子解析において制限酵素処理法を適用し成功したところであるが、今後はさらにブロッキング・プライマー法を用いて餌生物遺伝子の検出精度向上を試みる。
神経栄養因子によって発現誘導される転写促進因子TIS11の転写制御と核内輸送機構

これまでに神経成長因子(NGF)によって誘導される初期応答遺伝子として転写因子やサイトカイン類などをコードする遺伝子が報告されているが,申請者らはホルボールエステル(TPA)で誘導されることが知られているTIS(TPA-Induced Sequences)遺伝子群の一つであるTIS11もNGF刺激時の初期応答遺伝子の一つであることを報告している.さらに,申請者は,TIS11遺伝子の翻訳産物であるTIS11蛋白質の機能解析についても研究を進め,ごく最近,TIS11蛋白質が基本転写活性を増大させる転写促進因子であることを報告している.そこで,TIS11蛋白質は,核内へ移行して,はじめて転写調節機能を発揮することから,本研究では,TIS11の核-細胞質間輸送機構の解析を行い,TIS11が核と細胞質間をシャトルしていることを見い出した.さらに,TIS11が核-細胞質間をシャトルする場合に,TIS11の一次構造にて核内移行および核外移行に必要となるアミノ酸領域を同定し,各々のシグナル領域における必須アミノ残基を同定した.これらの知見は,TIS11の機能発現と細胞内局在に密接な関連があることを示唆している.そこで,TIS11の生理機能を解明することを目的として,TIS11に特異的に結合する蛋白質の探索を試みたところ,現時点で,TIS11結合蛋白質としてアポトーシス関連蛋白質,ユビキチン関連蛋白質,翻訳開始因子などを同定した.これら3つのTIS11結合蛋白質の発見により,TIS11は多機能性蛋白質であることが想定され,今後,TIS11とTIS11結合蛋白質との結合様式を解析し,TIS11結合蛋白質の機能からTIS11の生理機能を解明したいと考えている.私共は,ホルボールエステル(TPA)で誘導されるTIS(TPA-Induced Sequences)遺伝子群の一つであるTIS11が神経成長因子刺激時の初期応答遺伝子の一つであることを報告している.ごく最近,私共は,TIS11遺伝子の翻訳産物であるTIS11蛋白質が基本転写活性を増大させる転写促進因子であることを報告した.そこで,TIS11蛋白質は,核内へ移行して,はじめて転写調節機能を発揮することから,TIS11の核-細胞質間輸送機構を解析することは,TIS11の転写制御を理解するうえで重要な研究課題になると考えた.今回,TIS11の細胞内局在について解析を行い,以下の結果を得た.1.TIS11発現ベクターをCOS-7細胞に導入した場合,定常状態ではTIS11は核と細胞質に存在したが,leptomycin B(核外輸送担体CRM1の阻害剤)処理によって核外輸送経路を遮断すると核内に局在した.この知見は,TIS11が核と細胞質間をシャトルしていること示している.2.TIS11のZn^<2+>フィンガー領域が核内移行に必要となるシグナル領域として機能することが判明し,核内移行活性に必須となる二つのアルギニン残基が同定された.3.TIS11のN末端近傍に核外移行シグナル領域が存在し,このシグナル領域の核外移行活性はleptomycin Bにより阻害された.この知見から,TIS11は,そのN末端のシグナル領域にCRM1が結合することによって,核外輸送されることが示唆された.本研究により,TIS11の核-細胞質間輸送機構の一端を解明することができ,今後は,TIS11の核内移行に関与する輸送担体を同定するための研究を行いたいと考えている.これまでに神経成長因子(NGF)によって誘導される初期応答遺伝子として転写因子やサイトカイン類などをコードする遺伝子が報告されているが,申請者らはホルボールエステル(TPA)で誘導されることが知られているTIS(TPA-Induced Sequences)遺伝子群の一つであるTIS11もNGF刺激時の初期応答遺伝子の一つであることを報告している.さらに,申請者は,TIS11遺伝子の翻訳産物であるTIS11蛋白質の機能解析についても研究を進め,ごく最近,TIS11蛋白質が基本転写活性を増大させる転写促進因子であることを報告している.そこで,TIS11蛋白質は,核内へ移行して,はじめて転写調節機能を発揮することから,本研究では,TIS11の核-細胞質間輸送機構の解析を行い,TIS11が核と細胞質間をシャトルしていることを見い出した.さらに,TIS11が核-細胞質間をシャトルする場合に,TIS11の一次構造にて核内移行および核外移行に必要となるアミノ酸領域を同定し,各々のシグナル領域における必須アミノ残基を同定した.これらの知見は,TIS11の機能発現と細胞内局在に密接な関連があることを示唆している.そこで,TIS11の生理機能を解明することを目的として,TIS11に特異的に結合する蛋白質の探索を試みたところ,現時点で,TIS11結合蛋白質としてアポトーシス関連蛋白質,ユビキチン関連蛋白質,翻訳開始因子などを同定した.これら3つのTIS11結合蛋白質の発見により,TIS11は多機能性蛋白質であることが想定され,今後,TIS11とTIS11結合蛋白質との結合様式を解析し,TIS11結合蛋白質の機能からTIS11の生理機能を解明したいと考えている.
モンゴル諸語における語形成および言語接触に関する研究

本年度は,前年度夏季および春季のシネヘン・ブリヤート語を対象とした現地調査(於:中国内蒙古自治区呼倫貝爾市)によって得られた資料の分析を重点的におこない,さらに東京にて留学生からの聞き取り調査を夏季におこなった.昨年度の現地調査では,音韻論,形態論にかんする聞き取り調査とテキスト収集をおこなったが,テキスト収集にやや不明確な箇所があったため,東京での調査においてデータを補完した.また,音韻論,形態論にかんする聞き取り調査の成果の一部を,第127回日本言語学会大会(於:大阪市立大学)にて,「モンゴル諸語の"particle"の自立性について」と題し,口頭にて発表をおこなった.また,この成果は「モンゴル諸語の'particle'について:シネヘン・ブリヤート語の事例から」(津曲敏郎編『環北太平洋の言語』第11号(2004年発行予定)所収)として,公表を予定している.この成果は,語形成研究をおこなう際の前提となる,「語」の定義をおこなったものであり,当研究課題の枠組みを決定づける指針として有意義な成果が得られたと考える.留学生を対象とした東京での調査では,語形成法のひとつ,複合を対象として,その定義および音韻,形態,統語,意味の各側面における特徴を記述し,当該言語の複合法の概要をまとめた.そのほか,重複法,派生法に関する調査も同時におこない,一定の成果をあげることができた.また,夏季には上記調査に加え,モンゴル国ウランバートル市にて,当該研究に関連する資料収集をおこない,現地研究者からの情報提供を受けた.なお,以上の成果と,前年度の研究成果とをまとめ,刊行することを予定していたが,学位申請論文「モンゴル諸語の語形成について」として,来年度中の提出を予定している.本年度は,夏季および春季の2回,中国内蒙古自治区呼倫貝爾市にて,シネヘン・ブリヤート語および周辺のモンゴル諸語についての現地調査を重点的におこなった.現地調査では,音韻論,形態論にかんする聞き取り調査を中心に,コーパス作成のためのテキスト収集,映像資料、文献資料の収集をおこない,それぞれ一定の成果をあげることができた.音声付きのテキストと映像資料はともに,MDおよびCD-Rに収録,デジタル化することで恒久的使用に耐えられるよう処理した.また,得られた資料の一部はデータベース化し,汎用可能な体制を整えた.以上の一連の研究成果は,「シネヘン・ブリヤート語音韻体系概説」,「内モンゴル北部におけるモンゴル系諸言語比較基本語彙」(ともに津曲敏郎編『環北太平洋の言語』第10号所収)として,公表を予定している.また,夏季にはモンゴル国ウランバートル市で開催された国際モンゴル学会に出席し,現地研究者からの情報提供を受けるとともに,今後の研究方針について検討した.このほか,語形成にかんする研究の一環として,モンゴル語の名詞に接続する複数接尾辞のふるまいについての分析をおこなった.複数接尾辞の意味の差異と接続する名詞との間に,有生性の階層に沿った関係が見られることを指摘し,言語普遍的傾向が見られることを示唆した.この研究成果は「モンゴル語の複数接尾辞と名詞句階層」『言語研究』第124号(日本言語学会編,2003年11月発行予定)として,公表を予定している.本年度は,前年度夏季および春季のシネヘン・ブリヤート語を対象とした現地調査(於:中国内蒙古自治区呼倫貝爾市)によって得られた資料の分析を重点的におこない,さらに東京にて留学生からの聞き取り調査を夏季におこなった.昨年度の現地調査では,音韻論,形態論にかんする聞き取り調査とテキスト収集をおこなったが,テキスト収集にやや不明確な箇所があったため,東京での調査においてデータを補完した.また,音韻論,形態論にかんする聞き取り調査の成果の一部を,第127回日本言語学会大会(於:大阪市立大学)にて,「モンゴル諸語の"particle"の自立性について」と題し,口頭にて発表をおこなった.また,この成果は「モンゴル諸語の'particle'について:シネヘン・ブリヤート語の事例から」(津曲敏郎編『環北太平洋の言語』第11号(2004年発行予定)所収)として,公表を予定している.この成果は,語形成研究をおこなう際の前提となる,「語」の定義をおこなったものであり,当研究課題の枠組みを決定づける指針として有意義な成果が得られたと考える.留学生を対象とした東京での調査では,語形成法のひとつ,複合を対象として,その定義および音韻,形態,統語,意味の各側面における特徴を記述し,当該言語の複合法の概要をまとめた.そのほか,重複法,派生法に関する調査も同時におこない,一定の成果をあげることができた.また,夏季には上記調査に加え,モンゴル国ウランバートル市にて,当該研究に関連する資料収集をおこない,現地研究者からの情報提供を受けた.なお,以上の成果と,前年度の研究成果とをまとめ,刊行することを予定していたが,学位申請論文「モンゴル諸語の語形成について」として,来年度中の提出を予定している.
p53シグナル系を指標にした新しい放射線感受性検査の開発

癌に対する治療法として放射線照射は有効であるが、時には照射によって皮膚潰瘍や腸管破裂などを引き起こす患者がいる。現在このような放射線に対して超過敏な患者を事前に診断することはできない。本研究では照射前または照射後早期にこのような患者を診断するための検査法を開発することを目的とした。対象は抗癌剤未投与で放射線照射が予定されている術後の乳癌患者とした。このような患者から放射線前後で採血し、末梢血単核細胞の放射線による影響を検討した。照射後に皮膚障害の程度を評価したが、個々の患者で大きな相違を認めなかった。残念ながら今回対象とした患者群には放射線に高感受性の患者は含まれていなかった。末梢血のリンパ球絶対数は照射によって減少したが好中球の減少はいずれの患者でも認められなかった。興味深いことにリンパ球の放射線感受性はサブセットによって異なり、Tリンパ球はBリンパ球やNKリンパ球と比較してより高い感受性を示した。Tリンパ球の中でもCD8陽性リンパ球が最も感受性が高く、照射後は急激に減少した。照射終了12週の時点で多くの細胞は前値に回復したが、CD8陽性Tリンパ球の減少は遷延した。照射によるアポトーシス細胞の増加が予測されたが、少なくとも末梢血リンパ球の解析ではアポトーシス細胞の増加を確認できなかった。照射前後においてリンパ球のp53やp14^<ARF>、p16^<INK4A>、Hzf等のアポトーシスや細胞周期に関わる分子群のmRNA発現量を比較したが有意な変動は認められなかった。残念ながらこれらの分子群とリンパ球減少の間には有意な相関性を認めなかった。DNAに障害を受けた細胞の生死を決定するp53シグナル伝達系の解析から、放射線感受性を評価するための新しい検査法の開発を進めている。本研究の対象は、抗癌剤未投与で放射線照射が予定されている術後の乳癌患者とした。このような患者では純粋に放射線照射による影響を評価できると思われる。当該患者を担当している外科および放射線治療部と綿密に協議を重ね、当大学の学外者を含む倫理委員会に研究の申請を行い承認された。放射線が体のどの部分に照射されようとも、血液細胞は血流に乗って照射野を通過するため繰り返し少量の放射線を浴びることになる。放射線照射前および照射後は照射終了まで週に一回採血し、一般血液検査および表面マーカー検査を行い、放射線の各種リンパ球サブセットに与える影響を観察した。また単核細胞を分離し、Annexin VとPI染色の結果から、アポトーシス細胞の変動を観察している。まだ少数例での解析であるが、放射線照射による特定のリンパ球サブセットの減少やアポトーシス細胞の増加が観察されている。HzfやAT、KChk1/2などのp53をとりまく分子群の発現・変動についても検討を行うべく、単核細胞からmRNAおよびタンパクを分離し保存している。定量のための手技は確立しているため、症例が集まりしだい検討する予定である。これらの結果と、実際の放射線照射による皮膚有害反応の国際基準に基づく重症度判定との相関性から、放射線感受性検査として最も優れている指標を明らかにする。放射線照射は癌に対する有効な治療法の一つであるが、正常な組織にも影響が及ぶため、患者によっては重篤な障害を引き起こすことがある。本研究ではこのような放射線感受性の個人差を、照射開始早期から明らかにするための検査法を開発することを目的とした。このような患者では純粋に放射線照射による影響を評価することが可能である。放射線が体のどの部分に照射されようとも血液細胞は血流に乗って照射野を繰り返し通過するため、持続的に少量の放射線を浴びることになる。放射線照射前および照射終了まで週に一回採血し、放射線の血液細胞に与える影響を観察した。

また、Annexin VとPI染色の結果からアポトーシス細胞の変動を観察した。さらに、DNAに障害を受けた細胞の生死を決定しているp53シグナル伝達をとりまく分子群の発現・変動についても解析した。末梢血のリンパ球絶対数は照射によって有意に減少したが好中球の減少は認められなかった。放射線感受性はリンパ球サブセットによって異なり、Bリンパ球やNKリンパ球と比較してTリンパ球がより高い感受性を示した。Tリンパ球の中でもCD8陽性リンパ球が最も感受性が高く、照射後は急激に減少した。照射終了12週の時点で多くの細胞は前値に回復したが、CD8陽性リンパ球の減少は遷延していた。照射によるアポトーシス細胞の増加が推測されたが、少なくとも末梢血リンパ球の解析では増加を確認できなかった。現在までに照射前後におけるp53、p14^<ARF>、p16^<INK4A>およびHzf mRNA発現の定量を終えているが、照射前後による有意な変動を認めていない。今後さらに放射線照射に影響をうけると思われる分子群について検討を加える予定である。癌に対する治療法として放射線照射は有効であるが照射は正常な組織にも及ぶ。そのため患者によっては皮膚潰瘍や腸管破裂などの重篤な障害を引き起こすことがある。現在このような放射線に超過敏な患者を事前に診断することはできない。本研究では放射線感受性の個人差を照射後早期にに診断するための検査法を開発することを目的とした。対象は抗癌剤未投与で放射線照射が予定されている術後の乳癌患者とした。このような患者では放射線照射による影響を純粋に評価することができる。つまり放射線が体のどの部位に照射されようとも血液細胞は血流に乗って照射野を繰り返し通過するため、持続的に少量の放射線を浴びることになる。放射線照射前および照射終了まで週に一回採血し、放射線の血液細胞に与える影響を観察した。照射後に皮膚障害の程度を評価したが、個々の患者で大きな相違を認めなかった。残念ながら今回対象とした患者群には放射線に高感受性の患者は含まれていなかった。末梢血のリンパ球絶対数は照射によって有意に減少したが好中球の減少はいずれの患者でも認められなかった。興味深いことにリンパ球の放射線感受性はサブセットによって異なり、Tリンパ球はBリンパ球やNKリンパ球と比較してより高い感受性を示した。照射終了12週の時点で多くの細胞は前値に回復したが、CD8陽性リンパ球の減少は遷延した。照射によるアポトーシス細胞の増加が予測されたが、少なくとも末梢血リンパ球の解析ではアポトーシスの増加を確認できなかった。照射前後においてリンパ球のp53やp14^<ARF>、p16^<INK4A>、Hzf等のアポトーシスや細胞周期に関わる分子群のmRNA発現量を比較したが有意な変動は認められなかった。これらの分子群の変動を見るには照射直後に解析する必要があるよう思われた。
バイオエコノミーの社会的インパクトに関する人類学的研究

現代医療の実践の一つの社会的な帰結として、新たにバイオエコノミーと呼ぶべき領域が生み出されている。この経済は、身体の交換に際してさまざまな情動の作用が現れることを一つの特徴としている。こうした傾向は臓器移植医療にのみ当てはまるものではなく、生殖医療などさまざまな場面で共通して現れ、それぞれに特徴的な差異を作り出す。それゆえ、バイオエコノミーにおける情動の問題は、さらなる研究を必要とする重要なテーマであると思われる。平成22年度は、以下の三点について研究を進めた。(1)先行研究の検討。臓器移植医療のほか、動物実験、血液事業、生殖細胞の取引、遺伝子情報の使用に関する文書(民族誌、論文、著書、報告書、議事録等)を収集し、扱う人体資源の種類の違いによる歴史的変遷や制度の差異を比較した。そのことで、バイオエコノミーの広がりとその射程について検討した。とくに理論的枠組みに関わる先行研究については、研究動向論文を執筆して、そのなかで触れた(『生権力論の現在』勁草書房、所収)。(2)臓器不足をめぐる言説とその対応に関する検討。「臓器の移植に関する法律」の改定に伴う議論の変化や実践の変化について、これまで行ってきた調査を継続的に行った。また、英米仏において「臓器不足」の問題が重要な争点となっていることを踏まえ、臓器提供の必要性を正当化する論拠と、それによって引き起こされるコンフリクトの比較を行った。バイオエコノミーの観点から臓器移植をとらえた場合の問題点と有効な概念、今後の研究課題について論文にまとめた(『生権力論の現在』勁草書房、所収)。(3)民族誌的調査の準備と実施。カナダ・アルバータ大学を中心に、動物の社会的な利用に関する調査を行った。2月にエドモントン等に滞在し、今後の調査の打ち合わせを行ったほか、関連する文献の収集と読み込みを集中的に行った。人体の社会的利用との比較から動物の問題を扱うことで、バイオエコノミーにおける「生命」の位置づけを、人間と動物の関係性の変化と合わせて議論するための準備を行った。本研究では、現代医療の実践の一つの社会的な帰結として、新たにバイオエコノミーと呼ぶべき領域が生み出されてきていることを、特に臓器移植医療との関係で探究した。臓器のやり取りの特徴を民族誌的な観点から考察し、とりわけ、匿名の制度的条件のもとでなされる交換が、特殊な身体認識と密接に関わっていることに着目することで、匿名の交換システムが生み出す人格、身体感覚、負債の感覚などを、贈与論のモチーフとの関連で明らかにした。匿名化のプロセスは、一般に身体の脱商品化のプロセスであるとみなされているが、脱商品化は、かならずしも脱経済化を意味しない。むしろ、身体の交換に際して現れるさまざまな情動の作用が、臓器の経済を特殊なものにしていることに、積極的な意味を与える必要がある。こうした傾向は、臓器移植医療にのみ当てはまるものではなく、とりわけ生殖医療などさまざまな場面において、それぞれに特徴的な差異があるとはいえ、ある程度の共通性をともなって問題化している。こうした論点については、バイオエコノミーの特殊性とその普遍的性格をテーマにさらに精査する必要があり、今後も継続的な研究が必要とされる。本研究は、その意味で、2012年度以降になされる予定の「情動の経済」に関わる申請者の新たな研究テーマへと継承されていくこととなった。研究の成果は『文化人類学』誌や共著書において論文として発表した。
炭素-フッ素結合の新機能とその応用

1.酸化フッ化バナジウムのグラファイト層間化合物の合成と電気化学的性質過剰の酸素を含む酸化フッ化バナジウムのグラファイト層間化合物を酸化バナジウムとフッ素ガスを用いて合成した。IR、XPSスペクトル、X線回折測定より、得られた化合物は炭素層1層おきに酸化フッ化バナジウムが挿入された第2ステージで、挿入種は過剰の酸素を伴うVOF_4^-であった。IR吸収スペクトルにはVOF_3の存在を示すV=O、V-Fの伸縮振動が1080cm^<-1>、750cm^<-1>にまたC-F結合を示す吸収が1125cm^<-1>に観察された。XPS測定ではC_<1S>、F_<1S>、O_<1S>、V_<2p>スペクトルにVOF_4^-と過剰の酸素を示すピークが観察された。即ちC_<1S>スペクトルではC-C結合を示す主ピークが283.3eVに現れ、その他、C-F結合、C-O結合を示すピークが288.2eV、284.4eVに観察された。Fisスペクトルは3ケのピークに分離され、682.5eVのピークはV-F結合、684.5eVのピークはほぼイオン結合性のC-F結合にまた687.1eVのピークは半共有結合性C-F結合にそれぞれ帰属される。O_<1S>ピークの内、530.0eVのピークはV=O結合に、532.0eVのピークはC-O結合によると考えられ、更にV_<2p>3/2スペクトルでは516.0eVにV=O結合を、また517.6eVにV-F結合を示すピークが約1:3の割合で観察された。これらの結果は挿入種がVOF_3とFからなるVOF_4^-および過剰の酸素を幾分含んでいることと一致する。2.遷移金属高次フッ化物を触媒とするフッ素-グラファイト層間化合物の合成と構造AgF_3およびNiF_3を触媒としてグラファイトのフッ素化を-80°Cと室温で行い、生成物の組成、構造を調べた。AgF_3、NiF_3いずれを用いた場合でも第1ステージ第4ステージのC_4FC_<15>Fが得られた。主な生成物は第2ステージと第3ステージの混合物で組成はC_9FC_<10>Fであった。その他第2ステージはC_6F、第4ステージはC_<14>FC_<15>Fの組成をもつ化合物が得られた。シート状のパイログラファイトをホストとした第1ステージの相は1.03nmの大きなC軸周期距離を有し、イオン結合性フッ素と半共有結合性フッ素が交互に炭素層間に挿入されたBi-intercalation構造と考えられる。XPS測定により、第1ステージと第2ステージの混合物ではほぼイオン結合性のフッ素(685.6eV)、半共有結合性のフッ素(687.2eV)および共有結合性のフッ素(688.0eV)が共存し、第2ステージと第3ステージの混合物ではイオン結合性フッ素(683.3eV)、ほぼイオン結合性のフッ素(685.5eV)、半共有結合性フッ素(687.4eV)が存在することがわかった。3.炭素-フッ素複合材料の作成と電気化学的性質ニッケルメッキ浴に炭素-フッ素共有結合を有するオリゴマーを分散し、電解法によってフッ素オリゴマーとニッケルを銅基板上に共析させ、疎水性の薄膜を作成した。硫酸および食塩溶液中における電気化学的酸化により、その腐食性を調べたところ、腐食量はニッケルよりはるかに少なかった。水溶液中に懸濁したモノブロモベンゼンの還元反応は選択性を有することがわかった。O_<1S>ピークの内、530.0eVのピークはV=O結合に、532.0eVのピークはC-O結合によると考えられ、更にV_<2p>3/2

スペクトルでは516.0eVにV=O結合を、また517.6eVにV-F結合を示すピークが約1:3の割合で観察された。これらの結果は挿入種がVOF_3とFからなるVOF_4^-および過剰の酸素を幾分含んでいることと一致する。2.遷移金属高次フッ化物を触媒とするフッ素-グラファイト層間化合物の合成と構造AgF_3およびNiF_3を触媒としてグラファイトのフッ素化を-80°Cと室温で行い、生成物の組成、構造を調べた。AgF_3、NiF_3いずれを用いた場合でも第1ステージ第4ステージのC_4FC_<15>Fが得られた。主な生成物は第2ステージと第3ステージの混合物で組成はC_9FC_<10>Fであった。その他第2ステージはC_6F、第4ステージはC_<14>FC_<15>Fの組成をもつ化合物が得られた。シート状のパイログラファイトをホストとした第1ステージの相は1.03nmの大きなC軸周期距離を有し、イオン結合性フッ素と半共有結合性フッ素が交互に炭素層間に挿入されたBi-intercalation構造と考えられる。XPS測定により、第1ステージと第2ステージの混合物ではほぼイオン結合性のフッ素(685.6eV)、半共有結合性のフッ素(687.2eV)および共有結合性のフッ素(688.0eV)が共存し、第2ステージと第3ステージの混合物ではイオン結合性フッ素(683.3eV)、ほぼイオン結合性のフッ素(685.5eV)、半共有結合性フッ素(687.4eV)が存在することがわかった。3.炭素-フッ素複合材料の作成と電気化学的性質ニッケルメッキ浴に炭素-フッ素共有結合を有するオリゴマーを分散し、電解法によってフッ素オリゴマーとニッケルを銅基板上に共析させ、疎水性の薄膜を作成した。硫酸および食塩溶液中における電気化学的酸化により、その腐食性を調べたところ、腐食量はニッケルよりはるかに少なかった。水溶液中に懸濁したモノブロモベンゼンの還元反応は選択性を有することがわかった。炭素-フッ素化合物の合成、構造、化学結合、電気化学的性質について研究し、次のような結果を得た。1、フラーレン、カーボンナノチューブのフッ素化ヒフッ素化物の性質フラーレンC_<60>を室温90°Cでフッ素化した。単体フッ素のみの場合、C_<60>F_<40>C_<60>F_<45>、フォ素ガスとフッ素水素ガスの混合物の場合、C_<60>F_<42>C_<60>F_<45>、紫外線照射の場合、C_<60>F_<47>C_<60>F_<52>、塩化フッ化炭素溶媒中フッ素化した場合、C_<60>F_<27>C_<60>F_<32>が得られた。フッ素化物はすべて立方晶で指数付けされ、格子定数は1.711.77nmであった。XPS測定により炭素-フッ素結合はフッ素-グラファイト層間化合物C_2Fとフッ化黒鉛の中間的共有性を示すことがわかった。カーボンナノチューブのフッ素では室温80°Cで第1ステージC_4F、80°C100°Cで第2ステージのC_7F、500°Cでフッ化黒鉛(CF)_nが得られた。100400°Cでは表面フッ素化が観察された。炭素-フッ素結合はフッ素濃度および反応温度が増加するにつれてイオン性から共有性へ変化した。2、高次フッ化物を用いるフッ素-グラファイト層間化合物の合成最近合成された高次フッ化物AgF_3を触媒としてグラファイト層間化合物を合成し、第14ステージのC_3FC_<10>Fを得た。AgF_3存在下で容易にCxFが生成することが明らかとなり、XPS測定によりイオン性、半共有性フッ素が共存することがわかった。3、酸化フッ化バナジウム-グラファイト層間化合物の電気化学的性質V_2O_5+F_2+グラファイトの反応によって第2ステージの酸化フッ化
根性坐骨神経痛モデルにおける炎症反応と一次知覚ニューロンでの遺伝子発現

根性坐骨神経痛において神経根に対する圧迫による機械的障害に加えて、髄核組織等への免疫反応が、坐骨神経痛などの臨床症状の原因であると云われて久しい。しかしながら、炎症反応のどのような因子が神経系の興奮性に影響を与えているのか、どのようなメカニズムで神経系の興奮性に影響を与えるか、という基本的な問題が解決されていない。本研究は、腰部脊髄神経根及び後根神経節周囲に浸潤している免疫系細胞からのNGFが、そのNGF受容体(TrkA)を持つ神経細胞において、BDNFmRNA発現を増加させる、という仮説を検証するのが、本申請の目的であった。1年間の研究の結果、次のような結果が得られた。1)根性坐骨神経痛モデルの作成川上らの方法により、ラット尾部の髄核・線維輪を採取し、腰髄一側(L4,5)レベルの神経根上に留置し、根性坐骨神経根モデルを作成した。その結果、短時間ではあるが、疼痛関連行動が有意に発症することが明らかとなった。2)同モデルにおける後根神経節におけるBDNFmRNA発現の検索当教室のサブクローニングしたBDNFcDNAから作成したcRNAプローブを用いて、in situハイブリダイゼーション法をモデル群とshamOP群の後根神経節に対して施行した結果、明らかにモデル群の術後3日目で、BDNFmRNAの増加が確認された。また、RT-PCRにおいても、この増加が確認された。3)同モデルにおけるNGF産生細胞の組織学的解析モデル動物の後根神経節及び後根に対して、NGF抗体を用いた免疫組織化学法を施行すると、NGF陽性の多数の細胞が確認された。二重染色法で検索すると、このNGF産生細胞の一部は、Schawann細胞や、macrophageであった。また、NGFを直接、後根神経節に投与すると、BDMFmRNAの増加が確認された。これらの結果は、雑誌Painに投稿され、良好の反応を得ている段階である。
障害児自身の視点から見た障害児療育技法の適用と効果に関する臨床心理学的研究

動作訓練法という障害児のための療育技法を用いた訓練会に参加した運動障害児を対象に面接調査を行った結果、以下の点が明らかになった。運動障害児にとって、リラクセイション(脳性麻痺児の主要な身体的特徴としての筋緊張の亢進に対する筋弛緩訓練)が重要であること。特に、年長運動障害児でパーソナルコンピュータ等の操作を行う者にとって、作業姿勢のもたらす筋緊張に対する悪影響が示唆された。近年、パソコン通信というコミュニケーション手段が開発された結果、障害児・者も容易に他者と相互的な通信を行うことができるようになった。従って、重度の運動障害を有するこどもたちの多くがコンピュータを使用し、1日のうちの長時間をタイピング作業に従事するようになってきた。しかしながら、このことが逆に身体的問題をもたらしていることが推測された。例えば、運動障害が比較的軽度である腕を用いてタイピングを続けることによって、その体側の筋緊張がより亢進し、体幹のねじれなどが引き起こされ、慢性的な疼痛や健康不良に陥っている可能性が示された。このことから運動障害児のリハビリテーションにおいては坐位・立位・歩行などといった移動運動に直結する姿勢制御訓練だけでなく、慢性的な筋緊張をときほぐすための直接的な弛緩訓練が必要であることが明らかとなった。リハビリテーション技法が専門的なものとはいえ、障害をもつこどもにとって、家庭での訓練は欠かせない。しかしながら、技法の特殊化から家庭での訓練の中心となる母親にとって、技法の適用が非常に難しいという現況が指摘された。よりシンプルであると同時に効率的な手技の開発が必要である。なお、現在、調査・分析を継続中である。
グリオーマのエピジェネティクス異常に対する転写スイッチ低分子化合物開発の挑戦

本研究は、グリオーマ悪性転化に関わる転写ネットワーク異常を標的にした転写スイッチ低分子化合物の開発を目指した。グリオーマMesenchymal型転換の転写ネットワーク異常にRUNX1が関わる。転写を制御(スイッチ)する低分子化合物合成の開発に取り組み、グリオーマにおけるRUNX1転写制御複合体のコンセンサス配列結合阻害化合物の作用解析を行った。alkylating agentーconjugatedpyrroleーimidazole (PI)polyamides(アルキル化剤修飾ピロールーイミダゾールポリアミド:PIーポリアミド)によるコンセンサス配列結合阻害化合物ChbーM'は、RUNXファミリー制御遺伝子群を包括的に人工的に抑制(スイッチオフ)が可能な。ヒト由来グリオーマ細胞株で解析した結果、ChbーM'が、複数のタイプのグリオーマ腫瘍細胞で腫瘍抑制効果を示した。腫瘍抑制効果は、主にアポトーシス誘導であった。mRNAアレイ、プロテインアレイを用いて、ChbーM'投与による制御される遺伝子群を同定し、さらに、生存シグナルの阻害に至る詳細なメカニズムを明らかにした。ヒト由来グリオーマ細胞株におけるRUNX1転写制御複合体阻害化合物とコンセンサス配列結合阻害化合物が誘導するゲノム変化の解析として同定した遺伝子プロモーターのメチル化について解析を進めた。マウスグリオーマモデルにおいてのChbーM'の有効性を評価した。これらの結果、転写ネットワーク異常を標的にした転写スイッチ低分子化合物ChbーM'が、グリオーマ治療薬として有望であることが示唆されたため、臨床応用に向けて更なる計画を立案している。本研究は、グリオーマ悪性転化に関わる転写ネットワーク異常を標的にした転写スイッチ低分子化合物の開発を目的とする。グリオーマMesenchymal型転換の転写ネットワーク異常でRUNX1が関与することが指摘されている。そこで、平成29年度は、転写を制御(スイッチ)する低分子化合物合成の開発に取り組み、グリオーマにおけるRUNX1転写制御複合体のコンセンサス配列結合阻害化合物の作用解析を行った。化合物の一つ、alkylating agentーconjugatedpyrroleーimidazole (PI)polyamides(アルキル化剤修飾ピロールーイミダゾールポリアミド:PIーポリアミド)のChbーM'は、RUNXファミリー制御遺伝子群を包括的に人工的にスイッチオフすることが明らかとなってきた。そこで、ヒト由来グリオーマ細胞株で解析した結果、ChbーM'はグリオーマ腫瘍細胞の増殖制御を示すことが明らかとなり、その50%阻害濃度を決定することができた。これらの細胞障害作用が、数種類のグリオーマ細胞株で確認されたため、普遍的な作用系と判断された。さらに、ChbーM'投与による制御される遺伝子群を同定し、生存シグナルの阻害が腫瘍制御に働いている可能性を見出した。ヒト由来グリオーマ細胞株におけるRUNX1転写制御複合体阻害化合物とコンセンサス配列結合阻害化合物が誘導するゲノム変化の解析として一部の遺伝子プロモーターのメチル化状態の同定に着手した。予想された結果が得られているため本研究は、グリオーマ悪性転化に関わる転写ネットワーク異常を標的にした転写スイッチ低分子化合物の開発を目指した。RUNX1転写制御複合体のコンセンサス配列結合阻害化合物の作用として、浸潤、悪性形質転換、Mesenchymal型転換に着目して解析を進める。悪性形質転換の解析には軟寒天コロニー形成アッセイによる足場非依存的増殖を定量する。Mesenchymal型転換の解析では、グリオーマ幹細胞からのMesenchymal transitionへの形質転換を定量する。各実験系におけるRUNX1転写阻害による表現型同定に加えて細胞内シグナル、転写ネットワーク改変の同定を行う。さらに、全ゲノム解析とDNAメチル化に着目した解析を行い、RUNX1阻害で誘導されるエピゲノム変化を同定する。予想以上に順調に実験が進んだため
CMP-シアル酸アナログの化学合成とそのシアル酸転移酵素に対する活性評価

シアル酸転移酵素は、シチジン5'-モノファスフォシアル酸(CMP-シアル酸)から、糖鎖末端のガラクトースへのシアル酸の転移反応を触媒する。そこでCMP-シアル酸のアナログ体を合成し、これをシアル酸転移酵素で処理すれば、シアル酸アナログを糖タンパク質糖鎖の末端に組み込むことができると考えた。本研究では、シアル酸の各水酸基をフッ素原子、アジド基、アミノ基等で置換したCMP-シアル酸アナログの合成を行った。また特に、シアル酸の4位修飾体は、酵素阻害剤などの活性が期待できるため4位を修飾した誘導体の合成を行った。合成手順としては、シアル酸の水酸基を化学修飾した後、シアル酸の2位の水酸基とシチジンのリン酸を介した縮合、脱保護を行ってCMP-シアル酸アナログへと変換するルートを選んだ。シアル酸の9位の修飾については、9位の選択的トシル化、続いてアジド化を行ったのち、残りの各水酸基をアセチル化して保護した。そして、2位のみを遊離の水酸基へ変換後、5 ́位がアミダイト基で修飾されたシチジン誘導体との縮合、リン酸の5価への酸化、脱保護を行って、CMP-9゙-アジドシアル酸の合成に成功した。また、この化合物を接触還元によりCMP-9゙-アミノシアル酸に変換することにも成功した。また、9位を選択的にフッ素化したシアル酸誘導体も同様な方法を用いてCMP-9゙-フルオロシアル酸に変換することができた。また、シアル酸の4位の修飾に関しては、4位水酸基を酸化してケトンとした後、ボラン-アンモニア複合体による還元を用いて4位の立体配置を反転させることを完了した。現在、4位のフッ化、アジド化を検討している。また、得られたCMP-9゙-アミノシアル酸、CMP-9゙-フルオロシアル酸は、ラット肝臓由来、およびバクテリア由来のα2,6-シアル酸転移酵素に対し転移活性を有することを確認した。
保健体育における文献資料情報の流通

本研究は保健体育関係の文献情報の流通を円滑にするために、次の基礎的研究を進めた。1.新規の文献資料の登録とキ-ワ-ドの設備1988年以後の文献資料(体育学研究、体力科学、体育の科学、体育科学、学校保健研究、武道学研究など)を新規に登録するとともに、大文類のキ-ワ-ドの登録を行った。この一部は全国の関係者に送付して検討を依頼した。2.保健体育シソ-ラスの検討保健体育シソ-ラスに必要と考えられる用語をEDMARSの辞書デ-タベ-スに登録し、JISコ-ド順及び樹状構造化したシソ-ラスを作成・印刷した。そして、これを全国の関係者及び関係機関に配付し、シソ-ラスの検討を依頼した。その結果、今回のシソ-ラスに対する意見が少なかったため、当分の間、このシソ-ラスを検索用辞書として利用することにした。3.保健体育文献情報の流通大型計算機を用いた文献検索についてはすでに検討されているので、今回はパソコンを利用した文献情報の流通について検討した。すなわち、パソコンによる検索ソフト(NIRS)を開発し、フロッピ-に移植したデ-タベ-スをパソコンで検索できるよう研究を進めてきた。その結果、これの実用性が確認され、今回はこの利用方法とシソ-ラスを添付した手引書「保健体育研究文献検索のためのシソ-ラス及びNIRSの利用法」を作成して、全国の関係者へ配付した。また希望者にはNIRSとデ-タベ-ス(フロッピ-に移植したもの)を提供している。