hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アセトアルデヒド脱水素酵素欠損マウスを用いた行動・神経毒性の遺伝子発現変化の解析

(1)エタノール強制経口投与後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに0.1,0.5,1.0,2.0および5.0g/kg体重の20%エタノールを経口投与し、1時間後の血液中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度を各群6匹について測定した。エタノール濃度に有意な差は認められなかったが、Aldh2-/-マウスの臓器中アセトアルデヒド濃度は3-30倍の高値を示した。(学術誌投稿中)(2)アセトアルデヒド2週間連続吸入曝露したマウス視床下部のマイクロアレイ解析われわれは既にAldh2-/-マウスがAldh2+/+マウスに比べエタノールを好まないことを報告している。エタノール嗜好性を低下させる内因性の機序を解明するためマイクロアレイ解析を実施した。エタノール投与による食餌状態の変化を避け、エタノールによる毒性とアセトアルデヒドによる毒性の別を区別するために、2週間連続アセトアルデヒド500ppm吸入曝露を実施した。この結果、Aldh-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに血中アセトアルデヒド濃度数マイクロモルの状態を得ることが出来た。これは慢性アルコール中毒患者における血中アセトアルデヒド濃度に等しい。この慢性アルコール中毒状態の血中アセトアルデヒド濃度にあるときのAldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスの視床下部を用いて、遺伝子発現の網羅的解析をマイクロアレイ法を実施した。この結果、アセトアルデヒド曝露に関係なくAldh2-/-マウスとAldh2+/+マウスで発現が異なる遺伝子、アセトアルデヒド曝露によりAldh2-/-マウスとAldh2+/+マウスで発現が異なってくる遺伝子の候補を見出した。現在データ解析中であり、定量PCR法で追実験を実施している。(1)エタノール自由選択摂取試験アルデヒド脱水素酵素2遺伝子ノックアウトマウス(Aldh2-/-マウス)および野生型マウス(Aldh2+/+マウス)各15匹を用い、3%エタノールおよび水の自由選択摂取試験を行った。Aldh2+/+マウスの1日エタノール摂取量の8日間平均は1.00mL、Aldh2-/-マウスは0.32mLであり、Aldh2-/-マウスのエタノール摂取量はAldh2+/+マウスに比べ有意に少なかった。計測期間を通じて体重、摂食量、飲水量に有意な差を認めなかった。グルコース溶液(甘み)およびキニーネ溶液(苦味)での自由選択摂取試験結果において、Aldh2+/+マウスおよびAldh2-/-マウスの摂取量に差は認められなかった。したがって、エタノール選択は味覚によるものではなくエタノール選択によるものと考えられた。(2)エタノール自由選択摂取後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウス各7匹を用い、3%エタノールおよび水の自由選択摂取試験を1日間行い、摂取開始24時間後の血中、脳および肝臓中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度をヘッドスペースGC-MS法で測定した。Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスは、エタノール摂取量が異なるにもかかわらず、血液、肝臓、および脳内アセトアルデヒド濃度が同程度を示した。臓器中エタノール濃度は検出限界値以下であった。上記実験(1)(2)をまとめ学術雑誌上(項目11参照)に発表した。(3)エタノール強制経口投与後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに5.0g/kg体中の20%エタノールを経口投与し、0,1,3,6,12,24時間後の血液、肝臓、脳中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度を各群7匹について測定した。エタノール濃度に大きな差は認められなかったが、Aldh2-/-マウスの臓器中アセトアルデヒド濃度はAUCで血液において24倍の差を示した。(現在学術誌投稿準備中)本年度はAldh2-/-マウスの行動学的特長、In vivoにおけるアルデヒド代謝遅延を明らかにした。ヒトALDH2活性不全と同様の行動、代謝遅延を示すことから当マウスはモデル動物として有用であると考えられる。(1)エタノール強制経口投与後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに5.0g/kg体重の20%エタノールを経口投与し、0,1,3,6,12,24時間後の血液、肝臓、脳中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度を各群7匹について測定した。エタノール濃度に大きな差は認められなかったが、Aldh2-/-マウスの臓器中アセトアルデヒド濃度はAUCで血液において24倍差を示した。(学術誌投稿中)(2)エタノール強制経口投与後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに0.1,0.5,1.0,2.0および5.0g/kg体重の20%エタノールを経口投与し、1時間後の血液中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度を各群6匹について測定した。(学術誌投稿中)(1,2)の結果を併せ学術誌に投稿中である。

また、薬物動態解析を行いIn vivoにおけるアルデヒド代謝遅延を明らかにしたので学術誌に投稿準備中である。ヒトALDH2活性不全と同様の代謝遅延を示すことをしめした。(1)エタノール強制経口投与後の臓器中エタノールおよびアセトアルデヒド濃度測定Aldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに0.1,0.5,1.0,2.0および5.0g/kg体重の20%エタノールを経口投与し、1時間後の血液中のエタノールおよびアセトアルデヒド濃度を各群6匹について測定した。エタノール濃度に有意な差は認められなかったが、Aldh2-/-マウスの臓器中アセトアルデヒド濃度は3-30倍の高値を示した。(学術誌投稿中)(2)アセトアルデヒド2週間連続吸入曝露したマウス視床下部のマイクロアレイ解析われわれは既にAldh2-/-マウスがAldh2+/+マウスに比べエタノールを好まないことを報告している。エタノール嗜好性を低下させる内因性の機序を解明するためマイクロアレイ解析を実施した。エタノール投与による食餌状態の変化を避け、エタノールによる毒性とアセトアルデヒドによる毒性の別を区別するために、2週間連続アセトアルデヒド500ppm吸入曝露を実施した。この結果、Aldh-/-マウスおよびAldh2+/+マウスに血中アセトアルデヒド濃度数マイクロモルの状態を得ることが出来た。これは慢性アルコール中毒患者における血中アセトアルデヒド濃度に等しい。この慢性アルコール中毒状態の血中アセトアルデヒド濃度にあるときのAldh2-/-マウスおよびAldh2+/+マウスの視床下部を用いて、遺伝子発現の網羅的解析をマイクロアレイ法を実施した。この結果、アセトアルデヒド曝露に関係なくAldh2-/-マウスとAldh2+/+マウスで発現が異なる遺伝子、アセトアルデヒド曝露によりAldh2-/-マウスとAldh2+/+マウスで発現が異なってくる遺伝子の候補を見出した。現在データ解析中であり、定量PCR法で追実験を実施している。
成層圏・対流圏オゾン測定高精度化のための較正装置開発

いわゆるオゾン層破壊や対流圏オゾンの増加による温室効果で重要な下部成層圏上部対流圏でのオゾン変動を明らかにするためには,オゾン直接測定器の観測精度向上が必要である。ところが,実際の観測条件と同じ低い気圧での較正を行うことができる,取り扱いが簡便な較正装置はこれまで存在していない。そこで本研究では,実際の観測条件に近い状況で測定器の較正を行うことで,実際の対流圏上部から成層圏でのオゾン観測精度を向上させることが目的である。はじめ,市販のオゾン較正装置にテフロン製の減圧チャンバーを組み合わせた装置を作成したが,調整が難しく一般的に使用できる装置ではなかった。そこで,より安定なオゾン発生装置を独自開発する予定であったが,市販の装置にいくつかの改造を行うことで,精度を失うことなく減圧を安定に行えることがわかり,それにより気圧1001000hPaおよびオゾン濃度0-10ppmvの範囲で安定にオゾン濃度を較正することが可能になった。実際に,航空機搭載用の紫外吸光方式オゾン測定装置の較正に用い,オゾン測定装置の絶対精度をすべての気圧範囲で3%以内で較正することができた。その際,相対精度+非直線性が±300/気圧(hPa)ppbv以内であることを確認することができた。ここで較正したオゾン測定器は,3回のフィールド観測キャンペーンで使用し,熱帯域での上部対流圏オゾン分布に及ぼす対流による上方輸送の影響について明らかにすることができた。しかし,開発したオゾン較正装置をフィールドで簡便に使用できるように,コンピューターを内蔵させ,測定手順や較正データ取得を自動化することは本研究期間中にはできなかった。現在,本研究で開発した装置によって較正した装置を使用したオゾン観測について,いくつか研究結果を発表しつつある。今後,較正装置については動作自動化まで開発を行い,発表する予定である。本研究では、オゾンゾンデなどオゾン測定装置を、測定直前に実際の対流圏上部成層圏の気圧まで減圧した状態で較正することにより、観測の精度を向上させることが目的である。本年度は、まず減圧状況下で正常に較正が行えるかの確認作業を行った。テフロン製の減圧チャンバーを作成して、すでに開発していた圧力コントローラーを用いて、減圧試験を行い良好な結果を得た。そこで、最初はオゾン源としてメーカー製のオゾン較正装置を用いることとして、対流圏上部成層圏下部の気圧まで減圧した状態でオゾン較正が可能か試験を行った。その結果、既存のオゾン発生装置を用いた場合では調整が難しいが、0.1気圧までは問題なく減圧して較正が行えることがわかった。実際に、航空機搭載用のオゾン測定装置の較正を行ったが、上部対流圏の気圧を再現して行った150-1000hPaでの試験では、較正直線からのばらつきが全気圧範囲で±3%以内に収まり、較正装置及び観測装置ともに安定に動作していることが確認できた。この観測装置を実際に航空機に搭載して、日本オーストラリアでの航空機観測を行い、上部対流圏における広域的なオゾン分布を観測することができた。航空機観測キャンペーン前後で較正結果に変動が出るかどうかも調べたが、差は1%以内と小さく無視できることがわかった。ひとまず、較正が可能なことが確認できたので、調整を簡易・自動化できるよう、オゾン発生装置・測定装置および制御回路などを現在作成しており、来年度はそれらを組み合わせて較正装置として完成させる予定である。

ところが,実際の観測条件と同じ低い気圧での較正を行うことができる,取り扱いが簡便な較正装置はこれまで存在していない。そこで本研究では,実際の観測条件に近い状況で測定器の較正を行うことで,実際の対流圏上部から成層圏でのオゾン観測精度を向上させることが目的である。はじめ,市販のオゾン較正装置にテフロン製の減圧チャンバーを組み合わせた装置を作成したが,調整が難しく一般的に使用できる装置ではなかった。そこで,より安定なオゾン発生装置を独自開発する予定であったが,市販の装置にいくつかの改造を行うことで,精度を失うことなく減圧を安定に行えることがわかり,それにより気圧1001000hPaおよびオゾン濃度0-10ppmvの範囲で安定にオゾン濃度を較正することが可能になった。実際に,航空機搭載用の紫外吸光方式オゾン測定装置の較正に用い,オゾン測定装置の絶対精度をすべての気圧範囲で3%以内で較正することができた。その際,相対精度+非直線性が±300/気圧(hPa)ppbv以内であることを確認することができた。ここで較正したオゾン測定器は,3回のフィールド観測キャンペーンで使用し,熱帯域での上部対流圏オゾン分布に及ぼす対流による上方輸送の影響について明らかにすることができた。しかし,開発したオゾン較正装置をフィールドで簡便に使用できるように,コンピューターを内蔵させ,測定手順や較正データ取得を自動化することは本研究期間中にはできなかった。現在,本研究で開発した装置によって較正した装置を使用したオゾン観測について,いくつか研究結果を発表しつつある。今後,較正装置については動作自動化まで開発を行い,発表する予定である。
マルチチャンネルレコーディングシステムを利用した摂食嚥下機能時の大脳皮質活動記録

平成30年度では,咀嚼から嚥下に至る一連の摂食運動を記録するために,咬筋,舌骨上筋,舌骨下筋の各筋に筋電図記録用の双極電極を留置し,自由行動下での摂食行動の記録法の確立を目的に研究を進めた.平成29年度までの成果では,再現性のある実験手技や解析方法の検討が必要であったが,本年度では,これらの点を改善することが可能となり,安定した筋活動の記録を実施することができた.ラットでの自由行動下における摂食行動では,嚥下直前の咬筋筋活動(咀嚼運動)と舌骨下筋筋活動(嚥下)の間隔に規則性は確認されず,嚥下中枢は咀嚼運動に影響を及ぼさないことが示唆された.上記を含めた成果は,平成31年3月に開催された国際学会にて発表するに至った.研究期間全体を通じて実施した研究成果では,多チャンネル電極によるマルチニューロンレコーディングシステムを用いたニューロン記録においては,その実験手技の獲得は概ね可能であったが,複数の実験動物でのニューロン記録には至らなかった.また,口腔顔面領域の感覚入力の変化については,咀嚼時の重要な感覚の1つである歯根膜感覚に着目しラットの臼歯部を便宜的に抜去したモデルを作成することに成功し,同モデルに対して3次元X線透視装置を使用した咀嚼・嚥下行動との関係性について,学会発表するに至った.さらに,咀嚼・嚥下時の行動様式には,筋電図を用いた定量的な記録方法についても実施し,上記の成果を得た.多チャンネル電極によるマルチニューロンレコーディングシステムを用いたニューロン記録と筋電図を用いた摂食行動の同時記録には至らなかったが,研究実施計画に基づいたステップ毎の目的は概ね達成することが可能であった.補綴治療を始めとする歯科的介入は、単なる咬合機能の回復にとどまらず、摂食機能全体に与える効果が期待されている。この研究の意義は、咀嚼から嚥下に至る過程および口腔機能と大脳皮質の機能連関を神経学的に明らかにし、要介護高齢者や有病者の摂食嚥下障害において、口腔機能や咀嚼機能の維持と回復に向けた取り組みのエビデンスを得ることである。具体的には、覚醒動物を対象として、マルチレコーディングシステムを用いたニューロン記録を行い、咀嚼や嚥下時の口腔顔面領域の感覚入力の変化が及ぼす脳の情報処理動態を解明することを目的としている。平成28年度は、多チャンネル電極を用いたラット自由行動摂食時におけるニューロン活動の記録法の確立を目指した。この確立のために、シカゴ大学のRoss教授の下に短期海外研究を行い、同研究室に所属し研究協力者である高橋先生と実験方法や実験手技について議論を重ねた。この海外研究においては、自由摂食時のラット行動をX線透視を用いて3次元的に記録する方法を確立した。その成果の一部を平成29年3月に開催されたDRSにて発表を行った。大脳皮質咀嚼野や一次運動野で制御される咀嚼と、嚥下中枢とある延髄とその機能を修飾する末梢性入力に影響を受ける嚥下において、咀嚼から嚥下に至る行動の解析には摂食行動の記録は重要であることからこの成果の意義は大きいといえる。また、海外研究では、マルチチャンネルを用いてラット大脳皮質からのニューロン記録の手技および解析方法を学んだ。この研究領域では、電気生理学的な知識とその実験手技、さらに得られたビッグデータを解析するプログラミングスキルは必要不可欠であり、これら双方を学ぶ機会が得られたことは実験進捗に有益であった。平成28年度は、多チャンネル電極を用いたラット自由行動摂食時におけるニューロン活動の記録法の確立を目指している。その確立に際し、概ね実験系は確立したと考えられる。補綴治療に代表されるような歯科的介入は,咬合接触状態の回復やそれに伴う咀嚼能率の回復だけではなく,脳機能を含んだ摂食機能全体に与える効果が期待されている.この研究の意義は,咀嚼から嚥下に至る過程および口腔機能と大脳皮質の機能連関を神経学的に明らかにし,要介護高齢者や有病者の摂食嚥下障害において,口腔機能や咀嚼機能の維持と回復に向けた取り組みのエビデンスを得ることである.平成29年度では,ラットにおける咬合回復モデルの確立を目標とし実験を遂行した.歯牙の喪失による咀嚼能力の低下やそれに伴う神経筋への影響,咬合回復によってもたらされる機能回復が摂食嚥下に与える影響を調査するためには,再現性のあるモデルの確立が必要不可欠である.具体的には,実験動物に対して上顎臼歯部の抜歯術を施行,咬合支持域を喪失させることで咀嚼障害モデルとした.さらに,抜歯窩治癒後にスクリュー型のミニインプラントを埋入することで咬合支持域の回復を試みた.この研究成果の一部は平成29年9月に開催された国際学会にて発表するに至った.

また,咀嚼運動の記録と嚥下タイニングの同定を目的に,咀嚼筋群や舌骨下筋群に筋電図記録用の双極電極を留置し,自由行動下での摂食行動の記録法の確立を目指した.一部の実験動物においては,固形物飼料を咀嚼時の筋活動記録やその後の嚥下運動に至る一連の摂食嚥下運動の記録が可能となったが,再現性やその解析方法については改善の余地があり,さらなる検討が必要とされた.平成29年度は,ラットにおける咬合回復モデル,摂食嚥下運動の記録方法の確立を目指した.後者については,再現性やその解析方法については改善の必要性を認めるが,進歩状況としてはおおむね順調に進展していると考えられる.平成30年度では,咀嚼から嚥下に至る一連の摂食運動を記録するために,咬筋,舌骨上筋,舌骨下筋の各筋に筋電図記録用の双極電極を留置し,自由行動下での摂食行動の記録法の確立を目的に研究を進めた.平成29年度までの成果では,再現性のある実験手技や解析方法の検討が必要であったが,本年度では,これらの点を改善することが可能となり,安定した筋活動の記録を実施することができた.ラットでの自由行動下における摂食行動では,嚥下直前の咬筋筋活動(咀嚼運動)と舌骨下筋筋活動(嚥下)の間隔に規則性は確認されず,嚥下中枢は咀嚼運動に影響を及ぼさないことが示唆された.上記を含めた成果は,平成31年3月に開催された国際学会にて発表するに至った.研究期間全体を通じて実施した研究成果では,多チャンネル電極によるマルチニューロンレコーディングシステムを用いたニューロン記録においては,その実験手技の獲得は概ね可能であったが,複数の実験動物でのニューロン記録には至らなかった.また,口腔顔面領域の感覚入力の変化については,咀嚼時の重要な感覚の1つである歯根膜感覚に着目しラットの臼歯部を便宜的に抜去したモデルを作成することに成功し,同モデルに対して3次元X線透視装置を使用した咀嚼・嚥下行動との関係性について,学会発表するに至った.さらに,咀嚼・嚥下時の行動様式には,筋電図を用いた定量的な記録方法についても実施し,上記の成果を得た.多チャンネル電極によるマルチニューロンレコーディングシステムを用いたニューロン記録と筋電図を用いた摂食行動の同時記録には至らなかったが,研究実施計画に基づいたステップ毎の目的は概ね達成することが可能であった.平成29年度は、確立することができた実験系にてニューロン活動を長期に渡って記録する方法を検索する。本研究では慢性実験であり2ヶ月程度のレコーディングを予定している。実際に処置を施した実験動物を長期飼育し、記録されるニューロン活動の変化から、より理想的な電極埋入方法や固定方法、飼育方法等の検索を行う。また、ラットの咬合回復モデルの確立を行う。具体的には、ラット上顎臼歯部の抜歯やミニインプラント埋入等の実験手技の検討を行い、より非侵襲的な手技の獲得を目指す。最終年度である平成30年度は,咬合回復モデルを改善させ,このモデルを用いた摂食嚥下運動の記録を進める予定である.平成28年度は海外研究を行ったことで購入予定であった消耗品の一部の購入を控えたため、次年度使用金額が生じることとなった。本年度に確立を目指した,自由行動下での摂食時における咀嚼運動や嚥下記録に関する筋電図記録に改善の余地を認め,記録後の解析装置やソフトウェアの購入を控えたために次年度使用額が生じた.しかしながら,研究計画に大きな変更は必要とせず,次年度での使用する.購入予定であった消耗品は平成29年度に購入を実施、実験を進める予定であり、使用計画に大きな変更点は生じないと考えている。
胸腺T細胞レパトア形成を制御する細胞間相互作用

胸腺皮質上皮細胞は、胸腺T細胞の分化とレパトア選択を支持する。私達は,皮質上皮細胞の大部分が多数の胸腺細胞と会合した多細胞複合体を形成していることを見出した。多細胞複合体の一部は、皮質上皮細胞が胸腺細胞を包み込む構造をとっており、これらは過去に「胸腺ナース細胞(TNC)」として記載された構造体と同一であった。TNC複合体はマウスの新生仔期以降に生成され、T細胞の正の選択によって減少した。また、TNC複合体の内部には、長期生存しTCRα鎖の遺伝子再構成を経たCD4^+CD8^+胸腺細胞が多く含まれていた。以上の結果より、皮質上皮細胞と胸腺細胞の複合体はTCR再構成とT細胞の選択を促進する微小環境を形成することが示唆された。T細胞は免疫システムの司令塔であり、胸腺にて分化する。胸腺の微小環境は様々な胸腺ストロマ細胞からなり、胸腺細胞(未熟T細胞)の選択による抗原認識レパトア(レパートリー)形成を支持する。本研究では、胸腺ストロマ細胞の一種である胸腺皮質上皮細胞が多数の胸腺細胞と会合した多細胞複合体を形成することを見出し、これらの複合体の構造と機能の理解を目的とした。成体マウス胸腺において、皮質上皮細胞の大部分は、胸腺細胞を内部に包み込んだ閉鎖型複合体、または胸腺細胞が皮質上皮細胞の外側にも会合した開放型複合体を形成することがわかった。閉鎖型複合体は過去に「胸腺ナース細胞」として記載された構造体であり、マウスの生後12週以降に生成され、CD4+CD8+胸腺細胞を内部に含んでいた。閉鎖型複合体は胸腺細胞の正の選択が強く誘導される条件ではほとんど形成されず、正の選択が阻害される条件でより多く形成されることがわかった。最終年度には、過去に「胸腺ナース細胞」の減少が報告されたCD4欠損マウスの解析を行った。CD4欠損マウスでは正常マウスと同程度の閉鎖型および開放型複合体が検出され、CD4は多細胞複合体形成に必要ではないことが明らかとなった。一方、胸腺細胞が長期生存するBcl2-Tgマウスでは閉鎖型複合体が増加し、胸腺細胞の生存が低下するRORγ欠損マウスでは閉鎖型複合体が減少していた。また、複合体内部の胸腺細胞は、ゲノム上の位置がより外側(遠位)のTCRα鎖の使用頻度が高いことがわかった。従って、複合体に包み込まれた胸腺細胞はTCRα鎖遺伝子再構成を繰り返して長期生存してきた細胞であることが示唆された。以上の結果より、「胸腺ナース細胞」は皮質上皮細胞と胸腺細胞の複合体の一部であり、胸腺細胞のTCRα鎖の遺伝子再構成を促進することでT細胞の抗原認識レパトア形成を制御することが示唆された。胸腺の微小環境は様々な胸腺ストロマ細胞からなり、胸腺細胞(未熟T細胞)の正と負の選択による抗原認識レパートリー形成を支持する。本研究では、胸腺ストロマ細胞の一種である胸腺皮質上皮細胞が多数の胸腺細胞と会合した巨大な多細胞複合体を形成することを見出し、これらの複合体の構造と機能の理解を目的とした。フローサイトメーターおよび共焦点レーザー顕微鏡を用いた解析により、皮質上皮細胞は大まかに、胸腺細胞が皮質上皮細胞の外側にも会合した開放型複合体、胸腺細胞が皮質上皮細胞の内部に包み込まれ外部に露出しない閉鎖型複合体、多細胞複合体を形成しない単独細胞集団、の3つの亜集団から構成されることがわかった。このうち、閉鎖型複合体は過去に「胸腺ナース細胞」として記載された構造体であり、新生仔期以降に生成され、CD4+CD8+胸腺細胞を内部に含んでいた。閉鎖型複合体は胸腺細胞の正の選択が強く誘導される条件ではほとんど形成されず、正の選択が阻害される条件でより多く形成された。閉鎖型複合体に包み込まれたCD4+CD8+胸腺細胞は、TCRα鎖の遺伝子再構成を繰り返した細胞であることが示された。以上の結果より、皮質上皮細胞は分化途上のCD4+CD8+胸腺細胞と緊密な複合体を形成し、CD4+CD8+胸腺細胞の長期生存とTCRα鎖の遺伝子再構成を促進することでT細胞の抗原認識レパートリー形成に重要な役割を担うことが示唆された。

胸腺上皮細胞と胸腺細胞による多細胞複合体を定性的かつ定量的に測定する技術を確立することに成功し、複合体の構造と機能の解明が大きく進展した。また、多細胞複合体を欠損する変異マウスを見出し、表現型解析と原因遺伝子同定を進めている。胸腺上皮細胞と胸腺細胞による細胞間接着を担う分子を同定し、多細胞複合体の形成機序と生理的意義を明らかにする。また、多細胞複合体を欠損する変異マウスの表現型解析と原因遺伝子の同定を行う。多細胞複合体を欠損する変異マウスの原因遺伝子同定には規模の大きな動物実験と遺伝子解析、および機能検証のための遺伝子改変動物の作製が必要となるため、経費の一部を次年度に集中的に使用することとした。
蛇紋石の脱水がつくる地震波速度異方性～高圧変形実験からのアプローチ

沈み込むプレート内、特に、二重深発地震面のうち下面地震帯付近に観測される地震波速度異方性の原因を探るために、プレート内に存在する含水鉱物の変形実験を行い、鉱物多結晶体が作る異方性を明らかにする試みをすすめている。下面地震帯付近に多く存在すると考えられる蛇紋石は、高温高圧の条件下において、phase Aと呼ばれる含水鉱物へと移行していく。そこで、phase A多結晶体の変形実験を行い、その選択配向性を調べ、沈み込むプレート内の地震波速度異方性との関係性を明らかにすることを目指した。はじめに、マルチアンビルプレスを用いてphase A多結晶体を合成し、それを斜め45度にカットし、単純せん断変形セルに入れて変形させた。変形実験は、高エネルギー加速器研究機構設置のD-CAPを用いて行った。回収試料を切断、研磨し、東北大学設置のEBSDを用いて方位解析を行い、走査型電子顕微鏡を用いて組織観察を行った。いくつかの試料について、格子選択配向性の測定に成功した。それらを用いて、phase A、多結晶体の弾性波速度を計算した。計算結果と観測される地震波速度異方性を比較した。今後は、複数の温度圧力条件での実験を行うこと、さらに変形中の応力を測定することを計画している。phase Aがつくる地震波速度異方性を明らかにすることで、蛇紋岩が脱水分解した後の沈み込むプレート内の描像を描くことができると期待している。含水鉱物phase Aの変形実験について、複数回成功し、EBSDを用いて格子選択配向を測定することができた。また、その結果と観測される地震波速度異方性を比較し議論することができた。しかし、高圧変形試験装置D-CAPの不具合や放射光施設での実験回数が少なく、応力測定をすることができなかった。また、水を封入するための金属ジャケットセルの開発が遅れている。準備が遅れている金属ジャケットセルの作成をすすめる。その上で、phase A単相の選択配向性を調べることができたので、蛇紋石が脱水する際、脱水した後の鉱物および流体がつくる異方性について、実験的に明らかにする。実験によって得られた結果より蛇紋石および緑泥石がつくる異方性、さらに脱水後につくる異方性を計算によって求める。プレート毎で観測される地震波異方性、速度構造と比較し、各々の異方性の原因を特定する。高圧下で水を封入するための金属ジャケットセルの選定が予定より遅れてしまったことから、次年度使用額が生じた。次年度は、このジャケットセルの購入および人件費として使用することを計画している。
根の重力屈性におけるオーキシンの可逆的代謝反応とカルシウムイオンの役割

根の重力屈性の重力信号伝達系には,信号を根冠から伸長域へ伝達する化学シグナルが存在すると考えられている。しかし,化学シグナルの実体,さらにはその供給源等については明らかにされていない。我々は,化学シグナルとして拡散性IAA,その供給源として根冠の細胞壁結合型IAA,さらにIAAの結合型から遊離型への解離反応(オーキシ可逆的代謝反応)Ca^<2+>によって制御されている仮説を提案している。本研究は,この仮説をin vivoとin vitro実験系で検証することが目的である。[in vivo]トウモロコシ種子根の根端0-1mm切片をCa^<2+>キレート剤の5mMEGTAで処理した場合,細胞壁結合型IAAの含量は,EGTA処理区>非処理区であった。また,EGTA処理切片を[10mM CaCl_2+10^<-6> M IAA],あるいは10^<-6> M IAAだけで処理した場合,結合型IAA含量は,非処理区>CaCl_2処理区であった。この結果は,細胞壁中の結合型IAA含量がCa^<2+>に制御されている,つまりCa^<+2>はIAAを結合型から解離し非結合型(遊離型)IAAにする反応に関与していることを示している。[in vitro]そこで,より直接的にCa^<2+>の役割を調べるために,EGTAあるいは緩衝液のみで処理した0-1mm切片から分画した細胞壁標本を[EGTA+IAA]あるいは[CaCl_2+IAA]で処理した。緩衝液処理由来細胞壁標本では,両者の処理で,結合型と遊離型のIAA含量に差は見られなった。一方,EGTA処理由来細胞壁標本では,遊離型IAA含量は,CaCl_2処理区>EGTA処理区,結合型IAA含量は,EGTA処理区>CaCl_2処理区であった。この結果は,in vivoと同様の結果であり,Ca^<2+>は結合型IAAの解離反応を促進することを示した。本研究より,重力感受細胞におけるシグナルと組織間化学シグナルの動向をリンクする反応の実体が明らかになった。根の重力屈性の発現に,根冠アポプラストにおける遊離型Ca^<+2>が何らかの役割を担っていることが報告されてから久しいが,まだ,その役割については明らかにされていない。我々は,トウモロコシの一次根を材料として,重力の信号伝達系におけるCa^<+2>の役割を解析し,根冠における遊離型Ca^<+2>は,根冠から伸長域へ重力信号を伝達する物質(成長制御物質)であるインドール酢酸(IAA)の代謝(結合型IAAから遊離型IAAへの変換)に関わっている仮説を提案した。本研究は,この仮説を検証することが目的である。今年度は,トウモロコシ一次根の根冠を含む0-1mm根端切片を用い,その細胞壁画分における結合型IAAの動向に及ぼすCa^<+2>の影響を調べた。カルシウムイオンキレート剤であるEGTA処理区と非処理区の細胞壁結合型IAAの含量は,それぞれ,1.56±0.19nm/g F.W.,0.85±0.18nm/g F.W.であった。

この結果は,EGTAでアポプラストのCa^<+2>を除去すると,細胞壁中の結合型IAAが増加することを示している。また,EGTA処理後続いて10^<-6>M IAAだけで処理した切片と,10^<-6>M IAAと同時に10mM CaCl_2で処理した切片における結合型IAA含量を調べたところ,IAAだけの処理区は1.62±0.25nmol/g F.W.,IAA+CaCl_2の処理区は1.17±0.13nmol/g F.W.であった。さらに,非結合型のIAAは,IAAだけの処理区で0.79±0.07nmol/ml,IAA+CaCl_2の処理区は0.90±0.06nmol/mlであった。これら結果は,Ca^<+2>を加えると細胞壁中の結合型IAAが減少し,非結合型IAAが増加することを示している。つまり,細胞壁中の結合型IAA含量はアポプラストのCa^<+2>に依存し,Ca^<+2>は結合型IAAからIAAを解離し,可動性の非結合型(遊離型)IAAにする反応に関与していることが明らかになった。現在,結合型IAAからIAAの解離におけるCa^<+2>の機能を明らかにすべく,細胞壁標本を試料したin vitro系の実験を計画している。根の重力屈性の発現に,根冠アポプラストにおける遊離型Ca^<+2>が何らかの役割を担っていることが報告されてから久しいが,まだ,その役割については明らかにされていない。我々は,トウモロコシ種子根を材料として,重力の信号伝達系におけるCa^<+2>の役割を解析し,根冠アポプラストの遊離型Ca^<+2>が,根冠から伸長域への組織間シグナル分子の候補としているインドール酢酸(IAA)の細胞壁における代謝(結合型IAAから遊離型IAAへの変換)に関わっている仮説を提案した。本研究は,この仮説を検証することが目的である。トウモロコシ種子根の0-1mm根端切片によるin vivo系及び0-1mm切片から分画した細胞壁標本によるin vitro系で実験を行った。0-1mm切片をCa^<+2>キレート剤のEGTAで処理した場合,細胞壁結合型IAAの含量は,EGTA処理区>非処理区であった。また,切片をEGTA処理後,10^<-6>M IAAだけ,あるいは10^<-6>M IAAと同時に10mM CaCl_2で処理した場合,結合型IAA含量は,非CaCl_2処理区>処理区であった。この結果は,細胞壁中の結合型IAA含量がCa^<+2>に制御されている,つまりCa^<+2>は結合型IAAからIAAを解離し可動性の非結合型(遊離型)IAAにする反応に関与していることを示している。そこで,より直接的にCa^<+2>の役割を調べるために細胞壁標本をEGTAあるいはCaCl_2で処理したところ,結合型IAA含量は,CaCl_2処理区>非処理区≧EGTA処理区であった。一方,遊離型IAA含量は,非処理区≧EGTA処理区>CaCl_2処理区であった。これら結果は,in vitroではin vivoとは逆に,Ca^<+2>はIAAを細胞壁に結合する作用を持っていることを示している。本研究で,細胞壁におけるIAAの動態にCa^<+2>が関わっていることを明らかにしたが,in vivoとin vitroではCa^<+2>の作用が相反する結果を得た。現在,この逆方向の作用を明らかにすべく研究を行っている。
非強酸・非窒素系溶媒を活用した低環境負荷的希少元素リサイクル法の開発

過酸化水素は酸素と水素から成り分解すれば水と酸素となることから精製の観点から見ると理想的な溶媒である。この過酸化水素溶離液中の金属含有量をプラズマ分光法で測定し回収率を算出した。その結果、30種以上含む金属溶液からV, Mo, W, Nb, Taを高選択的に回収可能であった。これらの元素に共通する点は、オキソアニオン形成元素であるとともに過酸化水素と容易に反応する元素である。また、焼却飛灰への適用を試みたところ、V, Mo, Wの良好な回収率を得た。固相に吸着した金属の溶出には強酸(硝酸・塩酸・硫酸)が使われるのが一般的であり、これは金属の陽イオンと強酸中のプロトンが交換することで達成される。しかし、強酸を使用することのデメリットとして、処理システムの耐酸性仕様化に伴う高コスト化、選択性の低下がある。また、窒素を含む溶媒の排出に関しては、瀬戸内海法に代表されるように、総量規制が始まり、窒素を有しない溶媒の利用が求められている。そこで、強酸を使用しない温和な条件下での分離回収システムを構築することを目的とした実験を実施した。その結果、いくつかのレアメタルについて選択的に回収出来ることが判明した。さらに、その精製度を高めることに成功した。吸着・溶離メカニズムを誘導結合プラズマ質量分析法(ICP-MS)、発光分析装置(ICP-AES)、X線分光装置-(XRF,XRD,XPS),核磁気共鳴分析装置フーリエ変換赤外分光法FTIR、紫外可視分光光度計UV-vis、X線吸収微細構造(XAFS)分析により解析中である。これまでに、イミノジ酢酸キレート固相に吸着した30種類以上の金属から、ペルオキソ系試薬を通液することで、V,Mo,W,Nb,Taの5元素を選択的に抽出できることを明らかにした。また、金属回収法の1種で、共同沈殿法に着目し、そこに非毒劇系試薬を通液した際の金属溶離挙動の解析を行っている。現在までに、タングステン、モリブデンなどが選択的に溶離することを確認している。さらに、イミノジ酢酸基を有するキレート樹脂に対象金属イオン(タングステン・モリブデン・バナジウム)を吸着させた後、非強酸かつ非毒劇系溶媒の一種(X)を通液したところ、モリブデンとタングステンがどもに溶出した。この際バナジウムはほとんど溶出しないことが明らかとなった。この結果は、先述した過酸化水素通液の場合(V,Mo,Wが溶出する)結果とは異なるものである。このことから、このX溶液を使用することで、Mo,WとVを分離可能であり、X溶液に続いて過酸化水素を通液すれば、バナジウムのみを回収出来ることを意味する重要な成果といえる。当初掲げた目標には十分達成できたものと考えている。また、現在、Xの濃度を変化させながらMoとWの分別回収を行っている。その結果、Xの希薄溶液(1%)通液後、10%のXを通液することでMoとWが分別できることを明らかにした。実用化の見通しとしては、現在のところ、廃棄物から資源回収への適用を考えている。その際には、モリブデン・バナジウムなどを多く含む廃触媒・焼却飛灰に含まれる有用成分(モリブデン、バナジウム、タングステン)の回収・資源化への寄与が期待される。
身体的老化の制御に関する統計的接近

この研究は老化の定義として「人間の活動能力の加齢基準値よりも、低減・増昇傾向が観察されること」という立場をとる。そのための方法論として演えき的に種々の老化学説を整理し、加齢指標と考えられるものを多数とりあげ、統計学の手法を援甲して総合的な老化指標を作成する。本研究は大別して以下の3点を実施したことになる。(1).都市や農漁村部を対象に種々の生理機能を測定し、同時に生活形態因子の関与度を検討すること。(2).身体生理機能を歯科機能を老化の面で検討すること。(3).スタンツ系テストで「動きの良さ」からみた老化指標を作成し、他の生理指標との関連を検討なること。(1).都市住民などを対象にした研究では、特に全身持久系のテストが加齢指標として重要であることが明らかとなり、老け度の大きい個体の場合には通勤方法が自家用車であったり、栄養摂取がアンバランスであったりなど生活規範が好ましくない状態が観察された。(2).歯科機能は歯旡動揺度・歯槽骨の状態から観察したが、運動機能特に平衡機能がすぐれている者は歯旡の状態も良好であることが明らかになった。単に咬合力のみではなく、口腔機能全般の良否が、全身の健康状態と連動していることが推察できた。(3).スタンツ系テストによる「動きの若さ」は重回帰分析のうち、カテゴリヤルな手法を援甲した結果、動きのす速さ・器用さなどが重要な変数となった。また動きの若い人・活力のある人は歩行速度という、極めて日常的な活動形態にも優れていることが明らかとなり、この点で、ウォ-キング(歩行)による健康つくりの処方の有効性が示唆された。以上のような論点から2,3の論文を構成し、老化研究の糸譜、方法論の検討をもまとめて、研究成果報告量を作成した。本年度はテストバッテリーの構成から老化指標の検討を行った。一般的な体力テスト成績や医学検査指標を用いて、歴年齢を予測する線型重回帰方程式の作成を行った。その構成内容はパフォーマンステスト(背筋力、立位体前屈、握力、肺活量、閉眼片足立ち)、最大酸素摂取量、体脂肪率、安静時心拍、抗張期、収縮期の血圧であり、ステップワイズに変数を採択していくと、男女それぞれに有意な変数として、6種程度のものが採択された。しかしその重相関係数は0.68程度の低いものであり、この原因について検討した結果、サンプルサイズやサンプルそのものに問題はなく、むしろ変数の構成に問題があることがわかった。即ち、年令変化は感覚機能でかなりの部分が説明できることが古川ほか(1976)でも指摘されており、また循環機能も同様であってこれらの変数群の拡充が必要となった。そのため、ある離島の住民(40才代から69才代)を対象に、感覚系変数の妥当性、信頼性を検討する作業を行った。だが、比較的小筋系の感覚機能に年令の影響がみられることが推察できた。次年度以降は、パフォーマンステストも質問紙で行い得る可能性を検討できた。すなわち「からだのす速い動き」、「しなやかな動き」、「粘り強さ」「巧みな動き」というカテゴリーで、いくつかの組テストの妥当性を検証し、統計16項目程度からなるスタンツ系組テストを作成し、検討を始めたところである。最後に制御要因は、日常の一般的な生活規範(規則正しく、時間や行動のバランスの良さなど)について検討した。このうち、運動不足や生活時間のアンバランスは、老化に強く関連していることを指摘できた。

いずれも自己制御可能な要因が多く老化を自らコントロールすることの可能性は指摘できることになろう。(1)身体的活動能力から評価した年齢・老化度従来の諸家による研究並びに本研究によって種々の内科的指標、体力テスト測定値から年齢を予測する統計モデルが提示されてきているが、本研究では動作系(スタンツ)テストを作成・試用して年齢予測モデルを作成し、生活習慣や内科的・体力学的測定値との関連を検討した。柔軟性項目として座位ボ-ル転がし・足先つかみ,平衡性種目として閉眼片足立ち、筋力性項目としてタオル両足移動・足で文字書き,巧緻性項目として切り換えとびの6種目を作成した。これらの測定を20才代から60才代の被験者について実施した結果、年齢との相関は閉眼片足立ちや足先つかみで高く、ボ-ル転がしや切換えとびは逆に低いことが明らかになった。6種目全ての投入した重回帰分析での重相関係数は男子0.456、女子0.350と不十分でしかなかった。(2)老化度と健康指標との関連(1)で求めた予測年齢と医学・体力学的指標との関連度をWilliams,W.G.(1959)の統計量に従って検討した。老化度の低い者は歩行速度も速く、日常的に「速足」で歩く習慣を有することが推察された。しかし、その他の内科的・形態(肥満)的指標にはこうした関係は見られなかった。(3)スタンツ・テストの策定(1)で示したスタンツ系テストの重相関係数が低く、従って妥当性が小さいことが先ず指摘される。テスト自体信頼度が低いことも別の研究で明らかになった。今年度はそのため、種々の手続き(統計解析、諸家の既発表資料)によって、計18種目のスタンツ系テストを策定し、少なくとも妥当性については予測の精度向上を考えた。これは次年度までの資料・デ-タの収集によって明らかになると考えられる。なお新しいテストには瞬発性・巧緻性の種目に拡充した。本研究は現代人の抱える健康科学的・体力学的な問題に焦点をあて、また老化の定義については「年齢の当核標準値によりも低減・増昇を示している状態」とする。本年度は3カ年の研究計画のうちの最終年度に相当し、そのため主たる課題は研究成果報告書の作成であった。個別単独課題としては1).歯科機能の老化度と2、3の生理指標の関連を明らかにすることであった。この課題については平均年齢約73歳の高齢者を対象に(1).歯科医による種々の歯科機能側定、(2).体力系研究者による体力・身体機能の側定を実施した。この結果、歯の動揺度は全身の平衡維持機能(バランス能)と関連が深く、従来いわれてきた静的筋力(握力等)との関連は高くないことを見出した。一般に小学生や中学生を対象にした場合、スポ-ツ適性と歯の咬合状態、特に咬合力との関連が深いことが示唆されているが、高齢者を対象としたこの種の情報は限定されている。姿勢保持能力は体性伸経系のほか骨格筋・骨格骨の解剖学・運動学的な構造と機能によって規定されており、必然的に歯槽骨の状態とも関連していることが、推察できる。いずれにしても今後、多数の標本によるデ-タを吟味し、この点を確認いていく必要がある。この他にスタンツ系運動の成就度にもとづき、これらが医学的指標・体力学的指標とどのように関連するかも検討しているが、この研究成果に関しては今後、順次刊行を計画している。研究成果報告書では『序論』で老化研究の系譜、特に老化学説・老化数理モデルについて概観し、また加齢現象の一般的知見を整理した。『方法論』では研究対象(Biomarken of Aging)の選択・デ-タ収集・解析法について論じた。
国際化時代の新たな日本古典学ーベトナムにおける教育実践の研究ー

平成30年度の本研究では、古典学を教育実践の視点から、そして古典学の大衆化・グローバル化についての視点から考察した。具体的にはまず、古典学の図書や古典学について記載している教科書を集めて、どのような教科書や図書があるかを研究した。そして、学校における古典の授業を見学し、どのような授業が行われているかを調査した。担任の先生方と面談し、どのような古典学のテキストを使用しているかについて調査した。次に、一般市民を対象とした「古典文学を楽しむ」ための講座を見学し、調査し、できる限り多くの関連情報を入手し、分析した。さらに、古典学に関する研究会、勉強会、研究ゼミ、特に外国人の研究者がいる研究会に参加し、お互いの研究課題に関する課題、困難などについて意見交換した。古典学に関するシンポジウムや講演会に参加し、講演者と研究課題について意見交換した。さらに、これまで研究してきた俳句に関しては、句会や講演会に参加し、現在の俳句に関する研究課題、世界における俳句の普及状況などについて調査した。また、日本の俳句教育研究会に入会し、さらに日本における俳句教育に関する活動の情報などを入手し、日本の小中学生対象の俳句教育活動の情報などについて研究してきた。また、受け入れ機関の国際日本文化研究センター(日文研)では、受け入れ教員である荒木浩教授の中世文学の講座、そして、大阪大学の月曜会(俳句勉強会)に参加した。さらに、日文研での講演会や荒木教授の共同研究会「投企する古典性ー視覚/大衆・現代」に参加し、日本の古典学に関する研究知識をより深めることができた。この研究期間中、日本及びベトナムにおける国際学会で研究成果を発表した。さらに、関連課題の研究論文をベトナムの研究雑誌に投稿した。研究中に、熊本県立湧心館高等学校の古典授業を見学した。「マンガ作成」の形式、「取り札」、アニメのビデオを見せる授業によって生徒が「古典に親しむ」ことを実践しており、熱心に参加している様子が窺えた。福山市の藤井先生による、「古典文学を楽しむ」、「面白い古典味わい」という『更級日記』「富士山の伝説」講座に参加した。中世時代からの伝統的な遊び「貝合わせ」(貝殻の内側に描かれた題材は源氏物語の全帖)が授業で紹介される等、遊びを通して古典学習を楽しんでいることが理解できた。国文学研究資料館における特別展示「祈りと救いの中世」、特設コーナー「源氏物語画帖と古写本」、国際子ども図書館で「赤い鳥」展、サントリー美術館で「扇の国、日本」の展示会・記念館を観覧し、古典文学の広報・宣伝の役割に関する知見が広められた。更に、福山市尾道の文学公園・文学町・志賀直哉旧居作家の記念館、熊本県の夏目漱石の句碑、「芭蕉園」に関する句碑等の調査を行い、資料を集めてきた。その他、早稲田大学「漢字漢語教育」研究会、明星大学「古典は本当に必要なのか」カンファレンス、お茶の水女子大学の「国語国文学会」、国際俳句交流協会「季語・切れ字・文体」講演会、関西大学の勉強会等に参加し、古典学の専門家と面談した。そこで国語教育の課題、古典文法、古典教育、古典言語のテキスト使用、社会発展やグローバル時代における国内外の外国人学生を対象とした教育に関する古典教育の意義や魅力、伝え方に関する研究課題を深く理解することができた。特に、ベトナムで開催した「日越俳句交流会」では、日本の独特な「句会」や季語を大切にして俳句を詠んでいる姿をベトナム人に紹介することができた。また、受け入れ機関の日文研で開催された研究会・講演会や荒木教授の共同研究「投企する古典性ー視覚/大衆・現代」に参加し、日本の古典学に関する研究知識をより深めることができた。2年目の研究は、基本的にはこれまでの研究を継続するものである。「古典の学習は必要ではない」という見解に対する反論材料の蓄積のために、日本での日本古典学の現代的観点を中心に引き続き調査し、基本的な情報を収集するために調査・研究を行う。日本の大学や高校で行われている日本古典学の授業や講座を見学し、その状況や授業法などを引き続き調査し、研究する。更に、日本の古典学の大衆性、現代性という古典学の新たな創造性という視点で研究を行いたい。現代社会における古典学はどのように変化しているか。その現代化の背景の中で、古典学はどのような創造性を発揮しているか。日本で古典学が一般市民の生活へどのように浸透しているか。視覚性、大衆性、現代性という観点でどのような人たちが古典学に触れているのか、またどのような人がそれを読んでいるのかについて研究する。そして、古典学の教育事例調査を行う。古典学の授業開発を行っている大学・高校を訪問調査する。大学の古典学教育の課題及び改革に関して比較調査を行う。古典学教育の課題及び改革に関して比較調査を行う。日本にある多数の大学での古典学の教育・研究事例を収集し、教授に対してインタビュー調査を行う。さらに、母国であるベトナムにおいても、日本の古典学の教育状況という視点からの研究を展開する。ベトナムにおいて日本の古典学を導入する方法論・応用論を考察し、日本の古典学教育の国際的な意義づけについて探求する。特に、ベトナムにおいては日本の古典文学のテキストは存在していない状況であるため、ベトナムで使用可能な日本の古典学のテキストの作成を目指して研究を行う。そして引き続き、日文研での学術研究会、共同研究会に参加し、古典学に関する知見を深める。さらに研究成果全体の統括を行い、学術書を執筆する。

平成30年度の本研究では、古典学を教育実践の視点から、そして古典学の大衆化・グローバル化についての視点から考察した。具体的にはまず、古典学の図書や古典学について記載している教科書を集めて、どのような教科書や図書があるかを研究した。そして、学校における古典の授業を見学し、どのような授業が行われているかを調査した。担任の先生方と面談し、どのような古典学のテキストを使用しているかについて調査した。次に、一般市民を対象とした「古典文学を楽しむ」ための講座を見学し、調査し、できる限り多くの関連情報を入手し、分析した。さらに、古典学に関する研究会、勉強会、研究ゼミ、特に外国人の研究者がいる研究会に参加し、お互いの研究課題に関する課題、困難などについて意見交換した。古典学に関するシンポジウムや講演会に参加し、講演者と研究課題について意見交換した。さらに、これまで研究してきた俳句に関しては、句会や講演会に参加し、現在の俳句に関する研究課題、世界における俳句の普及状況などについて調査した。また、日本の俳句教育研究会に入会し、さらに日本における俳句教育に関する活動の情報などを入手し、日本の小中学生対象の俳句教育活動の情報などについて研究してきた。また、受け入れ機関の国際日本文化研究センター(日文研)では、受け入れ教員である荒木浩教授の中世文学の講座、そして、大阪大学の月曜会(俳句勉強会)に参加した。さらに、日文研での講演会や荒木教授の共同研究会「投企する古典性ー視覚/大衆・現代」に参加し、日本の古典学に関する研究知識をより深めることができた。この研究期間中、日本及びベトナムにおける国際学会で研究成果を発表した。さらに、関連課題の研究論文をベトナムの研究雑誌に投稿した。研究中に、熊本県立湧心館高等学校の古典授業を見学した。「マンガ作成」の形式、「取り札」、アニメのビデオを見せる授業によって生徒が「古典に親しむ」ことを実践しており、熱心に参加している様子が窺えた。福山市の藤井先生による、「古典文学を楽しむ」、「面白い古典味わい」という『更級日記』「富士山の伝説」講座に参加した。中世時代からの伝統的な遊び「貝合わせ」(貝殻の内側に描かれた題材は源氏物語の全帖)が授業で紹介される等、遊びを通して古典学習を楽しんでいることが理解できた。国文学研究資料館における特別展示「祈りと救いの中世」、特設コーナー「源氏物語画帖と古写本」、国際子ども図書館で「赤い鳥」展、サントリー美術館で「扇の国、日本」の展示会・記念館を観覧し、古典文学の広報・宣伝の役割に関する知見が広められた。更に、福山市尾道の文学公園・文学町・志賀直哉旧居作家の記念館、熊本県の夏目漱石の句碑、「芭蕉園」に関する句碑等の調査を行い、資料を集めてきた。その他、早稲田大学「漢字漢語教育」研究会、明星大学「古典は本当に必要なのか」カンファレンス、お茶の水女子大学の「国語国文学会」、国際俳句交流協会「季語・切れ字・文体」講演会、関西大学の勉強会等に参加し、古典学の専門家と面談した。
顔面成長異常に対する下顎骨の成長制御に関する研究

下顎骨成長を制御する方法を求め、われわれが開発した『近交系同週齢ラット下顎骨移植モデル』を用いて実験を行った。下顎頭部を皮下に移植し、力学的影響のない状態に置くと、下顎頭軟骨は軟骨性骨形成を止め、骨化や線維化により成長を止めてしまうが、肩鎖関節部に移植すると、正常状態以下だが成長が持続する傾向が見られた。このことは、力刺激が下顎の成長に必須で、持続的力刺激が顔面の成長促進に役立つことを示唆している。近交系同週齢ラット下顎骨移植モデルの作製と実験6週齢のルイスラットを2頭1組として用い、donor ratから総頚動脈と外頚静脈を血管茎とする下顎骨と周囲組織を採取し、recipient ratの同一動静脈にマイクロサージャリーを用いて吻合し、移植した。移植により、咀嚼運動などの外的力学的ストレスを失った下顎頭では、proliferative zoneからtransitional zone、hypertrophic zoneそしてdegenerative zoneに至る自然な軟骨細胞の配列が乱れ、proliferative zoneの下層に、不規則に骨芽細胞や線維芽細胞が現れ、異所性の骨形成が認められた。このことは、外的力学的因子が、下顎頭における内軟骨性化骨の規則性の維持に重要であり、下顎頭部の未分化間葉系細胞は、外的力学的因子が喪失すると、増殖能は保たれるが分化の方向が変化し、骨芽細胞や線維芽細胞へ分化することを意味している。そこで次の研究では、咀嚼運動などの外的力学的因子のように、下顎頭の軟骨細胞の分化増殖をコントロールする因子を探ることが目標である。われわれは、咀嚼運動に代わる因子として、他の力学的因子やサイトカインを加えた実験を行っている。現在、(1)下顎頭の埋入位置を皮下から筋肉内などに移したモデルの作成(2)下顎頭にラバーキャップを被せたモデルの作成(3)移植後に超音波刺激を加えたモデルの作成(4)モデルラットにBMP-2を投与したモデルの作成を行い、その下顎頭の組織形態学的変化を調べている。これらの因子の効果を調べることにより、外的力学的因子に代わり下顎頭軟骨の成長を有効に促進・抑制する因子を求めたいと考えている。近交系同週齢ラット下顎骨移植モデルの作製と成長制御因子の探究6週齢のルイスラットを2頭1組として用い、donor ratから総頚動脈と外頚静脈を血管茎とする下顎骨と周囲組織を採取し、recipient ratの同一動静脈にマイクロサージャリーを用いて吻合し、移植した。またマクロ的にも下顎頭の形態が長球形から球形に変化するのを認めた。このことは、外的力学的因子が、下顎頭における内軟骨性化骨の規則性の維持に重要であり、外的力学的因子が喪失すると、下顎頭部の未分化間葉系細胞の増殖能は保たれるが、分化の方向性が不安定になり、骨芽細胞や線維芽細胞へ分化・増殖することを意味している。現在、この咀嚼運動に変わり、下顎頭の軟骨細胞の分化増殖をコントロールする因子を求めて、研究を行っている。これまでに、(1)下顎頭の埋入位置を皮下から筋肉内などに移したモデルの作成(2)下顎頭にラバーキャップを被せたモデルの作成(3)移植後に超音波刺激を加えたモデルの作成を行ってきたが、これら因子による下顎頭軟骨の組織形態学的変化には多様性が見られ、現在検討を続けている。また学会・論文からBMP-2などのサイトカインの有効な投与法を検討中で、それらの中から、外的力学的因子に代わり下顎頭軟骨の成長を有効に促進・抑制する因子を求め、今年度に研究結果をまとめて発表したいと考えている。