hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
シロイヌナズナのオーキシン依存性偏差成長反応の分子遺伝学的研究

オーキシン応答性転写調節因子族(ARF)の中でARF7/NPH4に類似した遺伝子に焦点を当てて、T-DNA挿入株の表現型を調べた。その結果、ARF8破壊株arf8-1は光条件下でのみ長胚軸となることがわかった。オーキシンに対する感受性の変化は認められず、胚軸の屈性も屈光性に対する反応性がやや低下するのみであった。ARF8過剰発現体(ARF8OX)は逆に光条件下で短胚軸となるので、胚軸のインドール酢酸(IAA)含量を測定したところ、ARF8OXのIAA含量は野生型の約70%と有意に減少していた。ARF8OXは、短胚軸、弱い頂芽優勢、長い根、少ない側根等の異常を示すが、これらの表現型はオーキシンレベルが低いこととよく符合する。arf8-1の表現型はほぼARF8OXと逆であるが、IAA含量に有意な変化はなかったので、局部的にオーキシンレベルが上昇しているのではないかと考えられる。GH3遺伝子族はオーキシン誘導性遺伝子で、その過剰発現体はARF8OXと似た表現型を示すものがある。また、GH3タンパク質はIAAを包合体化する反応の初発反応を触媒する酵素をコードしていて、IAAレベルを調節している可能性がある。そこで、GH3遺伝子の発現をarf8-1とARF8OXで調べたところ、3個のGH3遺伝子発現はARF8の発現レベルと比例していたので、これら遺伝子はARF8の標的遺伝子であると考えられる。以上の結果から、ARF8はオーキシン包合体形成をオーキシン依存的に行わせることによって、オーキシンレベルのフィードバック調節機構を形成していると考えられ、ARF遺伝子族はオーキシンの感受性ばかりでなくオーキシンレベルの調節もおこなっていることが示唆された。オーキシン依存性偏差成長反応の中心はオーキシン応答性転写調節因子ARF7とオーキシン早期誘導性タンパク質IAA19との相互作用であると考えられるが、他のARFタンパク質の関与も示唆されている。そこで、本研究ではARF7にアミノ酸配列の似ているARF8の機能を分子遺伝学的に研究した。ARF8の遺伝子破壊株arf8の表現型を調べたところ、光条件下で胚軸が長くなるなど、光感受性が低下していることがわかった。この表現型異常は、野生型のARF8遺伝子をarf8に導入することで回復した。また、ARF8を35Sプロモーターで過剰発現させると、胚軸が野生型より短くなった。以上のことから、ARF8は光感受性の促進因子であることがわかった。ARF8はARF7によく似ているので、ARF8がオーキシン感受性に関与しているかどうか調べた。暗所での胚軸と根の成長に関するオーキシン感受性はarf8と野生型で同じだった。光条件下での胚軸の成長に関する感受性も変化がなかった。しかし、arf8の胚軸の屈光性は、ARF7の破壊株ほどではないが、感度が低下していた。屈地性は正常だった。以上の結果は、ARF8はほとんどオーキシンの感受性には関与していないが、現象によっては若干関与している場合もあるかもしれないことを示している。AFR8プロモーターGUSの形質転換体を作成して、AFR8の遺伝子発現を調べた。ARF8は、光条件下の胚軸で最も強く発現していて、茎頂と根端分裂組織では光条件によらず、構成的に発現していた。この知見は、光条件下の胚軸長に異常が観察されるarf8の表現型とよく一致する。ARF遺伝子は普通、構成的に発現していると考えられている。本研究が示したARF8の発現の光依存性は、ARF遺伝子族の機能を考え直す契機になるに違いない。

以上の結果から、ARF8はオーキシン包合体形成をオーキシン依存的に行わせることによって、オーキシンレベルのフィードバック調節機構を形成していると考えられ、ARF遺伝子族はオーキシンの感受性ばかりでなくオーキシンレベルの調節もおこなっていることが示唆された。
肝細胞冬眠誘導を用いた転移性肝癌に対する治療法の開発

冬眠状態はG0の概念からCancer stem cellと似たような性質であると考え、胆道癌の細胞株TFK-1、HuCCT1用いて、Cancer stem cellのマーカーCD133, CD44, EpCAM)を用いて解析することとした。各種抗体の単染色および二重染色で、陽性・陰性分画を比較し、さらにマウスに移植した結果、胆管癌においてCD133はCancer stem cellと似たような性質であることがわかり、冬眠、細胞静止状態のマーカーとなることが示唆された。転移性肝癌の治療は外科的切除が第1と考えられ、切除の可能性を探り術前化学療法を積極的に取り入れている。われわれもBevacitumabを用いたネオアジュバント療法を積極的に施行している。しかし強力な化学療法を行えば脂肪肝やblue liverなど副作用により治療困難になる場合が増えている。そこで、正常細胞に冬眠状態に誘導することにより細胞静止状態となり、正常細胞が各種抗癌剤耐性となることと、冬眠誘導されない癌細胞が特異的に抗腫瘍効果を誘導できるという考えのもと、転移性肝癌に対する新規治療を開発することを目的とした。本年度では、非冬眠動物の肝臓が冬眠状態を維持できるかを蛍光標識グルコース誘導体2-NBDGを用いて代謝の面から検討した。用いた細胞は、胆道癌の細胞株TFK-1、HuCCT1を用いて,初期条件の設定を目的とした実験を施行した。フローサイトメトリーでの結果1.蛍光標識グルコース誘導体2-NBDGによる分離の検討:95%以上の目的細胞集団の分離率が得られ、十分検討に用いることが可能であることを確認した.2.蛍光標識グルコース誘導体2-NBDGの至適濃度の検証:細胞株ごとの測定可能濃度の検討をした.3.蛍光標識グルコース誘導体2-NBDGの反応時間と蛍光強度の検討:2-NBDG投与後、4060分から蛍光強度がプラトーに達し、約1時間後から実験が可能である確証を得た.4.2-NBDG反応後の保存条件による蛍光強度の変化の検討:冷却保存することで代謝・排出による蛍光強度の減弱の回避が可能であることを確認し、停電など不慮の事態時に細胞の保存、中断が可能であることを確認した。以上より、蛍光標識グルコース誘導体2-NBDGによる代謝からの細胞状態の検討が可能であることを確認した。結果:胆道癌細胞株について表面マーカー(CD133,CD44,EpCAM)を用いて検討.陽性細胞率が高かった細胞株HuCCT1(CD133陽性率4560%)、CD133陽性率が低いTFK1(12%)をCD133陽性・陰性分画に分離し免疫不全マウスに皮下移植した。各種抗体の単染色および二重染色で、陽性・陰性分画を比較し、HuCCT1で特にCD133陽性分画の腫瘍増殖能力が高かった。TFK1では、CD133陽性・陰性分画で比較するも腫瘍形成能に有意差を認めることができなかったが、CD133陽性分画のほうが腫瘍増殖能力・形成能力が高い可能性がある。移植後腫瘍をFACSで解析し、CD133陽性分画は移植前と同程度であった。また、CD133陽性・陰性分画で比較すると、増殖能・薬剤耐性能に差は認められなかった。
胎児神経系の発育分化過程におけるNerve growth Factor(NGF)の意義に関する研究

昨年度までは、NGFの受容体およびtyrosine hydroxhlase活性に及ぼすNGFの作用を、ラットの神経組織(とくに神経節)において、そのontogenityに伴う変化をみながら検討した。本年度は、肝仔神経組織におけるNGFをmolecular biologyの側面から検討することを目的とした。1)NGFmRNA検出用のoligo nucleotide probeの作成。2)ラット胎仔神経組織におけるmRNAのontogeny各胎令のラット胎仔の脳を摘出後直ちに液体窒素にて凍結、保存した。crystsstatにて切片作成後、in situ hyfridizationを行う予定であったが、ひと胎盤性NGFについて、まず、このprobeが有用であるか否かを予備実験的に確認することとした。ヒト胎盤にNGFが存在することはこれまでの我々の研究で確認されている。ヒト胎盤からmRNAを抽出して、Nothern blottingを施行すると、1.3kb相当の位置に濃いシグナルが認められ、NGFmRNAによるものと考えられた。したがって、このprobeを用いて、この条件設定の中で、胎仔神経組織でのNGFmRNAのNothern blottingおよびin situ hyfvidizationの実験が可能であることが判明した。3)ラット胎仔の神経節におけるNGF受容体の変化、およびtyroseine hydroxyCase活性に及ぼすNGFの影響本年度も、一部追加実験を行ったが、昨年度の結果とほぼ同様であった。1)胎仔、新生仔におけるNGF受容体ニワトリ胚の脊髄後根神経節、ラット胎仔および新生仔の上頚神経節や副腎随質におけるNGF受容体の存在を明らかにし、その胎令、出生後の日令による変化を明らかにした。すなわち、NGF binding studyにおけるNGF受容体は、まず、後根神経節では、胎令79日令で高濃度であるが、11日13日日令では漸減して低下を示し、1517日令ではほとんど認められなかった。これらの変化は生物学的検討とも一致した。一方、上頚神経節では、胎令20日でもNGF受容体は存在するが、これは生後1週より徐々に減少した。最後に、副腎では、NGF受容体の活性は低く、生後1週のラットでは活性を示したが、生後2、3週ではほとんど認められなかった。2)胎仔におけるNGFの作用ラット胎仔、新生仔の上頚神経節および副腎のin vitro実験において、NGF添加によるtyrosine hydroxylase活性を^3H-tyrosineを用いて分析し、胎仔神経系におけるNGFの生物学的効果およびその胎令による変化を検討した結果、この酵素活性の定量がNGFの効果発現の有効な指標であることが新たな知見として得られた。すなわち、ラット胎仔(20日令)および生後1、2週のラットの上頚神経節において、NGF添加によりtyrosine hydroxylase活性の有意の上昇を認めたが、とくに胎仔において上昇率が高かった。一方、副腎においては、上頚神経節に比較して全般的にこの酵素活性は低く、NGF投与でも2週令のラットの副腎においてのみ有意の上昇がみられた。以上の知見から、NGFが胎児、新生児の神経系の発育に深く関与している可能性が生化学的に証明された。
二次元結晶工学に基づく電荷移動錯体の形成制御と光誘起電子移動

有機分子を思いどうりに配列し高い秩序性を有する分子組織を構築することで、光合成にみられる効率の良い光エネルギー変換のような、従来の均一溶液系とは異なった新しい光化学の創出が期待される。そこで本研究では、LB膜や二分子膜などの二次元分子集合体の高度な分子組織性に注目し、光化学的に重要な機能を有する電荷移動錯体の形成制御とその光機能を検討する。電子供与体あるいは受容体、もしくは両者を有する両親媒性化合物を合成し、二次元分子集合体中における分子分布や分子配向特性と電荷移動相互作用の相関性を見いだすとともに、効率の良い光誘起電子移動やエネルギー移動を達成する。1.電子受容部位としてビオロゲン、トリニトロフルオレノン、電子供与部位としてビフェニル、スチルベンを有する両親媒性化合物を合成した。2.ビオロゲンとビフェニルをあわせ持つ化合物は水中で自己会合し二分子膜を形成する。二分子膜中における分子配向は、ビオロゲン親水部とビフェニル疎水部とを結ぶアルキルスペーサー鎖長に大きく依存し、短い場合には傾いた配向をとり隣接する分子間でCT錯体を形成した。犠牲還元剤存在下で可視光を照射しCT錯体を励起するとビオロゲンラジカルが生成する。ラジカルの吸収極大は560nm付近にありラジカル間での相互作用を示しており,二分子膜内でラジカルが蓄積され電子プールとしての可能性が期待される。3.さらにスペーサー鎖長が長い場合には親水基部分に特異的な大きさの空間が形成される。適当なサイズの電子供与性ゲストを添加するとCT錯体が形成される。ドナー性が強いテトラメチルフェニレンジアミンをゲストとした場合にはゲスト分子のカチオンラジカルが形成され、形成速度はホスト二分子膜のスペーサー鎖長に大きく依存した。
標的遺伝子組換えによる微小管関連蛋白欠失マウスの作製とその分子細胞生物学的解析

神経細胞は、樹状突起、細胞体、軸索という特徴のある構造を分化させた極性のある細胞である。近年、微小管に結合してその重合を調節する蛋白である微小管関連蛋白(MAPs)の遺伝子のいくつかが単離され、これらの遺伝子の発現が神経突起の伸長や軸索、樹状突起の分化に重要であることが示された。一方、細胞体とシナプスの間をつなぐ軸索は通常非常に長い突起であり、この中で蛋白合成が行われないため、シナプス領域で必要な蛋白は全て細胞体で合成され軸索輸送で運ばれている。近年この軸索輸送を司っていると思われる蛋白(モーター蛋白)が単離された。これら微小管関連蛋白やモーター蛋白の詳しい役割を調べることは、神経生物学の中心的な課題である。現在我々は、(1)MAPs遺伝子のうちTau,MAP2,MAP1B各MAPs遺伝子及び(2)モーター蛋白遺伝子のうちダイニン、キネシン及びその近縁蛋白の遺伝子について、これらの遺伝子の欠失したマウス系統を胚幹細胞の標的遺伝子組み換え法を用いて作製し、得られたマウス個体を分子細胞生物学的手法を駆使して解析している。そのうち,Tauについてはこれらのマウスの解析から,単独では軸索伸長に必要ではないが細い軸索中で微小管の安定化に重要な役割を果たしていることが明らかになった。さらに我々がTau欠失マウスの解析を続けて行った結果,これらのマウスでは,筋力の低下や活動性の軽度の低下及び活動パターンの異常が明らかになった。現在我々はこれらの現象の詳しい解析を行っているところである。更に他のMAPs及びモーター蛋白遺伝子についてもこれらの遺伝子の欠失したマウス系統を作成中であり,このうち,MAP2,MAP1B遺伝子については,ヘテロ接合体同士をかけ合わせているところであり,キネシン,ダイニン遺伝子については相同組み換え体の胚幹細胞を得た段階にある。
宇宙開発の基盤となる潜伏感染症の横断的解析

地球人口の約95%に、ヒトヘルペスウイルス(HHV)は潜伏感染している。地球上では、HHVと人類の可塑性(免疫)は平衡関係にあり、健常人がHHVにより深刻な病態を引き起こすことは稀である。しかしながら、宇宙は潜伏感染ウイルスと人類の絶妙な平衡関係が破綻するリスクに富む空間であると予想される。また、宇宙飛行士のHHV再活性化という事例を契機とし、アメリカ航空宇宙局は、宇宙飛行時、免疫系の変化を早期に察知するために、HHV再活性化のモニタリングが有効であると報告している[NASA Tech. Innov. 15 (2010)]。したがって、宇宙開発上、HHV再活性化状態の定量的かつ高感度な検査キットの確立や、HHVが潜伏感染を成立・維持させる機構、極限ストレス(重力、睡眠障害等)下における潜伏感染症の推移に関する知見をあらかじめ蓄積することは重要な課題であると考えられる。しかしながら、一連の研究課題の大部分は未着手なままであった。そこで、本研究では、代表的HHV、単純ヘルペスウイルス(HSV)に注目し、高感度有機小分子蛍光プローブを用いた定量的なHSV検査試薬の開発、HSVの潜伏感染成立・維持機構の解明、さらには、極限ストレスや加齢ストレス下におけるHSV潜伏感染の推移に関する知見の解明を試みた。現在までに、HSVの潜伏感染成立・維持機構の一端として、TLR3を介したHSV病態発現の抑制機構(Nat Immunol. 2018Oct;19(10):1071-1082.)やウイルス遺伝子産物UL51を介したウイルス粒子増殖機構(J Virol. 2018Aug 29;92(18).)を明らかとした。これらの知見は、地球におけるHSV感染症の克服や宇宙空間におけるヘルペスウイルス再活性化率の上昇の理解に貢献することが期待される。生体レベルにおけるHSVの潜伏感染成立・維持機構の大部分は不明なままであった。周知のとおり、HSVは健常人では上皮系細胞における初感染の後、速やかに神経組織に潜伏感染に移行し、時折、再活性化するものの致死的な病態を引きおこすことは希である。しかし、家族性ヘルペス脳炎患者では、TLR3や1型IFN経路にSNPが認められ、ヒトとHSVの共生関係が破綻すると考えられていた。我々は、上皮系組織および中枢神経系組織におけるTLR3とHSVの相関関係に関する詳細な分子機構を解明し、TLR3-mTOR経路がHSV脳炎の治療標的となることを解明した(R. Sato and A. Kato., et al. Nat Immunol. [2018])。また、HSVが宿主に潜伏感染を成立させるためには、上皮系組織において一過的な子孫ウイルスの増殖が必要であることが容易に想像される。我々は、ヒトヘルペスウイルスに保存させるUL51遺伝子が、上皮系細胞特異的にウイルス粒子の核からの出芽に関与することも明らかとした(A. Kato. and S. Oda, et al. J. Virol. [2018])。また、HSV検査試薬の開発に関しても、一定の成果は得られており、本研究の現在までの進捗状況は、おおむね順調に進展していると判断される。以下を今後の研究推進の方策としている。(i)領域内共同研究という形で、宇宙航空研究開発機構(JAXA)の閉鎖環境適応訓練設備を用いたヒト閉鎖実験より得られるサンプルを用い、閉鎖ストレスに起因する短期・長期ストレスマーカーの探索に参画する。具体的には、ヘルペスウイルス定量系を提供すること、ヒト唾液中に放出されるヘルペスウイルス量の測定を支援する。(ii)個体レベルにおけるHSV潜伏in vivoイメージング解析の確立として、神経侵襲性を保持したCre発現HSVを作出し、Cre存在下では恒常的に蛍光を発するレポーターを搭載した遺伝子組換えマウスに、本ウイルスを角膜感染させ、HSVを三叉神経節に潜伏感染させる。その後、蛍光シグナル追跡することで、各種のストレスに対するHSV潜伏細胞の推移(再活性化の程度等)を解析可能な実験系を構築する。(iii)昨年度に引き続き、代表的HHVであるHSVに注目し、高感度有機小分子蛍光プローブを用いた定量的なHSV検査試薬の開発、HSVの潜伏感染成立・維持機構の解明、さらには、極限ストレスや加齢ストレス下におけるHSV潜伏感染の推移に関する知見の解明を試みていく。

そこで、本研究では、代表的HHV、単純ヘルペスウイルス(HSV)に注目し、高感度有機小分子蛍光プローブを用いた定量的なHSV検査試薬の開発、HSVの潜伏感染成立・維持機構の解明、さらには、極限ストレスや加齢ストレス下におけるHSV潜伏感染の推移に関する知見の解明を試みた。現在までに、HSVの潜伏感染成立・維持機構の一端として、TLR3を介したHSV病態発現の抑制機構(Nat Immunol. 2018Oct;19(10):1071-1082.)やウイルス遺伝子産物UL51を介したウイルス粒子増殖機構(J Virol. 2018Aug 29;92(18).)を明らかとした。これらの知見は、地球におけるHSV感染症の克服や宇宙空間におけるヘルペスウイルス再活性化率の上昇の理解に貢献することが期待される。生体レベルにおけるHSVの潜伏感染成立・維持機構の大部分は不明なままであった。周知のとおり、HSVは健常人では上皮系細胞における初感染の後、速やかに神経組織に潜伏感染に移行し、時折、再活性化するものの致死的な病態を引きおこすことは希である。しかし、家族性ヘルペス脳炎患者では、TLR3や1型IFN経路にSNPが認められ、ヒトとHSVの共生関係が破綻すると考えられていた。我々は、上皮系組織および中枢神経系組織におけるTLR3とHSVの相関関係に関する詳細な分子機構を解明し、TLR3-mTOR経路がHSV脳炎の治療標的となることを解明した(R. Sato and A. Kato., et al. Nat Immunol. [2018])。また、HSVが宿主に潜伏感染を成立させるためには、上皮系組織において一過的な子孫ウイルスの増殖が必要であることが容易に想像される。我々は、ヒトヘルペスウイルスに保存させるUL51遺伝子が、上皮系細胞特異的にウイルス粒子の核からの出芽に関与することも明らかとした(A. Kato. and S. Oda, et al. J. Virol. [2018])。また、HSV検査試薬の開発に関しても、一定の成果は得られており、本研究の現在までの進捗状況は、おおむね順調に進展していると判断される。以下を今後の研究推進の方策としている。(i)領域内共同研究という形で、宇宙航空研究開発機構(JAXA)の閉鎖環境適応訓練設備を用いたヒト閉鎖実験より得られるサンプルを用い、閉鎖ストレスに起因する短期・長期ストレスマーカーの探索に参画する。具体的には、ヘルペスウイルス定量系を提供すること、ヒト唾液中に放出されるヘルペスウイルス量の測定を支援する。(ii)個体レベルにおけるHSV潜伏in vivoイメージング解析の確立として、神経侵襲性を保持したCre発現HSVを作出し、Cre存在下では恒常的に蛍光を発するレポーターを搭載した遺伝子組換えマウスに、本ウイルスを角膜感染させ、HSVを三叉神経節に潜伏感染させる。その後、蛍光シグナル追跡することで、各種のストレスに対するHSV潜伏細胞の推移(再活性化の程度等)を解析可能な実験系を構築する。(iii)昨年度に引き続き、代表的HHVであるHSVに注目し、高感度有機小分子蛍光プローブを用いた定量的なHSV検査試薬の開発、HSVの潜伏感染成立・維持機構の解明、さらには、極限ストレスや加齢ストレス下におけるHSV潜伏感染の推移に関する知見の解明を試みていく。
木星型惑星始源物資の高温高圧下における物質の研究

本年度は、メタンの高圧下の融解曲線と相転移を明らかにすることを目的として、そのために必要な実験装置の整備と技術開発を行なった。まず研究実施計画書にあるように、抵抗線加熱によりダイヤモンドアンビル中の試料を加熱することを試みたが、高圧ガス試料充填装置を用いる場合には、加熱用ヒーターを最初から組み込むことは困難なことが判明し、新たに熱風を試料室に吹き付けて加熱する方式を開発した。次に、温度測定に熱電対を使う予定であったが、これも試料室外部では温度勾配がきつくて正確な測温は困難なことが判明し、試料室中に入れて圧力測定に用いられている。ルビーの蛍光線の半値幅を用いて温度を決める方式を確立した。一連のデーター処理のためには、分光器で測定したスペクトルのデーターをすばやくコンピューターに転送してカーブフィティングなどの処理をするシステムが不可欠となり、予定通りデーター処理用のインターフェースおよびその周辺機器を購入した。しかし急速なエレクトロニクスの進歩により、予定よりずっと安く必要な機器を揃えることができたので、設備備品費の一部は、本研究で使用するガス充填装置の整備と性能の向上に回した。昨年度の研究も含めた、これら一連の技術開発により、メタンガスをダイヤモンドアンビルの試料室に封入し、それを10GPaまで加圧し、途中の液相-固相転移、および個相-個相転移を観察することが可能になった。今後この融解曲線と2つの個相の境界線を精密に決定し、従来の低温の測定結果と比較して、メタンを主成分とする惑星の形成の条件に付いて議論する予定である。
完全長cDNAライブラリを利用した新規マラリアDNAワクチンの開発研究

マラリアに対し有効な新規ワクチンを開発する目的で、ネズミマラリア原虫から完全長cDNAライブラリを作成しDNAワクチンとしてマウスに免疫し、その後、チャレンジ感染を行った。2000クローン投与群で有意な生存期間延長効果を認めたため、全クローンの5端塩基配列を決定し、遺伝子の特徴別にサブセット化した。それぞれについて免疫効果を評価して絞り込みを行った結果、効率良く免疫応答を誘導する104クローンが選択された。新規マラリアDNAワクチン開発の目的で、ネズミマラリア原虫(Plasmodium berghei)の赤内型原虫からoligo-cap法で全長cDNAライブラリを作成した。2000クローンをまとめて免疫したところ有為な生存期間延長効果を認めたため、5'端塩基配列の解読を行ない1518クローンのシークエンスを決定した。これらをゲノム上にマップし、予測される遺伝子の特徴別にグループ化した。1)ワクチン候補群(分泌タンパク+膜タンパク:525クローン242遺伝子)、2)非候補群(細胞内タンパク:382クローン143遺伝子)、3)不明群(ゲノムマップ不能:611クローン)を、それぞれ、まとめてBALB/cマウス(6週齢メス各8匹)の腹部皮内にGeneGunを用いて免疫した。陽性対照は1518クローンをまとめたもの(G1518群)、陰性対照は空ベクターを免疫した。免疫後、P.berghei感染赤血球5万個を腹腔内投与で感染させ、生存期間を指標に効果を検討した。その結果、不明群で、G1518群より生存期間の延長がみられた。追試でも確認された。作用機序を解明するために、免疫学的検討を行った。免疫マウスの脾臓細胞とP.bergjei粗抗原を共培養し、P.berghei特異的サイトカイン産生を測定したところ、G1518群と不明群は、他群に比べ、IL-2, IFN-g, IL-4, IL-10の産生量が高かった。これより、サイトカインの産生が防御免疫に機能していると考えられた。新規マラリアDNAワクチン開発の目的で、ネズミマラリア原虫P.berghei (Pb)の完全長cDNAクローン群をワクチンとして接種して免疫応答を効率良く誘導するクローン(群)をスクリーニングした。これまでの研究で、チャレンジ感染に対して生存の延長が確認された2000クローンから、不要な遺伝子を除いた計1518クローンの塩基配列を、Pbのドラフトゲノム配列上にマッピングし、P.falciarumのゲノム配列と比較した。そこからcDNAクローンがコードする遺伝子を予測して特徴別にサブセット化し、各サブセットのワクチン効果を検討してきた。今回、IL-2, IL-4, IL-10, IFN-γが最も高く誘導されたクローン群'(UK群)につき、2回目のサブゼット化を行い、更なるクローンの絞込みを目指した。精製したライブラリサブセットおよび対照の空ベクターをDNAワクチンとして免疫し、その後回収した脾細胞を用いて、Pbの粗抗原と共培養し、原虫特異的サイトカイン産生および血清中のIgGを調べた。その結果、IL2、IL-4、IL-10、IFN-γ、およびIgGを高く誘導するHP群(312クローン)を得た。また、HP群を3群に分けた実験では、HP3群がIL-2とIL-4を高く誘導し、他の群はサイトカインの高い産生誘導を示さなかった。また、血清中のIgGも同様の傾向を示した。以上の結果から、1518クローンから、312クローンまでの絞込みができたと考えられた。また、この312クローンを3群に分けた実験から、サイトカインの産生誘導がクローンの組み合わせによって変わる可能性が考えられた。
ホスホグリセレートムターゼ欠損症の分子遺伝学的研究

ホスホグリセレートムターゼ(PGAM)欠損症解析の第一歩として正常の、PGAMM(筋型)のgenomic cloringに着手した。PGAM-M cDNAをプローブとしたgenomic Southern lilotで強くハイブリダイズする2本のバンドを基に2種類のenirichl genomic libraryを作製した。それらのlibraryよりλPGAMM4.11(2.8Kb)とλPGAMM5.11(4.3Kb)をクローニングした。その後の解析からλPGAMM4.11はPGAMMgenomic DNAの5′側をλPGAMM5.11はその3′側を構成し、両者は隣接することが判明した。PGAMM genomic DNAの特徴を述べると、全長2.86Kbで3つのEXONと2つのINTRUNより成り立っていた。この構成は2.3ーbisphosphoglycerate mufase(BPGAM)の構成と似ており、特に2番目のINTRONは全く同じ場所に局在していた。このことは、PGAMとBPGAMがgene familyで同じancestral geneより派生してきたという仮説をさらに支持するものである。TATA boxと逆転したCCAA boxは通常の位置にみられた。他の筋特異的housekeeping geneとそのプロモーター領域を比較検討したところ"GGGGCTGGG"の9ーbPなレメントが、アルトラーゼ筋型、クレアチンキナーゼ筋型、グリセロアルデヒドー3燐酸脱水素酵素の遺伝子の5′上流にも存在していた。不完全ではあるが乳酸脱水素酵素Aにも存在している。この9ーbpエレメントが筋特異的プロモーターか否かはエレメントの変異実験が骨格筋特異的プロモーター活性に及ぼす影響をみなければならない。以下の実験は現在進行中である。1.PGAM-M欠損症の解析(米国コロンビア大D.Mauro教授との共同研究)3つのEXONの両サイドのDNAを合成し、それらをprimerとして患者のgenomicDNAのEXON部分のみをポリメラーゼチェーンリアクション法により増幅し、その遺伝子構造を決定する。2.PGAM-M遺伝子座位の決定(英国MRCエドワード教授との共同研究)PGAMーB(脳型)にハイブリダイズしないPGAM-M INTRONor 5′上流をプローブとしてPGAM-Mの遺伝子座を決定する。ホスグリセレートムターゼ(PGAM)のM型(筋肉型アイソザイム)欠損症患者の遺伝学的解析を行う第一段階として我々は正常のPGAM-M genomic DNAのクローニングから開始した.というのは,正常のDNAの構造か明らかな場合tag I DNAポリメラーゼを用いたpolymerase chain reaction法(PCR法)により数時間で患者のDNAがクローニングできるばかりでなく,直接genomic DNAを鋳型とし構造決定か可能になるからである.又M型genomic DNAのクローニングをし,そのプロモーダー領域を明らかにる事は筋肉に時異的に発現する種々のアイソザイムの遺伝子発現という基本的なテーマへの重要なアプローチとなる.まずPGAM-M CDNAをプローブとてヒトleukocytc genomiclilramyをスクリーンニングしたところ70万個のプラークのうち実に36個のpositive-plaqueを得た.しかし種々の解析結果からそのほとんどはPGAM-B(脳型アイソザイム)のprocessed pseudogeneであろうと考えられた. (M型とB型のcDNAのホモロジーは約75%である事からcross-hybri-digationしたものと思われる. )普通用いられる方法ではPGAM-B related genefamily(processed pseudogene)をかいくぐりauthenticgenomicMをクローニングする事は困難と考えられた.そこでM-cDNAをプローブとしたEcoRI-digested gonomic Soutern blotにみられるmultiple hybridizing bandsのうち最もそのintensityの強い4.5kbと2.7kbの領域を切りとりEcoRI-digested xgtioにサブクローニングし2種類のenrich genomic libraryを作製した.それぞれのlibraryから1つづのクローンを得, puc18vectorにサブクローニングした.最初に2.7kbのクローンの全構造を決定した所M型cDNAの3′末端(622nt822nt)を中央に持ち,両サイドにintronを持つpartialauthentic M-genomic cloneである事が判明した.このintronをプローブとしてgenomic Southentic M-genomic cloneである事が判明した.このintronをプローブとしてgenomic Southentic blotを行った所予想通り2.7kb(Ecoの場合)にたった一本のバンドを認めた.現在4.5kbのクローンにつき検討中であるが, genomic Mの5′側を含んでいる事が期待される.ホスホグリセレートムターゼ(PGAM)欠損症解析の第一歩として正常の、PGAMM(筋型)のgenomic cloringに着手した。

このことは、PGAMとBPGAMがgene familyで同じancestral geneより派生してきたという仮説をさらに支持するものである。TATA boxと逆転したCCAA boxは通常の位置にみられた。他の筋特異的housekeeping geneとそのプロモーター領域を比較検討したところ"GGGGCTGGG"の9ーbPなレメントが、アルトラーゼ筋型、クレアチンキナーゼ筋型、グリセロアルデヒドー3燐酸脱水素酵素の遺伝子の5′上流にも存在していた。不完全ではあるが乳酸脱水素酵素Aにも存在している。この9ーbpエレメントが筋特異的プロモーターか否かはエレメントの変異実験が骨格筋特異的プロモーター活性に及ぼす影響をみなければならない。以下の実験は現在進行中である。1.PGAM-M欠損症の解析(米国コロンビア大D.Mauro教授との共同研究)3つのEXONの両サイドのDNAを合成し、それらをprimerとして患者のgenomicDNAのEXON部分のみをポリメラーゼチェーンリアクション法により増幅し、その遺伝子構造を決定する。2.PGAM-M遺伝子座位の決定(英国MRCエドワード教授との共同研究)PGAMーB(脳型)にハイブリダイズしないPGAM-M INTRONor 5′上流をプローブとしてPGAM-Mの遺伝子座を決定する。ホスホグリセレートムターゼ(PGAM)欠損症解析の第一歩として正常のPGAM-M(筋型)のgenomic cloningに着手した。PGAM-M CDNAをプローブとしたgenomic southern blotで強くハイブリダイズする2本のバンドを基に2種類のenriched genomic libraryを作製した。それらのlibraryよりλPGAMM4.11(2.8kb)とλPGAMM5.11(4.3kb)をクローニングした。その後の解析からλPGAMM4.11はPGAM-M genomic DANの5^1側を入PGAMM5.11はその3^1側を構成し、両者は隣接することが判明した。PGAM-M genomic DNAの特徴を述べると、全長2.86kbで3つのEXONと2つのINTRONより成り立っていた。この構成は2.3-bisphosphogycerate mutase(BPGAM)の構成と似ており、特に2番目のINTRONは全く同じ場所に局在していた。
非可換確率論，確率論，単葉関数論の対応関係

量子物理学においては物理量が単なる数値ではなく「非可換」かつ「確率変数」である.数学的には関数解析学や作用素環論において,確率論を取り込みながら量子論の基礎が作られてきた.いったん量子物理を離れてその数学的構造に注目して調べてみると,確率論との興味深い対比が見られる.例えば,複数の物理量(非可換確率変数)に対して「独立性」を数学的に定義すると,幾つかの異なった定義が可能である.その中で「単調独立性」というものが知られており,本研究ではこの単調独立性を軸にした非可換確率論と古典的な確率論の間の対応関係,さらに複素関数論における単葉関数の対応関係を解明する.量子物理学においては物理量が単なる数値ではなく「非可換」かつ「確率変数」である.数学的には関数解析学や作用素環論において,確率論を取り込みながら量子論の基礎が作られてきた.いったん量子物理を離れてその数学的構造に注目して調べてみると,確率論との興味深い対比が見られる.例えば,複数の物理量(非可換確率変数)に対して「独立性」を数学的に定義すると,幾つかの異なった定義が可能である.その中で「単調独立性」というものが知られており,本研究ではこの単調独立性を軸にした非可換確率論と古典的な確率論の間の対応関係,さらに複素関数論における単葉関数の対応関係を解明する.
空間認知地図の神経基盤の解明

本研究ではナビゲーションかかわる脳内神経機構を明らかにする事を目的としておこなった。これまでの我々の研究は、頭頂葉内側面と海馬傍回にナビゲーションに関係するニューロンがあることを明らかにし、特に頭頂葉内側面のニューロンの性質について詳しく調べてきた。本研究では、頭頂葉内側面と海馬傍回にナビゲーションに関係するニューロンの機能的差異について詳細に検討した。その結果、頭頂葉内側面のニューロンは、正しいルートをたどるために運動方向を指示することに関連し、海馬傍回のニューロンは風景の認識に関連することが明らかとなった。広い空間のナビゲーションにおいて、頭頂葉内側領域と海馬傍回との間にどのような機能的差異が存在するのかを調べることを目的として、ビルの中を移動するナビゲーション課題を遂行中に単一ニューロン活動を記録し比較した。2頭のニホンザルの海馬傍回(PHC)、頭頂葉内側面(MPR)からそれぞれ159個、119個のニューロンが記録でき解析をおこなった。ナビゲーション課題の開始から目的の部屋に到達するまでの間を行動の時間軸にそって10の期間に区切りニューロン活動を解析したところ、PHCニューロン群ではMPRニューロン群に比べ目的地の提示時期、目的地への到達直前期、到達期での活動を示すニューロンの割合が優位に高く、逆にMPRニューロン群では途中での旋回期での活動を示すニューロンの割合が高かった。目的地の提示期に最も強く反応するPHCニューロンは、解析できた142個中25個(18%)でそのうち16個は目的地に対する選択性があった。また、この16個のうち10個は目的地到達時に提示期と同じ選択性を示した。一方、MPRニューロンではそれぞれ6個/119個(5%)、2個と少なっかっく、選択性の強さを示す指標もPHCニューロンの方が高かった。旋回期で最も強い反応を示すニューロンはMRPで42個、PHCで20個とMPRで多く、MPRでは15個が旋回方向に選択性を示したのに、PHCでは選択性を示すニューロンはなかった。またMPRニューロンは実際の旋回が始まる前に活動を開始する傾向にあった。以上の結果は広域のナビゲーションにおいて、PHCニューロンは主として風景情報を処理し、MPRニューロンは運動情報の選択に係わりっている可能性を可能性を示唆していると考えられる。これまでの研究で、頭頂葉内側領域および海馬傍回のニューロン群が広い空間のナビゲーションに関連していることがわかって来た。広い空間内のナビゲーションにおいて、頭頂葉内側領域と海馬傍回との間にどのような機能的差異が存在するのかを調べることを目的として、同じ課題を用いて両方の領域から単一ニューロン活動を記録し、海馬傍回のニューロン群の解析をおこない論文を作成しつつ、ヒトでの機能的MRI研究の準備を始めた。これまでの研究では、頭頂葉内側領域のニューロン群は、場所情報と運動情報の組み合わせる、ナビゲーションのモデルにおける道順知識のリストの要素に相当するニューロンが見つかっていた。今回の研究では、今まで用いたナビゲーション課題のコースを変えて、単純化するとともに、コース内での直進、左折、右折の運動回数をそろえることで、場所情報と運動情報の区別をより明確にできる設定とした。その結果、頭頂葉内側面のニューロンは、これまでの結果でも観察されたように、運動の要素に関係するニューロンが多く、経由地点での運動方向に選択的に活動するニューロンが多かった。その一方で、海馬傍回のニューロンは、ナビゲーション課題の初めで、目的の部屋が提示された際に、部屋選択的に活動するニューロンが多かった。この結果は海馬傍回の機能が風景認知に関わるのに対して、頭頂葉は運動のための視覚情報処理に関わることを示唆している。これまで、広い空間内のナビゲーションにおいて、頭頂葉内側領域と海馬傍回との間にどのような機能的差異が存在するのかを調べることを目的として、同じ課題を用いて、2頭のニホンザルの海馬傍回(PHC)、頭頂葉内側面(MPR)から記録した単一ニューロン活動を記録し解析をおこなってきた。昨年度報告したように、PHCニューロンは主として風景情報を処理し、MPRニューロンは運動情報の選択に係るとい結果を得たので論文を投稿したところ、いくつかのコメントが得られたため再解析し論文の再投稿準備中である。機能的MRI実験において、実験に先立ち、実験で用いる課題の検討を行い完成させた。被験者には以下の二通りの方法で街並みの地図(認知地図)を覚えさせる。1)サーベイマップ的表象の構成:「右方向を見ると手前に郵便局、その先には警察署の建物が見え・・」のように俯瞰的に目印を覚えさせ、全体の認知地図を構成する。2)ルートマップ的表象の構成:「右に進んだ先には郵便局、左に曲がるとスーパーマーケット・・」のように道をたどりながら目印を覚えさせ全体の認知地図を構成する。

その上で、認知地図がどの程度正確に構成されたかを検証するためのYes、Noで回答できる質問を準備し、その結果から構成された認知地図の確かさを客観的に判断することとした。これよって、記銘と想起に関わる脳内機構を探る。機能的MRI実験では時間的制約があるため、1.どの程度の認知地図の広さと複雑さが適当であるか、2.文章の提示をする際に一度に提示する文章の量はどの程度が最適か、3.どの程度の繰り返し提示が適度の認知地図の構成に適切か、4.検証のための質問数はどの程度が適切か、についての検討をおこない、実際の機能的MRI実験実施できる状況にある。神経生理学ナビゲーション課題遂行中のニホンザルの、頭頂葉内側領域と海馬傍回でのニューロン活動の詳細な解析が終了し、投稿論文も仕上がっている。本報告作成と並行して投稿作業を行っている。ヒトでの機能的MRI研究は、MRI装置の入れ替えがあったため実験設備のセッティングに時間を要しているが、ほぼ終了し実験が開始出来る状況にある。また、実験で使用する課題についても構想がまとまり、ヒトでの行動実験を開始する予定である。上記のような過渡的な状況であったため、論文、学会発表が行えなかったが、最終年度への継続のため研究活動は十分に行えたと考える。サルでデータはまとまりつつあり、論文投稿の用意も始めている。ヒトでの機能的MRI研究の準備は構想の段階であり、今後、詰めていく。MRI装置入れ替えが作業が終了し、実験環境もほぼ整備されたので、本年度はヒトでの機能的MRI実験を集中して行う予定である。用いる課題を完成させ、行動実験でチェックしたあと、実際の撮像を行う予定である。研究計画にそって推進していく予定である。研究計画にそって予定どおり進めるが、研究遂行のため人員が必要であり、予定よりも人件費部分を多くとる可能性がある。
新規遺伝子RIG-Iを用いた細胞周期制御による新たな癌治療法の開発

常在性の細菌やウイルスの侵入に常にさらされる口腔内において組織が恒常性を保つためには、口腔内に特異的な免疫機構を有するものと推測される。それゆえ申請者は、RIG-Iの役割について解析を行い、同遺伝子を用いた遺伝子治療につながる基礎的研究を行ってきた。本研究においては、これまで遂行してきたRIG-I遺伝子の機能解析に加えて、口腔癌由来細胞株を用いて同遺伝子のシグナル伝達経路を明らかにし、口腔癌細胞の細胞周期を制御することを目的とする。本研究は臨床的応用においても有用であり、新たな遺伝子治療に発展する可能性を包含している。即ち、将来的には、遺伝子治療による細胞周期制御と免疫治療を含包した全く新たな癌治療法の開発につながる可能性も想定される。本年度申請者らはRIG-I(retinoic acid-inducible gene-I)の口腔癌における役割を検討すべく研究を行った。本研究においては、これまで遂行してきたRIG-I遺伝子の機能解析に加えて、口腔癌由来細胞株を用いて同遺伝子のシグナル伝達カスケードを明らかにし、口腔癌細胞の細胞周期を制御し、加えてアポトーシスに導くことを目的とした。細菌やウイルスに常に暴露されている環境を想定し、二本鎖RNAであるpolyICを用いて、口腔癌細胞におけるRIG-Iの発現を検討したところ、polyIC添加群ではRIG-I、GADD45Aの発現増強とCDK2の発現抑制を認めた。この結果はタンパク産生でも同様であった。さらにRIG-I強制発現した際にはCDK2の発現抑制も認められた。口腔癌細胞におけるRIG-I刺激によるタンパクの産生をプロテインアレイを用いて包括的に検討したところ、同様の結果を得た。フローサイトメーターを用いた細胞周期の変動解析では、RIG-IをノックダウンすることによってS期が増加し、G2/M期が減少していた。以上の結果から、RIG-Iは口腔癌細胞株の細胞周期に関与していることが示唆された。今後、マイクロアレイによる解析結果とプロテインアレイによる解析結果を包括的に統計処理し同遺伝子のシグナル伝達カスケードを解明する予定である。発現値をマッピングした「Hs Cell cycle KEGG」パスウェイ図より、G2/M期進行のチェックポイントに関与し、細胞周期の停止に関与するCHEK1およびその下流に位置するCDC25Cが、RIG-I強制発現サンプルで発現上昇にあることが認められた。また、DNA修復経路に関連するPCNAも、発現上昇の傾向を示した。一方、RIG-I siサンプルでは、CHEK1およびCDC25C、PCNAは発現減少を示し、RIG-I強制発現のサンプルと逆の発現傾向が見られた。以上の結果から、RIG-Iには細胞増殖抑制効果があることが示された。
新規システムを用いた致死性静脈血栓塞栓症に対するハイブリッドＩＶＲに関する研究

静脈血栓塞栓症に対するIVR治療の合併症について検討し、手技に伴う遠隔塞栓の予知が同時肺動脈圧測定により可能であることを明らかにした。また、静脈血栓塞栓症に対するIVR治療の有用性につき検討し、長期成績についてはじめて言及することができた。さらに、致死性静脈血栓塞栓症に対する血栓溶解・破砕・吸引療法を組み合わせたハイブリッドIVR治療システムの開発に着手することができた。致死性静脈血栓塞栓症に対するIVR(Interventional Radiology)への期待はきわめて大きいが、いまだ標準治療として評価されるには至っていない。申請者は、本領域におけるハイブリッドIVR治療システムを考案しこれまで研究を重ねてきたが、それに伴い新たな問題点も明らかになってきている。本研究の目的は、重症静脈血栓塞栓症に対する血栓溶解・破砕・吸引療法を併せたハイブリッドIVR治療システムの完成を目指すことにある。具体的には、新規システムを開発し、基礎的研究を行うことにより安全性を高め、最終的に治療成績を更に向上させる。本年度は、主に、新しい血栓吸引デバイスを考案・作成し、in vitro studyを推進した。具体的には、ブタ肺塞栓モデルを用いたハイブリッドIVRに関する研究に従事した。まず、いくつかの方法を用いて、自己血栓作成。作成した血栓に対し、体外で新規吸引デバイスを用いて吸引実験を行った。次に、ブタ下大静脈に血栓を作成。吸引実験を行った。最後に、エックス線非透過血栓を作成し、透視にて視認できるか確認した。今回の成果をまとめると、以下のごとくであった。今回の実験系で、下大静脈バルン閉塞自体は問題なく行われた。血栓も作成可能であったが、ヒト生体内への近似性という点で、トロンビン量とヘパリン量の検討が必要であった。エックス線非透過血栓としては、造影剤Iohexol 300mgI /ml 20ml+血液40ml+トロンビン600単位、または、10ml+血液40ml+トロンビン500単位が望ましかった。新規作成デバイスは血栓が比較的詰まりやすく、ヘパリン・コーテイングなどが必要かもしれない。また耐久性の強化が不可欠と考えられた。致死的静脈血栓塞栓症に対するIVR(Interventional Radiology)への期待はきわめて大きいが、いまだ標準治療として評価されるには至っていない。昨年度は、主に、新しい血栓吸引デバイスを考案・作成し、in vitro studyを推進した。まず、新しい血栓吸引デバイスについては、問題なく作成しえたため、そのまま動物実験に入ることとした。吸引実験を行った。成果をまとめると、以下のごとくであった。血栓も作成可能であったが、ヒト生体内への近似性という点で、トロンビン量とヘパリン量の検討が必要である。エックス線非透過血栓としては、造影剤Iohexol 300mgI /ml 20ml+血液40ml+トロンビン600単位、または、10ml+血液40ml+トロンビン500単位が望ましい。昨年度は、新規作成デバイスは血栓が比較的詰まりやすいことが判明したため、デバイスをヘパリン・コーテイングとし、また、耐久性の強化をおこなうこととした。現在動物実験により、システムの安全性と有効性を実証している段階である。また、並行して、手技に伴う血栓塞栓の遠隔塞栓に対する解決法とその予知についても研究を進めることができた。本研究の目的は、重症静脈血栓塞栓症に対する血栓溶解・破砕・吸引療法を併せたハイブリッドIVR治療システムの完成を目指すことにあった。エックス線非透過血栓としては、造影剤Iohexol 300mgI /ml 20ml+血液40ml+トロンビン600単位、または、10ml+血液40ml+トロンビン500単位が望ましいことが明らかになった。一方、新規作成デバイスは血栓が比較的詰まりやすいことが判明した。今後、デバイスをヘパリン・コーテイングとし、また、耐久性の強化をおこなうなどの対策が必要である。

また、手技に伴う遠隔塞栓に対する解決法とその予知とともに、更には我々が今まで行ってきたIVRの長期予後調査についても研究を進めた。その結果、致死的静脈血栓塞栓症に対する血栓吸引術の10年生存率は75.0±12.5%、ハイブリッドカテーテル治療の10年生存率は74.5±9.0%であることが初めて明らかになった。静脈血栓塞栓症に対するIVR治療の合併症について検討し、手技に伴う遠隔塞栓の予知が同時肺動脈圧測定により可能であることを明らかにした。また、静脈血栓塞栓症に対するIVR治療の有用性につき検討し、長期成績についてはじめて言及することができた。さらに、致死性静脈血栓塞栓症に対する血栓溶解・破砕・吸引療法を組み合わせたハイブリッドIVR治療システムの開発に着手することができた。致死的静脈血栓塞栓症に対するIVR(Interventional Radiology)への期待はきわめて大きいが、いまだ標準治療として評価されるには至っていない。本研究の目的は、重症静脈血栓塞栓症に対する血栓溶解・破砕・吸引療法を併せたハイブリッドIVR治療システムの完成を目指すことにある。具体的には、新規システムを開発し、基礎的研究を行うことにより安全性を高め、最終的に治療成績を更に向上させる。昨年度、ファントーム実験は問題なく行われ、重症静脈血栓塞栓症に対するハイブリッドIVR治療に適したデバイス・システムを決定することができた。そして動物実験に進むことができた。本年度は、システムの改良にやや手間取り、現在動物実験の段階でシステムの安全性と有効性を実証する段階である。一方、手技に伴う血栓塞栓の遠隔塞栓に対する解決法と予知については研究を進めることができた。内科系臨床医学・放射線科学本研究の目的は、重症静脈血栓塞栓症に対する血栓溶解・破砕・吸引療法を併せたハイブリッドIVR治療システムの完成を目指すことにある。次年度は、システムの安全性と有効性を実証した後、臨床応用を開始したい。具体的には、搬入された重症静脈血栓塞栓症患者を対象として、十分なインフォームドコンセントを得た後、細心の注意をもって、新しいハイブリッドIVR治療システムの臨床応用を開始したい。具体的には、15例を目標とする。また、手技に伴う遠隔塞栓に対する解決法とその予知とともに、更には我々が今まで行ってきたIVRの長期予後調査についても研究を進める。得られた成果については詳細に検討し、厳密な統計処理を行った上で、学会発表・論文執筆を行う。致死性静脈血栓塞栓症に対するIVR(Interventional Radiology)への期待はきわめて大きいが、いまだ標準治療として評価されるには至っていない。