hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
シリアにおける都市文明の展開に関する考古学的研究

1.本研究では各年度8月から9月にかけて現地調査を実施し、テル・マストゥーマ遺跡の補足的な整理研究を行った。テル・マストゥーマ周辺遺跡の地形測量及び表面採集調査では、合計14遺跡の地形実測図を作成し、採集遺物から鉄器時代に入って集落が急増拡大することを再確認した。この研究成果は研究分担者の常木晃が纏め研究成果報告書に収録した。2.これまで手つかずだった動物骨及び貝類の整理分析は、平成17年度から開始し翌年度には合計9,808点の分析調査を行い終了した。その結果、鉄器時代の集落研究に再考をもたらすような知見が得られた。研究分担者の西山伸一、研究協力者のCarine TOMEが纏めて公表した研究概要を研究成果報告書に再録した。3.放射性炭素年代測定の結果は、これまでのテル・マストゥーマ編年の比較年代を補強することになった。この成果は西山が纏め報告書に収録した。4.建築遺構図及び出土遺物実測図のデジタル化作業を行い、これらの版下を使ってテル・マストゥーマ鉄器時代第3街区の研究報告を研究協力者の和田久彦が纏め研究成果報告書に収録した。5.さらに1970年代にシリア・ユーフラテス川水没地域のルメイラ地区で、古代オリエント博物館が緊急発掘を行った青銅器時代前期のD21号墓の報告(脇田、石田、和田)、ルメイラ遺跡出土1の「刻線画のある石製容器片」(石田)の研究を当館紀要で公表したが、これらを報告書に再録した。6.本研究で得られた成果は、今後も「古代オリエント博物館紀要(BAOM)」などで研究成果を逐次公表していく予定である。1.8月から9月にかけてテル・マストゥーマ周辺遺跡の地形測量および表面採集、出土遺物の補完的な写真撮影、印章及び印影の再検討などの現地調査を実施した。さらにシリア考古総局から要請があった借用試料を返却した。2.テル・マストゥーマ周辺遺跡の調査では、半径15km圏内で確認されている28遺跡のうち11遺跡の実測図を作成し、さらに表面採集遺物から鉄器時代に入って集落が急増することを確認した。この地域の開発は鉄製農具の普及に伴って進められたとの結論を得た。3.出土遺物の補完的な写真撮影は、未登録資料を保管倉庫から取り出して仕分け整理を行い、編年写真撮影は次年度も継続して行う。4.未登録資料の整理を進める課程で印影と考えられる遺物が見つかり、印章及び印影の再検討が行われた。各年度かなりの出土をみた印章関係の検討は、最終報告作成のための総体的な調査として大きな意義があった。5.鉄製品の自然科学的な分析を目的として借用した試料をシリア考古総局に正式に返却した。日本で分析を行い保存処理を施した鉄製品は、保存状態がきわめて良好で、当局から高い評価を得た。6.研究支援者の和田久彦が毎年度末に開催される西アジア発掘調査報告会で、本年度の現地調査および整理作業についての概要発表を行った。1.前年度に継続して、8月から9月にかけてテル・マストゥーマ周辺遺跡の地形測量及び表面採集、出土遺物の補完的な写真撮影を行った。さらに動物骨及び貝類の整理分析、放射性炭素年代測定用のサンプル採取などの現地調査を新たに実施した。またイドリブ博物館から要請があった展示ケース内の出土品展示を整備した。2.テル・マストゥーマ周辺遺跡の調査では、合計14遺跡の地形実測図を作成し、採集遺物から鉄器時代に入って集落が急増することを再確認した。3.出土遺物の写真撮影は動植物の遺存体や織物生産関連遺物を中心に行い、印章関連遺物では印影も作成した。

4.これまで手つかずだった動物骨及び貝類の整理分析は、動物考古学のCarine TOMEが分析を担当し、鉄器時代のテル・マストゥーマの集落研究に再考をもたらすような知見が得られた。即ちマストゥーマは宮殿をもつような都市ではなかったが、当時の地域社会のなかで経済的・政治的な重要な役割を果たしていたことが、今回の動物骨と貝類の分析で示唆された。本研究は次年度も継続し報告書に纏めていく予定である。5.放射性炭素年代測定のための試料12点を採取し、分析を依頼した。その結果、これまでの考古学的編年からの比較年代を補強することが出来た。6.イドリブ博物館に展示してあるテル・マストゥーマ出土品にアラビア語、英語、日本語による展示解説や写真・図版パネルを加え、ビジュアルで解りやすい展示ケースに仕上げ好評を得た。研究成果を地元民に還元したことにより、シリア考古総局からも高い評価を受けた。7.研究分担者の西山伸一が毎年度末に開催される西アジア発掘調査報告会で、本年度の現地調査について動物骨・貝類の整理分析を中心にして概要発表を行った。1.本研究の最終年度の現地調査は、8月から9月にかけてテル・マストゥーマ出土遺物の補足的な整理研究を実施した。とりわけ動物骨及び貝類の整理分析では、研究分担者の西山伸一が中心となり、研究協力者のCarine TOMEが分析を担当し、前年度分(BAOM25,pp.87-116,2005参照)を含めて合計9,808点の分析調査を行い終了した。2.イタリア隊が発掘調査を行っている近隣の大都市遺跡テル・マルディーフ及びテル・アフィス出土の動物骨等についての情報交換を行ったところ、これらの遺跡で海産の巻貝類が出土していないことが判明し、同じ地域社会の鉄器時代で経済的な役割の違いが明らかとなってきた。3.テル・マストゥーマ周辺遺跡の調査で作成した地形測量図はコンピュータトレース作業によりデジタル化し、3次元画像の作成に対応できるように加工を施した。4.テル・マストゥーマの最終報告書刊行にむけて、建築遺構図及び出土遺物の実測図のデジタル化作業を行い、版下の作成を一部で試みた。5.研究協力者の和田久彦はテル・マストゥーマ鉄器時代の第3区画の研究報告をまとめ「研究成果報告書」に収録した。6.最終年度後に提出する「研究成果報告書」を作成した。さらに本研究で得られた成果は「古代オリエント博物館紀要(BAOM)」などで逐次公表していく予定である。
胸部ストレッチ体操を取り入れた冠動脈大動脈バイパス術後の運動療法プログラムの評価

正中切開法による冠状動脈大動脈バイパス術(CABG)後の呼吸筋萎縮や胸郭運動制限の緩和を目的として、呼吸筋伸展体操(RMSG)を併用した新しい術後運動療法プログラム(以下新RH)を考案した。術後の症例20例を、無作為に新RH群(10例)、対照群(10例)にわけて運動療法を行い(対照群には従来から行われている歩行運動のみ)、運動耐容能、肺換気能、呼吸筋力および主観的QOLについて検討した。術後の%VCは、両群とも術前より有意に低下していた。退院直前に行った6分間歩行試験(6MWD)は、新RH群が有意に高値を示した(p<0.05)。また最大吸気圧(MIP)と6MWDの間には、正の相関関係(r=0.66,p<0.05)が、胸郭拡張差(CHW)と年齢間には負の相関関係(r=-0.715,p<0.05)がみられた。6MWD後のBorg Scoreおよび退院直前に行ったMIP、CHWについては有意差はなかった。主観的QOLは、「排泄」パターンにおいて新RH群が有意に高値であった(p<0.05)。その他の項目については、有意差はみられなかった。CABG後の早期RMSGは、術後の運動耐容能向上に好影響を与え、新RHの有用性が示唆された。今後の課題として以下のことが考えられた。(1)RMSGの肺換気能と呼吸筋力への影響を検証することができなかったため、呼吸筋収縮の結果である呼吸運動や、呼吸筋の酸素消費量変化から運動効率を測定する方法を応用することによって、安全性・簡便性・再現性の高い呼吸筋の測定方法を評価時期を含めて検討する。(2)対象者の主観的評価に関しては、QOLのみでなく、身体症状や気分などに関して質問紙の内容を洗練していく。(3)対象の年齢や重症度、手術侵襲にそくしたRMSGの内容・回数を検討し、その有効性をより明らかにするとともに、CABG患者のクリティカル・パスにおける運動療法の一般化に応用する。【目的】正中切開法による冠状動脈バイパス術(CABG)後の呼吸筋萎縮や胸郭運動制限緩和を目的とした呼吸筋伸展体操(RMSG)を併用した新しい術後運動療法プログラム(以下新RH)を作成し、運動耐容能、換気機能および呼吸筋力に及ぼす影響について検討した。【方法】CABGを施行した患者を無作為に抽出し、術後新RHを施行したR群4例と従来の歩行のみの運動を施行したC群6例にわけた。術前後スパイロメトリー(%VC,%FEV_<1.0>)を測定し、退院前には6分間歩行試験(6MWD)、Borg Score、最大吸気圧(MIP)および乳頭部胸郭拡張差(CHW)を測定し両群の比較を行った。【結果】両群とも、術後の%VCは術前よりも有意に低下していたが、退院前6MWDではR群が有意に高値を示した(p<0.05)。またMIPと6MWD間で正の相関関係(r=0.74,p<0.05)を、CHWと年齢間で負の相関関係(r=-0.75,p<0.05)を認めた。6MWD後のBorg Scoreおよび退院前MIP、CHWでは有意差はみられなかった。【結論】CABG後の早期RMSGは術後の運動耐容能向上に影響を与え、新RHの有用の可能性が示唆された。【今後の課題】RMSGが術後の胸郭呼吸筋緊張や創部痛による不良姿勢を緩和し、換気量増大の不均衡性を軽減することで、呼吸感覚の閾値をさげ、運動耐容能向上に関節的に影響を及ぼすのではないかと期待したが、Borg Scoreでは有意な低下はみられず明らかにされなかった。また術前の呼吸筋力測定が、対象者の発作を誘発する危険性があるため倫理的配慮から行うことができず、RMSGの呼吸筋力への影響を検証することができなかった。MIP以外の呼吸筋の評価方法としては、Konno-Mead diagram、瀧島らの呼吸筋機能測定装置と、いずれも特殊器具を必要とする。今後は、評価時期を含め安全性・簡便性・再現性の高い測定方法を検討し、RMSGの有効性を明らかにすること、対象者数を増やしRMSGの心理的側面への評価を行っていきたい。

主観的QOLは、「排泄」パターンにおいて新RH群が有意に高値であった(p<0.05)。その他の項目については、有意差はみられなかった。CABG後の早期RMSGは、術後の運動耐容能向上に好影響を与え、新RHの有用性が示唆された。今後の課題として以下のことが考えられた。(1)RMSGの肺換気能と呼吸筋力への影響を検証することができなかったため、呼吸筋収縮の結果である呼吸運動や、呼吸筋の酸素消費量変化から運動効率を測定する方法を応用することによって、安全性・簡便性・再現性の高い呼吸筋の測定方法を評価時期を含めて検討する。(2)対象者の主観的評価に関しては、QOLのみでなく、身体症状や気分などに関して質問紙の内容を洗練していく。(3)対象の年齢や重症度、手術侵襲にそくしたRMSGの内容・回数を検討し、その有効性をより明らかにするとともに、CABG患者のクリティカル・パスにおける運動療法の一般化に応用する。
森林の熱エネルギー交換過程における樹冠内の貯熱変化量の影響評価

従来、森林の熱エネルギー交換過程においてさほど重要視されていなかった樹冠内部の貯熱変化量に着目し、樹冠内部の気象観測より貯熱変化量の推定を行い、熱エネルギー交換過程における貯熱貯熱変化量の影響評価を行った。観測は兵庫県赤穂市に位置する環境保全林で行った(植栽後約11年、植栽密度は2本/m^2、平均樹高は約6m、葉面積指数は6程度)。この樹冠上で純放射量、乾湿球温度、樹冠表面温度、樹冠内の乾湿球温度および樹帯域、葉面温度、地中の含水率及び温度の測定を行い、気層温度変化、気層水蒸気圧変化、樹体温度変化、土壌層温度変化に起因する貯熱変化量の算出をそれぞれ行い、樹冠内部の貯熱変化量の総和を求めた。測定された9, 10月の晴天日の貯熱変化量中の最大項は、土壌層の温度変化による地中熱流量で、最大値は30W/m^2程度、続いて樹体温度変化による20W/m^2程度であった。気層の温度、水蒸気圧変化による項はそれぞれ10W/m^2以下と小さな値であり、総和は純放射量の10%程度の約60W/m^2であった。比較として測定を行ったスギ人工林(平均樹高約10m、樹冠は閉鎖)での貯熱変化量の特性は異なり、樹体温度変化に起因する項が最大で30w/m^2程度、続いて土壌温度に起因する項で20W/m^2程度であり、総和は純放射量の10%程度の70W/m^2程度であった。以上より森林樹冠内の貯熱変化量は、樹冠の材積量、密度などの日照の減衰等の影響により、地中熱流量と樹体の貯熱量との配分が規定されると考えられ、この2項目が重要であり、気層の貯熱変化量は小さいと考えられた。晴天日における貯熱変化量の総和は、純放射量の1割程度を占めることが明らかとなった。
ヒト遺伝子組換え型bFGFを用いた虚血性心疾患に対する冠血管新生手術の基礎的研究

【目的】bFGFの血管内投与における血管新生効果は既に確立されている。本研究では虚血心筋に対し、外科手術適にbFGFの心外膜および心筋内局所投与し、その血管新生効果を検討することを目的とした。【方法】1)雑種成犬を用い、左冠状動脈前下行枝を2段階結紮し虚血心筋モデルを作成し、ヒト遺伝子組換え型bFGFを心外膜および心筋内に下記の条件で投与し、投与後34週間で血管造影検査にて血管新生の効果を検討した。一部は病理組織学的検査を行った。(1)bFGF10μg,(2)bFGF10μg+ヘパリン1mg,(3)bFGF30μg(4)bFGF30μg+ヘパリン1mg,(5)bFGF300μg+ヘパリン10mg。2)上記実験(5)を日本猿を用いて行った。3)雑種成犬の虚血心筋モデルに冠状動脈バイパス手術を行い、(5)を投与した。【結果】1)3)の実験では血管造影上側副血行の存在は認められたが、bFGFの投与部位に有意な血管新生効果を認めることはできなかった。【考察】初年度の研究において、実験1)の(1)(4)を行い、血管新生効果が認められなかったため、次年度の研究においてbFGFの大量投与を検討したが効果が認められなかった。実験動物の種差を考慮し、日本猿を用いて同様の実験を行ったがやはり効果を認められなかった。また、最終年度には冠状動脈バイパス下に大量投与を行ったが血管新生効果は明らかではなかった。遺伝子組換え型bFGFは常温では数分で失活することが判明している。局所投与では血管内投与よりも細胞内に取り込まれるのに時間がかかり、心筋細胞内に取り込まれる前にbFGFが失活し血管新生効果を発現しなかったものと考えられた。雑種成犬12頭(体重10.019.5kg)を用いて基礎的実験を行った。実験は全身麻酔、左開胸下に行った。左冠状動脈前下行枝を二段階結紮することにより左前下行枝支配領域に虚血を作成し、次の3種類の方法でbasic Fibroblast Growth Factor(bFGF)を左心室心筋に局所投与した。12頭中2頭が1週間以内に死亡した。一週間以上の生存が得られた10頭を対象として、心筋虚血の有無、血管新生の有無を病理組織学的または冠状動脈造影検査を行って検討した。実験1)雑種成犬3頭:bFGF 10μgを2ccの生理食塩水に溶解し、虚血心筋の心外膜下の数カ所に注射器を用いて局所投与を行った。4週間後に犠牲死させ、摘出心の病理組織学的検討を行った。実験2)雑種成犬4頭:bFGF10μgを2ccの生体糊に溶解し、虚血心筋の心外膜上に塗布、留置し、4週間後に犠牲死させ、摘出心の病理組織学的検討をおこなった。なお4頭中1頭では心外膜を剥離し、生体糊が心筋に直接接触するように行った。実験3)雑種成犬3頭:bFGF10μgを0.5ccの生理食塩水に溶解し、虚血心筋の心外膜下の数カ所に注射器を用いて局所投与を行った。

2週間後に犠牲死させ、摘出心の冠状動脈造影を行い、血管新生の有無を検討した。結果:現在までの実験では組織学的に小血管の存在と、造影上の側副血行の存在は認められたが、明らかな血管新生の所見は得られていない。現在、bFGFの有効な投与法を検討中である。昨年度の研究結果を踏まえ、雑種成犬3頭、日本猿2頭を用いて実験を行った。昨年度の実験ではbFGF 10μgの局所投与では十分な血管新生効果が得られないことが判明したため。今年度の実験ではbFGF 300μgの局所当初による血管新生効果を検討した。実験1)雑種成犬3頭を用い、全身麻酔、左開胸下に左前下行枝の中間部を2段階結紮し、急性心筋虚血を作製した。bFGF 300μgを硫酸ヘパリン10mgに溶解したものを、虚血心筋内に局所投与した。3週間後に犠牲死させ、摘出心の冠上動脈造影および組織学的検討を行い、虚血心筋の血管新生を検討した。結果1)組織学的に小血管の存在、造影上わずかな側副血行の存在は認められたが、明らかな血管新生効果は認められなかった。以上の実験1の結果はbFGFの効果に種差があるためではないかと考えられた。我々が用いているbFGFは遺伝子組み換え型ヒトbFGFであるため、ヒトと遺伝子上近いと考えられる日本猿を用いて実験2を行った。実験2)日本猿2頭を用い、実験1と同様の方法でbFGFを虚血心筋内局所投与を行い、血管新生効果を検討した。結果2)摘出心の血管造影では明らかな血管新生は認められなかった。現在、組織学的検討を行っている。【目的】bFGFの血管内投与による血管新生効果は既に確立されている。本研究では虚血心筋に対し、外科手術的にbFGFの心外膜および心筋内局所投与し、その血管新生効果を検討することを目的とした。【方法】1)雑種成犬を用い、左冠状動脈前下行枝を2段階結紮し虚血心筋モデルを作成し、ヒト遺伝子組換え型bFGFを心外膜および心筋内に下記の条件下で投与し、投与後34週間で血管造影検査にて血管新生の効果を検討した。一部は病理組織学的検査を行った。(1)bFGF10μg,(2)bFGF10μg+ヘパリン1mg,(3)bFGF30μg,(4)bFGF30μg+ヘパリン1mg,(5)bFGF300μg+ヘパリン10mg。2)上記実験(5)を日本猿を用いて行った。3)雑種成犬の虚血心筋モデルに冠状動脈バイパス手術を行い、(5)を投与した。【結果】1)3)の実験では血管造影上側副血行の存在はは認められたが、bFGFの投与部位に有意な血管新生効果を認めることはできなかった。【考察】初年度の研究において、実験1)の(1)(4)を行い、血管新生効果が認められなかったため、次年度の研究においてbFGFの大量投与を検討したが効果が認められなかった。実験動物の種差を考慮し、日本猿を用いて同様の実験を行ったがやはり効果を認めなかった。また、最終年度には冠状動脈バイパス下に大量投与を行ったが血管新生効果は明らかではなかった。遺伝子組換え型bFGFは常温では数分で失活することが判明している。局所投与では血管内投与よりも細胞内に取り込まれるのに時間がかかり、心筋細胞内に取り込まれる前にbFGFが失活し血管新生効果を発現しなかったものと考えられた。
学校インターンシップ体験が学生の実践的指導力に与える影響についての実証的研究

本研究は、教員養成系大学で行われている学校インターンシップの効果について、実証することを目的とした。本研究では、学校インターンシップ体験内容の調査、学生の実践的指導に関する自己評定の調査、そして実践的な指導に関する実証実験を実施した。その結果、学校インターンシップ体験は、児童との関係性をより寄り添ったものに変え、模擬授業のパフォーマンスを児童に寄り添ったものへと変えることが示唆された。現在,教職を目指す学生に対して,教員として必要な資質能力を確実に身につけさせることが喫緊の課題として存在しており,その課題を解消する取り組みの一つとして「学校インターンシップ」の充実が求められている。学校インターンシップは,教育職員免許法に基づく教育実習とは別に設けられた教育活動の体験的プログラムであり,学校組織に位置づく過程の中で実践的な活動に従事することが期待されている。本研究は,「学校インターンシップ」における体験に注目し,学校インターンシップ体験が学生の実践的指導力に与える影響について,調査・実験を実施し実証的に明らかにすることを目的としている。本研究は,3つの期に分かれている。第1期では,学校インターンシップに参加した学生群と参加しなかった学生群の2群に対して,「学校インターンシップにおける体験の調査(参加学生のみ)」,「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」,「教師観や教育姿勢について問う半構造化面接調査」を実施する。平成25年度は,学校インターンシップに参加した大学生を対象にして,第1期の「学校インターンシップにおける体験の調査」を実施した。その結果,参加学生の活動が,主に「授業中の子どもの学習支援」「特別な支援が必要な子どもの支援」「学校行事の準備」「休み時間や放課後における子どもとの交流」であることが明らかになった。次年度は,学校インターンシップ参加群と不参加群の両方の研究対象者に対して,「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」,「教師観や教育姿勢について問う半構造化面接調査」を実施する予定である。本研究は,「学校インターンシップ」における体験に注目し,学校インターンシップ体験が学生の実践的指導力に与える影響について,調査・実験を実施し実証的に明らかにすることを目的とする。平成26年度は,学校インターンシップに参加した大学生を対象にして,第1期の「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」を実施し,第2期の「学校インターンシップにおける体験の調査」を実施した。その結果,前年度の調査結果と同様に,参加学生の活動が,主に「授業中の子どもの学習支援」「特別な支援が必要な子どもの支援」「学校行事の準備」「休み時間や放課後における子どもとの交流」であることが明らかになった。現在,実践的指導力の実証を行うための実験で得られたデータを分析中である。平成27年度は,第2期の「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」を実施した。第3期の「学校インターンシップにおける体験の調査」については、学校インターンシップの運営が一部中断されたため、調査を行うことが出来なかった。次年度は,学校インターンシップ不参加群の研究対象者に対して,第3期の「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」を実施する予定である。調査対象の学校インターンシップが、運営主体の都合により一部中止となっており、データ収集が困難となっているため。本研究は、「学校インターンシップ」における体験に注目し、学校インターンシップ体験が学生の実践的指導力に与える影響について、実証的に明らかにすることを目的とし、A大学教員養成系学部の学生38名(学校インターンシップ体験有:19名、学校インターンシップ体験無:19名)に対して、実践的指導力の自己評定の質問

紙調査及び実践的指導力の実証実験を実施した。学校インターンシップ体験(有・無)と模擬授業練習回数(少・多)を独立変数、森下・麻生・長谷川・河野(2012)の実践的指導力自己評定尺度の下位尺度である「授業実践力」「生徒指導力」「教育臨床力」「教師の資質」「児童生徒理解力」を従属変数とした分散分析を実施した。その結果、模擬授業練習回数が多い者において、学校インターンシップによって生徒指導力の自己評定に差が生じることが明らかになった。学校インターンシップの体験内容の多くは、「授業中の学習支援」や「特別な支援が必要な子どもへの支援」など個々の子どもに寄り添った活動であった。そのため、学校インターンシップの体験は、体験した学生の生徒指導力に対する自己評定を高める効果があることが示唆された。さらに、現在、野中(2011)の授業中に小学校教師が取る姿勢をもとにして、学校インターンシップ体験有り群と無し群の模擬授業中の姿勢を分析した。その結果、学校インターンシップ体験有り群において、児童の目線に合わせて個別支援を行う姿勢が多く見られた。学校インターンシップ体験は、生徒指導力に対する自己評定を高めるだけではなく、個々の子どもに寄り添った指導を行う姿勢を身につける効果があったことが示唆された。本研究は、教員養成系大学で行われている学校インターンシップの効果について、実証することを目的とした。本研究では、学校インターンシップ体験内容の調査、学生の実践的指導に関する自己評定の調査、そして実践的な指導に関する実証実験を実施した。その結果、学校インターンシップ体験は、児童との関係性をより寄り添ったものに変え、模擬授業のパフォーマンスを児童に寄り添ったものへと変えることが示唆された。調査対象の学校インターンシップが,運営主体の都合により中止となったため,データの収集が困難となっているため。学校インターンシップ不参加群の研究対象者に対して,第3期の「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」を実施する予定である。教育心理学今後は,学校インターンシップ参加群と不参加群の両方の研究対象者に対して,第2期の「実践的指導力の自己評価についての質問紙調査」,「実践的指導力の実証を行うための実験」を実施し,第3期の「学校インターンシップにおける体験の調査」を実施する予定である。本研究は,「学校インターンシップ」における体験に注目し,学校インターンシップ体験が学生の実践的指導力に与える影響について,調査・実験を実施し実証的に明らかにすることを目的としている。現在までに第1期調査「学校インターンシップにおける体験の調査(参加学生のみ)」の調査・分析を完了している。研究計画で設定していた調査・分析を完了しているため,現在までの達成度を(2)おおむね順調に進展していると判断した。
Kaposi肉腫の発症病態像の地域特異性に関する血清疫学, 病理学的研究:赤道アフリカ型.欧米古典型および後天性免疫不全(AIDS)型の比較研究

近年, Kaposi肉腫Kaosi's sarcomaは後天性免疫不全症候群Acquired Immune Deficiency Syndrome(AIDS)の患者に発生する腫瘍としてにわかに注目されるようになった.Kaposi肉腫は,身体の四肢とくに下肢や躯幹の皮膚に,単発性あるいは多発性の,結節性あるいは扁平な病巣を形成したり,リンパ節や内蔵に出血性あるいは増殖性の病変を生じる疾患である.病理組織学的には,リンパ管内皮細胞あるいは血管内皮細胞に類似した異型細胞から成る管腔組織とその間に介在する紡錘形の異型細胞が増生している.その初期には炎症性肉芽組織にも類似するので, Kaposi肉腫は感染症と腫瘍疾患との両者の性質を兼ね備えた疾患として病理学的に大変興味ある疾患である.Kaposi肉腫は地理病理学的に以下のような各型に分類される.1)欧米古典型:古来,地中海沿岸地方をはじめ欧米で散発する型で,イタリア人やユダヤ人に多いとされている疾患である.Kaposi(1872)が記載したのはこの型と思われる.成人型が一般的である.2)アフリカ風土病型:赤道アフリカを中心に南北数百キロメートルの地帯に高頻度に見られる.多くの患者は中高年の男子である(成人型).小児に発生する場合は全身のリンパ節に病変が生じ,とくに頚部リンパ節が侵されると外観的に小児のバーキットリンパ腫に類似する(小児型). 3)AIDS流行病型:AIDSのうちとくに男子同性愛者に併発する型である.したがって比較的若年者に多い.4)腎臓移植患者,悪性リンパ腫など何らかの免疫不全の状態に併発する型.研究成果の概略は以下の如くである.1.アフリカ風土病型Kaposi肉腫の発症について自然環境や人類生態がどのような影響を及ぼすかについて人類および動物の生態学者,環栄生理学者,公衆衛生学者,疫学者などとともに学際的シンポジウムを開き討議した(学際的熱帯医学シンポジウム:人類の生態と疾患の発現様式.1987年1月長崎).アフリカ大陸ではKaposi肉腫やバーキットリンパ腫は高温湿潤地帯に比較的多いことが指摘された.またKaposi肉腫の発生頻度も部族によって異なることが従来よりもさらに明確になりつつある.つまり, Kaposi肉腫の発生には自然環境,生活様式,遺伝的素因など多くの要因が関与していることが推察された.2.アフリカ風土病型Kaposi肉腫,とくにリンパ節原発型の病理形態学的特徴についてさらに詳細に検討した.AIDS流行病型のリンパ節原発型とは病変の発生部位において多少とも異なることを見出した.3.Kaposi肉腫の組織中に見出される分泌物について組織化学的に検索した.4.3型のKaposi肉腫(欧米古典型,アフリカ風土病型, AIDS流行病型)についてそれらの病態像の差異についてさらに資料を充実させて検討を続けている.近年, Kaposi肉腫Kaosi's sarcomaは後天性免疫不全症候群Acquired Immune Deficiency Syndrome(AIDS)の患者に発生する腫瘍としてにわかに注目されるようになった.Kaposi肉腫は,身体の四肢とくに下肢や躯幹の皮膚に,単発性あるいは多発性の,結節性あるいは扁平な病巣を形成したり,リンパ節や内蔵に出血性あるいは増殖性の病変を生じる疾患である.病理組織学的には,リンパ管内皮細胞あるいは血管内皮細胞に類似した異型細胞から成る管腔組織とその間に介在する紡錘形の異型細胞が増生している.その初期には炎症性肉芽組織にも類似するので, Kaposi肉腫は感染症と腫瘍疾患との両者の性質を兼ね備えた疾患として病理学的に大変興味ある疾患である.Kaposi肉腫は地理病理学的に以下のような各型に分類される.1)欧米古典型:古来,地中海沿岸地方をはじめ欧米で散発する型で,イタリア人やユダヤ人に多いとされている疾患である.Kaposi(1872)が記載したのはこの型と思われる.成人型が一般的である.2)アフリカ風土病型:赤道アフリカを中心に南北数百キロメートルの地帯に高頻度に見られる.多くの患者は中高年の男子である(成人型).小児に発生する場合は全身のリンパ節に病変が生じ,とくに頚部リンパ節が侵されると外観的に小児のバーキットリンパ腫に類似する(小児型). 3)AIDS流行病型:AIDSのうちとくに男子同性愛者に併発する型である.したがって比較的若年者に多い.4)腎臓移植患者,悪性リンパ腫など何らかの免疫不全の状態に併発する型.研究成果の概略は以下の如くである.1.アフリカ風土病型Kaposi肉腫の発症について自然環境や人類生態がどのような影響を及ぼすかについて人類および動物の生態学者,環栄生理学者,公衆衛生学者,疫学者などとともに学際的シンポジウムを開き討議した(学際的熱帯医学シンポジウム:人類の生態と疾患の発現様式.1987年1月長崎).アフリカ大陸ではKaposi肉腫やバーキットリンパ腫は高温湿潤地帯に比較的多いことが指摘された.またKaposi肉腫の発生頻度も部族によって異なることが従来よりもさらに明確になりつつある.つまり, Kaposi肉腫の発生には自然環境,生活様式,遺伝的素因など多くの要因が関与していることが推察された.2.アフリカ風土病型Kaposi肉腫,とくにリンパ節原発型の病理形態学的特徴についてさらに詳細に検討した.

AIDS流行病型のリンパ節原発型とは病変の発生部位において多少とも異なることを見出した.3.Kaposi肉腫の組織中に見出される分泌物について組織化学的に検索した.4.3型のKaposi肉腫(欧米古典型,アフリカ風土病型, AIDS流行病型)についてそれらの病態像の差異についてさらに資料を充実させて検討を続けている.
肢形成の分子機構と関連シグナル伝達遺伝子の探索

ショウジョウバエ肢形成過程で、主としてホメオボックス遺伝子BarH1,BarH2の上流及び下流に関与すると思われる遺伝子を探索した。昨年度同定を報告した20遺伝子に加え、新たにaristaless-like(all)を同定しDfrizzled-3(Dfz3)と共に詳しく調べた。allは、BarH1,BarH2の発現領域の内側で円盤状に発現し、その変異体は、同様にBarH1,BarH2の発現領域の内側で円盤状に発現するホメオボックス遺伝子aristalessと同様の表現型を示した。即ち、変異株では、BarH1,BarH2の肢中心部での発現抑圧が解除され、肢先端部の構造が欠損した。cDNAの構造解析の結果、allは、aristalessとは異なったグループに属するホメオボックス遺伝子であることが判明した。即ち、BarH1,BarH2は、肢中心部で少なくとも2種類のホメオボックス遺伝子allとaristalessにより負の調節を受け、逆にこれらの遺伝子は、肢のより周辺部でBarH1,BarH2により負の制御をうけていることになる。この相互抑制的な転写制御機構により肢のpretarsusとtarsiの境界が決められる。Dfz3の性質を調べた。Dfz3は、新規のショウジョウバエWingless受容体であることが判明した。培養細胞を用て調べたところ、Dfz3はDfz2と同様に、培養液中のWinglessと結合し、弱いながらもシグナルを細胞内に伝達した。同様な弱いシグナル伝達活性は、UAS-Dfz3を用いた実験からも支持された。Dfz3は、planar polarityには、全く関係しなかったが、Winglessシグナリングが弱いときその活性を抑圧できることが分かった。これは、Dfz3が、非効率的なWingless受容体であることから期待される当然の結果かもしれない。Dfz3は、Winglessモルフォゲン勾配を結果として低下させ、より滑らかにする働きがあると示唆された。
細胞運命決定機構を利用した環境汚染物質の曝露評価とその簡便検出法の開発

現在、日本は多くの環境汚染物質に悩まされている。その例として黄砂やPM2.5といった粒子状物質があり、それらには、細菌などの微生物をはじめ、鉱物、化学物質などが付着している。本研究課題では、モデルマウスを用いた解析から、実際に日本に飛来してきた粒子群、それに付着していた成分、また室内で検出される物質に、免疫反応を修飾する働きがあることを明らかにした。粒子に関してはそのサイズの違いにより影響に差異があることもわかった。これらを応用し、環境汚染物質影響速報といった、情報提供に繋げていくことを考えている。申請者らは環境汚染物質の健康影響に関して多方面から研究してきたものの、よりシンプルに且つ明確に健康影響評価できる方法の必要性に直面してきた。そこで、細胞が環境汚染物質によって何らかの影響を受けた際に出すサインに注目し、その特徴的なサイン(分子マーカー)を用いて、分子プロファイルすることで環境汚染物質に対する曝露評価を行うことを提案した。初年度はマウスの初代培養細胞を用いたin vitroアッセイを中心に行った。サインとしてはeatmeシグナル、dangerシグナル、オートファジーシグナルに着目し、多くはそれらの細胞溶解液を用いたウエスタンブロット法とEMSA(ゲルシフト)法により、サインの誘導を解析した。マウスの脾臓より脾臓細胞を調製し、初代培養細胞として用いた。またマウス骨髄細胞からマクロファージを分化誘導し、貧食細胞の例として用いた。環境汚染物質としては例年、春先に飛来してくる黄砂を想定し、PM10の粒子状物質を用いた。刺激後、12時間で、脾臓細胞においてオートファジーの特徴的なサインであるp62とLC311の発現誘導が認められた。また誘導マクロファージにおいては刺激後12時間で、dangerシグナルに深く関与するNF-kBの活性化誘導が認められた。またLPSで誘導されるNF-kBに対して、PM10の粒子状物質は増強させる作用があることが示された。以上より、初代培養細胞が環境汚染物質により影響を受け、シグナル・サインを誘導することが示唆された。環境汚染物質、特に粒子状物質の健康影響に関して、多方面から研究してきた。特に粒子状物質の代表でもあり、健康影響が懸念されている黄砂について、亜急性の影響をリンパ組織に関して解析した。マウスの気管内にハロタン麻酔科で、0.5 mL量(100 μg)の黄砂を投与後すばやく蘇生しケージに戻す。気管内投与後、1日目および3日目にマウスを解剖し、脾臓細胞を調製した。肺での炎症は洗浄液中のサイトカイン(TNF-α)を測定することで評価した。1日目では肺での炎症が確認されたが、脾臓では変化が認められなかった。対照的に、3日目では肺での炎症は低下していたが、脾臓では細胞の活性化が認められた。特に転写因子であるNF-kBの活性化が脾臓細胞中で観察された。これらの結果は環境汚染物質による生体影響があり、更にはアレルギーなどを引き起こす際に重用な役割を果たす免疫担当細胞の活性化を伴っていることを示している。また環境汚染物質のうちガス状化学物質であり、シックハウス(ビルディング)症候群の原因物質として疑われている2-エチル-1ヘキサノールについて解析をした。BALB/cマウスに2-エチル-1ヘキサノールを10μL点鼻し、曝露モデルマウスを作成した。曝露後、24時間でマウスかた脾臓を摘出し、脾臓細胞を調製した。その増殖能を測定したが、対照群と曝露群に有意な差は認められなかった。これらの結果から、粒子状物質の生体影響が懸念されるエビデンスが得られた。またガス状物質に関しては、投与方法、期間などを更に検討していくことが重要であると考えられ、最終年度につなげていく予定である。環境汚染物質として黄砂やPM2.5が挙げられるが、それらは粒子と付着物質から構成されている。本年度はまず、粒子のサイズの違いによる免疫応答の差異を検討した。粒子サイズを均一なものを用い、サイズの違う(0.3 μm、1 μm、3 μm)球状の粒子を用いた。粒子をマウスに10μL点鼻投与し、曝露モデルマウスを作成した後、24時間後にマウスから脾臓を摘出し脾臓細胞を調製した。その脾臓細胞を細胞分裂誘発剤の一つであるリポポリサッカライド(LPS)で刺激し、増殖反応と液性因子の一つであるTNFーαの産生量を検討した。興味深いことに1 μm、3 μmの群において増殖反応、TNFーα産生量が対照群に比べ増強されており、それは3 μmの群でより顕著であった。続いて、付着物質としてTar(タール)成分が確認されていたので、その影響を調べた。

マウスの気管内にハロタン麻酔下で、0.1 mL量(100 μg)のtar成分を2週間おきに4回投与し、最終投与後、24時間後にマウスから脾臓を摘出し、脾臓細胞を調製した。その脾臓細胞の増殖能を調べたところ、対照群に比べ、有意に高値を示した。更には細胞分裂誘発剤の一つであるコンカナバリンA(ConA)で刺激後の培養上清中の液性因子、IL-2の量を調べたところ、投与群で高かった。これらの結果から、粒子状物質自身とそれに付着している物質が生体に影響を及ぼすことが示された。その修飾作用は多岐に渡り、組成に伴う生体影響の違いが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。免疫学26年度が最終年度であるため、記入しない。in vitroのアッセイが中心であったため、比較的スムーズに実験が進んだ。計画にのっとり、遂行している。今年度はin vitroで更に種々の環境汚染物質を用いて、データ取得を重ねる計画である。概ね、計画通りに行う予定である。前年度の結果を踏まえ、計画を遂行していく。粒子状物質の生体影響が懸念されるエビデンスが得られたので、その点はより詳細に解析する。またガス状物質に関しては、条件検討などを含め、影響の有無を再度検証する計画である。H24年度に遺伝子導入装置の購入を予定していたが、予算の関係上取りやめた。その分を効率は落ちるが、試薬を用いた方法に移行し、H25年度に使用していく予定である。ほぼ計画通りに進んだが、海外のレートや、キャンペーンを利用し、若干の余剰がでたため。金額は多くないので、消耗品に当てる予定である。
連続体モデルによるバラスト道床の繰り返し変形挙動の定量評価に関する総合的検討

本研究では,弾塑性連続体モデルに基づく3次元有限要素モデルを用いて,バラスト道床の沈下メカニズムの解明に取り組んだ.また,時間域均質化法やmulti-time scaling法, cyclic densificationモデルの適用により,有限要素法に基づく道床沈下解析における計算効率の改善を図った.さらに, particle swarm optimization(PSO)により拡張下負荷面モデルの材料パラメータを同定した上で, 1次近似2次モーメント法を用いて,材料の力学挙動の変動の影響を考慮した3次元道床沈下解析手法を開発した.本研究では,弾塑性連続体モデルに基づく3次元有限要素モデルを用いて,バラスト道床の沈下メカニズムの解明に取り組んだ.また,時間域均質化法やmulti-time scaling法, cyclic densificationモデルの適用により,有限要素法に基づく道床沈下解析における計算効率の改善を図った.さらに, particle swarm optimization(PSO)により拡張下負荷面モデルの材料パラメータを同定した上で, 1次近似2次モーメント法を用いて,材料の力学挙動の変動の影響を考慮した3次元道床沈下解析手法を開発した.平成21年度は,バラスト道床を下負荷面モデル,まくらぎを線形弾性体でモデル化した弾塑性有限要素モデルにより繰り返し変形解析を行ない,鉛直荷重および水平荷重がレール位置に繰り返し作用する場合の道床内部の変形状態について考察した.その結果,載荷時のまくらぎのたわみの影響を考慮した場合,塑性ひずみはまくらぎの真下の領域に集中し,物質の移動について粒状体解析の場合の解の挙動と類似した解析結果が得られることがわかった.その他,応力やスピン,回転の分布についても検討した.さらに,有限要素連続体モデルを用いた繰り返し変形解析のさらなる効率化を目的に,hypoplasticモデルに時間域均質化法を援用したマクロ・ミクロ時間応答に関する弱連成解析手法を有限要素法プログラムに実装し,準静的釣り合い問題における解析アルゴリズムの妥当性,および計算負荷の削減可能性などについて検討した.また,cycle-jump型構成モデルを用いて物質点での応力解析を行ない,残留ひずみの評価精度と計算負荷の関係について検討した.なお,上述の研究成果は,平成22年度以降に順次論文等で公表する予定である.平成22年度の主たる研究成果は,以下の通りである.1.解析効率のさらなる向上の望める変形解析モデルの導入可能性の検討Cycle jump型構成モデルを3次元有限要素法に実装し,ベンチマーク問題の解析を通して解析結果の妥当性,および当該モデルの将来性について検討した.また,hypoplasticモデルを採用する場合を対象に,既往の研究で粘塑性問題への適用事例が報告されているwavelet基底を用いたmulti-time scaling法を援用した繰り返し変形解析手法を開発し,その基本性能について数値解析を通して検証した.2,バラスト道床の構成などの不確実性を考慮した繰り返し変形解析モデルの横箪前年からの検討結果を踏まえ,材料の構成や功学特性のばらつきの影響を連続休モデルの材料パラメータの変動としで度映するものとし,その変動が応力やひずみの計算値に及ぼす影響を評価する手法の開発に取り組んだ.平成22年度は下負荷面モデルを対象に,1次近似2次モーメント法に基づく解析手法を開発し,ベンチマーク問題を対象に評価精度の検証と材料パラメータの感度解析を行なった.3.連続体モデルを用いたバラスト道床の繰り仮し変形メカニズムの解明連続体モデルによる繰り返し変形解析への粒状体解析手法による数値実験結果の活用方法について,関連文献等の資料収集を行ない,今後の検討課題の整理を行なった.なお,上述の研究成果は,平成23年度以降に順次論文等で公表する予定である.平成23年度の主たる研究成果は,以下の通りである.1.弾塑性連続体モデルに基づくバラスト道床の繰り返し変形解析の信頼性の向上回転硬化を考慮した拡張下負荷面モデルを用いる場合を対象に,バラスト道床の変形解析のロバスト性・信頼性の向上を図ることを目的に,partic leswarm optimization(PSO)を用いた材料パラメータ同定手法を開発し,同定計算のロバスト性および同定精度について検証した.2.解析効率のさらなる向上の望める変形解析モデル・手法の導入・開発繰り返し載荷時におけるバラスト道床の残留変形の発生・蓄積を対象とした解析効率の向上を目的として,cyclic densificationモデルの有限要素法プログラムへ実装した上で,まくらぎ・バラストからなる有道軌道の3次元道床沈下解析を行ない,実物大有道床軌道の繰り返し載荷試験のシミュレーションを行なった.解析の精度および計算効率について,他手法の解析結果との比較も交えて詳細に検討した.また,cyclic densificationモデルの低サイクル数での評価精度の低さの改善可能性について検討した.3.バラスト道床の構成・構造などの不確実性を考慮した繰り返し変形解析モデルの構築平成23年度は,下負荷面モデルに基づくバラスト道床沈下解析を対象に,平成22年度に引き続き,材料パラメータの変動の影響を1次近似2次モーメント法により評価することとし,その有限要素法に基づく3次元道床沈下解析へ適用した.当該手法を用いて,バラスト道床内部の発生応力・変形量に及ぼす材料特性の変動の影響を評価・検討した.
新規心房細動発症予防としての栄養を軸としたフレイル介入手段の検討

フレイルとは身体機能が低下した脆弱な要介護前段階のことである。高齢心血管病患者の2550%にフレイルがみられ、フレイルと心血管疾患との関連が示唆されている。フレイルは身体的要素、精神的要素、社会的要素の3要素で構成されるが、なかでも加齢や疾病に伴う筋肉量減少や筋力低下から身体機能障害を来たすサルコペニアはフレイルの身体的要素の中核をなす。加えて、低栄養、栄養障害はサルコペニアに強く影響するフレイル要因であり、内科的介入が可能な因子である。すでに、フレイルと心血管病との関連に低栄養が介在していることが証明されていることからも、心房細動発生にも低栄養が関与している可能性が十分考えられる。以上、加齢と心房細動との関連、加齢とフレイルとの関連、フレイルと心血管病との関連、以上の3つの関連から、フレイルは心房細動発生の危険因子になっている可能性が挙げられるものの、その妥当性を示す研究はなされていない。さらに、低栄養・栄養障害を軸にしたサルコペニアやフレイルが、心房細動発生の原因となりうるかという検証はいまだなされていない。したがって、低栄養、栄養障害がフレイルを介して心房細動発生を来たし、それ故、栄養介入によるフレイル予防が、後の心房細動発症やさらなるフレイル増悪の悪循環を改善しうるという仮説を立証することとした。本研究目標は加齢性不整脈疾患で最も頻度の多い心房細動とフレイルとの関連を明らかにし、さらにフレイル要素が心房細動発症に寄与するか検証することである。そのうえで、フレイル介入により心房細動発症予防を可能たらしめることを最終ゴールに掲げている。健診データを使用する後ろ向き研究は概ね順調に進んでいるが、レジストリを使用する前向き研究において、同意いただける患者が少ないことから十分な症例数の確保がやや遅れている。レジストリを用いた前向き研究において、登録症例を増やすべく、広報活動やリクルート作業を推進していく。
培養ヒト食道上皮細胞及び線維芽細胞を用いた細胞再構築型人工食道の開発

組織再構築型人工食道開発のため、正常ヒト食道上皮細胞、正常ヒト線維芽細胞を用いて以下の実験を行った。1.ヒト線維芽細胞をコラーゲンゲルに包埋培養したマトリックスの検討ヒト真皮由来の線維芽細胞(三光純薬)0、8、16×10^5個をtypeIコラーゲンゲル2mlに包埋培養した直径35mmのコラーゲンは、710日間収縮して、直径813mmの円盤状のシートになった。線維芽細胞を包埋しないコラーゲンの収縮は認められず、包埋する線維芽細胞数が多いほど収縮率は高かった。2.ヒト食道上皮細胞シートの検討食道癌新鮮切除標本より、ディスパーゼ、トリプシンを用いて採取した食道上皮細胞を、1で作製した各種濃度のコラーゲンシート上で培養した。線維芽細胞非包埋コラーゲンシート上での上皮細胞は、培養14日目で23層に重層化したが、培養21日目では発育に変化を認めなかった。8×10^5個包埋シート上では、培養14,21日目で34層,45層に重層化した。16×10^5個包埋シート上では、培養14,21日目で10層,1718層に重層化し、さらに細胞の形態は基底層から上方に向かい扁平化を呈し分化傾向を認めた。つまり、包埋する線維芽細胞数が多いほど上皮細胞の重層化は促進されることが明らかになった。3.ヌードラット腹直筋への移植2で作製した線維芽細胞8×10^5個包埋ヒト食道上皮細胞シートの、ヌードラット腹直筋への移植実験においては、移植後22日目の組織像で、上皮細胞は10層以上の重層化を示し、コラーゲン層には新生血管を認め、炎症生細胞浸潤も軽度で、生体への生着は可能であった。
口腔がん幹細胞ニッチを標的とした新しい治療方法の開発

1)悪性腫瘍細胞株を用いてがん幹細胞と成熟がん細胞を分離した.2)マウス移植モデルから腫瘍血管内皮細胞(TEC)を分離した.3)CSCとTECとの共培養,およびCSCへのTEC培養上清(TEC-CM)処理をおこなった.これにより,CSCにおいて生存シグナルAktやNF-kBの活性化がおこることがわかった.CSCにおいていくつかの幹細胞マーカーの発現が変化し,またがん細胞のアポトーシスが阻害されていること示唆された.さらに,高転移性腫瘍組織から分離したTECと共培養した際に,より大きなspheroidを形成し,TECによるanoikis抵抗性が誘導されることが示唆された.1)口腔がん臨床サンプルにおけるがん幹細胞の局在解析:口腔がんにおけるがん幹細胞の局在をCD133,CD44, ALDH,PSF-1をもちいた組織免疫染色で明らかにし,腫瘍血管との位置関係を解析した.2)がん幹細胞の分離:ヒト舌癌をはじめとして異なる転移能をもつ悪性腫瘍細胞株を用いてCD133, CD44,SP分画ならびにALDH活性などによりがん幹細胞と成熟がん細胞を分離した.3)腫瘍血管内皮細胞の分離:上記口腔がん腫瘍株のマウス移植モデルから腫瘍血管内皮細胞をCD31抗体とCD45抗体とを用いてFACSaria 2によりCD31+CD45-の分画として分離した.4)がん幹細胞のcharacterization: PCR法とフローサイトメーターを用いて,分離したがん幹細胞の幹細胞マーカーの発現を確認した.さらにALDEFLUOR(商品名)キットを用いてALDHの活性を計測し,Hoechst33342を用いてFACS Aria 2によりSide populationを解析する.さらにanoikis抵抗性をspheroid assayにより確認した.5)細胞内活性酸素の測定:分離・培養したがん幹細胞ならびにがん細胞における細胞内活性酸素をFACS Aria-2により測定し比較・解析したところ,がん幹細胞により高い活性酸素の蓄積が見られた.1)分離後のがん幹細胞(CSC)と腫瘍血管内皮(TEC)との相互作用解析(薬剤抵抗性): CSCとTECとの共培養,およびCSCへのTEC培養上清(TEC-CM)の処理を行い,抗がん剤に対する抵抗性の変化をコントロール群と比較検討した.またTEC特異分泌タンパクbiglycanによるがん細胞のDNA damge responseも解析した.Biglycanによって薬剤耐性は誘導されなかったが,DNA damage responseは惹起され,TEC由来因子により腫瘍細胞の悪性形質が獲得される可能性が示唆された,また,がん幹細胞のドーマンシーが維持されているかどうか,Ki67染色により細胞増殖の有無を解析する.2)分離後のCSCとTECとの相互作用解析(足場非依存性): CSCとTECとの共培養,およびCSCへのTEC培養上清(TEC-CM)の処理を行い,低血清条件下でspheroid assayをおこないanoikis抵抗性の変化をコントロール群と比較し検討を行った.3)分離後のCSCとTECとの相互作用解析(未分化性維持):CSCとTECとの共培養共培養,およびCSCへのTEC培養上清(TEC-CM)の処理を行い,CSCがnon-CSCへ分化せず,未分化細胞として維持されるかをコントロール群と比較検討する.解析にはPCR法とフローサイトメーターを用いて,がん幹細胞の幹細胞マーカー(CD133,CD44,SP分画,ALDH活性)の発現を確認した.1)幹細胞を多く含むがん細胞集団と腫瘍血管内皮(TEC)との相互作用解析(薬剤抵抗性)をおこなった.がん細胞へのTEC培養上清(TEC-CM)の処理を行い,がん幹細胞性集団の生存シグナルAktやNF-kBの活性化がおこることがわかった.現在TEC由来分子の同定を試みている.2)がん幹細胞性集団とTECとの相互作用解析(足場非依存性)を解析した.幹細胞集団の多い高転移性腫瘍組織から分離したTECと,幹細胞性の少ない低転移性腫瘍組織から分離したTECとがん細胞を非接着性のプレ-とにおいて共培養した.高転移性腫瘍組織から分離したTECと共培養した際に,良い大きなスフェロイドを形成し,またがん細胞のアポトーシスが阻害されていることが示唆された.TECによるanoikis抵抗性が誘導されることが示唆された.3)がん幹細胞性集団とTECとの相互作用解析(未分化性維持)を行った.TECの培養上清により,がん細胞においていくつかの幹細胞マーカーの発現が変化した.その機序に関わる分子について現在検討中である.1)悪性腫瘍細胞株を用いてがん幹細胞と成熟がん細胞を分離した.2)マウス移植モデルから腫瘍血管内皮細胞(TEC)を分離した.3)CSCとTECとの共培養,およびCSCへのTEC培養上清(TEC-CM)処理をおこなった.これにより,CSCにおいて生存シグナルAktやNF-kBの活性化がおこることがわかった.CSCにおいていくつかの幹細胞マーカーの発現が変化し,またがん細胞のアポトーシスが阻害されていること示唆された.さらに,高転移性腫瘍組織から分離したTECと共培養した際に,より大きなspheroidを形成し,TECによるanoikis抵抗性が誘導されることが示唆された.今回の研究では,口腔がん幹細胞と口腔がん血管内皮細胞との相互作用を解析し,口腔がん幹細胞の維持に口腔がん血管内皮細胞が果たす役割を検討し,口腔がん幹細胞のVascular Nicheを標的とした新しいがん治療法の開発の基盤的研究を行うことを目的に下記を検討している.