hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
グリオーマ幹細胞epigeneticsの盲点をついた新規がん幹細胞標的治療法開発

がん幹細胞は腫瘍創始能と治療耐性を併せ持つごく少数の未分化がん細胞集団であり、不可逆的に分化することで、腫瘍の大部分を構成する治療感受性で腫瘍創始能をもたない非がん幹細胞を生じると考えられている。がん幹細胞は治療後再発の要因として注目されており、グリオブラストーマでもがん幹細胞(グリオーマ幹細胞)に対する治療法開発は長期予後改善の鍵を握ると期待されている。本課題では「ヒストンH3リシン27(H3K27)のトリメチル化がグリオーマ幹細胞の分化誘導に促進的に関与する」という我々独自の、従来の常識に照らして逆説的な仮説の検証を試み、もって斬新なグリオーマ幹細胞治療法の開発へと繋げることを目指した。ヒストンH3における27番目のアミノ酸残基リジン(H3K27)をメチル化する酵素EZH2がグリオーマ幹細胞維持に必須であるとの先駆的論文の発表以来EZH2阻害によるH3K27メチル化の「抑制」がグリオーマ幹細胞治療になるものと信じられてきたが、我々は先行論文に潜む「盲点」に着眼し、むしろH3K27メチル化の「促進」がグリオーマをはじめとするがん幹細胞治療に有用であるとの一見対立的な、しかし実際は相互排他的でない仮説構築に至った。具体的にはH3K27脱メチル化酵素による幹細胞維持に関わる遺伝子のH3K27メチル化抑制ががん幹細胞やH3K27低トリメチル化が見られるがん細胞の維持に必須の役割を果たしているのではないかと考え、このような仮説がグリオーマについて成り立つか、さらにはがん種を超えて成り立つ普遍的な仮説となりうるかという挑戦的な課題に挑むべく一連の解析を行った。その過程でまず明らかになったのが、非小細胞肺がんでは必ずしもがん幹細胞に限らず細胞全体のH3K27のトリメチル化状態が低下しているということである。そこで非小細胞肺がん細胞に対するH3K27脱メチル化酵素阻害薬GSK-J4の効果を検討したところ、正常細胞に対して毒性を示さない低濃度において細胞死(アポトーシス)を誘導すること、さらには当初予想していなかったことであるが、抗がん剤との組み合わせにおいてもその効果を増強することが明らかになった。これらの結果はH3K27トリメチル化レベルが低いがん細胞ではH3K27脱メチル化酵素がその生存維持に重要な役割を果たしていることを示すものとなり、当初仮説の一端を支持する結果が得られた。本課題の仮説の一つである「H3K27トリメチル化レベルの低いがん細胞においてはその維持にH3K27脱メチル化が重要な役割を果たしている」という考え方を示唆するデータが得られているため。本課題ではこのような仮説の検証を行うため、グリオーマ幹細胞におけるH3K27脱メチル化酵素JMJD3, UTXの役割について検討を行った。JMJD3, UTXの遺伝子ノックダウンについては、いずれの遺伝子についてもある程度の発現抑制を得られる実験条件を確立することができたが、その条件下ではH3K27メチル化状態に明らかな一定の変化を確認するには至らなかった。ただ、これがJMJD3, UTXのノックダウンの程度がまだ不十分なことによるのか、あるいはJMJD3, UTXの機能抑制は十分なるもこれら以外の他の脱メチル化酵素がグリオーマ幹細胞で機能しているためなのか等については明らかにすることができていない。また、JMJD3, UTXに対する薬理的阻害剤GSK-J4を用いた検討も行ったが、予想外なことに低濃度のGSK-J4によりグリオーマ幹細胞が死滅してしまうことが明らかになり、その結果GSK-J4の分化誘導作用を調べるための至適条件の設定が予想以上に困難となった。そこで細胞死が評価結果に影響を及ぼさないと考えられる条件を模索・設定し検討を試みたところ、一部のグリオーマ幹細胞ではGSK-J4処理によりH3K27メチル化レベルの上昇が認められたものの、一部のグリオーマ幹細胞では一定の傾向が得られず、結論を得るにはさらなる検討が必要と考えられた。引き続きグリオーマやその他のがんにおいて、がん幹細胞やH3K27トリメチル化レベルの低いがん細胞を対象とし、H3K27脱

メチル化酵素の役割についてpharamacologicalないしgeneticアプローチにより検討を継続する。特にgeneticアプローチとしてはH3K27脱メチル化酵素であるJMJD3、UTXをノックダウンし、その影響につき検討を行う。脳神経外科学、脳腫瘍学と同時に、科研費の効率的かつ有効利用を最大化するため、研究課題で行う予定の実験のうち、研究室に既存のマテリアルを使用することで推進可能なものは極力既存のマテリアルを使用することで実施する努力をしたため。新知見に基づいて今後得られるであろうと期待される新情報を踏まえつつも方法論的には当初計画どおりに研究を進める予定であり、そこで必要とされる一連の実験を実施するために研究費を使用する。
トキソプラズマ原虫の発育ステージ変換機構の解明と新規ワクチンの開発

本研究は、人獣共通感染症の原因原虫でもあるトキソプラズマ原虫の宿主体内における発育ステージ(急性感染期のタキゾイト→慢性感染期のブラディゾイト)変換機構の解明と新規弱毒ワクチン開発を目指して企画した。本年度に実施した研究内容と得られた研究成果は以下の通りである。タキゾイトとブラディゾイト虫体ESTデータベースによる各遺伝子の転写レベルの比較を行ったところ、多くのステージ特異的転写遺伝子の存在が確認された。その中で、虫体のレドクスシステム(酸化還元系)の関連酵素-グリオキサラーゼI(メチルグリオキサール(MG)とグルタチオン(GSH)からS-D-ラクトイルグルタチオンを生成させる酵素)遺伝子のクローニングと解析を行った。グリオキサラーゼI(TgGlo1)遺伝子は、1,008-bpのORFよりなり、推定タンパク質の分子量は38.5-kDaであった。TgGlo1の機能ドメインフラグメントを大腸菌にて発現し、組換えタンパク質に対する免疫血清を作製した。この抗血清を用いたイムノブロット法により、38.5-kDaの虫体由来TgGlo1タンパク質が同定できた。また、組換えTgGlo1の酵素活性も確認された。TgGlo1の機能ドメインの二つのアミノ酸残基(E166、R188)が酵素活性に必須であることも確認された。この酵素活性はグリオキサラーゼのインヒビターであるcurcuminにより特異的に抑制された。また、curcuminは試験管培養においてトキソプラズマ原虫の増殖を顕著に抑制した。さらに、マウスモデルにおける治療試験においても一部治療効果が認められた。今後、TgGlo1の虫体発育ステージへの関与の解明が待たれる。本研究では、人獣共通感染症の原因原虫でもあるトキソプラズマ原虫の宿主体内における発育ステージ(急性感染期のタキゾイト→慢性感染期のブラディゾイト)変換機構の解明と新規組換えワクチン開発を試みる。1.試験管内ステージ変換系を確立した。試験管内で培地のpHを7.4から8.0に上げることにより人為的にタキゾイトからブラディゾイトへのステージ変換を促し、大量のブラディゾイト虫体を得ることができた。2.ブラディゾイト虫体の完全長cDNAラブラリーとESTデータベースを作成した。ブラディゾイト虫体のmRNAを抽出し、オリゴキャッピング法にて完全長cDNAライブラリーを構築した後、約10,000クローンの全塩基配列を解読し、ESTデータベースを作成した。3.トランスクリプトーム解析を行った。以前当研究グループで構築したタキゾイトESTデータベースと2)で作成したブラディゾイトESTデータベースの比較により、タキゾイト或いはブラディゾイト単一ステージのみに特異的に発現する遺伝子を網羅的に探索した。今回は特に虫体特異的代謝経路に注目し、ブラディゾイトステージで特異的に転写されるグリオキサラーゼ(メチルグリオキサール(MG)とグルタチオン(GSH)からS-D-ラクトイルグルタチオンを生成させる酵素)遺伝子のクローニングを行った。
レジリエントな手術チームのシステムダイナミクスの解明

本研究は、手術チームというシステムにおいて、想定内及び想定外を含む大小さまざまな擾乱と環境的制約がある中で、レジリエントに手術パフォーマンス行われているメカニズムをダイナミクスに着目して、複雑系科学のさまざまな専門家の参画により学際的に解明しようとするものである。今年度(1年目)は、実際の手術の際に利用可能な測定機器の選定(軽量、ワイヤレス、装着時の快適性等)と手術室環境下での使用時の検証(手術操作の邪魔にならないか、環境ノイズが収集データの品質に与える影響等)を行った。複数の手術チームメンバーのパフォーマンスの統合という観点から、メンバー間の会話データや脳活動データの収集が必要と考えた。まず、術中の会話音声の録音方法、デバイス、文字起こしの方法等を検討した。商業ベースの製品や技術では、会話音声が必ずしもクリアに録音できないこと(声の大きさ、複数名の同時発話等)、自動音声認識と文字おこしが困難であることが判明したが、録音上の工夫及び人手と時間をかければ、質の高い音声データの収集が可能であることが確認できた。また、術中の脳活動データの収集の可能性や方法についても検討した。3264チャンネルのアクティブ電極型脳波計を用いることで、眼球運動などの筋電混入や手術室環境でのある程度の電気的ノイズの混入は解析時に処理でき、また手術時には術者の大きな動作は比較的少ないことから、手術中の脳波計測が可能であることが確認できた。さらに、大動脈弁置換術(1例)における手術チームメンバー間の会話について、自然言語処理による解析を行った。術中のコミュニケーションネットワークの可視化により、術者を中心とするクローズドループ・コミュニケーションが明らかになった。また、手術中の「発話の長さ(音節数)」および「発話の応答時間」の分布には「ベき則」が認められた。研究開始当初、活動中の脳機能をどのように計測するかという点が最大の懸念事項であったが、ワイヤレス近赤外線脳酸素モニター(NIRS)、チャンネル数の少ないウエアラブル脳波計、チャンネル数の多いワイヤード脳波形等を用いて基礎的検討を行い、実際の手術の環境下で使用可能な測定装置を同定し、購入することができた。これによって、統合的なチームパフォーマンスにおける脳波解析を実施できる環境が整った。また、会話分析においては、自然言語処理による解析が必要であると判断し、ヘルスケア領域の自然言語処理の第一人者である分担研究者の参加を得た。1症例のみの分析ではあるが、安定的に制御されている手術チームメンバー間の会話には、隠れたパターンが存在することが示唆された。本知見については、第27回日本コンピュータ外科学会大会、第119回日本外科学会定期学術集会で発表し、第40回日本手術医学会総会では優秀演題賞を受賞した。今後は会話分析、動作解析、脳波解析を中心に研究を進める。会話分析では、手術中の会話データを手術操作の動画情報とあわせて統合的に解析する必要があるため、会話の質的分析と動作分析の両方を専門とする分担研究者に参加を依頼し、分析を深める。また、脳波解析については、実際の手術中に脳波測定・データ収集を行える見通しがついたことから、複数人の脳活動を同時に計測するハイパースキャニングの測定および解析に精通したエキスパートを分担研究者として迎え、研究を発展させる予定である。

また、会話分析においては、自然言語処理による解析が必要であると判断し、ヘルスケア領域の自然言語処理の第一人者である分担研究者の参加を得た。1症例のみの分析ではあるが、安定的に制御されている手術チームメンバー間の会話には、隠れたパターンが存在することが示唆された。本知見については、第27回日本コンピュータ外科学会大会、第119回日本外科学会定期学術集会で発表し、第40回日本手術医学会総会では優秀演題賞を受賞した。今後は会話分析、動作解析、脳波解析を中心に研究を進める。会話分析では、手術中の会話データを手術操作の動画情報とあわせて統合的に解析する必要があるため、会話の質的分析と動作分析の両方を専門とする分担研究者に参加を依頼し、分析を深める。また、脳波解析については、実際の手術中に脳波測定・データ収集を行える見通しがついたことから、複数人の脳活動を同時に計測するハイパースキャニングの測定および解析に精通したエキスパートを分担研究者として迎え、研究を発展させる予定である。
Leigh脳症をきたす新たなミトコンドリア機能異常症の解明とその治療法の確立

Leigh脳症は乳幼児期に発症し、特異な画像所見、高乳酸血症、精神運動発達遅延などの中枢神経症状を伴うミトコンドリア機能異常症である。本研究では日本人Leigh脳症74例中半数の37例の病因を明らかにした。この内訳はPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例、ミトコンドリアDNA異常症24例であった。上記のミトコンドリア機能正常でピルビン酸脱炭酸能が著明に低下していた新たな機能障害に基づくLeigh脳症患児も見出した。ミトコンドリア機能異常症は細胞が生きるために必要なエネルギーを産生するミトコンドリアの機能障害により生ずる疾患群である。本疾患では種々の臨床症状を呈するが、特にエネルギー供給を常に必要とする中枢神経系や筋肉において症状が出現しやすい。ミトコンドリア機能異常症の中には進行性の神経症状を主症状とするLeigh脳症がある。このLeigh脳症は乳幼児期に発症し、中枢神経系の特異的な画像所見および高乳酸血症・高ピルビン酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙攣などの神経症状を伴う小児難病である。このLeigh脳症は種々の病因に基因している。これまでにはピルビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)の異常や電子伝達系酵素異常やミトコンドリアDNA異常などが報告されている。本研究ではLeigh脳症をきたす新たなミトコンドリア機能異常症の解明とその治療法の確立である。ミトコンドリア機能異常症は細胞が生きるために必要なエネルギーを産生するミトコンドリアの機能異常により生ずる疾患群である。本研究で行った日本人のLeigh脳症64例(男38例、女26例)の病因解明では32例(男21例、女11例)において病因を明らかにすることができた。この内訳はPDHC異常症5例、複合体1欠損症4例、複合体IV欠損症4例、ミトコンドリアDNA異常症19例(A8344G変異は1例,T8993C変異は2例,T8993G変異は14例,G13513A変異は2例)であり、日本人の半数のLeigh脳症患児において病因が明らかになった。今回の結果では約60%がミトコンドリアDNA異常症であり、その中ではT8993G変異が最も多かった。現時点では、Leigh脳症に対する根本治療法は未だ確立されていないが、一部有効な治療がみられたのはジクロロ酢酸ナトリウム(DCA)が12例で、ビタミンB1が6例で、ACTHが4例で有効であった。今後の研究はこれまでに病因が不明であった半数のLeigh脳症の病因を明らかにし、新たな治療法を確立することである。これまでにはれピノビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)の異常や電子伝達系酵素異常やミトコンドリアDNA異常などが報告されている。本研究で行りた日本人のLeigh脳症64例(男38例、女26例)の病因解明では32例(男21例、女11例)において病因を明らかにすることができた。この内訳はPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例、ミトコンドリアDNA異常症であり19例(A8344G変異は1例、T8993C変異は2例、T8993G変異は14例、G13513A変異は2例)であり、日本人の半数のLeigh脳症患児では病因が明らかになった。

その内訳では約60%がミトコンドリアDNA異常症であり、その中ではT8993G変異が最も多かった。PDHC異常症5例の遺伝子変異はC101F変異が1例、S152P変異が1例、L216F変異が1例、R263G変異が2例であった。現時点では、Leigh脳症に対する根本治療法は未だ確立されていないが、一部有効な治療がみられたのはジクロロ酢酸ナトリウムが12例で、ビタミンB1が6例で、ACTHが4例で有効であった。今後の研究はこれまでに病因が不明であった半数のLeigh脳症の病因を明らかにし、有効であった治療を組み合わせたり、新たな治療法を確立することである。ミトコンドリア機能異常症は細胞が生きるために必要なエネルギーを産生するミトコンドリアの機能障害により生ずる疾患群である。本疾患では種々の臨床症状を呈するが、特にエネルギー供給を常に必要とする中枢神経系や筋肉において症状が出現しやすい。ミトコンドリア機能異常症の中には進行性の神経症状を主症状とするLeigh脳症がある。このLeigh脳症は乳幼児期に発症し、中枢神経系の特異的な画像所見および高乳酸血症・高ピルビン酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙攣などの神経症状を伴う小児難病である。このLeigh脳症は種々の病因に基因している。これまでにはピルビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)の異常や電子伝達系酵素異常やミトコンドリアDNA異常などが報告されている。本研究で行った日本人Leigh脳症70例(男41例、女29例)の病因解明では35例(男22例,女13例)において病因を明らかにすることができた。この内訳はPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例、ミトコンドリアDNA異常症22例(A3243G変異は1例,A8344G変異は1例,T8993C変異は2例,T8993G変異は16例,G13513A変異は2例)であり、日本人の半数のLeigh脳症患児では病因が明らかになった。63%がミトコンドリアDNA異常症であり、その中ではT8993G変異が最も多かった。このLeigh脳症は乳幼児期に発症し、中枢神経系の特異的な画像所見および高乳酸血症市高ピルビン酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙攣などの神経症状を伴う小児難病である。本研究で行った日本人Leigh脳症74例(男43例、女31例)の病因解明では37例(男23例,女14例)において病因を明らかにすることができた。
高圧NMR測定技術の開発と強相関電子系物質群研究への応用

「YbXCu_4の高圧下物性測定」YbInCu_4は常圧下約40Kにて一次の価数転移を示す物質であるが、その転移は圧力によって抑制されることが報告されている。本研究の高圧下交流帯磁率測定等によって、この物質の高圧下安定相の基底状態が強磁性秩序状態であることが明らかになり、圧力-温度相図が作成された(Phys.Rev.B67,224409,2003)。又、この磁気秩序転移に関して微視的な磁気的情報を得るために、2.5GPaまでの高圧下NQR(核四重極共鳴)測定を行った。その結果、2.5GPaにおいて価数転移は微視的な観点からみてもほぼ完全に抑えられており、又、この価数転移は、完全に抑制される直前の圧力まで一次相転移的であることが分かった。更に、圧力誘起磁気秩序転移は4fホールが局在性の良い状態で生じていることが分かった(Phys.Rev.Lett.に投稿中)。現在、高圧下におけるNMR(核磁気共鳴)測定が進行中である。「V_2O_3の高圧下NMR測定」V_2O_3は常圧下約170Kにて金属-絶縁体転移を示す物質であるが、その転移は圧力によって抑制されることが分かっている。この物質の圧力誘起金属状態は軌道の揺らぎ等の観点から非常に興味が持たれているが、実験的な難しさからこれまでに詳しい研究は為されていない。本研究では、この金属相における磁気的情報を得るために、純良な単結晶試料を用い、更に外部印加磁場に対して精密に角度制御した高圧下NMR測定を行った。その結果、1.95GPaの高圧下において試料の約10%程度が低温まで金属状態を保ち続け、その部分において測定された核スピン-格子緩和時間T_1やナイトシフトの温度依存性には、以前粉末試料を用いて測定された報告と同様に低温での異常が観測された。しかし、ナイトシフラトの異常には圧力依存性がないのに対して、T_1の以上には圧力依存性があることが分かった。現在、2.4GPaの圧力下において測定が進行中である。*YbXCu_4の高圧下物性測定YbInCu_4は常圧下約40Kにて価数転移を示す物質であるが、その転移は圧力によって抑制されることがわかっている。私はこの物質の高圧下安定相の基底状態を調べるため、圧力発生装置(圧力セル)中に電気抵抗用4端子プローブと交流磁化測定用の1次,2次コイルをセットし、これらの測定を2GPa以上の圧力下において行った。試料はLos Alamos国立研究所より提供された単結晶試料である。その結果、約2.4GPa付近で価数転移は低温まで完全に抑制され、代わりに強磁性磁気秩序が出現することを発見した(Phys. Rev. Bに投稿中)。Yb系化合物の価数遥動⇔磁気秩序の転移は5GPa以上の非常に高い圧力下においては報告があるが、この様な低い圧力下で観測された例は今回が初めてである,現在、高圧下での電子状態を微視的な観測手段によって調べるため、高圧下NQR(核四重極共鳴)測定が進行中である。また、常圧下の電子比熱係数がYbInCu_4よりも大きいYbAgCu_4についても高圧下測定を行っているところである。*V_2O_3の高圧下NMR測定V_2O_3は常圧下約170Kにて金属-絶縁体転移を示す物質であるが、その転移は圧力によって抑制されることがわかっている。この物質の低温での圧力誘起金属状態は軌道の揺らぎ等の観点から非常に興味が持たれているが、実験的な難しさからこれまでに詳しい研究は為されていない、NMR(核磁気共鳴)測定もその例外ではなく、2GPa以上の高圧発生に加えて、純良な単結晶試料を用いること、さらに精密に角度を制御することの必要性がこれまでの研究からわかっている。現在までに上述の技術的な困難を克服し、非常に信号強度が強いNMR信号の観測に成功した。この信号強度は、角度制御なしでは金属表面における電磁波の減衰(表皮効果)のために微弱になる場合の100倍以上に相当する。現在は静的な情報を与えるスベクトル測定や動的な情報を与える緩和の測定を行っている。「V_2O_3の高圧下NMR測定」

V_2O_3は常圧下約170Kにて金属-絶縁体転移を示す物質であるが、その転移は圧力によって抑制されることが分かっている。この物質の圧力誘起金属状態は軌道の揺らぎ等の観点から非常に興味が持たれているが、実験的な難しさからこれまでに詳しい研究は為されていない。本研究では、この金属相における磁気的情報を得るために、純良な単結晶試料を用い、更に外部印加磁場に対して精密に角度制御した高圧下NMR測定を行った。その結果、1.95GPaの高圧下において試料の約10%程度が低温まで金属状態を保ち続け、その部分において測定された核スピン-格子緩和時間T_1やナイトシフトの温度依存性には、以前粉末試料を用いて測定された報告と同様に低温での異常が観測された。しかし、ナイトシフラトの異常には圧力依存性がないのに対して、T_1の以上には圧力依存性があることが分かった。現在、2.4GPaの圧力下において測定が進行中である。
火山噴出物中の揮発性成分定量分析に関する新手法の開発

火山噴出物中の揮発性成分を簡単に定量できる方法として,顕微FTIR反射分光法の開発をおこなった.機器の整備によってS/Nを大幅に向上させ,玄武岩流紋岩組成に対応する検量線を作成した.加えて,班晶ガラス包有物の分析が容易に行えるように,視野内にある班晶が測定スペクトルに与える影響を補正する方法を開発した.今回開発した方法で,2030ミクロンサイズの試料の水の定量分析が0.3wt%程度の分析精度で可能になった.分析時間は22分/1試料である.この方法は片面研磨試料で分析が可能なため,壊れやすい試料や微小な試料の分析に威力を発揮する.測定データの質の向上の目的で前年度に導入した高感度検出器について,スペクトルの特徴の把握と検量線作成をおこなった.高感度検出器の導入によって,シグナルーノイズ比がおよそ5倍向上した.これによって,前年度までは,30ミクロンx30ミクロンサイズの試料に対しておよそ25分かけてデータ収集をおこなっていたが,同様な質のデータを20ミクロンx20ミクロンサイズの試料で12分間で取得できるようになった.天然試料の場合,小さな試料のほうが圧倒的に多いので,この技術の拡張によって分析可能な天然試料の範囲を大きく拡大することができた.また,分析に要する時間を半減することができたので,たくさんの試料を効率良く分析できるようになった.前年度に開発した斑晶ガラス包有物分析用の斑晶反射補正方法(カンラン石用)について,斜長石,輝石,石英についても同じプログラムを使えるようにプログラムを拡張した.この結果,天然試料の多くの斑晶ガラス包有物で,この補正プログラムが利用可能になった.この補正プログラムの適用によって,斑晶が分析領域に少々入っていても,分析精度を下げずに水の定量が行える.反射法の有効性を確認するため,天然試料の分析にも取り組んだ.前年度に引き続き,2011年1月の霧島火山の噴火の苦鉄質側マグマ由来のかんらん石斑晶中に含まれるガラス包有物を分析し,このマグマの由来した深度を検討した.また,富士宝永火山噴出物の輝石斑晶中のガラス包有物の分析を行い,珪長質マグマの深度について初めて見積もりを与えることに成功した.今年度は,開発した顕微FT-IR反射分光法の普及のための作業を中心に研究をおこなった.まず,反射スペクトルのピーク高さを読み取るプログラムを作成した.個人の主観による読み取り値の変動を防ぎ,一定の質でデータ生産を行うためには極めて有効である.次に,このプログラムを用いて,32個の合成ガラスのスペクトルから含水量測定のための検量線を作成した.弱い組成依存性が存在するため,玄武岩組成,安山岩組成,流紋岩組成の3つに分けて検量線を公開した.分析サイズによる影響も調べたが,100ミクロン角と30ミクロン角の視野サイズでは誤差を超えて有為な差はみられなかった.加えて,分析視野内に入った班晶量を補正して含水量を求めるプログラムを作成した.ガラス包有物,班晶,基準ガラスの3つのスペクトルファイルを与えれば,自動的に作図とピーク高さの表示を出力する.このため,多数の分析データを効率よく処理することができるようになった.以上のように分析環境を整えた上で,天然試料への手法の応用を行った.対象とした分析試料は,富士火山1707年宝永噴火の白色パミスである.この試料に含まれる斜方輝石斑晶の多くは,ガラス包有物を捕獲しており,顕微FT-IR反射分光法で分析したところ,4から4.5 wt%の含水量であった.これは1から1.5kb程度の飽和圧力に相当する.一方,共存する班晶鉱物の組成からは白色軽石のもとになった珪長質マグマ溜まりの存在した圧力は1から1.5kb (深度4から6km)であることがわかった.したがって,白色パミスの元になった珪長質マグマは噴火前に水に飽和していたことになる.簡便に含水量測定が行えるメリットを生かした本研究によって,宝永噴火の噴火過程を理解する上で重要な知見を得ることができた.火山噴出物中の揮発性成分を簡単に定量できる方法として,顕微FTIR反射分光法の開発をおこなった.機器の整備によってS/Nを大幅に向上させ,玄武岩流紋岩組成に対応する検量線を作成した.加えて,班晶ガラス包有物の分析が容易に行えるように,視野内にある班晶が測定スペクトルに与える影響を補正する方法を開発した.今回開発した方法で,2030ミクロンサイズの試料の水の定量分析が0.3wt%程度の分析精度で可能になった.分析時間は22分/1試料である.この方法は片面研磨試料で分析が可能なため,壊れやすい試料や微小な試料の分析に威力を発揮する.赤外光の反射率にはある程度の主元素組成依存性があることが予想されていた.そこで,玄武岩安山岩組成で含水ガラスの標準試料を内熱式ガス圧装置で合成した.このガラス試料について,カールフィッシャー装置を用いて,含水量を精密に決定し,それらの含水量と反射率との間の検量線の作成を行った.この結果,含水量0.1から5.5 wt%,玄武岩安山岩組成の範囲で,30ミクロン四方の分析サイズがあれば,顕微赤外反射分光法によって迅速に含水量に定量分析が行えるようになった.

加えて,斑晶ガラス包有物の正確な分析ができるように斑晶の反射の影響を補正する方法について検討し,かんらん石斑晶についてはその補正方法を確立した.また,より高感度の検出器の導入しシグナル・ノイズ比の向上をはかった結果,15ミクロン四方の試料でも,これまでの30ミクロン四方の試料と同等の信号強度が得られることがわかった,現在は,この15ミクロン四方のサイズについて検量線を作成に取り組んでいる.さらに,反射法の有効性を確認するため,天然試料の分析にも取り組んだ.2011年1月の霧島火山の噴火をうけて,当初の計画にはなかった霧島火山噴出物に含まれるガラス包有物の含水量定量を実施した.2011年1月27日に放出された灰色軽石のかんらん石斑晶中に含まれるガラス包有物の中で, 30ミクロン四方のサイズが確保出来る13個の試料について分析を行い,それらの含水量を1.6から5.5 wt%と決定した.この中で最も高含水量のものを飽和圧力に換算すると約250MPa (深度約10km)となり,物質科学的にマグマ溜まりの存在領域に制約を与えることに成功した.実施時期の多少の前後はあるが,3年間の全体計画の中で予定した作業について,およそ2/3にあたる研究を完了した.顕微反射分光法による含水量定量については,検量線の作成が玄武岩質マグマから流紋岩質マグマまで整備することが終わり,手法としてはほほ確立したといえる段階にある.今後は天然試料への適用ついて,様々な試料を分析してノウハウの蓄積をはかるとともに,普及にむけての活動を開始する予定である.一方,二酸化炭素の定量分析については,天然試料において十分な濃度を持った試料が少ないこともあり,未だに合成試料における検量線作成の段階で留まっている.最終年度では,数百ppmの含有量があることが報告されている天然試料の幾つかについて,分析を試みる予定である.実施時期の多少の前後はあるが,3年間の全体計画の中で予定した作業について,およそ1/3にあたる量を実施できた.また,予定外である天然試料の分析についても,2011年霧島噴火を受けて実施し,現在実用化に向けて取り組んでいる顕微赤外反射分光法の有効性を確認することができた.水の定量については,手法を広く公開することを目指して,ノイズリダクションの操作やスペクトルのピーク値の自動読取等のデータ解析の方法について,よりいっそうの自動化をはかる.試料表面の平滑度の分析結果への影響の評価など,試料の前処理について技術レベルの異なる多数の利用者が生産するデータの精度について検討する.以上によって,天然試料の分析環境を整備する.二酸化炭素の定量分析については,数百ppmの含有量があることが報告されている天然試料の幾つかについて分析を試み,手法の有効性を確認したい.以上の研究結果をとりまとめ,成果の発表を行う.水の定量に加えて,二酸化炭素測定のための手法開発を行う.また,データ解析の方法についても検討を行い,ノイズリダクションの操作や,スペクトルのピーク値の自動読取等について自動処理できる環境を構築する.また,検稜線作成の組成範囲をデイサイト質ガラスにまで拡張し,分析可能な天然物の組成を広げる.加えて,試料表面の平滑度の分析結果への影響の評価や,計測時の斑晶によるデータ汚染量評価,および,その補正方法を検討し,天然試料の分析環境を整備する.以上の得られた研究結果をとりまとめ成果の発表を行う.手法の有効性の確認のために天然試料の分析を行うことを計画している.多量の天然試料の分析を試みるため,試料の前処理をおこなう実験補助者を雇用する予定である.
疾患遺伝子変異と疾患関連多型の総合知識ベースの構築

1)単一遺伝子疾患に関する遺伝子変異データの収集・知識ベース構築:遺伝子疾患変異グラフィカル知識ベースKMDBのデータ構築を進めた結果、データを順調に増加させることができ、平成12年度当初は、144疾患、149遺伝子、突然変異件数3738件であったが、平成16年度終了時には、259遺伝子、407疾患、突然変異件数10,166件となった。データのカテゴリーは計画より数を増やし、11種類(遺伝性眼疾患、遺伝性聴覚疾患、循環器・心臓疾患、筋肉疾患、脳/神経疾患、血液系疾患、腎臓疾患、症候群性疾患、自己免疫疾患、家族性腫瘍、`骨系統疾患)とした。類型的疾患群の原因遺伝子群に関する集中的データ構築も積極的に行った。例えば非症候群性聴覚障害の原因遺伝子55種類、網膜色素変性症の原因遺伝子33種類等に関しては全遺伝子のデータ構築をほぼ完了している。2)多型データの抽出:公共データベース(HGBASE、dbSNP)を解析し、単一遺伝子疾患関連の多型データを抽出して、変異データと同様にKMDBに収載した。また、多因子疾患の要因となる遺伝子多型の知識ベース化の方法をHLAなどの実例を用いて検討した。3)実際の遺伝子疾患症例からの変異データ収集:浜松医科大学における以下の疾患の症例について、実験により遺伝子変異を解析してデータ収集した。光線過敏症/眼底白点症/斜視/青錐体一色色覚このうち、眼底白点症についてはRDH5遺伝子に新たな変異を発見した。また、光線過敏症については、本邦での最初(世界でも4例め)の硫黄欠乏性毛髪発育異常症(TTD-A)症例からTFB5遺伝子の変異を探索し、新規の変異を発見した。また、東京女子医大との共同研究として、円錐動脈幹異常顔貌症候群の患者でTBX1に遺伝子変異を発見して、同遺伝子が同疾患の原因遺伝子であることを証明した。※これらのデータはhttp://mutview.dmb.med.keio.ac.jp/から公開している。我々は、遺伝子疾患変異オンライングラフィカル知識ベースKMDBを構築し、疾患原因遺伝子の変異と疾患関連遺伝子多型のデータ収集を行なってきた。本年度は、難聴、脳神経疾患の原因遺伝子を中心にデータの拡充を行なった。現在までに199疾患、214遺伝子、突然変異件数8478件を1533の文献から抽出して入力した。その内訳は以下のとおりである。カテゴリー遺伝子数変異数多型数文献数眼55 2586 534 440心臓19 666 122 117耳39 969 222 206脳/神経32 2399 186 373癌関連21 2873 533 398症候群37 2149 285 318自己免疫2 238 33 26筋肉30 1415 170 346血液37 1032 277 236腎臓11 1962 124 197上記の214遺伝子に関しては、同時に多型データも文献から収集しており、合計1469件の入力を完了している。上の表には、カテゴリー別の多型データ数も記載した。また、カロリンスカのHGVbaseのデータからも多型データを抽出して収載した。これらのデータはhttp://www.dmb.med.keio.ac.jpで公開している。

一方、データベース化の自動化を図るため、HLA遺伝子クラスターのDDBJエントリーをダウンロードし、記載してあるゲノム塩基配列、CDS、多型などの情報を自動的に抽出する方法を検討した。これにより、データ構築の速度がかなり改善されることが期待できる。なお、国内外とも、他にこのようなビジュアルなデータベース構築の試みはほとんどなく、上記URLのアクセスは平均1万ページ/月に達する。本データベースは、一昨年創設された国際学会HGVS(Human Genome Variation Society)の公式サイト(http://www.genomic.unimelb.edu.au/mdi/)からリンクされている。1)疾患遺伝子変異データ・多型データの収集:遺伝子疾患変異知識ベースKMDBのデータ構築・入力を継続し、現在までの累積で219疾患、235遺伝子、変異・多型件数9361件、文献数1673となった。その内訳は以下のとおりである。このデータはhttp://www.dmb.med.keio.ac.jp/で公開している。2)データ作表の自動化の検討:専ら手作業で行っているデータ作成を可能な限り自動化するために、RefSeqデータベースと、Ensemblシステムからのインポートを試み、857遺伝子について、ゲノム構造のグラフィクスデータファイルを自動作成した。3)検索機能の強化:疾患の臨床症状や発症器官、人種さ、変異-症状相関など、あらゆる疾患情報を効率的に検索するためにOMIMの厖大なドキュメントの利用を図る方法を検討した。すなわち、OMIMテキストを統計処理して、同時に出現する頻度の高い英単語の組み合わせを抽出した。これにより、疾患症状、発症臓器、遺伝子機能、タンパク機能などに関するキワードと関連の深い単語群を自動的にユーザーに与え、検索の支援を可能とするモジュールを作成できる目途がたった。1)疾患遺伝子変異データ・多型データの収集:遺伝子疾患変異知識ベースKMDBのデータ構築・入力を継続し、現在までの累積で500疾患、292遺伝子、変異・多型件数17,119件、文献数2,147となった。カテゴリー遺伝子数変異症例数変異の種類多型数文献数眼科関連109 5,806 2,665 725 756耳鼻科関連57 2,112 1,236 400 339心臓疾患36 2,338 889 235 265筋肉疾患35 3,293 1,072 180 401骨45 2,181 1,079 223305脳・神経疾患74 6,007 2,371 416 772癌39 5,382 2,313 611 661症候群48 3,582 1,677 338 423自己免疫疾患250471 3326血液疾患43 2,463 883 439 350腎臓疾患203,2681,2541352702)従来のKMDBのデータは、疾患名と遺伝子名が明瞭には区別されていなかったため、データ項目を一部追加し、それらを別項目として全疾患についてデータを再構築した。その結果、疾患2,421件、遺伝子1,603件のデータが多対多で対応づけられた、相互に検索可能な、より有効な知識ベースとなった。3)浜松医科大学における以下の疾患の症例について変異の収集を試みた。
実験動物施設における減菌, 消毒作業マニュアルの作成

実験動物施設の現場に適合した減菌,消毒作業マニュアルを作成するため,最初に,実験動物の主要病原体とそれらに対して有効と思われる税菌手段のリストアップを行った.つづいて代表的な細菌15種120株,マイコプラズマ3種10株,真菌8種10株,ウィルス13種36株,寄生虫4種4株を選び,オートクレーブ処理,煮沸,紫外線照射ならびにアルコール,石炭酸,クレゾール石けん,次亜塩素酸ソーダ,ヨードホール,第4級アンモニウム塩等11種類の消毒茶に対する抵抗性を, 3年間にわたって詳細に検討した.その結果,一部の病原体X殺菌処理の関係において,従来の成書とはかなり異った知見,つまり予想以上に病原体の抵抗性が強かったり,逆に弱かったりした.これらの基礎実験の成績を踏えて,第3年目に「実験動物施設における殺菌操作手順書(作業マニュアル)」を作成することが出来た.この手順書は,微生物学的基礎の上に作られたものであるが,同時に文献的研究が進められた各種消毒茶の毒性ならびに,実験動物施設の日常作業へ適合させることに配慮されている.作業マニュアルは膨大な内容をもっているので,添付の「研究成果報告書」にすらその全容を載せ切れない.そこで「実験動物施設における減菌,消毒作業マニュアル」という表題のテキストとして本年5月にソフトサイエンス社より出版することにした.このテキストは,実験動物の衛生管理に多大の貢献をすることは疑いはない.実験動物施設の現場に適合した減菌,消毒作業マニュアルを作成するため,最初に,実験動物の主要病原体とそれらに対して有効と思われる税菌手段のリストアップを行った.つづいて代表的な細菌15種120株,マイコプラズマ3種10株,真菌8種10株,ウィルス13種36株,寄生虫4種4株を選び,オートクレーブ処理,煮沸,紫外線照射ならびにアルコール,石炭酸,クレゾール石けん,次亜塩素酸ソーダ,ヨードホール,第4級アンモニウム塩等11種類の消毒茶に対する抵抗性を, 3年間にわたって詳細に検討した.その結果,一部の病原体X殺菌処理の関係において,従来の成書とはかなり異った知見,つまり予想以上に病原体の抵抗性が強かったり,逆に弱かったりした.これらの基礎実験の成績を踏えて,第3年目に「実験動物施設における殺菌操作手順書(作業マニュアル)」を作成することが出来た.この手順書は,微生物学的基礎の上に作られたものであるが,同時に文献的研究が進められた各種消毒茶の毒性ならびに,実験動物施設の日常作業へ適合させることに配慮されている.作業マニュアルは膨大な内容をもっているので,添付の「研究成果報告書」にすらその全容を載せ切れない.そこで「実験動物施設における減菌,消毒作業マニュアル」という表題のテキストとして本年5月にソフトサイエンス社より出版することにした.このテキストは,実験動物の衛生管理に多大の貢献をすることは疑いはない.本年度は、実験動物施設で利用する「滅菌,消毒作業マニュアル」を作成するための基礎資料とするため、実験動物に関わる各種の病原体の熱,紫外線ならびに種々の消毒剤に対する抵抗性を検討した。細菌では、気管支敗血症菌等の15菌種、120株について熱,紫外線,エタノールその他8薬剤に対する抵抗性を検索した。芽胞を形成しない細菌では、100°C1分の加熱に耐えるものはなく、エタノール,イソプロパノール,クレゾール,塩化ベンザルコニウムに容易に殺され、紫外線に対しても約15分の照射で大部分が不活化された。しかし、芽胞形成菌の多くは、100°C5時間あるいは110°C5分の加熱に抵抗し、滅菌のためには120°C10分以上のオートクレーブ処理を必要とした。マイコプラズマについて3菌種、10株の抵抗性を検索したところ、エタノール,イソプロパノール,クレゾールの殺菌効果にはいずれも著しいものがあったが、塩化ベンザルコニウムのそれはやや劣り、クロルヘキシジンその他の消毒剤では無効の例もあった。真菌の8菌種に関する抵抗性は、加熱や消毒剤に対して一般には容易に不活化されるが、紫外線に対しては株によるばらつきが大きかった。ウィルスの抵抗性については、センダイウイルス,ハンタンウイルス,イヌパルボウィルス等を用いて検索した。感染性ウィルス粒子を含むエロゾール飛散によって主に伝播すると考えられるウィルスは、多くの消毒処理が有効であるとする成績をえた。また、そのほかのウィルスについても、通常の消毒処理で不活化可能と思われる。いずれにしても従来の滅菌、消毒法について、実験室レベルでの殺菌効果はみとめられるけれども、実験動物施設の現場における使用には、慎重な配慮が必要と思われる。
インドネシアの経済成長と地域間経済格差：生産要素の地域データを用いた実証研究

本研究は、インドネシア政府への政策提言を目的に、地域間経済格差の要因となる地域間要素不均衡が経済成長に与える影響を、生産要素の地域データを用いて、検証した。具体的には、(1)州別資本ストックの推計、(2)州別生産関数による資本の生産力効果の推計、(3)州別生産関数の投入変数のパラメータを技術制約、投入量の全国総計を資源制約として、全国の経済厚生を最大とする競争均衡条件下の要素配分を応用一般均衡モデルにより算定、(4)投資の均等配分比率を用いた過去の地域開発政策の方向性の検証の4項目の研究を実施した。世界第4位の人口と東西5千kmに及ぶ広大な国土を有する島嶼国家インドネシアは、独立以来、主要政策課題である経済活動の地域間不均衡の是正に尽力してきた。しかし、現在も、経済活動の6割が国土面積の1割弱のジャワ島に集中し、課題解決は道半ばにある。加えて、この課題に貢献する研究は、資本の地域データの制約から多くはない。本研究では、本政策課題の解決に資する政策的含意の提供を目的に、インドネシアの生産要素の地域配分状況を考察してきた。研究の2年目となる平成24年度では、資本の地域配分パターンを効率性と衡平性の観点から、ソロー成長会計モデルから独自に導出した投資の均等配分比率を算定した。本研究では、投資の均等配分比率を、各地域の経済成長に対する資本の寄与度が全国で均等となる時の投資の地域シェアと定義している。同比率の算定には、インドネシアの各州の生産額を被説明変数、生産要素(労働と資本)を説明変数とするコブ=ダグラス型地域生産関数のパネル推計から得られたパラメータを用いる。地域関数の特定化では、政策変数である社会資本を含む資本のパラメータは各地域で異なり、利益最大化を基準として各地域に配分される労働のパラメータは各地域で同一であると想定した。これらのパラメータから投資の均等配分比率を算定し、実際の配分比率と比較して、各地域の資本の集中・拡散の程度を検証した。分析の結果、アチェ、北スマトラ、リアウ、東カリマンタン州の資源産出地域では資本の収益性が高く、東西ヌサトンガラ州の後発開発地域やジョグジャカルタ州といった観光業に特化した地域では資本の収益性が低い結果となった。また、経済活動が集中するジャワ島地域では、経済危機の起きた1998年とその後の地方分権化の動きに一致するように、ジャワ島集中から島外への分散へという投資配分比率の変化が確認できた。研究の最終年度は、地域間経済格差の要因となる地域間要素不均衡を検証すべく、ソロー成長会計モデルから導出した「投資の均等配分比率」を用いて、経済危機前後のインドネシアの地域開発政策の方向性を、明らかにした。投資の均等配分比率とは、当該地域の資本の経済成長に対する寄与度(直接効果)と他地域の資本が当該地域の経済成長に影響を与える寄与度(スピルオーバー効果)の2つの寄与度の合計が全地域で等しくなる衡平的な配分政策下で投資の地域シェアを示す。均等配分率の算定に必要な資本の分配率は、各地域の生産額を説明変数、労働、物的資本、スピルオーバー効果を持つ他地域の資本の3変数を被説明変数とする地域生産関数の推計値を使った。生産関数は「資本の分配率は地域開発政策に依存するため各地域で異なる」として特定化した。他地域の資本は、2010年と2015年のインドネシア州間産業連関表から空間近接行列でウエイト付けして算定した。検証の結果、各地域の資本の生産力効果は、ジャワ島各州は資源産出地域の各州ほど高くはなく、東部各州では低いことがわかった。さらに、均等配分率の推移をみると、ジャワ島各州は経済危機を境に資本投資の集中から拡散への変化を経験し、資源産出地域の各州では危機後の資本投資の集中、東部各州では観察期間中の低水準での推移を観察できた。ジャワ島各州の生産力効果がそれほど高くないことを考えると、経済危機前後の同地域への投資の集中・分散は投資の効率的地域配分から再分配的な地域配分への変化とはいえないことを示唆した。この成果は、本年5月に国際地域学会世界大会で報告予定である。また、この手法をバブル経済後の日本経済に適応した論文は国際ジャーナルLetters in Spatial and Resource Sciences(2013年)で採択済である。世界第4位の人口と東西5千kmに及ぶ広大な国土を有する島嶼国家インドネシアは、過去40年間で高い経済成長を達成する一方で、独立以来の政策課題である地域間経済格差の是正に尽力してきた。しかし、現在でも経済活動の6割が国土面積の1割に満たないジャワ島に集中し、地域格差の是正はいまだ十分とは言えない状況にある。この要因には生産要素の地域間不均衡が大きく影響しているが、資本の地域データの制約からこの要因の解明に貢献する研究は現在まで行われていない。

本研究は、経済成長の達成と地域間経済格差の是正という政策目標の実現に苦慮する政府への政策的含意の提供を目的に、インドネシアの経済成長と地域格差の変化を生産要素の地域配分から考察を行う。研究の初年度となる平成23年度は、生産要素の地域配分の効率性を分析した。分析では、まず、インドネシアの26州別の生産額と生産要素のデータを整備し、その後、各州の生産額を被説明変数、生産要素(労働と資本)と時間的変化を説明変数とするコブ=ダグラス型州別生産関数のパネルデータ推計を行った。次に、推計結果の各変数のパラメータを技術制約、各要素の投入量の全国総計を資源制約として、全国の国民の経済厚生が最大となる競争均衡条件の下での要素配分(競争均衡配分)と生産額(競争均衡的生産額)を、計算可能な一般均衡モデルを用いて算定した。この競争均衡条件下での各州の生産額に対する実際の生産額の比率を地域配分の効率性として、その推移を分析した。分析の結果、生産要素の地域配分の現状を見ると、ジャワ・バリ地域への資本集中、ジャワ外島の農村地域への労働人口の偏在、ジャカルタ周辺地域への労働人口の集中など資源配分の不均衡が確認された。当初の計画では、平成23年度には、(1)州別資本データの再確認、(2)地域生産関数の推計、(3)確率的フロンティア(SFA)法やデータ包括分析(DEA)法による効率性の影響を考慮した生産性成長率の推計、平成24年度には(4)効率的な生産要素の地域配分と現実の賦存状況との比較の4項目を実施予定であった。平成24年度までの2年間で項目(3)を除き、ほぼ達成できた。しかし、項目(4)については、平成23年度に前倒しで行い、その研究成果から得られた「インドネシアの非効率的な資本の地域配分」という重要な観察結果に関して、平成24年度に前述のように追加的に検証を試みた。このように、当初の研究計画に無かった検証項目を追加したため、項目(3)が後回しとなり、作業がやや遅れた結果となった。平成23年度は、(1)生産要素の地域データの整備と地域生産関数の推計、(2)確率的フロンテイア法やデータ包括分析法による効率性の影響を考慮した生産性成長率の推計の2つの研究項目を実施する予定であった。実際には、(1)の研究実施中に、生産要素の地域配分の効率性の推移を分析するために、計算可能な一般均衡モデルを用いた競争均衡配分と競争均衡的生産額の算定作業を追加した。分析結果では、上記の記載のとおり興味深い分析結果が観察できたため、23年度はこの研究成果を学会報告し、さらに、研究論文として取りまとめて、投稿した。その一方で、この作業項目の追加で、(2)の作業開始時期が遅れ、23年度は先行研究のみで終わることとなった。平成25年度は、過年度計画で先送りとした項目(3) SFA法やDEA法による効率性の影響を考慮した生産性成長率の推計に加えて、一部門地域CGEモデルを用いた政策シミュレーション分析を行う。また、分析おいて、労働・資本に加え、人的資本の地域データも検討すべきであるとの示唆を、多くの研究者から受けていることから、人的資本の地域配分に関しても検討する。平成24年度は、インドネシアの経済成長における確率的フロンテイア法やデータ包括分析法による効率性の影響を考慮した生産性成長率の推計を行う。また、ジャワ・バリ地域における資本の地域配分状況を、23年度に実施した分析手法とは異なるアプローチから検証する。
成長ホルモン分泌促進因子遺伝子発現に対するリマトスタチンの効果

成長ホルモン(GH)は視床下部に作用して視床下部ホルモンの分泌合成を修飾することが明らかとなっている。我々はラットの下垂体においてGH受容体(GHR)遺伝子発現がGH産生細胞に比較的選択的に分布することをin situ hybridization法を用いて明らかにした。この成績からGHは視床下部ばかりでなく下垂体にも作用してGH産生細胞の機能を修飾する可能性を考えた。これを検討するため下垂体培養細胞を用いて以下の観察を行った。成熟雄ウイスター系ラットの下垂体前葉を取り出した後、細胞を単離しDMEM+10%FCS中で3日間培養した。培養4日目に細胞を洗い、培養液をDMEMに交換した。一群の細胞にはヒトGH(hGH)(10^<10>M-10^6M)を添加し、他群には抗ラットGH抗体を添加した。(最終濃度1:10000-25000)。24時間培養後ノザン解析により細胞のGHmRNA量を測定した。培養液のラットGH濃度はRIAで測定した。1,外因生にhGHを添加した時の培養液のラットGH濃度と細胞のGHmRNA量は対照群と比較して各々差がなかった。2,抗ラットGH抗体を加え培養液の内因性GHを中和するとGHmRNA量は対照群に比較して増加した。この成績は内因性GHが存在する時には外因性にGHを投与してもGHの合成、分泌には影響を与えないが、培養液中のGHを中和することによりGHの合成が高進することを示唆する成績と考えた。以上よりGHは下垂体のGHRに作用し、GHの合成に関与している可能性が考えられた。