hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
線形応答関数に基づく反応場計算スキームの開発と酵素の高効率化への応用

結合次数の線形応答関数に基づいた全く新しい反応場設計法を開発した。具体的には、結合次数の線形応答関数に基づく新たな変分問題を提案し、基質内の形成もしくは解離させたい結合の結合次数を最大にするような外場を計算する方法を開発した。そして安息香酸の酸解離反応、プロテアーゼの加水分解反応、Nアセチルグルコサミン転移反応などの反応系に応用した。また、その過程で必要となった自由エネルギーの遷移状態を計算できる新たな方法も開発した。さらに、特定の結合の結合次数の増減を最大にする反応場だけでなく、基質を最も有効にトラップする反応場との重ね合わせが、酵素の高効率な触媒能の源であるという重要な知見を得た。初年度は、基本となる方法論やツールの確立を行った。具体的には、反応を誘起する場を求める際に、その反応場を定義する空間領域として、基質分子の分子表面を採用し、特定の結合を解離あるいは生成する反応場を求めるプログラムを完成させた。この分子表面の代表点とその測度を求める方法としては、通常誘電体近似(polarized continuum model)で使用されるアルゴリズムを採用し、結合次数の線形応答関数計算モジュール、逆問題を解き反応誘起場を求めるモジュールとともに汎用プログラムGAMESSに搭載した。一方、応用計算としては、(1)酵素系とともにルイス酸塩基型の反応場としては最もシンプルかつ基本的な場として(2)安息香酸やフェノール等の酸解離反応の反応誘起場に着手した。(1)では『結合解離・生成』場だけでなく『基質トラップ』場も併用した方が妥当であるとの知見が得られた。(2)では当初、基質に1つの水分子が攻撃をしヒドロニウムイオンとして脱離するというシナリオの下、基質+水分子1個のみを量子力学(QM)的に、他の水分子は古典的(MM)溶媒として扱うQM/MM計算を行っていたが、学会発表で水分子間のプロトンリレーが起こる可能性を指摘されて、約11&#197;サイズの立方体に1atmで水を詰めた状況で全QM分子動力学計算を実行した。また、この過程で、トラジェクトリーから基質の平均構造を決定しその分子表面を決定するコードの開発も行っている。酸解離の反応機構解明は、メタダイナミクス、アンブレラサンプリング酸解離の分子論の詳細自体、研究として価値のあるものである為、詳細に解析している。反応場設計の研究と合わせてこの成果は2年目の本年度に発表する予定である。当初の予定と異なるのは、酸解離の反応を応用の第一歩とした事である。これは基本理論である、ルイス酸塩基型触媒場の設計という観点からは妥当な変更であると考えている。その分酵素反応場の検証は多少遅れているが、基質が揺らいだ場合の解析ツールの解析などいずれ必要となるツールの開発や、酸解離反応の分子論の詳細自体、未解明なテーマであり、副産物的な成果としての価値は高いと考えている。又、酵素反応場の設計に関しては、いくつかの酵素反応場の計算から、『結合を切る・生成する』場だけではなく、『基質をトラップする』場との重ね合わせである場合がある事が判明してきた。これに関しても、後者の効果をカバーする為の、基質のみの量子化学計算から基質トラップ場を計算するモジュールも開発済みであり、理論としてはより重厚かつ様々なケースに対してロバストなものになってきている。今後、様々な効果が効いている様々な酵素系に対し、全てに適用できるユニバーサルな反応場設計理論にするか、又は、酵素系をある程度、クラスに分け、各々のクラスに最適な反応場設計理論を複数構築するか勘案中である。酸化還元型反応に対する電子可変方式への理論の拡張については、現在進行中であり、こちらは並行して、適用対象サンプルの為、カタラーゼ活性を持つマンガン二核錯体(E. J. Larson et al. J Chem Soc Chem Commun 116, 102 (1992))の反応機構の解析も同時に行っている。ケースにより理論の詳細を変更しなければならない可能性や、参照応用計算が重くなるのは、予想していた通りであるとも言える。以上、計画のままではないが、当初計画になかった研究を進行しているので、全体としてはおおむね順調に進行していると言える。昨年(2016)度は、結合次数の線形応答関数の定式化、それに基づいた反応場設計の構築の理論スキームの電子可変形式への拡張まで行った。具体的にはT=0KのグランドカノニカルアンサンブルDFTに基づく化学ポテンシャル一定の場合の結合次数の線形応答関数の定式化を行った。またシスプラチンの合成経路で、平面4配位白金錯体[Pt(NH3)Cl]-(1)から[Pt(NH3)2Cl2] (2)への置換反応において、(1)の各配位サイトに摂動を加えた場合の結合次数の揺動を計算したところ、摂動を与えるサイトに関し、結合解離型の揺動の大きさが、NH3隣接サイト> NH3対面サイト>> NH3サイト自身、となり、NH3隣接サイトが反応を起こしやすい事、すなわちシスプラチン合成時のトランス効果を、結合次数の線形応答関数から予見可能を含意する。他、hexan-1-ol and hexa-1,3,5-trien-1-olの計算から有機物の置換基効果である誘起効果と共鳴効果の記述子である事がわかる等、結合次数の線形応答関数の特性を論文発表した。反応場設計に関しては、学会発表時の他研究者との意見交換から、対象とする凝集相や生体系など自由エネルギーが重要となる化学反応における遷移状態の決定という重要な問題に取り組んできた。

昨年度報告書にも記載した通り、安息香酸の酸解離の遷移状態の決定をアンブレラサンプリング及びメタダイナミクスで行なってきたが、他のより複雑な凝集系・生体系反応では反応座標の選択やそれを増加させる際の計算コスト(次元の呪い)が問題となる。これを解決する方法としてアンブレラ積分に基づく自由エネルギー地形での反応経路の自動探索という方法を考案し、実装した。この研究自体も反応場設計の重要な1ステップ(反応場設計の対象となる基質遷移状態の決定)に寄与するものであるので、本課題の成果と言える。研究の進行度の評価に関しては二点ある。まず当初の予定では、2016年度までにルイス酸塩基型反応の触媒設計並びに、酸化還元反応などの電子可変型化学反応に対する、結合次数の線形応答関数に基づく触媒設計法まで至る予定であったが、まだ確立しているとは言い難い状況である。この理由としては、「研究実績の概要」に記載した通り、凝集相や生体内化学反応で特に熱揺らぎが重要となる場合に、遷移状態の構造を決定する確立された手法論がなかった為、それを本課題の副テーマとして解決する事になった為である。一般にアンブレラサンプリング(US)とメタダイナミクス(MetD)がこの目的のために使用されているが、それぞれ、事前に設定した反応座標空間全域を、冗長に(USは計画的に、MetDは平坦化された地形上の動力学に任せ)探索する必要があるので問題がある。これに対し我々は、アンブレラ積分法に基づき、局所の自由地形を描いて最小限の計算量で反応経路を自動探索し、自由エネルギー遷移状態を求める方法の考案・実装までに至った。これが評価の第二点目で、反応場設計に必要な結合次数の線形応答関数の計算対象構造である、自由エネルギー地形における遷移状態の決定、の提案に至るという意味で、重大な成果を得たとも言える。この(i)自由エネルギーに関する遷移状態構造決定法、と(ii)その構造を固定し計算した結合次数の線形応答関数に基づく反応場設計、は、今後、研究の両輪になることを勘案し、(ii)の進行が遅れているが、(i)の大幅な進捗によって「おおむね順調な進展」との評価を下した。本年度は、昨年度から引き続き、結合次数の線形応答関数に基づく反応場設計および関連研究と、現実の反応場設計のターゲットとなる、自由エネルギーベースでの遷移状態構造探索法の開発を並行して行った。業績として2017年度内に論文発表は主に第二のテーマの方となるが、第一のテーマに関しても、(1)線形応答関数計算の際の摂動を空間的に分布した関数であたえられる形式に拡張し、また(2)第二テーマの成果によって自由エネルギー地形上の遷移状態を求める事が可能になったので酸解離反応の反応場設計を完成させ、さらにNアセチルグルコサミン転移酵素の反応場設計を行っており、これらの成果に関しても順次論文発表する予定である(学会発表としては国際会議の招待講演で発表済み)。
排泄低下型高尿酸血症の発症機序に関する分子生物学的解析

尿酸は、尿細管で再吸収と分泌の両方向性に輸送が行われ、その輸送体の実体は明らかにされていなかった。今回、尿酸の再吸収に働くヒト腎臓尿酸トランスポーター(urate transporter : URAT1)をコードする遺伝子SLC22A12が同定された。URAT1は、膜12回貫通型のトランスポーターであり、腎臓に特異的に発現し、近位尿細管管腔側に局在していた。URAT1をXenopus leavisの卵母細胞に発現させた取り込み実験によるURAT1のミカエリス定数は、370μMであり、乳酸、ピラジンカルボン酸、ニコチン酸等の有機アニオンとの尿酸/アニオン交換輸送体であることが明らかになった。また、尿酸排泄促進作用を持つプロベネシドやベンズブロマロンによりURAT1の尿酸輸送は阻害され、尿酸再吸収亢進作用を持つピラジンカルボン酸の前負荷により尿酸の取り込みが増加することより、URAT1がこれら尿酸動態に影響を与える薬物の作用点であることも証明された。腎臓における尿酸の動態異常の遺伝子疾患である腎性低尿酸血症は、URAT1が責任遺伝子の一つであることが考えられ、腎性低尿酸血症症例の解析を行った。腎性低尿酸血症患者32例中、30例にSLC22A12に異常を認めた。24例はホモ接合体または複合ヘテロ接合体で、6例はヘテロ接合体であった。ナンセンス変異であるG774A変異を、74.1%に認めた。ミスセンス変異は変異体を作成し、尿酸輸送能が消失または著しい低下を確認した。以上より、SLC22A12の異常による腎性低尿酸血症が腎性低尿酸血症のほとんどを占め、更にG774Aが多数を占めることを明らかにした。また、これらの事実と1mg/dl以下の低尿酸血症であることから、URAT1が腎臓における尿酸再吸収の主要なトランスポーターであり、血清尿酸値を規定していることが明らかになった。尿酸は、尿細管で再吸収と分泌の両方向性に輸送が行われる等、複数の輸送体を介した複雑な輸送が想定され、その輸送体の実体は明らかにされていなかった。生体内で、尿酸は有機酸として存在することから、有機陰イオントランスポーターにより輸送される可能性が想定されていた。最近我々は有機陰イオントランスポーターであるhOAT1が尿酸を輸送することを明らかにした。今回、ヒトゲノム概要配列を元に、hOAT1のファミリーである近位尿細管基底膜側に存在するhOAT4遺伝子の近傍より、尿酸の再吸収に働くヒト腎臓尿酸トランスポーター(urate transporter : URAT1)をコードする遺伝子SLC22A12を同定した。URAT1は、膜12回貫通型のトランスポーターであり、ノーザンブロットの結果より腎臓に特異的に発現していた。また、ヒト腎組織切片の免疫染色により、近位尿細管管腔側に局在していた。URAT1をXenopus leavisの卵母細胞に発現させた取り込み実験により、URAT1は時間依存性に尿酸の取り込み増加を示した。その取り込みは、担体輸送の特徴を有し、ミカエリス定数は、370μMであった。

乳酸、ピラジンカルボン酸、ニコチン酸によりURAT1を介した尿酸輸送がtransstimulationされることから、URAT1はこれら有機アニオンとの尿酸/アニオン交換輸送体であることが明らかになった。また、尿酸排泄促進作用を持つプロベネシドやベンズブロマロンによりURAT1の尿酸輸送は阻害され、尿酸再吸収亢進作用を持つピラジンカルボン酸をあらかじめ卵母細胞に負荷しておくことにより尿酸の取り込みが増加したことより、URAT1がこれら尿酸動態に影響を与える薬物の作用点であることも証明した。腎臓における尿酸の再吸収が障害されている、または排泄が促進している遺伝子疾患である腎性低尿酸血症は、URAT1が責任遺伝子である可能性が考えられた。そこで、3例の腎性低尿酸血症症例を解析したところ、3例ともSLC22A12に遺伝子異常を認めた。この事実から、少なくとも一部の腎性低尿酸血症の責任遺伝子がURAT1であることが明らかになった。我々は有機陰イオントランスポーターであるhOAT1及びURAT1が尿酸を輸送することを明らかにし、それぞれをコードする遺伝子SLC22A6とSLC22A12を同定した。さらに尿酸の排泄亢進を示す遺伝子疾患である腎性低尿酸血症症3例を解析し、腎性低尿酸血症の責任遺伝子がURAT1であることを明らかにした。これらに基づき、以下のことを施行した。【URAT1の輸送特性の解析】マウス遺伝子の相同性検索により、マウスRSTがURAT1と74%の相同性を認めたため、アフリカツメガエルの卵母細胞を用いRSTの尿酸輸送能を検討した。KmとVmaxがそれぞれ1213±222μMと268.8±38.0pmol/oocyte/hrであり、benzbromarone、probenecidにより尿酸輸送が阻害されること等から、マウスRSTが尿酸を輸送し、URAT1のhomologueであることを明らかにした。【腎性低尿酸血症症例の解析】腎性低尿酸血症の中に占めるURAT1の異常が原因で起こる頻度や、疾患の特徴を明らかにすることを試みた。腎性低尿酸血症患者32例を解析し、30例にSLC22A12に異常を認めた。24例はhomozygoteまたはcompoundheterozygoteであり、6例はheterozygoteであった。SLC22A12の遺伝子異常の中で、ナンセンス変異であるG774Aが74.1%を占めていた。その他にミスセンス変異であるG269Aが9.3%に認められ、総計10の変異を明らかにした。更に、今回明らかになった6個のミスセンス変異に関し、変異体を作成しアフリカツメガエルの卵母細胞に発現させた結果、尿酸輸送能が消失または著しく低下していた。以上より、SLC22A12の異常による腎性低尿酸血症が腎性低尿酸血症のほとんどを占め、更にG774Aが多数を占めることを明らかにした。尿酸は、尿細管で再吸収と分泌の両方向性に輸送が行われ、その輸送体の実体は明らかにされていなかった。今回、尿酸の再吸収に働くヒト腎臓尿酸トランスポーター(urate transporter : URAT1)をコードする遺伝子SLC22A12が同定された。URAT1は、膜12回貫通型のトランスポーターであり、腎臓に特異的に発現し、近位尿細管管腔側に局在していた。URAT1をXenopus leavisの卵母細胞に発現させた取り込み実験によるURAT1のミカエリス定数は、370μMであり、乳酸、ピラジンカルボン酸、ニコチン酸等の有機アニオンとの尿酸/アニオン交換輸送体であることが明らかになった。
高齢者の外出特性と地域環境整備に関する研究

高齢者をとりまく今日の状況を空間的な側面から捉え、高齢者の居住空間を、高齢者の生活様式や生活空間の分析を通して把握した上で、高齢者の居住に関する地域環境のあり方と整備の方向について検討した。地理学のなかには、未だに、高齢者の問題を地域環境との関わりにおいて解明しようとする研究の定着をみていない。しかし、現在の他に類を見ない急激な高齢化の波は、地域社会に医療・福祉・財政や雇用などの社会問題を発生させるとともに、高齢者本人についても就労・居住・所得や健康などの生活上の問題を発生させている状況にある。今後、高齢社会の到来とともに、コミュニティおよびコミュニケーション・スペースは変化し、外出特性を中心とする生活行動や生活圏域も影響を受け、地域社会は、高齢者を意識した社会へと変容していく。具体的には、調査対象地域を東京大都市圏(東京・横浜・藤沢)、地方中心都市(札幌・広島・福岡・松山)、地方都市(富士宮・観音寺・出水)を事例として、居住地区(コミュニティ)レベルで分析した。高齢者の外出特性は、公共交通機関の発達していない地方都市では、徒歩空間を中心とした日常的な行動圏での外出が主体であり、公共交通機関の整備された大都市圏では、日常的行動圏から離れた、過去における活動領域であった空間への外出が、たびたび行われることが理解された。現在、高齢者の居住者数の増加は、地方都市よりも大都市圏および地方中心都市の周辺住宅地域で著しくなっている。これらの地域は、かつての転入者の中心的存在であった青年層に居住環境のレベルを合わせてあるために、高齢者の居住における不都合が随所に出現している。青年層以下の人々を対象とした公園配置・小文字の案内板・交通体系の複雑化などは高齢者にとって改善の余地を残すものである。高齢者に適応した地域環境の確定とその整備の必要性が理解された。
アデノ随伴ウィルスベクターを用いた神経障害性痛に対する遺伝子治療

本研究の目的は、痛みに関わる神経伝達に重要な役割を果たすとされる脳由来神経栄養因子(BDNF)遺伝子に注目し、アデノ随伴ウィルス(AAV)ベクターを用いて痛み発生メカニズムに寄与するBDNFの発現抑制を実現することで、難治性疼痛の新たな治療法を確立することである。まず、痛みに関わる特異的なBDNFの発現を阻害するRNAを組み込んだAAVベクターを作成した。次に、痛み動物モデルにおいて脊髄くも膜下腔内に作成したAAVベクターを投与し、神経節におけるBDNF合成阻害を確認し、その鎮痛効果を検討する。最終的には本治療法の安全性を確認し、臨床における治療法開発への道を探る。【BDNFエクソン1 mRNAに対するsiRNAのデザイン】これまでの研究により、痛みモデルではBDNFのエクソン1を含むmRNAが増加することが分かっている。BDNFエクソン1に対する効果的なsi-RNA配列は、コンピュータアルゴリズムにより有効と予測される3種類の配列のsiRNAをデザインした。【神経障害性痛動物モデルの作成】Wistarラットに対して、麻酔下に背部の皮膚を切開後、L6の横突起周囲を丁寧に剥離後切断し、第5腰神経を5-0絹糸にて神経を結紮した。その後、くも膜下に薬剤注入用の、PE10カテーテルを挿入した。止血を確認して閉創した。この処置によって、術後2日目から数週間持続する痛覚過敏状態が観察された。【投与経路の確認】腰椎レベルからのくも膜下投与により、腰椎レベルでの後根神経節にベクターが入りこんでいることを確認した。さらに、胸椎レベルの後根神経節や脳では検出されないことも確認できた。BDNF定量条件の検討:ラットC6細胞からmRNAを抽出し、BDNF Exon1およびCoding Sequence(CDS)のプライマーを用いてReal Time PCRを行い定量条件の検討を行った。CDS(BDNFの全てのTranscript variantsに共通の配列)に比べ、Exon1の発現量は非常に少なく(およそ1/100以下)、定量性に欠けるという結果となった。siRNAの検討:siRNAポジティブおよびネガティブコントロールを購入し(Dharmacon社)、これらを用いたトランスフェクション条件の検討を行った。具体的にはsiRNA量、細胞数、トランスフェクション試薬量、無血清培地での洗浄、siRNA暴露時間などの条件を検討し、コントロールCPBに対するsiRNA効果を確認した(50%ノックダウン)。一方、Exon1に対するsiRNAターゲット配列はSIGMA社に設計を依頼し、3つのターゲット領域を得た。しかし、C6細胞から得られるExon1は低濃度であり、siRNAによるノックダウン効果を検討するには定量精度が低かった。そこでBDNF transcript variant Iをクローニングし、細胞へのトランスフェクションによるBDNF過発現細胞を作成することになった。BDNFクローニング:ラット脳からmRNA抽出した後、BDNF transcript variant I (4252bp)のうち、Exon1とCDSを含む1410bpの遺伝子クローニングを試みた。プラスミドベクターpcDNA3.1(+)へ挿入するため、BDNF transcript variant Iの5'末端にBamHIサイト、CDS領域の3'末端にEcoRIサイトを接着したプライマーを設計し、目的とするBDNF transcript variant Iを得た。今後はBDNF過発現細胞を作成し、siRNAの効果を確認した後、shRNAおよびアデノ随伴ウイルスベクターを用いたshRNA発現系を作成し、in vivoで検討を行う予定である。医歯薬学(疼痛学)所属の異動があり、in-vitroの実験に関してはやや遅れが生じた。次年度に予定していた疼痛モデルの確認を前倒しして行うことで、速やかに遅れが取り戻せるよう準備した。まず培養DRG細胞を使用し、in-vitroでのBDNF発現抑制効果の確認を行う。さらに、in-vivoでAAVベクターくも膜下投与後5ー6週に組織(DRG、脊髄)を摘出し、ウィルス感染のモニタリングとなるGFPの発現、及びBDNFの発現抑制を確認する。定量PCRにてmRNAの変化を、ウエスタンブロット法にてタンパク質の変化を確認する。疼痛行動評価は、機械刺激によるアロディニアを測定する。具体的にはvon Freyfilamentを用いて両側ラット足底を刺激し、その逃避反応から50%逃避閾値を測定する。試薬の一部が予定より安価で入手できたため、39,889円の余剰が生じた。平成26年度分に合算して使用する予定である。
高齢者における心理的適応過程としての老年的超越に関する研究

高齢期には身体機能が低下するにも関わらず,主観的幸福感は比較的高く維持される。さらに近年では,加齢とともに心理的適応が促進されると示唆される。しかし,この心理的適応過程は十分には解明されておらず,高齢者が身体機能の低下に適応するようにいかなる心理的変化を示すかは明らかではない。そこで本研究では,この心理的適応過程を解明するため,心理的発達理論の一つである老年的超越を適用する。老年的超越とは,「物質的で合理的な世界観から,宇宙的で超越的な世界観への,高次の見方の変化」と定義される心理的変化である。しかし,老年的超越がどのような行動として表出されるかは十分には明らかではなく,測定尺度を作成する必要があった。したがって,(1)老年的超越の概念を記述し,その測定尺度を開発すること,さらに(2)老年的超越と主観的幸福感との関連を明らかにすることの2点を目的に研究を実施した。本年度は,慢性疾患患者や一般成人を対象にしているものの,老年的超越と類似した概念について研究する研究者らと共同して学会で企画を行い,身体機能の低下といった種々の喪失に適応するようにいかなる心理的変化がについて議論した。さらに,初年度に行った調査と同一地域で80歳高齢者973人を対象に,会場招聘調査を実施した。年度内に実査を終え,データセットを作成中であるが,現在分析可能な70歳と80歳のデータを合わせて分析した結果,老年的超越尺度の信頼性・妥当性が再確認された。また,高齢期だけでなく成人期を対象に,老年的超越の生涯発達変化と主観的幸福感との関連を検討するため,30歳,50歳,70歳を対象にしたインターネット調査を行った。来年度は,引き続き90歳を対象にした調査を実施し,超高齢期を含めた高齢期の発達を検討していく。研究計画の通り,初年度は70歳1000人を対象に調査を行い,本年度は80歳約900人強を対象に調査を行った。来年度は90歳約600人を対象に調査を行う予定である。また,初年度に行った医療従事者を対象にした研究については,東日本大震災以降予算の執行7割の縮減が告知されて以降目立った進展は見られなかったが,年度後半に3割の予算の交付が決定し,インタヴューデータを逐語録にすることができた。来年度以降,分析を実施する。老年的超越とは,高齢期に生じてくる発達的変化である。しかしながら,70歳80歳を対象にしたこれまでの研究では,身体機能の低下がまだ顕著ではなく,老年的超越が身体機能の低下に適応するようにして生じた心理的変化なのかは十分には明らかではない。今後の研究では,90歳を対象にした調査を引き続き実施するとともに,80歳の研究協力者のうち,虚弱者に焦点を当てて分析を行ない,老年的超越が身体機能の低下に対して主観的幸福感を維持するように機能するかを検討したい。さらに,縦断調査を行うことで老年的超越の変化と主観的幸福感との関連を検討することが重要だと考えられる。また,高齢期における発達に死生観や宗教性がどのように関わりを持っているかを検討するため,死が現前化していると考えられる100歳高齢者を対象にした研究も行いたい。しかし,この心理的適応過程は十分には解明されていない。本研究では,この心理的適応過程を解明するため,心理的発達理論の一つである老年的超越を適用する。老年的超越とは,「物質的で合理的な世界観から,宇宙的で超越的な世界観への,高次の見方の変化」と定義される発達的変化である。しかし,老年的超越がどのような行動として表出されるかは十分には明らかではない。そこで本年度は,(1)老年的超越の概念を記述し,その測定尺度を開発すること,さらに(2)老年的超越と主観的幸福感との関連を明らかにすることの2点を目的に研究を実施した。(1)に関しては,85歳以上の超高齢者の語りを分析し,超高齢者の身体・人生・生命といった生への意味づけを明らかにし,超高齢者の世界観を記述した。さらに,共同研究者とともに測定尺度を開発し,これらの成果を論文化した。また,医療福祉の専門家へのインタヴューを行い,周囲の人が老年的超越と考えられる行動を認識しているか,どのように解釈しているかを明らかにすることを目的に,研究を実施してきた。(2)に関しては,関西・関東の都市部・非都市部在住の70歳高齢者約1000人を対象に,会場招聘調査を実施した。この調査に際し,主観的幸福感と心理的発達理論に関する研究を整理し,「どれくらい長生きしたいか」と関連する主観的幸福感の指標(Valuation of Life)を開発するとともに,情動加齢に関する理論で提唱される肯定的感情の増加・否定的感情の低下に関連する情動調整を測定する尺度を開発してきた。来年度は,これらの新たな測定尺度の成果を論文化するとともに,データセットを完成させ,老年的超越と主観的幸福感との関連を検討する。さらに,同一地域で80歳高齢者を対象に同様の調査を実施する。

さらに近年では,加齢とともに心理的適応が促進されると示唆される。しかし,この心理的適応過程は十分には解明されておらず,高齢者が身体機能の低下に適応するようにいかなる心理的変化を示すかは明らかではない。そこで本研究では,この心理的適応過程を解明するため,心理的発達理論の一つである老年的超越を適用する。老年的超越とは,「物質的で合理的な世界観から,宇宙的で超越的な世界観への,高次の見方の変化」と定義される心理的変化である。しかし,老年的超越がどのような行動として表出されるかは十分には明らかではなく,測定尺度を作成する必要があった。したがって,(1)老年的超越の概念を記述し,その測定尺度を開発すること,さらに(2)老年的超越と主観的幸福感との関連を明らかにすることの2点を目的に研究を実施した。本年度は,慢性疾患患者や一般成人を対象にしているものの,老年的超越と類似した概念について研究する研究者らと共同して学会で企画を行い,身体機能の低下といった種々の喪失に適応するようにいかなる心理的変化がについて議論した。さらに,初年度に行った調査と同一地域で80歳高齢者973人を対象に,会場招聘調査を実施した。年度内に実査を終え,データセットを作成中であるが,現在分析可能な70歳と80歳のデータを合わせて分析した結果,老年的超越尺度の信頼性・妥当性が再確認された。また,高齢期だけでなく成人期を対象に,老年的超越の生涯発達変化と主観的幸福感との関連を検討するため,30歳,50歳,70歳を対象にしたインターネット調査を行った。来年度は,引き続き90歳を対象にした調査を実施し,超高齢期を含めた高齢期の発達を検討していく。研究計画の通り,初年度は70歳1000人を対象に調査を行い,本年度は80歳約900人強を対象に調査を行った。来年度は90歳約600人を対象に調査を行う予定である。また,初年度に行った医療従事者を対象にした研究については,東日本大震災以降予算の執行7割の縮減が告知されて以降目立った進展は見られなかったが,年度後半に3割の予算の交付が決定し,インタヴューデータを逐語録にすることができた。来年度以降,分析を実施する。老年的超越とは,高齢期に生じてくる発達的変化である。しかしながら,70歳80歳を対象にしたこれまでの研究では,身体機能の低下がまだ顕著ではなく,老年的超越が身体機能の低下に適応するようにして生じた心理的変化なのかは十分には明らかではない。今後の研究では,90歳を対象にした調査を引き続き実施するとともに,80歳の研究協力者のうち,虚弱者に焦点を当てて分析を行ない,老年的超越が身体機能の低下に対して主観的幸福感を維持するように機能するかを検討したい。さらに,縦断調査を行うことで老年的超越の変化と主観的幸福感との関連を検討することが重要だと考えられる。また,高齢期における発達に死生観や宗教性がどのように関わりを持っているかを検討するため,死が現前化していると考えられる100歳高齢者を対象にした研究も行いたい。
遺跡の公園化における環境デザイン手法の開発-吉野ヶ里遺跡を事例として-

本年度は、本課題における総括として、遺跡情報の公園計画への応用手法の開発および、歴史公園における遺跡情報の公開展示などに対する提案を行うことを目的とした研究を進めた。具体的には、歴史公園の計画に対する遺跡情報の応用的な利用のために、昨年度までで作成した吉野ヶ里遺跡における遺跡情報のデータベースを用い、すでに行われた吉野ヶ里歴史公園における計画策定の経緯に対し、情報の利活用に対する可能性に関して検討を加え、歴史公園における計画から展示に至るまでの情報化によるプロセスの具体的提案を示した。つまり、歴史公園の計画において発生しうる様々な調査や計画、発掘調査における考古学的資料や、公園の立地などに関わる広域計画、公園内における詳細な各種の計画に至るまでの様々な過程において発生する資料や図面といった遺跡が持っている情報や、その周辺の関連情報を空間情報を中心とすることによってとりまとめ、GISを用いたデジタルアーカイブとすることで、情報の作成者や精度の異なる情報を一元的かつ横断的に利用するための方法論の構築によるプロセスの提案である。また、これらのデジタルアーカイブを用いることによって、情報を中心とした仮想歴史公園という概念の提案をおこなった。これは、歴史公園の魅力を向上するために、実空間における歴史公園では表現しきれないリアリティの強調や、遺跡に対する興味の増幅を目指すことを目的としており、今後発見される遺跡の保護や保存に対する世論の説得材料としての位置付けも持たせるものとなりうるものであり、歴史公園による考古学、文化財行政に対する貢献材料となりうるものである。本年度は、科研費によって購入したデジタルカメラ一式を用い、開園した国営吉野ヶ里歴史公園において、360度の視界をもった3次元ムービーを作成し、それらをGIS上にリンクさせ、仮想空間マップを展開する作業を中心におこなった。これに先行して同様の作業を国営武蔵丘陵国営公園において実験的におこない、公園内の施設管理当に対して、これらの情報が有効に利用できることを立証している。また、遺跡発掘時にえられた図面等から作成したGISデータをもとに、コンピュータグラフィックスによる仮想空間の構築をおこなっている。これらの成果物はインターネットを通じて公開することを計画している。さらに、昨年度に引きつづき、吉野ヶ里遺跡における遺跡情報のデータベース化を進めており、これに関連して、佐賀県・福岡県における遺跡分布を両県の教育委員会の協力のもと、両県の遺跡地図からGIS上に展開する作業を進めている。遺跡公園はひとつの空間としての遺跡を対象に計画・運営されているのに対して、歴史を学んだり研究したりという観点からは、周辺の遺跡との関連が非常に重要であるということから、公園の計画やその後の計画・運営・展示等において、周辺遺跡との関連を知るのに役立つはずであるという理由で進めているものである。これらは本研究における、中心となるもののひとつであり、歴史公園における遺跡情報の効果的な発信・展示に役立つものとなる。また、今年度の成果に関しては、指導教官である筑波大学鈴木雅和助教授らとの共著による、ランドスケープGIS(ソフトサイエンス社)に、原稿を寄せており、2003年5月に刊行予定となっている。また、奈良文化財研究所が中心となって設立された、日本遺跡学会の設立に際し、その発起人の一人として参加している。
透析療法の質の向上をもたらすバイオ人工腎の開発

透析療法は進歩しているものの、腎不全患者の予後は未だ非腎不全患者に比べ格段に不良である。その原因の一つとして、現行の透析療法では除去できない尿毒症性物質が多数存在し、末期腎不全患者では透析療法を行っているにもかかわらず、これら分子の大きな尿毒症性物質が体内に蓄積しつづけているためであることが明らかにされつつある。そこで、本研究では蛋白結合率の高い尿毒素であるインドキシル硫酸の輸送体であるヒトOAT-3遺伝子を高発現させた培養尿細管細胞を用いて、我々が開発したハイブリッド型人工腎臓に培養し、これを用いて腎不全モデル動物の血中インドキシル硫酸濃度を低下させることができるか否かを明らかにすることを目的として、以下の研究を行った。1)ヒトOAT3高発現細胞近位尿細管培養細胞を確立することができた。この細胞は、対照細胞に比してOAT3蛋白発現量が有意に高いことを免疫染色およびウェスタンブロットにより確認した。2)申請者らが、これまで開発してきたハイブリッド型人工腎臓システムにこの細胞を大量、単層培養することができた。3)これを用いて測定したIn vitroにおけるインドキシル硫酸クリアランスは38ml/min/m2であり、対照細胞を使用した場合の約8倍であった。volume markerとして同時に添加したイヌリンのクリアランスはほぼゼロであり、本システムによる基質輸送能には基質選択性が見られた。4)更に正常イヌを用いた安全性評価を行った。平均4時間の装置装着を行ったが、有害反応として血小板減少が見られたたものの、ごく軽度であり、出血など大きな合併症はみられなかった。以上から忍容性は良好と判断した。以上のように、今回開発した新しい人工腎臓は既存の透析では除去できない尿毒素を選択的に除去可能であり、今後の応用が期待される。現行の透析療法では除去できない蛋白結合型尿毒素の一つであるインドキシル硫酸(IS)を除去するバイオ人工腎を作成するために、その輸送蛋白である有機アニオン輸送体3(OAT3)および、新規膜蛋白ABCA8を導入した培養細胞を用いて、その基礎研究を行った。In vitroにおいて、OAT3を導入した培養尿細管細胞は対照細胞の約7倍のIS除去能を有していた。Km値は約50mM、Vmaxは500pmol/hr/mg.protと推定された。この輸送はプロベネシド(0.5mM)添加により有意に抑制された。また、この細胞において別のOAT3基質であるestorne-sulfate(ES)の分泌も検討した。それによると、ES分泌能も同様に対照の約8倍と有意に高いことが判明した。またこの分泌もプロベネシド(0.5mM)およびIS(0.5mM)添加により有意に抑制された。また、ABCA8の機能解析をも病態モデル(ジゴキシン負荷、胆管欠紮、高コレステロール負荷)を用いたmRNA発現の変化を比較検討した。これによると、急性ジゴキシン負荷時における一時的なmRNA発現低下が確認された。このように、OAT3基質分泌能の高い培養尿細管上皮細胞の作成がin vitroで確認された。また、慢性腎不全イヌ(7/8腎摘)を作成し、血清尿素窒素濃度のみならずIS濃度も上昇することも確認した。今後は、これらの知見をもとにバイオ人工腎に装着しての機能検討が予定されている。現行の透析療法では除去できない、蛋白結合型尿毒素の一つであるインドキシル硫酸(IS)を除去するバイオ人工腎を作成し、そのIS除去能をin vitroで検討した。

ISを基質とする膜蛋白である、ヒト有機アニオン輸送体(hOAT3)を高発現させた培養尿細管細胞を用いて、血液透析用中空糸型モジュールの中空糸内側に細胞を播種し、細胞培養液を1週間循環させること、単層培養することが可能であった。トルイジンブルー染色した中空糸を光学顕微鏡により観察したが、細胞は中空糸繊維全面を覆い、リークは見られなかった。このシステムおよびISとイヌリンを添加した培養液を用いて、ISのin vitroにおける除去能を検討した。IS(10mg/dl)を添加した場合の、hOAT3細胞使用時のシステム単回通過後のIS濃度は2.6±0.5mg/dlと有意に減少したが、コントロールの細胞を播種した場合には9.2±0.3mg/dlとほとんど変化はなかった。リークの指標であるイヌリンの濃度は、どちらの細胞を播種した場合にも、単回通過後に変化しなかった。さらに、血中IS濃度の上昇したモデルである7/8腎臓摘出イヌを作成中であり、現在の平均クレアチニン濃度は1.8±0.3mg/dl、IS濃度は3.9±0.7mg/dlまで上昇してきている(n=7)。以上をまとめると、今年度はIS除去能を持つバイオ人工腎を作成し、その高いIS除去能をin vitroで確認した。この除去は基質特異的であった。また動物モデルも作成しつつあり、次年度に装着予定である。透析療法は進歩しているものの、腎不全患者の予後は未だ非腎不全患者に比べ格段に不良である。その原因の一つとして、現行の透析療法では除去できない尿毒症性物質が多数存在し、末期腎不全患者では透析療法を行っているにもかかわらず、これら分子の大きな尿毒症性物質が体内に蓄積しつづけているということが明らかにされつつある。そこで、本研究では蛋白結合率の高い尿毒素であるインドキシル硫酸の輸送体であるヒトOAT-3遺伝子を高発現させた培養尿細管細胞を用いて、我々が開発したハイブリッド型人工腎臓に培養し、腎不全モデル動物の血中インドキシル硫酸濃度を低下させることができるか否かを明らかにすることを目的として、以下の研究を行った。1)申請者らが、これまで開発してきたハイブリッド型人工腎臓システムにこの細胞を培養し、これを用いて測定したIn vitroにおけるインドキシル硫酸クリアランスは38ml/min/m2、対照細胞を使用した場合の約8倍であった。volume markerとして同時に添加したイヌリンのクリアランスはほぼゼロであり、本システムによる基質輸送能には基質選択性が見られた。2)更に正常イヌを用いた安全性評価を行った。平均4時間の装置装着を行ったが、有害反応として血小板減少が見られたたものの、ごく軽度であり、出血など大きな合併症はみられなかった。認容性は総じて以上から良好と判断した。4)これらと並行して腎不全におけるIS蓄積の意義を検討するために、IS添加時の大動脈平滑筋細胞増殖への影響を検討した。これによりIS蓄積が、平滑筋細胞を増殖させ、腎不全患者において動脈硬化を増強させる可能性があることを明らかにした。
Tissue Engineering技術を応用したブタ新生児膵ラ島の分化誘導

ラ島移植の臨床への応用を念頭におき、tissue engineeringの手法、すなわち細胞外マトリックスを用いた細胞培養法、各種増殖因子やサイトカイン、遺伝子導入技術などを駆使して、生体外において未分化なブタ新生児ラ島を成熟ラ島に分化させ、十分なホルモン産生能を有する移植用ラ島を効率良く大量に作製できる技術開発を目的とする。さらにDNAマイクロアレイを用いた発現遺伝子解析により、ラ島再生に関わる遺伝子群を明らかとする。1、膵管上皮細胞株の樹立:ブタを用いる前に母細胞を分離し、ヒト膵臓から膵管上皮細胞を分離し実験に用いる細胞株を樹立した。2、細胞外マトリックスによる刺激:膵管上皮細胞を細胞外マトリックス上で培養し、形態の変化を観察するとともにインシュリン分泌能の変化を検討した。細胞培養液を変更することで細胞形熊は変化したが、元の細胞培養液に戻すと形態変化も戻り、細胞には可逆性の性格があることが確認できた。適正なマトリックスを検討中である。3、マウスEC細胞を用いた検討:マウスのES細胞よりインシュリン産生細胞の誘導を試みた。インシュリン産生能の誘導は軽度であったが可能であった。4、マイクロアレイ解析:ES細胞から誘導したインシュリン産生能を獲得した細胞および膵管上皮細胞からmRNAを抽出し、DNAマイクロアレイ解析により、発現遺伝子のサブトラクションを行い、インシュリン産生能を有する細胞誘導に必要な遺伝子群の発現変化を解析した。ヒト膵臓より膵管上皮細胞を分離しパピローマウイルスの早期発現遺伝子E6E7を遺伝子導入してヒト正常膵管上皮細胞の細胞株(HPDEC)を樹立した。インシュリン産生に関与すると考えられるPDX-1遺伝子を組み込んだアデノウイルスベクター(Ax-PDX)を作製した1)細胞培養液の違いによるHPDECの形態変化HPDECはK-SFM培養液内では玉石様の形態を示したが、RPMI培養液に変えたところ線維芽細胞様の形態に変化した。これを再度K-SFM溶液内に戻したところ、再び玉石様の形態に戻った。2)PDX-1遺伝子導入による変化・PDX-1遺伝子を導入したHPDEC/PDXでは細胞同士が凝集し、ラ島様のクラスターを形成した。・HPDEC/PDXおよびHPDECの各種膵ホルモンの発現をWestern blottingで蛋白レベルで検討したところHPDEC/PDXではHPDECに比較してE-cadherinとglucagonの発現が増強していた。・HPDEC/PDXはマウスの皮下で増殖し、insulinおよびglucagon染色で陽性を示した。4)マイクロアレイ解析ホルモン産生能の変化や細胞形態の変化に関わる遺伝子発現の役割を明らかにするために独自にマイクロアレイシステムを確立した。次年度への研究の展開が非常に期待できる。
早産予防に寄与する生活習慣を促進する健康教育プログラムの開発と評価

本研究の最終目的は、妊婦の腟内細菌叢を正常化し早産予防に寄与する「妊娠中におすすめしたい生活習慣」を促進するための健康教育プログラムを開発し検討することである。本研究は、ステップ1において、我々の先行研究を基に妊娠期の生活習慣と腟内・腸内細菌叢の変化および妊娠転帰の関連の検討を行い、ステップ2において、ステップ1の結果を基に健康教育プログラムを開発し、ステップ3において開発した健康教育プログラムを妊婦に提供し健康教育プログラムが腟内・腸内細菌叢の正常化と正期産に寄与するのかを検討する。平成30年度は、平成29年度に引き続き、早産予防に寄与する生活習慣を促進する健康教育プログラムを開発する際に必要となる基礎的データを収集するための症例対照研究の研究計画を検討した。介入プログラムを開発するための追加調査であり本研究結果は非常に重要である。開発する介入ブログラムは、妊婦の生活に取り入れやすいものである必要がある。研究計画立案に際しては、遺伝子解析分野の研究者や機能性食品開発分野の研究者のスーパービジョンを受けながら研究計画の詳細を検討した。本研究では、産褥入院中の褥婦を対象に、生活習慣の中でも特に食習慣について摂取を促進したい候補食品の摂取状況と分娩週数との関連について具体的に調査を行う。また、早産および正期産となる一部の症例については、パイロットスタディとして腟内・腸内細菌叢の網羅的解析を行い妊娠中の食生活が腟内・腸内細菌叢と関連するのかを検討する。また、環境省の子どもの健康と環境に関する全国調査データを利用し、妊娠中の食生活と分娩時期の関連を追加分析することを検討している。現在は、倫理審査受審のためのコンサルテーションを受ける段階である。腸内細菌叢および腟内細菌叢の観察について、試料収集方法・保存方法・試料精製・解析方法・症例数・解析費用の具体的検討に時間を要したこと、実行可能な介入プログラムであるために機能性食品の活用可能性も検討しつつ、調査内容を再検討したために研究の開始が遅れた。研究計画がほぼ確定したため、倫理審査を受審後ステップ1の研究を開始する。データ収集を開始後に、所属機関の多職種(栄養士、食品開発分野の研究者)の協力を得ながら介入プログラム開発のための準備を開始する。本研究の最終目的は、妊婦の腟内・腸内細菌叢を正常化し早産予防に寄与する「妊娠中におすすめしたい生活習慣」を促進するための健康教育プログラムを開発し検証することである。本研究はステップ1において、我々の先行研究を基に妊娠期の生活習慣と腟内・腸内細菌叢の変化および妊娠転帰の関連の検討を行い、ステップ2においてステップ1の結果をもとに健康教育プログラムを開発し、ステップ3において開発した健康教育プログラムを妊婦に提供し健康教育プログラムが腟内・腸内細菌叢の正常化と正期産に寄与するのかを検討する。平成29年度は早産予防に寄与する生活習慣を促進する健康教育プログラム開発のための基礎的データを収集するために症例対照研究の研究計画について検討した。介入プログラムを開発するための追加調査となるため本研究結果は非常に重要なものとなる。そのため腟内・腸内細菌叢の観察方法については遺伝子分野の研究者にもスーパービジョンを受けながら研究計画の詳細を検討した。本研究では、産褥入院中の褥婦を対象に、生活習慣の中でも特に食習慣について候補食品の摂取状況と分娩週数との関連について具体的に調査を行うこととした。また、早産および正期産となる一部妊婦に対してはパイロットスタディとして腟内・腸内細菌叢の網羅的解析を行い妊娠中の食生活が腟内・腸内細菌叢と関連するのかを検討することとなった。さらに、開発する健康教育プログラムの信頼性妥当性を高めるために、環境省の子どもの健康と環境に関する全国調査データを利用し、妊娠中の生活習慣と分娩時期の関連を追加分析することを検討した。平成29年度は、早産予防に寄与する生活習慣を促進する健康教育プログラム開発のための基礎的データを追加収集するための症例対照研究計画を検討し、研究計画を立案しデータ収集を開始する予定であった。しかし、特に腟内・腸内細菌叢の観察方法について方法と症例数の決定に時間を要したため研究が遅れた。

また、早産および正期産となる一部の症例については、パイロットスタディとして腟内・腸内細菌叢の網羅的解析を行い妊娠中の食生活が腟内・腸内細菌叢と関連するのかを検討する。また、環境省の子どもの健康と環境に関する全国調査データを利用し、妊娠中の食生活と分娩時期の関連を追加分析することを検討している。現在は、倫理審査受審のためのコンサルテーションを受ける段階である。腸内細菌叢および腟内細菌叢の観察について、試料収集方法・保存方法・試料精製・解析方法・症例数・解析費用の具体的検討に時間を要したこと、実行可能な介入プログラムであるために機能性食品の活用可能性も検討しつつ、調査内容を再検討したために研究の開始が遅れた。症例対照研究の準備がほぼ整ったため、平成30年度は早産予防に寄与する生活習慣を促進する健康教育プログラム開発のための基礎的データを追加収集するための分娩入院中の褥婦を対象とした研究を開始する。同時に、環境省の子どもの健康と環境に関する全国調査データを利用し、早産と関連する妊婦の生活習慣を統計的に推察する研究を検討する。研究計画がほぼ確定したため、倫理審査を受審後ステップ1の研究を開始する。データ収集を開始後に、所属機関の多職種(栄養士、食品開発分野の研究者)の協力を得ながら介入プログラム開発のための準備を開始する。平成29年度に実施を予定していた症例比較研究の開始が遅れ、当初予定していた腟内・腸内細菌叢の分析が開始されていないために生じた。細菌叢の網羅的解析には次世代シーケンサーを用いることを検討しており、次年度使用額はこれにあてられる。症例対照研究の開始が遅れ、腟内・腸内細菌叢の解析が開始されていないために生じた。平成31年度は、症例対照研究が開始されるため次年度使用額として使用する。細菌叢の網羅的解析には次世代シーケンサーを用いるが、シーケンサー利用料が高額であるために次年度使用額が多い。平成31度分の助成金については、介入プログラム開発と介入研究費用として使用する。
膵神経内分泌腫瘍における新たな分子生物学的分類と個別化治療への応用に関する研究

膵神経内分泌癌(pNEC)の臨床病理および分子生物学的特徴と化学療法への反応について検討した。WHO2010分類におけるpNECを100例集積し、病理中判定で70例がNEC (高分化なNET-G3が21、低分化NEC (PDNEC)は49)であり、30例はNEC以外であった。NET-G3はKi-67 LI低値、Rb染色は正常、KRAS野生型であった。PDNECではKi-67 LIは高値、Rb lossを54.5%、KRAS変異を48.7%に認めた。NET-G3とPDNECは異なる疾患であり、Rb lossとKRAS変異はプラチナベース化学療法に対する奏効の予測因子である可能性が示唆された。平成27年3月末までに85症例が集積された。今後、病理診断、遺伝子解析結果と臨床情報を対比し、予備的検討の外的妥当性を検証する。またその結果が現在進行中である消化器NECを対象とした第3相試験(JCOG 1213試験)の附随研究として適用可能かどうかを判断していく。平成27年度までに、WHO2010分類による膵神経内分泌癌(pNEC)の全国31施設における多施設共同研究を行い、NET-G3とPDNEC (small cell NEC (SCNEC)およびlarge cell NEC (LCNEC))の鑑別にはKRAS変異とRbの免疫染色が有用であることに加え、KRAS変異陽性とRbの免疫染色低下がプラチナベースの化学療法の奏功を予測する各々独立したバイオマーカーの可能性があることを示した。平成28年度は、KRAS変異とRb免疫染色低下とプラチナベースレジメンに対する効果予測が、pNECのサブタイプであるSCNECとLCNECで同様であるかを交互作用の有無を用いて検討した。Rb免疫染色低下はSCNECとLCNECとの間で交互作用を認めず、SCNECとLCNECにおいて同様の効果予測因子である可能性が示唆された(P-heterogeneity = 0.96)。一方、KRAS変異に関してはLCNECではKRAS変異陽性症例のみに奏功しKRAS野生型に奏功例が存在せず、解析モデルの適応ができなかった。リキッドバイオプシーに関しては、保存血清1 mLを用いてKRAS変異をdroplet digital PCR (ddPCR)法で解析し、少数例ではあるがpNECでは組織と血中KRAS変異感度が100% (2/2)であり、リキッドバイオプシーとしての可能性が示唆された。成果の論文公表とリキッドバイオプシーの症例集積が遅れている。NECに対する外科切除の意義は不明確であり、さらにPDNECとNET-G3で意義が異なるかも不明である。最終年度ではJapan pNEC studyのサブグループ解析として膵NECにおける外科手術(治癒切除および減量切除)の意義について、NET-G3とNECに分け、全生存期間(OS)をエンドポイントとして解析した。その結果、NET-G3では治癒切除および減量切除ともに、非切除症例と比較してOSの延長が認められた。NECでは治癒切除および減量切除ともに非切除症例と比較してOSの延長は認められなかった。以上より、NET-G3では治癒切除はもとより、減量手術も集学的治療の選択肢となることが示唆された。一方、NECにおいては治癒切除においても外科切除の成績は不良であり、外科的介入の適応に関しては慎重に行うべきであると考えられた。症例の収集が平成26年度末まで遅れたことによって解析もやや遅れている。そのため、手術症例を対象に予定していた次世代シークエンサーによる解析予定も遅れている。平成28年度には膵をはじめとする消化器臓器原発NECのliquid biopsyの可能性について研究を進める。また病理検体を用いたバイオマーカー研究については論文による公表を目指す。消化器内科学、臨床腫瘍学手術症例を対象に次世代シークエンサーによる解析を計画している。そのため、これまでに集積した症例のなかで解析可能な症例の抽出を行い、新たに研究計画書を作成する。ただし、集積した症例には不適格症例が含まれること、および手術症例が全体の1/4程度と少ないことより、これまでに協力していただいた施設に加え、新たに参加施設を増やすなどの方策が必要と考える。平成27年度は、PDNECとWDNECの鑑別を中心に、膵原発NEN診断におけるliquid biopsyの可能性について予備的検討を開始する予定するである。研究のスピードアップを目的に、研究分担者の追加も検討する。リキッドバイオプシー解析の遅れおよび論文投稿の遅れ。平成26年度の研究の進捗が予定よりやや遅れたため、平成26年度予定していた研究の一部を平成27年度に持ち越したことによって次年度使用額が生じた。平成28年度においてはliquid biopsyに関する研究を開始する計画である。リキッドバイオプシー解析の継続、成果発表のための最新情報収集と論文投稿。

既に開始したMCMT発現に関する研究の進行。遺伝子解析のための消耗品、病理組織標本の収集費用への支出を予定している。次世代シークエンサーによる解析と血中核酸測定(liquid biopsy)は外注する予定であり、それらの支払への支出を予定。研究成果の発表・情報収集のための学会出張、研究打ち合わせなどを目的とした会議出張にも支出する予定である。