hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
疾患胚モデルの生理機能マルチセンシングと成長診断システムの臨床応用

心臓初鼓動撮影の試みと多方向撮影からの体動解析精度向上の検討についてはH30年度に実施する。この成果についてはH30年度後半に発表・論文投稿(BMFSA英文誌を想定)を予定しているH29の進捗は「おおむね順調」だが、H28年度の簡潔性低酸素制御システム開発の遅れによる影響により以降の実験が遅れている。1)慢性低酸素環境において正常成長胚では見られない周期での周期的な体動変動や孵卵約110時間以降の体動の減少が報告された.このような低酸素環境における胚の成長(ここでは胚の大きさを成長度と定義する)についても画像処理により解析を行った.低酸素環境下において,体動が減少すると報告された孵卵開始約110時間に,胚の大きさ,すなわち成長度が正常成長胚に対して明らかに低くなったいる事が分かった.通常の胚の体動は弧を描くように動く事が多いため,胚の大きさ(ここでは直径に相当する)が変われば円周長も変化するので,胚の大きさの違いが体動量の減少として反映された可能性がある.しかしながら,逆の見方をすれば体動量解析によって胚の大きさをチェックする事も可能である事が示唆された.また,体動のパターンは規格化の必要がある事も示唆された.2)計測したビデオから画像処理により胚の位置を検出し,フレームごとの移動距離を5分ごとに積算して体動量として算出した.最初の10分ならびに30分を18%低酸素環境にした場合の例をそれぞれ2例ずつえられた.それぞれの低酸素暴露時間において低酸素中の一時的な体動量の増加が確認されたものの,低酸素環境事において必ず起きているわけではなかった.また,同じ孵卵時間・同じ低酸素濃度における暴露時間の違いについて10分と30分では大きな違いは見られなかった.今後は低酸素症が原因である体動増加パターンと通常の体動増加パターンに違いがあるのか,深層学習でそのパターンをどれくらいの精度で識別出来るのかが,課題となる.また,慢性・間欠性どちらの場合においても,低酸素環境においてすぐに特異な現象が発現しなくてもその蓄積により何らかのシグナルが現れる可能性も考えられるので孵卵中期まで連続的に計測する必要もある.上記についてはそれぞれ国内外の学会において発表した.遂行方策についてはテーマ全体で考えた場合は申請書と大きく変わることはない。任意低酸素制御システムについては上記で述べたとおり。テンプレートマッチングによるニワトリ胚の座標解析については座標予測アルゴリズムの確立とニューラルネットワーク等の認識精度向上手法を取り入れる。■計画書に記した「データが予定通りに計測できない場合」に従って追加実験を行う■多方向録画解析システムは今年度着手する。任意酸素濃度制御システムの完成の遅れに伴い実験およびデータ解析の全てに遅れが生じたために予定していた国際会議および国内会議での成果発表旅費が全額未使用のため。申請時の旅費計上額は400,000円であり、次年度使用額(B-A)の423,457円とほぼ一致する。なお、物品費については申請額1,350,000円をほぼ計画通りに使用している。現在投稿中の論文がアクセプトされた場合の「論文掲載料」として60,000円を予定していたが、審査が年度をまたいだためその費用をH30年度に持ち越すこととなった。採択されれば論文掲載料に使用する。
培養細胞を用いたアレルゲンの腸管透過性と通過経路に関する研究

小腸上皮細胞は抗原提示細胞として機能することが知られており,Th細胞への抗原提示には,抗原のプロセシングが重要とされている。また,炎症性サイトカインである(IFN-γ)は粘膜透過性を変動させることが知られるが,抗原の取り込みに及ぼす影響を検討した報告は少ない。本研究では食餌性抗原であるOVAがCaco-2細胞を通過する際に、どのようにプロセシングされるのか、またIFN-γが食事性抗原の取り込みや輸送をどのように調節するのかを検討した。OVAがCaco-2細胞を粘膜側から漿膜側へ通過する際,インタクトなOVA(45kDa)だけでなくペプチド断片に限定分解されて通過した。IFN-γ処理した細胞では,通過量の増加だけでなく著しい分解の亢進が認められた。免疫組織化学的手法によっても抗原の細胞内取り込みの亢進が観察された。また,フローサイトメトリー法による抗原取り込みは,低濃度より高濃度のIFN-γ処理した細胞で著しく,Caco-2細胞における抗原取り込みと粘膜透過性に及ぼすIFN-γの作用濃度が異なることが示された。今回の結果から,高濃度のIFN-γは小腸上皮細胞における抗原の取り込み,プロセシング,通過を促進させることで積極的に免疫応答を調節していることが示唆された。今後,細胞質およびライソゾームプロテアーゼの活性と小腸細胞内抗原取り込みに及ぼす種々のサイトカインの影響を明らかにすることが必要である。本年度は小腸粘膜バリアを介するアレルゲンの取り込み機構に関して以下の検討を行った。1.アレルゲンの小腸粘膜透過動態の観測(1)透過性のあるフィルター上で単層培養したCaco-2細胞を用い,粘膜透過性とアレルゲンの輸送に及ぼすインターフェロン(IFN)の影響を観察した.単層Caco-2細胞の粘膜透過性を経上皮粘膜電気抵抗と低分子量色素(ルシファーイエロー)透過性で測定すると,IFNで刺激した細胞で亢進していた。この時の卵アレルギーの代表的な原因アレルゲンであるオボアルブミン(OVA)の粘膜透過性の亢進も観察された。(2)漿膜側に通過したOVAをウエスタンプロッティング法で解析すると,Caco-2細胞通過時に低分子量のペプチド断片に限定分解されることが明らかになった。さらにOVAの低分子ペプチド断片への変換はIFN処理により促進された。(3)Caco-2細胞によるOVAの限定分解はカテプシンB,D阻害剤により抑制されるが,これらの活性に対しIFN処理は影響しなかった。2.免疫組織法によるOVAの細胞内への取り込みの測定コラーゲンコートしたチャンバースライド上で2週間培養したCaco-2細胞をOVAとインキュベートした後,細胞内に取り込まれたOVAをグルコースオキシダーゼ法(Vectastain ABC-GOキット)で検出すると,細胞内へのOVAの取り込みが観察され,その程度はIFN刺激細胞で著しかった。3.今後の展開本年度の研究は小腸粘膜細胞を介する食物アレルゲンの輸送が,単に上皮細胞間隙のリークではなく,小腸上皮細胞への取り込みと細胞内プロセッシングに依存していることを明らかにした。今後フローサイトリーを用い,小腸細胞へのアレルゲンの取り込みをダイレクトに測定する予定である。前年度の報告書において,ヒト大腸腺癌由来細胞株Caco-2細胞を透過性のあるフィルター上で培養した後,インターフェロン-γ(IFN-γ)刺激すると、オボアルブミン(OVA)の小腸上皮細胞通過量が増大することを報告した。しかしながらCaco-2細胞によるOVA取り込み機構そのものについては明らかでない。そこで,本年度の研究では,Caco-2細胞によるOVAの取り込みをフローサイトメーターを用い検討した。フローサイトメトリーによるFITC-OVAとFITC-DXの取り込み約3週間培養したCaco-2細胞をFITC-OVAあるいはFITC-デキストリン(100μg/ml)と37°Cで15120分反応させ後,細胞内への取り込みの程度をフローサイトメーターを用いて解析した。

FITC-OVAと120分間インキュベートした細胞はFITC-OVAを取り込ませていない細胞に比し蛍光強度の強い細胞群の割合が増大した。蛍光強度の増大した細胞群には蛍光強度の弱い細胞群と強い細胞群が認められ,それぞれ細胞表面への結合(binding)と,細胞内蓄積(incorporating)に相当するものと考えられる。細胞表面への結合と細胞内蓄積を合わせた部分(FITC-ポジティブ細胞)の割合は120分までほぼ時間依存的に増加し,その程度はIFN処理群で大きかった。細胞内蓄積と細胞表面への結合に分けて解析すると,INF刺激した細胞では、FITC-OVAの細胞内蓄積が著しく増加し、二相性の取り込みパターンが顕著化した。一方、FITC-デキストランの細胞内取り込みはINF刺激後もほとんど変化が見られず二相性のパターンも認められなかった。このことはFITC-デキストリンは細胞表面に結合するのみであるのに対し,FITC-OVAは細胞表面に結合した後,細胞内に移行することを示唆している。IFNは取り込んだ抗原の細胞内移行と蓄積を促進しているのであろう。IFNの効果の作用機序,抗原の細胞内蓄積と局在性について現在検討中である。平成11,12年度の本研究報告において,1)ヒト大腸腺癌由来細胞株Caco-2細胞を透過性のあるフィルター上で培養した後,インターフェロン-γ(IFN-γ)刺激すると、オボアルブミン(OVA)の小腸上皮細胞通過量が増大し,さらに,2)FITC-OVAと120分間インキュベートした細胞をフローサイトメーターを用いて検討すると,FITC-OVAを取り込ませていない細胞に比し蛍光強度の強い細胞群の割合が増大し,蛍光強度の増大した細胞群には蛍光強度の弱い細胞群と強い細胞群が認められることを報告した。一方,FITC-デキストランとインキュベートした場合には蛍光強度の弱い細胞群が観察されることを認めた。前年度の報告では,FITC-OVA取り込みの際に観察される蛍光強度の弱い細胞群と強い細胞群を,それぞれ細胞表面への結合(binding)と,細胞内蓄積(incorporating)に相当する可能性を想定したが,それを指示する明確な証拠は得られていなかった。そこで,本年度の研究は,Caco-2細胞によるFITC-OVAの取り込みを細胞表面への結合と細胞内蓄積に分けて観察した。フローサイトメトリーによるFITC-OVAとFITC-DXの取り込み約3週間培養したCaco-2細胞をFITC-OVAあるいはFITC-デキストリン(100μg/ml)と37°Cあるいは4°Cで4時間反応させ後,細胞内への取り込みの程度をフローサイトメーターを用いて解析した。37°CFITC-OVAと4時間インキュベートした細胞はFITC-OVAを取り込ませていない細胞に比し蛍光強度の増強が認められ,蛍光強度の増大した細胞群は,蛍光強度の弱い細胞群と強い細胞群に分けられた。一方,FITC-デキストランと反応させた場合には,蛍光強度の弱い単一のピークが観察された。ところが,4°Cで反応させた場合,FITC-OVAの場合もFITC-デキストランの場合もいずれも細胞の蛍光強度の増加は全く観察されなかった。
超早産が発達障害のリスクを高める機構の解明

本研究課題は平成27年4月からスタートさせたが、新学術領域研究「場との連携による脳細胞の動態制御機構」(H28-H32)が採択されたことにより、重複制限規定に伴い平成28年6月に終了することとなった。超早産児の虚血性脳障害による後遺症の頻度は減少しておらず、高い確率で高次脳機能障害が生じる。そこで本研究では、ヒト超早産児が生まれる時期に相当すると考えられる胎生後期にマウスを一過的に虚血にし、その後発生発達を継続させるモデルを確立して、脳の形態学的解析及び行動実験を行った。その結果、ヒト超早産児と同様に神経細胞の移動障害や移動後の配置及びオリエンテーション異常、認知機能障害などが生じることがわかった。そこでさらに神経細胞の配置異常が与える影響を調べた結果、本来とは異なる部位に配置された神経細胞の少なくとも一部は、その分化状態を変化させ、細胞形態や投射様式等が本来とは変わってしまうことを発見した。さらに、虚血モデルでは新奇物体認識試験、Y-迷路試験などの行動実験で異常がみられたことから前頭前野に特に注目し、胎生期の一過性脳虚血によって前頭前野で細胞移動に異常が生じた神経細胞の活動を薬理遺伝学的手法で人為的に活性化させて、行動異常がレスキューできるか検討を行っている。さらに、胎生期に一過的に虚血にしたマウスについて、脳のRNAを抽出してマイクロアレイを用いた遺伝子発現解析を行い、脳虚血群で大きく変化する分子群を同定した。28年度が最終年度であるため、記入しない。我が国の低出生体重児は生存率が向上したことを背景に増加傾向にあるが、超早産児の虚血性脳障害による後遺症の頻度は減少しておらず、高い確率で発達障害が生じるため大きな課題となっている。超早産児では出生前後(すなわち本来は胎児期)の脳虚血がほぼ必発であり、虚血による影響が発達障害の一因になる可能性が考えられるため、まずはマウスで胎生期に一過的に虚血にし、その後発生発達を継続させるモデルを作成した。すなわち、胎生14日から18日のマウスを麻酔下に開腹し、子宮動脈を結紮後再灌流して、胎児の一時的な循環障害による脳虚血を効率良く誘導できる至適条件を決定した。このマウス胎生期脳虚血モデルにおいて、移動神経細胞を子宮内胎仔脳電気穿孔法によるGFP遺伝子導入及びブロモデオキシウリジンでラベルした上で、様々な日数経過後に脳の組織学的解析を行った。その結果、神経細胞移動に異常が生じ、一部は白質内で止まってしまう他、移動終了後の皮質内への神経細胞の配置や樹状突起の発達・向き、軸索投射様式などにも異常が見られることがわかった。さらに倫理委員会の承認を得て正常ヒト胎児の様々なステージの死後脳切片の解析も行い、神経細胞の産生や移動がいつまで認められるかを調べた。その結果、超早産児が生まれる時期にはまだ神経細胞移動は続いている可能性が高いことが確認された。実際に、ヒト超早産児の死後脳切片においても、マウスと同様に神経細胞の移動障害等が認められることがわかった。また、胎生期に一時的に虚血にしたマウスについて生後6週齢以降に新奇物体認識試験、Y-迷路試験などの行動実験を行った結果、ヒト超早産児と同様に認知機能異常が高頻度に生じることを見出した。そこでさらにマウスで虚血とは別の方法で人為的に異所性の神経細胞(ヘテロトピア)を白質内に生じさせ、行動解析を行ったところ、同様に認知機能障害を生じることがわかった。27年度に当初予定していた計画は年度内にすべて終了し、さらに細胞移動に異常が生じて白質内で止まってしまった神経細胞群(ヘテロトピア)が脳機能に与える影響を調べた研究が論文になったため。新奇物体認識試験、Y-

迷路試験などの行動実験で異常がみられたことから前頭前野に特に注目し、胎生期の一過性脳虚血によって前頭前野で細胞移動に異常が生じた神経細胞の活動を薬理遺伝学的手法で人為的に活性化させて、行動異常がレスキューできるか検討する。また、これまでの実験で虚血操作中の温度が関係する可能性も示唆されたので、虚血後の一時的低体温処置によって発症が予防できるかも調べたいと考えている。さらに、胎生期に一過的に虚血にしたマウスについて、脳のRNAを抽出してマイクロアレイを用いた遺伝子発現解析を行い、脳虚血群で大きく変化する分子を同定する。また、ゲノムメチル化が変化している遺伝子を検索し、一過的脳虚血によって影響を受けるシグナルカスケードを見いだすことを目指す。28年度が最終年度であるため、記入しない。
インド古典における言語論の比較論的再検討

本研究は、古典インドの言語論・言語哲学の特質と展開を、テキストの精密な読解と比較論的な観点からの再検討を通じて明らかにすることを目的としたものであった。前年度までにほぼ完了していた、古代インドの言語哲学者バルトリハリの主著『ヴァーキヤ・パディーヤ』全体の読解研究を受けて、最終年度である本年度は、ジャイナ教論書のうちの『ドゥヴァーダシャーラ・ナヤ・チャクラム』および『サンマティ・タルカ・プラカラナ』に見られるプラフマニズム言語論に対する批判を分析することを個人研究における課題とした。また同時に、他分野・多領域の研究者との討議・共同研究を通じて、西洋やイスラーム世界における言語論・言語哲学についての知識を深化させ、古典インドの言語論・言語哲学の比較論的再検討を行うことを目的とした。ジャイナ教論書に見られる言語論批判の検討については、『ドゥヴァーダシャーラ・ナヤ・チャクラム』第5章の研究を終え、ジャイナ教論書における正統文法学派とバルトリハリ思想の位置づけについての検討を終えた。言語論・言語哲学を専門とする諸領域の古典研究者との討議・共同研究の方は、所属する「古典の世界像」班の共同研究テーマが「魂論の諸相」となったことから、十分には行えなかったが、「魂と言語」の問題については十分に考究する機会を得た。所属するA04班「古典の世界像」班の共同研究テーマ「魂論の諸相」に関連しては、その成果として「魂論の諸相-古代インドにおける魂と自己の問題」を論文として提出した。さらに申請者は公募研究に採択された者であるが、総括班報告の一部として「インド学史:近代インド学の成立(サンスクリットの発見から第2次世界大戦まで)」の執筆を分担した。本年度の研究実績は以下の通りである。1、ジャイナ教の哲学書である『ドゥヴァーダシャーラ・ナヤ・チャクラム』の第4章、第5章の読解をすすめた。このテキストは、インド古代において各種の学派が形成されつつある時期の哲学的議論の実態をよく反映しているものである。そこで展開される議論の背景には、『マハー・バーシュヤ』(MBh)に典型的に見られる文法学派の議論の枠組みと問題設定がある。本年度は、「実体」(dravya, bhava)をめぐってなされた議論を中心に研究した。同時に電子テキスト化を行った。(電子テキスト化は、このテキスト全体を対象としている。)このテキストの本文は、注釈文献に基いて再構成されたものである。注釈部分を含む全体の電子テキスト化によって、より正確なテキスト校訂を目指している。2、「古典の世界像」(A04)班では、「魂論の諸相」をテーマとして共同研究が展開されている。その研究会において、本代表者は、「ブラフマニズムの伝統における魂論の展開」という発表を行い、インド仏教、ギリシャ哲学、中国哲学、イスラーム哲学の専門家たちとの対論の中で、「アートマン論」に関わる比較論的考察を行った。本代表者が進めている言語論の比較論的検討は、インド中世の神秘主義を対象とするとき、「神と魂をめぐる言葉」の研究へと展開するものである。3、『ヴァーキヤ・パディーヤ』(含ヴリッティ)全体のテキスト・データベースの作成とそれを利用した語彙分析研究は続行中である。
葉層構造論の応用

P.Walczakは1995年に葉層構造に対してその挙動の複雑さを測る不変量として横断ハウスドルフ次元なる概念を導入し,いくつかの例についてその値を計算した.この概念は既に在る不変量(葉層エントロピー,葉の成長度,葉層特性類等)とは異なる種類の複雑さを見るものであり,その意味で興味深い.本研究代表者はWalczakと共同で余次元1葉層の場合にこの次元を調べ,葉層が非自明ホロノミーを持つ場合には全て決定した.また,ホロノミーを持たない場合には互いに位相共役や2つの葉層であって一方の横断ハウスドルフ次元は1,他方は0であるような例を見つけた.今後はこの概念の力学系理論への応用を考えたい.また,従来力学系に対してのみ定義されていた概念をすべての葉層に一般化し,諸分野へ広く応用できるように基盤整備に取り組んでいる.現在は葉層の拡大性、擬葉追跡性,位相安定性等の概念について,相互間の関係や葉層エントロピー,コンパクト葉の個数の増大度との関係の研究が進行中である(論文準備中).これとは別に,葉層構造の極小集合の研究の副産物として,極小集合を一切もたない開曲面上の流れの例を構成した(現在投稿中).分担者高木は複素空間形中の平行平均曲率ベクトル場を持つCR部分多様体の種々の幾何学的性質,及び複素射影空間内の実超曲面の剛性等を調べた.これは葉に幾何構造を有する葉層の研究に役立った.分担者越谷は有限群の表現,コホモロジー等の研究を通して,分担者西田は環の研究を通して間接的に葉層のホロノミー群の代数的研究に役立った。
ローンペア酸化物における電子局在性制御による材料設計指針の構築

2価Snを有する酸化物において,ローンペア電子と呼ばれる孤立電子対は試料の電子構造と結晶構造の両面において重要な役割を担っている.本研究では,ローンペア電子を有する酸化スズ(SnO)について,電子物性測定やX線光電子分光法等の実験手法と,第一原理計算の双方からアプローチすることで,ローンペア電子と物性の相関に関して評価を行うことを目的としている.平成26年度には,パルスレーザー堆積法により作製したヘテロ界面試料の断面透過電子顕微鏡(TEM)観察を行った.SnOとY添加ZrO2(YSZ)単結晶基板とのヘテロ界面において断面TEM観察を行い,界面構造を詳しく調べた結果,SnOとYSZの結晶は第二相や不純物などのない急峻な界面を有していることがわかった.また,X線光電子分光測定により価電子帯上端や内殻の電子状態の測定を行った.X線電子分光の結果と第一原理計算の結果を合わせて考慮すると,ローンペア電子は価電子帯上端に状態密度を有し,正孔の伝導に寄与していることが示唆された.また,試料の作製条件とフェルミ準位の関係を評価した結果,成膜時の酸素分圧によってフェルミ準位がシフトし,試料の電気伝導性をp型からn型まで制御可能であることを明らかにした.n型試料における電子移動度は,p型試料における正孔移動度と同程度かそれよりも高く,伝導帯下端が比較的広がったSnの軌道により構成されていることと矛盾しない.また,n型試料における電子の活性化エネルギーはp型試料において求めた正孔の活性化エネルギーよりも高く,第一原理計算による欠陥形成エネルギーの結果と同様の傾向がみられた.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。一般に典型元素酸化物は,その価電子帯が主に酸素のp軌道により構成されており,他の化合物半導体に比べ正孔導入に必要なエネルギーが高く局在しやすいため,p型の電気伝導を示すものは稀である.一方,2価Snの単純酸化物であるSnOは典型元素酸化物としては珍しくp型の電気伝導性を示す.これは,SnO中で2価Snがローンペア電子と呼ばれる孤立電子対を有し,価電子帯上端で酸素のp軌道と混成することで価電子帯のエネルギー準位が浅くなっていることが一因と考えられる.SnOは大気下において熱力学的に不安定であると報告されており,これまでに良質な結晶が得られていないためその物性・電子状態研究は途上にある.本年度の研究では,SnOを薄膜として基板上に成長させ,配向性試料が得られる条件を探索した.SnO焼結体ターゲットを使用し成膜した薄膜のXRDプロファイルより薄膜はSnO単相であり,(001)配向で成長していることがわかった.また,系統的なXRD測定より薄膜と基板の結晶の面内方位は<110>SnO//<100>YSZという方位関係であることがわかった.ホール効果測定とゼーベック測定の結果,試料はp型の電気伝導性を示すことがわかった.キャリア濃度の温度依存性から,その活性化エネルギーは約0.16eVであった.これまでに報告されているSnOの室温におけるHall移動度は2.4cm^2/Vs程度であり,今回作製した薄膜の室温におけるHall移動度が5.3cm^2/Vsであったことから,比較的結晶性の高い試料が作製できたことが示唆される.2価Snの単純酸化物でるSnOは典型元素酸化物としては珍多し<ρ型の伝導性を示すことが知らている.これは, SnO中で2価Snがローンペア電子と呼ばれる孤立電子対を有し,価電子帯上端で酸素のρ軌道と混成することで価電子帯のエネルギー準位が浅くなっていることが一因と考えられる.本年度の研究では,作製雰囲気の精緻な制御により, SnO薄膜の伝導キャリアタイプをρ型からn型へ変化させることを試みた.Snターゲットを使用し成膜した薄膜のXRDプロファイルより薄膜はSnO単相であり, YSZ単結晶基板上に(001)配向で成長していることがわかった.また,系統的なXRD測定より薄膜と基板の結晶の面内方位は<110>_<SnO>//<100>_<YSZ>という方位関係であることがわかった.ホール効果測定とゼーベック測定の結果,特定条件下での成膜によりn型およびp型それぞれの電気伝導性を示すSnO薄膜を作製できることがわかった.キャリア濃度の温度依存性から,その活性化エネルギーはn型試料においては0.13eV, p型試料では0.04eV程度であることがわかった.これまでにSb添加によるn型SnOの作製は報告されているが、無添加で作製したという報告は本研究が初めてである。Sb添加SnO薄膜の室温におけるHall移動度が1cm^<2>/Vs程度であるのに対し, n-SnOの室温におけるHall移動度は11cm^<2>/Vs程度であり,本手法によりキャリア移動度の高い試料を作製できることが示された.

2価Snを有する酸化物において,ローンペア電子と呼ばれる孤立電子対は試料の電子構造と結晶構造の両面において重要な役割を担っている.本研究では,ローンペア電子を有する酸化スズ(SnO)について,電子物性測定やX線光電子分光法等の実験手法と,第一原理計算の双方からアプローチすることで,ローンペア電子と物性の相関に関して評価を行うことを目的としている.平成26年度には,パルスレーザー堆積法により作製したヘテロ界面試料の断面透過電子顕微鏡(TEM)観察を行った.SnOとY添加ZrO2(YSZ)単結晶基板とのヘテロ界面において断面TEM観察を行い,界面構造を詳しく調べた結果,SnOとYSZの結晶は第二相や不純物などのない急峻な界面を有していることがわかった.また,X線光電子分光測定により価電子帯上端や内殻の電子状態の測定を行った.X線電子分光の結果と第一原理計算の結果を合わせて考慮すると,ローンペア電子は価電子帯上端に状態密度を有し,正孔の伝導に寄与していることが示唆された.また,試料の作製条件とフェルミ準位の関係を評価した結果,成膜時の酸素分圧によってフェルミ準位がシフトし,試料の電気伝導性をp型からn型まで制御可能であることを明らかにした.n型試料における電子移動度は,p型試料における正孔移動度と同程度かそれよりも高く,伝導帯下端が比較的広がったSnの軌道により構成されていることと矛盾しない.また,n型試料における電子の活性化エネルギーはp型試料において求めた正孔の活性化エネルギーよりも高く,第一原理計算による欠陥形成エネルギーの結果と同様の傾向がみられた.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。ほぼ当初の計画通り,初年度における結晶成長条件の最適化を終えることができた.ほぼ当初の計画通り, SnOの電気伝導性に関する研究を進めることができた.また,当初計画していた第一原理計算による欠陥形成エネルギーの評価も同時に進めており,結果を検討している最中である.第一原理計算による欠陥の形成エネルギー評価を行い,SnOの電子状態と伝導機構のメカニズムに関して考察を行う予定である.第一原理計算による格子欠陥近傍の電子状態とローンペア電子の相互作用に関し考察を行う予定である.
精密測定実験に対する量子色力学(QCD)効果の理論的研究

新しい模型の手がかりを得るため、また標準模型の立証のためにも実験的かつ理論的に精密な考察が必要とされている。理論的にはQCDの効果を如何に正確に評価するかが重要なポイントとなる。そこで今年度は次のテーマを具体的に検討した。まず、昨年度に引き続き、B中間子の波動関数を解析的に調べた。B中間子のハドロン崩壊は、小林・益川行列やCP位相の決定に多くの情報を含んでいる。この過程に摂動論的QCDの手法を適用すると、B中間子の波動関数の知識が求められる。前年度に、運動方程式と重いクォークの有効理論から、光円錐波動関数に強い制限が与えられ、高次のフォック状態を無視すると解析的に解けることを見出したが、波動関数(横方向の自由度も含む)自体にも同様な制限が与えられ、2体フォックの近似ではやはり解析的に解けることを見出した。この結果は、より多くの現象(過程)を調べられるという観点からも重要である。成果は論文として纏められ(プレプリントhep-pb/0112174)現在投稿中である。重いクォークを含むハドロン、典型的にはJ/Ψ粒子の生成問題を昨年とは、異なった角度から検討した。J/Ψ粒子一個の生成では、理論的な不確定さが依然多く、問題であるが、J/Ψ粒子二個の生成過程では、これらの不確定性は強く抑制されかつ断面積もそれほど小さくないことを見出した。(参考文献1およびプレプリントhep-ph/0202227投稿中)そこで、逆にこの過程を用いRHICの実験でグルオンの偏極分布関数が測定できる可能性を検討した。RHICの次の高ルミノシティーの実験では有力な過程であることが解った。成果は論文として纏められ(プレプリントhep-ph/0207318)現在投稿中である。
緑内障モデル動物におけるEcel1の機能解析と治療への応用

緑内障モデルマウスの網膜内で発現上昇するEcel1の発現機序および機能解析を目的とした。qPCR、ウェスタンブロッティングおよび免疫染色の結果から、視神経挫滅により網膜神経節細胞障害を誘導したところ、視神経挫滅4日後にEcel1が網膜神経節細胞に高発現することを確認した。また、Ecel1はNMDA障害では誘導されないが、軸索流障害によって軸索挫滅と同程度に高発現を示した。網膜神経節細胞にEcel1を高発現するAAV2-mEcel1ウイルスベクターを作成した。このウイルスを眼内に投与し視神経挫滅を行ったところ、仮説とは異なり、Ecel1高発現群での神経保護効果は認められなかった。視神経挫滅により神経節細胞が変性しているかどうかを、網膜神経節細胞のマーカーであるThy1, Nefh, Brn3a, Brn3b, Brn3cおよびRbpmsの遺伝子発現量をRT-PCRにより調べた。その結果、視神経挫滅2,4,7日後において継時的に網膜神経節細胞のマーカー遺伝子の発現減少が認められた。また、ウェスタンブロッティングの結果、Rbpmsタンパク質も同様に発現量が減少していた。さらに、視神経挫滅4日後にはRbpms陽性細胞数の減少が認められ、視神経挫滅により緑内障モデルが作製できていることを確認した。視神経挫滅による緑内障モデルにおいてEcel1の発現量が劇的に上昇すること、また、この急激なEcel1の発現上昇はNMDA障害やAAPHによる酸化ストレスでは誘導されないが、ビンブラスチンによる軸索流障害によって発現誘導が再現されることから、視神経挫滅によるEcel1の発現上昇は網膜神経節細胞の軸索流障害により生じていることが明らかとなった。またEcel1を発現する細胞が網膜神経節細胞であることを免疫組織化学により確認した。加えて、Ecel1の機能解析を行うため、Ecel1を過剰発現させるウイルスベクターを作製した。このウイルスベクターを感染させた網膜神経節細胞内においてEcel1が過剰発現していることがRT-PCRおよびウェスタンブロッティングの解析から明らかとなった。申請者は緑内障障害モデルの確立とEcel1の発現パターンおよび局在の解析に加え、Ecel1過剰発現のウイルスベクターを既に作成しており、申請書に記載した当該年度の研究内容をすべて終えデータをまとめ、学会で発表した。さらに、次年度に実施する予定であったウイルスベクターを用いた神経保護の評価実験に加え、そのメカニズムの解析に既に着手していることから、当初の計画以上の進展が見られている。本年度で得られた成果は国際的な雑誌に投稿する予定であり、現在執筆を進めている。Ecel1過剰発現ウイルスベクターを用いて神経節細胞に対する神経保護効果を検討する。また、Ecel1の下流シグナルを解析するため遺伝子発現の網羅解析とその再現性を確認し、標的因子を絞り込むことでEcel1の生理的な機能の解明を目指す。加えて、得られた成果を国際誌に投稿し研究内容を広く世界に発信する。医歯薬学申請書に記載している次年度予定の最も重要な実験内容である神経節細胞治療の試みを、Ecel1過剰発現ウイルスベクターを用いて行うため。またEcel1の下流にあるシグナル経路を解明するため。Ecel1を過剰発現するウイルスベクターを眼球内に投与してあらかじめ網膜神経節細胞内にEcel1を過剰発現させ、その後に視神経挫滅を行い緑内障モデルを作製する。神経節細胞の保護効果は、フルオロゴールドによる逆行性神経や、in vivoイメージングによる死細胞の検出および網膜神経節細胞特異的に発現する遺伝子の発現量を測定することで評価する。
アレルギー炎症における好塩基球と肥満細胞の病態生理学的役割の解明

本研究では、2つのSLP-76ファミリーアダプター分子(MISTとSLP-76)の面から、マスト細胞と好塩基球の細胞分化、機能発現ならびにFcεRIを介したシグナル伝達について検討した。1)FcεRI・c-Kit陽性のマスト細胞ならびにはFcεRI陽性c-Kit陰性の好塩基球はインターロイキン3(IL-3)存在下でMIST、SLP-76単独および二重欠損マウス骨髄からも野性型マウス骨髄と同様に分化することから、マスト細胞ならびに好塩基球の分化にはSLP-76ならびにMISTは必須でないことが明らかになった。2)MIST欠損では軽度に、SLP-76欠損では顕著に脱顆粒反応の低下が認められ、二重欠損ではそれが完全に消失した。このことから、FcεRIを介したマスト細胞の脱顆粒反応においては、SLP-76が中心的な役割を担っており、MISTは補助的な役割を担っているものと考えられた。3)FcεRI刺激によるサイトカインの発現誘導は、MIST、SLP-76それぞれの単独欠損においては野生型と同程度認められたが、MIST/SLP-76二重欠損にすると顕著に低下することから、MISTとSLP-76はお互いにその機能を補い合っていることが示唆された。4)FcεRI刺激に伴う細胞内カルシウム濃度の上昇、それに関与するPLC_γ1およびPLC_γ2のリン酸化はSLP・76欠損マスト細胞で顕著に低下しており、MIST/SLP-76二重欠損細胞でさらに低下した。一方、カルシウム反応に関与しないFcεRIシグナル伝達系と考えられているAKTのリン酸化を解析したところ、MIST、SLP-76単独欠損、および二重欠損いずれのマスト細胞においても、野性型と同程度あるいはやや亢進した反応が認められた。5)FcεRI刺激に伴う分子間相互作用、細胞内局在の変化と機能との関連について解析を行った結果、1)SLP-76はGadsと結合できるが、MISTは結合しないこと、2)SLP・76のGads結合ドメインをMISTに移植することにより、MISTの膜へのリクルートがSLP-76と同程度に増強すること、3)Grb2結合ドメインを欠くMIST変異体も野生型MISTと同程度に膜にリクルートされるが、非機能的SH2ドメインをもつMIST変異体のFcεRI刺激に伴う膜局在は認められないこと、4)MISTはFcεRI誘導性の脱課粒反応をわずかにしか増強させないが、SLP-76と同程度の膜移行が認められるGads結合ドメインを有するMIST変異体は、SLP-76を導入した場合と同レベルの増強効果を示すこと、が明らかになった。以上の研究成果は、MISTとSLP-76は、カルシウム反応に依存したFcεRIシグナル伝達経路を正に制御しており、シグナル分子複合体の量的差異だけでなく、シグナルを下流に伝達する質的差異によって、FcεRIを介したマスト細胞の脱穎粒反応が制御されていることを明らかにしたものであり、I型アレルギー発症におけるFcεRIを発現するマスト細胞や好塩基球の活性化の制御機構を解明する上で重要な基礎的知見である。

5)FcεRI刺激に伴う分子間相互作用、細胞内局在の変化と機能との関連について解析を行った結果、1)SLP-76はGadsと結合できるが、MISTは結合しないこと、2)SLP・76のGads結合ドメインをMISTに移植することにより、MISTの膜へのリクルートがSLP-76と同程度に増強すること、3)Grb2結合ドメインを欠くMIST変異体も野生型MISTと同程度に膜にリクルートされるが、非機能的SH2ドメインをもつMIST変異体のFcεRI刺激に伴う膜局在は認められないこと、4)MISTはFcεRI誘導性の脱課粒反応をわずかにしか増強させないが、SLP-76と同程度の膜移行が認められるGads結合ドメインを有するMIST変異体は、SLP-76を導入した場合と同レベルの増強効果を示すこと、が明らかになった。以上の研究成果は、MISTとSLP-76は、カルシウム反応に依存したFcεRIシグナル伝達経路を正に制御しており、シグナル分子複合体の量的差異だけでなく、シグナルを下流に伝達する質的差異によって、FcεRIを介したマスト細胞の脱穎粒反応が制御されていることを明らかにしたものであり、I型アレルギー発症におけるFcεRIを発現するマスト細胞や好塩基球の活性化の制御機構を解明する上で重要な基礎的知見である。本年度は、MIST、SLP-76シグナル分子欠損マウスの骨髄細胞を用いて、肥満細胞ならびに好塩基球の培養ならびにその分化、機能について解析を行った。まず、骨髄細胞をIL-3存在下で1週間培養することにより、高親和性IgE受容体陽性、c-Kit陰性の好塩基球の分化が選択的に誘導されることを確認した。さらに培養を継続することで、4週目には好塩基球に代わって、高親和性IgE受容体陽性、c-Kit陽性の肥満細胞の分化が認められた。本培養条件を用いて、MIST、SLP-76単独欠損ならびに二重欠損マウス由来の骨髄細胞を培養した結果、野生型と同様、培養1週目には好塩基球の分化が観察された。以上の結果から、MISTならびにSLP-76という高親和性IgE受容体下流で機能するシグナル分子は好塩基球の分化には必須ではないことが明らかになった。次に、レトロウイルスベクターを用いて、骨髄細胞に活性化型M-Rasを導入することにより、好塩基球ならびに肥満細胞の不死化を試みたが、既に報告されている論文と異なり、IL-3非依存性の好塩基球ならびに肥満細胞の増殖を追試できなかった。現在、培養条件の違いなどについて詳細に検討中である。肥満細胞の高親和性IgE受容体を介したシグナル伝達については、MIST、SLP-76二重欠損肥満細胞に、MIST, SLP776ならびにSLP-76のGads結合ドメインを移植したMIST変異体をレトロウイルスベクターを用いて発現させることにより、高親和性IgE受容体を介した肥満細胞の脱顆粒反応には、これらシグナル分子がアダプター分子であるGadsと結合することが重要であることを明らかにした。マスト細胞にはSLP-76とMISTの2つのSLP-76ファミリーアダプター分子が発現しており、いずれも、高親和性IgE受容体(FcεRI)を介したマスト細胞の脱顆粒反応に関与していることが明らかになっているが、その機能的相補性、特異性ならびにその分子構造の差異と機能の関連性については明らかになっていない。そこで、MISTの様々な機能ドメインの変異体ならびにSLP-76に存在する機能ドメインを移植した変異体を用いて、これら2つのアダプター分子のFcεRI刺激に伴う分子間相互作用、細胞内局在の変化と機能との関連について解析を行った。
博物館における海洋環境変動の影響把握に寄与するダイバー撮影画像の情報化

地球温暖化に関連する海洋環境変動の把握には、温帯域での熱帯性魚類の出現状況を分析することが有効である。この観点から、伊豆大島を含む相模湾や駿河湾でダイバーにより撮影された魚類の水中写真を体系的に収集するシステムを構築し、過去20年間にわたって熱帯性魚類の越冬状況を分析した。その結果、同一種が複数年連続で記録された年の海況を他の年と比較することで、その変動を捉える鍵が見つかる可能性が示唆された。初年度に引き続き画像データの収集に努めた結果、当該年度にデータベース化された画像は13282件に達した。魚類の出現状況に基づく環境変動の把握に重要な地域である伊豆大島を含む相模湾、伊豆半島沿岸、駿河湾において、1993年から2012年にかけての過去20年間にわたり撮影された沿岸魚類の画像は2013年度末で2669件である。これらの画像に含まれる熱帯性魚類について、越冬の目安となる3月から4月にかけての出現状況を分析した結果、ハタ科、チョウチョウウオ科、ハゼ科、クロユリハゼ科などのべ74種を確認できた。年別に出現種数をみると、多くは1から5種であるが、2011年と2012年ではそれぞれ13種と21種で突出していた。2013年の状況は現在データベース化を進めている段階にある。過去に蓄積されたすべての画像データに基づき、モニタリング対象となる魚種を抽出するために参考となる相模湾内の地点別魚類相を検討した結果、城ヶ崎海岸と伊豆大島の2地点と、その他の沿岸各地点との間に大きなギャップがあることが判明した。このギャップは熱帯・亜熱帯性魚類の低温致死限界に近い15°C(2月)の等温線に一致していた。この成果は生物地理学会報に論文として公表した。一方、伊豆半島の西岸に位置する駿河湾に面した黄金崎において、ダイバーからの画像情報に基づき熱帯・亜熱帯性のイソギンポ科魚類の複数種やハナダイ亜科のスミレナガハナダイ等が越冬している可能性が高いことが判明した。これら越冬種は黄金崎よりもやや北に位置する大瀬崎においては出現あるいは越冬が確認されていない。これらの分析結果や予備的情報から、伊豆半島の駿河湾沿岸では黄金崎、相模湾沿岸では城ヶ崎海岸に死滅回遊魚が越冬可能な最前線があることが強く示唆された。今後、これらの地点とその近隣からの情報を重点的に収集することが、死滅回遊魚の出現パターンから環境変動をとらえるための鍵となるだろう。この観点から、伊豆大島を含む相模湾や駿河湾で活動しているダイビングショップや個人のダイバーから魚類の生態写真を体系的に収集するシステムを構築し、当該年度に6709件の画像をデータベース化できた。研究期間全体を通じて収集できた画像は20263件、画像データベース全体では95519件に達した。これらの画像に含まれる熱帯性魚類について、越冬の目安となる3月から4月にかけての年別出現状況を過去20年間にわたって分析した結果、ハタ科(10種)、ベラ科(8種)、チョウチョウウオ科(5種)、イソギンポ科(5種)など、23科59種を確認できた。多くはある年1回だけの出現にとどまったが、複数年に出現した魚類が6科10種あり、中でもオオモンカエルアンコウ(カエルアンコウ科)、ホカケハナダイとアカオビハナダイ(いずれもハタ科)、クロフチススキベラ(ベラ科)、カモハラトラギス(トラギス科)、ヒメユリハゼ(クロユリハゼ科)の6種は23年連続の出現を確認できた。また、ほとんどの年で越冬種は15種と少数であったが、2011年と2012年ではそれぞれ13種と21種と突出して多かった。ただし、2011年と2012年の両年に出現した種は、ホカケハナダイ、アカオビハナダイ、カモハラトラギスの3種のみで、2012年に越冬した種が翌年の2013年にも継続して越冬した事例は確認できなかった。このように年変動がきわめて大きい現状にあるが、突出して出現種の多かった年や、同一種が複数年連続で記録された年の海況を他の年と比較することで、海洋環境変動を捉える鍵が見つかる可能性が示唆された。魚類分類学本研究の目的は水中写真のデータベース化と環境変動を捉えるために適したモニタリング種の抽出と特に水温と関連した出現状況の解析、さらには継続的な情報収集を可能にするモニタリングシステムの構築にある。これまでの活動により画像はおおむね順調に蓄積されつつあり、年別の出現状況もある程度把握できる段階に達している。

熱帯性沿岸魚類の越冬条件として重要な平均海水温について、伊豆大島を含む相模湾沿岸部での状況は把握できたが、駿河湾側についても同様な情報収集を行う必要があるダイバーから収集した画像をデータベース化するための画像入力ステーションを設置し、オペレーター1人を雇用してデータベース化を推進した。これによりデーベース化された画像は約2600点にのぼる。この中には環境変動をとらえるために重要な冬季から春季にかけての魚類画像が含まれる。加えて、伊豆海洋公園魚類標本コレクションを整理し、2786件の情報をデータベース化した。また、関連する益田一写真コレクション19500件を画像データベース化を行った。これら2つのコレクションには、1970年代から1990年代にかけて相模湾で収集された死滅回遊魚の情報を多数含む。引き続き水中写真の画像データベース化を継続するとともに、モニタリングに適した魚種の探索・抽出を進める。抽出されたモニタリング種について水温との関係を分析し、環境変動との関連について考察を行う。継続的な情報集積を可能にするシステム構築のため、引き続き関連海域で活動するダイバーやダイビングショップに対して協力要請を行う。ダイバーが撮影した画像の収集と平行して博物館所蔵標本や文献の調査を継続する。データベース化された情報に基づき、環境変動をモニタリングするのに最適な魚種を抽出する。本プロジェクトに理解を示し、協力が得られる伊豆半島沿岸のダイビングショップやダイバーとのネットワーク化を進める。該当なし
非線形超音波を用いたボルトの軸力評価システムに関する研究

ボルト締結評価に2次高調波を用いるには,CAN(Contact Acoustic Non-linearity)の発生源であるねじ山の接触面積(長さ)と,超音波の波長の関係が重要であることが,有限要素解析および実験により確かめられた.それにより,2次高調波を検出する位置や,本手法を適用できるボルトの長さ・径などにも影響を及ぼすことが考えられた.さらに,実用ではシール材・接着剤なども用いられており,使用する材質の超音波透過特性を把握しておくことが本手法には重要であることもわかった.本研究では,有限振幅超音波が金属界面等に入射したとき,非線形振動が生じ,非線形超音波(2次高調波や分調波)が発生するという超音波の非線形性を利用して,ボルト-ナットの締結状態の新しい検査法を開拓している.非線形超音波はボルトの塑性変形やボルト-ナット間のCAN(接触型音響非線形性)により生じる.発生源に有限振幅超音波を送波し,非線形超音波を発生・伝搬できていることを確認する必要がある.当該年度では,市販の有限要素法を用いたシミュレーション解析ソフトのComWAVEを用いて,超音波伝搬過程にCANを模擬した要素を配置し,2次高調波の発生と伝搬の様子を解析・検討した.その結果,波長とCAN部の長さの関係により,2次高調波の発生と伝搬に違いが見られた.CAN部の長さが波長に対して短い時は,2次高調波が点音源から発生するように拡散していく.そのため,CAN部から離れた位置での2次高調波の検出は難しいが,ある程度広範囲にCAN現象を捉えることが可能である.一方,CAN部の長さが波長に対して長い時は,2次高調波は入射波とほぼ同じビーム幅で伝搬していくことがわかり,比較的遠方での検出も可能であるが,送波振動子,CAN部,受波振動子がほぼ一直線に並んだ状態でないと検出が難しいことが明らかとなった.解析結果をふまえて,実際のボルト-ナット中をどのように超音波が伝搬し,ボルト-ナットの表面が振動しているかを把握するため,レーザドップラ振動計と自動精密ステージを用いて自動振動計測を行った.本研究では,有限振幅超音波が金属界面等に入射したとき,非線形振動が生じ,非線形超音波(2次高調波や分調波)が発生するという超音波の非線形性を利用して,ボルト-ナットの締結状態の新しい検査法を開拓している.非線形超音波はボルトの塑性変形やボルト-ナット間のCAN(接触型音響非線形性)により生じるとされている.発生源に有限振幅超音波を送波し,非線形超音波を発生・伝搬できていることを確認する必要がある.当該年度では,市販の有限要素解析ソフトComWAVEを用いて,塑性変形を模擬した媒質に超音波を伝搬させた場合の解析を行い,2次高調波の発生・伝搬の様子を検討した.実験による結果と同様に,塑性変形が進むにつれて2次高調波が増加する結果が得られた.また,さらに亀裂が成長した場合,2次高調波が減少することも確かめられた.さらに,実験的な検討では,ボルト締結評価について基本波と2次高調波の両面から検討した.連続波超音波を用いた方法では,トルクの増加に伴って,反射係数が減少することがわかった.また,多重反射の影響を検討するため,ナット2個をボルトのヘッドから離れた位置で締め付け,ナットから超音波を送波し,ボルトヘッドで2次高調波の検出を試みた.しかし,これまでの結果と異なり,トルクを変えても2次高調波はほとんど検出できなかった.この原因として,ボルト中は多重反射を繰り返して伝搬するため,エネルギーの小さい2次高調波のほとんどは伝搬過程で減衰してしまうもの考えられた.本手法の適用限界についての検討が必要であることがわかった.本研究は,有限振幅超音波が金属界面等に入射したとき,非線形振動が生じ,非線形超音波(2次高調波・分調波等)が発生するという超音波の非線形性を利用して,ボルト-ナットの締結状態の新しい検査法を開拓するために行われた.今年度は,ボルト-ナット間にシール材がついている場合を模擬した検討を行った.シール材により,ねじ山の接触状態が変化するため,計測に影響を及ぼす可能性が高いと考えられる.実験では,固体同士を接着し,結合剤の面積や試料の厚さを変えることで,超音波の反射係数を測定し,2層目の固体内部への透過量を検討した.その結果,振動子直径の4/5以上であれば,ほぼ透過するが,それ以下になると徐々に透過量が減少し,3/10程度の面積ではほとんど透過しない結果となった.この結果より,ボルト締結の場合に適用するには,ねじ山部分に塗布する接着剤をある程度の量を必要とし,接着面積を多くする必要があるものと考えられる.また,ボルトの材質を変えた場合の検討を行う.材質によりボルトの強度区分が異なるため,適正な軸力が変わる.これまでの鉄製のボルトに加えて,ステンレス材の同型のボルトを用いて実験結果との比較を行った.

特に,軸力に対する反射係数を測定する実験においては,ボルト軸力の増加に伴って,反射係数が減少する結果が得られたが,その傾向は鉄製とステンレス材で共に同様の傾向が示された.ただし,測定のばらつきが大きく,現状は緩んでいる状態と,十分に締まっている状態の判別ができるという評価が行えるのみであるため,今後はより細かな軸力の差異を区別できるよう精度を高める必要がある.ボルト締結評価に2次高調波を用いるには,CAN(Contact Acoustic Non-linearity)の発生源であるねじ山の接触面積(長さ)と,超音波の波長の関係が重要であることが,有限要素解析および実験により確かめられた.それにより,2次高調波を検出する位置や,本手法を適用できるボルトの長さ・径などにも影響を及ぼすことが考えられた.さらに,実用ではシール材・接着剤なども用いられており,使用する材質の超音波透過特性を把握しておくことが本手法には重要であることもわかった.有限要素法を用いた解析により2次高調波が発生することを確かめる検討は,おおむね予定どおり進展している.実験についても,2次高調波だけでなく連続波超音波を用いた検討や,多重反射の影響を検討し,新しいボルト締結評価法に向けて,おおむね予定どおり進展できている.超音波工学これまでは2次高調波超音波や連続波超音波を用いた検討を行った.ボルト締結以外の非線形超音波を用いた非破壊検査の分野では,分調波や高次高調波を利用する検討が進められている.本研究においても,ボルト締結評価の精度を高められる最適な条件について検討する予定である.おおむね計画どおり遂行できているため.これまでは2次高調波超音波を用いて検討してきた.ボルト締結以外の非線形超音波を用いた非破壊検査の分野では,その他の非線形超音波(例えば,分調波や3次高調波)や連続波基本波を利用する検討が行われている.本研究においても,2次高調波以上にボルト締結評価の精度を高められる最適な条件について検討する必要がある.