hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
歯根膜組織再構築メカニズムの解明

本研究では、歯根膜由来培養細胞を用いて人工的にインプラント体周囲に歯根膜組織を構築し、その機能である咬合ストレスに対する緩衝作用および生理的咀嚼を満足することを目指している。細胞から組織を構築するメカニズムを解明するため、その基礎としてin vivoにおける歯根膜組織発生過程について研究してきた。その結果、1.歯根膜線維芽細胞の分化マーカーの1つであるアルカリフォスファターゼ(ALPase)活性の違いにより、組織形成過程が大きく3つの領域に分けられた。2.3つの領域内では、ALPase活性のみならず、細胞形態、細胞外のコラーゲン線維の分布様式、ヘルトヴィッヒ上皮鞘の存在様式がそれぞれ異なっていることが、透過型および走査型電子顕微鏡による観察で明らかにされた。3.上皮鞘の基底膜の断裂に伴い、歯小嚢の細胞のALPase活性が上昇したことから、上皮間葉相互作用が示唆された。4.断裂後の上皮鞘は、3週齢ラットの場合、有細胞セメント質付近においては、象牙質とセメント質の間に取り込まれ、TUNEL法を用いて検討したところ陽性反応を示し、DNAのfragmentationの起こっていることが確認された。5.ラット歯頚部の無細胞セメント質付近では、生後3週齢頃よりマラッセの上皮遺残の基底膜が確認されるようになり、その後、上皮遺残は細胞数を増していく傾向がみられた。また、再生過程での上皮間葉相互作用について、歯根部に象牙質にまで達する窩洞を形成し、その後の歯根膜組織再生過程におけるマラッセの上皮遺残について、現在検討中である。
トマトの葯および花粉におけるポリアミン合成酵素の遺伝子発現および翻訳の環境応答

1.トマト蕾の高温遭遇による花粉稔性低下と葯のポリアミン代謝との関係常温下で発育した葯のポリアミン合成酵素活性と酵素遺伝子の転写および翻訳活性の蕾発育に伴う変化を調べた.ADC活性は開花75日前に高く,その後緩やかに低下したが,SAMDC活性は開花5日前に顕著に増大し,その後は急速に低下した.一方,両酵素ともmRNA転写量は恒常的に発現していたが,mRNA翻訳量の変化パターンは酵素活性のそれと類似し,葯のポリアミン合成酵素活性は翻訳のレベルで発育的に制御されていることが明らかとなった.これに対して,高温遭遇葯では,ADC活性は高温非遭遇のものと差異がなかったが,開花5目前におけるSAMDC活性の増大が起こらなかった.高温遭遇葯では高温遭遇時の葯の齢に関わらずmRNA転写量が少なかったが,mRNAの翻訳やproenzymeの加工は高温の影響を受けなかった.これらのことから,SAMDCの遺伝子発現は特異的に高温に敏感であることが明らかになった.また,開花8-5日前に高温に遭遇した葯では,高温非遭遇葯でみられた結合態スペルミジン(Spd)含量の顕著な増加が起こらず,稔性花粉数が高温非遭遇花のそれの1/2に減少したが,高温遭遇前に2.5mM Spdを処理すると花粉稔性に対する高温の悪影響が緩和された.以上の研究結果から,蕾の高温遭遇による花粉稔性の低下には,葯におけるSAMDC遺伝子発現抑制が密接に関係していると結論された.本研究の成果はPlant Scienceに投稿すべく準備中である.2.トマト花粉の長期貯蔵による発芽力低下と花粉のポリアミン合成能との関係24ヶ月以上貯蔵したトマト花粉は発芽力(発芽率および花粉管伸長)が著しく低かった.このような花粉では培養後におけるADCおよびSAMDC活性の増大やポリアミン含量の増加が起こらなかった.酵素活性が増大しなかったのは翻訳能力の減退によるものであった.しかし,花粉をSpdで前処理すると発芽率と特に花粉管伸長が良好になり(このSpd効果には花粉のタンパク合成能の高まりが関係),受精能力(着果能力)が改善された.1.SAMDC抗体の作成トマトの花の可溶性タンパクを精製してSAMDCタンパク0.3mgを得た.これを抗原としてモルモットを免疫動物にSAMDC抗体を作成した((株)タカラバイオに依頼して3月27日に入手).2.蕾の高温遭遇によるトマト花粉の稔性低下と葯のポリアミン代謝との関係常温下(25/20°C)では,葯+花粉のポリアミン合成酵素活性およびポリアミン含量は,花粉の発育ステージが四分子期に相当する開花89日前に最大になる.ところが,開花89日前の蕾を36/26°Cの高温に3日間遭わせると,SAMDCの活性増大が抑制され(ADC活性は常温の場合と同じように高まる),その結果,スペルミジンおよびスペルミン含量の上昇が起こらなくなる.一方,開花89日前の蕾では,高温遭遇によって花粉稔性(開花時に採取した花粉の25°Cでの発芽率)が顕著に低下するが,高温遭遇1日前に蕾を2.5mMスペルミジン溶液に10秒間浸漬すると,花粉稔性の低下は起こらず着果も正常に起こる.これらの結果は,花粉四分子期における花粉または葯のポリアミン合成酵素(特にSAMDC)の活性化とスペルミジンおよびスペルミンの増加が稔性花粉の形成に必要であること,高温による花粉稔性の低下には発育中の花粉におけるポリアミン不足が密接に関係していることを示唆している.現在,高温によってSAMDCが活性化しなくなる分子生物学的機作と花粉形成におけるポリアミンの生化学的役割について研究を行っている.1.トマト蕾の高温遭遇による花粉稔性低下と葯のポリアミン代謝との関係常温下で発育した葯のポリアミン合成酵素活性と酵素遺伝子の転写および翻訳活性の蕾発育に伴う変化を調べた.ADC活性は開花75日前に高く,その後緩やかに低下したが,SAMDC活性は開花5日前に顕著に増大し,その後は急速に低下した.一方,両酵素ともmRNA転写量は恒常的に発現していたが,mRNA翻訳量の変化パターンは酵素活性のそれと類似し,葯のポリアミン合成酵素活性は翻訳のレベルで発育的に制御されていることが明らかとなった.これに対して,高温遭遇葯では,ADC活性は高温非遭遇のものと差異がなかったが,開花5目前におけるSAMDC活性の増大が起こらなかった.高温遭遇葯では高温遭遇時の葯の齢に関わらずmRNA転写量が少なかったが,mRNAの翻訳やproenzymeの加工は高温の影響を受けなかった.これらのことから,SAMDCの遺伝子発現は特異的に高温に敏感であることが明らかになった.また,開花8-5日前に高温に遭遇した葯では,高温非遭遇葯でみられた結合態スペルミジン(Spd)含量の顕著な増加が起こらず,稔性花粉数が高温非遭遇花のそれの1/2に減少したが,高温遭遇前に2.5mM Spdを処理すると花粉稔性に対する高温の悪影響が緩和された.以上の研究結果から,蕾の高温遭遇による花粉稔性の低下には,葯におけるSAMDC遺伝子発現抑制が密接に関係していると結論された.本研究の成果はPlant Scienceに投稿すべく準備中である.

2.トマト花粉の長期貯蔵による発芽力低下と花粉のポリアミン合成能との関係24ヶ月以上貯蔵したトマト花粉は発芽力(発芽率および花粉管伸長)が著しく低かった.このような花粉では培養後におけるADCおよびSAMDC活性の増大やポリアミン含量の増加が起こらなかった.酵素活性が増大しなかったのは翻訳能力の減退によるものであった.しかし,花粉をSpdで前処理すると発芽率と特に花粉管伸長が良好になり(このSpd効果には花粉のタンパク合成能の高まりが関係),受精能力(着果能力)が改善された.
心筋特異的ホメオボックス遺伝子の解析

我々は心臓の分化・発生の上で重要な遺伝子として心筋特異的ホメオボックス遺伝子(CSX)を単離した。心臓の発生、分化の機序を明らかにするために、ヒトCSX遺伝子の上流・下流及び会合する分子を解析した。(1)上流の解析ヒトCSX遺伝子は、2つのエクソン及び1つのイントロンより形成されており、CSXの3つのcDNAアイソフォームは選択的スプライシングにより形成されることが明らかとなった。約1kbのプロモーター領域は心筋細胞でのみ高い転写活性を示したが、特に-110bp付近に存在する20bpの配列が重要であり、この部分に結合する蛋白が、心筋の核抽出物中に存在することがわかった。(2)下流の解析心筋に発現している種々の遺伝子の内、CSXにより心房性Na利尿ペプチド(ANP)、脳型クレアチンキナーゼ(CKB)の遺伝子の転写が亢進した。CSXによる転写の亢進に必要なANPのプロモーター領域には、CSXの結合配列が存在した。またその近傍には、ジンクフィンガーモチーフをもつ転写因子であるGATA4の結合する配列が存在した。(3)会合する分子の解析CSXはGATA4と協調的にANPの転写活性を亢進させることより、CSXとGATA4の会合について解析した。CSXはそのホメオドメインにより、GATA4のジンクフィンガードメインと会合することが明らかとなった。以上のように、心筋特異的ホメオボックス遺伝子CSXの解析により、心臓の分化の機序について多くのことが明らかとなった。心筋特異的ホメオボックスCsxのゲノムDNAマウスを単離し、その上流領域を解析したところ、Csx cDNAの5′非翻訳領域の一部が逆向きに存在していることがわかり、プロモーター領域の同定は困難であった。そこでヒトのCsxゲノムを解析することにした。まずヒトCsx cDNAを単離したところ、可変スプライシングによると思われる3種類のアイソフォームが存在した。ヒトCsx1はマウスCsxと配列が類似しており特にホメオドメインの配列は100%一致していたが、CSX2、3はスプライシングエクソンに停止コドンがあるため、ホメオドメインを欠いた短い産物ができると考えられた。ヒトCSXはヒトにおいても心臓にのみ発現しており、特に胎児心に多い傾向がみられた。各々のアイソフォームの発現を調べたところ、ホメオドメインをもったCSX1は胎児心に、ホメオドメインを欠いたCSX2、3は成人心に相対的に多いことがわかった。Csx cDNAをつかってヒトCSXゲノムDNAを単離し、染色体上の位置をFISH法にして解析した。CSXはヒト染色体5番長腕末端に存在した。この領域には他のホメオボックス遺伝子としてMSX2が存在することが知られており、2つのホメオボックス遺伝子の関係について今後解析を進めたいと考えている。現在CSXゲノムDNAのエクソン-イントロン構造を決定し、プロモーター領域の解析を進めているところである。ノックアウトマウスの実験結果よりホ乳類の心臓の発生にとってCSXが必須であることが明らかとなった。そこで我々は、心臓の発生、分化にとって重要な種々の分子を明らかにするために、ヒトCSX遺伝子の上流・下流の分子を解析した。約1kbのプロモーター領域をルシフェラーゼ遺伝子に接続し、種々の培養細胞に導入したところ、ラット新生仔培養心筋細胞のみ高い転写活性を認めた。次にこのプロモーターの領域を5'側より欠失させ心筋

特異的な領域を決定したところ-110bp付近に存在する20bpの配列が重要であることが明らかとなった。この部分のDNAをプローブにしてゲルシフトアッセイを行なったところ心筋の核抽出物中に結合する蛋白の存在することがわかった。(2)下流の解析α型・β型ミオシン重鎖、骨格筋型及び心筋型アクチン、トロポニン、筋型(MCK)及び脳型(CKB)クレアチンキナーゼ、心房性Na利尿ペプチド(ANP)、脳型Na利尿ペプチドなどの遺伝子の内、CSXによりANP、CKBの遺伝子の転写が亢進した。現在CSXにより転写の亢進に必要なANPのプロモーター領域を200bp前後にまでしぼっている。我々は心臓の分化・発生の上で重要な遺伝子として心筋特異的ホメオボックス遺伝子(CSX)を単離した。心臓の発生、分化の機序を明らかにするために、ヒトCSX遺伝子の上流・下流及び会合する分子を解析した。(1)上流の解析ヒトCSX遺伝子は、2つのエクソン及び1つのイントロンより形成されており、CSXの3つのcDNAアイソフォームは選択的スプライシングにより形成されることが明らかとなった。約1kbのプロモーター領域は心筋細胞でのみ高い転写活性を示したが、特に-110bp付近に存在する20bpの配列が重要であり、この部分に結合する蛋白が、心筋の核抽出物中に存在することがわかった。(2)下流の解析心筋に発現している種々の遺伝子の内、CSXにより心房性Na利尿ペプチド(ANP)、脳型クレアチンキナーゼ(CKB)の遺伝子の転写が亢進した。CSXによる転写の亢進に必要なANPのプロモーター領域には、CSXの結合配列が存在した。またその近傍には、ジンクフィンガーモチーフをもつ転写因子であるGATA4の結合する配列が存在した。(3)会合する分子の解析CSXはGATA4と協調的にANPの転写活性を亢進させることより、CSXとGATA4の会合について解析した。CSXはそのホメオドメインにより、GATA4のジンクフィンガードメインと会合することが明らかとなった。以上のように、心筋特異的ホメオボックス遺伝子CSXの解析により、心臓の分化の機序について多くのことが明らかとなった。
ウイルス膜融合タンパク質の宿主細胞内輸送とトランスゴルジ領域での活性化機構

パラミクスウイルスはRNAウイルスであり,エンベロープを有しているが,エンベロープに局在する膜融合活性をもつ糖蛋白質Fが本ウイルスの動物細胞への感染に重要な役割を果している。F蛋白質は宿主動物細胞の結合型ポリゾームで膜融合活性のない前駆体蛋白質F_0として生合成される。本ウイルスはプロテアーゼの遺伝子を有していないので,F_0は宿主細胞内のプロテアーゼの作用を受けて膜融合能を有するF_1+F_2のヘテロニ量体を形成する。我々は,パラミクソウイルスの一種であるニューカッスル病ウイルス(NDV)のF蛋白質の生合成と細胞内プロセシング,ウイルス粒子形成と動物細胞への感染の機構に宿主細胞内のトランスゴルジ膜でのプロセシングプロテアーゼによる活性化が関与していることを明らかにした。NDVには強毒株(Miyadera等)と弱毒株(D26)があるが夫々のF_0のプロセッシングプロテアーゼによる切断点のアミノ酸配列は,強毒株ではArg-Gln-Arg-Argのカルボキシル側であり,弱毒株ではArg-Gln-Gly-Argのカルボキシル側である。前者はトランスゴルジ膜のプロテアーゼで切断され,後者は細胞膜表面で切断される。一方,オルトミクソウイルスの一種であるインフルエンザウイルスにおいては,エンベロープに局在するヘマグルチニン(HA)が膜融合活性を有するがNDVのFと同様に宿主細胞内で活性化される。我々は,HAもFと同じ宿主細胞内のオルガネラで活性化が起こることを明らかにした。次に,ラット肝よりトランスゴルジ膜を調製して,膜結合性のプロセシングプロテアーゼを可溶化,精製した。F_0活性化酵素3種類が見出され,そのうち1つはfurinであったが,F_0活性化を最も強く起こすプロテアーゼはCa依存性のセリンプロテアーゼであったが,furinとは異なる新しいプロテアーゼであった。
ウサギ後根神経節におけるα1,2フコース転移酵素遺伝子の発現とその調節機構

後根神経節の小径神経細胞に特異的に発現しているH抗原(Fucα1,2Gal)は、ウサギにおいては主にH型α1,2フコース転移酵素遺伝子(RFT-I)によってその発現が調節されていることを、昨年度までに明らかにしてきた。ウサギ後根神経節神経細胞の初代培養系などを用いたプロモーター解析により、RFT-I遺伝子の翻訳開始点より上流約700bpを後根神経節神経細胞に特異的なプロモーター領域として同定し、更にこの領域内に幾つかのSp1結合部分と、神経成長因子によって誘導される転写調節因子Egr-1の結合部分(GSG-element)を見いだした。しかしこれらの転写調節因子のみでは、後根神経節神経細胞に特異的なRFT-I遺伝子の発現に不充分であることから、新たな転写調節因子の同定を目指して今年度の研究を行った。約700bpのプロモーター領域を酵母レポーター遺伝子の上流に結合して酵母に導入し、One-hybrid systemによってウサギ後根神経節cDNAライブラリーをスクリーニングした。しかし、この方法ではポジティブクローンが得られなかったため、手法を改良し、Sp1あるいはEgr-1タンパク質を予め酵母内に発現させた上で、上記のスクリーニングを施行した。その結果、幾つかの候補となる遺伝子が得られたので、現在それらの塩基配列の決定および転写因子であるか否かなどの検討を行っている。一方、糖鎖抗原と感覚神経細胞の機能維持との関連を探る目的で、GDlbガングリオシド感作による末梢神経障害モデルを用い、神経栄養因子受容体trkA・trkCの発現を定量し、このモデルにおいて極く早期の段階からtrkCの発現量が減少していることを見いだした。糖鎖抗原に対する抗体によって、神経細胞維持に必要な情報伝達がブロックされる可能性を示した。後根神経節に特異的に発現しているH抗原(Fucα1,2Gal)の発現調節機構および神経機能における意義を解析するため、H抗原生合成を司るα1,2フコース転移酵素遺伝子の発現を調べた。ウサギ中枢神経系の領域ごとにRNAを抽出し、3種類存在するウサギα1,2フコース転移酵素遺伝子の発現を検討したところ、胎生後期には3種類全ての発現が認められ、生後はH型α1,2フコース転移酵素遺伝子(RFT-I)が後根神経節特異的に発現していることが明らかになった。in situ hybridization法によってRFT-Iが後根神経節小径神経細胞に豊富に発現していることが示され、UEA-1レクチンの認識する糖タンパク質上のH抗原およびfucosyl GM1の分布と対応することが確認された。そこでRFT-I遺伝子の転写調節機構を詳しく調べるため、RFT-I遺伝子のゲノム構造および転写開始点を解析した。3種類存在するRFT-I遺伝子の転写産物のうち、後根神経節特異的な転写産物の転写開始点が翻訳開始点より82bp上流にあることを決定した。更にこの転写開始点の上流部分を取りだし、ルシフェラーゼ遺伝子につないでプロモーター活性の検討をおこなった。ウサギ後根神経節神経細胞の初代培養系などを用いた解析により、翻訳開始点より上流約700bPに強いプロモーター活性が認められた。この領域内には幾つかのSp1結合部分やNGFなどの神経成長因子によって誘導される転写調節因子の結合部分(GSG-element)が認められ、機能していることが確認されたが、後根神経節神経細胞特異的なプロモーター活性にはそれらのみでは不充分であることもわかった。今後この700bpのプロモーター領域に結合する未知の転写因子を同定する予定である。
プロテインビーズを含有した治癒促進効果を持つティッシュコンディショナーの開発

研究当初より,プロテインビーズの入手が困難となり,新たな治癒促進効果を持つ素材の検討を余儀なくされた.結果,治癒促進効果を持つ材料の発見には至らなかった.市販ティッシュコンディショナーに関する基礎的データの収集の結果,市販ティッシュコンディショナーは種類によって,細胞毒性が異なる結果を得た.現存の市販ティッシュコンディショナーは,まだまだ改良の余地が存在する.本研究期間に,臨床研究の構築を行い,新規開発材料の臨床応用のための臨床研究の基礎を築くことができた.今後も,本研究を継続し,新しいティッシュコンディショナーの開発を行っていく予定である現在、超高齢社会を迎え、今後義歯使用患者は増加するものと予想される。義歯使用中患者は、不適合義歯により顎堤粘膜に褥瘡性潰瘍を形成することもある。その対処方法として、義歯床内面に暫間的にティッシュコンディショナーをリラインして損傷部の治癒の促進をはかる処置がある。これまで本材の研究・開発は、欠点である可塑剤の溶出を抑制することにより本材の劣化をいかに防ぐかに注目されていた。本研究室でも理工学的性質を分析し、より治療効果の高いティッシュコンディショナーの開発を行ってきた。しかしながら、細菌の付着、繁殖を促進したりなど、新たな問題点も見つかった。そこで本研究は、抗菌性を有し、また治癒促進物質を徐放する新しいテッシュコンディショナーの開発を目的とし行っている。本年度は、学会参加などで情報収集に徹し、なかでも、新しいティッシュコンディショナーの組成を決定すべく、治癒促進物質の模索を行った。研究計画段階でプロテインビーズを構想していたが、プロテインビーズが生産終了となり、新たに治癒促進物質を模索する必要が生じてしまった。本年度は、歯科の学会でも一番大きく、有名なIADRに参加、発表する機会を得た。本研究実績もIADRで発表予定としている。本研究は、治癒に不可欠な成長因子に着眼し、様々な成長因子を含有したティッシュコンディショナーの開発を行ってきた。しかしながら、未だ理想的な材料の開発には至っていない。そこで本研究は、抗菌性を有し、また成長因子を徐放する新しいテッシュコンディショナーの開発を目的とし行っている。本年度は、様々な成長因子を市販ティッシュコンディショナーに含有し、それらが線維芽細胞に与える影響を調査してきた。結果は芳しくなく、発表に値する成果を得られていない。本研究とは若干離れるが、本研究室では、義歯関連材料が細胞に与える影響に関して、その評価方法に関する研究も行っている。今まで(本研究計画でも)、単層培養の線維芽細胞に与える影響を観察してきたが、積層培養に成功し、線維芽細胞と表皮角化細胞の積層培養行った標本に与える影響の観察を学会発表した。本研究も単層培養の線維芽細胞に与える影響のみならず、積層培養された標本でも検討したいと考えている。平成28年度の研究計画は臨床試験としていたが、本開発材料は到底間に合わない。臨床試験に関して、本開発材料を用いず、市販製品や市販薬品の盲目試験を予定して患者選択や実験計画を遂行したいと考えている。治癒促進物質(b-FGF)の溶出量をコントロールできない。フィブラストスプレーが液状であり、混入させようとするティッシュコンディショナーの液成分に混和させただけのドーズ曲線を記録しても、同じように溶出してこないという結果しか得られず、まずは溶出量のコントロールが最大の鍵となっている。現在、日本は超高齢社会を迎え、高齢者の増加に伴い、義歯使用患者も増加するもののと予想される。義歯使用患者は、不適合義歯の使用により粘膜に褥瘡性潰瘍を形成する場合がある。その対処法として使用されるティッシュコンディショナーは、可塑剤溶出という欠点が存在し、材料の劣化が問題となっている。そこで、本材の治療効果、抗菌性、材料学的性質の向上を目的に新しいティッシュコンディショナーの開発を行ってきた。本研究の肝であるプロテインビーズは、平成26年に早々と生産終了となり、新たに治癒促進物質を模索する必要が生じた。様々な成長因子を市販ティッシュコンディショナーに含有し、それらが線維芽細胞に与える影響を調査検討を行ってきたが、ティッシュコンディショナーの主成分が細胞に与える影響を上回ることはなく、結果は芳しくなく、発表に値する成果は得られなかった。平成28年度の研究計画は、新規ティッシュコンディショナーを用いた臨床試験が計画であった。新規材料の開発は治癒促進剤の模索を続け、臨床研究に関しては、本研究の材料を用いたものではないが、義歯安定剤、歯科補綴装置に関する2つの研究計画を長崎大学病院倫理委員会に提出し承認を受け、実際、2例の臨床研究の遂行した。このことは、今後新規ティッシュコンディショナーの臨床応用に先立つ、臨床研究を行う上で、十分役立つと感じた次第である。本研究は、研究期間3年で新規ティッシュコンディショナーの開発、臨床応用までの計画であった。しかしながら、実際、開発の段階で中途になってしまっていることは大変残念に考える。今後も、本研究の大目的である、新規材料の研究開発を行っていく予定である。研究当初より,プロテインビーズの入手が困難となり,新たな治癒促進効果を持つ素材の検討を余儀なくされた.結果,治癒促進効果を持つ材料の発見には至らなかった.市販ティッシュコンディショナーに関する基礎的データの収集の結果,市販ティッシュコンディショナーは種類によって,細胞毒性が異なる結果を得た.現存の市販ティッシュコンディショナーは,まだまだ改良の余地が存在する.本研究期間に,臨床研究の構築を行い,新規開発材料の臨床応用のための臨床研究の基礎を築くことができた.

今後も,本研究を継続し,新しいティッシュコンディショナーの開発を行っていく予定である本年度は、学会発表や論文発表に時間を費やしため、実働実験が遅れ気味である。また、計画した材料が入手困難となったため、新たな材料の検討が必要となってしまった。細胞に関しては、違う系統の当研究室の実験系にて積層培養を確立しつつあるため、現在単層で計画している細胞実験をより生体に近い積層培養細胞を使用して行うことができ、動物実験の前段階の課題が増えたところである。より早く、溶出量のコントロールを確実にして実験に遂行する。歯科補綴学本年度購入した顕微鏡を用いることで、本来計画した研究計画以上の成果が期待できる。新たな治癒促進物質に関して、b-FGFと決定しその配合方法の工夫を検討する必要がある。現在カプセルに含有することを検討している。購入予定のプロティンビーズが販売中止となり、購入できず、消耗品は本研究室ストック分で使用できたため。プロテインビース購入予算として計上した分が購入不可であったため遅れている細胞実験使用予定のセルライン細胞の購入に補填する。新規治癒促進物質の購入予算として計上
エイズの総合的基礎研究

柱15にわかれて組識されているが、全体を通じておもなものを挙げる。HIVの構造と機能:ワクチニアウイルスベクタ-を用いた構造蛋白の機能解析,レセプタ-吸着部位の構造,SIVの分子遣伝学的比較、PCR法を用いた検出法とその系統発生学的応用,T細胞におけるHIVの遣伝子発現制御,HIVエンベロ-プの補体制御膜糖蛋白など。HIVの感染:HIVとSIVの感染病態の比較,エイズにおける後期ウイルス血症の成因,脳由来細胞に感染するHIV変異性,SIV_<mac>によるマカク属サルの感染および発症機構,Tリンパ球へのHIV感染におけるトリプシン系プロテア-ゼの関与,CD4遣伝子導入によるHIV感受性の付与など。エイズの免疫異常:エイズ患者におけるB細胞リンパ腫の多発傾向,HIV感染によるB細胞膜抗原のダウン・レギュレイション,HIVの中和エピト-プ(V3ル-プ)の機能解析,マウスにおけるMAIDSの免疫異常の解析,HIV感染ヒト単球産生サイトカイン,ネコのエイズモデル,HIVーenv遣伝子発現ヒト細胞性を用いた致死機構,HIV脳症における血管病変など。エイズの病態:抗PND抗体の交叉反応性と交叉中和活性,エイズ剖検脳,病態把握と治療法の関係,血友病患者の免疫能,DNA-PCRおよびRT-PCRの臨床的応用,マイコプラズマ重感染の意義,VIPに依存する倍養中枢ニュ-ロン生存維持へのペプタイドTの影響など。エイズの予防と治療:非中和抗体によるHIV増殖の抑制,抗HIV活性を有する微生物産物のスクリ-ニング,HIVRNAの塩基配列特異リボザイムによる細胞内破壊の可能性,超高感度の抗体測定法の開発,時異的細胞障害性T細胞を誘導しうるワクチンの開発,p17蛋白のミリストイル化阻止によるエイズ発症制御など。以上多彩な内容であるが、計議により理解は深められ、わが国の研究は世界から評価されるレベルに達している。
双極子追跡法による中枢聴覚路可塑性の検討

双極子追跡による中枢聴覚路の検討の結果、以下のような研究成果が得られた。1聴性中間反応のPb成分は覚醒時に比較し、睡眠時にて正中寄りに位置した。2聴性中間反応のNb,Pb成分は睡眠時の上行性網様体ふかつ系の機能低下・抑制により総体的に脳幹部の活動性が高まる結果、双極子が睡眠時に正中に位置するものと考える。3頭頂部緩反応・N1成分の双極子は音刺激反対側の側頭回に近似され、その位置は高周波数ほど、より深部に位置した。4頭頂部緩反応・N1,P2成分の双極子は刺激反対側の側頭部に位置した。5語音刺激によるP2成分双極子はトーンバーストによる刺激時と同様に刺激反対側の側頭回に近似される傾向が認められた。非侵襲的に脳内の活動部位を推定する手法である双極子追跡法を用いて聴性誘発反応の起源につき検討を行った。1.聴性脳幹反応(ABR)につきマスキングの有無による反応の変化につき検討を行った。得られた双極子はMRI画像上に重ね、より詳細な起源推定を行った。被検耳にマスキング雑音を与えた際のABRのIV波、V波、VI波の双極子はそれぞれ脳梁膝部付近、中脳背側付近、視床前部付近に推定された。マスキング雑音を与えなかった際の双極子はIV波、V波、VI波に明瞭に分離しなかった。睡眠時と覚醒時においてl000Hzの音刺激を用いて頭頂部緩反応(SVR)を記録した。音刺激後250400msecの反応であるN2成分の双極子は睡眠時では、覚醒時に比較してより頭蓋正中よりに起源が推定された。睡眠時における大脳皮質の抑制と大脳辺縁系のふ活化が反映しているのではないかと考えられた。2.両耳刺激と片耳刺激をした際の聴性中間反応(MLR)、Pa成分,Na成分につき検討を行った。片耳刺激でのPa成分,Na成分の双極子は側頭部に近似される傾向があった。また、両耳刺激では片耳刺激に比して双極子はより正中に近似される傾向が認められた。3.睡眠時と覚醒時において1000Hzの音刺激を用いて頭頂部緩反応(SVR)を記録した。4. SVRのN1成分につき刺激音の周波数を変化させて検討を行った。N1成分の双極子は刺激反対側の側頭部に近似された。音刺激には500.1000.2000.4000Hzの音を用いたが刺激音の周波数が高くなるほど、双極子はより頭蓋内側に推定された。SVRは、周波数特異性のある反応であるといわれており、その関与が示唆された。双極子追跡法は脳機能を優れた時間分解能、空間分解能で解析することが可能である。また非侵襲的に検討することができるため、繰り返し施行することが容易であり、今後広く臨床応用されることが期待される。頭頂部緩反応SVR,N1成分につき刺激音周波数を変化させて双極子の反応動態につき検討を行った。双極子の解剖学的位置をより詳細に検討するためMRI画像上に重ねた。双極子は、刺激反対側側頭回に近似されるものと視床近傍に近似されるものが認められた。側頭回に近似された例では、刺激音周波数の変化により双極子の位置が変化した。高周波数刺激ほど、双極子は側頭回のより内側に推定された。視床近傍に近似された例では刺激音の周波数変化による双極子の変化を認めなかった。聴性中間反応MLRについて睡眠の影響を検討した。MLRは比較的覚醒、睡眠レベルにより影響を受けるといわれており、これまでにも潜時、振幅の変化などにつき研究されてきている。今回、MLRの後半成分Pb,Nbにつき双極子の検討を行った。Pb,Nbの双極子は両側側頭部に近似されたが、覚醒時に比して睡眠時では、正中寄りに近似される傾向があった。今後症例数を増やし、睡眠覚醒レベルにおけるMLRの双極子についてさらに検討を行いたいと考えている。双極子追跡法は時間分解能,空間分解能に優れ,また非侵襲的に脳機能を評価することが可能である。

この特性を生かし,音刺激に対する中枢聴覚路の電気生理学的反応動態を双極子を指標として検討した。各種の聴性誘発反応のうち聴覚皮質と最も深い頭頂部緩反応は50300msecの潜伏時間を有し、立ち上がりの緩やかな音刺激によっても明瞭に記録が可能である。従って、周波数特異性を有する音刺激により誘発される。周波数特異性を有する反応である。音の強弱のみならず周波数を変化させならが4種類8種類の刺激音を用いて得られた本反応の双極子を検討し、その起源を推定した。周波数変化により双極子は低周波数から高周波数へ刺激音を変化させると共に側頭回外側から内側、そしてやや前方寄りへと双極子が移動した.これまでに行われた観血的な実験等の報告に見られる聴皮質の周波数受容配列と同様な結果が非侵襲的な方法である双極子追跡法でも得ることが可能であった.また、語音刺激を用いて検討を加えた。双極子は刺激側に関係なく左右どちらか一側の側頭回近傍に位置する例が多かった。語音に対する認知についての研究への応用発展の可能性もあると思われた。中枢聴覚路の可塑性に関する研究への応用が可能であると考えられる。
新しい光物性機能をもった半導体材料の開拓

本研究は,将来の高度な光エレクトロニクス技術の発展に備えて,既存の半導体材料には見られない新しい光物性機能を持った新規材料を,広く無機・有機物質の中から開拓し,その基礎的な電子物性を解明するとともに,その成果に基づいて新しいコンセプトによる機能素子の開発を行うことを目指す。この目的に沿って上記の四名の計画研究分担者が,互いに密接な協力態勢を保ちながら研究を進める。3年間の研究期間の最終年度である平成4年度における研究成果の大要は以下の如くである。国府田:これまで各種の有機半導体の電気的・光学的非線形現象を組織的に研究してきたが,本年度はシリコン高分子(ポリシラン)の3次非線形光学効果に対象を絞り,実験的・理論的に従来にない精密な研究を行った。各種の非線形光学スペクトルの特徴は,高分子主鎖上の1次元励起子のモデルによって定量的に説明できることが,この結果明らかにされた。これらの高分子半導体は究極の量子細線として重要である。柊元:2種類の間接遷移型半導体を積層した(Ga)m(AlP)n系の短周期超格子を有機金属気相法によって初めて作製し,直接遷移型の半導体に匹敵する高効率の可視発光を示すことを見いだすと共に,その発光素子への応用の可能性を実際に示した。佐藤:Zn,Cdを添加したCuAlS_2の青・緑色発光の原因について,結晶工学および光物性の両面から考察した。また,CuAlS_2に一連の遷移金属を添加したときの光吸収とESRを測定,解析した。さらに,Tb,Tm,Smなどを添加したCuAlS_2の発光スペクトルを測定した。岡:半磁性半導体の軍結晶の研究では,Zn_<1-x>Mn_xTeが将来の光通信に必要なファラデー素子として良好な特性を示すことを明らかにした。半磁性半導体超格子は,Cd_<1-X>Mn_XTe/ZnTe超格子を作製し,量子井戸励起子発光過程についての物性制御が行えることを示した。
磁性流体を援用したセラミック球の高能率超精密研削法の開発

セラミック球の高性能加工法(高加工能率,高真球度,高表面品質,低コスト,清浄環境)を開発することを目的に,ダイヤモンド砥石によるセラミック球の磁性流体援用研削装置を設計・試作した.粒度SD2008000の砥石で粗研削仕上げ研削実験を行い,下記の知見を得た.1.セラミック球の磁性流体研削装置の特長(1)固定砥粒方式のダイヤモンド砥石を採用したため,環境を汚染せずに高能率加工が実現されるとともに,砥石粒度を順次変えることにより粗加工から仕上げ加工まで可能となった.(2)高価な磁性流体を隔室内に密封したため,加工コストの低減,加工圧力の安定を得た.2.主な実験結果(1)研削能率は主軸回転数,砥石粒径および研削荷重にほぼ比例する.(2)SD200のダイヤモンド砥石を用いて,主軸回転数4000rpmで粗研削加工したところ,直径減少率30μm/minの高能率加工が実現された.(3)到達真球度は回転砥石の粒径に比例し,主軸回転数の減少とともに直線的に減少し,良くなる.また,到達真球度は主軸回転数2000rpm以上の場合は研削荷重が増加すると改善されるが,2000rpm以下の場合は逆に研削荷重が低い方が良い.(4)真球度は6分間の極めて短い研削時間で初期の43μmから6μmに改善された.また,SD8000砥石で真球度0.121μm,表面粗さRmax0.092μmの高精度なセラミック球が得られた.(5)加工球は研削特性に大きな影響を及ぼす.摩擦係数の高い準乾式研削の真球度が最も良い.(6)砥石粒度,砥石回転速度,研削荷重の広い研削条件で窒化珪素(HIP)球が延性モードで研削されていることが確認された.(7)酸化クロム砥石によるメカノケミカルポリシング加工は真球度の改善にはあまり効果がないが,表面粗さの改善には有効である.(8)ガイドリング材質やテ-バ台設置方法(自由回転・固定)は研削特性に殆ど影響しない.セラミック球の高性能加工法(高加工能率,高真球度,高表面品質,低コスト,清浄環境)を開発することを目的に,ダイヤモンド砥石によるセラミック球の磁性流体援用研削装置を設計・試作した.粒度SD2008000の砥石で粗研削仕上げ研削実験を行い,下記の知見を得た.1.セラミック球の磁性流体研削装置の特長(1)固定砥粒方式のダイヤモンド砥石を採用したため,環境を汚染せずに高能率加工が実現されるとともに,砥石粒度を順次変えることにより粗加工から仕上げ加工まで可能となった.(2)高価な磁性流体を隔室内に密封したため,加工コストの低減,加工圧力の安定を得た.2.主な実験結果(1)研削能率は主軸回転数,砥石粒径および研削荷重にほぼ比例する.(2)SD200のダイヤモンド砥石を用いて,主軸回転数4000rpmで粗研削加工したところ,直径減少率30μm/minの高能率加工が実現された.(3)到達真球度は回転砥石の粒径に比例し,主軸回転数の減少とともに直線的に減少し,良くなる.また,到達真球度は主軸回転数2000rpm以上の場合は研削荷重が増加すると改善されるが,2000rpm以下の場合は逆に研削荷重が低い方が良い.(4)真球度は6分間の極めて短い研削時間で初期の43μmから6μmに改善された.また,SD8000砥石で真球度0.121μm,表面粗さRmax0.092μmの高精度なセラミック球が得られた.(5)加工球は研削特性に大きな影響を及ぼす.摩擦係数の高い準乾式研削の真球度が最も良い.(6)砥石粒度,砥石回転速度,研削荷重の広い研削条件で窒化珪素(HIP)球が延性モードで研削されていることが確認された.(7)酸化クロム砥石によるメカノケミカルポリシング加工は真球度の改善にはあまり効果がないが,表面粗さの改善には有効である.(8)ガイドリング材質やテ-バ台設置方法(自由回転・固定)は研削特性に殆ど影響しない.セラミック球の高性能加工法(高加工能率,高真円度,高表面品質,低コスト,清浄環境)を開発することを目的に,ダイヤモンド砥石によるセラミック球の磁性流体援用研削装置を設計・試作した.粒度SD200の砥石で粗研削実験を行い,次に粒度SD1000およびSD2000の砥石で中仕上げ研削実験を行い,下記の知見を得た.1.セラミック球の磁性流体研削装置の特長(1)固定砥粒方式のダイヤモンド砥石を採用した.従って,環境を汚染することなく高能率加工が実現されるとともに,砥石粒度を順次変えることにより粗加工から仕上げ加工まで可能となった.(2)高価な磁性流体を隔室内に密封した.従って,加工コストが大幅に低減し,加工圧力も安定した.2.主な実験結果(1)窒化珪素(HIP)

球を粒度SD200のダイヤモンド砥石を用いて粗研削加工したところ,直径減少率30μm/minの高能率加工が実現された.真円度は加工時間6分間で初期の43μmから6μmに改善された.(2)粗加工に続く中仕上げ研削では,粒度SD1000の砥石で40分間,続いて粒度SD2000の砥石で40分間,合わせて80分間の研削で,真円度がさらに0.4μmまで改善された.(3)粒度SD2000の砥石で研削した後の窒化珪素球の表面は粗さRmax=0.2μmで鏡面になった.(4)粒度SD200の粗砥石から粒度SD2000の微粒砥石まで,そして低速・低研削荷重から高速(4000rpm)・高研削荷重(40N)までの広い研削条件で窒化珪素(HIP)球が延性モードで研削されていることが確認さされた.今後,さらに微粒の砥石または固定砥粒方式研磨法を採用し,真円度及び表面粗さの一層の向上を図る.セラミック球の高性能加工法(高加工能率、高真球度、高表面品質、低コスト、清浄環境)を開発することを目的に、昨年度に設計・試作したダイヤモンド砥石によるセラミック球の磁性流体援用定圧研削装置を用いて,最適な研削条件をさらに詳しく調べ,下記の知見を得た.(1)加工液が研削特性に及ぼす影響について(a)加工液は到達真球度に大きな影響を及ぼす.2種類の研削液JC-707とSMS,水及びSMSの準乾式の中では,準乾式研削の到達真球度も最も良い.(b)加工液が到達真球度に影響を及ぼす原因は,セラミック球-ダイヤモンド砥石間の摩擦係数が加工液により異なるためであり,摩擦係数が大きいほど,真球度が良い.(c)研削能率(直径減少率)はJC-707の場合が最も高い.(d)表面粗さには加工液の影響が見られなかった.(e)SD8000砥石での準乾式研削では真球度0.121μm,表面粗さRmax0.092μmの高精度なセラミック球が得られた.(2)到達真球度は回転砥石の粒径が小さくなるにつれてほぼ比例して小さくなり,良くなる.(3)加工能率は砥石粒径,回転数に比例して増加する.(4)表面粗さは砥石粒径にほぼ比例する.(5)酸化クロム砥石によるメカノケミカルポリシング加工では,真球度の改善にはあまり効果がないが,表面粗さはRmax0.05μmに達した.(6)ガイドリング材料として鋳鉄とダイヤモンド砥石を比較実験したが,研削特性に差異はなかった.(7)テ-パ台の設置方式の自由回転方式と固定方式について調べたところ,研削特性への影響は殆どなかった.
寄生性線虫の感染によって誘導される植物細胞の細胞質分裂・核分裂脱制御の分子機構

本研究では既に,ネコブセンチュウの感染の初期過程を再現・解析するための実験系として,タバコBY-2培養細胞へのマイクロインジェクションによるエフェクターアッセイ系を開発している。このアッセイ系を用いた解析により,ネコブセンチュウの分泌物が植物細胞を操作していること,また,この分泌物が植物細胞に直接注入される必要があることを見いだしている。このことは,このエフェクターが細胞膜上のレセプター等を介して機能するのではなく,宿主植物の細胞内に入り込んで機能することを示唆する。ネコブセンチュウのもつmicroRNAを解析した結果から植物寄生性センチュウ,ネグサレセンチュウとネコブセンチュウに共通のmicroRNA,およびネコブセンチュウに特異的なものを同定している。一方,上記アッセイ系により90塩基からなるRNA分子を見いだしており,その塩基配列および2次構造等から,このRNAが植物細胞内で機能すると考えられた。この90塩基のRNAについて,その作用機作を解明するため,誘導的過剰発現系を用いた解析を行った。さらに,このRNAをミヤコグサ形質転換根に導入し,根の成長や生理機能,および核の分裂に対する効果を解析した。なお、2013年度途中に、姓をGotoからBartlemに変更した。25年度が最終年度であるため、記入しない。我々はタバコBY-2細胞とマイクロインジェクションを用いて感染初期の過程を再現した新奇のRKNエフェクターアッセイ法の開発に成功している。このアッセイによってRKN分泌物が植物細胞を操作していること、また分泌物は植物細胞の中に直接注入される必要があることを示した。これはこの未知のエフェクターが細胞外で膜受容体などを通して機能するのではなく、宿主細胞の細胞質内で機能することを示唆している。一方、エフェクターの同定には分泌物を画分してその活1生を確認する必要があるが、このアッセイ法は非常に繊細で試行回数を増やすのが困難であり、現段階では望ましいサンプル数や再現性が得られていない。上記のアッセイと同時に、分泌物自体の分析も行なった。放射性同位体を用いて分泌物を解析した結果、非常に特異的な種類のRNAを発見した。次世代シークエンスによって得た320877種のリードのうち、バイオインフォマティクスを用いてフィルタリングすることで90ntからなる一つのRNAを見出した。配列と予想される構造から、このRNAは植物細胞において何らかの制御機能を持ち得ると考えられた。このRNAはRKNエフェクターの有力な候補であり、本研究計画の重点はこのRNAの機能解析に移行しつつある。また、寄生における非コードRNAの役割を理解するために、RKNの中のmicroRNAを解析した。先行研究で得られていたmicroRNA候補の配列に対して、複数の異なる種の線虫を用いてノーザンプロット解析を行った。その結果、寄生性線虫特異的なmicroRNAを16種類の発見した。そのうち5種類は三種の植物寄生性線虫から検出されたが、4種類はRKNとネグサレセンチュウからのみ検出された。さらに6種類はRKNからのみ検出され、これらのmicroRNAの標的遺伝子が寄生の決定に関わっている可能性が考えられた。分泌物の直接注入実験は繰り返し行われて活性は確認できているものの、この実験は熟練を要する繊細な操作を要求するので、試行回数を増やすのが困難であり、現段階では望ましいサンプル数や再現性が得られていない。しかし独立に進行していた線虫分泌物自体の分析がうまく進行し、分泌物中に存在する特異的な種類のRNAを同定することができた。よって、このRNAに重点をおいた生理機能解析を開始することができている。この研究計画において現在我々は線虫分泌物の中からエフェクター分子の推定候補を得ることができ、そのエフェクター候補であるRNAの配列も決定することができた。今後はこのRNAの機能を異なる実験系を用いた誘導的過剰発現によって解析する。これらの実験によってこの推定エフェクター分子が植物細胞に対してどのような影響を持っているか、線虫感染のどの段階に作用するかを明らかにすることができると期待される。
ユーザの概念モデル可視化によるデザイン支援システムの開発

本研究はユーザの概念モデルを可視化することによって,ユーザの内省的な作用を重視した製品のデザイン支援システムを構築することであった.そのため,ユーザの概念モデルを可視化する手法として「Category Camera」の電子アプリケーションと「TTS手法」を開発した.拡張ADTモデル概念を導入したデザイン支援システムの全プロセスを可視化することができ,その支援システムを国際デザイン・ワークショップで活用し,評価実験を行った結果,その有効性も確認された.本年度の実施計画は、昨年に実施したユーザの内省的作業を表現できるように拡張したADTモデルを基に、複数視点の導入によるデザインプロセスの応用を試みることであった。その際に大事になる複数視点から抽出された多様なユーザの概念モデルに関する情報を有効にデザインプロセスに活かすためには、複数視点間の活発な共有が必要とされる。ユーザの内省的レベル情報のより積極的な共有が行われるように、「TTS手法」を開発した。そのTTS手法は、複数の視点(デザイナー側)はユーザの内省的レベルの観察結果を、TTS手法シートを用いて複数の視点から気づいた情報を可視化し、その可視化された情報を共有することからまた新たな気づきが行われるように開発された手法である。この手法の活用により、複数視点からの多様な情報がアイディア創造プロセスにより積極的に活かすことができる。今後、より多くのデザイン創造プロセスにおいて活用できるように、TTS手法の改善と電子システム化を計画している。また、複数視点の導入による実践的な試みとして、多用な価値観を集約するツールを開発した。それは、災害時教育やモラル教育の現場で実績のある「クロスロードゲーム」をベースとしたウェブサイト上のコミュニケーションツールである。参加者は、ウェブブラウザやスマートフォンなどの携帯端末を用いて、画面上に表示される設問に「はい」もしくは「いいえ」で答える。設問は立場によってその回答傾向が大きく異なるものを採用している。回答後、他のプレイヤーの判断を表示し、多様な考え方への気づきを促すものである。ゲームの結果は随時サーバに蓄積され、分析に用いることもできる。本年度の実施計画は,昨年提案された「TTS手法」を用いてデザインワークショップによるその有効性を明らかにすることと,その「TTS手法」をよりより活動できるように,電子化デザイン支援システムの一環として,ユーザの概念モデルの可視化ツールである電子アプリケーションを提案することであった.研究実績として,電子可視化ツール「Category Camera」を提案することにより,より積極的かつ効率的に複数視点からの多様な情報を用いてユーザの概念モデルを分析することができるようになった.この「TTS手法」と「Category Camera」の電子アプリケーションを用いて国際デザインデザインワークショップを開催し,その有効性と可能性,そしてその改善の方向性を明らかにすることができ,より多くの創造プロセスへの活用の可能性が検討だれた.また,グループワークにおけるチームワークを向上を目的としたコミュニケーションの枠組みであるRSNSの概念を提案し,それに基づくソーシャルゲームシステムを構築した.これまでの3年間の成果をまとめて,拡張ADTモデル概念を導入したデザイン支援システムの全プロセスを可視化することができ,よりユーザの「楽しさ」や「嬉しさ」といった内省的な作用を重視した製品のデザイン支援システムを可視化することができた.本研究はユーザの概念モデルを可視化することによって,ユーザの内省的な作用を重視した製品のデザイン支援システムを構築することであった.そのため,ユーザの概念モデルを可視化する手法として「Category Camera」の電子アプリケーションと「TTS手法」を開発した.拡張ADTモデル概念を導入したデザイン支援システムの全プロセスを可視化することができ,その支援システムを国際デザイン・ワークショップで活用し,評価実験を行った結果,その有効性も確認された.本年度の実施計画は、ユーザの行為に着目したADTモデルを、ユーザの内緒的作業を表現できるように拡張することであった.その拡張は、1)内省的作業の構造分析、2)ユーザの概念モデル導入、3)複数視点の導入の3段階である。そのため、研究はユーザの概念モデル(須藤)とユーザの内緒的レベルへの対応した人工物提案手法への調査に分けて研究を行った。まず、ユーザの概念モデルにつきましては、情報の流れを数学的に取り扱うツールであるチャンネル理論を拡張し、ユーザの経験や状況文脈に概念モデルを拡張する応じた解釈を表現できるようにした。表現内容が変わらずに、表現メディアのみが変化した場合のユーザの好みの変化を記述することに成功した。現在、複数視点の導入について検討を行っている。またユーザの内緒的作用からの潜在的ニーズ検出・共有につきましては、ユーザがどのような構造に対しどのような感情を抱くかという内省的作用を明らかにするため、既存の人工物とその改善を通して人の感情がどのように変化するのかを調べた。また、事例調査として,デザインワークショップを行い,ユーザの内緒的レベルへの対応への現状と方向性を検討した。そのワークショップでは、複数視点からユーザのおかれた状況からの潜在的なニーズを検出・共有するための手法の提案を行い、デザインワークショップでの活用を試みた。現在は、その手法の改善を行い、その有効性について検討を行うと共に、手法の拡張も検討している。ユーザの内省的作業の構造分析とユーザの概念モデル導入、そして複数視点の導入による拡張型ADFモデルを基にデザイン支援システムの構築を行う。特に、複数視点の導入などを基に拡張されたADTモデルの有効性の検証を行い、デザイン支援システム構築への適応可能性を検討し、その結果に基づいたシステム構築を行う。

そのために、開発したコミュニケーションツール及び複数視点の導入を基に開発されたTTS手法は、日本・中国・シンガポール・韓国などのデザイナーが参加し行う予定である国際デザインワークショップなどで活用し、その効果を検証する.また,コミュニケーションツールにおいては、どのような状況において判断が分かれるのかについて分析して、その結果をADTモデルの知識データベースに反映させる予定である。TTS手法については、電子システム化するための試みも行う予定である。複数視点の導入は,ADTモデルのユーザの概念モデルを,複数ユーザの概念モデルを記述できるように拡張する.ユーザの概念モデルは様相論理式で記述されており,複数の論理式にラベルをつけて管理することによって実現可能である.23年度に行った研究を基に、ユーザの再生的作用を重視した人工物のデザイン支援システムを構築する.ユーザの再生的作用を重視した人工物のデザイン支援システムを構築する.インタフェースの操作性については、その製品への愛着と深く関連することから、色彩や構成といったデザイン要素とユーザビリティとの関係に着目した内部設計を進める予定である.外部仕様設計は,実際のデザインプロセスを分析して,ユーザの内省的作用を把握する必要がある具体的状況と必要な支援を明らかにし,分析結果にもとづいてデザイン支援システムの外部仕様を決定する予定である.また、2011年度に提案した手法の改善及び拡張を行い、システム構築への適応可能性を検討する.内部設計および実装は,決定した外部仕様を実現するための内部仕様を決定する.ADTモデルシミュレータに関しては既に内部仕様が決定しており,これを拡張することによって達成する.内部設計が決定した箇所から順次計算機上に実装する.内部設計および実装には,システム開発の実績が豊富な須藤があたる.前年度に引き続き、システム提案における資料の購入する予定である。開発された手法とコミュニケーションツールの有効性を明らかにする必要があり、国際デザインワークショップの実施による検証を行う予定である。その他、研究者会議をより充実に行うとともに、研究成果の発表するためのの旅費及び会議への参加費を予定している。システム開発のための資料を購入する予定である。提案された手法の有効性をより明らかにするため、デザインワークショップへ参加し、その手法の評価を行う予定である。その他、研究者会議をより充実に行う共に、研究成果を発表するための旅費および会議への参加費も予定している.