hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
看護学修効果に繋げる望ましい解剖見学実習モデルの構築

実習がないと回答した教員が教育上で困っていることは『人体の構造と形態をイメージできない』260名(53.9%),『臓器の位置関係を理解できない』241名(50.0%)の順であった。実施できない理由は,『実習施設がない』316名(65.6%)が最も多かった。しかし,『所属機関』との関連は認められなかった。これらの結果から、必要時に見学できるようなセミナーの開催や教育環境の改善が必要と考えられた。上記の詳細は日本看護学教育学会第27回学術集会において発表予定である。2014年度は,人体解剖の歴史が古く,多くの世界的に著明な人体解剖標本の展示施設が存在する欧米の現状を把握するために,海外における現状視察を行った。また,これまでのホルマリン固定に替わる固定法であるsaturatedsalt solution (SSS)法による人体標本モデルを作製した。2015年度は,SSS法による全身の人体解剖モデル1体を作製し,実際の見学実習に活用した。2016年度は,看護基礎教育における解剖学見学実習の実施状況や必要性,期待する効果などについて明らかにすることを目的に,全国の看護教員を対象に,郵送法による質問し調査を実施した。海外の状況視察や新たな人体標本モデルの作製といった成果は,当初想定していなかったものであり,これらの点では,当初の計画以上の伸展が得られたと言える。しかしながら,それらの看護学修への効果を測定し,カリキュラムの改善に活かすまでには至っていない状況である。SSS法固定遺体による人体標本モデルの解剖見学実習への活用を,学会発表や論文により報告する。新たに分担研究者2名に参加を依頼し,広く見学型カリキュラム改善のための知見を集める。特に,新規分担研究者の1名は,看護の分野で制度化が進められているナース・プラクティショナー(NP)養成(修士相当)における,全国的な解剖学教育をどのようにするかについての検討にも関わっていることから,卒後教育における解剖見学も新たに検討の対象とし,看護教育全体における解剖見学のモデル構築を目指す。解剖学,医学教育学遺体の観察可能部位や状況は,解剖実習の進行状況によって異なる。これらのモデル遺体は,実習遺体以上に安定した状態で長期保存されることが必須である。また,実習遺体以上に筋や内臓に可動性があれば,様々な部位を様々な状態(例えば筋を翻転した状態)で観察し,更にそれを復元することで,その学習効果が高まると考えられる。SSS法固定遺体を用いたプレセクションモデルを作製し,実際の本学での解剖見学実習に用いることでその特徴や有用性を検討する。また,解剖見学はただ行えばよいのではなく,より高い学修効果を上げるためには,内容や教授方法をさらに洗練する必要がある。並行して,本学で見学を行う各学校の見学実習の成果を基に,より高い学修効果が得られる見学のあり方を明らかにしていく。本年度実施予定であった見学実施校に対するアンケート調査等を,次年度実施としたため。固定法の開発を優先するために,当初計画と研究計画の順序を変更したため。上記を実施するとともに,その成果発表を行う。引き続き固定法の開発・改良に努めるとともに,初年度に計画していた,全国の看護師養成機関の解剖学・フィジカルアセスメント教育担当者を対象としたアンケート調査や,見学学生に対するアンケート調査や客観試験などを行っていく予定である。
踊りにおける老い : コドモとの比較から

研究の目的「踊りにおける老い」というテーマに「コドモ」の変数を加え、踊り手における老いのプロセスを、老いとコドモという二つの極から図る。博士論文で扱ったポストモダン的転回(ダンス「美学」における転回と、ダンス「テクニック」での能力と障害を問う技巧的転回)に、老いとの比較で「コドモ」を設定し、身体の社会性を時間と経験の点から比較することで、ダンサーの身体知がダンスに与える影響を検証する。本年度は、2012年ベルリンで行ったシンポジウム「踊りと老いー欧米と日本の文化比較における身体のエステティックスとポリティックス」を、研究代表者及びガブリエレ・ブラントシュテッター教授の編集で学術書にまとめ、ポストモダンダンスの振付家イヴォンヌ・レイナーに依頼した原稿"The Aching Bodyin Dance"を加え、出版準備を進めた。並行して、ベルリン自由大学の研究プロジェクトInterweaving Perfomance Culturesに参加した。招待講演としては、6月3日にドイツ・ライプチヒでのシンポジウムTANZOFFENSIVE 2013 : TANZBEFAHIGTで、ダンスと障がいに関する講演と、ワイマール時代から続くダンス会議Tanzkongress2013 (6月6日-9日、デュッセルドルフ)で、踊りと老いに関する講演を行った。また、6月26-30日に米国・スタンフォード大学で行われたPerformance Studies international#19での、老いと時間についての学会発表と、7月22-27日ポーランド・ヤギェウォ大学における国際美学会での、老いとバイオエシックスに関する学会発表も行った。加えて、ベルリンで実施したシンポジウムを、日本からの視点で構成し直し、2014年5月23、24日に国際シンポジウム<老いと踊り>として、東京ドイツ文化センターで開催する準備を進めた。本年度は、予定していたドイツ二カ所での講演、二つの国際学会での研究発表とゲッティー研究所での資料調査を滞り無く行った。その発表原稿についても各学術雑誌から掲載依頼を受けており、ドイツダンス会議(Tanzkongress2013)での講演は、講演映像がダンス会議のウェブサイトに収録されたことに加え、原稿が2014年のドイツ舞踊学会(Gesellschaft fur Tanzforschung GTF)の紀要に掲載されることとなった。加えて、国内では埼玉大学での学術講演会「musica mundane :気の宇宙論・身体論」の開催、ダンスドラマトゥルクとして宮城県名取市でのプロジェクト、早稲田大学文学部でのドラマトゥルク/ドラマトゥルギー研究プロジェクトでの講義など、アウトリーチ活動も積極的に行った。本研究課題を推進する方策として、ベルリンで実施したシンポジウム「踊りと老いー欧米と日本の文化比較における身体のエステティックスとポリティックス」を、日本からの視点で構成し直し、2014年5月23、24日に東京ドイツ文化センターで、外山紀久子教授と共に、国際シンポジウム〈老いと踊り〉として開催する。このシンポジウムでは、「老いと踊り」というテーマをめぐって、ドイツ、英国、米国、日本の視点を交差させて問題提起する。年齢を重ねても踊り続けるダンサーを起用し新たなジャンルを立ち上げたドイツ、タンツテアターの振付家ピナ・バウシュから議論を始め、日本の舞踊の事例と比較しながら、ダンスを越えたアート全般や社会的状況へと考察を進めていく。ここでは、これまで遂行してきた研究内容を、シンポジウムの構成内容として展開させる。構成としては、前シンポジウムの共同主催者であるガブリエレ・ブラントシュテッター教授によるピナ・バウシュ『春の祭典』についての基調講演から、美術家やなぎみわ氏によるレクチャー・パフォーマンス「老女と少女の物語自作を中心に」、重要無形文化財保持者である日本舞踊家・花柳寿南海氏と若手舞踊家の花柳大日翠氏、演劇批評家・渡辺保氏による鼎談、宗教哲学者の鎌田東二教授による翁童身体を巡る講演、パフォーマンス研究のレノーラ・シャンペーン教授と、ダンス史家ラムゼイ・バート教授によるポストモダンダンス論、ピナ・バウシュのドラマトゥルクを務めた振付家ライムント・ホーゲ氏による講演と舞踏家・大野慶人氏によるレクチャー・パフォーマンス、そして舞踊批評の尼ヶ崎彬教授と中島那奈子による未来のダンスを考える対談を執り行う。また、2014年度はこの研究を、京都造形芸術大学舞台芸術研究センター<舞台芸術作品の創造・受容のための領域横断的・実践的研究拠点〉共同研究プロジェクト「老いを巡るダンスドラマトゥルギー」として、「劇場を用いた研究」という手法を通じて実践的に探究していく。「踊りにおける老い」というテーマ上に、「コドモ」の変数を加え、踊り手における老いのプロセスが踊りに与える影響を、老いとコドモという二つの極から図った。博士論文で扱ったポストモダン的転回(ダンス「美学」における転回と、ダンス「テクニック」での能力と障害を問う技巧的転回)に、老いとの比較で「コドモ」を設定することで、身体の社会性を時間と経験の点から比較することが可能になり、ダンサーの身体知がダンスに与える影響を検証出来ると考えている。1.まずドイツにおける、老いとコドモを対象にした作品を概観し、テクニック習得やマイノリティの参加、アマチュアリズムの視点から、どのような動きの特質が文化における老人とコドモのダンサーに求められているかを検証した。これは、具体的には、ベルリンのラディアル・システムとヘッベル劇場のプログラム、ダンスフェスティバル「8月のダンス」、劇場カンプナーゲルの夏のフェスティバルを視察し、ダンスにおけるこどもの依存性や物質性、成人との権力関係を問う作品を検証した。2.そして、老いと幼さが日本の舞踊に関する言説ではどのように描写されているかを検証した。

具体的には、日本における1990年代のコンテンポラリーダンス批評と美術批評における「コドモ身体」「未成年」という幼児性に関する語彙を概観し、アリエスに代表される社会教育学的な「子ども」「児童」の発見という視点が、日本の近代化や義務教育制度、ポストモダン論のもとでどう受容されているかを、子ども論・子ども学における知見を参考にしてまとめた。3.以上の研究を、ダンス制作の場におけるドラマトゥルギーとして連動させた。障害を持つ者と持たない者による日独国際ダンス・プロジェクト「Thikwa plus循環プロジェクト」を継続しつつ、ベルリン自由大学国際舞台芸術研究プロジェクト"Interweaving Performance Cultures"の枠内でも、この研究発表を行った。「踊りにおける老い」というテーマ上に、「コドモ」の変数を加え、踊り手における老いのプロセスが踊りに与える影響を、老いとコドモという二つの極から図った。博士論文で扱ったポストモダン的転回(ダンス「美学」における転回と、ダンス「テクニック」での能力と障害を間う技巧的転回)に、老いとの比較で「コドモ」を設定することで、身体の社会性を時間と経験の点から比較することが可能になり、ダンサーの身体知がダンスに与える影響を検証出来ると考えている。本年度の研究では、前半期はベルリンを拠点に、ベルリン自由大学の研究プロジェクトInterweaving Perfbrmance Culturesへの定例研究会に参加し、またフェスティバルTanz im Augustとルール地方の芸術祭Ruhrtriennaleにおいて、マイノリティの参加、アマチュアリズムの視点から、踊りとコドモのテーマに関連した作品を論考にまとめ、またドイツ・オルデンブルク国立劇場で4月に開催されたドイツ・ドラマトゥルク協会2012年度の年次総会において、プロジェクト発表"Alternde Korper im Tanz"を行った。そして6月には、これまでの「踊りと老い」という研究成果をベルリンでの3日間の国際ダンス学術シンポジウム「踊りと老い-欧米と日本の文化比較における身体のエステティックスとポリティックス」に具体化させて開催し、ガブリエレ・プラントシュテッター教授と共同で、4力国から研究者、アーティスト、プロデューサーを招聘し、ドイツメディアの中継も入る大きな成功を収めた。そして後期は、ダンス研究と実践を繋げるダンスドラマトゥルクの立場から、国際共同制作ダンスプロジェクト「劇団ティクバ+循環プロジェクト」のベルリン・京都での公演を滞り無く行い、その後にはフォーラムとして、障がいとマイノリティとダンスに関する議論の場を提供した。研究の目的「踊りにおける老い」というテーマに「コドモ」の変数を加え、踊り手における老いのプロセスを、老いとコドモという二つの極から図る。博士論文で扱ったポストモダン的転回(ダンス「美学」における転回と、ダンス「テクニック」での能力と障害を問う技巧的転回)に、老いとの比較で「コドモ」を設定し、身体の社会性を時間と経験の点から比較することで、ダンサーの身体知がダンスに与える影響を検証する。
英米文学史におけるソネットの包括的研究の発展と完成:史的展開の探究と本質論の構築

これまで第1集『ソネット選集-サウジーからスウィンバーンまで-』(主に19世紀のソネットを扱ったもの)および第2集『ソネット選集-ケアリからコールリッジまで-』(主に18世紀を扱ったもの)の2冊を出版した。今回はそれに続く研究として第3集『ソネット選集-ワイアットからハーバートまで-』(主に16-17世紀を扱ったもの)の出版に向けて、最終稿を完成した。このように、時代を遡ってソネットの発展の軌跡をたどることで、韻律構成とテーマにおけるイギリス・ソネットの独自性を明らかにした。(1)『ソネット選集』第3集出版に向けての研究会John Fuller(ed.),The Oxford Book of Sonnetsを底本として、第3集『ソネット選集-ワイアットからハーバートまで-』の出版準備のための研究会を重ねた。研究分担者がそれぞれ作品を分担し、蒐集した資料に基づき精読し、詩人小伝・テキスト・対訳・注・作品解説を持ち寄って議論を重ねた。(2)論文集『ソネット-史的展開と本質』出版に向けて、各自の研究経過を報告しあい、議論を重ねた。各時代の英米ソネットの特質、ソネットの変遷と文化史的意義、英詩の形式とその意味を分担して研究にあたり、英詩の形と技巧についての論文を執筆、翻訳論についての研究を発表した。(3)国内外での資料収集大英図書館、ケンブリッジ、オックスフォード、ハーバード、アマスト大学図書館、ロンドンのPublic Office、アメリカ国会図書館、また、大英博物館、ナショナル・ポートレイト・ギャラリーで資料収集に努めた。国会図書館、東京、法政、中央、上智大学などの図書館に赴き、また可能なものはインター・ライブラリで資料を収集した。(1)『ソネット選集』第3集出版に向けての研究会John Fuller(ed.), The Book of Sonnetsを底本として、第3集『ソネット選集-ワイアットからハーバートまで-』の出版準備のための研究会を重ねた。研究分担者3人がそれぞれ作品を分担し、蒐集した資料に基づき精読し、詩人小伝、テキスト、対訳、注、作品解説を持ち寄って議論を重ね、原稿はほぼ出揃い、現在チェック段階にある。(2)論文集『ソネット-史的展開と本質』出版にむけて、各自が研究経過を報告し合い、議論を重ねた。(3)国内内外での資料収集大英図書館、ケンブリッジ、オックスフォード、ハーバード、アマスト大学各図書館、ロンドンのPublic Office、アメリカ国会図書館、また、大英博物館、ナショナル・ポートレイト・ギャラリーで資料収集に努めた。(1)『ソネット選集』第3集出版に向けての研究会John Fuller(ed.), The Book of Sonnetsを底本として、第3集『ソネット選集ーワイアットからハーバートまでー』の出版準備のための研究会を重ねた。研究分担者3人がそれぞれ作品を分担し、蒐集した資料に基づき精読し、詩人小伝、テキスト、対訳、注、作品解説を持ち寄って議論を重ねてきた。原稿はほぼ出揃い、現在最終チエックを進めている。2013年度中に出版予定である。(2)論文集『ソネットー詩的展開と本質』出版に向けて、各自が研究経過を報告しあい、議論を重ねた。各時代の英米ソネットの特質、ソネットの変遷と文化史的意義、英詩の形式とその意味を分担して研究を進め、深めてきた。作品解釈をめぐっての議論から、その時代の政治状況、人間関係などが浮かび上がり、その背景としての思想の流れの把握にも努めてきた。その結果、論文集として出版するにはまだまだ資料の点からも不足であることが痛感され、論文集出版は今の時点では断念し、各自が得た研究成果をそれぞれの機関誌等に発表していくことで合意した。(3)国内外での資料蒐集国会図書館、東京、上智大学などの図書館に赴き、また可能なものはインターライブラリで資料を収集した。国外では、ケンブリッジ、オックスフォード、ハーバード、アマスト大学各図書館、また、大英博物館、ナショナル・ポートレイト・ギャラリーなどで資料蒐集に努めた。代表者の桂はソネットという14行定形詩の創始者であり、また、完成者ともいえるイタリアの抒情詩人ペトラルカの記念館を現地イタリアに訪ね、英語、イタリア語による研究資料を集めた。その中にはペトラルカの『カンツオーネ』の最新の注釈書も含む。『ソネット選集』第3集のための原稿はほぼ出揃い、現在チェック段階にある。24年度が最終年度であるため、記入しない。

今回の問題点といえば、『ソネット選集』第1集ロマン派に比して、1617世紀は宮廷文化の中での詩人同士の交流、背景の歴史、独自の世界観などへの関心が収拾がつきがたいほど広がっていったことである。あくまでソネットの注釈、ということを念頭においてまとめる所存である。なお、研究者全員が専任職をはなれ、パソコン使用、研究室の確保等に関して困難が生じた。科研の研究期間内は研究機関に融通を図っていただけるように、何らかの働きかけをお願いしたい。24年度が最終年度であるため、記入しない。
特徴的な立体構造を利用したタンパク質内エネルギー散逸機構の解明

タンパク質中の活性部位に生じた余剰エネルギーは、活性部位から周囲のタンパク質部分へと伝わり、タンパク質内の散逸する。われわれは、アンチストークスラマンバンド強度が余剰エネルギーの大きさを反映することを利用して、ヘムタンパク質中のエネルギー散逸過程を観測することに成功した。ミオグロビンの変異体について、アミノ酸残基単位でエネルギーを流れを観測し、タンパク質のエネルギー伝搬において、原子間接触が重要な因子であることを明らかにした。ミオグロビンは、比較的小さな球状タンパク質で、その中心付近にヘムをもつ。したがって、ヘムを中心としたほぼ球対称な形状をもつ。そこで、球対称な形状を利用して、ヘムからのエネルギー散逸にどのような異方性があるかを調べた。時間分解共鳴ラマン分光法を用いて、ヘムタンパク質におけるエネルギー伝達過程の直接観測を行った。振動エネルギー伝達過程は、紫外光による共鳴ラマン効果を受けるトリプトファン残基のアンチストークスラマンバンドを、時間分解測定することによって観測した。本年度は、ヘムから距離がほぼ同じ(約6 Å)で、方角が異なる位置にトリプトファン残基を導入した三種類のミオグロビン変異体におけるタンパク質内エネルギー移動を調べた。各変異体に対して、ヘムの光励起に伴う時間分解アンチストークス共鳴ラマンスペクトルを測定した。760 cm-1付近に見られるトリプトファン残基由来のW18バンドについて、アンチストークスラマン散乱光強度の光誘起増加率を求めたところ、は、トリプトファン残基へのエネルギー流入とエネルギー流出に対応する、バンド強度の増大と減衰が観測された。各変異体の間には、バンド強度増大の大きさに違いが見られた。この実験事実は、ミオグロビン内のエネルギー伝達が異方的であることを示している。複数のモデルで解析した結果、タンパク質内の位置によってトリプトファン残基からのエネルギー流出速度が異なるというモデルが最も妥当であると考えられた。さらに、エネルギー流出速度はトリプトファン残基側鎖の溶媒への露出度と相関があり、溶媒へのエネルギー移動がエネルギー流出に大きく寄与していると考えられる。本年度は、ヘリックスバンドルタンパク質を利用したエネルギー散逸の距離依存性の研究を行った。チトクロムb562は4本のαヘリックスからなるヘリックスバンドル構造をもつヘムタンパク質であり、4本のヘリックスの内部にヘムが位置している。αヘリックスの周期構造を利用してエネルギー散逸の距離依存性を調べた。760 cm-1付近に見られるトリプトファン残基由来のW18バンドについて、アンチストークスラマンバンドの光誘起増加率を求めたところ、強度の増大と減衰が観測された。この違いからエネルギー散逸の距離依存性について考察した。また、球状タンパク質であるミオグロビンについてもエネルギー散逸の時空間マッピングを行った。その結果、タンパク質内部のエネルギー散逸において、主鎖を経由した経路の寄与は小さく、原子間コンタクトが大きな寄与をなすことが明らかになった。理論研究グループと共同して各アミノ酸残基の溶媒露出面積を計算し、溶媒露出面積とエネルギー緩和速度の間に高いそう考えることを明らかにした。ヘリックスバンドルタンパク質を利用したエネルギー散逸の距離依存性の研究は、変異体の数を増やして順調に進んでいる。エネルギー散逸における原子間コンタクトの重要性を指摘した内容は論文としてまとめ、現在投稿中である。理論研究グループとの共同研究体制は軌道に乗り、実験データをリーズナブルに説明するモデルを構築できている。タンパク質内のエネルギー散逸機構の解明は、タンパク質で起きる化学反応の理解に非常に重要である。その解明のためには、タンパク質内のエネルギーの流れを時空間分解して知る必要がある。本研究課題では、ヘムを分子ヒーター、トリプトファン残基をエネルギープローブとして用い、ピコ秒の時間分解能でアミノ酸残基のアンチストークスラマンバンド強度変化を追跡することによって、残基の空間分解能でタンパク質内エネルギー散逸を時空間分解観測した。特に、特徴的な立体構造をもつタンパク質を選び、その立体構造の特徴を活かして、エネルギー散逸の異方性、距離依存性、水とのカップリングに関する計測を行った。その結果、タンパク質内エネルギーフローにおいては、主鎖の共有結合を介するのではなく、原子間接触を介してエネルギーが移動していることを明らかにした。また、散逸速度の系統的な比較から、溶媒の水分子が効率的なエネルギー受容体として働いていることを明らかにした。これらのデータを基に、タンパク質内のエネルギー散逸を支配する構造的因子を明らかにした。さらに、温度プローブ分子であるトリプトファンのアンチストークスラマンスペクトルの温度依存性を定量的に調べ、タンパク質の特定の部位について過渡的な温度を定量的に評価できるようにした。これまでに測定したチトクロムcの過渡的な温度を算出したところ、タンパク質内エネルギー移動に異方性があることを示唆する結果が得られた。

球状タンパク質を利用したエネルギー散逸の異方性の解明については、計画通り研究を進め質の高いデータが得られた。現在、論文としてまとめているところである。また、実験データのより詳しい解釈を行うため、分子動力学計算を理論研究グループと共同で行っている。レーザー光源の問題のために、測定実験に一部遅れがあるが、すでに問題は解決されており遅れを取り戻す目処はたっている。タンパク質のアミノ酸残基の紫外共鳴ラマンスペクトルを測定し、アンチストークスラマンバンド強度の時間変化をもとに残基単位でエネルギー移動速度を明らかにする。平成26年度に製作した、微弱なアンチストークスラマンバンドを高感度で観測できる測定システムを用いて、アンチストークスラマンバンド強度の時間変化をピコ秒の時間分解能で観測する。この時間変化をもとにそのアミノ酸残基を導入し、タンパク質内部各部位でのエネルギー流入、流出速度を求める。これによって、タンパク質内部でのエネルギー移動を時空間分解観測する。このデーターから蛋白質内のエネルギー散逸を支配する構造的因子を明らかにする。平成28年度は、チトクロムb562に対する時空間分解観測を行う。ヘリックスバンドル内部へ配向したトリプトファン残基とヘリックスバンドル外部へ配向したトリプトファン残基に対して行い、結果を比較する。両者の差は、タンパク質ー水間のカップリングの強さを反映すると考えられる。すなわち、タンパク質ー水間のカップリングの強さによって、両者の間には伝搬するエネルギーの距離に応じた減衰に差が現れると考えられる。この差を詳細に調べることで、タンパク質ー水間のカップリングの強さを求め、タンパク質ー水間エネルギー散逸機構を解明する。28年度が最終年度であるため、記入しない。生物物理化学次年度はヘリックスバンドルタンパク質を利用したエネルギー散逸の距離依存性を中心として研究を行う。チロクロムb562は4本のαヘリックスからなるヘリックスバンドル構造をもつヘムタンパク質であり、これらの4本のαヘリックス内部にヘムは位置している。そこで、αヘリックスの周期構造を利用してエネルギー散逸の距離依存性を調べる。すなわち、ヘリックスの1ターンずつずれた位置にトリプトファン残基を導入し、それらをプローブとしてエネルギーの伝搬を観測する。αヘリックスは5.4Åの空間的周期をもっているので、ヘムからの距離を等間隔でずらしていくことができる。この性質を利用して、ヘムートリプファン残基間の距離を等間隔で長くしてデータを計測し、エネルギー散逸の距離依存性を明らかにする。一部の変異体タンパク質について発現量が低く、測定に必要な量を得るのに時間を要したため。
日常生活活動の心肺負荷と大腿筋収縮の評価を意図した腰部加速度の時系列解析法の開発

本研究の目的は,腰部装着型加速度計により,日常生活活動時の呼吸循環応答と下肢筋活動を評価する方法を開発することであった.研究1として,腰部加速度信号から呼吸循環応答を評価する方法を検討した.対象者は,腰部に加速度計を装着し,胸部に心拍数モニターを装着した.その結果,腰部加速度信号により得られた活動強度は,心拍数との間に強い相関関係を認めた.また,研究2として,下肢筋活動を評価の指標として,日常生活下での歩幅の測定方法を検討し,実験環境下にて5%程度の誤差範囲内での測定精度を確認した.本研究の結果にて開発された腰部加速度信号の処理アルゴリズムにより呼吸循環応答と下肢筋活動を評価できる.本研究の目的は,日常生活活動における身体活動の心循環系負荷と大腿筋収縮を腰部加速度から簡易かつ客観的に評価するシステムを開発することであった.平成27年度は,以下の研究を実施した.研究課題IA.日常生活下の身体活動の実態調査.身体活動あたりの大腿部の活動量の推定方法に関する研究を行った.97名の男女を対象に歩行運動負荷試験を行うと同時に日常生活下での身体活動水準を評価した.起床時から就寝時までにわたり,腰部に2種の身体活動モニタ(Lifecorder,Active Style Pro)を装着した.Lifecorderにおいては,4秒毎の強度を測定し,これまでに持続時間別に身体活動を評価できることが報告されている.本研究においては,これまでの報告と同様に,日常生活の身体活動が短時間かつ断続的であることを確認した.研究課題IB.モデル化された日常生活活動に対する心循環応答,大腿筋収縮の把握と腰部加速度信号の解明と新規アルゴリズム開発.日常生活下での身体活動をモデル化した身体活動について,身体活動毎の強度,継続時間,心循環応答,大腿筋収縮を推定できる腰部加速度信号の評価アルゴリズムを開発することを目的として行った.対象者は,実験環境下にて身体活動を行い,その際の腰部加速度信号を測定した.本研究は,平成27年度から平成28年度までの2カ年にて,3つの研究課題を計画していた.平成27年度においては,当初計画通りに研究課題Iaと研究課題Ibを実施することができた.平成28年度は,当初計画通りに研究課題IIを実施できると考えている.本研究の本年度の課題は,新規加速度信号処理アルゴリズムについて,実生活での日常生活下での精度検証として,健常成人を対象に日常生活下にて,腰部加速度信号,心拍数,筋放電量の測定を行うことであった.腰部加速度信号と心肺負荷について検討した.日常生活の中では,断続的な短時間の身体活動が主体となるため,これまでの単位時間あたりの加速度信号の積算や平均化では,心肺への高い負荷の活動を過小評価することを明らかにした.また,その改善策として加速度信号の測定エポック長の短縮を検討した.この測定エポック長の短縮により相対的に心肺負荷が高まる身体活動を探知することができた.さらに,身体活動を物理的に探知する加速度信号に対して,心肺応答に時間的な遅れが生じることから,身体活動の継続時間を加味するためのエポック長についても検討した.さらに,日常生活の身体活動の非連続性を考慮して,身体活動中の休息についても配慮したエポック長を検討した.腰部加速度信号と大腿筋収縮の関係性を明らかにするために,客観的に歩幅を測定する方法を検討した.監視下での試験と非監視下での日常生活活動から,腰部加速度信号の頻度とサイズから歩幅を評価するシステムを開発し,実生活での調査運用した.その結果,監視下での試験においては,5%以内の誤差範囲であることを確認し,また,日常生活下での歩幅の実態を明らかにした.これらの両者のシステムを統合して,日常生活における心肺と大腿部への負荷を評価するシステムを特にエポック長に焦点を当てて検討した.その結果,データ保存容量やデータの安定性などを考慮しても30秒未満のエポック長が好ましいと考えらた.これらの新たな身体活動評価のアルゴリズムを応用した地域での健康づくりプログラムを運用できる.本研究の目的は,腰部装着型加速度計により,日常生活活動時の呼吸循環応答と下肢筋活動を評価する方法を開発することであった.研究1として,腰部加速度信号から呼吸循環応答を評価する方法を検討した.対象者は,腰部に加速度計を装着し,胸部に心拍数モニターを装着した.その結果,腰部加速度信号により得られた活動強度は,心拍数との間に強い相関関係を認めた.また,研究2として,下肢筋活動を評価の指標として,日常生活下での歩幅の測定方法を検討し,実験環境下にて5%程度の誤差範囲内での測定精度を確認した.本研究の結果にて開発された腰部加速度信号の処理アルゴリズムにより呼吸循環応答と下肢筋活動を評価できる.平成27年度に明らかにした新規加速度信号処理アルゴリズムの実生活での日常生活下での精度検証を行う.実生活に即した環境下にて制限のない生活下にて,腰部加速度計,心拍数,筋電図を測定しする.さらに,研究成果について,国内外の学会や学術雑誌にて発表する.運動生理学次年度使用額が生じた理由は,平成27年度に執行予定であった人件費に計上費用を執行しなかったためである.これは,研究代表者と研究分担者により,人的労力を節約できたためである.平成28年度については,計画通りに執行し,平成27年度残額についても,平成28年度の研究過程で必要になる経費として執行する.
微量有機汚染地下水の現場土壌環境中での生物化学的浄化の関する研究

有機塩素化合物による地下水の汚染は現在の日本の重要な環境問題の一つである。その解決法の一つとして,有機塩素化合物を汚染現場にて微生物により分解し,汚染地下水を浄化する方法が考えられる。これに資するために、本研究では、有機塩素化合物として塩化フエノ-ル類を取り上げ、これらの生物分解に関与する微生物を単離・培養し,それらの活性特性の把握を試みる。本年度は,処理場返送汚泥およびゴルフ場最終調整地底質を種として、パラクロルフェノ-ルおよび2,4ージクロルフェノ-ルの分解能を有する細菌の集積培養を試みた。その結果,96時間で10mg/lのパラクロルフェノ-ルを,また2.4mg/lの2.4ージクロルフェノ-ルを分解しうる細菌群を処理場返送汚泥より得た。ゴルフ場最終調整地底質からは、72時間で9.5mg/lのパラクロルフェノ-ルを、また60時間で1.4mg/lの2.4ージクロルフェノ-ルを分解しうる細菌群を得た。これらの細菌群は、パラクロルフェノ-ルおよび2.4ージクロルフェノ-ルを含むグルコ-ス培地で大量培養することが可能である。また,起源の異なる両細菌群はこれらクロルフェノ-ル類の除去パタ-ンに関して、グルコ-ス基質の存在の有無により異なる挙動を示す。すなわち,処理場からの細菌群はグルコ-ス存在下でパラクロルフェノ-ルを直ぐに除去し始めるが,グルコ-スが存在しない場合はパラクロルフェノ-ルの除去に遅れが生ずる。一方、ゴルフ場よりの微生物群はグルコ-スの存在の有無にかかわらず直ぐにパラクロルフェノ-ルの除去を開始する。今後、ゴルフ場からの細菌群より、これらクロルフェノ-ルの分解能を有する細菌の半離を行い,その活性特性の把握を試みる。
ステロイドホルモンの海馬神経細胞に対するtoxic effectに関する研究

我々は先にラット海馬培養神経細胞を用いてカイニン酸による神経細胞毒性をglucocorticoidが用量依存性に培養することを認めた。この際glucocorticoidのみでは海馬培養神経細胞に対して毒性を示さないことを認めた。本年度はこの海馬培養神経細胞に対するdexamethasoneのカイニン酸毒性増強作用の作用に対してnicotineがどの様な影響を与えるかを検討した。この際カイニン酸の量及び、dexamethasoneの量はそれぞれ10^<-5>M及び10^<-4>Mとした。nicotineは、10^<-9>M10^<-4>Mの範囲内の用量依存的にdexamethasoneの毒性増強作用を抑制し、細胞保護的に働くことを認めた。一方扁桃核細胞に対するestrogenの作用を検討した結果、estrogen単独で、低濃度では細胞保護的に、高濃度では用量依存的に細胞毒性を示すことが判明した。これらのdexamethasone、estrogenの細胞毒性作用及び、nicotineの細胞保護作用のメカニズムについてin vivo microdialysis及びin situ hybridization法によって検討した。その結果、glucocorticoidは、ラット海馬におけるglutamateの放出を増強させることを認めた。また、estrogen投与がc-fosの発現をきたすことを明らかにした。estrogenの細胞毒作用については扁桃核培養神経細胞の細胞内Ca^<2+>濃度にあたえるestrogenの作用について検討した。estrogenは細胞内Ca^<2+>濃度の上昇をきたし、この上昇が、10分以上にわたって持続することを認めた。このCa^<2+>濃度の上昇がどのような遺伝子を介するものかを検討中である。
電気泳動による新しい免疫応答マーカーの開発（Ｔ細胞受容体クローナリティアッセイ）

T細胞クローナリティーアッセイを実現するにあたり、走査型キャピラリー等電点電気泳動装置の自動運転化と切替式マイクロカラムの開発を中心に進めた。自動運転化は自動運転プログラムの開発を外注して実現できた。切替式マイクロカラムはポリメチルメタクリレート(PMMA)の円盤の同心円状に16個の穴(体積1マイクロリットル)を開け、ここにクロマトグラフィー担体を充填する。この円盤を両側にキャピラリーを接続したホルダーに挟み、円盤を回転することでマイクロカラムの交換が容易にできるように設計した。ホルダーは円盤の摺動と、液漏れを防ぐ密着性を考慮してテフロン(PTFE)製とした。試作したマイクロカラムとホルダーを組み立てたところ、計画した送液を行うことができた。マイクロカラムの充填剤としてはモノマーの重合によるモノリス構造が理想的である。モノマーとしてグリシジルメタクリレートとエチレンジメタクリレートを、開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル、ポロジェンとしてデシルアルコール、シクロヘキサノールを用いて、重合を行ったところ、多孔性のモノリスカラムを調製できた。今後、ここにストレプトアビジンを固定化し、最終的にはビオチン化抗体を固定化して使用する予定である。1.T細胞クローナリティーアッセイに必須の走査型キャピラリー等電点電気泳動装置の自動運転化を実現できた。2.切換型マイクロカラムの試作を行った。3.モノリスカラムの調製に目処がついた。1.切替式マイクロカラムにモノリスカラムを調製し、アフィニティークロマトグラフィーカラムとしての性能を確認する。2.マイクロカラムに抗体を結合し、抗原タンパク質のマイクロカラムによる捕捉と引き続くキャピラリー等電点電気泳動分離がオンラインで行えることを確認する。3.単球細胞からのT細胞受容体の遊離と、部分精製法を確立する。4.T細胞受容体の蛍光標識法を確立する。5.T細胞受容体の抗体カラムによる捕捉とキャピラリー等電点電気泳動のオンライン分析を実現する。2.抗TCRモノクローン抗体当初は抗TCRモノクローン抗体産生ハイブリドーマより、抗TCR組換えFabのクローニングを計画したが、現時点では抗TCRモノクローン抗体産生ハイブリドーマの提供者はまだ見つかっていない。そこで、抗TCR抗体固定化マイクロカラムとキャピラリー等電点電気泳動(CIEF)を直結したアフィニティーキャプチャーCIEF (ACCIEF)によるTCRクローナリティーアッセイの開発を先に進めることとした。固定化抗体としては市販されている抗TCRβ鎖モノクローン抗体であるG-11抗体が最適と考えられた。3.免疫アフィニティー捕捉とCIEFの結合を可能にするACCIEF装置の自動化と改良ACCIEFによるTCRクローナリティーアッセイ開発を進めるために、本研究者らが開発しているACCIEF装置プロトタイプの改良と全自動化を行い、全自動運転が可能になった。抗TCRモノクローン抗体産生ハイブリドーマの提供者が見つからないという状況であるが、当初計画したアフィニティープローブキャピラリー等電点電気泳動法(APCIEF)に換えて、ACCIEF法を採用することにより、ハイブリドーマから抗体遺伝子のクローニングを行わずに研究を進めることができると考えられる。ACCIEF装置プロトタイプの改良と全自動化を完了できたことから、ACCIEFによるTCRクローナリティーアッセイの開発に弾みを付けることができた。1.TCRβ鎖蛍光標識法の開発APCIEF法に換えてACCIEF法を採用する場合、高感度検出にはTCRを蛍光標識する必要がある。幸い、TCRβ鎖には部位特異的標識に適した遊離システインが1残基存在する。このシステイン残基を高効率に標識する方法を開発する。2.TCRの可溶化、糖鎖の除去などは当初の計画通りに進める。3.上記の研究に加えて、平成30年度の研究計画を進める。

2.マイクロカラムに抗体を結合し、抗原タンパク質のマイクロカラムによる捕捉と引き続くキャピラリー等電点電気泳動分離がオンラインで行えることを確認する。3.単球細胞からのT細胞受容体の遊離と、部分精製法を確立する。4.T細胞受容体の蛍光標識法を確立する。5.T細胞受容体の抗体カラムによる捕捉とキャピラリー等電点電気泳動のオンライン分析を実現する。当該年度の残額が生じたが、次年度に有効に使用する予定があったため、次年度使用額とした。1.国際会議の内の1つが日本で開催されたため、旅費が下がった。2.自動化プログラムの外注費が見積より下がった。
USD列の基礎的研究と特異点改良問題への応用

これまでのUSD列の研究では、列はparameter系、idealはparameter(又は極大)idealが中心であったが、現在は、parameter系を成さない列、parameter(又は極大)でないidealへと、研究が移りつつある。そこで、極大準素idealに注目し、列はそのminimal reductionを成す(もちろん、それはparameter系ではあるが)として、この状況下でのUSD列の振る舞いを解析する事に着手した。Filtrationについては、ideal-adic filtrationに関するdecompositionの議論が一般のfiltrationへ拡張できる事が分かった。Filtrationに付随するRees代数Rや随伴次数付環Gの環論的構造の解析とそのlocal cohomologyを簡便かつ実際的に求める問題については、一般の極大準素idealでは大変困難なので、equi-I-invariantの場合を取り上げ、極大準素idealの定めるfiltrationについて考察した。環論的構造、特にBuchsbaum性については、GはBuchsbaumである事がまず分かった。Rについては、後藤四郎先生(明治大学)がCohen-Macaulay環の場合に導入した"minimal multiplicity"の概念を自然にBuchsbaum環へ拡張する事で、さらに極大準素idealのreduction数が高々1とすれば、その十分条件を得た。かなり特殊な場合ではあるが、これまでで一番優れた結果と考えている。極大埋入次元を持つ極大idealのRees環はBuchsbaumである事も分かった。Local cohomologyについては、この場合はかなり詳しく解明出来た。西田氏は、正則列で生成されたidealの整閉包について重要な成果を挙げ、また一般のfiltrationに対してanalytic deviationの概念を定義し、analytic deviationが高々1のfiltrationについて、Cohen-Macaulay性の解明に取り組み優れた成果を得ている。また、氏は重複度理論をGrothendieck群へ拡張したが、この新理論ではI-invariantの概念を拡張することが今後望まれる。川崎氏は、NoetherスキームXに対し、Xへの双有理射を持つNoetherスキームYで高々Cohen-Macaulay特異点しか存在しないもの(このYをXのCohen-Macaulay化という)を構成する問題に取り組み、氏はかなり一般のXでCohen-Macaulay化の構成に成功している。X=Spec A(AはNoether環)に対し、Y=Proj Rで構成するのであるが、Rees環R自身がCohen-Macaulay環であることを要求するとき、RをAの算術的Macaulay化という。氏はCohen-Macaulay化の理論を更に発展させて、Noether(局所)環が算術的Macaulay化を持つための必要十分条件を完全に解明している。本研究の今後の課題について、すでに幾つかの萌芽が見られる。まず、GのI-invariantの役割は大変重要であるので、その解明のため、idealのべきを取るとき、その随伴次数付環GのI-invariantはどう振る舞うのかを調べて、ある種の安定性を持つことを突きとめた。次に、GがBuchsbaum環であるとき、極大準素idealの型をreduction数が高々1の場合についてほぼ決定できた。これは、下田保博氏(北里大)との共同研究である。最後に、Rees代数RのBuchsbaum性については、前述の議論を加群の場合で展開する事など、更なる一般化が求められる。今後は、こうした課題に取り組んでいく予定である。

川崎氏は、NoetherスキームXに対し、Xへの双有理射を持つNoetherスキームYで高々Cohen-Macaulay特異点しか存在しないもの(このYをXのCohen-Macaulay化という)を構成する問題に取り組み、氏はかなり一般のXでCohen-Macaulay化の構成に成功している。X=Spec A(AはNoether環)に対し、Y=Proj Rで構成するのであるが、Rees環R自身がCohen-Macaulay環であることを要求するとき、RをAの算術的Macaulay化という。氏はCohen-Macaulay化の理論を更に発展させて、Noether(局所)環が算術的Macaulay化を持つための必要十分条件を完全に解明している。本研究の今後の課題について、すでに幾つかの萌芽が見られる。まず、GのI-invariantの役割は大変重要であるので、その解明のため、idealのべきを取るとき、その随伴次数付環GのI-invariantはどう振る舞うのかを調べて、ある種の安定性を持つことを突きとめた。次に、GがBuchsbaum環であるとき、極大準素idealの型をreduction数が高々1の場合についてほぼ決定できた。これは、下田保博氏(北里大)との共同研究である。最後に、Rees代数RのBuchsbaum性については、前述の議論を加群の場合で展開する事など、更なる一般化が求められる。今後は、こうした課題に取り組んでいく予定である。これまでのUSD列の研究では、列はparameter系、idealはparameter(又は極大)idealが中心であったが、現在は、parameter系を成さない列、parameter(又は極大)idealでないidealへと、研究が移りつつある。本研究では、極大準素1dealに注目し、列はそのminimal reductionを成す(parameter系ではあるが)として、この状況下でのUSD列の振る舞いを解析する事に着手した。Filtrationの議論で、decoampositionに関するこれまでの研究手法を一般のfiltrationへと拡張することができ、満足すべき成果を得た。Filtrationに付随するRees代数、随伴次数付環などの環論的構造を解析し、特にそれらのlocal cohomologyを簡便かつ実際的に求める方法を開発する事については、上述のような極大準素idealのadic filtrationに付随する随伴次数付環について、特にequi-I-invariantの場合には、環論的構造を含め完全に解明することができた。川崎氏はMacaulay化の存在の証明に成功したが、それはUSD列の議論の有効性を示す出来事であり、本研究の今後を占う成果として特筆に値すると思われる。
分子レベルでのタンパク質の配向制御による新しいバイオ素子の設計

酵素や抗体を電極、微粒子表面に固定化し、これを効率よく利用するためには、タンパク質分子が有効に機能する部位、方向に固定化し、提示する必要がある。これまでの酵素や抗体の固定化では、タンパク質のアミノ酸残基を利用する方法が用いられてきた。しかしタンパク質は同種のアミノ酸を多数有しているため、部位特異的な固定化は難しい。そこで二つのアプローチにより、タンパク質の配向性を分子レベルで制御して非生物材料表面上に提示する方法を開発する。タンパク質表面の近接する異なるアミノ酸残基を利用することにより、部位特異的に蛍光性修飾剤を導入した。本法では最後にジスルフィド結合を切断するため、Ser(またはThr)とLysが近接する部位にのみ蛍光性修飾剤が修飾される。平成11年度はグルコースオキシダーゼ(GOx)に蛍光性修飾剤を導入した。GOxの化学修飾過程を調べたところ、蛍光性修飾剤の化学修飾により極めて大きな蛍光強度の増加がみられた。また、ジスルフィド結合を還元することにより著しい減少がみられた。すなわち、Lysが近傍に存在しなかった蛍光性修飾剤の脱離が起こったと考えられる。タンパク質に対し部位特異的親和性を持つペプチドを用いることにより、配向制御可能なタンパク質固定化法を開発する。ファージ提示系ペプチドライブラリーから、GOxの52から58番目の部分配列に親和性を持つペプチドを選択した。次に、このペプチドをコードするDNAのシークエンスを行い、アミノ酸配列を決定した。次に、表面プラズモン共鳴装置を用い、得られたペプチドとGOxとの親和性を調べた。その結果、いずれのペプチドともGOxに対し大きな親和性を示した。また、あるペプチドについて速度論的解析を行い、解離定数を決定したところ、6.4×10-5Mが得られた。
離乳時期の違いが咀嚼器官の発達に及ぼす影響

近年、"噛まない、噛めない、呑みこめない子供"の問題にともない、その原因として離乳期を含めた乳幼児期の、食生活の問題や食物の物性の変化、母子関係が指摘されている。発育期の中で特に離乳期では、食生活が大きく変化し、液状食から固形食へと変わっていく時期である。そこで離乳が早いと、咀嚼器官の正しい機能を獲得できず、発達が遅れ、離乳が遅いと母乳を飲む期間の長期化から、同様に咀嚼器官の発達に遅れをもたらすことが考えられる。そこでC3H/He系マウスを用いて、通常離乳群(通常通りの飼育、生後21日齢で離乳)、早期離乳群(生後14日齢で離乳)、晩期離乳群(生後28日齢で離乳)に分け、各群10匹づつ雌雄は区別せずに飼育した。各群35日齢で屠殺後、全身では頭尾長、体重、肝臓重量を、咀嚼器官では咀嚼筋の重量(咬筋、側頭筋)、顎下腺の発育(顎下腺重量、アミラーゼ活性)を観察した。顎骨の大きさ(上顎骨長径、上顎骨幅径、頬骨弓幅径、下顎骨長、下顎骨体長、下顎枝高、下顎角、下顎頭長径、下顎頭幅径)、組織標本(咬筋、側頭筋、顎下腺)は標本の作成中である。その結果、全身の発育、咀嚼筋重量、顎下腺の発育には差がなかった。顎骨の大きさは標本の作成中であるが、咀嚼筋重量、顎下腺の発育に差がないことから著明な差は現れないと予想される。本研究では屠殺時期がかなり影響していると考えられ、追実験として晩期離乳群(生後28日齢で離乳)の離乳時期に屠殺することを検討している。
胞巣状軟部肉腫をモデルとした血行性転移機構の解明

胞巣状軟部肉腫(ASPS)は、初診時に既に転移がしばしば観察される若年者の肉腫である。ASPSでは全症例でASPL-TFE3融合遺伝子が認められ、これがドミナントドライバーとして機能すると考えられている。本研究課題により、ex vivoシステムを応用してASPSモデルマウスを樹立した。ASPSモデルマウスはヒトASPSと同様に、原発巣における血管内皮(CD31+, CD34+)と血管周皮(SMA+, PDGFR+)に裏打ちされる成熟した血管構築が観察された。さらに、ヒトASPSの特徴である胞巣状構造や血管網形成と、肺への高頻度の転移も忠実に反映していた。転移の際には、腫瘍細胞は血管周皮細胞に被われた胞巣状構造のまま血管内を移動していて、このことが宿主免疫からの回避法である可能性が考えられた。この現象はヒトASPSでも観察された。また腫瘍細胞が血管内に侵入する際、融合遺伝子ASPL-TFE3の標的であるGPNMBの発現が不可欠であることも見出した。遺伝子発現解析からは、オートファジーやライソソーム経路の遺伝子群の顕著な発現亢進が認められ、腫瘍細胞内に多量のライソソームの集積が観察された。さらに、ASPL融合蛋白の造腫瘍能には、MIT/TFEファミリーのTFE3とTFEBで共通し、MITFやTFECには存在しない機能領域が関わっていることが示唆された。そこでASPL-TFE3の機能領域を特定するために、9つの欠失変異体を用いてin vivo造腫瘍試験を行ったところ、2箇所の欠失変異体で腫瘍形成が消失したことから、この領域がoncogenicドメインとして機能していることが示唆された。この領域には特定のSH3蛋白質が結合すると考えられる。今後は、ASPL-TFE3が機能し得るASPSのエピゲノムランドスケープを明らかにすることで、ASPL-TFE3の転写制御機構の全貌に迫りたい。1) ASPS細胞と血管周皮細胞の相互作用による血管新生機構の解析ASPS細胞が分泌する血管周皮細胞遊走因子の探索を遂行した。ASPSの無血清培養上清をイオン交換カラムクロマトグラフィーにてタンパク質を精製・分画し、得られた各画分の生理活性能を血管周皮細胞に対する遊走能アッセイで確認した。次いで、活性画分に含まれるタンパク質を質量分析器(LC/MSMS)で同定し、機能予測と、解析済みのヒトとマウスASPSの遺伝子発現プロファイルと比較することで、ASPSにおける血管周皮細胞の新規遊走因子として抽出した。これらの因子をひとつずつsiRNAでノックダウンしたところ、血管周皮細胞の遊走活性能は減弱したが、消失には至らなかった。このことから、血管周皮細胞の遊走性の調節には、複数の因子が関与していることが示唆された。2)融合遺伝子ASPL-TFE3の機能解析と標的遺伝子の同定ASPSの発症において、MiT/TFEファミリー(TFE3/TFEB/TFEC/MITF)の中で、TFE3とTFEBに共通の造腫瘍性ドメインが存在し、MITFとTFECには存在しないことをこれまでの実験で明らかにした。この結果から28年度は、造腫瘍性ドメインに結合する転写共役因子の同定を行った。Hisタグ付きのTFE3とMITFタンパク質を各々、ヒトASPS細胞の核抽出物と混合し、SDS-PAGEで分離後銀染色を行い、TFE3に特異的に共沈するタンパク質を精製、質量分析器にてアミノ酸配列を特定した。現在は、得られたタンパク質について、ヒトとマウスのASPS細胞で、ASPL-TFE3との結合の有無を免疫沈降実験により確認している。ASPS細胞が分泌する血管周皮細胞遊走因子の候補は同定できたが、候補因子をノックダウンした際の遊走活性化能が顕著に減少しないので、候補は複数なのか、他に見落としている可能性も考えられる。また、血管形成の過程を明らかにするため、血管周皮細胞の遊走をひとつの指標としたが、別のアッセイ方法での検証も必要である。(1)胞巣状軟部肉腫(ASPS)細胞と血管周皮細胞の相互作用による血管新生機構の解析ASPSは、豊富で成熟した血管新生を伴う腫瘍細胞の胞巣状パターンと血行性肺転移が特徴である。腫瘍細胞による血管周皮細胞の遊走や接着を介した血管構築機序を明らかにするため、ASPS細胞が分泌する血管周皮細胞の遊走因子の探索を行った。今回行ったプロテオーム解析は、ASPS細胞の培養上清に対する血管周皮細胞の遊走を指標としており、解析の結果、候補分子を4つに絞った。一方で、血管周皮細胞の培養上清に対してもASPS細胞の遊走がみられた。(2)融合遺伝子ASPL-TFE3の機能解析と標的遺伝子の同定ASPSの発症において、MiT/TFEファミリー(TFE3, TFEB, TFEC, MITF)の中で、TFE3とTFEBに共通の造腫瘍ドメインが存在し、MITFとTFECには存在しないことがこれまでの実験で明らかになっている。平成29年度は、TFE3の造腫瘍性ドメインに結合する転写共役因子Xについて検証を行った。XとTFE3との特異的な結合の有無を免疫沈降実験によって確認したが、MITFにも結合していることが判明した。しかし、Xの結合部位を欠損させたTFE3変異体では造腫瘍性が認められなかったことから、TFE3特異的ではないが、腫瘍形成には重要なドメインであることが示唆された。引き続き、TFE3特異的な造腫瘍ドメインの探索を進める。