hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プロトン輸送混合導電体を利用した新規な低エネルギー消費型水素分離膜

水素解離・再結合触媒については、透過性能が触媒量、塗布状態に強く依存することからそれらの最適化を図るとともに、Pd, Ni等のPt代替触媒の検討を行う。また、本研究で開発を目指す低温作動型水素透過膜の応用分野としては、光触媒による水の完全分解で生成する水素・酸素混合ガスからの水素分離が想定される。この場合、触媒が水素を酸化しないことが必須であり、触媒材料探索に加え、高分子、シリカゲルなどを素材にした水素選択透過層による触媒の被覆を検討する。作製したコンポジット混合導電体膜に触媒層を塗布した膜の水素透過能の評価、水素供給側に酸素、一酸化炭素、二酸化炭素を共存させることによる水素透過に対する他ガスの共存効果の解明、水素透過機構に関する知見を得るために、コンポジット混合導電体膜のプロトン導電性、電子導電性を測定し、それと水素透過性能との関連を精査する。得られた成果をもとに、原理の検証、材料開発指針を確立し、新たな分離技術としての確立と応用研究への課題抽出を行うとともに、「混合導電体利用低エネルギー型ガス分離」の学理と技術について総括する。平成25年度は設備備品は導入せず、経費は研究推進のための消耗品費と成果発表、情報収集のための旅費に用いる。なお、平成24年度に研究の効率化、節約化等により発生した繰越金は、平成25年度の物品費に組み込み有効に利用する。平成24年度からの繰越金261,189円を含んだ直接経費1,461,189円のうち,旅費として400,000円,消耗品費として1,061,189円を使用する予定である。
環とその表現の研究

本研究では,環論と環の表現論を主体に代数学の研究全般を包括的に支持するために,本分野の日本の代表的研究社を分担者として含む形で研究組織を作り,各種の研究集会を開き,国内外の研究連絡の場を作ると共に,関連分野の発展の方向性を明らかにして,代数学を含む数学(または,それを更に含む基礎科学全般)の発展に寄与しようと試みた.具体的には,分担者全員の参加のもとで実施計画を検討し,毎年秋に開催される研究集会(可換環論シンポジウム,環論シンポジウム及び多元環の表現論シンポジウム)及びより専門的な研究集会を実施し,研究分担者が中心となり,研究発表,討論,共同研究を行った.とりわけ平成7年度第2回日中環論シンポジウムと平成8年度可換環論国際シンポジウムでは,海外からの参加者を多く得て,海外参加者と国内研究者の共同研究など多くの成果が得られた.実際的な研究成果としては,まず分担者吉野が,Cohen-Macaulay加群の表現論の研究を続け,加群のlifting問題やmatrix factorizationについて新たな結果を得た.渡辺は,標数正のtight closusreの理論と標数0の特異点のdiscrepancyとの関係を明らかにして標数正の特異点の理論に新たな境地を開いた.後藤は,局所環のdeviationが小さい場合のRees代数のCohen-Macaulay性について様々な成果を得た.山形は,Frobenius代数の研究を継続して行い,self-injective algebraに対するsocle deformationの理論を展開した.西田は,有限表現型のBass orderやprimary orderの構造を明らかにした.永田はHibertの第14問題に関連したZarisikiの問題に対して新たな成果を得た.本研究では,環論と環の表現論を主体に代数学の研究全般を包括的に支持するために,本分野の日本の代表的研究社を分担者として含む形で研究組織を作り,各種の研究集会を開き,国内外の研究連絡の場を作ると共に,関連分野の発展の方向性を明らかにして,代数学を含む数学(または,それを更に含む基礎科学全般)の発展に寄与しようと試みた.具体的には,分担者全員の参加のもとで実施計画を検討し,毎年秋に開催される研究集会(可換環論シンポジウム,環論シンポジウム及び多元環の表現論シンポジウム)及びより専門的な研究集会を実施し,研究分担者が中心となり,研究発表,討論,共同研究を行った.とりわけ平成7年度第2回日中環論シンポジウムと平成8年度可換環論国際シンポジウムでは,海外からの参加者を多く得て,海外参加者と国内研究者の共同研究など多くの成果が得られた.実際的な研究成果としては,まず分担者吉野が,Cohen-Macaulay加群の表現論の研究を続け,加群のlifting問題やmatrix factorizationについて新たな結果を得た.渡辺は,標数正のtight closusreの理論と標数0の特異点のdiscrepancyとの関係を明らかにして標数正の特異点の理論に新たな境地を開いた.後藤は,局所環のdeviationが小さい場合のRees代数のCohen-Macaulay性について様々な成果を得た.山形は,Frobenius代数の研究を継続して行い,self-injective algebraに対するsocle deformationの理論を展開した.西田は,有限表現型のBass orderやprimary orderの構造を明らかにした.永田はHibertの第14問題に関連したZarisikiの問題に対して新たな成果を得た.最初に、本研究においては環論を特にその表現論的な側面に力点をおいて研究するものであるが、更に広い意味での表現論や代数幾何学に及ぶ代数学の幅広い成果が着実に得られたことを、報告しておきたい。次に研究代表者並びに分担者の研究実績について順に解説する。研究代表者吉野は、完備なGorenstein局所環上で定義されるCohen-Macaulay近似やそれに付随して現われるデルタ不変量の研究を継続している。この成果は、Cohen-Macaulay近似と環の斉次性との関連に付いての定理をPubl.RIMSに、また高次Auslander不変量の消滅定理をProc.of the AMSに掲載の予定である。また渡辺は標数0の有理特異点と標数正の環のF-purityとの関連について新たな知見を得た。さらに後藤は解析的deviationが小さい場合のイデアルのassociated graded ringがCohen-MacaulayやGorensteinになる条件を膨大な計算の結果明らかにした。この渡辺と後藤の成果は当科研費によって開催された可換環論シンポジウムにおいて発表された。次に分担者山形は有限次元多元環のうちで表現型がwildであるような場合に付いて、そのAuslander-Reiten成分の構造を研究し、当科研費による多元環の表現論シンポジウムにおいてその成果を公表した。また西田はBass整環の研究を継続し、その分類を土方との共同研究によってほぼ完成させた。これはKyoto Math.Journalに発表された。吉野は、完備なGorenstein局所環上で定義されるCohen-Mecaulaty近似とそれに付随して現われるデルタ不変量の研究を継続している。特にある種の高次デルタ不変量の消滅定理を証明することに成功した。また、加群についてのLifting Problemを鎖複体に拡張して考えて、Cohen-Macaulay近似に関する新たな知見を与えた。更にKoszul環上で同様の計算を進めている。

渡辺は標数0の特異点と正標数の環におけるF-purity,F-rationality,F-regularity等の条件との関連について研究を進め、標数0での有理特異点の概念が正標数では正確にF-rationalityに対応することを証明した。これはこの分野の研究の基礎となる重大な発見で、さらに正標数の特異点研究にも大きな影響を与えるものと期待されている。後藤は解析的deviationが小さい場合にはイデアルのassociated graded ringの多くがCohen-Macaulay環であることを証明した。更に、この研究によって蓄積した知識を利用して、一般の局所環のMacaulay化の問題に付いて研究を進めている。山形はwildな表現型をもつ有限次元多元環の性質を明らかにすることを中心に研究を進めているが、一方でFrobenius多元環の研究、多元環とその剰余環の大域次元を比較する問題で多くの成果を得た。西田は有限表現型の整環の研究を継続し、土方との共同研究によって、有限型のPrimary Orderの分類及びそのAuslander-Reiten Quiverの記述を完成させた。これは以前知られていたDrozd-Kirichenkoの結果を正すものであり、各方面から注目を集めている。本研究では,環論と環の表現論を主体に代数学の研究全般を包括的に支持するために,本分野の日本の代表的研究者を分担者として含む形で研究組織を作り,各種の研究集会を開き,国内外の研究連絡の場を作ると共に,関連分野の発展の方向性を明らかにして,代数学を含む数学(または,それを更に含む基礎科学全般)の発展に寄与しようと試みた.具体的には,分担者全員の参加のもとで実施計画を検討し,毎年秋に開催される研究集会(可換環論シンポジウム,環論シンポジウム及び多元環の表現論シンポジウム)及びより専門的な研究集会を実施し,研究分担者が中心となり,研究発表,討論,共同研究を行った.とりわけ平成7年度第2回日中環論シンポジウムと平成8年度可換環論国際シンポジウムでは,海外からの参加者の多く得て,海外参加者と国内研究者の共同研究など多くの成果が得られた.実際的な研究成果としては,まず分担者吉野が,Cohen-Macaulay加群の表現論の研究を続け,加群のlifting問題やmatrix factorizationについて新たな結果を得た.渡辺は,標数正のtight closureの理論と標数0の特異点のdiscrepancyとの関係を明らかにして標数正の特異点の理論に新たな境地を開いた.後藤は,局所環のdeviationが小さい場合のRees代数のCohen-Macaulay性について様々な成果を得た.山形は,Frobenius代数の研究を継続して行い,self-injective algebraに対するsocle deformationの理論を展開した.西田は,有限表現型のBass orderやprimary orderの構造を明らかにした.永田はHilbertの第14問題に関連したZarisikiの問題に対して新たな成果を得た.
新規着床因子の同定と着床メカニズムの解明

新規着床因子を同定するために、trophoblast stem cell (TS cell)とTS cellを分化させたgiant cellを用いたスクリーニングを行ない、解析を行ってきた。その中で、マイクロアレイスクリーニングでGiant細胞での発現が高かったmRASに注目した解析を行ってきたが、その間に遺伝子欠損マウスが別の研究室から報告されて、特に着床に異常がないことが明らかとなった。また、並行してin silicoの解析も行っていたところ、胎盤の合胞体栄養膜細胞で特異的に発現しているsyncytinに注目した。このタンパク質は、ウィルスのエンベロプタンパクと相同性が高く、培養細胞の系において、栄養膜細胞の融合能を持つことが明らかとなっているものの、その詳細なメカニズムについては未だ明らかとなっていなかった。そこで、詳細な融合メカニズムを解明するために、syncytinのfurin領域を欠損させた変異体とfurin領域に変異を入れた組換えたんぱく質を293T細胞において発現誘導させたところ、融合能がなくなることを明らかにした。このことにより、furin領域が融合に重要であることが明らかとなった。さらに、syncytinのshRNA発現レンチウィルスベクターを作成し、syncytin発現293T細胞においてshRNAを発現誘導させたところ、発現の低下とともに、融合能が抑制されることが明らかとなった。このことから、合胞体栄養膜細胞の融合に、syncytinが重要な役割を担っていることが示された。1)マイクロアレイ法によるスクリーニングTS cellに対して、giant cellで発現が10倍以上上昇していた遺伝子は120あった。120の遺伝子中、着床機能が不明なものを選び、胚盤胞での発現をRT-PCRにより確認したところ、14個の遺伝子が発現していた。これらの遺伝子のdsRNAを受精卵にインジェクションして発現を抑え、胚盤胞まで培養させた後、偽妊娠に移植し12.5dで解剖した。着床数の低下の有無を解析したところ、着床に影響のある遺伝子は得られなかった。しかしながら、Ras関連遺伝子を、新たに確立された胎盤特異的発現法(Nat.Biotechnol.2007)により発現させたところ、12.5dでの胚発生率が低下していたことから、胎盤発生に影響があるものと考え、現在解析中である。2)抗体作製によるスクリーニングマウスgiant cellに対するモノクローナル抗体を作製し、giant cell特異的に認識する抗体を10個得た。抗体が認識する抗原を同定するために、免疫沈降法や2次元ウェスタンブロッティングにより目的のスポットを切り出して、LC/MS/MSにて解析を行った。しかしながら、LC/MS/MSの解析ができた抗原は5種類で、結果としては、すでに機能が明らかとなっているCD9(1種類)、K19の複合体に含まれているもの(3種類)や、解糖系酵素の一種(1種類)であった。着床に直接結びつくような抗原は同定できておらず、今後は、新たなスクリーニング方法として、2D-DIGEを用いてTS Cellをコントロールとしてgiant cell特異的なタンパク質を網羅的に同定していく予定である。
ゲノムワイド疾患関連遺伝子同定のための遺伝統計学手法の開発

個々の患者の生存予後予測、即ち、遺伝子解析データ、先天的要因、診断時の臨床所見等から癌摘出手術を行ってから再発・死亡するまでの生存率曲線を予測することが、臨床の現場では有用となる。生存時間解析での打ち切り症例(フォローアップ途中に観察が打ち切られた症例のこと)を考慮に入れた多変量回帰モデルにより、個々の患者の無再発率や生存率を予測することが可能である。そこで、それぞれの疾患での独立で有意な予後規定因子から、ある経過年後の生存率(たとえば、5年生存率)を臨床の現場で推定する方法を検討した。前立腺癌患者の生存率予測を行った。対象症例は211例の根治的前立腺切除症例である。癌摘出後、癌が再発するまでの時間を評価尺度とした。収集されたデータ項目は、PSA値(他の論文を参照して5つのカテゴリーに分割)、Gleasonスコア、癌の深達度分類(T1/T2,T3a)、PPB、手術時年齢(50歳未満、50歳以上)、の5因子である。また、これら5因子を使い米国で開発されたUCSF-CAPRAスコア(0点から10点まで)が計算された。無再発率を予測するために、多変量生存時間解析手法のCoxの比例ハザードモデルを用いた。また、Harrellの一致係数(c-index)が予測精度を定量的に評価するために用いられた。比較のために、D'Amico分類やCAPRAのリスク分類も計算された。CAPRAスコアによる低リスク群、中間リスク群、高リスク群の人数は、それぞれ85例(40.3%)、106例(50.2%)、20例(9.5%)であった。D'Amicoのリスク分類の低リスク群、中間リスク群、高リスク群の人数は、それぞれ66例(31.3%)、89例(42.2%)、56例(26.5%)であった。cAPRAスコアとD'Amicoのリスク分類の一致係数(c-index)は、それぞれ0.755と0.713でありCAPRAスコアの方が予測精度が高いことが示唆された。これらに基づき、日本人にあった予後予測モデルの構築がなされた。研究計画書に記載された研究目的がほぼ達成され、その成果は英文論文誌に掲載された。すでに終了した研究である。本年度は、遺伝子解析データの統計解析手法のひとつであるBayesian Network Modelを、大腸癌データに用いることにより、転移に有意な影響を与えるリスク因子を特定する研究を行なった。対象は日本大腸癌研究会に所属する8病院の大腸癌患者111例(男性:62例、女性:49例)である。収集されたデータは、手術時年齢、性別などの患者属性データ以外に、深達度、癌浸潤様式、ぞく出、脈管侵襲、リンパ管侵襲など16個のリスク候補因子と結果因子である転移の有無を検討の対象とした。Bayesian Network Modelにより確率構造図を作成し、各リスク因子が転移の有無にどのように関連しているのかを示した。最終的な結果として、Bump、PLV、degreeおよびBVIの4因子が転移に重大な影響を与える因子であることがわかった。年齢と性別を除く他の因子は、転移に対して中程度の影響しか及ぼさないこともわかった。4つの有意なリスク因子のうち、Bumpありの症例はなしの症例に比べて転移確率を約3倍高める(0.111から0.306に上昇)ことが推測された。また、PLV陽性は陰性に比べて転移確率を0.111から0.259に高めることがすい差臆された。将来、大腸がん患者の手術所見、病理学的所見、遺伝子解析の結果等から肝転移などの確率予測を、個々の症例に対して行うことが可能となる。本研究の適用経験から、Bayesian Network Modelに入れる変数の個数や特性(連続データ、順序データ、離散データの別)と症例数の多い少ないが解析結果の信頼性にどのような影響を及ぼすのか、という新たな統計学上の研究課題が見出された。これらの課題の解決により、遺伝統計学の新たな手法開発につながると考える。本研究成果は、国際的なオンラインブックに掲載されることが決まっている。1.遺伝子解析データの統計学的解析手法のひとつであるBayesian Network Modelについて、昨年度に引き続き研究している。Bayesian Network Modelを大腸がん患者データに適用し、転移に有意な影響を与えるリスク因子を特定した。大腸がん患者の手術所見、病理学的所見、遺伝子解析の結果等から肝転移などの確率予測を、個々の症例に対して行うことが可能となる。今年度は、Bayesian Network Modelとともに遺伝統計学でよく用いられる多重ロジスティックモデルによる結果との優劣評価を行った。本研究成果は医療情報学の国際雑誌に投稿するための準備を行っている。2.遺伝子解析において、最近注目されているマイクロアレイによる遺伝子発現データの解析について、産婦人科の子宮頚がんの事例に基づき研究を進めている。研究目的として、遺伝子発現データから再発リスクの高い症例を選定するための遺伝子を検索する際の最適な研究デザインを見つけ出す、ことである。子宮頚がんの症例を検索群と検証群の2群に分けて、検索群で再発リスクに関与する遺伝子の検索を行い、検証群でその妥当性と信頼性を評価する。この際、必要症例数、それぞれの群に割り当てる症例数の割合、検索群における遺伝子抽出のプロセス等を統計学的な理論に基づき構築しつつある。

個々の患者の生存予後予測、即ち、遺伝子解析データ、先天的要因、診断時の臨床所見等から癌摘出手術を行ってから再発・死亡するまでの生存率曲線を予測することが、臨床の現場では有用となる。生存時間解析での打ち切り症例(フォローアップ途中に観察が打ち切られた症例のこと)を考慮に入れた多変量回帰モデルにより、個々の患者の無再発率や生存率を予測することが可能である。そこで、それぞれの疾患での独立で有意な予後規定因子から、ある経過年後の生存率(たとえば、5年生存率)を臨床の現場で推定する方法を検討した。前立腺癌患者の生存率予測を行った。対象症例は211例の根治的前立腺切除症例である。癌摘出後、癌が再発するまでの時間を評価尺度とした。収集されたデータ項目は、PSA値(他の論文を参照して5つのカテゴリーに分割)、Gleasonスコア、癌の深達度分類(T1/T2,T3a)、PPB、手術時年齢(50歳未満、50歳以上)、の5因子である。また、これら5因子を使い米国で開発されたUCSF-CAPRAスコア(0点から10点まで)が計算された。無再発率を予測するために、多変量生存時間解析手法のCoxの比例ハザードモデルを用いた。また、Harrellの一致係数(c-index)が予測精度を定量的に評価するために用いられた。比較のために、D'Amico分類やCAPRAのリスク分類も計算された。CAPRAスコアによる低リスク群、中間リスク群、高リスク群の人数は、それぞれ85例(40.3%)、106例(50.2%)、20例(9.5%)であった。D'Amicoのリスク分類の低リスク群、中間リスク群、高リスク群の人数は、それぞれ66例(31.3%)、89例(42.2%)、56例(26.5%)であった。cAPRAスコアとD'Amicoのリスク分類の一致係数(c-index)は、それぞれ0.755と0.713でありCAPRAスコアの方が予測精度が高いことが示唆された。これらに基づき、日本人にあった予後予測モデルの構築がなされた。研究計画書に記載された研究目的がほぼ達成され、その成果は英文論文誌に掲載された。すでに終了した研究である。
「アニムズム的思考」から科学的思考への穏やかな移行を促すカリキュラム試案の開発

1.研究目的:次期学習指導要領改訂に向け,子どもたちがグローバル化社会を生き抜くための「資質・能力」を重視した教育課程の編成,より主体的・協働的に学ぶ学びの在り方への転換,ならびに理科学習への意欲や意義の実感向上が喫緊の課題とされていることを本研究の背景とし,これらの解決をはかるべく,初等教育段階の子どもたちが,さらに主体的・協働的に科学的事象を探求していく場の設定と工夫の必要性に目を向けた。特に,身のまわりの事象に対し関心が高く,かつ,アニミズム的に思考する傾向がある低学年期の子どもだちの学びの在り方を工夫することにより,中学年期以降,より科学的事象に関心をもち,科学することのおもしろさや科学の有用性を実感していくことが可能となるのではないかと考え,「アニムズム的思考」から科学的思考への穏やかな移行を促すカリキュラム試案を開発することを,本研究の目的とした。2.研究方法:「アニミズム的思考」から科学的思考への穏やかな移行を促すカリキュラム試案の要素を, 6歳の子どもの姿(2015K大学附属小学校第1学年)と,これまでの取り組みから,研究仮説として設定した。研究仮説は,「1“なぜ"を大切にした個別追求型の単元構成・展開」,「2「たとえ」表現を用いた,科学概念の表現・共有」の2要素とした。この2要素を各単元の中に位置付け実践し,「子どもの姿」をもとに効果検証した。「科学的リテラシー」の獲得度合いを測る事前調査と事後調査も行った。3.研究成果:研究仮説として設定した2要素に対して,見られた効果について述べる。【要素1】第2学年(7歳)において,単元「ゴムパワーとあそぼう」を実施したところ,ゴムの特性に気付き,特性を活かしたあそびをつくりだそうとする姿が多く見られた。なかなか特性を活かしたあそびをつくりだせずにいた子どもも,目の前で生じる現象にこだわり,何度も見たり,触ったり,試したりしながら,自分なりの考えを深めていこうとしており,主体的に科学的事象を追求していこうとする姿が見られるようになった。【要素2】実施当初,低学年期の子どもたちにとって,物事を何かにたとえて説明することは,難しい様子であった。しかし,くり返し取り組んで行く中で,目の前の事象を「○○みたい」と表現し,友達の表現を受けて,「あ,本当だ!」と会話しながら,解決に向け,協働的に活動する姿が見られるようになった。概念の共有において有効であった。
文明移動としての「仏教」からみた東アジアの差異と共生の研究

インド亜大陸発祥の「仏教」がアジア世界に広く流伝したことと、そのアジア世界で多様な国家や社会や文化が形成されていくこととが、どのような関係にあったのかを調査研究した。とくに、国家の構築と社会の秩序化、造形表現や文字言語表現の展開、諸宗教や儀礼・習俗との複合、という三つの観点からアプローチした。そして、これらの観点が文明としての「仏教」の三要件に合致するものと考えた。同時に、このような「仏教」文明の観点からアジア世界を理解しなおすことの重要性と必要性を、様々な方法(シンポジウム、研究会、共同調査、論集刊行など)で検証し、また、広く訴えた。本「研究の目的」は、文明移動としての「仏教」が東アジア世界にいかなるグローバリゼーションとインターナショナリゼーションとの協調や矛盾をもたらしたのかを三つの局面から調査研究するところにある。その三つの局面とは、「世俗秩序」「造形・言語文字表現」「諸宗教・習俗儀礼」であり、これらは「研究実施計画」に準じて以下のようにすすめられた。第一は、2012年3月、百済地域(韓国公州・扶余・全州・益山)での仏教金石文・遺物・遺跡の共同調査を実施し、上記三つの局面から東アジアにおける「仏教」文明の共生と差異について検討した。第二は、「世俗秩序」の局面から日韓の文字資料(写経践文・金石文・木簡)を随時実見し(韓国国立中央博物館など)、中国石刻資料の調査(2012年3月、天竜山など)にも及んだ。「造形・言語文字表現」の局面からは、四川省夾江千仏岩摩崖造像研究の検討会を開き(2012年3月)、中国に渡った日本の「仏教」関連資料調査などもおこなった(2012年1月以降、中国国家科学院図書館など)。「諸宗教・習俗儀礼」の局面からは、日本の密教・陰陽道に影響を与えた中国の「日書」や道教の研究をすすめ(2011年以降)、台湾でのフィールド調査もおこなった。さらに、中国四川省におけるり「仏教」移動ルートの踏査を試みた(以上、2012年3月)。第三は、2011年12月、国際シンポジウム「『仏教』文明の東方移動-その受容と抵抗-」(フランス・中国・韓国・日本の各研究者報告、早稲田大学大隈小講堂)を開催し、本研究の課題を共有した。第四は、論集『「仏教」文明の受容と君主権の構築-東アジアのなかの日本-』(勉誠出版)の本年度末刊行をめざした。第五は、定例研究集会を継続した(本年度通算7回)。第六は、次年度に向けて、参考資料・文献の蒐集、器具の整備などをおこなった。第一に、本研究の日常的な基盤となる定例研究集会を7回おこなった。第二に、特別研究集会を2回開催した。1回目は、古井龍介・馬場紀寿両氏(東京大東文研)を招いて、インドおよび東南アジアの仏教文明に関する最新の研究状況を学び、意見交換をおこなった。仏教文明の本源と東アジア仏教との差異を知ることができた。2回目は、石見清裕氏(早稲田大)を招いて、中国太原地域の地政学的位置を学んだ。これは、前年度における本研究での太原石窟(仏教・道教)調査を補うものである。第三に、シンポジウムを早稲田大学で2回開催した。1回目は、9月28日の「対敵と仏法」である。昨年度の課題を継承して、これまで見失われがちであった仏教の実践的側面、つまり造形物にみられる対敵、調伏、防御の役割を追求した。大島幸代(龍谷大)、三上喜孝(山形大)、長坂一郎(東北芸工大)、黒田智(金沢大)、長岡龍作(東北大)各氏の報告を受けて討論がおこなわれた。2回目は、12月21日の「言語・文字の転回からみた『仏教』流伝」である。翻訳を含む言語文字表現の変革と仏教の関係を問題視した。朱慶之(香港教育学院)、吉田豊(京都大)、阿部龍一(ハーバード大)、ジョン・ウイットマン(国立国語研究所)、河野貴美子(早稲田大)各氏による報告および問題提起がなされた。第四に、研究分担者城倉正祥氏を中心にして、2014年2月末から3週間以上、千葉県龍角寺跡の調査をおこなった。かつて多くの文字瓦を出土した本寺院跡は、仏教文明の列島移動において注目されるところであるが、本格的な調査は進んでいなかった。このたびは、最新技術のレーダー探査などを駆使し、廻廊を含む伽藍配置の歴史的変遷などを確認した。また、散布する古代瓦を慎重に回収し、次調査に備えた。第一は、研究メンバーによる定例研究会を7回、実施した。

この定例研究会は、地味なものであるが、本研究の日常的な基盤をなすものである。第二は、2012年7月14日、日韓合同シンポジウム「百済弥勒寺西塔の舎利奉安からみた『仏教』文明の東方移動」を早稲田大学で開催した。近年の百済故地寺院趾発掘調査のうち、弥勒寺の場合は最新の成果であり、舎利安置の金製板銘文も発見された。韓国の発掘関係者や研究者を招聘し、日本側の研究者との合同研究発表をおこなった。そして、このシンポジウムを基盤にして、2013年3月、本科研費による新川登亀男編『「仏教」文明の東方移動ー百済弥勒寺西塔の舎利荘厳ー』(汲古書院)を刊行した。執筆者は、ペ・ビョンソン、チェ・ヨンシク、ジュ・キョンミ、大橋一章、瀬間正之、稲田奈津子、新川登亀男の各氏。第三は、2012年9月11日16日、中国西安・太原において仏教・道教遺跡遺物の調査をおこなった。太原では、天龍山・龍山石窟の調査と中国側との学術討論会が予定されていたが、日中関係悪化により、公的な開催は中止された。第四は、2012年9月29日、シンポジウム「畿内における飛鳥・白鳳寺院とその源流」を早稲田大学で開催した。若手研究者による当該寺院跡発掘の成果と課題を報告し合ったものである。第五は、2012年12月22日、国際シンポジウム「『仏教』は、なぜ東漸したのか」を早稲田大学で開催した。困難な課題への挑戦である。第六は、2013年1月26日、シンポジウム「中国占い文化の日本的展開」を早稲田大学で開催し、仏教と諸宗教・習俗儀礼との融合現象に注目した。以上のほか、2012年10月17日には、イギリスの研究者を招聘して、仏教の身体論に関する講演が早稲田大学で開かれた。さらに、大学院生による日本の関連資料蒐集と整理がすすめられた。本研究は、現代のグローバリゼーションに匹敵する地球規模の流伝を惹起したインド亜大陸発祥の「仏教」を「世間(世俗)秩序との交差」「造形と諸表現」「宗教としての複合化」の三要件からなる「仏教文明」としてとらえ、その文明が東アジア諸地域にどのような国家・社会・思考・慣習を誘発したのか。いかなる「仏教」を再生し続けたのか、を調査研究する目的をもつ。当該年度については、以下のとおりである。第一は、本研究の基盤をなす定例研究会を継続した。第二は、特別研究集会「ヴェトナム出土の隋仁寿舎利塔銘」(2014年7月18日、早稲田大学)を開催した。ヴェトナム北部で近年発見された隋の舎利塔銘が紹介され、他の科研チームの参加も得て、諸分野からの検討がなされた。第三は、日韓中共同国際シンポジウム「仏教文明の拡大と転回」(2014年10月24・25日、早稲田大学)を開催した。三国における「仏教文明」研究の成果を集積したが、学術研究の背景にかかわる差異も確認された。第四は、千葉県の龍角寺発掘調査を、1か月間、継続した。古代以来の通時的な地域寺院跡の変容が明らかになりつつあり、北側・西側遺構、金箔のセン仏、墨書土器の新発見がみられた。当該年度は、本研究の最終年度にあたるので、これまでの成果をまとめた論集2冊を公刊した。『仏教文明と世俗秩序』『仏教文明の転回と表現』(ともに勉誠出版、2015年3月、前者総頁602、後者総頁655)である。この2冊は、研究協力者を含む38名の論文(図表・写真など付帯)からなるが、8世紀初めに長屋王が発願して書写させた大般若経(和銅経600巻,神亀経600巻)の伝来悉皆調査の成果も掲載された。この悉皆調査は初の試みであり、多くの大学院生の協力を得て実現したものである。このような論集2冊が斯界および社会に広く貢献できれば幸いである。26年度が最終年度であるため、記入しない。
環状最小ペプチド酵素の創製

本研究計画は、短鎖ペプチドを大環状化することで構造的に束縛(Constrained)した空間を持つペプチドライブラリーを翻訳合成し、触媒機能をもつペプチド分子を探索することに挑む。具体的には、(1)3次元空間を生み出す大環状ペプチド(1環-3環)ライブラリーの構築、(2)触媒活性種のセレクション、(3)個々の大環状ペプチド触媒の反応機構および構造の解明を達成目標に上げた。平成30年度は平成28年度で同定したアシルトランスフェラーゼ活性種の検討(3)中心に研究を進めた。また、アシル基は一旦内在のシスティン残基にアシル化され、その後近傍のセリン残基に転移することがわかった。その際、その並び方配列(その具体的配列については特許化を考え非公表)が重要で、逆配列では反応が著しく遅いことがわかった。また、本研究でアシル転移の動的挙動も詳細に検討した。この反応を用いたワンポットで主鎖にエステル結合を含み環状化した環状デプシペプチドの翻訳合成する技術の開発に成功した。これは我々の知る限り翻訳合成で達成した初めての例であり、インパクトの高い研究と自負している。また、この位置特異的なエステル化反応を応用したタンパク質への高効率ラベル化反応(蛍光化、ビオチン化、あるいは薬剤共役化)の開発を進めており、良好な結果が出ている。この短鎖ペプチドアシル化触媒のセレクションから始まった研究は、単に触媒機能をもつ短鎖配列の同定だけでなく、バイオテクノロジーとしての応用にも展開され、本研究の修了後もさらならる技術的な発展が期待できる。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究計画は、短鎖ペプチドを大環状化することで構造的に束縛(constrained)した空間をもつペプチドライブラリーを翻訳合成し、様々な触媒機能をもつペプチド分子を探索することに挑む。究極的には、大環状ペプチドの人工進化系を用いた「酵素起源」の探索とも言える基礎研究提案でもある。具体的には、(1)3次元空間を生み出す大環状ペプチド(1環3環)ライブラリーの構築、(2)触媒活性種のセレクション、(3)個々の大環状ペプチド触媒の反応機構及び構造の解明を達成目標に掲げた。また(2)については、(2a)レドックス触媒、(2b)キナーゼ、(2c)アシルトランスフェラーゼ、(2d)糖転移触媒、を具体的な活性種探索の候補に挙げた。本年度は、(1)の目標を完全に達成した(論文投稿中)。本研究では、システィン残基が2位にあっても、3位以下の位置に現れたシスティン残基がN末端のクロロアセチル基と選択的に環状化する知見を得ていた。そこで、2位のシスティン残基の下流に3つのシスティン残基を配置し、1,3,5-トリス(ブロモメチル)ベンゼンの投入による2位システィン残基とm位ならびにo位のシスティン残基のトリプルチオエーテル架橋を行うことで、3環構造をもつ複雑なペプチドの合成に成功した。さらに、2位のシスティン残基の下流にランダム配列のペプチド鎖を入れることで、そのライブラリー化にも成功した。一方、(2a)のセレクションによる1環ペプチド構造をもつ活性種の濃縮にも成功した。ただし、(2a)については、その濃縮された活性種が実際に目的の反応を促進している触媒機能をもつかどうかの確認を進めている最中であり、結論は平成27年度に持ち越している。また、(2b)についてもキナーゼ活性の探索を開始した。本研究計画は、短鎖ペプチドを大環状化することで構造的に束縛(Constrained)した空間をもつペプチドライブライーを翻訳合成し、様々な触媒機能をもつペプチド分子を探索することに挑む。具体的には、(1)3次元空間を生み出す大環状ペプチド(1環3環)ライブラリーの構築、(2)触媒活性種のセレクション、(3)個々の大環状ペプチド触媒の反応機構および構造の解明を達成目標に揚げた。平成26年度に達成した(1)の合成手法の成果をもとに、2環および3環の環状ペプチドライブラリーの合成し、(2)へ展開することに挑んだ。平成26年度で試みた(2a)レドックス触媒のセレクションでは、低いながらも活性種の濃縮に成功したようにみえた。しかし、平成27年度前半の検討で、その活性種が目的のペプチド由来の活性ではないと判明した。その理由として、1環のペプチドでは十分に強固な3次元構造をもったペプチドライブラリーが構築できず、高機能な活性種の濃縮がかからなかったとの仮説を立てた。そこで、2環および3環の環状ペプチドライブラリーを構築し、(2a)、(2c)および(2c)の活性種探索を並行して進めることにした。また、新たなライブラリーとして、DMAP類似体を側鎖に導入したアミノ酸を考案し、そのアミノ酸のペプチド鎖への取り込みを検討した。その結果、DMAP類似体側鎖をもつ大環状ペプチドが翻訳合成できることがわかった。そこでこのアミノ酸を含む、1環および2環の大環状ペプチドライブラリーを構築した。現在、これらの新規ペプチドライブラリーを用いた(2a)、(2c)および(2c)の活性種探索を進めている最中である。

平成26年度で濃縮できたと考えていたレドックス触媒環状ペプチドが触媒機能をもっていなかったことから、平成27年度では、2環および3環の環状ペプチドライブラリーの構築に精力的に進めた。これはもともとの計画にも入っていたことで、計画の変更ではないが、軸足をより複雑な環状ペプチドライブラリーに移すことになった。また、当初の計画にはなかったDMAP類似体を側鎖に導入したアミノ酸の合成、およびペプチド鎖への翻訳導入効率の検討を進めたことにより、追加的な実験を進めた。したがって、全体としては概ね順調に進展しているとした。本研究計画は、短鎖ペプチドを大環状化することで構造的に束縛(Constrained)した空間を持つペプチドライブラリーを翻訳合成し、触媒機能をもつペプチド分子を探索することに挑む。具体的には、(1)3次元空間を生み出す大環状ペプチド(1環-3環)ライブラリーの構築、(2)触媒活性種のセレクション、(3)個々の大環状ペプチド触媒の反応機構および構造の解明を達成目標に上げた。平成30年度は平成28年度で同定したアシルトランスフェラーゼ活性種の検討(3)中心に研究を進めた。また、アシル基は一旦内在のシスティン残基にアシル化され、その後近傍のセリン残基に転移することがわかった。その際、その並び方配列(その具体的配列については特許化を考え非公表)が重要で、逆配列では反応が著しく遅いことがわかった。また、本研究でアシル転移の動的挙動も詳細に検討した。この反応を用いたワンポットで主鎖にエステル結合を含み環状化した環状デプシペプチドの翻訳合成する技術の開発に成功した。これは我々の知る限り翻訳合成で達成した初めての例であり、インパクトの高い研究と自負している。また、この位置特異的なエステル化反応を応用したタンパク質への高効率ラベル化反応(蛍光化、ビオチン化、あるいは薬剤共役化)の開発を進めており、良好な結果が出ている。この短鎖ペプチドアシル化触媒のセレクションから始まった研究は、単に触媒機能をもつ短鎖配列の同定だけでなく、バイオテクノロジーとしての応用にも展開され、本研究の修了後もさらならる技術的な発展が期待できる。実験開始を優先した(1)および(2a)については順調に進んでおり、また後続して開始した(2b)についても順調である。したがって、現状に大きな計画変更はない。平成28年度では(2a)(2b)(2c)の研究に特化し、活性種の濃縮を試みる。もし、それが確認できた時点で、より複雑な活性種探索系である(2d)に着手する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度では(2b)の継続的研究、および(2c)と(2d)の研究を開始する。
保育職について若年労働市場における離職行動の要因

○研究目的:保育士ニーズが増大しているなか、保育士を量的に増やすだけでなく、平均勤続年数を引き上げ離職による保育士減少をくいとめることも、保育士確保のための重要な取り組みとなってきている。保育士の資格を有する者が保育士職に就職を希望しない理由は、すでに平成23年度厚生労働省委託事業として全国的な調査が発表されているが、今回の調査では新規学卒就職者の離職行動に焦点をあて、現状を把握し、要因を分析することを目的とする。○研究方法:今回の研究では、新規学卒の保育士が、卒業後早い時期に離職行動を起こす要因について、地域因子を「福岡市」と限定し、初めて保育士として働いた保育園の職場環境と離職の関係を探った。平成27年平成27年11月1日現在の状況について、調査票を配布し、調査主旨に賛同した者から回答を得た。調査票は502件配付し、回答は140件あった。そのうち有効回答は136件だった。この調査票から、「早期離職者の退職理由」、「退職した者と退職しなかったものの職場環境の違い」について、研究を行った。○研究成果:新規学卒者の5年未満の離職理由の上位は「園内の人間関係がよくなかった」「労働時間・休日・休暇の条件がよくなかった」「健康上(体力・メンタル)」の3項目であり、全年齢を対象とした同様の調査と異なり「賃金の条件が悪かったため」は6番目の理由であった。また、離職行動をおこす者とそうでない者の違いは、園長や主任といった「立場が上の者との人間関係」、「労働時間・休日・休暇などの労働条件」が要因となっていることを明らかにした。一方、賃金については、離職行動をおこす者もそうでない者も感じ方に差がないことがわかった。ただし、自由記述欄には、仕事離職行動の有無にかかわらず、仕事の内容にはやりがいを感じる反面、仕事の量、質に比べて賃金が低いことが記述されていた。若年労働市場においては、流動性は不可避であるが、就業を継続に導くためには、保育士と保育園のマッチングの重要性が浮かび上がってきた。
ルイス酵素欠損の担癌患者におけるCA19-9上昇のメカニズム解明に関する研究

腫瘍マーカーとして用いられているCA19-9は、I型糖鎖抗原に属するシアリルLeaである。日本人の約10%はルイスA (Lea)糖鎖を合成するフコシル化酵素(ルイス酵素、FUT3, Le)の欠損者(Le陰性者)であり、ルイス糖鎖もシアリルルイスA糖鎖も合成できない。このため、ルイス式血液型Le (a-b-)型の患者ではCA19-9は感度以下(ほとんどゼロ)であることが教科書にも記載されている。しかしながら、過去にCA19-9がほぼゼロであったにもかかわらず、発癌によって10U/mlを越えて上昇してきた症例を経験し、原因を追求した結果、分泌酵素(FUT2, Se)遺伝子の共通した多型によることが判明した(Hamada et al. 2012)。本研究ではこの特徴が普遍的かどうかを検討するとともに、CA19-9の上昇の度合いという表現型とルイス酵素・分泌酵素の遺伝型との関係を調べた。ルイス酵素・分泌酵素がいずれも変異型のホモ接合体の群、ルイス酵素はホモ・分泌酵素はヘテロか野生型の群はいずれも元来CA19-9がほぼゼロであったが、後者は他の腫瘍マーカーが上昇してもCA19-9は上昇せず、一方前者はCA19-9がわずかに上昇するに至った。この原因は、遺伝学的には分泌酵素活性を有するかどうかということと、生物学的には癌がいかに増大していたかに因ると推察された。一方、CEAが極端な上昇を示したにもかかわらず、DUPAN-2もCA19-9も上昇が軽微な症例を見出したので遺伝子型を検索したところ、分泌酵素は野生型で、ルイス酵素がヘテロ接合体であったため、癌の増大にも関わらずCA19-9もDUPAN-2もその合成が進まなかったと推測された。以上から、癌化におけるCA19-9の上昇は、分泌型酵素活性が大きな役割を示していると考えられた。
RB活性化能を有するがん予防成分を応用した動脈硬化予防戦略

近年の日本人の死因は「がん」と「循環器疾患」が半数を超えていることが報告されている。一方、がん・循環器疾患の発症には、高血圧や糖尿病、肥満などが関与することが明らかになってきていることから、共通した標的分子の影響が存在する可能性が十分に考えられる。数々の既報から、その候補として研究代表者らは『RB』に着目した。本課題では、「RB活性化」食品成分が、がん細胞のみならず、血管平滑筋細胞、大動脈内皮細胞に対してもRBを活性化し、動物モデルにおいても動脈硬化予防効果が認められるか否か検証する。「RB活性化」による動脈硬化予防の実践の可能性が示唆されるものと期待される。
大腸がん先進部における脈管侵襲に及ぼす微小環境の分子病理機構

ヒト培養線維芽細胞および臍帯静脈内皮細胞にMMP7およびTGF-beta1を添加したところ、線維芽細胞、内皮細胞に共に変化がみられた。特に内皮細胞では、MMP7添加により内皮細胞の結合性低下が観察され、MMP7産生癌細胞周囲では癌細胞が脈管内に侵入しやすい可能性が示唆された。進行大腸癌のうち、早期に血行性転移をきたした症例についてMMP7と関連するマクロファージのマーカーであるMSR1の免疫染色を施行したところ、浸潤先進部、つまりMMP7の発現の高い部分において、MSR1が様々な様式で浸潤しており、MMP7陽性細胞が周囲間質の特にマクロファージと関連して脈管侵襲をきたすことが示唆された。1、ヒト大腸がんの手術検体20症例より浸潤部を切り出し、凍結ブロックを作製した。Hematoxylin-Eosin染色、MMP7(Matrix metalloproteinase 7)およびDesminの免疫組織化学染色を施行した。形態学的観察に加え、がん細胞におけるMMP7の発現分布を観察し、MMP7陽性がん細胞周囲の間質およびMMP7陰性がん細胞周囲の間質をそれぞれ選出した。Laser Microdissection法により、目的の組織のみを回収しRNAを抽出したが、定量的RT-PCR解析が可能となるRNA量を回収することが困難であった。3、MMP7の内皮細胞への影響を観察するため、ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)にMMP7およびTGF-beta 1を添加し、48時間後、96時間後の形態学的変化および蛋白発現の差を検討した。形態学的にMMP7、TGF-beta 1添加後は間隙が目立ち、内皮細胞の結合性の減弱が示唆された。Western Blotting法において、TGF-beta 1添加によりclaudin-5の発現低下が示された。今後さらに蛋白発現および内皮細胞の機能的変化について検討する予定である。平成26年5月22日より平成27年3月31日まで産前産後休暇および育児休業を取得しており、平成26年度の研究は停止していた。期間を1年延長する手続きをし、平成27年度・28年度で研究を継続・完結させる予定である。過去の研究代表者の病理学的解析により、大腸がんの浸潤先進部におけるMMP7発現の程度が、血行性転移の代表である肝転移の有無とリンパ節転移の有無に強く関わることを見出していることから、大腸がん細胞の産生するMMP7が血管内皮細胞にどのように影響するのかをin vitroで観察することを目的として、大腸がん細胞株5株においてMMP7発現程度を確認した。具体的には、DLD-1, Colo320DM, Colo201, LoVo, WiDrを購入し、RIPA Bufferにてタンパクを抽出した。MMP7の発現をWestern blotting法にて部分的に確認できたが、バンドが明確に判断できず、現在Western Blotting法の条件の検討中である。ヒト内皮細胞株であるHUVECにMMP7およびTGF-betaを添加し、48時間後、96時間後の細胞を回収しRIPA Bufferにてタンパクを抽出した。形態的に内皮細胞の結合性の低下が示唆されたことから、Western Blotting法にてVE-cadherinの発現変化を確認中である。東邦大学医療センター大森病院の大腸がん症例から、術前治療の施行されていない結腸・直腸切除症例の選出とその臨床データ(再発の有無、治療経過、予後など)の収集中である。血管と癌の関連を整理するため、乳房Paget病における血管増生とVEGFA, bFGFの発現を免疫組織化学的に観察し、血管の数の増加および血管の拡張と、腫瘍細胞におけるVEGFA, bFGFの発現が確認された。この様な現象が大腸がんの浸潤部でも起きている可能性もあり、今後大腸がんで検討する予定である。産休・育休から復帰してまもなくは実験ができる状況ではなかった。細胞株のコンタミネーションが発覚し購入し直したこともあり、実験が遅れてしまった。大腸癌の血管と腫瘍の関係を検索するために、まず非浸潤状態の癌の血管新生、リンパ管新生における血管新生因子とMMP7の発現を確認した。臨床的に腫瘍部に著明な血流増加がみとめられると知られているPaget病にて検討を行った。Paget病14例、コントロール14例を対象とし、MMP7、VEGF、bFGF、COX-2の腫瘍における発現および内皮細胞マーカーによる脈管の分布を免疫組織化学染色を用いて比較検討した。腫瘍細胞は全例でbFGFの発現がみとめられ、血管数の増加、血管内腔面積割合(血流に相当すると考えられる単位面積当たりの血管内腔の面積総和)と有意な相関をみとめた。VEGFも腫瘍細胞に発現をみとめたが、明らかな相関はなかった。MMP7、COX-2は腫瘍細胞に少数発現するのみであった。以上より、進行大腸癌においても同様の手法で検討を試みた。早期に肝臓、肺に転移した症例15例についてMMP7、bFGFの免疫染色を施行した。bFGFは腫瘍に広く陽性像をみとめ、比較的表面に近い腫瘍の方が発現の高い症例が多かったが、表層から深部まで一様に強陽性の腫瘍も存在した。脈管侵襲部、浸潤先進部の腫瘍細胞に発現が高いということはなかった。MMP7と血管新生の関係を調べるうえで文献的に検索に挙がったSTAT3およびマクロファージスカベンジャーレセプターであるMSR1を免疫組織化学的に観察した。STAT3に関しては、数種類の抗体を購入し免疫組織

化学染色を試みたが、有意な染色と判定される像は得られなかった。MSR1は腫瘍胞巣周囲に多く陽性細胞をみとめた。発現分布として、浸潤先進部に陽性細胞が多く分布するタイプ、腫瘍の中にも陽性細胞が入り仕込み表層から浸潤先進部まで一様に分布するタイプ、拡張した腺管の破綻部周囲の肉芽形成領域に集簇するタイプ、全体として発現細胞が少ないタイプと4タイプに分かれた。ヒト培養線維芽細胞および臍帯静脈内皮細胞にMMP7およびTGF-beta1を添加したところ、線維芽細胞、内皮細胞に共に変化がみられた。特に内皮細胞では、MMP7添加により内皮細胞の結合性低下が観察され、MMP7産生癌細胞周囲では癌細胞が脈管内に侵入しやすい可能性が示唆された。進行大腸癌のうち、早期に血行性転移をきたした症例についてMMP7と関連するマクロファージのマーカーであるMSR1の免疫染色を施行したところ、浸潤先進部、つまりMMP7の発現の高い部分において、MSR1が様々な様式で浸潤しており、MMP7陽性細胞が周囲間質の特にマクロファージと関連して脈管侵襲をきたすことが示唆された。平成26年5月22日より平成27年3月31日まで産前産後休暇および育児休業を取得しており、平成26年度の研究は停止していた。期間を1年延長する手続きをし、平成27年度・28年度で研究を継続・完結させる予定である。細胞株はそろっており、細胞を新たにおこしタンパクをとりなおしてWestern Blottin法をやり直す。大腸がん切除検体の選択については、臨床医と相談し、臨床データの整理が円滑に進むようにする。準備が終了している乳房Paget病における腫瘍のVEGFA, bFGFの発現の程度と血管の増生・拡張の病態を確認し、同様の変化が大腸がんの浸潤先進部でも起こっているのか、その病態が脈管侵襲の亢進に関わるのかを解析する。それらの結果をin vitroで再現できるのか、他の分子の動きがあるかどうかを確認し、再び大腸がん切片の検討に反映させる。人体病理平成25年度に行ったLMDによるRNAの採取量が十分採取できず、RNAによる解析は困難であった。そのためin vitroでの解析を行うことにする。大腸癌細胞株、血管内皮細胞株、線維芽細胞株を用い、それぞれの相互関係およびMMP7添加による変化を観察する。これらさまざまな環境下で得られた細胞よりmRNAおよび蛋白を抽出し、Real-Time PCRおよびWestern blotting法を用いて分子メカニズムを解析する。大腸癌浸潤先進部におけるMMP7を中心としたがん間質相互作用、血管侵襲との関係が示唆される分子をもちいて、それを標的とする抗体を用いた免疫組織化学染色を行うことで、実際の病理組織つまり患者から得た腫瘍内で実際に起こっている病態を明らかにし、転移の有無や予後などの臨床データとの関係を統計学的に解析する。Laser Microdissection法によるRNAの回収に想定以上の時間がかかった。さらにRNAの定量による候補分子の選出が不可能とわかったことで、培養細胞による実験系への変更を余儀なくされた。実験系を変更をしたことで、準備に時間がかかった。産休・育休復帰後まもなくは、実験ができる状況ではなく、実験が遅れてしまった。