hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
鋭敏な聴覚の源であるモーター蛋白質プレスチンの精製とそれを用いた構造と機能の解明

Prestinは哺乳類内耳外有毛細胞の細胞膜に高密度に発現している膜タンパク質である.細胞膜電位が変化すると,prestinは細胞内の陰イオンを輸送し,それに伴い構造変化すると考えられている.そして,その構造変化は外有毛細胞の伸縮運動を引き起こすと推察されている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.そこで本研究では,まず,prestin遺伝子を導入したChinese hamster ovary(CHO)細胞と遺伝子を導入していないCHO細胞の細胞膜を,それぞれ原子間力顕微鏡により観察し,prestinの直径が8-12nmであることを明らかにした.次に,prestin遺伝子を導入したCHO細胞膜のprestinを,量子ドット(Qdot)で標識し,原子間力顕微鏡で観察した.その結果,Qdot周辺に4つのピークを持ち中心部が窪んだ形状の構造物が観察され,prestinは4量体であることが推察された.最後にprestinの遺伝子を導入した細胞からprestin分子を精製した.そして,精製したprestinの活性を,等温滴定型カロリメータを用いて評価した.その結果,精製prestinは細胞中のprestinと同様に,塩化物イオンと相互作用すること,すなわち活性を有していることが示された.さらに,prestinの拮抗剤であると考えられているサリチル酸ナトリウムの存在下で同様の計測を行い,サリチル酸ナトリウムが濃度依存的にprestinと塩化物イオンとの相互作用を抑制することを明らかにした.Prestinは哺乳類内耳外有毛細胞の細胞膜に高密度に発現している膜タンパク質である.細胞膜電位が変化すると,prestinは細胞内の陰イオンを輸送し,それに伴い構造変化すると考えられている.そして,その構造変化は外有毛細胞の伸縮運動を引き起こすと推察されている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.そこで本研究では,まず,prestin遺伝子を導入したChinese hamster ovary(CHO)細胞と遺伝子を導入していないCHO細胞の細胞膜を,それぞれ原子間力顕微鏡により観察し,prestinの直径が8-12nmであることを明らかにした.次に,prestin遺伝子を導入したCHO細胞膜のprestinを,量子ドット(Qdot)で標識し,原子間力顕微鏡で観察した.その結果,Qdot周辺に4つのピークを持ち中心部が窪んだ形状の構造物が観察され,prestinは4量体であることが推察された.最後にprestinの遺伝子を導入した細胞からprestin分子を精製した.そして,精製したprestinの活性を,等温滴定型カロリメータを用いて評価した.その結果,精製prestinは細胞中のprestinと同様に,塩化物イオンと相互作用すること,すなわち活性を有していることが示された.さらに,prestinの拮抗剤であると考えられているサリチル酸ナトリウムの存在下で同様の計測を行い,サリチル酸ナトリウムが濃度依存的にprestinと塩化物イオンとの相互作用を抑制することを明らかにした.Prestinは哺乳類内耳外有毛細胞の細胞膜に高密度に発現している膜タンパク質である.細胞膜電位が変化すると,prestinは細胞内の陰イオンを輸送し,それに伴い構造変化すると考えられている.そして,その構造変化は外有毛細胞の伸縮運動を引き起こすと推察されている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.そこで本研究では,これまでに構築したFLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞からprestinを抽出精製し,精製prestinの活性を等温滴定型カロリメータを用いて評価した.まず,prestinを細胞から抽出するため,12種類の界面活性剤から最適なものを限界ミセル濃度及び細胞の可溶化率に基づき選択した.抽出したprestinを,FLAGタグを利用しアフィニティークロマトグラフィーで精製した.Prestinの精製度はSDS-PAGEで評価し,以降の実験に十分な純度まで精製できていることを確認した.次に,精製prestinが活性を有しているか,精製prestinと塩化物イオンとの相互作用を等温滴定型カロリメトリーにより評価した.その結果,精製prestinは塩化物イオンと相互作用し,活性を有していることが示された.今後,精製prestinを脂質二重層の平面膜にならびにリポソームに再構成し,精製prestinの形状を原子間力顕微鏡で,電気特性をパッチクランプ法で明らかにすることを目指す.Prestinは哺乳類内耳外有毛細胞の細胞膜に高密度に発現している膜タンパク質である.細胞膜電位が変化すると,prestinは細胞内の陰イオンを輸送し,それに伴い構造変化すると考えられている.そして,その構造変化は外有毛細胞の伸縮運動を引き起こすと推察されている.Prestinについてその同定以来様々な研究が行われてきたが,prestinの形状や構造変化メカニズムは解明されていない.本研究では,まず,これまでに構築したFLAGタグ融合型prestinを安定発現する細胞からprestinを界面活性剤で可溶化し,抗FLAG抗体アフィニティークロマトグラフィーで精製した.精製したサンプルをSDS-PAGEで評価し,以降の実験に十分な純度まで精製できていることを確認した.次に精製prestinの活性を等温滴定型カロリメータを用いて評価した.その結果,精製prestinは細胞中のprestinと同様に,塩化物イオンと相互作用すること,すなわち活性を有していることが示された.さらに,prestinの拮抗剤であると考えられているサリチル酸ナトリウムの存在下で同様の計測を行い,サリチル酸ナトリウムが濃度依存的にprestinと塩化物イオンとの相互作用を抑制することを明らかにした.

また,バキュロウィルス/昆虫細胞系を用いたprestinの発現系の構築を試みた.その結果,活性のある状態でprestinを発現する系の構築にも成功した.
力学特性計測によるニューロン核移動機構の解明

新生ニューロンの移動は脳皮質形成に必須の過程であるが、数多く同定されている細胞骨格制御因子が生む力と運動の関係は明らかでない。in vitro再構築系を用いた高速・高解像生細胞イメージング系により、ニューロンの微細形態の時間変化を細胞骨格ダイナミクスと同時に非侵襲で観察した結果、移動ニューロンの核が頻繁に変形と回転運動することを見出した。変形と回転は微小管モーターダイニンとキネシンが核膜分子LINC複合体と結合し、局所で牽引力を発生することにより誘導されることが明らかとなった。本研究は、皮質形成過程で細胞移動するニューロンの核を粘弾性流体として捉え、高解像生細胞イメージングと力学計測技術を用いて核移動時に発生する力ベクトルを算出し、力の本体となる細胞骨格を同定することで、ニューロン核移動の分子・力学機構の解明を目指している。平成27年度は、顆粒細胞移動のin vitro再構築系の高解像ライブ画像から、移動する核の動的形態ゆらぎの特徴量を抽出する点軌道解析法を確立し、輪郭の曲率変化や回転軸・角速度等の特徴量を画像解析により抽出することに成功した。解析の結果、核回転が核移動と同方向に起こり、共通して微小管モーター分子で制御されることを明らかにした。また牽引力顕微鏡解析(traction force microscopy)を確立し、移動する顆粒細胞移動が周辺基質にもたらす応力場を解析し、応力分布の時間変化と核移動の相関を検証した。蛍光ビーズを混濁した薄層ゲル板をラミニン塗布し、その上で顆粒細胞を移動させてビーズの動きを画像定量解析し、力のベクトルを算出する手法を立ち上げたが、ビーズの分布が不均一になり、焦点外のビーズのノイズが問題となるなど定量解析に支障があった。条件を最適化し、Particle Image Velocimetry(PIV)法でビーズの変位から力ベクトルを算出する手法を確立した。この方法を用いて予備解析を行った結果、核移動と同期して先導突起に牽引力が発生することを見出した。これらの成果をSociety for Neuroscienceなど複数の国際学会で発表した。平成27年度は核の動的揺らぎの画像解析を核回転に絞り、点軌道解析法を確立して回転を起こす力の絞り込みに成功した。現在論文発表のための最終データを収集しており、年度内の発表を目指している。牽引力顕微鏡解析は定量解析を障害する予期しなかった問題があったが、ビーズのコーティングなどの工夫により均一に散布する方法を確立し、次年度に向け応力分布解析の準備が整った。研究の進捗は概ね順調であり、期待通りの成果があったと言える。本研究は、皮質形成過程で細胞移動するニューロンの核を粘弾性流体として捉え、高解像生細胞イメージングと力学計測技術を用いて核移動時に発生する力ベクトルを算出し、力の本体となる細胞骨格を同定することで、ニューロン核移動の分子・力学機構の解明を目指してきた。昨年度までの研究で、スピニングディスク式共焦点顕微鏡を用いた高速高解像ライブ観察により、ニューロン移動に伴う動的な核回転運動を見出し、これが核移動を司る細胞骨格の力で起こることを示唆する結果を得ていた。本年度は薬理実験と分子阻害実験を組み合わせ、核回転にはアクチン骨格は関与せず、微小管およびモーター分子ダイニンとキネシンが不可欠であることを証明した。これまで分化したニューロン移動にダイニンが必要であることは知られていたが、キネシンの関与は示されていなかった。そこで移動期の小脳顆粒細胞に発現するkinesin-1の阻害により核移動・回転が抑制され、生体でもニューロン移動が顕著に遅延することを証明し、ニューロン移動にキネシンが関与することを初めて明らかにした。以上の研究はPNAS誌に投稿し、現在改訂のための実験を行っている。Particle Image Velocimetry (PIV)法でビーズの変位から力ベクトルを算出する方法を用い、核移動と同期して先導突起に牽引力が発生することを見出した。これらの成果をまとめた論文を準備中である。核回転の分子・力学機構については前年度に解析技術は確立したので、観察と解析を完了させ、年度内に論文発表する。さらに歪み・前進の特徴量抽出と動態の画像解析を行い、牽引力との相関を明らかにする。また、核を牽引する力の分子実態を同定するため、遺伝子ノックダウンや変異分子発現などの分子操作または薬理的阻害実験により分子機能をかく乱した際に核の動的揺らぎや牽引力分布に及ぼす影響を解析する。このような定量画像解析と分子操作技術を組み合わせた核移動のレオロジー解析の基本技術を確立し、年度内に論文の基礎データを収集することを目指す。神経科学
マウス中枢神経系への遺伝子導入によるALS新規病態モデルの開発及び応用研究

TDP-43は、孤発性ALS病巣部に封入体として蓄積し、細胞毒性を発揮する病原蛋白質である。ALSの標的細胞である運動ニューロンは、膜及び分泌蛋白質の成熟装置である小胞体に対する負荷(小胞体ストレス)に過敏である事が示唆されており、本研究ではALSにおける小胞体ストレスの関与に着目し解析を進めた。その結果、TDP-43の発現を抑制されたHeLa細胞では、小胞体ストレスに対する細胞応答が更新していた。網羅的遺伝子解析から、TDP-43の発現抑制により小胞体ストレスを制御し得る1つの蛋白質の発現の劇的な低下が明らかとなり、子宮内エレクトロポレーション法によりこの蛋白質の神経系での機能解析を進めた。(1)孤発性ALSの分子発症機構はこれまでに殆ど明らかにはされていないが、患者病巣で核蛋白質であるTDP-43が、細胞質に異所局在し封入体を形成し、封入体内でユビキチン化、リン酸化、蛋白質の断片化が起こる事から、TDP-43のこれら翻訳後修飾がALS発症の重要な引き金となっていると考えられている。これまでin vitro ubiquitinationに伴い結合する蛋白質の質量解析から、TDP-43に会合するセリンスレオニンキナーゼ(TDP-K)を同定し、今年度は、TDP-43の蛋白質の翻訳後修飾に関わる可能性について解析を進めた。これまでに、免疫沈降法やHeLa細胞におけるTDP-43封入体モデルを用い、TDP-Kの一つのアイソフォームがHeLa細胞での封入体にTDP-43と共局在し、かつ結合する事を確認したが、phostag-PAGE等の解析から、現在までにTDP-KがTDP-43のリン酸化に関与する証拠は得られなかった。(2)(1)の研究と併行して、培養細胞の遺伝子導入及びその後の生化学的・分子生物学的解析を進め、ALSの発症に深く関与すると考えられる新規の細胞応答を見いだした。(3)ALSを含め神経変性疾患は、影響を受ける細胞種により疾患特異的な症状を示すにも関わらず、それぞれの細胞病態には共通の分子基盤が存在する。中でもオートファジーと小胞体ストレスは、神経変性疾患のみならず、多くの疾患の共通した細胞病態である。前者については既に幾つかのプローブが報告・利用されている事から、私はALS病態解明のツールとして後者のプローブの開発を進めた。現在までに開発したプローブが、既知の小胞体ストレス誘導試薬に対して反応する事、変異proteolipid protein1 (PLP1)による小胞体ストレスを検出できる事、複数の変異PLP1を用いた実験から、臨床的な重症度を見分ける事が可能である事を明らかにした。(1)孤発性筋萎縮性側索硬化症(ALS)の細胞質内封入体主要構成蛋白質TAR DNA-binding protein of 43KDa (TDP-43)は、封入体内でユビキチン化、リン酸化、蛋白切断の修飾を受け封入体毒性の本体と考えられている。今年度、私は共著者として、Cullin-2複合体がTDP-43のとりわけ切断C末端のユビキチンリガーゼとして機能し、その除去に重要な役割を担っている事を学会及び誌上で表する事に貢献した。(2)患者病巣部を用いた解析、ALSモデルマウス及び培養細胞の実験系より、家族性・孤発性を問わずALS進行に小胞体ストレスに対する生体応答(unfolded protein response; UPR)が惹起される事が報告されている。本研究では、小胞体ストレスをリアルタイムで検出する目的で、ルシフェラーゼをベースにした分子プローブの開発を進め、これらプローブについて各種小胞体ストレス試薬や小胞体内でミスフォールドする事により小胞体ストレスを惹起するproteolipid protein1変異体に対する応答を解析した。(3)孤発性ALS患者病巣では、核蛋白質であるTDP-43が細胞質内封入体に引き込まれ核から消失する事から、TDP-43の機能欠損がALS発症の鍵を担っていると考えられている。そこでTDP-43遺伝子に対する異なる3種類のsiRNAをHeLa細胞に導入し、各種阻害剤に対するUPRについてウェスタンブロット、リアルタイムPCR並びに小胞体ストレス分子プローブ用いて進め、TDP-43はUPRを制御する可能性を見いだした。更に、このようなUPRの調節を来す分子について、マイクロアレイの結果からスクリーニングし、候補遺伝子の検索を行った。本研究において、私はこれまでに2点の研究を中心に進めた。(1)ALSの病態解析を目的に、小胞体ストレスをリアルタイムで評価可能なレポーター遺伝子を幾つか樹立し、各種小胞体ストレス誘導薬や小胞体ストレス誘導蛋白質に対する応答を評価した。(2)これらプローブと異なる3種類のTDP-43に対するsiRNAを用いた定量的な解析から、TDP-43によるUPRの調節の可能性を見い出した。これまで患者病巣部やALSモデルマウス、並びに培養細胞を用いた解析からALSの進行に伴いUPRが惹起される事が示唆されていたが、この生体応答はALSの原因か、或は疾患の進行に伴う結果なのか明瞭に示す事はできなかった。それ故、現在までの成果は、ALSにおける小胞体ストレスの役割の解明に貢献し、本研究の方向性を大きく左右するものと考えられる。しかし、当初はこのレポーターをマウスの大脳皮質並びに大脳皮質分散培養に導入し、その表現型を解析する事を目指しており、その意味で進捗状況は計画よりやや遅れていると判断した。筋萎縮性側索硬化症(ALS)の殆どは、遺伝子変異を伴わず原因を特定できない孤発例である。

孤発性ALSの病巣部には高度にユビキチン化、リン酸化及び蛋白切断修飾を受けた核蛋白質TDP-43が封入体主要構成蛋白質として細胞質に蓄積し、核からTDP-43が消失する事が明らかとなっいる。現在までに、TDP-43による封入体毒性並びに核からの消失に伴う機能不全が、オートファジーやプロテオソーム機構の低下、小胞体やミトコンドリアのストレス増加を惹起し、孤発性ALS発症に重要な役割を担っていると考えられている。孤発性ALS発症における小胞体ストレスの役割を明らかにする目的で、HeLa細胞におけるTDP-43の発現をsiRNAにより抑制し、小胞体ストレスに対する生体応答機構(unfolded protein respeonse, UPR)がどのように変化するかと言う点に着目し解析を行った。その結果、TDP-43の発現抑制はUPRの過剰な活性化を誘導する事を明らかにした。更に、Micro Array解析により、TDP-43発現抑制により2倍以上の発現変化を示し、その分子構造や過去の報告から小胞体ストレスに関連し得る遺伝子についてqPCR解析を進め、最終的にTDP-43発現低下によりmRNAおよび蛋白質の発現レベルが劇的に低下する遺伝子、TDP-43 regulated gene(TRG、仮称)を同定し、TRGの発現抑制もTDP-43の場合同様、HeLa細胞において過剰なUPRの活性化を誘導する事を明らかにした。更に、TRGの中枢神経系での機能を類推する目的で、野生型及び活性ドメインに変異を導入したdominant negative型TRGをマウス胎仔大脳皮質にin utero electroporation法により一過性に発現させ、その表現型を解析を進めた。TDP-43は、孤発性ALS病巣部に封入体として蓄積し、細胞毒性を発揮する病原蛋白質である。ALSの標的細胞である運動ニューロンは、膜及び分泌蛋白質の成熟装置である小胞体に対する負荷(小胞体ストレス)に過敏である事が示唆されており、本研究ではALSにおける小胞体ストレスの関与に着目し解析を進めた。その結果、TDP-43の発現を抑制されたHeLa細胞では、小胞体ストレスに対する細胞応答が更新していた。網羅的遺伝子解析から、TDP-43の発現抑制により小胞体ストレスを制御し得る1つの蛋白質の発現の劇的な低下が明らかとなり、子宮内エレクトロポレーション法によりこの蛋白質の神経系での機能解析を進めた。in vitro ubiquitinationの実験より、TDP-Kがユビキチン化特異的にTDP-43に結合する事から、TDP-43によるALSの病態、特にユビキチン化TDP-43の蓄積や封入体内での高度なリン酸化に深く関わるもとの考え、当初はリン酸化部位の同定や抗リン酸化抗体の樹立を計画に挙げたが、TDP-KによるTDP-43のリン酸化そのものが確認されなかったので、この計画は更に進行できなかった。しかしその一方で、培養細胞へのALS関連遺伝子の導入実験から、ALSに関与する可能性のある新規細胞応答をHeLa細胞で見い出す事ができた。本研究の目的は、マウス中枢神経系でのALS関連遺伝子の発現を種々の方法で調節し、in vivoで局所的なALS病変モデルを作り、治療法を確立する事にある。
RFLP法によるサルコイド-シス患者のHLA及びT cell受容体遺伝子の解析

サルコイド-シスは原因不明の全身性肉芽腫性疾患であるが、その発症には何らかの免疫異常や遺伝因子の関与が推定されている。我々は以前にはサルコイド-シスとHLAーDRW52抗原との相関を報告しているが、このたびは同病患者のHLA遺伝子とT cell receptor遺伝子をRFLP法を用いて解析し、健常人との比較検討を行った。サルコイド-シス患者及び健常人対照の末梢血リンパ球よりDNAを抽出し、HLAーDRB、DQα、DQβ遺伝子、及びT cell receptorのα鎖、β鎖遺伝子のcDNAをプロ-ブとして用いた。HLAーDR遺伝子については、従来の血清学的なタイピングでは同定できなかった多型が識別された。サルコイド-シス患者に特異的なDNAフラグメントは認められなかったものの、5種類のDRβフラグメントは陽性者の頻度が患者群で有意に高く、DRw52陽性者に特異的に認められた。またそれらのフラグメントがどの患者で見られるかといったパタ-ンは互いによく一致し、患者をフラグメントの有無によって2群に分けることが可能であった。一方、HLAーDQα、DQβ遺伝子のRFLPにおいても血清学的特異性を上回る多型が確認されたが、サルコイドーシスとの明かな相関はなく、同病発症におけるHLAの役割の主体はDR抗原によっていると推定された。T cell receptor遺伝子については、サルコイド-シス患者に特異的なV領域のrearrengementは認められず、またRFLPで得られるフラグメントの頻度についても患者と健常者間で有急の差はなかった。この結果より、サルコイド-シス発症に関わる抗原はheterogenousである可能性が示唆された。サルコイド-シスの発症には何らかの免疫異常の関与が推定されており、一方で家族内発症例等より遺伝因子の存在も考えられている。我々はすでにテサルコイド-シスとHLA-DRW52の相関を報告しているが、このたびはRFLP法を用いて同病患者の持っているHLA-DR遺伝子について解析し、健常人との比較検討を行った。サルコイド-シス患者32名(うちDRW52陽性者24名、陰性者8名)及び健常人対照47名(同陽性者24名、陰性者23名)の末梢血より高分子DNAを抽出し、6種類の制限酵素で消化後、アガロ-ス電気泳動、サザンブロッティングを行った。^<32>PをラベルしたHLA-DRβのCDNAをプロ-ブとして、ハイブリタイゼイション後、第一トラジオグラフィ-で解析した。これまでの結果としては、1.血清学的に同一にタンピングされるHLA-DR特異性を持っていても、RFLPでは異なるバンドパタ-ンを示すことがあり、2.サルコイド-シス患者群と健常人対照群では、同じDRW52陽性者でも、RFLPで見られるバンドの頻度に違いがあった。しかし、3.サルコイド-シス患者に特異的にRFLPバンドは今のところ発見されていない。今後は制限地図がすでに同定されている細胞株と比較し、具体的にどのHLA-DR抗原が、あるいは同抗原遺伝子のどの部分が発症にかかわっているかを検討したい。サルコイド-シスの発症には何らかの免疫異常の関与が示唆されており、HLAをマ-カ-として、その免疫遺伝学的側面を探る研究が広く行われている。以前サルコイド-シスとHLAーDRw52抗原の相関を報告して以来,我々には同症患におけるHLAの役割を研究してきたが,今年はHLAーDQ抗原及びその遺伝子を主な解析対象とした。HLAーDQ抗原系は血清学的にはDQw1w9の特異性を有しているが,生化学的,分子生物学的にはさらに多くの多型を示すことが知られている。

症患によってはDR抗原との相関連鎖が重視されていたものが,遺伝子レベルの解析によってDQ抗原のはたす役割がより重要であることが判明した例もある。今回我々は、日本人サルコイド-シス患者32名と,健常人対照47名を比較解析の対象とし,末析血より得られた高分子DNAを6種類の制限酵素で消化後、DQα、DQβのcDNAをプロ-ブとして用いたRFLPを行なった。その結果、1)DQα、DQβ遺伝子についても血消学的タイピングを上回る多型がRFLPで確認され、いくつかのワラグメントの頻度は患者群と対照群で差が見られた。2)RFLPで示されたDQ遺伝子フラグメントの有無によって、患者をさらに2群に分けることができ、両群間でその臨床動態に差が見られた。今後はサルコイド-シス発症におけるHLAーDQ抗原の役割にも目を向け、Tcell受容体遺伝子も合わせて解析する予定である。サルコイド-シスの発症には何らかの免疫異常の関与が示唆されており、HLAをマ-カ-として、免疫遺伝学的側面を探る研究が広く行われている。一方でサルコイド-シス発症につながる未知の抗原に対する免疫応答において.どのようなTcell cloneが関与しているかも.重要な関心事と言える。昨年度までのHLAーDR.DQ遺伝子の解析に引き続き.Tcell receptor遺伝子をRFLP法を用いて解析した。この実験においては2種類の細胞DNAを用いた。すなわち1)サルコイド-ンス患者未梢血リンパ球より抽出したDNA.これにおいてはTcell receptor遺伝子のrearrengenentの起こったリンパ球が混在している。2)サルコイド-シス患者のBリンパ球にEBウイルスをtransformして得られたcell lineより抽出したDNA.こちらではTcell receptor遺伝子はgerm lineの形で保持されている。の2種類である。これらのDNAを6種類の制限酵素で処理.プロ-ブとしてはTcell Vregionのα鎖、β鎖cDNAを用いた。これまでの結果としてはサルコイド-シス患者に特異的なrearrengementは認められず、またRFLPで得られるフラグメントの頻度についても健常者と患者間で有意の差を認めていない。サルコイド-シス発症に関わる抗原はheterogenousである可能性が示唆される。今後はγ鎖、δ鎖についても検討していく予定である。
炭酸ガス吸着によって誘起される結晶相転移挙動の構造化学的研究

研究代表者が独自に見いだしている単結晶ガス吸着剤であるロジウムおよび銅の安息香酸-ピラジン錯体を用いて、水素ガス吸着構造の決定に成功した。また、架橋配位子であるピラジンへのアルキル基を置換した誘導体結晶の合成を行い、ガス吸着誘起相転移特性の異なる単結晶ガス吸着剤の創出に成功した。ピラジン上に導入されたアルキル基は細孔表面に露出するため、アルキル基によって結晶内の細孔表面を分子修飾できることが明らかになった。メチル基を導入した結晶では、細孔表面に修飾されたメチル基が吸着ガス分子の結晶内拡散に干渉する。そのため、これまで困難であった吸着酸素分子を室温でさえ単結晶X線構造解析によって明瞭に捉えることに成功した。室温から10Kまでの広い温度範囲にわたる単結晶X線構造解析を行い、酸素吸着構造を決定したところ、狭い1次元細孔中に取り込まれて形成される一次元鎖状分子酸素の配列構造は温度誘起の構造相転移によって高温相、中温相、低温相の3状態があることが分かった。この吸着酸素の3つの相は吸着平衡状態での流体相の高温相、飽和吸着状態で柔粘性をもつ中温相、細孔壁を介して三次元的にオーダーした共結晶相の低温相であると考えられる。酸素は常磁性分子のため、磁気測定によって酸素の低次元磁性を観測するのに成功し、この中温相は磁場に誘起されて酸素間配置が変化する挙動がみられた。研究代表者が独自に見いだしている単結晶ガス吸着剤であるロジウムおよび銅の安息香酸-ピラジン錯体について、吸着挙動の温度および圧力依存性を明らかにするために、比較的単純な無機ガスである炭酸ガスおよび有機物であるエタノール蒸気についてガス吸着挙動を調べた。特にエタノール蒸気吸着では室温付近で著しいガス吸着挙動が見られるため、吸着挙動の温度依存性について詳細な解析を行った。その結果、本物質はエタノール蒸気吸着によっても相転移が誘起され、相転移前後の二つの結晶相が共存する一次相転移機構が明確となった。この二相共存状態における二相の存在比は二相共存状態でのガス吸着量の分率で規定される特徴を有しており、本物質で見られるガス吸着誘起相転移現象を"mass induced phase transition"と名付けた。また、細孔中に取り込まれたエタノール分子のOH...O水素結合二量体の選択生成を単結晶X線構造解析により観測した。本結果はガス吸着プロセスを用いて有機分子会合体を選択的に生成する新手法としての可能性を示唆している。また、超臨界ガスの吸着平衡状態における吸着構造の決定を目的にメタンガスを高圧下室温にて結晶内に吸着させ、単結晶X線構造解析によって吸着構造決定を試みた。その結果、飽和吸着状態の構造決定に成功した。周期的に配列しているにもかかわらず熱運動によって球形のメタン分子は高速に回転していると考えられ、ゲストの分子配向がランダムな結晶状態と考えられる。この特異な固体状態を包接柔粘性結晶状態と結論した。
肝内胆管癌における多段階発癌に関する病理組織学的検討および胆管癌実験モデルの確立

【目的】肝内胆管に粘液産生が亢進し乳頭状に発育進展する腫瘍(Intraductal papillary neoplasm of the liver(IPN-L))に着目し,肝内胆管癌における新たなカテゴリーとして分類した。異型度,進行度が進展する過程を,低異型dysplasia,高異型dysplasia, in situ癌および非浸潤性あるいは微小浸潤性乳頭状腺癌,高度浸潤性乳頭状腺癌の4群に分類することでIPN-Lにおけるdysplasia-carcinoma sequenceもしくは多段階発癌過程を明らかにする。【対象と方法】材料は剖検例および外科的切除された肝内胆管癌合併もしくは非合併の肝内結石症(56例)および肝内胆管乳頭腫(10例)を用いる。正常あるいは非乳頭状肝内大型胆管上皮(20例),非乳頭状肝内胆管癌(20例)をコントロールとする。ホルマリン固定パラフィン包埋薄切切片を作成し,HE, d-PAS, HID-AB染色による組織学的検討および免疫組織化学的検討に用いる。病理組織学的に細胞および構造異型により,肝内胆管内に乳頭状に発育する腫瘍Intraductal papillary neoplasm of the liver(IPN-L)として,低異型dysplasia(13例),高異型dysplasia(20例),in situ癌および非浸潤性あるいは微小浸潤性乳頭状腺癌(19例),高度浸潤性乳頭状腺癌(14例)の4群に分けた。肝内結石症などの慢性胆管炎を背景に発生した肝内胆管癌において,発癌過程でDNA修復関連遺伝子の異常が関連していることが考えられる。そこで,DNA修復系の0^6-methylguanineの修復酵素であるMGMT,ミスマッチ修復酵素であるhMLH1に着目し,肝内胆管癌におけるこれらの発現の程度を調べた。P53, p21, cyclinD1, p16やDPC4/Smad4等のタンパク発現を免疫組織化学的に検討した。【結果】P16は低異型dysplasiaで発現が低下する傾向があり,P53は分化度が増すにつれて,発現頻度が増加した。MGMTやhMLH1は,低異型から高異型dysplasiaで発現が少ない傾向があるが,有意差は認めなかった。【考察,まとめ】p16やMGMT, hMLH1の不活化がIPNLの発癌に関与している可能性がある。材料は当科および関連施設で収集した剖検例および外科的切除された肝内胆管癌合併もしくは非合併の肝内結石症(56例)および肝内胆管乳頭腫(10例)を用いる。ホルマリン固定パラフィン包埋薄切切片を10数枚ずつ作成し,HE, d-PAS, HID-AB染色による組織学的検討および以下の免疫組織化学的検討に用いる。病理組織学的に細胞および構造異型により,肝内胆管内に乳頭状に発育する腫瘍Intraductal papillary neoplasm of the liver (IPN-L)として,低異型dysplasia(13例),高異型dysplasia(20例),in situ癌および非浸潤性あるいは微小浸潤性乳頭状腺癌(19例),高度浸潤性乳頭状腺癌(14例)の4群に分けた。免疫組織化学染色として癌抑制遺伝子(DPC4/SMAD4),細胞周期関連因子(cyclinD1,P27),cyclooxygenase-2 (COX-2)の発現頻度や発現強度を評価し,統計学的にIPN-Lの異型度もしくは悪性度との関連性を検討中である。同時にコントロール群としての正常あるいは非乳頭状肝内大胆管上皮と非乳頭状肝内胆管癌との比較検討も行っている。肝内胆管に粘液産生が亢進し乳頭状に発育進展する腫瘍(Intraductal papillary neoplasm of the liver (IPN-L))に着目し,肝内胆管癌における新たなカテゴリーとして分類した。そこで,DNA修復系のO^6-methylguanineの修復酵素であるMGMT,ミスマッチ修復酵素であるhMLH1に着目し,肝内胆管癌におけるこれらの発現の程度を調べ,肝内胆管癌の発癌機構を明らかにする。P53,p21,cyclin D1,p16やDPC4/Smad4等のタンパク発現を免疫組織化学的に検索し肝内胆管癌の発癌機構を明らかにする。

異型度,進行度が進展する過程を,低異型dysplasia,高異型dysplasia, in situ癌および非浸潤性あるいは微小浸潤性乳頭状腺癌,高度浸潤性乳頭状腺癌の4群に分類することでIPN-Lにおけるdysplasia-carcinoma sequenceもしくは多段階発癌過程を明らかにする。【対象と方法】材料は剖検例および外科的切除された肝内胆管癌合併もしくは非合併の肝内結石症(56例)および肝内胆管乳頭腫(10例)を用いる。正常あるいは非乳頭状肝内大型胆管上皮(20例),非乳頭状肝内胆管癌(20例)をコントロールとする。ホルマリン固定パラフィン包埋薄切切片を作成し,HE, d-PAS, HID-AB染色による組織学的検討および免疫組織化学的検討に用いる。病理組織学的に細胞および構造異型により,肝内胆管内に乳頭状に発育する腫瘍Intraductal papillary neoplasm of the liver(IPN-L)として,低異型dysplasia(13例),高異型dysplasia(20例),in situ癌および非浸潤性あるいは微小浸潤性乳頭状腺癌(19例),高度浸潤性乳頭状腺癌(14例)の4群に分けた。肝内結石症などの慢性胆管炎を背景に発生した肝内胆管癌において,発癌過程でDNA修復関連遺伝子の異常が関連していることが考えられる。そこで,DNA修復系の0^6-methylguanineの修復酵素であるMGMT,ミスマッチ修復酵素であるhMLH1に着目し,肝内胆管癌におけるこれらの発現の程度を調べた。P53, p21, cyclinD1, p16やDPC4/Smad4等のタンパク発現を免疫組織化学的に検討した。【結果】P16は低異型dysplasiaで発現が低下する傾向があり,P53は分化度が増すにつれて,発現頻度が増加した。MGMTやhMLH1は,低異型から高異型dysplasiaで発現が少ない傾向があるが,有意差は認めなかった。【考察,まとめ】p16やMGMT, hMLH1の不活化がIPNLの発癌に関与している可能性がある。
YbEr共添加ナノ微結晶Siにおける赤外発光のセンシタイゼイションに関する研究

本研究によって次のことが明らかになった。1.X線回折測定を行った結果、Si:YbEr薄膜は、3040nmの粒径を持つナノ構造(nc-Si:YbEr)を示していることが明らかになった。2.nc-Si:Yb薄膜からは、0.980、1.036、1.091μmにおいてYb^<3+>イオンの内殻遷移発光を観測した。3.Yb^<3+>イオンの0.980μm発光の時間分解発光スペクトルを測定した結果、Yb^<3+>イオン発光は励起後約300nsで立ち上がることを見出した。4.nc-Si:Yb(Yb添加量1wt%)薄膜、nc-Si:Er(Er添加量1wt%)薄膜、nc-Si:YbEr(Yb添加量1wt%およびEr添加量1wt%)薄膜の3種類の試料に関して、赤外発光スペクトルを測定した。Yb^<3+>イオンの励起準位(^2F_<5/2>)は、Er^<3+>イオンの第2励起準位(^4I_<11/2>)よりも5meVだけ、高いエネルギー位置にあることが明らかになった。この結果は、母材であるSi中に生成された電子・正孔対の消滅エネルギーが、Yb^<3+>イオンの励起準位(^2F_<5/2>)を介することにより、母材料→Yb^<3+>イオン(^2F_<5/2>)→Er^<3+>イオン(^4I_<11/2>)→Er^<3+>イオン(^4I_<13/2>)→1.54μm発光→Er^<3+>イオン(^4I_<15/2>)への効率良いエネルギー移動を示している。実際に^4I_<13/2>→^4I_<15/2>遷移として現れる1.54μm帯のEr^<3+>イオンの発光強度を、nc-Si:Er薄膜とnc-Si:YbEr薄膜とで比較した結果、YbをErに共添加することで2.5倍の増強(センシタイゼイション)を得た。5.nc-Si:Yb(0.2wt%)Er(0.2wt%)薄膜では、センシタイゼイション効果は1.1倍、およびnc-Si:Yb(3wt%)Er(3wt%)薄膜では1.6倍であった。Er^<3+>の1.54μm発光をセンシタイズさせるための最適Yb添加量は、Yb(1wt%、1.4×10^<19>cm^<-3>)であることを明らかにした。6.Er^<3+>の1.54μm発光の励起スペクトル(PLE)測定を、Yb^<3+>の励起準位(^2F_<5/2>)とEr^<3+>の第2励起準位(^4I_<11/2>)を含む波長領域で行った。nc-Si:Yb(1wt%)Er(1wt%)薄膜での吸収帯が最も大きいことは、前述したEr^<3+>イオンの発光強度のセンシタイゼイションの効果を支持している。本研究により、Er添加nc-Si薄膜において観測されるEr^<3+>イオンの1.54μm発光(^4I_<13/2>→^4I_<15/2>遷移)を、Yb^<3+>イオンを共添加することで、センシタイズすることが明らかになった。

実際に^4I_<13/2>→^4I_<15/2>遷移として現れる1.54μm帯のEr^<3+>イオンの発光強度を、nc-Si:Er薄膜とnc-Si:YbEr薄膜とで比較した結果、YbをErに共添加することで2.5倍の増強(センシタイゼイション)を得た。5.nc-Si:Yb(0.2wt%)Er(0.2wt%)薄膜では、センシタイゼイション効果は1.1倍、およびnc-Si:Yb(3wt%)Er(3wt%)薄膜では1.6倍であった。Er^<3+>の1.54μm発光をセンシタイズさせるための最適Yb添加量は、Yb(1wt%、1.4×10^<19>cm^<-3>)であることを明らかにした。6.Er^<3+>の1.54μm発光の励起スペクトル(PLE)測定を、Yb^<3+>の励起準位(^2F_<5/2>)とEr^<3+>の第2励起準位(^4I_<11/2>)を含む波長領域で行った。nc-Si:Yb(1wt%)Er(1wt%)薄膜での吸収帯が最も大きいことは、前述したEr^<3+>イオンの発光強度のセンシタイゼイションの効果を支持している。本研究により、Er添加nc-Si薄膜において観測されるEr^<3+>イオンの1.54μm発光(^4I_<13/2>→^4I_<15/2>遷移)を、Yb^<3+>イオンを共添加することで、センシタイズすることが明らかになった。今年度の研究実績は次のようにまとめられる。1)Siに酸化イッテルビウムを1wt%添加したSi : Yb_2O_3(Yb添加量:7×10^<19>cm^<-3>)ターゲットを、1×10-^3Torrの酸素雰囲気中でKrFエキシマレーザーを用いたアブレーションを行い、Si基板あるいは石英基板上にZnO : Er薄膜を形成した。このアブレーション中に発生するレーザープルームを分光分析し薄膜形成におよぼすレーザー生成プラズマの活性種を同定した。その結果、原子ラジカル(Yb^*、Si^*、O^*)による発光線が支配的に観測され、Si:Yb薄膜は原子ラジカルによって形成されていることを明らかにした。2)Si : Yb薄膜中に添加されたYb量を定量分析するために、蛍光X線分析を行った。その結果、ターゲットと作成された薄膜とにおいてほぼSi : Ybの比率が一致することから、ターゲット中のYb(7×10^<19>cm^<-3>)が、原子ラジカルのYb^*として基板に到達しSi : Yb薄膜中に添加されていることを確認した。3)X線回折測定を行った結果、Si : Yb薄膜は、ナノ構造(nc-Si : Yb)を示していることが明らかになった。Ybを添加しない場合でも同様にナノ構造(nc-Si)が観測され、それぞれの粒径をシェラーの式より見積もった結果、3040nmであった。したがって、nc-Si : Yb薄膜は粒径約30nmのnc-Si:Ybにより構成されていることが明らかになった。4)Ybの発光センターを活性化するために、nc-Si : Yb薄膜を大気圧の窒素雰囲気中で800°C、3分間の熱処理を施し、赤外発光スペクトルを測定した。鋭い輝線が0.980、1.036、1.091μmに観測され、これらはいずれもYb^<3+>の内殻遷移発光(^2F_<5/2>→^2F_<7/2>遷移)であることが明らかになった。また、発光スペクトルの温度依存性を測定した結果、室温においてもYb^<3+>の0.98μm発光が観測された。5)Yb^<3+>の0.98μm発光の時間分解発光スペクトルを測定した結果、Yb^<3+>発光は励起後約300nsで立ち上がることを見出した。一方、母材のnc-Siによる発光は約1μmにピークを持つブロードなスペクトル形状を示し、その立ち上がり時間は数nsであり、Yb^<3+>発光よりも早いことを見出した。本年度は次のことが明らかになった。1)nc-Si:Yb(Yb添加量1wt%)薄膜、nc-Si:Er(Er添加量1wt%)薄膜、nc-Si:YbEr(Yb添加量1wt%およびEr添加量1wt%)
幼樹の生理生態的特性をとりこんだ照葉樹林更新パターンの解明

常緑広葉樹実生が様々な光環境のもとでどのように成長するかを実験環境下で調べた。冬季のギャップの形成(被陰環境から裸地環境への移動)は個葉に光阻害を強く与え、後の成長をギャップのない時より抑制していた。夏季は、より暗いところに由来するものほど、ギャップ形成によって成長が促進した。成長速度の大きな種は光環境に寄らず成長速度が大きく、逆に成長の遅い種は環境が変動しても遅かった。常緑樹林の動態において、実生は確率的な過程によって更新に寄与することが示唆された。西日本の潜在自然植生である常緑広葉樹林(照葉樹林)は古くから人為の影響を受け,残存する自然度の高い森林はわずかである。自然植生の回復のためには,更新のパターンの解明が必須である。これまで,森林の更新パターンは成木を中心にモニターされてきたが,環境ストレスに敏感な幼樹の定着成否が森林更新を決定すると考えた。稚幼樹にとって影響力の大きな環境変動は,倒木によるギャップ形成による光環境の急激な変動である。耐陰性の高い照葉樹の稚幼樹が強光環境下に存在可能か否かを明らかにすることが照葉樹林の更新パターンの解明につながる。そこで,強光環境への応答を明らかにするために,照葉樹林の優占種(イスノキ,シイ,カシ類7種)の栽培実験を行った。3段階の被陰環境(相対照度7,14,50%)においたところ,いずれの種も明るい環境で多く展葉し,また,最大光合成速度も高かった。冬季(低温期)になると,最大光合成速度は低下した。1月に被陰なしの環境に暴露したところ,光化学系IIにおける最大量子収率(Fv/Fm)の著しい低下が見られた。これは,葉緑体の光合成反応中心が,強光によって阻害を強く受けていることを示す。そして,そのまま葉を落としてしまう種もあった(クスノキや相対照度7%由来のイスノキなど)。Fv/Fmは,その後,3月まで低下したままで回復は見られなかった。低温期に急激に強光環境に変動することは,常緑樹にとって,好ましくないことが推察された。西日本の潜在自然植生である照葉樹林は、古来、人為の撹乱を受け、現在ではわずかにしか残存しない。わずかに残存するこれらの森林を保全し、再生することは緊急の課題である。そのためには、照葉樹林の更新パターンを理解する必要がある。更新のパターンにおいて最も重要なものの一つは、環境変動に対して感受性の高い幼樹定着の成否である。照葉樹林の更新はギャップ形成による林内の光環境の変化に負うものが大きいと考えられるが、光は植物にとって重要な資源であるとともに、過剰な光は葉の機能を阻害し、成長や生残に影響を与える。そこで、栽培実験下で、ギャップ形成を模して被陰下から裸地に植物を移動させたときに、個葉および個体にどのような影響がもたらされるかを調べた。特に、強光への感受性が高くなる冬季と夏季に測定を行った。強光に対する潜在的な耐性は冬季の葉の方が高かった。しかし、植物を裸地に移動させたとき、夏季の葉は強光阻害を受けても2週間程度で回復した。一方、冬の葉は強光阻害を受け続け、樹種によっては落葉してしまった。落葉せずに残った葉は、春になり気温が上昇したら、強光阻害から回復した。最大光合成速度も同様に、強光阻害を強く受けている時はマイナスに転じていたが、強光阻害から回復したら、元の値程度に回復した。また、個体の成長は、夏に裸地に移動したものは、その時の葉が明るい環境に順化して、成長に貢献するようであったが、冬に移動したものは、強光ダメージでいったんは落葉し、その後に展葉した葉が成長に大きく貢献するようであった。ギャップ形成による強光阻害の影響がが、個葉レベルでも個体レベルでも夏と冬で異なることが明らかになった。このことは、照葉樹林再生のための施業において重要な知見となる。照葉樹林構成樹種実生14種を林床光環境を模した3毅階の被陰区(相対照度6、16、44%)、夏と冬のギャップ形成を模した3段階被陰から裸地への移動という変動光環境(夏、冬open)の9処理のもとで栽培し、個体成長を調べた。被陰区の相対成長速度(RGR)は次第に頭打ちになるが、明るいほど大きかった。44%区でRGRが大きいのはイスノキ、クスノキなど、小さいのはウバメガシ、アカガシなどであった。RGRの決定要因は、44%区では純同化速度であった。光合成速度が高いこととほぼ同義であり、生理的な活性の高さが成長に貢献した。

一方、6%区では個体重あたりの葉重、および単位重あたり葉面積がRGRと正の相関を持ち、薄い葉をたくさんつけること、つまり形態的要素が成長速度の決定因となった。16%は生理的能力と形態的要素の両方がRGRと相関を持った。夏openではRGR決定要因が被陰区とほとんど変わらなかったが、冬openでは、すべて、RGR決定要因は純同化速度であった。これは、低温下で強光阻害を受けて葉が落ち、新たな展開葉が明るい環境に順化した光合成能力を示したことによる。冬openでは被陰区よりもRGRが低く、逆に夏openでは、被陰区の個体とRGRが同等以上で、暗い処理区に由来するものほど被陰区よりもRGRが大きくなった。44%区のRGRは各樹種の成長ポテンシャルと考えられるが、RGRの種の順位は、その他の処理区でもほぼ保存されていた。常緑広葉樹林はギャップ形成が更新の引き金となるが、実生の段階では、ギャップが形成されて成長が促進されるのは、暗い林床で夏にギャップができた場合に限られた。成長速度の種の順位性は環境によらず保存されていて森林更新の過程は確率的であることが示唆された。以上、時空間的に不均一な林床光環境下で、実生が森林更新に果たす役割を現実的な精度で明らかにすることができた。
6年制薬学部長期実習におけるHIV実習の検討

【目的】抗HIV薬は95%以上の服薬率を継続する必要がある薬剤であり、薬剤師による服薬指導は一方的なおしつけでなく、患者の立場に立った指導が求められている。学生時代に毎日の服薬を体験学習することにより患者の立場にたった薬剤師が養成できると考える。【方法】平成23年度薬学部長期実習生30名に対し、HIVについての講義を行った。その中で、ガイドラインの推奨薬剤の用法、用量、副作用、注意点を解説後、服薬体験を行う処方内容(薬剤と服用時間)を学生自身が設定し、自動服薬記録瓶(Medication Event Monitoring System:MEMSボトル)を用い、2週間体験学習を行った。なお、8日目に薬剤師が服薬状況を確認し、学生とともに後半1週間の服薬率を上げるための対策をたてた。MEMSボトルは蓋をあけると日時がチップに記録され、その情報をリーダーで読み取ることにより自身の服薬状況を客観的に観察することができるシステムである。【結果】講義前に実施したアンケートでは、「抗HIV療法の成否には服薬指導が重要である」と回答した学生は32.3%とそれほど高いものではなかった。服薬体験については、薬剤師介入前の前半1週間の服薬率は89.6(28.6-100)%、介入後の後半1週間の服薬率は94.5(71.4-100)%であった。服薬体験後に学生にとったアンケートでは、「毎日同じ時刻に服用する困難さがわかった」96.7%、「自分の生活に合わせて服薬時間を設定することはアドビアランス確保の上で重要である」76.7%との回答が得られた。【考察】学生は長期実習開始時、「患者は医師の指示通り服薬するのは当然」と考えていたようであったが、この体験学習で、継続服用の困難さに気づいており、今後、患者の立場にたった服薬指導が行えることが期待される。また、後半の1週間の服薬率が前半の1週間より改善したことは、薬剤師による介入が有効であり、実臨床においても服薬中の患者に対する定期的な薬剤師の介入が重要であると考えられた。
社会ダイナミクスにおけるステレオタイプの伝染過程に関する検討

本研究では,ステレオタイプが,所属する社会や友人関係のネットワークを通して伝染し,社会の中拡大していく可能性を検討することを目的としていた。当該目的の達成のため,本年度は以下の2つの研究を行った。第一に,大学生を対象として,友人ネットワークを通してステレオタイプが時間と共に共有されていくかを検討した。その結果,友人は時間と共にステレオタイプが類似していくことが示され,友人関係を通して信念やステレオタイプが共有される可能性が示唆された。第二に,友人関係を超えた他者の影響を検討するため,夫婦のステレオタイプの類似性に関する縦断調査を行った。この研究では,昨年度に調査協力してくれた夫婦の追跡調査を行うことで,夫婦が時間と共にステレオタイプを共有していく可能性について検討した。その結果,夫婦間においても,ステレオタイプが時間と共に類似度を増していくことが明らかとなった。ただし,夫婦の効果は,ムスリムに対するステレオタイプで顕著な一方で,自集団(日本人)に対するステレオタイプでは弱いことが確認された。一般に,自集団に対するステレオタイプは,他集団に比べて強固な信念が構築されていると考えられる。このことから,夫婦や友人のような他者の影響は,ステレオタイプの形成過程に影響を与えるのに対して,いったんステレオタイプが形成されてしまうと,他者やネットワークの影響をもってしても,個人の信念を変えるのは難しいことが推察される。本研究は,顕在的・潜在的ステレオタイプが,人と人とのネットワークの中でどのように伝染するかを検討するものである。また,伝染の文化普遍性を検討するため,日英の両国で同様の検討することを目的としていた。以上の目的を達成するため,初年度は,日本・イギリスの両国において,大学生を対象として,友人のネットワークを通してステレオタイプがどのように共有されるかを検討した。まずイギリスで予備調査を行い,顕在的ステレオタイプを測定するための調査項目の整備や潜在的ステレオタイプを測定するための課題の整備を行った。次に,各国の文化的背景を踏まえ,日本では日本人ステレオタイプと韓国人ステレオタイプを検討し,イギリスではイギリス人ステレオタイプとイスラム教徒ステレオタイプを検討することとし,各国で友人関係とステレオタイプに関するデータを集めた。その結果,顕在指標と潜在指標とで,異なる友人の影響が確認された。なお,1回のみの横断調査では,友人同士のステレオタイプが似ているか否かを調べることはできても,「単に似ている人同士が友人になりやすいだけ」という可能性を排除できず,実際に「個人Aのステレオタイプが個人Bに伝染したか否か」を判断することはできない。複数回の縦断調査を行い,「友人間のステレオタイプが似てくるかどうか」を調べることで,初めて伝染の有無を検討することができる。そこで初年度にデータをとったサンプルに関して,2年目以降も縦断的にトラックし,伝染の有無を継続的に検討することとした。初年度はほぼ予定通り,日本とイギリスの両国で,ステレオタイプと友人関係のデータを得ることができた。以上の目的を達成するため,本年度は,日本・イギリスの両国において,大学生を対象として,友人のネットワークを通してステレオタイプがどのように共有されるかを検討した。昨年度に引き続き,イギリスではイギリス人ステレオタイプとイスラム教徒ステレオタイプを,日本では日本人ステレオタイプと韓国人ステレオタイプを検討した。なお1回のみの横断調査では,友人同士のステレオタイプが似ているか否かを調べることはできても,「単に似ている人同士が友人になりやすいだけ」という可能性を排除できず,実際に「個人Aのステレオタイプが個人Bに伝染したか否か」を判断することはできない。そこで初年度にデータをとったサンプルに関して,縦断的にトラックし,伝染の有無を継続的に検討した。また1学年のサンプルサイズが限られているため,新たに入学してきた大学生を対象に,データを追加した。更に,友人関係を超えて,他者がステレオタイプに与える影響を検討するため,夫婦のステレオタイプの類似性に関する調査を開始し,およそ100組の夫婦のデータを得た。上述のように,伝染を調べるためには縦断調査が不可欠であるため,次年度もこれらの夫婦のステレオタイプについて縦断調査をする予定である。予定通り,日本とイギリスの両国で,ステレオタイプと友人関係のデータを得ることができたともに,夫婦に関するデータも得られた。

一般に,自集団に対するステレオタイプは,他集団に比べて強固な信念が構築されていると考えられる。このことから,夫婦や友人のような他者の影響は,ステレオタイプの形成過程に影響を与えるのに対して,いったんステレオタイプが形成されてしまうと,他者やネットワークの影響をもってしても,個人の信念を変えるのは難しいことが推察される。上述したように,伝染を調べるためには縦断的調査が欠かせない。更に,1学年のサンプルサイズが30名程度と比較的小さいため,十分な検出力を担保するためには,新たなサンプルを追加する必要がある。そこで2年目以降は,1年目にとったサンプルを継続調査すると共に,新たに入学してきた大学生を対象に,データを追加する予定である。また大学生というサンプルに固執していると,十分なサンプルサイズが得られない可能性もあるため,2年目以降はサンプルに関して柔軟に変更を加え(例.家族内での伝染を見るなど),ステレオタイプの伝染の有無を立証する。更に1年目の成果に関しては,日本心理学会を始めとする関連学会で発表を行い,結果についてのフィードバックを得ると共に,論文執筆のための参考にする。そこで3年目は,2年目までに得られたデータに縦断調査を行い,伝染の有無を明らかにする。当初の予定に比べて,大学の一学年のサンプルサイズが小さく,その結果被験者謝金が少なくなった。家族内の伝染を調べるため,より大規模なサンプルを集め,プロジェクトを完遂する予定である。次年度以降は,大学生と言うサンプルに固執せず,家族内の伝染を見るなどサンプルに関して柔軟に変更を加えることで,より大規模なサンプルを集め,プロジェクトを完遂する予定である。