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ガンダーラ仏教寺院遺跡の保存に関する基礎的研究－祠堂建築遺構の復原形態を中心に－

今年度は、引き続きガンダーラ仏教寺院の関連資料の補足および収集したデータの整理、分析考察を進め、明らかになった研究成果の発表を行った。最終年度である今年度は、成果の取りまとめとその発表と補足的な資料調査を中心に行った。祠堂建築については、資料収集およびデータベースの作成、分析考察を継続した。今年度は、主にスワート地域の祠堂建築の資料収集およびデータベースの作成、分析考察の予定であったが、当初研究計画で予定していたパキスタンにおける遺構調査は、現地の治安状況等から今年度も実施することができなかったため、概略的な分析・考察にとどまった。これまでガンダーラ仏教寺院における祠堂建築について建築史学的な分析考察を進めたが、発掘等調査で祠堂と報告されたものの、報告等では図面や写真、遺構に関する記述が未掲載で確認不能な部分について、現地での遺構調査が実施できなかったことから、分析考察が不可能な部分も残したものの、平面形態等の基本的形態の特徴等についてはある程度明らかにすることができた。今年度もガンダーラ遺跡の遺構調査が実施できなかったため、海外調査として、対象地域の近隣である中央アジアの仏教遺跡の類例調査を行った。具体的には、キルギス共和国のアクベシム遺跡の発掘調査に参加する機会を得て、キルギス共和国の仏教寺院遺跡に関する現地調査の他、調査担当者や研究者等と仏教遺跡の形態やその保存等に関して意見や情報の交換ができた。今後は、未確認の遺構の現地調査等で確認することでより詳細な考察が可能になり、その成果がガンダーラ仏教寺院における祠堂遺構の保存修理の資料となり、またガンダーラ仏教寺院建築の独自性が明らかになることで、ガンダーラとの関連が予想される周辺地域との比較検討が可能になると考えられる。29年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は主にガンダーラ仏教寺院の発掘調査などの関連資料収集を行い、祠堂建築遺構についてのデータベースの作成を進めた。研究計画で予定していた海外調査、すなわち現地パキスタンでの遺構調査は、現地の治安問題などのため自粛し、実施しなかったが、イギリス大英図書館などで資料調査を行った。また本研究は、遺跡保存の基礎研究と位置付け、建築史研究と遺跡保存の現場の実務という二つの視点からのアプローチによって進めており、祠堂建築の形態研究と並行して、研究の前提となるガンダーラ遺跡の保存や建造物の修理の経緯など、主に英領時代のガンダーラ遺跡についての調査研究および保存事業の実態の把握も行った。実際には、大英図書館で収集した資料をはじめとした保存事業の報告や記録写真などから、当時の保存理念や保存事業の手法などについて関連資料の整理を行い、実際の保存事業がどのように行われていたかを考察した。そしてインド考古調査局が20世紀初頭から組織的および学術的な発掘調査を実施し、ガンダーラ遺跡で最初の保存事業の対象としたタフティ=バヒ遺跡の遺構の修理を中心に当時の記録写真などを用いて、その実態について明らかにし、英領時代の保存について考察を行った。この内容に関しては、平成28年度に行われる日本建築学会全国大会(平成28年8月開催予定)に投稿し、口頭発表の予定である。平成27年7月に行われた第22回ヘレニズムイスラーム考古学研究会において、ガンダーラ仏教寺院の構造物遺構において、石積み部分にみられる建築装飾の分析と考察について、口頭発表を行った。その後ヘレニズムイスラーム考古学研究22号において、その内容をまとめ、掲載された。本年度に計画していた通り、資料調査および祠堂建築遺構に関するデータベースの作成を開始し、おおむね順調に研究を進めることができた。海外での調査としては平成27年11月下旬にイギリス大英図書館などでの英領インド時代の発掘調査記録の資料調査など、また国内では、京都大学学術調査隊によるラニガト遺跡などの発掘調査の記録写真や図面などの関連資料調査を行い、閲覧、収集した資料などをもとに、主にペシャーワル盆地周辺(本研究では中央ガンダーラと定義)における仏教寺院遺跡の祠堂建築の各遺構についてのデータベース作成を開始した。資料調査の結果、イギリスでは英領時代のインド考古調査局Archaeological Survey of Indiaによる調査研究および保存事業に関する記録写真や報告書など大英図書館所蔵資料を中心に関連資料を収集することができた。あわせてロンドン大学ウォーバーグ研究所Warburg Institute of University of London図書室およびオランダ・ライデンの国立民族博物館に所蔵されているガンダーラ彫刻についても資料調査を行い、日本では見られない文献や遺物、ヨーロッパでの古代インド研究およびガンダーラ研究に関する文献などを閲覧した。国内ではラニガト遺跡について、遺構写真などの資料を閲覧・収集し、調査報告書などに掲載されなかった祠堂建築遺構に関する資料を収集することができた。データベースについては、発掘調査報告書の内容をもとにデータベース作成を開始したが、事前に予測したよりも祠堂建築に関する記述や図面などの掲載が少なかったため、まず京大隊によって発掘調査が行われたラニガト遺跡を中心に、発掘調査報告書に掲載されなかった写真や図面などの資料調査を実施した。また現状で修理が行われた遺構などについて、修理の時期やその方法の把握を行った。本年度は、昨年度収集をおこなったガンダーラ仏教寺院の発掘調査をはじめとした関連資料などをもとに、データベース作成を継続して行い、それらと並行して主に中央ガンダーラおよびタキシラにおける祠堂建築についての分析・考察を進めた。

本年度も昨年度と同様、パキスタンにおける現地調査は、現地の治安問題のため自粛し、インドのデリーにおいてインド考古調査局Archaeological Survey of India(以下、ASIという)等で、また英領時代に設置されたアグラのASI地域事務所でも保存や資料の状況などについて当時の調査および保存事業に関する調査資料、またインド中部の古代仏教寺院や古代インドの仏教寺院の建築形態がみられる石窟寺院を中心に類例調査として海外調査を実施した。なお、国内においても日本隊が実施したガンダーラにおける発掘調査の関連資料の収集をすすめるため、調査を継続した。なお平成28年7月に実施された第23回ヘレニズムイスラーム考古学研究会において、中央ガンダーラの仏教寺院の祠堂建築の研究成果について、口頭発表を行い、『ヘレニズムイスラーム考古学研究23号』に掲載された。また前年度に日本建築学会へ投稿した「タフティ=バヒ遺跡における英領時代の保存と修理ーガンダーラ遺跡群における保存のあり方に関する研究ー」について、平成28年8月に開催された日本建築学会大会において口頭発表を行った。これらの発表にともない、同様の分野や地域で研究を行う研究者等を意見交換なども行った。本年度に計画していたように、データベースの作成の継続および分析・考察を進めた。主に昨年度と同様、現地調査を実施することはできなかったために、インドのデリーのインド考古調査局Archaeological Survey of Indiaや国立博物館などでの英領時代の写真資料などについて資料調査を実施し、いくつか出版物に掲載されていない写真資料などを収集できたほか、英領時代に設立されたアグラ地域事務所Agra Circle Officeでも英領時代の調査や保存事業等についての調査を行った。またスワートで発掘を行っていたイタリア隊などの資料をはじめとした近年の資料の収集や、国内での資料収集も継続し、データベースに反映させた。現地調査が実施できなかったため、データベース作成に若干の遅れが生じているものの、分析・考察など研究は、おおむね順調に進捗している。今年度は、引き続きガンダーラ仏教寺院の関連資料の補足および収集したデータの整理、分析考察を進め、明らかになった研究成果の発表を行った。最終年度である今年度は、成果の取りまとめとその発表と補足的な資料調査を中心に行った。祠堂建築については、資料収集およびデータベースの作成、分析考察を継続した。今年度は、主にスワート地域の祠堂建築の資料収集およびデータベースの作成、分析考察の予定であったが、当初研究計画で予定していたパキスタンにおける遺構調査は、現地の治安状況等から今年度も実施することができなかったため、概略的な分析・考察にとどまった。これまでガンダーラ仏教寺院における祠堂建築について建築史学的な分析考察を進めたが、発掘等調査で祠堂と報告されたものの、報告等では図面や写真、遺構に関する記述が未掲載で確認不能な部分について、現地での遺構調査が実施できなかったことから、分析考察が不可能な部分も残したものの、平面形態等の基本的形態の特徴等についてはある程度明らかにすることができた。
Tリンパ球膜新プロテア-ゼの発見と、そのAIDSウイルス受容体としての作用機構

エイズウイルス(HIV)は人Tリンパ球膜上のCD4レセプタ-に結合するが、ウイルスによる膜融合と細胞内侵入プロセスにはCD4とは別の細胞膜蛋白の関与が推定されていた。我々はHIVの外膜糖蛋白gp120のV3領域と特異的に結合するCD4とは別の人Tリンパ球膜蛋白TryptaseTL_2を見出した。V3領域はウイルスの細胞性トロピズムの決定や膜融合に関与し、この部位に対する抗体は強いウイルス中和活性を持つことから、HIVの感染機序の解明と、HIVの治療の面から注目されている領域である。Tryptase TL_2はプロテア-ゼ活性を持ち、V3領域はそのインヒビタ-として両者は結合していると思われる。またV3領域と類似の構造をその活性中心に持つKunitz型インヒビタ-のトリプスタチンは、HIVによる細胞膜の融合を阻害した。このTryptase TL_2とgpl20との結合の解離定数は、Kd=3.8×10^<ー8>Mで高い親和性を示した。なおTryptase TL_2は32kDaと28kDaの二つのサブユニットからできており、32kDaのサブユニットは細胞膜の外側に向かって露出し、このサブユニットに対する抗体は、gp120との結合を阻止すると同時に、ウイルスによる膜融合を抑制した。以上のことからTryptase TL_2はV3領域に対するレセプタ-として作用していることが推定された。さらにTryptase TL_2Fgp120のV3領域以外に、もう1つのウイルス外膜糖蛋白gp41の膜融合領域とも結合し、この結合はTryptase TL_2とgp120との結合の解離を誘導することが最近明らかになった。このことはHIVとTリンパ球膜上のCD4レセプタ-との結合から、細胞内侵入に至るまでの過程で、Tryptase TL_2はgp120のV3領域との結合からgp41の膜融合領域との結合におきかわる可能性を示唆する。今後HIV感染における、Tryptase TL_2の膜融合プロセスでの役割をさらに明確にしてゆかなくてはならない。エイズウイルス(HIV)が人T_4^+リンパ球やマクロファ-ジに感染するさいに、これらの細胞の膜上に局在するCD4受容体だけでは感染が成立しないこと、さらにCD4受容体によらない感染機構が存在することが判明し、CD4以外の受容体の発見に多くの努力がなされている。我々は世界に先がけてHIVの外膜蛋白gp120と特異的に結合するCD4とは別の受容体の精製に成功した。この受容体は、gp120のV3領域のKunitz型インヒビタ-ドメインと特異的に結合するセリン・プロテア-ゼで、32KDaの二量体と28KDaの四量体からなる分子量198KDaの膜局在プロテア-ゼであることが判明し、これをトリプタ-ゼTL_2と命名した。32KDaのサブユニットは細胞膜の外膜に露出し、28KDaのサブユニットは膜の中に局在すると思われる。

gp120のV3領域は、HIVが細胞に侵入するさいの膜融合活性を示す部位であるばかりでなく、この領域を抗原とする抗体が強いHIV中和能力を示すことからHIVの感染機序の解明と、免疫療法の開発の上で最も注目されている領域である。従ってこのV3領域を特異的に認識して結合するトリプタ-ゼTL_2は、HIVの細胞侵入プロセスに深くかかわっていることが推定される。現在両サブユニットの一次構造の解析が進行中である。このトリプタ-ゼTL_2は、HIVの感染が認められる人ヘルパ-T細胞、マクロファ-ジ,脳のミクログリア細胞で認められるだけではなく、HIVに対する感染症のないHela細胞,B細胞にも認められた。これらの非感染性細胞に人CD4の遺伝子をトランスフェクトしてCD4受容体を発現させるとHIVに対する感染性を持つようになる。従ってHIVの感染には、CD4受容体とトリプタ-ゼTL_2受容体の少なくとも2ケ所の結合が感染成立に必要であると推定された。現在HIV感染機構におけるCD4とトリプタ-ゼTL_2の相互作用を検討している。我々はCD4レセプタ-とは異なる新しいレセプタ-、Tryptase TL_2を見出しその性質をこれまで報告してきた。平成3年度の研究において、人免疫不全ウイルス(HIVー1)の外膜糖蛋白gp120と精製されたTryptase TL_2の結合を詳細に解析し、gp120の結合部位を解析すると同時に、培養細胞レベルにおいてもHIVー1の外膜蛋白gp120は人培養T細胞のTryptase TL_2と結合することを確認した。ヨ-ドラベルしたHIVー1のgp120とTryptase TL_2の結合の解離定数は、3.8×10^<-8>Mと計算され強い親和性が確認された。なおこの値は、これまでに報告されているgp120とCD4レセプタ-との結合の解離定数に比較するといくぶん弱い。さらにこの両者の結合は、gp120のV3領域に対するモノクロ-ン抗体やV3領域の合成ペプチド、Tryptase TL_2のサブユニットの1つ、32kDaサブユニットに対する抗体で強く抑制された。またTryptase TL_2のプロテア-ゼ作用を抑制するKunitz型インヒビタ-のTrypstatin,HIー30によっても両者の結合は抑制された。V3領域とこれらのプロテア-ゼインヒビタ-は、共にその結合部位と推定される領域にーGP(^G_C)RAFー構造を持つ。以上の事からTryptase TL_2はその32kDaサブユニットとgp120のV3領域が特異的に結合することが示唆された。さらにTryptase TL_2はHIVー1のもう1つの外膜糖蛋白gp41の膜融合ドメインとも結合し、この結合はV3領域を介するgp120とTryptase TL_2との結合の解離を誘導することが判明した。またTryptase TL_2の32kDaサブユニットに対する抗体はウイルスによる膜融合を阻止した。以上のことから、Tryptase TL_2はHIV初期感染プロセスにおいて、ウイルスの標的細胞認識と、膜融合プロセスに深く関与していることが示唆された。現在HIV感染におけるCD4レセプタ-とTryptase TL_2の相互作用を検討している。
代数幾何学とその境界領域への応用

本年度の研究では、代数多様体の構造の研究、および多変数の超幾何関数の群論的な構造の研究において進展を見た。まず、代数多様体の構造では6次曲面の大域変形を決定した論文を完成、投稿して出版した。引き続き、種数3のペンシルを持つ曲面の構造の研究の完成を目指している。後者の超幾何関数については、パラメーターを上げ下げした場合の隣接関係の観点から、これらの関数にはたらく対称性をリー群・リー環との関連でとらえることに興味を持ち、その立場からの研究を続けた。ゲルファントの定義したグラスマン多様体上の超幾何関数の場合の隣接関係が一般線形群GL(n)の作用で説明できることに注目して、それを拡張した形でq-類似の場合にも隣接関係を与える差分作用素を定めることができた。これらの作用素の全体は対応する量子群の表現を与えるものである。同様の関係がシンプレクチック群Sp(2n)の場合にも発見できることを予想していたが、本年の研究によって最終的な結果を得た。現在論文を作成中である。これはガウスの1変数超幾何関数でパラメーターが特別な関係を持つ場合を含みその点からも興味深いものである。さらにシンプレクチックの場合にもq-類似が存在することが期待されるので、このようなqつきべき級数の定義、それのみたす差分方程式系、およびそれらの隣接関係を研究し、Spの場合の量子展開環との関連を明らかにすることが次年度以降の研究で期待される。超幾何関数の研究は種々の専門が交差する分野にあたり、研究協力者からのサジェスションが有益であった。特に協力者の木村弘信は合流型の超幾何関数について類似の研究を行い、野海正俊はより抽象的に量子群の立場から隣接関係をとらえる研究を行った。
神経変性疾患に関わるタンパク質のミスフォールディングと毒性発揮のメカニズム解明

筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、重篤な筋萎縮や運動障害を引き起こす神経変性疾患で、未だ有効な治療法は確立していない。一部のALS患者では、病変部位である脊髄運動ニューロンに、構造が異常となった(ミスフォールドした)SOD1タンパク質が異常に蓄積していることが報告されている。しかし、ALSの病態が進行する際に、どのようにSOD1がミスフォールドしてALSの病態に関与するのかについては明らかでない。そこで本研究では、ALS患者の脊髄において、酸化ストレスの上昇が報告されていることに着目し、酸化ストレスに伴うSOD1のミスフォールディングメカニズムの解明に取り組んだ。まず、活性酸素の一種である過酸化水素を添加すると、SOD1が不溶性の凝集体を形成することを確認した。SOD1が、過酸化水素によって酸化的に修飾されることで、凝集体形成が進行するのではないかと考え、質量分析による解析を行った。その結果、タンパク質表面に露出したシステイン残基が、過酸化水素によってスルフェニル化された後、SOD1分子内で新たなS-S結合が形成していることが分かった。また、SOD1は通常、強固な二量体として存在しているが、新たな分子内S-S結合の形成によって、SOD1が容易に単量体化し、ミスフォールドすることを見出した。さらに、分子内S-S結合を形成したミスフォールド型SOD1は、運動ニューロン様の培養細胞に対して毒性を発揮することも明らかとなった。つまり、酸化ストレスの上昇に伴って、SOD1に分子内S-S結合が導入され、細胞毒性を有するミスフォールド体を形成することで、ALS病態の進行に関与することが考えられた。本課題は、神経変性疾患の病態進行に関与するタンパク質のミスフォールディングメカニズムを明らかにすることを目的としている。研究実績の概要でも述べたように、ALS患者にみられるような酸化ストレス条件下で進行する、SOD1の新たなミスフォールディング経路を見出すことができた。さらに、同定したミスフォールド型SOD1が細胞毒性を発揮することも確認できたことから、本計画は順調に進展していると考えられる。前年度までに同定した、酸化ストレスにより形成するミスフォールド型SOD1の構造・物性について、より詳細な検討を進める。具体的には、X線結晶構造解析とX線小角散乱による解析に取り組み、分光学的・生化学的手法による解析結果と併せて、ミスフォールド型SOD1の構造を明らかにする。その結果をもとに、細胞毒性を発揮する要因となる、ミスフォールド型SOD1の構造的特徴について議論する。
水害避難行動のミクロモデルシミュレ-ションと制御に関する研究

本研究では,水害時の避難行動や情報の伝達方法を分析するため,プロダクションシステムやファジィ推論といったAI手法を駆使して,水害意識や経験などの違いを考慮にいれた個人レベルの水害避難行動モデルを開発した.本研究で得られた成果を以下に相約する.(a)避難行動のモデル化に当たっては,住民の水害時の避難行動を規定する要因を初期条件,外的要因,内的要因の3つに分類・整理した.初期条件については,特に,水害意識の型を定義し,過去の水害経験を水害意識の型の変化を通じて表現することにより,水害経験シミュレ-ションの可能性を示した.また,内的要因を表現するため危険認識度・関心度を定義するとともに,外的要因である情報を危険認識度に影響を与えるタイプのものと直接避難行動をうながす「きっかけ情報」とに分け,これらの相互作用をプロダクションル-ルおよびファジィ推論ル-ルを用いて表現することで,個々の住民の避難行動に関する判断過程をモデル化した.この方法により,住民の自主避難や避灘命令に従わない場合といった,現地調査では多々指摘されているにも関わらず従来のシミュレ-ション手法では再現できなかった状態を再現することに成功した.(b)具体的なモデルの設計に当たっては,水害時の避難行動を,情報入手状況を取り扱う過程,避難開始の意志決定過程,避灘場所・経路の決定過程,避難行動過程の4つの過程に分割し,プロダクションシステム,ファジィ推論システム,協調問題解決手法およびオブジェクト指向プログラミングを取り入れることにより,水害避難行動を計算機上でシミュレ-トする環境を提供した.(c)開発したモデルを用いて昭和57年の長崎水害時の避灘行動シミュレ-ションを行い,モデルの妥当性の検証と問題点の抽出を行った.本研究では,水害時の避難行動や情報の伝達方法を分析するため,プロダクションシステムやファジィ推論といったAI手法を駆使して,水害意識や経験などの違いを考慮にいれた個人レベルの水害避難行動モデルを開発した.本研究で得られた成果を以下に相約する.(a)避難行動のモデル化に当たっては,住民の水害時の避難行動を規定する要因を初期条件,外的要因,内的要因の3つに分類・整理した.初期条件については,特に,水害意識の型を定義し,過去の水害経験を水害意識の型の変化を通じて表現することにより,水害経験シミュレ-ションの可能性を示した.また,内的要因を表現するため危険認識度・関心度を定義するとともに,外的要因である情報を危険認識度に影響を与えるタイプのものと直接避難行動をうながす「きっかけ情報」とに分け,これらの相互作用をプロダクションル-ルおよびファジィ推論ル-ルを用いて表現することで,個々の住民の避難行動に関する判断過程をモデル化した.この方法により,住民の自主避難や避灘命令に従わない場合といった,現地調査では多々指摘されているにも関わらず従来のシミュレ-ション手法では再現できなかった状態を再現することに成功した.(b)具体的なモデルの設計に当たっては,水害時の避難行動を,情報入手状況を取り扱う過程,避難開始の意志決定過程,避灘場所・経路の決定過程,避難行動過程の4つの過程に分割し,プロダクションシステム,ファジィ推論システム,協調問題解決手法およびオブジェクト指向プログラミングを取り入れることにより,水害避難行動を計算機上でシミュレ-トする環境を提供した.(c)開発したモデルを用いて昭和57年の長崎水害時の避灘行動シミュレ-ションを行い,モデルの妥当性の検証と問題点の抽出を行った.
『ひですの経』の原典的研究

本研究は、2009年にハーバード大学で再発見された日本イエズス会版(いわゆるキリシタン版)『ひですの経』を原典的視点から研究した。三年間の主な成果として、a)『ひですの経』校注本(教文館・2011年)、b)ファクシミリ版(八木書店・2011年)を刊行し、さらにc)文献学・書誌学・近世初期東西異文化交流・思想史学における『ひですの経』の意義を国内外に広く公開した。本年度は、『ひですの経』の原典的研究を行う上での大前提となる、欧文原典の特定という文献学的作業に主に従事した。1583年のスペイン語初版以降、ルイス・デ・グラナダのスペイン語原典はマドリッド、バルセロナを中心に数多く出版されている。しかし1586年にベネチアからラテン語版が出版され、また1587年にはジェノバからイタリア語訳が出版されていることから、それら諸語・諸版の異同(テキストクリティーク)の作業が必要であった。それらの異同がキリシタン版の語句・語彙に反映されている決定的な例は未だ確認できていないが、聖句引用箇所の誤り、地名や人名の音訳表記等の分析から、『ひですの経』の翻訳にスペイン語版が使用された形跡は結果として明らかになった。また、可能な限りの諸版をヨーロッパの文書館で参照した結果、『ひですの経』29、30章に存在する「あにまらしよなる(Anima Racional、理性的霊魂)」とその不滅に関する長文の言及が、いずれの原典にも存在しないことが明らかになった。すなわち霊魂とその不滅に関する言及は、『ひですの経』の翻訳者・あるいは編纂者によって大胆に加筆されたものであることがわかった。霊魂とその不滅論は当時の中国布教における漢訳教理書においても重要なテーマであり、それらとの内容的な影響関係が今後の課題として提示された。このことは、日-欧という二国間関係に依拠して解明されようとしていたキリシタン思想史の研究に、東アジア地域間交流という新たな視点をもたらす必要性を示唆するものであると思われる。これまでの二年間の主な成果として『ひですの経』校注本(教文館・2011年)とファクシミリ版(八木書店・2011年)を刊行した。釈文・校註・解説の執筆過程で明らかになったのは主に以下の二点である。まず、キリシタン版の「再発見」の必要性である。所謂キリシタン版は、ラウレス神父(Johannes Laures,1891-1959)の没後、所蔵が一度も確認されずに現在に至っているものが多くある。この半世紀の間に個人の所蔵者が没し、行方不明になっていたことが気づかれずに、突然海外の大学のデータベースでヒットするという、『ひですの経』ど類似した事実が、本年度さらに一例確認された。欧米に残存するキリシタン版の現状を精査し、書誌学的情報としてまとめることによって、文化遺産保存の一助とするための先鞭をつけることができた。次に、キリシタン版を、日本人のキリスト教受容の実態の解明のみならず、当時のヨーロッパ(イエズス会)の思想的動向をうかがい知るテキストとして検討することの必要性である。対訳分析の過程で、自然と意志のアウグスティヌス的結合を説く「愛(キリシタン用語では"あもる")」についての言及や、ポンポナッツィ(1462-1525)によって批判された考え方である「来世賞罰」についての言及などが『ひですの経』では原典と比較すると強調されていることが明らかになった。このことは、従来「アリストテレス-トマス」の枠組みで一枚岩的にとらえられがちであった当時のイエズス会の知的背景の理解に再考を促すことにも通じると思われる。本年度の研究結果は三点にまとめられる。まず、昨年度に引き続き行ったキリシタン版の原本調査の結果、アメリカ、スペイン、オランダにおいて各一件、『キリシタン文庫』の著者J・ラウレス以来包括的調査が途絶えていた、所蔵先の移動の現状が明らかになった。海外におけるキリシタン版の所在が散逸する危険性を回避し、日本の文化遺産保存の一助となったと考える。次に、キリシタン版の欧文原典の特定である。すでに知られている通称「バレト写本」(1591頃)が、スペインの修徳思想家であり『ひですの経』の原著者でもあるルイス・デ・グラナダのラテン語説教集『祝日の説教集』(全4巻、1575-1580)『諸聖人の説教集』(全2巻、1578)の構成を踏襲していることを考察した。そして、これらの実証的な文献学的調査を踏まえて、対訳分析による内容の精査に着手した。そこで明らかになったことの第一が、トリエント公会議(1543ー63)を前後するヨーロッパのルネサンス人文主義の影響である。同会議では、人が義とされるのは信仰のみではなく、人間側の自由意志による修徳的な働きかけにもよると決議された。

これは極めて人文主義的な見方であるが、キリシタン版への翻訳に際して、このような倫理・道徳に関する教説が敷衍・増補されているという傾向が『ひですの経』の内容的分析では注目された。また、当時イタリアを中心に盛んであった新プラトン主義の代表的著作家(フィチーノ、ポンポナッツィら)の、霊魂(アニマ)に関する言及が、キリシタン版において名前を伏せて引用されている事実も明らかになった。以上のことは、ヨーロッパから日本への「受容」という一方向のみから論じられてきたキリシタン思想史の在り方に対して、当時の来日イエズス会士が置かれていた、ヨーロッパの複雑な思想的状況を逆照射した、「動的な」テクストとして読むことの重要性を提起した。校注本、ファクシミリ版の両方を、二年目である本年度においてすでに出版できたため。また国際学会で外国人研究者を含むパネル発表を行い、今年度も『ひですの経』の存在を海外にアピールすることができたため。24年度が最終年度であるため、記入しない。欧米に残存するキリシタン版の現状を精査し、書誌学的情報としてまとめることによって、文化遺産保存の一助となる資料をまとめ上げる。また、すでに数点発表されている拙著(編著・校註)の書評を活用しながら『ひですの経』の内容分析をさらに行い、当時のイエズス会の知的背景の理解に努める。
インドネシア海大陸の豪雨と冬季アジアモンスーンの影響の気候学

本研究課題は、1.インドネシア海大陸域の降水データベースを(地上雨量計・気象レーダー)を構築し、豪雨出現の時空間分布、及び豪雨をもたらすメソスケール対流システム(MCS)の生成・発達過程に関する動態把握を行うこと、2.豪雨発生環境を指標化すると共に、数値実験を通した豪雨生成メカニズムの解明を進めること、3.降水年々変動に及ぼす冬季アジアモンスーンの影響をエルニーニョ・南方振動(ENSO)とも対比し、定量的に評価することを目的としている。課題最終年度の本年度は、ジャカルタ広域首都圏における、19世紀中頃から、近年までの約150年間の月及び日降水量データの収集・整理を進め、モンスーンに伴う降水の長期変動を解析し得るデータセットを作成した(課題1.海大陸域降水データベースの拡充)。得られたデータより、太平洋十年規模変動(PDO: Pacific Decadal Oscillation)の位相により、ENSOがジャカルタの雨季の降水量経年変動に異なる影響を及ぼすことを示し、国際学会等で発表した(課題1及び課題3.冬季アジアモンスーンの影響評価、Hamadaetal.,2018他)。また、YMC(Years of Maritime Continent)計画への参画を通し、インドネシア海大陸域における気象レーダー・ゾンデ集中観測データの整理・解析を進め、スマトラ島沿岸域(Pre-YMC 2015及びYMC-Sumatra 2017)における、降水特性を含めた、降水・雷活動の日変化及び季節内変化の特徴について示した(課題1.豪雨出現の動態把握、及び課題2.豪雨発生環境のメカニズム解明、Mori et al. 2018等、国際・国内学会で発表)。さらに、ジャカルタ広域首都圏における集中観測データの解析により(HARIMAU2010)、降水雲システムの日変化の特徴と、冬季アジアモンスーンに伴うコールドサージが降水日変化に与える影響について明らかにした(課題13、Mori et al. 2018, Katsumata et al. 2018)。本研究課題は、1.インドネシア海大陸域の降水データベース(地上雨量計・気象レーダー)を構築し、豪雨出現の時空間分布、及び豪雨をもたらすメソスケール対流システム(MCS)の生成・発達過程に関する動態把握を行うこと、2.豪雨発生環境を指標化すると共に、数値実験を通した豪雨生成メカニズムの解明を進めること、3.降水年々変動に及ぼす冬季アジアモンスーンの影響をエルニーニョ・南方振動(ENSO)とも対比し、定量的に評価することを目的としている。今年度(研究初年度)は、1.海大陸域の降水データベース作成作業を進めることを第一の目的とし、その上で、主として2.豪雨出現の動態把握を開始し、豪雨など降水極端現象の発生頻度分布解析を実施した。特にインドネシア気象気候地球物理庁(BMKG)によるインドネシア東部スラウェシ島及びマルク諸島の長期地上日雨量データ(1972年2012年、23地点)を基に、豪雨を始めとする降水極端現象の出現頻度の年々変動とENSOとの関連の地域性及び季節性を調べ、エルニーニョ(ラニーニャ)年に少雨(多雨)傾向であること、エルニーニョ年に無降水日が二ヶ月以上増加し、旱魃状態となることや、豪雨出現の年々変動が雨季の中心ではなく、乾季と雨季の遷移期に顕著なことなどを明らかにした(Lestari et al. 2016)。また、スマトラ島西岸のベンクルで実施されたPre-YMC (Years of the Maritime Continent: http://www.jamstec.go.jp/ymc/ymc_japanese.html)集中観測に参画し、スマトラ島沿岸多雨域におけるMCSの生成・発達過程の解析に資する、現地Cバンドドップラー気象レーダーデータを入手した。地上雨量計、気象レーダーデータの収集・整理を開始し、海大陸域の豪雨解析に必要な基本的なデータセットとなる、海大陸降水観測データベースの構築を進めた。また、初期解析結果として、海大陸域東部における降水極端現象経年変動に及ぼすENSOの影響について調べ、論文発表を行った。地上雨量計、気象レーダーデータの収集・整理を継続的に実施し、海大陸域の豪雨解析に必要な基本的なデータセットとなる、海大陸降水観測データベースの構築を進めた。また、得られたデータセットを基に解析を進め、スマトラ島沿岸多雨域やジャカルタ首都圏など海大陸域西部を中心として、豪雨出現の季節内変動や経年変動に関する論文発表を行った。地上雨量計、気象レーダーの収集・整理を継続的に実施し、海大陸域の豪雨解析に必要な海大陸降水観測データベースの構築を進めた。

また、得られたデータセットを基に解析を進め、豪雨出現とも関連するスマトラ島沿岸多雨域における降水雲システムの日変化の特徴や、そのメカニズム解明に資する観測研究結果について論文発表を行った。本研究課題は、1.インドネシア海大陸域の降水データベースを(地上雨量計・気象レーダー)を構築し、豪雨出現の時空間分布、及び豪雨をもたらすメソスケール対流システム(MCS)の生成・発達過程に関する動態把握を行うこと、2.豪雨発生環境を指標化すると共に、数値実験を通した豪雨生成メカニズムの解明を進めること、3.降水年々変動に及ぼす冬季アジアモンスーンの影響をエルニーニョ・南方振動(ENSO)とも対比し、定量的に評価することを目的としている。課題最終年度の本年度は、ジャカルタ広域首都圏における、19世紀中頃から、近年までの約150年間の月及び日降水量データの収集・整理を進め、モンスーンに伴う降水の長期変動を解析し得るデータセットを作成した(課題1.海大陸域降水データベースの拡充)。得られたデータより、太平洋十年規模変動(PDO: Pacific Decadal Oscillation)の位相により、ENSOがジャカルタの雨季の降水量経年変動に異なる影響を及ぼすことを示し、国際学会等で発表した(課題1及び課題3.冬季アジアモンスーンの影響評価、Hamadaetal.,2018他)。また、YMC(Years of Maritime Continent)計画への参画を通し、インドネシア海大陸域における気象レーダー・ゾンデ集中観測データの整理・解析を進め、スマトラ島沿岸域(Pre-YMC 2015及びYMC-Sumatra 2017)における、降水特性を含めた、降水・雷活動の日変化及び季節内変化の特徴について示した(課題1.豪雨出現の動態把握、及び課題2.豪雨発生環境のメカニズム解明、Mori et al. 2018等、国際・国内学会で発表)。さらに、ジャカルタ広域首都圏における集中観測データの解析により(HARIMAU2010)、降水雲システムの日変化の特徴と、冬季アジアモンスーンに伴うコールドサージが降水日変化に与える影響について明らかにした(課題13、Mori et al. 2018, Katsumata et al. 2018)。平成28年度以降も、引き続き1.海大陸域降水観測データセットの構築を進め、2.気象レーダーデータ解析によるMCSの動態把握、ならびに数値実験等による豪雨発生メカニズム解明に向けた解析を実施する。また、3.降水観測データセットの統合解析より、コールドサージなど冬季アジアモンスーンが海大陸域の降水変動に及ぼす影響評価を進める。研究最終年度として、1.海大陸域降水観測データセットの構築を完了し、2.YMCなど現地集中観測実施期間を中心とした気象レーダーデータ解析によるMCSの動態把握、ならびに数値実験等による豪雨発生メカニズム解明に向けた解析を実施する。また、3.降水観測データセットの統合解析より、コールドサージなど冬季アジアモンスーンが海大陸域の降水変動に及ぼす影響評価を進め、研究成果を取りまとめる。
消化器癌および乳癌・甲状腺癌におけるセンチネルリンパ節生検に関する研究

甲状腺濾胞癌は、甲状腺癌の多くを占める乳頭癌に比べ頻度が少ないが、診断時に遠隔転移をきたしていることも少なくない。しかし濾胞腺腫との鑑別診断に苦慮することも多く、また穿刺吸引細胞診や術中迅速病理検査にても濾胞腺癌の確定診断にいたらないことも知られている。これまでに消化器癌、肺癌、乳癌において血中CEA mRNAが検出される症例は予後が不良であることを示してきたが、今回濾胞性甲状腺腫の良悪性の鑑別診断における血中CEA mRNA測定(RT-PCR法)の意義について検討と行った。当科にて外科的切除を行った甲状腺腫121例を対象とし、術前および術後(2-3週後)に採血を行いCEA mRNAをRT-PCR法にて検出した。術前においては良性腫瘍(濾胞腺腫を含む)ならびに乳頭癌ではCEA mRNAを検出できなかったが、微小浸潤型濾胞癌、広範浸潤型濾胞癌ではそれぞれ44.4%(4/9)、50%(2/4)にCEA mRNAを検出した。術後においては広範浸潤型濾胞癌1例にCEA mRNAを検出した。以上より甲状腺濾胞腺腫良悪性鑑別における分子生物学的指標としてCEA mRNAの測定の有用性が示唆された。今後、さらに症例数を増やし、再発や予後との関連につき検討する必要があるが、甲状腺癌の新しい治療戦略を決定する指標として、甲状腺癌細胞分子生物学的診断の重要性が増すことが期待される。変異遺伝子のみを特異的に増幅する方法として3'末端に変異した遺伝子の配列に相当する塩基を持つプライマーを用いてPCRを行うプロセスを開発しました。この方法によりリンパ節や血液中に散布された癌細胞を鋭敏に検出することができます。臨床病期早期の末梢性小型肺癌においても、術前、術中、術後の末梢血中には高頻度に癌細胞を検出できることが判明しました。これにより、肺癌や乳癌は発見の段階ですでに全身病としてとらえねばならない病態が存在することを証明することができました。このように癌特異的遺伝子変異やmRNAを指標としたPCR法による潜在癌細胞の検出法の確立は、坦癌患者における血液やリンパ節中の潜在癌細胞の検出を可能とし、治療のstrategyを構築する新たな手段となりました。消化器癌、乳癌、甲状腺癌手術において色素法によるセンチネルリンパ節の同定を行いました。腫瘍周囲にICG 5mLを注入し、腫瘍からドレナージされる最初のリンパ節を同定し摘除しました。またRI法によるセンチネルリンパ節の同定も併用しました。手術前日にテクネシウムラベルのトレーサーを腫瘍周囲に注入し、術中、ガンマプローベを用いてセンチネルリンパ節を同定しました。摘除したセンチネルリンパ節は半割し、半分を術中病理診断、半分を術中迅速遺伝子診断に用いました。これまでの成績は、正診率100%、偽陰性率0%です。

術後においては広範浸潤型濾胞癌1例にCEA mRNAを検出した。以上より甲状腺濾胞腺腫良悪性鑑別における分子生物学的指標としてCEA mRNAの測定の有用性が示唆された。今後、さらに症例数を増やし、再発や予後との関連につき検討する必要があるが、甲状腺癌の新しい治療戦略を決定する指標として、甲状腺癌細胞分子生物学的診断の重要性が増すことが期待される。
脳磁図を用いた音声に関連するヒト脳機能の研究

ヒトの音声言語に関連する中枢処理機構について神経科学的に解明するため,大きく2つ((1)音声の表出(2)音声の認知)に分けて検討した.まず,音声の表出に関しては,主に発声中の自分の声に対する聴覚モニタリング機構の解明をめざした.発声中は聴覚だけでなぐ舌や口周囲の感覚や運動に関連する種々の神経活動が同時に生じるため,発話中の自分の声に対する聴覚反応を検討する際には,他の感覚・運動情報との協調構造の解明が期待されている.本研究では,発語に関連する事象関連脱同期(Event-related desynchronization : ERD)・同期(Event-related synchronization, ERS)の解析により,構音の企画・実行,呼吸コントロールやそれらのモニタリングに特異的な脳領域とその律動変化について検討し,その成果の一部がThe 8th International Evoked Potentials Symposium(IEPS)および12th World Congress of Psychophysiology,第34回日本臨床神経生理学会にて報告され,IEPSではポスタ賞を受賞した.また,ヒトが発声する際,喉頭調節によって声区(低・中音域と高音域)の変換様式が中枢の準備過程へ及ぼす影響について,これまでの成果についてまとめた(臨床脳波).次に,音声の認知に関わる基礎的な研究として,特殊な周波数特性を示す音を聴取した際の,聴覚野における脳磁場反応の特異的な適応と側抑制の関係について検討した.本研究から,短時間での聴覚入力による聴覚野の神経活動では,側抑制が順応よりも有意な抑制系であり,両抑制系ともに時間の経過でその効果が減少することが示唆された.この成果の一部は第19回日本生体磁気学会,the 14th International Conference on Biomagnetismにて報告された.ヒトの音声言語に関連する中枢処理機構について神経科学的に解明するため,大きく2つ((1)音声の表出(2)音声の認知)に分けて検討した.まず,音声の表出に関しては,主に発声中の自分の声に対する聴覚モニタリング機構の解明をめざした.発声中は聴覚だけでなぐ舌や口周囲の感覚や運動に関連する種々の神経活動が同時に生じるため,発話中の自分の声に対する聴覚反応を検討する際には,他の感覚・運動情報との協調構造の解明が期待されている.本研究では,発語に関連する事象関連脱同期(Event-related desynchronization : ERD)・同期(Event-related synchronization, ERS)の解析により,構音の企画・実行,呼吸コントロールやそれらのモニタリングに特異的な脳領域とその律動変化について検討し,その成果の一部がThe 8th International Evoked Potentials Symposium(IEPS)および12th World Congress of Psychophysiology,第34回日本臨床神経生理学会にて報告され,IEPSではポスタ賞を受賞した.また,ヒトが発声する際,喉頭調節によって声区(低・中音域と高音域)の変換様式が中枢の準備過程へ及ぼす影響について,これまでの成果についてまとめた(臨床脳波).次に,音声の認知に関わる基礎的な研究として,特殊な周波数特性を示す音を聴取した際の,聴覚野における脳磁場反応の特異的な適応と側抑制の関係について検討した.本研究から,短時間での聴覚入力による聴覚野の神経活動では,側抑制が順応よりも有意な抑制系であり,両抑制系ともに時間の経過でその効果が減少することが示唆された.この成果の一部は第19回日本生体磁気学会,the 14th International Conference on Biomagnetismにて報告された.
難治てんかん患者を対象とした新世代抗てんかん薬の有効血中濃度の探索と薬物動態解析

本研究は、新世代抗てんかん薬の薬物動態に影響を与える因子を同定するとともに、有効血中濃度範囲の探索を行った。ラモトリギン血漿中濃度と1,653サンプルとトピラマート血漿中濃度1,217サンプルを測定して解析対象とした。薬物動態の指標として血漿中濃度投与量比を用いた。ラモトリギンとトピラマートの血中濃度は薬物代謝酵素誘導作用を有する抗てんかん薬(フェニトイン、フェノバルビタール、カルバマゼピン)の併用により大きく低下し、濃度低下が有効性に影響を与えることが明らかとなった。近年,トピラマート,ラモトリギン,レベチラセタムなど新世代抗てんかん薬が次々と市販され難治てんかんの薬物治療は大きく変化している.しかしながら,難治てんかんの発作型および頻度は多様であるため,新世代抗てんかん薬を用いた場合の有効血中濃度は明らかでない.本研究は新世代抗てんかん薬の体内動態に影響を与える患者因子および併用抗てんかん薬を血中濃度を推定するモデルの構築すると同時に,難治てんかん患者にける新世代抗てんかん薬の有効血中濃度領域を明らかにすることを目的とした.709名のラモトリギン服用患者から1653ポイントの解析サンプルを抽出し,血漿中濃度/投与量比を算出した.ラモトリギンの血漿中濃度/投与量比はバルプロ酸の併用により2倍以上に上昇し,酵素誘導作用を有する抗てんかん薬(フェニトイン,フェノバルビタール,カルバマゼピン)を併用する事により半分以下に低下した.フェニトインは他の誘導剤と比較して有意に血漿中濃度/投与量比を低下させたが,フェニトインにフェノバルビタールまたはカルバマゼピンを併用しても酵素誘導能の増強は認められなかった.重回帰分析の結果,性別,体重,年齢1歳未満,フェニトイン,フェノバルビタール,カルバマゼピン,トピラマート,エトスクシミド,ルフィナミドの併用がCD比に影響する因子であった.さらに本回帰式を用いてラモトリギンの推定血中濃度を算出し,実測値と比較したところr2=0.84の良好な相関が得られた.近年,トピラマート,ラモトリギン,レベチラセタムなど新世代抗てんかん薬が次々と市販され難治てんかんの薬物治療は大きく変化している.本研究は新世代抗てんかん薬の体内動態に影響を与える患者因子および併用抗てんかん薬を探索すると同時に,難治てんかん患者における新世代抗てんかん薬の有効血中濃度領域を明らかにすることを目的とした.ラモトリギン服用患者709名の血漿中濃度を解析したところ,バルプロ酸の併用によってラモトリギンの濃度は2倍以上に上昇し,フェニトイン,フェノバルビタール,カルバマゼピン(薬物代謝酵素誘導作用を有する抗てんかん薬)の併用によって半分以下に低下した.さらにラモトリギンの血漿中濃度はUGT1A4 142T>Gアレルを有すると低下し,UGT1A4 -161C>Tアレルを有すると上昇した.続いてトピラマート服用患者446名の血漿中濃度を解析したところ,酵素誘導作用を有する抗てんかん薬の併用によってトピラマートの濃度は半分以下に低下し,スチリペントール(CYP3A4の阻害剤)を併用することによって上昇した.焦点性てんかん,症候性全般てんかん,ドラベ症候群,レンノックス・ガストー症候群のトピラマート治療濃度の中央値はそれぞれ5.4,4.6,4.7,5.2μg/mLであった.トピラマートとラモトリギンの体内動態は併用抗てんかん薬の影響を強く受けることが明らかになった.てんかん分類別,症候群別に新世代抗てんかん薬の治療濃度範囲を比較したが,明らかな差は認められなかった.今後レベチラセタムの体内動態と治療濃度を明らかにすることによって,新世代抗てんかん薬の治療効果の向上を目指す.2014年度はラモトリギンの体内動態に影響する因子を同定して,血漿中濃度を推定する回帰式を構築した.2015年度は122名の患者のUGT1A4とUGT2B7の遺伝子多型を測定し,UGT1A4 142T>GおよびUGT1A4 -161C>Tがラモトリギンの体内動態に影響を与える因子であることを報告した.2015年度は難治てんかん患者446名のトピラマート血漿中濃度を解析し,体内動態に与える影響因子と有効血中濃度を同定した.また,2015年12月までに2,499名の患者から12,588ポイントのレベチラセタム血漿中濃度を測定した.近年,トピラマート,ラモトリギン,レベチラセタムなど新世代抗てんかん薬が次々と市販され難治てんかんの薬物治療は大きく変化している.本研究は新世代抗てんかん薬の体内動態に影響を与える患者因子および併用抗てんかん薬を探索すると同時に,難治てんかん患者における新世代抗てんかん薬の有効血中濃度領域を明らかにすることを目的とした.トピラマート服用患者610名の血漿中濃度1217サンプルを解析したところ,フェニトイン,フェノバルビタール,カルバマゼピン(薬物代謝酵素誘導作用を有する抗てんかん薬)の併用によって成人および小児てんかん患者のトピラマート血中濃度はそれぞれ45.4%,33%低下した.一方,スチリペントールはトピラマートの血中濃度を上昇させることが明らかとなった.さらに,トピラマートの有効性と忍容性が認められ2年以上服用している患者276名の平均血漿中濃度は5.1μg/mLであった.

焦点性てんかん,症候性全般てんかん,ドラベ症候群,レンノックス・ガストー症候群に分類して各群の血漿中濃度を比較したが有意差は認められなかった.トピラマートの治療濃度が5μg/mL以上に達した群の治療継続率は5μg/mL未満の群と比較して有意に高かった(945日vs 802日;ログランク検定p = 0.007).同様に薬物代謝酵素誘導作用を有する抗てんかん薬の併用によって治療継続率は有意に低下した(p = 0.002).てんかん分類別,症候群別に新世代抗てんかん薬の治療濃度範囲を比較したが,明らかな差は認められなかった.しかし,トピラマートの体内動態は併用抗てんかん薬の影響を強く受け,治療継続率に影響を与えることが明らかになった.本研究は、新世代抗てんかん薬の薬物動態に影響を与える因子を同定するとともに、有効血中濃度範囲の探索を行った。ラモトリギン血漿中濃度と1,653サンプルとトピラマート血漿中濃度1,217サンプルを測定して解析対象とした。薬物動態の指標として血漿中濃度投与量比を用いた。ラモトリギンとトピラマートの血中濃度は薬物代謝酵素誘導作用を有する抗てんかん薬(フェニトイン、フェノバルビタール、カルバマゼピン)の併用により大きく低下し、濃度低下が有効性に影響を与えることが明らかとなった。ラモトリギンの体内動態に影響する因子を同定して,血漿中濃度を推定する回帰式を構築した.さらに,ラモトリギン服用患者のうち158名より遺伝子多型測定の同意を得て,ゲノムDNAを抽出した.他の新世代抗てんかん薬(トピラマートおよびレベチラセタム)についもデータ収集は完了し,体内動態を解析中である.2015年度の研究成果「トピラマートの体内動態に与える影響因子と有効濃度の探索」を国際学会で発表し,論文投稿する予定である.レベチラセタム血漿中濃度については,データクリーニングと患者背景の調査を行い薬物動態解析と有効濃度の解析を行う予定である。医療薬学2,686ポイントのトピラマート血漿中濃度および9,632ポイントのレベチラセタム血漿中濃度を用い,これら新世代抗てんかん薬の体内動態に影響する因子を同定する.さらにUGT2B7,UGT1A4の遺伝子多型を測定し,ラモトリギンの体内動態に及ぼす影響を検討する.2011年から2014年までにトピラマート,ラモトリギン,レベチラセタムを服用開始した難治てんかん患者304名,800名,1292名の患者背景および開始時の発作型および発作頻度を後ろ向きに調査し,ロジスティック解析により新世代抗てんかん薬処方に関する傾向スコアを算出する.必要に応じて研究費を執行したが,当初の見込み額と少し異なり,若干の残金が生じた.研究計画の変更はない.前年度の研究費を含め,予定通りの研究を進めてゆく.残金は2016年に開催される国際学会(参加登録,抄録登録済み)の参加費(2015年度に支払済み)として計上する予定である.
Ｔｏｌｌ様受容体作動薬の扁平上皮癌への治療応用の検討

頭頸部扁平上皮癌細胞のCD44陽性細胞が癌幹細胞の特徴を有するか検討した。その結果、頭頸部扁平上皮癌CD44陽性細胞は癌幹細胞の特徴を有する事を確認した。頭頸部扁平上皮癌のCD44の発現を抑制することは癌の再発・転移を抑制に繋がる可能性を感じ、既存の化学療法剤の中で頭頸部扁平上皮癌のCD44の発現を抑制し、なおかつアポトーシスを誘導する化学療法剤を探索した結果、イリノテカン塩酸塩とゲフィチニブの併用療法がCD44の発現を抑え、さらにアポトーシスが誘導する事を明らかにした。頭頸部扁平上皮がん幹細胞に着目し、頭頸部扁平上皮がん幹細胞マーカーであるCD44の発現を確認した。磁気ビーズ抗体にて頭頸部扁平上皮細胞株HSC-2, HSC-3よりCD44陽性細胞を分取し、幹細胞の特徴を有するか確認した。その結果、頭頸部扁平上皮癌細胞株CD44陽性細胞には移行能を有し、SOX2, Nanogなどが有意に発現しており、幹細胞の特徴を有している事を明らかにした。頭頸部扁平上皮癌細胞のCD44に有効な化学療法を探索した。その結果、分子標的薬であるゲフィチニブ、ラパチニブ、エルロチニブ単独ではCD44の発現を減弱させる一方、細胞増殖に変化無く、アポトーシスへの誘導能は弱かった。そこで、イリノテカンと分子標的薬と併用してみた所、CD44の発現を減弱させ、さらにアポトーシスへの誘導が強化された。さらに腫瘍移植モデルを用いて検証した結果、イリノテカンと分子標的薬の併用により、腫瘍の再発が抑制される事を証明した。治療終了後の腫瘍ではイリノテカンと分子標的薬の併用した腫瘍組織では免疫組織染色でCD44の発現が減弱していた。これにより、CD44を標的とした化学療法が腫瘍の転移・再発が抑制される事が示唆された。今後はより効果的な頭頸部扁平上皮がん幹細胞を標的とした治療法を開発するため、がん幹細胞の機構解析をしていく予定である。申請者のこれまでの研究成果により、Toll様受容体3(TLR3)作動薬がヒト頭頸部扁平上皮癌の転移巣を抑制する事を明らかにし、その作用機序も解明していた。そこで、本研究はそれを元に、頭頸部扁平上皮癌の為の新たな分子標的薬として、TLR3作動薬の腫瘍転移抑制薬としての治療応用を検討する為にマウス頭頸部扁平上皮癌細胞株を用いて、細胞培養上でのTLR3作動薬投与によるアポトーシス誘導、をDNAの断片化、ウエスタンブロッティングでの新規アポトーシスの指標であるcleaved PARP、Annexin Vもしくはカスパーゼ3/7の発現量を確認する事でTLR3作動薬のアポトーシス誘導を評価を行った。本研究を実施している間に、Toll様受容体とがん幹細胞(Cancer stem cells)との相互関係が化学療法に対する耐性獲得や腫瘍再発と関連するかもしれないとの論文{Cancer Biol Ther. 2011Apr 15;11(8):708-13. Epub 2011Apr 15.}が発表されたため、申請者は頭頸部扁平上皮癌のToll様受容体とがん幹細胞との関連を調べる為に、まず始めに頭頸部扁平上皮癌細胞株のがん幹細胞マーカーであるCD44の発現をウエスタンブロッティング法にて調べた。さらに頭頸部扁平上皮癌細胞のがん幹細胞の特徴解析のため、MACS磁気細胞分離法(Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Glabach, Germany)を用いて幹細胞を分離し、CD44陽性細胞に対しcolony formation assayと細胞周期解析を行いCD44陽性細胞が幹細胞の特徴を有していることを明らかにした。今後は頭頸部扁平上皮癌がん幹細胞とToll様受容体の相互関係を検証する予定である。当初、マウス頭頸部扁平上皮癌転移モデルを作成し、Toll様受容体作動薬の腫瘍転移抑制、腫瘍免疫能亢進を検証し、それをもって、新しい分子標的薬開発の礎にすることを目的としていたが、本研究を遂行している間にがん幹細胞とToll様受容体の相互関係が腫瘍再発抑制、化学療法耐性獲得に重要である知見が得られたため、頭頸部扁平上皮癌細胞のがん幹細胞の特徴を明らかにする必要性が生じた。そのため、マウス頭頸部扁平上皮癌転移モデルを作成が遅れている。しかしながら、今後は頭頸部扁平上皮癌のがん幹細胞を解析し、がん幹細胞とToll様受容体との相互関係を明らかにすることで新しい分子標的薬に結びつくと考えている。