hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
免疫制御を可能とする紫外線波長特性の解析―あらたな深紫外光LED光線治療の開発

4+CD25+Foxp3+Neuropilin-1+細胞(nTreg)が、290300nmで誘導が見られた。7日後で明らかに皮膚とリンパ節でTregが増加、Neuropilin1陽性のnTregであり、Treg関連の遺伝子におけるメチル化を調べたところ、脱メチル化がみられ、安定した抑制機能のあるTregが誘導されることを明らかとなった。乾癬患者において、Tregの抑制能の低下は、PUVAバス療法後においてほぼ正常へ回復し、PUVAバスによるTregの機能回復が示した。照射開始(PUVAバス)から5回ごとに、3つの分画を調べたところ、aTregが、明らかに上昇することが明らかとなった。マウス皮膚で、Tregが誘導されたことから、ヒトでも同様のTregの誘導がわかるかどうかを確かめるため、皮疹血として採取したわずかな全血から、細胞解析ができるかどうかの検討を行った。マルチカラーでのFACS解析、さらに高速セルソーターで、CD4/ CD8を分離することも成功した。末梢血に比べ、皮疹血では、CD4およびCD8のpopulationに差があり、現在、CyTOFやT細胞レパトア解析を行っている。昨年度につづき、制御性T細胞(Treg)による免疫寛容誘導する波長探索を行い、乾癬患者において、ナローバンドUVB・308nmエキシマライト・PUVAバスによる末梢血でのTreg誘導解析などの解析は進めることができた。今年度、乾癬および皮膚T細胞性リンパ腫の皮疹部分から、皮疹血として採取したわずかな全血から、細胞解析ができること、さらには、高速セルソーターで分離することにも成功した。光線療法後の皮膚に浸潤する細胞群をセルソーターで分離し、RNAシークエンス、Treg関連遺伝子のエピジェネティック解析(次世代シークエンサー)で行う予定である。乾癬以外の白斑、アトピー性皮膚炎、掌蹠膿疱症患者においても、同様に解析を行い、Tregの誘導に関して解析を行う。マウスレベルからもっとも効率よくTreg・免疫寛容を誘導する波長が明らかとなった場合、その波長やあらたに開発した深紫外光LED照射機器を用い、臨床レベルで、Treg数、Dysfunctional Tregの機能回復、aTreg、RNAシークエンス、Treg関連遺伝子のエピジェネティック解析を行う予定である。マウス・ヒトレベルでの紫外線(可視光線)の選択的波長の利用することによるTreg誘導(しかも、nTregとiTregを波長ごとに誘導する可能性)が明らかとなる。表面マーカーの解析(FACS)、RNAシークエンス、Treg関連遺伝子のエピジェネティック解析から、誘導されるTregの詳細なタンパク・遺伝子発現・エピジェネティックプロファイルが明らかとなり、より詳細な波長ごとの特性を明らかにすることができる。これらの結果から、さらに、どのような光生物学的メカニズムによって、波長ごとの特性がえられるか、検討を進める予定である。さらに、予定通り、制御性T細胞を誘導する樹状細胞を誘導する波長特性解析、免疫を制御するUVA1(340-400nm)の有効波長の探索もあわせて進める予定である。
細胞の運動性と形状の操作による走化性シグナル伝達機構の制御と理解

細胞性粘菌は,細胞外cAMPに依存したcAMPの合成と分泌(cAMPリレー応答)により大域的ならせん波様のcAMP濃度場を形成し(cAMP振動),cAMPを誘引物質とする走化性運動により集合する.我々は,cAMPリレー応答等の細胞の応答が,細胞骨格タンパク質の量や,細胞の運動性や形状にどのように依存するかを検証した.アクチン重合阻害剤の濃度勾配下では,低濃度側でのcAMP振動の周期は短く,また低濃度側で多くのらせん波中心が生成されることがわかった.さらに,細胞と基質との間の接着を促進するポリマー分子を基質にコートした状況で集団のcAMP振動を観察することに成功し、その周期は増大することがわかった.この特徴は,野外環境においてアクチン重合の阻害等により運動しづらいような地点が存在したときに,そこからの距離が遠い地点に集合中心が生じやすくなる,という生存戦略を担っていると期待される.アクチン重合の薬理的阻害や基質接着の促進による細胞の重心移動の抑制により,Fーアクチン量が減少することがわかった.cAMPリレー応答とFーアクチンの動態を同時可視化したところ,両応答の強度は正に相関することがわかった.また,細胞の形状の周期的変動と細胞内cAMP濃度の周期的変動の位相が一致する様子が時折観察された.以上の結果とこれまでの研究結果を合わせることで,一細胞レベルのcAMPリレー応答と細胞集団のcAMP振動は,Fーアクチンや基質への接着に依存する現象である可能性が強く示唆された.細胞の応答の運動依存性が生物学的にも意義のある重要な特徴であることを示すことができた.細胞の挙動の理解をより深める上で,本研究のように,細胞の応答の運動依存性を解析することは重要であると考えられる.上記の結果とこれまでの研究結果に基づいた論文を投稿中である.27年度が最終年度であるため、記入しない。27年度が最終年度であるため、記入しない。細胞性粘菌は細胞外cAMP依存的なcAMPの一過的な合成と分泌(cAMPリレー応答)によってcAMPの進行波を形成し、cAMPへの走化性運動により集合する。我々は、cAMPリレー応答等の細胞の応答が、細胞骨格タンパク質の量や、細胞の運動性や形状にどのように依存するかを検証検証してきた。以下に平成26年度の成果を記す。細胞内cAMPと重合したアクチン(F-アクチン)を可視化する蛍光プローブを同時に発現する細胞株を用いて、これら2つの量が細胞外cAMP依存的にどのように変化するかを一細胞レベルで測定した。その結果、ある条件下においては、細胞内cAMP濃度の周期的変化が、膜に局在するF-アクチンの総量の周期的変化と同調することがわかった。また、細胞の形状の周期的変化についても、ある条件下では、細胞内cAMP濃度の周期的変化と同調することがわかった。これは、アクチンの重合やそれに伴う細胞の形状の変化が細胞内cAMPによって積極的に制御される可能性を示しており、細胞内cAMP濃度の周期的変化の意義になりうるものである。ガラス基板上に細胞接着を促進するポリマー分子を様々な密度でコーティングした状態で細胞外cAMP刺激を細胞に与えるための微小流体デバイスを作製することに成功した。これを用いて、細胞の運動性を操作した状態でのcAMPリレー応答を一細胞レベルで測定した。その結果、ポリマー分子のコーティング密度依存的にcAMPリレー応答が抑制されることがわかった。これは、細胞の運動性に依存した細胞内cAMP濃度の変化が生じていることを示唆する。上記の結果とこれまでの研究結果に基づいた投稿論文を執筆中である。細胞性粘菌は,細胞外cAMPに依存したcAMPの合成と分泌(cAMPリレー応答)により大域的ならせん波様のcAMP濃度場を形成し(cAMP振動),cAMPを誘引物質とする走化性運動により集合する.我々は,cAMPリレー応答等の細胞の応答が,細胞骨格タンパク質の量や,細胞の運動性や形状にどのように依存するかを検証した.アクチン重合阻害剤の濃度勾配下では,低濃度側でのcAMP振動の周期は短く,また低濃度側で多くのらせん波中心が生成されることがわかった.さらに,細胞と基質との間の接着を促進するポリマー分子を基質にコートした状況で集団のcAMP振動を観察することに成功し、その周期は増大することがわかった.この特徴は,野外環境においてアクチン重合の阻害等により運動しづらいような地点が存在したときに,そこからの距離が遠い地点に集合中心が生じやすくなる,という生存戦略を担っていると期待される.アクチン重合の薬理的阻害や基質接着の促進による細胞の重心移動の抑制により,Fーアクチン量が減少することがわかった.cAMPリレー応答とFーアクチンの動態を同時可視化したところ,両応答の強度は正に相関することがわかった.

また,細胞の形状の周期的変動と細胞内cAMP濃度の周期的変動の位相が一致する様子が時折観察された.以上の結果とこれまでの研究結果を合わせることで,一細胞レベルのcAMPリレー応答と細胞集団のcAMP振動は,Fーアクチンや基質への接着に依存する現象である可能性が強く示唆された.細胞の応答の運動依存性が生物学的にも意義のある重要な特徴であることを示すことができた.細胞の挙動の理解をより深める上で,本研究のように,細胞の応答の運動依存性を解析することは重要であると考えられる.上記の結果とこれまでの研究結果に基づいた論文を投稿中である.計画通り、細胞の運動性を操作した状態での応答を測定し、細胞の環境への応答と細胞の運動性との間の関係を明らかにすることができた。また、F-アクチンを可視化するプローブを用いたことにより、細胞内cAMPとの量的関係をより明確な形で記述できた。ガラス基板上に細胞の接着を抑制するポリマー分子をパターニングする技術を取り入れ、細胞の空間的配置を操作することには成功した。しかし、当初の目的であった細胞の形状を操作できるデバイスの作製には至っていない。27年度が最終年度であるため、記入しない。細胞内cAMPの量とF-アクチンの量や細胞の形状の周期的変化が同調する現象がどのような条件で生じるのかを検証していく。その結果を踏まえて、この現象のメカニズムやその意義を明らかにしていく。現在、基板に対する細胞の接着性の違いが関係していると考えているので、細胞の接着を抑制した状態での応答を測定する。これと、細胞の接着を促進した状態での応答(ガラス基板上にポリ-L-リジンをコーティングした状態)とを比較する。また、アクチンの重合量に依存して細胞内cAMPの上昇量が変化することの意義を明らかにするために、アクチン重合阻害剤の濃度勾配存在下での細胞集団のcAMPリレー応答を観察する。細胞の形状を操作できるデバイスの作製を進めていく。作製でき次第、形状を操作した状態での応答を測定する。
蛋白キナ-ゼによるトランスミッタ-放出の調節機構

1)80K蛋白cDNAのクロ-ニング及び一次構造解析:ラット脳シナプトソ-ムでCキナ-ゼの主要な基質と考えられている蛋白と相同なヒト蛋白をヒト培養細胞より精製した。その過程で分子量のわずかに異なる2種の蛋白(80K-H,80K-L)が存在することが明らかとなった。80K-Hに関しては、アミノ末端よりアミノ酸配列を23残基決定した。さらにブロモシアン分解により得られた2つのペプチドのアミノ酸配列も部分的に決定した。アミノ末端から23残基に対応する塩基配列を予想しヌクレオチドを合成した。これをプロ-ブとしてλgt10ヒトA431細胞cDNAライブラリ-より、80K-H蛋白cDNAを得た。cDNA塩基配列を決定し、80K-H蛋白のアミノ酸配列を推定した。80K-Hは513アミノ酸からなり分子量は57kDaで、その中にGluが非常に多い領域が存在した。一方、80K-Lに関しては、トリプシン分解産物のアミノ酸配列を8残基決定できた。この配列は既に報告されたウシMARCKS蛋白中に見いだされ、80K-LはウシMARCKSと相同であると考えられた。80K-L蛋白アミノ酸配列より推定した塩基配列及びMARCKScDNA塩基配列の一部に相当する2種のヌクレオチドを合成し上記cDNAライブラリ-より2クロ-ンを得た。現在塩基配列を決定中である。2)モノクロ-ナル抗体の作成:80K-Hのアミノ末端20残基及び80K-Lの部分アミノ酸配列20残基に相当するペプチドを合成しKLHに接合後、免疫原としてモノクロ-ナル抗体作成を試みた。現在、得られたクロ-ンを解析中である。抗血清を用いた予備実験において抗80K-H血清は中枢及び末梢神経線維に強い染色性を示した。
産業用繊維を空気流で操作するための空気力学的特性の解析

本研究は、炭素繊維やアラミド繊維など「産業用繊維」を、従来の衣料製織技術と同様に、空気流を利用して飛ばしたり保持したり移動させるなど、繊維を自在に操るための空気力学的特性を明らかにしようとしている。円形断面の材料において、空気摩擦抗力係数は糸半径を代表長さとする半径レイノルズ数で整理できることがわかったが、繊維をテープ状に収束させた材料では、剛体平板と同様に、繊維長を代表長さとする長さレイノルズ数で整理できることがわかった。空気抗力係数の大きさに影響を及ぼす因子としては、拘束条件、糸半径、テープ幅、繊維の柔軟性があげられる。これらは繊維が空気流によって振動する「はためき」に大きく関係している。本研究は、最近脚光を浴びている炭素繊維やアラミド繊維など「産業用繊維」において、従来の衣料製織技術と同様に、空気流を利用して飛ばしたり保持したり移動させるなど、繊維を自在に操作するための空気力学的特性を明らかにすることを目的としている。最初に、ガラス繊維・炭素繊維・高性能PE繊維・PBO繊維・アラミド繊維などの産業用繊維を入手し、その繊維や織物の構造および特性を観察および計測した。産業用繊維は、複合材料の素材として利用されることから、繊維数が極めて多く平らな状態で製織されることが多い。特に炭素繊維については、その取り扱いについて安全上の対策も大変重要で、機器の電気的保護や人体への影響なども十分考慮し、まずは衣料用繊維による再現からアプローチを試みた。そこで、特性が既知の衣料用繊維に収束剤を使用して円形からテープ状にまで断面形状を変化させ、その形状が及ぼす空気抗力およびはためき挙動への影響について検討した。実験では、産業用繊維に近い特性を得るために、幾つかの収束剤を準備しその濃度などについても検討を行った。現在、いろいろな形状寸法・繊維数・糸構造・物性などをもつ糸について、空気抗力、空気抗力係数、はためき挙動などの実験を行っている。観察から、これまでの円形断面を有する糸に比べ曲率の効果はほぼなく、平板に近い傾向を示していることが確認された。しかし、空気流そのものやその乱れの影響も大きく受け、はためきによる抗力増加や、摩擦抗力と圧力抗力の同時解析も必要と考えられる。最初に、産業用繊維に関する調査を行うとともに製造工程なども見学して、ガラス繊維・炭素繊維・高性能PE繊維・PBO繊維・アラミド繊維などの産業用繊維および織物サンプルを入手した。これをもとに、繊維や織物の構造および特性を調査し、衣料用繊維との比較、空気力学的特性に及ぼす影響などを検討した。一方、今年度は繊維の空気抗力を測定するための吸い込み流実験装置の製作にも着手した。装置は直径30mm長さ1000mmの円筒空間において最大120m/sまでの空気流を発生させることができ、その中に繊維を挿入することによって太さや構造・拘束条件を変えた様々な繊維の張力を測定することができる。空気抗力係数が既知であるモノフィラメント糸の空気抗力を計測することで、この装置の検定までが完了した。より高速の空気流については、圧縮空気を使用したジッットノズルの装置を準備し、300m/s超(音速域)までの空気流を生成できるようになった。加えて、産業用繊維を取り扱う上で問題となる毛羽・粉塵・フライなどに対して、機器の電気的保護や人体への影響なども十分考慮し、安全性の確保についても取り組んだ。本研究は、最近脚光を浴びている炭素繊維やアラミド繊維など「産業用繊維」において、従来の衣料製織技術と同様に、空気流を利用して飛ばしたり保持したり移動させるなど、繊維を自在に操るための空気力学的特性を明らかにすることを目的としている。代表的な産業用繊維を入手し、その繊維の特徴を観察するとともに、空気抗力を測定するための実験装置を製作した。産業用繊維は、そのまま使用されることもあるが、多くはFRPのようにプラスチックの強化材として使用されることが多く、あらかじめサイジング剤でテープ状に成形されている。そこで、本研究では従来の円形断面を持つ糸ならびにテープ状の素材を使って、その形状が空気抗力に及ぼす影響とはためきの影響について検討した。この結果、単繊維や細い繊維を収束させた円形断面をもつ糸では、空気摩擦抗力係数は糸半径を代表長さとする半径レイノルズ数で整理できることがわかったが、テープや細い繊維をテープ状に収束させた材料では、剛体平板と同様に、繊維長を代表長さとする長さレイノルズ数で整理できることがわかった。

ただ、空気抗力係数の大きさに影響を及ぼす因子としては、次のようなものがあげられる。繊維の両端を固定した時より一端を解放した自由端条件の時のほうが抗力係数は大きい。また、テープ幅がある程度あると抗力係数は一定となるが、テープ幅が狭くなると抗力係数は増加していく。さらに、自由端条件でも繊維の剛性が高い場合には剛体平板に近い抗力係数を示すが、繊維の柔軟性が増すと抗力係数も増加していく。これらは、いずれも繊維が空気流によって振動する、いわゆる「はためき」が起こりやすい条件となっており、テープ状の形状を持つ繊維集合体では、この点が空気抗力係数に大きな影響を及ぼしていることが明らかとなった。断面が円形から矩形に変化する過程での変化、はためきについても今後詳しく検討していく必要がある。制御工学研究対象である各種「産業用繊維」は最先端の材料であり、研究開発および市場シェアに関する競争も極めて激しい。このため、どのメーカーでも閉鎖性・機密性が高く、容易に素材を入手することができなかった。現在はサンプル提供いただいた素材をもとに、研究は進んでいるが、当初の計画から若干の遅れを生じている。研究対象となる各種「産業用繊維」は最先端の素材であり、研究開発および市場シェアに関する競争も極めて激しい。このため、どのメーカーでも閉鎖性が強く機密の点からも、容易に素材を購入することができなかった。そこで、メーカーなど数社に研究協力を依頼しサンプルの提供は実現したが、研究の進捗に若干の遅れを生じている。その他、実験装置の製作等は計画どおり順調に進んでいる。これまでの衣料用繊維と異なり、複合材料素材しての産業用繊維はフィラメント数が極めて多く平らな形状で製織されることが多い。このため、繊維束の断面形状が空気抗力に及ぼす影響やテープ状繊維のはためき挙動などについて基礎データを収集する。これらをもとに、空気流を使って繊維をさまざまに操作する上での、産業用繊維のもつ特有の問題点や特徴を明らかにしていく。さらに、産業用繊維を確実かつ効率的に操作するための条件などについても検討していく。今後は、形状寸法・糸構造・物性など産業用繊維の特徴を把握するための測定を継続する。同時に、空気流に対する繊維の空気力学的特性について実験を行い、基礎データを収集する。これらをもとに、空気流を使って繊維をさまざまに操作する上での、従来の衣料用繊維との違い、産業用繊維のもつ特有の問題点や特徴を明らかにしていく。初年度に計画していたメーカーからの産業用繊維の購入が予想以上に困難で、結果としてサンプル提供という形で入手が実現し、その時の残額が引き続き繰り越しとなっている。新たに繊維収束剤や乾燥ヒーターなども必要となっており、残額をこれらに充当する計画である。その他については、調査研究費、計測装置消耗品の購入、ソフトウェアサポート料など当初の計画どおり使用する予定である。当初予定していたメーカーからの産業用繊維購入が予想以上に困難で、結果としてサンプル提供という形で実現したため、研究費に残額が生じてしまった。しかし、今後繊維を加工しながら実験をするにあたり、繊維を被覆・収束させるためのサイジング剤が新たに必要となった。
家計部門の省エネ化策の提案を目的とした世帯の用途別電力消費分析

本研究では,以下の5つの研究課題に取り組むことを予定している.【課題1】総務省の全国消費実態調査(全消調査)と二酸化炭素排出量の推計に関わる実態調査(CO2調査)のデータを入手・分析し,どの様な世帯がどの様な家電にどれ位の電気を利用しているか,どの様に節電行動を行っているかを明らかにする.【課題2】家電の省エネ化がどれ位世帯の電力消費の削減に貢献したか,省エネ技術の影響評価を行う.【課題3】全消調査とCO2調査のデータ分析の結果を人口将来予測と組み合わせることで,家計部門の電力消費が将来どの様に変化していくか,人口動態の影響予測を行う.【課題4】エネルギー課税の逆進性の緩和策を提案する.【課題5】同一世帯が電気料金の変化に応じて,電力使用量をどの様に変化させたかについて調査する.2018年度は,課題1に関連して,世帯の家電別のエネルギー消費量を推計し,LED化による節電量も推計した.そして,2件の学会発表を行った.成果論文は,現在英文査読誌に投稿中である.課題2に関連した成果論文を英文査読誌に掲載した.同論文ではトップランナープログラムの省エネ効果が家電の大きさと数が増加したために,失われてしまったことが示されている.この結果は,家庭が節電できたお金を他のエネルギーサービスの使用にまわせる場合には,技術進歩だけにたよっていては省エネ化を望めないということを示唆している.課題3と課題4と課題5については,次年度の分析のためのデータ整理,業者との打ち合わせなどの下準備を行った.初年度の段階で,2件の学会報告と1本の論文掲載まで済ませることができている.2019年度にも2件の国際学会での報告が採択されており,1本の論文掲載も既に決定している.加えて,現在2本の論文を英文査読誌に投稿中であり,更なる研究成果の講評が期待される.研究課題1ー3については,既に一定の成果が出ているが,研究課題4ー5についても,準備は順調に進んでいるといえる.今年度から来年度にかけては,学会報告を行った論文の専門誌への掲載を目指すとともに,残された以下の2つの研究課題を着実に進める。【課題4】全国消費実態調査のデータを利用し,どの様な世帯がどの様な目的で電気を利用しているかを示した後に,逆進性の緩和策の提案を行うことを目指す。【課題5】調査会社に依頼を行い複数年の電気代が確認できる世帯を選別して貰う.それらの世帯の電気代の変化を分析することで,電力料金の影響分析を行う.初年度にスクリーニングは住んでいるので,本年度に継続調査を実施する予定である.本研究では,以下の5つの研究課題に取り組むことを予定している.【課題1】総務省の全国消費実態調査(全消調査)と二酸化炭素排出量の推計に関わる実態調査(CO2調査)のデータを入手・分析し,どの様な世帯がどの様な家電にどれ位の電気を利用しているか,どの様に節電行動を行っているかを明らかにする.【課題2】家電の省エネ化がどれ位世帯の電力消費の削減に貢献したか,省エネ技術の影響評価を行う.【課題3】全消調査とCO2調査のデータ分析の結果を人口将来予測と組み合わせることで,家計部門の電力消費が将来どの様に変化していくか,人口動態の影響予測を行う.【課題4】エネルギー課税の逆進性の緩和策を提案する.【課題5】同一世帯が電気料金の変化に応じて,電力使用量をどの様に変化させたかについて調査する.2018年度は,課題1に関連して,世帯の家電別のエネルギー消費量を推計し,LED化による節電量も推計した.そして,2件の学会発表を行った.成果論文は,現在英文査読誌に投稿中である.課題2に関連した成果論文を英文査読誌に掲載した.同論文ではトップランナープログラムの省エネ効果が家電の大きさと数が増加したために,失われてしまったことが示されている.この結果は,家庭が節電できたお金を他のエネルギーサービスの使用にまわせる場合には,技術進歩だけにたよっていては省エネ化を望めないということを示唆している.課題3と課題4と課題5については,次年度の分析のためのデータ整理,業者との打ち合わせなどの下準備を行った.初年度の段階で,2件の学会報告と1本の論文掲載まで済ませることができている.2019年度にも2件の国際学会での報告が採択されており,1本の論文掲載も既に決定している.加えて,現在2本の論文を英文査読誌に投稿中であり,更なる研究成果の講評が期待される.研究課題1ー3については,既に一定の成果が出ているが,研究課題4ー5についても,準備は順調に進んでいるといえる.今年度から来年度にかけては,学会報告を行った論文の専門誌への掲載を目指すとともに,残された以下の2つの研究課題を着実に進める。【課題5】調査会社に依頼を行い複数年の電気代が確認できる世帯を選別して貰う.それらの世帯の電気代の変化を分析することで,電力料金の影響分析を行う.初年度にスクリーニングは住んでいるので,本年度に継続調査を実施する予定である.気象条件の理由からアンケートの実施を次年度としたため。
「面影」に関わる心理機能の解明

人の顔や風景などを見た際、そこにかつての有様を感じることは、日本では「面影」という概念で表現されてきた。「面影」とは、眼前の知覚情報を誘因として、記憶情報が想起されたり、その記憶情報を眼前の知覚対象に投影・定位したりする能動的な認知機能といえる。さらにその際、懐かしさや喪失感と行った情緒反応が伴う場合もあり、心理学の観点から見ても興味深い現象といえる。本研究では、「面影」に関わる認知過程やその誘発要因などについて心理学的に検証することを目的としている。本年度はまず、日常生活において「面影」という概念がどのような意味で用いられているかなどについて、探索的な概念分析・用例分析を開始した。具体的には、大学生を対象とした予備調査を通して、「面影」の定義や「面影」から連想・イメージすること、「面影」の日常的な使用事例などの収集に着手した。さらに、「面影」という言葉の用いられ方や他の言葉との共起関係を検討するため、NINJAL-LWPなどの日本語コーパスを用いて、「面影」のコロケーション分析を行った。これらの概念分析・用例分析は現在も継続中であるが、ここから得られた知見を踏まえ、「面影」の主観的評価の尺度を作成する予定である。また、以上の検討と並行して、顔写真に対して感じる面影に特に焦点を当て、面影を誘発する外的要因を検討するための準備も開始した。具体的には、インターネットを通して有名人の子どもの頃の写真などの収集や、モーフィング技術などの顔画像加工を通して、面影の外的な誘発要因について探索的に検討した。今後は収集した画像や加工した顔画像を用いて、面影の評定調査を行い、面影の誘発要因を検討していく予定である本年度は、日常生活における「面影」という概念の用いられ方についての概念分析・用例分析を開始した。質問項目の検討や準備に時間がかかってしまったため、当初の計画よりもやや遅れている。しかしその一方で、来年度以降に計画していた「面影」の誘発要因を検討についても、今年度から着手できている。したがって、総合的に見れば、研究はおおむね順調に進展しているといえる。まず、「面影」の日常的な使用事例を収集し、整理・分類することで、日常生活における「面影」という概念の用いられ方について、探索的に事例分析する。さらに、面影に関わる因子を特定し、「面影」の主観的評価の尺度の作成を試みる。次に、著名人の写真を収集・選別し、モーフィング加工などを施した画像を作成する。そして、これらの画像に対する「面影」の主観的評価を通して、「面影」を誘発する外的要因(視覚的特徴)の特定を試みる。物品(ノートパソコンなど)を当初想定していたよりも安い金額で購入できたため、次年度使用額が生じた。次年度は、調査データや実験用画像を保存するためのハードディスクなどの購入に使用する予定である。
スーザン＝ロリ・パークスの作家としての戦略

本研究の主目的は、劇作家スーザン=ロリ・パークスの上演テクストの分析であるが、2018年度は、ニューヨークにて海外調査を実施し、ニューヨークで上演されたパークスの最新の戯曲作品、"White Noise"を見ることが出来た。これにより、劇作家としてのパークスの30年ほどのキャリアの中で、彼女の作風やスタイル、また政治的意識の持ち方を、今日の視点から、その変遷と在り方を考証することが可能となる。戯曲はメディアにおいて概ね高く評価されていることから、現代におけるパークスの作家としての重要性を裏付けることにもなっている。2019年の夏に刊行されている同戯曲テクストも分析し、この調査の結果とともに2019年度に論文として発表していく予定である。加えて、ニューヨーク公立図書館のビデオ・アーカイブにて行った調査で、パークスの作品の演記録を調査することができ、これまでに戯曲テクストに基づいて行っていた分析を深化させることが出来た。戯曲以外にも、パークスが手がけたミュージカルなどの映像を視聴し、視点の多角化につながった。2017年度から行っていた本研究における考察の一部を、2018年度に英語の論文にした。この論考で扱った作品、"Father Comes Homefrom the Wars"は、ギリシャの古典を下敷きとした3部作で、パークスの初期の代表作と比較して、ナラティヴが中心的な要素となっている。その観点から、アメリカ演劇史のキャノン的作家、ユージーン・オニールの戯曲とのつながり、さらにパークスの政治的な意識と表現のスタイルとの関係についても考察した。それにより、パークスとアメリカ演劇史との関わり、また、アフリカ系アメリカ人の歴史を演劇空間で表象するという試みの意義について明らかにした。2017年度、2018年度に論文を1本ずつ刊行し、これについては、若干目標との隔たりがあるものの、概ね計画通りのペースであると言えると考えている。一方で、予定していた劇作家へのインタビュー調査計画が進んでおらず、この点については、勤務校の業務予定を研究計画に組み直すなどして、残りの研究期間内で実施できるようにしたい。2019年度が3年目となり、4年にわたる計画の後半となるので、これまでの資料・文献調査の総括となるように、テクストの分析、理論的な考証、海外の劇場での調査に加え、劇作家へのインタビューを行い、作家研究としてまとめていく。2019年の夏には、研究課題としている劇作家の最新の戯曲が刊行されるため、2018年度に行ったNYでの調査と併せて、この戯曲の考察を研究に加えていく。理論的には、デリダやアラン・バディウの演劇についての思想を引き続き検証し、歴史的には、ギリシャ演劇とアフリカ系アメリカ演劇との関係からパークスの作品を考察することも視野に加えてゆく。学会での活動については、2018年度に国内で行われた学会で、パークスの作品を扱った研究発表2つの司会をする機会を経て、全国の、とくに若手の研究者とともにパークスの現代における評価について考察する機会を持てたため、今後、そのような研究者たちとの意見交換を活発に行い、さらには、過去の留学先であるニューヨーク大学の研究者との意見交流も視野に入れて、研究のためのネットワークの充実を目指す予定である。平成29年度は、主に文献調査を中心に、スーザン=ロリ・パークスの創作活動の政治的・歴史的な位置づけを検証した。扱った文献は、主にアメリカで出版された博士論文である。それらの分析により、(1)パークスについて現在・およびこれまでにどのような研究が行われているか。(2)現代におけるアヴァンギャルド演劇の社会的な意義をいかに見出すか。(3)パークスの劇作を分析するための理論的枠組みは何か。(4)パークスと比較して検証すべき作家や演劇グループについて、どのような研究が行われているか、の主に4つの観点から、今後の自分の研究の発展のための基礎となる情報の整理を行った。より具体的には、(2)の文献調査より、1980年代以降に発表されているパークスの作品を分析するためには、「アメリカにおける60年代のアヴァンギャルド演劇に見る人種のポリティクス」が、比較・検証のための対象として有効であるとわかった。また、(3)に関する文献調査では、哲学者アラン・バディウによる政治と演劇との関係性の批評を、新たな理論的枠組みとして得ることができた。バディウの理論は、パークスの戯曲の上演テクストを分析する際にとくに有効であるため、「上演の政治性をいかに分析するか」という本研究課題の推進のためには大きな手掛かりとなる。こうした文献調査は、研究の目的である「上演形式」と「内容」の関係を明らかにし、パークスの劇作の社会的意義を検証していく上では不可欠なプロセスであった。今年度以降は、上演の調査に重点を置き、研究を発展させていく予定である。戯曲の他に、平成29年度は、パークスの小説を対象に、その創作技法と政治的な戦略を分析した。それにより、劇作家としてのパークスの政治的な立場が、小説においても反映されていることが明らかとなり、パークスの創作活動をより包括的に検証することにつながった。本研究の遂行には文献調査とインタビュー調査、現地資料調査が必要である。海外調査(インタビューや資料収集)は、平成29年度は実施しなかった。これは、申請者の所属先の変更により、スケジュールの見直し等が必要となったことによるものである。そのため、平成29年度は、文献による調査を主に行い、海外調査を次年度に行うように調整している。

その結果、課題全体で見れば、研究手順に多少前後はあるものの、おおむね順調に進展していると考えている。本研究の主目的は、劇作家スーザン=ロリ・パークスの上演テクストの分析であるが、2018年度は、ニューヨークにて海外調査を実施し、ニューヨークで上演されたパークスの最新の戯曲作品、"White Noise"を見ることが出来た。これにより、劇作家としてのパークスの30年ほどのキャリアの中で、彼女の作風やスタイル、また政治的意識の持ち方を、今日の視点から、その変遷と在り方を考証することが可能となる。戯曲はメディアにおいて概ね高く評価されていることから、現代におけるパークスの作家としての重要性を裏付けることにもなっている。2019年の夏に刊行されている同戯曲テクストも分析し、この調査の結果とともに2019年度に論文として発表していく予定である。加えて、ニューヨーク公立図書館のビデオ・アーカイブにて行った調査で、パークスの作品の演記録を調査することができ、これまでに戯曲テクストに基づいて行っていた分析を深化させることが出来た。戯曲以外にも、パークスが手がけたミュージカルなどの映像を視聴し、視点の多角化につながった。2017年度から行っていた本研究における考察の一部を、2018年度に英語の論文にした。この論考で扱った作品、"Father Comes Homefrom the Wars"は、ギリシャの古典を下敷きとした3部作で、パークスの初期の代表作と比較して、ナラティヴが中心的な要素となっている。その観点から、アメリカ演劇史のキャノン的作家、ユージーン・オニールの戯曲とのつながり、さらにパークスの政治的な意識と表現のスタイルとの関係についても考察した。それにより、パークスとアメリカ演劇史との関わり、また、アフリカ系アメリカ人の歴史を演劇空間で表象するという試みの意義について明らかにした。2017年度、2018年度に論文を1本ずつ刊行し、これについては、若干目標との隔たりがあるものの、概ね計画通りのペースであると言えると考えている。一方で、予定していた劇作家へのインタビュー調査計画が進んでおらず、この点については、勤務校の業務予定を研究計画に組み直すなどして、残りの研究期間内で実施できるようにしたい。初年度において遂行した文献・資料調査をもとに、今後は、研究計画書にもあるとおり、アメリカ合衆国ニューヨーク市での資料調査やインタビューなどを行い、研究対象としている劇作家の作品の上演についての分析をより重点的に行う。その際、アラン・バディウの理論などを新たに分析の方法に加え、スーザン=ロリ・パークスの戯曲の上演に、作家の政治的な戦略がどのように反映されるのか、また、「黒人女性作家」というパークスの出自と彼女の政治的な立場との関係がどのように評価されるべきなのかという点を引き続き検証してゆく。そのうえで、演劇作品の上演形式と内容との関連やその政治的・社会的意義をじゅうぶんに検証し、論文として発表する。また、国内外の研究者とコンタクトを取り、演劇研究の動向、方法論などについて意見交換を行ってゆく予定である。
ゲノム編集技術とiPS細胞を利用した脳腫瘍に対する遺伝子細胞療法の開発

はじめに、ヒトiPS細胞から分化誘導した神経幹細胞(NSC)にウイルスベクターを用いてHSV-tK遺伝子を導入した。脳腫瘍モデルマウスにHSV-tk発現NSCを移植し、Ganciclovir (GCV)を投与したところ、著明な治療効果が認められた。つぎにゲノム編集によりHSV-tk遺伝子をiPSに導入したところ、細胞毒性により安定したiPS細胞株が樹立できなかった。そこで、遺伝子発現誘導システムを用いて、Tet-inducible HSV-tk導入iPS細胞を樹立した。治療用NSCを誘導し、脳腫瘍モデルマウスに移植後、GCVとDoxycyclineを投与すると、著明な治療効果が確認された。腫瘍幹細胞(BTSC)は、腫瘍周辺の正常脳組織へ浸潤する性質を有し、悪性神経膠腫が極めて治療困難な要因の一つと考えられている。これまで、悪性神経膠腫に対する様々な遺伝子治療が開発され、我々もherpes simplex virus vector (HSV vector)を中心に治療研究を進めてきたが、欧米での臨床試験の結果では、浸潤性の悪性グリオーマに対する治療効果は十分ではなかった。一方、神経幹細胞(NSC)は、脳内を遊走し脳腫瘍へ集積する性質を有することから、治療遺伝子を搭載する細胞としての役割も注目され、とくに最近、iPS細胞の臨床応用が開始されたことから、ヒトNSCの供給も現実的になりつつある。そこで本研究では、治療困難な浸潤性BTSCの根絶を目指してiPS細胞誘導NSCを用いた新たな遺伝子細胞治療の開発を行う。本研究では、早期に臨床応用可能なプラットファーム技術を確立するため、すでに臨床応用された自殺遺伝子治療のHSV-tKとGanciclovir (GCV)を利用した。はじめにヒトiPS細胞およびiPS細胞から分化誘導したNSCの各段階でレンチウイルスベクターを用いてHSV-tK遺伝子を導入し、それぞれの細胞に対するGCVの薬剤感受性を調べた。つぎに、HSV-tK遺伝子発現NSCと脳腫瘍細胞を共培養して、GCV投与後の脳腫瘍細胞に対するin vitroでのbystander effectを確認した。さらに安定した遺伝子発現を得るため、CRISPR/Cas9システムを使用して、iPS細胞のハウスキーピング遺伝子であるGAPDH領域にHSV-tk遺伝子を挿入した。HSV-tK遺伝子挿入および発現を確認し、現在、治療用細胞となるNSCへの分化誘導を行っている。HSV-tK遺伝子を発現するiPS細胞から分化誘導したNSCの作成に成功し、GCV投与後の脳腫瘍細胞に対するin vitroでのbystander effectを確認した。さらにゲノム編集技術(CRISPR/Cas9システム)を利用して、iPS細胞のGAPDH領域にHSV-tk遺伝子を挿入し、HSV-tK遺伝子発現iPS細胞の作成に成功した。本年度の目標はおおむね達成することができた。これまで、悪性神経膠腫に対する様々な遺伝子治療が開発されたが、欧米での臨床試験の結果では、浸潤性の悪性グリオーマに対する治療効果は十分ではなかった。本年度は、in vivoでの治療効果の解析を中心に行った。ヒトiPS細胞由来NSCにレンチウイルスベクターを用いてHSVtk遺伝子を導入し、ヒト脳腫瘍モデルマウスに移植すると、ganciclovir(GCV)投与により著明な治療効果(bystander effect)を認め、本治療法の有効性を証明することができた。一方、治療用NSCの安定供給のためには、ヒトiPS細胞にHSVtk遺伝子を導入することが望ましい。そこで、レンチウイルスベクターおよびゲノム編集によりHSVtk遺伝子をiPSに導入したところ、細胞毒性により、安定してHSVtkを発現するiPS細胞株が樹立できなかった。そこで、我々はTet-inducibleシステムを用いることによりこの問題を解決した。Tet-inducible HSVtk導入iPS細胞株の樹立に成功し、治療用NSCを誘導し、ヒト脳腫瘍モデルマウスに移植すると、GCVとDoxycycline(Dox)投与により、著明な治療効果が確認された(特願2017-092973)。1ヒトグリオーマモデル:ルシフェラーゼ遺伝子発現ヒトBTSCおよびグリオーマ細胞を免疫不全マウス脳内移植し、ヒトグリオーマ・マウスモデルを作成する。

さらにヒトiPS由来NSC(HSV-tK遺伝子導入)を移植し、経時的に組織解析することにより、グリオーマへの集積性を解析・評価する。2マウスBTSCモデル:マウスBTSCにルシフェラーゼ遺伝子導入後、脳内移植モデルを作成する。一方、HSV-tK遺伝子発現マウスNSCを作成し、マウスBTSCモデルに移植して、経時的に組織解析することにより、BTSCへの集積性を解析・評価する。・in vivoモデルにおける遺伝子細胞療法の有効性の解析1ヒトグリオーマに対する治療効果の検討:上記ヒトグリオーマモデルに、HSV-tK遺伝子発現・ヒトiPS由来NSCを移植し、GCVを投与する。GCV投与後の治療効果について、IVIS imaging systemを利用したin vivo腫瘍イメージングおよび生存解析を行う。また、治療効果の機序解明のため、経時的に脳組織を摘出し、組織学的解析を行う。2マウスBTSCモデルに対する治療効果の検討:上記マウスBTSCモデルにHSV-tK遺伝子発現・マウスNSCを移植して、GCVを投与する。GCV投与後の治療効果について、in vivo腫瘍イメージングおよび生存解析を行う。また、経時的に脳組織を摘出し、BTSC殺傷効果に加え、免疫反応について組織学的解析を行う。脳神経外科学効果的に物品調達を行った結果であり、次年度の研究費と合わせて試薬・消耗品などの購入に充てる予定である。次年度は、in vivoでの自殺遺伝子細胞療法の効果およびその機序の解析に重点を置くため、動物実験が主体となる。In vivoイメージング、組織学的解析などに必要な関連試薬を含め、多くの動物を購入する予定である。
末梢前庭器,前庭核および前庭小脳の解剖学的,生理学的特性と相互関連

末梢前庭においても各種の神経活性物質の存在が明らかにされているが,これら神経活性物質が機能的に重要であるためには,そのレセプターの存在を明らかとしなければならない.今回,サブスタンスPの主要なレセプターであるNeurokinnin1レセプター(NK1 receptor)の末梢前庭器でのmRNAの発現を検討した.Wister系雄ラットより採取した蝸牛および前庭の組織はチオシアニン酸グアニジン法(GTC法)にてRNAを抽出した.RNAは定量した後にRT-PCR法にて増幅した.RT-PCR法は逆転写酵素にて42°C25分,99°C5分反応させcDNA作成した.用いたプライマーは既に報告されたラットNK1レセプター遺伝子配列より作成した.センスプライマー:5'-+512ACA-GAG-ACC-ATG-CCC-AGC-AGA-GTC-G+536-3',アンチセンスプライマー:5'-+831GAG-ATC-TGG-GTT-GAT-GTA-GGG-CAG-G+807-3',とし,膜貫通部を含むように設計し,期待されるbase pair(bp)は320bpである.これらのプライマーを用いて94°C30秒,60°C1分,72°C2分を1サイクルとして,30サイクル増幅を行った.エチレンブロマイド加1.5%アガロースゲルにて電気泳動を行った.末梢前庭においてNK1 receptorの機能は不明点は多い.しかし,RT-PCR法を用いて蝸牛および半規管,耳石器組織での検討で,期待されるbase pairとしての320bpに単一のバンドが蝸牛および前庭組織にても形成されたことにより,末梢前庭器でもサブスタンスPの主要なレセプター(NK1 receptor)のmRNAの発現が認められ,サブスタンスPが内耳において機能的にも役割を担っていることが推察された.末梢前庭においても各種の神経活性物質の存在が明らかにされているが,これら神経活性物質が機能的に重要であるためには,そのレセプターの存在を明らかとしなければならない.今回,サブスタンスPの主要なレセプターであるNeurokinnin1レセプター(NK1 receptor)の末梢前庭器でのmRNAの発現を検討した.Wister系雄ラットより採取した蝸牛および前庭の組織はチオシアニン酸グアニジン法(GTC法)にてRNAを抽出した.RNAは定量した後にRT-PCR法にて増幅した.RT-PCR法は逆転写酵素にて42°C25分,99°C5分反応させcDNA作成した.用いたプライマーは既に報告されたラットNK1レセプター遺伝子配列より作成した.センスプライマー:5'-+512ACA-GAG-ACC-ATG-CCC-AGC-AGA-GTC-G+536-3',アンチセンスプライマー:5'-+831GAG-ATC-TGG-GTT-GAT-GTA-GGG-CAG-G+807-3',とし,膜貫通部を含むように設計し,期待されるbase pair(bp)は320bpである.これらのプライマーを用いて94°C30秒,60°C1分,72°C2分を1サイクルとして,30サイクル増幅を行った.エチレンブロマイド加1.5%アガロースゲルにて電気泳動を行った.末梢前庭においてNK1 receptorの機能は不明点は多い.しかし,RT-PCR法を用いて蝸牛および半規管,耳石器組織での検討で,期待されるbase pairとしての320bpに単一のバンドが蝸牛および前庭組織にても形成されたことにより,末梢前庭器でもサブスタンスPの主要なレセプター(NK1 receptor)のmRNAの発現が認められ,サブスタンスPが内耳において機能的にも役割を担っていることが推察された.前庭小乳のうち小節・虫部垂は垂直性眼球運動に関与し、その抑制性繊維が眼球運動の安定性に関与していると考えられる。本年度の研究の臨床的な検討としては、この様な眼球の安定性を欠如している症例について検討を加えてみた。基礎的な面からの検討として、まず神経系の発生学的な面から、神経繊維の伸展に関与しているとされる種々の細胞接着因子の末梢前庭器および中枢系での分布を組織学的にマウス、ラットを用いて検討を行なった。時にNeuralcell adhesion molecule(NーCAM)につきマウスを用いて胎生期の初期、中期、後期および生直後の発現について、NーCAMにたいする単クロ-ン抗体を用いて免疫組織学的に検討を加えた。このNーCAMを含めた神経系における細胞接着因子は神経の発生のみならず神経障害のさいに発現されるとされ、神経繊維再生のために重要な因子とされる。そこで、一側の迷路破壊、前庭神経切断等による末梢前庭器障害における前庭器、前庭核および前庭小脳の神経伝達物質、細胞接着因子の変化を検討した。しかし小動物では前庭代償の発現が哺乳動物に比較して非常に早いこと、麻酔方法の問題などまだ実験上の問題点が解決されていない。この点が解決されることにより、今後の検討課題としては組織学的な面のみならず、末梢前庭器、中枢系における発現の程度を定量的に検討することが必要となってくる。細胞接着因子の他、細胞外マトリックス、神経ペプチドについても検討中である。

垂直性眼球運動異常の機序として前庭小脳、および脳幹の関与が考えられるが、臨床的な解析から脳幹、前庭小脳の関与を示唆する臨床症例の検討を行なった。中枢性障害の異常眼球運動は代償過程が起こりにくいとされるが、疾患により軽度の障害においては治療法の選択により改善可能であることが認められた。末梢前庭器の障害における代償過程のメカニズムを解析するために、末梢前庭器の神経構築を関連の深い種々の細胞接着因子や細胞外マトリックスの分布を調べるとともに、その発生過程におけるこれらの分布の変化や発現時期について検討を行なった。用いた動物としては、ラットを使用し胎生期、生後直後の内耳、及び中枢よりの神経発生について検討を行なった。免疫組織学的に解析を行ない、N-CAM、Lamiminなどに対する抗体を用いて胎生期の種々の時期の発現形態を検討した。また、末梢前庭器の破壊による細胞接着因子の動態について検討中である。垂直性眼球運動障害に関与する部位として脳幹、前庭小脳の関与が考えられるが、臨床症例の検討からこの関与を認める特異な症例につき検討した。さらに、椎骨脳底動脈系の障害が垂直性眼球運動のみならず、斜向性あるいは回旋性眼球運動にも関与することが認められ、その責任病巣の局在、病因論につき検討を行った。前庭小脳、脳幹と末梢前庭器とのかかわりは主に密接な反射経路により結ばれている。より高次の中枢の存在が末梢前庭とどのようにかかわるかは今だ不明である。しかし、末梢性の前庭系入力の知覚(回転感覚)の高次中枢の局在は前庭代償、動揺病の発症機序などにとって重要と考えられ、この前庭感覚の中枢局在、機能について臨床例につき検討を加えた。神経系のネットワークを形成するうえで接着分子は重要である。この意味において、ラットを用いた基礎的な研究は、末梢前庭および脳幹部位における各種接着分子の発現などについて検討した。発生段階における接着分子の動態については免疫組織学的に検討され、その局在の変化を観察した。残念ながら末梢前庭障害とそれにより引き起こされる前庭代償機転におけるこれらの因子の役割については明確な結論は得られず、現在さらに検討をすすめている。
マルチ化された一重項ビラジカルの合成と構造・物性解析

リン複素環構造を有する一重項ビラジカルは室温・空気中という通常の環境で取り扱い可能な安定分子である。この一重項ビラジカル構造を同一分子内に複数個導入した「オリゴ(ビラジカル)」を合成してその基本物性を解析したところ、ビラジカルユニット間に空間を介した特異な相互作用が発現することを見出した。この性質を利用すれば、従来の設計指針にとらわれない斬新な分子エレクトロニクス材料を開発できると期待される。室温・空気中で取り扱い可能なリン複素環一重項ビラジカル(1,3-ジホスファシクロブタン-2,4-ジイル)ユニットを複数個分子内に導入すると、ビラジカルユニット間に明確な共役構造は無くとも相互作用が発現することを明らかにした。すなわち、ビスー、およびトリス(メチレン)ベンゼン構造をスペーサー部位としてビラジカルユニットを連結して「オリゴ(ビラジカル)」を安定に合成し、その電気化学特性を解析したところ、ビラジカル部位からの電子放出が段階的に生じることが観測された。このことは、ビラジカルユニットが空間を介して相互作用することを示唆する知見である。またさらに、一重項ビラジカル部位が電子移動の経路を形成できることを示しているとも言える。このような特徴から、一重項ビラジカル構造を利用することによって、パイ平面分子構造の積層を基本とする従来の有機エレクトロニクス材料の設計指針にとらわれない、新たな機能性物質の創製が可能であることが期待される。その一方、オリゴ(ビラジカル)の合成においては、難溶性で物性測定が困難となる分子系が幾つか見出された。この問題は有機エレクトロニクス材料の開発において良く見られるが、溶解性を上げるためのユニークな分子デザインの指針を確立することもでき、これは実際に材料開発で利用可能と思われる。合成した幾つかのオリゴ(ビラジカル)の分子構造をX線回折によって解析したところ、ビラジカルユニットが空間的相互作用の影響と考えられる立体配座が同定された。かさ高い置換基で立体保護されたリン複素環構造を有する一重項ビラジカル(1,3-ジホスファシクロブタン-2,4-ジイル)ユニット間に発現する相互作用に関する新規な知見を得た。すなわち、ビス(メチレン)ビフェニル骨格をビラジカル連結部位として二つのビラジカルユニットを連結した「ビラジカルダイマー」を合成し、その電気化学挙動について検討したところ、これまでの検討から示唆されていた空間的な経路によるビラジカルユニット間相互作用をより強く支持する酸化還元特性が見出された。これに加えてさらに、ビラジカルユニットを連結するビフェニル骨格の特徴を有効に利用することによって、スルーボンド経路によるビラジカルユニット間相互作用の発現を示すデータも得ることができた。これらの知見は、一重項ビラジカルを利用することによって、従来の有機電子材料では必須となるパイ平面の有効な重なりを用いなくとも、電子移動パスを形成できることを示しているだけでなく、通常の有機共役構造に異常な電子状態を形成させる効果を一重項ビラジカルがつくり出せることを示す結果である。続いて、特異な有機エレクトロニクス材料創製への試みの一つとして、一電子酸化還元によるラジカルイオンの発生を確認し、導電性物質への変換について基本的な知見を得た。これに関して、モデル分子を用いたDFT計算を行い、ラジカルイオンのスピン密度がビラジカルを形成する分子骨格上に大きく存在することを確認したが、スペーサーの構造によっては比較的大きなスピン密度がスペーサーに存在することも確認された。
歯髄幹細胞特異的蛋白質の同定

本研究は、歯髄特異的蛋白質マーカーを同定することを目的として、歯髄形質を規定する歯髄特異的蛋白質を解析する。昨年度は歯髄幹細胞を脱分化させ、脱分化前後の細胞のプロテオミクスによる比較により歯髄特異的マーカーを得る予定であったが、脱分化の制御が困難であった。よって、本年度は、イヌ同一個体から幹/前駆細胞画分として歯髄・骨髄・脂肪CD31^-SP細胞を分取し、タンパク質可溶液をそれぞれ回収し、二次元電気泳動(等電点電気泳動およびSD-PAGE)を行い、蛍光染色後、歯髄に特異的に発現しているスポットを解析した。その結果、三者に共通して見られるスポットが434個(97.1%)であり、歯髄にのみ発現するスポットが3個存在した。さらに、その3個のスポットを切り出し、トリプシン処理後、脱塩、acetonitrile中で溶出し、Zip-Tip μC18で濃縮し、得られたペプチドをnano-LC/MSにてペプチド断片の質量を測定し、得られた結果をデータベースを用いPMF法により蛋白質を同定した。しかしながら、tropomyosin 3 isoform 2 isoform 5やgamma-enteric smooth muscle isoform 1 precursorなどの、特に歯髄に特異的とは考えにくい蛋白質が同定された。イヌは同一個体の細胞が同時に得られやすいが、データベースの充実に問題があることが判明した。よって、現在、ブタを用いた同様の実験を実施中である。本研究は、歯髄特異的蛋白質マーカーを同定することを目的として、エピジェネティクスの観点からヒストン脱アセチル化酵素の一つであるTrichostatin AとLIFを培地に添加して、歯髄幹細胞を脱分化させ、歯髄幹細胞とプロテオミクスにより比較することにより、歯髄形質を規定する歯髄特異的蛋白質を解析する。本年度は、まず、ブタ歯髄幹細胞をフローサイトメトリーにて分取し、Trichostatin AとLIFを培地に添加、培養し、経時的に未分化マーカーであるNanog、Klf4、Rex1についてmRNAの発現量を測定することにより脱分化状態を検討し、適切な培養条件および培養期間を検討した。また、細胞を低張溶液中で超音波破砕し、タンパク質可溶液を回収し、等電点電気泳動およびSDS-PAGEし、蛍光染色後、特異的に発現しているスポットを切り出す二次元電気泳動操作を習得した。さらに、それぞれのゲルを脱塩し、acetonitrile中で溶出し、凍結乾燥後トリプシン処理後、Zip-TipμC18で濃縮し、得られたペプチドをnano-LC/MSにてペプチド断片の質量を測定し、得られた結果をデータベースを用いPMF法により蛋白質を同定する手法を習得した。