hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
感染性心内膜炎に及ぼす歯周病原細菌感染度と炎症性サイトカインとの関係

本研究は、心臓弁膜症患者の歯周病原細菌感染度と血清抗体価から感染性心内膜炎(IE)が発症するリスクを統計学的に検索することを目的とした。被験者は、徳島赤十字病院心臓血管外科の心弁膜症既往患者を対象とした。その結果、IE発症者はIE未発症者と比較して、骨吸収率が高く、残存歯が少なく、要抜歯数も多く認められた。Porphyromonas gingivalis検出率は、IE未発症者では53.5%、IE発症者は100%であった。一方、血清IgG抗体価の上昇率もIE未発症者は43.7%であったが、IE発症者では100%認められた。これによりIE発症と歯周感染との間に関連がある可能性が示唆された。感染性心内膜炎(infective endocarditis:IE)は、心内膜や弁膜に細菌を含む疣贅(vegetation)を形成し、菌血症、塞栓症、心障害など多彩な臨床症状を呈する重篤な感染症である。感染経路として口腔内細菌による感染がいわれているが、不明な点が多くエビデンスが十分といえないのが現状である。本研究では、心弁膜症患者の歯周病原細菌感染度と炎症性サイトカイン発現量から感染性心内膜炎が発症するリスクを統計学的に検索し、感染性心内膜炎との関連性が指摘されている歯周病原細菌が心臓に与える影響について検討することを目的としている。多くの被験者を集積するにあたり、徳島赤十字病院心臓血管外科および徳島大学病院心臓血管外科で心弁膜症の既往のある患者のうち、研究の同意が得られた者を被験者とした。研究実施にあたり、徳島赤十字病院および徳島大学病院臨床研究倫理審査委員会に申請書を提出して審査・承認を受けた。被験者には、十分なインフォームドコンセントを行い、同意書にサインを頂いた方のみを対象とした。感染性心内膜炎(IE)の発症歴のある心弁膜症患者、および感染性心内膜炎(IE)を発症していない心弁膜症患者において、口腔内診査、X線写真による歯槽骨吸収の診査、および採血による歯周病原細菌の血清抗体価の測定と炎症性サイトカイン(TNF-α,IL-6)の定量を行い、歯周病の進行度と感染性心内膜炎の発症リスクとの関係を統計学的に検討することとした。現時点では合計12名の心弁膜症被験者の資料を集積している。感染性心内膜炎発症患者は、発症していない心弁膜症患者に比較して、要抜歯数が3倍以上高く、全被験者において指尖採血による歯周病原細菌(P.gingivalis)の抗体価が基準値以上であるという結果を得ている。感染性心内膜炎(Infective endocarditis:IE)は、心内膜や弁膜に細菌を含む疣贅(vegetation)を形成し、菌血症、塞栓症、心障害などの重篤な臨床症状を呈する感染症である。本研究では、心弁膜症患者の歯周病原細菌感染度と炎症性サイトカイン発現量から、感染性心内膜炎が発症するリスクを統計学的に検索し、感染性心内膜炎との関連性が指摘されている歯周病原細菌が心臓に与える影響について検討することを目的としている。被験者を集積するにあたり、県内で一番心弁膜症患者数の多い徳島赤十字病院心臓血管外科に協力をいただき、心弁膜症の既往のある患者のうち、研究の同意が得られた者を被験者とした。研究実施にあたり、徳島赤十字病院臨床研究倫理審査委員会に申請書を提出して審査・承認を受けた。被験者には、十分なインフォームドコンセントを行い、同意書に署名をいただいた方のみを対象とした。感染性心内膜炎(IE)の発症歴のある心弁膜症患者、および感染性心内膜炎(IE)を発症していない心弁膜症患者において、口腔内診査、X線写真による歯槽骨吸収の診査、唾液による歯周病原細菌検査、採血による歯周病原細菌の血清抗体価の測定と炎症性サイトカイン(TNF-α,IL-6)の測定を行い、歯周病の進行度と感染性心内膜炎の発症リスクとの関係を統計学的に検討することとした。現時点では、合計45名の心弁膜症被験者の資料を集積している。感染性心内膜炎(IE)発症歴のある被験者は、発症していない心弁膜症患者に比較して、歯槽骨が約30%吸収しており、要抜歯数が3倍以上高く、採血による歯周病原細菌(P.gingivalis)の抗体価が基準値以上であるという結果がでている。これまでに集積した被験者のデータをまとめて、昨年10月にインドネシア(バリ)で開催された国際学会(11th Asian Pacific Society of Periodontology Meeting)で発表した。また、学会発表したデータを論文作成中である。しかし、研究に参加いただいた被験者が、当初予定していた数よりも少ないため、今後も被験者を集積してデータ解析を続ける予定である。感染性心内膜炎(Infective endocarditis:IE)は、心内膜や弁膜に細菌を含む疣贅(vegetation)を形成し、菌血症、塞栓症、心障害など重篤な臨床症状を呈する感染症である。

本研究では、心弁膜症患者の歯周病原細菌感染度と炎症性サイトカイン発現量から、感染性心内膜炎が発症するリスクを統計学的に検索し、感染性心内膜炎との関連性が指摘されている歯周病原細菌が心臓に与える影響について検討することを目的にしている。被験者を集積するにあたり、県内で一番心弁膜症患者数の多い徳島赤十字病院心臓血管外科に協力をいただき、心弁膜症の既往のある患者のうち研究の同意が得られた者を被験者とした。研究実施にあたり、徳島赤十字病院臨床研究倫理審査委員会に申請書を提出して審査・承認を受けた。被験者には十分なインフォームドコンセントを行い、同意書に署名をいただいた方のみを対象とした。感染性心内膜炎(IE)の発症歴のある心弁膜症患者、および感染性心内膜炎(IE)を発症していない心弁膜症患者において、口腔内診査、X線写真による歯槽骨吸収の診査、唾液による歯周病原細菌検査、採血による歯周病原細菌の血清抗体価の測定と炎症マーカー(TNF-α,IL-6,CRP)の測定を行い、歯周病の進行度と感染性心内膜炎の発症リスクとの関係を統計学的に検討することとした。現時点では、合計78名の心弁膜症被験者の資料を集積している。感染性心内膜炎(IE)発症歴のある被験者は、発症していない心弁膜症患者と比較して、歯槽骨が約30%吸収しており、要抜歯数が3倍以上高かった。また、P.g菌(filmA遺伝子型2型)の検出が2倍以上高値に検出され、細菌に対する抗体価が基準値以上であるという結果を得ている。一昨年までは、順調良く集積したデータをまとめて学会発表を行い、論文作成にとりかかっていた。しかし、昨年に研究代表者の親族が要介護状態(介護度3)となり、介護休暇をとる必要があったため研究データの集積、論文作成が思うように進められない状況となってしまった。公共の介護支援を受けることで、現場復帰し研究が進められるようになったため、被験者の試料集積を再開しながらこれまでの研究成果を論文にまとめる予定としている。感染性心内膜炎(Infective Endocarditis:IE)は、心内膜炎や弁膜に細菌を含む疣贅(vegetation)を形成し、菌血症や塞栓症など重篤な臨床症状を呈する感染症である。感染因子として口腔内細菌が報告されているが、不明な点が多くエビデンスが十分といえないのが現状である。本研究では、心弁膜症患者の歯周病原細菌感染度と炎症性サイトカイン発現量から感染性心内膜炎が発症するリスクを統計学的に検索することを目的とした。被験者は、徳島赤十字病院心臓血管外科の心弁膜症既往患者で研究同意が得られた者とした。また、対照群は徳島大学病院歯周病科に来科された心弁膜症歴のない歯周病患者とした。IE発症歴のある心弁膜症患者、およびIE未発症の心弁膜症患者、心弁膜症の既往のない歯周病患者において、口腔内診査、X線写真による歯槽骨吸収(Scheiの骨吸収率)、唾液による歯周病原細菌検査、指尖採血による血清抗体価と歯肉溝浸出液(GCF)中の炎症性サイトカイン測定を行い、歯周病進行度とIE発症との関係を統計学的に検討した。その結果、被験者総数119名のうち、心弁膜症患者78名と心弁膜症歴のない患者41名において残存歯数、歯槽骨吸収要抜歯数に有意差は認められなかった。また、P.g菌の検出および血清抗体価においては心弁膜症患者のほうが有意に低下していた。一方、IE発症歴のある心弁膜症患者(7名)はIE未発症の心弁膜症患者(71名)と比較して、残存歯数は平均9.3歯少なく、骨吸収率は29.8%高く、要抜歯数は2.3歯多く認められた。
硫酸化糖鎖の合成制御機構の解明と制御機構を利用した細胞機能の制御

硫酸化糖鎖は発生過程や成熟後の細胞機能の制御や恒常性の維持において多彩な機能を発揮する重要な分子であり,硫酸化糖鎖の機能はその構造多様性を基盤とする.発生プログラムの制御下あるいは環境からの刺激を受け,その時・その場に適した糖鎖構造が合成され細胞機能が制御されると考えられているが,状況に応じて糖鎖構造が制御される仕組みの詳細は不明である.また,このような生合成制御機構の破綻は細胞機能の異常を引き起こし,種々の疾患と関連することが予想される.本研究では以下の2点を明らかにした.1細胞内外の状況(特に糖鎖の合成状況)を反映し,場面に応じた糖鎖構造を合成する制御機構の存在を明らかにするとともに,糖鎖合成制御機構の生理的意義を示す.プロテオグリカンの合成が活発になるほどゴルジ体ストレス応答は活性化した.また,神経新生の時期にゴルジ体ストレス応答が活性化し,ゴルジ体ストレス応答の鍵転写因子をノックダウンすると神経新生が遅延することがわかった.ある硫酸化糖鎖合成酵素遺伝子をノックアウトした細胞では,別の合成酵素遺伝子の発現が特異的かつ顕著に変化していた(糖鎖合成状況に応答した糖鎖合成遺伝子の発現調節機構の存在).2糖鎖構造の合成制御機構を作動させる低分子化合物の探索を行う.糖鎖合成制御機構を動かす候補転写因子を活性化する化合物をスクリーニングし,この化合物が神経幹細胞から神経細胞への分化を促進することを明らかにした.また,神経再生時に軸索伸長のバリアとなる硫酸化糖鎖の合成において重要な役割を果たす鍵酵素の発現を抑制する化合物を見出した.軸索伸長のバリアとなる硫酸化糖鎖は主にアストロサイトで合成されるが,化合物でアストロサイトを処理すると,軸索伸長阻害活性が低い硫酸化糖鎖を合成するようになった.1細胞内外の状況(特に糖鎖の合成状況)を反映し,場面に応じた糖鎖構造を合成する制御機構の存在を明らかにするとともに,糖鎖合成制御機構の生理的意義を示すこと, 2糖鎖構造の合成制御機構を作動させる低分子化合物の探索を行うために,予定していた実験はほぼ終了し,ポジティブな結果が得られた.論文として発表するための前段階まで到達したと考えられるため,おおむね順調に進展していると判断した。糖鎖合成状況に応答して変化する糖鎖合成遺伝子を見つけたが、この発現調節機構の解析はできていない.また,今回明らかになった発現調節機構が作動した結果,細胞機能は変化していたが,合成された硫酸化糖鎖の構造を機能を相関させることができていない.今後はこの2つの点について明らかにしていく予定である.硫酸化糖鎖は発生過程や成熟後の細胞機能の制御や恒常性の維持において多彩な機能を発揮する重要な分子であり,硫酸化糖鎖の機能はその構造多様性を基盤とする.発生プログラムの制御下あるいは環境からの刺激を受け,その時・その場に適した糖鎖構造が合成され細胞機能が制御されると考えられているが,状況に応じて糖鎖構造が制御される仕組みの詳細は不明である.また,このような生合成制御機構の破綻は細胞機能の異常を引き起こし,種々の疾患と関連することが予想される.本研究では以下の3点を明らかにする.1細胞内外の状況(特に糖鎖の合成状況)を反映し,場面に応じた糖鎖構造を合成する制御機構の存在を明らかにする2糖鎖合成制御機構の生理的意義を示す.3糖鎖構造の合成制御機構を作動させる低分子化合物の探索を行う.本年度は、糖鎖生合成の破綻を起こした状況を模擬するために、幾つかの硫酸化糖鎖生合成酵素遺伝子のノックアウト細胞をゲノム編集により作出し、その解析を行った。計画していた硫酸化糖鎖生合成酵素遺伝子を欠損させたノックアウト細胞株の作成はほぼ終了した。作成したノックアウト細胞の硫酸化糖鎖生合成酵素遺伝子群の発現レベル、及びこれらが合成する糖鎖を解析した。硫酸化糖鎖の修飾が阻害されている細胞、あるいは特殊な糖鎖構造の発現が変化している細胞を作出できたことが確認された。また、プロテオグリカンの合成が活発に行なわれる時、合成されるコアタンパク質に対してゴルジ体の糖鎖修飾能が不足すると考えられ、このような状況を打破するために糖鎖合成酵素遺伝子の発現を誘導するシステムが備わっているという考えられる。この仮説を証明するために、Tet-onシステムによりコアタンパク質の発現を薬物で誘導できる細胞を作出した。CRISPR-Cas9システムを利用したゲノム編集により糖鎖合成酵素遺伝子を改変したノックアウト細胞の作出がほぼ終わった。また、作出した細胞が合成する糖鎖を解析した結果、当初の目的通り、糖鎖合成に異常を起こした細胞の作成がうまくいったことが確認できた。また、コアタンパク質の合成に呼応してゴルジ体の糖鎖合成酵素遺伝子の発現を誘導するシステムの存在を示すために、Tet-onシステムによりコアタンパク質の発現を薬物で誘導できる細胞を作出した。これらにより、解析すべき対象細胞の準備が整ったことになるため、本研究課題は概ね順調に進行していると言える。

硫酸化糖鎖は発生過程や成熟後の細胞機能の制御や恒常性の維持において多彩な機能を発揮する重要な分子であり,硫酸化糖鎖の機能はその構造多様性を基盤とする.発生プログラムの制御下あるいは環境からの刺激を受け,その時・その場に適した糖鎖構造が合成され細胞機能が制御されると考えられているが,状況に応じて糖鎖構造が制御される仕組みの詳細は不明である.また,このような生合成制御機構の破綻は細胞機能の異常を引き起こし,種々の疾患と関連することが予想される.本研究では以下の2点を明らかにした.1細胞内外の状況(特に糖鎖の合成状況)を反映し,場面に応じた糖鎖構造を合成する制御機構の存在を明らかにするとともに,糖鎖合成制御機構の生理的意義を示す.プロテオグリカンの合成が活発になるほどゴルジ体ストレス応答は活性化した.また,神経新生の時期にゴルジ体ストレス応答が活性化し,ゴルジ体ストレス応答の鍵転写因子をノックダウンすると神経新生が遅延することがわかった.ある硫酸化糖鎖合成酵素遺伝子をノックアウトした細胞では,別の合成酵素遺伝子の発現が特異的かつ顕著に変化していた(糖鎖合成状況に応答した糖鎖合成遺伝子の発現調節機構の存在).2糖鎖構造の合成制御機構を作動させる低分子化合物の探索を行う.糖鎖合成制御機構を動かす候補転写因子を活性化する化合物をスクリーニングし,この化合物が神経幹細胞から神経細胞への分化を促進することを明らかにした.また,神経再生時に軸索伸長のバリアとなる硫酸化糖鎖の合成において重要な役割を果たす鍵酵素の発現を抑制する化合物を見出した.軸索伸長のバリアとなる硫酸化糖鎖は主にアストロサイトで合成されるが,化合物でアストロサイトを処理すると,軸索伸長阻害活性が低い硫酸化糖鎖を合成するようになった.1細胞内外の状況(特に糖鎖の合成状況)を反映し,場面に応じた糖鎖構造を合成する制御機構の存在を明らかにするとともに,糖鎖合成制御機構の生理的意義を示すこと, 2糖鎖構造の合成制御機構を作動させる低分子化合物の探索を行うために,予定していた実験はほぼ終了し,ポジティブな結果が得られた.論文として発表するための前段階まで到達したと考えられるため,おおむね順調に進展していると判断した。糖鎖合成異常がゴルジ体ストレス応答を発動させるかどうかを明らかにするために、平成29年度に作出した糖鎖合成に異常を起こした細胞や薬物によりコアタンパク質の発現を誘導できる細胞を用いて、ゴルジ体ストレス応答の活性化レベルを調べる。また、ノックアウト細胞の作出に用いた細胞は神経幹細胞株であるので、βIII-チューブリンやMAP2遺伝子などの神経マーカーの発現を指標に、糖鎖の変化により神経分化のステージが影響を受けているかどうか調べる。さらに、前述の細胞を分化誘導条件で培養した時、神経細胞への分化に影響が生じるかどうか調べる。また、糖鎖合成異常を感知して作動するシステムの標的遺伝子である糖鎖合成遺伝子を探すために、作出した細胞の糖鎖合成酵素遺伝子の発現を調べる。糖鎖合成状況に応答して変化する糖鎖合成遺伝子を見つけたが、この発現調節機構の解析はできていない.また,今回明らかになった発現調節機構が作動した結果,細胞機能は変化していたが,合成された硫酸化糖鎖の構造を機能を相関させることができていない.今後はこの2つの点について明らかにしていく予定である.発注の時期が遅れたため次年度使用額が生じたが、研究は計画通り進んでいる。研究は論文発表の段階に到達している。したがって、次年度使用額は、論文のリバイズのための消耗品の購入、論文投稿料などに使用予定である。
植物細胞における外来遺伝子の発現機構

本研究の目的の第一は、遺伝子工学的手法によりlacZ(大腸菌β-galactosidase)を改変し、植物細胞で利用できるvisibleマーカーを作製すること、第二は、作製されたlacZキメラ遺伝子を用いて、植物遺伝子の発現調節領域を探索、解析することである。まずlacZを高効率に発現させるために、数種類の植物遺伝子由来のプロモーター配列等とlacZを連結してキメラ遺伝子を作製した。これらのキメラ遺伝子を、Tiプラスミドベクター系を用いてタバコ細胞へ導入し、形質転換細胞中のβ-galactosidase活性、及び酵素タンパク質の存在を検討した。その結果、【P_(35)】s(カリフラワモザイクウィルス35SRNAプロモーター)を連結したものが最も高い活性を示し、バックグラウンドの20倍であった。また、この細胞中には、確かに大腸菌由来のβ-galactosidaseタンパク質が存在することが示された。さらに、【P_(35)】sキメラ遺伝子をもつカルスは、X-galを含む、寒天培地上で、明瞭な青色を呈し、他のキメラ遺伝子をもつものは、又はプロモーターがないlacZをもつカルスとは明らかに区別された。以上の結果から、【P_(35)】s-lacZキメラ遺伝子は、植物細胞系において、visible選択マーカー遺伝子として利用できることが明らかになった。本実験遂行に必要なクライオクールと必要な消耗品を予定通り購入した。
レプトマイシンBを用いた核外移行蛋白質の同定とその機能に関する研究

レプトマイシンB(LMB)は、核外移行シグナルの受容体Crm1に特異的に共有結合し、蛋白質核外移行を阻害する。最終年度である今年度は、以前のスクリーニングにより見いだしたLMB添加による微小管構造の変化に関する解析を引き続き行った。これまでの解析の結果から、LMB添加後にM期の紡錘体微小管様構造体が核内に生じること、この構造体が様々な面でM期の紡錘体微小管とは異なることが明らかになっていた。これらのことから、以下の3つの仮説をたてた。(1)LMB添加によりpremature mitosisが起きて擬似的な紡錘体微小管が生じた。(2)LMB添加により核内のtubulin濃度が上昇し、核内微小管の重合が起きた。(3)LMB添加により、核内に微小管重合を引き起こす因子Xが蓄積し、その結果核内で微小管重合が起きた。これらの仮説を元に実験を行った。まず(1)の仮説を検討するために、前年度行った実験の確認も含めて。Spindlepolebody(SPB)、微小管、キネトコア、核膜などの蛍光マーカー蛋白質を発現する株を構築し、単染色、二重染色、三重染色して、LMB添加後の紡錘体微小管様構造体の性質を調べた。その結果SPB、キネトコアともに、微小管上には存在せず、微小管上以外の核膜に留まっていることが明らかになった。このことは前年度の実験と同様M期の紡錘体微小管とは異なることを示唆する。またM期特異的なリン酸化残基を認識する抗体MPM-2を用いた実験でも、LMB添加後に特にMPM-2認識蛋白質が増えることもなく、さらに窒素飢餓で細胞周期をG1期に止めた状態でLMBを添加しても紡錘体微小管様構造が生じたことからも、LMB添加による微小管構造の変化は細胞周期には非依存的、すなわち(1)premature mitosisiが起きて擬似的な紡錘体微小管が生じている、という仮説が否定できることが示された。現在、(2)、(3)の仮説について検討するため、実験を行っているところであります。レプトマイシンB(LMB)は核外移行シグナル(NES)の受容体Crm1に特異的に共有結合し蛋白質核外移行を阻害する。今年度はLMBを用いた以前のスクリーニングから得られた新規核外移行蛋白質の解析の続きと、分裂酵母ORF-YFPライブラリーの構築、ライブラリーを用いた蛋白質の局在解析を行った。1.新規核外移行蛋白質の機能解析以前のスクリーニングで得られた新規核外移行蛋白質Nem1、Alp7のLMB添加後の局在変化より、これらが相互作用する微小管そのものがLMB添加により局在変化することを見出した。また微小管を構成するチューブリンを免疫染色法により解析したところ、チューブリンそのものが核細胞質問をシャトルしていることが明らかになった。さらにDNAや核膜の染色像から、LMB添加後、チューブリンが核内に蓄積し、それに続いて核内に紡錘体微小管様構造体が形成されることが明らかになった。この構造変化はM期の紡錘体微小管の構造変化に似ているが染色体の分配はおこらない。現在この構造変化の機構を解析中である。2.分裂酵母ORF-YFPライブラリーの作成と蛍光蛋白質の局在解析本研究室で構築された分裂酵母の全遺伝子ライブラリーを利用し、研究室内の多数の研究者と共同でORF-YFPライブラリーを作成、それらを分裂酵母に形質転換し、蛍光蛋白質の局在解析を行っている。ORF-YFPライブラリーは8割ほど完成しており、局在解析も3割ほど終了した。またLMBを用いて、新規核外移行蛋白質のスクリーニングも始めており、現在までに約20クローンを取得した。レプトマイシンB(LMB)は、核外移行シグナルの受容体Crm1に特異的に共有結合し蛋白質核外以降を阻害する。今年度は以前のスクリーニングにより見いだしたLMB添加による微小管構造の変化に関する解析と、ORF-YFPライブラリーを用いた局在のカタログ化と核外移行蛋白質のスクリーニングを行った。1.LMB添加による徴小管構造変化機構の解析前年度につづき、LMB添加による構造変化がM期の紡錘体微小管とどのようにちがうのかを検討した。まず微小管重合阻害剤を用いて検討したところ通常のSpindleとは異なりその構造は破壊されないことが明らかになった。さらにSpindle Pole Body(SPB)のマーカーを用いLMB添加後のSPBの挙動を観察したところ、M期のそれとは異なりSpindleの先端に局在しなかった。2.分裂酵母ORF-YFPライブラリーを用いた局在のカタログ化とスクリーニング前年度本研究室で構築された分裂酵母の全遺伝子ライブラリーを利用し、研究室内の多数の研究者と共同でORF-YFPライブラリーの作成と局在解析を開始したことを報告した。今年度は全ての遺伝子を含むORF-YFPライブラリーが完成し、まず完成したライブラリーを用い、全蛋白質の細胞内局在のカタログ化を行った。またこのライブラリーを用いたLMB添加により細胞内局在が変化する蛋白質のスクリーニングも完了した。スクリーニングの結果、約5000の蛋白質中257個のcandidatesが得られた。これは約5%の蛋白質が分裂酵母内でCrm1依存的に核外移行の制御を受けているということを示唆するものである。

また以前の研究で見いだした微小管の構造変化と同様の局在変化を呈するcandidatesも25個得られた。カタログ化した全蛋白質の局在、LMBによるスクリーニングの結果は近々ホームページを開設し公開する予定である。レプトマイシンB(LMB)は、核外移行シグナルの受容体Crm1に特異的に共有結合し、蛋白質核外移行を阻害する。最終年度である今年度は、以前のスクリーニングにより見いだしたLMB添加による微小管構造の変化に関する解析を引き続き行った。これまでの解析の結果から、LMB添加後にM期の紡錘体微小管様構造体が核内に生じること、この構造体が様々な面でM期の紡錘体微小管とは異なることが明らかになっていた。これらのことから、以下の3つの仮説をたてた。(1)LMB添加によりpremature mitosisが起きて擬似的な紡錘体微小管が生じた。(2)LMB添加により核内のtubulin濃度が上昇し、核内微小管の重合が起きた。(3)LMB添加により、核内に微小管重合を引き起こす因子Xが蓄積し、その結果核内で微小管重合が起きた。これらの仮説を元に実験を行った。まず(1)の仮説を検討するために、前年度行った実験の確認も含めて。Spindlepolebody(SPB)、微小管、キネトコア、核膜などの蛍光マーカー蛋白質を発現する株を構築し、単染色、二重染色、三重染色して、LMB添加後の紡錘体微小管様構造体の性質を調べた。その結果SPB、キネトコアともに、微小管上には存在せず、微小管上以外の核膜に留まっていることが明らかになった。このことは前年度の実験と同様M期の紡錘体微小管とは異なることを示唆する。またM期特異的なリン酸化残基を認識する抗体MPM-2を用いた実験でも、LMB添加後に特にMPM-2認識蛋白質が増えることもなく、さらに窒素飢餓で細胞周期をG1期に止めた状態でLMBを添加しても紡錘体微小管様構造が生じたことからも、LMB添加による微小管構造の変化は細胞周期には非依存的、すなわち(1)premature mitosisiが起きて擬似的な紡錘体微小管が生じている、という仮説が否定できることが示された。現在、(2)、(3)の仮説について検討するため、実験を行っているところであります。
前頭前野、視床下部および扁桃体連関とストレス負荷に対する反応

1.扁桃体後核之ニューロンの性状と投射領域の検索(1)ラットの内側前頭前野と視床下部にFluoro-goldとFluoro-redをそれぞれ注入し、扁桃体に逆行性に標識される細胞を検索した。扁桃体後核および隣接する海馬CA1,CA3,海馬支脚に二重標識細胞が発見された。これらのニューロンは軸索側副枝により視床下部(腹内側核および乳頭体前内側核)と内側前頭前皮質に投射することが明らかとなった。(2)扁桃体後核の神経細胞の大部分は、エストロジェン受容体を発現し、性行動および攻撃的行動と密接な関係があると考えられる。ラット扁桃体後核では、GABA陽性の神経細胞の蜜密度は約5%、pervalbumin含有神経は約5%、calbindin含有神経は約4%、ER-α発現ニューロンは雌ではほぼ100%、雄では45%であった。(3)ラットの扁桃体後核に順行性トレーサーとしてBDAを注入し、ラット脳で標識された神経終末を検索した。この結果、扁桃体後核は海馬CA1、CA3、扁桃体亜核、分界条床核、視床下部腹内側核、外側中隔核、側坐核、内側前頭前野に投射することが明らかとなった。2.NMDAによる扁桃体後核破壊後のラットに恐怖条件付けによる行動解析および機能形態的解析を行なった。慢性のストレス負荷の影響を見た結果、a)軽度のfootshock条件付け(0.6mA,3sec×30回,30min/day)を、5日間負荷すると%freezing時間がコントロール4%にたいして43%と有意に増大した。b)血中のcorticosterone濃度は、4日目にコントロール3.2ng/nlにたいして35.3ng/nlと有意に増大した。c)脳内のc-Fosの発現には有意の変化を認めなかった。また、過度のfootshock条件付け(0.6mA,3sec×60回,30min/day)を負荷した場合では、freezing時間の増大は1日負荷で飽和に達したと思われ、corticosterone量は、2日には増大反応を示したがその後は有意の変化を示さなかった。これらの結果を考慮し、新しく設定した実験条件でさらに本実験を進めている。1)ラットの内側前頭前野と視床下部にFluoro-goldとFluoro-redをそれぞれ注入し、扁桃体に逆行性に標識される細胞を検索した。とくに扁桃体後核および隣接する海馬CA1,CA3,海馬支脚に見い出された二重標識細胞は、軸索側副枝により視床下部腹内側核および乳頭体前内側核に投射することが明かとなった。2)扁桃体後核の神経細胞の大部分は、エストロジェン受容体を発現し、性行動および攻撃的行動と密接な関係があると考えられた。その機能を調べる目的でカルシウム結合蛋白のタイプ、GABA神経細胞の局在につき解析を進めている。3)ラットの扁桃体後核にトレーサーとして10%BDAをイオン導入法により注入し、3週間後に固定して順行性に標識された神経終末を検索した。

この結果、扁桃体後核の遠心性線維は海馬CA1、CA3、扁桃体亜核、分界条床核、視床下部腹内側核、外側中隔核、側坐核、内側前頭前野に投射することを明らかにした。4)NMDA注入により扁桃体後核を両側性に破壊したラットに、恐怖条件付けを行った。行動学的解析ではフリージング時間が増加し、機能形態学的解析では扁桃体亜核、海馬、中脳中心灰白質においてc-Fos、Egr-1の発現が変化した。これらの結果より扁桃体後核は扁桃体、海馬、視床を介する恐怖条件付け反応の調節、とくに抑制に関与していることが推定された。1)扁桃体後核の神経細胞の大部分は、エストロジェン受容体を発現し、性行動および攻撃的行動と密接な関係があると考えられた。ラット扁桃体後核について、GABA神経、Ca結合蛋白(pervalbumin,calbindin)含有神経、エストロジェン受容体(ER-α)発現神経の分布密度を調べたところ、GABA陽性の神経細胞の密度は約5%、pervalbumin神経は約5%、calbindin神経は約4%、ER-α発現ニューロンは雌ではほぼ100%、雄では45%あった。2)扁桃体後核から内側前頭前皮質への投射様式を検索する目的で、扁桃体後核にBDAを注入し3週間後にラットを固定し、内側前頭前皮質のcalbindin,pervalbumin含有ニューロンと投射終末との関係を蛍光免疫組織化学法により解析した。投射終末は辺縁下野皮質の3層から2層に密に分布し、その一部はcalbindin,pervalbumin陽性の介在ニューロンに近接して終わることを確認した。3)恐怖条件付けラットについての行動解析および辺縁系および自律神経系の反応の機能形態的解析について予備実験を行なった。慢性の軽度のストレス負荷の影響を見た実験では、a)軽度のfootshock条件付け(0.6mA,3sec×30回,30min/day)を、5日間負荷すると%freezing時間がコントロール4%にたいして43%と有意に増大した。B)血中のcorticosterone濃度は、4日目にコントロール3.2ng/nlにたいして35.3ng/nlと有意に増大した。C)脳内のc-Fosの発現には有意の変化を認めなかった。また、過度のfootshock条件付け(0.6mA,3sec×60回,30min/day)を負荷した場合では、freezing時間の増大は1日負荷で飽和に達したと思われ、corticosterone量は、2日には増大反応を示したがその後は有意の変化を示さなかった。実験条件を新しく設定してさらに本実験を進めている。
複統合的言語の類型論的研究

本研究は、従来の言語研究において理論・記述の両面から研究が不足している複統合的言語(polysynthetic language)を対象とした類型論的研究であり、特に、これらの言語に特徴的とされる形態統語論的性質の相互関係と多様性を探ることを目的としたものである。特に、複統合的言語の代表例とされるメキシコのナワトル語に焦点をあて、わけても前年度以降はメキシコ・プエブラ州で話されている現代ナワトル語(イシュキワカン方言)の現地調査とその成果発表に主眼をおいている。2016年度4月には東京大学言語学論集に現地調査のデータを基にした論文を投稿し、掲載された(9月出版)。また、2016年3月には、現地調査で得られた資料の一部に注釈と訳を施し、ナワトル語の口語テキストとしてTlalocan誌(メキシコ)に投稿した。このほか、学会において査読つき口頭発表を3回行った。また、学会発表および論文投稿に加え、前年度までに収集した資料をもとに博士論文の執筆を行い、約3週間にわたりイシュキワカン方言の現地調査を行った。この調査においては、博士論文のためのデータを補うため、特に関係詞と冠詞・コピュラ構文、助動詞的接辞を中心とするやや複雑な構文の追加調査を行い、必要な例文、録音、テキストを収集・整理することができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、北アメリカ・メソアメリカを中心として複数の複統合的言語のデータを収集し、その多様性と普遍性を明らかにすることを目指すものである。当該年度は、本研究で扱う複統合性(polysynthesis)とかかわりの深い現象のうち、言語類型論的に特異な現象であるナワトル語の名詞の指示対象人称標示に着目し、同言語の各種方言のデータをもとに2件の学会発表を行った。これらの発表は、「すでに出版・発表されている複統合的言語のデータにもとづいて複統合的言語の特性を検討する」という当初の研究計画に沿ったものである。従来、古典ナワトル語に関してのみ報告・記述されてきた同現象について、対象を現代ナワ語諸方言に拡大し、その方言間の多様性を概観し、その歴史的起源を考察した。同現象は、複統合性とかかわりの深い現象ではあるが、複統合的言語一般に共通する特質ではなく、また先行研究で示唆されていたよりも遥かに多様で不安定な現象であり、周辺の諸現象との境界も曖昧である。また、当該年度においては、現在話されている代表的な複統合的言語のひとつである現代ナワトル語(メキシコ)の現地調査に注力した。メキシコ中央部プエブラ州のナワトル語地域に2度渡航し、同言語の未記述の方言であるイシュキワカン方言および近隣諸村の方言について、調査地・調査者を確保し、研究の中心となるイシュキワカン方言の基礎語彙、音韻・文法の基礎データ、および少数のテキストの収集を行った。同方言に関する成果の発表および類型論的分析については次年度の課題とする。本研究は、日本語や英語と大きく異なった文法的性質をもつ複統合的言語(polysynthetic languages)の類型論的・比較統語論的研究に資すべく、ナワトル語(メキシコ)を中心とした複統合的言語の文法的性質の記述・分析を行うものである。複統合的言語について、単なる基礎文法以上の統語的なデータを得るには、実際に話されている言語のフィールドワークを行い、聞き取り調査や対話調査を行う必要がある。このため、2014年23月と2014年79月の2度にわたり、メキシコで長期のフィールドワークを行った。対象とした言語は、現在も活発に話されている複統合的言語のひとつであるナワトル語イシュキワカン方言(Ixquihuacan Nahuatl、プエブラ州)である。本年度は、イシュキワカン方言について2000程度の語彙と2時間程度のテキスト録音、各種文法事項を収集し、イシュキワカン方言の音韻や方言学的位置づけと基礎語彙を論文として発表した。フィールドワークで得たデータの整理・発表を行った。現在、博士論文としてイシュキワカン方言の文法を執筆中である。また、複統合的言語には冠詞が存在しないという理論言語学の仮説に反して、イシュキワカン方言では指示詞由来の小辞が冠詞としてふるまうことを指摘し、各段階での成果やその理論的解釈について、3度にわたり学会・研究会で発表した。また、副次的成果として、今後、記述言語学上の貢献が期待できる。当方言は近隣で最大の話者数を誇るが、ほとんど記述されておらず、不明な点が多い。また、この地域では、系統的に異なったナワトル語(中央ナワ語・東ナワ語)が互いに隣接しており、相互に影響関係が認められる。両者の関係は近年ナワトル語方言学の分野でひときわ注目されており、この地域の方言接触の実態を記述することは、こうした研究にとっても有用である。

2016年度4月には東京大学言語学論集に現地調査のデータを基にした論文を投稿し、掲載された(9月出版)。また、2016年3月には、現地調査で得られた資料の一部に注釈と訳を施し、ナワトル語の口語テキストとしてTlalocan誌(メキシコ)に投稿した。このほか、学会において査読つき口頭発表を3回行った。また、学会発表および論文投稿に加え、前年度までに収集した資料をもとに博士論文の執筆を行い、約3週間にわたりイシュキワカン方言の現地調査を行った。この調査においては、博士論文のためのデータを補うため、特に関係詞と冠詞・コピュラ構文、助動詞的接辞を中心とするやや複雑な構文の追加調査を行い、必要な例文、録音、テキストを収集・整理することができた。フィールドワークとその情報の整理に、当初の予定よりやや時間がかかっている。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、現在までに得られたデータを整理しつつ、再度のフィールドワークを行い、博士論文の執筆をすすめる。対象言語の統語的性質とその理論的帰結をより深く議論するため、博士論文の内容を、言語類型論的なものから、ナワトル語イシュキワカン方言の記述をより重視したものにする。複統合的言語の類型論的特質を明らかにするという本研究の目的に沿いつつも、手法上、複数の記述済みの言語を文法書にもとづいて対照するのではなく、体系的な言語データを収集できる現代ナワトル語の記述研究に注力している。そのため、当該年度においては、調査地・調査者の確保、言語研究の基礎となる語彙・音韻・文法の記述に注力しており、類型論的成果の本格的な発表および博士論文の執筆は次年度の課題としている。当初の研究計画では複数の記述済みの言語を文法書にもとづいて対照することに主眼をおいていたが、より信頼性・独自性の高い研究とするため、フィールドワークにより重点をおく。したがって、本研究の対象である複統合的言語のうち、調査体制がすでに確立できている現代ナワトル語イシュキワカン方言の記述に主眼をおき、同言語について得られたデータに類型論的考察を加える方策をとる。
骨組織におけるRNAヘリカーゼp68の機能解明

RNAヘリカーゼの1種であるp68はmiRNA合成に関わるなど種々の生理作用を有している。しかし、骨組織でのp68の役割は明らかとなっていない。そこで、その機能解明のため、骨組織特異的p68ノックアウトマウスの作製を試みた。その結果、p68 floxマウスの作製に成功した。また、細胞を用いた実験系により、p68が骨芽細胞分化に影響を与えることを明らかにした。RNAヘリカーゼの一種であるp68は二本鎖RNAを巻き戻す作用の他、ERのコアクチベーターとして機能することが明らかとなっている。また最近ではp68が骨代謝に重要な影響を及ぼす因子であるBMPと協調的にmicroRNAの生成にも関与していることも報告されている。このように、p68はエストロゲンシグナルやBMPシグナル系を介して、骨代謝に作用する可能性が強く示唆されているが、その詳細は不明な点が多い。そこで本研究では1)Cre-loxPシステムによる細胞種特異的KOを作製するためのp68floxマウスの樹立、2)骨芽細胞特異的Cre発現マウスとの交配による骨芽細胞特異的KOマウスの作製と解析、3)破骨細胞特異的Cre発現マウスとの交配による破骨細胞特異的KOマウスの作製と解析を行う。最終的に各KOマウスの解析から得られた結果を比較・検討することで、骨におけるp68の機能の解明を目指す。これらの成果により、骨代謝の新たな制御機構の解明と共に、骨関連疾患に対する新たな治療法確立への応用が期待できる。p68 floxマウス作製にあたり、まずin vitroにおいてp68が骨芽細胞分化に影響を与えるかについて解析を行った。マウス線維芽細胞由来MC3T3-E1細胞を用い、siRNAでp68をノックダウンすると骨芽細胞分化マーカーであるアルカリフォスファターゼの活性が低下した。またp68と非常によく似た分子であり、RNAヘリケース活性を有するp72についても同様の解析を行ったところ、p72も骨芽細胞分化に影響を及ぼすことを明らかにした。以上のように、p68が骨代謝において重要な役割を果たす可能性を見いだした。そこで本研究ではCre-loxPシステムによる細胞種特異的KOを作製し、KOマウスの解析から得られた結果を比較・検討することで、骨におけるp68の機能の解明を目指す。これらの成果は、骨代謝の新たな制御機構の解明と共に、骨関連疾患に対する新たな治療法確立への応用が期待できる。p68 floxマウス作製にあたり、まずinvitroにおいてp68が骨芽細胞分化に影響を与えるかについて解析を行った。また、p68を組織特異的に過剰発現するトランスジェニックマウスの作製するため、トランスジェニックマウス用のベクターの作製を行った。本ベクターのCreリコンビナーゼ依存性発現を培養細胞系において確認したところ、Creリコンビナーゼ共発現時のみp68を過剰発現させることができることを確認した。この作製したベクターを用い、マウス受精卵へのインジェクションを行ったところ、数匹の組織特異的founderマウスの作出に成功した。マウス線維芽

細胞由来MC3T3-E1細胞を用い、siRNAでp68をノックダウンすると骨芽細胞分化マーカーであるALPの活性が低下した。またp68と非常によく似た分子であり、RNAヘリケース活性を有するp72についても同様の解析を行ったところ、p72も骨芽細胞分化に影響を及ぼすことを明らかにした。また、p68を組織特異的に過剰発現するトランスジェニックマウスの作製を試み、数匹の組織特異的founderマウスの作出に成功した。p68 floxマウスの作製についてはexon25をloxP配列で挟んだコンストラクトを作製し、TT2 ES細胞に導入した。その結果、5ラインの相同組み換えES細胞を取得し、そのうち2ラインについて、100%キメラマウスを得ることが出来た。この2ラインのキメラマウスを用いた交配により、ES細胞を由来とするF1マウスの取得に成功した。このfloxマウスを各種Creマウスと交配することで、p68の機能の詳細が解明できるものと期待される。本研究の大きな柱であるp68floxマウスの作出には至っていないものの、組み換えES細胞は同定済みであるため、作出は時間の問題である。また、invitroでの基礎的データやトランスジェニックマウスの作出が進んでおり、おおむね順調に進展しているものと考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はfloxマウスの作出を急ぐと共に、トランスジェニックマウスの骨組織の解析を先行して進める。トランスジェニックマウスの解析と同時進行でinvtro系での実験を詳細に詰める。また、組織特異的ノックアウトマウスの作製に必要なCre発現マウスを入手する。
社会的条件不利地域の母子支援活動実践と連携した心理学的介入

大阪市西成区において1970年代より地域における子育て支援実践を継続し、近年地域包括的な機能をもつに至っている非営利特定法人「こどもの里」を連携拠点として、地域における包括的支援の実態を調査した。放課後児童保育、および地域特性を踏まえたエンパワメント・プログラム、ファミリーホームの運営、自立援助ホームの開設と運営などの定点観察をとおして調査課題を発見することができた。こどもの保育、養護において政策的に推奨されてる家庭的な要素について、公的な施設、民間の同種の施設を比較することによって検討することができた。韓国、台湾の施設を訪問調査し、地域ベースの草の根型の活動において重要な要素を抽出した。本調査の対象フィールドの拠点となる西成区にある特定非営利法人「こどもの里」(荘保共子代表)の、コミュニティーベーズドの実践活動の意義を抽出するのが主な作業であった。具体的には以下のようである。1.学童保育機能をもつ「こどもの里」では、生活保護世帯や片親家庭、ステップファミリーが多く、子どもの情緒発達に配慮した養育条件が不十分な家庭がで育ったこともたちが大半である。「本気で勉強会」「エンパワメントの会」「男の子話そう会」など、ボランティアおよび専門家がマネージするプログラムが保育時間に組み込まれているのはそのためである。それぞれのプログラムに参加して観察し、プログラムマネージャーへの聞き取りを行った。その成果は、「日本虐待防止学会、第21回学術集会にいがた大会」のシンポジウムにおいて発表した。2.「こどもの里」は地域の子どもが通う居場所としてだけでなく、大阪市から委託される「一時保護」および「ファミリーホーム」として養護、里親の機能をもっている。西成に育った、養護施設での適応困難児や要保護児童対策地域連絡協議会で見守り、危機的状況にあると判断された子どものを地域において預かるという役割を果たしてきた。そこには、行政機関の運営する一時保護所、他の養護施設とは異なった小規模多機能の特徴があり、その意義を抽出するために定点観察と聞き取り調査を行った。その成果は、28年5月の日本居住福祉学会シンポジウムにおいて報告する予定である。フィールドの拠点とした「こどもの里」の調査はおおむね順調であったが、研究分担者、研究協力者の一部との連絡・連携が不十分であった。インターディシプリナリーな調査・研究であり、研究分担者の関心実績に適合する具体的な研究課題を提示するのが遅れてたためである。児童養護施設および自律支援ホームの実態を調査した。地域においてNPOによって運営される「こども里、ファミリーホーム」、「こどもの里、自立援助ホーム」(大阪市西成区)および「自立援助ホームあらんの家」(奈良市大宮)の3施設を訪問観察、代表者への聞き取りを並行して行った。比較対象として「大阪府中央児童相談所」が運営する一時保護施設「なにわプラット」(大阪府箕面市)を訪問観察し、施設職員より実施・運営について聴取した。公的な施設の施設内の運営と地域との関係を参照することによって、知地域との結びつきを強調したNPOの子どもの権利に対する認識、理念に基づく施設運営の特徴を把握できた。「こども里」のファミリーホームの運営は、現在推奨されている「家庭的」養護について、具体的に何をすることが必要なのかを考える上で有益であった。居住福祉学会において、その報告をおこない(2016年5月)、子どもの権利と児童養護をテーマトシンポジウムを開催して専門家たちに問題提起した(2016年7月)。連携する研究課題(東アジア都市における包摂型居住福祉実践に関する研究、基盤B:全代表)の調査で韓国ソウルを訪問し、養護施設と放課後デイケアを併設する施設を訪問し、地域や他の福祉機能との連携を試みる実践を調査した(2017年2月)。他の年齢の対象者や異なった種類の条件不利をもつ人々の支室の連携するときに、相互に与える好影響があることが注目されているが、その力動的な家庭について詳細に論じる準備段階である。地域との連携、開かれた児童養護という点において、西成区の「こどもの里」の事業の先生性を確認した。最終年は、西成区の母子支援のネットワークにある保育園、虐待対応のNPOを定点観察して、地域福祉のグッドプラクティスを探り、臨床心理学的な観点から評価する。人権・多文化教育の観点から連携している分担者(阿久澤)の調査フィールドとして西成区がもっとも適切なのかどうか、これまでのところ明確ではない。地域の関係形成の観点から連携している分担者(全)とは、海外事例の調査などをとおして連絡はとれているが、西成区のネットワークという部分で、広く居住・生活の不利をもつ大人、そして子どもおよび母子に限った活動の有機的連携にたった調査計画が十分ではない。そのため、調査対象者、情報提供者を絞りきれなかったため。社会的条件不利を抱える地域として大阪市西成区のNPO法人「こどもの里」における子どもの地域包括支援の活動より、本調査研究では、ファミリーホームと自立援助ホームの活動実態を焦点化した。家庭的な支援が要請されているファミリーホームの運営のひとつのモデルとして「こどもの里」のそれを取りあげ、公的機関の一時保護施設の様態と運営の仕方とを比較検討することによって「家庭的なもの」を構成する要素を抽出した。自立援助ホームについては、児童養護施設やファミリーホームを出た若者の継続的支援の必要性が認知されて地域の包括的支援の一部としてその必要性が訴えられている。奈良県のNPO組織の運営する「あらんの家」と「こどもの里」を比較して、地域の特性、地域ネットワークの有無がその運営にとって重要であることが明らかになった。

外国にルーツをもつ子どもたちも増加しており、その生活の実態、条件不利を明らかにしながら、彼らが出会う困難を地域において支援するうえで必要なことを探った。これら草の根型の地域支援はNPOをはじめとする市民活動によって支えられており、組織運営において財政的な課題、専門職の配置など質的な問題を抱えているのものたしかであったが、東アジア地域の同様な活動組織と比較して現状の分析を試みた。韓国においては、公的機関の補助金を受けている組織と、草の根型のコンブッパン運動に位置づく一組織を調査した。人的資源、その専門性に対する考え方の違いがより明瞭になった。「こどもの里」も草の根型の活動から始まっており、いわゆる資格重視の専門性の追求について、草の根型組織が警戒的である理由が明確になった。ただし、草の根型の組織活動が継続性をもつには資金的な問題があり、台湾の社会的企業として成功している事例を分析した。その結果は、2018年3月、国際シンポジウムを開催して公開した。大阪市西成区において1970年代より地域における子育て支援実践を継続し、近年地域包括的な機能をもつに至っている非営利特定法人「こどもの里」を連携拠点として、地域における包括的支援の実態を調査した。放課後児童保育、および地域特性を踏まえたエンパワメント・プログラム、ファミリーホームの運営、自立援助ホームの開設と運営などの定点観察をとおして調査課題を発見することができた。こどもの保育、養護において政策的に推奨されてる家庭的な要素について、公的な施設、民間の同種の施設を比較することによって検討することができた。韓国、台湾の施設を訪問調査し、地域ベースの草の根型の活動において重要な要素を抽出した。「こどもの里」を拠点とする調査・研究は、「こどもの里」が男子対象の更生保護施設も設置することになったため、センター型の更生保護施設と比較対照ができる条件が整った。定期的な観察、面談、聞き取りによる詳細な心理的側面の探求が可能な条件が整備された。それに基づき、研究協力者の当初予定を変更して、より詳細な面接調査が行えるようにする予定である。地域における養護システムのユニークな意義は確認できたが、心理的介入の方法、プログラム運営について、臨床心理学の専門性との関係についてより詳細な検討を加える。そして、人権・多文化教育、子どもの発達支援を中核とする地域コミュニティー再生に関するグッドプラクティスを探り、子どもの地域包括支援の活動実践について臨床心理学的観点を中心に、公共政策、福祉政策の観点からも評価する。臨床心理学海外調査、聞き取り調査対象が、当初予定より遅れたため。西成区のグッドプラクティスに関する調査の遅れに伴い、予定していた情報提供者への謝金の支払いが不要であった。上記の理由に記載した事項を実施する。海外・国内のグッドプラクティス調査の旅費、調査対象者への謝金支払、成果報告関係の支出を予定しており、基金化した部分が必要になると考えている。
二分子蛍光消光反応と拡散過程の研究

アセトニトリル、トルエン、ジメチルスルホキシド中でテトラフェニルポルフィン(TPP)の蛍光のベンゾキノン、ナフトキノンおよびそれらの誘導体存在下での蛍光減衰を測定した。過渡効果を解析し、反応距離Rと拡散係数D^<FQ>(蛍光体と消光剤の拡散係数の和)を見積もった。これと独立にTaylor分散法により蛍光体および消光剤の拡散係数、D^F、D^Q、を測定した。ジメチルスルホキシド中では過渡効果から得られたD^<FQ>とTaylor分散法から得られた拡散係数の和( D^F+ D^Q)はほぼ等しいが、その他の系では前者の方が後者よりも小さかった。負電荷を持つジミリストイルフォスファチジルグリセロール(DMPG)ベシクル溶液系で、TPPおよびテトラキス(4-N-トリメチルアンモニオフェニル)ポルフィン陽イオン(TTMAPP^<4+>)の蛍光減衰を、メチルビオローゲンイオン(MV^<2+>)存在下で測定した。減衰定数は、DMPGの電荷がMV^<2+>で完全に中和されるまでMV^<2+>濃度の増大とともに直線的に増大し、電荷が中和された後一定値を示した。TTMAPP^<4+>- MV^<2+>系よりもTPP- MV^<2+>系の方が消光反応速度定数が大きく、陰イオン性ベシクル表面でも前者の系では電荷反発の寄与があることがわかった。