hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
東・東南アジアにおける沖縄の地域間ネットワークの形成と変遷に関する総合的研究

また、(2)では、中国華南奥地の雲南地方とインドネシア・スラヴェシ島の北部(マナド地方)と中部(ママサ地方)で調査を行い、集落と住居形態、民俗・風習、文化、沖縄人移民問題等のテーマの下、琉球沖縄諸島との史的かかわりを探り、検討した。いずれの地も、今日なお開発近代化に染まること少なく、生活形態と心性に伝統が顕在して残っている実態を豊富に知りえて、琉球沖縄文化との史的連関(ネットワークの形成と変遷)を明らかにするための貴重な基礎資料を拡充することが出来た。調査研究した事項を個別に示しておくと、(1)集落形態では琉球列島にもみられる男系集落と女系集落との問題、(2)住居形態では高床氏と船形屋根問題、(3)民俗・風習では山地民俗と海洋民俗との問題、(4)文化問題では(イ)精神文化問題としての原始的・古代的祭祀宗教・祖霊問題と(ロ)物質文化形象問題(前者では特に「世界観」「創世神話」「伝承」「儀礼」を、後者ではとくに染織の一形態であるイカット(絣織物)問題)、(ハ)移民問題に、いずれも琉球沖縄での在り方との異同に注目することで取り組んできたものである。本研究3年目の本年(平成18年度)は、昨年度に引き続き、当該研究にかかかわる(1)データーベースの補充作業と、(2)フィールド調査を行った。(1)では、文献資料の体系的整備・拡充につとめた。(2)では、中国中華南奥地の貴州省(貴陽、安順、反排、凱里、肇興、櫁江、郎徳、報京、鎮遠、鳳凰、銅仁の地方)とフィリッピンのマニラ、ダバオ、バギオの3地域調査を行い、前者では集落と住居形態、民俗・風習、文化問題を、また後者では沖縄人移民問題に集中して、琉球沖縄諸島との史的かかわりを探り、検討した。貴州省の山間奥深い諸地域では、いずれの地も、今日なお開発近代化に染まること少なく、生活形態と心性に伝統が顕在して残っている実態を豊富に知りえて、琉球沖縄文化との史的連関を、また沖縄移民が多く居住するフィリピンの3地域では60戸を個別訪問して移民経緯とその後の生活と意識をつまびらかに伺い(ネットワークの形成・変遷とアイデンティティ問題)を明らかにするための貴重な基礎資料を拡充することが出来た。調査研究した事項を個別に示しておくと、(1)集落形態では琉球列島にもみられる男系集落と女系集落との問題、(2)住居形態では高床氏と船形屋根問題、(3)民俗・風習では山地民俗と海洋民俗との問題および石敢当たり問題、(4)文化問題では(イ)精神文化問題としての原始的・古代的祭祀宗教・霊魂問題と(ロ)物質文化形象問題(前者では特に「世界観」「創世神話」「伝承」「儀礼」を、後者ではとくに染織の一形態であるイカット(緋織物)問題)、(ハ)移民問題に、いずれも琉球沖縄での在り方との異同に注目することで取り組んできたものである。本研究最後の年度として,場地フィールド調査を沖縄諸島,九州,五島列島,チェジュ島(韓国),フィリッピン(ルソン島マニラ,ミンダナオ島ダバオ)に赴き行い,本研究最終成果報告書作成に取り組んだ。特に本研究では,視野を外にも求めて,内(琉球・沖縄)と外(東・東南アジア)との史的関係に重きを置いて,沖縄文化の形成と展開を,研究課題に即して独自的に跡付け,理論化することを目的としてきた。研究分野からすると,ジャンルは多岐にわたるが,大別して,「原琉球」および「古琉球」時代の問題では,中国(就中「華南」),台湾,東南アジア(将来的には南太平洋諸島も視野に入れた),韓国(朝鮮),大和(日本)との文化的「ネットワークとアイデンティティ」の形成と展開を史的に掘り起こし,「琉球処分」以降の問題では・とくに日米関係(日本とアメリカとの関わり)に重点をおいて,所期の目的を遂行した。
リポカリンタンパク質の家畜疾病バイオマーカーとしての利用

鯨偶蹄目に属する各種家畜の疾病と,血液以外の各種体液(唾液、鼻粘液、尿、汗を含む皮膚付着物)中に含まれるリポカリンタンパク質bcOBP及びその類縁タンパク質発現量との関連を明らかにし,バイオマーカーとしての利用可能性を検証した.乳房炎などの諸症状を示す泌乳牛,雌ヒツジ,雌ヤギから採集した唾液,鼻粘液,尿,汗を含む皮膚付着物中のbcOBP及びその類縁タンパク質発現量は,健常個体から採集した体液試料中の発現量と有意差は認められず,bcOBP及びその類縁タンパク質の発現変動をこれら疾病のバイオマーカーとして用いるのは困難であることが明らかとなった.鯨偶蹄目に属する各種家畜の疾病と,血液以外の各種体液(唾液、鼻粘液、尿、汗を含む皮膚付着物)中に含まれるリポカリンタンパク質bcOBP及びその類縁タンパク質発現量との関連を明らかにし,バイオマーカーとしての利用可能性を検証した.乳房炎などの諸症状を示す泌乳牛,雌ヒツジ,雌ヤギから採集した唾液,鼻粘液,尿,汗を含む皮膚付着物中のbcOBP及びその類縁タンパク質発現量は,健常個体から採集した体液試料中の発現量と有意差は認められず,bcOBP及びその類縁タンパク質の発現変動をこれら疾病のバイオマーカーとして用いるのは困難であることが明らかとなった.本研究は、家畜体液中に存在するリポカリンタンパク質bcOBPの発現量と各種疾病との関連の有無を明らかにし、新規バイオマーカーとしての利用可能性の検証を目的とする。本年度は、解析に必要となる抗bcOBPモノクローナル抗体を大量調製し、各種疾病に罹患した家畜の体液試料の採集ならびにその一部を用いウエスタンブロット解析を実施した。泌乳牛209頭分から乳、鼻粘液、唾液を体液試料として採集し、80%飽和硫安沈殿によりタンパク質画分を回収した。209頭の健康状態の内訳は、健常牛(n=164)およびケトーシス(n=9)、乳房炎(n=15)、蹄異常(n=5)、卵胞嚢腫(n=1)、血乳症(n=1)、下顎腫瘤(n=1)、皮膚炎(n=1)であった。また、排卵誘起(n=11)、黄体退行誘起(n=1)処置を施した個体も含んでいた。このうち、ケトーシスおよび乳房炎に罹患した個体の各種体液をウエスタンブロット解析に供しbcOBP発現量を見積もったところ、いずれにおいても健常牛(n=10)と比較して有意差は認められなかった。抗bcOBPモノクローナル抗体を一次抗体として用いたウエスタンブロット解析により,平成26年度は,血漿中bcOBP発現量を泌乳牛201頭について調査した.また,泌乳牛(89頭),ヤギ(雌14頭),ヒツジ(雌13頭)の唾液,鼻粘液,尿,皮膚付着物中のbcOBP発現量についても調査した。泌乳牛の血漿中bcOBP発現量については,平成25年度に得られた結果と合わせ,ケトーシス(n=17),乳房炎(n=38),蹄異常(n=10),卵胞嚢腫(n=5),血乳症(n=3),下顎腫瘤(n=1),皮膚炎(n=3)に罹患した泌乳牛の各個体および排卵誘起(n=26),黄体退行誘起(n=5)処置を施した各個体いずれにおいても,健常牛(n=299)と比較して有意差は認められなかった.また,乳量,ボディコンディションスコアおよび各種血中成分濃度と泌乳牛血漿中bcOBP発現量の間に,単相関は認められなかった。一方,重回帰分析の結果から,泌乳牛血漿中bcOBP発現量と血中BUN濃度および血中カロテン濃度間にそれぞれ正および負の相関が示された.泌乳牛,ヤギ,およびヒツジの唾液,鼻粘液,尿,皮膚付着物中のbcOBP発現量に関しては,泌乳牛血漿で得た結果と同様に,各種疾病に罹患した個体と健常個体間でいずれも有意差は認められなかった。以上より,家畜体液中のbcOBP発現量の変動を疾病バイオマーカーとして用いるのは困難であることが明らかとなった。畜産学モノクローナル抗体の大量調製を完了し、泌乳牛から体液試料を採取した。その一部を用いウエスタンブロット解析を実施した結果、泌乳牛に高頻度で見られた乳房炎あるいはケトーシスとbcOBP発現量には相関の無いことが示唆された。以上の理由から、達成度を2とした。ウシ患畜からの体液採取を進め試料数を増やすとともに、罹病したウシ以外の家畜(ブタ、ヤギ、ヒツジ)から体液の採取を進める。また、ウエスタンブロット解析により採取した体液試料中のbcOBP発現量を見積もり、各種疾病との関連性を引き続き調査する。
大規模疫学調査からみる学童期アレルギー疾患の実態 -この10年間の変遷-

我々は2006年に京都市の小中学生1万3千人を対象とした大規模疫学調査を施行し、1996年に行った同一地域、同一手法の調査結果と比較検討した。その結果、96年当時と比べて改善しているのは喘息重症度のみであり、他のアレルギー疾患は有症率、重症度とも悪化していることを見出した。特にアレルギー性鼻・結膜炎の増加は著しく、06年における有症率は96年の約2倍に達していた。さらにスギ花粉症疑い例は約4倍となっていた。食物アレルギーについては06年が初めての調査となったが、低学年になるほど食物除去施行例は上昇しており、ここ数年での有症率の増加が示唆された。除去項目で多いのは、そば、卵、甲殻類、果物、魚、ピーナッツの順であったが、卵は年齢が上昇するとともに除去率が低下するのに対して他の品目は低下せず、小学校高学年以上で除去率が多いのはそば、甲殻類、果物、魚、ピーナッツなどの順であった(現在論文投稿準備中)。以上より、今後特に学童期に重点的に対策を考えるべきアレルギー疾患は、アレルギー性鼻・結膜炎、スギ花粉症、食物アレルギー(特にそばや甲殻類など)であると考えられた。これらの疾患に対して学童期に学校現場でスクリーニング検査を行い、ハイリスク例を抽出して早期介入を行い疾患の予防や軽減化を図ることは学校保健上きわめて重要な取り組みと思われる。一方、肥満と小児アレルギー疾患との関連に関して、我々は96年の調査結果データベース(京都・滋賀地域合わせて合計50,086人)を用いて解析し、従来の報告通り女子において肥満児童に喘息が多いことを確認するとともに、特、に男子において肥満児童で鼻炎・結膜炎が有意に少ないことを見出した。同じアレルギー疾患であるにもかかわらずこのような背反する結果となることに関して、環境因子の影響やアディポサイトカインの免疫系に与える影響など複雑な因子が絡んでいることが推察された。平成18年6月から8月にかけて学校を通じて配布し1万2千名あまりから回収し得た学童期アレルギー疾患調査票(回収率89%)のうち、07年3月時点で5,832名分のデータ打ち込みが終了した。現時点での中間集計を取ってみたところ、以下のような大変興味深い傾向が明らかになった。1)喘息、皮膚炎の有症率はこの10年で差はなかったが、重症度は喘息で軽症化、逆に皮膚炎は重症化していた。喘息の軽症化はステロイド吸入をはじめとする長期管理の進歩によることが推察されるが、皮膚炎の重症化は問題であり、未だ有効な治療管理法が見出されていないことの反映と思われる。2)鼻炎、結膜炎はこの10年で各々1.3倍、1.8倍に増加していた。3)学童期に入っても食物アレルギーのため除去食をしている症例は3.7%あり、内容はソバ、卵、甲殻類が3大除去項目であった。平成19年8月をめどに全データの打ち込みを終了させ、その上で最終結果をまとめる予定である。我々は2006年に京都市の小中学生1万3千人を対象とした小児アレルギー疾患大規模疫学調査を施行し、1996年に行った同一地域、同一手法の調査結果と比較検討した。

さらにスギ花粉症疑い例は約4倍となっていた。食物アレルギーについては06年が初めての調査となったが、低学年になるほど食物除去施行例は上昇しており、ここ数年での有症率の増加が示唆された。除去項目で多いのは、そば、卵、甲殻類、果物、魚、ピーナッツの順であったが、卵は年齢が上昇するとともに除去率が低下するのに対して他の品目は低下せず、小学校高学年以上で除去率が多いのはそば、甲殻類、果物、魚、ピーナッツなどの順であった(現在論文投稿準備中)。以上より、今後特に学童期に重点的に対策を考えるべきアレルギー疾患は、アレルギー性鼻・結膜炎、スギ花粉症、食物アレルギー(特にそばや甲殻類など)であると考えられた。これらの疾患に対して学童期に学校現場でスクリーニング検査を行い、ハイリスク例を抽出して早期介入を行い疾患の予防や軽減化を図ることは学校保健上きわめて重要な取り組みと思われる。一方、肥満と小児アレルギー疾患との関連に関して、我々は96年の調査結果データベース(京都・滋賀地域合わせて合計50,086人)を用いて解析し、従来の報告通り女子において肥満児童に喘息が多いことを確認するとともに、特に男子において肥満児童で鼻炎・結膜炎が有意に少ないことを見出した。同じアレルギー疾患であるにもかかわらずこのような背反する結果となることに関して、環境因子の影響やアディポサイトカインの免疫系に与える影響など複雑な因子が絡んでいることが推察された。
都市直下地震を受ける二相系構造物群の連鎖倒壊メカニズムの解明

・二相系構造物の剛接合柱材・梁材の曲げ剛性・耐力の違いが層間変形集中に及ぼす影響静的地震力を受ける二相系構造物における架構のせん断剛性及び柱材曲げ剛性の相関性が架構の層間変形集中に及ぼす影響を検討し,柱材に作用する最大モーメントを併せて検討し、層間変形集中率に対する剛接合柱材の必要性能を提示している。・地震外乱を受ける二相系構造物の層間変形集中抑制に対する柱材・梁材の必要剛性・耐力評価振動特性,応答加速度の卓越周期の異なる数種類の地震波を用い,ブレース架構の崩壊メカニズムに及ぼす剛接合柱材の曲げ剛性・耐力との関係を把握した。強度,塑性変形性能及びエネルギー吸収能力ごとに,ブレース材による架構の耐震性能への寄与を明確にしている。・連層ブレース架構及び連層耐震壁を有する架構の動的崩壊メカニズムの解明連層ブレース材を有する二相系構造物において,せん断抵抗要素の耐荷能力喪失に伴う動的崩壊メカニズムの形成とモーメント抵抗要素による架構の冗長性を明らかにしている。二次抵抗要素であるラーメン架構が一部のブレース材の耐荷能力喪失に伴う連鎖倒壊の発生を抑制することから,構造要素の固有周期・履歴エネルギー吸収能力と,連鎖倒壊に対する抑制効果を包括的に把握している。その際,構造物の周期特性・強度特性や構造種別の違いをパラメータとしている。・二相系構造物の剛接合柱材・梁材の曲げ剛性・耐力の違いが層間変形集中に及ぼす影響静的地震力を受ける二相系構造物における架構のせん断剛性及び柱材曲げ剛性の相関性が架構の層間変形集中に及ぼす影響を検討した。有限要素法による弾塑性大変形解析及び釣合方程式による理論解析から柱脚の支持条件の違いと架構の層間変形集中率との関係を明らかにした。柱脚の固定度により架構の崩壊挙動が異なることが示された。さらに,架構の高さ方向のせん断剛性比と層間変形集中率との関係を示すとともに,柱材に作用する最大モーメントを併せて検討し,層間変形集中率に対する剛接合柱材の必要曲げ剛性及び必要曲げ耐力を提示した。・地震外乱を受ける二相系構造物の層間変形集中抑制に対する柱材・梁材の必要剛性・耐力評価種々のブレース材及び耐震壁を有する架構の時刻歴応答解析を行った。振動特性,応答加速度の卓越周期の異なる数種類の地震波(El Centro, Taft, Hachinohe, JMA-Kobe)を選定した。前述の知見より実構造物の柱脚固定度を調べ,柱脚固定度の違いが架構の応答性状に与える影響を検討した。さらに,ブレース材の強度,塑性変形性能及びエネルギー吸収能力ごとに,ブレース材及び耐震壁による架構の耐震性能への寄与を明らかにした。また,強度特性の等しいラーメン架構の動的解析を併せて行い,崩壊機構や層間変形集中率,塑性変形倍率を比較することで,構造形式の異なる架構の耐震性能を調べ,二層系構造物の地震応答特性を明らかにした。・二相系構造物の剛接合柱材・梁材の柱脚支持条件の違いが層間変形集中に及ぼす影響静的地震力を受ける二相系構造物における架構のせん断剛性及び柱材曲げ剛性の相関性が架構の層間変形集中に及ぼす影響を検討した。これまで,柱脚支持条件をピン支持としてきたが,実構造物の設計上柱脚固定と仮定する場合が多い。そこで,有限要素法による弾塑性大変形解析及び釣合方程式による理論解析から柱脚の支持条件の違いと架構の層間変形集中率との関係を明らかにした。

強度,塑性変形性能及びエネルギー吸収能力ごとに,ブレース材による架構の耐震性能への寄与を明確にしている。・連層ブレース架構及び連層耐震壁を有する架構の動的崩壊メカニズムの解明連層ブレース材を有する二相系構造物において,せん断抵抗要素の耐荷能力喪失に伴う動的崩壊メカニズムの形成とモーメント抵抗要素による架構の冗長性を明らかにしている。二次抵抗要素であるラーメン架構が一部のブレース材の耐荷能力喪失に伴う連鎖倒壊の発生を抑制することから,構造要素の固有周期・履歴エネルギー吸収能力と,連鎖倒壊に対する抑制効果を包括的に把握している。その際,構造物の周期特性・強度特性や構造種別の違いをパラメータとしている。
癌の骨破壊病変に対する新規ａｎｇｉｏｇｅｎｉｎ阻害剤による分子標的治療の開発

癌の骨浸潤・骨破壊には,破骨細胞性骨吸収が重要である。血管新生因子angionenin(ANG)を分子標的とした癌骨破壊病変の治療の開発を行ってきたが,本研究では,ANG-1ノックアウトマウス(ANG-KO)を作製し検討すると同時に,ANG阻害剤の有用性を検討した。ANG-KOでは成長初期の骨梁形成が抑制され,ANG-KOの細胞を用いた破骨細胞形成は抑制されたがin vivoでは差異は少なかった。ANG阻害薬neomycinはマウス癌骨破壊モデルに対して有用性が確認できた。ANGの産生抑制する新規阻害剤Terreinは,血管新生阻害のみならず抗腫瘍効果も認められ,その有用性が示唆された。癌の骨浸潤・骨破壊には,破骨細胞性骨吸収が重要な役割を果たす。申請者は,癌細胞に発現する血管新生因子angiogenin(ANG)を分子標的としたANG選択的阻害薬の癌の骨浸潤,骨破壊の治療法の臨床応用を目的に研究を計画した。本年度は,ANG-1ノックアウトマウス(ANG-KOマウス)を作製し,骨代謝系でのANGの分子制御機構の解析,KOマウスならびに野生型マウスの分離細胞の骨関連因子の応答遺伝子の解析研究を開始した。ANG-KOマウスを作製し成長過程における変化を観察した。骨格成長には影響は認めなかった。また長期間の経時的な骨格のサンプリングを行っており,24年度にCT,組織学的解析を計画している。癌細胞に発現する血管新生因子angiogenin (ANG)をsiRNAによって抑制すると,癌の骨浸潤・骨破壊が制御されることを見出している。これらの研究基盤をもとに本研究では,破骨細胞性骨吸収を標的とした癌の骨浸潤,骨破壊に対するANG阻害剤による治療法の確立を目的に研究を計画した。1ANGノックアウト(KO)マウスを用いたin vivoならびにin vitroにおける骨代謝系の解析では,ANG KOマウスとWtマウスの大腿骨をマイクロCTにて骨形成能を比較すると、生後4週、8週で骨梁形成がANG KOマウスでは抑制され骨形成能におけるANGの重要性が示唆された。しかし6ヶ月後ではその変化は消失した。またAngノックアウトマウスとWtマウス頭蓋冠にPTHrPを投与し骨代謝回転を上げて破骨細胞形成の状態を再検討したが,破骨細胞の出現数に変化はなかった。2破骨細胞様細胞株RAW264.7細胞の細胞増殖能にANG阻害剤Neamine, Neomycineのいずれも有意な抑制効果は示さず,骨髄間質細胞様細胞株ST2の細胞増殖に対しても同様の結果を示した。一方,血管内皮細胞増殖能には増殖抑制を示しANGは促進的に働いた。以上よりANG阻害剤の破骨細胞抑制は血管新生を介している可能性が示唆された。3口腔扁平上皮癌細胞HSC-2を大腿骨内に注入し作成したマウス癌骨破壊病変に対するANG阻害剤Neomycineの検討を投与量等を再検して評価を行ったところ,著明に骨内での腫瘍細胞増殖が抑制され骨破壊も抑制された。申請者は,癌細胞に発現する血管新生因子angiogenin (ANG)を分子標的としたANG選択的阻害薬の癌の骨浸潤,骨破壊の治療法の臨床応用を目的に研究を計画した。1.ANG-1ノックアウトマウス(ANG-KOマウス)に対する骨吸収因子の影響昨年度の骨髄細胞ならびに脾細胞を用いた破骨細胞形成系で,ANG-KO群はWT群と比較して破骨細胞数の減少を認めたことから,本年度は,ANG-KOマウスの頭部皮下にPTHrPを注射し,頭蓋冠の骨吸収を誘発させ,組織学的に検討した。その結果,in vitro同様にWTマウスと比較しANG-KOマウスでは破骨細胞性骨吸収が抑制され骨吸収への関与が示唆された。2. ANG阻害剤の破骨細胞性骨吸収における解析1)新規ANG阻害剤のin vitroでの細胞障害性の検討:ANGは細胞内の核へ移行する。ANGの核移行はリボソームRNAの転写に必須であることから、この経路をブロックするNeomycinならびにANG分泌自体を抑制する新規化合物Terrein glucosidについてin vitroにて検討した。その結果,Terreinは,骨芽細胞様細胞MC3T3E-1,骨髄間質細胞ST2,ANG高発現ヒト口腔扁平上皮癌HSC2に対して濃度依存性に細胞障害を示したが,HSC2で効果が最も強かった。Terreinは各種合成体の作成し安全性等を検討中である。2)口腔扁平上皮癌骨破壊動物モデルに対するANG阻害剤の効果の検討:HSC-2をヌードマウス大腿骨内に注射して作製した癌骨破壊モデルに対するANG阻害剤(Neomycin)の癌骨破壊について検討した。

X線学的には差異は少なかったが,濃度を再検討して追試をおこなっている。Terreinは皮下移植モデルで抗腫瘍効果が確認できた。ノックアウトマウスの作製が実験開始当初に遅れたため,サンプル数が揃わないなど動物での解析がやや遅れいてる。すでに作製については解決されており,サンプリングも順調であり、今後の計画への支障は無い。25年度が最終年度であるため、記入しない。本研究で最も重要な癌誘発骨破壊動物実験モデルでの結果が画像所見において効果が不十分であり,阻害剤の濃度変更を行った上で追試をすでに行っており,サンプリングができ次第評価が可能である。そのためコアの部分の結果の公表がやや遅れているが平成25年度内には可能と思われる。これまでのsiRNA等を用いて行ってきた研究成果と同様に,本研究ではANGが破骨細胞形成に重要であるという結果が,ノックアウトマウスでも証明がなされた。平成23年度の遺伝子検索に関しては、3年間の予定であり,既に解析準備が進行中である。今後は計画通りANG阻害剤を用いてより臨床的な観点からの治療的アプローチを展開してゆく計画である。angiogenin(ANG)を標的にした癌の骨破壊の制御を検討しており,臨床的な観点から動物モデルでのANG阻害剤の検討が最も重要である。昨年度の結果は骨破壊の評価でバラつきが認められたが,同サンプルの組織学的検討ならびにすでに阻害剤の濃度を再検討して動物実験も追試を開始しており特に問題なく推敲できると思われる。新規化合物Terrein glucosidに関しては,in vitroでの検証は行ったが,in vivoに関しては,平成24年度に癌の皮下移植モデルでの効果について投与濃度ならびに抗腫瘍効果は確認できており,癌の骨破壊動物実験モデルでの検証もすでに準備中である。さらに安全性のあるより効果を示す化合物についてアナログの開発と細胞障害へのin vitroの検討を行っている。
モデル動物を用いた糸球体メサンギウム細胞増殖機構の分子病理学的研究

目的糸球体メサンギウム細胞の増殖機構を解析するために、糸球体過剰濾過ラットを作成し、血小板由来成長因子(PDGF)の関与を、肥大糸球体におけるPDGFーmRNAの発現と生成ペプチドとしての発現について検討した。方法SDラットの一側腎を摘出し、対側3/4に梗塞病変を作成した。手術後、腎の光顕像は7日、2週及び3週間で、PDGFは2、3、及び7日目で検討した。PDGFーペプチドの検出は蛍光抗体法により行い、PDGFーAおよびPDGFーBのmRNAの検出はオリゴヌクレオチド・プロ-ブを用いたin situ hybridizationにより行った。結果1.光顕所見:術後1週で、糸球体サイズの増大と核の増加を呈する糸球体肥大の所見が見られた。2週では、糸球体肥大は軽快し、過剰濾過の影響と考えられる係蹄腔の拡大が見られ、一部の糸球体ではメサンギオリ-シスが認められた。3週では糸球体硬化の進行が著明であった。尿細管は、1週より近位尿細管と集合管の肥大と増殖が進行し3週では、尿細管円柱、集合管細胞の増生がめだった。2.蛍光抗体法所見:2、3、および7日の腎糸球体の一部でPDGFがメサンギウス領域に陽性であった。尿細管は、7日的の皮質集合管の細胞質が陽性であった。正常ラットでは陽性所見は見られなかった。3.in situ hybridization:PDGFーmRNAは、3日までは糸球体、尿細管(集合管部)ともに陽性であったが、7日では集合管のみで陽性であり、糸球体は陰性であった。いずれでもPDGFーAとPDGFーBの分布の違いは明らかでなかった。結論と考案部分腎摘除後の初期における糸球体肥大の成立にPDGFの関与が質唆された。PDGFが尿細管、集合管部の増殖変化の要因である可能性も示唆された。今後、PDGFとともTGFーβの発現調節について研究を進めるとともに、自然発症型硬化性糸球体腎炎のモデルマウス(RF/J系)におけるPDGFおよびTGFーβについて検討したい。
活性化サブユニットp35コンディショナルKOを用いたCdk5の機能解析

神経細胞特異的セリン・スレオニンキナーゼCyclin-dependent kinase 5(Cdk5)の機能を、活性化サブユニットp35のコンディショナルノックアウト(KO)マウスを作製し、空間学習課題や恐怖条件付け課題などの行動解析、電気生理学的解析、生化学的解析を行なう事で明らかにする事を本研究の目的とした。本研究ではp35遺伝子座に2つのloxPを挿入した(p35-flox)マウスを作成した。脳形成が終了してからp35遺伝子を破壊するために、タモキシフェン(TM)でCre活性を誘導できるCreERマウスと交配して、誘導型p35コンディショナルKOを作成した。2mg TMの経口投与3日間連続でp35の80%以上の量的低下が確認された。また、生後約3週の海馬CA1特異的にCreが発現するCaMKII-Creマウスとの交配で、CA1特異的p35コンディショナルKOを作成し、Cre発現後にp35タンパク質量が海馬で低下していることが確認できた。CA1特異的p35コンディショナルKOマウスにおいては、海馬CA1錐体神経細胞のスパイン数の減少が観察されている。これらのp35コンディショナルKOについて、現在行動解析を行なっている。神経細胞特異的セリン・スレオニンキナーゼであるCyclin-dependent kinase 5(Cdk5)は神経可塑性への関与が示唆されている。Cdk5欠損マウスは胎生致死のため、Cdk5の活性化サブユニットであるp35の欠損マウスを用いてCdk5の生後の脳機能に関する役割について解析し、p35の欠損により空間学習が障害されている事を明らかにした(Ohshima2005)。しかし、p35欠損マウスには軽度の脳構造異常があり、学習の障害が機能的障害によるものか結論を得ていない。また2007年、米国のBibb博士らの研究グループが、Cdk5の誘導型コンディショナルKOマウスを解析し、シナプス後膜でのNR2Bのタンパク質量が増加し、学習・記憶が野生型に比べ増強していたと報告したが、Cdk5のキナーゼとしての機能的意義に関しては、解明されないままである。本研究では、脳の高次機能におけるCdk5の役割を、活性化サブユニットp35のコンディショナルKOマウスを作製し、空間学習課題や恐怖条件付け課題などの行動解析、電気生理学的解析、生化学的解析を行なう事で明らかにする事を目的としている。H21年度は、p35floxマウスラインの確立と、Creマウスとの交配をおこなった。用いたCreマウスは。(1)tamoxifenの投与によりp35遺伝子の組換えが誘導できるCreERマウスライン、(2)生後の小脳プルキンエ細胞でCreが発現するL7-Creマウスライン、(3)生後の海馬CA1領域で特異的にCreが発現するCaMKllalpha-Creマウスラインであった。p35floxマウスラインに関しては、p35タンパク質の量には変化がないこと、脳組織に形態的異常がない事を確認した。今後は、得られたコンディショナルKOマウスについて、p35タンパク質の喪失があるかを確認し、計画通り解析を進める事とした。学習記憶や恐怖の保持や消去といった脳の高次機能における神経細胞特異的セリン・スレオニンキナーゼCyclin-dependent kinase 5 (Cdk5)の機能を、活性化サブユニットp35のコンディショナルノックアウト(KO)マウスを作製し、空間学習課題や恐怖条件付け課題などの行動解析、電気生理学的解析、生化学的解析を行なう事で明らかにする事を本研究の目的としている。H21年度に作成を行なった、CreERTMマウスを用いた誘導型コンディショナルKOマウスについて、今年度は、40H-タモキシフェン投与後の遺伝子欠損誘導をp35タンパク質量の低下で確認した。現在行動解析に向けて準備を行なっている。また、誘導型コンディショナルKOマウスに加えて、海馬及び小脳プルキンエ細胞特異的なコンディショナルKOマウスをCaMKII&#61537;-creマウス及びL7-creマウスを用いてそれぞれ作成した。

これらのマウスの脳組織をウエスタンブロット法で解析して、領域特異的なp35タンパク質量の低下をそれぞれ海馬と小脳で確認した。これらのマウスの行動解析の準備も現在進めているところである。本年度に計画していたAlzheimer病モデルマウスとの交配については、現在保持しているAPP/PS1 double Tgマウスではアミロイド病変が顕著であるものの、Cdk5の影響がより明らかであるタウタンパク質リン酸化の異常が少ないことから、今後は変異タウタンパク質高度発現型のモデルマウスに対して、p35の喪失の効果を検討すべきと考え準備を開始した。また本研究と関連して、Cdk5のコンディショナルKOマウスにおいて、ミエリン形成の異常を見出し、これがオリゴデンドロサイトの分化の障害により起こることを報告した。神経細胞特異的セリン・スレオニンキナーゼCyclin-dependent kinase 5(Cdk5)の機能を、活性化サブユニットp35のコンディショナルノックアウト(KO)のマウスを作製し、空間学習課題や恐怖条件付け課題などの行動解析、電気生理学的解析、生化学的解析を行なう事で明らかにする事を本研究の目的とした。本研究ではp35遺伝子座に2つのloxPを挿入したマウス(p35-floxマウス)を作成した。脳形成が終了してからp35遺伝子を破壊するために、タモキシフェン(TM)でCre活性を誘導できるCreERマウスと交配して、誘導型p35コンディショナルKOを作成した。2mg TMの経口投与3日間連続でp35の80%以上の量的低下が確認された。また、生後約3週の海馬CA1特異的にCreが発見するCaMKII-Creマウスとの交配で、CA1特異的p35コンディショナルKOを作成し、Cre発現後にp35タンパク質量が海馬で低下していることが確認できた。これらのp35コンディショナルKOについて、現在行動解析を行なっている。CA1特異的p35コンディショナルKOマウスにおいては、海馬CA1錐体神経細胞のスパイン数の減少が観察されている。また、アルツハイマー病(AD)のモデルマウスに対するp35の関与は、先行研究として行なったp35KOマウスとの交配でAD病態が悪化する結果を得ており、詳細を検討中である。
幹細胞生物学と腫瘍生物学の接点

研究目的ES細胞と腫瘍細胞は、増殖や未分化維持の分子機構において共通点が存在することが予想される。ES細胞で特異的に発現する遺伝子群(ECAT:ES cell associated transcript)は正常成体組織では発現しないが、多くのヒト腫瘍細胞中での発現が示唆されている。このことはECAT遺伝子群の発現が腫瘍細胞の不死化や脱分化に関与している可能性を示唆する。本研究では、この可能性を検討するために次の研究を行った。研究結果1.ECAT遺伝子群の遺伝子ノックアウトによる機能解析ECAT1、ECAT15-1、ECAT15-2、ECAT17、およびECAT20(Sall4)について、ノックアウトES細胞およびマウスの作製を行った。これまでにSall4KOマウスは、胎児期に致死となることが示唆されている。2.ECAT遺伝子産物の生化学的解析正常細胞とECAT遺伝子ノックアウト細胞との間でのDNAマイクロアレーによる遺伝子発現解析を進める。これまでにSall4の標的と考えられる遺伝子がいくつか同定されている。3.細胞初期化におけるECAT遺伝子および癌関連遺伝子の役割の解析昨年度の研究で、ECAT遺伝子(Oct3/4とSox2)および癌関連遺伝子(c-MycとKlf4)を組み合わせることにより線維芽細胞を初期化し多能性幹細胞を樹立できることを示した。今年度は、初期化過程におけるこれら4因子の役割を解析した。これまでにc-Mycはグローバルなヒストンアセチル化に関与することが示唆されている。胚性幹細胞(ES細胞)は哺乳動物の初期胚(ブラストシスト)に由来する幹細胞で、成体を構成するすべての細胞へと分化できる多能性を維持したまま、癌細胞に匹敵する速度で半永久的に増殖する。ES細胞を生体に移植すると三胚葉系の様々な組織を含む奇形腫を形成することから、ES細胞は腫瘍細胞に類似するだけではなく、ある意味では腫瘍細胞そのものであると考えられる。私たちはこれまで、ES細胞は恒常活性型のRas蛋白質であるERASや分化多能性の維持に必須であるホメオボックス転写因子Nanogを特異的に発現していることを見いだした。NanogなどECAT遺伝子群は正常の成体組織では発現しないが、多くのヒト腫瘍細胞中での発現が示唆されている。このことはES細胞と腫瘍細胞は遺伝子発現の面でも類似していることを示し、さらにはECAT遺伝子群の発現が腫瘍細胞の不死化や脱分化に関与している可能性を示唆する。本研究ではこの可能性を検討するために、ECAT遺伝子群の遺伝子ノックアウトによる機能解析、ECAT遺伝子産物の生化学的解析、およびECAT遺伝子産物のヒト腫瘍細胞における発現と役割の解析を行うことが目的であるが、本年度はECAT遺伝子群の遺伝子ノックアウトによる機能解析を中心に行った。その結果、ECAT8はTudorドメインを有する蛋白質をコードするが、精母細胞のNuageに局在しており、減数分裂の進行に必須であること、ECAT9はTGFβファミリーのGDF3をコードするが、初期胚の軸形成において重要な役割を果たすこと、さらにECAT20はZnフィンガー蛋白質をコードするが、多能性細胞の増殖に必須であるとともに神経管閉鎖や直腸肛門形成においても重要であることを明らかにした。研究の目的ES細胞と腫瘍細胞は、増殖や未分化維持の分子機構において共通点が存在することが予想される。ES細胞で特異的に発現する遺伝子群(ECAT : ES cell associated transcript)は正常成体組織では発現しないが、多くのヒト腫瘍細胞中での発現が示唆されている。本研究では、この可能性を検討するために次の研究を行う。本年度の研究成果ECAT1、ECAT15-1、ECAT15-2、ECAT16およびECAT17について、ノックアウトES細胞およびマウスの作製を行った。これまでにECAT15-1およびECAT15-2ノックアウトマウスはそれぞれ胎生致死であることが示唆されている。現在、ノックアウトES細胞の樹立を試みている。ECAT15-1およびECAT15-2はホモダイマーおよびヘテロダイマーを形成することが明らかとなった。またこれらの蛋白質は核に局在し、ユークロマチンに存在していることが示唆されている。Oct3/4、Sox2、c-Myc、Klf4の4因子をマウス線維芽細胞に強制発現させることによりES細胞に類似した多能性幹細胞(iPS細胞)が誘導されることを明らかにした。またSox2以外の3因子を導入すると形態や増殖能はES細胞に類似するが多能性はない細胞が樹立される。これらの結果はごく少数の遺伝子の活性化により体細胞が幹細胞の性質を獲得することを示唆しており、腫瘍幹細胞の一部は組織幹細胞ではなく、分化細胞に由来にする可能性が考えられる。研究結果1.ECAT遺伝子群の遺伝子ノックアウトによる機能解析ECAT

1、ECAT15-1、ECAT15-2、ECAT17、およびECAT20(Sall4)について、ノックアウトES細胞およびマウスの作製を行った。これまでにSall4KOマウスは、胎児期に致死となることが示唆されている。2.ECAT遺伝子産物の生化学的解析正常細胞とECAT遺伝子ノックアウト細胞との間でのDNAマイクロアレーによる遺伝子発現解析を進める。これまでにSall4の標的と考えられる遺伝子がいくつか同定されている。3.細胞初期化におけるECAT遺伝子および癌関連遺伝子の役割の解析昨年度の研究で、ECAT遺伝子(Oct3/4とSox2)および癌関連遺伝子(c-MycとKlf4)を組み合わせることにより線維芽細胞を初期化し多能性幹細胞を樹立できることを示した。今年度は、初期化過程におけるこれら4因子の役割を解析した。これまでにc-Mycはグローバルなヒストンアセチル化に関与することが示唆されている。
授業評価結果の有効活用につながるフィードバック方法に関する研究

本年度は初年度に得られた知見に基づいてさらに授業評価結果の効果的なフィードバック方法の要因を探ることを目的とした。高等教育機関のなかでも教育に重点をおいている高等専門学校を対象に質問紙調査を行ったが,特に(1)授業評価の意義や目的の理解度とその方法,(2)授業評価活用のための組織体の構造,(3)授業評価調査票,授業評価結果票,授業評価結果に対する教員からの提出書類など,現物書類の検討,を念頭においたデータ収集を行った。今回の調査は授業評価の実施担当者を対象とした質問紙調査であったが,先行研究の高専の授業評価に関する報告と重ねて検討したところ,(1)周知方法に関しては,教員については理解を得られていると考えている割合が高いが,相対的にみて学生に対しては周知方法が限られ,理解が得られていないと授業評価の執行部は考えている,(2)結果の返却日数についてはばらつきがみられ,また,内容については直接的な情報が重視されている,(3)38機関中33機関では,授業評価結果が「返却されて終了」ではなく,教員に何らかのアクションを求めている,ことなどが特徴として得られた。全体としては,多くの高専では授業評価がいわゆる「やりっぱなし」ではなく,改善のしくみとして組み込まれ,活用される枠組みを整えていることが明らかとなった。また,授業評価の実施体のチャートの分析からは,いくつかの類型化が試みられ特に校長の関与の有無が授業評価の活用を特徴づける要因の一つとなっていた。本研究では、授業評価の実施担当者を対象とした調査が中心となったが、実際に活用して改善に活かすその主役は高専の教員である.今後は高専教員本人にとっての有効性についても検討することが課題であろう.学生による授業評価はいまやほとんどの大学で実施されているが,その結果が十分に活用されているかどうかは定かではない.「自己点検の義務化」や「認証評価制度」などへの対応という側面が強く,その大きな負担に比して「授業評価実施後の結果の活用」は十分ではないのではないかという疑念が生じている.本年度は授業評価の結果の活用に関して,現状の把握を行うという目的のため質問紙調査およびインタビューを行った.質問紙調査は,2006年8月に行われた授業評価に関するシンポジウム(対象:高等教育機関の教職員)出席者に対して実施したものである.その結果から,授業評価実施は教育の改善に有効であるととらえられている(84%)が,現状には満足していない(61%)という結果が得られた.現状に満足できない主な理由としては,(1)学生から信頼のおけるデータが得られるかどうかが不安,(2)結果活用が教員個人の力量に依存,(3)教育改善に活用できるだけの情報が少ない,(4)結果返却その後の改善にまで踏み込んだシステムの未整備,などが挙げられた.また,大学へのインタビュー調査を行ったところ,「授業評価のその後」までフォローする人も資金も,方法に関する知識も不足し,その結果として「やりっぱなし」になっていることが事例として明らかとなった.海外の事例についても調査を行ったが,やはり「結果の活用」は内外を問わず多くの機関の抱える共通の課題であることが明らかとなった.本調査の結果から,(1)授業評価の意義が学生や教員にどのように周知されているのか,(2)授業評価後の活用の体制はどうなっているのか,という点について,授業評価調査票原票およびその評価結果に対する教員の提出書面等の調査を含めた調査を計画することを決定した.これは次年度に実施する予定である.本年度は初年度に得られた知見に基づいてさらに授業評価結果の効果的なフィードバック方法の要因を探ることを目的とした。本研究では、授業評価の実施担当者を対象とした調査が中心となったが、実際に活用して改善に活かすその主役は高専の教員である.今後は高専教員本人にとっての有効性についても検討することが課題であろう.
CD8陽性細胞による非細胞傷害的ウイルス排除機序の解析

ワクチンにより誘導される免疫は主に液性免疫(抗体)と細胞性免疫に大きく分類される。細胞性免疫は細胞傷害性T細胞(CTL)と呼ばれるCD8陽性T細胞(CD8+細胞)による感染細胞の殺傷であると考えられ、発症防止に大きな役割を果たしていることが知られている。一方、ウイルスを排除する非細胞傷害性CD8+細胞の存在を示唆する報告が様々なウイルス感染症において報告されている。しかしながら、この非細胞傷害性CD8+細胞のウイルス抗原排除の作用機序についてはほとんど分かっていない。本研究ではこの非細胞傷害性CD8+細胞の作用機序を解明することにより、より安全で効果的なワクチン開発の基盤を作ることを目的としている。代表者らの研究室では強い細胞性免疫誘導能に定評のあるワクシニアウイルスにC型肝炎ウイルス(HCV)の遺伝子を組み込んだ組み換えワクシニアウイルス(rVV)とHCV-トランスジェニックマウスを用いた動物感染実験を行ってきた。当初の研究計画では研究初年度はこのHCV-トランスジェニックマウス/rVVを用いた研究を計画していたが、研究計画の二年目以降に計画していたデングウイルス由来の遺伝子を有するrVVの作製を行った。これは現在の日本および世界での社会的状況を鑑みてのことである。二年目では初年度に作製したデングウイルス遺伝子を組み込んだrVVのマウスへの接種実験を行い、本研究の目的であるCD8+細胞のうちインターフェロンγを産生する細胞の誘導が行われることを示した。3年目は解析ツールとなるルシフェラーゼを組み込んだデングウイルスのクローンの作製に成功などした。一方、マウス接種実験を試みたが、2年目とのマウス接種実験と再現性が取れなかった。接種方法またはウイルスベクターの再検討をする必要がある。申請者らの研究室では強い細胞性免疫誘導能に定評のあるワクシニアウイルスにC型肝炎ウイルス(HCV)の遺伝子を組み込んだ組み換えワクシニアウイルス(rVV)とHCV-トランスジェニックマウスを用いた動物感染実験を行ってきた。当初の研究計画では研究初年度はこのHCV-トランスジェニックマウス/ rVVを用いた研究を計画していたが、研究計画の二年目以降に計画していたデングウイルス由来の遺伝子を有するrVVの作製を行った。また、デングウイルスはヒトには感染するものの、野生型のマウスではほとんど増殖しない。このため、デングウイルスがよく増殖し、且つワクチンによる免疫応答を十分に付与することを目的としたマクロファージ(単球を含む)特異的なI型インターフェロンノックアウトマウスの導入を行った。本研究ではワクチンにより誘導される免疫のうち細胞性免疫の特に非細胞傷害性CD8+細胞の作用機序を解明することにより、より安全で効果的なワクチン開発の基盤を作ることを目的としている。上述のように当初の研究計画では研究初年度はこのHCV-トランスジェニックマウス/ rVVを用いた研究を計画していたが、研究計画の二年目以降に計画していたデングウイルス由来の遺伝子を有するrVVの作製を行った。また、一方、I型及びII型インターフェロン受容体を欠損させたノックアウトマウスではデングウイルスはよく増殖し、人で見られるような症状を呈する。このことから、このノックアウトマウスがデングウイルスの動物モデルとしてよく用いられるが、II型インターフェロン応答がないために、免疫委誘導能が低く、ワクチンの評価系としては向かない。そこで、現在報告されているデングウイルスに感受性を持つマウスの中で、最も免疫応答性が高いトランスジェニックマウス(マクロファージ・単球特異的なI型インターフェロンノックアウトマウス)の導入を行った。このように当初の研究計画とは順序が異なるものの、二年目以降に懸隔していたデングウイルス遺伝子を有するrVVの作製およびその評価系となるトランスジェニックマウスの導入を行ったことから、本研究は概ね順調に進展していると考えている。

当初の研究計画では研究初年度はこのHCV-トランスジェニックマウス/rVVを用いた研究を計画していたが、研究計画の二年目以降に計画していたデングウイルス由来の遺伝子を有するrVVの作製を行った。これは現在の日本および世界での社会的状況を鑑みてのことである。二年目では初年度に作製したデングウイルス遺伝子を組み込んだrVVのマウスへの接種実験を行い、本研究の目的であるCD8+細胞のうちインターフェロンγを産生する細胞の誘導が行われることを示した。本研究ではワクチンにより誘導される免疫のうち細胞性免疫の特に非細胞傷害性CD8+細胞の作用機序を解明することにより、より安全で効果的なワクチン開発の基盤を作ることを目的としている。初年度に作製したデングウイルス由来の遺伝子を有するrVVの接種実験を行った。本研究の目的であるCD8+細胞のうちインターフェロンγを産生する細胞の確認をELISPOT法により行った。ワクチン接種したマウスのCD8+細胞にウイルスタンパク質により刺激することで、インターフェロン産生細胞の確認が出来た。作成したrVVによりインターフェロンγ産生細胞を誘導出来たことから、概ね順調に推移していると考える。ワクチンにより誘導される免疫は主に液性免疫(抗体)と細胞性免疫に大きく分類される。細胞性免疫は細胞傷害性T細胞(CTL)と呼ばれるCD8陽性T細胞(CD8+細胞)による感染細胞の殺傷であると考えられ、発症防止に大きな役割を果たしていることが知られている。一方、ウイルスを排除する非細胞傷害性CD8+細胞の存在を示唆する報告が様々なウイルス感染症において報告されている。しかしながら、この非細胞傷害性CD8+細胞のウイルス抗原排除の作用機序についてはほとんど分かっていない。本研究ではこの非細胞傷害性CD8+細胞の作用機序を解明することにより、より安全で効果的なワクチン開発の基盤を作ることを目的としている。代表者らの研究室では強い細胞性免疫誘導能に定評のあるワクシニアウイルスにC型肝炎ウイルス(HCV)の遺伝子を組み込んだ組み換えワクシニアウイルス(rVV)とHCV-トランスジェニックマウスを用いた動物感染実験を行ってきた。3年目は解析ツールとなるルシフェラーゼを組み込んだデングウイルスのクローンの作製に成功などした。一方、マウス接種実験を試みたが、2年目とのマウス接種実験と再現性が取れなかった。接種方法またはウイルスベクターの再検討をする必要がある。
東アジアにおける魚類の環境ホルモン国際共同調査と研究者ネットワークの構築

本研究では、日中韓各国においてボラ、マハゼ、トビハゼを調査対象生物とした環境ホルモン汚染の実態調査を実施した。血中ビテロジェニン濃度、生殖腺の組織学的観察、および環境中の化学物質分析を行った結果、日本、韓国および中国の東シナ海沿岸域の大都市部周辺海域や工業・港湾地域において環境ホルモンによる汚染が確認され、魚類の繁殖現象に異常が起きていることが解った。また、本研究の目的のひとつである環境ホルモンおよび魚類繁殖研究に関する研究者ネットワークの構築も着実に進み、日中韓の大学、特に韓国済州大学と中国上海水産大学との間で、大学院生を主体としたセミナーや共同研究が継続的に行われる事となった。環境ホルモンよる海洋汚染は現在も続いており、特に工業化が盛んに進められている東アジア地域におけるそれは甚だしい。そこで、東アジア各国の研究者と共同で、環境ホルモン汚染実態解明に向けた共同調査を計画した。本研究は以下の特徴を持つ。1)韓国・中国・台湾・ベトナムの研究者とともに、これらの国において同一魚種、同一手法、同一評価基準による調査および分析を行い、汚染の実態を明らかにする。2)特に雌性ホルモン作用を持つ化学物質による汚染の状況と、これらの物質が魚類の生殖腺発達に及ぼす影響について解明する。3)これらの地域の研究者とともに国際会議を開催し、研究成果の公表を行うとともに、共同研究の推進および研究者交流を目的とした研究者ネットワークを構築する。4)このネットワークを母体とした次世代若手研究者の養成を目指す。平成18年度は、以下の点について研究を実施した。1)韓国沿岸における環境ホルモン汚染の実態調査:韓国各地でボラ採集し、生殖腺の組織学的観察を行うともに、血中ビテロジェニン濃度の測定を行った。その結果、韓国沿岸の4都市均衡で捕獲したボラから、高濃度のビテロジェニンが検出されるとともに、精巣内を持つ個体が見つかった。これにより韓国沿岸域でも、我が国と同様に雌性ホルモン作用をもつ環境ホルモン汚染が起きている事がわかった。2)韓国の研究者とのシンポジウムの開催:共同で進めている環境ホルモン汚染の実態調査の研究結果の公表および若手研究者の交流を目的としたシンポジウムを11月に済州大学で開催した。3)中国研究者との共同研究の立ち上げ:上海水産大学のZhong教授と中国沿岸域における環境ホルモン汚染の実態調査を共同で行う事を約束し、調査地域の下見などを行った。これにより平成19年度における中国沿岸域の調査の準備は整った。近年、工業化が盛んに進められている東アジア地域における環境ホルモン汚染が問題とされている。そこで、東アジア各国の研究者と共同で、環境ホルモン汚染実態解明に向けた共同調査を実施した。平成19年度は、以下の点について研究を実施した。その結果、韓国の複数の都市部沿岸域から捕獲したボラにおいて、高濃度のビテロジェニンが検出されるとともに、精巣内を持つ個体が見つかった。2)韓国の研究者とのシンポジウムの開催:共同で進めている環境ホルモン汚染の実態調査の研究結果の公表および若手研究者の交流を目的としたシンポジウムを11月に長崎大学で開催した。これには中国の初めて研究者も参加した。3)中国研究者との共同調査の実施:上海水産大学のZhong教授と上海近郊において環境ホルモン汚染の実態調査を実施した。現在、血中のビテロジェニン濃度および生殖腺の組織観察を行っている。本研究は、韓国・中国の研究者とともに東アジア各国の沿岸域において環境ホルモン汚染の実態調査を行い、これら地域域における環境ホルモン汚染の有無を明らかにすることを目的とする。また、雌性ホルモン作用を持つ化学物質による汚染の状況と、これらの物質が魚類の生殖腺発達に及ぼす影響についても解明する。さらに、これらの地域の研究者とともに国際会議を開催し、研究成果の公表を行うとともに、共同研究の推進および研究者交流を目的とした研究者ネットワークを構築するとともに、次世代を担う若手研究者の養成を目指す。我々は、平成20年度に中国を中心とした同一魚種、同一手法、同一評価基準による調査および分析を行い、汚染の実態の解明を進めた結果、以下の成果を得た。

1)中国沿岸における環境ホルモン汚染の実態調査:中国上海周辺でボラ採集し、生殖腺の組織学的観察を行うともに、血中ビテロジェニン濃度の測定を行った。その結果、この地域から捕獲したボラにおいて、高濃度のビテロジェニンが検出された。これにより韓国沿岸域でも、我が国と同様に雌性ホルモン作用をもつ環境ホルモン汚染が起きている事がわかった。2)日本国内の調査地点(長崎港、博多港、大牟田川河口)では、ビテロジェニンの異常値を示す個体が検出されなかった。昨年までは異常個体が確認されていたことから、環境が改善されている可能性がある。しかし、今後の経過観察が必要である。2)日中韓の研究者とのシンポジウムの開催:共同で進めている環境ホルモン汚染の実態調査の研究結果の公表および若手研究者の交流を目的としたシンポジウムを9月に韓国済州大学校で開催した。参加大学は、我々長崎大学の他、琉球大学、北海道大学、韓国済州大学、釜慶大学、江陵大学、上海海洋大学など。多くの大学院生間の交流が進み、これをきっかけとして上海海洋大学の学生が、平成21年度に日本に留学することが決まった。
第2の麻疹ウィルスレセプター -蛋白化学的同定とcDNAクローニング-

1.B95aマーモセットBcell上のヒトCD46 homologueの同定マーモセットB95a細胞株から2種のCD46様分子をcDNAクローニングした。1つは4つのshort consensus repeat(SCR)、1つは3つのSCRを含む細胞外ドメインを持つ。N末1個のSCR(SCR1)の有無からmRNAのalternative splicingにより2種のspliced formが生じることが判明した。SCR1^+isoformが90%、SCR1^-isoformが10%の比で膜上に存在し、SCR1^+isoformのみが麻疹ウィルスワクチン株CAMのレセプターとして機能した。他のウィルス株はwild-typeを含めてマーモセットCD46をレセプターとして使用しなかった。B95aの麻疹ウィルス高感受性はCD46以外のレセプター分子に起因する。B95aをマウス(Bal b/c)にくり返し腹腔(i.p)又は皮内(s.c)投与し、脾細胞からhybridomaを樹立した。Nagahata株、最近のwild-type strain(Yokoyama株)の合胞体形成阻害活性をクライテリアにセカンドレセプターの阻害抗体をスクリーニングした。6回Fusionを試行し、計3,500個以上のhybridomaをスクリーニングしたが完全阻害抗体は得られなかった。部分阻害抗体は4株得られ、うち2種は分子量約2万の同一分子を認識した。他の2種はwestern blotで分子同定ができなかった。当該分子の同定を推進中である。