hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ミュータントマウスを用いた小脳による運動制御・学習機構の解析

グルタミン酸受容体デルタ2サブユニット欠損マウス(d2-/-)を用いて神経細胞でのシナプス形成異常が神経活動及び行動に与える影響を検討した。d2-/-ではシナプス形成の異常により小脳唯一の出力細胞であるプルキンエ細胞へ投射する登上線維が増加していることが知られている。一方で、我々はこれまでにd2-/-で反射性眼球運動の1つである視運動性眼球運動(OKR)のタイミング遅れが大きいことを報告している。そこで本研究では、登上線維入力の増加とOKRのタイミング遅れの関係を調べる目的でOKR中のプルキンエ細胞活動の記録・解析を行った。OKR中のプルキンエ細胞において視覚刺激に対する登上線維活動のタイミングは野生型マウス(WT)及びd2-/-間で同様であった。しかしながら、WTでは登上線維入力は低頻度でありプルキンエ細胞全体の活動への影響はほとんど無かったのに対して、d2-/-では登上線維入力がWTと比べ高頻度であり、細胞全体の活動に影響を与えるほどであった。そのためd2-/-では登上線維活動によりプルキンエ細胞全体の活動が乱され、視覚刺激に対する応答にタイミング遅れが生じていた。そして、このタイミング遅れはOKRのタイミング遅れに対応するものであった。以上の結果はd2-/-ではプルキンエ細胞への登上線維入力の増加がOKRのタイミング遅れに関与しており、登上線維入力が低頻度で制御されていることが小脳による眼球運動制御に重要であることを示唆している。また、小脳の電気刺激実験からd2-/-では小脳下流の神経経路の特性が変化しており、小脳皮質からの異常出力がその下流経路の特性に影響を与え得ることを示唆する実験結果を得た。以上の研究報告はEur.J.Neurosci誌に採択された。本研究では、ミュータントマウスを用いて神経細胞への入力バランスの異常が神経活動及び行動に与える影響を検討した。グルタミン酸受容体デルタ2サブユニット(GluRδ2)は運動制御に重要な脳部位である小脳のプルキンエ細胞に特異的に発現しており、シナプス形成・可塑性に関与している。プルキンエ細胞は平行線維と登上線維という2種類の興奮性の入力を受けているが、GluRδ2欠損マウス(δ2-/-)ではシナプス形成の異常により登上線維からの入力が相対的に増強していることが知られている。また、我々はこれまでにδ2-/-が反射性眼球運動の1つである視運動性眼球運動(OKR)のタイミング遅れが大きいことを報告している。本研究では、登上線維入力の増強とOKRのタイミング遅れの関係を調べる目的でδ2-/-においてOKR中のプルキンエ細胞活動の記録・解析を行った。プルキンエ細胞では平行線維入力によりその発火頻度が増減する単純スパイクと登上線維入力に由来する複雑スパイクの2種類のスパイク波形を示すこと知られている。野生型マウス(WT)のプルキンエ細胞では単純スパイクの発火頻度が複雑スパイクの発火頻度に比べ非常に大きく、プルキンエ細胞全体の活動は主に単純スパイクにより担われていた。それに対して、δ2-/-のプルキンエ細胞では単純スパイクはWTと同様の発火頻度変化を示したが、複雑スパイクの発火頻度が大きいために両者を足し合わせたプルキンエ細胞全体の発火頻度変化はWTと比べOKR誘導刺激に対するタイミング遅れが大きかった。以上の結果はδ2-/-ではプルキンエ細胞への登上線維入力の増加がOKRのタイミング遅れを引き起こしており、プルキンエ細胞への入力バランスが小脳による眼球運動制御に重要であることを示唆している。
昆虫の脳・中腸・生殖腺におけるインドールアミンNアセチル転移酵素の構造と機能

次の器官でNAT及びインドールアミン代謝系が次の様な生理機能に関わっていることが明らかになった。1)ゴキブリ脳においてはNAT活性が周期的に変化したが、昼と夜に2つの活性ピークを示し、このリズムは自由継続した。従って、生物時計の制御機構に関わっている可能性が強い。サクサンではメラトニンが夜間に高い一山のピークを示した。NATの活性も長日による休眠覚醒と低温処理に対応して増加した。この時機に、脳内のセロトニンと血中エクダイソンの上昇が見られた。したがって、時計-NAT-セロトニン/メラトニン-PTTHという光周性の枢軸にこの代謝系が深く関わっている可能性が示唆された。サクサンNATをクローニングした。リアルタイムPCRでNATの転写活性に夜にピークを持つ活性の変動を確認した。イエコオロギにメラトニンを飲水に入れて飲ませると明期の活動の減少と自由継続リズムが顕著に同期化した。2)中腸で飢餓と摂食でセロトニンがそれぞれ減少、増加し、NAT活性と平行にN-アセチルセロトニンが増加、減少する。飢餓に晒したコキブリを再摂食させるとセロトニンがスパイク的に増加する。飢餓に晒したゴキブリに摂食したゴキブリの体液を注射すると中腸細胞にプロモデオキシウリヂンの取り込みが促進され、同じ結果がセロトニンを注射したときにも見られる。従ってセロトニンは細胞増殖を引き起こす系の少なくとも上流に関わっており、この調節を制御するのがNATと考えられる。鱗翅目幼虫の中腸幹細胞の初代培養件でセロトニンが細胞増殖活性を示した。したがって、セロトニンが細胞増殖因子そのものである可能性もある。同じ系でN-アセチルセロトニンは細胞増殖を抑制した。3)ワモンゴキブリ雌生殖腺付属腺のNAT活性を羽化後に追跡した。トリプタミンとセロトニンにたいしてNAT活性の変化は異なり、トリプタミンの存在が示唆され、これが確認された。トリプタミン及びN-アセチルトリプタミンの注射は卵細胞に卵黄蛋白質の取り込みを促進した。従って、インドールアミン代謝系は生殖調節にも関与することが明らになった。クサギカメムシの幼虫発育と生殖制御に関して、NAT活性が環境条件に対応して動くこと、幼虫発育と脂質の蓄積についてメラトニンが雄の光周性に関わる可能性が示された。4)ゴキブリ中腸と雄雌の生殖腺からNATを完全精製した。等電点を異にする2つのタイプの酵素が精製されたが、両者ともMr=28kDaであった。それぞれの器官は両方のタイプを含み器官ごとに最適pHと活性レベルの特異性を示した。また精製された2つのタイプの基質親和性を比較すると両者はかなり異った。それぞれの器官に由来する酵素について基質結合様式や基質親和性、金属イオンの活性に及ぼす効果、高温における安定性,クロマトグラフィにおける挙動などからも3つ以上の酵素が示唆された。酸性で強い活性を示すNATの一部アミノ酸配列を決めた。中腸からアルカリ側に強い活性を持つアイソフォームの精製を行い同じサイズの精製バンドを得た。前者は発表されたショウジョウバエNATの配列と相同のフラグメントを1つ持っていた。2つのペプチドフラグメントをクローニングしたNAT遺伝子から推察されたアミノ酸配列に一致した。ノーザン分析でも蛋白質として精製されたものに対応するサイズのバンドが得られた。中腸、雌生殖腺で昼と夜でmRNAの変動が示された。

トリプタミン及びN-アセチルトリプタミンの注射は卵細胞に卵黄蛋白質の取り込みを促進した。従って、インドールアミン代謝系は生殖調節にも関与することが明らになった。クサギカメムシの幼虫発育と生殖制御に関して、NAT活性が環境条件に対応して動くこと、幼虫発育と脂質の蓄積についてメラトニンが雄の光周性に関わる可能性が示された。4)ゴキブリ中腸と雄雌の生殖腺からNATを完全精製した。等電点を異にする2つのタイプの酵素が精製されたが、両者ともMr=28kDaであった。それぞれの器官は両方のタイプを含み器官ごとに最適pHと活性レベルの特異性を示した。また精製された2つのタイプの基質親和性を比較すると両者はかなり異った。それぞれの器官に由来する酵素について基質結合様式や基質親和性、金属イオンの活性に及ぼす効果、高温における安定性,クロマトグラフィにおける挙動などからも3つ以上の酵素が示唆された。酸性で強い活性を示すNATの一部アミノ酸配列を決めた。中腸からアルカリ側に強い活性を持つアイソフォームの精製を行い同じサイズの精製バンドを得た。前者は発表されたショウジョウバエNATの配列と相同のフラグメントを1つ持っていた。2つのペプチドフラグメントをクローニングしたNAT遺伝子から推察されたアミノ酸配列に一致した。ノーザン分析でも蛋白質として精製されたものに対応するサイズのバンドが得られた。中腸、雌生殖腺で昼と夜でmRNAの変動が示された。(1)ショウジョウバエNATをPCRを用いてcDNAライブラリーより増幅しGSTとの融合蛋白質として大腸菌で発現させて抗体を作った。同様にして、ショウジョウバエChryptochrome(Cry)の抗体を作出した。カイコESTデータベースからdouble time(dbt)のhomologueを見つけこれを全長シークエンスしGST融合蛋白質として発現し、抗体を作った。ゴキブリperのcDNAを譲渡してもらい、これをGST融合蛋白質として発現して抗体を作った。これらの抗体でゴキブリとサクサン脳で免疫組織化学的探索を行った。PERとDBTは両方の種で共存した。サクサンではNATも同じ細胞に存在することが判った。ゴキブリでもPER,DBTは常に共存した。NATはこれらの細胞に一部共存したが、PERとDBTだけでNATの共存しない細胞体群が視葉に見られた。一方、NATとメラトニンの概日振動が観測され、時計の出力系としてのNATの生物時計への関与がいっそう強く明らかにされた。カイコのCycle(Cyc)遺伝子を部分的にクローニングした。サクサンでは休眠の覚醒に従って、NATの活性が減少することが判った。NATの光周性や休眠への関与が示されたわけである。(2)生殖調節の方ではワモンゴキブリのVbitellogenin 1(Vg1)のクローニングを完結し、現在Vg2のクローニングを行っている。NATによるVg発現機構の調節の解析に向かう。
急性膵炎の膵実質壊死に対するアルブミンの阻止効果-実験的研究並びに臨床応用-

リパーゼおよびホスホリパーゼA2は,中性脂肪,レシチンの分解産物である遊離脂肪酸,リゾレシチンによって,膵細胞障害を引き起こす.両者を抑制するアルブミンの膵炎治療効果について,ラット実験モデルを用いて検討した.in vitroの実験で,還流膵の主膵管にタウロコール酸(1% wt/vol)を注入し,膵を持続的に還流した.門脈からの還流液内膵酵素濃度(アミラーゼ,リパーゼ)を膵障害の指標とした.その結果,アルブミンで膵を還流した場合には膵酵素濃度は有意に抑制された.また,in vivoの実験で,タウロコール酸の膵管内注入と同時にアルブミンを膵間質内に注入,6時間後に屠殺して,腹腔内の脂肪壊死の拡がりおよび膵実質壊死の程度を,肉眼的あるいは組織学的に観察したところ,アルブミンは強力に脂肪壊死の拡がりおよび実質壊死を抑制した.また,trypsinに対して阻害作用を有するurinarytrypsin inhibitor(UTI)の膵障害抑制作用について,ラットの還流膵モデルを用いて検討した.タウロコール酸(1% wt/vol)を主膵管から注入,門脈回収液中の膵酵素の濃度および還流後の膵を組織学的に画像解析装置を用いて検索した.その結果,UTIは回収液中の膵酵素濃度を低下せしめることはなかったが,組織学的に膵の実質壊死および間質の浮腫を,コントロール群に比較して有意に減少した.以上の結果は,膵還流実験における門脈回収液中の膵酵素濃度が膵の組織学的変化を必ずしも反映していないことを示している.還流膵を用いた実験を評価する際には,in vivoの実験と組み合わせたり,あるいは還流後の膵組織を組織学的に検索することが重要であろう.また,UTIがタウロコール酸による組織学的膵障害の程度を減ずることを示している.リパーゼおよびホスホリパーゼA2は,中性脂肪,レシチンの分解産物である遊離脂肪酸,リゾレシチンによって,膵細胞障害を引き起こす.両者を抑制するアルブミンの膵炎治療効果について,ラット実験モデルを用いて検討した.in vitroの実験で,還流膵の主膵管にタウロコール酸(1% wt/vol)を注入し,膵を持続的に還流した.門脈からの還流液内膵酵素濃度(アミラーゼ,リパーゼ)を膵障害の指標とした.その結果,アルブミンで膵を還流した場合には膵酵素濃度は有意に抑制された.また,in vivoの実験で,タウロコール酸の膵管内注入と同時にアルブミンを膵間質内に注入,6時間後に屠殺して,腹腔内の脂肪壊死の拡がりおよび膵実質壊死の程度を,肉眼的あるいは組織学的に観察したところ,アルブミンは強力に脂肪壊死の拡がりおよび実質壊死を抑制した.また,trypsinに対して阻害作用を有するurinarytrypsin inhibitor(UTI)の膵障害抑制作用について,ラットの還流膵モデルを用いて検討した.タウロコール酸(1% wt/vol)を主膵管から注入,門脈回収液中の膵酵素の濃度および還流後の膵を組織学的に画像解析装置を用いて検索した.その結果,UTIは回収液中の膵酵素濃度を低下せしめることはなかったが,組織学的に膵の実質壊死および間質の浮腫を,コントロール群に比較して有意に減少した.以上の結果は,膵還流実験における門脈回収液中の膵酵素濃度が膵の組織学的変化を必ずしも反映していないことを示している.還流膵を用いた実験を評価する際には,in vivoの実験と組み合わせたり,あるいは還流後の膵組織を組織学的に検索することが重要であろう.また,UTIがタウロコール酸による組織学的膵障害の程度を減ずることを示している.我々は,重症急性膵炎の有効な治療をめざし,種々の薬剤を用いた実験的検討を行ってきた.本研究では,膵実質障害を引き起こす遊離脂肪酸やリゾレシチンの有力な阻害物質であるアルブミンの効果をみる実験を,closed duodenal loop(CDL)(+caerulein)を用いたラットのin vivo膵炎モデルにより施行している.すなわち,2cmのCDL作成時にloop内に生食(コントロール),アルブミン(5,10,20% wt/vol)を1ml/kg投与し,24時間後に屠殺した.1.血清のアミラーゼ値に各群間の有意差はみられなかった.2.腹腔内における脂肪壊死の肉眼的な広がりをscore化して比較したところ,20%アルブミン投与群では後腹膜および大網の脂肪織壊死が,10%アルブミン投与群では腸間膜の脂肪織壊死が,また5%アルブミン投与群では大網および精巣上体の脂肪織壊死が,コントロール群に比べ軽度になる傾向が認められた.3.実質壊死については画像解析装置を用い,組織切片を検討中である.また,ラット膵還流実験では,大動脈から還流液(HEPES-Ringer,1.3ml/min)で膵を持続的に還流し,3分おきの門脈回収液中の膵酵素濃度を膵障害指標とした.主膵管からタウロコール酸(1% wt/vol)注入したところ,デキストラン70(コントロール)によって還流したコントロール群とこれにurinary trypsin inhibitor(UTI)を加えて還流した群では,1.門脈液中の膵酵素濃度に差はみられなかった,2.しかし,画像解析装置による組織学的壊死の広がりは,コントロール群に比較してUTI群で有意に減少した.

今後,慢性膵炎の急性増悪モデルと考えられるWEB/KOBラット(慢性膵炎ラット)を用い,さらに検討していく予定である.我々は,重症急性膵炎の有効な治療をめざし,種々の薬剤を用いた実験的検討を行ってきた.本年度はtrypsinに対して阻害作用を有するurinary trypsin inhibitor(UTI)の膵障害抑制作用について検討した.ラットの還流膵モデルを作製し,膵をdextran70 ±UTIで還流した.タウロコール酸(1% wt/vol)を主膵管から注入,門脈回収液中の膵酵素の濃度を膵障害の指標とした.さらに還流後の膵を組織学的に画像解析装置を用いて検索した.その結果,UTIは回収液中の膵酵素濃度を低下せしめることはなかったが,組織学的に膵の実質壊死および間質の浮腫を,コントロール群に比較して有意に減少した.以上の結果は,本実験における門脈回収液中の膵酵素濃度が膵の組織学的変化を必ずしも反映していないことを示している.急性膵炎における血中アミラーゼの増加は必ずしも膵炎の重症化の程度に反映されないことはよく知られている.還流膵を用いた実験を評価する際には,他の実験と組み合わせたり,あるいは還流後の膵組織を組織学的に検索することが重要であろう.また,今回の結果は,UTIがタウロコール酸による組織学的膵障害の程度を減ずることを示していると考えられた.
自律的温度制御用無機膜の開発

ゼオライト膜の粒界制御のためのCVD処理条件を確立する。昨年度示唆された、大きなシリカプリカーサー(デシルトリメトキシシランなど)の蒸着条件を中心に検討した。この時、ゼオライトではなくアルミナ支持体などへの蒸着により、反応性などを調べた。アルミナ支持体への蒸着より、デシルトリメトキシシランなどアルキル基をもつシリカ源は、アルキル鎖の長さが長くなることで反応性が向上することがわかった。さらに、窒素やSF_6などガス透過試験に加え、エタノール水溶液のパーベーパーレーション試験も行った。結晶間隙と結晶中のエタノール透過のパラメータフィッテングを行った。デシルトリメトキシシランをシリカ源としたCVD処理では、粒界透過のパラメータが小さくなり、ヘキシルトリメトキシシランでは全体の透過抵抗が大きくなった。ヘキシルトリメトキシシランでは、反応性が悪いためか、膜表面などに抵抗層が形成されている可能性が示唆された。以上より、長いアルキル基をもつデシルトリメトキシシランをシリカ源に用いることが良いことがわかった。また、本研究ではメタノールのオートサーマル改質反応であり、水蒸気の透過により目的の温度で制御することを目指している。シミュレーション結果より、酸化反応と水蒸気改質反応のバランスを取るには、酸化反応の制御および水蒸気改質反応の促進が重要であることが示された。特に、水蒸気改質反応の触媒量が計算結果に大きな影響を及ぼすことがわかった。本年度は、温度振動型新規ゼオライト膜合成手法の開発を行った。ゼオライト種はZSM-5とし、水熱合成法によりα-アルミナ基材の細孔内にゼオライト結晶を生成させる合成条件で製膜を行った。原料ゲル比は2SiO_2-0.9TPAOH-55.6H_2Oとし、72時間攪拌し反応溶液として用いた。α-アルミナ基材は細孔径100nmのNOK製多孔質アルミナキャピラリーを用いた。合成は413K463Kで3090時間、無攪拌で行なった。温度振動パラメータは、振動開始時間(X=040)、振動保持時間(Y=2.5,5)、低温保持時間(Z=1030)、高温振動温度(T1=170190)、低温振動温度(T2=150170)、温度振動回数(N=1,2,3)とした。膜性能の評価はN_2およびSF_6の室温での単成分透過試験により行なった。温度振動によってN_2・SF_6両者の透過係数が上昇し、選択性には大きな変化は見られなかったことより、温度振動により選択性を保ったまま透過係数が向上できることがわかった。高温振動温度(T1)は高く、低温振動温度(T2)は低く、両者の温度差が大きい条件で高い透過性能をもった膜が得られた。一方、高温時の保持時間(Y)の影響は小さく、低温での保持時間(Z)は20時間が最適であることがわかった。また、振動開始時間(X)の影響は明確ではなかった。温度振動回数は大きくなると透過係数が小さくなった。この結果を説明する温度振動での製膜モデルを提案した。今回の検討範囲では振動回数(N=1)、振動温度(T1=190)とすることで最も透過係数の高い膜が合成できた。また、CVD処理によるゼオライト膜の改良については、CVD用の原料プリカーサーを検討し、20nm程度のシリカ薄膜を均質に蒸着する条件を見出した。本年度の最大の目標は、CVD法によるアモルファスシリカの蒸着によるゼオライト膜の粒界の制御である。処理後のシリカの安定性を考慮して500°C以上の高温での蒸着を検討している。CVD法として、2種の原料を用いる対向拡散法を適用した。まず、水素透過シリカ膜として実績のある酸素とテトラケイ酸オルトメチル(TMOS)を用いたCVD法(550°C)により、ゼオライト膜の処理を行った。MFIゼオライト膜は、α-アルミナキャピラリ(NOK製、細孔径100nm、φ2.9mm、長さ58mm)基材上へ水熱合成法(Si:TPAH=2:0.9)で、170°Cにて90時間製膜した。TMOS処理(20分)では、SF_6透過率が1.3×10^<-8>mol m^<-2> s^<-1>Pa^<-1>から3.0×10<-9>mol m^<-2> s^<-1> Pa^<-1>と減少したが、N_2/SF_6透過率比も2.8から1.8と減少しており、シリカが粒界内で蒸着したのではなく、MFIゼオライト細孔内で蒸着したと推測される。550°Cという高温での処理のため、TMOSもMFI細孔内へ拡散できたと思われる。そこで、次に、ヘキシルトリメトキシシラン(HTMOS)、デシルトリメトキシシラン(DTMOS)など大きなシリカ源を用いた。HTMOS処理を220分間行ったが、N_2/SF_6透過率比は2.0から2.7とあまり変化せず、H_2透過率も3.2×10^<-7>mol m^<-2> s^<-1>Pa^<-1>から5.8×10^<-8>mol m^<-2> s

^<-1>Pa^<-1>と若干の減少であった。一方、100分のDTMOS処理では、SF6透過係数が5.3×10^<-8>mol m^<-2> s^<-1> Pa^<-1>から3.7×10^<-9>mol m^<-2> s^<-1> Pa^<-1>と一桁以上減少し、N_2/SF_6透過率比も3.4から13.1と向上した。選択性が高くなっていることより、粒界が選択的に閉塞できたといえる。ゼオライト膜の粒界制御のためのCVD処理条件を確立する。昨年度示唆された、大きなシリカプリカーサー(デシルトリメトキシシランなど)の蒸着条件を中心に検討した。この時、ゼオライトではなくアルミナ支持体などへの蒸着により、反応性などを調べた。アルミナ支持体への蒸着より、デシルトリメトキシシランなどアルキル基をもつシリカ源は、アルキル鎖の長さが長くなることで反応性が向上することがわかった。さらに、窒素やSF_6などガス透過試験に加え、エタノール水溶液のパーベーパーレーション試験も行った。結晶間隙と結晶中のエタノール透過のパラメータフィッテングを行った。デシルトリメトキシシランをシリカ源としたCVD処理では、粒界透過のパラメータが小さくなり、ヘキシルトリメトキシシランでは全体の透過抵抗が大きくなった。ヘキシルトリメトキシシランでは、反応性が悪いためか、膜表面などに抵抗層が形成されている可能性が示唆された。以上より、長いアルキル基をもつデシルトリメトキシシランをシリカ源に用いることが良いことがわかった。また、本研究ではメタノールのオートサーマル改質反応であり、水蒸気の透過により目的の温度で制御することを目指している。シミュレーション結果より、酸化反応と水蒸気改質反応のバランスを取るには、酸化反応の制御および水蒸気改質反応の促進が重要であることが示された。特に、水蒸気改質反応の触媒量が計算結果に大きな影響を及ぼすことがわかった。
母乳脂質濃度調節における核内受容体群クロストーク機構の解明

母乳は子供の急速な成長と発達にとって重要であり、十分なエネルギーと必須栄養素を供給する。母乳は、リゾチーム、ラクトフェリン、分泌型IgAなどを含有し、消化管免疫に重要な役割を果たしている。母乳中のミネラル、タンパク質、脂質などの構成成分は時期により変化するが、その機構は不明である。本研究では、脂質代謝に関与する核内受容体群が母乳中の脂質を調節するか否かを検討した。その結果、転写因子である核内受容体が、母乳中脂質成分の構成に関与している可能性が示唆された。母乳は子供の急激な成長と発達にとって重要であり、十分なエネルギーと必須栄養素を供給する。感染予防物質・細胞・ホルモン・酵素・成長因子・結合タンパク質など多くの物質を含んでいる。授乳期の経過とともに、母乳中のタンパク質、ミネラル成分は顕著に減少し、逆に乳糖および脂肪成分は上昇する。このような変化に対する明確な理由は、未だ見いだされていない。ビタミン群も授乳を通じて、乳児に供給される。授乳の経過とともに、母乳中の脂溶性ビタミンE濃度は、低下する。また、母乳中の脂質濃度は、最初の30日間において、増加するが、これらの脂質濃度調節機構は不明である。最近、分子生物学的手法を用いて、授乳期における脂質代謝に関する報告が散見される。例えば、授乳期の経過とともに、乳腺リポプロテインリパーゼ活性の上昇、脂肪酸合成酵素の遺伝子発現上昇が報告されている。本研究では、脂質代謝に関係する核内受容体(PPARα・γ・δあるいはLXR)が、授乳期の乳腺組織において、どのように機能し、母乳中の脂質濃度調節に関与しているかを検討する。さらに核内受容体間のクロストーク機構を検討する。現在の研究内容は、次のとおりである。Wistar雌ラット(17週齢、出産後17日)に対して、核内受容体に核内受容体PPARαリガンド(Wy4643)、PPARδリガンド(GW0472)、PPARγリガンド(pioglitazone)の単回経口投与をそれぞれ行った。そこで、24時間後に検体を採取し、母乳中脂質濃度を測定する。それぞれの標的遺伝子群の発現を検討する。母乳は乳児に十分なエネルギーと必須栄養素を供給し、健やかな成長と発達に大変重要である。感染予防物質・細胞成分・ホルモン・酵素・成長因子・結合タンパク質など多くの物質を含み、乳児の発育に必要充分な栄養源である。母乳成分は、授乳期の経過とともに変化する。すなわち、母乳中のタンパク質、ミネラル成分は顕著に減少し、逆に乳糖および脂肪成分は上昇する。これら母乳成分の時間的変化に関するメカニズムは未だ不明である。授乳の経過とともに、母乳中の脂溶性ビタミン濃度は低下する。また、母乳中の脂質濃度は、最初の30日間において増加するが、これらの脂質濃度調節機構は不明である。最近、分授乳期における脂質代謝に関連する遺伝子発現に関する報告が散見される。Wistar雌ラット(17週齢、出産後17日)に核内受容体PPARαリガンド(Wy4643)、PPARδリガンド(GW0472)、PPARγリガンド(pioglitazone)の単回経口投与をそれぞれ行った。24時間後に検体を採取し、母乳中脂質濃度を測定した。

その結果、それぞれのリガンド投与により、わずかながら脂質の変動が見られたが、有意な差は認められなかった。以上から、脂質代謝に関連する転写因子PPAR群は、母乳中脂質濃度にある程度影響を与える可能性が示唆された。小児科該当年度においては、主に動物実験を主体として行っている。予備実験として、Wistar雌ラット(17週齢、出産後17日)に核内受容体PPARαリガンド(Wy4643)、PPARδリガンド(GW0472)、PPARγリガンド(pioglitazone)の単回経口投与をそれぞれ行った。24時間後に検体を採取し、母乳中脂質濃度を測定した。さらに乳腺細胞における各核内受容体の標的遺伝子群の発現をreal-time PCRで検討する準備を行った。該当年度においては、主に動物実験を主体として行っている。予備実験として、Wistar雌ラット(17週齢、出産後17日)に核内受容体LXR(liver X receptor)リガンドであるT0901317の単回経口投与を行った。また、同様のラットに対して、PPARαリガンド(Wy4643)、PPARδリガンド(GW0472)、PPARγリガンド(pioglitazone)を投与し、乳腺細胞における各核内受容体の標的遺伝子群の発現をreal-time PCRで検討する準備を行った。さらにそれぞれの母乳中の脂質濃度を検討する。1)乳腺細胞の遺伝子発現および母乳中の脂質分析哺乳ラットに各核内受容体リガンドを投与し、乳腺細胞中の脂質代謝に関連する核内受容体の遺伝子発現を検討する。また、母乳中の脂質およびリポタンパク質の分析を行う。2)核内受容体遺伝子欠損マウス(LXRα遺伝子欠損マウスおよびPPARα遺伝子欠損マウス)の母乳分析遺伝子欠損マウスの飼育の準備を行う予定である。実験試薬の購入について、以前の試薬を使用したため、次年度使用額が生じた。合計100万円の内訳は、分子生物実験試薬代60万円、ラット・マウス・飼料代20万円、免疫染色・抗体代10万円、プラスチック製品代10万円の予定である。なお、次年度使用額(36,874円)は、分子生物実験試薬代に充当する予定である。合計100万円の内訳は、分子生物実験試薬代60万円、ラット・飼料代20万円、免疫染色・抗体代10万円、プラスチック製品代10万円の予定である。なお、次年度使用額(36,771円)は、分子生物実験試薬代に充当する予定である。
キリシタン版『羅葡日辞書』日本語訳の位相

キリシタン版『羅葡日辞書』(1595刊)の日本語訳は、『日葡辞書』(1603-04刊)と比べると、臓器を表す語彙に見られるように訳語に違いがあり、また方言語彙など『日葡辞書』で使用が勧められていない語が含まれている。さらに漢字辞書『落葉集』(1598刊)も合わせて見ると、各辞書で語形が異なることがある。これらは当時の日本語の多様性とともに、各辞書がかなり個別に編纂されたことを示している。通事用とみられる日葡対訳写本『南詞集解』では、方言を含むややくだけた日本語とピジン化されたポルトガル語が用いられており、キリシタン版とほぼ同じ時期・地域の成立ながら、さらに異なる言語様相を示している。平成25年度は、おもに以下1・2を明らかにした。1.キリシタン時代のポルトガル語辞書についてキリシタン時代の現存するまとまった辞書のうち、ポルトガル語を含むのは『羅葡日辞書』『日葡辞書』のキリシタン版2点と、『葡日辞書』『南詞集解』の転写本2点であるが、これらは目的と性格が大きく異なる。前者2点はイエズス会におけるポルトガル人宣教師の日本語学習および日本人会士のポルトガル語学習のため、他のキリシタン版とは異なり例外的にポルトガル語が用いられたと考えられるものである。後者2点は、著者も成立事情も不明であるが、日本人南蛮通事のポルトガル語習得のために作成されたと推測される。2点ともキリシタンの教義に関わる用語は見られないが、南蛮貿易と宣教活動とは不可分の関係であったから、キリシタンと全く無縁な人々の手により成立したとは考えにくい。2.羅葡日辞書の内臓に関する訳語について『羅葡日辞書』と『日葡辞書』とでは、ラテン語・ポルトガル語と日本語との訳語の対応が一致しない例が少なくない。また、同じ辞書内でも、訳語の不統一が見られる場合もある。元来ヨーロッパ解剖学の用語とは大きく異なる概念であった日本語の「脾臓」「腎臓」「肝臓」は、『羅葡日』『日葡』ではどのようなラテン語・ポルトガル語の単語と対応させているかでゆれが見られたが、遅くとも江戸時代半ばには現代と同じ対応関係に落ち着いた。「南蛮」の語も、『羅葡日』『日葡』でEuropaを指したりIndiaを指したりと、用法のゆれが認められる。これらの訳語のゆれは、イエズス会における日本語研究の進展と、それに伴う訳語の変化・定着の様相を示すものとみられる。キリシタン版『羅葡日辞書』を他の辞書と比較することにより、以下14を明らかにした。1、『羅葡日辞書』の方言語彙『羅葡日』の日本語には、『日葡辞書』においてXimo(九州)方言注記がされている語・『日葡辞書』に方言注記がないが九州方言語彙と思われる語が合計約30語含まれている。辞書全体を通じ類義語の中央語と混用されているものの、後半では少なくなっている。2、『羅葡日辞書』における西欧古代神話に関する訳語羅葡日辞書の日本語訳では、原典のラテン語辞書に含まれる西欧古代の神々を「仏神」「仏」を用いて訳したほか、神話における冥界を仏教語を用いて「地獄」と訳し、古代神話も仏教の世界もキリシタンにとって異教の概念であることを明示している。3、ラテン語学習辞書としての『羅葡日辞書』とバレト『葡羅辞書』の比較羅葡日辞書はラテン語学習者・日本語学習者の両方を対象としており、ラテン語の意味や語形変化を知るには役に立つが、原典の豊富な用例を省いているため書くための辞書としては不十分である。ヨーロッパでもポルトガル人にとってこの目的での良い辞書はなかったので、バレトは日本で他の資料をも駆使して『葡羅辞書』を編纂した。4、16-17世紀の日本におけるポルトガル語辞書『羅葡日辞書』と同時期、日本語・ポルトガル語を含む辞書としては他に『日葡辞書』と、写本の『葡日辞書』および『南詞集解』が現存する。当時の日本でポルトガル語習得が必要だったのはキリシタンと商人であり、実用的かつ会話重視である点は共通するが、あくまでもラテン語に準ずる媒介語としての位置づけだったキリシタンの場合と異なり、商人はポルトガル語のみを運用する必要があった。このような方向性の違いが四辞書の内容に反映している。キリシタン版の辞書である羅葡日辞書(1595刊)・落葉集(1598刊)・日葡辞書(1603-04刊)、および写本南詞集解(17世紀半ば成立か)の調査から、以下の13を明らかにした。1.羅葡日辞書と日葡辞書注記日葡辞書において品位が劣る、あるいは一般的でないとみなされて注記されたと考えられる語は、さかのぼる羅葡日辞書において、少数ではあるが用いられている。

また、日葡辞書において優劣があると注記された語のうち、劣っているとされた語が使われている例も散見する。さらに羅葡日辞書以外のキリシタン版においても、日葡辞書で注記された特殊語・劣位語が用いられている例がある。2.日葡辞書と落葉集の語形比較落葉集の漢語について、連濁の有無や字音の種類の違いなど、日葡辞書とよみが異なる語が少なくない。また、日葡辞書の優劣注記語のうち、劣っているとされた語形も採用されている。これらの例は二辞書の目的や対象者の違いのほか、典拠および編者の違いを反映していると考えられる。3.南詞集解の特徴南詞集解は日葡辞書にやや遅れて成立したとみられる日本語ポルトガル語対訳辞書であるが、時期と言語の種類のほかは様々な点で異なっている。日葡辞書が外国人宣教師の日本語学習を目的としイエズス会によって組織的に編纂・刊行されたのとは異なり、南詞集解は日本人南蛮通事のポルトガル語学習用とみられ、個人的な覚書、語彙集の性格が強い。そのため未整理・過誤とみられる箇所が少なくないが、南蛮通事の日常に近い言語状況をある程度写しているともみられ、日本語については長崎の話し言葉を含んでいること、ポルトガル語の面から見るとピジン化とみられる例があることが注目される。日本語史『羅葡日辞書』単体では見えてこない語彙の位相のうち、特に方言については『日葡辞書』と比較することではほぼ明らかにしたが、その他専門用語についても、『日葡辞書』だけでなく南蛮通事用辞書『南詞集解』を加えて比較することにより明らかにしつつある。『羅葡日辞書』日本語訳の位相のうち、方言・卑語の使用の実態をほぼ明らかにすることができた。26年度は最終年度にあたるため、研究対象を『羅葡日辞書』と『日葡辞書』の語彙的位相の違いに絞り、『日葡辞書』の特殊語注記をもとに『羅葡日辞書』の調査を進め、研究課題のまとめとしたい。成果の発信方法としてウェブの使用が十分ではないので、日本語・英語での個人サイト作成を行う。購入希望の文具が品切であった為。代替の文具を購入予定。該当なし
岡山孤児院大阪分院の日誌を通して見る、事業当事者間のネットワーク構想

本研究の目的は一つには石井十次の岡山孤児院大阪分院(大阪事務所)の活動記録たる日誌を、石井記念愛染園(大阪市浪速区日本橋東)に出張して写真撮影し、その複写物によって原文の翻刻を行ない、成果を大学紀要に発表することで、明治末から大正初めの大阪の地における社会事業に関する第一次資料を公的に利用可能なものとすることであった。この点では、この弓年間の研究期間で2年度に亘り当該日誌の翻刻を研究代表者および研究分担者の所属する大学の紀要にて発表することが出来た。本研究のもう一つの目的は、上記資料を実際に利用して、明治末から大正初めの大阪の地における社会事業展開の実際の過程を解明することであったが、この点についても2篇の論考をまとめることが出来た。そこではまず第一に、事業展開における事業主とその手足として働くスタッフとの間の信頼関係が、ある場合(石井十次と光延義民)には毀損し、ある場合(石井十次と冨田象吉)には、事業主の没後も事業主の遺志を継承して精励していたことが判明した。また、事業展開の場を、大阪から朝鮮半島に求めることが当時広く模索されていたが、ある団体(岡山孤児院、時の事業主は大原孫三郎)は調査の結果進出を断念し、ある団体(加島敏郎の大阪汎愛扶植会)は同じく調査の結果、朝鮮総督府、東洋拓殖株式会社の支援のもと、進出を決断したが、この明治末から大正、昭和初期の過程を今回まとめることが出来た。ただ、昭和20年の植民地統治終了時に至る過程については未解明であり、今後の研究課題としたい。3年計画の初年度に当たる本年度は、当初の計画通り、石井記念愛染園(大阪市浪速区)が保管する岡山孤児院大阪分院関係書類のうち、次の12点の写真撮影を実施し、その撮影フィルムから普通紙への引き伸ばし、さらにその製本化、そしてその一部の翻刻作業までを終えた。その12点とは以下の通りである。すなわち、1明治四十二年六月起日誌愛染橋保育所2明治四拾五年度日誌愛染橋保育所/夜学校3日誌岡山孤児院大阪分院自明治40年1月14日至明治41年3月15日4石井記念愛染園日誌大正5年-13年5日誌愛染園自大正13年1月至大正15年3月6明治四十三年七月保育児原簿愛染橋保育所7補習科卒業学籍簿永久保存8永久保存卒業児童学籍簿9明治四十四年一月慈善函物品ライオン仁丹慈券寄附簿岡山孤児院大阪事務所10自大正四年八月至大正六年十二月日誌岡山孤児院大阪分院石井記念愛染園11明治四拾貮年五月日誌岡山孤児院大阪事務所12重要書類岡山孤児院大阪事務所この12点は分量としては保管書類のほぼ半分であり、残りの半分については次年度同様の作業を行なうこととした。なお本年度は上記3の「日誌岡山孤児院大阪分院」について翻刻作業を行ない、その成果を発表誌の都合で(上)(下)に二分割し、研究代表者と研究分担者の所属する各大学の紀要にそれぞれ発表した。この翻刻作業のための研究会は慶応義塾大学(日吉)において2回開催した。この翻刻した岡山孤児院大阪分院関係資料を中心とした、明治40年代から大正初年度時期における大阪市の社会福祉事業当事者間のネットワークの本格的分析は、次年度の作業となるが、本年度の研究会での日誌に関する分析から判明した点の一つは、事業の創始者(岡山在住)とその実務担当者(大阪在住)との間の、運営方針をめぐる不一致であった。いわば内政と外交の両面の関係が問われる必要があることが予想された。

3年計画の2年目に当たる本年度は、当初の計画通り、石井記念愛染園(大阪市浪速区)が保管する岡山孤児院大阪分院関係書類のうち、次の17点の写眞撮影を実施し、その撮影フィルムから普通紙への引き伸ばし、さらにその製本化を行なった。その17点とは以下の通りである。すなわち、1.事業報告石井記念愛染園自大正七年至昭和七年2.理事會決議録愛染園自大正五年至昭和二七年3.特別寄附金簿岡山孤児院4.大阪慈善會寄附簿岡山孤児院大阪事務所明治四三年十月二八日、二九日於中之島公會堂5.賛助寄附金簿岡山孤児院大阪事務所明治四四年一月6.慈善箱函物品ライオン仁丹慈券寄附簿岡山孤児院大阪事務所7.機械器具掛図臺帳愛染尋常小学校8.資金元簿岡山孤児院白米販賣部明治四四年十二月9.家政倶楽部原簿愛染園10.永久保存賞状授與録11.日誌愛染園自大正十三年至昭和五年12.表紙日誌財團法人石井記念愛染園その他13.報徳社出納簿岡山孤児院報徳社大阪支部明治四四年14.永久保存卒業修業證書授與録15.記録愛染同窓會(抄録)16.日誌財團法人石井記念愛染園17.大阪基督幼稚園クラブ同連合會記録この17点は分量としては保管書類のほぼ半分で、昨年度の撮影を含め、これで石井記念愛染園が現在保管する岡山孤児院大阪分院関係書類はすべて撮影を終えたことになる。ただし一部抄録したものもある。なお本年度の翻刻作業は昨年度に撮影した「明治四拾貮年五月日誌岡山孤児院大阪事務所」(初年度報告書のなかの第11番目の書類)について行ない、研究代表者の所属する大学の紀要に発表した。この翻刻作業のための研究会を神戸女学院大学(西宮市)において1回開催した。本年度の分析作業で判明したことは、昨年度の分析と同様に、大阪での事業展開の際の事業創始者(岡山市常住)と実務担当者(大阪市常住)との間での行動様式の相違であり、また実務の細部が本年度の翻刻作業のなかでさらに明確となった。石井記念愛染園保管資料のうち、表紙に明治42年7月の日付そして「保育兒原簿愛染橋保育所」と記された書類は、335名(貼紙の1名を加えれば336名)の保育兒に関する本人の姓名、生年月日、現住所、本籍地、両親の姓名・職業、入所日、退所日、預入事由という事項が記入されている。入所日で一番古いのは明治42年7月21日、一番新しいのが大正3年12月11日であり、5年半ほどの記録ということになる。本人の姓名は勿論、住所、本籍地というプライバシー保護から公表されてはならない事項が多いが、それらのプライバシー保護を図った上で、そのデータから明治末から大正初めの5年半ほどの、大阪市南区下寺町にあった岡山孤児院経営の保育所周辺の人々の生活状況が浮かび上がる。現在行なっている分析項目は、次の3項目である。1.保育所に通った日数(出所日マイナス入所日)2.入所日における年齢(入所日マイナス生年月日)3.父親、母親の職業さらに現住所の統計からどの範囲から保育所に通っていたのかについては、当時の住所表示についての研究がさらに必要で、例えば日本橋筋東何丁目と日本橋東何丁目とが同じ地所という断定が未だ出来ない。上記1.については、0日=3名、1日=29名、2日=16名、3日=19名、4日=7名、5日=10名、6日=5名、7日=3名、8日=5名、9日=9名、10日=4名、11日=4名等で、短期間のみの在所が多かった。2.については、ゼロ歳児36名、1歳児84名、2歳児49名、3歳児29名、4歳児27名、5歳児12名、6歳児2名等で、1歳児が最も多かった。
受精のシグナル伝達におけるRho蛋白質の位置づけ

受精のシグナル伝達におけるRho蛋白質とチロシンリン酸化について解析し、以下の成果を得た。1.ユウレイボヤでは、受精の初期、精子添加後5分に、surface contractionと呼ばれる形態変化が観察される。卵内に前もってRho蛋白質を失活させるADPリボシルトランスフェラーゼC3を顕微注入すると、精子を添加しても上記の卵の形態変化は起こらず、また、受精も進行しないことが明らかになった。すなわち、Rho蛋白質が受精初期の機構に関与すると考えられる。2.受精初期の機構に関与するチロシンキナーゼを明らかにするために、ユウレイボヤ卵のsurface contractionに対する各種チロシンキナーゼインヒビターの阻害作用を調べた。その結果,erbstatin analogは阻害効果を示したが、その他のインヒビターはほとんど阻害しなかった。すなわち、erbstatin analog感受性チロシンキナーゼが受精初期の機構に関与することが明らかになった。3.ユウレイボヤの受精に伴う卵蛋白質のチロシンリン酸を、ホスホチロシンを認識するモノクローナル抗体PY20を用いたウェスタンブロット解析により調べた。その結果、surface contractionが起こる、精子添加後25分の間に,分子量66kD、75kD、100kD、140kD、190kDの蛋白質がチロシンリン酸化され,その後,脱リン酸化されること、また、erbstatin analogが75kD蛋白質のチロシンリン酸化を阻害することが明らかになった。このチロシンリン酸化とRho蛋白質の関係を明らかにするために、チロシンリン酸化に対するADPリボシルトランスフェラーゼC3の効果を調べようとしたが、C3酵素を顕微注入できる卵の量の問題でまだ未解決である。
発達障がい者のウェルビーイングに影響する社会的環境的因子に関する定量的研究

本研究は自閉スペクトラム症(以下ASD)のある青年・成人期の人々のウェルビーイングに,社会的環境的要因や自閉症特性の強さがどのような影響を及ぼしているかについて,定量的研究を用いて明らかにすることを目的としている。当年度より調査を開始し、ASDの診断のある14名に対して国際生活機能分類(以下ICF)をもとに作成した質問紙とAQ、ASRS、SF12を施行した。AQは自閉性特性の強さを測り、ASRSはADHDの簡易なスクリーニングとして、SF12は健康関連QOLを測定する質問紙として使用されている。結果:SF12で得られたASD群の値について国民標準値と比較するため1サンプルのt検定を行ったところ、ASD群は日常役割機能(身体)、日常役割機能(精神)、心の健康で有意に低かった。3コンポーネントサマリーとの比較では、役割・社会的健康感、精神的健康感でASD群が有意に低かった。次に、AQ、ASRS、ICFとSF-12の間に相関があるのか検討を行った。AQでは日常役割機能(身体)、全体的健康感、日常役割機能(精神)の間にそれぞれ相関が示された。ASRSにおいても日常役割機能(身体)、全体的健康感、日常役割機能(精神)の間にそれぞれ相関がみられた。ICFでは、身体機能、日常役割機能(身体)、全体的健康感、活力、日常役割機能(精神)において相関が示された。以上の結果からASDのある人はふだんの日常生活をこなすことに困難を伴うことが示された。また抑うつ感を問う心の健康の項目でASD群は著しく得点が低かった。AQ、ASRS、ICFとSF-12との相関では、AQとASRSの両質問紙において日常役割機能の身体及び精神で高い相関が示され、ASDのある成人において自閉症特性やADHD傾向が強いほど日常生活を送ることに支障をきたしやすいことが示された。本年度より調査を開始し、調査の結果、ASDのある人はふだんの日常生活をこなすことに困難を伴うことが統計的に明らかにすることができた。本年度の調査ではサンプル数が予定より少なかったため引き続きサンプル数を増やして検討を行う。変更点:アウトカムに用いる予定の質問紙をPWIからSF12に変更した。PWIは国内外のASDのある人の量的研究の先行研究が探した限りでは1件のみであったため、自閉症を対象にした先行研究数が数例あり日本人の国民標準値との比較が可能なSF12を使用することにした。また、ASDのある人との比較で定型発達群のデータも必要となるため、定型発達群にも協力を依頼することとした。今後について:ASDのある人に社会的環境的要因や自閉症特性の強さがどのような影響を及ぼしているかについて詳細な解析を行うためには、更に調査への協力者が必要であるため、引き続き協力者の募集を行っていく。青年・成人期の自閉スペクトラム症のある人々のウェルビーイングに社会的環境的要因や自閉症特性の強さがどのような影響を及ぼすかについて、定量的研究によって明らかにするため、当事者にできる限り負担をかけない範囲で複数の質問紙調査を行う。本年度は、社会的環境的因子に関する質問紙の検討を行い、また、別の研究協力で作成中の自閉症症状と関連症状を測定する質問紙の信頼性を検討するための調査の準備を行った。本年度は出産・育児休暇の取得のため、研究に従事する時間を十分に確保することが難しかった。当該年度は育児休暇取得のため研究成果は少なかった。育児休暇取得と申請者が海外在住のため、研究の進捗が遅れている。

本年度より調査を開始し、調査の結果、ASDのある人はふだんの日常生活をこなすことに困難を伴うことが統計的に明らかにすることができた。本年度の調査ではサンプル数が予定より少なかったため引き続きサンプル数を増やして検討を行う。H30年度は文献的研究と予備調査をもとに社会的環境的因子に関する質問紙を作成する。また、Personal Wellbeing Index-Adultの使用許諾を得ること、行動特性に関する質問紙の信頼性の検討を行い、調査が実施できるように準備を行う。H31以降は、作成した質問紙を用いて調査を実施する。次年度(平成30年度)は過去の文献に関する批判的レビューを行う。次に、ASD者のウェルビーイングモデルを仮定した構成概念をもとに質問紙を作成する。質問紙は予測因子に社会的環境的因子を含み、アウトカムはウェルビーイングとする予定である。社会的環境的要因に関する尺度は独自作成、ウェルビーイングと自閉症特性に関する質問紙は既存のものを用いることとする。次年度はこれら質問紙の準備と調査フィールドの準備を行う。変更点:アウトカムに用いる予定の質問紙をPWIからSF12に変更した。PWIは国内外のASDのある人の量的研究の先行研究が探した限りでは1件のみであったため、自閉症を対象にした先行研究数が数例あり日本人の国民標準値との比較が可能なSF12を使用することにした。また、ASDのある人との比較で定型発達群のデータも必要となるため、定型発達群にも協力を依頼することとした。今後について:ASDのある人に社会的環境的要因や自閉症特性の強さがどのような影響を及ぼしているかについて詳細な解析を行うためには、更に調査への協力者が必要であるため、引き続き協力者の募集を行っていく。産休及び育休による研究の中断のため、当初の予定通りの研究実施が難しかったため。当該年度は育児休暇を取得したため使用額はなかった。代表者が海外に在住しており当年度は妊娠、出産と育児が重なったため、調査への協力者を集めることが予定よりも下回った。そのため、使用予定としていた謝礼額を満額使用できなかった。今後も継続してサンプル数を増やす予定であるので、次年度使用額については育休が明け次第、謝礼額として使用していく予定である。次年度は、育休取得のため研究費の使用は行わない予定である。
上皮間葉移行を介した癌悪性化における核膜孔複合体因子Rae1の役割と機能解析

細胞核膜上に多数ある核膜孔には核膜孔複合体が存在しており、約30種類の核膜孔複合体因子から構成されている。この核膜孔複合体の機能は細胞質-核間の物質輸送の制御であるが、細胞内における各器官への分子の誤送は数多い疾患、例えば癌、に関わっている。実際に核膜孔複合体因子のひとつであるRaelの発現が乳癌において重要な役割を担っていることが示唆されている。しかし、核膜孔複合体因子と癌悪性化に関する研究は近年始められたばかりであり、その詳細なメカニズムは未だ不明のままである。上皮間葉移行は上皮系細胞の間葉系細胞への形態的および機能的変換を示し、個体発生に必須な過程とされている。近年、細胞の癌化およびその進展・癌細胞の浸潤能の獲得にはこの上皮間葉移行が深く関与していることが明らかにされ、これまで多くの研究が癌の上皮間葉移行と悪性度や予後との関係を示している。癌の上皮間葉移行誘導機構の解明は、癌転移機構の解明や新規治療法の開発にも貢献するものと考えられている。上皮間葉移行では、E-カドヘリンが上皮系発現マーカーとして知られており、Snai1、Twistやβ-カテニンといった転写因子が上皮間葉移行を調節しているとされている。本研究では、核膜孔複合体因子Rae1がE-カドヘリンと相互作用し、共発現して上皮間葉移行を制御している可能性を見出してきた。また、Raelの結合パートナーである核膜孔複合体因子Nup98がβ-カテニンの核外への移行を制御していることも見出した。Nup98は癌悪性化因子であり上皮問葉移行への関与が示唆されるガレクチン-3と相互作用し、β-カテニンの核内外の輸送を制御することでβ-カテニンシグナル伝達経路をコントロールしていることを明らかにした。現在は核膜孔複合体因子による上皮間葉移行の制御メカニズムについて、さらに詳細な検討を行っている。細胞核膜上の核膜孔は、約30種類の核膜孔複合体因子によって構成されており、細胞質-核間の分子輸送の制御に関係している。現在核膜孔複合体因子に関する研究は活発に進められ、様々な知見が集積されつつあるが、癌の悪性化に関するメカニズムについての知見はない。そこで本研究では、核膜孔複合体因子のひとつであるRae1(RNA export factor 1)と、上皮間葉移行(EMT)の指標のひとつでありまた癌転移に深く関わるE-カドヘリンとの相互作用について詳細に解析して、上皮間葉移行におけるRae1の役割を検討し、さらにはRae1による癌悪性化機構の分子機序を解明することを目的している。研究代表者はRae1がE-カドヘリンと相互作用することを免疫沈降実験により見出し、また細胞免疫染色実験によりRae1は細胞膜上でE-カドヘリンと共発現しているのを観察した。この細胞膜上の発現パターンは、上皮様細胞形態を示す乳癌細胞MCF7やT47Dにおいて観察され、間葉系細胞の形態を示す乳癌細胞MDA-MB-231やBT549では確認できなかった。また間葉系の乳癌細胞よりも上皮様の乳癌細胞のほうがRae1が多く発現していた。Rae1は核膜孔において核内と細胞質間を移動できる可動性の分子で、物質と結合して移動することで細胞質-核間の物質輸送に関与しているとされる。またRae1は乳癌の進展に重要であるとの報告もある。これらの結果は、核膜孔複合体因子であるRae1がEMTの指標とされるE-カドヘリンと相互作用し、そしてその発現・機能を制御している可能性を示唆しており、本事象の詳細な検討は該当分野に革新的な知見をもたらす可能性がある。

Nup98は癌悪性化因子であり上皮問葉移行への関与が示唆されるガレクチン-3と相互作用し、β-カテニンの核内外の輸送を制御することでβ-カテニンシグナル伝達経路をコントロールしていることを明らかにした。現在は核膜孔複合体因子による上皮間葉移行の制御メカニズムについて、さらに詳細な検討を行っている。本研究計画は、(1)Rae1とE-カドヘリンの相互作用のメカニズムを、分子生物学的・細胞生物学的・生化学的手法を用いて明らかにする。Rae1の細胞膜における発現機構についても考察する。(2)Rae1 - E-カドヘリンの相互作用に基づき、EMTにおけるRae1の役割・およびそのメカニズムを明らかにする。(3)細胞を用いた実験による結果を確認しさらに進めるため、マウスを用いた実験を行い、Rae1の癌悪性化における詳細な役割を解明する。といった目標を設定している。本年度は3年間の予定で交付される初年度であり、本年度中に上記(1)の目標はおおむね達成できたと考えている。また、研究成果について論文発表や学会発表を行うことができた。今後の研究の推進方策としては、交付申請書にかかげた(2)Rae1 - E-カドヘリンの相互作用に基づき、EMTにおけるRae1の役割・およびそのメカニズムを明らかにする。といった目標を達成するように研究を推進していく。研究計画の進行上、次年度以降により多くの物品が必要になることが予想されたため、次年度以降に使用できるよう今年度分に未使用分の研究費が生じた。次年度以降の研究費に関しては、交付申請書に記載したとおり免疫ブロット・染色用の試薬・抗体や細胞培養用試薬、消耗品としてフラスコやチューブなどのプラスティック製品などを購入する予定である。