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親と暮らす障害のある若者の自立に関する研究-日常生活構造と将来生活設計に着目して

親と同居している障害当事者、親、支援者の三者が、障害者の自立についていかなる自立観を持ち、自立に向けて実際にどのような行動をとっているのか検討を行った。その結果、障害のある人が自立する、あるいは大人になっていくというイメージを、最も身近な家族や支援者ですら持てていなかった。また、障害者に日頃から意思表示や自己決定の機会を与える様子もみられず、障害者を支える人々の主観的なイメージを元に障害者の自立を現実のものにするのは困難であることが見出された。本研究では,親と同居している障害のある若者の日常生活構造と将来生活設計を当事者および彼らが日常的に関わる人々の視点から明らかにすることを目的として次の2つの柱を設定した。第一に,親と同居する障害のある若者の日常生活構造を把握すること。第二に,障害のある若者本人,その親,福祉サービス提供者の三者のそれぞれが考える障害のある若者の「自立観」と将来展望を明らかにすることである。これらを踏まえ,日常生活構造と将来展望への意識を解明することによって,親が介護してくれる生活から親なきあとの生活への移行の際の「断絶」という問題の解決と障害のある若者の将来生活設計にとって有効な視座の提供につなげていくことが本研究の意義である。平成19年度は,第一の柱である《親と同居する障害のある若者の日常生活構造を把握と分析》をすすめ,客観的な構造の部分の把握を行うよう努めた。具体的には以下のとおりである。(1)先行研究の検討および日常生活調査にかんする質問紙の作成:障害者の日常生活構造のうち,生活時間(就労時間,生活必需時間,自由時間),生活空間(家庭内,家庭外),所得・資産(個人および家族の所得、資産,収入の使い道)といった項目を的確に把握するための設間を吟味する。国内外の先行研究の収集と整理,質問紙作成を行った。(2)面接調査と参与観察の実施および分析:20代30代の障害のある若者本人と,本人と同居して自宅での日常的な介護を行っている親を対象に予備的な聞き取り調査を行った。内容は(1)の日常生活構造にかんすること,および生活に対する本人の主観的満足度,それぞれが考える障害のある若者の「自立観」と将来展望について自由に話してもらった。本年度は数組の親子を対象に予備的調査を行った段階である。本研究では、親と同居している障害のある若者の日常生活構造と将来生活設計を当事者および彼らが日常的に関わる人々の視点から明らかにすることを目的として次の2つの柱を設定した。第一に、親と同居する障害のある若者の日常生活構造を把握すること。第二に、障害のある若者本人、その親、福祉サービス提供者の三者のそれぞれが考える障害のある若者の「自立観」と将来展望を明らかにすることである。これらを踏まえ、日常生活構造と将来展望への意識を解明することによって、親が介護してくれる生活から親なきあとの生活への移行の際の「断絶」という問題の解決と障害のある若者の将来生活設計にとって有効な視座の提供につなげていくことが本研究の意義である。平成20年度は、《障害のある若者本人、その親、障害のある若者に関わる福祉サービス提供者の三者それぞれが考える「自立観」および将来展望の実現可能性についての検討》のうち、主な介助者である母または父を対象とした面接調査を実施し、親が考える障害のある若者の自立観および将来展望を分析した。その結果、第一に、障害のある子を持つ親は「親は子の一生に責任を持つ義務がある」と考えており、子が「自分で生きていけるようにすること」を重視していない。そのため経済的な援助や介助面でのサポートについても親に責任があると考えている。第二に、子の将来について親がいなければ心配だとは考えていないが、親離れ・子離れはできていないと自覚し、子に対しても親離れするようには接していない。親の自立イメージは障害のない若者と同様のものであり、しかしながら障害を持つ子の具体的な自立イメージやその実現性を具体的に描けていないことが明らかとなった。平成21年度は、《障害のある若者本人、その親、障害のある若者に関わる福祉サービス提供者の三者それぞれが考える「自立観」および将来展望の実現可能性についての検討》のうち、障害のある若者本人を対象とした面接調査を実施した。

昨年までに行っていた、親と福祉サービス提供者との自立観と照らし合わせた上で、《障害のある若者における現在の生活から将来への生活への移行の実現可能性と阻害要因の分析》を行った。その結果、第1に、親と支援者の自立観が異なっていること、ADL自立を重視していることは共通しているが、親は、ADL自立=子の自立と捉える「自立観」を有し、それを実現不能なもの捉えることと、親自身の子に関わらねば/関わりたいとの思いが、「子の自立」という目標からそれた関わりになっている。一方、支援者は当事者の自立を「目標」ではなく、「過程」と捉えていた。そのような自立観に基づき、当事者自身の今後の活動の広がりをもたらすためにADL自立や他者との関係性構築を重視していた。第2に、障害当事者は、親と支援者の異なるそれぞれの自立観に同意しながらも、その狭間で揺れ動いているということである。それは、子どもから大人になる過程で、若者なら誰しもが抱く、親と自分の考えの相違、周囲との関係で葛藤するという状況に他ならない。しかしながら第3に、当事者、親、支援者の誰もが、自分(障害者)が自立している姿が具体的には描き出せていないことも明らかになった。したがって、障害者の自立イメージをつくりあげていくには、まずは、障害の有無にかかわらず、子どもが大人になる道筋を中心に置き、誰しもが共通する自立の実態を捉えることが、今後の課題となるだろう。
新出資料による琉球処分期琉球知識人の総合的研究ーそのアイデンティティに着目して

本研究は、新発見の琉球王国末期から琉球処分期の琉球知識人文書を整理研究することで、琉球王国崩壊期の琉球知識人の複雑で多様な文化的背景、思想、アイデンティティの問題を明らかにし、それを、東アジア世界における前近代と近代の狭間に生じた古典的知識人達のアイデンティティの問題の中に位置づけるものである。研究成果は、東方学会主催国際東洋学者会議「新出の琉球漢文資料と琉球史の読み直し」(2016年5月、東京都)、「琉球漢詩文国際シンポジウム」(2017年1月、うるま市)において公表し、資料集として『新見琉球王国漢文文献集成』(上海・中西書局)20冊(2018年3月出版予定)を編集した。本研究は、新しく東京都及び山形県で発見された琉球王国末期から琉球処分期における琉球知識人文書を整理研究することで、中国、日本という文化圏の狭間にあった琉球王国崩壊期の琉球知識人の複雑で多様な文化的背景、思想、アイデンティティの問題を明らかにし、それを、東アジア世界における前近代と近代の狭間に生じた古典的知識人達のアイデンティティの問題の中に位置づけるものである。平成26年度においては、新発見の琉球資料について、山形大学大学附属図書館、米沢市立図書館所蔵資料のデータ収集、分析を行った。その研究成果の一部を2014年6月、中国・北京で開催された「燕行使進紫禁城」学術研討会にて発表し(「從琉球漢詩文看北京的琉球人」(高津孝))、また、2014年12月に香港で開催された中國詩學研究前沿國際論壇:Leading Scholarship on Chinese Poetics: An International Symposium(香港浸會大學Hong Kong Baptist University)においても発表を行った(「琉球的出版文化與琉球漢詩集」(高津孝))。また、沖縄県立博物館・美術館(那覇市)の一室を借りて、琉球漢詩文研究会を2回開催した。第1回(7月)は、北京学会報告(高津孝、榮野川敦)の他、「『琉球王国漢文文献集成続編』について」(高津孝)、「蔡大鼎の詩歌と人生」(紺野達也)「蔡大鼎詩集と琉球女性史(続)」(高津孝)が報告された。第2回(3月)では、今年度の研究成果報告(高津、紺野、水上、榮野川)の他、「組踊と演戯故事」(高津孝)、「陳観酉・陳慶福父子と琉球漢詩人」(紺野達也)が報告された。平成27年度においては、新発見の琉球資料について、山形県立米沢女子短期大学附属図書館、米沢市立図書館を調査し、所蔵資料のデータ収集、分析を行った。また、新出琉球資料60数点を中国で出版する準備が進行中である。高津は、その研究成果の一部を2015年12月、中国・上海の復旦大学古籍整理研究所主催の「古文献・新視野系列講座」にて「琉球士族的蔵書与學問」(高津孝)と題して発表を行った。また、研究分担者水上雅晴は、2015年11月に厦門大学国際学術交流センターで開催された「「科挙制と科挙学」第12回国際学術シンポジウム」において「再論琉球的“科"ー以現存琉球漢籍為線索」という発表を行った。また、琉球漢詩文研究会を沖縄で2回開催し、研究題目に関する発表を重ね、知見を深めた。本年度における研究題目に関連する研究成果としては、高津孝「蔡大鼎の漢詩文と琉球の遊里」(鹿大史学63号、2016年2月)、紺野達也「琉球漢文学者蔡大鼎の晩年に関するいくつかの新知見ー『北上雑記』・『北京話』を中心にー」(中国詩文論叢36輯、2015年12月)、陳捷「韓国国立中央図書館所蔵琉球『選日通書』について」(大高洋司・陳捷編「アジア遊学」特集『日韓の書誌学と古典籍』、勉誠出版、2015年5月)が挙げられる。山形県及び中国上海市、福建省における新出琉球資料の調査が進展したこと、それを受けて、新出琉球資料を叢書として中国で出版する準備が進んでいること、琉球王国末期の知識人についての共同研究が進み、研究代表者及び研究分担者による口頭発表、研究論文発表が盛んに行われていることによる。平成28年度においては、最終年度のせいか取りまとめとして、東方学会主催国際東洋学者会議において、パネル「新出の琉球漢文資料と琉球史の読み直し」(2016年5月、東京都)を開催し、「琉球漢詩文国際シンポジウム」(2017年1月、沖縄県うるま市)を開催した。

また、新発見の琉球文献を集成した『新見琉球王国漢文文献集成』(上海・中西書局)20冊の編集を行い、2018年3月に出版の予定である。このほか、『平成26-28年度科学研究費補助金「新出資料による琉球処分期琉球知識人の総合的研究」報告書』(2017年3月)を刊行し、研究代表者、分担者の3年間の研究活動における主要な業績を掲載した。このほか、高津孝は、「琉球における漢籍受容と漢文の学習」(福島金治編『生活と文化の歴史学9学芸と文芸』,2016年8月)、「琉球的出版文化與琉球漢詩集」(『人文中國學報』22巻,2016年5月)を発表し、南京大学において講演「琉球漢籍概説」(2016年12月)を行った。水上雅晴は、「再論琉球的“科":以現存琉球漢籍為線索」(『厦門大学学報(哲学社会科学版)』2016年第4期(総第236期)、2016年9月)等を発表し、紺野達也は、「琉球漢詩人蔡大鼎の詩に詠われた日本ー『欽思堂詩文集』巻二所収の15首についてー」(『2016和漢比較文学研討会』、2016年10月)を発表した。本研究は、新発見の琉球王国末期から琉球処分期の琉球知識人文書を整理研究することで、琉球王国崩壊期の琉球知識人の複雑で多様な文化的背景、思想、アイデンティティの問題を明らかにし、それを、東アジア世界における前近代と近代の狭間に生じた古典的知識人達のアイデンティティの問題の中に位置づけるものである。研究成果は、東方学会主催国際東洋学者会議「新出の琉球漢文資料と琉球史の読み直し」(2016年5月、東京都)、「琉球漢詩文国際シンポジウム」(2017年1月、うるま市)において公表し、資料集として『新見琉球王国漢文文献集成』(上海・中西書局)20冊(2018年3月出版予定)を編集した。新発見の資料についての収集、分析が順調に進んでいること、新発見の資料等の分析に基づく研究成果を海外の学会で2回報告していること、沖縄において琉球漢詩文研究会を2回開催し、研究分担者との共同研究が進展していると判断できること。平成28年度においては、研究代表者高津は、東方学会主催の国際東洋学者会議において、琉球パネル「新出の琉球漢文資料と琉球史の読み直し」(2016年5月)を企画し、中国から2名の著名な琉球関係研究者を招聘する。本パネルは、本科研の研究成果の発表を企図し組織したものである。また、年2回の琉球漢詩文研究会を開催し、研究成果の深化を図り、年度末には研究会の総括として、研究成果をまとめた報告書を刊行する予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。中国文学今後、琉球王国末期から琉球処分期の琉球知識人の漢詩文の内容分析を、研究分担者との共同研究において、さらに進展させ、彼らのおかれた状況、アイデンティティの問題をいっそう明らかにしていく。主として、平成26年度に計画していた北京における脱清人資料調査が、担当に当たっていた研究分担者の多忙により、実現できなかったことによる。早急に研究分担者と相談の上、北京調査を実施するか、或いは、他の調査費用への振り替えを行う予定である。
魚類における2種のビテロゲニンの発現制御機構

1培養系の確立マハゼの肝臓は油滴を多量に含むことが多く、コラーゲナーゼ処理後の分離した細胞が浮遊し、遠心による回収が困難であった。そこで、肝臓のスライス培養を試みた。その結果、L-15培養液にウシ胎児血清(FBS)5%を添加した培養液で良好な結果が得られた。2 cDNAクローニングVg-530およびVg-320のcDNAクローニングに成功した。Vg-530はこれまで報告されてきた他魚種のビテロゲニンと同様、リポビテリン1、ホスビチン、リポビテリン2およびβ'-コンポーネント領域を含んでいた。しかし、Vg-320はホスビチン以下の領域が存在しない特異なビテロゲニンであることが判明した。3検出系の確立マハゼの2種のビテロゲニンの特異抗体はすでに作製できていたので、それら抗体を用いて酵素免疫測定法(ELISA)による微量タンパク定量系を確立した。4発現制御機構の解析マハゼ雌の成熟に伴う肝臓のVg産生能を比較した結果、卵巣の発達に伴い産生されるVg量は増加し、卵黄形成中期ではどちらのVgも産生量は著しく増加した。両者の産生量はVg-320に比べVg-530の方が多かった。また、マハゼ雌肝臓での2種のVg産生に及ぼす低濃度エストラジール-17βの影響を調べた結果、未成熟個体の肝臓ではVg-320が先に産生され、卵巣の発達に伴いVg-530の産生量が増加し、Vg-320量とVg-530量が逆転することが判明した。以上の結果から、2種のビテロゲニンは異なる制御を受けていることが明らかとなり、異なる機能を有することが示唆された。本年度は、2種のビテロゲニン(Vg-530、Vg-320)の存在が明らかにされているマハゼについて、生体外培養系および微量検出系を確立し、それらの発現制御機構を調べ、以下の成果を得た。1培養系の確立最初に、マハゼ肝臓を用いて細胞培養系の確立を試みた。しかし、マハゼの肝臓は油滴を多量に含むことが多く、コラーゲナーゼ処理後の分離した細胞が浮遊し、遠心による回収が困難であった。そこで次に、肝臓のスライス培養を試みた。4発現制御機構の解析1で確立した器官培養系および3で確立したELISAを用いて、マハゼ雌の成熟に伴う肝臓のVg産生能(同じ濃度のエストラジールー17β添加でのVg産生量)を比較した。その結果、卵巣の発達に伴い産生されるVg量は増加し、卵黄形成中期ではどちらのVgも産生量は著しく増加した。

昨年度は、2種のビテロゲニン(Vg-320およびVg-530)の存在が明らかにされているマハゼについて、生体外培養系および微量検出系を確立し、マハゼ雌の成熟に伴う肝臓のVg産生能(同じ濃度のエストラジールー17β添加でのVg産生量)を比較した。その結果、卵巣の発達に伴い産生されるVg量は増加し、卵黄形成中期ではどちらのVgも産生量は著しく増加した。また、両者の産生量はVg-320に比べVg-530の方が多かった。本年度は、マハゼ雌肝臓での2種のVg産生に及ぼす低濃度エストラジールー17βの影響を調べた。その結果、未成熟個体の肝臓ではVg-320が先に産生され、卵巣の発達に伴いVg-530の産生量が増加し、Vg-320量とVg-530量が逆転することが判明した。さらに、2種のVg抗体を用いて、各成熟段階の卵巣および肝臓の免疫組織化学的観察を行なった。その結果、卵母細胞中の卵黄球は両抗体で免疫染色されたことから卵黄球は両Vgに由来する卵黄タンパクから構成されていることが明らかになった。また、肝臓では、2種のVgが異なる細胞で産生されることが示唆された。以上の結果から、2種のビテロゲニンは異なる制御を受けていることが明らかとなり、異なる機能を有することが示唆された。
近代中国における社会の武装化と中国共産党の武装闘争ー中央革命根拠地の事例分析

本研究では、内戦期の中国共産党の軍隊が傭兵、民間自衛団体、匪賊といった当時の社会が抱えていた既存の武力に大きく依存していたという仮説をたて、その仮説を検証するために、中央革命根拠地(江西省・福建省)における共産党の武装闘争に関する実証研究をおこなった。その結果、共産党が結党直後から敵軍の将兵を取り込むための工作(軍内政治工作)を推進し、その具体的成果として、中央革命根拠地をめぐる戦いの過程で約二万人もの国民党軍将兵を味方に引き込むことに成功したことをあきらかにした。また、共産党を殲滅しようとした中国国民党が福建省において既存の武力の管理・動員に悪戦苦闘していた様子も浮き彫りにした。平成24年度は、日中関係の悪化により江西省・福建省の档案館での史料収集が中止を余儀なくされた。しかし、このようなトラブルへの対応策は研究計画に織り込み済みであり、その対応策、即ち、米国と台湾における史料収集は、滞りなく実施され、重要な成果を挙げた。その一つが共産党の中央根拠地に対する国民党軍の掃討作戦を指揮した陳誠が収集した共産党の内部文書などからなる陳誠文庫のマイクロフィルム22巻である。マイクロ化された陳誠文庫は、約半世紀前に慶應大学が米国のフーバー研究所から一度入手していたが、経年劣化によって使用不可能となった。今回、そうした事情をフーバー側に説明した結果、研究代表者である阿南が所属する東北大学に新たに陳誠文庫のマイクロフィルムが提供された。この貴重な資料は、本研究グループの研究のみならず今後の日本における中国近代政治史研究にも寄与することが期待される。一方、分担者の山本は、台湾の国史館、政治大学、東呉大学、台湾大学、衛理神学研究院において1930年代、40年代の中国福建社会に関わる資料の調査をおこない、国民党側の福建における統治、動員、兵站などに関する貴重な資料を多数入手した。また、協力者の岩谷は、台湾の国史館、法務部調査局、中央研究院近代史研究所郭廷以図書館において、中国国民党による対共産党政策に関する文書、報告を調査、閲覧、収集した。その結果、これまで不明であった1930年代、40年代の共産党の秘密指示、ならびにそれに対する国民党の対共対策などが判明した。岩谷は、米国のスタンフォード大学ならびにフーバー研究所でも国民党関連の資料の調査をおこなった。各メンバーは、以上のような資料調査と並行する形で調査結果を論文にまとめる作業を進めた。また、平成25年度に学会(アジア政経学会)においてメンバー全員が参加する形で研究成果を発表するための準備にも着手した。平成25年度は、阿南、山本、岩谷の三人体制で取り組んできた共同研究の最終年として、研究課題に関する調査活動を継続しつつ、研究成果発表に関する取り組みを本格化させた。調査活動に関していえば、代表者の阿南は、8月に江西省と福建省に点在する中央革命根拠地関連の遺跡、古戦場、資料館を回り、多くの貴重な資料を入手した。分担者の山本は、台湾での資料調査、協力者の岩谷は、米国での資料調査をそれぞれ実施した。共同研究の成果は、平成25年10月に開催されたアジア政経学会東日本大会において分科会「近代中国の武装化した社会と革命政党ー革命に与した武装勢力の実態を探る」を企画し、そこで阿南と山本が報告をするという形でおこなわれた。阿南の報告「敵軍に加担した傭兵をいかにして引き抜くか?民国期中国の武装化した社会と中国共産党による軍隊建設に関する一考察」では、中央革命根拠地における共産党の軍隊にとって国民党軍に所属する傭兵が重要な兵士の供給源となっていた実態および国民党軍将兵が共産党に寝返った動機や背景について報告がおこなわれた。山本の報告「民国時期、福建省における武装化した社会と国民党政府による戦時動員」では、福建省における社会の武装化の実態および民間の武装集団と国民党との関係について報告がおこなわれた。本研究の意義は、上記の学会報告ならびに阿南が10月に発表した論文「中国共産党による軍隊を対象とした政治工作の起源と初期の展開」(『法学』第77巻第4号、東北大学)などをつうじて、共産党が既存の軍隊や民間の武装集団を活用した軍隊建設を計画的に推進していた実態を明らかにし、社会変革が軍隊建設の不可欠な前提となったという従来の共産党軍に関する定説とは異なる軍隊建設の論理を学界ならびに社会に対して提示した点にあると考えられる。本研究は、1930年代に中国の江西省と福建省にまたがって形成された中国共産党の中央革命根拠地を共産党の資料、中国国民党の資料、民間の資料を用いて多角的に分析し、社会に内在した様々な暴力形態と革命政党との関係について考察することを主たる目的としている。平成23年度においては、上記の目的を達成するために、中国の江西省、福建省における資料収集や現地調査の実施準備、

中国国内で出版された資料集の収集、既に収集済みの資料の分析、分析結果に関する意見交換などを進めつつ、参加メンバー全員が3月に訪米し、複数の大学において資料収集を実施した。研究代表者の阿南と協力者の岩谷は、Columbia大学において1930年代に対共産党工作に関わった国民党幹部(熊式輝、陳立夫、張発奎など)の手記、日記、手紙、公式文書、著作物の調査と収集をおこなった。阿南は、その後Harvard大学に移動し、同大学において、中国の民間武装団体に関する資料や中国共産党関連の資料の調査・収集をおこなった。また、同大学の燕京センターの所長で中国における社会の武装化に関して複数の著作を発表してきたエリザベス・ペリー教授ならびに日本研究・中国研究の世界的権威として知られるエズラ・ボーゲル教授に面会し、本研究に関する建設的な助言を得た。研究分担者の山本は、Drew大学, Yale大学,Columbia大学で主として19世紀半ば以降の福建省の社会に関して宣教師などが残した記録や農村建設関連資料(晏陽初文書)の収集をおこなった。メンバー全員がコピーや撮影をして得た資料は合計4千枚前後に達した。これらの資料は、今後、研究を進めていくうえで極めて有力な材料となる。平成24年度は、初年度(平成23年度)で準備を進めた中国国内の档案館(公文書館)での調査を実施する予定であった。ところが、尖閣諸島をめぐって日中関係が著しく悪化したことにより、江西省、福建省の档案館での資料調査は中止を余儀なくされた。こうした事態は、交付申請書を作成した段階で既に発生し得ると予想されていたことであり、対応策として台湾と米国に保管されている資料の収集ならびに市場に出回っている両档案館の資料集の入手を想定していた。現時点でこの2つの対応策は、順調に進展している。具体的にいえば、「研究実績の概要」でも述べたように、台湾・米国において貴重な資料を多数入手するとともに江西省、湖南省の档案館がそれぞれ発行した資料集:『革命歴史文献彙集』も確保し、目下、それらの資料の分析を進めている。『革命歴史文献彙集』は、档案館に保管されている内部文書を修正せずに掲載していることが既に確認されている。したがって、共産党の内部文書を駆使して中国社会の武装化と共産党の武装闘争との相関関係を明らかにするという本プロジェクトの研究目的は、予定どおり達成される見込みである。本研究では、中国、米国、台湾において資料調査をおこなうことを重要な課題として設定している。研究に着手した最初の年度で米国においてほぼ計画通りの資料調査を実施することができ、なおかつ、研究を進める上で非常に重要な判断材料となる貴重な資料を大量に入手できたことは大きな成果といえる。本研究の構成員は、とりあえず一つの課題はクリアできたという評価を共有している。また、中国、台湾での資料調査を実施するうえでの準備(調査対象となる史料館への連絡、調査をするうえで不可欠となる紹介状の執筆依頼など)もほぼ完了しており、3名のメンバーがそれぞれの役割分担に従って、平成24年度中に中国と台湾で調査を実施する予定である。つまり、残る2つの課題も本研究の3年計画の2年めでほぼ達成できる見込みである。既に収集した資料の分析も各メンバーによって着実に進められており、その分析結果に基づき論文執筆と学会報告をおこなう態勢が整いつつある。
HLA 発現ヒト免疫構築マウスを用いた HIV 感染モデルマウスの作製と免疫応答の解析

HIV感染に対する免疫応答の解析が困難である理由のひとつとして、小動物を用いたHIV感染実験系が確立されていないことが挙げられる。そこで我々はヒト免疫系をマウス生体内に構築したヒト免疫構築マウス(ヒト化マウス)を作製し、そのマウスを用いたin vivoのHIV感染実験系の確立を目指した。ヒト化マウスにHIV-1を感染後、血中からHIV-1を検出でき、さらにCD4T細胞の減少を確認できた。また、感染細胞の排除に重要な役割を担うエフェクターCD8T細胞の誘導を確認できた。以上の結果は、ヒト化マウスを用いたHIV-1感染に対する免疫応答の解析が可能となることを示した。本研究では、日本人において高頻度に認められるHLA-B*51:01遺伝子を組み込んだ高度免疫不全マウス「NOK/B51Tgマウス」を作製し、さらにそのマウスにヒト造血系幹細胞(CD34細胞)を移植して作製した「ヒト化NOK/B51Tgマウス」を用いて、HIV-1感染に対するヒトT細胞の免疫応答の解析を行い、HIV-1感染マウスモデルの構築を検討した。ヒト化NOK/B51Tgマウスでは、CD34細胞移植後10週目にヒトT細胞が検出された。ヒト化NOK/B51TgマウスにHIV-1を感染させると、感染2週間目のプラズマ中からHIV-1が検出され、少なくとも感染6週目まで検出された。HIV-1感染マウスのヒトCD4T細胞の割合は感染4週目から減少し、非感染マウスのそれと比べ有意な差が見られ、HIV-1の感染成立が確認できた。HIV-1感染に対するヒトCD8T細胞の免疫応答を調べるため、HIV-1感染後のヒト化NOK/B51Tgマウス末梢血中のヒトCD8T細胞の表現型解析を行った。感染4週目と6週目の末梢血中では、細胞傷害活性能を持つlate effector memory CD8T細胞とeffector CD8T細胞の割合が増加していることが明らかなった。また細胞傷害活性能の指標となるCXCR1とCX3CR1を発現しているヒトCD8T細胞の割合を調べた結果、HIV-1感染マウスでは非感染マウスに比べその割合が有意に増加していた。さらにHIV-1 Gagペプチドを用いたELISPOTアッセイでは、HIV-1感染マウスの脾細胞からGagペプチドに反応した細胞が検出された。以上の結果から、ヒト化NOK/B51TgマウスはHIV-1感染に対してHIV-1特異的免疫応答を誘導することが示唆された。今後更なる改良を加えることで、HIV-1感染マウスモデルとしての有用性が期待される。本研究では、日本人において高頻度に認められるHLA-B*51:01遺伝子を組み込んだHLA-B51トランスジェニックマウス(B51Tgマウス)と高度免疫不全マウスであるNOD/SCID/Jak3ノックアウトマウス(NOKマウス)を交配させ作製したNOK/B51Tgマウスを用いて、ヒト造血系幹細胞を移植したヒト免疫構築NOK/B51Tgマウス(ヒト化NOK/B51Tgマウス)を作成し、このヒト化マウスを用いたHIV-1感染モデルマウスの作製とHIV-1感染に対するヒト免疫応答の解析を行った。HIV-1感染ヒト化NOK/B51Tgマウスでは、感染2週間目のプラズマ中からHIV-1が検出され、少なくとも感染6週目まで検出された。ヒトCD4T細胞の割合は感染4週目から減少し、非感染ヒト化NOK/B51Tgマウスのそれと比べ有意な差が見られた。HIV-1感染に対するヒトCD8T細胞の免疫応答を調べるため、HIV-1感染後のヒト化マウス末梢血中のヒトCD8T細胞の表現型解析を行った。また、HIV-1感染ヒト化マウスにおいて細胞傷害活性能の指標となるCXCR1とCX3CR1を発現しているCD8T細胞の割合を調べた結果、非感染ヒト化マウスに比べその割合が有意に増加していた。さらに、HIV-1感染ヒト化マウスの脾細胞からHIV-1 Gag特異的CD8T細胞の誘導を示唆するデータが得られた。これらの結果から、我々のヒト化マウスではHIV-1特異的免疫応答を誘導することが可能であることが示唆された。HIV-1感染ヒト化NOK/B51Tgマウスでは、ヒトCD4T細胞の減少や細胞傷害活性を担うヒトeffector CD8T細胞の誘導が確認できた。これらの結果は、HIV-1感染患者の急性期感染症状を反映しており、我々のモデルはHIV-1感染モデルマウスとしての有用性が期待できる。

さらにHIV-1特異的CD8T細胞の誘導が示唆されたことは、次の段階であるヒト化マウスにおけるエイズワクチンを用いたHIV-1特異的T細胞が誘導できると期待される。平成23年度の実験はほぼ計画通りの達成度であるといえる。【HIV感染ヒト免疫構築マウスを用いたHIV-1慢性持続感染機序と逃避変異蓄積機序の解析】HIV-1感染ヒト化NOK/B51Tgマウスにおいて、経時的に末梢血を採取しHIV-1のin vivoにおける血漿中のウイルス量の解析をRT-PCR法を用いて定量する。さらに、HLA-B51拘束性HIV-1特異的細胞傷害性T細胞のウイルスに及ぼす影響を解析するため、経時的に採取したウイルスの遺伝子配列の解析を行い、免疫逃避変異が誘導されるかを解析する。【ヒト免疫構築マウスにおけるエイズワクチンを用いたHIV-1特異的T細胞の誘導】エイズワクチンを用いたHIV-1特異的T細胞の誘導を検討するため、HIVが産生する逆転写酵素等が含まれるPolタンパク質由来で我々が同定した強いHIV増殖抑制能および細胞傷害能が認められたHLA-B51拘束性のエピトープ2種類とHIVの構成タンパク質であるGag領域全体を組み込んだmodified vaccinia virus Ankara(MVA)ベクター(Roshorm Y., et al., Eur. J. Immunol., 2009)を、ヒト免疫構築NOK/B51Tgマウスに投与し、in vivoにおけるHLA-B51拘束性HIV特異的細胞傷害性T細胞の誘導について解析を行う。ヒト化NOK/B51Tgマウスにワクチンを投与し、経時的にマウスから末梢血、脾臓を採取する。得られた血液細胞はHLA-B*51分子と抗原ペプチドの複合体の四量体に蛍光色素が結合した試薬(テトラマー)を用いて、フローサイトメーターにより抗原特異的CD8T細胞について定量的な解析を行う。さらに脾細胞にペプチドによる刺激を加え、抗原特異的CD8T細胞における細胞増殖能およびIFN-γのサイトカイン産生能について、フローサイトメーターを用いて解析する。平成24年度は、ヒト化マウスの作成および解析用の消耗品と研究成果の報告にかかる費用に研究費を使用する予定である。消耗品についてはカタログを参考にし、国内における一般的な価格設定として算出を行っている。旅費については1年に1回の国内外の成果発表のための学会参加にかかる費用として算出している。
始生代海底熱水活動環境における微生物活動

初期生命体の進化のみならず、生命体の発生場も海底熱水域に求める考えが普及してきている。その場合、Archean時代の海底熱水系が生命起源の場であり、火山性ガスからの有機体合成反応や、そこから派生した始源的生物の活動や初期進化の痕跡が熱水性堆積物の中に残されている可能性がある。しかしこれらの問題は、地質学的には検証されてきていない。そこで本研究ではArchean時代の海底熱水に関連した環境で生息する微生物の痕跡を見出し、安定同位体分析を中心にそれらの生態系を明らかにし、熱水の無機成分との関連、グローバルな生態系に対する考察を行う事を主目的にして研究を行ってきた。始生代海底熱水に直接関係した地域として、カナダ・アビティビ・グリーンストーン帯およびオーストラリア・ピルバラ地域を設定した。地質調査を長瀬敏郎博士および東北大学の学生と行った。その他、Archean時代の岩石で海底熱水活動の兆候を示す試料や比較の為に現世の熱水性堆積物も広範に分析した。その結果、二酸化炭素に富んだ海底熱水系が引き起こす特異な熱水変質、それに伴う特異なリンの挙動、マグマ活動に伴って海洋に放出されるメタンを巧みに用いる微生物活動生態系、海底熱水活動によって有機物中にCuなどが濃集し酵素の前駆体を作るプロセスなどが明らかになった。特に世界最古の海底熱水鉱床から抽出された有機物(微生物死骸)からモリブデンや亜鉛の濃集を見いだし、熱水から放出される金属を巧みに用いる微生物活動の姿が具体化された。微生物共存系で熱水中での新規エネルギー獲得システムが現世熱水系試料から見つかり、Archean生態系へのヒントになった。これらの成果は既に幾つかの学術雑誌に掲載されている。国際学会での招待講演も行ってきており研究成果の重要性を物語る。更に、現世の熱水性微生物の研究成果も加え、初期地球環境における微生物進化と海底熱水(火山活動)に関する新しい仮説を提唱するに至った。本年度は、研究の目的を遂行するための、岩石の採集、分析および新規購入した備品の設置、試験運転に主だった研究時間を費やした。本研究でターゲットとしている始生代海底熱水系の試料としてカナダのオンタリオ州アビティビ緑色岩帯を対象にフィールドワークを行った。この緑色岩帯には、27億年前の海底熱水活動で形成された鉱床や海底熱水活動で変質した岩石が広く分布している。微生物の死骸と硫化鉱物が密接に空間的に関係した試料が採取されるなど、目的を達成する上で重要な試料が多く得られた。これら試料に関して既存設備を用いて有機無機元素分析、バルクレベルでの同位体分析を行った。海底熱水変質時における元素の挙動などが、明らかになった。特筆すべき成果は、地下海底熱水循環系において有機物が見い出され、そこで微生物活動が行われていた可能性を見い出したことである。これらの成果の一部は、既に論文として公表した(Kakegawa et al., 2002, Res. Geology)。備品申請したコンフローシステムは、購入に遅れが生じたものの、年度内に設置が完了し、試験運転を終了した。始生代(25億年よりも古い時代)の海底熱水活動で形成された岩石を採集し、その中で微生物活動の痕跡を見い出し、熱水活動と微生物活動の関連を明らかにするのが本研究の目的である。この研究計画において、昨年度、微少量で様々な安定同位体分析を可能にするフィネガンマット社製ConFlo IIIを導入した。昨年度は装置の設定と分析制度の確立に主眼を置いてきた。

今年度は、実際の天然試料からのデータ蓄積に主眼をおいた。その結果、200個近くの安定同位体データ(主に炭素と硫黄)を蓄積し、(1)熱水-微生物の間での炭素循環様式(特に熱水性メタンとメタンを用いる微生物との関係)、(2)硫黄循環様式(特に硫酸の役割)が明らかになった。これら同位体データに加え、卓上蛍光X線分析顕微鏡などを用いた無機元素分析の結果、(3)金属やリンなど無機元素が熱水から微生物に取り込まれる様子が具体化された。それに加え、研究分担者と行った電子顕微鏡を用いた岩石微細部分観察も行い、海洋地殻を循環する熱水が微生物活動に重要な元素を岩石から溶脱させ、微生物まで運搬する役目を果たしている姿が具体化されつつある。本研究を提案した段階での目標の70パーセントは、既に達成していると評価している。これらの成果は、既にResource Geologyなどの国際雑誌に論文として掲載されている。また、日本惑星科学会誌にも招待論文として成果が公表されており、本研究課題への関心の高さ、得られているデータの重要性を示すものである。生命起源に関する最も有力な説は、海底熱水で生命が誕生し初期進化を果たしたとする説である。多くの始生代海底硫化物鉱床は有機物(微生物死骸)に富んだ堆積物を伴い言い、コモンアンセスターに近い生物の死骸である可能性がある。熱水性硫化物と密接に関わった有機体の起源を明らかにし、生命体の初期進化様式における海底熱水の役割を検証するため、始生代海底熱水活動に関連した岩石の総合的研究をする事が本研究の目的であった。本研究で備品購入したコンフローシステム(EA-IR-MS法)は順調に機能し、既に多くの安定同位体データを出し、その一部は論文として出版した(地学雑誌)。カナダおよびオーストラリアから27億年と32億年前の海底熱水活動に関連した地質試料を分析し、それらの成果も国際会議で発表し、国内でも招待講演などで紹介し、さらにいくつかは速報として論文化した(Water Dynnamics Process)。ここで新たに作られた概念が、熱水活動の活発さと微生物活動のリンクであり、生命進化をコントロールしてきた要因に関して新説を唱えるに至った。また熱水-微生物反応系における金属元素の役割、還元ガス(微生物由来水素など)の役割なども具体化され、この関係を現在の熱水系で検証した。そこで始源的生命の共存関係が初めて示され、その成果がすでに国際雑誌に掲載された(Extremophile)。
閉塞性黄疸における胃粘膜バリアーの変化

1。黄疸時に血中に増加する胆汁酸とビリルビンのモルモット胃幽門部重炭酸イオン分泌に及ぼす影響を、in vitroの系で検討し次のような結果を得た。(1)0.1-5mMのタウロコール酸は基礎分泌には有為な変化を与えなかったが、ベサネコール(BCh)刺激による分泌促進反応を濃度依存性に抑制した。(2)0.1-1mMのコール酸も、BCh刺激による重炭酸イオン分泌反応を抑制した。(3)ビリルビン(0.24mM)を投与すると基礎分泌には影響を与えなかったが、BCh刺激による分泌反応を低下させた。以上より、胆汁酸やビリルビンは、閉塞性黄疸時に見られる血中濃度範囲内で胃幽門部重炭酸イオン分泌を抑制することが明らかになった。2.胃幽門腺粘液分泌に及ぼす胆汁酸とビリルビンの効果を検討するため、切り出した粘膜をビデオ強化型顕微鏡下で観察することにより、粘液分泌反応を検討する系の確立を目指し、次のような結果を得た。(1)カルバコール(CCh)は、濃度依存性に粘液分泌を亢進した。(2)プロスタグランジンE2は、それ自身は分泌刺激は弱かったが、CChの分泌刺激を増強した。(3)ヒスタミンは、プロスタグランジンE2存在下で著明な粘液分泌刺激効果を表した。以上の結果より、今後胆汁酸やビリルビンの幽門腺粘液分泌に対する影響を検討できる系が確立したといえる。1。
局所自動血流調節における新しいペプチド作動性神経の役割

骨格筋が強縮すると、その直後から骨格筋周囲の血流が局所的に増加する。この現象はreactive hyperaemiaとして知られているが、その詳細な機構については不明な点が多い。我々は本研究プロジェクトを通じて、ラットの後肢骨格筋を電気刺激して強縮を起こさせた際に生じる骨格筋の血流増加機構を探ってきた。その結果、以下のことが判明した。まず、骨格筋が恐縮するとエネルギー代謝が亢進してCO2が産生・遊離され、血管周囲のカプサイシン感受性の知覚神経を興奮させる。この知覚神経の電気的興奮は中枢神経系に伝えられると同時に、周辺の知覚神経にもおそらく軸策反射様のメカニズムで伝播して、血管周囲の知覚神経末梢端からCGRP(calcitonin gene-related peptide)を遊離する。遊離されたCGRPは血管平滑筋に直接作用して平滑筋を弛緩させ(血管拡張をもたらし)、ひいては骨格筋の局所的血流増加反応を引き起こすものと考えられる。この血流増加反応は、中枢神経系から切り離した摘出後肢標本でも認められることから、純粋に局所の反応である。CGRPは強力で持続性の血管拡張物質であり、カプサイシン感受性の知覚神経末梢端に含まれていて(脊髄などの中枢端にも大量に貯蔵されている)、知覚神経の興奮により遊離されることも確かである。このCGRP作動性(知覚)神経はほとんどの末梢血管周囲に高密度に分布していることから、CGRPが生理的に重要な循環系調節因子として作動しているであろうことは想像に難くない。しかし、その生理的意義は不明な点が多く、CGRPがどのような時に如何なる機構で知覚神経末梢端から遊離されるかについては、これまでほとんど知られていなかった。本研究は、その一端を初めて明らかにしたものである。CGRP作動性神経の生理的・病態生理的意義の解明は、局所の循環調節や循環器疾患とも密接に関連して重要なものと考えられるが、研究は緒に就いたばかりである。ラットをウレタンで麻酔した後、総腸骨動脈にセットしたパルス・ドップラー血流計により下肢の血流を測定した。坐骨神経を10Hzで1分間電気刺激すると、刺激終了後より数分間持続する血流増加反応が認められた。この際、血圧、心拍数の変化は認められないことから、末梢部の血管抵抗の低下が起こっていると考えられた。d-ツボクラリンで前処置することにより、神経刺激による下肢の強縮、血流増加反応は共に消失することから、この血流増加反応は骨格筋の強縮により惹起される二次的な反応であると判断した。骨格筋収縮後の静脈血を総腸骨静脈から採取し、血中のpH、Po_2、Pco_2変化を調べたところ、興味深いことに、今回用いた神経刺激の条件では、Pco_2のみが著しく上昇していた。そこで、NaHCO_3を下肢動脈内へ局所的に投与することによりPco_2の上昇を誘導したところ、骨格筋収縮による反応と類似の持続的な血流増加反応が観察された。また、このNaHCO_3による血流増加反応は、カプサイシン、CGRP(8-37)により有意に抑制された。さらに、NaHCO_3投与により静脈血中のCGRP濃度が有意に上昇することも確認した。以上の結果から、骨格筋収縮による血流増加反応には、Pco_2の上昇が密接に関係しており、このPco_2の上昇により、カプサイシン感受性知覚神経の末梢端からCGRPが遊離されることが示唆された。

本研究により、骨格筋の持続収縮により生じたCO_2がカプサイシン感受性知覚神経を興奮させ、その血管周囲末梢端からCGRPを遊離することにより血管を拡張させ血流増加をもたらすという、新しい神経性の局所血流調節機構の存在が明らかとなった。我々はこれまでに、骨格筋の持続収縮により生じたCO_2がカプサイシン感受性知覚神経を刺激し、その血管周囲抹消端からCGRPを遊離することにより血管を拡張させ血流増加をもたらすことを示唆する成績を得た。そこで本年度は、このCO_2によるカプサイシン感受性知覚神経の興奮が、抹消での局所的な反応なのか、あるいは、中枢神経系を介する反応なのかを明らかにすることを目的として、中枢から後肢部を切り離した摘出後肢灌流標本を用いた実験を行った。ラットをペントバルビタールで麻酔した後、後肢全体を股関節で胴体から切り離した。総腸骨動脈に挿入したカニューレから37°Cに保温したリンゲル溶液を一定速度で灌流し、カニューレに接続した圧トランスデューサーを用いて灌流圧を測定することにより抹消血管抵抗の変化を解析した。NaHCO_3を灌流リンゲル溶液中に加えると、骨格筋の持続収縮による反応と類似の持続的な血流増加反応が観察された。その際、灌流排液中のCO_2濃度は有意に上昇していた。以上の結果から骨格筋収縮によるPco_2の上昇を介した血流増加反応は、中枢神経系を介さず、抹消組織のみで引き起こされる局所的な反応であることが示唆された。本研究により、骨格筋の持続収縮により生じたCO_2がカプサイシン感受性知覚神経を興奮させ、その血管周囲抹消端からCGRPを遊離することにより血管を拡張させ血流増加をもたらすという、中枢神経系を介さない新しい神経性局所血流調節機構の存在が明らかとなった。我々はこれまでに、骨格筋の運動により産生されたCO_2が血管周囲に存在するカプサイシン感受性の知覚神経を刺激し、その末端からCGRPを遊離することにより血管を拡張し局所の血流を増加させることを示してきた。そして、この反応は中枢神経系を介さない、新しい神経性局所血流調節機構であることを証明してきた。本年度は、高血圧状態において、このような局所血流調節機構に変化があるか否かを探る目的で、自然発症高血圧ラット(SHR)を用い、まずCGRPの血圧降下作用と総頚動脈および大腿動脈の血流増加作用を対照のWistar-Kyotoラット(WKY)と比較検討した。ウレタン麻酔下に、CGRPを静注した際の血圧降下反応を指標にして用量・反応曲線を作成すると、12週齢のSHRでは同週齢のWKYに比べて有意に降圧反応の亢進が認められた。CGRPは総頚動脈と大腿動脈の何れにおいても血流増加を引き起こしたが、総頚動脈の血流増加の方が大きかった。この血流増加は末梢血管の拡張に基づく末梢抵抗の低下によるものであり、この末梢血管拡張反応はWKYに比べてSHRにおいて有意に亢進していた。以上の結果より、高血圧動物においてはCGRPによる降圧反応及び末梢血管拡張反応が亢進していることが示唆される。これには、高血圧時に血中のCGRPレベルが低下しており、血管平滑筋のCGRPに対する感受性が増大していることが関与しているものと考えられる。
植物の生態型分化機構研究：アキノキリンソウ群多様化の比較ゲノム解析

平成30年度までに解読を行なったアキノキリンソウのゲノム情報は、3種類のアセンブルが終了した。この3種類のデータに基づいて行った結果, CEGMAを用いて256種の保存的遺伝子の相同遺伝子を探索したところ,完全検出できたものが90%を占め,single-copy遺伝子を対象とするBUSCO解析では3つのリファレンスともに85%前後の検出率を記録した.次に,最もN50が長くなったゲノム配列をリファレンスとして, Illumina PE150で20xのリシークエンスを行なった。蛇紋岩型は、林床型と地質境界で隣接して分布している旭川市と勇払郡・坊主山の2ペア集団、高山型は大雪山系・赤岳の1,850m集団を解析した。蛇紋岩土壌と通常の土壌に生育する4集団のマッピング・変異検出を行った結果,蛇紋岩土壌と非蛇紋岩土壌の集団間では,Mg2+, K+, NO3-,重金属等のイオントランスポーター周辺の遺伝的分化度が高くなっていた.また,蛇紋岩土壌の集団は早期開花性を持つことから,開花遺伝子の分化にも着目して解析を行ったところ,FTとGA2がアウトライヤーとして抽出された.こうした,自生地の環境や表現型と関係する候補遺伝子は局所環境への適応に寄与している可能性が高いことが明らかになった.まこれに対し、高山型と林床型の比較では開花遺伝子の分化度は低く、蛇紋岩型から見つかった候補遺伝子が高山型の早咲き化に関与していない可能性がある。今後、高山型集団を増やして再解析することと,ドラフトゲノムの網羅度を高めることが課題である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。アキノキリンソウの各生態型からそれぞれ3株ずつ、合計21個体について、SSR遺伝子座16座からヘテロ接合度を算定した。その結果、ハチジョウアキノキリンソウが最もヘテロ接合度が低く、次いでアオヤギバナが低かった。この結果を踏まえ、ハチジョウアキノキリンソウ、アオヤギバナ、アキノキリンソウを各2個体、合計6個体をIllumina HiSeqを用いて全ゲノムのショートリード解析を行い、全ゲノム領域におけるヘテロ接合度を見た。その結果、ハチジョウアキノキリンソウの1個体が全ゲノム配列決定のリファレンスを作成するのに最も適していると判断された。なお、アキノキリンソウ群では全体的にヘテロ接合度が高いため、このリファレンス個体の決定が遅れ、28年度の研究期間を延長した。全ゲノム配列決定のため、同個体から高純度・低切断DNAを抽出し、PacBio RSIIを用いたロングリード解析を行った。また、エラー率の低減のため、並行してIllumina HiSeqによるショートリード解析を行った。その結果、全ゲノム配列の約65%のカバー率を達成した。さらに、遺伝子カバー率をみるため、多様な器官から抽出したRNAを用いてRNAseq解析を行った。その結果、遺伝子カバー率は80%を超えていた。形態的、生態的および生理的特徴とゲノム内の遺伝的変異との関連を解析するため、各生態型とアキノキリンソウを交配し、F1の作成を行った。得られたF1株はさらに相互交配を行い、形質の分離および遺伝子との相関を見るのに用いる。アキノキリンソウ群では全体的にヘテロ接合度が高いため、どの個体をリファレンス個体に用いるかの決定が遅れた。これは、、アキノキリンソウ群は他殖が中心であるためである。そのため28年度の研究期間を延長した。28年度に引き続き、アキノキリンソウの全ゲノム配列の決定のための配列取得を行った。28年度の同様に、PacBio RSIIによるロングリード解析とIllumina HiSeqによりショートリード解析の追加解析を行い、全体カバー率は75%、遺伝子カバー率は85%まで上昇し、これを第一次ドラフトゲノム配列として用いた。さらなるカバー率の上昇を目指し、chromiumシステムによる解析を行った。このデータは現在、アセンブル中であり、30年度に加える予定である。リファレンスゲノム配列が得られたため、リシークエンスにより、生態型特有のゲノム配列の抽出を行った。29年度は北海道産の蛇紋岩型アキノキリンソウと林床型アキノキリンソウ(通常タイプ)および屋久島産イッスンキンカについて、各10個体について、Illumina HiSeqによるショートリード解析の配列情報を得て、リファレンス配列を参照して配列の統合を行った。その上で、各生態型に特有の配列をゲノムワイドに探索し、20領域以上の候補領域の特定を行った。28年度に作成したF1を用いて、相互交配によりF2個体の作成を試みた。その結果、多数種子が得られたので播種した。3月末現在、まだ開花には至らないが、葉の形質を見る限り、両親生態型に近い個体から中間の形態の個体まで多様なF2個体が得られている。これらの個体は開花後に形質測定とリシークエンスによるゲノム配列決定を行い、ゲノム配列と形質の関連解析および自然選択圧の検出を行う。全ゲノムリファレンス配列のドラフトが得られたため、その後の解析は順調に進行した。

この3種類のデータに基づいて行った結果, CEGMAを用いて256種の保存的遺伝子の相同遺伝子を探索したところ,完全検出できたものが90%を占め,single-copy遺伝子を対象とするBUSCO解析では3つのリファレンスともに85%前後の検出率を記録した.次に,最もN50が長くなったゲノム配列をリファレンスとして, Illumina PE150で20xのリシークエンスを行なった。蛇紋岩型は、林床型と地質境界で隣接して分布している旭川市と勇払郡・坊主山の2ペア集団、高山型は大雪山系・赤岳の1,850m集団を解析した。蛇紋岩土壌と通常の土壌に生育する4集団のマッピング・変異検出を行った結果,蛇紋岩土壌と非蛇紋岩土壌の集団間では,Mg2+, K+, NO3-,重金属等のイオントランスポーター周辺の遺伝的分化度が高くなっていた.また,蛇紋岩土壌の集団は早期開花性を持つことから,開花遺伝子の分化にも着目して解析を行ったところ,FTとGA2がアウトライヤーとして抽出された.こうした,自生地の環境や表現型と関係する候補遺伝子は局所環境への適応に寄与している可能性が高いことが明らかになった.まこれに対し、高山型と林床型の比較では開花遺伝子の分化度は低く、蛇紋岩型から見つかった候補遺伝子が高山型の早咲き化に関与していない可能性がある。今後、高山型集団を増やして再解析することと,ドラフトゲノムの網羅度を高めることが課題である。多数の個体のヘテロ接合度をスクリーニングすることにより、全ゲノム配列を決定するリファレンス個体を決定した。研究期間を延長したので28年度の計画は遂行でき、29年度の研究計画は問題なく行えた。特に研究計画上の問題はないので、予定通り研究を進める。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
高精度AFMリソグラフィー手法の開発による単一分子の電気伝導測定

集束イオンビーム(FIB)により先鋭化した金探針の付いたAFMセンサー(水晶振動子)を作製して非接触AFMで用い、探針・試料間にパルス電圧を印可することによって、探針先端原子の電界蒸発を促し試料表面上への文字パターンや金ナノ細線の描画(AFMリソグラフィー)を行った。独自に開発したナノレベルで鋭利な金探針を距離制御性に優れ高分解能を有する非接触AFMで制御してAFMリソグラフィーに成功した点で意義深い。これまでのAFMリソグラフィーでは、曲率半径50100nm程度の金属被覆Si探針を用いており、描画線幅も50nm程度が限界だったのに対し、本研究で、先端半径12nm程度の金探針のついたAFMセンサーを非接触AFMで制御したことにより、線幅2030nm程度の金属細線の描画が可能となった。また、この高精度AFMリソグラフィー手法は、半導体デバイスの導線など様々な応用が考えられるが、中でもナノ構造の電気伝導測定に威力を発揮すると考えている。特に、ナノギャップ作製の技術的難解さやbreak-junktion法の再現性の低さなどから単一分子の電気伝導測定結果については異なる実験間での値がまちまちであり、加えて理論値と実験値が異なるのが現状である。本研究により高精度AFMリソグラフィー手法を確立し、試料表面上で分子・マクロ金属電極を結ぶことができれば、新たな電気伝導測定手法を確立することができ、分子エレクトロニクス発展への手がかりとなると考えている。これまでに代表的なナノ構造の一例としてカーボンナノチューブをSi表面上に分散させたり、シャドーマスク蒸着によリマクロな金属電極を作製したりして、電気伝導測定の準備を進めてきた。ナノギャップ作製の技術的難解さやbreak-junktiom法の再現性の低さなどから、ナノ構造の中でも特に単一分子の電気伝導測定結果については異なる実験間での値がまちまちであり、加えて理論値と実験値が異なるのが現状である。