hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
下肢の運動錯覚を活用した片麻痺歩行の疑似体験手法とその教育利用

平成23年度はこれらの成果を踏まえ,膝・足首関節周りの運動錯覚を効果的に発生させるための取り組みとして,新たな腱振動刺激装置の開発と,刺激制御や評価のために,擬似体験中の身体動作を計測するセンサシステムの開発に主に取り組んだ.腱振動装置は,膝関節と足首関節用のそれぞれをモジュール化して開発した.各モジュールは小型モータの回転をクランク機構によって振動数100[Hz],振幅3[mm]の振動へと変換し,振動刺激を与える.また,この振動刺激を適切な箇所に与えるため,歩行時の関節付近の形状の変化に対して,バネの伸縮によって刺激箇所を追従する機構を搭載した.この振動部は,下肢形状に合わせて造形したプレートに取り付けられ,プレートをベルトで固定することで下肢に装着した.このプレートは多様な被験者の体格差に対応するよう大きさを変えて複数枚製作した.さらにプレートが撓むことで歩行中にもずれにくいように設計し,振動部をスライドさせて位置調節ができるような構造の工夫も行った.続いて身体動作の計測に関しては,刺激付与のタイミングと歩行時の特徴を計測する目的で,腰部の加速度を測るセンサモジュールと,足裏の接地状況を測る圧力センサ内蔵のサンダルを開発し,振動装置には膝・足首の関節角度を測る角度センサを搭載した.そして,装置を使用して歩行する際にそれらのデータがリアルタイムで計測可能であることを確認した.また関節の運動に負荷を付与する方法に関しては,先に開発した,パウダーブレーキによって膝関節周りの運動に負荷を与える装置を踏まえ,足首関節への負荷を付与する装置に関する基礎的な設計も検討した.片麻痺歩行の体験デザインという本研究においては,1提案手法の検証,2実験システムの開発・評価,3利用方法の提案という3段階に課題を分けて,各年度にそれぞれの課題に取り組むことを基本方針として進めてきた.平成23年度には1の課題をほぼ完了しており,平成24年度においては2の課題に取り組んだ.多数の被験者実験を実施することを想定して,耐久性やユーザビリティを考慮した実験システムを構築したこと,20名程度の被験者実験も既に実施し,データ解析にも取り組んでいること,さらにはこれまでの成果について国際会議で発表したことから,おおむね計画通りに進んでいるといえる.交付申請書に記述した平成23年度の目標である,下肢を対象とした片麻痺歩行擬似体験ツールを構成する基礎技術の確立に関してはほぼ実現したため.平成24年度に構築した実験システムを用いて,振動刺激・負荷付与のタイミングや,振動刺激箇所の違いによる歩行への影響について引き続き調査を行い,片麻痺歩行の体験として効果的な,運動錯覚・反射運動・負荷付与を組み合わせる条件について実験的に調べる.それと並行して,この実験システムを活用した歩行体験に関するワークショップを考案・実施し,体験ツールとしての問題点を洗い出すとともにその改善に取り組み,既存装具と比較した教育的な効果や,運用の問題点を踏まえ,教育向けの体験プログラムの実施方法を検討する.平成23年度の研究成果を活用し,研究室外の場所における実習教育やワークショップの現場で使用するための,可搬性や耐久性,ユーザビリティを考慮した実験システムを構築する.そして効果的な知覚と運動のずれを生じさせるために,膝関節・足首関節への振動刺激・負荷付与の最適な制御条件を実験的に明らかにする.この時,各種センサデータの同時計測・解析を行うことで,擬似体験中の歩行動作の特徴を解析する.また,ワークショップにおける試験的な利用も行い,それらの知見と被験者実験の結果を合わせて,実習教育のプログラムを検討する.
組織修復を担う補償的細胞肥大のメカニズム

申請者はこれまでの研究で、分化した分裂後の成体上皮組織において一部の細胞が損傷等によって失われた場合、周辺細胞が細胞分裂ではなく核の多倍体化を伴う細胞肥大によって失われた場を埋め合わせる「補償的細胞肥大」という現象が組織修復能を担っていることを発見した。このメカニズムについてこれまでの予備実験結果から、局所的な組織容積の減少により残存細胞にかかる物理的伸張が細胞成長に関わる遺伝経路(IIS経路)の活性亢進を促し、核の多倍体化による細胞肥大が起こると考えられたため、このメカノトランスダクションに関わる分子を同定する目的で、ショウジョウバエの伸展濾胞細胞をモデルシステムとして、RNAiを用いた機能阻害による遺伝学的スクリーニングを行った。平成26年度は、予備実験の第一回目のスクリーニングにおいて蛍光顕微鏡下において効果が確認されていた10種類の遺伝子について、もう一度同実験を行い、さらにコンフォーカル顕微鏡によって得られた三次元像を用いて実際の核の大きさを正常細胞のものと比較することにより、予備実験の再現性に加え、より詳細な表現系解析を行った。これにより、この10種類の中からさらに核の多倍体化抑制に対してより再現性の高いRNAi系統2種類を同定することに成功した。これら2種類の遺伝子は、現在までに上皮組織での機能は報告されていないため、今後行う予定である上皮細胞における機能解析、および実際の補償的細胞肥大が起こる条件下における機能解析によって、組織修復のメカニズムに関する新しい知見が得られるものと期待される。26年度が最終年度であるため、記入しない。
日伊非加速器物理学共同研究[LVD+LMD]

本研究はLVD[Large Volume Detector]実験とLMD[Large Massive particles Detector]実験から成るのでそれぞれ別個に実績の概要を記載する。1)LVD実験:大容積液体シンチレータ・タンクによるニュートリノ,ミューオン検出器である。第一期建設計画のタワー1は平成4年に完成し,データをその年の6月から取り続けている。世界最大の液体シンチレータであり,超新星爆発時に発生するニュートリノを最も効率よく,且つ精確に捉えることができる。平成9年からタワー2もデータが取れるようになった。さらに,タワー3の建設が始りつつある。超新星爆発は1987年以来観測されていないが,グランサッソー山上の空気シャワー観測装置の連動による実験結果から一次宇宙線の組成を知る等の結果を得ている。またミューオンの精確な深さ強度の測定結果はニュートリノ振動等の理論に貴重な基礎資料を与えた。測定容積が増したので,ニュートリノ,ミューオン物理の解析が可能になった。2)LMD実験:超低速・超重粒子検出用熱ルミネッセンス・シートスタック[TLS]はTLシートと医療用X線フィルムを多数枚重ねたものからなる。通常の電離型放射線検出器では困難とされる超低速のGUTモノポールの検出ができる。モンブラン地下実験所での基礎測定を経て,バックグラウンドが十分ノーであるグランサッソー地下実験所にTLSを25平方メートル平成8年8月からLVDのタンクの上に敷き詰め,さらに5平方メートル平成9年9月より設置面積を増やしてた。平成9年9月には60平方メートル・年になるので超低速のGUTモノポールの検出が期待できる。特に低バックグラウンドで二重真空パックされているので、もし、モノポールが飛来してきた場合,確実に検証できる。平成10年3月1平方メートル分,地下ミューオン・核相互作用を調べるためTLSを現像した。その結果、TLSの内部真空度が保たれていたこと,核相互作用が調べられることが判った。1,LVD実験:大容積液体シンチレータ・タンクによる大容積ニュートリノ,ミューオン検出器である。LVDの第一期建設計画の「タワー1」は平成4年に完成し,トラック検出器の調整も済み,その年の6月からデータが取れるようになった。平行して,「タワー2,3」の建設が始まり,平成9年3月末には「タワー2」からのデータが取れるようになる予定である。平成6年以降,日本から現地(イタリア,グランサッソ-地下実験所)におもむき,装置の運転及び共同作業やデータ解析などを行ってきた。LVD装置の運転(シフト)業務は各国で分担している。日本グループとしては年間最低4週間従事することになっていたが,本年から6週間になったので,この業務を最優先した。2,LMD実験:LMD実験としての超低速・超重粒子検出用熱ルミネッセンス[TL]スタック[TLS]はTLシートと医療用X線フィルムを多数枚重ねたものからなり,通常の電離型放射線検出器では検出が困難とされる超重粒子の検出を目的としており,平成6年9月に40平方メートルのTLシートスタックをイタリア,モンブラン地下実験所に設置した。17ヵ月後の平成8年2月にXフィルムを現像し,解析した結果,超低速・超重粒子の可能性を持つ3例の候補イヴェントが見つかった。対応する箇所のTLシートの読み取りを行った結果,バックグラウンド[BG]が多いため候補イヴェントのTL発光が統計的優位性を示すものは1例のみだった。

それまでにBG測定をして低いことが判っているグランサッソ-地下実験所のLVDタンクの上に平成8年8月に新しいTLSを25平方メートル設置した。このTLSは二重真空パックにしたので成果が期待できる。本研究はLVD[Large Volume Detector]実験とLMD[Large Massive particles Detector]実験から成るのでそれぞれ別個に実績の概要を記載する。1)LVD実験:大容積液体シンチレータ・タンクによるニュートリノ,ミューオン検出器である。第一期建設計画のタワー1は平成4年に完成し,データをその年の6月から取り続けている。世界最大の液体シンチレータであり,超新星爆発時に発生するニュートリノを最も効率よく,且つ精確に捉えることができる。平成9年からタワー2もデータが取れるようになった。さらに,タワー3の建設が始まりつつある。超新星爆発は1987年以来観測されていないが,グランサッソ-山上の空気シャワー観測装置の連動による実験結果から一次宇宙線の組成を知る等の結果を得ている。またミューオンの精確な深さ強度の測定結果はニュートリノ振動等の理論に貴重な基礎資料を与えた。さらなるタワーの建設で測定容積が増すの。統計精度が上がるので,今後ニュートリノ及びミューオン物理の発展が期待される。2)LMD実験:超低速・超重粒子検出用熱ルミネッセンス・シートスタック[TLS]はTLシートと医療用X線フィルムを多数枚重ねたものからなる。通常の電離型放射線検出器では困難とされる超低速のGUTモノポールの検出検出の可能性を有している。プラスチックのCR-39が超低速のGUTモノポールに感度が悪いことが報告され,唯一期待できるものである。モンブラン地下実験所での基礎測定を経て,バックグラウンドが十分ノ-であるグランサッソ-地下実験所にTLSを25平方メートル平成8年8月からLVDのタンクの上に敷き詰め,さらに5平方メートル平成9年9月より設置面積を増やしている。平成10年9月には60平方メートル・年になるので超低速のGUTモノポールの検出が期待できる。特に低バックグラウンドで二重真空パックされているので,もし,モノポールが飛来してきた場合,確実に検証できる。
ステロイド生合成システムにおける膜酵素反応速度論

副腎皮質のミトコンドリアの内膜から調製された亜ミトコンドリア粒子(smp)にリポソーム膜を加えるとコレステロールの代謝活性が約1/4に低下することを発見した。この原因としてコレステロールあるいはコレステロールを代謝するP450(SCC)がリポソーム膜へ移動する可能性が考えられた。smpとリポソームを混合して一定時間静置後、卓上超遠心機を用いリポソームをsmpから分離した。分離されたリポソームにはコレステロールは検出されなかったが、P450(SCC)は移動してきていた。膜に深く組み込まれているP450(SCC)が他の膜系に動くという事実は膜タンパク質としては非常に珍しい。この実験結果はP450(SCC)は同じ膜中に存在するコレステロールしか代謝できないことも証明している。また、このP450(SCC)の移動速度に与えるリポソーム濃度とsmp濃度の影響から、P450(SCC)はまずsmp膜から解離し,水溶液中をリポソーム膜まで分散して行きリポソーム膜に組み込まれることが明らかになった。この過程ではP450(SCC)がsmp膜から解離する段階が律速になっていることも明らかになった。ステロイドホルモン生合成におけるステロイド中間体の膜間移動機構を調べるためミトコンドリアとミクロソームの混合液と、ステロイドホルモン代謝に関与するすべての膜酵素を含むリポソーム膜との反応を比較したところ、それらの反応にはほとんど差異が認められず、細胞内小器官膜内にはステロイド中間体移動に対する特別な機関を持っていないことが明かとなった。
ショウジョウバエにおける左右非対称性の形成機構に関する研究

動物のからだが左右非対称になる機構は進化的に多様であり、無脊椎動物においては、その機構はほとんど理解されていない。本研究では、ショウジョウバエを用いた遺伝学的な解析手法を用いて、左右非対称性形成の新規な機構を明らかにすることを目的として研究を行った。その結果、ショウジョウバエの消化管の左右非対称性の形成には、細胞シグナル(Wntシグナル)や、RhoGEFによるアクチン細胞骨格の制御が必要であることを明らかにした。また、消化管の左右非対称性形成をコンピュータ・シミュレーションするためのデータを取得することができた。からだの左右非対称性は、動物形態の基本的属性の一つである。我々は、ショウジョウバエの左右非対称性の研究を、世界に先駆けて行ってきた。構造が単純な胚の後腸に注目して研究を進めたところ、その左右非対称な形態は、後腸上皮の管が左ネジ方向に90度回転することで形成されることがわかった。この左ネジ回転が起る過程の上皮細胞の形態変化を観察、計測したところ、左ネジ回転の前に、上皮細胞の頂端面(消化管の内面側)の形態がキラルになることがわかった。研究代表者は、この新規な細胞の平面極性を、planar ceu chirahty(PCC)と命名した。PCCにおいて認められる上皮細胞形態のキラリティが、すでに知られている細胞極性と共通した機構を介して形成されている可能性がある。細胞の中心に対する中心体の位置の偏りは、細胞の極性化の指標となるが知られている。後腸上皮の頂端面の重心(中心)に対する中心体の位置を測定したところ、中心体は、右側に偏って分布していた。この結果は、PCC形成においても、すでに知られている細胞極性の構成要素が、何らかの機能をはたしていることを示唆している。我々のこれまでの研究から、後腸の左ネジ回転に必要な遺伝子が同定されている。MyosinID(MyoID)突然変異体では、後腸の捻転が反転(鏡像化)し、E-cadherin(DE-cad)の突然変異体では、これがランダム化する。これらの突然変異体のPCCを調べた結果、MyoID突然変異体では、PCCが鏡像化し、DE-cad突然変異体では、PCCが消失した。この結果は、PCCが、後腸の捻転の方向と対応していることを示唆している。これらの知見を総合すると、(1)PCCは、DE-cadに依存して形成される、(2)MyoIDは、DE-cadに依存して形成された鏡像のPCCを逆転させていることが考えられた。左右軸は、前後軸や背腹軸とともに、体軸の要素として、胚発生の基礎となっている。したがって、左右非対称性の形成機構は、個体発生や臓器形成を理解するための中心的な課題の一つである。1、左右非対称性の形成に必要な新規遺伝子の検索・同定胚消化管の左右非対称性形成に関与する遺伝子を同定するためには、各遺伝子の母性効果を除いた突然変異ホモ接合体において、消化管の左右性異常を示す突然変異を検索(マターナル・スクリーン)する必要があると考えた。申請書の研究計画にしたがい、平成22年度までに、突然変異原物質であるEMS(ethyl methanesulfonate)を用いて誘発した、第2染色体の左腕に存在する約400の突然変異について、マターナル・スクリーンを実施した。その結果、中腸の左右性がランダム化する3つの遺伝子の同定に成功した。2、左右非対称性形成の分子機構を解明する平成21年度までの研究によって、Wntシグナルが、中腸の左右非対称性形成に重要な機能をはたしていることを明らかにしている。平成22年度においては、リガンドであるWnt4によって、古典的Wntシグナルが中腸の内臓筋で活性化されることが、中腸の正常な左右非対称性の形成に必要であることを明らかにした。また、中腸の左右非対称性形成には、非筋型MyosinIIが、中腸の内臓筋で機能することが必要であることを明らかにした。外見が左右対称な動物においても、内臓器官には、遺伝的に決まった左右非対称性がみられることが多い。研究代表者は、ショウジョウバエを用いたこれまでの研究から、新規な左右非対称性形成機構の一端を明らかにしたが、その全体像は不明のままである。そこで、ショウジョウバエを用いた遺伝学的な解析手法を用いて、左右非対称性形成の遺伝的経路を理解することを目的とする研究を行い、次のような成果を得た。(1)左右非対称性形成で働く新規遺伝子の同定とその機能解析平成22年度までに同定した、胚中腸の左右非対称性に異常を示す突然変異の責任遺伝子の同定を、malerecombination法を用いて行った。

その結果、中腸の左右非対称性が形成されない(左右対称化する)突然変異の責任遺伝子がfizzyであることを明らかにした。Fizzyは、Cdc20のオーソログであり、WD40リピートをもつ機能不明のタンパク質である。(2)母性効果スクリーニングによる左右非対称形成に必須な遺伝子の検索第二染色体の200の突然変異について、母性効果を除いたホモ接合体における胚消化管の左右非対称性の異常を指標としでスクリーニングを実施した。その結果を整理したところ、後腸の左右非対称性に異常を示す突然変異体、中腸の左右非対称性に異常を示す突然変異体を1系統ずつ同定することができた。(3)左右非対称性形成の遺伝的経路のフレームワークを解明する中腸の左右非対称性の形成におけるWntシグナルの機能を解析した。その結果、中腸の環状筋における古典的Wntシグナルの活性化が、中腸の左右非対称性形成に必要であることがわかった。
環境刺激による細胞リプログラミング制御

植物細胞は一般的に動物細胞に比べて分化全能性を発揮しやすく、一旦分化した細胞が傷害ストレスなどの過酷な環境刺激に応答して脱分化、再分化するが、その分子機構はほとんど解明されていない。本研究では、環境ストレスがクロマチン状態によって規定される細胞記憶をリセットすることにより細胞リプログラミングを誘導するという仮説を検証し、その分子機構を解明する。具体的には植物のエピジェネティックな細胞記憶の分子実体の解明、細胞リプログラミングを誘導する環境シグナル伝達機構の解明、環境ストレスによる細胞リプログラミングの分子機構の解明を目指している。先行研究から、シロイヌナズナでは傷害及び高温ストレスが細胞リプログラミングを誘導することを見いだしており、今年度はこれらの環境シグナルがリプログラミング遺伝子の発現を誘導する転写制御ネットワークの解析を進めた。特に傷害を与えた直後から24時間までの遺伝子発現変化をRNAseqによって解析し、WIND1を初めとする多くのリプログラミング遺伝子の発現が傷害後1時間以内に誘導されることを見いだした。また遺伝学的な解析から、WIND1と同じくAP2/ERF転写因子であるERF115及びPLT3, 5, 7が傷害誘導性のカルス形成に関与することを明らかにした。さらに酵母ワンハイブリッド法を用いてストレス応答や植物ホルモン応答、細胞リプログラミングへの関与が予想される転写因子と下流候補遺伝子のプロモーター領域の結合関係を調べ、1162個の結合を検出した。これらのデータをもとに植物の細胞リプログラミングを司る転写制御ネットワークを構築した。傷害誘導性の転写制御ネットワークについて初の網羅的な解析を行い、今後の研究の基盤をつくることができた。なかでもこの転写ネットワークのなかで細胞リプログラミング誘導の鍵となる複数の転写因子を同定することができ、研究は順調に進んでいる。傷害ストレス付与後に起きるリプログラミング遺伝子の発現誘導とヒストン修飾の変化の作用関係、またその分子機構を明らかにする。ストレス条件下におけるリプログラミング遺伝子近傍のクロマチン修飾の変化を解析し、ヒストンの脱メチル化やアセチル化の変化と遺伝子発現制御との関係を解析する。本研究では、環境ストレスがクロマチン状態によって規定される細胞記憶をリセットすることにより細胞リプログラミングを誘導するという仮説を検証し、その分子機構を解明することを目指している。今年度の研究では、シロイヌナズナの変異体を用いた解析から、ヒストン修飾を触媒するPOLYCOMBREPRESSIVE COMPLEX2 (PRC2)が植物細胞の分化状態を積極的に記憶させること、またこの機能が欠損すると根毛細胞のような最終分化した細胞がリプログラミングされ、胚発生を再開することを発見した(Nature Plants 2015)。さらにPRC2変異体では、胚発生の制御因子LEC2やFUS3、幹細胞形成制御因子WOX5、脱分化誘導因子WIND1やそのホモログWIND2、WIND3の発現が著しく上昇すること、また野生型においてはこれらの遺伝子の多くが直接PRC2によるヒストンH3の27番目のリジン残基のトリメチル化(H3K27me3)を受けることを見いだした。このうちLEC2とWIND3に関してはさらに野生型で過剰発現するだけで根毛細胞が多細胞化するというPRC2変異体の表現型を再現できること、逆にPRC2変異体におけるLEC2の過剰発現を抑えることで多細胞化を一部抑圧することができることから、細胞の分化記憶の維持にはLEC2などのリプログラミング遺伝子の発現を抑制することが重要であることを示した。今年度は細胞リプログラミングに関する論文と総説を発表することができ、研究は順調に進んでいる。またクロマチン変化を解析するための共同研究も順調に進んでいる。先行研究から、シロイヌナズナでは傷害及び高温ストレスがWIND1-4を初めとするリプログラミング遺伝子の発現を誘導することを見いだしている。今年度はこれらの環境ストレスによって発生する初期シグナル分子の探索を進め、これらのシグナルがリプログラミング遺伝子の発現を誘導する転写制御ネットワークの解析を進めた。今年度は特に高温ストレス応答のシグナル伝達に関与することが知られる転写因子群が細胞リプログラミングを制御することを見いだし、その分子機構の解明を進めた。またWIND1遺伝子の発現が幹細胞維持に関与する転写因子ERF115とその相互作用因子PAT1によって制御されること、またWIND1が茎葉再生を促進するENHANCER OF SHOOT REGENERATION1 (ESR1)遺伝子の発現を直接誘導することで傷口からの再生を促進することを明らかにした。これまでに細胞リプログラミングを誘導する環境シグナル伝達機構の一部の解明に成功し、今年度はWIND1-ESR1経路に関する論文をPlant Cell誌に発表することができた。またヒストン修飾を介した植物のエピジェネティックな細胞記憶の分子実体の解明にも着手し、ChIP-seq, RNA-seqの実験系を順調に立ち上げることができた。

植物細胞は一般的に動物細胞に比べて分化全能性を発揮しやすく、一旦分化した細胞が傷害ストレスなどの過酷な環境刺激に応答して脱分化、再分化するが、その分子機構はほとんど解明されていない。本研究では、環境ストレスがクロマチン状態によって規定される細胞記憶をリセットすることにより細胞リプログラミングを誘導するという仮説を検証し、その分子機構を解明する。具体的には植物のエピジェネティックな細胞記憶の分子実体の解明、細胞リプログラミングを誘導する環境シグナル伝達機構の解明、環境ストレスによる細胞リプログラミングの分子機構の解明を目指している。先行研究から、シロイヌナズナでは傷害及び高温ストレスが細胞リプログラミングを誘導することを見いだしており、今年度はこれらの環境シグナルがリプログラミング遺伝子の発現を誘導する転写制御ネットワークの解析を進めた。特に傷害を与えた直後から24時間までの遺伝子発現変化をRNAseqによって解析し、WIND1を初めとする多くのリプログラミング遺伝子の発現が傷害後1時間以内に誘導されることを見いだした。また遺伝学的な解析から、WIND1と同じくAP2/ERF転写因子であるERF115及びPLT3, 5, 7が傷害誘導性のカルス形成に関与することを明らかにした。さらに酵母ワンハイブリッド法を用いてストレス応答や植物ホルモン応答、細胞リプログラミングへの関与が予想される転写因子と下流候補遺伝子のプロモーター領域の結合関係を調べ、1162個の結合を検出した。これらのデータをもとに植物の細胞リプログラミングを司る転写制御ネットワークを構築した。傷害誘導性の転写制御ネットワークについて初の網羅的な解析を行い、今後の研究の基盤をつくることができた。なかでもこの転写ネットワークのなかで細胞リプログラミング誘導の鍵となる複数の転写因子を同定することができ、研究は順調に進んでいる。害ストレス付加後にリプログラミング遺伝子の近傍においてどういったクロマチン変化がおき、これらの遺伝子発現を誘導するのかを解明する。ヒメツリガネゴケの系では、特にヒストンバリアントH3.3とヒストンシャペロンHIRAが細胞リプログラミングの過程でどのように細胞記憶のリセットに機能しているのかを明らかにする。これまでに同定したリプログラミング遺伝子の多くは非ストレス条件下ではPRC2によるH3K27me3を受け発現抑制されるが、ストレス条件下で発現が誘導される。今後はこうしたエピジェネティックな発現抑制が解除される仕組みの解明を進める。ストレス条件下におけるリプログラミング遺伝子近傍のクロマチン修飾の変化を解析し、ヒストンの脱メチル化やアセチル化の変化と遺伝子発現制御との関係を解析する。傷害ストレス付与後に起きるリプログラミング遺伝子の発現誘導とヒストン修飾の変化の作用関係、またその分子機構を明らかにする。
日本近・現代における家族変動

今年度は2つの研究を行った。1つめとして、新聞の投書欄に寄せられた投書をもとに、現在人々がもつ家族イメージを分析した。すでに他の研究によって、家族とは人々がをれぞれもっている主観的な像であり、家族/非家族の区別は人々がそれぞれ主観的に行っているということが明らかにされている。それでは人々はどのような基準で家族/非家族の区別を行っているのであろうか。それを明らかにするためにまず、人々が家族に対してもつイメージを探った。それによると、家族内においては「無償性」「非業績主義」「比較不能性-交換不能性」という原理が貫通している(すべきである)と考えられていることがわかった。また、このような原理がはたらくゆえに、家族は「自己の存在の根拠」を無条件に与えてくれる場であり、「安らぎ」の場であると考えられていることもわかった。人々は、家族には上記のような特徴があり、非家族にはそのような特徴はないという、2分法的な単純化されて世界観を繰り返し述べている。そして人々は、上記のような原理を将来に向けて維持できるような人物を家族に区分し、維持できないような人物は「もう家族とは思わない」という形で非家族に区分する傾向があることがわかった。今後は、家族イメージの年齢差やジェンダー差、また時代差について調べていきたい。2つめとして、筆者が既に収集していた数量データを分析して、中年期の女性のもつ家族イメージが、学歴、就労形態、家族形態などの基本属性によってどのように異なるかについて分析した。学歴が高いほうが、フルタイムの仕事をもっているほうが、子供や夫がいない人の方が、伝統的な家族意識から解放されている度合いが大きいことがわかった。ただし、家族イメージを構成する個々の項目によって、解放度には差がある。そこで今後はどの項目では差が大きく、どの項目では小さいのかなど、さらに詳細な分析を進めたい。
近赤外光の時間分解計測を基盤とした多面的抗酸化活性評価技術の構築

本課題は、紫外・可視部の光吸収や白濁による散乱の妨害を受けにくい近赤外光の時間分解計測の特徴を活用して、食品・飲料,野菜・果実等の多成分含有サンプルの一重項酸素やHO・などの活性酸素に対する抗酸化活性について有効成分の溶解性・反応環境依存性を含めた多面的な視点から評価できる測定系のセットと一貫性のあるシンプルな測定シークエンスを構築し、得られる多面的抗酸化機能データを総合表示する汎用性の高い手法を作ることを目的とする。その方法として、(1)活性酸素との反応により近赤外に吸収・発光を示す抗酸化評価のプローブ化合物の新規開発,(2)食品・飲料などの多成分含有系サンプルの抗酸化活性を多面的に評価する測定系セットの開発,(3)野菜・果物・食品・飲料試料に構築した手法を適用して抗酸化表示の実用性・有効性を提示,というステップをとる。2018年度の研究実績は次の通りである。(1)のプローブ開発において、研究代表者のグループで開発してきた520 nm付近の吸収帯を持つ活性酸素検出プローブ分子を改良し、吸収・発光を100 - 200 nm長波化した新プローブを設計し、合成に着手した。(2)の測定系セットの開発において、評価条件(溶媒等)の検討を開始した。食品系試料の特性を考慮して溶媒の極性・水含有率を調整し、抗酸化成分の溶解性・溶存環境依存性が顕わになる複数の評価条件について、モデル飲料サンプルを基準に近赤外発光寿命計測による一重項酸素消去活性評価を検討した。水と有機溶媒の混合比を変化させ最適条件の候補を複数抽出することができた。また、時間分解測定時のフリーラジカル発生に使用する紫外光パルスレーザー(266 nm DPSS YAGレーザー)を本課題の経費で購入し、計測の準備を行った。当初計画で2018年度に実施を予定していた、(1)近赤外吸収・発光を持つラジカル検出プローブの分子設計と合成の準備,(2)多成分含有系サンプルの抗酸化活性を多面的に評価する測定系セット開発における計測条件の探索,を、ほぼ計画通り実施することができ、2019年度に計画の研究を順調に進められる状況にある。2019年度は、「(1)設計した近赤外吸収・発光を持つラジカル検出プローブの合成」を中心に研究を推進する。化学合成において多少の障壁が想定されており、最適な合成ルートを探索しながらの開発となる。また、「(2)多面的評価のための測定系セット開発」も引き続き標準評価サンプルを変えながら研究を進める計画である。【理由】消耗品(器具,試薬等)の経費として使用する計画の額から、研究の進捗状況等の原因による想定範囲内の差額が生じた。【使用計画】引き続き化学合成・測定に必要とされる溶媒・試薬,ガラス器具等の消耗品の経費として使用する。
らせん高分子を不斉場として用いる高分子不斉触媒の創製

一方向巻きらせんポリマー、天然高分子、不斉分子を担持した高分子、等の多くの高分子化合物が光学分割剤として利用されているが、不斉触媒への応用は限られている。最近いくつかの合成ポリマーの一方向巻きらせんが単離されており、優れた光学分割能を示すことから、らせんポリマーが不斉反応の場としても重要な役割を果たすことが考えられる。そこで本研究では、ポリペプチドの中でらせん構造をとりやすいと考えられるα-アミノイソ酪酸の重合を試みた。α-アミノイソ酪酸のN-カルボン酸無水物を種々の光学活性アミンを開始剤として重合した結果、高い旋光度を有するポリマーを合成できた。α-アミノイソ酪酸自身には不斉炭素が無く、旋光性は主にらせん構造によるものと考えられる。われわれはすでに高分子担持型の光学活性ポリアミノ酸がカルコン類の不斉エポキシ化反応で100%eeに近い選択性を示すことを見いだしているが、ポリ(α-アミノイソ酪酸)では10%ee以下であった。次に、高分子によって構築される不斉場を利用した不斉反応において影響を与える高分子効果を評価するためには高分子担持型の不斉触媒が有効であると考えられるので、その合成を検討した。高分子担体としては架橋ポリスチレンを用いて、光学活性アミノアルコール、ジオール、N-スルホニルアミノ酸の担持法を種々検討した。これらを担持したポリマーは、ボランまたはハロゲノボランとの反応により、高分子担持ルイス酸触媒として不斉Diels-Alder反応に用いることができた。架橋度、触媒の担持率、が不斉選択性に大きく影響を与えることがわかった。また条件によっては低分子触媒を上回る選択性を与えることも明かにした。架橋高分子触媒であることから、触媒の回収、再利用が容易であり、反応のフローシステム化を現在検討中である。
MRI対応型高精度位置決め手術支援システム

研究はロボットのアクチュエータである超音波モータ(USM : UltraSonic Motor)の制御とMRIロボットの構成の2つに分けて行った。ロボットのアクチュエータは、非磁性体でかつ電磁ノイズを発生しないものを用いなければならない。ここではUSMを用いた。本研究ではこのモータを制御するにあたり、回路および制御手法を見直した。制御回路は複雑になる位差制御回路をCPLDで構成することにより、信頼性の向上と小型化を同時に実現できた。また、制御手法にニューラルネットワークを用いた知的制御手法により、±0.0036(deg.)によって制御することが可能になった。これによりアームをモータによるダイレクト駆動で動かしても、高精度な位置決めが実現できる。手術ロボットの構成はMRIの形式がオープン型またはクローズド型によって異なってくる。ここでは、現在最も普及し、画像の解像度の高いクローズド型MRIを対象とした。ロボットはガントリ内の直径(30cm程度)に収まり、かつ画像に影響を与えないような構造にする必要がある。このため、単に工場にあるようなアーム型ロボットを小型するだけでは対応できない。ロボットの動作は、各アームをリンク棒を介して動かす手法を用いた。この手法により、USMまたはこのモータに電源を供給しているケーブルからのノイズによる画像への影響をきわめて少なくすることができた。実機のロボットにおいてアクチュエータはガントリ内から、75cm以上離れた場所に設置した。使用する材料はアクリル、強化プラスッチクス、セラッミクスなどの非金属系の材料を主に用いた。試作機は3軸のアームと全体を回転できる1軸のから構成される。このような構造にすることにより、より広範囲の位置からアームを設定できるようになった。本研究においては超音波モータの位置決め精度の向上を図るため、まず従来の制御回路の改良を行った。論理回路のすべてをCPLD (Complex Programmable Logic Device)に置き換えることにより、位相差制御の分解能の向上(従来の2倍)、信頼性の向上および小型化を実現させた。この制御回路を超音波モータに用いることにより、PID制御器においては±0.0045(deg.)、PID-NN制御器(ニューラルネットワーク併用型PID制御器)では±0.0011(deg.)の精度で位置決めを行うことができた。この値は従来の精度を3.2倍上回る値である。この結果より手術ロボット用のアクチュエータとして、超音波モータは十分な制御性能を得られることが確認された。次に手術支援ロボットの試作を行った。6軸による構成とし、各軸はx、y、z軸方向のスライダ、ロボットアームの右左回転、上下回転および伸縮である。構成材料は主にアルミを用いて構成を行った。この試作のロボットを検査用MRIに持ち込んで、画像に与える影響について調べた。画像は頭部を想定してヘッドコイルからの画像として、中心部にファントムをおいた。画像を取得している間は、超音波モータを一軸のみ往復運動をさせた。その結果、ヘッドコイルから約30センチ以上離すと画像への影響はほとんどないことが確認された。今後は更にロボットを近接させても画像に影響を与えないように、構成部品のすべてを非金属製のアクリルやセラミックに材料を変更する予定である。また、超音波モータに直結されているエンコーダにおいては、構成部品として部分的にステンレスが使用されている。この部分も光ファイバーを用いるなどして、ロボット全体を非金属化にする予定である。16年度においては、超音波モータの位置決め精度の向上を図るため、制御回路の改良を行った。超音波モータは、低速時のトルクが大きいためギアを介さずにダイレクトにアームを制御することが可能である。

MRI内の空間は限られており、この空間を有効利用する点でもダイレクト駆動方式による制御性能の向上は重要な点であると考えられる。ここでは制御回路をCPLD(Complex Programmable Logic Device)で構成することにより、位相差制御の分解能の向上、信頼性の向上および小型化を実現させた。この制御回路を用いることにより、PID制御器においては±0.0045(deg.)、PID-NN制御器(ニューラルネットワーク併用型PID制御器)では±0.0011(deg.)の高い精度で位置決めを行うことができた。この結果より手術ロボット用のアクチュエータとして、超音波モータは十分な制御性能を得られることが確認された。17年度においては、手術支援ロボットの試作を行った。本研究では、手術ロボットの対象をクローズド型MRIとした。全体として5軸による構成とした。各軸は、3軸をモータからのリンク方式によるアーム角度調整、1軸を回転方向、1軸をMRIのトンネル方向への移動とした。これによって手術アームは頭部(下部を省く)に対して、任意の角度からアームの位置と方向を設定することができる。また、アームをリンク方式によって駆動することにより、(1)超音波モータからの画像への影響の低減。(2)手術先端部の機構部品め低減。の2つを実現することができた。構成部品は、画像への影響をより少なくするために、非金属製のアクリルやセラミックによる構成とした。アームの位置を確認するエンコーダは、非金属で試作し、データを光ファイバーによって伝送する方式を検証中である。
元禄文学と教訓

本研究は、元禄文学における教訓の役割を、儒者の伝記研究と、孝子説話・名女説話を中心とする教訓本の書誌調査という二つの面から究明してゆこうとするものである。3年目の本年度は、とくに元禄文学におけるさまざまなジャンルの文芸に関する研究、という面において成果を得た。【周辺ジャンル研究】雑誌論文「藩士文芸としての紀行文-加賀藩士有沢永貞と貝原益軒」は、元禄文学における紀行文を、従来の文芸的な鑑賞ではなく、藩士に必要な覚え書きという面から考えようとしたものである。文学作品の達成点ではなく、文学作品へのスタンスを考えるという問題意識と、従来手薄であった加賀藩士文芸についての調査との両面から成ったものである。また雑誌論文「神田・本郷-火災の街の文学」は、『むさしあぶみ』『天和笑委集』といった、火災をめぐる近世前期の記録文学が、本郷という同じ土地を舞台としている事に着目。火災を巡る説話が再生産される姿を跡づけたものである。【孝子説話研究】雑誌論文「善人伝のゆくえ-『明治孝節録』と新聞」は、明治初期に宮内省によって編まれた大規模な善人伝に関する研究である。該書は宮内省によって編まれたものでありながら、内閣の褒賞制度の文書を利用せず、新聞記事を利用しているなど、明治期の善人伝をめぐるメディアの諸相を明らかにした。私の専門は近世前期の孝子説話集であるが、本稿でその手法を明治期の説話集にも適用し、孝子説話研究が江戸明治を通じて有効なものである事を示そうとした。【伝記研究】伝記研究の面では、藤井懶斎に関する調査を継続中である。口頭発表「藤井懶斎の家系」(九州大学国語国文学会平成15年6月)では、新出の藤井懶斎の系図を報告した。これによって、従来まったく不明であった彼の家系と出生について明らかにした。本年度の調査では、所期の目標通り、後者の面で大きな成果を得ることができた。雑誌論文「藤井懶斎と筑後の孝子-『仮名本朝孝子伝』「追加」部所収説話をめぐって-」は、孝子説話集についての論考である。藤井懶斎は、日本で初めての邦人を扱った体系的な孝子説話集『本朝孝子伝』(貞享元<1684>年刊)を漢文表記で刊行し、その二年後に『仮名本朝孝子伝』と題して、自ら平仮名に改めたものを刊行し直した。本稿では『本朝孝子伝』以後、『仮名本朝孝子伝』以前に懶斎が記した文章を紹介。『本朝孝子伝』刊行以後、さまざまな反響が寄せられて、その意見を『仮名本朝孝子伝』に反映させている様子を具体的に示した。雑誌論文「元禄期女性伝記の作者-『松菊苑』をめぐって」は、女性教訓書『松菊苑』の書誌調査から、従来女性と思われて来た該書の作者が、じつは京都の儒者・中村〓斎であった事を考証した。元禄時代における儒者と教訓書との関わりという、一貫した間題意識から成った論文である。雑誌論文「藩士文芸としての紀行文-加賀藩士・有沢永貞と貝原益軒」は、元禄文学における紀行文を、従来の文芸的な鑑賞ではなく、藩士に必要な覚え書きという面から考えようとしたものである。いっぽう伝記研究の面では、本年度は論文を発表しなかった。しかし進行中の伝記研究としては、研究費による香川県高松市における藤井懶斎に関する調査が収穫を得た。来年度中の発表を予定している。

私の専門は近世前期の孝子説話集であるが、本稿でその手法を明治期の説話集にも適用し、孝子説話研究が江戸明治を通じて有効なものである事を示そうとした。【伝記研究】伝記研究の面では、藤井懶斎に関する調査を継続中である。口頭発表「藤井懶斎の家系」(九州大学国語国文学会平成15年6月)では、新出の藤井懶斎の系図を報告した。これによって、従来まったく不明であった彼の家系と出生について明らかにした。
新規ペプチド、グレリンとニューロメジンU、の新たな生理作用の検索と臨床応用

ニューロメジンUのノックアウトマウスは肥満を呈することを先に報告したが、今回よく観察すると、触れることに対して鈍い反応を示し、また動きも幾分鈍いように感じられた。そこで、反射機能を調べるため、52度と58度のホットプレートテストを行うと、ノックアウトマウスでは熱反射機能が低下していることが判明した。次にホルマリンテストによる痛み反射を調べると、第2相(10分後からの反応)の慢性的痛みに対する反応が低下していることが判明した。逆に、ワイルドマウスで、ニューロメジンUを脳室内に投与すると、熱反射も痛み反射も通常より亢進することが示された。最近ニューロメジンUが脊髄の電気活動の伝播を早めることが報告されており、このことと今回の結果は関係しているように思われた。そこで、ニューロメジンU投与後の神経活性化の指標としてFos蛋白質の発現部位を調べてみると、弧束核や脊髄後核(ラミナエII)などに発現が認められた。また、ホルマリンによる痛みを与えた後、脊髄のニューロメジンUmRNAの増加が認められた。以上の結果は、ニューロメジンUが熱や痛みの反射機能に関わっていること、そめ部位は恐らく脊髄の可能性を強く示唆している。反射機能が低下していることから、環境への適応機能も低下している可能性が推測される。そこで、室温を23度から37度に変化させた時の心拍数や血圧の変化を調べたところ、ニューロメジンUのノックアウトマウスでは血圧変化が鈍いことが判明した。またエーテルストレスへの副腎皮質ホルモンの上昇や、新たな明暗条件へのリズムの再同調速度などもノックアウトマウスでは劣っていることが判明した。以上の結果、ニューロメジンUは反射や環境への適応の調節に重要なホルモンであると推測された。1.グレリンのミルク合成促進作用:グレリンの能動免疫ラットから分娩された胎児は、通常の胎児よりも体重が低い傾向にあった。泌乳期中では、この差はさらに広がり、能動免疫ラットに肥育された幼児はミルク分泌量の低下に伴う体重の増加の割合が有意に低かった。リアルタイムPCRによる乳腺のカゼインmRNAの量もグレリン能動免疫ラットで減少した。以上の結果、妊娠中や泌乳期中の母体のグレリンを中和すると胎児や幼児の成長が損なわれることが判明した。2.ウズラと哺乳類の摂食機構の相違:ウズラへグレリンを末梢投与すると、有意に摂食量が促進された。しかし、1nmol以上のグレリン投与では逆に摂食は抑制された。この濃度依存性の相反する理由として、1nmol以上では中枢へ作用し、一方それ以下では中枢へ作用する濃度に達しないのではと推測した。そこで、0.2nmolを側脳室に投与した結果、摂食の抑制が認められた。このことから、末梢でのグレリンは摂食を促進し、中枢での作用は逆に抑制すると考えられた。この結果は哺乳類と異なる。次に、哺乳類の摂食抑制物質NMUを同様に側脳室へ投与した結果、逆に摂食の亢進が認められた、このことから鳥類においては摂食調節機構が哺乳類とはかなり異なることが推測された。3.成長におけるグレリンの役割:胎児組織のグレリン受容体GHS-R mRNAを調べた結果、妊娠20日の胎児では皮膚、骨、筋、消化管、心臓、肺、脳にGHS-R mRNAの発現を認めた。妊娠14,15日では、脊髄において最も顕著で、脳、消化管が次に多く発現した。皮膚、骨、心臓では弱い発現であった。一方、肺では認められなかった。これらの結果は免疫染色の結果とほぼ一致した。妊娠母親の皮下に浸透圧ミニポンプを埋没し、慢性的にグレリンを投与した結果、グレリン投与群でのみ有意な胎児重量の増加が認められた。また、母親にグレリンを投与し、胎児への移行の有無を検討した結果、極めて容易に胎盤を通過する事、また胎児血中では半減期が長い事が判明した。

そこで、室温を23度から37度に変化させた時の心拍数や血圧の変化を調べたところ、ニューロメジンUのノックアウトマウスでは血圧変化が鈍いことが判明した。またエーテルストレスへの副腎皮質ホルモンの上昇や、新たな明暗条件へのリズムの再同調速度などもノックアウトマウスでは劣っていることが判明した。以上の結果、ニューロメジンUは反射や環境への適応の調節に重要なホルモンであると推測された。
大腸がん微小転移巣に対する個別化増感放射免疫療法の開発

腹膜播種は、現在有効な治療法がなく、新規治療法の開発が求められている。現在、その治療においては、手術により病巣を切り取る外科療法が標準治療として行われているが、肉眼ではとらえられない微小転移巣を切除することは難しく、これが再発の原因となっている。また、現在大腸がんにおいては、5-FU等を用いた術後化学療法が行われているが、効果は不十分であると報告されており、より有効な治療法の開発が課題となっている。一方、治療用放射性核種を標識した抗体(放射性抗体)を体内に投与する「放射免疫療法」は、散在性微小がんに放射性抗体が結合し、細胞を放射線により近傍から攻撃できるため、有望な術後療法として期待されている。我々はこれまでに、大腸がんにおいて、多くの患者で高発現する上皮成長因子受容体(Epithelial Growth Factor Receptor, EGFR)を標的とした放射性抗EGFR抗体を用いた放射免疫療法が有望であると報告してきた。しかし、抗EGFR放射免疫療法の実用化に向けては、さらなる最適化が望まれる。一方最近、放射線に対するがん細胞の応答経路は細胞毎に異なるため、各がん細胞に効果の高い放射線増感剤に違いがあることが認識されつつある。本研究では、抗EGFR放射免疫療法において、がん個性に応じた増感剤を事前に選択し、これを併用する方法の開発を行った。昨年度までに、放射性抗体の合成・増感剤スクリーニングキットの作製・増感剤スクリーニングキットによるがん個別最適増感剤の選定法の確立を行った。また、本年度は、増感剤スクリーニングキットで選定された薬剤が、実際にin vivoで効果があることをマウスモデルを用いて実証した。本研究により、抗EGFR放射免疫療法における「個別化増感放射免疫療法」の有用性が示唆された。また、現在大腸がんにおいては、5-FU等を用いた術後化学療法が行われているが、効果は不十分であると報告されており(VallantらAnn Surg 2000)、より有効な治療法の開発が課題となっている。一方、治療用放射性核種を標識した抗体(放射性抗体)を体内に投与する「放射免疫療法」は、散在性微小がんに放射性抗体が結合し、細胞を放射線により近傍から攻撃できるため、有望な術後療法として期待されている(KoppeらJ Nucl Med 2006)。大腸がんにおいては、多くの患者で高発現する上皮成長因子受容体(Epithelial Growth Factor Receptor, EGFR)を標的とした放射性抗EGFR抗体(放射性セツキシマブ)を用いた放射免疫療法が有望であると報告されている(GuoらJ Nucl Med 2013)。また最近、放射線に対するがん細胞の応答経路は細胞毎に異なるため、各がん細胞に効果の高い放射線増感剤に違いがあることが報告された(KleimanらPLOS ONE 2013)。本研究では、抗EGFR放射免疫療法において、がん個性に応じた増感剤を事前に選択し、これを併用する方法の開発を行っている。昨年度は、放射性抗体の合成・増感剤スクリーニングキットの作製を行った。本年度は、増感剤スクリーニングキットによるがん個別最適増感剤の選定法を確立した。これにより、抗EGFR放射免疫療法における「個別化増感放射免疫療法」の提供を目指す。

平成29年度は、以下の内容につき検討を行った。・増感剤スクリーニングキットを用いたがん個別最適増感剤の選定ヒト大腸がん細胞株を用い、三次元培養を行った。これを用い、昨年度開発した増感剤スクリーニングキットを適用し感受性試験を行うことで、各がん細胞に対する最適増感剤を選定した。感受性試験は、三次元培養に対し、放射性抗体投与後、各増感剤を一定時間処理した細胞に対し、細胞活性を測定することで評価した。また、本年度は次年度でのマウス腹膜播種モデルを用いた生体内治療実験の評価のために、マウスモデルの確立を行った。マウス腹膜播種モデル作成には、ヒト大腸がん細胞RFP安定発現株を使用した。その結果、本研究に適用しうるマウス腹膜播種モデルの作成に成功した。大腸がんは、罹患数が多く、死因上位を占める疾患である。現在、その治療においては、手術により病巣を切り取る外科療法が標準治療として行われているが、肉眼ではとらえられない微小転移巣を切除することは難しく、これが再発の原因となっている。また、現在大腸がんにおいては、術後化学療法が行われているが、効果は不十分であると報告されており、より有効な治療法の開発が課題となっている。これに対し、治療用放射性核種を標識した抗体(放射性抗体)を体内に投与する「放射免疫療法」は、こうした散在性微小がんに放射性抗体が結合し、細胞を放射線により近傍から攻撃できるため、有望な術後療法として期待されている。大腸がんにおいては、多くの患者で高発現するEGFRを標的とした放射性抗EGFR抗体(放射性セツキシマブ)を用いた放射免疫療法が有望であると報告されている(GuoらJ Nucl Med 2013)。しかし、抗EGFR放射免疫療法の実用化に向けては、さらなる治療効果の向上・副作用軽減のための最適化が望まれる。また最近、放射線に対するがん細胞の応答経路は細胞毎に異なるため、各がん細胞に効果の高い放射線増感剤(放射線の効果を高める薬剤)に違いがあることが報告された(KleimanらPLOS ONE 2013)。このことから、抗EGFR放射免疫療法において、がん個性に応じた増感剤を事前に選択し、これを併用することができれば、さらなる治療効果の向上・副作用の軽減が可能になると期待できる。本研究では、申請者らが開発したナノプリント培養法を用い、個別のがんにおいて放射免疫療法における最適な増感剤を事前に選択し、抗EGFR放射免疫療法と併用することで、微小大腸がんに対する新治療戦略を提供できる「個別化増感放射免疫療法」の有用性を前臨床で実証する。本年度は、放射性抗体の合成・増感剤スクリーニングキットの作製を行った。平成28年度は、以下の項目につき検討を行った。検討は、当初の計画通り進行している。(1)放射性抗体の合成放医研に既設されている大型サイクロトロンを用いて64Cuを製造した。まず、原料となる64Niをメッキした標的ディスクを作製し、これにプロトン照射し、64Cuを得た。その後、自動精製装置を用いて、陽イオン交換樹脂による64Cuの精製を行った。標識には、二官能性キレートを用い、抗体に放射性64Cuを標識した。標識後の64Cu標識放射性抗体を精製し、純度検定試験を行った。