hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
revertant mosaicismに着目した遺伝性皮膚疾患治療システムの開発

我々はヒトiPS細胞で、CRISPR/Cas9により染色体相同組換えを起こす系を、研究期間中に確立することができた。19番染色体に選択カセットを導入し、ブルーム遺伝子の発現を制御できるようにしたiPS細胞を樹立。その細胞株を用いてCRISPR/Cas9により染色体を切断したところ、切断点の近傍で相同組換えが生じてテロメアまでの領域においてLOHが起きていることをSNPを検定することにより確認した。さらに19番染色体で用いた選択カセットを導入したトランスポゾンベクターを作製、他の染色体でも機能することを確認した。今後、皮膚疾患に関連するiPS細胞株を得て、表記システムの樹立を達成したい。表皮水疱症をはじめ、多くの疾患で、本来ゲノム上に存在している変異(病因因子)の消えたrevertant mosaicismが生じる現象が知られている。表皮水疱症の場合、生じるrevertant細胞によって一時的に症状が寛解する。revertant細胞に関して、我々は皮膚幹細胞における相同組換えによるrevertant細胞の生成の可能性を考えている。revertant細胞を意図的に作成することができれば、それはそのまま治療に用いることが出来る。ヒトiPS細胞においてブルーム遺伝子の発現制御により染色体が相同組換えを起こし、Loss Of Heterozygosity (LOH)を生じたクローンを治療と病院因子の探索に用いるのが本研究の目的である。平成27年度は、CRISPR/Cas9システムを利用して、LOHクローンを効率よく得る手法の開発に成功した。また、その手法によって得られた、ヒト19番染色体の43M近傍に存在するPSG locusのLOHクローンの表現型解析から、酸化損傷抵抗性に関与することが示唆されていた本領域が、我々が使用したiPS細胞では実際に細胞増殖や酸化損傷抵抗性に関与しているデータを得ており、本システムの有効性が示された。導入遺伝子が安定して発現するAAVS1 locusが存在することからモデルとして選んだ19番染色体で、システムが機能することが示唆された。このため当初の予定通り、3次元培養皮膚モデルで表現型の検出が可能と考えられるダリエー病における小胞体カルシウムポンプ(SERCA2b)L321F変異導入をはじめ、いくつかの病因遺伝子と、それを引き起こす点変異が同定されている疾患に関して、使用しているiPS細胞で同じ変異がない場合は、それを導入して表現型との相関を捉える実験系の確立に移行している。ブルーム遺伝子の発現制御だけでは、染色体が組換えを起こしてLoss Of Heterozygosity (LOH)を生じたクローンは、100万個あたり12個程度であった。これがPAM配列にG or AのSNP配列を含んだCRISPRで染色体の片アリルだけ(NGG側)をブルーム遺伝子の発現制御下で切断したところ、LOHクローンは100万個あたり10個程度と、効率が飛躍的に向上した。通常の両アリルを切断するCRISPRでは、100万個あたり23個程度と、効率はそれほど上がらない。この事は、本研究により開発された“SNP情報を元にした片アリル切断する手法"がLOHクローンを得るのに有効であることを示していると考えられる。この手法をベースとして用いて、ゲノムワイドに皮膚疾患に関与する未知の病院因子探索へとつなげてゆく。表皮水疱症なとで見られるrevertant mosaicismでは、変異のなくなった細胞の存在が確認されている。その発生のメカニズムは不明であるが、我々は皮膚幹細胞における相同組換えによるrevertant細胞の生成の可能性を考える。その生成の際に同時に生じる、両アリルに変異を持っている細胞によって新規の病因因子を特定すると共に、revertant細胞を治療に用いる新規システムの確立の意義は大きいと考える。その第一歩として、我々はヒトiPS細胞でCRISPR/Cas9による切断で、染色体の狙った領域で染色体相同組換えを起こし、部分的にLOHを起こさせる系を研究期間中に確立することができた。具体的には、ブルーム遺伝子の発現を制御できるようにしたiPS細胞を樹立。その細胞株において、19番染色体のAAVS1領域にG418/puromycin double selection選択カセットを導入し、相同組換えを起こした細胞のみを選択できるようにした。その細胞株において、ブルーム遺伝子の発現制御下において、CRISPR/Cas9により染色体を切断したところ切断点の近傍で相同組換えが生じて、そこからテロメアまでの領域においてLOHが起きているiPS細胞株が得られたことをSNPを検定することにより確認した。さらに計画通り、19番染色体で用いた選択カセットを導入したトランスポゾンベクターを作製、他の染色体でもG418/puromycin double selectionが機能することを確認した。今後、皮膚疾患に関連するiPS細胞株を得て、新規の病因因子を特定すると共に、revertant細胞を治療に用いるシステムの樹立を達成したい。

我々は、トランスポゾンを用いた遺伝子導入システムを、ヒトiPS細胞においてすでに確立している(Igawa K. Yoshimura Y et al.Stem Cells Transl Med. 2014)。このシステムは、トランスポゾンの認識配列を導入遺伝子カセットの両端に挿入したもので、導入してリプログラミングを起こすなどの目的を達した後に、ゲノム上から完全に除くことができる。このため、導入遺伝子カセットの痕跡はゲノム上には全く残らない。このシステムを、相同組換えを起して部分的に片方のアリルだけとなったLOHクローンを選択するためのnep/puro選択カセットにも応用し、ゲノムワイドに挿入する。各染色体あたり57個程度の選択カセット導入クローンを得て、皮膚疾患に関与が示唆される領域近傍に挿入されたクローンを選ぶ。これを用いて、すでに手法を確立しているiPS細胞からケラチノサイトへの分化、さらに3次元培養皮膚モデルにおいて表現型の解析を行う。幹細胞生物学、遺伝学
19世紀英国散文に見られるロマン主義精神

ロマン主義は19世紀のイギリス文化を支配する最も特徴的な思潮であるが、その特質を規定する作業は19世紀前半の詩の分野に偏って行われており、ここでは19世紀中期からさらに世紀末まで範囲を広げ、また対象を詩から散文に変えて、考察を行った。例えばヴィクトリア朝を代表する小説を生んだブロンテ姉妹は、シャーロットの『ジェイン・エア』やエミリーの『嵐が丘』といった代表作において、他にあまり例をみない独特の語りの装置、言い換えれば、自己劇化そのものをテクスト化しているとも読める奇妙な語り手を、設定しているが、これは、彼女たちの子供時代、即ちロマン主義詩の最盛期に愛読した『ブラックウッズ・マガジン』に不定期連載という形で掲載されて評判となった『アムブローズ館夜話』に反応した可能性が少なくない。ここではロマン主義的な文学議論を含む架空の談話が、実在の人物をモデルにした仮面によって進行しているからである。また「仮面」を最も積極的に利用したと言っていい世紀末作家オスカー・ワイルドはゾラの自然主義・リアリズム小説を批判したが、そこで「ロマン主義」という概念を持ちだしていることも、これが様々の意味の変容を蒙りながらも19世紀全般にわたって広く流布し、影響力を持った概念であることが分かる。しかし19世紀が典型的な帝国主義の世紀であることを考えると、以上の事実はまたロマン主義精神と帝国主義的精神の隣接性も暗示し、実際、機会仕掛け・実物主義のスペクタクル演出とロマン主義から継承された「驚異の美学」を備えたヴィクトリア朝の演劇空間の実態を調査すると、逆説的に観客の舞台への没入を遮断し,観客に舞台そのものを,劇場そのものを見せる「劇場性」を実現することによって、このような劇場性によって生ずる観客の主体としての位置は,世界を視線の権力によって征服する帝国主義的主体のそれときわめて近づくことが明らかになる.ロマン主義は19世紀のイギリス文化を支配する最も特徴的な思潮であるが、その特質を規定する作業は19世紀前半の詩の分野に偏って行われており、ここでは19世紀中期からさらに世紀末まで範囲を広げ、また対象を詩から散文に変えて、考察を行った。しかし19世紀が典型的な帝国主義の世紀であることを考えると、以上の事実はまたロマン主義精神と帝国主義的精神の隣接性も暗示し、実際、機会仕掛け・実物主義のスペクタクル演出とロマン主義から継承された「驚異の美学」を備えたヴィクトリア朝の演劇空間の実態を調査すると、逆説的に観客の舞台への没入を遮断し,観客に舞台そのものを,劇場そのものを見せる「劇場性」を実現することによって、このような劇場性によって生ずる観客の主体としての位置は,世界を視線の権力によって征服する帝国主義的主体のそれときわめて近づくことが明らかになる.ロマン主義と文学史上呼ばれるものが古典主義に続いて現れたことは間違いないが、19世紀のイギリスで発行された文芸・総合誌を調べると、普通文学史でロマン主義の代表と位置づけられる詩の領域においてすら、「ロマン主義」という名称がそれほど頻繁に使われていないことに驚かされる。当時の有力な雑誌、ともに興味深いことにエディンバラで発行された『エディンバラ評論』や『ブラックウッズ・マガジン』は、それぞれホイッグ系、トーリー系というイデオロギーに違いがあるとされるが、しかし、例えば『エディンバラ評論』の主幹フランシス・ジェフリーの主張の行間には革命に対する恐怖なり忌避が窺えるように思われる。つまりロマン主義精神なるものは一枚岩的なものではなく、さまざまな相反するイデオロギーの集積といった側面があり、それは、これも当時の雑誌を調査することで浮かび上がってくるのだが、いわゆる「ロマン派詩人」といったラベルが、イデオロギー特性を表示するものとしては、少なくとも19世紀前半には、用いられていないことからも明らかである。こうした状況がヴィクトリア朝にはいってどう変化するのか、しないのか、今後は19世紀中葉の雑誌やウィリアム・ハズリット、スコットランド人であるトマス・カ-ライルといった思想家の社会批評テクストを調査して、その人間観や社会観がいかに先行する多様なロマン主義精神と関係しているかが探らねばならない。それによってディケンズやブロンテ姉妹に見られる異質なロマン主義精神を跡付けることが可能になるであろう。ロマン主義は19世紀のイギリス文化を席巻する思潮であるが、ホイッグ的『エディンバラ評論』とトーリー的『季刊評論』の論調の対立は甚だしい。しかも、それはいわゆる湖水詩人たちへの評価の違いとして示されるのだが、そこには保守対革新という図式では割り切れないねじれの構造が窺われる。革新派が政治的革新を標榜する詩人を評価せず、保守派が評価する、革新派が耽美的詩人を評価し、保守派が評価しない、という現象が見られるのである。

それにもかかわらず、超保守的色彩を帯びた『ブラックウッズ・マガジン』が革新派の雄ハズリットに対して激しい攻撃を行いながら、一方で、フランス革命を象徴的事件とする激動の時代に反応する詩人たちとして、様々な傾向を持つ詩人たちを一つのグループとして分類したものが、現在「ロマン派」とされる詩人たちと重なるという事実を見出すことができる。これらは耽美派を中心とする「超自然」の領域への関心を含めて、ロマン主義という概念が単一のイデオロギーの産物でないことを明らかにしている。平成9年度の研究はおおよそ以上の点を確認、検証した。平成10年度は、そうした知見を整理し、ロマン主義概念の見直しを図りつつ、ヴィクトリア朝文学との関連、例えば『ブラックウッズ』を愛読したブロンテ姉妹が描き出した自己劇化を前景化した著作に、そのように錯綜した思潮がどのように投影され、ワ-ズワスに代表される子供の神話が、一般にブルジョア市民への主人公の成長の道程を描いたとされるディケンズの教養小説とどう結びついているか、といった点を考察することになる。ロマン主義は19世紀のイギリス文化を支配する最も特徴的な思潮であるが、その特質を規定する作業は19世紀前半の詩の分野に偏って行われており、ここでは19世紀中期からさらに世紀末まで範囲を広げ、また対象を詩から散文に変えて、考察を行った。例えばヴィクトリア朝を代表する小説を生んだブロンテ姉妹は、シャーロットの『ジェイン・エア』やエミリーの『嵐が丘』といった代表作において、他にあまり例をみない独特の語りの装置、言い換えれば、自己劇化そのものをテクスト化しているとも読める奇妙な語り手を、設定しているが、これは、彼女たちの子供時代、即ちロマン主義詩の最盛期に愛読した『ブラックウッズ・マガジン』に不定期連載という形で掲載されて評判となった『アムブローズ館夜話』に反応した可能性が少なくない。ここではロマン主義的な文学議論を含む架空の談話が、実在の人物をモデルにした仮面によって進行しているからである。また「仮面」を最も積極的に利用したと言っていい世紀末作家オスカー・ワイルドはゾラの自然主義・リアリズム小説を批判したが、そこで「ロマン主義」という概念を持ちだしていることも、これが様々の意味の変容を蒙りながらも19世紀全般にわたって広く流布し、影響力を持った概念であることが分かる。しかし19世紀が典型的な帝国主義の世紀であることを考えると、以上の事実はまたロマン主義精神と帝国主義的精神の隣接性も暗示し、実際、機会仕掛け・実物主義のスペクタクル演出とロマン主義から継承された「驚異の美学」を備えたヴィクトリア朝の演劇空間の実態を調査すると、逆説的に観客の舞台への没入を遮断し,観客に舞台そのものを,劇場そのものを見せる「劇場性」を実現することによって、このような劇場性によって生ずる観客の主体としての位置は,世界を視線の権力によって征服する帝国主義的主体のそれときわめて近づくことが明らかになる。
NK細胞機能に関連する遺伝子群のゲノム多様性とその医学・生物学的意義

本研究では、NKレセプター群とそのリガンドに着目し、遺伝子多型解析を行った。NKG2Dのリガンド群であるULBP/RAET1遺伝子群についてレセプター結合ドメイン部分の多型を解析したところ、特にULBP4に著明な多型が見いだされた。また、ULBP4ではプロモーター領域においても一塩基挿入/欠失と(GT)n繰り返し配列多型が認められた。また、KIR-3DL1のアリルとHIV/AIDS抵抗性との関連を明らかにした。疾患への感受性・抵抗性には個体差があるが、ことに個体の免疫応答性には大きな個体差があり、この個体差の形成には環境要因と遺伝要因の両者が関与する。本研究では、NKレセプター、ことにNKG2レセプター群とそのリガンドに着目し、炎症性疾患や自己免疫疾患との関連を解明することを目的とする。本年度は日本人一般集団における上記遺伝子群のゲノム多様性の分布について検討した。1.NKG2遺伝子座内に設定した4種のマイクロサテライトマーカーについて、それぞれ612種のアリルを検出した。2.ULBP/RAET1遺伝子領域に設定した5種のマイクロサテライトマーカーにおいて611種のアリルが検出された。3.ULBP/RAET1遺伝子群についてエクソン2-3内の多型検索を行い、ULBP1,ULBP2,ULBP3,RAET1Lの4遺伝子について、既知の4種に加えて新たに4種の塩基多型を見出した。4.上記で検出したマイクロサテライト多型と塩基多型により構成されるハプロタイプの推定を行なった。アミノ酸の置換を伴う5種の遺伝子多型については、今後各種疾患との関連解析を予定している。また、塩基配列データベースの検索により、ULBP1,ULBP2,ULBP3,RAET1L,RAET1G遺伝子の各プロモーター領域では、転写因子結合部位をコードする複数の配列が遺伝子間で共有されることが明らかとなったため、次年度はこれら遺伝子のプロモーター領域塩基配列多型の検索を行う。前年度までに設定したNKレセプターおよびそのリガンド群の遺伝子領域に設定したマイクロサテライトマーカーと塩基多型を用いて自己免疫疾患における分布を検討し、日本人一般集団頻度と比較解析を行なった。ベーチェット病ではKIRレセプターのリガンドであるHLA-B*5101遺伝子についてもっとも強い相関を示した。そこで患者、一般集団でのB*5101遺伝子全長塩基配列解析を行ったところ、エクソン、イントロン部は完全一致しており、遺伝子下流の非翻訳領域にのみ多型が認められることを見いだした。一方、バージャー病ではHLA-DRB1*1501, DPB1*0501に有意な増加が認められたが、両者は互いに独立であることから、異なる発症機序に関与していると考えられた。mた、KIRレセプターであるKIR3Dについて、アリルタイピング法の確立を目指した。KIR3DL1, 3DS1の各遺伝子について、現在までに報告されているアリルの塩基配列を基に、多型部位のデータベースを構築した。アリルの識別に必須の多型部位をカバーするプライマーを設計し、塩基配列解析によりアリルタイピングを行なったところ、3DL1では既知に報告されている高発現、低発現アリルに分類可能であった。現在3DS1についても解析を進めている。さらにNKG2DリガンドであるULBP/RAET1遺伝子群について、最近既知のULBP14に加えて新たにULBP5/RAET1GがMICAと極めて類似の発現様式で、リガンドとして機能してることが報告されたことから、ULBP5/RAET1G遺伝子のプロモーター領域塩基配列多型の検索を進めている。疾患への感受性・抵抗性には個体差があるが、ことに個体の免疫応答性には大きな個体差があり、この個体差の形成には環境要因と遺伝要因の両者が関与することから、NKレセプター、ことにNKG2レセプター群とそのリガンドに着目し、遺伝子多型解析を行った。NKG2ファミリーのうち、唯一の活性化レセプターであるNKG2DはULBP/RAET1遺伝子群をリガンドとするため、タイ人におけるULBP16の各遺伝子のレセプター結合ドメイン部分の多型を解析したところ、ULBP4において7種の多型(6種の非同義置換多型)が見いだされた。また最近同定されたULBP6においても7種の多型(4種の非同義置換多型)を認めた。これに対して、ULBP1,ULBP3各遺伝子では多型は認められず、日本人とほぼ同様の遺伝子多型分布であることが明らかとなった。一方、ULBP5ではレセプター結合ドメインにおける1アミノ酸残基の違いがNKG2レセプターとの結合に影響することが報告されており、また、ULBP6は腫瘍細胞上皮で強発現し、その発現量の違いがNK細胞による標的細胞の殺傷機能に影響を与えていることがつい最近報告されたが、本研究で明らかにしたULBP/RAET1

遺伝子群の多型がNKG2D機能の差異に関与する可能性があるため、今後さらに検討する。これとは別に、KIRレセプターのうちKIR-3Dについて、インド人集団サンプルを用いて3DL1/3DS1タイピングを行い、前年度までに行った日本人集団での結果と比較した。KIR-3DS1は活性型、3DL1は抑制型レセプターをコードするが、インド人一般集団中のKIR3DS1頻度は48.5%と日本人の35%よりも高く、活性型レセプターを持つ割合が高いことが示された。以上のことから、NKレセプターとそのリガンドの両者に多型が存在することが明らかになった。
創薬にむけた膵癌の進展過程におけるクロマチンリモデリング因子BRG1の役割の解明

クロマチンリモデリング因子BRG1は膵前癌病変であるPanINの形成に必須であるが、PanINの維持・進行や膵癌そのものにおけるBRG1の役割は十分に解明されていない。本研究ではこれらにおけるBRG1の役割について、主に遺伝子改変マウス、ヒト膵癌由来オルガノイドを用いた実験により明らかにする。さらに、これらの観察結果に基づき、BRG1をターゲットとした創薬の検討を行う。
個別化医療のためのフッ化ピリミジン系抗癌剤の定量的治療効果予測システムの構築

消化器癌化学療法のkey drugである5ーFUについて、バイオマーカーとしての肝臓でのDPD活性に着眼し、同代謝酵素によって変換される生体内のuracil (Ura)とdihydrouracil (UH2)の比をサロゲートバイオマーカーとして血漿中5ーFU濃度と腫瘍径との間におけるPK/PDモデルを構築した。血漿中UH2 / Ura比と肝臓中でのDPD活性との相関関係が成立し、さらに日内変動に関するパラメータをPK/PDモデル導入したところ、腫瘍径の予測値は実測値を十分説明し得る値を示した。本知見は個別化医療への実用的合理的投与設計と患者の身体的・経済的負担軽減に貢献し得ることが期待される。5ーFUをkey drugとした癌化学療法での個別化医療を目指し、PK/PD理論に基づく定量的治療効果予測システムの構築を目的とした本研究において、前年度までに、5ーFUの代謝に関与する肝臓中DPD活性に着眼し、間接的なDPD活性測定としての血漿中ジヒドロウラシル/ウラシル比の時間的変化が血漿中5ーFU濃度の推移と相関することを明らかとした。一方、生体内DPD活性には日内変動(サーカディアンリズム)が存在することが知られており(Jiang H., et.al. Br.J. Pharmacol., 141, 616-623, 2004)、非活動時においてDPD活性が低下する傾向があるというJiangらの報告があるが、我々のラットでの5ーFU投与実験においても、投与時刻を変化させたところ血漿中5ーFU濃度は非活動時に上昇する傾向を認めた。(Kobuchi et al., Biol. Pharm. Bull., 34, 365-376, 2013)すなわち、DPD活性は5ーFUの消失を左右する指標として、または薬物動態学的バイオマーカーとしての有用性を見いだした。しかしながら、大腸がん化学療法を施行時には、薬効について予測またはモニターするためのバイオマーカーが個別化医療において用量設定のための重要因子となる。そこで、大腸がんの予後予測因子としての好中球/リンパ球比に替わる指標として、各種血球レベルの変化から骨髄抑制予測に有効となるバイオマーカーを探索するべく、5ーFU投与後の白血球、好中球、リンパ球、赤血球の血球動態の経時的変化について検討した。その結果、各種血球レベルは、5ーFUの用量に応じて異なる推移を示し、特に好中球において顕著であったことから、骨髄抑制の予測の可能性を示唆する結果を得た。本結果から、投与後の採血から5ーFU濃度と各種血球数データをえることで、用量変更時の有用な基礎的情報となりえることを見いだした。5ーFUをkey drugとする癌化学療法の個別化医療を目指し、PK/PD理論に基づく定量的治療効果予測システムの構築を目的として、今年度得られた実績を下記に記す。1.大腸癌モデルラットにおける5ーFUの体内動態について正常ラットに対する体内動態変動とその要因の解明として、ジメチルヒドララジン誘発の大腸癌モデルラットと正常ラットにおける病態時の生化学的検査から、大腸癌ラットにおいて体重減少、好中球/リンパ球比の増加及び大腸異常腺窩が認められた。5ーFU静脈内投与時と門脈内投与時のAUCの比較から、大腸癌モデルラットでの肝初回通過回避率が20%低下していたため、肝臓中DPD活性の有意な増加が示唆され、全身クリアランスの増大を認めた。このことから、DPDのバイオマーカーとしての有用性が示唆された。2.5ーFU治療時のバイオマーカーである肝臓中DPD活性としての尿中ウラシル/ジヒドロウラシル比の経時的変動について検討したところ、5ーFUの体内動態パラメーターである、AUCおよび全身クリアランスの両パラメーター間において尿中ウラシル/ジヒドロウラシル比との間に正の相関関係を認めた。3.5ーFUのPK/PDモデルにおけるPDの評価として、大腸癌モデルラットにおける治療時の腫瘍径から体積を算出し、経時的変化を追跡したところ、治療の進展に伴い腫瘍径の縮小を認めたことから、PDとしての観測意義を確認した。4.WinNONLINによるPK/PDモデルの構築には、これまでに得られた、5ーFUの血漿中濃度、パラメータ、DPD活性およびPDとしての腫瘍径に関するパラメータをモデルに組み込み、Simeoniらの(Can.Res., 2004, 64, 1094-1101)perturbed growthmodelを導入することで、実測値を反映した、腫瘍抑制効果の予測に有用なモデルが確立された。5ーFUをkey drugとした癌化学療法での個別化医療を目指し、PK/PD理論に基づく定量的治療効果予測システムの構築を目的とした本研究において、1間接的なDPD活性測定としての血漿中ジヒドロウラシル/ウラシル比の時間的変化が血漿中

5ーFU濃度の推移と相関すること、2生体内DPD活性には日内変動(サーカディアンリズム)が存在し、非活動時においてDPD活性が低下する傾向が認められ、我々のラットでの5ーFU投与実験からも、投与時刻の変化による血漿中5ーFU濃度の非活動時の上昇傾向を認められたことから、Jiangらの報告とも一致した。(Kobuchi et al., Biol. Pharm. Bull., 34, 365-376, 2013)すなわち、5ーFUの消失を左右する指標として、DPD活性の測定意義を見いだし、サーカディアンリズムを組み込んだPK/PDモデルの構築を検討し、実測値と予測値の乖離の有無からモデルの妥当性を評価した。その結果、DPD活性から5ーFUのクリアランスが予測可能であることが明らかとなった。一方で、大腸がん化学療法施行時での、薬効の予測およびモニターのためのバイオマーカーについての検討を行ったところ、大腸がんの予後予測因子として、骨髄抑制予測に有効な因子の検出を目的として、各種血球動態の経時的変化について検討した。その結果、5ーFUの用量に応じて、特に好中球において良好な相関関係を認めた。さらに、想定される臨床データでは、母集団薬物動態速度的解析法が必要になることから、これまでのラットでのデータを用いて、クリアランス値の推定値から投与量を変化させた5ーFUの血漿中薬物動態をシミュレーションしたところ、実測値とほぼ一致する結果が得られた。従って、5ーFUによる治療時のバイオマーカー測定が5ーFUの血漿中薬物濃度と大腸癌の予後予測に重要な意義をもたらすことが示唆された。薬物動態現在までの達成度については、当初の計画に対してやや進展が遅れている部分があるが、これは癌化学療法での個別化医療を目指したPK/PD理論に基づく定量的治療効果予測を確立するうえで、研究遂行に伴って検討すべき項目、すなわち、当初のバイオマーカーとして想定していたDPD活性について日内変動を考慮し、予後予測のための指標としての各種血球レベル、白血球、好中球、リンパ球、赤血球の検討といった項目を随時追加したためである。なぜなら、DPD活性の代替マーカーとしての血漿中ジヒドロウラシル/ウラシル比がバイオマーカーとして重要因子であることは確認したが、もともと生体内DPD活性にはサーカディアンリズムが存在することが明らかとされていることから、投与時刻の影響についても検討すべき項目として追加した。このDPD活性は5ーFUの消失に大きく関与するファクターであるが、効果予測または予後予測については別のマーカーが必要と考えられた。そこで、重篤な副作用として骨髄抑制の予測に有用となり得るか否かについて各種血球レベルの推移について、5ーFU投与後の経時的変化とともに血球ごとのデータを得た。本成果は、日本薬学会、ISSX、日本薬物動態学会、日本臨床薬理学会にて発表を行い、論文として、4報すでに掲載許可通知を得ている。当初の予定では、基本となる5ーFUのPK/PDモデルが構築され、大腸がん化学療法の代表的レジメンに対応したPK/PDモデルの構築を予定していたが、現状では基本となるPK/PDモデルの構築に時間を有している状況である。
DNA損傷バイパスに伴う突然変異の誘発とその抑制の分子メカニズム

ほ乳類ではDNA損傷バイパス(TLS)に関わるDNAポリメラーゼは複数存在し、異なる損傷特異性を示す。個々の損傷に対して適当なTLS DNAポリメラーゼがどうやってリクルートされるかを探るために、ヒトのPolκ、Polη、Polιとその他のタンパク質との相互作用について解析した。Polκ、Polη、PolιはいずれもREV1のC末端領域(REV1-CTD)に結合するが、1)Polκの機能にはREV1-CTDとの相互作用には必要であること、2)Polηが紫外線照射によって生じた損傷をバイパスするという機能にはREV1-CTDとの相互作用は必要ではないが、その他の損傷のバイパスには必要であろうという結果が得られた。PolηはPCNAに対する結合するばかりでなく、Rad6-Rad18複合体にも結合することから、DNA損傷個所で進行停止となった複製フォーク中のPCNAをRad6-Rad18複合体がユビキチン(Ub)化するとPolηが優先的にUb-PCNAに結合すると考えられ、Polηがバイパスできない損傷が存在する場合にはREV1との相互作用を通じて他のTLS DNAポリメラーゼへのスイッチが起こると考えられる。遺伝情報を安定に子孫に伝えるためには染色体DNAは誤り無く複製されることが必要であり、その過程に関わる複製型DNAポリメラーゼは正常な鋳型DNAを極めて正確にコピーする。しかし、染色体DNAは様々な内的、外的要因により絶えず損傷を受けており、複製型DNAポリメラーゼは損傷部位で進行を停止してしまうので、細胞周期を維持するためには、Polκなどの忠実度は低いが損傷をバイパスすることの出来るバイパス型DNAポリメラーゼに置き換わることが必要である。ヒトには複数の損傷バイパス型DNAポリメラーゼが存在し、それぞれは異なる損傷特異性を持つ。筆者らはこれまでPolκは肺ガンの原因物質と考えられているベンゾピレンがグアニンのN2の位置に付加したような損傷の向かい側にシトシンを挿入してバイパスすることを報告して来た。酸化的DNA損傷の代表例である8-ヒドロキシグアニンに対するPolκのバイパス効率は低く、また誤りをおかしやすいことが明らかになった。一方、モンシロチョウの作るタンパク質であるピエシリンはNADの存在下でDNA中のグアニン塩基のN2の位置にモノリボシルADPを付加することことが知られているが、Polκはこの損傷の向かい側にもシトシンを挿入してバイパスすることが明らかになった。また、ヒト肺ガン由来の細胞株H1299株をベンゾピレンの活性化された化合物であるBPDEで処理すると、GFP-Polκは核内でフォーカスを形成することが明らかになった。また、Polk遺伝子を欠損したマウス由来のMEF(Mouse Embryonic Fibroblast)細胞はBPDE処理に高い感受性を示した。野生型の細胞ではBPDE処理した後、数時間後にはDNA合成が再開されるのに対して、Polk欠損MEF株ではDNA合成は再開されなかった。DNAに損傷が生じるとPCNAがユビキチン化され、それが複製型DNAポリメラーゼから損傷バイパス型DNAポリメラーゼへのスイッチの引き金になると最近では考えられている。実際、BPDE処理によってもPCNAがモノユビキチン化されて、Polκがそのような修飾を受けたPCNAに強く結合することが明らかになった。DNA損傷によって点突然変異が誘発されることは古くから知られて来たが、現在ではそのような突然変異の大半はDNA損傷のバイパス合成に伴って生じると考えられている。ヒトやマウスにおいてDNA損傷バイパスに関わるDNAポリメラーゼは複数存在し、その代表例がPolηやPolκである。Polηが紫外線照射によって生じるT-T CPDなどを含めて比較的幅広いスペクトラムのDNA損傷をバイパスするのに対して、Polκは肺がんの有力原因物質と考えられるベンゾピレン(BP)の体内代謝物(BPDE)がグアニンのN2の位置に付加したdG-N2-BPDEなどのかなり限定された種類の損傷のバイパスに関与する。DNAに損傷を受けた細胞ではRad6-Rad18複合体によってPCNAがユビキチン化され、それが引き金となって複製型DNAポリメラーゼから損傷バイパス型のDNAポリメラーゼへのスイッチが起こると考えられており、実際BPDE処理したヒト培養細胞においてもPCNAがユビキチン化され、Polκがそれに結合することが明らかになった。Polηの場合にはRad18とも結合することが知られており、Rad6-Rad18-Polη複合体がPCNAをユビキチン化するとすぐにそれにPolηが結合することにより、Polηが損傷箇所に優先的にリクルートされると想定される。

PolkもBPDE処理した細胞中ではRad18と結合するが、Polhの場合と比べて結合は弱いことが明らかになった。一方、酵母ツーハイブリッド法を用いてPCNA、ユビキチン、Rad18との相互作用について検討したが、PolκはPolηと比べるといずれに対しても相互作用は弱いという結果が得られた。BPDE処理した細胞中ではPolκはリン酸化などの修飾を受けることにより、ユビキチン化を受けたPCNAに強く結合できるようになるという可能性が考えられる。ヒト細胞中には損傷バイパス合成(Translesion DNA synthesis, TLS)に関わる酵素はY-ファミリーに属するPol eta、iota, kappaそしてREV1、更にB-ファミリーに属するPol zetaなど複数が存在する。Y-ファミリーの酵素のそれぞれは異なる種類の損傷のバイパスに関わると考えられており、損傷箇所に適当な酵素がどうやってリクルートされるかを明らかにすることが重要な課題である。我々及び他のグループのこれまでの研究から,REV1のC末端の約100アミノ酸からなる領域にPol eta、iota, kappaそしてPol zetaのREV7サブユニットが結合することが分かっている。Pol eta、iota, kappaのxFFyyyy(xはあらゆるアミノ酸、Fはフェニルアラニン、yはプロリン以外のアミノ酸)という短いモチーフ配列がREV1のC末端領域との結合に関わることが明らかになった。一方、REV7にはこのような配列は存在せず、また100アミノ酸以上からなる領域が必要であることから、REV1のC末端領域とREV7は相互の立体構造を認識して結合すると考えられる。REV7はPol zetaの触媒サブユニットであるREV3やREV1のC末端領域の他に、ADAM9 (A Disintegrin And Metalloproteinase)やELK-1 (an Ets-like transcription factor)など、機能の異なるタンパク質とも相互作用することが報告されている。REV3、ADAM9、ELK-1の9アミノ酸からなる短いモチーフ配列(そのコンセンサス配列はffxPxxxPP、fは疎水性のアミノ酸、Pはプロリン)がREV7との結合に必須であり、場合によってはそのようなモチーフ配列のC端側に存在する数個のアミノ酸配列によってREV7との結合が安定化されることが明らかになった。REV7はspindle assembly checkpoint (SAC)に関わるMAD2と弱い相同性(23% Identity)を持つことからMAD2L2とも呼ばれ、REV7がSACに関わることが示唆されている。REV7とMAD2の結合モチーフ配列について比較検討し、それぞれのモチーフ配列の相違を明らかにしつつある。
心筋ネクサスのキネティクスと興奮伝導における役割に関する電気生理学的研究

心筋におけるnexusはelectrical cell-to-cell couplingの場として細胞間興奮伝導に重要な役を果たしていることは強く示唆されている。しかし、nexusの電気的抵抗と興奮電導速度との関係を実測から論じたものはなかった。本研究では、動物(イヌ)の摘出心筋の多細胞標本において、impedance法によりnexus抵抗(Rj)を直接求め得ることせ実証し、これと伝導速度(θ)へのC-AMP,ouabain,heptanolなどの影響から、θ=k_1+k_2√Rj(r=0.9923)の関係があることを明らかにした。本年度は特に、不整脈の発生消退におけるnexus抵抗の意義について追究した。nexus channelを構成するconnexinに働き、channelを可逆的に、閉鎖させるこにが認められているheptanolは、23×10^<-3>Mでは活動電位のVamxを抑制する(せいゼい20%)よりも、θを著明に抑制(70%80%)する。このときRjは、約2.5%倍に上昇させることが前式により想定された。octanolも同濃度で同様の効果を示した。家兎右心室Purkinje線維において、aconitine誘発細動(fibrillation,高頻度不規則放電)では約300μm離れた細胞間で相互干渉がみられた。この時相でheptanolやoctanolを上記濃度で作用させたとき、fibrillationは粗動(flutter,高頻度規則性放電)に移行した。またflutterの時相でhepnotalやoctanolを作用させたとき、一過法のfibrillationが出現し、のちflutterに移行した。heptanolやoctanol作用後らflutter時の伝導速度は、作用前の1/10程度に減少していた。これらのことから、心筋作動の起因となる不完全伝導遮断や緩徐伝導(slowconduction)に基づくre-entryは、200300μm離れた細胞間でも発生していることが示唆された。
難病克服をめざしたアミロイド形成阻害ペプチドの合成研究

アルツハイマー病はβアミロイド沈着を特徴としているが、高齢化社会における難病として、その病因解明と治療薬開発が近年特に重要視されており、治療薬として、セクレターゼ阻害剤、ワクチンなどが研究されている。一方、アミロイド沈着すなわちアミロイドーシスにより、腎臓病や神経障害などが起こることが知られている。本研究は、アミロイドβペプチドの凝集過程に着目して、これまで培ってきたアミノ酸・ペプチドのN-メチル化による膜透過性向上の手法や低分子化、ペプチドミメティクス化の手法を用いて、アミロイド生成を阻害する物質を見出すことをめざした。以下のN-メチル化ペプチドを合成した。
多段電気透析による希土類金属の分離

希土類元素の分離として、種々の錯化剤を用いて電気透sh析によるサマリウムとガドリニュウムの分離を検討したが、高い膜透過選択係数得られなかった。透過選択係数は錯化剤により異なり、EDTAが僅かに選択性の向上を示した。これを用いて多段電気透析を行ったところ、多段化の効果は認められ分離度の向上は確認できた。多段電気透析分離法を確立するために、アルカリ金属の分離を3つの操作法で行った。供給液を陽極側に供給するenriching modeでは膜を優先的に透過するイオン種が陰極側に相対的に濃縮され、電流の増加につれて陰極での回収率は向上するが、分離の指標となる2種イオンの濃度比は低下する。また還流量を大きくすると、濃度比は高くなるが回収率は低下する。供給液を陰極側に供給するstiupping modeでは逆に非優先的に膜透過するイオン種が陽極側に相対的に濃縮され、電流の増加とともに回収率は低下し濃度比は向上する。還流量が増大すると、回収率は大きくなるが、濃度比は低下する。これらの2つの操作を結合した形式で、供給液を中間の段に供給するjoint modeでは、供給段より陰極側は濃縮部と、陽極側は回収部とみなされる。濃縮部からの溢流液はenriching modeと同じ傾向を示し、回収部はstripping modeの傾向を示した。多段電気透析に対するシミュレーション法を導出して、計算した結果は実験結果とよく一致し、多段電気透析装置の設計の指針を与えることができた。本年度は希土類金属であるガドリニウム(Gd)とサマリウム(Sm)の電気透析による分離について検討した。陽イオン交換膜1枚を通しての透過速度はSmがGdに比べてすこし大きく、その透過選択係数(透過速度の比/供給側の濃度比)は1.16であった。この選択係数を増大させるために水相において希土類金属と錯体を形成する錯化剤として、エチレンジアミン四酢酸(EDTA)およびジエチレントリアミン五酢酸(DTPA)を供給液に添加しその効果を調べた。錯化剤添加により金属イオンの透過速度は抑制され、DTPAの場合はSmの透過速度の減少が大きいため、透過選択性は小さくなった。一方、EDTAの場合はGdの透過速度が強く抑制され、透過選択性はEDTA濃度とともに増大した。EDTA濃度4mol/m^3で透過選択性は1.4になり、透過速度は半減した。さらに高濃度では選択性は向上するが透過速度が非常に小さくなった。透過速度を大きくするには透過側の酸濃度を高くし、低pHで行うことが有効であり、その際、選択性は一定に維持された。これらのことを踏まえて、EDTA添加系で7段の多段電気透析実験を行った。しかし、EDTAは高酸濃度では沈殿する問題があり、多段操作では透過側に酸を加えると還流により全ての段でpHが下がるため,酸濃度、EDTA濃度とも高くすることができなかった。EDTA濃度1.0mol/m^3で行ったが、この濃度では透過選択係数1.21に対して、多段電気透析での分離度(透過側の濃度比/供給側の濃度比)は印加電圧5Vで2.3となり、15Vでは分離度は2.6にまで上昇した。ざらに印加電圧を高くすると分離度は向上したが、透過速度が極端に小さくなった。以上、SmとGdの電気透析による分離において、錯化剤の効果は多少見られたが、飛躍的な向上は得られなかった。今回の系では透過選択係数が小さいため多段電気透析において実用的な分離度は得られなかったが、多段化による分離度の向上は確認され、透過選択係数に対する分離度としては十分に大きくなった。希土類元素の分離として、種々の錯化剤を用いて電気透析によるサマリウムとガドリニュウムの分離を検討したが、高い膜透過選択係数得られなかった。

透過選択係数は錯化剤により異なり、EDTAが僅かに選択性の向上を示した。これを用いて多段電気透析を行ったところ、多段化の効果は認められ分離度の向上は確認できた。多段電気透析分離法を確立するために、アルカリ金属の分離を3つの操作法で行った。供給液を陽極側に供給するenriching modeでは膜を優先的に透過するイオン種が陰極側に相対的に濃縮され、電流の増加につれて陰極での回収率は向上するが、分離の指標となる2種イオンの濃度比は低下する。また還流量を大きくすると、濃度比は高くなるが回収率は低下する。供給液を陰極側に供給するstripping modeでは逆に非優先的に膜透過するイオン種が陽極側に相対的に濃縮され、電流の増加とともに回収率は低下し濃度比は向上する。還流量が増大すると、回収率は大きくなるが、濃度比は低下する。これらの2つの操作を結合した形式で、供給液を中間の段に供給するjoint modeでは、供給段より陰極側は濃縮部と、陽極側は回収部とみなされる。濃縮部からの溢流液はenriching modeと同じ傾向を示し、回収部はstripping modeの傾向を示した。多段電気透析に対するシミュレーション法を導出して、計算した結果は実験結果とよく一致し、多段電気透析装置の設計の指針を与えることができた。
母親と新生児のメタゲノム解析を用いた健全な消化管細菌叢形成のための歯周治療戦略

口腔内の常在細菌叢が腸内細菌叢に及ぼす影響に注目が集まっている。歯周炎に罹患した妊婦では早産・低体重児出産のリスクが高まることが知られている。しかし、母親の口腔内細菌叢が子供にどのような影響を与えるのかについては十分に明らかとなっていない。我々は、歯周炎のない妊娠女性の口腔内細菌の中でビフィズス菌が増加し、さらにこのビフィズス菌は歯周病原細菌であるPorphyromonas gingivalisが口腔内に増加していると減少してしまうことを明らかにした。母親の健康な口腔細菌叢の維持が新生児の健康に果たす影響が大きいことは、医科歯科に限らず健康増進のための方策としての波及効果が高い。
活性化変異c-Kit、Flt3の異常シグナル伝達を標的とした治療法の開発

1.Kit, Flt3シグナル伝達に関与する細胞内ドメインチロシン残基の検討:細胞質内各Tyr残基のPheに置換にて野生型c-Kitにおいては増殖・生存は影響を受けなかったがTyr567,569,719のPhe置換にて細胞遊走が著明に阻害された。Tyr567からsrc family kinase, p38MAP kinaseの活性化,Ca2+ influx, Erk1/2の活性化に到るシグナル及びTyr719からPI3-Kinaseの活性化、Ca2+influxの誘導に到るシグナルの両経路が協調しながら細胞遊走をもたらしていることを明らかにし、SCF/c-Kitを介した腫瘍浸潤へのこれらのシグナルの関与が考慮された。一方、Tyr719/PI3-Kinaseはc-Kitキナーゼ変異型でのキナーゼ活性に重要である知見を得ていたが、Flt3キナーゼ領域変異型では同領域のtyr残基およびPI3-Kinaseの会合ともキナーゼ活性に関連しないことを新たに見い出した。2.活性化変異c-Kitレセプター特異的阻害療法の開発:STI571,AG1296,SU5614などのチロシンキナーゼ阻害剤が膜直下型変異c-Kitには有効であるが、キナーゼ領域型には単独、併用にても全く無効で、PP1のみが部分的に有効であることを見い出した。3.活性化変異c-Kit, Flt3特異的標的遺伝子の解析:Flt3-ITDを用いたmicrochip解析にて特異的発現が認められたSTAT3/5の標的遺伝子の発現が、c-Kit変異型においても認められ、活性化変異レセプターチロシンキナーゼの腫瘍性シグナルがSTAT3/5を共通としていることを見い出した。またその標的遺伝子の一つであるpim-2はAML症例において高発現しており今後の分子標的の対象と考えられた。
体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を評価する指標の開発

日本では義手使用者の基礎的な操作技能を定量的に評価できる指標がないため,臨床では代替として簡易上肢機能検査(STEF)を用いた評価が行われている.しかしながら,STEFは国際標準化されておらず,義手には不可能な物品操作課題があり,義手の基礎的な操作技能の定量的な指標になり得ていない.本研究は,体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を評価する指標を作成し,臨床評価に応用することを目的とした.上肢切断もしくは整形外科疾患のリハ経験のある作業療法士4名と意見交換を行い,評価指標を独自に作成した.また,作成した評価指標の妥当性を検討するために,the Southampton HandAssessment Procedure: SHAPを開発者の許可を得て日本語に翻訳した.翻訳した手引書は逆翻訳を行い,日本語版からの逆翻訳版を作成した.作成した逆翻訳版を原著者に査読させて内容の確認を行ったものをSHAP日本語版として使用した.最終年度は体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を作成した評価指標とSHAPとで測定し,測定した値の解析を行った.日本では体内力源型能動義手使用者の基本操作技能を評価できるツールの開発が必要である.欧米では,上肢切断者に特化した評価指標としてSHAP, ACMC, UEFS, TAPESが挙げられるが,日本ではこれら4つの評価指標はすべて未だに導入されていない.日本で考案された上肢切断者の評価指標は,兵庫県立総合リハビリテーションセンターのADL評価表のみであり,義手使用者の基礎的な操作技能を評価できる日本の評価指標は皆無である.そのため,日本では代替として簡易上肢機能検査(STEF)を用いた評価が行われているが,STEFは国際標準化されておらず,義手には不可能な物品操作課題があり,十分な評価になり得ていない.本研究は,体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を評価する指標を作成し,臨床評価に応用することを目的とした.本研究で開発する検査の妥当性はSouthampton Hand Assessment Procedure (SHAP)を用いて行うため,併せてSHAP日本語版の作成・検証も実施する.本年度は,上肢切断者の操作能力を測定するための機器の開発およびSHAP日本語版のバックトランスレーションを実施した.当初は,これまでの研究で使用していた機器の中で廃盤となった機器に関しては代替となる機器を購入する方向で検討していたが,工学系の研究協力者と検討した結果,新たに測定可能な機器を開発することとした.また,併せて他の項目においてもタブレットやPCと連動させて測定できる方法に変更可能な項目に関して検討し,検討した項目に関する機器の試作も実施した.SHAP日本語版検証作業においてはバックトランスレーションを実施し,SHAP原作者側とともに内容の精査を行った.日本では体内力源型能動義手使用者の義手の基本的な操作技能を評価できる指標は皆無である.代替として簡易上肢機能検査(STEF)を用いた評価が行われているが,STEFには義手では操作不可能な物品課題が設定されており,十分な評価になり得ていない.対して,欧米では上肢切断者に特化した評価指標としてSouthampton Hand Assessment Procedure (SHAP)といった上肢機能を測定できる評価指標が開発されている.しかしながら,このSHAPも人の手の動きに近い動作を再現できる筋電義手の操作技能を測定することに適しており,日本で一般的に普及している体内力源型能動義手の操作技能を測定するには不十分である.本研究は,体内力源型能動義手使用者の基礎的操作技能を評価する指標を作成し,臨床評価に応用することを目的としている.今年度は,昨年度に引き続き考案した評価項目に関してPCやタブレットを使用して評価が行えるようにソフトの製作・改良を行った.また,データ収集に向けて倫理審査申請を行い,承認を得た.考案した評価項目に関するソフトの製作・改良に時間を要したこと,途中で一時研究を中断する事態が生じたことなどから進度が遅れている.本研究は体内力源型能動義手使用者の基礎的操作技能を評価する指標を作成し,臨床評価に応用することを目的としている.今年度は考案した評価項目ならびに評価法を基にデータ収集を行う予定であったが、妊娠・出産により研究協力者との今後の研究方針の確認ならびに関連資料の収集・整理、データ収集に伴う準備を行うに留まった。研究代表者の妊娠・出産に伴い研究の遂行が難しい状況があったため。本研究の背景として,日本では義手使用者の基礎的な操作技能を評価できる評価指標がなく代替として簡易上肢機能検査(STEF)を用いた評価が行われている.しかしながら,STEFは国際標準化されておらず,義手には不可能な物品操作課題があり十分な評価になり得ていない.そこで本研究は,体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を評価する指標を作成し,臨床評価に応用することを目的とする.平成29年度は研究代表者が育児休業を取得したことにより研究を中断したため当該年度の研究実績はない。研究代表者の産前産後および育児休業の取得に伴い研究を一時中断したため本研究課題の進捗状況は遅れている。日本では義手使用者の基礎的な操作技能を定量的に評価できる指標がないため,臨床では代替として簡易上肢機能検査(STEF)を用いた評価が行われている.しかしながら,STEFは国際標準化されておらず,義手には不可能な物品操作課題があり,義手の基礎的な操作技能の定量的な指標になり得ていない.

本研究は,体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を評価する指標を作成し,臨床評価に応用することを目的とした.上肢切断もしくは整形外科疾患のリハ経験のある作業療法士4名と意見交換を行い,評価指標を独自に作成した.また,作成した評価指標の妥当性を検討するために,the Southampton HandAssessment Procedure: SHAPを開発者の許可を得て日本語に翻訳した.翻訳した手引書は逆翻訳を行い,日本語版からの逆翻訳版を作成した.作成した逆翻訳版を原著者に査読させて内容の確認を行ったものをSHAP日本語版として使用した.最終年度は体内力源型能動義手使用者の基礎的な義手操作技能を作成した評価指標とSHAPとで測定し,測定した値の解析を行った.当初は,これまでの研究で使用していた機器の中で廃盤となった機器に関しては代替となる機器を購入する方向で検討していたが,研究協力者と検討した結果,新たに測定可能な機器を開発することとした。また,併せて他の項目においてもタブレットやPCと連動させて測定できる方法に変更可能な項目に関して検討し,検討した項目に関する機器の試作も実施した。このため、機器の検討・開発に時間を要したことから当初予定していたデータ収集まで至らず、進度が遅れている状況である。今年度は考案した評価項目に関する参考値のデータ収集およびSHAPに関するデータ収集を中心に研究計画を組む予定である。平成30年度より研究を再開する予定である。再開後は、データ収集・データ解析・成果のまとめを行う。27年度は、試作した機器の本作を製作する。また、倫理審査申請を行い、承認後、本作を用いて上腕切断者へのデータ収集を開始する予定である。SHAP日本語版に関しては、原作者側と精査した内容を踏まえた最終版の日本語版を作成する。作成した手順書を用いて一般成人を対象にSHAPを実施し、信頼性の検証を行う予定である。当初実施予定であったデータ収集まで至らなかったため繰越金が生じた.妊娠・出産に伴い研究を遂行することが難しい状況にあったため.研究代表者の産前産後および育児休業の取得に伴い研究を一時中断したため研究計画の進捗に遅れが生じ,現時点で余剰金が発生している.次年度は主にデータ収集に伴う被験者への謝金やデータ解析に要する費用ならびに成果発表に伴う費用等で資金を使用する予定である.これまでの研究で使用していた機器の中で廃盤となった機器に関しては代替となる機器を購入する予定でおり、そのための資金を計上していた。しかし、検討の結果、新たに機器を開発することとし、その余剰金が発生した。また、機器の検討や開発の決定までに時間を要し,当初予定していたデータ収集まで至らなかったことから、さらに差額が生じた。データ収集は次年度に実施するため,28年度の支出は主に,研究協力者および実験協力者への謝金,データ収集に要する施設への旅費,研究打ち合わせに要する費用,記録機器などの必要機器の購入費などを予定している.データ収集の際の被験者への謝礼や消耗品,成果発表等における使用を計画している.27年度は、試作した機器の本作の製作および研究協力者への謝金を中心に執行していく予定である。本作の製作では、本研究は研究協力者と協力してデータ収集を行うため、機器が2台必要となり、2台分の本作製作費を計上している。