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ドイツ神秘思想のマリア論―処女降誕をめぐるマリア図像と神の子の誕生論―

とくにエックハルトのラテン語著作集、およびドイツ語著作集の各テキストを精査した結果、「魂の根底」が「神の根底」を映しこんでいるというエックハルトの理解が、伝統的な「imago Dei論」を踏まえた上で、さらに独自に理解されたエックハルトの「imago Dei論」に基づいているこが判明した。本年度も「受胎告知」図像の映像資料および研究論文等の資料を、とくに作例が集中しているイタリア各地で収集し、そのイコノグラフィー的解釈をまとめることに専念することができた。本研究は、中世のドイツ神秘思想家マイスター・エックハルトの「魂の内における神の子の誕生」の教説を、キリスト教伝統のマリア論の観点から解釈するものである。マイスター・エックハルトの中心的教説である「魂の内における神の子の誕生」は「魂におけるマリア論」として解釈されうるものである。魂のうちで神の子の誕生が生起するためには、魂は処女でなければならないとされ、魂の処女性が「魂の離脱」として説かれるのである。そうしたエックハルトの思弁をマリア図像を手がかりにして解釈を試みた。本研究は、きわめて思弁的であるといわれるドイツ神秘思想の救済論、とくにドイツ神秘思想の代表的思想家マイスター・エックハルト(ca.1260-1328)の思想がその根底にマリア論の枠組を持っていることをマリア論の伝統を踏まえて明らかにしようとするものであるが、その際中心的に扱うテーマが、エックハルトの「魂の内における神の子の誕生」の教説といわれるものである。この教説の釈義が当面の課題であったが、研究を進めるうち、ラテン語著作で展開される神学的考察の中にドイツ語著作においてのみ語られている「神性への突破の教説」の神学的根拠に当たるエックハルトの思弁を見つけることができた。これは望外の成果であった。このことに関する論文を早稲田大学大学院文学研究科研究紀要第60輯に「ドイツ神秘思想の依拠する神論の伝統(承前)」として発表した。こうした研究展開を振り返ると交付申請書に記載した「研究の目的」の達成度について(1)当初の計画以上に進展している、と判断することができると考える。宗教哲学これまでの図像学領域研究の知見に基づき、ギリシア教父以来の伝統であるテオーシス(人間神化思想)を「魂の内における神の子の誕生」として受け止め、「処女懐胎」というマリア論の枠組みで構築していったドイツ神秘思想の救済論を、エックハルトの「本質的始原論」の内に定位することを試みたい。さらに永遠の場である「始原」がトリアーデ構造(神の存在、子の誕生、世界の創造)をもって理解されていること明らかにした上で、「魂の内における神の子の誕生」が生起するとされる「魂の根底」が離脱の場として「始原」のトリアーデ構造を映し込んでいるという解釈をこれまでの研究結果としてまとめ上げることをめざす。図像学領域研究では初年度の目標として「受胎告知」図像の現地調査と資料収集を設定し行ったが、この研究計画はおおむね予定通りに進行したと判断される。一方神学・宗教哲学領域のおける研究は、「魂の内における神の子の誕生」の教説をささえ、聖母マリアの処女懐胎の教義を思想化した「離脱の教説」に関して、2つの講演依頼という外的制約もあり、きわめて集中的に研究が進み、思いがけないほどの成果を上げることができたと考えている。幸いに評価も高いものがあった。現在使用のPCが不具合で新規購入予定であったが、応急措置で使用可能になったため2015年度の新機種購入に変更したため繰越金が生じた。当初の年次計画通りに推進する予定である。
人間、国民、市民-市民社会、ナショナリズム、グローバリズムと新しい政治理論

冷戦後の世界において、多くの人びとは我々の政治理論・社会理論が動揺する世界秩序を把握する言葉や構想を持ちえていないことを感じているという現状認識のもとに、近代政治理論における政治主体の基本用語の可能性と限界を追求した。「人間、国民、市民」(ヒューマニティ、ナショナリティ、シティズンシップ)という基幹的主体用語を中心に、「市民社会、ナショナリズム、グローバリズム」という三つの政治思想との関連において、その妥当性を検証し、既存概念の限界を指摘すると同時に、それらに代わる政治主体の可能性を検討した。20世紀末、冷戦後の世界において、多くの人びとが感じている世界秩序の安定感の喪失は、我々の政治理論・社会理論が動揺する世界秩序を把握する言葉や構想を持ちえていないことに対応している。本研究の全体的構想は、近代政治理論において継承された政治主体の基本用語の可能性と限界を追求し、我々の状況を把握し切り開く新しい言葉を構築することを目的としている。具体的には、第一に、「人間、国民、市民」(ヒューマニティ、ナショナリティ、シティズンシップ)という基幹的主体用語を中心に、これらの主体用語を、「市民社会、ナショナリズム、グローバリズム」という三つの政治思想との関連において取り上げる。第二に、政治理論のレリヴァンスに注意を払い、理論的革新とともに、今を生きる人びとの苦しみや惑いに答える政治理論の可能性を探求する。従来の理論の弥縫策的対応ではなく、新しい言葉とそのための理論的展望が必要である。このために、13人の中堅・若手の政治(理論)研究者が、意識的に新しい理論構築に焦点を当て集中的に基本概念の検討を行い、その成果として政治理論叢書を刊行・完結させ、日本の学界では少ない批評・反論を含めた対論形式を含む著作を刊行する。また、日本政治学会、及び世界政治学会でのセッション形成、国際会議およびシンポジウムを行なう。本研究課題は、変革期における新しい政治主体の可能性を探ることを目的としている。初年度は、研究合宿を2回、また政治思想学会での会合や日本政治学会でのセッションでの議論などの形で研究活動を行った。本研究自体は、4年間のプロジェクトであり、その初年度にあたる本年は、萌芽的な研究成果が出てきているということができる。千葉は、平和の担い手に強い関心を示しつつ、9.11以後の新しい段階での平和の探究に対して、日本の平和憲法や和や共生などという概念を手掛かりにした議論を展開した。また木部は一貫して、平等及び福祉国家の問題に関心を持ち、それらの担い手の問題にも議論を展開している。他方、寺島や岡本は、市民運動、NPOの運動などが、都市や市民社会、さらにはネーションなどにどのような形で構成的に関わっているのか、またその可能性を探求し展開している。杉田は特に活発な研究活動を展開し、その成果は、著書としても公刊された。菊池は、共同体論を丹念に追求し、サンデルの主著の翻訳を記念したシンポジウムでの発表も重要な成果である。荒木は、古代政治思想からアプローチし、政治思想学会での報告を行った。その他にも学会の運営企画などを含め各メンバーが多面的な成果をあげている。また、同時に多くのメンバーが、政治主体概念と関連をもつ「シティズンシップ」に対して強い関心を持っており、合宿においては、ゲストとして大澤真幸、岡部一彦を迎え、この概念に対して、歴史的に、また現代の多様な諸側面からのアプローチを持った研究発表がなされた。本研究自体は、4年間のプロジェクトであり、その第2年度である。本年度は、研究合宿を2回行った。第一に、今年度は新しく、実地調査を導入した。夏の合宿において、大阪市の釜ケ崎地区における実地調査を行った。また、12月の合宿においても、浜松市でブラジル系移民・外国人労働者関連地区を訪問した。研究報告としては、それぞれの合宿で、合計13本の報告セッションが設けられ、非常に活発な議論が行われた。なお、ゲストとして、遠藤比呂通弁護士(前東北大学助教授)、及び大竹弘二(南山大学助教授)氏を招き、活発な議論を行った。テーマ的には、本年度は、貧困、福祉国家、平和、といったキーワードを重点にして合宿が行われた。コミュニティやシティズンシップに対する関心も継続されている。第二に、昨年に引き続き、メンバーが国際学会での発表を行ったり、英文発表を行っており、継続的な国際的発表の努力が行われている。第三に、本年度は特に、貧困、及び平和というテーマとの関係で、憲法論との関連が深い研究が多く行われ、その成果も発表されてきている。第四に、最終年度に向けて、研究成果の出版発表のための、企画検討を行い、出版準備をおこなった。第五に日本政治学会においては、政治的シティズンシップ概念に関するセッションを企画運営し、発表者3名、コメンテーター2名、司会を本研究会のメンバーで行い、研究成果の発表を行うことができた。

本共同研究は、変革期における新しい政治主体の可能性を探ることを目的としている。本年度は、4年間のプロジェクトの第3年度に当たる。研究合宿を1回行い、冬合宿は行わず最終年度に向けて執筆作業に集中することとした。第一に、今年度は夏の研究合宿においては、立岩真也(立命館大学教授)氏を招き、狭い意味での政治思想を超えて、哲学的・社会学的な、非常に広範囲な論題について活発な議論を行った。特に、コスモポリタニズム、エコロジカルな市民性、さらには「人間」概念との関係で、これまでの議論よりも普遍主義的な視点よりの研究関心が中心となったが、それらと従来の議論の緊張感が維持されつつ研究がなされてきている。その成果も発表されている。もちろん、コミュニティやシティズンシップという継続的な基本関心も維持されている。本研究会の特質である、古代政治思想研究者から現代エコロジーやNPO論研究者にまで至る広範囲な参加が、研究会の議論に多様な質を与えている。第二に、日本政治学会、及び政治思想学会において、共同研究者が研究報告のみならず、司会やコメンテータなど多様に活躍している。第三に、昨年に引き続き、メンバーが英文発表を行っており、継続的な国際的発表の努力が行われている。第四に、最終年度に向けて、研究成果の出版発表のための、企画検討を行い、特に後半は最終年度のための調整作業が行われた。今年度は、最終年度にあたる年である。また、同時に東日本大震災によって、我々の社会に大きなインパクトが与えられた年である。本年度は、一部の研究分担者に、震災の影響が出て昨年度の研究計画が今年度にずれ込むなどの影響があった。また、最終年度に海外からの研究者の招聘も考えていたが、東日本大震災後の原発を巡る不安のなかで、具体化することはできなかった。しかし、幸いにして、これまで3年間の蓄積をもとに、夏以後はきちんとした研究を継続することができた。夏合宿においては、当初の本研究会の趣旨にそって、政治思想研究者が具体的に社会的現実から学ぶ機会を作るためにも、東日本大震災の被災地での合宿を行い、仙台地域の海岸部、東松島町、石巻市などの被災地を回った。また七ヶ浜町では救援活動を行っているNPOからの聞き取りや松島町では地域寺院からの被災に関する聞き取りを行った。もちろん、研究合宿であることから、最終年度に向けての打ち合わせやそれに照準を合わせた形での研究交流を行った。秋の時点で、研究代表者である岡本が、「政治主体」概念についての手がかりとなるペーパーを執筆し、それを踏まえて、最終報告書の執筆に向けて、各自の研究を進展させることに集中した。なお、政治思想学会、及び政治学会での研究分担者の発表や活動も多くなされ、それぞれの研究成果の発表も下記のように行われている。科学研究費の報告のための要件とはされていないが、成果物をきちんと作成することが必要と判断し、その計画を立て、2012年3月には、A4判、218ページの最終報告書を作成し配布した。今後この報告書をベースとして、出版に結び付けるべく、計画を立てて取り組んでいる。
体の左右を決定づけるノード繊毛におけるカルシウム動態の可視化

本研究では、体の左右軸決定に関わるノードの不動繊毛でのカルシウム動態の可視化を目指した。マウスの8日胚に見られるノードには、回転性の運動を行い流れを作り出す動繊毛とノード周縁部に局在する不動繊毛とが見られる。この不動繊毛は動繊毛により作り出された流れを感知することで左右の決定を行う。このとき、不動繊毛からカルシウムが流入すると推測されていたが、マウス胚性繊毛においてはっきりとしたカルシウム流入を可視化した研究はなかった。本研究では、繊毛由来のカルシウム流入を可視化を試みた。これまでに、我々はマウスのノード繊毛特異的にカルシウムセンサータンパク質GCaMP6を発現させ、繊毛におけるカルシウム濃度変化を可視化した。また、細胞質におけるカルシウムシグナルと繊毛におけるカルシウムシグナルの関係性を解析するために、繊毛でのGCaMP6とともに細胞質性のカルシウムセンサーとしてRGECO1を発現するラインを用いた解析を行った。その結果、細胞質、繊毛ともに非常に活発なカルシウム濃度の振動を示すことが明らかとなった。一方で、我々の研究により細胞質でのカルシウム上昇が繊毛へと流入することが示され、繊毛でのカルシウム濃度変化を論ずる上では、繊毛からのカルシウム流入と細胞質からのカルシウム流入を区別する必要があることが明らかとなった。我々は細胞質におけるカルシウムの阻害条件下において、ノードの左側繊毛特異的なカルシウム変動の存在を示し、繊毛由来のカルシウム流入の存在を示した。また、細胞質におけるカルシウムの振動頻度は、ノードの左側の細胞で高くなっており、繊毛に対するシグナルの下流に、細胞質におけるカルシウム振動が存在することが示唆された。これらの知見から、胚における対称性の破れに対して、カルシウムが重要な役割を有することが強く示された。本研究では、体の左右軸決定に関わるシグナル経路を明らかにすることを最終目標とし、特に左右決定に関わることが強く推測されているノードの不動繊毛におけるカルシウム動態の可視化を目指している。この不動繊毛は動繊毛により作り出された流れを感知することで左右の決定を行うと考えられている。このとき、不動繊毛からカルシウムが流入することがシグナルの開始であると考えられているが、シグナルの実体は不明であり、マウス胚性繊毛においてはっきりとしたカルシウム流入を可視化した研究はない。本研究の目的は、繊毛由来のカルシウム流入を可視化し、これが左右決定に関わることを示すことである。これまでに、我々はマウスのノード繊毛特異的にカルシウムセンサータンパク質GCaMP6を発現させ、繊毛におけるカルシウム濃度変化を可視化することに成功した。現在は、左右軸決定へのこれらカルシウムシグナルの寄与と、細胞質におけるカルシウムシグナルと繊毛におけるカルシウムシグナルの関係性の解析を行っている。また、共同研究を通して、流れの刺激の実体を明らかにする研究にも取り組んでいる。我々は、現在までにマウス胚のノード繊毛に着目したカルシウムイメージングに取り組んだ。現在までに、マウス胚ノード細胞において、ノード繊毛をカルシウムセンサーGCaMP6および蛍光タンパク質mCherryでラベルするライン、さらに繊毛をGCaMP6、細胞質をRGECO1でラベルするラインの準備を完了した。さらにそれを観察するためのスピニングディスクタイプの共焦点顕微鏡(CSU-W1)を利用することで、十分な時間解像度で繊毛、細胞質におけるカルシウムシグナルを捉えることができた。これらの観察により、左右決定に関わる繊毛におけるカルシウムシグナル、さらにその下流に存在すると思われる細胞質におけるカルシウムシグナルの可視化と解析を試みている。特に、繊毛におけるシグナルと細胞質におけるカルシウムシグナルの関係性、さらに繊毛におけるシグナルが左右決定におけるシグナルに関わるかどうかを明らかにするための解析に取り組んでいる。また、共同研究者とのプロジェクトである、光ピンセットによる不動繊毛に対する物理的刺激をあたえ、イメージングを行うシステムを立ち上げた。現在理化学研究所の当研究室におけるシステムで充分な精度で物理的刺激を与えることに成功している。

一方で、我々の研究により細胞質でのカルシウム上昇が繊毛へと流入することが示され、繊毛でのカルシウム濃度変化を論ずる上では、繊毛からのカルシウム流入と細胞質からのカルシウム流入を区別する必要があることが明らかとなった。我々は細胞質におけるカルシウムの阻害条件下において、ノードの左側繊毛特異的なカルシウム変動の存在を示し、繊毛由来のカルシウム流入の存在を示した。また、細胞質におけるカルシウムの振動頻度は、ノードの左側の細胞で高くなっており、繊毛に対するシグナルの下流に、細胞質におけるカルシウム振動が存在することが示唆された。これらの知見から、胚における対称性の破れに対して、カルシウムが重要な役割を有することが強く示された。今後は、現在までにみられているカルシウムシグナルが、左右決定に関わることかどうかを解析する。現在観察されている繊毛でのシグナルが、実際に繊毛に局在するチャネルを由来するものであることを確認する。また、当研究室が保持する、繊毛が不動となる変異体や繊毛を有さない変異体の観察を行い、繊毛、細胞質のシグナルを定量的に評価、比較する。特にノードの左右でシグナルに何らかの違いがないかを詳細に解析する。また、さまざまな阻害剤を用いた実験を行い同様の解析を行う。また、共同研究を通して、不動繊毛が感知するシグナルが化学的なものか物理的なものかを判別するための実験にさらに集中的に取り組む。光ピンセットによる物理的刺激によって繊毛に局在するチャネルを介したカルシウム流入が誘起されるかどうか、さまざまな刺激の与え方をおこなうことで検討する。これらの実験により、これまで不明であった不動繊毛がノード流からシグナルを受け取る仕組みを明らかにする実験を行う。これらの研究により、これまで不明な部分が多かった、左右決定時における繊毛とカルシウムの役割について明らかにする。
関節水症の病態解明(リンパ管系の関与に関する酵素組織化学的研究)

正常関節滑膜および実験的関節炎での滑膜におけるリンパ管分布と関節液貯留・排導機序平成7年度に報告した,ヒト(慢性関節リウマチ,変形性膝関節症)およびニホンザルの関節滑膜のリンパ管,血管の分布(International Orthopaedics,Vol.19,396-402)をふまえ,動物モデルとして正常膝関節(ラット)関節内にlatex,fluoresbriteをトレーサーとして注入し,経時的に走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を駆使し観察した.その結果,関節内に注入された粒子は関節内で好中球およびマクロファージに貪食されること,マクロファージによって滑膜内に運ばれ肉芽組織の一部となること,さらに粒子の一部はマクロファージにより滑膜の5^l-nucleotidase陽性のリンパ管を経由し所属リンパ節へ運ばれることなどが明らかとなった.これらの結果はJournal of Orthopaedic Surgery誌(Vol.2,1997,in press)にて報告した.実験的関節炎(ラットコラーゲン関節炎)においても同様の実験を行った.その結果,滑膜細胞が増殖し滑膜が肥厚し炎症細胞の浸潤した関節においても,粒子はマクロファージに貪食され,滑膜内やリンパ節に運ばれていたが,リンパ節に達するまでの時間は遅延していた.この結果は第20回日本リンパ学会(1996年6月)にて報告した.正常関節滑膜および実験的関節炎での滑膜におけるリンパ管分布と関節液貯留・排導機序平成7年度に報告した,ヒト(慢性関節リウマチ,変形性膝関節症)およびニホンザルの関節滑膜のリンパ管,血管の分布(International Orthopaedics,Vol.19,396-402)をふまえ,動物モデルとして正常膝関節(ラット)関節内にlatex,fluoresbriteをトレーサーとして注入し,経時的に走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を駆使し観察した.その結果,関節内に注入された粒子は関節内で好中球およびマクロファージに貪食されること,マクロファージによって滑膜内に運ばれ肉芽組織の一部となること,さらに粒子の一部はマクロファージにより滑膜の5^l-nucleotidase陽性のリンパ管を経由し所属リンパ節へ運ばれることなどが明らかとなった.これらの結果はJournal of Orthopaedic Surgery誌(Vol.2,1997,in press)にて報告した.実験的関節炎(ラットコラーゲン関節炎)においても同様の実験を行った.その結果,滑膜細胞が増殖し滑膜が肥厚し炎症細胞の浸潤した関節においても,粒子はマクロファージに貪食され,滑膜内やリンパ節に運ばれていたが,リンパ節に達するまでの時間は遅延していた.この結果は第20回日本リンパ学会(1996年6月)にて報告した.正常関節滑膜および実験的関節炎での滑膜におけるリンパ管分布と関節液貯留・排導機序1)正常膝関節滑膜(ニホンザル)において5'-Nase-ALPase二重染色法を行い、リンパ管と血管の染別に成功した。その結果滑膜表層にもリンパ管、とくにinitial lymphaticsの存在が明確となった。また、全載標本では膝蓋骨周辺の滑膜に特に発達したリンパ管のnetworkが存在することを見い出し、これらの詳細をInternational Orthopaedics誌(1995,Vol.19,396-402)に報告した。2)正常膝関節(ラット)を用い、その関節腔内にlatex、fluoresbriteを注入する実験では、とくに走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を駆使し観察し、その結果、好中球やマクロファージがそれら粒子を貧食する様子や肉芽組織の形成過程があきらかとなった。関節腔内に注入された粒子は関節腔内でマクロファージに貧食され、滑膜内に運ばれ、マクロファージに取り込まれた状態で肉芽組織の中に認められた。また貧食したマクロファージが5'-Nase陽性のリンパ管を通り、粒子をリンパ節へ運ぶ様子も観察された。これらの結果は第19回日本リンパ学会(1995年6月)および第10回日本整形外科基礎学術集会(1995年10月)にて報告した。3)実験的関節炎(ラットコラーゲン関節炎)に関しては現在検索を進めている。正常関節滑膜および実験的関節炎での滑膜におけるリンパ管分布と関節液貯留・排導機序平成7年度に報告した,ヒト(慢性関節リウマチ,変形性膝関節症)およびニホンザルの関節滑膜のリンパ管,血管の分布(International Orthopaedics,Vol.19,396-402)をふまえ,動物モデルとして正常膝関節(ラット)の関節内にlatex,fluoresbriteをトレーサーとして注入し,経時的に走査型電子顕微鏡および透過型電子顕微鏡を駆使し観察した.その結果,関節内に注入された粒子は関節内で好中球およびマクロファージに貪食されること,マクロファージによって滑膜内に運ばれ肉芽組織の一部となること,さらに粒子の一部はマクロファージにより滑膜の5'-nucleotidase陽性のリンパ管を経由し所属リンパ節へ運ばれることなどが明らかになった.これらの結果はJournal of Orthopaedic Surgery誌(Vol.2,1997,in press)にて報告した.実験的関節炎(ラットコラーゲン関節炎)においても同様の実験を行った.

その結果,滑膜細胞が増殖し滑膜が肥厚し炎症細胞の侵潤した関節においても,粒子はマクロファージに貪食され,滑膜内やリンパ節に運ばれていたが,リンパ節に達するまでの時間は遅延していた.この結果は第20回日本リンパ学会(1996年6月)にて報告した.
光合成膜ガラクト脂質の生理機能解析

光合成膜に多量に存在するガラクト脂質の生理機能を明らかにするため、ガラクト脂質を他の糖脂質やリン脂質と置換した。その結果、ジガラクトシルジアシルグリセロールはホスファチジルコリンと置換することができなかったが、グルコシルガラクトシルジアシルグリセロールとは置換することができた。このことは、現在光合成膜に使われている糖脂質の少なくとも一部は、リン脂質で置換することはできないが、構造の近い他の糖脂質であれば機能相補できることを示している。光合成反応の場であるチラコイド膜の脂質組成は、酸素発生型光合成生物で非常によく保存されており、多量のガラクト脂質を含むことが知られている。しかし、何故チラコイド膜に多量の糖脂質が存在するのか、なぜ極性頭部にガラクトースが利用されているのか、その理由は明らかではない。植物葉緑体およびその進化的な祖先であると考えられているシアノバクテリアの光合成膜は、非常によく似た脂質組成をしているが、その合成経路は異なることが分かっている。光合成膜に最も多く存在するモノガラクトシルジアシルグリセロール(MGDG)は、植物葉緑体ではMGDG合成酵素によるジアシルグリセロールへのガラクトース転移反応により合成されるのに対し、シアノバクテリアではまずグルコースがジアシルグリセロールに転移された後、異性化酵素によってMGDGに変換される。そこで、このシアノバクテリアの異性化酵素に着目した。この遺伝子を同定し、遺伝子破壊株が作製できれば、MGDGの極性頭部がグルコースに置き換わった株が単離できると期待される。まず、比較ゲノム学的解析からこの異性化酵素の同定を試みた。この合成経路はシアノバクテリアでしか知られていないことから、ゲノム情報が公開されている13種のシアノバクテリア間で保存されており、かつ他の生物種で保存されていない遺伝子を検索したところ、75の遺伝子が抽出された。このうち異性化酵素と有意な相同性を持つ遺伝子の破壊を試みたところ、完全に破壊することができなかったことから、この遺伝子は必須遺伝子であると考えられた。現在、植物型MGDG合成酵素を導入した株や、MGDGを加えた培地を用いて、この遺伝子が完全に破壊された株が単離できないか調べている。光合成反応の場であるチラコイド膜は、多量のガラクト脂質を含むことが知られている。植物葉緑体およびその祖先であると考えられているシアノバクテリアの光合成膜は、非常によく似た脂質組成をしているが、その合成経路は異なることが知られている。チラコイド膜に最も多く存在するモノガラクトシルジアシルグリセロール(MGDG)は、葉緑体ではMGDG合成酵素によるジアシルグリセロールへのガラクトース転移反応により合成されるのに対し、シアノバクテリアではまずグルコースをジアシルグリセロールに転移してモノグルコシルジアシルグリセロール(MGlcDG)を合成した後、異性化酵素によってMGDGに変換する。本研究ではこのシアノバクテリアの異性化酵素に着目し、比較ゲノム学的解析からその候補遺伝子を抽出した。この候補遺伝子は、完全に破壊することができなかったことから、必須遺伝子であると考えられた。そこで、植物型MGDG合成酵素を導入し、MGDG合成のバイパス経路を持つ株を作成することを計画した。まず、ラン藻内で恒常的に発現するConIIプロモーター制御下でキュウリMGDG合成酵素遺伝子を発現させた株を用いたところ、候補遺伝子を破壊することはできなかったので、次に、より活性が高いことがわかっているGST融合型MGDG合成酵素を用いた。MGlcDG合成酵素のプロモーター制御下でこの融合遺伝子を発現させたところ、MGlcDG合成酵素遺伝子と完全に置きかえることが出来た。このことは、ラン藻特有のMGDG合成経路は通常の培養条件では必須ではないことを示している。この株が作成できたことにより、上記候補遺伝子を含む、目的の異性化酵素候補遺伝子の破壊による同定が可能となった。
炎症性肺疾患に対する温度応答DDSの基盤技術に関する研究

本研究の目的は、炎症性の肺疾患部位特異的に効率的に薬物放出できるような、薬物送達システム(通称:DDS)技術の開発を行うことである。体温よりも温度が高い条件に敏感に応答して薬物放出するナノサイズの脂質カプセル(リポソーム)の開発に成功した。ある種の界面活性剤をリポソームに組み込むことで、温度応答性を示しつつも、肺組織内に対する炎症応答・細胞毒性はない経肺投与型製剤を作成することに成功した。本研究の目的は、申請者が開発した温熱感受性リポソームのもつスマートな温度応答能力を利用したドラッグデリバリーシステム(DDS)が、炎症を引き起こす肺疾患に対して、有効な戦略になりうるのかどうかを検証することであり、実験評価系を確立して当該分野の基盤形成を行うことである。平成25年度は、新しい温熱感受性リポソーム製剤の開発とその評価法について焦点をあてた。温熱感受性リポソームのリポソーム組成の選定にあたり、「ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)」と「PEG系界面活性剤の一種であるポロクサマー188(Poloxamer 188)」をリポソーム組成とするリポソームを調製し、in vitro条件下における薬物放出パターンについて評価を行った。薬物は蛍光マーカーであるカルセインをモデル薬物としてリポソーム内に封入を行った。その結果、37度(体温条件下を想定)においてリポソームからのカルセインの放出はほとんど認められなかった。これに対し、42度(加温条件下を想定)においては顕著なカルセインの放出が確認された。またDPPCに対するPoloxamer 188の含有率を増加させるにつれてカルセイン放出率は高くなったことから、目的の温度における薬物放出はPoloxamerの含有率によって微調節が可能であることが強く示唆された。今後の課題としては、モデル薬物ではなく実際の治療薬物においても放出がおきるかどうか確認する必要があると考えられる。また肺組織内におけるリポソームの安定性および薬物放出パターンに与える影響、そして体内動態について知ることが重要であり、さらなる検討が必要であるといえる。前年度に引き続き、炎症性肺疾患に有効な温度応答性リポソーム(リン脂質であるDPPCとPEG系界面活性剤であるポロクサマー188から構成されるリポソーム)を用いたドラッグデリバリーシステム(DDS)に関する研究を行った。二年目は、申請書に記載したように「リポソーム製剤から放出された薬物の肺内分布および炎症部位における評価法の確立」を構築することを目的とし、肺組織炎症においてリポソームを経肺投与する際、重要となる要因について調査を行った。肺組織内環境を模した状況の一つとして、気管支・肺胞洗浄液(BALF)中における温度応答性リポソームの安定性において評価を行った。その結果、我々が調製したリポソームは、等張緩衝液中と比較し、BALF中において薬物放出(今回はモデルとして蛍光マーカーのカルセインを使用)が促進されることがわかった。また、炎症誘導したBALF中において、タンパク濃度が顕著に上昇していた。そこで申請者は、BALF中の主要タンパクの一つであるムチンに着目し、ムチン中におけるリポソームの安定性について検討を行った。その結果、ある濃度域において、ムチンの濃度を上げていくにつれて、リポソームからの薬物放出が顕著に促進することがわかった。これに対し、同様に主要タンパクの一つであるアルブミン存在下ではリポソームの薬物放出がほとんど見られなかった。以上より、肺組織炎症条件下において、リポソームを経肺投与する際、BALF中のムチン濃度がリポソームの安定性ならびに薬物保持を予測する一つの指標となりうる可能性が示唆された。申請者は、肺組織炎症時におけるリポソームのDDS研究を行う際に重要な情報を見い出すことができた。その一方で、検討するにつれて、炎症部位は必ずしも温度上昇を伴わないことが明らかとなってきた。そのため、他の環境応答性DDSを併用するとさらに有用な研究内容になると考えられた。過去二年間において、リン脂質であるDPPCとPEG系界面活性剤であるポロクサマー188からなるリポソームを調製し、その機能および、炎症性肺疾患(肺炎、肺がんなど)における肺組織内環境がリポソームに与える影響について検討を行ってきた。今年度は、治療を視野に入れ、カルセインという蛍光マーカーではなく、抗がん剤であるドキソルビシンを用い、経肺投与に有効なドキソルビシン封入リポソーム製剤の開発を行った。条件の検討を行うことにより、ドキソルビシンを高効率でリポソーム内に封入することに成功した。またリポソーム内にドキソルビシンを導入するためのリポソーム内溶液(緩衝液)を選択することで、温度応答性に変化が生じたことから、リポソームの温度応答性はリポソームの構成膜だけでなく、リポソーム内における薬物の保持状態も大きく影響することを見い出した。このリポソームの脂質組成をラットに経肺投与したところ、炎症性サイトカインの増加は認められなかった(in vivo)。さらに、このリポソームは、細胞株を用いたin vitro条件においても、細胞毒性を示さないことより、経肺投与に適していると推察される。そして、本リポソームは、加温することで薬物であるドキソルビシンを放出し、肺がん細胞株に対して、殺細胞効果を示したことから、非常に有用な経肺投与型リポソーム製剤として期待できた。

また、二次的な研究成果であるが、本研究計画を遂行している際に、本リポソームは温度だけでなく炎症部位で高発現する酵素であるホスホリパーゼA2においても高感度に応答し、薬物を放出することを見出している。これらの新たな知見も合わせて、本計画については、引き続き、検討を重ねていく予定である。本研究の目的は、炎症性の肺疾患部位特異的に効率的に薬物放出できるような、薬物送達システム(通称:DDS)技術の開発を行うことである。体温よりも温度が高い条件に敏感に応答して薬物放出するナノサイズの脂質カプセル(リポソーム)の開発に成功した。ある種の界面活性剤をリポソームに組み込むことで、温度応答性を示しつつも、肺組織内に対する炎症応答・細胞毒性はない経肺投与型製剤を作成することに成功した。2年目における目的は、「リポソーム製剤から放出された薬物の肺内分布および炎症部位における評価法の確立」であった。その結果、気管支・肺胞洗浄液(BALF)中の、ムチン濃度がリポソームの安定性に大きく寄与しており、ムチン濃度がリポソームの安定性予測の指標として期待できる。今後も、多くの要因の検討や体内動態について検討の必要はあると考えられるが、おおむね順調に進展していると考えられる。現在、本研究成果についての内容についてHPを作成予定(更新中)である。物理系薬学今後も、申請者が開発した温熱感受性リポソームを用いた検討を行っていく予定である。ただし、調査の結果、肺組織内が炎症している場合、肺組織内環境が様々な観点において変化していることから、温度応答性だけに着目したDDS研究を行っていくのではなく、他の環境応答性を利用したDDSの研究を行っていくことがより有用な戦略となると考えられる。平成25年度における目的は、炎症性肺疾患におけるDDSにおいて有用な温熱感受性リポソームの候補を発掘することであった。Poloxamerは細胞毒性が比較的少ないことで知られており、医薬品添加剤にすでに使用されている化合物であるため、生体、特に肺組織に対しても有用なリポソーム製剤になることが期待できる。さらにPoloxamerシリーズを含めることで特定の温度領域(35-42度)において温度依存的な薬物放出を行うことが強く示唆されたことから、Poloxamer含有DPPCリポソームはスマートな温度応答を有するリポソームであるといえる。以上をまとめると、本研究計画はおおむね順調に進展していると考えられる。試薬を安価に購入することができたため。今後は、申請書の研究計画に従い、リポソームから肺組織中に放出される薬物の放出および分布の評価・解析を行う予定である。また、平成25年度ではモデル薬物を用いて薬物放出を検討したが、実際の治療薬物を用いた検討を行うことが重要であるといえる。さらに、薬物放出の検討は、これまで緩衝溶液を用いて評価を行ってきたが、より肺組織内の環境に近づけた状況における薬物放出について検討を行うことが、効率的なDDS製剤の開発に有効な手法になりうると考えている。高額ではないため(<50000円)、当初の実験計画に従い研究を進めていく予定である。
入院中の統合失調症者のメタ認知の向上を目指した看護介入の効果

統合失調症者の対人機能の基盤になっているメタ認知機能の向上を目指した看護介入プログラムを作成し、その効果を明らかにすることを目的とした。看護介入プログラムは、心理教育、ワークシートを用いた面接を6回で構成した。同意が得られた対象は、男性、女性各1名であった。メタ認知機能を測定する尺度MAS-Rは、日本語版を作成し、妥当性が確保された。介入によって男性は、改善が認められなかったが、女性には有用性が示された部分も認められた。しかし本研究における信頼性はやや低く、対象者数が少ないことと関連があると考えられた。今後も検討を重ねていきたい。成25年度は、統合失調症者のメタ認知機能を測定するSemerari(2009)らが測定したMetacognition Assessment Scale2009-R(以下、MAS-R)と評価マニュアルを日本語に翻訳し、日本語版の妥当性を確認すること、及び看護師が実施可能な統合失調症者のメタ認知機能を高める看護介入プログラムを作成することを目的とした。調査項目及び評価マニュアルについて著者から許可を得、日本語に翻訳しバックトランスレーションを行った。調査項目については、メタ認知機能の測定に妥当であるかを確認する調査用紙を作成し、関東甲信地区にある精神科病院で協力を求めた。対象は修士課程を修了した精神科看護師50名であった。評価項目の妥当性を質問紙で調査した結果、修士課程を修了した26名の看護師から回答を得た。評価カテゴリである「自分自身の心の理解」「他者の心の理解」「心理的制御の問題対処」の3つのカテゴリ及び20全ての調査項目について「妥当である」、「ほぼ妥当である」との回答を得た。同時に研究協力者の協力を得て、精神科の看護師が日常的な看護の中で実施可能なセルフモニタリングを通してメタ認知機能を高められるような介入プログラムを作成している。【今後の予定】現在のところ対象者人数が少ないことから、再度調査を実施し、精度を高める予定である。また評価マニュアルについて専門看護師と話し合いを実施し、確認を行う。また作成中の介入プログラムを対象者に実施し、日本語版評価マニュアルを活用し、日本語版MAS-Rで評価を実施する予定である。本研究は、統合失調症者の対人機能の基盤になっているメタ認知機能の向上を目指すことを目的とした看護介入プログラムを作成し、その効果を明らかにすることを目的とした。自分自身の感情への気づきを高めるように、自分の感情を感じた状況やその時の行動、その感情を感じたきっかけについて述べてもらうような全6回からなるプログラムを開発し、精神看護の修士課程を修了した専門家から妥当性があるとの確認を得た。また有効性を明らかにするために、メタ認知機能を測定するSemerariらが開発したMASーR(Meta cognition Assessment Scale 2009-R)およびLASMI-I(Life Assessment Scale for the Mentally Ill Interpersonal relation)を用いて評価を行った。MASーRは、日本語への翻訳の後、バックトランスレーションを行い、精度を高めた。その他、対象者選択に際してTMT(Trail Making Test)、知能検査を実施した。対象者の選択基準に該当し、同意の得られた30歳代の統合失調症2名が対象となった。1名の対象者はメタ認知の向上が認められたが、1名には改善が認められなかった。改善の認められなかった対象者は、知能検査には差が認められなかったが、TMTに要する時間が長く神経認知機能の低下、陰性症状による会話の困難や自発性の低下が認められたため、それらの神経認知機能の影響が大きかったのではないかと考えられた。改善の認められた対象者は、自らの感情の状態に気づき、自分の意思を明確にすることができるようになった。しかし、本研究の結果を以て本プログラムの有効性が明らかになったとは言い難く、さらに継続する必要性が示唆された。精神看護学調査項目の妥当性について、回収できた調査票が少なかったために統計的に妥当であるとまでは言えない。もう少し対象者数を増やす必要がある。その他、介入プログラムの作成などは概ね計画通りに進展している。1)調査用紙の妥当性の検討については、引き続き調査を行い、調査用紙を確定する。2)介入用プログラムは、専門家に妥当性を確認する。3)統合失調症者を対象にプログラムを実施し、評価用紙及び評価マニュアルを用いて評価を行う。
原核生物Ｐ４５０を機能発現する植物形質転換系の構築

本課題では、(1)P450の活性を短時間で評価できる植物形質転換系の構築を行うこと、次に、構築した植物形質転換系を用いて、(2)P450を葉緑体で機能させるための植物発現系の開発を行なうことを目的とした。タバコ(Nicotiana benthamiana)を利用したアグロインフィルトレーション法は、発現ベクターで形質転換したアグロバクテリウムをシリンジでタバコ葉に注入することにより、数日後に目的遺伝子を一過的に発現させるという方法であり、複数の生合成遺伝子を同時に植物へ導入して一過的過剰発現を行うことにより、植物体内での目的代謝産物の生成を短時間で評価できる。今回、モデルP450としてヒト由来ミトコンドリア局在型P450であるCYP11Aと、植物由来ステロイド水酸化P450であるCYP90Bを用いて発現系を構築した。ヒトCYP11AはN末をER局在シグナルと葉緑体局在シグナルに改変した発現ベクターを構築した。一方、CYP90Bはそのまま過剰発現させることとした。CYP90B発現ベクターを導入したアグロバクテリウムをタバコ葉にアグロインフィルトレーションし感染3日後の葉をGCMSにより分析した結果、ステロイド22位水酸化物を検出することができた。このことから本発現方法によりP450を植物で一過的発現させることによりP450活性を評価できることを確認した。現在、CYP11A発現系を解析中である。次に、P450が葉緑体の電子伝達系とカップリングできることを確認するため、大腸菌で発現させたCYP90Bをタバコ由来チラコイド膜と混合して、In vitroで酵素アッセイを行った。その結果、光依存的に酵素活性を検出することができたことから、チラコイド膜上の電子伝達系から光依存的にP450へ電子が伝達されることを確認した。24年度が最終年度であるため、記入しない。原核生物型P450は、電子伝達系としてフェレドキシン(Fd)およびフェレドキシンNADP^+還元酵素(FNR)を利用する。植物細胞内ではI)小胞体膜上のNADPH-P450還元酵素、II)ミトコンドリア内のFd+FNR、III)葉緑体内のFd+FNRの3つの電子伝達系のいずれかを利用して、効率よく原核生物型P450に電子を伝達させる必要がある。一方、P450を含む生合成マシナリーを植物内で再構築するためには、複数の生合成遺伝子を同時に植物へ導入する必要がある。本課題では、(1)多重遺伝子を発現させるための植物形質転換系の構築を行う。次に、構築した植物形質転換系を用いて、(2)原核生物型P450(原核生物P450および動物ミトコンドリアP450)を植物で機能させるための植物発現系の開発を行なう。今回、植物二次代謝生合成マシナリーのモデルとして、クマリン類生合成に関わる酵素遺伝子の発現ベクターを導入したアグロバクテリウムをタバコ葉に注入し、数日後にクマリン類の分析を行った。柑橘由来のC2H遺伝子を注入した結果、タバコ葉中に多量のスコポレチンとウンベリフェロンを検出した。また、各種移行シグナルを融合した原核生物型P450およびP450反応の基質を生産する酵素の各遺伝子発現ベクターを作成した。今後、アグロインフィルトレーション法により、各発現コンストラクトを評価していく予定である。

次に、P450が葉緑体の電子伝達系とカップリングできることを確認するため、大腸菌で発現させたCYP90Bをタバコ由来チラコイド膜と混合して、In vitroで酵素アッセイを行った。その結果、光依存的に酵素活性を検出することができたことから、チラコイド膜上の電子伝達系から光依存的にP450へ電子が伝達されることを確認した。24年度が最終年度であるため、記入しない。発現系を迅速に評価するための植物発現系の構築を行うことができた。また、評価する対象の原核生物型P450の発現ベクターの一部を構築することができた。P450を含む生合成マシナリーを植物内で再構築するためには、複数の生合成遺伝子を同時に植物へ導入する必要がある。H24年度は、原核生物型P450として動物ミトコンドリア局在型P450に各N末シグナルを付加して発現ベクターを構築する。また、放線菌由来の抗生物質生合成遺伝子クラスター中のGGDPS、ジテルペン合成酵素、P450の各遺伝子を植物の葉緑体で発現するよう改変したベクターを構築する。それぞれをアグロインフィルトレーション法によりタバコへ導入し、代謝産物を分析する。以上にようにして、原核生物型P450の植物細胞での発現系を評価する。
可溶性タンパク質のシナプス前部特異的局在機構

前シナプス部位に存在する可溶性タンパク質、Complexin II(CPX II)の前シナプス部位特異的局在機構解明のため、エピトープタグを付与したCPX IIをラット海馬神経初代培養細胞に導入し、その局在を観察した。局在の偏りを明らかにするため、共焦点レーザー顕微鏡で定量解析用画像を取得した。取得した画像を、画像解析ソフトを応用した粒子解析手順を開発して解析し、CPX IIの神経軸策に偏った局在を明らかにした。さらに欠失変異をCPX IIに導入し、軸策に特異的に局在するために必要な領域の限定を行った。限定した領域に対して相互作用を示すタンパク質を取得し、そのCPXIIのシナプス前部局在への関与を明らかにする事を試みた。決定した領域のペプチドを作製、あるいは当該領域をGSTとの融合タンパク質とし、ラットのシナプス部位を多く含む脳由来の画分と相互作用させ、候補タンパク質の分離を試みたところ、約20K Daのタンパク質の他、4種類以上のタンパク質がこの領域と相互作用することが判明し、現在TOF-MS法によって解析を進めており、数種の候補タンパク質が得られている。また、生体に存在するタンパク質を直接分離する手法では候補分子の分離に限界があるため、Yeast Two Hyrid法を利用した相互作用分子の分離を同時に進めた。この遺伝学的手法により、180の独立クローンが得られ、FK506結合タンパク質や細胞内小器官内移動分子であるSynaptotagmin IVを同定した。さらに数種の神経疾患に関連する病因遺伝子が得られ、それらとのタンパク質レベルでの結合を確認した。研究が完結したとは言い難い状況ではあるが、前シナプス性の病因遺伝子が得られるなど、今後の研究進展に大きく貢献する結果が多く得られた。なお、一部の成果は18年度の国際生化学・分子生物学会議(京都)で発表予定である。決定した領域のペプチドを作製、あるいは当該領域をGSTとの融合タンパク質とし、ラットのシナプス部位を多く含む脳由来の画分と相互作用させ、候補タンパク質の分離を試みたところ、約20K Daのタンパク質の他、4種類以上のタンパク質がこの領域と相互作用することが判明した。17年度はプロテオーム解析を通じて相互作用しているタンパク質を決定する予定である。現在180の独立クローンが得られており、各クローンがどの様な分子であるかを決定中である。この遺伝学的手法によりFK506結合タンパク質や細胞内小器官内移動分子であるSynaptotagmin IVを同定している。今年度は、研究は順調に進行したが、決定的な証拠を示すには至らず、学術誌への発表や学会発表は17年度以降に行う予定である。
II型糖尿病原因遺伝子導入コンジェニックラット作成による糖尿病発症機構の解明

糖尿病モデルラット、OLETFにおける糖尿病原因遺伝子座14QTL領域すべて並びに体重に関するQTL領域に対するコンジェニックラットの作成をスピードコンジェニ:ック法にて完了した。一番狭く導入されたのはNidd6の約10cMであった。残るコンジェニックラットは約2030cM長のOLETFラットの糖尿病原因遺伝子座を含んで導入されていた。他のすべての染色体にわたって遺伝子型を調査したところ、ほとんどの系統で導入遺伝子座領域以外はほとんど基準系統の遺伝子型に置き換わっていた。作成したすべてのコンジェニック系統について、絶食時血糖値、グルコース経口投与後、30,60,90,120分でのグルコース値並びに体重について30週齢にて測定した。その結果、グルミコース値についしてはF.O-Nidd1,F.O-Nidd2,F.O-Nidd3,F.O-Nidd4,F.O-Nidd7,F.O-Nidd-10の6系統のコンジェニック系統が明らかな有意水準において基準系統より高い血糖値を示した。残り7系統ほ基準系統とあまり変わらなかった。その中で3系統は絶食時血糖値に関与するものであったが、もともと絶食時血糖値はOLETFと基準系統間でそう大きな差のないことから、コンジェニック系統では判定が難しいためと考えられた。他の2系統はヘテローシスを示す遺伝子座であり、そのため正常血糖を示したのかも知れない。残りの1系統は体重に関するQTL導入のものであり、その領域はもともと血糖値には関与していない。また、おもしろいことにそのコンジェニックラットは基準系統より低い体重を示した。この3年をかけて、ほぼ予定通り糖尿病遺伝子座に対するコンジェニックラットを作成することが出来た。今後はそれらのより詳細な特性解析、さらには原因遺伝子のクローニングのため、サブコンジェニック系統の作成が必要であろう。肥満と糖尿病に燗する遺伝子座の検索肥満と糖尿病を示すOLETFラットと正常ラットF344とを交配してF1ならびにF2ラット約200匹を作成し、30週まで飼育後、糖負荷試験後の血糖値ならびにインスリン値を測定し、その後、主として肥満に関わる表現型である腹腔(後腹膜、副睾丸、腸間膜)脂肪をそれぞれ取り分け、その重量を測定した。また、皮下脂肪はEM scanにて測定し、全脂肪量測定後、腹腔脂肪を差し引いたものとした。染色体マーカーは約230マーカーを取り上げ、全ゲノムスキャンを行った。その結果、染色体2,4,8,9,14p,14q,17番上にLOD score 4.3を超える遺伝子座がみいだされ、それらをObs1-7と命名した。そして、染色体14番は高血糖、高脂質に関する表現型がリンクしていた。コンジェニック系統の作成前回の研究で見い出した糖尿病に関する遺伝子座の主要な遺伝子座をOLETFラット雄をF344雌に交配して、F1を得、次いでこのF1の雄とF344雌とを交配してN2を得る。このN2雄約2030匹について、全染色体にわたって約20cM間隔でgenotypeを調べる。そしてその中から糖尿病遺伝子座に関する領域がヘテロで、他の領域がホモである確率の最も高い雄の子供(best male)を選択し、これをさらにまたF344雌と交配する。これを5世代くり返すことによりマーカー選択によるスピードコンジェニック系統を2系統作成した。現在予備的な実験を行ってその表現型を調べているところである。これまでに10遺伝子座を越える2型糖尿病原因遺伝子座(QTL)をOLETF糖尿病ラットを用いて同定した。

各遺伝子座はおよそ812%のgenetic variance(糖尿病発症に及ぼす各遺伝子座の貢献度)をもち、それらの複合効果として糖尿病が発症する。しかしそのままでは各遺伝子間相互作用のため、遺伝子そのものの探索は難しい。そこで、個々の遺伝子座を個別に他の基準系統に導入したコンジェニック系統を作成し、あたかもsingle gene支配のような系統の作成は更なる遺伝解析のために重要である。しかし通常の方法ではコンジェニック作出に5年近くかかってしまう。このため、マーカー選抜によるスピードコンジェニック法を利用してその作出を試みた。現在、約10ラインほどのコンジェニック系統ができつつある。全染色体にわたる遺伝子型の検査の結果、それらのすべての系統について、導入OLETF遺伝子領域以外の染色体は基準系統であるF344ホモ型に固定されていた。これはスピードコンジェニックの大きな成果であった。染色体14番のQTL領域を導入したコンジェニック系統については、6週齢で70%膵切除を行い、血糖値の変動等を観察した。その結果、約58%程度の有意な血糖上昇を確認した。従って、ジェノタイプを指標に作成されたコンジェニック系統は、少なくとも調べた1系統については確かに表現型も一致し、求めるコンジェニック系統が作出されていると結論された。なお、上記のコンジェニック系統の逆の形、即ち、OLETFラットを基準系統として、それに高血糖、肥満に関するF344側のQTL遺伝子領域を導入した新たなコンジェニック系統の作出を開始している。糖尿病モデルラット、OLETFにおける糖尿病原因遺伝子座14QTL領域すべて並びに体重に関するQTL領域に対するコンジェニックラットの作成をスピードコンジェニク法にて完了した。一番狭く導入されたのはNidd6の約10cMであった。残るコンジェニックラットは約2030cM長のOLETFラットの糖尿病原因遺伝子座を含んで導入されていた。他のすべての染色体にわたって遺伝子型を調査したところ、ほとんどの系統で導入遺伝子座領域以外はほとんど基準系統の遺伝子型に置き換わっていた。作成したすべてのコンジェニック系統について、絶食時血糖値、グルコース経口投与後、30,60,90,120分でのグルコース値並びに体重について30週齢にて測定した。その結果、グルコース値についてはF.O-Nidd1,F.O-Nidd2,F.O-Nidd3,F.O-Nidd4,F.O-Nidd7,F.O-Nidd-10の6系統のコンジェニック系統が明らかな有意水準において基準系統より高い血糖値を示した。残り7系統は基準系統と余り変わらなかった。その中で3系統は絶食時血糖値に関与するものであったが、もともと絶食時血糖値はOLETFと基準系統間でそう大きな差のないことから、コンジェニック系統では判定が難しいためと考えられた。他の2系統はヘテローシスを示す遺伝子座であり、そのため正常血糖を示したのかも知れない。残りの1系統は体重に関するQTL導入のものであり、その領域はもともと血糖値には関与していない。また、おもしろいことにそのコンジェニックラットは基準系統より低い体重を示した。
表紙細胞と線維芽細胞の相互作用によるIL-6産生亢進の機序

我々が確立した2相分離細胞培養法、及びこれを応用した正カルシウム状態での乾癬皮疹部表皮細胞培養法を用いて実験を行い、以下の結果を得た。1.表皮細胞のcytokine分泌に与える線維芽細胞の影響を検索したところ、乾癬皮疹部線維芽細胞は健常人線維芽細胞に比べ、健常人表皮細胞との同時培養で多量のIL-6を分泌し、この傾向は乾癬皮疹部表皮細胞とのinteractionによってより顕著である事を見いだした。2.同様にTGF-alphaを測定したところ、健常人表皮細胞に比べ、乾癬皮疹部表皮細胞は単独でも多量のTGF-alphaを分泌しており、これは健常人由来及び乾癬皮疹部由来線維芽細胞との同時培養によっても何ら影響を受けない事を見いだした。