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ブランドマネジメントの慣性に関する実証研究：ブランドのあるべき姿の再構築

本研究の目的は、ブランド・マネジメントの慣性が強化・緩和される条件を明らかにすることである。技術革新や顧客ニーズといった外部環境の変化が生じているのにもかかわらず、なぜブランドを革新することが難しくなってしまうのか。それはいかに克服されるのか。これらの問いを踏まえて、強いブランドであるがゆえに生じる負の側面とそれが緩和される条件を複数事例研究によって検討し、組織慣性の理論を構築することが最終的な目的である。本研究の2年目にあたる30年度では、主に2つの作業に注力した。第1に、消費者がブランドに対して正統性を見出す際の手がかりを整理したことである。具体的には、ブランドの正統性に関する先行研究の知見をまとめた上で消費者調査のデータを分析した。主要な発見事実として、所有と共有において消費者によるブランドに対する正統性探求に違いがあることが確認された。第2に、同じ環境に直面している思われる同一業界の企業の革新活動について、事例を収集し定性的な検討を加えた。特に、上述のような所有から共有へと消費者の行動が変化する中で、対応を迫られる企業をリストアップし、対応できた企業と対応に遅れた企業との差異を分析し、慣性が生じる条件と緩和される条件を探索的にではあるが複数抽出した。外部者からすると同じよう見える市場環境および経営資源に対する当事者の見方が異なる要因についても、少数事例に基づいた発見事実ではあるが確認された。ブランドマネジメントの慣性が強化・弱化する条件については、その研究成果の一部を本年度の前半に査読付き論文として発表した(「ブランド・マネジメントに関する慣性間の相互影響関係:ブランド・アイデンティティの再構築を通じた企業成長」『流通研究』)。それ以降の作業として、変化が激しいファッション業界を事例対象としたこの論文で明らかにされた理論的知見の精緻化に取り組んできた。現在まで、業種を問わず事例を収集することに加えて、所有から共有へと消費者の行動が変化する中で、消費者によるブランドの正統性探求の変化と企業による対応という2つの視点を踏まえて組織慣性について検討してきた。前者については、研究当初には想定していなかった論点ではあるが、共有という消費形態に関する既存の消費研究を整理し、今後行う予定の消費者調査の準備をした。本年度秋に実施される学会にて研究成果を発表する予定である。後者については、特にクルマやバイク、ファッションといった所有から共有へと消費形態の変化が見られる業界の企業を対象としてデータを追加した。ブランドマネジメントの慣性として、バイク業界に着目して明らかにされる理論的知見を本年度中に海外ジャーナルに投稿する予定である。ブランドマネジメントの慣性が生じた事例に関して、本国で培われた組織能力やブランドのあるべき姿を踏襲してしまい進出先の国や地域の実情に合わせられないという点を、これまで複数の企業に対する調査で確認してきた。上述した論文はその一つである。新たな市場への進出は、企業にとっての市場環境の変化に関する事例として考えられ、そこでは現地の文化的なコンテクストを踏まえた革新が必要とされる。既にご協力をいただいている西川産業やリコー、大手アパレルメーカーの事例の検討からはじめ、現地化と標準化のやりとりを通じてブランドの正統性が再構築され、現地化が進むプロセスを検討しながら、同様の事例を2次資料から5事例抽出し、インタビュー調査と比較分析を行う。進出先国での現地調査も実施する予定である。技術革新や顧客ニーズの変化といった外部環境の変化が生じているのにもかかわらず、なぜブランドを革新することが難しくなってしまうのか。これらの問いを、組織内外で形成された「ブランドらしさ」とこれまで培ってきたブランド・マネジメントの組織能力に捕らわれ、市場環境の変化に対応できなくなってしまうという慣性に着目して明らかにする。強いブランドであるがゆえに生じる負の側面とそれが緩和される条件を複数事例研究によって検討し、組織慣性の理論を構築することが最終的な目的である。初年度の29年度は3つの作業を実施した。第一に、製品のリブランディングおよびコーポレート・ブランドのもと革新を行った事例の抽出である。二次資料を中心に、組織内部で新たな取り組みが阻まれてしまったものの、その後それを打破した事例を収集した。第二に、市場において「ブランドらしさ」が強固に共有されているブランドの抽出である。消費者のグループ・インタビューと質問票調査を実施し、本物らしさを感じるブランドとその根拠をリストアップした。合わせて、ブランド・イメージが変化したと認識されたブランドについても明らかにした。第三に、組織慣性に関する先行研究の整理である。分析視点を明らかにして事例の収集にいかすだけでなく、ブランド研究における課題についても確認した。上記2つの作業、すなわち事例の収集については、企業と消費者に対する調査によって20ほどに絞込み、一部においてインタビュー調査を始めた。当初の計画にはなかったが、スタートアップ企業においてもブランド・マネジメントの慣性に直面している場合も把握できたことから、3社についてインタビュー調査を行った。3つめの先行研究の整理については、組織慣性の研究とブランド・マネジメントの研究を整理し、単一事例研究を通じてブランド・マネジメントの慣性の強化と緩和の条件を検討した。前者の調査を通じた発見事実の一部を「企業によるブランドの創造的原点回帰と消費者による原点の知覚:ブランドヘリテージを通じた正統性の構築」として論文にまとめ発表し、後者の研究成果の一部は「ブランド・マネジメントに関する慣性間の相互影響関係:ブランド・アイデンティティの再構築を通じた企業成長」として30年度に発刊される学術誌に掲載される予定である。

本研究の目的は、ブランド・マネジメントの慣性が強化・緩和される条件を明らかにすることである。技術革新や顧客ニーズといった外部環境の変化が生じているのにもかかわらず、なぜブランドを革新することが難しくなってしまうのか。それはいかに克服されるのか。これらの問いを踏まえて、強いブランドであるがゆえに生じる負の側面とそれが緩和される条件を複数事例研究によって検討し、組織慣性の理論を構築することが最終的な目的である。本研究の2年目にあたる30年度では、主に2つの作業に注力した。第1に、消費者がブランドに対して正統性を見出す際の手がかりを整理したことである。具体的には、ブランドの正統性に関する先行研究の知見をまとめた上で消費者調査のデータを分析した。主要な発見事実として、所有と共有において消費者によるブランドに対する正統性探求に違いがあることが確認された。第2に、同じ環境に直面している思われる同一業界の企業の革新活動について、事例を収集し定性的な検討を加えた。特に、上述のような所有から共有へと消費者の行動が変化する中で、対応を迫られる企業をリストアップし、対応できた企業と対応に遅れた企業との差異を分析し、慣性が生じる条件と緩和される条件を探索的にではあるが複数抽出した。外部者からすると同じよう見える市場環境および経営資源に対する当事者の見方が異なる要因についても、少数事例に基づいた発見事実ではあるが確認された。ブランドマネジメントの慣性が強化・弱化する条件については、その研究成果の一部を本年度の前半に査読付き論文として発表した(「ブランド・マネジメントに関する慣性間の相互影響関係:ブランド・アイデンティティの再構築を通じた企業成長」『流通研究』)。それ以降の作業として、変化が激しいファッション業界を事例対象としたこの論文で明らかにされた理論的知見の精緻化に取り組んできた。現在まで、業種を問わず事例を収集することに加えて、所有から共有へと消費者の行動が変化する中で、消費者によるブランドの正統性探求の変化と企業による対応という2つの視点を踏まえて組織慣性について検討してきた。前者については、研究当初には想定していなかった論点ではあるが、共有という消費形態に関する既存の消費研究を整理し、今後行う予定の消費者調査の準備をした。本年度秋に実施される学会にて研究成果を発表する予定である。後者については、特にクルマやバイク、ファッションといった所有から共有へと消費形態の変化が見られる業界の企業を対象としてデータを追加した。ブランドマネジメントの慣性として、バイク業界に着目して明らかにされる理論的知見を本年度中に海外ジャーナルに投稿する予定である。30年度の主要な作業は事例間の比較分析である。具体的には3つの作業に取り組む。第一に、企業当事者やゲートキーパーを対象とした本格的なインタビュー調査である。
腫瘍壊死因子受容体遺伝子の肺癌細胞への導入による遺伝子治療の基礎的研究

本研究では、悪性腫瘍とくに肺癌に対する遺伝子治療の基礎的研究として、腫瘍壊死因子(Tumor Necrosis Factor;TNF)に対する受容体について研究を行った。TNFは、腫瘍細胞に対して細胞傷害活性を示す生理活性物質である。これまでの臨床研究では、生体へのTNFの全身投与は抗腫瘍効果が弱く、臨床的効果を得るためには人での最大耐量の5倍から25倍の高濃度が必要であろうと推測されている。したがって標的腫瘍細胞のTNFに対する感受性を増大させるためにはTNF受容体の導入が一つの方法として考えられる。今回の検討では、すべての肺癌組織にTNF-RI遺伝子の発現を認めたが、その発現はきわめて弱いものであった。一方、TNF-RII遺伝子の発現は、主として正常組織に存在し肺癌組織での発現頻度は低いことが示された。さらに、TNF依存性細胞傷害活性を調べた結果、55KDaのTNF-RIによりシグナル伝達が行われると考えられた。以上のことより、TNF-RI遺伝子を肺癌組織に移入しその発現を増強させることにより、肺癌細胞に対するTNFの感受性を増強させうることが示唆されるため、2つの異なるTNF受容体遺伝子移入のための発現ベクターの作製を試みた。その結果、pEF-BOS-55KDとpEF-BOS-75KDを構築した。これらの発現ベクターは、in vivoでのTNF受容体の役割と肺癌に対する遺伝子治療の研究をすすめるうえで有用であると考えられた。原発性肺癌手術症例15例より得られた肺癌組織と正常肺組織及びヒト肺癌細胞株における55kDa及び75kDa腫瘍壊死因子(TNF)受容体の発現の有無を、mRNAレベルと蛋白レベルで検討した。ヒト肺癌細胞株はSBC-2、RERF-LC-MA(MA)、RERF-LC-MS(MS)、A549を用いた。55kDaTNF受容体mRNAは肺癌組織で15例中13例、正常組織で15例全例陽性であった。75kDaTNF受容体mRNAは肺癌組織で15例中6例、正常組織で15例中11例陽性であった。ヒト肺癌細胞株では、55kDaTNF受容体mRNAは全例陽性、75kDaTNF受容体mRNAはMSのみ陽性であった。MA、MS、A549の蛋白レベルでのTNF受容体の発現をみるためにTNFの結合能を測定したところ、全ての細胞においてTNFの高い親和性がみられた。TNFによる細胞傷害は55kDaTNF受容体mRNAを強く発現していたMAに高くみられた。MSやSBC-2でもTNFによる細胞傷害性がみられたが、A549はTNFに耐性であった。原発性肺癌患者より得られた腫瘍組織及びヒト肺癌細胞株では、55kDaTNF受容体のmRNAの発現が多くみられたが発現レベルはβ-アクチンに比して弱かった。TNFの腫瘍細胞への細胞傷害性は、主に55kDaTNF受容体を介すると考えられている。しかし、55kDaTNF受容体の腫瘍細胞における発現は、TNFの効果が発揮されるための必要条件ではあるが十分条件ではないと考えられ、細胞内シグナルも重要であることが推察される。最近、55kDaTNF受容体のみに作用するhuman TNF mutantsが開発され、動物実験段階では抗腫瘍効果を維持しつつ、副作用の軽減がみられたとの報告がある。今後55kDaTNF受容体の遺伝子を肺癌細胞に導入しTNF受容体をより強力に腫瘍細胞に発現させることによりTNFが肺癌患者の治療において有用である可能性が示唆された。腫瘍壊死因子受容体(TNF-RI)遺伝子を肺癌組織に移入し、腫瘍壊死因子(TNF)に対する感受性を亢進させることにより腫瘍細胞を変性に導くことができるかどうかは興味がもたれるところである。このようなTNF受容体遺伝子移入実験を今後行っていく目的で、TNF受容体遺伝子発現ベクターの作製を試みた。

プラスミドpUC19に組み込まれた55KDaのTNF受容体のcDNA(2050bp)は、両側末端に制限酵素EcoRI切断部位を有するが、cDNA内部の1271bpに同じくEcoRI切断部位を持つために部分切断法を用いた。まず0bp-1271bpのフラグメントAをBluescriptプラスミドに挿入した。次に、EcoRIによる部分切断を行い、5′末端のみが切断されたプラスミドをアガロースゲルにより分離した。その後、5′末端EcoRI切断部位とBluescriptのEcoRI切断部位を盲端処理しEcoRI切断部位を破壊した。その後、それぞれの盲端処理部分を再び盲端結合により結合した。次に、EcoRIにより3′末端を切断し、55KDaのTNF受容体の残りのcDNAフラグメントB(1272bp-2050bp)を切断部位に挿入し、再び2050bpの55KDaTNF受容体を再構築した。その後、BluescriptプラスミドのマルチクローニングサイトよりNotIおよびXhoIの切断部位を用いてcDNAを取り出し、両端にBstXI adoptorsを結合した。最後に、発現ベクターであるpEF-BOSのBstXIサイトにcDNAを挿入し、55KDaのTNF受容体発現ベクター(pEF-BOS-55KD)を作製した。同様に、75KDaのTNF受容体発現ベクターを作製した。今後本研究の成果をもとに、作製されたTNF受容体遺伝子発現ベクターを用いて、in vivoでのTNF受容体遺伝子の発現を試みるとともに、TNF受容体の役割と肺癌に対する遺伝子治療の可能性について研究をすすめる予定である。
古代地方官衙における曹司の研究ー国衙・郡衙を中心としてー

1.考古資料で確認できる国衙・郡衙の曹司には、(1)工房関係、(2)物資の調達・収蔵に関わるもの、(3)食料供給・宿泊に関わる施設があり、文献史料によると、文書処理実務などを担当する曹司も存在した可能性が高い。2.各曹司ごとには、建物配置に計画性がみられ、溝や塀で敷地を区画している事例が多い。3.しかし、国衙の曹司の占地形態には、政庁の周囲に整然と配置され宮城と類似した一郭を構成している場合と、政庁周辺地区に独立分散的に設けられている場合とがある。後者の事例は、地方官衙の曹司が、宮城内の中央官衙曹司に比べると、制度的に体系化されていなかったことを示している。4.国衙・郡衙の曹司には、政庁から数キロメ-トル以上も離れて設置された例も存在する。それは、一つには、(1)のように、製鉄工房のような原材料産地との関わりという地形的な制約による場合がある。しかし、(3)に関わる出先機関と推定しうる遺跡例も判明しつつあり、国内あるいは郡内の数か所に「御厨」的な官衙を配置し食料物資などの調達を図るといった国衙・郡衙の日常的な運営方式の実態をとらえることができる。5.国衙の曹司は、8世紀中ごろ以降に顕著にみられ、8世紀後半以降に整備される傾向にある。これは、国衙機構が分化独立したことにともなうものであり、国衙行政の充実した時期を示すものと考える。6.国衙・郡衙の厨家には、下部組織や別置された出先機関などの下部機構を備えた機能分化も推定できる。7.郡衙の厨家は、郡衙のみならず、隣郡の郡衙や国衙などに動員されることもあり、伝使に対する供給のみならず、部内巡行国司に対する供給、国衙・郡衙での各種の饗宴の食膳準備など、広範囲の給食活動を展開していた。これまでの、国衙・郡衙関係遺跡の発掘調査デ-タの収集整理の結果、次のような点が新たに判明した。1.「曹司」の語については、これまで宮城の官衙にのみ用いられてきたが、平塚市相模国府推定地等出土の墨書土器により、国府段階でも狭義の官衙を曹司と呼称することがあった。2.文献史学の研究では、「所」の成立が9世紀以降とする見解が一般的であったが、8世紀段階から、国衙では「藤所」、郡衙では「郡雑器所」「水院」など「所」の存在が認められ、曹司の役割分担が分化していた。3.国衙・郡衙の曹司には、(1)工房関係、(2)物資調達・収蔵に関わるもの、(3)食料供給・宿泊に関わる施設の存在があきらかとなったが、文書処理などの実務機関が曹司を形成していたかはまだ判然としない。4.宮城の曹司は、一般的に正庁・副屋・雑舎・井戸等が明確に区画された一郭を形成し、朝堂院などの中枢施設の周りに長期にわたる官衙地区を構成している。それに比較して、国・郡衙の曹司は、数棟で構成されるが、明確な区画施設がなく構造も変化する例が多い。また、政庁の周囲に整然と配置されている例も少ない。このことは、地方官衙の曹司が、相対的に独立性が弱く、制度的に体系化されていないことを示している。5.国衙の曹司は、8世紀中ごろ以降に顕著にみられるようになり、国衙行政の充実した時期を示唆している。

6.国衙・郡衙の曹司には、政庁から数キロメ-トル以上も離れて設置された例が存在する。それは、一つには、(1)のように、製鉄工房のような原材料産地との関わりという地形的な製約による場合がある。しかし、(3)に関わる出先機関と推定しうる遺跡例も判明しつつあり、国内あるいは郡内の数か所に「御厨」的な官衙を配置し食料物資などの調達を図るといった国衙・郡衙の日常的な運営方式の実態が浮かび上がってきた。今年度は、国衙・群衙関係遺跡の文献目録を作成し、収集した発掘調査デ-タを整理検討して次のような点を新たに明らかにした。1.国衙の曹司の占地形態には、国庁の周囲に整然と配置され宮城と類似した一郭を構成している宮城型と、国庁の周辺地区に独立分散的に設けられている散在型とがある。2.いずれの場合も、各曹司ごとには、建物配置の計画性がみられ、溝や塀で敷地を区画している事例が多い、という共通性が認められる。伯耆国衙曹司例のように、曹司の改作が国庁の建て替えと一連のものとしておこなわれている場合もあり、曹司造営の計画性を裏付けている。3.国衙の曹司は、8世紀後半以降に整備される傾向にあり、国衙機構が分化し独立するようになったことが知られる。4.国衙・郡衙の曹司の一つに厨家がある。この厨家は、下部組織や別置された出先機関などの下部機構を備え、国衙・郡衙における供給機能を果たしていたと考えられる。5.郡衙の厨家は、郡衙のみならず、隣郡の郡衙や国衙などに動員されることもあり、広範囲の給食活動を展開していた。
量子情報通信・計算のための固体中における多量子ビット単一常磁性発光中心の研究

量子暗号通信・計算のための量子ネットワークの構築には、光アクセスビリティーを持つ数量子ビットの固体素子の開発が重要である。近年、ダイヤモンド中の単一NV中心の優れた特性が注目されている。本研究では核スピンを持つ同位体炭素<13>^Cの量を制御した合成ダイヤモンドを用い、単一NV中心において4量子ビットまでの系を初めて見出し、また、固体中の電子スピンの室温における最長のコヒーレンス時間(T_2)を実現した。近年、ダイヤモンド中の単一の常磁性発光中心である単-NV中心が量子通信・計算素子の観点から注目されている。単一常磁性発光中心の単一電子スピンとそれと相互作用する単一核スピンが量子ビットとして利用され、更にそこからの単一光子発生が通信・計算において重要な役割をする。本研究では、固体では最多数の量子ビットをもつ単一常磁性発光中心の探索、及び探索した系における量子情報処理操作の実証を目指している。集積化が期待される固体素子での量子もつれ状態の生成は容易ではなく、これまで2量子ビットでの量子もつれ状態の生成が極低温で超伝導体素子を用いた研究で報告されているだけであった。今回、電子スピンが2つの^<13>C核スピンと相互作用した3量子ビット系において、2つの核スピンの2量子ビット間、及び電子スピンと2つの核スピンから成る3量子ビット間に量子もつれ状態を室温で生成することに成功した。3量子ビット間での量子もつれ生成は固体では初めてで、また、それらが室温で行われた点は特筆すべき点である。また、量子通信・計算素子の観点からは電子スピンのコヒーレンスを保持できる時間(スピン緩和時間)が長いことが必要である。そこで今回、核スピンをもつ^<13>Cを天然存在比(1.1%)より少なくしたダイヤモンド中の単-NV中心のスピン緩和時間を調べた。エコー法による横緩和時間T_2を測定し、室温で1.8ミリ秒と非常に長いことを示した。これは我々の知る限り固体中における電子スピンの室温におけるT_2としては最長時間である。本研究ではダイヤモンド中の単一NV中心を量子通信・計算素子の観点から注目し、研究した。単一NV中心の単一電子スピンとそれと相互作用する単一核スピンは量子ビットとして利用でき、量子通信・量子計算において重要な役割を担えることが期待できる。本研究では固体では最多数の量子ビットをもつ単一常磁性発光中心の探索を目指した。これまで、3つの最近接炭素原子のうち、一つが核スピンを持つ^<13>Cの単一NV中心は観測されていたが、我々は^<13>Cの量を増やした高品質ダイヤモンドを用いることにより、3つの最近接炭素原子のうち、2つ、3つが^<13>Cである単一NV中心を初めて観測した。昨年度は2つが^<13>Cである単一NV中心において固体では最多量子ビット数となる3量子ビットでの量子もつれの生成に成功し、報告した。本年度は、3つが^<13>Cである単一NV中心を光検出磁気共鳴スペクトルを詳細に解析して同定した。またその核スピンのラビ振動も観測し、単一核スピン操作を実証した。3つが^<13>Cである単一NV中心では電子スピンも合わせ4量子ビットの実現といえる。また第3近接位置にある遠くの^<13>C核スピンの同定と単一核スピン操作実証にも成功した。これらが室温で行われたことも特筆すべき点である。最近接位置の3つの核スピン、電子スピンと組み合わせれば、原理的には5量子ビットがこれらの^<13>Cを用いることにより実現可能であることを示した。実用化が期待される固体では量子ビットのコヒーレンスを長く保つことが難しく、緩和機構の解明と長時間化が重要である。我々は同位体^<13>C濃度の異なった高品質ダイヤモンド試料を用い、コヒーレンスを保つ時間(T_2^*とT_2)が共に^<13>C濃度に依存して変化することを初めて示し、超微細相互作用による詳細な機構を明らかにした。これは更なるコヒーレンス時間の長時間化に向けて指針を与える非常に重要な結果であった。
正常および内リンパ水腫モルモット血管条のレクチン結合部位

内耳の膜迷路は内リンパで充たされているが、この内リンパは一般のリンパ、細胞外液とは異なるイオン組成を有しており、このことが平衡聴覚の感覚受容に必須である。このイオン組成の維持調節に蝸牛管血管条の辺縁細胞が重要な役割を担っていることが明らかになりつつある。しかし、この内リンパの分泌吸収に関しては、従来トレ-サ-実験等、多くの研究にもかかわらず明確な解答は得られていない。本研究では、この問題を少しでも明らかにすることを目的に、以下の研究を行った。1.Lowicryl K4Mに包理した超薄切片上で、レクチンを用い、辺縁細胞の形質膜の糖鎖を行った。その結果、SBA、HPA、RCAーIIで認識されるGalーNac、Galは辺縁細胞の腔側形質膜の微絨毛および飲小胞の各部、辺縁細胞核上部の頂部小胞、エンドゾ-ムの限界膜にあり、これらの細胞膜が、共通の性質を持ち、これらの間で代謝回転のあることが判明した。LFAで認識されるシアル酸は、辺縁細胞の基底陥凹部の形質膜にみられ、WGAで認識されるGluーNacは、血管条を構成するすべての細胞の形質膜にみられた。2.カチオン化フェリチン(CF)を内リンパへ注入し、辺縁細胞での取り込みをみてみると、CFは経時的に飲小胞の形で取り込まれ、エンドゾ-ムに入り、さらに一部は頂部小胞に入ることが、in vivo in vitro両方の実験で確められた。3.内リンパ水腫を実験的に惹起せしめた動物の血管条のNaーKーATPaseの活性をみてみると、内リンパ水腫発生1年までの例では、血管条上皮間の浮腫、辺縁細胞の萎縮、中間細胞の萎縮、消失がみられたが、NaーKーATPase活性は、辺縁細胞の基底陥凹部形質膜にみられ、内リンパ水腫にもかかわらず、重要な働きをしていることが判明した。しかし、さらに長期にわたれば、いずれ辺縁細胞は消失し、酵素活性も消失する。レクチンは特定の糖と特異的に結合する蛋白あるいは糖蛋白で、免疫学的産物でなく、糖結合部位を2つ以上有し、その活性が単糖やオリゴ糖など簡単な糖で阻害されるものと定義されている。細胞や組織に存在する複合糖質は細胞の分裂や分化の調節、自己非自己の認識、物質の輸送、レセプタ-関与による細胞の活性化など多くの機能を持っており、レクチンにより、糖鎖の分析が可能である。内リンパのイオン組成の維持調節に深く関与していると考えられている血管条において、レクチンを用いた研究は少ない。血管条が内リンパの吸収産生に、どの様に関与しているか明らかにする目的でSoybean agglutinin(SBA)、Helix pomatia agglutinin(HPA)、Ricinus communis agglutinin-II(RCA-II)、Limax flavus agglutinin(LFA)、Wheat germ agglutinin(WGA)の5種のレクチンを用い、Lowicry1 K4Mに包埋した超薄切片でcolloidal goldを標識とし、電子顕微鏡的に明らかにした。LFAは辺縁細胞腔側形質膜に反応はみられず、基底陥凹部と、血管内皮基底膜に反応がみられた。WGAは全ての細胞の形質膜に反応がみられた。

SBA、HPA、RCA-IIは、辺縁細胞腔側のmicrovilli及び飲小胞開口部の形質膜と、一部の核上部小胞及びendosomeの限界膜に反応がみられ、これらは同じ性質を持っていると考えられた。即ち、これらの膜は、invaginationから小胞を経由してendosomeに到る吸収機能とendosomeから小胞を経由して内リンパ腔に到る分泌機能の両者に関与していることを示唆している。メニエ-ル病の原因は、未だ不明な部分が多いが、その病理組織学的特徴として、内リンパ水腫があげられている。これは内リンパ液の産生、または吸収のメカニズムに障害が起こり、内リンパ液が貯留することを意味しいてる。我々は内リンパ液のイオン組成の維持調節に深く関与している蝸牛管血管条が、内リンパ液の吸収、産生にどの様に関与しているかを明らかにする目的で、SBA、HPA、RCAーII、LFA、WGAの5種のレクチンを用い、colloidal goldを標識とし、postーembedding法により、レクチン結合部位による糖鎖の解析を行ってきた。前年度は正常モルモットを用い、SBA、HPA、RCAーIIによって検出されるNーacetylーgalactosamine(GalーNAc)とgalactose(Gal)は、辺縁細胞腔側形質膜の微絨毛部、核上部小胞とその開口部、endosomeの限界膜にみられる。これよりこれらの部位では形質膜の性質が同じであると考えられ、飲小胞により物質を取り込み、小胞を経由してendosomeに到る吸収機能と、endosomeから小胞を経由し内リンパ腔に到る分泌機能の両者の性質を有していることが判明した。本年はこれに続き、実験的に内リンパ嚢を破壊して、内リンパ水腫を作成したモルモットを用い、血管条における、上記5種のレクチンの結合部位を検索したが、正常と大きな差異は認められなかった。また蝸牛管の各回転での差異があるかどうかを検索したが、大きな差異は認められなかった。またこれに関連して、辺縁細胞の基底陥入部のNaーKーATPase活性が、内リンパ水腫モルモットでどの様になっているか検索した。形態学的には内リンパ水腫により、血管条は、辺縁細胞基底陥入部の細胞間隙の浮腫、中間細胞の萎縮変性と消失がみられるが、NaーKーATPase活性の局在には大きな変化はみられなかった。内リンパ水腫は、メニエ-ル病の病理所見として特徴的である。この内リンパ水腫の発生機序を明らかにする目的で、内リンパの化学組成の維特に重要な働きを行っている血管条の辺縁細胞の形質膜の糖鎖の解析を、SBA、HPA、RCAーII、LFA、WGA等のレクチンを用い、金コロイドで標識し、Lowicryl K4Mに包埋した超薄切片上で行った。Nーacetylーgaーlactosamineとgalactoseと特異的に結合するSBA、HPA、RCAーIIの金粒子は、血管条辺縁細胞の腔側形質膜の微絨毛部及び飲小窩部にみられ、また辺縁細胞の核上部細胞質中の頂部小胞、エンドゾ-ムの限界膜にみられた。Nーacetylーneuraminic acidと結合するLFAは、辺縁細胞の基底部の基底陥凹形質にみとめられ、また血管条内の血管周囲の基底膜にもみられた。Nーacetylーglucosamineと結合するWGAは、血管条を構成するすべての種類の細胞の形質膜にみられた。これらは前年度と同様に、飲小窩、エンドゾ-ム、頂部小胞の各部の形質膜の性質が同じであることを示し、これらの間で形成膜の代謝回転のあることを示している。実験的に内リンパ嚢を破壊し、内リンパ水腫を惹起させた血管条においては、前年度と同様に、上記のレクチンの結合態度は、正常とは差異がなかった。
近代化にともなうヨーロッパの地域間格差の拡大メカニズム-保養地を事例にした分析-

中央ヨーロッパにおける地域間格差の拡大メカニズムを明らかにするために、本年度は、かつてのオーストリア・ハンガリー帝国領内の保養地をはじめ、とくにハンガリーにおいて経済的に活性化している地域の動向について、その歴史的背景を重視しながら観察した。その際、既存のセンサスデータをはじめ、景観観察や住民への聞き取り調査を行った。成果として得られた結果として、以下4つの著作および論文を作成した。1.「オーストリア・ハンガリー帝国における保養地の地域的概観」では、19世紀から20世紀初頭にかけて形成された中央ヨーロッパの保養地が、人口規模が小さいながら中心地としての機能をもっていた点で地域間格差の拡大過程において注目すべき事象であることを論じた。2.「ハプスブルク帝国の温泉地を巡る」では、中央ヨーロッパの温泉保養地の特徴を概観した。3.「民族が織りなすドナウ川文化圏」では、中央ヨーロッパの多民族性がこの地域のイメージ形成にかかわってきたこと、それゆえにヨーロッパの中でも特色ある地域として位置づけられてきた点を指摘した。4,「ロマ民族をみる視角-東ヨーロッパという土壌」では、中央ヨーロッパにおける地域間格差がロマ民族の居住地と対応する点に焦点を当て、民族集団と地域間格差の関連性について、過去から現在、さらにはEU拡大にともなう将来の変化にまで論考を広げた。中央ヨーロッパの地域的な特色を解明する切り口は多々存在する。今後もフィールドワークに基づいた事例研究を蓄積していくとともに、多様な研究領域の視点を総合した研究の枠組みについても検討したいと考えている。成果として得られた結果を、以下に列記する。1.中央ヨーロッパにおける地域間格差が、近年ますます拡大しつつあることを指摘し、その背景として、近代化以降の歴史的な経緯を概観した。とくに都市と農村の格差の拡大が、この地域における地域間格差の拡大において重要であることを指摘した。2.保養地を含む地域の変化の仕方が、中央ヨーロッパにおける近代化の過程で著しく異なることを明らかにした。具体的には、アルプス山岳地の3つの集落に居住する住民の死因に着目し、その変化と集落の社会経済的な変化との対応関係を検証した。3.近代化以降の地域間格差の拡大にとって、とくにエスニック集団が重要な役割を果たしていると考え、ハンガリーにおけるドイツ系住民を事例にし、かれらの組織的な活動が地域の経済的、社会的変化に重要な役割を果たしていることを明らかにした。4.中央ヨーロッパにおける地域間格差の拡大と、エスニック集団とのかかわりを論じるにあたり、エスニック集団に固有の文化が果たす意味についての論考を行った。これらを踏まえて、次年度には、近代化のプロセスと地域変化との対応を検証するために、保養地をはじめとする観光活動に重点を置いた調査を行う。

4.「ロマ民族をみる視角-東ヨーロッパという土壌」では、中央ヨーロッパにおける地域間格差がロマ民族の居住地と対応する点に焦点を当て、民族集団と地域間格差の関連性について、過去から現在、さらにはEU拡大にともなう将来の変化にまで論考を広げた。中央ヨーロッパの地域的な特色を解明する切り口は多々存在する。今後もフィールドワークに基づいた事例研究を蓄積していくとともに、多様な研究領域の視点を総合した研究の枠組みについても検討したいと考えている。
組織球性壊死リンパ節炎の発症因子とその進展機構

組織球性壊死性リンパ節炎(HNL)についての免疫組織学的並びにウイルス学的検討を行なったが、リンパ節病変部に見られるリンパ球はT細胞性が主ではあるが増殖細胞はCD8+、CD15ーのcytotoxic細胞であること、同時に見られるCD4陽性細胞の多くがKiーM1p陽性のplasmacytoid monocyteとされる特異な細胞群であり病変部での増殖は見られないことを明らかにした。このことは従来helperーinducer T細胞と考えられていた病変部に見られるCD4陽性細胞がそれとは機能的には異なる細胞であり、本疾患の細胞反応は単なる遷延感作の反応とするには問題であることを示すものであるが、このplasmacytoid monocyteの機能や疾患との関連については今日なお明らかでない。HNLはこの細胞研究の有力なモデルとなり得る。病変部細胞にinterferon産生に関与するとされるtubuloreticular structureが多く認められ組織学的に病変部にinterferon産生の増加があり、その態度はウイルス感染に対する反応に一致すること、さらにウイルス感染初期に上昇する2'5'oligoadenilate acetate synthetaseの血清中での上昇を明らかにしたことは本症の発症にウイルスが関与する可能性が極めて大きいことを示すものであった。ウイルスの検索では病変部のスタンプ標本で大型リンパ球と組織球の膜表面にHuman Herpes Virus type VI(HHVー6)抗原を見出すことから、組織内でのHHVー6遺伝子検出を試み病変の見られるリンパ節にこのウイルスが存在することを証明した。ただこのウイルスはin situ hybridizationで病変部に陽性細胞が特に増加している像は見られず、また本疾患以外の各種感染性疾患や腫瘍リンパ節でも多くの症例でこのウイルスを認めたことから、本疾患との直接の関係を明らかにし得なかった。本病変はリンパ節を主に侵すが、その他骨髄や皮膚にも組織学的に同様な病変が見られ、リンパ節病変と同様に悪性リンパ腫との鑑別が問題となることを明らかにした。組織球性壊死性リンパ節炎(HNL)は特異的な像を呈するが、病因は明らかでなく、臨床症状からウイルス感染が疑われている。そこでウイルス感染初期に産生されるインタ-フェロン(IFN)により誘導される2 ́5 ́オリゴアデニル酸(2ー5A)合成酵素活性をHNL患者血清について測定した。また病変リンパ節での増殖細胞を把握するため、増殖細胞の核に反応するKi67抗体と、細胞膜に染るCD4(helper/inducer),CD8(cytotoxic/suppressor),CD15(monocyte)抗体とで二重染色を行った。(結果)HNL30例中、2ー5A合成酵素活性が100pmol/dl以上の陽性を示すものが12例にみられ、対照とした健常者、非感染性疾患、サルモネラ胃腸炎では上昇はなく、ウイルス疾患では上昇していた。2例のペア血清では活動期の陽性値が正常化していた。発熱及びリンパ節を触知した日を発病日とすると、2ー5A合成酵素活性は病日と共に、低下する傾向を示した。二重染色を行ったところ、増殖細胞(Ki67陽性細胞)の大多数はCD8陽性細胞であった。この増殖を示すCD8細胞は病日と共に、徐々に減少してきていた。また増殖性のCD4陽性細胞はほんのわずかしか見られず、増殖性のCD15陽性細胞は皆無であった。(考察)2ー5A

合成酵素はINFにより誘導され、HNLの発症に、ウイルスの関与する可能性を強く示唆していたが、ただINF産生はウイルス感染のみでなく、自己免疫疾患、トキソプラズマを含む原虫、細菌感染でも産生され決定的ではなかった。また今回の検索で、増殖細胞の主体がCD8陽性細胞で、病日とともに減少してきている。また増殖細胞に占めるこの細胞の割合は病日に関係なく一定であり、この細胞は増殖しつつ、一方で崩壊しているものと考えられた。以上よりHNLの病態には、CD8陽性細胞の関与する局所細胞免疫反応が重要な役割を演じているものと考えられた。組織球性壊死性リンパ節炎についてその発症要因としてウイルス感染が重視されている。現在特定のウイルスとの関係は明らかにされていない。このことは急性症状の見られる時期にウイルス急性感染期に上昇する血清中2'5'オリゴアデニ-ル酸合成酵素(2'5'OSA)の上昇や症変部の増殖するリンパ球、組織球にtuburoreticular strucutur(TRS)が多くみられることからも推測されていた。本年度は2'5'OSAの血清中での上昇がみられ、組織学的にも多くのTRSをみとめる定型的な症例について、2'5'OSA上昇の組織学的裏ずけとして病変部に於けるインタ-フェロンaを検索したが、多数存在する組織球にこのインタ-フェロンが多量見られることを確かめ得た。これは本症に於ける細胞反応がウイルス感染に直接関与することを強く示唆する成積であった。また病変部にCD4,8陽性リンパ球の集ぞくがみられるがCD8陽性細胞のみが増殖の主体であること、CD8陽細胞もLeu15をも陽性を示すyctooxic型であることも明らかにしたので、病変の進展に於ける局所の遷延感染の様式を示す細胞性免疫の関与が組織像を規制するものと推測された。ウイルス感染としては各種ウイルスのうちヒトの突発疹に関連すっるヒトヘルペス6(HHVー6)型ウイルスとの関連が最近注目されているので組織学的に病変部に於けるこのウイルス抗原の検索を行ったところ、膜を主として陽性反応を示す大型化リンパ球の集ぞくがみられ、他の反応性リンパ節病変や腫瘍の際と異なる所見を得た。しかしながら急性期に於いてこのウイルスに対する血清抗体値の上昇は見られなかった。このことは本症はHHVー6の急性感染に直接結びつくものでなく、HHVー6はむしろ病変の進展や組織像の形成になんらかの関与を有するものの様であった。組織球性壊死性リンパ節炎(HNL)についての免疫組織学的ならびにウイルス学的検討をおこなったが、リンパ節病変部に見られるリンパ球はT細胞性が主ではあるがそのうち増殖細胞はCD8+、CD15-のcytotoxic細胞であることを明らかにするとともに、同時にみられるCD4陽性細胞がその多くがKiーM1p陽性のplasmacytoid monocyteとされる特異な細胞群であることを明らかにした。このことは従来helperーinducerT細胞と考えられていた病変部にみられるCD4陽性細胞が機能的には異なる細胞であり、本疾患の細胞反応は単なる遷延感作の反応とするには問題であることを示すものである。
ファジィ理論を援用したシステムの安全性設計に関する研究

本年度の研究は,基礎理論の確立および計算機上でのシミュレーションを中心として進められ,研究計画通りの進展が見られた.特に,ファジィ制御システムに着目し,ファジィ制御システムに関する研究を行なった.ファジィ制御システムは,・複雑な系・系の数学モデルが厳密に表現できない系・動特性の変動する系・非線形な系等に適用され,その有用性が示されている.また,・PID制御が適用されている系にもそのかわりにファジィ制御が用いられ,その有効性についてさまざまな研究がなされている.しかし,一般にファジィ制御システムは複雑な構造をしているため,実現したい特性が与えられたとき,その特性をファジィ制御システムで構成しようとしても,ファジィ制御システムの構成は試行錯誤的になることが多く,数学的理論を背景とした構成法は数少ない.ファジィ制御システムに限らず,制御器を構成する場合には,与えられた特性を満たすという保証が必要であり,その意味でファジィ制御システムの信頼性は低い.以下に本研究で得られた成果を示す:1.外乱や変動等が加わったファジィ制御システムのモデリングを,関数解析論とファジィ理論を融合させることによって開発した.このモデリングには,設計者によるモデリング誤差・運転者による操作誤差等も含まれている.2.モデリングされたシステムに,先に提案したフェイルセーフを実現するために必要な数学的理論を構成した.具体的には,実システムに援用可能な形でのファジイ写像における不動点定理を新たに構成した.3.実現したい特性が与えられたとき,それをファジィ制御システムで厳密に表現する構成アルゴリズムを示した.本年度の研究は,基礎理論の確立および計算機上でのシミュレーションを中心として進められ,研究計画通りの進展が見られた.特に,ファジィ制御システムに着目し,ファジィ制御システムに関する研究を行なった.ファジィ制御システムは,・複雑な系・系の数学モデルが厳密に表現できない系・動特性の変動する系・非線形な系等に適用され,その有用性が示されている.また,・PID制御が適用されている系にもそのかわりにファジィ制御が用いられ,その有効性についてさまざまな研究がなされている.しかし,一般にファジィ制御システムは複雑な構造をしているため,実現したい特性が与えられたとき,その特性をファジィ制御システムで構成しようとしても,ファジィ制御システムの構成は試行錯誤的になることが多く,数学的理論を背景とした構成法は数少ない.ファジィ制御システムに限らず,制御器を構成する場合には,与えられた特性を満たすという保証が必要であり,その意味でファジィ制御システムの信頼性は低い.以下に本研究で得られた成果を示す:1.外乱や変動等が加わったファジィ制御システムのモデリングを,関数解析論とファジィ理論を融合させることによって開発した.このモデリングには,設計者によるモデリング誤差・運転者による操作誤差等も含まれている.2.モデリングされたシステムに,先に提案したフェイルセーフを実現するために必要な数学的理論を構成した.具体的には,実システムに援用可能な形でのファジイ写像における不動点定理を新たに構成した.3.実現したい特性が与えられたとき,それをファジィ制御システムで厳密に表現する構成アルゴリズムを示した.
アルツハイマー病治療薬の創薬標的分子同定を目指したγセクレターゼ基質特異性の解明

γ-Secretaseは、アルツハイマー病(AD)治療・予防薬開発の上で、重要な創薬ターゲットであるが、APP以外にも発生・分化に重要なNotchの切断を担う。したがって、単純なγ-secretase阻害はNotch切断阻害による副作用が懸念されている。近年、γ-secretaseに『基質特異性』を与える分子機構の存在が示唆され、APP切断特異的な副作用のない新たなAD創薬標的として期待されている。申請者は、γ-secretase活性に対し基質特異性を与えうる遺伝子の同定を目指し、ショウジョウバエ培養細胞S2細胞系を用いたRNAiスクリーニングを遂行し、Notch切断を特異的に制御する遺伝子Surf4を同定した。本研究課題では、Surf4による基質特異性に関わる分子機構を解明し、その活性制御による新規創薬機構の発見を目的として研究を遂行した。本年度においては、Surf4によるNotch認識部位の同定を目指し、APP/Notchの各種変異体を用いて検討した。その結果、Surf4はNotch細胞質領域を認識していることを明らかにした。さらに、in vivoでのSurf4の機能にいて、Notchシグナル評価線虫を作出しRNAi法により検討したところ、in vivoにおいてもやはりSurf4はNotchシグナルに関与していることを見出した。前年度までの結果と合わせると、Surf4はER-Golgi間輸送において、Notchのカーゴ受容体として機能し、生体においての主要なシグナルの一つであるNotchシグナルを制御していることが明らかとなった。すなわち、申請者は本研究課題により、γ-secretaseの基質特異性がER-Golgi間輸送において生み出されていること、特にγ-secretase基質の特異的輸送制御タンパク質による小胞輸送によりなされていることを初めて明らかにした。γセクレターゼは、アルツハイマー病(AD)治療・予防薬開発の上で、重要な創薬ターゲットであるが、APP以外にも発生・分化に重要なNotchの切断を担う。したがって、単純なγセクレターゼ阻害はNotch切断阻害による副作用が懸念されている。近年、g-secretaseに『基質特異性』を与える分子機構の存在が示唆され、APP切断特異的な副作用のない新たなAD創薬標的として期待されている。申請者は、γセクレターゼ活性に対し基質特異性を与えうる遺伝子の同定を目指し、ショウジョウバエ培養細胞S2細胞系を用いたRNAiスクリーニングを遂行し、Notch切断を特異的に制御する遺伝子Surf4を同定した。本年度においては、S2細胞でSurf4がERからcis-Golgiにかけて局在していることを明らかにした。このときCOPII輸送小胞マーカーと局在が一致したものがあったこと、酵母Surf4が選択的小胞輸送に関与しているという知見から、細胞内輸送に注目し、Surf4のRNAi条件下でAPP、Notchの細胞内局在を検討したところ、APPは正常な輸送を受けているのに対し、NotchはERに留まっていることが確認された。以上のことから、Surf4はERからGolgiへの輸送過程において、Notchが細胞表面膜へ輸送されるのに必要な分子であることが示唆された。また個体におけるSurf4の機能を解析するため、Surf4変異線虫を作出、解析し、Notchシグナルの異常に起因すると思われる表現形を確認した。さらにSurf4欠損マウスの作出を開始した。γ-Secretaseは、アルツハイマー病(AD)治療・予防薬開発の上で、重要な創薬ターゲットであるが、APP以外にも発生.分化に重要なNotchの切断を担う。本年度においては、内因性にショウジョウバエNotchが発現しているKc167細胞を用い、内因性Surf4をRNAiすると、細胞表面膜に輸送されるNotchの量が減少することを見いだした。また、Surf4を含む輸送小胞にショウジョウバエNotchが濃縮されることを見いだした。これらの結果は、Surf4が作る輸送小胞への取り込みが、Notchの細胞表面への輸送を規定しているという新しい知見である。一方、マウス神経芽細胞腫N2a細胞において、内因性SURF4をRNAiすると、Aβ産生は抑制しないものの、Notch切断活性のみが低下することを明らかにした。この結果は、S2細胞において見られた結果と同様であることから、Surf4の機能はショウジョウバエのみではなく、哺乳類においても保存されていることが分かった。現在、個体におけるSurf4の機能を解析するため、Surf4欠損マウス/線虫の解析を進めているところである。

近年、γ-secretaseに『基質特異性』を与える分子機構の存在が示唆され、APP切断特異的な副作用のない新たなAD創薬標的として期待されている。申請者は、γ-secretase活性に対し基質特異性を与えうる遺伝子の同定を目指し、ショウジョウバエ培養細胞S2細胞系を用いたRNAiスクリーニングを遂行し、Notch切断を特異的に制御する遺伝子Surf4を同定した。本研究課題では、Surf4による基質特異性に関わる分子機構を解明し、その活性制御による新規創薬機構の発見を目的として研究を遂行した。本年度においては、Surf4によるNotch認識部位の同定を目指し、APP/Notchの各種変異体を用いて検討した。その結果、Surf4はNotch細胞質領域を認識していることを明らかにした。さらに、in vivoでのSurf4の機能にいて、Notchシグナル評価線虫を作出しRNAi法により検討したところ、in vivoにおいてもやはりSurf4はNotchシグナルに関与していることを見出した。前年度までの結果と合わせると、Surf4はER-Golgi間輸送において、Notchのカーゴ受容体として機能し、生体においての主要なシグナルの一つであるNotchシグナルを制御していることが明らかとなった。すなわち、申請者は本研究課題により、γ-secretaseの基質特異性がER-Golgi間輸送において生み出されていること、特にγ-secretase基質の特異的輸送制御タンパク質による小胞輸送によりなされていることを初めて明らかにした。
生体由来高親水性化合物の超高性能分離のためのHPLC用カラムの開発

高性能/高選択的な親水性相互作用(HILIC)型、イオン交換型、キラル分離型HPLC用カラムをモノリス型、粒子充填型について調製し、既存の粒子充填型カラムの性能限界を超えた高親水性化合物の分離媒体を開発した。(1)シリカの表面修飾に用いる重合反応の反応条件とカラム性能の関係を精査し、最適な修飾条件を確立した(2)導入した高分子鎖の鎖長と分離性能の相関を検討した(3)カラムの理論段高4-10ミクロン、理論段数30万段を発生させるHILIC型カラムを調製し、メタボローム解析に応用した。(4) HILIC型,カチオン交換型、アニオン交換型、キラル分離能を併せ持つカラムを調製した。(1)シリカの表面修飾に用いる重合反応の最適化と分離性能の関係の調査親水性相互作用クロマトグラフィー(HILIC)のでは、移動相中の水が固定相近傍に濃縮されて形成された水和層と、移動相の間の分配平衡が分離の機構とされている。カラム内ポリマーコート法において、重合時のモノマー濃度を段階的に高くすると高極性化合物の保持が段階的に向上することと、モノリス流路に生成するポリマーによってカラムの洗浄が不可能になる限界濃度が存在することが分かっている。微小シリカ粒子とシリカモノリス両方について、モノマーの構造と対応するポリマーの溶解性を基に、カラムあたりの親水性ポリマー結合量を極限まで高め、親水性の層の厚みを確保できる修飾条件を探索した。テトラゾールを含むモノマーを重合すると、市販されているHILICカラムで最大の保持を示す製品のさらに2倍の保持の実現が可能になった。種々の類縁体を重合修飾した後、国際特許として出願した。(2)高分子鎖の分子量とシリカ上の親水性層の関係の解明、分離性能との相関の検討シリカ上に結合しているごく微量の高分子鎖を解析する方法として、シリカ粒子、あるいは直径25ミリメートルのシリカモノリスカラムを、キャピラリーカラムと同様の条件で重合修飾し、元素分析、イオン交換容量の測定、質量スペクトル分析法等の解析を行ない、高分子鎖の鎖長(重合度)や結合量を解析した。重合反応条件を統一すれば、シリカ粒子充填型とシリカモノリス型のカラムで、ほぼ同様の構造選択性を発現できることが示された。このことにより、シリカモノリス上に結合された高分子鎖の性質は、同様の化学修飾をシリカ粒子で行ない、解析することで類推できることが示された。(1)シリカの表面修飾に用いる重合反応の最適化と分離性能の関係の調査親水性相互作用クロマトグラフィー(HILIC)の分離媒体の性能向上のため、以下の検討を行った。シリカ上で、テトラゾールを含むメタクリルモノマーを重合修飾することによって、従来の市販品をはるかに上回る親水性の保持を発現することに成功した。平成27年度は、この重合条件の微調整を行ない、飛躍的に保持が大きくなるラジカル重合開始剤の濃度が存在することを見出した。米国を始めとする国際特許として出願した。(2)HILICとキラル分離を同時に実現するカラムの調製HILIC型固定相にキラル分離能を付与するため、システインまたはグルタチオン(GSH)含有ポリマーを修飾したシリカ粒子を調製した。これらの固定相表面は共に中性(市販の双性イオン型の固定相に近い)を示した。ウリジンの保持によるその親水性の評価では、Cysでk(U) = 3.02、GSHでk(U) = 4.37が得られた。特にGSHの親水性は、測定した市販のHILIC型固定相の中では2番目に大きな値であった。グルコース、フルクトース、アラビノースのエナンチオマーを分離したところ、GSHのカラムではグルコースのα(D/L)値が1.02となった。今後カラムの分離性能を向上すれば、この固定相でグルコースの光学分割が可能であると考えられる。(3)理論段高5&#8211;10ミクロンの極性化合物分離用のカラムの調製テトラゾールを含有するシリル化剤を開発したところ、これを用いた化学修飾は、一般的なシリル化剤修飾型固定相とは異なり、厚い水の相を形成するシリカ粒子の調製に向いていることが明らかになった。シリル化剤型の修飾は、分配平衡が速いことが期待されるため、微小粒子の化学修飾に向いていると考えられる。高分子鎖の分子量とシリカ上の親水性層の厚みの間には、ある関係があり、分子量5万程度のポリマーより小さい高分子鎖では十分な親水性の保持は発現しにくいことが明らかになりつつある。重合修飾の条件下において、ポリマーの洗浄が困難になったり、粘度の上昇によって重合反応自体が進行しにくくなったりすることで、この閾値である分子量に達するまでに重合が止まってしまうことが問題であることが示された。今後は、モノマーによっては、この問題を回避する方向へ修飾方法を変更する必要がある。微小粒子を用いた速い分離のための固定層としては、ポリマー修飾は不向きである。一方で、シリル化剤による化学修飾では十分な親水性を付与できないという問題があった。テトラゾールを含有するシリル化剤は、シリル化剤修飾型としては異例の親水層の厚みを提供することができるようである。これで、微小粒子の修飾法の問題が解決できるのではないかと考えている。