hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
精神薄弱児の時間弁別能力:マスキングにおける誘発電位の潜時の変動を示標とした分析

後者ではターゲットの種類(数字またはチエカー)は指定されたが、そのターゲットが【S_1】と【S_3】,【S_2】と【S_4】のいずれかに提示されるかは被験者には不明であった。2.脳波測定法。(1)電極を後頭,頭頂,中心,前頭部に装着し、両耳を基準にして単極脳波を記録した。(2)ターゲットの不明条件などの変数ごとに分類してコンピュターにより加算平均法により誘発電位を作成した。3.結果。(1)誘発電位の成分。刺戟対の2刺戟に対する電位成分が重畳して出現したが、【S_1】/【S_3】に対する陰性と陽性波【N_1】と【P_2】、および【S_2】/【S_4】に対する【N_1】とP300を分離計測することが可能であった。(2)後頭電位の中で【S_1】に対する【N_1】は種類不明、位置不明両条件間で振巾差を示した(種類不明<位置不明)が潜時差を示さなかった。(3)【S_2】に対する頭頂・中心・前頭【N_1】はこれら両条件間で潜時差を示し(種類不明<位置不明)、P300は振巾差(位置不明<種類不明)と約50ミリ秒の潜時差(種類不明<位置不明)を示した。4.展望。注意切り換えのおくれの効果を誘発電位を用いて計測可能となりこれを精神薄弱に適用する。精神薄弱児を被験者として脳波測定を行ない,コンピューターにより加算して視覚誘発電位(VEP)を記録した.統制群として大学生の脳状測定を前年度に引き続いて実施した.数字(N)と不規則チェカー模様(C)のスライドを400ミリ秒の間隔で対にしたものをスライド投射器でスクリーン上に投射した.測定は暗順応の状態で行なわれた.1試行中に2ツの刺激対(S_1S_2とS_3S_4)を1.5秒間隔で提示した.刺激対はチェカーと数字CNーCNかもしくは数字とチェカーNCーNCであった.被験者には2種類の注意条件を要求した.第1は固定注意条件で,対のはじめの刺激(S_1とS_3)もしくはあとの刺激(S_2とS_4)に注意を払うよう教示した.第2は分割注意条件で,CもしくはNの一方をターゲットに指定し,ターゲットは対のはじめ(S_1とS_3)かあと(S_2とS_4)にランダムに提示されることを教示した.分割注意条件は,S_1ーS_2の対を見たあとではターゲットの位置が判明するので,S.ナ_<3.ニ>ーS.ナ_<4.ニ>の対を処理する場合には固定注意条件に変化する.このような注意セットの変化を各刺激に対する後頭葉VEPのN1(N180とN560)およびP400の振巾変化を示標として測定した.結果の一部はつぎのとおりである.大学生統制群にあっては,分割注意セットは第2刺激対処理に際しては固定注意セットに変化した.固定注意条件における第2刺激対に対するVEPはN560の振巾がN180に比して小さく,P400の振巾がより陽性方向に偏移した(ターゲットがS_1とS_3にある場合).ターゲットがS_2とS_4にあるある場合にはN180に比してN560の振巾が大きく,P400の振巾がより陰性方向に偏移した.分割注意条件の第2刺激対に対するVEPにはこれと同様な変化が認められた.このような注意セットの変化は精神薄弱児群にも見出されたが続制群に比して個人差が著しく,分割注意セットが第2刺激対に適用されやすかった.前年度(昭和62年度)の研究実績を基礎として、被験者数の増大と欠落データの補充のための実験を行なった。それらのデータの分析を実施し、報告書を作成し印刷した。第1部門(注意転換)の実験について。(1)精神薄弱児の典型的な例について事例史的実験を実施した。典型例の第1は衝動性の希薄な精神薄弱児、第2は衝動性の多いタイプであった。(2)分裂病者のタイプ別たとえば解体型(破瓜型)と妄想型についてそれぞれの症例の増加を推進した。結果:(1)非衝動型の精神薄弱児は、具体的な注意手がかり(数字を探して読め、のように教示する)がある場合には、ターゲットに注意しノンターゲットにはは注意しない、という注意の統制が可能である。
積雪量の減少に伴う湿原植生の変化の検出

本研究の目的は、積雪量の減少に伴う植生の変化を検出し定量的に評価することである。そのために積雪量の変化に敏感な植生である湿原を対象として本州中部以北の山岳地の空中写真の年代間比較と現地調査を行った。その結果、中部、北関東、東北の各地方で湿原の縮小が確認された。それらの湿原では、植生変化は主にササ類およびハイマツの侵入によるものであり、日本の山地湿原は徐々に森林化してきていることが明らかとなった。本研究では積雪量の減少による植生変化の実態を明らかにすることである。そのたために、積雪量の変化に敏感な湿原を対象として植生変化を検出した。今年度は中部地方を中心に調査を行った。具体的には次の3点を検討した。1.山地湿原の面積変化→中部地方を代表する湿原である黒部川源流部および黒部川中流部、八ケ岳周辺、白馬岳周辺の湿原植生の面積を経年的に追跡した2.山地湿原の植生構成種の変化→黒部川源流部および黒部川中流部、八ケ岳周辺、白馬岳周辺の現地調査をおこなって植生変化の状況から、湿原の植生変化はチシマザサおよびハイマツ・オオシラビソの侵入によるものである事があきらかとなった。3.積雪量の変動と植生変化との比較検討→1,2で得られた植生変化と積雪量変動の対応を気象観測資料から検討するために、黒部川流域の各関係機関に要請して積雪量観測記録を入手し、積雪量変動を追跡した。また、積雪が形成する環境が植物へどのような影響を与えるかを調査するために、八ケ岳周辺および尾瀬ケ原において積雪環境の調査をおこなった。以上の1.から山地の上部、とくに頂上部や尾根部に位置している湿原では面積に縮小が認められた。さらに2.から、積雪量が減少した際に特徴的であるとされる植生変化が認められた。また、3.から、積雪量の減少が裏付けられた事から、尾根上部などの立地は積雪量の減少の影響が大きいため植生が変化したと考えられた。本研究は積雪量の減少による植生変化の実態を明らかにすることが目的である。そのために、積雪量の変化に敏感な湿原を対象として植生変化を検出した。今年度は関東地方から東北地方南部を中心に調査を行い、その結果から次の3点を検討した。1.山地湿原の面積変化→関東地方から南東北地方を代表する湿原である尾瀬ヶ原および会津駒ヶ岳、平ヶ岳の湿原植生の面積を経年的に追跡した2.山地湿原の植生構成種の変化→尾瀬ヶ原および会津駒ヶ岳、平ヶ岳周辺の現地調査をおこなって植生変化の状況から、湿原の植生変化はチシマザサおよびハイマツ・オオシラビソの侵入によるものである事があきらかとした。3.積雪量の変動と植生変化との比較検討→1,2で得られた植生変化と積雪量変動の対応を厳密に検討するために、平ヶ岳の積雪の詳細な水平分布を調査し、積雪分布と植生分布の対応を検討した。また、積雪が形成する環境が植物へどのような影響を与えるかを調査するために、風衝樹の分布調査と植生調査を行った。また、3.から、積雪量が多く、残雪が遅くまで残る所には湿原植生が分布し、その残雪の分布は冬期の風の影響を強く受けている事が明らかとなった。本研究の目的は、積雪量の減少による植生変化の実態を明らかにすることである。その結果、調査をおこなった黒部川源流部の山地上部、とくに頂上部や尾根部の湿原では面積に縮小が認められ、その原因が積雪量の減少に伴うハイマツの増加によるものであることが明らかとなった。今年度は中部地方・山陰地方を中心に調査を行った。具体的には次の4点を検討した。1.山地湿原の面積変化→中部地方を代表する山地湿原である黒部川源流部、および山陰地方を代表する山地湿原である氷ノ山古生沼のそれぞれについて、空中写真の解析によって経年的に追跡し、湿原の縮小を確認した。2.山地湿原の植生構成種の変化→黒部川源流部および黒部川中流部の現地調査をおこなって、湿原の植生変化はハイマツの侵入によるものである事があきらかにした。3.積雪量の変動と植生変化との比較検討→1,2で得られた植生変化と積雪量変動の対応を気象観測資料から検討するために、黒部川流域の各関係機関に要請して積雪量観測記録を入手し、積雪量変動を追跡し、データ整理を行った。4.気候の変動と植物の生育状況の関係性→湿原に進入するハイマツの成長量と気象条件の変動を比較して、それらの関係性を明らかにした。
硬質レジン前装チタンクラウンの臨床応用に関する研究

チタン鋳造における、リテンションビーズの再現性を評価した結果、遠心鋳造法を用いた場合、リテンションビーズ部の再現性は良好であったが、鋳造体表層のSEM観察からリテンションビーズ部において鋳型材の残留が認められ、サンドブラスト処理を施しても完全な除去は困難であった。このため、レジン前装チタンクラウンには、鋳造体表層のチタン酸化物や鋳型材を除去が容易なノンリテンションビーズ法が適していると考えられた。ノンリテンションビーズ法を想定した。チタンに対するサンドブラスト処理の影響について、3種類の粒径のアルミナ粉末を用いたサンドブラスト処理を行い、コバルトクロム合金と比較した。EDX分析の結果、サンドブラスト処理を施したチタン上では3345wt%、コバルトクロム合金上で2242wt%のアルミナが検出された。チタンに対するサンドブラスト処理は、他の非貴金属合金に対するよりも低圧力、短時間の処理を行うほうが好ましかったが、サンドブラスト処理によるアルミナ汚染の影響は避けられないことが認められた。サンドブラスト処理(50μm,110μm,250μmアルミナ)を施したチタン表面、またチタンとアルミナ焼結体に対する各硬質レジン接着システムの接着強さを測定し、チタン・サンドブラスト処理面の接着性について評価を行った。250μmアルミナ粉末を用いたサンドブラスト処理面では、最高の接着強さを示したが、110μmアルミナを用いた場合の接着強さとの有意差は認められなかった。また、50μmアルミナによるサンドブラスト処理は硬質レジンの接着性向上に及ぼす影響は小さかった。アルミナ焼結体に対する接着性は、チタンに対して良好な接着性を示した接着システムでは有意に小さい接着強さを示しため、サンドブラスト処理によるチタン表面へのアルミナの残留は、硬質レジンの接着性向上への関与は小さいことが認められた。本研究では、硬質レジン前装チタンクラウンを製作するために必要な、チタンに対する市販硬質レジンシステムの有するプライマーの接着性について検討を行った。その結果、チタン表面上の不動態皮膜は接着性に非常に有利に働き、未処理のチタン板に対し、高い接着性を得られることが認められた。しかし、チタン補綴物は通常歯科鋳造法によって作製されるため、被着面が埋没材との焼き付きや酸化皮膜で汚染される。このため、ノンリテンションビーズシステムによる硬質レジン前装冠作製を目指して、サンドブラスト処理による影響について検討した。その結果、アルミナ粉末による5秒のサンドブラスト処理によっても、EDX分析によって処理面上には1520wt%のアルミニウムが存在することが判明した。このアルミナの有する接着性はチタンの有する接着性に比べ劣ることが認められたため、サンドブラスト処理はチタン補綴物の接着性に影響することが判明した。このことから、本年度では、チタン被着面に対する表面処理法や他の加工処理面との接着性についても検討する予定である。また、硬質レジン前装冠のメタルフレーム上にはリテンションビーズによる維持装置が用いられる。このため、チタン鋳造によるリテンションビーズの再現性について検討したところ、鋳造性についてはほぼ満足できる結果を得られたが、チタンと埋没材との焼付きが認められた。このため、鋳造によって得られたチタン被着体が接着性にどのような影響を及ぼすが、検討を加える予定である。硬質レジン接着システムには、オペークレジンによる金属色の隠蔽が必要とされ、接着性にも大きく影響する。このため、本年度購入した粘度計を用いて、オペークレジンの粘度特性を調べ、接着性に及ぼすオペークレジン組成ならびに酸化チタン粉末の試適含有量等について検討する予定である。
小胞型グルタミン酸トランスポーターの構造生物学

本研究課題により、構造生物学的手法を用いて、ホモログタンパク質の結晶構造解析は飛躍的にその解像度を上げることができた。また、その成果については現在論文作成中であり、平成27年度中の論文化を目指す。また、小胞型グルタミン酸トランスポーターと同じ内膜系トランスポーターの解析についてPNAS、J.Neurochemに論文が提出できた事は、小胞型グルタミン酸トランスポーターの解析にフィードバックできる成果である。本課題を遂行する上で必要不可欠であった、AKTA FPLCを購入後日本での研究システムを構築した。また、さらに岡山大学薬学部の山下敦子教授の研究室にある、Mosquitoを使用してより高解像度の結晶作成および、基質、イオンの結合状態を解析している。それとともに年間2回のUCSFへの長期滞在により、より多くの結晶化条件を作成し、分子置換法により、VGLUTホモログタンパク質の立体構造を電子密度から推察できるまでに至っている。現在は、他の結晶化条件(リピッドキュービックフェイズ法)等を用いてさらに高解像度の結晶を作成するとともに、基質結合体、位相差結晶の作成をスカイプ等を用いて日本、UCSF双方で常に討論しながら研究遂行中である。現在、推定できたVGLUTホモログタンパク質の結晶構造は3.7オングストロームと、論文作成で要求される解像度にも近い状態まできたことから、VGLUTホモログタンパク質の結晶化の論文作成の最終段階に入ったと考えている。また、位相差結晶のための重元素の選定は済んでおり、結晶作成後の重元素浸潤条件を検討しながらこちらについても高解像度での位相差結晶の作成を目指している。基質結合結晶や、イオン結合結晶の作成においても以前よりより解像度の高いpH条件やPEG条件等を探索した。結晶が小さいため(20um)、立体構造の解明には至っていないがより大きな結晶を得るために更なる解析をしている。この申請課題により、小胞型グルタミン酸トランスポーターの結晶構造解析は飛躍的に進み、その解像度は論文提出レベルとすることができた。また、それに付随する重元素置換体の結晶二ついても現在未だ作成中であるが、こちらも重元素の選定等は既に済んでおり、作成した結晶に浸潤させるのみとなっている。これらの実験結果をもとに、平成27年度中の結晶論文化を目指し、現在論文作成と平行して行っている。また、生化学的解析については、同じ内膜系トランスポーターの一つである小胞型GABAトランスポーターの機能解析に関する論文(J. Neurochem.)とマラリア原虫の食胞に存在するクロロキントランスポーター(pfCRT)の機能解析をした論文(PNAS)を出すことができた。これらのデータは小胞型グルタミン酸トランスポーターの機能解析にフィードバックできるデータであり、その意義は大きい。また、小胞型グルタミン酸トランスポーターの機能解析に関する変異体についても、数多く作成できた事から、この結晶構造解析の結果と統合して論文かを目指したいと考えている。構造生物学すでに電子密度マップから結晶構造の全体像を得ることができるまでになっていることから、当初よりも早いと考えている。また、必須アミノ酸残基と思われる部位への変異体も随時作成し、機能解析をしていることから、すでに論文作成前の最終検討段階に突入したと考えられるため。今後は、再度UCSFに行くことも視野に入れながら、さらに結晶を作成するとともに、UCSFのビームラインを利用して回折データをみながらより解像度の高い化粧構造解析データの獲得を目指している。また、このプロジェクトも最終段階に入ったことから、回折データをもとに立体構造等をプログラミングを用いて作成する必要がある。最終的により自分の知識を広げる上でCCP4ソフトウェアのプログラミングを学ぶ会議や、蛋白質科学会等への参加により、より多くの情報を得ることについても積極的に行く。結晶構造が取れ次第、論文作成をして年度内の提出を目指している。
ゲノムに傷を抱えて増殖する細胞のＤＮＡ損傷チェックポイント機能発現の揺らぎの理解

超高齢化社会となった日本では今後、散発性のガンの増加は避けられず、そのガン化メカニズムの理解は重要である。散発性のガンは、究極的には、様々なストレスをうける細胞集団に出現した一個の異常細胞が増える病気といえる。よってストレス下にある細胞集団の中で正常と異常のはざまにある細胞の挙動を知る必要がある。申請者は、出芽酵母をモデルに慢性的なDNA損傷ストレス下にある細胞において、細胞周期を停止していたDNA損傷チェックポイントの強制的な不活化が起こると、不活後の細胞の再増殖は不均一に起こることに注目する。よって本研究ではゲノムに傷を持って再増殖する細胞の性質を知ることを目的に、その不均一な増殖を、娘細胞によるDNA損傷チェックポイント機能の発現の揺らぎとして捉えられるか調べ、その揺らぎに影響する要因を検討する。本年度は、DNA損傷チェックポイント蛋白Ddc2とRad9の融合蛋白によるDNA損傷チェックポイントキナーゼRad53の活性化の影響を調べた。Rad53の活性化は、細胞増殖の停止だけでなく染色体動態に影響を与えることがわかった。従って、今後、Ddc2-Rad9融合蛋白の発現調節の系を構築する事によって、揺らぎをリセットされるときの細胞の再増殖と、染色体の関係を調べることができると考えられる。本年度は、前年度に開発したDNA損傷チェックポイント蛋白Ddc2とRad9の融合蛋白によるDNA損傷チェックポイントキナーゼRad53の活性化の系の作用機構を調べた。Rad53の活性化にはRad9のヒストン修飾を介したクロマチン結合が重要である。今回、Rad53が活性化されない減数分裂細胞を用い、Ddc2-Rad9融合蛋白質が、Rad9のクロマチン結合能力を必要とせずに、Ddc2によってDNA損傷部位に局在し、Rad53を活性化することを見出した。またRad9の機能は、Ddc2と結合するMec1キナーゼによるリン酸化によって活性化されるが、Ddc2-Rad9融合蛋白質によるRad53の活性化もMec1によるリン酸化に依存していた。細胞の再増殖時におけるDNA損傷チェックポイント機能発現の揺らぎは、ヒストン修飾の作用を受ける可能性がある。よって今後、Ddc2-Rad9融合蛋白の発現調節の系を構築する事によって、揺らぎをリセットした時の影響を調べることができると考えられる。申請者は、慢性的なDNA損傷ストレス下にある細胞において、細胞周期を停止していたDNA損傷チェックポイントの強制的な不活化が起こると、不活後の細胞の再増殖は不均一に起こることに注目する。DNA損傷に長時間曝された酵母細胞は、DNA損傷チェックポイントの強制的な不活化を起こし、再び細胞増殖を始める。本年度は、これら再増殖細胞におけるDNA損傷の存在とDNA損傷チェックポイント活性化状態をモニターするための系の構築を試みた。まずDNA損傷チェックポイント

蛋白Ddc2と蛍光蛋白CFPの融合蛋白を発現する酵母株を作成し、観察を試みた。しかし、予想したような観察像を得る条件設定が出来ていない。今後はより蛍光シグナルの強い蛋白と融合して条件設定を行う。一方、Ddc2とその下流にあるDNA損傷チェックポイント蛋白Rad9の融合蛋白を発現するとDNA損傷チェックポイントを過剰に活性化できることを見出した。従って、この融合蛋白の発現調節の系を構築する事によってDNA損傷チェックポイントの活性化状態をコントロールできる可能性があるので、次年度以降の研究に有用な知見を得ることができた。当初の目的にある再増殖細胞におけるDNA損傷の存在とDNA損傷チェックポイント活性化状態をモニターするための系の構築を試みた。DNA損傷チェックポイント蛋白Ddc2と蛍光蛋白の融合蛋白とDNA損傷のマーカーとなるRfa1蛋白と蛍光蛋白の誘導蛋白を同時に発現する酵母株を作成したが、予想したような観察像を得る条件設定が出来ていない。今後も引き続き、条件の改良を試みる。一方で、Ddc2-Rad9融合蛋白によるDNA損傷チェックポイント活性化の作用機序が明らかとなってきているので、この系も利用して研究を推進して行く予定である。本年度は、Ddc2と蛍光蛋白の融合蛋白の蛍光シグナルが予想していたより弱かったので、DNA損傷チェックポイントが活性化してから強制的に不活化するまでの長時間にわたるタイムコースにおける条件設定に時間を取られ、また所属研究室にあるDelta Vision蛍光顕微鏡システムのバージョンアップが行われたが、システム再稼働の移行期間もあったことが計画の遅延につながっている。一方でDdc2とRad9の融合蛋白の解析にも時間を費やしたが、この融合蛋白は、今後の解析に役立つと考えている。引き続き、よりよい観察条件を見つけるために、様々な蛍光蛋白とDdc2の融合蛋白の組み合わせを発現する酵母株を作成する。それぞれの株で修復できないDNA二重鎖切断を形成した時の蛍光フォーカスとマイクロコロニー形成の経時変化を所属研究室にあるDelta Vision蛍光顕微鏡システムのタイムラプス機能を用いて撮影する。観察に最も適したDdc2融合蛋白を決定し、それに適合する蛍光蛋白をDNA損傷のマーカーとなるRfa1蛋白と融合させてDdc2融合蛋白と同時に発現できる酵母株を作成する。Ddc2とRfa1の組み合わせの決定が困難なことを考えて、今後、染色体の各部分(テロメア、アーム、セントロメア)を蛍光蛋白でマークする系を導入して、再増殖細胞において、染色体の安定性にどのような影響が起きるか調べる。またDdc2-Rad9融合蛋白の発現を調節できる系と組み合わせることによってDNA損傷チェックポイントの活性化状態をコントロールできる系も構築し、その影響も調べる。よりよい観察条件を見つけるために、様々な蛍光蛋白とDdc2の融合蛋白の組み合わせを発現する酵母株を作成する。
自然・文化景観から人と自然との関わりを現出するための新たな研究手法の構築

異年代の空中写真から作成した相観植生図や市民の撮影した風景写真などを用い、昭和中期以降における都市近郊の山林景観が復元できた。また、当山林景観復元を行った地域を対象に、簡易測量や絵図などの既往文献類を基に、中世後期の山城景観が復元できた。さらに、把握した両景観の変化が生じた理由を明らかにした。一方、適切な技術を有する業者と研究者が協議を重ねることで、博物館資料としての価値を有する昭和初期撮影の劣化フィルムの補修および複製が可能であることが明らかとなった。平成26年度(初年度)は、1)景観解析支援データベースの構築および2)景観復元に向けた準備に重点を置いた研究を実施した。景観解析支援データベースの構築では、景観復元に活用できる資料、それら資料からの景観復元手法、人による自然の利用に関する定性的・定量的資料、それら資料からの人による自然へのインパクトの定性的・定量的評価手法およびその他の景観復元・解析に関する事項等を、系統的に整理統合するための方策を検討し、これら項目のデータベース化に適したソフトウエアの選定およびデータベース・フォーマットの構築を行った。また、自然科学、特に景観生態学的分野を中心に、景観復元に関連する資料・文献類の収集を実施した。さらに、それら収集した資料・文献類を解析し、構築したデータベース・フォーマットを用いてデータベース化を行った。景観復元に向けた準備では、昭和初期現在の里山・山林景観、明治昭和初期の石炭・鉄鋼産業関連景観および中世後期の山城関連景観を対象景観とし、関連する資料・文献類の分析や現地踏査等から解析対象地点を選定した。その結果、里山・山林景観および中世後期の山城関連景観については、解析対象候補地点を具体的に絞り込むことができた。また、研究代表者・分担者の所属する博物館に寄贈されている大正昭和初期に撮影された劣化した8mmフィルム等の補修の可能性および補修方法の確定のための調査を実施した。その結果、補修が難しいと考えられた資料も存在したが、多くの資料は部分的にでも補修できることが判明し、解析に用いることが可能であると判断された。<景観解析支援データベースの充実化>景観解析支援データベースの充実化に向け、前年度に引き続き景観復元に活用できる資料や人による自然の利用に関する資料の収集を行った。<都市域の里山景観の復元>研究対象域を北九州市中央部に設定し、以下の2項目を行った(一部、実施中)。1)当該対象域における里山林に設置した7箇所の調査区(面積50m×20m)において、樹木群集の構造調査を実施した。なお、これら調査区は、2004年に設置したもので、設置当時に今回と同一の手法で群集構造を調査している。2)異なる年代に撮影された空中写真を用い、当該地域の過去の里山景観の復元を実施している。<都市近郊の山林景観の復元>文献や古写真等の資料が比較的多く存在する北九州市の皿倉山を研究対象域として設定した。本対象域の昭和初期中期の自然景観の復元に利用できる資料として、本対象域の昭和中期頃に撮影された写真や植物相調査結果の論文などを収集することができた。現在の本対象域は、常緑広葉樹が優勢な林やスギ・ヒノキの植林地が大部分を占めているが、昭和初期中期には山頂から中腹まで二次草原が広がっていたこと、それら草原は人によって形成されたこと、そこには草原性の植物が多数生育していたこと、現在のような森林中心の植生に変化したのは1970年代以降であることが分かった。<山城景観の復元>研究対象域を、上記の昭和初期平成の都市近郊の山林景観の復元対象域と同じく、北九州市のランドマーク的な存在でもある皿倉山に設定し、当該地域に存在した中世後期の山城(花尾城および帆柱城)を重点的に踏査し、曲輪や縦掘、掘切などの現存が確認できた。さらに、現在の微地形と当該城址の測量図および古絵図を比較し、現存する古絵図は正確に表現されていることなどが判明した。大正昭和初期に撮影された劣化した8mmフィルムなどの補修手法の検討・実施および補修したフィルムを用いた解析の担当者が平成27年度は育児休業中であったため、本研究項目を平成28年度以降に集中して実施することとした。また、明治昭和初期の石炭・鉄鋼産業関連景観の復元に関する定性的・定量的資料の収集を進展させることができなかった。しかし、本研究の対象地である北九州市が世界遺産「明治日本の産業革命遺産製鉄・製綱、造船、石炭産業」の一地域に選定されたこと、本研究の最終年度に予定している研究成果公開(博物館での無料展示)が世界遺産指定の意義や価値の周知にもつながることから、世界遺産関連業務担当部局と情報交換や普及啓発に関する協力関係を強化し、情報提供などを依頼したいと考えている。<都市近郊の山林景観の復元>研究対象域における異年代の空中写真から、相観植生図を作成した。また、収集した当該域内における1970年代の風景写真・記念写真(写真とする)が撮影された地点を踏査によって確認し、それら地点における現在の景観を撮影した。これら同一地点の異年代における空中写真・植生図・写真を用いて当該地域の植生景観の変化パターンを把握した。さらに探査した文献の分析結果等をもとに、把握された景観変化が生じた理由を明らかにした。<都市域の里山景観の復元>調査対象域における昭和初期の里山景観の復元に活用できる資料の存在を確認した。景観復元および展示会への活用に向けた検討を実施している。<山城景観の復元

>研究対象域における幾つかの城跡の調査図を作成した。また、前年度に踏査した山城跡周辺域の地質図、地形図、空中写真から得られる情報を検討した結果、山城が築城された地点は、他地点より浸食を受けにくい地質的特徴を持った地点である可能性が示唆された。<劣化フィルムの補修>収集した昭和初期の風景等が記録された劣化した16mmフィルム等の整理・データベース化を完了させ、それら劣化ファイルムの一部の補修を実施した。その際、フィルムとしての複製製作に加え、記録されていた画像情報のデジタルデータへの変換も実施した。これによって、劣化したフィルムを博物館資料として修復・保存する手法および研究や展示用に活用する手法を確立させることができた。<成果公開のための展示会の準備>都市近郊の山林景観の復元作業で収集・作成した上述の空中写真・植生図・写真を用いて、景観の変遷とその理由を解説する一般市民に向けたワークショップを伴った講演会を3回実施した。その結果、多くの市民には、景観変化のパターンの知覚化には、空中写真や植生図に比べ、写真の方が効果的であることが判った。復元した都市近郊の山林景観などのGISを用いた景観解析に際し、地域の博物館でも実施できる手法を構築するため、高価なGISソフトではなく、QGISなどの汎用性が高くかつ安価(無料)で入手できるソフトを使用することとした。当研究担当者が当該ソフトの活用に慣れていなかったため、ソフト使用方法のマスターや、当該ソフトに適した植生図・土地利用図の作成方法の検討にかなりの時間を費やしてしまった。このため、計画より少数の植生図や土地利用図しか作成できなかった。また、劣化フィルムの補修のための手法はほぼ確立することができたが、非常に劣化したフィルムの補修方針の検討にかなりの時間が必要であった。また、寄贈いただいた大量のフィルムの撮影テーマや撮影時期などのデータベースが整っていなかったため、本研究に適した情報を内包していると考えられるフィルムの選定にもかなりの時間を費やすこととなった。さらに、劣化フィルムの複製に用いる予定であった16mmフィルムが製造中止となったため、相対的に高額の35mmフィルムを用いることとした。これらのため、当初計画よりやや少ない量のフィルムしか補修ができなかった。<最終年度の成果>景観復元に係る既往の論文約120編を調査し、復元目的、復元手法や成果などを整理した。当調査結果や既研究結果などを総合的に考慮し、市民に景観の変化を伝えるための手法を考察し、学会で発表した。また、都市近郊の山林景観復元対象域と同地域において、現地調査や資料調査などを融合し、中世後期の山城関連景観を復元し、研究結果を学会で発表した。さらに、都市近郊域の山林景観復元に係る成果を中心に、「景観は時代とともに変化するものであること」、「景観の変化には人為的要因も大きく関与していること」などを市民に伝えるための企画展示を、北九州市立自然史・歴史博物館において実施した。なお、当企画展示実施期間中の来館者数は、約45,000人であった。<補助事業期間を通して得られた成果
産業社会の変容と生活行動の差異化

本研究においては、平成元年から平成3年にかけてのいわゆる「バブル経済」期の労働時間短縮要求の高まりに起因する、生活の余暇化への志向を、産業社会の秩序再生産の一画を構成するものとして位置付け、この視点から以下の分析をおこなった。【.encircled1.】政府刊行白書(『労働白書』、『経済白書』、『国民生活白書』)の分析。これによって「バルブ経済」期と余暇志向(ゆとりある生活、豊かな生活)の相関関係が明確化された。【.encircled2.】地方自治体において余暇政策関連の資料収集。これにより、都市化-過疎化による余暇政策と余暇志向の特色、地域の産業構造と余暇志向の相関関係が確認できた。【.encircled3.】自動車産業、エネルギー産業を中心とした労働組合による余暇関係政策の資料収集。これによって、「バルブ経済」期前後における余暇への志向の変容が明確に確認できた。以上の三点からなる資料の分析によって、「ゆとり・豊かさ」をキーワードとする余暇志向の高まりは、我々の価値観の多様化にともなう自己実現の契機としてではなく、景気動向に大きく規定された産業社会の秩序の再編成=産業社会から提出された選択肢の選択であり、この選択こそが「差異」に他ならないことが明確となった。また、こうした選択肢は地域的特性、産業構造、社会階層、年齢等によってその内容をことにするが、このような余暇志向の特定のパターンを類型化することにより、選択肢としての差異化からシフトしたメタ差異化に基づく余暇社会を構想する手掛かりが得られるはずである。また、今後の問題点としては国、地方自治体、労働組合による余暇政策による、個人の価値意識への関与の問題が挙げられる。
二次元すきま流励起振動に関する研究

すきま流れを含む構造系ではしばしば激しい自励振動が生じる.著者らは先に,一次元すきま流路における非定常流体力を解析的に求めて安定性の解析を行い,実験によってその妥当性を確認した.本研究はこれを二次元のすきま流路に適用して,二次示すきま流励起振動の発生機構を解明しようとするものである.そこで,すきま流れの基礎理論を二次元すきま流路に適用して,定常および非定常圧力分布を数値計算する手法を研究した.1.二次元すきま流路内の定常圧力分布および流体力の計算偏心環状すきまにおける定常圧力分布の計算を行ない,内部円柱に働く定常流体力およびモーメントを求めた.周方向の広がり流路における遅い流れでは圧力回復は無いとする,すきま流スキームを導入して圧力分布を求めた.その結果,平行流路と先細流路では正のばね力が作用し,末広流路では負のばね力が発生することが分かった.2.非定常流体力の計算定常圧力分布の解を基にして非定常圧力分布の計算を行い,非定常流体力およびモーメントを計算した.並進1自由度モードは不安定になり難いこと,回転モードは比較的容易に不安定になることが分かった.3.実験による検証定常圧力分布の測定を行い,計算結果と比較したところ,両者はほぼ一致し,本研究の知見として得られたすきま流スキームによる計算法が妥当であることが確認された.非定常圧力分布の計算を基にして得られた限界流速も妥当な値であった.これによって,二次元すきま流励起振動の解析に明るい見通しが得られた.すきま流れを含む構造系ではしばしば激しい自励振動が生じる.著者らは先に,一次元すきま流路における非定常流体力を解析的に求めて安定性の解析を行い,実験によってその妥当性を確認した.本研究はこれを二次元のすきま流路に適用して,二次示すきま流励起振動の発生機構を解明しようとするものである.そこで,すきま流れの基礎理論を二次元すきま流路に適用して,定常および非定常圧力分布を数値計算する手法を研究した.1.二次元すきま流路内の定常圧力分布および流体力の計算偏心環状すきまにおける定常圧力分布の計算を行ない,内部円柱に働く定常流体力およびモーメントを求めた.周方向の広がり流路における遅い流れでは圧力回復は無いとする,すきま流スキームを導入して圧力分布を求めた.その結果,平行流路と先細流路では正のばね力が作用し,末広流路では負のばね力が発生することが分かった.2.非定常流体力の計算定常圧力分布の解を基にして非定常圧力分布の計算を行い,非定常流体力およびモーメントを計算した.並進1自由度モードは不安定になり難いこと,回転モードは比較的容易に不安定になることが分かった.3.実験による検証定常圧力分布の測定を行い,計算結果と比較したところ,両者はほぼ一致し,本研究の知見として得られたすきま流スキームによる計算法が妥当であることが確認された.非定常圧力分布の計算を基にして得られた限界流速も妥当な値であった.これによって,二次元すきま流励起振動の解析に明るい見通しが得られた.本研究は,二次元すきま流路における非定常流体力を数値計算によって求める手法を開発し,安定性の解析を行うとともに,実験によってその妥当性を確認し,二次元すきま流励起振動の発生機構を解明するものである.平成3年度の実績は次の通りである.1.基礎式の定式化と流体力の計算システム二次元すきま流路内の圧力分布を求めるために,非定常すきま流れの基礎式を,管路網モデルに変形して,多自由度非線形振動方程式と同じ形に離散化した.これを新たに購入した汎用有限要素解析プログラムを用いて解くシステム作成した.2.定常圧力分布の計算二次元すきま流路として偏心環状すきまを対象として,定常圧力分布の計算を行なった.入口流量の修正法として,多自由度ニュウトン・ラプソン法及び感度解析の手法を用いることにより収束が良くなり,圧力分布の計算が容易に行えるようになった.3.非定常流体力係数行列の計算基礎式を線形化し,非定常圧力分布の計算を行い,これを積分してx,y方向の非定常流体力を求めた.これより流体力係数行列を求めたところ,並進1自由度モ-ドは不安定になり難いことが分かった.したがって,並進運動の他に回転モ-ドも加える必要があるとの知見を得た.4.実験装置の検討平成3年度に計算した流体力を基にして,平成4年度に製作する実験装置の主要諸元を決定した.並進モ-ドと回転モ-ドの連成振動が可能な系とした.本研究は二次元すきま流路における流体力を数値計算によって求め,安定性の解析を行うとともに,実験によってその妥当性を確認し,二次元すきま流励起振動の発生機構を解明するものである.平成4年度の実績は次の通りである.1.流路内の定常圧力布および定常流体力の計算偏心環状すきまにおける定常圧力分布の計算を行ない,内部円柱に働く定常流体力およびモーメントを求めた.平行流路と先細流路では偏心を元に戻す正のばね力が作用するが,末広流路では負のばね力が発生することが分かった.

2.非定常流体力の計算定常圧力分布の解を基にして非定常圧力分布の計算を行い,非定常流体力およびモーメントを計算し,流体力係数行列を求めた.並進1自由度モードは不安定になり難いこと,回転モードは比較的容易に不安定になり,また,並進と回転の連成モードが起こり安いことが分かった.3.実験による検証定常圧力分布の測定を行い計算結果と比較したところ,計算結果と実験結果はほぼ一致し,すきま流理論および計算法が妥当であることが確認された.内円柱を弾性的に支持して安定性の実験を行った.内円柱が振動を起こす前に初期位置からずれる現象および限界流速を越えると不安定になって振動を引き起こすことが確認された.本研究は二次元すきま流路における流体力を数値計算によって求め,安定性の解析を行うとともに,実験によってその妥当性を確認し,二次元すきま流励起振動の発生機構を解明するものである.平成5年度の実績は次の通りである.1.流路内の定常圧力分布および定常流体力の計算偏心環状すきまにおける定常圧力分布の計算を行ない,内部円柱に働く定常流体力およびモーメントを求めた.平行流路と先細流路では正のばね力が作用し,末広流路では負のばね力が発生することが分かった.2.非定常流体力の計算定常圧力分布の解を基にして非定常圧力分布の計算を行い,非定常流体力およびモーメントを計算し,流体力係数行列を求めた.並進1自由度モードは不安定になり難いこと,回転モードは比較的容易に不安定になり,また,並進と回転の連成モードが起こり安いことが分かった.3.実験による検証定常圧力分布の測定を行い計算結果と比較したところ,両者はほぼ一致し,本研究で得られたすきま流スキームによる計算法が妥当であることが確認された.非定常圧力分布の計算を基にして得られた限界流速も妥当な値であった.4.研究成果報告書の作成以上の研究成果を取りまとめて,研究成果報告書を作成した.
アラキドン酸カスケードと病的動態

年度の研究により、アラキドン酸カスケードに関わる諸因子との関連性について以下の点を明らかにした。(1)プロスタグランジンの産生と病態;高脂血症患者に於ける血清脂質及び尿中prostacyclin(PGI_2)、thromboxaneA_2(TXA_2)代謝産物、8-isoprostane排泄量を測定し、高脂血症患者におけるTXA_2/PGI_2産生不均衡とその血管合併症への関与が示唆された。またイコサペント酸エチル投与により、PGI_2、TXA_2及び8-isoprostaneがその効果に関与することが示唆された。さらに、異常妊娠例(妊娠性糖尿病例、子宮内胎児発育遅延例など)や糖尿病患者では、TXA_2/PGI_2産生不均衡が生じていることが示された。(2)シクロオキシゲナーゼの変動;急性炎症モデルに於けるCOX-2阻害薬の抗炎症作用はCOX-2を介するPGE_2産生阻害であること、更にデキサメタゾンの血漿滲出抑制作用はPLA_2及びCOX-2の発現抑制は重要でないことが示された。血管新生モデルを用いての検討では、COX-1ではなくCOX-2がPG生成を介して血管新生を増強していることが示され、誘導されたVEGFが実際にこのモデルの血管新生に役割を持つことが判明した。また、COX酵素がCOX活性とperoxidase活性を合わせ持っていることを利用して、生細胞系でCOX活性を個々の細胞で測定できる系を確立し、内因性アラキドン酸を利用できるのはCOX-2のみであること、NOはCOX-2活性を有意に抑制することを明らかにした。COX-1はヒト巨核芽球性白血病細胞CMKでホルボールエステルで誘導され、血小板では認められないPGD合成酵素の造血器型がCMK細胞に存在することが示された。COX-2マウス骨芽細胞MC3T3-E1でTNFαによって著明に誘導され、その転写調節因子として、NFκBとNFIL-6の関与が明らかとなった。(3)ロイコトリエン(LT)の定量と機能;LTB_4の定量分析には、LTB_4のモノクローン抗体を用いた放射免疫測定法、尿サンプルを用いる簡便な酵素免疫測定法、ESIイオン源を装着したLC/MS微量定量分析をそれぞれ確立した。また、喘息患者では健常人に比べて尿中LTE_4、11β-PGF_<2α>とも有意に高値を示し、アスピリン喘息患者では尿中LTE_4が非常に高値を示し、肺気腫患者では11β-PGF_<2α>が有意に高値を示した。新規抗糖尿病薬troglitazoneには抗原刺激によるLT産生を抑制する作用があることをラット肥満細胞株であるRBL-2H3細胞を用いて明らかとなった。またLTB_4受容体のクローニングに成功し、その性状を明らかにした。CHO細胞に発現させた場合、LTB_4はアデニル酸シクラーゼ活性の阻害、細胞内カルシウム濃度の上昇を引き起こし、また、LTB_4の遊走活性への関与が明らかとなった。

また、喘息患者では健常人に比べて尿中LTE_4、11β-PGF_<2α>とも有意に高値を示し、アスピリン喘息患者では尿中LTE_4が非常に高値を示し、肺気腫患者では11β-PGF_<2α>が有意に高値を示した。新規抗糖尿病薬troglitazoneには抗原刺激によるLT産生を抑制する作用があることをラット肥満細胞株であるRBL-2H3細胞を用いて明らかとなった。またLTB_4受容体のクローニングに成功し、その性状を明らかにした。CHO細胞に発現させた場合、LTB_4はアデニル酸シクラーゼ活性の阻害、細胞内カルシウム濃度の上昇を引き起こし、また、LTB_4の遊走活性への関与が明らかとなった。各班員の分担領域において下記の成果を得た。研究の進展状況は良好と考えられた。1.シクロオキシゲナーゼ(COX)に関して(1)ラットの腹膜炎モデルにおいて、血漿滲出速度、滲出液中のPGレベル及び白血球中のCOX-2発現レベルはほぼ並行に推移した。COX-2阻害剤は血漿の滲出及びPGE2の産生を抑制した。(2)蛍光顕微鏡などを用い、生細胞におけるCOXの活性測定法を確立した。2.12-リポキシゲナーゼに関してヒト赤白血病において、NF-xBは12-リポキシゲナーゼの発現を抑制した。また、リコンビナント酵素に対するモノクローナル抗体を調製し本酵素の組織内分布及び細胞内局在を明らかにした。3.PAFに関してPAF受容体を高発現したCHO細胞の、粗膜画分を用いた受容体結合実験(ラジオ・レセプターアッセイ)を確立した。本法の感度はラジオイムノアッセイと同程度で、特異性はこれを上回り、また本法は煩雑な前処理を必要としない点で有用性が高いものと考えられた。4.TXA2/PG12バランスに関してPG12とTXA2の安定代謝体である6-kreto-PGF1α、2,3-dinor-6-keto-PGF1α及び11-dehydro-TXB2の同時測定法を確立した。尿中のTXA2の安定代謝体は、糖尿病、全身性エリテマトーデス及び脳梗塞患者において、対照群と比較して高値であった。しかし、PGI2の代謝体は変化が認められず、TXA2の産生亢進とTXA2-PGI2の不均衡がこれらの疾患に関与することが示唆された。S.TXA2,TXA3の新規代謝体の検出について未だ検出されていなかったTXA2,TXA3の新規代謝体である、11-dehydro-2,3-dinor体及び11-dehydro-2,3,4,5-tetranor体をGC/MSを用いて、ヒト尿中より検出・同定した。これら代謝体の含量は、11-dehydro体の約30%程度であることが判明し、TXの指標の一つとして重要であるものと考えられた。アラキドン酸カスケードと病態の関連性を明らかにする目的で種々の検討を行い、以下の成果を得た。1.血小板活性化因子(PAF)に関して:PAF受容体を過剰発現したマウスを作製した。同マウスを用いた検討から、PAFは気管支喘息やエンドキシン誘発病態のみならず皮膚疾患や色素異常などにも関与する可能性を示した。2.PG代謝産物の測定から:(1)高血圧を合併した高脂血症患者の検討から、イコサペント酸エチルは脂質代謝の改善、コレステロールやトリグリセリド(TG)の減少、さらにトロンボキサン選択的な減少効果を示し、血栓症や血管合併症の予防への有用性を示した。(2) GC/SIMを用いた検討から、網膜血管閉塞症患者のトロンボキサン産生量が増加していること。また低用量のアスピリンの投与によりトロンボキサン/プロスタサイクリンバランスは改善され、さらに病態の改善例も認められたことから、PGバランスの変動が血管閉塞の一因になりうることが示された。
石炭の総合的利用を目指した複合的変換プロセスの開発

本研究は、石炭の高度利用技術の開発によって石炭利用効率を大幅に向上するとともに、クリーンな石炭転換プロセスを開発して、炭酸ガス問題を始めとする環境問題解決に大きく貢献することを目的にしている。具体的には、(1)非常にマイルドな条件下で液収率を大幅に向上し得る熱分解法の開発、(2)生成物の組成制御を可能とする新しい超臨界・熱分解抽出法の開発、(3)各ステップを最適化した高効率多段液化プロセスの開発、(4)高温ガス化プロセスの最適条件選択の基盤確立、(5)石炭ガス化等で生成するガスを脱硫・精製するための高複合機能脱硫剤の開発に取り組んでいる。本年度得られた成果は以下の通りである。1.石炭内非共有結合の強度分布を評価する手法を開発した。さらに、石炭転化率、液・BTX収率を飛躍的に増加させる合理的プロセスとして石炭メタノールスラリーの迅速熱分解を提出し、工業化可能なことを明らかにした。2.CoMo/Al_2O_3触媒を用いた石炭の粉・粒流動層熱分解により、水素雰囲気、500°Cの熱分解条件下で、7.2wt%のBTX、ナフタレン収率を得た。3.超臨界流体による石炭抽出条件を最適に設定することで、60%近くの石炭転化率,10数%のBTXを得ることに成功した。4.前処理/水素移動液化/硫化鉄触媒水素化反応からなる多段液化を提案し、溶剤/石炭比が1において完全転化,オイル+アスファルテン収率81%を達成できた。5.最高1500°Cの高温域で石炭をガス化した。高温でも炭種によるガス化反応速度の差が認められ、その序列は炭化度、表面積、結晶不完全性と相関された。6.石炭ガス化生成ガス組成に応じた酸化亜鉛系高度脱硫剤の至適使用温度の指標を確立した。7.層間架橋粘土触媒を用い、石炭低温揮発性成分のその場接触改質を行い、600°C以下常圧水素下にて24%のBTX収率を得た。8.石炭の高分子構造と溶媒等の各種化合物との親和性を実験的に評価する新手法を確立した。
蛍光共鳴エネルギー転移を利用したセンサーペプチドの創成

蛍光エネルギー転移によるクエンチングを利用した、cAMP依存性プロテインキナーゼ(PKA)の活性をイメージングするためのペプチドの設計を行った。本センサーペプチドは、リン酸化されることによって親水性が高くなり、立体構造変化を起こし、蛍光強度が変化すると考えられる。具体的には、Kemptide配列(LRRASLG)を含む種々のペプチドを用いて、このペプチドのC末端に蛍光ドナーとして、EDANSを、N末端にクエンチャーとして、dabcylを修飾したペプチドを合成した。合成によって得られた非リン酸化及びリン酸化センサーペプチドの蛍光スペクトルを測定した結果、リン酸化センサーペプチドの蛍光強度は、非リン酸化ペプチドより大きく、顕著な差が見られた。これは、センサーペプチドがリン酸化されることによって、親水性が高くなり、ペプチドが伸びたような構造をとるために、蛍光色素間の距離が離れ、エネルギー転移が起こりにくくなったためであると考えられる。一方、塩基性アミノ酸を伸長させたペプチドでは、反対にリン酸化により蛍光強度が小さくなった。これはリン酸化により、電荷が中和され、それゆえ縮んだ構造になるためであると考えられる。また、PKA反応後のセンサーペプチドのHPLCの溶出時間は、合成によって得られたリン酸化センサーペプチドの溶出時間と一致し、本センサーペプチドは、PKAによってリン酸化されることが確認された。分裂促進物質活性化タンパク質キナーゼ(MAPK)カスケードは真核生物の重要な情報伝達経路である。そのため、これらの挙動をイメージングにより解析することは極めて重要となっている。本研究ではリン酸化で起こるペプチドの立体構造変化に着目し、その立体構造変化により蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)が変化するようにセンサーペプチドを設計、合成した。センサーペプチドの配列は、MAPKキナーゼによりリン酸化されるMAPKの配列(HTGFLT__-EY__-VAT,下線のチロシンとトレオニンがリン酸化される)を用いた。まず、GHTGFLTEYVATGCを固相上に合成し、N末端α-アミノ基にRhodamine B(Rho) sulfonylchlorideを修飾した。次にクリベージを行い、Rho-GHTGFLTEYVATGCを得た。次にシステイン側鎖にFluorescein (Flu)-5-maleimideを修飾し、逆相HPLCにより精製した。Rho-GHTGFLTEYVATGC(Flu)の合成確認は、MALDI-T0F MSで行った。同様にリン酸化センサーペプチドRho-GHTGFL[pT]E[pY]VATGC(Flu)を合成した。次に、リン酸緩衝液中、励起波長450nm(Fluの励起波長)でセンサーペプチドの蛍光スペクトルを測定した。その結果、センサーペプチドはリン酸基の有無により異なる蛍光スペクトルを示した。センサーペプチドは、リン酸化されるとFluの蛍光が増加し、FRETによるRhoの蛍光が減少した。これはリン酸化によりペプチドの立体構造が変化したことでFRETが起こりにくくなったためと考えられる。このリン酸化による蛍光スペクトル変化から本研究で設計したセンサーペプチドはキナーゼ活性測定ができるセンサーとしての可能性が示唆された。蛍光エネルギー転移によるクエンチングを利用した、プロテインキナーゼ活性をイメージングするためのペプチドの設計を行った。具体的には、センサーペプチドの配列として、7残基のKemptide配列(LRRASLG)を用いて、このペプチドのC末端に蛍光ドナーとして、EDANSを、N末端にクエンチャーとして、dabcylを修飾したペプチドを合成した。蛍光エネルギー転移によるクエン

チングを利用した、cAMP依存性プロテインキナーゼ(PKA)の活性をイメージングするためのペプチドの設計を行った。本センサーペプチドは、リン酸化されることによって親水性が高くなり、立体構造変化を起こし、蛍光強度が変化すると考えられる。具体的には、Kemptide配列(LRRASLG)を含む種々のペプチドを用いて、このペプチドのC末端に蛍光ドナーとして、EDANSを、N末端にクエンチャーとして、dabcylを修飾したペプチドを合成した。合成によって得られた非リン酸化及びリン酸化センサーペプチドの蛍光スペクトルを測定した結果、リン酸化センサーペプチドの蛍光強度は、非リン酸化ペプチドより大きく、顕著な差が見られた。これは、センサーペプチドがリン酸化されることによって、親水性が高くなり、ペプチドが伸びたような構造をとるために、蛍光色素間の距離が離れ、エネルギー転移が起こりにくくなったためであると考えられる。一方、塩基性アミノ酸を伸長させたペプチドでは、反対にリン酸化により蛍光強度が小さくなった。これはリン酸化により、電荷が中和され、それゆえ縮んだ構造になるためであると考えられる。また、PKA反応後のセンサーペプチドのHPLCの溶出時間は、合成によって得られたリン酸化センサーペプチドの溶出時間と一致し、本センサーペプチドは、PKAによってリン酸化されることが確認された。
血管作動物質による血管平滑筋細胞のイオン交換系賦活と細胞内情報伝達機構

本研究では、細胞内Na^+濃度([Na^+]i)、細胞内遊離Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)そして細胞内pH(pHi)を蛍光色素法で直接測定し、血管平滑筋細胞(VSMC)におけるバゾプレシン(AVP)による[Na^+]i増加作用に対する[Ca^<2+>]i動員、Ca^<2+>/カルモジュリン系そしてCキナーゼ系の関与を検討した。1.AVPの[Na^+]i増加作用に対する[Ca^<2+>]i動員の役割。AVPによる[Ca^<2+>]i動員を細胞内Ca^<2+>キレート剤(BAPTA、50μM)で抑制し、AVP添加時の[Na^+]iの変化を検討した。BAPTAの10分間前処置は、[Ca^<2+>]iと[Na^+]iの基礎値には影響しなかったが、AVP添加時の[Ca^<2+>]i動員と[Na^+]i増加作用を完全に抑制した。2.AVPの[Na^+]i増加作用に対するCa^<2+>/カルモジュリン系の役割。Ca^<2+>/カルモジュリン系阻害剤(W〓、50μM)を用いて、AVPの[Na^+]i増加作用とCa^<2+>/カルモジュリン系の関係を検討した。W〓の10分間前処置は、pHiと[Na^+]iの基礎値には変化を与えなかったが、AVPによるNa^+/H^+交換系賦活化によるpHiのアルカリ化と[Na^+]i増加作用を完全に阻止した。3.AVPの[Na^+]i増加作用に対するCキナーゼ系の役割。[Na^+]iとCキナーゼの関係は、Cキナーゼ賦活剤(PMA)を用いて検討した。PMAは、同細胞の[Na^+]iには影響を与えなかった。PMAで細胞を24時間前処置しCキナーゼを抑制した細胞においても、AVP添加による[Na^+]i増加作用は同様に認められた。以上により、血管平滑筋細胞におけるAVPの[Na^+]i増加作用は、AVPの[Ca^<2+>]i動員とCa^<2+>/カルモジュリン系の賦活化に依存し、Cキナーゼ系の賦活化にはあまり依存していないことが示唆された。