hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
腹部肥満者の動脈硬化の進展に及ぼす終末糖化産物の関与と運動介入効果の検討

肥満者における最終糖化産物(AGEs)の血液中での形成・集積状態と種々の運動・食事介入を行ったさいの同成分の変化を若年から中高年の幅広い年代で観察した。主として血清CML濃度は一日歩数の増加や体脂肪量の減量に伴い減少した。肥満者における生活指導は生体内AGE成分を減少させ、動脈硬化性疾患を予防できる有効なプログラムとなり得る可能性を示唆した。Advanced Glycation End-product(以下AGE)関連物質は、還元糖とアミノ基(タンパク質、脂質、核酸など)がメイラード反応を起こしてできるもので、高血糖、酸化ストレスが原因となって形成され、血管内皮や平滑筋組織などに徐々に蓄積することで、動脈硬化の進展に関与すると推測され、これまで特に糖尿病患者において多くの報告がなされている。我々は、こういったAGEの集積やアディポサイトカイン分泌異常を含めた動脈硬化進展のプロセスを調べる目的で、腹部肥満のリスクをもつ(明らかな高血糖を示さないような)若年者から中高年まで対象者を広くとって、世代間を通したこれらの物質の形成・蓄積動態と動脈硬化との関連を解析し、また、腹部肥満を持つ対象者を中心に運動・食事介入を行い、AGEやアディポサイトカインを介して動脈硬化の進展にどのような影響を与えるのかを調べている。平成19年度は、動脈硬化予備群にあたる中年肥満者と、AGE蓄積予備群と思われる若年肥満者を対象に、血清AGE成分(3-デオキシグルコソン(3-DG)、ペントシジン、カルボキシメチルリジン(CML))のモニタリングを行った。また、同時に身体組成、血液生化学的項目やインスリン抵抗性、アディポサイトカイン、活性酸素を測定し、動脈硬化の進展に及ぼすAGEの影響について総合的、横断的に解析した。その結果,若年肥満学生(46名、21±3歳、体重:83.2±18.1kg、BMI:28.9±5.4kg/m^2、体脂肪率:27.45±8.0%)において、血清CML濃度がインスリン抵抗性の指数(P=0.029)や活性酸素量(P<0.001)と正の相関を示し、明らかな高血糖を示さない若年肥満者においても、早期よりAGE成分CMLがインスリン抵抗性の存在や活性酸素量増加に応じて形成・蓄積されることが示唆された。一方、明らかな高血糖のない中高齢女性(47名、56±8歳、体重:61.0±10.7kg、BMI:24.7±4.0kg/m^2、体脂肪率:33.0±6.7%)における検討では、血清CML濃度が体脂肪率(P=0.017)やHDL-コレステロール(P=0.003)、中性脂肪(P=0.015)と正の相関を示し、このような中高齢女性においても、AGE成分CMLは体脂肪や血液脂質量に応じて形成・蓄積されることが示唆された。以上より、明らかな高血糖を示す糖尿病患者に限らず、AGE成分CMLは、肥満や体脂肪やそれに伴う活性酸素増加やインスリン抵抗性の存在に応じて生体内で形成されていることが示された。Advanced Glycation End-product(以下AGE)は、還元糖とアミノ基(タンパク質、脂質、核酸など)がメイラード反応を起こしてできるもので、高血糖、酸化ストレスが原因となって形成され、血管内皮や平滑筋組織などに徐々に蓄積することで、動脈硬化の進展に関与すると推測されている。これまで特に糖尿病患者において多くの報告がなされており、3-デオキシグルコソン(3-DG)、ペントシジン、カルボキシメチルリジン(CML)などの物質が知られている。我々は、平成19年度に、明らかな糖尿病を有しないが腹部肥満を有する若年・中高年者を対象に、これらAGEの血清濃度と身体組成、血液生化学的項目やインスリン抵抗性、活性酸素の関係を総合的・横断的に解析し、特にAGE成分CMLは、肥満者では(非肥満者と比較して)若年期から既にインスリン抵抗性や活性酸素量に応じて形成され始めており、また中高年肥満女性では、体脂肪量や血液脂質量に応じてさらに形成・蓄積されることを明らかにした。平成20年度は、このような肥満者を対象に種々の運動指導を行い、身体組成、各種栄養素の摂取状況、血液生化学的項目、インスリン抵抗性や活性酸素の変化とあわせて、血清AGE成分がどのように変化するかを観察し、動脈硬化の進展に与える影響を検討した。具体的には、(1)腹部肥満を持つ中年女性(47名、56±8歳、体重:61.0±10.7kg、体脂肪量:33.0±6.7kg)を対象に、3ヶ月間、週3回の運動教室と非監視下での日常活動量のモニタリングを行い、また(2)別の肥満中高年女性(29名、57±9歳、体重:60.2±7.1kg、体脂肪率:20.6±5.8%)に対して、2ヶ月間、週3回の水中運動の教室を行った。その結果、これらの介入では、体脂肪量や血清CML濃度が有意に減少し、特に(2)の介入では、同年齢の非介入群と比べて、CML濃度の減少と日内歩行数が正の相関を示した。

以上の結果から、明らかな糖尿病を有しないような中高年の肥満女性においても、体脂肪や血液脂質量に応じて形成・蓄積されるAGE成分の一部が運動介入により減少させうることが証明され、運動指導が動脈硬化性疾患り予防に果たす新たな役割が存在する可能性が示唆された。平成19年度は、メタボリック症候群の動脈硬化の進展に及ぼす終末糖化産物(AGE)の関与を検討するために、20歳代の若年成人と40歳から70歳代の中高齢者(いずれも明らかな糖尿病や腎疾患を有さない肥満を含む対象)に、AGE物質(カルボキシメチルリジン(CML)、ペントシジン、3-デオキシグルコソン)の血液濃度の測定を行い、身体組成や血液生化学的項目、インスリン抵抗性、活性酸素、各種栄養素摂取との関連を横断的に解析した。平成21年度には、運動介入や食事摂取がAGE関連物質の蓄積に与える影響に関して、上記中高年女性を対象に2-3ヶ月間の運動介入・生活指導を(1)陸上中心の運動、(2)水中運動に対象を分けて実施・検討してきた。その結果1)CMLは血中活性酸素・糖脂質指標と、ペントシジンは年齢や体脂肪・血液脂質と関連した。2)体脂肪量や血清CML濃度が有意に減少し、特に運動介入では、同年齢の非介入群と比べて、CML濃度の減少と日内歩行数が正の相関を示した。そこで、平成21年度では、中高齢者の陸上運動介入群・水中運動介群の観察の中で、上記の運動の効果のさらなる検討に加えて、介入期間中に施行した食事の摂取カロリーと摂取栄養素の分析を行ない、これらの各栄養諸量と最終糖化産物の変化との関係について検討した。その結果、血中CML濃度は、陸上・水中の両運動介入群とも有意に低下しているのとは対照的に、血中ペントシジンは陸上運動群では有意な減少なく水中運動群では有意に増加していた。ペントシジンは他のAGE群とは違い、病的あるいは加齢に伴う筋肉線維間のコラーゲン架橋に関与するとも考えられており、今回の運動介入によりこの構造的変化に何らかの影響を与えた可能性がある。運動介入時の食事成分の分析では、両指導群とも総カロリー・炭水化物・たんぱく質・ビタミン・ミネラル類の摂取量には血中AGE成分との関連を認めなかったが、介入前の一日脂肪摂取量(g/day)と血中ペントシジン濃度には有意な負の相関を認めた。以上のような、若年者から中高齢者までの加齢によるAGEs成分と動脈硬化に及ぼす影響、運動形式によるAGEs成分への影響の検討、食事因子の影響についての検討を行い、本研究課題の主テーマである"腹部肥満者の動脈硬化の進展に及ぼす終末糖化産物の関与と運動介入効果"の総括し、日本透析医学会総会や日本体力医学会近畿地方会のシンポジウムで発表を行った。
コンデンシン結合による細胞周期特異的染色体構造の変化

遺伝情報を記録したクロマチンDNA繊維は、分裂期になると太くて短い分裂期染色体へとその形態が大きく変化する。染色体凝縮と呼ばれるこの過程は、複製された遺伝情報を正確に次世代の細胞に継承するために必要だが、そのメカニズムや凝縮した染色体の構造について不明の点が多い。真核生物で広く保存される蛋白質複合体のコンデンシンは、直接DNAに作用して染色体凝縮に役割を果たすと考えられている。モデル生物の出芽酵母で、コンデンシンは染色体上の(1)セントロメア、(2)腕部上では主にtRNA遺伝子部位、そして(3)リボソームRNA(rDNA)遺伝子繰り返し領域内にあるRFBに結合することがわかっている。今年度、まずコンデンシンの結合をクロマチン免疫沈降法により、上記3種の結合を比較した。その結果、RFB(1コピー)への結合シグナルが最も強く、次にセントロメアへの結合シグナルがその約1/2、腕部上に散在するtRNAには極めて僅かな結合しかないことが判った。すなわち、RFBは最もコンデンシンが結合しやすい配列であることがわかった。次に、コンデンシンによる染色体凝縮のメカニズムを調べる目的で、染色体上のrDNA領域を完全に欠失した細胞(RFB配列を持たない)を用い、6番染色体腕部上に2つあるいは3つのRFBを約15kb間隔で挿入した。この細胞を使い、RFBへのコンデンシン結合に依って分裂期細胞では、腕部上に並んだRFB同士が相互作用することが、Chromosome Conformation Capture(3C)法によりわかった。この結果から、コンデンシンがDNAに結合することで、その結合部位同士が相互作用し、結果としてそれらの間のクロマチンが折りたたまれる事になる。これが染色体凝縮の素反応の1つであると考えられた。細胞分裂期になると、遺伝情報を記録した細いクロマチンDNA鎖は、太くて短い棒状の分裂期染色体へとその形態を大きく変化させる。このダイナミックな形態変化は染色体凝縮として知られており、そこで直接DNAに作用して中心的な役割を果たすと考えられているのが、コンデンシンと呼ばれる蛋白質複合体で、真核細胞で広く保存されている。これまでに出芽酵母を用いて、コンデンシンが結合する配列(RFB)をリボソームRNA遺伝子(rDNA)繰り返し領域内に見出し、またその結合のメカニズムを明らかとしている。今年度、rDNA領域のRFBに結合したコンデンシンが、如何にしてクロマチンDNAの凝縮に働くのかを調べた。方法は、染色体上の離れた部位間の物理的相互作用を検出できる、Chromosome Conformation Capture(3C)法により解析した。その結果、微小間重合阻害剤(ノコダゾール)で分裂期(metapahase)に停止した細胞で、rDNA領域内に約9kb間隔で並ぶRFB配列同士が、物理的に相互作用している事が検出された。コンデンシンを構成する遺伝子に欠損がある場合、またRFBへのコンデンシン結合に必要な因子(Fob1,Csm1等)に欠損がある細胞では、RFB間の相互作用が野生型のそれに比較して減少することが観られた。このことから、コンデンシンがRFBに結合する事によって、RFB間の相互作用が生じていることがわかった。この結果から、コンデンシンがクロマチンに結合すると、その結合配列間での相互作用が生じ、結果としてそれらの間のクロマチンが折りたたまれる。これが染色体凝縮の素反応の1つではないかと考えられた。
自閉症スペクトラム障害の早期診断のためのオミックス解析と発達コホート研究

自閉スペクトラム症(ASD)の発症リスク因子である環境ストレスとしてのミクログリア活性化分子ネットワークに着目し、ASDのバイオマーカー候補としてmiRNA(micro-RNA)解析を行った。福井県A町で出生した子の発達に関する前向きコホート調査参加者の母子に対し、視線計測検出装置による社会性の評価を行った。その結果、母のメンタルヘルスは乳児期における子の社会性発達へ影響することが示唆された。また、月齢により異なる側面の社会性が発達するが、その発達の程度はOXTR遺伝子多型によって異なる可能性が示唆された。本成果は、ASDの病態解明を目指した臨床応用への足掛かりになりうる。自閉スペクトラム症(ASD)は多因子性の疾患で、遺伝要因とともに環境要因の重要性も指摘されている。とくに胎児の環境としての母体は、様々な化学的、物理的環境、感染や社会的環境に起因するストレスにさらされ、免疫システムを介して神経発達に必須な脳内サイトカインネットワークに影響を与える。本研究では以下の検討を行った。・アレイを用いた網羅的解析により、3200個の中からマーカー候補を絞った。・ASD児・者において、子どもと成人に共通してmiRNA発現に有意差が見られた3候補(miR-122-5p, miR-3925-5p, miR-4755-3p)を見出した。2ASD児は社会的情報(顔における目など)への注視時間が短いという報告がある。福井県永平寺町で出生した子の発達に関する前向きコホート調査参加者のうち同意が得られた母子に対し、幼児期ASDの早期発見を目的として開発された視線計測検出装置(Gazefinder&reg;)を用いて視線計測を行った。その結果、オキシトシン受容体(OXTR)遺伝子多型と視線計測による社会性発達評価との関連を解析した結果、月齢との交互作用が見られ、発達とともに視線の選好パターンが有意に変化するものの、OXTR遺伝子多型により選好パターンの発達が異なっていた。ASDでは、miR-122-5pの発現が有意に上昇マーカー候補となり得る結果を示した。miR-122-5pは、ADAM10の発現を負に制御しており、またADAM10はニューロリジン(NLG1)の制御に関わり、ASDとの関連性が示唆されている。今後はその生理的機序の解明に取り組みたい。自閉症の発症リスク因子としてのミクログリア活性化分子ネットワークに着目したmiRNA(micro-RNA)解析およびオキシトシン受容体(OXTR)遺伝子多型と視線計測による社会性発達評価との関連に関する解析については、複数の実験を終了し、現在国際誌投稿の段階に入っている。本研究の独創性を反映したユニークな視点、手法による結果が得られたため、当初の予定を超える順当な成果をあげたと評価できる。本年度は以下の検討を行った。1)福井県永平寺町で出生した子の発達に関する前向きコホート調査参加者のうち同意が得られた母子に対し、視線計測検出装置Gazefinder&reg;による社会性の評価を行った。2)さらに、オキシトシン受容体(OXTR)遺伝子多型と視線計測による社会性発達評価との関連を解析した。その結果、月齢との交互作用が見られ、発達とともに視線の選好パターンが有意に変化するものの、OXTR遺伝子多型により選好パターンの発達が異なっていることが明らかとなった。これは月齢により異なる側面の社会性が発達するが、その発達の程度はOXTR遺伝子多型によって異なる可能性を示唆された。以上の研究成果を学会報告するとともに、Scientific Reports誌に報告した(電子版:2017年5月に掲載予定)。今後はASD児およびASD者において、miRNA*唾液中オキシトシンホルモン値*脳MR画像*視線計測検出結果を組み合わせることにより、判別率の向上を目指したい。小児精神神経学、小児発達学脳イメージング研究による病態解明のための被験者リクルートが当初の計画通り進まなかったためさらに被験者リクルートを積極的に行い、得られたデータからASDの複数の中間表現型、即ち脳画像、脳波、行動、分子データを、多変量解析し、創薬候補分子を絞り込むためのアルゴリズムを開発する
ストレス環境下における近交弱勢の個体群存続性への影響評価

乾燥化や富栄養化など環境の悪化が著しい、貧栄養湿地に生育する絶滅危惧植物、イヌセンブリの個体群存続性に近親交配・乾燥化・被陰の相互作用が及ぼす効果を、実験個体群および自生地での個体数調査に基づいて評価した。その結果、実生の段階では近交弱勢が乾燥ストレス下で強くなる傾向が見られた。その後の開花までのステージにおいてはそのような交互作用は見られなかったが、過湿により成長が著しく阻害される傾向、および自殖個体では近交弱勢により生存率・着花数ともに低下する傾向がみられた。一般に自殖性の植物では近交弱勢が弱く、個体群存続性への影響は考慮されていない状況だが、野外のストレス環境下で、近交弱勢がより強く現れ、個体群存続性にも影響を及ぼす可能性がある。本課題では、乾燥化や富栄養化など環境の悪化が著しい、貧栄養湿地に生育する自殖性の絶滅危惧植物、イヌセンブリを対象として取り上げる。2007年度は、均一な栽培環境および被陰・乾燥ストレスの程度を制御した野外実験個体群で近交弱勢の測定を行った。近交弱勢の測定は、人工授粉によって作成した自殖・他殖種子を播種し、その発芽・成長率を比較することで行った。野外実験では、ストレス条件として、被陰の程度を高茎草本の刈り取りにより操作し、乾燥条件は比高の高低で変化させた。室内の栽培環境では、自殖・他殖ともに発芽率は99.5%、半年後のロゼットを形成した段階での生存率はそれぞれ47%と43%と、有意な差はなく、成長率にも顕著な差はみられなかった。従って、栽培条件ではロゼット形成の段階までには近交弱勢は起きないことが明らかになった。ストレス条件においた野外実験個体群では、夏場の乾燥と台風で冠水した影響で、発芽・ロゼット形成までの生存率は0.1%未満と、栽培環境に比べて著しく低かった。いずれの被陰・乾燥条件でも自殖・他殖間での生存率の有意な差はなく、野外のストレス条件下でも近交弱勢は検出されなかったが、撹乱によって生残個体が10個体に満たなかったために正確な計測ができなかった可能性があるため、継続実験が必要と考えられた。本課題では、乾燥化や富栄養化など環境の悪化が著しい、貧栄養湿地に生育する自殖性の絶減危惧植物、イヌセンブリを対象として取り上げる。2008年度は、被陰・乾燥ストレスの程度を制御した圃場実験個体群で近交弱勢の測定を行った。圃場実験では、ストレス条件として、被陰の程度を寒冷紗を用いて操作し、乾燥条件は比高の高低(5,25,50cm)で変化させた。その結果、乾燥条件は実生の生存率に大きく影響し、比高が高く乾燥しているほど生存率が低く、さらに、自殖の個体で乾燥による生存率低下が大きい傾向が見られた。しかし、その後のロゼットの生存率においては、そのような乾燥条件と近親交配の交互作用は見られなかった。また、ロゼットの成長率は中間の比高(25cm)で最も高く、比高5cmでは過湿による成長速度の低下が見られた。被陰については、実験で設定した範囲では影響が見られなかった。野外での血縁構造を分析するためのマイクロサテライトマーカーを、マグネットビーズ法を用いて開発、候補となる32座についてプライマー設計を行った。今後、増幅条件と対立遺伝子数の設定・検証を行う予定である。2009年度は、被陰・乾燥ストレスの程度を制御した圃場実験個体群での近交弱勢の継続測定を行った。前年度の実生段階では、乾燥条件が生存率に大きく影響し、比高が高く乾燥しているほど生存率が低く、さらに、自殖の個体で乾燥による生存率低下が大きい傾向が見られていた。

しかし、その後のロゼットの生存率および開花率・着花数においては、そのような乾燥条件と近親交配の交互作用は見られなかった。また、ロゼットの成長率および開花率・着花数は中間の比高(25cm)で最も高く、次いで比高50cmで高かった。比高5cmでは、成長率・開花率・着花数全てに大きな低下が見られ、過湿によるものと考えられた。被陰については、開花に対しても実験で設定した範囲では影響が見られなかった。
非線形誘電率顕微鏡を用いた次世代超高密度強誘電体記録

次世代超高密度強誘電体記録に関する研究を行い,世界最小の2.8nmφの単一ドメインドットの生成に成功した.また直径7nmの一次元ナノドメインドットアレイの形成及び15nmφのドメインドット列の生成・消去実験にも成功した.更に多数の記録ビットからなる実情報(画像情報)記録に於いて強誘電体記録では世界最高の4Tbit/inch^2の記録密度を達成した.そしてハードディスクドライブ型シングルプローブメモリを用いて,書き込み速度に関しては20Mbpsの高速性を実証した.本研究では走査型非線形誘電率顕微鏡と薄片化単結晶記録媒体作製技術,を研究開発の核にして,人工的に作製可能で物理的に安定な最小の強誘電ナノドメインドットの大きさや強誘電性の消失する限界の試料厚の確定,スイッチングスピードの詳細な計測や強誘電体のドメイン壁の実測などの基礎的研究を行い,これらの結果と新開発の非接触SNDM法等プローブメモリ技術の諸問題点を根本から解決できる多数のSNDM関連技術を組み合わせ,実用化技術として発展させることを目的とする.次世代超高密度強誘電体記録に関する研究を行い,世界最小の2.8nmφの単一ドメインドットの生成に成功した.また直径7nmの一次元ナノドメインドットアレイの形成及び15nmφのドメインドット列の生成・消去実験にも成功した.更に多数の記録ビットからなる実情報(画像情報)記録に於いて強誘電体記録では世界最高の4Tbit/inch^2の記録密度を達成した.そしてハードディスクドライブ型シングルプローブメモリを用いて,書き込み速度に関しては20Mbpsの高速性を実証した.初年度は超高密度SNDMプローブメモリ実現のための学理(ナノドメインマニピュレーション)の為の研究を開始し以下のような成果を得た(1)サブナノドメインマニピュレーション専用SNDMの開始1ナノメートル以下の精度でピンポイントに媒体の特定部を狙いドメインマニピュレーションを正確に行うために,サブナノ領域で十分な位置決め精度があるクローズドループタイプのスキャナを持つSNDM装置を開発を開始し,位置補正無しで最高0.18nm/分のドリフトに対する基本性能を持ち,マーク検出によるドリフト補正機能を作動させると,有意な位置ずれは検出されなかった.(2)定比組成LiTaO3単結晶媒体におけるドメインピンニング技術の開発の開始定比組成LiTaO3単結晶を用いた記録媒体の研究開発を開始し,ナノドメインドットの断面計測によりH18年度はアルゴンイオン照射による表面ダメージ層(ピンニング層として期待できる)の厚さを明らかにした.(3)薄片化単結晶媒体の大面積化の開始コンピュータ制御され厚さの分布を補正しながら薄片化できるドライエッチング法を適用して大面積媒体の作製を行った.また並行して大口径のドライエッチング装置を開発した.(4)ナノドメインの生成と評価の開始微細加工と分極処理によりトラッキング用ナノドメインストライプパターンの作製を試み成功した.また長期安定性に関して大きな学術的成果を得た.(5)超高密度記録媒体用強誘電体薄膜の研究開発ナノドメインマニピュレーション専用SNDMの開発を開始した.本装置は1ナノメートルの繰り返し精度でピンポイントに媒体の特定部を狙う,ドメインマニピュレーションを正確に行うのに十分な位置決め精度があるSNDM装置であり,位置補正無しで0.18nm/分のドリフトに対する基本性能を持つことが確認された.更に新開発のマーク検出によるドリフト補正機能を作動させると,有意な位置ずれは検出されなかった.開発直後で,試運転中の状態であるが,この装置を用いて世界最小の2.8nmφの単一ドメインドットの生成に成功した.更に直径7nmのナノドメインドットアレイの形成及び15nmφのドメインドット列の生成・消去実験にも成功している.また上記のほんの少数のドットではなく,多数の記録ビットからなる実情報記録に置いて強誘電体記録では世界最高の3Tbit/inch^2(まだエラー数は多いが)の達成した.次に書き込み速度に関しては回転ディスク型(HDD型)記録再生装置を用いて,実際の書き込み動作を行うことによって10Mbpsの高速性を実証した.更に,顕微鏡技術として開発された非接触SNDM(nc-SNDM)法を実際のHDD型記録再生装置に適用し非接触読み取りの動作確認実験を行った.今回は先端半径25μmの探針を使用したスケールアップ実験ではあるが,実際にアクティブに空隙を制御しながら分極を書込読みとりに成功した.また印加電圧がまだまだ大きいがHDD型再生装置に置いて(これもスケールアップ実験であるが)1Mbpsの再生に成功した.H20年度は主に以下の6点の事において研究成果があった.1.多数の記録ビットからなる実情報(画像情報)記録に置いて強誘電体記録では世界最高の4Tbit/inch^2の記録密度を達成した.2.書き込み速度に関しては回転ディスク型(HDD型)記録再生装置を用いて,実際の書き込み動作を行うことによって20Mbpsの高速性を実証した.またまだ多数の記録誤りはあるものの, 100Mbpsの高速転送レートに置いても一部の記録に成功した.3.また印加電圧がまだまだ大きいがHDD型再生装置に置いて2Mbpsの再生に成功した.この速度はシングルプローブを用いたプローブストレージ方式では群を抜いて高速なものである.4.顕微鏡技術として開発された非接触SNDM(nc-SNDM)法を実際の記録再生装置に適用し非接触

読み取りの動作確認実験を前年度から行っているが,今回は先端半径より先鋭化した探針を使用した実験を行い,実際にアクティブに空隙を制御しながら分極を書込読みとりに成功した.具体的には非接触状態での書込でGap1.5nmの制御に成功し,ビット間距離50nmの記録に成功し,更に非接触で記録速度500bps,再生速度100kbpsを達成した.5.薄膜記録媒体の研究開発を行った,特にLiTaO_3系薄膜とPZT系薄膜について研究を行い,それぞれ, 1Tbit/inch^2以上での記録が可能であることが分かった.6.高速読み取りを目指したSNDM復調器の広帯域化・高感度化を計り帯域30MHzのFM復調器の開発に成功した.今年度は強誘電体記録の研究に於いてはナノスケールの記録ビットを正確に書込読み取るのに必要不可欠な技術であるサーボトラッキング法の開発を行った.具体的には,データの記録再生を行う前に,サーボ領域内で一致溶融組成LiTaO_3(CLT)記録媒体にサーボマークとして部分的に分極を反転させ,周期分極構造を作製した.次に,このライン状のサーボマークを基準として,SNDMからの出力が0 Hz/Vになるような自動制御を行いながら64×64点からなる実データの記録再生を行った.これを言い換えると記録再生ヘッドにサーボマーク(周期分極構造)のドメインバンダリ上を走査させるという制御方法である.このとき補償回路は動的PID法を応用して構成した.ビット間距離は25.6nmであり,密度に換算して1Tbit/inch^2のデータ記録である.直径が20nm程度という微小なドットであるにも関わらず記録再生ヘッドがトラック列中央を走査し,所望の機能を果たしていることが確認された.このとき,書き込んだビット総数とビット誤りを起こしたビット数から算出されるビットエラーレートは,1.7×10^<-3>と算出された.次に制御信号と目標値の差分で表されるエラー信号の評価を行った.実験で用いたデータ記録再生システムにはSNDMに重畳するノイズが存在するため,サーボ信号は必ずしも0 Vにはならないものの,時間を十分とると,0 Vに漸近していくことが分かった.さらにサーボラインのラインプロファイルを参考にヘッドの位置精度を求めた.ノイズが存在するため正確な精度は不明であるが,大きく見積もったとしても目的位置に対して2nm_<pp>程度の範囲内にヘッドを移動させることが可能であるという結果を得た.本年度は強誘電体ディスクリート記録媒体の研究並びに回転ディスク型強誘電体記録装置で書込と読み取りの一連の動作を連続して行う実験をおこなった.まず強誘電体ディスクリート記録媒体についてであるが,ディスクリート媒体に記録することにより,データをより長期間保存できると考え,集束イオンビームを用い,薄片化したLiTaO3単結晶上にトラック幅30nmのディスクリート媒体を作製することに成功した.次に,ディスクリート媒体へのデータ記録を行った.その結果ビット間隔18nm,線記録密度に換算して1.41Mbit/inchという高い線密度によるデータ記録を達成した.更に強誘電体回転ディスク記録方式におけるシングルトラック記録・再生においては,最初に記録媒体としてLiTaO3単結晶用いた.
造血因子受容体を介する血球の増殖・分化・腫瘍化の分子機構

c-kitレセプターチロシンキナーゼ(KIT)は、細胞外領域、細胞膜貫通領域、細胞内チロシンキナーゼ領域から構成され、造血幹細胞、マスト細胞、皮膚色素細胞、生殖細胞、消化管のカハール介在細胞などの増殖・分化に重要な役割を担っている。我々は、kinase領域あるいはjuxtamembrane領域の変異によりKITが恒常的に活性化されることを見い出した。これら変異KITの二量体形成や活性化機構、ならびに、増殖シグナル伝達機構を解析するため、(a)KIT-G559、KIT-V814、野生型KIT(KIT-WT)の細胞外領域領域を欠失したDel-KITミュータント、(b)細胞外領域ならびに細胞膜貫通領域を欠失させ細胞内領域とsrc N-terminal myristylation signalを結合させたsrc-KITキメラを作製しIL-3依存精細胞株へ導入した。導入細胞を用いた解析により、両変異による二量体(self-association)形成、恒常的活性化ならびに下流への増殖シグナルには細胞外領域と細胞膜貫通領域は必須ではないことが明かとなった。一方、インターロイキン-3(IL-3)やトロンボポエチン(TPO)依存性増殖機構を、IL-3/TPO依存性ヒト赤白血病由来細胞株F-36P-mplを用いて解析した。IL-3やTPOによる増殖にはrasとSTAT5が関与していた。このrasならびにSTAT5を介する増殖反応と細胞周期制御因子との関係を解析したところ、rasならびにSTAT5はcyclin D1の転写を誘導し細胞増殖を促進させることが明かとなった。造血因子の作用は特異的受容体を介して発揮されるが、その中でもc-kit(stem cell factor受容体)とc-mpl(トロンボポエチン受容体)は構成的造血に関与する受容体である。c-kitレセプターチロシンキナーゼ(KIT)はリガンド依存性に活性化され、造血幹細胞、マスト細胞、生殖細胞、色素細胞や消化管のカハール介在細胞の増殖・分化に必須のシグナルを伝達する。一方、我々はc-kit遺伝子に恒常的活性化(機能獲得gain-of-function)変異が存在することを見い出した。現在までに、骨髄異形成症候群、骨髄線維症、mastocytoma、急性骨髄性白血病患者から、c-kit恒常的活性化変異が検出されているが、そのhot spotはのkinase領域のAsp816である。一方、jaxtamembrane領域のc-kit活性化変異にはhot spotは見い出されていないが、消化管のペースメカ-を担っているカハール細胞由来のヒト消化管ストローマ腫瘍から高率に検出されることが明らかとなった。現在、野性型KITならびに活性化変異KITの細胞内領域のTyr残基をPheに置換したミュータントを作製し、細胞増殖や腫瘍化に必須の細胞内シグナル伝達系を解析中である。一方、c-mplに関しては、急性骨髄性白血病(AML)細胞では約半数の症例でトロンボポエチン(TPO)受容体(c-mpl)の発現が認められるが、本態性血小板血症ではc-mplの発現が著明に低下していることを見い出した。AML細胞の過剰増殖や分化にもTPO/c-mplシステムが関与しているが、巨核芽球性白血病細胞を用いてTPOによる巨核球細胞への分化機構を解析した。その結果、TPOによる巨核球への最終分化には、STAT5の活性化と活性化STAT5によるp21^<WAF1/Cip1>の発現誘導が関与していることを明らかにした。c-kitセプターチロシンキナーゼ(KIT)は、kinase領域とjuxtamembrane領域の変異により、恒常的に活性化される。特に、kinase領域のAsp814コドン(ヒトではAsp816)は恒常的活性化変異のhot spotであり、マスト細胞増多を伴う骨髄異形成症候群や骨髄線維症、aggressive mastocytosis、急性骨髄性白血病患者から検出される。

腫瘍原性の高いAsp814→Val(V814)変異に伴う変異KITの恒常的活性化と腫瘍化シグナル伝達機構について解析すると、KIT-V814のkinase insert部に存在するTyr719残基が恒常的活性化ならびに下流への腫瘍化シグナルに重要な役割を担っていることが明らかとなった。一方、トロンボポエチン(TPO)依存性に増殖、分化するヒト赤白血病由来細胞株F-36P-mplへ各種dominant-nagative型シグナル伝達分子(STAT1,STAT3,STAT5やRasなど)を誘導的に発現させる系を用いて、IIりによる巨核球系細胞の増殖と分化シグナルを解析した。IIりによる増殖にはRasとSTAT5の両者が関与していることが明かとなった。さらに、TPOによるF-36P-mpl細胞の巨核球分化にはRasが長期間(24時間以上)活性化されることが必須であることを明かにした。c-kitレセプターチロシンキナーゼ(KIT)は、細胞外領域、細胞膜貫通領域、細胞内チロシンキナーゼ領域から構成され、造血幹細胞、マスト細胞、皮膚色素細胞、生殖細胞、消化管のカハール介在細胞などの増殖・分化に重要な役割を担っている。我々は、kinase領域あるいはjuxtamembrane領域の変異によりKITが恒常的に活性化されることを見い出した。これら変異KITの二量体形成や活性化機構、ならびに、増殖シグナル伝達機構を解析するため、(a)KIT-G559、XITへV814、野生型KIT(KIT-WT)の細胞外領域領域を欠失したDel-KITミュータント、(b)細胞外領域ならびに細胞膜貫通領域を欠失させ細胞内領域とsrcN-teminal myrislation signalを結合させたsrc-KIT、キメラを作製しIL-3依存性細胞株へ導入した。導入細胞を用いた解析により、両変異による二量体(self-association)形成、恒常的活性化ならびに下流への増殖シグナルには細胞外領域と細胞膜貫通領域は必須ではないことが明かとなった。一方、インターロイキン-3(IL-3)やトロンボポエチン(TPO)依存性増殖機構を、IL-3/TPO依存性ヒト赤白血病由来細胞株F-36P-mplを用いて解析した。IL-3やTPOによる増殖にはrasとSTAT5が関与していた。このrasならびにSTAT5を介する増殖反応と細胞周期制御因子との関係を解析したところ、rasならびにSTAT5はcyclinD1の転写を誘導し細胞増殖を促進させることが明かとなった。
前脳高次機能の脳幹への伝達を手綱核に視る

μオピオイド受容体(MOR)cDNAを用いてin vitro転写系によるcDNAを合成し、これをプローブとしてラット前脳、中脳組織におけるMOR mRNAの発現を調べた。ジゴキシゲニン標識法を用いることにより、細胞形態の同定が以前のin situハイブリダイゼーション法に比し格段に向上した(cf.研究業績Molec.Brain Res.,24:347-352,1994)。前脳では、本研究で対象とした中隔、海馬、対角帯をはじめ、線条体・前頭皮質に選択的に発現細胞の分布を認めた。間・中脳では、反屈束起始神経細胞(内側手綱核)をはじめ、前脳由来の入力情報を受ける諸核にMORは発現した。MORの発現分布を調べる過程で、MOR発現細胞とコリン性神経細胞との異同を検定したところ、前脳情報を下行性に伝達する間・中脳核のなかにMOR発現陽性のコリン性神経細胞が存在することが判明した。またMOR発現はいずれの部位においても神経細胞に限局した。さらに、特定の脳内部位が損傷されたラットでMOR発現を検討したところ、神経細胞でのMOR発現は、その軸索の活動が正常に機能していなければ、低下することが推定された。このため、神経損傷による変化の解析がすすめやすい系として、脳神経起始細胞をとり上げ、MOR発現系を用いて、神経損傷後の発現変化をつぎに調べた。脳神経起始細胞のMOR発現を無処置ラットで追求したところ、疑核や迷走神経背側運動核などの、迷走神経起始核で高度のMOR発現を認めた。ついで、片側性に迷走神経切断ないし結紮による神経損傷を加え、経時的に発現変化をみた。いずれの損傷によっても、損傷後12日目に起始核でのMOR発現は著減し、約1か月間、MOR発現は枯渇状態にあった。この際、神経縫合などの損傷修復操作を早期に加えると、MOR発現は回復に向かった。以上の結果から、運動機能の発現機作におけるオピオイド受容機構の役割が今後の解明課題と考えられる。
高機能型バイオスーパーの合理的デザインと疾患モデルによる治療評価システム開発

1.つくば農研機構との共同で作製した、ヒトリソソーム性カテプシンA(CTSA)を後部絹糸腺で高発現する組換えカイコの繭から精製した、末端マンノース残基(Man)含有糖鎖付加型のCTSA前駆体タンパク質を、スプライシング異常誘導型Ctsa劣性変異導入(Ctsa及びNeu1同時欠損)ガラクトシアリドーシスモデル(GS)マウス脳由来の初代培養ミクログリアに投与すると、細胞表面のManレセプター(ManR)を介して取り込まれ、Ctsa及びNeu1活性を回復させるとともに、蓄積Neu1基質である末端シアル酸含有糖鎖を減少させることを明らかにした。2.ヒトCTSA前駆体タンパク-6xHisタグ付きを高発現するCHO細胞の培養上清から精製し、成体GSマウスの脳室内に単回投与すると、脳構成細胞内に取り込まれ、Ctsa及びNeu1活性が一過的に回復することを明らかにした。またGS患者由来繊維芽細胞株の培養液に添加すると、マンノース6-リン酸レセプター(M6PR)との結合を介して細胞内に取り込まれた後、リソソームへと輸送され、欠損しているCtsa及びNeu1活性が回復した。しかしリソソーム内半減半減期は短く、24時間程度と推定された。3.ムコ多糖症1型(MPS1)の責任酵素である、α-イズロニダーゼ(IDUA)を絹糸腺で高発現する組換えカイコの繭から、活性型IDUAを簡便に抽出・精製し、N型糖鎖転移酵素を用いた末端M6P含有合成糖鎖付加IDUAは、MPS1患者由来線維芽細胞内に取り込まれ、蓄積ヘパラン硫酸が減少させることを明らかにした。また2017年度に京都大霊長類研究所との共同で発見した、自然発症IDUA欠損症ニホンサル家系において、酵素診断により疾患個体をさらに見いだすことができた。これまで治療薬がない、リソソーム病の一種であるヒトCTSA欠損症(ガラクトシアリドーシスGS)のモデルマウスの脳由来初代培養ミクログリアに対して、連携研究者の瀬筒秀樹博士、立松謙一郎博士らが作製した、ヒトCTSA遺伝子を絹糸腺で高発現する組換えカイコ繭の供給を受け、繭から精製したCTSA前駆体がManRを介して取り込まれ、有効性を示すこと、また脳室内単回投与により、活性化ミクログリアや神経炎症の抑制効果をもつことを明らかにできた。またヒトCTSA-6xHis高発現・分泌する哺乳類CHO細胞株の培養上清から精製した組換えCTSA-6xHisを、GSマウスに脳室内に投与すると、CTSA前駆体タンパク質に付加される末端M6P含有糖鎖とM6PRを介して脳構成細胞内に取り込まれ、欠損Ctsa及びNeu1活性を回復させることができた。さらにIDUA発現組換えカイコの繭から精製したヒト酵素に、末端M6P含有合成糖鎖を付加でき、IDUA欠損細胞内に取り込ませ、蓄積基質を分解・減少させる技術を開発できたため。2019年度以降は、ヒトCTSA遺伝子を恒常発現する組換えカイコまたは哺乳類CHO細胞株の培養上清から精製するヒトCTSA前駆体タンパク質を、GSマウスの脳室内(脳脊髄液)または静脈内に投与し、同マウスの中枢神経症状及び末梢症状に対する有効性を検討していく。また自然発症ムコ多糖症1型(IDUA欠損症)ニホンザル個体に、IDUA発現組換えカイコの繭由来ヒト酵素の糖鎖改変体を静脈内投与し、有効性と安全性評価を検討していく予定である。1.ヒトリソソーム性カテプシンA(CTSA)を後部絹糸腺で高発現する組換えカイコを、つくば農研機構との共同で作製し、生物機能を保持したCTSA前駆体タンパク質を繭から簡便に抽出・精製する方法を確立した。繭由来精製CTSA前駆体には、高マンノース(Man)型、混成型及びパウチマンノース型などの、ヒトN型糖鎖の部分構造をもつことが判明し、昆虫特異的糖残基は含まれないことが示された。また精製CTSA前駆体は、in vitroで単離ヒトノイラミニダーゼ1(NEU1)と会合して、NEU1活性化能をもつこと、またトリプシン処理により、CTSA成熟体(活性型)に変換できることを明らかにした。2.スプライシング異常誘導型Ctsa劣性変異導入マウスの作製に成功し、各臓器におけるCtsa及びNeu1活性が同時に野生型マウスの10%以下まで低下し、またNeu1の基質となる末端シアル酸含有糖鎖が増大していること、遺伝性CTSA欠損症であるガラクトシアリドーシス(GS)患者と極めて類似した症状を示し、GSモデルマウスとして利用できることを明らかにした。3.このGSモデル成体マウスの脳では、スフィンゴ糖脂質であるガラクトシルセラミドやスルファチドの含量が低下しており、オリゴデンドロサイトの発生異常やミエリン形成不全などが示唆された。4. GS成体マウスの脳室(脳脊髄液)内に、繭由来精製ヒトCTSA前駆体を投与すると、神経炎症の誘因の一つである脳内ミクログリアの活性化と炎症性ケモカインの一種Macrophage inflammatory protein 1α(Mip1α)の分泌が抑制されることを明らかにした。

これまで治療薬がない、リソソーム病の一種であるヒトCTSA欠損症(ガラクトシアリドーシスGS)のマウスモデルとして、日本人若年・成人型症例でも共通して認められる、スプライシング異常を誘導する5'スプライス部位の点変異をマウスCtsa遺伝子に導入した変異ノックインマウスを作製し、患者と同様の、ミオクローヌス、脊椎彎曲、腎障害、顔貌異常などの臨床症状を示すGSモデルマウスとして利用できることを明らかにした。連携研究者の山本圭博士、池田和貴博士らと本GSマウスの分子病理学的解析を進めるとともに、連携研究者の瀬筒秀樹博士、立松謙一郎博士らとの共同で、ヒトCTSA遺伝子を絹糸腺で高発現する組換えカイコ系統を作製でき、その繭からの生物機能を保持したCTSA前駆体タンパク質の簡便な抽出・精製方法を確立しつつあるため。1.つくば農研機構との共同で作製した、ヒトリソソーム性カテプシンA(CTSA)を後部絹糸腺で高発現する組換えカイコの繭から精製した、末端マンノース残基(Man)含有糖鎖付加型のCTSA前駆体タンパク質を、スプライシング異常誘導型Ctsa劣性変異導入(Ctsa及びNeu1同時欠損)ガラクトシアリドーシスモデル(GS)マウス脳由来の初代培養ミクログリアに投与すると、細胞表面のManレセプター(ManR)を介して取り込まれ、Ctsa及びNeu1活性を回復させるとともに、蓄積Neu1基質である末端シアル酸含有糖鎖を減少させることを明らかにした。2.ヒトCTSA前駆体タンパク-6xHisタグ付きを高発現するCHO細胞の培養上清から精製し、成体GSマウスの脳室内に単回投与すると、脳構成細胞内に取り込まれ、Ctsa及びNeu1活性が一過的に回復することを明らかにした。またGS患者由来繊維芽細胞株の培養液に添加すると、マンノース6-リン酸レセプター(M6PR)との結合を介して細胞内に取り込まれた後、リソソームへと輸送され、欠損しているCtsa及びNeu1活性が回復した。しかしリソソーム内半減半減期は短く、24時間程度と推定された。3.ムコ多糖症1型(MPS1)の責任酵素である、α-イズロニダーゼ(IDUA)を絹糸腺で高発現する組換えカイコの繭から、活性型IDUAを簡便に抽出・精製し、N型糖鎖転移酵素を用いた末端M6P含有合成糖鎖付加IDUAは、MPS1患者由来線維芽細胞内に取り込まれ、蓄積ヘパラン硫酸が減少させることを明らかにした。また2017年度に京都大霊長類研究所との共同で発見した、自然発症IDUA欠損症ニホンサル家系において、酵素診断により疾患個体をさらに見いだすことができた。これまで治療薬がない、リソソーム病の一種であるヒトCTSA欠損症(ガラクトシアリドーシスGS)のモデルマウスの脳由来初代培養ミクログリアに対して、連携研究者の瀬筒秀樹博士、立松謙一郎博士らが作製した、ヒトCTSA遺伝子を絹糸腺で高発現する組換えカイコ繭の供給を受け、繭から精製したCTSA前駆体がManRを介して取り込まれ、有効性を示すこと、また脳室内単回投与により、活性化ミクログリアや神経炎症の抑制効果をもつことを明らかにできた。またヒトCTSA-6xHis高発現・分泌する哺乳類CHO細胞株の培養上清から精製した組換えCTSA-6xHisを、GSマウスに脳室内に投与すると、CTSA前駆体タンパク質に付加される末端M6P含有糖鎖とM6PRを介して脳構成細胞内に取り込まれ、欠損Ctsa及びNeu1活性を回復させることができた。さらにIDUA発現組換えカイコの繭から精製したヒト酵素に、末端M6P含有合成糖鎖を付加でき、IDUA欠損細胞内に取り込ませ、蓄積基質を分解・減少させる技術を開発できたため。
超分子ブロック形成により自己集積する高分子材料の創製と機能開拓

本研究では、金属錯体と配位子を元素ブロックとして用いて高分子材料を集積させて高分子材料の接着システムを創製した。さらに金属錯体と生体高分子との複合体形成を利用して、ヒドロゲルを自己組織化させるとともに、ゲルの集積・解離により触媒機能がオン・オフできるようなシステムを開発することに成功した。また遷移金属元素のイオンを転嫁するだけで高分子ヒドロゲルが接着するシステムを構築することができた。塩化ルテニウムを含む水溶液を浸漬したポリアクリルアミド(pAAm)ゲルが、塩化ルテニウムを含まないfresh pAAmゲルと接着する現象を見出した。強い配位部位を持たないpAAmが、金属塩の存在により接着した例は現在までになく、興味深い現象である。アクリルアミドと化学架橋剤であるN,N'-メチレンビスアクリルアミドを水中でラジカル重合することにより、pAAmゲルを得た。0.1M塩化ルテニウム水溶液に1時間浸漬したpAAmゲルと、fresh pAAmゲルの両者を接触させた。ポリ(N,N-ジメチルアクリルアミド)(pDMAAm)ゲルまたはポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(pNIPAAm)ゲルを0.1M塩化ルテニウム水溶液に1時間浸漬し、freshゲルとの接着の可否を観察した。塩化ルテニウム水溶液に浸漬したpAAmゲルとfresh pAAmゲルは強く接着し、水中で振とうしても解離しなかった。一方、塩化ルテニウム以外の各種金属塩水溶液を用いた系では、pAAmゲルは接着しなかった。さらに、pDMAAmゲルやpNIPAAmゲルを用いた系でも、接着は見られなかった。以上のことより、この接着がpAAm、塩化ルテニウムを用いた系のみにおいて見られる特異的な現象であることがわかった。27年度が最終年度であるため、記入しない。
遺伝子改変による細胞特異的エクソソーム単離法の開発

本研究課題の目的は、エクソソーム表面に存在するタンパクに時期・部位特異的に特異的なタグを挿入し、そのタグを精製することでエクソソームを分泌した細胞を特定することを可能とすることである。すなわち、エクソソーム精製用マウスを作製し、評価することである。エクソソームは様々な細胞より分泌される脂質二重膜、表面抗原に覆われた小胞であり、その中には、mRNAやmiRNAなどが含まれており、最近では、がんのバイオマーカーとして的中率90 %を超えるまでに至っている。エクソソーム表面に存在する表面抗原タンパクは、分泌した細胞により特異性があり、特にがん特異的な表面抗原タンパクなども知られている。その中でもほぼ全てのエクソソームに共通して存在することが知られているのが、テトラスパン(TN4)スーパーファミリーに属するCD9である。そこで、本研究計画では、CD9のEC2ドメインにFLAG-HAタグを時期および部位特異的に挿入するために、loxp-FLAG-HA-loxPカセットを受精卵におけるゲノム編集によって挿入したマウスを作製し、時期・部位特異的なCreマウスと交配させることで、任意の時期・部位にのみCD9-FLAG-HAを発現するエクソソーム精製マウスを作製する。今年度はCD9領域にゲノム編集により二重鎖切断を導入するためのCas9のguideRNAの設計および評価を行った。また、ゲノム編集によりloxp-FLAG-HA-loxPカセットを導入するためのターゲッティングベクターの作製を行った。平成30年度はCD9領域にゲノム編集により二重鎖切断を導入するためのCas9のguideRNAの設計および評価を行ない、また、ゲノム編集によりloxp-FLAG-HA-loxPカセットを導入するためのターゲッティングベクターの作製を終えたことから、計画通り進捗している。令和元年度においては、昨年度に作製したguideRNAおよびターゲッティングベクターを用いてCd9-loxp-FLAG-HA-loxPノックインマウスを、マウス受精卵におけるゲノム編集により作製をする。研究所が移転のために動物実験を翌年度に行うこととしたことによる。
HIV-1感染時の細胞活性化状態とその後のウイルス存在様式

AIDS病態はプラズマウイルス負荷と密接な相関関係にあり、AIDS病態の進行とともにマクロファージ指向性HIV-1からT細胞指向性HIV-1へとウイルストロピズムもシフトすることが知られている。一方、HIV-1感染者には免疫T細胞のうち、CD38抗原を発現している細胞の割合が上昇することから、病態マーカーのひとつとして用いられている。そこで、私たちはHIV-1感染者にみられるCD4+CD38+T細胞の割合が上昇する点に着目して、CD4+T細胞のCD38+のサブセットとCD38-サブセットがHIV-1の感受性に違いを見せる可能性について検討した。その結果、CD38+のサブセットはT細胞指向性HIV-1に高感受はを示し、逆にCD38-サブセットはマクロファージ指向性HIV-1に高感受はを示すことが判明した。次に、それぞれの高感受性を示す機序を検討した。CD38+サブセットとCD38-サブセット間でHIV-1レセプターであるCD4の発現には差異が認められなかった。CD38-サブセットはCD38+サブセットに比べ、マクロファージ指向性HIV-1のコレセプターであるCCR5発現が高かった。一方、T細胞指向性HIV-1のコレセプターであるCXCR4は両サブセットで顕著な違いが認められなかった。そこで、サイトカイン分泌能について検討したところ、CD38+サブセットはTh2サイトカインであるIL-4を高分泌しており、このIL-4がこのサブセットでのT細胞指向性HIV-1の高感受性に関わっていることが明らかとなった。したがって、AIDS病態進行とともに変化するT細胞サブセットの変化がHIV-1のトロピズムのシフトという結果を招いていると考えられる。
1990年代以降の日本におけるアマチュア写真文化の展開に関する研究

本研究では、1990年代以降の日本のアマチュア写真文化の展開を特徴づける、「カメラの自動化」や「スナップ写真の美学」といったトピックの分析を通して、写真技術のデジタル化以降、アマチュア写真文化がどのような変容を遂げたのか、あるいは逆にどのような点で過去の伝統を継承しているのかを検討し、海外の状況と比較した際の、日本の写真文化の特殊性と普遍性を明確化する。そのうえで「趣味としての写真」が持つ社会的意義を明らかにすることを目指す。