hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ゴルジ体から小胞体への逆行輸送機構の解明

小胞体からの順行輸送は、ゴルジ体からの逆行輸送によって相補されており、両者の輸送のバランスは厳密にコントロールされている。逆行輸送については今まで解明が進んでいなかったが、申請者は小胞体に存在するSNARE(syntaxin18:Syn18)を同定し、このタンパク質が逆行輸送における膜融合に関与することを見いだした。Syn18は他のSNARE(BNIP1、p31、Sec22b)および膜表在性タンパク質であるZW10、RINT-1、NAGと複合体を形成している。本研究によって以下のことが明らかとなった。(1)NAGはそのN末端領域でp31のN末端領域と結合し、C末端領域でZW10-RINT-1と結合している。NAGは逆行輸送を仲介する輸送小胞の小胞体への繋留に関与する。(2)ノックアウトマウスの解析から、p31遺伝子は細胞の生存に必須であることが判明した。p31の欠損は小胞体ストレスを誘起してアポトーシスを導く。(3)Syn18は小胞体構造の維持に関与し、それには逆行輸送も何らかの関係をしている。(4)逆行輸送を介して膜タンパク質の小胞体局在維持に関与するRer1は、動物細胞では小胞体-ゴルジ体中間区画に存在し、その形成に関与する。SNARE (SNAP receptor)は細胞内膜融合を司るタンパク質であり、ターゲット膜に存在する分子種(t-SNARE)と小胞に存在する分子種(v-SNARE)が存在する。t-SNAREからは3本、v-SNAREからは1本、合計4本のα-ヘリックスが強固に結合することで小胞とターゲット膜の融合が引き起こされると考えられている。会合したα-ヘリックスの中心領域にはグルタミンまたはアルギニンが存在することから、SNAREはQ-およびR-SNAREに分類されることもある。膜融合後、α-SNAPを介してシャペロン様ATPaseであるNSFがSNARE複合体に結合し、ATPの加水分解エネルギーを利用して複合体を解離させる。我々は、小胞体に局在するt/Q-SNAREであるsyntaxin18 (Syn18)を見い出し、Syn18が種々のタンパク質と複合体を形成していることを明らかにした。本研究ではSyn18の機能をRNAi法によって調べた。Syn18の発現が抑制されると、粗面小胞体と滑面小胞体は解離し、滑面小胞体は凝集してパッチ状の構造体を形成した。またこの時、COPII小胞(小胞体からのタンパク質順行輸送を仲介)が形成される小胞体出芽部位の構造も大きく変化した。これらの変化は、ゴルジ体から小胞体への逆行輸送を促進する薬剤であるブレフェルジンAの添加で回復したので、逆行輸送が関与していると考えられる。本研究によって、Syn18が小胞体出芽部位の構築にも貢献していることが示唆された。また今までまったく不明であった粗面小胞体と滑面小胞体の構造維持に、逆行輸送を介してSyn18が関与していることも判明した。研究協力者:木榑猛(東京薬科大学・生命科学研究科・博士後期課程院生)SNARE(SNAP receptor)は細胞内膜融合を司るタンパク質であり、ターゲット膜に存在する3つのt-SNAREと、小胞に存在する1つのv-SNAREが、各々のα-ヘリックスを介して強固に結合することで小胞とターゲット膜の融合が引き起こされると考えられている。我々は、小胞体に局在するt-SNAREであるsyntaxin18(Syn18)が他のSNARE(p31、BNIP1、Sec22b)および膜表在性タンパク質(NAG、ZW10、RINT-1)と複合体を形成していることを明らかにしてきた。本年度は、1)作製したp31のノックアウトマウスの解析を行い、2)昨年度同定したNAGについてさらに解析を進めた。1)p31のノックアウトマウスは胎生致死であり、胎生8.5日前に死亡した。

脳特異的にノックアウトすると、細胞はアポトーシスを起こして死滅した。胎児繊維芽細胞においてもアポトーシスが誘導されたので、その機構を詳細に解析した。その結果、p31のノックアウトによって小胞体が変形して小胞体ストレスが引き起こされ、アポトーシス誘導に関与する転写因子であるCHOPの発現が誘導されることが判明した。2)NAGの発現を抑制すると、小胞体とゴルジ体の間をリサイクリングしているタンパク質の局在は変化するが、ゴルジ体の構造は変化しないことを昨年見い出していた。しかしながら、長時間NAGの発現が抑制されると、ゴルジ体のプロセシング酵素の局在も変化し、糖タンパク質のプロセシングも変化することを見い出した。現在、この理由の解明を進めている。研究協力者:古野暁子(東京薬科大学・生命科学部・プロジェクト研究者)木榑猛(東京薬科大学・生命科学研究科・博士後期課程院生)1)動物細胞におけるRer1の局在酵母においてはRer1はゴルジ体に存在することが報告されているが、動物細胞にはゴルジ体以外に小胞体-ゴルジ体中間区画(ERGIC)が存在する。ヒト由来のHeLa細胞におけるRer1の局在を細胞分画等を用いて調べたところ、Rer1はゴルジ体ではなくERGICに存在することが判明した。2) Rer1とKDEL受容体のライブセルイメージングRer1とKDEL受容体はともにゴルジ体から小胞体への逆行輸送に関与するが、異なるタイプのカーゴを輸送する。GFP-Rer1およびKDEL受容体-mRFPを利用し、生細胞イメージングによって両者の挙動を比較した。その結果、Rer1がERGICに存在するのに対して、KDEL受容体はシスゴルジに存在し、両者は異なる経路で小胞体へ戻っていることが判明した。3) Rer1の発現抑制におけるERGIC構造の変化Rer1の発現抑制によって、ERGIC構造が分散し、そこに存在するタンパク質が小胞体へ戻ることが判明した。またERGICの消失によってゴルジ体の形成速度は促進されていた。すなわち、Rer1は自分自身が機能するための膜区画を形成するのに役立っているということになる。FLA6-Rer1を発現させ、抗FLAG抗体を用いて免疫沈降させ、Rer1との相互作用を調べたところ弱いながら結合していることが判明した。5) BNIPのKOマウスの解析BMP1のKOマウスの解析については実験をあまり進めることができなかった。
線虫の温度と餌との連合学習において機能するcGMPシグナル伝達系の逆遺伝学的解析

線虫は、餌が存在する条件で飼育された場合は温度勾配上で過去の飼育温度へ移動し、餌がない飢餓条件で飼育された場合は過去の飼育温度を避けるという、餌と温度の連合学習行動を示す。cGMP依存性プロテインキナーゼ遺伝子(PKG)に変異を持つegl-4変異体はこの連合学習行動に異常を示し、餌のない条件で飼育されても、温度勾配上で飢餓体験温度付近に移動する。新規の遺伝子に変異を持つaha-3変異体は、egl-4変異体と同様に、この連合学習行動に異常を示す。本研究では、EGL4/PKGと新規タンパク質AHO-3との関係を調べるために、aho-3変異体について遺伝学的、行動学的な解析を行なった。AHO-3はα/β加水分解酵素ドメインを持つと予測され、ヒトを含む多くの生物種で高度に保存されているにも関わらず、その機能についてはほとんど明らかにされていない。α/β加水分解酵素スーパーファミリーでは酵素活性に必須な3つのアミノ酸が保存されている。AHO-3における予測必須アミノ酸を別のアミノ酸に置換した組替え型遺伝子を作成し、aho-3変異体において発現させたところ、aho-3変異体の連合学習異常はこの組替え型aho-3遺伝子では回復しなかった。このことから、連合学習において、AHO-3は加水分解酵素として機能することが示唆された。AHO-3の連合学習における機能細胞を同定する目的で、aho-3変異体において細胞特異的に野生型aho-3遺伝子を発現させる細胞特異的表現型回復実験を行なったところ、aho-3変異体の連合学習異常は、温度受容ニューロンAWCのみでの野生型aho-3遺伝子の発現によって部分的に回復した。また、AWCニューロンの温度受容において機能することが示されていたGα/ODR-3が欠損したodr-3変異体が、aho-3変異体と同様の学習行動異常を示すことも明らかにした。cGMPシグナル伝達系は、記憶・学習において重要な役割を果たすことが示唆されてきたが、遺伝子・神経回路・行動の3つの階層の統合的な解析は行なわれていなかった。本研究では、神経機能解析に適したモデル動物である線虫C.elegansをもちいて、記憶・学習におけるcGMPシグナル伝達系の役割を解析している。まず、cGMPシグナル伝達系に異常を持つegl-4変異体とpde-5変異体における、温度と餌条件との連合学習の異常について、解析を行なった。egl-4遺伝子はcGMP依存性プロテインキナーゼ(PKG)をコードし、pde-5遺伝子は環状ヌクレオチドの分解に関与するホスホジエステラーゼ10(PDE10)をコードする。egl-4変異体は、高温(25°C)においてのみ、飢餓を体験した温度に対する忌避行動に異常を示し、低温(17°C)においての忌避行動は正常であった。pde-5変異体は、高温あるいは低温のいずれにおいても、餌餓体験温度忌避行動に弱い異常を示した。興味深いことに、この異常は、孵化後継続して同じ温度で飼育した場合よりも、第4幼虫期の前と後とで飼育温度を変化させて飼育した場合のほうがより顕著に表れた。また、pde-5以外のすべてのpde遺伝子についても欠失変異体を作製し、そのうちの一部について飢餓体験温度忌避行動を解析したが、顕著な異常は観察されなかった。また、本研究者が所属する研究室で単離された変異体の中には、egl-4変異体と同様に、高温においてのみ飢餓体験温度忌避行動に異常を示すaho-3変異体が存在した。aho-3遺伝子は、加水分解酵素ドメインを持つ新規のタンパク質をコードすることが予測され、現在、EGL-4/PKGと新規タンパク質AHO-3との関係を調べるために、aho-3変異体についても、遺伝学的、行動学的な解析を行なっている。cGMP依存性プロテインキナーゼ遺伝子(PKG)に変異を持つegl-4変異体は、低温(17°C)における連合学習行動は正常であるが、高温(25°C)においては、餌のない条件で飼育されても、温度勾配上で饑餓体験温度である25°C付近に移動するという、連合学習行動の異常を示す。新規の遺伝子に変異を持つaho-3変異体は、egl-4変異体と同様に、高温においてのみ連合学習行動に異常を示す。本研究では、EGL-4/PKGと新規タンパク質AHO-3との関係を調べるために、aho-3変異体について遺伝学的、行動学的な解析を行なった。AHO-3は加水分解酵素ドメインを持つと予測され、ヒトを含む多くの生物種で高度に保存されているにも関わらず、その機能についてはほとんど明らかにされていない。AHO-3の発現パターンを解析する目的で、野生型個体にaho-3遺伝子連結型GFPを導入し発現させた結果、温度走性行動を制御するニューロンAFD、AWC、AIYと、餌の認識に関与する可能性が示唆されている感覚ニューロンADFにおいて、GFP蛍光が観察された。aho-3変異体において細胞

特異的に野生型aho-3遺伝子を発現させる細胞特異的表現型回復実験を行なったところ、aho-3変異体の連合学習異常は、温度受容ニューロンAWCを含む少数のニューロンにおける野生型aho-3遺伝子の発現によって、部分的に回復した。現在は、引き続き細胞特異的表現型回復実験を行なうと共に、酵母Two Hybrid系を用いて基質の同定を行なうために、DNAコンストラクトの作成などの準備を進めているところである。線虫は、餌が存在する条件で飼育された場合は温度勾配上で過去の飼育温度へ移動し、餌がない飢餓条件で飼育された場合は過去の飼育温度を避けるという、餌と温度の連合学習行動を示す。cGMP依存性プロテインキナーゼ遺伝子(PKG)に変異を持つegl-4変異体はこの連合学習行動に異常を示し、餌のない条件で飼育されても、温度勾配上で飢餓体験温度付近に移動する。新規の遺伝子に変異を持つaha-3変異体は、egl-4変異体と同様に、この連合学習行動に異常を示す。本研究では、EGL4/PKGと新規タンパク質AHO-3との関係を調べるために、aho-3変異体について遺伝学的、行動学的な解析を行なった。AHO-3はα/β加水分解酵素ドメインを持つと予測され、ヒトを含む多くの生物種で高度に保存されているにも関わらず、その機能についてはほとんど明らかにされていない。α/β加水分解酵素スーパーファミリーでは酵素活性に必須な3つのアミノ酸が保存されている。AHO-3における予測必須アミノ酸を別のアミノ酸に置換した組替え型遺伝子を作成し、aho-3変異体において発現させたところ、aho-3変異体の連合学習異常はこの組替え型aho-3遺伝子では回復しなかった。このことから、連合学習において、AHO-3は加水分解酵素として機能することが示唆された。AHO-3の連合学習における機能細胞を同定する目的で、aho-3変異体において細胞特異的に野生型aho-3遺伝子を発現させる細胞特異的表現型回復実験を行なったところ、aho-3変異体の連合学習異常は、温度受容ニューロンAWCのみでの野生型aho-3遺伝子の発現によって部分的に回復した。また、AWCニューロンの温度受容において機能することが示されていたGα/ODR-3が欠損したodr-3変異体が、aho-3変異体と同様の学習行動異常を示すことも明らかにした。
論文別刷り集の調査を通して探る動物学者谷津直秀の研究姿勢

谷津直秀(東大動物学教授)が遺し、内容が不明のまま保存されている論文別刷り集について調査し、データベースを作成した。外国人著者による別刷りは、谷津の海外留学時および東大教授就任の頃にピークがあり、先輩や同輩からのものが比較的多いが、日本人著者によるものは東大教授就任後に急増し、若輩の研究者から献呈されたものが圧倒的に多かった。このように、別刷り集には谷津のおかれた状況や交流関係などが反映されていることが明らかとなり、別刷り集の分析を通じて谷津の実像に迫って行けることが示された。本研究の目的は、東京大学理学部生物学科図書室保存書庫に保管されている、谷津直秀(1877-1947)が遺した5224編の論文の別刷り集を元にして、1)そのデータベースを作成し公表する、2)別刷り調査の結果を踏まえ、彼の人的交流の様相、関心分野の変遷、動物学への姿勢などを明らかにすることである。保存書庫にある谷津の別5224編の目録・データベースを作成するための基礎作業として、それに必要なデータを電子機器に取り込むことを始めた。別刷りの必要なページをスキャナーにより取り込み、またはデジタルカメラ(以下デジカメと略称)撮影により電子データとしてMOディスクに記録した。別刷りの様相により、スキャナーとデジカメを適宜使い分けている。電子媒体に保存されたデータを整理、解析し、データベースの構造を決めデータの入力を進め、データベースを作成中である。18年度は、谷津の研究・教育に深い関わりのある「無脊椎動物発生学」、「実験発生学」、「再生」、「卵割」、「卵の局在」、「実験所」の分野のフォルダーの内容を調査した。これは、まだ全別刷りの4分の1にすぎないが、いくつかの点が明らかにされつつある。谷津は現役中は別刷りを論文の発行年ごとに整理していたらしいが、定年退官(1938)にあたりそれを分野別に分類・整理しなおしたらしいこと、その分類の仕方は人為的観点からではなく動物の生命現象を元にした分類基準であること、彼が深く関わった分野は多くの別刷りがありより細分化されていること、正式の別刷りの他に学術雑誌からそこだけ抜き取られた論文が少し含まれていることなどである。来年度以降、調査を続け別刷り集全体の内容を明らかにし、そこから有益な手がかりを得て、動物学の諸分野に対する谷津のスタンス、人的交流の様相などを推察していくことができるだろう。本研究の目的は、それまで保管されていた東京大学理学部生物学科図書室保存書庫から2008年1月に東京大学総合博物館小石川分館へ移管された、谷津直秀(1877-1947)が遺した5千2百余編の論文の別刷り集を元にして、1)そのデータベースを作成し公表する、2)別刷り調査の結果を踏まえ、彼の人的交流の様相、関心分野の変遷、動物学の研究姿勢などを明らかにすることである。谷津のすべての別刷りの撮影作業は2008年2月末に終了し、エクセルへの入力が作業従事者の尽力によりもう少しで今年度中に完成するところである。今後の解析にとって極めて重要かつ基本となるデータベースができあがり、これで来年度の解析作業(分野別、著者別、雑誌別、年代別などに整理し、そこから谷津の人的交流や情報の収集の様子などを考察する)が円滑に行える見通しがついた。谷津は1901年に米国プリンストン大学のE.B.ウィルソンのもとに留学し、そこで実験発生学に接し、自分の研究、および日本の動物学の将来に関して大いに触発されたと言われている。谷津に関する上述の事柄を明らかにしていくためには、彼をとりまく当時の欧米および日本の生物学の状況について、綿密に調べておく必要がある。谷津が身を置いたその当時の生物学の具体的状況を知るため、19-20世紀にかけての生物学史についての欧米における先行研究の文献や資料を入手して読み、多くの知見を得ることができた。そうした状況の中で、谷津がどのような人と交わり、論文や書籍などを通じてどのような情報をインプットして、自分の生物学研究を打ち立てていったかを、明らかにしていきたいと考える。谷津直秀(1877-1947)が遺した5千2百余編の論文の別刷り集を調査し、そのデータベースを完成することができたので、『谷津直秀記念文庫論文別刷り目録』として製本した。本研究の目的のひとつは、谷津の生涯における人的交流関係を別刷り集の解析を通して明らかにすることである。論文を発行された年代順(これはおおむね谷津が別刷りを入手した順でもある)に並べてみた。東大卒業(1900年)

以前、米国欧州留学中(19011907年)に発行された論文の著者は、ほとんどが外国人であり、日本人は、谷津の師匠や先輩格の学者であった少数に限られる。東大に赴任(1908年)して後は、引き続き外国人が書いた論文別刷りが圧倒的に多いが、1910年代後半に入ると徐々に日本人著者によるものが増えてくる。これら日本人は、谷津の同輩格にあたる人が多く、師匠や先輩格の著者が見あたらなくなる。1920年代もこの傾向が続くが、20年代後半には少しずつ次世代の動物学者の論文別刷りが現れてくる。1930年代には、著者の大半が日本人となり、次世代の者たちの論文がますます増加し、著者たちの専門分野もさまざまとなっている。若い時代に入手した論文別刷りは、谷津自身の学習や研究に必要な情報源であったろう。壮年期にもそれは続くが、研究者どうしで自分の研究成果である論文の別刷りを交換することが多くなり、その後、動物学会会頭を勤めた頃になると、広い分野の若い世代の日本人著者から別刷りを献呈されることが多くなったようである。生涯の時期により、谷津と著者たちとの関係、谷津にとっての別刷りの持つ意味が変化している様子が見て取れる。今後は、さらに詳しい解析を行い、谷津直秀が日本の動物学に果たした役割について考えていきたい。
金属イオンをメディエーターとする環状ナノストラクチャーの構築と新機能開発

1.配位子として3-hydroxypyridine-2-carboxylic acid(3-hydroxypicolinic acid, H_2hpic)を選択した。H_2hpicはピリジン環の窒素原子、2位のカルボキシル基、3位のヒドロキシル基と三点で配位可能な配位子である。したがって、H_2hpicは架橋配位子として多核錯体を形成する可能性があり、この配位子を用いることにより、金属錯体をメディエーターとするナノストラクチャーの構築が期待される。硫酸バナジルを原料とし、単核及び4核錯体を合成し、その生理活性評価を行った。3.in vitroインスリン様活性の評価薬物による(±)-epinephrineで刺激したラットの脂肪細胞からのFFAの遊離抑制効果を評価することによって、インスリン様活性を間接的に評価した。ポジティブコントロールであるVOSO_4に比べて、4核のT-V3HPAの活性は低く、単核のM-V3HPAは高い活性をもつことが明らかになった。本実験により、バナジル錯体のインスリン様活性は、用いた配位子の構造だけではなく、錯体全体の構造にも依存するということが示唆された。1.本年度は2位のカルボキシル基、3位のヒドロキシル基と三点で配位可能な配位子である3-hydroxypyridine-2-carboxylic acid (H_2hpic)を選択し、バナジル錯体をメディエーターとするナノストラクチャーの構築を目指し以下の研究を展開した。3.X線結晶構造解析より、単核錯体および4核錯体の構造を決定した。すべてのバナジウム(IV)中心は水分子を一個含み、二つのH_2hpicがシス位に配位した歪んだ六配位八面体である。単核錯体中の二つのHhpic^-のうち一つはピリジン環の窒素原子がプロトン化を起こして配位に関与しておらず、脱プロトン化した3位のヒドロキシル基のO^-とカルボキシル基のO^-で配位している。4核錯体はhpic^<2->の3位のヒドロキシル基、ピリジン環の窒素原子、2位のカルボキシル基が架橋配位した大環状クラスターであることが判明した。また、水-MeOH溶液中で、H_2hpicとpHの調節により、単核錯体と4核錯体が相互に変換することが分かった。pHの高い状態では、ピリジン環のH^+がはずれH_2hpic分子は3点で配位可能になり、環状錯体を形成する。一方で、H_2hpicの濃度がバナジウムの濃度より多くなると単核錯体を形成する。よって、単核錯体をモノマーとしてみなすことができ、超分子設計の上で極めて重要な現象を見出した。
中世イングランドにおける賦役労働の経済モデルの作成と史料分析によるモデルの検証

近年J.ハッチャーは、13世紀のイングランドの農民にとっての脅威は、領主の搾取より、人口増加による土地の価値の上昇であったと主張し、このため、封建領主の強い支配を受けていた慣習土地保有農customary tenantsは逆に封建的慣習に守られていたことにより、市場の圧力にさらされていた自由農freeholdersより低いレベルの地代しか負担していなかったと主張している。そこで、本年度は中世農民のモデル作成の前提としてオックスフォド州のハンドレド=ロールズHundred Rolls(1279年)に記された地代の統計的分析から、市場の働き、領主の圧力、慣習のうちどの要因が農民の地代の決定で重要な要因となっていたかを検討した。まず、多くのマナで、市場によって決定されたと考えられる自由農の最高地代水準は、慣習土地保有農の地代水準より高いことが確認される。この事実はハッチャーの主張を支持しているように見える。しかし、自由農の最高地代水準と慣習土地保有農の地代水準には有意な正の相関(R=0.222,N=141)も認められることにも注意しなくてはならない。これは、後者の地代も市場と無縁ではなかったこと、すなわち、それが完全に慣習によって完全に守られてはいなかったことを示している。また、自由土農の最高地代水準は、慣習土地保有農の貨幣地代の水準とは高い相関(R=0.327)を示すのに対して、賦役の水準とはまったく相関関係を示してはいない。これは、貨幣地代水準が市場の影響を強く受けたのに対して、賦役の水準はむしろ領主の封建的な力を反映していたためであると考えられる。しかし、封建的な力が強いことは、必ずしも農民に過重な負担を強いたことを意味しない。例えば、多くの賦役労働を負担していた聖界領の農民の地代総額は、むしろ貨幣地代中心の世俗領の地代総額より少ないのである。農民の地代を押し上げる力は、当時は市場のほうが強かったと考えられるだろう。
アスパラガス属植物における擬葉の発生および多様化機構の解明による擬葉進化の考察

アスパラガス属植物は本来、側枝が発生する葉腋の位置に、擬葉(仮葉枝)と呼ばれる葉状器官を形成する。この特異なシュート構造である擬葉の発生、およびその多様化機構の理解を目的として研究を行った。擬葉の基本的な発生を理解するために、Asparagus asparagoidesを、属内の擬葉形態の多様化を理解するために擬葉の形態が棒状のA.officinalisを解析に選んだ。これら2種を比較解析することにより、上記の問題解決に挑んだ。樹脂切片および電子顕微鏡を用いた形態観察により、A.asparagoidesの葉状の擬葉では解剖学的に背腹性を有していること、A.officinalisの棒状の擬葉では、背腹性を有していないことを明らかにした。さらに、これら2種のシュートおよび葉の形態形成に関わる遺伝子群の発現解析を行った結果、両種の擬葉において、葉の形態形成に関わる遺伝子群が発現しており、擬葉の形態が棒状のA.officinalisでは、葉の平面成長に必要な向背軸の確立に欠損があることを明らかにした。また、発現解析の過程で、葉において発現している遺伝子全てが擬葉において発現しているわけではないこともわかった。なお、発現解析に用いたAaDLに関するデータの一部は、「遺伝子の進化が生む新しい植物の形」としてJT生命誌研究館の季刊誌である生命誌に掲載された。また、これまでの結果を京都産業大学で行われたセミナーに招待され、口頭で発表した。さらに今年度は、これらの仮説を検証するための形質転換系の構築に務めた。なお、発現解析に用いたAaDLに関するデータの一部は、Nakayama et al.2010として国際誌American Journal of Botanyに掲載され、論文中の図が掲載号の表紙に採用された。以上より、側枝の位置に発生し、葉状の形態を呈するアスパラガス属の擬葉は、葉の形態形成に関わる遺伝子の発現により葉状化していることが示唆された。また、擬葉の起源は側枝の変形である可能性が高いと考えられた。擬葉の形態の多様化に関して、A.officinalisでは背腹性関連因子の変化により、擬葉が平面成長できないために棒状となっていることが示唆された。
ナノファイバーセルロースを基質としたセルラーゼ活性の超高感度可視化計測

ナノファイバー構造のセルロース表面に、インクジェット技術を用いてセルラーゼ溶液を数十pL滴下すると、加水分解に伴って基板表面に凹みが形成される。研究代表者は、加水分解で生じる凹みの体積を3Dコンフォーカル顕微鏡を用いて精密に経時測定することにより、セルロースの酵素分解速度を超高感度に測定する手法を確立した。さらにゼラチンゲルを基質に用いて、プロテアーゼ活性を測定することにも成功した。酵素活性測定は反応生成物を定量するのが一般的である。本手法は、基質の加水分解に伴う体積変化を指標として酵素活性測定する新手法であり、これまで困難であった水に不溶な基質の酵素加水分解の高感度測定に広く応用可能である。本研究の目的は、セルラーゼの活性測定に、セルロースが酵素加水分解に伴い体積減少する過程を指標とする全く新しい方法論を確立することである。具体的には、ナノファイバーセルロースからなる基質の表面にピエゾインクジェット式極微量分注装置を用いて数十pLの酵素溶液を滴下し、酵素加水分解の進行とともに基盤表面に形成される凹みの体積を、表面形状計測が可能な3Dレーザー顕微鏡を用いて経時的に精密測定する。得られた酵素反応時間と凹みの体積変化から加水分解速度を求める方法を確立する。本年度は、セルラーゼをインクジェット式分注装置で極微量滴下するためのピエゾ駆動条件(駆動電圧、パルス間隔など)を検討し、最適滴下条件(10pL/dot)を決定した。ナノファイバーセルロース基板表面にセルラーゼを20100pL滴下して、室温条件下で酵素反応を行い、酵素滴下量に伴う凹みの体積変化を経時的に計測し、酵素加水分解速度を比較した。その結果、加水分解に伴うナノファイバーセルロース基板の凹み体積の増大により得られた酵素反応速度は、酵素滴下量と相関関係にあった。凹みの体積が基質の消失を表すことから、体積量をセルロース分解量に換算すると、数ng程度の微量な加水分解量を検出していることが明らかになった。この実験系で、酵素反応速度の測定に要する酵素反応時間は30分程度であり、このことからも本手法による酵素活性検出は高感度であることが示唆された。本研究の目的は、セルロースの酵素加水分解に伴う体積減少を指標とした、セルラーゼ活性測定の全く新しい手法を確立することである。具体的には、ピエゾインクジェット式極微量分注装置を用いて数十pLのセルラーゼ溶液をナノファイバーセルロース基板の表面に滴下すると、酵素加水分解に伴いナノファイバーセルロース表面に凹みが現れ、時間とともに成長していく。そこで表面形状を非接触で計測可能な3Dコンフォーカル顕微鏡を用いて凹みの体積を経時的に精密に計測し、それをもとに酵素反応速度を決定する手法の確立を目指した。ナノファイバーセルロース表面に20100pLのセルラーゼ溶液を滴下し、酵素加水分解に伴う凹みの体積を、室温で経時的に測定することによって、30分程度で酵素反応速度を定量的に測定する手法を確立した。凹み形成の際に分解されたセルロースの重量は数ng程度であり、本手法が高感度にセルロースの酵素加水分解を検出できることもわかった。その一方で、測定結果に大きなバラツキがみられた。これは反応基質に用いたナノファイバーセルロースのファイバー密度が微視的に不均一であることに起因すると考えられた。そこでH26年度はファイバー密度の微視的均一性が高いゼラチンゲルとプロテアーゼを用いた反応実験系を構築し、より詳細な検証を行った。プロテアーゼ溶液の滴下にピエゾ駆動条件(駆動電圧、パルス間隔など)を最適化した後、30120pLのプロテアーゼ溶液をゼラチン基板表面に滴下すると、ナノファイバーセルロース/セルラーゼ実験系と同様にゼラチン表面に凹みが形成された。凹み成長の経時計測から酵素反応速度を10分以内に、再現性よく測定することに成功した。これらの結果から、水に不溶な基質の酵素加水分解速度を、基質の分解量を可視化・定量することで酵素活性を測定する新手法を確立できた。生物工学平成25年度目標にしていた、ピエゾ式インクジェット分注装置を用いたセルラーゼ滴下条件の検討について、ピエゾ駆動条件を最適化でき、一回の酵素滴下実験で形状が均一な凹みを作製できる手法を確立した。並行して実験精度の向上のため実験装置を改良し、1)インクジェット式分注装置に酵素滴下時間を記録する機能を追加し、2)インクジェット式分注装置基板ステージと3Dレーザー顕微鏡試料ステージ装置にサンプルを設置するための治具を作製し、それぞれの装置で認識する酵素加水分解反応位置を統一させた。これらの改良によって、酵素滴下直後から形成する凹みの形状・体積を迅速かつ詳細に計測できる実験系を確立し、酵素滴下量と凹みの相関を明らかにした。

新手法をさらに発展させるために、現在凹みの計測を短時間で計測可能な3Dレーザー顕微鏡(レーザーテック製)を新たに導入し、従来装置で得られた実験結果との比較検討を進めている。その過程でナノファイバーセルロースを基質としたセルラーゼ活性測定法について、ナノファイバーセルロースの材料特性(特にファイバー密度の微視的不均一性)が測定の再現性に大きく影響することが新たに判明したが、ゼラチンゲルとプロテアーゼの組み合わせを用いることで問題を解決出来るメドがたっており、本研究は順調に進展していると判断している。3%ナノファイバーセルロースを基板にして酵素滴下実験を行った場合、隣接する凹みの体積変化に再現性はみられるが、同一基板でも酵素滴下位置が離れると凹みの体積量、変化量が大きくばらつくことがわかった。これは基板のナノファイバー密度の微視的な不均一性を反映しているものと考えられる。基板の調製方法を様々に変えてファイバー密度の均一化を試みたが、これまでのところ良好な再現性が得られる基質は得られていない。そこで平成26年度は、微視的なファイバー密度の不均一性が格段に少ないと予想されるゼラチンゲル(ゼラチンナノファイバーからなる多孔質体)を基質として、ゲル表面にインクジェット式滴下装置でプロテイナーゼKを滴下し、酵素加水分解に伴う体積減少を評価することとする。プロテイナーゼK溶液滴下のためのピエゾ駆動条件は既に最適化が完了しており、0.52mg/mLの酵素濃度を10pL/dotで再現性よく滴下可能である。また酵素加水分解によるゼラチン表面に凹み形成すること、凹み体積には再現性があることを確認している。ゼラチンゲルで酵素滴下量、濃度、反応温度など様々な酵素反応条件における凹み体積変化を比較し、新規酵素活性測定法の妥当性および定量性を解析する。
高温および低温物質の地下岩盤内空洞貯蔵に関する研究

今回の研究で得られた成果を要約すると次のとおりである。1.高温物質の地下岩盤内空洞貯蔵(1)熱水貯蔵時を想定し,現場にて孔周辺岩盤の温度分布,熱水の温度降下および岩盤の挙動を測定し,得られた結果と要素分割法および有限要素法による解析結果とを比較した結果,測定値と解析値はよく一致しており,これらの解析方法の妥当性が確かめられた。(2)熱水貯蔵時の漏水防止対策として高分子系材料を空洞表面に施すことを想定し,高温下における強度・変形特性および熱的性質を実験により求めた結果,強度は温度上昇とともに著しく低下するが熱物性値は高温下ではほとんど変化しないことがわかった。(3)空洞の安定性を解析した結果,岩盤は安定しているが高分子系材料はせん断により亀裂が生じるので,今後膨張量をおさえる物質を混入して改良することが必要であることがわかった。2.低温物質の地下岩盤内空洞貯蔵(1)水分を多く含み得るので熱収縮が小さいと予想される砂岩岩盤内に低温物質を貯蔵する場合を想定し,岩盤の挙動を解析した結果,花崗岩の場合よりは小さいが,いずれも熱収縮により亀裂を生じることがわかった。(2)空洞周辺の亀裂からの液漏れおよび冷気漏れ対策として水封式,氷ライニング方式を提案し,それらの効果を効果を解析および実験により検討した結果,いずれも有効な手段となり得ることがわかった。(3)高分子系材料を空洞表面に施した場合を想定し,低温下における高分子系材料の強度・変形特性および熱的性質を実験により求め,この値により安定性を解析した結果,熱収縮により亀裂が生ずるので,今後収縮量をおさえる物質を混入し改良することが必要である。1.高温物質の地下岩盤内空洞貯蔵愛媛県菊間町および久万町の現場においてそれぞれ花崗岩および安山岩を使用し,熱水貯蔵時の岩盤の熱特性について実験を行い,別に要素分割法および有限要素法を用いた解析結果とを比較検討した。得られた成果を要約すると次のとおりである。(1)花崗岩・安山岩の孔周辺の温度分布の経時変化ならびに熱水の温度降下を測定した結果,両者には大きな差がみられなかった。また,解析値とはよく一致し,要素分割法による解析は実際の現象をよく再現し得ることがわかった。(2)花崗岩・安山岩中に熱水を貯蔵した場合の孔壁のひずみを測定した結果,孔は中心に向って,また上面の自由面に向って膨張することがわかった。有限要素法による解析結果と比較したところ,実験中に発生した亀裂により測定値とは多少差が認められた。2.低温物質の地下岩盤内空洞貯蔵空洞の収縮によって生じる亀裂からの液漏れ,ガス漏れ対策として水封式および氷ライニング方式を適用することを提案し,実験および解析により検討した。(1)色粉を用いて水封式の効果を実験によって確かめた結果および解析の結果から,有効な手段となることがわかった。(2)氷ライニング方式を適用した場合,氷の層で体積膨張によりせん断破壊することが実験および解析によって確かめられ,氷に生ずる応力を軽減する方法の検討が必要であることがわかった。(3)多孔質物質に水を含ませてみかけの水分量を減少させ氷のライニングを設ける場合には有効な手段となることが実験および解析によって確かめられた。今年度に得られた成果を要約すると次のとおりである。1.高温物質の地下岩盤内空洞貯蔵熱水貯蔵時に空洞周辺岩盤に存在する亀裂からの漏水防止対策の一つとして高分子系材料を空洞表面に施すことを想定し,高温下における強度・変形特性および熱物性値を実験により求め,これを用いて空洞の安定性を解析により求めた。

(1)強度は温度上昇とともに著しく低下するが,熱物性値は高温下ではほとんど変化しないことがわかった。(2)空洞の安定性を解析した結果,岩盤は安定しているが,高分子系材料にはせん断により亀裂が生じるので,今後膨張量をおさえる物質を混入して改良することが必要であることがわかった。2.低温物質の地下岩盤内空洞貯蔵低温物質貯蔵時に空洞周辺岩盤に存在する亀裂からの液漏れ,ガス漏れ対策として水封式および氷ライニングシステムを提案し,それらの効果を解析および実験により検討した。(1)水封式の場合を解析した結果,貯蔵30日後以降においては亀裂内の氷がふさがり,またその範囲は時間の経過とともに広がり,水封式の効果が得られることがわかった。(2)色粉を用いた実験の結果,スリット内の氷に亀裂を生じても水が亀裂内に浸入し氷結することが確かめられ,水封式が有効な手段となることがわかった。(3)解析および室内実験の結果,氷ライニング方式を適用した場合,氷の体積膨張によりせん断破壊するので,これらを軽減する目的で多孔質に水を含ませてみかけの水分量を減少させる方式が有効な手段となることがわかった。
内因性アルブミンの血管透過性・がん標的化能を活用する新規がん標的化ナノ粒子の開発

本申請研究は、がん集積性の向上と大きな間隙をもたないがん血管の透過を目的として、ナノ粒子表面上へ配置した高アルブミン結合性化合物に血管内で内因性アルブミンをリクルートさせ、その血管内皮細胞透過性・がん細胞による取り込み能を有効活用する新規がん標的化戦略を創出する。本戦略は、大きな間隙をもたないがん血管が障壁となっていた微小な原発巣や転移巣への効率的な送達の実現に大きく貢献する。本研究計画は3年間からなり、1.標的化能向上のための組成最適化、2.がん細胞におけるアルブミン取り込み機構の解明、3.アルブミンを取り込まないがん細胞への本戦略の有効化を各年度の目標とした。当該計画は連続的ナノ粒子合成が可能なマイクリアクタの使用を前提とする。しかし、前年度に開発した脂質-高分子複合ナノ粒子(LPN)は高分子の親水性による乏しい薬物保持性が問題だった。より疎水性の高い高分子はこの問題の解決が期待される一方、開発したマイクロリアクタでは著しい粒子径の増大が新たな障害となっていた。そこで、平成30年度はマイクロリアクタ流路の再設計によって薬物保持性を向上させた30 nm程度のLPNの構築に取り組んだ。再設計にあたり、2液の合流から混合開始までの流路を最小限に短縮させ、合流部をY字型または十字型とした。従来型マイクロリアクタと比較して、新型はいずれも粒子径を30 nm近く減少させた。より分子量が大きく疎水性の高い高分子を用いることで粒子径を40 nm程度にまで減少させることに成功した。さらに、上述の結果はすでに報告されている他のどのマイクロリアクタよりも混合性能に優れていた。高い薬物保持性をもつ超極小薬物ナノキャリアは細胞内動態的観点から血管内皮細胞透過性を向上させる上で極めて重要である。前被採択課題「がん低酸素領域を送達範囲内に収める難水溶性薬物搭載粒子径可変ナノキャリアの開発」(課題番号15K21534)の研究期間を実施状況の遅れから1年間延長していた。さらに、従来型マイクロリアクタ開発における有機溶媒除去条件の最適化、新型マイクロリアクタ開発におけるトラブル対処がさらなる遅れの原因となった。また、前被採択課題から全てを申請者単独で実施せざるを得ない状況が上述した遅れの一因ともなっていた。新型マイクロリアクタは従来と同等の粒子径と薬物保持性の向上を両立したLPNの構築に有用であることを実証する。新型マイクロリアクタが世界最高レベルの混合性能をもつ可能性が高いことを考慮すると、この実証は実施に値するものである。現在はLPNが1粒子ずつ分離した状態となる調製条件・処方を検討している。本検討が終了し次第、in vitro細胞毒性、薬物放出プロファイルおよび薬物保持性を評価する。また、ナノ粒子表面へのアルブミンのリクルートについても、より安価かつ効率的に実施できる戦略を採用し遅れを取り戻す。当該戦略は文献検索より既に見出している。しかしながら、前被採択課題「がん低酸素領域を送達範囲内に収める難水溶性薬物搭載粒子径可変ナノキャリアの開発」(課題番号15K21534)の研究期間を実施状況の遅れから1年間延長した。本申請研究は超極小かつ均一な脂質-高分子複合ナノ粒子(LPN)の構築を前提としており、当該計画遂行に先立ちこの達成が必須であった。そこで、平成29年度は、30 nmかつ単分散からなるLPNのマイクロリアクタによる構築に初めに取り組んだ。LPN形成後の揮発性有機溶媒除去条件を穏和にした上で、中核的成分となる生分解性高分子の最適化から30 nmとなる組成を見出した。LPN表層部を構成するポリエチレングリコール結合脂質およびリン脂質の複合組成は、薬物封入条件下においても目標に掲げた物性を達成した。初年度計画は上述の成果を得次第遂行する予定であったが、想定以上の期間を要し遂行ができなかった。一方で、本LPN調製方法を深く理解し、かつ当初想定しなかったよりシンプルな設計を見出したことは当初申請計画の遅れを取り戻し本申請研究の最終目標を達成するために極めて重要である。前被採択課題「がん低酸素領域を送達範囲内に収める難水溶性薬物搭載粒子径可変ナノキャリアの開発」(課題番号15K21534)の研究期間を実施状況の遅れから1年間延長したことに起因する。当該課題は薬物封入率の向上・マイクロリアクタを用いたLPN調製法の確立を達成するために当初の研究計画から1年遅れることになってしまった。本申請研究は前被採択課題を基盤として成り立ちうる性質を持っていた。また、マイクロリアクタを用いたLPN調製法の確立が終わり次第初年度計画を遂行する予定であったが、想定以上に検討すべき項目が多くなり当該計画の遂行ができなかった。

前被採択課題および本申請研究のいずれもが申請者単独で実施することになっており、時間の観点からも同時遂行が極めて困難な状態にあった。本申請研究は、がん集積性の向上と大きな間隙をもたないがん血管の透過を目的として、ナノ粒子表面上へ配置した高アルブミン結合性化合物に血管内で内因性アルブミンをリクルートさせ、その血管内皮細胞透過性・がん細胞による取り込み能を有効活用する新規がん標的化戦略を創出する。本戦略は、大きな間隙をもたないがん血管が障壁となっていた微小な原発巣や転移巣への効率的な送達の実現に大きく貢献する。本研究計画は3年間からなり、1.標的化能向上のための組成最適化、2.がん細胞におけるアルブミン取り込み機構の解明、3.アルブミンを取り込まないがん細胞への本戦略の有効化を各年度の目標とした。当該計画は連続的ナノ粒子合成が可能なマイクリアクタの使用を前提とする。しかし、前年度に開発した脂質-高分子複合ナノ粒子(LPN)は高分子の親水性による乏しい薬物保持性が問題だった。より疎水性の高い高分子はこの問題の解決が期待される一方、開発したマイクロリアクタでは著しい粒子径の増大が新たな障害となっていた。そこで、平成30年度はマイクロリアクタ流路の再設計によって薬物保持性を向上させた30 nm程度のLPNの構築に取り組んだ。再設計にあたり、2液の合流から混合開始までの流路を最小限に短縮させ、合流部をY字型または十字型とした。従来型マイクロリアクタと比較して、新型はいずれも粒子径を30 nm近く減少させた。より分子量が大きく疎水性の高い高分子を用いることで粒子径を40 nm程度にまで減少させることに成功した。さらに、上述の結果はすでに報告されている他のどのマイクロリアクタよりも混合性能に優れていた。高い薬物保持性をもつ超極小薬物ナノキャリアは細胞内動態的観点から血管内皮細胞透過性を向上させる上で極めて重要である。前被採択課題「がん低酸素領域を送達範囲内に収める難水溶性薬物搭載粒子径可変ナノキャリアの開発」(課題番号15K21534)の研究期間を実施状況の遅れから1年間延長していた。さらに、従来型マイクロリアクタ開発における有機溶媒除去条件の最適化、新型マイクロリアクタ開発におけるトラブル対処がさらなる遅れの原因となった。また、前被採択課題から全てを申請者単独で実施せざるを得ない状況が上述した遅れの一因ともなっていた。当初申請計画から大幅に遅れてしまったものの、数々の検討項目からLPN物性への影響因子をほぼ明らかにしたことは当初申請計画の遂行および遂行速度の向上にとって極めて有用である。また、遅れを取り戻すための遂行速度の向上にあたり、構築するナノ構造体の設計を再考する必要がある。当初は脂質に結合させたポリエチレングリコール(PEG)の先端に高アルブミン結合性化合物を修飾する戦略を採用していた。この戦略の短所は用いるPEG結合脂質がかなり高価であること、そして結合および精製に時間を要することの2点にあった。よりシンプルかつ効率的に本申請研究の最終目標を達成するために、生分解性高分子からなるコア部の表面を脂質以外の素材で修飾する設計へと変更する。この素材についは既に候補を選定済みであると同時に、この設計は構築可能であることが明らかとされている。
実験動物における高多型DNAマ-カ-の開発とGerm-lineでの安定性の検討

本研究はマウス、ラットにおけるLinkage解析において有用となる高多型性を示すDNAマ-カ-を見いだし、そのDNAマ-カ-について染色体上の位置を明らかにする。また、多型のうち、Variable Number of Tamdem Repeat(VNTR)によるものについては、Germ-lineでどの程度安定に保たれるか検討を加えることを目的とする。平成元年度までの研究成果並びに進行状況は以下のごとくである。マウス、ラットのGenemic Libraryから分離したクロ-ンについてBiotin標識、によりDNA Probeを作成し、マウス、ラットについて遺伝的変異を検出しやすいと思われる系統それぞれ5系統を選び、抽出したDNAについてヒトで多型が多く認められている制限酵素を用い、サザンブロットによりRFLPsを示すクロ-ンのスクリ-ニングを行った。現在まで検討したなかではまだRFLPsを示すクロ-ンは得られていない。引き続き、検討を要する。DNAマ-カ-を染色体に帰属する方法として従来はProbe DNAをラジオアイソト-プ標識によるin situ hybridization法は結果がでるまで3週間程度を要すること、多くの経費を要すること、R1を使うことによる危険性があること、標識したProbeの保存ができないことなど種々の問題がある。迅速で経済的な方法を検討した。その結果、Probe DNAをBiotinで標識し、金コロイド結合した抗体で検出する方法を確立した。この方法によりマウスとラットのミエリン塩基性タンパク質遺伝子(Mbp):マウスのアルギノサクシネ-トリア-ゼ遺伝子(Asl):アルギノサクシネ-トシンセタ-ゼ遺伝子(Ass)のマッピングを行いこれらの遺伝子の染色体上の位置を明らかにした。またAs1については多型が見られることから、DNAマ-カ-として利用できることから、現在この遺伝子のlinkageマップを検討している。これらの結果については投稿中あるいは投稿準備中である。本研究はマウス、ラットにおいてLinkage解析を行う際に有用な多型性を示すDNAマーカーを多数開発し、染色体への帰属を行うことが主たる目的である。昭和63年度の研究計画はマウス、ラットのGenomic Libraryから多型性を示すクローンを検索することであり、当年度の成果、並びに進行状況は以下のごとくである。1.マウス、ラットのGenomic Libraryからランダムにそれぞれ、100クローンずつを選び、増殖させDNAを抽出し、これを標識しDNA Probeとした。2.多型性を示すDNAマーカーの開発に際し経済性に加え、より多型性の高いクローンを選ぶため、なるべく少ないマウス、ラット系統で多型性を検討できる実験系を検討した。このため従来報告されているマウス、ラットでの遺伝的変異をデーター処理し、また多型性を示すDNAマーカーについてRI Strainや交配実験による染色体マッピングの解析のしやすさも考慮し、それぞれ最も適当と思われる5系統を選び高分子DNAの調整を行った。3.制限酵素はヒトでも報告で多型が最もみられる9種を用い、マウス、ラットから抽出したDNAについて制限酵素処理し、サザンブロットを行いRFLPsを示すクローンの選択を現在行っている。本研究と同様の実験系でヒトのGenomic Libraryでの場合、5人のヒトDNAについてサザンブロットにより1664クローンを検討したSchummら(1988)は515(30.9%)のクローンで多型性がみられること、またこのうち1つを除いては、すべてSingle locusによって支配されていることを報告している。これらのことから、本実験系で多型性を示すマウス、ラットのSingle locusに支配されているDNAクローンが多数得られることが期待できるものと思われる。
グローバル化における権力編成の変動と新たなコミュニティ運動―東南アジア大陸部から

本研究は、研究代表者・研究分担者9名が、次のような調査を行った。阿部は、「カンボジアにおける反土地コンセッション運動のレパートリー」、中田は、「南ラオスのゴム・プランテーション開発と村落コミュニティの変化」、古谷は「東北タイにおける複合農業・森林再生のコミュニティ運動」、久保は「権力関係の再編とコミュニティ運動:ビルマ(ミャンマー)カヤー州での民族言語の教育」、高城は「北タイにおけるラジオ・メディアと新たなコミュニティ運動」、西井「タイの民主化運動の行く末ー森に入った人々とコミュニティ運動」、斎藤が「ミャンマーのムスリムコミュニティについて」、土佐が「ダンマスクール(仏教日曜学校)運動」、田辺が「北タイ行者の(非)近代的な仏教コミュニティ運動」をテーマとして、それぞれタイ、ラオス、ミャンマーを中心とした東南アジア大陸部の各国で継続して臨地調査を実施した。臨地調査に関しては、タイ、ラオス、カンボジア、ミャンマーの各国において、現地の大学・研究機関に属する外国人研究者の協力を得ながら、必要な基礎的文献資料の収集と現地調査を行った。そこでは、研究代表者及び研究分担者がそれぞれのミクロなフィールドの現場における権力布置の実態把握を、いかにマクロな分析につなげることができるのかについて、留意しつつフ行ったィールドワークの知見をもちより、ミクロ-マクロ両面から東南アジア全般の権力状況の理解を深めた。コミュニティ運動のミクロな次元から実態把握を行うとともに、東南アジア各国及び東南アジア全域、またグローバルな権力編成のマクロな動向の把握に努めた。また、本年度8月に計画していた国際ワークショップに先立って、知見の共有を図り、理論構築の基盤作りを行った。そうして得た共通理解のもと、8月にミャンマーのヤンゴン大学において、行った国際ワークショップ"Rethinking “Community": from Case Studies in Mainland South East Asia"においては、ミャンマーの研究協力者と有意義な意見交換をすることができ、研究の中間地点において今後の研究の展開に資する議論を行うことができた。これらの議論からは、ミクロな状況の相違点と共通点が浮かび上がり、今後こうした知見から、いかにこれまでのコミュニティ論の理論的展開を新たな視点から見直していけるのかについての課題が明らかになった。3年目には、初年度及び2年目の調査、またそれらの知見をもちよって海外の研究協力者をまじえて行ったミャンマーのヤンゴン大学で国際ワークショップにおける成果をもとに、今後の研究の指針の修正や展開を図る予定である。3年目の初旬において、神奈川大学にて、第1回目の国内研究会を行い、前年度の調査結果について各自報告し、全体の方向性についての議論を行う。それら中間的成果をもとに、各自のフィールドにおいて精査、発展させ現地調査を行う。また、11月くらいに、調査結果をもちより、国内においてワークショップを行う予定である。そこでは、権力分析に資する理論的指針となりうると思われるデヴィッド・グレーバーの研究に関して、国内における第一人者とも目される酒井隆史氏を講師に招き、勉強会を行うことで、今後の研究の展開にむけての理論的なプラットフォームの構築を行う。臨地調査に関しては、タイ、ラオス、カンボジア、ミャンマーの各国において、現地の大学・研究機関に属する外国人研究者の協力を得ながら、必要な基礎的文献資料の収集と予備調査に着手した。臨地調査とともに、研究会を開催し、知見の共有を図り、理論構築の基盤作りを行った。初年度は、権力編成の変動分析と研究会を通じての理解の共有、およびフィールドにおける実態調査を主要な活動内容とし、マクロな動向とともに、ミクロなフィールドの現場における権力布置の実態把握を、研究代表者及び研究分担者がそれぞれ各フィールドにおいて行った。それらの知見をもちより、ミクロ-マクロ両面から東南アジア全般の権力状況の理解を深めるために、国内において2回のワークショップ(研究会)を開催した。臨地調査に関しては、タイ、ラオス、カンボジア、ミャンマーの各国において、予定通り各自が2週間から1か月にわたり現地において調査を行い、現地におけるコミュニティ運動のミクロな次元から実態把握を行うとともに、東南アジア各国及び東南アジア全域、またグローバルな権力編成のマクロな動向の把握に努めた。各自が調査に出発する前の2017年4月23日には分担者の所属する大谷大学において第1回目の国内研究会を行って、知見の共有を図り、調査の準備を行った。また、調査後に、研究代表者及び研究分担者がそれぞれ各フィールドにおいて行った調査の結果をもちより、ミクロ-マクロ両面から東南アジア全般の権力状況の理解を深めるために、2018年1月28日から29日にかけて、2回目の研究会を分担者の一人が所属する神奈川大学で開催し、理論構築の基盤作りを行った。