hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
偶然性をいかに生きるか：現代日本の『阿弥陀信仰』の諸相とその原点

2018年度は、近畿地方の阿弥陀信仰を明らかにするため、(1)三重県の真宗寺院・専修寺と(2)熊野三山、(3)琵琶湖周辺に注目し、フィールドワークを行った。その三つを調査対象に選んだ理由は、日本宗教の多くの側面を包括するからである。それは主に、(1)浄土真宗系本山の年中行事での最も重要な儀式、(2)存在し続けた神仏習合の宗教施設、(3)宗教巡礼である。(1)専修寺では、特に「通夜念仏」という儀式における特殊な空間利用を解明するための調査を行った。「通夜念仏」は他の浄土真宗系本山でも勤められるものではあるが、出家・在家の区別の理解という点に関しては他の浄土真宗系本山と比べれば異例であった。本研究における根本的な関心である理論と実質との関係性についていえば、浄土真宗系寺院はおおむね同じ教義理解を持つとはいえ、実質的な面で大きく違う点が存在していることが本研究において非常に重要な発見である。(2)熊野三山のフィールドワークは、特に現在における熊野参詣曼荼羅の扱いに関して新たな発見ができた。熊野三山は本地垂迹の継続を公に宣言するのみならず、速玉大社・那智大社・本宮大社の本殿にまでそれを実践するという点に関しては全国的に数の少ない事例の一つである。(3)琵琶湖の周辺には、「びわ湖百八霊場」という比較的に新しくできた巡礼があり、それに参加する寺院の巡礼意識とそれに伴う空間創造は従来の巡礼と大きく異なったことが分かった。熊野のフィールドワークは二つの発表で報告した。その発表で注目された点は、現代の空間的な参詣状況と熊野参詣曼荼羅および主に一遍と親鸞に関係する熊野文学であった。三つ目の発表は、天台宗における浄土教の祖と言われる源信の「縁」という概念についてであった。その概念を中心にした源信の著作の分析によって、源信の阿弥陀理解を明瞭することができた。【フィールドワーク】2018年度のフィールドワークは近畿地方を中心にし、その地方における最も代表的な阿弥陀信仰の場を分析した。これにより、巡礼空間と堂内空間についての調査が進んだ。また、とりわけ参詣空間に関しては、2018年度のフィールドワークで本研究での必要な調査を完了した。本研究の最終的な目標は、ほぼ全国を視野に入れることの他、すべての典型的な空間種類(境内、堂内など)をフィールドワークの対象にすることである。そのため、次年度は特に巡礼という空間の調査を完了する予定である。その場合には具体的に、四国の八十八ヶ所遍路と関東における浄土真宗系巡礼を調査する。巡礼は多くの宗派を同時に取り入れる特徴を持ち、それよって阿弥陀という信仰対象に関して新たな発見ができると予想する。【方法】本研究の実施計画では、通例か異例かの一方に重点を置くことをせず、両方の側面を入れる。しかし、申請書で書いた「宗派」と「単立」という区別は本研究には適切ではないところがあったことが分かった。そこで、二つの代替方法を現時点で考えている。一つは、地域に分けて、代表的な事例を決定することである。もう一つは、ある寺院のベースとなった寺院とそれをベースにした寺院の比較である。
ラットでの長期体外式肺補助法の確立とその生体に及ぼす影響

ラツトに人工肺を用いた部分対外循環を施行し,以下の結果を得た。方法:Wistar系ラット9匹(411±49g,mean±SD),4匹(288±25g)で,それぞれV-V,V-AバイパスECLA(以下V-V,V-A)を施行した。麻酔はペントバルビタール50mg/kgの腹腔内注射で導入,ECLA中は酸素+笑気(FiO_2:0.5)で維持した。送血のためV-Aでは右総頚動脈に,V-Vでは左大腿動脈にサーフローカテーテル(24G)を留置した。脱血のため右鎖骨下静脈分岐部よりV-Vでは側孔付きアトム管(6Fr.),V-Aでは側孔付きサーフローカテーテル(18G)を右房に留置した。ポンプはV-Vではマイクロチューブポンプ,V-Aでは輸血ポンプを使用した。膜面積0.04m^2の小型中空糸外部灌流型人工肺を用い,ヘパリン添加乳酸加リンゲル液で無充血充填後,部分体外循環を施行した。ECLA中の人工呼吸器の換気条件を変えず,人工肺への酸素吹送はFiO_2:1.0,0.2-4 L/分で行った。ECLA時間及びバイパス血流量,人工肺出入口の血液ガス,血液電解質,ヘモグラムを経時的に測定した。まとめ:無輸血充填による血液希釈,溶血による高K血症が生じたが,ラットを用いたV-AバイパスECLAはバイパス流量も良く保持され,最高150分間施行できた。ラットに小型の人工肺を用いた部分体外循環を施行し,以下の結果を得た。方法:体重350-500g(平均400g)のWister系ラット7匹を用いた。ペントバルビタール50mg/kgの腹腔内注射で麻酔導入後,頸部を縦切開し気管を剥離露出した。サーフローカテーテル(16G)を気管内挿入しハーバード型小型動物用人工呼吸器にて人口換気(一回換気量5-7ml,呼吸数70回/分)を行った。鼠径部を切開剥離し,血圧測定,採血のため大腿動脈にサーフローカテーテル(24G)を挿入し,さらに送血用として同側の大腿静脈にサーフローカテーテル(22or24G)留置した。脱血のため右総頚静脈を剥離後,右鎖骨下静脈分岐部より側孔付きアトム管(6Fr.)挿入し上大静脈に留置した。小型の中空糸外部灌流型人工肺と回路を乳酸加リンゲル液で充填後(充填量約6ml),上大静脈より脱血し大腿静脈へ送血する部分体外循環(V-Vバイパス)を施行した(人工肺への酸素吹送は3L/分,FiO_21.0)。体外循環時間及び血流量,人口肺出入口の血液ガス,体外循環中の血液電解質,Hb,Hctを測定した。結果:平均体外循環時間は27分,体外循環血流量は3.4mL/分であった。人工肺脱送血側の血液ガスはpH7.11→7.34,PO_232.2→266.8mmHg,PCO_254.9→29.2mmHg,BE-13.4→-10.1,SatO_242.5→95.5%(人工肺脱血側→送血側)と代謝性アシドーシスが認められたが,人工肺によるガス交換能は確認された。ヘモグラムでHbとHctはそれぞれ14.4→12.0g/dl,56.8→37.0%と人工肺回路の充填液によると思われる希釈が認められたが,体外循環中の血液電解質はNa165.7,K4.4,Cll22.6mEq/lとほぼ正常範囲であった。今後の方針:平均体外循環時間の延長と体外循環血流量の増加をめざす。

1時間程度の体外循環が可能であれば,体外循環前後のサイトカインの変動を調べる予定である。麻酔はペントバルビタール50mg/kgの腹腔内注射で行った。頸部を正中切開し気管を剥離露出後,サーフローカテーテル【○!R】(14G)を気切孔より挿入,ハーバード型小型動物用人工呼吸器を用いてnormoventilationを保った。実験中はGO(酸素十笑気)で麻酔を維持した。送血のため右総頚動脈にサーフローカテーテル【○!R】(24G)を穿刺法で留置した。さらに脱血のため右総頚静脈を剥離後,右鎖骨下静脈分岐部より側孔付きサーフローカテーテル【○!R】(18G)を小児用中心静脈挿入用ガイドワイア-を用いて挿入,上大静脈経由で右心房に留置した。膜面積0.04m^2の小型中空糸外部灌流型人工肺を用い,人工肺と回路をヘパリン添加乳酸加リンゲル液で無血充填後,上大静脈より脱血し総頚動脈へ送血するV-Aバイパスによる部分体外循環を施行した。部分体外循環中の人工呼吸器の換気条件は変えず,人工肺への酸素吹送はFiO_21.0,0.2-4L/分で行った。体外循環時間及びバイパス血流量,並びに人工肺出入口の経時的な血液ガス変化,体外循環中の経時的血液電解質,ヘモグロビン,ヘマトクリット,血漿蛋白濃度の変化を測定した。結果:(1)体外循環:平均体外循環時間は82.5±61.8分(30-150分),平均バイパス血流量は35.0±3.3ml/kg/分(33.3-40ml/kg/分)であった。(2)血液ガスの変化:人工肺出口でのPO_2は385573mmHg,PCO_2は7.834.4mmHgと十分な酸素加と炭酸ガスの除去効果が認められた。(3)ヘモグラムの変化:ECLA前値と比較してECLA開始5分後よりヘモグロビン,ヘマトクリット値がそれぞれ6.8g/dl,18.3%と有意に低下したが,その後は変化は認められなかった。(4)電解質の変化:ECLA前値と比較してKは経時的に有意に上昇した。まとめ:V-AバイパスECLAにより最高150分間の体外循環に成功した。無輸血充填による血液希釈,溶血による高K血症が生じたが,十分なガス交換能が得られ,ラットを用いた体外循環が施行できた。
内皮細胞由来微小粒子による炎症制御機構の解明と応用

糖尿病網膜症は糖尿病三大合併症の一つであり、年間3,000人が失明する重篤な視覚障害である。本疾患に対する予防法や根本的な治療法はなく、その開発は急務である。私はマウスに抗Platelet-derived growth factor receptor β(PDGFRβ)抗体を投与して網膜血管壁へのペリサイト集積を阻害することで、糖尿病網膜症モデルを迅速かつ簡便に作製することが出来ることを見出した。本研究ではこのモデルを用い、糖尿病網膜症における内皮細胞の特徴を解析することを目的とした。生後1日の新生仔マウスに抗PDGFRβ抗体を腹腔投与し、生後8日の網膜組織を免疫染色によって観察したところ、ペリサイト消失に伴って血管壁が拡張・蛇行し、バリア構造が破綻していた。網膜血管内皮における遺伝子発現を網羅的に解析した結果、網膜症の発症に伴って、ケモカインの1つであるStromal cell-derived factor-1α(SDF-1α)の発現が強く誘導されていた。SDF-1αの受容体であるCXCR4の阻害剤の投与は、抗PDGFRβ抗体処置による血管の拡張や血管透過性の亢進、マクロファージの浸潤を有意に抑制した。CXCR4は内皮細胞に多く発現しており、実際に内皮特異的CXCR4欠損マウスでは抗PDGFRβ抗体処置による症状が弱くなっていた。抗PDGFRβ抗体投与により作成した糖尿病網膜症モデルにおいて、血管内皮で産生されたSDF-1αは内皮のCXCR4受容体を介して遊走・接着シグナルを増強し網膜間質へのマクロファージの浸潤を促していることが分かった。浸潤したマクロファージは種々の炎症性物質を放出し、血管透過性や血管新生を亢進させることで、浮腫や出血といった糖尿病網膜症の病態を進行させることが分かった。本研究は糖尿病網膜症時の血管内皮に着目して網羅解析を行っており、糖尿病網膜症時の血管の特徴を知ることが出来たため。網羅解析の結果、網膜症においてSDF-1αが顕著に発現増加し、網膜症の病態進行に関与していることを見出したため。今後も引き続き様々な疾患における血管に着目し、正常時との形態的・機能的違いを明らかにすることで、血管を標的とした新規治療標的の探索を行いたい。マウスにB16メラノーマを皮下移植したのち、増殖した癌からTECを単離した。TECにおける炎症メディエーターやCOX、各PGSの発現量が、正常な内皮細胞と比べてどの程度変化しているのかについてreal time PCR法を用いて解析した。その結果、prostaglandin D2(PGD2)を合成するリポカリン型PGD合成酵素(L-PGDS)の発現量が、TECで10倍以上と顕著に増加していることを発見した。採取した癌組織の免疫染色を行ったところ、L-PGDSはTECのみに存在していた。そこでL-PGDSが癌の血管、及び癌の増殖に与える影響について検討した。L-PGDS遺伝子欠損マウス(L-PGDS-/-)を作成し、L-PGDSが癌の増殖に与える影響を検討した。皮下にメラノーマを移植したところ、L-PGDS-/-では野生型マウス(WT)と比べて癌の増殖が有意に早かった。癌組織内部の形態学的な変化をHE染色によって観察したところ、L-PGDS-/-では癌組織内部の壊死層が減少しており、アポトーシス細胞数もWTと比べて有意に減少していた。L-PGDSがTECに局在していることから、癌血管の性質や機能の解析を行った。L-PGDS-/-の癌では、TECの数とフィブリノーゲンの血管外漏出量がWTと比較して有意に増加しており、L-PGDSの欠損が癌血管の新生と透過性を亢進することが明らかとなった。最後に、単離内皮細胞を用いてL-PGDSの生成物であるPGD2が内皮細胞の機能に与える影響を検討した。PGD2の処置は内皮細胞の透過性と管腔形成を顕著に抑制した。以上の結果より、癌細胞の刺激を受けたTECは、L-PGDSの発現を誘導してPGD2を産生し、自身の透過性と新生にブレーキをかけて、癌細胞への栄養や酸素の供給を制限することで、無秩序な癌の増殖を抑制していることが明らかとなった。本研究は腫瘍血管内皮細胞におけるプロスタグランジン類や、その他の炎症メディエーター発現量を網羅的に解析しており、腫瘍血管の特徴を知ることができたため。網羅解析の結果、L-PGDSが癌の血管形成に大きく関わっていることを見出し、新規性のある発見ができたため。また、L-PGDSが癌の血管に作用することで癌の血管新生を抑制性に制御するという、癌増殖におけるL-PGDSの新たな機能を明らかにしたため。

生後1日の新生仔マウスに抗PDGFRβ抗体を腹腔投与し、生後8日の網膜組織を免疫染色によって観察したところ、ペリサイト消失に伴って血管壁が拡張・蛇行し、バリア構造が破綻していた。網膜血管内皮における遺伝子発現を網羅的に解析した結果、網膜症の発症に伴って、ケモカインの1つであるStromal cell-derived factor-1α(SDF-1α)の発現が強く誘導されていた。SDF-1αの受容体であるCXCR4の阻害剤の投与は、抗PDGFRβ抗体処置による血管の拡張や血管透過性の亢進、マクロファージの浸潤を有意に抑制した。CXCR4は内皮細胞に多く発現しており、実際に内皮特異的CXCR4欠損マウスでは抗PDGFRβ抗体処置による症状が弱くなっていた。抗PDGFRβ抗体投与により作成した糖尿病網膜症モデルにおいて、血管内皮で産生されたSDF-1αは内皮のCXCR4受容体を介して遊走・接着シグナルを増強し網膜間質へのマクロファージの浸潤を促していることが分かった。浸潤したマクロファージは種々の炎症性物質を放出し、血管透過性や血管新生を亢進させることで、浮腫や出血といった糖尿病網膜症の病態を進行させることが分かった。本研究は糖尿病網膜症時の血管内皮に着目して網羅解析を行っており、糖尿病網膜症時の血管の特徴を知ることが出来たため。網羅解析の結果、網膜症においてSDF-1αが顕著に発現増加し、網膜症の病態進行に関与していることを見出したため。今後は他のプロスタグランジン類やその合成酵素が腫瘍血管内皮細胞の機能に与える影響を検討するとともに、他の臓器や病態における内皮細胞の機能についてもより詳しく解析していていきたい。今後も引き続き様々な疾患における血管に着目し、正常時との形態的・機能的違いを明らかにすることで、血管を標的とした新規治療標的の探索を行いたい。
液晶を利用した2次元XY系におけるトポロジカル・ディフェクトの動力学の研究

2次元配向したネマチック液晶中に現われるディスクリネーションは、2次元XY系でのVortex,Antivortexに対応する。これまでの研究により、数多くのディスクリネーションが消滅していく過程には、動的スケーリング則が存在することなどがわかっている。本研究では、オーダーパラメターの2時間相関関数を測定した。偏光顕微鏡の透過光強度I(r,t)と、液晶分子の配向方向n(r,t)と偏光子のなす角度phi(r,t)にはI(r,t)sin^2(2phi(r,t))という関係がある。I(r,t)を用いて配向角の2時間相関関数A(t,t′)を次式で定義した。観察領域の有限性のため、実験結果には,ばらつきがあったが、時間が十分経つとA(t,t ́)は時間のベキ乗に比例して減少していくことがわかった。15EA05:また、ディスクリネーションの符号を区別しながら、位置を測定した。この解析では、同符号同士および異符号同士のディスクリネーションの位置に関する相関関数を求めた結果、2次元XY系でのVortex,Antivortexの消滅過程における位置の相関関数と非常によく一致していることが明らかになった。さらに、位置の相関関数からも、動的スケーリング則が存在することが確かめられた。次に、各時刻のディスクリネーションの分布関数を符号を区別して計算したところ、ディスクリネーションの分布はランダムではなく、符号の異なるディスクリネーションの存在確率は、最隣接ディスクリネーション間距離だけ離れた場所でピークを持つことがわかった。さらに、ディスクリネーションの相互作用は、最隣接距離の約10倍まで及んでいることがわかった。これは、異符号間の相互作用が非常に強いことを示唆している。
肥満代謝症候群の脂肪酸分画と単球機能に着目した動脈硬化早期診断法の確立

本研究により、1050例の肥満・糖尿病・メタボリック症候群の前向きコホートにおいて、各脂肪酸摂取量や血中濃度が既知の心血管病リスク指標や末梢血単球機能と強く関連していることが明らかになった。また、高脂血症薬・Eicosapentaenoic acid投与により、脂肪酸分画濃度と単球機能の改善を認め、その作用機序を解明した、更に、脂肪酸分画及び単球機能改善の反応性に影響する遺伝子多型について検討している。研究結果より脂肪酸分画と単球機能の測定による早期動脈硬化進展の検出や心血管病予防・治療戦略の可能性が示唆された。本研究では、既に構築した828例の肥満・メタボリック症候群(MetS)データベースを基に、脂肪酸分画・単球機能に着目した新規動脈硬化診断法の確立を目指して、下記研究を施行した。(1)各脂肪酸摂取量と心血管病(CVD)リスクとの関連:栄養調査では血中アディポネクチンは魚摂取量と正相関を、肉摂取量は逆相関を認めた。最近、JELISによりエイコサペンタエン酸(EPA)のCVD発症抑制作用が報告され、そのサブ解析ではEPA/アラキドン酸(AA)比は心血管病発症抑制と関連すると報告された(Cir J, 2009)。今回、肥満・MetSにて、血中EPA/AA比が抗炎症性サイトカイン・IL-10や動脈硬化指標・PWVと負の相関を有する事を認めた(ATVB, submitted)。(2)肥満・Metsの各脂肪酸血中濃度とCVDリスク及び末梢血単球機能との関連:肥満の末梢血単球では、M1マーカー(TNFα,IL-6)発現上昇やM2マーカー(IL-10,CD163)発現低下、糖尿病や脂質異常症では単球中IL-10の低下を認めた。PWVには年齢と低CD163が独立して関連し、単球M1/M2の質的変化の動脈硬化への関与が考えられた(Diabetes Care 33 : e7,2010)。EPA/AA比は単球中IL-10と有意な相関を認めた。(3)EPA投与による各脂肪酸分画濃度と単球機能の改善効果とその分子機序:肥満症において、EPAの3ヶ月投与によりIL-10の上昇を認め、PWVの改善に関連していた。ヒト単球THP-1細胞において、EPA投与によるPPARγを介するIL-10の発現上昇を認めた(ATVB, submitted)。(4)現在、肥満500例において、肥満・脂質関連候補遺伝子272遺伝子712SNPsの検討をについて遺伝子型タイピングを終了し、脂肪酸分画・単球機能・動脈硬化との関連を解析中である。本研究では、既に構築した1050例の肥満・糖尿病・メタボリック症候群(Mets)コホートのデータベースを基に、脂肪酸分画・単球機能に着目した新規動脈硬化診断法の確立を目指して、下記研究を施行した。(1)各脂肪酸量と心血管病(CVD)リスクとの関連:最近、JEHSによりエイコサペンタエン酸(EPA)のCVD発症抑制作用が報告され、そのサブ解析ではEPA/アラキドン酸(AA)比は心血管病発症抑制と関連すると報告された(Cir J,2009)。今回、肥満症患者にて血中EPA/AA比が末梢血単球における炎症性サイトカインであるTNFαと有意な負の相関を、IL-6と負の相関傾向を認めた。また、抗炎症性サイトカインであるIL-10と正の相関傾向を認めた。さらに、IL-10が動脈硬化指標・PWVと有意な:負の相関を認めた(Diabetes Care,in revision)。(2)EPA投与による各脂肪酸分画濃度と単球機能の改善効果とその分子機序:肥満症において、EPAの3ヶ月投与による血中EPA/AA比の上昇と末梢血単球IL-10の改善に有意な相関を認めた。さらにIL-10の改善は、PWVの改善に有意に関連していた。更に、ヒト単球及びヒト単球系細胞株・THP-1細胞において、EPA投与によるIL-10の発現上昇を認め、その効果は阻害剤やsiRNAの実験より、PPARγを介する可能性が示唆された(Diabetes Care,in revision)。(3)現在、肥満500例において、肥満・脂質関連候補遺伝子272遺伝子712SNPsの遺伝子型タイピングが終了し、脂肪酸分画・単球機能・動脈硬化指標との関連を解析中である。以上、肥満・糖尿病・MetSにおける脂肪酸分画と単球機能改善に着目した早期動脈硬化進展の検出や心血管病予防・治療戦略の可能性が示唆された。
レンチオニンによる血小板凝集抑制作用機序の解明とex vivoにおける効果の検討

レンチオニンによる血小板内情報伝達阻害の検討シイタケ中の環状硫黄化合物の中で最も含有量が多く、シイタケ独特のフレーバー成分であるレンチオニンを用いて、血小板凝集抑制作用の有無を検討した。レンチオニンはアラキドン酸凝集、およびU-46619凝集に対して濃度依存的に血小板凝集を抑制した。また、シイタケ精油中のレンチオニン濃度を算出したものと、レンチオニンの血小板凝集抑制作用を比較したところ、その効果はほぼ同じであった。このことから、シイタケ精油の持つ血小板凝集抑制効果は、ほぼレンチオニンによるものであることが明らかとなった。次に、レンチオニンの血小板凝集抑制作用機序の解明を行うため、種々の血小板凝集惹起物質(A23187,PMA,PAF,ADP)を用いて検討を行った。レンチオニンは全ての血小板凝集惹起物質に対して、濃度依存的に血小板凝集を抑制した。このことよりレンチオニンの作用は、血小板内の情報伝達物質による血小板凝集カスケードには関与せず、血小板の接着や形態変化、活性化に関係する血小板膜や各種受容体、もしくはそれらに伴うタンパク質のリン酸化反応を阻害していることが示唆された。レンチオニンのex vivoにおける血小板凝集抑制作用の検討レンチオニンを経口摂取した場合でも血小板羅集抑制作用を示すか否かを明らかとするため、ラットにレンチオニンを経口胃内投与し、一定時間後に採血した血液の血小板凝集抑制作用を測定した。その結果、レンチオニンは経口胃内投与後、820時間後において、コントロールに対し有意に血小板凝集を抑制した。さらに、レンチオニンを食事として摂取する場合、どの程度摂取すれば血小板凝集抑制作用を示すのかを明らかとするため、レンチオニンの投与量を変化させ、レンチオニンが血小板凝集抑制作用を示す最低投与量を検討した。その結果、レンチオニンは1mg/kg以上の投与量でコントロールに対し有意に血小板凝集を抑制した。1.レンチオニンによる血小板内情報伝達阻害の検討血小板惹起物質として、アラキドン酸、トロンボキサンA2受容体に作用するU-46619、カルシウムイオノファーであり血小板内へのカルシウム流入を促進するA23187、プロテインキナーゼCを活性化しタンパク質のリン酸化を促進するPMA、PAF受容体に作用し血小板内ホスホリパーゼやキナーゼを活性化させるPAF、ADP受容体に作用しカルシウム放出を促進すると共にcAMPを低下させるADPを用い、レンチオニン存在下および非存在下においてヒト血小板を活性化し、レンチオニンが血小板内の情報伝達を阻害するか否か検討した。その結果、レンチオニンは全ての惹起物質に対して凝集阻害効果を示した。このことから、レンチオニンは、血小板の接着や形態変化、もしくはそれに伴うタンパク質のリン酸化を阻害していることが示唆された。2.レンチオニンによる血小板膜タンパク質GPIIb/IIIaとフィブリノーゲンの結合阻害の検討

抗体として、血小板を認識しPerCPにより蛍光標識されているCD61、活性化した血小板を認識しPEにより蛍光標識されているCD62P、活性化したGPIIb/IIIaを認識しFITCにより標識されているPAC-1を用い、レンチオニン添加・無添加のヒト血小板を種々の惹起物質により活性化後、これらの抗体と混合し、フローサイトメーターにより各抗体との結合の有無を測定した。その結果、レンチオニンを添加した血小板では、FITC強度ばかりでなくPE強度も低下した。このことから、レンチオニンは、血小板の接着に関係する血小板膜上の受容体ではなく、血小板の形態変化を阻害していると推察された。レンチオニンのex vivoにおける血小板凝集抑制作用の検討レンチオニンを経口摂取した場合でも血小板凝集抑制作用を示すか否かを明らかとするため、ラットにレンチオニンを経口胃内投与し、血小板凝集抑制作用を測定した。その結果、レンチオニンは経口胃内投与後、820時間後において、コントロールに対し有意に血小板凝集を抑制したことから、レンチオニンは経口摂取した場合においても血小板凝集抑制作用を示すことが明らかとなった。さらに、レンチオニンは体内に吸収されるとしばらくの間血中に留まり、血小板を破壊することなく血小板凝集抑制作用を示し、徐々に代謝されて効果を失っていくものであることが示唆された。レンチオニンは経口摂取しても肝機能に障害を与えていないことが示され、レンチオニンは生体への毒性を示さず、血小板凝集抑制作用を発揮することが明らかとなった。レンチオニンの投与量を変化させ、レンチオニンが血小板凝集抑制作用を示す最低投与量を検討したところ、レンチオニンは1mg/kg以上の投与量でコントロールに対し有意に血小板凝集を抑制した。経口胃内投与した1mg/kgのレンチオニンが全て吸収され、血中に存在すると仮定すると、血中濃度は約9.2×10^<-5>Mとなり、in vitroにおいてレンチオニンがヒト多血小板血漿に対して血小板凝集抑制作用を示す濃度とほぼ同様の値であったことから、レンチオニンは体内の消化器官で分解されることなく吸収されて血中に至ることが示唆された。このことから、レンチオニンを1mg/kg摂取することで十分に血小板凝集抑制作用を示すことが明らかとなった。
ヒトとイヌの共生に伴うSocial exerciseの評価とヒト健康への効果検証

生物学的親和関係を構築したヒトとイヌの共進化は、互恵的なパートナー関係をもたらし、イヌとの生活によるヒトの心身の疾病の予防・改善効果が報告されている。また、実験動物では仲間との運動により、うつ症状やストレス状態が改善していることから、運動の社会的共有(Social exercise)に注目した。イヌとの生活が飼い主のSocial exerciseを長期的に高め、飼い主の健康状態の向上に寄与するとの仮説を立て、加速度センサー装着により数か月にわたるSocial exerciseを計測し、あわせてヒトの健康指標の変化を追跡する。ヒトとイヌの互恵的関係の効果をヒトの健康と福祉に役立てることを目指す。
分子内Julia縮合を鍵反応とする大員環テルペンの合成

Julia縮合とは、スルホンのα炭素アニオンとアルデヒド間の反応により,βヒドロキシ・スルホンを生成する反応で,専ら分子間の炭素・炭素結合形成に利用されてきた。本研究者はこれまでに,同縮合の分子内バ-ジョンをテトロノリド(抗腫瘍活性抗生物質)の大員環形成に導入し,その全合成に成功しているが(1991年),その手法の一般性を検証すべく本研究を行なった。対象とした天然物は,14員炭素環のサルコフィトールA(発がんプロモーター)および15員環のテルペスタシン(HIVシンシチウム生成阻害活性)で,何れもテトロノリドと同一のアリル・アルコール単位を大員環に含むものである。目的のJulia縮合は、分子末端に共役アルデヒド基とフェニルスルホンをもつ前駆体を用い,反応条件を吟味した結果,塩基としてリチウム・ヘキサメチルジシラチド,溶媒にベンゼンを使用することで目的の大員環形成を実施することができた。すなわち,本研究者の設定した分子内Julia縮合の反応条件は,反応点が遠隔でフレキシブルな配座の系においても有効であることを確認した。
光STM融合技術の開拓とナノスケールでの物性研究への展開

近年の微細加工プロセス技術の進展による半導体デバイスのナノスケールへの微細化や、量子ドットや量子細線などの半導体ナノ構造を応用した次世代ナノデバイスの開発が盛んに行われてきている。そして、このような微小な半導体デバイスにおいてはナノスケールの電気物性がデバイス全体の特性を支配するため、現在様々な顕微鏡を応用した高分解能の半導体物性評価手法の開発が急速に進められている。本研究ではこれまで、STM探針直下に光照射することにより誘起される表面光起電力を測定することにより、半導体のバンド構造をナノスケールで測定する手法「光変調トンネル分光法」の開発を行ってきた。本年度は、本手法を用いて半導体デバイスの基本、且つ最も重要な構成要素であるp-n接合を有するGaAs試料を対象に実験を行った。p-n接合界面でのSPVの空間分布測定を行い、SPVのドープ量依存性が明らかにするとともに、その特性を利用してSPVから定量的なドーパント分布計測が可能であることが示された。さらに、p-n接合に順方向電圧を印加した際にp-n接合界面からp型、n型それぞれの中性領域へと注入される少数キャリアの空間分布を計測することに成功した。この結果から、本手法がデバイスの動作特性を実空間で解析する手法として非常に有効であることを明らかになった。さらに、p-n接合界面に光照射することにより誘起される界面での内蔵電位の減少を観測することに成功した。今後は、量子ドットや量子井戸などのナノ構造を有する半導体デバイスへの応用が可能になると考えられる。以上のように、本研究において開発した光変調トンネル分光法は半導体デバイスの様々な特性をナノスケールの空間分解能で評価することが可能であり、半導体デバイスのナノ計測手法として非常に有力であることが明らかになった。近年、ナノテクノロジーの進展により、既存のSiデバイスに加え、ナノチューブ・ナノワイヤー、有機分子などを利用したナノスケールのデバイスが多く提案されているが、今後これらデバイスの評価するためには、ナノスケールでドーパント分布、バンドギャップなどの局所バンド構造を調べる手法の開発が必要である。今回、我々の開発した光変調トンネル分光法は、走査トンネル顕微鏡(以下STM)の探針直下にチョツピングしたレーザーを照射した状態で、I-V曲線を得ることにより得られる表面光起電力(以下SPV)から、キャリア密度・Efピニングなどの局所バンド構造を数nmオーダーで計測可能な手法であり、デバイス評価技術としての応用が期待できる。しかし、STMによって計測されるSPVは、トンネル電圧やSTM探針-試料間距離に依存し複雑に変化することが容易に予想され、データの解釈においてその重要性は認識されていたが、これまで詳細な研究がなされていなかった。そこで、今回我々は、Si(100)清浄表面(P型Bドープ・0.018Ω・cm)を用いて、トンネル電圧・試料-探針間距離・光強度依存性について詳細な研究を行った。得られた結果から、探針を試料表面に近づけると観測されるSPVが小さく現れるという傾向が明らかになったが、この結果は、単純な金属-絶縁体-半導体接合モデル(MISモデル)では説明が出来ない。つまり、従来のMISモデルでは取り入れられていない、トンネル電流の影響について考察する必要があり、本結果は、伝導体に光励起されたキャリアが探針にトンネルすることによるものであることが明らかになった。近年,半導体においては、変調ドーピングやヘテロエピタキシー等のプロセス技術の発展によって,特異な機能を示すように設計されたバンド構造をもつ素子が作製されるようになり,実用レベルで大きな成功を収めている。そして,ナノテクノロジーの発展に伴いより微細なデバイス構造の研究が行われるようになり,作製したナノ構造体が示す物性およびその起源をナノ計測技術を用いて調べる必要が生じている。近年、異なる2種類のIII-V族化合物半導体からなる超薄膜多層構造を用いた半導体素子が、衛生放送、移動体通信、光通信などに広く使われ、情報社会の発展の一翼を担っている。このようなデバイスは、ナノスケールでドープ量や、バンドギャップを変調させることにより実現されており、実空間でこれらのバンド構造を調べることは非常に重要である。私はこれまで、STM探針直下に光照射することにより誘起される表面光起電力を測定することにより、半導体のバンド構造をナノスケールで測定する手法「光変調トンネル分光法」の開発を行ってきた。この手法を実際のデバイス評価技術へと応用していくには、デバイスにおける多層構造などの界面をSTM観測する必要があり、これを実現するために、半導体へき界面をSTM観察する手法である"断面STM"の開発を行った。そして光変調トンネル分光法と組み合わせてLEDとして用いられるGaAlAs-pn接合エピタキシャルウェハーを試料として実験を行った。結果、断面STMを用いることで、pn接合界面のSTM観察に成功し、さらに光変調トンネル分光法を適用することにより、界面における静電ポテンシャル分布をナノスケールの分解能で画像化することに成功した。このように同手法は、非常に高い空間分解能を持つことから、より微細で複雑な構造を持つナノデバイス評価技術として有望であることが示唆される。

本研究ではこれまで、STM探針直下に光照射することにより誘起される表面光起電力を測定することにより、半導体のバンド構造をナノスケールで測定する手法「光変調トンネル分光法」の開発を行ってきた。本年度は、本手法を用いて半導体デバイスの基本、且つ最も重要な構成要素であるp-n接合を有するGaAs試料を対象に実験を行った。p-n接合界面でのSPVの空間分布測定を行い、SPVのドープ量依存性が明らかにするとともに、その特性を利用してSPVから定量的なドーパント分布計測が可能であることが示された。さらに、p-n接合に順方向電圧を印加した際にp-n接合界面からp型、n型それぞれの中性領域へと注入される少数キャリアの空間分布を計測することに成功した。この結果から、本手法がデバイスの動作特性を実空間で解析する手法として非常に有効であることを明らかになった。さらに、p-n接合界面に光照射することにより誘起される界面での内蔵電位の減少を観測することに成功した。今後は、量子ドットや量子井戸などのナノ構造を有する半導体デバイスへの応用が可能になると考えられる。以上のように、本研究において開発した光変調トンネル分光法は半導体デバイスの様々な特性をナノスケールの空間分解能で評価することが可能であり、半導体デバイスのナノ計測手法として非常に有力であることが明らかになった。
トポロジーの異なる高分子鎖のからみ合い効果の研究

高分子集合体の物理的性質を支配している基本的な要因である鎖状分子のからみ合い効果を解明するために、1)分子量の異なる単分散直鎖ポリマーのブレンド、2)ブロックポリマーミセルをホモポリマーマトリックス中に分散した系、3)直鎖/星型鎖、4)高分子網目中のダングリング鎖、あるいは、5)網目中にトラップされた直鎖の系などを調製し、これらトポロジー的に異なる成分を含む高分子凝集系の示す緩和挙動を、粘弾性および誘電スペクトロスコピーの方法を用いて研究した。すなわち、成分の一方、例えば、1)では高分子量成分、3)では星型鎖成分、また、4)では取込まれた自由鎖をプローブ鎖と見なし、その緩和時間と分布が、もう一方の成分の分子量、および、系の組成等にどのようにして依存しているかを観測し、その結果を解析・評価した。プローブ鎖の緩和挙動は、プローブ鎖自身の運動の特性時間とプローブ鎖をからみ合いによって拘束している周囲の鎖の運動の特性時間の大小関係によって決まる。このような実験によって、通常の条件ではあらわに見ることの出来ないプローブ鎖の緩和の素過程-からみ合いの分子論の1つである管模型の言葉で言うと、reptation,tube renewal,path breathingなどのモード-に分離出来、このような種々の素過程がどのような条件下で発現するかが分かる。従って、プローブ鎖の緩和過程が周囲からの拘束の度合にどのように依存しているかを分子論的な立場から解釈することが出来、高分子凝集系における高分子鎖のダイナミックスの基本問題である"からみ合い効果"に関する知見を得ることが出来た。これらの知見は、応用面では、高分子材料の設計、成型・加工の問題、例えば、ゴムラテックスを他のポリマー中に分散して作るインパクトプラスチックスの相構造の設計、ポリエチレンのような分岐を持つ高分子材料の成型・加工性を記述するモデル系として重要な知見を与えるであろう。
多様な公演分野別集計を可能にする日本の商業演劇公演データベースの整備

・「日本の商業演劇」全体を研究対象とする、としながらも、事実上東京圏で上演される芸能分野に絞られていたこれまでの研究枠を脱し、大阪の「新喜劇」の公演実績データ集計に着手した。新喜劇には松竹新喜劇と吉本新喜劇があるが、平成30年度はまず、今日も大盛況を誇る吉本新喜劇の公演を取り上げることとし、吉本新喜劇オフィシャルサイト掲載の過去の公演記録をデータ化して、座長別公演数や座組傾向の違いを集計した。・新橋演舞場および明治座は、これまでに上演データ集計を行ってきた歌舞伎、新派、新国劇等の上演会場として盛んに利用されてきた。これらの各分野の隆盛と、各劇場での上演頻度の上昇には関連があると考え、この2劇場の過去の上演記録をデータ化し、劇場創設期からの分野別上演比率の推移を調べた。この集計結果には、時代ごとの各劇場の「人気分野」の移行がよく表されており、特に新橋演舞場における松竹新喜劇公演の存在の重要性が明示できた。・「演劇年鑑」のデータベース化作業の予備調査として、1960年以降分について、公演分野別上演回数の推移に関するデータの掲載内容確認を行った。結果的には、時系列データと思しき表は掲載されているものの、用語の定義が未掲載な上に途中年次で一部項目の掲載が終了する、という非常に心許ない状況であり、計画的・体系的な上演記録整備の必要性を痛感した。併せて、演劇以外の分野(バレエなど)の公演データ整備状況をヒアリングした。・「長期データの通覧から時代変化を俯瞰する」という研究の有用性を示す附属研究として、NHKの過去の番組データを用いて大向こうの量的変遷を調査した論文と、大量データを用いた演劇鑑賞者の属性分析をまとめた論文を発表した。「伝統芸能」としての側面を持つと思われるため、長年データ整備の必要性を感じ続けていた新喜劇の研究に着手でき、実際にその研究成果を出すことが出来た。また、過去の落語のデータ整備における体験と同様に、まさに自身がデータ整備を始めたタイミングで劇的な世代交代が起き(吉本新喜劇は2月に新座長体制への移行を発表)、自らが作成した上演データを用いて世代交代の効果を検証できる、という好機にも恵まれている。・吉本新喜劇のデータ集計を行ったことで、吉本新喜劇の座組と、東京の寄席定席興行の顔付けの「固定度」の比較という新たな研究視角を得たので、このテーマでの研究報告を行う。・上演データベースの作成状況に関するヒアリングから上演データ整備の現状を知り、このテーマの専門的研究の必要性を痛感した。各分野の最先端の情報収集を行うため、データ・アーカイブに関する学会にも積極的に参加する。・令和元年度から、ヨーロッパのオペラ上演データベースの作成に関する科研費研究に分担者として参加することが決まったため、自身の「日本の演劇上演データベース作成」という研究の枠組みをさらに発展させる。本研究の基礎データとして継続的に必要となる、これまでに作成した伝統芸能興行データの整備・拡充(集計用プログラムの改修も含む)を図りつつ、日本の戦後演劇史に関する資料等を熟読して、新たに整備対象とする公演分野の選定を行った。具体的には、研究対象を「日本の」商業演劇としたことに留意し、これまで積極的に調査を行っていなかった関西の芸能について、「上方演芸資料館」等に赴いて情報収集を行った。そしてまず、先年創業100年を迎え、平成29年にはテレビドラマにも取り上げられていた吉本興業の主催する「吉本新喜劇」について考察を行うこととし、資料収集を開始した。また、日生劇場や明治座など、データ整備対象とする計画のある歴史の長い劇場について、公式な劇場史もしくは上演史の公開状況や、電子データ化の状況を確認した。全体的な印象としては、ある程度まで電子化されており、ファイル構成を読み取りやすくするのみですぐに集計に使えそうな公開データのある劇場と、一連の文章の中から必要なデータ内容を拾い出さなければならない劇場に分かれるようである。また、研究成果の広報として、所属先発行の月刊誌「ESTRELA」に隔月連載で研究紹介の記事を執筆するとともに、平成29年6月号では特集テーマを「上演データベース利用の現状と展望」とし、本研究に関係する専門家から歌舞伎やオペラの上演データベースに関する記事を寄稿頂いて、広大な利用可能性を秘めた長期上演データベースの整備の必要性を訴えた。新しい分野への調査・研究の拡張と、既存の整備済みデータのより高度な分析、およびそれらの成果を相互比較しながらの今後の研究計画策定等が並行して進められており、順調と言える。

・「演劇年鑑」のデータベース化作業の予備調査として、1960年以降分について、公演分野別上演回数の推移に関するデータの掲載内容確認を行った。結果的には、時系列データと思しき表は掲載されているものの、用語の定義が未掲載な上に途中年次で一部項目の掲載が終了する、という非常に心許ない状況であり、計画的・体系的な上演記録整備の必要性を痛感した。併せて、演劇以外の分野(バレエなど)の公演データ整備状況をヒアリングした。・「長期データの通覧から時代変化を俯瞰する」という研究の有用性を示す附属研究として、NHKの過去の番組データを用いて大向こうの量的変遷を調査した論文と、大量データを用いた演劇鑑賞者の属性分析をまとめた論文を発表した。「伝統芸能」としての側面を持つと思われるため、長年データ整備の必要性を感じ続けていた新喜劇の研究に着手でき、実際にその研究成果を出すことが出来た。また、過去の落語のデータ整備における体験と同様に、まさに自身がデータ整備を始めたタイミングで劇的な世代交代が起き(吉本新喜劇は2月に新座長体制への移行を発表)、自らが作成した上演データを用いて世代交代の効果を検証できる、という好機にも恵まれている。引き続き、公演データの探索、電子データ化、そして集積されたデータの分析を行う。また本研究は、現在筆者が参加している、日本芸能実演家団体協議会における長期公演データ整備に関する研究や、早稲田大学オペラ研究所における、ヨーロッパでのオペラ上演データベース整備WGでの研究内容と非常に関連が深いので、これらの研究会での研究成果も活用しながら、利用しやすいデータベースの作成を目指す。・吉本新喜劇のデータ集計を行ったことで、吉本新喜劇の座組と、東京の寄席定席興行の顔付けの「固定度」の比較という新たな研究視角を得たので、このテーマでの研究報告を行う。・上演データベースの作成状況に関するヒアリングから上演データ整備の現状を知り、このテーマの専門的研究の必要性を痛感した。各分野の最先端の情報収集を行うため、データ・アーカイブに関する学会にも積極的に参加する。・令和元年度から、ヨーロッパのオペラ上演データベースの作成に関する科研費研究に分担者として参加することが決まったため、自身の「日本の演劇上演データベース作成」という研究の枠組みをさらに発展させる。これまでのデータ整備経過報告と課題提言を兼ねた研究会を行う計画であったものが、未開催に終わったため。現在、ゲストスピーカー候補の研究者に打診を行っており、平成30年度中の開催を計画している。前年からの繰越額とほぼ同額であり、前年同様、研究会の開催経費として想定した分の未執行による繰越発生である。平成30年度は年度末に研究論文執筆が2本重なり、研究会開催準備に時間を割くことができないまま終わってしまった。令和元年度は計画的な予算執行を図りたい。月刊誌「ESTRELA」(統計情報研究開発センター発行)にて「伝統芸能興行データ集計・その一里塚」を連載(各回4ページ)平成29年度5月号「国立劇場作成データを用いた『忠臣蔵』上演回数集計ー文楽編ー」、7月号「歌舞伎俳優の『初舞台』に関する集計」、9月号「寄席定席興行での出演位置」、10月号「『落語家データベース』の集計」、平成30年3月号「昭和期入門の落語家の下積み時代」
ジーンターゲティングによるヒト発癌機構の解析

我々は、世界に先駆けて、Cre組換え酵素遺伝子を発現する組換えアデノウイルスを用いた、新たなコンディショナル・ジーンターゲティング法を開発し、これを用いることによりAPC遺伝子の不活化が(1)マウスの胆道上皮を癌化させること、及び(2)マウスの膵臓上皮を癌化させるには、さらにp53遺伝子が不活化されている必要があることを明かにした。この膵癌ではβカテニンが細胞質及び核内に貯留しており、APC遺伝子の不活化がWNTシグナルの活性化を介して細胞を癌化させたことが示唆されたが、このβカテニンの貯留の頻度及び程度は、p53変異の有無との関係は認められず、p53遺伝子変異はWNTシグナルが活性された細胞が増殖を始めるために必要であると推察された。一方、我々はマウスの発生における特定の細胞系列でのみCreを発現するトランスジェニックマウスを作成し、これをコンディショナルノックアウトマウスと交配させることにより、マウスの個体の発生におけるAPC遺伝子の機能の解析を行っている。本年度は、ケラチン14遺伝子のプロモーターを用い、表皮の基底細胞特異的にCreを発現するマウスを樹立し、これを交配することにより表皮でのみAPC遺伝子が不活化されているマウスを作成した。この結果、表皮でもβカテニンの貯留が観察され、このWNTシグナルの活性化された基底細胞では細胞増殖の刺激も観察されたが、同時に著明なアポトーシスが観察された。近年の分子遺伝学の急速な発展により、ヒト癌の発生に関与すると考えられる遺伝子が次々と単離されている。こうした各種がん抑制遺伝子の欠失と発癌機構との関係は、生体内の癌の発生母地となる組織において解析することが理想的である。我々は、APC遺伝子及びp53遺伝子のダブル変異マウスを作成し、その大腸上皮を詳細に解析することにより、大腸腺腫形成過程の初期病変である単一腺管腺腫の高頻度の発生が明らかになった。この腺腫ではβカテニンの発現が増強しており、APC遺伝子産物の欠損による上皮細胞の腫瘍化の機構にβカテニンが関与している可能性が示唆された。さらに我々は、大腸上皮特異的なAPC遺伝子のターゲティングに成功した。1対のLoxP配列がAPC遺伝子内に組み込まれた変異マウスとCre組換え酵素を発現する組み換えアデノウイルスを用いるこの系では、ウイルス感染後約4週で高頻度に大腸腺腫の形成が観察され、腺腫形成過程の全てを短時間で再現できる理想的なシステムが確立された。又、本年度我々はVHL(von Hippel Lindau)遺伝子及びMLH1遺伝子のターゲティングに成功した。VHL遺伝子ホモ変異マウスでは、心臓の発生過程で心筋層の菲薄化が顕著であり、ホモ変異体の胎児は全て胎生13.5日までに死亡した。一方、これによりVHL遺伝子が胎児の発生に必須であることが明らかとなった。MLH1遺伝子ホモ変異マウスは正常に発生したが、雌雄ともに減数分裂時の遺伝的組み換えの異常のために不妊となることが明らかとなった。これによりミスマッチ修復機構が遺伝的組み換えに必須であることが明らかとなった。これらの新たに作成された変異マウスはVHL病や非腺腫性家族性大腸癌のモデルマウスとなることが期待される。近年の分子遺伝学の急速な進歩により、ヒト癌の発生に関与すると考えられる遺伝子が次々と単離されている。こうした各種がん抑制遺伝子の機能の欠失と発癌機構との関係は、がんの発生母地となる生体内の組織において解析することが理想点である。このため、我々は本研究において、コンディショナルジーンターゲティング法を確立し、これをがん抑制遺伝子に応用することにより、ヒト発癌過程をマウス生体内で再現し、詳細な解析を行うことを目的としている.我々は昨年度までに、Cre組換え酵素を発現する組換えアデノウイルスを作製し、これをやはり我々が樹立したAPC遺伝子のコンディショナル・ノックアウトマウスに感染させることにより、大腸腺腫を発生させることに成功した。本年度は、この腺腫の長期観察を行い、この腺腫が腺癌へと進展することを確認した。又、同時にこのコンディショナル・ノックアウトマウスの胆・肝・膵領域の各種上皮細胞において、Cre遺伝子を発現させてAPC遺伝子に変異を導入したところ、殆どのマウスで胆管上皮由来の癌の発生が確認された.次に、さらにp53遺伝子を欠損させたマウスで同様にAPC遺伝子を欠損させたところ、膵癌多発が観察された。しかし、いづれの場合も、胆細胞癌の発生は観察されなかった。これらの事実は、上皮細胞の種類によって、APC遺伝子機能の欠失による細胞増殖刺激に対する感受性が大きく異なることを示唆しており、興味深い。本年度、我々はさらにがん抑制遺伝子であるTsc2遺伝子、Patched遺伝子、β-カテニン遺伝子等のコンディショナル・ノックアウトマウスを樹立することに成功しており、現在これらのマウスにおける発癌の誘導を試みている。本研究で、我々は、家族性大腸腺腫症(FAP)の原因遺伝子であるAPC遺伝子のコンディショナル・ノックアウトマウス(以下Apc580Sマウス)を樹立した。

これによりマウスの各種上皮において、APC遺伝子の機能とその発癌への関与を詳細に解析することが可能となった。その結果、APC遺伝子が胆道系(胆のう・胆管)や膵臓の上皮細胞の増殖制御に関わっていることが明らかとなった。ただし、APC遺伝子の不活性化は胆道系の上皮の癌化を引き起こすのに対し、膵臓上皮の癌化にはAPC遺伝子の不活化のみでは十分でないことが判明した。また、マウス及びヒトの神経系においてAPC遺伝子の高い発現が見られることは良く知られているが、その機能は全く不明であった。本年度、我々は神経系の各種細胞特異的にCre組換え酵素を発現するトランスジェニックマウスを樹立し、これをApc580Sマウスと交配することにより、嗅神経及び小脳プルキンエ細胞といった神経細胞の発生にはAPC遺伝子は必須ではないのに対し、神経堤細胞の発生においてはAPC遺伝子が必須の役割を果たしていることが明らかとなった。さらに本年度我々はβカテニンの活性化による発癌を直接的に証明することを目的として、マウスの各種細胞において誘導性に活性化型の変異βカテニン蛋白を発現させることの出来るトランスジェニックマウスの樹立に成功した。一方、APCの不活化による発癌機構におけるβカテニン分子の重要性を検証するために、βカテニン遺伝子のコンディショナル・ノックアウトマウスの樹立にも成功した。我々は、世界に先駆けて、Cre組換え酵素遺伝子を発現する組換えアデノウイルスを用いた、新たなコンディショナル・ジーンターゲティング法を開発し、これを用いることによりAPC遺伝子の不活化が(1)マウスの胆道上皮を癌化させること、及び(2)マウスの膵臓上皮を癌化させるには、さらにp53遺伝子が不活化されている必要があることを明かにした。この膵癌ではβカテニンが細胞質及び核内に貯留しており、APC遺伝子の不活化がWNTシグナルの活性化を介して細胞を癌化させたことが示唆されたが、このβカテニンの貯留の頻度及び程度は、p53変異の有無との関係は認められず、p53遺伝子変異はWNTシグナルが活性された細胞が増殖を始めるために必要であると推察された。一方、我々はマウスの発生における特定の細胞系列でのみCreを発現するトランスジェニックマウスを作成し、これをコンディショナルノックアウトマウスと交配させることにより、マウスの個体の発生におけるAPC遺伝子の機能の解析を行っている。本年度は、ケラチン14遺伝子のプロモーターを用い、表皮の基底細胞特異的にCreを発現するマウスを樹立し、これを交配することにより表皮でのみAPC遺伝子が不活化されているマウスを作成した。この結果、表皮でもβカテニンの貯留が観察され、このWNTシグナルの活性化された基底細胞では細胞増殖の刺激も観察されたが、同時に著明なアポトーシスが観察された。
血管構築弾性素材の自己集合組織化と弾性機能:正常および老化モデルによる解析

血管の主要な構築素材であるエラスチンの弾性発現の分子機造は、細胞外空間での分子内及び分子間疎水的相互作用に基づく自己集合によって形成され、その自己集合過程は逆温度依存性コアセルベーションとして試験管内で再現可能である。正常エラスチンを模したモデルペプチド[エラスチンの弾性発現を担うポリペンタペプチド(Gly-Val-Gly-Val-Pro)n (以下正常モデルペプチド)]のコアセルベーション曲線はpHの影響を受けないのに対して、NaCl溶液中ではコセルベーション開始温度が低温側に移行した。この塩効果は正常モデルペプチド架橋重合体の弾性変化とも対応し、弾性はNaCl溶液中では発現するが、純水中では消失することが示された。一方老化エラスチンを模したモデルペプチド[上記のポリペンタペプチドにGlu又はLysを約4%導入したポリペプチド(以下老化モデルペプチド)]は酸性側、塩基性側の等電点でコセルベーション開始温度が低温側に移行し、その架橋重合体の弾性も酸性側、塩基性側の等電点で発現され、生理的pHでは低下することが示され、老化に伴う自己集合及び弾性の異常性が示唆された。正常モデルペプチドの石灰化能について検討すると、このモデルペプチドは石灰化を受け易いペプチド配列であり、そして石灰化を受けると弾性を失うことが示された。このモデルペプチド上の石灰化部位を^<13>C-NMRを用いて調べると、Ca^<2+>はペプチド骨格カルボニル-CONH-酸素に結合するとが明らかになった。さらに正常モデルペプチド及び老化モデルペプチドと酸化LDL(老化の要因である過酸化脂質を多量に含む)との結合を検討すると、正常よりも老化のモデルペプチドに多量に結合することが示された。