hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ラット脳出血モデルにおける運動プレコンディショングの効果とその解析に関する研究

脳出血のリスクファクターである高血圧症の予防・治療における運動プレコンディショニングの概念のもと運動療法がよく行われている。それに基づき脳内出血前の運動(プレコンディショニング)は、脳血管障害を軽減させるかをラットを用いて検証した。青年期及び老齢期のラットにおいても脳神経細胞の損傷は軽減された。しかしながらその仕組みや詳細は明らかにならなかった。現在の医療現場では、疾病予防・健康増進も推進され、脳出血のリスクファクターである高血圧症の予防・治療で、運動療法がよく用いられ、運動による高血圧の予防は、脳出血の予防や脳出血発症程度の軽減の可能性があり、そのうえ最近では運動プレコンディショングという概念もあり、抗酸化作用が疾患耐性を有する可能性がある。よって二次的損傷の要因である酸化的障害の抑制のために抗酸化能力の向上が出来れば、脳神経細胞の損傷が軽減され、機能回復期間も短縮されることは想像できる。本研究では、我々の先行研究にもとに、ラットを用いて発症後ではなく発症前に運動プレコンディショングとして軽運動を行い、運動プレコンディショングの状態をつくり、脳神経系に与える影響について組織学的・行動学的に検討し、脳出血への耐性が明らかになれば、臨床現場において疾病予防として大きな意味を持つのではないかと考えている。そこで、今年度も運動プレコンディショングの状態の検討及び運動後の脳神経細胞への影響の解析,ラットの日常における行動量について測定・解析を行った。運動プレコンディショングの状態把握は非常に重要なので、研究初年度に引き続きその確立を目指した。昨年度同様の条件で8週齢の若年ラットを運動群(トレッドミル軽運動)、非運動群の2群に分け、平常時のラットの活動期行動量を用いて測定した。それをもとに運動前(1週間)、運動中(3週間)、運動後(1週間)の2群間で比較検討した。運動群のみ運動中に行動量が若干増加傾向だったが、有意な差は見られなかった。48週齢の老齢ラットでも昨年度同様に行ったが2群間に有意な差は見られず、逆に運動群のみ運動中に行動量が若干減少傾向も同様だった。脳神経細胞の組織学的変化は若干見られたが変化には乏しかった。以上によりプレコンディショニングの再検討及び組織学の再検討が必要であることがわかった。現在の医療現場では、疾病予防・健康増進も推進され、脳出血のリスクファクターである高血圧症の予防・治療で、運動療法がよく用いられている。運動による高血圧の予防は、脳出血の予防もしくは脳出血発症程度の軽減の可能性があり、そのうえ最近では運動プレコンディショングという概念もあり、抗酸化作用が疾患耐性を有する可能性がある。本研究では、我々の先行研究にもとに、ラットを用いて発症後ではなく発症前に運動プレコンディショングとして軽運動を行い、運動プレコンディショングの状態をつくり、脳神経系に与える影響について組織学的・生理学的・行動学的に検討し、脳出血への耐性が明らかになれば、臨床現場において疾病予防として大きな意味を持つのではないかと考えている。そこで、今年度は運動プレコンディショングの状態の検討及び運動後の脳神経細胞への影響の解析,通常ラットの日常における行動量の測定項目について測定・解析を行った。運動プレコンディショングの状態把握は非常に重要な位置を占めるので、研究初年度で行いその確立を目指した。8週齢の若年ラットを運動群(トレッドミル軽運動)、非運動群の2群に分け、平常時のラットの活動期行動量を用いて測定した。48週齢の老齢ラットでも同様に行ったが2群間に有意な差は見られず、逆に運動群のみ運動中に行動量が若干減少傾向であった。脳神経においても組織学的に変化は見られなかった。以上によりプレコンディショニングの再検討が必要であることがわかった。

それをもとに運動前(1週間)、運動中(3週間)、運動後(1週間)の2群間で比較検討した。運動群のみ運動中に行動量が若干増加傾向だったが、有意な差は見られなかった。48週齢の老齢ラットでも同様に行ったが2群間に有意な差は見られず、逆に運動群のみ運動中に行動量が若干減少傾向であった。脳神経においても組織学的に変化は見られなかった。以上によりプレコンディショニングの再検討が必要であることがわかった。現在の医療現場では、疾病予防・健康増進も推進され、脳出血のリスクファクターである高血圧症予防・治療で、運動療法が用いられ、運動による高血圧の予防は、脳出血の予防や脳出血発症程度の軽減の可能性がある。最近では運動プレコンディショニングという概念もあり、抗酸化作用が疾患耐性を有する可能性がり、二次的損傷の要因である酸化的障害の抑制のための抗酸化能力の向上すれば、脳神経細胞の損傷が軽減され、機能回復期間も短縮されることは想像できる。本研究では、我々の先行研究をもとに、ラットを用いて発症前に運動プレコンディショニングとして軽運動を行い、その状態をつくり、脳神経細胞に与える影響を組織学的・行動学的に検討し、脳出血の耐性が明確になれば、臨床現場において疾病予防として大きな意味を持つと考えている。今年度は昨年度同様に運動プレコンディショニングの状態の検討及び運動後の脳神経細胞の解析、ラットの日常時および運動時の行動量の測定・解析を行った。運動プレコンディショニングの状態把握は非常に重要な位置を占めるので、研究初年度でその確立をした。8週齢の若年ラットを運動群(トレッドミル軽運動)、非運動群の2群に分け、平常時のラットの活動量を測定した。それを基準に、運動前(1週間)、運動中(3週間)、運動後(1週間)の2群間で比較検討した。運動群のみ運動中に行動量が増加傾向であったが、有意な差は認められなかった。48週齢の老齢ラットにおいても2群間には差は見られず、逆に運動群にのみ運動中に行動量が減少傾向を示し、予想とは違った結果になった。脳神経細胞においての組織学検討でも同様であった。以上により、運動プレコンディショニングの効果が明確に出ず、脳出血の予防・脳出血発症程度の軽減に繋がる結果が得られなかった。そのため今後も運動プレコンディショニングの方法を含めた再検討が必要であることが分かった。脳出血のリスクファクターである高血圧症の予防・治療における運動プレコンディショニングの概念のもと運動療法がよく行われている。それに基づき脳内出血前の運動(プレコンディショニング)は、脳血管障害を軽減させるかをラットを用いて検証した。青年期及び老齢期のラットにおいても脳神経細胞の損傷は軽減された。しかしながらその仕組みや詳細は明らかにならなかった。昨年度の計画を通り、軽運動下における運動プレコンディショニングに焦点を当て、検討及び解析することとした。このプレコンディショニング検討の段階では、我々の先攻研究において軽運動下では脳神経細胞においてはあまり変化が見られないことから判断し、脳神経細胞の解析よりは、行動量を重視した。
逆相ガスクロマトグラフィーによる高分子ブレンドおよび高分子表面の研究

各種高分子の相互作用測定に対するIGCの適用性を温度範囲80200°Cにわたって調べるために,ゴム状高分子(I)(EPR,NBR),熱可塑性高分子(II)(PMMA),結晶性高分子(III)(PVDF)を取り上げ,各々に対してほぼ共通の溶媒七種を用いて,これらとの相互作用をまず調べた。PMMAとPVDFは相溶性ブレンドを形成するために用いた。各温度で溶媒の比保持容量Vg^0にカラム中の高分子の量比の影響を調べるため,34種の量比について得られたIn Vg^01/Wプロットを行った。EPR,NBRともほとんどの溶媒でその勾配に規則性は無いが直線プロットで得られた。一般的に180200°Cの高温データには,「荒れ」が目立ち直線外挿が困難であった。各温度での得られたIn Vg^0(補正後)corr.1/Wプロットを作ると大部分の溶媒で良好な直線関係が得られた。各溶媒のInVg^0corr.値はデカンとペンタンの間に位置した。PMMAのInVg^01/Tプロットの特徴は,120160°Cに反転の見られることであった。これは,PMMAのTgの高分子鎖運動の凍結解除の温度に一致する。したがってPMMAの場合,In Vg^01/Wプロットから,(I)と同様な方法でInVg^0corr.を求めようとしても,この領域ではその外挿は不正確なものとなった。反転領域外では,InVg^0corr.(I)と同様に求めることができた。PVDFでもInVg^01/Tプロットは,140180°Cに反転がみられる。これは結晶の融解に相当する。この領域外では,InVg^01/Tプロットは(I)と同様であり,各温度に相当するInVg^0corr.を求めることができた。得られたVg^0corr.を用いて,高分子/溶媒間相互作用係数X_<12>,無限希釈時の活量係数Ω^∞_1を求めた。この様に平成4年度までに単一ポリマー/溶媒系の相互作用をIGCで求める方法が確立されたと考える。今後当初目的としたポリマー1/ポリマー2系の相互作用をIGCで求める研究に入る予定である。本研究の第一目的を達成する為の第一関門は、逆相ガスクロマトグラフィ-(IGC)で正確に高分子/高分子あるいは高分子/溶媒間の相互作用係数Xパラメ-タが求められるかどうかである。この関門に対して文献的に確度の高いAlーSaighらの研究(Macromolecules,22,2974(1981))を参考にして、ポリフッ化ビニリデン(PVdF)に対して、アセトン,トルエン,ベンゼン,DMFの四種の溶媒を使用し、温度80°C220°C間を20°C間隔に分割して各温度で得られる比保持容量Vg^0を求めた。この際PVaF充填カラムは、PVaFの充填剤に対する塗布量を3,6,12重量%のものをそれぞれ使用した。

それぞれのカラムから得られたVg^0を比較してみたところ,例えばアセトン120°Cで6%と12%のカラムではVg^0に21%の相違がみられた。したがってこのVg^0から計算して求めたX値には50%の相違があらわれることがわかった。このことは正確なX値を求めるためには先ず塗布量の補正を行なう必要があることを示していることになる。さらにキャリヤ-ガス流速,試料注入量,担体等のVg^0に対する影響的因子も大さく,正確なXを求めるには、すべてこれらの影響的因子が零になったVg^0を求める必要があることがわかった。この様なVg^0に対する影響的因子を調べているなかで手間取ったことの一つに,影響因子の傾向が必ずしも文献に報告されている結果がなく、逆の効果になるすなわち個々の使用機器特性に依存する項目があることも実験によって始めてわかった。次に上記したことからわかる様に、Vg^0を正確に求めようとすれば、実験手法的にかなり面倒である。このためデ-タのパソコン処理をめざしたが、残念ながら、これは完成したとはいえない。今後まずこの点に集中して第一関門を通過したい予定である。ガスクロマトグラフィ-とイウ動的手法から熱力学的諸量を求めるためには上記諸補正は必然的に必要なことと考えるに到った。各種高分子の相互作用測定に対するIGCの適用性を温度範囲80200°Cにわたって調べるために,ゴム状高分子(I)(EPR,NBR),熱可塑性高分子(II)(PMMA),結晶性高分子(III)(PVDF)を取り上げ,各々に対してほぼ共通の溶媒七種を用いて,これらとの相互作用をまず調べた。PMMAとPVDFは相溶性ブレンドを形成するために用いた。各温度での溶媒の比保持容量Vg^0にカラム中の高分子の量比の影響を調べるため,34種の量比について得られたIn Vg^01/Wプロットを行った。EPR,NBRともほとんどの溶媒でその勾配に規則性は無いが直線プロットで得られた。一般的に180200°Cの高温データには、「荒れ」が目立ち直線外挿が困難であった。各温度での得られたIn Vg^0(補正後)corr,1/Wプロットを作ると大部分の溶媒で良好な直線関係が得られた。各溶媒のInVg^0corr.値はデカンとペンタンの間に位置した。PMMAのInVg^01/Tプロットの特徴は,120160°Cに反転の見られることであった。これは,PMMAのTgの高分子銷運動の凍結解除の温度に一致する。したがってPMMAの場合,In Vg^01/Wプロットから,(I)と同様な方法でInVg^0corr.を求めようとしても,この領域ではその外挿は不正確なものとなった。反転領域外では,InVg^0corr.(I)と同様に求めることができた。PVDFでもInVg^01/Tプロットは,140180°Cに反転がみられる。これは結晶の融解に相当する。この領域外では,InVg^01/Tプロットは(I)と同様であり,各温度に相当するInVg^0corr.を求めることができた。得られたVg^0corr.を用いて,高分子/溶媒間相互作用係数χ^<12>,無限希釈時の活量係数Ω^∞_1を求めた。この様に平成4年度までに単一ポリマー/溶媒系の相互作用をIGCで求める方法が確立されたと考える。今後当初目的としたポリマー1/ポリマー2系の相互作用をIGCを求める研究に入る予定である。
日本人英語学習者における英語形態素処理に関する脳内メカニズム：事象関連電位研究

本研究では、日本人英語学習者における三人称単数現在-sと過去形-edの英語形態素処理に関する脳内メカニズムを、英語接触開始年齢、英語習熟度、そして、英語と日本語の言語学的相違点・類似点という観点から、事象関連電位を用いて検証した。研究の結果、日本人英語学習者は、英語習熟度が高まれば、英語学習開始年齢とは関係なく、英語形態素処理ができ、そして、その処理は、英語と日本語の言語学的相違点による影響を受けるこが明らかになった。さらに、第二言語処理のある条件下において、作業記憶負荷と関わりがある認知作用が優位に働くことがあり、それは英語接触開始年齢の影響を受けることが示唆された。本研究は、日本人英語学習者にとって習得が難しいと言われている英語の三人称単数現在(三単現-s)と過去形-edの処理に関する脳内メカニズムを、1)英語接触開始年齢、2)英語習熟度、3)英語と日本語の言語学的相違点・類似点という三要因の観点から、事象関連電位(ERPs)を用いて解明することを目的とする。更に、日本における英語教育への脳科学データの応用へと展開するための研究基盤を確立する。平成25年度は、基礎研究として、脳波解析ツール(EEGLAB/MATLAB)操作スキルの習得と新解析方法の開発、その後、日本人英語学習者における、三単現-sと過去形-edの処理に関する脳内メカニズムの解明を研究実施計画とした。今年度は、解析ツールのスキルを習得し、一方で、これまで分析・検証してきたことを国際ジャーナル(Second Language Research)に投稿した。現在は、脳波データの解析方法の開発を進めており、各種データの再解析を行っている。また、投稿論文に対して、査読者から多角的なコメントが寄せられたため、更にデータを検証して再投稿の準備を進めている。今後は、データをより詳細に解析するための最適な脳波解析方法を開発し、日本人英語学習者における、英語形態素処理に関する脳内メカニズムのモデル構築を予定である。今後、さらに詳細な解析を行うことにより、日本人英語学習者と英語母語話者との質的・量的な英語形態素処理の違い、更にその違いを生じさせる要因を脳生理学的に解明することが可能となり、日本における英語教育への応用に寄与できるものと考える。最終年度は、前年度の続きとして基礎研究を完成させ、その後、応用研究として、日本人英語学習者における英語形態素処理に関する脳内メカニズムのモデム構築と、効果的な英語教育導入や英語学習法・英語指導方法への考察を研究実施計画とした。前年度にMATLABの講習・講義を受講する機会があまりなかったため、最終年度は、まずその機会を得て、脳波解析ツールの操作スキルを習得し、最適な脳波解析方法の開発に力を注いだ。また、前年度同様、国際ジャーナル(Second Language Research)に投稿するため、脳波データの解析方法の開発と各種データの再解析を行い、さらにデータを検証して再投稿の準備を進めた。また、応用研究の完成に向け、これまでの解析で得られた結果もとに、日本人英語学習者における、英語形態素処理に関する脳内メカニズムのモデルを構築した。そして、国内の様々な学会や講習会、セミナーに参加し、幅広い観点から、効果的な英語教育導入や英語学習法・英語指導方法へを考察する機会を得ることができた。今後、さらに幅広い観点から十分な考察を行うことにより、本研究の、日本における英語教育及びグローバル教育の教育システム構築への応用に寄与できるものと考える。第二言語処理研究本研究は、多チャンネル脳波(128電極)を用いて、約250名の成人を対象にERP実験を行ったが、この多チャンネル脳波を用いて大人数を対象とした第二言語(外国語)処理研究は、前例のきわめて少ない新規性が高い研究である。そのため、最適な脳波解析方法の開発に多くの時間を要する。今年度は、これまでの解析を踏まえつつ、予備的な解析を基に、日本人英語学習者における、英語形態素処理に関する脳内メカニズムを検討し、論文を投稿した。脳波解析ツールの操作スキルを更に習得し、最適な脳波解析方法の開発が必須である。この開発がクリアできれば、本研究の目的は達成できると考える。MATLABの講習・講義を受講する機会があまりなかったために国内旅費に、また、国際ジャーナルに投稿はしたものの、現段階ではまだ受理されていないために論文投稿関係費に、次年度使用額が生じた。
メチル基供与反応の促進がドーパミン神経伝達機能の及ぼす影響-抗うつ作用との関連-

強い抗うつ作用を有する内因性メチル基供与体であるS-adenosyl-L-methionine(SAM)の急性および慢性投与が、脳内ドーパミン(DA)神経機能に与える影響を、ラット線条体、前頭前野および側坐核においてin vivo dialysis法(HPLC-ECD)を用いて検討した。1)SAM(250,100mg/kg)の急性腹腔内投与後に、前頭前野において用量依存的にDOPAC、HVA濃度の増加およびDA濃度の減少が一過性にみられた。しかし、線条体と側坐核では急性投与によるDA代謝の有意な変化は認められなかった。この反応の違いは、SAMの基質であるCOM活性の部位間差に基づく可能性がある。2)SAM(250mg/kg)の14日間慢性腹腔内投与後に、透析液中の10^<-5>M apomorphineへの20分間の暴露によるDA自己受容体刺激を行なった。その結果、SAM慢性投与群では細胞外DA遊離の抑制率がvehicle投与対照群に比較して、3部位すべてにおいて有意に低下していた。これらの結果は、SAM慢性投与後にDA自己受容体の低感受性(もしくは機能低下)が生じていることを示している。一般に、DA遊離促進剤もしくは再取り込み阻害剤の慢性投与後に、DA自己受容体機能低下が生じることが知られており、逆耐性およびDA神経系の機能亢進の発現機序に関連するものと推定されている。SAM急性投与実験の結果から、SAMは細胞外DA濃度の変化をもたらすことなしに、同様な機能変化を引き起こすことが明らかになった。これらの所見は、SAMの抗うつ作用の発現機序に関連しているものと考えられる。
重力崩壊型超新星における高速自転および超強磁場の研究

今年度は昨年度に引き続き、主に軸対称2次元のMHDシミュレーションを用い、磁場と高速自転が超新星のダイナミクスに与える影響をいろいろな側面から研究した。主に澤井との共同研究では、高速自転と強磁場が組み合わさった場合のジェットの起こり方について調べた。その結果、ポロイダル磁場を内部コアと外部コアの境界付近で生じる差動回転により巻き込み、物質の圧力に匹敵するストレスを生み出すようなトロイダル磁場が生じることがジェットを引き起こす主因であることがわかった。また、この計算ではMRIによる磁場の増幅が見られなかったが、これは3次元計算を含む今後の研究の課題である。固武との研究では、パリティの破れによる、ニュートリノの北極と南極での違いに着目をした。これは、若いパルサーに見られる高速固有運動の起源として重要と考えられるが、数値モデルに基づく評価では、南北の非対称性は実際に起こるものの、固有速度を説明するには若干足らないことがわかった。また、重力波放出の評価も行ったが、磁場からの寄与はあまり大きくないことがわかった。以上とは全く異なるアプローチも行った。ニュートリノ加熱による衝撃波の復活に対する回転の役割を定性的に明らかにするべく、山崎と定常自転降着流解を数値的に求め、その安定性、臨界光度の変化を系統的に明らかにした。それによると、与えられた質量降着率に対して定常解が存在しなくなる臨界ニュートリノ光度が自転のあるときにも存在し、その値が自転のないときに比べ小さくなることがわかった。これは、自転が衝撃波の復活にとって有利であることを明確に示している。今後はこれを詳細なシミュレーションで確かめることが重要である。最近の理論的研究によれば、重力崩壊型超新星を球対称な爆発として起こすことは難しそうな情勢である。一方、観測も重力崩壊型超新星が一般的に非球対称あることを示唆しているようだ。こうした非球対称性を引き起こす原因として最も考えられるのは、星の高速自転である。また。星の磁場も重要になる場合があるかもしれない。こうしたことを受けて本研究では、(1)高速自転の遠心力により扁平になったコアから非球対称に放出されるニュートリノが爆発の成否に決定的に重要であるという仮説を確かめること、(2)磁場が崩壊と衝撃波のダイナミクスに与える影響の基礎的理解を得ることを目標としている。本年度はまず、(1)については現実的な状態方程式とIeakage schemeによるニュートリノ輸送を考慮した二次元の数値計算を行い、ニュートリノ放出の非球対称度と、それによる物質加熱の非球対称度を調べた。それによれば星の進化の理論が予言する程度のコアの自転があれば十分に大きな(数10%)ニュートリノ加熱の非対称性が生じうるとともに、ニュートリノの光度も球対称の場合と変わらないことがわかった。これは、上記シナリオにとって大変有望である。この結果は「ニュートリノと超新星」研究会で招待講演として報告し、現在論文としてまとめているところである。一方、(2)については状態方程式とニュートリノ輸送を現象論的な状態方程式で近似し、自転と磁場の強さの組み合わせを変えた10例程度のモデル計算を行い、非常に強い磁場のもとでは、回転軸方向へのジェット状の爆発が起こりることがわかった。この結果は、国際会議「Numrical Simulations in Astrophysics」において招待講演として、また「Texas Symposium」においてはポス夕ー発表として報告し、現在論文にまとめている。超新星爆発のメカニズムは、過去40年の研究にもかかわらず、いまだに明らかにされていない。最近の球対称シミュレーションの結果を見ると、球対称モデルによる爆発は非常に難しそうである。本研究では、超新星コアの自転と磁場の効果を考慮することにより、この困難を回避できないか探ることを目的としている。昨年度までに開発した軸対称2次元のMHDコードは、現実的な核物質の状態方程式と、近似的ではあるがニュートリノの輸送を取り込んだものになっており、本年度は主にこれを用い多くの数値実験を行い、結果を論文として発表してきた。まず、自転のみを考慮した計算では、自転の速さ、回転則、差動回転の強さをパラメターとしていろいろ変えながら、主にニュートリノがどのように球対称からずれるかを系統的に調べた。それによると、いずれの場合もニュートリノ球が回転で扁平になるため、ニュートリノが回転軸方向に出やすくなることがわかった。また、ニュートリノ球の上では軸に近い方の温度が高く、これら2つの効果によって回転軸付近でニュートリノ加熱が球対称よりも大きくなる可能性を示した。これは超新星爆発のメカニズムにとって非常に重要である可能性がある。一方、磁場を考慮した計算では、磁場の強さもパラメターに加え、磁場形状を一様で回転軸に平行なものとトロイダルなものを考慮して、広いパラメター領域にわたったシミュレーションを行なった。その結果、一様磁場に自転を加えると、回転軸方向にジェット的な衝撃波が伝わることがわかった。初期に強いトロイダル磁場を与えた場合も同じである。磁場はく通常の巻上げだけでなく、磁気回転不安定に起因すると見られる増幅も見出された。これらのことは、マグネター形成にとって重要なだけでなく、より小さな種磁場の増幅による超新星爆発の可能性も示唆しており、今後一層の研究が必要である。

その結果、ポロイダル磁場を内部コアと外部コアの境界付近で生じる差動回転により巻き込み、物質の圧力に匹敵するストレスを生み出すようなトロイダル磁場が生じることがジェットを引き起こす主因であることがわかった。また、この計算ではMRIによる磁場の増幅が見られなかったが、これは3次元計算を含む今後の研究の課題である。固武との研究では、パリティの破れによる、ニュートリノの北極と南極での違いに着目をした。これは、若いパルサーに見られる高速固有運動の起源として重要と考えられるが、数値モデルに基づく評価では、南北の非対称性は実際に起こるものの、固有速度を説明するには若干足らないことがわかった。また、重力波放出の評価も行ったが、磁場からの寄与はあまり大きくないことがわかった。以上とは全く異なるアプローチも行った。ニュートリノ加熱による衝撃波の復活に対する回転の役割を定性的に明らかにするべく、山崎と定常自転降着流解を数値的に求め、その安定性、臨界光度の変化を系統的に明らかにした。それによると、与えられた質量降着率に対して定常解が存在しなくなる臨界ニュートリノ光度が自転のあるときにも存在し、その値が自転のないときに比べ小さくなることがわかった。これは、自転が衝撃波の復活にとって有利であることを明確に示している。今後はこれを詳細なシミュレーションで確かめることが重要である。
エクソソームのがん細胞指向性解析に基づく高選択的薬物送達法の開発

申請者は、glioblastoma (U251)より分泌されるエクソソーム(U251exo)が正常細胞であるastrocyteによりも分泌元のがん細胞へ効率的に移行し、その現象がエクソソーム表面のタンパク質に依存したものではないことを前年度の研究において明らかにした。本年度では、U251exoにみられるがん細胞指向性の詳細なメカニズムの解明を目指した。また、本エクソソームの薬物送達能を評価するための、担がんモデルマウスの作製を行った。まず、アクチンの重合阻害剤であるcytochalasin DをU251に処置し、エクソソームの取り込みが変化するかどうかを検証した。薬物を前処置した細胞では、U251exoの取り込みが顕著に抑制されることが示された。このことから、U251exoの細胞内取り込みにおいて、エンドサイトーシスが主に関与していることが示唆された。次に、エクソソームおよびその分子構成を最適化したリポソームの薬物送達能を評価するために、分泌元細胞であるU251をBalb/cヌードマウスの皮下に移植したモデルの作製を行った。Balb/cヌードマウスにU251luc 50,000&#8211;10,000,000cellsを皮下投与し、腫瘍の生着および成長をin vivo imagingsystemにより経時的に評価した。その結果、移植から5日目の時点で強い発光が確認された。以上より、がん細胞指向性を示すエクソソームやそれを基に作製したリポソームの個体レベルでの有効性を評価するための系の確立に成功した。27年度が最終年度であるため、記入しない。申請者は、神経膠芽腫由来エクソソーム(U251exo)が正常細胞であるヒトアストロサイ(Ast)に比べて、由来がん細胞に効率よく導入されることをこれまでに示した。がん細胞由来エクソソームについては、受容細胞へ膜融合する際の分子メカニズムの詳細は不明であり、エクソソームのDDS医薬品応用に向けて、その細胞指向性および膜融合に寄与する因子を分子レベルで解明する必要がある。そこでまず、本現象がU251exo自身の性質によるものかどうか検証したところ、Ast由来エクソソーム(Astexo)の取り込みはがん/正常細胞共に僅かであった。つまり、U251exoのがん細胞指向性はがん細胞の非特異的な取り込みではなく、本エクソソームの特徴的な構成因子の認識によるものと考えられた。次にU251exoの指向性を生み出す因子を同定するため、酵素処理によりエクソソームの表面タンパク質リガンドを脱落させ取り込みの変化を評価したが、がん細胞への高い集積が依然観察され、表面タンパク質リガンドは本現象への寄与が低いことが示唆された。一方で、がん/正常細胞由来の細胞外ベシクルの脂質組成が各々異なることをこれまでの薄層クロマトグラフィーを用いた実験で示した。本結果の精査のため脂質分析の条件を種々検討し再試したところ、がん細胞由来の細胞外ベシクルでphosphatidylethanolamineの組成比が高く、sphingomyelinの割合が低いことがわかった。本成果は、U251exoの特徴的な脂質組成を利用し、簡便に調製可能ながん選択的ドラッグデリバリーシステムを開発する上で極めて重要な知見である。本成果の一部は、Biochemical and Biophysical Research Communications紙に受理掲載された。申請者が着目している“がん細胞由来エクソソームが由来がん細胞へ効率よく導入される"現象における、導入機序についてはこれまでほとんど検討がなされていないため、本指向性に関与する生体成分(タンパク質・糖質・脂質)を分子レベルで同定するには、系統的解析が必要であった。

解析の結果、主要生体分子のうち少なくとも表面タンパク質リガンドの寄与は低く、特徴的な脂質を有したエクソソームであることまでを明らかにした。以上の系統的検討結果は、Biochemical and Biophysical Research Communications誌に速報として掲載されており、当初計画をしのぐペースで解析研究が進展している。27年度が最終年度であるため、記入しない。エクソソーム表面の糖鎖に注目し、endoglycosidase処置などによりU251exoの糖タンパク質や糖脂質とがん細胞指向性との関連性について検証する。またU251exoのがん細胞指向性を規定する因子がその特徴的な脂質組成であるかを調べるために、本エクソソームの全脂質を抽出しそれらで再構成したリポソームを作製し、がん細胞への取り込みを評価する。作製したリポソームががん細胞選択的に取り込まれることが確認され次第、siRNAなどの各種薬剤を導入し、抗がん活性やがん細胞内への選択的な薬物送達能を株化細胞およびモデル動物を用いて評価し、作製したリポソームの薬物キャリアとしての有用性を確認する。リポソームのがん細胞選択性が乏しい場合、U251exoの表面膜電荷、膜流動性をゼータ電位、Laurdan試薬処置により求め、膜物性を評価し、得られた情報をリポソーム作製に反映する。
触媒的不斉1,3-双極性環状付加反応による光学活性多元素環状化合物の合成

DBFOX-Zn(OTf)_2あるいはDBFOX-Ni(ClO_4)_2錯体は、α-ブロモアクロレインやメタクロレインなどのα,β-不飽和アルデヒドとN-ベンジリデンアニリン-N-オキシドとの環状付加反応を効率的に触媒し、高立体選択性で環状付加体を与える事を見い出した。ある種の金属塩から誘導した錯体は反応溶媒であるジクロロメタンに著しく難溶であるにも拘わらず、高い触媒活性を示したことから、触媒の会合による活性低下を解決できれば、単座親1,3-双極子であるα,β-不飽和アルデヒドへのニトロン環状付加反応の優れたキラル触媒開発への手掛かりが得られると考え、以下の2つの方法を検証した。まず、DBFOX-Zn(OTf)_2錯体に種々のアルコール性の添加剤を加えて反応を行った。無添加時と比較して2mol%の触媒存在下において90%eeを越える高いエナンチオ選択性が観察された。一方、オキサゾリンの5位に4つのメチル基を導入したテトラメチルDBFOX/Ph配位子を用いると、室温下数分で錯体を形成して、均一な溶液を与えた。この錯体溶液を触媒として用いると、不飽和アルデヒドを用いるニトロン環状付加反応がスムーズに進行し、1mol%の亜鉛触媒存在下において95%eeの高いエナンチオ選択性を達成することができた。加えて、ほぼ完全なエンド選択性を示した。他の不飽和アルデヒド基質を用いたニトロン環状付加反応においても、DBFOX/Ph錯体を用いた反応と比較して、エナンチオ選択性とジアステレオ選択性が大幅に向上しただけでなく、触媒量の低減に成功することができた。強配位性の求核剤であるニトロンの触媒的不斉環状付加反応において、単座の反応基質である不飽和アルデヒドを用いて成功を収めたことにより、我々の開発したDBFOX/Ph錯体がこの種の反応における優れたキラル触媒として効果的に使えることを実証することができた。DBFOX-Zn(OTf)_2錯体触媒はジクロロメタンに不溶であるにも拘わらず、α-ブロモアクロレインとN-ベンジリデンアニリン-N-オキシドとの環状付加反応を効率的に触媒し、高立体選択性で環状付加体を与える(3h,85%,endo/exo=95/5;98% ee (endo))。従って、溶媒に僅かに溶けた錯体が反応を効果的に触媒していると考えられる。この顕著な不溶解性は、この錯体がジクロロメタン中で強く会合していることを示唆し、会合を解いて触媒を可溶化することができれば、著しく高い触媒活性が発現すると考えられる。そこで、(1)可溶化剤として各種アルコールを添加しての反応、(2)配位子の骨格中に会合を阻止する置換基を導入する、の2つを試みた。TM-DBFOX/PhとZn(OTf)2とから通常通りの方法で錯体を調製した。調製開始から30分経過後ほぼ均一の溶液が得られた。重クロロホルム中で調製した溶液の1H NMR測定では錯体の形成が確認されたが、長時間攪拌すると次第に懸濁していく。また、調製した錯体を単離した後、空気中でしばらく保存すると再びクロロホルムには溶解しなかったことから、この錯体は単離せずに系中で調製する必要があることが明らかとなった。系中で調製した錯体を使用してα-ブロモアクロレインとニトロンとの環状付加反応を行った。DBFOX/Phを使用した場合と比較して反応速度に大きな増加は見られなかった。ジアステレオ選択性は顕著に向上し、室温条件下では最高のジアステレオ選択性で環状付加体が得られた(45min at rt,100%,endo only,97% ee (endo))。ほぼ均一に近い錯体溶液が調製されたものの、可溶化触媒の効果は顕著には見られなかった。今後は、オキサゾリン5位に導入する置換基を変えて、会合を阻止することのできる配位子を合成したい。1,3-双極性環状付加反応の不斉触媒化の研究の一貫として、不飽和アルデヒドを用いたニトロン環状付加反応を研究した。ジクロロメタン中で(R,R)-4,6-ジベンゾフランジイル-2,2'-ビス(4-フェニルオキサゾリン)、以下R,R-DBFOX/Phと略記、とZn(OTf)_2から調製した懸濁液はα-ブロモアクロレインとN-ベンジリデンアニリン-N-オキシドとの環状付加反応を効率的に触媒し、高立体選択性で環状付加体を与える(3h,85%,endo/exo=95/5;98%ee(endo))。溶媒に僅かに溶けた錯体が反応を効果的に触媒し、錯体触媒の反応溶媒への溶解度を高めると同時に、Zn(OTf)_2の難溶性の原因と思われるこの金属塩(およびR,R-DBFOX/Ph錯体)同士の会合を抑止するルイス酸触媒を入手できれば、格段に効果的な触媒反応が開発できると考えた。そのために、R,R-DBFOX/Ph配位子のオキサゾリン環の5位に4つのメチルおよびブチル基を導入した新規配位子を開発した。これらの5位置換配位子を用いると、ジクロロメタン中短時間で可溶性の錯体が調製でき、α-ブロモアクロレインのみならずメタクロレイン、クロトンアルデヒドとの反応においても、5位無置換錯体よりも高い触媒活性と高いエナンチオ選択性を達成することができた。

現在、これらの新しい触媒を用いたニトロン環状付加反応における触媒効率の改善をめざした研究を遂行している。DBFOX-Zn(OTf)_2あるいはDBFOX-Ni(ClO_4)_2錯体は、α-ブロモアクロレインやメタクロレインなどのα,β-不飽和アルデヒドとN-ベンジリデンアニリン-N-オキシドとの環状付加反応を効率的に触媒し、高立体選択性で環状付加体を与える事を見い出した。ある種の金属塩から誘導した錯体は反応溶媒であるジクロロメタンに著しく難溶であるにも拘わらず、高い触媒活性を示したことから、触媒の会合による活性低下を解決できれば、単座親1,3-双極子であるα,β-不飽和アルデヒドへのニトロン環状付加反応の優れたキラル触媒開発への手掛かりが得られると考え、以下の2つの方法を検証した。まず、DBFOX-Zn(OTf)_2錯体に種々のアルコール性の添加剤を加えて反応を行った。無添加時と比較して2mol%の触媒存在下において90%eeを越える高いエナンチオ選択性が観察された。一方、オキサゾリンの5位に4つのメチル基を導入したテトラメチルDBFOX/Ph配位子を用いると、室温下数分で錯体を形成して、均一な溶液を与えた。この錯体溶液を触媒として用いると、不飽和アルデヒドを用いるニトロン環状付加反応がスムーズに進行し、1mol%の亜鉛触媒存在下において95%eeの高いエナンチオ選択性を達成することができた。加えて、ほぼ完全なエンド選択性を示した。他の不飽和アルデヒド基質を用いたニトロン環状付加反応においても、DBFOX/Ph錯体を用いた反応と比較して、エナンチオ選択性とジアステレオ選択性が大幅に向上しただけでなく、触媒量の低減に成功することができた。強配位性の求核剤であるニトロンの触媒的不斉環状付加反応において、単座の反応基質である不飽和アルデヒドを用いて成功を収めたことにより、我々の開発したDBFOX/Ph錯体がこの種の反応における優れたキラル触媒として効果的に使えることを実証することができた。
中欧諸国の多様な連邦制の下での周辺的位置にある地域の経済発展に関する比較研究

本研究は、中欧各国内で周辺的位置にある農村小規模地域が当該国平均以上の経済力を発揮できるのは何故かという問題の解明を目的とする。調査対象地域はドイツのエムスラント郡、オーストリアのフォラールベルク州、スイスのシャフハウゼン州である。研究の結果、以下の諸要因が明らかとなった。上記3地域ではいずれも、複数の地元中小企業がニッチな商品市場で高い世界シェアを持つ「隠れたチャンピオン」へと、経営戦略や商品開発の故に成長した。加えて、地方政府による「自助のための支援」と地域内社会的ネットワークが有効に作用した。誘致企業も独自の意思決定・R&Dの機能を持つ場合がある。その背景に各国独自の連邦制がある。2015年8月末から9月初めにかけて、ドイツ北西部のエムスラントとオーストリア最西部のフォーアアルルベルクに関する現地での資料収集ならびに識者へのインタビュー調査を行った。また、2016年2月にスイス北東部のシャフハウゼンに関して同様の調査を行った。その結果、エムスラント、特にその北部は、1970年代初めまでドイツの中で最も貧しい地域のひとつであったが、グローバリゼーションが進展する1990年代以降の成長が目覚しく、エムスラントはドイツ全国平均を上回る一人当たりGDPを実現していることが明らかとなった。他方、フォーアアルルベルクは20世紀前半期にはオーストリアの中で工業化が進んでいた地域であったし、シャフハウゼンもまたスイスの中で鉄鋼業や機械工業が早くから発展していた地域であったが、いずれも各全国平均を上回るほどの経済水準だったわけでもなく、各々の伝統工業が1970年代以降になると構造不況に陥った。しかし両地域ともに、産業構造の転換に成功し、21世紀にはいると各国の平均を上回る経済水準を安定的に実現するに至っていることが明らかとなった。上記3地域が、地理的に見れば各国の中での周辺的位置にありながら、経済的にはもはや周辺ではなくなっていることが明らかとなった。このような経済発展をもたらした要因として、エムスラントとフォーアアルルベルクについては地元中小企業の中から世界市場に商品を供給できる企業へと育ったものが複数あること、シャフハウゼンについては州政府の政策によって多国籍企業の中枢管理部門の誘致に成功したことが重要な要因であるという仮説が得られた。研究を構想した当時、3つの研究対象地域が、各々を含む国民国家の中で1950年代から1980年代にかけてどのような位置にあったのか必ずしも明確ではなかったが、現地での資料収集とその解読、及び識者へのインタビューによって、それが明らかとなった。さらに1980年代以降にどのような変化が見られたのかという点についても、その概略の姿が見通せるようになった。エムスラントは複数の地場企業が世界市場のなかでのハイエンド商品生産と販売に成功したこと、フォーアアルルベルクではそれまでの伝統的な工業であった繊維衣服とは全く別の機械工業や電気機械工業が地元の中から育ったこと、シャフハウゼンでは州政府の政策により、有力多国籍企業の欧州次元での中枢管理部門の誘致が実現して産業構造の転換が進展したことなどを見通せるようになった。以上の知見を得たがゆえに、挑戦的萌芽研究の1年目として、順調なスタートを切ることができたと考えている。7月末にドイツ、ニーダーザクセン州エムスラント郡文書館を訪問し、エムスラントの開発に関する公的資料や立地企業に関する地元新聞に掲載された地元企業に関する記事などを収集するとともに、文書館長シュップ氏や郡役所企業支援担当係官クルーゼ氏などから、エムスラント郡所在企業に関する聞き取りを行った。また、前年度の研究成果の一部を英文レポートにまとめ、地域整備国土計画アカデミー前事務局長のショーリヒ教授に提出し、これをもとにディスカッションを行なった。8月初旬に、オーストリア、フォラールベルク州文書館と州立図書館で、同州政府による経済振興政策、および地元企業に関する資料の収集を行うとともに、同州出身のハイデルベルク大学栄誉教授モイスブルガー氏に、研究成果の一部を英文レポートにまとめて提出し、これをもとにディスカッションを行なった。(なお、フォーアアルルベルク、とこれまでカタカナ表記してきたが、現地での発音に倣ってフォラールベルクと修正表記する。)これらの現地調査により、上記2つの地域の経済発展は、グローバライズする経済の中で、「隠れたチャンピオン」と呼ばれる、特定ニッチ分野の国際市場で高いシェアを持つ企業の成長によって可能になっていることが明らかとなった。エムスラントではマイヤー造船所や農業機械とトレーラーを生産するクローネ社がその代表である。フォラールベルクではケーブルカー製造のドッペルマイヤー社や業務用照明器具製造のツムトーベル社がその典型である。いずれにしても、人口30万人前後という小規模地域でありながら産業構成は、サービス部門も含めて多様性に富んでいることが特筆される。こうした研究成果の一部を、人文地理学会2016年度大会において、「オーストリア、フォラールベルク州の産業構造転換ー地理的「周辺」小規模州の経済活力ー」というタイトルで報告し、聴取者とディスカッションした。日本では、各国政府が出版する統計書や、ごく簡単な解説書(10数年から30年以上前に書かれた論文を含む)以外にはほとんど情報が得られなかった中欧の小規模農村地域について、その経済発展を支える具体的な企業の活動の一端が明らかになり、また、それら小規模地域の経済発展に関する地元政府(地方自治体)の政策が明らかになりつつあるから。また、それら地元企業を訪問インタビューするための協力を、公的ないし準公的機関の職員を通じて得ることができる見通しを得たので。

本年度は8月27日から9月1日までドイツのエムスラントに、9月2日から16日までオーストリアのフォラールベルクに滞在し、主として活力ある製造企業の経営者から、また産業支援を任務とする公的機関からも聞き取りを行った。あわせて過去の新聞や州政府広報誌などの記録資料で不足していたものを補足収集する作業を、現地の文書館や図書館などで行なった。さらに、スイスのシャフハウゼン経済の復活に関する研究報告を日本地理学会2017年秋季学術大会で行なった。研究成果の一部として、調査研究対象地であるエムスラント、フォラールベルク、シャフハウゼンの各地域の経済発展あるいは経済的復活を論ずるための理論的バックボーンを確立すべく、ミッテルシュタントすなわち家族所有になり当該地域に根づいている企業の役割を論じたアメリカ人経済学者や経済ジャーナリストの所説を論評する論文を公表した。フォラールベルクに典型的なように、地域に根づき、地域の中に存在する社会的関係の維持や青少年の職業教育に積極的に関わるとともに、ビジネスとしては外国市場に積極的に打って出るミッテルシュタントの存在が、ひとたび地域経済衰退の危機に瀕することがあったとしても、その経済的復活を実現する基盤となっていることが明らかになった。また、そうしたミッテルシュタントが少なかった地域であっても、約30年ほどの期間をかけて徐々に増えることは、エムスラントの事例に認められる。他方、州政府が積極的な「自助のための支援」という政策や生活環境の整備を進めることによって、衰退しかかった地域経済が復活することはシャフハウゼンでみられた。いずれの事例も、各国独自の連邦制という基盤の上で、周辺的な地理的位置にある小規模農村地域の発展あるいは復活がなされたことを示している。今後、各調査研究対象地域に関する論文および全体を総括する論文を執筆し、公表する予定である。本研究は、中欧各国内で周辺的位置にある農村小規模地域が当該国平均以上の経済力を発揮できるのは何故かという問題の解明を目的とする。調査対象地域はドイツのエムスラント郡、オーストリアのフォラールベルク州、スイスのシャフハウゼン州である。研究の結果、以下の諸要因が明らかとなった。上記3地域ではいずれも、複数の地元中小企業がニッチな商品市場で高い世界シェアを持つ「隠れたチャンピオン」へと、経営戦略や商品開発の故に成長した。加えて、地方政府による「自助のための支援」と地域内社会的ネットワークが有効に作用した。誘致企業も独自の意思決定・R&Dの機能を持つ場合がある。その背景に各国独自の連邦制がある。研究対象地域が、各国民経済の中で有力な経済先進地域に変貌しつつあることの要因をおおむね把握できたが、その詳細については依然として不明確な点がある。グローバリゼーションが進展する時代において、なぜ地場中小企業だったものが世界市場でハイエンド商品をもって活躍する能力を獲得できたのか、そのような企業成長が地域の産業全体にどのような効果を及ぼしてきたのか、地方政府や企業団体などの政策がどのような役割を果たしたのかについては未解明である。
植物感染における情報伝達と細胞応答

植物感染における病原菌放出の信号因子の識別とそれによって誘起される受容性・抵抗反応過程を分子および細胞レベルで解析し、以下の成果のを得た。I.識別過程に関与する信号因子の単離・同定およびその生成機構:(1)宿主特異的に感染を誘発する病原信号因子の単離(タバコ赤星病、カンキツbrown spot病、ラッキョウ灰色かび病、イネいもち病など)。(2)信号因子AKおよびAF毒素の生合成中間体(エポキシ構造付加のデカトリエン酸アルコール)の同定と、その生合成が酢酸経路であり、病原菌の病原性易失活性は主として酢酸から本中間体までの段階の活性低下によることの立証。(3)AK毒素のGenomic libraryの作製と、Alternaria alternataの形質転換系の確立。(4)宿主原形質膜上にAKおよびAF毒素受容体の存在することを立証。(5)疫病菌細胞壁からファイトアレキシン・エリシターを遊離するダイズ因子(β-1、3-endoglucarase)のクローニングとその遺伝子の全塩基配列の決定、および本因子によって遊離するエリシターの構造解明。II.信号因子伝達過程とその制御機構:(1)AM毒素による宿主細胞の壊死過程に光によって阻害される暗期過程が必要なことを発見。(2)ファイトアレキシン生合成系の活性化に及ぼす病原菌由来の抑制因子の作用特性の解明。(3)過敏感細胞反応におけるO_2^-生成系の意義とフォスフォリパーゼ活性化機構。(4)不親和さび病菌感染葉中の抗菌性糖蛋白質の生成。III.病原・非病原信号に対する細胞応答:(1)第1次作用点を異にするAK、AM、ACR、HMT毒素の初期作用過程と侵入菌系受容との関係を詳査して、宿主細胞における受容反応と原形質膜機能の障害過程が密接に関与することを立証。(2)ムギラどんこ病で付着器の宿主細胞接着時に病原菌識別反応始動を細胞観察。信号因子識別とそれによって誘起される受容性・抵抗性反応過程を組識的に解明するために研究手法と最新情報の交換および討議集会をもった.1.識別過程に関与する信号因子の単離・同定およびその生成機構:(1)イネいもち病菌の胞子発芽液の酢酸エチル可溶部からイネだけを選択的に感染誘導する信号因子を分離した.タバコ赤星病菌の生成する宿主特異的毒素を単離し,その生物的特性を解明,AT毒素と命名した.さらに,ナシ黒斑病菌のAK毒素依存の病原性発現における分泌酵素やメラニン合成能の関与を調べたところ,クチナーセ欠損株では病原性の抵下を示したが,ペクチン分解酵素欠損およびメラニン合成能欠損株は依然として病原性を保持していた.(2)疫病菌細胞壁からファイトアレキシンのエリシターを遊離するダイズ因子(βー1,3ーendoglucanase)のクローニングを行ない,その遺伝子の全塩基配列を決定した.また,エリシターの構造が,βー1,6ー結合を主鎖とし, βー1.3ー結合の分枝をもつグルカンであることを明かにした.2.信号伝達過程とその制御機構:(1)宿主特異的毒素の初期作用過程:感受性ナシ品種の原形質膜にAK毒素結合物質の存在することを証明した。また,ACR毒素は感受性ミトコンドリアの膜電位障害を伴う脱共役およびNAD漏出を起すことが明かとなった。(2)過数感細胞反応におけるO_<2^-生活系の活性化との関連でCa^

<++>依存性フォスホリパ-ゼA_2>が重要であることを明かにした。(3)エンバクのファイトアレキシン(アベナルミン)の生成とポリアミンの活性化の関係が明かとなった。3.病原・非病原信号に対する細胞応答:第1次作用点を異にするAK,AM,ACR,HMT毒素の初期作用過程と侵入菌糸受容との関係を詳査したところ,宿主細胞における受容反応と原形質膜機能の障害過程が密接に関連していることを明かにした.昨年度に引続き、病原信号因子識別とそれによって誘起される受容性・抵抗反応過程を解明するための研究手法と最新情報の交換および研究成果検討会をもつた。1.識別過程に関与する信号因子の単離・同定およびその生成機構:(1)ラッキョウ灰色かび病菌の胞子発芽液から宿主特異的に感染を誘発するペプチド様の信号因子を単離した。(2)ナシ黒斑病菌の培養液中に、AK毒素と共に、エポキシ構造の付加したデカトリエン酸アルコールおよびテトラエン・ジカルボン酸が存在し、それらが生合成中間体と思われた。3Hラベル・デカトリエン酸アルコールはAK毒素分子中に効率よく取り込まれた。このデカトリエン酸部分は、酢酸5分子から生合成されることが判明した。(3)病原毒素生成遺伝子を分離するための形質転換効率の高いベクター系が確立できた。2.信号伝達過程とその制御機構:(1)イチゴの培養細胞カルスより原形質膜を分離し、膜画分タンパク質と3Hラベル毒素との結合を調べたが、宿主の感受性に関係なく結合した。(2)AM毒素の作用過程に暗期の必要なことが判明した。毒素作用開始2時間後から約3時間は光に感受的で、懐死形成は完全に停止した。(3)エンドウ褐紋病菌のファイトアレキシン生成抑制因子はエリシター誘導のピサチン合成系の活性化を数時間遅延させた。(4)ダイズの原形質膜分画に遊離エリシターに特異的に結合するレセプターの存在を認めた。(5)不親和性冠さび菌感染エンバク葉中にリポキシゲナーゼ活性をもつ抗菌性含Fe糖蛋白質を見出した。活性はFe^<++>で増大し、α、α′-ピリジル阻害された。3.病原・非病原信号に対する細胞応答:ムギ子葉鞘細胞にエンドウうどんこ病菌を接種し、付着器を形成した一細胞上にムギうどんこ病菌を侵入させて検定すると、前者の付着器接着時に拒絶性が増高した。