hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
映像による南西諸島民俗資料の収集と分析

第1年目の研究計画の達成状況については次のとおりである。1映像記録の作成は沖縄本島北部東海岸の一村落において、年中行事の一部について神役の行為に注目した記録を得ることができた。2この調査において現地の字誌作成過程で収集されたスチール写真の存在が分かり、これも本研究の資料として加えることができた。スチール写真については本研究が映像記録に焦点をおいていたことから、あまり注目していなかったものであるが、一定の画面の切り取り方から撮影者の意図をうかがうことができ、当初の計画を若干修正して、今後ビデオ映像とともに考察の対象にしていくことにしたい。また、字誌の編纂がほぼ終わって原稿を見せてもらうと、そこに組み込まれた写真の扱い方に地元の、つまりこれまでフィールドワークの対象であった人々の表明した民俗のとらえかたが認められる。ここに近年の民俗誌をめぐる問題を考察する糸口がみいだされる。これらは調査に付随して得られた新しい展開である。3本研究のめざす映像記録の分析には現地側の資料とともに、研究者側の映像記録もかなりの本数が必要である。このため今年度収集された資料では未だ不十分であり、目的を達するためにひとつには当該村落以外で地元の人々が撮影しているものの所在調査が今後必要と思われた。また、研究者側のあるいは外部の者の視点を検討する素材を増やすには、映像作家の作品の民俗学の立場からの検討も有効であろう。それらの収集には別の予算措置で若干進めているところである。
高炭素鉄合金に生成する非平衡固溶体Ψ相の磁気特性

ほぼ単一のΨ相からなる合金の組成は、Fe-3%C-10%Cr-10%Mo合金およびFe-3%C-10%Cr-3%Si合金(いずれもmass%)であることを確定した。また、同様な組成の合金を用い、急冷速度を高くしてアモルファス相を作製した。そして、Ψ相の電気抵抗の温度依存性が、アモルファス相とほぼ同様であることがわかった。示差熱分析およびX線回析図形の解析結果から、これらの相はおおよそ室温から500600Kの温度まで他の相を形成せず(Metall.Trans.A(1994))、また原子配列の短範囲規則度という観点から、Ψ相は他のどの結晶質相よりもアモルファス相に近いことを明かにし(Metall.Trans.A(1993))、これを裏づける証拠を現在提出している(Philosophical Magazineに投稿中)。したがって、Ψ相は本来、結晶質相であるにもかかわらず、アモルファス相と構造的に類似しており、また同様の熱的安定性および電気抵抗性を示すことが明らかになった。以上のように、Ψ相の熱抵抗および電気抵抗はアモルファス相と同等であることがわかったが、磁性に明かな向上が見いだされた。Ψ相は凝固ままでは非平衡の固溶体であり、低温(<500K)で熱処理すると、規則構造を形成する。磁気特性は、アモルファス相、固溶体Ψ相および規則化Ψ相の3種について調べた。いずれの相も残留磁化はゼロであった。しかし、比透磁率および飽和磁束密度がアモルファス相、固溶体Ψ相、規則化Ψ相の順に高くなり、特に規則化Ψ相の飽和磁束密度はアモルファス相の3倍の値を示した。これらのことから、Ψ相、特に規則構造を有するΨ相は、アモルファス相より優れたソフト磁性材料として有望であると結論された。種々の組成からなる高炭素鉄合金を単ロール法により急冷凝固してリボンを作製した(冷却速度:10^4K/s)。急冷リボンの組織はアモルファス相から種々の非平衡個溶体と広い範囲の相が得られた。この中で、Fe-3%C-10%Cr-10%Mo合金及びFe-3%C-10%Cr-3%Si合金でほぼ完全なpsi相を有するリボンが得られたが、比較材として前者の合金のC量を増加させ(4%C)、アモルファス相のみからなる合金も作製した。示差熱分析の結果、psi相は200300°Cの間で緩やかな発熱反応を示し、一部規則化が起こっていることが示唆された。さらに高温ではalpha鉄より格子定数がかなり大きいBCC構造の相がウィッドマンシュテッテン状に形成される。この段階の結晶相については、電気抵抗の温度依存性が通常の結晶相とあまり変わらないが、凝固まま及び200°Cで熱処理したものでは電気抵抗の温度依存性が極めて小さく、アモルファス相に匹敵する。また、psi相は本来結晶質相でありながら、アモルファス相と同等の熱的安定性を示す。psi相の合金を200°Cで熱処理を行うと、電子線回折図形において(100)スポットが弱くなり、psi相は一部規則化する。規則化の状況を知るため、psi相に塑性変形を与えて超転移の導入を試みたが、超転移は導入されず、psi相がアモルファス相に変化することが、電子線回折図形と高分解能電子顕微鏡観察により明きらかになった。

前年度において、ほぼ単一のψ相からなる合金の組成は、Fe-3%C-10%Cr-10%Mo合金およびFe-3%C-10%Cr-3%Si合金(いずれもmass%)であることを確定した。また、同様な組成の合金を用い、急冷速度を高くしてアモルファス相を作製した。そして、ψ相の電気抵抗の温度依存性が、アモルファス相とほぼ同様であることがわかった。示差熱分析およびX線回折図形の解析結果から、これらの相はおおよそ室温から500K600Kの温度まで他の相を形成せず(Metall.Trans.A(1994))、また原子配列の短範囲規則度という観点から、ψ相は他のどの結晶質相よりもアモルファス相に近いことを明かにし(Metall.Trans.A(1993))、これを裏づける証拠を現在提出している(Philosophical Magazineに投稿中)。したがって、ψ相は本来、結晶質相であるにもかかわらず、アモルファス相と構造的に類似しており、また同様の熱的安定性および電気抵抗性を示すことが明らかになった。以上のように、ψ相の熱抵抗および電気抵抗はアモルファス相と同等であることがわかったが、磁性に明かな向上が見いだされた。ψ相は凝固ままでは非平衡の固溶体であり、低温(<500K)で熱処理すると、規則構造を形成する。磁気特性は、アモルファス相、固溶体ψ相および規則化ψ相の3種について調べた。いずれの相も残留磁化はゼロであった。しかし、比透磁率および飽和磁束密度がアモルファス相、固溶体ψ相、規則化ψ相の順に高くなり、特に規則化ψ相の飽和磁束密度はアモルファス相の3倍の値を示した。これらのことから、ψ相、特に規則構造を有するψ相は、アモルファス相より優れたソフト磁性材料として有望であると結論された。
ゲノムDNAマイクロアレイを用いた悪性神経膠腫の化学療法効果判定に関する研究

悪性神経膠腫(glioblastoma及びanaplastic astrocytoma)13例から腫瘍DNAの抽出を行った。実際の腫瘍細胞における遺伝子レベルでのDNAコピー数の異常の有無を知るために,この腫瘍DNAを対象としてゲノムDNAマイクロアレイ法による約300種類の遺伝子についての解析を行った。その結果,増幅を示した遺伝子としてはEGFR(7p12.3-p12.1)が全症例の約40%と最も高頻度に検出された。欠失を示した遺伝子として頻度の高かったものは,MTAP(gp21.3),FGFR2(10q26),DMBT1(10q25.3-q26.1)であった。Comparative genomic hybridization(CGH)の結果から7番染色体短腕(7p)のDNAコピー数の増加(gain)及び10番染色体長腕(10q)の減少(loss)を認めた症例が予後不良例である可能性が示唆されていたが、EGFRの増幅症例と非増幅症例の間において,その生存率や補充療法(放射線療法・化学療法)に対する反応性との間には統計学的な有意差は認められず、EGFRは悪性神経膠腫の発生・増殖に重要であるが、予後を規定する因子としての可能性は低いと考えられた。またCGHの結果で7pのgainを認めた症例中においても、EGFRの増幅を示さない例が存在し、CGHにおける7pのgainにはEGFR以外の遺伝子の増幅が影響している可能性も示唆された。悪性神経膠腫における10qの欠失は良く知られており,10q上に存在するPTEN(10q23.3)の係わりが多数報告されている。今回の結果ではPTENの欠失以外にも,前述のEGFR2,DMBT1の欠失が高頻度に検出された。この両遺伝子とMTAPの欠失については過去に悪性神経膠腫における報告はなく,あらたな関連遺伝子異常である可能性がある。悪性神経膠腫(glioblastoma、anaplastic astrocytoma)13例から、腫瘍DNAの抽出を行い得た。腫瘍組織における実際の遺伝子増幅の状態を知るために、これらの腫瘍DNAを対象としてgenome DNA microarrayにより、約300種類の遺伝子について解析を行なった。その結果、増幅を示した遺伝子としては、EGFR(7p12.3-p12.1)が約40%と最も高頻度に検出された。しかしながら、EGFRの増幅を認めた症例と、認めない症例の間において、その生存率、補充療法(放射線療法・化学療法)に対する反応性との間には、統計学的な差は認められなかった。また、Comparative genomic hybridization(CGH)上で7pのDNAコピー数の増加(gain)を認めた例の中で、EGFRの増幅を示さない例も存在したが、他の7p上の遺伝子についても増幅は検出されず、CGHによる7pのgainが、いかなる理由によるものであるかは未だ不明である。一方、欠失を示した遺伝子として頻度の高かったものは、MTAP(9p21.3)、FGFR2(10q26)、DMBT1(10q25.3-q26.1)であった。悪性神経膠腫における10番染色体長腕(10q)の欠失は良く知られており、10q上に存在する遺伝子で悪性神経膠腫に係わるものとしては、PTEN(10q23.3)が多数報告されている。今回の結果ではPTENの欠失以外にも、前述のFGFR2、DMBT1の欠失が高頻度に検出された。この両遺伝子とMTAPの欠失については過去に悪性神経膠腫における報告はなく、あらたな関連遺伝子異常である可能性がある。

今後これらの遺伝子についても、化学療法感受性との関連について検討する。悪性神経膠腫(glioblastoma及びanaplastic astrocytoma)13例から腫瘍DNAの抽出を行った。実際の腫瘍細胞における遺伝子レベルでのDNAコピー数の異常の有無を知るために,この腫瘍DNAを対象としてゲノムDNAマイクロアレイ法による約300種類の遺伝子についての解析を行った。その結果,増幅を示した遺伝子としてはEGFR(7p12.3-p12.1)が全症例の約40%と最も高頻度に検出された。欠失を示した遺伝子として頻度の高かったものは,MTAP(9p21.3),FGFR2(10q26),DMBT1(10q25.3-q26.1)であった。Comparative genomic hybridization (CGH)の結果から7番染色体短腕(7p)のDNAコピー数の増加(gain)及び10番染色体長腕(10q)の減少(loss)を認めた症例が予後不良例である可能性が示唆されていたが、EGFRの増幅症例と非増幅症例の間において,その生存率や補充療法(放射線療法・化学療法)に対する反応性との間には統計学的な有意差は認められず、EGFRは悪性神経膠腫の発生・増殖に重要であるが、予後を規定する因子としての可能性は低いと考えられた。またCGHの結果で7pのgainを認めた症例中においても、EGFRの増幅を示さない例が存在し、CGHにおける7pのgainにはEGFR以外の遺伝子の増幅が影響している可能性も示唆された。悪性神経膠腫における10qの欠失は良く知られており,10q上に存在するPTEN(10q23.3)の係わりが多数報告されている。今回の結果ではPTENの欠失以外にも,前述のFGFR2,DMBT1の欠失が高頻度に検出された。この両遺伝子とMTAPの欠失については過去に悪性神経膠腫における報告はなく,あらたな関連遺伝子異常である可能性がある。
低酸素遺伝子応答分子イメージングに基づく新しい口腔癌治療戦略

18F-Fluoromisonidazole (FMISO) PETは癌の低酸素状態を非侵襲的に検出できる。本研ではOSCC患者におけるFMISO PETと術前化学療法の組織学的効果の関連を明らかにした。対象は術前化学療法後に根治的手術療法を受けたOSCC患者22例である。FMISOが集積する症例は集積しない症例と比較して治療効果例が有意に少なかった。OSCC患者の術前化学療法の組織学的効果が原発巣のFMISOPETのSUVに関連する可能性を初めて示した。基礎研究では、低酸素PETトレーサーの腫瘍集積量は低酸素遺伝子応答を反映する99mTcO4ーの腫瘍集積量と正の相関を示した。低酸素応答イメージングを可能にする樹立した担癌マウスモデルに対して、異なる3つの酸素条件(21%O2:正常酸素、10%O2:12時間、80%O2:24時間)を負荷した後、99mTcO4- (各群n=8)、I-124 (各群n=6)を投与し、低酸素応答イメージングを行った。低酸素群における腫瘍の99mTcO4-集積(SUVmax)は、正常酸素群(2.3±0.7 vs 1.2±0.2, p<0.05)、過剰酸素群(2.3±0.7 vs 0.9±0.1, p<0.001)に対して有意に高値を示した。I-124によるPETイメージングの結果においても、同様の結果が得られた(低酸素群2.5±0.2 vs正常酸素群1.4±0.3, p<0.05、低酸素群2.3±0.7 vs過剰酸素群1.1±0.2, p<0.001)。以上から、腫瘍への各トレーサーの取り込みは、酸素濃度の低下に応じて、増加していることが明らかになった。口腔癌におけるFMISO-PETの集積と組織学的悪性度の関連:低酸素状態を示す口腔癌は化学療法に抵抗性を有することが明らかになったが、低酸素状態の癌が予後不良を示すのは、癌細胞自体の悪性度が増加することも一因だといわれている。そこで、口腔癌23例の切除標本中の細胞増殖マーカー(Ki-67)の発現とFMISO-PETの集積を比較・検討した。6/23例(26%)の口腔扁平上皮癌組織内にKi-67が高発現していた。FMISO-PETの集積はKi-67の発現を予測する有意な独立因子であった(P=0.04)。以上から、低酸素状態を示す口腔癌は組織学的悪性度が増加していることが初めて示された。悪性腫瘍内の低酸素遺伝子応答イメージングを可能にする担癌モデルマウスの評価を行った。SPECTイメージングの結果、99mTcO4-集積(SUV)は、低酸素負荷群(10%)正常酸素群(20%)に対して有意に高値を示した(2.3±0.7 vs 1.2±0.2, p = 0.003)。また、PETイメージングの結果、I-124集積(SUV)は、低酸素負荷群(10%)正常酸素群(20%)に対して有意に高値を示した(8.4±1.4 vs 5.1±0.7, p = 0.045)。以上の結果から、樹立した担癌マウスの腫瘍では、飼育環境の酸素濃度の変化に応じて、低酸素状態になり、それによりNISが発現し、I-124あるいは99mTcO4-の腫瘍への取り込みされたことが明らかになった。本研究の目的はOSCC患者のFMISO-PETおよびFDG-PET所見とOSCC組織内のKi-67の発現の関連を明らかにすることである。対象は根治手術を受けたOSCC患者23例(男/女: 15/8、年齢42-84歳)で、術前のFMISO-PETおよびFDG-PET検査でSUV maxを求め、手術標本におけるKi-67発現細胞と比較検討した。Ki-67陽性細胞の割合が15%以上認められた症例をKi-67高発現例と定義した。前年度に評価した低酸素遺伝子応答イメージングの担癌モデルマウスを用いて、低酸素PETトレーサーと低酸素遺伝子応答の腫瘍内分布の比較を行った。18F-FMISOと125I-のオーバーラップ領域は、64Cu-ATSMと125I-のオーバーラップ領域よりも有意に大きかった(正常酸素下:14.3±3.4% vs. 6.3±2.8%, p = 0.0007、低酸素下:29.0±8.1% vs. 14.0±5.8%, p = 0.004)。また、低酸素PETトレーサー集積領域における125I-の集積領域の割合は、18F-FMISOにおける125I-の集積領域の方が有意に大きかった(正常酸素下:42.5±8.9% vs. 20.6±10.5%, p = 0.002、低酸素下:71.6±12.6% vs. 40.5±16.3%, p = 0.004)。以上から、低酸素領域に対する選択的放射線治療において、64Cu-ATSMよりも18F-FMISの方が照射野の決定に適していることが示唆された。

本研ではOSCC患者におけるFMISO PETと術前化学療法の組織学的効果の関連を明らかにした。対象は術前化学療法後に根治的手術療法を受けたOSCC患者22例である。FMISOが集積する症例は集積しない症例と比較して治療効果例が有意に少なかった。OSCC患者の術前化学療法の組織学的効果が原発巣のFMISOPETのSUVに関連する可能性を初めて示した。基礎研究では、低酸素PETトレーサーの腫瘍集積量は低酸素遺伝子応答を反映する99mTcO4ーの腫瘍集積量と正の相関を示した。本研究により多くのデータが得られた。研究成果を多くの国際学会での報告のみならず一流雑誌に論文として発表できた。27年度が最終年度であるため、記入しない。医歯薬学下記に示す研究計画どおりに研究を推進する。1.動物実験1)低酸素応答領域の特定、2)治療抵抗性獲得メカニズムの解明2.クリニカルPET:2)治療前の生検材料から病理組織学的、免疫組織化学的解析と血清中の各種マーカーによる診断を行う。3.PETと病理組織学的、免疫組織化学的データとの相関本研究により多くのデータが得られた。研究成果を比較的多数の学会発表のみならず一流雑誌に論文として発表できた。予定していた実験が一部遅れたため学会発表も見送った。1)低酸素応答領域の特定:各低酸素PETトレーサーの集積領域から、低酸素応答領域を特定する。これにより、化学療法や放射線治療、特に局所照射治療(dose-dependent radiation)の治療方針への臨床応用に繋げる。2)治療抵抗性獲得メカニズムの解明:癌幹細胞は治療抵抗性と密接に関連しているという報告があるが、詳細は不明である。低酸素応答領域と癌幹細胞との関係を詳細に調べ、癌幹細胞イメージングあるいは、治療抵抗性イメージングへと発展させる。平成25年度同様、口腔癌患者に対し放射線化学療法前後でFDG-PET、FMISO-PETを撮影、症例を蓄積する。治療前の生検材料から病理組織学的、免疫組織化学的解析と血清中の各種マーカーによる診断を行う。PETと病理組織学的、免疫組織化学的データとの相関、FDG-PETとFMISO-PETのデータを蓄積し、臨床病理学的パラメーター、臨床効果判定、組織学的効果判定や病理組織学的、免疫組織化学的解析と血清中の各種マーカーで得られたデータとの関係を統計学的に詳細に分析する。現在実験を行っておりデータは出ている。次年度に学会発表を予定している。予定していた研究に対し、研究費の使用額を抑えて遂行できた為。研究の更なる進展のため、次年度で一括し使用する。
細胞機能を可視化する新奇な超分子ナノ材料の光創製

(抄録なし)本研究課題は、無毒性かつ高発光性超分子の新規ナノ粒子を開発することである。また、これらのナノ粒子については、細胞外および細胞内標識用の蛍光ラベルとしての利用を目指している。本研究で用いるナノ粒子は金(Au)や銀(Ag)の量子クラスター及び、Eu(III)やTb(III)の錯体のナノ粒子も含む。初めに、AuやAgの高発光性量子クラスターの合成を行った。この合成には、グルタチオンやウシ血清アルブミン(BSA)のようなリガンドを用いた。リガンドに含まれるチオール基(-SH)は、金属イオンの還元によって形成される量子クラスターと結合する性質を有する。また、BSAやグルタチオンに含まれる親水基は水相における量子クラスターを安定化する性質も有する。そこで、我々はAu8、Au15、Ag25の三種の量子クラスターを合成した。これらの量子クラスターは、赤外線領域での可視化が可能な強いフォトルミネセンスを示す。また、これらの量子クラスターが、ベクターなどの導入媒体を介することなく、生きた細胞に効率的に輸送されることも見出した。さらに、これら量子クラスターは、・Mレベルにおいても細胞毒性を持たなかった。本研究と平行して、フラーレンや量子ドットに基づく新規超分子性ナノ粒子のフォトファブリケーションを行ってきた。合成した超分子性ナノ粒子はフォトルミネセンスの明滅現象(blinking)の減少を示した。一方、純量子ドットは強いblinkingを示した。これはバイオイメージングには不必要な性質である。本研究の目的は、以下の2点に要約される。(1)無毒性かつ高発光性を有する新規超分子ナノ粒子の創製と、(2)その新規ナノ粒子を用いた細胞ラベリングの達成である。初年度には、金および銀の量子クラスター(QCs)を調製し、量子ドットを基にした超分子ナノ粒子の光加工に成功した。次年度は、金QCsを用いた細胞イメージングとその細胞内輸送に焦点を当て、QCsを含む超分子ナノ粒子の光加工を試みた。まず、我々は上皮増殖因子(EGF)やアラトスタチン(AST)のようなホルモンと金QCsの抱合反応を行った。がん細胞に高発現するEGF受容体(EGFR)を標的にしたラベリングを目的として、我々はヒト肺腺癌細胞株H1650細胞に金QCsで標識したEGFを添加し培養を行った。その結果、細胞膜上にあるEGFRは金QCs標識EGFによって効率よくラベルできた。続いて、我々は標識されたEGF-EGFR-QCs複合体が受容体を介したエンドサイトーシスによって細胞内に取り込まれ、細胞質に輸送されることを確認した。これらの様子は蛍光イメージングによって観察できた。また金QCs標識AST抱合体と比して、EGF抱合体の細胞内輸送効率は格段に高かった。次に強励起レーザーを用いて、細胞内における金QCs抱合体を光励起した。細胞内での金QCsの検出は、抱合体の細胞内凝集によって観察できなかった。並行して、金QCsの単一分子を検出し、その光安定性も評価した。金QCsは有機蛍光色素と比して4-5倍の光安定性を持つことを確認した。最後に、培養細胞を用いた細胞毒性評価によって金QCsの生体親和性についても調べた結果、10pMレベルまでは金QCs抱合体による標識は細胞増殖に影響を及ぼさないことが確認された。要約すると、新規に創製した無毒性QCs抱合体は、生体ラベリングやイメージング解析への応用が見込まれる。金量子クラスターやEu複合体のような非中毒性の蛍光プローブの2タイプの可視化の他に、単一分子の超分子ナノ粒子の可視化を完成させた。金量子クラスターは10・・に至るまで細胞毒性ではないことが分かり、がん細胞の可視処理に役立つことが分かった。本研究で得られた結果は、概ね予想通りであった。我々は無毒性かつ高発光性の量子クラスターの創製に成功した。金量子クラスター上のリガンドに存在する官能基が、量子クラスターから抱合体への転換に利用されている。量子クラスターの無毒性の特徴は、量子ドットにも含まれるCdのような有害重金属を含有しないためである。これら抱合体の無毒性かつ光安定性によって効率的に細胞ラベリングやイメージングが可能になった。量子ドットを含む超分子ナノ粒子の光加工は創製できたが、量子クラスターを基にした超分子ナノ粒子の創製はまだできていない。それは恐らくエンドソーム貯留による抱合体の細胞内凝集のためだと考えられる。今年度は主に蛍光特性の最適化と初年度に可視化したプローブの細胞毒性の極小化に特化する。これに加え、表皮成長因子をこのプローブに結合させることを予定し、がん細胞のラベリングと可視化のための抱合体を使用することも予定している。今年度の研究目標は、以下の二点に要約される。(1)量子クラスター及び配位化合物を基にした超分子ナノ粒子の調製と(2)そのナノ粒子に対する細胞イメージングや単一分子検出への有用性の評価である。その詳細は、以下の四点を予定している。第一に、光活性化した分子を用いて量子クラスター及び配位化合物を化学的修飾を行い、超分子ナノ粒子への転換をする。

第二に、AFM、SEMイメージング及び蛍光スペクトル分析によるナノ粒子の流体力学的サイズ、光安定性及び量子発光効率の評価を行う。第三に、細胞に対する超分子ナノ粒子の生体親和性と細胞及び単一分子イメージングへの応用評価を行う。最後に、原稿形式で結果をまとめ、論文を発表する。(抄録なし)
ペプチダーゼ最大ClanPA唯一のエキソペプチダーゼファミリーの構造機能相関解明

本研究では、申請者が先導研究してきた非病原菌Pseudoxanthomonas mexicana WO24由来S46ペプチダーゼをモデル酵素とし、病原菌由来S46ペプチダーゼの網羅的な基質特異性解析およびサブサイトとα-ヘリカルドメインを中心とした構造機能相関の解明を行う。最終的には、Family S46構造機能相関の完全解明を目的としている。さらに、本研究は、ヒトが有しないS46ペプチダーゼをターゲットとした、歯周病原因菌、多剤耐性日和見感染菌を抑制可能な創薬開発への基礎研究となる本年度は以下の「課題(1)S46群の構造解明」、「課題(2)S46群の網羅的基質特異性の解明」、「課題(3)S46基質認識機構の解明」を行った。課題(1)S46群の構造解明多剤耐性日和見感染由来SmDPP7とジペプチドとの共結晶構造解析に成功した。また、歯周病原因菌由来PgDPP11の高分解能な構造解析に成功し、ドッキングシミュレーションからPgDPP11に特異的な阻害化合物を発見した。今後は、結晶化に成功していない標的タンパク質の純度向上を目指す。課題(2)S46群の網羅的基質特異性の解明ジペプチドライブラリーを用いた競合阻害試験により、S46群の基質P2特異性を明らかにした。これにより、病原菌由来S46ペプチダーゼ群の共通した基質P2特異性を示すことに成功した。課題(3)S46基質認識機構の解明SmDPP7をモデル酵素とした変異解析によって基質P2認識に重要とされる残基の同定に成功した。課題(1)S46群の構造解明院内感染の起因菌で肺炎や菌血症での死亡率が57割に達する多剤耐性日和見感染菌Stenotrophomonas maltophiliaに由来するSmDPP7についてジペプチジドとの共結晶構造解析に成功した。さらに、日本成人の7割が有病している歯周病の主な原因菌であるPorphyromonas gingivalisに由来するPgDPP11に高分解能な結晶構造解析に成功し、ドッキングシミュレーションを経て、S46群に特異的な阻害剤の発見に至った。課題(2)S46群の網羅的基質特異性の解明標的S46群の基質P2特異性をジペプチドライブラリーを用いた競合阻害試験により決定した。これにより、病原菌由来S46ペプチダーゼ群の共通した基質P2の嗜好性を明らかにした。さらに、オリゴペプチドを用いてP2・P1特異性の解析に必要なHPLCを用いたジペプチドの検出基盤構築を試みたが、既存の検出方法ではジペプチドの検出が困難な場合があることが明らかになった。そのため、今後はLC/MSなど他のジペプチド検出手法を検討していく。課題(3)S46群の基質認識機構の解明SmDPP7のジペプチドとの共結晶構造解析と部位特異的変異解析からS2サブサイトにおける認識に重要な残基の同定に至った。さらに、S2サブサイトへの基質の収容にはサブサイト下部における水素結合ネットワークが寄与していることが見出された。(1)S46群の構造解明結晶化に成功していないS46群、PgDPP7、SpDPP11、PeDPP7、PeDPP11、SmDPP11の精製純度の向上および結晶構造の取得を目指し、S46群の構造解析を行う。特にSubfamily S46Sに属するSpDPP11およびSmDPP11の構造解析に成功していないため、優先して結晶構造の取得を目指す。(2)・(4)S46群の網羅的基質特異性およびイミド結合切断能の解明羅的基質特異性およびイミド結合切断能の解明のため、本研究では、長鎖ホルモンを含む様々なオリゴペプチドを基質とした解析を実施予定である。次年度はジペプチド検出基盤の構築を目指す。(3)S46基質認識機構の解明基質認識残基の基質特異性への寄与を解析するため、DAP BIIをモデル酵素とした変異解析によって基質認識に関与している残基の同定を目指す。また、精製に成功している他のS46群についても同様に変異解析を行い、S46群の基質認識機構の解明を試みる。また、網羅的に基質認識残基を解析することで、基質認識構成残基と基質特異性の相関関係を明らかにする。また。本年度に見出されたS2サブサイトにおける水素結合ネットワークに寄与をITCを用いて検証していく。(5)S46α-ヘリカルドメインの機能解明S46α-ヘリカルドメインの機能解明のため、基質の選択性とその相関性を明らかにするための活性測定と共結晶構造解析を試みる。また、S46α-ヘリカルドメインを置換や欠損させた、キメラタンパク質を発現・精製し、基質長・構造特異性の変化を観察する。さらに、豊富にあるアミノ酸配列等の情報を用いたドライ解析からも、S46α-ヘリカルドメインの機能解明に迫る。さらに、本研究は、ヒトが有しないS46

ペプチダーゼをターゲットとした、歯周病原因菌、多剤耐性日和見感染菌を抑制可能な創薬開発への基礎研究となる。本年度は以下の「課題(1)S46群の構造解明」、「課題(2)S46群の網羅的基質特異性の解明」、「課題(3)S46基質認識機構の解明」を行った。課題(1)S46群の構造解明病原菌由来のS46ペプチダーゼ群PgDPP7、SpDPP11、PeDPP7、PeDPP11、SmDPP7およびSmDPP11の発現と精製法の確立に成功した。さらに、SmDPP7の結晶構造解析に成功した。今後は、結晶化に成功していない標的タンパク質の純度向上を目指す。課題(2)S46群の網羅的基質特異性の解明P1基質特異性を合成基質を用いて決定した。これにより、病原菌由来S46ペプチダーゼ群の活性の違いが明らかになった。さらに、オリゴペプチドを用いてP2・P1特異性の解析に必要なジペプチドの検出基盤構築を試みた。その結果、生成ジペプチドのアミノ末端をHPLC分離後に蛍光修飾して検出する方法では検出困難だと明らかになった。今後は、他の検出法やLC/MSを用いた分解後のジペプチド検出基盤を構築する課題(3)S46基質認識機構の解明DAP BIIをモデル酵素とした変異解析によってDAPBIIのS682残基が基質特異性に大きく寄与していることが見出された。今後は、他のタイプ(S, R)における寄与を解析する。課題(1)S46群の構造解明予定通り標的酵素群の発現量と純度向上を実現した。さらに、院内感染の起因菌で肺炎や菌血症での死亡率が57割に達する多剤耐性日和見感染菌Stenotrophomonas maltophiliaに由来するSmDPP7については結晶構造解析に成功した。課題(2)S46群の網羅的基質特異性の解明標的S46群のP1基質特異性を合成基質を用いて決定した。その結果、生成ジペプチドのアミノ末端をHPLC分離後に蛍光修飾して検出する方法では、蛍光が消光されてしまうケースがあるため、検出困難な場合があるとことが明らかになった。そのため、今後は消光され無いようなペプチドを使用するあるいはLC/MSや他の検出手法を検討していく。課題(3)S46群の基質認識機構の解明S1サブサイトにおいて、S682残基が基質特異性に大きく寄与していることが見出された。さらに、SmDPP7の構造解析に成功したことで、基質P2の認識に関する知見が得られた。以上のように、S46群のP2、P1認識機構の解明に向けて研究が前進した。本研究では、申請者が先導研究してきた非病原菌Pseudoxanthomonas mexicana WO24由来S46ペプチダーゼをモデル酵素とし、病原菌由来S46ペプチダーゼの網羅的な基質特異性解析およびサブサイトとα-ヘリカルドメインを中心とした構造機能相関の解明を行う。
「論理的」に理解し表現する力を伸ばすための国語科作文教材の開発

【研究目的】国語科では従来「読むこと」において,「論理」とは考えや文章の筋道という意味にしか受け止められてこなかったため,筆者の「表現の論理」を学習者に理解させることと,学習者の「認織の論理」を育てることが混同され,筆者の「表現の論理」を学習者にとらえさせることが即「論理的」に読む力を育てることであるかのように受け取られ実践されてきた。本研究では生徒を書き手に回らせて,読み手の視点を生かして推敲の質を高めるような教材を開発した。「論理性」を磨くには「他者の目」が必要であるのに,思春期の中学生は誤脱字に気を取られたり,相手に遠慮して推敲を避けたりしがちなので,開発教材によりこの改善が期待できる。【研究方法】生徒の実態を踏まえれば,中学校国語科では,網羅的に論理吟味の観点を学ばせるより,まずは漏れなく重なりなく述べること,特に,議論する相手から「言われたこと」だけでなく「言われなかったこと」をも点検させ,その問題点を吟味させるほうが,簡便かつ有効である。そこで,論題に対し賛否双方の立場で同心円状に根拠を掘り下げて書くイメージマップを作文執筆前後に書かせる方法を授業で試み,推敲前後の作文とイメージマップ上の生徒の記述の変化を追った。【研究成果】このイメージマップや,それを使った学習活動によって,生徒らは,指導者による下書きへの直接の添削指導を受けなくても,主張と根拠との対応関係や,根拠のなかでも挙げられた事実(事例)と理由づけとの対応関係に目を向けて主張文を書くことができた。またイメージマップは,40人を同時に指導する教室において,指導の漏れを防ぐ可能性をもつことが分かった。
有用形質転換動物開発の基礎としての遺伝子発現調節機構に関する研究

(1)シバヤギゲノムDNAライブラリーをスクリーニングすることにより、SRY構造遺伝子ならびにプロモーター領域、3′側の非翻訳領域を含む、SRY遺伝子の全長をクローニングと塩基配列の決定を行うことに成功した。一方マウスSry遺伝子を、マウスSertoli細胞起源のTM4細胞、XXの核型をもつES細胞に導入し、Sry下流遺伝子の同定を試みた。前者ではP450ar om遺伝子が、後者ではWT1遺伝子がそれぞれ発現誘導された。恐らく、両者に共通して存在しSryの作用を仲介する遺伝子があるのではないかと結論された。(2)mWAPプロモーターの組織特異性を、in vivoでのWAP mRNAの発現パターンをRT-PCR法で詳細に解析した結果、従来考えられていたように乳腺に特異的なものではなく、広汎な組織で発現されていることが確認された。この事実は、Tg動物におけるmWAPプロモーターの実用上、重要な意味をもつ。(3)妊娠BALB/c雌マウスの乳腺上皮細胞から確立した培養細胞株HC11を用いて長鎖型プロラクチン受容体(L-PRLR)の過剰発現が、プロラクチン(PRL)の標的遺伝子、βカゼイン、WAP遺伝子の発現に対する影響を解析した。予想に反して、L-PRLRの過剰発現はPRL標的遺伝子の発現抑制をもたらした。恐らく、シグナル伝達物質レベルで競合が起こり、′Abortive Hit′が起こったためと考えられる。(4)チロシンキナーゼ型受容体であり、始原生殖細胞や、造血細胞、色素細胞のin vivoにおける生存に重要な役割を果たすc-kitのcDNAを、シバヤギ小脳cDNAライブラリーからクローニングし、ORF全長、ならびに、3′UTRの塩基配列を決定した。その結果、ヤギとヒツジのc-kitの細胞内ドメインで、kinase insert region (Kl領域)に、両種に特異的なアラニン残基の挿入があることが明らかになった。機能は不明であるが、ヤギとヒツジの系統分化の解析に有用な手がかりを与えるものと期待される。平成5年度に完了した主な実験計画は以下の通りである。1)ラムダファージを用いたシバヤギのゲノム遺伝子ライブラリーの作成が完了した。2)ヒトY染色体ライブラリーから単離したヒトSRYプローブおよび、各種哺乳類のSRYに共通と考えられるHMG Box部分の塩基配列を用いてプライマーを設計し、これを用いてシバヤギのゲノムSRY構造遺伝子の単離を試みたところ、複数の陽性クローンを得ることができた。しかし、現在のところ、最終的なシバヤギSRY遺伝子の同定には至っていない。マウスやシバヤギの培養細胞、および、培養初期胚を用いて、得られたSRY遺伝子のトランスフェクションによる発現の可能性を検討中である。特に、マウウスのセルトリ細胞由来の培養細胞株を用いて、形質転換細胞を得る試みを中心にして実験を行っている。3)各種正常マウス組織およびmWAP-hGHトランスジェニック(以下、Tg)マウスに於ける、内在性WAPおよび導入WAPの発現パターンを解析し、mWAPプロモーターの発現調節機構の解明を試みる実験は、ほぼ予定通り進行しmWAPプロモーターの組織特異性が従来考えられていたほど乳腺に対して特異的で無い事が明らかになった。今後、mWAPプロモーターを用いてTg動物を得る試みを行う際に、この点に十分留意する必要があると思われる。

4)In vitroにおいて、高分化能を維持している培養乳腺細胞HCIIを用い、長鎖型プロラクチン受容体遺伝子(cDNA)をトランスフェクトして、形質転換細胞を得ることができた。現在、この細胞を用いて、プロラクチン受容体遺伝子の発現調節、また、プロラクチン受容体とWAP発現調節機構の関係を解析中である。5)シバヤギの優性白色の発現調節因子を支配する遺伝子座がc-kitに関連する遺伝子を含む可能性が示唆されているので、現在、シバヤギにc-kit遺伝子の単離の試みが進行中である。本研究の期間内に完了した主な実験計画は以下の通りである。1)ラムダファージを用いたシバヤギのゲノム遺伝子ライブラリーの作成が完了した。2)ヒトY染色体ライブラリーから単離したヒトSRYプローブおよび、各種哺乳類のSRYに共通と考えられるHMG Box部分の塩基配列を用いてプライマーを設計し、これを用いてシバヤギのゲノムSRY構造遺伝子の単離を試み、複数の陽性クローンを得ることができた。(舘、中込)。3)その一つについて、塩基配列を決定したところ、シバヤギSRY遺伝子のプロモーター領域であることが明らかになった。(舘、東條、田中)。4)マウスのセルトリ細胞起源の培養細胞株TM-4を用いて、ヒトおよびマウスSRY遺伝子のトランスフェクションによる発現の可能性を検討した。その結果、ミュラー管抑制因子(MIS)の遺伝子発現に関しては、ヒトSRYは抑制的に、マウスSRYは促進的に作用することを示唆する結果が得られた。また、P450アロマターゼ遺伝子の発現を促進するらしいことが知られた(舘、東條、田中)。5)各種正常マウス組織およびmWAP-hGHトランスジェニック(以下、Tg)マウスに於ける、内在性WAPおよび導入WAPの発現パターンを解析した。その結果、mWAPプロモーターの組織特異性が従来考えられていたほど乳腺に対して特異的に無い事が明らかになった。今後、mWAPプロモーターを用いて、Tg動物を作出する試みを行う際には、この点に十分留意する必要があると思われる。(東條、舘、高橋)。6)In vitroにおいて、高分化能を維持している培養乳腺細胞HC11を用い、長鎖型プロラクチン受容体遺伝子(cDNA)をトランスフェクトして、形質転換細胞を得る事ができた。この細胞を用い、プロラクチン受容体遺伝子の発現調節、また、プロラクチン受容体の過剰発現とβ-カゼインならびに、WAP遺伝子発現調節機構の関係を解析した。その結果、受容体分子とシグナル伝達分子との間で競合が生じ、シグナル伝達分子を持たない受容体分子が生じ、標的遺伝子の発現が見かけ上、抑制されることを示唆する結果が得られた(abortive hit model)。受容体遺伝子を用いたTg動物を作出する際に、この問題の検討が必要となろう。(舘、東條、田中)。7)シバヤギのc-kit遺伝子のクローニングと塩基配列の解析を行った。その結果、細胞内ドメインにヤギに特異的と思われるアミノ酸のインサーションがあることが明らかになった。
推理や談話理解のための心的表象の構成過程に関する研究

人間が推理を行う際の心的メカニズムを情報処理モデルで記述するために、条件文を題材として心理学実験を行なった。抽象的な条件文を用いて、被験者には4枚カード問題と真理表判断を課した。従来の研究において、「表がRならば裏は2である」という場合にはRと2、「表がRならば裏は2ではない」でもRと2(規範解)が選択されるという現象から、条件文に表示される名辞が選択されるというマッチングバイアス説が提唱されていた。この傾向は、真理表判断においても観察される。しかし、表示の名辞への注意よるというこのバイアスの説明は、推理現象の説明としては比較的低次であって、説得力に欠ける。それに代わるものとして、否定文においては、否定を肯定にするだけで違反であるという心的ルールを被験者が持っているとする仮説をここでは提唱する。この仮説に従えば、2重否定文において被験者は、通常の否定にしたものを違反と見なすと考えられる。この点を検討するために、前件、後件、前後件各々について2重否定のルールを用いて、4枚カード問題と真理表判断を被験者に課した。その結果、4枚カード問題においてはこの仮説どおりにはならなかったが、真理表判断においてのみ予想される傾向が現れた。この結果は、否定概念と違反概念とを混同させるような素朴な心的ルールを持っていることを示唆する。素朴な心的ルールという考え方は、メンタルモデルや素朴理論などの最近の認知心理学の理論に新しい知見をもたらすものであり、学界に貢献できると思われる。
内皮リパーゼを標的とした動脈硬化治療法の新たな戦略‐遺伝子改変ウサギを用いた研究

内皮細胞リパーゼ(Endothelial lipase, EL)はHDL代謝においては重要な酵素として知られている。ELの発現を低下させることによって、血漿HDL値を上昇させることが、動脈硬化に対する新たな治療法になりうると考えられる。この仮説を証明するために、我々はウサギモデルを用いて、ELの発現様式や、ELと血漿HDLとの関係、動脈硬化病変内のELの発現、ELのアンチセンスの投与により血漿HDLの変化などの解析を行った。また、ヒトのEL遺伝子を用いて、ELの過剰発現トランスジェニックウサギの作製にも挑戦した。本年度では内皮リパーゼを過剰発現させるトランスジェニックウサギの作製と内皮リパーゼアンチセンスの合成及び投与実験を行った。肝臓で特異的に発現できるコンストラクトplivHEG/LE6を用いて16羽のドナーから476個のウサギ受精卵へのマイクロインジェクションを行い、11羽の仮親ウサギへの移植を行った。4羽のウサギの妊娠が確認されたが、出産したのは1羽のみであった。産まれた3羽の子ウサギには、内皮リパーゼ遺伝子導入されたポジのウサギが確認できなかった。現在、新しく精製したDNAコンストラクトを用いてマイクロインジェクションを継続している。ISIS社との共同研究の一環として、ウサギ内皮リパーゼアンチセンスの合成を行った。90種類の候補より、ウサギ培養肝細胞のEL発現を強力的に抑制できる内皮リパーゼアンチセンス2種類が選定できた。それぞれを合成し正常JWウサギ(6羽)に静注より6週間投与した。コントロール群と比べて、内皮リパーゼアンチセンスの投与により、肝臓での内皮リパーゼmRNAの発現量が約50%低下していることが判明した。また、6週間後の血中の高密度リポ蛋白値は上昇している傾向を示しているが、総コレステロールや中性脂肪の変化は認められなかった。リポ蛋白分画をHPLCにより分析した結果、粒子の大きい高密度リポ蛋白のコレステロールとリン質の量が内皮リパーゼアンチセンスの投与により著しく上昇していることが認められた。同様の方法で内皮リパーゼアンチセンスを高脂血症動物モデルであるwHHLウサギに投与したが、著明なHDL変化は認められなかった。現在、WHHLウサギの動脈硬化変化を調べている。本年度では引き続き内皮リパーゼを過剰発現させるトランスジェニックウサギの作製と内皮リパーゼアンチセンスの投与実験を行った。2回目の実験では、肝臓特異的に発現するコンストラクトplivHEG/LE6を用いて562個のウサギ受精卵へのマイクロインジェクションを行い、21羽の仮親ウサギへの移植を行った。そのうち、7羽の仮親ウサギの妊娠が確認され、7羽の子ウサギを出産した。Southern blot並びにPCR法にて測定した結果、内皮リパーゼ遺伝子が導入されたポジのウサギはいなかった。現在は、新しく精製したDNAを用いてのチャレンジを続けている。ISIS社より提供されたウサギ内皮リパーゼアンチセンスを用いて正常JWウサギ並びにWHHLウサギに静注実験を行った。センス投与群と比べて、内皮リパーゼアンチセンスの投与により、JWウサギの血清高密度リボ蛋白値が上昇している傾向が確認されたが、総コレステロールや中性脂肪の変化は認められなかった。リボ蛋白分画をHPLCにより分析した結果、粒子の大きい高密度リボ蛋白のコレステロールとリン質の量が内皮リパーゼアンチセンスの投与により、著しく上昇していることが認められた。同様の方法で内皮リパーゼアンチセンスを高脂血症動物モデルであるWHHLウサギに投与した。WHHLウサギの血清高密度リボ蛋白値の変化はJWウサギと同様であったが、ELアンチセンスの抗動脈硬化作用は認められなかった。以上の結果をまとめた論文を、2o12年のJAT誌に発表している。本年度では引き続き内皮リパーゼを過剰発現させるトランスジェニックウサギの作製を試みた。今回の実験では、1081個のウサギ受精卵へのマイクロインジェクションを行い、32羽の仮親ウサギへの移植を行った。そのうち、12羽の仮親ウサギの妊娠が確認され、18羽の子ウサギを出産した。Southern blot並びにPCR法にて測定した結果、内皮リパーゼ遺伝子が導入されたポジのウサギは2羽が確認された。現在は、この2羽ウサギの解析と繁殖を行っている。センス投与群と比べて、内皮リパーゼアンチセンスの投与により、JWウサギの血清高密度リポ蛋白値が上昇している傾向が確認されたが、総コレステロールや中性脂肪の変化は認められなかった。リポ蛋白分画をHPLCにより分析した結果、粒子の大きい高密度リポ蛋白のコレステロールとリン質の量が内皮リパーゼアンチセンスの投与により、著しく上昇していることが認められた。

同様の方法で内皮リパーゼアンチセンスを高脂血症動物モデルであるWHHLウサギに投与した。WHHLウサギの血清高密度リポ蛋白値の変化はJWウサギと同様であったが、内皮リパーゼアンチセンスの抗動脈硬化作用は認められなかった。以上の結果は2012年のJ Atheroscler Thromb誌に発表している。更に、内皮リパーゼの分子構造と阻害剤との相互作用を調べるために、生物情報科学技術を利用して、内皮リパーゼ分子3D構造を解析したとともに、脂質代謝にも重要な酵素である肝リパーゼとリポタンパクリパーゼの構造特徴を比較した。これらの研究成果はすでに2013年のPLoS ONEに発表される予定となっている。ウサギのELアンチセンスの合成や抗ウサギEL抗体の作製などは予想よりもやや遅れているが、In vivo実験自体は順調だと思われる。また、EL遺伝子導入には未だ成功していないが、さらにチャレンジすることにしている。24年度が最終年度であるため、記入しない。EL・Tgウサギの作製には未だ成功していない。考えられる原因としては、導入する遺伝子の質と量、マイクロインジェクションの技術などが挙げられる。現在、これらの原因を考慮しながら、確率を上げるべく努力している。
ヘリコバクター・ピロリ菌CagAによる胃上皮細胞の極性破壊と細胞増殖の共役機構

cagA遺伝子を保有するヘリコバクター・ピロリ感染は胃がん発症の危険率を有意に高める。本研究の目的は、CagAによる胃上皮細胞の極性破壊と細胞増殖をつなぐ分子機構を解明することである。CagAはSHP2活性化を介してErk-MAPK経路を異常活性化すると同時に、PAR1抑制を介して上皮細胞極性を破壊する。CagA依存的な上皮極性破壊がRhoAを活性化し、p21の発現を抑制する結果、細胞増殖を亢進させることを明らかにした。cagA遺伝子を保有するcagA陽性ヘリコバクター・ピロリ菌感染は胃癌発症の危険率を有意に高める。本研究の目的は、CagAによる胃上皮細胞の極性破壊と細胞増殖をつなぐ分子機構を明らかにし、ピロリ菌感染から胃癌発症に至る分子機構を解明することである。これまでに、申請者の所属する研究室では、CagAが細胞極性制御のマスターレギュレーターであるPAR1bに結合し、そのキナーゼ活性を抑制することにより上皮細胞極性を破壊することを明らかにしている。さらに、CagAがE-cadherin/β-catenin複合体を不安定化することによりβ-cateninシグナルを活性化することを見いだしている。興味深いことに、β-cateninシグナル活性化に必要なCagAの責任領域はCagAのPAR1b結合領域(CM配列)と一致する。そこで本年度は、CagA-PAR1b相互作用とβ-cateninシグナル活性化の関連性を解析した。PAR1bとE-cadherin/β-catenin複合体は、極性化上皮細胞において側方側(lateral)膜に共局在する。そこで、両者が物理的に相互作用する可能性を免疫沈降実験により検討した結果、両者の直接的な相互作用は認められなかった。次に、CagA依存的なβ-cateninシグナル活性化におけるPAR1bのキナーゼ活性の関与を解析した。TCF結合配列をルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだTOPtkLuciferaseを用いてレポーターアッセイを行ったところ、CagA依存的なβ-cateninシグナル活性化は野生型PAR1bの過剰発現により抑制される一方、キナーゼ活性を保有しない変異型PAR1bによっては抑制されなかった。よって、CagAによるβ-cateninシグナル活性化においてCagAによるPAR1bキナーゼ活性の抑制が関与していることが示された。cagA陽性ピロリ菌感染は胃がん発症の危険率を有意に高める。菌体内で産生されたCagAはピロリ菌のIV型分泌機構を利用して胃上皮細胞内に侵入する。細胞内においてCagAはSHP2の異常活性化を介して細胞増殖シグナルを脱制御すると同時に、細胞極性制御のマスターレギュレーターであるPAR1bの抑制を介して上皮細胞極性を破壊する。実際に、CagAを全身性に発現するトランスジェニックマウスは消化管腫瘍ならびに血液系腫瘍を発症する。一方、機能獲得型SHP2発現マウスは血液系腫瘍のみを発症する。この事実から、上皮細胞のがん化には過剰な増殖シグナルの誘導に加えて上皮細胞極性の破壊が重要な役割を担うと推察される。本研究は、CagAによる胃上皮細胞の極性破壊と細胞増殖をつなぐ分子機構を解明することを目的とする。上皮細胞極性を形成していない細胞において、CagAはSHP2の脱制御を介してErkシグナルを異常活性化し、CDK阻害分子であるp21を誘導した。その結果、細胞周期G1期停止ならびに過剰な発がんストレスによって生じる早期細胞老化が誘導された。一方、極性化上皮細胞においては、CagAはp21を誘導することなく、Erkシグナルの異常活性化を介して細胞増殖を亢進させた。よって、Erkシグナル依存的なp21誘導が上皮細胞極性によって制御されていることが推察された。そこで、p21発現制御に関与する分子を探索した結果、CagAによる上皮細胞極性破壊に伴いRhoAが活性化されることを見いだした。さらに、CagAにより活性化されたRhoAはROCKを介してc-Mycを活性化し、p21mRNAの翻訳抑制を担うmicro RNA(miR-17及びmiR-20a)の発現を誘導した。従って、CagAによる上皮細胞極性破壊はRhoAを活性化し、p21発現抑制を介して細胞増殖を亢進させることを明らかにした。
Cross-linguistic disagreement and its philosophical problems

また、ニュージーランドで開催された実験哲学の会議では、「知っている」と「分かっている」についてのさらなる詳しい研究を発表し、両者の使用の判断についての大きな違いを報告すると共に、それらが異なる知識概念を表しているという水本の従来の主張を補強した。さらに、他者の感情についての判断について日本人、中国人、アメリカ人の間で極めて興味深い違いがあることを発見し、それをオーストラリアで開催された心理学の哲学の会議で報告した。これらはcross-linguistic disagreementを具体的に考察するためのさらなる具体例を与えることになる。個人の研究においては、新たな具体的なcross-linguisticおよびcross-culturalな違いを哲学的に重要な領域において見出すことができ、他方国際会議の準備においては著名な哲学者を基調講演者として招待することができたため。個人の研究においては、上記の主要な成果を論文にまとめ国際的な雑誌に投稿するとともに、それらをもとにCross-LinguisticDisagreementについての考察を深め、それもまた論文の形に仕上げたい。国際会議については、今年度中に要旨を募集し、できればプログラムの目途が立つように準備を進めたい。