hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
食虫植物の有機化合物代謝機構の解析とその応用

本研究では、食虫植物の栄養獲得機構に関する予備的な知見を得るために、モデル植物としてウツボカズラ科の食虫植物を用い、捕虫袋内部に分泌される消化酵素や分泌液に関する基礎データの収集を行った。まず、捕虫袋分泌液に含まれる消化酵素の種類を明らかにすべく、各種加水分解酵素の活性測定を行った。予備実験において、蓋(ふた)が開く前の未成熟捕虫袋分泌液は無菌状態であった。一方、昆虫が捕らえられた捕虫袋分泌液は、外見上透明であり、腐敗臭は全く認められないが、数種類の微生物の存在が確認された。その中にはプロテアーゼを分泌するものも存在することが判明した。そこで、植物由来の酵素のみを分析するために、ほぼ無菌的な蓋が開いた直後の捕虫袋分泌液を酵素活性測定に使用した。その結果、プロテアーゼ、エステラーゼ、ホスファターゼ、RNase.DNase、ホスホリパーゼD、キチナーゼといった、少なくとも7種類の酵素活性が存在することが明らかになった。このうちプロテアーゼに関しては、プロテアーゼインヒビターを用いた阻害実験がら、アスパラギン酸プロテアーゼ(酸性プロテアーゼ)である事が判明した。一方で、捕虫袋分泌液のpHは蓋が開いた直後で4.0 4.8、獲物が捕らえられると3以下にまで低下することが予備実験で観察されていた。そこで、分泌液が強酸性を示す原因を探るために、分泌液に含まれる各種無機イオン濃度を測定した。その結果、プロトンの他にK^+とCl^-が高濃度(それぞれ、650 760ppm、530 600ppm)含まれることが明らかとなった。このことから、分泌液の酸性pHは、哺乳類の胃の内部と同じく塩酸の分泌によるものと推測された。以上の結果から、捕虫袋分泌液には昆蚤の消化に必要な消化酵素が一揃い存在し、これら消化酵素と分泌液のpHの低下が本植物の栄養獲得過程において重要な役割を果たしていることが示唆された。今後のさらなる研究により、根以外の部位からの低分子の吸収機構が明らがとなり、葉面がらの効率的物質吸収に関する新しい知識が集積されることが期待される。食虫植物は窒素、リン、無機塩類が乏しい貧栄養土壌地域に生息し、不足する栄養分を昆虫等を捕獲・消化吸収することで補っていると言われているが、昆虫消化吸収機構に関する詳細な研究報告例はほとんど無い。我々は前記機構解明の第一歩として、主に東南アジアに生息するウツボカズラ科の食虫植物であるNepenthes alataを実験植物として用い、補虫嚢の分泌液中に存在する各種加水分解酵素の分析を行った。ウツボカズラ(Nepenthes alata)の成熟補虫嚢分泌液を蓋が開く前、開いた直後、開いて一定時間後サンプリングし、各種一次代謝系加水分解酵素活性を測定したところ、蓋の開いた補虫嚢分泌液からプロテアーゼ、キチナーゼ、グルカナーゼ、リボヌクレアーゼ、デオキシリボヌクレアーゼ、ホスファターゼ、エステラーゼの各活性が検出された。また、プロテアーゼ活性は蓋が開いていない未成熟補虫嚢の分泌液においても検出された。次に、これらの酵素についてSDS-PAGE/活性染色を行ったところ、一種類のプロテアーゼ(分子量約48KDa)と4種類のデオキシリボヌクレアーゼ(分子量約42,50,58,68KDa)の各活性を有する酵素の存在が示唆された。一方で、分泌中に共存する微生物の単離を行ったところ、細菌と思われる微生物が単離された。現在、単離微生物由来の酵素を含めた各種酵素の生化学的解析を進めている。

以上の結果から、捕虫袋分泌液には昆蚤の消化に必要な消化酵素が一揃い存在し、これら消化酵素と分泌液のpHの低下が本植物の栄養獲得過程において重要な役割を果たしていることが示唆された。今後のさらなる研究により、根以外の部位からの低分子の吸収機構が明らがとなり、葉面がらの効率的物質吸収に関する新しい知識が集積されることが期待される。
宿主因子によるパラミクソウイルスの遺伝子発現と病原性の制御に関する研究

パラミクソウイルスのセンダイウイルス(SeV)は、非分節1本鎖マイナスRNAをゲノムとするマウス肺炎ウイルスである。本研究はP遺伝子から発現するアクセサリーV蛋白質の抗innate immunity作用の検討と、強毒SeV野外株の発育鶏卵継代による弱毒化機構の検討を通して、宿主因子によるSeVの遺伝子発現と病原性の制御を明らかにすることを目的とした。以下のような成果が得られた。1.V蛋白質の抗innate immunity作用は、発育鶏卵で幾代も継代された弱毒研究室株のZ株を用いて明らかにされたが、この作用は強毒野外株の浜松株によるマウス自然感染の過程でも発揮されていることを明らかにした。しかしこの作用はウイルスの肺内における活発な増殖によって覆い隠されていた。2.V蛋白質の抗innate immunity作用は、V蛋白質C端側のパラミクソウイルス亜科ウイルス間に高度に保存されたシステインをはじめとするアミノ酸配列が、亜鉛との結合を介して一定の構造をとることにより発揮されることを明らかにした。3.V蛋白質の作用標的は、インターフェロンシグナル伝達系やNK細胞であるという証拠は得られなかった。4.強毒SeV野外株病原性の発育鶏卵継代による弱毒化には、ウイルスゲノム・リーダー配列の20位、24位の塩基と宿主因子との相互作用が重要であることを明らかにした。パラミクソウイルスのセンダイウイルス(SeV)は、マウスを自然宿主とするマイナス鎖RNA肺炎ウイルスである。本研究は、(1)強毒野生型SeVのニワトリ受精卵継代による弱毒化の機構、及び(2)SeVアクセサリー遺伝子産物V蛋白の機能として想定されているマウスの免疫修飾能を検討することにより、宿主因子によるSeVの遺伝子発現と病原性の制御を明らかにすることを目的としている。(1)(1)強毒新鮮SeV浜松株の卵継代により得た種々の弱毒ウイルスクローンは、マウス病原性低下に対応して初代マウス肺上皮(MPE)細胞における増殖能が低下した。この増殖性の低下は弱毒クローンのゲノム複製不全が原因であった。初代ニワトリ胎児細胞では浜松株、弱毒クローンともほぼ同等によく増殖したことから、強毒野生型SeVの卵継代による弱毒化は宿主依存性のウイルスゲノム複製不全により起こることが明らかとなった。同時にウイルスゲノム複製に関わる宿主因子の存在が示唆された(Arch.Virol.,2001,in press)。(2)弱毒化をもたらす遺伝子変異を同定するために、浜松株ゲノムの全塩基配列を決定した(Virus Genes,2001)。(3)さらに、代表的弱毒SeVクローンの全塩基配列を決定して浜松株の塩基配列と比較したところ、プロモーターの存在するリーダー部位とRNA合成酵素L遺伝子に弱毒化と関連すると推定される変異が検出された(投稿準備中)。(4)今後は浜松株cDNAからのウイルス回収系を確立してそれぞれの変異の弱毒化における意義を明らかにする。(2) SeVV蛋白C端側のCysに富むZnフィンガーモチーフ様構造がマウスの初期免疫応答を修飾とすると推定されている。各Cysを変異させたV蛋白および変異V蛋白を発現するSeVを回収系により作成して、V蛋白が実際にZn結合能を持つこと、そのZn結合能はウイルス病原性発現に関与していることを明らかにした(J.Virol.,2000)。今後V蛋白の初期免疫修飾能の検討を行う。マイナス鎖RNAセンダイウイルス(SeV)は、マウスの肺炎ウイルスである。本研究は宿主因子とSeVの病原性発現及び遺伝子発現との関わりを明らかにすること、特に、(1)SeV強毒野外株(浜松株)のニワトリ受精卵継代による弱毒化における宿主因子との相互作用、及び(2)免疫制御蛋白と予想されているSeVV蛋白とマウス宿主因子との相互作用の実体を解明することを目的としている。(1)12年度の研究により、強毒野外株SeV(浜松株)の卵継代による弱毒化は宿主依存性のウイルスゲノム複製不全により起こること、弱毒化と関連すると推定されるゲノムの変異はプロモーターの存在するリーダー部位とRNA合成酵素L遺伝子に存在することを明らかにした。

13年度は、これらの変異のうちリーダー変異の弱毒化における意義の検討を行った。(1)まず浜松株全長cDNAを作製してcDNAからの浜松株回収系を確立した。(2)浜松株cDNAにリーダー変異を導入した変異ウイルスを作製した。(3)作製した変異ウイルスの病原性をマウス感染実験系で検討した結果A20U, A24U両リーダー変異を導入したウイルスの病原性が著しく低下したので、これらは弱毒化変異であることが明らかとなった。今後、マウス肺、ニワトリ胎児初代培養細胞において、ウイルスの増殖能及びゲノムの転写・複製を検討する。(2)12年度の研究により、V蛋白C端側特異部分が実際にZn結合能を持つこと、このZn結合能はウイル、ス病原性発現に関与していることを明らかにした。13年度は、V蛋白の作用標的を明らかにすることを目的とした。V蛋白の標的はinnate immunityと予想されるので、SeV回収系で作製したV欠損SeVの増殖を、ヌードマウス、IFNRα/β及びIFNγノックアウトマウス、NK欠損マウスなどで比較検討したが、いずれのマウスにおいても正常マウスと同様の増殖態度を示し、V蛋白の標的を特定することはできなかった。本研究ではマウスパラミクソウイルスのセンダイウイルス(SeV)病原性発現及び遺伝子発現と宿主因子との関わりを明らかにするために、(1)SeV強毒野外株(浜松株)の非自然宿主継代による弱毒化の機構と(2)SeVアクセサリー遺伝子産物V蛋白の機能に焦点を絞って検討している。14年度は(1)に関する検討が前進したので、(1)について報告する。12・13年度の研究により、浜松株を非自然宿主のニワトリ受精卵で継代すると、卵への順化と選択により、マウス肺でのウイルス増殖能と病原性が著しく低下すること、この増殖性の低下は初代マウス気管上皮細胞において再現できること、その低増殖性は主にウイルスゲノムの複製不全によることを明らかにした。同時に卵順化SeVと浜松株全ゲノムの塩基配列の比較により、リーダー配列とRNA合成酵素L遺伝子に弱毒化と関連すると思われる変異を同定した。14年度は、同定されたリーダー変異のゲノム複製と病原性における意義をリバースジェネティクスにより検討した。まず、浜松株全長ゲノムのcDNAを作成してSeV強毒野外株のウイルス回収系を確立した。つぎにcDNAにこのリーダー変異を導入してリーダー変異ウイルスを作成した。この変異ウイルスのマウス気管培養細胞及びマウス肺での増殖性、さらには病原性を検討したところ、いずれも明らかに低下していた。対照的にこの変異ウイルスはニワトリ胎児細胞でよく増殖した。これらの結果は卵順化SeVに検出されたリーダー変異が弱毒化に確かに関与していることを示している。本研究はパラミクソウイルスのリーダー配列がウイルス病原性に関与することを初めて示したものであるとともに、今回検討したリーダー配列の塩基は直接あるいは間接的に宿主因子と相互作用することによってウイルスゲノムの転写複製の調節に関与していることを示唆している。
定位放射線照射による脳傷害の画像評価の基礎的研究

定位放射線照射による放射線生物学的効果について画像評価を病理学的根拠に基づくものとするため、動物を用いた定位放射線照射システムを考案した。定位放射線照射の放射線生物学的効果の詳細を検討するためには、動物実験においても臨床における定位放射線照射と同等の精度が保たれることが必要である。そこで本研究においてX-Knife^<TM>を用いたシステムを考案、検証行った。検証にはフィルム法を用い、X-Knife^<TM>での治療計画による線量分布図の15、18Gyの面積をフィルム法による実測と比較した。結果は、その誤差が20%程度であり再現性よく照射可能であることが証明された。15、18Gyではbeam profile上線量が大きく変化する部位であり、上記の結果は我々の実験システムが高い精度を保っていると考えられた。一方、画像評価法の1つとして、micro-PETの最適化を行った。FDG-PETは機能画像として位置付けられ、CT、MRIとの比較により定位照射においてしばしば問題となる脳壊死の診断の一助となる。我々の検討では、家兎を用いた肺転移モデルにおいて、MDCTをgold standardとして比較した場合、φ2mmの腫瘤まで検出可能であっった。また集積の定量化も可能で、再現性も保たれていた。従ってネコなどの小動物における脳のFDG-PET像もmicro-PETによる評価により、詳細な機能評価が可能であると考えられた。ネコを使った実験に先駆け、現在ヒトの定位放射線照射の治療計画システムとして用いられているX-kmife(Radionics社製)が、ネコのような小さな頭部の照射の治療計画にも適応可能かを、ネコの頭部とほぼ同様の大きさのファントムを作成し、ファントムに内蔵したGAFクロミックフィルムの解析により、照射線量、照射野形状の評価を行った。動物用定位照射装置自体の動作の誤差は申請時にしめした如く0.1mm以下であるが、これを実際ネコのような小さな頭囲のもので、定位照射として照射野の再現性(照射野形状の再現が±1mm以下)が保たれているかどうかをファントムを用いて検証する。ファントムは直径10cmの球状で、密度を1.00としたポリエチレン樹脂を用い、半球部分を中心部から1cmまでは5mmの間隔で、それより外側は1cmの間隔でスライスし、これらの間に各スライスの中心にGAFクロミックフィルムを固定して球体の中心が定位照射のiso-centerとなるよう設計した。照射野形状の評価は球体の中心に置かれたフィルムの2次元形状とX-knife上で決めた仮想のtarget(φ5mm)のGTVの辺縁線量で比較した。照射方法は5から7アークの3通りで行った。いずれもGAFクロッミクフィルム上での可視的な形状はX-knife上での治療計画の結果と2次元的な照射野形状についてはx-、y-いずれの方向にもほぼ1mm以内であり、また線量についてもほぼ2%以下であったことから、これらの照射システムは動物の照射においても定位放射線照射としてのQAが保たれると考えられた。またネコでの治療実験の準備として、X-knife上で認識されるネコのCTを撮像するためのdeviceとしてヒトで用いられている定位照射のためのhead ringを改造し、照射装置に固定されているのと同じ頭位で固定可能な固定具の作成を行っている。我々が所有する動物用定位放射線照射システムのファントムによる検証では、これまでLaser Densitometer (CMS社製)を用いて行ってきた。GAFクロミックフィルムのこれを用いたデータ解析では、GAFクロミックフィルムの濃度勾配から線量測定を行う過程についてはデンシトメータの測定ごとの誤差は2%以内であったが、照射野形状の検証については視覚的評価にとどまり、またノイズも目立つことが課題となっていた。そこで新たに臨床におけるIMRT ; intensity modulated radiotherapyの検証用ツールとして導入されたDD system (アールテック社製)を用いファントムにおける検証を行った。

なおCMS社製フィルムデンシトメータと同様、DD systemにおいてもマイクロチェンバーによるフィルム濃度-線量の標準曲線作成し、線量評価を行った。臨床で定位放射線照射システムとして用いられているX-knife (Radionics.社製USA)で行った治療計画はCT画像上で線量分布図を作成、球状ファントムの中心の画像をcaptureしてphoto shop Ver6.0上でフィルム固定用のspaceを2cm角とし等線量曲線(15,18)の面積をピクセル数の比から算出、前述のDD systemの結果と比較検討した。照射野形状については視覚的に評価し、各々ほぼ同様の楕円形で、15Gy、18Gyのそれぞれの等線量曲線内のGAFクロミックフィルム上での面積とX-knifeから算出したものとの差は計測ごとにいずれも15、18Gyそれぞれ2.28%、8.16%以内であった。以上より動物用定位放射線照射システムが高い精度で照射可能であることが示された。今後の課題としてはネコの照射実験における照射線量と画像評価および組織学的評価の時期をpilot studyの結果から最適化していく予定である。平成15年度は、我々が考案した動物用定位放射線照射システムにおいて、その精度をより臨床のレベルにまで近付けるべく改良を行った。平成14年度に構築したX-Knife(Radionics社製USA)を用いた治療計画システムにおいては、ファントム実験においてフィルム法による照射野形状、照射線量の測定を行っているが、我々の定位放射線照射装置の動作は安定しており、φ1cmのコリメーターを用いて5arcsの定位放射線照射を行った(中心線量20Gy)時の線量分布は15、18Gyの等線量曲線で囲まれる面積を比較し、その誤差が20%程度であり再現性よく照射可能であることが証明された。しかし治療計画用CT撮像を行い、その後定位放射線照射装置再固定する場合に、球状ファントムではgeometryの再現性の評価が困難であったため、平成15年度では、照射装置のear-bar、上顎固定具の相対的位置関係が同一なCT撮像用頭部固定具の設計、製作を行った。またこれを用いてファントム実験を行い、さらなる改良を加え、その再現性について検証を行った。予めファントム内のfilm gap内にマーカーを貼り、そのファントム内の位置を把握しておく。このマーカーを中心にSRS(5arcs、中心線量;20Gy)の計画を行う。一方、治療計画に従い、GAF Chromic filmを内蔵したファントムを動物用照射装置で実際に照射行い、治療計画上での線量分布と比較した。マーカーの位置を球の中心から5mm、1cmのスライス上としたが、いずれも照射野形状の差は面積で20%程度と、再現性が保たれていた。今後動物実験において、臨床に則した条件での実験が可能となった。
膀胱癌の再発防止に対する特異受動免疫療法に関する研究

3年間を通じて浸潤性膀胱癌が少なく、なかなか思うように研究がすすまなかった。10例(腎癌4例、膀胱癌6例)の泌尿器科癌患者において、手術時採取した領域リンパ節は、新鮮凍結切片にて病理学的に転移がないことを確認して、ホモジネート後、リンパ球を分離した。分離したリンパ球は10単位のインターロイキン2と6%CO2、37°Cの培養器内で4日間培養することでLAK細胞を誘導した。この誘導されたLAK細胞の殺細胞能は30-40%であったが、患者側の問題で全例生体投与は不可能であった。また、腎癌患者で3年間を通じて、4例ではあるが、末梢血リンパ球よりCTC細胞を誘導してみたところ、1例のみ自己癌細胞に対して30%の殺細胞能を有していた。また、この活性はCD3ブロッキングによりブロックされた。この症例は、CTL誘導時にOK-432を使用しており、0K-432の役割や分子レベルにおける解析も必要と考えている。このほかにインターフェロンなどのサイトカインを併用することで増強効果があるか否かも併せて確かめてみようと考えている。当該年度は膀胱癌患者,とくに浸潤性膀胱癌患者が1例と少なかったため思うように研究が進まなかった。手術時採取した領域リンパ節は,新鮮凍結切片にて転移がないことを確認して,リンパ球を分離した。分離したリンパ球は10単位のインターロイキン2と4日間培養してLAK細胞を誘導した。この誘導されたLAK細胞の殺細胞能は3040%であったが,患者側の問題で生体投与は不可能であった。次年度は膀胱癌患者だけに限らず,尿路性器癌の患者で手術時領域リンパ節が採取可能な症例は,可能な限り,この研究に組み入れることと,できれば,LAK細胞だけではなくCTLを誘導してみようと考えている。また,標的細胞も自己癌細胞であるべきで,採取した標本より癌組織も採取利用する予定である。症例さえあれば,このほかにインターフェロンα,γを併用することで併用効果があるか否かも確かめたいと考えている。当該年度も浸潤性膀胱癌が少なく、なかなか思うように研究がすすまなかった。手術時採取した領域リンパ節は、新鮮凍結切片にて転移がないことを確認して、リンパ球を分離した。この誘導されたLAK細胞の殺細胞能は3040%であったが、患者側の問題で生体投与は不可能であった。最終年度こそは膀胱癌患者のみにかかわらず、尿路性器癌患者で手術時領域リンパ節の採取可能である症例は、可能な限り、本研究に組み入れることと、できれば、LAK細胞だけでなく、CTL細胞も誘導することを考えている。腎癌患者で一例のみではあるが、末梢血リンパ球よりCTL細胞を誘導してみたところ、自己癌細胞に対して30%の殺細胞能を有していた。症例さえあれば、このほかにインターフェロンなどのサイトカインを併用することで増強効果があるか否かも併せて確かめてみようと考えている。分離したリンパ球は10単位のインターロイキン2と6%CO_2、37°Cの培養器内で4日間培養することでLAK細胞を誘導した。この誘導されたLAK細胞の殺細胞能は3040%であったが、患者側の問題で全例生体投与は不可能であった。また、腎癌患者で3年間を通じて、4例ではあるが、末梢血リンパ球よりCTL細胞を誘導してみたところ、1例のみ自己癌細胞に対して30%の殺細胞能を有していた。この症例は、CTL誘導時にOK-432を使用しており、OK-432の役割や分子レベルにおける解析も必要と考えている。
自由電子レーザーの開発とコヒーレントX線の発生技術と評価技術の開発と利用研究

この20年に放射光科学は急速に発展した。高エネルギー物理学に寄生した第一世代から専用の光源をもつようになった1980年代、さらに加速器の進展を促し、いわゆる第3世代光源の出現を作り出した1990年まで大きく分けて3世代の歴史がある。我々の関心のあるX線領域の光を出す2.5GeV蓄積リングと6.5GeV入射・蓄積リングにおける輝度の増加を見ると1983年から現在に至るまでおよそ3年毎に2ケタの伸びが見られる。この輝度のデイメンジョンの中には光源の大きさが含まれているので、定義するところの第1次コヒーレンスが自動的に入っている。すなわち空間コヒーレンスである。さらには輝度の中には波長分解能が入っているが自動的に輝度の増加と時間コヒーレンスの増加とは関係がつかない。さて第4世代光源はかまびしく喧伝されてきたが、実態は第3世代のほんの少しの改良になっている。そこで2次のコヒーレンス度を上げる本当の意味での第4世代光源=コヒーレント光源の開発が必要になる。この開発の技術面から見た方法は2つあって1つはストレジリングもう1つはライナックである。さらには念のためプラズマX線も考えておく必要がある。さらに技術的難易度とは別にどの波長領域を最も狙うべきか考えるべきである。このような状況下で3つのことを進めた。まずロシアはこの方面の物理的考察と実験方面に特に優れているので調査の対象とした。さらに主に米国内のDuke大学、ブルックヘブン国立研究所、UCLA、SLAC、アルゴンヌ国立研究所および独国DESYから合わせて12名の開発の第1線級の研究者をKEKに招待した。これらの研究者との討論を通していろいろの件が明瞭になってきた。例えばコヒーレンス度の定義については日本側の議論が最も進んでいる。マシンの開発は日本がかなり遅れている。高性能電子銃などがそれである。そこで次のステップとして国際協力のレベルでどことどのテーマを進めるか、別々の役割分担でよいか、役割分担をしながら全体もあわせて進めるか検討中である。海外から招いた人の最も都合のついた機会にこれらのことを議論する2日間の国際ワークショップを開催した。規模50-60名を想定したところ3時宣にかなっていたとみえて出席者数は100名を超え、非常に盛況であった。本年度の活動をまとめると以下のようであった。(1)1次コヒーレンスの定義(2)応用科学の洗い出し(3)2次コヒーレンスの定義(4)応用科学の洗い出し(5)プラズマ発生型コヒーレント光源開発の可能性に関する検討(6)ストレジリング型コヒーレント光源開発の可能性に関する検討(7)ライナック型コヒーレント光源開発の可能性に関する検討この20年に放射光科学は急速に発展した。(1)1次コヒーレンスの定義(2)応用科学の洗い出し(3)2次コヒーレンスの定義(4)応用科学の洗い出し(5)プラズマ発生型コヒーレント光源開発の可能性に関する検討(6)ストレジリング型コヒーレント光源開発の可能性に関する検討
BMP応答性骨格形成細胞前駆細胞の可視化とその応用

BMPは強力な異所性骨誘導作用を持つ生理活性物質である。しかしBMPに応答し骨芽細胞や軟骨細胞へ分化する前駆細胞は未だ明らかにされていない。そこで本研究ではBMP応答性骨格形成細胞前駆細胞の同定を試みた。まず、BMPのシグナル異常により異所性骨化を生じる遺伝病であるFOPに着目した。FOPの原因遺伝子であるALK2のR206H変異を発現するトランスジェニックマウスを作製し3ラインを確立に成功した。Bone MorDhogenetic Proteln ; (BMP)は強力な異所性骨誘導作用を持つ生理活性物質である。BMPは培養細胞を用いた実験系で様々な細胞に対し、骨芽細胞分化誘導能を有することが示されている。一方、in vivoの骨誘導に際して、BMPの標的となり、骨芽細胞や軟骨細胞へ分化する前駆細胞は未だ明らかにされていたい。そこで本研究では、BMPの初期応答遺伝子のプロモーター・エンハンサーで緑色蛍光タンパク質を発現するBMPレポーターマウスを作製し、in vivoにおけるBMP応答性の骨格形成細胞前駆細胞を同定し、その性状を解明することを月的とする。BMPは全身の筋組織内に異所性骨化を生じる進行性骨化性線維異形成症(Fibrodysplasia Ossificans Progressiva ; FOP)への関与が示唆され、これまでにBMPのI型受容体の一つであるALK2が原因として同定されている。我々はALK2で見られるR206H変異が構成的活性型の受容体であることを報告している。骨格形成前駆細胞の同定に用いるため、筋組織での異所性骨化誘導を可能にするALK2(206H)を筋組織内で特異的に発現するトランスジェニックマウスの作製を行った。ALK2(206H)トランスジェニックマウスはCreリコンビナーゼの発現依存的にALK2(206H)発現するコンディショナルトランスジェニックマウスシステムを用い、作製を行った肝臓特異的にCreを発現するAlbmin-Creとの交配により、導入遺伝子の発現の確認を行ったところ、2Lineで肝臓特異的ALK2(206H)の発現を確認することに成功した。今後はこのマウスを用い、異所性骨化の確認と同定されている。骨格形成前駆細胞の同定を試みる予定である。Bone Morphogenetic Protein;(BMP)は強力な異所性骨誘導作用を持つ生理活性物質である。一方、in vivoの骨誘導に際して、BMPの標的となり、骨芽細胞や軟骨細胞へ分化する前駆細胞は未だ明らかにされていない。そこで本研究ではin vivoにおけるBMP応答性の骨格形成細胞前駆細胞を同定し、その性状を解明することを目的とする。BMPは全身の筋組織内に異所性骨化を生じる進行性骨化性線維異形成症(Fibrodvsplasia Ossificans Progressiva;FOP)への関与が示唆され、これまでにBMPのI型受容体の一つであるALK2が原因として同定されている。ALK2(206H)トランスジェニックマウスはCreリコンビナーゼの発現依存的にALK2(206H)発現するコンディショナルトランスジェニックマウスシステムを用い、作製を行った。肝臓特異的にCreを発現するAlbmin-Creとの交配により、導入遺伝子の発現の確認を行ったところ、3Lineで月刊蔵特異的ALK2(206H)の発現を確認することに成功した。また、筋組織内にCreを発現するアデノウイルスを投与することにより、導入遺伝子を発現させることに成功した。本研究で作製に成功したトランスジェニックマウスはFOP治療法や治療薬の開発に用いることができるだけでなく、未だ解明されていない骨格形成細胞前駆細胞の同定に大きく関与できると思われる。
医用材料に吸着する超微量タンパク質の高感度絶対定量法の開発

本研究では、研究代表者らが過去に構築した同位体希釈質量分析を利用したアミノ酸分析法(IDMS-AAA法)を応用し、医用材料に吸着した超微量タンパク質の絶対量を高感度かつ高精度に定量する方法を開発することを最終目標とする。初年度は、まず過去に研究代表者らが確立した現行法(IDMS-AAA法)を改良し、全天然アミノ酸を定量出来る分離・検出が可能で、かつ分析時間を10分程度まで短縮できる条件を検討した。具体的にはAPDS(アミノタグワコー, Rapid Commun. Mass Spectromet., 23(2009)1483)を誘導体化試薬として利用した誘導体化-LC/MSによるアミノ酸分析法と、HILICカラムを利用した非誘導体化ーLC/MSを利用したアミノ酸分析の2種を検討し、後者の方法においては、既存の方法と比較して感度は保ちつつ、分析時間の大幅な短縮(88分/1分析→23分/1分析(洗浄工程・平衡化の時間も含む))と測定対象アミノ酸の拡大(8種→17種)を達成することが出来た。次に、モデルタンパク質であるヒト血清アルブミン認証標準物質を約100倍希釈したもの(0.7 mg/mL)について、加水分解条件の検討を行った。結果、加水分解時間については6時間以上で十分であることが分かった。また、17種類中、Cys-Cys,Gly,Thr, Tyrを除く13種類のアミノ酸については定量が可能であることが分かった。また、汎用の低タンパク質吸着界面であるポリエチレングリコール固定界面の作製にも着手し、ガラス基材への金の蒸着とチオール-金結合を介したポリエチレングリコールの固定化法を最適化できた。当該研究課題に関しては、研究実施初年度である平成30年度において2つの課題を目標として設定し、その計画に従って研究を実施した。当初の予定通り、IDMS-AAA法の分析条件の改良およびモデルタンパク質の分解条件の検討を行うことが出来た。また、汎用の低タンパク質吸着界面の作製にも着手することができ、順調に進展していると判断する。今後の研究については、研究初年度の実施状況が概ね順調であったことから、交付申請時に計画した研究実施計画に従って推進する。特に令和元年度については、初年度に設定した課題の成果のうち、特に初年度に改良したIDMS-AAA法分析により、汎用材料界面へ吸着したモデルタンパク質、あるいは血清蛋白質の吸着絶対量の定量を実施する。また、参照実験として、同一のタンパク質溶液の吸着量を本手法と従来法(比色定量法および免疫学的定量法)とでそれぞれ定量し、感度や精度を比較する予定である。IDMS-AAA法において内部標準として用いる安定同位体標識アミノ酸類(3C, 15N標識した各種アミノ酸)を購入するにあたって、予算の残額の関係から次年度以降に予算を繰り越し、購入することとした。令和元年度においては、標品試薬、ヒト血清タンパク質試料、タンパク質定量試薬、抗体試薬、医用材料の表面処理用試薬等を購入予定である。
予防接種従事者と親への幼児のワクチン接種関連疼痛マネジメント教育プログラムの開発

ワクチン接種時の疼痛軽減に関してWHO(世界保健機構)より痛みへの対処の必要性が指摘されている。ワクチン接種関連疼痛は接種前から最中、後を含めた子どもの身体的・心理的苦痛を示す。本研究では、親と予防接種従事者への調査をもとに日本における予防接種にかかわる医療従事者への子どものワクチン接種関連疼痛緩和のための教育プログラムを開発し、その有効性を考察することを目的としている。
神経ペプチドのヒト毛周期におよぼす作用の研究

I.毛乳頭細胞の単離および培養:頭部の手術時に得られた皮膚片より毛乳頭を単離し、培養液中で培養した.まず継代培養した細胞が毛乳頭由来の細胞であることを証明する目的で、smooth muscle actinの発現を免疫蛍光抗体方およびにて調べた.両手法において、smooth muscle actinが培養細胞質に認められた.II.各毛乳頭細胞に与える神経ペプチドの細胞生物学的影響の検討:これまで皮膚に発現することが判明している神経ペプチドは、calcitonin gene-related peptide(以下CGRP),substance P(以下SP),vasoactive intestinal polypeptide(以下VIP)がある.今回の実験ではCGRP,VIP,SPにて培養した毛乳頭細胞を刺激してまず細胞増殖に与える影響、次に毛の成長を促すとされるサイトカインの分泌に与える影響を調べた.細胞増殖能はBromodexyuridine(Thymidine analogue)を用いたDNA合成率で検討した.対照としての用いた線維芽細胞は、CGRPおよびSP刺激によりそれぞれ80%,60%増加した.それに対し、毛乳頭細胞は、CGRPあるいはVIPにて刺激しても変化が認められなかった.むしろ、SP刺激は毛乳頭細胞の増殖を抑制する傾向を示した.SPは一般的にストレスに関係するといわれており、毛乳頭細胞の抑制はストレスと脱毛の関係に寄与している可能性を示した.また、いずれの神経ペプチドも毛乳頭のサイトカイン分泌に対する影響は少なかった.III.毛乳頭における細胞間接着因子の検討:生検頭皮より毛組織を単離した標本を電子顕微鏡を用いて詳細に観察すると、毛乳頭細胞の突起間にgap junctionの構造とadherens junctionの構造が認められた.それぞれの細胞接着構造の構成蛋白であるconnexinとcadherinの発現を免疫蛍光抗体法およびウエスタンブロット法にて調べるた.In vivoにおいて両蛋白は細胞間に発現しており、これらの接着構造が毛乳頭の構造構築に重要であることが明らかになった.I.毛乳頭細胞の単離および培養:頭部の手術時に得られた皮膚片より毛乳頭を単離し、培養液中で培養した.まず継代培養した細胞が毛乳頭由来の細胞であることを証明する目的で、smooth muscle actinの発現を免疫蛍光抗体方およびにて調べた.両手法において、smooth muscle actinが培養細胞質に認められた.II.各毛乳頭細胞に与える神経ペプチドの細胞生物学的影響の検討:これまで皮膚に発現することが判明している神経ペプチドは、calcitonin gene-related peptide(以下CGRP),substance P(以下SP),vasoactive intestinal polypeptide(以下VIP)がある.今回の実験ではCGRP,VIP,SPにて培養した毛乳頭細胞を刺激してまず細胞増殖に与える影響、次に毛の成長を促すとされるサイトカインの分泌に与える影響を調べた.細胞増殖能はBromodexyuridine(Thymidine analogue)を用いたDNA合成率で検討した.対照としての用いた線維芽細胞は、CGRPおよびSP刺激によりそれぞれ80%,60%増加した.それに対し、毛乳頭細胞は、CGRPあるいはVIPにて刺激しても変化が認められなかった.むしろ、SP刺激は毛乳頭細胞の増殖を抑制する傾向を示した.SPは一般的にストレスに関係するといわれており、毛乳頭細胞の抑制はストレスと脱毛の関係に寄与している可能性を示した.また、いずれの神経ペプチドも毛乳頭のサイトカイン分泌に対する影響は少なかった.III.毛乳頭における細胞間接着因子の検討:生検頭皮より毛組織を単離した標本を電子顕微鏡を用いて詳細に観察すると、毛乳頭細胞の突起間にgap junctionの構造とadherens junctionの構造が認められた.それぞれの細胞接着構造の構成蛋白であるconnexinとcadherinの発現を免疫蛍光抗体法およびウエスタンブロット法にて調べるた.In vivoにおいて両蛋白は細胞間に発現しており、これらの接着構造が毛乳頭の構造構築に重要であることが明らかになった.
初年次専門（職）教育と生涯キャリアデザインとの接合点の構築に関する実践開発的研究

本研究は、四年制大学のI特定の専門職養成に直結したキャリア直結型学部、II進路を特定せずに関心分野で受け入れるキャリア非直結型学部の双方で、初年次の専門教育(初修専門教育)と生涯を通じたキャリアデザインへの教育を効果的に接合する方途に実践的に取り組み、そこに即応するプログラム開発を目指すものである。代表者は本科研申請後(2017年4月)に赴任した文理融合の新設の新潟大学創生学部で同11月、本研究の構想を土台とするキャリア創生研究会を組織化し、複数領域の有志教員(生涯教育学・経営学・メディア学・会計学・心理学・社会科教育学)で研究を開始し、発信媒体『創生ジャーナルHuman and Society』を創刊した。平成30年度は、1ユニークな初年次教育を行うキャリア直結型学部の視察見学・ヒアリング調査、報告の活字化、ジャーナル特集記事への取りまとめ、2実践研究として2回の学生主体キャリアイベントの実施、多面的振り返り、記録化・活字化、ジャーナル記事への取りまとめ、3中国北京師範大学珠海校教育学部およびカナダマクマスター大学医学部の初年次教育の訪問調査、その報告の活字化を行った。1では、メンバー全員で医療系総合大学である昭和大学の富士吉田キャンパスを訪ね、初年次教育の現地調査を行った。医・歯・薬・看護・理学療法の1年生全員が同キャンパス内で、多領域混合の課題基盤型教育(PBL)と全寮制生活を経験するIPE(多職種連携教育)の実態について、視察と聴き取りを行い、報告と振り返りを執筆した。2では、学生主体型キャリアイベントの第2回(留学・海外経験を活かし働く先輩)・第3回(公務員のライフとワーク)を実施し、参加・主催学生の意識の変化を見るアンケートを行い、記録と振り返りを、学生たちと連名でジャーナル原稿にまとめた。3では、中国(依頼)とカナダの調査報告をジャーナル原稿に掲載した。第一に、本研究には多領域を足場とする研究会メンバーが研究協力者として参加しており、視察訪問・実地調査でも、学生主体のキャリアイベントへの支援においても、学習/教育事象や学習支援アプローチなど、同じ対象を多面的観点から捉え、領域横断的に検討できるという有意義な研究活動が成立しているためである。学生支援上も、FD的な要素を兼ね備えた実り多い経験が共有できている。第二に、初年次教育とキャリアデザインを考える上で、学生主体キャリアイベントを組織し支援する経験は、両者を橋渡しするような、本研究の実践的プログラム開発の構想に、多くの示唆を与えてくれるためである。第三に、研究会の発信媒体としての『創生ジャーナルHuman and Society』を活用できることで、特定領域に足場を持たない本研究会の成果発表の場が確保できる。のみならず、このような媒体を通して、初年次段階の学生のキャリア意識やキャリアデザインへの諸課題が多面的な形で明確化でき、これらが、学部内の他領域の教員との今後の実践研究に向けた連携協力体制の形成にも、有用な助けとなっているためである。今年度は、非キャリア直結型学部のキャリア教育の取り組みに注目する。前半期に、工学系で初年次からキャリアに関わる取り組みを行っている大学を選び、視察訪問・ヒアリング調査を行うとともに、創生学部の自然系教員との対談・鼎談などの機会を設定し、非キャリア直結型学部において、初年次にどのような取り組みが可能かを、自然系の文脈で検討する機会を設定する。その成果は記録化し、多面的な振り返りを経て、ジャーナル第3号に、特集として掲載する予定である。合わせて後半期には、非キャリア直結学部の初年次からの学生のキャリア支援に関わって、創生学部ないし他の大学学部での量的・質的な学生意識調査を計画している。但し、この調査研究に関わっては、対象の選定や質問紙の作成、データの整理・考察などに一定以上の時間を要することが予測される。このため、今年度の課題遂行上の便宜により、研究期間を一年延長することも検討しており、この方向性については、研究会メンバーと相談し、来年度も含む研究協力依頼と合わせて一定の了承と合意を得ている。本研究は、四年制大学の1特定の専門職養成に直結したキャリア直結型学部(医歯学部・看護学部等)、および2進路を特定せずに関心分野で受け入れるキャリア非直結型学部(法学部・理学部等)の双方で、初年次の専門教育(あるいは初修専門教育)と生涯を通じたキャリアデザインへの教育を効果的に接合する方途の模索に実践的に取り組み、そこに即応したプログラム開発を試みるものである。平成29年度は、1全国の動向調査、2異動・赴任先でのキャリア創生研究会の組織化と活動、3同研究会の実践研究としての学生主体キャリアイベントの実施、多面的振り返り、それらの記録・活字化・ジャーナル特集記事への取りまとめ作業、4医学部における初年次授業「自己主導型学習」の実践研究の継続と論文化などがある。1では、キャリア直結型学部の典型例として医学部に注目し、初年次専門(職)教育の実際に関するインターネット・文献での実態調査を実施した。2では、2017年4月に異動・赴任した新潟大学創生学部において、経営学、メディア学、会計学、心理学、社会科教育学など複数領域の有志教員と、キャリアに関する研究会を結成し、専門教育とキャリア支援について各領域での実態と課題の共有作業を行っている。3では、同研究会において、実践研究のための共通基盤構築の取り組みとして、有志学生を募り、学生主体型キャリアイベントを企画・実施し、当日の記録とその多面的な振り返りを研究会ジャーナル『創生ジャーナルHuman and Society』の企画特集として取りまとめた。

4同授業は、於:奈良医科大学)のに関わる申請者自身の2013年以降の実践経験について、同大医学教育開発センター藤本眞一教授と共同で、同授業の実践的評価と課題などに関わる論文を執筆し、同大紀要に投稿するために準備中である。2017年4月に勤務先の異動があり、申請時とは研究環境や研究状況が大きく異なったため、研究を進めるうえでの困難が予想されたが、以下のような展開があったために、予想以上の純情な展開が見られている。1創生学部において、異なる専門領域を足場とする複数の教員が自分野におけるキャリアとキャリア支援を考える研究会が組織されたことによって、多領域における良質の情報収集や状況把握、およびそれらを踏まえた横断型議論が可能になったため。2同研究会が、創生学部をキャリア非直結型学部の典型と捉え、実践研究のフィールドとして取り組んだ学生主体型キャリアイベント「女性と男性がともに人間らしく働くために」(2018年2月10日)を実施することができ、キャリア非直結型学部における初年次キャリア教育への示唆や手がかりが少なからず得られたため。3奈良県立医科大学との良好な協力関係が維持され、授業「自己主導型学習」の継続のみならず、より発展的な実践研究としての展開の可能性が検討できる段階になったため。本研究は、四年制大学のI特定の専門職養成に直結したキャリア直結型学部、II進路を特定せずに関心分野で受け入れるキャリア非直結型学部の双方で、初年次の専門教育(初修専門教育)と生涯を通じたキャリアデザインへの教育を効果的に接合する方途に実践的に取り組み、そこに即応するプログラム開発を目指すものである。代表者は本科研申請後(2017年4月)に赴任した文理融合の新設の新潟大学創生学部で同11月、本研究の構想を土台とするキャリア創生研究会を組織化し、複数領域の有志教員(生涯教育学・経営学・メディア学・会計学・心理学・社会科教育学)で研究を開始し、発信媒体『創生ジャーナルHuman and Society』を創刊した。平成30年度は、1ユニークな初年次教育を行うキャリア直結型学部の視察見学・ヒアリング調査、報告の活字化、ジャーナル特集記事への取りまとめ、2実践研究として2回の学生主体キャリアイベントの実施、多面的振り返り、記録化・活字化、ジャーナル記事への取りまとめ、3中国北京師範大学珠海校教育学部およびカナダマクマスター大学医学部の初年次教育の訪問調査、その報告の活字化を行った。1では、メンバー全員で医療系総合大学である昭和大学の富士吉田キャンパスを訪ね、初年次教育の現地調査を行った。医・歯・薬・看護・理学療法の1年生全員が同キャンパス内で、多領域混合の課題基盤型教育(PBL)と全寮制生活を経験するIPE(多職種連携教育)の実態について、視察と聴き取りを行い、報告と振り返りを執筆した。2では、学生主体型キャリアイベントの第2回(留学・海外経験を活かし働く先輩)・第3回(公務員のライフとワーク)を実施し、参加・主催学生の意識の変化を見るアンケートを行い、記録と振り返りを、学生たちと連名でジャーナル原稿にまとめた。3では、中国(依頼)とカナダの調査報告をジャーナル原稿に掲載した。
ペルー海岸地方における先土器時代神殿の建築構造と自然災害に関する学際的研究

ラス・シクラス遺跡の発掘を実施し、同遺跡の中核的遺構の北マウンドの様態を解明した。マウンド上部の建築群は形成期早期(紀元前29001800年)の神殿建築であり、少なくとも8回の神殿更新が認められた。その過程で多量のシクラが使用されたのがこの遺跡の特徴である。シクラ構造を模擬した試験体で振動台実験を行った。その結果、一定の制振効果をもつことが確認される一方で、ある条件のもとでは、その効果がなくなるという特徴が示唆され、シクラを持つ神殿の地震動に対する挙動と被害軽減効果を確認した。現地調査期間中、ペルー沿岸でM8の地震が発生した。耐震工学・建築構造学担当者は、被災地の被害状況を調査すると共に、現地研究者と連携し、地震データを記録し、発生原因、特徴、被害状況などを明らかにした。14地点で得られた強震記録は当該研究で有効活用されると共に、ペルー国内の地震防災計画策定等への利用が期待される。地質学・地理学担当者は、ラス・シクラス遺跡とその周辺及びチャンカイ谷の河口から源流部までアンデス山脈を横断する地質調査を行った。遺跡及び周辺山地の岩石は、後期白亜紀(約1億年6500万年前)の火山活動で形成された玄武岩質安山岩だと確認した。チャンカイ水系は、下流部(河成段丘)、中流部土(石流段丘)、上流部(峡谷・V字谷や地すべり)、および高原(氷食谷・U字谷や端堆石堤・羊背岩、低平な氷河侵食・堆積地形の集合)に区分されることが理解された。文化人類学担当者は、地質グループと共にチャンカイの河口から高原までを探査し、高原と海岸の交流に関する予備的研究を行った。また、ラクダ科動物骨の分析のための準備作業として出土動物骨を整理した。さらに、ペルー中・南部高地を踏査し、ラクダ科家畜の放牧形態、植生などを比較調査し、地域的多様性を把握した。考古学担当者は、シクラス遺跡と同時期の諸遺跡の調査報告を分析すると共に、発掘中の遺跡の最新データを収集し、先土器時代の神殿の共通性とシクラス遺跡の特殊性を検討した。動物生態学担当者は、ラクダ科野生動物ビクーニャの生態調査を継続すると共に、映像資料を作成し、ラクダ科野生動物の習性やドメスティケーションに関する生物学的研究の基礎データを得た。遺伝学担当者は、獣骨からDNAを抽出し試料化する条件を探るため、フニン高原で現生のラクダ科家畜の骨を採取し、現地で調製したDNA試料を日本に輸送し、ミトコンドリア遺伝子の部分配列を解読するためのPCR条件を検討している。耐震工学・建築構造学担当者は、シクラの基礎構造としての振動応答特性を振動台実験により検証し、シクラの持つ耐震性能、地盤・基礎の補強性能に関する基礎データを得た。シクラの構造上の特長により、耐変形性能、耐荷重性能を発揮することが考えられ、一種の耐震釣な性能を有していることを把握した。固有周波数が高い組積造の遺構では、地震時にシクラ基礎が振動応答低減効果を発揮したことが推察され、構造物の固有周波数が低くなるにつれて、シクラ基礎の振動応答低減効果がなくなり、地震時の安定性を欠くことになったことが明らかになった。文化人類学担当者は、海岸地方諸遺跡の広域調査を実施し、シクラス遺跡および同時期の他の遺跡(カラル、ビチャマ、アスペロ、バンドゥーリアなど)を踏査して、その文化的特性を把握するとともに、アンデス高地におけるラクダ科動物の利用の実態について調査し、家畜化及びアンデス文明の形成への影響などを検討した。考古学者は、シクラス遺跡の平面図を整理し、建築プロセスを検討した。シクラス遺跡では、垂直方向に積み重なる更新が複数回確認されている。また、シクラス遺跡の特徴を把握するため、同時代の海岸の他の神殿を実見し、関連資料を収集した。建造物が複数回更新されている点は共通点であるが、古い神殿を埋める際、土、石、シクラをどのように用いるかは、神殿毎に異なっていることを確認した。地質学・地理学担当者は、チャンカイ川の主谷の出現する地形の景観から、(1)下流部、(2)中流部、(3)上流部、および(4)高原に区分され、それぞれ、1)河成段丘・土石流段丘、2)峡谷(V字谷)や地すべり、3)氷食谷(U字谷)や端堆石堤・羊背岩、4)低平な氷河侵食・堆積地形の集合、に特徴づけられることを確認した。また、地質も、1)白亜紀深成岩類、2)第三紀火山岩類、3)白亜紀堆積岩類、4)第三紀火山砕屑岩層が分布していることを確認した。耐震工学・建築構造学班は、模擬シクラ基礎を用いた振動台実験の解析を行った。

シクラ基礎の地震時振動応答特性として、以下の事項が推察される。1、シクラの最大応答を示す周波数に近い振動、およびそれより高い周波数の振動では、シクラ基礎は振動応答低減効果を有する。2、シクラの最大応答を示す周波数よりも低い振動ではシクラ基礎は振動応答低減効果が少ない。3、シクラ基礎の振動応答低減効果はシクラ基礎の厚さに依存する。厚さが薄いと効果が小さく、厚くしすぎると応答を増幅する効果がある。4、シクラ基礎と砕石のみの基礎の層厚が同じ場合の卓越周波数はほとんど同じである。5、シクラの効果は見かけ剛性を向上させるのではなく、減衰効果を上げることが主な作用であると考えられる。ラス・シクラス遺跡のような遺構は固有周波数が高いことから、神殿更新が成されていない初期の段階では、シクラ基礎は地震時に振動応答低減効果を発揮したことが推察され、神殿更新を繰り返して構造物の固有周波数が低くなるにつれて、シクラ基礎の振動応答低減効果がなくなり、地震時の安定性を欠くことになったことも推察される。また、シクラス遺跡の特徴を把握するため、南部海岸地域の他の神殿実見と文献調査を行った。異なる文化的変化のプロセスがあったことの一因に、人間の自然災害への対処の違いが見られ、地域や時代によって、試行錯誤のあり方に違いが認められた。考古学・文化人類学班は、発掘調査に関わって、第4シーズンの発掘成果まで含め、断片的なデータを統合して建築シークエンスを復元した。発掘した範囲だけでも壁や床の更新が少なくとも8回認められた。その多くは、中央に炉を備えた方形空間に対応するものである。
談話的観点からのフランス語時制の研究

時制は単文でなく談話レベルで分析されるべきであるとの認識に基づいて、フランス語の時制がどのような体系をなしているかを考究した。フランス語の時制は発話時現在t0を中心とする時制群と、過去の時点t1を中心とする時制群とに二分される。未来は独立の領域を形成しない。この二つの領域がどのように発動されるかによって時制は機能する。また時制の解釈には視点が重要な役割を果たすことも明らかにした。フランス語の過去時制を、談話的における情報の保持と管理という観点から分析し、次の点を明らかにした。金水(大阪大学)は日本語について、「出来事的テンス」と「情報的テンス」を区別することを提唱した。前者は「私は昨日東京へ行った」の過去形のタのように、時間軸の上での出来事の分布を表す。これにたいして後者は「君は確か鳥取の生まれだったね」のタのように、時間軸上での過去ではなく、話し手が情報を取得した時点に関係する。このように過去時制は常に過去を表すわけではなく、話し手の談話情報の取得と保持に関わっている。フランス語でも事情は同じであり、今年度の研究では特に時制の持つ情報管理的側面に着目して分析を進めた。単純過去は談話外の語り手による情報の全体的保持を前提とし、また視点を担うことがない。また単純過去の表す談話情報は、語り手の知識ベースに帰属する。言い換えれば単純過去は、話を最初から最後まで知っている語り手を前提とする時制である。一方、半過去は、知覚的半過去、単純型の認識的半過去、包括型の認識的半過去の3つの用法に区別できる。知覚型の半過去は最もよく知られている半過去の用法で、談話内人物の視点を表す。いわゆる内的視点を感じさせる半過去である。ところがIletait une fois un prince malheureux.「昔々あるところに不幸せな王子様がおりました」のような物語の冒頭の半過去には視点が感じられない。これは認識的半過去と見なすべきで、認識的半過去では視点ではなく、情報の帰属主体が問題となる。このような包括型の認識的半過去では談話外の語り手に談話情報が帰属すると考えるべきである。また認識的半過去の単純型とは、Paul travaillait chezIBM.「ポールはそのIBMで働いていた」のような文が、談話の登場人物の知識として述べられるケースで、この場合、談話情報は一次的には談話内人物に帰属する。本研究の目的は、時制の豊富な言語であるフランス語を対象として、ややもすれば単文の考察に終始しがちな時制の研究を談話レベルで行うことである。時制を時間軸上での出来事の分布を示すものと考える伝統的な立場では、ライヘンバッハのS=発話時点、E=出来事時点、R=基準点の3つのパラメータで記述することが広く行われてきた。しかしこの考え方では、例えばフランス語のPierre pensait que son pera revenu avant midi.「ピエールは父親が正午までに戻って来ているだろうと考えた」において、pensaitに割り当てるパラメータがなくなってしまうことが知られていた。時制の正しい記述のためにはS,E,Rの他に、談話内人物(この例ではPierre)に視点を設定しなくてはならない。本研究ではフランス語時制を発話時点を中心とするゾーンと過去の時点t1を中心とするゾーンに二分する分析に基づいて、過去の研究で論議の的となってきたJean semiten miten route dans sa nouvelleMercedes. Il attrapaune contravention. Il roulait trop vite「ジャンはベンツの新車ででかけた。彼は違反切符を切られてしまった。スピードを出しすぎていたのだ」の半過去もまた、過去時点t1(=attrapa)に視点をおいてそれより過去のゾーンを振り返った用法であることを明らかにし、さらにこの現象の理解を深めるためには時制の一致の考察が不可欠であることを示した。また半過去の用法を正しく記述するためには、視点移動をともなうrecitの半過去とdiscoursの半過去を別せねばならず、その区別に深く関係するのが話し手の談話構築という観点に立つことが必要不可欠であることを示した。本研究は時制は談話的性格を有するものであるとの認識に基づき、談話構成のメカニズムを明らかにすることによって時制の体系的性格に迫ろうとした。フランス語の時制は発話時現在を中心とするzone 1と、過去の時点t1を中心とするzone 2という二つの時制空間から成る。zone 1には現在、複合過去、単純未来、前未来が、zone 2には半過去、大過去、過去未来(条件法現在)、過去前未来(条件法過去)が属する。これらは視点的用法を持つ時制であり、視点的用法を持たない単純過去と前過去はいずれのzoneにも属さない。