hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
近世上方歌舞伎音楽史の研究-囃子方の動向にみる周辺地域との交流-

21年度は前年度に引き続き、顔見世番付・役割番付・絵尽しの補足調査ならびに収集を行った(調査機関:西尾市岩瀬文庫、慶応義塾大学、京都府立総合資料館、ボストン美術館他)。その上で評判記など他の興行関係史料の調査にも着手した。後者は未だ継続中であるが、今回の調査から抽出された囃子方(唄方、三味線方、鳴物)の芝居出勤情報は編年資料として再構成し、博士論文の基礎資料に位置付ける。当該期の上方には800名を超える囃子方の存在が確認される。従来その全体像すら明らかでなかったこれら囃子方について、断片的な情報であれ史料から具体的に跡付けられたのは大きな成果であった。その性格や特徴は宝暦期を画期として前後大きく二期に分けられると現時点では考えている。一期の特徴としては小歌方が主流であること、屋号を姓にもつ者が散見すること、能と歌舞伎の両方に関わった囃子方の存在が確認できること、そして宝暦期を境に囃子方の世代交代が見て取れることなどを指摘することができる(「上方歌舞伎囃子方の諸相-近世前中期の顔見世番付に基づいて-」)。一方、二期(宝暦以降)の囃子方には小歌方と長唄方が併存する傾向や、屋号を姓にもつ者が減り姓による芸系の芽生えが見出されることなど寛延以前とは異なる特徴が確認される。こうした諸点は江戸歌舞伎の影響とも関係していると考えられる。今後は東西交流の視点からも詳細な分析を加え、興行状況などを踏まえた上で当該期の上方の囃子方の動向をおさえてゆく必要がある。なお今年度は史料を劇場外にも求め、周辺地域での囃子方の活動に目を向ける予定であったが、前年度やり残した課題や史料収集に重点があったため結果的に当初より限定的な調査に止まった。しかし上方の囃子方の動態性の一端は一期における能や地歌など先行あるいは周辺諸芸能との直間接的交渉、一期二期を通じての京大坂の囃子方の交流など今回の調査範囲からも窺われた。本研究は江戸時代中後期(17世紀後半18世紀後半)の上方の歌舞伎囃子方に着目し、劇場の出勤状況を明らかにするとともに、周辺地域での演奏機会にも触れることによって、囃子方を通じた演奏空間の広がりとその動態性の特徴を浮かび上がらせることを目的とする。20年度は主に興行関係史料を中心に調査、収集、分析を進めた(調査機関:天理大学附属天理図書館、阪急学園池田文庫、早稲田大学演劇博物館、東京大学総合図書館霞亭文庫、実践女子大学図書館、国立国会図書館他)。まず従来断片的な活用にとどまっていた顔見世番付の悉皆調査を行い、年間の座付き演奏家の出座を把握した。200余点の番付からは、寛延以前に限っても450名を超える囃子方が認められ、京の囃子方の充実が顕著であった。ことに当該前期の上方歌舞伎の囃子方には、芸系のあり方や構成定員、屋号を姓にもつ囃子方の存在など、幕末の上方の囃子方や江戸のそれとは異なる独自の実態を指摘することができる。こうした特徴は上方での歌舞伎音楽の生成過程とその変遷を類推させる根拠の一つとなるものと考えられ、今後さらに分析を重ねていく必要がある。また芝居小屋における長唄呼称の初出に関して既存の見解に再検討の余地かおる可能性も出てきており、次年度の優先課題としたい。以上と並行して、役割番付、絵尽し、長唄の絵表紙正本の調査にも着手した。各興行に即した番付史料に囃子方の記載が乏しい中、盆興行の都風流大踊の中に囃子方の出座を確認できたことは収穫であった(「上方歌舞伎における盆踊-十八世紀都風流大踊の所演状況-」東洋音楽学会第59回大会にて口頭発表、平成20年11月)。絵表紙正本については継続調査中であるが、上方における長唄正本板行の習慣化には、江戸で修業を積んだ後上坂した湖出市十郎との関係性が想定される。今後これら基礎調査から抽出された囃子方出勤情報を集積し、編年資料として再構成する予定である。

一方、二期(宝暦以降)の囃子方には小歌方と長唄方が併存する傾向や、屋号を姓にもつ者が減り姓による芸系の芽生えが見出されることなど寛延以前とは異なる特徴が確認される。こうした諸点は江戸歌舞伎の影響とも関係していると考えられる。今後は東西交流の視点からも詳細な分析を加え、興行状況などを踏まえた上で当該期の上方の囃子方の動向をおさえてゆく必要がある。なお今年度は史料を劇場外にも求め、周辺地域での囃子方の活動に目を向ける予定であったが、前年度やり残した課題や史料収集に重点があったため結果的に当初より限定的な調査に止まった。しかし上方の囃子方の動態性の一端は一期における能や地歌など先行あるいは周辺諸芸能との直間接的交渉、一期二期を通じての京大坂の囃子方の交流など今回の調査範囲からも窺われた。
アトピー性皮膚炎患者ランゲルハンス細胞によるTh2T細胞活性化についての研究

アトビー性皮膚炎患者では血清IgEが高値を示す事が多く、また病変部から採取されたT細胞クローンの解析の結果からTh2優位のT細胞活性化が生じていることが示されている。我々はこのTh2優位のT細胞活性化におよぼす抗原提示細胞の影響を検討する目的で、アトビー性皮膚炎患者および対照健常人コントロールの末梢血単球のサイトカイン産生能を検討し、LPS刺激6時間後にTNF-a,IL-6の発現が、また溶連菌由来スーパー抗原SPEC刺激24時間後にリンパ球のTNF-aの産生が認められること、さらに健常人、アトピー性皮膚炎患者間でこれらサイトカイン産生に差は認められないことを報告してきた。今回我々は、ビタミンA及びD3誘導体(a11-transretinoicacid(RA)、活性型ビタミンD3(VD3))の末梢血単球サイトカイン産生に対する制御効果を検討する目的で、これら薬剤で前処理したさいの健常人末梢血単球のサイトカイン産生をEACS法を用いて検討した。LPS刺激によって誘導される健常人末梢血単球のTNF-a産生はRAによる前処置で約40%抑制されたがIL-6産生は抑制されなかった。VD3はLPS刺激による健常人末梢血単球のIL-6、TNF-aの産生をそれぞれ約60%、70%抑制した。RAおよびVD3はともに角化細胞の増殖、分化をレギュレートする因子として知られているが、同時に免疫系細胞に働き、その増殖、サイトカイン産生を調整することが示されている。RAおよびVD3がともに健常人末梢血単球のTNF-a産生に対し抑制効果を示したこと,またVD3は末梢血単球のIL-6産生をも抑制したことは、これら薬剤が細菌由来内毒素等の刺激によって活性化された末梢血単球によるサイトカイン産性をブロックすることで、炎症性疾患に対する治療効果を示す可能性が示唆された。今後はこのシステムを用いて、アトピー性皮膚炎患者末梢血単球のサイトカイン産生に与える影響について検討していきたいアトピー性皮膚炎病変部では、皮膚固有の抗原提示細胞であるランゲルハンス細胞に、IgE分子が高親和性IgEレセプターFcεRIを介して結合していることが報告されており、FcεRI架橋によって誘導されるランゲルハンス細胞のフェノタイプの変化、あるいはサイトカイン産生がアトピー性皮膚炎でみられるTh2優位な免疫反応を誘導していることが強く予想される。我々はアトピー性皮膚炎病変部ランゲルハンス細胞のフェノタイプをフローサイトメトリーおよび免疫組織学的手法を用いて検討したところ、病変部ランゲルハンス細胞はFcεRIの発現が高く、また大部分がcostimulatory moleculeのCD86陽性であったのに対し、CD80陽性ランゲルハンス細胞はごく僅かであった。接触性皮膚炎および尋常性乾癬病変部ランゲルハンス細胞でも同様の傾向がみられたがCD86陽性ランゲルハンス細胞の出現率はより低かった。次に我々は、健常人、アトピー性皮膚炎および尋常性乾癬患者から調整した末梢血単核球分画をLPSまたは溶連菌由来スーパー抗原で刺激し、FITC標識抗CD3、CD4、CD14抗体とPE標識抗TNF-α、IL-6抗体で二重染色し細胞内サイトカイン濃度をフローサイトメトリーにて半定量した。その結果、LPS刺激6時間後の単球内にTNF-α、IL-6の発現が認められた。また、溶連菌由来スーパー抗原SPEC刺激24時間後にリンパ球のTNF-αの産生が認められた。健常人、アトピー性皮膚炎および尋常性乾癬患者間でサイトカイン産生に差は認められなかった。今後はこのシステムを用いて、FcεRI架橋刺激後にランゲハンス細胞が産生するサイトカインおよびフェノタイプの変化がT細胞のサイトカイン産生に与える影響について検討していきたい。RAおよびVD3がともに健常人末梢血単球のTNF-

a産生に対し抑制効果を示したこと,またVD3は末梢血単球のIL-6産生をも抑制したことは、これら薬剤が細菌由来内毒素等の刺激によって活性化された末梢血単球によるサイトカイン産性をブロックすることで、炎症性疾患に対する治療効果を示す可能性が示唆された。今後はこのシステムを用いて、アトピー性皮膚炎患者末梢血単球のサイトカイン産生に与える影響について検討していきたい
変形性関節におけるオートファジーの役割

オートファジーは細胞内の不要なタンパクや器官を除去する細胞内浄化機構である。本研究ではオートファジーが変形性関節症の病態や進行に関与していると我々は仮説をたて、研究を行った。オートファジー誘導に必須遺伝子であるAtg5を軟骨細胞特異的にノックアウトしたマウスを作製して解析を行った。また、オートファジーの活性化剤のラパマイシンによる変形性関節症進行抑制効果を調べた。変形性関節症の誘発により、Atg5ノックアウトマウスでは変形性関節症の進行が促進され、一方でラパマイシンの投与で抑制される傾向をみとめた。オートファジーは変形性関節症の病態に関わる重要な役割を果たしていることが示唆された。Autophagy誘導に必須遺伝子であるautophagy-related 5(Atg5)軟骨細胞特異的にノックアウトするコンディショナルノックアウトマウスの作製をまず行った。Atg5をloxpで挟んだ変異遺伝子マウスAtg5 flox/floxマウスとCol2a1-Creマウスと掛け合わせた後にAtg5 flox;Col2a1-Creマウスを獲得。次にAtg5 flox;Col2a1-CreマウスとAtg5 flox/floxマウスを掛け合わせ、Atg5 flox/flox; Col2a-Creマウス(軟骨細胞特異的ノックアウトマウス)を得る予定とした。しかしながら上記掛け合わせから、生まれてきた半数近くのマウスは生後間もなく、母親に食べられてしまい、予定していたようなメンデルの法則よりはるかに少数のマウスのみが得られるのみであったため、詳細な解析に至らなかった。生き延びえた、Atg5 flox/floxマウスは外観上は正常で、交配にも可能と考えられたためさらに、Atg5 flox/flox; Col2a1-CreマウスをさらにAtg5 f/ox/floxマウスと交配し、より多くのノックアウトマウスを得られるようにした。Atg5 f/ox/flox;Col2a1-CreマウスはAtg5 flox/floxマウスと比較してやや小さい傾向を示した。現在、成長過程の骨格異常を調べるために、胎生16.5日のマウスと生後1日のマウスを組織学的および、骨格解析を行っている。オートファジーに必須遺伝子であるAutophagy-related 5 (Atg5)の軟骨細胞特異的なコンディショナルノックマウスの作成と解析を行った。前回の報告と同様にAtg5 flox/flox; Col2a1-Creマウスは死亡もしくは母親マウスに食べられてしまう傾向があったが、生き延びたマウスを用いて解析を行った。骨格標本を作製して、観察を行ったが、明らかな外観上の骨格系の異常はみとめなかった。また、胎生期16.5日のマウスから生後1年までのマウスを組織学的に解析を行った。HE染色やSafranin-O染色では成長軟骨や関節軟骨を含めた、骨軟骨に、コントロールマウスと比較して明らかな染色性に差を認めなかった。次にAtg5 flox/flox;Col2a1-Creマウスとコントロールマウス(Atg5 flox/floxマウス)を用いて生後8週の時点で内側半月板不安定化による変形性関節症モデルを作製した。生後10週の時点で膝関節を採取し、現在組織学的に解析を行っている。また、さらに4週、16週で組織を採取して、経時的に変形性関節症の進行の違いを調べる予定としている。上述のごとく、胎生期では生存していたにも関わらず、生まれてきた多くの軟骨細胞特異的Atg5ノックアウトマウスは生後間もなく、母親に食べられてしまい、解析が行えるほどにマウスの獲得に至らなかったため遅延した。15%程度の達成。マウスの購入と交配が予想した時間よりかかったため、研究全体の進行の遅れとなった。目標とするマウスの解析に至らなかったが、現在マウスの産出が順調になり、今後マウスの解析により研究が加速的に進むと予想されるため。まずは、成長過程での骨格異常について調べる。組織学的検討にて四肢や胸郭、頭蓋底、脊椎などの骨の成長や成長軟骨帯の状態を調べる。LC3-GFPトランスジェニックマウスの発現解析では脊椎でのGFPの発現が強く認められ、同部での役割が大きいと考え、脊椎も詳細に調べる予定である。また、生き延びているマウスを用いて、老化に伴って変形性関節症の進行が早期にみられるかを調べる。現在生後約10か月まで、生存しているマウスがいるため、生後1年の時点で同じlitter mateと比較して変形性関節症に及ぼす影響を調べる。さらに、マウスが増加してきたら、変形性関節症モデルを作成して、変形性関節症発症に与える影響についても調べる予定。

前年度マウスの交配が進まなかったため、途中の段階である交配を引き続き進る。まず、genotypingを行った後に、目的とする軟骨細胞で特異的にをAtg5をノックアウトした、Atg5 flox/flox;Col2a1-Creマウスを解析を行う。組織学的な解析を主には行い、基本的にはまず、骨格解析を行い、その後、免疫染色等を含む組織学的な解析を行う予定。さらに、マウスの関節軟骨を採取して、in vitroでも解析を行う。また、Atg5 flox/+;LC3-GFPマウスとAtg5 flox/floxマウスを掛け合わせ生まれてきた、Atg5 flox/flox;LC3-GFPマウスと、Atg5 flox/+;Col2a1-Creマウスを掛け合わせる予定。マウスの維持のため動物実験費400,000円、組織学的検討用免疫染色の抗体、試薬に約300,000円。その他の解析費用に約30,000円程度、学会発表費100,000円使用予定動物の購入と交配に時間を要したため、解析が十分に進まずに、繰り越しに至った。主には遺伝子解析、タンパク解析試薬、抗体、組織解析試薬、実験用器具、実験用動物に使用手予定。また、研究の結果を国内外研究発表する予定のために一部を旅費やポスターの印刷代として使用する。前年度からの繰り越し金は引き続き解析に必要なマウスの動物飼育料や昨年度に行えなかった組織学的解析に主に使用する予定。また、一部はタンパク解析に必要な消耗品に使用予定。
評判：社会を支える認知的基盤の探求

評判は、協力的な社会を支える仕組みとして、社会科学から進化化学にわたる広い領域で注目を集めている。近年、間接互恵性と呼ばれる協力行動の理論研究が発展し、協力的な社会を生み出すために人々がどのように情報を組み合わせて他者に対する評判を構築すべきかが明らかにされつつある。本研究は、実験室実験を用いて、こうした理論的知見の検証を試みたものである。一連の研究の結果、人々は理論が要請する複雑な認知的方略を利用することが可能であるにも関わらず、実際にはより単純な方略を用いて評判を形成している可能性が明らかとなった。一般的に他者に協力しない人は「利己的な悪い人だ」と人々から評価されるだろう。だが、他人に協力したことがない利己的な人から協力を求められてその依頼を断った場合、我々はその人物をどのように評価するだろう。利己的な人間に協力しない人間は「良い人だ」という評判を得るのだろうか?それとも「誰であれ協力を求められているのに協力しない人間は悪い人だ」という評判を得るのだろうか?人間社会における秩序や協力の存在を説明する上で、評判という仕組みが重要な役割を果すことは繰り返し指摘されてきた。だが、実際に人々がどのように評判を形成し共有していくのか、マイクロな認知レベルでの実証的な研究はあまりない。本研究の目的は、評判という、協力的な社会を支えるための認知的基盤を実証的に探求することにある。本年度は2種類の異なる間接互恵性に注目し複数の実験を実施した。その結果、評判型間接互恵は1次の情報しか存在しない場合でも頑健に観察されるのに対し、恩送り型間接互恵は非常にもろく不安定であることを見出した。またMRI実験により、2つの間接互恵性の神経基盤を検討した。本年度は間接互恵性場面を用いた実験を複数実施し、人々が間接互恵性の理論研究で用いられているのと同様のアルゴリズムで評判を形成しているか否かを検討した。その結果、個人レベルでは人々は従来の理論で提唱されていたimage scoringというアルゴリズムに近い方法で過去の情報を集約して評判を形成している可能性が指摘された。また他者から観察されていて自らの行動が評判に影響する状況で、協力及び罰行動がどのように変化するかを検討した。利己的な人間に対して非協力的に振る舞う人を見た時、我々は「良い人間だ」と判断するのだろうか?あるいは「悪い人間だ」と判断するのだろうか?間接互恵性の理論研究を通して、協力的な社会を維持する上では、人々がいくつかの限られた戦略に従って情報を合成して評判を形成することが必要であるとされてきた。だが本研究がこれまでに実施した実験によれば、人々はいかなる相手であれ非協力的に振る舞う人を「悪い」、協力的に振る舞う人を「良い」と判断し、振る舞いの相手がどのような人間であるかを考慮しないことが繰り返し明らかとなっていた。すなわち評判を判断される行為者が選択した行動を一次の情報、その行為が向けられた相手がどのような評判を持つ人間であるかを二次の情報と呼ぶならば、間接互恵性の原理によって協力的な社会が維持されるためには、一次の情報だけでなく二次の情報との組み合わせによって評判を判断しなければならないのに、実際の人間は二次の情報を利用することがないという知見である。本年度は個人が独立に情報を入手して判断するのではなく、複数の個人が集団で情報を共有しながら他者について評判を形成する場面を想定して実験を実施した。間接互恵性の理論研究によれば、協力的な社会を維持するための評判形成は、共同体内で情報が共有されることで促進されると指摘されているためである。実験の結果、わずかではあるが個人が判断する場合よりも集団で情報を交換し評判を形成する方が、振る舞いの相手の性質を考慮する傾向が見られたが、その効果は非常に小さいものであった。現在、さらに詳細な分析が進んでおり、その成果を英語論文として公開する予定である。

社会心理学実験はほぼ計画通りに実施されており、研究の目的は概ね達成されており、順調に進展している。実験はほぼ計画通りに実施されており、研究の目的は概ね達成されており、順調に進展している。次年度以降も研究計画に従って粛々と実験を実施してく予定である。1992円と少額であり、これを年度内に利用する場合、無意味な用途に利用することとなるため研究目的のために計画的に利用する予定である今年度の実験は無報酬で実施することができたため、平成24年度入金分は未使用とした。平成25年度に実験参加者への謝礼、研究打ち合わせ、研究成果発表のための旅費、実験補助者への謝礼といった用途で研究費を使用する予定である。
後期ディドロの生理学的人間観の研究-『生理学要綱』の間テクスト的読解-

『生理学要綱』の最大の典拠と推定されるハラー『生理学原論』をラテン語で読み、それ自体が、ハラーの生理学者としての研究成果であるだけでなく、ヨーロッパ中の生理学関係の古典ならびに最新著作を整理した総合的著作であること、その科学的かつジャーナリスト的活動は『百科全書補遺』の生理学項目執筆にも継承されたことを解明した。ディドロはそのような間テクスト的ハラー生理学を唯物論的に換骨奪胎することで『生理学要綱』を執筆した。そのテクスト生成の研究は今後の課題だが、それに必要なSP写本の暫定的校訂版を作成し、HPに掲載した。21年度については研究実施計画にも示したように必要な文献・資料を調えることを第一とした。とりわけハラー『生理学原論』の複写が最大課題だった。しかし、幸いなことに全7巻のうち最初の5巻まではインターネットでGooglebooksからダウンロードできることが判明し、それらを無料でダウンロードしプリントアウトすることができた。残りの2巻についてはアメリカの古本屋がたまたまそれらを端本として安く売り出していることが見つかり、それを購入することができた。その結果、謝金が不要となり、物品費も当初より抑えることができた。そこで、当初は日本にいて注文する予定だった資料につき、手間を省くことも考えパリに出向いて直接当地の本屋や古本屋、国立図書館で現物もしくは複写を手に入れる方針に変更し、2月の後半に出張した。パリでは新本や古本を日本の半額程度で10万円ほど購入することができた。また、国立図書館ではディドロ『生理学要綱』の写本のマイクロフィルムを注文し、それ以外にも、17、8世紀に出た生理学関係著作などいくつかの貴重資料を、許可を得てデジタルカメラに撮るなどして、出張旅費に見合うだけの資料収集の成果を上げることができた。かくして、本研究の目的である『生理学要綱』の間テクスト的読解のために必要な資料はほぼ収拾することができた。当初はハラー『生理学原論』、ハラー『生理学初歩』の仏訳、ディドロ『生理学要綱』という三著の関係をエクセルに記入する作業を行う予定だったが、ディドロ『生理学要綱』の写本と二つの校訂版(マイエのものとクィンティーリのもの)を比較することしかできなかった。ただ、各校訂版にある原文の起こし誤りを発見し、また編者注に見られる典拠指示の相違などを調べ、それらをエクセルに記入できたので、間テクスト的読解のために必要なテクストの背景的読解を深め、今後の研究の足場を形成できた。1.ディドロ『生理学要綱』が典拠としてもっとも利用したと思われるラテン語の大部の著作、ハラー『生理学原論』を読み進めること、2.サンクトペテルブルグにある『生理学要綱』の写本を調べること、以上二点について主として研究を進めた。1については、18世紀に書かれたラテン語の生理学書ということもあって、読解に苦労したが、次第に専門用語にも慣れ、ある程度の速度で読めるようになってきた。それを通じて、この著作自身が当時の最先端の生理学の成果を盛り込んで、間テクスト的に成立していること、とりわけ各国のアカデミーなどで出版された研究報告を丹念に読み込み、それらを典拠として示しながら、ハラーなりに整理・要約して体系化していることがわかった。ディドロは『生理学原論』を典拠として利用しただけでなく、当時の最先端の研究報告や研究書を知るための情報源としても利用したこと、その意味で、ディドロによる生理学の間テクスト的読解法にも、ハラーが大きな影響を与えたと思われる点が見えてきた。2については、ほぼ二週間にわたる調査で、サンクトペテルブルグ写本とその校訂版である19世紀に出たディドロ全集の版との相違点(写本の起こし間違い、校訂者による読点などの多数の付加など)を確認するとともに、パリ写本(したがって、それを元にした現行のディドロ全集の版とクィンティーリの校訂版)との構成上の相違点も確認できた。とりわけ後者については、最近の校訂版が依拠するアカデミックな論文風のパリ写本に対する、モラリスト的筆致のサンクトペテルブルグ写本の独自性や優越性を確認できた。それゆえ、サンクトペテルブルグ写本に読点が少ないのは、そうしたモラリスト的文体からの要請と想定されることも見えてきた。この成果を活かし、今後はサンクトペテルブルグ写本に主として依拠し、ハラーなど他の著作との間テクスト的関係に迫ってゆきたい。ディドロは『ダランベールの夢』までは、ボルドゥやメニュレを中心とするモンペリエ学派の生気論の影響下にあったが、その後それ以外の脱=単純機械論的潮流からも大きな影響を受け、その間テクスト的広がりのなかで、『生理学要綱』を執筆した。中でもハラー『生理学原論』の影響は重要で、その内容に影響を受けただけでなく、そこに引証された典拠もディドロは間テクスト的に利用している。

その意味で、本研究の遂行に当たって、ハラー『生理学原論』を間テクスト性の観点からきちんと読解し、それとディドロ『生理学要綱』を比較することが決定的に重要である。『生理学原論』がラテン語の大部の著作であることから、これはまだ欧米の研究者も行えていない研究である。今年度は、その意味で『生珪学要綱』は置いて、ひたすら『生理学原論』の読解に傾注した。当初の予定では全八巻中最低でも第一巻は読了するつもりだったが、ラテン語一般の読解上の困難に留まらず、18世紀生理学ラテン語独自の用語や歴史的文脈の問題もあって、初めは読解が遅々として進まなかった。半年ぐらい経ってやっと多少スムーズに読めるようになり、現在第一巻の半分程度まで読解が進んでいる。現状では、その読解の成果を『生理学要綱』の間テクスト的読解に活かすまでには至っていない。ただし、以前と比べれば、かなりスムーズにラテン語を読めるようになっており、その過程で『生理学原論』自体が間テクスト的成果であり、ディドロがそうした側面にも着目しながら、『生理学原論』を活用したことなど、重要な知見も得られている。ハラー『生理学原論』の読解を進めたが、第一巻全部を読み通すことはできなかった。9月に「日仏啓蒙・『百科全書』研究集会」が慶應大学で開催され、そこでRepenser Albrecht von Haller comme 'encyclopediste' : Son intervention erudite, journalistique etscientifique dans le Supplemental'Encyclopedieと題する報告を行い、同名の論文を3月刊行の『『百科全書』・啓蒙論集』第二巻に発表したためである。ハラー『生理学原論』の代わりに、晩年に彼が寄稿した『百科全書補遺』項目を読み込み、関連する研究書・論文も読んで、論文を書くことに時間をかけたが、そのおかげで、単なる生理学者に留まらないこの博学の知の巨人(ジャーナリスト)について、彼の研究スタイルや知のネットワークなどを深く知ることができた。ハラーはラテン語、フランス語、ドイツ語で文章を書いており、研究は母国であるスイスやドイツで盛んだが、今回ドイツ語でいくつか研究書・論文を読み、研究情況をフォローするだけでなくドイツ語の読解力も高めることができた。また、『百科全書補遺』の彼の生理学項目からも、『生理学原論』同様、それが同時代あるいは少し前の非常に多くの生理学論文・著作の間テクスト的集成であることを理解できた。当初の予定では、ディドロがハラーのどの部分を取り出し間テクスト的に『生理学要綱』を執筆したか、を報告書で明らかにする予定であったが、『生理学原論』の読解が進まなかったこともあって、それは断念した。その代わりにHPを作成し、そこにロシア・サンクトペテルブルグにある写本を元にした『生理学要綱』の暫定的校訂版を報告書として掲載し、世界中の研究者がアクセスしダウンロードできるようにした。ディドロが『生理学要綱』執筆に当たってもっとも依拠したのが、ハラー『生理学原論』である。これが四つ折版ラテン語全八巻(各巻500ページ強)からなり、通常のラテン語辞典にないような近代生理学の専門用語なども使われ、読解するのに苦労している。ただ、第一巻を既に半分ほど読み、ハラーの文体や用語にも慣れてきたので、今年度はかなり読み進められると思っている。24年度が最終年度であるため、記入しない。
加齢および病変による網膜内境界膜の構成要素の変化に関する組織化学的研究

1.ラット眼における免疫組織化学および組織化学の手技の確立1)正常ラット眼において、プロテインA-金コロイド法を用いて、光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルで、基底膜コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンの同定を行ったが、満足できる結果を得られなかった。さらに継続して行う予定である。2)正常ラット網膜内境界線で、ヒアルロン酸、プロテオグリカンを電子顕微鏡下に把握するために、ルテニウム・レッド、アルシアン・ブルー、サフラニン、タンニン酸などの染色を行い、検討中である。3)加齢ラットを準備して、上記と同様の方法を試みている。2.加齢ラットにみられた第1次硝子体過形成遺残様病変の研究長期間飼育したラットに第1次硝子体過形成遺残様病変がみられたので、光学顕微鏡観察の結果を報告した。電子顕微鏡観察の結果は現在まとめている。3.ヒトおよびサル眼におけるフィブロネクチン、ラミニンの分布ヒト剖検眼および実験的穿孔性眼外傷サル眼におけるフィブロネクチン、ラミニンの分布を蛍光抗体法で検討した結果をまとめて報告した。4.ヒト摘出眼球における網膜硝子体境界部病変の電子顕微鏡観察ヒト摘出眼球にみられた不完全後部硝子体剥離、網膜上索状組織、網膜前血管新生、網膜格子状変性、穿孔性眼外傷眼の索状組織などの種々の病変を光学顕微鏡、電子顕微鏡で観察し、グリア細胞の増殖や内境界膜の再生について検討し、一部を報告した。5.眼病理学書『網脈絡膜疾患の臨床病理』の分担執筆ヒト摘出眼球にみられた病変の病理組織学的研究の成果を利用し、眼病理学書『網脈絡膜疾患の臨床病理』を分担執筆し、近く出版の予定である。1.ラット眼における免疫組織化学および組織化学の手技の確立1)正常ラット眼網膜内境界膜において、酵素抗体法を用いて光学顕微鏡レベルで基底膜コラーゲン・フィブロネフチン・ラミニンの同定を行ったが、必ずしも容易でなかった。ラミニンは確認できるが、フィブロネフチンははっきりしなかった。手技の問題か、標本の問題か、現在検討中である。2)電子顕微鏡レベルで正常ラット眼網膜,内境界膜に基底膜コラーゲン・フィブロネフチン・ラミニンの局在を明らかにする予定であったが、光顕レベルで必ずしもうまくいかず、プロテインA-コロイド金法など他の免疫組織化学的手技を用いることを検討している。3)正常ラット網膜内境界膜で、ヒアルロン酸・プロテオグリカンを電子顕微鏡下に把握するために、ルテニウム・レッド,アルシアン・ブルー,サフラニン,タンニン酸などの染色を行った。2.加令ラットの準備62,63年度の研究のために加令ラットを飼育し、網膜内境界膜の微細構造の加令変化を追究した。ラットでは、ヒト内境界膜と異なり、加令による肥厚は明らかでなかったが、粗造になる傾向がみられた。3.加令ヒト眼球における網膜内境界膜の微細構造摘出眼球および剖検時入手した眼球において、アルシアン・ブルー染色を施し、網膜内境界膜を電顕的に観察した。加令により内境界膜は肥厚するとともに、粗造となることが明らかにできた。4.網膜内境界膜にタイプIコラーゲンの検出が報告された。ラットおよびヒト眼球で他のコラーゲンも含め検討する予定である。1ラット眼における免疫組織化学および組織化学の手技の確立1)正常ラット眼網膜内境界膜において,蛍光抗体法を用いてラミニンを検出したが,フィブロネクチンは確認できなかった.加令によりフィブロネクチンが出現する可能性があり,検討中である.2)正常ラット眼において,プロテインA-コロイド金法を用いて光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルで,基底膜コラーゲン・フィブロネクチン・ラミニンの同定を行っているが,必ずしも容易でない.3)正常ラット網膜内境界膜で,ヒアルロン酸・プロテオグリカンを電子顕微鏡下に把握するため,ルテニウム・レッド,アルシアン・ブルー,サフラニン,タンニン酸などの染色を行い,検討中である.2加令ラットにおける網膜内境界膜の微細構造の変化加令ラットを飼育し,網膜内境界膜の微細構造の変化を電子顕微鏡下に追究し,粗造になることを確認した.免疫組織化学的手法を用いて基底膜コラーゲン・フィブロネクチン・ラミニンなどの分布の変化を追究する予定である.3加令ヒト眼球における網膜内境界膜の微細構造摘出眼球および剖検時入手した眼球において,アルシアン・ブルー染色を施し,網膜内境界膜を電子顕微鏡下に観察した.加令により後極部内境界膜は肥厚し粗造となり,網膜上膜のみられた眼球ではグリア細胞が内境界膜を穿破し,内境界膜上に伸展する像がみられた.また周辺細胞では内境界膜が部分的に剥離,あるいは消失している像がみられた.さらに網膜上膜下では,内境界膜中に異常な物質が蓄積していた.1.ラット眼における免疫組織化学および組織化学の手技の確立1)正常ラット眼において、プロテインA-金コロイド法を用いて、光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルで、基底膜コラーゲン、フィブロネクチン、ラミニンの同定を行ったが、満足できる結果を得られなかった。

3)加齢ラットを準備して、上記と同様の方法を試みている。2.加齢ラットにみられた第1次硝子体過形成遺残様病変の研究長期間飼育したラットに第1次硝子体過形成遺残様病変がみられたので、光学顕微鏡観察の結果を報告した。電子顕微鏡観察の結果は現在まとめている。3.ヒトおよびサル眼におけるフィブロネクチン、ラミニンの分布ヒト剖検眼および実験的穿孔性眼外傷サル眼におけるフィブロネクチン、ラミニンの分布を蛍光抗体法で検討した結果をまとめて報告した。4.ヒト摘出眼球における網膜硝子体境界部病変の電子顕微鏡観察ヒト摘出眼球にみられた不完全後部硝子体剥離、網膜上索状組織、網膜前血管新生、網膜格子状変性、穿孔性眼外傷眼の索状組織などの種々の病変を光学顕微鏡、電子顕微鏡で観察し、グリア細胞の増殖や内境界膜の再生について検討し、一部を報告した。5.眼病理学書『網脈絡膜疾患の臨床病理』の分担執筆ヒト摘出眼球にみられた病変の病理組織学的研究の成果を利用し、眼病理学書『網脈絡膜疾患の臨床病理』を分担執筆し、近く出版の予定である。
ポリリン酸による大腸菌Lonプロテアーゼの多量体化と活性調節機構

ポリリン酸と結合するタンパク質はin vitroにおいて数多く見つかっており、その中にはDNA結合タンパク質が含まれている。そこで、Lonと同様な局在の変化を示すDNA結合タンパク質を探索した。その結果、核様体を構成する主要なタンパク質の一つであり、グローバルな転写に関わるFisを発見した。また、in vitroにおいてFisはLonによりポリリン酸依存的に分解されることを見いだした。さらに、DNAが存在してもポリリン酸依存的に分解されることを示した。これらの結果は、Lonとポリリン酸による新規の転写調節機構の存在を示唆している。今後、細胞内におけるFisの分解や転写への影響についてさらに詳細な解析が必要であると考えられる。LonのDNAおよびポリリン酸結合性についてin vitroで詳細に解析を行った。その結果から、通常Lonは細胞内でDNAの集合体である核様体に存在しており、アミノ酸飢餓で蓄積したポリリン酸によりLonは核様体から遊離し、複合体として新たな活性を持つようになるというモデルが考えられた。そこで本年度は、このモデルが細胞内で正しいことを確かめるために、LonのGFP(緑色蛍光タンパク質)融合タンパク質を用いて細胞内局在の解析を行った。ポリリン酸を蓄積しない栄養条件ではLon-GFPは染色体DNAの集合体である核様体に局在した。一方、アミノ酸飢餓ではLon-GFPは核様体から遊離し、ポリリン酸-Lon-GFP複合体の粒子として確認できた。この結果から、Lonの局在がポリリン酸により変化するというモデルが細胞内において正しいことが示された。ポリリン酸に依存するLonプロテアーゼによるリボソームタンパク質の分解機構について検討した。ポリリン酸、Lonプロテアーゼ、リボソームタンパク質L24を用意し、それぞれ添加の順番を変えた場合、L24の分解にどう影響するかを検討した。その結果、ポリリン酸とLonプロテアーゼを最初に混合して、ある程度放置しておくことが重要であることがわかった。すなわち、ポリリン酸とLonプロテアーゼが複合体を形成することがL24の分解に対して重要であると推察できた。Lonはポリリン酸だけでなくDNAとも複合体を形成することが知られている。そこで、ポリリン酸とDNAの結合力の比較をゲルシフトアッセイにより行った。その結果、DNAと同量のポリリン酸を競合させることでLonとDNAは完全に解離した。このことより、DNAよりもポリリン酸の方が強くLonに結合することがわかった。Lonに於けるポリリン酸の結合領域を調べた結果、ポリリン酸はLonのアミノ酸配列320番目から437番目の領域に結合することが欠失タンパク質の解析からわかった。同様にDNAの結合領域を調べたところ、DNAもまたポリリン酸と同じ領域に結合することが明らかとなった。通常Lonは細胞内でDNAと結合した状態(ヌクレオイド)で存在していると考えられる。しかし、ストレスを受けてポリリン酸が蓄積する環境ではLonがポリリン酸によってDNAから遊離し、ヌクレオイドの外へ移行することで新たな活性を持つようになると考えられた。
マレーシアにおける森林資源利用をめぐる民族間関係に関する人類学的研究

今年度は、2010年7月から2011年3月の間にマレーシア・サラワク州でおこなった調査にもとづき、日本国内において日本語と英語で研究発表を行うと共に、博士論文の執筆活動に焦点をあてて研究してきた。(1)第46回日本文化人類学会での分科会口頭発表これまでサラワク州でフィールドワークを行ってきた若手の人類学者が中心となって分科会(演題:熱帯林と社会)を組織し、発表に向けて東京と京都で研究会を開催して議論を重ねてきた。私の口頭発表「資源利用から見る森と人の関係誌」では、高級食材として華人社会で重宝されているツバメの巣の採集活動をおこなう人びとに注目し、彼らに付与された「焼畑民」というラベリングゆえに看過されてきた森との関わり方を人類史に位置づけて説明した。(2)第47回日本文化人類学会での個人口頭発表の準備本発表(演題:サラワク先住民社会位における先住民運動の影響一ブラワンとブナンの民族間関係からの考察)の目的は、80年代後半から90年代にかけてサラワクを舞台にしたグローバルレベルの運動(以下、「運動」)を振り返り、彼らの生活にどのような影響を与え、また、彼らにとってこの運動は何だったのかを評価することである。これは、これまでのサラワク先住民社会における研究において、サラワクの外部社会から起きた一連の運動は、結局のところサラワク先住民社会にどのような影響をもたらしたのか、運動に加担した側からの検討と評価が全くされていないことを鑑みると、非常に独創的かつ重要な指摘である。本発表ではこの点に着目して、運動を批判的に検討すると共に、その影響を検討する。調査地であるサラワク州北部のブラワン人の集落は、人類学者による調査はこれまで一度も行われてこなかったが、その特異な多言語状況故に言語学的研究が数多くなされてきた場所である。しかしながら、多言語社会における使用言語の時代状況における変化と持続は、生業、居住形態、家族、信仰、経済活動の移り変わりと分かちがたく結びついている事象である。このような問題意識に基づき、「Current situation of inter-ethnic relationship and language use at Mulu and Long Terawan」という演題で発表した。本発表での最大の収穫は、私が現在調査しているブラワン人集落周辺の流域社会を中心にサラワク州北部の先住民の言語について、1970年代に調査され、数多くの論文を発表してこられたRobert Blust先生(ハワイ大学)が私の研究に関心をもっていただき、発表後にたくさんの有益なご助言をいただいた。前年度は出産・育児のためにかなわなかったサラワク州での短期間の補足調査を行うことで、データの裏付けと補足をした。また、日本文化人類学会での分科会発表や、日本国内の国際ワークショップにおいて積極的に英語で発表し、それをステップに新たな領域へ挑戦することで、研究をさらに発展させてきた。ことにより、本研究課題の達成に向けて大きく前進したといえる。今年度は、2010年7月から2011年3月の間にマレーシア・サラワク州でおこなった調査にもとづき、フィールドデータの分析及び学会発表の準備に焦点をあてて研究してきた。(1)全戸調査データの入力・分析これまでの調査結果と比較することで、以下のことが明らかとなった。まず、1)村落内の住居及び人口が増加している一方で、これまで主要生業活動とされてきた焼畑農耕を行っている世帯が確実に減少していることである。この焼畑の「減少」を「衰退」ととらえることは適切なのか、慎重に検討する必要がある。次に、2)集落内の場所によって住居の増減の差が明確になってきたことである。下流域で河川に面して建つ住居の空洞化が進むと同時に、より上流域の道路沿いの住居が増加傾向にある。これには、下流域からの移動と婚入による世帯増加の2つの要因が挙げられる。さらに考察の範囲を村落外にまで広げると、村落社会やそれを基盤とする人間関係の維持において、近隣の都市や華人社会との関係を維持することが非常に重要視されていることが見えてきた。(2)言語データの分類先述のフィールドワークにおいて、調査対象社会を含む広域集落の言語をできる限り収集した。通婚関係が密接な村でも、距離、言語ともにかなり隔たりがある村と、距離は離れているが言語は非常に近い村とに大別できることがわかった。その要因について、さらに詳しく検討する必要がある。(3)第46回文化人類学会研究大会での分科会発表への準備今年度の研究大会において、これまでサラワク州で研究を行ってきた若手の人類学者が中心となって分科会を組織し、昨年末からメンバーが集まる機会をもうけて議論を重ねてきた。私の発表では、ブラワン人社会を取り巻く自然環境と社会状況の変化にともなうツバメの巣の経済的、社会的役割の変遷を記述することをとおして、人と自然の関係を検討する。この発表内容は、博士論文を構成する最も重要な章となる予定である。

私の口頭発表「資源利用から見る森と人の関係誌」では、高級食材として華人社会で重宝されているツバメの巣の採集活動をおこなう人びとに注目し、彼らに付与された「焼畑民」というラベリングゆえに看過されてきた森との関わり方を人類史に位置づけて説明した。(2)第47回日本文化人類学会での個人口頭発表の準備本発表(演題:サラワク先住民社会位における先住民運動の影響一ブラワンとブナンの民族間関係からの考察)の目的は、80年代後半から90年代にかけてサラワクを舞台にしたグローバルレベルの運動(以下、「運動」)を振り返り、彼らの生活にどのような影響を与え、また、彼らにとってこの運動は何だったのかを評価することである。これは、これまでのサラワク先住民社会における研究において、サラワクの外部社会から起きた一連の運動は、結局のところサラワク先住民社会にどのような影響をもたらしたのか、運動に加担した側からの検討と評価が全くされていないことを鑑みると、非常に独創的かつ重要な指摘である。本発表ではこの点に着目して、運動を批判的に検討すると共に、その影響を検討する。調査地であるサラワク州北部のブラワン人の集落は、人類学者による調査はこれまで一度も行われてこなかったが、その特異な多言語状況故に言語学的研究が数多くなされてきた場所である。しかしながら、多言語社会における使用言語の時代状況における変化と持続は、生業、居住形態、家族、信仰、経済活動の移り変わりと分かちがたく結びついている事象である。このような問題意識に基づき、「Current situation of inter-ethnic relationship and language use at Mulu and Long Terawan」という演題で発表した。本発表での最大の収穫は、私が現在調査しているブラワン人集落周辺の流域社会を中心にサラワク州北部の先住民の言語について、1970年代に調査され、数多くの論文を発表してこられたRobert Blust先生(ハワイ大学)が私の研究に関心をもっていただき、発表後にたくさんの有益なご助言をいただいた。採用期間中に長男を出産したため、予定していた追加調査はかなわなかったが、これまでにおこなった長期調査のデータ分析は、これまで分析ができたデータにもとづいて、今年度の文化人類学会研究大会において分科会発表できる状態まで進展しておりおおむね順調に進展しているといえる。前年度は出産・育児のためにかなわなかったサラワク州での短期間の補足調査を行うことで、データの裏付けと補足をした。また、日本文化人類学会での分科会発表や、日本国内の国際ワークショップにおいて積極的に英語で発表し、それをステップに新たな領域へ挑戦することで、研究をさらに発展させてきた。ことにより、本研究課題の達成に向けて大きく前進したといえる。サラワクのロングハウス社会における主要生業活動だとされてきた焼畑農耕の減少が、私の調査地のみならずサラワク各地で起きていることが明らかになった。その多くは、慣習的に所有している焼畑耕作地を世帯レベルでオイルパーム用に転用して、小農として収入を得る世帯が増加しているのが実態だが、私の調査地では、主要労働力世代が村のそばにある国立公園における観光産業へ従事したり、都市へ移住したことによる焼畑の中止が顕著である。
環境・エネルギー創製システムを指向した酸化物ナノチューブの高次構造制御と機能共生

様々に修飾した酸化チタンナノチューブ及び関連の低次元ナノ構造材料を創製し、その機能解明・向上を目的として、溶液化学的合成法の最適化、多様な複合化プロセス開発を行い一連のナノチューブおよびナノコンポジット材料を作製した。その結果、従来にない優れた化学的特性や複数機能が共生した環境浄化触媒機能、新規な光機能などを明らかとすると共に、低次元ナノ構造とこれら機能の相関ならびに材料設計指針を見出した。高性能環境浄化触媒システムやエネルギー創製システムみなどへ最適化した材料創製を目的に、低次元ナノ構造を持つ酸化チタンナノチューブ(TiO_2 NT、TNT)に関して光触媒機能やその特異構造由来の分子吸着能などの機能を精査すると共に、構造を結晶及びナノレベルで設計・制御・複合化して高次機能化を行った。本年度はTNTの合成プロセス開発ならびに材料創製と基礎物性に関する研究(材料創製フェーズ)を集中的に行い、以下の成果を得た。メチレンブルー(MB)退色法を用いてTNTの触媒能を評価した結果、本材料が光触媒特性に加えて優れた分子吸着能を持つ高次機能調和型ナノ材料であることを見出した。この等温吸着挙動を解析しLangmuir型に良く従うことや高い飽和吸着量を示すことを明らかとした。光触媒特性は加熱処理による結晶性の向上に従って向上し、両者の特性は熱処理によりトレードオフ関係にあることを見出した。更にドープ型TNTを合成し、これにより特性が向上することを確認した。一方でアセトアルデヒド分解挙動の解析により、本TNTが気相中でもガス吸着能と光触媒特性を示すことを見出した。こうしたTNTの高次機能は、特徴的なナノ構造と格子レベル構造に由来することをX線回折法や電子顕微鏡観察などの結果と合わせて考察した。更に、合成したTNTに化学的あるいは物理的プロセスの適用と制御により、Pd, Ag, Ni等の金属ナノ粒子や化合物をTNT表面やチューブ内部に析出担持させることに成功した。低次元ナノ構造を持つ酸化チタンナノチューブ(TNT)について、高性能環境浄化システムやエネルギー創製システムなどへの展開を目的として、構造を結晶及びナノレベルで設計・制御・複合化して高次機能化を行い、以下の成果を得た。1.溶液化学的合成法を最適化し、多様な元素、特に稀土類元素で修飾したTNTを合成した。TNT合成時に元素を同時添加する方法では固溶型TNTが生成することを見出した。加えて純粋なTNTに多様な元素の陽イオンを吸着させ、熱処理することで、ナノ複合型TNTが得られる事を明らかにした。2.固溶型TNTでは有機分子(メチレンブルー)吸着能が純粋なTNTに比較して向上すること、そのメカニズムを明らかにした。加えて稀土類添加により蛍光発光特性が付与出来ることを見出した。3.溶液化学的手法による合成方法を室温条件下で行うことによっても、配向型TNTをはじめとして、酸化チタンナノシート(TNS)等の多様な形態、配向性を持つ材料を基板上に直接合成するることに初めて成功した。これら多様なナノ構造を持つ材料でも、TNT粉末同様に優れた吸着能を持つ高次機能を有することを明らかにした。4.合成したTNTが優れた光触媒特性を示すことを確認すると共に、増感型太陽電池セルの電極として有効に作用することを確認した。5.溶液組成を制御した電気化学的手法により、高配向なTNT配向膜を金属Ti上に直接高速合成する手法を確立した。6.得られた一連のTNT系材料は、優れたエネルギー・環境調和機能ばかりでなく、生体適合性や生体材料のホスト材料として機能することも合わせて見出した。
大腸癌の肝転移を抑制するＨＯＸ遺伝子の同定

本研究では、HOXD8が大腸癌の肝転移抑制遺伝子として働くことを証明するために、肝転移成立過程の3つの段階におけるHOXD8の役割について実験病理学的に解析した。その結果、内皮下基底膜に対する浸潤性はHOXD8の低発現細胞に比べ、高発現細胞で高いこと、肝類洞内皮細胞への接着性とHOXD8の発現レベルには関連性がないこと、ならびにヌードマウスの肝臓で増殖している癌組織のHOXD8の発現は盲腸でのそれに比べ低いことが明らかとなった。以上より、大腸癌の肝転移において、HOXD8は転移成立過程の癌細胞が置かれた場所によって転移促進的あるいは抑制的に働く可能性が示唆された。本研究の目的は、1)HOXD8が大腸癌の肝転移に対して転移抑制遺伝子として働くこと、2)HOXD8を中心とした肝転移に対して抑制的に働く遺伝子発現ネットワークを明らかにすることである。本年度は以下の成果をあげた。ヒト大腸癌細胞株KM12SMをヌードマウスの盲腸壁、皮下、肝臓、脾臓および腹腔内に接種し、形成された腫瘍組織からRNAを抽出してHOXD8の発現を調べた。その結果、盲腸で増殖している腫瘍だけがHOXD8の高い発現を示し、肝臓、脾臓、腹腔内で増殖している腫瘍のHOXD8の発現は低かった。これは我々が以前報告したヒト臨床材料で検討した結果と同様であり、我々のヌードマウス移植モデルがヒトがんのHOXD8発現パターンを反映していることを示している。内皮下基底膜モデルであるマトリゲルに対して浸潤能に差のあるヒト大腸癌細胞の亜株を樹立した。高浸潤性細胞のHOXD8の発現が低浸潤性細胞のそれに比べ高いことがわかった。また、大腸癌細胞のマウス肝類洞内皮細胞層への接着性とHOXD8の発現の関連性を調べたところ、HOXD8の発現の低い癌細胞は、肝類洞内皮細胞層に接着しやすいが、接着後速やかにそのHOXD8の発現レベルは低下することがわかった。これらの事実から、HOXD8は大腸癌の肝転移成立過程において、その置かれた環境によって転移促進的あるいは抑制的に働くと推察された。また、ヒト大腸がん細胞にHOXD8を強制的に発現させることに成功したが、長期にわたり発現を維持させるには至っていない。今後発現ベクターに工夫をこらし、HOXD8の安定発現細胞株を樹立する予定である。HOXD8が大腸癌の肝転移抑制遺伝子として働いているのではないかと考え、その証明を試みた。ヒト大腸癌KM12SM細胞をヌードマウスの様々な臓器(盲腸,肝臓,脾臓および腹膜)に移植し,形成された腫瘍組織からRNAを抽出し,HOXD8の発現をリアルタイムRT-PCR法で解析した。その結果,盲腸で増殖している腫瘍組織のHOXD8の発現レベルは他の臓器で増殖している腫瘍組織に比べ高いことがわかった。また,盲腸で増殖している癌組織のヘパラナーゼ(HPSE)およびMMP-2の発現レベルは,他の臓器で増殖している癌組織に比べ,高い傾向が認められ,とくにHPSEの発現パターンはHOXD8と類似していた。つぎに,内皮下基底膜モデルであるマトリゲルに対するヒト大腸癌SW480細胞の浸潤能とHOXD8の発現の関連性について調べた。浸潤アッセイは3度繰り返して低浸潤性亜株細胞(3×非浸潤細胞)および高浸潤性亜株細胞(3×浸潤細胞)を選別した。それらの細胞のHOXD8の発現を解析したところ, 3×浸潤細胞のHOXD8の発現レベルは親株および3×非浸潤細胞に比べ,有意に高いことが明らかとなった。さらに, HPSEの発現量は3×非浸潤細胞と比べ, 3×浸潤細胞で有意に高いことがわかった。大腸癌細胞の肝類洞内皮細胞への接着能とHOXD8の発現との関連性について検討した。KM12SMおよびSW480細胞から肝類洞内皮細胞への接着接着性を指標に高接着性亜株と低接着性亜株を選別し、それぞれのHOXD8の発現を調べた。その結果、両細胞株ともに接着細胞と非接着細胞間にHOXD8の発現には差がないことがわかった。以上、大腸癌の肝転移において, HOXD8は転移成立過程の癌細胞が置かれた場所によって転移促進的あるいは抑制的に働く可能性が示唆された。本年度は、以下の成果をあげた。蛍光蛋白質tdTomatoを発現するヒト大腸がん細胞KM12SMを樹立し、ヌードマウスの盲腸壁、脾臓および皮下に移植した。In vivoイメージングシステムを利用して、生体内のおけるtdTomatoの蛍光シグナル(がん細胞)の検出を試みた。

皮下移植腫瘍は、高感度でシグナルが検出された。しかし、盲腸壁移植腫瘍および脾臓移植腫瘍の検出感度は、各臓器が深部にあるためか、皮下移植腫瘍に比べ著しく低かった。蛍光から、より深部の検出に有効な発光システムに変更すべきであると考えられた。移植部位に形成された腫瘍組織(原発巣)および肝転移巣を採材し、HOXD8 mRNAの発現を解析した。その結果、肝転移巣のHOXD8の発現は原発巣と比べ低いことがわかった。これは、我々がヒト臨床材料を用いたこれまでの研究結果と一致していた。このことは、KM12SMのヌードマウス移植モデルはヒト大腸がんの肝転移におけるHOXコードの変化を反映していることを示唆している。すでに構築していたHOXD8発現プラスミドベクターをKM12SMおよびLoVo細胞に遺伝子導入し、HOXD8の発現を解析した。その結果、両細胞株ともに一過性にはHOXD8を過剰発現することが明らかとなった。一方、遺伝子導入細胞の選択培地で長期間培養するとHOXD8を過剰発現している細胞が減少していくことがわかった。HOXD8の過剰発現は、通常の培養条件(遺伝子導入細胞を選択するためにネオマイシンを含んでいるが)では生存に不利に働く可能性が考えられた。今後、HOXD8の発現を人為的に誘導できるシステムを構築していく必要性が示唆された。本年度の研究から、HOXD8は肝転移成立過程の各局面において転移に対して促進的あるいは抑制的に働きうることが明らかとなった。この成果は新規性が高く評価できるが、これらは表現型の異なるヒト大腸がん細胞を比較して得られた成果である。昨年度からの課題となっている大腸がん細胞にHOXD8を強制的に発現させ、対照細胞との悪性形質を比較する実験については進展させることができなかった。なぜなら、大腸がん細胞にHOXD8を発現させうるプラスミドベクターの作製に試行錯誤が続いているからである。本年度の目標は、ヒト臨床材料から得られた研究結果が我々のxenograftモデルで反映できることを確認すること、ならびにHOXD8の発現を人為的に変化させる方法の確立にあった。KM12SM細胞を用いる限り、前者は確認されたし、また後者においても過剰発現させることには成功した。ただし、HOXD8の発現抑制システムについては安定した結果を得る段階には至っていない。ヒト大腸がん細胞にHOXD8を強制発現させるために、発現誘導型かつプロモーター活性の比較的低いベクターの構築をめざす。HOXD8の発現を人為的に変化させるシステムでは、安定発現型ではなく発現誘導型のシステムの構築をめざす。また、生体内イメージングについては、蛍光検出系から、より深部の臓器まで観察可能な発光系の構築も試行する。該当なし。