hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
メダカ突然変異体を用いた腸管閉鎖症発症機構の解析

前年度までの研究で、原因遺伝子を同定し、腸管の閉鎖が観察される部位以外では形態的な異常を示さないこと、また腸管閉鎖が始めて観察されるのが、腸管の管腔形成が完了するstage26(2日胚)であることを明らかにした。本年度はこの腸管の閉鎖が引き起こされる時期において、どの様な異常が観察されるかについて解析を行った。ファロイジンを用いてF-アクチンの集積を観察した所、変異体胚において腸管の閉鎖に先行するstage25の胚において腸管の一部の頂端側と基底膜側の両方に強いシグナルを認めた。この部位は腸管閉鎖が生じる部位であり、腸管閉鎖の原因と考えられた。更にアクトミオシン系の制御に関わるミオシンIIの調節軽鎖(MRLC)のリン酸化状態を調べた所、リン酸化タンパク質のシグナルも同様に亢進していることが観察された。これらの現象はstage24の胚では観察されず、変異体胚は野生型胚と区別できない。以上の結果から腸管の管腔形成が完了する直前にアクトミオシン系のシグナルが異所的に亢進し、異所的なアクトミオシンの太い束が生ずる事により、腸管閉鎖をひき起こすと考えられた。そこでミオシンの阻害剤であるBlebbistatinを用いた実験をおこなった。腸管閉鎖を引き起こす直前かつF-アクチンの集積などが観察されたstage25の胚をBlebbistatinで処理した所、腸管閉鎖が抑制された。従って腸管閉鎖の原因はアクトミオシン系の亢進が原因であると考えられた。以上の結果は第122回日本解剖学会総会において報告した。本年度は変異体の表現型解析を主たる目的とし、抗体染色による解析やトランスジェニック系統の作出とそれを利用した解析を予定していた。以下の通り概ね順調に進んでいる。1表現型解析前年度に原因遺伝子がアクトミオシン系の制御に関わる遺伝子であることを明らかにしたことに基づき、アクチンやミオシンと行った細胞骨格に対する抗体を用いて表現型の詳細な解析を行った。このことにより当初の目的である、いつ、どの組織で、どの様な現象により腸管閉鎖が生じるかについて、2日胚の腸管の管腔形成が終了する時期に、腸管上皮において、局所的なアクチン繊維の異常な集積によって引き起こされることを明らかにした。2トランスジェニック作成前年度から引き続いて解析用のトランスジェニック系統の作成を行った。Crispr/Cas9のシステムを導入し、ノックインによるエンハンサートラップの手法を用いてトランスジェニックを2系統作成した。内胚葉と腸管形成の際に発現が確認されているsox17とfoxa2のエンハンサー領域に、minimal promoterを付加した膜結合型のGFPを挿入したものであり、両系統とも表現型解析の結果から重要であると考えられる腸管の管腔形成の際に発現が認められ、リアルタイムでの解析を行うことが可能になった。腸管閉鎖症は、先天的に腸の一部が閉鎖・狭窄する疾患である。本研究では、胚発生期に腸管閉鎖を示すメダカ突然変異体を用い、その遺伝的要因と、発症のメカニズムを明らかにすることを目的としている。本年度は変異体のライブイメージングによる表現型解析と、野生型原因遺伝子のトランスジェニック個体を利用した変異体胚のレスキュー実験を行った。1トランスジェニック個体を用いたライブイメージング前年度に作成した腸管上皮の細胞膜にGFPを発現するトランスジェニック系統に加え、同じく腸管上皮にLifeact-mCherryを発現するトランスジェニック系統を作成した。
形質転換を図った肝前駆細胞移植による肝不全治療法の開発に関する研究

肝硬変治療を目的に、肝硬変の責任分子の一つと考えられるTGFβに対する阻害物質であるBMP7の発現プラスミドベクターを作成し、CCL4の投与により作成したマウス肝硬変モデルに遺伝子導入した。結果、BMP7遺伝子導入群と対照群の肝硬変の程度をHE染色、Masson- Trichrome染色、コラーゲンIa発現を肝線維化の指標として比較したところ、両群間に差は無く、肝硬変治療におけるBMP7の意義を確認できなかった。◎目的:肝硬変などの慢性肝障害においては、肝前駆細胞による肝再生や、成熟肝細胞の増殖が抑制されていると考えられる。TGFβはこれらの抑制因子の一つと考えられる。今回我々はTGFβアンタゴニストである、BMP7をマウス肝硬変モデルに遺伝子導入することが、肝繊維化や成熟肝細胞および肝前駆細胞からの肝細胞増殖にどのように影響するかを検討する。・BMP7発現ベクターの作成:BMP7のcDNAをDNAライブラリーから、RT-PCR法にて作成し、シークエンスの確認した。System Biosciences社より購入したdual promotor piggybac systemのマルチクローニングサイトにマウスBMP7をinsertすることによりBMP7発現ベクターを作成した。これと同社より購入したtransposase発現プラスミドベクターをマウス肝にco-transfectionすることにより、マウス肝細胞にBMP7を強制発現させた。・肝線維化モデルマウス:C57BL/6マウスに1週間に2回の頻度でCCl4の腹腔への反復投与により肝障害を惹起させた。4週経過後に遺伝子導入を行った。その後も同様のペースでCCl4を与え、8週終了時に評価を行った。・遺伝子導入方法:BMP7を発現するtransposonプラスミドベクター(piggybac)をhydrodynamic法により肝細胞に遺伝子導入した。具体的には、BMP7発現ベクターおよびtransposase発現プラスミドベクターをマウス体重の8%の生理食塩水に混じ、マウス尾静脈より5秒間ほどの時間内に注入した。・評価方法:肝線維化の有無を評価として組織免染(HE染色、MT染色)、RT-PCR法によるコラーゲン1a遺伝子発現を検討中である。目的:肝線維化には肝星細胞においてTGFβによるSmad/non-Smad signaling pathwayを介する機序が挙げられるが、BMP7は拮抗的に作用することが知られている。BMP7発現プラスミドベクターをCCl4による肝線維化モデルマウスの肝組織に遺伝子導入し、BMP7非強制発現群と比較して肝線維化における抑制効果を評価する。方法:ベクタ-はSystem Biosciences社より購入したdual promotor piggybacベクターを使用し、マウスBMP7強制発現ベクターを作成した。遺伝子導入の評価には遺伝子導入72時間後に非験マウスの肝細胞を2tsep灌流法および低速遠心にて回収し、遺伝子導入さFACSを用いて評価した。肝線維化モデルマウスの作成には8-12週齢の雄C57BL/6マウスに1週間に2回の頻度でCCl4の腹腔への反復投与を行い、8週目にHE染色、Masson-Trichrome染色(MT染色)およびRT-PCRによりコラーゲン1a遺伝子の発現量を評価した。CCl4の4週経過後にhydrodynamics法によりBMP遺伝子導入し、その後も同様のペースでCCl4を与え、8週終了時に評価を行った。CCl4投与4週目に遺伝子導入したマウスを導入群、遺伝子導入を行っていないものを非導入群とし、この2群間での差異を比較評価した。結果:CCl4を4週間投与したマウス肝においてHE染色、MT染色において肝障害および線維化が確認された。これらの変化はCCl4を8週間投与後の非導入群においてより顕著であった。hydrodynamics法によりBMP発現ベクターを遺伝子導入群において、CCl4を8週間投与後にHE染色およびMT染色所見は非導入群と明らかな差異が見られなかった。肝前駆細胞の増殖能,多分化能を利用して、形質導入により成熟肝細胞への分化、増殖を誘導し、肝硬変症における肝線維化を抑制することで、肝不全の治療法を新規開発することが本研究の目的である。肝硬変症における肝不全の障害肝から産生される炎症性サイトカインや諸種の因子が、肝前駆細胞を成熟肝細胞ではなく細胆管増生や線維芽細胞などへ分化を異常に誘導することに着眼した。肝不全の治療として肝前駆細胞移植を行うにあたり、移植肝前駆細胞への遺伝子導入により、ドナー肝前駆細胞の肝細胞への分化増殖を誘導し、線維化を抑制することにより、治療の創出をめざす。標的分子として、TGFβ阻害物質であるBMP-7を選択した。京都大学医学部口腔外科、別所和久教授よりhBMP-7発現pCAGGSプラスミドベクター供与を受けた。hBMP-7発現ベクターを精製し、制限酵素処理により、精度を確認した。マウス胎仔肝細胞およびマウス胎仔線維芽

細胞を採取、培養し、hBMP-7プラスミドベクターをリポフェクタミン法にて遺伝子導入した。プラスミド:リポフェクタミンの割合を1:21:5まで割り振り、コントロール群も含めてDay7まで観察したところ、hBMP-7遺伝子導入群で形態学的に紡錘状細胞が多くなる傾向を示した。Day 4にmRNAを回収し、RT-PCR法を用いてhBMP-7遺伝子導入群でBMP7の発現を確認した。研究開始当初は京都大学口腔外科学教室よりBMP7発現プラスミドベクターの供給を受け、研究を開始したが、得られたプラスミドベクターを制限酵素にて切断たところ、予期せぬバンドが確認された。このため。BMP7のcDNAをDNAライブラリーから、RT-PCR法にて改めて作成し、シークエンスの確認の後、発現ベクターへの挿入作業をおこなった。また供給されたベクターにはレポータージーンが組み込まれていなかったため、GFP発現ベクターとした。文献を参考にマウスにCCL4を腹腔投与し、肝硬変モデルを作成したが、肝繊維化の形成には予定より長期間のCCL4の投与が必要であった。hydrodynamic法による遺伝子導入効率を現在確認中である。BMP-7遺伝子発現プラスミドベクターの作成のためにC57BL/6マウスの肝臓、腎臓、骨髄よりmRNAを抽出し、RT-PCR法によりBMP-7のcDNAの合成を行ったが、全長のBMP7-cDNAは1296bpと分子量が大きく、高精度の全長のCDNAの作成が困難であったた。最終的に、京都大学医学部口腔外科、別所和久教授よりhBMP-7発現pCAGGSプラスミドベクター供与を受けた。・肝繊維化マウスモデルの作成を継続。・BMP7を発現するtransposonプラスミドベクター(piggybac)の遺伝子導入によるBMP7強制発現モデル作成を継続する。・肝線維化の有無を評価として組織免染(HE染色、MT染色)、RT-PCR法によるコラーゲン1a遺伝子発現を検討する。・肝繊維化モデルをBMP7遺伝子導入群、非遺伝子導入群に分け、成熟肝細胞および肝前駆細胞を肝に移植し、肝細胞の増殖様式を検討する。h-BMP7の産生能の高いマウス胎仔肝細胞およびマウス胎仔線維芽細胞を細胞移植するために、hBMP-7を遺伝子導入したマウス胎仔肝細胞およびマウス胎仔線維芽細胞から安定発現細胞株を樹立する。ジフテリアトキシンによる急性肝障害モデル、四塩化炭素による肝硬変マウスモデルを作成しており、これらにhBMP-7を遺伝子導入したマウス胎仔肝細胞およびマウス胎仔線維芽細胞の細胞移植が、肝不全の改善に寄与するかについて検討を行っている。肝硬変マウスにおける肝切除後に、hBMP-7を遺伝子導入細胞を細胞移植し、非細胞移植群、非遺伝子導入細胞移植群との間の、生存率を比較する。ジフテリアトキシンによる急性肝障害モデルにおいても、同様にhBMP-7を遺伝子導入細胞を細胞移植し、非細胞移植群、非遺伝子導入細胞移植群との間の、生存率を比較する。
生理活性を指向する複素環化合物の実用的電解部分フッ素化プロセスの開発

本研究は生理活性が期待される複素環化合物の電解部分フッ素化の安全かつ高効率的な実用プロセスを開拓することを主な目的として行ったものであり、以下の成果を得たことから実用プロセス化確立への基盤作りを行うことができた。1)フッ化物イオンの合成とその電気化学的性質の解明:支持塩兼フッ素源であるフッ化物塩は電解フッ素化の最も大きな支配因子であるから種々のフッ化物塩を新たに合成し、これらの電気化学的性質(電位窓や電導度など)の解明を行い、複素環化合物の電解フッ素化に適した支持塩を見い出した。2)含硫黄複素環化合物の電解モノフッ素化:ユニークな生理活性が期待できる種々の含硫黄複素環化合物の部分フッ素化について検討し、フッ素系支持塩とフッ素化効率、選択性との関係を明らかにすることによりこの種の化合物の選択的部分フッ素化法を確立した。3)含窒素複素環化合物の直接的電解モノフッ素化:オキソインドールやイソキノリンなどの生理活性含窒素複素環化合物を対象とし、電解モノフッ素化の最適電解条件を陽極材料と関連から調べ、実用化のための指針を得た。4)β-(フェニルチオ)-β-ラクタム類の間接的脱硫モノフッ素化:トリアリールアミンをメディエーターとするβ-ラクタムの間接的電解脱硫モノフッ素化を達成した。5)生理活性試験により電解生成フッ素化体のうちフルオロチオラノン類が顕著なPLA2阻害作用を示すことが見い出された。本電解フッ素化法は無隔膜で十分であり、しかも支持塩との組み合わせによっては安価な炭素系陽極材料が利用できることから実用化できる可能性を示すことができた。本研究は生理活性が期待される複素環化合物の電解フッ素化の安全かつ高効率的な実用プロセスを開拓することを主な目的として行ったものであり、所期の目的をほぼ達成することができた。1)フッ化物イオンの合成とその電気化学的性質の解明支持塩兼フッ素源であるフッ化物塩は電解フッ素化の最も大きな支配因子であることから種々のフッ化物塩を新たに合成し、これらの電気化学的性質(電位窓や電導度など)の解明を行い、電解フッ素化に適した支持塩を見い出した。2)含硫黄、酸素複素環化合物の電解モノフッ素化チオラクトンやラクトンおよびその類縁体などユニークな生理活性が期待できる複素環化合物の部分フッ素化について検討し、フッ素系支持塩とフッ素化効率、選択性との関係を明らかにすることによりこの種の化合物の選択的部分フッ素化法を確立した。3)含窒素複素環化合物の電解モノフッ素化β-ラクタムなどの生理活性含窒素複素環化合物を対象とし、電解モノフッ素化の最適電解条件を調べ、実用化のための指針を得た。本研究は生理活性が期待される複素環化合物の電解部分フッ素化の安全かつ高効率的な実用プロセスを開拓することを主な目的として行ったものであり、一部を除き所期の目的をほぼ達成することができた。1)フッ化物イオンの合成とその電気化学的性質の解明支持塩兼フッ素源であるフッ化物塩は電解フッ素化の最も大きな支配因子であるから種々のフッ化物塩を新たに合成し、これらの電気化学的性質(電位窓や電導度など)の解明を行い、複素環化合物の電解フッ素化に適した支持塩を見い出した。2)含硫黄複素環化合物の電解モノフッ素化ユニークな生理活性が期待できる含硫黄縮合複素環化合物の部分フッ素化について検討し、フッ素系支持塩とフッ素化効率、選択性との関係を明らかにすることによりこの種の化合物の選択的部分フッ素化法を確立した。3)含窒素複素環化合物の直接的電解モノフッ素化オキソインドールなどの生理活性含窒素複素環化合物を対象とし、電解モノフッ素化の最適電解条件を調べ、実用化のための指針を得た。

4)4-フェニルチオ-β-ラクタム類の間接的脱硫モノフッ素化トリアリールアミンをメディエーターとするβ-ラクタムの間接的電解脱硫モノフッ素化を達成した。
NMRによる動的構造解析法の開発と応用

1.プロ-ブの作製および2次元粉末スペクトルのシミュレ-ション用コンピュ-タソフトの開発を行った。2.ギ酸カルシウムの2つの非等価なギ酸イオンにおける^<13>C化学シフト/^<13>C-^1H双極子相互作用2次元スペクトルを3次元SASS法を用いて分離測定した。スペクトルは不動格子を仮定したシミュレ-ションに比べて歪んでいることを見出し、その歪みは異方的なC-H変角振動により説明できることが分った。この研究はNMRによる微小振幅の運動の研究の道をひらくものである。3.選択励起法と回転軸のスイッチングを組合わせて1次元NMRで異方性相互作用を各々の核に対して分離測定する方法を開発した。4.SASS法を用いてデオキシコ-ル酸-フェロセン包接化合物においてゲスト分子の^<13>C化学シフト異方性による粉末スペクトルを分離測定した。5.SASS法を用いてα、β、γシクロデキストリン-フェロセン包接化合物において、フェロセン分子の包接状態および運動状態を調べた。6.MM2分子力場計算を上記化合物に対して行い、実験結果の解析を行った。1.プローブ等、本研究の方法が可能な装置を建設した。2.2次元粉末スペクトルのディスプレイおよびシミュレーションのためのコンピュータソフトを開発した。3.ギ酸カルシウムの2つの非等価なギ酸イオンにおける^<13>C化学シフト/^<13>Cー^1H双極子相互作用2次元スペクトルを3次元SASS法を用いて分離測定した。スペクトルは不動格子を仮定したシミュレーションに比べて歪んでいることを見出し、その歪みは異方的なCーH変角振動の存在を仮定すると説明できることが分った。この結果から非等価なギ酸イオンそれぞれに対して面内および面外CーH変角振動の振幅を求めた。NMRは分子運動の研究に極めて優れた手段として用いられてきたが、その対象は大きな振幅をもつ運動に限られていた。4.今後、デオキシュール酸ーフェロセン包接化合物、α、β、γシクロデキストリンーフェロセン包接化合物においてスペクトルを測定し、ゲストのフェロセン分子の運動性を調べる予定である。1.選択励起法と回転軸のスイッチングを組合せて1次元NMRで異方性相互作用を各々の核に対して分離測定する方法を開発した。この方法により従来の2次元法に比較して短時間で測定でき、動的構造解析にきわめて有効である。2.SASS法を用いてαβγシクロデキストリン(CD)-フェロセン包接化合物においてゲストのフェロセン分子の^<13>C化学シフト異方性による粉末スペクトルを分離測定した。包接されたフェロセン分子は5回軸回りの運動のほか、才差運動および秤動運動を行うことが分った。α-CDでは異なったモ-ドで運動しているフェロンがほぼ1:1の比率で存在している。β-CDでは半数のフェロセン分子は縦型配向をとってホスト分子内にきっちりと包接されている。γ-CDではフェロセンは横型配向をとって才差運動をおこなっているが、これに39°の振巾をもつ秤動運動が加わっている。3.同様にSASS法を用いてデオキシコ-ル酸-フェロセン包接化合物において、フェロセン分子の包接状態および運動形態を調べた。X線結晶解析の結果は、フェロセン分子は静止しているということであったが、この研究により、5回軸まわりの速い回転運動と5回軸自身の比較的大きな振巾(25°)の秤動運動があることがわかった。4.MM2分子力場計算を上記化合物に対して行った。
現代都市の場所・景観をめぐる文化ポリティクス

本研究では、主として東京・岐阜・大阪・神戸・那覇をフィールドに、昭和戦後期都市政策のなかで生み出された、さまざまな場所とその景観の社会的・地理的性格を検討することを通じ、都市の復興(再建)ならびにそれにつづく新たな都市建設に固有の理念と空間的論理を明らかにした。対象となった具体的な場所ないし景観は、戦災都市の食料品市場(自由市場、闇市など)、露店街、スクウォッター地区(引揚者の集住地区)、そして特殊飲食店街であり、いずれも敗戦後の都市空間に空隙を縫うようにして形成されたところばかりである。当初、それらは体系的な都市政策が実施されないなかで空地を占拠するかたちで確固たる地盤を築いていたものの、復興の進捗に合わせて取り払われるべき「不快」な景観として認識され、最終的には再開発すべき対象として都市政治の焦点となり、実際に移転ないし取り払われるまでの経緯を明らかにしている。今年度は、研究期間の最初の年に当たるため、場所・景観の「文化ポリティクス」に関する内外の文献・論文を精読し、基本的な論点をまとめるとともに、言説分析に関わるおおよその枠組みをつくりあげることに時間を費やした。これまでに科研費を使用して蓄積してきた成果を、今年度の研究に資する視座としてまとめたのが加藤政洋・大城直樹編『都市空間の地理学』(ミネルヴァ書房)であり、今後の研究の理論的枠組みや着想が示されている。一方、戦災都市--東京・名古屋・岐阜・大阪・神戸・那覇--について、戦災地図、復興計画地図、復興計画・都市計画に関する書類などのほか、新聞記事や雑誌記事をも含むその他の関連する資料の収集を進めた。今後の事例研究に向けて、とりわけ有意義な資料を得られたのは、東京と岐阜、そして那覇である。まず、東京については、都庁から流出したと思われる「後楽園裏バラック」のクリアランスをめぐる一連の資料を入手した。これについては、すでにデータベース化を終了し、研究協力者とともに論文の作成にとりかかっている。次いで、岐阜についてであるが、二つの特殊飲食店街--金津園・国際園--の移転問題に関して入手の見込みのある資料は、新聞記事を中心にほぼ全部の資料の複写を終了した。那覇については、1970年までの必要な新聞記事をすべて入手しており、あとは本土復帰後までの資料を残すのみとなっている。この三都市については、おおまかな分析を終え、論文の執筆に取り掛かっており、次年度に研究成果を発表できる見込みとなった。本年度は昨年度までの蓄積を踏まえて、東京・岐阜・那覇におけるフィールドワークを集中的に行なった。その結果、不足していた資料を入手し、また現状を把握することができたので、早い段階で資料の分析、論文の執筆に取り掛かることができた。まず、東京・岐阜についてであるが、戦災の状況、復興の計画と実際の過程、そして都市計画との関わりを踏まえて、特殊飲食店街の形成過程をつぶさに検討した。ここで明らかになったことは、戦前の遊廓に象徴される集合的な公娼制度が米軍の占領下においても巧みに継続され、戦前以上に集娼地域が増えたことである。こうした戦前-戦後の連続性についてはこれまでほとんど明らかにされておらず、平成20年度に成果を公表(書物として出版)する予定である。また、これまで確認されてこなかった「東京パレス」、岐阜の「手力園」といった特飲街の所在を空中写真で発見したことも大きな成果である。さらに那覇については、米軍統治下で進められた土地の段階的開放にともない、市街地が新たに建設されていく過程を分析した。いまだ資料の制約があるためその全貌は詳らかでないものの、本研究の目的である「場所の文化ポリティクス」という点では、「歓楽街」と称される場所がまさに米軍と琉球政府による折衝の焦点となり、民意を糾合しつつ、あらたな景観が形作られてゆく過程を言説分析から明らかにし得たことは、次年度に向けても大きな成果となった。また、東京については別の側面(露店問題)にも注目し、年度末から資料の収集、分析を開始した。これは次年度で引き続き検討する予定である。本研究の目的は、昭和戦後期の都市政策のなかで生み出された、さまざまな場所とその景観の社会的・地理的性格を検討することを通じ、都市の復興(再建)ならびにそれにつづく新たな都市建設に固有の理念と空間的論理を明らかにすることにあった。本研究で対象とする場所ならびに景観は、戦災都市の食料品市場(自由市場、闇市など)、スクウォッター地区(引揚者の集住地区)、そして特殊飲食店街などであり、いずれも敗戦後の都市空間に空隙を縫うようにして形成された場所である。

平成20年度は研究期間の最終年度にあたるため、前年度まで調査・研究の過程で絞り込んだ東京・那覇それぞれの対象地区に関する総括を行なった。すなわち、東京における露店マーケットの解体と代替施設の提供問題、そして那覇市における歓楽街の設置問題である。まず、東京の露店街であるが、昭和26年以降、代替施設(主として会館)の建設場所を提供することで、急速に解体が進んだ。それは、都市の「病的現象」であるとして、公共性の高い空間からの排除を意味したのである。次いで、那覇の「歓楽街」設置問題については、当時の都市建設という地理的文脈のなかで施設の布置をめぐる議論のなかで惹起されたことを明らかにした。まさに、都市の空間プランニングと場所のポリティクスとが交差した問題であり、辻という具体的な場所の構築を通じて、都市建設をつきうごかす力学の一端を明らかにした点に意義があるものと思われる。なお、岐阜市における引揚者マーケットの移転問題については、前年度に成果をまとめている。
根未完成失活歯に象牙芽細胞活性化因子を併用した血管再生療法の根管壁硬組織再生

歯髄血管再生療法は、歯根未完成無髄歯に対し根管内を消毒後、誘導した新鮮な血餅を利用して根尖組織から新生血管を再生させ、同時に歯髄の再生を期待する歯髄血管再生療法である。これまでの短期的実験では、象牙芽細胞による象牙質の新生は確認されていない。本実験は、不規則な硬組織形成を防止し、象牙芽細胞による根管壁象牙質の新生を誘導するため、象牙芽細胞活性化因子PRP(多血小板血漿)を応用した根管壁硬組織新生を導く新しい歯髄再生療法を確立し、長期経過例を観察することを目的としている。本年度は、実験に供するPRPの1実験あたりに必要な量を計算し、その確保につとめるための方法を検討した。予備実験においてラット尻尾からの採血では十分量の全血が確保できず、必要量のPRP確保が困難であった。自己血によるPRP確保を予定していたが、実験系の検討が必要となった。採取した血液からのPRPとPRP成長因子活性化開始剤の調整については概ね順調に進行した。採血に供したラットから摘出した歯髄の初代培養後、継代培養を繰り返し、細胞数の確保を継続している。ALP活性、Von Kossa陽性細胞株の樹立は現在継続中である。本実験のコントロールの1系として前年度に行った歯根未完成歯の根管に血餅を満たし、PRPのみを添加した6週齢のEDTA(-)と(+)群、12週齢のEDTA(-)と(+)群の顎骨摘出試料から、脱灰、パラフィン包埋、薄切切片作成、染色標本の作成を行っている。ラットから採血し得る血液量の十分な確保が困難であったことから、他家血の使用と採取した血液の保管可能時間の確認等、予定外の準備が必要となった。歯髄細胞の数の確保に時間を要し、細胞株樹立を継続中である。さらに、本学共同の動物実験室の実験数の大幅な増加により、動物飼育ゲージ数の不足が生じ、本実験で使用予定の動物飼育ゲージの確保が困難となり、新たなゲージ導入までの間実験待機をせまられた。以上のこと等が重なり、現在実験予定が遅れている。本実験開始のための改善点とその対策が概ね整ったことから、実験担当者のスケジュール管理を行い、協力が得られ次第、本実験を早急に開始する予定である。本実験後の追加実験の必要性も考慮し、可及的すみやかな実験の遂行を予定している。本研究は、根未完成失活歯に対し、根尖部からの血餅に象牙芽細胞活性化因子を併用して血管再生を促し、根管壁硬組織形成を導くことを目的としている。H29年度は、1細胞株の樹立、2血餅誘導法に用いるラットの採血とPRPとPRP成長因子活性化開始剤の調整を行う計画をたてた。まず1の実験として、ラットI1にラバーダム防湿を行い無菌下で抜髄し、摘出した歯髄の初代培養を行った。細胞は派生するまでに長期間を有し、現在、実験に必要な細胞数確保のために継代培養を継続中である。2血餅誘導法に用いるラットの採血とPRPとPRP成長因子活性化開始剤の調整の実験として、本実験の実験計画に即し、まず5週例のラットで採血を行った。通法に従い、尻尾からの採血を試みたがごく微量しか採血できず、末端から基部方向へ部位を変えて行ったが十分量ではなかった。次にラット後肢の血管を剖出し、採取を試みたが十分量ではなかった。最後に心血管からの採取も試みたが、5週例では1匹からの採血量では必要十分な血液を採取することが困難であった。次に12週例のラットで同様の実験を行ったところ1匹から実験に供するに十分な血液量を採取することができた。次に採取した血液からのPRPとPRP成長因子活性化開始剤の調整実験を行った。数種類のキットを試験的に使用し、採取血液から最大限有効なPRP作成方法を決定することができた。この結果、5週例では複数回採取も困難であることから自家血からのPRP作成が困難であり、他家血使用や採取血液の保存が必要となり、検討を行った。なお、採血に供したラットから歯髄を摘出し、初代培養を行って細胞数の確保を図っている。さらに、本実験のコントロールの1系として、根未完成失活歯の根管に血餅を満たし、PRPのみを添加して仮封した5週と12週後の組織標本を作製中であり、薄切切片作成後各種染色を施し、本実験の参考にする予定である。本実験はN数の確保、実験サイクルの日数等の観点から、ラットを使用することとしたが、ラットの歯はごく微小でありその抜髄処置や血液採取法には特殊な技術を要するため、予備実験が必要不可欠であることや、連携作業の必要性が考えられた。そのためH29年度は、まず基礎的実験を行うことに重点を置き、本実験の役割分担や作業環境の確認、必要器材の確認と準備、実際の作業を行い、改善点をチェックする計画を立てた。細胞の派生時期や、増殖等、コントロールできないものも多く、まずはその見極めと、日数の確認を予定し、細胞数確保も進行中であり、予定に沿った進捗状況と言える。

これまでの短期的実験では、象牙芽細胞による象牙質の新生は確認されていない。本実験は、不規則な硬組織形成を防止し、象牙芽細胞による根管壁象牙質の新生を誘導するため、象牙芽細胞活性化因子PRP(多血小板血漿)を応用した根管壁硬組織新生を導く新しい歯髄再生療法を確立し、長期経過例を観察することを目的としている。本年度は、実験に供するPRPの1実験あたりに必要な量を計算し、その確保につとめるための方法を検討した。予備実験においてラット尻尾からの採血では十分量の全血が確保できず、必要量のPRP確保が困難であった。自己血によるPRP確保を予定していたが、実験系の検討が必要となった。採取した血液からのPRPとPRP成長因子活性化開始剤の調整については概ね順調に進行した。採血に供したラットから摘出した歯髄の初代培養後、継代培養を繰り返し、細胞数の確保を継続している。ALP活性、Von Kossa陽性細胞株の樹立は現在継続中である。本実験のコントロールの1系として前年度に行った歯根未完成歯の根管に血餅を満たし、PRPのみを添加した6週齢のEDTA(-)と(+)群、12週齢のEDTA(-)と(+)群の顎骨摘出試料から、脱灰、パラフィン包埋、薄切切片作成、染色標本の作成を行っている。ラットから採血し得る血液量の十分な確保が困難であったことから、他家血の使用と採取した血液の保管可能時間の確認等、予定外の準備が必要となった。歯髄細胞の数の確保に時間を要し、細胞株樹立を継続中である。さらに、本学共同の動物実験室の実験数の大幅な増加により、動物飼育ゲージ数の不足が生じ、本実験で使用予定の動物飼育ゲージの確保が困難となり、新たなゲージ導入までの間実験待機をせまられた。以上のこと等が重なり、現在実験予定が遅れている。H29年度に行った予備実験により、ラットの歯の抜髄処置や血液採取に必要な器具器材、実技の方法やコツ、連携方法等の細部が確認でき、本実験に向けた十分な準備ができた。また、予定していた自家血使用の困難性から、代替え手段の検討を行った。血液採取同日実験不可の可能性もあり、その場合の保存の可否、それによる実験計画の見直し等考慮すべきところが確認でき、対応することも可能となり、より実践的な実験計画の遂行が可能となり、研究を推進することができる。本実験開始のための改善点とその対策が概ね整ったことから、実験担当者のスケジュール管理を行い、協力が得られ次第、本実験を早急に開始する予定である。本実験後の追加実験の必要性も考慮し、可及的すみやかな実験の遂行を予定している。設備備品としてマイクロモーターとチューブ用卓上遠心機を購入予定であったが、本学の共同科学実験室である生物科学施設の改築に付随して、共同利用できる設備が設置され、それらを使用することが可能となり、H29年度の実験を遂行することができたため、購入を見合わせた。今後は画像処理・データ処理の必要性が拡大する見込みであるため、周辺機器とあわせて充実をはかるために有効的に活用する予定である。実験の基礎となる使用細胞数の確保と十分な自己血採血量の確保が困難であったため、試行錯誤を繰り返し、当初の計画通り本実験を遂行することができず、本年度使用予定額に大きな残余を生じる結果となった。本年度は、それらを改善、克服することができる見込みであるため、本実験を進める予定である。従って、本実験に伴う必要経費が発生する見込みである。
昆虫の刺激方向予測に基づく運動意思決定に関与する神経回路機構の解明

本年度は,昨年度実施した,昆虫におけるモデルベースの意思決定を検証するための学習タスクを改良し,先行する聴覚刺激によって忌避的刺激に対する行動が変化することを明らかにした。ボール型トレッドミル上のコオロギに,左右いずれかのスピーカーから10kHzのトーン音(手掛かり刺激)を1秒間与え,その終了直前に左右いずれかの側方から200ms間の気流刺激(忌避性無条件刺激)を与えたところ,気流刺激によって誘導される歩行運動方向がやや後方よりに変化した。この変化は1回目の刺激に対する応答でも見られ,刺激を繰り返しても変化しなかったことから,気流刺激の予測で生じたものではなく聴覚と気流感覚のcross-modal effectによるものであると考えられる。また,この効果は側方からの気流刺激に対して最大となり,音源の位置に関係しなかった。次に,歩行運動方向を決定する下行性介在ニューロンを明らかにするため,トレッドミル上を歩行するコオロギの頸部腹側縦連合から下行性神経活動を細胞外記録し,同時にトレッドミルから運動情報を同時計測した。神経活動をスパイクソーティングによって約4060個のユニットに分離し,その発火列データから歩行速度およびターン角速度をSparse logisticregressionを用いて予測したところ,自発歩行ではほぼすべてのユニットを使って予測したのに対し,気流誘導性歩行では少数のユニットだけで予測を行っていた。さらに,自発歩行予測モデルでは気流刺激に対してまばらな発火をしめすユニットと刺激終了後も長く発火が続くユニットに大きな重み付けがされているのに対し,気流誘導性歩行予測モデルでは刺激に対して一過的に発火するユニットに大きく重み付けられていた。すなわち,前者は意思決定により運動を起こすユニットであると考えられることから。これらのニューロンが運動意思決定に関与していることが示唆された。25年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は,「昆虫が刺激予測によってモデルベースの行動内容を決定できるか」を検証するための新しい学習タスクの確立を目指した。ボール型トレッドミル上のコオロギに,10kHzのトーン音(手掛かり刺激)と気流刺激(忌避性無条件刺激)を組み合わせたトレーニングを行い,その前後でトレーニングに用いた10kHzと3kHzのトーン音に対する反応を計測した。その結果,静止したコオロギに対して条件付け刺激を与えた群では10kHz音に対して歩行運動を示すようになったのに対し,静止中・歩行中にかかわらず一定の間隔で条件付け刺激を与えた群では,変化はみられなかった。すなわち,コオロギは静止している状態でトレーニングした場合のみ,音と気流刺激を連合づけることができると考えられる。しかし,この実験ではトレーニング中に気流刺激に対するadaptationが生じてしまうため,多くの個体でトレーニングを終えることができなかった。そこで,気流刺激と電気ショックを組み合わせた条件付けを行い,その前後で気流刺激に対する反応を調べた。そのうち,1群は,トレーニング時にコオロギの周囲8方向から1回ずつ計8回気流を与え,別の群では側方1方向から10回刺激を与えた。その結果,前者ではトレーニング後に気流に対する歩行距離が伸び,刺激角度に対する依存性が大きくなった。一方,後者では歩行距離,刺激角度依存性ともに変わらなかった。すなわち,様々な方向からトレーニングを行うことによって,刺激に対してより正確な忌避運動を制御するようになる。以上の結果から,音を手掛かりとした行動決定タスクのためのトレーニングでは,静止中のコオロギに限定して8方向から気流刺激を行い,モデルフリーのタスクでは条件刺激のトーン音を固定した方向から与え,モデルベースのタスクでは常に気流刺激と同方向から与えるパラダイムが有効であると考えられる。

コオロギにおいて音と気流によるモデルベースの行動決定を行うための学習タスクを確立するために,トレーニング時のadaptationを減少させ,また自発的な歩行中はトレーニングを行わないことが重要であることが分かった。これらをふまえて,新しい学習タスクの構築にある程度めどをつけることができた。今後,学習タスクの細部を修正し,モデルベースの行動決定が行えるトレーニング課題を確立する。さらに,気流回避の歩行運動の開始および方向制御に関与する下行性ニューロンを探索し,それらの神経活動をモデルベースによる行動時とモデルフリーによる行動時で比較することによって,昆虫の行動決定の神経機構の解明に迫っていく。25年度が最終年度であるため、記入しない。
海洋生物からのトポイソメラーゼ阻害物質の探索

トポイソメラーゼはDNA高次構造を制御している酵素であり、新しい抗がん物質探索のターゲットとして注目されている。本研究では海洋生物(海綿やホヤ類など)や海洋微生物を研究材料として、トポイソメラーゼ阻害活性を指標としてスクリーニングを行い、いくつかのトポイソメラーゼ阻害物質を単離しその化学構造を明らかにした。以下にその概要を報告する。今回の研究でトポイソメラーゼIの阻害物質として、海綿Halichondria okadaiより単離した細菌Alteromonas sp.の培養菌体から、4環性マクロラクタム化合物であるAltera-mide Aを、海綿Luffariella sp.よりセスターテルペン化合物であるManoalideを、海綿Plakortis sp.より二量体型脂肪酸誘導体であるManzamenone Aを、海綿Amphimedon sp.よりセスターテルペン化合物であるVariabirinをそれぞれ単離し、それらの化学構造をNMR,MS等のスペクトルデータに基づいて帰属した。また、海綿Xestospongia sapraから単離したXestoquinone及びHalenaquinoneについて、ColE1 NDAを用いてトポイソメラーゼI阻害作用を調べた結果、これらの化合物はトポイソメラーゼIと結合することによっd、トポイソメラーゼIとDNAとの結合を阻害することが明らかとなり、これまでトポイソメラーゼI阻害物質として知られているCamptothecinとは異なる作用メカニズムであることがわかった。
大動脈弁狭窄症の発症抑制を目指したmicroRNA解析

ヒト大動脈弁標本、ブタ大動脈弁間質細胞、ワイヤー傷害石灰化大動脈弁狭窄(CAVS)マウスを用いてCAVSとmicro RNA(miR)の関連について検討した。CAVS患者と大動脈弁逆流(AR)患者の大動脈弁標本を用いて、石灰化への関与が報告されている10個のmiRの発現をqRT-PCRを用いて調べた。CAVS群においてmiR-34aを含む6個のmiRの発現が亢進していた。CAVS群では石灰化を促進するRunx2の発現が亢進し、Runx2の発現を抑制するNotch1の発現が低下していた。ブタ大動脈弁間質細胞を石灰化誘導培地で刺激すると、miR-34aの発現は亢進した。またRunx2の発現は亢進し、Notch1のmRNAの発現は低下した。ブタ大動脈弁間質細胞においてmiR-34aを過剰発現させると、Notch1の発現が低下し、Runx2の発現および石灰沈着が亢進した。miR-34a抑制により、Notch1亢進、Runx2抑制を介し、石灰沈着が抑制された。Notch1 mRNAを用いたルシフェラーゼアッセイおよびプルダウンアッセイにより、ブタ大動脈弁間質細胞においてmiR-34aはNotch1の発現を直接調節していることが示された。本邦では高齢人口の増加とともに大動脈弁狭窄症(AS)の有病率が増加している。高齢者の大動脈弁石灰化の有病率は高率で、5年で約9%がASに進行する。ASの危険因子は動脈硬化と共通するが、ASの半数は動脈硬化を合併せず、脂質低下療法を含めAS進行抑制に有効な薬物療法がない。近年、様々な疾患の発生にノンコーディングmicroRNA(miRNA)の関与が明らかとなり、AS進行への関与も示唆されている。本研究では、まずASおよび大動脈弁逆流患者の大動脈弁組織を用い、AS進行に関与するmiRNAを選定する。大動脈弁置換術時に採取した大動脈弁組織を用い、石灰化に関係することが報告されているmiRNAの発現状況を解析した。ブタ大動脈弁間質細胞を採取・培養し、石灰化を誘導する培養液(OM)による刺激を行い、miRNAの発現状況を解析した。次に、候補miRNAのmimicまたはinhibitorをトランスフェクションし、石灰化が抑制されるか、石灰化に関与する遺伝子発現に与える影響を検討している。今後は、候補miRNAのmimicまたはinhibitorを投与開始後に、マウス大動脈弁ワイヤー傷害ASモデルを作成し、大動脈弁圧較差を心エコーで継時的に観察する。またワイヤー傷害後4-16週間で、大動脈弁の組織学的検討を行う。In vitroおよびin vivoでの実験を繰り返し、AS進行抑制の治療標的を検索し、創薬の可能性を探る。大動脈弁狭窄症(AS)および大動脈弁逆流患者において大動脈弁置換術時に採取した大動脈弁組織を用いて、miRNAの発現状況を解析した。さらに、ブタ大動脈弁間質細胞を採取・培養し、石灰化を誘導する培養液(OM)による刺激を行い、miRNAの発現状況を解析した。両者の検討で、同様な傾向を示すmicro RNAを候補miRNAとして、選定した。これら候補miRNAのmimicまたはinhibitorをブタ大動脈弁間質細胞トランスフェクションし、石灰化が抑制されるか、石灰化に関与する遺伝子発現に与える影響を検討している。次に、候補miRNAのmimicまたはinhibitorをトランスフェクションし、石灰化が抑制されるか、石灰化に関与する遺伝子発現に与える影響を検討した。今後は、候補miRNAのmimicまたはinhibitorを投与開始後に、マウス大動脈弁ワイヤー傷害ASモデルを作成し、大動脈弁圧較差を心エコーで継時的に観察している。またワイヤー傷害後4-16週間で、大動脈弁の組織学的検討を行っている。

これら候補miRNAのmimicまたはinhibitorをブタ大動脈弁間質細胞トランスフェクションし、石灰化が抑制されるか、石灰化に関与する遺伝子発現に与える影響を検討した。現在、マウス大動脈弁ワイヤー傷害ASモデルを作成し、大動脈弁圧較差を心エコーで継時的に観察している。ヒト大動脈弁標本、ブタ大動脈弁間質細胞、ワイヤー傷害石灰化大動脈弁狭窄(CAVS)マウスを用いてCAVSとmicro RNA(miR)の関連について検討した。CAVS患者と大動脈弁逆流(AR)患者の大動脈弁標本を用いて、石灰化への関与が報告されている10個のmiRの発現をqRT-PCRを用いて調べた。CAVS群においてmiR-34aを含む6個のmiRの発現が亢進していた。CAVS群では石灰化を促進するRunx2の発現が亢進し、Runx2の発現を抑制するNotch1の発現が低下していた。ブタ大動脈弁間質細胞を石灰化誘導培地で刺激すると、miR-34aの発現は亢進した。またRunx2の発現は亢進し、Notch1のmRNAの発現は低下した。ブタ大動脈弁間質細胞においてmiR-34aを過剰発現させると、Notch1の発現が低下し、Runx2の発現および石灰沈着が亢進した。miR-34a抑制により、Notch1亢進、Runx2抑制を介し、石灰沈着が抑制された。Notch1 mRNAを用いたルシフェラーゼアッセイおよびプルダウンアッセイにより、ブタ大動脈弁間質細胞においてmiR-34aはNotch1の発現を直接調節していることが示された。今後は、候補miRNAのmimicまたはinhibitorを投与開始後に、マウス大動脈弁ワイヤー傷害ASモデルを作成し、大動脈弁圧較差を心エコーで継時的に観察する。またワイヤー傷害後4-16週間で、大動脈弁の組織学的検討を行う。シャム手術およびワイヤー傷害ASマウスより採血し、miRNA arrayを行い、さらに治療の候補となるmiRNAを選定する。In vitroおよびin vivoでの実験を繰り返し、AS進行抑制の治療標的を検索し、創薬の可能性を探る。今後は、候補miRNAのmimicまたはinhibitorを投与開始後に、マウス大動脈弁ワイヤー傷害ASモデルを作成し、大動脈弁圧較差を心エコーで継時的に観察している。またワイヤー傷害後4-16週間で、大動脈弁の組織学的検討を行っている。候補miRNAが大動脈石灰化を抑制するメカニズムを検討している。予定されていた予算はほぼ使用したが、634円わずかに残金が生じた。(理由)予定されていた予算はほぼ使用したが371円わずかに残金が生じた。(使用計画)来年度に消耗品購入に使用する予定である来年度に消耗品購入に使用する予定である。
物質生産と環境保全に資する低温バイオテクノロジーに有用な好冷性微生物の探索と開発

(2)南極海水から単離した低温菌S. livingstonensis Ac10を宿主として、発現制御可能なタンパク質低温生産系を構築した。trpオペロンプロモーター制御下のレポーター遺伝子について、L-Trp添加による発現抑制、trpリプレッサー阻害剤添加による発現誘導が可能であることを見いだした。タンパク質分泌生産能に優れた好冷性微生物を宿主として外来タンパク質を低温で分泌生産するシステムを構築することに成功した。これにより、生産された外来タンパク質の単離精製が容易になることが期待される。また、好冷性微生物を宿主とした発現制御可能なタンパク質低温生産システムを開発した。外来タンパク質の発現を抑制した状態で宿主細胞を培養することが可能になり、特に毒性をもった外来タンパク質の生産などに有用と期待される。一方、分泌生産システムについては生産性の改善やキャリアタンパク質の除去といった課題が残されており、発現制御可能な生産システムについては発現抑制効率の改善といった課題が残されていることから、「おおむね順調に進展している」と評価することが妥当と考えられる。引き続き新しい有用好冷性微生物の探索を行う。特にタンパク質分泌生産能に優れた微生物や、熱処理による宿主由来タンパク質の変性除去が容易な微生物(熱処理による外来タンパク質の純度向上が可能な微生物)の探索を重点的に行う。開発中のタンパク質低温分泌生産システムについては、分泌機構の解明に基づく分泌効率の改善とキャリアタンパク質除去方法の検討を行う。発現制御可能なタンパク質低温生産システムについては、さらに強力な発現抑制が可能なプロモーターの探索を行う。
アルツハイマ-型痴呆脳におけるアミロイド沈着機序の解明

アルツハイマ-型痴呆脳におけるアミロイド沈着に関与する細胞を同定することにより,試験管内での実験系を確立し,アミロイド沈着を防ぐ方法を究明することが可能となる。このために,アミロイド沈着の最初期像を捉え,これを分析することが不可欠であると考え,び慢性老人斑の超微形態を観察し,アミロイド沈着に関与する細胞を同定した。通常の電顕観察では見い出せない瀰慢性老人斑の電顕像を,厚切りエポン切片のβ蛋白陽性部位を隣接の超薄切片で観察して明らかにした。び慢性老人斑内には少量のアミロイド線維が散在しているのみで,正常な構造の様にみえるが,強拡大ではアミロイド線維は洗明な細胞突起に囲まれていた。この突起はしばしばgap junctionを形成し,glia線維を有し星形グリア由来と同定されるものもあった。このび慢性老人斑の中に出現する毛細血管はアミロイドを有しておらず,び慢性老人斑のアミロイド形成は血管ではなく,星形グリアと関連していると考えられた。そこで,パラフォルムアルデヒド固定の切片でGFAP染色,HLA-DR染色を行い,老人斑とグリアの関係を検索するとび慢性老人斑の多くは星形グリアのマ-カ-であるGFAPに陽性であった。脳アミロイドはアミロイドβ蛋白前駆体から作られるが,今回の研究でこの前駆体のいくつかの部分に対応する合成ペプチドを用いて抗体を作製し,この前駆体と老人斑の関係も検討した。すると前駆体は正常老人では主に神経細胞に局在するが,老人斑を有する脳では,老人斑の腹大神経突起と星形グリアに局在していた。以上の結果からアルツハイマ-型痴呆脳におけるアミロイド沈着が,星形グリアと大きくかかわっていることを明らかにした。
サーチ理論を用いた労働者の投資の最適性や解雇規制等の政策の理論的、実証的考察

経済成長に大きな影響を与える人的資本は、主に学校教育と企業訓練によって蓄積される。ここで教育と訓練について二点、重要な特徴を挙げることができる。一点目は補完性を持つ点である。既存の研究が示すように、高い教育水準の労働者は高い水準の訓練を受けていることがデータから分かっている。二点目は動学的な側面を持つ点である。つまり労働者は労働市場に入る前に教育に投資をし、労働者と企業が出会った後、企業が労働者を訓練するという時間構造が存在するのである。この二つの特徴は、他の経済学者もその重要性を指摘している。以上のことから、教育と訓練について理論的に考える際には補完性と動学的側面を考慮すべきであると言える。これらを踏まえると、労働サーチ理論は基本モデルとして適切であることが分かる。労働サーチ理論の文献上、投資が社会的に望ましい水準よりも過小になることが知られている。しかし既存文献は教育と訓練を同時には考察しておらず、補完性と動学的側面が投資水準にどう影響を及ぼすのかについて考えられていない。教育と訓練を同時に考察するに当たっても、それらが社会的に望ましい水準よりも過小になることが予想されるため、政府の補助が必要とされる。よって、この研究では、政府がどのように教育と訓練を補助すれば、社会的に望ましい水準が実現されるかを考察した。本研究の意義としては、初めて労働者の「実質的」交渉力の概念を提唱した。さらに、教育補助は労働市場の流動性に依存させるべきである一方、訓練補助は流動性に依存させるべきではないということを示した初の研究でもある。(抄録なし)経済成長に大きな影響を与える人的資本は、主に学校教育と企業訓練によって蓄積される。当初の予定通り、本年度中に理論的な結果を導出することができたため。上で述べた理論、結果をもとに実証分析や政策のシミュレーションをして、現実経済に対する含意を得る予定である。具体的には、日本やアメリカ、ヨーロッパ等のデータを用いて、現実の教育と訓練に対する補助が社会的に望ましい水準となっているか否かを検証する。(抄録なし)
森家所蔵森敦自筆資料による基礎的研究

本課題研究は、森家の所蔵する森敦自筆資料について全体像を示すことを目的としている。これまで未公開であった膨大な森敦自筆資料について、小説、評論、エッセイ等に分類し、それらを発表誌等の書誌的な事項に基づいて一覧化した。その成果は『森敦資料目録』として公開した。森敦文学の草稿や紙片等の調査を行い、生成過程を跡づけた本課題研究は、森敦文学の基礎的研究としての成果をあげている。とくに代表作「月山」については、すべての草稿類を翻刻し、それぞれの草稿の内容的、表現的な関連についても明らかにした。同時に「月山」の舞台である山形県鶴岡市七五三掛地区の現地調査も行い、作品の虚構性を明らかにした。本年度は、当初の計画通り森家所蔵の森敦自筆資料について、整理分類を行った。そのうち、森敦文学にとって最重要作品の一つ「月山」の草稿について、すべての整理分類が終わったため、まず、それらを翻刻し公開することを目指した。初公開となる「月山」草稿については、大別して5種類の草稿に分けられ、5種類それぞれについて、執筆順を調査し推定した上で、「月山」生成過程を明らかにできるように配置した報告書を作成した。最終形である単行本「月山」に成るまでの過程を示し得たことは、基礎的な資料として、森敦文学研究に貢献できるであろう。また、その生成過程は、月山注連寺に籠った森敦の実体験に基づいていることがわかっているため、資料の価値をさらに高めるべく、現地調査も行った。得られた実地資料を地図や方言資料としてまとめたり注釈とすることで、単なる翻刻資料に留まらず、「月山」を執筆生成の側面と現地調査の側面とから総合的に検討できるようにしている。現地調査も本研究で体系的にまとめることができ、「月山」研究の基礎的な資料になっているとともに、作品の舞台である山形県鶴岡市七五三掛地区の歴史としても意義がある。さらに、「月山」翻刻資料が森敦文学の他作品との関連性も探究し、本研究としての一定の方向性を示すことで、草稿執筆時の森敦が他作品をも構想していたことの一端を明らかにしている。最後に森富子氏の多大なご協力のもと、「月山」執筆時を特化させた森敦年譜も作成した。以上のような複数のアプローチを通じて、「月山」の総合的な研究を研究成果報告書として刊行し、森敦文学研究へ寄与している。本年度は森家所蔵森敦自筆資料について、デジタル撮影を行い、資料の保存とともに、当初からの本研究の目的である目録作成に向けて、分類を行った。また、その過程で昨年度まとめた『森敦「月山」総合的研究』を踏まえ、さらに晩年の大作「われ逝くもののごとく」を含めて、そこに描き出されている山形県庄内平野の地理的、歴史的資料を関連させた研究を進めた。その成果の一端として、平成26年10月11日(土)に國學院大學の教室を借りて、研究成果報告会を実施した。本報告会では、森家より森富子氏をお招きし、森敦についてご講演いただいた。自筆資料について森敦の執筆の状況のお話は、来場いただいた方々にも有用な内容であった。さらに、森敦が生前庄内平野を訪れる際に同道した鶴岡市在住の黒井卓也氏もお招きし、当時の森敦について語っていただいた。活字資料からはうかがい知れなかった森敦の訪れた地や滞在していた家などについて、現地をよく知る人ならではのお話は、森敦文学を資料面と実地踏査面から総合的に研究していくにあたって、示唆に富んだ内容であった。さらに、井上による現時点までの自筆資料調査から見出せる内容や問題点について報告を行った。また、同時に本研究に参加している学部生によるアクティブラーニングを行った。内容としては小説「月山」を中心に、自筆資料の分類と特徴、実地踏査による成果を踏まえた登場人物のモデルについて、庄内平野に残る「モリ供養」といった伝承的行事など、パネルを作成し、それぞれ担当した学部生による説明を行い、来場者からの質疑に答えた。これらの内容についてパンフレットを作成し、来場者に配布した。来場者にはアンケートを行い、さまざまなフィードバックをいただいた。当初の研究目的の一環として、本研究の内容を周知して、森敦研究をさらに広めることができたと言えよう。本年度は本課題研究の最終年度に当たる。そのため、当初の目的通り、森家所蔵森敦自筆資料の目録の完成を目指した。これまでに自筆資料のデジタル撮影をすべて終えており、それに基づいて精査、分類をすすめた。小説類、エッセイ類の分類は比較的困難はなかったが、メモ類や紙片など、分類が困難な資料も多数存在した。森富子氏に助言を仰ぎ、初出資料については森家所蔵の資料の寄贈を賜り、それに当たることで分類が可能になった。とくに書籍の推薦パンフレットや社内報など、国会図書館をはじめとする公的機関にさえ納められていない資料を直に見ることができたため、分類をいっそう精しくすることができた。また、新聞に発表された文章については、各地方紙にも後日掲載されるなどしており、『森敦全集』収録の年譜にもない資料が多数発見された。森家が所蔵していない地方紙の場合は、それぞれ直接問い合わせるなどしてできる限り収集した。これらは雑誌に関しても同様である。こうした作業を通じてさらに発見された森敦の文章や推薦・宣伝文があり、初出資料一覧を充実させることができた。