hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
破骨細胞の形成と骨吸収活性を指標とした各種薬物の簡便なスクリーニング系の確立

(1)破骨細胞を象牙質切片あるいはプラスチックディッシュ上に蒔くと、F-アクチンの点状配列(ポドソーム)よりなるリング状構造体を形成した。しかし、コラーゲンゲル上の破骨細胞はこのアクチンリングを形成できなかった。(2)アクチリンリングの形成は、チロシンキナーゼ阻害剤herbimycinAとPl-3キナーゼの特異的阻害剤wortmanninにより抑制された。また、低分子量のG蛋白rhoの特異的ADPリボシル化酵素C3を破骨細胞に微量注入すると、アクチンリングを完全に消失した。これらの阻害剤によるアクチンリングの破壊は吸収窩形成の抑制と完全に一致した。(3)Focaladhesion kinase(p125^<FAK>)に対する抗体とantisenseDNAを用いた実験から破骨細胞のアクチンリング形成と吸収窩形成にp125^<FAK>が関与していることが示唆された。(4)骨吸収抑制ホルモンであるカルシトニンを添加するとアクチンリング形成は抑制され、その効果も吸収窩形成の抑制と一致した。また、カルシトニンによるアクチンリングの破壊にはcAMP依存性の蛋白リン酸化酵素を介する可能性が示された。(5)骨吸収制薬であるbisphosphonateは、波状縁を有した破骨細胞に特異的に取り込まれ、そのアクチンリングを破壊することで骨吸収の抑制を誘導することが示された。また、その機序としてチロシンホスファターゼの抑制が示唆された。以上の様に、破骨細胞が形成するアクチンリングの破壊と骨吸収の抑制は一致しており、アクチンリング形成試験法は、効率の良い骨吸収評価系になるものと考えられる。骨芽細胞と骨髄細胞の共存培養系で形成された破骨細胞を用い、骨粗鬆症治療薬であるカルシトニンとビスフォスフォネートの作用機序を解析した。(1)カルシトニンの骨吸収抑制作用の解析破骨細胞形成評価系と骨吸収能評価系を用い、カルシトニンの骨吸収抑制機構を解析した。カルシトニンは破骨細胞の分化過程には殆ど抑制効果を示さず、むしろ形成された破骨細胞の機能を抑制することが示された。このカルシトニン作用は、細胞内cAMP濃度を上昇させるような薬物でも再現されること、実際にdibutilyl-cAMPが吸収窩形成を抑制すること、更に活性型のcAMP依存性protein kinaseを破骨細胞に微量注入(microinjection)するとカルシトニン効果が誘導されることから、破骨細胞に対するカルシトニンの効果は、cAMPを介するもの出ることが示唆された。(2)ビスフォスフォネートの骨吸収抑制作用の解析破骨細胞形成評価系と骨吸収能評価系を用い、ビスフォスフォネートの骨吸収抑制機構を解析した。カルシトニンと同様に、ビスフォスフォネートは破骨細胞の形成は抑制せず、破骨細胞の機能を抑制することが示された。興味深いことに、ビスフォスゴネートはコラーゲンゲル上の破骨細胞には作用せず、象牙質切片上の波状縁を有する破骨細胞に選択的に取り込まれ作用を発現することが示された。更に骨吸収抑制の作用機序としては、ビスフォスフォネートは破骨細胞のチロシンホスファターゼを阻害し破骨細胞の細胞骨格系の破壊を誘導する機序が示唆された。
運動部活動におけるライフスキル獲得プログラムの開発と実銭

本研究の目的は,運動部活動への参加を通じて生徒がライフスキルを獲得できるプログラムを開発し実践することであった。その内本年度は,運動部活動に参加していない生徒を対象に調査を実施し,これまでに収集した運動部活動参加者のデータと比較・検討することにより,本プログラムによる効果を測定した。その結果,本プログラムへの参加により生徒はライフスキル(目標設定スキル)を獲得できることが明らかになった。また,目標設定スキルの獲得は基礎的認知能力の発達を通じて時間的展望の獲得に結びつくこと,さらに,時間的展望の獲得には時間的展望生成の図式に基づいた指導が一定の効果を持つことが明らかになった。本研究の結果,運動部活動への参加を通じたライフスキルの獲得に関して,本プログラムの有効性が確認された。本研究を遂行する過程において生徒用ワークブック及び指導者用マニュアルが作成された。本年度はプログラムの効果がこれまで以上に認められるよう,これらの内容の充実を図ると共にカラー化を実施した。また,本プログラムは基本的に中学・高校生を対象に開発されているが,運動部活動全体を視野に入れたプログラムの開発に向けて,大学運動部を対象とした聞き取り調査を行った。本調査の結果は今後の研究に活かされる。なお,本年度が研究計画の最終年度であることから,本研究の成果について日本スポーツ心理学会,及び日本フットボール学会にて発表を行った他,論文等への投稿を通じて広く成果を公開した。来年度以降の運動部活動へのライフスキル獲得介入に向けて,本年度は介入プログラムの作成に多くの時間を割いた.そして,ライフスキルプログラムの中心的スキルとなる目標設定スキルについて,獲得介入のための「指導者用マニュアル」と「生徒用ワークブック」を作成した.さらに内容として,目標設定スキルの獲得にとどまることなく,目標を設定し達成していく過程に注目することで,参加者の現在の行動の意義を,過去・未来を含めた人生のなかで位置づける視点(生涯発達的観点)を養うことを含めた.これにより,ライフスキルの獲得に向けた取り組みを将来に向けた時間的展望の獲得に結びつけることが可能であり,単なるスキルの獲得という次元ではなく,人格の形成を目指す取り組みとして位置づけられるのではないかと考えられた.本研究では,高等専門学校のサッカー部員(15名:内5名は統制群)を対象にシュートスピードの向上と,その過程においてライフスキル及び,生涯発達的観点(時間指向性による)の獲得を目指したプログラムを予行的な介入として実施した.介入は,部活動場面における目標設定スキルの獲得とライフスキルへの般化に関する講義が5回,講義内容に沿って生徒が作成した練習計画(ゴールラダー)に基づいた筋力トレーニングが12回(週3回×4週間)から構成された.その結果,介入前後に作成を求めた高校総体(部活動場面)と,学年末テスト(学校生活場面)に向けた目標設定に関する調査をそれぞれ比較したところ,介入後,目標は自分でコントロール可能な明確なものに,計画は段階が設定され時間を意識したものにそれぞれ変化し,介入の効果が窺われた.しかし,時間指向性に関する変化は不明確であり,プログラムの後半部分については改訂の必要性が認められた.本年度の研究目的は,高校生(正確には高専1・2年生)を対象に昨年度予備的に実施され,スキル獲得における効果が確認されたライフスキル獲得介入プログラムを改訂することであった。昨年度実施された予備介入及びその後の研究の結果,参加者の発達段階をより適切にプログラムに反映させるならば,介入対象者は高校生よりも中学生が適当であるとの判断に至った。それは,スキル獲得に対するレディネスという点では高校生年代が勝るものの,ライフスキルの日常生活への般化を中心に考えた場合,可能な限り早い段階で介入が行われるべきであるという点にある。非常に多くの情報が氾濫する現代では年代が上がるほどスキルの般化が困難であり,日本でも諸外国のプログラムと同様な傾向が認められたからである。そこで本年度は,A市内の2つの中学サッカー部に協力を求め,計4回のレクチャーをそれぞれ本研究者が毎日もしくは,1週間に2度のペースで実施した。実際の現場への介入であることから統制群の設置は困難であり,参加者37名全員を対象に介入が実施された。介入内容は昨年度作成されたプログラムのなかで,ライフスキルへの般化過程についてさらに改良したものを用いた。本研究の結果,部活動場面と学校生活場面のそれぞれに向けた目標設定に関する調査については,昨年同様に介入の効果が窺われた.また,時間的展望については白井(2000)による尺度をもとに調査を行った結果,各時制(過去・現在・未来)に対する情緒的態度に変化が認められ,プログラムの効果が推測された。しかし,本年度のもう一つの目的であったサッカー指導場面以外でのプログラム作成は未だ完成に至っておらず,来年度への課題となった。

本研究を遂行する過程において生徒用ワークブック及び指導者用マニュアルが作成された。本年度はプログラムの効果がこれまで以上に認められるよう,これらの内容の充実を図ると共にカラー化を実施した。また,本プログラムは基本的に中学・高校生を対象に開発されているが,運動部活動全体を視野に入れたプログラムの開発に向けて,大学運動部を対象とした聞き取り調査を行った。本調査の結果は今後の研究に活かされる。なお,本年度が研究計画の最終年度であることから,本研究の成果について日本スポーツ心理学会,及び日本フットボール学会にて発表を行った他,論文等への投稿を通じて広く成果を公開した。
敗血症における内皮微小粒子の動態とその病態生理学的作用の解明

敗血症患者のEMPsの動態を把握するために臨床研究を行った。敗血症患者50名(敗血症17名、敗血症性ショック33名)、ICUに入室した非敗血症患者10名の血漿中のEMPsを継時的に測定した。各種EMPs数は敗血症患者においては非敗血症患者より有意に増加していた。PECAM+EMPs数およびVE-cadherin+EMPs数はday1, 2, 3, 5日の時点で敗血症患者より敗血症性ショック患者で有意に高く、敗血症の重症度を反映する可能性が示唆された。一方で接着分子を発現するEMPsに関しては、day1でのE-selectin+EMPs(p=0.0046)以外は敗血症と敗血症性ショック患者間で有意な差はなかった。現在敗血症患者およびコントロール用の非敗血症患者は当初の予想通りの症例数を確保している。また、HUVECsに対する炎症性刺激実験も概ね予定通り進行しているが、予定していた血管透過性とEMPsの関係性については検証できていない。コラーゲン膜に内皮細胞を播種し擬似血管内皮を作成する予定であったが、内皮細胞のmonolayerがうまく形成できていない状況である。臨床研究においてはさらなる症例数を確保し、より信頼性の高いデータとしたい。またin-vitro実験では擬似血管内皮形成のための内皮細胞のmonolaer形成が十分ではなかった。そこで播種細胞の数、培養条件を検討しmonolayer形成に最適な条件を確立し、血管透過性実験を完遂させたい。また透過性実験にこだわらず、EMPsの血管内皮細胞に対する作用など実現可能な実験から行っていく予定である。次年度はHUVECsを用いた血管透過性実験および臨床研究、腹膜炎モデルマウスを用いたin-vivo実験を予定しており、細胞培養試薬、ヒト用、マウス用の試薬が必要になる。
哲学的ディスクールにおける歴史的思考の問題

2年間の研究の中心は、古代から現代に至る哲学的言説の中で、歴史へのアプローチがいかになされ、歴史の偶然性、事実性、出来事性等と哲学的合理性の間にどんな関係が追求されていたのかを、20世紀以後の新たな歴史意識に照射して再検討することだった。1)戦死者追悼演説と哲学言語のプラトン的対比、聖書の言語を出来事としてのイエスの記憶と証言として解釈する可能性等を検討し、古代や中世の哲学においてすでに戦争による大量死、民族的苦難等の要因が哲学に歴史性の問題を持ちこんでいたこと、しかし、ギリシャ思想では.「永遠なるもの」への志向が歴史に独自の合理性を見ることを妨げていたことを解明した。2)近代については、(1)カントまでは非歴史的思考が優位だったが、フィヒテの『ドイツ国民に告ぐ』等、ナポレオン戦争時にドイツに生じた「抵抗のナショナリズム」を動因として哲学的ディスクールの歴史化が始まったという見方と、(2)カントの『判断力批判』においてすでに、思考の言語被拘束性の自覚を通して非歴史的アプリオリズムの克服が始まっていたとする見方が対立し、決着を見ていない。3)現代の歴史哲学の有力形態である「歴史の物語論」を検討した。1年めには、歴史叙述を物語行為に還元し、「過去自体」の確認不可能性を主張するこの立場は独断的歴史哲学への批判としては妥当だが、歴史のフィクション性を前提し利用しつつ登場する「国民の物語」としてのナショナル・ヒストリーへの批判には無力で、逆にそれと両立しうること、歴史的責任が問われる場面では「物語の多様性」を擁護するだけでなく、判断による何らかの物語へのコミットメントが要請されること、等が確認された。2年めには、さらにその歴史における判断の正当・不当にいかなる尺度がありうるかを検討したが、この点について決着を得るためには、自己-他者関係の原理的究明が必要であることが明らかになった。初年度の研究は、古代については、プラトンにおける戦死者追悼演説と哲学の言語の対比をめぐって、中世およびヘブライ思想については、聖書テキストの言語を出来事としての「イエス」の記憶と証言として解釈する可能性をめぐって、それぞれ古典的哲学における「歴史性」の位置を探ったが、研究の中心は近代および現代の哲学と歴史的思考の問題に置かれた。1)近代哲学のディスクールに「歴史性」の問題が本格的に登場してくる経緯と要因をめぐって、ドイツ観念論初期の哲学が検討された。その際、カントにおいてはコスモポリタン的・非歴史的思考が優位していたが、フィヒテの『ドイツ国民に告ぐ』に見られるように、ナポレオン戦争の敗北をきっかけにドイツに起こった「抵抗のナショナリズム」を動因として、哲学的ディスクールの歴史化が始まったという見方と、カントの『判断力批判』においてすでに、思考の言語被拘束性の自覚を通して、非歴史的アプリオリズムの乗り越えが始まっていたとする見方が対立した。この点を、ヘルダーなども考慮に入れつつ再検討することは次年度の課題の一つである。2)現代的な「歴史哲学」の有力な形態である「歴史の物語論」の妥当性と有効性が検討された。その際、歴史叙述を物語行為に還元し、物語る行為から独立した「過去自体」の確認不可能性を主張する「物語論」は、独断的歴史哲学への批判としては妥当するが、歴史のフィクション性を前提し利用しつつ登場する「国民の物語」としてのナショナル・ヒストリーへの批判には無力で、むしろそれと両立しうること、歴史的責任が問われる場面では、「物語の多様性」を擁護するだけでは不十分で、悪しき相対主義を乗り越えられないこと、「物語の抗争」と呼ぶべき現代的状況の中では、判断による何らかの物語へのコミットメントが不可避に要請されること、などが確認された。

2年間の研究の中心は、古代から現代に至る哲学的言説の中で、歴史へのアプローチがいかになされ、歴史の偶然性、事実性、出来事性等と哲学的合理性の間にどんな関係が追及されていたのかを、20世紀以後の新たな歴史意識に照射して再検討することだった。1)戦死者追悼演説と哲学言語のプラトン的対比、聖書の言語を出来事としてのイエスの記憶と証言として解釈する可能性等を検討し、古代や中世の哲学においてすでに戦争による大量死、民族的苦難等の要因が哲学に歴史性の問題を持ちこんでいたこと、しかし、ギリシャ思想では「永遠なるもの」への志向が歴史に独自の合理性を見ることを妨げていたことを解明した。2)近代については、(1)カントまでは非歴史的思考が優位だったが、フィヒテの『ドイツ国民に告ぐ』等、ナポレオン戦争時にドイツに生じた「抵抗のナショナリズム」を動因として哲学的ディスクールの歴史化が始まったという見方と、(2)カントの『判断力批判』においてすでに、思考の言語被拘束性の自覚を通して非歴史的アプリオリズムの克服が始まっていたとする見方が対立し、決着を見ていない。3)現代の歴史哲学の有力形態である「歴史の物語論」を検討した。1年めには、歴史叙述を物語行為に還元し、「過去自体」の確認不可能性を主張するこの立場は独断的歴史哲学への批判としては妥当だが、歴史のフィクション性を前提し利用しつつ登場する「国民の物語」としてのナショナル・ヒストリーへの批判には無力で、逆にそれと両立しうること、歴史的責任が問われる場面では「物語の多様性」を擁護するだけでなく、判断による何らかの物語へのコミットメントが要請されること、等が確認された。2年めには、さらにその歴史における判断の正当・不当にいかなる尺度がありうるかを検討したが、この点について決着を得るためには、自己-他者関係の原理的究明が必要であることが明らかになった。
高齢者糖尿病患者におけるクローズドループを用いた新規血糖制御モデルの作成

胃ろう作成者18名の高齢糖尿病患者、5名の高齢非糖尿病患者に三種類の栄養素の異なる経腸栄養をランダマイズに投与し、72時間5分ごとの連続血糖測定を行ない、その時系列データの複雑性解析を行った。非糖尿病群と糖尿病群を比較した場合、その複雑性はDetrended Fluctuation Analysis (DFA)解析を用いると1.379±0.069 vs. 1.484±0.073, P=0.012、と有意に糖尿病群での血糖複雑性は低下していた。またその低下はインスリン分泌と有意に負の相関を認め、血糖の時間変動の説明因子にインスリン分泌が有効であった(R2=0.33, P<0.01)。炭水化物、タンパク質、脂質の組成の異なる3種類の製剤投与下で連続血糖測定を行い血糖変動の評価を行った。血糖値は5分毎に72時間連続で測定を行い、血糖変動の差を評価した。また各時間帯による血糖変動の違いを評価するために3種類の製剤はランダマイズに投与開始した。1番目に糖質60%で液体、2番目に糖質60%で半固形、3番目に脂質55%で液体の栄養剤をランダマイズに1日に体重あたり24Kcal投与し、1回1時間、1日3回投与し、その間の72時間を5分ごと(毎)に連続血糖測定装置を用いて血糖測定を行った。同カロリーで同じ時間で投与下にも関わらず、驚くべきことに血糖変動は、糖質液体、糖質半固形、脂質液体で全く血糖変動は異なった。糖質液体では、食前は110mg/dL前後であったが、約2時間後には230mg/dLまで上昇し、その上昇率は2倍以上となり、他の栄養剤と比較して明らかな食後高血糖を認めた。特に血糖値が200mg/dL以上の高血糖の時間が約1時間持続し、Detrended fluctuatin analysis(DFA)を用いた解析では、他の製剤よりも有意に血糖変動の複雑性は低下しており、明らかにインスリンまたはグルカゴン依存による血糖制御の要素が大きく影響がでる。すなわち血糖制御のアルゴリズム作成には摂取栄養素の違いを考慮したうえでのモデル作成が必要である。また予想外に同じ栄養素の成分であっても朝食時と夕食時では血糖変動が異なり、時間栄養学的な要素の考慮が必要であると考えられる。今後、栄養素の種類、投与時間の違いを考慮した血糖予測アルゴリズムの策定を行っていく予定である。今回の結果は2014年糖尿病学会近畿地方会で報告した。本病院にて、連続24時間血糖測定が可能であった23名を対象にインスリン、グルカゴンを測定した。しかしながらRIAを用いたグルカゴンの測定系が不安定なため適切な血糖の予測モデルの作成が困難であった。ただし食後血糖のパターンに関しては、現在のデータで作成したところ、二次曲線の式にてY1=Y0+(-0.57)*ins*ins+0.04*ins+gluでR2=0.28で近似できた(Y1=現在の血糖値、Y0=Y1の5分前の血糖値)。空腹時の血糖推移に関しては現在、二次微分方程式を用いた予測式を考慮しているが、グルカゴンの値が下記に示す様に不安定なため、まだパラメータ式の作成の成功には至っていないRIA法では同じ検体を用いても値にばらつきがでたり糖尿病患者および正常耐糖能患者においても値が大きく出るため、血糖値の微細な変化を説明する因子としては大きくなりすぎる欠点があった。平成27年度に入り、メルコディアのELISAによるグルカゴンの測定系が、CV値は2.54.7%と安定していることが報告された。この測定系はRIAの測定値よりも小さくなることが報告されており、血糖の変動の説明変数としてより適切と考えられる。当研究においてもメルコディアのELISAによるグルカゴンキットの購入を行い、本年度はこのキットを用いた血糖の予測系の作成を行う予定である。そのため当院でもメルコディアの測定が可能である環境の整備を行うべく、既にメルコディアのグルカゴンキットの購入を行い、来年度に吸光度計の購入を計上している。上記で説明した通り、RIAによるグルカゴン測定値にはばらつきが大きいのと、測定値自体がグルカゴン類似物質も測定しているため、値が大きくなることがあり、血糖連続測定の微細な変動を説明する因子としては不適当であるケースが認められた。しかしながら、昨年度、メルコディアによるELISAの測定法が安定していることが判明し、当研究においてもメルコディアの測定系を用いることによりより適正な予測係数の作成が可能と考えられる。既にキットは購入完了しており、血清も手元にあり直ちに測定可能な状況であるため、現在の所やや遅れているが本年度で十分研究首領可能な進捗状況と考えられる。昨年、ELISAによるグルカゴン測定系のアッセイが完了し、取得検体のメグルカゴン濃度の測定が完了し、現在、食後血糖のアルゴリズムパターンの作成に着手中である。現在、実際データと予測式の精度はR2=0.34程度の精度で、まだ私たちが以前発表した強化療法中のインスリン患者の血糖時系列データの精度より精度が低いデータである。現在、マルチフラクタルの新規のアルゴリズムでグルカゴンの濃度を考慮した新しい予測式を作成中であり本年度中に完成する予定である。

また、本年度より以前より使用していたデバイスより簡便な新規の血糖測定装置(フリースタイルリブレR)が導入できたため、データの数を増やすことが可能であり可能な限りデータ数を増加してより血糖予測の精度を上げる方針である。グルカゴンのデータが当初の予測より大きくばらつきがあり、アルゴリズムの作成にあたり精度が低下しているため、現在その制度を上げるために新しいマルチフラクタル解析のアルゴリズムの導入を行っているため。具体的にはグルカゴンデータの対数化を行い、そのばらつきを小さくしたうえでのアルゴリズムを作成中である。本科研費を用いて、胃ろうの糖尿病患者および非糖尿病患者に三種類の栄養素の異なる経腸栄養を投与し72時間5分ごとの連続血糖測定を行ない、得られた時系列データのモノマルチフラクタル解析を行った。胃ろう患者のため、咀嚼時間、胃までに食物が届く時間などの条件を一定なため自由経口摂取にした既報(Yamamoto N, et al Diabetes Technol Ther 2010)より血糖変動の複雑性を正確に評価できた。非糖尿病群と糖尿病群を比較した場合、血糖変動の複雑性はDetrended Fluctuation Analysisを用いると1.379±0.069 vs. 1.484±0.073, P=0.012、高速フーリエ変換を用いると1.734±0.105vs. 2.617±0.329, P<0.001と有意に糖尿病群での血糖複雑性は低下していた。各栄養素の食後4時間の血糖値をそれぞれ切り出し、炭水化物が60%、タンパク質20%、脂質20%の糖尿病食では非糖尿病群では4次以上の差分方程式でR2=0.60、糖尿群では2回線形差分方程式でR2=0.750.95と非常に良い相関を認めた。すなわち糖尿病群のような血糖変動は条件がそろえば、再現することが可能(解を求めることが可能)であることを示した。さらに今回の検討で以下の新知見が得られた。1同じ栄養製剤でも朝、昼、夕では血糖の変動が異なること(複雑性は変化なく2階線形差分方程式で解を求めることは可能だが係数の調整が必要2同じ成分構成の半固形の栄養素の場合は液体と同様の2階線形差分方程式で再現できるが係数が変わること。脂質が多くなると3次以上になる。3インスリン、グルカゴンのホルモンはばらつきが大きく再検を要する。以上の結果は2018年6/146/16老年学会学術総会で発表予定であり、症例の一部は2017年GGIに掲載。胃ろう作成者18名の高齢糖尿病患者、5名の高齢非糖尿病患者に三種類の栄養素の異なる経腸栄養をランダマイズに投与し、72時間5分ごとの連続血糖測定を行ない、その時系列データの複雑性解析を行った。非糖尿病群と糖尿病群を比較した場合、その複雑性はDetrended Fluctuation Analysis (DFA)解析を用いると1.379±0.069 vs. 1.484±0.073, P=0.012、と有意に糖尿病群での血糖複雑性は低下していた。またその低下はインスリン分泌と有意に負の相関を認め、血糖の時間変動の説明因子にインスリン分泌が有効であった(R2=0.33, P<0.01)。計画はほぼ順調に進んでいるが、一部血糖制御アルゴリズムの作成が遅れている。理由としては、血糖変動の要素には、個人のばらつきのみではなく、投与する栄養素の種類、および投与時間という、外的要因を考慮する必要があると考えられる。
抗菌剤を含む試作リン酸カルシウムセメントによる象牙質の再石灰化と歯髄の消炎効果

抗菌剤を含む試作リン酸カルシウムセメントによる象牙質の再石灰化と歯髄の消炎効果を検討している。その結果、抗菌剤を含まないリン酸カルシウムセメントの場合には初期において桿状体の出現が著名であり炎症の存在を認めた。長期観察例においてはリンパ球、形質細胞を主とする炎症性細胞の浸潤と毛細血管のうっ血を認めたが、修復象牙質の生成は認められなかった。一方、抗菌剤を含むリン酸カルシウムセメントの場合には初期において象牙芽細胞の退行変性を認めるものの炎症をほとんど認めず、長期観察例においては修復象牙質の生成と形質細胞を主とする炎症性細胞の浸潤による慢性炎症の存在を認めた。抗菌剤を含むか否かに関らず、短期、長期例の炎症の程度はシリケートセメントより小さかった。以上の結果から、抗菌材(チモール)は、処置後比較的初期の間に炎症を抑えるような効果を発揮するのではないかと推察された。細胞毒性試験の結果では、ユージノールセメントがもっとも強い毒性、シリケートセメントが顕著な毒性を示し、リン酸カルシウムセメントの場合には抗菌剤を含む場合も含まない場合にも毒性を示さないことがわかっている。また、抗菌剤を含んだリン酸カルシウムセメントは齲蝕原性菌に対して抗菌性を示すことがわかっている(IADR abst#2526)。これらの結果と今回の結果から、抗菌剤を含んだリン酸カルシウムセメントの場合には、比較的初期に歯髄の炎症を抑えつつ修復象牙質の生成を促すような働きがあるのではないかと示唆された。平成9年度は健全歯に対する影響を観察した。ビ-グル犬3頭に全身麻痺下にて5級窩洞を形成した。窩洞は窩底から歯髄までの距離が1mm以下となるように電気抵抗値を参考にして形成を行った。試作リン酸カルシウムセメント(抗菌剤を含むものと含まないもの)、ポジティブコントロールとして亜鉛華ユ-ジノールセメント、ネガティブコントロールとしてシリケートセメントを充填した。試作セメント2種は充填後に光硬化型コンポジットレジンでこの上を覆った。セメント充填後7日、90日経過後に10%ホルマリンで冠流固定後、屠殺つし、歯牙を採取した。窩洞形成並びに歯牙の採取等はADA規格に準じて行った。固定、脱灰、包埋を経て、現在切片作成中である。病理組織所見に関してはヘマトキシリン・エオジン重染色を通法にしたがって一般組織染色として行っている。細菌数および種類の変化についてはグラム組織細菌染色、炎症の治癒機転についてはIL-1を指標として間接酵素抗体法にて観察を行う。平成10年度は人工齲触形成菌に対する影響を観測する予定になっているため、均一な人工齲触形成についての予備実験を試みている。齲触の形成にばらつきが認められるため、実験方法を再検討中である。
極低エネルギー光励起による強い電子相関を持つ物質のフェルミ端電子構造の研究

本研究は光のエネルギーが極微小な赤外線を用いた赤外分光実験が強い電子相関を示す物質の微細な電子状態変化を知る手段として有用であることに着目した研究である。本研究の目的は、先ず、強い電子相関を持つ化合物(d及びf電子系)についてその赤外スペクトルの温度変化を測定し、そこから得た詳細な光伝導度スペクトルの解析から温度誘起金属-絶縁体転移に伴う転移前後の電子構造の変化を明らかにすること、次に、物質の格子定数を圧力によって連続的に変える高圧力下での赤外分光実験により、強相関電子系に特有の局在電子と伝導電子間の混成度を人為的に変えてその電子構造の変化から物性発現機構の知見を得ることである。本研究では以下に述べる実験研究を行い夫々成果を挙げた。1.d電子系化合物の赤外スペクトルの測定先ず温度環境に応じて金属から絶縁体への電子相転移を示す典型的物質CuIr_2XS_4及びCuの代わりにZnを置換した一連のCu_xZn_<1-x>Ir_2X_4化合物(x=0-0.5)の詳しい赤外スペクトルの温度変化からその電子構造を明らかにし、その成果を強相関電子系に関する国際会議(SCES02、Polland)及び広島国際シンポジュウム(2003年)で発表した。2価Znイオンのドープはホールキャリヤーに対して電子ドープの効果を持ち、そのフェルミ準位を変化させる。本研究ではそれによる電子状態の変化を、観測された帯間遷移ピークの低エネルギー側へのシフト及び低エネルギーピークの分裂として補足し、その置換効果を明らかにした,関連物質としてBaVS_3、Y_<1-x>Ca_xTiO3等の測定と成果。2.高圧下赤外顕微鏡分光実験大型放射光施設SPring-8に申請者が主導して建設した赤外観測システムに設置の赤外顕微鏡ステーションにおいて絶縁体である4f電子化合物YbSが圧力の下で価数揺動状態を経て金属に変わる過程の高圧下の赤外スペクトルを測定することに成功し、その成果を強相関電子系に関する国際会議(SCES02、Polland)で発表した。印加圧力は定圧から16万気圧まで。吸収端が圧力によって潰れて行く様を観測し、その減少量の圧力依存係数を正確に決めた。3.本研究の目的に適う高圧で金属へ移行する物質TmXとSmX(X:S,Se,Te)の単結晶育成及びその基礎物性測定と品質評価(落合)。強い電子相関を示す物質のフェルミ準位近傍の微細な電子状態を知る手段として光のエネルギーが極微小な赤外線を用いた赤外分光実験が有用であることに着目した。本研究の目的は,実験に用いる事が出来る強い電子相関を示す物質の多くが多結晶状態である現状を考え,その状態でもその物質が僅かでも良質な表面を持つ場合に赤外分光実験が可能な赤外顕微分光法を開発し,それを絶縁体から異常金属相を含む金属への物性の移り変わりを示すf電子系化合物に適用してフェルミ準位極近傍の電子構造の変化の詳細な情報を得ようとするものである。

本研究では今年度以下の研究を行い夫々成果を挙げた。1.本研究の中心である「高圧下赤外顕微鏡分光法」の開発。このため,高真空中で稼動する赤外顕微鏡システムを設計する。設計のキーポイントは(1)赤外分光器からの赤外光強度を最大限に効率よく利用できるように出切るだけ明るい光学系を実現すること。(2)実験室光源での顕微鏡実験の空間分解能は光源の輝度が低いためにせいぜい50ミクロン程度であるので空間分解能の高さは追求せず顕微鏡内の試料回りの作業空間を広く取る。これは試料に高圧力を加えつつ低温での分光実験をするときに重要な実験条件である。これらを考慮し,赤外顕微鏡の基本設計を終了し,目指す性能に求められる光学部品の仕様決定と入手を全て完了した。2.f電子系化合物の光学スペクトルの測定。先ず温度環境に応じて金属から絶縁体への電子相転移を示す典型的物質Culr_2X_4(X=S,Se)の電子構造を赤外スペクトルから明らかにした。3.本研究の目的に適う高圧で金属へ移行する物質TmXとSmX(X:S,Se,Te)の結晶育成とその基礎物性測定。強い電子相関を示す物質の物性変化はそのフェルミ準位極近傍の電子状態の変化によって決定されている。この研究は光のエネルギーが極微小な赤外線を用いた赤外分光実験が強い電子相関を示す物質の微細な電子状態変化を知る手段として有用であることに着目した研究である。本研究の目的は、先ず、強い電子相関を持つd及びf電子化合物についてその赤外スペクトルの温度変化を測定し、そこから得た詳細な光伝導度スペクトルの解析から温度誘起金属絶縁体転移に伴う電子構造の変化を明らかにすること、次に実験に用いる事が出来る強い電子相関を示す物質の多くが多結晶状態である現状を考え、その状態でもその物質が僅かでも良質な表面を持つ場合に赤外分光実験が可能な赤外顕微分光法を開発すること、及びそれを絶縁体から金属への物性の移り変わりを示すf電子系化合物に適用してフェルミ準位極近傍の電子構造の変化の詳細な情報を得ようとするものである。本研究では今年度以下に述べる実験研究を行い夫々成果を挙げた。1.d電子系化合物の光学スペクトノレの測定。先ず温度環境に応じて金属から絶縁体への電子相転移を示す典型的物質Culr_2XS_4及びCuの代わりにZnを置換したCuxZn1-xlr_2X_4(x=0、0.1、0.3、0.4、0.5)の電子構造を赤外スペクトルから明らかにした。即ち、Znドープはホールキヤリヤーに対して電子ドープの効果を持ちそのフェルミ準位を変化させると期待される。本研究ではそれによる電子状態の明確な変化を、観測された帯間遷移ピークの低エネルギー側へのシフト及び有効キャリヤー数の減少と言う現象から明らかにした。2.高圧下赤外顕微鏡分光実験。大型放射光施設SPring-8に申請者が協力して建設した赤外観測システムに設置の赤外顕微鏡ステーションにおいて絶縁体であるf電子化合物YbSが圧力の下で価数揺動状態を経て金属に変わる過程の高圧下の赤外スペクトルを測定するとこに成功した。印加圧力は定圧から16万気圧まで。吸収端が圧力によって潰れて行く様を観測し、その減少量の圧力依存係数を正確に決めた。3.本研究の目的に適う高圧で金属へ移行する物質TmXとSmX(X : S, Se, Te)の単結晶育成及びその基礎物性測定と品質評価(落合)。本研究は光のエネルギーが極微小な赤外線を用いた赤外分光実験が強い電子相関を示す物質の微細な電子状態変化を知る手段として有用であることに着目した研究である。
コンパクト天体および大質量ブラックホールからの重力波波形に関する研究

重力波検出は相対論の検証、強重力場中の物理現象の解明など現代物理学において非常に大きな意味を持っているが未だ検出には至っておらず、検出に向けた動きは一段と増してきている。DECIGOなど衛星を用いた重力波検出の有力候補に大質量ブラックホールに落下するコンパクト天体からの重力波があるが、検出には精度の良い波形の雛形が必要となる。これには落下する天体の詳細な軌道を予測する必要があり、本年度は輻射反作用の一次を考慮した落下天体の軌道を計算することを行った。輻射反作用を考慮した軌道計算にはPost-Newton法と重力波摂動法がありこれらは互いに相補的である。我々は摂動法を用い質量比一次の近似で計算を行った。この研究で特筆すべき点は、中心ブラックホールの回転、落下天体の軌道傾斜角、および軌道離心率のすべてを考慮し摂動近似の上ではあるが一般的に扱った点である。一般的に宇宙の多くの天体は自転を行っていることが知られており、ブラックホールも例外ではない。一方落下天体はランダムにブラックホールに引き寄せられるため一般には任意の離心率と自転軸に対する傾斜角をもつ。これまではとくに傾斜角に対しての取り扱いが困難とされていたが、本研究で特に赤道から大きく外れた一般的な軌道傾斜角をもつ軌道に対しても輻射反作用を考慮に入れた軌道の変化を明らかにすることが可能となった。加えて計算された軌道を用いて放出される重力波の波形を求めることも行った。我々は摂動五次の範囲に渡って波形を計算し特に周波数変化の表式を得ることに成功した。
初等的物理学のe-learning教材の開発

物理学e-Learning教材の制作にあたり,電子教材を用いた物理教育のあり方を探るため,教材電子化を実践している物理教員にメールでの調査を行った。その結果,対面授業と,実験などにより学生にリアルな体験をさせることとを教育の核としつつ,学習履歴管理・把握に役立つ学習管理システムを用いたe-Learningを,自宅学習での個別指導促進のために活用する,ブレンディド教育が共通的に模索されていることが知られた。そのための教材共有の必要性の指摘も多かった。そこで教科書や授業の理解を補強する内容で,種々の学習管理システムに共通的に適用でき,教員が独自に再編集しやすい構成の検討・開発を行った。その結果,図を多用し,シミュレーションの表示が可能で,意見収集フォームなどの付加的コンポーネントをモジュール化して装着することができ,また必要に応じて教材にSCORMトラッキングが装着可能な,Flashを用いた教材形式を考案した。作成教材分野は,基礎数理,力学,熱とエネルギー,振動と波動,電気と磁気の5分野である。各分野の小項目ごとに独立した教材を作成するとともに,各項目を内容の結びつきで視覚的に結合表示させた連結グラフマップを考案した。各項目の意味の結びつきを把握しながら学習を進めることができるので,自主的に自習を進める際にこのマップは役立つことが分かってきた。さらに,授業の予復習などに提供するドリル教材システムにおいて,同じドリルを正答率履歴に応じた日数間隔で分散的に再学習するようアドバイスする分散型反復学習支援システムを開発・運用した。その結果,学習者の反復学習が促進されるとともに,理解度の向上が見られた。この成果に対して私立大学情報教育協会の奨励賞を授与された。教材は公開して利用者の意見や指摘を収集するとともに,NPO法人科学芸術学際研究所のピア・レビューを受けて改善を続行している。学習履歴の多様化する理工系大学学部入学者のための,初等物理学のe-Learningコンテンツの制作を行った.始めに理工系学部での物理教育e-Learningの準備・導入状況を,これを進めている主な大学の実際のコンテンツ制作従事者に対して行った.その結果次の傾向が知られた.近年の学生には特に実体的体験と結びついた知識理解の必要度が高まっており,そのための対面指導の重要性が著しく高まっている.限られた時間内に学習補強から一般的内容の教育を行うためには、授業時間外学習支援のe-Learningの併用が選択肢の一つとして重視されるようになっている.このことから物理でのe-Learningを効果的にするために本質的に不可欠な要素は,電子教材自体の有効性のほかに,緻密な個別学習支援機能と,授業時間外学習を促進する機能であると考えられた.しかし,現状では効果的なコンテンツと運用法の蓄積・確立が不十分であり,情報交換と成果物の共有が求められている.さらに,学生の知識や基礎学力の変化に対応した不断の更新が不可欠になっている.そこで,申請者がこれまで蓄積してきた初等物理e-Learningコンテンツをもとに,共有・配布・更新が容易な電子教材形態の検討を行った.各大学ではe-Learningでの個別学習管理のため,学習管理システムの導入が進んでいる.これに共通的に適用可能な教材とするためには,インターネットブラウザ上で簡易なシミュレーションやビデオの再生ができ,かつ,ドリル学習をSCORM規格でトラッキングできることが必要である.

また,各教員が修正・編集・追加できることも重要である.以上の検討のもとにコンテンツ制作ベースとしてMacromedia Flashを用い,そのSCORMトラッキング機能を活用することとした.以上の上に立ち,本年度は主として基礎数理と力学コンテンツの更新・再構築を行った.物理学e-Learning教材の制作にあたり,電子教材を用いた物理教育のあり方を探るため,教材電子化を実践している物理教員にメールでの調査を行った。その結果,対面授業と,実験などにより学生にリアルな体験をさせることを教育の核としつつ,学習履歴管理・把握に役立つ学習管理システムを用いたe-Learningを,自宅学習での個別指導促進のために活用する,ブレンディド教育が共通的に模索されていることが知られた。そのための教材共有の必要性の指摘も多かった。そこで教科書や授業の理解を補強する内容で,種々の学習管理システムに共通的に適用でき,教員が独自に再編集しやすい構成の検討・開発を行った。その結果,図を多用し,シミュレーションの表示が可能で,意見収集フォームなどの付加的コンポーネントをモジュール化して装着することができ,また必要に応じて教材にSCORMトラッキングが装着可能な,Flashを用いた教材形式を考案した。作成教材分野は,基礎数理,力学,熱とエネルギー,振動と波動,電気と磁気の5分野である。各分野の小項目ごとに独立した教材を作成するとともに,各項目を内容の結びつきで視覚的に結合表示させた連結グラフマップを考案した。各項目の意味の結びつきを把握しながら学習を進めることができるので,自主的に自習を進める際にこのマップは役立つことが分かってきた。さらに,授業の予復習などに提供するドリル教材システムにおいて,同じドリルを正答率履歴に応じた日数間隔で分散的に再学習するようアドバイスする分散型反復学習支援システムを開発・運用した。その結果,学習者の反復学習が促進されるとともに,理解度の向上が見られた。この成果に対して私立大学情報教育協会の奨励賞を授与された。教材は公開して利用者の意見や指摘を収集するとともに,NPO法人科学芸術学際研究所のピア・レビューを受けて改善を続行している。
腎細胞癌におけるホルモン依存性増殖の解明と治療への応用

【目的】ヒト腎細胞癌におけるエストロゲンレセプター(ER-α、および-β)の発現と各エストロゲン製剤による増殖抑制に対する効果につき検討した。
気分障害におけるグルココルチコイド受容体遺伝子の選択的スプライシング異常の検討

平成19年度は,抑うつ状態にある気分障害(双極性障害および大うつ病性障害)患者の末梢白血球におけるSR蛋白質遺伝子群mRNAの発現量を検討した.さらに,寛解状態における気分障害患者や気分障害患者第一度血縁者においても同様の検討を行った.山口大学医学部附属病院精神科神経科に入院もしくは通院中の気分障害患者78名(双極性障害37名,男性7名,女性30名,平均年齢53.2±2.3歳,大うつ病性障害41名,男性15名,女性26名,平均年齢57.3±2.2歳)および健常者28名(男性15名,女性13名,平均年齢50.0±1.8歳)を対象とした.診断には精神疾患の分類と診断(DSM-IV)の診断基準を用い,うつ状態の重症度評価にはハミルトンうつ病評価尺度(Hamilton Depression Rating Scale : HDRS)を用いた.また,本研究は山口大学倫理委員会の承認を得て行い,対象者には研究の趣旨について文書を用いて説明し,同意を得た.また採血はうつ状態と寛解状態の二時点で施行した.気分障害患者の末梢白血球におけるSR蛋白質遺伝子群(SRp20, SRp30c, SC35, SRp40, SRp46, SRp54,SRp55, SRp75, ASF/SF2, 9G8)のmRNA発現量について検討したところ, SRp20 mRNA発現量が双極性障害患者群において健常者群より有意に高い値を示した.さらに,この発現低下は寛解状態でも認められたことから,SRp20 mRNA発現量の低下は双極性障害におけるtrait-dependentなものであることが示唆された.さらに,健常者でみられたGRβ/α発現量とSRp20mRNA量の相関が気分障害患者では認められなかった.この結果から,気分障害患者におけるSRp20を介したGRの選択的スプライシング異常が示唆された.平成18年度は,抑うつ状態にある気分障害(双極性障害および大うつ病性障害)患者の末梢白血球におけるSR蛋白質遺伝子群mRNAの発現量を検討した.さらに,寛解状態における気分障害患者や気分障害患者第一度血縁者においても同様の検討を行った.山口大学医学部附属病院精神科神経科に入院もしくは通院中の気分障害患者78名(双極性障害37名,男性7名,女性30名,平均年齢53.2±2.3歳,大うつ病性障害41名,男性15名,女性26名,平均年齢57.3±2.2歳)および健常者28名(男性15名,女性13名,平均年齢50.0±1.8歳)を対象とした.診断には精神疾患の分類と診断(DSM-IV)の診断基準を用い,うつ状態の重症度評価にはハミルトンうつ病評価尺度(Hamilton Depression Rating Scale : HDRS)を用いた.また,本研究は山口大学倫理委員会の承認を得て行い,対象者には研究の趣旨について文書を用いて説明し,同意を得た.また採血はうつ状態と寛解状態の二時点で施行した.平成19年度は,抑うつ状態にある気分障害(双極性障害および大うつ病性障害)患者の末梢白血球におけるSR蛋白質遺伝子群mRNAの発現量を検討した.さらに,寛解状態における気分障害患者や気分障害患者第一度血縁者においても同様の検討を行った.山口大学医学部附属病院精神科神経科に入院もしくは通院中の気分障害患者78名(双極性障害37名,男性7名,女性30名,平均年齢53.2±2.3歳,大うつ病性障害41名,男性15名,女性26名,平均年齢57.3±2.2歳)および健常者28名(男性15名,女性13名,平均年齢50.0±1.8歳)を対象とした.診断には精神疾患の分類と診断(DSM-IV)の診断基準を用い,うつ状態の重症度評価にはハミルトンうつ病評価尺度(Hamilton Depression Rating Scale : HDRS)を用いた.また,本研究は山口大学倫理委員会の承認を得て行い,対象者には研究の趣旨について文書を用いて説明し,同意を得た.また採血はうつ状態と寛解状態の二時点で施行した.気分障害患者の末梢白血球におけるSR蛋白質遺伝子群(SRp20, SRp30c, SC35, SRp40, SRp46, SRp54,SRp55, SRp75, ASF/SF2, 9G8)のmRNA発現量について検討したところ, SRp20 mRNA発現量が双極性障害患者群において健常者群より有意に高い値を示した.さらに,この発現低下は寛解状態でも認められたことから,SRp20 mRNA発現量の低下は双極性障害におけるtrait-dependentなものであることが示唆された.さらに,健常者でみられたGRβ/α発現量とSRp20mRNA量の相関が気分障害患者では認められなかった.この結果から,気分障害患者におけるSRp20を介したGRの選択的スプライシング異常が示唆された.
セロトニンによるセメント芽細胞分化と歯周組織形成制御メカニズムの解明

セロトニンは発生期神経堤の遊走や頭蓋顎顔面などの初期発生にも関わることが知られている。本研究では歯・歯周組織形成過程におけるセロトニンの関与を検討した。セロトニンおよびセロトニントランスポーターは歯および歯周組織の形成の進行とともに、エナメル芽細胞、Hertwig上皮鞘、Malassez上皮遺残など上皮由来の細胞に限局して観察された。これらのことより、セロトニンは特に、上皮組織を介して歯・歯周組織の形成に関与することが示唆された。セロトニンレセプターには数種のサブタイプが存在するが、本研究において特にターゲットとしているセロトニンレセプター2B(5-HT2BR)の歯の形成過程における局在について、市販の抗体および新しく作製した自作の抗体数種を用いて追加検討を行った。しかしながら、組織学的に良好な反応性を得ることができなかった。セロトニンレセプターに対する抗体選定には、これまでにかなりの費用と時間を費やしており、セロトニンレセプター自体に対する免疫組織学的検討はこれ以上継続することはやめ、一時中止することと判断した。一方、セロトニントランスポーターについては、歯冠形成期エナメル芽細胞、歯根形成期Malassez上皮遺残およびHertwig上皮鞘にその局在が観察されたことから、下顎臼歯部器官培養系およびビーズ埋入in vivoモデルマウスの作製と解析により、歯・歯周組織形成へのセロトニン-セロトニントランスポーターの関与を検討することとした。下顎臼歯部器官培養実験では、培養組織像が比較的安定しており、かつ培養後早期における細胞の反応が観察可能な時期であると判断し、培養開始時、培養24時間後、培養48時間後に試料を採取し検討している。モデルマウス作製については炎症反応を極力避けるためビーズの埋入方法を数種検討し、臼歯抜歯窩あるいは臼歯歯髄腔内にビーズを埋入する方法を採用している。試料採取は抜歯窩あるいは歯髄腔へのビーズ埋入数日後にそれぞれ行い、周囲細胞組織の増殖・分化への影響について検討を進めているところである。また、昨年度、セロトニントランスポーターのマウス二次口蓋形成過程における局在について学会報告を行ったが、これを発展させる目的で、セロトニン代謝との関連性が報告されているテネイシンに着目し、その口蓋形成過程における局在について学会にて報告した。セロトニンレセプターノックアウトマウスについて解析を行ったところ、μCTでは臼歯歯冠部エナメル質形成不全が観察された。歯根および歯周組織形成については、μCTの所見では大きな異常は確認されなかった。またSEMではエナメル小柱の不正な結晶構造が観察された。これらの結果より、セロトニンはエナメル芽細胞の機能に関与していること、その作用はレセプターを介して生じる可能性が示唆された。これらの結果を踏まえ、歯の形成過程におけるセロトニンレセプター局在を検討したところ、市販の抗体では良好な反応性を示さなかったため、新たに抗体を作製しているところである。一方、セロトニンの再取り込みを行うセロトニントランスポーターに着目し、その局在を検討したところ、歯冠形成期エナメル芽細胞、歯根形成期Malassez上皮遺残およびHertwig上皮鞘にセロトニントランスポーター局在が観察された。これらの結果より、歯・歯周組織形成へのセロトニンの関与が裏付けられ、さらにトランスポーターの歯・歯周組織形成への関与が推察された。歯根形成期マウス歯周組織採取による培養実験は、回収できる細胞数がわずかで検討が困難であると判断し、器官培養系を用いている。歯・歯周組織形成に加え、口腔組織形成を観察する目的で、胎児期マウスの二次口蓋形成過程におけるセロトニントランスポーター局在について検討を行ったところ、水平位に拳上した口蓋突起先端部上皮細胞および完成した口蓋の口腔粘膜上皮基底層中間層にその局在が観察され、セロトニントランスポーターはセロトニンの制御を介して口蓋突起上皮細胞の分化を調節する可能性が示唆された。これらの結果については第57回日本口腔外科学会総会にて報告した。昨年度までに歯・歯周組織形成過程におけるセロトニントランスポーター局在を検討したところ、歯冠形成期エナメル芽細胞、歯根形成期Mallassez上皮遺残およびHertwig上皮鞘にその局在が観察されたことから、本年度は歯・歯周組織形成へのセロトニン-セロトニントランスポーターの関与を検討した。下顎臼歯部器官培養実験では安定した組織像の回収が見込めると判断した培養48時間後までの試料を採取し検討したが、顕著な差は観察されなかった。モデルマウスについては臼歯抜歯窩にビーズを埋入する方法で検討したところ、炎症反応の回避は困難を極めるため、このモデルでの検討はこれ以上継続することは中止することと判断した。一方、臼歯歯髄腔内にビーズを埋入する方法はほぼ確立でき、海外共同研究機関であるパリ第5大学にて研究実施し、試料の解析を進めているところである。これに並行して、所属研究機関での実験系確立のための準備にも着手したところである。また、マウス二次口蓋形成過程におけるセロトニンおよびセロトニントランスポーター局在について、これまでに得ている結果を発展させるため、免疫組織化学的手法、ウェスタンブロッティング法により検討し、口蓋形成過程におけるセロトニンの経時的な局在変化とセロトニントランスポーターの局在パターンとの関連性を示し、セロトニントランスポーターはセロトニンの制御を介して口蓋部上皮組織の分化を調節する可能性が示唆された。これらの成果について学会にて報告した。

モデルマウス作製についてビーズを埋入する方法を改良し、安定した組織像が得られるようになった。採取した試料については、脱灰した試料に加え、現在、非脱灰試料の解析を進めているところである。また、マウス二次口蓋形成過程におけるセロトニンーセロトニントランスポーター局在について、免疫組織化学的手法、ウェスタンブロッティング法により検討し、セロトニン、セロトニントランスポーターの口蓋形成過程への関与およびセロトニンによる細胞内シグナル伝達系の活性化と細胞増殖について考察し、これらの成果について学会にて報告するとともに、現在、論文を執筆中である。セロトニンは発生期神経堤の遊走や頭蓋顎顔面などの初期発生にも関わることが知られている。本研究では歯・歯周組織形成過程におけるセロトニンの関与を検討した。セロトニンおよびセロトニントランスポーターは歯および歯周組織の形成の進行とともに、エナメル芽細胞、Hertwig上皮鞘、Malassez上皮遺残など上皮由来の細胞に限局して観察された。これらのことより、セロトニンは特に、上皮組織を介して歯・歯周組織の形成に関与することが示唆された。1器官培養系の結果より採取時期は決定できたが、その時期では細胞組織レベルでの差が明確ではないことがわかった。2モデルマウスの作製方法の改編の必要性3歯・歯周組織形成過程に加え、口蓋部上皮組織形成過程におけるセロトニン-セロトニントランスポーターの関連性についての結果を得ることができている。口腔解剖学1モデルマウスの作製と解析2パリ第5大学での研究実施と解析1マウス下顎臼歯部器官培養実験がほぼ安定して行えるようになり、試料採取のタイミングが決定できた。2ビーズ埋入モデルマウスの作製法が確立でき、実験系として稼働させ、応用できるようになった。35-HT2BRに対する抗体は残念ながら入手できなかったが、セロトニントランスポーターについての免疫組織学的検討は良好な結果を得ることができている。1.研究代表者の所属機関変更に伴い、研究実施環境の整備等に時間が必要となったため。2.市販の抗体では不良な結果しか得られず、新規に抗体を作製する必要が生じたため。平成26年度に試料作製用の機器を購入予定であったが、研究分担者所属機関の研究者より同等品の提供を受け、購入の必要がなくなったため、未使用額が生じた。平成26年度にレーザーマイクロダイセクション法により採取試料の解析を行う予定であったが、所属研究機関研究機器センター設置の機器が故障し、解析が不可能となった。機器使用再開の目処が立たず、必要物品等の購入を中止したため、未使用額が生じた。昨年度の研究代表者の所属機関変更に伴い、研究実施環境の整備について再検討したところ、申請時に予定していた備品購入の必要性がなくなったため、未使用額が生じている。未使用額と次年度の研究費とを合わせ、下記に使用する予定である。1器官培養に用いるマウス、試薬等2モデルマウス作製のためのマウス、ビーズ、試薬等3採取した試料の処理を行うための機器等の購入