hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
スフェロイドによる新規初代培養系を用いた薬剤感受性試験の膀胱癌治療への臨床応用

その後、オリジナルの膀胱癌組織における候補遺伝子の発現およびCTOSにおける候補遺伝子の発現を多数症例で解析し、CTOSを用いた薬剤感受性試験結果と比較検討する。次年度は今年度の繰越金729,815円に次年度交付額の900,000円を加え、計1,629,815円の研究費がある。筋層非浸潤性膀胱癌患者に対する経尿道的膀胱腫瘍切除直後の膀胱内注入化学療法の治療効果を予測する新規バイオマーカーを同定する研究におけるcDNAマイクロアレイを用いたmRNA発現プロファイル解析に関して、今年度はまず膀胱癌より樹立したCTOSとヒト膀胱癌細胞株におけるmRNA発現プロファイルの比較検討を行った。そのため、薬剤感受性試験に対する感受性群と耐性群を比較するためのcDNAマイクロアレイ解析を行うことができず、729,815円の繰越金が生じた。次年度は、まず新規バイオマーカー候補遺伝子同定を目的として、薬剤感受性試験に対する感受性群CTOSと耐性群CTOSのcDNAマイクロアレイ解析を行い、両群のmRNAの発現プロファイルを比較検討する。cDNAマイクロアレイ解析の受託研究費として756,000円使用する。オリジナルの膀胱癌やCTOSにおける同定した新規バイオマーカー候補遺伝子の発現解析に用いる試薬代やCTOS培養のための試薬代など物品費として473,815円使用する。また、学会発表や調査のための旅費・学会参加費・宿泊費に250,000円、論文投稿のための英文添削料や論文投稿料に150,000円使用する。
空孔内デザインによるγ-シクロデキストリンのTailor-Modeホスト化

修飾残基として、フェロセン、ナフタリン、アントラセン、ピレンを有するγ-シクロデキストリン(γ-CD)を合成した。ゲスト包接に際し、フェロセンは空孔外にナフタレンは空孔内に位置を移動させた。アントラセンやピレンのような大きな芳香環を有するγ-CDは、会合体を形成した。ピレン修飾γ-CDは、会合体中でピレンのエキシマーを形成する。ゲストを添加すると会合体は解離し、1:1ホスト・ゲストコンプレックスに変化する。この時、エキシマー蛍光は消失し、モノマー蛍光が現れるので、この系は有機化合物検出のセンサーとして用いることができる。多くの化合物について検討した結果、ステロイド化合物の高感度、高選択的検出に特に有効であることが判明した。また、芳香環のサイズが異なるナフタレン、アントラセン、ピレン修飾γ-CDを比較すると、ゲスト結合能力の大きな差異が観察され、スペーサー・サイズの変化によるゲスト結合の調節はほぼ達成されていることが確認された。なお、本研究課題に関連して、2個の修飾残基を有するγ-CDについてコンプレックス形成の検討を行なった。ナフタレン、アントラセンいずれの場合も、ゲスト不在下で安定な分子内コンプレックスを形成しており、外部ゲストに対する包接能力は低下していた。また、γ-CDのAB、AC、AD、AEのグルコースに9-アントラセンカルボン酸残基を有する化合物を用いて検討したところ、アントラセンの対面的相互作用が困難なAC体が不安定な分子内コンプレックスを形成し、ゲスト包接は容易であることが判明した。アントラセンの光二量化をこれからの系で行なうと、AB、ACは不安定な光二量体を生成しフォトクロミズム系となった。AD、AEでは安定な光二量体が生成した。なお、二量体の立体化学はABはシス、他はトランスとなった。通常生成しないシスが得られた点は、この系の合成手法としての有用性を示唆する。γ-シクロデキストリン(γ-CD)は,グルコース8単位から構成されており,大きな空孔を有している.修飾残基として芳香環を有するγ-CDでは,芳香環が空孔内に入り大きなγ-CD空孔を狭くするスペーサーとして機能するが,スペーサー残基の大きさ,形状を調整すると残余空隙の大きさ,形状が相補的に定まりデザインできる可能性がある.本研究では,修飾残基の個数,大きさを変化させて,スペーサー相補性の原理が成立つか,また,どのような包接挙動が芳香環修飾γ-CDで見られるのかについて検討した.1.1点修飾γ-CD:アントラセンあるいはピレン1個を有するγ-CDは, 2分子会合しやすいことが明らかになった.UVスペクトルの濃度依存の解析より会合定数が求められた.また,ゲスト添加に伴なうUVスペクトルの変化から,これらγ-CD誘導体が会合状態を解消して1:1ホスト・ゲストコンプレックスを形成することが明らかになった.また,ピレン修飾体の会合体は顕著なエクシマー蛍光を示し,会合により形成される長い空洞内にピレン残基が2個収容されることが判明した.しかし,広い口にピレン残基を有するγ-CD誘導体では,エクシマー形成は無く,ピレン環はCD軸に直角に配向して存在すると推測さた.2.2点修飾γ-CD:アントラセン残基2個を有するγ-CDのAB, AC, AD, AE異性体を合成した.これらは,円偏光二色性スペクトルに明確なエクサイトン・カップリングパターンを示し, 2個のアントラセンがγ-CD空孔内で相互に捩れた関係で配向していることが明らかになった.ゲスト添加による円偏光二色性パターンの変化から結合定数を求めた結果, ACが最大, AEが最小の値を示した.修飾残基として、フェロセン、ナフタリン、アントラセン、ピレンを有するγ-シクロデキストリン(γ-CD)を合成した。

なお、二量体の立体化学はABはシス、他はトランスとなった。通常生成しないシスが得られた点は、この系の合成手法としての有用性を示唆する。本研究課題では、γ-シクロデキストリン(γ-CD)の疎水性修飾残基が、γ-CDの大きな空孔を狭くするスペーサーとして機能することを利用してγ-CDの残余空隙の大きさを調節することを意図している。この目的を達成するためには、スペーサー残基の大きさとゲスト包接挙動の相関を検討する必要がある。そこで、スペーサー残基として、大きさの異なるナフタレン,アントラセン,ピレン修飾γ-CDを合成した。それらの蛍光,円偏光二色性,紫外スペクトル等による測定の結果は、それら修飾γ-CDが2分子会合することを示している。その会合の程度は、芳香環が大きくなる程顕著であった。会合傾向の強いピレン修飾γ-CDでは、広い濃度範囲で顕著なエクシマー蛍光が観察され、2個のγ-CD単位で構成される長い円筒状空洞に、2個のピレン残基が収容されていることが明らかとなった。この系では、温度の上昇,ゲストの添加,有機溶媒の存在等によってエクシマー蛍光の強度は弱まり、対応して通常けい光の強度が増大した。アントラセン修飾γ-CDの場合は、そのスペクトル特性を明らかにするため2個のアントラセン残基で修飾されたγ-CDを合成した。このγ-CD誘導体は、光照射によりアントラセンが分子内光二重化を起こす。分子内架橋したこのγ-CD誘導体では、アントラセン二重体がγ-CDの空孔を占拠し、ゲスト包接能力が消失している可能性がある。現在、この光によるホストの生から死への変換について、応用も含めて詳細な検討を行なっている。修飾γ-CD系についての分子会合の理解は、スペーサー効果による空隙デザインの実現のためにも必要と思われるので、これらの系について各種熱力学パラメーターを求める予定である。1-ピレンブタノイル残基を有するγ-シクロデキストリン(γ-CD)誘導体を合成した。それらは、γ-CDの一級水酸基側にアミド(1__-)、エステル(2__-)結合したもの、および、二級水酸基側のC_2(3__-)、C_3(4__-)部位にエステル結合したものであり、ピレン環とγ-CD空孔の相対的位置および立体化学的関係について円偏光二色性および蛍光スペクトルによる解析を行った。その結果、一級位修飾体ではピレン環はγ-CD空孔内にアクシャルに包接されること、および、その分子内コンプレックスは会合し、会合体中でピレン環は対面的相互作用によりエキシマーを形成することが明らかとなった。1__-がpH12.5以上でエキシマー蛍光を消失し、モノマー蛍光のみを示すようになることから、この会合体が二級水酸基側で相互接触する構造を有することが明らかとなった。二級位修飾体では、ピレン環はγ-CD空孔内に浅くしか抱接されず、分子会合の形成は困難であった。2個の9-アントラセンカルボン酸残基をγ-CDを構成するAB,AC,AD,AEグルコース部位に有する修飾体は、アントラセン光二重化により、AB,ACが不安定な光二重体を与え、AD,AEが安定な光二重体を与えた。通常生成しないシス光二重体がACで生成した点は、γ-CDのテンプレート効果の有効性を示している。
鳥類による"数"認識とその適応的意義:親子間相互作用と托卵鳥ジュウイチによる搾取

当研究の対象種であるジュウイチは東アジア固有のカッコウ科托卵鳥で,日本には夏鳥として渡来し,オオルリ,コルリ,ルリビタキといった小型スズメ目の巣に卵を産み込み,雛を育てさせる.ジュウイチの雛は他に例を見ない特徴があり,それによって宿主を騙している.翼の裏側に羽根が生えずに口内と同じ色の鮮やかな皮膚が裸出しているパッチ状の部分があり,それを給餌にやってきた宿主に誇示することでより多くの餌を得ているのだ.宿主の巣は中が暗いことが多く,同じ色で似たような動きをする実際の嘴と翼のパッチを宿主は区別することができず,巣の中にいる雛の数を実際より多く錯覚させられている可能性がこれまでの研究から示唆されている.それを実証するのが当研究の目的である.これまでの研究から宿主が巣に滞在する時間が提示された翼のパッチに応じて増加しているという予備的な結果が得られており,提示された数刺激に対する反応であることが示唆されていたが,例数が不足しているために証拠としては不十分だった.また,提示されたパッチの数に応じて提示された黄色の皮膚面積も増加するため,厳密には双方の効果が分離できていない.そこで,(1)観察例数を増やし,また,(2)パッチを部分的に黒く着色する実験を実施するため,野外調査を実施した.野外調査は静岡県駿東郡において5月中旬から8月下旬にかけて行い,45巣の宿主の巣を発見した.そのうち4巣がジュウイチによって托卵されたが,2巣においてはデータ収集が行えなかったため,残りの2巣において観察及び実験を行った.その結果,(1)の観察例数に関してはこれまでのデータに加算し,統計解析に耐えられる例数を確保できたため,解析を行った.その結果,仮説を支持する十分に強い証拠が得られたため,論文としてまとめた.(2)の実験に関しては,例数は不足しているものの予測通りの解析結果が得られた.研究対象である托卵鳥のジュウイチは、寄生雛として宿主に育てられる間、翼の裏側に口内と同じ色をした皮膚裸出部があり、それを誇示することで宿主から給餌を引き出している。これは嘴と異なった部位にそれに似せた特徴を持つことで巣の中にいる雛の数を実際より多く錯覚させていると考えられる。申請者はこの仮説を対象種が実際に生息している野外において検証するため、野外調査および実験を行った。5月中旬より8月中旬まで静岡県駿東郡小山町にて調査を行った。宿主であるルリビタキが雛の数に対し、どう反応しているかを検証するため、自然状態でのビデオ観察および人工的に雛の数を操作する実験を行った。また、ジュウイチによって托卵された巣においてビデオ観察を行った。現在までに宿主のルリビタキがジュウイチの雛によって誇示された裸出部の数に反応しているという結果が得られているが、9月中旬熊本大学において開催された日本鳥学会大会、3月中旬九州大学において開催された日本生態学会大会、訪問研究員として赴いたケンブリッジ大学動物学科進化生態行動セミナにおいて発表し、様々な研究者と議論することでより高水準の議論へ昇華させることができ、現在執筆はほぼ終了し、投稿準備中である。9月末より12月末まで、英国ケンブリッジ大学動物学科に訪問研究員として在籍した。受け入れ先のデイビス教授は托卵鳥研究だけでなく、行動生態学においても第一人者であり、様々な研究者と交流を持つことができ、将来的な糧となる経験をした。特別研究員研究計画に則り,2008年5月下旬より8月中旬まで,静岡県駿東郡小山町にて野外調査を行った.ジュウイチはカッコウ科の托卵鳥で,ルリビタキなどの小型烏類に寄生するが,雛は両翼にある口内と同色の皮膚裸出部をディスプレイすることで宿主から給餌を引き出している.この皮膚裸出部と嘴を合わせた三ヵ所の刺激を提示することにより,宿主に対し,巣内の雛数を多く錯覚させているという仮説を野外観察と実験によって証明することを試みた.具体的な調査内容としては(1)ジュウイチの雛を用いた自然状態での行動観察,(2)ジュウイチの雛を用いた部分染色実験,(3)宿主であるルリビタキの巣を用いた雛数操作実験の三点である.約40巣のルリビタキの巣を発見し,うち2巣がジュウイチによって托卵された.まず,ジュウイチに関し,発見された巣において上述(1),(2)の処理を行う予定だったが,天敵である食肉目哺乳類に捕食されてしまったため,遂行出来なかった.残る(3)のルリビタキにおいても発見した巣のうち適正に実験を行うことができる日齢にまで生存できた巣は5巣程度であったが,捕食,およびルリビタキの親による放棄により,データ収集を遂行できなかった.これらの失敗は天敵となる哺乳類の従来とは異なった活性が原因と考えられる.来年度の野外調査においては適正な申請を行い,捕食者の影響を最小限に抑える努力をするつもりである.これらの結果,執筆中の論文は残念ながら例数を増やすことができず,科学的な検証に耐えられないため,公表には至らなかった.当研究の対象種であるジュウイチは東アジア固有のカッコウ科托卵鳥で,日本には夏鳥として渡来し,オオルリ,コルリ,ルリビタキといった小型スズメ目の巣に卵を産み込み,雛を育てさせる.ジュウイチの雛は他に例を見ない特徴があり,それによって宿主を騙している.

翼の裏側に羽根が生えずに口内と同じ色の鮮やかな皮膚が裸出しているパッチ状の部分があり,それを給餌にやってきた宿主に誇示することでより多くの餌を得ているのだ.宿主の巣は中が暗いことが多く,同じ色で似たような動きをする実際の嘴と翼のパッチを宿主は区別することができず,巣の中にいる雛の数を実際より多く錯覚させられている可能性がこれまでの研究から示唆されている.それを実証するのが当研究の目的である.これまでの研究から宿主が巣に滞在する時間が提示された翼のパッチに応じて増加しているという予備的な結果が得られており,提示された数刺激に対する反応であることが示唆されていたが,例数が不足しているために証拠としては不十分だった.また,提示されたパッチの数に応じて提示された黄色の皮膚面積も増加するため,厳密には双方の効果が分離できていない.そこで,(1)観察例数を増やし,また,(2)パッチを部分的に黒く着色する実験を実施するため,野外調査を実施した.野外調査は静岡県駿東郡において5月中旬から8月下旬にかけて行い,45巣の宿主の巣を発見した.そのうち4巣がジュウイチによって托卵されたが,2巣においてはデータ収集が行えなかったため,残りの2巣において観察及び実験を行った.その結果,(1)の観察例数に関してはこれまでのデータに加算し,統計解析に耐えられる例数を確保できたため,解析を行った.その結果,仮説を支持する十分に強い証拠が得られたため,論文としてまとめた.(2)の実験に関しては,例数は不足しているものの予測通りの解析結果が得られた.
ヒラメ仔稚魚の減耗要因に関する行動学的解析

ヒラメ仔稚魚の成長と減耗の過程および要因について次の2つの行動実験を行い,以下の結果を得た。1.水温と摂餌開始時期がヒラメ仔魚の成長と減耗に及ぼす影響・水温区15°,18°および21°Cにおけるヒラメ仔魚のpoint-of-no-return (PNR)は,それぞれ孵化後,7.5日,4.8日および4.0日であることがわかった。・同日齢であれば,高水温区の仔魚ほど高成長率で高死亡率を示した。・絶食の日数が増えるに従って日間成長率は有意に減少し,死亡率は増大した。・高成長率を維持し,飢餓による死亡率を押さえるためには,ヒラメ仔魚は15°,18°Cおよび21°Cでそれぞれ卵黄吸収後2日,1日,および1日以内に摂餌を開始する必要があるものと示唆された。2.サイズ差がヒラメ稚魚の成長と社会行動に及ぼす影響・小サイズ群の成長は大サイズ群の存在により著しく抑制された。・大サイズ群は小サイズ群の摂餌量を抑制することはなかったが,強い攻撃行動を示すことによって小サイズ群の活動を抑制した。・小サイズ群の低成長は大サイズ群の攻撃行動による生理的ストレスによるものと推測された。
地震活動と火山活動の相関に基づく大地震発生予測の研究

大地震の発生とその周辺における火山活動の間になんらかの相関が見られるとした研究例は過去に多く見られる。日本列島域についても筆者らを含めた多くの研究がなされており、例えば伊豆大島火山の噴火と関東地方の大地震の間にはよい相関が成り立つとされている。本研究では、木村琉球大学名誉教授、京都大学防災研究所井口准教授らの協力を頂き、地震活動も火山活動が日本列島におけるそれらより数倍活発であるインドネシア島弧域を研究対象に加え、比較研究を行った。まずインドネシア地域における、1980年以降の地震活動の統計的解析を行い、巨大地震による一時的な地震数の増加およびその背景にある長期的な地震活動の活発化を見出した。近年、地震活動、火山噴火活動が活発化の傾向にあり、火山帯においてはそれらは相互相関していると考えられる。日本とインドネシアはたびたび地震や火山の影響を被ってきたが、その発生パターンには両国間に差異がある。時系列解析モデルARIMA(3,1,2)とARIMA(2,0,1)x(1,0,1)を各々インドネシアと日本における地震予測に適用した。時系列解析の結果、日本では大地震の発生に先行して火山噴火活動があった例が多い。これは沈み込みに伴う地殻応力の増大が火山活動を誘発することを示唆している。一方、インドネシアにおける地殻活動は複雑で、大地震と火山活動の間に強い相関を見出すことはできなかった。火山噴火と大地震には時間と距離に依存した関係がある。インドネシア、日本両国において震央位置が迅速に得られ火山活動が十分モニターされるならば、この時間と距離の相関解析は地震の事前予測に役立つものであることが示唆される。大地震とその周辺における火山活動には相関が見られる例が多く、日本列島域についても筆者らの研究を含む多くの研究がなされてきた。本課題についてさらに発展を求めるにあたり、地震活動も火山活動も日本列島におけるそれらより数倍活発であるインドネシア島弧域を研究対象とするのが良いであろうというアドバイスを、防災研究所火山活動研究センターの井口准教授より得た。そこでインドネシア地域における、1978年以降のマグニチュード7.0以上の地震と火山活動についてのデータを収集し、インドネシア地域における地震活動と火山活動の相関を表す適切なARIMAモデルの構築に着手した。木村琉球大学名誉教授、井口准教授らとの協力により、作業は順調に進んでおり、今後の研究継続により良い成果が期待できる。地震活動とその周辺における火山活動の間になんらかの相関が見られるとした例は過去に多く見られる。日本列島域についても筆者らを含めた多くの研究がなされてきたが、地震活動も火山活動が日本列島におけるそれらより数倍活発であるインドネシア島弧域を研究対象とし、研究を進めている。今後インドネシア地域における地震活動と火山活動の相関を表す適切なARIMAモデルの構築に着手する。木村琉球大学名誉教授、京都大学防災研究所井口准教授らの協力燃えられよ、引き続き研究を進める予定であり、今後の成果が期待できる。時系列解析の結果、インドネシアでは地震は強い非定常性を示すのに対し、日本では季節性の変動を示す。インドネシアに本両国において震央位置が迅速に得られ火山活動が十分モニターされるならば、この時間と距離の相関解析は地震の事前予測に役立つものであることが示唆される。
統合失調症の社会認知と認知リハビリテーション効果に寄与する神経基盤の統合的解明

統合失調症の社会認知障害は患者の社会機能に大きく影響し、かつ治療抵抗性であり、新たな治療法開発のため、その病態解明が急務となっている。社会知覚の一種であるbiologicalmotion知覚は他者の動きの知覚であり、「視覚的注意ーbiological motion知覚ー共感」という一連の認知過程が関わっているが、統合失調症ではこれらの認知機能が障害され、患者の社会機能とも関連する。本研究では、統合失調症患者17名、対照健常者18名に対してアイトラッカーのディスプレイ上にpoint-light walkerを用いた動画刺激を提示し、biological motion知覚課題施行中の眼球運動を計測した。また、3T-MRI装置によりT1強調3D構造画像および安静時fMRIを撮像した。構造MRI脳画像を用いて眼球運動、biological motion知覚課題、共感の指標と、灰白質構造との相関を算出し、これらの認知機能の障害の神経基盤を同定した。統合失調症患者においてbiological motion知覚と視覚的注意に関連する脳部位を眼球運動計測およびvoxel-based morphometryを用いて探索し、それぞれの認知機能に関連する脳部位として上側頭溝と側頭頭頂接合部を検出した。いずれも社会脳と呼ばれるネットワークの一部であり、biological motion知覚が社会的知覚であることと矛盾しない知見が得られた。安静時fMRI画像はFSLを用いて前処理後、独立成分分析により注意ネットワークを同定し、ネットワークにおける機能的コネクティビティと、眼球運動、biological motion知覚課題、共感の指標との相関を算出する解析が進行中である。本研究の知見は社会認知リハビリテーションの開発とその評価に役立つことが期待される。統合失調症の社会認知障害は「注意-社会知覚-社会認知」という複数の認知処理過程の統合と捉えられる。本研究では、統合失調症において障害され、かつ社会認知にとって重要な役割を持つ社会知覚として、他者の動きの知覚(biological motion知覚)に焦点を当てた。初年度は、統合失調症における社会認知障害の階層的処理過程を明らかにするために、アイトラッカーとMRIを用いて、視覚的注意とbiological motion知覚の神経基盤を同定した。統合失調症患者において、voxel-based morphometry (VBM)により、biological motion知覚課題の正答率と相関する脳部位を探索したところ、側頭頭頂接合部と前部上側頭溝の体積が課題正答率と相関した。一方、眼球運動指標を用いて注意の影響を制御したVBMでは、正答率と側頭頭頂接合部の体積の相関は消失した。さらに患者において、注意とbiological motion処理がそれぞれどの程度課題正答率に寄与するかを重回帰分析により評価したところ、注視点の数と前部上側頭溝の体積の双方が、正答率に多大な影響を与えることが判明した。これらの結果から、患者における側頭頭頂接合部の変化はbiological motion知覚時の注意の方略に関与し、前部上側頭溝の変化は高次のbiological motion処理そのものに関与することが示唆された。統合失調症における社会認知障害の発現には、階層的処理過程およびそれに対応する脳部位の異常が関わっており、本研究の知見は、注意を操作する社会認知リハビリテーションの開発やその評価に役立つことが期待される。統合失調症の社会認知障害に関するMRI研究はほぼ予定通り進行でき、一部は論文投稿中である。統合失調症の社会認知障害の発現には、注意や社会的知覚などより低次の認知機能が関与していると考えられる。本研究では近年社会的知覚として重要性が明らかになってきたbiologicalmotion知覚に焦点を当て、その神経基盤を評価する。統合失調症患者および健常者のbiological motion課題、心理指標、構造・機能MRIデータが蓄積し、一部は論文化することができた。統合失調症患者において、biological motion知覚と視覚的注意に関連する脳部位を眼球運動計測およびvoxel-based morphometryを用いて探索し、それぞれの認知機能に関連する脳部位として上側頭溝と側頭頭頂接合部を検出した。いずれも社会脳と呼ばれるネットワークの一部であることから、biological motion知覚が社会的知覚であることが確認された。また統合失調症において、社会的知覚には注意が多大な影響を及ぼすことが示唆された(Matsumoto et al. in submission)。そのほかにもbiological motion知覚と安静時fMRIデータの関連、および運動習慣との関連を評価するためのデータ取得、解析が進行中である。被験者のリクルートは順調であり、統合失調症患者および健常者のbiological motion課題、心理指標、構造・機能MRIデータが蓄積し、一部は論文投稿中である。統合失調症患者および健常者のbiological motion課題、心理指標、構造・機能MRIデータが蓄積し、一部を論文化した。いずれも社会脳と呼ばれるネットワークの一部であり、biological motion知覚が社会的知覚であることが改めて示された。また統合失調症において社会的知覚に注意が多大な影響を及ぼすことが示唆された(Matsumoto et al. 2017)。そのほかにもbiological motion知覚と安静時fMRIデータの関連、およびスポーツとbiological motion知覚、社会認知との関連を評価するためのデータ取得、解析が進行中である。

被験者のリクルートは順調であり、統合失調症患者および健常者のbiological motion課題、心理指標、構造・機能MRIデータが蓄積し、一部を論文化した。biologicalmotion知覚と安静時fMRIデータの関連、およびスポーツとbiological motion知覚、社会認知との関連についてもデータ取得、解析が進行中である。統合失調症の社会認知障害は患者の社会機能に大きく影響し、かつ治療抵抗性であり、新たな治療法開発のため、その病態解明が急務となっている。社会知覚の一種であるbiologicalmotion知覚は他者の動きの知覚であり、「視覚的注意ーbiological motion知覚ー共感」という一連の認知過程が関わっているが、統合失調症ではこれらの認知機能が障害され、患者の社会機能とも関連する。本研究では、統合失調症患者17名、対照健常者18名に対してアイトラッカーのディスプレイ上にpoint-light walkerを用いた動画刺激を提示し、biological motion知覚課題施行中の眼球運動を計測した。また、3T-MRI装置によりT1強調3D構造画像および安静時fMRIを撮像した。構造MRI脳画像を用いて眼球運動、biological motion知覚課題、共感の指標と、灰白質構造との相関を算出し、これらの認知機能の障害の神経基盤を同定した。統合失調症患者においてbiological motion知覚と視覚的注意に関連する脳部位を眼球運動計測およびvoxel-based morphometryを用いて探索し、それぞれの認知機能に関連する脳部位として上側頭溝と側頭頭頂接合部を検出した。いずれも社会脳と呼ばれるネットワークの一部であり、biological motion知覚が社会的知覚であることと矛盾しない知見が得られた。安静時fMRI画像はFSLを用いて前処理後、独立成分分析により注意ネットワークを同定し、ネットワークにおける機能的コネクティビティと、眼球運動、biological motion知覚課題、共感の指標との相関を算出する解析が進行中である。本研究の知見は社会認知リハビリテーションの開発とその評価に役立つことが期待される。今後、安静時fMRI画像を用いて、注意や社会認知に関わる灰白質間の機能的コネクティビティ異常を同定し、各認知機能との関連を明らかにする。
Wnt2bによる網膜幹細胞の維持に関わる分子のスクリーニングと機能解析

網膜幹細胞が生体内で維持される際に重要な役割を果たす遺伝子の探索を行い、いくつかの候補遺伝子を得た。これらのうちいくつかの遺伝子は、網膜において網膜幹細胞が存在する領域CMZに特異的に発現していた。またこれらの遺伝子の発現はWnt2bの過剰発現によって活性化されたことから、Wnt2bによって維持される網膜幹細胞の優れたマーカーとしてはたらくことが分かった。研究の途中で、bHLH型転写因子であるc-hairylがCMZで発現していることが報告された。そこでc-hairylがWntシグナルの下流で網膜幹細胞の維持に関わっているかどうか検討した。Wntシグナルを活性化すると、c-hairylの発現が上昇したことから、c-hairylの発現はWntシグナルの下流で制御されていることが示唆された。c-hairylの過剰発現を行うと、Wnt2bの過剰発現と同様に、神経細胞への分化が抑制され、かつ細胞増殖能が保持されていた。さらに、上記スクリーニングで得られたCMZで特異的に発現する遺伝子の発現が、c-hairylの過剰発現により異所的に観察されたことから、CMZに存在する細胞に良く似た性質を持つ未分化な細胞集団が誘導されていることが示された。逆に、c-hairylのドミナントネガティブ分子の過剰発現を行うと、1)神経分化が異所的に観察されたこと、2)またCMZでは、CMZ特異的発現遺伝子の発現が消失していたことから、c-hairylは未分化性の維持に必要であることが示唆された。さらに、c-hairylのドミナントネガティブ分子は、Wnt2bによる神経分化抑制、および細胞増殖能維持の効果を打ち消したことから、Wnt2bによる幹細胞の維持には、c-hairylの機能が必要であることが考えられた。様々な組織特異的な幹細胞は、増殖能・多分化能を持っており、他の分化した細胞種とは大きく異なった特徴をもつ。これまでの研究から、網膜幹細胞はWntシグナルによって未分化な状態に維持されていることが示唆されている。Wntシグナル経路では、転写因子TCF/LEFによって特定の標的遺伝子の発現が誘導されることから、実際に網膜幹細胞の維持に関わるのはこれら標的遺伝子であると考えられる。そこで網膜幹細胞を維持する分子機構を理解するために、私はWntシグナル経路の下流で働く分子をスクリーニング・同定し、その機能を解析することにした。私はまず、Wntシグナルに反応している網膜細胞のcDNAを得ようと考えた。その方法として、網膜細胞のsingle cell PCRを行った。この方法により、単一細胞で発現している転写産物を、細胞内でのもともとの発現比を保ったまま、バイアスをかけることなく増幅することができる。96細胞についてsingle cell PCRを行い、網膜においてWnt-2bに反応して発現が上昇する遺伝子LEF1をマーカーとして、Wntシグナルに反応していると予想される細胞を選出した。この細胞から調整したcDNAと、LEF1を全く発現しておらず、かつ神経分化を開始し始めるころに発現されるNotch1を発現する細胞から調整したcDNAとの間でサブトラクションを行った。このようにしてサブトラクションを行ったcDNAのプールから、LEF1発現細胞のみで発現する候補クローンを選出し、それらの発現パターンをin situ hybridizationによって調べた。これまで得られたクローンの中は、Wntシグナルの下流で働くことがすでに報告されているConnexin 43が含まれていた。このConnexin 43は網膜幹細胞が存在する領域に特異的に発現していた。現在、このスクリーニングの規模をさらに広げている。Wntシグナル経路では、転写因子TCF/LEFによって、その標的遺伝子の発現が誘導されることから、実際に網膜幹細胞の維持に関わるのはこれら標的遺伝子であると考えられる。私はまず、網膜細胞のsingle cell PCR法を用いて、網膜組織内の単一細胞で発現するcDNAを96サンプル得た。この中から、Wntシグナルに反応している細胞を、すでにWntシグナルの赤流で発現が誘導されることが知られている遺伝子LEF1の発現を指標として選び出し、サブトラクション法を用いて、この細胞で特異的に発現する候補遺伝子を選出した。得られた候補遺伝子の発現パターンをin situ hybridizationによって調べたところ、網膜幹細胞が存在する領域に特異的荷発現する遺伝子が複数得られた。これら候補遺伝子の中には、すでにWntシグナルの下流で働くことが報告されているConnexin 43が含まれていたことから、このスクリーニング方法の有効性が示唆された。得られた候補遺伝子のうちの一つは、bHLHドメインを持つ転写因子をコードしていた。この遺伝子を、ニワトリ胚網膜に過剰発現したところ、分化した神経細胞の数が顕著に減少していた。この結果より、この転写因子が網膜において神経への分化を抑制する活性を持つことが示唆された。現在、この転写因子の機能および、Wntシグナル経路との関連を調べている。

またこれらの遺伝子の発現はWnt2bの過剰発現によって活性化されたことから、Wnt2bによって維持される網膜幹細胞の優れたマーカーとしてはたらくことが分かった。研究の途中で、bHLH型転写因子であるc-hairylがCMZで発現していることが報告された。そこでc-hairylがWntシグナルの下流で網膜幹細胞の維持に関わっているかどうか検討した。Wntシグナルを活性化すると、c-hairylの発現が上昇したことから、c-hairylの発現はWntシグナルの下流で制御されていることが示唆された。c-hairylの過剰発現を行うと、Wnt2bの過剰発現と同様に、神経細胞への分化が抑制され、かつ細胞増殖能が保持されていた。さらに、上記スクリーニングで得られたCMZで特異的に発現する遺伝子の発現が、c-hairylの過剰発現により異所的に観察されたことから、CMZに存在する細胞に良く似た性質を持つ未分化な細胞集団が誘導されていることが示された。逆に、c-hairylのドミナントネガティブ分子の過剰発現を行うと、1)神経分化が異所的に観察されたこと、2)またCMZでは、CMZ特異的発現遺伝子の発現が消失していたことから、c-hairylは未分化性の維持に必要であることが示唆された。さらに、c-hairylのドミナントネガティブ分子は、Wnt2bによる神経分化抑制、および細胞増殖能維持の効果を打ち消したことから、Wnt2bによる幹細胞の維持には、c-hairylの機能が必要であることが考えられた。
植民地朝鮮の中等学校の部活動に関する基礎的研究

植民地朝鮮において、学校教育は植民地支配政策の土台であった。朝鮮人に対する教育政策の既存の研究は授業やカリキュラムなどの正課に集中しているが、本研究は朝鮮の中等学校の放課後の部活動を検討するものである。朝鮮総督府は中等学校のカリキュラムなどには介入したが、部活動に対する政策は規定してなかったと考えられる。また、部活動には生徒が自発的に参加するという点に着目し、これまで支配される客体として描かれてきた朝鮮人生徒の主体性を軸として朝鮮教育史を再構成することを目指している。2018年度は、2017年度に引き続き、資料収集、とくに朝鮮の中等学校の『学友会誌』(各部活の部報が掲載されている)を、日本の各種図書館に所蔵されているものを中心に収集した。研究としては、朝鮮の中等学校のうち、日本人が多く通った中学校、朝鮮人と日本人の双方が通った実業学校の部活動の分析を進めた。そして、野球部を中心に、日本人生徒や教員の朝鮮人部員認識や、日本人と朝鮮人の共学校における双方の認識などを分析した。また、民族問題とは別に、部活動を通して、「朝鮮」という郷土意識が芽生えていく過程や、部活動を通じた朝鮮の地方都市の町興しとの関連、さらには、運動部にとって非常に重要な気候の問題についても分析した。郷土意識は、たとえば甲子園に出場する場合、朝鮮人生徒は朝鮮民族を代表して甲子園に臨む傾向がみられる一方、日本人生徒の場合は、帝国日本の一地方都市としての朝鮮を代表する意識がみられ、これが大邱などの朝鮮内の地方都市、いわば地方の地方となると、部活動と郷土意識がより密接に結びつき、これが町興しの手段になっていた。これらの研究成果は、「植民地朝鮮と甲子園ー在朝日本人中等学校の野球史」『「甲子園」の眺め方』(小さ子社、2018)として発表することができた。2017年度に勤務先を移ったことによる仕事量の増加に、1919年の三・一独立運動の100周年とかかわる韓国の歴史認識や現状分析などの仕事も加わり、韓国での資料調査の時間が十分にさけていない。2019年度は韓国で資料調査をして『校友会誌』を収集する。そして、これまで収集してきた日本に所蔵されている朝鮮の『校友会誌』も用いて、各学校の部活動の傾向や部員数などのデータを収集し、分析する。そして、朝鮮人部員に関する資料紹介を兼ねた論文を発表したいと考えていてる。初年度は、主に資料収集、とくに朝鮮の中等学校の『学友会誌』(各部活の部報が掲載されている)を、日本の各種図書館に所蔵されているものを中心に収集した。ただし、韓国での資料収集の時間がとれなかった。研究としては、朝鮮の中等学校のうち、日本人が多く通った学校の運動部を分析し、日本人部員がどう朝鮮人部員を認識していたのかについて論文を執筆した。これは2018年度に公刊される予定だが、朝鮮人部員については、韓国での資料調査ができなかったため、分析に至っていない。ただし、朝鮮人が通う中等学校の部活動の顧問の大半は日本人であった。中等学校の部活動に朝鮮総督府はあまり介入しなかっため、顧問や校長の意向が部活動に反映されることが多く、その顧問の日本人教員に関する資料(回顧録、同窓会誌、『校友会誌』、新聞や雑誌の記事)は集まってきている。現在、それらの分析も進めている。研究代表者が初年度の2017年の途中で勤務先を移ることになったため、韓国での資料調査の時間が十分に確保できなかった。

郷土意識は、たとえば甲子園に出場する場合、朝鮮人生徒は朝鮮民族を代表して甲子園に臨む傾向がみられる一方、日本人生徒の場合は、帝国日本の一地方都市としての朝鮮を代表する意識がみられ、これが大邱などの朝鮮内の地方都市、いわば地方の地方となると、部活動と郷土意識がより密接に結びつき、これが町興しの手段になっていた。これらの研究成果は、「植民地朝鮮と甲子園ー在朝日本人中等学校の野球史」『「甲子園」の眺め方』(小さ子社、2018)として発表することができた。2017年度に勤務先を移ったことによる仕事量の増加に、1919年の三・一独立運動の100周年とかかわる韓国の歴史認識や現状分析などの仕事も加わり、韓国での資料調査の時間が十分にさけていない。2018年度は韓国で資料調査をして『校友会誌』を収集する。そして、これまで収集してきた日本に所蔵されている朝鮮の『校友会誌』も用いて、各学校の部活動の傾向や部員数などのデータを収集し、分析する。そして、朝鮮人部員に関する資料紹介を兼ねた論文を発表したいと考えていてる。2019年度は韓国で資料調査をして『校友会誌』を収集する。研究代表者の勤務先が年度内に変わったことにより、韓国出張の時間がとれなかったことによる。また、研究に必要な物品の購入の必要も生じ、物品費による支出が増えたこともある。初年度の未使用額の出張費は、次年度にあてる。韓国出張の時間がとれなかったことによる。また、購入予定だった資料集の刊行が延期となったため、その購入費用を次年度にまわざるを得なかったこともある。2018年度の未使用額の出張費や物品費は、2019年度にあてる。
不完全変態昆虫概日時計の光同調機構の解析

不完全変態昆虫の光同調機構を明らかにするため、コオロギ複眼で発現するオプシン類の光同調における機能を解析し、以下の結果を得た。複眼には紫外光、青色光、緑色光をそれぞれ受容するオプシン類、opsin-UV, opsin-Blue, opsin-LWが特定の部域で発現する。これらのうち、光同調に関与するのはopsin-LWであり、そのRNAiによる発現抑制で光同調が強く阻害された。複眼ではクリプトクロムも発現するが、これらは光同調には関与しない。光によるリセットは、転写レベルで調節され、特に時計遺伝子Clockとcycleがそれぞれ位相後退と前進時に重要な役割を担うことを示唆する結果を得た。複眼で発現する3種の視物質遺伝子,opsin-long wave(opLW),opsin-UV(opUV),およびopsin-Blue(opBL)のcDNA全長を取得した。定量的PCRによりそれらのmRNA発現の日周性を検討したところ、いずれの遺伝子も1日を通して一定量発現しており、発現量に周期性は見られなかった。in situ hybridizationにより、それらの発現領域を検討したところ、opLWは複眼背縁部(DRA)を除く全域で、opUVは複眼腹側部を除く全域で、またopBLはDRAと複眼腹側部で発現することを明らかにした。タンパクレベルの発現を検討するため、現在抗体作成を目指して、cDNAからタンパク断片の作成を行っている。また、網膜電図を用いた解析により、波長感度がそれぞれ緑、紫外、青の領域にあることを示した。一方、それぞれの2本鎖RNAを用いたRNA干渉により、各遺伝子のmRNA発現が強く抑制されることを明らかにした。それぞれのノックダウン個体を用いて、6時間位相前進あるいは後退後の明暗周期への概日活動リズムの同調を検討したところ、opLW RNAi処理個体群では約30%の個体で同調が阻害され、同調した個体でも同調に要する移行期が対照群と比べ延長することが分かった。一方、opUV,opBL RNAi処理個体群では、移行期が短縮する傾向が見られた。これらの結果から、複眼で発現するオプシン類は概日時計の光同調に異なる役割を演じており、特にopLWが同調に重要であることが示唆された。予備的ではあるが光パルスによるリセット時にはClock遺伝子の転写が活性化する結果を得た。フタホシコオロギ、タンボコオロギ、マダラシミを用いて、オプシン類を中心に概日時計の光リセット機構に関連した解析を行い以下の結果を得た。フタホシコオロギでは、(1)別領域で作成した2本鎖RNAを用いて、dsRNAによるオプシン遺伝子mRNAのノックダウンのoff target effectの可能性を検討し、同様の効果を確認した。(2)opsin遺伝子の2重RNAiでは単一のオプシン遺伝子のみが強く発現し、opsin-LWとopsin-UV、opsin-Blueとの組合わせの場合には、同調能を失う個体の割合が高く、同調した個体でも同調に要する移行期が延長した。一方、opsin-LWのみの発現では全個体が光同調し、かつ移行期も対照群と同様であったことから、光同調にはopsin-LWが主要な役割を演ずると結論された。(3)光同調機構の解析のため時計機構に関与するvrille, Pdp1, E75, HR3の各遺伝子cDNAを取得し、機能解析を進めた。E75、HR3のRNAiでは、活動リズムへの顕著な影響は見られなかったが、cycをはじめとする既知の時計遺伝子の発現レベルや発現リズムの位相に変化が生じた。vri RNAi個体では、Clkの発現が暗期に明瞭なピークを示すようになり、cycの発現レベルが増加するとともに、per, timのmRNA発現リズムの振幅が増強した。(4)ハエ型クリプトクロムcry1の全長を取得し、光同調機構への関与を検討した。Cry1は複眼でも発現するが、そのRNAi個体でも対照群と同様の光同調性を示したことから、cry1は光同調には重要ではないことが分かった。(5)タンボコオロギで、Opsin-LW/cry1 RNAi個体の時計遺伝子発現リズムを解析したところ、per, timの発現レベルが低下し、長日では位相前進、短日では位相後退が生ずることが分かった。(6)マダラシミではopsin-LWのRNAi処理個体でも、光同調性は維持されることが明らかとなった。フタホシコオロギ、タンボコオロギおよびマダラシミを用いて、オプシン類を中心に概日時計の光リセット機構に関連した解析を行い、以下の結果を得た。1)各オプシン遺伝子2本鎖RNAの当該遺伝子へのノックダウンは、他のオプシン遺伝子発現へ影響しないことが明らかになった。

2)各オプシンの2本鎖RNAを投与した個体の複眼の波長感度を、ERGの振幅を指標として測定したところ、op-UV RNAiでは短波長領域が、op-Blue RNAiでは480500nm付近の、op-LW RNAiでは540nm付近のピークが消失することから、それぞれ400nm、480nm, 540nm付近に波長感度のピークを持つと推定された。3)タンボコオロギでオプシンcDNAをクローニングし、フタホシコオロギ同様にop-UV, op-Blue, op-LWの3種を得た。これらの発現部位を検討したところ、フタホシコオロギ同様に、op-LWが複眼背縁部を除くほぼ全域で、op-UVが腹側部の一部を除く全域で、op-Blueは複眼背縁部と腹側の一部で発現することが示された。4)光によるリセット機構を解析するため、フタホシコオロギで必要な時計遺伝子Clkとcycの解析を進めた。これらの発現リズムを解析し、Clkには周期性が無くcycに周期性があるが、cycのノックダウンではClkも周期的発現を示すことなどを明らかにした。5)光リセットの機構を暗黒下で自由継続させたコオロギ1齢および3齢幼虫に異なる時刻で一度だけ光照射を行い、per, tim, Clk, cry2などの時計関連遺伝子の光による発現量変化の時刻依存性をqPCRにより解析した。主観的夜の前半および後半での光照射により、per, tim, cry2の発現リズムがそれぞれ後退、前進するが、変位の時間経過は遺伝子により異なるらしいことがわかった。昨年度に引き続き、概日時計の光リセット機構、及び光周時計機構へのオプシンの役割を解析し、以下の結果を得た。1.フタホシコオロギを用いて、光パルス照射後、1時間間隔で1齢幼虫頭部での各種時計遺伝子のmRNA発現量の変化を検討したところ、主観的夜前半の光パルス照射後にはまずPdp1の転写の上昇が生じ、続いてClockの転写が上昇し、その後periodが上昇すること、主観的夜の後半では、cycleの急激な低下が生ずることが分かった。一方、光同調に主要な役割を演ずるopsin-LW(opLW)をRNAiにより発現抑制したところ、opLW RNAiではこれらの応答は抑制されるとともに、活動リズムの位相変位も強く抑制された。これらの結果から、光による時計の同調の初期反応にClock, cycleの転写レベルの制御が関与することが示唆された。2.タンボコオロギを用いて、opUV, opBlue, opLWをそれぞれRNAiにより発現抑制した個体での、概日活動リズムの光同調を検討した。opBRNAiでは同調時の位相が約3時間前進するが、明暗周期の位相前進・後退に伴う同調過程そのものはほぼ正常であること、opUV RNAiでは前進時の同調が促進されること、opLW RNAiでは前進後退ともにやや阻害されることが分かった。これらの結果は、概ねフタホシコオロギの結果と類似していた。3.タンボコオロギ長日反応の光誘導相に誘導効果の高い緑色光または青色光パルス照射後に、頭部から抽出したmRNAを用いて、時計遺伝子の発現レベル、発現リズムの位相を検討したところ、periodの発現レベルが暗期に上昇しやや位相が前進すること、timelessは暗期後半の発現量が増加し位相がやや後退することが分かった。
高病原性インフルエンザウイルスによる呼吸不全の分子病態の解明

(1)マクロファージおよび好中球特異的VPS34欠損(VPS34 LyM-cre)マウスを作製した。VPS34 LyM-creマウスはコントロール状態では特別な異常を認めなかった。(2)インフルエンザウイルスに感染し呼吸不全を起こした患者がICUで人工呼吸等の治療を受ける状態をマウスで再現するインフルエンザマウスICUモデルを樹立した。マウスに経気道的にインフルエンザウイルス(PR8株)を投与し、呼吸機能解析システムで呼吸機能の経時的変化を解析したところ呼吸機能、エラスタンスの悪化が認められた。(3)同モデルを用いてウイルスRNAの増幅、肺病理所見、サイトカインプロフィール、オートファジー関連遺伝子の発現変化等を経時的に解析した。さらに肺組織を用いて遺伝子発現解析を行った。(4)同モデルを用いてdotplot法で肺組織PIsの変化を見た。インフルエンザ感染に伴いPI(3,4,5)P3、PI(3,4)P2、およびPI3Pが増加することがわかった。PI(4,5)P2の量には大きな変化は見られなかった。(5)VPS34 LyM-creマウスから単離したマクロファージあるいは好中球をインフルエンザウイルスで刺激すると炎症性サイトカインの産生の変化を認めた。現在さらに肺胞上皮細胞特異的VPS34欠損(VPS34 SPC-cre)マウスを作製し、同モデルを用いた感染実験を行っている。このような検討からPI3Pがインフルエンザによる呼吸不全の発症に重要な役割を果たしていることが示唆された。本年度は、(1)イノシトールリン脂質(PIs)関連酵素欠損マウスの樹立ならびに(2)高病原性インフルエンザ不活化ウイルス、組換蛋白およびウイルス様粒子の調製、(3)in rivoマウス経気道インフルエンザ感染モデルの樹立を行った。(1)では、PIPase,PIK3C3,あるいはPIPK IIIのマクロファージ特異的遺伝子欠損マウスを作製し交配を進め、実験に必要なマウスを準備した。(2)では、「1918年スペイン風邪」ウイルスのHAおよびNAが発現しているウイルス様粒子(VLP)を作製した。これはヒト293T細胞にHIV-1 gagとスペイン風邪ウイルスのHAおよびNAのプラスミドを遺伝子導入したものである。このVLPは、マクロファージからのROSならびに炎症性サイトカインの産生を亢進させ、またマウス肺に投与するとHAおよびNAを発現していないコントロールのVLPに比較して呼吸不全が重症化することがわかった。さらに、(3)では、in vivoマウス経気道インフルエンザ感染モデルの樹立し、感染に伴い生存率の低下、体重減少、ウイルス価の増加、肺病理所見の悪化、呼吸機能の低下、炎症性サイトカイン産生の増加を認めた。このモデルを用いて、(1)で作製したマウスを用いて現在解析を進めている。
統合保育における障害幼児の指導方法に関する研究

本研究の自的は、障害児と健常児が一緒に保育を受ける統合保育場面で、障害児の発達にふさわしい保育支援のあり方を実践的に検討することにある。今年度は以下の3点について研究を行った。1.気になる子どもの保育場面に即した実態把握方法の検討忙しくまた障害について専門ではない保育者が、担任する子どもの発達や社会性について、特に保育に必要な情報として簡便にかつ的確に把握できる、5歳児用の評定チェックリストを作成した。単に気になる子どもの同定だけでなく、それがLD、PDD、ADHDのいずれに該当するのかまでを見越した項目を作成した。約100項目からなる予備チェックリストを作成し、上記3障害の特徴を把握するのに有用な項目であることが、予備調査の結果から示唆された。2.幼稚園における特別支援教育体制のあり方に関する検討統合保育を実施する保育所や幼稚園において、障害幼児の個別の指導計画の内容や形式、保育計画の立案の方法、特別支援教育コーディネーターの職務、園内委員会の運営の仕方といった特別支援教育体制のあり方について、県内の幼稚園ならびに保育園において、昨年度に引き続き継続的に実践的に検討を行い一定の成果を得た。今後は幼児期と学齢期との連携移行のあり方が課題である。3.発達障害の診断名の有無や、診断名の違いが、保育者の子ども理解や支援に及ぼす影響の検討幼児期は、発達障害の診断の確定が困難であると同時に、一方で同じクラスの中にさまざまな障害のある子どもが一緒に保育を受けていることも少なくない。そこで、保育者に対して質問紙調査を行い、診断名の有無や診断名の違いが保育者の支援行動に及ぼす影響について検討した。その結果、発達障害の診断名の有無によって、支援方法に差がみられたことから、保育者の適切な障害理解啓発と、早期発見と適切な対応の重要性が示唆された。本研究の目的は、障害児と健常児が一緒に保育を受ける統合保育場面で、障害児の発達にふさわしい保育的支援のあり方を実践的に検討することにある。特に担当保育者や職員全体の研修やカンファレンスのあり方(保育者支援・環境支援)、そして障害のある子どもの支援ならびにクラスメートへの障害理解のあり方(本人支援・クラス支援)、という視点から2年計画で行うものである。今年度は、統合保育現場において、1.障害のある子どもの保育アセスメントの作成、2.個別の保育計画の作成、3.発達や社会性を促進する遊びを基盤とした保育プログラムとその実践について、実際に保育園においてダウン症の子どもを対象に検討を行った。以下に各概要と成果を示す。1.障害のある子どもの保育アセスメントの検討忙しくまた障害について専門ではない保育者が、担任する子どもの発達や社会性について、特に保育に必要な情報として簡便にかつ的確に把握できる記入フォームを、保育者の意見などを踏まえて開発した。2.個別の保育計画作成に関する検討統合保育を実施する保育所や幼稚園では、障害幼児の個別の保育計画は、どのような内容や形式のものが有効か、また保育計画の立案はどのように行えばよいか、ということについて、保育園における一年間の障害児の保育に関するカンファレンスを企画・主催する中で検討した。3.障害児の発達や社会性を促進する遊びを基盤とした保育プログラムの検討ダウン症ならびに自閉的傾向児を対象に、遊びを基盤とした保育プログラムを作成し、クラスメートとのかかわりや相互作用を促進するとともに、対象児の社会性や発達の変容について検討した。なお、本研究では、その理論的検討のために、統合保育実践で先進的な取り組みをしている、ニュージーランド保育学会への参加ならびにアメリカ合衆国の統合保育実施プリスクールへの視察を行い、実践的検討に際しての大きな示唆を得た。