hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
家庭内行動情報データベースのための並列分散ネットワークセンシングシステム

そのため,従来文書情報を想定してデザインされたリモートメソッドコール用プロトコルを低レベル部からセンサ情報通信処理に合うように分散ネット管理システム開発環境で再設計し,各コントローラで実装した.また,常時365日計測蓄積できるようになる人間の運動・動作情報につき,生理的情報や行為情報との対応関係を行動情報分析処理装置で解析することにより,人の癖や行動の予兆検知をできるようにした.抽出アルゴリズム構築として,蓄積情報の高速検索装置とその情報提示機能,時系列要約提示機能などを作成した.
頭部外傷による呼吸及び循環中枢の神経細胞障害の解析及び法医病理学的診断への応用

この研究では、カルパイン及びカスパーゼ-3により分解された各種スペクトリン分解産物に対する抗体、他の細胞骨格蛋白質及びグリア細胞のマーカーに対する抗体を用いて、免疫組織化学的染色及び蛍光抗体法により脳幹部における神経細胞障害を解析した。この研究より、スペクトリン分解産物陽性像は神経細胞に特異的であることが明らかとなった。さらに、HE染色やKB染色で形態学的変化が出現しない神経細胞においてもスペクトリン分解産物の免疫染色陽性像が観察された。したがって、この研究の成果は、法医剖検例における頭部外傷の病態を評価する上で重要な情報を与えるものと考える。この研究では、1)calpain及びcaspase-3による各種αIIーspectrinの分解産物(SBDP)に対する抗体を作製し、2)上記抗体に加え、他の細胞骨格蛋白質及びグリア細胞のマーカーに対する抗体を用いて、免疫組織化学的染色、免疫蛍光抗体法により、脳幹部(呼吸・循環中枢)を観察する。以上の研究より得られたデータより、頭部外傷における脳幹部の神経細胞障害に関与するメカニズムを解析する。さらに頭部外傷例における呼吸・循環中枢障害の法医病理学的診断への有用性について検討することを目的としている。昨年度に作製したSBDP120、SBPD145に対するポリクローナル抗体を用いて、法医剖検例の脳組織を蛍光抗体法により染色したところ、陽性像が認められた。さらに、neuron-specific enolase (NSE:神経細胞のマーカー)やさらにアストロサイトのマーカーであるGFAP及びミクログリアのマーカーであるhGLUTとともに二重染色したところ、神経細胞における局在を確認した。したがって、免疫組織化学的なSBDP染色は、神経細胞障害の同定に有用であると考える。SBDP145及びSBPD150iのN末端部領域の5個のアミノ酸(SBDP145:NH2-SAHEV、SBDP150i:NH2-SKTES)からなるペプチドを合成し、それらのポリクロナール抗体の作製した。Caspaseによる分解産物であるSBDP120及びcalpain-3による分解産物であるSBPD145のN末端部領域の5個のアミノ酸(SBDP120:NH2-SVEAL、SBDP145:NH2-SAHEV)からなるペプチドを合成し、C末端にシステインを介した上で、Keyhole Limpet Hemocyanin(KLH)を結合させ、それぞれを2匹のウサギに免疫して、3ヶ月後に血清を採取して、抗原カラムクロマトグラフィーによる精製を行った。これらの抗体について、高濃度の覚醒剤投与したラットの脳について、線条体を摘出し、タンパク質抽出を行った。タンパク質を電気泳動後に、ウェスタンブロット法により、抗体との反応を検討した。その結果、SBDP120に対する抗体では120kDのバンド、SBPD145に対する抗体では、150kDのバンドと特異的な反応を認めた。したがって、calpain及びcaspase-3による神経細胞障害を識別することができるポリクロナール抗体の作製が確認された。この研究では、異なる神経細胞障害の経路を識別できることが注目されている細胞骨格蛋白質であるαIIーspectrinの分解産物(SBDP)について、以下の点について検討を行ってきた。1)SBDPの細胞障害のマーカーとしての評価を行う。2)頭部外傷例の脳幹部における呼吸及び循環中枢のSBDPの出現パターンを解析する。3) 2)の所見と、その他の細胞骨格蛋白質の障害及びグリア細胞の反応とを検討する。以上の研究により、頭部外傷による脳幹部の神経細胞障害の病態の解析を行い、頭部外傷における呼吸及び循環中枢障害の法医病理学的診断を目指すものである。これまでに作製したcalpainにより120kDのスペクトリン分解産物(spectrin breakdown products 120; SBDP120)と150kDの分解産物(SBDP150)が生成され、caspase-3では145kD及び150kDの分解産物(SBDP145、SBDP150i)に対する抗体、さらに神経細胞及びグリア細胞に特異的な抗体を用いて、ホルマリン固定された脳幹部(呼吸及び循環中枢を含んだ延髄など)、さらに脳挫傷、壊死部及び出血部を切り出し、免疫組織化学的染色を行ったところ、脳幹部の神経核においてSBDPが検出され、局在の大部分は神経細胞であり、グリア細胞の一部にも染色像が認められた。

また、SBDP陽性である神経細胞では、HE染色やKB染色において明らかな形態学的変化を示さなかったものも存在した。したがって、免疫組織化学的染色によりSBDPを検出することは、早期の神経細胞障害の検出に有用であることを示唆すると考える。法医学頭部外傷等の法医剖検例について、作製したポリクローナル抗体を用いた蛍光抗体法により、calpain及びcaspase-3による各種αIIーspectrinの分解産物(SBDP120、SBPD145)が染色されることにより、神経細胞障害の指標として有用であることを確認した。頭部外傷のマーカーとなり得る、calpain及びcaspase-3による各種αIIーspectrinの分解産物(SBDP120、SBDP145)に対する抗体を作製することができた。頭部外傷等の症例の脳組織について、SBDP120、SBPD145に加えて、SBDP145及びSBPD150iの免疫組織化学的染色染色を行い、画像解析を行う。そのデータを、神経細胞の形態学的変化(虚血性変化)や、MAP2などの神経骨格細胞障害とを比較することにより、早期の神経細胞障害の評価の可能性について検討する。αIIーspectrinの分解産物(SBDP120、SBDP145)に対する抗体を用いて、頭部外傷例の剖検脳について免疫組織学的染色を行い、有用性を検討する。また、calpain及びcaspase-3によるその他のαIIーspectrinの分解産物であるSBDP150N、SBDP150iについて、それぞれのN末端部領域の5個のアミノ酸を合成して、これらをウサギに免疫してポリクローナル抗体を作製する。該当なし
犯罪人引渡法の変容と展開-国際テロ、組織犯罪との関連において

本研究は、組織犯罪の蔓延及びテロとの戦いの時代において国際法上の犯罪人引渡制度がどのように変容し発展してきたか分析し、それに起因する問題点を抽出し考察することを目的としている。具体的には、例えばEUが採択したヨーロッパ逮捕状枠組決定を基礎として発展してきたが、実際の運用においては引渡しに伴う人権の確保という点では多くの課題が残されていることについてもあわせて考察する。また、米国がテロリスト容疑者の移送に際して用いてきた「特別移送」制度も国際人権基準に反する側面が多々あることも指摘される。さらに、わが国の犯罪人引渡法が必ずしも時代の要請に適合していないこともあわせて検討し、近年発展してきた国際社会の人道的な基準に対応するよう修正する必要があることを提案する。本年度は、主として予備的調査の延長線上において、EUにおける共通逮捕状制度に関する問題点を検討した。欧州共通逮捕状の有効性に関するEU裁判所の判例の検討を行ってきた。EU裁判所の判例では、共通逮捕状と人権との関係については、矛盾、抵触がないとの態度が維持されている。2010年2月末から3月にかけて、別の科研費共同研究グループの一員としてヨーロッパ諸国に調査研究に当たってきた際には、ハンガリー、チェコ、オーストリアの憲法裁判所を訪れ、EU共通逮捕状制度の運用に関する質疑も行ってきた。それらを通じて、EU共通逮捕状枠組み決定は、さまざまな点、特に自国の国内法の人権規定との関連において各国の裁量的運用が行われており、必ずしも統一的な運用は行われていないのではないという印象を強くもった。例えば、ドイツやポーランドでは自国民不引渡原則により引渡請求を拒否する対応がなされているが、他の国でも、一事不再理(2重の危険)の原則、双方可罰性の原理などにより不引渡とされることが見られることが分かった。詳細について、今後の研究を進展していく上での重要な視点になるかと思われる。ヨーロッパ人権条約と犯罪人引渡との関連においても引き続き判例の検討を行ってきたが、2009年度中に新たな研究成果の公表には至っていない。国際犯罪としての強制失踪に関する研究においては、強制失踪条約の意義を検討する中においで、強制失踪が国際法上の犯罪として引渡の対象とされるべきことが明記されている。条約であるから批准しない限り、厳密には法的拘束力を欠くが、北朝鮮による拉致事件に関して、我が国が、北朝鮮当局に対して容疑者の引渡を求めるための重要な根拠となりうると思われる。2010年9月には、世界人権問題研究センターの研究会において「欧州逮捕状と双罰性(double criminality)の原則」と題して研究報告を行った。従来の国際法上の犯罪人引渡条約では、双罰主義が原則として踏襲されてきたが、最近の欧州諸国間の欧州逮捕状枠組み決定では、テロ犯罪を中心とする32の犯罪類型については双罰主義を脱却する措置がとられている。しかし、双罰主義は罪刑法定主義の要請に基づくものであり、人権原則からもその遵守の必要性が指摘されている。このような考慮の下に、各国における欧州逮捕状制度の実際の運用においては、双罰主義への回帰の傾向も見られる。こうした傾向について分析を行い、報告を行った。本報告の内容については、近々に論文としてまとめる予定である。2011年の2月、3月には、中央大学図書館に所蔵していない犯罪人引渡法関係の古典的な図書について国内大学図書館の相互貸借制度を利用して、文献の調査を行った。さらに2011年3月下旬には、英国ロンドン大学高等法学研究所(IALS)において文献・資料の調査を行ってきた。短い滞在期間ではあったが、日本国内では利用できないデータベースも利用して多くの文献、判例等の基調な資料を多く収集することができた。以上により、本研究課題に関する主要な文献を多数収集できたと考える。今後は、これらの文献、資料を精査して、論文等にまとめて公表する作業が控えている1本年度は、「わが国における犯罪人引渡し法の現状と課題」と題する論文をまとめて、発表した。本論文は、グローバル化の進行とともに、国境を超える組織犯罪と国際テロに対抗するために犯罪人引渡制度の円滑かつ迅速な執行への要請が高まるようになるにつれて既存の犯罪人引渡し法の再検討が行われている。それにもかかわらずわが国の逃亡犯罪人引渡し法は昭和20年代に制定されたままの旧態依然たるものであるところから、どのような問題と課題があるかを考察、検討を加えることにより、抜本的な見直しが必要であることを指摘した論文である。2他に、諸外国とくにヨーロッパ諸国間の犯罪人引渡し制度が大きく転換してきたことを実証的かつ総合的に分析する作業を進めているところである。その一環として、今年はEU逮捕状枠組決定の日本語訳を活字化した。

3本年度が本研究の最終年度であるが、研究成果の全体をまとめ上げるまでには至っていない。現在、「EU犯罪人引渡制度の新展開-欧州逮捕状における相互承認と人権原則(仮題)」を執筆中である。本稿では、EU諸国間の犯罪人引渡制度がEU逮捕状制度の採択により抜本的に変化してきたことを論ずるとともに、自国民不引渡原則及び相互承認原則と人権との関連等、運用上の問題点を明らかにしようとするものである。他の依頼原稿などの兼ね合いのために、進行が滞っているが、早急にとりまとめ本年度内には刊行の予定である。4犯罪人引渡し制度に関する研究は、諸外国の現状と比べてわが国では遅れている。この問題に関する新たな学術研究の成果としてとりまとめたいと考えている。
リガンド結合にともなうDNAの変形伝達距離とその塩基配列依存性

DNA分子を通しての変形の伝達距離を測定するために、マイコン制御のインジェクターを装備した吸収分光光度計による滴定実験により、特異的結合部位を2箇所もちしかも結合部位間の距離が異なるDNA、d(A_4GCA_nGCA_4)・d(T_4GCT_nGCT_4)(n=2、6、10、14)へのアクチノマイツンD(AMD)の結合曲線の測定をおこなった。測定を行う過程で以下の問題点が発生したため、装置の改良と新たな測定ソフトの製作を行った。昨年度製作したインジェクターは死体積が大きいために高価なDNA試料がかなり無駄になってしまった。そのままでは条件を変えて多数の実験を行うことが不可能なため、インジェクターの改良を行い、死体積が0.5ml以下になるようにした。また、昨年度製作した滴定実験ソフトでは特定波長での吸収値の変化しか測定することが出来なかったために、AMDの結合状態の測定が不十分であった。そこで、滴定実験にともなう吸収スペクトルの変化を精密に測定するためのソフトを新たに製作した。これらの改良などを行って結合曲線の測定を行ったところ、値が10%程度変動して再現性のよい結果が得られなかった。いろいろと調べた結果、再現性がよくない原因が溶液の計量に使用していたピペッターのポリプロピレン性チップにAMDが不可逆的に吸着されるためであることが判明した。ガラスを使用した場合にはそのような問題がほとんどないことが判ったので、出来るだけガラス性を使用し、やむなくポリプロピレン性のものを使用する場合はあらかじめAMDの溶液で処理してから使用するようにした。この結果12%の精度で再現性の良い結果が得られるようになった。現在、こられの点に注意して再び結合曲線の測定を行い、そのデータを解析中である。当初の研究計画のなかで「特異的結合部位を2箇所もつDNAオリゴマーの調整」,「スキャッチャードプロットから結合部位間の相互作用のエネルギーを導出する方法の確立」に関しては,ほぼ目的が達成された.特に, DNAオリゴマー2重ラセン試料の調整に関しては,従来確認が難しかった試料溶液中の1本鎖ヘアピン構造の混入率をHPLCをもちいて簡便に測定する新しい方法を開発した.また,東京大学大型計算機センターで行ったスキャッチャードプロットの非線型最小2乗法による解析や変形のエネルギー計算の結果を転送して表示するための通信プログラムも新たに開発整備した.「結合度の測定」と,その結果に基づく「変形伝達距離の決定」に関しては,所属が変わり実験が中断したために残念ながら計画はかなり遅れてしまった.しかし,マイクロコンピュータ制御の新しいマイクロインジェクター,新しい分光光度計の開発も完了し,高精度の測定を今後効率よく行うことが出来るようになった.特に,分光光度計に関しては,吸収のシグナルだけでは困難な低濃度での実験も行えるように,蛍光も同時に測定できるかたちのものを製作した.また,温度を変えての測定を行うためのワンボードCPUをもちいた温度プログラマーの製作も行った.X線構造解析によるアクチノマイシンDの3次構造の座標データ, DNAへの結合モデルの座標データは既に発表されている.それらをもとにエネルギー計算をもちいて変形の検討が出来るようにグラフィクスのシステムを新たに開発整備した.今後は,今年度に開発整備したものをもちいて結合度の測定を行い,変形伝達距離の値,塩基配列依存性,結合部位間の相互作用のエンタルピーとエントロピーを決定する.その結果をもとに, DNA分子を通しての変形伝達の機構を考察する予定である.DNA分子を通しての変形の伝達距離を測定するために、マイコン制御のインジェクターを装備した吸収分光光度計による滴定実験により、特異的結合部位を2箇所もちしかも結合部位間の距離が異なるDNA、d(A_4GCA_nGCA_4)・d(T_4GCT_nGCT_4)(n=2、6、10、14)へのアクチノマイツンD(AMD)の結合曲線の測定をおこなった。
低周波複合振動ドリルによる木材および木質材料の穴あけ加工に関する研究

従来の慣用ドリルによる穴あけ加工の性能を改善させる加工法の一つとして振動複合ドリルによる加工が考えられる。本研究では、低周波振動を複合させたドリルによる木材および木質材料の穴あけ加工についての基礎実験を行ない,この時の振動および穴あけの各種加工条件がドリルの切削抵抗に及ぼす影響について検討した。実験装置には,自動ボ-ル盤と電磁式加振機を用い,加工材を工具ドリルの送り方向に対し上下方向に振動させ,これに対し上部より一定の速度で送り込み穴あけを行なう方法である。実験では,2種類の加工材を用い,振動数(f),全振幅(2a),送り速度(V),ドリル回転数(N)を広範囲に変化させて加工実験を行ない,この時の切削抵抗(スラスト,トルク)を測定した。なお,得られた研究成果の概要は,下記のとおり。1)振動穴あけでの切削抵抗は,f変化の場合スラストは,0Hz(無振動穴あけ)から約20Hz位までは振動複合による減少効果が認められるが,それ以上からはやや高い値を示す。トルクは,fの増加とともに減少効果が見られる。2)2a変化でのスラストは,fの低い場合2aの増加につれて減少するが,fの大きい場合約2a=0.4mm位までは減少するがそれ以上からは逆にわずかに増加する傾向を示す。トルクは,2aの増加とともにわずかに減少する。3)V変化では,スラストおよびトルクともVの増加につれて増加するが,無振動のそれよりも常に小さい値を示す。4)N変化では,スラストおよびトルクともNの増加につれて減少するが,無振動のそれよりも小さい。5)各種加工条件下でのドリル先端形状の顕微鏡観察結果では,本実験の範囲内では明らかな差異は認められない。
潰瘍性大腸炎におけるdysplasiaの高感度分子イメージング法の開発

潰瘍性大腸炎を背景に生じてくる大腸癌を標的とした分子イメージング法の開発に取り組んだ。大腸前癌病変であるACFでEGFRなど計8分子で発現が高まっていることが確認された。大腸癌細胞における蛍光強度はEGFR発現と有意に相関がみられた。担癌ヌードマウスを用いてin vivoイメージングを行ったところ、EGFR発現の高い腫瘍では蛍光が明瞭に観察された。アゾキシメタン誘発ラット大腸癌モデルを用いて標識EGFR抗体反応後に蛍光内視鏡検査を行ったところ、強い蛍光を発する病変が確認された。以上より小動物を用い大腸癌のバイオマーカーであるEGFRを標的とした内視鏡分子イメージングは可能であることが示された。本研究では、潰瘍性大腸炎を背景に生じてくる大腸癌をターゲットとした分子イメージング法の開発に取り組んでいる。初年度は計画を若干変更して大腸癌で高頻度に発現するEpidermal Growth Factor Receptor(EGFR)を標的とした分子イメージングに関する基礎的検討を行った。方法:1)ヒト大腸癌細胞におけるEGFR発現数を、モノクローナル抗体を用いたフローサイトーメトリー法により算出した。2)大腸癌細胞に蛍光標識抗体を反応させ、共焦点レーザー顕微鏡下に観察を行い、蛍光強度を定量化した。3)ヒト大腸癌細胞移植ヌードマウスを用いてEGFR発現のin vivoイメージングを小動物用イメージングシステム下に行い、CT像と比較検討した。4)AOM投与8か月後に形成されたラットの大腸癌に細径内視鏡を挿入し、抗EGFR抗体を反応させ管腔側からのin vivoイメージングを行った。結果:1)大腸癌各細胞における細胞膜表面上のEGFR数は蛍光強度と相関を示した。2)腫瘍移植ヌードマウスにおけるEGFRのin vivoイメージングでは蛍光動態が良好に観察された。3)細径内視鏡によりラットの大腸癌に発現しているEGFRに特異的なシグナルが確認された。大腸癌細胞株においてEGFRの発現程度がイメージに反映され、小動物を用いた実験系においてもin vivoでEGFRの発現をイメージングすることが可能であった。初年度は計画を若干変更して大腸がんで高頻度に発現するEpidermal Growth Factor Receptor(EGFR)を標的とした分子イメージングに関する基礎的検討を行った。2年目である今年度は昨年度の実績を受けてさらにin vivoイメージングを目的とした研究を進めた。方法:ヒト大腸癌移植ヌードマウスを用いてEGFR発現のin vivo分子イメージングを行うとともに、5-FU投与前後におけるEGFR発現の変化と治療効果の関連を病理組織との対応で評価した。Azoxymethane(AOM)誘導ラット大腸癌モデルに発現したEGFRを細径蛍光内視鏡下に観察した。結果:EGFR発現の強い細胞株を移植したヌードマウスにおけるEGFRのin vivoイメージングでは48時間後に蛍光のピークを認め、EGFRイメージングは治療後の病理組織所見を反映していた。ラット大腸粘膜に生じた大腸癌において細径内視鏡下にEGFRの発現が確認された。昨年度よりも再現性が強くなり、潰瘍性大腸炎で発現するEGFRの分子イメージングは可能と考えられた。本研究では、潰瘍性大腸炎を背景に生じてくる大腸癌をターゲットとした分子イメージング法の開発に取り組んだ。まず、大腸前癌病変であるAberrant crypt fociをサンプリングし、RNA抽出を行いTaqman-PCRを行ったところ、EGFRをはじめとする合計8分子で発現が高まっていることが確認された。そこで蛍光標識EGFR抗体を用いて大腸癌の各細胞株に対して生細胞での分子イメージングを行った。続いて担癌ヌードマウスを作製し、in vivoイメージングを行ったところ、EGFR発現の高い腫瘍では蛍光が明瞭に観察され、低い腫瘍では観察されなかった。これらの結果をもとにアゾキシメタン誘発ラット大腸癌モデルを用いて内視鏡分子イメージングの可能性を検討した。合計12匹のF344ラットにアゾキシメタン投与を行い、6か月後に腫瘍性病変の発育を確認した。病変を摘出し病理組織学的に検討したところ、high grade dysplasiaの像が確認された。これらの結果をもとに管腔内での評価を目的として小動物用内視鏡に蛍光フィルターを挿入し、分子イメージング内視鏡を作製した。本機器を用いてアゾキシメタン投与ラットモデルに内視鏡検査を全身麻酔下に行ったところ、強い蛍光を発する病変が確認された。同病変を回収し免疫染色に供したところEGFRの発現が確認された。以上より小動物を用い大腸癌のバイオマーカーであるEGFRをターゲットとした内視鏡分子イメージングは可能であることが示された。

徳島大学病院消化器内科などで診療中の潰瘍性大腸炎患者を対象に大腸内視鏡検査中に認められたcolitic cancerあるいはdysplasiaと考えられる病変よりサンプリングを行い、発現タンパクの解析を進めてきたが、潰瘍性大腸炎のdysplasiaにおいて優位に発現している蛋白はこれまでのところ同定できていない。ターゲットとなるペプチドを絞り込むにはさらなるサンプル数が必要であり、計画書に基づいて他施設のサンプル収集を進めているところである。消化器内科学十分なサンプル数が揃った時点でターゲットとなるペプチドの絞り込みに移る。ペプチドの蛍光標識技術、それを用いるin vivoイメージング技術に関してはすでに安定的に確立されており、主たる研究施設である徳島大学消化器内科学と共同研究を進めている同大学薬学部あるいは同大学分子イメージング部門との連携も緊密であることから全体的な計画の推進は予定通りに進むものと期待できる。徳島大学病院消化器内科などで診療中の潰瘍性大腸炎患者を対象に大腸内視鏡検査中に認められたcolitic cancerあるいはdysplasiaを疑う病変よりサンプリングを進めている。複数のヒト大腸癌細胞株を用い、作製した標識抗体を反応させ、徳島大学分子イメージングセンター所有の共焦点レーザー顕微鏡にて生細胞観察を行う実験系、ヌードマウスを用いるin vivo分子イメージングの実験系、ICGラベル化抗体を局所散布ののちに小動物用のイメージング機器であるAVS社製細径内視鏡(マウス用軟性プローブ)にて観察する実験系は技術が安定してきている。蛍光プローブを作成するにあたって,候補ペプチドの絞り込みにやや遅れが生じている。サンプル数をさらに増やして検討を進めることを予定しているが,実験計画の若干の変更に伴い,購入物品の予定が次年度に繰り越しとなるため。また,一部で学会発表計画にも若干の変更が生じるため,旅費の使用に一部変更を加える。症例数が十分数に満たない場合は徳島大学関連病院消化器内科(徳島県立中央病院、徳島市民病院、徳島赤十字病院など)のhigh volume centerに依頼し、倫理委員会の承認を得てデータ収集が可能な環境を整える。蛍光特性の評価、分子イメージングにおける技術的問題は同キャンパス内の薬学部、工学部、分子イメージング部門の研究者に相談し、適切なアドバイスを受ける。主に消耗品が主体となるが,それらを用いて次年度に候補ペプチドを選定し,追加購入予定の実験動物を用いた蛍光プローブ実験を行い研究計画で予定された実験を遂行する。情報収集も兼ねて学会発表を積極的に行い,旅費として使用する。
ビジランス低下抑制効果を指標とした次世代型木材評価法の確立

前年度に引き続き、次世代型木材評価法の確立のためのビジランス(持続的注意力)低下抑制評価試験の改艮を行った。匂い物質提示装置を作成し、遠隔でビジランスプログラムを操作し、実験を遂行した。木材の揮発成分を定性・定量的に分析するために、SPME (Solid Phase Micro Extraction)法ならびに吸着管法を援用し、GC-MS (ガスクロマトグラフ質量分析装置)を検討し、両方法を組み合わせることによって、定性的・定量的な解析法を確立した。さらに、生理的な観点においては、脳波・心電図を計測し、心理学的な方法については、POMSならびに嗜好性評価を行い、網羅的に解析できる手法を確立した。木材に含有されるテルペン等、種々の香り成分について評価した。その結果、ビジランス(持続的注意力)低下抑制効果を有する木材の香りであっても、濃度によって、大きく挙動が異なることが観察された。すなわち、一連の濃度を変化させ、人に提示した実験系においては、ビジランス低下抑制効果を誘導するには、木材の揮発成分の種類も重要であるが、濃度という要因が、人の認知心理学的な持続的注意力を維持するという観点から勘案すると、より影響が大きいことが示唆された。一方で、木材の乾燥過程を変化させることによって、揮発成分濃度が変化することを見出している。すなわち、これら一連の検討結果を勘案すると、木材の種類によって、さらに、木材の乾燥工程の違いによって、人のビジランスは、大きく変化することが示唆され、また、それは、濃度によって制御可能であることが示唆された。このことは、住環境において、木材の種類ならびに調製方法を適切に選択することによって、人の注意力等の快適感・作業効率を制御可能であることを示しており、新たな、木材評価法の一つとしての可能性が示唆された。本プロジェクトの成功の如何は、木材の香りの提示における持続的注意力の低下抑制活性の数値化に掛かっている。平成19年度においては、乾燥木材を提示させた場合の持続的注意力の低下抑制活性に関する実験系の確立に成功した。さらに、GC-MS(ガスクロマトグラフ質量分析装置)を用いた、乾燥木材提示時における濃度の算出にも成功した。基盤実験系の確立を行うために、モデル香り成分として、酢酸リナリルやメントールを用いた。それらの香り物質を、香り提示部屋に、一定流量で、提示し、その際のビジランス(持続的注意力)評価系のプロトコールを確立した。その結果、酢酸リナリルの香りを提示した際に、ビジランス低下抑制活性が観察された。しかしながら、いくつかの香り(ラベンダー精油、ペパーミント精油)においては、持続的注意力の低下抑制効果は観察されなかった。このことは、香りの種類や濃度によって、ビジランスの低下抑制効果が異なることを示すと共に、本実験系で、その差違に対して、高い検出力を有していることが確認された。さらに、同時に、SD(Semantic Differential)法、POMS(Profile of.MoodStates)による心理評価、脳波、心電図、NIRS脳計測装置を用いた生理計測を組み合わせた網羅的評価を可能とした。その過程で、待に、香りの濃度の差違によって、交感神経系優位もしくは副交感系優位挙動が異なることも観察された。加えて、濃度によっては、人それぞれの個人差が、実験データに大きく影響を与えることも見出されてきた。これらのことを勘案すると、テーラーメード型の人の感性に影響を与える木材の調製の可能性を示唆するものであった。次年度は、様々な、木材由来の香りを提示することによって、香りの人の生理・心理に及ぼす影響についてのデータを蓄積し、テーラーメード型木材調製法という新たな概念の確立を目指す。
5α還元酵素阻害剤の副作用による勃起障害と血管障害機構の解明

2005年に男性型脱毛症治療薬のフィナステリド、2009年に前立腺肥大症治療薬のデュタステリドが承認された。これらの薬剤は5α還元酵素を阻害する薬剤であり、これまでの報告によると5α還元酵素阻害剤服用患者で勃起障害(ED)の副作用が見られたことを報告されている。EDと同様の機序で動脈硬化が進行することが知られており、本研究では5α還元酵素阻害剤による心血管機能への副作用を検討した。ラットにデュタステリドを連日投与したところ、4週後および8週後の時点でEDを発症した。一方、大動脈を用いて血管内皮機能を薬理学的に評価したところいずれの期間においてもデュタステリド投与による変化は観察されなかった。5α還元酵素阻害剤(5ARI)は、テストステロン(TEST)をジヒドロテストステロン(DHT)へ変換する酵素を阻害し、男性型脱毛症や前立腺肥大症に臨床使用されている。5ARIはTEST量を低下させず、男性性機能には影響しないと考えられていた。しかし、近年の欧米の性機能学会において高頻度(38%73%)に勃起不全(ED)が報告され、この原因として一酸化窒素(NO)の産生低下が示唆されている。このままNOの産生が低下した状態が続くと、EDのみならず心血管障害などの重大な副作用も引き起こしかねない。そこで、薬理学的、分子生物学的手法により、DHT低下とNO産生、勃起機能および血管系へ与える影響を明らかとし、5ARIによる副作用の予防策を提案することを目的とした。平成25年度計画では、5ARIであるデュタステリドをラットに投与し、5500 micro- g/kg /dayの投与量で420週間の観察期間を設け、ラットの勃起機能および心血管機能への副作用の影響を比較検討する計画を立てた。今回用いるデュタステリドは高額な試薬であるため、デュタステリドの原末提供を製薬メーカーに依頼し、承認・受理後に原末の提供を得て実験を開始した。また本研究を遂行するにあたり、心血管機能を薬理学的に評価するため、微小標本マグヌス実験装置を購入した。薬物投与モデルの実験に先駆けて、Wistar/STラットの大動脈を用いて予備実験を行ったところ、良好な反応を得ることができ、薬物投与モデルの作成を開始するに至った。現在、Wistar/STラットに対して、デュタステリド投与をしており、海綿体内圧測定法を用いたラットの勃起機能評価、ならびに薬理学的手法を用いたラットの陰茎海綿体および大動脈の血管内皮機能評価を行っている。今後、ラットの組織を摘出し、分子生物学的手法によるさらなる検討を行う予定である。そこで、薬理学的、分子生物学的手法により、DHT低下とNO産生、勃起機能および血管系へ与える影響を明らかとし、5ARIによる副作用の予防策を提案することを目的とする。本研究では、5ARIであるデュタステリドを500 ug/kg/dayの用量でWistar/STラットに4週間、8週間、12週間投与した。各観察期間終了後に大動脈を摘出し、微小標本マグヌス実験装置を用い、アセチルコリンに対する反応性を検討し、ラットの血管内皮機能を薬理学的に評価したところ、いずれの期間においても血管内皮機能障害は観察されなかった。また、摘出した大動脈をHE染色、およびマッソントリクローム染色を行い組織学的に検討したところ、5ARIによる組織障害は観察されなかった。一方、ラットの勃起機能を海綿体内圧測定法を用いて検討したところ、投与4週間で勃起機能の低下が観察された。さらに陰茎海綿体を摘出し、リアルタイムPCR法を用いて内皮性一酸化窒素合成酵素(eNOS)mRNAおよび組織障害マーカーであるNADPH oxidase、IL-6 mRNAの発現変動を観察したところ、変化は観察されなかった。以上の結果より、5ARI投与により、心血管疾患発症の副作用発現の可能性は低いと考えられるが、勃起障害は発症することが示唆された。現在、5ARI投与による勃起障害発症メカニズムの解明を行っている。

本研究では5ARIであるデュタステリドを500 ug/kg/dayの用量でWistar/STラットに4週間、8週間、12週間投与した。各観察期間終了後、大動脈を摘出し、微小標本マグヌス実験装置を用いてアセチルコリンに対する反応性を検討し、ラットの血管内皮機能を評価した。すると、いずれの期間においても血管内皮機能障害は観察されなかった。また、摘出した大動脈をHE染色およびマッソントリクローム染色を行い、組織学的に検討したところ、5ARIによる組織障害は観察されなかった。一方、ラットの勃起機能を海綿体内圧測定法を用いて検討したところ、5ARI投与の4週間後および8週間後の時点で勃起機能低下が観察された。摘出した陰茎海綿体組織を用いてリアルタイムPCR法により各種mRNAの発現変動を検討したところ、内皮性一酸化窒素合成酵素(eNOS)や神経性一酸化窒素合成酵素(nNOS)の発現には変化は見られず、これまでの報告とは異なる結果を得た。また、酸化ストレスマーカーのNADPHoxidase-1については有意な発現上昇が観察された。2005年に男性型脱毛症治療薬のフィナステリド、2009年に前立腺肥大症治療薬のデュタステリドが承認された。これらの薬剤は5α還元酵素を阻害する薬剤であり、これまでの報告によると5α還元酵素阻害剤服用患者で勃起障害(ED)の副作用が見られたことを報告されている。EDと同様の機序で動脈硬化が進行することが知られており、本研究では5α還元酵素阻害剤による心血管機能への副作用を検討した。ラットにデュタステリドを連日投与したところ、4週後および8週後の時点でEDを発症した。一方、大動脈を用いて血管内皮機能を薬理学的に評価したところいずれの期間においてもデュタステリド投与による変化は観察されなかった。本研究において5α還元酵素阻害剤(5ARI)が心血管系疾患の副作用を発症させるかどうかを検証し、発症した場合にはそのメカニズムを解明することが本研究の課題であった。今回の結果から、設定した5ARIの最大容量を12週間投与しても心血管疾患の副作用は観察されなかったため、5ARI投与による心血管疾患発症の副作用は低いものと考えられる。そのため、本研究において心血管疾患の検討はいったん終了とする。一方、5ARIを4週間投与しただけでも勃起障害の副作用は観察された。摘出組織を用いて内皮型一酸化窒素合成酵素(eNOS)の検討を行ったところ、これまでの報告とは異なり、変化が見られなかった。そのため、今後は5ARIによる勃起障害発症のメカニズムを解明することとする。以上より、現時点では目標とした結果を得られ、さらに新たな研究課題に取り組むことができており、おおむね順調に進展していると考えられる。臨床薬学5α還元酵素阻害剤(5ARI)を投与したラットの陰茎海綿体組織を用いて、薬理学的、分子生物学的手法により、DHT低下が勃起機能へ与える影響を明らかにし、5ARIが勃起障害を引き起こすメカニズムを解明する予定である。本研究を行うにあたり、今回用いる5α還元酵素阻害剤(5ARI)であるデュタステリドは高額な試薬であるため、デュタステリドの原末提供を製薬メーカーに依頼した。しかし、申請は製薬メーカーのイギリス本社に対して行ったため、申請の過程で受理・承認までに3か月間費やす必要があった。
遷移金属マイクロクラスターの電子状態

本年度の研究において、中性および陽イオンMn_Nクラスター(N=27)の電子状態を計算し、中性クラスターでは非金属的なクラスターになること、陽イオンクラスターではN=5で非金属的なクラスターから金属的なクラスターに変化することを明らかにした。これは他の3d遷移金属クラスターには見られないMnクラスター特有の性質である。1.中性Mn_2クラスターでは、3d軌道は半分、4s軌道は完全に詰まった孤立原子に近い配置(3d^54s^2)の電子配置を示す。また、平衡原子間距離は結晶の130%程度と非常に大きい。2.中性MnNクラスター(N=37)では、最高占有準位付近で3d-4s混成が大きくなるものの全体としてはMn_2と類似の電子状態を示す。また、平衡原子間距離も結晶の120%であり依然として大きい。3.以上の結果から、中性Mnクラスターは“丸い"孤立原子が集まった、非金属的なクラスターであるといえる。4.陽イオンMn_2^+クラスターでは、4sの反結合準位から電子が抜けた分、中性クラスターに比べ原子間距離は縮まり(結晶の120%)、3d-4s混成が大きくなるものの、電子状態の様相はだいたい中性クラスターに似ている。Mn_4^+クラスターまでは同様の結果を示す。5.一方、Mn_5^+以上のクラスターでは様相は一変し、3d準位のエネルギー幅が広がりバンド的になる。また、原子間距離は結晶の90%以下になり、金属的な結合性を示す。6.この非金属-金属遷移はMnクラスターに固有のものであり、魔法数N=5に対応しているものと思われる。
ヒストンH2A脱ユビキチン化酵素よる遺伝子転写制御機構の解明

真核細胞は遺伝情報を安定に保ち、正確に発現し、細胞分化を維持するため、多彩な機構を働かせている。H2Aの118番目のリジン残基はユビキチン化されることが30年前に明らかにされている。われわれは今回の研究により、このH2A118Kのユビキチン化がH3K4のメチル化とクロストークすることにより遺伝子転写開始を調節していることを明らかにした真核細胞は遺伝情報を安定に保ち、正確に発現し、細胞分化を維持するため、多彩な機構を働かせている。われわれは今回の研究により、このH2A118Kのユビキチン化がH3K4のメチル化とクロストークすることにより遺伝子転写開始を調節していることを明らかにした真核細胞のゲノムはクロマチンと呼ばれるDNA高次構造により核内に収納されている。クロマチン構造の最小単位はヌクレオソーム構造で、ヌクレオソームはゲノムにおける様々な生物学的現象に伴い、ダイナミックに変化する。平成19年度は、遺伝子転写や分化の調節機構におけるクロマチン構造の役割の一端を解明した。最近注目されているクロマチン中のヒストン翻訳後修飾としてユビキチン化ヒストンH2Aがある。このヒストンH2Aユビキチン化は31年前ラットの肝切除後に発見された最初のユビキチン化蛋白である。H2Aユビキチン化部位はC末端の119番目のリジン残基で、NHK-1によるリン酸化部位に隣接し、生物種間で保存されている部位である(Genes Dev 18:877-888,2004)。我々はこのヒストンH2Aユビキチン化部位の変化をマウス肝臓切除後の残存肝を用いて調べた。このユビキチン化は肝切除後劇的に変化する。平成19年度はユピキチン化の変化に関与する酵素USP21を同定し、その役割を明らかにした(GenesDev.22:37-49,2008)。真核細胞のゲノムはクロマチンと呼ばれるDNA高次構造により核内に収納されている。平成20年度は、遺伝子転写や分化の調節機構におけるクロマチン構造の役割の一端を解明した。H2Aユビキチン化部位はC末端の119番目のリジン残基で、NHK-1によるリン酸化部位に隣接し、生物種間で保存されている部位である。平成20年度はユビキチン化の変化に関与する酵素USP21を同定し、その役割を明らかにした。新奇リン酸化酵素及び脱ユビキチン化酵素USP21の基質の発見とその機能解析は試験管内の再構築系を駆使したものであり、その手法、成果とも学問的にインパクトが大きい。
フラストレーションが内在する磁性体における磁化過程の磁場掃引速度依存性

交感相互作用競合系である混晶Fe_xMn_<1-x>TiO_3は典型的なスピングラスの振舞いを示す。リエントラントスピングラスの振舞いを示すx=0.65の試料の磁化過程に現れるメタ磁性転移が、4.2Kにおいて、定常磁場を用いて1.7x10^<-3>T/秒でゆっくりと磁場を掃引した場合は非常に鈍って観測され、一方、パルス磁場を用いて揮2x10^3T/秒で速く掃引した場合には比較的シャープに観測された。通常の系では、磁場掃引速度が速いほど系の磁場に対する応答が遅れるために転移が鈍る。従って、x=0.65の試料で観測された振舞いは、通常の系の振舞いとは逆のものである。ただし、10^3T/秒の磁場掃引速度領域では、通常の系と同じように、磁場掃引速度が速いほど転移が鈍る様子が観測された。この原因についてはまだ明かとなっていないので、今後、さらに研究を進める予定である。さらに、定常磁場においてx=0.65の試料の7Tまでの磁化過程の温度依存性を測定したところ、温度の低下と共に、メタ磁性転移の際に生じるヒステリシスが大きくなる現象が観測された。しかし、1.5Kまで温度を下げると、ブロードなメタ磁性転移が一次転移的なメタ磁性転移へと変化した。磁場掃引速度や測定温度を同一にした場合でも、この一次転移的なメタ磁性転移は2.5T以上6.5T以下の様々な磁場で観測された。この原因は、スピングラスの特徴である系の自由エネルギーの多谷構造を反映した現象であると思われる。現在、その詳細について研究を続けている。
英国18-19世紀予約購読出版と文芸サークルが女性詩人支援に果たした役割

本研究は、18-19世紀英国ロマン主義時代の女性詩人を支援した読者層の知られざる人脈の実態を、詩集の予約購読者一覧表の精緻な分析によって、具体的に明らかにした。詩人の地元から遠隔地へ拡大する予約購読者のネットワークが、作品を世に広く知らしめる原動力となっていた状況を、個々の事例の精査から示すことができた。つまり同時代の熱心な読者が文芸嗜好を創出していく背景の一端を解明することになったのである。計画は2部からなる。最初の2年は、予約購読出版に関わったスコットランド女性詩人、出版者、そして文芸サークルに関連する資料の収集と精査であり、具体的には、詩人ジョアンナ・ベイリー、アン・グラント等の作品研究とその文芸サークルの読者層研究である。次の2年は、ロンドンにおける女性詩人について同様の研究を行なうもので、具体的にはヘレン・マライア・ウイリアムズとシャーロット・スミスを対象とする。なお3年度目には、最初の2年間で必要であることが判明した海外でのみ閲覧できる資料で研究をするためにオックスフォード大学ボドリアン図書館等を利用することにした。研究成果は学会で発表し、意見交換も行なった上で、論文としても公表する。本年度は研究開始の段階であるので、今後の研究に必要な予約購読出版に関わったスコットランド女性詩人、出版者、そして文芸サークルに関する基本文献の調査・収集を、年間を通じて実施し、あわせて若手研究(B)からの発展的な研究として、スコットランドの女性劇作家・詩人ジョアンナ・ベイリーとその読者層についての研究を深めた。まず資料収集については、知己を得たスコットランド哲学思想研究者の助言のおかげで、信頼しうるスコットランド人研究者による文献を多数入手でき、本研究に有意義な箇所を求めて研究した。また海外における最新の研究資料を求めたため、いまだに数点が昨年度刊行されなかったために未入手である。20年度には入手できるので入手しだい研究する。次にジョアンナ・ベイリーの作品と文芸サークルの研究については、10月から2月にかけて、上記の新たに入手した資料を参照しながら読者層データの整理を行なって、研究を深めた。そして最終的には、2006年度に他の研究者に呼びかけて実施した学会シンポジアム(於鳥取大学、イギリス・ロマン派学会全国大会)ので発表原稿を、大幅に加筆修正して、2008年4月に『読者の台頭と文学者』(世界思想社刊)として、発表することができた。本年度研究計画に挙げていた学会発表を実現することはできなかったが、この著書がその代替となるものと考える。本年度は、19世紀初頭のスコットランド女性詩人アン・ハンター、アン・グラント、ジャネット・リトルらと、彼女たちを支援した読者層を明らかにする研究を計画に沿って行なった。上述の3人は、現在の文学研究においてあまり重要視されていない詩人であるため、入手・閲覧できる研究資料もたいへん少ない。そこで、詩人個人だけでなく、彼女の支援者となったスコットランド読者層に関連する資料もあわせて収集・研究することにした。そのため4月から7月にかけては、おもに資料の検索と収集に専念し、研究の基盤となる文献の多くが揃った。8月から10月までの夏期休暇には、収集した資料と作品研究を行なうことになった。この研究調査によって、特にグラントが文学的にも人脈的にも前年度のベイリーと関わりが大きいことが判明したので、11月から12月にかけてはグラントの予約購読者一覧に記録されている人物を特定する調査を実施した。その結果、前年度のベイリーだけでなく、詩人ロバート・バーンズや作家ウォルター・スコットにまで広がる文芸サークルが宝、具体的に明らかでき、さらにはグラントの詩集の編集者で民謡集の出版者であったジョージ・トムソンが、広大な人脈の要と言えることが判明したので、彼についての研究を1月から2月にかけて実施し、次年度も継続することにした。3月には本年度の研究成果を、欧米言語文化学会(於日本大学文理学部)で、「詩人アン・グラントと19世紀初頭スコットランドの文芸サークル」と題して発表した。発表では3人の詩人の中でも特にグラントに焦点をおいて、無名の彼女を一躍有名にした予約購読者の意義を、編集者トムソンの思惑とスコットランド民族主義との関わり等を交えて明らかにした。この発表は来年度に論文化する。昨年度のスコットランド女性詩人と読者層研究の成果を踏まえ、本年度は民謡集という媒体が啓蒙主義と民族主義の主張に果たした役割をも考察する学際性の高い研究となった。政治的・民族主義的思想を含んだ詩を、多くの人々、すなわち読者あるいは聴衆に、伝播させた具体的な方法とその成果についての研究である。詩人の周辺の文芸サークルや詩人の支持者も、その思想の発信に関わっていたことが明らかになった。具体的な成果は以下のとおりである。(1)計画どおり、海外の図書館・資料館で資料収集を行なった結果、民謡集編集者トムソンの業績と、イギリスにおけるハイドン周辺について豊富な資料を収集することができた。また前年度までに必要であることがわかった資料の収集も合わせてできた。

(2)(1)の情報に精通しているグラスゴウ大学の研究者カースティン・マッキュー氏の知己を得たので、今後の研究での支援が期待できる。(3)前年度に研究したグラント等の研究の補完を行ない、その成果を、イギリス・ロマン派学会全国大会(於明星大学日野キャンパス、10月4日)で「Mrs.Grant of Lagganの"Killiecrankie"の政治性と読者網の国際性」という題目で発表した。発表後にいくつか再検討すべき問題が明らかになったため、論文化は次年度に行なうことにした。(4)11月以降は、ロンドンの文芸サークルと女性詩人の研究を行なうために、ヘレン・マライア・ウィリアムズやシャーロット・スミス等の関連資料の収集と精査を行なった。これは次年度にむけての基盤的な研究であり、その成果は22年度に学会で発表する計画である。研究計画の最終年度であったので、昨年度までの研究の補完と総括を行なうと同時に、その成果を3つの学会で発表した。具体的には下記のとおりである。(1)詩人シャーロット・スミスとヘレン・マライア・ウィリアムズの予約購読一覧から、ロンドンの文芸サークルとそのネットワークの研究の補完を行なった。その成果は、まず「18世紀末女性詩人とその支援者-C.SmithとH.M.Williamsの事例を並列して」(第36回イギリス・ロマン派学会全国大会,2010年10月,於大阪大学)となり、スミスとウィリアムズの共通の支援者を明らかにして、同時代ロンドンの文芸支援者とそのネットワークに新たな光を当てることができた。この成果の一部を発展させたものが、筆者が企画したシンポジウム「拡大する読者ネットワーク:文学嗜好の共有が作り出す19世紀文芸思潮」(司会者兼発題者,第2回欧米言語文化学会全国大会,2010年12月,於日本大学)である。他の2名の発題者に19世紀初頭英国と19世紀後期アメリカの文壇と読者層について論じてもらい、筆者は「予約購読者一覧にみる読者・支援者網の拡大:Helen Maria Williamsの『詩集』(1786年)の事例研究」で18世紀末の状況を論じ、18世紀末から19世紀の英語圏で拡大していく文芸支援者の歴史的潮流を具体化できた。(2)スコットランドの文芸支援者とそのネットワークについての研究を、特に詩人ジャネット・リトルを中心に行ない、その成果を「スコットランド女性詩人とその支援者:ジャネット・リトルの事例」(日本カレドニア学会2010年度大会,2010年9月,於拓殖大学)として発表した。この研究を通して、ロバート・バーンズとその周辺人物との関係だけでなく、上記ロンドンの文芸支援者層との密接な関係を明らかにできた。研究成果の論文化は23年度中に実施する。
卵巣癌が産出する血小板由来増殖因子を介した癌細胞-間質細胞間相互作用に関する研究

1、sis癌遺伝子産物である血小板由来増殖因子(PDGF)が卵巣癌で高頻度に産生され、その産生能が悪性度と相関するかについて検討するために、卵巣腫瘍検体30例の内容液中PDGF濃度をELISA法により測定した。良性例19例のうち18例で、PDGFは検出濃度以下であったのに対し、境界悪性腫瘍7例では5例に低濃度のPDGFが検出された。悪性腫瘍症例14例では検出可能例がほとんどで、その濃度も高くなる傾向が認められた。2、アクチン結合細胞骨格関連蛋白であるカルポニンが卵巣癌由来のPDGFを含む液性因子に反応し、発現低下するかに関しての検討をNorthern blot解析により行ない、卵巣癌の培養上清が濃度依存性に線維芽細胞ないしは腹膜中皮細胞における発現を低下させることを確認した。ヒトリコンビナントPDGFも用量依存的にカルポニンの発現を減弱させた。3、腫瘍間質細胞におけるカルポニン発現低下が、宿主側のバリアーとしての働きの低下を介して主要浸潤の亢進に関与するか否かの検討では本研究では未だ検討中であるが、共同研究者である信州大学加齢研の谷口俊一郎博士らがカルポニン遺伝子をノックアウトしたマウスでは卵巣癌の腹膜播種が高度に生じることを確認し、中皮細胞におけるカルポニン発現の低下が癌細胞の進展に関わることを証明した。以上の知見は、卵巣癌が宿主間質細胞へのcell-cellinteractionを介してその生体バリアとしての機能を障害することにより、自己の浸潤・転移に有利な環境を生み出している可能性を示唆しており、今後新たな転移(特に癌性腹膜炎)に対する治療法の開発へと展開してくと思われる。以上の結果は平成12年4月の第52回日本産婦人科学会総会において発表予定で、現在、論文投稿に向け執筆中である。我々がすでに報告したヒト卵巣癌細胞が産出する血小板由来増殖因子(PDGF)が線維芽細胞や血管壁周細胞などの間質細胞における平滑筋型αアクチン(α-smooth muscle actin:α-SMA)の発現低下を引き起こすという現象に基づき、本年度進めてきた研究により以下の2点が明らかとなった。1)卵巣腫瘍内溶液を用いたELISAによりPDGFは良性卵巣腫瘍に比し卵巣癌で高頻度に産生されていることがわかった。産生能はと卵巣癌の組織型との間に有意の相関はなかった。2) α-SMA以外に発現低下が生じる細胞骨格関連蛋白としてアクチン結合蛋白であるカルポニンに着目した。これは分化型平滑筋に特異的に発現し平滑筋の表現型変換の優れたマーカーと考えられているが、3Y1線維芽細胞や血管PericyteはPDGFに反応し、カルポニンの発現が減弱した(Northern blot analysisによる解析)。以上の結果に基づき、以下の2点を明らかにすることを本年度の目的とする。1)腫瘍間質細胞におけるα-SMAやカルポニンを始めとする細胞骨格蛋白の発現低下は、腫瘍浸潤の亢進に関与していないか?具体的には、間質線維芽細胞や血管壁周細胞での発現低下は癌細胞に対する宿主側のバリアーとしてのそれぞれの働きを低下させ、腫瘍細胞が間質や脈管内に浸潤し易い状況を作り出してはいないか?2)卵巣癌が産生するPDGFは間質細胞に細胞骨格蛋白発現低下以外の変化も引き起こし、癌の浸潤性発育に有利な状況を作り出してはいないか?具体的には、PDGFは線維芽細胞に対する肝細胞増殖因子(Hepatocyte Growth Factor:HGF)の産生刺激物質(HGF-inducer)であるが、HGFは別名Scattering Factorと呼ばれる浸潤促進物質である。

我々はすでにヒト卵巣癌細胞株の多くがHGFのレセプター(c-met蛋白)を発現していることを確認し、実際in vitro invasion assayでHGFが高頻度に卵巣癌細胞の浸潤能を亢進させたことを報告した。そこで今回検証すべき疑問として、卵巣癌よりのPDGF産生→間質線維芽細胞のHGF産生→卵巣癌でのHGFレセプターを介したシグナル伝達→卵巣癌細胞の浸潤亢進というクローズド・ループ機構が存在しないか?以上の疑問点を解明する過程を通じて、卵巣癌と宿主間質とのcell-cell interactionを記述するのが本研究の最終目標である。1、sis癌遺伝子産物である血小板由来増殖因子(PDGF)が卵巣癌で高頻度に産生され、その産生能が悪性度と相関するかについて検討するために、卵巣腫瘍検体30例の内容液中PDGF濃度をELISA法により測定した。良性例19例のうち18例で、PDGFは検出濃度以下であったのに対し、境界悪性腫瘍7例では5例に低濃度のPDGFが検出された。悪性腫瘍症例14例では検出可能例がほとんどで、その濃度も高くなる傾向が認められた。2、アクチン結合細胞骨格関連蛋白であるカルポニンが卵巣癌由来のPDGFを含む液性因子に反応し、発現低下するかに関しての検討をNorthern blot解析により行ない、卵巣癌の培養上清が濃度依存性に線維芽細胞ないしは腹膜中皮細胞における発現を低下させることを確認した。ヒトリコンビナントPDGFも用量依存的にカルポニンの発現を減弱させた。3、腫瘍間質細胞におけるカルポニンの発現低下が、宿主側のバリアーとしての働きの低下を介して腫瘍浸潤の亢進に関与するか否かの検討では本研究では未だ検討中であるが、共同研究者である信州大学加齢研の谷口俊一郎博士らがカルポニン遺伝子をノックアウトしたマウスでは卵巣癌の腹膜播種が高度に生じることを確認し、中皮細胞におけるカルポニン発現の低下が癌細胞の進展に関わることを証明した。以上の知見は、卵巣癌が宿主間質細胞へのcell-cell interactionを介してその生体バリアとしての機能を障害することにより、自己の浸潤・転移に有利な環境を生み出している可能性を示唆しており、今後新たな転移(特に癌性腹膜炎)に対する治療法の開発へと展開していくと思われる。以上の結果は平成12年4月の第52回日本産婦人科学会総会において発表予定で、現在、論文投稿に向け執筆中である。