hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
タンパク質凝集初期過程解析のための蛍光偏光相関分光装置の開発

本研究では、生細胞内におけるタンパク質凝集体形成の初期過程における体積変化を偏光蛍光相関分光法(Pol-FCS)によって実現することを目指した。平成28年度では、Pol-FCSの時間分解能と検出感度の両方を向上させ、GFP多量体の生細胞内測定に成功した。平成29年度では、蛍光タンパク質で標識した凝集性タンパク質の測定を細胞内で行う系の確立と実証を行った。試料として黄色蛍光タンパク質(Venus)で標識したTDP43タンパク質をマウス神経芽細胞腫細胞に発現させる系を確立した。また、TDP43の生細胞中における凝集過程を解析するためには細胞を生かしたまま継時的にpol-FCS計測するため、可能な限り短時間かつ弱い励起光で測定を行うための条件決定を行った。当該年度(平成30年度)では、確立した測定条件において、生細胞中のTDP43タンパク質のPol-FCS測定を行った。しかし、生細胞中の凝集体形成は個体差が非常に大きく、比較検討を行うことが困難であった。このことから、次に凝集体形成時の形状変化を模擬するため、Venusを2分子含みカルシウムイオンに応答して変形する蛍光タンパク質を12種類作成し、このタンパク質を生成した溶液に対してPol-FCS計測を行った。カルシウムイオン添加によってコンパクトな形状をとることで、回転拡散の緩和時間が短くなり、Pol-FCS計測における回転拡散成分の振幅が変化することが明らかになった。さらにこの振幅は2つのVenus分子の配向性によって変化し、凝集性タンパク質の凝集初期過程において、その大きさに加えて配向性をも定量評価する可能性を示すことができた。タンパク質の凝集体・封入体形成はアルツハイマー等の発症と関わりがあるとしられており、凝集過程を定量評価可能とするこの研究は、これらの病気のメカニズム解明に大きく寄与できると考えられる。本研究は、生細胞内におけるタンパク質凝集体形成の初期過程における体積変化を蛍光偏光相関分光法(Pol-FCS)によって実現することを目指す物である。しかしながら研究代表者らが構築済みであったPol-FCS装置は、蛍光タンパク質の回転拡散係数測定のためには時間分解能が不足していた。また、生細胞内計測の実現のためには、測定感度を向上させることで細胞に照射する励起光を可能な限り抑え、光毒性を低減する必要があった。そこで当該年度(平成28年度)では、まずそれまで構築済みであったPol-FCSの時間分解能の向上と、光学系の高効率・高感度化を目指した。Pol-FCSの時間分解能は、それまで用いていたハードウェア相関器を高速な物に変更することで、1.56ナノ秒まで向上させた。また、蛍光フィルタの最適化と消光比の高い偏光子の導入によって検出感度を向上させることに成功した。次に、溶液試料によるPol-FCS計測の実証実験を行った。高時間分解能化によって、従来の装置で測定可能であった量子ロッドに加え、生物学実験で頻繁に用いられる緑色蛍光タンパク質(GFP)の回転拡散計測が可能になった。GFP標識した全てのタンパク質の回転拡散は、GFP単体よりも遅いため、この結果はPol-FCSによってGFP標識した全てのタンパク質を計測可能であることを示す重要な物である。また、タンデムリピートGFP(単量体5量体)の溶液計測に成功したことから、徐々に成長して大きくなる凝集体形成初期過程の解析が十分に可能であることを実証できた。さらに次年度に予定していたPol-FCSによる生細胞内におけるGFPの回転拡散計測前倒しで世界で初めて実現し、上記タンデムリピートGFPの結果と併せて成果を論文誌に発表した。当該年度(平成28年度)では、1Pol-FCS装置の改良および2溶液試料によるpol-FCS計測の実証を計画していた。1Pol-FCS装置の改良では、それまで用いていたハードウェア相関器ALV-5000/FAST(ALV GmbH, Germany)をFlex02-01D(Correlator.com, USA)に変更し、時間分解能を従来の12.5ナノ秒から1.56ナノ秒に向上させた。蛍光をファイバ光学系によって2分岐させ光学系を簡略化することも試みたが、測定信号に不要なノイズ成分が現れたため、この案は不採用とした。このことは測定分解能や精度に影響を与える物では無いため、問題はない。2溶液試料によるPol-FCS計測の実証では、従来の装置で測定可能であった量子ロッドに加え、生物学実験で頻繁に用いられる緑色蛍光タンパク質(GFP)の回転拡散計測が可能であることを実証した。また、タンデムリピートGFP(単量体5量体)の溶液計測に成功し、徐々に大きくなる凝集体形成初期過程の解析が可能であることを実証できた。また、測定結果とシミュレーションの比較検討により、Pol-FCS測定によって単純に凝集体サイズの成長だけではなく凝集体を構成する分子の配向性を解析可能である可能性を示した。当該年度の研究計画は上記の通り全て達成することに成功したため、更に次年度に計画していたPol-FCSによる生細胞内におけるGFPの回転拡散計測を前倒しで行った。生細胞内での蛍光タンパク質のPol-FCS計測は世界で初めて実現した物であった。また、並進拡散係数と回転拡散係数の比較から、細胞内構造や分子クラウディングの影響を検証できる可能性を示した。これらの成果を論文誌において発表した。

本研究は、生細胞内におけるタンパク質凝集体形成の初期過程における体積変化を偏光蛍光相関分光法(Pol-FCS)によって実現することを目指すものである。昨年度(平成28年度)では、それまで不足していたPol-FCSの時間分解能と検出感度の両方を向上させることに成功した。更に翌年度の研究計画を前倒しし、タンデムリピートGFP(単量体5量体)の生細胞内測定に成功した。また、同じ装置を用いて細胞内構造や分子クラウディングの影響を検証できる可能性も示すことができた。当該年度(平成29年度)では、実際に蛍光タンパク質で標識した凝集性タンパク質の測定を細胞内で行う系の確立と実証を行った。試料として黄色蛍光タンパク質(Venus)で標識したTDP43タンパク質をマウス神経芽細胞腫(Neuro2A)細胞に発現させる系を確立した。また、TDP43が生細胞中で凝集を始め、大きく成長していく過程を解析するためには、生きた細胞を生かしたまま継時的にpol-FCS計測する必要がある。しかしながら、蛍光タンパク質に励起光を照射し続けると、蛍光退色や光毒性による細胞へのダメージが懸念される。そのため、可能な限り短時間かつ弱い励起光で測定を行うための条件検討を行った。TDP43は神経細胞内で凝集体・封入体を形成し、アルツハイマーや筋萎縮性側索硬化症(ALS)の発症と関わりがあるとしられており、その凝集過程を解明することは、これらの病気のメカニズム解明に大きく寄与できると考えられる。当該年度(平成29年度)および翌年度(平成30年度)では、1pol-FCSによる生細胞内回転拡散計測の実証実験および2pol-FCSによる凝集体形成初期過程の実証実験を計画していた。しかしながら1についてはすでに前年度に前倒しで達成済みであった。当該年度では、2の達成に向けて、Neuro2A細胞(マウス神経芽細胞腫由来)において、アルツハイマーや筋萎縮側索硬化症(ALS)の原因タンパク質と考えられている凝集性タンパク質TDP43のpol-FCS計測を行う系の確立・実証を行った。まずNeuro2A細胞内に黄色蛍光タンパク質Venusで標識したTDP43をpol-FCS計測を行う上で適切な濃度で発現させる系を確立した。また、同じ計測手法を用いて細胞内構造や高分子クラウディングの影響を検証できることを実験的に実証することに成功した。これによってタンパク質凝集体の凝集過程と高分子クラウディングとの関係性についても検証可能になり、当初の計画よりもより優れた計測手法となると期待できる。本研究では、生細胞内におけるタンパク質凝集体形成の初期過程における体積変化を偏光蛍光相関分光法(Pol-FCS)によって実現することを目指した。平成28年度では、Pol-FCSの時間分解能と検出感度の両方を向上させ、GFP多量体の生細胞内測定に成功した。
葬墓制からみた琉球史に関する基礎的研究

本研究は琉球列島の発掘墓資料を歴史研究資料として昇華させ、墓から見た琉球史の再構築を目指すことを目的とする。このため、琉球の墓を対象に次の4つの資料収集を計画した。遺跡調査されている(1)琉球墓、(2)厨子(蔵骨器)、(3)銘書、(4)人骨など「琉球墓」資料を、考古学、文献史学、美術史、民俗学、人類学の垣根を越えて資料化することを目指しており、本年度は主に(2)厨子、(3)銘書、(4)人骨をエクセルに打ち込み一覧表の作成するとともに、代表的な資料を実見した。また、厨子については、図化資料を主としてデータシートを作成し研究者間で共有している。なお、これらの作業はアルバイトを雇用し資料情報を集約した。本研究の目的が、考古学、文献史学、美術史、民俗学、人類学の垣根を越えて資料化し新しい琉球史を描くことを目指しており、資料化にあたっては単に考古学分野だけの資料化にならないようにするためにも、定期的に研究会を開催し情報交換の場を設けている。今年度は、3回研究会を開催した。研究会の期日とテーマは以下のとおりである。平成30年度第1回研究会:2018年8月28日(火)『骨に残されたライフヒストリーと近世期琉球の災害・飢饉』。第2回研究会:2018年12月1日(土)『考古学からみた琉球列島の墓制』。第3回研究会:2019年3月24日(日)『墓石調査の視点と方法』あわせて、実際に以下の現地調査等を実施した。(1)伊是名調査。(2)東京打ち合わせ会議及び資料調査。(3)平安座島トゥダチ墓の調査。(4)浦添市歴史にふれる館所蔵人骨調査。(5)那覇市・浦添市内琉球墓調査。資料整理作業において(1)遺跡の一覧。(2)厨子の一覧及び画像データシートを作成することができたが、(3)銘書、(4)人骨は作成の途中で未完成である。本研究において重要と位置づけた、実地調査については地元の協力を得て、考古学のみならず民俗学や形質人類学、歴史学の研究者とともに実践することができた。本調査は、予備的調査の性格が強かったが、予想以上の成果を得る事が出来たため、所有者と調整を図り、隣接する関連の墓室の調査を次年度に計画している。一方、銘書の紀年銘資料と人骨を用いた分析を計画したが、選定した遺跡の資料が当初期待していた以上に資料の保存状態が悪い事が実地調査によって明らかになった。このため、人骨の調査においては、今一度分析可能な出土人骨の選定を行う予定である。なお、研究が低調であった御殿形厨子の編年研究については、紀年銘資料を集成し、おおよその編年的枠組みを提示することができた。銘書は現在エクセルデータにまとめ入力の途中である。しかし厨子の銘書はその記載方法の統一性が乏しく、本研究においてこれらの記載方法について一定の標準化を図ることを企画する必要があると考えている。これについては、引き続きアルバイトを雇用し、これまでに調査されている銘書データの一覧表を速やかに完成させるとともに、記載方法については琉球史の研究者との意見交換を行い、標準化の確立を目指していきたい。また、銘書に記載された人物については、琉球の家譜史料との比較分析を進め、考古学ではアプローチと困難な個人に焦点をあてた研究を行うことを計画したい。あわせて、厨子に納骨された人骨資料については、分析の対象となる資料の選定を急ぐとともに、収集されたデータから平均身長や平均余命といったビッグデータを用いた動態的な研究を進めていきたい。研究会で明らかになった地方的なあり方との比較について、現地調査を実施するとともに、奄美や八重山など沖縄本島周辺地域の研究者を招聘して研究会を企画する予定である。

第3回研究会:2019年3月24日(日)『墓石調査の視点と方法』あわせて、実際に以下の現地調査等を実施した。(1)伊是名調査。(2)東京打ち合わせ会議及び資料調査。(3)平安座島トゥダチ墓の調査。(4)浦添市歴史にふれる館所蔵人骨調査。(5)那覇市・浦添市内琉球墓調査。資料整理作業において(1)遺跡の一覧。(2)厨子の一覧及び画像データシートを作成することができたが、(3)銘書、(4)人骨は作成の途中で未完成である。本研究において重要と位置づけた、実地調査については地元の協力を得て、考古学のみならず民俗学や形質人類学、歴史学の研究者とともに実践することができた。本調査は、予備的調査の性格が強かったが、予想以上の成果を得る事が出来たため、所有者と調整を図り、隣接する関連の墓室の調査を次年度に計画している。一方、銘書の紀年銘資料と人骨を用いた分析を計画したが、選定した遺跡の資料が当初期待していた以上に資料の保存状態が悪い事が実地調査によって明らかになった。このため、人骨の調査においては、今一度分析可能な出土人骨の選定を行う予定である。なお、研究が低調であった御殿形厨子の編年研究については、紀年銘資料を集成し、おおよその編年的枠組みを提示することができた。銘書は現在エクセルデータにまとめ入力の途中である。しかし厨子の銘書はその記載方法の統一性が乏しく、本研究においてこれらの記載方法について一定の標準化を図ることを企画する必要があると考えている。これについては、引き続きアルバイトを雇用し、これまでに調査されている銘書データの一覧表を速やかに完成させるとともに、記載方法については琉球史の研究者との意見交換を行い、標準化の確立を目指していきたい。また、銘書に記載された人物については、琉球の家譜史料との比較分析を進め、考古学ではアプローチと困難な個人に焦点をあてた研究を行うことを計画したい。あわせて、厨子に納骨された人骨資料については、分析の対象となる資料の選定を急ぐとともに、収集されたデータから平均身長や平均余命といったビッグデータを用いた動態的な研究を進めていきたい。研究会で明らかになった地方的なあり方との比較について、現地調査を実施するとともに、奄美や八重山など沖縄本島周辺地域の研究者を招聘して研究会を企画する予定である。ほぼ計画どおりに執行したが、わずかに残額が生じた。残額も含め次年度も計画に沿って適切に使用したい。
β-アミラーゼのドメイン工学

産業的により優れた機能を持つβ-アミラーゼを開発するために、ダイズβ-アミラーゼ、オオムギβ-アミラーゼ、及びBacillus cereusのβ-アミラーゼのドメイン構造の徹底的な構造比較を行い、本酵素の至適pHの変換およびデンプン粒分解活性の強化について、変異酵素を設計し、その機能解析とX線結晶構造解析を行った。【1.Bacillus cereus β-アミラーゼの至適pHの変更】ダイズβ-アミラーゼの触媒残基のひとつであるGlu380の側鎖と水素結合を形成する3個の残基の微生物型への改変により至適pHがそれぞれアルカリ側に移行したことから、逆にBacillus cereusのβ-アミラーゼの対応するTyr164とThr328をダイズ型のGluとAsnに変異した結果、至適pHがやはり酸性側に1pHユニット以上移行することを認めた。しかし、その原因が触媒基であるGlu367の側鎖との水素結合の有無によるのか、周辺の静電的環境によるのか不明であった。そこで、本酵素のTyr164をGln164へ変異した結果、至適pHがやはり酸性側に移行し、マルトース複合体のX線結晶構造解析の結果では触媒基との水素結合は認められなかったことから高至適pHであるためには164番目がTyrであることが重要であると示唆された。また、Thr328のAsn328への変異によって、ダイズ酵素のGlu380に対応するGlu367の側鎖が約1PÅ移動し、このことにより比活性が約8%まで低下することがX線結晶構造解析の結果明らかになった。【2.微生物β-アミラーゼのデンプン粒分解活性の強化】Bacillus cereusのβ-アミラーゼのC末端に存在するデンプン吸着ドメインについて、グルコアミラーゼのデンプン吸着ドメインとの比較から2個存在するデンプン吸着サイトのうち2番目のサイトに欠陥があると考えられたので、その修復変異を試みたが、その部分が触媒ドメインとの接触領域にあるため、大腸菌での発現率が極端に低下した。そこで、進化工学的手法を導入し、得られた酵素の機能解析と構造解析を行うこととし、現在、変異酵素のスクリーニング系の確立を行っている。【3.β-アミラーゼの原子レベル分解能での予備的X線結晶構造解析】酵素の比活性の変化等、触媒部位での微小な位置変化を問題にする場合、2Å程度の構造解析では精度が不足し、構造変化から機能変化を論じることはできない。このためには結晶の分解能を向上し、1Å以上の分解能で構造を決定する必要がある。そこで、ダイズβ-アミラーゼの結晶化条件を検討し、放射光で測定をおこなうことにより、現在1.25Å分解能での構造の精密化を行うことができた。今後、末端残基の削除等の変異により更に結晶の分解能を改善し、より高分解能のデータを収集し、水素原子の位置をも明らかにする予定である。

このためには結晶の分解能を向上し、1Å以上の分解能で構造を決定する必要がある。そこで、ダイズβ-アミラーゼの結晶化条件を検討し、放射光で測定をおこなうことにより、現在1.25Å分解能での構造の精密化を行うことができた。今後、末端残基の削除等の変異により更に結晶の分解能を改善し、より高分解能のデータを収集し、水素原子の位置をも明らかにする予定である。β-アミラーゼの至適pHおよび生澱粉分解能などの酵素機能を改変し、産業的により優れた酵素を設計するために、それらの変異体の作成と機能評価およびX線結晶構造解析による構造評価を行った。【1.Bacillus cerus β-アミラーゼの至適pHの変換】植物β-アミラーゼはpH5.5付近の酸性側に、微生物β-アミラーゼはpH7付近の中性に至適pHがある。以前に行ったダイズ酵素の至適pHの変換の結果から至適pHは触媒残基の一つであるGlu380とその周辺のアミノ酸残其の側鎖との水素結合により制御されていることが示された。そこでBacillus cerus β-アミラーゼの触媒残基の周辺に存在するTyr164とThr324をダイズ型のGluとAsnに変換した変異体を作成した結果、その至適pHはいずれもpH4-5付近まで低下していた。これらの変異体の結晶を作成し、マルトースとの複合体のX線結晶構造解析を2,0Å分解能で行った。その結果、ダイズ酵素で認められた触媒残基との水素結合は形成されていなかった。このことは触媒残基の制御に水素結合のみが関係しているのではなく、近傍アミノ酸残基の電荷および酸素原子との距離が重要であることが示唆された。この点について、これらのアミノ酸残基をさらに異なるアミノ酸に置換して検討する予定である。【2.デンプン吸着能強化Bacillus cerus β-アミラーゼの発現とそのX線結晶構造解析】これまでの研究によってBacillus cerus β-アミラーゼのC末端デンプン吸着ドメインの2個のデンプン吸着サイトの1個は機能していないことが示された。そこでこのサイト部分のアミノ酸配列をグルコアミラーゼあるいはシクロデキストリン合成酵素の対応する配列に置換した変異体を設計し、大腸菌での発現を試みたが、発現量が極端に減少した。これはこの配列部分がメインドメインとの接触領域にあり、変異により酵素の正常な折れたみが影響を受けることが原因と考えられた。産業的により優れた機能を持つβ_アミラーゼを開発するために、本酵素の至適pHおよびデンプン粒分解活性についての機能解析をX線結晶構造解析に基づいて行い、変異酵素の設計とそのX線結晶構造解析を行った。【1.触媒部位周辺残基の系統的変異によるβ-アミラーゼの至適pHの変更】ダイズβ-アミラーゼの触媒残基のひとつであるGlu380の側鎖と水素結合を形成する3個の残基の微生物型への改変により至摘pHがそれぞれアルカリ側に移行したことから、逆にBacillus cereusのβ-アミラーゼの対応する残基をダイズ型に変異した結果、至適pHがやはり酸性側に1pHユニット以上移行することを認めた。しかし、その原因がGlu380の側鎖との水素結合の有無によるのか、周辺の静電的環境によるのか不明であった。
ジャイロ流体モデルの拡張と検証

トーラス形状の磁場に閉じ込められたプラズマの粒子や熱の輸送現象を正確に取り扱うためには、粒子集団と電磁場の振る舞いを記述するジャイロ運動論に基づくシミュレーションを行う必要がある。本研究では、ジャイロ運動論と同程度に正確で、より短時間の計算が可能なジャイロ流体モデルが開発され、その有効性の検証およびプラズマ乱流解析への応用が進められた。無衝突過程での残留ゾーナルフローレベルは、乱流輸送の抑制に大きく寄与するため、ゾーナルフローに対するジャイロ流体モデルを構築する前に、ジャイロ運動論により正確に評価しておく必要がある。本年度において、ヘリカル系磁場配位と平衡電場に対する残留ゾーナルフローレベルの依存性を調べるためジャイロ運動論的シミュレーションを行い、理論予測との比較を行った。理論予測通りに、平衡電場の増加により、ヘリカルリップル捕捉粒子の径方向変位が減少すると、残留ゾーナルフローが増加することがシミュレーションにより確認された。多種イオンからなるプラズマに対する新しい線形モデル衝突演算子を構築した。新たなモデル衝突線形演算子は、異種イオンが異なる温度を持つ場合に対しても、粒子・運動量・エネルギー保存を満たし、共役関係やボルツマンのH定理を満足する。この衝突線形演算子をジャイロ運動論的方程式に導入できる形に変形し、衝突性ジャイロ運動論的方程式とマクスウェル方程式に基づいて、乱流揺動に伴うエントロピー、電磁揺動エネルギー、粒子・熱の乱流輸送や衝突散逸の間に成立するジャイロ運動論的エントロピーバランス方程式を導いた。衝突効果を取り入れたジャイロ流体クロージャーモデルの構築を目指し、ゾーナルフローの時間発展に対する衝突の効果を調べるため、モデル衝突線形演算子を用いたジャイロ運動論的シミュレーションコードの開発に着手した。昨年度に引き続き、乱流輸送の抑制に大きく寄与するゾーナルフローが、ヘリカル系磁場配位において、平衡電場によりどのような影響を受けるかをジャイロ運動論に基づく理論解析およびシミュレーションにより調べた。測地的音響モード(GAM)振動や残留フロー等に関する運動論的なゾーナルフローの特性を記述する運動論的流体クロージャーモデルを用いて、ゾーナルフローの無衝突時間発展に対する非円形断面等の磁場配位の効果を線形ジャイロ流体シミュレーションにより調べた。また、新たに衝突の効果を取り入れたクロージャーモデルの導出を行った。軸対称・非軸対称トロイダルプラズマにおける粒子・熱・運動量の新古典及び乱流輸送を記述する基礎方程式に基づき、トロイダル磁場配位の有する対称性・非対称性が、運動量輸送や両極性粒子拡散等の径方向電場の決定に関わる物理機構に対して、どのように影響するかを系統的に示した。一般の非軸対称配位では、ジャイロ半径オーダリングの2次オーダーでの両極性粒子拡散条件から、平衡電場が決定されるが、上下対称性を持つトカマク配位やステラレーター対称性を持つ準対称ヘリカル配位では、2次オーダーまで、自動的に両極性拡散条件が成立し、平衡電場を決定するには、3次オーダーの運動量バランス方程式を解く必要があることを明らかにした。昨年度に引き続き、運動論的流体クロージャーモデルを用いて、ゾーナルフローの無衝突時間発展のシミュレーションを行い、残留ゾーナルフローに対するトロイダル磁場配位の非円形断面の効果や磁力線方向の初期フローの効果を調べ、クロージャーモデルがジャイロ運動論による予測結果を再現することを明らかにした。また、微視的不安定性の線形固有関数を用いた非線形ソース項を用いたシミュレーションにより、イオン温度勾配(ITG)モード、捕捉電子モード(TEM)や電子温度勾配(ETG)モードに対するゾーナルフローの生成効率の違いを示した。さらに、ヘリカル素磁場配位におけるゾーナルフロー生成に対する平衡電場の影響をジャイロ運動論的シミュレーションにより調べた。トロイダルプラズマにおける輸送過程に大きな影響を与える電場・フローに対する磁場配位の効果の研究も進めているが、準対称性を有するトロイダル磁場配位において、高速フローが存在するための条件を吟味し、その結果、磁気面を横切る電流がないという標準的な条件の下では、イオン音速程度の高速フローが存在するためには、Boozer座標における計量テンソル成分が全て対称性を有することが必要となり、結論として、トカマクのような軸対称配位でなければならないことが示された。また、トカマク配位において、非軸対称摂動磁場が印可されだ場合に生じるトロイダル方向の新古典粘性をδfモンテカルロ・シミュレーションにより計算することに成功し、解析的予測との比較を行うことにより、シミュレーション結果の有効性を確認した。トカマクにおけるイオン温度勾配乱流による乱流熱輸送の評価を正確かつ高速に行うため、Rosenbluth-Hinton公式の残留ゾーナルフロー振幅を再現できるクロージャーモデルを取り入れたジャイロ流体シミュレーションコードの開発が進められた。また、ジャイロ中心の分布関数、乱流電磁場および、輸送時間スケールでゆっくりと時間変化する背景磁場の支配方程式系全てを変分原理から導くように拡張されたGyrokinetic Field Theoryに基づき、軸対称な背景磁場により閉じ込められたプラズマの乱流状態における粒子・エネルギー・運動量の保存則が導かれた。さらに、導かれた粒子・エネルギー・運動量保存則のアンサンブル平均を取って得られる方程式系が、WKB近似を用いて得られる従来の粒子・エネルギー・運動量の輸送方程式系と、ジャイロ半径パラメーター展開におけるリーディングオーダーにおいて一致することが確かめられた。

ゾーナルフローに対する運動論的流体クロージャーモデルが、残留ゾーナルフローに対する磁場配位や初期フローの効果について、ジャイロ運動論による予測結果を再現することを検証し、このクロージャーモデルを取り入れて、トロイダル・イオン温度勾配不安定性(ITGモード)による乱流輸送フラックスを計算するためのジャイロ流体シミュレーションコードの開発に着手した。先ず、ジャイロ流体コードによるITGモードの線形時間発展シミュレーションを実行し、線形ITGモードの周波数・成長率のポロイダル波数依存性や固有関数の空間分布構造を求め、それらを線形ジャイロ運動論的シミュレーションの結果と比較することにより、妥当なが結果が得られることを確認した。ヘリカル系プラズマ(LHD)における標準配位およびプラズマ内寄せ配位に対するITG乱流のジャイロ運動論的シミュレーションから得られた乱流揺動のデータに対して、エントロピー・スペクトル解析を行った。内寄せ配位においてより顕著なゾーナルフローによる乱流輸送の抑制が、高い小半径方向波数への揺動エントロピー・スペクトルの移送により生じることを明らかにした。ジャイロ運動論の基礎となるブラゾフ・ポアッソン・アンペール方程式系が持つエネルギー・運動量保存則を、作用積分にネーターの定理を用いることにより導出し、光速の電磁波を含むブラゾフ・マクスウェル方程式系におけるエネルギー・運動量保存則との差を明らかにした。トロイダルプラズマの乱流輸送に大きく影響するゾーナルフローの物理機構を流体モデルにより表現するためのクロージャーモデルの有効性の検証が進み、また、ゾーナルフローに対する磁場配位や巨視的系電場の効果の理解が進展した。25年度が最終年度であるため、記入しない。ゾーナルフローの物理機構を流体モデルにより表現するためのクロージャーモデルの有効性が検証され、そのクロージャーモデルを組み込んだジャイロ流体コードの開発が進み、イオン温度勾配(ITG)不安定性の線形計算によるジャイロ流体コードの検証がなされた。ジャイロ運動論的シミュレーションの乱流揺動データに対するエントロピー・スペクトル解析の有効性が示された。ジャイロ運動論の基礎となるブラゾフ・ポアッソン・アンペール方程式系の持つ持つエネルギー・運動量保存則に対する理解が深まった。今後、線形ITGモードを記述する無衝突クロージャーモデルの構築を進め、線形ジャイロ運動論との比較による妥当性のクロージャーモデルの検証を行ったの値、クロージャーモデルを組み込んだジャイロ流体シミュレーションを実行し、ジャイロ運動論による非線形乱流シミュレーションの比較により、その有効性を検証することを計画している。今後、運動論的クロージャーモデルを組み込んだジャイロ
選択的オートファジーを介した転写制御機構の解明

近年,遺伝子発現制御に重要である転写制御とタンパク質分解の分子機構であるオートファジーが密接に関与していることは明らかになりつつある。その接点として我々は選択的オートファジーのレセプターであるp62がクロマチン構造変換因子ARIP4に結合し調節することで,細胞外の状態をモニターしてクロマチン構造に反映させるエピジェネティック制御因子であることを発見した。本研究ではこのp62の核内での機能を明らかにするために,p62の核内複合体の精製およびその構成因子の機能解析を通してp62によるクロマチン構造変換およびそれに伴う転写制御機構の解明を目的とする。本年度は昨年度に引き続き,p62の核内複合体の精製によって得られた情報から核内p62に特異的に結合する複合体構成因子の相互作用の確認と,抗体作製,局在確認を行ってきた。核内p62複合体をより精製度を上げて精製するために現在グリセロール濃度勾配による分離を試みている。この手法を用いることで複数の複合体の集合体である場合,それぞれの大きさによって分離することができ,それぞれの分画から再度p62の抗体で精製することでより均一な複合体の精製が可能である。このようなアプローチと共に本年度は構成因子の一つである還元酵素であるPRDXファミリー因子群が核内p62と特異的に結合する因子であることを発見した。抗体を用いた解析で,細胞質p62複合体では非常にすくなく,核内複合体に多く含まれることが判明した。現在この因子群がp62の機能制御にどのように関与しているのか解析を進めている。p62は核内では核内小構造体を形成することが以前の観察から判明している。これらの構造体への複合体構成因子の局在を観察することで,局在と機能の関係を明らかにすると共に,クロマチンとの関与を解明していく予定である。本年度は,p62の核内複合体の精製のため,核排出阻害剤の処理によるp62の核局在の条件を検討し効果的に核移行した状態でのp62複合体の精製に成功した。二段階精製の段階で精製度の高い複合体の取得に成功し順番に構成因子の同定を行っている。これまでに細胞質の複合体では見られない特異的な因子が数多く検出され,その中には細胞の寿命に関わる因子など,これまでまったく相互作用の知られていない因子との結合が多数検出され,来年度に行う機能解析に非常に興味深い材料がそろった状態である。このように計画にそって順調に進んでいるが,一部構成因子で同定がまだなものが存在するので順次それらについては進めていきたい。p62核内複合体のまだ未同定な構成因子が存在するために早急にの同定および,それらの確認を抗体を用いて行う。抗体は購入または受託によって作製することで,そちらに労力を取られない用にしp62複合体の機能解析に優先的に時間を使う。また既知の構成因子においては国内外にその因子の専門家がいる場合が多く,共同研究などを通じてそれらの解析に役立つ資料,資材の調達を行うことで,研究のより早い推進を図りたいと考えている。細胞は外的シグナルを受け取り,必要な遺伝子の転写を行うことで,細胞分化や恒常性維持を厳密に制御している。近年オートファジーには,単なるアミノ酸確保の為のタンパク質分解だけではなく,環境シグナルに応答し遺伝子の転写を制御する「選択的オートファジー」が存在することが明らかとなった。本研究では選択的オートファジーのレセプターであるp62に関して,核内での機能を解析することによりオートファジーと転写制御機構を融合し理解する。これにより細胞が飢餓などの外的環境に応答し遺伝子発現を制御する新規の分子機構の存在を明らかにする。初年度はp62の翻訳後修飾の変化に着目し核移行および核内複合体形成の制御を解明することを目的とした。これまでの実験からp62は細胞環境が変化することで,カルボキシル末端のUBA domainのユビキチン結合活性を制御するS403のリン酸化が起きる事を明らかにしてきた。このUBA domainには,ARIP4もまったく同様の結合様式で結合する事から,このリン酸化は,ユビキチン化タンパク質のみならず,核内でARIP4との相互作用の調節もできると考えられる。つまりp62の核内複合体形成において重要な翻訳後修飾であると考えられた。そこでS403のリン酸化を特異的に認識する抗体を作製した。この抗体を用いてp62のリン酸化を検出した結果,マウスの初代培養細胞などでは,このリン酸化は定常状態で殆ど検出できないが,細胞に刺激を与えることによって急激にリン酸化フォームが増加することが判明した。興味深いことにある種の癌細胞では常にこのリン酸化状態が維持されており,p62が細胞外シグナルに応答するだけで無く,癌細胞のような細胞増殖や代謝経路の異常も検知し,細胞内の状態を認識し反応することが判明した。来年度,選択的オートファジーのレセプターp62の核内での機能解析をするために,本年度は予備的に様々な条件下でp62複合体の精製を行った。現状では2種類の細胞において,3つの条件下での複合体の精製に成功している。すでにこれらの複合体に関しては,電気泳動によるバンドの分離を行わず網羅的な質量分析による解析を行い,それぞれの条件下で複合体の構成因子が大きく変化することを発見している。またp62の翻訳後修飾が複合体において変化することも確認している。

これらはp62が細胞外シグナルに応答する状況下において複合体の構成因子を変更し様々な細胞内機能を果たしていることを意味している。特にp62は核移行すると核内でドット上の核内構造体に共局在することが知られているが,今回精製した核内複合体の構成因子には,核内で小構造体を形成することが知られている因子が複数含まれており,核内での複合体形成とそれらが働く核内での微小空間の形成がリンクしている可能性が示唆された。これらはp62の機能を理解する上で,構成因子による機能の予測と共に,核内の構造体形成の意義について解明する手掛かりとなると考えられる。このようにp62の生化学的な解析においては概ね順調に発展しており,また来年度の研究遂行に対して十分な準備ができていていると考えている。近年,遺伝子発現制御に重要である転写制御とタンパク質分解の分子機構であるオートファジーが密接に関与していることは明らかになりつつある。その接点として我々は選択的オートファジーのレセプターであるp62がクロマチン構造変換因子ARIP4に結合し調節することで,細胞外の状態をモニターしてクロマチン構造に反映させるエピジェネティック制御因子であることを発見した。本研究ではこのp62の核内での機能を明らかにするために,p62の核内複合体の精製およびその構成因子の機能解析を通してp62によるクロマチン構造変換およびそれに伴う転写制御機構の解明を目的とする。本年度は昨年度に引き続き,p62の核内複合体の精製によって得られた情報から核内p62に特異的に結合する複合体構成因子の相互作用の確認と,抗体作製,局在確認を行ってきた。核内p62複合体をより精製度を上げて精製するために現在グリセロール濃度勾配による分離を試みている。この手法を用いることで複数の複合体の集合体である場合,それぞれの大きさによって分離することができ,それぞれの分画から再度p62の抗体で精製することでより均一な複合体の精製が可能である。このようなアプローチと共に本年度は構成因子の一つである還元酵素であるPRDXファミリー因子群が核内p62と特異的に結合する因子であることを発見した。抗体を用いた解析で,細胞質p62複合体では非常にすくなく,核内複合体に多く含まれることが判明した。現在この因子群がp62の機能制御にどのように関与しているのか解析を進めている。p62は核内では核内小構造体を形成することが以前の観察から判明している。これらの構造体への複合体構成因子の局在を観察することで,局在と機能の関係を明らかにすると共に,クロマチンとの関与を解明していく予定である。本年度は,p62の核内複合体の精製のため,核排出阻害剤の処理によるp62の核局在の条件を検討し効果的に核移行した状態でのp62複合体の精製に成功した。二段階精製の段階で精製度の高い複合体の取得に成功し順番に構成因子の同定を行っている。これまでに細胞質の複合体では見られない特異的な因子が数多く検出され,その中には細胞の寿命に関わる因子など,これまでまったく相互作用の知られていない因子との結合が多数検出され,来年度に行う機能解析に非常に興味深い材料がそろった状態である。このように計画にそって順調に進んでいるが,一部構成因子で同定がまだなものが存在するので順次それらについては進めていきたい。本年度の複合体の粗精製の結果から,p62は特定の細胞内状態において複数の複合体を形成している可能性が示唆された。
超音波画像処理による義歯床下粘膜に関する研究ー荷重量と厚さの同時計測システムの開発ー

本研究は,荷重時における義歯床下粘膜の厚さの変化を咬合力計と同期をとることにより,床下粘膜の動的状態の解析可能なシステムの構築を目的としている。開発したシステム(直接入力システム)は,超音波断層像と咬合力を同時にコンピュ-タに記録可能なものであり,粘膜の厚さを0.1mmの精度で計測可能なものである。さらに,顎口腔系に異常がなく,口蓋隆起を認めない上下顎無歯顎者60名に,床下粘膜の厚さ計測が可能な上下実験義歯を製作した。また,口蓋隆起を認めない者5名,口蓋隆起が中の者5名,強の者5名に対し,口蓋隆起部(口蓋隆起の認められない場合は口蓋正中部)および切歯乳頭部に0,0.25, 0.50, 0.75, 1.00mmのリリ-フを施して,同様の方法で上下実験義歯を製作した。この実験義歯と超音波画像処理システム(間接入力システム)を用いて,1)最大咬合力下における義歯床支持粘膜の沈下量の計測, 2)口蓋隆起部の適切なリリ-フ量の検討を行なった結果,以下の知見を得た。1.口蓋隆起が認められない被験者において,最大咬合力で噛みしめた場合の粘膜沈下量は,上下顎ともほぼ0.3mm程度であった。2.口蓋隆起が認められない被験者において,各部位の粘膜沈下率は,上顎顎堤部で10.911.8%,口蓋側方部で8.08.9%,口蓋正中部および切歯乳頭右側部で12.7151%,下顎顎堤部で16.517.6%であった。3.口蓋隆起が認められない場合でも,口蓋正中部および切歯乳頭部におけるリリ-フの必要性が示唆された。4.口蓋隆起が認められない場合の口蓋正中部および切歯乳頭部におけるリリ-フ量は,0.25mm程度で良いことが示唆された。5.口蓋隆起が中等度のものは0.250.50mm,強度のものは0.50mm程のリリ-フが,同部位に必要であることが示唆された。本年度の目標は、システムの構築である。開発したシステムは(1)超音波診断装置、(2)咬合力計、(3)咬合力計を撮るCCDカメラ、(4)(1)と(3)により得られる画像を合成するビデオワイパ-、(5)ビデオワイ-パ-からの画像を記録するS-VHSビデオデッキ、(6)ビデオワイパ-およびビデオデッキからの画像をコンピュ-タ-に入力するフレ-ムメモリ-から構成される。ハ-ドウエアに関してはすでに開発が終了している。画像処理用のソフトウエアについては、すべてのプログラムが完成しているわけではないが、左右臼歯部に咬合力センサを備え、閉口時に前歯部から超音波プロ-ブを挿入可能な実験義歯を製作し、計測デ-タもすでにビデオ・テ-プに約50人のデ-タをすでにビデオテ-プに記録している。その成果についても、荷重時における義歯床下粘膜の動態について、最大咬合力時および無負荷時の挙動についてオフ・ラインの形ではあるが、第82回日本補綴歯科学会学術大会(10月)において報告した。

粘膜沈下量は上顎顎堤部および口蓋側方部で0.30.4mm、口蓋正中部で0.20.3mm、下顎顎堤部で0.30.4mmの値を示した。これを粘膜沈下率(粘膜沈下量/安静時の粘膜厚径)で比較すると上顎と下顎において有意な差が認められた。また、口蓋部にリリ-フを施すことにより、上顎顎堤部および口蓋側方部において沈下率が増加し、さらに被験者によって最大咬合力の著明な増加を認めた。この0.30.5mmのリリ-フにより、粘膜の菲薄な部位に力が集中するのを防ぎ、咬合力を効果的に分散させることが可能であることが示唆された。本研究は,荷重時における機歯床下粘膜の厚さの変化を咬合力計と同期をとることにより,床下粘膜の動的状態の解析可能なシステムの構築を目的としている。開発したシステム(直接入力システム)は,超音波断層像と咬合力を同時にコンュピュ-タに記録可能なものであり,粘膜の厚さを0.1mmの精度で計測可能なものである。さらに,顎口腔系に異常がなく,口蓋隆起を認めらい上下顎無歯顎者60名に,床下粘膜の厚さ計測が可能な上下実験義歯を製作した。また,口蓋隆起を認めない者5名,口蓋隆起が中の者5名,強の者5名に対し,口蓋隆起部(口蓋隆起の認められない場合は口蓋正中部)および切歯乳頭部に0,0.25,0.50,0.75,1.00mmのリリ-フを施して,同様の方法で上下実験義歯を製作した。この実験義歯と超音波画像処理システム(間接入力システム)を用いて,1)最大咬合力下における義歯床支持粘膜の沈下量の計測,2)口蓋隆起部の適切なリリ-フ量の検討を行なった結果,以下の知見を得た。1.口蓋行起が認められい被験者において,最大咬合力で噛みしめた場合の粘膜沈下量は,上下顎ともほぼ0.3mm程度であった。2.口蓋隆起が認められない被験者において,各部位の粘膜沈下率は,上顎顎堤部で10.911.8%,口蓋側方部で8.08.9%,口蓋正中部および切歯乳頭右側部で12.7151%,下顎顎堤部で16.517.6%であった。3.口蓋隆起が認められない場合でも,口蓋正中部および切歯乳頭部におけるリリ-フの必要性が示唆された。4.口蓋隆起が認められない場合の口蓋正中部および切歯乳頭部におけるリリ-フ量は,0.25mm程度で良いことが示唆された。5.口蓋隆起が中等度のものは0.250.50mm,強度のものは0.50mm程のリリ-フが,同部位に必要であることが示唆された。
水素貯蔵サイクルに効果的な固定化触媒の開発

本研究の目的は,水素貯蔵のための固定化触媒の開発を行うことである.水素を化学水素貯蔵物質であるギ酸へと変換することは,エネルギーキャリアの観点から重要である.提案者は,既にギ酸を水素貯蔵体とするサイクルに有効な水溶性の高活性・高耐久性均一系触媒の開発に成功している.しかし,均一系触媒であることから回収が困難である上,高価なレアメタルを用いるため,実用化に不向きであった.このような背景のもと,本研究においては,水素社会実現を見据えた技術開発として,高性能均一系触媒を固定化し,回収可能な触媒を開発することを目標とする.平成30年度は,提案者がこれまでに開発したイリジウム触媒骨格上に官能基を導入し,種々の担体へと担持した.調整した固定化イリジウム触媒を用い,ギ酸分解による水素発生反応を検討した.1Mのギ酸水溶液中,80°Cで反応を行ったところ,触媒性能が発現し,3回以上の回収・再利用が可能である固定化触媒を見出した.同反応条件において,金属溶出を抑えるためには,金属と担体を繋ぐリンカーの種類が重要であることが分かった.しかしながら,高濃度のギ酸水溶液中,かつ,高温条件ではどのリンカーにおいても金属の溶出が確認されたため,さらなる検討が必要である.また,担体の種類も金属溶出に影響を与えることも見出している.担体として,シリカゲルを用いると容易に金属溶出が起こるが,メソポーラスシリカの場合には抑えられた.今後,リンカーや担体を検討し,より過酷な条件で金属溶出を抑えつつ複数回利用できる固定化触媒を開発する.これまでに開発した高性能な均一系錯体を固定化することに成功し,反応条件によってはギ酸分解反応において,金属溶出を抑え,回収・再利用できる固定化触媒を開発できた.触媒構造と担体の組み合わせによって,金属溶出を改善させる知見を得た.また,ギ酸分解だけでなく,水素貯蔵工程であるCO2水素化によるギ酸合成に対しても低活性ながら触媒性能を発現することも見出していることから,現在までの進捗状況としては、概ね順調に進展している.2019年度も継続して,金属溶出を抑える触媒・担体の組み合わせの探索を行う.最適な組み合わせを探索しつつ,ギ酸分解反応の条件の最適化にも取り組む.とりわけ,過酷な反応条件における触媒の長寿化・回収性能の向上を目指す.CO2水素化によるギ酸合成については,担持する配位子の改良を行うことで,触媒性能の向上を行う.これまでに効果的であることが判明している水酸基を有する配位子を固定化することを行う.本研究の目的は,水素貯蔵のための固定化触媒の開発を行うことである.水素を化学水素貯蔵物質であるギ酸へと変換することは,エネルギーキャリアの観点から重要である.提案者は,既にギ酸を水素貯蔵体とするサイクルに有効な水溶性の高活性・高耐久性均一系触媒の開発に成功している.しかし,均一系触媒であることから回収が困難である上,高価なレアメタルを用いるため,実用化に不向きであった.このような背景のもと,本研究においては,水素社会実現を見据えた技術開発として,高性能均一系触媒を固定化し,回収可能な触媒を開発することを目標とする.平成30年度は,提案者がこれまでに開発したイリジウム触媒骨格上に官能基を導入し,種々の担体へと担持した.調整した固定化イリジウム触媒を用い,ギ酸分解による水素発生反応を検討した.1Mのギ酸水溶液中,80°Cで反応を行ったところ,触媒性能が発現し,3回以上の回収・再利用が可能である固定化触媒を見出した.同反応条件において,金属溶出を抑えるためには,金属と担体を繋ぐリンカーの種類が重要であることが分かった.しかしながら,高濃度のギ酸水溶液中,かつ,高温条件ではどのリンカーにおいても金属の溶出が確認されたため,さらなる検討が必要である.また,担体の種類も金属溶出に影響を与えることも見出している.担体として,シリカゲルを用いると容易に金属溶出が起こるが,メソポーラスシリカの場合には抑えられた.今後,リンカーや担体を検討し,より過酷な条件で金属溶出を抑えつつ複数回利用できる固定化触媒を開発する.これまでに開発した高性能な均一系錯体を固定化することに成功し,反応条件によってはギ酸分解反応において,金属溶出を抑え,回収・再利用できる固定化触媒を開発できた.触媒構造と担体の組み合わせによって,金属溶出を改善させる知見を得た.また,ギ酸分解だけでなく,水素貯蔵工程であるCO2水素化によるギ酸合成に対しても低活性ながら触媒性能を発現することも見出していることから,現在までの進捗状況としては、概ね順調に進展している.2019年度も継続して,金属溶出を抑える触媒・担体の組み合わせの探索を行う.最適な組み合わせを探索しつつ,ギ酸分解反応の条件の最適化にも取り組む.とりわけ,過酷な反応条件における触媒の長寿化・回収性能の向上を目指す.CO2水素化によるギ酸合成については,担持する配位子の改良を行うことで,触媒性能の向上を行う.これまでに効果的であることが判明している水酸基を有する配位子を固定化することを行う.当初購入を予定していた,高価なイリジウム試薬の使用量が少なく済んだため.本年度は,イリジウム試薬購入や担体・触媒の組み合わせの為のスクリーニング用試薬購入に充当する.
キャリアの強制中断を含む労働者の最終離職過程

本研究は、職業生活の中途に、強制的にキャリアの中断(キャリアの停止と再形成)を経験したブルーカラー労働の最終離職過程を動的にとらえることを目的としている。具体的には、以下の3点が研究目的となる。1.旧常磐炭砿株式会社磐城砿業所(昭和46年閉山)で就業し、「大閉山」によるキャリアの強制中断という共通経験をもつ労働者の最終離職局面(高齢期の生活過程)に関するライフコースデータを収集する。2.彼らの最終離職局面をすでに収集済みの個々人のイベント・ヒストリーデータ(生涯職業キャリア・データならびに前期高齢期のライフスタイルに関するデータ)と連結し、現在のライフスタイルのクラスターがいかなる先行要因によって形作られたものなのかを分析する。ライフコースにおける達成感のもてる加齢のダイナミズムを明らかにする。3.その結果を、すでに収集済みのホワイトカラー・サラリーマンの最終離職過程と比較する。戦後を職業人として生き抜いた男性サラリーマンの高齢期のライフスタイルの階層構造の解明を目指す。本研究期間において、上記の3課題を遂行し、個人のイベント・ヒストリーデータを完成させた。これらのデータを用いて、最終離職過程の分析にとりくみ、ホワイトカラー・サラリーマンとの比較検討を実施した。研究成果は『炭砿労働者の閉山離職とキャリアの再形成PartX』で発表した。本研究は、職業生活の中途に、強制的にキャリアの中断(キャリアの停止と再形成)を経験したブルーカラー労働者の最終離職過程を動的にとらえることを目的としている。平成17年度には、第1の目的である元炭砿労働者の最終離職過程に関する面接調査を中心にすすめた。1.最終離職過程面接調査:・現地確認調査(9月)いわき市外居住対象者のうち千葉県君津市、富津市、茨城県鹿島市在住者への予備調査を実施した。・最終離職過程調査(2006年1月3月):調査会社へ委託し530名に対する面接調査を実施した(2006年3月末終了予定)。2.イベントヒストリーデータの整理:これまでに収集している個々人のイベントヒストリーデータの整理作業を進めた(2006年7月完成予定)。その過程で、調査関連資料集を作成した(2006年3月刊行)。3.地元いわき市に残存している地図資料を入手し、デジタル化し、web上で検索可能なデータベースを構築した(2006年5月完成予定)。本研究は、職業生活の中途に、強制的にキャリアの中断(キャリアの停止と再形成)を経験したブルーカラー労働者の採集離職過程を動的にとらえることを目的としている。3.その結果を、すでに収集済みのホワイトカワー・サラリーマンの最終離職過程過程と比較する。

平成18年度には、第1の目的である元炭砿労働者の最終離職過程に関する面接調査を中心にすすめた。1.最終離職過程面接調査:・いわき市在住者への面接調査(2006年7月)を実施し、最終離職過程についての詳細なデータを収集した。2.イベントヒストリーデータの整理:これまでに収集している個々人のイベントヒストリーデータの整理作業を進めた。その過程で、調査関連資料集を作成した(2007年3月刊行)。3.昨年度に構築したいわき市の昭和30年代・40年代地図のGISデータを完成させ、さらに、写真画像データ(約300枚)をリンクさせ、web上で検索可能なデータベースを完成させた。本研究は、職業生活の中途に、強制的にキャリアの中断(キャリアの停止と再形成)を経験したブルーカラー労働者の最終離職過程を動的にとらえることを目的としている。具体的には、以下の3点が研究目的となる。1.旧常磐炭砿株式会社磐城砿業所(昭和46年閉山)で就業し、「大閉山」によるキャリアの強制中断という共通経験をもつ労働者の最終離職局面(高齢期の生活過程)に関するライフコースデータを収集する。2.彼らの最終離職局面をすでに収集済みの個々人のイベント・ヒストリーデータ(生涯職業キャリア・データならびに前期高齢期のライフスタイルに関するデータ)と連結し、現在のライフスタイルのクラスターがいかなる先行要因によって形作られたものなのかを分析する。ライフコースにおける達成感のもてる加齢のダイナミズムを明らかにする。3.その結果を、すでに収集済みのホワイトカラー・サラリーマンの最終離職過程と比較する。戦後を職業人として生き抜いた男性サラリーマンの高齢期のライフスタイルの階層構造の解明を目指す。最終年度にあたる平成19年度には、個人のイベントヒストリーデータを完成させた。これらのデータを用いて、最終離職過程の分析にとりくみ、ホワイトカラーサラリーマンとの比較検討を実施した。研究成果の一部はすでに『炭砿労働者の閉山離職とキャリアの再形成Partx』で発表した。