hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
直線偏光γ線による低エネルギー電気双極子遷移の発現メカニズムの研究

兵庫県立大学・高輝度産業科学研究所のニュースバル電子蓄積リング施設で稼働中のレーザーコンプトンガンマ線ビームを用いた核共鳴蛍光散乱実験を行った。散乱ガンマ線の強度及び角度分布の測定から、クロム52及び鉛207に対する双極子遷移の強度分布を明らかにした。また、乱雑位相近似模型に基づく理論計算を行い、残留相互作用として、2粒子2空孔励起による配位混合やテンソル力が重要であることがわかった。また、電気双極子遷移強度の比較から、鉛領域核では、電気双極子遷移強度の増加と中性子スキンの厚みに相関があり、主に、中性子最外殻の3p1/2軌道の寄与によることがわかった。励起エネルギー10MeV以下の電気双極子遷移の強度と原子核表面に現れる中性子スキンとの関連を明らかにするため、兵庫県立大学・高度産業科学技術研究所のニュースバル電子蓄積リング施設において、レーザーコンプトンガンマ線を用いた核共鳴蛍光散乱実験を行った。今年度前半は、実験に使用するゲルマニウム検出器や臭化ランタンシンチレーターの固定用架台を準備するとともに、実験データ記録用のCAMACデータ収集系の整備を行った。また、入射ガンマ線と空気との散乱によるバックグラウンドの影響を軽減するため、ガンマ線ビーム軸上に設置する真空パイプの製作を行った。年度後半には、ビスマス、鉛、および、クロムターゲットを用いた核共鳴蛍光散乱実験を行った。実験では、これらのターゲットに、最大エネルギー8.2MeVから12MeVのレーザーコンプトンガンマ線を照射し、共鳴散乱ガンマ線を100%140%の3台のゲルマニウム検出器を用いて測定した。これらのゲルマニウム検出器の内、2台をビーム軸に対して90度方向に、残りの1台を130度方向に設置した。また、90度方向の検出器は、それぞれ、垂直方向と水平方向に設置した。レーザーコンプトンガンマ線の偏光面を横方向に固定し、ビーム軸に対して90度方向に設置した2台のゲルマニウム検出器を用いて、入射ガンマ線の偏光面と散乱ガンマ線の放出角との相関を測定した。また、ビーム軸上に設置したNaIシンチレーターを用いて入射ガンマ線のフラックスの測定を行った。一方、入射ガンマ線のエネルギースペクトルは、臭化ランタンシンチレーターを用いて測定した。これらのデータを用いて、モンテカルロシュミレーション計算により、入射ガンマ線のエネルギー分布を決定した。励起エネルギー10MeV領域の電気双極子遷移(E1)強度と原子核表面に現れる中性子スキンとの関連を明らかにするため、兵庫県立大学・高度産業科学技術研究所のニュースバル電子蓄積リング施設において稼働中のレーザーコンプトンガンマ線ビームを用いて行ったCr-52の核共鳴蛍光散乱実験データの詳細な分析を行った。その結果、入射ガンマ線ビームの偏光面に対する共鳴散乱ガンマ線強度の非対称性を調べることにより、観測された40本のガンマ線遷移に対して、11遷移の多重極度を決定し、励起エネルギー7から12MeV領域において双極子遷移強度を決定した。また、乱雑位相近似(RPA)模型に残留相互作用として2粒子2空孔効果を取り入れたSecond RPA (SRPA)を用いて、Cr-52の低励起エネルギーの双極子遷移強度の理論計算を行った。2粒子2空孔のモデルスペースとして、中性子は、2s1/2,1d3/2,1f7/2,2p1/3,2p1/2,1f5/2,1g9/2軌道までを、陽子は、2s1/2,1d3/2,1f7/2,2p3/2,2p1/2,1f5/2軌道までを考慮した。通常のRPAでは、5-10 MeVの励起エネルギーに12本のピークしか求めることができないが、SRPAでは2粒子2空孔効果によって広いエネルギー範囲に強度が分布することが分かった。この結果は、実験データの傾向と良く一致しており、5-10MeVでの遷移強度の積分値も実験データとほぼ一致することやその値が有効核子間相互作用の違いによって大きく変化しないことが分った。その結果、Cr-52の遷移強度を説明するためには、2粒子2空孔の残留相互作用が重要であると言える。兵庫県立大学・高度産業科学技術研究所のニュースバル電子蓄積リング施設で稼働中のレーザーコンプトンガンマ線ビームを用いて行ったCr-52及びPb-207の核共鳴蛍光散乱実験データの解析を行った。厚さ数cmの標的を用いた核共鳴蛍光散乱実験のデータ解析では、遷移強度を求める際、アトミックな散乱に加えて、核共鳴蛍光散乱による自己吸収の効果を考慮する必要がある。そこで、これまでに測定したCr-52の実験データに関して、自己吸収の効果を加えた解析を新たに行い、核共鳴蛍光散乱実験で観測された約40本のガンマ線遷移対して、より正確に遷移強度を決定した。その結果、励起エネルギー7.5MeVから12MeVにおける全崩壊幅は、38eVとなり、既知の値の約2倍となることが分かった。また、入射ガンマ線ビームの偏光面に対する散乱強度の非対称度から求めた散乱ガンマ線の多重極度の情報をもとに、励起エネルギー7.5MeVから12MeVまでの準位に対して、電気双極子遷移強度及び磁気双極子遷移強度を求めた。

さらに、Pb-207についても、励起エネルギー5MeVから7MeV領域において、約20本の共鳴散乱ガンマ線を観測し、これまでの共鳴散乱実験で観測されていた11本の遷移の内、8本の遷移に対して新たに、多重極度を決定し、また、今回、新たに観測した9本の遷移に対しても多重極度及び遷移強度を決定した。一方、中重核の低エネルギー電気双極子遷移強度の測定では、入射ガンマ線の強度や直線偏光度及び計測システムの不感時間をより正確に求める必要がある。入射ガンマ線の直線偏光度は、グラントムソンプリズムを用いて、電子ビームとレーザー光の衝突点の後方で測定を行い、波長板を用いてレーザー光の偏光面を回転させてレーザーパワーの変化を測定し、レーザー光の直線偏光度を決めた。入射ガンマ線の強度や直線偏光度及び計測システムの不感時間の正確な測定方法を開発した。また、新たに自己吸収を考慮した解析を行い、より精度の良い遷移強度の値を得ることができた。励起エネルギー10から12MeV以下の電気双極子遷移の強度と原子核表面に現れる中性子スキンとの関連を明らかにするため、兵庫県立大学・高輝度産業科学研究所のニュースバル電子蓄積リング施設で稼働中のレーザーコンプトンガンマ線ビームを用いた核共鳴蛍光散乱実験を行った。実験では、鉛207、ビスマス、クロムターゲットに、レーザーコンプトンガンマ線を照射し、相対検出効率100%から140%の高純度ゲルマニウム検出器を用いて、共鳴散乱ガンマ線の測定を行った。測定では、これらのゲルマニウム検出器を、ビーム軸に対する散乱角90度、かつ、入射ガンマ線ビームの偏光面に対して水平方向と垂直方向に設置し、入射ガンマ線ビームの偏光面と散乱ガンマ線の放出角の相関を調べ、散乱ガンマ線の多重度と共鳴準位のパリティを決定した。特に、Cr-52データの解析結果から、励起エネルギー7.5MeVから12.1MeVにおいて、17の正パリティの準位と19の負パリティの準位を観測し、磁気双極子遷移、及び、電子双極子遷移の強度を決定した。また、Pb-207についても、励起エネルギー5MeVから7MeV領域において、新たに観測した9本の遷移を含む20本の散乱ガンマ線を観測し、多重極度、及び、遷移強度を決定した。乱雑位相近似(RPA)模型計算との双極子遷移強度の比較から、残留相互作用として、2粒子2空孔励起による配位混合やテンソル力が重要であることがわかった。また、Pb-207に対する電気双極子遷移強度の実験値と計算値との比較から、中性子最外殻の3p1/2軌道の寄与よる電気双極子遷移強度の増加と中性子スキンの厚みに相関があることを明らかにした。兵庫県立大学・高輝度産業科学研究所のニュースバル電子蓄積リング施設で稼働中のレーザーコンプトンガンマ線ビームを用いた核共鳴蛍光散乱実験を行った。散乱ガンマ線の強度及び角度分布の測定から、クロム52及び鉛207に対する双極子遷移の強度分布を明らかにした。また、乱雑位相近似模型に基づく理論計算を行い、残留相互作用として、2粒子2空孔励起による配位混合やテンソル力が重要であることがわかった。また、電気双極子遷移強度の比較から、鉛領域核では、電気双極子遷移強度の増加と中性子スキンの厚みに相関があり、主に、中性子最外殻の3p1/2軌道の寄与によることがわかった。核共鳴蛍光散乱実験で得られた測定データの解析も順調に進んでいる。また、乱雑位相近似模型を用いた理論計算も当初の予定よりも早く進んでおり、計画は順調に進んでいると言える。ニュースバル放射光施設において、鉄や鉛領域核などの核共鳴蛍光散乱実験を行い、実験データの解析から、電気双極子遷移と磁気双極子遷移の強度分布を求める。また、理論計算との比較から、双極子励起の発生メカニズムを明らかにする。
博物館IPMへのATP拭き取り検査活用に向けた基礎的な研究

博物館IPMにおけるATP拭き取り検査における合理的なATP発光量の基準を設定していくための基礎的な知見を得ることを目的とし、3年計画の第1年次にあたる平成30年度は、博物館の保存環境におけるカビの生理学的特性についての研究を行った。博物館の保存環境におけるカビのATP発光量の範囲を設定するにあたり、カビ菌種によってATP含有量が異なることから、博物館の保存環境に存在する種々のカビを採取し供試する必要がある。実際の博物館の収蔵庫で保管されている資料や、博物館外部からの借用資料のカビ跡等について採集し単離培養を行った。また博物館IPMとしてATPふき取り検査が活用される場面には、保存環境や展示環境に存在するカビだけでなく、災害時に外部から持ち込まれる水損資料も考慮する必要がある。このことから当初想定していなかった、博物館へ持ち込まれた水損紙資料に発生したカビについても採集した。一般的な博物館の保存環境に存在するカビの傾向をできるだけ反映するため、博物館IPMに関わる環境におけるカビの採集については今後も引き続き行っていく。ここで単離培養されたカビについては、今後同定を行ったうえで、培地上での単位面積当たりのATP発光量を測定していく予定である。また単位面積当たりに含まれる生細胞の割合は、カビの増殖期によって異なるため、今後はこれらのカビの増殖期による培地上での単位面積当たりの発光量の変化についても検証を行っていく。研究環境が変わったことから研究の実施に若干の遅れが出ている。研究環境が変わったことから研究の実施に若干の遅れが出ているが、本研究課題の推進に大きな問題はないため、計画変更は要しない。次年度は引き続き博物館の保存環境におけるカビの生理学的特性について研究を行うとともに、当初の計画通り測定機器間の光学的特性の比較を行う予定である。研究環境が変わったことから、年度末に計画していたカビ同定に係る費用を執行できなかったため、次年度使用額が生じた。準備が整い次第すみやかに執行する予定である。
芳香族系環境汚染物質への紫外線・放射線曝露による構造と生物活性の変化

ビスフェノールA(BPA)およびその塩素化体(3-ClBPA、3,3'-diClBPA、3,3'5-triClBPA)は環境中から検出され、さらに塩素化体の環境ホルモン作用がBPAより強いことが報告されている。本研究ではこれらに紫外線UVA、UVB、UVCを照射し、その生成物の生物活性と構造変化を検討した。3-ClBPAと3,3'-diClBPAはBPAと3,3'5-triClBPAより強い細胞増殖阻害がみられた。そこで、細胞増殖にほぼ影響がない濃度で紫外線を照射し、その影響を検討した。塩素化体にUVBおよびUVCを100J/cm^2照射した時、毒性は未照射より増加したが、1000J/cm^2では100J/cm^2の場合より低下した。これは紫外線照射により、まず毒性の高い物質に変化し、さらなる照射で毒性の低い物質の生成が起こったことを示した。UVA照射によりBPA,3-ClBPA、3,3'-diClBPAでは毒性の変化は観察されなかったが、3,3'5-triClBPAは毒性の上昇を示した。また環境ホルモン作用はUVB照射により消滅した。さらにGC/MSによる照射生成物の同定を、UVBまたはUVCの100J/cm^2照射により細胞毒性の増加がみられた3-ClBPAと3,3'-diClBPAについて行った。その結果、3-OH-BPAや3-OH,3'-ClBPAが検出された。3-OH-BPAは非常に強い細胞毒性を示し、100J/cm^2照射による毒性の増加の1要因と考えられた。1000J/cm^2照射の場合はOH体がさらに分解され、毒性が減少したと推察された。細胞毒性の機構について検討した結果、クロマチン凝集やカスパーゼ3の活性上昇が観察され、細胞死の一つであるアポトーシスの誘導が確認された。本研究の結果は環境化学物質を紫外線の複合効果が環境問題として非常に重要であることを示した。3-ClBPAと3,3'-diClBPAはBPAと3,3'5-triClBPAより強い細胞増殖阻害(Jurkat細胞におけるalamar Blueの代謝による吸光度変化により測定)がみられた。そこで、細胞増殖にほぼ影響がみられない濃度(0.05mM)で紫外線を照射し、その影響を検討した。4種の化合物にUVBおよびUVCを100J/cm^2照射した時、毒性は未照射より増加したが、1000J/cm^2では100J/cm^2の場合より低下した。UVA照射によりBPA,3-ClBPA、3,3'-diClBPAでは変化は観察されなかったが、3,3'5-triClBPAからは毒性の高い物質が生成した。

3,3'5-triClBPAのUV吸収波長がUVAの波長に最も近いことから、3,3'5-triClBPAがUVAのエネルギーを吸収し、活性化されたためかもしれない。さらにGC/MSによる同定を、UVBまたはUVCの100J/cm^2照射により細胞毒性の増加がみられた3-ClBPAと3,3'-diClBPAについて行った。その結果、3-ClBPAからは3-OH-BPAが、3,3'-diClBPAからは3-OH,3'-ClBPAが検出された。この塩素と水酸基の置換は遊離された塩素イオンの定量からも確認された。今後はさらに詳細に構造変化と生物活性の関係や細胞毒性の機構などを検討する。環境中に放出されたビスフェノールA(BPA)とその塩素体(3-ClBPA、3,3'-diClBPA、3,3',5-triClBPA)は紫外線照射(UVBとUVC)によりまず毒性の強い物質に変化し、さらなる照射で構造変化が進み、毒性が弱くなること及びこれら光反応生成物から塩素基が水酸基に変化した水酸化BPAが同定されたことを15年度に報告した。今年度の成果を以下にまとめる。塩素化体自身はBPAより環境ホルモン作用が高くなることが報告されているが、UVB照射によりその作用はほとんど消失した。さらに上述した水酸化BPAの内、3-OHBPAを合成し、その毒性をUV照射した塩素化体と比較した結果、3-OHBPAの生成が光反応生成物の毒性の原因の1つであることが明らかになった。しかしこの化合物の環境ホルモン作用はBPAより強かった。この理由として光反応生成物中の3-OHBPAの量が微量であるためと推察されたが今後の詳細な検討が必要である。細胞毒性のメカニズムに関して、細胞死の1つであるアポトーシスについて検討した結果、その指標であるクロマチン凝集やカスパーゼ3の活性上昇が観察された。この機構についてはネクローシスによる細胞死も含めてさらに検討が必要である。環境中で化学物質は水中だけでなく固体表面に付着した状態でも存在するので、固体界面の影響も受ける。紫外線照射時の固体界面の影響について反応液中にガラスビーズを入れて検討したが、報告できるまとまったデータを得ることはできなかった。環境中で環境汚染物質と紫外線を含めた太陽光との複合効果は生物に影響を与えることがこの研究結果によっても明らかとなり、今後さらに詳細な研究が重要である。
胃がんの組織内多様性と遺伝子のエピジェネティックな変化の関連性

本研究では、胃がんの組織内特異性をエピジェネティックな面から解析した。ヒト胃がんの解析ではヒストンH3K4メチル化に関わるSET7/9の発現低下が認められ、組織内でもその発現が異なっていた。更にSET7/9は細胞分化関連遺伝子群の発現を調節し、がん抑制的機能を持っていた。またp53/E-cadherinノックアウトマウスの胃がん組織よりTwist1の発現が異なる胃がん細胞株を樹立した。Twist1発現はDNAメチル化、ヒストン修飾および転写因子Sp1の複合的エピゲノム変化によって制御されていた。以上、がんの組織内多様性にはエピジェネティックな遺伝子発現制御が関与している可能性が示唆された。胃がんは組織学的に腺管形成が明瞭な分化型とがん細胞がバラバラと散在性に認められる未分化型の2つに大別されるが、同一組織内に両者が混在している場合がしばしば認められる。本研究では、この組織内での違いについて遺伝子のエピジェネティックな変化の面から検討することを目的とし、ヒトとマウス胃がんの両方で解析した。GATA4転写関連遺伝子、およびヒストン修飾関連遺伝子SET7/9とSETDB2について、ヒト胃がん組織のパラフィン包埋切片で免疫組織化学染色を行った。GATA4とSET7/9のタンパク質発現は進行がんで低下しており、SETDB2発現は亢進していることが明らかになった。GATA4の蛋白質発現は、胃がん組織内でも染色パターンが異なっており、部分的な発現低下も複数のがん組織で検出された。GATA4によって発現変化する複数の標的遺伝子とmiRNAを同定したので、機能解析を進めている。siRNAを用いてSET7/9発現を抑制すると細胞増殖、浸潤能などが亢進し、がん抑制的な機能を持つことが示唆された。現在までにGATAおよびSET7/9の標的遺伝子のマイクロアレイ解析は終了しており、いくつかの重要な遺伝子が明らかになった。p53とE-cadherinのダブルノックアウトマウスの原発性胃がんから培養細胞株の樹立に成功した。興味深いことに、1つの細胞株から細胞形態の異なる2種類(roundとflat型)の培養細胞系を樹立できた。両者の違いを遺伝子解析したところ、上皮間葉転換(EMT)に関わる転写因子Xの発現が異なっていた。この転写因子Xはヒト胃がんの場合、浸潤や転移に関わることが既に報告されている。転写因子Xの発現についてエピジェネティックな面から検討した結果、2つの細胞株ではメチル化とヒストン修飾に違いが認められたので、更に解析を進めている。胃がんでは同一組織内に分化型と未分化型胃がんの両者が混在していることがしばしば認められる。これまでに様々な遺伝子変化が両者の胃がんで検出されてきたが、組織内多様性に関わる遺伝子変化の解析はほとんど行われていない。本研究では、この多様性について遺伝子のエピジェネティックな変化の面から検討することを目的とした。まずDNAメチル化異常が検出されているGATA4転写関連遺伝子、およびヒストン修飾関連遺伝子SET7とSETDB2について、胃がん組織のパラフィン包埋切片で免疫組織化学染色を行った。その結果、GATA4とSET7のタンパク質発現は進行がんで低下しており、それら胃がん患者の予後は悪かった。この結果はin situ hybridizationを用いたmRNA発現解析の結果とも同様であった。一方、SETDB2発現は胃がんで亢進していた。これらタンパク質発現の異常は胃がん組織全体で起こっている場合の他、部分的に発現異常が認められる症例も数多くあった。この結果より、GATAおよびSET関連遺伝子に焦点をあてることで、組織多様性の解析が進められることが考えられた。機能解析として、まず胃がん細胞株を用いてSET7およびSETDB2についてsiRNAによる発現抑制実験を行い、マイクロアレイにて網羅的に下流遺伝子発現を探索した。GATA転写因子については既に標的遺伝子の解析が終了しているので、今後、これら標的遺伝子の違いや共通性を調べる予定である。一方、胃がんマウスモデルの実験系では、原発性胃がんから培養細胞株の樹立に成功している。興味深いことに、1つのがん組織から複数の培養細胞系を樹立した場合、EMTに関わる転写因子Xの発現が異なる細胞株が樹立できた。転写因子Xが組織内で異なる発現様式を示すことが推測され、現在、この転写因子におけるメチル化、ヒストン修飾解析も進めている。胃がんでは同一組織内に腺管形成が明瞭な分化型とがん細胞がバラバラと散在性に認められる未分化型の両方が混在している場合がしばしば認められる。本研究では、この組織内多様性について遺伝子のエピジェネティックな変化をヒト胃がんと未分化型胃がん発症マウスを用いて検討した。ヒト胃がん組織を用いてヒストン修飾関連遺伝子SET7/9とSETDB2の免疫組織化学染色を行った。その結果、376例中129例(34.3%)の胃がん組織でSET7/9のタンパク質発現の低下が認められた。SETDB2は71例中30例(42.2%)で高発現していた。SET7/9は進行がんの深部浸潤部分で発現が低下しており、予後との関連性も示唆された。胃がん細胞株を用いてSET7/9とSETDB2の発現調節機構の解明を進めており、ヒストン修飾状態の違いがこれらの発現に強く関わっていることがわかった。機能的にはSET7/9はがん抑制、SETDB2はがん促進的に働くことを明らかにした。一方、胃がん組織内では転写因子GATA4の部分的な発現低下も複数のがん組織で検出された。

我々は既にGATA4発現には遺伝子メチル化が関与していることを報告しているので、メチル化状態の違いがGATA4の組織多様性に関わる可能性が推測された。p53とE-cadherinのダブルノックアウトマウスの原発性胃がんから細胞形態が異なる複数の培養細胞株(roundとflat型)を樹立した。これらは転写因子Twist1の発現が異なっていた。本研究により、Twist1のプロモーター領域とは異なる部分(領域X)のメチル化とヒストン修飾、および転写因子Sp1の結合能がTwist1発現に密接に関わることが明らかになった。現在、1つの胃がん組織からTwist1発現が異なる2つの培養細胞系を樹立できたので、両者のエピジェネティックな変化の違いについて検討している。胃がんは、同一組織内に分化型と未分化型がんが混在するなど、多様な組織形態を示している。組織内多様性に関しては国内外で注目されているが、その分子メカニズムは未だに不明な点が多い。エピジェネティックな異常は細胞分化や腫瘍の発生、増殖において重要な役割を果たしている。本研究では、組織内多様性に着目し、未分化型胃がん発症マウスとヒト胃がんを用いて遺伝子のエピジェネティックな変化を検討した。当教室で作成したp53とE-cadherinダブルノックアウトマウスは100%スキルス胃がんを発症する。このマウス胃がん組織より、細胞形態が異なる2種類の細胞株の樹立に成功した。網羅的遺伝子解析の結果、これら2種類は転写因子Twist1発現が異なっていた。また、脱メチル化剤などのエピジェネティック阻害剤を処理するとTwist1発現が変化し、DNAメチル化やヒストン修飾状態も変わることが明らかになった。また、転写因子Sp1のTwist1遺伝子への結合パターンがTwist1発現に強く一致した。本研究により、Twist1発現にはDNAメチル化、ヒストン修飾およびSp1の複合的メカニズムが密接に関わることが明らかになった。免疫組織化学染色を行うとTwist1はマウス胃がん組織内で発現パターンが異なっており、その違いにこれら複合的エピゲノム変化が関与する可能性が推測された。次に、ヒト胃がんでヒストン修飾関連酵素SET7/9の発現を調べた。その結果、約40%の胃がんでSET7/9発現低下を認めた。機能解析により、SET7/9ががん抑制的な役割を示すこと、およびその標的遺伝子として複数の細胞分化に関わる遺伝子が単離された。SET7/9発現は同一胃がん組織内でも発現陽性部分と陰性部分が認められたため、今後、SET7/9と組織内多様性との関連性を調べる必要があると考えている。本研究では、胃がんの組織内特異性をエピジェネティックな面から解析した。ヒト胃がんの解析ではヒストンH3K4メチル化に関わるSET7/9の発現低下が認められ、組織内でもその発現が異なっていた。更にSET7/9は細胞分化関連遺伝子群の発現を調節し、がん抑制的機能を持っていた。
甲状腺癌のプログレッションにおける遺伝子背景の分子病理学的解析

乳頭癌と未分化癌混在例について、RET遺伝子の再構成とBRAF遺伝子の突然変異を解析した。その結果、乳頭癌成分、未分化癌成分ともRET遺伝子再構成は無く、BRAF遺伝子は両成分で40%以上が検出された。さらに、2例では、BRAF遺伝子の突然変異は、乳頭癌成分にのみ認められた。以上より、RET遺伝子再構成、とくにRET/PTC1は乳頭癌から未分化癌へのプログレッションにはほとんど関係せず、BRAF遺伝子の突然変異がプログレッションに重要な役割をもつ可能性が示唆された。甲状腺腫瘍の形態所見と臨床像との関連あるいはホルモンを中心とした機能的側面について、病理学的な側面から種々の検討を加え、多くの実績をあげてきた(Katoh et al.Microsc Res Thch 60,2003)。近年はさらに実験的にラット甲状腺に腫瘍を作成し、発生した腫瘍をマイクロダイゼクション法を用いて結節のみからDNAを抽出することに成功し、PCR法を用いて蝦5遺伝子の変異を検討した(Kobayashi et al.,Virchows Arch 441,2002)。従来より日本人ではこの遺伝子変異は低率であるとされてきたが、近年の我々の研究では日本人乳頭癌における本遺伝子異常の率は、欧米人と有意な差が無いことを報告してきた。また乳頭癌ではまた興味あることにRET遺伝子再構成(RET/PTC)は若年者に発生する癌と密接に関係することを証明した(Nakazawa et al.Cancer 104,2005)。また、RET遺伝子再構成が証明されない乳頭癌の発生には、ras遺伝子やさらにMAP kinase系を刺激するBRAF遺伝子の異常も重要視されている(近藤哲夫ほか、2004年日本病理学会総会)。甲状腺低分化癌は昨年発刊のWHO分類で正式にその概念が認知され、本邦の甲状腺癌取り扱い規約においてもその存在がクローズアップされた。現在まで、分化癌から低分化癌さらには未分化癌への転化におけるまとまった研究は報告されていない。我々は、従来の報告および自己の成果を踏まえ、濾胞上皮細胞から発生する甲状腺腫瘍のプログレッションについて背景となる遺伝子異常の機構を解明することを目的とした。その結果は、治療の困難な甲状腺癌の発生機構を解明するもので、腫瘍病理学的な興味とともに、臨床的な治療の立場からも有用な情報を与えるものと考えている。さらに、同じ分化癌でも将来的にプログレッションを起こしうるものかどうかの推定にも役立つものと考えている。現在まで、甲状腺の分化癌から低分化癌、未分化癌へのプログレッションにおける遺伝子背景については不分明で、またその形態的なクライテリアも十分に確立されているとは思わない。そこで、甲状腺癌のプログレッションの形態的な客観性を確立する目的で、イタリアのトリノでコンセンサスミーティングに参加し、甲状腺低分化癌の病理学的クライテリアについてまとめた(VOLANTE et al. Am J Surg Pathol 31,2007)。一方、甲状腺癌の遺伝子背景については、昨年までの実績を踏まえて、B-Raf蛋白の発現との関係を免疫組織化学的に検討したところ、甲状腺癌ではB-Raf蛋白の発現が更新していることが証明された(Kondo et al. Hum Pathol 38,2007)。さらに現在は甲状腺未分化癌でのB-Raf遺伝子やRET遺伝子の発現について検討しており、RET遺伝子は甲状腺癌のプログレッションに関与する可能性は少なく、B-Raf遺伝子の関係が重要であることが考えられた(投稿中)。甲状腺癌は予後の良い癌として知られているが、低分化癌や未分化癌は予後の悪い腫瘍で、現在でも有効な治療法は確立されていません。そこで、予後の悪い低分化、未分化癌の将来の治療法の確立と予後の改善を目的として遺伝子背景を検討することにした。現在まで、甲状腺の分化癌から低分化癌、未分化癌へのプログレッションにおける遺伝子背景については不分明で、またその形態的なクライテリアも十分に確立されていない。そこで、甲状腺癌のプログレッションの形態的な客観性を確立する目的で、イタリアのトリノでコンセンサスミーティングに参加し、甲状腺低分化癌の病理学的クライテリアについてまとめた(VOLANTE et al. Am J Surg Pathol 31, 2007)。一方、甲状腺癌の遺伝子背景については、昨年までの実績を踏まえて、B-Raf蛋白の発現との関係を免疫組織化学的に検討したところ、甲状腺癌ではB-Raf蛋白の発現が更新していることが証明された(Kondo et al. Hum Pathol 38, 2007)。さらに現在は甲状腺未分化癌でのB-Raf遺伝子やRET遺伝子の発現について検討しており、RET遺伝子は甲状腺癌のプログレッションに関与する可能性は少なく、B-Raf遺伝子の関係が重要であることが考えられた(Nakazawa et al.投稿中)。

さらに、現在まで検討されたことのない甲状腺未分化癌と分化癌の混在例の遺伝子背景を検討し、未分化癌の多くが分化癌からのプログレッションによることを分子病理学的立場から証明することができた(Mochizuki et al.投稿中)。さらに、他の遺伝子についても将来検討していくことを計画している。
ウサギ胎仔持続的薬物投与モデルを用いた肺成熟過程の相互作用に関する研究

妊娠家兎胎仔(25日齢)に、マイクロオスモティックポンプを用いて神経筋遮断剤の持続投与を行うことにより、胎仔呼吸様運動を停止させる実験を15胎仔に施行した。胎仔呼吸様運動の観察は、超音波断層法により行い、ビデオテープに記録した。妊娠28日齢で、胎仔を解剖し、胎仔重量および肺、肝臓、心臓、腎臓等の臓器重量を計測した。さらに、肺細胞については、光学顕微鏡標本、電子顕微鏡標本を作製し、肺胞分岐数、Radial alveolar count(RAC)、II型肺細胞内lamellar bodyの数、大きさを指標として、胎仔呼吸様運動の胎仔肺成熟に及ぼす組織学的影響を検討した。対照としては、胎仔呼吸様運動を有する生理食塩水注入群と無処置群を用いた。胎仔重量は、実験群、対照群で有意差はなかった。胎仔肺重量および肺/体重比は、実験群で有意に低値を示した。肺以外の臓器重量および臓器重量/体重比には、実験群、対照群で有意差はなかった。光学顕微鏡所見では、肺胞分岐数、RACとも実験群で有意に低値を示した。また、電子顕微鏡所見では、II型肺細胞内lamellar bodyの数、大きさとも実験群で有意に低値を示した。以上の実験結果から、神経筋遮断剤持続投与による胎仔呼吸様運動の停止が、肺低形成および組織学的肺成熟の遅延に関与したと考えられ、胎仔呼吸様運動の肺形成、肺成熟における重要性が示唆された。今後は、胎仔呼吸様運動の生化学的肺成熟過程との関係について検討を続けたい。
相乗的活性化により反応を促進する不斉有機触媒の創製

適切な反応促進ユニットをキラルな骨格へ導入することで"相乗的活性化効果"を生み出す不斉触媒の創製研究を行った。具体的には、剛直なスピロ骨格に、イソオキサゾリン、イソオキサゾールおよびイミダゾールを導入した不斉スピロ型配位子のコンビナトリアル合成を行った。それら配位子を用い、医薬品合成原料に有用な光学活性ヘテロ環化合物の効率的合成法を確立した。また、α,β-不飽和カルボニル化合物とイミンとの炭素-炭素結合形成反応であるaza-Morita-Baylis-Hillman (aza-MBH)反応に有効なブレンステッド酸-ルイス塩基型不斉有機分子触媒の開発に成功した。(1)マロン酸誘導体に様々なアルケニル基やアルキニル基を導入することでスピロイソオキサゾリン/イソオキサゾール配位子のコンビナトリアル合成を展開した。今回、合成した光学活性スピロ型配位子は、既に開発しているスピロビスイソオキサゾリン配位子(SPRIX)と同等もしくは選択的に二環式化合物を与えた。また、高エナンチオ選択的に二環式化合物を与えた。(2)二重活性化能を有する触媒研究の新展開として、aza-MBH反応に有効な二重活性化能を有する有機不斉分子触媒の開発研究を行った。本反応に有効な有機不斉分子触媒を構築するには、基質であるα,β-不飽和カルボニル化合物を活性化する酸性および塩基性部位の不斉骨格への適切な位置への導入が重要と考えられる。結果、光学活性1,1'-bi-2-naphthol (BINOL)の3位からスペーサーを介してルイス塩基であるホスフィンユニットを導入した有機分子触媒の開発に成功した。ブレンステッド酸として働くフェノール性ヒドロキシ基を保護すると活性および不斉収率の低下が見られることから2つのフェノール性ヒドロキシ基が必須であることが示唆された。
歴史社会学の理論・実証の蓄積の再構築と新しい研究教育法の開発に関する総合研究

三年目の研究プロジェクトにおいて大きく進んだ方向性として、2点をあげることができる。一つは、昨年度事業の繰り越し実施で行われたオーストラリアのアデレードでの国際研究交流集会などを踏まえて、メディアの歴史的・現代的変容と深く関係させつつ社会学研究の方法論を再検討する必要を掲げる本研究の、国際的な意義の検討が進んだことである。とりわけ、日本社会だけでなく、グローバルな現代社会の変容において、その観察・記述・分析において社会学がいかなる方法論的なツールを開発しえているのかを反省的に捉えなければならない課題が浮かびあがってきた。その方法論的な意義をもつツールには、「AI」というマジックワードで括られてしまっているものを含めたさまざまな電子テクノロジーが包含されていると同時に、感性や言語を内蔵した調査者/被調査者の身体もまた含まれる。いわば、グローバルであると同時にローカルな課題が明らかになりつつある。二つ目に、この研究プロジェクトの成果として、力を入れて進めてきた「教科書」と位置づけうる入門書もしくはハンドブックの作成が軌道に乗りつつあることである。「歴史社会学」への招待として、いかなる解読の想像力が歴史社会学と論じうるのかを、いくつかの主題・テーマ・専門領域においての研究者自身の解説において提示するとともに、蓄積されてきた資料やデータをどのように活用しうるかという「ハンドブック」的・実践的な性格についても、工夫が検討された。研究代表者が本年度の実績のひとつとしてまとめた『文化資源学講義』は、実際には歴史社会学的な発想で貫かれており、基礎理論編において「文化」「資源」「情報」といった概念の基礎を根底から問いなおし、演習・実習編では具体的な対象である「新聞錦絵」や「万年筆」といった事物を取りあげ、分析をどう立ち上げるかを論じている。「教科書」構想の参考となるだろう。何度かの研究会における検討を通じて、研究当初の第2課題である「コモンズとしての蓄積の再編成」のひとつに位置づけられる教科書・ハンドブックの内容については、大きく進んだといえるだろう。具体的には「歴史社会学への招待」「歴史社会学入門」「歴史社会学的想像力の諸相」「さまざまな歴史資料・データ」という仮タイトルの4部構成において、主題テーマ、先行研究の古典、資料論などを幅広く押さえた執筆の要項の検討が進んだ。具体的な執筆の分担についても、調整が進みつつある。「コモンズとしての蓄積の再編成」のもうひとつに位置づけられるデータベースの構築については、一昨年度に展開した「作田啓一と見田宗介」の連続シンポジウムを受けて、研究者個人という括りにおいて整理活用できる資料共有の試行的な実験が進んでいる。具体的には作業を進めてきて、文献目録レベルでも筆名・匿名の処理や、改訂の関連づけなど、共有における課題が浮かびあがってきており、今後の研究会での検討が待たれる。また主題データベースについても、研究代表者が取り組んだ「浅草十二階」ケーススタディを踏まえた検討が進んでいる。「歴史社会学の理念と方法の再構築」という研究の第1課題については、研究会活動を通じて着実に進めつつある。研究代表者・研究分担者による論文での公表にまで至っているものは少ないが、これまで統合的に描かれていない日本社会学史に資する研究が進められている。とりわけ、戦後における日本の社会学の展開については、その欠落が近年多くの研究者から指摘されており、それらを補う知識の蓄積と参照が共有されなければならないと考えている。これまでの成果を踏まえ、それぞれの持ち場での研究を進めるとともに、研究会活動を継続することで、ひきつづき「歴史社会学の理念と方法の再構築」と「コモンズとしての蓄積の再編成」に取り組んでいく予定である。データベース型の公共化を進めるにあたって、技術的・システム的な展望を得られるような活動と同時に、「公共圏」という理念等とのすりあわせも必要ではないかと考えている。また昨年度来ひとつの主題となってきている、個人に焦点をあてた資料データベースが抱える問題点や文字テクストや画像データ等々の資料群の公開・共有の形態などについては、専門家を招いた研究会などの工夫が必要であろう。いずれも、具体的な資料の処理にもとづいた議論が必要であると考えており、抽象的な原理や技術に留まるものではないだろうと見込んでいることから、これまで蓄積してきた資料群にもとづく作業を推進していきたい。研究の国際的・社会的な拡がりについては、本年度は必ずしも研究プロジェクト全体での海外での研究交流にはこだわらず、日本におけるさまざまな歴史的な展開を視野に入れる形での研究展開を考えてみたい。もちろん、分担者それぞれの研究活動を含め、国際的な展開を軽視するものではない。初年度は「歴史社会学」の研究の蓄積を網羅し、その存在形態と、それがどのように論じられ認識されてきたかを把握するという基礎作業を中心に研究会活動を進めた。とりわけBourdieu風に表現するなら「歴史社会学のメチエ(経験に根ざす職人的な方法知)」とも呼ぶべき方法論に裏付けられた実践的な社会学的想像力について、それぞれの研究フィールドから素材を出しあった。なかでも、戦後社会学をリードしてきた作田啓一や見田宗介の著作についての検討などにおいては、研究者の資質・方法の違いもさることながら、時代や世代の文脈をたんねんに把握することの重要性など、今後につながる論点を多く提出された。

戦後日本の社会科学を再出発であった政治学者らの軍国主義の精神構造や天皇制国家の分析についても、同時代の「思想の科学研究会」の戦争期や戦後社会の現実分析や、社会学のなかで固有に展開した「近代化」論の試みなどをにらみつつ位置づけてみると、見田宗介の「社会心理史」や「存立構造論」などを、あらたな歴史社会学的分析として意味づける視座がえられる。いわゆる社会史のインパクトを受けて、1990年代あたりから簇生するようになった、ライフヒストリーやエスノグラフィーを名のる社会学の歴史把握についても検討を進めているところである。社会学方法論および社会調査論のテクストにおける歴史性の把握もひとつの課題であったが、本年度は戦争社会学の領域において検討を進め、合宿の研究会として成果としての「教科書」についての素案を練り上げた。本共同研究が具体的にとりくむのは、「1多様な展開をしめした近代日本における「歴史社会学」の理論と実証の成果を、その理論枠組みの特質や方法論的な問題点もふくめて一覧できる学史的なデータベースを構成すること」であったが、問題の検討は順調に進んでいると評価できる。その一方でデータベースをどう作成していくかという具体的な課題に関しては、「2系譜の厚みの検討のなかから、Bourdieu風に表現するなら「歴史社会学のメチエ(経験に根ざす職人的な方法知)」とも呼ぶべき方法論に裏付けられた実践的な社会学的想像力を立ちあげる能力を、社会学の今後の研究法の教育に活かすこと」という課題との関連において、まだ準備段階にとどまっており、今後の推進の仕方を研究会でも議論したい。さらに「3資源の共有をつうじて、その世界史的な意義を明確にするなかで、広い意味で「社会問題」あるいは社会の危機に対処する知として構築されてきた社会学の存在意義を現代において示すこと」という目的に関しては、作田啓一と見田宗介の二人をとりあげた連続シンポジウムにおいて、一般にも歴史社会学の新たな意義について発信しており、こうした活動は次年度も続ける予定である。三年目の研究プロジェクトにおいて大きく進んだ方向性として、2点をあげることができる。一つは、昨年度事業の繰り越し実施で行われたオーストラリアのアデレードでの国際研究交流集会などを踏まえて、メディアの歴史的・現代的変容と深く関係させつつ社会学研究の方法論を再検討する必要を掲げる本研究の、国際的な意義の検討が進んだことである。とりわけ、日本社会だけでなく、グローバルな現代社会の変容において、その観察・記述・分析において社会学がいかなる方法論的なツールを開発しえているのかを反省的に捉えなければならない課題が浮かびあがってきた。その方法論的な意義をもつツールには、「AI」というマジックワードで括られてしまっているものを含めたさまざまな電子テクノロジーが包含されていると同時に、感性や言語を内蔵した調査者/被調査者の身体もまた含まれる。いわば、グローバルであると同時にローカルな課題が明らかになりつつある。二つ目に、この研究プロジェクトの成果として、力を入れて進めてきた「教科書」と位置づけうる入門書もしくはハンドブックの作成が軌道に乗りつつあることである。「歴史社会学」への招待として、いかなる解読の想像力が歴史社会学と論じうるのかを、いくつかの主題・テーマ・専門領域においての研究者自身の解説において提示するとともに、蓄積されてきた資料やデータをどのように活用しうるかという「ハンドブック」的・実践的な性格についても、工夫が検討された。
生殖系機能発現に対する免疫細胞のパラクリン調節

排卵は卵胞の損壊を伴う卵巣の局所的炎症であり、黄体形成は炎症後の肉芽腫形成と類似の現象と考えられる。排卵の際に、マクロファージが浸潤し、黄体形成後も黄体内に遺存するが、その機能はいまだ明らかでない。黄体に遺存するマクロファージの機能を調べるために、性周期の異なる時期にラット脾臓を摘出し、その効果を検討した。発情後期の午前に脾臓を摘出すると、それに続く排卵を1日遅延させる。排卵遅延を生じたラットの血中ステロイドホルモンの濃度を測定したところ、正常ラットに比べて、発情間期のプロゲステロンが高く、20αジヒドロプロゲステロンが低かった。発情間期の午前中にプロゲステロンの濃度が高いと、排卵を誘起するLHのサージの出現を遅延させるため、脾臓摘出によって生じた排卵遅延の原因は、黄体の機能退行が遅延し、それによるプロゲステロンの高濃度がLHのサージを遅らせたことにあると思われる。さらに、発情後期に脾臓を摘出したラットに、発情後期または発情期のラットの脾臓を移植すると排卵遅延を防ぐことができた。これらの結果は、黄体に浸入した脾臓細胞が性周期黄体の機能退行を促進していることを示唆している。ラットでは、プロラクチンが黄体の20αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性を抑制することにより黄体機能の退行を阻止する。従来、プロラクチンの黄体退行抑制作用をin vitroで再現することができなかった。そこで、マクロファージの共存下にプロラクチンの効果を調べた。偽妊娠ラットより得た黄体細胞を発情後期のラットより採取したマクロファージと共に48時間培養すると、プロラクチンの黄体20αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性上昇抑制作用が観察された。以上の結果は、黄体機能がマクロファージをはじめとする脾臓細胞のパラクリン調節下にあることを示唆するものである。単球由来の各種ヒスチオサイトが各種組織内に存在することは周知の事実で,これらが組織固有の機能調節に関与していることは十分に予想される.今年,脾臓由来マクロファージ(Mφ)様細胞が黄体機能調節に重要な役割を果していることをインビトロ,インビボ実験より明らかにした.まず,ラットを用いて性周期の異る時期に脾臓摘出を行い,その影響をしらべた.その結果,Metestrusの特定時期の脾臓摘出のみがその後の排卵日を一日遅延させた.そして,脾臓摘出ラットに別個体の脾臓細胞を移植することによって排卵遅延の発生を防ぐことが明らかになった.脾臓摘出によって排卵遅延が生じるラットの血中プロジェステロン(P)および20αーダイハイドロプロジェステロン(20αーP)濃度を測定した結果,正常ラットに比べてDiestrus午前中のP濃度が高く, 20αーP濃度が低いことがわかった.これらより,(1)Metーestrus午前中に脾臓由来の浮遊性細胞が新生黄体内に侵入し性周期黄体の機能的退行を促進している.(2)性周期黄体の機能に関与する脾臓細胞に性周期の回帰を認識する機構が存在することが示唆された.次に偽妊娠ラット(8日目)の黄体を用いて脾臓M0が直接黄体細胞に作用することをインビトロ実験で示した.黄体細胞単独ではプロラクチン(PRL)存在下でもP/20αーP分泌比率は培養時間経過と供に低下する.

PRL存在下で黄体細胞をM0と共培養した場合,P/20αーP比率は高値に保たれた.このように,インビトロ系で初めてPRLのLuteotrophic作用を示すことが可能となったが,この場合も, MetestrusのM0が最も高い活性を示した.以上示した実験成績はM0様細胞が少なくとも黄体の機能発現あるいは分化の細胞性調節因子として機能を果していることが明らかとなった.現在,卵巣,下垂体におけるこれら細胞の関与について研究中である.排卵は卵胞の損壊を伴う卵巣の局所的炎症であり、黄体形成は炎症後の肉芽腫形成と類似の現象と考えられる。排卵の際に、マイクロファージ浸潤し、黄体形成後も黄体内に遺存するが、その機能はいまだ明らかでない。黄体に遺存するマイクロファージの機能を調べるために、性周期の異なる時期にラット脾臓を摘出し、その効果を検討した。発情後期の午前に脾臓を摘出すると、それに続く排卵を1日遅延させる。排卵遅延を生じたラットの血中ステロイドホルモンの濃度を測定したところ、正常ラットにくらべて、発情期間のプロゲステロンが高く、20αジヒドロプロゲステロンが低かった。発情間期の午前中にプロゲステロンの濃度が高いと、排卵を誘起するLHのサージの出現を一日遅延させるため、脾臓摘出によって生じた排卵遅延は、黄体の機能退行の遅延によって生じたプロゲステロンの高濃度によりLHサージが遅延したためと考えられる。発情後期に脾臓を摘出した動物に、発情後期または発情期中のラットの脾臓を移植すると、排卵遅延を防ぐことができた。これらの結果は、発情後期の午前中に脾臓細胞が黄体内に浸入し、性周期黄体の機能退行を促進していることを示唆している。ラットでは、プロラクチンが黄体の20αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性を抑制することにより、黄体機能の退行を阻止する。従来、このプロラクチンの黄体退行抑制作用をin vitroで再現することができなかった。そこで、マイクロファージの黄体機能に与える影響を検討するために、脾臓細胞の共存下に、黄体細胞を培養し、プロラクチン作用の効果を調べた。偽妊娠ラットより得た黄体細胞と、性周期中に採取したマイクロファージを48時間培養した結果、発情後期の脾臓細胞と培養すると、プロゲステロンの濃度が高く、プロラクチンの黄体20αヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ活性上昇抑制作用が観測され、マクロファージのパラクリン調節を示唆した。
常染色体優性外側側頭葉てんかんの病態解明の融合的研究

側頭葉てんかんは成人てんかんで最も多く、常染色体優性外側側頭葉てんかん(ADLTE)はイオンチャンネル以外の遺伝子(LGI1)異常が発見され、その病態を検討した.3家系でのLGI1のアミノ酸置換を伴う点変異は、exon8の1645G>Aと1642C>T、exon7の677T>Gで、家系間と家系内で症状差を認め、外側・内側側頭葉症状、パニック発作などが混在した.FDG-PET、MRIで外側側頭葉の糖代謝低下と容量低下を示した.音刺激での誘発発作を有する患者では、全頭型脳磁場計測装置で聴覚誘発磁場振幅の異常増強を認めた.本疾患では、genotypeとphenotypeの相違を決定する修飾因子の存在が示唆され、今後は全国規模の多数例の解析と動物モデルでの病態研究を予定する.側頭葉てんかんは成人てんかんで最も多く、常染色体優性外側側頭葉てんかん(ADLTE)はイオンチャンネル以外の遺伝子(LGI1)異常が発見され、その病態を検討した.3家系でのLGI1のアミノ酸置換を伴う点変異は、exon8の1645G>Aと1642C>T、exon7の677T>Gで、家系間と家系内で症状差を認め、外側・内側側頭葉症状、パニック発作などが混在した.FDG-PET、MRIで外側側頭葉の糖代謝低下と容量低下を示した.音刺激での誘発発作を有する患者では、全頭型脳磁場計測装置で聴覚誘発磁場振幅の異常増強を認めた.本疾患では、genotypeとphenotypeの相違を決定する修飾因子の存在が示唆され、今後は全国規模の多数例の解析と動物モデルでの病態研究を予定する.現在当施設で加療中の常染色体優性外側側頭葉てんかん(autosomal dominant lateral temporal lobe epilepsy with auditory features : ADLTLE)はADLTLEは3家系あり、そのうち外来で通院加療中は現在計6名である。他施設で加療中あるいはてんかん発作が強く疑われる構成員は現在段階で13名が把握されている。本年度は、臨床症状および各所臨床検査所見に関して、検討して、以下のような結果を得た。1)2家系において、遺伝子検索を行い、LGI1遺伝子のexon8における点突然変異を2家系で異なる部位に認めた。その一つは既報告で、もう一つは新たな部位であった。2)同一家系においても臨床症状に差異を認め、外側側頭葉症状、内側側頭葉症状、パニック発作症状が、混在していた。また家系間でも上記症状には差異を認めた。3)少なくとも異なる2家系に属する2名の患者の発作は極めて難治であり、過去の報告のように発作は必ずしも稀発ではなかった。4)FDG-PET、MRIでは、それぞれ外側側頭葉の糖代謝低下と容量低下を示した。5)脳波検査では、発作間欠期のてんかん性放電の出現率は極めて低かった。一方、臨床症上音刺激で誘発される発作を有する患者においては、全頭型脳磁場計測装置を用いて、聴覚誘発磁場(auditory evoked field : AEF)の振幅の異常な増強を認めた。以上より、LGI1遺伝子以外に、genotypeとphenotypeの相違を決定する修飾因子の存在が強く示唆された。また異常機能部位が、興奮性の亢進か脱抑制の低下であるかは、今後検討検討を進める予定である。現在当施設で加療中の常染色体優性外側側頭葉てんかん(autosomal dominant lateral temporal lobe epilepsy with auditory features: ADLTLE)は当初3家系あり、そのうち外来で通院加療中は現在計6名である。本年度は、2年目の結果として臨床症状と検査所見に関して検討して、以下のような結果を得た。1)LGI1遺伝子異常を認めた2家系の臨床症状と詳細に検討した。同一家系においても臨床症状に差異を認め、外側側頭葉症状、内側側頭葉症状、パニック発作症状が、混在していた。少なくとも異なる2家系に属する2名の患者の発作は極めて難治であり、過去の報告のように発作は必ずしも稀発ではなかった。FDG-PET、MRIでは、それぞれ外側側頭葉の糖代謝低下と容量低下を示した。臨床症上音刺激で誘発される発作を有する患者においては、全頭型脳磁場計測装置を用いて、聴覚誘発磁場(auditory evoked field: AEF)の振幅の異常な増強を認めた。2)さらに、臨床的にADLTLEと診断され優性遺伝を示す2家系と家族歴は明瞭ではない3名の遺伝子検査を施行したが、いずれもLGI1遺伝子異常はなかった。(また、付記として、京大動物実験施設での動物モデルの研究では、ENU誘発突然変異G1ラット(ENUを投与したF344雄ラットにF344雌を交配して得られた子)1735頭のDNAスクリーニングでは、LGI-1変異は未だ発見されていない。)以上より、LGI1遺伝子以外に、genotypeとphenotypeの相違を決定する修飾因子の存在が強く示唆されるともに、LGI異常によるADLTLE自体はむしろ発現は稀な病態であることが示唆され、今後は全国の施設での疑い症例の遺伝子検査を進めることを検討していく。

少なくとも異なる2家系に属する2名の患者の発作は極めて難治であり、過去の報告のように発作は必ずしも稀発ではなかった。FDG-PET、MRIでは、それぞれ外側側頭葉の糖代謝低下と容量低下を示した。臨床症上音刺激で誘発される発作を有する患者においては、全頭型脳磁場計測装置を用いて、聴覚誘発磁場(auditory evoked field: AEF)の振幅の異常な増強を認めた。LGI1による蛋白は脳内しかも側頭葉外側での発現が多いことも最近指摘され、ADAM22がLGI1蛋白の受容体であることが示されその異常がシナプス伝達に関与することが示された。以上から、AEFの振幅の異常な増強は、抑制系の破綻かあるいは興奮の増強かは、病態解明と治療へのアプローチに関してさらに解明する必要がある。今後の展望LGI1遺伝子改変ラットの開発:既に実績のあるENUミュータノジェネシス法により個体を作成し、その精子の新規DNAスクリーニング法によりてんかん関連遺伝子異常を見いだし顕微授精して遺伝子改変ラットを作成する方法を用いる。作成されたラットの行動評価、脳波記録によりてんかん活動の有無の評価、動物用PETによるてんかん焦点を評価して、部分てんかんモデルとしての妥当性とその行動学的、生理学的特徴を明らかにする。さらに組織学的に異常遺伝子の発現蛋白の脳内分布と発現蛋白の免疫的機能的評価、発現した神経細胞の組織学的、機能的評価を行い、LGI1の異常遺伝子が如何にして神経細胞にてんかん原性を発現させるかという機序を明らかにして、clinico-genotype correlation検討を進める。本申請グループでは現時点でENUミュータノジェネシス法により上記のADLTEのLGI1の異常を有する精子の作成に既に成功し、今後顕微授精の予定である。