hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
希土類-コバルト酸化物のp-f軌道混成と電子状態

このことからLa_<0.9>Pr_<0.1>CoO_3のCo^<3+>イオンはLaCoO_3のそれと同様2段階スピン転移を生じることが分かる。しかしその転移温度はPrドープ量とともに高温側へシフトしていく。この現象を、La^<3+>とPr^<3+>のイオン半径の違いに寄る化学的圧力効果と考え、解析に成功した。ペロブスカイト型酸化物RECoO_3(RE:希土類元素)におけるp-f混成効果がもたらす特異な磁性と電子輸送特性、主に熱電特性との間に相関に注目して、La_<1-x>Pr_xCoO_3単結晶試料を作製し、その磁性と電子輸送現象を系統的に研究した。(1)電気抵抗測定から、REサイト置換により、キャリア数が増大する、またはポーラロンホッピング伝導の活性化エネルギーが減少する、といった効果があること、熱電能およびホール効果測定からLaCoO_3へのPr少量ドープにより負符号のキャリア、PrCoO_3へのLa少量ドープにより正符号のキャリアがドープされていることを示唆する結果を得た。これらの実験事実を、Pr-4f軌道がO-2p軌道を介してCo-3d軌道と混成することにより、Co-3d軌道に電子的なキャリアがドープされているというモデルで説明した。(2)La_<1-x>Pr_xCoO_3単結晶におけるCoによる磁気モーメント成分を抽出することを目的として、La_<1-x>Pr_xAlO_3多結晶試料を作製し、磁化測定を行った。その結果、La_<1-x>Pr_xAlO_3の帯磁率の温度依存性は結晶場を考慮したPr-4f状態による磁気モーメントで説明できるが、La_<1-x>Pr_xCoO_3の低温での帯磁率はこれでは説明できないことが明らかになった。これはPrの磁気モーメントがLa_<1-x>Pr_xAlO_3とLa_<1-x>Pr_xCoO_3で大きく異なることを示唆する。これは、上記のPr-4f軌道のO-2p軌道を介したCo-3d軌道との混成により、Prの磁気モーメントの大きさが変化していることによる可能性がある。すなわち上記モデルの傍証と考えられる。(3)光電子分光によるPr-4f軌道の観測を行い、La_<1-x>Pr_xCoO_3においてはPr-4fレベルがCo-3dレベルに非常に近く、重なっていることが明らかになった。これはPr-4f軌道がO-2p軌道を介してCo-3d軌道と混成しているというモデルの協力な証拠となる。(4)La_<0.1>Pr_<0.9>CoO_3の帯磁率の温度依存性(x(T))はPrCoO_3のそれと100K以下の低温を除いてほぼ等しい。これはPrの4f電子の磁気モーメントの寄与が大きいことを示す。一方、La_<0.9>Pr_<0.1>CoO_3のx(T)はLaCoO_3のそれと同様、100K付近にピークを持ち、500K付近にもプラトーを持つ。このことからLa_<0.9>Pr_<0.1>CoO_3のCO^<3+>イオンはLaCoO_3のそれと同様2段階スピン転移を生じることが分かる。ペロブスカイト型酸化物RECoO_3(RE:希土類元素)におけるp-f混成効果がもたらす特異な磁性と電子輸送特性との間に相関に注目して、La_<1-x>Pr_xCoO_3単結晶試料を作製し、磁性と電子輸送現象を系統的に研究した。
がん診断のためのイメージング抗体の作製技術の開発

CD44は接着分子としてがん幹細胞の自己複製能を維持するために必要な因子の一つと考えられていることから人工がん幹細胞が細胞プレートへの接着を阻害する一本鎖抗体のセレクションをIVV法により行った。全部で7ラウンドの選択実験後、得られた2つのクローンAXT7-30とAXT7-12はAXT細胞の細胞プレートへの接着を阻害した。CytoTox-Glo CytotoxicityAssayの結果、強い殺細胞活性を有し(IC50=3nM)、AXT7-30の方が3倍強い活性を有していた。そこでこの一本鎖抗体AXT7-30を使って蛍光ラベル化抗体を作成した。tdTomatoは非常に明るい赤色蛍光タンパク質であり、tdTomato蛍光ラベル化されたAXT7-30を用いて免疫染色したところAXT細胞を明瞭に蛍光観察することができた。現在この蛍光ラベル化一本鎖抗体の担がんマウス投与を実施中であり、二光子励起蛍光顕微鏡を用いた体内動態の画像化によりがん細胞への集積を解析中である。全部で7ラウンドの選択実験後、得られた2つのクローンAXT7-30とAXT7-12はAXT細胞の細胞プレートへの接着を阻害し、免疫染色実験ではAXT細胞に結合していることが確認された。さらにWST-1アッセイによる増殖阻害実験では濃度依存的にAXT細胞の増殖を抑えた。CytoTox-Glo Cytotoxicity Assayにより評価した結果、強い殺細胞活性を有し(IC50=3nM)、AXT7-30の方が3倍強い活性を有していた。両一本鎖抗体の抗原を探索する目的でまずCD44に対する結合をビアコアにより調べところ両者ともCD44に対して強い親和性を示した。CD44に対する親和性と各種生物活性の強さは相関していた。tdTomatoは非常に明るい赤色蛍光タンパク質であり、EGFPの2.5倍の蛍光強度を示す。tdTomatoは、dTomato(dimeric Tomato)遺伝子2つをタンデムにつなぎ合わせ、タンデム2量体を形成するよう設計されている。これにより非常に明るい蛍光シグナルが得られ、しかも凝集性は極めて低く抑えられている。tdTomato蛍光ラベル化されたAXT7-30を用いて免疫染色したところAXT細胞を明瞭に蛍光観察することができた。一方正常細胞であるWT細胞を蛍光標識することはなく高い特異性が認められた。現在この蛍光ラベル化一本鎖抗体の担がんマウス投与を実施中であり、体内動態の画像化in vivo imagingによりがん細胞への集積を画像解析中である。CD44は肺がん、脳腫瘍、乳がん、膵臓がん、骨髄腫などのがん細胞や、肺がん、大腸がん、白血病、前立腺がんなどの幹細胞の特異的表面抗原として知られている。CD44と高分子量ヒアルロン酸(HMWHA)との結合を特異的に阻害することのできる一本鎖抗体の超高効率なスクリーニングをマイクロ化学チップを利用したIVV法により行った。一本鎖抗体のIVVライブラリー存在下高分子量ヒアルロン酸(HMWHA)コーティングプレート上に接着できない人工癌幹細胞からIVVを回収する方法でスクリーニングを行った後、さらにCD44の野生型(CD44W)の細胞外領域をマイクロ流体チップに結合させて抗CD44W抗体のスクリーニングを行った。合計6ラウンドスクリーニングした結果、32個のクローンの内4種類の重複した配列を得た。この内の2つのクローン(AXD6-12-54、AXD6-12-51)は、人工癌細胞のHMWHAコーティングプレートへの接着を阻害した。阻害活性の高いAXD6-12-54は、免疫染色では人工癌細胞の細胞表面を検出することができ、人工癌幹細胞の遊走活性を阻害した。マウス肉腫から抽出した基底膜を使った人工癌細胞の浸潤活性も阻害した。また、CD44の細胞外領域に対する親和性を測定した結果、解離定数(Kd)は1.6nMと見積られた。

さらに、人工癌幹細胞より抽出した膜画分を電気泳動しウエスタンブロットを行い、AXD6-12-54で染色した結果85kDaの単一バンドが検出され、市販の抗CD44抗体を用いた場合と同一のバンドだった。以上の結果より、AXD6-12-54は抗CD44抗体であり、癌幹細胞と高分子量ヒアルロン酸との相互作用を阻害し、ニッチを制御する抗体であることがわかった。我か国では、がんによる死亡者数は戦後一貫して増加している。現在、国民のおよそ3人に1人はがんにより死亡しており、近い将来、国民の約半数が死亡するという予測もある。がん治療を困難にしている最大の原因の1つとして、主に使用されている薬物が、増殖相にある細胞の死滅を狙った細胞傷害性抗がん剤または増殖シグナルを特異的に遮断する分子標的薬剤であり、それらは一時的に増殖能が高く最終的には増殖を停止する非がん幹細胞(progeny)には有効であるが、増殖が遅く自己複製能を持つがん幹細胞に対する効果は低いことが挙げられる。がんの薬物治療や外科手術による除去後、このがん幹細胞が完全に除かれず残存することががん再発の原因と考えられており、腫瘍形成の根本となるがん幹細胞を標的とした新たな診断と治療の出現が望まれている。本研究では、これら申請者独自の抗体作製および標識技術を用いて、がんやがん幹細胞特異的な表面抗原に対する高い親和性と特異性を有するscFvを作製し、そのC末端を放射性同位元素でラベル可能な配位子でラベル化し、最終的に放射性同位元素でラベル化できる手法の確立を目指す。平成23年度は、肺がん、脳腫瘍、乳がん、膵臓がん、骨髄腫などのがん細胞や、肺がん、大腸がん、白血病、前立腺がんなどのがん幹細胞の特異的表面抗原として知られているCD44と高分子量ヒアルロン酸(HMWHA)との結合を特異的に阻害することのできる一本鎖抗体のスクリーニングをIVV法により行い、CD44に強力に結合し、癌幹細胞の接着を阻害する一本鎖抗体を得ることができた。それ故、本研究の目的に合致した成果は得られたと考えている。(1)IVV法による一本鎖抗体(scFv)の超高効率な選択:CD138(Syndecan-1)は多発性骨髄腫細胞の特異的表面抗原として知られている。平成24年度は、CD138の細胞外ドメインを抗体選択の抗原として用いる。まず、CD138の細胞外ドメインをCHO細胞で強制発現させて調製する。前年度に確立した実験条件に基づき、この抗原をマイクロ流体チップに固定し、ヒトおよびマウスのnaïveと変異導入抗体ライブラリーから抗CD138抗体のスクリーニングを行う。得られた抗体をCHO細胞で強制発現させ、抗原との結合や解離定数(Kd)をELISAやBiacoreで測定する。また、得られた抗体の患者由来の種々の多発性骨髄腫細胞の表面への特異的な結合を検証する。(2)C末端ラベル化法によるscFvの蛍光ラベル化:これまでに確立したタンパク質のC末端ラベル化条件(Genome Res., 12, 487, 2002)に基づき、Alexa594-dC-ピューロマイシンと得られたcD44とCD138に対するscFvのmRNAを、小麦胚芽抽出液の無細胞翻訳系またはCHO細胞培地に投入して、蛍光標識scFvを調製、精製する。(3)蛍光ラベル化scFvの担がんマウス投与と体内動態の画像化:ヒト患者由来の各種骨髄腫細胞を移植した担がんマウスを作製する。
次世代計算資源上のカイラルクォークシミュレーション

本年度は新たに導入されたBlueGene/Q (3.5 rack 700 TFLOPS peak)上で、自然界のクォーク質量に等しい物理点上のアップ、ダウン、ストレンジの軽いクォークの関わる物理量の計算を、効率良く行うための研究を行った結果、5倍から40倍もの計算効率化を果たすことが出来た。目的とする正確な物理量(高コスト)とその近似計算(低コスト)の両方を、後者の近似計算をより頻繁(正確な計算の100倍程度の頻度)行うことによって統計誤差を下げ、なおかつ格子理論の対称性を使うことに計算結果にバイアスを入れないAll-Mode Averaging (AMA)という方法を提案した。物理量の骨組みとなるクォークの伝搬関数を計算する際に、長距離の伝搬を支配するクォークの低エネルギーモードを固有ベクトルを求めることにより正確に扱い、短距離伝搬を担う高エネルギーモードは多項式近似を行う。新しい計算資源であるBlueGene/QやGPU上で、それぞれの資源の特長を生かした固有ベクトル計算を高効率で行うためのアルゴリズムimplicitly restarting Lanczos with Chebyshev accelerationを開発・実装した。BlueGene/Q上での計算コードは理論絶対ピークの30%の速度を超えており、この世代のメニコア環境下では満足のいく効率だと思われる。現在の方法では、より大体積の格子計算では、より大きなメモリ容量が必要(体積の2乗に比例)であり、ドメイン分割法などの方法で必要メモリを減らすことが現在の課題であるが、これに関しても今現在進展を得つつある。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究計画では、次世代計算機資源上で、過去10年余にわたる研究で有用性が広く認められてきているカイラル対称性を保った格子クォークのシミュレーションの計算方法(アルゴリズム)を研究している。本年度は、物理量の計算の中で最も計算量の多い部分である、クォーク伝搬間関数(ディラック行列の逆行列)を如何に効率よく求めるかということを目標に以下のことを行った。まず、エルミート化されたディラック行列のゼロ付近の固有ベクトルを拡張されたLanczosで求める事に成功した(Implicitly restarting Lanczos method with Polynomial acceleration with shift)。先行研究に比べて、固有ベクトルを一括して求めず、固有値スペクトルの異なる部分部分を別々にシフトしながら求められること、固有ベクトルの圧縮・復元などが新しい点である。この固有ベクトルを元に、クォーク伝搬関数の計算を加速する(deflation)に成功した。我々の渡航としている問題の中で中くらいのサイズ(24x24x24x64 x 16)の場合で、クォークの質量が物理的なup/downquarkに比べて約4-6倍の場合に約12倍の高速が実現された。つぎに、この固有ベクトルを正確なクォーク伝搬関数の近似として使い、求めたい物理量の統計平均をより正確に求めるLow Mode Averaging(LMA)を行った。小さい固有値に属する固有ベクトル(low mode)が支配的な物理量に関しては、同じ計算量で、統計誤差を大きく削減することが出来た。また、現在次世代計算資源の上での効率的なディラック行列の計算コードを開発中である。目的とする物理量の一つである、核子の電気双極子では、小さい固有値に属する固有ベクトル(low mode)が必ずしも支配的でないため計算の統計誤差が思うほど下がらない。上記のlow modeが支配的でない物理量についても統計誤差の縮減を行えるようなアルゴリズムが必要であり、現在開発中である。調べてみると、実は多くの物理量でlow modeは必ずしも支配的でないことがわかり、このアルゴリズムの開発に成功すれば多くの困難な計算に道が開ける。
糖尿病マウスの細静脈血管透過性に関する研究

糖尿病の合併症の一つである細小血管症の発生機序を明らかにするために,糖尿病マウスを用い研究した.1.ストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスにおけるブラジキニン(BK),ヒスタミン(Hist),サブスタンスP(Sub P)の血管透過性亢進作用が,正常マウスと異なるか否かを色素漏出法により検討した.〔成績〕糖尿病マウスでのBKの反応は正常マウスと同じであったが,Hist,Sub Pの反応は糖尿病マウスで減弱した.Histの反応の減弱は,インスリン処置により正常に回復し,この反応性の変化は,インスリン欠乏によることが示唆された.2.上記起炎物質による血管透過性亢進作用が,プロスタグランジン(PG)または一酸化窒素(NO)を介しているか否かを合成酵素阻害剤を用いて検討した.〔成績〕糖尿病マウスでも正常マウスと同様に,上記3物質による血管透過性亢進作用にPGが関与すると考えられた.正常マウスでは,BK,Sub Pの作用にNOが関与し,HistではNOは関与しなかった.糖尿病マウスでは3物質すべての作用に対し,NOの関与が示唆された.3.上記起炎物質およびセロトニン(5-HT),PAFの皮下投与が,局所における血流量にどのように影響するかを検討した.〔成績〕正常マウスで背部皮下投与部位の血流量の変化を無麻酔下で測定した結果,PAFでは血流量の増加傾向を示し,BK,Hist,5-HTでは減少傾向を示した.しかし,この方法は再現性に乏しいため,糖尿病マウスでの血流量測定は行わなかった.4.〔結論〕糖尿病動物での,皮膚血管透過性は5-HTで増強,Hist,Sub Pで減弱,BKでは不変となることが明らかとなった.起炎物質の種類により血管透過性に違いが生じたこれらの結果から細小血管症発生の成因を説明することは難しい.更にVEGFなど他の炎症メディエーターについての研究が必要であろう.糖尿病の合併症の一つである細小血管症の発生機序を明らかにするために,糖尿病マウスを用い研究した.1.ストレプトゾトシン誘発糖尿病マウスにおけるブラジキニン(BK),ヒスタミン(Hist),サブスタンスP(Sub P)の血管透過性亢進作用が,正常マウスと異なるか否かを色素漏出法により検討した.〔成績〕糖尿病マウスでのBKの反応は正常マウスと同じであったが,Hist,Sub Pの反応は糖尿病マウスで減弱した.Histの反応の減弱は,インスリン処置により正常に回復し,この反応性の変化は,インスリン欠乏によることが示唆された.2.上記起炎物質による血管透過性亢進作用が,プロスタグランジン(PG)または一酸化窒素(NO)を介しているか否かを合成酵素阻害剤を用いて検討した.〔成績〕糖尿病マウスでも正常マウスと同様に,上記3物質による血管透過性亢進作用にPGが関与すると考えられた.正常マウスでは,BK,Sub Pの作用にNOが関与し,HistではNOは関与しなかった.糖尿病マウスでは3物質すべての作用に対し,NOの関与が示唆された.3.上記起炎物質およびセロトニン(5-HT),PAFの皮下投与が,局所における血流量にどのように影響するかを検討した.〔成績〕正常マウスで背部皮下投与部位の血流量の変化を無麻酔下で測定した結果,PAFでは血流量の増加傾向を示し,BK,Hist,5-HTでは減少傾向を示した.しかし,この方法は再現性に乏しいため,糖尿病マウスでの血流量測定は行わなかった.4.〔結論〕糖尿病動物での,皮膚血管透過性は5-HTで増強,Hist,Sub Pで減弱,BKでは不変となることが明らかとなった.起炎物質の種類により血管透過性に違いが生じたこれらの結果から細小血管症発生の成因を説明することは難しい.更にVEGFなど他の炎症メディエーターについての研究が必要であろう.
血管のstretch activationを用いた物理情報の受容と応答機構の研究

数多くの興奮細胞より成り立つ心・脈管系は液性調節因子の化学受容と応答の場のみならず、血流や血圧などの血行力学因子に代表される物理受容と応答の場でもある。著者は脳および冠動脈における伸展や歪刺激などの物理受容の細胞内機構について、生体工学的方法と薬理学的方法を組み合わせ、特にカルシウムシグナリングの観点から調べた。本研究に於いては1)物理受容の感応素子であるバイオセンサ-の機能特性、2)バイオセンサ-からのフォスフォリパ-ゼCやL型Caチャネルの活性化過程、3)筋原性収縮反応に対する血管拡張薬の作用、等について研究し以下の結果を得た。1)センサ-部位の機能は糖鎖末端部の切断をするシアリダ-ゼ処理では抑制されず、アルキル化剤であるフェノキシベンザミンや連鎖ブドウ状球菌由来アルファ毒素で抑制された。細胞膜のアルキル化や、アルファ毒素による膜の6量体形成に伴う有孔化によって影響を受け易い因子が物理受容に関する可能性が示された。(2)物理受容によるGTP結合蛋白(G_a)を介するフォスフォリパ-ゼCの活性化によるイノシト-ル1、4、5三燐酸(IP_3)の生成が収縮発生に先立ち亢進する。このIP_3がカフェイン感受性および非感受性Ca貯蔵部位からのCa遊離を促進し細胞内Ca濃度の増加に結びつく。また、伸展などの物理刺激はL型Caチャネルの活性化を促進する。その機序について、IP_3や蛋白キナ-ゼCなどの細胞内機能因子によるCaチャネルの活性化や非特異的カチオンチャネルを介する膜の脱分極の促進効果などの可能性が示された。3)筋原性収縮反応は新たな作用機序を有する血管作用薬の検索に応用可能であることを示した。これらの実験結果を国際シンポジウムにおいて発表すると共に論文として公表した。今後はさらに、センサ-機構の実体の解明、蛋白キナ-ゼCおよびフォスフォリパ-ゼCの脈管系における役割とその多様性について研究したい。摘出した脳血管の急速伸展刺激によって誘起される筋原性収縮反応は、1)脳血流の自己調節の生理・薬理機構や、血管攣縮および高血圧症の病態を解明し、2)循環系における物理受容・応答機構研究のためのモデル反応として有用である。著者は、筋原性収縮機構を化学受容体を介する収縮反応と対比させつつ研究を行い、以下の事実を明らかにした。1.筋原性収縮反応発生時における細胞内Ca^<2+>濃度([Ca2+])_i測定の結果、収縮の発生に先だち、[Ca^<2+>]_i上昇が起こり、それは、主としてLー型電位依存性Ca^<2+>チャネルを介してのCa^<2+>流入と細胞内貯蔵部位からのCa^<2+>遊離によるものであることを証明した。2.細胞内Ca^<2+>遊離が、ライアノジンに感受性を有する貯蔵部位からであることを明らかにした。また、このCa^<2+>遊離が、ホスホリパ-ゼCの活性化を介することを示唆した。百日咳毒素やコレラ毒素が筋原性収縮反応に影響しないことから、これらの毒素で修飾されるG蛋白がホスホリパ-ゼCと連関していないことを明らかにした。

3.PGF_2αなどの受容体を介する収縮反応は、連鎖球菌由来α毒素処置後も保持されるが、筋原性収縮反応は完全に消失することを見い出した。即ち、伸展という物理情報の受容・情報転換部位が、膜タンパクではなく、ガングリオシドなどの糖脂質である可能性を新たに見い出した。4.循環系疾患治療薬の筋原性収縮反応への抑制効果を検討し、現在、臨床応用されている薬物が、筋固有の筋原性収縮反応に対しては、完全には抑制しないものの、異常に亢進した収縮反応については、これを完全に消失させることを見い出した。この性質は、これらの薬物が、血管平滑筋固有の基礎張力は、消失させないという点できわめて重要であると考えられ、脳循環改善薬のよい評価系であることを示した。以上の結果を、本年度の国際会議にて招待講演し、また、英語論文に発表する。数多くの興奮細胞より成り立つ心・脈管系は液性調節因子の化学受容と応答の場のみならず、血流や血圧などの血行力学因子に代表される物理受容と応答の場でもある。著者は脳および冠動脈における伸展や歪刺激などの物理受容の細胞内機構について、生体工学的方法と薬理学的方法を組み合わせ、特にカルシウムシグナリングの観点から調べた。本研究に於いては1)物理受容の感応素子であるバイオセンサ-の機能特性、2)バイオセンサ-からのフォスフォリパ-ゼCやL型Caチャネルの活性化過程、3)筋原性収縮反応に対する血管拡張薬の作用、等について研究し以下の結果を得た。1)センサ-部位の機能は糖鎖末端部の切断をするシアリダ-ゼ処理では抑制されず、アルキル化剤であるフェノキシベンザミンや連鎖ブドウ状球菌由来アルファ毒素で抑制された。細胞膜のアルキル化や、アルファ毒素による膜の6量体形成に伴う有孔化によって影響を受け易い因子が物理受容に関係する可能性が示された。2)物理受容によるGTP結合蛋白(Ga)を介するフォスフォリパ-ゼCの活性化によるイノシト-ル1、4、5三燐酸(IP_3)の生成が収縮発生に先立ち亢進する。このIP_3がカフェイン感受性および非感受性Ca貯蔵部位からのCa遊離を促進し細胞内Ca濃度の増加に結びつく。また、伸展などの物理刺激はL型Caチャネルの活性化を促進する。その機序について、IP_3や蛋白キナ-ゼCなどの細胞内機能因子によるCaチャネルの活性化や非特異的カチオンチャネルを介する膜の脱分極の促進効果などの可能性が示された。3)筋原性収縮反応は新たな作用機序を有する血管作用薬の検索に応用可能であることを示した。これらの実験結果を国際シンポジウムにおいて発表すると共に論文として公表した。
活性化B細胞に表現される細胞表面抗原(Lpー3)の構造と機能について

自己免疫病に認められる自己抗体の産生はB細胞の異常な活性化に基づく結果であるが、このB細胞の異常は最終的な抗体産生レベル(6カ月令)でしか検出できず、この点がモデル動物を用いた自己免疫研究における一つの障害となっていた。しかし、最近我々はMRL/lprマウスの増殖T細胞で免疫して得たモノクロ-ナル抗体の中から活性化B細胞を検出し得る抗体を発見した。本研究では、Lpー3で検出される抗原(Lpー3)の機能解析、マ-カ-としての応用性の検討、構造解析を行ない以下の結果を得た。1.Lpー3は、顆粒球やT細胞では構成的に表現されている。2.B細胞では、休止期には表現されず、抗原刺激やMitogenによる活性化に伴って、(GO期からGIA期への移行)、B細胞にも表現される。また腫瘍B細胞もLpー3陽性である。これらの事実は、Lpー3抗原がB細胞を始めとする一群の細胞の増殖分化に関係した細胞表面抗原である可能性を示唆する。3.(NZB×NZW)F1マウスでは自己抗体産生の認められない若年期にすでにLpー3陽性細胞が異常に増加しており、この細胞亜集団はILー5、ILー6に反応し自己抗体を産生した。この事実は、Lpー3が増殖分化因子のリセプタ-あるいはリセプタ-親和性増殖因子である可能性を示唆する。4.Lpー3は分子量132Kdの単量分子である。5.2、3を裏付けるため、Lpー3遺伝子のクロ-ニングを目的にまず、Lpー3の精製を行った。そのペプチド断片のシ-クエンスの一つに免疫グロブリンス-パ-ジ-ンファミリ-との相同性を認め、3との関連で興味深い。6.現在、Lpー3遺伝子と思われるクロ-ンを得ており、将来的にはヒトhomologueを精製し、それに対するヘテロ血清抗体を得たいと考えている。自己免疫病に共通して認められる異常は、自己抗体の産生である。この自己抗体の産生はB細胞の異常な活性化に基づく結果であるが、この異常は最終的な抗体のレベル(6カ月齢)でしか検出できず、この点がモデル動物を用いた自己免疫病の研究における一つの障害になっていた。しかし、最近我々はMRL/lprマウスの増殖T細胞で免疫して得たモノクロナール抗体の中から活性化B細胞を検出し得る抗体を発見した。この抗体で検出される抗原(Lpー3)は顆粒球系細胞やT細胞にも表現され、活性化B細胞に特異的な抗原ではない。しかし、休止期のB細胞には表現されず、Mitogenによる活性化、腫瘍化によって表現されるようになることから、in vivoで進行している免疫現象の研究には極めて有効なマーカーとなる可能性がある。今年度はこれらの点について研究し、以下の結果を得た。1.Lpー3抗原は顆粒球系細胞やT細胞では構成的に表現されている。2.一方、大部分が休止期にある脾臓などのB細胞は概ねLpー3抗原陰性であるが、LPS刺激で陽性細胞数が増加する。この点を詳細に検討した結果、Lpー3抗原はG1Aの細胞周期で始めて表現され、non-GO期の約50%の細胞がLpー3陽性となった。

これらの結果からB細胞はIgM(+)/Lpー3(-)とIgM(+)/Lpー3(+)とに分れ、前者は休止期、後者はG1A以降の活性化されたB細胞であることが明らかとなった。3.自己免疫病を自然発症する(NZB×NZW)F1マウスでは、自己抗体産生の認められない若齢時にこのIgM(+)/Lpー3(+)のB細胞亜集団が異常に多く、これらのB細胞はInterleukinー5(ILー5)、ILー6に反応して抗体を産生した。また、このB細胞亜集団の一部にはある時期より膜免疫グロブリンにクラススイッチが起こることが示唆された。自己免疫病に認められる自己抗体の産生はB細胞の異常な活性化に基づく結果であるが、我々は先にこの活性化B細胞を検出し得る抗体を発見した。この抗体で検出される抗原(Lp-3)は、顆粒球系細胞やT細胞にも構成的に表現されるが、休止期B細胞には表現されず、Mitogenによる活性化、種瘍化により初めて表現される。また自己免疫病を自然発症する(NZB×NZW)F1マウスでは、自己抗体産生を認めない若齢期にLp-3(+)のB細胞亜集団が異常に多く、これらのB細胞はIL-5、IL-6に反応し抗体を産生した。以上よりLp-3には増殖分化因子のレセプタ-、あるいはリセプタ-関連分子の可能性もありこの検討のために、遺伝子クロ-ニングによる既知のレセプタ-分子等とのホモロジ-検索が近道と考え、部分アミノ酸配列分析に着手し、目的クロ-ンと思われるものを得るに至った。1.Lp-3を発現しているMRL/lprの増殖T細胞を出発材料として、アフィニティ-クロマトグラフィ-等を用いて、アミノ酸配列分析に耐えられる量、純度のLp-3抗原を得た。2.上記の蛋白を酵素消化し、数個のペプチドフラグメントについてのアミノ酸配列を決定した。それらのうちの1つは免疫グロブリンス-パ-ジ-ンファミリ-と相同性がみられ、既知のリンホカインレセプタ-構造との関連で興味深い。現在、既に確立してある、cDNAライブラリ-より、アミノ酸配列分析を基にして、Lp-3をコ-ドすると思われるクロ-ンを得ている。3.Lp-3は分子量132kdの分子間ジスルフィド結合をもたない分子である。ウエスタンブロットでみる限り、T細胞系、B細胞系、腫瘍細胞それぞれに発現しているLp-3抗原は同じ挙動を示した。これらの蛋白の発現制御研究には、クロ-ニングされたcDNAが有効と考えている。
知的障害者グループホームの室内温熱環境と体温調節行動が居住者の健康性に与える影響

本研究の目的は、知的障害者グループホームにおける室内温熱環境や知的障害者の体温調節行動の実態を把握し、それらが知的障害者の健康性に与える影響度を明らかにすることである。日本国内のグループホームを対象に、実態調査とアンケート調査を実施した。その結果、体温調節行動に関して多くの居住者が何らかの介助を要することがわかった。また、住まいの健康性が高いほど、体温調整行動の自立度は高く、冬季に居住者が風邪をひく頻度が少ないことなどが明らかとなった。研究初年度にあたる平成26年度は、文献サーベイと予備実験をおこなった。既存研究のサーベイのうち、知的障害者グループホームや体温調節行動に関する調査研究については主だった文献をほぼ収集し、知見をまとめた。当初の見通しのように、グループホームにおける知的障害者の環境調整行動や温熱環境実態、健康性に与える影響に関連した文献はほとんどみられなかった。予備実験に関しては、学生数名に対して、睡眠計による就寝・起床時間、睡眠効率の測定、体温・血圧測定、温湿度測定、ヒアリング調査(健康状態、疾病の有無、居住年数、建物の状況、エアコンの性能、建物の断熱性能、など)を行った。その結果、就寝前後に調査対象者が睡眠計のスイッチを押すことを頻繁に忘れるなど、特に実験機器の使用に関して、いくつかの問題・課題があることが判明した。そこで、実験協力者(世話人)の支援の仕方や実験方法の簡素化など、調査対象が知的障害者であることを考慮して調査方法の改善案を検討した。上記の結果をふまえて、研究協力者である施設職員と打合せを行い、住宅形態(マンション、一戸建て)、世話人の勤務体制(通勤型、同居型)、平面構成、築年数、居住者の障害程度や入居年数ごとに調査対象施設を選定した。本研究の目的は、知的障害者グループホームにおける室内温熱環境や知的障害者の体温調節行動の実態を把握し、それらが知的障害者の健康生に与える影響度を明らかにすることである。研究初年度に文献サーベイと予備実験をおこなった。既存研究のサーベイでは、知的障害者グループホームにおける知的障害者の体温調節行動に関する調査研究については主立った文献をほぼ収集し、知見をまとめた。当初の見通しのように、グループホームにおける知的障害者の環境調整行動や温熱環境実態、健康生に与える影響に関連した文献はほとんどみられなかった。予備実験に関しては、学生数名に対して、睡眠計による就寝・起床時間、睡眠効率の測定、体温・血圧測定、温湿度測定、ヒアリング調査(健康状態、疾病の有無、居住年数、建物の状況、エアコンの性能、建物の断熱性など)をおこなった。その結果、就寝前後に調査対象者が機器のスイッチを押すことを忘れるなど、特に実験機器の使用に関して、いくつかの問題・課題があることが判明した。上記の結果をふまえて、研究協力者である施設職員と打合せをおこない、住宅形態(マンション、一戸建て)、世話人の勤務体制(通勤型、同居型)、平面構成、築年数、居住者の障害程度や入居年数ごとに調査対象施設を選定した。当該年度(研究2年目)は、研究代表者の在外研究により当初予定していた実験や研究発表はできなかったが、東南アジアの知的障害者等の居住施設をいくつか訪問し、室内温熱環境や住まい方に関する実態調査をおこなった。研究開始時点では、本事業は2015年度で終了する予定であったが、研究代表者が、独立行政法人国立高等専門学校機構から在外研究員としてSingapore Polytechnicに派遣されたことにより、事業期間を1年間延長することになった。研究最終年度にあたる平成28年度は、予備実験や世話人や職員等に対するヒアリングの結果をふまえて、ケーススタディと郵送アンケート調査を実施した。また、前年度までの研究成果について学会発表を行った。ケーススタディでは、中国地方にあるグループホーム3件(居住者は計13名)を対象とし、夏期と冬期の2回、各居住者の個室(寝室)・リビング・ダイニング・屋外の温熱環境測定を実施した。また、就寝時間帯に居住者の呼吸・脈拍・体動を測定し、それらのデータを用いて睡眠・覚醒判定を行った。そして、世話人に血圧測定や健康状態、各居住者に対する支援内容及びそれらが行われた時間帯などの記録を依頼した。アンケート調査では、全国のグループホーム1,000件に調査票を郵送配布し、410票の回答があった(回収数41.0%)。調査内容は、居住者の体温調節行動の自立度、冷暖房の使用状況、健康や睡眠の状況、GHの建物種別や平面構成、住まいの環境と健康性の評価(CASBEE健康を使用)などであった。調査の結果、体温調節行動に関して多くの居住者が何らかの介助を要することがわかった。

日本国内のグループホームを対象に、実態調査とアンケート調査を実施した。その結果、体温調節行動に関して多くの居住者が何らかの介助を要することがわかった。また、住まいの健康性が高いほど、体温調整行動の自立度は高く、冬季に居住者が風邪をひく頻度が少ないことなどが明らかとなった。導入予定であった実験機器(睡眠計)が廃番となり、知的障害者を対象とした実験でも使用可能な代替機器がなかなか見つからず、研究初年度に冬期実態調査を実施できなかった。ただし、研究計画最終年度に夏期・冬期の両方の実測調査を実施し、当初の計画通りに研究を完了することは可能であると考えている。研究計画最終年度に夏期・冬期の両方の実測調査を実施する予定である。今後は、研究協力者(施設職員・世話人)とさらに密に打合せをおこない、知的障害者一人一人に合わせた実験サポートの仕方などを十分に検討した上で、本実験にのぞむ予定である。総合領域当初の研究計画を変更し、研究計画最終年度に夏期・冬期の両方の実測調査を実施することとした。本研究では、知的障害者にも実験機器をある程度操作させることから、何度か実験に失敗することも想定して、実験期間にゆとりを持たせて調査計画を立てているため、最終年度に実験の遅れを取り戻すことは可能であると考えている。今後は、研究協力者(施設職員・世話人)とさらに密に打合せをおこない、知的障害者一人一人に合わせた実験サポートの仕方などを十分に検討した上で本実験にのぞむ予定である。本年度、研究代表者が、急遽、独立行政法人国立高等専門学校機構から在外研究員としてSingapore Polytechnicに派遣されたことにより、当初計画の実施が困難となった。上記の理由により、補助事業期間延長承認申請書を提出し、補助事業期間を1年間延長することとなった。研究計画初年度に実施予定であった冬期実測調査を次年度に実施することとしたため。当初計画で本年度に実施予定であった事業は次年度に実施し、次年度使用額を使用する予定である。冬期実測調査の実施における調査協力者謝金(施設関係者)として使用する予定である。
空間および周波数領域逆相関法による高次視覚機能の研究

視覚系の大脳神経細胞の刺激選択性について、高次刺激特徴を明示的に表現できる新たな受容野を可視化し、それにより視覚情報処理の段階的変遷と機構を中心に研究している。特に、当研究室が開発した局所スペクトル逆相関法(LSRC)と方位・周波数領域における受容野計測を利用することにより、新たな受容野特性を可視化することができた。一つの研究では、ネコとサルの1次、2次視覚野の受容野内における、局所的方位選択性の非一様性を検討した。不均一な方位選択性は、高次視覚野細胞が持つ曲率選択性の基礎となると考えられる。非動化したサルのV1,V2単一細胞記録による、生理学研究所の伊藤南氏とのLSRC法及び周波数領域逆相関法を使った共同研究により、サルのV2野において不均一な方位選択性を持つ細胞が見られた。第二の研究では、臨界期に方位を例えば垂直のみに限定して育てられた子猫の視覚皮質は、垂直な刺激にのみ反応する細胞ばかりになってしまうB1akemoreらの研究を発展させた。過去の研究では細胞の好む方位が経験したものばかりになるという事以外、細胞の特性は検討されなかったが、細胞には最適方位以外にも細胞には多くの重要な特性がある。これらの特性の多くは受容野を詳細に計れば知る事ができる。今回の実験により、垂直方位限定環境に置かれた子猫の初期視覚野細胞受容野の形そのものが、縦に長く伸びたものになることを発見した。これは、最適方位が垂直になる事とは別の効果であり、こうして育ったネコの方位選択性が正常ネコのそれよりもシャープになるという事も意味しており、方位限定環境下での生育により、異常ではあっても正常ネコの方位選択性を上回る細胞ができていることを意味している。本研究の目的は当研究室が最近開発した、複数領野の多数の視覚野細胞からの同時記録に適合性の高い計測手法を用い、視覚領野内での神経細胞間の結合と中高次の領野への視覚情報の受け渡しの機構を解明することにある。この新解析法は「局所スペクトラム逆相関法」(LSRC : Local Spectral Reverse Correlation)と呼ばれ、これを多点電極記録及び従来の解析手法を組み合わせることにより、多数の神経細胞の特性の一括計測を可能にする。この方法により、初期視覚野の神経細胞において従来検出することが難しかった反応特性や、中高次視覚領域の細胞の受容野の内部構造を解析し可視化した。具体的には、この新手法を中高次視覚受容野の生成機構と脳梁による左右視野の受容野レベルでの融合機構の解明に応用した。ネコにおいて複数の電極により、同時に数個の細胞から記録を行い、これらの細胞の受容野の内部構造を解析した。17,18野内の、複数の細胞からの同時記録を行った。受容野を2次元ダイナミックノイズ刺激から求め、さらにその同一データをLSRC法により解析し、受容野内での最適方位の局所変化を調べ、そのような受容野を可視化した。また、脳梁結合による左右視野にまたがる受容野の継ぎ合わせの機構を解明するために、左右半球の17及び18野から同時記録し、線形受容野の計測に加えて、LSRC法、半球間の結合を調べるための相互相関法の適用した。18野の受容野は視角10度以上の大きさを持つものが多くあり、最大でも2度程度の網膜レベルのオーバラップでは継ぎ合わせを説明できない。これらの記録により、受容野構造のどの部分がどちらの半球由来の入力であるかを調べた。さらに、輝度ではなく、コントラストの変化によって定義される両眼視差による奥行き情報が18野の細胞によって表現されていること、その奥行き情報は輝度によって得られる情報とつじつまの合う形で表現されている事(手掛不変性)を発見した。この成果をTanaka & Ohzawa(J.Neuroscience,2006)に発表した。

これは、最適方位が垂直になる事とは別の効果であり、こうして育ったネコの方位選択性が正常ネコのそれよりもシャープになるという事も意味しており、方位限定環境下での生育により、異常ではあっても正常ネコの方位選択性を上回る細胞ができていることを意味している。
感覚神経の刺激による誘発脳磁界の計測と解析

1.脳磁界計測システムの開発を,誘発脳磁界の測定と並行して行なった.計測システムは, (1)2次微分でグラジオメータを含む液体ヘリウムデュワーを頭部上の任意の点にアクセスする装置と, (2)末梢神経を刺激するための電流パルスを種々の時間間隔で発生,もしくは純音や言語音などの刺激音を任意の順序で発生する刺激装置, (3)SQUID出力の磁気信号を刺激の種類により個別に収録して加算平均したり,定常応答の振幅や位相を検出する装置からなる.2.沢骨神経を電流刺激する体性間隔誘発磁界(SEF)においては,刺激後80とし60msに互いに逆向きのピークを持つ応答を,純音バーストによる聴覚誘発磁界(AEF)では, 100と180msにピークを持つ応答を観測した.側頭部でマッピング測定した磁界分布からは, SEF, AEFともに電流双極子が発生源として推定された.最小2乗法に基づく計算により求めた双極子の位置は,それぞれ体性感覚野と聴覚野にあり, MRI断層像の観測結果と良く一致した.また双極子の大きさは530nAmである.3.連続刺激によるSEF定常応答では,位相遅れが刺激周波数に対し線形となる関係がみられ,その傾きからは,刺激周波数に依存して3つの時間遅れの値が求まり,うち2つは単一刺激による過渡応答のピークの潜時に一致した.他の最も短い時間遅れは,早期成分の潜時に対応すると考えられた.4./a/や/ka/などの単音節音声を純音と混合して与えるAEFにおいては,純音とほぼ同じ潜時のピークを持つ音声応答が得られた.また,音声応答において第2ピークの後に遅い成分が左側頭の後部でみられることがあった.双極子のパラメータの推定では,純音,音声ともに右脳半球の双極子の大きさは左脳半球のものと同じか,より大きい.双極子の位置は左脳半球で純音と音声でわずかな差異があった.1.脳磁界計測システムの開発を,誘発脳磁界の測定と並行して行なった.計測システムは, (1)2次微分でグラジオメータを含む液体ヘリウムデュワーを頭部上の任意の点にアクセスする装置と, (2)末梢神経を刺激するための電流パルスを種々の時間間隔で発生,もしくは純音や言語音などの刺激音を任意の順序で発生する刺激装置, (3)SQUID出力の磁気信号を刺激の種類により個別に収録して加算平均したり,定常応答の振幅や位相を検出する装置からなる.2.沢骨神経を電流刺激する体性間隔誘発磁界(SEF)においては,刺激後80とし60msに互いに逆向きのピークを持つ応答を,純音バーストによる聴覚誘発磁界(AEF)では, 100と180msにピークを持つ応答を観測した.側頭部でマッピング測定した磁界分布からは, SEF, AEFともに電流双極子が発生源として推定された.最小2乗法に基づく計算により求めた双極子の位置は,それぞれ体性感覚野と聴覚野にあり, MRI断層像の観測結果と良く一致した.また双極子の大きさは530nAmである.3.連続刺激によるSEF定常応答では,位相遅れが刺激周波数に対し線形となる関係がみられ,その傾きからは,刺激周波数に依存して3つの時間遅れの値が求まり,うち2つは単一刺激による過渡応答のピークの潜時に一致した.他の最も短い時間遅れは,早期成分の潜時に対応すると考えられた.4./a/や/ka/などの単音節音声を純音と混合して与えるAEFにおいては,純音とほぼ同じ潜時のピークを持つ音声応答が得られた.また,音声応答において第2ピークの後に遅い成分が左側頭の後部でみられることがあった.双極子のパラメータの推定では,純音,音声ともに右脳半球の双極子の大きさは左脳半球のものと同じか,より大きい.双極子の位置は左脳半球で純音と音声でわずかな差異があった.1.脳磁界計測システムの開発を、誘発磁界の実際の計測と併行して行った。計測システムは、(1)2次微分グラジオメータとSQUIDを含む液体ヘリウムデュワーを頭部上の任意の点にアクセスする装置と、(2)SQUID出力の磁気信号をフィルタリング、加算平均してS/Nを改善し、表示・記録する装値からなり、以上により磁気シールドの無い実験室内で微弱な(【10^(-13)】T)脳磁界が計測可能となった。さらに、(3)ヘルムホルツ型コイルを用いた渦電流による磁気シールドを考案し、予備実験を行い、その効果を確認した。2.末梢神経および聴覚神経に刺激を加え、頭部に誘発される脳磁界の計測を行った。まず、(1)末梢神経として手首の尺骨神経に電流パルス(0.5ms幅210ms高さ)を与える刺激装置と、(2)左・右ないし両耳に純音バースト(1KHz200ms,800ms幅)を与え刺激する装置を試作し側頭部の種々の点で刺激に同期して発生する磁界を計測した。その結果、(3)体性感覚誘発磁界(SEF)は、刺激後80と160msに互いに逆向きの2つのピークをもつ応答として観測された。大きさは5×【10^(-13)】T程度であった。

(4)聴覚誘発磁界(AEF)は、純音バーストの開始後100と180msに互いに逆向きの2つのピークを生じ、その大きさはSEFと同程度であった。(5)さらにSEFにおいては刺激をくり返し与え、連続刺激とした時に得られる定常応答誘発磁界についても計測し、解析を行った。3.SEF・AEFともに側頭部のデータから磁界分布を得た後、磁気信号源の解析を行った。(1)磁界分布からは、電流ダイポール性の信号源が推定され、(2)頭部を球形にモデル化して計算を行い、最小二乗法に基づいてダイポールの大きさと位置を求めた。(3)その結果、SEF・AEF信号源は、それぞれ感覚野と聴覚野に相当する位置にあり、530nAmの大きさであることがわかった。
マラリア防御免疫記憶の分子的解析

病原体感染予防で最も優れているのはワクチンであり、これを開発するためには、感染による防御応答を詳細に観察し、最も有効な免疫系のファクターが何であるのかを追究する必要がある。またその防御免疫記憶がどのようなメカニズムで維持されるのかを理解する必要がある。しかしマラリアにおいては、どのようなファクターが防御免疫において最も重要な機能を持つのかが、未だに不明である。我々はRag2ノックアウトマウス(T細胞とB細胞を欠損)やMHCノックアウトマウス、ZAP-70ノックアウトマウス(いずれもT細胞を欠損)が、マラリア原虫強毒株Plasmodium berghei NK65の感染で、免疫機能が正常な野生型マウスよりも長期にわたって生存することを見出した。以上の結果は、マラリア免疫においてあるT細胞のサブセットが感染増悪因子であることを意味する。この結果を踏まえ、次に抗体投与により野生型マウスのCD4+T細胞あるいはCD8+T細胞を消去し、P.berghei NK65を感染させた結果、CD8+T細胞が感染増悪因子であることが認められた。次にこの赤内型マラリアにおけるCD8+T細胞の活性化メカニズムを追究するために、マラリア抗原とは全く無関係のTCRのトランスジェニックマウス(HY/Rag2-/-,P14LCMV/Rag2-/-,OT-I/Rag2-/-,いずれも末梢T細胞はCD8+)を用い、これにP.berghei NK65を感染させると、意外にもこれらのTCRトランスジェニックマウスはコントロールのRag2-/-マウスと比較すると早期に死亡し、末梢CD8+T細胞の活性化が認められた。また同様に末梢T細胞がCD4であるTCRトランスジェニックマウス(DO11.10/Rag-/-、Cyt5c.c7/Rag-/-)においては、P.bergheiNK65による死亡時期はコントロールのRag2-/-マウスと有意な差は認められなかった。以上の結果からマラリア感染においてCD8+T細胞は感染増悪因子であり、その活性化はTCR非特異的であることが示唆された。宿主と感染体との関係を考えるには、感染による宿主免疫応答を理解する必要がある。感染症を克服する上で最も効果的であるワクチンの開発のためには、防御免疫を仲介する記憶維持のメカニズムを理解する必要がある。しかし感染防御免疫の中心的な役割を果たしているCD4^+T細胞のマラリア防御免疫における役割については、本来ならワクチン開発戦略を考える上で最も重要な課題でありながら、未だそのメカニズムについては不明な点が多い。またMHC class I分子を持たない赤血球に寄生する病原体に対し、CD8^+T細胞が活性化するという報告も存在する。われわれは各種免疫関連分子のノックアウトマウスを用い、弱毒マラリア原虫Plasmodium berghei XAT株の感染におけるT細胞の免疫応答について検討した。XAT株の感染によって野生型マウスは二峰性の原虫血症を呈した後に自然治癒する。しかしながらI型ヘルパーT細胞(Th1)の重要なサイトカインIFN-γを欠損するマウス(IFN-γ^<-/->)では全く原虫血症を抑制出来ずに死亡した。またII型ヘルパーT細胞(Th2)の分化に必須のシグナル伝達分子STAT6を欠損するマウス(STAT6^<-/->)では、最初の原虫血症のピークを抑制するが、次のピークを抑制出来ずに死亡した。以上の結果から、弱毒原虫XAT株感染において野生型マウスで観察される二峰性の原虫血症のうち、最初のピークの抑制にはTh1が、2番目のピークの抑制にはTh2が関与することが考えられた。

また同様に末梢T細胞がCD4であるTCRトランスジェニックマウス(DO11.10/Rag-/-、Cyt5c.c7/Rag-/-)においては、P.bergheiNK65による死亡時期はコントロールのRag2-/-マウスと有意な差は認められなかった。以上の結果からマラリア感染においてCD8+T細胞は感染増悪因子であり、その活性化はTCR非特異的であることが示唆された。
自己免疫疾患におけるprolactinの免疫担当細胞を介した疾患修飾作用機序

1.全身性エリテマトーデス(SLE)、Sjogren症候群、健常人より血清を採取し、血清中のprolacin値を測定した。SLEおよびSjogren症候群では約20%に上昇がみられてが、臨床症状や疾患活動性との間には相関関係はみられなかった。2. SLE、Sjogren症候群、健常人より、リンパ球を分離し、非刺激,PHA,IL-2,PMA等の刺激下で各種prolactin濃度に対するcytokine産生能検討した。IL-4は、prolactinの無添加時の52.2±14.0pg/mlより29.5±9.8に抑制され、逆に、INF-γの71.9±34.6から98.6±43.7に有意に産生の上昇がみられた。これらのINF-γの産生の亢進と、IL-4の産生抑制の程度と血清prolactin値とは相関関係はみられなかった。3. Sjogren症候群では、PRLによりTヘルパー細胞のTh1優位のヘルパーT細胞が誘導される可能性が推測された。4. Sjogren症候群患者リンパ球で、prlactin刺激によるSTAT5の発現が、健常人より強く発現することが確認された。すなわち、prolactinによりSjogren症候群患者のリンパ球の活性化に関与していることが推測された。しかし、これが、リンパ球のいかなる機能の活性化に関与するかは、今回の実検では明らかではなく、今後、この点を明らかにする必要があると考えられた。Sjogren症候群の一部では、PLRが上昇し、その結果、Th1優位のヘルパーT細胞が誘導される可能性が推測されているが、PRLによるThl細胞の誘導の機序を検討が今後必要である。2.SLE、Sjogren症候群、健常人より、リンパ球を分離し、非刺激,PHA,IL-2,PMA等の刺激下で各種prolactin濃度に対するcytokine産生能検討した。健常人のPMBCを用いprolactinのINF-γ/IL-4の産生に対する影響では、IL-4は、prolactinの無添加時の939.8±751.0pg/mlより、prilactinの添加時には779.6【.+-。】668.4とやや抑制され、逆に、INF-γの産生は145.2【.+-。】63.4unitより210.6【.+-。】64.1へ上昇した。同様に原発性Sjogren症候群についても検討した。IL-4は、prolactinの無添加時の52.2【.+-。】14.0pg/mlより29.5【.+-。】9.8に抑制され、逆に、INF-γの71.9【.+-。】34.6から98.6【.+-。】43.7に有意に産生の上昇がみられた。3.Sjogren症候群ではPRLによりTヘルパー細胞のTh1優位のヘルパーT細胞が誘導される可能性が推測された。4.T細胞およびB細胞上のprolactin受容体の発現、発現調節の異常の有無を明らかにするため、prolactin受容体に対するmonoclonal抗体を作成するため、現在、Balb/cマウスに合成PRL受容体ペプチドを免役し、monoclonal抗体を作成中である。

Sjogren症候群の一部では、PLRが上昇し、その結果、Th1優位のヘルパーT細胞が誘導される可能性が推測されているが、PRLによるTh1細胞の誘導の機序を検討中である。1.T細胞およびB細胞上のprolactin受容体の発現、発現調節の異常の有無を明らかにするため、prolactin受容体に対するmonoclonal抗体を作成を試みた。現在、Balb/cマウスに合成PRL受容体ペプチドを免疫を試みているが、受容体を認識する抗体の回収に成功していない。方法を再検討中である。2.prolactin受容体を介した細胞内シグナル伝達系の検討を患者および健常人を用いて検討中である。リンパ球ではSTAT5の活性化が知られており、この経路の活性の亢進がいなか比較検討中である。3.血清中のprolactinの上昇に、抗体と結合したprolactinの存在が報告されている。この可能性を否定する意味で、抗prolactin抗体をELISAにて、SLE、シェ-グレン症候群患者で検討したが、有意な上昇はみられず、この可能性は否定的であった。1. T細胞およびB細胞上のprolactin受容体の発現、発現調節の異常の有無を明らかにするため、prolactin受容体に対するmonoclonal抗体を用いて、シェーグレン症候群(SJS)患者のT細胞上の、PRL受容体の発現状態をFASCを用いて検討した。しかし、健常人と、SJS患者との間にはTリンパ球上のPRL受容体の陽性細胞数、発現量には有意差はなかった。従って、本症においていは、prolactinがより強く、Th1細胞を優位の状態に誘導している原因として、prolactinの受容体の発現の異常は認められなかった。2.次ぎに、prolactinによるTh1細胞の誘導している機序を、明らかにするため、受容体から細胞内の伝達系の異常により亢進した反応がみられるなどの可能性が推測された。PRLは、リンパ球上で受容体に結合し、細胞内のSTAT5を誘導することが知られている。そこで、prolactin刺激、リンパ球より、immunoprecipitationにより、STAT5を回収し、抗STAT5抗体を用いた、Western blotにてその発現量を検討した。健常人にくらべシェーグレン症候群では、STAT5の発現は有意に多かった。シェーグレン症候群(SJS)患者のリンパ球内で、SJSではprolactin Stat5の伝達系が亢進しており、その結果、IL-4の産生を抑制し、INF-γの産生優位となっている可能性がある。しかし、TH0よりTh1細胞を誘導しやすいのかは明らかでなく、今後、明らかにしなければならない課題である。