hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
リアルタイム自律神経世界地図の構築

本研究では,スマートフォンのビデオカメラから得られる映像脈波情報に基づき,スマートフォンが利用可能な全世界の人々の自律神経系指標を,他のストレスや体調に関係するアンケートとともにオンライン・リアルタイムにクラウド上に収集・解析し,評価結果を各利用者にフィードバックするとともに,世界地図上で匿名化した全員の評価結果を同時に表示・共有するツールを開発することを目的としている.これを実現するためには2つの方法があり,一つの方法は,ユーザーが持つスマートフォン上に専用のアプリをインストールし,そのアプリによってクラウドサーバーにアクセスする方法である.もう一つは,クラウド上にアップロードサイトを構築し,ユーザーは自分のプラットフォームから映像ファイルをアップロードし,クラウド側で解析する方法である.本研究では後者の方法を採用することにより,ユーザーのプラットフォームに専用のアプリをインストールすることなく解析サービスが受けられるようになる.さらに,使用するプラットフォームはスマートフォンでもPCでもよく,プラットフォームの種類に依存しない.本年度は,このような機能を有するプラットフォームをWindowsサーバー上に構築することが完了し,その動作を確認するところまで進展したため,予想以上の研究の進展が見られた.本研究の目的はリアルタイムに変化する自律神経世界地図システムを開発することである.すなわち,スマートフォンのビデオカメラから得られる映像脈波情報に基づき,スマートフォンが利用可能な全世界の人々の自律神経系指標を,他のストレスや体調に関係するアンケートとともにオンライン・リアルタイムにクラウド上に収集・解析し,評価結果を各利用者にフィードバックするとともに,世界地図上で匿名化した全員の評価結果を同時に表示・共有するツール(自律神経世界地図)を開発することである.これにより,巨大データ収集とその利用が自動化される.このような自律神経世界地図は,その時点における世界中の自律神経系疾患や精神的ストレスに悩む人々の分布とその度合いを表すものであり,各地域の環境(時間帯・天候・衛生・経済・治安・災害など)の変化に応じて時々刻々と変動するものと思われる.これは世界規模のリアルタイムのコホート分析ツールでありながら,ごく普通のカメラ付きスマートフォン以外には特別なセンサや検査装置を全く必要としない.上記システムの基盤を構築するために,昨年度において,プラットフォームに依存しないクラウド型映像脈波解析システムのプロトタイプを開発した.これにより,ユーザーは本クラウドサイトにアクセスし,映像ファイルをアップロードすることにより,サイト内解析エンジンが映像脈波を自動解析する.しかしこれまでは,映像脈波抽出対象領域の設定を手動で行う必要があった.
エピジェネティック制御異常に着目した腎細胞癌の新規治療標的分子の探索

本研究は、腎細胞癌(RCC)の遺伝子変異解析結果に基づいた新規標的分子のスクリーニングの有用性と標的分子のvalidationを行うことを目的とした。一次スクリーニングにより複数のエピジェネティクス関連遺伝子が有用な標的遺伝子候補として抽出された。さらにin vitroにおける二次スクリーニングの結果、得られた標的遺伝子候補のshRNA(抑制)はVHL遺伝子変異細胞において有意な増殖抑制効果を示した。また、in vivoにおいても同様の結果が得られた。以上のことから、本研究で得られた標的遺伝子候補はRCCの新規治療標的分子として期待でき、また抽出に用いたスクリーニング法も有用であると示された。腎細胞癌(RCC)は全腎悪性腫瘍の約85%を占め、初診時に約25%の症例が遠隔転移を有し、術後に約20%の症例で再発を認め、罹患例の約1/3が死亡に至る予後不良な疾患である。進行症例では抗VEGF療法が行われるが、殆どの症例が治療抵抗性を示すため、新規治療薬の開発が急務である。本研究はRCCの遺伝子変異解析結果に基づいた新規標的分子のスクリーニングの有用性と標的分子のvalidationを行うことを目的とする。1.標的遺伝子候補の抽出: i)研究協力者による一次スクリーニング結果の解析をもとに標的遺伝子候補を抽出した。RCC組織において変異を認めるヒストン修飾酵素について先行検証を行い、一次スクリーニングの信頼性の確認を行った。対照的に、逆の作用を示す修飾酵素は逆の結果が導き出されると予想された。ii)逆の作用を示すヒストン修飾酵素遺伝子を標的としたhairpinはVHL(+)コントロール細胞(VHL)と比較してVHL遺伝子変異を有するVHL-/-RCC細胞(Mock)において減少しており増殖抑制効果を示すことから、標的遺伝子候補の一つであると考えられた。iii)現在、データ解析途中であるが、Mock細胞に増殖抑制効果を示す複数のヒストン修飾酵素遺伝子が有力な候補として挙がっている。2.標的遺伝子候補のin vitroにおけるvalidation(二次スクリーニング): i)Mock細胞とVHL細胞を用いて、標的遺伝子候補に対するshRNAを導入し、結果の再現性の確認をclonogenic assayにより行った。また、shRNAも複数用いて再現性の向上をはかった。最有力の標的遺伝子候補においては複数のhairpinでの再現性は現段階では認められていないが、有用なhairpinでの再現性は高いという結果が得られた。腎細胞癌(RCC)は全腎悪性腫瘍の約85%を占め、初診時に約25%の症例が遠隔転移を有する。また、術後に約20%の症例で再発を認め、罹患例の約1/3が死亡に至る予後不良な疾患である。1.標的遺伝子候補のin vitroにおけるvalidation(二次スクリーニング):最有力の標的遺伝子候補と同様、VHL (+)コントロール細胞(VHL)と比較してVHL遺伝子変異を有するVHL-/-RCC細胞(Mock)において増殖抑制効果を示す複数のヒストン修飾酵素遺伝子について、各shRNAを導入したMock細胞とVHL細胞を用いたclonogenicassayにより、結果の再現性の確認を行った。複数のhairpinでの再現性は認められなかったが、有用なhairpinでの再現性が高い有力な標的遺伝子候補をさらに2つ絞り込んだ。2. In vivo皮下腫瘍モデル:先行して評価・検討を進めた最有力の標的遺伝子候補について、レンチウイルスによりshRNAを導入したMock細胞をヌードマウスに皮下移植してin vivo皮下腫瘍モデルを作製し、評価した。コントロール細胞(コントロールshRNA導入Mock細胞)と比較して、移植後37日まで有意な増殖抑制が認められた。以上のことから、得られたエピジェネティクス関連の標的遺伝子候補はRCCの新規治療標的分子として期待できるものであり、またその抽出に用いたスクリーニング法も有用であることを示した。今後は、Off Target Effectの検証とともに、標的遺伝子のさらなる機能解析を行うことが重要である。分子腫瘍学、分子標的治療学当初の予定通り、一次スクリーニングにより複数のヒストン修飾酵素遺伝子が有用な標的遺伝子候補として抽出されている。さらにin vitroにおける二次スクリーニングを行った遺伝子候補においては、VHL (+)コントロール細胞(VHL)と比較してVHL遺伝子変異を有するVHL-/-RCC細胞(Mock)において有意な増殖抑制効果を示す結果が得られた。この結果はスクリーニングの有用性と信頼性を示すものと考える。また先行して有用な評価が得られた遺伝子候補については、Off Target Effectの検証が必須ではあるが、予想された結果が得られており、今後も研究計画通りに研究を遂行できるものと考える。

当初の計画通り、これまでに一次スクリーニングで得られた有用な標的遺伝子候補について二次スクリーニングを継続して行い、さらに絞り込みを行う。現在最も先行して評価・検討を進めている標的遺伝子候補については以下のように研究を推進する。i)有用なhairpinに対するshRNAのOff TargetEffectの検証を行う。具体的には、hairpinの標的配列のcodon usageを変更することによりアミノ酸配列は同一であってもknock downは受けないcDNAを作製し、shRNAの効果(Mock細胞に対して特異的な増殖抑制)が、同cDNAの発現により相殺された場合、Off Target Effectを否定できると考える。ii)すでに作製済みのpLKO shRNA plasmidをMock細胞に導入し、同細胞をヌードマウスの皮下に移植してin vivo皮下腫瘍モデルを作製する。同様に、pLKO Tet-On shRNA plasmidを作製し、Tet-On systemによる標的遺伝子のshRNA mediated knockoutが可能なin vivo皮下腫瘍モデルを作製する。これらのin vivoモデルを用いて標的遺伝子候補のRCC治療に対する有用性の評価・検討を行う。その他の有用な標的遺伝子候補についても同様に評価・検討を行う。以上の条件を満たした遺伝子に関しては、同じTet-On細胞を用いてエピジェネティックに制御を受ける下流標的遺伝子の探索を行う。次年度は本研究の最終年度にあたり、標的遺伝子候補の有用性を示したいと考える。そのために前臨床モデルにおける評価・検討が必要であるが、モデルの作製と解析には経費がかさむことが予想される。当初計画した今年度の研究は計画通りかつ効率的に進捗できたため、予定していた使用額より経費をおさえることができた。そこで次年度の研究をさらに推進するため今年度の余剰額を次年度の使用額として計上したい。このことは本研究のよりよい成果につながるものと考える。今年度に行った二次スクリーニングにてin vitroでVHL-/-RCC細胞(Mock)に対し細胞増殖抑制効果を示したエピジェネティクス関連遺伝子候補について、次年度にin vivo皮下腫瘍モデルを作製し評価・検討を行う。すでにこのための経費として次年度の使用額の1/3以上にあたる額を計上しているが、今年度の研究成果により有力な標的遺伝子候補が複数挙がっており、これらについても前臨床モデルにおける有用性の評価・検討を行うため、これに今年度の余剰額を充てる。
歯周組織の発生に関する定量組織学的研究

歯周組織の良性腫瘍である顎嚢胞をWHOの分類に従い、歯根嚢胞、歯原性角化嚢胞および含歯性嚢胞に分けた。顎嚢胞においては炎症が高度になるほど上皮脚が発達し、上皮脚の発達程度と上皮下結合組織の炎症性細胞浸潤の程度とは高い相関を示す。従って、上皮脚の発達程度と上皮基底層細胞のDNA含有量、すなわち細胞分裂活生との関係を求めた。DNA含有量は、Feulgen反応による細胞の核の染色濃度を顕微分光光度計を用いて波長560mmで測定した。その結果、上皮脚の発達が高度であるほどDNA量が増加する傾向が認められた。しかし、嚢胞の再発例では、上皮脚の発達程度に比し上皮基底層の細胞のDNA量が高く、従って再発の可能性も高いことが示唆された。歯科矯正学では、オトガイ部に力を加えて下顎骨を後方に牽引し、下顎頭を圧迫することによって下顎骨の成長を抑制する治療法がある。その実験的裏付けとして、同一目的の装置によって下顎頭軟骨層の成長方向が変わるので、軟骨の成長が活発になった部位を選び、Feulgen反応およびDAPI染色により下顎頭軟骨の層ごとの細胞DNA活性を観察した。下顎頭の軟骨層が骨化する機転は、軟骨の肥大層の細胞が退化して死滅した後に、石灰化が始まって骨を形成すると考えられているが、肥大層の細胞にはDNA量がむしろ増加しているものがあり、この層が骨形成に積極的な役割、を果たしているという意見を裏付ける事実であると思われる。また、幼若ラットの脛骨骨端軟骨においても、軟骨の肥大層にDAPIおよびPI染色で強く反応する細胞がある。すなわち、下顎頭以外でも骨形成が行なわれている部位では、軟骨の層のうち、特に肥大層が骨形成に対して積極的に関与していると考えられる。歯周組織の良性腫瘍である顎嚢胞をWHOの分類に従い、炎症性の歯根嚢胞と、発生学的嚢胞である角化嚢胞と含歯性嚢胞とに分け、それぞれの組織学的特徴と上皮基底層細胞のDNA含有量との関係を検討した。歯根嚢胞では炎症の程度と上皮脚の発達程度とは正比例の関係にあることが既に報告されているが、発生学的嚢胞である角化嚢胞と含歯性嚢胞においても炎症の程度と上皮脚の発達程度とを分割表を作成して検討した結果、いずれも炎症が高度になるほど上皮脚が発達することが明らかとなった。次に、嚢胞内面を覆う上皮の基底細胞の核をFEULGEN反応を用いて染色し、染色濃度を顕徴分光光度計を用いて波長560nmで定量した。標本に認められるリンパ球のDNA含有量を標準としてこれを2Nとすると、上皮の基底層の細胞の平均核DNA量は、歯根嚢胞では2.5N、角化嚢胞では2.8N、含歯性嚢胞では2.6Nであった。DNA含有量は上皮基底層の細胞分裂活性を示すものであり、上皮脚の発達が高度であるほど核DNA量が増加する傾向が認められた。角化嚢胞のうち1例においては、その上皮基底層の細胞の核DNA量が3.6Nと高い価を示した。この嚢胞は手術後の再発例であって、X線像では多房性で境界が不規則であり、組織像では上皮基底層の細胞の核が膨大してFEULGEN反応による染色性が異常に強くなっていた。このことはこの嚢胞は再発の可能性が高く今後の経過観察に十分な注意を払う必要があることを示すと考えられる。

ミニブタおよびラットの下顎頭、ラット脛骨の骨端軟骨をFEULGEN反応で染色し、軟骨層を増殖層、成熟層、肥大層、および予備石灰化層に分けて観察すると、通常は死滅して骨に変ると考えられている肥大層の細胞にDNA活性の高い細胞を見出したので、蛍光色素による染色およびDNA定量により検討することを考慮中である。
造血幹細胞における細胞競合を介した増殖制御機構の解明

本研究ではFlowerおよびHippoシグナル系に着目し、各々の分子メカニズムが造血幹細胞の細胞競合時に与える影響を解析することで、幹細胞間の細胞競合の本質を明らかにするものである。本研究から、造血幹細胞の競合時においてアイソフォームFwe1とFwe2がそれぞれ増殖優位性と劣性を示すことが分かった。このことからFlowerはFitnessが低下した造血幹/前駆細胞を排除する組織恒常性の維持機構における指標であることが考えられた。一方、造血幹細胞の競合時にLats1/2の発現の有無により増殖の優劣が生じることから、Hippoシグナルも造血幹細胞の細胞競合システムに関与することが明らかになった。本年度はまず、Flower(Fwe)欠損マウスを用いて細胞競合におけるFweの機能を解析した。細胞同士の直接接触する条件下でFwe欠損マウス由来造血幹細胞(HSCs)と野生型HSCsの競合培養を行い、用いた競合培養実験の結果から、野生型のHSCsは、Fwe欠損型HSCsよりも増殖優位性が見られたことから、Fweの全アイソフォームを発現しない幹細胞は、いずれかのFweを発現する細胞との競合では増殖劣性を示すことが考えられた。次に我々は、造血幹/前駆細胞分画におけるFwe分子の発現を単一細胞レベルにて確認した。HSCsにおいてFwe1を発現する細胞はFwe2を発現せず、逆にFwe2を発現するものはFwe1を発現しない傾向を見出した。さらに、pro-apoptotic遺伝子群の発現は、Fwe1発現細胞よりもFwe2発現細胞の方が高い傾向のあることが分かった。以上の結果から、Fwe1とFwe2が細胞競合過程のWinnerとLoserに分かれることが考えられた。次に我々は、培養後のHSCsの数を比較することで、Fweアイソフォームの種類ごとの増殖優位性を検討した。Fwel過剰発現HSCsは、コントロールやFwe2過剰発現HSCsとの共培養時に増殖優位性を示した。逆にFwe2の過剰発現HSCsの増殖は、ControlおよびFwe1との共培養時に低下することが示された。さらに、FwelおよびFwe2を過剰発現したHSCsの移植を行った。Fwe2を過剰発現したHSCsは骨髄再構築能がコントロールと比較して有意に低下し、逆にFwe1の過剰発現を行ったHSCsは向上する傾向が認められた。以上の結果から、Fwe1は細胞競合上のWinner、Fwe2はLoserを示す細胞競合過程の指標となる可能性が考えられた。本研究の知見から、細胞競合という概念を基に幹細胞増殖の分子基盤の解明が期待される。本年度はまず、造血幹細胞における細胞競合関連分子Flower(Fwe)の生体内での機能を解析するため、成体Fwe欠損マウス(全アイソフォーム欠損型)の定常状態における骨髄組織および造血幹細胞分画の解析を行った。野生型と比較してFwe欠損マウスにおける骨髄組織および造血幹細胞分画における有意な差は見られなかった。また、野生型およびFwe欠損マウスにおける造血幹細胞の骨髄再構築能を比較するため骨髄移植を行った。移植後4か月後の末梢血におけるキメリズムを解析したところ、両者の間に有意な差は見られなかった。さらに、生体内で細胞競合過程における増殖速度を比較するため、野生型およびFwe欠損マウス由来骨髄を移植したレシピエントに対し5-FUを投与して骨髄抑制を行った。この結果、両者の骨髄の回復速度には有意な差は見られなかった。これらの結果から、Fwe欠損マウスがFweアイソフォームのWinner型およびLoser型の両者を欠損しているため、骨髄組織においては細胞競合時に細胞競合の認識が起きない可能性が考えられた。また前年度の結果から、Fwe1と2の競合時の機能はそれぞれWinner型とLoser型であることが示唆されたので、今回我々は、Fwe欠損マウス由来造血幹細胞に対しFwe1(KO+Fwe1)または2(KO+Fwe2)の過剰発現を行って競合時の増殖能力に対する影響を検討した。これらの細胞を骨髄移植し、末梢血におけるキメリズムを解析して骨髄再構築能の比較を行った。その結果、KO+Fwe1はコントロールと比べ骨髄の再構築能が高く、一方でKO+Fwe2はコントロールとの有意な差が見られないことが分かった。以上のことから、造血幹細胞における細胞競合は生体内においてもFwe1およびFwe2が細胞競合過程の指標となる可能性が考えられた。本年度は、細胞競合のシグナル経路であるHippoの関連分子Lats1および2に着目し、これらの造血幹細胞の細胞競合時の増殖制御機構について解析を行った。Hippoシグナル経路において、細胞増殖はYapおよびWwtr1の核内移行によって制御される。我々はエフェクター分子Yap1およびYapの抑制因子

Lats1/2が未分化造血幹細胞において特に強い発現をみることを見出した。このことから、定常時静止期にある未分化造血幹細胞においては、Yap1の高発現による高い増殖ポテンシャルを維持しつつ、Lats1/2の発現によってこれを抑制し、増殖を制御していると考えられる。5-FU(150mg/Kg)投与したマウス骨髄では骨髄抑制が起こり、造血幹細胞数は4日目前後まで減少し投与後6日目から増加に転じ、10日目で投与前の数まで戻ることが報告されている。この実験系において造血幹細胞におけるLats2の発現は6日目で著減しその後徐々に回復することから、6日目の造血幹細胞の増殖開始と共にHippoシグナル系による細胞競合が起こることが考えられた。Lats分子による細胞競合・増殖制御が行われていることを確認するため、野生型およびLats1欠損マウス由来造血幹細胞の同数同時競合培養を行い、それぞれの造血幹細胞数の比較を行った。その結果、競合培養を行ったLats1欠損マウス由来造血幹細胞の増殖は野生型と比較して有意に高いことが分かった。一方で非競合培養の場合は同等の増殖が見られた。さらに生体内での細胞競合時のLats2の機能を解析するため、野生型およびLats2欠損造血幹細胞を移植した。その結果、Lats2欠損造血幹細胞を移植したマウスでは、野生型と比較して高い骨髄再構築能を示した。以上のことから、骨髄再構築時の細胞競合に対し、Hippoシグナル系によって造血幹細胞の増殖が制御されていることが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。幹細胞生物学26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、Fwe分子のアイソフォームごとの競合・選別作用に対する機能を解析することを目的としており、Fwe1およびFwe2の機能を分類・特定できたことから進展が見られたと考えられる。本年度は、Fwe分子のFwe1およびFwe2の各アイソフォームについて生体内における競合・選別作用に対する機能を解析することができ、これらの知見が細胞競合という概念を基にした幹細胞増殖の分子基盤の解明の一助となったと考えられるため。今後はより詳細にFweの機能を検討するためにFwe欠損マウスに対して、単一アイソフォームのFwe分子を過剰発現し、移植を行っていきたい。また、Fweアイソフォーム特異的抗体を作製し、アイソフォームごとに分離した細胞を、単一細胞レベルで遺伝子発現解析を行い、その特性を比較検討する。未使用額の発生は効率的な物品調達を行った結果であり、翌年度の消耗品の購入に充てる予定である。また、平成25年度には試薬購入のために研究費を支出する予定である。今後はより詳細にFweの機能を検討するため、Fweアイソフォーム特異的抗体を作製し、アイソフォームごとに分離した細胞を単一細胞レベルで遺伝子発現解析を行いそれぞれの特性を比較検討する。またこれらの細胞の増殖優位性を検討するために骨髄移植を行って骨髄再構築能を比較する。
チェコ語を中心とする所有の対照研究

所有という概念は、どの言語にも普遍的に現れる、人間の思考に不可欠の概念であると考えられる。一方で、所有という用語は、諸言語でそれぞれ異なる様々な関係を指して異なる方法で用いられてきたため、言語が変われば所有と呼ばれる関係の範囲も変わることになり、結果として所有という概念が非常に捉えどころのないものとなっている。所有という用語で括られてきた所有権関係・全体部分関係・親族関係・属性・存在などを含む一群の関係が、様々な言語で一つのカテゴリーを構成することの背後にある原理を、チェコ語を中心とする複数の言語の所有文の分析を通して明らかにすることが本研究の目的である。
食道癌における WNT シグナルの解析

2.Siβカテニンによる細胞死誘導の実験を食道癌細胞株TE11を用いて行った。コントロールsiと比較して、WST1アッセイで細胞死が誘導された。3.ベータカテニン、Eカドヘリン、TCF4の免疫染色を食道癌臨床検体を用いて行い、臨床病理学的因子との比較検討を行った。microRNAのpromoter領域のTCF7L2結合部位の検索を行った。NCBIのゲノム情報を用いてmicroRNAがcodeされているgenomeの上流1500bpにTCF7L2結合部位となりうる配列の有無を検索した。これらのデータの解析を現在行っているところであるが、その一部を報告する。以前、当研究室では、30人の食道扁平上皮癌患者より抽出した腫瘍部と正常粘膜部のRNAを用いてmicroRNA発現のプロファイリングを行い、それを報告したが、その際得られたデータで腫瘍部が正常粘膜部より2倍以上発現が高いmicroRNAのうち約54.5%でTCF7L2結合部位となりうる配列を確認できた。逆に2倍以上発現の低下しているmicroRNAにおいては、その上流1500bp以内にそのような配列は認めなかった(未発表)。また、mir-129においては、腫瘍部での発現が正常粘膜部の4倍以上であると共に、生存曲線においてmir-129高発現群では有意に予後不良であり、多変量解析においても独立した予後因子であることが確認されているが、同microRNAの上流にもTCF7L2結合部位となりうる配列が確認されている。これらのmicroRNAの上流でTCF7L2がpromoterとして本当に作用しているかをプロモーターアッセイにて確認を順次進めていく予定であるが、現時点で有意な結果は得られていない。1.microRNAのプロモーターアッセイいずれもプロモーター領域から、約1500bpまでの間に、上記のbinding siteをもつmicroRNAである。mir-129においては、食道癌の腫瘍部での発現が正常粘膜部の4倍以上であると共に、生存曲線においてmir-129高発現群では有意に予後不良であり、多変量解析においても独立した予後因子であることが確認されているが、同microRNAの上流にもTCF7L2結合部位となりうる配列が確認されている。まずはmicroRNAの上流でTCF7L2がpromoterとして本当に作用しているかをプロモーターアッセイにて確認を順次進めていく計画である。しかしながら、プロモーターベクター作製に難渋しており、現時点で有意な結果は得られていない。2.食道癌細胞株におけるWntシグナルの抑制実験TCF4siRNAの配列によって、細胞株によって抑制効果はまちまちで、細胞死誘導できるまでにはいたらなかった。この原因についてsiRNAのロットの違いを考え、またTCF4そのものを完全ブロックするのは困難であろうと考えている。ベータカテニンそのものをsiでブロックし、一部の食道癌細胞株に細胞死を誘導できた。今後食道癌におけるWntシグナル機構の関与を解明できるものと考える。1.microRNAのプロモーターアッセイmicroRNA129の上流にTCF7L2binding siteを指摘しえたため、そのプロモーター領域のベクターを作成予定であったが、ベクター作成に非常に難渋し、現時点で優位な結果は得られていない。2.食道癌細胞株におけるWntシグナル抑制実験Siβカテニンによる細胞死誘導の実験を食道癌細胞株TE11を用いて行った。3.食道癌臨床検体におけるベータカテニンとEカドヘリンの免疫染色による検討ベータカテニンとEカドヘリンの免疫染色では、両者が細胞膜から消失している症例では予後不良というデータがえられ、Eカドヘリンと裏打ちタンパクであるベータカテニンの役割を考慮すると、両方の消失が細胞の遊走、転移能の獲得に寄与している可能性が示唆された。4.食道癌臨床検体におけるTCF4の免疫染色による検討TCF4の免疫染色でも、TCF4の核発現症例は予後不良であった。ベータカテニンが核に移行していない症例でもTCF4は核に移行しており、Wntシグナルがonになっている状態が示唆された。プロモーターアッセイ用のベクター作製には難渋しているが、そのほかsiRNAによる抑制実験では、TCF4、ベータカテニンの抑制実験を行い、細胞死を誘導できている。24年度が最終年度であるため、記入しない。ベクター作製においては、もう一度配列などの見直し、あるいは、候補microRNAの変更を考慮したい。そのほか、APC、AXINのsiRNAなども行い、食道癌においてWntシグナルはどの程度関与するのか、詳細な検討を行いたい。
脂質ブロッティング/質量分析による構造解析法の確立と脂質機能研究への応用

薄層クロマトグラフィー(TLC)で分離したリン脂質や糖脂質をプラスチック膜(polyvinylidene difluoride、PVDF)に効率よく転写する方法を確立した。これをTLC blottingと名付け、PVDF膜に転写された脂質を直接質量分析で構造解析する方法を検討した。この結果、次に示す方法を確立した。TLCプレートで分離した脂質をプリムリン試薬で発色させ、色鉛筆でバンドをマークした後、PVDF膜に転写する。マークは脂質と共にPVDF膜に転写される。マーク部分をパンチアウトし、これを質量分析器のターゲットチップにトリエタノールアミンとともに付着させる。分析はCs^+を20kVで照射し、2次イオン質量分析法によって行った。その結果、得られたスペクトルはノイズが低く抑えられ、分子イオンばかりでなくフラグメントイオンがきれいに検出された。検出感度はTLCのバンドとして0.1μgで充分きれいなスペクトルが得られることが明らかとなった。この方法を用いてラット乳癌細胞の転移性を異にする三種類の細胞株について糖脂質組成と構造の比較解析をおこなった。この結果、1x10^7個の細胞から分離した糖脂質で、それぞれの細胞株のすべての糖脂質を構造決定できた。従来の方法では1x10^9-10^<10>個の細胞が必要であり、分離した糖脂質についても主要糖脂質の構造解析ができる程度で、その分析には2年程度の期間が必要であった。本法の導入により糖脂質の構造解析は極めて容易になり、微量で短期間(2週間以内)に行えるようになった。またPVDF膜に転写した糖脂質に対する微生物の結合実験の可能となり、本法を応用したリガンドの構造解析が可能となった。
P450、発現を誘導する薬物受容体の細胞内存在様式

ダイオキシン受容体は細胞質に存在する時、ストレス蛋白質HSP90と複合体を形成している。リガンド(例えばTCDD)が細胞に浸入すると、受容体に結合するが、それによって複合体は解離する。TCDDとダイオシン受容体は核内に移行し、特定のエレメントを持つプロモ-タ-領域に結合し、その遺伝子発現を制御する。この機構を追及するために、高比活性の放射標識化合物が市販されている(リガンドとして利用可能な)グルココルチコイドと同受容体(以下GRと略す)をモデル系として次の研究を行った。1)モリブデン酸によって安定化された8SーGR(HSP90を含む)は重合アクチンと共沈澱する。一方、高塩濃度下にHSP90からフリ-になった4SーGRは重合アクチンと共沈澱しなかった。2)8SーGRの重合アクチンへの結合は多量のHSP90によって阻害された。また、放射標識したリガンドを結合した8SーGRにHSP90を適当量加えると、加えたHSP90の量に比例して8SーGRの重合アクチンへの結合が減少した。3)8SーGRの重合アクチンへの結合は、トロポミオシンあるいはカルシウム・カルモデュリンによって阻害された。これらの結は8SーGRがその構成要素であるHSP90を介して重合アクチンに結合することを示している。この研究によって次の解答が与えられた。GRは本来核移行シグナルを持つので核に移動するはずだが細胞算に分布する。これは8SーGRが細胞質のアクチン繊維に結合するためと考えられ、リガンドが8SーGRに結合すると、GRがHSP90から離れ(つまりアクチンからも離れ)核移行するのである。ダイオキシン受容体についても、まったく同じ機構が働いていると考えられる。
インセンティブを考慮したアルゴリズム設計の基礎理論

個人配分問題として物々交換とケーキ分割を扱い,ダミー入力への耐性を有するアルゴリズムについて議論した.また,物々交換に関しては,計算複雑性に基づくダミー入力への耐性の代替概念を提案した.社会的決定問題としては施設配置を扱い,同質な2つの施設を直線上に配置するモデルにおいて,ダミー入力への耐性を有する配置アルゴリズムの特徴付けに成功した.さらに,選択順序と呼ばれる数理モデルに確率の概念を導入し,いくつかの計算問題が多項式時間で解けることを示した.これらの研究成果は,人工知能分野で最難関の国際会議であるAAAI, AAMAS, IJCAIなどに採択され,口頭発表を行った.個人配分問題の例として取り上げたマッチングに関して,その特殊ケースである物々交換モデルに限定して議論を行った.各ユーザが複数の非分割財を保有する物々交換において,パレート効率性と個人合理性を満足する範囲では,厳密な意味でダミー入力への耐性を有するアルゴリズムが存在しないことを示した.さらに,よく知られたTop-Trading-Cycles (TTC)アルゴリズムの単純な拡張のもとで,ダミー入力を含む操作によってユーザが効用を増加できるか否かの判定問題がNP-completeであることを示した.すなわち,TTCを拡張したアルゴリズムのもとで,効果的なダミー入力の発見は計算困難である.この研究成果は,人工知能分野の国際会議AAAI-15にてフルペーパーとして採択され,口頭発表としても採択された.社会的決定問題の例として取り上げた施設配置に関しては,直線上に2つの同質な施設を配置するモデルに限定して議論を行った.各ユーザが高々1つの施設にアクセスするという仮定のもとで,パレート効率性と匿名性を満足する範囲において,厳密な意味でダミー入力への耐性を有するアルゴリズムの出力結果を特徴付けることに成功した.本研究成果は現在国際会議IJCAI-15に投稿中である.個人配分問題の例として,マッチング問題の特殊ケースである物々交換に着目し,各参加者が虚偽の表明をするインセンティブを持たない交換アルゴリズムが設計できるための条件について考察した.具体的には,全ての参加者の選好が,財に関する共通の順序に基づいていても,加法的拡張(additive extension)と呼ばれる形式で決定されている場合には,参加者が虚偽表明のインセンティブを持たないようなアルゴリズムは設計不可能であることを示した.また,ケーキ分割問題関しても議論を行い,自然な仮定のもとでダミー入力への耐性と公平性が両立しないことを示したほか,弱めた耐性と公平性とを同時に有する分割アルゴリズムを提案した.さらに,選択順序問題(picking sequence problem)と呼ばれる問題において,確率的に順序が決定されるケースを考察し,参加者が2人のケースで,相手の戦略を観測可能な場合に,自分の最適戦略の探索が多項式時間に収まることを示した.これらの研究成果は,国際会議AAMAS-15, IJCAI-15, AAMAS-16にそれぞれ採択された.一方,社会的決定問題に関しては,直線上に2つの同質な施設を配置するモデルにおいて,ダミー入力への耐性を有するアルゴリズムの出力結果の特徴付けを行った.また,円周上への配置モデルについても考察を行い,ダミー入力への耐性を有するアルゴリズムの動作の特徴付けに成功した.本研究成果は国際会議AAAI-16に採択され,発表を行った.個人配分問題として物々交換とケーキ分割を扱い,ダミー入力への耐性を有するアルゴリズムについて議論した.また,物々交換に関しては,計算複雑性に基づくダミー入力への耐性の代替概念を提案した.社会的決定問題としては施設配置を扱い,同質な2つの施設を直線上に配置するモデルにおいて,ダミー入力への耐性を有する配置アルゴリズムの特徴付けに成功した.さらに,選択順序と呼ばれる数理モデルに確率の概念を導入し,いくつかの計算問題が多項式時間で解けることを示した.これらの研究成果は,人工知能分野で最難関の国際会議であるAAAI, AAMAS, IJCAIなどに採択され,口頭発表を行った.マッチングに関しては,特殊ケースである物々交換モデルに制限しているものの,制限した範囲では,ダミー入力への耐性の緩和および緩和した耐性を満足するアルゴリズムの設計に成功している.さらに,従来のメカニズムデザイン分野における物々交換アルゴリズムとの関連・差異を明確に出来たことは,初期の想定以上の研究成果だと考える.施設配置に関しても,2つの施設の配置という異なるモデルではあるが,耐性を満足する決定性アルゴリズムの出力結果を特徴付けることができた.これは,社会的選択の分野においては,当初の研究計画に記載した乱択アルゴリズムの設計以上に重要な研究成果である.人工知能今年度に得た研究成果を拡張するとともに,マッチングに関して2部マッチングアルゴリズムの考察,施設配置に関しては乱択アルゴリズムの設計という,申請書記載の研究課題に引き続き取り組む.さらに,ソーティングや投票などの類似した例題への,提案したアルゴリズムや概念の応用可能性を探る.国際会議AAAI-15出張時のWi-Fi端末のレンタル料を計上していたが,会議場にて十分な通信速度の無線ネットワークが提供されることが予め判明し,端末のレンタルを取りやめたため.
北京語および北方方言の音韻史的研究

昭和59年度から61年度までの間の研究成果は、<清末河間府、献県方言の音韻特色>、<中古中国語の梗摂二等韻の音韻変遷について>、<いくつかの官話方言の音韻史的研究(I)>の3論考にまとめられた。最初の論文は、フランス人宣教師レ・ヴィジエールが1900年に出版した河間府方言字典にもとずいて、その漢字音を研究し、音節表を示し、官話方言としての特色、北京語との異同を指摘したもの。第2の論文は、中古中国語の梗摂二等の牙喉音字がなぜ他の摂のそれらとちがって北方方言において口蓋化しなかったのか、その原因と変化の過程を論じたもの。口蓋化が行われなかった理由としては、主母音a>aの変化を想定した。第3の論文は、ドイツ人K.ヘメリングが1902年に出版した『南京官話』と題する書を資料として、清末の主要な官話方言のひとつである南京官話を考察したもの。論文は、まずこの方言の音節表を掲げ、つぎにその官話音と中古中国語とを比較し歴史的な音韻変化を記述した。なお清末には欧文による種々の官話系中国語字典が著わされたが、それらは従来の中国語研究において資料としてあまり利用されることがなかった。筆者はそれについて注目し、個別に詳しい調査研究を行ったが、その発表は近い将来に期したい。1.《いわゆる北京読書音について》この論考は王璞著『国音京音対照表』(1921年)を資料として、北京俗音と区別される北京読書音を重点的にあつかったもの。清代出版の中国語学書によれば、当時の官話には「北官話」「南官話」とよばれる二つの種類があり、知識人・教養人の間に広く通行したのは後者のほうで、王璞の記載する北京読書音は、その「南官話」の系統を引くものであることを述べた。2.《梗摂二等韻母の音韻変化の特色について》この論考は、中古中国語の梗摂二等韻母が中古以後、他の摂の二等韻母とことなってたいへん特色ある音韻変化を経験したことをいくつかの方言資料や漢字音資料から指摘し、その変化の原因と変化過程を考察したもの。以上の2篇の論考は、それぞれ62年発行の学会雑誌,大学の研究紀要に発表予定。3.《北京語および北方方言の音韻史的研究》この研究は上記2論考とちがって総合的,包括的なもので、北京語および北方方言の各種の発音を、声母方面と韻母方面に大きくわけて、それぞれ歴史的にどう推移変化してきたかを、中古中国語・近世中国語・古官話・近代官話・現代語の順にくわしくあとづけようとしたもの。とくにこの研究は、清代官話というものを積極的に重視し、その実態を明確にしつつ、それと今日の北京語・北方方言との相互関係を考察している点に特色があると考えている。
都市近郊混住地域における地域景観保全のための計画区域区分と整備手法に関する研究

本研究では,全国的にデータ整備が進むデジタル地理情報と地理情報システムを用いて,都市近郊農村地域を特徴づけている現在と過去の田園景観(景観域)の,面的分布,空間,住宅地開発における阻害状況など特性を明らかにし,農業生産機能,生態系の保全,住宅立地適性等の視点から地域評価を行う。この評価を基に,農業,環境保全及び居住地としての位置付けを明確化した計画区域を設定し,各区域の整備・開発・保全手法を検討したものである。本研究で扱う景観とは,地域の自然,社会経済,空間の諸事象を総体化した,地理学的・生物学的景観(景域)である。研究成果として,(1)地域の自然環境・開発の状況を汎用に捉えるため,国土数値情報(1/10細分区画土地利用データ,50mメッシュ標高)を地理情報システム上でオーバレイさせ,9種類の景観原単位を設定し,混住化以前の景観を復元を行った。(2)復元化した景観については,国勢調査及び国土数値情報の人口動態・地域社会経済・空間整備の実態指標をデータとした分散分析により,6つ(平地水田,平地混在,平地畑地,台地畑地,波丘地,山間)の等質領域を抽出した。この領域は,これまでの地域計画単位である農業集落・市町村と一致ぜず,田園地域の特性に立脚し,領域毎の汎用な計画課題を導出することができる。これを景観域と呼称し,仮想の計画区域として捉える。(3)各景観域の特性を把握するために地形・植生・法的規制,住宅地開発動向から,各景観域における混住化前後の景観変容特性を明らかにした。(4)首都圏地方自治体の田園景観・環境保全の施策・計画の動向を踏まえ,6つの景観域毎に,混住化により生じる景観阻害問題,景観整備の方向・視点・条件,整備形態モデル及び整備の制度的対応と現状の課題,について整理・考察を行い,景観保全のあり方を提言した。本研究は,国土数値情報を基礎データとし,地理情報システムを用いて,混住化の進む都市近郊農村地域の農業生産機能,生態系の保全,住宅立地適性等の視点から地域評価を行う。この評価を基に,都市近郊混住地域において,田園景観の保全を前提に,農業,環境保全及び居住地としての位置付けを明確化した計画区域を設定し,汎用性の高い地域整備計画の基礎的知見を得ることを目的とする,本研究で扱う景観とは,地域の自然,社会経済,空間の諸事象を総体化した,地理学的・生物学的景観(景域)である。現在,(1)地域の自然環境・開発の状況について汎用に捉えるため,国土数値情報(土地利用,標高を用いて,首都圏の都市近郊農村地域(埼玉県西部地域)について,混住化が進行する前後の時期(1976年)における,グリッド(100m方形)単位とした,景観の原単位(9種類)を設定した。(2)設定した9つの景観原単位の首都圏における空間分布を地理情報システムソフトウェアを用いて表示する。これにより都市近郊農村地域の混住化進行以前の景観を2次平面上に復元化することができる。(3)復元した景観について,等質な領域を抽出する。この領域を景観域と呼称し,仮想の計画区域として捉える,対象地域では平地水田,平地混在,平地畑地,台地畑地,波丘地,山間の6つの景観域を抽出した。各景観域の特性を把握するために地形・植生・法的規制などの地理情報を用いて,景観の類型区分を検討した。(4)さらに各景観域の社会経済的特性を明らかにするために,国勢調査の地域メッシュ統計(1km方形)および農林業センサス農業集落界と,景観域を地理情報システム上でオーバレイさせて,景観域における集計を行っている。
ヒトデのリラキシン様生殖腺刺激ホルモン（GSS)による生殖制御機構の研究

卵濾胞細胞は繁殖期になるとGSSに応答し、1-MeAdeを生産する。この時、Gαsの生合成を必要とした。GSS受容体候補として、卵濾胞細胞からリラキシン受容体のホモローグをcDNAクローニングした。また、13C-メチオニンを用いた実験から1-MeAdeはSAMを基質として合成されることが示唆された。さらに、10種類のヒトデのGSSの化学構造を同定した結果、GSSには、3種類のオーソログがあることがわかった。これらは、いずれもリラキシン様ペプチドであったことから、ヒトデ生殖腺刺激ホルモンをrelaxin-like gonad-stimulating peptide (RGP)と呼ぶことにした。(1) GSSの作用機構:GSSによる1-メチルアデニン(1-MeAde)生産誘起作用は、卵濾胞細胞に対して受容体/G-タンパク質/アデニル酸シクラーゼを活性化によってもたらされることが明らかにされている。今回、まずイトマキヒトデ濾胞細胞のGαs-およびGαi-タンパク質についてcDNA cloningを行い翻訳領域(CDS)を解明し、次にGαsのmRNAレベルを卵黄形成期から卵成熟期の濾胞細胞で測定したところ、Gαsの転写活性が卵成熟期に著しく高まることが明らかになった。一方、Gαiの転写活性には、特に変化が見られなかった。(2) GSS分子の化学構造:北海道(厚岸)から九州(長崎)まで日本列島周辺10箇所に棲息するイトマキヒトデについて、GSSのcDNAを解析した。その結果、すべての地域のイトマキヒトデにおいて、GSSは塩基配列およびアミノ酸配列とも完全に一致することが確認できた。このことから、GSS遺伝子は極めて保存性が高いことが強く示唆された。さらに、オニヒトデのGSSについて、cDNA cloningを行ったところ翻訳領域(CDS)が塩基配列およびアミノ酸配列ともイトマキヒトデのGSSと同一であった。これは、イトマキヒトデとオニヒトデが同じアカヒトデ目に属していることに由来すると思われる。(1) GSSの作用機構:GSS受容体候補として、リラキシン様受容体のcDNA cloningをおこなった。その結果、イトマキヒトデ卵濾胞細胞から845個のアミノ酸をコードする2,538 bpのcDNAが得られた。予想されるタンパク質はシグナル配列除去後、7回膜貫通型受容体であることが確認された。(2) GSS分子の化学構造:イトマキヒトデGSSのmRNAと遺伝子の塩基配列を決定した。その結果、GSS遺伝子は2つのエクソンと1つのイントロンから構成されていることが明らかになった。さらに、マヒトデ(マヒトデ目)のGSSを新たに同定した。マヒトデGSSの化学構造は既に同定したイトマキヒトデ(アカヒトデ目)と同様にA鎖とB鎖の二量体からなるリラキシン様ペプチドであった。これにより、ヒトデ類の生殖腺刺激ホルモンをこれまでのGSSからリラキシン様生殖腺刺激ペプチド(relaxin-like gonad-stimulating peptide, RGP)と呼ぶことを提案した。一方、マヒトデRGPとイトマキヒトデRGPの相同性は、A鎖に対しては58%であり、B鎖に対しては73%であった。イトマキヒトデRGPはイトマキヒトデばかりでなくマヒトデの卵巣に対して、卵成熟および放卵を誘起したが、マヒトデRGPはマヒトデの卵巣に対してのみ、放卵誘起活性がみられたが、イトマキヒトデ卵巣に対しては、何ら影響を及ぼさなかった。(1) GSSの作用機構: GSS受容体候補として、新たにイトマキヒトデ卵濾胞細胞からリラキシン受容体のホモローグをcDNAクローニングした。得られたcDNA (PpeRXFP)は947個のアミノ酸をコードし、膜7回貫通領域を持っていた。また、1-MeAde生合成系について、卵濾胞細胞をGSS処理した場合、13C-メチオニンから13C-S-アデノシルメチオニン(13C-SAM)の生産量が増加することが見出された。このことから、1-MeAdeはSAMを基質として合成されることが強く示唆された。(2) GSS分子の化学構造:ヒトデ綱全7目のうち4目、11種類のヒトデについて、GSSの化学構造を同定した。GSSは、いずれもリラキシン様二本鎖ペプチドから構成されることから、ヒトデ生殖腺刺激ホルモンをrelaxin-like gonad-stimulating peptide (RGP)と呼ぶことを提唱した。これらRGPの解析から、RGPには、イトマキヒトデタイプ(PpeRGP)、マヒトデタイプ(AamRGP)およびエゾヒトデタイプ(AjaRGP)の3種類があることがわかった。特徴として、AamRGPとAjaRGPは互いにエゾヒトデやマヒトデ卵巣には有効であったが、イトマキヒトデ卵巣に対して放卵を誘起できなかった。一方、PpeRGPは、イトマキヒトデばかりでなく、マヒトデやエゾヒトデの卵巣に対しても有効で放卵を誘起した。このことから、RGPは部分的な種特異性を持つことが明らかになった。

また、13C-メチオニンを用いた実験から1-MeAdeはSAMを基質として合成されることが示唆された。さらに、10種類のヒトデのGSSの化学構造を同定した結果、GSSには、3種類のオーソログがあることがわかった。これらは、いずれもリラキシン様ペプチドであったことから、ヒトデ生殖腺刺激ホルモンをrelaxin-like gonad-stimulating peptide (RGP)と呼ぶことにした。GSSの受容体候補として、イトマキヒトデ卵濾胞細胞からリラキシン受容体と高いホモログを示すcDNA cloningが得られた。この遺伝子は、卵濾胞細胞で特異的に発現していることが確認されたことから、GSS受容体である可能性が高い。イトマキヒトデのGSSについて、これまでシグナルペプチドやC-ペプチドを含んだcoding-DNA sequenceは明らかにされていた。本研究により、GSSゲノムおよびGSS mRNAの全塩基配列を解読することができた。これにより、GSS遺伝子の転写開始点、mRNA合成時におけるスプライシング、ポリアデニル化シグナルを確認できた。すなわち、GSS遺伝子の転写調節機構が解明されたと考えられる。さらに、新たにマヒトデからGSSが同定され、イトマキヒトデ同様にリラキシン様ペプチドであることが明らかになったことは、他種のヒトデのGSS解析に弾みがついた。生物学(1) GSSの作用機構:1-MeAde生産系を実験計画に従って解析する。GSS受容体については、今回得られたリラキシン様受容体cDNAがGSS受容体であることを証明する。具体的には、リラキシン様受容体cDNAを発現ベクターに組み込み、COS-7培養系細胞で強制発現させ、GSSを処理した際に細胞内サイクリックAMP濃度に変動があるかどうかを確認する。(2) GSS分子の化学構造:実験計画に従って、さらに他種のヒトデ(Asterias rubens、モミジガイ、ルソンヒトデなど)について、GSSのcDNA cloningをおこなう。Asterias rubensのGSS解析は、英国Queen Mary University of LondonのMaurice Elphick教授と共同研究でおこなう。イトマキヒトデのGαs-およびGαi-タンパク質について、cDNA解析が完了したことで、リアルタイム定量PCRによるmRNAの転写活性が可能になった。その結果、卵黄形成期から卵成熟期にかけてのGSSに対する卵濾胞細胞の応答変化がGαsータンパクの発現により調整されていることを解明できた。日本列島各地に棲息するイトマキヒトデのGSS遺伝子の塩基配列がすべて同一であることが明らかになった。このことから、他種のヒトデのGSSの解析において、棲息場所の違いをあまり考慮する必要がなくなり、功績は大きい。今回、オニヒトデGSSについて、cDNA cloningによりcDNAが解析できたことで、他種のヒトデのGSS解析に弾みが付いた。(1) GSSの作用機構:1-MeAde生産系を実験計画に従って、解析する。さらに、GSS受容体を同定するための予備的な実験を開始する。(2) GSS分子の化学構造:実験計画に従って、他種のヒトデ(マヒトデ、モミジガイなど)について、GSSのcDNAクローニングを行う。
心不全大規模データベースによる突然死の日米比較：適正治療検証の新規システムの構築

平成30年度は、新規多施設共同レジストリーWest Tokyo Heart Failure (WET-HF) Registry 2 (参加施設:慶應義塾病院、榊原記念病院、杏林大学病院、済生会中央病院、聖路加国際病院、埼玉医科大学国際医療センターなど)、従来の評価項目に患者背景因子(悪性腫瘍・認知症・frailtyなど)観血的手技、心血管系有害事象(脳卒中・出血)などを追加した新たなフォーマットで症例登録が開始され、概ね順調に登録が進んでいる。一昨年度終えた長期予後の調査を踏まえて、中間目標とした"欧米のリスクモデルの適合度の検証"について学会・論文発表した。今後はより精度の高いリスクモデル作成のために、継続的に症例登録と詳細な評価を継続する。次年度もWET-HF2 Registryによる症例登録を継続する。死因、心血管系有害事象(脳卒中・出血)の評価は、高度な医学的知識が必要であり、医師による施設訪問、裁定システム委員会審議を繰り返し、追跡調査を継続する。本研究の最終的目標の一つである、本邦におけるより精度の高い死因別リスクモデル構築、より包括的な非薬物的治療の評価、非致死性合併症も踏まえた検証が今後可能と考えている。合同会議(4回/年;次回4月24日)での議論を踏まえて、精度を高めた死因別予測モデルの現場feedbackシステムの体制構築を予定している。昨年度は、多施設共同レジストリーWest Tokyo Heart Failure (WET-HF)Registry (参加施設:慶應義塾病院、榊原記念病院、杏林大学病院、聖路加国際病院、埼玉医科大学国際医療センターなど)のデータベースを再構築した。具体的には、従来の基本登録項目(1患者背景、2身体所見、検査所見、バイオマーカー、3治療[薬物、非薬物]、4退院後予後/心不全入院)に、詳細死因(心臓死[心不全、心筋梗塞、突然死など]・非心臓死[脳卒中、腎不全、感染症、悪性腫瘍など])やリスクモデルに必要な情報を追加した。死因判断は高度な医学的知識が必要であり、医師による施設訪問、裁定システム委員会審議を繰り返し、追跡調査を完了した。その結果、米国においてVAD適応判断に使用される全死亡率予測モデルへの適合度が、本邦でも良好であることに加え、特有のリスク因子を加えた新規モデルの有用性を明らかにした。また、突然死頻度が欧米に比して少なく、本邦特有の規定因子を有することを報告した(Fukuoka R, Kohno T, et al. The Prevalence and Determinants of Sudden Cardiac Death in the Real-World Japanese Heart Failure Patients.第78回日本循環器学会総会2018年3月大阪)。欧米でICDの有効性判断に用いる突然死予測モデルも、本邦で適合することを明らかにした。研究協力者であるDr Wayne Cecil Levy (University of Washington)とは、国際学会の会期中など含めdiscussionを重ね、精度を上げるべくリスクモデルの修正を進めている。死因を含めて長期予後の調査を終え、全死亡・死因別リスクモデルの検証を終えている。次年度より、WET-HF2 Registryの開始を予定しており(慶應大学倫理委員会承認済み)、従来の評価項目に患者背景因子(悪性腫瘍・認知症・frailtyなど)観血的手技、心血管系有害事象(脳卒中・出血)を追加する。これに伴い、より精度の高い死因別リスクモデル構築、より包括的な非薬物的治療の評価、非致死性合併症も踏まえた検証が可能になる。参加施設拡充(8施設)も予定しており、合同会議(4回/年;次回5月10日)での議論を踏まえて、精度を高めた死因別予測モデルの現場feedbackシステムの体制構築を今後予定している。本研究は、心不全予後、特にその死因、突然死の有無に関する精度の高い調査に加えて、心臓突然死リスク指標を探索するためのデータベース再構築が主体となる。データ収集とデータベース統合を行い、これを一括管理して質の高いデータとして維持するための人材(臨床コーディネイター)の雇用が必須となるが、管理に必要な費用が当初の予想を下回った。また、国内各参加施設にデータベースのフィードバックをwebベースで行うシステム構築は次年度以降に行うこととなり、繰り越しすることとしました。未使用額の発生は効率的な物品調達を行った結果である。残金は出張旅費として使用予定である。