hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
漢族ならびにその隣接少数民族コミュニティの研究

本研究は、初年度(1987年)に中国で行なった各分担者の調査資料とその後入手した二次資料とをもとにして、その整理・分析と検討による総括を目的としており、東京大学教養学部文化人類学研究室を拠点として、計四回の研究会議をもった。その四回めの研究会議の機会に、中国側の研究分担者である索文清・朱通華の両氏を招聘して、各分担者の研究成果に対して現地研究者の立場からのコメントと今後の研究展望と具体的な研究体制を固める上での貴重な助言を得ることができ、またその機会に、国立民族学博物館・広島大学でも研究連絡と意見交換の会合をもち、併せて日本側の地方農村の産業化とりわけ工場誘致の現状視察と現地の人たちとの意見交換の場を設け、中国における郷鎮企業振興の現状との比較研究のための共通の認識を得ることができた。分担研究のうち、漢族社会を対象とする研究では、山東省の畑作農村と広東省、福建省の水田稲作地帯の農村を対象として(1)村落の歴史的背景、(2)革命後の生産・居住組織の変遷、(3)父系出自集団(宗族)の機能と変遷、(4)廟その他の信仰の現状、(5)郷鎮企業の現状、等について不充分ながら凡その状況が明らかになった。少数民族地区の分担研究のうち、雲南白族の研究では、白族村落の社会組織、婚姻慣習のほか漢族社会との相互関係の概況が明らかとなり、また、湖南省で近年新たに存在が知られた白族集団についても、そのエスニシティーをめぐる民族間関係の概況が明らかとなった。また蔵族地区の研究では、河川流域に点在する伝統的な地方都市の宗教・行政上の中心的性格と周辺農村及び牧民たちとの相互関係にメスが入れられ、とりわけ宗教統合のあり方について概況が明らかとなりつつある。いづれの分担研究においても、不充分ながら概況を明らかにし得たので、今後はより集約的な調査研究と、未着手地区への拡大調査の展望を得ることができた。
留学生の就職に及ぼす日本語習得の効果について

就職に関する留学生の意識のグローバル化、国際化をめざす企業戦略等に伴い、留学生が留学終了後、日本での就職ができるようになった。日本語教育は大学での勉学に支障がないように成されるはずであり、そのための工夫や実践が多くなされている。その効果がいかに就職という結果に反映されるかを調査した。現在日本で就職している元留学生の日本語能力、その企業に採用された要因に日本語能力がどのように関わっていたか、を調査した。日本語能力は上級ではなくとも採用された例もあるが、その者が『困っていること』に「日本語能力に関すること」を挙げていることは、就職には日本語能力は必須であるといえる。企業側の調査をとると技術系で「専門知識や技術が日本語の壁を超える」とする企業が1社あったにすぎず、留学生の採用で最も危惧することに「日本語でのコミュニケーション」を挙げる企業や「外国人雇用者の誤解で大損をした、日本語能力は基本である」とする企業等、採用側の日本語能力に対する期待が大きいことは「日本人同様の採用条件」「全く同じ採用試験」という企業が大勢であることからも分かる。日本での就職、日本語関係の就職を促進するためには日本語能力を高めるより効果的な日本語教育が望まれる。
発育脳における放射線誘発アポトーシスの研究

1.確定妊娠マウスを自然分娩させ,出生1日目のマウス新生仔に1.0Gyのγ線を照射し、小脳外顆粒層の細胞にアポトーシスを誘発させた場合,照射後の小脳における蛋白合成について検索した.γ線照射後より経時的にマウス小脳を摘出し,^<35>S-メチオニン添加の緩衝液中(37°C)で新生タンパク質をpulseラベルした後,放射ラベルされた小脳のタンパク質を二次元電気泳動し,アポトーシスに伴って出現する可能性のあるkillerタンパク質の発現を検索した.γ線照射群と対照群との間には,ラベルされた新生タンパク質の分布には変化が無く,いわゆるkillerタンパク質の誘導は見られなかった.2.アポトーシスにおけるシグナルの伝達に,Gタンパク質が関与している可能性を明らかにする目的で,出生1日目のマウス新生仔にリチウム(10μmol/g)を皮下投与し,2時間後に0.5Gyのγ線を照射した.形態的なアポトーシスの指標とされる小脳外顆粒層の核濃縮細胞の出現頻度の上昇は,リチウム投与群で非投与群に比べて約6時間遅延した.リチウムは,phosphoinositideの代謝回転および,それのGタンパク質へのguanine-nucleotideの結合を阻害することから,放射線誘発アポトーシスのシグナルは,cyclic-AMPまたはphosphoinositideを介して伝達されることが示唆された.3.妊娠8日目の母マウスに0.05Gyのγ線を照射しアポトーシスを誘発させた場合,照射後48時間目にheat shock proteinやc-fosなどが誘導されるが,この時期に1.0または0.5Gyの2度目のγ線照射を行い,アポトーシスを阻害するようなadaptive responseの獲得があるかどうか検索した.end pointとしての出生前日における外脳症の頻度には大きな変化は無く,adaptive responseは形成されないことが示された.1.確定妊娠マウスを自然分娩させ,出生1日目のマウス新生仔に1.0Gyのγ線を照射し、小脳外顆粒層の細胞にアポトーシスを誘発させた場合,照射後の小脳における蛋白合成について検索した.γ線照射後より経時的にマウス小脳を摘出し,^<35>S-メチオニン添加の緩衝液中(37°C)で新生タンパク質をpulseラベルした後,放射ラベルされた小脳のタンパク質を二次元電気泳動し,アポトーシスに伴って出現する可能性のあるkillerタンパク質の発現を検索した.γ線照射群と対照群との間には,ラベルされた新生タンパク質の分布には変化が無く,いわゆるkillerタンパク質の誘導は見られなかった.2.アポトーシスにおけるシグナルの伝達に,Gタンパク質が関与している可能性を明らかにする目的で,出生1日目のマウス新生仔にリチウム(10μmol/g)を皮下投与し,2時間後に0.5Gyのγ線を照射した.形態的なアポトーシスの指標とされる小脳外顆粒層の核濃縮細胞の出現頻度の上昇は,リチウム投与群で非投与群に比べて約6時間遅延した.リチウムは,phosphoinositideの代謝回転および,それのGタンパク質へのguanine-nucleotideの結合を阻害することから,放射線誘発アポトーシスのシグナルは,cyclic-AMPまたはphosphoinositideを介して伝達されることが示唆された.3.妊娠8日目の母マウスに0.05Gyのγ線を照射しアポトーシスを誘発させた場合,照射後48時間目にheat shock proteinやc-fosなどが誘導されるが,この時期に1.0または0.5Gyの2度目のγ線照射を行い,アポトーシスを阻害するようなadaptive responseの獲得があるかどうか検索した.end pointとしての出生前日における外脳症の頻度には大きな変化は無く,adaptive responseは形成されないことが示された.本年度の実験は,確定妊娠マウスを自然分娩させ,出生1日目のマウスに1.0Gyのγ線を全身照射し,経時的にマウスをエーテル麻酔下でと殺し,摘出小脳をドライアイスまたは液体窒素で凍結し,下記の生化学的な検索を行った。アポトーシスの指標酵素とされる組織トランスグルタミナーゼ(tTG)は,脳では非常に活性が低いことから,モルモットの肝臓よりDEAE-celluloseのイオン交換クロマトグラフィーによりtTGを分離抽出し,マウスを用いてモノクローナル抗体を作製した。γ線照射3,6,12時間後におけるマウス小脳の懸濁液をポリアクリルアミドゲル電気泳動し,更にニトロセルロース膜上にウェスタンブロットして,tTG抗体との免疫反応を検索した。しかし,ラジオアイソトープを用いて測定したtTG活性が,著しく上昇した照射後6および12時間におけるtTGの酵素誘導が,ウェスタンブロット検索では見られなかった。また,免疫組織化学的にもtTG抗体との陽性反応がみられなかった。何れも,モルモット肝臓のかTGとマウス脳組織のそれとが交差反応をしないのか,あるいは活性が低いために陽性反応が見られなかったと思われるが,今後,小脳からtTG蛋白を抽出したもので免疫反応を検索する予定である。また,tTG活性が著しく上昇したγ線照射6および12時間後の小脳組織を液体窒素で凍結し,mRNAを抽出し後,mRNAをノーザンブロットし,牛の血管内皮細胞よりクローニングされたcDNAを用いて,tTGのmRNAレベルでの誘導について検索したが,何れも陽性反応が見られなかった。現在,このcDNAを用いてin situ hybridaizationを行って検索している。

本年の実験は,確定妊娠マウスを自然分娩させ,出生1日目のマウスに1.0Gyのγ線を照射し,経時的にマウスをエーテル麻酔下でと殺し,摘出小脳について下記の生化学的な検索を行い以下の結果を得た.1.γ線照射後より経時的にマウス小脳を摘出し,^<35>S-メチオニン添加の緩衝液中(37°C)で新生タンパク質をpulseラベルした後,放射ラベルされた小脳のタンパク質を二次元電気泳動しkillerタンパク質の発現を検索したが,γ線照射群と対照群との間にはラベルされた新生タンパク質の分布には変化が無く,いわゆるアポトーシスに伴うkillerタンパク質の誘導は見られなかった.2.組織トランスグルタミ-ゼ(transglutaminase:TG)の阻害剤のmonodansylcadaverineをγ線照射1時間前に皮下投与(10mg/kg)し,TG活性の変化及びDNA断片化などによりアポトーシス阻害の有無を検索した.皮下投与された10mg/kgの阻害物質の濃度では大きな変化は無く,投与量を増加させると新生児マウスが死亡した.3.γ線照射2時間前のリチウム(10μ/g)を皮下投与すると,外顆粒細胞層において,形態的なアポトーシスの指標である核濃縮細胞の出現頻度の上昇時間が,リチウム非投与のγ線照射群に比べて約3時間遅延して発現した.リチウムは,phosphoinsitideの代謝回転およびGタンパクへのguan ine-nucleotideの結合を阻害することから,放射線誘発アポトーシスのシグナルは,cyclic-AMPまたはphos phoinositideを介して伝達されることが示唆された.
高性能光ラベル法による脂質標的分子の同定および結合解析

内在する脂質メディエーターの生体機能解析には、その機能発現を担う代謝関連タンパク質の探索・同定は必須である。反応基の改良を行いつつ、特定脂肪酸の代謝酵素と代謝物受容体のプロファイリングを目標としたアフィニティーラベル法開発を推進した。1.近接場効果を利用した関連酵素の化学的ラベル酵素反応は速いため、通常、ラベル化には阻害剤が用いられる。本研究では脂肪酸代謝酵素群の連続捕捉を目的とすることから酵素反応部位を残したパルミチン酸プローブを作製し、アシルCoA合成酵素ラベルで評価した。ラベル反応基には置換活性が低いチオエステルを採用し非特異的ラベルを抑えた。ATPやCoAの補因子非存在下では効率よくラベルされたことから、本プローブが酵素に結合し、保持された状態で近接場効果によりラベル化が促進することがわかった。一方、存在下ではその速度は極端に減少したが、ラベルは経時的に増加した。以上、プローブの一部はその酵素を捕捉しつつ、多くは基質部分が酵素反応を受け、次段階酵素に対するプローブに変換する手法論の開発に成功した。2.代謝プロセスを利用した関連受容体の光化学的ラベル受容体解析には非特異的ラベルが少ない光ラベル法を採用した。本研究では個々の複雑な脂肪酸代謝物のプローブ化を行わずに、代謝物受容体群を同定するための手法論を検討した。酵素反応部位を残した2種類のアラキドン酸光プローブを作製し、複数酵素で連続的に処理したところ、反応は遅いものの計3つの酵素反応に対応する代謝物の光プローブに順次変換することがMS分析で確認され、さらにそれらの光ラベルを達成した。別途、プロテオーム解析に向けて開発したアシルスルホンアミドを利用した光ラベル解析を評価したところ、微量解析に有効な切断効率向上に加え、光照射で質量変換する特殊MSタグとして機能することが判明した。29年度が最終年度であるため、記入しない。内在する脂質メディエーターの生理機能解析に受容体の探索・同定は必須である。本研究では特定不飽和脂肪酸の代謝物関連タンパク質群の同定を目標とし、光アフィニティーラベル法を利用した効率の良い相互作用タンパク質プロファイリング法開発を行う。初年度は、脂肪酸プローブ化が容易な高性能クロスリンカーユニット開発を進めた。Lys側鎖アミノ基やPhe側鎖ベンゼン環にジアジリン基を導入した誘導体の他に、無保護、無触媒でのカップリングが可能なスルホクリック反応を利用するため側鎖にスルホニルアジド基を有するアミノ酸を複数合成した。これと別途作製した光反応性桂皮酸チオエステル誘導体を混合して光反応性アミノ酸誘導体を作製した。スルホクリック反応で形成されたアシルスルホンアミドはsafety-catchリンカーとしてペプチド固相合成に利用されており、アルキル化処理で切断される。この特性はラベルタンパク質の濃縮・精製に極めて有効であり、既にラベルタンパク質での切断活性を確認した。一方、2つの光反応(光クロスリンクと光切断)の制御とリガンド親和性への影響の軽減を狙いo-ヒドロキシ基へ濃縮タグ導入を検討したが、合成した光反応基は不安定であったため開発を断念した。以上の多機能クロスリンカーユニット開発と並行し先行して、濃縮/検出タグであるビオチン基を有するPhe型光反応基を不飽和脂肪酸に導入した光反応性誘導体を作製した。この誘導体による関連酵素のラベルが確認されたことがら、プローブとしての機能を有することがわかった。本研究では、不飽和脂肪酸代謝に関連したタンパク質群の同定を目標とし、光アフィニティーラベル法を用いた効率の良い相互作用タンパク質のプロファイリング技術を開発する。初年度では複数の多機能光クロスリンカーユニットを開発した。特に側鎖にスルホニルアジド基を有するアミノ酸型リンカーから作製した光クロスリンカーユニットは、アルキル化処理による鋭敏な切断特性を示すことが明らかになった。これによりスルホクリック反応を利用した脂肪酸光プローブ作製の簡便化と、切断特性を利用した微量ラベルタンパク質解析効率化が見込める。別途先行して、ビオチン基を有する光反応基をアラキドン酸に導入し作製した光反応性プローブが関連酵素をラベルすることを確認した。以上、初年度の設定目標はほぼ達成した。しかし、先行して行った光ラベル検討ではこのプローブの酵素への結合が遅いことが判明した。最終目的とする代謝産物受容体のプロファイリングには、プローブ構造の再設計を含めた改善が必須と考えられる。

2.代謝プロセスを利用した関連受容体の光化学的ラベル受容体解析には非特異的ラベルが少ない光ラベル法を採用した。本研究では個々の複雑な脂肪酸代謝物のプローブ化を行わずに、代謝物受容体群を同定するための手法論を検討した。酵素反応部位を残した2種類のアラキドン酸光プローブを作製し、複数酵素で連続的に処理したところ、反応は遅いものの計3つの酵素反応に対応する代謝物の光プローブに順次変換することがMS分析で確認され、さらにそれらの光ラベルを達成した。別途、プロテオーム解析に向けて開発したアシルスルホンアミドを利用した光ラベル解析を評価したところ、微量解析に有効な切断効率向上に加え、光照射で質量変換する特殊MSタグとして機能することが判明した。作製したビオチンタグを付与したアラキドン酸プローブによる詳細なラベル条件検討を引き続き行う。これと並行して、先のラベル検討の結果をフィードバックし、アラキドン酸ー酵素複合体結晶構造を考慮したプローブの再設計を行う。以下の2点「基質ー光反応基間リンカー鎖長の変更」と「光反応基構造の軽量化」を推進する。後者の軽量化に関してはタンデムラベル化法を採用し、機能を保持しつつも嵩張る構造を除去した反応基を作製する。この戦略で用いるエチニル基は極めて小さく、光クロスリンク後にクリック反応を利用して選択的にビオチン基を導入できるためラベルタンパク質の検出/濃縮が可能となる。既にこの方法論による実施例は多く報告されている。アラキドン酸代謝酵素を評価系として、その関連タンパク質への親和性、酵素反応性、光ラベルなどを評価し、その結果をプローブ設計にフィードバックする。十分な酵素反応特性が確認され次第、プロテオーム系でのラベル解析に移行する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
新型シーケンサーを用いた細菌における自然環境でのゲノムアダプテーション解析法

前年度までに、ヒト臨床由来O26とウシ常在O26の高解像度系統解析を行い、ウシ常在O26は潜在的にヒトに対する病原性を持つことを示唆する結果を得た。本年度は、ヒト由来大腸菌とウシ由来大腸菌をO26の血清型に限定せず収集し、両者の系統的関係を詳細に解析した。ヒト由来大腸菌については、敗血症由来株を146株、健康なヒトの便由来大腸菌(ヒト常在株)53株を収集した。ウシ由来大腸菌は、全国11地域からウシの直腸便を計1666検体収集し、ヒトに腸管感染症を起こす病原性大腸菌(志賀毒素と三型分泌装置のどちらか一方か両方をもつ大腸菌、ここではヒト腸管病原性株とする)を810株とそれ以外の一般大腸菌(ウシ常在株とする)を411株分離した。まず、ヒト敗血症株、ヒト常在株、ヒト腸管病原性株、ウシ常在株の各50株について、illumina MiSeqでシーケンスし、アセンブルによりドラフトゲノム配列を取得した。次に、大腸菌K-12をリファレンスとして、各菌株のSNPsをゲノムワイドに同定し、その情報を基に、全ゲノムレベルの高解像度系統樹を作成した。系統解析の結果、ヒト由来大腸菌(ヒト敗血症株とヒト常在株)とウシ由来大腸菌(ヒト腸管病原性株とウシ常在株)の系統は、大きく異なることが明らかとなった。このことは、(1)ヒト常在大腸菌が、血液内で増殖できるようになったことでヒトの敗血症を起こしていること、(2)ウシ常在大腸菌が、志賀毒素や三型分泌装置など獲得し、偶発的にヒトに感染することで腸管感染症を起こしていること、逆に、(3)ヒト常在大腸菌がヒト腸管感染症の原因にはなりにくい、また(4)ウシ常在大腸菌がヒト敗血症の原因にもなりにくいことなどを示唆する結果である。今後は、菌株数を増やして、上記のことを確認すると共に、宿主特異性や病原性進化に関する機構を遺伝子レベルで解明するよである。26年度が最終年度であるため、記入しない。細菌が自然環境下で様々な環境や宿主等の変化に適応して、そのクローンを拡大する(clonal expansion)ためには、外来性遺伝子の獲得だけでなく、塩基置換や塩基の挿入・欠失などの微細なゲノム変化も、ゲノムアダプテーションという点で重要な役割を果たす。本研究では、疫学・臨床情報が完備された病原性大腸菌O26(500株)と結核菌(100株)をモデルとして、大規模配列解析による高解像度進化系統樹の作製と各株のメタ情報との統合解析を行い、病原細菌におけるゲノムアダプテーションの解析手法の確立を目指す。これまでに、本新学術領域の公募研究(H23-24年度)において、約350株のO26ヒト臨床由来株の収集とシーケンスを終えている。本年度は動物衛生研究所、地方動物保健所、地方衛生研究所などの協力を得て、ウシ糞便由来O26を36株収集した。また、動物診療所の協力を得て、ウシの直腸便400検体を収集し、7株のO26(うち2株が志賀毒素陽性)を分離した。これらのウシ由来O26について、MiSeqによりゲノムシーケンスを行い、ヒト由来株を含めた配列解析を行っているところである。全ゲノムレベルの高解像度系統解析の結果、国内のO26は大小2つの主要系統群を構成することがわかった。本主要系統群は日本の環境に適応し、そのクローンを増大させていると考えられることから、本ゲノムアダプテーションに関わるゲノム領域の抽出を目指して、各主要系統群に特異的なゲノム領域(変異)の同定を進めている。また、結核菌については、これまでに老人ホーム集団発生由来の8株についてシーケンスと一部の解析までを終えている。

このことは、(1)ヒト常在大腸菌が、血液内で増殖できるようになったことでヒトの敗血症を起こしていること、(2)ウシ常在大腸菌が、志賀毒素や三型分泌装置など獲得し、偶発的にヒトに感染することで腸管感染症を起こしていること、逆に、(3)ヒト常在大腸菌がヒト腸管感染症の原因にはなりにくい、また(4)ウシ常在大腸菌がヒト敗血症の原因にもなりにくいことなどを示唆する結果である。今後は、菌株数を増やして、上記のことを確認すると共に、宿主特異性や病原性進化に関する機構を遺伝子レベルで解明するよである。26年度が最終年度であるため、記入しない。ウシ由来株O26の収集については、当初予定していた150株には達していない。動物衛生研究所に加え各地の地方動物保健所や地方衛生研究所に問い合わせているが現在までに収集できたのは36株にとどまっている。ウシのO26の保菌率は数パーセントと言われており、今回400検体のウシ糞便から7株のO26を分離したが、割合から考えて、分離手法には問題ないと考えられる。今後は、さらに多くの糞便検体を収集し、O26の分離を進める予定である。配列解析については、順調に進んでおり、全ゲノム系統解析のパイプラインは完成している。現在、主要系統群特異的なゲノム領域と変異を抽出する解析系の構築を進めている。結核菌については、生育速度が非常に遅いことと、国内外の競合研究との関係から菌株の再選別が必要となったため、少し遅れているが次年度には100株の解析を終える予定である。今後は、ウシ由来O26の収集と分離をさらに進める予定である。これまでの予備的な結果では、ヒト由来臨床株とウシ由来環境株に系統的な違いは見られず、ウシに存在するO26の大部分が基本的にはヒトへの病原性を保持していることが示唆される。本仮説の学術的信頼性を得るためには、少なくとも100株程度のウシ由来株を解析に加える必要があると思われるため、次年度中に目標数の分離・収集を目指す。また、本年度の解析により同定した2つの主要系統群に特異的なゲノム領域や変異を同定し、ゲノムアダプテーションに関わる遺伝子やその変異を明らかにする。将来的には本研究で確立した解析手法を用いて、O157を含む他の重要な血清型の腸管出血性大腸菌についても同様の解析を行う予定である。結核菌については、研究期間中に100株のシーケンスと解析を終わらせる予定である。O26の研究については、研究期間内に論文投稿するつもりである。
光学異方性を有する光波電界ベクトル記録媒体を用いた3次元ベクトルホログラムの創成

本研究課題において、「3次元ベクトルホログラム」と呼ぶホログラム記録における新しい概念を提案した。3次元ベクトルホログラムは、一軸に初期配向され、結果として大きな光学異方性を有する光反応性の液晶材料中に記録された。異方性媒体中の光波伝搬速度が偏光状態に依存する効果によって、液晶分子の光再配向の3次元空間分布が誘起される。これらの光学異方性の高度な3次元空間分布によって引き起こされる種々の興味深い光学現象についての系統的な考察を行った。本申請に関わる初年度においては、3次元ベクトルホログラム創成において、実験的・理論的にその可能性を実証した。具体的には、前述したアゾベンゼンをドープした光機能性液晶を一軸配向したホログラム記録媒体を用い、偏光ホログラムの手法を用いて3次元ベクトルホログラムの形成を試みた。この目的のため、従来からの予備実験で使用してきたアゾベンゼンドープ高分子複合体液晶を用い、「3次元ベクトルホログラム実証光学系」を構築し、3次元ベクトルホログラムの書き込み・評価・実証を行った。実証光学系は、実時間3次元ベクトルホログラムの実証を目的としており、書き込み光として用いる高出力DPSSレーザー(波長488nm)、プローブとして用いるHe-Neレーザー(波長633nm)からなる。さらに、3次元ベクトルホログラムでは、光学的異方性が3次元的に分布した構造が形成されるため、書き込み光の入射角依存性を観察するための回転試料台、読み出し光の入射角依存性を観察するための移動式ミラー、などの光学系からなっている。その結果、等方的な記録媒体とは、明らかに異なる回折特性が観察され、光記録媒体の厚さ方向も含めた変調構造を強く示唆する結果が得られた。また、形成された3次元ベクトルホログラムについてExtended Jones Matrix法、4×4Matrix法、FDTD法、などのシミュレーション技術の適用の検討を開始し、おのおのの解析方法の特徴を把握した。従来からの予備実験で使用してきたアゾベンゼンドープ高分子複合体液晶を用い、「3次元ベクトルホログラム実証光学系」を用い、3次元ベクトルホログラムの書き込み・評価・実証を継続した。実証光学系は、実時間3次元ベクトルホログラムの実証を目的としており、書き込み光として用いる高出力DPSSレーザー(波長488nm)、プローブとして用いるHe・Neレーザー(波長633nm)からなる。本申請に関わる2年目においては、これらの実験結果を、Extended Jones Matrix法、4×4Matrix法、FDTD法、などのシミュレーション技術を用いて解析し、そのメカニズムを詳細に理解することに成功した。また、書込光が軸対象な偏光を有する特殊偏光を用いた書込・再生実験を開始した。昨年度までに実証した一軸配向したアゾベンゼン色素ドープ高分子複合体液晶を用い、書き込み光として用いる高出力DPSSレーザー(波長488nm)、プローブとして用いるHe-Neレーザー(波長633nm)からなる実証光学系を用い、3次元的に光学異方性分布を形成した「3次元ベクトルホログラム」について、より一般化することを目的に、(1)軸対称性を有する特殊偏光を用いた記録・再生実験、(2)結合波理論のベクトルホログラム理論への拡張、を行った。昨年度まで行ってきた一軸異方性を有する記録媒体へのベクトルホログラム記録では、記録媒体自体の光学異方性に起因して書込光の偏光が空間変調されることを利用していたが、それに対して、書込光自体に偏光分布を持たせることによってより一般化されたベクトルホログラム記録が可能であった。また、形成された3次元ベクトルホログラムの光学特性については、従来はFDTD法のような数値計算法で行ってきているが、光学特性の物理について明確に考察するためには、解析的手法による説明が欠かせない。この目的のため、平成22年度においては、結合波理論の拡張を行い、3次元ベクトルホログラム理論の確立への足がかりを得た。
北海道統治と台湾統治との連続と断絶ーー「殖民地撰定」事業を中心に

本研究は、台湾統治初期の「殖民地撰定」事業を、同時期の北海道の開拓政策と比較しながら、日本の北海道統治と台湾統治との連続・断絶を明らかにする。既存研究での当該時期北海道と台湾との関係は、北海道関係者の台湾赴任などが指摘されているが、土地政策や移民・植民についてはその重要性にも関わらず、きちんとした比較がなされていない。よって本研究は、「台湾総督府档案」(日本の台湾統治機関であった台湾総督府が所蔵していた公文書)を活用する文献研究を主とし、北海道と台湾でのフィールドワークを従として、北海道と台湾のそれぞれの「殖民地撰定」事業とその後の北海道と台湾の土地政策・移民政策を比較する。
グリコサミノグリカン分解による連鎖球菌の宿主細胞侵入・感染機構の分子・構造生物学

化膿性溶血型連鎖球菌(Streptococcus属)由来のヒアルロン酸リアーゼ(HLY)は、宿主細胞外マトリクスであるグリコサミノグリカン(GAG)を不飽和オリゴ糖に分解し、菌の侵入に重要な役割を示すと考えられている。これまでに、Bacillus属細菌GL1株においてHLYホモログであるキサンタンリアーゼXLY及びGAG不飽和オリゴ糖を分解する新規酵素(不飽和グルクロニルヒドロラーゼ,UGL)を対象に、それらの構造と機能を解析している。本研究では、連鎖球菌における宿主細胞への侵入・感染機構を解明するため、GAG分解系酵素の構造・機能相関を明らかにした。1.XLY-基質複合体の構造解析及び部位特異的変異解析により、HLYとXLYに共通する触媒反応機構を見出した。Tyr一残基が、基質ウロン酸のC5位からプロトンを引き抜き、グリコシド結合にプロトンを供与する。2.UGL-基質複合体の構造解析及び部位特異的変異解析により、従来の糖質加水分解酵素とは異なるUGLの新規な触媒反応機構を明らかにした。UGLは、基質不飽和ウロン酸のビニルエーテル結合を水和することにより触媒反応を開始する。3.UGLと相同性を示す機能不明タンパク質が、種々の連鎖球菌ゲノムにコードされていることを見出した。大腸菌で発現させた連鎖球菌(S. agalactiae, S. pneumoniae, S. pyogenes)由来UGLホモログは、多糖リアーゼ反応により生じたGAG(コンドロイチン、ヒアルロン酸)不飽和2糖を単糖に分解した。これは、連鎖球菌においてHLYとUGLが協働して宿主細胞外マトリクスを分解することを示す。また、連鎖球菌UGLはBacillus由来UGLと異なり硫酸化GAG不飽和糖にも作用するため、この広い基質特異性が連鎖球菌の感染を容易にすることが示唆された。化膿性溶血型連鎖球菌(Streptococcus属)由来のヒアルロン酸リアーゼ(HLY)は、宿主細胞外マトリックスであるグリコサミノグリカン(GAG)を不飽和オリゴ糖に分解し、菌の侵入に重要な役割を有することが示唆されている。これまでに、Bacillus属細菌GL1株においてGAG不飽和オリゴ糖を分解する不飽和グルクロニルヒドロラーゼ(UGL)の構造と機能を明らかにしてきた。本研究では、連鎖球菌における宿主細胞への侵入・感染機構を明らかにするため、連鎖球菌のGAG分解系酵素の構造と機能を解析した。UGLと相同性を示す機能不明タンパク質が、種々の連鎖球菌ゲノムにコードされていることを見出した。S.pneumoniaeでは、HLYとUGL遺伝子が近傍に位置することから、これらの遺伝子がGAG分解に関わる遺伝子クラスターを形成することが予想された。大腸菌で発現させた連鎖球菌UGLホモログは、多糖リアーゼ反応により生じたGAG(コンドロイチン、ビアルロン酸)不飽和2糖を単糖に分解した。これは、連鎖球菌においてHLYとUGLホモログが協調して宿主細胞外マトリックスを分解することを示す。抗UGLホモログ抗体を用いたウェスタンブロッティングにより、連鎖球菌はGAGの存否に拘わらずUGLホモログを構成的に発現することが示された。連鎖球菌UGLホモログは、既知のBacillus由来UGLと異なり硫酸化GAG不飽和糖にも作用した。そこで、X線結晶構造解析により、連鎖球菌UGLホモログがBacillus由来UGLと比較して硫酸基を許容する活性部位構造を持つことを明らかにした。

Streptococcusに属する化膿性溶血型連鎖球菌は、多糖リアーゼを初発酵素として宿主細胞外マトリックス(グリコサミノグリカン:GAG)を分解することにより宿主細胞への侵入・感染を容易にすることが示唆されている。本研究では、連鎖球菌における宿主細胞への侵入・感染機構を明らかにするため、連鎖球菌ゲノムにコードされる機能不明タンパク質を、GAG分解に関して多糖リアーゼと協働する不飽和グルクロニルヒドロラーゼ(UGL)であることを明らかにし、そのX線結晶構造を決定した。大腸菌発現系より精製した連鎖球菌(Streptococcus agalactiae)UGL(Sag UGL)は、多糖リアーゼ反応により生じたGAG(コンドロイチン、ヒアルロン酸〉不飽和糖を分解し、既知のBacillus由来UGLとは異なりGalNAc4位の硫酸化GAG不飽和糖にも作用する。本酵素は、硫酸アンモニウムを沈殿剤とした蒸気拡散平衡法により結晶化した。放射光実験施設SPring-8にてX線回折データを収集し、Bacillus UGLをサーチモデルとした分子置換法により、Sag UGLの高次構造を分解能1.8Åで決定した。活性クレフトについてSag UGLと不飽和コンドロイチン2糖が結合したBacillus UGLとの構造比較を行った結果、基質と相互作用するアミノ酸残基は両者で高度に保存されているが、GalNAcの4位に位置するアミノ酸残基で相違が見られた。すなわち、GalNAc4位の近傍にはBacillus UGLではヒスチジン210が、Sag UGLではアルギニン236が配置されている。また、この部位でのアラインメントを調べたところ、3種類の連鎖球菌(S. agalactiae, S. pneumoniae, S. pyogenes)では全てアルギニン残基であった。そこで、アルギニン236をヒスチジンやアラニンに置換すると、GalNAc4位の硫酸化GAG不飽和糖の分解が抑制された。従って、連鎖球菌の4位硫酸化コンドロイチンに作用する要因として、このアルギニン残基が重要であることが明らかになった。
ドレブリン遺伝子導入培養神経細胞を用いた神経組織の発生および分化に関する研究

ドレブリンは神経系の発生過程で特徴的に発現する蛋白質であり、ヒト及びラットでは2種類のアイソフォームE、Aよりなるが、そのうち成熟後にも存在するドレブリンAは神経特異蛋白であり、分化した神経細胞のみに特異的に発現されている。まず、ヒト神経芽細胞腫由来SH-SY5Y細胞をレチノール酸(RA)によって分化させた。未分化SH-SY5Y細胞では、ドレブリンは細胞質内に斑点状に存在し、ストレスファイバー(SF)上においても連続性を持たずに点状にのみ存在した。分化して突起を伸展したSH-SY5Y細胞では、細胞体および突起の細胞膜近傍に局在が変化し、F-アクチンと共在したが、このF-アクチンはアクチンの脱重合剤サイトカラシンDに対して、SFを形成するF-アクチンよりも安定性が高かった。このことはドレブリンがアクチンの重合状態に影響を与えている可能性を示唆している。また、蛋白リン酸化酵素阻害剤k-252aによってもRAの場合と同様の変化がみられ、RAによるドレブリンの膜近傍への局在の変化には蛋白リン酸化酵素活性の阻害が関与すると推測された。次に非神経細胞であるL細胞にドレブリンA遺伝子を導入してドレブリンを発現させたところ、SFは太く束状になって蛇行する、あるいは網目状のアクチン線維に変化し、ドレブリンが共在した。ドレブリン発現細胞では、サイトカラシンDに対して接着斑が安定化しており、同時にビンキュリン発現量の増加が確認された。ドレブリンはアクチンの重合状態を変化させることによってアクチン線維の形態のみならず接着斑の状態にも影響を与えている可能性が示唆された。ヒト神経芽細胞腫由来SH-SY5Y細胞の培養液中にretinoic acidおよび分裂抑制剤を添加し、neurofilament(NF),NSE,シナプトフィジン(SVP38)を用いた免疫組織染色を行った結果、神経細胞への分化が確認され、in vitroにおける神経組織の分化モデルになり得ると判断された。上記確認の後、ヒト神経芽細胞腫(SH-SY5Y細胞)を用いて、末分化およびレチノール酸(RA)により神経突起を伸展した際の、ドレブリンの細胞内局在と細胞骨格蛋白F-アクチンの変化を検討した。末分化SH-SY5Y細胞では、ドレブリンは細胞質内に斑点状に存在し、ストレスファイバー(SF)上においても連続性を持たずに点状にのみ存在した。神経突起を伸展したSH-SY5Y細胞では、細胞体および突起の細胞膜近傍に局在が変化し、F-アクチンと共在した。これは、初代培養系における小脳神経細胞のドレブリンの局在と類似した。ドレブリンと共在する膜近傍のF-アクチンはアクチンの脱重合薬サイトカラシンDに対して、SFを形成するF-アクチンよりも安定性が高かった。また蛋白リン酸化酵素阻害薬k-252aによりSH-SY5Y細胞は突起を伸展し、その際のドレブリンの細胞内局在は、RAの場合と同様に膜近傍にF-アクチンと共在した。したがって、RAによるドレブリンの膜近傍への局在の変化には蛋白リン酸化酵素活性の阻害が関与すると推測された。次に非神経細胞であるL細胞にドレブリンAcDNAを組み込んだベクターをリン酸カルシウム共沈法でtransfectし、ドレブリンを安定に発現する形質転換線維芽細胞(MiwD-6cell)を確立した。この細胞に免疫組織染色を行ったところ、細胞質内にアクチンが太く束状になって蛇行し、そこにドレブリンが共在している細胞が散見された。これはドレブリンの発現量増加に伴い、アクチンの重合状態が変化して細胞膜へと移動していく中間過程を示しているものと推測された。申請者らが同定したドレブリンは神経系の発生過程で特徴的に発現する蛋白質であり、ヒト及びラットでは2種類のアイソフォームE、Aよりなる。それぞれのmRNAは1種類の遺伝子から可変スプライシングの機構により作られ、成熟後にも存在する

ドレブリンAは神経特異蛋白であり、分化した神経細胞のみに特異的に発現されている。今回、そのドレブリンA cDNAをもつ発現ベクターをL細胞に導入してドレブリンを安定的に発現する形質転換線維芽細胞MiwD-6を確立した。MiwD-6とL細胞にtubulinの脱重合剤であるcolcemidとactinの脱重合剤であるcytochalasin Dを加えたところ、L細胞のほとんどが球形化したのに対し、MiwD-6の細胞突起は比較的よく維持された。一定濃度のcolcemid存在下において、この形態変化とcytochalasin D濃度との間には正の相関を認めた。また、MiwD-6とL細胞のcell spreading及びcell adhesionには有意差を認めなかったが、cytochalasin D存在下では両方ともMiwD-6のほうが優っており、有意差を認めた。各脱重合剤添加時のtubulinおよびF-actinの免疫染色では、微小管、ストレスファイバーの形状変化は両者同様であったが、抗ビンキュリン抗体を用いてcytochalasin D添加時の接着斑を解析すると、MiwD-6のほうがL細胞よりも接着斑がよく維持されていた。以上の結果から、ドレブリンはactinの重合状態を変化させることによって接着斑の安定化にも関与している可能性が示唆され、細胞骨格のみならず細胞基質間接着にも注目して研究を進めることとなった。当初、計画していたSH-SY5Y細胞への遺伝子導入とは異なる部分もあるが、神経組織発生過程の細胞移動にも関連あるものと思われ、有意義な研究方向であると思われた。MiwD-6細胞では網目状のアクチン線維が観察され,ドレブリンと局在が一致していた。MiwD-6細胞とL細胞にtubulinの脱重合剤であるcolcemidとアクチンの脱重合剤であるcytochalasiDを加えたところ、microtubulesとstress fiberは両者共破壊されていたが、MiwD-6細胞の形態はよく維持され,L細胞のほとんどが球形化したのと対照的であった。この形態変化とcytochyalasin D濃度との間には正の相関を認め,アクチンの重合状態が変化していると考えられた。また、抗体vinculin抗体を用いてcytochalasin D添加時の接着斑を解析すると、MiwD-6細胞はL細胞に比べ、接着斑がよく維持されていた。一方,MTI-5はCd添加量の増加に伴ってドレブリン発現量が増加するが、それに伴い、突起伸展細胞の割合が増加すると共にストレスファイバーから網目状のアクチン線維への変化が観察された。このとき、ドレブリン発現細胞では免疫染色でビンキュリンの染色性が増加して接着斑がより明かに同定され、ウェスタンブロッテイングでも発現量の増加が確認された。また、ドレブリン発現細胞ではアクチンの脱重合剤cytochalasin Dに対して接着斑が安定化している所見が得られた。以上のことから、ドレブリンはアクチンの重合状態を変化させることによって細胞生態の変化及び細胞-細胞外基質接着に関与していると考えられた。
セントロメア構築に関わるGATA転写因子のS期機能の解明とその標的遺伝子の同定

真核生物のゲノムにはヒストン遺伝子が複数コピー存在することが知られている。分裂酵母のコアヒストン遺伝子は単独にH2Aβが存在する他は、H2Aα-H2Bが1コピー、H3-H4が3コピー(H3.1-H4.1,H3.2-H4.2,H3.3-H4.3)存在している。前年度の研究成果として、Ams2破壊株ではコアヒストンの転写量が減少していることからAms2によってS期にヒストン転写が促進されている可能性があることを報告した。今年度は、特に3コピーとも同じアミノ酸配列をコードしているヒストンH3およびH4遺伝子の発現量とAms2の関係について詳細に解析した。各ヒストン遺伝子の発現量についてはこれまでに報告がないため、始めに野生株における各ヒストン転写量の細胞周期を通しての変動を検討した。Northern blotおよび定量的RT-PCRの結果、細胞周期を通して3コピー間で転写量に違いが見られた。ヒストン転写量はS期にピークになることが知られているが、興味深いことにH3.2の転写量はS期に転写量の増加が見られず、細胞周期を通して転写量の変動が少ないことがわかった。Ams2破壊株ではコアヒストンの転写量はS期に増加が認められず、G2期にはH3.2,H4.2の転写量が増加していることがわかった。ChIP解析によりAms2はS期特異的にヒストン遺伝子上流領域に存在するAACCCTbox依存的に結合していた。これらの結果は、Ams2がS期におけるコアヒストンの転写活性化に必要であること、G2期に見られるヒストン転写はAms2非依存的に起こることを示している。さらに、酵母HIRAホモログ(Hip1,Slm9)についても解析した。Hip1破壊株ではコアヒストンの転写量がs期以外で増加することが報告されている。今回の定量的RT-PCRの結果から、Hip1破壊株とSlm9破壊株は、特にH3.2,H4.2転写量が著しく増加していることが明らかとなった。Ams2は分裂酵母ヒストンH3バリアントcnp1+温度感受性変異株cnp1-1の多コピー抑圧因子として単離され、Cnp1のセントロメア局在を促進することが報告されている。これまで知られているCnp1のセントロメア局在化因子とは異なり、AmS2は非必須遺伝子である。野生株では細胞周期を通してCnp1がセントロメアに局在しているのに対し、ams2破壊株では主に2核細胞でCnp1がセントロメアに局在していた。この結果はams2破壊株においてCnp1が細胞周期特異的にセントロメアへ局在することを示唆している。今回、細胞周期特異的なCnp1のセントロメア局在化機構を調べるために生細胞観察を行った。その結果、ams2破壊株ではS期からG2期にかけてCnp1はセントロメアへ局在しなくなり、G2後期からM期にかけて再局在することがわかった。この結果はCnp1がS期においてAms2依存的にセントロメアへ局在し、G2後期ではAms2非依存的に局在化することを示している。G2期に観察されるAms2非依存的なCnp1のセントロメア局在化について調べるために、G2期変異株とams2破壊株の二重変異株を作成した。ams2破壊株にG2期が伸長する変異を導入すると細胞の生育がよくなり、G2期が短縮する変異を導入した株ではM期で大小核を示し致死となった。G2期の長さに応じてams2破壊株の生存率が変化することから、G2期に見られるCnp1のセントロメア局在によってams2破壊株の生存率が保たれていると考えられる。また、野生株でもCnp1^<ts>たんぱく質がS期だけでなくG2期にもセントロメアへ局在できることを確認した。これらの結果からCnp1はS期とG2期の少なくとも2つの時期でセントロメアに局在できることが明らかとなった。ams2破壊株のようにS期におけるCnp1のセントロメア局在化機構が欠如した場合、G2期にCnp1の再局在化によって染色体の均等分配が保障されているようである。セントロメアに存在するヌクレオソームはH2A,H2B,H4およびヒストンH3バリアントCENP-A(分裂酵母ホモログはCnp1)からなる。Ams2はcnp1+温度感受性変異株cnp1-1の多コピー抑圧因子として単離され、Cnp1のセントロメア局在を促進することが報告されている。前年度の研究成果として、Cnp1はS期とG2期の少なくとも2つの時期でセントロメアに局在できることを示し、Ams2によるヒストン転写の活性化によってCnp1のセントロメア局在がS期に促進されている可能性を報告した。今年度は、ヒストンの転写調節とCnp1のセントロメア局在化の関係について分子レベルの解析も含めて行った。Ams2破壊株ではヒストン転写量が減少しCnp1のセントロメア局在化がS期で見られなくなる。ヒストン転写量が上昇することが知られている分裂酵母HIRAホモログであるHip1の破壊株では細胞周期のすべての時期においてCnp1がセントロメアへ局在することがわかった。これらの結果は、S期にはAms2依存的にCnp1がセントロメアに局在し、G2期初期にはHip1依存的にセントロメア局在が抑制されていることを示している。

このため、少なくともヒストン転写に関与している2つの因子が協調してCnp1のセントロメア局在化を調節していると考えている。さらに、Ams2が直接ヒストンのプロモーター領域に結合できるかをChIP解析により検討した。分裂酵母には3コピーのヒストンH3-H4カセットが存在し、各ヒストンカセットでAms2の結合量が異なっていた。現在、Ams2のヒストンプロモーター領域への結合量と転写量の関係について検討している。真核生物のゲノムにはヒストン遺伝子が複数コピー存在することが知られている。分裂酵母のコアヒストン遺伝子は単独にH2Aβが存在する他は、H2Aα-H2Bが1コピー、H3-H4が3コピー(H3.1-H4.1,H3.2-H4.2,H3.3-H4.3)存在している。前年度の研究成果として、Ams2破壊株ではコアヒストンの転写量が減少していることからAms2によってS期にヒストン転写が促進されている可能性があることを報告した。今年度は、特に3コピーとも同じアミノ酸配列をコードしているヒストンH3およびH4遺伝子の発現量とAms2の関係について詳細に解析した。各ヒストン遺伝子の発現量についてはこれまでに報告がないため、始めに野生株における各ヒストン転写量の細胞周期を通しての変動を検討した。Northern blotおよび定量的RT-PCRの結果、細胞周期を通して3コピー間で転写量に違いが見られた。ヒストン転写量はS期にピークになることが知られているが、興味深いことにH3.2の転写量はS期に転写量の増加が見られず、細胞周期を通して転写量の変動が少ないことがわかった。Ams2破壊株ではコアヒストンの転写量はS期に増加が認められず、G2期にはH3.2,H4.2の転写量が増加していることがわかった。ChIP解析によりAms2はS期特異的にヒストン遺伝子上流領域に存在するAACCCTbox依存的に結合していた。これらの結果は、Ams2がS期におけるコアヒストンの転写活性化に必要であること、G2期に見られるヒストン転写はAms2非依存的に起こることを示している。さらに、酵母HIRAホモログ(Hip1,Slm9)についても解析した。Hip1破壊株ではコアヒストンの転写量がs期以外で増加することが報告されている。今回の定量的RT-PCRの結果から、Hip1破壊株とSlm9破壊株は、特にH3.2,H4.2転写量が著しく増加していることが明らかとなった。
メコン川中上流域の森林と開発

本調査研究は、山岳少数民族の社会を対象とし、彼らの森林と共生する生活様式を、当該地域の今後の経済社会の構築の中核に据えるべく、その現代的な意義と価値を探る事を目的とした。近年の東南アジアにおける政治的安定と経済グローバル化の深化の中で、開発対象として急速に注目を集めている巨大国際河川メコン河(中国名:〓〓江)水系に住む合計6民族9ヶ村(中国西双版納〓族自治州〓海県、〓〓地区〓〓県・双江県、保山地区〓冲県の〓Dai族3ヶ村、〓Wa族2ヶ村、布朗Bulang・哈尼Hani(愛尼Aini)・〓〓Lisu・拉〓Lahu族各1ヶ村)で調査(本調査3回、補足調査1回)を行った。当該研究では,1.村落社会における森林政策・制度の影響、2.村落の歴史と自然環境の変遷,3.森林利用とその結果(森林利用に焦点を当てた生業活動の実態と慣習法、)、4.世界観(村落世界の民族固有の環境認識)の4点に問題関心を絞った。もちろんそれぞれの民俗,村落でその負って来た歴史は異なるものの,調査結果の分析から,概して次のような諸点を指摘できる。当該地域の少数民族の多くは、森林に尊崇を払いつつそれを利用して長年生活を営んできた。第二次世界大戦後の中国革命成立による激烈な中央集権化と、世界的な物的生産力の急激な拡大の中にあって、彼らの伝統的な自給的生活様式は大方、無視・否定され、大きな破壊を被ってきたし、今なおさらなる破壊の危機に直面しているといってよい。その傾向の一部は皮肉にも、近年の、商業主義的開発と抱き合わせとなった森林保護政策によっても、促進されている。我々は、彼らが長年にわたって主体的に編み出してきた森林保護の思想や文化が、森林の維持と利用を両立させるために重要な機能を持っており、その中に今後の森林環境を保護していくための第一の意義と価値を見出すものである。森林保護とそこに生きる民族の生存とが密接不可分の関係にあること、森林保護に森林利用民の排除は必要ないだけでなく、むしろ当事者でない者に決定権を持たせることは森林破壊を導き当該地域社会を混乱に導くものと考える。森林利用の当事者である、我々が調査対象としたような少数民族をこそ、森林保護の一番の担い手に据えるべきであるという結論を得た。最後に,本調査研究の成果の一部を公開する目的で,国際シンポジウムを開催したことを附記する。本研究で計3回予定している本現地調査のうち,本年度は,平成14年3月6日から3月30日にかけて、第1回目の現地調査を行った。本研究のテーマは国際河川であるメコン川(瀾滄江)流域山岳地帯に住む少数民族の森と水の文化を明らかにすることである。今回は、中国雲南省西双版納州〓海県に所属する3郷内3民族3ヵ村を調査対象とした。

それは、〓遮郷曼来村(〓族)、布朗山郷吉良村(布朗族)、巴達郷曼来老村(哈尼族)である。その村落調査に先立ち,〓海県政府、〓遮郷・布朗山郷両政府に対してもインタビュー調査を行った(巴達郷政府は調査できず)。参加者は,研究代表者及び研究分担者の上田信(同じく研究分担者の比嘉政夫は都合により参加できず)、研究協力者として、杉浦孝昌・韋蘭春・時雨彰の3名,そして海外共同研究者として中国雲南省社会科学院民族研究所の鄭暁雲・鄭成軍・和鳳菊、同文学研究所の張雍徳、広東省民族研究所の馬建〓、の計10名であった。調査項目は,本調査の主要テーマである森と水に関する少数民族の文化に即し,1.村落社会における森林政策・制度の影響、2.村落の歴史と自然環境の変遷,3.森林利用とその結果(森林利用に焦点を当てた生業活動の実態と慣習法、)、4.世界観(村落世界の民族固有の環境認識)の4つに分けた。そして、調査者を4つのグループに分けてそれぞれの小テーマを分担し、同一村落内で同時に調査を実施,並行して相互に討論しながら調査を進めるという、組織的手法を取った。それに先立ち,各村落が属する上位の行政単位(県、郷)では、全員で、その地域における森林政策の実態につき,インタビュー調査を行った。今後,第1回目の調査結果をグループごとに簡単なレポートにまとめ,相互に討論し,来年度秋に予定している第2回調査に向け,より良い調査方法の模索と調査内容の充実を図っていく予定である。本研究で計3回予定している本現地調査のうち,本年度は,第2回,第3回目の現地調査を行った。第2回目は,平成14年10月16日から11月1日にかけて中国雲南省臨滄地区臨滄県・双江県、第3回目は平成15年3月12日から3月28日にかけて中国雲南省保山地区騰沖県にて現地調査を実施した。前者の調査は、〓族(〓旺大寨・臘東村)、拉〓族(南楞田村)、〓族(布京村)を直接の調査対象とし、それらが属する上位の行政機関(臨滄県林業局・民族宗教局、南美郷・章駄郷政府,〓旺・南美・布京の各村民委員会)に対するインタビュー調査も行った。調査団は研究代表者と研究分担者の比嘉政夫、研究協力者として杉浦孝昌・時雨彰、海外共同研究者として中国雲南省社会科学院民族研究所の鄭暁雲・鄭成軍・和鳳菊・陶志剛、同文学研究所の張雍徳、広東省民族研究所の馬建〓、の計10名構成であった。後者の調査は、〓〓族(沙家〓村)、〓族(荘家寨)を調査対象とし、それらの上位行政機関(騰沖県林業局・民族宗教局・水利局、猴橋・荷花郷政府,猴橋・汪李村民委員会)に対するインタビュー調査も行った。調査団は研究代表者と研究分担者の比嘉政夫・上田信、研究協力者として杉浦孝昌・時雨彰、海外共同研究者として鄭暁雲・和鳳菊・陶志剛・張雍徳・馬建〓、の計10名構成であった。本調査の主要テーマである森と水に関する少数民族の文化に焦点を当て,調査項目は大きく,1.村落社会における森林政策・制度の影響、2.村落の歴史と自然環境の変遷,3.森林利用とその結果(生業活動の実態と慣習法、)、4.世界観(民族固有の世界観・環境認識)の4つを設定し、調査員を4班に分けてそれぞれのテーマを分担した。現在調査結果を整理中であり,その不備な点を明らかにするため、来年度6月の補足調査を実施する予定である。さらに10月には東京で、中国側共同研究者と共に,本調査研究に関する公開シンポジウムを開催する予定である。本年度は,一昨年度・昨年度の2年間で計3回行った現地調査のうち、第1回と第2回調査に関する補足調査を、9月6日20日の日程で行った。第1回調査(平成14年3月)の調査地である雲南省西双版納自治州〓海県〓遮郷曼来村(〓族)、布朗山郷
iPS細胞を用いたin vitroでの成熟骨格筋細胞モデル系の構築

難治性筋疾患の多くは、未だ最適な疾患モデルが存在せず病態解明が不十分なため治療方法の開発が遅れている。本研究では、ヒトiPS細胞から分化誘導した未熟な骨格筋細胞と細胞シート技術を組み合わせ、電気刺激の付加や骨格筋近隣細胞との共培養、還流培養を実施し、より生体に近い構造・機能を有する3次元成熟骨格筋細胞モデルを作製する。3次元成熟骨格筋細胞モデルの作製に成功すれば、将来患者自身の細胞に由来する疾患特異的iPS細胞へ本技術を応用することで、直接病態解明が可能となり、様々な希少難治性筋疾患に対する新規治療法開発に大きく貢献する。