hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
「シーボルトが紹介しようとした日本」の復元的研究

21年度の共同研究はシーボルトに関する文書資料群として最大の規模を持つブランデンシュタイン家の文書・記録・地図・絵画の調査により抽出された日本研究および日本外交に関する資料とその他これまでの調査で新たにシーボルトに関する文書資料や地図、その他に本研究の遂行に必要な資料の所蔵が確認された博物館等においてシーボルトの収集品や外交文書の調査、資料撮影等を積極的に行った。これにより、これまでに収集した資料と当該年度の調査において収集できた資料を複合的に分析・整理を行うことで、より正確な収集資料の分析・整理を行うことができた。また、これまでに収集した資料の分析・整理が順調に進んでいることを受けて、これまでに収集した調査資料をより効果的に利用するための簡易データベースを作成し、保存・分析をより効率的に行うための準備を開始した。21年度は以下のとおり資料調査及び記録撮影を行った。・ブランデンシュタイン家資料群の基礎調査および関係資料の抽出と記録撮影。・ミュンヘン国立民族学博物館所蔵シーボルトコレクション所在調査。特に漆器、藍染、穀物、藁製品、金属加工品、地図類、地理学関係書籍、絵画などを中心に所在調査と記録撮影を行った。・ライデン国立民族学博物館シーボルトコレクションの調査と記録撮影。特に漆器、銅製品・ライデン大学図書館シーボルト収集地図、地理学関係書籍調査と記録撮影・オランダ国立中央公文書館幕末外交文書史料調査。課題(1)シーボルトの日本産業調査の解明に関してはブランデンシュタイン家文書中から穀物に関する未完の草稿を抽出し、翻刻、翻訳を行い、ミュンヘン国立民族学博物館所蔵のコレクションから原材料、半製品の調査、撮影をおこなった。また、漆器に関する調査は、引き続きミュンヘン国立民俗学博物において悉皆調査並びに高画質写真撮影をおこなった。課題(2)シーボルトによる日本地図作成過程の解明にかんしては、ブランデンシュタイン家文書中の地図資料のデータ・ベース化の準備、ミュンヘン国立民族学博物館所蔵の地図類の悉皆調査ならびに撮影を行った。課題(3)シーボルトの日本博物館の復元的研究に関しては、ミュンヘン国立民族学博物館所蔵の文書資料の中からシーボルトの展示が再現できる最初のコレクション目録を発見し、翻刻ならびに翻訳をおこなった。また同館所蔵のシーボルトによる世界最初の民族学博物館構想を発見し翻刻ならびに翻訳をおこなった。課題(4)シーボルトの幕末外交への関与の実態解明に関してはブランデンシュタイン家文書中から対象となる資料を抽出し、高画質撮影をおこなった。また、シーボルトの二男であるハインリッヒ・フォン・シーボルトの未調査の自筆書簡が大量に発見されたため、これも高画質撮影を開始した。本研究の最終年度に当たり、下記の研究調査並びに報告を行った。(1)調査・撮影:対象資料の所蔵先であるフォン・ブランデンシュタイン家、ミュンヘン国立民族博物館ならびに関連資料の所蔵先であるルール大学ボッフムならびにベルリン国立図書館で資料調査を継続し、未収録の重要資料の高画質撮影を実施した。
南極１．２ｍサブミリ波望遠鏡による大質量星形成過程の解明

本研究では大質量星の形成過程の解明されていない部分のうち、巨大分子雲内で生じる高密度ガスから大質量星に進化する条件を明らかにするため、巨大分子雲を効率よく観測できる広視野望遠鏡を開発している。大質量星形成の解明には高密度領域の温度や密度、速度分布などを調べることが重要であり、そこをトレースできるサブミリ波・THz波の観測を計画している。今年度の研究は時間のかかると予想される光学設計の理論の整理と実際の計算手順をまとめるところからとりかかり、広視野の電波望遠鏡の設計・評価を優先して行なった。検出器の各素子に対応するビームに対して準光学的な解析を行うのは現実的な時間では終わらず、得策ではない。そこで、昨年得られた、必ずしも自明ではなかった幾何光学による評価と準光学による評価の関係を実際の設計に応用するための手順をまとめた。その結果、実際に望遠鏡の広視野光学系を設計することができるようになり、さらに、幾何光学によって得られていた光学設計解を評価することもできるようになった。筑波大学と国立天文台の共同研究で得られていた設計解を評価したところ、観測に用いるのに十分な性能を有していることが明らかになった。この手法はビームの能率を計算コストの高い準光学的な解析に頼ることなく数%の精度で見積もることができ、これらの内容を学位論文としてまとめた。27年度が最終年度であるため、記入しない。今年度の研究計画は1.受信機など観測に必要な装置の基礎実験、詳細設計、2.広視野を持つ光学系の検討であったが、主に望遠鏡の光学設計を行なった。受信機の詳細設計などよりも先行して行なったのは、従来の電波望遠鏡の光学系では掃天観測に必要な広視野の光学系をつくることができず、広視野の光学系は従来の電波望遠鏡のそれとはまったく異質のものであるからである。そのため、早急に光学系の検討を行う必要があり、可視・赤外線の望遠鏡の光学系を参考に光学設計を先行させた。従来の電波望遠鏡では準光学を用いて光学系を設計していたが、本研究では可視・赤外望遠鏡にならって幾何光学を用いて光学系を評価した。幾何光学を用いて設計するにあたり必要な知識や技術を習得するため、科研費の一部を使っていくつかの国内の研究機関や国内外の学会へ行った。その結果、周波数1.5THz、F/6のナスミス焦点上に視野角1度以上を確保することができた(ストレール比0.8以上)。従来の電波望遠鏡と比較すると、野辺山45m鏡(230 GHz)の視野角の10倍以上、天空上の観測領域の立体角にして100倍以上になる。効率よく観測をする上で、ここで得られた光学系の解は観測効率を劇的に向上させ、今後の研究の要となる。今年度の研究計画は1.幾何光学によって得られた設計解を準光学の手法によって評価する、2.望遠鏡構造の検討であった。今年度の研究は時間のかかると予想される1.からとりかかり、今年度は広視野の電波望遠鏡の設計・評価手法の確立を優先して行なった。そこで、必ずしも自明ではなかった幾何光学による評価と準光学による評価の関係を数学的に整理することから始めた。その結果、望遠鏡の光学系の広視野のまま広い周波数帯域を持たせる条件を明確にできた。加えて、幾何光学的な解析から得られる破面の情報から、各素子に対応するビームの能率を計算する手法を確立した。この手法はビームの能率を計算コストの高い準光学的な解析に頼ることなく数%の精度で見積もることができ、設計解を探査する効率を飛躍的に向上させることができた。

その結果、実際に望遠鏡の広視野光学系を設計することができるようになり、さらに、幾何光学によって得られていた光学設計解を評価することもできるようになった。筑波大学と国立天文台の共同研究で得られていた設計解を評価したところ、観測に用いるのに十分な性能を有していることが明らかになった。この手法はビームの能率を計算コストの高い準光学的な解析に頼ることなく数%の精度で見積もることができ、これらの内容を学位論文としてまとめた。平成26年度は光学系の評価に注力し光学設計については今後の研究にとって重要、かつ応用が期待できる結果を得ることができた。一方で、望遠鏡構造の検討はほとんど進まなかったため、やや遅れているとした。27年度が最終年度であるため、記入しない。これまでに幾何光学による設計を行ない、準光学的な性能を見積もる手法を確立したので、望遠鏡構造にとっても実現しやすい光学設計解を探す。南極という過酷な環境下での望遠鏡設置を実現するには、望遠鏡構造設計と光学設計を切り離して進めることが難しいとわかったため、平成26年度確立した手法を駆使して両者を有機的に結びつけながら設計を進める。平成25年度は光学系の設計に注力し光学系については今後の研究にとって重要な結果を得ることができた。一方で、受信機等の設計、開発がほとんど進まなかったため、やや遅れているとした。これまで幾何光学による設計を行なったので、今後は幾何光学で得られた光学系を準光学の手法によって評価することが必要である。幾何光学による評価と準光学による評価の関係は必ずしも自明ではないためである。同時に、設計した光学系を南極という過酷な環境下で実現するために、どのような望遠鏡の支持構造をつくればよいか、どのように極端な環境から望遠鏡全体を守るかの検討を進めていく。この検討によっては、受信機性能を引き出すための満たすべき要求も変わってくるため、受信機周辺の設計は一時中断する。よって、今後は設計した光学系の評価と、南極という過酷な環境下でどのように光学系を実現するかの検討を行っていく。
人工的腫瘍抗原分泌細胞を用いた新しい癌免疫療法の開発

本補助金により、遺伝子改変による分泌型のサバイビン導入細胞を作成し、抗原提示細胞、T細胞との共培養による細胞障害性T細胞の誘導能を検討した。1.分泌型サバイビン遺伝子導入腫瘍細胞の樹立とそのT細胞応答adenoE3由来のシグナルシークエンスをサバイビン遺伝子のN末端側に導入したplasmidをK562細胞に遺伝し導入し、ssSVN-K562を作成した。培養液中に分泌されるサバイビンは数ngであった。このssSVN-K562をX線照射後、HLA-A2402陽性坦癌患者の樹状細胞およびCD8T細胞と共培養した。その結果、明らかなCD8+CTLの誘導は確認されなかった。これは分泌されるサバイビン量がごく少量であるため、十分なサバイビン由来の抗原が樹状細胞に提示されず、T細胞を活性化できないものと考えられた。2.熱ショック蛋白質Hspは腫瘍細胞内で抗原ペプチドと結合している。そこでHsp72,Hsc73,ORP150を分泌型とする改変遺伝子を作成し、マウスの腫瘍細胞株に導入した。分泌型Hsp72,およびhsc73を発現した腫瘍は、免疫原性が増強し、腫瘍拒絶あるいは増殖抑制効果を示した。これは、抗体を用いたdepletion assayにより、CD8T細胞によるCTLの効果的な誘導によることが示された。またこれら分泌されたHsp72,Hsp73は腫瘍抗原を結合して分泌されることも示された。さらに樹立された腫瘍細胞に対する治療効果も確認された(論文投稿中)。3.また臨床応用を目的として、サバイビン陽性のヒト腫瘍細胞株に分泌型Hsp72,Hsp73を導入した細胞株を作成している。この遺伝子導入株とHLA-A2402陽性坦癌患者の樹状細胞およびCD8T細胞およびCD4T細胞と共培養することにより、サバイビンに対するCTL応答およびCD4T細胞応答を誘導しえた。1.研究の目的:我々は癌で選択的に発現しているsurvivin由来のペプチドSurvivin2Bが、HLA-A24に提示される細胞傷害性T細胞(CTL)の認識抗原であることを示した。本研究では遺伝子改変によりsurvivin分子に免疫グロブリンFc部分とsignal sequenceを付加することにより分泌型として、in vitroでのsurvivin特異的細胞傷害性T細胞の誘導の効率化をはかり、養子免疫療法に応用することを目的とする。またこのような可溶性の分泌型蛋白抗原を用いるとCD8^+T細胞のみならず、CD4^+T細胞をも刺激できる可能性があり、これによるサイトカイン分泌でさらにCTLの活性化が期待できると考えている。2.平成15年度の成果(1)AdenouirusE3由来のsignal sequenceを付加したFc-survivinキメラ蛋白をcodeする遺伝子を作成し、これをpcDNA3.1に組み換えた。(2)293T細胞へのtransient transfectionを行い、培養上清中のFc-survivinキメラ蛋白が分泌されることをWestern blottingにより確認した。(3)K562細胞への遺伝子導入を行ない、数クローンのstable transfectantを樹立した。(4)現在、このK562-ssFc-Survivin2Bを用いて、HLA-A24陽性担癌患者の末梢血由来の樹状細胞と単核球から、細胞傷害性T細胞およびCD4陽性ヘルパーT細胞の誘導を試みている。

K562-ssFc-Survivin2Bの培養上清と末梢血由来の樹状細胞を共培養することで、そのHLA-A24にsurvivin2Bペプチドが提示されうるかを、既に誘導してあるsurvivin2Bペプチド特異的CTLを用いて検討を行なっている。本補助金により、遺伝子改変による分泌型のサバイビン導入細胞を作成し、抗原提示細胞、T細胞との共培養による細胞障害性T細胞の誘導能を検討した。1.分泌型サバイビン遺伝子導入腫瘍細胞の樹立とそのT細胞応答adenoE3由来のシグナルシークエンスをサバイビン遺伝子のN末端側に導入したplasmidをK562細胞に遺伝し導入し、ssSVN-K562を作成した。培養液中に分泌されるサバイビンは数ngであった。このssSVN-K562をX線照射後、HLA-A2402陽性坦癌患者の樹状細胞およびCD8T細胞と共培養した。その結果、明らかなCD8+CTLの誘導は確認されなかった。これは分泌されるサバイビン量がごく少量であるため、十分なサバイビン由来の抗原が樹状細胞に提示されず、T細胞を活性化できないものと考えられた。2.熱ショック蛋白質Hspは腫瘍細胞内で抗原ペプチドと結合している。そこでHsp72,Hsc73,ORP150を分泌型とする改変遺伝子を作成し、マウスの腫瘍細胞株に導入した。分泌型Hsp72,およびhsc73を発現した腫瘍は、免疫原性が増強し、腫瘍拒絶あるいは増殖抑制効果を示した。これは、抗体を用いたdepletion assayにより、CD8T細胞によるCTLの効果的な誘導によることが示された。またこれら分泌されたHsp72, Hsp73は腫瘍抗原を結合して分泌されることも示された。さらに樹立された腫瘍細胞に対する治療効果も確認された(論文投稿中)。3.また臨床応用を目的として、サバイビン陽性のヒト腫瘍細胞株に分泌型Hsp72,Hsp73を導入した細胞株を作成している。この遺伝子導入株とHLA-A2402陽性坦癌患者の樹状細胞およびCD8T細胞およびCD4T細胞と共培養することにより、サバイビンに対するCTL応答およびCD4T細胞応答を誘導しえた。
薬学的介入の臨床的有用性とその医療経済的効果に関する研究

【研究目的】薬剤師は患者の薬物療法に対して薬学的観点から様々な介入(薬学的介入)を行い、医薬品の有効性と安全性の確保、医療経済面を含めた医薬品適正使用に努めている。本研究では、薬学的介入を行った結果としての臨床的有用性とその医療経済的効果を客観的に評価し、薬剤師による臨床薬剤業務の意義と必要性に関する科学的根拠を示すことを目的とする。【研究方法】2011年810月に京都大学医学部附属病院で集積した入院患者に対する薬学的介入事例を対象とし、医薬品による副作用・相互作用の未然防止、早期発見、重篤化防止につながった事例を抽出した。これら薬学的介入事例の臨床的有用性を個々に評価するとともに、介入件数と薬剤師側の要因(1ヶ月の病棟滞在時間、1ヶ月の薬剤管理指導件数、薬剤師としての経験年数)との相関を解析した。また、病棟に薬剤師が滞在・配置されているメリットについて、医師・看護師に聞き取り調査を行った。【研究成果】調査期間中の薬学的介入件数は1116件、医師の受入率は94.1%であった。このうち、医薬品による副作用・相互作用の未然防止は126件(11.3%)、早期発見は66件(5.9%)、重篤化防止は89件(8.0%)であり、薬剤師が被疑薬の減量・中止や副作用の対症療法を提案し、実施された結果、薬物治療を継続できた例が多くみられた。薬剤師別の薬学的介入件数は、病棟滞在時間、薬剤管理指導件数と正の相関をもつ傾向を認めた。また、医師・看護師からは、病棟に薬剤師が滞在・配置されているメリットとして、薬について速やかに相談できてよい、副作用・相互作用の評価が正しく行える、薬に関わるリスクが低下する等の意見があげられた。薬剤師が病棟に常駐し、患者の病態や治療方針をよく理解した上で、他の医療スタッフと協働して薬物治療の質的向上に努めることが、臨床的に有用であることが示唆された。今後、介入事例の医療経済的効果を検討する予定である。
山腹斜面における雨水土壌侵食の三次元可視化手法に関する研究

中国・内モンゴルにおける黄土高原のWufendigou流域(北緯39度43分37秒39度46分28秒、東経111度7分7秒111度9分14秒で、流域面積は3.85km^2)を対象として、数理弁証法的論理学モデリング(MDL)の考え方に基づく土壌浸食モデルを構築した。豪雨による土砂流亡の激しい場所を対象としているので、黄土高原全体の土砂流出機構の解明と推定に関する有用な知見を得ることができた。昨年度までにVisual C++とOpen GLというプラットフォーム上で開発した、地表面流と土壌浸食を現実的な形で可視化するシミュレーション技法により、流域における降雨・土砂流出、表面流の発生場所、土壌侵食の発生場所などを動的に表示することができるようになった。GIS流体要素(FE)によって降雨と地表面流出が、GISソフトヴォクセル(SV)によって土壌浸食がそれぞれシミュレーションできる。これに関する3次元シミュレーション手法は、地理情報科学国際ジャーナルに掲載された。また、山腹斜面における土壌浸食の修正型リモートセンシング情報モデル(MRSIWEH)を同流域に適用して、土壌浸食量を計算した。このモデルと従来から用いられているWEPPモデルの計算結果と比較してそれと同等または優れた結果を与えることを示した。これに関しては国際水工学会誌に論文が掲載された。平成18年8月46日に香港で開催された地盤工学における物理モデリングに関する国際会議に出席し、山腹斜面への土壌浸食のモデリングとシミュレーションに関する研究成果の発表を行うとともに、平成18年10月1617日にバンコクで行われたユネスコ国際水文学計画のシンポジウムにおいても成果発表を行った。本研究では、洪水流、土石流、溶岩流のような外力によって変形する物体をソフト・ジオオブジェクトと呼び、これの挙動を地理情報システム(GIS)上で取り扱う手法について検討している。GIS流れ要素(FE)とGISソフトヴォクセル(SV)を用いる。GIS-FEは、ソフト・ジオオブジェクトの位置、速度や方向の動的な変化を三次元空間でシミュレートするのに用いられる。GIS-SVは、位置、速度、方向、体積をもつヴォクセル(体元)であり、陰関数で定義される等値曲面で覆われるものであり、ソフト・ジオオブジェクト。どちらも地球物理学的モデルによって制御され、リモートセンシング画像からのピクセル(画素または像元>に基づいて構築されるものでシミュレーションの基本単位として用いられる。GIS FEとSVのシミュレーションは、コンピュータ・グラフィックスの粒子系とメタボール技術に基づくが、次のような特徴を持つ。明確な地理学的意味を有する。空間的・時間的に変化するそれらの速度や方向は地球科学的モデルの科学計算により得られる。また、データ取得の現在の精度を考慮して、リモートセンシング画像の画素に基づいてシミュレートできる。よって、地球科学法則を効果的に反映できるし、広く実務的な場面で用いられる潜在能力をもつ。中国の黄土高原地域における降雨、地表面流、土壌浸食、河川流のシミュレーションを事例研究として行い、このアプローチが、三次元空間でのソフト・ジオオブジェクトを現実的にシミュレートできることを示した。さらに、リアルタイムで水の三次元的動きを二次元的に表現するための投影格子アルゴリズムといった最新のコンピュータ技術を導入した。数理弁証法的理論学モデリング(MDL)考え方に基づき、土砂侵食モデルを構築し、そのモデルにおける弁証法的要素を例示した。モデルに含まれる係数やべき指数は変動しうるが、理論的にはすべての影響要素を表現しうること、地球科学的現象や過程の複雑な時空間変化を表現できることを示した。幾何学的観点からは、3次元地理情報システム(3D GIS)モデリングは、表面解析、体積解析及びハイブリッド解析の三つに分類できる。今までのところ、固体系の地物にはこれらのアプローチは適切であるが、流動する水や土砂のような流体系の柔らかい地物に対して理想的なGISモデリング手法はなかった。本研究では、GIS流体要素(FE)とGISソフトヴォクセル(SV)を地表面流と土壌浸食のシミュレーションに用いた。GIS FEは位置、速度及び方向をもつ一方、体積が考慮されないが、リモートセンシング画像の画素(ピクセル)ごとに形成され、ソフトな地物の力学的挙動をシミュレートする地球科学的モデルによって動かされる基本的なシミュレーション単位である。一方、GIS SVは、位置、速度、方向及び体積をもち、陰関数で定義される等価関数面によって覆われるものであって、これもリモートセンシング画像のピクセル内で地球科学的モデルにより動かされる。これらは基本的にソフトな地物の変革のシミュレーションのために利用できる。中国の黄土高原の小流域において、MDLに基づく土壌浸食モデルを構築し、この手法によるシミュレーションの精度を検証した。また、Visual C++とOpen GLというプラットフォーム上で、地表面流と土壌浸食を現実的な形で可視化シミュレーションを実現した。

GIS流体要素(FE)によって降雨と地表面流出が、GISソフトヴォクセル(SV)によって土壌浸食がそれぞれシミュレーションできる。これに関する3次元シミュレーション手法は、地理情報科学国際ジャーナルに掲載された。また、山腹斜面における土壌浸食の修正型リモートセンシング情報モデル(MRSIWEH)を同流域に適用して、土壌浸食量を計算した。このモデルと従来から用いられているWEPPモデルの計算結果と比較してそれと同等または優れた結果を与えることを示した。これに関しては国際水工学会誌に論文が掲載された。平成18年8月46日に香港で開催された地盤工学における物理モデリングに関する国際会議に出席し、山腹斜面への土壌浸食のモデリングとシミュレーションに関する研究成果の発表を行うとともに、平成18年10月1617日にバンコクで行われたユネスコ国際水文学計画のシンポジウムにおいても成果発表を行った。
整形外科術後感染症早期診断に向けた手術侵襲による全身性炎症反応の病態解明

整形外科予定手術例364例がエントリーし、各種マーカーを経時的に測定した。1、新しい敗血症診断マーカーであるプレセプシン(presepsin: PSEP)の周術期動態:術後感染のなかった初期115例のPSEP中央値(四分位範囲)は、術前126(98-155)、術直後171(125-269)、術翌日194(148-259)、術後1週147(115-182)pg/dLで、Kruskal-Wallis検定(posthoc test: Dunn検定による群間比較)の結果、術前と比べ術直後・術翌日で有意に上昇、術後1週で術前レベルまで低下した。95パーセンタイル値は、術前229,術直後620,術翌日396,術後1週297 pg/dLで、術後感染を生じた3例の術後1週PSEP値は高値(642, 1030, 317 pg/dL)を示した。PSEPは感染を伴わない手術侵襲により変動し細菌感染に特異的なマーカーとは言えないこと、術後1週におけるPSEP cut-off値300pg/dLは術後感染診断に有用な指標となり得ることが明らかになった。以上の結果を複数の国内学会で発表し、英語論文一編が掲載された。2、mitochondrial DNA(mtDNA)をはじめとするダメージ関連分子パターン(alarmins)の周術期動態:術後感染症を生じなかった初期116例のmtDNA中央値(四分位範囲)は、術前0.08(0.02-0.20)、術直後0.21(0.06-0.58)、術翌日0.11(0.04-0.29)、術後1週0.12(0.03-0.34)μg/mLであった。Kruskal-Wallis検定(posthoc test: Dunn検定による群間比較)の結果、術前と比べ術直後のみが有意に高値を示し、術翌日には術前レベルまで低下した。以上の結果を複数の国内学会で発表した。1新しい敗血症診断マーカーであるプレセプシン(presepsin: PSEP)の周術期動態:術後感染のなかった115例のPSEP中央値(四分位範囲)は、術前126(98-155)、術直後171(125-269)、術翌日194(148-259)、術後1週147(115-182)pg/dLであった。Kruskal-Wallis検定(posthoc test: Dunn検定による群間比較)の結果、術前と比べ術直後・術翌日で有意に上昇し(p<0.01)、術後1週で術前レベルに低下した。術後感染を生じた3例の術後1週PSEP値は高値(642, 1030, 317 pg/mL)を示した。術後感染のなかった115例の95パーセンタイル値は、術前229、術直後620、術翌日396、術後1週297 pg/mLであった。PSEPは感染を伴わない手術侵襲により変動し細菌感染に特異的なマーカーとは言えないこと、術後1週におけるPSEP cut-off値300 pg/mLは術後感染診断に有用な指標となり得ることが明らかになった。以上の成果を国内学会で発表し、英語論文を投稿中である。2mitochondrial DNA(mtDNA)をはじめとするダメージ関連分子パターン(alarmins)の周術期動態:術後感染症を生じなかった104例におけるmtDNAの中央値(四分位範囲)は、術前0.09(0.03-0.21)μg/mL、術直後0.21(0.05-0.54)μg/mL、術翌日0.14(0.04-0.34)μg/mL、術後1週0.13(0.03-0.35)μg/mLであった。Kruskal-Wallis検定(posthoc test: Dunn検定による群間比較)の結果、術前と比べ術直後のみが有意に高値を示し(p<0.01)、術翌日には術前レベルに減少した。以上の成果を国内学会で発表した。1新しい敗血症診断マーカーであるプレセプシン(presepsin: PSEP)と従来の感染症診断マーカーの周術期動態について:整形外科定期手術症例については全例欠測なくデータを蓄積出来ている。PSEPの周術期動態、従来のマーカーとの違い、術後感染症診断における有用性に関して知見が得られ、複数の国内学会で公表し、英語論文一編を作成した(投稿中)。2mitochondrial DNA(mtDNA)をはじめとするダメージ関連分子パターン(alarmins)の周術期動態について:整形外科定期手術症例については全例欠測なくデータを蓄積出来ている。mtDNAは従来の重症外傷例における報告と同じく、手術侵襲によって術前と比べ術直後に有意に上昇、術翌日には術前レベルまで低下することが明らかになった。以上の成果を国内学会で公表した。一方で重症外傷例、重症敗血症例におけるデータ収集が予定症例数(年間各50例)に達せず、まだ各群間での比較を行えていない。1、新しい敗血症診断マーカーであるプレセプシン(presepsin: PSEP)の周術期

動態:術後感染のなかった115例のPSEP中央値(四分位範囲)は、術前126(98-155)、術直後171(125-269)、術翌日194(148-259)、術後1週147(115-182)pg/dLであった。Kruskal-Wallis検定(posthoc test: Dunn検定による群間比較)の結果、術前と比べ術直後・術翌日で有意に上昇し(p<0.001)、術後1週で術前レベルまで低下した。術後感染を生じた3例の術後1週PSEP値は高値(642, 1030, 317 pg/dL)を示した。術後感染のなかった115例のPSEP95パーセンタイル値は、術前229,術直後620,術翌日396,術後1週297 pg/dLであった。PSEPは感染を伴わない手術侵襲により変動し細菌感染に特異的なマーカーとは言えないこと、術後1週におけるPSEP cut-off値300pg/dLは術後感染診断に有用な指標となり得ることが明らかになった。以上の結果を複数の国内学会で発表し、英語論文一編の掲載が決定した。2、mitochondrial DNA(mtDNA)をはじめとするダメージ関連分子パターン(alarmins)の周術期動態:術後感染症を生じなかった116例のmtDNA中央値(四分位範囲)は、術前0.08(0.02-0.20)、術直後0.21(0.06-0.58)、術翌日0.11(0.04-0.29)、術後1週0.12(0.03-0.34)μg/mLであった。Kruskal-Wallis検定(posthoc test: Dunn検定による群間比較)の結果、術前と比べ術直後のみが有意に高値を示し、術翌日には術前レベルまで低下した。以上の結果を複数の国内学会で発表した。1、新しい敗血症診断マーカーであるプレセプシン(presepsin: PSEP)と従来の感染症診断マーカーの周術期動態について:整形外科定期手術症例については、前年度に続き全例欠測なくデータを蓄積出来ており、2017年度までに305例を登録した。各測定日におけるPSEPの基準値を策定し、C反応性蛋白、プロカルシトニン等の従来のマーカーと比べ手術侵襲による上昇と正常化が早く、術後感染症有用なマーカーとなり得ることが明らかになった。以上の成果を複数の国内学会で発表し、英語論文一編の掲載が決定した。2、mitochondrial DNA(mtDNA)をはじめとするダメージ関連分子パターン(alarmins)の周術期動態について:PSEPと同じく、整形外科定期手術症例については前年度に続き全例欠測なくデータを蓄積出来ている。手術侵襲によってmtDNAは術前と比べ術直後に有意に上昇し、術翌日には術前レベルまで低下した。重症外傷例・敗血症例と群間比較の結果、重症外傷例では定期手術症例と同様の動態を示したが、敗血症例は経時的に有意な変動が生じなかった。以上の結果を複数の国内学会で発表し、英語論文を作成中である。HMGB-1(High Mobility Group Box 1)をはじめとするその他のalarminsの動態を現在解析中であり、今後学会発表予定である。一方で、対照群としての重症外傷例、敗血症例は年間50例を見込んでいたが、学会主導の多施設研究と重なったため、十分なデータが得られていない。整形外科予定手術例364例がエントリーし、各種マーカーを経時的に測定した。1、新しい敗血症診断マーカーであるプレセプシン(presepsin: PSEP)の周術期動態:術後感染のなかった初期115例のPSEP中央値(四分位範囲)は、術前126(98-155)、術直後171(125-269)、術翌日194(148-259)、術後1週147(115-182)pg/dLで、Kruskal-Wallis検定(post
甲状腺未分化癌と上皮間葉転換の関連に関する研究

OCUT-1CとOCUT-1Fは、同一の腫瘍を起源に持つヒト甲状腺未分化癌細胞株で、同様の遺伝子変異をもつ。OCUT-1CはE-cadherinの発現など上皮様の性質を持つが、OCUT-1Fは間葉様の性質を持ち原因は不明であるがE-cadherinの発現が消失している。OCUT-1CにTGF-betaを添加すると、E-Cadherinは減弱したが、形態の変化は認められなかった。手術標本を用いた検討でも未分化癌組織で間葉系マーカーの高率な発現が認められ、Nestinの発現は臨床所見とは独立した予後不良因子であることが示された。平成25年度は、同一腫瘍から樹立しEMTのモデルとして有望と考えられた細胞株OCUT-1CとOCUT-1F、および臨床検体でのEMTマーカーの発現を中心に検討した。また、新たな細胞株のクローニングを進めた。網羅的プロテオーム、メチル化解析のデータを得ることができ、いくつかの蛋白についてOCUT-1CとFの間で明らかな発現量、メチル化状態の差異が認められている。現在解析中。これまでに加え4種の未分化癌細胞を新規にクローニングし、遺伝子変異、染色体分析を終えた。甲状腺未分化癌の手術標本を用いた免疫組織学的検討から、Stemnessを示す因子の一つであるNestin発現と予後との関連が明らかとなり、論文として発表した。5種のヒト甲状腺未分化癌細胞をクローニングし基本的性質を確認中。同一の腫瘍から樹立した敷石状形態をとるヒト甲状腺未分化癌細胞株OCUTー1Cと、紡錘形の形態をとるOCUTー1Fについて、その差異を検討してきた。遺伝学的にはDNA分析(STR解析)により同一個体の細胞であること、細胞の形態も長期間の培養によっても変化しない各細胞固有の性質であることが再確認された。これまで、細胞の持つ基本的性質の差異を検討してきたが、本年度は抗癌剤、分子標的薬剤の投与による形状の変化や遺伝子発現状態の変化を確認してきた。抗癌剤の一種により間葉上皮転換が誘導されている可能性が示されたので、現在追試を行い確認している。新たな複数の甲状腺未分化癌細胞を培養状態で維持することができた。これらの細胞について、基本的性質の確認を行い、細胞の独自性を確認している。また、実験動物における造腫瘍能を検討している。それらのうちの一つでは、手術標本において甲状腺濾胞癌からの脱分化変化が確認されており、治療後の転移再発病巣の組織も得られている。甲状腺癌の脱分化、治療抵抗性、転移機構を解明するために重要なモデルとなる可能性があり、検討を進めている。当初計画していた以外にも多くの知見が得られたため、研究全体のまとめが遅れている。1年間の期間延長を行い、結果のまとめを図っている。ヒト甲状腺未分化癌細胞株OCUT-1Cは敷石状形態とる。これは同一腫瘍から樹立しDNAプロファイルも同一で、紡錘形の形態をとる細胞株OCUT-1Fと全く異なる表現型である。1CではE-Cadherinの発現が確認されたが、1Fでは発現が無く1Cは未分化転化に至る途上でEMT(Epithelial-mesenchymal transition)が完成していない細胞、1FはEMTが完成した未分化癌細胞ではないかとの仮説を立て研究を行った。E-cadherin発現消失の機序はDNAメチル化によるものではなかった。網羅的プロテオーム解析より、酸化的ストレス抵抗性や細胞骨格の維持に関与する蛋白の発現量が大きく変動していることが確認された。抗癌剤、放射線、multi-kinase inhibitorに対して1Cは1Fより有意に感受性が高かった。1FへのEribulinの添加により、紡錘形から敷石状への不完全な細胞形態の変化が観察された。一方、1CへのTGF-βの添加によりCDH1 mRNAの発現が強く抑えられたが形態変化は確認できなかった。1CにEMTが起きると1Fに変化していくという仮説を証明することはできなかった。4種の癌細胞を新規にクローニングしたが、それらのうちOCUT-7では、敷石状と紡錘状の2種のクローンOCUT-7Cと-7Fが樹立できた。未分化転化前、未分化転化後、遠隔転移病巣の組織が採取できた別の症例からは、未分化転化後の組織からOCUT-10を樹立した。同一の腫瘍から樹立した敷石状形態をとるヒト甲状腺未分化癌細胞株OCUTー1Cと、紡錘形の形態をとるOCUTー1Fについて、薬剤による形態変化とその背景に絞った検討を進め、これまで得られた結果と比較することで甲状腺未分化癌細胞株における上皮間葉転換機構を解明していく。

さらに、新規に培養された細胞について細胞株として樹立していく。内分泌外科学27年度は、これまでの研究結果を総括する。分離樹立した細胞株の性格付けと分子発現の差異が明らかとなった。また、薬剤への曝露による細胞形態の変化が確認されており、形態変化と分子発現の相互の関連性について研究を深め、論文発表する予定である。細胞株のうち最も興味深いものについて樹立と特徴的性格を中心に論文化する予定である。細胞株、臨床検体を用いた検討は、おおむね順調に進捗しており、一部は想定以上に結果が導かれている。臨床検体を用いた検討結果からは、甲状腺未分化癌の新規予後規定分子を確認できた。網羅的解析のデータを得ることができたが、解析に予想以上の時間を必要としている。新規細胞株のクローニングは終了し、基本的性格の解析に進んでいる。得られた新たな知見(薬剤による細胞の間葉上皮転換)と研究成果(細胞株の樹立)により、効率的に研究費を使用するために研究の見直しが行われたため。26年度に実施予定であったエクソーム解析が未実施であったため、約50万円の予算が執行できずに残額となっている。網羅的蛋白解析に時間を要したことが主な原因であるが、年々シークエンス技術が発達し、発注価格も抑えられるようになっており、先進的技術を有効に活用するためエクソーム解析を27年度に実施予定とした。また、海外発表のための旅費を他の経費から捻出可能であったため、10万円の予算が他の目的で使用可能となった。薬剤により間葉上皮転換が起こることを確認し、その機構を確認する。新規細胞株を樹立する。臨床検体を用いた免疫組織学的検討部分については、論文作成を行っており、平成26年度中に発表ができるものと思われる。細胞株を用いた基礎的研究はほぼ計画通りの進捗状況であるが、DNAの異常メチル化に関する結果は予想と異なったため、今後メチル化に関する検討を省略し、E-Cadherinや癌幹細胞マーカー発現との関連を検討する予定である。また、プロテオーム、エクソームの解析に重点を置く予定である。さらに新たな細胞株がクローニングできており、それらの基本的性格付けを行い、過去樹立した細胞との比較検討する予定である。27年度にエクソーム解析を行う予定であり、繰り越し予算をこれに充てる。残額が少額であり、実験用消耗品の購入には不足であった。次年度に繰り越して今後の物品費の購入に加算する方が有益に利用できると考えた。26年度の消耗品の購入に使用。
変形性関節症におけるメカノチャネルTRPV4の病態関与と新規治療を目指した研究

軟骨細胞のメカノチャネルTRPV4に着目し、変形性関節症(OA)への病態関与を遺伝子改変マウスで検証した結果、OA初期ではTRPV4を介して関節荷重面のSox9発現が一時的に上昇し、TRPV4ノックアウトマウスは野生型に比してOAの病態が進行するという知見を得た。また、TRPV4の選択的アゴニストGSK1016790Aは軟骨細胞のSox9発現を誘導し、変形性関節症の病態進行を抑制することを明らかにした。変形性関節症の発症、進行には半月板変性などに起因する異常なメカニカルストレスの亢進・負荷が関係しているが、関節軟骨においてメカニカルストレスにより誘発された分子の発現動態および変形性関節症との病態関与は殆ど解明できていない。本研究では、発生過程でSox9の上流に位置し、生後における関節軟骨で膜チャネルタンパクとして機能するTRPV4に着目した。本年度はTRPV4のノックアウトマウスおよび野生型マウスを用いて変形性膝関節症(OA)モデルを作製し、組織学的・分子生物学的検証を行った。その結果、術後3カ月までの段階においてTRPV4ノックアウトマウスのOAが野生型に比べて進行していることが分かった。次に、ラットOAモデルを用いてTRPV4特異的薬理活性剤を膝関節に投与し、溶媒のみを投与した群と比較した結果、薬理活性剤を投与した群においてOAの進行が抑制されるという結果を得た。そこで、TRPV4を介した軟骨細胞外マトリックスの動態に着目し、コラーゲンおよびアグリカンの転写を制御するSox9の発現動態をSox9-3'EGFPマウスを用いてリアルタイムに可視化し、TRPV4薬理活性剤投与に伴う蛍光強度変化を評価した。その結果、マウス膝関節にex vivoにてTRPV4薬理活性剤を投与すると、一旦EGFPの蛍光強度が増加、即ちSox9の転写活性が上昇するという結果を得た。以上のことから、TRPV4を介したSox9の発現がOAの病態に関与している可能性が示唆された。平成23年度は変形性関節症においてメカニカルストレス-TRPV4-Sox9の関係を明らかにするために、TRPV4ノックアウトマウスとSox9-EGFPマウスを交配し(TRPV4KO;Sox9-EGPF)、変形性関節症の病態進行に伴う関節面EGFPの蛍光発現変化を解析した。変形性関節症の惹起には膝関節の内側側副靭帯及び内側半月板切離を行うmedialモデルを採用し、対側はsham手術を施した。その結果、野性型マウス(Sox9-EGFPマウス)の脛骨内側荷重面では術後1週の時点でsham側と比較してEGFP蛍光強度の上昇が見られ、病態進行に伴いその差は減少した。一方、TRPV4KO;Sox9-EGFPマウスでは病態進行と関係なく蛍光強度に差は見られなかった。また、脛骨近位外側では野生型、TRPV4ノックアウトマウスともにsham側との差は検出されず、蛍光強度の上昇は見られなかった。以上のことから、変形性関節症の発症初期ではメカニカルストレス亢進部においてTRPV4を介してSox9遺伝子の発現が一過性に上昇することが明らかとなった。またTRPV4特異的薬理活性剤GSK1016790Aを軟骨細胞もしくはATDC5細胞の培養液に添加すると、添加後2時間でSox9遺伝子の発現が亢進し、24時間でCol2a1遺伝子の発現量が上昇した。GSK1016790Aの関節内投与は変形性関節症の病態進行を抑制すること、及びTRPV4ノックアウトマウスは野生型に比べ早期に変形性関節症のステージが進行することから、TRPV4を介した初期のSox9発現亢進が細胞外基質蛋白質の発現を誘導し、病態の抑止に関与している可能性が示された。
HGFプロモーター遺伝子変異によるEGFRチロシンキナーゼ阻害薬の効果予測

本研究ではHGF発現に関与するプロモーター領域のA繰り返し配列数(polyA)とHGF発現の関連を検討した。固形がん細胞73細胞株を対象にpolyA領域の変異を検討したところ、Short polyA(<25bp)の細胞株が7株、正常型のpolyAの細胞株は66株であった。73細胞株のHGFのmRNA発現をrealtime RT-PCRで解析し、HGFのmRNA高値の細胞株では29%(2株/7株)がShortpolyAで、HGFのmRNA低値株では3%(2株/66株)であった。予想通りHGFのmRNA高値株は、ShortpolyA型である頻度が有意に高いことが示された(p=0.04)。次にHGFタンパクの分泌量をELISAで検討したところ、Short polyAであるH69細胞とIM95細胞が、他株と比べて1000倍以上HGFタンパクを分泌することを見出した。一方、Short polyAでもHGF低値の細胞株が存在したことから、9個のHGFプロモーターのSNPを検討した。HGF高値のIM95細胞は、rs3735520がC/Aアレルであったのに対して、他の18株はCアレルであった。rs72525097についてもShort polyA株で頻度が高い傾向を認めた。HGFプロモーターの解析方法としては、自動ゲル解析装置の簡便スクリーニング系およびシークエンスの検証方法を確立した。臨床検体サンプルについては、肺癌30例に対して検討した。自動ゲル解析装置の測定では、そのうち4例にShort polyA型異常が認められた。TAクローニングし、各10クローンのシークエンスを行ったところ、1例はpolyAが14個と著明な短縮を認めた。結論としてHGFpoly A領域の変異は、がん細胞株および臨床検体でHGF発現量を制御する可能性が示唆された。1年目の本年度は、HGFプロモーターの基礎研究を行った。固形がん細胞73細胞株を対象にHGFプロモーターpoly A領域の変異を検討したところ、Short polyA (< 25bp)の細胞株が7株、正常型のpolyAの細胞株は66株であった。73細胞株のHGFのmRNA発現をrealtime RT-PCRで解析し、HGFのmRNA高値の細胞株では29% (2株/7株)がShort polyAで、HGFのmRNA低値株では3%(2株/66株)であった。予想通りHGFのmRNA高値株は、Short polyAである頻度が有意に高いことが示された(p=0.04)。一方、Short polyAでもHGF低値の細胞株が存在したことから、HGFプロモーターのSNPを検討した。SNPは、-2142[C/A, rs11763015], -1965[G/T], -1903[G/A], -1652[C/T, rs3735520], -1268[G/C], -1215[-/C], -955[T/C], -578[T/C], +247[-/T, rs72525097]の9個のSNPを検討した。研究は来年の臨床検体の検討に向けて予定通り順調に進行している。

自動ゲル解析装置の測定では、そのうち4例にShort polyA型異常が認められた。TAクローニングし、各10クローンのシークエンスを行ったところ、1例はpolyAが14個と著明な短縮を認めた。結論としてHGFpoly A領域の変異は、がん細胞株および臨床検体でHGF発現量を制御する可能性が示唆された。本年度は、がん細胞株73株を対象にHGF発現とHGFプロモーターのshort polyAおよびSNPの関連を基礎研究で確認した。検出系も確立し、来年度からの臨床検体の解析に向けて順調に進行している。次年度からの2年で、(1)肺癌検体でのHGFプロモーターpolyA個数とHGF発現量の相関解析(2)肺癌検体でのHGF発現量とEGFR-TKIs治療の臨床的相関解析を予定している。本年度と同じように遺伝子変異解析に伴う消耗品に対して使用を計画している。
下垂体腫瘍の機能分化に関する分子病理学的研究:Notchシグナルによる新展開

近年、細胞の増殖・機能維持に関するシグナル伝達経路としてNOTCHシグナル伝達経路が着目され、特に魚類やげっ歯類の発生分化において、その特異的な機能が報告されている。本研究では、ヒト正常下垂体、下垂体腺腫においてNOTCHシグナル伝達経路(受容体NOTCH1,NOTCH3,リガンドJagged1,Jagged2)の発現を解析した。正常下垂体でNOTCH1はGH細胞の、NOTCH3はACTH細胞の細胞質局在が確認されたが、GH産生腺腫ではNOTCH3が核内に検出され活性化型として機能することが示唆された。ACTH産生腺腫においてはNOTCH1,NOTCH3共に各局在を示した。NOTCHシグナル伝達経路は、ヒト下垂体において細胞の分化、増殖、維持に関与していると考えられる。Notchシグナル伝達は、細胞膜リガンドの刺激によりNotchレセプターの細胞内ドメインの核移行を起点とし、細胞増殖、分化、アポトーシス、癌化に機能することが知られている。これまでに、マウス下垂体において、Notch1がACTH細胞の分化を抑制し、Notch2がゴナドトロピン(Gn)細胞の分化を遅らせることが報告されている。ヒト下垂体では非機能性腺腫でNOCTH3発現が報告されているものの、機能や増殖への関与は明らかになっていなかった。本研究では、下垂体分化の初期、特にPOMCとProp1/Pit1系譜への分化に重要なNotchシグナル伝達に注目して、ヒト正常下垂体および下垂体腺腫におけるその機能的役割を明らかにするために病理学的な解析を行った。経蝶形骨手術により採取したヒト下垂体腺腫43例(GH産生腺腫9例,ACTH産生腺腫6例,PRL産生腺腫9例,TSH産生腺腫5例,Gn産生腺腫9例,Null Cell腺腫5例)および正常下垂体剖検例3例を20%ホルマリン固定、パラフィン包埋した。レセプター(NOTCH1,NOTCH3)およびリガンド(DLL1,JAGGED1,JAGGED2)について免疫組織化学染色(ABC法)を試行し、その発現と細胞内局在を解析した。正常下垂体においてはNOTCH1がGH細胞の、NOTCH3がACTH細胞の細胞質に陽性であった。また、JAGGED1はGH細胞、JAGGED2はゴナドトロピン細胞およびPRL細胞に陽性であった。一方、下垂体腺腫においては、GH産生腺腫の8割にJAGGED2の細胞膜陽性がみられ、全例でNOTCH3が核に陽性であった。さらに、TSH産生腺腫ではNOTCH1が核に陽性で、全例にJAGGED2が細胞膜に陽性であった。以上より、ヒト下垂体では腺腫化に伴うNOTCHシグナル伝達の充進が考えられた。また、腺腫間でレセプターの核陽性およびリガンドの細胞膜陽性パターンが異なることから、下垂体腺腫の機能分化におけるNOTCHシグナル伝達の関与が強く示唆された。現在、NOTCH核内移行に関連するセクレターゼ、およびNOTCH標的遺伝子の発現についても検討中である。ヒト下垂体では非機能性腺腫でNOCTH3発現が報告されているものの、機能や増殖への関与は明らかにされていなかった。一方、WNT4、FZD6は、下垂体腺腫においてGH産生腺腫、PRL産生腺腫、TSH産生腺腫に高頻度の発現が確認され、腫瘍化に伴いPIT1細胞系譜にcommitした細胞の生存・機能維持に関与することが示唆された。以上より、ヒト下垂体では腺腫化に伴うNOTCHシグナル伝達の亢進が考えられ、WNTシグナル伝達はPIT1細胞系譜にcommitした細胞の生存・機能維持への関与が示唆された。これらのことからNOTCH、WNTシグナル伝達経路は、ヒト下垂体において細胞の分化、増殖、維持に関与しでいると考えられろ。

ヒト下垂体では非機能性腺腫でNOCTH3発現が報告されているものの、機能や増殖への関与は明らかになっていなかった。また、発生・形態形成などの生命現象に重要な役割を果たしているWntシグナルの活性化が、癌をはじめ多様な疾病の発症に深く関わっていることが明らかになりつつある。本研究では、ヒト正常下垂体および下垂体腺腫におけるその機能的役割を明らかにするためにヒト正常下垂体および下垂体腺腫においてNotch signaling(Notch receptor1, 3 and ligand Jagged 1, 2)およびWnt signaling(Wnt4 and Frzd6)の発現を免疫組織化学(IHC)およびReal time RT-PCRにより解析した。正常下垂体細胞でNotch 1,3はIHCにより、それぞれGH細胞、ACTH細胞の細胞質に局在したが、GHomaにおいては、Notch3が核に検出されactive formとして機能していることが示唆された。ACTHomaではNotch1, Notch3共に核局在を示した。Notch receptorの活性化パターンおよびリガンド発現は各腺腫タイプで異なっていた。げっ歯類では、Notchは下垂体におけるGHとACTHの機能分岐に関わっていると報告されている。一方、Wnt4 Fzd6は、下垂体腺腫において免疫組織化学、Real time RT-PCRにより、GHoma, PRLoma, TSHomaに優位に発現しており、腫瘍化に伴いPit-1 lineageにcommitした細胞の生存および機能維持に関与することが示唆された。このように、Notch、Wnt signalingは、転写因子と協調し、下垂体腫瘍細胞の分化、増殖、維持に関与していると考えられる。これらの知見を基に、下垂体における幹細胞を視野に入れ腫瘍化と機能分化のメカニズムとその動態につき詳細な検討を行っていきたい。
生体試料中のケイ素の定量ならびに存在状態の解明-血清中のケイ素-

1.血清分離管の違いによる血清中ケイ素濃度の変動:血液をそれぞれ血清分離管に採血し血清を分離し、ICP発光分析法によりケイ素濃度を測定した。血清分離管の違いにより血清中のケイ素濃度は大きな差異が認められた。このことは血清分離管からのケイ素の溶出、あるいは血清中のケイ素の血清分離管への吸着を示している。したがって、血清中のケイ素濃度と腎機能の指標とされている血清中のクレアチニン濃度の関係を検討するためには、少なくとも血清分離管からのケイ素の溶出の少ないものを使用する必要がある。2.血清中のクレアチニン濃度とケイ素濃度について:血清中のケイ素濃度はクレアチニン正常群で0.14±0.3ppm、クレアチニン高値群では2.8±1.6ppmで、0.1%以下の危険率で有意な差が認められた。クレアチニンとケイ素濃度との相関は正常群では認められないが、高値群においては0.1%以下の危険率で有意な相関が認められた。しかし、ケイ素濃度を腎機能の指標として利用するためには問題点が多い状況である。3.血清中のケイ素の存在形態:血清中のケイ素濃度はクレアチニン高値群において高いことから、透析患者の透析前のプール血清試料を用いて研究を行った。分画分子量3万および1万の簡易微量濃縮器を用いて、分画分子量1万以下の血清ろ過液を採取し、そのケイ素濃度測定したところ6.36±0.87ppmであった。もとのプール血清中のケイ素濃度は9.17±1.80ppmであったので、血清中のケイ素の約7割が分子量1万以下の化合物であり、残り約3割は分子量が1万以上の化合物であることを示唆する興味深い結果が得られた。今後、血清分離管からのケイ素の溶出の問題や使用器具類からの汚染などの問題を克服して、より詳細な実験を行い血清中のケイ素の存在形態の解明を進めていきたい。平成5年度は、血清中のケイ素濃度と腎機能との関係を明らかにするために、腎機能の指標となる血清クレアチニン値と血清中のケイ素濃度の関係について検討を行った。血清試料は、徳島大学医学部附属病院検査部からの「検査済み」となった検体(218例)と医療技術短期大学部の教官および学生からの検体(23例)を、それぞれトリクロロ酢酸と硝酸を用いて除蛋白操作を行い作成した。これら試料中のケイ素濃度をICP発光分光装置により定量した。一方、血清試料をそのクレアチニン値により、正常群と高値群に分類し、さらに高値群を濃度範囲によりG1G6の6段階に分類した。各群におけるケイ素濃度の平均値と、クレアチニン値との関係について検討を行った。なお、クレアチニン値の正常範囲は、徳島大学附属病院が用いている正常範囲(男性0.61.4mg/dl、女性0.51.1mg/dl)を使用した。正常群は94例でその平均クレアチニン値は0.89mg/dl、また高値群は147例で平均クレアチニン値は5.67mg/dlであった。クレアチニン濃度の最も高いG6ではその平均値は11.8mg/dlで最も低いG1(平均値1.7mg/dl)の約7倍であった。ケイ素濃度についても同様にG6が最もその平均値が大きく6.0ppmで最も低いG1(平均値1.2ppm)の5倍であった。

全体としては、血清中のクレアチニン濃度とケイ素濃度の間では、0.1%以下の危険率で有為な相関が認められ、腎機能と血清中のケイ素濃度が密接に関係していることが明らかになった。1.血清分離管の違いによる血清中ケイ素濃度の変動:血液をそれぞれ血清分離管に採血し血清を分離し、ICP発光分析法によりケイ素濃度を測定した。血清分離管の違いにより血清中のケイ素濃度は大きな差異が認められた。このことは血清分離管からのケイ素の溶出、あるいは血清中のケイ素の血清分離管への吸着を示している。したがって、血清中のケイ素濃度と腎機能の指標とされている血清中のクレアチニン濃度の関係を検討するためには、少なくとも血清分離管からのケイ素の溶出のないものを使用する必要がある。2.血清中のクレアチニン濃度とケイ素濃度について:血清中のケイ素濃度はクレアチニン正常群で0.14±0.3ppm、クレアチニン高値群では2.8±1.6ppmで、0.1%以下の危険率で有意な差が認められた。クレアチニンとケイ素濃度との相関は正常群では認められないが、高値群においては0.1%以下の危険率で有意な相関が認められた。しかし、ケイ素濃度を腎機能の指標として利用するためには問題点が多い状況である。3.血清中のケイ素の存在形態:血清中のケイ素濃度はクレアチニン高値群において高いことから、透析患者の透析前のプール血清試料を用いて研究を行った。分画分子量3万および1万の簡易微量濃縮器を用いて、分画分子量1万以下の血清ろ過液を採取し、そのケイ素濃度測定したところ6.36±0.87ppmであった。もとのプール血清中のケイ素濃度は9.17±1.80ppmであったので、血清中のケイ素の約7割が分子量1万以下の化合物であり、残り約3割は分子量が1万以上の化合物であることを示唆する興味深い結果が得られた。今後、血清分離管からのケイ素の溶出の問題や使用器具類からの汚染などの問題を克服して、より詳細な実験を行い血清中のケイ素の存在形態の解明を進めていきたい。