hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
初期日本列島構成岩類の同位体組成:古太平洋とユーラシア大陸の間で何が起こったか?

その結果については、平成20年5月の地球惑星科学連合2008年大会、その発展した成果について平成20年9月の岩石鉱物鉱床学会にて公表し、それぞれ相応の反応・評価を得た。そして岩石の構成と組成が北部ベトナムと西南日本内帯とで対比可能であることがより鮮明となった。この結果は、当時のPaleothethys海から古太平洋そして現在の太平洋へと推移する海洋地殻の変遷をたどる上で貴重な情報と成りうる。それゆえ、今後とも調査・解析を行う機会があったら積極的に参加し、過去の日本列島周辺の地質学的特徴を、今までとは異なる視点で解析したい。本研究補助にて行う研究課題とは物質移動などの観点で間接的に関係するその他の研究についても、本研究補助にて培った技術および購入した機材・物品を有効に活用した(例えば、公表論文のMiyamotoetal.(2008)や、学会講演の宮本ほか(2008、11月))。その成果は、将来、日本列島や大陸地殻の形成を考察する上で重要な情報源・考察対象になると確信する。平成19・20年度に続き、日本列島の骨格をなす年代学的に古い岩体について、その起源を明らかにすべく野外調査および採取試料の解析を継続して行った。特に年代学的な研究がなされているにも関わらず、そのデータの乏しさと、結果的に形成年代の特定ができていない熊本県山鹿地域の苦鉄質・超苦鉄質岩体について重点的に解析した。その試料から得られた489Ma(4億8900万年)の年代学的成果については学会(鉱物科学会2009年大会(札幌開催))や研究集会(変成岩などシンポジウム(広島宮島開催))にて発表し、相応の学術的反応や評価と今後の研究の展望につながる意見を得るに至った。また、岩石および構成鉱物の化学組成も並行して求めており、その分析結からも、岩石の起源を考察する上で重要な結果が得られている。最終年度である平成22年度には、山鹿地域の苦鉄質・超苦鉄質岩体について補足的な調査を行うとともに、分析・解析を進め、成果公表に努める。また、本研究を遂行する際に得られた分析手法と技術を応用することで、大陸からの物質移動に関する雑誌論文(Miyamoto et al. Geochim. Cosmochim. Acta(2010))を公表することができた。過去から現在にかけての大陸から日本への物質移動の一形態に関する内容で、今後の本課題研究にも少なからず影響を与えることが予想される。過去3年間に引き続いて、日本列島の骨格をなす年代学的に古い岩体について、その起源を明らかにすべく野外調査および採取試料の解析を行った。特に、熊本県山鹿地域の苦鉄質・超苦鉄質岩体について、明確な源岩推定を行うために記載岩石学的観察と主要元素・微量元素組成解析を行った。その結果、同地域の苦鉄質岩体は、その主要元素組成上の特徴より、主として沈積岩から成り、若干の火成岩が付随する、いわば下部地殻的特徴を有することが明確になった。また、これまでの解析によって得られた489Ma(4億8900万年)の年代学的成果については、この岩体が形成した時代を反映するものであり、日本列島の骨格を構成する岩体の中で最古のものの一つであることが、学会(鉱物科学会2010大会(島根県松江開催))や研究集会(変成岩などシンポジウム(広島県宮島開催))などにおける発表および討論の過程で再認識され、相応の評価を得た。本年度後半は第52次南極観測隊に従事し南極にて地質調査を行った。今回の調査地域は5.5億年前後の変成岩が主として分布する地域で、その中に5.04.5億年の変成作用後に活動した火成岩体も点在する。
フラーレン類の有機ケイ素誘導体の合成と機能

C_<60>に代表される新しい炭素同素体として知られるフラーレン類はその特殊かつ新規な分子構造に由来する興味ある種々の物理的、化学的特性を有しており、新炭素素材として非常に魅力ある物質群である。本研究はこれらフラーレン類の有機ケイ素誘導体の合成及びそれらの機能材料への応用を目的とする。C_<60>やC_<70>の官能基化に、光化学的に発生させた有機ケイ素活性種であるシリレンやジシレン等との付加反応やボリシラン類の光誘起電子移動反応を利用し、シリル化による異原子クラスラ-を合成して、新しい機能性クラスター化合物群の創製を試みた。ジシラン、トリシラン等のシクロポリシランやポリシラン類との光誘起電子移動を経由する光シリル化反応を検証した。特に、電子供与能の高いSi-Si結合を有するジシラシクロプロパンをターゲット分子として用いる光反応を試み、付加体のビスシリル化フラーレンの合成に成功した。この反応の興味深い点は、付加体の構造、即ち、付加するジシラシクロプロパンの数及びその位置(5, 6-付加か6,6-付加か)であり、付加の位置、数及び付加体の構造に関する理論計算の結果と合わせて6,6-付加体の生成を明らかにした。さらに、C_<60>とジシリラン、ジゲルミランによる新しいタイプの[4+3]型環状付加体の生成機構を解明し、本反応の有用性を確立した。また、シリル化フラーレンの物性に関する知見を得る検討を行なった。即ち、酸化還元電位の測定によるレドックス性の解明や、電気伝導度の測定による新規炭素材料としての有用性を評価した。本研究ではこれらフラーレン類の有機ケイ素誘導体の合成及びそれらの機能材料への応用を目的とする。C_<60>やC_<70>の官能基化に、光化学的に発生させた有機ケイ素活性種であるシリレンやジシレン等との付加反応やポリシラン類の光誘起電子移動反応を利用し、シリル化による異原子クラスターを合成して、新しい機能性クラスター化合物群の創製を試みた。本年度はジシラン、トリシラン等のシクロポリシランやポリシラン類との光誘起電子移動を経由する光シリル化反応を検討した。特に、電子供与能の高いSi-Si結合を有するジシラシクロプロパンをターゲット分子として用いる光反応を試みた。生成物はリサイクル型HPLCにより分離精製を行ない、カラムクロマトグラフィーによる精製も試みた。付加したジシラシクロプロパンの数をFAB-MASSスペクトルより求め、電子構造に関する情報を^1H、^<13>C、及び^<29>Si-NMR、IR、UV、CVスペクトル等を用いて得、付加体、即ち、ビスシリル化フラーレンの合成に成功した。この反応の興味深い点は、付加体の構造、即ち、付加するジシラシクロプロパンの数及びその位置(5,6-付加か6,6-付加か)であり、付加の位置、数及び付加体の構造に関する理論計算の結果と合わせて6,6-付加体の生成を明らかにした。C_<60>やC_<70>の官能基化に、光化学的に発生させた有機ケイ素活性種であるシリレンやジシレン等との付加反応やポリシラン類の光誘起電子移動反応を利用し、シリル化による異原子クラスターを合成して、新しい機能性クラスター化合物群の創製を試みる研究の一環において以下の研究成果を得た。単離した活性なジシレンとフラーレン類の環化反応を試みた。

生成物として[2+2]-あるいは[2+4]-付加体の何れが生成するか、叉、付加するジシレンの数及びその位置(5,6-付加か6,6-付加か及び対称付加か非対称付加か)はどこか、興味深い所である。何れの生成物もHOMOレベルの高いSi-Si単結合を有し、C_<60>やC_<70>ユニットとの分子内電荷移動相互作用により新しいC_<60>の性質が発現することが期待される。C_<60>の二重結合は活性な官能基として求核試薬やラジカル試剤に対して高い反応性を示すが、ジエンとしての反応例はなく、[2+4]-付加反応の検討はC_<60>の化学的挙動を解明する上で重要である。この反応の興味深い点は、付加体の構造及び付加の位置であり、これらにに関する情報を得るために理論計算グループとの共同研究を行なった。現在の所,付加体の単離,精製には至っておらず誠意検討を続行している。本研究はC_<60>やC_<70>の官能基化に、光化学的に発生させた有機ケイ素活性種であるシリレンやジシレン等との付加反応やポリシラン類の光誘起電子移動反応を利用し、シリル化による異原子クラスターを合成して、新しい機能性クラスター化合物群の創製することを目的とする。これらはケイ素化学と炭素化学の融合による新しい化学を生み出すものと信じられる。1991年のC_<60>大量合成法の報告以来、物理化学者を中心とした構造、物性の研究が爆発的にスタートし、多くの成果が挙がっているが、有機化学分野の研究に於ては、その反応例からはC_<60>の化学反応性の一端を知るのみである。本研究は、フラーレン類の化学的分子変換において包括的な意味合いのある研究であり、世界に一歩先んじた成果が得られるものと期待される。C_<60>とジシリラン、ジゲルミランによる新しいタイプの[4+3]型環状付加体の生成機構を解明し、本反応の有用性を確立した。さらに、本年は2年間に得られた研究成果の総括的な検討を試み、シリル化フラーレンの物性に関する知見を得る検討を行なった。即ち、酸化還元電位の測定によるレドックス性の解明や、電気伝導度の測定による新規炭素材料としての有用性を評価した。
筋細胞分化を制御する遺伝子の構造と機能の解析

1筋分化制御因子の一つであるMyogeninの機能と胚発生における発現を調べた。ミオシン軽鎖遺伝子の上流に存在するエンハンサー領域(ELCl)の解析により、Myogeninによって特異的に活性化されるエンハンサーを見いだした。ELClにはMyoDファミリーの結合配列であるE-boxが5個ならんでおり、上流2個はMyoDによって活性化されるエンハンサー(ELClD)であり、下流3個はMyogeninによって活性化されるエンハンサー(ELClG)である。次に特異性を決定している要因を調べとた。MyoD,Myogeninが直接結合するE-boxは交換可能である。MyoD,Myogeninのキメラ蛋白を合成して、その機能を調べたところ、DNAに結合するドメインであるbHLH配列は交換可能で特異性を規定せず、転写活性化ドメインが含まれるN末、C末側配列がいずれに由来するかによってその特異性が規定されることが明かとなった。2胚発生におけるMyogeninの発現を調べるためにMyogenin遺伝子の上流配列の解析を行い、-2kbと-100までのプロモーターに制御領域を見いだした。ついで上流配列4kbとLacZをつなぎ、トランスジェニックマウスを作成し、発現を調べたところ、初期胚ではLacZの発現は体節、Myotomeなど、筋芽細胞が発生する部位でのみ発現し、発生が進むと骨格筋でのみ発現することが確認された。骨格筋細胞での特異的発現を制御する因子が同定され、また、筋特異的発現が個体レベルでも確認されたので、個体レベルの筋細胞の操作、遺伝子導入などに応用できると考えられる。3Myogenin遺伝子の機能を解析する目的で相同組み替えによりMyogenin遺伝子機能を欠失したマウス系統を作成した。現在、掛け合わせにより、ホモ個体の表現型を解析中である。ミオシンアルカリ軽鎖遺伝子の発現制御に関与する因子(1)骨格筋特異エンハンサ-,(2)MLCボックス,(3)負に制御する因子NREの解析を行った。又、これらの因子と筋分化制御路子との関係を解析した。(1)骨格筋特異エンハンサ-、...骨格筋軽鎖遺伝子の上流2kbに存在する。2個のMyoD結合配列があり、両配列が活性にとって必須である。このMyoDサイトにはMyoD,Myogeminが直接結合し、軽鎖遺伝子の軽写を誘導する。しかし、同じ機能を持つMRF4はエンハンサ-への結合,転写誘導活性を示さない。(2)MLCボックス......ミオシン軽鎖遺伝子群のプロモ-タ-に存在する共通配列が見い出され、MLCボックスと名づけた。MLCボックスとアクチンのCArGボックスはよく似た配列をもち、検討の結果、同一の転写因子が結合することが明らかになった。MyoD,MyogeniuによりMLCボックスが活性化されるがMyoD,MyogeninがMLCボックスには直接結合しない。(3)負に転写を制御する因子NRE・......骨格筋の発生過程では三種のミオシンアルカリ軽鎖遺伝子が発現するが、その一つに心筋タイプの軽鎖遺伝子があり、この遺伝子は発生過程でその発現が止まる。なぜ、発現が止まるのかを検討したところ、骨格筋で同遺伝子の発現をおさえる因子,NREを同定した。NREはプロモ-タ-にMLCボックスが存在することが活性にとって必須らしいと推定できる結果が得られている。なお,NREは心筋細胞では働かない。又、骨格筋細胞には特異的に結合する因子が存在するが、同様の因子は心筋には存在しない。

筋分化制御因子群の機能を解析するために4種の筋分化制御因子の遺伝子をクロ-ニクグし、発現べクタ-連結、筋細胞誘導能、筋細胞で特異的に発現する遺伝子の転写誘導能を調べた。(1)骨格筋ミオシン軽鎖遺伝子のエンハンサ-領域に5個のEーboxが並んでおり、MyoD、Myogeminにより活性化され、転写を誘導する。しかし、MRF4では転写を誘導できない。又、MyoDによる転写誘導には5個のEーboxのうち、5^1端の2個があれば十分な活性が得られることが明らかとなったが、Myogeminによる転写誘導のためにはこの2個のEーboxのみでは機能せず、別のEーboxが必要なことが明らかとなった。よってbHLH構造をもつ点では保存された配列をもつMyogenic Factorも、その機能を詳細に調ベると異な機能をもっていることが明らかとなった。(2)プロモ-タ-にはMLC boxとEーboxが並んでいるが筋分化制御因子はMLC boxに直接結合しないがMLC boxを活性化して転写誘導する。Eーboxを介しての転写誘導は極めて弱いがEーboxとMLC boxと並んでいることにより、全体の活性が3倍に増大することから、MLC boxとの相互作用による転写の増大にEーboxを機能している(3)2つの全く性質を異にする因子であるEーbox(エンハンサ-)とMLC boxの活性化に筋分化制御因子が関与しており、又、第3の筋特異遺伝子のミス因子であるMーCATモチ-フ、あるいはMEF2因子も筋分化制御因子の下流に位置すると報告されていることから、筋持異遺伝子の発現は筋分化制御因子群によって一元的に制御されている可能性が高い。1筋分化制御因子の一つであるMyogeninの機能と胚発生における発現を調べた。ミオシン軽鎖遺伝子の上流に存在するエンハンサー領域(ELC1)の解析により、Myogeninによって特異的に活性化されるエンハンサーを見いだした。ELC1にはMyoDファミリーの結合配列であるE-boxが5個ならんでおり、上流2個はMyoDによって活性化されるエンハンサー(ELC1D)であり、下流3個はMyogeninによって活性化されるエンハンサ(ELC1G)である。次に特異性を決定している要因を調べとた。MyoD,Myogeninが直接結合するE-boxは交換可能である。MyoD, Myogeninのキメラ蛋白を合成して、その機能を調べたところ、DNAに結合するドメインであるbHLH配列は交換可能で特異性を規定せず、転写活性化ドメインが含まれるN末、C末配列がいずれに由来するかによってその特異性が規定されることが明かとなった。2胚発生におけるMyogeninの発現を調べるためにMyogenin遺伝子の上流配列の解析を行い、-2kbと-100までのプロモーターに制御領域を見いだした。ついで上流配列4kbとLacZをつなぎ、トランスジェニックマウスを作成し、発現を調べたところ、初期胚ではLacZの発現は体節、Myotomeなど、筋芽細胞が発生する部位でのみ発現し、発生が進むと骨格筋でのみ発現することが確認された。骨格筋細胞での特異的発現を制御する因子が同定され、また、筋特異的発現が個体レベルでも確認されたので、個体レベルの筋細胞の操作、遺伝子導入などに応用できると考えられる。
抗リン脂質抗体症候群におけるアデノシン二リン酸(ADP)受容体を介した血栓形成機

マウスモノクロナル抗リン脂質抗体231Dは、preliminaryな検討で血小板ADP凝集能低下を誘導したが、再精製された抗体では再現できず、3種のサブクローンいずれを用いても、やはり十分な再現性を示さなかった。一方、ヒトモノクロナル抗体であるEY2C9や一部の患者IgGでは認めた。現在、その機序について検討中である。更に、μチップを用いフロー下の白色血栓を観察するT-TAS®では、抗リン脂質抗体存在下での性血栓傾向は乏しかった。抗リン脂質抗体を含めた動脈血栓症の予防に頻用されるADP受容体(P2Y12)阻害剤はAPSで効果的でない可能性もあり今後の検討が必要である。抗リン脂質抗体の存在が血小板や血球細胞のアデノシン2リン酸(ADP)刺激に対する反応を変化させるとの仮説を検証するためモノクローナル抗リン脂質抗体(231D)を用いたin vitroの単球刺激実験を行ったが、一定の結果を得られなかった。血小板におけるADPに対する2次凝集抑制能の再現も困難となった為、検証した結果、ハイブリドーマから産生されるモノクローナル抗体(231D)に3種のサブクローンが存在することをPS/PT抗体ELISAやループスアンチコアグラント検査といった抗リン脂質抗体の対応エピトープや機能を検討する手法によって確認し、平成25年度の実験では先行実験と異なるサブクローンを用いていていたことを確認した。サブクローン3種のうちの1種で、ADPによる血小板凝集能低下が認められることをpreliminaryなdataとして確認し、現在、同サブクローンの231Dを精製中である。3種のサブクローンは抗リン脂質抗体の特徴(陰性荷電リン脂質と血漿蛋白の複合体に結合し、in vitroで凝固異常を惹起させる)を共有する。APS患者から精製したIgGを用いて血小板のADP刺激に対する凝集能を観察すると従来用いていた231Dのサブクローンを用いた場合と類似の凝集能抑制を認める為、ADP惹起の血小板凝集能異常(および単球活性化)はよりAPS患者の病態に即した抗リン脂質抗体に特徴的な所見である可能性もあると推測している。膠原病・リウマチ学モノクローナル抗リン脂質抗体である231DのサブクローンにおけるADP刺激系に対する機能の違いの解析を行った為、予定より研究の達成度が遅れたAPS患者から精製したIgGと同様にin vitroでの血小板凝集能を変化させるクローンが同定できる見込みがたったため、今後は当初の予定にそって研究を進める。231Dのサブクローンのうち1種が、APS患者から精製したIgGと同様にADP刺激に対する血球、血小板機能の異常を来す可能性があり、同抗体を用いて単球や血管内皮細胞におけるADP刺激反応系について検討する。同サブクローンの精製・調整を行っており、血小板凝集能測定機を用いて血小板のADP惹起性凝集能の低下を確認した後に、in vitroにおける単球細胞(末梢血単核細胞、RAW264.7、THP-1などといった単球細胞株)あるいは血管内皮細胞(臍帯静脈血管内皮細胞や臍帯動脈血管内皮細胞)を用いて血球刺激実験を行う。

また、モノクローナル抗体のサブクローンでADP刺激に対する血小板凝集能の変化が大きく異なるため、これら3種のサブクローンの対応エピトープを検討することで、231Dの血小板膜上の結合蛋白や特異受容体、とりわけADP受容体との関与について今後研究していくことについても検討を進めるモノクローナル抗リン脂質抗体である231DのサブクローンにおけるADP刺激系に対する機能の違いの解析を行った為、予定より研究の達成度が遅れた予定より研究の達成度が遅れたAPS患者から精製したIgGと同様にin vitroでの血小板凝集能を変化させるクローンが同定できる見込みがたったため、今後は当初の予定にそって研究を進める。
居住福祉支援におけるコミュニティーワークの意義と課題

本研究は、「住宅」と「福祉」を融合した新たな居住福祉の在り方と、両者を包含する「地域」におけるコミュニティの実践が、貧困や格差によってもたらされる複雑化した福祉課題を解決する可能性について検討した。複数の研究対象地域におけるフィールドワークによる調査によって、それぞれの地域における福祉課題と地理的条件は互いに関係性が深いことが実証された。その結果、地域の複雑化した福祉課題には、地域密着型のコミュニティワークによる居住福祉支援が有効であることが示唆された。本研究では、低所得・貧困に関する課題を抱えた地域においてアクションリサーチを実施し、「住宅」と「福祉」を融合した新たな居住福祉の在り方と、両者を包含する「地域」の問題解決能力から地域居住福祉の可能性について検討することを目的としている。研究対象地として、大都市、地方都市、離島地域の地域性の異なる地域を設定し、居住福祉支援におけるコミュニティワークの有効性について検討し、評価を行う。本研究の初年度である平成22度は、次年度以降に実施予定の本調査に向けた予備調査を実施した。まず、貧困・格差をめぐる文献収集および国内外で実施された貧困・格差とコミュニティワークについての実践調査報告や先行研究の収集を行った。ここでは、貧困や格差をめぐる問題は、問題そのものが見えにくく実態が明らかになりくいことから、個々のケースに対応可能な人的資源による支援と、それらの支援のネットワークを結節させる中間的相談機能の重要性が示唆された。また、予備調査として和歌山県新宮市、鹿児島県薩摩川内市における小地域福祉活動実践に関する基礎的データの収集と地理的条件不利地域における定住継続を支えるための居住資源に関するヒアリング調査を実施した。ヒアリングの内容から、制度や施策による「福祉」だけでなく、地域独自に培われた福祉観にみられる地域の福祉文化の系譜や伝統が現在のコミュニティワークの実践を下支していることが明らかとなった。この予備調査段階での調査結果については、貧困研究関連の学会誌や地理学関連の学会において成果を発表した。研究の進捗状況については、現地調査におけるヒアリング調査等は順調に進んでいるものの、住宅需給構造分析に関する作業が不十分であった。来年度は、国勢調査や住宅統計調査等の既存統計調査のデータの再集計や、既存統計などで得られないデータおよび一次資料等の基礎データの収集を行う予定である。本研究では、「住宅」と「福祉」を融合した新たな居住福祉の在り方と、両者を包含する「地域」の問題解決能力から、地域居住福祉の可能性について検討することを目的としている。本研究の2年目である平成23年度は、昨年度に実施した各対象地域における予備調査によって把握した「大都市型」「地方都市型」「中山間地域型」「遠隔地型」の4類型におけるコミュニティワークの実践に関する調査を進めた。本年度は「地方都市」である和歌山県新宮市と、「大都市型」である東京都新宿区や台東区、さいたま市大宮区、大阪市西成区を中心に調査を進めた。新宮市においては、部落解放同盟の女性部の運動史や日常の活動の記録や公営住宅の建て替え運動の実践記録などから、居住福祉に関連する生活課題と、それらに関連する問題への解決へ向けた実践のプロセスを明らかにした。また、これらの実践プロセスを明らかにする過程で行った解放運動の中心人物や実際の活動を牽引するアクターへの詳細なインタビューから、運動に関与する女性の持つ地域の生活者としての延長上にある「つながり」がコミュニティワークとして公式/非公式に機能し、地域の問題の早期把握や解決に結びついていることが明らかとなった。この実践プロセスと居住福祉の関係性については『「セーフティネットの空間」の形成過程とジェンダー同和地区におけるコミュニティワーカの実践からー』(お茶の水地理51巻)について詳細な検討を行った。大都市における調査は、東京都23区内のインナーエリアやさいたま市の中心部で展開されているNPO法人が主体として展開している高齢者向けケア付き住宅や刑余者の地域生活移行支援の取り組みと地域での関与や認知の浸透のプロセスについて聞き取りを中心とした調査を実施した。また、大阪市西成区の調査に関しては、これまでの研究成果を「釜ヶ崎のススメ」(共著:洛北出版)として出版した。本研究は、「住宅」と「福祉」を融合した新たな居住福祉の在り方と、両者を包含する「地域」の問題解決能力から、地域居住福祉の可能性について検討することを目的とする。本研究の最終年度である平成24年度は本研究の調査対象地域の類型のうち「遠隔地型」である離島地域における相互扶助に基づいた高齢者介護のケア規範の構築と地域への「住み続け」を支える地域居住資源の変容についての調査を行った。高齢化が著しく進展する上甑島里地区では、古くから村の生活様式に根付く互酬的相互扶助をケアの現場に活用することで、低コストの地域密着在宅型のケアを実践してきた。しかし、2000年の介護保険制度の導入、2004年の周辺9市町村との合併によって、高齢者ケアの現場やケアをめぐる社会資源は大きく変容した。今年度はマクロスケールで実施される政策が、離島地区の小地域におけるケアを含む居住福祉の現場にもたらす変化をコミュニティワークの実践や新たな地域づくりの動きから検討した。

その結果、ケア規範に関する変化が顕著であり、地縁関係を重視した互酬的相互扶助的なケアが介護保険制度に包摂されることで、金銭や制度を介して受給するサービスとしてのケアとしての認識が高まっていることが明らかとなった。また、特別養護老人ホームやグループホームの設置が相次ぎ、島での住み続けを支える居住資源は増加する一方で、ケア労働の担い手が常に不足していることが問題化しつつあることも明らかになった。また、新しい地域づくりが活発化し、アートフェスティバルの実施や旅行代理店と連携した観光プランの開発、定住促進と雇用創造を目指した人材育成事業の実施などが積極的に行われるようになったが、こうした新たな地域の動きが居住福祉へと接点を持つプロセスまでは十分に調査できなかったため、今後の課題としたい。以上の成果を踏まえて、本研究のとりまとめの作業を行う予定である。平成23年度の調査対象地域である新宮市熊野川地区は、平成23年9月の台風12号による豪雨によって甚大な被害を受け、調査を継続して実施することが不可能となった。そのため、熊野川地区以外の3つの対象地域の調査内容に生活誌調査やインタビュー調査を加え、調査計画の変更を行った。変更後の計画は予備調査の段階であるものの、本調査に向けた基礎的データの収集を着実に行っており、おおむね順調に進展している。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度の調査対象地域として予定していた新宮市熊野川地区は、平成23年9月の台風12号による豪雨によって甚大な被害を受けたため、調査が一時的に中断した。復興の時期にあわせて調査期間を延長したものの、予定通りに復興が進まず、平成23年度中の調査受け入れの目処がたたなくなった。よって、熊野川地区での調査を断念し、調査対象地を新宮市市街地エリアに限定し、調査計画を修正することになった。これにともない、土地利用の変遷や住宅構造分析に関する統計データを使用した数量的な調査から、高齢者の地域への住み続けや子育て世帯へのサポートを実施しているコミュニティワークの実態をより詳細に明らかにする聞き取り調査に重点をおいた調査体制に変更した。また、24年度以降に予定していた鹿児島県上甑島での予備調査を23年度中に前倒しして実施するとともに予備調査の回数を増やすことで本調査へ向けた基礎的データの収集を集中的に行った。本研究の地域カテゴリーは、「中山間地域」である新宮市熊野川地区における調査が不可能となったことで、「大都市」、「地方都市」、「遠隔地」の3つの分類で分析を行うことになったが、3地域の調査内容にコミュニティワークに関連する人々の生活誌やインタビューデータなどを積極的に取り込み、それぞれの内容を深化させることで、調査計画の変更に対応した。
放射性同位元素(RI)標識抗体を用いる腫瘍特異的な新しい癌治療法の開発

B細胞悪性リンパ腫ではCD20抗原に対するモノクローナル抗体を放射性同位元素(RI)で標識。RI標識抗体は悪性リンパ腫細胞に腫瘍特異的に結合し、放射性ヨード-131標識抗体がSCIDマウスに移植した悪性リンパ腫モデルで、腫瘍の発育を抑制し、大量の放射性ヨード-131標識抗体を投与すると、腫瘍が消失することが確かめられた。またヒト白血球と反応する抗体(NCA-95)を遺伝子工学の手法でヒト型化。RI標識ヒト型化抗体は骨髄に集積し、骨転移の画像診断や再生不良性貧血、骨髄増殖性疾患などの画像診断に有用で、安全に臨床応用されることが明らかとなった。RI標識抗体は造血器、リンパ系腫瘍の診断、治療に安全かつ有効に臨床応用される。CD20抗原と反応するモノクローナル抗体が動物実験においてB細胞悪性リンパ腫の治療に有用なことが明らかとなった。使用するRI標識抗体に容量反応性が見られ、非標識抗体のみの投与でも軽度ではあるが、腫瘍縮小効果が認められた。RI標識抗体による悪性リンパ腫治療機序はなお不明な点も多いが、モノクローナル抗体単独で治療効果を示すことにより、今後さらに作用機序の検討、他の癌への応用の検討が不可欠となった。抗体の投与に伴う免疫反応は遺伝子工学で開発されるヒト型化抗体の利用により解決され、安全に利用されることが確認された。さらにNCA-95に対する抗体は癌の骨転移や骨髄疾患の画像診断に有用なことが示された。同じ手法は白血球の集積する炎症の診断にも有用であると期待される。
中性子捕捉治療のためのがん標的ホウ素ポルフィリンの開発

ホウ素中性子捕捉療法(BNCT)は脳腫瘍および皮膚がんの治療に用いられてきたが、最近頭頸がんの治療にも成功しその応用範囲の拡大が注目されている。現在わが国では、小型加速器の開発が進んでおり、これまでの原子炉依存型から病院併設型BNCTの実現が近い将来可能となってきている。本研究では、ポルフィリンの腫瘍親和性と光感受性に着目し、ポルフィリンにホウ素イオンクラスターを導入したホウ素キャリアーを新たに開発し、BNCTと光線力学療法(PDT)の組み合わせによる本治療法の適応拡大を目的とした。21年度に開発に成功したホウ素イオンクラスター含有ポルフィリンのヒト子宮がん細胞HeLaに対する毒性をMTT法で調べた結果、本研究で合成した化合物が既知のカルボラン含有ポルフィリンBOPPより低毒性を示した。細胞内へのホウ素取り込みはBOPPに比べて約5倍亢進した。さらに、HeLa細胞において光線力学的治療効果を解析した結果、IC_<50>=0.21μMとBOPP(IC_<50>=4.83μM)より23倍強い活性を示した。これらの結果から、化合物11は低毒性で高い細胞内取り込み活性及び光線力学治療効果を有することが明らかになり、BNCTとPDTのコンビネーションセラピーに有用である可能性が示唆された。さらに、アセチレン部位を有するホウ素イオンクラスターと様々な有機アジドの銅触媒を用いるクリック付加環化反応に成功した。この手法により、様々なホウ素イオンクラスター有機化合物の合成が容易に行えることができた。例えば、細胞膜を形成するリン脂質を模倣したホウ素脂質の開発にも成功した。本研究では、ポルフィリンの腫瘍親和性と光感受性に着目し、ポルフィリンにホウ素イオンクラスターを導入したホウ素キャリアーを新たに開発し、BNCTと光線力学療法(PDT)の組み合わせによる本治療法の適応拡大を目的とする。既にKah1らによってカルボランを導入したポルフィリンが開発されたが、第1相臨床試験で血小板減少症が見られ、2001年に開発がストップした。そこで本研究では、我々が既に開発した手法を用いてホウ素12個からなるイオンクラスターを利用することで副作用を克服するため、プロトポルフィリンIX(PPIX)へ無機ホウ素イオンクラスターであるメルカプトウンデカヒドロドデカボレート(BSH)の導入した化合物(PPIX-BSH)を設計し、その合成に成功した。さらに、PPIX-BNH_2及びPPIX-BOHのようなPPIX-クロソ型ホウ素イオンクラスター複合体の合成にも成功した。これらの化合物お用いて特定波長の照射によるPDT効果を調べた結果、既知のカルボランを導入ポルフィリンより様々なヒト及びラット癌細胞に対する細胞増殖阻害活性が亢進した。さらに、PPIX-BSHをマウス(Slc/DDY、メス)に静脈注射投与した結果、50%致死量(LD_<50>)が171.1mg/kgであり、カルボランを導入ポルフィリン(LD_<50>;60.7mg/kg)に比べ急性毒性が3倍程度低いことが明らかになった。現在、動物モデルにおけるこれらの化合物のBNCT及びPDT効果を行うため、大量合成技術の確立の検討を行っている。本研究ではプロトポルフィリンIX(PPIX)へ無機ホウ素イオンクラスターであるメルカプトウンデカヒドロドデカボレート(BSH)の導入した化合物(PPIX-BSH)を設計し、その合成に成功した。さらに、PPIX-BNH2及びPPIX-BOHのようなPPIX-クロソ型ホウ素イオンクラスター複合体の合成にも成功した。動物モデルにおけるこれらの化合物のBNCT及びPDT効果を行うため、大量合成技術の確立に成功した。マウス大腸がん細胞を背中に移植したモデルマウスに対して、PPIX-クロソ型ホウ素イオンクラスター複合体を投与したところ、腫瘍内集積性が期待したほどに高くないことが分かった。同様の実験をヒト上皮扁平がんモデルで行った場合も同様で、カルボラン誘導体BOPPと同様、高い集積性は見られなかった。22年度は、DDS技術を応用することで高い集積性を狙う予定である。

本研究では、ポルフィリンの腫瘍親和性と光感受性に着目し、ポルフィリンにホウ素イオンクラスターを導入したホウ素キャリアーを新たに開発し、BNCTと光線力学療法(PDT)の組み合わせによる本治療法の適応拡大を目的とした。21年度に開発に成功したホウ素イオンクラスター含有ポルフィリンのヒト子宮がん細胞HeLaに対する毒性をMTT法で調べた結果、本研究で合成した化合物が既知のカルボラン含有ポルフィリンBOPPより低毒性を示した。細胞内へのホウ素取り込みはBOPPに比べて約5倍亢進した。さらに、HeLa細胞において光線力学的治療効果を解析した結果、IC_<50>=0.21μMとBOPP(IC_<50>=4.83μM)より23倍強い活性を示した。これらの結果から、化合物11は低毒性で高い細胞内取り込み活性及び光線力学治療効果を有することが明らかになり、BNCTとPDTのコンビネーションセラピーに有用である可能性が示唆された。さらに、アセチレン部位を有するホウ素イオンクラスターと様々な有機アジドの銅触媒を用いるクリック付加環化反応に成功した。この手法により、様々なホウ素イオンクラスター有機化合物の合成が容易に行えることができた。例えば、細胞膜を形成するリン脂質を模倣したホウ素脂質の開発にも成功した。
ClutterのIdeal性についての「よい特徴付け」を目指して

本研究では、グラフのコードレス奇数点サイクルの点集合をhyperedgeとするclutterやその一般化に当たる、有向マトロイド上の正コサーキットのなすclutterについて、そのidealityやpacking propertyについての禁止マイナー型特徴付けに成功した。本研究は、最近筆者が提起した以下の2つの予想に取り組み、究極的な目標としてこれらのclutterのクラスを統合する、より広い自然なクラスを同定することを目指し、その取り組みの中で得られた様々な新しい問題群等も併せて考察することを目的としている。(予想1):有向マトロイドの正サーキットからなるclutterのidealityは「縮退した射影平面、odd-hole clutterとそのblocker」の3つの無限系列をcoreに持つminimally non-ideal clutterのみを、禁止マイナーに持つであろう。(予想1):有向マトロイドの正サーキットからなるclutterのidealityは「縮退した射影平面、odd-hole clutterとそのblocker」の3つの無限系列をcoreに持つminimally non-ideal clutterのみを、禁止マイナーに持つであろう(予想2):Escher wallを含まないグラフのもつ5点以上の奇数点コードレスサイクル、もしくはその補グラフをなす点集合をhyper-edgeとするclutterのidealityは「縮退した射影平面、odd-hole clutterとそのblocker」の3つの無限系列をcoreに持つminimally non-ideal cltterのみを禁止マイナーに持つであろう。予想1に関連する取り組みについて:本年度は、現在我々が得ている証明のプロセスを再検討し(とりわけ、${\mathca1{J}}_n$-freeなclutterの特徴付けを用いて)新たな分解構造定理の構築を目指し、計算機を用いた予備的な考察や実験などを行なった。予想2に関連する取り組みについて:このクラスのclutterを手計算で構成するのは困難であるため、グラフのコードレスサイクルを列挙する効率的なアルゴリズムを利用して、計算機上で具体例を観察する必要がある。本年度はこのアルゴリズムを完成させた。更にこの研究開発の過程で、「oddholeのrecognitionは多項式時間で判定可能である」という当該研究分野の最も重要な未解決予想に対して、本質的な貢献をもたらすことが期待される新しい証明手法が発見された。またbasis graphからマトロイドのランクの最小値を求めるアルゴリズムの開発に際しても大きな進展があった。これらの結果は、それぞれ別々の国際会議に投稿中である。(予想1) :有向マトロイドの正サーキットからなるclutterのidealityは「縮退した射影平面、odd-hole clutterとそのblocker」の3つの無限系列をcoreに持つminimally non-ideal clutterのみを、禁止マイナーに持つであろう。予想1に関連する取り組みについて:本年度は、現在我々が得ている証明のプロセスを再検討し、新たな分解構造定理の構築を念頭に新しい証明の枠組みを構築した。この研究開発の過程で、「odd holeのrecognitionは多項式時間で判定可能である」という当該研究分野の最も重要な未解決予想に関連する結果が得られた。これらの結果は、それぞれ別々の国際会議に受理され発表された。加えて、グラフ上の点素な偶サイクルのパッキングに関する未解決予想を肯定的に解決した。また、グラフ上のいわゆる15パズル問題の一般化に成功した。これらの結果はそれぞれ、21年度の国際会議において発表される予定である。その結果をチュニジアで開催された権威ある国際会議ISCOにおいて招待セッションで講演し、高い評価を受けた。予想2に関連する取り組みについて:「odd holeのrecognitionが多項式時間で判定可能なグラフのクラス」として、claw-free graphの族に着目することに思い至り、研究が進展した。

claw-free graphsについては、ごく最近Seymour & Chudnovskyらのdecomposition theoremという非常に深い結果が得られたが、これらの結果を複合的に用いて、claw-free graphsの族についての結果が得られることが解明できた。この方針の下で引き続き研究を続けている。グラフ上の点素な偶サイクルのパッキングに関する未解決予想の肯定的解決と、グラフ上のいわゆる15パズル問題の一般化に成功し、それぞれ、22年度の格式ある国際会議EuroComb 09に受理され、高い評価を受けている。本研究は、最近筆者が提起した以下の2つの予想に取り組み、究極的な目標としてこれらのclutterのクラスを統合する、より広い自然なクラスを同定することを目指し、その取り組みの中で得られた様々な新しい問題群等も併せて考察することを目的としている。(予想1):有向マトロイドの正サーキットからなるclutterのidealityは「縮退した射影平面、odd-hole clutterとそのblocker」の3つの無限系列をcoreに持つminimally non-ideal clutterのみを、禁止マイナーに持っであろう。予想1と2に関連する取り組みについて:
Costimulatory分子導入による口腔癌免疫療法の研究

本年度も口腔癌免疫療法の基盤となる諸種の研究を行った。下顎歯肉癌については、いわゆる下顎管分類を用いてT分類を行い、骨浸潤様式を併せて考慮すると、下顎辺縁切除か下顎区域切除以上かの治療法選択基準に成りうることを示した。口腔癌患者から生検時ならびに切除手術時に口腔癌腫瘍組織を採取し、口腔癌細胞を分離、培養し、いくつかの培養腫瘍細胞が樹立された。培養液中にはIL-6が高濃度でみられ、培養細胞の免疫組織化学的にはIL-6レセプターの発現も高く、オートクライン機構による増殖も示唆された。また口腔扁平上皮癌担癌患者血清中のIL-6,INFγ濃度を測定し、陽性例もみられた。口腔扁平上皮癌の切除癌の凍結標本において、転移抑制遺伝子とされるKAI1/CD82の発現を免疫組織染色法や、RT-PCR法でみると、58%が陽性、42%が陰性であり、原発巣の組織学的悪性度、腫瘍湿潤様式と相関して、陰性例で湿潤傾向が認められた。またMMP-7遺伝子のmRNAレベルでの発現をRT-PCRでみると、45%が陽性、55%が陰性で、陽性例では組織学的分化度、腫瘍の局所再発率と有意な相関がみられたが、原発腫瘍の大きさやリンパ節転移の有無とは相関がみられなかった。樹立された口腔扁平上皮癌細胞株および口腔癌手術材料より初代培養して短期に培養した口腔扁平上皮癌細胞に対してCostimulatory分子であるCD80,CD86,CD54(ICAM-1)MHC class Iの発現をflowcytometry法で解析したが、CD80,CD86の発現はほとんどみられず、CD54、MHC class Iについてもきわめて弱いものであった。CD80による第2シグナルはCTLの誘導時にとくに必要であるが、CTLの効果発現時にはとくに必要としないと考えらるので、in vitroでCD80アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入腫瘍細胞により誘導されたCTLは養子免疫療法としての効果が期待される。本研究初年度の本年は口腔癌免疫療法の基盤となるような諸種の研究を行った。口腔癌のなかでも口腔の特色となるような下顎歯肉癌については、T分類法を過去の研究から下顎管にまで画像診断上で腫瘍浸潤が考えられるものをT4と判断するいわゆる下顎管分類を用いた場合の下顎切除法について検索した。また口腔扁平上皮癌については講座にて経験している過去の症例から症例の予後をもっとも左右する臨床的ならびに病理組織学的因子を多変量解析によって解析した。その結果からはT分類、治療方法、組織学的腫瘍浸潤様式がおのおの独立した予後規定因子として重要であることが判明した。口腔癌患者から生検時ならびに切除手術時い口腔癌腫瘍組織を採取し、口腔癌細胞を分離、培養することを試みた。そのうち舌原発で口底と下顎歯肉に浸潤する1例では培養細胞の樹立が得られ、細胞は多角形で敷石状に配列し、細胞倍加時間は28時間で染色体数は68から80本に分布しており、ヌードマウスへの移植では可移植性で、病理組織学的には高分化型扁平上皮で原発巣に類似していた。培養液中にはIL-6が高濃度でみられ、培養細胞の免疫組織化学的にはIL-6セレプターの発現も高く、オートクライン機構による増殖も示唆された。Costimulatory分子については今後検索していく予定である。本年度も昨年度に引き続いて口腔癌免疫療法の基盤となる諸種の研究を行った。下顎歯肉癌については、T分類法をいわゆる下顎管分類を用いた場合に、T分類および骨浸潤様式別にみて過去のデータから腫瘍制御率の高い下顎切除法について、下顎辺縁切除か下顎区域切除かの観点から分析した。また口腔扁平上皮癌については症例の予後をもっとも左右する臨床的ならびに病理組織学的因子を多変量解析によって解析した。その結果からはT分類(p=0.0125)、治療方法(p=0.0293)、組織学的腫瘍浸潤様式(p=0.0027)がおのおの独立した予後規定因子として重要であることが判明した。口腔癌患者から生検時ならびに切除手術時に口腔癌腫瘍組織を採取し、口腔癌細胞を分離、培養することをその後も試みている。昨年度口腔癌から分離培養し樹立された細胞は形態学的には多角あるいは類円形を呈し敷石状に配列した。透過電顕所見はデスモゾームやトノフィラメントの形成も見られ、上皮細胞マーカーであるケラチンも陽性で、倍加時間は28時間であり、染色体数は68から80本に分布していた。そこで口腔扁平上皮癌担癌患者血清中のIL-6濃度を可及的に測定しているが、症例により陽性例もみられる。Costimulatory分子については今後さらに検索予定である。培養液中にはIL-6が高濃度でみられ、培養細胞の免疫組織化学的にはIL-

6レセプターの発現も高く、オートクライン機構による増殖も示唆された。また口腔扁平上皮癌担癌患者血清中のIL-6,INFγ濃度を測定し、陽性例もみられた。口腔扁平上皮癌の切除癌の凍結標本において、転移抑制遺伝子とされるKAI1/CD82の発現を免疫組織染色法や、RT-PCR法でみると、58%が陽性、42%が陰性であり、原発巣の組織学的悪性度、腫瘍湿潤様式と相関して、陰性例で湿潤傾向が認められた。またMMP-7遺伝子のmRNAレベルでの発現をRT-PCRでみると、45%が陽性、55%が陰性で、陽性例では組織学的分化度、腫瘍の局所再発率と有意な相関がみられたが、原発腫瘍の大きさやリンパ節転移の有無とは相関がみられなかった。樹立された口腔扁平上皮癌細胞株および口腔癌手術材料より初代培養して短期に培養した口腔扁平上皮癌細胞に対してCostimulatory分子であるCD80,CD86,CD54(ICAM-1)MHC class Iの発現をflowcytometry法で解析したが、CD80,CD86の発現はほとんどみられず、CD54、MHC class Iについてもきわめて弱いものであった。CD80による第2シグナルはCTLの誘導時にとくに必要であるが、CTLの効果発現時にはとくに必要としないと考えらるので、in vitroでCD80アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入腫瘍細胞により誘導されたCTLは養子免疫療法としての効果が期待される。
外国人子女用日本語教材開発のための基礎的研究

本研究は、外国人子女が日本の学校生活に慣れるまでの日本語教材の開発を目的としている。教材の開発にあたっては,ブック教材を基本としたが,多様なニーズに対応するため,英語・中国語・スペイン語に対応したマルチメディアによるCAIシステムを部分的に試作した。本年度については,次のように作業を進めた。1.ブック教材の開発昨年度検討した5課分に引き続き,残り5課分について,会話表現・語い・解説事項・翻訳などの検討を行った。翻訳上の問題点については,英語・中国語・スペイン語のそれぞれについて,報告書の中に盛り込むこととした。2.イラスト及び音声素材の作成算数の場面について,CAIソフトウェアに組み込む文字素材・音声素材(日本語会話とその英・中・スペイン語訳の録音)・イラストの作成作業を行った。3.CAIソフトの開発と評価文字素材・音声素材・イラストをもとに,マルチメディアによるCAIソフトウェアの改訂版作成作業を進めた。そして,ほぼ完成段階に達したものを外国人子女受入校で試用してもらい,児童と教師から意見を聴取した。4.報告書の作成2年間の研究成果を報告書にまとめた。報告書には,研究組識,研究経過,教材の構成とねらい,英語・中国語・スペイン語を母語とする学習者に対する日本語指導上の問題点のほか,ブック教材とCAIソフトウェアの内容を盛り込んだ。本研究は,外国人子女が日本の学校生活に慣れるまでの日本語教材の開発を目的とする.教材の開発にあたっては,ブック教材を基本とするが,多様なニ-ズに対応するため,英語・中国語・スペイン語に対応したマルチメディアによるCAIシステムを部分的に試作する.本年度については,次のように作業を進めた.1.研究会議の開催7月に研究会議を開催し,関連分野の専門家から現状説明・研究報告・意見聴取などの機会を得た.このほか,既存の文献資料やソフトウェアを参考にしながら,本研究全般に関する意見交換を行った.2.ブック教材の開発9月の検討会で,教材に盛り込む10場面の選定を行った.そして,そのうちの1場面について,必要とされる日本語表現,学習者の母語別に必要となる解説事項,音声や映像の素材を検討し,1課の構成の枠組みを決定した.12月及び2月の検討会で,ブック教材10課のうちの5課分について,会話表現・語い・解説事項・翻訳などの検討を行った.3.CAIソフトの開発10月3月にかけて,9月の検討会で枠組み検討の対象とした1課の素材をもとに,マルチメディアによるCAIソフトの基本設計を行った.次年度は,本研究の最終年度となり,ブック教材10課分とCAIソフト試材版を完成させるとともに,報告書を作成する.本研究は、外国人子女が日本の学校生活に慣れるまでの日本語教材の開発を目的としている。
メダカ背腹構造突然変異Daにおける黒色素細胞の特異的配列

脊椎動物の背腹構造の形成機構は発生生物学における重要課題の一つである。メダカの突然変異Daは脊椎動物では稀有の背腹構造突然変異である。本研究では変異形質の形成過程を黒色素細胞の配列、膜鰭形成、筋節形成の三つに注目して、形態変異が最も顕著な尾部(肛門から後方)について形態学的な検索を行った。黒色素細胞の配列の腹側化:メダカでは3日胚で黒色素細胞が背側と腹側の正中線に出現する。尾部でその配列を見ると野生型では背側1列腹側2列であるが、Daでは背側の配列は腹側と同じ2列になっている。この配列様式は孵化直前まで続く。Daでは背側の腹側化が黒色素細胞の出現直後から起っているのである。膜鰭の形成の腹側化:メダカの3つの正中鰭(背鰭、尾鰭、尻鰭)は1枚の膜鰭として発生する。背側膜鰭は4日胚で発生するが、野生型ではその先端は尾部第7体節で、腹側の先端は尾部第1体節に達している。発生が進んでもこの位置関係は変化しない。ところがDaでは、背側膜鰭の先端は野生型のものより3体節分前方に発生し、その後尾部第1体節まで伸長する。これによって、Daの背鰭は尾鰭と同一の形態をとることによって腹側化することが明らかになった。筋節の腹側化:2日胚では筋節は野生型、Daともに左右両側に位置している。ところが野生型では孵化直前までに左右筋節は背方に成長し、正中線で融合して神経管を覆い、背側に特徴的な形態をとるようになる。腹側では、このような成長は見られない。Daでは背側筋節でも背方への成長が見られず、腹側と同一の形態をとっている。これらの結果からDaでは背側構造の腹側化が筋節のような主要組織も含めて、広範に生じていることが明らかになった。この現象の原因遺伝子の解析が今後の課題である。
食品蛋白質の遺伝子工学的修飾・分子設計による高機能化

遺伝子工学的な手法による蛋白質の分子設計は食品蛋白質の高度利用に資する情報を得ることができ、その産業的利用にインパクトを与える可能性を秘めている。本研究ではこうした視点から、リゾチーム、α-ラクトアルブミン、オボインヒビターなどの生物活性を有するタンパク質を高度利用するための基礎的知見をうるために、遺伝子工学的な手法で分子設計したタンパク質を酵母で発現分泌し、以下のような興味深い結果を得た。(1)リゾチームを酵母P.pastorisで発現分泌させ、リゾチームの疎水性内部パッキングを強化すると構造安定化リゾチームが得られることを明らかにした。(2)ヤギのα-ラクトアルブミンはリゾチームと構造的に相同性が高いが、その機能は異なっている。α-ラクトアルブミンはAsn^<45>-Asp^<46>-Ser^<47>,Asn^<74>-Ile^<75>-Ser^<76>の2箇所にN-型糖鎖付加シグナルが存在するが、動物細胞では大部分が非グリコシル型蛋白質として分泌する。酵母P.pastorisにおいてαラクトアルブミンを発現分泌させるとグリコシル化αラクトアルブミンと非グリコシル化αラクトアルブミン両方が分泌することが示された。また、45位のAsnをAspに置換すると非グリコシル化αラクトアルブミンが著しく多量に発現分泌することが示された。このグリコシル化αラクトアルブミンがリポポリサッカライドと同様の濃度でマクロファージを著しく活性化し、ネコ乳癌細胞とマクロファージ共存下でグリコシル化αラクトアルブミンを10マイクログラム添加することにより、乳癌細胞がアポトーシスを起こすことを明らかにした。(3)卵白に存在するオボインヒビターを酵母P.pastorisで発現分泌させ、その特性を調べた。オボインヒビターはトリプシン、キモトリプシン、エラスターゼの阻害ドメインをもつ。本研究では各ドメインを遺伝子工学的に個々に断片化し、その性質を調べ、キモトリプシンドメインとエラスターゼドメインの阻害様式を明らかにした。また、トリプシンとキモトリプシンドメインに糖鎖付加シグナルが存在するために、グリコシル化および非グリコシルオボインヒビターが存在することを明らかにし、糖鎖付加により、阻害活性が影響を受ける可能性を示した。遺伝子工学的な手法で食品タンパク質の分子設計を行い、高機能化を目的として研究を進めた。そのために、第一にαラクトアルブミンを酵母Pichia pastoris発現系で分泌し、その機能を検討した。αラクトアルブミンcDNAをPichia pastorisに導入するとグリコシル化αラクトアルブミンが優先的に分泌することが明らかになった。これはαラクトアルブミンは元来N型糖鎖付加シグナル配列(Asn-X-Thr/Ser)を2箇所持っているためで、酵母ではグリコシル化が起こりやすい事を示す。得られたグリコシル化αラクトアルブミンはマクロファージを強く活性化する作用を有するが、グリコシル基を除去するとその活性は低下することが示された。