hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
酸化ストレス抵抗性を有する変異型チャネルの導入による抗老化への挑戦

・外因性ROS及び個体の加齢により小脳プルキンエ細胞のNICR及びCa2+放出チャネルのNOによる化学修飾であるS-ニトロシル化が阻害されることが示された。・酸化シグナルによる化学修飾であるジスルフィド化を選択的に検出する生化学的手法を確立し、外因性ROS及び個体の加齢による影響を調べたところ、シグナルの有意な上昇が見とめられた。・これらの結果から酸化シグナルはジスルフィド結合を形成することでS-ニトロシル化を阻害し、S-ニトロシル化依存的な現象であるNICRを阻害する可能性が示された。・さらに再構築系を用いた実験により、ジスルフィド結合に関与するシステイン候補を同定した。本研究では、まずマウス小脳プルキンエ細胞をモデル系として、外因性の活性酸素種(ROS)および加齢(内因性ROS)によりリアノジン受容体(RyR)が酸化修飾を受けることで、NO依存的Ca放出(NO-induced Ca release; NICR)が阻害されることをイメージングおよび生化学的手法により確認することを目的とする。さらに培養細胞系を用いて、酸化修飾によるNICR阻害において決定的な役割を果たすアミノ酸残基を同定し、将来的には、ROSによる機能阻害が起こらないようアミノ酸置換を導入したCa2+放出チャネルを発現するノックインマウスを作成し、加齢もしくはROSによる分子・細胞・組織・個体レベルでの生体機能低下を防御できることを示すとともに、寿命への影響についても調べることを視野に入れている。H23年度の研究により、外因性ROS及び個体の加齢によりプルキンエ細胞のNICRが阻害されること、さらにNICRの阻害に伴い、RyRのNOによる化学修飾であるS-ニトロシル化が阻害されることが明らかになっていた。H24年度は、外因性ROSおよび個体の加齢によりRyRに酸化シグナルによる化学修飾であるジスルフィド化が蓄積することを生化学的に示すこと、NICRに必要なRyRのシステイン残基とジスルフィド結合を形成することで、酸化シグナルによるNICRの阻害において決定的な役割を果たすシステイン残基を同定することを目標として研究を進めた。研究代表者は、ジスルフィド結合を特異的に還元し、ビオチンでラベルすることで生化学的に検出する方法を確立し、外因性酸化シグナルにより、NICRが阻害されるとともにRyRのジスルフィド結合が増加することを明らかにした。さらに、NICRに必要なシステインとジスルフィド結合を形成し、NICrの阻害に関与するシステイン残基の同定に成功した。本研究課題では先ず、マウス小脳プルキンエ細胞をモデル系に、外因性の活性酸素種(ROS)及び加齢によりリアノジン受容体(RyR)が酸化修飾を受けることで、新規細胞内カルシウム(Ca2+)放出機構、一酸化窒素(NO)依存的Ca2+放出(NO-induced Ca2+ release; NICR)が阻害されることをイメージング及び生化学的手法により確認する。さらに酸化修飾によるNICR阻害において決定的な役割を果たすアミノ酸残基を同定し、将来的にはROSによる機能阻害が起らないことが期待されるアミノ酸置換を導入したCa2+チャネルを発現するノックインマウスを作製し、加齢もしくはROSによる分子・細胞・組織・個体レベルでの生体機能低下を防御できることを示すことを目指す。平成23-25年度に行われた研究により、以下のような結果が得られた。・外因性ROSおよび個体の加齢によりプルキンエ細胞のNICR及びRyRのNOによる化学修飾であるS-ニトロシル化も阻害される。さらに、酸化シグナルによる化学修飾であるジスルフィド化を選択的に検出する生化学的手法を確立し、外因性ROSおよび個体の加齢による影響を調べたところ、シグナルの優位な上昇が認められた。したがって、酸化シグナルはジスルフィド化を形成することでS-ニトロシル化を阻害し、S-ニトロシル化依存的な現象であるNICRを阻害する可能性が示唆された。・培養細胞にNICRに必要なシステインの近傍のシステインを一つずつアラニンに置換したRyRを導入し、酸化試薬処理に対するNICR阻害が見られないことを指標に、ジスルフィド結合に関与するシステイン候補の同定を行った。その結果、或るシステインをアラニンに置換したRyRにおいては、NICRが酸化試薬処理により阻害されなかったことから、このシステインをジスルフィド結合に組み込まれるシステインの候補とした。平成23年度は、当初の研究実施計画に基づき、先ず、小脳プルキンエ細胞における一酸化窒素依存的カルシウム放出(NICR)が個体の加齢および酸化シグナルにより阻害されることをカルシウムイメージング法を用いて検証した。生後18ヶ月齢以上のマウスより得られた小脳急性スライス標本上のプルキンエ細胞では、一酸化窒素(NO)供与体(NOドナー)投与によるカルシウム上昇、すなわちNICRの阻害が見られた。

NICRはNOによる1型リアノジン受容体(RyR1)の活性化によるものであることがすでに示されているが、同じRyR1のカフェインに対する応答、すなわちCICRには阻害が見られなかった。したがって、加齢個体小脳で見られるNICRの低下はRyR1発現量の低下によるものではなく、NICRの特異的阻害によるものであることが明らかになった。引き続き、生後1ヶ月齢の若齢個体由来の小脳急性スライス標本を過酸化水素などの酸化試薬で処理すると、老齢個体と同様にNICRの特異的阻害が見られた。これらの結果から、酸化シグナルによるNICRの特異的阻害が示された。さらにNOによるRyR1のS-ニトロシル化が個体の加齢および酸化シグナルにより阻害されることを示すため、ビオチンスウィッチアッセイシステムを立ち上げた。現在までに、NO供与体によるS-ニトロシル化の誘導と酸化試薬処理による阻害を示す予備的データが得られており、さらに定量性をよくするため、システムの改良中である。一方、酸化試薬によるジスルフィド結合形成に関与するシステインを同定するため、CHO細胞に野生型、および変異型RyR1を導入し、酸化試薬処理がNICRに及ぼす影響を解析したところ、少なくとも、或るシステインがジスルフィド結合形成に関与することを示唆するデータが得られた。H24年度の研究における最も大きな進展は、研究実績の概要にもあるように、NICRに必要なRyRのシステインとジスルフィド結合を形成し、NICRの阻害に寄与していると考えられるシステインを同定できたことである。RyRは約5000個のアミノ酸より構成される巨大な分子であり、約100個のシステインを含むとされている。したがって、これらのシステインを一つずつアラニンに置換した変異型RyRを培養細胞に導入し、それぞれについて酸化シグナルによるNICRの阻害が解除されるかどうかをイメージング法を用いて調べてゆくことでジスルフィド結合を形成するシステインを同定することは、多大な時間を要することが予想され、H24年度以内に目的のシステイン残基を同定することは困難であると予想されていた。しかし幸運にも、比較的初期の段階で、或るシステインをアラニンに置換したところ、その変異型RyRが酸化シグナル抵抗性を有することを示すデータが得られ、H24年度内に目的とするシステインが同定された。また、生化学的手法によりRyRのジスルフィド結合を検出する方法の確立にも成功した。解析に用いる予定だった老齢マウス個体が死んでしまったため、老齢個体の小脳RyRにおけるジスルフィド結合の増加を、この新たに確立した手法を用いて検出できなかったのは残念であるが、本研究計画全体において最も律速段階になると思われる研究が大きく進展したことの意義は大きいので、自己評価を当初の計画以上に進展していると表現しても差支えないものと判断した。
リーマン面の等角的埋め込みの多面的研究

本研究課題では1つのリーマン面を別のリーマン面に等角的に埋め込む問題とその周辺に横たわるさまざまな問題を論じることが計画された。特に、物理現象など、直接的にリーマン面論との関係の意識されることの少ない分野との関わりも将来の展開を視野に入れて考慮しようとした。具体的な成果としては、開いたトーラス(種数1の開リーマン面)の通常のトーラスへの等角的な埋め込みとその流体力学的な意味について、新しい結果が得られた。例えば、楕円的な面の上のジューコフスキー変換が初めて調べられた。その結果は95年夏にハンブルクで開かれた国際学会で発表され、その概要はプロシ-ディングにも掲載される。また、境界成分が唯1つの対称な開トーラスの場合には、その境界を閉トーラス上の直線分として実現することを以前に示したが、この際直線分の長さがその傾きとともにどのような変化を見せるかという問題を新たに取り上げた。この問題は、この研究課題の下で、数値的にはほぼ完全に解決され、数式処理的な扱いも相当展開された。さらにその抽象的な取り扱いが目下進行中である。全く一般の、(もちろん種数有限の)開リーマン面についても、その閉リーマン面への等角的な埋め込みの集合の中での理想境界像の振る舞いについて、ドイツ連邦共和国ゲラルト・シュミーダー教授との、メイルなど通信による共同研究が進行中であるが、発表までにはさらに日時を要する。自己等角写像のなす不連続群の作用をもつリーマン面の上で、従来考察されたことのなかった「領域とその上の等角計量に関する極値問題」を論じた。これについては、ロンドン数学会の雑誌における発表に続く展開が進行中である。不連続群の基本領域に関する新しい結果も得られたが、これは発表準備中であり、業績欄には挙げていない。その他関数論に限定することのない広範な数学の分野からの補助的な情報を、代表者が分担者から得ることができたことは大きな収穫であった。またそれぞれの分担者は、この研究課題の下で新しい知見を得たが,紙幅の都合もあってその詳細は割愛する(業績欄参照)。
免疫電顕法によるケラトヒアリン顆粒の多様な形態と機能の解析

ヒト正常皮膚、および尋常性乾癬・水疱型先天性魚鱗癬様紅皮症においてケラトヒアリン顆粒構成蛋白であるフィラグリン、ロリクリンの局在を他の角化関連蛋白とともに免疫電顕法により明らかにした。これにより角化異常症におけるケラトヒアリン顆粒の形態と含有物質の変化の意義を検討した。正常表皮ではケラトヒアリン顆粒はおもにフィラグリン前駆体であるプロフィラグリンから構成されており、ロリクリン陽性の顆粒は包皮をのぞき極めて稀であることがわかった。角質細胞ではフィラグリンはケラチン線維間に彌慢性に分布し、ロリクリンは辺縁帯に一致して局在した。他の辺緑帯前駆体蛋白であるインボルクリンは初期の辺縁帯にのみ陽性であった。新生仔マウスではロリクリン含有ケラトヒアリン顆粒が豊富であるのと対照的であり、ケラトヒアリン顆粒の成分に種差、部位差があることがわかった。尋常性乾癬の皮疹部表皮ではケラトヒアリン顆粒は消失ないし形態的異常を示し、プロフィラグリンとロリクリンの発現は低下していた。これに対してインボルクリンの発現は表皮中層からみられ、角質辺縁帯はインボルクリンに強い陽性反応を示した。乾癬において観察される異常なケラトヒアリン顆粒の出現と菲薄な辺縁帯の形成を特徴とする角化異常は、プロフィラグリン、ロリクリンの発現低下と、早期のインボルクリン主体の辺縁帯形成による角化過程の頓挫としてとらえられると考えた。水疱型先天性魚鱗癬様紅皮症では滴状のフィラグリン陽性ケラトヒアリン顆粒に加え、トリコヒアリン陽性顆粒が観察された。ロリクリンは顆粒としては観察されなかったがケラチンの異常凝集塊上に反応が見られた点が特徴的であった。本症の1次的な異常であるケラチンの分子異常により、これとフラグリン、ロリクリンとの反応パターンが変化したと考えた。また、トリコヒアリンの異所性発現は表皮過増殖との関連が示唆された。
ソリトン伝播に対する不規則性の効果の理論的研究

ソリトン伝播に対する系の単一の不純物の影響は調べられているが、系に不規則に分布した不純物の影響は解析されていない。そこで、数値的および解析的なアプローチにより、ソリトン伝播に対する不規則性の影響を明らかにする。主に光ファイバー中のソリトンの散乱過程を解析し、光ファイバー通信技術の改善、また光ファイバーの局所的な構造をコントロールする事でビットレートの向上を目指す。また、戸田格子モデルを用いたソリトンの散乱過程を解析し、新しい知見が得られた。1.複数の光ファイバーを接続した系におけるソリトン伝播を記述するモデル方程式を数値的に解析した。また、摂動理論を用いた解析的手法を適用し、数値計算の結果と比較した。その結果、各ファイバーにおいてソリトンの振幅は大きく変動するにも関わらず、その変動の仕方はソリトンの長期的な減衰率にはあまり影響を与えないことがわかった。2.単一の非一様領域をもつ光ファイバー中のソリトン伝播の解析に関して得られた研究成果をまとめ、学術論文を執筆した。3.戸田格子モデルに線形媒質領域を入れ、線形媒質によるソリトンの散乱過程を解析した。主に数値計算を行ない、すべてのパラメーターに対して透過係数を系統的に求めた。線形媒質の特性を操作する事によりソリトンの透過性を飛躍的に高められる事を示した。また、その最適な特性値を解析的に算出した。4.戸田格子モデルを用い、1次元の戸田格子で厳密解であるソリトンを2次元の系に入射し、境界における散乱過程と2次元媒質中での減衰過程を数値的に解析した。ソリトン伝播に対する単一の不純物の影響は調べられているが、系に不規則に分布した不純物の影響は解析されていない。そこで、数値的及び解析的なアプローチにより、ソリトン伝播に対する不規則性の影響を明らかにする。主に光ファイバー中のソリトンの散乱過程を解析し、光ファイバー通信技術の改善、また光ファイバーの局所的な構造をコントロールすることでビットレートの向上を目指す。実際の光ファイバー通信では複数の光ファイバーを接続したものを用いるため、光ソリトンは特性の異なる複数のファイバー中を伝播する事になる。そこで、ファイバー特性が異なる領域(非一様領域)をもつ光ファイバーにソリトンを入射するモデルを扱い、ソリトン伝播の特性を数値的に解析した。光ファイバーに入射された1次のソリトンが、非一様領域を透過後、複数のソリトンの束縛状態(高次のソリトン)になる場合がある事を示した。光ファイバーを特徴付けるパラメーターの様々な値に対して透過波を解析し、高次のソリトンが出現するパラメーターを系統的に調べた。その結果を踏まえ高次のソリトンが出現する条件を示した。また、光ファイバーのパラメーターが漸近的な値をとる場合について、透過波の特性を解析的手法で示した。その漸近値が数値計算の結果の漸近値と一致する事を示した。光ファイバーの非一様性の強さに依存して変化する物理量を見つけた。逆にその物理量を測る事で、ファイバーの非一様性の強さを測定する事を提案した。
土壌環境シグナルから根毛形成制御に至る情報伝達機構

根毛伸長の正の制御因子であると考えられるPIP5キナーゼ、PIP5K3の機能解析を進めた。T-DNA挿入型変異体の独立な系統を4系統に増やし、根毛の形態的変化を観察した。その結果、それら変異体の根毛は伸長において抑制されているが、それ以外に異常な形態は見られないことが明らかになった。変異体遺伝子および転写産物の構造解析の結果より、それらの内少なくとも2つでは機能的なタンパク質が殆ど発現していないことも判明した。これらのことから、PIP5K3以外のPIP5Kが根毛で機能していること、およびPIP2の量的変化は根毛伸長に特異的に影響を与えることが示唆された。このことは、PIP5K3の過剰発現により根毛伸長が促進されること、および伸長の活発な根毛ほど先端にPIP5K3-YFPが多量に存在することと併せて、根毛先端のPIP2の量が根毛伸長の重要なパラメーターとなっていることを強く示唆するものである。PIP5K3の細胞内局在性を詳しく調べるためにPIP5K3-YFPを発現する根毛をFM4-64で短時間処理し、YFPとFM4-64の多重蛍光観察を行った。その結果、PIP5K3-YFPが最も強く局在する部位は根毛先端の細胞膜であることが確かめられた。誘導的過剰発現実験の結果、PIP5K3の過剰は根毛伸長の促進以外に根毛の歪曲、および単一の表皮細胞からの複数の突起の形成をもたらすことが観察された。また、PIP5K3-YFPは根毛突起が全く見られない未熟な根毛細胞においても、根毛突起が予定される場所に局在することが明らかとなった。これら2つの結果は低分子Gタンパク質ROP2を用いた同様の実験で報告されているものと酷似しており、PIP5K3とROP2が同一の径路で根毛形態形成の制御に関わることを強く示唆している。根毛は地下外部環境との境界を形成し、土壌からの物質輸送において中心的な役割を果たす。根毛の発生および伸長は遺伝的プログラムにより規定されているだけでなく、環境要因によっても大きく影響を受ける。根毛の役割から考えると、土壌栄養素条件はそのような環境要因として特に重要であるが、土壌栄養素条件が根毛の発生パターンや、形態に反映されるに至る情報伝達過程に関しては全く判っていない。本研究では、根毛を土壌栄養素吸収のための機能構造と捉え、無機栄養素の濃度という環境シグナルが、根毛形態制御へと変換される分子機構について解明しようと試みた。PLDz2のリン酸欠乏時における役割を調べるために、機能欠失型突然変異体におけるリン酸欠乏応答を解析した。しかし、様々なリン酸濃度条件において、植物体全体の生育、根の伸長、根毛の伸長の全てで野生型植物体と同様であった。このことから、可能性の一つとして、PLDz2と重複的な機能を有する遺伝子の存在が考えられた。根毛伸長の正の制御因子と考えられるPIPキナーゼ、PIP5K3の機能解析を行った。その遺伝子の突然変異体では根毛の伸長が抑制され、また、過剰発現により根毛の伸長が促進された。YFPとの融合タンパク質PIP5K3-YFPのPIP5K3プロモーターによる発現はpip5k3突然変異体の形質を相補することができた。このタンパク質の細胞内局在性を観察した結果、PIP5K3-YFPは根毛発生の極初期段階から根毛先端の細胞膜およびその周辺の細胞質に局在し、根毛伸長の終止とともに速やかに消失することが判明した。これらのことから、PIP5K3は、根毛先端において根毛伸長を量的に制御する因子であると考えられる。ちなみに、pip5k3突然変異体においてもリン酸欠乏による根毛伸長の促進は起きるので、リン酸欠乏に応答するPIP5Kが他に存在することが考えられる。

また、PIP5K3-YFPは根毛突起が全く見られない未熟な根毛細胞においても、根毛突起が予定される場所に局在することが明らかとなった。これら2つの結果は低分子Gタンパク質ROP2を用いた同様の実験で報告されているものと酷似しており、PIP5K3とROP2が同一の径路で根毛形態形成の制御に関わることを強く示唆している。
機能性複素環化合物の分子設計

ヘテロ原子や複素環化合物の特性を生かして選択的な合成反応を開発することにより機能性複素環化合物の分子設計を行なうことを本研究の目的としてきた。この間の成果を以下に述べる。1.複素環周辺ジエンの[4+2]環化付加反応;ジエン発生においてマグネシウム(II)塩と有機塩基の組合せがブチルリチウム等の強塩基に替わるものとして有用であることを明らかにした。本法をもちいて2,4(1H,3H)-ピリミジンジオン、4(1H)-ピリドン、および△^3-ピラゾリン-5-オン系においてマグネシウムジエノラートを発生させオレフィンやトロポノイドとの選択的な環化付加反応を行なうことにより新規環系を含む多くの新規複素環化合物を合成した。2.複素環周辺部での1,3-双極子環化付加反応とエン反応;5-ホルミル-2,4(1H,3H)-ピリミジンジオンとヒドラジン、ヒドロキシルアミンとの反応で生成するヒドラゾン、オキシムでは1、2-水素移動によりアゾチンイミンやニトロン中間体が容易に発生し分子内付加反応を行なうことが明らかとなった。一方、アミノ酸誘導体との反応ではアゾレチンイリド環化付加とイミンを親エン部とするエン反応が競合した。後者については分子軌道法計算をもちいてその経路を解明した。3.カルボジイミドの求核性を利用しての環化反応;カルボジイミドの環化反応により薬理活性が期待できる複素環化合物を選択的に合成する経路を明らかにした。この環化を連続的に行い鎖状カルボジイミドからの多環性複素環化合物合成へと応用した。反応性複素環の合成法の確立とその反応性の評価1.複素環周辺ジエンの調整とDielsーAlder反応(1)5ーホルミルー6ーメチルウラシルに塩化マグネシウム(MgC1_2)/DBUをジクロロメタン中で作用させると、マグネシウムジエノラ-ト(A)が生成する。ジエノラ-ト(A)は反応活性であり種々の親ジエン成分と極めて高いレギオ及び立体選択的な[4+2]環状付加反応を行い、キナゾリン誘導体を与えた。(2)活性メチル基の存在と、エノ-ル化の際キレ-ティングできるカルボニル基の配置があれば、他の複素環系においても周辺ジエンの生成が可能なものと考え、Mgcl_2/DBU法により、いくつかの複素環周辺ジエン(BD)の生成に成功した。現在、その反応性についての知見を得るために、[4+2]環状付加反応を検討している。2.ピリミジン系のおける分子内1,3ー双極性環状付加反応による3環性ピリミジン化合物の選択的合成ピリミジン系におけるアゾメチンイミンの分子内反応は高収率でピラゾロ[3',4':4,5]ピリド[2,3ーd]ピリミジン誘導体(E)を立体選択的に与えた。一方、対応するホルミル体とαーアミノ酸誘導体との反応によるアゾメチンイリド生成はNー置換体の場合のみ起こり、対応するピロロ[2',3':4,5]ピリド[2,3ーd]ピリミジン誘導体(F)を与えた。Nー無置換体の場合はピリミド[4,5ーb]アゼピン誘導体(G)が得られた。アゼピン環生成は大変興味がもたれ反応経路について現在検討を行なっている。複素環周辺部は電子的偏りのある部分で何らかの反応が起こりえる場と考えることができる。今年度の研究において、周辺部ジエンを用いた環化反応;1,3-双極子環化反応とエン反応の競合;生物活性物質合成への連続環化反応による新経路の提案を行った。

・交差共役型アルデヒド基をもつピリミジン及びピラゾール周辺部ではジエノラートが形成され、オレフィン類との環化反応はキナゾリン及びインダゾール誘導体の合成法として有用であることを明らかにした。・交差共役型のアルデヒド基或いはそのイミン体はエン反応において良好な親エン部となることを明らかにした。即ち、6-(2-アルケニル)アミノ-5-ホルミルウラシルとアミノ酸誘導体との反応ではアミノ酸窒素原子上の置換状態により2つの反応様式をとる。N-置換アミノ酸誘導体との反応では脱水縮合してアゾメチンイリド中間体を与え分子内環化付加体が生成した。一方,N-無置換アミノ酸誘導体ならびに1級アミンとの反応ではイミン体を経てイミンエン反応によりアゼピン体が生成した。類似のホルミル基をもつ4-(2-アルケニル)アミノ-3-ホルミルクロメノンの反応でもアゾメチンイリド生成とカルボニルエン反応が競合した。このようなタイプIIIのエン反応の例は少なく反応の一般性についての検討が急務である。分子内にエステル部をもつカルボジイミドは2箇所の反応サイトを有しているために、1級アミンとの反応で2度の求核反応により母核複素環部を構築できる。アルケニルアミンを用いた場合は母核上でのヨウ素環化反応により5及び6員環を形成できた。これらの連続環化反応はレギオ選択的に進行し、生物活性が期待できる二環性グアニジン誘導体の容易な合成経路として注目される。
計算演奏的方法による音楽の知覚・認知の研究

音楽演奏における多様な演奏表現を比較的少数の規則によって生成することと、これによって生成された演奏が主観的にどのように聴収されるかを記述するという問題は、音感性情報科学の重要な問題と考えられる。本研究はピアノ音楽について、実演奏の物理量を分析するソフトウェア、ならびに提案した演奏モデルの概念に基づくピアノ自動演奏系を用いて、演奏表現の物理量とその印象評価の関係を実験的に検討することを目的としたものであり、次の研究成果が得られた:(1)演奏意図の演奏モデルによる実現と主観的評価との対応関係の実験的検討(音響学会論文誌論文)、(2)ペダリングと演奏音質との関係の分析、とくに演奏の個人差に関する問題(ストックホルム音楽音響会議発表)、(3)演奏の物理的な速度と心理的な速度感との関係、とくにインテンポ感の問題(第3回国際音楽知覚認知会議発表(予定))、および(4)自動演奏系によりさまざまなスタイルで演奏されたピアノ音楽音のもつ物理的特性とその演奏法との関係の考察(第14回国際音響学会議発表)。これらはいずれも、演奏表現の定量的分析という基本的な枠組みに沿ったものであって、前3者はそれぞれが演奏表現の物理量と印象評価との対応を具体的に示したというだけでなく、そのような問題を扱うための新しい分析方法を提案したという点でオリジナルな成果である。後1者はそれ自身で完結した研究ではなく、今後音場(コンサートホール等)における最適な演奏者とそのための演奏法を研究するための基礎を与える点に意味を持つ。1.演奏情報の抽出モデル。速度変動を3成分にわけるTRI分解(T=トレンド、R=リズム、I=雑音)の数学モデルを構築した。このモデルの記述力を検証するために、8人の演奏家(アラウ、アシュケナ-ジ、ハラシェビッチ、フランソワ、ブ-ニン、スメンジアンカ、リパッティ、中村)による同一のピアノ曲(ショパンワルツ第10番)の演奏における速度変動のプロフィ-ルをCD等の音源から採取してTRI分解にかけた。その結果、演奏家ごとに特徴ある3拍子の緩急リズムとフレ-ジングアゴ-ギグが同定された。今のところこの一曲のみの分析だけであるが、このTRI分解モデルの有効性は充分あると考えられる。2.計算演奏の生成と聴取実験。ショパンのピアノ曲(夜想曲第1番)を音素材に選び、設定した6通りの表現意図(静かな、感傷的な、情熱的な、幼さの残る、あっさりした、重厚な)を演奏モデルにもとづいて計算機支援により生成した。これを音楽大学生49名にSD法を用いて印象評価してもらい、多次元尺度法等のデ-タ解析手法により6演奏の心理空間への布置とその空間の意味付けを行った。演奏の制作者(我々実験者)の持つ表現意図と聴取者の印象評価との差異、ならびに音楽経験の種類の違いによる聴取者の判断の差異等の興味深い結果が得られた。以上のうち、1.は現在論文に取りまとめ中であり、2.は第2回音楽知覚認知国際会議(1992年2月、米国ロスアンゼルス)にて発表した。(1)演奏情報の抽出ピアノ演奏におけるぺダリング情報を記述する方法として「時間正規化ペダリング関数」の概念を導入した。これを用いると、同一曲を複数のピアニストが演奏した場合のペダリングの個人別の特徴、個人間の差異等を客観的に分析することが出来る。ショパンのワルツ第9番の一節を8人のピアニストが3種類の演奏表現(自分のベストの表現、あっさりとした、悲しみをこめて)を意図して演奏した24演奏について、正規化ペダリング関数を求め、これから距離行列を算出し、多次元尺度法によって2次元空間に布置した。さらに、この布置と演奏の印象評価との対応を重回帰分析によって求めた。その結果、ペダルの平均深さと音の響きの印象や、演奏の全体的な好ましさなどとの関係を見いだすことが出来た。以上により、ピアノ演奏におけるペダリングの個人差の問題に対する物理・心理的な一つの分析方法を提示した。(2)計算演奏と聴取実験

この問題については、論文「ピアノの計算演奏に対する聴取者の反応ーショパンのワルツの一節による実験」をまとめた。(日本音響学会誌49巻1号)。(3)演奏と室内音響条件との関係無響室録音したピアノ演奏音の短時間自己相関関数をいろいろな曲について求め、ピアノ音楽信号の音響的特性を把握する事を行ってきた。さらにこの音楽信号に対して信号処理的に第1反射音を加えたもの場合の遅れ時間の聴感上のプリファレンスとの関係を実験的に考察する研究をはじめた。(1)演奏情報の抽出前年度に行ったピアノ演奏におけるペダリング情報の抽出と個人差分析についてさらに詳しい検討を加えた結果、ペダルの平均深さの大小と聴取者が感じる演奏音の響きの大小の間に強い相関があることを見いだした。以上、ペダリングについての一連の研究成果は他に例を見ない新しいものである。これを、1993年夏のストックホルム音楽音響会議Stockholm Music Acoustics ConferenceSMAC93に論文発表した。(2)インテンポ演奏の物理的速度と心理的速度メトロノーム的な演奏(時間的に楽譜通りの音価で進む演奏)が主観的に速度一定な演奏にならないことを、典型的な一つの音素材(モーツァルトのピアノソナタK545第3楽章の一節)について示した。その内容は、職業ピアニスト達の演奏の物理的計測、および速度変化を系統的に変えた一連の自動演奏についての聴取実験よりなる。両者は定量的に良い一致を示した。これにより、インテンポ感をもつために必要な物理的速度の変動条件に一つの知見が得られた。この結果は1994年夏の第3回国際音楽知覚認知会議3rd ICMPC(ベルギー)で発表する予定である。(3)ピアノ演奏音の自己相関特性前年度に引き続き、無響室録音したピアノ演奏音の短時間自己相関関数を研究したが、今回はとくにアルペジオ的なフレーズと半音階的なフレーズをさまざまな演奏法で自動演奏した音素材を詳しく分析した。この結果は現在整理中であるが、これによりピアノ音楽信号の音響的特性をより精密に把握する事が出来ると期待される。
弓部大動脈瘤手術に対する補助手段としての一側脳灌流法の頭蓋内血流の評価

1.コントロール(成人開心術症例)成人開心術10例において超音波ドプラ法による眼動脈および総頚動脈血流速測定と電磁血流計による腕頭動脈血流量の測定を行った.体外循環(CPB)の灌流量を2.4,2.2,2.0,2.2,2.4l/min/m^2と変化させた時、眼動脈最大血流速(OAVmax)は総頚動脈最大血流速や腕頭動脈血流量よりCPBの灌流量の変化に応じた推移を示した.また,同時に検討した末梢血管抵抗からCPB中は眼動脈の血管抵抗の変化は小さく、OAVmaxはCPBの灌流量に規定されると考えられた.したがって、OAVmaxはCPB中の脳内血流動態のモニターとして有用であると考えられた.2.一側脳灌流法(SCP)研究期間内に弓部大動脈瘤手術の2症例からデータが得られた.OAVmaxはCPB前(control)は右0.19m/sec,左0.23m/sec,SCP前はR0.09m/sec,L0.10m/sec,SCP中は600-700ml/minの送血量において送血側(R)0.07m/sec,非送血側(L)0.06m/secであった.controlを100%としてCPB開始後,SCP前,中,後,CPB終了後の変化率を表すと送血側は73.7%,47.4%,36.8%,121.1%,231.6%,非送血側は82.6%,43.5%,26.1%,152.2%,217.4%であった.脳組織酸素分圧の測定ではSCP中は酸化ヘモグロビン,チトクローム酸化レベルは不変であり,頚静脈酸素飽和度も良好に保たれた.乳酸,ビルビン酸はSCPにより増加したが左右差はなかった.眼動脈血流速は一側脳灌流時では送血側に加え非送血側でも良好に測定され,一側脳灌流時の頭蓋内血流動態のモニターとして有用であった.また.本研究により一側脳灌流法の安全性を確かめられた.1.コントロール(成人開心術症例)成人開心術10例において超音波ドプラ法による眼動脈および総頚動脈血流速測定と電磁血流計による腕頭動脈血流量の測定を行った.体外循環(CPB)の灌流量を2.4,2.2,2.0,2.2,2.4l/min/m^2と変化させた時、眼動脈最大血流速(OAVmax)は総頚動脈最大血流速や腕頭動脈血流量よりCPBの灌流量の変化に応じた推移を示した.また,同時に検討した末梢血管抵抗からCPB中は眼動脈の血管抵抗の変化は小さく、OAVmaxはCPBの灌流量に規定されると考えられた.したがって、OAVmaxはCPB中の脳内血流動態のモニターとして有用であると考えられた.2.一側脳灌流法(SCP)研究期間内に弓部大動脈瘤手術の2症例からデータが得られた.OAVmaxはCPB前(control)は右0.19m/sec,左0.23m/sec,SCP前はR0.09m/sec,L0.10m/sec,SCP中は600-700ml/minの送血量において送血側(R)0.07m/sec,非送血側(L)0.06m/secであった.controlを100%としてCPB開始後,SCP前,中,後,CPB終了後の変化率を表すと送血側は73.7%,47.4%,36.8%,121.1%,231.6%,非送血側は82.6%,43.5%,26.1%,152.2%,217.4%であった.脳組織酸素分圧の測定ではSCP中は酸化ヘモグロビン,チトクローム酸化レベルは不変であり,頚静脈酸素飽和度も良好に保たれた.乳酸,ビルビン酸はSCPにより増加したが左右差はなかった.眼動脈血流速は一側脳灌流時では送血側に加え非送血側でも良好に測定され,一側脳灌流時の頭蓋内血流動態のモニターとして有用であった.また.本研究により一側脳灌流法の安全性を確かめられた.1.眼動脈血流速度10例の成人開心術において体外循環前および中にドプラエコーで眼動脈血流速度の測定を行った。その結果、眼動脈血流速の平均は0.31±0.02m/secであり、体外循環中はポンプ流量の影響を受け前値の20-30%まで低下した。また、眼動脈血流は心拍出量およびポンプ流量の間に相関係数0.8以上の強い相関を示した。2.腕頭動脈血流量平成5年11月より電磁血流計用フロープローブが使用できるようになり、計4例の成人開心術において腕頭動脈血流とドプラエコーによる眼動脈血流の同時測定を行った。その結果、以下のことが判明した。(1)腕頭動脈血流量は体外循環前は心拍出量の約10%であり体外循環中はポンプ流量の約7%となった。したがって、体外循環により腕頭動脈血流量は30%減少したことになり、上記1で判明した眼動脈血流速の減少の割合と一致することがわかった。(2)腕頭動脈血流量の波形と眼動脈血流速の波形はほぼ同一のパターンを示すことがわかった。

これらのことから体外循環により内頚動脈を介し頭蓋内に送られる血流は頭蓋内動脈の分枝である眼動脈の血流を測定することにより間接的に測定することができると考えられた。3.今後の研究以上の知見を弓部大動脈瘤の手術で応用する。1.コントロール(成人開心術症例)成人開心術15例よりコントロールのデータが得られた.そのうち10例に眼動脈血流および総頸動脈血流測定と同時に電磁血流計を用いた腕頭動脈血流量の測定を行いえた.その結果,体外循環前の眼動脈最大血流速(OAVmax)は0.22±0.12m/sec,総頸動脈最大血流速(CAVmax)は0.61±0.41m/sec,腕頭動脈血流量(BAflow)は492±211ml/minであった.体外循環前値を100%とする体外循環中の灌流量を2.4,2.2,2.0,2.2,2.4l/min/m^2と変化させ,さらに体外循環後まではOAVmaxは65.3,56.5,42.0,57.9,73.6,117.5%,CAVmaxは70.4,69.0,49.2,113.6,140.9%,BAflowは84.3,39.5,59.7,50.5,113.1,144.9%と変化した.この結果,眼動脈血流速は総頸動脈血流速,腕頭動脈血流量より体外循環の灌流量の変化に応じた推移を示すことがわかった.これは同時に検討した末梢血管抵抗の変化から,体外循環中では眼動脈の血管抵抗の変化が小さく,眼動脈血流速は体外循環血流量に規定されるためと考えられた.したがって,体外循環中は眼動脈血流速の変化は灌流量の変化を示し,脳内血流動態のモニターとして有用であることがわかった.2.弓部大動脈瘤症例弓部大動脈瘤で脳分離体外循環を必要とした症例は本年度は1例のみであった.術中に近赤外線分光法による脳組織酵素分圧の測定,動静脈血中のガス分析,末梢血中の乳酸値の測定が施行できた.この結果からは一側脳灌流中は非灌流側でも脳組織酵素需要に対して十分な脳循環が保たれていることがわかり,さらに灌流側と非灌流側では動静脈血中のガス分析,末梢血中の乳酸値には差がなかった.しかし,眼動脈血流の測定は検討に十分なデータが得られず眼動脈血流の有用性は検討できなかった.今後も脳分離体外循環でデータ収集を続け,一側脳灌流法の有用性を明らかにしていくつもりである.
幼児の投・跳動作における定位・分化能力の発達 ―運動遊びプログラムの効果の検討―

本研究の目的は,1幼児期の定位能力・分化能力の発達的特性を明らかにし,2それらの能力を形成する発達特性に適した運動遊びプログラムを構築することにより,幼児期における発育発達の問題解決に寄与することである。平成30年度は特に1について,跳動作に関する定位能力・分化能力の発達的特性の解明という研究課題を設定し研究を展開した。平成30年度の成果は,第1に,跳動作におけるコオーディネーションテスト(以下CT)を実施するにあたり,これまで筆者が実施してきたCTの研究から「幼児期の跳動作における定位能力・分化能力の発達的特性に関する研究:跳動作の質的変化との関連(日本体育学会第69回大会)」をまとめた。そこでは,跳動作に関する2つのCTにおける定位能力・分化能力の発達について,男女で発達時期が異なること,さらにそれぞれのテスト結果の平均値と着地姿勢に関係性があることが明らかとなった。第2に,3歳6歳までの幼児約400名を対象に跳動作における5つのCTと跳躍力を測定する立ち幅跳びを実施し,その発達的特性を「幼児期の跳動作における定位能力・分化能力の発達的特性に関する研究(II):テスト項目間の関連に着目して(日本発育発達学会第17回大会)」にまとめた。そこでは,跳躍力は年齢とともに発達するが,身体を運動課題に応じてコントロールする定位能力・分化能力は,ある年齢に停滞の段階が現れることが明らかとなった。第3に,動的なものに対して,予測してタイミングよくターゲットに跳躍するという課題のCTを実施し,「幼児期の跳動作におけるコオーディネーションテストの検討:動的なものに対する定位能力・分化能力に着目して(日本体育測定評価学会第18回大会)」にまとめた。そこでは,移動標的に対する跳動作の定位能力・分化能力の発達は,4歳前半の粗削りな段階から,5歳後半頃に安定することが示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は,幼児期の定位・分化能力を測定するテストの開発,実施及び発達を促す運動遊びの理論的・実証的分析を行い,1幼児期の定位・分化能力の発達的特性を明らかにし,2それらの能力を形成する発達特性に適した運動遊びプログラムを構築することにより,幼児期における発育発達の問題解決に寄与することである。そのために,I.投動作に関する定位・分化能力の発達に効果的な運動遊びの理論的・実践的解明,II.跳動作に関する定位・分化能力の発達的特性の解明という2つの研究課題を設定し研究を展開する。平成29年度は,投動作に関する定位・分化能力の発達的特性を明らかにしたこれまでの研究成果を継続し,Iの研究課題に取り組んだ。平成29年度の成果は,第1に,運動遊びプログラム作成のために「加納裕久(2018)幼児期における定位能力・分化能力の発達と運動遊びとの関連:保護者への調査を対象にして.人間発達学研究,(9),57-64」をまとめた。そこでは,コオーディネーションテストとアンケート調査の結果から,ボール遊びと鉄棒を合わせて行うことが,投動作における定位・分化能力の発達に影響を与えていることが明らかとなった。この結果をもとに現場との検討を重ね,運動遊びを介入した。第2に,運動遊び介入結果を「加納裕久他(2017)幼児期の投運動における定位能力・分化能力の発達的特性:運動遊びの介入が与える効果に着目して,スポーツ健康科学研究,39,9-17」としてまとめた。そこでは,(1) 4歳半前後の幼児に対しボール遊びや鉄棒遊びを介入することで投動作における定位・分化能力の発達が促されること,(2)性別や年齢層によって運動遊びの質を変えることにより,定位・分化能力の発達に効果が現れることが明らかとなった。とりわけ鉄棒を握る力の調整がボールリリース時のコントロールに関係があるのではないかと示唆された。平成29年度は,Iの研究課題「投動作に関する定位・分化能力の発達に効果的な運動遊びの理論的・実践的解明」を中心に研究を行った。とりわけ「的当て遊びと鉄棒遊びプログラムの作成」,「保育現場における運動遊びの介入」,「運動遊びの効果の分析」の3つの作業課題が中心となった。これらの結果から,運動遊びプログラム作成のために(1)「加納裕久(2018)幼児期における定位能力・分化能力の発達と運動遊びとの関連:保護者への調査を対象にして.人間発達学研究,(9),57-64」をまとめ,さらに運動遊び介入結果を(2)「加納裕久他(2017)幼児期の投運動における定位能力・分化能力の発達的特性:運動遊びの介入が与える効果に着目して,スポーツ健康科学研究,39,9-17」としてまとめた。また,平成29年度はIの研究課題と並行して,IIの研究課題「跳動作に関する定位・分化能力の発達的特性の解明」の作業課題である「跳動作に関する定位・分化能力のコオーディネーションテストの検討」に取り組んだ。コオーディネーションテストを検討するため,ドイツのコーディネーション理論における文献や資料の整理を行い,妥当だと考えられるテストを抽出したが,予備テストの実施,コオーディネーションテストの適正を十分に検証することができなかった。そのため,平成30年度に跳動作に関するコオーディネーションテストの検討を行い,保育現場において実施していく。

本研究の目的は,1幼児期の定位能力・分化能力の発達的特性を明らかにし,2それらの能力を形成する発達特性に適した運動遊びプログラムを構築することにより,幼児期における発育発達の問題解決に寄与することである。平成30年度は特に1について,跳動作に関する定位能力・分化能力の発達的特性の解明という研究課題を設定し研究を展開した。平成30年度の成果は,第1に,跳動作におけるコオーディネーションテスト(以下CT)を実施するにあたり,これまで筆者が実施してきたCTの研究から「幼児期の跳動作における定位能力・分化能力の発達的特性に関する研究:跳動作の質的変化との関連(日本体育学会第69回大会)」をまとめた。そこでは,跳動作に関する2つのCTにおける定位能力・分化能力の発達について,男女で発達時期が異なること,さらにそれぞれのテスト結果の平均値と着地姿勢に関係性があることが明らかとなった。第2に,3歳6歳までの幼児約400名を対象に跳動作における5つのCTと跳躍力を測定する立ち幅跳びを実施し,その発達的特性を「幼児期の跳動作における定位能力・分化能力の発達的特性に関する研究(II):テスト項目間の関連に着目して(日本発育発達学会第17回大会)」にまとめた。そこでは,跳躍力は年齢とともに発達するが,身体を運動課題に応じてコントロールする定位能力・分化能力は,ある年齢に停滞の段階が現れることが明らかとなった。第3に,動的なものに対して,予測してタイミングよくターゲットに跳躍するという課題のCTを実施し,「幼児期の跳動作におけるコオーディネーションテストの検討:動的なものに対する定位能力・分化能力に着目して(日本体育測定評価学会第18回大会)」にまとめた。そこでは,移動標的に対する跳動作の定位能力・分化能力の発達は,4歳前半の粗削りな段階から,5歳後半頃に安定することが示唆された。平成30年度には,IIの研究課題「跳動作に関する定位・分化能力の発達的特性の解明」を中心に研究を行う。まず第1に,平成29年度からの継続課題である「跳動作に関する定位・分化能力のコオーディネーションテストの検討」を行う必要がある。検討にあたっては,ドイツのコーディネーション理論における文献や資料を中心に妥当だと考えられるテストを抽出し,予備テストの実施を経て,コオーディネーションテストの適正を検証する。検討内容の一部については,日本体育学会第69回大会にて発表予定である。第2に,跳動作に関する定位・分化能力の発達的特性を明らかにすべく,保育現場において36歳の幼児を対象にコオーディネーションテストの実施及び保護者対象にアンケート調査を実施する(2018年6月8月予定)。実施にあたり,所属大学の研究倫理審査委員会にて倫理審査を受け,承認を得る予定である。第3に,コオーディネーションテスト結果より跳動作に関する定位・分化能力の発達的特性を検討,考察する。そして,コオーディネーションテストとアンケート調査の結果より,跳動作に関する定位・分化能力の発達に影響を与えている運動遊びについて明らかにする。これらの結果は,学会や学術論文で発表予定である(2019年3月予定)。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
細胞内生命金属動態を制御するタンパク質メタレーション

亜鉛(Zn)は、3,000を超えるタンパク質と結合(メタレーション)し、Zn結合タンパク質として多彩な生理機能を発揮する。Znが多数のタンパク質の中から目的タンパク質を探し当て、正しくメタレーションするためには、Zn輸送体によって細胞外から取り込まれたZnが、細胞内で目的タンパク質に正確に配送されるという一連の制御が不可欠となる。一方、Zn輸送体はある種の有害金属も輸送することから、メタレーションの過程は、有害金属の毒性発現制御とも密接に関わる。本研究では、Zn輸送体を出発点とするZnメタレーションの分子機序を明らかにし、さらに、その方法や成果を応用して有害金属毒性発現の分子機序の解明を目指す。
IL-6による骨髄腫細胞増殖刺激伝達分子の解析

骨髄腫細胞の増殖にはCD45によって制御されるsrc型PTKの活性化が重要であることから、その下流で働く刺激伝達分子を同定する目的で、(His_6)tag化したLynをIL-6依存性CD45^+骨髄腫細胞株ILKM2およびILKM8に強制発現させたところ、IL-6による細胞増殖が促進された。過剰発現したLynは恒常的に活性化されでおり、さらにphosphatidylinositol-3 kinase(PI3-K)およびAktの活性化が亢進していたが、STAT3とERK1/2のリン酸化は変化していなかった。これらの結果は以前の知見を支持するものであり、LynはSTAT3とERK112とは独立にIL-6による骨髄腫細胞増殖に寄与していることが確認された。また、PI3-K選択的阻害剤LY294002が細胞増殖を著明に抑制したことからLynの下流で活性化されるPI3-K刺激伝達系がIL-6による骨髄腫細胞増殖に重要であることが今回新たに解った。現在、(His)_6 tag化したLynを過剰発現するこれらの細胞の細胞抽出液をNi-beadsによりアフィニティー精製し、Lynと会合する分子群を質量分析法により同定しようと試みているところである。これにより、IL-6による骨髄腫細胞増殖におけるLynの下流で活性化される刺激伝達分子群をより綱羅的に解析できると考えている。一方で現在、骨髄腫細胞におけるIL-6応答刺激伝達分子群の網羅的解析を行っており、IL-6処理後に脂質ラフトに存在する分子、チロシンりん酸化される分子、脂質ラフト外でチロシン脱りん酸化される分子を質量分析法により既に同定済みである。今後これらの分子のIL-6刺激前後の細胞内局在およびチロシンりん酸化を確認する予定である。また、IL-6依存性骨髄腫細胞株を用いて、DNAマイクロアレイによるIL-6刺激後の遺伝子発現の経時的解析を行ったところ、早期には多くのSTAT3標的遺伝子、遅れていくつかのNF-KB標的遺伝子の発現が認められ、IL-6誘導遺伝子の中で新たにBcl-6遺伝子の重要性を明らかにした。それ以外にもIL-6によって発現が変化する遺伝子を多数同定しているので、Bcl-6の標的遺伝子も含めて、さらにIL-6刺激後の細胞増殖を担う遺伝子発現カスケードを明らかにしていきたい。ヒト骨髄腫細胞は、分化度の異なる不均一な腫瘍細胞集団であり、その中で未熟骨髄腫細胞が増殖因子であるIL-6に反応して増殖している。未熟骨髄腫細胞はCD45抗原の有無により二つの細胞集団に分けられ、CD45陽性の細胞が増殖集団である。骨髄腫細胞の増殖にはIL-6によって活性化されるSTAT3とErk1/2に加えて、CD45の発現とsrc型チロシン・キナーゼ、Lynの活性が必須である。IL-6依存性骨髄腫細胞株にLynを過剰発現させると、IL-6添加時の細胞増殖のみならずIL-6除去時の細胞死も促進されることがわかった。

CD45を発現する骨髄腫細胞がsrc型PTKの活性化を介して酸化ストレスに感受性が高まっていることから、Lynが骨髄腫細胞のIL-6依存性を規定している可能性が示唆される。既に(His)_6でtag化したCD45、Lyn、IL-6Rαを過剰発現する骨髄腫細胞株を樹立しており、IL-6刺激後にこれらの分子と会合する分子群をNi beadsで回収し、質量分析法により同定する予定である。これらの分子の中にはCD45 PTPの生理的基質やLynの下流で活性化される刺激伝達分子群が含まれていると予想される。一方で現在、骨髄腫細胞におけるIL-6応答刺激伝達分子群の網羅的解析を行っており、IL-6処理後に脂質ラフトに存在する分子、チロシンりん酸化される分子、脂質ラフト外でチロシン脱りん酸化される分子を質量分析法により既に同定済みである。今後これらの分子のIL-6刺激前後の細胞内局在およびチロシンりん酸化を確認する予定である。また、IL-6依存性骨髄腫細胞株を用いて、DNAマイクロアレイによるIL-6刺激後の遺伝子発現の経時的解析を行ったところ、早期には多くのSTAT3標的遺伝子、遅れていくつかのNF-κB標的遺伝子の発現が認められ、IL-6誘導遺伝子の中で新たにBcl-6遺伝子の重要性を明らかにした。それ以外にもIL-6によって発現が変化する遺伝子を多数同定しているので、Bcl-6の標的遺伝子も含めて、さらにIL-6刺激後の細胞増殖を担う遺伝子発現カスケードを明らかにしていきたい。骨髄腫細胞の増殖にはCD45によって制御されるsrc型PTKの活性化が重要であることから、その下流で働く刺激伝達分子を同定する目的で、Lynと免疫沈降により共沈してくる分子のうちCD45^+ U266でのみ活性化されている分子を探したところ、phospholipase (PLC)-γ2が該当する分子として見つかってきた。さらにprotein kinase C (PKC)の活性化および細胞内Caイオン(Ca^<2+>)の増加がCD45^+ U266の方で亢進していたことから、CD45^+ U266で活性化されているLynの下流にPLC-γ2を介したPKCの活性化および細胞内Ca^<2+>の増加が起こっていると考えられた。PLC選択的阻害剤U-73122処理でCD45^+ U266のIL-6反応性増殖が著しく抑制されたことから、PLC-γ2を介した刺激伝達経路が重要であると思われた。さらにLynの下流で働く刺激伝達分子を同定する目的で、(His_6) tag化したLynをIL-6依存性CD45^+骨髄腫細胞株ILKM2およびILKM8に強制発現させたところ、IL-6による細胞増殖が促進された。過剰発現したLynは恒常的に活性化されており、さらにphosphatidylinositol-3 kinase (PB-K)およびAktの活性化が亢進していたが、STAT3とERK1/2のリン酸化は変化していなかった。これらの結果は以前の知見を支持するものであり、LynはSTAT3とERK1/2とは独立にIL-6による骨髄腫細胞増殖に寄与していることが確認された。また、PI3-K選択的阻害剤LY294002が細胞増殖を著明に抑制したことからLynの下流で活性化されるPI3-K刺激伝達系がIL-6による骨髄腫細胞増殖に重要であることが今回新たに解った。