hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
胃内酸度に対する至適リン吸着剤の選択と治療の効率化に関する研究

目的:慢性腎不全患者の高リン血症の原因の一つに胃内酸度の低下によるリン吸着剤の吸着効果の低下があると考えられ、通常使用されている炭酸カルシウムから乳酸カルシウムへの変更により軽快する症例が経験される。血清リン値のコントロール不良例のうち、胃亜全摘除術の既往またはH2受容体拮抗剤やプロトンポンプ阻害剤を内服している症例に対し胃内pHとリン吸着剤の効果について検討した。方法:安定期維持透析患者のうち、胃亜全摘除術の既往がなく、H_2ブロッカーまたはプロトンポンプ抑制剤を内服していない患者(非胃疾患透析患者)を対象にし、24時間胃内pHを測定し、内服中の炭酸カルシウムと同量の乳酸カルシウムに変更し、血清リン値および血清カルシウム値、副甲状腺ホルモンの変動を調べ、胃亜全摘除術の症例およびH_2ブロッカーまたはプロトンポンプ抑制剤を内服中の症例と比較検討した。結果:胃亜全摘除後の症例では平均胃内pHが高くpHが6以上である時間が50%以上であり、乳酸カルシウム変更後速やかにリン値のコントロールが良好であった。H2受容体拮抗剤やプロトンポンプ阻害剤を内服している症例では、胃内pHは健常人に比べると高値であったが胃亜全摘除後の症例より低値であった。また乳酸カルシウムに変更しても血清リン値は改善しなかった。非胃疾患透析患者の胃内pHは健常人と明かな差が無く、pH4以上の時間が1.7%であった。乳酸カルシウムへの変更により短期間に血清リン値の上昇を認め、長期投与は中止した。考察:乳酸カルシウムはpHが6以上の時間が50%と高度の胃酸分泌不良の患者に対してのみ炭酸カルシウムに比しリン吸着能が有効であることが示唆された。炭酸カルシウムは酸性状態以外では溶解度が低下する事が知られており、溶解度の低下が吸着能の低下を来した原因と考えられた。方法:慢性維持血液透析患者で炭酸カルシウムをリン吸着剤として服用しても血清リン値が6以上を対象にし、24時間胃内pHを測定し、内服中の炭酸カルシウムと同量の乳酸カルシウムに変更し、血清リン値および血清カルシウム値、副甲状腺ホルモンの変動を調べた。結果:胃亜全摘除後の症例では平均胃内pHが高くpHが6以上である時間が50%以上であり、乳酸カルシウム変更後速やかにリン値のコントロールが良好となった。
分子軌道の位相に着目した新しい有機反応理論の構築

軌道相の最小変化の概念における分子軌道の位相の保存の様子を定量的に表す係数として、保存係数(N)という概念を導入した。この保存係数(N)は、化学反応A→Bの単分子反応においてA、Bの分子軌道の準位をそれぞれi、jとすると、N_<ij>=<Ψ_j^B|Q|Ψ_i^A>と定義される。ここでQはA→Bの分子の核の変位を表す変換行列であり、このQを適当に選ぶことにより各種反応を取り扱うことができる。この保存係数の正負に物理的な意味はなくその絶対値が大きい程軌道相はその素反応においてよく保存されていることを表す。さらに、得られた保存係数の絶対値の2乗の積をとり、全保存係数(φ)を定義する。すなわち、φ_<ij>・・・・_<k1>=|N_<ij>|^2・・・・|N_<k1>|^2。反応の軌道相関図はこの全保存係数が最大になるように作成すればよい。作成された軌道相関図を解析することにより、対象とする素反応を解析することができる。現在までに本方法による解析方法が確立された素反応の一つが、オレフィンのcis-trans異性化反応である。この保存係数を使う方法の利点は、Woodward-Hoffmann理論では取り扱うことが困難な全く対称性を持たないような分子に対しても全く同様な手続きにより軌道相関図を作成し解析を行えることである。また、電子環状反応についても本方法を適用でき、軌道相関図を作成し反応の選択則(反応許容、反応禁制)を予測できる。ほとんどの場合選択則はWoodward-Hoffmann理論と同じであるが、置換デュワーベンゼンの熱開裂反応などの場合には異なる結果を与え、その際は本方法のほうがより正しいと考えられる相関図を作成することができる。一方、π-電子系分子に関する実験では、トロポン系分子の性質やその反応性について検討を行い、その反応機構に関して分子軌道法による解析を行った。軌道相の最小変化の概念における分子軌道の位相の保存の様子を定量的に表す係数として、新たに保存係数という概念を導入した。この保存係数(N)は、化学反応A→Bの単分子反応においてA、Bの分子軌道の準位をそれぞれi、jとすると、N_<ij>=<ψ_j^BlQlψ_i^A>と定義される。ここでQはA→Bの核の変位を表す変換行列であり、このQを適切に選ぶことによって各種素反応に対応する。この保存係数の絶対値が大きい程軌道相はその反応においてよく保存されていること表す。また、得られた保存係数の絶対値の2乗の積をとり、全保存係数(φ)として定義する。すなわち、φ_<ij・・・・kl>=lN_<ij>l・・・・lN_<kl>l。反応の相関図はこの全保存係数が最大になるように作成される。このように、軌道相の変化を定量的に評価する方法を確立し、相関図を作成する手続きを構械化した。作成された相関図を解析することにより、対象とする素反応を解析することができる。オレフィンのcisーtrans異性化反応について上記解析を行い相関図を作成、解析を行っている。本方法ではWoodwardーHoffmann理論では解析が不可能な対称性を持たないオレフィンについても全く同様に解析を行うことができる。電子環状反応の解析も上記方法を適用できる。

反応の保存係数を算出し全保存係数を導くことにより相関図を作成、これを解析することにより反応の選択則(許容もしくは禁制)を予測することができる。ほとんどの反応の選択則はWoodward-Hoffmann理論と同じものであるが、一部異なる反応(置換デュワ-ベンゼンの熱開裂反応)については、本方法の方がより正しいと考えられる相関図を作成すること可能である。なお、本方法により作成される相関図は、これまで我々が提唱してきた相関図と何等矛盾していない。軌道相の最小変化の概念における分子軌道の位相の保存の様子を定量的に表す係数として、保存係数(N)という概念を導入した。この保存係数(N)は、化学反応A→Bの単分子反応においてA、Bの分子軌道の準位をそれぞれi、jとすると、N_<ij>=〈ψ_j^B|Q|ψ_i^A〉と定義される。ここでQはA→Bの分子の核の変位を表す変換行列であり、このQを適当に選ぶことにより各種反応を取り扱うことができる。この保存係数の正負に物理的な意味はなくその絶対値が大きい程軌道相はその素反応においてよく保存されていることを表す。さらに、得られた保存係数の絶対値の2乗の積をとり、全保存係数(φ)を定義する。すなわち、φ_<ij>...._<kl>=|N_<ij>|^2....|N_<kl>|^2。反応の軌道相関図はこの全保存係数が最大になるように作成すればよい。作成された軌道相関図を解析することにより、対象とする素反応を解析することができる。現在までに本方法による解析方法が確立された素反応の一つが、オレフィンのcis-trans異性化反応である。この保存係数を使う方法の利点は、Woodward-Hoffmann理論では取り扱うことが困難な全く対称性を持たないような分子に対しても全く同様な手続きにより軌道相関図を作成し解析を行えることである。また、電子環状反応についても本方法を適用でき、軌道相関図を作成し反応の選択則(反応許容、反応禁制)を予測できる。ほとんどの場合選択則はWoodward-Hoffmann理論と同じであるが、置換デュワーベンゼンの熱開裂反応などの場合には異なる結果を与え、その際は本方法のほうがより正しいと考えられる相関図を作成することができる。一方、πー電子系分子に関する実験では、トロポン系分子の性質やその反応性について検討を行い、その反応機構に関して分子軌道法による解析を行った。
神経系の発生・発達におけるGABAの役割のGAD67遺伝子欠損マウスによる解析

中枢神経系の抑制性神経伝達物質であるガンマアミノ酪酸(GABA)の役割をさらに解明するため、その合成酵素であるグルタミン酸脱炭酸酵素(GAD)の2型65,67の遺伝子ノックアウトマウスを作成、解析してきた。ともに脳内GABAが減少して、成熟マウスではけいれんや異常な情動行動を起こすことがわかった。これまでの培養細胞を用いた研究ではGABAがシナプス伝達とともに、発生期で栄養因子に似た各種作用をもつことが報告されたが、生体内で実際に栄養因子的役割を果たしているかは不明である。また発生過程の大脳皮質でGABA性ニューロンが他のニューロンと異なる機構で発生することが明らかにされ、他の脳部位でも同様か否かは明らかにされるべき問題である。本研究では胎児期のGABA量が激減するGAD67ノックアウトマウスとGAD67を蛍光タンパクGFPで置換してGABAニューロンを蛍光標識したノックインマウスを用いてこれら2つの問題をしらべた。誕生直後のノックアウトマウスは口蓋裂のため、誕生しても呼吸不全で生存できないが、誕生直後の呼吸リズムは不規則、微弱であった。誕生前後の動物から摘出延髄脊髄標本を作製して呼吸中枢のニューロン活動を電気生理学的方法でしらべたところ、抑制性シナプス活動の異常が見出されたので、呼吸運動異常が中枢性であると結論された。また口蓋原器の器官培養では口蓋形成は進行することなどから、口蓋裂の発生も脳内GABAの低下にもとづく中枢性のものであることが示唆された。GABAニューロンが発生初期から標識されるノックインマウスで、大脳皮質に似た層構造をとる上丘の発生をしらべた。ここでは大脳皮質と異なり、GABAニューロンが特定の部位で発生して水平移動するのではなく、他のニューロンと同様に発生して放射状に移動することが示された。またきわめて早期にGABA性神経が外部から上丘表面に到達し、しだいに消失することが見出された。発生に何らかの役割を果たしていることが示唆された。また共同研究により、このマウスの大脳皮質におけるGABAニューロンの発生につきスライス標本での生きたニューロンの移動のタイムラプス解析およびBrdU標識を行い、GABAニューロンが水平移動中も分裂を行い、また一部放射状移動も行うことを見出した。近年、培養細胞の研究から、抑制性神経伝達物質のGABA(ガンマアミノ酪酸)が発生過程で独自の作用を発揮して神経系の発達に関与するとみなされているが、生体での証明はない。本研究は13,14年度において、われわれが作成した脳内GABAが減少するGAD(グルタミン酸脱炭酸酵素)ノックアウトマウスを用いてこれらの点を明らかにする。13年度は以下の成果を得たので、14年度にこれを継続して完成させる。1.呼吸調節系の発達に対するGABAの関与。誕生前後のマウスにつき呼吸運動の記録と摘出延髄脳幹標本の呼吸ニューロン活動の記録を行い、GAD67欠損マウスでは発達が数日遅れていることを見いだした。2.GABA性ニューロンの発生の解析。

GAD67のエクソン1にGFPをノックインし、GAD67の発現をGFPによって検出して、GABAニューロンの初期移動を追跡した。従来研究されているganglionic eminensから大脳皮質への移動を系統的に経時的に解析して知見を加えた。3.発生過程の非神経組織におけるGABAの発現と役割。GFPノックインマウスによりGAD67の発現を従来の方法より明確に示すことができた。毛根、歯髄、鼻粘膜で発現を見いだしたので、その意義を追求する。4.GAD67の異所性発現の神経発生に及ぼす影響。全ニューロンに発現するCAGのプロモターにGAD67遺伝子をつないで、中脳水道に注入したのち、エレクトロポレーションによって脳室壁の細胞にとりこませて、上丘・下丘の層構造、神経核の形成に及ぼす影響をしらべている。抑制性神経伝達物質GABAは培養神経細胞に対し栄養因子的な作用を示すことから、神経組織発生にも関与すると主張されている。われわれは既にGABA合成酵素のグルタミン酸脱炭酸酵素GAD67の遺伝子ノックアウトマウスを作成した。このマウスは誕生後、口蓋裂のために生存できないが、誕生時の脳組織に目立った異常はみられない。GABA性ニューロンを明確に同定して、これを確認するために、今回、蛍光蛋白GFPをGAD67に置換して発現させるGAD67-GFPノックインマウスを作成した。このマウスのフェノタイプはGAD67ノックアウトと同様であった。このヘテロマウスでGFP蛍光を指標としてGABAニューロンの発生を解析した。阪大村上博士との共同研究で、大脳新皮質で基底核原基からのGABAニューロンの水平移動による発生が、スライス標本での生きた細胞について確認された。ついで、新皮質と似た層構造を持つ上丘で解析した。細胞の形態的観察、胚の微小傷害実験、スライスでの細胞移動観察の結果、上丘ではGABAニューロンは水平移動ではなく放射状移動で発生することがわかった。また発生初期の上丘表層には脊髄と同様にGABA性の交連線維が存在した。この役割の解明は今後の課題である。また、小脳皮質における3種のGABA性介在ニューロンの発生を定量的に解析し、プルキンエ細胞、果粒細胞の発達との関連性をしらべている。ホモマウス(GAD67ノックアウト)でも大脳新皮質でのGABAニューロンの移動は同様であった。さらに4種のニューロンがGABA性である小脳皮質についてGABAニューロンの定量的解析を行っている。
人文社会科学と自然科学を連携するメタレベル知識ベースシステムの開発

本研究では、平成13年度から16年度までの4年間に、人文社会科学と自然科学の情報源を有する異種データベース群を連結し、それらの情報源を融合するための情報の検索、抽出、編集、統合機能群、および、それらの機能群を実現するメタレベル知識ベースシステムの実現を行い、そのシステムを対象としたヒューマン・インタフェース、知識発見機能、学習機能の実現を行ってきた。具体的には、(1)メタレベル知識ベースシステムの機能群およびシステム・アーキテクチャの設計、構築、(2)異種データベース群のメタレベル知識ベースシステムの連結による知識情報獲得を実現する言語体系の設計、構築、(3)研究、学問領域創造のためのヒューマン・インターフェース環境の設計、構築、(4)知識発見機能、学習機能の設計、構築を行ってきた。平成17年度、本研究では、(1)(4)において実現したメタレベル知識ベースシステムが、実際の学問領域において、異なる学問分野間に跨る研究活動に有効に利用、応用されることを検証し、本システムの主要機能群、特に、意味的連想検索機能、知識発見機能、学習機能が、研究活動において実際に創造的なシステム機能として利用可能であることを検証するために、本システムの実際の利用、応用時における有効性に関する評価実験、実証実験を行い、本システムの本格的な利用、応用環境の実現を行った。応用例として、[1]医学分野(呼吸器分野,感染症分野)、[2]国際関係分野、[3]音楽分野、[4]画像を対象とした感性検索分野、[5]教育・職業データベース連携による個人キャリア開発分野の5分野の研究活動における本システムの有効性を実証実験によって検証した。それらの分野の研究者を対象として、本システムによる知識獲得、知識統合、知識発見による知的創造活動の実験を行い、異なる学問分野間の情報源を連携することによる創造的研究活動を支援する機能としての本システムの実現可能性、有効性を明らかにした。さらに、本システムの今後の活用を促進するために、本システムの本格的な利用、応用環境として、それらの分野を対象としたWWW上からのシステム利用インタフェースの実現を行った。それらの実証実験、および、本システムの利用環境の構築により、今後、本システムを様々な応用において利用するための環境を実現した。本研究は,人文社会科学と自然科学の情報源の連結による新しい研究,学問領域の創造を実現するためのメタレベル知識ベースシステムの構築を目的とする.メタレベル知識ベースシステムとは,サイバースペース上に展開する情報源を知識ベース群に蓄積,集約し,それらの知識ベース群を編集・統合した情報を発信することにより,学問領域を越えた,一段抽象度の高い人間の思考,創造活動を可能にするシステムである.本研究では,平成13年度において,メタレベル知識ベースシステムの機能群およびシステム・アーキテクチャの基本設計,問い合わせ言語設計,メタデータベース空間設計,および,実験システムの実現を行った.具体的には,人文社会科学と自然科学の情報源を有する異種データベース群を連結し,それらの情報源を融合するための情報の検索,抽出,編集,統合機能群,および,それらの機能群を実現するシステムの基本設計を行った.また,それらの機能を利用するための問い合わせ言語設計を行い,メタレベル知識ベースシステムからデータベース群への問い合わせ発行機能,ローカルデータベース群から収集されたデータ群を対象とした時間的,空間的,意味的な検索,統合機能を実現する基本アルゴリズムの設計および基本演算群の設計・実現を行った.さらに,異分野の既存データベース群を対象としたデータ検索,データ統合を実現するメタデータベース空間の構築を目的として,環境分野メタデータベース空間,医療分野メタデータベース空間,エネルギー分野メタデータベース空間の設計,実現を行った.さらに,実験システムによって,それらの機能群,基本アルゴリズム,メタデータベース空間の実現可能性,および,有効性を確認した.<異種データベース群のメタレベル知識ベースシステムへの連結による知識情報獲得を実現する言語体系の設計,構築>本研究は、人文社会科学と自然科学の情報源の連結による新しい研究、学問領域の創造を実現するためのメタレベル知識ベースシステムの構築を目的とする。メタレベル知識ベースシステムとは、サイバースペース上に展開する情報源を知識ベース群に蓄積、集約し、それらの知識ベース群を編集・統合した情報を発信することにより、学問領域を越えた、一段抽象度の高い人間の思考、創造活動を可能にするシステムである。本研究では、平成14年度において、自然科学系、人文社会科学の具体的な情報源として、医学分野データベース、エネルギー分野データベース、環境分野データベース、および、国際関係分野データベースを対象としたメタレベル知識ベース、および、意味的検索空間の設計・構築を行った。また、それらの学術分野の意味的検索空間をメタレベル知識ベースシステムに連結し、メタレベル知識ベースシステムにおいて実現した機能群により検索、編集、統合し、複合領域の知識情報を発信するための検索、編集、統合処理系の構築を行った。さらに、異分野データベース群を対象とした新しい意味的検索空間統合方式の設計・構築を行った。また、本研究のメタレベル知識ベースの利用環境として、多様な言語により、多種の言語によって記述された情報源およびメタデータ群の検索を実現する多種言語(multiple languages)問い合わせシステムを設計・構築した。さらに、画像データ、音楽データなどのメディア・データを有するマルチメディアデータベースを対象とし、直接検索系の内容検索エンジンを用いることにより、それらのメディアデータに対応するメタデータを有するメタデータベースを自動的に構築するメタデータ自動生成方式を設計・実現した。これらの研究成果を本研究の対象であるメタレベル知識ベースシステムの主要機能群、および、意味的検索空間群として連結し、それらを統合的に利用するシステム環境を構築し、実際のシステム実験を行ない、本研究の実現可能性、先進性、有効性を確認した。<研究,学問領域創造のためのヒューマン・インターフェース環境の設計,構築

>本研究では、人文社会科学と自然科学の情報源の連結による新しい研究、学問領域の創造を実現するためのメタレベル知識ベースシステムを実現し、そのシステム上で人文社会科学と自然科学分野に関する既存データベース群(ローカルデータベース群)を連結することにより、それらの分野を連携した新たな研究、学間領域の創造環境の構築を目指している。本研究では、平成15年度において、平成13年度および平成14年度に構築した"メタレベル知識ベースシステム"および言語体系を用いて、新たな研究領域、学問領域を創造するためのシステム利用環境の設計および構築を行った。具体的には、WWWを中心とした計算機ネットワーク環境において、メタレベル知識ベースシステムを対象とし、利用者が、知識創造、新領域創造を可視的に行うためのヒューマン・インタフェース機構の設計・構築を行った。また、システム利用の拡大を可能とする多言語利用機構の設計・実現を行った。具体的なデータベースとして、医療分野データベース、国際関係データベース、教育データベースの構築、拡張を行なし、それらのデータベース群を対象とした時間的、空間的、意味的データベース統合機構の適用に関する実証的実験を行ない、本システムにおけるデータベース統合方式の有効性を明らかにした。また、データ間の因果関係計量を実現する新しい意味的連想検索方式を示し、その機構の実現を行った。さらに、新しいシステム利用環境として、データ間の意味的相関の強さを詳細に分析するための意味スペクトル分析技術を示し、その実現を行った。それらのシステム利用環境およびシステム機能群を本研究の対象であるメタレベル知識ベースシステムの主要機能群として連結し、それらを統合的に利用するシステム環境を構築し、システム実験を行ない、本研究の実現可能性、先進性、有効性を確認した。本研究では、人文社会科学と自然科学の情報源の連結による新しい研究、学問領域の創造を実現するためのメタレベル知識ベースシステムを実現し、そのシステム上で人文社会科学と自然科学分野に関する既存データベース群(ローカルデータベース群)を連結することにより、それらの分野を連携した新たな研究、学問領域の創造環境の構築を目指している。平成16年度、本研究においては、前年度までに構築したメタレベル知識ベースシステムの基本機能群を対象として、それらの上位機能として、メタデータベースに内在する知識を抽出する知識獲得機構の設計、構築を行った。また、情報獲得における利用者間の個人差を吸収し、各利用者毎に適切な情報獲得を実現するための知識を蓄積する学習機構の設計、構築を行った。
発癌における新規転写統合装置複合体によるエピジェネティカルな遺伝子発現制御の研究

DNAのメチル化はエピジェネティックな遺伝子発現調節機構の一つであり、細胞のがん化、発生分化などに重要な役割を担っていると考えられている。cAMP responsiveelement(CRE)は多くの遺伝子のプロモーター上に存在し、DNAのメチル化・脱メチル化を介して遺伝子発現が制御されている。実際、CREはBRCA1などをはじめとする多くの癌抑制遺伝子のプロモーター上に存在し、腫瘍細胞において高度にメチル化され転写が抑制されていることが報告されている。以前申請者は、メチル化されたCREに結合する因子としてMBD2aを同定した。MBD2aが転写抑制複合体と相互作用してメチル化CREからの転写を抑制するだけでなく、RHAと複合体を形成し、転写活性化に機能することを明らかとした。本研究では申請者が見出したエピジェネティカルな遺伝子発現制御に関わる新規転写統合装置複合体を中心とし、発癌にいたる過程の転写統合装置の破綻、DNAのメチル化・ヘテロクロマチン化の分子メカニズムの解明を行なうことを目的とした。本研究にてRHA/MBD2a複合体の機能解析を行なった結果、メチル化したCREに結合したMBD2aにRHAが結合することを見出した。さらに、MBD2a/RHA複合体のメチル化CREへの結合実験を行なった結果、MBD2aのメチル化CREへの結合がより強められている可能性が示唆された。また、レポーターアッセイを行なった結果、RHAはメチル化されたレポーターからの転写をプロモーターの種類に依存して、活性化、または、抑制化した。以上の結果から、RHAMBD2a複合体は転写活性化複合体として機能するのみならず、メチル化されたCREからの転写抑制の開始段階に関与する可能性が示された。
脊髄虚血に対する肝細胞増殖因子の遺伝子導入による神経保護作用の検討

術中の脊髄虚血に起因する胸腹部大動脈瘤手術後の対麻痺は重大な合併症である。肝細胞増殖因子(HGF)は潜在的な血管新生因子、神経栄養因子の一つとされている。ウサギ脊髄虚血モデルにおけるHGF遺伝子導入の神経保護効果についての研究を計画した。ヒトHGF発現プラスミドはhemagglutinating virus of Japan (HVJ)エンベロープベクターに組み込んだ。HGF遺伝子導入群にはHGF遺伝子を含むHVJエンベロープベクターを、コントロール群にはコントロールベクターもしくは生理食塩水を髄腔内に注入した。注入5日後、30分間の腎動脈下大動脈の閉塞により脊髄虚血を誘導し、Hind-limb運動機能をTarlovスコアを用いて14日間評価した。ヒトHGFは遺伝子導入後3日の脊髄液中に検出され、測定値は5日後にピークを迎えた。HGF遺伝子導入群では、コントロール群と比較して有意に脊髄灰白質の網細血管密度が増加し、浮腫の軽減が認められた。コントロール群では、脊髄虚血14日後には全てHind-limb運動機能の悪化、対麻痺(Tarlovスコア=0)を認めたが、HGF遺伝子導入群では、著名にTarlovスコアが維持され、9羽中8羽が正常なHind-limb運動機能を認めた。組織学的評価においては、遺伝子導入群においてより多くの正常な神経細胞の保護、維持が認められた。HGF遺伝子導入は脊髄虚血後の神経損傷を減弱させると考えられた。下行大動脈瘤および胸腹部動脈瘤に対する手術における脊髄障害は、未だに予測のできない重篤な合併症である。肝細胞増殖因子(Hepatocyte growth factor, HGF)は多面発現性サイトカインとして、脈管形成および神経細胞栄養作用があることが認められており、本研究ではHGFの脊髄虚血に対する保護作用について検討を行った。ウサギを用い、生理食塩水注入群、仮ベクター注入群、HGFベクター注入群の3群に分けて検討した。HGFのcDNAをpcDNA3.1(-)に導入し、HVJウイルスと組み合わせベクターを作成した。HGFのcDNAを含まない仮ベクターも用意した。L6に穿刺して、脳脊髄液に200μgベクターまたは生理食塩水を注入し、5日後、100μlの脳脊髄液を採取しELISA法でHGFの量を測定した。また腎動脈下大動脈遮断による脊髄虚血モデルを用いて、脊髄虚血30分後におけるTarlov scaleを判定し、神経運動機能を評価した。2週間後に脊髄を採取し病理組織学的脊髄障害レベルを検討した。生理食塩水注入群と仮ベクター注入群では脳脊髄液内のHGF濃度に差を認めなかった。HGFベクター注入群では脳脊髄液内のHGF濃度の上昇を認め、導入5日後のHGF濃度が最も高く、その後徐々に減少していくことが判明した。HGFベクター注入群では脊髄虚血後Tarlov scoreが有意に高く、14日後における運動機能完全回復率は88%(8/9)であった。HGFベクター注入群では病理組織学的脊髄障害も低下していた。HGFを脳脊髄液内に導入することで、脊髄虚血に対する脊髄保護効果を認めた。
イーラーニングコミュニティサイトの形成に関する研究~互いに教えあう学び空間~

インターネットを利用したイーラーニング型の自習教育における最大の問題である「学習を継続させるための方法」について、その解決をSNSを活用したコミュニティ形成によって実現を図ることを目的とし、サイトの立ち上げと授業での運用を行った。その結果、学習のためのコミュニティは、SNS等のシステムに依存して形成されるものでは無く、システムへの参加者がそれぞれに役割を果たすことで始めて形成に向かう、極めて微妙なものであることが分かった。コミュニティサイトの準備のためにWebサーバーに無料の学習管理システムであるMoodleとSNSであるOpenPNEをインストールし立ち上げた。このサーバーマシンについては,別事業の結果,使用されなくなったものを流用した。また,研究分担者である鈴木恒雄教授の金沢大学共通教育課目における授業「一歩進んだPC活用講座」にて,このシステムを活用した。この際にシステム運用について,学生アルバイトなどを雇用し,作業に従事してもらった。本研究では,コミュニティサイトの構築という部分については,システム的な新規性などの研究を目指すものではないので,既存の技術を用いたシステムを構築した。本題である,より効果的な学習を行うことができ,学習の継続や互いに教えあうなど環境の構築について,焦点をあてた。特にSNS内においてコミュニティを構築し,それを実際に学習に用いて効果を確かめるという点については,コミュニティの形成の前段階として,システム利用率を如何に高めるかという点に苦労することとなった。そこで,学生アルバイトも活用し,授業を受けている学生からの意見に対しては,出来る限り返信を返すという体制を取ることによってシステムを活用化,利便性を実感させることで利用率を高めた。この点は,今後のe-Learningの実施という観点から,今後の重要な課題となる部分であり、様々なトライアンドエラーの繰り返しが必要となろう。コミュニティー運用を,イーラーニング、それも「自習のみの学習を継続させる」という観点から行うことは非常にユニークであるが,それを上手く回すには,さらに工夫とアイデアが必要である。665文字本研究の目的は、インターネットを利用したイーラーニング型の自習教育における最大の問題である「学習を継続させるための方法」について、1つの解決方法を与えることである。これを踏まえて、昨年度作成したイーラーニング環境とSNSを、学習内容への議論や分からない点を互いに教えあうといった、学習すること自体に積極的に関わらせるような仕掛けとして授業に活用した。実際に、活用した授業は、研究分担者である鈴木恒雄教授の金沢大学共通教育課目における授業「情報発信リテラシ」と「一歩進んだPC活用講座(前期、後期各一回開講)」である。昨年度の研究結果として、「学習コミュニティを作らせる」ためには、その前段階として、システム利用率を高め、学生がこのシステムを利用すれば有効であることを実感できる環境構築が必要ということが分かっており、これを踏まえて、各授業において、学生に対する利用案内のアプローチ方法を変えてみた。その結果、コミュニティをある程度以上活性化させるためには、そこを利用して各種情報を、きめ細やかに発していく存在が必要であることがわかった。これは単に日記を毎日書き込むというだけでなく、学生が求めている情報を発信していくことが重要な要素であると推測できる。さらに学生の中に、とにかく毎日、日記を書き込むようなヘビーユーザーが存在すると、それ以外の学生は、いわば「引いてしまう」状態となり、利用頻度が損なわれてしまう等の運用結果として、各種結果を得ることができた。このように、本研究の目的につながる学習を継続させるための学習の場の作成として、有益なデータを得ることができたのは、大きな成果である。
「有害」な野生哺乳類の空間分布構造に及ぼした人為的影響の定量的把握

平成15年度は、兵庫県農林水産部などがこれまで取りまとめてきた野生哺乳類と「有害鳥獣」行政に関わる農林業被害情報の磁気情報化を進め、その解析を進めた。これらの磁気化した情報は、自然・環境科学研究所・生態研究部門、および兵庫県立人と自然の博物館・自然・環境マネジメント研究部に集約した。横山ほか(2003)では、兵庫県全域でもっとも農林業との軋轢が大きな、淡路島、および兵庫県本州部で捕獲されたニホンジカ137個体を用いて、健全なニホンジカを維持するために必要な個体群の質的な評価手法を検討した。その結果、兵庫県域に生息するニホンジカは脂肪量の蓄積が少なかったが、これは慢性的な低栄養状態を示すものではなく、通年、良質な食物が確保できる環境に住むからだと考えることができた。そのため、生息環境や気象条件が悪化すると、ニホンジカ個体群は、急速に状態を悪化させる可能性が高いことがわかった。このことは、個体群成長のモデルを考える場合も高成長と急激な悪化が存在することを示す。その他に、鈴木ほか(2003)では、狩猟や有害駆除によって対象鳥獣の個体数に直接影響が強い狩猟者人口の推移をシュミレーションによって予測し、赤星ほか(2003)では、ツキノワグマやニホンジカと地域住民の精神的距離感を比較し、政策立案や合意形成のあり方を検討した。平成13年度は、環境省などが公開している自然環境情報を利用しつつ、兵庫県県民生活部、兵庫県農林水産部などがこれまで取りまとめてきた野生哺乳類と「有害鳥獣」行政に関わる農林業被害情報の磁気情報化を進めた。同時に、但馬・丹波をモデル地域と捉え、そこで発生している農林業被害状況の情報を、その空間分布に留意して収集した。この情報は、今後解析可能な形に取りまとめる。現在は、兵庫県県民生活部、兵庫県農林水産部と、兵庫県全域を対象としたよりシステマティックな情報集積法についても検討している。これらの磁気化した情報は自然・環境科学研究所、生態研究部門に集約し、その一部を用いてツキノワグマの近畿・中国地方での潜在的生息適地分布を推定しGIS学会第10回バイオリージョン分科会、日本哺乳類学会などで発表した。また、平成13年5月に京都府嵐山で射殺されたツキノワグマの検体が回収できたため、生殖可能性の有無や栄養状態など組織学的検討を行うと共に、ミトコンドリアDNAを取り出し、平成12年に六甲山を中心に出没したツキノワグマ個体の毛根細胞に残されたミトコンドリアDNAと比較した。この検討は本研究で行うクマの潜在生息適地と個体の拡散を考える上で重要な情報を与える。合わせて、兵庫県・大阪府が取りまとめた2000年に六甲山などに異常出没したツキノワグマの移動地選択をロジスティック・モデルを検討することで解析し、結果を印刷公表した(三谷ほか,2001)。さらに、兵庫県域のニホンジカ分布を糞塊密度法から推定するモデルを立て、シカ密度と農業被害の関係を検討し、結果を印刷公表した(坂田ほか,2001)。平成14年度は、環境省などが公開している自然環境情報を利用しつつ、兵庫県県民生活部、兵庫県農林水産部、神戸市などがこれまで取りまとめてきた野生哺乳類と「有害鳥獣」行政に関わる農林業被害情報の磁気情報化を進め、解析を試みた。また但馬、丹波、および六甲山系をモデル地域と捉え、哺乳類の活動情報、および、空間分布に留意して、そこで発生している農林業被害状況の情報を昨年度に引き続き収集した。現在は、兵庫県県民生活部、兵庫県農林水産部、神戸市農林水産部と、兵庫県全域を対象としたよりシステマティックな情報集積法について検討している。これらの磁気化した情報は自然・環境科学研究所、生態研究部門に集約し、その一部を用いてツキノワグマの近畿・中国地方での潜在的生息適地分布を推定した(坂田・三谷,2002)。さらに、兵庫県域のニホンジカ個体群の狩猟方法による推移モデルを立て、地域によるシカ密度と農業被害の関係を検討し、結果を印刷公表した(坂田ほか,2002)。

また、平成14年6月、および7月に兵庫県春日町と村岡町で捕殺されたツキノワグマの死体を回収し、解剖して組織を回収すると共にミトコンドリアDNAを採集する機会を得た(横山ほか,2002)。これは、本研究で行うクマの潜在生息適地と個体の拡散を考える上で、重要な情報を与える。これらの成果は論文として公表したばかりでなく、兵庫県、および神戸市の鳥獣害行政に実地に役立ち、特定鳥獣保護管理計画、およびイノシシ餌付け禁止条例の形で役立っている。平成15年度は、兵庫県農林水産部などがこれまで取りまとめてきた野生哺乳類と「有害鳥獣」行政に関わる農林業被害情報の磁気情報化を進め、その解析を進めた。これらの磁気化した情報は、自然・環境科学研究所・生態研究部門、および兵庫県立人と自然の博物館・自然・環境マネジメント研究部に集約した。また横山ほか(2003)では、兵庫県全域でもっとも農林業との軋轢が大きな、淡路島、および兵庫県本州部で捕獲されたニホンジカ137個体を用いて、健全なニホンジカを維持するために必要な個体群の質的な評価手法を検討した。その結果、兵庫県域に生息するニホンジカは脂肪量の蓄積が少なかったが、これは慢性的な低栄養状態を示すものではなく、通年、良質な食物が確保できる環境に住むからだと考えることができた。そのため、生息環境や気象条件が悪化すると、ニホンジカ個体群は、急速に状態を悪化させる可能性が高いことがわかった。このことは、個体群成長のモデルを考える場合も、高成長と急激な悪化が存在することを示す。その他に、鈴木ほか(2003)では、狩猟や有害駆除によって対象鳥獣の個体数に直接影響が強い狩猟者人口の推移をシュミレーションによって予測し、赤星ほか(2003)では、ツキノワグマやニホンジカと地域住民の精神的距離感を比較し、政策立案や合意形成のあり方を検討した。これらの成果は、論文として公表したばかりでなく、地域の鳥獣害行政に実地に役立ち、特定鳥獣保護管理計画の立案・策定に役立っている。
胚性ゲノム活性化と分化全能性獲得における着床前期特異的新規ＳＣＡＮ遺伝子の役割

着床前期で特異的に発現していると考えられた新規遺伝子Zfp371に着目し,初期胚発生及びES細胞における役割を明らかにすることを目的としたRT-PCR、免疫染色において2細胞期から胚盤胞期の着床前期胚およびES細胞にのみ発現を認めた.KOマウスは成獣まで発生し,生殖能も維持されていた.着床前期胚発生や産仔数にも異常は認められず, KOマウスから得られたES細胞(KO ES)は未分化性,多分化能性も維持されていた.しかし,核型解析を行ったところ, KOマウスでは高頻度にchromosomal gapが認められ,本遺伝子が何らかのゲノムや染色体の安定性に寄与している可能性が示唆された.近年,着床前期胚から樹立される胚性幹(ES)細胞を用いた再生医療が急速に進歩しており,着床前期胚発生の分子機構を研究することは,ES細胞の分化多能性の背景にある分子機構の解明にも繋がる.そこでin silico解析により着床前期初期より特異的に発現していると考えられた新規遺伝子Zfp371に着目し,発生及びES細胞における役割を明らかにすることを本研究の目的としている。まず本遺伝子の着床前期胚における発現解析を行った.RT-PCRおよび免疫組織化学染色により着床前期各ステージ胚及びマウス多組織において発現解析を行った.また転写阻害剤を受精卵の培養液に添加して2細胞期後期まで培養し,mRNA発現量を定量RT-PCRにより観察した.さらに機能解析のため,本遺伝子の第2,3exonを欠失させたノックアウト(KO)マウスを作成し,妊孕性の有無及び着床前期胚発生の観察,さらに胚盤胞からノックアウトES細胞を樹立した.結果はRT-PCRではいずれの成獣臓器でも発現は認められず,2細胞期から胚盤胞期の着床前期胚およびES細胞にのみ発現を認めた.免疫組織化学染色においても着床前期胚で発現を認め,さらに8細胞期及びES細胞では核への局在が確認された.また,転写阻害剤添加により着床前期胚での発現が消失し,胚性に発現する遺伝子であった.したがって本遺伝子は着床前期ステージ特異的に発現し転写因子として何らかの遺伝子発現制御に関わっている可能性が示唆された.KOマウスは成獣まで発生し,生殖能も維持されていた.現在のところ明らかな表現型は得られていないが,核型解析を行ったところ特徴的な染色体構造異常を認めた.またKOマウスの胚盤胞からはES細胞を樹立することも可能であった.着床前期胚発生の分子機構を解明することは,体外受精における胚の質的向上に寄与するのみならず,着床前期胚から樹立される胚性幹(ES)細胞の分化多能性に寄与する分子機構の解明にも繋がる.そこでin silico解析により着床前期で特異的に発現していると考えられた新規遺伝子Zfp371に着目し,初期胚発生及びES細胞における役割を明らかにすることを目的とした.RT-PCRおよび免疫組織化学染色により着床前期各ステージ胚及びマウス成獣多組織において発現解析を行った.機能解析のため,本遺伝子の第2および第3エクソンを欠失させたノックアウト(KO)マウスを作成し,表現型を解析した.さらに胚盤胞からノックアウトES細胞を樹立し,遺伝子発現についてマイクロアレイを用いて野生型ES細胞と比較検討した.結果は,RT-PCRでは2細胞期から胚盤胞期の着床前期胚およびES細胞にのみ発現を認めた.免疫組織化学染色においても着床前期胚で発現を認め,特に8細胞期及びES細胞では核への局在が確認された. KOマウスは成獣まで発生し,生殖能も維持されていた.着床前期胚発生や産仔数にも異常は認められず, KOマウスの胚盤胞からES細胞(KO ES)を樹立可能で未分化性,多分化能性にも異常は認められなかった.しかし,核型解析を行ったところ, KOマウスでは高頻度にchromosomal breakageが認められることが明らかとなり, KO ES細胞と野生型ES細胞では有意に発現レベルの異なる遺伝子が抽出された(887 transcripts).KOマウスの表現型に異常は認められなかったが,体細胞の染色体に構造異常(凝縮不全)をもつことから,本遺伝子はゲノムや染色体の安定性に寄与している可能性が示唆された.着床前期で特異的に発現していると考えられた新規遺伝子Zfp371に着目し,初期胚発生及びES細胞における役割を明らかにすることを目的としたRT-PCR、免疫染色において2細胞期から胚盤胞期の着床前期胚およびES細胞にのみ発現を認めた.KOマウスは成獣まで発生し,生殖能も維持されていた.着床前期胚発生や産仔数にも異常は認められず, KOマウスから得られたES細胞(KO ES)は未分化性,多分化能性も維持されていた.しかし,核型解析を行ったところ, KOマウスでは高頻度にchromosomal gapが認められ,本遺伝子が何らかのゲノムや染色体の安定性に寄与している可能性が示唆された.着床前期胚発生は、受精、胚性ゲノムの活性化(Zygotic Genome Activation : ZGA)、分化全能性の獲得、コンパクション、胚盤胞腔の形成、内細胞塊と栄養外胚葉への分化など、再生医学および生殖医療にとって極めて重要な事象を含んでいる。従って、本研究ではZfp371に着目し、その発現および機能解析により着床前期胚発生の分子生物学的機構の解明を目指している。まず、マウス多組織及び胎生器各発生段階のRNAパネルを用いノザンブロットを行い、Zfp371遺伝子の着床前期胚の発現特異性を確認した。

成獣多組織では発現を認めず、着床前期の2細胞期胚から胚盤胞期までにのみ発現を認めた。さらに分子表面に露出する可能性が高いと予測される部位から、ペプチド抗体を作成して着床前期胚各ステージの免疫組織染色を行った。8細胞期胚においてのみ細胞質から核内へ移行した。核への移行を検証するため、Zfp371に蛍光遺伝子であるmCherryを組み込んだDNAを作製し、in vitroでmRNAを合成し、受精卵に導入を行うと、ステージ特異的に核への集積を示した。このことから8細胞期にはじめて転写因子として機能する可能性が示唆された。そこで、本遺伝子を機能解析するため、ノックアウトマウスを作成した。Zfp371に対するターゲッティングベクター(エクソン2、3をノックアウト)をデザインし、エレクトロポーション法でマウスES細胞へ導入を行った。ここで得られたES細胞を胚盤腔に挿入し、仮親となる偽妊娠マウスの子宮内に移植し、キメラマウスを作製した。正常マウスと交配させ、相同組み換えES細胞由来のヘテロ接合体となり、germline trasmissionを確認した。ヘテロ同士の交配によりノックアウトマウスを作製した。今後は産仔数や生存曲線あるいは着床前期胚発生を評価し、その表現型を解析する。着床前期胚に特異的に発現している新規遺伝子の発現および機能解析を行っている.これまでの研究結果より着床前期胚および成獣多組織またES細胞においてそのmRNAおよび蛋白レベルでの局在を特定した.また機能解析のため,ノックアウトマウスを作成し,さらにその胚盤胞からノックアウトES細胞を樹立することに成功し,着床前期胚の遺伝子発現制御に転写因子として何らかな役割を果たしている可能性が示唆された.従って当初の計画通り,概ね順調に進展していると考える.マウス多組織RNAパネルおよび胎生器各発生段階のRNAパネルを用いたノザンブロットも行い、Zfp371遺伝子の着床前期胚の発現特異性を確認するとともに、全長クローニングを終えた。さらに二次構造予測においてループ構造を取り、分子表面に露出する可能性が高いと予想される部位の中から、ペプチド抗体を作成してウェスタンブロット法および卵子および着床前期胚各ステージの免疫組織染色を行い、Zfp371遺伝子の蛋白レベルでの発現解析を試みた。またZfp371についてsmall interfering(siRNA)をデザインし、受精卵の卵細胞質に注入した後、着床前期胚発生を観察する。また、siRNAによるZscan5b発現の抑制を定量的RT-PCR、ウェスタンブロット法、免疫組織染色を用いて検証した。さらに、siRNAを注入した卵から発生した胚盤胞について、outgrowth assayに供して内部細胞塊の発生を観察するとともに、胚移植して着床率を観察し、着床への影響を検討し、成果として学会で発表した。これまでに認められているノックアウトマウスの特徴的な染色体構造異常の結果より、本遺伝子が何らかの染色体あるいはゲノムの安定性に寄与している可能性が示唆されており,今後はこの点に着目しノックアウトマウスおよびノックアウトES細胞のさらなる機能解析を行う.遺伝子発現プロファイリングZfp371遺伝子のノックアウトマウスから着床前期胚を回収し、オリゴDNAマイクロアレイを用いて着床前期胚遺伝子発現プロファイリングの変化を解析する。
遺伝子光学的に改質した大豆グリシニンの迅速評価システムの構築

大豆グリシニン遺伝子の遺伝子工学的改質の成否を迅速に評価するために、エレクトロポレーション法による未熟子葉細胞での一過性発現系の確立を試みた。大豆品種ワセスズナリ(wild)およびそのグリシニングループI欠失変異体(mutant)を慣行法により栽培し、播種後日数(DAS)の異なる各未熟子葉よりプロトプラストを調製した。プロトプラストの単離効率はDASの増加とともに低下した。プロトプラストにCaMV35Sプロモータ支配下のbeta-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子を導入し、外来遺伝子導入・発現効率の指標としてその酵素活性を調べた。GUS活性値はプロトプラストの状態に大きく依存し、DASの増加とともに低い値を示す傾向にあった。品種(wild,mutant)による差は認められなかった。電場強度(EFS)が400-1000V/cmの間では、EFSの増加とともにGUS活性値は高くなった。1000V/cm以上においてはGUS活性値は頭打ちとなった。パルス長(gamma)が5-40msの間ではgammaが増加するにつれてGUS活性値も高くなった。ただしgammaが高いほど、低いEFSにおいてEFSに対するGUS活性値の変化が急激になり、高いEFSでの変化は緩慢となった。ポレーション緩衝液にポリエチレングリコール(PEG)を加えたところ、GUS活性値は大きく増加した。ただし、プロトプラストにDNAを添加する前にPEGを加えると、逆にほとんどGUS活性を示さなかった。ポレーション後の培養条件(培地組成、細胞密度)を変えてGUS活性に及ぼす影響を調べたが差は認められず、GUS活性値は培養開始後48時間目まではほぼ直線的に増加し、以後速やかに減少した。得られた最適条件において、抗GUS抗体によるGUSタンパク質の検出を試みたが検出できなかった。また同様に、グリシニン遺伝子をCaMV35Sプロモータ、グリシニンプロモータ、beta-コングリシニンプロモータに各々連結したプラスミドをmutantに導入し、抗グリシニン抗体を用いてグリシニンの検出を試みたが検出できず、引き続き調査している。
四股の虚血,再潅流障害Apotosisとの関係

四股の虚血-再潅流障害におけるnoreflow phenomenonの発生機序について研究した。ウサギを用いた四股の虚血-再潅流障害実験モデルを作成した。ネンブタール麻酔後、臥位に固定し、下腿にレーザードップラー血流計、および水素クリアランス血流計のプローベを装着して組織血流量を測定した。大腿基部を駆血帯で8時間虚血し、それに引き続いて180分間の再潅流を行った。虚血前、虚血中、再潅流直後、及び再潅流後30分,60分,180分に下腿皮膚血流を測定した。同時に下腿皮膚組織を採取しNick End Labeling法を用いてapotosisの程度を測定した。再潅流直後、皮膚の血流は減少したままであったが、60分後には血行の回復傾向が認められ、180分後には安定化した。しかし、虚血善の血流の約二分の一程度であった。Apoptotic cellsは虚血後、組織学的に壊死した皮膚の辺縁に観察され、壊死組織から離れた部分からは殆ど認められなかった。この研究から、皮膚の虚血再潅流障害では細胞の壊死だけでなく、Apotosisも関与していることが明らかとなった。今回、虚血再潅流障害からno reflow phenomenonを経て壊死に至る機序をを明らかにする目的で、no reflow phenomenon発現前後におけるエンドセリン-1やトロンボキサンB2およびサイトカインの役割について検討した。ウサギを用いた四肢の虚血-再潅流実験モデルを作成した。ウサギを麻酔した後、仰臥位で保定し一側の後肢を大腿部でタ-ニケットを用いて駆血した。下腿にレーザードップラー血流計、および水素クリアランス血流計のプローベを装着して組織血流量を測定した。予備実験の結果、8時間の虚血により再潅流障害が著明に出現することが明らかになった。8時間虚血前、虚血中、再潅流直後、及び再潅流30分、60分、120分後に下腿皮膚、筋組織を採取し病理組織検査、および組織活性測定用として冷凍保存した。四肢の虚血-再灌流障害におけるnoreflow phenomenonの発生機序について研究した。ウサギを用いた四肢の虚血-再灌流実験モデルを作成した。ネンブタール麻酔後、下腿にレーザードップラー血流計、および水素クリアランス血流計のプローベを装着して組織血流量を測定した。大腿動静脈に血管クランプをかけ、虚血前、虚血中、再灌流直後、及び再灌流後2時間ごとに6時間まで下腿血流を測定した。同時に下腿皮膚、筋組織を採取し組織活性測定用として冷凍保存した。組織は処置を行った後、それぞれ、エンドセリン1測定キット、トロンボキサンB2測定キットを用いて、電気免疫化学的に組織中のエンドセリン、トロンボキサンB2濃度および各種サイトカイン濃度を測定した。また、Nick End Labeling法を用いて虚血再灌流時におけるapotosisの程度を測定した。
Ｘ染色体多型の利点を応用した法歯学的個人識別における弱点の克服

X染色体上にあるSTRから18座位を選択して、一度のPCR操作で増幅し、検査を可能とするMultiplex PCRsystemを作成し、日本人男性378人、女性175人より人口データを取得した結果、X染色体を1つしか持たない男性の個人識別においても0.9999999992のpower of discriminationが得られ、女性の場合は0.999999999999997のpower of discriminationがある結果となり、十分な個人識別精度を持っていた。これらはミトコンドリアやY染色体が使用不可能であり、常染色体が不得手とする世代を隔てた同胞鑑定においても有効であった。DNA多型検査による新たな個人識別法として、X染色体上の18箇所のSTR多型を同時に検査出来る検査法を作成し、546人の日本人多型情報を取得し、論文として発表した。従来のDNA検査では常染色体(親から子へ二分の一の確率で遺伝し、血縁が遠くなると識別能力が著しく低下する)Y染色体(父親から息子へそのまま遺伝する)の2種類が用いられてきたが、X染色体検査は既存の検査では検討不能な事例の幾つかを(父親と娘の関係において常染色体鑑定のみでは結論が出せない場合等)の鑑定を可能とし、X染色体を用いたDNA鑑定単体でも十分な識別能力がある事を立証した。X染色体は母親から子供へ遺伝する場合において組み換えを起こす。その為、母親の持つ2つのX染色体のどの部位がどう組み換えを起こして子に伝わったかを把握し利用する事が出来ればX染色体検査だけの利点となると考え、上記18座位検査とは別に、組み換え検査用に13座位のX-STRを一度に増幅するPCR法を作成した。実際の鑑定事例に置いて使用し、組み換えを考慮したX染色体DNA検査を行う事でより精度を高める事に成功した。当講座で作成した18座位検査と13座位検査に加え、市販の12座位検査キットで同一サンプル(日本人約550人)を検査し、常染色体、ミトコンドリア、Y染色体の3種の検査結果との比較検討を可能とするデータベースを作成し、また、マレーシア人約300人のX-STR36座位の多型情報を取得した。マレーシア人集団は、東アジア集団である日本、中国、韓国の3集団に比べて多型の分布に明確な有意差が見られ、それらはヨーロッパ人集団と日本人集団との比較の間に入る事で、連続性を持って両者の間を埋める傾向を示した。DNA多型検査による新たな個人識別法として、X染色体上の18箇所のSTR(34塩基からなる繰り返し構造で、この繰り返しの回数が個人識別の指標になる)多型を同時に検査出来る検査法を作成し、546人の日本人多型情報を取得してLegal Medicineに論文として発表した。従来のDNA検査では常染色体(親から子へ二分の一の確率で遺伝し、血縁が遠くなると識別能力が著しく低下する)Y染色体(父親から息子へそのまま遺伝する)の2種類が用いられてきたが、X染色体検査は既存の検査では検討不能な事例の幾つかを(例えば父親と娘の関係において常染色体鑑定のみでは結論が出せない場合等)の鑑定を可能とし、X染色体を用いたDNA鑑定単体でも十分な識別能力がある事を立証した。当講座で作成した18座位検査と13座位検査に加え、市販の12座位検査キットで同一サンプル(日本人約550人)を検査し、常染色体、ミトコンドリア、Y染色体の3種の検査結果との比較検討を可能とするデータベースを作成に取り掛かっている。人種鑑別や集団移転学分野での重要な基礎情報となるマレーシア人約300人のX-STR12座位の多型情報を取得し、またX染色体鑑定においてSTR検査と相互発展性が高いと予想されるSNPs(一塩基変異)の検査に着手し、それぞれを学会において発表した。研究目的に掲げた5項目の内(1)18座位MultiplexPCR法の作成と日本人多型情報の習得(2)X染色体STRのhaplotype応用に適したMultiplexPCR法の作成を達成している。(3)世代を隔てた検査法の確立(4)日本人550人における常染色体、Y染色体、ミトコンドリアDNA、X染色体の4種の検査結果を統合したデータベース作成(5)X染色体上のSNPsの検査にもそれぞれ着手している。