hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高耐久性木質ボードの製造と材質に関する基礎的研究

pHが中性(6.7)とアルカリ性(10.3)と異なるが、分子量分布がほぼ同じ低分子量(数平均分子量:約300)のフェノール樹脂を合成し、スギ材に含浸・硬化させて寸法安定性について検討した。その結果、処理後のかさ効果の値は両樹脂間で差異は認められず、重量増加率(WPG)が約40%で12%となること、アルカリ性樹脂は溶液濃度の増加とともに材色が暗褐色となるが、中性樹脂の場合はほぼ無処理材に近い材色をしていること、WPG30%の試験片の吸湿率および体積膨張率は無処理材の約1/2となること、抗膨潤能はWPGが約30%までは急激に上昇して約60%に達し、pHの差異は認められないこと、吸水処理を2回繰り返しても抗膨潤能に差異は認められないことなどを明らかにした。また、同じWPGでは樹脂の分子量が小さいものほどかさ効果が大きく、また抗膨潤能も大きい。室内、屋外で太陽光のみあたる場所、屋外の3ヵ所で暴露した場合、無処理材の色差△Eは約1ヵ月で増加し、明度L*は低下するが、それ以後は一定となる。フェノール樹脂含浸処理材の△Eはやや低下、L*はやや大きくなる傾向があるが、pHの影響は認められない。屋外暴露では無処理材の彩度c*が暴露時間が長くなるとともに大きく低下し、材面は灰色となる。フェノール樹脂含浸処理材の△E、L*は暴露時間が長くなってもほとんど変わらず、またc*の低下割合もかなり小さい傾向がある。無処理材の腐朽試験による重量減少率は約50%であるが、低分子量フェノール樹脂処理材の場合はほとんど重量減少がみられず、pHによる影響も認められない。数平均分子量が290のメタブロモフェノール樹脂を合成して木材に含浸・硬化させた試料についてX腺マイクロアナライザー(EPMA)により検討した結果、3%濃度で厚壁の晩材仮道管の壁全体にわたって低分子量樹脂が分布していることが明らかになった。本年度は、研究実施計画に沿って、まず、pHの異なる低分子量の含浸用フェノール樹脂を合成し、その樹脂の分子量分布と平均分子量について現有のGPC装置により検討した。その結果、pHが6.5と10.3で、数平均分子量が300から330程度の樹脂が合成できた。また、比較のために、ボード製造に際して接着剤として用いられている高分子量(数平均分子量:1078)のフェノール樹脂(pH :10.3)を合成した。これら合成した樹脂を供試して各種濃度の水溶液を作成し、スギの木口試験片(30mm×30mm×5mm)およびストランド・パーティクルに含浸するとともに、寸法安定性について検討した。その結果、いずれの樹脂の場合にも、水溶液濃度と含浸率との間には良好な直線関係があり、含浸率を規制できることを明らかにした。また、pHが中性であるフェノール樹脂を供試した場合も、アルカリ性の樹脂の場合の結果に近い程度まで、スギの寸法安定性が改善できることが明らかになった。すなわち、含浸率15%で比較した場合、pH6.5の低分子量樹脂で処理した木材の抗膨潤能は65%、pH10.3の場合は63%、接着剤の場合は15%であった。なお、抗吸水能は、それぞれ、42、41、36%であった。

また、高分子量樹脂の含脂率を8%一定として、低分子量樹脂の含脂率を、0、5、7.5、10%の4水準として、ラジア-タパインのフレークに所定量の樹脂混合液を噴霧添加してパーティクルボードを製造した。この場合の目標ボード比重は0.6、マット含水率は12%、圧締条件は180°C、35kgf/cm^2、10分として、10mm厚のボードを製造した。これらの各種ボードの耐久性について検討するため、現在、日本(京都)とインドネシアでの屋外暴露を行っている。pHが中性(6.7)とアルカリ性(10.3)と異なるが、分子量分布がほぼ同じ低分子量(数平均分子量:約300)のフェノール樹脂を合成し、スギ材に含浸・硬化させて寸法安定性について検討した。その結果、処理後のかさ効果の値は両樹脂間で差異は認められず、重量増加率(WPG)が約40%で12%となること、アルカリ性樹脂は溶液濃度の増加とともに材色が暗褐色となるが、中性樹脂の場合はほぼ無処理材に近い材色をしていること、WPG30%の試験片の吸湿率および体積膨張率に無処理材の約1/2となること、抗膨潤能はWPGが約30%までは急激に上昇して約60%に達し、pHの差異は認められないこと、吸水処理を2回繰り返しても抗膨潤能に差異は認められないことなどを明らかにした。また、同じWPGでは樹脂の分子量が小さいものほどかさ効果が大きく、また抗膨潤能も大きい。屋内、屋外で太陽光のみあたる場所、屋外の3カ所で暴露した場合、無処理材の色差ΔEは約1カ月で増加し、明度L*は低下するが、それ以後は一定となる。フェノール樹脂含浸処理材のΔEはやや低下、L*はやや大きくなる傾向があるが、pHの影響は認められない。屋外暴露では無処理材の彩度c*が暴露時間が長くなるとともに大きく低下し、材面は灰色となる。フェノール樹脂含浸処理材のΔE、L*は暴露時間が長くなってもほとんど変わらず、またc*の低下割合もかなり小さい傾向がある。無処理材の腐朽試験による重量減少率は約50%であるが、低分子量フェノール樹脂処理材の割合はほとんど重量減少がみられず、pHによる影響も認められない。数平均分子量が290のメタブロモフェノール樹脂を合成して木材に含浸・硬化させた試料についてX線マイクロアナライザー(EPMA)により検討した結果、3%濃度で厚壁の晩材仮道管の壁全体にわたって低分子量樹脂が分布していることが明らかになった。
フランス近代建築デザイン理論における「景観」概念の生成

本年度は、フランス近代建築デザイン論における「景観」概念に関して、土木・造園分野との比較・考察を行った。新たに得られた知見は以下の通りである。1建築・庭園・土木の分野における「景観」概念を学校教育プログラムから見ると、土木分野については、19世紀には都市の美化という観点から景観概念が抽出できるが、20世紀になると国土開発の近代化にともなって景観概念の欠如が著しくなる。一方造園教育では、19世紀における英国式風景庭園の影響から、20世紀におけるフランス式整形庭園の再評価への移行が見られた。土木・造園いずれにおいても、学校教育における「景観」の意味は都市の植栽空間との関連で限定的に言及されている。2(1)建築・庭園・土木の分野における「景観」概念の関連という点に関しては、とくに1920年代のモダニズム運動における建築・造園の緊密な関係がみられた。すなわち、従来の建物・背景(都市的環境もしくは自然的環境)の二重構造から、建物・敷地周辺環境(おもに植栽空間)・背景の三重構造において景観配慮がなされるようになる。(2)ル・コルビュジエの「景観」概念と具体的な建築作品の制作との照合については、「建築的プロムナード」を主題として検討した。ル・コルビュジエのいくつかの建築作品の制作プロセスに焦点を当て、その景観構成の手法(景観の三重構造の再編)を具体的に明らかにすることにより、19世紀までの静的景観(シーン)に対して、20世紀の建築デザイン理論における動的景観(シークエンス)への主題の変容が明らかとなった。本年度は、フランス近代建築デザイン理論のうち、ル・コルビュジエとオーギュスト・ショワジイによる論説を取り上げ、建築の景観デザインに関する理論を抽出し、比較検討を行った。新たに得られた知見は以下の通りである(以下の内容は投稿中もしくは投稿準備中であり、次年度に発表予定である)。1ル・コルビュジエに関しては、1920年代の著作から独自の景観デザイン論を抽出し、「建築的プロムナード」の概念構成の特徴を把握した。とくにパルテノン神殿に関する記述に、ショワジイとの明白な類似点が見出せた。ル・コルビュジエに特異な点として、たんに即物的な建物の景観ではなく、「景観」における「建築的」特徴を記述しようとする意図が見られた(Vers une architecture,1923)。すなわち建築的広がりの「内dedans」性が、現象学的に捉えられ、即物的な内部・外部の空間領域を越えて、外部空間にも適応されている。一方でショワジイの場合(Histoire de l'architecture,1899)、パルテノン神殿に関する記述は即物的景観論に留まり、「景観」は視覚的内容に還元されていることが、「ピトレスク(絵画的)pittoresque」と形容される歴史的建築作品についての記述から判明した。これは、美学的、心理的内容と関わるイギリス庭園論における「ピクチュアレスク(絵画的)picturesque」概念とも異なっている。2また他方、実際の建築制作の面からみると、ル・コルビュジエにおける「建築的プロムナード」は斜路を巡る建築空間構成に具現化されるわけであるが、建築設計過程における斜路の変容に、ル・コルビュジエが「建築的プロムナード」について理論的に記述し得なかった内容が解釈できることが判明した。従って今後、「景観」概念の理論的検討に際して、具体的な建築作品の制作との照合も必要である。
香りを用いた芸術療法「アロマコラージュ療法」の開発および効果の検討

本研究では、精油を使ってフレグランスを制作し、その香りをコラージュで表現するという香りを使ったアートセラピーを開発し、効果の検討を行った。アロマコラージュ療法後、ネガティブな気分、身体感覚は緩和され、ポジティブな気分、身体感覚は高まっていた。フレグランス、コラージュ作品、パーソナリティ特性の関連が認められた。アロマコラージュ療法によって充足できる欲求として、創造性、自己表現、自尊感情、協調、依存の5因子が抽出された。3回体験することにより社会的スキルが向上し、作品に変化が生まれ、自己表現が深まっていた。以上のようにアロマコラージュ療法による効果は、心理、社会、身体的側面に及ぶことが示された。平成24年度は、1平成23年度までに行った調査のとりまとめ、公表を行うとともに、2新たな視点での研究に着手した。1については、『感覚療法への招待』(福島明子編著、2012年5月31日、風間書房)を発行した。本研究における嗅覚を中心とする応用的アプローチの方法、研究成果、意義をまとめるだけでなく、視覚、体性感覚や聴覚、深部感覚など、感覚から心身にアプローチしている他の研究者の研究を紹介し、「感覚療法」という新たな療法、研究領域の提言を行った。また日本健康心理学会において、平成23年度までに行った研究成果について公表を行った(福島明子アロマコラージュ療法における作品と気分の関連、8、日本健康心理学会第25回大会、2012年9月1日・2日、東京家政大学)。2については、アロマコラージュ療法において独自に導入している「作品を振り返るためのワーク」(以下、「ワーク」と標記)が、シェアリングでの語りに及ぼす効果について検討を行うための調査を実施した。分析の結果、「ワーク」を行うことで、作品への気づき、受容が高まるなどの効果がみとめられた。この研究結果については、平成25年度に開催される学会において発表する予定である。以上のように、平成24年度は、平成23年度までに実施した調査結果を著書や学会をとおして広く公表するとともに、新たな視点での研究にも着手した。交付期間中の研究計画を順調に遂行できているといえる。本研究では、人間の自然治癒力に働きかけるアロマセラピーにコラージュ療法を導入した、香りを使った初めての芸術療法「アロマコラージュ療法」を開発し、体験中、体験後の変化について心理・社会・身体的側面から検討を行った。平成23年度はアロマコラージュ療法による自律神経系への効果、および社会的効果について、平成24年度は本療法独自に考案した「作品と向き合うためのワーク」がシェアリングにおける語りにもたらす効果について検討を行った。平成25年度は、アロマコラージュ療法において創作したフレグランスによる心身、および作品に対する意識への芳香浴効果について検討を行った。また、研究期間前に実施した調査結果のとりまとめも行った。その結果、アロマコラージュ療法による気分や身体感覚の緩和、アロマコラージュ療法による欲求充足、グループで複数回アロマコラージュ療法を体験することによる社会的スキルの向上、および作品変化・作品における自己拡大、「作品と向き合うためのワーク」による気づきの促進・作品受容の高まりなどの効果がみとめられた。平成24年度までに実施した研究成果は著書、学術誌、学会において発表し、平成25年度の研究成果については学術誌に投稿準備中である。さらに適応指導教室の不登校児童生徒、自閉症児親の会、東日本大震災の被災者などを対象にしたアロマコラージュ療法による支援活動にも積極的に取り組み、よりスムーズで効果的な実施方法の確立に努めた。以上のようにアロマコラージュ療法による心理・社会・身体的効果が明らかにされ、また問題や困難を抱えた方たちへの支援活動をとおし、よりスムーズで効果的な実施手続きも確立した。自然療法(アロマセラピー)と心理療法(コラージュ療法)を融合した、香りを使った新たなアートセラピー、嗅覚を中心とする感覚をとおした心身へのアプローチ法が確立されたといえる。本研究の目的は、人間の自然治癒力に働きかける自然療法のひとつであるアロマセラピーに、心理療法であるコラージュ療法を導入することにより、香りを使った初めての芸術療法「アロマコラージュ療法」を開発し、効果の検討を行うことである。具体的には、好きな精油を用いてフレグランスを制作し、その香りをコラージュで可視化する。そして、短期的および長期的観点から、心理的・身体的・社会的効果の検討を行う。検討内容は大きく2つに分けられる。主観的評価や生理的指標を用いたアロマコラージュ療法による自律神経系・免疫系への効果、およびアロマコラージュ療法を複数回実施することによる自尊感情や社会的スキルへの長期的な心理社会的効果である。平成23年度は、アロマコラージュ療法による自律神経系への効果について検討を行う。また、2週間に1回の割合で複数回、アロマコラージュ療法を継続的に実施し、作品の変化を検討するとともに、自尊感情や社会的スキル等への長期的な社会的効果についても検討を行う。

平成24年度はアロマコラージュ療法による免疫系への効果について検討を行う。平成24年度以降、研究成果を学会で発表し、国内外の学会、アロマセラピー団体の学術誌等において公表する。そして平成25年度は平成2324年度に得られた研究成果の総括を行う。3年間の交付期間に予定している研究計画のうち、1年目(平成23年度)に実施した調査結果の公表を2年目(平成24年度)に終えるとともに、2年目(平成24年度)に予定していた調査を終えることができたため。平成23年度は、アロマコラージュ療法による自律神経系への効果について検討を行った。アロマコラージュ療法前、実施中、アロマコラージュ療法後に、センサーにより自律神経機能を測定し、リラクセーション効果、ストレス緩和効果の検討を行った。また、長期的な社会的変化として、2週間おきに複数回、アロマコラージュ療法を継続して実施し、第1回の1週間前、第3回の1週間後に自尊感情と社会的スキルを測定した。前者についてはデータ解析中で、学会発表の準備中である。後者については学会発表を経て、学術誌に論文が掲載された。以上のように、データの収集は予定どおり進んでいる。研究成果は平成24年度以降公表する予定であったが、平成23年度中に学会発表を経てレフリー付の学術誌に成果を公表することができ、また韓国で開催された日韓健康科学ワークショップにおいても成果を公表した。さらに本研究者が編著者として平成23年度に本の企画立案、執筆・編集を進めてきた単行本が平成24年5月に発行された。このように1年目から学会、学術誌、海外でのワークショップにおいて研究成果を公表し、また年度内ではないものの平成24年度初めに単行本を発行し、研究は計画以上に進んでいるといえる。1年目(平成23年度)は量的データをもとにアロマコラージュ療法の生理的効果、心理社会的効果についての検討を行い、2年目(平成24年度)は、質的研究(語りをもとにしたプロトコル分析)をもとに作品(フレグランス、コラージュ作品)および作品に対する意識の検討を行った。3年目(平成25年度)は、量的データ・質的データ双方を用いて、作品(フレグランス、コラージュ作品)が心身に及ぼす効果について検討を行う予定である。平成24年度は、アロマコラージュ療法による免疫系への効果について検討を行う。当初は採血を行い分析を行う予定であったが、被験者への負担を考え、非侵襲的方法である唾液採取によりデータを収集し、唾液コルチコーゼなど免疫機構への影響について検討を行う。また、質的研究を用いた研究についても研究計画の立案を行っている。平成23年度に収集したデータの分析を進め、国内の学会等において学会発表を行い、論文投稿の準備を進める。アロマコラージュ療法実施のための消耗品(精油、容器、文房具等)を購入する。制作したフレグランスを使用することが、心身にどのような効果をもたらすか検討を行うため、フレグランスで常時、芳香浴を行うことができるペンダントを購入する。
待ち行列理論から観た相乗りタクシーの解析

この一年間、「待ち行列理論から観た相乗りタクシーの解析」を分担者と共同で多方面から研究して来ました。「相乗り」に関する一つの研究成果が、ドイツのOR雑誌EIKに発表したStochastic properties of sharinga taxi(相乗りタクシーの確率的特性)である。これは、都立大学経済学部の中塚氏と代表者との共同ですすめてきた研究の一端を纒めたもので、相乗りタクシーの客が待ち行列で待っている時、自分が何台目のタクシーに乗車できるかを話題にしたものです。これらの確率を式として表現することにも苦労しましたが、その式を評価するのに大変難儀しました。結果的には、組み合わせ理論や整数論等の理論を適用することで、非常に興味深い成果を得ることができました。また一方、「タクシー待ち」でよく見受けられる「並列待ち行列」に関する研究の成果は、シンポジウム研究集会で発表した「効率から見た並列待ち行列」です。並列待ち行列系の解析は、一見簡単そうに見えるが、2つの並列待ち行列系の解析すら理論的平衡解が求められていない。上記の研究発表も理論的平衡解の性質を論じたり、近似解を示した途中経過の報告です。これら2件の研究報告は、本科学研究費補助金の分担者の協力のもとで実った成果であり、分担者の協力に感謝の意を表したい。更に、本科学研究費補助金のお蔭で、この一年間代表者は勿論のこと分担者も、それぞれの分野の数多くのシンポジウムや研究集会に参加し、研鑚を重ねることができ有意義な研究活動ができましたことを感謝している。
塩基除去修復における DNA 傷害の初期認識機構の解明

MutMタンパク質はグアニンの酸化傷害を認識し、除去する酵素である。傷害認識の初期段階を解明するために、傷害を含むDNAだけでなく傷害を含まないDNAとの複合体の立体構造解析を行った。傷害を含まないDNAとの複合体では、これまで報告されている傷害を含むDNAとの複合体とは異なり塩基のフリップアウトもDNA鎖の曲がりも起こっていなかった。これらの立体構造をもとに、傷害認識の初期段階ではMutMは塩基をフリップアウトさせることなく、DNA鎖の主溝側から傷害を認識しているモデルを提唱した。本研究ではDNA修復系の1つである塩基除去修復について傷害認識の初期過程を解明することを目的としている。塩基除去修復ではDNAグリコシラーゼという酵素が傷害塩基を認識し、傷害塩基とDNA鎖のグリコシド結合を切断する。まずは既に結晶化が成功している高度好熱菌Thermus thermophilusHB8由来のDNAグリコシラーゼMutMとDNAとの複合体のX線回折データについて解析を行った。傷害塩基である8-オキソグアニンを含むDNAとの複合体については高分解能回折データを用いて構造解析の精密化を行った。構造解析の結果、他のDNAグリコシラーゼと同様に傷害塩基である8-オキソグアニンがDNAの外側にフリップアウトし、DNA鎖が曲がっていることが分かった。塩基が除去された後のAPサイトを含むDNAとの複合体の回折データについても精密化を行った。その結果、APサイトを含むDNAとの複合体でもDNA鎖が曲がっていることが分かった。これらの立体構造解析からDNA鎖が曲がることが傷害認識の最終段階に重要であると考えられる。さらに、傷害認識の初期過程を解明するために傷害を含まないDNAとの複合体の構造解析を試みた。傷害を含まないDNAとの複合体については、高分解能の回折データの取得が必要であるが、これまでに得られた回折データを解析したところ、DNA鎖は曲がっておらず、塩基のフリップアウトも起こっていないことが分かった。DNA修復の過程で塩基除去修復酵素は、傷害塩基をフリップアウトさせて認識することが知られている。しかし、これは傷害塩基の認識過程の最終段階であり、初期段階でどのよう認識しているかは不明な点が多い。本研究では傷害認識の初期過程を明らかにする目的で、高度好熱菌Thermus thermophilus HB8由来の塩基除去修復酵素とDNAとの複合体の立体構造解析を行っている。これまでにMutMと8-オキソグアニンを含むDNAとの複合体、MutMとAP部位を含むDNAとの複合体、MutMと傷害を含まないDNAとの複合体の3種類の複合体の結晶化に成功し、X線回折データの収集を行った。傷害を含むDNAとの複合体に関しては立体構造解析の精密化の最終段階である。傷害を含まないDNAについては精密化の途中である。これまでの解析の結果、傷害を含むDNAとの複合体については他の塩基除去修復酵素と同様に傷害駅をフリップアウトさせてDNA鎖を曲げて認識していることが分かった。一方、傷害を含まないDNAとの複合体では塩基のフリップアウトやDNA鎖の曲がりがないことが分かった。さらにこのような違いが、他の塩基除去修復酵素にもあてはまるのかを調べるために、family 5に属するウラシルDNAグリコシラーゼUDG-Bについても立体構造解析を進めている。これまでの研究からAP部位を含むDNAとの複合体では、DNA鎖が曲がっていることが報告されている。そこで、傷害を含まないDNAとの複合体について結晶化を試みたが、結晶化には至っていない。UDG-Bと傷害を含まないDNAとの結合力をゲルシフト法で測定すると、これまでに使用していたDNAの長さでは結合力が不十分であることが分かった。本研究では複数の塩基除去修復酵素について傷害のあるDNAと傷害のないDNAとの複合体の構造解析を行い、傷害認識の初期過程の一般法則を見いだすことを目的としている。これまでに、塩基除去修復酵素MutMについて傷害のあるDNAと傷害のないDNAとの複合体の構造解析を行っている。本年度はさらにウラシルDNAグリコシラーゼ(UDG-B)についても傷害のないDNAとの複合体の構造解析を進める予定であったが、結晶化が困難で未だ回折データの収集には至っていない。よって、当初の計画より「遅れている」と評価した。DNA修復において最も重要な過程の一つが膨大なDNA配列の中から傷害部位を見つけることである。塩基除去修復系では、DNAグリコシラーゼが傷害の認識を行うが、その過程でDNA鎖を曲げ、傷害塩基をDNA鎖からフリップアウトさせて傷害を認識していることが知られている。しかし、これは傷害認識の最終段階であり、傷害認識の初期段階でDNA鎖とどのような相互作用をしているかは未解明である。本研究では、高度好熱菌由来のDNAグリコシラーゼを用いて構造解析を行うことにより、傷害認識の初期過程を解明することを目的としている。高度好熱菌由来のMutMと8-オキソグアニンを含むDNAとの複合体を結晶構造解析した結果、他のDNAグリコシラーゼと同様に8-オキソグアニンをフリップアウトさせて、DNA鎖を曲げていることがわかった。その際、8-オキソグアニンはAsp211の側鎖とLeu209, Ser207の主鎖と水素結合することにより認識されているおり、反対側のシトシンはArg99の側鎖によって認識されていることがわかった。一方、傷害を含まないDNAとの複合体構造では、DNA鎖は曲がっておらず、塩基のフリップアウトも起こっていないことがわかった。

また、MutMの構造をDNAと結合している場合とDNAと結合していない場合で比較すると、傷害を含むDNAとの複合体では2つのドメンンがDNAを挟む方向に動いているのに対し、傷害を含まないDNAでは2つのドメインはよりopenな構造になっていることがわかった。これらの複合体の立体構造解析から、MutMは傷害認識の初期段階では塩基を一つ一つフリップアウトさせるのではなく、DNA鎖をスライドしながら不安定な塩基対を探している可能性が示唆される。MutMタンパク質はグアニンの酸化傷害を認識し、除去する酵素である。傷害認識の初期段階を解明するために、傷害を含むDNAだけでなく傷害を含まないDNAとの複合体の立体構造解析を行った。傷害を含まないDNAとの複合体では、これまで報告されている傷害を含むDNAとの複合体とは異なり塩基のフリップアウトもDNA鎖の曲がりも起こっていなかった。これらの立体構造をもとに、傷害認識の初期段階ではMutMは塩基をフリップアウトさせることなく、DNA鎖の主溝側から傷害を認識しているモデルを提唱した。本研究は、DNA修復酵素の1つであるMutMとDNAとの複合体の構造解析を行うことにより、傷害認識機構の解明を目指すものである。傷害を含むDNAとの複合体の解析データについては、2種類の傷害を含むDNAとの複合体の高分解能の回折データが得られており、その解析が進んでいる。しかし、傷害を含まないDNAとの複合体については高分解能の回折データの取得が遅れているため、構造解析が精密化の途中である。平成26年度中に3種類のDNAとMutMとの複合体の構造解析を終える計画であったが、そのうち1つである傷害を含まないのDNAとの複合体の構造解析が遅れているため、当初の計画より「遅れている」と評価した。既に回折データの収集に成功しているMutMの3種類の複合体の構造については精密化を完了させ、座標データをProtein Data Bankに登録し公開する準備を進める。結晶化に難航しているUDG-Bについては、DNAの配列や長さを変えて結晶化を試みる予定である。結晶化に最適なDNAの長さを確認するために、ゲルシフト法を使って複合体を形成するのに十分な結合能を有するDNAの長さを確認する。UDG-Bの結晶化が成功しない場合に備えて、既に基質を含まない立体構造の解析が終了しているAPエンドヌクレアーゼEndoIVや発現・精製方法が確立している他の塩基除去修復酵素UDG-AやMutYについてDNAとの複合体の結晶化を行い、結晶化に成功したものについて立体構造解析を進める。複数のDNA修復酵素で傷害を含まないDNAとの構造解析が成功した場合は、それらの構造を比較し傷害認識の初期過程に重要な役割を果たしていると考えられるアミノ酸残基を推定する。その残基の変異体の作製してDNA結合能の有無、傷害塩基のフリップアウトの有無、グリコシラーゼ活性の有無を測定し、立体構造解析から推定した傷害認識の初期過程のモデルについて検証する。
アルギニンメチル化が担う胎児期の血管形成メカニズムの解明

正常な血管は、臓器の発生や胎児の生存と発育に重要であり、また、成体での組織の働きに必須である。特に、酸素や栄養素を全身に循環させる血管の構造と機能において、血管の内側を裏打ちして存在する血管内皮細胞の構造と機能は極めて重要である。タンパク質の翻訳後修飾の一つであるアルギニン残基のメチル化について、このアルギニンメチル化を触媒する酵素・PRMT1は、血管の構造や機能に重要な血管内皮細胞で、特に胎生期で強く発現しているが、その機能は不明である。本研究では、内皮細胞特異的なPRMT1欠損マウスの開発と、血管の高次構造の可視化を可能とする組織透明化in vivo 3Dイメージング技術とを組み合わせて、血管形成におけるアルギニンのメチル化が担う役割とその分子基盤の解明を目指している。本年度は、樹立した内皮PRMT1欠損マウス(P1-ECKOマウス)について、胎生致死のタイミングを詳細に解析した。出産日から妊娠期間を遡った解析を行い、内皮PRMT1欠損マウスが胎生13日目から14日目に致死となることを突き止めた。また、組織中での内皮細胞のin vivo 3Dイメージング解析に向けて、赤色蛍光を発するレポーターマウスとP1-ECKOマウスとの交配を進め、「ノックアウトされた細胞(内皮細胞)のみが赤色蛍光を発するP1-ECKOマウス」を新たに樹立した。また、イメージング解析に必須である組織の透明化について、透明化試薬についての組成や処理時間、また、多光子顕微鏡での観察条件を、実際のマウスの各臓器を用いて条件検討を進めた。内皮PRMT1欠損マウス(P1-ECKOマウス)の胎生致死のタイミングを解析し、胎生1314日目で致死となることを突き止めた。また、赤色蛍光を発するレポーターマウスとP1-ECKOマウスとの交配で、PRMT1がノックアウトされた内皮細胞のみで赤色蛍光を発するP1-ECKOマウスの作出に成功した。組織中での内皮細胞のin vivo 3Dイメージング解析に向けて、組織の透明化処理の検討を行い、観察に適した条件を最適化する。また、作出した、ノックアウトされた細胞(内皮細胞)のみが赤色蛍光を発するP1-ECKOマウスを用いて、組織内の血管構造を観察し、血管形成におけるPRMT1によるアルギニンのメチル化が担う役割とその分子基盤の解明を目指す。正常な血管は、胎児の生存と発育、また、成体での組織の働きに必須であり、酸素や栄養素を全身に循環させる血管の構造と機能に、血管内皮細胞は極めて重要である。タンパク質の翻訳後修飾であるアルギニンのメチル化を触媒する酵素・PRMT1は、血管の構造や機能に重要な血管内皮細胞で、特に胎生期で強く発現しているが(未発表)、その機能は不明である。本年度は、磁気ビーズと抗体を活用した胎生期のマウス肝臓からの血管内皮細胞単離・回収法を確立した。回収した胎児肝臓内皮細胞からタンパク質を抽出し、胎仔由来の血管内皮細胞でPRMT1タンパク質が発現することを確認した。また、PRMT1のタンパク質発現は胎生期に強く、出生後に減弱することを見出した。さらに、PRMT1の酵素活性領域をloxP配列で挟んだマウス(PRMT1-floxマウス)と、血管内皮細胞で特異的にCre組換え酵素を発現するマウス(Tie2-Creマウス)とを交配し、血管内皮細胞特異的なPRMT1欠損マウス(PRMT1-ECKOマウス)系統の開発に成功した。これまでに、ヘテロ欠損マウス同士の交配実験から、PRMT1ホモ欠損マウスが産仔として得られないことが判明しており、妊娠期間を遡った解析から、内皮PRMT1欠損マウスは、胎生14日目頃に致死となることを突き止めた。内皮細胞特的なPRMT1遺伝子欠損(P1-ECKO)マウスの作出に成功した。また、マウスの胎仔組織からの内皮細胞調製法を確立し、内皮PRMT1は胎仔発育の各段階で発現量を変化させることを突き止めた。出産日から妊娠期間を遡った解析を行い、内皮PRMT

1欠損マウスが胎生13日目から14日目に致死となることを突き止めた。また、組織中での内皮細胞のin vivo 3Dイメージング解析に向けて、赤色蛍光を発するレポーターマウスとP1-ECKOマウスとの交配を進め、「ノックアウトされた細胞(内皮細胞)のみが赤色蛍光を発するP1-ECKOマウス」を新たに樹立した。また、イメージング解析に必須である組織の透明化について、透明化試薬についての組成や処理時間、また、多光子顕微鏡での観察条件を、実際のマウスの各臓器を用いて条件検討を進めた。内皮PRMT1欠損マウス(P1-ECKOマウス)の胎生致死のタイミングを解析し、胎生1314日目で致死となることを突き止めた。また、赤色蛍光を発するレポーターマウスとP1-ECKOマウスとの交配で、PRMT1がノックアウトされた内皮細胞のみで赤色蛍光を発するP1-ECKOマウスの作出に成功した。樹立した内皮PRMT1欠損マウス(P1-ECKOマウス)について、胎生致死のタイミングを解析するとともに、組織中での内皮細胞のin vivo 3Dイメージング解析に向けて、赤色蛍光を発するレポーターマウスとP1-ECKOマウスとの交配を行い、ノックアウトされた細胞(内皮細胞)のみが赤色蛍光を発するP1-ECKOマウスを作出する。組織中での内皮細胞のin vivo 3Dイメージング解析に向けて、組織の透明化処理の検討を行い、観察に適した条件を最適化する。また、作出した、ノックアウトされた細胞(内皮細胞)のみが赤色蛍光を発するP1-ECKOマウスを用いて、組織内の血管構造を観察し、血管形成におけるPRMT1によるアルギニンのメチル化が担う役割とその分子基盤の解明を目指す。
酵素類似機能発現のための反応場の設計(金属錯体による糖質の分子識別と変換)

1.糖質変換反応および糖質の分子識別機能を有する金属錯体の探索-N-置換ジアミンとの組み合わせの系では従来のNi^<2+>の他にCo^<2+>, Sr^<2+>, Pr^<3+>がC2エピ化に対し有効であることが判明した.またアルカリ土類元素の中でCa^<2+>がケトースへの異性化を伴いながらも高い反応性を示すことが明らかとなった.さらにCa^<2+>の場合には簡単なモノアミンでもエピ化が速やかに進行することが見いだされた.2.N-置換ジアミンーNi(III)錯体によるアルドースのエピ化反応機構の解明-エピ化反応をC1位の炭素が^<13>Cで同位体標識されたD-Glcを用い^<13>CNMRにより検討した.その結果,立体特異的炭素骨格転位を伴う極めて珍しいC2エピ化が進行していることが明らかとなった.さらにFXAFS法により,反応活性線は単核錯体であることが判明した.以上の知見を基に,エピ化反応の機構を提案した.3.モノアミンーCa^<2+>系によるアルドースの変換反応機構の解明-CaD1^<2+>-トリエチルアミン系による反応を,〔1-^<13>C〕-D-Glcを用いD1^<13>CNMRにより検討した.その結果,立体特異的炭素骨格転位を伴うC2エピ化と同時に転位を伴わないケトースへの異性化も進行していることが明らかとなり,それらの反応機構を提案した.4.酵素類似機能を有する反応場の設計-tren{tris(2-aminoethyl)amine}とNi^<2+>とD-Manとの反応により糖残基を2個含んだ錯体{〔Ni(D-Man_2-tren)〕Cl_2・CH_3OH}が得られた. X線結晶構造解析を行ったところ, trenに二つのD-ManがN-グリコシドで連結し, tren由来のN原子と各糖部分のC2のO原子とでNiに六座配位していることが判明した.また,本錯体中で二つのD-Man部が互いに接近し,水素結合によるネットワークが形成された特異な構造を持っていることが明らかにされた.この事実は,金属錯体上に糖質を集積させることにより,酵素類似機能を発現する可能性のある新規反応場の分子設計の手掛かりとして重要な知見と考えている.1.糖質変換反応および糖質の分子識別機能を有する金属錯体の探索-N-置換ジアミンとの組み合わせの系では従来のNi^<2+>の他にCo^<2+>, Sr^<2+>, Pr^<3+>がC2エピ化に対し有効であることが判明した.またアルカリ土類元素の中でCa^<2+>がケトースへの異性化を伴いながらも高い反応性を示すことが明らかとなった.さらにCa^<2+>の場合には簡単なモノアミンでもエピ化が速やかに進行することが見いだされた.2.N-置換ジアミンーNi(III)錯体によるアルドースのエピ化反応機構の解明-エピ化反応をC1位の炭素が^<13>Cで同位体標識されたD-Glcを用い^<13>CNMRにより検討した.その結果,立体特異的炭素骨格転位を伴う極めて珍しいC2エピ化が進行していることが明らかとなった.さらにFXAFS法により,反応活性線は単核錯体であることが判明した.以上の知見を基に,エピ化反応の機構を提案した.3.モノアミンーCa^<2+>系によるアルドースの変換反応機構の解明-CaD1^<2+>-トリエチルアミン系による反応を,〔1-^<13>C〕-D-Glcを用いD1^<13>CNMRにより検討した.その結果,立体特異的炭素骨格転位を伴うC2エピ化と同時に転位を伴わないケトースへの異性化も進行していることが明らかとなり,それらの反応機構を提案した.4.酵素類似機能を有する反応場の設計-tren{tris(2-aminoethyl)amine}とNi^<2+>とD-Manとの反応により糖残基を2個含んだ錯体{〔Ni(D-Man_2-tren)〕Cl_2・CH_3OH}が得られた. X線結晶構造解析を行ったところ, trenに二つのD-ManがN-グリコシドで連結し, tren由来のN原子と各糖部分のC2のO原子とでNiに六座配位していることが判明した.また,本錯体中で二つのD-Man部が互いに接近し,水素結合によるネットワークが形成された特異な構造を持っていることが明らかにされた.この事実は,金属錯体上に糖質を集積させることにより,酵素類似機能を発現する可能性のある新規反応場の分子設計の手掛かりとして重要な知見と考えている.
水熱処理及びイオン液体処理から得られる天然型キシランの構造と酵素による分解挙動

本研究は、植物細胞壁内に含まれるキシラン構造の多様性に着目し、天然構造を維持したキシラン画分を調製することで、実バイオマスに対する酵素の正確な反応特性を解析し、キシラン成分の利用拡大に向けた基礎的知見を得ることを目的としている。本課題では、これまでに草本系の資源作物であるエリアンサスを実験材料に用いたイオン液体処理を行うことで、キシランとリグニンを主に含む成分を収率よく回収できることを明らかにした。平成30年度は、得られたキシラン及びリグニンを含む画分の組成や、それらに対する酵素反応性の解析と、植物種による違いを検証するために、木質系原料を用いた際の検討を試みた。その結果、木質系を用いた場合でも、草本と比較すると溶解処理温度が高めで処理時間は長くなるが、草本と同様にキシラン及びリグニンを含む画分を調製することが可能であった。イオン液体処理によって調製されたキシラン及びリグニンを含む画分については、水に対する溶解性が異なる2つの画分が得られた。エリアンサスについては、キシラン主鎖に修飾されているアセチル基に加え、アラビノース残基やそれらに付加されるフェルラ酸やクマル酸含量が両者で異なることも明らかとなった。また、これらの画分に、キシラナーゼやアセチルキシランエステラーゼ、4-O-メチルグルクロニルエステラーゼなどの植物細胞壁分解酵素を作用させた結果、アセチル基については、アセチルキシランエステラーゼが作用し難いセチル基がグルクロン酸分岐周辺に存在することが明らかとなった。木質系については、現在、詳細な検討を行っている。今後は、キシランとリグニン間の結合の有無や様式に着目し、その構造的な特徴を明らかにすると同時に、酵素反応性を解析していく予定である。当初の計画通り、天然キシラン分画については、草本であるエリアンサスに加え、木質系原料であるナラを用いて実施し、イオン液体抽出の条件検討(160°C・3時間で、原料から固形分として75%可溶化)及び、キシラン/リグニン含有画分の回収(原料から約20%の回収率)に成功した。リグニン-キシラン複合体の酵素を用いた解析については、キシラナーゼ及びアセチルキシランエステラーゼ、4-O-メチルグルクロニルエステラーゼを用いた評価が終了し、リグニン-キシラン複合体の構造様式に対して新しい知見を得ることに成功した。また、植物細胞壁分解に寄与している考えられる糖質加水分解酵素ファミリー113に分類される酵素蛋白質(IrpGH131A)について、糖結合能の評価を行い、セルロースだけでなく、キチンにも結合することを新たに見出した。以上のように、当初計画に沿った形で順調に研究が進展している。草本及び木質原料からイオン液体抽出によって得られたリグニン/キシラン含有画分について、リグニンとキシランとが何らかの化学結合を介した複合体を形成しているのかどうかを検証する。具体的には、リグニン/キシラン含有画分に対して、これまでに得られた単一酵素を作用させ、ある程度低分子化させ、構造の均一化を図った後、FT-IRやNMR等の機器分析を行うことで構造決定を行っていく予定である。また、草本系及び木質系における構造的な違いを明らかにし、植物間の植物細胞壁構造の多様性について知見を得ることで、植物細胞壁利用の可能性についても検証する。個別酵素については、平成29年度と同様にまだ異種発現系が構築できていないα-グルクロニダーゼの調製を行うと同時に、触媒機能が明らかとなっていないGH131酵素についても、本研究で得られた天然基質を用いて酵素の機能検証を行う。また、令和元年度では、これまでに得られた成果を論文にまとめ、情報発信していくことにも力を入れる予定である。現在、キシランを代表するヘミセルロースの調製法は主にアルカリ処理による抽出が中心であるが、この手法ではエステル結合が加水分解されるため、キシランに付加されたアセチル基の脱離や、キシランとリグニン間を架橋するエステル結合の分解などが生じ、厳密には天然状態に近いキシランを調製することができない。我々は、これまでに、水熱処理法を用いるとキシランにアセチル基を残存させたまま回収することが可能であることや、イオン液体処理を用いるとヘミセルロース及びリグニンの一部がイオン液体中に溶け出たまま再析出物として回収できない現象を見出してきた。本研究では、水熱反応及びイオン液体処理に着目し、天然状態に近いキシラン成分の調製方法の構築を目指している。また、得られたキシラン成分に対する細胞壁分解酵素の作用機序を解析することを目指している。今回、草本系の資源作物であるエリアンサスを実験材料に用いてイオン液体処理を実施した。エリアンサス粉末をイオン液体によって加熱溶解処理後、脱イオン水の添加によりセルロースを主成分とする画分を再析出させ取り除いた。再析出しなかった可溶性画分を回収後、更に透析によってイオン液体を十分に除去することで、キシランとリグニンを主に含む沈澱成分を収率よく回収できることを明らかにした。最終的にイオン液体を含む透析外液中にはキシロースなどの単糖は検出されなかった。今後は、キシランとリグニンとの結合の有無を検証し、酵素反応性を解析していく予定である。

当初の計画通り、イオン液体処理によって最終的に得られる透析外液、即ち、イオン液体を高濃度で含む溶液中の糖分析を、配位子カラムを用いたHPLCにより分析することができた。また、実験手法を見直すことで、イオン液体中に溶解した植物細胞壁成分の回収率を上げることに成功し、その成分中にはキシラン及びリグニンが含まれることをFTIRにより確認することができた。リグニン-糖複合体の解析に用いる酵素の調製は、アセチルキシランエステラーゼについては組換え体酵素の調製が完了した。α-グルクロニダーゼについては、現在、形質転換体の作製を試みている。以上のように、当初計画に沿った形で順調に研究が進展している。本研究は、植物細胞壁内に含まれるキシラン構造の多様性に着目し、天然構造を維持したキシラン画分を調製することで、実バイオマスに対する酵素の正確な反応特性を解析し、キシラン成分の利用拡大に向けた基礎的知見を得ることを目的としている。本課題では、これまでに草本系の資源作物であるエリアンサスを実験材料に用いたイオン液体処理を行うことで、キシランとリグニンを主に含む成分を収率よく回収できることを明らかにした。平成30年度は、得られたキシラン及びリグニンを含む画分の組成や、それらに対する酵素反応性の解析と、植物種による違いを検証するために、木質系原料を用いた際の検討を試みた。その結果、木質系を用いた場合でも、草本と比較すると溶解処理温度が高めで処理時間は長くなるが、草本と同様にキシラン及びリグニンを含む画分を調製することが可能であった。イオン液体処理によって調製されたキシラン及びリグニンを含む画分については、水に対する溶解性が異なる2つの画分が得られた。エリアンサスについては、キシラン主鎖に修飾されているアセチル基に加え、アラビノース残基やそれらに付加されるフェルラ酸やクマル酸含量が両者で異なることも明らかとなった。また、これらの画分に、キシラナーゼやアセチルキシランエステラーゼ、4-O-メチルグルクロニルエステラーゼなどの植物細胞壁分解酵素を作用させた結果、アセチル基については、アセチルキシランエステラーゼが作用し難いセチル基がグルクロン酸分岐周辺に存在することが明らかとなった。木質系については、現在、詳細な検討を行っている。今後は、キシランとリグニン間の結合の有無や様式に着目し、その構造的な特徴を明らかにすると同時に、酵素反応性を解析していく予定である。当初の計画通り、天然キシラン分画については、草本であるエリアンサスに加え、木質系原料であるナラを用いて実施し、イオン液体抽出の条件検討(160°C・3時間で、原料から固形分として75%可溶化)及び、キシラン/リグニン含有画分の回収(原料から約20%の回収率)に成功した。リグニン-キシラン複合体の酵素を用いた解析については、キシラナーゼ及びアセチルキシランエステラーゼ、4-O-メチルグルクロニルエステラーゼを用いた評価が終了し、リグニン-キシラン複合体の構造様式に対して新しい知見を得ることに成功した。また、植物細胞壁分解に寄与している考えられる糖質加水分解酵素ファミリー113に分類される酵素蛋白質(IrpGH131A)について、糖結合能の評価を行い、セルロースだけでなく、キチンにも結合することを新たに見出した。初年度に得られたリグニン-
ノニルフェノール分解代謝遺伝子群の環境動態解析

本研究は、土壌環境でのノニルフェノールの動態を探るための基礎情報の獲得と分析手段の開発を目的としたものである。本研究の成果は以下のように要約される。1.環境試料から新規ノニルフェノール分解細菌YT株を分離し、YT株に対して新種Sphingobium amienseを提唱した。2.Sphingobium amiense YT株によるノニルフェノール分解経路を部分的に解明した:分枝型ノニルフェノールの種々の異性体に対する反応性の違いと、2種のヒドロキシラーゼが初期反応に関与すること、そしてノニルフェノールの分解代謝経路を部分的に明らかにした。3.活性汚泥から分離された既知のノニルフェノール分解細菌、Sphingomonascloacae JCM 10874^T株とSphingobium amiense YT株におけるノニルフェノール分解活性を比較した:ノニルフェノール濃度や異性体と分解活性の関係、関連する芳香族化合物群に対する分解活性の違いを明らかにした。4.将来的な研究である環境ホルモン分解細菌のゲノム解析に向けて、Sphingobium amiense YT株とSphingomonas cloacae JCM 10874^T株のゲノムサイズを決定した。5.Sphingobium amiense YT株においてとSphingomonas cloacae JCM 10874^T株の両菌株において、約200kbと約10kbのプラスミドを発見した。Sphingobiumamiense YT株の約10kbのプラスミドについては、Sphingomonasグループ細菌群を宿主とする有用な非伝達性ベクターとして応用・開発に成功した。本年度は、(1)先に分離したノニルフェノール(NP)分解性スフィンゴモナス属細菌YT株の分類学的性質の検討、(2)YT株による直鎖型および分岐型NPの分解様式の解明、(3)YT株の分岐型NP分解に影響を与える培養条件の検討、(4)NP分解混合培養系の解析、(5)NP分解に関わる遺伝子のクローニングを行った。各研究項目の概略は以下の通りである:(1)最近になってNP分解活性が報告されたスフィンゴモナス・クロアカエS3株と、形質学的特徴、種々の抗生物質に対する感受性、化学分類学的性質について比較し、さらにDNA-DNAホモロジー解析を行った。その結果、YT株はS3株とは異なる新種であることが判明した。(2)ガスクロマトグラフ(GC)-質量分析(MS)装置で分析した結果では、直鎖型NP分解の場合、まずフェノール環にヒドロキシ基が付加されてからフェノール環が開裂することが推定された。分岐型NPの分解については、約20種のNPアイソマーを分離するGC条件を見いだし、NP分解過程における各NPアイソマーの消長を追った結果、直鎖型に近いNPアイソマーが選択的に分解されることが判明した。(3)培地にフェルラ酸などのフェノール性有機酸を加えた条件でYT株を培養すると、分岐型NPの分解活性が高まること、また、フェルラ酸が共存する条件ではNPの分解が著しく抑制されることが観察された。この結果より、フェノール性有機酸の分解経路とNPの分解経路には接点があることが示唆された。(4)YT株と共存して分離されたNP非分解性のWT株との2員混合培養では、迅速なNP分解にはWT株の共存が必要であることが確認された。現在、さらに詳細な解析を進めている。(5)種々の方法で、NPの分解に関わる遺伝子のクローニングを試みたが成功には至らなかった。次年度は、NP分解遺伝子のクローニングと遺伝子の解析を重点的に進める予定である。また、(1)(4)の結果を、土壌生態系でのNP分解菌の動態解析に展開・応用する。

本年度は、まず、これまでの研究で用いてきたノニルフェノール分解性スフィンゴモナス属細菌YT株が新種であることを明らかにし、Sphingomonas amiensisと命名して細菌分類学の国際学会誌に論文投稿を行った。また、このS. smiensis YT株と藤井らによって報告されたノニルフェノール分解性Sphingomonas cloacae JCM10874株を用いて、1)ノニルフェノール分解代謝遺伝子と、2)分解代謝経路の解析を行った。さらに、3)土壌中におけるノニルフェノール系農薬の動態と分解微生物遺伝子を明らかにするたに、環流土壌モデル系についてPCR-変性勾配電気泳動(DGGE)法で遺伝子を解析した。以下に結果の概略を述べる。1)S. smiensis YT株とS. cloacae JCM10874株について巨大プラスミドの存在を見出した。そのプラスミドのサイズは、S. smiensis YT株では203kb、S. cloacae JCM10874株では254kbであった。これらのプラスミドは、ノニルフェノール分解能や多環芳香族化合物分解能を有さないスフィンゴモナス属菌株(当研究室が有するものについて)ではみつかっていない。現在、ノニルフェノール分解とプラスミドのより詳細な関係を解析している。また、S. smiensis YT株とS. cloacae JCM10874株のゲノムサイズが、それぞれ3.5Mbp、4.0Mbpであることを明らかにした。2)分枝型ノニルフェノールには様々な異性体が存在する。S. smiensis YT株は直鎖型に近い異性体をよく分解する選択性がみられたが、S. cloacae JCM10874株では、各異性体をほぼ同様な速度で分解した。S. smiensis YT株はノニルフェノールよりも環境ホルモン活性が強いオクチルフェノールも分解し、その中間代謝産物として、4-(1,1,3,3-テトラメチルブチル)ベンゼン-1,2-ジオールまたはヒドロキノンを生じることを明らかにした。3)ノニルフェノール系農薬(商品名、「ヨネポン」)溶液で土壌カラムを環流し、集積する微生物遺伝子をPCR-DGGE法で解析した。このノニルフェノール系農薬は、5日間の培養で約80%が消失し、土壌中の16Sリボソーム遺伝子解析では、特定の遺伝子群が集積することが判明した。現在、この遺伝子を解析している。本年度は、次の2つの方向から研究を進めた。1)新規ノニルフェノール分解性細菌スフィンゴビウム・アミエンセのYT株が持つ203kbプラスミドと10kbプラスミドのうち、後者のDNA全塩基配列を決定した。その結果、ノニルフェノール分解に関係する遺伝子は検出されなかったが、様々なスフィンゴモナス属細菌やスフィンゴビウム属細菌を宿主とする広宿主域プラスミドベクター系として応用できることを明らかにした。一方、203kbプラスミドについては、分離を試みたが、プラスミドが不安定であるため成功には至らなかった。2)実際に使用されている分枝型ノニルフェノールは多様な異性体の混合物である。このことは分解酵素の特定とそれに続く遺伝子の解明の際に多くの困難を生じている。
一九三〇年代台湾文学における「大衆」とそのリテラシー

一九三〇年代前半の台湾文壇では文芸大衆化をめぐる論争が巻き起こった。一般に「郷土文学論争」とよばれるこの論争における焦点が、文芸大衆化の方策としての使用言語の選択にあったことは広く知られている。本研究の目的は各議論における「大衆」の概念が、個人、時代、論者の使用言語およびそのリテラシー等によって一様ではないことや、一九三〇年代に急速に発達したメディア(新聞、雑誌、映画等)がこうした「大衆」の捕らえ方にも大きく影響を与えていることに注目し一九三〇年代の台湾文学における「大衆」とは一体何であったのか。またその「大衆」はどのようなリテラシーを有していたのか、という問題を明らかにしようとするものであった。研究の結果、30年代の台湾には主として1)文盲層、2)漢文通俗文学層、3)日本語大衆読者層、4)中文エリート層、5)日本語エリート層の5層のリテラシー層が存在したことが明らかになった。さらには5)日本語エリート層の一人である楊逵に注目することで彼がプロレタリア文学の立場から1)文盲層に如何に係わろうとしたか、4)中文エリート層と5)日本語エリート層が1934年5月の台湾文芸連盟成立以降、どのように混在し、入れ替わって行ったのか、という問題について考察した。本年度は特にプロレタリア作家楊逵に注目し、一九三〇年代台湾および日本文壇における「大衆」に関する楊逵の言説を中心に、楊逵における「大衆」とは一体何であったのか、またその「大衆」はどのようなリテラシーを有していたのかという問題についての検討を進め、その成果を日本・アメリカ・中国・台湾・香港の学会において発表した。次に、6月には日本台湾学会第七回学術大会において1930代から40年代における台湾文学界の変容の諸相を「読者」「大衆」「文壇」をキーワードに「想像の「大衆」-プロレタリア作家楊逵の抱える矛盾と葛藤について」についての口頭発表を行った。さらにこの問題を発展させ、8月には北京・中国社会科学院主催の「東亜現代文学中的戦争与歴史記録国際学術研討会」において「台湾新文学中的日本普羅文学理論受容-以普羅大衆文学為中心-」を発表、1930年代台湾におけるプロレタリア大衆文文学の受容について論じた。一方、11月には台湾・国立清華大学主催の「後殖民地的東亜在地化思考:台湾文学国際学術研討会」および香港・嶺南大学主催の「東亜文化與中文文学」研討会において、台湾人読者のリテラシーの問題とそれに対する楊逵の方策を中心に「「為了台湾普羅大衆文学的確立-楊逵的一個嘗試」を発表した。これら四つの国際学会への出席を通じ、各国の研究者と意見交換を行った。本年度は研究視野を広げるため、二つの国際学会にコメンテーターとして参加した。まず7月には東京大学大学院総合文化研究科において開催された近代東亞文化教育會議・日本委員會主催の「国際学術シンポジウム近代東アジアにおける知の生産と転換」において、黄英哲教授(愛知大學現代中國學部)「戦後台湾之台湾研究的展開-以「帝國」日本的学術継承為中心-」、黄美娥教授(政治大學中國文學系)「日本」意味著什麼?-殖民地時期臺灣傳統文人漢文想像的演繹與衍異」張隆志教授(中研院台灣史研究所)「從「舊慣」到「民俗」:日本近代知識生産與殖民地台灣的文化政治」のコメンテーターを務め、意見交換を行った。特に黄美娥教授の研究テーマは漢文を中心とするリテラシーの問題に深く関連するものであり、有益であった。次に、成功大学の李承機助教授の求めに応じて、9月には台湾の成功大学主催の「台日台湾文学研究者交流会議」に参加、林巾力氏の「自我、他者、共同体:論洪耀勲<風土文化観>」のコメンテーターを務めたほか、2泊3日にわたるワークショップに参加、日台の研究者交流を行った。また、台湾における日本語新聞・雑誌について詳細な研究を行っている李承機助教授とも意見交換が行え有意義であった。