hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
糖尿病性網膜症における網膜硝子体の血管新生の機序解明のための実験モデル作製

1)ヒトでの糖尿病網膜症では、網膜の血管新生より網膜血管の透過性亢進がおこる。糖尿病の動物モデルでは、静注したトレーサーが網膜血管から漏出することを、網膜血管の透過性亢進の指標とする実験方法が従来広く行われてきた。しかし、この方法に対しては、異物であるトレーサーが血管透過性の亢進を引き起こしているのではないかという批判がある。今回私たちは内因性の物質、すなわち血漿蛋白のアルブミン(分子量69kd)とフィブリン(分子量340kd)をマーカーとし、免疫組織学的にこれらの物質が糖尿病ラットの網膜血管外に漏出していることを確認した。漏出はより分子量が低いアルブミンで分子量が大きいフィブリンより顕著であり、分子量が小さ物質の方が網膜血管から漏出しやすいことが明らかになった。(Grafe's Arch Clin Exp Ophthalmol 231:157-161;1993)現在まで、網膜の血管新生をおこす糖尿病の動物モデルは知られていない。ヒトでは糖尿病網膜症での血管新生の進展を促進する因子の一つとして硝子体出血がある。そこで今回我々はラットの毛様体扁平部の血管を傷害することにより、硝子体出血を誘導し、視神経乳頭部から新生血管を発生させることに成功した。硝子体にのびた血管が新生血管であることは、免疫組織学的に増殖細胞核抗原の発現が確認されたことにより明らかであった。電子顕微鏡による観察でも、血管内皮細胞の核分裂像や、細胞が細胞外気質に突起をのばす発芽の像が観察された。(Ophthalmic Resarch 25:157-161,1993)1)ヒトでの糖尿病網膜症では、網膜の血管新生より網膜血管の透過性亢進がおこる。(Ophthalmic Resarch 25:157-161,1993)
核酸鋳型化学反応の遷移状態制御に基づく触媒回転数の向上

核酸鋳型化学反応では、2種類のオリゴ核酸鎖の末端に化学反応性の官能基を導入したプローブを用いる。これらが配列特異的に標的RNAに結合し局所濃度が高まることで発蛍光反応が進行する。標的核酸鋳型を触媒として利用し反応回転を起こすことによりシグナル増幅が可能になるが、反応サイクルにおける結合・化学反応・解離の各ステップを高速化することで、高感度な核酸検出が可能になる。前年度までに反応サイクルにおける化学反応のステップの高速化の検討を行い、反応性官能基をチオフェノール基からセレノフェノール基に変更することで、発蛍光反応の高速化に成功した。この成果を踏まえ、本研究では最終目標である細胞内での高感度のRNA検出の検討を行った。細胞内RNA検出においては、適切な手法でプローブを細胞内に入れることが重要である。例えばオリゴ核酸の細胞内導入法として一般的なリポフェクション法を用いた場合、プローブが細胞内で凝集するため正確かつ高感度な検出の障害となる。そこで本研究では大腸菌をモデルとして、RNA検出プローブ検出に適した細胞導入法の検討を行った。その中でホスホロチオエート修飾を導入した核酸プローブが最適であることを見出した。リポフェクション試薬等を用いずに細胞にプローブを投与し標的であるrRNAの検出に成功した。今後は、プローブ核酸にさらなる修飾を導入することにより、標的RNAの結合・乖離を促進し、検出感度の一層の向上を目指す予定である。核酸鋳型化学反応では、2つのDNA鎖の末端に化学反応性の官能基を結合させたプローブを用いる。2つの化学反応プローブが配列特異的に標的鋳型核酸に結合し、局所濃度が高まり化学反応が進行する。今年度は化学反応の高速化の検討を行った。以前までに、チオフェノールを求核剤、7-アミノクマリンのスルホンアミド保護体を求電子的プローブ前駆体とした反応で、既存の核酸プローブ反応と比較して化学反応速度が大幅に向上することを見出している。本反応の求核剤として、より求核性が高く反応速度の向上が期待されるセレノフェノールを選択した。まず、セレノフェノールの活性エステル体の合成を行い、アミノ基末端を持つDNA鎖と結合させた。求電子的プローブ前駆体についても同様に、アミノクマリンのスルホンアミド保護体の活性エステルを合成し、アミノ末端をもつDNA鎖と結合させた。合成した両プローブを用いて鋳型核酸存在下での発蛍光反応の速度解析を行った。チオフェノールを求核剤としたプローブと比較して、若干の反応速度の向上が観測された。今後はセレノフェノール部位の構造誘導化、および求電子的プローブの消蛍光性基の構造最適化により更なる反応速度の向上を目指す。適切な求核プローブを設計・合成することで発蛍光反応の速度向上を実現できたため。求核剤及び求電子的蛍光前駆体の構造最適化を行うことで、化学反応速度の向上を目指す。また、プローブの核酸部位に非天然骨格や化学修飾を導入することで、結合・解離段階を促進し、反応回転数のさらなる向上を目指す。
エムドゲインの歯牙移植への応用に関する研究

今回、犬の歯牙を意図的に抜去し歯根端切除をおこなった後、歯根表面を覆うようにエムドゲインを塗布し抜歯窩に再植したものを実験群、エムドゲインを塗布せずに再植したものを対照群と設定し実験を行った。一定期間経過後に両群とも組織標本とした後、H・E染色を施し光学顕微鏡下で観察を行った。その結果を以下に示す。歯根端切断面以外の歯根表面については、両群とも吸収像やアンキローシスが存在しているが、その程度は実験群の方がやや軽度であると思われる。歯根端切断面では、対照群では歯根端の切除により生じた欠損部分での肉芽組織の増生にともない歯根端切断面での活発な歯根の吸収が観察された。その後、吸収窩での細胞性セメント質と思われる硬組織の添加にともない、歯槽骨との癒着や歯根膜の再生が観察された。また、逆根管充填剤の部分では線維化した肉芽組織や直接歯槽骨と接している像が観察された。一方、実験群では欠損部分での肉芽組織の増生は、対照群と同様に生じるものの、対照群で認められた歯根の吸収は、ほとんど観察されなかった。その後、歯根膜の再生にともないわずかな吸収が切断面に生じるものの吸収部は硬組織の添加により補われている像が観察された。また、逆根管充填剤の部分では、歯根膜様組織や直接歯槽骨と接している像が観察された。以上の観察結果より、歯牙の再植や移植に際しエムドゲインを塗布することで初期の歯根吸収、なかでも歯根膜欠損部の吸収を抑制できる可能性が示唆された。今回、犬の歯牙を意図的に抜去し根表面に存在する歯根膜組織をできるだけ損なわないように、生理的食塩水にて血液等を洗い流した後、根表面を覆うようにエムドゲインを塗布し抜歯窩に再植したものを実験群とし、一方歯牙を抜去した後、エムドゲインを塗布せずに再植したものを対照群として設定した。歯根の吸収に関しては、両群とも歯根の吸収が認められるものの、その程度は実験群にくらべ対照群で非常に活発に行われる傾向が認められた。吸収の生じる部位に関しては、根尖部、根中央部の両者とも観察されており部位による特異性は認められなかった。一方、歯根表面への硬組織の添加に関しては、実験群では吸収の生じていないセメント質表層には、ほとんど変化が認められないのに対し、対照群では細胞性セメント質と思われる組織の添加が認められた。また、吸収窩への硬組織の添加は、実験群では無細胞性の硬組織による添加が起きているものの吸収窩を完全に満たしてはいないのに対し、対照群では、細胞性セメント質と思われる硬組織による修復が起きている部分と添加の生じていない部分が混在している像が観察されると同時に、吸収窩への骨組織の陥入が観察された。アンキローシスに関しては、両群ともに観察された。以上の観察結果より、歯牙の再植に際してエムドゲインを塗布し再植を行うと、再植後に生じる初期の歯根吸収を抑制できる可能性が示唆された。
高精度地球科学分析を用いた弥生時代の石器生産と流通ネットワークの解明

本研究は、弥生時代に広く流通したとされる石斧の石材を地球科学的に分析した。その結果、従来から指摘されている今山遺跡(福岡県福岡市)で産出される玄武岩を用いて石斧を製作し広く流通していることが明らかとなった。吉野ヶ里遺跡(佐賀県吉野ヶ里町)で出土した石斧の石材も今山で産出される玄武岩であることが確認できた。しかし、堂の前遺跡(佐賀県唐津市)出土の石斧石材は今山やその周辺で産出される玄武岩ではなく、他の産地の玄武岩が用いられていた。このことから、弥生時代の石斧には今山以外の玄武岩が用いられて、流通している実態も明らかとなった。平成26年度は今山系石斧に関する総合的な調査を開始した。研究の具体的な目的は、今山系石斧と称される玄武岩製の弥生時代の石斧が、今山産出(福岡市西区所在)の玄武岩だけではなく、未知の玄武岩を使用して製作されていることが判明したため、新たな産地を探索することである。また、今山ではない玄武岩で製作された石斧が、弥生時代の流通量としてどの程度であったのかを調査し、今山ブランド石斧の範囲と、類似した石材を使用した石斧の流通圏から、弥生時代の資源獲得状況やヒトの動きを探ることを目的としている。なお、今山でない玄武岩の分析には、地球科学の分野で用いられる高精度の分析手法を駆使し、全岩化学組成、微量元素、希土類元素の組成比較、鉱物化学組成などを実施した。そこで、本年度は石斧資料から適切な試料を採取するため、マルトー社製の卓上コアピッカーを配備し、石斧の破損断面からサンプルを抜くことに成功した。この成果は、学会で発表し多くの研究者から興味関心をもたれ、問い合わせが数多く寄せられた。この方式の有効な点は破損面からのサンプル採取を行うため、考古資料で最も重視される外形情報を全く損なわずに運用できる点にある。現在は石斧を想定した機器の設定にしているが、次年度以降は他の試料にも対応できるよう改造していく予定である。また、本年度は唐津地方で採取した原石の高精度分析を実施したが、遺跡から発見された今山ではない石材と合致するサンプルはなく、次年度以降の課題となった。平成27年度も今山系石斧に関する総合調査を継続して推進している。研究の具体的な目的は、今山系石斧と称される玄武岩製の弥生時代の石斧が、今山産出(福岡市西区所在)の玄武岩だけでなく、未知の玄武岩を使用して製作されていることが判明したため、新たな産地を探索することである。弥生時代の流通量に対して、今山産と非今山産の割合がどの程度になるのかを調査し、今山ブランド石斧の流通範囲とその他の石材の流通範囲の重なり合いを具体的に明らかにし、弥生時代の資源獲得状況やヒトの動きを探ることを目的としている。なお、石材の分析には地球科学の分野で用いられる高精度な分析手法を駆使し、全岩化学組成、微量元素、希土類元素の組成比較、鉱物化学組成、鉱物の組み合わせを実施している。本年度は、伊万里地域の玄武岩の露頭調査を実施し、新たな産地の石材サンプルを採取した。採取したサンプルに対して分析を実施したが、新たな産地の発見には至っていない。また、考古資料としては中山資料の10点に対して、サンプルコアの採取を実施した。考古資料に対するサンプルコアの採取を行うために、昨年度配備したマルトー社製の卓上コアピッカーを改造し、対象資料の様々な形態に対する汎用性を高めた。その結果、多くの石斧資料に対してサンプル採取が可能な機器として改造することができた。なお、平成27年度から研究の対象範囲を玄武岩製の石斧資料だけでなく、弥生時代の滑石資料に対してもサンプル採取や分析を進めており、研究課題が順調に広がっている。石斧の形態情報を残しながら、破損面からサンプルを採取する方法は、昨年度まで資料の形状に制約があったが、本年度実施した機器の改造により、資料の形態上の制約は解除され、多くの考古資料に対してサンプルを採取することが可能となった。また、新たな原産地探しは今年度も発見に至っていないが、候補地を1つ1つつぶしている状態であり、着実に絞り込みが行われている。これまで進めてきた玄武岩製の石斧資料以外に、滑石資料に対しても分析を広げはじめ、着実に研究が広がりをみせ、当初の計画以上に本研究は進展している。平成28年度は引き続き今山系石斧に関する総合調査を推進した。また、今年度は今山に隣接する今津遺跡出土の石斧を分析したところ、当初予想された毘沙門山の玄武岩ではなく、今山の玄武岩を使用していたことが判明した。このことは毘沙門山の玄武岩を弥生時代においては利用していない可能性が出てきており、今山周辺地域では今山のみの玄武岩を利用している実態が明らかになりつつある。

また今年度は、非今山系玄武岩の産地として嘉麻市の琴平山の玄武岩、壱岐市の玄武岩の露頭調査を実施し、新たな産地の石材サンプルを採取した。しかしながら採取したサンプルに対して分析を実施したが、新たな産地の発見には至っていない。初年度配備したマルトー社製の卓上コアピッカーを今年度も改良し、対象資料の様々な形態に対する汎用性を高めた。その結果、多くの石斧資料に対してサンプル採取が可能な機器として改造することができた。本年度は研究の最終年度であるが、ここで研究の成果を簡潔にまとめる。1今山の玄武岩以外の玄武岩を使用している石斧が存在する。2その非今山玄武岩の産地は現状では不明である。3今山に隣接する毘沙門山の玄武岩は考古学的に使用されているとされてきたが、本研究では使用されていないことが判明した。4今山の玄武岩を利用した石斧は北部九州一円に広がっている。本研究は、弥生時代に広く流通したとされる石斧の石材を地球科学的に分析した。その結果、従来から指摘されている今山遺跡(福岡県福岡市)で産出される玄武岩を用いて石斧を製作し広く流通していることが明らかとなった。吉野ヶ里遺跡(佐賀県吉野ヶ里町)で出土した石斧の石材も今山で産出される玄武岩であることが確認できた。しかし、堂の前遺跡(佐賀県唐津市)出土の石斧石材は今山やその周辺で産出される玄武岩ではなく、他の産地の玄武岩が用いられていた。このことから、弥生時代の石斧には今山以外の玄武岩が用いられて、流通している実態も明らかとなった。石斧の外形情報を残しながら、破損面からサンプルを採取する方法が当初の予定以上にうまく機能し、試料でのダメージがほとんど残らないことが判明した。想定以上に試料採取が容易で安全に実施できることから、今後のサンプル採取計画が予定以上に進行することも予期される。また、新たな原産地探しは今年度は発見に至らなかったが、1つ1つ候補を絞り込んで行っており、着実な進行が認められる。したがって、当初の計画以上に本研究は進行していると報告する。これまでの高精度分析を実施した結果、平成27年度までにサンプルを採取した唐津地域や伊万里地域では、原産地を特定するに至らなかった。そこで、本年度は、両地域以外での原産地探しを実施する予定である。また、平成27年度にサンプルコア採取に際し、資料の形態的制約を払拭するために改造した卓上コアピッカーを駆使し、より多くのサンプルコア採取を実施する予定である。玄武岩製石斧資料以外の滑石資料に関しても、高精度な分析を実施する予定である。考古学次年度からは、本年度配備した卓上コアピッカーを、石斧対応から他の考古資料へも対応可能な汎用型に改造を施し、より多くのサンプル採取が外形情報を損なうことなく実施できるように進めていく。その結果、分析試料の増加が見込まれる。また、新たな原産地探しは唐津地域の試料採取と高精度分析が実施された結果、対象としていた石材ではないことが判明した。したがって、次年度以降は隣接する伊万里地域や多久地域などを対象に、原石採取の地域を広げ、対応していく予定である。
環境負荷最小化のための化学実験ダウンサイジング

化学実験に用いる器具・装置類のダウンサイジングは、今日マイクロナノテクノロジーの一研究分野として世界的に重要性が認識されてきたマイクロ化学システムを利用し、ガラス実験器具・装置の微小モノづくりによる環境負荷最小化を目的に、サンプルの前処理,反応,分離,検出など実験室・研究室で行われている化学操作をすべてマイクロチップやマイクロリアクター上に構築するものである。化学操作をダウンサイジング化することにより、化学実験の小スケール化による合理的な環境負荷低減・リスク低減を、実験効率を大きく低下させないで実現可能な環境安全教育に適用することを目標として化学実験器具のダウンサイジングによる実験教育手法の開発を行った。大学等でHPLC装置・システムを研究実験に使用するところは多く、廃棄有機溶媒の環境に対する負荷削減を目的に検討したが、実験者に対する曝露リスクの低減効果を考えると、分離カラムのダウンサイジングはきわめて費用対効果は大きい。現在全国で稼働中のHPLCシステムをモノリス型カラムに置き換えることに対し抵抗感が無くなれば、HPLC稼働に伴う溶媒消費量を1/1000近くに低減できることがわかった。ダウンサイジングによる環境安全教育を標準化し、モノリス型カラムLC組み立て実験、化学工学スケールダウン実験、小スケール有機反応実験などのダウンサイジング化学実験事例を取り入れた実験指導教育が望まれることを認めた。中学・高校および大学一般教育・専門教育で行われる基盤的化学実験においては、適切な実験を経験する機会をできるだけ多く与えることが重要で、実験教育による環境負荷や曝露リスクの低減等の課題を解決できるダウンサイジング化学実験法の構築が有望であるため、実験効率を大きく低下させることなく、種々の実験テーマに適用可能なように標準規格化することが今後の課題である。化学実験に用いる器具・装置類のダウンサイジングを行う。マイクロチップ上に化学操作を集積化することにより、試薬量、試料量、エネルギー消費量等を大幅に減少させることができ、化学物質による曝露リスクや環境負荷を削減可能できる。(1)大学レベルでの教育活動で行われている主として有機合成実験については、0.1mL規模の使用溶液量を想定した化学実験操作法を開発し、広く研究活動における化学実験に普及可能な器具・装置類を実現することを目指す研究を行うことにより、環境負荷最小化を達成する。(2)実験教材の使用では、データ収集のための実験器材を用意する。仕組みが理解できるよう機能別にブロック化し、自由に組み合わせて実験ができるようにする。自作の楽しみは学生のやる気を引き出し、器材の仕組みの理解は分子学習効果により一層の広がりを持たせることになる。化学実験に用いるHPLCでは、移動相として有機溶媒や各種緩衝溶液を毎分1mL程度の流量で連続的に分離カラムに送液する。1台のHPLCを8時間運転するとおおよそ500mLの移動相溶液を消費する。HPLCでは、有機溶媒としてアセトニトリルやメタノールを使用することが多く、送液用ポンプが一部開放系で運転されることから送液時や調製時に実験者が有機溶媒に曝露されるリスクが高い。さらに実験廃液として1台につき1日0.5kg程度が生じることになり、稼働台数を考えると環境への負荷は膨大な量となる。化学実験でHPLCを実施している大学は多く、かつ研究室は無数にある。有機溶媒の曝露に対するリスクや環境への有機溶媒の負荷を考えると、分離カラムのダウンサイジングが対策として有望である。μLオーダーの移動相で実施できるようなマイクロLC送液ポンプがあれば、マイクロLCは流量が110μL/minで稼働できるので通常の1/1001/1000の溶媒使用量となることを認めた。マイクロチップ上での化学操作の集積化による器具、装置類のダウンサイジングや試薬、試料、エネルギー消費量等の大幅な減少と、化学物質による暴露リスクや環境負荷を削減可能できる。(1)モデル実験として設定した実験スケールは体積で0.1mLオーダーで、アニリンの減圧蒸留によるセパラブルタイプのフランジ付マイクロガラス器具を作製した。

適用したところ、留出率は51.4%と低い値になったが、留出液の体積は0.1mLオーダーであり、スケールダウンに伴う目的物質の損失率増加をかなりの程度で抑えることができた。(2)テトラメトキシシランの加水分解によるモノリス型シリカをin-situでキャピラリー内に作製した。モノリス型シリカキャピラリーカラムは,細孔の特徴に基づいて,従来の1/10程度の圧力で送液できる。その結果,従来の高圧ポンプ送液をガス圧送液に置き換えることが可能となり,システムの省エネルギー化を図ることができる。(3)マイクロチャンネルの内壁に抗体を吸着させることで、試料の拡散距離が短くなり反応効率及び反応速度の向上が見込めると考え、独自の集積化免疫分析システムの構築を試みた。反応時間における蛍光強度の変化を調べたところ、反応時間の増加とともに蛍光強度も増加して、試料の濃度が大きいほど蛍光強度も大きいことが確認できた。(4)パイレックスガラス基板上にマイクロチャネルを構築させ、熱融着法により、カバープレートと張り合わせを行うことで、マイクロ化学リアクターを作製した。マイクロ化学リアクターを合成反応に利用したとき、有用性があることがわかった。このように、化学実験ガラス器具類のダウンサイジングさらなる高機能化を図ることで、将来はコンビナトリアルケミストリーをマイクロ化学システム上で実現できる可能性を有する。必要な試薬量や廃棄量を減らすことが出来るマイクロ化学システムを利用し、マイクロチップの改良に取組み、従来の単層マイクロチップに比べより多くの化学反応を一度に行える、積層マイクロチップを開発した。マイクロチップ上に反応場のみならず、ポンプや検出部などを集積化させることにより、装置の自動化や小型化ができる。パイレックスガラス板上にマイクロチャネルを構築させ、熱融着法によりカバープレートと張り合わせを行うことでマイクロ化学リアクター(MCR)を作製した。アニリンを出発原料とし、塩化ベンジルを反応させて、第2級アミンを合成、MCRとY字チップとを組み合わせて合成実験に供した。これにより、薬品、材料、エネルギー消費等の環境負荷を大幅に減少させることができたと同時に、実験者が受ける化学物質による曝露リスクを低減することが可能となった。また、高速液体クロマトグラフィー分離カラムのダウンサイジングに取組んだ。マイクロLCは、移動相流量が110μL/minで稼働できるので通常のHPLCの1/1001/1000の移動相溶媒の使用量となる。このため、高性能キャピラリーカラムの開発および一日あたり数mLの移動相消費で実施できるマイクロLC送液システムを開発した。従来のHPLC高圧ポンプによる送液をガス圧送液に置き換えることに成功し、分析システム全体の省エネルギー化を図ることも可能であった。本実験方法は大学の社会的責任(USR)を果たす上でも、非常に重要な役割を担う実験方法だといえる。
SAGE法によるヒト血液細胞の遺伝子発現解析

我々は、生体防御機構(免疫)、特に炎症、免疫疾患をターゲットにした遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明の為、生体防御機構に中心的な役割を担う血液細胞(特に樹状細胞)に焦点を絞りSerial analysis of gene expression(SAGE)を用い包括的な遺伝子発現解析を行うことを目的とする。現在まで我々は、単球からの樹状細胞の分化に伴う遺伝子発現をSAGE法により検討し、さらにT細胞、B細胞など他の血液細胞の発現遺伝子のデータベースを構築した。これらで得られる情報によりクローニングされる樹状細胞特異的新規遺伝子は、癌ワクチンへの応用が期待される樹状細胞の機能を明らかにすると共に、免疫学の進歩に多大な貢献をすると期待される。今後、これらのデータベースをもとにして炎症、免疫疾患の遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明を行う。一方mRNA開始部位の同定は、遺伝子の完全長cDNAシークエンスの完成および遺伝子発現を調節するプロモータ領域の解析に不可欠である。そこで我々は、転写開始部位および個々のmRNAの発現頻度を包括的に同定するための方法、5'SAGE法を開発した。HEK293ヒト細胞ライブラリーの5'SAGEタグ25,684個のうち、19,893個がヒトゲノムに一致し、RefSeq、UniGene、およびDBTSSデータベースを用いて評価したところ、このゲノムに一ケ所マッチした15,448個のタグの中で、5'SAGEタグの85.896.1%がmRNA開始部位の-500+200bp内にマッチした。このことからほとんどのタグが転写開始点を示していることが示唆された。この技術を用いた方法により様々な生物の細胞および組織の詳細なトランスクリプトーム解析が促進されると予想される。ポストゲノム時代、病態と関連した各組織、細胞の遺伝子発現の包括的解析が必要とされる。われわれは、生体防御機構(免疫)、特に炎症、免疫疾患をターゲツトにした遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明の為、生体防御機構に中心的な役割を担う血液細胞に焦点を絞りSerial analysis of gene expression(SAGE)を用い包括的な遺伝子発現解析を行ってきた。NK細胞及びCD8T細胞において発現する遺伝子の同定はウイルス感染細胞及び癌細胞に対する免疫反応におけるこれらの細胞の機能を明らかにする上で重要と考えられ、今後、未知の遺伝子も含めてさらに解析していく予定である。今後、このデータベースを用い免疫疾患の遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明に寄与したいと考えている。私は、生体防御機構、特に炎症、免疫疾患をターゲットにした遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明の為、生体防御機構に中心的な役割を担う血液細胞に焦点を絞りSerial analysis of gene expression(SAGE)を用い包括的な遺伝子発現解析を行ってきた。今回、LongSAGE法を用いた遺伝子発現解析法について検討した。現在のSAGE法は制限酵素BmsFIを用いて遺伝子の断片化を行っているが、これだと遺伝子を特定するのには14bpの断片しか解析できず、特定できる遺伝子が限られてくる。そこで新たに制限酵素MmeIを使うことによって、21bpの遺伝子断片の解析を行った。これらの結果をoriginal SAGEと比較したところ非常によく相関していた。また、ほとんどの遺伝子が同定可能になった。さらに、SAGEとDNA microarrayを利用したT細胞の新規分泌・膜蛋白の同定法の開発も行った。SAGE法により明らかにしたヒト刺激Th1細胞、刺激Th2細胞、刺激T細胞の遺伝子発現プロファイルからそれぞれの細胞において選択的に発現し、かつその遺伝子産物が機能未知である遺伝子のDNAチップを作成し、次に平衡化密度遠心法により得た膜分画のmRNAを使いDNAチップにて分泌・膜蛋白候補遺伝子をスクリーニングした。その結果、ヒト刺激Th1、刺激Th2、刺激T細胞それぞれにおいて、遺伝子の全長が報告されている6個のうち、4つの遺伝子については、signal sequenceまたは膜貫通部の存在が予測された。

3個のESTのうちの1つの全長を決定したところ、その遺伝子産物は4回貫通膜蛋白であることが予測された。我々が開発した方法は、従来の方法と比較して効率的に新規の膜・分泌蛋白を同定することがさらに多くの新規分泌・膜蛋白コード遺伝子の同定が可能となった。私は、生体防御機構(免疫)、特に炎症、免疫疾患をターゲットにした遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明の為、生体防御機構に中心的な役割を担う血液細胞(特に樹状細胞)に焦点を絞りSerial analysis of gene expression (SAGE)を用い包括的な遺伝子発現解析を行うことを目的とする。現在まで私は、単球からの樹状細胞の分化に伴う遺伝子発現をSAGE法により検討し、さらにT細胞、B細胞など他の血液細胞の発現遺伝子のデータベースを構築した。これらで得られる情報によりクローニングされる樹状細胞特異的新規遺伝子は、癌ワクチンへの応用が期待される樹状細胞の機能を明らかにすると共に、免疫学の進歩に多大な貢献をすると期待される。今後、これらのデータベースをもとにして炎症、免疫疾患の遺伝的要因の同定と分子レベルでの解明を行う。一方mRNA開始部位の同定は、遺伝子の完全長cDNAシークエンスの完成および遺伝子発現を調節するプロモータ領域の解析に不可欠である。そこで私は、転写開始部位および個々のmRNAの発現頻度を包括的に同定するための方法、5'SAGE法を開発した。HEK293ヒト細胞ライブラリーの5'SAGEタグ25,684個のうち、19,893個がヒトゲノムに一致し、RefSeq、UniGene、およびDBTSSデータベースを用いて評価したところ、このゲノムに一ケ所マッチした15,448個のタグの中で、5'SAGEタグの85.896.1%がmRNA開始部位の-500+200bp内にマッチした。このことからほとんどのダグが転写開始点を示していることが示唆された。この技術を用いた方法により様々な生物の細胞および組織の詳細なトランスクリプトーム解析が促進されると予想される。
ベトナムにおける高齢期に必要な生活支援の調査に基づく介護福祉教育に関する研究

著しい経済発展を遂げてきたベトナム社会主義共和国だが、高齢化と介護問題が重要課題となってきた。専門職の人材育成を必要としているが、本研究はその具体的な要望に応えることを目的とした。「都市部」および「農村部」の高齢者福祉施設の利用者および職員、ならびに高齢者世帯への聞き取り調査を行い、その分析結果を踏まえた研究成果を論文等で発表し、ホーチミン市において介護職員を対象に「介護福祉セミナー」(研修会)を実施した。研究初年度として、過去のベトナムでの研究および平成19年9月にホーチミン市内の高齢者施設で実施した調査研究(本申請者および連携研究者である赤塚俊治本学准教授ならびに後藤美恵子本学助教3名による共同研究:自己負担)の結果を踏まえ、高齢者介護の問題点や課題を整理し日本社会福祉学会にて発表を行った。平成20年9月ホーチミン市内にある高齢者福祉施設を利用している利用者および職員のインタビュー、さらに「都市部」と「農村部」で生活している高齢者夫婦世帯および高齢者単身世帯における「介護問題」の調査を行った。具体的に、下記調査研究を行い、東北福祉大学研究紀要に研究論文を発表した。(1)ベトナムのセンサスを中心に人口動態、経済・社会状況についての分析。(2)ベトナムの高齢者問題に関する先行研究論文、著書、資料収集、高齢者の基本的な社会問題についての整理検討。(3)高齢者福祉施設における利用者のQOLに及ぼす要因について質問紙による聞き取り調査、参与観察。(4)高齢者施設で直接介護に従事する職員を対象に利用者の状態像と介護内容および介護の困難性について聞き取り調査実施。(5)介護職員の高齢者イメージ、介護肯定感、組織特性、仕事満足度等についての調査、その関係性の分析。(6)「都市部」と「農村部」で生活している高齢者から質問紙による聞き取り調査、および追跡調査によるケース研究、ならびに高齢期における生活課題、生活支援(サポート)の条件について検討。(7)次年度の本格的な調査研究に繋がるための予備的調査について分析・考察。初年度に実施した基礎的資料収集および「介護問題」に伴う調査研究を分析・考察した結果を踏まえ、ベトナムにおいて実態調査を実施した。調査内容『独居高齢者の生活実態調査』都市部:ホーチミン市30世帯、農村部:ビントゥアン(Binh Thuan)省ハム・タン(Ham Tan)県ラジ(La Gi)町30世帯合計60世帯(2009年9月11日-18日生田目学文・赤塚俊治・後藤美恵子)。これに基づき「要介護高齢者の効果的な理解」と「介護福祉教育」の実施方法について、以下の分析・考察を行った。(1)高齢者施設の利用者の状態像と介護内容および介護の困難性についての調査、および介護職員の高齢者イメージ、介護肯定感、組織特性、仕事満足度等が介護の困難性を伴うか否かについての分析。(2)(1)の結果が利用者のQOLにどのように影響しているかについての分析。(3)(2)の結果を踏まえ、ベトナムの介護福祉教育の実施方法についての分析。(4)高齢者施設における利用者のQOLに及ぼす要因について質問紙による聞き取り調査、参与観察。(5)「都市部」と「農村部」で生活しているケース研究の対象者の高齢者から質問紙による聞き取り調査を行い、前年度と比較し、高齢期における生活課題、および生活支援の条件について分析した。(6)(5)の結果を踏まえて、施設職員が抱えている諸問題などを調査し、それが介護職員および利用者にどのような影響を与えているかを分析した。(7)これまでの調査研究を踏まえた上での、ベトナムの介護福祉教育の実施方法の考察。(8)それに関連し世代間の高齢者介護に関する意識調査の分析。(9)「介護問題」を取り扱う上で基本的な概念である「人間福祉と人間の安全保障」について分析。上述した調査分析内容から、最終年度の研究に繋がる研究成果をまとめた。最終年度はこれまでの2年間に及ぶ調査研究の分析・考察のまとめとして位置づけ、高齢者福祉施設、関連機関を利用する高齢者および該当職員を対象に、「要介護高齢者の効果的な理解」「介護福祉教育」の実証的な検証を行なうために、高齢者福祉施設およびベトナム障害児・スポーツ教育協会ホーチミン市支部の協力を得ながら高齢者福祉セミナーを実施した。その際、調査票を活用して研修内容および専門職意識についてアンケート調査を実施し整理を行った。今後の高齢者福祉施策の重要課題である「介護問題」に係わる「要介護高齢者の効果的な理解」と「介護福祉教育」方法を研究成果の一環としてベトナム国内の高齢者福祉関係者に明示し、専門職の人材育成に繋げることを提案する機会として位置づけた。具体的には以下の通りである。1.高齢者福祉施設およびベトナム障害児・スポーツ教育協会ホーチミン市支部の協力を得ながら「高齢者福祉セミナー」を実施した。その対象は(1)ホーチミン市内の高齢者福祉施設の職員(2)ホーチミン市内居住者およびハム・タン県内居住者。2. 1の研修内容・方法について、研修評価を行った。

3. 2の結果から今後のベトナムにおける「介護福祉教育」の具体的な内容について検討した。4. 2、3の結果から、ベトナムの高齢期に必要な生活支援の介護福祉教育内容について分析した。これまでの3年間の研究結果を整理し、ベトナムにおける介護福祉教育について東北福祉大学研究紀要に研究論文にまとめた。5. 3年間の研究成果を『研究成果報告書』としてまとめた。
トマス・アクィナスにおける「愛」の理論

本年度は、前年度のトマス・アクィナスの愛の理論におけるアリストテレス受容を基盤に、擬ディオニシオス・アレオパギタ(Dionysius Areopagita)の「愛」の概念受容と展開を主題とし集中的に研究した。紀元後1世紀に活躍したパウロの直弟子の名前を語りながら、実際には6世紀に新プラトン主義的キリスト教団によって編まれたと考えられる「擬ディオニシオス文書」そのものの複雑性と13世紀スコラ学の最盛期を代表するトマスの思想的関係を俯瞰した研究成果を、9月のTsukuba Global Science Weekにて開催されたシンポジウムにおいて英語で発表した。11月には、中世哲学会にて、トマスによる擬ディオニシオスの註解書「神名論註解(In Librum Beati Dionysii De Divinis Nominibus Expositio)」第四章を中心に分析した成果を提示することができた。このテクスト箇所を主題化した研究は日本ではまだなく、また欧州においてもオランダ研究者が数名携わっているのみで、総合的な論究が求められている。トマスにおける擬ディオニシオス受容分析の難解さは、まず(1)ギリシア語からラテン語への翻訳の課程でおこった主題の共有の断絶と(2)ディオニシオス文書が聖人の名前を語った「偽書」であるものの、トマスたちの時代には気づかれていなかったという点から生じてくる。上述の研究とともに、平成26年7月末からの1ヶ月間のボン大学哲学部中世思想研究室とケルン大学中世思想研究所の滞在中に、資料収集を行うと共に、博士課程の学生のゼミにも参加し主に若手研究者と意見交換を行うことができた。この時のテーマは哲学史における「徳論(Tugendlehre)」であり、研究代表者自身も、トマスの徳論についてこれまでの研究成果を発表した。この時の成果は、ドイツ語で論文の形で執筆し発表する予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。今年度は、トマス・アクィナスの「愛」の理論を、神学的哲学的観点の両方から統合的に理解することを目指し、多角的な視野で研究を行った。1半年間に及ぶドイツの国立ボン大学哲学部での在外研究において、西洋の中世哲学や神学一般への包括的な理解をよりいっそう深めることができた。具体的な研究内容としては、これまでの研究を引き継いで、2主に彼の円熟期の主著『神学大全』の愛に関する論究の重要概念「amor」と「caritas」を分析し、その成果を論文にまとめた。1平成25年度4月1日から平成25年度10月1日にかけて、ドイツ国立ボン大学の古代・中世思想研究室の正教授TheoKobusch氏の下で、研究活動に従事した。トマスの哲学的な思想形成に決定的な影響を与えた哲学者アリストテレスの『形而上学』を精読する演習に参加し、哲学やカトリック神学、プロテスタント神学等様々な分野を研究する若手研究者と共にドイツ語で発表・議論を行うことで、トマスのアリストテレス受容についての理解を深めることができた。この在外研究での成果を論文の形でまとめるため、トマスの『形而上学註解(Sententia libri Metaphysicae)』を精読している。2トマスの『神学大全』の愛の理論の箇所を分析した結果、amorとcaritasという主要な二つの愛の概念の連続性をトマスの記述に即して浮き彫りにすることができた(「トマス・アクィナスにおける愛(amor)の射程-神の愛(caritas)への道行き」『倫理学』第30号、2014年3月)。この論文の執筆過程ではトマスの福音書の「愛」の理解を詳らかにする必要性が明らかとなったので、現在はトマスの聖書箇所の引用の仕方と、他の箇所で行っている愛についての議論(定期等論集「愛について(de catetate)」の分析を引き続いて行っている。

この時のテーマは哲学史における「徳論(Tugendlehre)」であり、研究代表者自身も、トマスの徳論についてこれまでの研究成果を発表した。この時の成果は、ドイツ語で論文の形で執筆し発表する予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。トマスの「愛」の理論を研究するにあたって前提となる、神学と哲学両方からの統合的観点を得るための研究はドイツでの在外研究によって大きな成果を得、また彼の「愛」の独自性も明らかになりつつあるが、その内容すべてを研究発表や論文の形では提出することはできなかった。平成26年度の研究活動では、可能な限り全国規模の学会で研究発表をこなし、そこで得られるであろう議論をもとに投稿論文を執筆する。トマスのテクストそのものを精読しつつ、同時に、彼の「愛」の理論について歴史上どのような評価が下されてきたのか、二次文献を精査することで歴史上の流れにも目を配る。その際、とりわけ肯定的な見解を出している重要な専攻研究として20世紀半ばのフランスのカトリック圏の神学者の見解の理解に努める。テクストを正確に読むためのフランス語能力を向上させる。
性能群の階層・相関の統計的モデリングに基づく実現可能な建築構造物のスマート設計法

本研究においては以下の成果を得た.(1)現実的な条件を取り入れた最適設計プログラムを実装し,ダンパー付き構造物の動的応答を制約条件に取り入れるためのシステム同定法を利用した等価線形化法を検討した.(2)これらの種々の性能制約条件を課せられた最適設計解を用いて,統計的手法を適用した性能感度情報の分析から,設計者の意思決定を支援する情報の抽出を試み,設計者の設計判断に馴染む情報の抽出法の検討を行った.(3)上記手法を適用したプログラムを実装し,抽出された情報を,設計支援資料として整理した.本研究においては以下の成果を得た.(1)現実的な条件を取り入れた最適設計プログラムを実装し,ダンパー付き構造物の動的応答を制約条件に取り入れるためのシステム同定法を利用した等価線形化法を検討した.(2)これらの種々の性能制約条件を課せられた最適設計解を用いて,統計的手法を適用した性能感度情報の分析から,設計者の意思決定を支援する情報の抽出を試み,設計者の設計判断に馴染む情報の抽出法の検討を行った.(3)上記手法を適用したプログラムを実装し,抽出された情報を,設計支援資料として整理した.本年度は,最適設計法を用いた構造設計支援法の可能性に関する検討を行った.まず,異なる条件下の最適設計解の相互比較を用いて,ある条件の変動が最適設計解にどのような変化を及ぼすかを検討した.このように,与えられた条件下の最適設計のみならず,条件の変動に対する解の変化といった周辺情報が設計者にとって重要であることが確認できた.また,実務設計において必須の要請である実際に製作施工可能であることを保証するために,実現可能性条件を記述できる枠組みを構築した.具体的には,断面寸法によってディテールのおさまりの条件を記述するという方法である.これによって,これまでの最適化手法を建築構造設計に導入した研究成果が,建築構造の実務設計で日常的に使用されていない理由の一つである,非現実的な解が得られることに対する解決策を提案できた.さらに,膨大な数の制約条件が課せられた場合に,設計を決定付ける要求性能や,特徴的な性能間の相関関係を抽出するための統計的手法について,基礎となる理論的検討を行った.現実的な規模の構造物には,上記の実現可能性条件を含め,耐震性,居住性,コストなどの多種多様な制約が課せられため,建築物の保有する各種性能のバランスを,設計者が逐一操作して,設計者の望む設計を導くには限界がある.上記のような,各物件固有の条件の相関関係を抽出する手法の確立によって,設計者の意思決定が支援できるものと考える.本年度は,現実的な条件を取り入れた最適設計プログラムの実装と,これらの種々の性能制約条件を課せられた最適設計解を用いて,性能感度情報の分析から,設計者の意思決定を支援する情報の抽出を試みた.(1)種々の構造物の現実的な条件を取り入れた最適設計法S造に関しては,施工性などの観点から実務設計上一般的に用いられることの多いいわゆる標準ディテールが成立するための条件を,断面寸法問の関係式として表現することにより取り入れた最適化を実行した.また,ダンパー付き構造物の動的応答を制約条件に取り入れるために,システム同定法を利用した等価線形化法方法について検討した.(2)性能相関情報の分析のための統計的手法の提案最適設計解の等号満足制約条件に着目し,クリティカルとなる要求性能の組み合わせのみならず,それ以外の制約条件も含め,全体としてどのような設計になっているのか,混合主成分分析法などの解析手法を利用して,設計者の設計判断に馴染む情報の抽出法の検討を行った(3)設計者の意思決定支援情報の整理意思決定情報の抽出法そのものの提案のみならず,実際抽出された情報を設計者にとって有用な形で提供することも重要である.上記手法を適用したプログラムを実装し,抽出された情報を,設計支援資料として整理した.
TED Talksのスピーチ動画を利用した英日マルチメディア・コーパスの構築

平成30年度に公開されたTED Talksの英語スピーチ約240本のデータをパソコンにダウンロードして,既に作成したデータベースに追加登録した。ダウンロードしたスピーチの英語字幕には,日本語字幕データを加えて,英文の意味の確認を容易に行える工夫をしている。平成30年度末時点において総数2,511本のスピーチをデータベースに登録した。平成29年度から,『新JACET8000』に掲載されている語彙の用例をこのデータベースから検索して,それを登録する作業を開始した。平成29年度は400語の登録を行なったが,平成30年度はさらに5000語の登録を行なった。『新JACET8000語彙リスト』には単語の意味や用例がないため,英語学習者がこのリストをそのまま使用して,英語を学習することは難しい。この問題を解決するために,本科研費研究では『新JACET8000』の見出し語に対して,単語の意味,英語の用例,用例の日本語訳,用例の書誌情報などを加えている。このような情報を効率的に入力するために,平成30年度にソフトウェアの改良を行なった。これまでの検索ソフトウェアは,検索する英単語をキーボードから文字入力したが,改良したソフトウェアでは『新JACET8000』の英単語をマウスでクリックすると,品詞を指定してTED Talksから用例検索を行える。さらに,検索結果の中から適切な例文を選び,それをクリックすると,英語の例文,日本語訳,その例文が使用されているスピーチの書誌情報,その例文がYouTubeで再生される場面のURLが,自動的にデータ項目欄にコピーされる。用例は動画ファイルとリンクしているため,用例が使用されている場面の音声と映像を確認することができる。必要となるソフトウェアが効率的に開発できたため。『新JACET8000』の用例登録作業を続ける。ソフトウェアをさらに使いやすく改良する。平成28年度に公開されたTED Talksの英語スピーチ約300本のデータをパソコンにダウンロードして、既に作成したデータに追加登録を完了した。ダウンロードしたスピーチの英語字幕には、日本語訳を加えてデータベースに登録した。平成28年度末時点において2,100本のスピーチを登録した。そのデータをWebブラウザーから検索して、その語句が使われている場面の動画をWebブラウザー上で再生するシステムを2016年9月10日から公開した。ソフトウェアの解説書を作成して公開した。本研究の目的を論じた研究論文「TEDビデオを利用した英日マルチメディア・コーパスの構築」を発表した。開発した検索システムを利用して、2,100本のスピーチの中から英語教育に適したものを10本選び出した。『大学英語教育学会基本語彙リスト新JACET8000』などを参照して、習得すべき語彙リストを作成した。さらに、その語彙リストを利用して、英語学習者の語彙力を測定するソフトウェアを開発した。開発した語彙力ソフトウェアを実際の英語教育の現場で使用して、その報告書「各学生の学力に合わせた英語試験の実施」を発表した。TED.comでは字幕データ等を簡単にダウンロードするための機能が公開されていたが、その公開が2016年7月15日に終了してしまった。7月15日以降に公開されたデータを効率的にダウンロードするために、プログラミング言語pythonを利用したスクリプトを作成した。このスクリプトによって、7月15日以降に公開されたデータも順次ダウンロードして、本研究で開発を進めているコーパスに追加登録できた。国際学会LREC2016に参加して(開催期間:2016年5月23日27日)、最新の言語資料とその処理方法に関する情報を収集した。平成29年度に公開されたTED Talksの英語スピーチ約180本のデータをパソコンにダウンロードして、既に作成したデータベースに追加登録した。ダウンロードしたスピーチの英語字幕には、日本語字幕データを加えて、英文の意味の確認を容易に行える工夫をしている。平成29年度末時点において総数2,280本のスピーチをデータベースに登録した。2,280本のスピーチの中から英語教育に適したものを16本選び出した。その16本から『大学英語教育学会基本語彙リスト新JACET8000』(大学英語教育学会基本語改訂特別委員会(著)、2016年)などを参照して、習得すべき語彙リストを作成し、訳語を入力した。語彙リストを効率的に作成するために、入力用のソフトウェアを大きく改良した。改良結果は、佐藤弘明(2018)「TED Talksの英日字幕データを利用した語彙リストの作成」で詳しく報告している。また、本研究費の人件費を使用して、英文科大学院生とプロの英文翻訳家を雇用し、語彙リスト作成作業に当たらせた。『新JACET8000』は、日本人の英語学習の実状に合うように作成されてはいるが、英単語の意味や例文が掲載されていないため、教育現場では使用しにくい。この問題を解決するため、2,280本のTED Talksから『新JACET8000』に掲載されている英単語を検索して、語義、英文用例、その日本語訳を登録する作業を開始した。作業を効率的に行うために、『新JACET8000』語彙登録用のソフトウェアを開発した。これまでに、『新JACET8000』に掲載されている約400語の語義、英文用例、その日本語訳の登録を行った。

全ての用例は、YouTube動画と関連付けしているため、用例が使用されている場面を音声と映像で確認することができる。必要となるソフトウェアが効率的に開発できたため。平成30年度に公開されたTED Talksの英語スピーチ約240本のデータをパソコンにダウンロードして,既に作成したデータベースに追加登録した。ダウンロードしたスピーチの英語字幕には,日本語字幕データを加えて,英文の意味の確認を容易に行える工夫をしている。平成30年度末時点において総数2,511本のスピーチをデータベースに登録した。平成29年度から,『新JACET8000』に掲載されている語彙の用例をこのデータベースから検索して,それを登録する作業を開始した。平成29年度は400語の登録を行なったが,平成30年度はさらに5000語の登録を行なった。『新JACET8000語彙リスト』には単語の意味や用例がないため,英語学習者がこのリストをそのまま使用して,英語を学習することは難しい。この問題を解決するために,本科研費研究では『新JACET8000』の見出し語に対して,単語の意味,英語の用例,用例の日本語訳,用例の書誌情報などを加えている。このような情報を効率的に入力するために,平成30年度にソフトウェアの改良を行なった。これまでの検索ソフトウェアは,検索する英単語をキーボードから文字入力したが,改良したソフトウェアでは『新JACET8000』の英単語をマウスでクリックすると,品詞を指定してTED Talksから用例検索を行える。さらに,検索結果の中から適切な例文を選び,それをクリックすると,英語の例文,日本語訳,その例文が使用されているスピーチの書誌情報,その例文がYouTubeで再生される場面のURLが,自動的にデータ項目欄にコピーされる。用例は動画ファイルとリンクしているため,用例が使用されている場面の音声と映像を確認することができる。TED.comから平成29年度に公開される約100本の英語スピーチのデータをパソコンにダウンロードする。ダウンロードしたスピーチの英語字幕に日本語訳を加えて、データベースに追加登録する。Webブラウザーから語句検索を行い、その語句が使われている場面の動画をWebブラウザー上で再生するシステムを改良して、さらに使いやすくする。『大学英語教育学会基本語リスト』などを参照して、ダウンロードした英語スピーチの語彙分析を行う。開発した検索システムを利用して、2,200本のスピーチの中から英語教育に適したものを新たに10本選び出す。10本のスピーチに関して、『大学英語教育学会基本語彙リスト新JACET8000』などを参照して、習得すべき語彙リストを作成する。さらに、その語彙リストを利用して、英語学習者の語彙力を測定するソフトウェアを改良する。語彙力ソフトウェアを実際の英語教育の現場で使用して、その教育効果を測定する。平成28年度には,TED.comからデータを効率的にダウンロードするためにプログラミング言語pythonを利用したスクリプトを作成した。しかし,TED.comでは定期的にホームページの形式を書き換えているため,その変更に合わせてスクリプトを修正する必要がある。
抗体アレイ法を応用した造血器腫瘍細胞におけるシグナル伝達因子異常の網羅的解析

細胞内シグナル伝達機構においてチロシンリン酸化は、チロシンキナーゼの活性化やその基質蛋白質のリン酸化によるシグナル伝達経路の活性化を意味する事から、造血器腫瘍(各種白血病、悪性リンパ腫、多発性骨髄腫等)の患者検体(末梢血、骨髄穿刺液、リンパ節生検材料等)を採取し、単核細胞分画の細胞抽出液を調整し、抗体アレイ法を応用して網羅的にシグナル伝達関連蛋白質のチロシンリン酸化を多数の症例や解析するための実験条件を設定する目的で、まず抗リン酸化チロシン抗体(4G10)およびJak2・STAT3・STAT5・Erk・CrkL・Lyn等の種々のシグナル伝達因子のリン酸化特異的抗体を用いてWesternブロット法による解析を施行した。これらの解析により、数例の急性骨髄性白血病症例においてSTAT5のチロシンリン酸化を、また、急性リンパ性白血病の1症例においてLynの強いチロシンリン酸化とRasGAPとの結合を見いだし、in vitro kinase assayによりLynの強い活性増強を認めた。さらに、慢性骨髄性白血病症例ではBCR/ABLの自己リン酸化を確認すると供に、下流のSTAT5やCrkLのチロシンリン酸化の亢進とSTI571処理による抑制を認めた。これらの結果をコントロールとして用いることで、抗体アレイ法を応用した網羅的シグナル伝達関連蛋白質のチロシンリン酸化検出法の条件を設定し、シグナル伝達因子や経路の活性化のパターンと、疾患の病態分類・治療反応性・予後との相関に関してもデータを蓄積して関連を明らかにするため症例の蓄積中である。
リンと酸素硫黄等を含む光学活性な複素環化合物の合成と反応

1,2-オキサホスホランはリンと酸素原子を環内に有する5員環化合物であり、1966年ハンズ等により初めて単離された。無色の安定な結晶であるが、吸湿性であり、容易に水と反応して環を開き、相当するホスフィンオキシドになる。この1,2-オキサホスホランを単離し反応を行うという試みは1990年代になるまでほとんどなされていなかった。そこで光学活性な1,2-オキサホスホランを合成しその反応性を検討した。原料の光学活性な3-ヒドロキシホスホニウム塩をエポキシドから合成し、塩基との反応により光学活性な1,2-オキサホスホランを合成した。光学活性な1,2-オキサホスホランとアルデヒドとは、ほぼ定量的に相当するホモアリルアルコール類が生成する。ケトン類とは加熱するという条件では、ほとんど反応しないことも明らかとなった。これらの反応によって得られるホモアリルアルコール類は天然にある種々の化合物の中に含まれる構成単位である。そこで天然にあるマクロライドの一種であるレシフェイオライドの合成を行った。1,2-オキサホスホランと末端にカルボン酸エステルを持つ長鎖アルデヒドとの反応で相当するホモアリルアルコールをほぼ定量的に得た。これを定法どおり、加水分解、環化反応をおこない、目的のレシフェイオライドを合成することができた。オキサホスホランとパラホルムアルデヒドとの反応でこれまでに全く得られなかった7員環アルキリデンアセタールという興味ある化合物が得られた。この反応の応用性はかなり広いと考えられる。他の複素環化合物の合成を試みた。酸素と同族体である硫黄を一つ環内に含んだ1,2-チアホスホランの合成を相当する3-メルカプトアルキルホスホニウム塩から合成しようと試みたが、非常に不安定であり、加水分解を起こして3-メルカプトプロピルジフェニルホスフィンオキシドに変換することが明らかとなった。以上のように、リンおよび他のもう一つのヘテロ原子を含む複素環化合物は興味ある反応性を示すことが明かとなった。我々はこれまでにリンと酸素を含む複素環化合物の一種であるオキサホスホラン(5員環)を合成し、パラホルムアルデヒドを作用させるとWittig反応ではなく新しい形式の反応を見いだした。光学活性な1、2-オキサホスホランを3種類(5-メチル、5-エチル、5-フェニル誘導体)合成し、種々の化合物との反応を行った。アルデヒドとの反応では相当する光学活性なホモアリルアルコールが得られた。この方法を応用することにより、大環状ラクトンの一種であるレシフェイオリドの合成にも成功している。この化合物の生成収率はこれまで非常によくなかったが、その原因である3-ヒドロキシアルキルホスホニウム塩とアルデヒドとの反応の段階をホスホニウム塩からオキサホスホランに置き換えることにより、大幅に収率が向上した(ほぼ定量的)。チアホスホランについてはまず合成が可能かどうかを検討している。イリドとチイランとの反応を行い、3-メルカプトアルキルホスホニウム塩の合成を試みたが、相当する化合物は得られなかった。別の方法で合成を試みている。さらにこの化合物の特徴を見極めて反応を行いたい。オキサホスホランとアルデヒドとの反応において、相当するホモアリルアルコールが収率よく得られた。