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インド密教における観想法と曼荼羅儀礼の包括的研究

インド密教において観想法を説く成就法(sadhana)文献は、マンダラ儀軌(mandalavidhi)と密接な関わりをもつことが知られている。後期密教において最も長い法灯を維持し続けたジュニャーナパーダ流の伝統を、最初期のジュニャーナパーダ(ca.750-800)から最晩期のアバヤーカラグプタ(ca.1080-1120)の時代に至るまで『四百五十頌』を中心に個々の儀礼とがそれぞれどのように形成され伝承されていったのか、両実践を系統別に類型化し,さらに密教周辺の儀礼文献をも視野に入れ包括的に解析することによって密教儀礼の背後にある教理内容を明らかにしようと試みた。(1)『四百五十頌』及び,ラトナーカラシャーンティ,ヴィタパーダの両注から得られた情報を対照させつつ『ヴァジュラーヴァリー』に説かれたプラティシュター儀軌の解析を進めた。アバヤーカラグプタが『四百五十頌』を解釈するにあたっての根拠や彼が伝承する儀礼体系の典拠が一体どこに求められるのか,ジュニャーナパーダ流の典籍を中心に,『アームナーヤマンジャリー』など,周辺の密教文献を視野に入れ解析した。ジュニャーナパーダ流における生起次第の系統としては,1)タガナ・ラトナーカラの師弟関係と,2)ヴィタパーダ・ヴァーギーシュヴァーラキールティ間の伝統という二つの相承系譜に注目し,これらの系統がアバヤーカラや他の継承者にどのような影響を与えたのか系統付けることが出来た。(2)ジュニャーナパーダ流を含む密教のプラティシュター儀軌を精査し,成就法と一緒にその類型化を行う。チベット大蔵経収録のプラティシュター文献は30点を数えるが(Bentor[1996]),それらの文献の系統と成立史を巡る文献学的な解析は充分とは言えなかったが,密教におけるプラティシュター儀礼を知る上で,手始めにジュニャーナパーダ流に関わる成就法とそれと併せた儀礼文献の類型化を行った。(3)上記(1)・(2)に関して,従来あまり注目されることのなかった近代における真言宗とチベット仏教との接点に着目し,彼らの交流のなかで実際に行われた灌頂儀礼の実施状況をチベット・日本側双方の資料を対照させることによって明らかにした。インド密教における観想法(成就法)と曼荼羅儀軌との関連性についてインド・チベット密教典籍の解析を中心に研究を進めている。初年度に当たる2012年度は,研究の基盤となる資料の収集と解析作業を中心に行った。研究の中核となる文献は,ジュニャーナパーダ流に所属する曼荼羅儀軌『四百五十頌』ならびにヴィタパーダ・ラトナーカラシャーンティ両注と,アバヤーカラグプタによる大部の曼荼羅儀軌『ヴァジュラーヴァリー』および曼荼羅観想法『ニシュパンナヨーガーヴァリー』である。これらの文献について,国内外の研究機関に照会し,対象文献と共にそれらに関連するサンスクリット写本・チベット資料について,可能な限りの蒐集を行った。さらにこの作業と平行して,これらの曼荼羅儀礼が実際にどのように執行されたのか,ネパールおよび清朝期の中国・日本国内の資料蒐集も積極的に行った。インド密教の伝統,なかでも後期密教の儀礼の実際については,インドの伝統が途絶えた現状では,チベットの伝統を解析することによって多くの研究が積み重ねられてきた。しかしながら,地域・時代共にチベット文化圏の領域は広範囲に渡っており,未だ未開拓の領域も少なくない。なかでも,清朝末期にパンチェン・ラマ達によって執行された複数の大規模な灌頂儀礼に真言宗の僧達も関わっており,国内外の密教研究にも大きな影響を与えたことについては,充分に検討されていないように思われる。灌頂儀礼と曼荼羅の観想法に関わる清朝期の儀礼の多くは『ヴァジュラーヴァリー』・『ニシュパンナヨーガーヴァリー』と内容的に密接な関係をもっていたと思われ,『蒙古喇嘛教史』の記述からもその伝統は裏付けることが出来る。以上の研究成果の一部は,昨年における国際シンポジウム「チベット美術の過去・現在・未来」(於金沢大学・8月)ならびにヴィクラマシーラ国際研究会(於東京大学・9月)で発表した。1)『四百五十頌』に説かれた成就法とそれぞれの儀礼との関係について、ディーパンカラバドラ自身が本書に示した記述が、ラトナーカラシャーンティ・ヴィタパーダ両『四百五十頌』の内容とどのように関係するのか分析・類型化し一覧に纏めた。『四百五十頌』に記述された儀礼内容は、1前段階の奉仕、2ー1地の浄化、2ー2地の受納、3ー1瓶の準備、3ー2尊格の準備、3ー3弟子の受認、4曼荼羅作成ならびに付属儀軌、5弟子引入儀軌、6狭義の灌頂儀軌、7曼荼羅の終結とその他の儀軌という全六改訂・計11項目に区分し得る。1が他の儀礼にどのように関わるのかに注目し整理した。2)上記1)の内容がアバヤーカラグプタの曼荼羅儀軌『ヴァジュラーヴァリー』とどのようにつながるのか、『ニシュパンナヨーガーヴァリー』だけでなく『ヴァジュラーヴァリー』自体の観想に関わる文脈とを対照しながらさらなる解析を進めた。3)以上1)・2)の内容理解に大いに資すると考えられる『サンプタウドバヴァタントラ』注『アームナーヤマンジャリー』解析に関わる予備調査を『サンプタタントラ』自体のサンスクリット写本に遡って進めた。

『サンプタウドバヴァタントラ』には現在確認されている貝葉写本が4本あるが、その中欠損されているとされる1写本を除く完本3本を入手し、他の紙製諸写本ならびにチベット訳を対照し、主にタントラならびに『アームナーヤマンジャリー』第一章の解析作業をおこなった。申請者は重要性が指摘されながらもこれまで研究を停滞させてきた一次資料の不備を補うべくインド密教において最も長い伝統を保持し続けた『秘密集会』ジュニャーナパーダ流の原典研究を採択課題「インド密教における観想法と曼荼羅儀礼の包括的研究」として進めてきた。本研究は、申請者の過去の校訂・訳注研究に基づきながらも、新たに見出された『ローカアーローカカーリカー』のサンスクリット原典写本を使用し、一般に「曼荼羅儀軌(mandalavidhi)」と呼ばれる儀礼集成文献の解読・校訂・訳注作業を通じて、インド密教におけるさらなる研究基盤の獲得を推進するものである。同書は、特定の聖典・流派を越えて受容され他の建築儀礼書にも多大なる影響を与えた。申請者はNGMCP(Nepalese-German Manuscript Cataloguing Project)を最大限に活用することによって『ローカアーローカカーリカー』ほぼ全体の校訂・訳注作業を完了し、現在は儀礼内容・語彙解析と事項索引の作業に取り掛かると共に内容を取り纏め、出版の準備を進めている。内容の一部については、タントラ国際会議(カルフォルニア大学バークレー校・2014年)をはじめとする国内外のシンポジウム・学術大会で発表する機会を得た。また、上記の研究によって得られた情報の一部を生かし、バウッダコーシャ(東京大学)・ヴィクラマシーラ(三重大学)・ITLR(ハンブルグ)三つのプロジェクトと連携し、密教の術語集成を構築する作業を進めており、本研究成果の多くがウェブ上で公開予定である。インド密教において観想法を説く成就法(sadhana)文献は、マンダラ儀軌(mandalavidhi)と密接な関わりをもつことが知られている。後期密教において最も長い法灯を維持し続けたジュニャーナパーダ流の伝統を、最初期のジュニャーナパーダ(ca.750-800)から最晩期のアバヤーカラグプタ(ca.1080-1120)の時代に至るまで『四百五十頌』を中心に個々の儀礼とがそれぞれどのように形成され伝承されていったのか、両実践を系統別に類型化し,さらに密教周辺の儀礼文献をも視野に入れ包括的に解析することによって密教儀礼の背後にある教理内容を明らかにしようと試みた。『四百五十頌』自体の解析はおおむね順調であるが、『アームナーヤマンジャリー』ならびに『サンプタウドバヴァタントラ』から新たに得られた情報のフィードバックに時間がかかっている。インド・チベット仏教学当初予定していたダルパナアーチャールヤの『クリヤーサムッチャヤ』に関しては、作業の進捗状況にあわせて『アームナーヤマンジャリー』関連の解析作業を優先し、対象となる内容を変更する可能性がある。平成25年度の活動において『ヴァジュラーヴァリー』を始めとするアバヤーカラグプタの曼荼羅儀礼に関する資料,ならびにその他の成就法・曼荼羅儀軌に関するサンスクリット写本・チベット語資料については,現在国内で入手し得るほぼすべての資料を複写することが出来た。さらに,従来はほとんど注目されることのなかった近代における満蒙資料に注目し,インドからチベット仏教世界に至る灌頂儀礼の実施内容を明らかにする作業も順調に進展している。インド密教における観想法(成就法)と曼荼羅儀軌との関連性について密教典籍の蒐集・解析作業を中心に研究を進めている。
時間外一次救急外来の実態調査および診療受け入れ体制の検討

佐賀大学医学部附属病院時間外救急外来において、救急搬送、小児、紹介を除いた初診患者を、平成25年度からの2年間で2,099症例登録した。患者の主訴と施行した検査を記録して解析した。26種の主訴の内「排尿、耳と聴覚、動悸、しびれ、その他の呼吸器症状、その他の消化器症状、発熱」は半数以上で検査を施行することなく帰宅可能と判断されており、中小医療機関の時間外診療でも受入可能である可能性が高いと考えた。逆に「運動麻痺と構音障害、吐血と下血」は緊急入院率が非常に高く、「その他の外傷、意識消失発作」はCTや専門医へのコンサルテーションを必要とする場合が多く、中小医療機関での受入困難な場合が多いと考えた。計画の半分、2013年度分の1年間のデータ入力を終え、主訴別に緊急入院率や各種検査やコンサルテーション率を算出。頻度の高い主訴や検査の頻度につきおおまかな傾向が判明した。2014年度分の入力は2015年6月に終える予定であり、頻度が少ない主訴についても母集団数が2年分となれば、もう少し傾向がわかると思われる。2年間の研究期間に佐賀大学医学部附属病院時間外救急外来において、救急搬送されていない紹介でない、小児を除く初診患者2099名を登録した。解析にあたり、様々な主訴を26種にグループ化した。また、1症例毎にNE(特に検査を行わず帰宅)、LE(Xpと採血を施行して帰宅)、HE(CTやMRIや専門科へコンサルテーションをして帰宅)、A(緊急入院)の4つに分類した。(1)NEが全体の50%以上かつLEを加えると70%以上になる条件の主訴は、排尿、聴覚、動悸、しびれ(異常知覚)、呼吸器症状(呼吸苦を除く)、消化器症状(吐下血と腹痛を除く)、発熱であった。(2)NE+LEが70%以上の主訴は、めまいとふらつき、四肢の症候、腰背部の症候、呼吸苦、交通外傷、腹痛、胸痛、倦怠感であった。(3)HE+Aが50%以上となる主訴は、運動麻痺と構音障害、吐血と下血、その他の外傷(交通外傷と皮膚外傷を除く)、意識消失発作であった。(1)は何ら検査のできない当直医一人の中小病院の時間外でも、結果的に50%以上を帰宅と判断でき、Xpと採血ができれば70%を帰宅と判断できることから、それらで受け入れやすい主訴と言える。(2)はXpと採血ができる状況なら同じく70%を帰宅と判断できる。(3)は半数以上がCT撮影やコンサルテーションなしに帰宅と判断できない、または緊急入院となるので、中小病院時間外での受け入れは困難と思われる。この研究の限界として、時間外でも検査が可能で専門科にコンサルトできる大学病院での調査であり、今回の結果は必要最低限でなく、過剰に検査やコンサルトを行なっている可能性がある。また、他院で受診を断られた症例が相対的に多く時間外特別加算料金も設定されているので、市中病院とは患者層が異なる可能性がある。小児と救急症例を除外しているので、相対的に重症度の低い母集団であり、あらゆる救急外来対応には応用できない。2013年度のデータにつき、2015年4月の第112回日本内科学会講演会にてポスター発表を行った。副次的に判明した、若手医師(3-4年目)が相対的に検査やコンサルテーションを行っている主訴も解析し、重点的に教育する項目を見出した。その結果については2015年2月の第10回日本病院総合診療学会学術大会にて発表した。2015年6月で集計を終える予定であり、おおむね予定通りに進んでいる。総合診療海外発表を2016年2月のWONCA South Asiaregion conferenceで行いたいと考えている。1年分の国内での論文発表は期限に間に合わせる予定だが、2年分の結果についての論文化も間に合わせたい。副次的に判明した、若手医師が検査を選択する主訴も2年分を解析する。同じく副次的に判明した、受診時間帯と緊急入院率の相関を2015年9月の第11回日本病院総合診療医学会学術総会で発表予定としている。予定していた当該年度の国内学会発表の1つが近距離で旅費がほとんどかからなかったこと、もう1つの発表を次年度4月にしたことで、当該年度の旅費への使用が少なくなった。集計や解析の人件費、海外発表の旅費、間に合えば英語論文作成の際の校正費用などに充てる予定。
蛍光相関分光法を用いたプロテアソームの時空間的制御機構の解析

本年度の研究課題は,主に蛍光相関分光法(FCS)および蛍光相互相関分光法(FCCS)を用いて生細胞内のプロテアソーム複合体の状態と会合の場(細胞質と核との比較)を明らかにすることである。そのため、変異株と阻害剤を用いて生理的条件を変えながら、26S複合体の会合と動態の状態を解析した。詳細は以下の通りである。1.蛍光蛋白質融合株並びに薬剤感受性株(δpdr)を用いた薬剤によるプロテアソームの質的・量的変化の追跡細胞内における26Sの遅い拡散成分の原因を調べるため(H21年度研究実績報告書参照)、蛋白質分解、細胞骨格、転写活性、脱アセチル化を阻害する薬剤をそれぞれ処理した細胞を用いて遅い拡散成分の変化を追跡した。その結果、蛋白質分解阻害剤(MG132)特異的に遅い拡散成分の割合が大幅に減ることを見出した。それに対して細胞骨格阻害については変化が見られなかった。2.プロテアソームの会合の場と核移行FCCS解析によりCPとlid(CPとBase)は細胞質と核内両方においてそれぞれ強く結合していることが明らかになり、サブユニットは殆どが26S複合体として存在していることが示唆された。一方,プロテアソームの核移行に欠損を示すインポーティン変異株(srpl-49)においても細胞質ではCPとlid(CPとBase)が野生型の株と同様強く結合していることが分かった。さらに、サブユニット融合型26Sプロテアソームを発現する変異株を用いた実験においても野生株と同様な局在を示した。以上の細胞計測結果から26Sプロテアソームは生細胞において細胞質で26Sとして完成し、そのまま核膜を通過できると言った新知見が示唆された。本年度の研究課題は,主に蛍光相関分光法(FCS)および蛍光相互相関分光法(FCCS)を用いて生細胞内のプロテアソーム複合体の拡散定数と絶対濃度を決定することである。まず、全プロテアソームタンパク質のうち,複合体を形成している割合とその絶対数,そして核内と細胞質でこれらは異なるのかについて解析した。1.プロテアソームサブユニット蛍光タンパク質融合株のFCS, FCCS測定の最適化FCS並びにFCCS解析に適切な蛍光タンパク質としてはGFP並びにmCherryの他mKateも応用可能なことが分かった。これらの蛍光蛋白質の性質分析なども行ない、コンフォカル顕微鏡観察を始め、FCSとFCCS測定条件をそれぞれ検討しながら安定且つ効率良く計測する実験条件を確定した。CP-,lid-,base-GFP株を作製してFCS測定を行なった結果、それぞれの細胞内おける濃度が100200nM範囲内であることが分かった。また動態解析から、それぞれのタンパク質の細胞内(細胞質と核〉動態は26S複合体の分子量から予想される動態とそれよりはるかに遅い動態が共存していることが示唆された。2.プロテアソーム系関連遺伝子の蛍光タンパク質融合株ミニライブラリーの作出とFCCS計測蛍光タンパク質融合の最適化をプロテアソームサブユニットについて行ない緑と赤の2色の蛍光タンパク質融合株を作出した。作製した株について表現形や精製プロテアソームの活性などを指標に評価した。それから得られた細胞株をFCCS解析し、CPとlidは細胞内の細胞質と核内両方においてそれぞれ強く相互作用していることが分かった。一方,プロテアソームの核移行に欠損を示すインポーティン変異srpl-49株を作製し、計測を行なった結果、細胞質においてCPとlidは野生型の株と同様強く結合していることが分かった。
アシド系局所麻酔薬の循環器系に対する実験的研究

アシド系局所麻酔薬・塩酸ブピバカイン0.5mg・kg・mmを経静脈的に犬に投与し、以下の成績を得た。1.新生児犬では明らかな痙攣をみることなく、血圧の変動、心電図の変化・頻拍、徐拍、QRS間隔の増大、心室性頻拍がみられ、その時間は17.6±3.0分(Mean ±SE、以下同様)、塩酸ブピバカインの血中濃度3.9±0.8μg・mlであった。2.成犬では、血圧の上昇とともに強直性、間代性の痙攣を惹起し、やがて心電図の変化・頻拍、徐拍、QRS間隔の増大、心室性頻脈がみられた。痙攣惹起に至る時間は14.4±1.0分、塩酸ブピバカインの血中濃度は6.52±0.5μg・mlであった。これら新生児犬、成犬の症状、所見出現迄の動脈血中のpHは7.40±0.01、PaO_293,7±2.7mmHg、PaCO_231.8±1.2mmHgであった。3.FiO_21.0群の幼弱犬では、投与後痙攣を起こし、やがて循環虚脱に至るが、前者に5.6±1.2分、後者に92±19.3分を要し、それぞれの塩酸ブピバカイン投与量は2.7±0.7mg・kg、44.5±9.4mg・kgであった。4.FiO_20.16群の幼弱犬でも投与後の経緯は同様であるが、その時間は5.6±1.0分、37.6±8.4分、それぞれに要した塩酸ブピバカイン量は2.7±0.4mg・kg、18.0±4.0mg・kgでのあった。これらFiO_2変動群の塩酸ブピバカイン投与前の動脈血PHは7.399±0.06、7.360±0.03、PaCO_229.06±3.9mmHg、34.6±3.4mmHgであり、収縮期、拡張期血圧、心拍数、QRS間隔、ヘモグロビン量、血清カリウム値などにも著変を認めていない。今回の結果は低酸素血症幼弱犬で塩酸ブピバカインの心臓毒性が強いことを示しているものと思われ、アシド系局所麻酔薬の臨床使用上の、特に硬膜外麻酔時の1つの指標を示している。今後、他のアシド系局所麻酔薬との比較検討を行う予定である。生後1乃至4週,体重420g乃至1000gの仔犬にブピカバカインmg/kg/minを径静脈的に投与し,以下の成績を得た.仔犬では成犬にみられるような痙攣を観察することなく,心拍数,血圧,心電図の変化が生じた. 2.仔犬では心拍数,血圧,心電図の明らかな変化は平均17.66±3.0(SE)分にみられ,成犬の痙攣が若起する時間,平均14.40±1.0(SE)分に比較し遅かった. 3.仔犬では,上記諸症状を呈するのに要したブピバカインの血中濃度は, 3.91±0.8(SE)Mg/mlで,成犬の痙攣が若起する時のブピバカイン血中濃度は6.52±0.5(SE)Mg/mlであった.今回の検討は成犬5頭(体重13.5±0.9(SE)kg)および仔犬3頭(生後1乃至4週,体重0.64±0.2(SE)kg)を用いた.成犬は実験7日前に全麻下に頚動静脈にカテーテルを挿入し,覚醒下に実験を行ない,仔犬は実験当日ケタラール麻酔下に1ボカインによる局所麻酔を併用し,股動,静脈にカテーテルを挿入し,血圧,血液諸検査,薬物血中濃度測定および薬物注入に供した.心電図は原則として第2誘導を用いた.ブピバカインは成犬,仔犬とも0.5mg/kg/minを経静脈的に投与した.成犬ではブピバカインを投与し,やがて血圧の上昇,頻拍を伴った痙攣を若起するに至るが,仔犬では一過性に軽度の血圧上昇後に心拍数は漸減し, QRS幅の増大をみた.今後,低FiO_2,低体温條件下のpharmacodynamicsについて検討を続ける予定である.アシド系局所麻酔薬・塩酸ブピバカイン0.5mg・kg・mmを経静脈的に犬に投与し、以下の成績を得た。

3.FiO_21.0群の幼弱犬では、投与後痙攣を起こし、やがて循環虚脱に至るが、前者に5.6±1.2分、後者に92±19.3分を要し、それぞれの塩酸ブピバカイン投与量は2.7±0.7mg・kg、44.5±9.4mg・kgであった。4.FiO_20.16群の幼弱犬でも投与後の経緯は同様であるが、その時間は5.6±1.0分、37.6±8.4分、それぞれに要した塩酸ブピバカイン量は2.7±0.4mg・kg、18.0±4.0mg・kgでのあった。これらFiO_2変動群の塩酸ブピバカイン投与前の動脈血PHは7.399±0.06、7.360±0.03、PaCO_229.06±3.9mmHg、34.6±3.4mmHgであり、収縮期、拡張期血圧、心拍数、QRS間隔、ヘモグロビン量、血清カリウム値などにも著変を認めていない。今回の結果は低酸素血症幼弱犬で塩酸ブピバカインの心臓毒性が強いことを示しているものと思われ、アシド系局所麻酔薬の臨床使用上の、特に硬膜外麻酔時の1つの指標を示している。今後、他のアシド系局所麻酔薬との比較検討を行う予定である。筋弛緩薬・塩化スキサメトニウムを静注し、呼吸停止後ただちに挿管を行なったFiO_21.0群およびFiO_20.16群の幼弱犬、体重25乃至11.0kgにアミド系局所麻酔薬・塩基ブピバカイン0.5mg・kg・minを経静脈投与し、以下の成績を得た。FiO_21.0群の痙攣惹起に至る時間は5.6±1.2分(数値はMean±SE、以下同様)、痙攣までに要した塩酸ブピバカイン量は2.7±0.7mg・kg、循環虚脱に至る時間は92±19.3分、循環虚脱までに投与した塩酸ブピバカイン量は44.5±9.4mg・kgであった。塩酸ブピバカイン投与前の動脈血中のPHは7.399±0.06、PaO_2511.5±18.2mmHg、PaCO_2、29.6±3.9mmHgであり、収縮期血圧148±13.7mmHg、拡張期血圧77±6.6mmHg、心拍数127±12.3・分であった。FiO_20.16群の痙攣惹起に至る時間は、5.6±1.0分、痙攣までに要した塩酸ブピバカイン量は2.7±0.4mg・kg、循環虚脱に至る時間は37.6±8.4分、循環虚脱までに投与した塩酸ブピパカイン量は18.0±4.0mg・kgであった。塩酸ブピバカイン投与前の動脈血中のPHは7.360±0.03、PaO_251.8±6.4mmHg、PaCO_234.6±3.4mmHgであった。また、収縮期血圧187±13.2mmHg、拡張期血圧は106±7.5mmHg、心拍数は123±7.2・分であった。その他、両群間にヘモグロビン量、血清カリウム血の有意差は認められない。塩酸ブピバカイン投与による心電図上のQRS間隔の変動は、FiO_2の如何にかかわらず全例に認められた。明らかな心室性頻拍はFiO_21.0群で3例、FiO_20.16群で2例認められている。今日の結果は、低酸素血症の幼弱犬で塩酸ブピバカインの心臓毒性が強いことを示しているものと思われる。
フォトボイスを用いた妊婦のメンタルヘルス支援の検討

本研究は、初めて出産する女性のメンタルヘルス支援を目指して、妊娠中の喜びや不安などの感情を整理し表出するためにフォトボイス(photovoice)を取り入れた研究である。フォトボイスを実施した初産婦群はフォトボイスを実施していない初産婦群と比較して気分状態の`爽快感'と`不安感'に有意差がみられ、フォトボイスを実施することにより妊娠末期の妊婦の不安感の軽減ならびに出産を前向きにとらえられる気分へと導くことができた。対照群のデータとして妊娠期間中の初産婦・経産婦の自己効力感と気分状態は平均点の違いはあるが、上昇と下降が同じ傾向をたどっていた。初産婦は経産婦と比較して不安感が高いことが示された。本研究の目的は妊娠期の健康教育の場において妊婦が自分の言葉で妊娠・出産について語ることによって、出産に対して気持ちを安定させて、臨むことができるかどうかを見ることである。方法は妊娠期間中に妊娠や出産でイメージすることを写真にとって来てもらい、視覚的イメージを使って妊婦の感情や思考、悩みなどを表出し、感情や行動の変化をみるものである。写真を撮影する前後には感情の変化をみるために調査票に答えてもらい、写真撮影後に写真の意味などを話を聞きながら妊婦の現在の心境を引き出すようにしている。母親学級は妊娠・出産・育児に関する一方的な情報提供イメージが強いが、妊婦同士が自分たちで必要な情報の取得や安産に向けた行動変容ができる教室運営が求められているため、一手段として写真を用いて妊婦の気持ちを表出することを試みた。本研究は妊婦のメンタルヘルス支援のために、視覚的な表現として写真を用いて妊婦の思考や行動を表現してもらい、研究者との会話を通して妊娠期や分娩前の気持ちの整理に効果があるかどうかを図る研究である。データは3年前から少しずつデータ収集を行っている段階である。また同時に対照群として、対話はしないが同じ健康教育を受けた妊婦にも同じアンケート調査を行っている。介入群・対象群ともに現在、20弱のデータが収集できている。さらに妊婦の一般的な心理状態を理解し、介入群と対照群と比較をするために、またデータに信頼性があるかどうかを確認する目的のために、初産婦と経産婦へのアンケート調査を実施している。アンケート調査の時期は妊娠初期・中期・後期・育児期である。アンケートの内容は妊婦が妊娠期の生活において、どのような情報を必要としており、どこから情報を入手しているのかを中心に、妊婦の心理状態・自己効力感を調査している。このデータは妊娠期の健康教育の際に具体的な内容を提供するための基礎データとなるであろう。また母親が求める、産後1カ月までに必要とされる支援内容や、母親が子育て中に必要としている情報や情報の入手先なども調査項目としている。データ分析はまだ行ってはいないが、少子化の現在において、これから助産師・看護師は詳細であり、かつ的確な集団健康教育の実施が求められると考えることから、本調査のデータがこれからの妊娠期の健康教育の在り方・運営において有効なデータになると確信している。本研究は妊婦に対して出産前の健康教育の中にフォトボイスという視覚的イメージを使ったディスカッションを取り入れることにより、妊婦の感情に良いとされる変化を起こすことを目的とした研究である。平成23年度は当初予定していた研究協力機関から研究の受入れが困難という状況であり、研究協力機関を探すことから始まったため、研究の開始が非常に遅れてしまった。そのような現状の中、研究協力機関が見つかり、平成24年1月から研究を実施している。今年度は妊婦の妊娠期間中の感情をアンケートを使って調査している。妊娠期間中に3回アンケートに答えてもらうようにしており、このデータはこれから介入する研究の基礎的な妊婦の感情としてのデータとする。現段階で研究協力していただいている妊婦は12名であり、今後も研究協力者は増えていくと予想される。まだデータ収集の途中であるため、学会で発表するには至っていない。本研究は、初めて出産する女性のメンタルヘルス支援を目指して、フォトボイス(photo voice)という手法を取り入れた研究である。研究者は妊娠末期における妊婦の気持ちや行動を聞き出すために、妊婦が持つ妊娠・出産のイメージをカメラに撮影してきてもらった。研究者は妊婦が撮影した写真を現像し、妊婦と写真を見ながら、妊婦の日常生活や妊娠・出産において考えていることを聞き出し、悩みや不安を明らかにした。結果:フォトボイスを実施した初産婦群はフォトボイスを実施していない初産婦群と比較して感情の一つである`爽快感'が圧倒的に高い値を示した。また同時に、妊娠期間中における初産婦と経産婦の自己効力感や感情得点を調査した。初産婦の平均年齢は30.23(±4.478)歳、経産婦の平均年齢は31.64(±4.380)歳であった。

自己効力感得点の平均は、妊娠35か月時の初産婦が24.35(±3.570)点、経産婦が24.79(±3.792)点であり、妊娠68か月時の初産婦が24.10(±4.095)点、経産婦が24.33(±3.824)点であり、妊娠910か月時の初産婦が24.75(±3.844)点、経産婦が24.98(±4.099)点であった。妊娠が経過するにつれて妊娠中期には自己効力感得点は低下するが、妊娠後期には自己効力得点は再び上昇する傾向にあった。妊娠期の感情である不安感は、妊娠910か月時において初産婦と経産婦を比較すると、初産婦の不安感得点が圧倒的に高い値を示していた。妊娠末期に友人から妊娠・出産の情報を得ている経産婦は、友人から情報を得ていない経産婦と比較して感情の爽快感得点が高く、そして疲労感得点、抑うつ感得点、不安感得点が低かった。同じく妊娠末期に義母から妊娠の情報を得ている経産婦は、義母から情報を得ていない経産婦と比較して感情の爽快感得点が高く、そして疲労感得点、抑うつ感得点が低かった。生涯発達看護学24年度は母親学級に参加された妊婦を対象に研究協力依頼をしてデータの収集を中心に行った。また同時に比較対象として母親学級などで介入をしていない妊婦へのアンケート調査を妊娠期間中3回郵送にて依頼している。介入群のデータは少しずつしか取れないことと、研究者が直接妊婦と話をして、妊婦の今の感情や考えを引き出すため、時間を要しているのが現状である。データの数が十分ではないため、25年度も引き続き、データの収集を行う予定である。研究のデータ収集を昨年度までに終える予定であったが、調査に協力していただける医療機関を探すことに時間をとられて、研究開始が遅れたことから、現在も研究調査を行っている状況である。研究実績の概要にも記載したが、当初予定していた研究協力機関から協力を断られたことにより、新たに研究協力機関を探すことに時間がかかったので、研究の開始が遅れたことが要因としてある。また研究方法も再度見直し、介入研究であるため、妊婦が負担にならないような方法に変更したことも研究の遅れの要因としてある。24年度と同様、母親学級に参加されている妊婦への調査協力依頼を行い、写真を使ったディスカッションを展開していく。研究者が一人であることと、母親学級への参加妊婦が少ないこともあり、一つ一つの症例を丁寧にとっていくため時間を要することは確実である。今年度はデータ収集と同時にデータ分析を行い、関連ある学会で研究成果を発表する。妊婦の感情のアンケート調査は基本データとしてあと2年間調査を続行する。フォトボイスセッションの介入研究に関しては、これから健康教育の中で実践していくこととする。24年度同様、研究協力依頼者への謝金に260000円程度と、調査施設への旅費に60000円と郵便郵送に60000円程度使用する。また文献等に使用する図書の購入を行う。研究進行が遅れていることから、予定の予算執行には至らなかった。研究においての考察に使用する書籍の購入と学会発表のための旅費、さらにデータ収集のための通信費や調査時の交通費、雑費などである。
乱流剪断層を通過するレーザ・ビームの伝播特性

乱流剪断層を通過するレーザー・ビームの劣化に対しては時に米国においてさかんに研究が行なわれており、この数年で剪断層が直線的な場合については乱流特性とビームの劣化特性の定量的な関係がおおむね明らかになってきた。また剪断層が湾曲している場合には特にビームのコヒーレンスの低下が著しいことも実験に示された。そこで本研究では特に噴流の乱流特性におよぼす湾曲の効果に着目し、湾曲噴流内の乱流諸量の測定を行なった。湾曲噴流内の乱流剪断応力を記述する理論式は混合距離におよぼす遠心力の効果を考慮してSayerによって与えられているが実験によって決まる遠心力効果定数Cを含む。Cの評価はいく人かの研究者によってなされており、噴流の初期領域では58,また充分に発達した領域では3程度とされている。これらはいずれも噴流の付着距離や平均速度分布によりCを評価したものである。したがって噴流内の乱流特性の分布は明らかにされていない。このため、レーザー・ビームの劣化を評価するデーターとはなり得ない。そこで昭和60年度は円弧に沿う噴流内のレイノルズ応力を測定し、これとSawyerの式を用いてCの評価を行なった。この結果、Cは噴流の初期領域で10以上の値をもち、下流方向に急激に減少してノズル中の25倍程度下流では3程度に減少することが示された。昭和61年度は、特に噴流の初期領域に主眼をおき各種の乱流パラメーターや乱流エネルギー保存式とレイノルズ応力輸送方程式の各項の大きさを実験的に評価した。今後は、湾曲噴流を通過するレーザー・ビームのコヒーレンスを測定し、得られた乱流測定結果と光学測定結果をもとにしたモデル化を行なう。
虚偽検出メカニズムの解明

本研究は表面に分子間相互作用を起こしやすい官能基を導入した樹状分子デンドリマーを利用して、様々な物質との相互作用により自己組織化を行い、分子集合体とポリマーの性質を併せ持った機能性分子集合体を作製することを目的としている。特に、デンドリマーの分子サイズと相補的な大きさを有する物質をターゲットとし、既存の分子集合体よりも巨大な分子からなるメソサイズの分子集合体の形成を目指している。まず、具体的な目的分子として、表面に種々のグアニジニウム基を有し、リンカーとしてオキシエチレングリコール鎖を有するデンドリマーを設計した。グアニジニウム基は、カルボキシレート、スルフェート、ホスホネート等、種々のオキシアニオン性官能基と静電的水素結合を形成することが知られている。このような置換基を1分子に多数導入することで、多価的に相互作用がはたらき、結果として種々のターゲットと強く相互作用することを期待した。まず、具体的な合成法を検討した結果、ポリエチレングリコールをコアとし、ダイバージェント的に合成できるタイプのデンドリマーが適切でないかと考えた。実際に合成法を検討した結果、第一世代第三世代のデンドリマーを効率的に得ることに成功した。また、予備的な検討により、これらのデンドリマーがいくつかの無機物質と強く相互作用してハイブリッド複合体を形成することが明らかになった。現在、デンドリマー世代の違いによる相互作用の差異等について検討を行っている。Guilty Knowledge Test(GKT)は,記憶を測るテストとして科学的に高い評価を受ける虚偽検出法である.本研究は,GKTによる虚偽検出メカニズムを解明し,GKTを犯罪捜査における確固たる科学技術として位置づけること,そしてその価値を世界に証明することを目指すものである.これまでのGKT研究では,認知要因を重視するあまり感情要因について全く検討がされてこなかった.ところが,感情と記憶の関わり,特に感情の中でも覚醒と記憶の関わりは多くの研究で示されており,まして犯罪という強い覚醒の伴う場面ではその関係は無視できない.ここでは,これまで排除されてきた「感情」を「記憶」との関連の中で再考し,新たな視点を持ってGKTの本質に迫る.本年度は,二つの要因に関する研究計画を実施した.まず研究計画1では,覚醒を強く伴った行為に関する記憶(高裁決刺激)と比較的弱い覚醒を伴った行為に関する記憶(低裁決刺激)が,GKT時の事象関連電位(ERP)にどう影響するかを検討した.その結果,高裁決刺激と低裁決刺激に対する反応は行為と関係ない刺激(非裁決刺激)への反応よりも有意に大きく,高裁決刺激への反応はさらに,低裁決刺激に比べて有意に増大することが明らかとなった.これにより行為時の覚醒がGKTと深く関わることが確証された.研究計画2では,研究計画1と同様のパラダイムを用いて行為の直後及び一ヵ月後に実施されたGKTにおけるERP反応を比較検討した.結果,低裁決刺激に対する反応は1ヶ月後には非裁決刺激のレベルまで低下し,検出が困難であることがわかった.逆に高裁決刺激への反応は1ヵ月後も大きく保たれており,顕著な刺激として長期にわたって保持されることが明らかとなった.これによりGKTにおける時間的影響と覚醒の効果の関係がはじめて明らかになった.
S1P を標的とした肺線維症の病態解析と新規治療法

スフィンゴシン1リン酸(sphingosine 1-phospate:以下S1P)受容体アゴニスト(FTY720)が高度の線維化形成を惹起するメカニズムの研究を行った。S1Pは肺線維芽細胞にたいし増殖能、遊走能を有しており、また線維化肺、線維芽細胞にはS1PR1が発現しており、肺線維症の治療ターゲットとしてS1P-S1P1シグナルの制御が有効である可能性が示唆された。スフィンゴシン1リン酸(sphingosine 1-phospate:S1P)はGタンパク質共役型S1P受容体ファミリー(S1PR1-S1PR5)を介して下流にシグナルを伝達する脂質メディエターの一つである。近年、S1Pシグナルは、TGF-βの重要なco-factorとして線維化に関与する分子として注目されている。今回我々は新規免疫抑制剤であるS1P受容体アゴニスト(FTY720)が高度の線維化形成を惹起するという研究成果を得たことより肺線維症におけるS1Pの役割について検討を行った。方法は、レコンビナントS1Pの肺線維芽細胞増殖、遊走に与える影響を、3H-TdR取り込み試験およびBoyden chamber法によるmigration assayにて検討した。またマウス肺線維症モデルは、7週齢C57BL/6マウスにBLM(ブレオマイシン)をmini-osmotic pumpにて持続皮下投与し作成した。FTY720は1mg/kg/dayをDay14-28に腹腔内投与した。またRT-PCRを用いC57BL/6マウス肺線維芽細胞株、及び線維化肺組織のS1P受容体(S1PR1-S1PR5)の発現を検討した。S1P濃度はマウス肺胞洗浄液を用いELISA法にて検討を行った。S1P受容体発現の検討は、肺線維症モデルとIPF:特発性肺線維症患者の肺組織を用い免疫染色法にて検討した。その結果、S1Pレコンビナント蛋白の刺激で、濃度依存性に細胞増殖、また遊走活性を認めた。また、マウスBLM肺線維症モデルのBALF中にはS1Pが上昇しており、マウス肺線維芽細胞株、及びBLM+FTY720投与群では、S1PR1の発現が亢進していた。以上の結果から、S1P-S1PR1シグナルが肺線維症に関与しており、その機能を制御・調節することで肺線維症の病態解明や治療に応用される可能性が示唆されたスフィンゴシン1リン酸(sphingosine 1-phospate:以下S1P)受容体アゴニスト(FTY720)が高度の線維化形成を惹起するメカニズムの研究を行った。1.S1P受容体アゴニスト、FTY720によりBLM誘発肺線維症を悪化。BLMをosmotic pumpを用いてマウスに1週間かけて持続皮下投与することにより肺線維症モデルを作成した。S1P受容体アゴニストであるFTY720をday15から28にかけて連日腹腔内投与しday28にてマウスをsacrificeし肺切片のAschcroft scoreを用いた組織学的検討を行ったところ、FTY720投与群にて著明な肺線維化増悪が認められた。また生存率においてもFTY720投与群にて悪化が認められた。2.FTY720およびS1Pがマウス肺線維芽細胞の増殖ならびに遊走を促進。マウス肺線維芽細胞を用いたトリチウムチミジン取り込み試験にて、FTY720およびS1Pは濃度依存性に肺線維芽細胞の増殖を促進した。また同様にケモタキシスアッセイにてFTY720およびS1Pは濃度依存性に肺線維芽細胞の遊走を促進した。3.マウス肺線維芽細胞においてS1P1が高発現。マウス肺線維芽細胞におけるS1P受容体の発現をリアルタイムPCRにて検討したところ、S1P1とS1P2の発現が確認され、さらにS1P1の発現が最も顕著であった。4.FTY720併用によりBLM投与マウス肺におけるS1P発現が亢進。BLM投与マウスならびにFTY720併用BLM投与マウス肺におけるS1P受容体の発現をリアルタイムPCRにて検討したところ、FTY720併用群にてS1P1の発現が亢進していた。一方でS1P1以外のS1P受容体の発現については両群間で差はなかった。5.免疫組織学的解析にてBLM投与マウス肺ならびにIPF患者肺組織の線維化巣にS1P1の発現を認めた。S1PアゴニストであるFTY720がBLM誘発肺線維症モデルにおける肺線維化悪化を誘発することをin vivoにて証明し、そのメカニズムの一部はFTY720ならびにS1Pの肺線維芽細胞に対する作用であることをin vitroにても証明できた。さらに肺線維化の進展においてS1PシグナルのうちS1P1受容体が重要である可能性がわかってきた。免疫抑制剤であるFTY720が肺線維化を悪化させる恐れがあり、さらにはそのメカニズムの一部を解明することができている。In vitroにてsiRNAを用いてマウス肺線維芽細胞のS1P1受容体をノックダウンすることによりFTY720およびS1P刺激により誘導された増殖反応

ならびに遊走反応が抑制されるか検討する。同時にin vivoにおいてもsiRNAを用いてマウスのS1P1受容体をノックダウンすることによりBLMモデルにおけるFTY720併用による肺線維化の増悪が抑制されるか検討する。さらにS1P1受容体をノックダウンしたBLM投与マウス肺切片を用いてKi-67、コラーゲン1の免疫組織染色にて線維芽細胞の増殖反応抑制の有無について検討する。繰越金はごくわすかであり、培養器具等の消耗品の購入に使用予定である。翌年度請求の研究費は、実験用マウスの購入ならびにFTY720、siRNA等の試薬、ケモタキシスアッセイ用チャンバー、免疫組織染色用抗体の購入にあてる予定である。
RB経路とp53経路を利用した小細胞肺癌に対する新規治療の探索

小細胞肺癌は高頻度に異常を認めるRB遺伝子とp53遺伝子の異常により不死化や増殖能を獲得し、独立して神経内分泌系への転写因子の活性化を得ることが重要である。(1)Ad-p53とAd-RBの単感染あるいは共感染による神経内分泌系分化誘導転写因子Ash1,Ash1のアンタゴニストであるId1とId2などの発現変動は細胞死の誘導に伴う。(2)ヒト肺癌幹細胞から非小細胞肺癌と小細胞肺癌への分化の切り替えはAsh1やNotchfamily(1,2,3)の遺伝子発現が関与するとの仮説に基づいて、20種類のヒト肺癌細胞株でAsh1,Notch family(1,2,3)の遺伝子発現をReal time RT-PCRで検討した。Ash1とNotch1は小細胞肺癌で非小細胞肺癌に比し、相対的に高値で、Notch2,3は逆であった。(4)小細胞肺癌においてsonichedgehogシグナル伝達系阻害剤のCyclopamineとAd-RbとAd-p53の3つの組み合わせについて併用効果をin vitroで検討し、combination index法で解析した。相加効果-拮抗作用を認め、CyclopamineはAd-RbやAd-p53の効果を減弱。(5)110症例の小細胞肺癌症例でEGFR遺伝子の変異を解析。3例にEGFR遺伝子の変異があり、腺癌とのcombined型であった。小細胞肺癌の癌化経路は幹細胞からAsh1とNotchが分化を規定する経路だけでなく、腺癌からの脱分化による発生など複数経路存在すると考えられた。RB遺伝子のヘテロマウスとp53遺伝子のノックアウトマウスを掛け合わせたマウスでは気管支において神経内分泌系細胞の過形成が認められること、またRB遺伝子とp53遺伝子の2つの遺伝子を肺上皮細胞でコンディショナルに欠損させたマウスにおいてヒト小細胞肺癌に類似した腫瘍が形成され、さらに脳や肝臓などに転移巣を形成することが証明されたことより、RB遺伝子とp53遺伝子の小細胞肺癌の発癌過程における重要性が再確認された。我々はin vitroではあるがRBとp53の2つの遺伝子導入により生じた相乗的増殖抑制効果/アポトーシス誘導効果増強を見出した。当院で樹立された小細胞肺癌ACC-LC-48(Mt-p53,RB null),-49(Mt-p53,RB null),-172(Mt-p53,wt-RB)の3株に対してAd-p53とAd-RBの共感染による相乗的効果の分子基盤を明らかにするために、上記3つの小細胞肺癌細胞株とNCI-H82とNCI-H146とNCI-H1299の6株にAd-RBとAd-p53の単感染あるいは共感染させ経時的(0,12,24,48,72時間後)に細胞を回収。神経内分泌系分化誘導転写因子Shh,hAsh1,hScratch,Gli1,GfI-1,Ash1のアンタゴニストであるId1(Inhibitor of DNA-binding-1)とId2(Inhibitor of DNA-binding)の発現をRT-PCRで検討している。また、神経内分泌系分化抑制転写因子のREST(NRSF)はそのスプライスバリアントが小細胞肺癌では高発現していて正常型RESTを抑制して分化誘導しているという報告があり、REST(NRSF)についても発現等検討している。(1)神経内分泌系分化誘導転写因子Ash1対するAd-Ash1-RNAiによる小細胞肺癌増殖抑制効果の検討。小細胞肺癌細胞株に対してAd-Ash1-RNAiを感染させ、Ash1の発現抑制効果をRT-PCRで確認。小細胞肺癌細胞株に感染させることで細胞増殖抑制効果・アポトーシス誘導効果を認めたが、神経内分泌系分化を有する非小細胞肺癌細胞株に比して弱かった。(3)神経内

分泌系分化誘導転写因子の発現と小細胞肺癌に対する抗癌剤の効果との相関関係の検討。神経内分泌系分化誘導転写因子の発現が小細胞肺癌細胞の増殖に寄与する因子であるならば抗癌剤の感受性への抵抗因子として働く可能性がある。RT-PCRによるAsh1とNotch1,2,3,4遺伝子の発現と、細胞株(in vitro)での抗癌剤感受性(IC50値)との相関を検討。相関を認めず、この仮説は棄却された。(4)小細胞肺癌における上皮成長因子受容体(EGFR)遺伝子変異の解析。小細胞肺癌の手術症例でしばしば、腺癌とのcombined型が見られることより、EGFR遺伝子の変異を解析した。今までに4例においてEGFR遺伝子の変異を見出しており、小細胞肺癌の癌化経路が複数あることを作業仮説としてたてている。現在、臨床的な特徴も含めて検討している。
利害葛藤事態における合議の意味と機能に関する社会心理学的解析

本研究は、交渉ゲームの観点から、利害葛藤事態において、当事者間での話し合いが果たし得る調整機能を実証的に検討した。交渉ゲームとは、複数の当事者(プレーヤー)がいくつかの行動選択肢をもち、交渉に臨む状況を指す。このような交渉事態で、従来の検討の多くは、当事者達が葛藤の構造を初めから相互に完全把握しているという状況を仮定してきた。しかし、この仮定は非常に不自然であり、本研究では、利害の構造に関する当事者達の知識が不完全な状況を設定し、交渉過程においてどのような社会的プロセスが現出するのか、検討を行った。本研究では“公共財"供給の状況を取り上げた。公共財は、たとえ費用を負担しなくても誰にとっても利用可能であるという特徴をもち、人々には“ただ乗り"(free riding)の動機が生じやすい。公共財供給問題を解決しようとする際の理論的な焦点として、人々のただ乗り動機を前提としながら、各個人の公共財に対する需要度をいかにして正確に把握するかという問題が存在する。適切な量の公共財を供給するためには人々の需要度を正確に把握する必要があるが、一方、各個人は自己負担額をなるべく少なくするために、真の需要度を隠す動機をも併せもつ。この問題は“需要顕示"の問題と呼ばれ、様々な解決法が提示されているものの、満足のいく解は得られていない。本研究では、需要顕示をめぐる問題が、合議のプロセスを通じどの程度まで解決されるのかを検討した。ここでは、公共財供給における公平な費用分担が、平等原理の安易な適用により阻害されるという側面に着目し、2つの実験研究を行った。これらの研究成果は、“The function of equality heuristic in distributive bargaining : Negotiated allocation of costs and benefits in a demand revelation context"という論文(投稿中)で報告されている。
歯髄myofibroblast様細胞の動態解明と新規歯髄保存療法への展開

歯を長期間機能させるために歯髄の保存が重要であることは、失活歯の生存率が低いことからも明白である。深在性のう蝕治療における覆髄処置は、歯髄を保存するために非常に重要な手法であるが、これに用いられる材料は機械的・化学的性質が間接的に治癒(修復象牙質形成)作用するにとどまっている。このため、直接的に修復象牙質形成を促進する生物学的治療法の開発が望まれている。本研究では、歯髄治癒過程で一過性に出現するα-SMA陽性myofibroblast様細胞に着目し、新規歯髄保存療法の可能性を模索した。同細胞は新生象牙芽細胞の前駆細胞であると考えられている。本年度は、ラット臼歯を用いてin vivoにおけるα-SMA陽性細胞の分化誘導を目指した。これまでにラット臼歯にセメントによる覆髄処置を行う方法は確立されているが、成長因子や細胞外マトリックスのようなタンパク質を適用する方法は確立されていない。そのため、各種生理活性物質の効果を検証することに先立ち、有効な適応法・実験モデルを模索した。コラーゲンスポンジやアテロコラーゲンゲルに含有させる方法、マイクロインジェクターにより注入する方法等を検討したが、機械的刺激や異物反応に起因すると思われる炎症反応により、良好な結果は得られなかった。一方で、同実験手法開発過程の副産物として、血餅をスキャホルドとして歯髄の再生を図るパルプ・リバスクラリゼーションについて、ラット実験モデルの開発に成功した。パルプ・リバスクラリゼーションは既に臨床応用可能な再生歯内療法として、注目を集めているが、基礎研究は遅れている。同モデルは、再生歯内療法の発展に大きく寄与すると考える。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。新生象牙芽細胞の分化機序は、現在でも断片的にしか解明されていない。このことは、歯髄保存療法の発展に大きな障壁となっており、より効果的な歯髄保存療法を確立するためには、さらなる分化機序の解明が必要不可欠である。近年、新生象牙芽細胞の前駆細胞として、歯髄myofibroblast様細胞の存在が新たに明らかとなったことから、本研究では、歯髄(幹)細胞から歯髄myofibroblast様細胞への形質転換に着目し、歯髄創傷治癒のメカニズム解明を目指した。このため、歯髄の治癒過程において、どの細胞がTGF-β1を産生しているかについて、さらに検討を加えた。この結果、治癒過程初期において創面に集積するM2マクロファージがTGF-β1の主な産生細胞である可能性が示唆された。M2マクロファージの活性化はTGF-β1産生の増加を介して、歯髄治癒を促進する可能性がある。平成29年10月、myofibroblast様細胞の形質転換誘導因子を特定する実験の結果、予想に反して、ラット由来歯髄初代培養細胞は極めて容易にαSMA陽性のmyofibroblast様細胞に形質転換してしまうことが判明した。これでは、各種生理活性物質添加の有無による効果を比較できないため、他の細胞ソースで解析を行う必要性が生じた。このため、In vivo実験予定の種とは異なるが、臨床応用への移行を念頭にヒト由来歯髄細胞を用いることに計画を変更した。ヒト由来細胞の研究使用に際しては倫理診査申請等が必要であり、許可が得られるまでに期間を要したことで、研究に遅れが生じた。しかしながら、現在までにヒト歯髄細胞の培養環境は整えられ、解析を開始できており、今後の伸展が期待できる。当初予定されたラット歯髄細胞からヒト歯髄細胞を使用することに計画を変更した。これにより、やや研究は遅れているが、研究手法は既に確立しており、期間内に研究成果を得る事が期待できる。