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Mg-Zn-Y基合金の微細組織制御と機械的性質

Mg-Y-Zn系合金の機械的性質の向上を目指した組織・構造制御法として,Ce,Gd,Alによる合金添加に加え,加工熱処理が析出組織に及ぼす効果に注目し,走査透過型電子顕微鏡法を駆使して,それらの組織・強度への影響を調査した。微量のCeやGdの添加によって,Mg固溶体母相と長周期規則構造(LPSO)相から成る2相組織に対し,準安定析出物であるGP-zoneやMg7RE型斜方晶相を高密度に導入できることがわかった。さらにZnに対するAlの一部・全置換によりLPSO相の底面規則化が進行すること,さらにこれに適当な熱間圧延を組み合わせることで,析出組織の微細化を促す効果があることもわかった。本研究は,Mg-Zn-Y基合金(Yをメインとして他の希土類元素による置換)の機械的性質の改善に向けた組織制御を目指した研究である。平成25年度の事業においては,Yの一部をGdに置き換えた合金系,つまりMg97Zn1RE2,Mg96.5Zn1.5RE2,Mg96Zn2RE2 (ただしRE=Y1.5Gd0.5)を試作し,溶体化処理(520540°Cでの等温保持後,水焼入れ)を施したのち,下記13の低温(1200°Cで100時間,2300°Cで100時間,3500°Cで1時間)と高温(500°C)の熱処理を個別に与えた試料,さらにはそれらを組み合わせた処理を施した試料の組織を電子顕微鏡法によって調査した。Gdを0.5at%添加することによって,Mg固溶体と長周期規則構造(LPSO)相から成る2相組織の中に微細なβ'相とGPゾーンを加えた併存組織を得ることができた。LPSO相は共晶反応によって現れ,示差熱分析の結果によればその共晶反応が510°C前後にあることから,当該温度より高い温度で長時間の熱処理を行うとLPSO相は母相に溶けて過飽和固溶体の単相に,一方低い温度で熱処理を行うとLPSO相の体積率が高まることが明らかになった。さらに,α-固溶体とLPSO相の2相共存組織に対して,200300°Cの温度域で長時間の低温時効処理を行うと,母相内に微細なβ'相とGPゾーンが併存した組織が現出することが明らかになった。本研究は,Mg-Y-Zn系合金の機械的性質のさらなる向上を目指した組織・構造制御の可能性を検討したものである。同合金系は,急速凝固粉末冶金法で作られたMg97Y2Zn1合金が従来Mg材をはるかに上回る強靱性を示すことが明らかにされて以来,最も注目されている系である。この合金系は,長周期積層構造(LPS)とα相の2相共存組織の下で高い機械的性質を発揮することが知られているが,溶製時の鋳造段階でLPS相が形成されることからその後の熱処理による組織制御が不可能と考えられてきた。そこで,第4,第5の合金添加物としてYやZnの一部をそれぞれCeならびにAlで置換した種々の時効析出合金の作製を試み,透過型電子顕微鏡法を駆使して時効析出挙動への影響を調査した。さらに,圧延と焼鈍から成る加工熱処理,時効熱処理を組み合わせた複合処理が組織・構造に与える影響を精査した。今年度の研究を通じて,以下の成果が得られた。(1)Mg97Y2Zn1合金もしくはその周辺組成の合金にCeを微量添加し、これに低温時効を施すと析出物のハイブリッド化が進み、LPSO相と規則化GPゾーンの併存組織が現れ、硬度が上昇する。(2)Mg97Y2Zn1合金もしくはその周辺組成の合金にAlを微量添加することでLPSO相の底面規則化が進行し、長周期規則構造相(OD-LPSO相)が現れる。こうして、Alの微量添加によってLPSO相の構造制御が可能になることが明らかになった。規則化が強まったOD-LPSO相の形成は強靭化に寄与する可能性がある。(3)Mg97Y2Zn1合金もしくはその周辺組成の合金に微量のCeとAlを同時添加した合金に対して、適当な加工熱処理と時効熱処理を施すことで、析出を活発化させるとともに、析出組織の微細化を促す効果があることが分かった。こうして,以上のような合金添加と加工熱処理を組み合わせることによって,Mg97Y2Zn1合金の機械的性質の向上に有効な組織・構造制御が可能になることが分かった。本研究は,次世代の超軽量構造材料として注目を浴びているMg-Y-Zn系合金の組織制御を行い,機械的特性の更なる向上に向けた設計指針を提案することを目的とする。この合金系は長周期積層構造相(LPSO相)とα-Mg固溶体相の2相共存下で高い機械的性質を発揮するが,鋳造段階でLPSO相が形成されることから,鋳造凝固後の熱処理のみに依存した組織制御は困難とされ,押出し加工のような強加工を経て母相の微細粒化を図る以外には,強度改善を目指した組織制御の研究はほとんど行われてこなかった。

そこで本研究では,第4,第5の合金添加物としてYやZnの一部をその他の希土類元素(RE=Ce, Gd)やAlで置換した種々の時効析出合金の作製を試みるとともに,加工熱処理の最適化を図ることで,これらが組織・構造に与える影響を調査し,機械的性質の向上の可能性を検討した。平成2526年度の研究を通じて,(1)Mg97Y2Zn1もしくはその周辺組成の合金にCeを微量添加し,これに低温時効を促すとLPSO相と規則化GPゾーンの併存組織が現れる。(2)Mg97Y2Zn1もしくはその周辺組成の合金にAlを微量添加することでLPSO相の底面規則化が進行し,長周期規則構造相(OD-LPSO相)が現れる。さらに平成27年度の研究から,(3)Yの一部をGdで置換し,Znの代わりに少量のAlを添加したMg-Al-Y-Gd合金において,OD-LPSO相とMg7RE型の析出物の併存組織が現れるとともに,(4)時効処理に先立って圧延処理を加えることで時効析出組織の微細分散化が進み,強度向上に繋がることがわかった。こうして,以上のような合金添加と加工熱処理を最適化することによって,時効析出組織のハイブリッド化や微細分散化が進行し,Mg97Y2Zn1合金の機械的性質の向上をもたらす組織・構造制御が可能になることが分かった。Mg-Y-Zn系合金の機械的性質の向上を目指した組織・構造制御法として,Ce,Gd,Alによる合金添加に加え,加工熱処理が析出組織に及ぼす効果に注目し,走査透過型電子顕微鏡法を駆使して,それらの組織・強度への影響を調査した。微量のCeやGdの添加によって,Mg固溶体母相と長周期規則構造(LPSO)相から成る2相組織に対し,準安定析出物であるGP-zoneやMg7RE型斜方晶相を高密度に導入できることがわかった。さらにZnに対するAlの一部・全置換によりLPSO相の底面規則化が進行すること,さらにこれに適当な熱間圧延を組み合わせることで,析出組織の微細化を促す効果があることもわかった。平成26年度の作業計画としては,Mg-Y-Zn基合金(Yをメインに他の希土類元素,Znをメインに他の典型元素による置換を含む)のLPS相の組織・構造制御と,LPS相とα-Mgの2相共存組織に他の準安定析出物を加えたハイブリッド組織を目指すことを目標に置いた。作業の主な流れとしては,以下の観点で検証を進めた。(検証1)初年度の活動で見い出した有効添加元素を含む試作合金に対して,高角度散乱暗視野STEM法(HAADF-STEM法)を駆使して,Mg7RE型析出物(β'相)やGP-zonesのような準安定析出物が形成されることを確認する。(検証2)当該合金系に対し,圧延と焼鈍を組み合わせた加工熱処理を通じて,結晶内に高密度に導入した転位を析出物の核発生サイトとして機能させることが可能か否か,検討する。検証1については,Mg-Y-Zn系では得られない,LPS相+α相に加えてGP-zonesの複合組織が有れることを確認すると共に,硬度の向上をもたらすことを確認した。さらにGP-zonesはMg格子に対するCeの化学的秩序によって生ずる規則構造をもつと解釈された。一方,検証2については,加工熱処理を通じてLPS相の分散状態の微細化が可能になることがわかった。さらに当初の予想結果とは異なる成果として,Znの一部を典型元素Alで置換することによって,底面内におけるLPS相の規則化がさらに進行し,LPS相の構造制御が可能になることを見出した。材料物理学平成26年度の成果で特筆すべき点としては,Znの一部をAlで置換することによって,従来LPS相の派生構造である規則化LPS相(OD-LPS)が現れることが明らかになった。これを基に今後は,OD-LPS相の安定性の評価に加え,同相の機械的性質への影響,さらには加工熱処理を組み合わせることによって,当該組織の微細分散化の可能性,ひいては強度性能の向上の可能性を検証する予定である。Mg-Zn-Y-Gd合金について過飽和固溶体による単相組織を得ることが容易でないことが原因で,時効処理後の析出物の分散状態が不均一な状況が多々見受けられた。
米糠成分イノシトールを原料とする剛直棒状かつ主鎖分解性をもつ高分子の開発

米糠の成分であるmyo-イノシトールを原料として用い、そのヒドロキシ基の立体反転などを通じて剛直なビスオルトエステル骨格をもつ新規ジビニルモノマーを開発した。このモノマーはチオールとラジカル付加可能であり、対応する付加体が定量的に得られた。さらに、高分子のモデル化合物として合成したビスオルトエステルは酸加水分解性を示したことから、本研究によって剛直棒状かつ主鎖分解性をもつ高分子を合成し、これを主鎖分解型レジスト材料として応用するうえでの基盤を確立することができた。本研究の最終的な目標は、米糠の成分であるmyo-イノシトールから剛直かつ酸分解性の高分子を合成し、その主鎖分解型レジスト材料としての可能性を明らかにすることである。この目標を達成するために4つのサブテーマを設け、それらを順次達成していくという計画のもと研究を遂行してきた。本年度は、サブテーマ1「全てのヒドロキシル基がアキシアル配向可能なイノシトール誘導体の合成」と、サブテーマ2「イノシトール誘導体のオルトエステル化の条件最適化」に取り組んだ。まず、サブテーマ1では、myo-イノシトールがもつ6つのヒドロキシ基のうち3つをオルトエステル化し、残った3つのヒドロキシ基のうち、アキシアル配向したものをベンジル基によって保護、エカトリアル配向したものを酸化してケトンへと誘導する合成ルートを確立することができた。得られたケトンにグリニヤール反応剤を反応させたところ、効率よく付加反応が進行し、グリニヤール反応剤のもつアルキル基を導入しつつ、アキシアル配向したヒドロキシ基を生成させることに成功した。さらに、得られた化合物のオルトエステル保護やベンジル保護も効率よく除去することができ、このようにして得られたイノシトール誘導体は、アルキル基が導入されたことで有機溶媒に対して良好な溶解性を示すことを明らかにした。次に、サブテーマ2では、両橋頭位にブロモエチル基やビニル基といった反応性置換基をもつビスオルトエステル誘導体、すなわち、本研究が目指す剛直骨格をもつ高分子を合成するためのモノマーを合成することに成功した。まず、サブテーマ1では「全てのヒドロキシ基がアキシアル配向できるイノシトール誘導体」の合成に成功し、かつ得られイノシトール誘導体は有機溶媒に対する良好な溶解性を示したことから、当初計画における全ての目標を達成することができた。次にサブテーマ2では、当初はサブテーマ1で得られたイノシトール誘導体をオルトエステル化することでビスオルトエステルを合成することを計画していた。この方法については現在も検討を続けているが、サブテーマ1での合成ルートの途中で得られる中間体をうまく利用することで、目的とするビスオルトエステルが得られることを見出し、いち早く目的を達成するためにそちらに注力した。なお、この研究遂行の方法については、当研究課題の申請書に「研究が当初計画通りに進まないときの対応」として提案したものと同様の考え方に基づくものである。このような対応の結果、両橋頭位に反応性置換基をもつビスオルトエステル誘導体の合成に成功し、サブテーマ2で掲げた目標を達成することができた。以上のことから、本研究はおおむね順調に進展していると判断した。本研究の最終目標は、米糠の成分であるmyo-イノシトールを原料とし、そこから剛直かつ酸分解可能なビスオルトエステル骨格からなる高分子を合成し、その主鎖分解型レジスト材料としての可能性を明らかにすることである。この目標を達成するため、4つのサブテーマ(サブテーマ1「全てのヒドロキシル基がアキシアル配向可能なイノシトール誘導体の合成」、サブテーマ2「イノシトール誘導体のオルトエステル化の条件最適化」、サブテーマ3「イノシトール誘導体とビスイミノエステル塩の重縮合反応」、サブテーマ4「ポリ(ビスオルトエステル)の耐熱性および酸分解性の評価」)を設定し、それらを順次達成していくという計画のもと、研究を遂行してきた。今年度、当初計画では、サブテーマ3の遂行、すなわち、サブテーマ1で得られたイノシトール誘導体をビスイミノエステル塩と重縮合させることで、目的とする高分子の合成を予定していた。しかしながら、その基盤となるサブテーマ2、すなわち、サブテーマ1で得られたイノシトール誘導体とイミノエステル塩との反応の難易度が高く、このルートでの高分子合成が困難であることが明らかになった。なお、このサブテーマ3の難易度の高さは、本研究の計画段階から予想されており、そのためにあらかじめ準備を進めていた別アプローチでの研究に速やかに移行した。具体的には、前年度の最終段階で合成を達成した、両橋頭位にブロモエチル基やビニル基をもつビスオルトエステルの合成ルートの各段階を精査し、合成効率の向上に注力した。これによって、サブテーマ3が目標として掲げていた「ビスオルトエステル骨格が連続した高分子の合成」を達成する状況が整った。今年度の研究では、ビスオルトエステル骨格からなる剛直高分子の合成を達成することを予定していた。この目的のため、27年度に合成を達成したイノシトール誘導体とビスイミノエスエル塩との重縮合反応による「ビスオルトエステル骨格の形成を伴う高分子合成」を検討した(サブテーマ3)。しかしながら、高純度のビスイミノエステルの調製が困難であったこと、さらにイノシトール誘導体との反応がさまざまな副反応を伴うこと等の問題が明らかになり、このルートでの高分子合成を断念した。一方で、27年度に遂行したサブテーマ1でのイノシトール誘導体の合成過程において、種々のビスオルトエステルの合成が可能になったことから、別のアプローチによって目的の高分子を合成するべく方針を転換した。

すなわち、まずビスオルトエステル骨格をもつモノマーを合成しておき、これを用いた高分子合成を行うことにした。そのため、2つの橋頭位に反応性部位をもつビスオルトエステルが必要となり、その合成ルートの確立に注力した。結果として今年度の目標であった高分子合成には至ってはいないものの、その準備が整うまでになったことから、「やや遅れている」と自己評価した。本研究では、米糠の成分であるmyo-イノシトールを原料とし、そこから剛直かつ酸分解可能なビスオルトエステル骨格からなる高分子を合成し、その主鎖分解型レジスト材料としての可能性を明らかにすることを目標とした。この目標を達成するため、複数のサブテーマ(サブテーマ1「すべてのヒドロキシ基がアキシアル配向可能なイノシトール誘導体の合成」、サブテーマ2「イノシトール誘導体のオルトエステル化の最適条件化」、サブテーマ3「イノシトール誘導体とビスイミノエステル塩の重縮合反応」、サブテーマ4「ポリ(ビスオルトエステル)の耐熱性および酸分解性の評価」)を設定し、それらを順次達成していくという計画のもと、研究を遂行してきた。昨年度、サブテーマ2およびサブテーマ3の達成が困難であることが明らかになり、別アプローチでの高分子合成の検討へと移行した。その結果、ビスオルトエステル骨格をもつジビニル化合物の合成を達成した。そこで、本年度の研究では、このジビニル化合物の合成のさらなる効率化をはかった。その結果、ジビニル化合物をグラムスケールで合成することが可能になった。さらに、ジビニル化合物がどのような反応に利用可能であるかを検討したところ、オレフィンメタセシス反応は困難であるものの、チオールとのラジカル付加反応は円滑に進行し、対応する付加体がほぼ定量的に得られることを見出した。すなわち、本研究で得られたジビニル化合物は、剛直なビスオルトエステル骨格をもつ高分子の合成のための有用なモノマーとなりうることが確認できた。また、サブテーマ4では、高分子のモデルとして合成した低分子ビスオルトエステルが酸性条件下で加水分解されることを確認した。米糠の成分であるmyo-イノシトールを原料として用い、そのヒドロキシ基の立体反転などを通じて剛直なビスオルトエステル骨格をもつ新規ジビニルモノマーを開発した。このモノマーはチオールとラジカル付加可能であり、対応する付加体が定量的に得られた。さらに、高分子のモデル化合物として合成したビスオルトエステルは酸加水分解性を示したことから、本研究によって剛直棒状かつ主鎖分解性をもつ高分子を合成し、これを主鎖分解型レジスト材料として応用するうえでの基盤を確立することができた。昨年度研究によるサブテーマ1および2における目標達成をうけ、今年度は当初計画どおり、サブテーマ2を続行しつつサブテーマ3に着手する予定である。すなわち、サブテーマ2において「全てのヒドロキシ基がアキシアル配向可能なイノシトール誘導体の合成」をすすめるとともに、反応性基をもつビスオルトエステル誘導体を合成し、そのようにして得られた種々の化合物をモノマーとして用いた高分子合成(=サブテーマ3)を検討する予定である。
キヌレン酸／キノリン酸比率が慢性痛に及ぼす影響（バイオマーカーの可能性を探る）

キヌレン酸とキノリン酸の薬理効果を検討した。【方法】本研究は事前に動物実験委員会による承認を得た。痛みモデルは、5週齢のddY雄マウスを、イソフルラン麻酔下に、第5腰椎神経を左側のみ結紮した神経障害性痛モデル(L5SNL)を用いた。キヌレン酸は、L5SNL作製当日から7日間連続で腹腔内投与(非投与群;0mg/kg、150群;150mg/kg、300群;300mg/kg、各群5匹)した。Sham群では腰背部の皮膚切開および縫合のみを施行した。体重負荷測定機器(Bioseb-In Vivo Research Instruments, France)を用いて、L5SNL作製前と作製7日後に、両下肢の荷重、接地面積、接地時間を測定し、左右比で痛みの評価を検討した。【結果】L5SNLモデルは、神経障害性痛の影響により下肢の荷重および接地面積は、健側に偏る傾向を認めた。キヌレン酸の300 mg/kg投与群は、荷重比および接地面積比が非投与群に比べ改善(荷重比:非投与群0.54 ±0.05、300群0.75 ±0.07接地面積比:非投与群0.68 ±0.07、300群0.85 ±0.04、平均±標準誤差)した。【考察】内因性NMDA受容体アンタゴニストのキヌレン酸は、神経障害性痛の行動様式を緩和する可能性が示唆された。キヌレン酸は脳血液関門を通過せず、その作用部位は、過去の報告では後根神経節と考えられているが、さらなる検討が必要である。次に重水素でラベルしたキヌレン酸を用いて、質量分析装置を使用してキヌレン酸の濃度測定の定量化を試みた。L5SNLモデルから血液・髄液を採取し、痛みが形成されていく過程でのキヌレン酸濃度の測定を試みた。しかしながら、下記の進捗状況に記載するように、計画に遅れが生じている。キヌレン酸・キノリン酸の濃度測定の検討が遅れている。その理由は、定量化に取り組んでいるが、適切な測定条件の検討に難渋しているからである。しかも、質量分析装置が故障し、修理不能(代替えの新品供給が不可/中古品も見当たらず)となり、止む無く廃棄処分となり、実験が中断してしまった。キヌレン酸の測定は、ELISA法を用いた市販の測定キットを用いて研究を進める方針である。キノリン酸の測定は検索中である。【キヌレン酸とキノリン酸の測定7】ELISA法を用いてキヌレン酸を測定し、L5SNLモデル群とコントロール群と比較し、神経障害性痛が形成される過程でとキヌレン酸濃度がどのように変化するかを検討する。キノリン酸の測定に関しては、測定方法を検討中である。【ミクログリアの活性とキノリン酸の産生の関係】ミクログリアの活性は、神経障害性痛の発生と維持に関与することが報告されていることから、キノリン酸はミクログリアから産生されるので、キノリン酸が神経障害性痛の維持発現に関与している可能性がある。Iba1抗体を用いた免疫染色法でミクログリアの活性度検討する。キヌレン酸とキノリン酸の薬理効果を検討した【方法】本研究は事前に動物実験委員会による承認を得た。統計学的検討は、Dunett's Testを行い、p<0.05を有意差ありとした。また、重水素でラベルしたキヌレン酸を用いて、質量分析装置を使用した濃度測定の適切な条件ンを検討している。平成29年度はキヌレン酸とキノリン酸の薬理効果を検討する予定であったが、予想以上に行動評価の検討に時間がとられてしまった。

理由は、体重負荷測定機器(Bioseb-In Vivo Research Instruments, France)を用いてマウスの行動観察を観察しているが、そのビデオ解析時に下肢の左右を決定しなければならないのだが、この作業に時間が多く費やされてしまった。マウスの脳脊髄液の採取に取り組み、手技の確立にある程度の目途がたった。しかし、その後の質量分析装置を用いた、濃度測定の検討が遅れている。その理由は、現在、重水素でラベルしたキヌレン酸を用いて、定量化に取り組んでいるが、適切な測定条件の検討に難渋しているからである。キヌレン酸とキノリン酸の薬理効果を検討した。【方法】本研究は事前に動物実験委員会による承認を得た。痛みモデルは、5週齢のddY雄マウスを、イソフルラン麻酔下に、第5腰椎神経を左側のみ結紮した神経障害性痛モデル(L5SNL)を用いた。キヌレン酸は、L5SNL作製当日から7日間連続で腹腔内投与(非投与群;0mg/kg、150群;150mg/kg、300群;300mg/kg、各群5匹)した。Sham群では腰背部の皮膚切開および縫合のみを施行した。体重負荷測定機器(Bioseb-In Vivo Research Instruments, France)を用いて、L5SNL作製前と作製7日後に、両下肢の荷重、接地面積、接地時間を測定し、左右比で痛みの評価を検討した。【結果】L5SNLモデルは、神経障害性痛の影響により下肢の荷重および接地面積は、健側に偏る傾向を認めた。キヌレン酸の300 mg/kg投与群は、荷重比および接地面積比が非投与群に比べ改善(荷重比:非投与群0.54 ±0.05、300群0.75 ±0.07接地面積比:非投与群0.68 ±0.07、300群0.85 ±0.04、平均±標準誤差)した。【考察】内因性NMDA受容体アンタゴニストのキヌレン酸は、神経障害性痛の行動様式を緩和する可能性が示唆された。キヌレン酸は脳血液関門を通過せず、その作用部位は、過去の報告では後根神経節と考えられているが、さらなる検討が必要である。次に重水素でラベルしたキヌレン酸を用いて、質量分析装置を使用してキヌレン酸の濃度測定の定量化を試みた。L5SNLモデルから血液・髄液を採取し、痛みが形成されていく過程でのキヌレン酸濃度の測定を試みた。しかしながら、下記の進捗状況に記載するように、計画に遅れが生じている。キヌレン酸・キノリン酸の濃度測定の検討が遅れている。その理由は、定量化に取り組んでいるが、適切な測定条件の検討に難渋しているからである。しかも、質量分析装置が故障し、修理不能(代替えの新品供給が不可/中古品も見当たらず)となり、止む無く廃棄処分となり、実験が中断してしまった。キヌレン酸の測定は、ELISA法を用いた市販の測定キットを用いて研究を進める方針である。キノリン酸の測定は検索中である。当大学の質量分析を専門にしている研究者に質量分析の測定条件の検討を相談し、共同で検討する予定にしている。測定条件を整えた後に、マウスから血液、脳脊髄液を採取し、資料分液装置を用いて、キヌレン酸、キノリン酸の濃度測定をする。キノリン酸はミクログリアから産生されるので、キノリン酸が神経障害性痛の維持発現に関与している可能性があるので、神経障害性痛モデルを用いて、その脊髄・後根神経節のミクログリアの活性を測定し、キヌレン酸・キノリン酸の濃度と関連があるかどうかを検討する。【キヌレン酸とキノリン酸の測定7】ELISA法を用いてキヌレン酸を測定し、L5SNLモデル群とコントロール群と比較し、神経障害性痛が形成される過程でとキヌレン酸濃度がどのように変化するかを検討する。キノリン酸の測定に関しては、測定方法を検討中である。【ミクログリアの活性とキノリン酸の産生の関係】
植物の細胞内シグナル伝達系の遺伝子の分離と解析

動物細胞や酵母における研究から、プロテインキナーゼC(PKC)などのリン酸化酵素によるリン酸化カスケイドが、細胞内シグナル伝達系を形成していること、このリン酸化カスケイドに関わる各々のリン酸化酵素が種々の生物種においてよく保存されていることが明らかにされている。我々は植物細胞においても類似したシグナル伝達系の存在を予想し、対応するリン酸化酵素遺伝子をクローニングすることを行ってきた。本年度は遺伝子クローニングのために、すでに出芽酵母において明らかにされているシグナル伝達系の種々の変異株を用い、その変異を機能的に相補する遺伝子をタバコ培養細胞のcDNAライブラリーから分離することを行った。その結果、十数種類の候補となるcDNAクローンを分離した。塩基配列を決定し、そこから予想されるアミノ酸配列を調べたところ、リン酸化酵素をコードしていると考えられるcDNAクローンは得られなかった。予想されたアミノ酸配列をもとにデーターベースによるホモロジーサーチを行ったところ、既知の遺伝子とホモロジーを示すものはなかったが、RNA結合活性示すドメインを含むもの、塩基性領域とジンクフィンガードメインと思われる領域を含むb-ZIP型の転写制御因子と考えられる遺伝子が分離されていることが明らかになった。これらの遺伝子産物が、実際に植物細胞内のシグナル伝達系に関与している可能性については現在のところ不明である。今回のスクリーニングに用いた一連の変異株は、いずれもその変異が不安定であり、変異の相補を見分けるのがかなり困難な株であったために、得られたcDNAクローンが必ずしも異変を相補しているとは言い難いものがあった。今後、別の変異株を用いることにより期待するリン酸化酵素遺伝子が分離できる可能性が残されている。
補体の膜侵襲複合体が表皮増殖を促す可能性についてのin vitroでの検討

補体の供給源としては、まず血清を用い、C3-NeF(補体の傍経路を活性化させる自己抗体)の添加によりin vitroでの膜侵襲複合体(membrane attack complex=MAC)形成を促すこととした。血清のみの添加により、非働化の有無にかかわらず濃度依存性に(WST-1アッセイで調べた)増殖が促進されたので、正常モルモット血清・正常ヒト血清・C9欠損ヒト血清それぞれの濃度を1%という低値に固定し、血清の非働化の有無・C3-NeF添加の有無による細胞増殖の変化を調べた。その結果、非働化していない正常モルモット血清を用いた場合のみに、C3-NeF添加による増殖の促進が観察された。非働化(56°30分加熱)した血清ではC3-NeFによる増殖の変化はもたらされなかった。また、ヒト血清では、そのような変化はみられなかった。つぎに、培養中のヒト表皮ケラチノサイトのCD59発現状況をflow cytometryで検討した。その結果、100%の細胞がCD59を発現していることがわかった。さらに、血清を添加した培地で培養したヒト表皮ケラチノサイトではより強くCD59を発現する傾向があった。この発現の強さは、血清の非働化の有無で差異を生じないことから、補体ではなくCaの濃度上昇に伴う細胞の分化がCD59の発現を促進している可能性があるとおもわれた。ヒト表皮ケラチノサイトは、Phosphatidylinositol phospholipaseC(PIPLC)を添加した培地での30分間のインキュベートにより、CD59の発現が大幅に減弱した。しかし、このCD59の発現が減弱したヒト表皮ケラチノサイトでも、新鮮正常ヒト血清を含む培地でC3-NeF添加による増殖の促進はみられなかった。以上から、ヒト表皮ケラチノサイト上に異種動物のMACを実験的に形成されて細胞の増殖を刺激することができる可能性はあるものの、CD59に妨げられてヒトのMACは形成されにくいし、細胞の増殖も起こらないと判断し一連の実験を終了した。
最適な医薬品使用のための飲食物成分の吸収動態と薬物吸収への影響とその定量的解析

梅肉含有のベンジルβグルコシドの腸管吸収動態を、ラット小腸を用いたUssing type chamber法および反転腸管法にて検討し、ベンジルβグルコシドは血管側に出現し吸収され、一部はベンジルアルコールへと代謝されること、さらにはNa^+/glucose cotransporter(SGLT1)によりベンジルβグルコシドが能動的に吸収することを明らかにした。加えて、このSGLT1を介した吸収が、ベンジルβグルコシドの腸管アベイラビリティの上昇を引き起こすという、「担体を介した輸送(吸収)が腸管アベイラビリティを上昇させる」新規知見を得た。Caco-2細胞における第II相代謝反応を、モデル薬物であるαナフトールを用いて検討した。Caco-2細胞はグルクロン酸抱合代謝活性および硫酸抱合代謝活性を保持していることを、Transwellを用いた単層培養細胞により、さらにはCaco-2細胞のcell suspensionによっても捉えられることを初めて見いだした。αナフトールの硫酸抱合代謝は、イソプロテレノールおよびテルブタリンにより有意に阻害を受け、一方吸収は上昇した。このことから、腸管硫酸抱合代謝およびそれを介した薬物の相互作用を検知できるCaco-2細胞in vitro実験系が確立できた。さらにCaco-2細胞単層膜を用いて、(-)-EGCG,(±)-catechin, tannicacidは、濃度の上昇にともないモデル薬物の硫酸抱合代謝およびグルクロン酸抱合代謝を有意に阻害し、吸収性に対してはそれとは逆に上昇させることを検出した。これらのことから、飲食物成分が、薬物の腸管抱合代謝を阻害することにより吸収を上昇させる「薬物-飲食物相互作用」の実例を、本研究により明らかにした。(1)Caco-2細胞における第II相代謝反応を、モデル薬物であるαナフトールを用いて検討した。その結果、Caco-2細胞はグルクロン酸抱合代謝活性および硫酸抱合代謝活性を保持していることが、Transwellを用いた単層培養細胞において検出できた。さらに本研究により、Caco-2細胞のセルサスペンジョンにおいても、両抱合代謝活性を捉えることができることを初めて示した。αナフトールの硫酸抱合代謝は、ヒト腸管において硫酸抱合代謝を受けるとされているイソプロテレノールおよびテルブタリンにより有意に阻害され、かつαナフトールの吸収は上昇した。このことから、本実験系により、腸管硫酸抱合代謝を介した薬物の相互作用を示すことができた。また、両薬物によるαナフトールの代謝阻害様式はそれぞれ異なっていることが、セルサスペンジョンを用いた検討により明らかとすることができた。このように、当初の目標である抱合代謝および相互作用を検知できるCaco-2細胞を用いたin vitro実験系を確立できた。(2)梅肉含有のベンジルβグルコシドの腸管吸収動態をラット小腸を用いて検討した。ベンジルβグルコシドは血管側に出現し、吸収されることが示された。また、一部はベンジルアルコールへと代謝されること、さらにはNa^+/glucose cotransporter (SGLT1)によりベンジルβグルコシドが能動的に吸収することも明らかにした。加えて、このSGLT1を介した吸収が、ベンジルβグルコシドの腸管アベイラビリティの上昇を引き起こすという知見も得ることができた。本研究により見い出した「担体を介した輸送(吸収)が腸管アベイラビリティを上昇させる」という結果は、初めての知見であると思われる。(1)モデル薬物としてαナフトールを選択し、Caco-2細胞を用いて薬物の腸管吸収および第II相代謝に対する飲食物成分の影響を検討した。本研究によって確立したCaco-2 cell suspension実験系を用いて代謝活性評価を行ない、硫酸抱合代謝に対しては(-)-epigallocatechingallate (EGCG), (±)-catechin, tannic acidが有意に阻害することを示した。

また、グルクロン酸抱合代謝に対しては、(±)-EGCGが阻害することを明らかにした。これらの知見を基に、Caco-2細胞単層膜を用いて、吸収(膜透過)性と抱合代謝性の両者に対する影響を調べたところ、(-)-EGCG, (±)-catechin, tannic acidは、その濃度の上昇にともない、モデル薬物の硫酸抱合代謝およびグルクロン酸抱合代謝を有意に阻害し、吸収性に対してはそれとは逆に上昇させた。これらのことから、上記飲食物成分が、薬物の腸管抱合代謝を阻害することにより吸収を上昇させる「薬物-飲食物相互作用」の実例を、本研究のin vitro実験により明らかにした。(2)梅肉含有のベンジルβグルコシドの腸管吸収動態を、ラット小腸を用いた反転腸管法にて検討した。Ussing type chamberを用いて得られた昨年の結果と同様に、ベンジルβグルコシドは確かに血管側に出現し、吸収されることが示された。また、一部はベンジルアルコールへと代謝されること、さらにはNa^+/glucose cotransporter (SGLT1)によりベンジルβグルコシドが能動的に吸収することも示された。このように、異なった2種類のin vitro実験法により、ベンジルβグルコシドは確かにSGLT1を介して吸収されることを明らかにした。ヒトにおいて、薬物の腸管吸収へ与える腸管抱合代謝の影響を、文献値を用いて定量的に解析した。この解析には、Sequential法とSimultaneous法の2つの方法により行った。従来法であるSequential法では、腸管における代謝の寄与が全身クリアランスの算出の際に無視されている。一方、その欠点を排除した新たなモデルによる方法を提示したが、それがSimultaneous法である。この2つの解析法により検討したところ、両解析法ともに、「腸管代謝の影響が大である」という以下のような結果を得た。サルブタモールの腸管アベイラビリティ(Fg)は0.7であるのに対して、肝アベイラビリティ(Fh)は0.89と、FgはFhよりも低く、バイオアベイラビリティへの腸管代謝の影響は肝代謝よりも高いことが示された。さらに、テルブタリンはFgが0.25に対してFhは0.95、さらにエチニルエストラジオールはFgが0.54に対してFhは0.78と、主に硫酸抱合代謝されるこれらの薬物は、腸管抱合代謝が、そのバイオアベイラビリティに大きく影響を与えていることを明らかにした。そこで、in vitro実験系として我々が確立したCaco-2細胞を用いた評価、解析を行った。先ず、Caco-2細胞サスペンションにおいて、確かにサルブタモールが硫酸抱合代謝を受けること、すなわち検出できることを明らかにした。さらに、その代謝を速度論解析できる充分な硫酸抱合代謝活性であることが示された。
ヒトII型糖尿病モデルNONマウスにおけるインスリン遺伝子の解析

本研究においてヒトII型糖尿病モデル動物であるNONマウスのインスリン遺伝子を単離し、その全塩基配列を決定することができた。初年度において、NONマウス肝から得た高分子DNAよりλファ-ジを用い1.1×10^6pfuの遺伝子ライブラリ-を完成した。ラットプレプロインスリンIcDNAをプロ-ブとしてプラ-クハイブリダイゼ-ション法によりスクリ-ニングし、3次まで行った結果この遺伝子ライブラリ-より5個の陽性プラ-クを得た。これらはEcoRI消化後プロ-ブとハイブリダイズする約1.4kbp、BamHI消化後約2.5kbpの断片を育するそれぞλNinsーI、λNinsーIIの二つの独立したクロ-ンなることを確認した。研究2年目では、まずこのクロ-ンをBluescriptにサブクロ-ニングし、pNinsーI、IIを作成した。このプラスミドDNAを抽出し、マウスで唯一報告されいているBALB/cマウスインスリン遺伝子の制限地図と比較すると、調べた範囲内ではpNinsーI、pNinsーIIはそれぞれインスリンI及びIIと一致した。次にpNinsーIとIIについてdeletion mutantを作成し、これらについて^<35>SーATPを用いdideoxy法(Sanger法)により各々の塩基配列を決定した。(1)pNinsーI、pNinsーIIはそれぞれマウスインスリンI、IIを含み、1384塩基、2512塩基より成っていた。(2)pNinsーIはBALB/cの配列と完全に一致した。(3)NONマウスインスリンI、IIとも5^'側にTATAbox、Insulin enhancer box、Enhancercore sequeneceを全て有し構造異常も認められなかった。(4)NONマウスインスリンIIはBALB/cが有しない100塩基余りの挿入を転写開始部位より994塩基上流に有し、また3^'側に3個の点変異を有していた。このNONマウスインスリンII5^'側上流の挿入部とNONマウスに認められるインスリンmRNA減少との関係は現段階では不明ではあるが、非常に興味ある知見であり、今後両者の関係の検討が必要である。62年度の研究計画は, (1)インスリン非依存性糖尿病動物モデルNONマウス遺伝子ライブラリーの作製と,(2)NONマウスインスリン遺伝子をクローン化することであった.まず,私はNONマウス肝より高分子DNAを抽出し,湿重量約1gの肝より69mgの高分子DNAを得た.この高分子DNAを制限酵素MboIで部分水解し,蔗糖密度勾配遠心法により約20KbpのDNA断片を得た.この20Kbp断片をバクテリアファージLamda Dashをarmとし, T_4Ligaseを用いてBam HI siteに挿入し,組換え遺伝子を作成した.この組換え遺伝子を次にKit(Giga pack Gold^<【O!R】>)を用いてin vitropackagingを行い,成熟ファージを作成した.この操作により1.1×10^6pfuのNONマウス遺伝子ライブラリーを得たが,このライブラリーをVCS257をホストとしてamplifyし,約1万倍(1.6×10^<10>pfu)の遺伝子ライブラリーを完成した.

次に,この遺伝子ライブラリーよりインスリン遺伝子をクローン化するため, rat proinsulin I cDNAをprobeとして,上記遺伝子ライブラリーを現在スクリーニング中である. 6×10^5pfuに対する一次スクリーニングでは51個のシグナル陽性プラークを得ており,更にこのファージを3次スクリーニングまで行い,インスリン遺伝子のクローン化も本年度内に終了する予定である.本研究初年度において、NONマウス肝より分離した高分子DNAよりλファージを用い1.1×10^6Dfuの遺伝子ライブラリーを完成した。ラットプレプロインスリンIcDNAをプローブとしてプラークハイブリダイゼーション法によりスクリーニングし、3次まで行った結果この遺伝子ライブラリーより5個の陽性プラークを得た。これらはEcoRI消化後プローブとハイブリダイズする約1.4kbp、BamHI消化後約2.4kbpの断片を有するそれぞれλNins-I、λNins-IIの2つの独立したクローンからなることを確認した。研究2年目では、まずこのクローンをBluescriptにサブクローニングし、pNins-I、IIを作成した。このプラスミドDNAを抽出し、マウスで唯一報告されているBALB/cマウスインスリン遺伝子の制限地図を比較すると、調べた制限酵素の範囲内ではpNins-I、pNins-IIはそれぞれインスリンIおよびIIと一致した。次にBluescriptに組み込んだpNins-IとIIについて約200塩基ずつ短いdeletion mutantを作成した。これらについて^<35>S-ATPを用いdideoxy法(Sanger法)によりpNins-I、pNins-IIの塩基配列を決定した。(1)pNins-I、pNins-IIはそれぞれマウスインスリンI、IIを含み、1384塩基、2512塩基よりなっていた。(2)pNins-IはBALB/cの配列と完全に一致した。(4)NONマウスIIはBALB/cが有しない100塩基余りの挿入をインスリン転写開始部位より994塩基上流に有し、また3'側に3個の点変異を有していた。このNONマウスインスリンII5'側上流の挿入部がNONマウスに認められるインスリンmRNA減少に対してどのような効果を発揮するかは本研究では不明であるが、非常に興味ある知見が得られた。
遠隔制御型光信号処理の実現と全光ネットワークの設計方法に関する検討

本研究では,遠隔制御光を用いた全光ノードの実現及び検討したノードによる全光ネットワークの設計方法の確立を目的とする.ノードにおいて電気処理を介さない全光ネットワークでは,ノードにて波長変換を行う.信号光とは異なる波長の制御光用光源をノードに備え,光ファイバ中の非線形光学効果と呼ばれる現象を利用して,波長変換を行う.このため,全てのノードに制御光用光源が必要となる.本研究では,一部のノードに制御光用光源を集約し,他ノードには遠隔地から制御光を送信することで,波長変換を行う.このとき,制御光の信号歪みの解析を行う,また,全光ネットワークにおける制御光用光源を搭載したノードの配置方法を検討する.本研究では,遠隔制御光を用いた全光ノードの実現及び検討したノードによる全光ネットワークの設計方法の確立を目的とする.ノードにおいて電気処理を介さない全光ネットワークでは,ノードにて波長変換を行う.信号光とは異なる波長の制御光用光源をノードに備え,光ファイバ中の非線形光学効果と呼ばれる現象を利用して,波長変換を行う.このため,全てのノードに制御光用光源が必要となる.本研究では,一部のノードに制御光用光源を集約し,他ノードには遠隔地から制御光を送信することで,波長変換を行う.このとき,制御光の信号歪みの解析を行う,また,全光ネットワークにおける制御光用光源を搭載したノードの配置方法を検討する.
老化に伴う泌尿器癌発症におけるメチル化異常の病態解析

本邦での尿路上皮癌や前立腺癌の発生頻度は上昇傾向にあるが、その一因として両疾患が高齢者に多く発生することと高齢者社会が進んでいることが考えられる。近年多くのヒト腫瘍でCpGサイトのmethylation異常が報告されている。特に癌抑制遺伝子のプロモーター領域のCpG islandに異常なメチル化が生じ癌抑制遺伝子の発現抑制がおこり癌化に寄与すると考えられている。また近年、メチル化異常が加齢に伴って進行している例が報告されており、加齢に伴うメチル化異常が癌抑制遺伝子や細胞周期の調節遺伝子群の発現異常を来し、発癌に関与している可能性がある。我々は9q上の尿路上皮癌の抑制遺伝子の候補領域を9q32-33にマップし、新たな遺伝子DBCCR1を同定した。さらにDBCCR1の5'領域のhypermethylationにより、その発現が抑制されることを報告してきた。本研究では正常尿路上皮ならびに尿路上皮癌を対象として、DBCCR1の5'領域のCpG methylationを調べ、メチル化のタイミングを検討した。尿路上皮癌45症例より69腫瘍、正常尿路上皮21例を解析した。その結果、加齢に伴い正常尿路上皮でもDBCCR1の5'領域のmethylationが認められた。DBCCR1の5'領域のhypermethylationは50%以上の腫瘍で認められたが、この異常は腫瘍の病期、異型度に関係なく観察された。この領域のhypermethylationは尿路上皮癌発生の極めて初期に生じている可能性がある。また尿路上皮癌が高齢者に多い理由として、正常尿路上皮でもhypermethylationが加齢に伴い進行していることが関与し、いわゆるfield defectの基盤となっている可能性もある。現在、加齢に伴う尿路上皮癌や前立腺癌の遺伝的背景因子を同定する目的で、尿路上皮癌においては従来、関与が報告されている、Her-2、CyclinD1やMnSODなどを、前立腺癌ではステロイドホルモン合成代謝に関与する遺伝子群(SRD5A2,CYP17,CYP11A1)の多型解析を進め、一部の結果を報告した。また近年、メチル化異常が加齢に伴って進行している例がわずかながら報告されている。加齢に伴いメチル化異常が生じ、この異常が蓄積し癌抑制遺伝子や細胞周期の調節遺伝子群の発現異常を来している可能性がある。したがってこのようなメチル化異常の機序を解析することは泌尿器癌の病態解析に不可欠であり、さらには加齢に伴う癌の予防に大いに貢献できる可能性がある。さらにDBCCR1の5′領域のhypermethylationにより、その発現が抑制されることを報告してきた。本研究では正常尿路上皮ならびに尿路上皮癌を対象として、DBCCR1の5′領域のCpG methylationを調べ、メチル化のタイミングを検討した。

尿路上皮癌45症例より69腫瘍、正常尿路上皮21例を解析した。その結果、加齢に伴い正常尿路上皮でもDBCCR1の5′領域のmethylationが認められた。DBCCR1の5′領域のhypermethylationは50%以上の腫瘍で認められたが、この異常は腫瘍の病期、異型度に関係なく観察された。この領域のhypermethylationは尿路上皮癌発生の極めて初期に生じている可能性がある。また尿路上皮癌が高齢者に多い理由として、正常尿路上皮でもhypermethylationが加齢に伴い進行していることが関与し、いわゆるfield defectの基盤となっている可能性もある。加齢に伴うhypermethylationの病態を解明することは今後の重要な課題であると考えられる。本邦での尿路上皮癌や前立腺癌の発生頻度は上昇傾向にとあるが、その一因として両疾患が商齢者に多く発生することと高齢者杜会が進んでいることが考えられる。近年多くのヒト腫瘍でCpGサイトのmethylation異常が報告されている。特に癌抑制遺伝子のプロモーター領域のCpG islandに異常なメチル化が生じ癌抑制遺伝子の発現抑制がおこり癌化に寄与すると考えられている。また近年、メチル化異常が加齢に伴って進行している例が報告されており、加齢に件うメチル化異常が癌抑制遺伝子や細胞周期の調節遺伝子群の発現異常を来し、発癌に関与している可能性がある。我々は9q上の尿路上皮癌の抑制遺伝子の侯補領域を9q32-33にマップし、新たな遺伝子DBCCR1を同定した。さらにDBCCR1の5'領域のhypermethylationにより、その発現が抑制されることを報告してきた。本研究では正常尿路上皮ならびに尿路上皮癌を対象として、DBCCR1の5'領域のCpG methylationを調べ、メチル化のタイミングを検討した。その結果、加齢に伴い正常尿路上皮でもDBCCR1の5'領域のmethylationが認められた。DBCCR1の5'領域のhypemethylationは50%以上の腫瘍で認められたが、この異常は腫瘍の病期、異型度に関係なく観察された。現在、加齢に伴う尿路上皮癌や前立腺癌の遺伝的背景因子を同定する目的で、尿路上皮癌においては従来、関与が報告されている、Her-2、CyclinD1やMnSODなどを、前立腺癌ではステロイドホルモン合成代謝に関与する遺伝子群(SRD5A2,CYP17,CYP11A1)の多型解析を進め、一部の結果を報告した。
社会的上下感覚の生成・持続・変容に関する比較史

日本史(古代、中世、近世、近代)、アジア史(中国史、イスラーム史)、ヨーロッパ史(中世イギリス、近世フランス、近現代ドイツ、近現代東欧)の研究者の共同研究として、社会的上下感覚に関する比較研究を行った。研究の重点は、第一に、社会的上下感覚というキーワードを媒介に、身分・ジェンダー・エスニシティなど、従来別個に論じられる傾向のあった問題を総合的に考察すること、第二に、固定的な一国的類型論を超えた比較史の方法を模索するとともに変動期に着目して前近代史と近現代史を架橋することであった。書札礼、都市空間、社会集団、エスニック・アイデンティティなどのテーマをめぐり、検討を行った。2012年度は、研究代表者及び各研究分担者が、それぞれの研究部会において個別の研究を進めるほか、3回の全体研究会を開催した。第一回の全体研究会(2012年6月6日)は、部会ごとの研究方向、及び全体のスケジュールについて、打ち合わせを行った。当面の重点的テーマとして、(1)古代近世における書札礼(手紙の書式)について日本史・アジア史・西洋史を通じて比較研究を行うこと、及び(2)近現代を中心として、ナショナリズムと身分感覚・エスニシティ認識の変容を比較史的に検討すること、といった諸点が確認された。第二回・第三回の全体研究会については、以下の通りである。第二回(10月24日):報告岸本美緒「清末における『奴隷』論の構図」。上記の第二のテーマに関する報告。清末の言論界における対外的危機感に基づく愛国主義的論調のなかで、中国人の国民性を示すキーワードとして盛んに用いられた「奴隷」「奴隷根性」という語をとりあげ、伝統的な「奴隷」観との共通性及び変化について論じた。'第三回(12月19日):報告古瀬奈津子「『明衡往来』にみる書札礼」。上記の第一のテーマに関する報告。藤原明衡の編纂した往来物(消息文例集)を取り上げ、貴族間の手紙のやりとりにおける書式及びそこに見出される身分感覚について論じた。両回とも活発な討論が行われ、関連の成果は2012年度中に論文又は学会発表として公表された。2013年度は、研究代表者及び各分担者が、それぞれの研究部会において個別の研究を進めるほか、1回の小シンポジウム、2回の全体研究会、及び1回の見学会を行った。小シンポジウム「国家・民族・身分感覚ー近現代中欧を中心に」(2013年6月29日)では、山本秀行「ナチズムに見る「ドイツ東方」の二重性ードイツ民族リストから見えてくるものー」及び篠原琢「文明の階梯と歴史の再編成ーベーメンドイツ人歴史協会の思想と活動」の2報告が行われ、エスニシティと上下感覚の関係をめぐり、他地域との比較の観点から活発な討論が行われた。10月30日の研究会では、新井由紀夫「中世イギリスのジェントリ家政家計簿から読む「社会的上下感覚」」及び小風秀雅「明治22年の東京の政治空間」の2報告が行われた。前者は、家計簿に記載された食糧から当時の上下感覚を分析するもの。後者は明治憲法制定に関する儀式を中心に、東京の政治空間と社会的上下感覚との関係を論じた報告であった。12月18日の研究会では、巽昌子(お茶の水女子大学大学院博士課程)による報告「書状の署名にみる僧侶の「上下感覚」ー興福寺大乗院を中心にー」をめぐって討論を行った。2012年度の古代史の報告と直接に関わる内容で、活発な議論が行われた。11月23日には、国立歴史民俗博物館で開催されていた「中世の古文書ー機能と形ー」特別展の見学会を行い、安田次郎・藤原重雄両氏の解説により、古文書の現物に即して、日本中世の身分感覚に関する理解を深めた。平成26年度は、全体の研究会としては、以下のごとく2回開催した。平成26年5月21日神田由築「近世芸能興業における上下感覚」同12月10日上野未央「ロンドン入市式における市民たちの序列意識」、佐々井真知「中世後期ロンドンの同業ギルドにおける上下感覚」神田報告は、大坂における芸能関係の番付から、座元・役者それぞれに関するランク付けのあり方を考察するとともに、地方での興行において、他地域から来演する役者等がどのように評価・序列づけされているかを検討した。上野・佐々井報告は、関連する研究を行っている若手研究者に報告を依頼したものである。上野報告は、近世ロンドンにおける国王の入市式の儀礼にあらわれる諸団体の序列づけやそれをめぐる諸問題を検討した。佐々井報告は、中世ロンドンの同業ギルドの上下のランクがどのような基準との関係で形成されてくるのかを論じた。いずれの報告も、上下感覚をめぐる新鮮な切り口からの具体的な考察であり、活発な討論が行われた。そのほか、平成26年度は、次年度の成果のまとめにむけて、比較の視座から検討を行うための、個別の打ち合わせを随時行った。2015年度は最終年度であるため、本研究計画の成果としての各自の論文執筆を中心として活動を行った。全体で開催した研究会は以下の通りである。

第一回は、2015年7月8日、新井由紀夫報告「墓地の選定に見る上下感覚ーロンドン、グレイフライアーズ教会の墓所案内写本例」、第二回は、同12月3日、ケンブリッジ大学のJoe McDermott教授の報告"The Funding and Funds of Ancestral Halles in Ming Huizhou"、第三回は2016年3月8日に、最終の研究会ということで、藤原重雄、三浦徹の両氏に話題提供をしていただき、本研究計画の成果について総括を行った。第二回の研究会は、科学研究費基盤研究B「ワクフ(イスラーム寄進制度)の国際共同比較研究」(代表三浦徹)と共催で行い、両研究計画のメンバーを超えた多数の参加者があった。本研究計画に関わる論文については、各自が原稿を作成し次第、メールでメンバーに送付し、随時討議検討を行うという形で、成果の共有とすり合わせを行った。日本史(古代、中世、近世、近代)、アジア史(中国史、イスラーム史)、ヨーロッパ史(中世イギリス、近世フランス、近現代ドイツ、近現代東欧)の研究者の共同研究として、社会的上下感覚に関する比較研究を行った。研究の重点は、第一に、社会的上下感覚というキーワードを媒介に、身分・ジェンダー・エスニシティなど、従来別個に論じられる傾向のあった問題を総合的に考察すること、第二に、固定的な一国的類型論を超えた比較史の方法を模索するとともに変動期に着目して前近代史と近現代史を架橋することであった。書札礼、都市空間、社会集団、エスニック・アイデンティティなどのテーマをめぐり、検討を行った。報告者1名ずつで行う予定であった研究会を、内容の関連性からまとめて行ったこともあり、研究会の開催回数が若干少なかったが、進展状況には特に問題はない。27年度が最終年度であるため、記入しない。中国明清史平成27年度は最終年度に当たるため、研究成果を具体的な形としてまとめることを課題とする。この間の研究会および個別の打ち合わせを通じて、(1)近代国家形成期のエスニシティと上下感覚、(2)書簡における呼称などの儀礼的書式の形成と展開、(3)芸能における上下感覚、などの具体的テーマが絞られてきたことをふまえ、34回の研究会を通じて比較史的な分析を練り上げ、論文を執筆する。同時に、各自の研究テーマについて研究を進め、関連の論文を発表するほか、国内・国外の学会で比較史の方法的視座を明確化した報告を行う。おおむね予定通りに進展しているが、昨年度末に計画していた第四回の全体研究会が、悪天候(強風による帰宅指示)により、中止となった。これについては、平成25年度の前半に、複数の研究報告を含む小シンポジウムとして再組織し、開催する予定である。2012年度の最初の全体会で、重点的テーマとして、(1)古代近世における書札礼(手紙の書式)について、日本史・アジア史・西洋史を通じて比較研究を行う、(2)近現代を中心として、ナショナリズムと身分感覚・エスニシティ認識の変容を比較史的に検討する、の二つの課題を設定したが、それぞれについて、順調に共同研究が進行している。調査の予定が大学業務などにより変更となったため、未使用額が生じた。2013年度以降は、研究会及び小シンポジウムなどで研究成果の共有を図るとともに、それを個別の成果としてのみでなく、共同研究として発信してゆくことに重点を置く。研究計画の変更は特にない。本年度は、上記の2テーマを中心として、比較史的研究を進め、共著論文へと結実させることをめざす。また、3回4回の研究会・シンポジウムを開催し、個別の研究課題について報告するとともに、比較史的に意義のある論点の深化を図る。