hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しい降圧ペプチド“アドレノメデュリン"(AM)の基礎的および臨床的研究

またAMの臨床的研究に関しては、ヒト血漿中AM濃度を測定可能なラジオイムノアッセイを確立し、正常人の血漿中にかなりの濃度で、AMが循環していることを明らかにした。さらに、各種疾患における血中AM濃度を検討したところ、心不全,腎不全,高血圧などの患者では血中AMが重症度にしたがって増加していた。現在、AMやPAMPが新しい降圧ペプチドとして循環調節に重要な機能をしていることを示すデータが得られつつあり、今後2-3年のうちに、ナトリウム利尿ペプチドやエンドセリンに続く、新しい循環調節機構が明らかになってくるものと思われる。“アドレノメデュリン(AM)"はヒト褐色細胞腫抽出液より発見された強力な血管拡張性の降圧ペプチドである。AM前駆体は185個のアミノ酸よりなり、AM以外に、20個のアミノ酸よりなる全く新しい降圧ペプチド“PAMP"が生合成される。本年度は基礎的研究として、AMの慢性投与実験を行い、AMが生理的血中濃度のレベルで降圧およびレニン活性を抑制することを明らかにし、将来AMもしくはAM受容体作働薬やAM分解抑制剤が新しい薬物となりうる可能性が示せた。また、AMやPAMPの生合成・代謝をみる研究では、PAMPが心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)を分解する中性エンドペプチダーゼで速やかに分解されることを証明し、その分解部位も明らかにした。さらに、AMとPAMPが生体内の幅広い組織で生合成・分泌されていることが明らかになり、循環調節以外の多くのAMの作用が明らかになりつつある。AMの臨床的研究に関しては、ヒト血漿中AMとPAMP濃度を測定可能なラジオイムノアッセイを確立し、正常人の血漿中にAMとPAMPが循環していることを明らかにした。さらに、各種疾患における血中AMとPAMP濃度を検討したところ、心不全、腎不全、高血圧などの患者では血中AMと同様PAMPが重症度にしたがって増加していた。本研究で、AMとPAMPが循環調節に重要な機能をしている新しい循環調節ペプチドであることが判明し、今後ANPやエンドセリンに続く、新しい循環調節機構が明らかになってくるものと思われる。
アデノシルコバラミンの補酵素活性の発現と維持に関わる蛋白質の機能解析

1.アデノシルコバラミン関与ジオールデヒドラターゼの高発現、精製および性質先にクローン化したジオールデヒドラターゼのサブユニット遺伝子を様々な組み合わせで大腸菌に高発現させたところ、それぞれのサブユニットは相互に影響を及ぼし合いながら活性な立体構造に折りたたまれることが示された。3つのサブユニットを同時に高発現させた大腸菌からジオールデヒドラターゼを単一にまで精製するための簡便な方法を確立した。組換え体の精製酵素はα_2β_2γ_2のサブユニット構造をとっており、親菌Klebsiella oxytocaから精製した酵素と同様の性質を示した。2.ジオールデヒドラターゼの再活性化因子の遺伝子クローン化と塩基配列解析および大量発現ジオールデヒドラターゼは、生理的基質の一つであるグリセロールにより酵素反応中に自殺不活性化を受ける。K.oxytocaには不活性化されたホロ酵素をアデノシルコバラミン、AT、Mg^<2+>存在下で再活性化する系が存在する。本研究では、3'-隣接領域に存在する2つの遺伝子が再活性化因子の遺伝子であると同定できた。塩基配列の解析より、再活性化因子は、610アミノ酸残基、分子量64,266と、125アミノ酸残基、分子量13,620の2つのサブユニットから成ることが分かった。この2つの遺伝子をそれぞれddrA、ddrB遺伝子と名付けた。ホモロジー検索により、このような再活性化因子はグリセロールデヒドラターゼにも存在することが強く示唆された。3.ラット肝臓コバラミン関与メチオニンシンターゼの精製と性質コバラミン関与メチオニンシンターゼをラット肝臓より精製した。Mono-Qカラムクロマトグラフィーにより酵素は2つの活性画分に分かれた。これらを溶出する順番にピークI、IIとすると、ピークI、IIの酵素はそれぞれ18,000倍、44,000倍に精製された。活性の回収率はそれぞれ0.7%および1.8%であった。これら2つのピークの相互転換は認められなかった。主要な画分であるピークIIの酵素は分子量約143,000の単量体であり、電気泳動的に単一に精製された。活性の発現には還元系とS-アデノシルメチオニンが必要であった。
労働と労働者のジェンダー化

本研究は、日独の近代化過程における労働と労働者の差異化のプロセス、つまりジェンダー化について比較史的に考察したものである。労働については、家内工業期から工場制へと移行する時期の織物業を取りあげた。ドイツの製織業は男性が多く、日本は圧倒的多数が女性である。担い手のジェンダーが異なると、労働の組織形態や労働に付与される意味合いも異なってくる。ドイツでは男性が製織で女性は補助労働というジェンダー・ヒエラルヒーが存在した。また実際には問屋から工賃をもらって製織する労働者であったにもかかわらず、徒弟、職人、親方という手工業的な体裁を取り、彼らは手工業的な自意識をもっていた。女性はこうした手工業的階梯からは排除されていたが、19世紀後半になると、織布工の寡婦や娘を中心に女性親方が増え、また力織機の導入とともに織物業の女性化がはじまる。これに対して男性は激しく抵抗したが、その形態もイヌング運動など手工業的性格を帯びていた。日本の家内工業は農家副業として営まれ、担い手の女性たちは自分の技能には誇りをもっていたが、職人としての意識はもたず、また職人とも認定されていなかった。彼女たちは家のために織り、機織り文化は「嫁の文化」と深く結びついていた。ドイツにおける社会保険の導入は、家族の扶養者である男性が標準的な労働者で、女性は特殊で家計補助という近代的な労働者モデルを定着させるにあたって重要な役割をはたした。すなわち保険はフルタイムで長期間働く男性をモデルにし、女性は結婚によって退職する者として特別な扱いを受けた。日本については、1930年代の修身雇用の導入とともに、従来の男女を別個にとらえる伝統的な労使関係にかわって、男性を標準とする労働者像があらたに登場した。本研究は、伝統的な労働様式が維持できなくなり、労働形態や労働者が近代化される過程で、それが近代的なジェンダー規範とどう関係しているのか、つまり労働や労働力のジェンダー化の過程と表象について日本とドイツの比較研究を通じて明らかにしようとするものである。本年度は、とくに2つの事柄を中心に研究を進めた。1つは、方法論に関する問題である。本研究はジェンダーの歴史学にもとづいて研究を進めているが、これが従来の女性史とどう違うのか、まだこの違いがドイツでどう認識されているかを考察した。ジェンダーの歴史学では、女性の実態の描写ではなく、男女の差異化がいかなる過程で行われるのかを重視する。これに関連して2つめに、「男性の労働/女性の労働」の構築およびその表象について考察した。家内工業期および工場での機械生産への移行期における日独の織物工業を比較した結果、同じ種類の労働でも、日本は女性、ドイツは男性という担い手のジェンダーによって、その労働の捉え方が異り、その労働に与えられる意味合いが違っていることが明らかになった。つまり日本では「農家の嫁の労働」、ドイツでは「職人の労働」という性格を帯び、織物労働はジェンダー化され、その労働に関する社会的な評価も異なっていた。本年度は「女性史」および「社会経済史とジェンダー」の過去20年間の成果と課題のまとめが研究の中心となった。女性の可視化、女性を歴史の担い手・主体とし位置づける試みから出発し、「女は家庭、男は仕事」という性別股割分担を普及させた近代的家父長制の抑圧的な側面に注目し、近代化の徹底=女性解放という従来の図式に異議を唱えた新しい女性史は、数多くの成果を生んだのち、90年代以降は次第に「ジェンダーの歴史学」へと転換を遂げている。杜会経済史の分野でも、杜会構造中心の見方に加えて人びとの認識に焦点を当てる「ジェンダーの歴史学」的な方法論が近年、優勢を占めるようになってきている。

「ジェンダーの歴史学」は、<女><男>を所与の存在とみなすのではなく、歴史過程のなかで権力による差異化によってヒエラルヒー的に構築されたとものとみなしている。そして近代の社会秩序はこの差異化を基盤として成り立っている。したがって「ジェンダーの歴史学」の課題は、差異化の過程を探究し、それがどのような秩序形成につながっていったのかを解読することにある。私が現在研究中の「労働と労働者のジェンダー化」もこの方法論に導かれており、現在は19世紀末ドイツで法制化された健康・労災・廃疾・年金という社会保険を中心に、そこセジェンダーがどう扱われたのかを考察している。共済保険の類は以前にも存在したが、就業者全員の強制加入方式はこれが最初であり、労働や労働者を定義する規範的な力をもった。すなわち「就業労働」のみが「労働」と定義され、ジェンダーに関しては性別役割分担を前提として制度化されたのである。本年度は19世紀末におけるドイツの社会保険の導入とジェンダーとの関連について考察し、それが家族の扶養者である男性が標準的な労働者で、女性は特殊で家計補助という近代的なジェンダー・ヒエラルヒーにもとづく労働者モデルを定着させるにあたって重要な役割をはたしたことを明らかにした。すなわち保険の内容をめぐる議会論議において、障害年金では女性は寡婦としてしか議論の対象にならず、老齢年金では女性は結婚によって退職する者、あるいは就業をしても家計補助者とみなされた。その結果、フルタイムで長期間働く男性をモデルにし、女性を特別な扱いする保険制度が生まれることになった。本年度は3年間のまとめの年にあたっており、以前から継続して研究していた労働のジェンダー化についても考察した。ドイツの織物業は男性が担い手の中心で、女性は補助労働をしている1人が多いが、それでも農村と都市、織物の種類などで差があり、都市の方が農村より、また絹織物のほうが綿織物より、その傾向が強かった。このような所では織布工は労働を手工業的に組織し、自らも手工業的なアイデンティティをもち、女性が自立した労働を行うのを排除しようとした。力織機の導入にともなう労働の女性化に対しては手工業的イヌング運動を組織して強く抵抗し、自らは手機に固執して工場労働者にはならなかった。織物業が男性中心に営まれているドイツと女性中心の日本とでは、この労働に付与される意味合いにも、担い手のアイデンテイテイにも大きな差があり、労働がジェンダー化されていることが明らかになった。
カナダ先住民文学・アジア系カナダ文学にみられる「グローカル」性の考察

Identity Politicsが声高に叫ばれていた90年代、マイノリティ作家と呼ばれていたカナダ先住民作家及びアジア系カナダ人作家の文学をグローバルとローカルを融合させた「グローカル」性という新しい概念で分析した。白人優勢の社会で、従来の支配者、被支配者という二元的な構図で創作するのではなく、彼らの作品が、グローバルに普遍なるものへの同化と同時に、自らの出自である母語や伝統的なローカル文化を作品の中に取り入れ、個別と普遍を融合させた「グローカル」性という新しい文学理念に向かっていることに注目した。この分析法は、内外においても本研究が初めてであり、新しい文学分析として今後活用されよう。日系カナダ文学、アジア系カナダ文学の権威であるサイモン・フレーザー大学(バンクーバー)のRoy Miki教授を訪問して、日系・アジア系カナダ人作家の最新の文学動向に関する専門知識の提供を受け、アジア系カナダ文学に見られる「グローカル」性について意見交換をはかり、示唆を受けた。以前よりミキ教授は、グローバル化時代における文学の状況を考えるとき、グローバル化は新しい形のローカリズムを生み、中国系カナダ人作家Larissa Laiの、Salt Fish Girlにその例を見ることができると指摘してきた。グローバル化による地球規模の緊張感が高まっている今日の状況の中で、植民地の歴史の遺産である今日の不平等さを認識させ、ローカルなものとグローバルなものが非暴力の形で共存し、想像力が新たな民主的統治を作り出す文化的枠組みの形成を呼びかけるライの小説は、文学の倫理的力を具現したものとして賞賛に値する、とミキ教授は語る。昨今のグローバルなものとローカルなものが対立する中で、この「民主的統治を作り出す文化的枠組み」を探るライの手法こそ、新しい理念「グローカル」性に繋がるものと私は分析する。グローバルだけでも、ローカルだけでもない両方の視野を持って双方向に行動しようとする「グローカル」性を、Salt Fish Girlに考察した。日系カナダ人作家HiromiGotoにインタビューをした。代表作であるChorus of Mushroomsで、ゴトーは主人公の「語り」に日本語を取り入れる手法を用いている。ゴトーの"narrative strategies"がグローバルとローカルなものを連結した「グローカル」性であることを指摘して、作者ゴトーの意見交換をした。また、カナダ文学会理事の愛知淑徳大学助教授Beverley Currn氏から随時専門的知識の提供を受けた。世界におけるカナダ文学の第一人者であるブリティッシュ・コロンビア大学教授で,カナディアン・スタディーズの科長Richard Cavell氏と昨年に引き続き密に意見交換をしながら,平成19年7月キャベル氏を招聘して,「マクルーハン,グローカリズム・カナダ文学」(McLuhan,Glocalism, and Cnadian Literature)の講演会を開催した。キャベル氏はまず,バンクーバー作家のDouglas Couplandの「グローカル」体験を引用する。しかし,このグローカル現象はインターネット開始よりはるか以前にさかのぼるとキャベル氏は説く。それは,カナダのメディア理論家Marshall McLuhanがすでに1950年初期に「グローバルビレッジ」という言葉で理論化したと述べ,マクルーハンのグローカル体験が今日のカナダ人作家の作品に現れていると例証した。それは,世界的に有名な劇作家で演出家のRobert LepageのThe Far Side of The Moon,作家Michael OndaatjeのThe English Patient,劇作家Tim CarlsonのOmniscienceなどである。キャベル氏の講演は示唆に富み,現在及び今後の私の研究に大いに役立つものとなった。また,バンクーバーとトロントを訪れ,中国系4世作家Larissa Lai,日系3世作家Kerri Sakamotoのインタビューを行った。マイノリティーといわれてきたアジアからの移民の子孫である作家らが,先祖から受け継いだローカル性をこのグローバル化された社会の中でいかに融合させて新たなグローカル性を見出しているかを,昨年Roy Miki教授が語った彼女らの作品に見られる「グローカル」性を引用しながら意見交換を図った。トロントでは,日系人作家の大御所Joy Kogawaとも意見交換を図った。明治学院大学国際平和研究所主催シンポジウム「グローバル化と多民族共生」で、カナダ先住民作家Tomson Highwayの戯曲Dry Lips Oughta Move To Kapuskasingを取り上げて、「カナダ先住民文学にみる<グローカル性>」を発表した。1492年のコロンブス一行による北米大陸到来によって、「ドラスティックでトラウマティックなことが起こった」とハイウェイは批判する。カナダはアメリカ同様イギリスや他のヨーロッパの列強が先住民の土地を植民地として略奪して建国された。以来、新天地を求めてヨーロッパから離散したディアスポラたちが、先住民たちを迫害し、ホームランドにいながら彼らを居留地に囲い込み、ディアスポラ化した歴史がある。先住民は悪名高き「白人同化策」という名目のもとに、インディアン文化の絶滅を強いられ、子供たちはカトリック教会運営の寄宿学校に入れられてキリスト教主義による洗脳教育を強制された。従来、先住民作家は、支配者・被支配者という二元的な構成で、悲劇的存在として先住民を描いてきた。

しかしハイウェイは本作品で、インディアン神話・文化の象徴で、かつジェンダーを超越した存在のトリックスターを登場させて、父なる神を崇める一神教のキリスト教が作り上げた家父長制的世界に挑戦するとともに、グローバル化によって二十一世紀には消滅してしまう恐れがあるローカルなインディアン文化とインディアン語を復活させることによって、グローバルとローカルなものの共生を「グローカル」という形態で展開している。これは、民族そのものの存続をはかろうとする先住民作家の切ないほどの願いでもある。この発表は『PRIME』に掲載される。本年6月の日本カナダ文学会年次研究大会では、インタビューを基に「Hiromi Gotoの作品にみるグローカル性」と題して発表し、『カナダ文学研究17号』に掲載される。これら二つの学会発表は、「グローカル性」という新しい視野に立った新文学理論として注目されるだろう。
金属分散カーボンナノホーン上の準安定解離吸着を利用した水素貯蔵材料の開発

スピルオーバー効果を最大限に活用した水素吸蔵材料の構造最適化を行う。この原理に基づく材料は金属分散カーボンナノホーンであり、水素吸蔵合金と同程度の水素吸蔵量を示すが軽量であることから実用上極めて有用となる。同材料を合成するためには申請者が独自に開発しているガス導入アーク法を用い、金属(合金)の組成、金属分散度、金属含有率、カーボンナノホーンの細孔構造、等を最適化する。
歯の萌出路の形成機構に関する基礎的研究

本研究課題の目的は、歯の萌出に関わる様々な液性因子のはたらきを動物実験や培養系を用いて明らかにしていくことである。平成12年度は、多数歯埋伏を伴う全身疾患として知られる副甲状腺1(PTH)機能低下症の動物モデルとして副甲状腺ホルモン関連ペプチド(PTHrP)遺伝子欠損マウスを用いて組織化学的・細胞生物学的な解析を行い、PTH-PTHrP系の歯槽骨形成・吸収におけるはたらきを検討した。その結果、PTHrPは正常な歯槽骨吸収において必須な因子と考えられた。そして歯の発生に続いて起こる歯の萌出過程においてもPTH-PTHrP系が歯槽骨内の萌出路形成において重要なはたらきを担うことが示唆された。そこで平成13年度は上記の知見を論文発表すると共に、歯の萌出路形成に伴う破骨細胞形成を評価する目的で、in vitroにおける破骨細胞形成系を確立した。切歯、臼歯の萌出期にあるマウス・ラットから歯や歯周組織を含んだ下顎骨体を取り出し、細切ミンス後、15%血清含有のα-MEM中で培養すると、再現性良くTRAP陽性細胞が形成された。これらの細胞を象牙質上で培養すると吸収かを形成したことから、破骨細胞が形成されたと考えられた。なお、下顎骨体から歯や歯周組織を除去して同様な培養を行っても、このような破骨細胞は形成されなかった。これまで、in vitroにおける破骨細胞形成系では、PTHやビタミンD3といったホルモン、あるいはプロスタグランディンやインターロイキンといった局所因子・サイトカインの添加が必要であった。今回確立した培養系においては、このような因子の非存在下で破骨細胞様細胞が形成可能であり、歯の萌出路形成に伴う局所環境の活性評価に大いに有用な実験系といえる。そこで平成12年度は、多数歯埋伏を伴う全身疾患として知られる副甲状腺(PTH)機能低下症の動物モデルとして副甲状腺ホルモン関連ペプチド(PTHrP)遺伝子欠損マウスを用いて組織化学的・細胞生物学的な解析を行い、PTH-PTHrP系の歯槽骨形成・吸収におけるはたらきを検討した。方法としては、正常マウスとPTHrPの遺伝子欠損マウスより歯胚とその周囲歯槽骨を単離し、無血清培地内で器官培養を行った。その結果、正常マウス由来の歯胚は培養条件下においても正常な歯胚発生が観察され、歯槽骨も歯胚発生と同調した形成がみられた。一方、遺伝子欠損マウス由来の歯胚は周囲歯槽骨から圧迫され形態の異常が観察された。培養開始前においては、正常マウス・遺伝子欠損マウス由来とも歯胚周囲には破骨細胞数やその局在に差はなかったものの、培養日数の増加にしたがい後者では破骨細胞数が顕著に減少した。以上の結果よりPTHrPは正常な歯槽骨吸収において必須な因子と考えられた。
ツメガエル前腎をモデルとしたNotchシグナルによる腎尿細管形成機構の解析

本研究では、Notchシグナルが前腎前駆細胞の発生運命にどのような役割を担っているのかを明らかにするために研究を行ってきた。これは、前腎前駆細胞から分化するglomus,proximal tubule(tubule),distal tubule(duct)の発生運命がNotchシグナルによってどのように変化するのかを解明するものである。得られた結果から、Notchシグナルはこれらの分化過程において、次のような3つの役割をもつことが分かった。1つ目は、Notchシグナルはglomusの誘導に必須であるということ、2つ目は、Notchシグナルは、前腎前駆細胞のproximal sideを確立して、distal sideに伸長する細胞の運動を抑制すること、3つ目は、Notchシグナルはdistal tubuleの分化を抑制することである。これらのことは、distal tubuleの形成に関しては、伸長と分化は相乗的に起こっており、どちらが失われても正常な分化が進行しないことを示している。またこれに付随する研究計画のうちの1つである、distal tubuleの各セグメントに発現する遺伝子のプロファイルを作成することを試みた。その結果、各セグメントに発現する遺伝子群(cldn19,cldn14,rhcg)をピックアップすることができ、Notchシグナルの活性化によって発現が減少する様子を捉えることができた。このことは先述した、distal tubuleにおいては、伸長と分化が相乗的に起こるという知見と一致している。以上のことから、Notchシグナルは前腎前駆細胞の分化において、glomusの分化誘導の他に、distal tubuleの細胞運動と分化の抑制に寄与していることが明らかになった。平成22年度は、Notchシグナルが前腎前駆細胞の発生運命にどのような役割を担っているのかを明らかにするために研究を行ってきた。これは、前腎前駆細胞から分化するglomus, proximal tubule (tubule), distal tubule (duct)の発生運命がNotchシグナルによってどのように変化するのかを解明するものである。このことは、将来的にiPS細胞などの多分化能を有する細胞を用いて、意図する腎尿細管の細胞を人為的に作出する際に有効となる知見を得るための根幹となる点で意義をもっている。研究結果から、Notchシグナルはこれらの分化過程において、次のような3つの役割をもつことが分かった。その結果、各セグメントに発現する遺伝子群(cldn19, cldn14, rhcg)をピックアップすることができ、Notchシグナルの活性化によって発現が減少する様子を捉えることができた。
「読み」の発達性障害に関する認知神経心理学的研究:実験的・モデル論的アプローチ

「読み」の発達性障害に関し,人間を対象とした音読実験と,コネクショニスト・モデルを用いたシミュレーション実験を行った.日本語の学習過程を反映させた規則語・例外語,及び非語の刺激リストを用いた音読実験から,日本語話者においても発達性音韻失読に分類される症例の存在が確認された.またシミュレーション実験により,発達段階のモデルを構築するためには,小学生の学習環境に準拠した単語学習方法を用いる必要があることが明らかとなった.さらに漢字・仮名音読のシミュレーション・モデルを用い,使用言語の違いによる発達性失読の出現率の差を説明する「粒と透明性仮説」の妥当性を検証した.「読み」の発達性障害に関し,人間を対象とした音読実験と,コネクショニスト・モデルを用いたシミュレーション実験を行った.日本語の学習過程を反映させた規則語・例外語,及び非語の刺激リストを用いた音読実験から,日本語話者においても発達性音韻失読に分類される症例の存在が確認された.またシミュレーション実験により,発達段階のモデルを構築するためには,小学生の学習環境に準拠した単語学習方法を用いる必要があることが明らかとなった.さらに漢字・仮名音読のシミュレーション・モデルを用い,使用言語の違いによる発達性失読の出現率の差を説明する「粒と透明性仮説」の妥当性を検証した.本研究では,日本語話者における表層失読と音韻失読に注目し,これらの発達性失読症状を検出可能な検査刺激を作成して失読例に実施するとともに,モデル論的見地から我が国における発達性失読の発現機序を検討することを目的とする.今年度は,まず,日本語発話者がどのような過程で漢字の読みを学習しているのかを調査し,どの発達段階でどのような語の読みを学習しているのかを調べ,各学年に対応する規則語と不規則語の刺激語リストを作成する元となるデータベースを構築した.これにより,次年度に予定されている発達性失読に対する音読検査が実施可能となった.さらに,シミュレーション・モデルのパイロット版を構築した.これはフィードフォワード・タイプの単純な読みのモデルであるが,実際の児童が学ぶ順に漢字を学習させている.そのため,従来のモデルでは再現できなかった配当学年の影響が現れ,健常児童の音読特徴を反映させることが可能になった.本結果は,次年度に構築する文字形態,音韻形態,意味の各表象が双方向的に計算される,日本語の学習過程を反映させた単語の読みのモデルに反映される予定である.本研究では,日本語話者における表層失読と音韻失読に注目し,これらの発達性失読症状を検出可能な検査刺激を作成して失読例に実施するとともに,モデル論的見地から我が国における発達性失読の発現機序を検討することを目的とする.平成19年度は,日本語発話者がどのような過程で漢字の読みを学習しているのかを調査し,どの発達段階でどのような語の読みを学習しているのかを教科書から調べ,各学年に対応する規則語と不規則語の刺激語リストを作成する元となるデータベースを構築した.平成20年度は,上記データベースを用いて日本語話者のための発達性失読用検査刺激セットを作成した.セットは規則語と不規則語それぞれ20語から成り,文字と読みとの規則性が操作されており,セット間における頻度,文字数,モーラ数,文字の学年配当は統制されている.小学5,6年生の健常児228名に本セットを音読させた実施しか結果,各学年とも規則語に比べて不規則語の音読成績が悪くなるという規則性効果が認められた.平成21年度は,上記の結果を踏まえて刺激セットをさらに洗練させ,健常児および発達性失読例に実施すると共に,発達性失読のシミュレーション・モデルを構築し,人間のデータをどこまで再現できるかを検討することにより,発達性失読の発現機序を明らかにする予定である.本研究では,日本語話者における表層失読と音韻失読に注目し,これらの発達性失読症状を検出可能な検査刺激を作成して失読例に実施するとともに,モデル論的見地から我が国における発達性失読の発現機序を検討することを目的とする.最終年度である今年度は,発達性失読の発現率が使用言語により異なる現象を説明する「粒性と透明性」仮説をコネクショニスト・モデルを用いたシミュレーション研究により検証した.本説では,1)1文字が表す音韻塊のサイズ(音素数)が大きいほど(粒性:漢字>仮名>アルファベット),あるいは,2)文字(綴り)と発音との対応が規則的であるほど(透明性:仮名,イタリア語,ドイツ語>英語>漢字),読みの障害が生じにくいと説明する.ここで,「透明性」を一定にし「粒性」のみを変化させて漢字と仮名を比較した場合,音韻塊のサイズの大きい漢字の文字音読学習は早く,発達性失読の発現機序の一つとされている音韻障害にも頑健であることが予想される.シミュレーションの結果.健常モデルにおける音韻形態学習,音読学習のいずれの場合も,仮名より漢字の学習が早かった.この傾向は音韻障害モデルにおける音読学習でも同様であり,漢字の方が損傷に対しても比較的頑健であった.本シミュレーションで漢字と仮名を区別する属性はモーラ数のみであり,モーラ数の多い,つまり音韻塊が大きい漢字の成績が良いという本結果は,「粒性と透明性」の仮説に合致するものであった.
慢性肉芽腫症における炎症制御異常の機序および遺伝子治療に関する検討

慢性肉芽腫症(CGD)では活性酸素種(ROS)が産生されず、感染症や慢性炎症をきたす。今回、gp91phoxの新たな変異型について検討したところ、mRNAの不安定性からgp91phox発現が低下したが、健常者の8割程度のROS産生能が残存した。しかし、本患者はCGD患者に類似した臨床像を呈した。X連鎖CGD保因者と異なり、全ての好中球でROS産生がわずかに低下しても、CGD症状を示すことが示唆された。CGD遺伝子治療では、長期的に高い遺伝子導入効率を維持することは期待できないが、遺伝子導入細胞は正常レベルのROSを産生するため、遺伝子治療はCGDの病態を改善する可能性がある。原発性免疫不全症である慢性肉芽腫症(CGD)では、過剰な炎症反応が遷延し炎症性肉芽腫をきたす。詳細な機序は明らかでないが、CGDの原因であるNADPHオキシダーゼの活性酸素種(ROS)産生障害による炎症制御異常との関連が示唆される。そこで、本研究では炎症を制御する単球/マクロファージのROSに関連する炎症シグナルについて検討している。単球/マクロファージはNADPHオキシダーゼを発現するが、免疫応答に関与するリンパ球(T細胞、B細胞)やNK細胞はNADPHオキシダーゼをほとんど発現していない。そのため、CGDに特徴的な過剰炎症の過程で、単球/マクロファージが中心的役割を果たしていると考えられた。そこで、ROSを全く産生しない典型的なX連鎖CGD患者と、好中球でのROS産生は残存するが単球/マクロファージ特異的にROS産生能が低下する患者(M特異的ROS低下患者)に注目した。この2例は、いずれも幼少時から細菌性肺炎を発症し、幼児期に炎症性腸疾患に類似したCGD腸炎(肉芽腫性腸炎)を発症している。NADPHオキシダーゼ構成蛋白の一つであるgp91phoxをコードするCYBB遺伝子を解析したところ、典型的なCGD患者ではnull変異、M特異的ROS低下患者ではミスセンス変異を認めた。これらの患者単核球からCYBB遺伝子のcDNAを作成し、GFPを共発現するレトロウイルスを介してK562細胞株へ遺伝子導入した。Flow cytometryを用いてgp91phox発現を検討したところ、K562-null変異CYBBでは発現を認めなかったが、K562-ミスセンス変異CYBBでは野生型CYBBよりも発現は低下しているが、gp91phoxの発現を認めた。ケミルミネッセンスを用いてROS産生能を検討したところ、K562-ミスセンス変異CYBBではわずかにROS産生が認められた。今年度は研究期間3年間の1年目であり、実験系と細胞株の樹立を行った。スクリーニングとして行った簡易実験では、作成した遺伝子導入細胞(K562)は患者のprimary cellの表現系を示す可能性が示唆された。詳細な解析については、次年度に実施する予定であるが、単球からマクロファージへ誘導した後の機能解析については、さらなる実験系の改善が必要と考える。現段階で、マクロファージへ誘導する際に用いるサイトカインが、細胞機能の解析に影響している可能性があるため、解析方法を再検討している。研究全体としては概ね予定通り進んでいるが、マクロファージの解析については予定よりやや遅れており、実験系の樹立は次年度も継続して行う予定である。慢性肉芽腫症(CGD)は、NADPHオキシダーゼの活性酸素種(ROS)産生障害により、易感染性と慢性炎症(肉芽腫形成、CGD腸炎(広義の炎症性腸疾患)など)をきたす原発性免疫不全症である。慢性炎症について、いくつかの機序が報告されているが、未だに詳細は不明である。NADPHオキシダーゼは食細胞に発現する複合分子であるため、本研究では炎症を制御する単球/マクロファージの機能解析を行い、CGDにおける慢性炎症の機序について検討を始めた。H27年度の研究結果から、CGDの慢性炎症は単球におけるROS産生能の低下が関与することが示唆された。H28年度、さらに単球の機能解析を行なったところ、CGDの単球では軽度の活性化が持続し、刺激に対する反応性も亢進していた。そのため、CGDの慢性炎症は、自己炎症性疾患に類似した病態を呈する可能性が示唆された。しかし、CGD患者では約半数にCGD腸炎を合併するが、自己炎症性疾患で炎症性腸疾患を合併することは稀である。CGD患者では、主に細菌や真菌による感染症によって肉芽腫が形成されるため、CGD腸炎においても何らかのトリガーが存在し、腸管の慢性炎症を発症すると推測される。今後、炎症トリガーを明らかにすることで、CGD腸炎の発症予防や治療法の開発につながると考える。また、遺伝子治療を行なったCGD患者では、蛋白発現解析では末梢血中に遺伝子導入細胞を検出することはできなかった。しかし、遺伝子治療で正常な遺伝子を挿入するために用いたベクターやCGDの正常遺伝子(cDNA)は、末梢血中にわずかに検出されたため、生体内では遺伝子導入細胞が残存していると考える。遺伝子治療後、臨床的に慢性炎症の再燃がみられないことから、ROSを産生する細胞が少なくても、臨床的な効果が得られる可能性がある。H28年度は研究期間3年間の2年目であり、H27年度に樹立した細胞、患者細胞を用いて細胞機能解析を行なった。

CGDの慢性炎症が単球やマクロファージの機能異常に関連するとの仮説に基づき、研究を継続している。これまでのin vitroのデータとCGD患者の臨床所見の解析では、この仮説を支持する結果が得られている。そのため、研究の方向性を修正する必要はないと判断した。H29年度も、当初の計画通り研究を進めるが、遺伝子治療患者で遺伝子導入細胞が検出困難だったことから、機能解析を行うことができない。しかし、遺伝子治療後、慢性炎症など臨床経過の詳細な検討を行うことで、遺伝子導入細胞の臨床的効果を評価していく。慢性肉芽腫症(CGD)は、NADPHオキシダーゼの活性酸素種(ROS)産生障害により、易感染性と慢性炎症(肉芽腫形成、CGD腸炎(広義の炎症性腸疾患)など)をきたす原発性免疫不全症である。慢性炎症について、いくつかの機序が報告されているが、未だに詳細は不明である。NADPHオキシダーゼは食細胞に発現する複合分子であるため、本研究では炎症を制御する単球/マクロファージの機能解析を行い、CGDにおける慢性炎症の機序について検討を始めた。これまでの研究結果から、CGDの慢性炎症には単球のROS産生能の低下が示唆された。しかし、感染防御や慢性炎症を回避するために必要とされる最低限のROSの閾値については、不明であった。今回、NADPHオキシダーゼを構成するgp91phoxの新たな変異を発見した。分子生物学的な解析の結果、本変異は、mRNAの不安定性からgp91phox発現が低下するともに、全ての単球と好中球のROS産生をわずかに低下させることが明らかとなった。また、同変異を有する好中球は、典型的なCGDよりもROS産生が維持されているにも関わらず、健常者でみられるROS産生の比較的強い好中球のグループが欠損していた。実際に、同変異を有する患者は、BCGリンパ節炎や非定型抗酸菌性肺炎、炎症性腸疾患(IBD)などCGD患者と類似した臨床経過を示した。一方、正常好中球と異常好中球が混在するCGD保因者では、IBDの報告はみられないことから、細胞数が少なくとも正常レベルのROSを産生する好中球の存在が、慢性炎症の抑制に寄与することが示唆された。CGDの遺伝子治療では、長期的に高い遺伝子導入効率を維持することは期待できないが、遺伝子導入細胞は正常レベルのROSを産生するため、遺伝子治療はCGDの病態を改善する可能性があると考える。慢性肉芽腫症(CGD)では活性酸素種(ROS)が産生されず、感染症や慢性炎症をきたす。今回、gp91phoxの新たな変異型について検討したところ、mRNAの不安定性からgp91phox発現が低下したが、健常者の8割程度のROS産生能が残存した。しかし、本患者はCGD患者に類似した臨床像を呈した。X連鎖CGD保因者と異なり、全ての好中球でROS産生がわずかに低下しても、CGD症状を示すことが示唆された。CGD遺伝子治療では、長期的に高い遺伝子導入効率を維持することは期待できないが、遺伝子導入細胞は正常レベルのROSを産生するため、遺伝子治療はCGDの病態を改善する可能性がある。次年度は、今年度に作成した遺伝子導入K562細胞株を用いて、CYBB遺伝子のmRNAの安定性について検討する。末梢血単核球では、CYBB遺伝子のmRNA発現レベルは正常遺伝子とミスセンス変異の遺伝子で有意な変化は認めなかった。
組織における「悪い情報」の伝達阻害要因の考察

組織の活動に困難をきたす「悪い情報」が生じた際の組織内コミュニケーションを阻害する要因として、組織内での普段の情報伝達時に規則を遵守しなければならない程度が関係していることが示唆された。また、「悪い情報」発生時に、事態の打開へ向けた部下の積極的提言が引き出されやすいのは、部下に配慮を示す上司だと一般的には考えられているけれども、組織内で共有される認識の違いによっては必ずしも部下の提言を促進するわけではないことも示された。本研究では、組織目標の達成や事業活動に困難をきたす事態が事業組織内の通常の業務中に生じた場合に、その「悪い情報」が上司へ伝達されるか否かという問題に注目している。本年度は、研究最終年度である来年度に実施する質問票調査にむけて、その事前調査を行うと共に、論点の絞り込みを行った。これは、調査の信頼性や妥当性を確保するためのものであり、具体的には、文献調査に加えて実務家に対するインタビューや予備的な質問票調査を実施している。「悪い情報」に関する既存研究をレビューし、本研究においては、組織成員によって共通に認識される結果として生じる「組織的沈黙」という現象を、組織構造によって生じる影響と、タイミングや要求される附随情報によって生じる影響という2つの側面から考察する。事業組織においては「悪い情報」を生んでいる事態に対処し組織目標を達成する必要があるため、本研究の論点は、組織的沈黙が生じないようマネジメントの立場から行える要因を検討するという視点に立った、実務家に対する実践的な示唆の提供を企図するものである。本年度実施した事前調査では、次年度に実施予定のインターネットを通じた質問票調査を用いた。データの集計等は本年度内に完了していないものの、1,253サンプルを得ることができた。なお、質問票作成にあたっては研究者との検討を行い、また実務家に対して質問内容の妥当性や表現の適切さなどを確認している。また、回答率や回答者の分布など、インターネット調査実施時の特性を確認できたことで、この一連の事前調査を通じて、次年度に実施する本調査に向け研究が進捗している。本研究では、組織目標の達成や事業活動に困難をきたす事態が事業組織内の通常業務で生じた場合に、その「悪い情報」が上司へ伝達されるか否かという問題に注目している。本年度の研究実績は、大きく分けて2つある。第1に、昨年度実施した事前調査で得られたデータから、非常時におけるコミュニケーションに対して、平時の組織的特徴が影響を及ぼしていることが示唆されたことである。具体的には、東日本大震災という非常時に組織で発生した「悪い情報」の伝達について、震災1年後に当時を振り返るかたちで質問票調査を実施した結果、情報伝達に係る規則を平時において守る組織ほど、非常時おける提言が消極的になる傾向がみられた。この傾向は、情報伝達ルールが遵守される組織に所属する個人ほど所属組織に対するコミットメントが弱くなり、その結果として積極的な提言が非常時なされなくなるという間接的な関係も見られた。また、情報伝達ルールを守る組織ほど情報発信時に伝えられる内容に配慮がなされるという特徴が見られた。第2に、今年度実施した質問票調査から、どのような問題がより重大な「悪い情報」だと認識されるのかによって、事態への対処に向けた積極的な提言を促進する要因が異なることが示唆されたことである。具体的な一例を挙げれば、社外秘紛失と他部署との調整失敗という2つの「悪い情報」に対して、前者の方がより重大だと認識している場合には、組織内での手順が定められている(公式化の程度が高い)ほどより積極的に提言がなされる傾向が見られる。しかしながら、後者の方がより重大だと認識している場合にはそのような関係は見られない。問題に対する認識の形成には組織内の担当業務内容が多分に寄与することから、ここで示された関係は、第1の点と合わせて、「組織的沈黙」を生じさせずに組織内の積極的な提言促進を企図する実務家に対する実践的な示唆になると考えられる。本研究課題では質問票調査を通じた実証研究を行うため、平成23年度はその事前調査を行い、想定よりも多くの回答者を得る方法で実施することができた。研究が学術的にも、そして実践的にも意義深いものであるためには、より論点を明確にしていく余地は残るものの、研究全体としては平成23年度の当初研究計画通りにおおむね研究が進んでいる。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度に実施した事前調査の結果を十分に考祭した上で、平成24年度上半期中に本調査を実施する予定である。本研究課題は平成24年度が最終年度であるため、調査結果の分析に早期に取り掛かり、その結果を学術論文としてまとめていく。
金属錯体をゲスト、液晶・無機層状物質をホストとするホスト・ゲスト化合物の創製

本研究は通常剛直な構造を持つ金属錯体を用いて、柔軟構造を持つ分子集合体を構築する事を目的とし、以下に示す2つのアプローチを行った。1つはキラルな錯体をゲストと捉え、液晶物質と組み合わせる手法である。ネマチック液晶はキラルな物質のドーピングにより、らせん構造へと変化する事が知られている。液晶との親和性を持つ長鎖アルキル基を導入したキラルRu(III)錯体を新規に合成したところ、結果予想通りにらせん構造が誘起されただけでなく、らせん誘起能力は180と当時知られていたキラル物質の中で最高値を示した。さらに光照射により可逆的にcis-trans異性を行うアゾベンゼンを配位子に持つRu(III)錯体を用いて、光照射によるらせん長の制御も試みた。その結果液晶中にわずか1%存在するRu(III)錯体の光異性化によってらせんの伸縮が効率的に起きる事を確認した。2つ目は金属錯体をホストとするアプローチである。通常は液相で行われる金属イオンと配位子の自己集合を固相で誘起する事を試み、3-cyano-pentane-2,4-dioneとM(OAc)2・nH2O(M=MnII,FeII,CoII,NiII,CuII,ZnII,CdII)の固体混合物から、固相反応によって配位高分子が構築できる事を見い出した。また、固相における、単核錯体と配位高分子間の可逆的な構造変換や、配位高分子の構造変換が進行する事例も見出した。以上の結果は"剛い"金属錯体も弱い相互作用によって集積する事で、その構造に柔軟性を付与できる事を示している。本研究では、ゲスト分子とホストの2成分を含む超分子集合体を構築し、ゲストあるいはホスト単独では発生しえない機能の発現を目指している。本年度はホストとしてよく知られた粘土鉱物を薄膜化し、その薄膜上に両親媒性Ru(II)錯体を規則配列化に関する研究を遂行した。LB法を用いて、陽イオン性かつ両親媒性のRu(II)錯体単分子膜と陰イオン性粘土鉱物単一シートを規則配列できることをAFM、SEM観察及び電気化学測定から確認した。さらに膜作成時の粘土粒子の濃度によって、錯体粘土ハイブリッド膜におけるパッキングを制御できる事が分かった。最も密な膜ではRu(II)由来の酸化還元応答が失活したことから粘土薄膜は電子移動を阻害すると結論付けられた。これは粘土鉱物単一シートが、厚さ1nm程度のフィロシリケート構造である事を考えれば妥当な結果といえる。一方、亜硝酸イオンを加えた状態で電気化学測定を行った場合には、Ru(II)の酸化還元応答が見られた。これは亜硝酸イオンが還元剤として働く事で、粘土シートを通した電子移動が可能となった事を意味している。さらに構造中にCo(II)を含む粘土鉱物を用いた場合にも、Co(II)、Ru(II)間の電子リレーが見られた。これらの結果は通常絶縁体とされる粘土鉱物も単一層まで剥離すれば、環境によっては電子を通しうる事を意味している。本研究結果は学術論文として報告した(Yoshida Jun et al. Langmuir 2006,9591)。昨年度は金属錯体(ゲスト)と無機層状物質である粘土鉱物(ホスト〉との複合化、及びその電気化学特性について明らかにした。本年度は1)新たな金属錯体型ホストの構築、及び2)金属錯体型ソフトマテリアルの開発、という2点に関する研究を遂行した。以下それぞれについて述べる。まず1)に関しては、金属錯体型分子をビルディングブロックとして配位高分子を構築する手法を試みた。具体的には、平面型bis・beta-diketonate Co(II)錯体とterpyridine型Ni(II)錯体を用いた。前者は金属イオン的な直線型素子として、後者は直線配位子として機能する。これらの組み合わせにより、1次元鎖構造を持つ錯体を合成した。この1次元鎖の積層構造はビルディングブロックを交換する事で制御する事ができた。錯体としてCo(hfac)2を用いた場合には井桁型に1次元鎖が組みあがり、その井桁の隙間中には[Co(hfac)3]-錯体がゲスト分子として取り込まれた。さらに、このゲスト錯体は自然分晶を示し、デルタ体、ラムダ体が3:1の比で存在した。これは、ビルディングブロックを交換する事で、一次元鎖の配列、さらにはゲスト分子の配列までを制御できた系として極めて興味深いものである。次に2)であるが、錯体分子の集合体を構築する過程で、一部のオリゴピリジン配位子から成る錯体がゲル化する事を見出した。通常ゲルとは高分子鎖のからみあいによるものと理解されているが、今回我々が見出した系は金属錯体が非常に弱い相互作用により擬似的なポリマー構造を作りゲル化したものと理解できる。現在はこの機構解明に向けて合成的なアプローチと物理化学的なアプローチを平行して進めている。

液晶との親和性を持つ長鎖アルキル基を導入したキラルRu(III)錯体を新規に合成したところ、結果予想通りにらせん構造が誘起されただけでなく、らせん誘起能力は180と当時知られていたキラル物質の中で最高値を示した。さらに光照射により可逆的にcis-trans異性を行うアゾベンゼンを配位子に持つRu(III)錯体を用いて、光照射によるらせん長の制御も試みた。その結果液晶中にわずか1%存在するRu(III)錯体の光異性化によってらせんの伸縮が効率的に起きる事を確認した。2つ目は金属錯体をホストとするアプローチである。通常は液相で行われる金属イオンと配位子の自己集合を固相で誘起する事を試み、3-cyano-pentane-2,4-dioneとM(OAc)2・nH2O(M=MnII,FeII,CoII,NiII,CuII,ZnII,CdII)の固体混合物から、固相反応によって配位高分子が構築できる事を見い出した。また、固相における、単核錯体と配位高分子間の可逆的な構造変換や、配位高分子の構造変換が進行する事例も見出した。以上の結果は"剛い"金属錯体も弱い相互作用によって集積する事で、その構造に柔軟性を付与できる事を示している。
金属酵素の反応機構解析の簡易化

セラチア菌からの分泌されるセラチアプロテアーゼは,抗炎症性などの薬理作用を持つ亜鉛金属蛋白質分解酵素である。触媒活性部位の亜鉛からの異常分散効果を利用するX線構造解析により,申請者らは立体構造を明らかにしていたが,さらに2.0Å分解能で構造の精密化を行った。その結果,亜鉛イオンはC末端ドメインの大きく,深い溝の底の位置しており,His176,HiS180,HiS186,Tyr216それに水分子が歪んだ三方両錐型で結合していた。その水分子はGlu177と水素結合していた。X線結晶構造解析に利用する波長領域では,CaのX線異常分散効果は非常に小さいために利用されていなかったが,高エネルギー物理学研究所放射光施設にて,波長1.283Åで測定した回折強度データのバイフット差フリエ-合成を行うことで容易にできるようにし,セラチアプロテアーゼには少なくとも4つのCa^<2+>が結合していることを明らかにした。これにより,セラチアプロテ-ゼで初めて見いだされβ-シートコイルと名付けられたまったく新規なモチーフ構造の形成にCa^<2+>イオンが不可欠であることを明らかにした。また,Caからの異常分散効果が大きな波長1.500Åでも,既に回折強度を測定を行い,解析は現在進行中である。セラチアプロテアーゼ結晶から亜鉛金属を除いたアポ酵素結晶は10mM_EDTAを含む35%飽和硫酸アンモニウム溶液(pH5.2)に4°C,6日間侵漬することで調製でき,これを2mM_MnCl_2を含む35%飽和硫酸アンモニウム溶液に2日間侵漬することでハロ酵素に変換できた。しかし,この調製では,大量の結晶がいること,長時間の保存に適さないことが判明した。そこで,溶液状態でハロ酵素に変換する方法を確立し,現在結晶化を試みている。なお,結晶化は本研究費で購入した恒温装置の使用で,安定して作成,保存ができるようになった。
感情障害におけるエンドルフィン作動系の関与

感情障害の成因仮説としてアミン仮説, GABA仮説などが提唱されているがなお多くの矛盾を含み意見の統一をみていないのが現状である.うつ病者では身体的不快感,痛みを訴えることは多い.抗うつ薬は鎮痛作用を有し,強い抑うつ症状に適用される電気ショック療法はエンドルフィン作動系を賦活する.このような事実はうつ病におけるエンドルフィン作動系の変異を推察させる.本研究では感情障害におけるエンドルフィン作動系の関与を明らかにするためにイミプラミン(IMI),クロジプラミン(CLO),シアンセリン(MIA)のラット脳内エンドルフィン作動系への影響を検討した.その結果1.IMI急性投与により前頭葉皮質,大脳辺縁領域,線条体,海馬,視床下部でメチオニンエンケファリン免疫活性(Met-Enk-Imm)に変化はなく視床で増加した.2.40日間にわたる経口的慢性投与実験において(1)痛覚閾値は投与開祖11日目までは上昇していたが,長期投与では閾値上昇は消失しCIOではむしろ低下した.(2)Met-Enk-Immは前頭葉皮質で変化しなかったが辺縁領域,線条体ではCLO, MIAの投与で有意に減少し, IMIでも減少傾向を認めた.海馬では反対にCLO,MIAの投与で有意な増加を認めた. (3)オピオイド受容体,前頭葉皮質の^3H-DAGO,^3H-DADLE結合はほとんど変化しなかったが辺縁領域の^3H-DAGO,^3-DADLE結合は抗うつ薬大量投与で有意に減少した.線条体のそれらもIMIおよびMIA投与で減少した.IMI投与ラットの線条体のμ-およびδ-受容体結合量の減少はScatchard解析からBmaxおよびKdが共に変化することが推察された.以上の所見は抗うつ薬慢性投与は大脳辺縁領域および線条体のμおよびδオピオイト作動系の機能低下をもたらし,海馬のエンドルフィン作動系に対しては逆方向に作用している可能性を示唆する. D_2受容体の特異的遮断薬であるsulpinideの少量投与は抗うつ作用を示す事からDAとコレシストキニンの関連について検索している.感情障害の成因仮説としてアミン仮説, GABA仮説などが提唱されているがなお多くの矛盾を含み意見の統一をみていないのが現状である.うつ病者では身体的不快感,痛みを訴えることは多い.抗うつ薬は鎮痛作用を有し,強い抑うつ症状に適用される電気ショック療法はエンドルフィン作動系を賦活する.このような事実はうつ病におけるエンドルフィン作動系の変異を推察させる.本研究では感情障害におけるエンドルフィン作動系の関与を明らかにするためにイミプラミン(IMI),クロジプラミン(CLO),シアンセリン(MIA)のラット脳内エンドルフィン作動系への影響を検討した.その結果1.IMI急性投与により前頭葉皮質,大脳辺縁領域,線条体,海馬,視床下部でメチオニンエンケファリン免疫活性(Met-Enk-Imm)に変化はなく視床で増加した.2.40日間にわたる経口的慢性投与実験において(1)痛覚閾値は投与開祖11日目までは上昇していたが,長期投与では閾値上昇は消失しCIOではむしろ低下した.(2)Met-Enk-Immは前頭葉皮質で変化しなかったが辺縁領域,線条体ではCLO, MIAの投与で有意に減少し, IMIでも減少傾向を認めた.海馬では反対にCLO,MIAの投与で有意な増加を認めた. (3)オピオイド受容体,前頭葉皮質の^3H-DAGO,^3H-DADLE結合はほとんど変化しなかったが辺縁領域の^3H-DAGO,^3-DADLE結合は抗うつ薬大量投与で有意に減少した.線条体のそれらもIMIおよびMIA投与で減少した.IMI投与ラットの線条体のμ-およびδ-受容体結合量の減少はScatchard解析からBmaxおよびKdが共に変化することが推察された.以上の所見は抗うつ薬慢性投与は大脳辺縁領域および線条体のμおよびδオピオイト作動系の機能低下をもたらし,海馬のエンドルフィン作動系に対しては逆方向に作用している可能性を示唆する. D_2受容体の特異的遮断薬であるsulpinideの少量投与は抗うつ作用を示す事からDAとコレシストキニンの関連について検索している.内因性うつ病者では侵害刺激に対する痛み閾値が高く、また三環系抗うつ薬は鎮痛作用を有する。このような所見は内因性うつ病の成因に脳内エンドルフィンおよびその受容体の機能異常が関与していることを示唆する。本研究ではラットを用いて三環系および四環系抗うつ薬のエンドルフィン作動系への影響をin vitroおよびin vivoで検討した。1.抗うつ薬のオピオイド受容体にたいする【IC_(50)】イミプラミン,クロミプラミン,デシプラミン,トリミプラミン,アミトリプチリン,マプロチリン,シメリジの【^3H】-DAGO結合(μ受容体)に対する【IC_(50)】は【10^(-5)】Mであり、【^3H】-DADLE結合(δ受容体)【IC_(50)】は【10^(-4)】【10^(-5)】Mであった。

2.イミプラミン急性投与実験、イミプラミン10mg/kg,20mg/kgの腹腔内投与で前頭葉皮質,大脳辺縁領域,線条体のメチオニンエンケファリン免疫活性(Met-Enh Imm.)に変化はなかった。3.抗うつ薬慢性投与実験imipramine(IMI)0.025%,0.1%、clomipramlne(CLO)0.025%,0.1%、mianserin(MIA)0.02%0.08%を含む固型飼料を40日間ラットへ投与した。(1)痛覚閾値への影響、Hotplate testによる痛覚閾値は投与11日目にはIMI,CLO,MIAの全群で上昇した。しかし39日目には閾値の上昇はなく、むしろCLOで低下した。(2)Met-Enk Imm.辺縁領域,線条体のMet-Enk ImmはCLO,MIAの少量,大量投与で減少した。IMIも線条体Met-Enk Immを減少した。(3)オピオイド受容体、辺縁領域ではIMI,CLO,MIAの大量投与で【^3H】-DAGO,【^3H】-DADLE結合は有意に減少した。線条体の【^3H】-DAGOおよび【^3H】-DADLE結合もIMI投与で減少し、MIA少量投与でも減少した。前頭葉皮質【^3H】-DAGO結合もIMI少量投与で減少した。以上の結果は抗うつ薬長期投与が大脳辺縁領域および線条体のμ-およびδ-オピオイド作動系の機能低下をもたらすことを示している。このことはうつ病においては脳内エンドルフィン作動系が過活動状態にあることを間接的に示唆している。