hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
食事及び血清脂質の脂肪酸組成と抑うつに関する職域疫学研究

本研究の目的は、n3系多価不飽和脂肪酸を豊富に含む魚を多食する日本人において、食事摂取および血清の脂肪酸組成と抑うつとの関連を明らかにすることである。対象は500名余の職域集団である。脂肪酸摂取量の推定には妥当性が検証されている食物摂取頻度調査票を、またメンタルヘルスの評価には国際的に用いられているGeneral Health Questionnaire及びCencer for Epidemiologic Studies DepressionScaleを用いた。交絡要因として、職場ストレスを含む事項についても尋ねた。健康診断項目として別途得られている生活習慣や検査結果などのデータを健康診断実施機関より入手した。血清中の脂質をFolch法にて抽出した後、薄層クロマトグラフィーにて遊離脂肪酸分画を分離し、ガスクロマトグラフィーで測定した。データを分析したところ、食事摂取からの脂肪酸との関連では、統計的に有意ではなかったものの、n3系多価不飽和脂肪酸の一種であるα-リノレイン酸の摂取量が多い群で抽うつ症状が少ない傾向がみられた。血清中の脂肪酸組成との関連ではα-リノレイン酸(組成割合)と抑うつ症状(特に日本人用の抑うつ判定基準を用いた場合)との統計学的に有意な負の関連を認めた。DRA・EPAといった他のn3系多価不飽和脂肪酸や、n6系多価不飽和脂肪酸との関連は認めなかった。その他、男性では葉酸摂取が抑うつ症状と予防的に関連していることを見出した。今回の職域疫学研究から、脂肪酸組成が抑うつと予防的に関連していることを示唆するデータが得られた。一般集団において血清中の脂肪酸組成を測定し抑うつとの関連を調べた研究は日本では始めてであり、食生活改善によるうつ病予防の可能性を支持する疫学的知見を提供した。食事からの脂肪酸の摂取及び血清中の脂肪酸分画と抑うつ状態との関連を明らかにすることを目的に、職域疫学調査を実施した。調査は、福岡県内の2つの公務事業場において、健康診断の実施にあわせて行った。事前に依頼書・調査票・同意書を配布し、記入の上、健康診断会場に持参してもらった。健康診断会場にて調査担当員が記載内容及び同意の確認を行った。所属職員の90%に相当する541名から研究参加の同意を得た。脂肪酸組成分析用に協力者から提供を受けた静脈血7mlについては、遠心分離器後、血清を-80°Cで保管した。一部の検体(130名分)について、血清中の脂質をFolch法にて抽出した後、薄層クロマトグラフィーにて遊離脂肪酸分画を分離し、ガスクロマトグラフィーで測定した。この作業は、測定担当者にメンタルヘルスの状態を知らせず行った。上記の調査票及び血液分析から得られたデータには調査に固有な識別番号を付与し、この番号によって全データを連結した。はずれ値や論理的整合性を確認した。予備的な検討により、ある種の血中脂肪酸組成が抑うつと関連することを示唆するデータを得た。脂肪酸摂取量の推定には妥当性が検証されている食物摂取頻度調査票を、またメンタルヘルスの評価には国際的に用いられているGeneral Health Questionnaire及びCenter for Epidemiologic Studies DepressionScaleを用いた。

データを分析したところ、食事摂取からの脂肪酸との関連では、統計的に有意ではなかったものの、n3系多価不飽和脂肪酸の一種であるα-リノレイン酸の摂取量が多い群で抑うつ症状が少ない傾向がみられた。血清中の脂肪酸組成との関連ではα-リノレイン酸(組成割合)と抑うつ症状(特に日本人用の抑うつ判定基準を用いた場合)との統計学的に有意な負の関連を認めた。DHA・EPAといった他のn3系多価不飽和脂肪酸や、n6系多価不飽和脂肪酸との関連は認めなかった。その他、男性では葉酸摂取が抑うつ症状と予防的に関連していることを見出した。今回の職域疫学研究から、脂肪酸組成が抑うつと予防的に関連していることを示唆するデータが得られた。一般集団において血清中の脂肪酸組成を測定し抑うつとの関連を調べた研究は日本では始めてであり、食生活改善によるうつ病予防の可能性を支持する疫学的知見を提供した。
耐熱性分子複合材料の創製研究

ベンゾオキサジンの一次構造とその熱的特性、機械的特性等の関係を明らかにし、スペーサーの電子的効果が開環重合性に影響を及ぼすことを明らかにした、また、ジアミノ化合物とビスフェノール類から新規熱硬化性樹脂の高分子型ベンゾオキサジンを開発した。さらに、ポリイミドとベンゾオキサジンの複合材料は新規な複合材料であり、組成と熱機械的特性の相関関係を明らかにする目的で研究を行った。本複合材料は、両材料の相溶性が高く加熱によりポリイミドマトリックス中でベンゾオキサジンの重合反応が進行し、セミIPN様特性を有する強靭な複合フィルム材料となることが明らかとなった。また、側鎖にフェノール性水酸基を導入したポリイミドは、ベンゾオキサジンの反応触媒能も有することを証明した。1.新規熱硬化性樹脂および新規高分子量ベンゾオキサジンの合成と特性に関する研究芳香族ビスフェノール類から誘導されるベンゾオキサジン類の反応性とスペーサー構造の関係についてDSC測定による速度論的研究の結果、電子吸引性スペーサーを有するベンゾオキサジンは、低温で反応が起こるが、開環重合全体の活性化エネルギーは大きくなる。これは、ベンゾオキサジン環の壊裂と付加重合にスペーサー基の電子的影響が関与していることに起因している。重合物のガラス転移温度は、架橋密度が高い材料ほど高くなる傾向を示した。また、芳香族ジアミン類を原料に新規二官能性ベンゾオキジン4種を合成し、反応性と重合物の熱機械的特性の研究を行い、ビスフェノール類から合成される二官能性ベンゾオキサジンよりも高い熱分解温度を有していた。これは、架橋構造の違いに起因していると考えられる。芳香族ジアミン、芳香族ビスフェノール類から新規高子分子量芳香族ベンゾオキサジンを2種合成し、これらの反応性、架橋反応物の熱機械的特性について研究を行った。構造中に含まれるベンゾオキサジン環は、理論量の2025%で平均分子量は10,000程度であった。また、DSCの結果から架橋反応は二官能性ベンゾオキサジンよりも高い温度で進行し、反応物は、二官能性ベンゾオキサジンよりも高い熱分解温度を示した。また、これらは、膜形成が可能で、これは高分子量化による結果であると考えられる。2.分子複合材料の基礎的研究耐熱高分子材料である芳香族ポリイミドとシリカのナノ分散コンポジットの合成方法として、事前にアルコキシシランを部分加水分解させたゾル中で、ポリアミック酸重合する方法により、数100nmレベルでシリカ分散したポリイミド膜材料が生成可能であることを見出した。本法によるコンポジットは、ポリイミド構造中の極性基とシリカ表面が強い相互作用を起こすことにより、ナノ分散が達成されているものと考えられる。1.高分子型ベンゾオキサジンの創製研究ジアミノ化合物とビスフェノール類から次の反応が進行し、高分子型ベンゾオキサジン(以下高分子型BXZ)の合成が可能なことを昨年報告した。今年度は、新たに多環芳香族系ジアミン原料と芳香族ビスフェノールから誘導される2種の新規高分子型BXZを合成し、これらのBXZ環導入率、開環反応温度、硬化物の熱機械特性について評価を行った。^1H-nmrによる解析の結果、BXZ環は1920mol%の導入率で、DSC測定結果から開環重合反応は、170250°Cで起こることが明らかとなった。また、動的粘弾性測定の結果、架橋密度は2.47[×1000mol/m^3]で、ガラス転移温度は130150°Cという特性を示した。2.ポリイミド分子複合材料の創製ポリイミドと二官能性BXZの複合材料は、新規な複合材料であり、これらの複合組成と熱機械的特性の相関関係を把握する目的で研究を行った。ポリイミドと二官能性BXZは、フィルム化が可能で、両材料の相溶性が高いため、BXZ添加量にほぼ比例してガラス転移温度が低下する。これを加熱するとポリイミドマトリックス中でBXZの重合反応が進行し、ガラス転移温度は上昇する。従って、ホットメルト型の成型が可能である。また、BXZの反応後は、セミIPN様特性を示し400°C以上でも可塑化せずに弾性率を有するため、強靭な複合フィルム材料が得られることが明らかとなった。さらに、ポリイミド側鎖にフェノール性水酸基を導入することによりBXZの反応触媒としての機能付与が可能であり、BXZとの架橋反応を起こさせることも可能であることを明らかにした。3.アルキレン鎖をスペーサーに有する新規二官能性ベンゾオキサジンの開発

スペーサーとして、-C(CH_3)_2-, -CH_2-, -O-, -S-など、単元素を有したBXZは、従来報告されている。これらは、開環重合後の成型体のガラス転移温度は200°C以上で高い耐熱性を示すが、可とう性に乏しくなることが知られている。本研究において、BXZに可とう性を付与する目的で、ソフトセグメント鎖として、アルキレン鎖を分子内に有する新規なアミド結合含有BXZの合成に成功した。
酒類メーカーを交えたアルコール関連問題の予防と低減に向けた対策の検討

本研究では成人男女1800名を対象に、酒類メーカーを含めたアルコール関連問題の予防と対策に向けた取り組みの認知度や望ましい対策等を尋ねる包括的な調査を実施した。酒類メーカーの取り組みの認知度は1割未満、医療・行政・自助グループの取り組みでは2割未満であり積極的な啓発や取り組みが必要であると考えられた。そして、マーケティングの規制や酒税の値上げといった取り組みは、意見が分かれており今後の慎重な議論を要すると思われた。また、対象者のおよそ1割が何らかの飲酒の問題を抱え、精神的健康状態が懸念される者が存在すること、依存症者に対するステレオタイプや誤った認識がもたれていることが確認された。本研究の目的は、アルコール関連問題の予防と低減に向けて、酒類メーカーに期待される役割や方向性を含めて、効果的な介入策を検討することである。平成26年度は、アルコール健康障害対策基本法の認知および、不適切な飲酒による障害に対する認識について予備的データを収集する目的で、対人援助の活動に従事する63名の協力を得て質問紙調査を実施した。その結果、平成26年6月に施行された基本法の認知度は23.8%であった。また対人援助に関わる資格の有無別で見た認知度では、資格を持つ援助職で50%、資格を持たない援助職で11.6%であり、有意差が認められた。不適切な飲酒による障害に対するイメージでは、「責任は本人にある」「飲酒そのものが悪いことではない」が49.2%、「医療を含めた支援体制が不十分」が38.1%、「罰則を強化すべき」が19.0%、「酒類の販売や広告を規制すべき」が12.7%であった。資格の有無別で見ると、「医療を含めた支援体制が不十分」は、資格を持つ援助職において回答割合が高く、「責任は本人にある」「罰則を強化すべき」は、資格を持たない援助職において回答割合が高かった。これらの結果から、今後もアルコール関連問題の適切な知識と予防に関する啓発を推進していくことの重要性が示唆された。また、罰則や酒類メーカーに関係する規制の強化を望む割合は高いとは言えず、それらがアルコール関連問題の予防となりうるのかどうかを慎重に検討していく必要があると思われる。本研究の目的は、アルコール関連問題の低減に向けて、酒類メーカーに期待される役割も含めて、効果的な介入策を検討することである。昨年度の調査からは、不適切な飲酒に関するイメージに関して、資格を持った援助職においては「医療を含めた支援体制が不十分」、資格を持たない援助職では「責任は本人にある」「罰則を強化すべき」という回答割合が高かった。これらの結果から、関係機関の連携の強化の検討や、罰則や規制強化がアルコール関連問題の予防になりうるかどうか検討する必要があることが示唆された。本年度は自助グループ関係者から上記について情報収集を行った。その結果、アルコール健康障害対策基本の施行に際して自助グループの果たす役割は小さくないこと、相談支援、社会復帰支援、民間段代の活動の支援といった三次予防が活動の主要部分となること、行政との共催事業には積極的に自助グループの機能や役割を説明し、体験的知識として伝えていくことが大切であることなどが挙げられた。罰則や規制の強化に関しては、その効果に関しては不明な部分もあるが、酒類メーカーの取り組みを尊重し、また連携しながらアルコール関連問題予防のために必要と思われることを発信していくことが大切であることが示唆された。予定していた関係機関の一部から情報収集を実施することができた。一方でアルコール関連問題に関する意識調査は研究期間や予算の都合もあり実施することができなかったため。わが国におけるアルコール消費は、その文化的背景から伝統文化として後世に伝承していくものであると同時に、日常生活に適度な潤いを与えてくれているのは紛れもない事実である。ただし不適切な飲酒が多様な問題を引き起こすことは、すでに多くの研究において繰り返し指摘されてきた。本研究では、飲酒量と健康調査に加えて、アルコール関連問題に対する意識や態度、酒類メーカーを踏まえた予防と対策に関する様々な取り組みの認知度や意見を尋ねる包括的な調査を実施し、アルコール関連問題の予防と低減に向けた基礎資料とすることを目的とした。本研究では成人男女1,800名を対象に、飲酒頻度と飲酒量を尋ねた健康調査に加えて、飲酒に対する態度やイメージ、飲酒に待つわる体験、アルコール関連問題の予防と対策に向けた取り組みの認知度や望ましい対策等についてインターネット調査を用いて尋ねた。本研究の結果から、何らかの飲酒の問題を抱え、精神的健康状態が懸念される対象者が一定数存在すること、飲酒に対する寛容さやハラスメントにつながりかねない危うさ、依存症者に対するステレオタイプや誤った認識がもたれていることが予想された。アルコール関連問題の予防に向けては、既存の取り組みの充実が望まれているいっぽうで、マーケティングや酒税の値上げといった取り組みは、今後の慎重な議論を要すると思われた。また酒類メーカーによる取り組みや、医療、行政、自助グループといった社会資源に関する認知度は概して高いとはいえず、効果的かつ積極的な啓発や取り組みが必要であると考えられた。

また、対象者のおよそ1割が何らかの飲酒の問題を抱え、精神的健康状態が懸念される者が存在すること、依存症者に対するステレオタイプや誤った認識がもたれていることが確認された。当初の研究計画では、平成26年度に酒類メーカー関係者に対して、アルコール関連問題対策においてどのような役割を果たしているのか、今後どのような役割を果たすことができるのかその可能性等について面接調査を実施する予定であったが、アルコール健康障害対策基本法が施行された中で、関係機関の業務が多忙を極めており、その中で調査への協力を依頼することは適切ではないことが分かった。しかしながら、当初計画が停滞した場合の対応案として検討していた質問紙調査によって、アルコール関連問題が社会の中でどのように認識されているのかを予備的に検討することができた。したがって、当初の計画よりも「やや遅れている」状況となった。酒類メーカにおけるアルコール関連問題対策の現状や今後の方向性について、酒類メーカー関係者から情報収集を行う。またアルコール関連問題に関する意識調査も予定している。3年間に渡って得られた結果をもとに、アルコール関連問題の予防に向けて総合的な考察を行う。社会心理学今後はWebによるアンケート調査を行い、アルコール関連問題の予防のために酒類メーカーに期待する役割や必要な取り組みについて、各属性や飲酒習慣や酒害経験の有無別等との関連を検討する予定である。この調査により、アルコール関連問題への社会的認識や対策を円滑にかつ広域的に進める上での課題が明確になると考えられる。また、自助グループ、酒類メーカー等への研究協力依頼および情報共有を継続して行い、次年度調査に向けての基盤づくりを進める。関係機関からの必要な情報収集に応じて研究費を執行したが、当初予定していた質問紙調査を実施する必要額が不足する事態となったため、次年度に繰り越して使用する研究費が生じた。当初計画していた面接調査から、計画が停滞した場合の対応案として検討していた質問紙調査を実施することとなり、その必要に応じて研究費を執行したため次年度に使用する研究費が生じた。次年度の研究費と合わせて、調査実施に際しての委託費、関係機関との情報収集や学会参加費用等に使用する予定である。次年度の研究費とあわせて、調査実施に際しての各委託費、関係機関との情報収集や学会発表参加費用などに使用する予定である。
CampylobacterとSalmonellaのニワトリ腸内定着因子の研究

Hepー2細胞では2×10^5/mlの細胞液をチャンバ-スライドグラスに培養し,十分発育したところで3×10^8コのCampylobacter,Salmonellaを接種して,CO_2インキュベ-タ-で培養した。Campylobacterは約6時間,Salmonellaは約1時間培養後,付着していない菌を洗浄し,メタノ-ルで固定後ギムザ染色と銀染色で付着を確認した.その結果,このアッセイ系では,細胞条件や培養条件で結果が一定しないものが多く,菌株による比較までにはいたらなかった。一方,INT407を用いた系では,Hepー2とほぼ同様のスケジュ-ルで,細胞及び菌を培養し,Campylobacterは56時間,SalmonellaとE.coliは1時間,細胞と菌を混ぜて培養後,SEMでの観察と,細胞付着生菌の培養により,付着を確認した。その結果,下痢患者より分離した5/21株で付着がみられ,細胞1個あたり1020コの生菌が培養された。また,健康な動物より分離された4株では,全て付着がみられなかった。Salmomellaはニワトリより分離された株では付着がみられたが,大腸菌は健康成人より分離したものは全て付着したが,健康動物より分離したもでは,付着がみられなかった。INT407細胞を用いた糖質や糖鎖切断酵素による付着阻止試験を行なったが,現在までのところ付着を阻止する糖質,酵素はみつかっていない。今回の研究で,in vitroの付着の評価系が確立できたものと考える。
VEGF/flt系を標的としたヒト生理活性物質による食道癌のターゲット療法の開発

血管新生抑制を利用した食道癌のターゲット療法開発のために血管新生促進効果のある増殖因子受容体系すなわちVEGF-RNaseを用いたVEGF/flt系を当初計画したが,遺伝子工学的にFGF-RNaseの作成に成功したのでこのFGF/FGFR系で検討した.FGF-RNasefused proteinを岡山大学工学部より供与を受けて血管新生阻害効果を検討した.同proteinは大腸菌で発現させ,インクルージョンボディーから可溶化・リフォールディングの後精製して得た.新鮮ヒト臍帯動脈切片培養法による検討:臍帯動脈切片はヘパリン結合セファロースカラム処理によりFGFを含むヘパリン結合性増殖因子を除去した20%FCS添加Medium199で培養し,FGF-RNase fused proteinを各種濃度で投与し,新生血管を位相差顕微鏡下に観察してNIHimageを用いて画像解析した.FGF-RNasefused proteinを0,100,200,300ug/0.5ml/well添加条件下で新生血管指数はそれぞれ3.2,2.7,2.0,0.3となり濃度依存的に血管新生抑制効果が認められた.一方,RNase単独やFGF単独,RNaseとFGFの混合では抑制効果は認められなかった.以上の結果からこの抑制結果は血管内皮上のFGF受容体を介する効果であると考えられた.家兎角膜法による検討:FGF2ug投与により安定した血管新生誘導系を確立し,さらにFGF-RNase fused protein 32ug含有メチルセルロースディスク法で完全な血管新生抑制を認めた.SCIDマウス移植腫瘍での検討:A431細胞をSCIDマウス皮下に移植し,移植腫瘍辺縁にFRFPを移植日より3週間連日1.45mg局注した.control群にはPBSを同様に投与した.連日腫瘍径を測定し推定腫瘍重量(W(mg)=0.5×LS;L(長径)S(短径))を算出し検討した.3週目の推定腫瘍重量はcontrol群3629.6±794.9(mg),FRFP投与群2420.9±401.4(mg)であり明らかな腫瘍増殖抑制効果を認めた.また死亡例はなく,体重の減少を含めて両実験においてこの濃度範囲での毒性は認められなかった.FGF-RNase fused proteinはA431細胞移植可スキッドマウスの腫瘍増殖を抑制したことより.新しい腫瘍血管新生抑制剤になる可能性が示唆された。また食道癌における新生血管の臨床腫瘍学的意義を検討するため,VEGF発現と組織内微少血管密度を測定し,両者が予後因子となることを明らかにした.現在論文投稿中である.血管新生抑制を利用した食道癌のターゲット療法開発のために血管新生促進効果のある増殖因子受容体系すなわちVEGF-RNaseを用いたVEGF/flt系を当初計画したが,遺伝子工学的にFGF-RNaseの作成に成功したのでこのFGF/FGFR系で検討した.FGF-RNasefused proteinを岡山大学工学部より供与を受けて血管新生阻害効果を検討した.同proteinは大腸菌で発現させ,インクルージョンボディーから可溶化・リフォールディングの後精製して得た.新鮮ヒト臍帯動脈切片培養法による検討:臍帯動脈切片はヘパリン結合セファロースカラム処理によりFGFを含むヘパリン結合性増殖因子を除去した20%FCS添加Medium199で培養し,FGF-RNase fused proteinを各種濃度で投与し,新生血管を位相差顕微鏡下に観察してNIHimageを用いて画像解析した.FGF-RNasefused proteinを0,100,200,300ug/0.5ml/well添加条件下で新生血管指数はそれぞれ3.2,2.7,2.0,0.3となり濃度依存的に血管新生抑制効果が認められた.一方,RNase単独やFGF単独,RNaseとFGFの混合では抑制効果は認められなかった.以上の結果からこの抑制結果は血管内皮上のFGF受容体を介する効果であると考えられた.家兎角膜法による検討:FGF2ug投与により安定した血管新生誘導系を確立し,さらにFGF-RNase fused protein 32ug含有メチルセルロースディスク法で完全な血管新生抑制を認めた.SCIDマウス移植腫瘍での検討:A431細胞をSCIDマウス皮下に移植し,移植腫瘍辺縁にFRFPを移植日より3週間連日1.45mg局注した.control群にはPBSを同様に投与した.連日腫瘍径を測定し推定腫瘍重量(W(mg)=0.5×LS;L(長径)S(短径))を算出し検討した.3週目の推定腫瘍重量はcontrol群3629.6±794.9(mg),FRFP投与群2420.9±401.4(mg)であり明らかな腫瘍増殖抑制効果を認めた.また死亡例はなく,体重の減少を含めて両実験においてこの濃度範囲での毒性は認められなかった.FGF-RNase fused proteinはA431細胞移植可スキッドマウスの腫瘍増殖を抑制したことより.新しい腫瘍血管新生抑制剤になる可能性が示唆された。また食道癌における新生血管の臨床腫瘍学的意義を検討するため,VEGF発現と組織内微少血管密度を測定し,両者が予後因子となることを明らかにした.現在論文投稿中である.血管新生抑制を利用した食道癌のターゲット療法開発のために血管新生促進効果のある増殖因子受容体系すなわちVEGF-RNaseを用いたVEGF/flt系を当初計画したが,遺伝子工学的にFGF-RNaseの作製に成功したのでこのFGF/FGFR系で検討した.

FGF-RNasefused proteinを岡山大学工学部より供与を受けて血管新生阻害効果を検討した.同proteinは大腸菌で発現させ,インクルージョンボディーから可溶化・リフォールディングの後精製して得た.新鮮ヒト臍帯動脈切片培養法による検討:臍帯動脈切片はヘパリン結合セファロースカラム処理によりFGFを含むヘパリン結合性増殖因子を除去した20%FCS添加Medium199で培養し,FGF-RNase fused proteinを各種濃度で投与し,新生血管を位相差顕微鏡下に観察してNIHimageを用いて画像解析した.FGF-RNasefused proteinを0,100,200,300ug/0.5ml/well添加条件下で新生血管指数はそれぞれ3.2,2.7,2.0,0.3となり濃度依存的に血管新生抑制効果が認められた.現在FGF,RNase,FGFとRNaseの混合体の3条件下に血管新生抑制効果を検討し,fused proteinとの比較実験を行っている.【目的】血管新生を促進する増殖因子受容体のリガンドとしてVEGFを川いる計画であったが、fusion proteinのset upの都合で以下に述べるFGF系を利用したproteinの検討を進めた。17GFを,低免疫原性の殺細胞物質としてヒトRNaseを遺伝子工学的に融合させFGF-RNase fusecl protein(FRFP)を作製し,in vitroにおける血管新生阻害効果を確認し、in vivoにおける腫瘍増殖抑制効果を検討した。【材料と方法】FRFPは大腸菌で発現させ,インクルージョンボディーから可溶化・リフォールディングの後精製したものを用いた。in vivo実験系は,A431細胞をSCIDマウス皮下に移植し,移植腫瘍辺縁にFRFPを移植日より3週間連日1.45mg局注した。control群にはPBSを同様に投与した。連日腫瘍径を測定し推定腫瘍重量(W(mg)=0.5×LS;L(長径)S(短径))を算出し検討した。【結果と考察】3週目の推定腫瘍重量はcontrol群3629.6±794.9(mg),FRFP投与群2420.9±401.4(mg)であり明らかな腫瘍増殖抑制効果を認めた。また死亡例はなく、体重の減少を含めて両実験においてこの濃度範囲での毒性は認められなかった。【結語】FGF-RNasefusecl proteinはA431細胞移植可スキッドマウスの腫瘍増殖を抑制したことより,新しい腫瘍血管新生抑制剤になる可能性が示唆された。
金属/高分子ハイブリットによる光透過電極のワイドポテンシャル化

金や白金などの貴金属薄膜は電極材料として長年使用されてきたが、更に大きな潜在的な機能を有している。電極としての貴金属薄膜の機能を高めるために要求される三つの要素である、電子伝導性、光透過性、基板との密着性を高レベルで実現するための金属/高分子ハイブリッド材料を開発するために、予備的検討で使用していたスパッタ金薄膜を単結晶である蒸着Au(111)に置き換えることを目的に、前年度までにターボ分子ポンプ及び600°Cまで昇温が可能な基板加熱ユニットを装備した真空蒸着装置を導入し、種々の条件下での真空蒸着による金薄膜形成を行い、チャンバーのベーキング時間と基板温度および加熱時間の最適化を図ることで、蒸着条件を検討してきた。蒸着薄膜に電気化学計測および走査型トンネル顕微鏡観察を適用し、(111)配向性とステップおよびテラス構造を確認できる最小膜厚の知見を得るのため、蒸着用真空チャンバーに水晶振動子製膜コントローラーを装着し、蒸着膜の膜厚の最適化を行ったところ配向性および表面の平滑性の維持には少なくとも50nm程度の膜厚が必要であることが判明した。それらの結果を踏まえて厚さが4050nmの(111)配向した蒸着金薄膜を堆積し、エポキシ密着層を用いて石英基板に固定化することで光透過性電極を作製した。本電極を用いて分光電気化学用薄層セルを組立て、紫外・可視分光電気化学測定に供したところ、波長500nm付近を中心として電極材料自体が光の吸収を持つものの、Fe(CN)_6^<2+/3+>の電極反応に対して負の電位印加をした場合420nm付近の光の吸収の減少が明確に検出でき、単結晶電極が光透過性電極として用いることができることを明らかにした。電極としての貴金属薄膜の機能を高めるために要求される三つの要素である、電子伝導性、光透過性、基板との密着性を高レベルで実現するための金属/高分子ハイブリッド材料を開発するために、本年度は以下のことを実施した。予備的検討で使用していたスパッタ金薄膜を単結晶である蒸着Au(111)に置き換えるために、ターボ分子ポンプ及び600°Cまで昇温が可能な基板加熱ユニットを装備した真空蒸着装置を導入し、種々の条件下での真空蒸着による金薄膜形成を行った。チャンバーのべーキング時間と基板温度および加熱時間の最適化を図ることで、蒸着条件を検討した。蒸着薄膜は電気化学計測および走査型トンネル顕微鏡を用いて、(111)配向性とおよそ金原子1個分のステップおよび数100nmに渡るテラス構造をとることを確認した。蒸着用真空チャンバーに水晶振動子製膜コントローラーを装着し、蒸着膜の膜厚を最適化するとともに、高分子とのハイブリッド化をすすめている。電極としての貴金属薄膜の機能を高めるために要求される三つの要素である、電子伝導性、光透過性、基板との密着性を高レベルで実現するための金属/高分子ハイブリッド材料を開発するために、予備的検討で使用していたスパッタ金薄膜を単結晶である蒸着Au (111)に置き換えることを目的に、ターボ分子ポンプ及び600°Cまで昇温が可能な基板加熱ユニットを装備した真空蒸着装置を導入し、種々の条件下での真空蒸着による金薄膜形成を行った。チャンバーのベーキング時間と基板温度および加熱時間の最適化を図ることで、蒸着条件を検討した。

当該年度は蒸着薄膜に電気化学計測および走査型トンネル顕微鏡を用いて、(111)配向性とおよそ金原子1個分のステップおよび数100nmに渡るテラス構造をとる最小膜厚の確認のため、蒸着用真空チャンバーに水晶振動子製膜コントローラーを装着し、蒸着膜膜厚の最適化を行ったところ配向性維持には少なくとも50nm以上の膜厚が必要であることが判明した。金や白金などの貴金属薄膜は電極材料として長年使用されてきたが、更に大きな潜在的な機能を有している。電極としての貴金属薄膜の機能を高めるために要求される三つの要素である、電子伝導性、光透過性、基板との密着性を高レベルで実現するための金属/高分子ハイブリッド材料を開発するために、予備的検討で使用していたスパッタ金薄膜を単結晶である蒸着Au(111)に置き換えることを目的に、前年度までにターボ分子ポンプ及び600°Cまで昇温が可能な基板加熱ユニットを装備した真空蒸着装置を導入し、種々の条件下での真空蒸着による金薄膜形成を行い、チャンバーのベーキング時間と基板温度および加熱時間の最適化を図ることで、蒸着条件を検討してきた。蒸着薄膜に電気化学計測および走査型トンネル顕微鏡を用いて、(111)配向性とおよそ金原子1個分のステップおよび数100nmに渡るテラス構造をとる最小膜厚の確認のため、蒸着用真空チャンバーに水晶振動子製膜コントローラーを装着し、蒸着膜膜厚の最適化を行ったところ配向性維持には少なくとも50nm程度の膜厚が必要であることが判明した。それらを踏まえて厚さが4050nmの(111)配向した蒸着金薄膜を堆積し、エポキシ密着層を用いて石英基板に固定化することで光透過性電極を作製した。本電極を用いて分光電気化学セルを組立て、紫外・可視分光電気化学測定に供したところ、波長500nm付近を中心として強い光の吸収を持つものの、Fe(CN)_6^<2+/3+>の電極反応に対して負の電位印加に対して420nm付近の光の吸収の減少が明確に検出でき、単結晶電極が光透過性電極として用いることができることを明らかにした。
品詞情報・構文情報を持った日本語中規模テキストコーパスの作成

本研究は種々の日本語文章の形態素解析、構文解析を通じて、我々の持っている形態素解析プログラム、構文解析プログラムの改良を行い、これらのプログラムを公開することを目的とした。また同時に,これによって解析され文法情報を自動付与された日本語文章のデータベースを作成し、広く自然言語処理研究者に公開することを目的とした.2年間の研究成果として次のことを達成した.1.形態素解析プログラムJUMANについて,連語処理機能の追加,標準形態素辞書の整備,標準文法辞書の整備を行い,その成果をJUMAN3.0として平成8年10月に一般に公開した.2.構文解析プログラムKNPについて,文法記述の枠組の修正,並列構造解析の強化,従属節のスコープ解析の強化,用言に準ずる種々の表現への対応,など種々の改良・修正を行った.この成果は,KNP2.0として平成9年3月に一般に公開した.3.コーパスに付与する形態素情報,構文情報について基準をまとめ,修正作業者へのマニュアルを作成した.4.コーパスの人手修正をスムーズに行うことができ,またコーパスに対する種々の検索が可能なマンマシンインターフェースを作成した.5.自動付与した情報の人手修正を日常的に行い,平成9年3月末までに「正しい」形態素・構文情報を付与したコーパス,約2万文を作成した.このうち,約1万文は平成9年3月に公開した.本研究は種々の日本語文章の形態素解析、構文解析を通じて、我々の持っている形態素解析プログラム、構文解析プログラムの改良を行い、これらのプログラムを公開することを目的とした。また同時に,これによって解析され文法情報を自動付与された日本語文章のデータベースを作成し、広く自然言語処理研究者に公開することを目的とした.2年間の研究成果として次のことを達成した.1.形態素解析プログラムJUMANについて,連語処理機能の追加,標準形態素辞書の整備,標準文法辞書の整備を行い,その成果をJUMAN3.0として平成8年10月に一般に公開した.2.構文解析プログラムKNPについて,文法記述の枠組の修正,並列構造解析の強化,従属節のスコープ解析の強化,用言に準ずる種々の表現への対応,など種々の改良・修正を行った.この成果は,KNP2.0として平成9年3月に一般に公開した.3.コーパスに付与する形態素情報,構文情報について基準をまとめ,修正作業者へのマニュアルを作成した.4.コーパスの人手修正をスムーズに行うことができ,またコーパスに対する種々の検索が可能なマンマシンインターフェースを作成した.5.自動付与した情報の人手修正を日常的に行い,平成9年3月末までに「正しい」形態素・構文情報を付与したコーパス,約2万文を作成した.このうち,約1万文は平成9年3月に公開した.本研究は種々の日本語分章の形態素解析、構文解析を通じて、我々の持っている形態素解析プログラム、構文解析プログラムの改良を行い、これらのプログラムを公開することを目的とする。また,これによって解析され文法情報を自動付与された日本語文章のデータベースを作成し、広く自然言語処理研究者に公開するものである。平成7年度は2年間の研究期間の第一年目として以下のことを行なった.1.形態素解析プログラムJUMAN、構文解析プログラムKNPについて相当規模の解析結果を調査することによってその誤りの傾向を明らかにした.2.上記の調査をもとにして,特に形態素解析プログラムJUMANについて種々の改良を行ない,文章データベース作成のためのシステムとして十分な精度のシステムとした.3.形態素解析、構文解析結果の見やすい表示と誤り部分の修正を簡単に行えるマンマシンのソフトウェアを開発した。4.形態素解析、構文解析結果の日常的修正作業について、試行実験を行なった。今後は、,構文解析プログラムKNPの改良を早急に行ない,大量文章の自動解析,その日常的修正作業の段階に入る予定である.本研究は種々の日本語文章の形態素解析、構文解析を通じて、我々の持っている形態素解析プログラム、構文解析プログラムの改良を行い、これらのプログラムを公開することを目的とした。また同時に、これによって解析され文法情報を自動付与された日本語文章のデータベースを作成し、広く自然言語処理研究者に公開することを目的とした.本年度は2年間の研究期間の最終年として以下のことを行なった.(1)形態解析プログラムJUMANについては,昨年度行なった改良・修正をまとめ,JUMAN3.0として平成8年10月に一般公開した.(2)構文解析プログラムKNPについては,文法記述の枠組の修正,並列構造解析の強化,従属節のスコープ解析の強化,用言に準ずる種々の表現への対応,など種々の改良・修正を行なった.この成果は,KNP2.0として平成9年3月に一般公開した.(3)コーパスに付与する形態素情報,構文情報について基準をまとめ,自動付与した情報の修正作業者へのアニュアルを作成した.(4)自動付与した情報の人手修正を日常的に行ない,平成9年3月末までに「正しい」形態素・構文情報を付与したコーパス,約2万文を作成した.このうち,約1万文は平成9年3月に公開した.大量文章の自動解析およびその修正作業は,これまでの成果を利用して,そのまま継続していく体制をとっており,プロジェクト終了後も追加版コーパスの公開を続ける予定である.
新規脳梗塞治療戦略としての選択的VEGF抑制療法の確立

血管内皮細胞増殖因子(VEGF)は血液脳関門の破綻に関与するが,血栓溶解療法後の脳出血に関与するかは不明である.我々はVEGFシグナルカスケードの抑制がtPA療法後の脳出血を軽減する可能性を考えた塞栓性中大脳動脈閉塞モデルに対し,虚血4時間後にtPAを投与し,虚血24時間にVEGFシグナルカスケード活性化と出血を評価した.抗VEGF抗体はこれらを抑制したVEGFは有力な治療標的分子である.血管内皮細胞増殖因子(VEGF)は血液脳関門の破綻に関与するが,血栓溶解療法後の脳出血に関与するかは不明である.我々はVEGFシグナルカスケードの抑制がtPA療法後の脳出血を軽減する可能性を考えた塞栓性中大脳動脈閉塞モデルに対し,虚血4時間後にtPAを投与し,虚血24時間にVEGFシグナルカスケード活性化と出血を評価した.抗VEGF抗体はこれらを抑制したVEGFは有力な治療標的分子である.本研究は治療可能時間を超えた組織型プラスミノゲン・アクチベーター(t-PA)の静脈内投与により生じる血栓溶解療法後の重大な合併症である脳出血に対する予防療法を確立することを目的とした.このために,ラット脳塞栓t-PA投与モデル(Okuboら)を使用した.このモデルにおいて,t-PAを脳虚血後1時間において使用すると脳梗塞サイズの縮小が見られるが,脳虚血後4時間において行うと,脳梗塞サイズの縮小は見られず,脳浮腫と脳出血の合併を認めることを確認した.本モデルを使用し,虚血性血管障害を防止し,それに基づく脳出血を抑制可能な薬剤のスクリーニングを行った.この結果,抗VEGF中和抗体の静脈投与は,脳梗塞後24時間における梗塞サイズや浮腫のサイズには影響を及ぼさないものの,出血量(Drabkin試薬によるHb酸化還元反応)を抑制し,発症後24時間における運動機能・生命予後を改善することを明らかにした.またVEGF受容体阻害剤の腹腔内投与も出血量を抑制することを確認した.ラット脳塞栓モデル(Okuboら.2007)層において,tPA(アルテプラーゼ)による血栓溶解療法を行い,治療可能時間を超えた治療後に合併する脳出血に対し,抗VEGF中和抗体(RB-222)およびVFGF受容体2型阻害剤(SU-1498)の2つ薬剤の作用機序と効果の比較を行った.(1)いずれの薬剤もVEGFカスケード下流のメタロプロテアーゼ9(MMP9)活性化を有意に抑制し,さらに血管構築蛋白の分解を有意に抑制した.(2)いずれの薬剤も脳出血(ラット単位体積あたりのヘモグロビン量)を有意に抑制した.(3)しかしながら,5段階の生命・運動機能スケールの評価では,抗VEGF中和抗体のみ,対照群(コントロール抗体ないし溶媒)と比較し有意な予後の改善をもたらした.以上より,抗VEGF中和抗体とVEGF受容体阻害剤では前者がより血栓溶解療法後の脳出血予防に有用である可能性が示唆された.この原因として抗VEGF中和抗体はVEGFシグナルカスケードの最も上流に作用するのに対し,SU1498はVEGF受容体2型を選択的に阻害する抗体で,その他のVEGF受容体(VFGF受容体1型等)の活性化が抑制できず,これらが,運動機能予後の差に現れた可能性が疑われる.今後,抗VEGF中和抗体に絞り,その至適用量や投与可能時間,および抗VEGF中和抗体の種類ごとの影響,とくに半減期の影響について検討を行い,臨床試験につなげるための基礎データとしたい.本研究は治療可能時間を超えた組織型プラスミノゲン・アクチベーター(t-PA)の静脈内投与により生じる血栓溶解療法後の重大な合併症である脳出血に対する予防療法を確立することを目的とした.このために,ラット脳塞栓t-PA投与モデル(Okuboら)を使用した.このモデルにおいて,t-PAを脳虚血後1時間において使用すると脳梗塞サイズの縮小が見られるが,脳虚血後4時間において行うと,脳梗塞サイズの縮小は見られず,脳浮腫と脳出血の合併を認めることを確認した.本モデルを使用し,虚血性血管障害を防止し,それに基づく脳出血を抑制可能な薬剤のスクリーニングを行った.この結果,t-PAを4時間で投与すると,虚血辺縁部の血液脳関門において血管内皮細胞増殖因子(VEGF)シグナルカスケードが活性化すること,引き続いてマトリックスメタロプロテアーゼ9(MMP-9)の活性化とそれに伴う基底膜構成蛋白の分解が生じ,脳出血を来すことを示した.また,MMP-9を含むいずれの変化も抗VEGF中和抗体(RB-222)により抑制された.以上より,VEGFシグナルカスケードはMMP-9の上流に存在し,tPA療法後の脳出血合併に関与する有力な治療標的分子であると考えられた.さらにVEGFシグナルカスケードを抑制するRB-222とVEGF受容体2型阻害剤(SU-1498)の2つ薬剤の作用機序と効果の比較を行った.この結果,以下のことが明らかになった.(1)いずれの薬剤もMMP-9活性化を有意に抑制し,さらに血管構築蛋白の分解を有意に抑制した.(2)いずれの薬剤も脳出血を有意に抑制した(3)しかしながら,5段階の生命・運動機能スケールの評価では,抗VEGF中和抗体のみ,対照群と比較し有意な予後の改善をもたらした.以上より,抗VEGF中和抗体とVEGF受容体阻害剤では前者がより血栓溶解療法後の脳出血予防に有用である可能性が示唆された.
多面的アプローチによるGnRHサージジェネレーター本体の解明

従来の研究から、LHのパルス状分泌にあたるGnRHニューロンは視床下部内側底部にあり、オピオイドニューロンと神経回路をつくっている。LHのサージ状分泌にあたるものは、より前方の視策前野にある多数のGnRHニューロンで、GABAニューロンと神経回路をつくっている。これまでは、視床下部内にはGnRHのパルスジェネレーターのみが存在し、これが基礎分泌も排卵性分泌も調節するとする仮説が世界を席巻していた。われわれは、GnRHパルスジェネレーターはサージ状LH分泌を引き起こせないことを証明することで、別個にサージジェネレーターが存在することを予測したが、本研究はサージジェネレーター本体の解明をすることを目的として行った。GnRHサージジェネレーターのモデルを作成する課題は成功し、それを用いた実験から、生物時計の存在する視交叉上核からの時刻情報はAVPニューロンを介して、エストロジェン依存性にサージジェネレーターのGnRHニューロンに伝えられ、それにより、GnLHサージにサーダデイアンリズムが発現する機序が考えられた。この仮説を傍証するように、発情前期のラットにおいて、LHサージ上分泌の始まる直前、13時に、脳室内にAVP V1抗体を投与してやるとLHサージ状分泌は顕著に抑制された。また、視策前野にはどのタイプのAVP受容体mRNAが存在するのかを調べた結果、AVP受容体la mRNAのみがあり、かつ、エストロジェンによりその発現量は2倍に増加することが判明した。さらに、発情前期の日、13時に、両側の視策前野内にTTXを投与してもサージ状LH分泌には何の変化が見られなかったことから、GnRHサージジェネレーターの分泌活動にはNaチャネル依存性の活動電位は関係しないことが明らかになり、Caチャネルとの関係を調べる必要性が視さされた。これによって、今後の研究の方向が定まった。我々は,ラットのGnRHサージジェネレーターは,視索前野にあるGnRHニューロンおよびエストロジェン受容ニューロン,および視交叉上核の生物時計ニューロンにより構成されていると考えている。そこで(実験1),この視索前野と視交叉上核を生後5日齢の雌性ラットより別々に切り出して回転培養を行い,in vitroでのサージジェネレーターの作成を試みた。培養開始後4週間目から連続的に培養液を採取し,ElA法によりGnRH,バソプレッシンおよびVlPの分泌量を測定した。その結果,(1)エストロジェンを投与しない場合は,バソプレッシンおよびVlPの分泌には有意なサーカディアンリズムを認めたが,GnRHの分泌には有意なサーカディアンリズムは認められなかった,(2)エストロジェンを投与した場合は,GnRH分泌にも有意なサーカディアンリズムが認められ,その周期および頂点位相は,バソプレッシンのものと一致したが,VlPのものとは一致しなかった。従って,視交叉上核からの時刻情報はバソプレッシンを介してエストロジェン依存性にGnRHニューロンに伝えられ,それにより,GnRH分泌にサーカディアンリズムが発現したと考えられた。次いで(実験2),発情前期臨界時刻前にバソプレッシンもしくはその拮抗剤を各々視索前野内あるいは脳室内に投与し,LHサージにおよぼす影響を検討した。その結果,(1)バソプレッシン投与によりLHサージの時刻が早まり,(2)拮抗剤投与によりLHサージの発現が阻止された。さらに(実験3),エストロジェンの作用機序を知る目的で,視索前野のバソプレッシン受容体mRNAの発現量におよぼすエストロジェンの効果を検討した。その結果,エストロジェンは,視索前野のバソプレッシン1a受容体mRNAの発現量を約2倍に増加させた。今後は,GnRHニューロンがサージ状分泌を起こす際のメカニズムを検討していく予定である。さらに、発情前期の日、13時に、両側の視策

前野内にTTXを投与してもサージ状LH分泌には何の変化が見られなかったことから、GnRHサージジェネレーターの分泌活動にはNaチャネル依存性の活動電位は関係しないことが明らかになり、Caチャネルとの関係を調べる必要性が視さされた。これによって、今後の研究の方向が定まった。1。サージジェネレーターを構成するGnRHニューロンの軸索末端からのGnRH分泌のメカニズムについては、以下のような結果を得た。(1)発情前期午後、ラットの正中隆起部で記録される多ニューロン発射活動(MUA)は、パルス状分泌と相関するGnRHパルスジェネレーターの電気活動は示すが、LHのサージ状分泌と相関するGnRHサージジエネレーターの活動は決して示さない.(2)発情前期午後、ネンプタールで排卵阻止したラットの正中隆起部で記録されるMUAは、GnRHサージジェネレーターのGnRHニューロンの存在部位である内側視索前野を排卵誘起可能な強度の電気刺激に対し刺激中の基礎活動の上昇を示したのみで、GnRHパルスジエネレーターとしての電気活動における変化を全く示さなかった。(3)発情前期午後、ネンブタールで排卵阻止したラットの内側視索前野を電気刺激して誘起されるLH分泌は、Na+チャネル阻害剤であるフグ毒(テトロドトキシン、TTX)の刺激部への投与によって容量依存性に阻止される.(4)発情前期午後のラットの内側視索前野にTTXを投与しても、LHのサージ状分泌には大きな変化は起こらない。(5)OVLTにおけるMUAの記録は未だ充分に行われていない.以上の結果から、GnRHサージジェネレーターの分泌活動のメカニズムには、電気刺激による分泌現象とは異なって、Na+チャネルが関与していないことが推測されたので、今後、Ca+チャネルの関わりについて検討する必要がでてきた.2。サージジェネレーターを構成するGnRHニューロンはLHサージ状分泌のためOVLTでもGnRHを分泌するかに関しては、GnRHのELISAの感度が充分に挙げられず、意義のある成績が得られなかった。
血管組織における平滑筋・内皮細胞間のギャップ結合を介する情報伝達

直径50100μmのモルモット腸管膜細動脈を用いた研究を行った.この標本の中膜は単層の平滑筋細胞からなっており,内皮細胞間には多くのギャップ結合が見られた(透過型電顕による超微形態観察).内皮細胞膜にはconnexin 40と43が,平滑筋細胞膜には同43が発現していた(免疫組織化学).内皮細胞からneurobiotinを注入すると回りの多数の内皮細胞が濃染したが,平滑筋細胞から注入した場合は回りの少数の平滑筋細胞が薄く染まるのみであった.長時間の注入によりneurobiotinの平滑筋-内皮細胞間の両方向の移動が見られた.さらにパッチクランプ法による膜電位の観察とビデオエッジ・ディテクタによる血管径の測定により,次のような結果を得た.内皮細胞同士は電気的に強固につながっており,細胞間の抵抗は本研究方法では測定できないほど低かった.平滑筋同士や平滑筋-内皮細胞間も電気的に結合しており,隣り合った平滑筋細胞同士間の抵抗は少なくとも90MΩ,1個の平滑筋細胞と内皮細胞層間の抵抗は0.9GΩであると計算された.また,この細動脈はある程度の緊張を常に保っており,また細胞膜電位の変化を伴わない小さな収縮が繰り返し起こって,それが直径の不規則なゆらぎとして観察された.18β-Glycyrrhetinic acidを投与してギャップ結合を遮断すると,平滑筋細胞は過分極し,血管壁緊張は減少した.高K^+による収縮は18β-glycyrrhetinic acidにより影響されなかった.内皮細胞は平滑筋-内皮細胞間ギャップ結合を介して平滑筋の膜電位を脱分極側に引っ張ることにより,平滑筋を収縮状態にしていると考えられた.細動脈壁の緊張は生理的な循環調節に不可欠であり,その維持への内皮細胞の関与が示唆された.今回の実験に用いた直径50100μmのモルモット腸管膜細動脈を電顕観察したところ,その中膜は単層の平滑筋細胞から成り,内皮細胞間にはギャップ結合が発達していることがわかった.免疫組織化学的手法から,内皮細胞膜にはconnexin 40と43が,平滑筋細胞膜にはconnexin 43が発現していた.この細動脈から3種類の標本(叛転血管,外膜除去血管および外膜除去血管の一部を切り開いたもの)を製作し,各々2個の血管内皮細胞,2個の血管平滑筋細胞,または内皮細胞と平滑筋細胞の膜電位をパッチックランプ電極を用いて同時に記録しながら,どちらか一方に膜電位変化を起こしてその伝播を観察した.アセチルコリンで内皮細胞を刺激して生じた過分極電位は伝播効率80%で平滑筋に,Ba^<2+>(5mM)で平滑筋細胞を刺激して生じた脱分極とスパイク放電は伝播効率92%で内皮細胞に各々伝播した.また一方の電極から通電して内皮細胞に生じた電気緊張電位は,内皮細胞層内をほとんど減衰することなく,また平滑筋には伝播効率84%で伝播し,内皮細胞間の抵抗が極めて低いことが示された.一方平滑筋細胞への通電により生じた電気緊張電位は平滑筋層内で急速に減衰したが,25μmを越えるとそれ以上減衰することなく,ある一定の大きさを維持した.この緊張電位は内皮細胞にも伝播したが,伝播効率は67%であった.この67%という伝播効率は緊張電位の極性に依らず一定であったことから,平滑筋と内皮細胞間の電気的結合には整流作用がないことがわかった.以上の結果から,隣り合った平滑筋細胞同士間の抵抗は少なくとも90MΩあり,1個の平滑筋細胞と内皮細胞層間の抵抗は0.9GΩであることが示唆された.直径50100μmのモルモット腸管膜細動脈を用いた研究を行った.この標本の中膜は単層の平滑筋細胞からなっており,内皮細胞間には多くのギャップ結合が見られた(透過型電顕による超微形態観察).内皮細胞膜にはconnexin 40と43が,平滑筋細胞膜には同43が発現していた(免疫組織化学).内皮細胞からneurobiotinを注入すると回りの多数の内皮細胞が濃染したが,平滑筋細胞から注入した場合は回りの少数の平滑筋細胞が薄く染まるのみであった.長時間の注入によりneurobiotinの平滑筋-内皮細胞間の両方向の移動が見られた.さらにパッチクランプ法による膜電位の観察とビデオエッジ・ディテクタによる血管径の測定により,次のような結果を得た.内皮細胞同士は電気的に強固につながっており,細胞間の抵抗は本研究方法では測定できないほど低かった.平滑筋同士や平滑筋-内皮細胞間も電気的に結合しており,隣り合った平滑筋細胞同士間の抵抗は少なくとも90MΩ,1個の平滑筋細胞と内皮細胞層間の抵抗は0.9GΩであると計算された.また,この細動脈はある程度の緊張を常に保っており,また細胞膜電位の変化を伴わない小さな収縮が繰り返し起こって,それが直径の不規則なゆらぎとして観察された.18β-Glycyrrhetinic acidを投与してギャップ結合を遮断すると,平滑筋細胞は過分極し,血管壁緊張は減少した.高K^+による収縮は18β-glycyrrhetinic acidにより影響されなかった.

内皮細胞は平滑筋-内皮細胞間ギャップ結合を介して平滑筋の膜電位を脱分極側に引っ張ることにより,平滑筋を収縮状態にしていると考えられた.細動脈壁の緊張は生理的な循環調節に不可欠であり,その維持への内皮細胞の関与が示唆された.摘出した腸間膜細動脈壁の血管径をビデオエッジディテクタにより計測した.外液のCa^<2+>を除くと細動脈は拡張することから,この標本はある程度の緊張を保っていると考えられた.また伝播しない小さな収縮が繰り返し起こり,それが直径の不規則な揺らぎとして観察された.時として大きな標本全体に伝播する収縮も観られた.この緊張はテトロドトキシンにより神経を遮断したり,外膜をはぎ取って神経を除去しても消失しないことから,神経性ではないことがわかった.また,エンドセリンA受容体遮断薬FR13937は無効であった.前年度の研究結果から,この組織では内皮細胞同士は豊富なギャップ結合で電気的につながっており,平滑筋同士や平滑筋と内皮細胞間にもギャップ結合が存在することが示されたので,定常状態では平滑筋細胞と内皮細胞は等電位であると考えられる.そこで内皮細胞層が外側になるような叛転標本を作り,パッチ電極による内皮細胞膜電位測定を血管径の計測と同時に行った.その結果,時々生じる大きな血管収縮はスパイク放電を伴っていたが,頻回に起きる血管径の小さな揺らぎは細胞膜電位の変化を伴っていなかった.18β-Glycyrrhetinic acidを投与してギャップ結合を遮断すると,血管壁緊張は減少した.また,18β-glycyrrhetinic acid存在下でも高K^+液によりコントロール状態と変わらない収縮が起きたことから,この物質が筋収縮そのものを抑制しているのでないことが示された.一方,外膜除去標本で測定した平滑筋細胞膜電位は18β-glycyrrhetinic acidにより過分極を示したことから,内皮細胞は平滑筋-内皮細胞間ギャップ結合を介して平滑筋の膜電位を脱分極側に引っ張ることにより,細動脈緊張を維持していると考えられる.