hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
小学校英語におけるスタンプ型評価システムを用いたICTによる形成的評価の検討

本研究は,小学生高学年を対象に,小学校外国語活動でのスモールトークに対する相互評価を支援するシステムを開発し,そのシステムを用いた効果的な形成的評価を検討することを目的としている.昨年度は,スモールトークに対する主な評価内容を5つに整理し,整理した内容をマーカーとして実装し,ドラッグ&ドロップとタップの操作だけで相互評価できる「スタンプ型評価システム」を使った実践を行い,子どもたちに対する質問紙調査や学校現場の教師によるエキスパートレビューなどをとおして,教育効果を検討した.その結果,昨年度作成した相互評価のための5つの観点よりも,コミュニケーション活動を活発にするためには,よりレベルを上げた観点の導入が必要であることがわかった.そこで,今年度は,小学校高学年を対象とした小学校外国語活動のスモールトーク中における形成的評価の観点を新たに作成し,より活発なコミュニケーション活動を促すための小学生が活用できるスタンプ型評価システムに改良した.そして,実際の小学校英語において,新たな評価観点を実装したスタンプ型評価システムを使った相互評価を取り入れた授業を可能にするため,研究協力者らと検討し,授業および単元デザインを行い,具体的な学習指導デザインを再度開発した.その後,スタンプ型評価システムを使った実践を定期的に行い,子どもたちの長期的な変化を観察した.今後の課題としては,観察した結果の分析と考察である.また,システムの安定性の向上と学校現場への普及のための環境整備についても同時に対処していく.昨年度の夏までは計画通り.当初は改善したシステムを用いた実践を行い,実践で得られたデータを分析して検討した結果を公開する予定でいたが,研究代表者の研究に関する環境が変わってしまったため,昨年度の秋からの研究の進捗状況がやや遅れている.昨年度の研究成果から得られた課題を元に,スタンプ型評価システムを改良した.また,改良したシステムを使った実践もすでに実施している.今後は,実施した実践から得られたデータを詳細に分析し,学習効果を検討していく.また,スタンプ型評価システムの安定性などを高めるために,さらにシステムを改良していく.「小学校英語におけるスタンプ型評価システムを用いたICTによる形成的評価の検討」と題する本研究では,小学生を対象に,小学校外国語活動でのスモールトークに対する相互評価を支援するシステムを開発し,そのシステムを用いた効果的な形成的評価を検討することを目的としている.今年度は,小学生が活用できるスタンプ型評価システムのプロトタイプを開発した.その後,小学校高学年を対象に,小学校外国語活動のスモールトークを行う活動をビデオ映像に記録し,その映像を用いた相互評価を試行した.開発したプロトタイプでは相互評価時の主な入力方法が文字入力であったため,学習をスムーズに遂行することに対し課題が見られた.そこで,発達の段階を考慮し,できる限り文字入力を行わない相互評価を可能とするシステムに改良した.具体的には,先行研究や調査研究から検討したスモールトークに対する主な評価内容を5つに整理し,整理した内容をマーカーとして実装し,ドラッグ&ドロップとタップの操作だけで相互評価できるように工夫した.その後,小学生高学年の児童を対象に,小学校外国語活動での実践を想定した授業をデザインし,プレ実践を試行した.その結果,小学校高学年の児童において,ユーザビリティやモチベーションの点から有効性が示唆された.さらに,実際の小学校英語において,スタンプ型評価システムを使った相互評価を取り入れた授業を可能にするため,研究協力者らと検討し,授業および単元デザインを行い,具体的な学習指導デザインを開発した.デザインした授業は,Web上に公開した.当初の計画通り,まずは,小学校英語に対応したスタンプ型評価システムの開発と,小学校英語における形成的評価に対する調査・資料収集を行い,小学校英語で活用可能なスタンプ型評価システムを開発することができた.また,実際に小学校英語で活用できるように,授業をデザインしWeb上に公開した.来年度,すぐに本実践ができるように,事前にデザインした授業を既に試行している.本研究は,小学生高学年を対象に,小学校外国語活動でのスモールトークに対する相互評価を支援するシステムを開発し,そのシステムを用いた効果的な形成的評価を検討することを目的としている.昨年度は,スモールトークに対する主な評価内容を5つに整理し,整理した内容をマーカーとして実装し,ドラッグ&ドロップとタップの操作だけで相互評価できる「スタンプ型評価システム」を使った実践を行い,子どもたちに対する質問紙調査や学校現場の教師によるエキスパートレビューなどをとおして,教育効果を検討した.その結果,昨年度作成した相互評価のための5つの観点よりも,コミュニケーション活動を活発にするためには,よりレベルを上げた観点の導入が必要であることがわかった.そこで,今年度は,小学校高学年を対象とした小学校外国語活動のスモールトーク中における形成的評価の観点を新たに作成し,より活発なコミュニケーション活動を促すための小学生が活用できるスタンプ型評価システムに改良した.そして,実際の小学校英語において,新たな評価観点を実装したスタンプ型評価システムを使った相互評価を取り入れた授業を可能にするため,研究協力者らと検討し,授業および単元デザインを行い,具体的な学習指導デザインを再度開発した.その後,スタンプ型評価システムを使った実践を定期的に行い,子どもたちの長期的な変化を観察した.今後の課題としては,観察した結果の分析と考察である.また,システムの安定性の向上と学校現場への普及のための環境整備についても同時に対処していく.昨年度の夏までは計画通り.当初は改善したシステムを用いた実践を行い,実践で得られたデータを分析して検討した結果を公開する予定でいたが,研究代表者の研究に関する環境が変わってしまったため,昨年度の秋からの研究の進捗状況がやや遅れている.平成29年度に開発したスタンプ型評価システムに機能を拡張していく.平成30年度は,スタンプ型評価システムを用いた相互評価による実践を行う.そして,スタンプ型評価システムに対する評価だけではなく,授業デザインに対する評価も行う.

その中から,効果的であった点や課題点を整理し,スタンプ型評価システムを使った相互評価による学びの学習効果と限界を明らかにする.昨年度の研究成果から得られた課題を元に,スタンプ型評価システムを改良した.また,改良したシステムを使った実践もすでに実施している.今後は,実施した実践から得られたデータを詳細に分析し,学習効果を検討していく.また,スタンプ型評価システムの安定性などを高めるために,さらにシステムを改良していく.概ね計画的に予算執行を行なったが,若干の支出計画のズレが生じた.例えば,得た資料の整理や分析を行うために人件費を使用したが,予定した期間以内にデータ分析が終了したため,人件費の支出が計画より少ない結果となった.そのような事例などが積み重なり,次年度使用額が生じたと思われる.次年度使用額については,物品費の一部にする予定である.資料の整理や分析を行うために人件費を使用したが,予定した期間より前にデータ分析が終了したため,人件費の支出が計画より少ない結果となった.また,2018年8月から2019年3月まで研究代表者の研究環境が変わったことで当初予定していた出張ができなくなった.このことで,旅費の支出が計画より少ない結果となった.次年度使用額については,期間内での研究遂行に必要な物品費もしくは研究成果の発表のための旅費の一部にする予定である.
エコノモ型脳炎後パーキンソニズムの臨床病理学的研究

エコノモ型脳炎後パーキンソニズムの5例(平均経過年数49.2年)について臨床病理学的に検討を行った。本症の精神症状としては人格変化が最もめだち、自己中心性、無遠虚、落ち着きのなさ、強情、易刺激性などがめだった。一方、記憶や見当識などにめだつた障害を認めない症例が多く、知能障害を認めた症例でも、むしろ注意や集中の障害の結果として知的脳力の低下をきたしたと考えられ、少なくともアルツハイマー型痴呆のような大脳皮質型の知能の低下は認めなかった。神経症状ではパーキンソン症状を全例に認めたほか、注視障害、注視痙攣、対光反射の異常などの眼症状も全例に認めた。臨床経過をみると、いずれの症例も精神症状が先行しており、パーキンソン症状は脳炎罹患後かなり長期(25年以上)経過して出現した症例もあつた。神経病理学的に、最も高度の変化は黒質にみられ、残存神経細胞は著明に減少し、残存する神経細胞に神経原線維変化が散見された。炎症所見はすでに消退していた。さらに今回は、脳炎後パーキンソニズムの神経原性変化の超微形態的、免疫組織学的特徴について検討し、アルツハイマー病のそれと比較検討した。細胞体内神経原線維変化は抗PHF、抗human-tau、抗ubiquitin抗体に陽性であったが、細胞外のいわゆるghost tangleはこれらの抗体に陰性であった。また超微形態的な検討では、ghost tangleは、異常な細管の束と細胞器官の遺残物から構成されており、グリア線維がそれを囲い、時にはghost tangle中に侵入していた。これらの結果は、アルツハイマー病の神経原線維変化における超微形態的、免疫組織学的検討の結果と同じであり、今回の研究からエコノモ型脳炎後パーキンソニズムの神経原線維変化とアルツハイマー病のそれとは、超微形態的、免疫組織学的特徴が同一のものであることが示唆された。
カーボンナノチューブ含有樹脂の射出成形及びその機械的・電気的特性の評価

樹脂基CNT複合材料を射出成形して成形品を作製し,機械的・電気的特性を調べることにより,以下の研究結果を得た.1.TEM利用ナノ材料試験法によるCNT及びCNT複合材料の力学特性評価超高圧透過型電子顕微鏡(TEM)中でのナノ材料試験法を用い,圧電素子と電解タングステン針で構成されたマニピュレータを利用したTEM中でのCNTの曲げ試験により多種類のCNTのヤング率を導出した.さらにCNT複合材料の引張試験及び曲げ試験を行った.すなわち,変位と力及び電流・電圧特性を動画とともにサンプリングできるステージを加えて,TEM中でのナノ材料試験を可能とした.ついで樹脂基複合材料を対象としてプローブを圧電素子により駆動して変位と力をモニタリングするための樹脂基CNT複合材料引張試験用のナノ材料試験ホルダを新たに設計・試作して,実際にCNT複合材料の破壊挙動が,以下のCNT表面の官能基修飾により大きく異なることを明らかにした.2.樹脂基CNT複合材料の表面修飾CNT表面のプラズマ処理を検討した.すなわち,炭化水素系のプラズマ中にCNTを曝すことによってアモルファス炭素の膜を形成し,さらに表面にアミノ基を修飾した.そして,処理後のCNTを,各樹脂中に二軸混練機により混練して複合材料を作製し,CNTと各樹脂との界面接着強度及びCNTの分散がどの程度向上するかをナノ材料試験と透過光による顕微鏡観察により定量的に明らかにした.3.樹脂基CNT複合材料の射出成形とマクロ的特性評価射出成形により樹脂基CNT複合材料を成形する.そして,上述のCNTの表面処理及び各樹脂とCNTとの混練条件及び成形条件(特に圧力と温度)が材料の諸特性に及ぼす影響を,成形品のマクロ的な引張試験,曲げ試験,粘弾性試験,四端子抵抗率測定,密度・比熱・温度伝搬率測定により明らかにした.特に複合材料表面付近のCNTの配向と濃度を明らかにして表面伝導率との関係を検討し,総せん断歪み量が大きくなると複合材料の抵抗率が上昇することを明らかにした.樹脂基CNT複合材料を射出成形して成形品を作製し,機械的・電気的特性を調べることにより,以下の研究結果を得た.1.TEM利用ナノ材料試験法によるCNT及びCNT複合材料の力学特性評価超高圧透過型電子顕微鏡(TEM)中でのナノ材料試験法を用い,圧電素子と電解タングステン針で構成されたマニピュレータを利用したTEM中でのCNTの曲げ試験により多種類のCNTのヤング率を導出した.さらにCNT複合材料の引張試験及び曲げ試験を行った.すなわち,変位と力及び電流・電圧特性を動画とともにサンプリングできるステージを加えて,TEM中でのナノ材料試験を可能とした.ついで樹脂基複合材料を対象としてプローブを圧電素子により駆動して変位と力をモニタリングするための樹脂基CNT複合材料引張試験用のナノ材料試験ホルダを新たに設計・試作して,実際にCNT複合材料の破壊挙動が,以下のCNT表面の官能基修飾により大きく異なることを明らかにした.2.樹脂基CNT複合材料の表面修飾CNT表面のプラズマ処理を検討した.すなわち,炭化水素系のプラズマ中にCNTを曝すことによってアモルファス炭素の膜を形成し,さらに表面にアミノ基を修飾した.そして,処理後のCNTを,各樹脂中に二軸混練機により混練して複合材料を作製し,CNTと各樹脂との界面接着強度及びCNTの分散がどの程度向上するかをナノ材料試験と透過光による顕微鏡観察により定量的に明らかにした.3.樹脂基CNT複合材料の射出成形とマクロ的特性評価射出成形により樹脂基CNT複合材料を成形する.そして,上述のCNTの表面処理及び各樹脂とCNTとの混練条件及び成形条件(特に圧力と温度)が材料の諸特性に及ぼす影響を,成形品のマクロ的な引張試験,曲げ試験,粘弾性試験,四端子抵抗率測定,密度・比熱・温度伝搬率測定により明らかにした.特に複合材料表面付近のCNTの配向と濃度を明らかにして表面伝導率との関係を検討し,総せん断歪み量が大きくなると複合材料の抵抗率が上昇することを明らかにした.カーボンナノチューブの樹脂複合材料としての機械的,電気的,熱的基礎特性を明らかにして,その混練及び射出成形による成形プロセスを確立することにより,従来にない高強度材料,高導電性材料及び高熱伝導材料の開発に資することを目的として研究を遂行し,以下の結果を得た.1.TEM利用ナノ材料試験法の開発とCNT単体のナノ材料試験超高圧透過型電子顕微鏡(TEM)中でCNTを変形させながら変位と力をモニタリングするナノ材料試験法を確立し,CNT単体の曲げ試験を行って種々のCNTの見かけのヤング率を明らかにした.さらに,CNTの品質と見かけのヤング率の関係を明らかにした.ついで,複合材料のナノ引張り試験を行い,CNTが樹脂から抜け落ちることにより破壊が進行することを明らかにした.2.CNTの表面処理及び樹脂との混合方法の検討及び成形実験CNT表面のアミノ基修飾を行った.まず,硫酸・硝酸の混酸中でCNTを30分120分程度熱した後にアミノ化処理した.そして,処理後のCNTを,各樹脂中に二軸混練機により混練して複合材料を作製し,射出成形により試験片を作製して引張り試験を行った.その結果,アミノ基修飾により高い界面接着強度が得られ,ポリプロピレン(PP)樹脂の場合引張強度のCNT含有率に対する上昇率が約2倍に向上することを確認した.

3.CNTの配向制御成形装置の試作及び成形実験成形中にCNTを回転させて,任意の方向にCNTを配向させる相対回転式特殊パイプダイ装置を設計・試作してCNT含有PP樹脂の押出成形を行い,CNTの配向状態が材料のヤング率と強度にどのような影響を及ぼすかを検討し,CNTを流動方向に±45°に傾斜させた円管の場合に優れた機械的特性を有することを明らかにした.4.CNT複合材料の熱伝導率PP及びPA66(ナイロン)をマトリクスとしてCNT複合材料の熱伝導率を調べ,樹脂流動方向の熱伝導率は,その直角方向の約2倍の高さを示し,30vol.%の含有量で3.6W/m・KとPP単体の16倍に上昇することを明らかにした.樹脂基カーボンナノチューブの樹脂複合材料としての機械的,電気的,熱的基礎特性を明らかにして,その混練及び射出成形による成形プロセスを確立することにより,従来にない高強度材料,高導電性材料及び高熱伝導材料の開発に資することを目的として研究を遂行し,今年度以下の結果を得た.1.CNT単体及び複合材料のナノ材料試験超高圧透過型電子顕微鏡(TEM)中でCNTを変形させながら変位と力をモニタリングするナノ材料試験法を確立し,種々のCNT単体の曲げ試験を行うことにより,結晶の完全性の高いCNTは13TPaのヤング率を有し,完全性の低いものでは10GPaと2桁も小さくなり事を明らかにした.さらに,結晶の完全性をラマン分光分析のID/IGのピーク比で整理し,この値により機械的特性も見積もりが可能であることを明らかにした.さらに,複合材料のナノ引張り試験を行い,CNT表面をDLCコーティングした上でアミノ基修飾することによCNTが樹脂から抜け落ちるのを防止できることを明らかにした.2.CNTの表面処理法の開発CNT表面に,アセチレンを原料としたプラズマCVD法によりDLC膜を合成することを試み,詳細に観察を行ってDLC膜が数十nmコーティングされていることを確認した.さらにその表面のアミノ基修飾を行った.まず,硫酸・硝酸の混酸中でCNTを30分120分程度熱した後にアミノ化処理した.そして,処理後のCNTを,各樹脂中に二軸混練機により混練して複合材料を作製し,射出成形により試験片を作製して引張り試験を行った.その結果,アミノ基修飾により高い界面接着強度が得られ,ポリプロピレン(PP)樹脂の場合引張強度のCNT含有率に対する上昇率が2倍以上に向上することを確認した.CNT複合材料を射出成形して成形品を作製し,機械的・電気的特性を調べることにより,以下の研究結果を得ることが出来た.1.TEM利用ナノ材料試験法によるCNT及びCNT複合材料の力学特性評価超高圧透過型電子顕微鏡(TEM)中でのナノ材料試験法を用い,圧電素子と電解タングステン針で構成されたマニピュレータを利用したTEM中でのCNTの曲げ試験により多種類のCNTのヤング率を導出した.さらにCNT複合材料の引張試験及び曲げ試験を行った.すなわち,変位と力及び電流・電圧特性を動画とともにサンプリングできるステージを加えて,TEM中でのナノ材料試験を可能とした.ついで樹脂基複合材料を対象としてプローブを圧電素子により駆動して変位と力をモニタリングするための樹脂基CNT複合材料引張試験用のナノ材料試験ホルダを新たに設計・試作して,実際にCNT複合材料の破壊挙動が,以下のCNT表面の官能基修飾により大きく異なることを明らかにした.2.樹脂基CNT複合材料の表面修飾
日本近代国家における郡制の意義と機能に関する研究

郡長,郡役所の制度は、大正15(1926)年7月に廃止されて以来、今日では、それらが存在したことすら意識されないほどに忘れ去られている。しかし、明治大正期においては、それらの活動は、極めて多岐にわたり、郡長,郡役所の活動を抜きにしては、日本近代国家の地方行政は語れない、と言っても過言ではない。郡長,郡役所は、府県と町村の結節点に位置して、町村行財政を指揮,監督し、日本近代国家の諸政策を一般国民に浸透させるうえで、大きな役割を担ったのである。研究代表者は、上述のような郡長,郡役所の役割を、国立国会図書館,国立公文書館,市政専門図書館等において収集した中央政府資料,立法資料および和歌山県,兵庫県等において収集した郡役所資料により実証的に研究し、それらの果した役割について考察した。そして、郡制の変貌と廃止の過程が、戦前日本の地方支配の体系に重大な変化をもたらし、それによって戦前日本の地方支配の体系の原型が確定したことも、実証的に究明することができた。それは、府県-郡-町村-住民と言った、いわば、点と線の行政系列による明治以来の地方=住民支配の方式から諸種の行政補助組織を動員して、政策の集中的貫徹をはかろうとする面的な支配への移行であった。それはまた、日本帝国主義国家の地方統治機構の原型の形成過程といいうるものである、とのいちおうの結論に達した。研究代表者は、「明治末期から大正期における日本近代国家の統治機構の法的構造の変化に関する研究」と題して、昭和62年度に申請した科学研究費補助金により、この研究をさらに拡充,発展させることができればと願っている。
戦略的補綴治療としての補綴前骨増生を手術なしで行う手法の開発とその原理の検討

人工材料を使用せず、自身の骨で、ドナーサイトを作らずに骨量増大を達成することを目標として本研究を企画した。種々のキャリアより、アテロコラーゲンとαTCPの組み合わせ、あるいはPLGAが生体内残存性、骨形成活性を有するスタチン徐放性両方の点で優れていることが示唆された。また、これらのキャリアには為害性がないことが示唆された。これらは培養骨芽細胞の分化を促進し、ラット生体内において骨増生効果を有する可能性が示唆された。人工材料を使用せず、自身の骨で骨量を増大する、ドナーサイトを作らず、骨量増大を希望する部位のみで手衛が完結するようにする、の二点を達成しつつインプラント術前骨増生を行うことを目標として本研究を企画した。ことが肝要であると考えられるが、これまでにはそのような取り組みはほとんどなされていない。本研究は骨移植・骨補填材を使用せず、手術なしで骨を増生させる手法を確立させることを目的として設定した。本年度は、昨年度検討した経皮的に注射可能なキャリアを用いて、in vitroおよび小動物における骨増生効果の検討とそのメカニズムの解析および、大動物への応用を行うことを目的とする。平成20年度は以下の項目について実験を行った。(1)経皮的に注射可能なキャリアの検討本研究で用いるキャリアは、注射器にて注入可能な上、注入時は液体であるが注入後速やかに硬ゲル化あるいは硬化し、かつ体内で徐々に崩壊するものが望ましい。本解析では、アテロコラーゲンゲルとα-TCPの混合物、数種のコラーゲンゲル、アルギン酸プロピレングリロール、PLGAあるいは水溶性ワセリンを種々の配合比でリン酸カルシウム系骨補填材(α-TCP、β-TCP、HA)と混合してキャリアを作製した。キャリアからの徐放性と体内崩壊性については、人工体液に浸漬したスタチン含有キャリアからのスタチン放出量を測定した。その結果、アテロコラーゲンとαTCPの組み合わせ、あるいはPLGAが生体内残存性、スタチン徐放性両方の点で優れていることが示唆された。キャリア自身、あるいはスタチン含有キャリアをラット骨膜近傍に注射し、骨増生効果について検討した注射後2,4週間でラット既存骨より盛り上がるように骨形成が行われ、本物質は骨増生効果を有する可能性が示唆された。本研究では、骨増生を望む部位における骨形成を刺激して骨量を増大することにより、人工材料や他部位からの移植の必要なく、骨量増大を希望する部位のみで手術が完結するようにする、の二点を達成しつつインプラント術前骨増生を行うことを目標とした。本年度は、昨年度検討した経皮的に注射可能なキャリアを用いて、in vitroおよび小動物における骨増生効果の検討とそのメカニズムの解析を行うことを目的とした。平成21年度は以下の項目について実験を行った。まずキャリア自身を培養した骨芽細胞に投与あるいはラット口腔粘膜下(傍骨膜)に注射し、以下の項目について為害性を検討した。・経時的細胞数の変化(MTTアッセイ)(培養実験)・細胞形態の変化(培養実験)・炎症細胞浸潤(ラット)。その結果、今回検討したPLGA系キャリアやコラーゲンーアパタイト系キャリアには為害作用がないことが明らかになった。そこで、種々の濃度のスタチンをキャリアに混入し、骨芽細胞培養系に投与、骨芽細胞の分化促進効果について検討したところ、オステオカルシン産生量や石灰化物形成量を刺激することが明らかになった。また、ラット口腔粘膜にも同様に経粘膜的に注射し、骨増生効果について検討中である。我々の予備実験では、注射後2,4週間で骨増生効果が見られたため、さらに長期(具体的には8,16,24週)における骨増生効果や増生された骨の経時的変化について検討する予定である。インプラント治療においては<埋入したい部位>にインプラントを埋入する、トップダウントリートメントの概念が中心的になってきた。その際かなりの割合で歯槽堤形成術や骨増生術が併用されるが、これに用いる自家骨、他家骨や人工骨は、それぞれ問題点が存在する。このような問題点を克服するには、1.人工材料を使用せず、自身の骨で骨量を増大する、2.ドナーサイトを作らず、骨量増大を希望する部位のみで手術が完結するようにすることが肝要であると考えられるが、これまでにはそのような取り組みはほとんどなされていない。本年度は、昨年度検討した経皮的に注射可能なキャリアを用いて、in vitroおよびin vivoにおける骨増生効果の検討とそのメカニズムの解析を行うことを目的とした。まず、ラットに種々の濃度のスタチンをキャリアに混和して経皮的に注射し、骨増生効果についてさらに検討した。その結果、新生骨の高さが経時的に増加していくことが明らかになった。また、骨密度、骨石灰化度も向上した。

さらに、8週例においては、骨が層板状構造を呈しはじめている状態が観察された。一方、骨増生メカニズムについては、PCR法を用いて、骨形成/吸収関連遺伝子の発現の検討を行った。その結果、これまでに知られているスタチンの働きである、BMP-2産生促進に関連したシグナルの促進の可能性が示唆された。
清酒濃縮物による肌質・高尿酸血漿状態の改善

清酒濃縮物を摂取した被験者では、含まれるethyl α-D-glucosideの約80%が24時間後までに尿中に排泄されていた。角層水分量については清酒濃縮物を皮膚に塗布した被験者では120分後まで高値を示していた。また清酒濃縮物を飲用した被験者では60分後までには変化が認められなかったが、続けて7日間、毎日摂取した場合、上昇傾向が見られた。正常ラットに清酒濃縮物を投与した場合、血漿尿酸値が低下した。しかし高尿酸モデルラットにおける高尿酸血漿状態に及ぼす影響については更なる検討の必要性がある。本研究の全体構想は、日本人が古くから飲み親しんでいる「清酒」の生理作用を明らかにしようとするものである。古くから清酒はアルコール飲料としての嗜好品の役割だけでなく、「酒は百薬の長」といわれるように様々な薬理・薬効があるといわれてきた。申請者はこれまでに清酒に特異的・恒常的かつ多量に含まれる配糖体であるethyl α-D-glucoside(α-EG)について研究を行ってきた。本研究の目的はこれまで得られた清酒濃縮物の生理効果に関する研究結果を踏まえ、(1)α-EGの体内動態の検討、(2)清酒濃縮物による皮膚状態の改善作用、(3)α-EGの利尿作用による高尿酸血漿状態の改善効果の点について研究を発展させる。近ごろでは清酒の輸出量が大きく増加し、海外でも"Sake"として注目されるようになった。こういった中で日本人として清酒の生理作用を明らかとすることを目的としている。これまでにα-EGを経口投与したラットの血液や尿中にα-EGが検出されることを示してきた。そこで本年度の研究では計画(1)の通り、ヒトにおけるα-EGの動態を調べるため実験協力者を募り、清酒濃縮物(6g ; α-EGを1g含む)を飲用して頂いた。摂取後0, 1, 2, 3, 6, 12, 24, 26, 48時間後の定期採取時間を含め、合計20回程度のすべての尿を採取した。以前の研究ではサンプル中のα-EGについて陰イオン交換カラムと電気化学検出法を組み合わせたHPAEC法にて測定してきたが、本研究ではLC-MSによる分析法の確立を行った後、定量を行った。また採取したサンプルの一部は検査キット等による臨床一般生化学検査に供したが、健康上問題のある協力者は存在しなかった。現在までに一部のサンプルの分析を行い、摂取されたα-EGの60-80%程度が尿中に排泄されることを明らかとした。加えて新たなサンプルの分析を行っている。本研究の全体構想は、日本人にとって古くから関係の深い「清酒」の生理作用を明らかにしようとするものである。清酒はアルコール飲料としての嗜好品の役割だけでなく、様々な作用があるといわれており、エタノールの効果を主として様々な成分の生理効果が報告されている。申請者はこれまでに清酒に特異的に含まれるethylα-D-glucoside(α-EG)という配糖体について研究を行ってきた。本研究の全体的な目的は(1)α-EGの体内動態の検討、(2)清酒濃縮物による皮膚状態の改善作用、(3)α-EGの利尿作用による高尿酸血漿状態の改善効果について、これまでの研究結果を踏まえてさらに進展させる。本年度は(2)皮膚状態の改善作用について検討した。古くから清酒がスキンケアローションとして利用されており、実際これまでに清酒(濃縮物)あるいはα-EG塗布により皮膚の保湿性が高まったり、経皮水分蒸散量が減少するなど、肌に対する有効な作用の報告がされている。一方清酒の飲用により肌の保湿性が高められることについても期待されている。動物実験においては清酒が他のアルコール飲料に比べ、飲用後の経皮水分蒸散量が減少すると報告されている。本研究では同意の得られた被験者にエタノールを除去した清酒濃縮物を10g(清酒1.5合程度に相当)を単回飲用していただき、その後経時的に心電波形・心拍・酸素飽和度を2時間にわたりモニタリングしたが、目立った変化は認められなかった。血圧・手指表皮温度に関しては摂取の30分後までにわずかに上昇がみられたが、有意な変化ではなかった。また前腕部の角層水分量を測定したが、摂取の2時間後までに有意な変化は認められなかった。さらに、被験者6名に対し、7日間にわたり5gずつの清酒濃縮物摂取を行って頂いたが、角層水分量に有意な変化は認められなかった。現在、清酒濃縮物の皮膚への直接的な塗布による角層水分量への影響を調べている。本研究の全体構想は「清酒」の生理作用を明らかにしようとするものである。

本研究では(1)清酒に含まれるethylα-D-glucoside(α-EG)の体内動態の検討、(2)清酒濃縮物による皮膚状態の改善作用、(3)α-EGの利尿作用による高尿酸血漿状態の改善効果について調べることとした。本年度は(3)高尿酸血漿状態の改善効果について検討した。実験I;ラットにはMF食を、さらに飲料水として蒸留水(Control群)、もしくは清酒濃縮物(Sake群)を自由摂取させた。7日間の飼育終了後、Sake群の肝臓重量が有意に増加したが、血漿GOT・GPT活性に差は認められなかった。また血漿BUN濃度、腎臓重量、腎臓の病理組織学的検査において差は認められなかった。総コレステロール、HDL-コレステロール濃度はSake群で有意に高値を示したが、血漿TG濃度には差が認められなかった。一方血漿尿酸濃度はSake群で有意に低値を示した。実験II;ラットにはオキソン酸(2.5%)とのRNA(2%)をMF食に混合した飼料を与えて高尿酸血症状態とした。飲料水として高尿酸群(HU)には蒸留水を、(HU-Sake)群には清酒濃縮物を与え、7日間の飼育を行った。その結果、肝臓重量及び血漿GOT-GPT活性に有意な差は認められなかった。HU-Sake群で血漿総コレステロール濃度は有意に増加したが、HDL-コレステロール濃度およびTG濃度には有意な差は認められなかった。腎臓重量・血漿BUN濃度に有意な差は認められなかったが、HU群では尿酸およびオキソン酸による形態的な変化が認められた。HU-Sake群では形態的な変化が軽微であった。血漿尿酸濃度ならびに尿酸の尿中排泄量はHU-Sake群で有意に低値を示した。以上から清酒濃縮物投与により血中尿酸濃度の低下が認められ、高尿酸血漿状態の改善効果に期待できることが示唆された。また付加的な結果としてコレステロールへの影響が考えられた。しかしそのメカニズムの解明や清酒濃縮物投与量については検討の余地がある。
第2世代ヘテロ核酸による脳血管内皮細胞マイクロRNA制御と脳梗塞治療法開発

平成30年度は、正常マウス及び急性期脳梗塞モデルマウスに対して我々が開発した人工核酸(ヘテロ核酸)の経静脈的投与による遺伝子抑制効果を検証した。Proof of concept(POC)として選択した脳血管内皮細胞特異的マイクロRNA (miR-126)及び、脳梗塞に対して抑制することで病態を改善することが知られているマイクロRNA (miR-155)を標的として人工核酸を作成した。人工核酸は経静脈投与であっても虚血脳の血管内皮細胞にデリバリーされ、強い標的遺伝子抑制効果を発揮した。さらに、miR-126ではVCAM-1、SPRED1などの直接の下流遺伝子が有意に変動すること、また、脳梗塞後の血管新生や脳梗塞体積が変化することが確認された。つまり我々の開発した人工核酸は、経静脈的投与であっても脳梗塞の病態を制御できること、また、脳血管内皮細胞特異的な遺伝子制御を行うことでneurovascular unitを介して虚血脳内の病態を制御できることが証明された。脳梗塞超急性期(発症24時間以内)には脳血管関門(BBB)の破綻は見られず、経静脈的投与では核酸の脳内への送達効率が非常に低かったため、虚血脳における輸送蛋白の解析を行った。その結果、脳梗塞超急性期(発症24時間以内)では、脳血管内皮細胞及び神経細胞において、速やかな脂質受容体の発現亢進が見られることを発見した。これらの結果から、人工核酸に脂質ライガンドを結合させれば脂質受容体発現亢進が見られた虚血部位特異的に人工核酸の送達が可能となる可能性を考えた。実際に脂質ライガンドを結合させたヘテロ核酸を脳梗塞モデルマウスに経静脈的に投与したところ、従来の一本鎖アンチセンス核酸と比較して、マウス脳梗塞モデルにて虚血部位へのデリバリー効果で8-10倍、遺伝子抑制効果で5倍以上の効果を発揮した。平成29年度、平成30年度にかけて当初の計画通り順調に研究を進めている。平成30年度は、脳梗塞に対する虚血特異的な人工核酸の開発研究に関して特許を取得することが出来た。平成31年度は、ヒト由来脳血管内皮細胞低酸素負荷モデルに対するマイクロアレイ解析により得られたマイクロRNA(特許出願中)を標的とした人工核酸(ヘテロ核酸)を作成する。in vitroの検討で最も遺伝子抑制効果の強いヘテロ核酸を脳梗塞モデルマウスに超急性期のタイミングで経静脈的に投与し、虚血病態改善の有無を確認する。脳梗塞モデルは中大脳動脈永久閉塞モデルや中大脳動脈虚血再潅流モデルなど複数のモデルマウスを作成し、MRI画像や病理学的に定量した脳梗塞体積、脳血管内皮細胞の分裂能や遊走能を免疫組織学的手法で評価するだけでなく、レーザードップラーや2次元血流計を使用した経時間的脳血流測定、2016年に我々の施設に導入されたin vivo共焦点顕微鏡(Nikon, A1R+)による微小血管レベルでの機能的血管新生効果、神経学的機能を主要エンドポイントに、核酸投与量別、脳梗塞モデル別に評価を行う。急性期脳梗塞では、neurovascular unitの中心的役割を果たす脳血管内皮細胞を制御することで、血管新生促進効果などにより脳保護、神経再生作用などを促し強い治療効果が期待できるが、現在まで有効な治療法は確立されていない。医学、薬学、工学の連携により、世界最高水準のin vivo遺伝子抑制効果をもつ独自のヘテロ核酸を2.脳梗塞病態特異的に作用する人工核酸技術「細胞内環境応答型核酸」(JP2001/096356)3.ヒト由来脳血管内皮細胞に対して虚血負荷をかけて同定した治療効果の期待できるmicroRNA3つの知財を軸に、急性期脳梗塞の病態に最適化した核酸医薬を開発し、新しい発想の治療薬を創薬する。平成29年度は、当初の計画通り脳梗塞モデルマウスを作成し、マイクロアレイ解析を行った。脳梗塞急性期に治療標的となる虚血周辺領域で、正常脳と比較して変動の強かったmicroRNAを選定し、以前より治療標的として選定していたmicroRNAに加えて新たな標的microRNAを見つけ出すことが出来た。選定したmicroRNAは、脳血管内皮細胞(b.End3)培養系で、細胞にそのmimicを導入し管腔形成能の阻害効果を見ることによりヘテロ核酸による治療標的となりうるmicroRNAを5つ選定することが出来た。また、pHの低下時のみ遺伝子抑制効果を発現する虚血応答性核酸を東北大学和田教授研究室で最適化し、pH 6.3-6.8と虚血病変のあらゆるpHに対応した核酸医薬の分子設計及び合成に成功した。脳血管内皮細胞培養系での、miR-126, -155の遺伝子抑制効果は良好に見られ、それぞれの下流遺伝子であるVEGF、Klf-4 mRNAの変動も容量依存性に見られたことから病態制御が可能と考えたれた。当初の実験計画通り、以下の様に順調に進展している。1.さらなる脳血管内皮細胞制御miRNAの探索と脳血管内皮細胞培養系での機能評価マウス脳梗塞モデルの主には梗塞周辺部位の脳組織を採取し、正常脳とマイクロアレイ解析にて比較することで、脳梗塞急性期において強い変化の認められるmicroRNAを同定した。その中で、脳血管内皮細胞培養系での管腔形成阻害能評価(in vitro評価系)により、そのmicroRNAの発現阻害をすることにより血管新生を促す可能性のある標的microRNAを検出することが出来た。

pH低下時のみに遺伝子抑制効果を発揮する虚虚血応答性核酸を東北大学和田教授研究室にて最適化を行った。脳梗塞時にはpH 6.3-6.8と低下することから、分子内導入フェニルボロン酸部位への置換基導入など分子設計・合成を行い、標的pHに最適化された人工核酸作成に成功した。また、脳血管内皮特異的で血管新生制御作用知られているmiR-126及び、脳梗塞に対する治療効果が報告されているmiR-155を本研究のPOC実験のmicroRNAとして選定している。それぞれのmicroRNAに対して、10種類以上のanti-miR配列から最も遺伝子抑制効果の強いanti-miR配列を脳血管内皮細胞培養系にて同定した。同配列から作成した虚血応答性ヘテロ核酸を細胞内に導入して、標的microRNAの強い抑制効果を定量的RT-PCRで確認した。また、microRNAの下流mRNA(VEGF、Klf-4、Rictorなど)に関しても、容量依存性に変化することが確認できた。平成30年度は、正常マウス及び急性期脳梗塞モデルマウスに対して我々が開発した人工核酸(ヘテロ核酸)の経静脈的投与による遺伝子抑制効果を検証した。Proof of concept(POC)として選択した脳血管内皮細胞特異的マイクロRNA (miR-126)及び、脳梗塞に対して抑制することで病態を改善することが知られているマイクロRNA (miR-155)を標的として人工核酸を作成した。人工核酸は経静脈投与であっても虚血脳の血管内皮細胞にデリバリーされ、強い標的遺伝子抑制効果を発揮した。さらに、miR-126ではVCAM-1、SPRED1などの直接の下流遺伝子が有意に変動すること、また、脳梗塞後の血管新生や脳梗塞体積が変化することが確認された。つまり我々の開発した人工核酸は、経静脈的投与であっても脳梗塞の病態を制御できること、また、脳血管内皮細胞特異的な遺伝子制御を行うことでneurovascular unitを介して虚血脳内の病態を制御できることが証明された。脳梗塞超急性期(発症24時間以内)には脳血管関門(BBB)の破綻は見られず、経静脈的投与では核酸の脳内への送達効率が非常に低かったため、虚血脳における輸送蛋白の解析を行った。その結果、脳梗塞超急性期(発症24時間以内)では、脳血管内皮細胞及び神経細胞において、速やかな脂質受容体の発現亢進が見られることを発見した。これらの結果から、人工核酸に脂質ライガンドを結合させれば脂質受容体発現亢進が見られた虚血部位特異的に人工核酸の送達が可能となる可能性を考えた。実際に脂質ライガンドを結合させたヘテロ核酸を脳梗塞モデルマウスに経静脈的に投与したところ、従来の一本鎖アンチセンス核酸と比較して、マウス脳梗塞モデルにて虚血部位へのデリバリー効果で8-10倍、遺伝子抑制効果で5倍以上の効果を発揮した。平成29年度、平成30年度にかけて当初の計画通り順調に研究を進めている。平成30年度は、脳梗塞に対する虚血特異的な人工核酸の開発研究に関して特許を取得することが出来た。平成30年度は、主にマウス脳梗塞モデルでの脳血管内皮細胞におけるmiRNA抑制効果やデリバリー効果に関してin vivoでの検証を行う。
有痛性糖尿病性神経障害発症におけるテトロドトキシン抵抗性Na^+チャネルの関与

【目的】糖尿病には種々の末梢神経障害が合併し、多彩な臨床症状を呈することが知られている。概ね「しびれ」「疼痛」に代表される陽性症状と、「感覚鈍麻」「感覚脱失」に代表される陰性症状に大別できるが、陽性症状の中の疼痛は有痛性糖尿病性神経障害と呼ばれ、患者QOLの低下の原因となり得るため、早急な管理が必要となる場合が多い。これらの症状の成因を解明する目的で、糖尿病ラットから単離した脊髄後根神経節(DRG)神経細胞を用いて、痛覚の情報伝達に関与しているテトロドトキシン抵抗性ナトリウムチャネル(TTX-R Na^+ channel)の機能について、電気生理学的手法を用いて検討した。【結果】糖尿病群においてTTX-R Na^+の電流密度が正常群に比して有意に増大し、TTX-R Na^+ channel機能が亢進していることを確認した。また糖尿病性細小血管症の治療薬として注目されている選択的PKCβ阻害薬LY333531(LY)について、TTX-R Na^+ channelに及ぼす影響についても検討したところ、LY投与によりTTX-R Na^+ channelの機能異常が改善された。【考察】DRG神経細胞でのTTX-R Na^+ channelの機能解析を実施し、糖尿病でその機能が亢進していることを確認した。TTX-R Na^+ channelの機能異常は末梢神経の易興奮性に直結するため、本研究は有痛性糖尿病神経障害の発症機序を考察する上で重要であると思われる。またPKC自体も痛覚の情報伝達を司る求心性線維の興奮性に関与していることから、PKCβ阻害薬が末梢神経の異常興奮を直接是正する可能性があり、有痛性糖尿病神経障害の治療薬として有用である可能性が示唆された。【課題】LYの作用機序として注目されているNO-cGMP系の関与を検討したが、現時点では明らかな結果は得られなかった。今後更なる細胞生理学的検討が必要と考えられる。【研究の背景および目的】糖尿病患者および糖尿病動物において、痔痛や知覚過敏といった神経興奮性の亢進を示唆する症状が認められる。これらの症状を説明するものとして、痛覚閾値の低下、自発興奮の亢進などが報告されているが、細胞生理学的に検討した報告は少ない。今回、実験的糖尿病モデルラットから単離した脊髄後根神経節(DRG)神経細胞を用いて、痛覚の情報伝達に深く関与しているテトロドトキシン抵抗性ナトリウムチャネル(TTX-R Na+ channel)の機能について電気生理学的手法を用いて検討した。また、糖尿病性神経障害の治療薬として現在治験中の選択的PKCβ阻害薬LY333531(LY)について、糖尿病ラットの痛覚過敏を改善させることが報告されていることから、LYのTTX-R Na+ channelに及ぼす影響についても検討した。【結果】1.糖尿病群においてTTX-R Na+の電流密度は正常群に比し有意に増大した。2.LY投与下ではTTX-R Na+電流は濃度依存的かつ可逆的に抑制された。3.LYによるTTX-R Na+電流の抑制は、糖尿病群にてより強い効果を示した。TTX-R Na+ channelの機能異常は「末梢神経の異常発火」に直結するため、本研究は有痛性糖尿病神経障害の発症機序を考察する上で極めて重要であると思われる。またPKCβを中心としたTTX-R Na+ channelの調節機序が明らかとなり、特異的治療薬の開発に繋がるものと思われる。【課題】

LYの作用機序として注目されているNO-cGMP系の関与を検討したが、現時点では明らかな結果は得られなかった。今後更なる細胞生理学的検討が必要と考えられる。
4.5S RNA_Hと結合するタンパク質およびその複合体の機能の解析

(1)RT-PCRによって得たマウスhnRNP CタンパクcDNAをプローブとし、マウス肝臓cDNAライブラリーをスクリーニングした結果、4種類のCタンパク・アイソフォームをコードするcDNAを単離した。このうち2つは、ヒトhnRNP C1およびC2タンパク質のホモログに相当すると考えられるため、それぞれマウスhnRNP C1およびC2タンパク質とし、残る2つはヒトにはホモログが存在しないマウスhnRNP C3、C4タンパク質とした。(2)それぞれのcDNAを、ヒスチジンタグをつけた組み換えタンパクとして大腸菌において発現させ、精製したものを用いて、UVクロスリンク法によりin vitroにおける4.5S RNA_Hとの結合を検討した結果、すべてのアイソフォームが同程度の強さの結合を示した。(3)4つのCタンパクアイソフォームが、それぞれ別の遺伝子にコードされているのか、一次転写産物の選択的スプライシングによるものなのかを検討するため、hnRNP Cタンパク遺伝子のイントロンの配列をPCRによって単離したところ、2箇所のスプライシング・ドナー部位と2箇所のアクセプター部位の選択の組み合わせにより、単一のpre-mRNAが4種類のmRNAを生ずることが示唆された。また、イントロンの配列をプローブとして、マウスゲノムDNAのサザン・ハイブリダイゼーションを行った場合には単一のバンドが検出されるのに対し、プローブとしてcDNA配列の一部を用いた場合には、6-8本のバンドが検出された。従って、マウスのゲノム上には、hnRNP Cタンパクをコードする単一のアクティブな遺伝子が存在する一方で、複数のprocessed pseudogeneが存在するものと思われる。(4)精製したCタンパク質でマウスを免役し、モノクローナル抗体のスクリーニングを行なった。現在までのところ1種類のIgM抗体と2種類のIgG抗体が得られている。今後、この抗体を用いて、in vivoにおける4.5S RNA_HとhnRNP Cタンパク質の複合体の存在について検討する計画である。
抗体療法及びがんの前臨床試験研究

新たながんの診断と治療法開発に向けて、抗体技術を用いての前臨床試験をにらんで分子基盤に基づいた研究を推進した。B型肝炎による肝癌発症に関わる研究では、HBe抗原はPreC領域の変異と関連し、core promoter領域変異との病態の進展やgenotypeとの関連性を明らかにした。また、若年者肝癌発症のリスクに関わるHBVの組み換え配列を同定し、その血清診断への応用の基礎を築いた。肺小細胞癌においてガングリオシドGD2蛋白発現は癌細胞の増殖や浸潤性に関与し、抗GD2抗体はJNK/SAPKの活性化を介したカスペース活性依存性アポトーシスの誘導により抗腫瘍効果を発揮することを見出した。リンパ系腫瘍発症に関わる転写制御因子MUM1に関してはその下流分子としてケモカインであるMIG分子を見つけ、B細胞性慢性リンパ性白血病(B-CLL)細胞のうち50%がMIGを発現し、抗MIGあるいは抗CXCR3中和抗体を用いて腫瘍増殖抑制効果を見出し、あらたなリンパ系腫瘍における分子標的を同定した。抗体リモデリングでは、抗変異EGFレセプター抗体の単鎖抗体の作製に成功し、99mTc標識となり可能となり、脳内移植腫瘍に対し極めて高い集積性を確認し得た。また、細胞増殖に関わるp16inkの最小機能ドメインをp16ink欠損腫瘍細胞に導入し、明らかな細胞増殖阻害を確認、抗体分子の生細胞内での機能化に成功し、トランスポーターペプタイドの開発を推進した。ケモカインを標的とした抗体療法の開発では、成人T細胞性白血病を始めとしたT細胞性腫瘍においてCCR4分子が高頻度に発現し、独立した予後因子であるとともに腫瘍生物学的重要性に深く関わること、さらには低フコース化したCCR4抗体による強力な抗腫瘍効果をin vitroおよびin vivoで明らかにでき、早期臨床試験の基盤的研究を完遂する事ができた。難治性がんや高齢者のがんなどに対するQOLを踏まえた科学的な治療法としての分子標的療法を実現性の高い抗体療法の再開発の立場として、ヒトがんに特異性が高く多くの固形癌に共通して過剰発現を認めるCEA,造血器腫瘍に発現を認め免疫調節作用を有するCD25,肺癌の自己増殖に関与するc-kitを対象とした抗c-kit,CEA,CD25抗体の生理活性を有する単鎖抗体を作製中である。また、肺癌治療を目的として小細胞肺癌で高発現が認められるガングリオシドGD2を標的とした抗体療法の可能性に関して基礎的検討を行った。GD2の発現を認めない小細胞肺癌株にα.2,8シアル酸転移酵素遺伝子を導入し糖鎖リモデリングを行いその生物学的特性に関して検討した結果、遺伝子導入株において有意な増殖促進を認めると共に有意な癌細胞浸潤能の亢進が認められた。このGD2高発現小細胞肺癌株における増殖効果は、抗GD2抗体(クローン220-51)投与により有意に抑制されその腫瘍活性機構の解析では、抗体処理によりDNAラダー形成の誘導,annexin V陽性細胞の検出,caspase-3の活性化を認め、アポトーシスが関与することを見いだした。加えて抗癌剤との併用により増強効果が得られた。更に、新しい概念である転写制御療法の可能性を分子標的としてヒストンデアセチラーゼ(HDAC)を対象として成立するか検討し結果、本邦で開発された阻害剤FK228は、PLZF-RARaならびにPML-RARa転座白血病に分化を誘導した。マウスモデルにおいてもこの併用は有効で、ヒストンアセチル化のみならず、分化、増殖抑制、アポトーシスを誘導した。次に、リセプターチロシンリン酸化酵素FLT3を標的とした研究では、変異型FLT3遺伝子はマウスIL3依存性骨髄性細胞株をIL3非依存的に増殖させ、マウスに接種すると白血病死が誘導された。申請者らは20年以上に亘り続けてきた基盤的抗体作製技術を用いたがんの「抗体療法」の方向性に、分子標的療法の観点からの基礎的および臨床的研究成果の獲得、およびtranslation researchの実践を目指してきた。1)抗体のリモデリングでは99mTc標識可能な抗変異EGFR抗体を作成し生体内における腫瘍集積性、抗体結合マグネタイトリポソームと磁場照射による腫瘍の温熱療法でのHspを介した腫瘍縮小効果を確認し、抗体の臨床応用に向けて飛躍的進歩につながる可能性を見出した。2)肺小細胞癌において抗ガングリオシド抗体のJNK/SAPKの活性化を介したアポトーシスを介した抗腫瘍効果、シスプラチンなどの抗癌剤のcytotoxicityを大きく亢進させることを見出しあらたな分子標的候補を同定した。3)クラスIIIレセプターチロシンキナーゼであるFLT3が急性骨髄性白血病(AML)で高頻度に変異型FLT3を認め予後不良因子であることを認め、この変異型FLT3遺伝子は腫瘍増殖能を有しHerbimycin AがHSP90を介してその効果を発揮することを明らかにしAMLの悪性度進展の一機構を解明した。4)抗ケモカインレセプター抗体のT細胞系腫瘍株の増殖抑制効果および免疫染色による迅速診断法を見出し、成人T細胞性白血病(ATL)の多くはCCR4陽性Th2タイプのリンパ腫瘍で、皮膚浸潤とCCR4発現の相関性を明らかにした。5)本邦でのB型肝炎ウイルスgenotypeに基づく肝癌発症リスクの同定法、また肝癌を若年発症する台湾でのgenotype B型の特異的なgenotype C型へのrecombinationを発見し、ウイルス肝癌のリスク因子の同定に成功した。がんの「抗体療法」の視点から基礎研究成果を臨床へ迅速に引き上げていくtranslation researchの実践を、以下の項目から検討してきた。

B型肝炎ウイルスのなかで肝癌発症リスクがgenotype間で異なることを見出したため、ハイリスクgenotypeの迅速血清診断法としてモノクローナル抗体を作製、臨床応用への可能性を検証している。ガングリオシドGD2抗原が肺小細胞癌に高発現し増殖亢進作用をもたらし、GD2抗体によるJNK系を介したアポトーシス誘導増殖抑制効果、抗癌剤併用効果、さらにヒト化抗体、IL2融合抗体のより強力な腫瘍抑制効果をin vitro及びin vivo(マウス)で確認しえた。多発性骨髄腫関連原癌遺伝子MUM1/IRF4が、慢性リンパ性白血病での予後不良因子、骨髄腫の成立・進展に関わる分子であることを明らかとした。またMUM1関連分子候補をマイクロアレイにて4つ同定し、そのうちのひとつMIG遺伝子はMUM1によって誘導されることを確認した。抗変異EGFレセプター抗体(3C10)では脳内腫瘍移植マウスの実験で優れた腫瘍への集積と99mTc標識が可能であることを示した。細胞の遊走、細胞間接着に関わるケモカインCCR4が成人T細胞性白血病(ATL)で高発現し、予後不良因子、皮膚浸潤との関連を見出した。さらにATL及びCCR4発現T細胞系腫瘍細胞株でキメラCCR4抗体によるADCC活性と増殖抑制効果を確認できた。抗体を用いた前臨床試験への導入をにらみ、さらなる検討を加えていく。抗体を用いたがんの診断・治療法の開発のため前臨床試験を中心にtranslational researchを推進させながら以下の成果を得た。慢性B型肝炎患者血清を用いS遺伝子領域のRFLP法によるgenotype決定法を開発し、民族性、病態の進展、肝癌発症リスクと関わることを明らかにした。肺小細胞肺癌で発現するガングリオシドGD2に対するinterleukin2結合抗GD2抗体は強力なカスペース活性依存性アポトーシスを誘導し、マウス肺内転移モデルでも抗腫瘍効果を確認することができた。転座関連原がん遺伝子であるMUM1/IRF4に関わる下流分子をcDNAアレイにてスクリーニングし、Monokine induced by IFNγ(Mig)とFK506 bindingProtein 3はMUM1の直接の標的遺伝子であることを明らかとし、さらにMigのレセプターであるCXCR3を標的とした中和抗体により増殖抑制効果を見出した。リモデリング抗体では変異EGFレセプター抗体、抗CD25抗体の単鎖抗体の作製に成功し、変異EGFレセプター抗体では脳内移植腫瘍に対し極めて高い集積性を確認し、ヒト抗体とのキメラ抗体を作製した。ケモカインレセプターCCR4では成人T細胞性白血病(ATL)のほか末梢性T細胞性リンパ腫でも高頻度に発現し予後不良因子であること、さらにATL及びT細胞系腫瘍検体で抗CCR4抗体が自己のエフェクター細胞を介したADCCによる増殖抑制効果を確認し,早期臨床試験への準備を展開した。新たながんの診断と治療法開発に向けて、抗体技術を用いての前臨床試験をにらんで分子基盤に基づいた研究を推進した。