hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
微細線維関連タンパクのTGF-β抑制機能を応用した瘢痕抑制法の開発

口蓋裂に対する口蓋形成術において、術後に起こる瘢痕を予防的に解決する方策は未だ不十分である。瘢痕は創傷治癒後にtransforming growthfactor-β(TGF-β)のシグナル伝達が抑制されず、線維芽細胞が活性化されたままである場合に形成される。申請者は、適度な力学的負荷環境に置かれた線維芽細胞が、微細線維関連タンパクmicrofibrilassociated glycoprotein-1 (MAGP-1)の産生を増大させること、MAGP-1は微細線維の規則的配列に接着分子として主要な役割を演じることを示した。近年、このようなMAGP-1が、組織内において活性型TGF-βを捕捉することで、線維芽細胞のTGF-βによる異常なシグナリングの持続と過剰な結合組織形成の誘導を阻止することが報告された。これらのことを考え合わせ、Push-back法などの術後瘢痕に対するMAGP-1の応用を着想した。本研究は、口蓋形成術後の組織に対するMAGP-1標品の応用が、線維芽細胞のTGF-βシグナル伝達の遮断による瘢痕形成の予防に有用である可能性を示すことを目的とする。2018年度は、In vitro研究に関して、マウス線維芽細胞の細胞伸展培養による微細線維成分分析を行った。その結果、微細線維成分MAGP-1、Fibrillin-1とEMILIN-1 mRNA・タンパクが細胞伸展によって増大すること、これらは培養物において、複合体として共存し、免疫染色で共染されること、規則的配列の増生はMAGP-1, Fibrillin-1とEMILIN-1によって促進され、抗MAGP-1抗体添加伸展培養細胞ではMAGP-1, Fibrillin-1とEMILIN-1産生が抗体濃度依存性に阻害されることを見出した。2018年度ではIn vitro研究は、マウス線維芽細胞を使用し、瘢痕を想定した牽引培養で微細線維成分MAGP-1, Fibulin-5とEMILIN-1発現量を解析、MAGP-1発現を基準化する作業を終了した。現在、2018年度終了予定の培養上清および細胞のTGF-β含有量、I・III型コラーゲン産生の基準化、ならびにMAGP-1 siRNAおよび抗MAGP-1抗体添加によるMAGP-1阻害環境で伸展培養した細胞について、MAGP-1, Fibulin-5, EMILIN-1およびI・III型コラーゲンの発現量の評価を行っている。2019年度は、In vivo研究に着手する。マウス口蓋の骨膜を除去して骨面を解放、瘢痕モデルを作成する。MAGP-1標品による瘢痕形成の予防、もしくは抗MAGP-1抗体による瘢痕形成の促進と瘢痕径の増大を観察する。痂皮形成直後から抗体希釈液、MAGP-1標品含有AtelocollagenあるいはMatrigelを痂皮の表面に塗布する。ドラッグデリバリー効果は確認している。正常治癒と瘢痕の形態評価を行う。両者の肉眼的鑑別は1ヶ月で可能となる。非脱灰組織をOCTコンパウンドに包埋して、タングステンナイフと切片専用粘着テープを用いて、川本法で10μの凍結連続切片を作製する。膠原線維・微細線維の産生量をHEおよびVillanueva骨染色、Azan染色にて評価する。TGF-βの組織内含有量と線維芽細胞におけるSMAD-2/3リン酸化、ならびに組織のI・III型コラーゲン産生を、組織リアルタイムPCRと免疫染色のImageJ解析で定量する。

2018年度ではIn vitro研究は、マウス線維芽細胞を使用し、瘢痕を想定した牽引培養で微細線維成分MAGP-1, Fibulin-5とEMILIN-1発現量を解析、MAGP-1発現を基準化する作業を終了した。現在、2018年度終了予定の培養上清および細胞のTGF-β含有量、I・III型コラーゲン産生の基準化、ならびにMAGP-1 siRNAおよび抗MAGP-1抗体添加によるMAGP-1阻害環境で伸展培養した細胞について、MAGP-1, Fibulin-5, EMILIN-1およびI・III型コラーゲンの発現量の評価を行っている。2019年度は、In vivo研究に着手する。マウス口蓋の骨膜を除去して骨面を解放、瘢痕モデルを作成する。MAGP-1標品による瘢痕形成の予防、もしくは抗MAGP-1抗体による瘢痕形成の促進と瘢痕径の増大を観察する。痂皮形成直後から抗体希釈液、MAGP-1標品含有AtelocollagenあるいはMatrigelを痂皮の表面に塗布する。ドラッグデリバリー効果は確認している。正常治癒と瘢痕の形態評価を行う。両者の肉眼的鑑別は1ヶ月で可能となる。非脱灰組織をOCTコンパウンドに包埋して、タングステンナイフと切片専用粘着テープを用いて、川本法で10μの凍結連続切片を作製する。膠原線維・微細線維の産生量をHEおよびVillanueva骨染色、Azan染色にて評価する。TGF-βの組織内含有量と線維芽細胞におけるSMAD-2/3リン酸化、ならびに組織のI・III型コラーゲン産生を、組織リアルタイムPCRと免疫染色のImageJ解析で定量する。理由は、科研費申請書に記載した通りに内定予算を使用して研究計画を完遂するため。In vitro研究では、マウス線維芽細胞を細胞伸展装置専用コラーゲンコートチャンバーにて瘢痕を想定した牽引培養を行う。培養上清および細胞のTGF-β含有量、I・III型コラーゲン産生を基準化する。抗MAGP-1抗体添加によるMAGP-1阻害環境で伸展培養した細胞について、MAGP-1, Fibulin-5, EMILIN-1およびI・III型コラーゲンのmRNA発現量をリアルタイムPCRで、さらに線維配列の規則性を免疫染色とImageJによる面積定量で評価する。培養上清のTGF-β含有量、I・III型コラーゲン産生がMAGP-1阻害環境で増大することを証明する。In vivo研究では、マウス口蓋の骨膜を除去した瘢痕モデルを作成する。MAGP-1標品による瘢痕形成の予防、抗MAGP-1抗体による瘢痕形成の促進と瘢痕径の増大を観察する。MAGP-1標品含有AtelocollagenあるいはMatrigelを痂皮の表面に塗布する。非脱灰組織をOCTコンパウンドに包埋してタングステンナイフを用いて川本法で凍結連続切片を作製する。膠原線維・微細線維の産生量をHEおよびVillanueva骨染色にて評価する。TGF-βとI・III型コラーゲンの組織内含有量を免疫染色のImageJ解析で定量する。
mTOR・Mnkプロテインキナーゼ系による翻訳調節を介した細胞増殖制御機構の解明

がん細胞の増殖における翻訳制御機構を解明するために,CRISPR/Cas9法を用いてヒトHeLa細胞のMnk1およびMnk2の遺伝子破壊を行い,mTOR経路とMnk経路の相互作用を解析した。その結果,mTORC1を阻害するとMnk2を介して翻訳開始因子eIF4Eのリン酸化が亢進すること,また,Mnk1が各種の増殖刺激によって活性化されるのに対しMnk2は逆に抑制されること,これらの活性制御機構の違いには主にキナーゼドメインのC末端領域が関与することを明らかにした。本研究により,がんの分子標的治療においてmTOR阻害剤とMnk阻害剤の併用効果が期待できることが示唆された。平成27年度の研究計画に基づいて,以下の研究を実施した。まず,各種Mnkノックアウト細胞(Mnk1-KO, Mnk2-KO, Mnk1/2-ダブルKOマウス由来の株化線維芽細胞)を用いて,増殖因子や過バナジン酸刺激によるMnk活性化動態を検討した結果,Mnk1が増殖刺激によって速やかに活性化されるのに対し,Mnk2は逆に不活性化されることを示す結果を得た。また,Mnk1とMnk2では2種類のMnk阻害剤(CGP57380及びCercosporamide)への感受性も異なることが示唆された。Mnk1とMnk2が全く逆の活性化動態を示す例はこれまで報告されておらず,TORシグナル系からのクロストークとの関連について解析中である。次に,Mnk1とMnk2の活性制御機構を解析する目的で,Mnk1とMnk2のキメラ分子発現プラスミドを6種類構築した。これらをMnk1/2ダブルKO細胞で発現させて増殖刺激によるMnk活性化動態を検討した結果,Mnk1型(誘導的活性化),Mnk2型(誘導的不活性化),及び中間型(活性不変)に分類でき,活性化動態を決定するのは主に2か所のリン酸化部位(ヒトMnk1のThr209及びThr214残基)であることが示唆された。他方,miR30模倣RNA発現系を利用して各種のヒト由来細胞でMnk1を誘導的に発現抑制する系の樹立を試み,同一標的に対する複数のmiR30模倣RNAを共発現させることで抑制効率が高まることを見出した。また,トランスレイトーム解析(mRNA翻訳プロファイリング)の第1段階として,エストロゲン受容体(ER)と活性化型変異Mnk1のキメラ分子を発現するMnK-DKO細胞を樹立した。この細胞を4-hydroxy tamoxifenで処理することによってeIF4Eの急速なリン酸化が生じることを確認した。『研究実績の概要』で記したように,当初の計画はおおむね順調に進展した。しかし,miR30模倣RNA発現系を用いたMnk1ノックダウン系では,eIF4Eリン酸化レベルの低下は観察されたが,生理的機能を解析する上で十分な抑制には及ばないことが示され,この部分に関しては予定通りに計画を進めることができなかった。この点についてはCRISPR/Cas9システムを利用することにした。H27年度の研究で作成したMnk1発現MEF細胞と親株のMnk-DKO MEF細胞について,二次元差分電気泳動(2D-DIGE)によるプロテオーム解析を行った結果,Mnk1の発現条件下でタンパク質レベルが低下する候補タンパク質としてKRIT1(Krev-interaction trapped 1)を同定した。KRIT1はRas-MAPキナーゼ経路への関与が示唆されており,KRIT1 mRNAの翻訳効率がMnk1によって制御される可能性について検討している。また,Mnk1あるいはMnk2のノックアウトマウス(Mnk1-KO, Mnk2-KO)から樹立した胚性線維芽細胞(MEF)を用いて血清飢餓後の増殖因子刺激によるMnk活性化動態を検討した結果,Mnk2-KO細胞では増殖刺激によってeIF4Eのリン酸化が速やかに誘導されるのに対し,Mnk1-KO細胞ではeIF4Eリン酸化が逆に低下することを見出した。すなわち,Mnk1が存在しない条件下では,増殖刺激によってMnk2の不活化とeIF4Eの脱リン酸化が促進されることが示された。他方,CRISPR/Cas9システムを利用してヒトHeLa細胞のMnk1遺伝子ノックアウトを試みた。pX330プラスミドを用いてヒトMnk1遺伝子の2ヶ所を標的とする発現ベクターを作成してピューロマイシン耐性遺伝子との共トランスフェクションを行い,一過的に薬剤耐性となったHeLa細胞集団を選択した。この細胞集団では内在性Mnk1の発現が検出限界以下に低下しており,HeLa細胞では迅速・簡便に遺伝子ノックアウトができることが分かった。このMnk1-KO HeLa細胞では,マウスMnk1-KO MEF細胞と同様,血清による増殖刺激によってeIF4Eのリン酸化が低下することを見出し,Mnk2活性制御の普遍性が示唆された。『研究実績の概要』で記したように,Mnk1/2の活性制御機構の研究計画についてはおおむね順調に進展した。CRISPR/Cas9システムを用いた一過性薬剤選択法によってHeLa細胞で迅速・簡便に遺伝子ノックアウトを行えることが判明したので,当初に計画していたmiR30模倣RNA発現系による種々のヒトがん細胞のMnk1ノックダウン研究については, CRISPR/Cas9法によるMnk遺伝子ノックアウトに変更することにした。また,2D-DIGEによるMnk1標的タンパク質のプロテオーム解析についても,候補分子KRIT1を同定し,その解析に着手することができた。

しかし,eIF4Eのリン酸化によるトランスレイトーム変動を解析する計画については,mRNAと翻訳開始複合体を免疫沈降する条件設定が期待通り進まなかった。H28年度の研究では,CRISPR/Cas9システムによるヒトHeLa細胞の遺伝子ノックアウト(KO)操作について,クローン単離を経ずに簡便かつ高効率に行う手法を開発した。H29年度は,この方法を用いてHeLa細胞由来のMnk1-KO,Mnk2-KO,及びMnk1/2ダブルKO細胞を作成し,内在性Mnk1あるいはMnk2の発現が検出限界以下に低下していることを確認した。これらの細胞を用いて血清刺激によるMnk活性化動態を検討した結果,Mnk2-KO細胞では増殖刺激によってeIF4Eのリン酸化が速やかに誘導されるのに対し,Mnk1-KO細胞ではeIF4Eリン酸化が逆に低下することを見出した。すなわち,Mnk1が存在しない条件下では,増殖刺激によってMnk2の不活化とeIF4Eの脱リン酸化が促進されることが示された。さらに,mTORC1シグナル伝達複合体の阻害剤であるEverolimusを用いて解析した結果、mTORC1の阻害によってMnk2を介したeIF4Eリン酸化が促進される事を見出した。mTORC1を阻害するとmTORC2が活性化されることが知られており、上記の結果からmTORC2からMnk2へのクロストークが存在する可能性が示唆された。他方,上記HeLa由来Mnk-KO細胞を用いてJNK経路の関与について解析したところ,Mnk1-KO細胞におけるeIF4Eリン酸化がJNK阻害剤SP600125あるいはCC-401のいずれによっても強く阻害されること,Mnk2-KO細胞では阻害効果は認められないことを見出した。この結果はMnk2の活性化にJNK経路が関与している可能性を示唆しており,Mnk1/Mnk2はERKまたはp38によってのみ活性化されるという従来の知見の再検討を促すものである。がん細胞の増殖における翻訳制御機構を解明するために,CRISPR/Cas9法を用いてヒトHeLa細胞のMnk1およびMnk2の遺伝子破壊を行い,mTOR経路とMnk経路の相互作用を解析した。その結果,mTORC1を阻害するとMnk2を介して翻訳開始因子eIF4Eのリン酸化が亢進すること,また,Mnk1が各種の増殖刺激によって活性化されるのに対しMnk2は逆に抑制されること,これらの活性制御機構の違いには主にキナーゼドメインのC末端領域が関与することを明らかにした。本研究により,がんの分子標的治療においてmTOR阻害剤とMnk阻害剤の併用効果が期待できることが示唆された。『研究実績の概要』で記した成果を踏まえ,それらをさらに発展させた研究をH28年度以降の計画に沿って実施していく予定である。特に,Mnkの活性化動態について,研究計画を立案した段階では,Mnk1が各種の刺激によって誘導的に活性化されるのに対してMnk2の活性は構成的であり大きく変動しないと予想していた。しかし今回,Mnk2はチロシンキナーゼシグナル伝達経路の活性化に応答して逆に不活性化される可能性が見出されたことは意外な結果であり,この知見を踏まえて研究を進める必要性が生じた。
力学系と計算トポロジーの融合による新しいデータ解析技術の開発

本研究では,力学系と計算トポロジーを融合させることで,双方の分野の困難を突破する新しい手法を提案する事を目指す.まず,力学系で開発されたConnection Matrixの理論とパーシステントホモロジー理論を融合させることで,時系列に適用可能な位相的データ解析法を構築する.また逆に,計算トポロジーの理論に基き,位相的な構造の変化に着目した,応用可能性の高い新しい力学系の安定性概念を定義することを目指す.これらの目的を達成するため,力学系の研究と位相的データ解析の双方で指導的な役割を果たしてきた,米国ラトガース大学のミシャイコフ教授のグループとの連携を進める.本研究では,力学系と計算トポロジーを融合させることで,双方の分野の困難を突破する新しい手法を提案する事を目指す.まず,力学系で開発されたConnection Matrixの理論とパーシステントホモロジー理論を融合させることで,時系列に適用可能な位相的データ解析法を構築する.また逆に,計算トポロジーの理論に基き,位相的な構造の変化に着目した,応用可能性の高い新しい力学系の安定性概念を定義することを目指す.これらの目的を達成するため,力学系の研究と位相的データ解析の双方で指導的な役割を果たしてきた,米国ラトガース大学のミシャイコフ教授のグループとの連携を進める.
超高圧高温下における典型元素金属液体の分子動力学シミュレ-ション

地球の外核の物質の分子シミュレ-ションを最終目的とし、本年度は超高圧下での典型元素の金属融体の分子シミュレ-ションの基本的問題の解決をめざした。問題の第1は、常圧から超高圧まで適用可能な金属原子間ポテンシャルモデルの開発である。従来用いられてきた原子間距離の3乗に反比例する長距離減衰振動ポテンシャルモデルが、充分な物理的意味と広範囲の適用性に欠けることの反省に立って、新たな典型元素金属原子間ポテンシャルモデルを構築した。精密な金属電子論から、その減衰がより速いことから、本モデルでは距離の4乗に反比例することとし、フェルミ半径をあらわに入れることにより体積依存の相互作用モデルを提案した。このモデルを用いて有効に計算するプログラムの開発は第2の課題である。本研究ではこれまで開発してきていたイオンの分子動力学計算プログラムに、いくつかのプログラムからなる計算システムを作成した。これらのモデルとプログラムを用いて、金属Naの結晶と液体の分子動力学計算を超高圧まで行なった。その結課、結晶の高圧誘起相転移を予測し、また超高圧下の液体構造は常圧のものと本質的に変わらないことが予想された。
古墳時代武装具研究の総合化と古代東アジアにおける政治史・文化史的意義の基盤的研究

古墳時代は、前方後円墳を中心として執行された葬送儀礼に武器・武具・馬具(以下、武装具)が大きな比重を占めた時代で、古墳文化は日本古代国家形成期における社会の安定と成長に重要な役割を果たしたとみられる。一方、日本列島の武装具は古代北東アジア諸地域の影響下に成立し、刀剣の卓越性や甲冑・馬具の独自性などに著しい特色がある。本研究は、古墳出土の副葬品や形象埴輪を中心に、武装具形埴輪や古代武装具と古代東アジア諸地域相互における武装具との比較・検討から、古墳時代武装具の古代東アジアにおける特質と政治史・文化史的意義を検討し、原始・古代武装具研究の総合化と日本列島における歴史的意義を解明するための研究基盤を確立することを目的とする。これまでの研究(基盤研究C:課題番号12610422・基盤研究B:課題番号17320127・基盤研究C:課題番号23520943)で把握した日本列島各地の主要古墳出土形象埴輪のうち、出土状況が明確な資料を分析対象として選択し、調査を実施した。また、併せて中国・韓国を含めた武装具資料を対象として調査し、平成28年には韓国・全羅南道地方において動物形の形象埴輪を含む資料調査を実施したほか、平成28・29年に韓国・慶北大學校において調査成果を公開する研究会および報告会を開催した。これらを受けて、4年目の平成30年度は重点的に、九州・近畿地方の福岡県沖出古墳・京都府蛭子山1号墳出土埴輪群の調査・分析および研究会を実施したほか、最終年度として収集した写真資料等の整理およびデータの整備を行った。古墳時代は前方後円墳を中心とした葬送儀礼において、武器・武具・馬具(以下、武装具)が大きな比重を占めた時代であり、古墳文化は日本古代国家形成期における社会の安定と成長に重要な役割を果たしたとみられる。一方、日本列島の古墳時代武装具は古代北東アジア諸地域の影響下に成立し、刀剣・矢鏃や武具などにおける装飾性の卓越や伝統性などに特色がある。本研究は、古墳副葬品や形象埴輪を中心に、古墳時代武装具の古代東アジア諸地域相互における歴史的位置を明確化する。また、東アジア諸地域の武装具や古代武装具との比較・検討から、日本列島の武装具と東アジア武装具の性格および政治・文化史的意義を分析し、日本列島における原始・古代武装具研究の総合化と歴史的意義を解明するための研究基盤を確立する。平成27年度は、日本列島各地方の主要古墳出土形象埴輪および武装具資料を調査し、基礎的情報の整備を進めた。具体的には、東京国立博物館・韓国国立慶州博物館・同大邱博物館、および福岡県嘉麻市・大分県大分市・大阪府高槻市・群馬県伊勢崎市において、資料調査を実施した。一方、調査情報を基礎に古墳時代武装具関係資料を比較・検討し、その政治・文化史的意義の研究を推進した。具体的には、資料調査時における研究会・会議で調査成果の分析・研究報告を行った。また、平成28年2月に、韓国・慶北大學校において公開共同研究会を開催し、研究成果を発表すると共に韓国側研究協力者と意見交換を行った。なお、これらの成果は、平成27年10月に東京国立博物館平成館で公開したリニューアルした新考古展示室の展示室計画および展示にも反映させた。これまでの研究で把握した主要な形象埴輪出土古墳のうち、出土状況が明確な資料を分析対象として選択している。平成27年度は、九州・関東地方を重点的に調査し、福岡・大分県・群馬県などの資料を対象とした。また、研究計画と研究対象・研究成果等の共有化を図るために、6回(15日間)の調査と共に、各所蔵機関および東京国立博物館において7回(8日間)の研究会を実施し、研究計画と研究対象・研究成果等の調査情報を参加者間で把握すると共に共有化を図った。うち、1回は2016年2月に韓国・慶北大學校において、韓国側研究協力者と共に公開共同研究会を開催した。ここでは、これまでの研究成果と研究課題を発表し、評価等の意見交換を行うと共に、韓国国内における本研究課題に関する朝鮮考古学の武装具研究状況について助言を得た。一方、日本列島の古墳時代武装具は古代北東アジア諸地域の影響下に成立し、武装具などにおける装飾性の卓越や伝統性などに特色がある。また、東アジア諸地域や古代の武装具との比較・検討から、日本列島と東アジア武装具の性格および政治・文化史的意義を分析し、日本列島における原始・古代武装具研究の総合化と歴史的意義を解明する研究基盤を確立する。2年目である平成28年度は、日本列島各地方の主要古墳出土形象埴輪および武装具資料を調査し、基礎的情報の整備を進めた。具体的には、東京国立博物館・韓国全南文化財研究所・韓国大韓文化財研究院保管資料、および福岡県嘉麻市・大阪府高槻市において資料調査を実施した。一方、事前調査情報を基礎に、資料調査時における研究会・会議において、調査成果の分析・研究報告を行った。

また、韓国出土円筒形土器および形象埴輪と古墳時代武装具関係資料を比較・検討し、その政治・文化史的意義の検討を進め、平成29年2月には韓国・慶北大學校において第2回公開合同研究会を開催し、調査研究成果を発表すると共に韓国考古学研究協力者との意見交換を行った。なお、これらの成果は東京国立博物館の常設展示(考古展示室)および特集展示等の計画および展示にも反映させる準備を進めた。調査研究対象には、従来の研究(基盤研究(C):研究課題12610422,基盤研究(B):研究課題17320127,基盤研究(C):研究課題23520943)で把握した主要な古墳出土形象埴輪のうち、出土状況が明確な資料を分析対象として選択した。平成28年度は、九州・近畿地方を重点的に調査し、福岡県・大阪府などの資料を対象とした。また、研究計画と研究対象・研究成果等の共有化を図るために、5回(18日間)の調査と共に、各所蔵機関および東京国立博物館において4回(4日間)の研究会を実施し、研究計画と研究対象・研究成果等の調査情報を参加者間で把握すると共に共有化を図った。このうち、1回は平成29年2月に韓国・慶北大學校において、韓国側研究協力者と共に慶北大學校合同研究会として、公開で「第2回古代韓日古墳研究交流会」を開催した。ここでは、主に平成28年8月に韓国で実施した韓国出土円筒形土器および形象埴輪の調査・分析成果と研究課題を発表し、日本・韓国側双方の評価等について意見交換を行った。また、本研究課題に関する韓国(朝鮮)考古学の研究状況についても、助言を得ることができた。なお、下半期は東京国立博物館常設展示(考古展示室)および特集展示等と共に、東京国立博物館所蔵資料(列品)の整理を中断したため、本研究の目標を十分には達成で出来なかった。古墳時代は、前方後円墳を中心として執行された葬送儀礼に武器・武具・馬具(以下、武装具)が大きな比重を占めた時代で、古墳文化は日本古代国家形成期における社会の安定と成長に重要な役割を果たしたとみられる。一方、日本列島の武装具は古代北東アジア諸地域の影響下に成立し、刀剣の卓越性や甲冑・馬具の独自性などに著しい特色がある。本研究は古墳出土の副葬品や形象埴輪を中心に、武装具形埴輪や古代武装具と古代東アジア諸地域相互における武装具との比較・検討から、古墳時代武装具の古代東アジアにおける特性と政治史・文化史的意義を検討し、原始・古代武装具研究の総合化と日本列島における歴史的意義を解明するための研究基盤を確立することを目的とする。これまでの研究(基盤研究C:課題番号12610422・基盤研究B:課題番号17320127・基盤研究C:課題番号23520943)で把握した日本列島各地の主要古墳出土形象埴輪のうち、出土状況が明確な資料を分析対象として選択した。3年目の平成29年度は九州・近畿地方出土埴輪群を重点的に分析し、併せて中国・韓国を含めた武装具資料を対象として調査を実施した。調査地は福岡県嘉麻市教育委員会・大阪府高槻市立今城塚古代歴史館・京都府与謝野町教育委員会、および中国社会科学院考古研究所・陝西省歴史博物館・陝西省考古研究所(北京市・西安市)、韓国慶北大學校博物館・大邱国立博物館(大邱市)・国立慶州立慶州博物館(慶州市)等である。また、各調査時に随時研究会・会議を開催したほか、平成30年3月24日に慶北大學校博物館で第3回公開合同研究会を開催し、これまでの研究成果および韓国調査成果を公開した。なお、全発表で韓国人考古学研究者をコメンテーターに委嘱し、具体的な所見報告を基に相互に意見交換を行うと共に、本研究課題に関する韓国(朝鮮)考古学の研究状況についても助言を得た。
「草庵和歌集」の享受史の研究

1.「草庵集」の亨受資料である「草庵集蒙求諺解」「草庵集難注」「草庵集聞書」などを紙焼などで集収し、また、近世和歌の研究書である「澄月伝の研究」「木下幸文伝の研究」などを購入し、その解読につとめた。2.澄月の歌論書「和歌爲隣抄」に言及されている「草庵集」の評釈と言及を探求し、近世における「草庵集」の受けとめかた、いわゆる正風体の内実を明らかにするとともに、対象とした「草庵集」の系統本もつきとめた。3.江戸時代にあって、最も広く読まれた「草庵集類題」の版本を五十本ほど調査し、版本の重刷や象嵌などを跡付けるとともに、対象とした「草庵集」の系統本をたどった。4.「草庵集」の享受が、ある歌道の家で、どのように受継されたかを跡付けるため「鼇頭草庵集」に着目し、その諸本を調査することにより、日野家歴代における、注釈的享受の一面を明らかにすることができた。5.陽明文庫の厖大な注釈書「草庵集聞書」十二冊と、同じく書陵部にある「草庵集聞書」を比較し、後者が稿本の位置にあること、及び当時の講釈の様相が跡付けられた。6.蓬左文庫には、澄月の弟子であった、堀田知之の蔵書があるが、、そのなかに、「草庵集蒙求諺解」と「草庵集難注」を比べた「草庵集諺難解注是非僻集」なる注釈書がある。この注釈書を、いま解読中であるが、澄月から知之への「草庵集」享受の特質がたどれそうである。7.今後は今回集収しえた注釈書類を基底にすえて、さらに江戸期の歌論書に言及されている「草庵集」の評価をからめ、系譜的に享受史の一面を明らかにしてゆきたい。
アイヌの日常的エスニシティの再編と多文化共生社会に向けた民族誌的研究

平成29年度に引き続き、アイヌ文化伝承活動が実践される「場」の参与観察(首都圏、北海道・様似町及び浦河町)を継続した。その中で、現在のアイヌ文化伝承・普及活動の大きな流れを形成している2020年4月開設予定の民族共生象徴空間及び国立アイヌ民族博物館が視野に入ってきたため、北海道におけるアイヌ文化復興の機運の高まりについて調査・検討した。本年度は特に、それらの文化伝承・普及活動の「場」において、当事者たちが関係的主体として、アイヌ/和人といった区別をどのように用いているのか、それによってどのように自らの〈想い〉を語ろうとするのかという点に着目して、ライフストーリーの聞き取りを行った。首都圏アイヌ民族団体「レラの会」会長、様似民族文化保存会会長、様似アイヌ協会元会長、様似町ジオパーク推進担当職員、浦河アイヌ協会生活相談員、各団体会員等からライフストーリーの聞き取りを行った。前年度に調査した持続する対面関係の中で、伝承活動を行う人びとが関係的主体として、アイヌ/和人といった区別をどのように用いているのか、それによってどのように自らの〈想い〉を語ろうとするのかという点に着目して、ライフストーリーを検討した。人びとは自分なりの生活の文脈に応じてそれらの区別について語るため、アイヌであることをめぐるそれぞれの〈想い〉は、ズレを伴いながら分かち合われることになる。このようなアイヌとしてのアイデンティティの、ズレを伴う分有こそが日常的エスニシティの編成原理となるものである。ここでは、固有の〈想い〉を伴うアイデンティティの語り方を明らかにするために、対話的ライフストーリー研究法を採用した。それによって、語り手が人と人とのつながりの中に巻き込まれた関係的主体であることを想定し、時には定型的な語り口とズレを生じさせることがあることも視野に入れることができた。昨年度行なわれた、北海道各地域における現代のアイヌ文化伝承活動の場の参与観察から、地域おこし、観光現象といった現代的テーマとの深いつながりが視野に入ってきた。今年度は、さらにその延長線上で、民族共生象徴空間・国立アイヌ民族博物館の開設にむけた動きに注目することとなった。また、昨年度に行われた現代におけるアイヌ文化伝承活動が日常的に実践される「場」の精緻な民族誌的調査を前提として、調査者自身が当事者と共に文化伝承活動に参加する密着型の参与観察を継続した。そして、首都圏並びに、北海道・様似町、浦河町でアイヌ文化伝承活動に携わる人々の多種多様なライフストーリーを聴取した。様似民族文化保存会会長や様似アイヌ協会元会長、そして会員の方々のライフストーリーはいずれも個々の日常生活の文脈に根差した固有のものとして聞き取ることができた。それによって、超越的視点をもつことなく、他者との対面的つながりを保持する関係的主体としての内在的視点から、当事者のライフストーリーに対話的に向き合うことができたと言える。その内在的視点から、ライフストーリーにおいて語られる民族的境界の再編に着目することによって、日常的エスニシティの編成原理が明らかになってきた。当該年度の調査・研究によって、日常生活の「場」の文脈において、アイヌ文化伝承・普及活動を行う人びとが関係的主体として、アイヌ/和人といった区別をどのように用いているのか、それによってどのように自らの〈想い〉を語ろうとするのかといったことに着目したライフストーリー研究を通して、融通無碍な自己意識を形成し、エスニシティの境界すらも流動的に再編していく持続的な共同性、すなわち日常的エスニシティの編成原理を検討することができた。関係的主体としての内在的視点は、他者との関係性の深化によって常に変容しつづける。対象密着型のフィールドワークを継続することによって、筆者自身の他者に対する視点もまた、変容しつづけるのである。2019年5月より、筆者は「国立アイヌ民族博物館設立準備室」に勤務することとなった。そのため、アイヌ文化伝承・普及活動を担う人びととの新たな関係性の展開から、さらなる内在的視点の深化が予見される。アイヌの人びとの繊細な〈想い〉に触れることは、調査・研究者自身が生々しい人間関係のネットワークの中に組込まれていくことでもあるだろう。次年度においては、平成29年度の参与観察によって捉えようとする伝承活動の「場」の特質と、平成30年度のライフストーリー調査によって検討される人びとの〈想い〉を総合的に検討することによって、日常的エスニシティの編成原理を理論的に検討していく。現代のアイヌ民族のエスニシティの再編過程の舞台となる文化伝承活動が実践される「場」の参与観察を実施した。首都圏においては、アイヌ文化伝承グループ「レラの会」による伝統舞踊・伝統工芸の継承活動の場の参与観察を行い、同時に、他グループとの協働による先祖供養儀礼をはじめとする伝承活動の場の参与観察を実施した。また、東京では数度にわたって、北海道旭川市の川村カ子トアイヌ記念館館長に聞き取りを行った。北海道・様似町においては、様似アイヌ協会および様似民族文化保存会の活動についての参与観察を行うとともに、様似アイヌ協会会長、様似民族文化保存会会長、様似アイヌ協会生活相談員、様似町ジオパーク推進担当職員から、伝承活動に関する聞き取りを実施した。北海道・浦河町においても、伝承活動の場の参与観察ならびに浦河アイヌ協会生活相談員からの聞き取りを行っている。さらに、阿寒湖アイヌコタンでは、観光業と密接な関わりのある「まりも祭り」の中で、全道各地のアイヌの人々が交流する場の参与観察を実施した。その上で、アイヌ文化伝承活動の地域ごとの特徴について比較検討をしている。

上記の調査・研究の意義は、日常生活の場に厳然として存在するマイノリティの共同性のあり方を明らかにすることであり、そのような「場」への注目は、エスニシティ論における本質主義/構築主義の対立やジレンマ(構築主義によるマイノリティの共同性の解体)の超克の足掛かりとなる。また、日常生活の場としての特質をもつアイヌ文化伝承活動の「場」に注目することは、それらの活動に関わる当事者たちが他者とのつながりを保持する関係的主体であることを明らかにするうえで極めて重要であった。自他の全体像を見渡す超越的視点の不在を示すものであり、そのことは新たなエスニシティ論ー本研究が提示しようとする日常的エスニシティーの一側面を明らかにするものであった。首都圏、および、北海道・様似町、浦河町、阿寒湖アイヌコタンの各地域における現代のアイヌ文化伝承活動の場の参与観察を行い、さらに文化伝承に関わる当事者たちの実践についてのインタビューを実施した。そこでは、様似町のアポイ岳ジオパークとアイヌ民族の関わりや、浦河町における海外の少数民族とアイヌ民族の交流、阿寒湖アイヌコタンにおける観光産業とアイヌ民族の関わりのような、現代のグローバリズム、地域おこし、観光現象といった現代的テーマとの深いつながりも視野に入ってきた。特に首都圏と様似町では、現代におけるアイヌ文化伝承活動が日常的に実践される「場」の精緻な民族誌的記述を行うことができた。すなわち、調査者自身が当事者と共に伝統舞踊や工芸技術の「体得」を目指す密着型の参与観察を実施することができた。それによって、調査者もまた超越的視点をもつことなく、他者との対面的つながりを保持する関係的主体による文化伝承の実践を、その内側から浮き彫りにすることができてきている。言い換えれば、調査者自身が超越的視点から内在的視点に移行し、関係的主体同士の関係性の中に埋め込まれるようになってきている。そのことは、アイヌではない和人である「私」自身がアイヌ/和人の民族的境界の再編を内側から捉える視点を得たことを意味している。そのような文化伝承活動の展開される「場」が日常生活の場でもあるという特徴を民族誌的記述によって明らかにすることによって、その「場」において生成する柔軟な自己意識やエスニシティの境界の再編過程を検討する次年度以降の研究の足場を築いた。そのような「場」自体がもつ特徴についての理解がなければ、そこで展開されるアイヌ文化伝承活動やそこに関わる人々の〈想い〉についての理解も得られないのである。平成29年度に引き続き、アイヌ文化伝承活動が実践される「場」の参与観察(首都圏、北海道・様似町及び浦河町)を継続した。その中で、現在のアイヌ文化伝承・普及活動の大きな流れを形成している2020年4月開設予定の民族共生象徴空間及び国立アイヌ民族博物館が視野に入ってきたため、北海道におけるアイヌ文化復興の機運の高まりについて調査・検討した。本年度は特に、それらの文化伝承・普及活動の「場」において、当事者たちが関係的主体として、アイヌ/和人といった区別をどのように用いているのか、それによってどのように自らの〈想い〉を語ろうとするのかという点に着目して、ライフストーリーの聞き取りを行った。
環境低負荷型材料・製造プロセスによるエネルギーデバイス技術の確立

全率固溶の性質を有するSi_<1-x>Ge_xにおいて、高効率光-電気変換効率に不可欠なオージェジェネレーションを実現するために、組成比.Si_<0.4>、Ge_<0.6>の均一な組成を垂直ブリッジマン法により得るための育成条件を探索した。前年度までに確立した、任意形状結晶育成法でSi_<1-x>Ge_xを扱う場合に不可欠な融液とアンプル材の間の撥液化条件を用い、再現性を有する均一組成の試料作製に必要な育成条件の抽出を目標とした。均一組威を有する多結晶Si_<1-x>Ge_x試料の作製-結晶成長法として高い品質の結晶育成が期待できる垂直ブリッジマン(VB)法では原理的に全率固溶の性質を有するSi_<1-x>Ge_xの均一組成結晶を得ることは一般には難しいが、当該研究では、育成環境の中で、融液の存在する空間、すなわち育成アンプル内径を12mmから5mmへ意図的に狭め、原料融液の対流を抑えることで拡散支配による原料元素の移動状態をつくりだした。これにより、育成した試料では、試料先端から中端部でSi_<1-x>Ge_x(x=0.750.95)において均一組成を得ることに成功し、複数回の再現を得た。-育成アンプル内径を3mm、2mmに細めていくと、5mm同様の均一組成化の傾向が得られたが、融液とアンプル材とで固着が発生し、撥液化条件の最適化を行う必要のあることがわかった。-育成アンプル内径を細くして育成した多結晶試料の光学的特性は、12mmで作製した試料と遜色なく、バンドギャップ値も理論値によい一致を見ている。また、固着のない試料では、細アンプル化による応力増加の影響は現れていない。総括-育成アンプル内径を細め、狭空間化したアンプルにおいて均一組成領域の作製を検討した。組成値を制御するには至っていないが、(x=0.750.95)において再現よく均一組成を得ることに成功した。全率固溶の性質を有するSi_<1-X>Ge_Xにおいて、高効率光-電気変換効率に不可欠なオージェジェネレーションを実現するために、組成比Si_<0.4>Ge_<0.6>の均一な組成を垂直ブリッジマン法により得るための育成条件を探索した。また、任意形状結晶育成法でSi_<1-X>Ge_Xを扱う場合の再現性を確保するために、融液とアンプル材の間の撥液化条件を抽出した。撥液条件の探索、および試料作製-結晶育成に先立ち、400°C800°Cの温度範囲、28時間の処理時間でSiCl_4による融液-石英アンプル間の撥液性を調べた。400°C500°Cの範囲ではSiCl_4の脱水反応が十分におこらず、また、700°C以上の範囲では処理時間の長短に関わらず、脱水・分解反応が生じ固着の原因となることが判明した。最適なSiCl_4処理条件は、600°Cで6時間の処理時間であることが分かった。-結晶成長法として高い品質の結晶育成が期待できる垂直ブリッジマン(VB)法によりGe-rich組成の原料を降温し結晶を析出させる方法を採用した。VB法では原理的に全率固溶の性質を有するSi_<1-X>Ge_Xの均一組成結晶を得ることは一般には難しいが、当該研究では、育成環境の中で、融液の存在する空間を意図的に狭め、原料融液の対流を抑えることで拡散支配による原料元素の移動状態をつくりだした。これにより、育成した試料では、試料先端から中端部でSi_<0.15>Ge_<0.85>の均一組成を得ることに成功した。総括-SiCl_4処理よる融液-石英アンプル間の撥液化条件が得られ、再現性が認められた。内径を細め、狭空間化したアンプルにおいて均一組成領域が従来の3倍にあたる長さで確認された。

-育成アンプル内径を3mm、2mmに細めていくと、5mm同様の均一組成化の傾向が得られたが、融液とアンプル材とで固着が発生し、撥液化条件の最適化を行う必要のあることがわかった。-育成アンプル内径を細くして育成した多結晶試料の光学的特性は、12mmで作製した試料と遜色なく、バンドギャップ値も理論値によい一致を見ている。また、固着のない試料では、細アンプル化による応力増加の影響は現れていない。総括-育成アンプル内径を細め、狭空間化したアンプルにおいて均一組成領域の作製を検討した。組成値を制御するには至っていないが、(x=0.750.95)において再現よく均一組成を得ることに成功した。
顎関節滑膜表層細胞層におけるデスミン陽性Ｂ型細胞の血管新生への関与

滑膜表層細胞の形態は多様性に富むものの,マクロファージ様の細胞はA型,その他は線維芽細胞様B型細胞と曖昧に分類されている.本研究では,血管新生時の血管周皮/内皮細胞に発現する分子のラット顎関節滑膜表層細胞における局在を検討した.デスミン陽性B型細胞は血管新生時に出現する活性化周皮細胞のマーカー陽性を示し,毛細血管や内皮細胞マーカー陽性のA型細胞と接していた.また,滑膜表層の血管端には未環流の内皮細胞が存在し,血管出芽端に存在するといわれるtip cellのマーカー陽性を示す細胞も局在していた.滑膜表層細胞と総称される細胞の一部は,滑膜の生理的血管新生に重要な役割を担う可能性が示唆された.顎関節の関節腔を裏打ちする滑膜表層細胞はマクロファージ様A型細胞と線維芽細胞様B型細胞の2種類に大別される.このうち滑液成分を産生するB型細胞の形態は多様性に富み,異なる由来・機能をもつ細胞が混在すると推測されるものの,すべてB型細胞と総称されている.我々はこれまでにラット顎関節滑膜における一部のB型細胞が筋特異的中間径フィラメントであるデスミンを発現することを発見し,昨年度の研究により,この細胞が血管周皮細胞前駆細胞を標識するマーカーに陽性を示すこと,またその近傍の血管内皮細胞マーカー陽性の細胞がA型細胞であることを明らかにし,それらが滑膜表層の血管新生を促している可能性が考えられた.今年度はホールマウント作製に必要な強い光源(ファイバーオプティックライトソース;アズワン株式会社)を購入したことにより,滑膜表層における機能血管の観察が可能となった.蛍光標識トマトレクチンを成熟ラットに麻酔下にて静脈内投与し,5分後に灌流固定して脱灰凍結切片と滑膜および円板のホールマウント標本を作製し,共焦点レーザー顕微鏡にて観察した.血管腔形成に先立って血管新生端に発芽する内皮細胞も陽性を示すRECA-1と,血流のある機能血管の内皮細胞を標識するトマトレクチンとの二重標識により,滑膜表層の血管腔の断端にRECA-1のみ陽性を示す細胞が観察された.つまり正常な成熟ラットにおいても,その滑膜に血管新生が生じている可能性が示唆された.滑膜表層細胞の形態は多様性に富むものの,マクロファージ様の細胞はA型,その他は線維芽細胞様B型細胞と曖昧に分類されている.本研究では,血管新生時の血管周皮/内皮細胞に発現する分子のラット顎関節滑膜表層細胞における局在を検討した.デスミン陽性B型細胞は血管新生時に出現する活性化周皮細胞のマーカー陽性を示し,毛細血管や内皮細胞マーカー陽性のA型細胞と接していた.また,滑膜表層の血管端には未環流の内皮細胞が存在し,血管出芽端に存在するといわれるtip cellのマーカー陽性を示す細胞も局在していた.滑膜表層細胞と総称される細胞の一部は,滑膜の生理的血管新生に重要な役割を担う可能性が示唆された.顎関節の関節腔を裏打ちする滑膜表層細胞はマクロファージ様A型細胞と線維芽細胞様B型細胞の2種類に大別される.このうち滑液成分を産生するB型細胞の形態は多様性に富み,異なる由来・機能をもつ細胞が混在すると推測されるものの,すべてB型細胞と総称されている.我々はこれまでにラット顎関節滑膜における一部のB型細胞が筋特異的中間径フィラメントであるデスミンを発現することを発見し,この細胞が滑膜表層の血管新生を促す可能性が考えられた.本研究において,今年度は特にデスミン陽性B型細胞の血管周皮細胞マーカーの発現や,滑膜表層の毛細血管網との関係を形態学的に検討した.その結果,デスミン陽性B型細胞にはNG2の他に,新たな血管周皮細胞前駆細胞を標識するPDGFRβの発現が認められた.また,RECA-1抗体を用いて血管内皮細胞を標識したところ,デスミン陽性B型細胞の近傍には多数の毛細血管が存在したことに加え,血管腔を形成しない滑膜表層細胞の一部が血管内皮細胞のマーカーであるRECA-1陽性を示した.

そのため本年度の当初の予定にはなかったが,この細胞の本態を探るべく,試料を免疫電顕法に供したところ,A型表層細胞であることが明らかとなった.一般的に,血管新生時には新生端のtip cellと呼ばれる細胞をマクロファージが引き寄せること,また新生端の活性化した周皮細胞が内皮細胞を誘導することから,滑膜表層においてRECA-1陽性A型細胞とデスミン陽性B型細胞が,各々マクロファージと活性化周皮細胞の役割を担い,ともに血管新生に関与している可能性が示唆された.昨年度までに,顎関節滑膜においてデスミン陽性B型表層細胞が血管新生時に出現する活性化周皮細胞に類似すること,その近傍に血管内皮細胞マーカー陽性のA型表層細胞が存在することを明らかにし,滑膜表層細胞と総称される細胞が表層への血管新生を促していると考えられた.本年度は,成熟ラットに加えて発育段階の滑膜における,これらの細胞の局在を検索した.胎生21生後1日の関節腔形成期に滑膜表層細胞層が明瞭化すると,血管形成に先立ってデスミン陽性B型およびRECA-1陽性A型細胞が出現した.生後5日目に関節腔が完成すると,RECA-1陽性内皮細胞とデスミン陽性周皮細胞からなる毛細血管が滑膜表層に形成され,発育に伴って,デスミンあるいはRECA-1陽性表層細胞を近傍に伴う血管が増加していった.つまり,滑膜形成期の血管形成には表層細胞が何らかの役割を担う可能性が示唆された.一方,成熟ラットにおいて,機能血管を標識するトマトレクチンと,管腔形成以前の新生端に発芽した内皮細胞も標識するRECA-1との二重染色により,滑膜表層にRECA-1のみ陽性を示す細胞が存在したので,引き続きトマトレクチンを静脈内投与し,昨年度の結果から得た,滑膜血管分布が最も明瞭に観察できる条件で標本作製し,共焦点レーザー顕微鏡にて観察した.デスミン標識も併用したところ,機能血管の先端にはRECA-1陽性A型細胞とデスミン陽性B型細胞が近接して存在していた.また,血管新生時の出芽端にはtip cellとよばれる特別な内皮細胞が現れ,tip cell同士をマクロファージが引き寄せて管腔を形成するといわれている.tip cellのマーカーであるNineinとの二重標識により,滑膜表層の機能血管端にNinein陽性反応が認められた.本結果より,デスミンあるいはRECA-1陽性を示した一部の滑膜表層細胞が,それぞれ活性化周皮細胞,tip cellあるいはマクロファージの役割を担い,血管新生へ関与している可能性が示唆された.口腔解剖学今年度に予定していた血管の発芽先端に出現するtip cellの存在は,マーカーであるnineinやCXCR4抗体を用いて検索したが,今のところ確認されていない.しかしながら他の結果からtip cellの存在は強く示唆されるため,今年度も引き続き検索し,市販抗体に加えて抗体作製することも考慮する.免疫組織化学の結果から,当初の研究計画の優先順位を変更し,次年度の計画であった電顕的免疫細胞化学的検索を一部繰り上げて遂行した.一方,今年度に予定していた計画の1つであるホールマウント標本における機能血管の観察については準備にとどめた.本年度に継続して,血管新生時の周皮/内皮細胞の相互作用に関わる分子に着目したデスミン陽性B型細胞における発現をさらに検索し,その機能を考察するとともに,滑膜表層における生理的血管新生の有無をさらに明確にする.8週齢雄性ラットの顎関節滑膜において周皮細胞前駆細胞であると想定したデスミン陽性B型細胞における新たな関連タンパクの局在を免疫組織化学法により検索する.前述した血管の発芽先端に出現するtip cellの存在も引き続き検索する.tip cellが存在した場合,その微細構造をデスミン陽性B型細胞と比較検討する.また,滑膜表層におけるトマトレクチンを用いた機能血管の観察も引き続き行う.並行して,発生過程の滑膜を対象として同様の実験を行う.我々のこれまでの研究で,ラットでは胎生21日目にHsp25陽性B型細胞が滑膜表層に出現することが明らかとなっているので,胎生19日から経日的に顎関節組織を採取し,滑膜における機能血管の発育観察,タンパク量の変化等の解析を行い,デスミン陽性B型細胞の出現と血管形成との関係を検討する.3年度にわたる研究結果をもとに,滑膜表層における血管新生の有無,またデスミン陽性B型細胞のそれに関わる機能を考察する.これにより,線維芽細胞様B型細胞と総称される細胞を細胞生物学的に細分類する.
ラテンアメリカ文学・美術における酒井和也の役割と日本文化紹介に関する研究

本年度は、酒井和也が活躍した時代のラテンアメリカ文学・美術について、先行研究をはじめとする関連資料を読み進めることから着手した。その一環として、2018年5月に松籟社から出版された久野量一氏の『島の「重さ」をめぐってーキューバの文学を読む』の合評会を開催し、世話人を務めた(7月28日、東京外国語大学本郷サテライト)。キューバの文学を論じた初の日本語研究書である本書について、著者と5名のコメンテーターを招いて活発な議論が行われた。並行して、国立国会図書館にてアルゼンチンの日本語新聞を調査した。特に195060年代の日本文化関連イベントに関する記事を調べ、日本大使館や日系団体のみならず、非日系アルゼンチン人も日本文化紹介に積極的に関わっていたことを明らかにした。またメキシコのラジオ局Radio Educacionと連絡を取り、酒井がパーソナリティを務めていた音楽番組の、新たにデジタル化された音声データを入手することが出来た。更に、2016年に行ったドナルド・キーン氏への日本語インタビューをスペイン語に翻訳し、メキシコの文芸雑誌『レトラス・リブレス(Letras Libres)』に掲載予定である。同誌は酒井が編集に関わった『プルラル(Plural)』、『ブエルタ(Vuelta)』の後継とも言える雑誌である。メキシコで教えた経験があり、酒井をよく知るキーン氏の貴重な証言を同誌で発表できたことは非常に有意義であった。なお、翻訳に際してアウレリオ・アシアイン氏の多大な協力を得た。2019年2月に出産し、4月まで研究を中断予定である。そのため、当初予定していた米国プリンストン大学での調査を延期せざるを得なかった。そこで本年度は国内で入手可能な日本語資料や音声データの収集、分析を行った。酒井の翻訳テクストの比較は進んでおらず、計画にやや遅れが生じているが、ドナルド・キーン氏へのインタビューを翻訳するなど、一定の成果を残すことが出来た。2019年度は酒井の翻訳テクストの比較、分析を進め、論文を執筆する。また、出産・育児のために延期していた米国プリンストン大学への調査を2020年3月に実施予定である。目的は、同大学が所蔵する『プルラル』編集部の書簡類閲覧である。その下準備として『プルラル』に掲載された記事を見直し、その傾向、国内外の寄稿者とのつながりや、編集長、アートディレクターとしての酒井の役割について明らかにする。
新たな重合分子を介した細胞形態制御機構

細胞は外部刺激に応じて適切に形態を変化させる。SWAP-70はこの過程において細胞膜とアクチン骨格をなかだちし、形態を制御することが明らかになっていたが、アクチン骨格非依存的な制御については不明であった。本研究では、SWAP-70がアクチン重合に先立って刺激依存的に重合すること、この重合には活性化型Racとの結合が重要であることを示し、刺激依存的なSWAP-70の重合が細胞形態変化に寄与している可能性を示唆した。細胞は外界からの様々な刺激に応じて適切に形態を変化させる。SWAP-70は刺激依存的な細胞膜、アクチンの構造変化に関与することで、形態変化に重要な役割を果たす分子の一つである。最近、このSWAP-70の新たな機能として刺激依存的に重合活性を持つ可能性を見いだしたため、本研究ではSWAP-70の重合能に焦点をあて、刺激依存的細胞形態制御における新たな分子機構を明らかにすることを目的とした。本年度はまず、昨年度確立したn vivo重合検出系を用いてSWAP-70の重合のタイミングを経時的に観察した。その結果、細胞を刺激後、細胞の形態変化の指標として着目しているラッフリング形成が起きる前からSWAP-70の重合が観察された。そこで、重合がアクチン再構成開始以前に起きている可能性が考えられたため、アクチン重合阻害剤の影響を検討した。その結果、SWAP-70の重合は阻害剤存在下でも影響がみられなかったため、アクチン重合非依存的であることが示唆された。さらに重合に必要な上流シグナルを明らかにするため、各種シグナル伝達分子の阻害剤を用いた解析を行った。その結果、刺激依存的なSWAP-70の重合にはPI3キナーゼ, srcキナーゼが必要であることが示唆された。以上の結果から、SWAP-70の少なくとも一部は細胞刺激後、これらの上流シグナルをうけてアクチンの再構成非依存的に重合することが示唆される。SWAP-70は刺激依存的な細胞形態変化に関与することが明らかになっており、その機能は膜やアクチンの制御を通じて行われると考えられてきた。最近、SWAP-70の新たな性質として自身が重合能をもつ可能性を見いだしたため、本研究では細胞形態変化との関連について明らかにすることを目指す。本年度は前年度に引き続き、in vivo重合活性検出系を用いて重合の調節制御機構に関する解析を行った。SWAP-70に点変異を導入し、様々なシグナル分子との結合能欠失変異体を作製したのち、SWAP-70欠損マウス繊維芽細胞に導入し、安定発現細胞株を取得した。まず、これらの細胞株における増殖因子刺激依存的なSWAP-70の重合能を解析した結果、ホスファチジルイノシトール3,4,5-三リン酸、および、低分子Gタンパク質、Racの活性化型のそれぞれとの結合が失われた変異体発現細胞株において、SWAP-70の重合活性が低下しており、後者はその傾向がより顕著であった。さらに、これらの細胞株において、刺激依存的な形態変化が起きるかどうかについて調べた。増殖因子刺激依存的なラッフリング形成能を解析した結果、活性化型Racとの結合能欠失変異体発現細胞において、ラッフリング形成能の低下が認められた。以上の結果から、SWAP-70は、増殖因子刺激によって活性化されたRacによる調節をうけて重合し、その重合体が刺激依存的細胞形態変化に関与する可能性が示唆される。最近、このSWAP-70の新たな機能として刺激依存的に重合活性を持つ可能性を見出したため、本研究ではSWAP-70の重合能に焦点をあて、刺激依存的細胞形態制御における新たな分子機構を明らかすることを目的とした。本年度はまず、重合を検出する系の確立を目指した。in vitroでの重合の検出法として、大腸菌を用いて調製した組換え体精製タンパク質SWAP-70を低塩濃度条件下におき、抗体による蛍光免疫染色を行ったところ、蛍光顕微鏡下で重合体と思われる構造を観察することができた。一方、in vivoでの重合の検出法としては、これまでSWAP-70の特異的な部位を認識する抗体による染色にのみ頼っていたが、この方法では生細胞における重合の様子を観察できないという欠点があった。しかし検討を重ねた結果、発現量が適切であればGFP-SWAP-70を細胞に発現させることにより生細胞においても重合体と予想される繊維状構造を検出できることが明らかになった。そこで、SWAP-70欠損マウス繊維芽細胞にGFP-SWAP-70を導入し、野生型細胞におけるSWAP-70と同レベルの発現を示す安定発現細胞株を取得した。この細胞は刺激依存的な繊維構造の観察が可能であったことから、今後SWAP-70の重合に関わる様々な解析に利用できることが期待される。SWAP