hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ポリオウイルス特異的蛋白合成開始機構に関わる宿主因子の解析

(1)アッセイ系の確立;HeLa細胞中に存在するポリオウイルス(PV)mRNAの翻訳開始に必須の宿主因子を分離・同定するためのアッセイ系の確立を行った。そのため本来PVRNAの翻訳効率を極めて悪いウサギ網状赤血球の粗抽出液(RRL)を利用したin vitro系を用いて、反応温度、時間、並びに反応系に添加するHeLa細胞抽出液量や鋳型RNA量についてその至適条件を検討した。その結果、HeLa細胞抽出液を加えることで、PVRNA特異的に翻訳効率の促進が観察されるようなアッセイ系を確立することに成功した。またこの翻訳促進活性は、HeLa細胞抽出液中のリボソームにアソシエートした蛋白質画分(RSW)に最も高い割合で存在していることが明らかとなった。(2)活性成分の部分精製;RSW画分についてSephacryl S-300カラムを用いてゲルろ過を行った結果、活性のピークは分子量マーカー240,000の蛋白質よりもさらに高分子量側に溶出することが明らかとなった。次にこの活性画分についてDEAE-Sephacelによるイオン交換クロマトグラフィーを行ったが、塩化カリウムの濃度を変えて溶出させたどの画分にも翻訳促進活性は見いだせず、またそれぞれの画分を足し合わせて添加した場合でも活性は認められなかった。さらに数種のアフィニティーカラムを用いてその部分精製を試みたところ、翻訳促進活性はこのうちHydroxyapatiteのみに親和性を示し、150mMのリン酸カリウムを含む緩衝液により溶出させてくることが判明した。この活性画分を再びゲルろ過法により分析したところ、活性はやはり240,000以上の高分子量を保持していることが確認された。
同調培養系による高等植物細胞周期の分子機構

本研究ではニチニチソウ同調培養系を用いて高等植物の細胞周期の制御機構を明らかにするために、細胞周期中における遺伝子発現、およびポリアミン代謝の変動について研究を行い次の結果を得た。1.細胞周期各期におけるタンパクのプ-ルサイズの変化、タンパク合成速度の変化、およびmRNA種の構成の変化について調べ、細胞周期の各期で特異的な発現が生じていること、2.細胞周期の特定の周期に特異的に発現するmRNA種の他に、周期特異的ではないが活発に分裂している細胞に特徴的に発現するmRNA種が存在することを示し、3.細胞周期、特にS期に特異的に発現するcDNAをdifferential screeningによりクロ-ニングして、それらのcDNAの細胞周期、および増殖過程での発現を詳しく解析した。4.次に機能の明らかな遺伝子として、動物細胞でDNAポリメラ-ゼδの補助因子として同定されたproliferating cell nuclerar antigen(PCNA)に対するcDNAをニチニチソウcDNAライブラリ-からクロ-ニングし、このPCNA遺伝子はS期特異的に発現することなどの諸点を明らかにした。さらに、5.細胞周期中のポリアミンレベルと、ODC、ADC活性の変動を調べると、ODC、ADC活性はG_1期とG_2/M期に顕著な上昇を示し、その変化に応じてプトレッシン、スペルミジン量も変動することなどの諸点を明らかにした。以上の研究から、植物細胞の細胞周期において特定の遺伝子が周期特異的に発現することを明らかにすることができた。また、ポリアミンが細胞周期の進行と密接な関係をもって代謝されていることを明らかにした。これらのことから高等植物細胞の細胞周期の機構の解明に向けての端諸が開かれた。本研究は、研究代表者によって確率されたニチニチソウ同調培養細胞系を用いて、高等植物の細胞周期の進行とその制御機構に関する総合的な知見を得ることを目的としている。昭和63年度の研究の結果以下の点について明らかとなった。1細胞周期各期において、タンパクレベル、タンパク合成速度、およびmRNA構成について2次元電気泳動法によって調べたところ、周期の進行に伴うタンパクの分解や修飾等の翻訳時、および翻訳後の調節機構が働いていること、またS期で3種類、細胞分裂期に1種類のmRNAが発現することが明らかとなった。一方周期特異的ではないが増殖の盛んな細胞に発現する2種類のmRNA種が同定された。2 S期および細胞分裂期のmRNAからcDNAライブラリーを作製しdifferentialscreeningを行なったところ細胞周期中でその発現が変動する4種類のcDNAがクローニングされた。3細胞周期突然変異株の単離を目的としてアラビトプシスの種子に突然変異を誘起された。現在、変異株を単離、同定中である。4細胞周期の制御に関与すると考えられているポリアミンについて、細胞周期の進行に伴う量的変更について調べたところ、プトレッシンとスペルシジンが、G_1/S期およびG_2/M期において一時的に増加することが明らかとなった。このポリアミン含量の変動は、ポリアミン代謝径路のkey enzymeである、オルニチン脱炭酸酵素およびアルギニン脱炭酸酵素の活性の変動と一致するものであった。以上のように、次年度については、研究を推進、発展させていくとともに、さらにオーキシンと細胞増殖との関係、また情報伝達で関わる因子についても研究を進めていく予定である。

1.細胞周期各期におけるタンパクのプ-ルサイズの変化、タンパク合成速度の変化、およびmRNA種の構成の変化について調べ、細胞周期の各期で特異的な発現が生じていること、2.細胞周期の特定の周期に特異的に発現するmRNA種の他に、周期特異的ではないが活発に分裂している細胞に特徴的に発現するmRNA種が存在することを示し、3.細胞周期、特にS期に特異的に発現するcDNAをdifferential screeningによりクロ-ニングして、それらのcDNAの細胞周期、および増殖過程での発現を詳しく解析した。4.次に機能の明らかな遺伝子として、動物細胞でDNAポリメラ-ゼδの補助因子として同定されたproliferatingcell nuclear antigen(PCNA)に対するcDNAをニチニチソウcDNAライブラリ-からクロ-ニングし、このPCNA遺伝子はS期特異的に発現することなどの諸点を明らかにした。さらに、5.細胞周期中のポリアミンレベルと、ODC、ADC活性の変動を調べると、ODC、ADC活性はG_1期とG_2/M期に顕著な上昇を示し、その変化に応じてプトレッシン、スペルミジン量も変動することなどの諸点を明らかにした。以上の研究から、植物細胞の細胞周期において特定の遺伝子が周期特異的に発現することを明らかにすることかできた。また、ポリアミンが細胞周期の進行と密接な関係をもって代謝されていることを明らかにした。これらのことから高等植物細胞の細胞周期の機構の解明に向けての端諸が開かれた。
非機能性下垂体腺腫細胞の多ホルモン分泌機序解明－人工下垂体への応用を目指して

ヒトでの下垂体幹細胞は分離、培養が難しく正常下垂体を用いた人工下垂体への応用は現実的ではない。一方、非機能性下垂体腺腫は、臨床上ホルモン過剰症状を認めないが、in vivoでは細胞から少量ではあるが、多種の下垂体ホルモンを分泌していることが知られている。そこで、手術時に採取可能な非機能性下垂体腺腫細胞を用いて、ホルモン分泌機序を解明することで、ホルモン分泌を制御した腺腫細胞をつくり、人工下垂体の構築を目指し、研究をおこなった。非機能性下垂体腺腫症例からの手術標本を集積した。Neural Tissue Dissociation Kits(Miltenyi Biotec)を用いて細胞を単離後Cell Banker(Takara Bio)内に凍結保存を行い、実験地に融解することで、同一条件下での測定を可能にした。腺腫細胞混濁液を一定の濃度で培養することで、培養液中の微量な下垂体前葉ホルモン(ACTH、LH、FSH、GH、PRL、TSH)分泌を詳細に測定した。すると、ほぼすべての症例で何らかの下垂体前葉ホルモンの分泌を認め、70%以上の症例で3種類以上の下垂体前葉ホルモンの分泌を確認した。さらに単離した腫瘍細胞は長期にわたる培養に不利であることが判明したため、細胞を単離せず、細胞間接着を維持したままの培養を行うCTOS(cancer tissue-originated spheroid)法を用いて、細胞塊での初代培養を可能とした。ヒトでの下垂体幹細胞は分離、培養が難しく、正常下垂体を用いた人工下垂体への応用は現実的ではない。一方、非機能性下垂体腺腫は、臨床上ホルモン分泌過剰の症状を認めないが、in vitroでは細胞から少量ではあるが、多種の下垂体ホルモンを分泌していることが知られている。そこで、手術時に採取可能な非機能性下垂体腺腫細胞を用いて、ホルモン分泌機序を解明することでホルモン分泌を制御した腺腫細胞をつくり、人工下垂体の構築を目指し、研究をおこなった。現在、非機能性下垂体腺腫症例からの手術摘出標本の集積を進めている。また、腺腫細胞からの微量ホルモン分泌を詳細に測定し、70%以上の症例で多系統の下垂体前葉ホルモンの分泌を確認している。脳神経外科実験室の移転の準備、移転後の組み換え遺伝子使用実験の施設承認、実験計画書、大臣確認実験申請書の再提出と再承認のために実験を中止する必要があったため。一方、非機能性下垂体腺腫は、臨床上ホルモン過剰の症状を認めないが、in vitroでは細胞から少量ではあるが、多種の下垂体ホルモンを分泌していることが知られている。摘出組織は、Neural Tissue Dissociation Kits (Miltenyi Biotec)を用いて細胞を単離後、Cell Banker (Takara Bio)内に凍結保存を行い、実験時に融解することで同一条件下での測定を可能にした。腺腫細胞混濁液を5×10^5 cells/mlの濃度で2時間培養し,培養液中の微量な下垂体前葉ホルモン(ACTH、LH、FSH、GH、PRL、TSH)分泌を詳細に測定した。すると、ほぼすべての症例で何らかの下垂体前葉ホルモンの分泌を認め、70%以上の症例で3種類以上の下垂体前葉ホルモンの分泌を確認している。さらにホルモン分泌の種類と臨床上の形態(MRI所見)との関連を検討した。すると非機能性下垂体腺腫のうち、gonadotropinの分泌を認める症例はACTHの分泌を認める症例と比べ、嚢胞形成が少なく、海綿静脈洞浸潤例が少ない傾向にあった。Gonadotropin分泌能の解析が非機能性下垂体腺腫の海綿静脈洞浸潤の機序解明の一助となることが示唆された。脳神経外科実験室の移転後の大臣確認実験申請書の再提出と再承認のため、実験に遅れが出た。また非機能性下垂体腺腫症例の手術例の減少により標本集積が遅れている。

すると、ほぼすべての症例で何らかの下垂体前葉ホルモンの分泌を認め、70%以上の症例で3種類以上の下垂体前葉ホルモンの分泌を確認している。しかし、単離した腫瘍細胞は長期にわたる培養が困難であることが判明したため、より効率的な培養方法の条件を設定しているところである。また、アデノウイルスの発展形である「アデノウイルスライブラリー」についても、準備を進めている。当初は腫瘍組織から採取した細胞塊を単離し、培養をおこない、各種実験を行う計画であった。しかし、単離した腫瘍細胞は長期にわたる培養が困難で死滅することが判明したため。ヒトでの下垂体幹細胞は分離、培養が難しく正常下垂体を用いた人工下垂体への応用は現実的ではない。一方、非機能性下垂体腺腫は、臨床上ホルモン過剰症状を認めないが、in vivoでは細胞から少量ではあるが、多種の下垂体ホルモンを分泌していることが知られている。そこで、手術時に採取可能な非機能性下垂体腺腫細胞を用いて、ホルモン分泌機序を解明することで、ホルモン分泌を制御した腺腫細胞をつくり、人工下垂体の構築を目指し、研究をおこなった。非機能性下垂体腺腫症例からの手術標本を集積した。Neural Tissue Dissociation Kits(Miltenyi Biotec)を用いて細胞を単離後Cell Banker(Takara Bio)内に凍結保存を行い、実験地に融解することで、同一条件下での測定を可能にした。腺腫細胞混濁液を一定の濃度で培養することで、培養液中の微量な下垂体前葉ホルモン(ACTH、LH、FSH、GH、PRL、TSH)分泌を詳細に測定した。すると、ほぼすべての症例で何らかの下垂体前葉ホルモンの分泌を認め、70%以上の症例で3種類以上の下垂体前葉ホルモンの分泌を確認した。さらに単離した腫瘍細胞は長期にわたる培養に不利であることが判明したため、細胞を単離せず、細胞間接着を維持したままの培養を行うCTOS(cancer tissue-originated spheroid)法を用いて、細胞塊での初代培養を可能とした。手術摘出症例の細胞採取を積み重ねていく大臣確認実験の申請書と施設承認を行い、アデノウイルスライブラリーシステムを開始する。手術摘出症例の細胞採取を積み重ねていく。大臣確認実験の施設承認されたため、アデノウイルスライブラリーシステムを開始する。単離した腫瘍細胞を単純なシャーレで長期培養することは困難である。これを克服するために大阪国際がんセンターで行われているCTOS法を用いた新たな3次元培養法を用いて、長期培養でのデータも追加していく。脳神経外科実験室の移転の準備、移転後の組み換え遺伝子使用実験の施設承認、実験計画書、大臣確認実験申請書の再提出に時間がかかったために、一時研究が中断した。そのため、次年度使用額が生じてしまった。しかし、現時点では研究室の移転は終了し、組み換え遺伝子使用実験施設の承認も得て、実験計画書も大臣確認が必要なアデノウイルスライブラリーを用いた研究以外は許可されていることから、脳神経外科研究室においてアデノウイルスベクターを用いた研究をP2実験室で行う準備は整った。手術症例数の減少にともない、非機能性下垂体腺腫細胞の標本集積を現在おこなっている。
Hilbert保型関数と二次形式

Kを総実代数体とする.K係数の正値2次形式に付随するtheta級数はHilbert保型形式となる:変数の個数が小さいとき,その2次形式の表現数,およびその表現数と代数体のL-関数の特殊値との関係を調べるには,重さの小さいHilbert保型形式の空間を調べる必要がある.主に2次体のHilbert保型形式の空間を調べたが,まずHilbert modular曲面のreducible locusを一般的に記述することに成功した.〓Kを整数環,〓Kをdifferentとする.整数環のZ上の基底λ,ηで,ληのノルムが負になるのは単数による作用を除いて有限個しかない.この有限集合と群【numerical formula】に対するHilbert modular多様体のreducible lociとの間には1対1の対応が付けられる.2次のSiegel modular caseでV.A.GritsenkoとV.V.Nikulinがtheta級数の無限積表示を具体的に与えた.上に述べた結果の一つの応用として次ができる.Hilbert modular多様体を2次のSiegel modular多様体に自然に埋め込むmodular emmbedingと言われる写像があるが,2次体のtheta級数は2次のSiegel modular caseのtheta級数をmodular emmbedingの写像で引き戻したものになる.これにより2次のHilbert modular caseでもtheta級数の無限積表示を得ることができた.本研究ではさらにHilbert modular曲面がある条件を満たせば重さ1/2および3/2のHilbert保型形式の空間の次元が求められることが分かったが,この点については具体的例を調べる余裕がまだなく応用はまだである.Kを総実代数体とする.K係数の正値2次形式に付随するtheta級数はHilbert保型形式となる:変数の個数が小さいとき,その2次形式の表現数,およびその表現数と代数体のL-関数の特殊値との関係を調べるには,重さの小さいHilbert保型形式の空間を調べる必要がある.主に2次体のHilbert保型形式の空間を調べたが,まずHilbert modular曲面のreducible locusを一般的に記述することに成功した.〓Kを整数環,〓Kをdifferentとする.整数環のZ上の基底λ,ηで,ληのノルムが負になるのは単数による作用を除いて有限個しかない.この有限集合と群【numerical formula】に対するHilbert modular多様体のreducible lociとの間には1対1の対応が付けられる.2次のSiegel modular caseでV.A.GritsenkoとV.V.Nikulinがtheta級数の無限積表示を具体的に与えた.上に述べた結果の一つの応用として次ができる.Hilbert modular多様体を2次のSiegel modular多様体に自然に埋め込むmodular emmbedingと言われる写像があるが,2次体のtheta級数は2次のSiegel modular caseのtheta級数をmodular emmbedingの写像で引き戻したものになる.これにより2次のHilbert modular caseでもtheta級数の無限積表示を得ることができた.本研究ではさらにHilbert modular曲面がある条件を満たせば重さ1/2および3/2のHilbert保型形式の空間の次元が求められることが分かったが,この点については具体的例を調べる余裕がまだなく応用はまだである.二次体上の正値二次形式をtheta級数を用いて調べるのに,Hilbert modular多様体の幾何的なデータが必要となる.Hilbert modular多様体はreal multiplicationを持つ主偏極アーベル多様体のmoduli空間ともなっている.その主偏極アーベル多様体が次元の低い主偏極アーベル多様体の直積となるときreducibleと言われ,reducibleな主偏極アーベル多様体に対応するHilbert modular多様体の点の集まりはreducible locusと言われる.現在までに行った研究により,二次体上のHilbert modular多様体においてreducible locusを完全に記述することが出来た.reducible locusは一番"普通"のtheta級数の零点となっており,今後役立つと思われる.また二次形式のtheta級数および一般のHilbert保型形式をreducible locusの各コンポーネントに制限することにより楕円保型形式が得られる.楕円保型形式の計算はHilbert保型形式の計算よりは容易であり,ここでの情報がもとのtheta級数,Hilbert保型形式を調べるのに役立つと思われる.reducible locusは二次体の整数環のある条件を満たすZ-基底を用いて記述される.二次体の判別式によりこれらは当然変わってくるが,判別式ごとに条件を満たす基底を計算するコンピュータプログラムを作成した.またreducible locusは何本かの代数曲線からなるのであるが,これらの種数の和と二次体上のL-関数の特殊値の関係も得られることが分かった.Kを総実代数体とする.K係数の正値2次形式に付随するtheta級数はHilbert保型形式となる.変数の個数が小さいとき,その2次形式の表現数,およびその表現数と代数体のL-関数の特殊値との関係を調べるには,重さの小さいHilbert保型形式の空間を調べる必要がある.主に2次体のHilbert保型形式の空間を調べたが,まずHilbert modular曲面のreducible locusを一般的に記述することに成功した.Ο_Kを整数環,〓_Kをdifferentとする.整数環のZ上の基底λ,ηで,ληのノルムが負になるのは単数による作用を除いて有限個しかない.この有限集合と群{

(αβγδ)∈SL_2(K)|α,δ∈Ο_K,β∈〓_K,δ∈〓^<-1>_K}に対するHilbert modular多様体のreducible lociとの間には1対1の対応が付けられる.2次のSiegel modular caseでV.A.GritsenkoとV.V.Niku1inがtheta級数の無限積表示を具体的に与えた.上に述べた結果の一つの応用として次ができる.Hilbert modular多様体を2次のSiegel modular多様体に自然に埋め込むmodular emmbedingと言われる写像があるが,2次体のtheta級数は2次のSiegel modular caseのtheta級数をmodular emmbedingの写像で引き戻したものになる.これにより2次のHilbert modular caseでもtheta級数の無限積表示を得ることができた.本研究ではさらにHilbert modular曲面がある条件を満たせば重さ1/2および3/2のHilbert保型形式の空間の次元が求められることが分かったが,この点については具体的例を調べる余裕がまだなく応用はまだである.
声楽の演奏スタイルと音場との融合に関する研究

本研究は、音場の心理的評価に関わる重要な物理パラメータである音源信号の短時間(ランニング)自己相関関数の有効継続時間τ_eと声楽演奏における音楽表現との対応関係を明らかにすることを目的としている。更に、これまでのオペラ歌唱に関する一連の研究で得られた知見を、伝統芸能の歌唱"詩吟"およびギター音の研究に応用し、その成果を国内の研究会で発表した結果、詩吟に関する研究発表が日本音響学会九州支部学生表彰に選出される評価を受けることができた。総じて、平成17年度科学研究費補助金(特別研究員奨励費)の助成を受けた本研究の成果は、今後の発展可能性も含めて国内外で高い評価を受け、今世紀の芸術文化振興・室内音場制御に貢献するものであったと考えられる。本研究は、音場の心理的評価に関わる重要なパラメータである音源信号の自己相関関数の有効継続時間τ_eと声楽演奏における音楽表現との対応関係を明らかにすることを目的としている。平成15年度は、1.個別の演奏表現要素とτ_eの関係、2.演奏者に好ましい反射音の遅れ時間の個人レベルでの評価(共同研究)に焦点を当てた。以下、研究成果の詳細を示す。1.個別の演奏表現要素とτ_eの関係(1)個人差を検討するために、12名の歌手が{歌詞の種類・演奏の速さ・音高変動}の異なる楽譜を演奏した音源を解析した。結果、τ_eは楽譜の種類だけでなく個人の歌い方によっても大きく異なることを明らかにし、母音におけるビブラート深さがτ_eに寄与する可能性を示した。この成果を、2003年6月の音楽音響研究会および2003年8月のストックホルム音楽音響会議において発表した。現在、原著論文を執筆中である。(2)ビブラートの効果を検討するために、13名のプロ歌手が異なる音高で歌った5母音を解析した。結果、単一母音のτ_eは{母音の種類・音の高さ・ビブラート深さ・イントネーション}を用いた線形モデルによりR=0.66の精度で予測できることを明らかにした。この成果を、2004年2月の音楽音響研究会および2004年3月の国際音楽音響シンポジウムにおいて発表した。2.演奏者に好ましい反射音の遅れ時間の個人レベルでの評価(共同研究)これまでに、声楽演奏者に好ましい反射音の遅れ時間は、音源信号のτ_eと反射音のレベルにより予測できる(R^2=0.68)ことを明らかにした。予測精度を高めるために、ラウドネスマッチング実験を行って個人ごとに異なる自声聴取レベルを求めて予測式に反映したところ、R^2=0.97の高精度で予測することが可能になった。この成果は、2004年5月のアメリカ音響学会および原著論文で発表予定である。平成16年度は、1.主観的音量・主観的ビブラート深さによるτ_eのコントロール可能性、2.分析/合成による音場と歌唱者との相互作用(共同研究)に焦点を当てた。1.主観的音量・主観的ビブラート深さによるτ_eのコントロール可能性音量・ビブラート深さがτ_eのコントロールに有効かどうかを検証するために、10名の歌手が主観的に3通りの音量{pp, mf, ff}、3通りのビブラート深さ{minimum, medium, maximum}で歌った、3通りの音高の5母音{ah, eh, ih, oh, uh}の音響分析を行った。結果、主観的音量・主観的ビブラート深さはτ_eをコントロールする手段として有効であることが明らかになった。この成果を、2004年5月のアメリカ音響学会において発表した。2.分析/合成による音場と歌唱者との相互作用(共同研究)これまでに、歌手は無響室内においては、主観的音量・主観的ビブラート深さを変えることでτ_eをコントロールできることを明らかにした。実際のコンサートホールやオペラハウスのように反射音・残響が存在する条件下においても、無響室内と同様にτ_eをコントロールできるかどうか、分析/合成による音場内で実験を行って検討した。結果、音場の条件によらず、無響室内と同様にτ_eをコントロールできる熟達者が存在することが明らかになった。この成果は、2005年秋の日本音響学会および原著論文で発表予定である。
アーキアにおける新規AMP再利用経路の全容解明

アーキアにおけるAMP再利用経路の生理的意義の解明を目指して本代謝経路を構成するタンパク質の生化学的および結晶構造解析を中心に研究を進め、本代謝経路がAMPに加えCMPおよびUMPも基質とできること、AMPやADPによって活性化されること等を明らかにした。これらのことから、本経路は細胞外のヌクレオチド資化や、低エネルギー状態でAMP/CMP/UMPの分解を介したエネルギー産生に関与する可能性等が示唆された。1.ゲノム情報の解析AMP再利用経路を有するアーキアだけに分布している遺伝子を探索したが、特異的な分布を示す遺伝子は見出せなかった。一方、翻訳因子と推定されているsua5遺伝子が1部のメタン菌においてRubiscoやAMP phosphorylaseとオペロンを形成していることを見出した。これらのことからsua5とAMP再利用経路の機能が関連している可能性も考えられる。今後sua5とAMP再利用経路の関連性を検討する。2.異なる培地条件でのトランスクリプトーム解析AMP再利用経路が活性化される生育条件を探索した。培地に各基質を添加し、AMP再利用経路を構成するAMP phosphorylase,ribose-1,5-bisphosphate isomerase(R15Pi)およびRubiscoの発現量をWestern blotにより調べた。その結果、AMPでは活性化されなかったもののアデノシンを添加した培地においてR15PiおよびRubiscoの発現量が有意に増加した。このことからアデノシンをリン酸化しAMPへ変換する酵素や代謝経路が存在する可能性が考えられた。現在、アデノシンキナーゼの可能性があるribokinase familyに属するタンパク質を解析している。3.AMP再利用経路構成遺伝子の破壊株および高発現株の作製・解析RubiscoおよびAMP phosphorylase遺伝子の破壊株、ΔrbcおよびΔdeoA株を作製した。また、R15Pi遺伝子破壊株を作製中である。ヌクレオシド添加培地において宿主の増殖量が上昇したのに対し、ΔrbcおよびΔdeoA株においては宿主ほどの増殖上昇は見られなかった。本代謝経路がアデノシンを中心とするヌクレオシド資化・変換で機能している可能性も考慮に入れて研究を進める。前年度はAMP代謝経路構成遺伝子と同様にTK2285(ribokinase)の転写がヌクレオシドで活性化されることを明らかにした。本年度はAMP代謝経路を構成するAMPpaseとribose-1,5-bisphosphate isomerase(R15Pi)に加えTK2285の組換え型タンパク質のin vitro解析を中心に行った。・AMPpaseの解析AMPpaseはAMPのみを基質とすると考えていたが、CMPやUMPも基質とすることを明らかにした。またこれらの内、AMPのみによってアロステリック制御を受けた。また、京大理学研究科の三木研と共同でR15Piの結晶構造を明らかにした。活性残基やR15Piは基質結合により反応に適した構造へ変化することを明らかにした(構造解析についての論文はJ.Biol.Chem.で掲載決定)。これらの結果からAMP代謝経路はAMP/ADP濃度が高い低エネルギー状態などでNMPを分解しエネルギーを取り出す可能性や、外部から取り込んだNMPを資化する可能性等が考えられる。これらの結果をまとめた論文を現在投稿中である。・TK2285の基質探索大腸菌で大量発現させたTK2285を熱処理および各カラムによるクロマトグラフィーで精製した。様々なヌクレオシド・単糖・二糖・リン酸化糖・アミノ糖等に対する活性を検討した。その結果、TK2285はキシロースやキシルロースを含む幅広い単糖に対し活性を示した。NMP代謝経路との関連はまだ明らかになっていないが、この成果について現在論文作成中である。
脂質修飾型CaMキナーゼによる神経機能制御

本研究では、研究代表者が分子同定を行い、神経樹状突起形成における役割と脂質修飾過程を明らかとしてきた、膜挿入型カルシウム/カルモジュリン依存性蛋白質リン酸化酵素(CaMK)であるCLICK-III/CaMKIγに焦点を当て、本酵素のマウス個体における生理的機能の解明を目指す。そのために、in vitro培養系によるシグナリング経路の解明に加えてノックアウトマウスを用いた脳組織構築異常、行動異常の探索を行った。また、マウス脳内への遺伝子導入法を確立し、より詳細な細胞形態異常について検討した。本研究では、申請者自ら分子同定を行い、神経樹状突起形成における役割と脂質修飾過程を明らかとしてきた、膜挿入型カルシウム/カルモジュリン依存性蛋白質リン酸化酵素(CaMK)であるCHCK-III/ CaMKIγに焦点を当て、本酵素のマウス個体における生理的機能の解明を行う。更に、リン酸化酵素として非常にユニークな特徴である、プレニル化、パルミトイル化の2重の脂質修飾を受ける点に着目し、その生物学的意義の立証を目指している。初年度は、上記目的を遂行するために下記の項目についての研究を遂行した。1.本酵素のマウス脳内における機能を探索するための遺伝子導入法として、in uteroelectroporation法ならびにレンチウイルスをもちいた遺伝子導入の実験系のセットアップを完了した。3.脂質修飾の意義を解明には、脂質修飾変異体型酵素をin vivoで発現させることが有効であり、そのためのレンチウイルスの作成を行った。4.生化学的特性を明らかとするために、CLICK- IIIリコンビナント蛋白質発現系の確立を目指しており、本年度はSf9を用いた発現系の条件検討を進めた。本研究では、申請者自ら分子同定を行い、神経樹状突起形成における役割と脂質修飾過程を明らかとしてきた、膜挿入型カルシウム/カルモジュリン依存性蛋白質リン酸化酵素(CaMK)であるCHCK-III/CaMKIγに焦点を当て、本酵素のマウス個体における生理的機能の解明を行う。本年度は、上記目的を遂行するために下記の項目についての研究を遂行した。1,CLICK-IIIノックアウトマウスを用いた脳組織構築異常の探索を行い、顕著な異常が認められないことを明らかとした。また各種神経細胞マーカーとの2重染色を行い、本酵素の脳内における分布を検討した。3,同マウスを用いた行動解析を開始した。4,生化学的特性を明らかとするために、CLICK-IIIリコンビナント蛋白質発現系の確立を行い、リコンビナントタンパク質の酵素活性を検討した。
開渠設置型多管式熱交換器設計のための水路内流速・流線分布測定

○研究目的:申請者は、下水処理水熱等の有効利用のため、専用水路(開渠)と採熱管を組み合わせた開渠設置型多管式熱交換器(以下:本熱交換器)を考案・設計した。本熱交換器は、開渠上流に整流のためのもぐり堰、下流に水深確保のための越流堰を設けているが、設計における開渠内の流速には平均流速を用いており、流速分布は考慮していないため、より厳密な設計を行うためには水路内の流れを把握する必要がある。○研究方法:本熱交換器を模擬した2次元モデル水路を製作した。前面は可視化のために透明板を使用し、水路の有効長は100cm、水深(越流堰の高さ)は12cmとした。実験条件は、上流側もぐり堰の高さを4段階(3,6,9cm,堰なし)、水路内平均流速を3段階(0.99,1.49,2.03cm/s)の計12ケース設定した。可視化実験においては、トレーサー(ローダミンB水溶液)を水路上流部から投入し、その流跡をビデオカメラで撮影・観測した。既存のホットフィルム流速計を用いた流速分布測定は、流れの乱流成分が多いため出力が不安定となり、正確な計測ができなかったため、計測手段も含めて今後の課題とした。○研究成果:すべてのケースにおける基本的な流れとして、もぐり堰後方(水路長の025%区間)で渦が発生し、その後(2590%区間)は流れが安定するが、水路底部の流速が遅く、その後越流堰に向かって(90100%区間)低流速範囲が水面方向に広くなるという形態を示した。また、もぐり堰高さおよび流速を変化させることにより、025%の区間内で渦の大きさが変化するが、越流堰前部の低流速範囲には変化がみられなかった。以上の結果より、水路内の流れが安定する2590%の区間に採熱管を設置することが理想的であると考えられる。今後は採熱管を設置した場合の流れの観測を行う予定である。
尾状核および側坐核におけるモノアミン受容体機能の均一性と特異性

1.ラットを用いて視床の束傍核から入力を受ける側坐核ニューロンに対するハロペリドールおよびスルピリドの作用を電気生理学的に検討した.さらに,これらの薬物が外来性に与えたドーパミンおよびメタンフェタミンの効果に対し拮抗するかどうかについて研究した.その結果,側坐核では外来性に与えたドーパミンは内因性に遊離されたドーパミンと同様にニューロン活動を抑制した.2.ラットにおいてメタンフェタミンは恐らく腹側被蓋野由来のドーパミン作動性神経終末からのドーパミン遊離をうながすことにより,視床の束傍核から入力を受ける側坐核ニューロンを抑制することを明らかにした.3.次いで,黒質から入力を受け,かつこの黒質刺激融発スパイクが選択的D-2拮抗薬であるドンペリドンによって遮断される同一の尾状核ニューロンに, D-1およびD-2受容体が共存するか否かを検討するため,麻酔ネコを用いて微小イオントホレシス法による研究を行った.その結果,黒質から入力を受ける同一の尾状核ニューロンに,抑制性D-1および興奮性D-2ドーパミン受容体が共存することを強く示唆する成績をえた.4.この事実を確認するため,ラットの尾状核ニューロンに対するドーパミンの効果をスライス標本において細胞内記録法を用いて研究した.その結果,尾状核ニューロンのシナプス後部位にはD-1およびD-2の2つのドーパミン受容体が存在しており,それぞれニューロンのドーパミンに対する抑制性および興奮性反応を仲介していることを明らかにした.5.また,尾状核ニューロンに対するドーパミンD-2受容体の選択的作用薬であるブロモクリプチンの効果を,スライス標本において細胞内記録法を用いて研究し,ブロモクリプチンおよび低濃度のドーパミンはドーパミンD-2受容体を活性化し,尾状核ニューロンを興奮させることを明らかにした.1.ラットを用いて視床の束傍核から入力を受ける側坐核ニューロンに対するハロペリドールおよびスルピリドの作用を電気生理学的に検討した.さらに,これらの薬物が外来性に与えたドーパミンおよびメタンフェタミンの効果に対し拮抗するかどうかについて研究した.その結果,側坐核では外来性に与えたドーパミンは内因性に遊離されたドーパミンと同様にニューロン活動を抑制した.2.ラットにおいてメタンフェタミンは恐らく腹側被蓋野由来のドーパミン作動性神経終末からのドーパミン遊離をうながすことにより,視床の束傍核から入力を受ける側坐核ニューロンを抑制することを明らかにした.3.次いで,黒質から入力を受け,かつこの黒質刺激融発スパイクが選択的D-2拮抗薬であるドンペリドンによって遮断される同一の尾状核ニューロンに, D-1およびD-2受容体が共存するか否かを検討するため,麻酔ネコを用いて微小イオントホレシス法による研究を行った.その結果,黒質から入力を受ける同一の尾状核ニューロンに,抑制性D-1および興奮性D-2ドーパミン受容体が共存することを強く示唆する成績をえた.4.この事実を確認するため,ラットの尾状核ニューロンに対するドーパミンの効果をスライス標本において細胞内記録法を用いて研究した.その結果,尾状核ニューロンのシナプス後部位にはD-1およびD-2の2つのドーパミン受容体が存在しており,それぞれニューロンのドーパミンに対する抑制性および興奮性反応を仲介していることを明らかにした.5.また,尾状核ニューロンに対するドーパミンD-2受容体の選択的作用薬であるブロモクリプチンの効果を,スライス標本において細胞内記録法を用いて研究し,ブロモクリプチンおよび低濃度のドーパミンはドーパミンD-2受容体を活性化し,尾状核ニューロンを興奮させることを明らかにした.黒質刺激に応答する尾状核ニューロンの興奮はドーパミンD-2受容体を介するものであるか否かを、クロラロース麻酔ネコを用いて電気生理学的に検討した。D-2拮抗薬ドンペリドンのイオントホレーシス法による適用は27個の尾状核ニューロンのうち20個において黒質刺激誘発スパイクを有意に抑制した。D-2作用薬ブロモクリプチンおよびLY171555はこの尾状核ニューロンの自然発火数を増加させた。しかしD-2拮抗薬により抑制されないニューロンではD-2作用薬による発火数の増加はみられなかった。D-2作用薬によるこの発火数増加はドンペリドンまたはハロペリドールにより拮抗されたが、D-1拮抗薬であるSCH23390では影響されなかった。これらの結果は黒質刺激による尾状核ニューロンのスパイク発生はドーパミンD-2受容体を介することを示した。これまでの成績とも合せて、抑制性のD-1受容体と興奮性のD-2受容体が同一の尾状核ニューロンに共存することが判明したので、さらにこのドーパミンの興奮性および抑制性機構を解明するために細胞内記録による実験を行った。ラット尾状核からえられたスライス標本を人工脳脊髄液にて潅流した。ドーパミンの0.11.0μMの低濃度適用は脱分極と細胞内の脱分極性パルスによる活動電位数の増加をもたらした。一部のニューロンではドーパミンにより自発発火が発生した。一方、ドーパミンの100500μMの高濃度では過分極をおこすか、または静止電位を変えなかったが、脱分極パルスによる活動電位の閾値の増加を伴った。これらのドーパミンの興奮性および抑制性反応はハロペリドールにより拮抗された。

以上の成績は同一尾状核内に興奮性および抑制性の機能的に異なる2種類のドーパミン受容体が存在することを示すものである。尾状核ニューロンにおいて、ドーパミンD-1受容体とD-2受容体が共存するか否か、また、これらの受容体を介して生じるドーパミンの抑制および興奮作用の作用機構を解明するために、ラットの摘出尾状核スライス標本を用いた電気生理実験を行なった。尾状核スライスは人工脳脊髄液灌流により維持し、ニューロン活動を細胞内記録することにより、ドーパミン受容体作動薬および拮抗薬の灌流投与時の尾状核ニューロンに対する作用を観察した。ドーパミンは0.11.0μΜの低濃度において、ニューロンに持続的脱分極をおこし、また自発的に発火活動を示すニューロンにおいては、その発火頻度を増加した。また、静止ニューロンにおいても、細胞内への脱分極パルスにより誘発される活動電位数を増加した。膜低抗および発火閾値には影響を与えなかった。一方、100500μΜの高濃度のドーパミン投与では、静止膜電位に著明な変化は生じなかったが、発火閾値が脱分極側にシフトすることにより、自発発火活動および細胞内への脱分極パルスによる発火が抑制された。同一ニューロンにおいて低濃度(1μΜ)および高濃度(100μΜ)のドーパミンを逐次投与すると、多くのニューロンにおいて、濃度に依存した興奮および抑制の二相性の作用が観察された。D-1およびD-2受容体拮抗薬のハロペリドールはドーパミンの興奮および抑制作用とともに抑制したが、高濃度のドーパミンの抑制作用に拮抗するには、低濃度ドーパミンの興奮作用を拮抗する場合の10倍の濃度を必要とした。D-2拮抗薬ドンペリドンはドーパミンの興奮作用に拮抗したが抑制作用には影響を与えなかった。D-1拮抗薬SCH23390はドーパミンの抑制作用に拮抗した。以上の成績は、脱分極作用を介する興奮性D-2受容体および発火閾値調節作用を介する抑制性D-1受容体が同一の尾状核ニューロン上に共存することを示るものである。
人工タンパク質の新規設計による細胞および抗体ターゲッティング機能分子の創製

人工分子の基本骨格であるα-ヘリックスやβストランドを連結するループ部分に、細胞や抗体等から認識される部位を持つターゲッティング分子構築のため2種の人工タンパクを合成し評価した。まず、ループ部分に細胞接着性機能を有するRGDS配列を持つ4α-ヘリックスバンドル構造体を合成した。合成ペプチドをセファデックスG-50ゲルろ過カラムで精製し、凍結乾燥して標品を得た。各種条件下でCDおよび蛍光スペクトルを測定して構造体形成を調べた。このペプチドは水溶液中およびメタノール中でα-ヘリックス構造を示し、α-ヘリックス含率はメタノールの添加とともに増大した。二次構造の安定性をグアニジン塩酸塩による変性実験で調べたところC_<0.5>は5Mであった。また、このペプチドは水溶液中でピレンのモノマーおよびエキシマー発光が見られ、このエキシマー発光はメタノール中では消失した。これらの結果からこのペプチドはループ部分にXRGDSXという長い配列を持つにもかかわらず水溶液中で4α-ヘリックスバンドル構造を形成していることがわかる。しかしながらRGDSの領域が特定のコンホメーションを取っているかどうかは確認できなかった。このペプチドの水溶液中での安定性を調べるため、トリプシンを作用させたところ短い(D-Ala-Pro)ループ部分を持つ4α-ヘリックスバンドル構造ペプチドよりも早く分解を受けることがわかった。ループ部分の長さは4α-ヘリックスバンドル構造の安定性に影響を与えると考えられる。また、ループ部分にテトラエチレンオキシ鎖を有する4α-ヘリックスバンドル構造体も合成した。このペプチドも水溶液中でα-へリックス構造を示し、α-へリックス含率はメタノール添加しても一定であった。このα-へリックスの安定性をグアニジン塩酸塩による変性実験で調べたところC_<0.5>は約4Mであった。このペプチドは水溶液中でピレンのモノマーおよびエキシマー発光が見られ、このエキシマー発光はメタノール中では消失した。これらの結果からこのペプチドも水溶液中で4α-ヘリックスバンドル構造を形成していると思われ、ループ部分に自由度の高いテトラエチレンオキシ鎖を有していてもバンドル構造の形成に支障がないことがわかった。しかし、水溶液中でのトリプシンによる分解実験の結果RGDS配列を持つものと同様に早く分解を受けることがわかった。
whole mount 神経染色法による筋神経の経路形成の研究

本年度はメダカ尾鰭の筋肉(MIR筋)に注目して、その発生と神経支配の経過を精細に観察した。その結果次のような知見をえた。神経と筋のwhole mousn染色法によると発生は次の4段階にわけられる。(1)stage 32;尾部脊髄神経の前根が腹側尾方に向けて十分伸長し、腹側に生じている尾鰭原基を通過し、さらに尾方に伸びる。(2)stage 34初期;尾鰭原基上にMIRのmyotubeが形成され始める。MIR筋が現われる場所は前根が通過している近傍(20μm)である。(3)stage 34;この近傍を通過している神経路より、運動神経線維がmyotubeの集団に入り、神経筋接合部を形成する。(4)stage 35;孵化後、メダカの脊索は背方に曲がり、尾鰭は尾方に位置するようになる。この形態形成運動に伴って、神経と筋肉はその相対的位置関係を二次的に変える。以上の観察は、アセチルコリンエステラーゼ染色法、アセチルコリン受容体染色法、DI蛍光法などを併用した所見によっても裏づけられた。従って、筋神経はすでに存在している運動性の神経路から発して近傍の「標的」に投入するのである。これは従来一般的に想定されている「神経の標的探索説」とは異なる知見であると思われる。
ケミカルゲノミクスによる小胞体ストレス応答制御機構の解明

小胞体ストレス応答の破綻や異常活性化は糖尿病、慢性炎症、がん等の様々な疾患の発症に寄与することが知られている。本研究では小胞体ストレスを高感度に測定できるレポーター細胞株と薬理活性化合物ライブラリーを用い、CRISPR-Cas9を組み合わせたケミカルゲノミクスを行うことで、小胞体ストレス応答を制御する新規タンパク質を探索し、その生理機能を解明する。
患者尊厳測定尺度国際版iPDSを英国の病院評価のための標準ツールにする研究

尊厳あるケアへの取り組みを評価するための信頼性と妥当性の確保されたベンチマークツール(短縮版尺度)の開発を目指した。予定していたイギリスでの調査が実現できなかったため、日本語版患者尊厳尺度J-PDSをもとにした日本語版短縮版の開発と先行研究データの再解析による広東語版短縮版の開発を行った。その結果、日本語版については尊厳への期待について3因子11項目、満足度について同じ3因子構造の12項目の信頼性と妥当性を確保した短縮版を得ることができた。広東語版については、IPDSのスコアとの相関が0.84を示す、期待について4因子11項目、満足度について2因子10項目の尺度ドラフトを得ることができた。英国においては,医療における患者の尊厳の確保について社会から高い関心を集めている。そのため、入院患者の尊厳に対する満足度や期待を把握し、さまざまな対策の効果を把握し、その後の動向や変化を提示できるツール(ベンチマーク)の開発が期待されている。本研究は,先行研究で開発した患者尊厳尺度国際版iPDS(英語版)を,英国の病院で実際に使えるベンチマークツールとして改良、発展させることを目的としている。そして、患者の尊厳に対する評価に影響を与える医療・看護上の要因を探索することを目指している。H26年度は、ベンチマークツールとして備えるべき要件を明らかにすること、および、本研究の基盤となる先行研究の成果の妥当性を検討するために、先行研究に協力してくれた病院に対する成果報告会を(1)病院管理者、(2)調査協力者(看護職)に対して行い、意見交換を行った。さらに、英国内での調査研究協力者が所属する大学において大学院生およびその他教員を交えたセミナーを開催し、本研究のデザイン等についてアドバイスを得た。この報告会とセミナーを通じて、英国においては病院がすでに政府などから要請されている自己評価などと内容、目的に重複がないように配慮する必要があること、および、ベンチマークツールに答えてくれる患者がより客観的に評価(回答)できるような質問形式への修正と質問数の削減などの必要性を明らかにして、ベンチマークツール(原案)を準備することができた。併せて、今後のベンチマークツール開発のための調査フィールドとして、再び研究参加への了解を得ることができた。次年度は、本研究成果を発表する国際看護倫理学会(英国・サリー大学)において、ベンチマークツール(原案)に対する意見交換ならびに今後の現地調査の準備のための最終打ち合わせを行う。そして、患者約200名規模の質問紙調査を実施する予定である。H27年度は、尊厳への期待:29項目、尊厳への満足:27項目からなるのオリジナルのiPDS尺度(調査票自体は35項目から構成)を用いた調査結果を再解析し、期待と満足度ともに(1)プライバシーの尊重、(2)思い、時間の尊重と礼節への配慮、(3)人としての尊重、(4)自律性の尊重の4因子で構成された合計17項目の短縮版を得た。クローンバックアルファ係数は、期待について0.930、満足度について0.914であった。この成果を第1回国際ケアの倫理学会(第16回国際看護倫理学会)にて口頭発表し、英国内での調査計画を紹介した。英国での国際学会での発表の後に、開発した短縮版を用いた調査を行う予定であったが、調査対象施設の研究協力者(当該施設の調査研究部門責任者)が入院するという不測の事態が生じ、その後の調査についての現地説明,実施準備のための手続きなどが一旦保留となった。退院と職場復帰を待ち,現在,調査のための準備を再開しているところである。なお、論文についてはH28年1月に第1候補の国際学術誌に投稿したが残念ながら不採択となったため、現在、第2候補の国際学術誌に再投稿するためのデータの再解析、論文の修正作業を続けている。ベンチマークツールとして用いる尺度短縮版の信頼性と妥当性の確認のための現地(イギリス)調査について、(1)調査協力施設の研究部門責任者の入院(H27年度以降)により、計画準備が全体的に遅れていた中で、(2)現地(イギリス)の研究協力者から、尺度短縮版のもととなる尺度(完全版)の研究成果についての論文化(論文採択)が調査実施の条件として示された。それに併せて、論文化を試みたが、第一候補の国際学術誌で不採択となってしまい、H28年度中の調査実施、完了に至らなかった。当初計画の英国における短縮版開発のための調査については、英国側の協力を得ることが困難になったために断念し、(1)日本語版の短縮版の開発、(2)先行研究の結果に基づく英語版の短縮版原案の作成、(3)新たな海外調査フィールドとしての香港での短縮版開発のための広東語版の原案の開発を行った。

日本語版の短縮版は、研究者らが2017年に開発・発表した日本語版患者尊厳尺度J-PDSをもとに、尺度としての信頼性を向上させるための若干の修正を加えて、全国830病院に調査依頼を行い、協力の得られた17病院の755名の患者を対象に無記名自記式質問紙調査を実施した。その結果、343件の回答が得られ、患者の尊厳への期待について11項目、満足度について12項目の、どちらも同じ3因子構造(F1:人間性と礼節の尊重、F2:プライバシーの尊重、F3:自律性の尊重)の信頼性と妥当性が確保された短縮版を得ることができた。一方、香港での調査の可能性が得られたため、先行研究で開発された21項目の英語版患者尊厳尺度IPDSとその再解析から導かれた11項目の短縮版原案をもとに、英語と広東語をバイリンガルとする保健医療専門家等で構成された専門家パネルによる検証、および翻訳結果を用いたプレテストとインタビューによる翻訳妥当性の検証などを含むバックトランスレーション手続きによりIPDS広東語版原案および短縮版の広東語版原案を作成した。なお、プレテストの結果では、IPDS広東語版原案と短縮版との間に0.84の有意な強い相関が確認され、短縮版原案の信頼性についてある程度確保できていることが確認された。またこれらの研究を通じて、IPDS広東語版原案と短縮版原案を用いた香港および中国広東語圏地域での患者尊厳についての国際共同研究のための協力体制を香港および広州の関係者と構築することができた。今後、中国広東語圏地域における患者尊厳の実情を把握するための調査研究を進める予定である。尊厳あるケアへの取り組みを評価するための信頼性と妥当性の確保されたベンチマークツール(短縮版尺度)の開発を目指した。予定していたイギリスでの調査が実現できなかったため、日本語版患者尊厳尺度J-PDSをもとにした日本語版短縮版の開発と先行研究データの再解析による広東語版短縮版の開発を行った。その結果、日本語版については尊厳への期待について3因子11項目、満足度について同じ3因子構造の12項目の信頼性と妥当性を確保した短縮版を得ることができた。広東語版については、IPDSのスコアとの相関が0.84を示す、期待について4因子11項目、満足度について2因子10項目の尺度ドラフトを得ることができた。当初計画で予定していた追跡調査は、調査協力病院の都合により、現在準備しているベンチマークツール(原案)の調査と同時に行うことした。それ以外については、報告会等を通じた調査準備など、予定通りに進んでいる。H28年度の研究再開(現地調査)についての協力を改めて確認できたので、当該病院を対象とする短縮版の信頼性、妥当性およびベンチマークツールとしての有用性に関する調査研究を行う。併せて、H27年度の国際学会での発表において、本短縮版に関心を持った医療関係者に調査への協力を打診し、可能ならば調査を行う予定である。もととなる尺度の論文化が、本研究実施のための条件となっているので、第二候補の国際学術誌へ改めて投稿するためのデータの再解析、論文の見直しと修正作業を進めている。論文が採択されれば、すでに所属元の研究倫理審査の承認は得ているので、すみやかに調査の実現のための調整等を進める予定である。看護倫理現在準備しているベンチマークツール(原案)の調査にiPDSを含めることで、対象患者および調査協力病院の負担を軽減した調査が実現できる。すでに、調査協力は取り付けており、現在、学内の倫理審査および英国での倫理審査のための準備をしているところである。