hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膀胱痛モデルを利用したオピオイド受容体κ型に対する「ブシ」の作用の解明

κオピオイド受容体拮抗薬ノルビナルトルフィミンを前処置で投与するグループと比較した。またκ受容体に選択的に作動性を示す薬剤としてナルフラフィン塩酸塩を投与するグループとの比較を検討した。ナルフラフィン塩酸塩の実験系において「ブシ」の効果を検証したが、検討する「ブシ」の容量については、様々な容量について検討したが、有意な結果は得られなかった。少なくとも「ブシ」とナルフラフィンを併用することで単独使用よりもさらにオピオイド受容体κ型に作用することが予想され、今後の展開が期待される。2015年日本泌尿器科学会総会フロンティアシンポジウムにて、ブシ(附子)を含んだ漢方の膀胱痛に対する作用機序の基礎的解明と臨床的実践についての検討について発表した。間質性膀胱炎の病態・治療について、局所の膀胱についてだけでなく、神経障害性疼痛が間質性膀胱炎の病態の一つであることを強調した。基礎研究結果と実臨床における附子末を含む間質性膀胱炎治療の有効性、安全性についてデータをもとに発表した。間質性膀胱炎について新しい切り口からの病態解明であるとの評価を得た。附子末の慢性期疼痛に対する効果については確認されたが、今回の研究において、求心性、ならびに下降抑制系における効果について研究進行中である。以下、κ受容体に選択的に作動性を示す薬剤としてナルフラフィン塩酸塩では確認されている実験系を確認する作業を確認している。1.帯状疱疹急性膀胱痛モデル(ラットの膀胱粘膜下にHSV-1を感染させたモデル動物)アロディニア、痛覚刺激:ラットの行動観察ならびに尿流動態検査2.膀胱内に5%ホルマリン溶液を注入した化学刺激膀胱痛モデル化学刺激:「ブシ」末内服投与によってラットの行動観察ならびに尿流動態検査3.酢酸刺激膀胱痛モデル(0.6%酢酸溶液を膀胱内に注入したモデル動物)化学刺激:「ブシ」末内服投与によってラットの行動観察ならびに尿流動態検査。現在上記のモデルの確立と実験手順、データ解析の作業確認中である。ただ、1については実験操作が困難であり、2、3について現在検討、進行中である。オックスフォード大学は、2014年製薬メーカーと協力して、漢方薬のメカニズムを西洋の科学的な手法で解析する新たな研究を始めている。メーカーが提供する漢方薬の各成分の混合比率のデータなどをもとに、日英両国の約10人の研究者が漢方薬の謎の解明にあたっており、日本でも研究の進行が望ましい。2015年4月に日本泌尿器科学会総会、フロンティアシンポジウムにて、ブシを含んだ漢方の膀胱痛に対する作用機序の基礎的解明と臨床的実践について発表した。間質性膀胱炎の研究は、局所の膀胱痛について研究が主体となっているが、神経障害性疼痛が間質性膀胱炎の病態のひとつであることを強調し、基礎研究結果と実臨床におけるブシの有効性、安全性についてデータをもとに発表した。今回の研究において、求心性ならびに下降抑制系における鎮痛効果について研究進行中である。漢方の製薬会社、ナルフラフィン塩酸塩の製薬会社との情報交換を行いながら、ナルフラフィン塩酸塩で確認されている実験系を確立するよう努力している。1.帯状疱疹急性膀胱痛モデル(ラットの膀胱粘膜下にHSV-1を感染させたモデル)2.化学刺激膀胱痛モデル(膀胱内に5%ホルマリン溶液を注入)1.2に対して、非投与群、ブシ末投与群(各容量にて)、ナルフラフィン投与群(各容量にて)ラットの行動観察ならびに尿流動態検査等に確認する。ラットの実験設定に苦慮している。漢方投与サイクルとナルフラフィンの投与サイクルが違い、コントロールの設定が変わるため、効果判定しにくい。漢方の製薬会社、ナルフラフィン塩酸塩の製薬会社との情報交換を行いながら、漢方投与の実験系とナルフラフィン投与の実験系の摺合せを行っている。動物用膀胱内圧測定装置、代謝ケージ(MCM/TOA-UF001)、テレメトリーによる行動分析装置は、過活動膀胱の研究についても稼働中であり、この研究に応用している。2015.04には日本泌尿器科学会総会にて招待講演で発表した。(附子を含んだ漢方の膀胱痛に対する作用機序の基礎的解明と臨床的検討)2015.03 Sciense of Kampo Medicineに講演内容を投稿した。漢方投与サイクルとナルフラフィン塩酸塩の投与サイクルが違い、コントロールの設定が変わるため、効果判定が困難であった。個々のコントロールとの効果の差についてはある程度の結果が得られているが、有意差が得られていない。求心性ならびに下降抑制系における鎮痛効果は理論的には可能と思われるが、疼痛緩和の効果が得るためには、掻痒治療の何倍かの濃度が必要とされ、副作用が軽減できなかった。最近ナルフラフィンのフリー体を含有し、製剤中薬物安定性と製剤から生体への薬物移行性のいずれも高いナルフラフィン含有局所適用製剤の特許が取得された。そう痒治療の分野においては、全身性の副作用リスクを軽減するために、局所適用製剤を第一選択薬として用いることが推奨されている。実際に、ナルフラフィン塩酸塩は、全身性の副作用として不眠、便秘および眠気などが認められているため、局所適用製剤化のニーズが高まっている。今回の研究では、漢方単独、ナルフラフィン塩酸塩単独では効果判定がなかなか困難であることがわかった。しかし漢方とナルフラフィン塩酸塩を併用することによって、安全域での鎮痛効果が得られる可能性が示唆された。

またκ受容体に選択的に作動性を示す薬剤としてナルフラフィン塩酸塩を投与するグループとの比較を検討した。ナルフラフィン塩酸塩の実験系において「ブシ」の効果を検証したが、検討する「ブシ」の容量については、様々な容量について検討したが、有意な結果は得られなかった。少なくとも「ブシ」とナルフラフィンを併用することで単独使用よりもさらにオピオイド受容体κ型に作用することが予想され、今後の展開が期待される。ラットの実験の設定に時間を要している。確認作業がうまくいかない。漢方の製薬会社、ナルフラフィン塩酸塩の製薬会社との情報交換を行いながら、漢方投与の実験系とナルフラフィン投与の実験系の摺合せを行っている。ナルフラフィン塩酸塩で確認されている実験系を確立するよう努力していく。今後動物用膀胱内圧測定装置、代謝ケージ(MCM/TOA-UF001)、テレメトリーによる行動分析装置は、過活動膀胱の研究についても稼働中であり、また別の研究において、病態の変化と尿の成分分析も行われているため、共同し、情報交換を積極的に行っていく。医歯薬学今後動物用膀胱内圧測定装置、代謝ケージ(MCM/TOA-UF001)テレメトリーによる行動解析装置は、過活動膀胱の研究においても稼働中であり実験系の確立を推進する。「ブシ」はκ受容体にも作用することで、鎮痛作用として、脳幹部を通じて大脳より脊髄に至る下行性抑制系を刺激するかを立証し、κ受容体に選択的に作動性を示す薬剤としてナルフラフィン塩酸塩との比較を行う。購入した試薬等が予定より安く納品できたため若干の繰越金が生じた。1.帯状疱疹急性膀胱痛モデル(ラットの膀胱粘膜下にHSV-1を感染させたモデル動物)アロディニア、痛覚刺激:ラットの行動観察ならびに尿流動態検査2.膀胱内に5%ホルマリン溶液を注入した化学刺激膀胱痛モデル化学刺激:「ブシ」末内服投与によってラットの行動観察ならびに尿流動態検査3.酢酸刺激膀胱痛モデル(0.6%酢酸溶液を膀胱内に注入したモデル動物)化学刺激:「ブシ」末内服投与によってラットの行動観察ならびに尿流動態検査。現在上記のモデルの確立と実験手順、データ解析の作業確認中である。ただ、1については実験操作が困難であり進行が遅れている。動物実験、データ解析等で消耗品が必要となる為繰越金で補填する。1.κ受容体に選択的に作動性を示す薬剤としてナルフラフィン塩酸塩では確認されている実験系を確認する作業を確認している。これに未使用金の研究費を使用していく。その後に27年後請求の研究費を使用し、このモデルを利用し、「ブシ」末内服投与させて、行動観察等を行う予定である。2.膀胱内に5%ホルマリン溶液を注入した化学刺激膀胱痛モデル化学刺激:「ブシ」末内服投与によってラットの行動観察ならびに尿流動態検査3.酢酸刺激膀胱痛モデル(0.6%酢酸溶液を膀胱内に注入したモデル動物)化学刺激:「ブシ」末内服投与によってラットの行動観察ならびに尿流動態検査。2、3について現在検討、進行中である。
導電性酸化物における高エントロピー伝導と熱電変換材料への応用

1.NaCo_2O_4系酸化物における部分元素置換のサイト選択性現時点で最も優れた酸化物熱電材料であるNaCo_2O_4のNaサイトをNiでイオン交換することにより導電率のみの、CoサイトをNi置換することによりゼーベック係数のみの減少が認められたため、構造パラメータ・導電率・ゼーベック係数・キャリア移動度などの置換量依存性を詳細に検討した結果、Coサイトへ選択的にNiが置換することでスピン交換によるエントロピー輸送を抑制している可能性が示された。2.LiV_2O_4系酸化物の合成と輸送特性の評価NaCo_2O_4と同様の層状結晶構造を持つLiV_2O_4、およびLiVO_2の熱電特性を測定したところ、ゼーベック係数は大きな正の値をとるものの、導電率はかなり低く、その温度依存性は半導体的であった。VサイトへのMgやCaの部分置換固溶によるホールドープを検討したが、導電率の向上には至らなかった。heavy fermion系と同程度の電子比熱係数を示すことから、輸送エントロピーによる有効質量が極めて大きいためと思われる。3.NaCo_2O_4系酸化物における非化学量論制御NaCo_2O_4を通常の固相反応法で合成する際に生じるNa非化学量論性の抑止を目的として、CO_2分圧の制御を検討した。pCO_2=1atmでは、反応物である炭酸ナトリウムの分解は完全に抑制されるものの、目的生成物であるNaCo_2O_4の生成反応は停止した。O_2雰囲気でpCO_2=0.01atmとすることにより、炭酸ナトリウムの分解を抑制したまま目的物を合成できることを見出した。4.ZnO系酸化物における微細構造制御と輸送特性との関連PMMAなどの有機樹脂微粒子を分散させ、不活性雰囲気下で焼結することにより、ZnOマトリックス部分が緻密に連続しつつ内部に微小な空孔(ナノボイド)を有する微細構造が実現できることがわかった。これにより導電率はほぼ不変のまま熱伝導率を最大35%低下させることができた。さらに、ナノボイドの効果でゼーベック係数が巨大な負の極値を示すため、性能指数の大幅な向上が実現できた。ナノボイドによるフォノンの選択散乱と巨大エントロピー輸送の両立が示唆される。1.NaCo_2O_4系酸化物における部分元素置換による輸送特性と構造との関連現時点で最も優れた酸化物熱電材料であるNaCo_2O_4のNaおよびCoサイトをNiで部分置換し、構造パラメータ・導電率・Seebeck係数・キャリア移動度の変化を調べた。Naサイトの置換により導電率のみの、Coサイトの置換によりゼーベック係数のみの増大が認められた。また、高分解能SEM、SIMS、AESなどを用いて、焼結体の粒界構造や組成分布、結晶子の微細構造を検討中である。2.LiV_2O_4系酸化物の合成と輸送特性の評価NaCo_2O_4以上の大きな電子比熱係数を示す遷移金属酸化物としてごく最近報告されたLiV_2O_4は、NaCo_2O_4と同様の層状結晶構造を持ち、V3d軌道の直接相互作用による金属的伝導の可能性が示唆されているが、熱電特性の報告例はない。

LiV_2O_4の焼結体を合成して熱電特性を測定したところ、ゼーベック係数は大きな正の値をとるものの、導電率はかなり低く、その温度依存性は半導体的であった。VサイトヘのMgやCaの部分置換固溶によるホールドープを検討している。3.ZnO系酸化物における微細構造制御と輸送特性との関連我々が見出したZnO系酸化物熱電材料は出力因子が酸化物中で最大であり、既存材料に匹敵するが、熱伝導率κも高い。ZnO系のフォノン散乱の選択的増強を目的として、異種酸化物粒子の分散や焼結体の多孔質化による微細ヘテロ構造の導入を試みた。ZrO2粒子を分散させる事により室温において熱伝導率κを約60%低減でき、フォノン散乱中心の増大が示唆された。しかし全温度域において導電率がやや低下したため、性能指数Zの向上には至らなかった。一方、有機樹脂微粒子を分散させて微細空孔を導入すると、κの低減は見られなかったが、出力因子が500°C付近で非常に大きな値を示し、電気的性能を向上させる事ができた。微細ヘテロ構造の導入による熱電性能向上の可能性が示唆された。本年度は、前年度の結果を踏まえて、下記の項目について研究を進めた。1.NaCo_2O_4系酸化物における部分元素置換と非化学量論制御現時点で最も優れた酸化物熱電材料であるNaCo_2O_4のNaサイトのNi置換により導電率のみの、CoサイトのNi置換によりゼーベック係数のみの増大が認められたため、構造パラメータ・導電率・Seebeck係数・キャリア移動度などの置換量依存性を詳細に検討した。また、Naの揮散によるNa非化学量論性の制御を目的として、電気化学的Na分圧センサを取りつけた焼成炉を構成し、試料合成時のNa分圧のin situモニタと精密制御を進めている。2.LiV_2O_4系酸化物の合成と輸送特性の評価NaCo_2O_4と同様の層状結晶構造を持つLiV_2O_4、およびLiVO_2の焼結体を合成して熱電特性を測定したところ、ゼーベック係数は大きな正の値をとるものの、導電率はかなり低く、その温度依存性は半導体的であった。VサイトヘのMgやCaの部分置換固溶によるホールドープを検討したが、導電率の向上には至らなかった。電子比熱係数を示すことから、有効質量が極めて大きいためと思われる。3.ZnO系酸化物における微細構造制御と輸送特性との関連引き続き焼結体の多孔質化による微細ヘテロ構造の導入を検討している。PMMAなどの有機樹脂微粒子を分散させ、300°C付近で一旦保持してから1400°Cで焼結することにより、マトリックス部分が繊密に連続しつつ内部に微小な空孔を有する微細構造が実現できることがわかった。大気中でもゼーベック係数に大きな負の極大が出現することから、細孔径が電子の平均自由行程より短くなっていることが示唆される。本年度は、前年度までの結果を踏まえて、下記の項目について研究を進めた。1.NaCo2O4系酸化物における部分元素置換のサイト選択性現時点で最も優れた酸化物熱電材料であるNaCo2O4のNaサイトをNiでイオン交換することにより導電率のみの、CoサイトをNi置換することによりゼーベック係数のみの増大が認められたため、量子化学計算手法を用いてサイト選択性や構造パラメータの最適化を検討した。CoサイトへのNi置換について、実験結果とのある程度の整合は得られているが、明確な結論には至っていない。2.NaCo
非妊娠豚からの初乳作出技術の確立

産業動物において、産まれたばかりの新生子が生後24時間以内に摂取した「初乳」の量や質は、その動物の育成率(生存率や発育性)に大きな影響を及ぼす。通常、哺乳動物から「初乳」を得るためには、分娩後数時間以内に母畜から搾乳する必要があり、時間的制限があるうえ非常に労力がかかる。我々はこれまでに、ブタの妊娠認識物質であるエストロジェンを、ブタの妊娠認識が起こる時期に筋肉内投与することにより、妊娠状態を再現する技術(偽妊娠誘起、偽妊娠豚)を確立した。さらに、この偽妊娠豚に対し、乳腺発達と泌乳誘起を目的としてそれぞれエストロジェンおよびプロスタグランジン(PG)F2αを追加投与すると、「初乳」を人為的に得ることが可能であることを示した。本研究では、この技術を発展させ、より効率的に泌乳を誘起し、かつ、乳量を確保するための条件(課題1.射乳促進のための条件検討;課題2.乳腺発達促進のための条件検討)を検討することで、全ての子ブタがいつでも初乳を十分量飲むことが可能な子ブタ育成補助技術を確立し、生産現場における子ブタの育成率改善に貢献することを目指す。我々は、これまでにPGF2αを用いた黄体退行誘起処置に加え、射乳を促進する目的でオキシトシンを偽妊娠豚に投与することにより、泌乳誘起効率が上昇する(オキシトシン無処置群vs.オキシトシン処置群=50% vs. 85%)ことを明らかにした。また、オキシトシン投与は、PGF2α投与後24時間目に得られる免疫グロブリンが高濃度で含まれている乳の量を増加することが示された。しかし、泌乳誘起豚へのオキシトシン投与は、処置後の処置豚の末梢血中プロジェステロンおよびプロラクチン濃度に明らかな変化を及ぼさないことが示された。産前・産後および育児休業を取得していたため。本研究は、1射乳促進のための条件検討(20182019年度)および2乳腺発達促進のための条件検討(20182020年度)を行う予定であった。しかし、産前・産後および育児休暇のため、2018年度は1のみしか行えていない。そこで、研究再開後は1の試験は当初予定通りに行い、2について20192021年度に行うこととする。産前・産後および育児休業を取得していたため、研究実施計画に遅れが出ている。そのため、次年度に使用額を持ち越し、遅れた研究に必要な資金として使用する。
てんかん患者における頭蓋内電極による脳機能の解明

難治性てんかん患者において、てんかん焦点を切除する外科治療に際し、言語野・運動野・記憶領域・情動領域近傍の病変においての焦点切除は機能の欠落を起こす可能性が懸念される。筆者らはこれらの機能的にeloquentな領域に及ぶ腫瘍性あるいはてんかん性病変の切除にあたって、主として硬膜下電極を術前に切除予定部位あるいはその近傍に埋め込み、慢性のビデオ脳波記録を行いてんかん焦点の特定を行う一方、硬膜下電極を単極あるいは双極に刺激して電極直下の脳の機能を検討しマッピングを行って、機能的にeloquentな領域ぎりぎり(1cm≦以上離して)まで切除を行ってきた。また側頭葉てんかん患者では側頭葉下面に硬膜下電極を、海馬・扁桃体には深部電極を挿入して、焦点の特定を行う一方、硬膜下電極では側頭葉下面の言語野の同定を、深部電極では海馬では記憶検査を、扁桃体では記憶機能以外に、情動に関係するスライドなどを見せながら皮膚電気反応(skin conductance response)を指標に検討してきた。本研究の記憶試験では切除部位の海馬扁桃体が記憶に重要な役割を果たしているかを、深部電極を高頻度に一定の発作閾値以下の強度で刺激し、後発射が刺激電極にのみ陽性であるときに、その電極の刺激が単独に行われたと判断し、刺激中・後に脳研式対語・非対語検査を行い、両者で正答率が3点以上低下した場合に記憶試験陽性と判断し手術を取りやめるなどの判断をするほか、手術前後に脳研式非対語検査試験を行い3点以上の低下を見たとき手術による記憶低下ありと判断した。硬膜下電極では電気刺激により言語野、運動野、感覚野、視覚野の同定を行い、それらのデータをTalairach前交連-後交連線およびそれらに垂直なV-AC,V-PC線を引きその座標軸に各反応陽性点をプロットし、標準化の試みを行い、それぞれ中間的データを発表した。データの標準化に当たってはMat lab systemによる標準化をすべく平成12年度コンピュウターおよびソフトの導入を行ったが、データの発表までには至っていない。頭頂葉に焦点を有する3症例に対して,PET検査により焦点を推定し,全例で同意のもとに頭蓋内電極を留置した.留置後にデジタル脳波計を用いて発作起始部および伝播様式を検討した.さらに留置した硬膜下電極を用いて脳機能マッピング(言語野,一次運動野および一次感覚野,運動関連野(補足運動野)の局在を同定した.症例1:23歳男性で右方擬視する発作を繰り返していた.側頭葉てんかんも疑い,両側の海馬・扁桃体および前頭葉・頭頂葉にストリップ電極を留置した.発作は左の角回より起始していたが,MRIでは異常所見は認められなかった.言語野のマッピングにより言語中枢の存在しないことを確認してから,左角回の焦点を切除し,発作は全く消失した.組織は皮質異形性であった.本症例では海馬刺激による記憶テストおよび扁桃体刺激による自律神経反応を発汗量を連続計測したが,その結果は現在分析中である.症例2:10歳女児.左下肢のクローヌス様の不随意運動が発作性に繰り返されていた.MRIにて右頭頂葉に皮質異形性を示唆する所見があり,硬膜下電極を留置したところ,発作は頭頂葉内側部左下肢運動野に及んでいた.焦点切除を行い発作は現在消失している.

この患児では発作開始時には補足運動野にも発作波がおよんでおり,発作の開始に対する補足運動野の関与が示唆された.19歳女性.右頭頂葉の一次感覚野に焦点を有していた.MRI上異常所見はなく,PETにて底代謝域が足手の感覚野に認められた.頭蓋内電極留置により焦点を切除したが,発作のコントロールが不良であったため,再手術を施行し現在発作は月1回以下に減少している.本患者では脳機能マッピングの際に,運動関連電位を前運動野より記録し補足運動野と同定することができた.以上のようにてんかん患者の焦点同定に際して,硬膜下電極より運動野,言語野だけでなく運動関連電位より補足運動野の同定も可能となっている.1.脳機能マッピングを併用した言語運動野グリオーマの手術(竹信敦充、堀智勝他)てんかんを主訴とする言語運動グリオーマに対して脳機マッピングを併用した手術をおこなった。硬膜下電極留置による脳機能のマッピングの後に、その結果に基づいて腫瘍を摘出するという2期的手術法は運動野および言語野近傍のグリオーマの手術で、機能温存のために有用と考えられ、代表的2例を提示し、マッピング方法の説明をおこなった。グリオーマの外科、柴田尚武(編)、メディカ出版、大阪PP200PP208、1998東京女子医科大・脳外科、川崎浩遠、村垣善治、大野雅晴、山口浩司、伊関洋、堀智勝eloqueutareaの脳室質内の腫瘍摘出にあたり神経脱落症状を出さずに摘出するためにプロポホールを用いて覚醒開頭術をおこない言語、運動機能のマッピングをおこなった。5例について、その結果と有用性を第1回ヒト機能マッピング研究会学術集会シンポジウムIIにおいて発表した。これら1.2.のデータはタレラックのAC-PC座標、ハブロットしマッピング結果の集録をおこなった。難治性てんかん患者において、てんかん焦点を切除する外科治療に際し、言語野・運動野・記憶領域・情動領域近傍の病変においての焦点切除は機能の欠落を起こす可能性が懸念される。筆者らはこれらの機能的にeloquentな領域に及ぶ腫瘍性あるいはてんかん性病変の切除にあたって、主として硬膜下電極を術前に切除予定部位あるいはその近傍に埋め込み、慢性のビデオ脳波記録を行いてんかん焦点の特定を行う一方、硬膜下電極を単極あるいは双極に刺激して電極直下の脳の機能を検討しマッピングを行って、機能的にeloquentな領域ぎりぎり(1cm≦以上離して)まで切除を行ってきた。また側頭葉てんかん患者では側頭葉下面に硬膜下電極を、海馬・扁桃体には深部電極を挿入して、焦点の特定を行う一方、硬膜下電極では側頭葉下面の言語野の同定を、深部電極では海馬では記憶検査を、扁桃体では記憶機能以外に、情動に関係するスライドなどを見せながら皮膚電気反応(skin conductance response)を指標に検討してきた。本研究の記憶試験では切除部位の海馬扁桃体が記憶に重要な役割を果たしているかを、深部電極を高頻度に一定の発作閾値以下の強度で刺激し、後発射が刺激電極にのみ陽性であるときに、その電極の刺激が単独に行われたと判断し、刺激中・後に脳研式対語・非対語検査を行い、両者で正答率が3点以上低下した場合に記憶試験陽性と判断し手術を取りやめるなどの判断をするほか、手術前後に脳研式非対語検査試験を行い3点以上の低下を見たとき手術による記憶低下ありと判断した。硬膜下電極では電気刺激により言語野、運動野、感覚野、視覚野の同定を行い、それらのデータをTalairachの前交連-後交連線およびそれらに垂直なV-AC、V-PC線を引きその座標軸に各反応陽性点をプロットし、標準化の試みを行い、それぞれ中間的データを発表した。
水生シダ植物アカウキクサ属植物(アカウキクサ科)の保全生物学

オオアカウキクサAzolla japonica Frnach.et Sav.(アカウキクサ科)日本国内での遺伝的変異を詳細に調べるため、デンプンゲルと平板アクリルアミドによる酵素電気泳動法で調査した。15酵素で推定した28遺伝子座について、茨城県・石川県から広島県・愛媛県までの18都府県、37地点からのオオアカウキクサを調査を行った。その結果、13遺伝子座で異なった対立遺伝子に固定している2つの型に大別できた。兵庫県豊岡市および奈良県大和郡山市産の個体を基準に仮に"但馬型""大和型"と呼ぶ。この2型の間でのNeiの遺伝同一度I=0.54、遺伝距離D=0.62であった。但馬型は関東・東海・北陸・中国・四国などに分布する。但馬型のなかにもSKD-2、SOD-2に多型があり、Skd-2aは関東でのみ、Sod-2aは能登半島にのみ確認された。大和型は奈良・大阪・三重・京都南部に記録された。Zimmerman et al.(1989)の用いた京都産のものは本型であった。大和型では3遺伝子座(Hk-1,Mdh-3,Pgm-2)ですべての調査個体がヘテロ接合とみられ、遺伝子重複の可能性がある。IRRIコレクションを用いて、海外の近縁種との関連も酵素多型により調べた。調査個体は数個体であるが、根井の遺伝距離を用いると、大和型はA.filiculoidesに近く(I=0.83、D=0.13)、但馬型はA.rubraに近い(I=0.87、D=0.19)。両型の形態の差異については、明らかではないが、水面で水平方向のみに成長しているときには、少なくとも但馬型の裂片がより大型である。また調査数が少ないが、大和型のグロキディウム(マスラの表面のとげ)に隔壁はなく、A.filiculoidesと同型である。一方、但馬型のグロキディウムには明らかに隔壁がある。
矯正的歯の移動に伴う歯肉溝浸出液中の各種サイトカインの動態

本研究は,矯正治療患者の歯肉溝浸出液gingival crevicular fluid(GCF)を,歯の移動開始後経時的に採取し,そのタンパク量およびサイトカイン量を測定することに加えて,GCFの採取部位についても比較検討することにより,歯の移動にともなう骨のリモデリングについての知見を求めることを目的として行った.同意を得た上下顎左右第一小臼歯抜歯症例患者12名を被験者とした.それぞれの被験者の上下顎左右第一小臼歯抜歯後,上顎にマルチブラケット装置を装着し,エラスティックチェーンにて上顎の左右いづれかの犬歯の遠心移動を開始した.遠心移動中の上顎犬歯を実験歯,反対側の上顎犬歯と実験歯と同側の下顎犬歯を対照歯として,移動開始時,1時間後,24時間後,168時間後に,それぞれの歯の遠心側と近心側より歯肉溝浸出液をペ-パーストリップスにて採取した.タンパク抽出後,ELISA法にてサイトカインの定量を行った.測定するサイトカインとして,骨吸収促進因子のひとつであるInterleukin(IL)-1β,IL-1βとsynergisticに作用するとされているTumor Necrosis Factor(TNF)-α,IL-1β,TNF-αによってosteoclastから産生されるIL-6,初期の炎症反応の場となるperiodontalligamentでfibroblastから産生されるEpidermal Growth Factor(EGF),さらに骨形成促進因子であるTransforming Growth Factor(TGF)-β_1について,その含有量を測定した.矯正力を加えた実験歯から採取されたGCF中のサイトカイン量は,実験歯の遠心側と近心側で統計学的に有意差は認められなかった.本研究は,矯正治療患者の歯肉溝浸出液gingival crevicular fluid(GCF)を,歯の移動開始後経時的に採取し,そのタンパク量およびサイトカイン量を測定することに加えて,GCFの採取部位についても比較検討することにより,歯の移動にともなう骨のリモデリングについての知見を求めることを目的として行った.同意を得た上下顎左右第一小臼歯抜歯症例患者12名を被験者とした.それぞれの被験者の上下顎左右第一小臼歯抜歯後,上顎にマルチブラケット装置を装着し,エラスティックチェーンにて上顎の左右いづれかの犬歯の遠心移動を開始した.遠心移動中の上顎犬歯を実験歯,反対側の上顎犬歯と実験歯と同側の下顎犬歯を対照歯として,移動開始時,1時間後,24時間後,168時間後に,それぞれの歯の遠心側と近心側より歯肉溝浸出液をペ-パーストリップスにて採取した.タンパク抽出後,ELISA法にてサイトカインの定量を行った.測定するサイトカインとして,骨吸収促進因子のひとつであるInterleukin(IL)-1β,IL-1βとsynergisticに作用するとされているTumor Necrosis Factor(TNF)-α,IL-1β,TNF-αによってosteoclastから産生されるIL-6,初期の炎症反応の場となるperiodontalligamentでfibroblastから産生されるEpidermal Growth Factor(EGF),さらに骨形成促進因子であるTransforming Growth Factor(TGF)-β_1について,その含有量を測定した.矯正力を加えた実験歯から採取されたGCF中のサイトカイン量は,実験歯の遠心側と近心側で統計学的に有意差は認められなかった.
多成分ベシクルの形態形成ダイナミクス

我々は生体膜の示す様々な膜変形現象を、多成分ベシクルを用いたモデルを通して研究した。様々な形状を持つベシクルで相分離を起こすことにより、ベシクルが内側に分裂したり、外側に分裂したりする現象、球状のベシクルが数珠状に繋がる現象等、相分離するベシクルに特徴的な変形を示す事がわかった。さらに、脂質分子の自発曲率と相分離を結合させることにより接着や孔形成などの機能性膜変形も再現できる事がわかった。我々は生体膜の示す様々な膜変形現象を、多成分ベシクルを用いたモデルを通して研究してきた。今年度は生体膜の持つ2つの特徴、膜内外の浸透圧差と膜内相分離によるドメイン構造をベシクルに導入し、競合させる実験を行った。高温で均一なベシクルの膜外に塩を加え、浸透圧差によってベシクルが様々な形状まで変形した後に、それぞれの形状で温度を転移点以下に下げ相分離させた。その結果ベシクルは、相分離を境に均一系とは全く異なる変形経路を示した。相分離初期過程では、2分子膜の非対称性によって分岐していた様々な多角形ベシクルが、2つのドメインを両側に持つ赤血球型ベシクルへと集約する様子や、チューブ状ベシクルが、同じく2つのドメインを両側に持つ赤血球型ベシクルを複数個連続させたネックレス形状へと変形する様子が観察された。相分離後期過程では、相分離直前にベシクルが持つ余剰面積値によって、ドメインがベシクルの内側もしくは外側に発芽する様子が観察された。我々は、これら様々な変形現象を、複数のドメインを持つベシクルに対してADE modelに基づくエネルギー解析を行い定性的に説明した。また、自発曲率の異なる2種類のリン脂質を混合し、相分離現象と結合させることにより、自発曲率を利用した膜接着(hemifusion)を起こす事を実験的に明らかにし、膜の弾性モデルを用いてその理論的な背景を解明した。高分子・コロイドを内包したベシクル膜変形の解明(実験グループ:今井・八重樫グループ)ベシクル内に高分子(DNA)やコロイドを内包しその閉じ込めのエネルギーと膜の弾性エネルギーの競合によるベシクルの変形挙動を調べた。コロイドを内包した場合に特徴的なストマトサイトから2連球型ベシクルへの転移が観察され、枯渇効果を含むコロイドの並進エントロピーとの競合によるモデルで現象を説明した。また、DNAを内包した場合はそのような変形は観察されなかったが、ベシクル内でのDNAの拡散係数の測定を行った。まだ、統計が不十分なので定量的な事はいえないが、ベシクル内に閉じ込められることにより拡散係数が増大する傾向にある結果が得られた。脂質ドメイン形成と変形のシミュレーション(シミュレーショングループ:浦上)Molecular Dynamics法によるベシクルの変形挙動を追跡し、基本的な挙動を捉えられたが、システムサイズが小さいため実験との対応をとるのは困難であった。そのため、新しくDPS法を導入しより大きなシステムでの計算を可能にした。また、ベシクル内での相分離現象のシミュレーションにも成功し、その静的・動的構造因子を計算し、実験データと比較、おおむね良好な一致が見られた。コロイドを内包したベシクル膜変形の解明ベシクル内にコロイドを内包しその閉じ込めのエネルギーと膜の弾性エネルギーの競合によるベシクルの変形挙動を調べた。荷電コロイドを余剰面積を持つ非球形のベシクルに高密度で内包した場合、ベシクルはその余剰面積を用いて、球状の小胞が繋がったネックレス構造へと転移する事を実験的に明らかにした。この時のネックレスの形状は、純粋にベシクル体積一定・表面積一定の条件で幾何学的に決定され、その転移の駆動力は、ベシクルの内側にある、枯渇領域を最小にして、お互いに斥力ポテンシャルをもつ荷電コロイドの自由体積を最大にする為である事を示した。また、現在このモデルをモンテカルロ計算により、検証している。ナノメートルサイズの脂質ドメインの膜内拡散ダイナミクス脂質膜中におけるナノメーターサイズの物体の拡散係数を、ナノメータースケールをもつ多成分ベシクルを用いて、中性子スピンエコー法により始めて直接的に測定する事に成功した。得られた拡散係数は、拡散物質のサイズには殆ど依存せず、2次元膜の流体力学的相互作用を考慮したSaffman-Delbruckモデルに絶対値で非常によく一致する事を示した。また、ナノメートルスケールでの流体ドメインの拡散ダイナミクスをDPD(Dispasive Particle Dynamics)法でシミュレーションし、実験結果と比較することによりナノメートルスケールでのダイナミクスの可視化を行っている。
高分解能電子顕微鏡法による金属間化合物の格子欠陥の解析

B2型金属間化合物CoTi中の刃状転位及びらせん転位コアーの高分解能電子顕微鏡像の撮影を行った。刃状転位のコアーは、約1nm程度にわたって、拡張していることが明かとなった。また、機械的性質に大きな影響を与えていると考えられるらせん転位については、転位コアーが、すべり面とは異なる(100)面上に僅かに広がっていることが示唆された。これら転位の高分解能電子顕微鏡像を詳細に解析するため、備品としてワークステーションの導入を行い、大型計算機及びスーパーコンピューターと本学のネットワークシステム(TAINS)を用いて接続し、画像解析用ソフトの開発を行った。現在、このワークステーションを用いた画像解析により、結晶表面の格子緩和の効果も考慮して、従来のB2型金属間化合物について提出されていた転位コアーモデルをもとに、そのシミュレーション像の計算を行い、高分解能電子顕微鏡像と転位コアーの原子配列との対応について検討を行っている。我々は、CoTiと同様強度の逆温度依存性を示すL1_2型金属間化合物Ni_3(Al,Ti)についても、らせん転位の高分解能電子顕微鏡像より、すべり面と異なる(100)面状で逆位相境界を介した分解が生じていることを明らかにしており、これらの二つの化合物における転位コアーの原子配列に関する類似点は、その機械的性質と密接に関係していると考えられる。今後、CoTiと同じB2型金属間化合物で強度の逆温度依存性を示さないNiAlについても転位コアーの原子配列の観察を行い、CoTiと比較する計画である。また、CoTi中のFeなどの添加元素のサイト占有率についても、新しい分析手法ALCHEMIを用いて、現在解析を進めている。
細胞1個の内部生化学成分の高感度・高分離測定

細胞一個を対象とした分析方法の開発のため、まずは細胞一個を懸濁液から単離するためのマイクロ流路を改良した装置を開発した。開発した装置は三つのマイクロチャンネルからなり、そのうちひとつのマイクロチャンネルに細胞懸濁液を流す。その細胞が流れてくるチャンネルに細胞一個を個別に補足するための細胞補足ポケットを備えており、流体の原理を利用して細胞一個を単離できる。実験では細胞懸濁液から細胞を一個ずつ3つのポケットに10秒以内に捕獲効率は70%程度で捕獲することに成功した。さて、高感度の測定として、希土類蛍光錯体を生体分子の標識剤として用いた時間分解キャピラリー電気泳動法を新規に開発した。時間分解キャピラリー電気泳動に用いる標識剤として、生体分子と共有結合可能で反応効率の高いジクロロトリアジル基をフェニル基のpara位に持つEu3+-p-DTBTAを合成した。リゾチーム、β-ラクトグロブリン、トリプシンインヒビター、トリプシノーゲン、カーボニックアンヒドラーゼ、卵白アルブミン、ウシ血清アルブミン、ミオンシンをEu3+-p-DTBTAで標識し、これらを仔牛胎児血清中でドデシル硫酸ナトリウム(SDS)-時間分解キャピラリーゲル電気泳動分析を行ったところ、遅延時間0.1 msで血清からのバックグラウンド蛍光の影響を受けることなく検出できた。Eu3+-p-DTBTAを末端に標識した63塩基の一本鎖DNAを用いて、血清中でのハイブリダイゼーションアッセイを行い、c-Ha-ras遺伝子のcodon12の点突然変異を識別することに成功した。従来の希土類蛍光錯体では困難であったC6アミノリンカーを介したDNAへの直接ラベルは、ジメチルスルホキシド(DMSO)を添加し、Eu3+-p-DTBTAの凝集体(擬ミセル)形成を阻害することで達成できた。時間分解キャピラリー電気泳動装置として、現在の検出装置と高電圧装置を組み合わせたシステムを構築した。その際に、遅延蛍光検出の特性を出来るだけ有効に利用することの出来る条件、特にS/N比を出来るだけ稼ぐ方法として、100マイクロ秒の遅延とフォトンカウンティングを組み合わせた方法を確立した。時間分解の方法によってキャピラリー電気泳動を行うために、早稲田大学理工学部化学科松本研究室で開発された3種類の希土類蛍光標識剤に対しても検討を行っている。現在、土類蛍光標識剤自身の光学的特性を利用した検出評価が完了し、実際の蛋白質にラベル化することを行っている。一方、μTASを利用したデバイスの作成を早稲田大学電子・情報通信学科庄子研究室と共同で進めている。現在、細胞一個をマイクロデバイス内にトラップして、界面活性剤による破砕の研究を進めている。細胞の破砕の様子をビデオで解析したところ、その破砕時間が平均で約200ミリ秒であった。今後、破砕した成分を次の分析に運ぶための基礎研究を進める。蛍光性希土類錯体Eu3+-para-DTBTAを新規に合成し、ハイブリダイゼーションを時間分解キャピラリー電気泳動の方法で分析することに成功した。従来の蛍光性希土類錯体DTBTA-Eu3+はたんぱく質にはラベル化が可能であったが、DNAには活性基の位置の違いによる構造異性体の混合物のために殆どラベル化が進まなかった。ところが、合成に成功した蛍光性希土類錯体Eu3+para-DTBTAは活性基の位置がパラ位のみの蛍光性希土類錯体でDNAにラベル化が容易に行うことができる。時間分解の特性を生かして、血清中でも血清からの蛍光に影響されることなくハイブリダイゼーションを検出できた。さらに、このハイブリダイゼーションの方法によって、c-Ha-ras遺伝子のcodon12における点突然変異を時間分解検出によって検出することに成功した。c-Ha-ras遺伝子のcodon12は口腔癌のマーカーである。(論文投稿中)μチャンネルを利用した細胞一個研究は、細胞一個を約70%の確率で捕獲することに成功し、それらの破砕に成功した。デザインしたマイクロチャンネルは3つの流路を持ち、真ん中の流路の沿うように3つの直径の異なる半円上の井戸を作り、さらに、その井戸の中央には細胞を捕獲するための流れを作るためドレイン流路がある。この流路を使って細胞を一個ずつ連続的に捕獲することに成功した。(日本化学会第87春季年会で報告)細胞一個を対象とした分析方法の開発のため、まずは細胞一個を懸濁液から単離するためのマイクロ流路を改良した装置を開発した。

リゾチーム、β-ラクトグロブリン、トリプシンインヒビター、トリプシノーゲン、カーボニックアンヒドラーゼ、卵白アルブミン、ウシ血清アルブミン、ミオンシンをEu3+-p-DTBTAで標識し、これらを仔牛胎児血清中でドデシル硫酸ナトリウム(SDS)-時間分解キャピラリーゲル電気泳動分析を行ったところ、遅延時間0.1 msで血清からのバックグラウンド蛍光の影響を受けることなく検出できた。Eu3+-p-DTBTAを末端に標識した63塩基の一本鎖DNAを用いて、血清中でのハイブリダイゼーションアッセイを行い、c-Ha-ras遺伝子のcodon12の点突然変異を識別することに成功した。従来の希土類蛍光錯体では困難であったC6アミノリンカーを介したDNAへの直接ラベルは、ジメチルスルホキシド(DMSO)を添加し、Eu3+-p-DTBTAの凝集体(擬ミセル)形成を阻害することで達成できた。
人口減少時代における包括型雇用創出に関する研究

本研究の特色及び意義は以下のとおりである。第一に,「就労困難者」といわれる就労までに支援と時間を必要とする者,就労の継続に支援を必要とする者の対象を明らかとし,それぞれが就労に対して抱える困難な問題点を整理する点にある。第二に,「就労困難者」に対する支援のあり方,支援に対するシステムの構築について具体的に整理・検討する点にある。第三に,「就労困難者」が福祉政策と労働政策の谷間に陥る課題を整理し,「包摂型雇用」を創出するための横断的な政策議論に貢献することにある。
RNA干渉法による周術期心筋障害におけるオートファジーとアポトーシスの役割の解明

本年度実験経過においては、ラット心筋細胞を用いたIn Vitro系でヒトを対象とした臨床実験(In vitro系)系と同様に心筋障害とアポトーシス及びオートファジーの関係を解明する事、β-blockerまたは吸入麻酔薬を培養液に添加する事で、アポトーシス及びオートファジーの発現変化を観察する事を目標にしていた。しかし、ヒトを対象とした臨床研究で研究結果の進展をみたので、ラット心細胞を用いた実験系を中断した。去年度の報告書において、1.心拍動下冠動脈バイパス手術症例における心筋保護作用を目的とした短時間作用型β-blocker(ランジオロール)投与に、一部有効性を示すことができた。人工心肺下冠動脈バイパス手術症例においては、心筋障害が高度に発現している可能性があるのでより有用性を示す可能性がある、と記載した。この仮説に従い術前からのβ遮断経口薬のみならず、術中の短時間作用型β遮断薬投与により、人工心肺下冠動脈バイパス手術において心筋細胞内の小胞体ストレス(CHOP発現)と細胞死(Caspase3発現)の発現が抑制されることで、周術期の心筋障害(血漿中H-FABP濃度)が抑制されることが分かった。また、これら術中の短時間作用型β遮断薬投与によるCHOP及びCaspase3発現抑制効果は心拍動下冠動脈バイパス手術においては確認されなかったことから、より心筋に侵襲の高い環境において短時間作用型β遮断薬の効果が見られる事が示唆された。予定On-pump CABG, Off-pump CABG及び手術患者より採血(手術前、冠動脈再建終了直後、2時間後、8時間後、24時間後)、及び右心耳の一部(冠動脈再建前後の2回)の外科的採取を行った。*フローサイト法の為のヒト右心耳組織からの心筋細胞の単離は、Medimachine(現有設備)を用いた。結果2. Off-pump症例のランジオロール投与では周術期のNT-BNP上昇が抑制された。3. β-blockerによる心筋保護効果には、心筋細胞内情報伝達系のCHOP, Bax, Caspase8, Caspse3の発現上昇が関与している可能性が示唆された。結論1. Off-pump CABG症例における心筋保護作用を目的とした短時間作用型β-blocker投与に、一部有効性を示すことができた。On-pump CABG症例においてはより有用性を示す可能性があると考える。2. CABG症例における術前からのβ-blocker投与による心筋保護の機序として、小胞体ストレス軽減作用が関与していることが示唆された。
アライアンス能力構築に向けた合弁経験の活用の分析

本研究は4ケ年計画で実施される。第1年度に当たる2018年度の研究概要は以下の3点である。第1に、海外進出企業が国際合弁の経験を通じて、グローバル事業展開におけるアライアンス能力をどのように構築したのかについて、先行研究を整理したことである。先行研究を分析することにより、(1)合弁事業においては,協働という経験を通して多様な知識が移転されるが、知識が完全に移転するには時間がかかる。(2)合弁企業に移転される様々な技術においては、親企業の文化の優れた部分を融合し、「第3の文化」を築き上ける能力に大きく影響されることが分かった。以上のアライアンス能力に関する研究成果は、国際学会で発表した。第2に、トヨタとGMが合弁で設立した自動車の製造会社・NUMMIの事例分析である。(1)NUMMIのすべての労働協約書の整理・分析、(2)これまで行なってきたNUMMIの経営に携わってきた人達へのインタビュー調査の整理・分析である。これらの作業から、組織内の労使関係・人間関係の動きを読み解くことができ、NUMMI独特の文化の形成プロセスや、社会システムを強化する作業組織を構築することの合理性を説明することが可能となった。NUMMI研究に関する成果は、学会報告および学術論文として投稿する予定である。第3に、国際合弁における組織文化に関する先行研究を整理・分析したことである。「第3の文化」の形成プロセスにおいては、「融合」、「支配」、「セグメンテーション」および「崩壊」という4つのパターンが存在し(Child, J., D. Faulkner, and S.Tallman,2005)、国際合弁企業においては、「融合」というカテゴリーが最も有効であるという分析枠組みを導出した。これらの分析枠組みは、今後の事例分析において活用していくこととなり、今後の研究の方向性を見出すこととなった。おおむね順調に進展していると評価する理由は、以下の2点である。第1に、アライアンス能力および組織文化の形成についての既存研究を整理することで、(1)合弁企業における技術移転は「第3の文化」の創出およびその中心的な役割を明らかにし、それを研究成果として発表できたことである。(2)また、組織文化の形成が、技術移転を促進させるということだけでなく、国際合弁企業における技術移転の「時差」に着目し、国際合弁事業における技術移転・知識移転の在り方を提示することができたことである。こちらの研究成果は、学術論文として投稿する予定である。(3)さらに、組織文化の「融合」という文化形成メカニズムに着目し、今後の研究の方向性を導出できたことである。第2に、NUMMIの事例分析を行うことで、合弁経験を、技術システム(生産方式、品質管理、原価管理など)と社会システム(組織文化、人間関係、労使交渉など)の2つの側面から分析ができ、その分析成果を、研究成果として発表できたことである。本研究課題の今後の推進方策については、以下の3つである。第1に、国際合弁企業における組織文化形成メカニズムについて、学術論文として成果を発表することである。第2に、NUMMIという国際合弁企業の25年史を整理し、合弁経験から抽出されたアライアンス能力を経営学史としてまとめることである。また、これらの研究成果については、学会報告および学術論文として発表する。第3に、NUMMIでの経験を体系化するため、NUMMIの関係者にヒアリング調査を継続して実施する予定である。

(2)また、組織文化の形成が、技術移転を促進させるということだけでなく、国際合弁企業における技術移転の「時差」に着目し、国際合弁事業における技術移転・知識移転の在り方を提示することができたことである。こちらの研究成果は、学術論文として投稿する予定である。(3)さらに、組織文化の「融合」という文化形成メカニズムに着目し、今後の研究の方向性を導出できたことである。第2に、NUMMIの事例分析を行うことで、合弁経験を、技術システム(生産方式、品質管理、原価管理など)と社会システム(組織文化、人間関係、労使交渉など)の2つの側面から分析ができ、その分析成果を、研究成果として発表できたことである。本研究課題の今後の推進方策については、以下の3つである。第1に、国際合弁企業における組織文化形成メカニズムについて、学術論文として成果を発表することである。第2に、NUMMIという国際合弁企業の25年史を整理し、合弁経験から抽出されたアライアンス能力を経営学史としてまとめることである。また、これらの研究成果については、学会報告および学術論文として発表する。第3に、NUMMIでの経験を体系化するため、NUMMIの関係者にヒアリング調査を継続して実施する予定である。次年度使用額が生じた理由は、ヒアリング調査にかかる費用が先方との調整ができなかったという理由により、かからなかったためである。次年度においては、アメリカ現地へのヒアリング調査のために旅費として使用すると共に、国内学会、国際学会での発表の旅費と参加費として、また、学術論文の投稿に際しての英文の校閲費にも充てる予定である。
筋炎特異自己抗体による病態形成の分子免疫機構の解明

【抗PMS1抗体の同定と臨床的意義】in vitrotranscription/translationで発現したhPMS1の免疫沈降法により,抗hPMS1抗体は,多発性筋炎(PM)重複症候群6例,皮膚筋炎2例,特発性間質性肺炎2例,強皮症1例,に検出された.抗hPMS1抗体陽性11例中8例(73%)に筋炎,6例(55%)に間質性肺炎と関節炎を認めた.抗hPMS1抗体はPM重複症候群と関連し,間質性肺炎を高頻度に合併する特徴を示した.【筋炎特異自己抗体の免疫遺伝学的背景】抗アミノアシルtRNA合成酵素(ARS)(Jo-1=10;PL-7=4;PL-12=8;EJ=10;OJ=4;KS=8)抗体陽性44例,抗SRP抗体陽性20例のHLAクラスII遺伝子を検討した.筋炎と関連する抗Jo-1抗体/抗PL-7抗体陽性14例中10例がDRB1*0405-DQA1*0303-DQB1*0401を高頻度に持っていた.問質性肺炎と関連する抗PL-12抗体/抗KS抗体はDR2(DRB1*1501/1502)と関連していた.治療抵抗性筋炎と関連する抗SRP抗体陽性20例中9例がDR8(DRB1*0802/08032)を持っていた.筋炎特異自己抗体の筋炎,間質性肺炎などの関連症状とHLAクラスIIとの密接な関連が示唆された.【抗SRP抗体の免疫学的多様性と臨床的意義】抗SRP抗体陽性36例中9例(25%)血清が脱蛋白(d)7SL-RNA,12例(33%)血清が72,54,19,9kDa蛋白を免疫沈降するなど,計10種類の免疫沈降パターンがみられた。72kDa蛋白,19/9kDa蛋白との反応例は非反応例に比べ筋力低下,CK高値を有意に高頻度に認めた。d7SL-RNA,68kDa蛋白を免疫沈降する全症例が筋力低下,CK高値を示したが,DM皮疹,悪性腫瘍は認めなかった。54kDa蛋白と反応する症例は非反応例に比べ,関節炎が有意に低頻度であった。抗SRP抗体は,d7SL-RNAと6種類のポリペプチドに対し免疫学約多様性を示し,その反応性と臨床像との関連性が明らかとなった。【方法】(1)新たな筋炎特異自己抗体が認識する核酸成分および蛋白成分の分析:HeLa細胞抽出物を用いた免疫沈降法,免疫ブロット法などにより行なった.(2)hPMS1に対する自己抗体はin vitrotranscription/translationにより発現した,アイソトープ標識PMS1の免疫沈降反応により同定した.(3)筋炎特異自己抗体の関連病態の分析:

教室と共同研究施設の4,500例の膠原病患者血清をスクリーニングし,かかる自己抗体と関連する臨床特徴を検討した.【結果】(1)抗hPMS1抗体は,PM OL6例,DM2例,SSc1例,特発性間質性肺炎1例に検出された.抗hPMS1抗体陽性11例中,9例(82%)に筋炎,6例(55%)に間質性肺炎と関節炎を認めた.(2)抗DNA-PKcs抗体はPM/DM 2例,PM-SSc2例,SLE2例,SSc1例に検出され,PM症例において高頻度に検出された.(3)抗Mi-2抗体は皮膚筋炎(DM)7例と多発性筋炎(PM)-強皮症(SSc)重複症候群(OL)1例に認めたが,SLE,SScでは検出されなかった.抗Mi-2抗体陽性8例において,間質性肺炎は1例(12.5%),関節炎は2例(25%)と低頻度であった。治療反応性では,1例は薬物治療を必要とせず寛解し,残りの7例でもステロイド治療で軽快し,治療反応性良好なDMと関連した.(4)抗SRP抗体陽性血清中に7SL-RNAを認識する自己抗体を見出した.【結語】(1)抗hPMS1抗体はPM OLと関連し,間質性肺炎を高頻度に合併する特徴を示した.(2)抗DNA-PKcs抗体はPMとの関連が示唆された.(3)抗Mi-2抗体はDMの疾患標識抗体となり,間質性肺炎と関節炎の頻度が低く,治療反応性が良好な臨床サブセットを形成する可能性が示唆された.(4)7SL-RNAを認識する自己抗体の解析と臨床像との関連追究を,今後行う予定である.本年度は,筋炎特異自己抗体の臨床・免疫遺伝学的特徴の検討を行なった.【方法】(1)筋炎特異自己抗体が認識する核酸成分および蛋白成分の分析:HeLa細胞抽出物を用いた免疫沈降法により行なった.(2)免疫遺伝学的背景の検討:HLAクラスII遺伝子は,患者末梢血白血球よりgenomic DNAを抽出し,PCR-RFLP法などで検討した.(3)筋炎特異自己抗体の関連病態の分析:教室と共同研究施設の4,500例の膠原病患者血清をスクリーニングし,かかる自己抗体と関連する臨床特徴を検討した.【結果】(1)当院・共同研究施設の対象患者中,抗アミノアシルtRNA合成酵素(ARS)(Jo-1=10;PL-7=4;PL-12=8;EJ=10;OJ=4;KS=6)抗体陽性42例,抗SRP抗体陽性20例.を検討した.(2)筋炎と関連する抗Jo-1抗体/抗PL-7抗体陽性14例中10例がDRB1^*0405-DQA1^*0303-DQB1^*0401を高頻度に持っていた.(2)間質性肺炎と関連する抗PL-12抗体/抗KS抗体はDR2(DRB1*1501/1502)と関連していた.(3)治療抵抗性筋炎と関連する抗SRP抗体陽性20例中9例がDR8(DRB1*0802/08032)を持っていた.【結語】筋炎特異自己抗体の筋炎,間質性肺炎などの関連症状とHLAクラスIIとの密接な関連が示唆された.今後,症例を集積し,他の筋炎特異自己抗体を含む,より詳細な検討を行なうことが,筋炎の病態解明,筋炎特異自己抗体の産生機序を追究する上で重要と考えられる.【方法】1.慶応義塾大学病院および関連施設の膠原病患者のうち、13,000例を対象とした。2.自己抗体の検索:HeLa全細胞抽出物(非脱蛋白抗原),あるいはフェノール抽出により脱蛋白した(deproteinized;d)核酸成分抽出物を抗原とした免疫沈降法により,患者血清中の自己抗体が認識する核酸成分,蛋白成分を分析した。3.抗SRP抗体陽性36例の臨床的特徴(臨床症状,検査所見,治療反応性,予後など)を,同抗体の免疫沈降反応パターンにより層別化し,解析した。