hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
軟骨変性の進行における小胞体ストレスの役割に関する分子生物学的解析

アポトーシス関連分子Chopの遺伝子欠損マウスの変形性関節症(OA)モデルと、同マウスの軟骨細胞を用いた解析により、Chopが軟骨細胞アポトーシスに直接的な役割を果たし、Chopを介した小胞体ストレス性アポトーシスが軟骨変性の進行に寄与することを示した。また、小胞体ストレスセンサー蛋白Perk, Ire1α, Atf6αの遺伝子欠損マウスのOAモデルと、各遺伝子発現が抑制された軟骨細胞を用いて、Atf6αが軟骨変性の進行に関与し、またIre1αとAtf6αが軟骨細胞の同化作用に影響を及ぼすことを明らかにした。【目的】変形性関節症(OA)における軟骨変性の進行機序として小胞体ストレスの関与が注目されており、われわれは平成23年度の研究で小胞体ストレス性アポトーシスに重要な因子であるChop遺伝子をノックアウトすることで軟骨変性が抑制されることを示した。小胞体ストレス応答では小胞体膜上の3つのセンサー蛋白(Perk, Ire1α、Atf6)が活性化することによって様々な転写因子の発現が増加し、タンパク質の恒常性維持に働く。平成24年度の研究目的は、小胞体ストレスセンサー蛋白遺伝子欠損マウスを用いて、各センサー蛋白の役割を明らかにすることである。【方法】6-7ヶ月齢雄のPerk+/-、Ire1α+/-、Atf6α-/-およびAtf6β-/-マウスおよびwild typeのC57BL/6Jマウスを用いて、右膝関節の内側半月切除および内側側副靭帯切離によるOAモデルを作成した。4週後に屠殺し、膝関節を摘出してパラフィン切片を作製し、軟骨変性をSafranin-O染色によるmodified Mankin score、アポトーシスをTUNEL染色の陽性細胞率によりそれぞれ評価した。【結果】軟骨変性はwild typeマウスと比較してPerk+/-、Perk+/-、Ire1α+/-、Atf6β-/-マウスでは同等であったが、Atf6α-/-マウスでは有意に進行した。Atfα-/-マウスではアポトーシスもwild typeと比較して有意な増加を認めた。【考察および結論】Atf6は哺乳動物ではαとβの2種のアイソフォームが存在するが、分子シャペロンや小胞体関連分解因子の転写を制御してタンパクの品質管理を担うのは、主にAtf6αとされている。本研究により、小胞体ストレスセンサー蛋白の中でAtf6αが軟骨細胞の恒常性維持には重要であり、OAの進行により深く関与することが示唆された。【目的】変形性関節症(OA)における軟骨変性の進行機序として小胞体ストレスの関与が注目されている。われわれは平成24年度の研究で、小胞体ストレスセンサー蛋白(Perk、Ire1α、Atf6α)のノックアウト(KO)マウスのOAモデルを作成し、解析を行った結果、Atf6αKOマウスで軟骨変性が進行することを明らかにした。平成25年度の研究目的は、各センサー遺伝子のノックダウン細胞を用いて、軟骨細胞機能におけるセンサー蛋白の役割を明確にすることである。【結果】TMの投与によって対照群ではCol2a1とAcanの発現が低下し、Mmp13とXbp1sの発現とアポトーシスが上昇した。これらの変化のなかで、Col2a1発現はIre1αとAtf6αのKDで、Acan発現はIre1αのKDで対照群よりさらに低下した。Mmp13は各センサー蛋白のKD群と対照群で差がなかったが、Xbp1sの発現上昇はAtf6αとIre1αのKDによって抑制された。また、アポトーシスの上昇は全センサー蛋白ともKDにより有意に上昇した。【結論】小胞体ストレス下において、Atf6αKDでCol2a1の発現が、Ire1αKDでAcanとCol2a1の発現が低下したことから、これらの遺伝子が軟骨細胞機能に重要な役割を果たすことが示唆された。【目的】変形性関節症(OA)軟骨では変性の進行とともに小胞体ストレスとアポトーシスが相関して増加し、小胞体ストレスがOAの進行に関与することが示唆されている。本研究では、小胞体ストレスとOAとの関連性をさらに明確にするために、小胞体ストレス性アポトーシスに重要な因子であるChop遺伝子のノックアウトマウスとノックダウン細胞を用いた解析を行った。【方法】実験1:10週齢雄C57BL/6JのChop+/+およびChop-/-マウスで内側半月切除および内側側副靭帯切離によるOAモデルを作製した。術後4、8週時に小胞体ストレスマーカー(Chop、peIF2α、Grp78)を免疫染色で、アポトーシスと軟骨変性を組織学的に評価した。

実験2:5週齢雄C57BL/6Jマウスより単離した関節軟骨細胞に、Chopに対するsiRNA(ノックダウン群)とNegative control siRNA(対照群)を遺伝子導入した。小胞体ストレス誘導剤Tunicamycin(TM)を1 μg/ml投与後、Grp78、Chop、Col2a、AcanのmRNA発現量をqPCR、アポトーシスをELISA、TUNEL染色で評価した。【結果】実験1:Chop-/-マウスでは、peIF2α、Grp78の発現はChop+/+マウスと同等であったが、アポトーシスと軟骨変性は抑制された。実験2:TM投与によってGrp78発現量は両群ともに増加したが、ノックダウン群では対照群と比べてChop発現とアポトーシスは抑制され、Col2a発現量は高かった。【考察および結論】Chop遺伝子をノックアウト(ダウン)することで、アポトーシスの発生、軟骨基質産生能の低下、軟骨変性の進行が抑制され、小胞体ストレスがOAの進展に関与することが強く示唆された。当初の計画では、平成24年度には、wild typeマウスと4種類の小胞体ストレスセンサー蛋白遺伝子欠損マウスを用いた膝OAモデルで、軟骨変性の進行とアポトーシスの頻度の比較検討とともに、pPerk、Chop、Grp78発現による小胞体ストレスの評価、II型コラーゲン、アグリカン、Mmp13発現による軟骨細胞機能の評価を終了する予定であった。しかし、小胞体ストレスセンサー蛋白遺伝子欠損マウスの繁殖と飼育に予想以上の長期を要したため、膝OAモデルの作成が予定より遅れた。このため、全ての解析サンプルの採取は完了しており、解析主項目である軟骨変性の進行とアポトーシスの頻度の比較検討については結論を得ることができたが、小胞体ストレスの評価、軟骨細胞機能の評価については現在解析中であり、4月末に最終結果が得られる予定である。本年度の研究結果は研究前に立てた仮説とほぼ一致していた。実験2で培養液の解析については現在施行中であるが、おおむね計画通りに進行している。【目的】平成24年度に引き続き、小胞体ストレスセンサー蛋白遺伝子(Perk、Ire1、Atf6)の軟骨変性における役割をより明確にするために、軟骨培養細胞系において各遺伝子のノックダウン細胞を用いた解析を行う。【方法】C57BL/6Jマウスの大腿骨頭より採取した関節軟骨から軟骨細胞を単離し、培養する。この軟骨細胞培養系で、Perk、Ire1、Atf6それぞれの遺伝子発現をsiRNAとLipofectamineを用いて抑制する。その後に小胞体ストレス誘導剤Tunicamycinを投与し、24時間後に軟骨細胞のアポトーシスをTUNEL染色で評価する。また、軟骨細胞からタンパクとmRNAを抽出後、軟骨細胞機能をII型コラーゲン、アグリカン、Mmp13の発現で評価し、また小胞体ストレスをXbp1sの発現で評価する。さらに培養液中のII型コラーゲン、アグリカン、Mmp13量を測定する。【目的】平成23年度の研究の結果、変形性関節症(OA)における軟骨変性の過程に小胞体ストレスが深く関与していることを明らかにした。一方、小胞体ストレスは小胞体膜上のPERK、IRE1、ATF6のセンサー蛋白の活性化により始まる3つの経路を介して小胞体ストレス応答を引き起こすが、その応答は細胞腫によって異なり、また疾患の病態にもそれぞれ異なる役割を担っていることが示されている。
プリズム形光ピックアップに関する研究

本研究グループは、小型・軽量化を目的とした、光ファイバとプリズムを用いた新しい光ディスク用光ピックアップを提案し、その特性の実験的検討を行った。その結果以下に示すような研究成果を得た。1.最初に、光ピックアップに光ファイバを導入する可能性について、偏波保存光ファイバと偏光ビームスプリッタ及びマイクロレンズの組合せによる基礎実験を行い、その有効性を確認した。2.半導体レーザの出射光を偏波保存光ファイバを介し偏光ビームスプリッタへわずかに斜め入射した場合、光ディスクから反射された光強度分布の光ディスクの変動に対する変化が焦点誤差信号を含むことを見い出した。3.光ディスクから反射された戻り光強度分布の変化を受光するために、石英単一モード光ファイバと2本のプラスチック光ファイバを用い、単一モードファイバのクラッドにプラスチックファイバのコアを融着した三分岐光ファイバカプラを試作した。4.この戻り光強度分布の変化をプリズムと三分岐光ファイバカプラを使って受光し、これより焦点誤差信号が得られることを確認した。5.これ等の実験段階に於て、我々は新たに、プリズムあるいは偏光ビームスプリッタの代わりに回転楕円鏡を用いた光ピックアップ方式を検討し、この新しい従来にない特徴を持つことが判った。6.回転楕円鏡と三分岐光ファイバカプラの組合せにより、他の光学部品を全く使わずに、焦点誤差信号が得られることを確認した。尚、今後、より高精度の光ピックアップを得るために、回転楕円鏡の最適設計、光ファイバカプラの改良及び光ディスク全体を一体化し、回転誤差信号、トラッキング信号等の特性の測定を行い、この光ピックアップの総合性能においての利点を明からにしてゆく。本研究で提案したプリズム形光ピックアップについて,次のような研究結果が得られた.1.光ピックアップに偏波保存光ファイバを導入する可能性について,光ファイバと偏光ビームスプリッタの組み合わせによる基礎実験を行い一応の研究成果が得られた.2.半導体レーザの出射光を偏波保存光ファイバを介し偏光ビームスプリッタへ斜め入射した場合,その戻り光強度分布が光デスクの変動に対し変化するという結果を得,戻り光を5分岐の単一モードファイババンドルで受光しフォーカス信号を得ることを実験的に確認した.3.これ等の実験段階に於いて,我々は新たに,回転楕円鏡を用いた光ピックアップ方式を検討し従来にない特徴をもつことが判った.なお,これ等の成果は, 62年11月及び63年3月の電子情報通信学会全国大会で講演した.また,これ等の研究結果の継続として, 1.半導体レーザの出射光を偏波保存光ファイバを介し,これを偏光ビームスプリッタへ斜め入射した場合,その戻り光強度分布が光ディスクの変動に対し変化するという実験結果が得られたが,これ等の理論的解明を行い,さらに,特性・性能の向上を図る.2.デバイスの到達性能を推定し,デバイス全体を半導体レーザを含めて作成し,特性の測定改良をくり返し,デバイスの小形,計量化を目的にした総合デザインを行う.3.プリズムを回転楕円鏡に代えた場合の,新しい光ピックアップについても,回転楕円面による集光特性の理論的解析及びその実験結果,ならびに,非焦点信号検出法等についても検討する.なお,これ等の結果をまとめて63年度末に電子情報通信学会論文誌等へ投稿する予定である.本研究グループは、小型・軽量化を目的とした、光ファイバとプリズムを用いた新しい光ディスク用光ピックアップを提案し、その特性の実験的検討を行った。当該年度の結果として以下に示すような研究成果を得た。1。半導体レーザの出射光を偏波保存光ファイバを介し偏光ビームスプリッタへわずかに斜め入射した場合、光ディスクから反射された光強度分布の光ディスクの変動に対する変化が焦点誤差信号を含むことを見い出した。2。

光ディスクから反射された戻り光強度分布の変化を受光するために、石英単一モード光ファイバと2本のプラスチック光ファイバを用い、単一モードファイバのクラッドにプラスチックファイバのコアを融着した三分岐光ファイバカプラを試作した。3。この戻り光強度分布の変化をプリズムと三分岐光ファイバカプラを使って受光し、これより焦点誤差信号が得られることを確認した。4。これ等の実験段階に於て、我々は新たに、プリズムあるいは偏光ビームスプリッタの代わりに回転楕円鏡を用いた光ピックアップ方式を検討し、このピックアップが、新しい従来にない特徴を持つことが判った。5。回転楕円鏡と三分岐光ファイバカプラの組合せにより、他の光学部品を全く使わずに、焦点誤差信号が得られることを確認した。尚、これ等の成果は、平成元年3月の電子情報通信学会春季全国大会で発表予定である。今後の方針として、より高精度の光ピックアップを得るために、回転楕円鏡の最適設計、光ファイバカプラの改良及び光ディスク全体を一体化し、焦点誤差信号、トラッキング信号等の特性の測定を行い、この光ピックアップの総合性能においての利点を明らかにしてゆく。
ニフェジピン歯肉増殖症における炎症性セリンプロテアーゼの線維芽細胞機能の修飾

ヒトニフェジピン(以下NF)誘発性歯肉増殖症におけるセリンプロテアーゼメダラシン(以下Med)の役割について検討するために、NF誘発性歯肉増殖症を有する患者(R群)5名と、対照として同薬剤を服用しない慢性辺縁性歯肉炎患者(ND群)5名および臨床的健康歯肉を有するう蝕症などの患者(Control群)5名を用い、Med特異抗体を用いて免疫染色を施し、Med陽性細胞の頻度および分布を検討した。その結果、R群の方が他群よりMed陽性細胞の頻度が有意に高く、歯肉結合組織全体に散在的に存在し、特に結合組織深部の血管周囲に多く認められた。これに対し、ND群ではポケット上皮直下に集中して認められた。Med陽性細胞は主として好中球であるが、R群では一部のマクロファージにおいても認められた。これらの所見より、Medは本疾患においてなんらかの重要な役割を果たしていることが示唆された。次に、同疾患におけるMedと増殖因子との関連性を解明する目的で、歯肉増殖と深い関連があるとされる線維芽細胞増殖因子(以下FGF)-2、血小板由来増殖因子(以下PDGF)-Aの抗体を用いた免疫組織学的検索を行い、その保有細胞の組織内分布をMed陽性細胞の分布と比較検討した。その結果、抗FGF-2抗体陽性反応はR群の炎症性細胞浸潤の強い領域で多く見られ、同部におけるMed陽性細胞の分布と類似した所見が得られた。一方、抗PDGF-A抗体陽性反応は弱く、同保有細胞は散在的に分布していた。これらのことから、NF誘発性歯肉増殖症において、MedとFGF-2および炎症性細胞浸潤に何らかの関連性があることが示唆された。今後、抗Med抗体と抗FGF-2抗体を用いた二重染色を行い、両因子の関係をさらに詳しく検討する予定である。ヒトニフェジピン(以下NF)誘発性歯肉増殖症におけるメダラシン(以下Med)の役割について検討するために、NF誘発性歯肉増殖症を有する患者(R群)5名と、対照として同薬剤を服用しない慢性辺縁性歯肉炎患者(ND群)5名および臨床的健康歯肉を有するう蝕症などの患者(Control群)5名を用い、Med特異抗体を用いて免疫染色を施し、Med陽性細胞の頻度および分布を検討した。その結果、R群の方が歯肉炎群よりMed陽性細胞の頻度が有意に高く、歯肉結合組織全体に散在的に存在し、特に結合組織深部の血管周囲に多く認められた。Med陽性細胞は主として好中球であるが、R群では一部のマイクロファージにおいても認められた。これらの所見より、MedはNF誘発性歯肉増殖症において重要な役割を果たしていることが示唆された。次に、同疾患における線維芽細胞の増殖能の変化を解明する目的で、上述のR、ND、Controlの各群5名に対して抗増殖細胞核抗原(以下PCNA)抗体を用いた免疫組織学的検索を行い、その保有細胞の組織内分布ならびに存在密度を比較検討した。その結果、各群の線維芽細胞および上皮細胞にPCNA陽性所見が見られ、なかでも単位面積あたりの線維芽細胞の総数に対するPCNA陽性線維芽細胞の百分率は、R群>ND群>Control群の順に有意に高かった。これらの所見より、NF誘発性歯肉増殖症では線維芽細胞の増殖能が増強されている可能性が示唆された。さらに、PCNAの発現に主としてマクロファージが産生する増殖因子である血小板由来増殖因子(以下PDGF)が密接に関わっていることから、同疾患の発症および進展にPDGFが関連していることが考えられた。
グルタミン酸シグナル伝達機構によるマウス体性感覚野バレルの臨界期発達

本研究では、遺伝子改変マウスを用いて、大脳皮質体性感覚野における臨界期の時間特性と可塑性振幅を制御する分子機構の解明を目的とする。特に、シナプス回路発達の最も重要な鍵を握っているNMDA型グルタミン酸受容体で発達段階の主要な発現サブユニットであるGluRε2とGluRε4と、大脳皮質の主要なグルタミン酸トランスポーターであるGLT1とGLASTに焦点を当て、これらの欠損マウスにおける臨界期の開始/終了時期と臨界期可塑性の振幅について検討した。その結果、野生型マウスに比べ、NMDA受容体GluRε1遺伝子を1個欠くヘテロマウスではバレルの出現と臨界期の終了時期がともに1日遅れ、GluRε4遺伝子を完全に欠失するホモマウスでは1日速まっていることが判明した。一方、C列触覚毛除去による臨界期可塑性の振幅は変化しなかった。一方、GLT1欠損マウスとGLAST欠損マウスでは、バレルの出現時期や臨界期の終了時期に違いは見られなかったが、C列触覚毛除去後のC列バレルの縮小率とB/Dバレルの拡大率が共に縮小し臨界期可塑性振幅が減少していた。これらの結果から、NMDA受容体はバレルの形成発達の時間的制御に関与し、グルタミン酸トランスポーターは活動依存的な臨界期可塑性振幅の制御に中心的な役割を果たしていることを示している。従って、両者の分子機構が揃うことにより、競合的なシナプス回路の臨界期発達が正常に行われることを物語っている。本研究では、遺伝子改変マウスを用いて、大脳皮質体性感覚野バレルにおける臨界期の時間特性と可塑性振幅を制御する分子機構の解明を目的とする。特に、シナプス回路発達の最も重要な鍵を握っているNMDA型グルタミン酸受容体で発達段階の主要な発現サブユニットであるGluRε2とGluRε4と、大脳皮質の主要なグルタミン酸トランスポーターであるGLT1とGLASTに焦点を当て、これらの欠損マウスにおける臨界期の開始/終了時期と臨界期可塑性の振幅について検討する。本年度の研究推進により、以下のような研究成果が得られた。GLT1は大脳に豊富なトランスポーターサブタイプである。この遺伝子欠損マウスでは、バレルの形成時期や臨界期終了時期などの発達の時間特性において、野生型マウスとの相違は見られなかった。しかし、C列感覚毛の除毛処置を臨界期において施すと、野生型マウスではこれに対応するC列バレルが大幅に縮小し、隣接するB/Dバレルの大幅な拡大が起こり、活動依存的なマップ改築が生じた。しかし、GLT1欠損マウスでは、この変動振幅が有意に減少していた。同様の現象は、もう一つの主要なトランスポーターであるGLAST欠損マウスにおいても観察された。以上の結果より、グルタミン酸トランスポーターは皮質マップの活動依存的改築において、その臨界期可塑性の変動振幅を制御する重要な分子機構であることが判明した。特に、シナプス回路発達の最も重要な鍵を握っているNMDA型グルタミン酸受容体で発達段階の主要な発現サブユニットであるGluRε2とGluRε4と、大脳皮質の主要なグルタミン酸トランスポーターであるGLTlとGLASTに焦点を当て、これらの欠損マウスにおける臨界期の開始/終了時期と臨界期可塑性の振幅について検討した。

一方、GLT1欠損マウスとGLAST欠損マウスでは、バレルの出現時期や臨界期の終了時期に違いは見られなかったが、C列触覚毛除去後のC列バレルの縮小率とB/Dバレルの拡大率が共に縮小し臨界期可塑性振幅が減少していた。これらの結果から、NMDA受容体はバレルの形成発達の時間的制御に関与し、グルタミン酸トランスポーターは活動依存的な臨界期可塑性振幅の制御に中心的な役割を果たしていることを示している。従って、両者の分子機構が揃うことにより、競合的なシナプス回路の臨界期発達が正常に行われることを物語っている。
典型金属原子の関与する化学反応設計に対する理論的研究

本年度は2つのテーマについて非経験的分子軌道法により研究を行った。1.エーテルへのAl原子挿入反応:ジメチルエーテル(DME)と水分子へのAl原子の挿入反応の比較検討を行なった。この反応はまず金属とO原子との間で錯体を形成する。この錯体形成に関し、軌道理論から錯体形成の実験的指標であるCOC(又はHOH)bendinhモードのシフトに関して説明ずけた。DMEのC-O結合へのAl原子の挿入反応は水分子のO-H結合への挿入と比較し、活性化エネルギーは低いが反応確率は低いことを予測した。これは先のX-H結合への挿入反応デX-H結合への電荷移動が活性化エネルギーを支配するという結論から導かれる結果と一致した。またDMEのC-H結合への挿入反応に関して、挿入化合物Me-0-CH_2-Al-HはKcml/mol以下のエネルギーバリアーでより安定な三員環化合物を生成することが明らかになった。以下のように挿入反応の容易さはO-C>O-H>C-Hの順となり、電荷移動エネルギーと活性化エネルギーの相関性をより一般的に示した。2.シリレン.ジメチルシリレンのシランおよびメチルシランのS_i-H結合への挿入反応:シリレンによるシランのS_i-H結合への挿入反応メカニズム及びそのナカニズムに基ずいた環換基効果について検討を行なった。LMO-centroid解析を行なった結果、反応はシランから水素原子がマニオンとしてシリレンに付加し、シリルカチオン-シリルアニオン型の錯体を形成し、シリルアニオンのinversionによりジシランが生成するというものである。シリレンおよびシランニメチル基がついた系に対するberrierを計算した結果、シリレンの場合に大きく変化することが明らかとなった。これらの反応の置換基効果はinversionエネルギーによって決められることも明らかにした。
子宮内胎児発育遅延の発症における胎盤形成遺伝子の関与に関する研究

本研究の目的は、レトロトランスポゾン由来の胎盤形成遺伝子(Rtl1)の発現異常がヒトの子宮内胎児発育遅延(IUGR)の発症に関与しているかを明らかにすることであった。IUGR児および正常新生児の胎盤を比較すると、Rtl1遺伝子発現量が相違する結果が得られた。このことは、ヒトのIUGRの発症にRtl1遺伝子の発現異常が存在することを世界に先駆けて明らかにした。本研究の目的は、胎盤内の胎児-母体間の毛細血管を形成し、ガス・栄養交換を行う上で重要な役割を担っていることが動物実験で明らかにされたレトロトランスポゾン由来の胎盤形成遺伝子(Rtl1)について、Rtl1がヒト胎盤で発現していることを確認すること、Rtl1の欠失や遺伝子変異がヒト子宮内胎児発育遅延(IUGR)の発症原因であるかを解明することである。1.ヒトIUGRの発症原因についての疫学的検討ヒトIUGRの発症にどの程度、胎盤の異常が関与しているかを明らかにするために、2004年から2008年の過去5年間に神戸大学医学部附属病院周産母子センターで出生した重症IUGR児を対象にIUGRの発症原因に関する疫学調査を行った。計150例の対象を解析した結果、発症原因が胎盤の異常であった症例が32.7%を占め、重症IUGR発症の主因であることを明らかにした(第54回日本未熟児新生児学会にて報告)。ヒトIUGRの発症において、胎盤異常の原因を明らかにすることが重要であることを臨床的観点から明らかにしえた。2.本研究の倫理委員会への申請と対象胎盤検体の確保本研究を神戸大学大学院医学研究科の医学倫理委員会へ申請し承認を得た。その後、原因不明のIUGR児30例と正常新生児25例の胎盤を採取し、DNA・RNAの抽出が完了した。来年度の分子生物学的手法を用いたRtl1の発現の検討に向けて、計画通り、対象の胎盤を十分な数を確保することができた。本研究の目的は、胎盤内の胎児-母体間の毛細血管を形成し、ガス・栄養交換を行う上で重要な役割を担っていることが動物実験で明らかにされたレトロトランスポゾン由来の胎盤形成遺伝子(Rt11)について、Rt11がヒト胎盤で発現していることを確認すること、Rt11の欠失や遺伝子変異がヒト子宮内胎児発育遅延(IUGR)の発症原因であるかを解明することであった。正常新生児およびIUGRにて出生した新生児の胎盤におけるRt11遺伝子発現の検討1.3'RACE法によるcDNAの作成ヒト胎盤RNAから5'末端にアダプター配列の付いたオリゴをプライマーにして逆転写反応を行い、cDNAを作成した。2.GAPDH(組織内で恒常的に発現している遺伝子)の発現を確認そのcDNAにおいて、GAPDHの発現を確認し、本研究の実験系の確立に成功した。3.Rt11遺伝子発現の検討cctgcaacgttaccgtcagtをセンスプライマーとしてアダプタープライマーと、PCR(94度x3分、94度x1分,55度x1分,72度x1分:35サイクル、72度x5分)を行った。その結果、目的の産物と思われる約400bpのバンドが得た(Rt11がヒト胎盤で発現)。正常新生児の胎盤では発現が強く、IUGRにて出生した胎盤では発現が弱いことが明らかになった(正常新生児とIUGRの胎盤での発現量の相違)。以上より、ヒト胎盤でもRt11遺伝子の発現があり、その発現量の違いがIUGRの発症と関連が示唆される研究結果が得られた。
ピエゾエレクトロニック・スピンデバイスの開発とその超低電圧超低電力メモリの開発

アモルファスSmFe2薄膜の垂直磁気異方性の起源を探索するため,偏光X線吸収微細構造(EXAFS)測定を実施した.この測定では,放射光の偏光面に対して試料面を垂直/平行に配置し,EXAFS信号を観測することで,短距離秩序の異方性が分かる.検出端としてSmのL3端を用いた.明瞭なEXAFS振動を検出し,さらに異方性を持った信号が得られた.SmFe2薄膜のフリー層への適用可能性を探るため,薄層化を試みた.100nmから10nmまで系統的に膜厚を変化させて,磁化特性と磁歪効果の評価を行った.垂直磁気異方性は膜厚に伴って減少した.垂直磁気異方性を示した最薄の膜厚は20nmであった.磁歪定数も膜厚の減少とともに下がったが,20nmの試料では100以上の値を示した.この値は,試作レベルとしては十分なものと考えている.ピエゾエレクトリックMTJの圧力印加構造のみを試作した.MTJ部分はW/SmFe2/Wの単純な積層構造とし,SmFe2層の磁化特性の変化を観測することで圧力印加効果の実証を試みた.圧電体としては,室温で成膜可能なAlNを用い,これを反応性スパッタリング法により形成した.デバイスプロセスをゼロから設計し,マスクレス露光装置を用いた光学リソグラフィ,イオンミリングによるドライエッチング技術,Al抵抗加熱法による電極パッド形成などを組み合わせて,実際に試作を行った.図1に作製した素子の上部顕微鏡写真を示す.図2に素子の加工前後で測定したSmFe2の磁化特性を示す.加工前後で若干ループ形状は変化したが,強磁性が失われることはなかった.ピエゾエレクトリック磁気抵抗素子の実証に向けて順調に研究が進んでいる.試作した圧力印加構造については,今後圧力印加効果を実証する.EXAFS測定は研究グループ内では初めての試みであったが,問題なく完了することができた.残りの課題は解析であるが粛々と進めていく計画である.圧力印加機構の実証・定量評価:現在のところ,測定系の問題により圧力の印加の確認には至っていない.圧力印加の確認は,サンプルに電圧を印加し,圧力によって磁化特性が変化する逆磁歪効果を磁化測定で検出することで行う計画であった.これを行うには,電圧源から磁化特性装置にセットしたサンプルまで配線を追加する必要がある.しかし,この追加した配線自体が測定結果に影響を及し,正確な評価が今のところできていない.今後は配線方法を工夫し,より細い配線を使うなどし,配線があったとしても正確な磁化測定が行えるようにする.EXAFS解析:解析を進め,近距離秩序に異方性の起源を裏付ける解析結果を得たいと考えている.さらに,この近距離秩序の異方性が実証できたとしたら,なぜこのような異方性が形成されるのか,どのようにしたら形成できるのかなどを追究していきたい.アモルファスSmFe2薄膜の垂直磁気異方性の起源を探索するため,偏光X線吸収微細構造(EXAFS)測定を実施した.この測定では,放射光の偏光面に対して試料面を垂直/平行に配置し,EXAFS信号を観測することで,短距離秩序の異方性が分かる.検出端としてSmのL3端を用いた.明瞭なEXAFS振動を検出し,さらに異方性を持った信号が得られた.SmFe2薄膜のフリー層への適用可能性を探るため,薄層化を試みた.100nmから10nmまで系統的に膜厚を変化させて,磁化特性と磁歪効果の評価を行った.垂直磁気異方性は膜厚に伴って減少した.垂直磁気異方性を示した最薄の膜厚は20nmであった.磁歪定数も膜厚の減少とともに下がったが,20nmの試料では100以上の値を示した.この値は,試作レベルとしては十分なものと考えている.ピエゾエレクトリックMTJの圧力印加構造のみを試作した.MTJ部分はW/SmFe2/Wの単純な積層構造とし,SmFe2層の磁化特性の変化を観測することで圧力印加効果の実証を試みた.圧電体としては,室温で成膜可能なAlNを用い,これを反応性スパッタリング法により形成した.デバイスプロセスをゼロから設計し,マスクレス露光装置を用いた光学リソグラフィ,イオンミリングによるドライエッチング技術,Al抵抗加熱法による電極パッド形成などを組み合わせて,実際に試作を行った.図1に作製した素子の上部顕微鏡写真を示す.図2に素子の加工前後で測定したSmFe2の磁化特性を示す.加工前後で若干ループ形状は変化したが,強磁性が失われることはなかった.ピエゾエレクトリック磁気抵抗素子の実証に向けて順調に研究が進んでいる.試作した圧力印加構造については,今後圧力印加効果を実証する.EXAFS測定は研究グループ内では初めての試みであったが,問題なく完了することができた.残りの課題は解析であるが粛々と進めていく計画である.圧力印加機構の実証・定量評価:現在のところ,測定系の問題により圧力の印加の確認には至っていない.圧力印加の確認は,サンプルに電圧を印加し,圧力によって磁化特性が変化する逆磁歪効果を磁化測定で検出することで行う計画であった.

これを行うには,電圧源から磁化特性装置にセットしたサンプルまで配線を追加する必要がある.しかし,この追加した配線自体が測定結果に影響を及し,正確な評価が今のところできていない.今後は配線方法を工夫し,より細い配線を使うなどし,配線があったとしても正確な磁化測定が行えるようにする.EXAFS解析:解析を進め,近距離秩序に異方性の起源を裏付ける解析結果を得たいと考えている.さらに,この近距離秩序の異方性が実証できたとしたら,なぜこのような異方性が形成されるのか,どのようにしたら形成できるのかなどを追究していきたい.
蛍光標識プローブを有する超分子による分子シンクロナイゼーションと生体センシング

1、環状構造を有するホストーシクロデキストリンの高次機能化を分子センシングの立場から検討した。その結果、1)ダンシル修飾β、γ-シクロデキストリンダイマーの合成に成功した。本ホスト分子は胆汁酸、テルペン類のゲストに対して特にβ-シクロデキストリン誘導体で高い応答を示した。これはダンシル基が空孔径の小さいβ-シクロデキストリン誘導体では空孔内自己包接が容易でなくゲスト包接に伴い空孔外へと容易に放出されるためと推定した。2)ピレン基、トシル基の二つの異なる修飾基をそれぞれシクロデキストリン上縁部、下縁部に導入した新規γ-シクロデキストリンの合成に成功した。あわせて本ホストの分子認識について検討した。本ホストの修飾位置についてはX-線回折用の単結晶の作成等により決定する予定である。3)その他、2種類の新規シクロデキストリン誘導体の合成に成功し、その分子認識を検討した。2、ベンゼン系大環状ホストの新規合成およびその固体化学挙動について新知見を得た。すなわち、1)ピレン修飾キャビタンドの合成に成功した。本ホストはメタルセンサーとしての機能を示した。2)チアカリックスアレンの部分あるいは完全脱tert-ブチル化に成功し、それぞれの結晶構造をX-線解析により明らかにした。残存するtert-ブチル基がリンカーとなり相手側の空孔に包接されダイマー構造を形成している興味ある知見を得た。3、熱ショック蛋白質の生化学的挙動あるいは生化学的性質に新たな知見を得た。すなわち、1)ミトコンドリア移行シグナルを持ったヒト熱ショック蛋白質(HSP60)はATP存在下で脱水とともにミトコンドリアに移行することを明らかにした。2)105KDa分子量の分子シャペロン(HSP105)の精製と存在部位等生化学的あらたな知見を報告した。4、チアカリックスアレンーK(Potassium)単結晶構造を報告した。Kを介した自己集合、自己組織化による多孔性のチャネル構造の存在を報告し、チャネル内には一分子ホスト当たり4個のKと14のメタノールが包接されているという興味ある知見を得た。今後、以上の知見をもとに新規ホストと生体成分とくに蛋白質との親和性、生化学的応答について検討する予定である。Human HSP70 DNAはHuntおよびMorimotoによりcDNAがcloningされた。本研究ではphagemid vector(PBKCMV)にinsertし、E.Coli XL1Blueで増殖させたHumanHSP70 DNA(2691bp)をphagemid vector DNA精製後、PCR法によりHSP70のcoding regionを増幅した。このようにして得られたそれぞれのNAをゲスト分子としてダンシル修飾シクロデキストリンダイマーとの分子シンクロナイゼーションについて検討した。その結果、蛍光性シクロデキストリンダイマーはDNAの添加に伴いその蛍光強度は減少した。このことは蛍光性シクロデキストリンダイマーはDNAを認識していることを示唆している。さらに、蛍光強度変化から求めた蛍光性シクロデキストリンダイマーの結合定数は非線形最小二乗法によって計算され、linear HSP70(2200bp)、linear PBK-CMV(4518bp)およびPBK-70(7200bp)に対してそれぞれ5.5x10^6、7.3x10^6および3.0x10^4(mol^<-1>dm^3)となり、直線状のDNAがより蛍光性シクロデキストリンダイマーに包接され易いことを示唆している。即ち、蛍光性シクロデキストリンダイマーのNAセンサーとしての有効性が認められた。蛍光分子であるジスルフォニルジベゾフランジフェニルをlower rim側に位置選択的にキャッピングしたシクロデキストリンの環境ホルモンに対する分子認識挙動について検討した。環境ホルモン類に対する蛍光センシング能はP-ノニルフェノールおよびビスフェノールAに対して高い応答を示し、他のゲストに対しては低い応答であった。このことからフェノール性のゲストを特異的に認識することが明らかになった。さらに、円二色性からゲスト包接時においてキャッピング部分がシクロデキストリンのlower rim上で修飾位置の相違によって異なる移動をすることが示唆された。

3、熱ショック蛋白質の生化学的挙動あるいは生化学的性質に新たな知見を得た。すなわち、1)ミトコンドリア移行シグナルを持ったヒト熱ショック蛋白質(HSP60)はATP存在下で脱水とともにミトコンドリアに移行することを明らかにした。2)105KDa分子量の分子シャペロン(HSP105)の精製と存在部位等生化学的あらたな知見を報告した。4、チアカリックスアレンーK(Potassium)単結晶構造を報告した。Kを介した自己集合、自己組織化による多孔性のチャネル構造の存在を報告し、チャネル内には一分子ホスト当たり4個のKと14のメタノールが包接されているという興味ある知見を得た。今後、以上の知見をもとに新規ホストと生体成分とくに蛋白質との親和性、生化学的応答について検討する予定である。
等質空間上のウェイブレットの構成

研究代表者は、ストリッチャーツによるR^n上の多重解像度解析とウェイプレットの構成法を、一般の局所コンパクトアーベル群Gに拡張することを試み、G中の格子とそれを保つGの自己同型から多重解像度解析が構成された場合にそれを利用してウェイプレットを構成する方法を確立した。さらにG中の格子とそれを保つ自己同型を与えたとき、二通りの多重解像度解析(ハール型とシャノン型多重解像度解析)が作れることを示した。とくにシャノン型はR^nの場合でも新しいものであると確信している。現在研究代表者はプレプリントを作成し評価を問うている。それとともにp-進体上でのウェイプレットの具体例の構成を目指して研究を進めている。次に研究代表者は研究分担者の協力のもとに非可換ウェイブレット理論の構築のため位相群の表現論と連続ウェイブレット変換の関係について研究を行った。これまでに発表されたこの分野の文献を収集しその内容について吟味した結果連続ウェイブレット変換はつまるところ位相群の二重可積分表現を正則表現にうめこむ変換に他ならないという結論に達した。これに基づいて種々の位相群について実験してみたところいくつかの新事実を発見した。たとえばGL_2(R)の正則離散系列表現のキリロフ模型から連続ウェイブレット変換により上半平面上の正則関数の空間での実現が得られること、ヴェイユ表現と連続ウェイブレット変換の間に密接な関係が存在すること等である。これらの諸結果(局所コンパクトアーベル群上のウェイプレットの構成と位相群上の二重可積分表現と連続ウェイプレット変換の関係)は研究代表者が主催した昨年一月の北海道大学理学部での研究集会で発表され評価を得た。現在その成果の公表の準備を進めている。今年度研究代表者はストリッチャーツによるR^n上の多重解像度解析とウエイブレットの構成法を一般の局所コンパクトアーベル群Gに拡張することを試みた。G中の格子とそれを保つGの自己同型から多重解像度解析が構成された場合にそれを利用してウエイブレットを構成する方法を確立した。さらにG中の格子とGの自己同型を与えた場合に二通りの多重解像度解析(ハ-ル型とシャノン型多重解像度解析)が作れることを示した。現在研究代表者はp-進体上でのウエイブレットの具体例の構成を目指して研究を進めている。次に研究代表者は研究分担者の協力のもとに非可変ウエイブレット理論の構築のため位相群の表現論と連続ウエイブレット変換の関係について研究を行った。これまでに発表されたこの分野の文献を収集しその内容について吟味した結果連続ウエイブレット変換はつまるところ位相群の二乗可積分表現を正則表現にうめこむ変換に他ならないという結論に達した。たとえばGL_2(R)の正則離散系列のキリロフ模型から連続ウエイブレット変換により上半平面上の正則関数の空間での実現が得られること、ヴェイユ表現と連続ウェイブレット変換との間に密接な関係が存在すること等である。これらの諸結果(局所コンパクトアーベル群上のウエイブレットの構成と位相群上の二乗可積分表現と連続ウエイブレット変換の関係)は研究代表者が主催した本年一月の北海道大学理学部での研究集会で発表された。現在そのプレプリントを作成中である。
ヒト精子受精能の分子生物学的解析と精子受精能障害による不妊治療に関する研究

哺乳類における受精のメカニズムは未だ十分には解明されておらず、特にヒトにおいてはほとんどわかっていない。そのため不妊治療における受精機能障害については十分な診断方法がないのが現状である。我々の開発したアクロビーズテストは先体反応を終了した精子の頭部に発現するCD46に着目したユニークな精子受精能検査であり、体外受精の結果と非常に良い相関を示した(Fertil. Steril. 63 ; 625-630, 1995)。またこの検査を国内20大学病院で検討し、体外受精時の精子受精能評価での有用性を確認した(日本不妊学会雑誌40 ; 368-373, 1995)。このアクロビーズテストで着目した精子頭部のCD46がヒト受精現象にどのように関わっているかは不明である。そこでCD46の細胞外ドメイン(short consensus repeat, SCR) 1-4に対する抗体とヒト精子-ハムスター卵の受精系を用いて、CD46のどの部位が受精に関与しているか検討した。その結果SCR-3が受精に関与しており、さらに精子と卵との細胞膜融合に深い影響を与えていることが判明した。CD46のSCR-3の部位は麻疹ウイルスのレセプターとしてウイルスと細胞の融合に関わっている部位であり、非常に興味深い結果となった。またヒト体外受精での良好な胚発生を可能にすべく、ヒト卵胞液の電解質、アミノ酸、エネルギー基質組成をベースとした新たな培養液作製にも着手している。マウス胚を用いた基礎的検討では現在用いられている他の培養液と比較して良好な胚発生を得ており、ヒト体外受精への応用について現在検討中である。(1)男子不妊患者の精子機能評価我々の開発した精子受精能検査であるアクロビーズテストをより少数の精子で可能にすべく、マイクロアクロビーズテストを開発した。その結果、従来法の1/10の精子で判定が可能となり、アクロビーズテストの弾性不妊患者への適用範囲が広がった。高度乏精子症に対して行われている顕微授精(精子囲卵腔注入)を行った症例で受精の有無について検討し、通常の体外受精の場合と同様にマイクロアクロビーズテストで精子囲卵腔注入法における精子受精能を評価しえた。一方、精子先体評価法として抗CD46モノクロナール抗体とレクチンによる2重染色法を開発し、体外受精における精子受精能を評価しうるかについて検討を加えている。(2)先体反応終了精子に発現するCD46分子の精子-卵細胞膜融合における役割精子CD46inneracrosonal membranceに存在するため、先体反応後に精子頭部発現し、精子が卵透明帯を通過した後に卵細胞膜表面と接触する際に何らかの働きを持つのではないかと推測される。またCD46は4つの細胞外ドメインからなり、補体の制御因子のみならず麻疹ウイルスのレセプターとしての働きを持ち、ウイルスと細胞の融合に関与している。そこで精子と卵の細胞融合(=受精)にCD46が関与しているかを報告すべく、抗CD46抗体による受精阻害実験を行った。その結果、特定の抗体により受精が阻害され、受精に関与する精子CD46分子のエピトープが.固定されつつある、(現在確認作業中)。さらに精子CD46分子の卵表面リガンドを分離すべく現在計画中である。我々の開発したアクロビーズテストは先体反応を終了した精子の頭部に発現するCD46に着目したユニークな精子受精能検査であり、体外受精の結果と非常に良い相関を示した(Fertil.Steril.63;625-630,1995)。またこの検査を国内20大学病院で検討し、体外受精時の精子受精能評価での有用性を確認した(日本不妊学会

雑誌40;368-373,1995)。このアクロビーズテストで着目した精子頭部のCD46がヒト受精現象にどのように関わっているかは不明である。そこでCD46の細胞外ドメイン(short consensus repeat,SCR)1-4に対する抗体とヒト精子-ハムスター卵の受精系を用いて、CD46のどの部位が受精に関与しているか検討した。その結果SCR-3が受精に関与しており、さらに精子と卵との細胞膜融合に深い影響を与えていることが判明した。CD46のSCR-3の部位は麻疹ウイルスのレセプターとしてウイルスと細胞の融合に関わっている部位であり、非常に興味深い結果となった。またヒト体外受精での良好な胚発生を可能にすべく、ヒト卵胞液の電解質、アミノ酸、エネルギー基質組成をベースとした新たな培養液作製にも着手している。マウス胚を用いた基礎的検討では現在用いられている他の培養液と比較して良好な胚発生を得ており、ヒト体外受精への応用について現在検討中である。
ボリコナゾールの薬物動態に及ぼすC反応性蛋白および核内受容体遺伝子多型の影響

研究初年度において、各CYP2C19遺伝子多型群におけるC反応性蛋白(CRP)と投与量(D)で補正したVRCZトラフ濃度(C0)(C0/D)あるいはVRCZ/ VRCZ N-オキシド体(N-ox:CYP2C19を介して生成される主代謝体)との相関関係について検討した。CYP2C19*1アレル保有者群(EM群)のC0/DおよびVRCZ/N-oxは、CYP2C19*2または*3アレルのホモまたはヘテロ接合群(PM群)と比較し、有意に低かった(各々P < 0.05)。*17アレル保有者は、現時点において存在しなかった。CYP2C19EM群およびPM群におけるCRPとVRCZ/N-oxとの間の相関係数は、r = 0.48およびr = 0.18であり、いずれも有意差は認められなかったが、解析症例数少なかったことが原因として考えられる。したがって、今後ある程度の症例数が確保されれば、統計学的に有意な相関関係が認められる可能性も十分に考えられる。また、CYP2C19*1アレル保有者群に関しては、十分な症例数が確保された後、*1/*1群と*1/*2+*1/*3群に分けて検討を行う予定である。一方、1患者内において、CRPの変動が大きかった患者群においては、CRPが正常値(< 1.0 mg/dL)の時と比較し、炎症時(> 4.0 mg/dL)において、VRCZ/N-oxは高い値を示した。対照的に、CRPの変動が小さかった患者群においては、比較的VRCZ/N-oxの個体内変動も小さかった。CRPがどの程度まで上昇するとVRCZ/N-oxが変動し始めるかについては、十分な症例数が確保された後、統計解析を実施し明らかにする予定である。加えて、CYP2C19遺伝子多型別に見た個体内変動の大きさについても、今後併せて検討する予定である。研究初年度においては、研究計画立案当初の見込みよりもVRCZ使用患者数が少なく、十分なパワーで統計解析を実施できなかった。特にCRPが正常範囲内で使用される患者(VRCZ予防投与患者)の確保が困難であった。したがって、現段階における解析結果の数値の信頼性は低いと考えられる。一方、1患者内において、繰り返しVRCZの血中濃度を測定した患者の数は、当初の見込みより多かったことから、C0/DおよびVRCZ/N-oxの患者間変動に加え、今後、患者内変動に関するデータ解析も実施できると考えられる。本年度は、C0/DおよびVRCZ/N-oxに及ぼすCYP2C19遺伝子多型およびCRPの影響に加え、核内受容体遺伝子多型[pregnane X receptor(PXR)*1B、constitutive androstane receptor(CAR)rs2307424、retinoid X receptor alpha(RXRa)rs7850212]の影響についても解析する予定である。しかし、統計解析に耐えうる十分な症例数を確保できるかについては予測困難である。そこで、CYP2C19活性を評価する際にプローブとして使用されることもあるオメプラゾールのS体(エソメプラゾール)について、同様の検討を行う予定である。エソメプラゾールは、CYP2C19を介してデスメチル体、およびCYP3A4を介してスルホン体に代謝されることから、各々の代謝レシオ(エソメプラゾール/各代謝体)を目的変数として、CRP、CYP2C19遺伝子多型、核内受容体遺伝子多型との関連について検討する予定である。また、CYP2C19遺伝子多型別に患者内におけるVRCZ/N-ox変動とCRP変動との関連についても解析し、炎症反応がどの程度強くなればVRCZの血中濃度が上昇しやすくなるのかについても、併せて検討する予定である。

一方、1患者内において、CRPの変動が大きかった患者群においては、CRPが正常値(< 1.0 mg/dL)の時と比較し、炎症時(> 4.0 mg/dL)において、VRCZ/N-oxは高い値を示した。対照的に、CRPの変動が小さかった患者群においては、比較的VRCZ/N-oxの個体内変動も小さかった。CRPがどの程度まで上昇するとVRCZ/N-oxが変動し始めるかについては、十分な症例数が確保された後、統計解析を実施し明らかにする予定である。加えて、CYP2C19遺伝子多型別に見た個体内変動の大きさについても、今後併せて検討する予定である。研究初年度においては、研究計画立案当初の見込みよりもVRCZ使用患者数が少なく、十分なパワーで統計解析を実施できなかった。特にCRPが正常範囲内で使用される患者(VRCZ予防投与患者)の確保が困難であった。したがって、現段階における解析結果の数値の信頼性は低いと考えられる。一方、1患者内において、繰り返しVRCZの血中濃度を測定した患者の数は、当初の見込みより多かったことから、C0/DおよびVRCZ/N-oxの患者間変動に加え、今後、患者内変動に関するデータ解析も実施できると考えられる。本年度は、C0/DおよびVRCZ/N-oxに及ぼすCYP2C19遺伝子多型およびCRPの影響に加え、核内受容体遺伝子多型[pregnane X receptor(PXR)*1B、constitutive androstane receptor(CAR)rs2307424、retinoid X receptor alpha(RXRa)rs7850212]の影響についても解析する予定である。しかし、統計解析に耐えうる十分な症例数を確保できるかについては予測困難である。そこで、CYP2C19活性を評価する際にプローブとして使用されることもあるオメプラゾールのS体(エソメプラゾール)について、同様の検討を行う予定である。エソメプラゾールは、CYP2C19を介してデスメチル体、およびCYP3A4を介してスルホン体に代謝されることから、各々の代謝レシオ(エソメプラゾール/各代謝体)を目的変数として、CRP、CYP2C19遺伝子多型、核内受容体遺伝子多型との関連について検討する予定である。また、CYP2C19遺伝子多型別に患者内におけるVRCZ/N-ox変動とCRP変動との関連についても解析し、炎症反応がどの程度強くなればVRCZの血中濃度が上昇しやすくなるのかについても、併せて検討する予定である。初年度の研究において必要な試薬は全て購入した。研究立案当初の予算との差額は僅かである。今後実施予定の研究において、薬物血中濃度測定および薬物応答性遺伝子多型解析用試薬の購入費として、今年度の予算と合わせて使用する予定である。
グローバル・ネットワーク型企業における競争基盤と資源展開に関する実証研究

本研究は、グローバル市場におけるマーケティング資源の戦略展開および管理体制、とくに日本企業における組織資源と情報の移転・共有化のなかで,技術資源と人的資源と並んで、マーケティング資源がどのように展開されているか,また日米企業との比較において、マーケティング資源の展開と管理が日本企業のグローバルな競争優位とどのように関連するのかといった問題を明らかにすることを目的にしています。分析結果をまとめると、現地化戦略は現地法人の経営業績と正の関係があることを支持する結果になっていないが、親会社の現地経営への強い関与は現地法人の経営業績にマイナスの影響を与える結果を統計的に明らかにしています。また、親会社が現地法人の取締役員会の主導権を握り、本社から重要なポストに管理職を派遣して現地法人の財務に関して目を光らす経営コントロールのスタイルは、現地での意思決定スピードを遅くし、現地環境の変化への反応能力を阻害することを統計的に示し、このタイプの企業で現地市場での競争力を低下させている可能性がある。さらに、IBMの営業のマネジメントに着目し、「ソリューション」という複雑なサービス商品の営業に求められる統合的かつ専門的な問題解決を実現するとともに、その営業をグローバルかつ個別的にマネジメントするために構築されている仕組みを明らかにした。さらに、マーケティング資源のなかで、ブランド資源と関係的資源のマネジメントの理論的な問題を考察し、研究開発における顧客関係資源の重要性を実証的に明らかにし、製造企業と小売企業の関係的資源をベースにした相互作用のなかで実現する複線型開発という概念を提起した。今年度の研究によってつぎの成果を得ている。1ブランド、顧客関係、チャネル資産や営業などのマーケティング資源について、基本概念の整理、近年の市場環境に対応した新しい展開、国内外の研究動向をふまえて提示した。2ブランドというマーケティング資源をグローバル競争の激しい新興市場に移転させているかどうについて、日本企業と欧米企業と比較してその違いを明らかにし、ブランド管理と営業活動の一貫性を検証している。3行動ベース管理(Behavior-Based Control Systems)を導入することで,職能部門間のコミュニケーションや協力関係が改善されることを実証分析から明らかにした。この分析を通じて,このような営業活動についてのプロセス改革を展開している企業の競争優位が,部門間連携による製品開発,生産,顧客サービスの能力にあることを示した。また、グローバル企業のIBMが、マーケティング資源の効率的活用と顧客の問題解決を同時達成すべく営業改革を行ったケースをまとめている。4企業間取引における関係性に焦点を当て、関係性を管理することと戦略的に生かしていくことをリレーションシップ・マーケティングの実践における中心課題として設定した。システム・インテグレーション業界を題材に、リレーションシップ・マーケティングの概念を体現する事例を識別し、関係性管理とそれに伴う資源移転について分析を行った。全社的な関係継続を前提に、取引関係が連鎖的に形成され、顧客関係をコントロールするという発見物とともに、従来の関係的取引の説明論理である取引コスト論に加えて、資源依存論の説明論理としての重要性を強調した。経営資源、とくにマーケティング資源の移転が海外現地法人の経営業績に与える影響を実証的に分析し、現地化戦略が海外での競争優位を実現するための有効な手段であるかどうかについて、日本企業の中国事業に関するアンケート調査に基づいて検証した。分析結果を全体的にまとめると、現地化戦略が現地法人の経営業績に貢献するという積極的な結論を支持する結果になっていないが、本社や親会社が現地経営に強く関与することが現地法人の経営業績にむしろマイナスの影響を与えるという結論にたどり着いている。現地法人の取締役員会で主導権を握り、本社から重要なポストに管理職を派遣して、現地法人の財務に関して目を光らすという伝統的な方法は、現地法人の意思決定のスピードと、現地市場環境の変化に敏感に反応する能力を阻害することで現地での競争力を低下させている可能性がある。また、小売業における家族従業の分析枠組みに基づいた東アジアでの国際比較を行うための理論的課題を整理し、仮説を明確している。もう一方では、現地調査の成果に基づいてこれまで分析されてこなかった中国企業とマレーシア企業との相互直接投資の比較分析を行い、従来の多国籍企業化理論の問題点を明らかにした。