hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
下等植物の無性生物群における種の認識法の一試行 : 単細胞性紅藻を用いて

生物の種あるいは種分化を研究するのに交雑実験による遺伝的親和性や生殖的隔離の解析に基づく方法が有力である.しかしこの方法は対象とする生物の有性生殖過程がよく知られており,しかもそれが実験的に制御が可能な生物群にかぎり適用できる.下等植物の中には有性生殖がないかあるいは未知のもの(このような生物を無性生物と呼ぶ)が多く,これらの生物にはこの方法が適用できない,本研究はこの点を踏まえ,既に形態・微細構造・光合成色素組成など従来の分類形質に基づき相互の類縁関係がある程度明らかにされている単細胞性紅藻を選び交雑実験以外の遺伝的根拠のはっきりした解析方法の捜索・開発を目的とし実施した.頭初予定した,葉緑体内タンパク質の1種フラクションー1-タンパクの電気泳動パタンによる解析,藻体構成総タンパクの二次元電気泳動,アイソザイム等の解析を試みたが,単細胞紅藻特有の細胞外被構造が生化学的処理の障害となってことごとく失敗(改良すれば可能)した.そこで主に光合成色素のうちフィコビリン系色素に着目して,それらの組成の詳細に分析と,有系分裂過程の微細構造解析に方向を転換した.独自に単離,培養したものを含め7属13種の藻を調査し,これらのデータを加えて,類縁関係の解析を行った.その結果,単細胞紅藻は, cyanidium-, Rhodospora-, Rhodella-, Rhodosorus-, Porphyridium-グループの5群に識別された.初めの4群は各群内で,生育分布,生殖法,光合成色素系が共通し,さらに基本的な葉緑体微細構造と有系分裂過程をもつが,一定の移行傾向が認められた.一方最後の一群は共通した葉緑体微細構造と生殖法をもつが,その他の形質は多様であり,上述の群とは明らかに異なる進化過程をもつことが判明した.前者を系統群,後者を祖先群と認識した.現在の各群内の種間の類縁関係の解析を進めている.生物の種あるいは種分化を研究するのに交雑実験による遺伝的親和性や生殖的隔離の解析に基づく方法が有力である.しかしこの方法は対象とする生物の有性生殖過程がよく知られており,しかもそれが実験的に制御が可能な生物群にかぎり適用できる.下等植物の中には有性生殖がないかあるいは未知のもの(このような生物を無性生物と呼ぶ)が多く,これらの生物にはこの方法が適用できない,本研究はこの点を踏まえ,既に形態・微細構造・光合成色素組成など従来の分類形質に基づき相互の類縁関係がある程度明らかにされている単細胞性紅藻を選び交雑実験以外の遺伝的根拠のはっきりした解析方法の捜索・開発を目的とし実施した.頭初予定した,葉緑体内タンパク質の1種フラクションー1-タンパクの電気泳動パタンによる解析,藻体構成総タンパクの二次元電気泳動,アイソザイム等の解析を試みたが,単細胞紅藻特有の細胞外被構造が生化学的処理の障害となってことごとく失敗(改良すれば可能)した.そこで主に光合成色素のうちフィコビリン系色素に着目して,それらの組成の詳細に分析と,有系分裂過程の微細構造解析に方向を転換した.独自に単離,培養したものを含め7属13種の藻を調査し,これらのデータを加えて,類縁関係の解析を行った.その結果,単細胞紅藻は, cyanidium-, Rhodospora-, Rhodella-, Rhodosorus-, Porphyridium-グループの5群に識別された.初めの4群は各群内で,生育分布,生殖法,光合成色素系が共通し,さらに基本的な葉緑体微細構造と有系分裂過程をもつが,一定の移行傾向が認められた.一方最後の一群は共通した葉緑体微細構造と生殖法をもつが,その他の形質は多様であり,上述の群とは明らかに異なる進化過程をもつことが判明した.前者を系統群,後者を祖先群と認識した.現在の各群内の種間の類縁関係の解析を進めている.無性生物群の対象として選んだ単細胞性紅藻を独自に天然から単離することと、世界各国に保存されている培養株を譲受し、5属11種15株を入手・確立した。その中の1種は石垣島名蔵川河口マングローヴ林内の土泥サンプルから単離したものであるがRhodella属の新種であることが判明した。この新種記載と属のcircumscriptianについては日本植物学会鹿児島大会で報告した。そして現在新種記載の論文を作成中である。確保した藻株全てについて、従来行なわれてきた分類法に則り、光顕レベルの形態的特徴と同定の再確認を兼ねた観察を実施した。同時に電顕レベルの微細構造的特徴も実施した。これらの結果に基づき、各属・各種間の相互関係を整理し、4つの系統群と1つの祖先型プール群に識別する仮説を設定し、以降の実験を行なった。これらの系統群内外の関係をより明らかにするために、これらの光合成色素組成の分析を行なった。とくに補助色素であるフィコビリンとカロチノイドに注目した。その結果、第1系統群(Rhodella maculataを代表とする)はB-フィコエリスリン、第2系統群(Rhodospora sordida)はC-フィコエリスリン、第3系統群(Cyanidium caldarium)はフィコエリスリンを欠き、第4系統群(Rhodosorus Marinus)はB-フィコエリスリン、第5の祖先型プール群(Porphyridium purpureum)は上記4群全てのタイプのフィコエリスリンをもつことが判った。

第1と第4系統群は同じタイプのフィコエリスリンであるが、前者は眼点様類粒を有するが、後者はそれを欠くことから、カロチノイド系色素の分析も併せて実施した。結果は検討中である。本年度は微細構造面では葉緑体とピレノイドに着目し、物質面では光合成色素組成を分析した。次年度は細胞・核分裂の構造面と、体構成蛋白質の2次元電気泳動の解析、アイソザイムパタンの解析など遺伝的側面のデータの集積に努力する。1.分離培養および株保存施設より譲受した6属12種20株の単細胞性紅藻の形態・微細構造・光合成色素分析・生育特性(塩分濃度に対する増殖率,紫外線耐性etc)・体構成タンパクの二次元電気泳動パタン解析を実施した. 2.これらの結果に加えてこれまで報告されているデータを考慮に入れ,単細胞紅藻の類縁関係を追究した.そしてそれらを4系統群(evolutional line)と1祖先群(ancertral stock)に識別した. Cyamdium, line(星型葉緑体→板状, Phycoerythrin欠,河口→河川域→温泉・泉)Rhodosorus-line(カップ状突出ピレノイド葉緑体B-phycoerythim,海域)Rhodella-line(裸出・ケラコイド欠ピレノイド・星状葉緑体, B-phycoerythim,汽水→海域), Rhodospra-line(裸出・曲折チラコイド侵入ピレノイド中空葉緑体, C-phycoerythrin,汽水・海岸)とPorphyndium-stock(星状葉緑体, B-phycoerythrin or phycoerytrin欠,海→河川→陸上)で,系統群は葉緑体・核の形状および配列に共通点と形態上のクラインをもつこと,光合成色素は共通,生育環境は類似し,塩分濃度・増殖も似る.一方祖先群は葉緑体・核の形状・配列は共通・類似し,光合成色素系は変異に富み,広い分布域を示すことが認識された.3.これらの系統・祖先群毎の種間の比較を体構成タンパクの二次元電気泳動法で解析,多糖類がタンパク抽出の邪魔をしてその除去方法に苦労したが,どうにか泳動パタンが得られるまでに達した.この結果が本格的に得られてから種間の分類学的解析に取り組む,以上の経過・結果の一部を日本植物学会,国際植物学会議,日本藻類学会に口頭・展示発表した.また63年8月の国際藻類学会にも発表を計画している.またこの研究中に発見したRhodella属の1新種にR anulomayaritaと命名し,近々論文投稿の予定である.無性生物群の種を認識する第一歩は形態・微細構造の精査にもとづく系統・類縁の解析で,その点についてはある程度の成果を得たと自負している.
受け係り関係を用いた辞書構築システムの開発

本研究では,受け係り関数を用いて,単語や句のレベルでの意味的なつながりを獲得し,辞書を構築することを目的としている.本年度は,形態素解析の精度を向上すること目的とした,辞書の構築に主眼をおいて,研究開発を行った.昨年度の研究では,コーパスと既存のシソーラスを用いて意味的な分類を行った.特に,従来あまり着目されてこなかった副詞を題材として取り上げた.本年度は,形態素解析の精度を向上することを主眼とする一般的な辞書の構築を中心に研究を実施した.形態素解析の手法としては,現在主流となっている隠れマルコフモデルを用いる.この手法の有利な点は,頑健性に富む点である.更なる精度の向上のためには,コーパスから有意義な統計情報を獲得することが鍵となる.本研究では,下記の三種類の辞書を構築し,実験を行った.1単語分類の階層構造を利用した辞書2部分コーパスごとに得られた統計量を総合して得られる辞書3多品詞性を考慮した辞書隠れマルコフモデルを用いた形態素解析においては,形態素レベルあるいは品詞レベルの状態遷移を考慮するのが普通である.1の研究においては,状態の遷移を同時確率で表現し,形態素・品詞階層間の相互作用の有無によって推定する手法を開発した.2ではコーパス間の統計量の差異から真の統計量を推定する手法を開発した.3においては,個々の単語が取り得る品詞による分類を既存の品詞による分類に含めることによって,新たな分類を作成した.これらの手法によって作成した辞書を形態素解析に適用したところ,既存の方法よりも高い精度が得られることを確認した.例えば,3の方法で2連接確率を用いたものは通常の品詞での3連接確率を用いたものよりも高い精度が得られた.今後の課題として,これらの方法で作成した辞書が形態素解析だけでなく一般的な辞書として有効であることを示すために,構文解析などで実験を行うことを考えている.本研究は,受け係り関係を用いて,単語や句のレベルでの意味的なつながりを獲得し,辞書を構築することを目的としている.このためには,本年度は,受け係り関係と意味のつながりについての調査とともに,より精度の高い解析手法の研究を行った.本研究では,副詞の意味に注目した.副詞または副詞句の表す意味は,他の品詞に比べて曖昧性が高く,辞書構築において最も大きな問題となることが予想される.本研究では,副詞の係り先の文に含まれる単語とその頻度によって,副詞を分類し,シソ-ラスを構築するという手法を取った.ただ,このままでは,人間が理解できるような階層構造は得られないので,多頻出副詞に関しては既存のシソ-ラスを用い,あらかじめ分類木を作成ししておく.これを用い,係り先の単語を用いて,新たに副詞の分類木上での位置を決定する.その結果,副詞を分類する要素としては,助動詞及び助詞が強力であり,頻度が60回以上であれば,平均して上位分類から70%程度の意味を推測できることが分かった.ただ,個々の副詞の特徴がよく反映されているとは言えず,課題として残される.日本語の係り受け解析を行うにあたり,形態素解析は最初の段階であり,解析精度の向上が要求される.自動的な辞書構築に関連して,形態素解析や構文解析の精度を向上することが必要である.本研究では,本年度は形態素解析の精度を向上するための研究を行った.コーパスから得られる頻度情報の信頼性を統計的に検定し,有意な情報でなければ,周辺の品詞情報から推定する.この手法によって,単語の品詞付けに関して97%以上の形態素解析精度を得ることができた.更に,言い換えを行うことにより人間が効率的に意味的曖昧性を解消する手法について研究を行った.これは,英日翻訳などへの適用を予定している.本研究では,受け係り関数を用いて,単語や句のレベルでの意味的なつながりを獲得し,辞書を構築することを目的としている.本年度は,形態素解析の精度を向上すること目的とした,辞書の構築に主眼をおいて,研究開発を行った.昨年度の研究では,コーパスと既存のシソーラスを用いて意味的な分類を行った.特に,従来あまり着目されてこなかった副詞を題材として取り上げた.本年度は,形態素解析の精度を向上することを主眼とする一般的な辞書の構築を中心に研究を実施した.形態素解析の手法としては,現在主流となっている隠れマルコフモデルを用いる.この手法の有利な点は,頑健性に富む点である.更なる精度の向上のためには,コーパスから有意義な統計情報を獲得することが鍵となる.本研究では,下記の三種類の辞書を構築し,実験を行った.1単語分類の階層構造を利用した辞書2部分コーパスごとに得られた統計量を総合して得られる辞書3多品詞性を考慮した辞書隠れマルコフモデルを用いた形態素解析においては,形態素レベルあるいは品詞レベルの状態遷移を考慮するのが普通である.1の研究においては,状態の遷移を同時確率で表現し,形態素・品詞階層間の相互作用の有無によって推定する手法を開発した.2ではコーパス間の統計量の差異から真の統計量を推定する手法を開発した.3においては,個々の単語が取り得る品詞による分類を既存の品詞による分類に含めることによって,新たな分類を作成した.これらの手法によって作成した辞書を形態素解析に適用したところ,既存の方法よりも高い精度が得られることを確認した.

例えば,3の方法で2連接確率を用いたものは通常の品詞での3連接確率を用いたものよりも高い精度が得られた.今後の課題として,これらの方法で作成した辞書が形態素解析だけでなく一般的な辞書として有効であることを示すために,構文解析などで実験を行うことを考えている.
大規模群れ動作の表現と高速化に関する研究-群れ動作へのフラクタル性の導入-

本研究では,大規模な群れの動作生成および表示を効率化するために,群れを再帰的に定義し動作させる階層的boidアルゴリズムを考案した.通常のboidアルゴリズムは,個体数をnとしたときにO(n^2)の計算量を必要とするが,階層的boidアルゴリズムは,階層数を深くするとO(n)の計算量に近づく.視点に依存して動作と表示の両方を簡略化する手法,および階層的boidアルゴリズムを用いることにより,群れの動作生成および表示の大幅な効率化を実現できることを確認した.本研究では,大規模な群れの動作生成および表示を効率化するために,群れを再帰的に定義し動作させる階層的boidアルゴリズムを考案した.通常のboidアルゴリズムは,個体数をnとしたときにO(n^2)の計算量を必要とするが,階層的boidアルゴリズムは,階層数を深くするとO(n)の計算量に近づく.視点に依存して動作と表示の両方を簡略化する手法,および階層的boidアルゴリズムを用いることにより,群れの動作生成および表示の大幅な効率化を実現できることを確認した.海を泳ぐ魚の群れは,数十万匹以上にも及ぶ場合があることが知られている.コンピュータグラフィックスの分野では,魚などの群れの形成にボイド(boid)アルゴリズムを利用することが一般的である.しかしながら,現在のコンピュータでリアルタイムにシミュレーションおよび表示できる個体数は数千匹程度である.近年,コンピュータディスプレイの高解像度化にも伴い,大規模な群れの動作を高速に表示できるアルゴリズムの構築が望まれる.本年度は,次のようなアルゴリズム構築を行った.(1)フラクタルボイドアルゴリズム:ボイドアルゴリズムにフラクタル性を導入し,n匹の群れの生成でn^2匹の群れの動作を生成する.これにより,群れの動作生成の大幅な高速化が可能となる.(2)再帰的ボイドアルゴリズム:フラクタルボイドアルゴリズムの部分群れに対して,個別にボイドアルゴリズムを動作させる.これにより,フラクタルボイドアルゴリズムにおける群れの規則性が減少され,より自然な動作を作成できることが期待される.再帰的ボイドアルゴリズムは,フラクタルボイドアルゴリズムよりも,高速ではないが,より自然な動作を生成できるという意味において有用である.(3)視界に依存する適応的表示アルゴリズム:視点からの近い場合には再帰的ボイドアルゴリズムを適用し群れの動作を生成し,遠くに離れているかほとんど隠れている場合にはフラクタルボイドアルゴリズムによって生成されたテクスチャ画像を表示する.これによって,群れの動作生成だけではなく,表示の高速化も可能となる.コンピュータグラフィックスでは,(魚などの)群れの動作生成にboidアルゴリズムと呼ばれる手法を用いることが一般的である.現在のコンピュータでboidアルゴリズムを用いてリアルタイムにシミュレーションできる個体数は数千程度であるが,実際の魚の群れは数十万体以上になることがある.本年度は,群れの動作生成への階層性の導入,および表示および動作生成に詳細度制御という概念の導入を行った.本年度の成果を次に示す.(1)階層性を考慮することにより効率的な魚の群れの動作生成boidアルゴリズムを再帰的に利用する階層的boidアルゴリズムにより,動作生成が大幅に効率化できることを示した,また,群れ内での個体の衝突回避や,障害物の回避なども考慮したアルゴリズムを考案している.(2)動作および表示の詳細度制御アルゴリズム詳細度制御とは,物体の重要度(視点からの距離など)に応じて,物体の複雑さ(ポリゴン数)を制御する手法である.本論文では,この考えを表示だけでなく,視点から他の「部分群れ」に隠される「部分群れ」の動作を簡略化させることによって動作生成を効率化する手法を考案した.上記(1),(2)の手法をプログラムとして実装し,動作生成および表示の大幅な効率化を実現した.
肺腺癌の上皮間葉系転換におけるクロマチンリモデリング分子の機能異常の関与

我々は,肺腺癌細胞株15株,肺腺癌症例93例のパラフィン切片,肺腺癌442例の遺伝子発現データを使い,肺腺癌でのBRG1,BRMの発現と,病理組織学的特徴,遺伝子異常,気管支上皮マーカー(TTF-1,CK7,MUC1,E-cadherin)の発現とを比較検討し,肺腺癌のBRG1,BRMの欠損は上皮間葉系転換(EMT)に関与する事を明らかにした.まず,細胞株15株において,BRG1変異型6株,野生型9株がみられたが,BRG1変異はBRG1発現が落ちる不活性型変異であった.また,BRG1変異はEGFR,MET,HER2の遺伝子異常と相互排他的であった.BRG1変異型はVimentinを高発現し,気管支上皮マーカーの発現の乏しいEMT形質を示すが,BRG1野生型は気管支上皮マーカーを高発現し,Vimentinの発現の低い上皮系形質を示した.BRM発現低下も同様にEMT形質で多くみられた.次に,肺癌症例93例での免疫組織化学的なBRG1,BRM陰性例(n=11,16)は,それぞれ充実型腺癌に高頻度であり,気管支上皮マーカーの発現低下を伴った.BRG1陰性例はEGFR変異と相互排他的であり,かつ,BAC成分を伴わないが,BRM陰性例はBAC成分,EGFR変異を有する事もあった.最後に442例の遺伝子発現データに基づくクラスター解析,予後解析により,BRG1,BRMの発現低下はやはりEMT形質の癌で高頻度であり,かつ,BRG1,BRMの欠損は有意に予後不良因子であることを示した.以上より,BRG1の変異,欠損はEMT形質をもつNon-TRUtypeの発癌に関与し,一方,BRM欠損はTRUtypeの癌の低分化腺癌への移行過程にも関与する事が示唆された.肺腺癌細胞株と原発性肺腺癌症例(93例)を用いて、クロマチンリモデリング因子であるBRG1、BRMの変異、発現低下が、上皮マーカーの発現低下、EMT形質、充実性腺癌形態などに関わり、予後不良を示すこと、かつ、BRG1欠失とEGFR変異とが相互排他的であることを見出した(Matsubara et al, Cancer sci, 2013)。また、肺腺癌細胞株40株におけるクロマチンリモデリング因子の発現とチロシンキナーゼの発現との比較を行っている過程で、Group Iに属する肺腺癌細胞株LC-2/adにおいて、RETが過剰発現していることに気づき、RET転座特異的PCRを行ったところ、CCDC6-RET転座を見出した。結果として、世界で初めて、RET転座を有する肺腺癌細胞株の存在を報告し、なおかつ、RET転座を有する肺腺癌に対しRET阻害剤(Vandetanib)が有効である可能性を示した(Matsubara et al, J Thorac Oncol 2012)。我々は,肺腺癌細胞株15株,肺腺癌症例93例のパラフィン切片,肺腺癌442例の遺伝子発現データを使い,肺腺癌でのBRG1,BRMの発現と,病理組織学的特徴,遺伝子異常,気管支上皮マーカー(TTF-1,CK7,MUC1,E-cadherin)の発現とを比較検討し,肺腺癌のBRG1,BRMの欠損は上皮間葉系転換(EMT)に関与する事を明らかにした.まず,細胞株15株において,BRG1変異型6株,野生型9株がみられたが,BRG1変異はBRG1発現が落ちる不活性型変異であった.また,BRG1変異はEGFR,MET,HER2の遺伝子異常と相互排他的であった.BRG1変異型はVimentinを高発現し,気管支上皮マーカーの発現の乏しいEMT形質を示すが,BRG1野生型は気管支上皮マーカーを高発現し,Vimentinの発現の低い上皮系形質を示した.BRM発現低下も同様にEMT形質で多くみられた.次に,肺癌症例93例での免疫組織化学的なBRG1,BRM陰性例(n=11,16)は,それぞれ充実型腺癌に高頻度であり,気管支上皮マーカーの発現低下を伴った.BRG1陰性例はEGFR変異と相互排他的であり,かつ,BAC成分を伴わないが,BRM陰性例はBAC成分,EGFR変異を有する事もあった.最後に442例の遺伝子発現データに基づくクラスター解析,予後解析により,BRG1,BRMの発現低下はやはりEMT形質の癌で高頻度であり,かつ,BRG1,BRMの欠損は有意に予後不良因子であることを示した.以上より,BRG1の変異,欠損はEMT形質をもつNon-TRUtypeの発癌に関与し,一方,BRM欠損はTRUtypeの癌の低分化腺癌への移行過程にも関与する事が示唆された.SWI/SNF chromatin remodeling complexesの二つのcore factorであるBRG1, BRMは腫瘍抑制因子としての働きが示唆されるも、肺癌での検討は十分ではない。我々は肺腺癌細胞株15株、自治医大肺腺癌症例93例の組織切片、442例の原発性肺線癌の遺伝子発現データを用いて、肺線癌におけるBRG1, BRM欠損が上皮間葉系転換(EMT)形質と関連することを見出した。

すなわち、肺腺癌細胞株において、15株中6株がBRG1変異型であり、いずれもBRG1の遺伝子レベル、タンパクレベルの発現低下が認められるのみならず、E-cadherin、気管支上皮マーカー(TTF1, CK7, MUC1)の発現の低下と、vimentinの高発現が見られるEMT phenotypeであるのに対し、BRG1野生型では、BRG1、E-cadherin、気管支上皮マーカーの発現は高く、vimentinの発現は低いBronchial Epithelial phenotypeであった。また、EGFR、MET、HER2の変異・増幅はBRG1野生型に高頻度にみられるも、BRG1変異型ではみられなかった。BRM欠損もまた、EMT phenotypeに高頻度にみられた。93例の肺腺癌症例を免疫組織化学的に検討したところ、BRG1, BRMの欠損した症例はそれぞれ10%程度みられたが、低分化で、high gradeなsolid predominant adenocarcinomaで多くみられ、E-cadherin、気管支上皮マーカーの発現低下を伴った。また、BRG1欠損例は、EGFR変異と相互排他的であり、lepidic growthを欠いた。442例の遺伝子発現データからは、BRG1, BRMの欠失はやはりEMT phenotypeに多く、かつ、有意に予後不良であった。現時点で、論文もほぼ完成しており、Journal of Pathologyに投稿予定である。2012年4月にはAACR(米国癌学会)でこれまでの研究内容を発表した。我々の知る限り、BRG1, BRMの欠損が、肺腺癌におけるEMTと関連していることを指摘した論文はいまだない。TET-ON,OFFシステムを用いて、ドキシサイクリン存在下でBRG1, BRMの遺伝子の発現、抑制を起こす細胞株を作り、3次元培養下での形態変化、浸潤能、EMT関連マーカーの発現の変化について検討する。EMT phenotypeにおいて、癌関連遺伝子において、Genome wideなLoss of dymethylationが示唆され、それに、クロマチンリモデリング因子が関わっていると推測される。上記のTET-ON,OFFシステムによる細胞株を用いて、E-cadherin等のMethylation statusをMSPアッセイで調べ、もしも、違いがある場合には、先端研のゲノムサイエンス部門の油谷浩幸先生にお願いして、Infiniumアレイによる45万箇所のメチル化を測定していただく。マウスを使った実験としては、これらの細胞株をヌードマウスの尾静脈にうち、肺内に腫瘍を形成させた上で、BRG1,BRMを発現、抑制した場合の浸潤、転移、薬剤感受性などについて検討する。余力があれば、TET ON, OFFシステムをもちいたトランスジェニックマウスを作成する。
土を利用した環境負荷の少ない家庭科洗濯・染色教材の開発

本研究計画は落ちにくい汚れである土に着目し、土を利用した環境負荷の少ない洗濯・染色教材の開発を提案する。土粒子が布に付着・脱落する現象について、水・機械力・土・布の組成や構造から物理化学的な分析・解明を進め、土を落とす洗濯条件と、土で染める染色条件の両者の確立を目指し、次の八つの研究項目を立てた:(1)布に対する土粒子の脱落・付着を促進する処理条件の影響の検討、(2)布に対する脱落・付着を促進する土粒子の組成と形態の影響の検討、(3)土粒子の脱落・付着を促進する繊維の組成と構造の影響の検討、(4)土粒子の脱落・付着を促進する布の構造の影響の検討、(5)土粒子の脱落を促進する諸条件の解明および最適洗濯条件の決定、(6)土粒子の付着を促進する諸条件の解明および最適染色条件の決定、(7)小中高を対象とした家庭科洗濯および染色学習の実験・実習教材の提案、(8)小中高における提案教材の授業実践と改善:以上である。H30年度は、(2)(3)(4)に関するゼータ電位を明らかにできたことが、大きな成果であった。一般的に水中で物質表面は負に帯電するが、実測可能な表面電位をゼータ電位という。その電荷が大きいほど物質間の電気的反発力も大きくなると考えられるため、土粒子と布のゼータ電位を測定した。その結果、布のゼータ電位はキュプラ、ナイロン、絹、マーセル化綿、JIS綿、未マーセル化綿、PETの順に負の電荷が大きくなり、PETのゼータ電位は-22mV、他の布は-11mV以下であった。しかしながら、このゼータ電位の順位は、各布をRouge土顔料粒子で染色処理した場合の付着挙動とは、必ずしも一致しなかった。したがって今回の実験条件下では、土粒子の脱着現象にはゼータ電位だけでなく、親水性・疎水性といった繊維の性質や、繊維側面や断面の形状、糸の太さや織密度等が大きく影響していると考察された。土粒子が布に付着・脱落する現象について、水と力、土や布の組成や構造といった物理化学的な観点から分析・解明を進め、土を落とすための洗濯条件と、土で染めるための染色条件の両者の確立を目指す。本研究は以下8個の研究項目を立てている。1.布に対する土粒子の脱落・付着を促進する処理条件の影響の検討、2.布に対する脱落・付着を促進する土粒子の組成と形態の影響の検討、3.土粒子の脱落・付着を促進する繊維の組成と構造の影響の検討、4.土粒子の脱落・付着を促進する布の構造の影響の検討、5.土粒子の脱落を促進する諸条件の解明および最適洗濯条件の決定、6.土粒子の付着を促進する諸条件の解明および最適染色条件の決定、7.小中高を対象とした家庭科洗濯および染色学習の実験・実習教材の提案、8.小中高における提案教材の授業実践と改善。平成27年度では項目14を行う計画であったが、最終的には1,2,3,6,7に関わる研究を進めることができた。1については、染色実験で土顔料の付着を促進する条件を明らかにし、平成27年度繊維学会秋季大会にて発表した。2と3については、北海道剣淵町で採取した剣淵粘土を高温で焼いて赤味を出し、数種の布に濃く染められるか検討を行い、化学系学協会北海道支部2016年冬季研究発表会にて発表した。さらに平成28年日本家政学会でも発表が確定している。6については、染色布の洗濯堅牢度を調べ、化学系学協会北海道支部2016年冬季研究発表会にて発表した。7については、染色布の授業教材用の洗濯実験汚染布としての適性を検討し、平成28年日本家政学会にて発表が確定している。また、染色布の色の特徴についても解析し、平成28年度繊維学会年次大会での発表が確定している。平成27年度の研究計画で遂行できなかったのは、研究項目4のみである。一方、計画には入っていなかった項目6と7にも一部着手することができた。これらを総合的に判断すると、研究計画はおおむね順調に進んでいる。以下に平成27年度研究の詳細を述べる。研究項目1では、Rouge土顔料を水酸化ナトリウム緩衝液で染色すると、他の条件に比べて濃色に染まり、染色布からは多量のカルシウムが検出されることを発見した。染色布の電子顕微鏡(SEM)観察では、土顔料と繊維の間に透明な鉱物粒子の介在が見られ、この鉱物が土顔料の付着を促進していると考えられた(平成27年度繊維学会秋季大会研究発表会にて発表)。研究項目2および3では、北海道剣淵町で採取した剣淵粘土を焼成して顕色化し、5種の繊維布(ポリエステル、ナイロン、キュプラ、絹、綿)を染色して付着鉱物種を分析し、未焼成粘土の場合と比較検討した(化学系学協会北海道支部2016年冬季研究発表会にて発表)。さらに染色布のSEM観察を行い、繊維表面への粒子付着状態について検討を行った(日本家政学会第68回大会研究発表会にて発表確定)。研究項目6では、Rouge土顔料で良好な状態に染められた染色布の洗濯堅牢度を調べて、その用途について検討し、簡易土顔料汚染布への応用を提案した(化学系学協会北海道支部2016年冬季研究発表会にて発表)。

研究項目7では、上記項目6で提案したRouge土顔料染色布の授業教材用汚染布としての適性を検討するために、洗浄実験を行って湿式人工汚染布の結果と比較検討した(日本家政学会第68回大会研究発表会にて発表確定)。また、Rouge土顔料染色布の色の特徴について、色差計で測色を行い解析した(平成28年度繊維学会年次大会研究発表会にて発表確定)。本研究計画は落ちにくい汚れである土に着目し、土を利用した環境負荷の少ない洗濯・染色教材の開発を提案するものである。土粒子が布に付着・脱落する現象について、水と力、土や布の組成や構造といった物理化学的な観点から分析・解明を進め、土を落とすための洗濯条件と、土で染めるための染色条件の両者の確立を目指す。本研究は次の研究項目を立てている:(1)布に対する土粒子の脱落・付着を促進する処理条件の影響の検討、(2)布に対する脱落・付着を促進する土粒子の組成と形態の影響の検討、(3)土粒子の脱落・付着を促進する繊維の組成と構造の影響の検討、(4)土粒子の脱落・付着を促進する布の構造の影響の検討、(5)土粒子の脱落を促進する諸条件の解明および最適洗濯条件の決定、(6)土粒子の付着を促進する諸条件の解明および最適染色条件の決定、(7)小中高を対象とした家庭科洗濯および染色学習の実験・実習教材の提案、(8)小中高における提案教材の授業実践と改善:以上の8項目である。これまでに以下6つの項目について研究を進め、学会発表することができた。土顔料の付着を促進する染色条件の解明(1)。染色装置によって布が受ける機械力の数値化(1)。北海道剣淵町産の剣淵粘土を焼成により赤く顕色化、繊維に濃く染まるか検討(2、3)。染色布の洗濯堅牢度試験の実施(6)。染色布の色の特徴を色差計で解析、測色値からの付着鉱物量定量を検討(6)。染色布を授業教材用の洗濯実験汚染布に用いる適性についての検討(5、7)。平成28年度までの研究計画で遂行できていないものは、研究項目(4)と(8)のみであり、研究計画はおおむね順調に進んでいる。以下に平成27、28年度の詳細を述べる。研究項目(1)(6)については、Rouge土顔料を水酸化ナトリウム緩衝液で染色すると、他の条件に比べて濃色に染まり、染色布からは多量のカルシウムが検出されることを発見した。染色布の電子顕微鏡(SEM)観察では、土顔料と繊維の間に透明な鉱物粒子の介在が見られ、この鉱物が土顔料の付着を促進していると考えられた[平成27年度繊維学会秋季大会研究発表]。研究項目(2)(3)については、北海道剣淵町で採取した剣淵粘土を焼成して顕色化し、5種の繊維布(ポリエステル、ナイロン、キュプラ、絹、綿)を染色して付着鉱物種を分析し、未焼成粘土の場合と比較検討した[化学系学協会北海道支部2016年冬季研究発表]。さらに染色布のSEM観察を行い、繊維表面への粒子付着状態について検討を行った[日本家政学会第68回大会研究発表]。研究項目(6)については、Rouge土顔料で良好な状態に染められた染色布の洗濯堅牢度を調べ、その用途について検討し、簡易土顔料汚染布への応用を提案した[化学系学協会北海道支部2016年冬季研究発表]。研究項目(5)(7)については、上記(6)で提案したRouge土顔料染色布の授業教材用汚染布としての適性を検討するために、洗浄実験を行って湿式人工汚染布の結果と比較検討した[日本家政学会第68回大会研究発表]。
近世南アジアにおける地方史叙述の展開に関する文献学的研究

本研究課題は、ムガル帝国時代(近世)に著されたペルシア語の地方史叙述にかかる文献資料を主たる調査対象として、帝国の威信を背景にした歴史叙述が南アジア各地方の過去を帝国の秩序に再編成していったプロセスを解明することが目的である。また主要なインド諸語の文献群における歴史叙述を収集することによって、近世南アジアにおける地方史叙述の形成と展開に関する総合的な基礎資料群を得ることも本研究課題の目的である。2018年度においては、昨年度同様、ペルシア語の歴史文献を根拠資料として、各地方史に関する歴史叙述を整理する作業を進めた。インド通史の一部を構成するものから、単体として著作された地方歴史書に至るまで、網羅的に調査対象とした。一方、近代インド諸語文献については昨年度に収集した、初動の参考資料となるべきカタログ、参考書誌をもとに、研究に資する個別の一次文献群の検討を進め、その一部を収集した。さらに、以上の一次資料群に加え、最新の研究動向をフォローするため、研究課題に直接、間接に関連する二次資料も併せて整備した。本研究課題に関連して、F. Speziale(パリ第3大学)を中心に始まった研究プロジェクトPerso-Indica(詳細については本研究課題の応募申請書に記入済み)の定期シンポジウムに招待され、ムガル帝国アクバル時代の歴史叙述について研究発表を行った。また南アジアにおけるペルシア語歴史叙述の資料を得るため、未公刊のペルシア語写本を調査するため、コムおよびテヘラン(イラン)に赴いて、実施調査を行った。その結果、所要の写本の現物を閲覧し、調査先の協力を得て、複写資料を購入することもできた。目下、その内容を整理、検討しているところである。所期の研究計画をおおむね実施できている。2018年度の海外実地調査は、研究計画ではインドに赴くこととなっていたが、研究の進展の方向性に鑑み、上記のごとく、イランに変更したことも、研究の進展にそくして機動的に研究計画を実施したものである。おおむね所期の研究計画通りに実施する予定である。2019年度には英国に調査に赴く計画であるが、研究の進展状況や所要の研究資料の優先順位を考慮して、調査先を変更する可能性も含めて、研究計画を実施していく予定である。H29年度においては、ペルシア語の歴史文献を根拠資料として、各地方史に関する歴史叙述を整理する作業を進めた。調査対象は、インド通史の一部を構成するものから、単体として著作された地方歴史書に至るまで、網羅的に作業対象とした。一方、近代インド諸語文献については初動の参考資料となるべきカタログ、参考書誌を整備した。さらにそれらから得られる知見をもとに、研究に資する個別の一次文献群を整備するため、整備すべき文献群について、検討を進めた。以上の一次史料群に加え、最新の研究動向をフォローするため、研究課題に直接、間接に関連する二次文献も併せて整備した。さらに、参照すべき未公刊の資料については、マイクロフィルム等の複写をオフサイトで購入した。なお文献の実地調査の調査先としてH29年度には大英図書館を予定していたが、他の研究活動および校務が予期せず多量に上ったため、果たすことができなかったが、これについてはH30年度中に速やかに実施する予定である。以上のごとく、本年度はおもにペルシア語文献群を中心として、現有の研究資料と新たに整備する研究資料を解読・整理・分析して、地方史の歴史叙述を構成する要素の情報を採集する作業を進めた。研究実施計画に記した事項はおおむね実施することができたため。H29年度に予定していた文献の実地調査は実施できなかったが、これについてはH30年度中に速やかに実施する予定である。実地調査を効果的に行うための予備的調査をその分進めたので、研究計画の進捗はおおむね順調に進捗していると判断した。

本研究課題に関連して、F. Speziale(パリ第3大学)を中心に始まった研究プロジェクトPerso-Indica(詳細については本研究課題の応募申請書に記入済み)の定期シンポジウムに招待され、ムガル帝国アクバル時代の歴史叙述について研究発表を行った。また南アジアにおけるペルシア語歴史叙述の資料を得るため、未公刊のペルシア語写本を調査するため、コムおよびテヘラン(イラン)に赴いて、実施調査を行った。その結果、所要の写本の現物を閲覧し、調査先の協力を得て、複写資料を購入することもできた。目下、その内容を整理、検討しているところである。所期の研究計画をおおむね実施できている。2018年度の海外実地調査は、研究計画ではインドに赴くこととなっていたが、研究の進展の方向性に鑑み、上記のごとく、イランに変更したことも、研究の進展にそくして機動的に研究計画を実施したものである。H29年度に実施できなかった文献の実施調査をH30年度中に速やかに実施する。H29年度中の研究内容に照らし、H30年度の研究計画については、大幅に変更する必要は無いと考えられる。おおむね所期の研究計画通りに実施する予定である。2019年度には英国に調査に赴く計画であるが、研究の進展状況や所要の研究資料の優先順位を考慮して、調査先を変更する可能性も含めて、研究計画を実施していく予定である。H29年度中に実施を計画していた外国における文献の実地調査を、他の研究活動と校務との関係から実施することができなかったため、これをH30年度中に実施することとしたため。イランに実地調査のために赴いた外国旅費については、2018年度末に出発し、2019年4月3日に帰着する行程であったため、収支状況に計上されていない。
ニワトリ肢芽形態形成におけるソニックヘッジホグ,レチノイン酸の機能

本研究によって、新規の遺伝子が4つ同定された。一つはparied typeのホメオドメインをもつ転写因子で、ニワトリ肢芽の前方部に発現する。この遺伝子はその発現様式から肢芽後方からのレチノイン酸(RA)、ソニックヘッジホグ(Shh)のシグナルに拮抗することが予想される。これを証明するため、肢芽前方部にRA,Shhを作用させたところ、この遺伝子の発現が速やかに抑制されることが見出された。この遺伝子の機能を詳細に調べるため、レトロウイルスによる強制的な異所的発現を現在試みている。また、この遺伝子の突然変異がpreaxial polydactylyを引き起こすことが予想されるため、マウスを用いて遺伝学的な検索を行った。この結果、ある種の変異多指症マウスでホメオドメイン領域に重大な変異が見つかった。現在。この変異型遺伝子がニワトリで多指症を起こせるか検討中である。もうひとつ遺伝子は、TBXであることが同定された。この遺伝子は肢芽の後方と前方に発現し、RAによる鏡型重複誘導によって変化することがわかった。これは、この遺伝子が肢芽の領域特異性に関わることを意味しており、機能的な解析を進めている。残り2つのTBX遺伝子は上肢芽、下肢芽特異的に発現することが見出された。したがって、これらの遺伝子が肢芽のwing/leg identityに関与することが示唆され、その機能的解析を進行中である。また、これに関する論文を1報発表した。肢芽の前後軸の決定には、ソニックヘッジホグとレチノイン酸が重要であることがわかっているが、これらは肢芽後方からのシグナルであって、肢芽前方から前後軸の決定に関わるシグナリングセンターがあるかどうか、いまだに明確なデータは報告されていない。われわれは、本研究で興味深いニワトリ遺伝子を見い出した。この遺伝子はpaired typeのホメオボックスをもつ転写因子をコードしており、発生初期から肢芽前方でのみ発現している。発生が進行するにつれて肢芽後方にも弱く発現が認められるようになる。もともと、肢芽前方にはソニックヘッジホグやレチノイン酸に拮抗する働きがあると考えられてきたが、われわれが今回クローン化した遺伝子は、このような機能をもつことが期待される。これを実証する目的でレチノイン酸を染み込ませたビーズを肢芽後方に植え込んだところ、この遺伝子の発現は、抑制された。さらに機能的な解析をするため、今後、ソニックヘッジホグ遺伝子を強静的に肢芽前方に発現させる実験を予定している。また、われわれの新規の遺伝子も肢芽後方に強制発現させることも考えている。現在、この実験のため、レトロウイルスの系を確立しようとしている。また、この遺伝子がソニックヘッジホグやレチノイン酸に拮抗するものであるとすると、その突然変異は、多指症となることが考えられる。したがって、現在、マウスとヒトのGenomic cloneを単離しようと試み、いくつかのクローンを同定したところである。また、Genomic cloneには、この遺伝子のプロモーターが含まれているはずであり、いままでに肢芽後方に特異性をもつプロモーターは見い出されていないことから、この解析は興味深い。現在。
ヒドロキシエポキシドの選択的閉環反応を基軸とした多官能性環状エーテル天然物の合成

中員環エーテル構造を含む多官能基化された単環性或いは多環性天然物は,西ナイル熱やマラリアを媒介する蚊の幼虫の高い殺幼虫活性など,興味ある生理活性を有する。これら多官能性中員環エーテル構造の立体選択的構築法として,ヒドロキシエポキシドの位置および立体選択的閉環反応を開発し,天然物合成に応用した。その結果,中員環エーテルを含む特異な2環性骨格を有するIsolaureatinの全合成に成功し,また,ポリ環状エーテル化合物であるHemibrevetoxin Bの基本骨格の構築に成功した。1)exo-閉環中員環エーテル構築法の触媒化、リサイクル化への展開申請者が開発した、Eu(fod)_3を用いるヒドロキシエポキシドのexo-閉環反応による立体選択的中員環エーテル構築法の触媒化、リサイクル化を検討した。中心金属元素として希土類金属とし、様々なフッ素化度、炭素長を有するフルオロアルキル基を有するアミド型配位子を調製し、ルイス酸性をチューニングした希土類金属錯体を系統的に精査した結果、Yb(hfa)3が優れた活性を示すことがわかった。2)endo-閉環中員環エーテル構築法の一般性の確立申請者が開発した、フェニルスルファニル基隣接基関与を利用するヒドロキシエポキシドのendo-閉環反応の問題点を解決するため、芳香環上への電子供与基の導入による電子的な安定化、キレーションによる安定化を検討した。しかし、顕著な位置選択性および反応性の向上はみられなかった。3)多官能性中員環エーテル天然物の全合成研究への応用中員環エーテルを含む特異な2環性骨格を有するisolaureatinを合成ターゲットに選び、その立体選択的全合成研究をおこなった。2段階の閉環反応を経て、基本炭素骨格の構築に成功した。また、ポリ環状エーテル化合物であるHemibrevetoxin Bおよび7員環エーテル化合物であるZoapatanolの合成研究をおこない、基本骨格の構築に成功した。1、endo-閉環中員環エーテル構築法の中員環エーテル天然物合成への応用申請者が開発した、フェニルスルファニル基隣接基関与を利用するヒドロキシエポキシドのendo-閉環反応を鍵反応として適用し、代表的7員環エーテル化合物であるZoapatanolの合成研究をおこなった。7員環エーテル骨格および側鎖部の立体選択的合成を完了し、両者のカップリングを検討している。また、代表的8員環エーテル化合物である(+)-Laurencinの全合成に適用し、既知の合成中間体の合成に成功し、形式合成を達成した。2、exo-閉環中員環エーテル構築法の中員環エーテル天然物合成への応用申請者が開発した、Eu(fod)_3を用いるヒドロキシエポキシドのexo-閉環反応による立体選択的中員環エーテル構築法を鍵反応として適用し、様々な多官能性中員環エーテル天然物の合成研究をおこなった。平成19年度に引き続き、中員環エーテルを含む特異な2環性骨格を有するIsolaureatinの合成研究をおこなった。ホモアリル位のシロキシ基の立体障害を利用したアリルアルコールからanti-選択的に導入したジエポキシドから、2段階の閉環反応により基本骨格となるジオキサビシクロ骨格を構築した。更にハロゲン基の導入およびエンイン側鎖の伸張をおこない、同化合物の全合成を達成した。一方、同反応を3環性センブラン型化合物であるAstrogorginの合成研究に展開した。基本骨格構築の中で重要となる9員環エーテル構造の部分構造の合成に適用し、高収率で目的とする化合物が得られることを見い出した。
ルテニウム素酸化物の遍歴磁性の研究と新超伝導物質の探索

我々は1994年に、ルテニウム酸化物Sr_2RuO_4が、銅酸化物高温超伝導体以外では初めての「層状ペロブスカイト構造」の超伝導体であることを世界に先駆けて発見した(臨界温度はT_c=1.4K)。この超伝導体と同一の2次元構造をもつ銅酸化物はT_c=40Kの超伝導体であるが、その関連物質としては銅-酸素面が2層ずつ対になった擬2次元構造の物質ではT_c=60Kとなることが知られている。本研究では、後者の銅酸化物と基本的に同一の構造をもつ物質として我々が新たに開発した擬2次元構造の新物質系、Sr_<3-x>Ca_xRu_2O_yのスピン相関と超伝導性を明らかにする目的で、物質合成、構造解析、磁化率・電気抵抗率・比熱などの測定を行った。その結果、Caの含有量x=1.2を境に、それより高濃度側では層間隔が顕著に短くなる結晶構造の変化を見いだした。この変化を理解するために、本補助金で購入した熱分析システムを用いて、Sr_<3-x>Ca_xRu_2O_yをアルゴン・水素混合ガス中で分解させたときの質量変化を精密測定することによって、試料に含まれる酸素量yを決定した。その結果、Caの含有量に依らずyは7.0であり、x=1.2を境に見られる構造の変化は、酸素含有量の変化を伴うものでないことが明らかになった。さらに電子線回折による構造解析から、RuO_6八面体は層内で回転した状態で凍結していることが明らかになり、この回転とRuO_6八面体の層面からの傾斜という2種類の歪みによってx=1.2を境にした構造変化が説明できることがわかった。また、この構造変化に伴って、Ruスピン間の面内の相互作用が反強磁性的なものから強磁性的なものへと変化し、面間の相互作用はこれとは逆にCa高濃度側で反強磁性的となることも明らかにできた。新たな超伝導相はまだこの系では見つけていないが、磁気転移温度が3K程度まで抑制されるx=1.0付近では、その磁性が遍歴電子系に対するいわゆる「弱い強磁性」の理論を用いて説明できることを示すことができた。
薬効スクリーニング法によるOA治療薬の開発-SOX9を活性化する薬剤の同定

転写因子SOX9は軟骨分化におけるマスター遺伝子である。変形性関節症(OA)軟骨においてSOX9遺伝子を過剰発現させると、細胞外マトリックス合成が促進され正常軟骨レベルに修復される。ゆえにSOX9遺伝子発現を促進する薬剤はOA治療薬として期待できる。我々はSOX9遺伝子のプロモーター領域に作用し、その発現を活性化する薬剤を同定するため、1, 184種類のFDA認可薬のオフラベル効果をスクリーニングした。その結果、2つの薬剤がSOX9の遺伝子発現を活性化させる可能性が示唆された。SOX9遺伝子は軟骨分化におけるマスター遺伝子であり、軟骨基質の形質維持に極めて重要である。SOX9の発現を促進することにより、軟骨変性の防止あるいは変性軟骨の修復が期待できる。SOX9遺伝子のプロモーター領域をルシフェラーゼ・レポーターベクターに挿入し、これをヒト軟骨肉腫細胞株HCS2/8にトランスフェクションした。この細胞株に1040種類のFDA認可薬薬剤を添加し、デュアル・ルシフェラーゼアッセイを行った結果、濃度依存性にルジフェラーゼ活性を上昇させる抗凝固剤Xを同定した。薬剤XをHCS2/8に添加して、SOX9およびSOX9の標的であるII型コラーゲンやアグリカンの発現をリアルタイムRT-PCR法にて評価した。しかし、いずれのmRNAにおいても濃度依存性の上昇を確認できなかった。次に、軟骨細胞を単層培養することによって起こる脱分化を薬剤Xによって抑制し軟骨形質維持が可能か検討した。ヒト軟骨細胞株を入手し、これを単層培養した。各継代(P15)の軟骨細胞を、培養液中に薬剤Xを添加した群と添加しない群(コントロール)に分け、それぞれRNAを抽出してリアルタイムRT-PCR法にてSOX9、II型コラーゲン、アグリカンの発現をリアルタイムRT-PCRにて評価した。しかし、脱分化の抑制作用を示す有意な結果を得られなかった。別のオフラベル薬剤を検討するため、新たに1200種類のスクリーニング用薬剤(Prestwick Chemical)を入手し、HCS2/8に対して同様に添加し、デュアル・ルシフェラーゼアッセイを行っている。ルシフェラーゼ活性を上昇させる薬剤がいくつか同定できており、実際にSOX9の発現を促進するかリアルタイムRT-PCR法にて検討している。この細胞株に新たに購入した1,184種類のスクリーニング用薬剤(Prestwick Chemical)を添加し、デュアル・ルシフェラーゼアッセイを行った結果、1次スクリーニングで67薬剤、2次スクリーニングで6剤に絞り、さらに濃度依存性を検討した。その結果、2つの薬剤XおよびYが濃度依存性にルシフェラーゼ活性を上昇させた。続いて、薬剤XおよびYを薬剤濃度10μMでHCS2/8に添加し24時間後に全RNAを抽出し、定量的RT-PCR法にてSOX9のmRNA発現量を検討した結果、両薬剤ともmRNA発現量が約1.4倍上昇していた。薬剤Xは高濃度(50μM)でさらにmRNA発現量が上昇した。次に、前駆軟骨細胞株ATDC株にインスリンを添加しながら培養することにより、軟骨多段階分化モデルを構築した。SOX9を発現する前肥大軟骨細胞に分化した時点で、上述と同様に薬剤Xを添加し、24時間後に全RNAを抽出し、定量的RT-PCR法にてSOX9のmRNA発現量を検討した。結果、薬剤濃度1050μMの範囲で濃度依存性にSOX9のmRNA発現量が上昇した。現在、SOX9の標的となるII型コラーゲンおよびアグリカンのmRNA発現量を測定し、さらに薬剤添加後24時間後の細胞を溶解し、細胞内のタンパクを抽出してE-lisa法およびWestern bltting法によりSOX9、II型コラーゲンおよびアグリカンのタンパクレベルでの発現を解析している。