hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しい脊髄虚血モニタリング法の開発

マイクロ・ナノテクノロジーを用いた微細電気機械システム(MEMS)技術を応用して極小サイズの超音波振動子を新規に作製し、脊髄腔内に挿入可能なフレキシブルカテーテルにそれらを側面配置型に搭載した脊髄虚血モニタリングシステムを開発した。Adamkiewicz動脈を模倣した血管ファントムの作製し、人工血液を灌流する実験系で、マイクロトランスデューサーの配置を最適化し、血流量変化に応じたドップラー・シフトを検知し得た。今後、S/N比の改善のためにさらなる修飾が必要である。生体内深部にある脊髄そのものの血流状態を鋭敏に、かつ、持続的にモニタリングできるデバイスを創作し、脊髄虚血再灌流を伴う胸腹部大動脈瘤手術後対麻痺という重篤な合併症を皆無にできる信頼できるシステムの開発を行う。東北大学医学系研究科と先進医工学研究機構ならびに岩手大学工学研究科の合同研究チームとして、超音波ドップラ法を応用したマイクロアクチュエーター・マイクロセンサ搭載型脊髄虚血モニタリングカテーテルの設計と試作を進めた。定期的なリサーチプロジェクトミーティングの開催とpilot studyの積み重ねにより、以下に記載する決定と研究の遂行および試作品の作製に至った。脊髄表面の血流測定手段として、赤血球の移動をその進む方向にかかわらず移動成分を相加する手法として連続波ドプラを用いることに決定した。遅い血流を信号として検出できるかが問題であるが、周波数が高い方が遅い血流信号を検出しやすいこと、周波数シフト(変移)を200Hz程度と想定し、中心周波数を20Mzと設定した。センサシステム構成として1)まず素子設計であるが、トランスデューサの材料としてPMN-PTを選択、厚さは82μm、その長さ1.5mmで同軸ケーブル接続用電極パッドを0.5mmと決定した。素子のバッキングとして音響インピーダンスが高いシリコンを選択し素子構造としての音響整合層は含めない方針とした。この素子インピーダンスを空気負荷および水負荷の条件下で測定した。また外径140μmの同軸ケーブルの特性を測定した。次はインピーダンスマッチング用コイルを作製する。2)センサカテーテル設計では連続波ドプラ用送信・受信素子2個を長軸に配列し素子間距離を1.5mmとした。次のステップとして振動子の上にアクリル樹脂(φ1.0mm)からなる拡散レンズを構成し、連続波を広げて測定位置合わせを容易にする工夫をする。3)新規のワークステーションとして実際の外部回路を作製(外部委託)し、少なくとも送信が可能であることまで確認した。4)医療用電気コネクタおよびバルブ付Yコネクタを用意しin vitroでの血流評価モデルを作製中である。東北大学医学系研究科と医工学研究科の合同研究チームとして、超音波ドップラ法を応用したマイクロセンサ搭載型脊髄虚血モニタリングカテーテルの設計と試作を行った。脊髄液ドレナージ法で用いるカテーテルの先端に二つの小型超音波センサを実装した。センサはSi基板上に圧電素子を接合し、圧電素子の上下電極を同一平面に設けた。超音波トランスデューサとして電気機械結合係数がPZTより大きい圧電単体結晶材料であるPMN-PTを使用し、センサ作製にはMEMSをはじめとする微細下行技術を駆使した。作成された圧電素子の周波数特性は22.4MHzとなった。新規のワークステーションとして外部回路を完成させることができた。続いて、複数種類からなる血管ファントムを作成した。その中に前脊髄動脈を模倣した擬似血流を形成し、先に開発したマイクロセンサ搭載脊髄虚血モニタリングカテーテルと外部回路を接合して、模擬測定実験を行つた。ドップラ信号を測定し、かつ、モニタ上に波形を描出することができた。しかしながら、測定結果が安定しなかったために、外部回路の感度補正を行っている。さらに、送信と受信のための圧電素子間の距離ならびに傾斜角を是正したセンサ部分の改良も行った。また、実際の大動物における髄腔内での脊髄血流測定実験に供えるため、脊椎外科一般に必要な手術器具を整え、脊髄硬膜の露出と局所髄腔穿刺によるモニタリングカテーテル留置の予備実験を行った。さらに、今回開発したカテーテルの測定機能以外のドレナージ機能についても反復測定し、臨床使用されているドレナージカテーテルに比し、ドレナージ機能に弊害が及んでいないことを確認した。東北大学医学系研究科と先進医工学研究機構ならびに岩手大学工学研究科の合同研究チームとして、これまでに超音波ドップラ法を応用したマイクロアクチュエーター・マイクロセンサ搭載型脊髄虚血モニタリングカテーテルの設計と試作を行ってきた。定期的なリサーチプロジェクトミーティングの開催とpilot studyの積み重ねにより、以下に記載する試作品の作製に至っている。試作した脊髄虚血モニタリング用カテーテル、寒天からなる血管ファントムを用いて実験システムを作製した。流路径は3.0mmおよび1.4mmとし、寒天表面からの距離は2.0mmとした。流路内に疑似血液を注入しながら、PCに表示されるドプラ偏移周波数等を計測したが、流速を早くしても変化はなし。

そこで、ドプラテスト液に空気を混ぜた液体を流路内に流したところ、ドプラ偏移周波数のヒストグラムに変化が観察された。一方、直径1.4mmの流路に同様の空気を混入したドプラテスト液を流しても、変化は見られなかった。原因として、(1)送信強度が小さい、(2)送信振動子、受信振動子、および計測対象との距離と角度が最適化されていないこと等が考えられた。現在(1)、(2)の問題に対し検討、改善を図っている。今後は再度基本特性の評価後に動物実験等の具体的な臨床応用に向けてのプロセスに移行する予定である。これまで考案した超音波連続波ドップラ法を応用したマイクロトランスデューサ・マイクロセンサ搭載型脊髄虚血モニタリングカテーテルのさらなる改良を実施し、疑似髄腔内で疑似血管に人工血液に潅流し測定を繰り返した。まず、振動子の上にアクリル樹脂(φ1.0mm)からなる拡散レンズを構成し、連続波を広げて測定位置合わせを容易にする工夫では、微弱信号に対して十分な受信の効率化と信号増幅効果が得られないと判断されたため、抜本的なプロトタイプセンサの構造修復の必要性に迫られた。これまで以上に送信・受信素子間の距離を短縮し、さらに両者の角度を180度から135度に変更した。その上で、改めて音響特性、干渉波による影響等の測定を行った。外部回路受信装置にもバージョンアップを重ね、現在も改良を続けさらなる感度の向上のため工夫を追加している。これまでの改良により、第二世代の試作モニタリングマイクロセンサが作製され、それを用いて疑似血管系での血流測定を行ったところ、流量の増加に伴う有意なDopplerシフトを記録することができた。ただし、信号強度増加を誘発するair bubbleの混注があって初めてしっかりとしたDopplerシフトを測定し得るという特性が残り、これが、疑似血管系での人工血液を用いた場合の限界とも考えられた。そこで、現段階における脊髄虚血モニタリングカテーテルの生体内における作動状況確認のための大動物(イヌ)を用いた測定実験も試みた。脊椎外科の手技を用いて脊髄硬膜を露出し小開窓から脊髄腔内ヘモニタリングカテーテルの留置を行った。人工髄液の注入を行いつつセンサが適正に作動するかどうかの確認を行った。わずかな信号を検知できたが、ノイズがいまだ多く、臨床応用に至る前にS/N比のさらなる改善を得る必要があることが判明した。
犬および猫の好中球のアポトーシスと疾患との関係について

動物における好中球のアポトーシスと疾患との関係は、ほとんど検討されておらず、不明な点が多い。このような背景をもとに、犬および猫の肝疾患やその他ウイルス感染、好中球増多症の症例における好中球のアポトーシスについて検討し、さらにアポトーシスを誘発させる機序について、分子生物学的に検討することを企画した。まず、ヒトでは肝硬変患者において好中球のアポトーシスが亢進しているとする報告が有ることから、肝疾患犬の好中球についても検討を行った。正常犬および肝疾患犬の末梢血から好中球を分離し、一定時間培養後、TUNEL染色およびDNAラダーの解析を行ったところ、肝疾患犬の好中球は正常犬のそれよりもアポトーシスが亢進していることが確認された。このことから、肝疾患では易感染状態の場合が認められるが、好中球のアポトーシスが関与しているのではないかと考えられた。以上の結果は、現在論文として学術雑誌の日本獣医学雑誌で印刷中である。次に動物の好中球のアポトーシスの機構を分子生物学的に解明するために、犬のアポトーシス抑制遺伝子BcL-xLのクローニングを行い、遺伝子塩基配列を決定した。さらに犬白血球由来株化細胞における同遺伝子の発現をRT-PCR法で確認した。このことは、犬の白血球のアポトーシス抑制にはBcL-xLが深く関与していることが示唆された。この結果は学術雑誌の日本獣医学雑誌にて発表を行った。現在は犬のアポトーシス抑制遺伝子である、BcL-2およびMcL-1遺伝子やアポトーシス促進遺伝子であるBaxおよびCaspaseファミリーのクローニングが終了しており、塩基配列情報をDDBJ(DNA data bank of Japan)にて一般に公開している。今後は、犬の好中球のアポトーシスの分子機構解明や、好中球増多症および減少症の症例におけるアポトーシスと疾患との関係を検討する予定である。以上の結果は、現在論文として学術雑誌へ投稿中である。現在、動物の好中球のアポトーシスの機構を分子生物学的に解明するために、犬および猫のBax遺伝子、BcLファミリー遺伝子のクローニングを行い、好中球のアポトーシスとの関与について検討を行っている。
脳が統合するエネルギー代謝調節機構－ストレスによる肥満易発症の分子機序－

生後早期の母子分離は、脳の神経回路の正常な形成を妨げ、結果として機能の歪として現れてくる。脳の神経栄養因子を介するシグナル伝達系やグルタミン酸受容体の異常に加え、シナプスおける膜蛋白質のリン酸化にも影響を及ぼすことが明らかになった。これらの異常に加え、脂質代謝関連酵素群(因子)にも影響を及ぼし、神経機能の異常を惹起していることが示された。一方、母子分離された動物では腸内細菌叢の組成が変容することも明らかとなった。これらの結果は、生後早期のストレス曝露は、脳が統合する末梢代謝関連臓器との相互作用を攪乱させ、肥満など生活習慣病易発症性の分子基盤を探る手がかりとなるものである。生後4-9日齢、3時間/日母子分離した。離乳後、通常の飼育用餌と高脂肪食(HFD-60オリエンタル酵母)を投与して、母子分離ストレスに加え、高脂肪食の摂取が、脳とエネルギー代謝関連臓器に与える影響について解析する。今回は、まずストレスによって惹起されるコルチコステロン上昇により脳に起こる動態変化を解析した。脳は、海馬、大脳皮質、小脳、視床下部などを研究対象とした。まず、ストレス曝露により惹起されるコルチコステロン上昇が脳に及ぼす影響について、コルチコステロン投与した動物の解析を行った。ホモジネイト画分と粗シナプトソーム膜画分を採取し,記憶・学習能あるいは神経回路網形成やその可塑性に重要な因子であるグルタミン酸受容体:NMDA受容体サブユニット(NR2A,NR2B)とCaMKIIα発現とそのリン酸化(CaMKII-thr286)をウェスタンブロットにて解析した。また、グルタミン酸作動性ニューロンのマーカーとしてVGLUT2とGABA作動性ニューロンのマーカーとしてVGATの発現も解析した。海馬のウェスタンブロット解析ではGluR1の発現量がホモジネイト画分及び粗シナプトソーム膜画分共に有意に低下していた。シナプトソーム膜画分ではCaMKIIαの発現には変化が認められなかったが、リン酸化状態が有意に低下していた。一方ホモジネイト画分においては、VGAT発現に変化が認められなかったが、VGLUT2の発現量が大幅に減少していた。本研究では発達期におけるコルチコステロン上昇がグルタミン酸作動性ニューロンを中心とした神経回路網形成に恒久的な影響を与えうる事が示唆された。実験動物(ラット)を離乳前の期間、母獣から分離し、その後母獣に戻す操作を行い、母仔分離実験プロトコルに従って研究を行った(昨年度同様)。次いで、21日齢で離乳後、高脂肪食餌(HFD-60)と通常飼育食餌を投与して、代謝関連臓器の関連について解析した(末梢組織への影響)。これに並行して、脳における変化(中枢神経系への影響)についても解析した。更に、脳の次世代シークエンス解析を行った結果、コレステロール輸送に関与する因子群への影響を示唆するデータを得ている。また、母仔分離ストレス曝露した動物では、高脂肪食餌を摂取しても体重の増加が見られなかった(対照群と比較)。これについては、再検討が必要であり現在追加実験が進行中である。研究当初は、脳や末梢の代謝関連臓器の多さから、サンプル数が大変多く解析に時間を要していたが、計画が進行するにつれ、母仔分離ストレスの影響が出る領域・臓器を絞ることができたので集中して解析が進行している。一方、高脂肪食を与えられた時の実験動物のデーターの挙動については再検討を行っており時間を要するかもしれないが、現時点では概ね計画の通り順調に進捗しているといえる。今年度はSDラットを用いて脳発達期母仔分離ストレス曝露モデルの体重変化と食摂量について通詳細な検討を行った。母仔分離群では離乳時(21日齢)で既に体重がコントロール群より低いため、その後の生後60日齢でもコントロール群より体重は低いままであった。しかし、生後25日の体重を基準とした「体重増加率」に換算すると母仔分離群では生後45日以降の体重の増加率が有意に高かった。更に体重の増加割合は、生後35日と45日では母仔分離群ではコントロール群と比して有意に高いことが分かった。また同様の時期では摂餌量(体重にて補正)が有意に高いことも明らかになった。これらの結果は母子分離曝露された仔では、離乳後の比較的早い成長期の摂食量が多くそれに伴って体重の増加率が高くなっていることを示唆するものである。これら若年期における摂食量及び体重増加率の増加の結果から、昨年度の発達期に母仔分離の影響を受けていた脳由来神経栄養因子(BDNF)に再度着目した。BDNFは摂食抑制やエネルギー代謝の促進作用を持つことが報告されているため、特に摂食やエネルギー代謝との関与が深い視床下部を中心に様々な脳部位を60日齢で採取しBDNF発現をウェスタンブロットにて解析した。どの部位においてもBDNFの発現に変化は見られなかったが、興味深いことにBDNFの受容体TrkBの発現量は母仔分離された群で高い傾向にあり、特に視床下部では有意に増加していた。培養細胞等による実験からBDNF刺激はTrkB発現を減少させることが報告されており、今回のTrkBの発現量も単純に増加したのではなくむしろBDNFが十分に機能していない(放出されていない)事を反映していると考え、視床下部の領域別の解析も視野に入れ更に検討を進めていく予定である。本研究はおおむね順調に進捗している。

しかし、上記研究実績の概要に記したように、体重と摂餌量の基本的データーをもとに脳、特に視床下部の解析に移行したため、当初予定していた網羅的解析(次世代シーケンサー解析)を延期したが、次年度は滞りなく実施できる体制にある。本研究は、脳発達期における母仔分離ストレスが、その後の発育に与える影響について、エネルギー代謝の観点から肥満易発症の機序について検索するものである。生後早期の母仔分離ストレスにより、体重の増加割合が亢進した。これは視床下部のBDNF受容体TrkBの発現量の亢進up-regulationを示唆し、更にBDNFの放出障害が推測されるものである。神経性調節の場は、視床下部室傍核と弓状核や迷走神経であることを鑑みると、神経栄養因子を介する神経性調節機構の存在が明らかになった。今年度はこれをさらに発展させるべく、実験モデル動物の腸管内の糞便の腸内細菌叢の解析を行った。生後2-20日、6時間/日母仔分離したラットを21日齢(離乳前)に、腹腔から糞便を取り出して腸内細菌叢の組成の解析を行った。腸内細菌として、Actinobacteria門、Bacteroidetes門、Deferribacteres門、Proteobacteria門、Verrucomicrobia門を中心として網羅的な解析を行った。その結果、母仔分離動物においてはProteobacteria門が最も増加し、次いでVerrucomicrobia門が増加していることが明らかになった。これらは、腸内ミクロビオータのうち準(亜)優勢菌群、あるいは最優勢菌群であり、細菌叢の組成異常が惹起されていることが明らかになった。近年、腸内細菌叢系統組成の変化が、潰瘍性大腸炎に関与するという研究に先行しそれに引き続き、消化管とは関係のない疾患群、精神神経疾患、代謝疾患、アレルギー・自己免疫疾患などの病因解明へと展開されている。報告者の一連の研究では、代謝疾患や精神神経疾患の原因の1つとして脳発達期のストレスが惹起する脳と腸管の双方向性シグナル機構の破綻に着目していることを鑑みると、今回得られた結果は今後の研究発展が期待できるものである。生後早期の母子分離は、脳の神経回路の正常な形成を妨げ、結果として機能の歪として現れてくる。脳の神経栄養因子を介するシグナル伝達系やグルタミン酸受容体の異常に加え、シナプスおける膜蛋白質のリン酸化にも影響を及ぼすことが明らかになった。これらの異常に加え、脂質代謝関連酵素群(因子)にも影響を及ぼし、神経機能の異常を惹起していることが示された。一方、母子分離された動物では腸内細菌叢の組成が変容することも明らかとなった。これらの結果は、生後早期のストレス曝露は、脳が統合する末梢代謝関連臓器との相互作用を攪乱させ、肥満など生活習慣病易発症性の分子基盤を探る手がかりとなるものである。研究対象領域として、脳とエネルギー代謝関連臓器に焦点を当てている。当初は、解析すべき脳の部位とサンプル数が多いため時間を要していたが、年度の後半からは、順調に解析が進行している。解析の順序として、脳に次いでエネルギー代謝関連臓器に移りたい。現在、後者の解析が進んでいる。総じて、ほぼ計画の通りの進捗状況である。上記で触れたが、高脂肪食を与えられた実験動物の解析を慎重に行わなくてはならないと考える。現時点では、計画通りの遂行が可能であると考える。
小脳をモデルとした糖鎖シグナルによる機能的・形態的シナプス可塑性制御

中・長期に持続する記憶・学習は、シナプス後部におけるAMPA受容体の輸送によって担われ、より長期に持続する記憶はシナプスの形態変化が伴う。本研究では小脳神経回路をモデルとし、糖鎖科学と神経科学的アプローチを融合することによって、機能的・形態的シナプス可塑性を制御する分子機構の解明を目指した。まず、シナプス可塑性のモデルである長期抑圧や長期増強時には、AMPA受容体はライソゾーム様細胞内プールから出入りし、ライソゾームに存在する糖鎖分解酵素が大きな働きをすることが分かった。またプルキンエ細胞への子宮内電気穿孔法と時期特異的遺伝子操作法を確立し、樹状突起とシナプス形態形成過程の分子機構を解明した。中・長期に持続する記憶・学習の実体は、シナプス後部におけるAMPA型グルタミン酸受容体の輸送によって担われている。AMPA受容体の輸送は、細胞内分子のみでなく、脂質ラフトや細胞外基質に存在する糖鎖とAMPA受容体との相互作用によって制御されるがその詳細は不明である。また、より長期に持続する記憶にはシナプス形態変化が伴い、成熟とともに神経細胞周囲に発達するプロテオグリカンが関与することも分かってきた。本研究では小脳をモデルとして、機能的・形態的シナプス可塑性を制御する分子機構を、糖鎖科学と脳科学的アプローチを融合することによって解明することを目的とする。神経活動亢進に伴うAMPA受容体輸送経路について明らかにするために、長期増強(LTP)刺激によって樹状突起の棘突起にエキソサイトーシスされてくるAMPA受容体が存在する細胞内プールについて検討を加えた。興味深いことにこのプールは酸性でかつカテプシンが陽性であり、ライソゾームの性質を持っていることがわかった。逆にライソゾームへの輸送を阻害するとLTPが障害されることも分かってきた。ライソゾームには糖鎖分解に関与する酵素が含まれているため、AMPA受容体の糖鎖修飾がこのプールで変化する可能性を示唆する。現在、神経細胞におけるライソゾームエキソサイトーシス経路とその意義についてさらに解析を進めている。一方、小脳プルキンエ細胞における長期抑圧(LTD)と糖鎖との関連について検討するために、まず発達早期の幼若プルキンエ細胞に子宮内電気穿孔法によりcDNAやshRNAを導入し、かつ発現誘導できるシステムの開発した(論文投稿中)。中・長期に持続する記憶・学習の実体は、シナプス後部における神経活動依存的なAMPA型グルタミン酸受容体の選択的輸送によって担われている。このためその制御機構の解明は神経科学の最重要課題の1つとなっている。本研究では小脳をモデルとして、機能的・形態的シナプス可塑性を制御する分子機構を、糖鎖科学と脳科学的アプローチを融合することによって解明する。神経活動亢進に伴うAMPA受容体輸送経路について明らかにするために、長期増強(LTP)刺激によって樹状突起の棘突起にエキソサイトーシスされてくるAMPA受容体が存在する細胞内プールについて前年度に引き続き検討を加えた。興味深いことに、このプールは酸性でかつカテプシンが陽性であり、ライソゾームの性質を持っていることがわかった。ライソゾームからの分泌経路(ライソゾーム分泌)は免疫細胞などで知られていたが、これまでに神経細胞における機能は不明であった。面白いことに免疫細胞においてライソゾーム分泌に関与することが分かっている分子を阻害することにより、神経細胞においてLTP誘導刺激によるAMPA受容体輸送が抑制された。またLTP誘導刺激によってライソゾーム酵素の一部が分泌され、神経細胞周囲のプロテオグリカンが減少することが分かり、この減少もライソゾーム分泌を阻害すると抑制された。これらのことから、神経細胞外のプロテオグリカンとAMPA受容体との相互作用が、神経活動によって調節されることが示唆された。中・長期に持続する記憶・学習の実体は、シナプス後部におけるAMPA型グルタミン酸受容体のトラフィッキングによって担われており、制御機構の解明は神経科学の最重要課題の1つである。AMPA受容体の細胞内ドメインに結合する様々なタンパク質による輸送制御機構が判明してきたが、それだけでは説明できない現象が残されている。この問題解決の鍵を握る機構の一つは、AMPA受容体細胞外ドメインと脂質ラフトや細胞外基質に存在する糖鎖との相互作用である。一方、より長期に持続する記憶にはシナプス形態変化が伴う。成熟と共に神経細胞周囲に発達するプロテオグリカンは小脳神経細胞にも存在することから糖鎖と小脳長期記憶との関連が疑われている。神経活動亢進に伴うAMPA受容体輸送経路について解明を進めた。これまで長期増強(LTP)刺激によって樹状突起の棘突起付近にエキソサイトーシスされてくるAMPA受容体が分泌されるとともに、ライソゾームからの分泌が起きることを明らかにした。ライソゾーム分泌は免疫細胞などで知られていたが、神経細胞における存在や機能は不明であった。免疫細胞においてライソゾーム分泌に関与することが分かっている分子を阻害することにより、神経細胞においてLTP誘導刺激によるAMPA受容体輸送が抑制された。

またLTP誘導刺激によってライソゾーム酵素の一部が分泌される過程の可視化にも成功した。これらの酵素の働きによって神経細胞周囲のプロテオグリカンが減少することが分かった。神経活動が亢進して棘突起付近にエキソサイトーシスされたAMPA受容体は、ライソゾーム酵素によって棘突起周囲のプロテオグリカンが分解されることによりシナプスに側方拡散され易くなるという仮説に至った。糖鎖による機能的・形態的シナプス可塑性制御機構を解明するために、本年度は次の2つの研究を実施した。1)シナプス可塑性誘導時における細胞外プロテオグリカンの改変機構の解明:シナプス可塑性のモデルである長期増強(LTP)はAMPA型グルタミン酸受容体の分泌によって起きる。これまでに、LTP誘導刺激によってAMPA受容体に加えてライソゾーム酵素の一部が分泌され、神経細胞周囲のプロテオグリカンが一時的に減少することを発見した。このようなライソゾーム分泌はこれまでに神経細胞においては知られていなかった新しい現象である。そこでこの現象の生理的意義についてさらに解明を進めた。現在、論文化にむけて準備中である。2)ゴルジ体ストレス反応における糖鎖修飾と神経機能の関連:神経細胞におけるゴルジ体は、通常は一番長い樹状突起の根元の細胞体や、主要な樹状突起の分岐部分に存在する。このことからゴルジ体が、細胞膜や膜タンパク質を供給することにより、一方向性樹状突起の形成・分化に関与することが示唆されている。またゴルジ体における膜タンパク質への糖鎖修飾の異常がAngelman症候群での神経症状に関与することも示唆されているが、その因果関係や分子機構はよく分かっていない。そこでこれまでに開発を続けてきたゴルジ体の機能を光遺伝学的方法によって制御する方法を更に改良し、小脳プルキンエ細胞の樹状突起形成やシナプス可塑性における、ゴルジ体機能について解明を進めた。現在論文化に向けて準備中である。中・長期に持続する記憶・学習は、シナプス後部におけるAMPA受容体の輸送によって担われ、より長期に持続する記憶はシナプスの形態変化が伴う。本研究では小脳神経回路をモデルとし、糖鎖科学と神経科学的アプローチを融合することによって、機能的・形態的シナプス可塑性を制御する分子機構の解明を目指した。まず、シナプス可塑性のモデルである長期抑圧や長期増強時には、AMPA受容体はライソゾーム様細胞内プールから出入りし、ライソゾームに存在する糖鎖分解酵素が大きな働きをすることが分かった。またプルキンエ細胞への子宮内電気穿孔法と時期特異的遺伝子操作法を確立し、樹状突起とシナプス形態形成過程の分子機構を解明した。中・長期に持続する記憶・学習の実体は、シナプス後部におけるAMPA型グルタミン酸受容体の輸送によって担われており、その制御機構の解明は神経科学の最重要課題の1つとなっている。AMPA受容体の輸送は、細胞内分子のみでなく、脂質ラフトや細胞外基質に存在する糖鎖とAMPA受容体との相互作用によって制御されるがその詳細は不明である。
歯質リサイクル型骨補填材料の開発

歯周組織や顎堤部における少量の骨再生が,臨床上重要な効果をもたらすと考えられる.本研究は抜歯後捨てられてしまう歯を利用して,骨補填材として利用可能かどうか,まずは動物実験を用いて検討したものである.ラット切歯を抜歯後に粉砕し,基材であるヒドロキシプロピィルセルロースと混和して使用した.補填材は抜歯窩と頭蓋骨の骨欠損部に〓入した.マイクロCTと組織学的観察の結果,今回用いた粉砕歯は〓入後もその部位に残留し,骨形成の核となることが見出され,本材料の有用性が示唆された.歯周組織や顎堤部における少量の骨再生が,臨床上重要な効果をもたらすと考えられる.本研究は抜歯後捨てられてしまう歯を利用して,骨補填材として利用可能かどうか,まずは動物実験を用いて検討したものである.ラット切歯を抜歯後に粉砕し,基材であるヒドロキシプロピィルセルロースと混和して使用した.補填材は抜歯窩と頭蓋骨の骨欠損部に〓入した.マイクロCTと組織学的観察の結果,今回用いた粉砕歯は〓入後もその部位に残留し,骨形成の核となることが見出され,本材料の有用性が示唆された.抜去した歯を再利用して骨補填材料を開発する目的で,ラット使用した動物実験を行った.Wistar系雄性ラットの片方の切歯を抜歯した後,凍結粉砕機を使用して歯を粉砕し,結合材としてヒドロキプロピルセルロースと混和して補填材を調整した.また,補填材の操作性を向上させる目的で,補填材にアルギン酸をゲル化したものを追加する実験も行った,これは,骨補填材を局所に保持してその効果を高める狙いがある,この補填材を抜歯窩に用いた時の初期の生物反応について,組織学的観察を行った結果,抜歯窩の治癒には殆ど影響を与えなかった。骨補填材の骨形成に及ぼす効果については,μCTを用いた三次元骨形態計測法を用いた評価を行った。すなわちコンピュータ上にてCT画像を三次元構築し,測定領域を抽出した後,骨形成量と骨密度を評価項目として検討した.抜歯窩にこの材料を填入すると,術後2週の骨形成を1,4倍,4週に至ると約1.5倍の骨が形成された.骨密度計測においても増加傾向は認められたが,有意な差は認められなかった.一方,結合材であるヒドロキシプロピルセルロースのみを使用した場合でも,術後4週において,有意な骨形成量の増加が認められた,このことは,生理活性を持たないといわれるヒドロキシプロピルセルロースが,骨形成の場において,何らかの効果を持つことが示唆され,現在頭蓋骨欠損モデルを使用して,更に検討を行っている.審美と機能を兼ね備えたインプラントによる修復のためには,しばしば骨造成の必要がある,いくつかの骨移植材が紹介されているが,自家骨移植が現在の標準治療である.この材料による治療の欠点は,それが高価であることである.我々は普段は捨ててしまう歯に注目し,これを使用した新しい骨移植材の開発を目指している.今回は動物実験により,雄性ラットの頭蓋骨と切歯の抜歯窩を利用して,今回の新しい材料の可能性を探った.抜歯された切歯は凍結粉砕して,基材であるヒドロキシプロピルセルロースと混ぜ,頭蓋に作った欠損と抜歯窩に注入した.治癒期間の後,標本として取り出しマイクロCTと病理組織学的に観察した.マイクロCTで得られた画像から三次元画像を構築した.抜歯窩モデルでは4週間後には骨形成が終わり,骨改造の段階に移っていたが,頭蓋欠損ではまだ新生骨により埋まっていなかった.抜歯窩では根尖部を除き成熟した骨が形成されていた.組織形態的評価では,4週間後に実験群において骨体積が対照群に比べて161%に増加した.骨塩量も30%増加がみられた.組織学的観察では,移植材による免疫拒絶反応も起こらず,根尖部に更に成熟した骨がみられた.面白いことに,基材のみでは二週後には骨形成量が減少したが,4週後には159%まで増加がみられた.一方頭蓋欠損モデルではどの材料でも欠損は埋まらなかった.今回の研究により,粉砕歯牙を利用した骨移植材はある程度の可能性を見出すことができた.この材料は安全で低コストであり,限定的な骨誘導能をもっている.今年度は抜歯窩及び頭蓋骨欠損部に,粉砕歯とヒドロキシプロピルセルロースを混ぜたゲル状の材料を填入し,骨形成に及ぼす影響を調べる目的で,μCTを使用して,同一個体で経時的な観察を行った.また,粉砕した歯は生体内において,吸収して骨に置き換わるのか,残存して骨形成の核となるのかを検証するために,組織切片を作成し,歯の象牙質に特異的な蛋白であるDMP-1の抗体を利用して免疫染色を行った.免疫染色には,酵素抗体法と蛍光抗体法を用いた.その結果,粉砕歯の粒子が小さい場合,酵素抗体法より,抜歯窩内の結合組織にDMP-1陽性に染色された組織像が確認できた.また,蛍光抗体法よりマクロファージ様の多核細胞に取り込まれている組織像が観察された.更に粒子が大きい場合は,粉砕歯の周囲で骨再生が起こっている組織像が観察された.更に填入後4週において,粉砕歯が抜歯窩に存在していることが確認できた.填入した粉砕歯は吸収され,骨に置換されると考えられていたが,今回,粉砕歯の粒子の大きさの違いにより,骨再生の核となるか,あるいは貪食されることにより二次的骨形成に関与するという,二つの様相があることが示唆された.

一方,頭蓋骨欠損部に填入したモデルでは,μCTによる硬組織画像解析の結果,対照群とくらべて骨形成量が多い傾向が見られたが,有意差は認められなかった.今回の研究により,粉砕歯を利用した骨移植材は骨形成を促進に役立つことが示唆されたが,骨誘導能は限定的なものであることが判明した
高齢者・障害者施設の利用者のインターネット・SNSトラブルと利用施設の対策

本研究は、高齢者・障がい者施設の利用者のインターネット・SNSトラブルと利用者施設の対策をテーマとして、当該関係者のインターネット・SNSをめぐる情報セキュリティ、プライバシー保護等をいかに図るかについて検討を行った。内容は、第1に、インターネット・SNSの法律問題を包括的に検討した。例えば、1高齢者・障がい者という施設利用者と関係者の情報流出、2個人情報取扱業者の責任、3ネットトラブルと損害回復の方法等である。第2に、インターネット・SNSに関する施設利用の判断能力の段階毎の対応、第3に、高齢者・障がい者施設の運営法人のガバナンス・役員責任のあり方を法人類型別に考察した。「高齢者・障がい者施設の利用者のインターネット・SNS・トラブルと利用施設の対策」をテーマとして、1インターネット・SNSをめぐる各種法人の情報セキュリティ、プライバシー保護のあり方、2インターネット・SNSに関する高齢者・障がい者の判断能力別の対応、3施設利用者がインターネット・SNSを通じて外部の者とのトラブルが施設運営法人に与える課題、4施設運営法人がインターネット・SNSを通じて外部の者とのトラブルルが施設利用者に与える課題、5インターネット・SNSをめぐる高齢者・障がい者施設の運営法人のガバナンスおよび役員責任、6インターネット・SNSのトラブルから高齢者・障がい者の資産保護のあり方、等の課題について、インターネット・SNSの法律問題を包括的に検討する。例えば、1利用者・顧客情報の流出、2不正アクセスと情報の漏えい、3個人情報取扱業者の責任(TBC事件、マンション業者の顧客名簿の開示等)、4インターネット・SNSのトラブルと損害回復の方法(インターネットの契約成立時期・情報プログラム債務不履行・ネット記載記事の不法行為・ネット掲示板の名誉棄損・データ通信とお高額課金等)、5不正ドメインの使用(ジャックス事件、タウンページデータベース事件等)、6クラウド事業者の責任(データ受託者の保管責任、まねきTV事件等)、7知的侵害(運営施設法人の知的財産の侵害・ブログの著作権侵害とう法的手段等)、8刑事責任(ウエブショッピングと詐欺・不正ダウンロード等)を考察する。実証研究を重視するため、1わが国の高齢者・障碍者施設の運営法人(社会福祉法人・医療法人等)に対するヒヤリング、諸外国におけるインターネット・SNSトラブルと各種法人の情報セキュリティ・プライバシー保護のあり方を検討する。本研究は、『高齢者・障がい者施設の利用者のインターネット・SNSトラブルと利用者施設の対策』をテーマとして、インターネット・SNSをめぐる情報セキュリティ、プライバシー保護を、1高齢者・障がい者施設においてどのように対策を取り、2利用施設の対策、3インターネット・SNSに関する高齢者・障がい者の判断能力別の対応と法的課題の検討を行う。類型すれば、1高齢者・障がい者という施設利用者と施設運営法人との間で生じる問題、2施設利用者がインターネット・SNSを通じて外部の者とのトラブルが施設運営法人に与える問題、3施設運営法人がインターネット・SNSを通じて外部の者とのトラブルが施設利用者に与える問題等がある。これら内容を考察するうえで、第1に、インターネット・SNSの法律問題を包括的に検討する。例えば、1利用者・関係者の情報流出、2個人情報取扱業者の責任、3ネットトラブル(ネット掲載の不法行為、名誉棄損、データ通信と高額課金等)と損害回復の方法等がある。第2に、インターネット・SNSに関する高齢者・障がい者の判断能力別の対応と法的課題として、利用者の判断能力の段階毎の対応、家族の協力が得られることの有無、第3に、高齢者・障がい者施設の運営法人のガバナンスおよび役員責任のあり方を、法人類型(一般法人、社会福祉法人、宗教法人等と株式会社との比較)で検討する。そして、高齢者・障がい者施設の利用者の資産保護・名誉保護をいかに図るのかを提言している。また、民法改正案にも触れ、本件テーマへの影響を考察している。平成26年に会社法改正および金融商品取引法改正が多岐にわたる項目であり、そのための書籍および論文執筆に多忙であり、本件テーマを遂行する時間が十分にとれなかったため。リサーチ・マップに詳細を掲載商事法実証研究を重視するため、高齢者・障碍者施設の運営法人を積極的にヒヤリングをしたい。また、諸外国の動向の現地調査をしたい。研究は前記実績をより具体化していくが、が、民法改正が現実化する可能性が大きく、そのため執筆活動が多忙となる可能性があり、本件研究に影響を及ぼす懸念がある。平成26年に、会社法改正および金融商品取引法改正があり、それに関連する書籍および論文の執筆に多大の時間を費やすことになり、本件テーマの研究に十分な時間をとることができなかったため。研究計画に従い、研究内容を実践していく予定であり、実証研究を重視するため、現地調査を行う。
下オリーブ核ニューロンの運命決定と神経回路形成の分子メカニズム

下オリーブ核ニューロン前駆細胞に発現するGsx2、Ptf1aに着目し、ゼブラフィッシュ変異体を用いて、軸索投射を制御する分子機構の解明を目指した。Gsx2、Ptf1a各々の変異体では、下オリーブ核ニューロンの数が減少することがわかった。その際、Ptf1aは、下オリーブ核ニューロン、プルキンエ細胞、crest細胞のような後脳ニューロンの分化に共通に必要な因子として働く一方で、Gsx2は、下オリーブ核が分化する第7菱脳節のパターン形成にかかわるレチノイン酸シグナルによって誘導され、下オリーブ核ニューロンの細胞運命を方向づけることで、下オリーブ核ニューロンの分化を制御することを見出した。神経回路は、ニューロンどうしが軸索と樹状突起を介して正確に結合することで成立する。この形成過程について、ゼブラフィッシュの下オリーブ核ニューロンをモデルとし、正確な軸索投射を制御する分子機構の解明を目指した。下オリーブ核ニューロン神経前駆細胞に発現するGsx2、Ptf1aの細胞分化・細胞移動に関する役割について、変異体とトランスジェニック(Tg)ゼブラフィッシュを用いて解析した。下オリーブ核ニューロンをGFP標識するトランスジェニック(Tg)系統を用いた解析から、gsx2またはptf1aのホモ接合体では下オリーブ核ニューロンの減少がみられたことから、Gsx2、Ptf1aの両者が下オリーブ核ニューロンの形成に関わることを見出した。両者の遺伝子カスケードの位置関係を明らかにするために、gsx2-/-個体でptf1aの、ptf1a-/-個体でgsx2の内在性の発現を検索した結果、どちらの発現も変化は見られなかった。よって、2遺伝子は上下関係にはなく、独立または協調的に下オリーブ核ニューロンの分化に関わることが示唆された。gsx2変異体でのgsx2:RFP、ptf1a:GFPの発現を検討すると、前駆細胞は観察されるが下オリーブ核での発現が減少した。一方、caspase3抗体による免疫染色でもアポトーシスは検出されなかったことより、Gsx2は前駆細胞からの正常な分化に必要と予想された。さらに、後脳前後軸位置情報の登上線維のtopographic map形成における役割の解明のため、下オリーブ核ニューロンが由来する菱脳節6-8番の神経前駆細胞の位置情報を制御する因子群のノックダウン実験を試みた中で、raldh2遺伝子のノックダウン解析により、後脳前後軸位置情報が重要な可能性が見えてきた。これまで、gsx2、ptf1a変異体において、Tgゼブラフィッシュによる表現型観察を中心的に行い、ほぼ計画通り行うことができた。しかし、軸索投射レベルからの解析については遅れている。具体的には、小脳に蛍光色素DiIを注入することによる逆行性の登上線維の染色を試みたが、これにはまだ実験手法上の改良の必要がある。これと関連して、登上線維の軸索形成過程の観察については解析が進んでいない。Gal4 Tg系統を用いて、神経回路を詳細に識別する方法、すなわちTol1 transposonを用いてUAS:Kaedeレポーターを少数細胞に導入する観察手法や、Cre依存的に多色蛍光タンパクを発現するUAS:Zebrabowシステムを用いた解析も、安定した実験条件を確立する必要がある。神経回路の形成過程について、ゼブラフィッシュの下オリーブ核ニューロンをモデルとし、正確な軸索投射を制御する分子機構の解明を目指した。本研究では、下オリーブ核ニューロン神経前駆細胞に発現するGsx2、Ptf1aの細胞分化・細胞移動における役割について、変異体とトランスジェニックゼブラフィッシュを用いて解析した。昨年度の解析から、Gsx2、Ptf1aの両者が独立または協調的に下オリーブ核ニューロンの分化に関わること、またgsx2の発現に、後脳菱脳節の神経前駆細胞の位置情報を制御する因子が関与することが示唆された。よって、本年度は、後脳領域の前駆細胞からどのような分子制御によって下オリーブ核ニューロンが形成されるかについて、詳細な解析を行った。第5-6菱脳節で発現する転写因子Mafbaのホモ変異体を解析したところ、gsx2の発現領域が拡大した。一方、下オリーブ核が分化する第7菱脳節のパターン形成にかかわるレチノイン酸シグナルを合成酵素Raldh2のノックダウンにより阻害した結果、gsx2の発現領域が縮小した。よって、gsx2の発現に対して、レチノイン酸シグナルが促進的に働き、下オリーブ核ニューロンの分化を制御することが示された。またPtf1aについては、変異体の解析から、下オリーブ核ニューロンだけでなく、プルキンエ細胞、crest細胞の分化にも関わることがわかった。これらのことから、Ptf1aが、後脳ニューロンの分化に共通に必要な因子として働き、これに加えて、レチノイン酸シグナルによって誘導されたGsx2が下オリーブ核ニューロンの細胞運命の方向づけに関わると考えている。

その際、Ptf1aは、下オリーブ核ニューロン、プルキンエ細胞、crest細胞のような後脳ニューロンの分化に共通に必要な因子として働く一方で、Gsx2は、下オリーブ核が分化する第7菱脳節のパターン形成にかかわるレチノイン酸シグナルによって誘導され、下オリーブ核ニューロンの細胞運命を方向づけることで、下オリーブ核ニューロンの分化を制御することを見出した。これまで、下オリーブ核ニューロン内在性に発現する遺伝子について、変異体における変化を確認しようと試みたが、発現時期と実験手法の問題により確認できていない。これについては、既存の遺伝子だけでなく、新たな遺伝子の探索の必要もあり、次年度の計画とともに継続の課題となっている。計画している下オリーブ核ニューロンの遺伝子プロファイリングに関しては、現在改良中の逆行性蛍光トレーサーによる蛍光標識も導入する予定であり、まずこの手法の確立を行った上でプロファイリングに取り組みたい。そしてさらに、Gsx2、Ptf1aの下流で機能する遺伝子の同定を行い、下オリーブ核ニューロンの分化・細胞移動の分子メカニズムの解明を目指す。発生生物学予定していた論文投稿費の請求が予定より遅れため、次年度での使用分とした。論文投稿のために使用する。
多電極同時記録法による上丘のセッケード眼球運動制御機構の研究

本研究の研究対象である上丘は小脳との神経線維の連絡があるが、以前からの研究の発展として、まず小脳において、本研究の手法上の主題である多電極記録法を試みた。下オリーブ・プルキンエ細胞投射による多プルキンエ細胞間の自発活動の同期生と周期性が下オリーブ内におけるセロトニンによって、強力に修飾されているという所見を見い出し、発表した(下の研究発表の2、3)。これは、セロトニン系の運動制御への関与の可能性を示すものである。ついで、本研究に必要な、在来のものより優れた多電極同時記録のシステムを作成した。このシステムは、取り込み速度はスパイクの解析に十分な5kHz(256チャンネルの場合)で動作し、チャンネル数は制限なしに増設可能で、また、データ取り込み時間には制約はなく、ハードディスクが一杯になるまで、連続取り込み、あるいは一定時間の反復取り込みができる。多電極のスパイク信号の相互相関解析・発火頻度ヒストグラム分析などを行うプログラムも完成した。本研究の主題であるネコの上丘での実験は現在継続中である。局所の電気刺激によって特定方向への眼球運動が発生することから、視野に大まかに対応する地図の存在を追試できた。しかし、同時に、この地図そのもの、あるいは上丘の関与する眼球運動は麻酔状態に非常に敏感であることがわかった。今後、麻酔なしの慢性記録の状態での実験を行う予定である。また、上丘は聴覚からの信号の入力も受けるので、本研究の一環として行った聴覚受容器の実験の成果として、聴覚受容容器(有毛細胞)にカルシウム依存性のカリウムチャンネルが多く存在することを見い出して発表した(下の研究発表の1)。
江戸時代における参詣街道沿いの地域社会の構造

江戸時代に寺社参詣道沿いの村々が、旅人たちといかなる関係を持ち、それは地域社会の成り立ちにどのような影響を与えたのかを検討した。基礎作業として、熊野街道を対象に、諸国の旅人が著した道中日記260点、善根宿に納められた旅人の納札5000点余、地域社会に遺された算用帳中の旅人救済記録約7000点をデータ化した。その上で道中日記の世界と対比しつつ、地域社会の救済を受けながら旅を続ける貧しき旅人の世界を抽出した。まず基礎作業として,全国の資料保存機関に収蔵される道中記関連資料の収集と歴史街道の調査を進めた。今年度は愛媛県(2007年7月),富山県(9月),福島県会津地方(ll月),埼玉県(2008年2月),長崎県、福岡県(3月)で実施し,道中日記を新たに30数点見出すなどの成果があった。その過程で関連資料たる納経帳や道中案内記の重要性が判明し,今後も引き続き調査作業が必要となっている。また,伊勢参宮街道や熊野街道沿いの調査は,自治体史や他の文化事業と並行して実施し,熊野街道沿いの最大規模の文書群、尾鷲組大庄屋文書の調査を終えるなどの成果をあげた。同文書中の200冊にのぼる算用帳から旅人への救済記録を整理する作業を,アルバイトを雇用しつつ,進めている。分析成果の公表としては,まず2007年5月に熊野市で開催された全国歴史の道会議において,「熊野街道『伊勢路』の特質-江戸時代の道中記から-」と題して講演を行い,道中記から見られる参詣街道の姿,また特に熊野街道に関しては道の多様性(不安定性)という論点について,本研究における基本的な見通しを示した。またll月23日に開催された国際熊野学会において,「江戸時代の巡礼たちと伊勢路-道中記と地域史料から-」と題して研究報告をし,京都、大坂の旅籠屋による参宮街道沿いでの客引きの様相と旅人や地域社会への影響,参宮街道、大和越えの街道と熊野街道との相違,また地域史料を用いて,道中日記の世界とは異なる貧しき旅人の実態などについて検証した。収集した道中日記を地域史料として用いる試みとして,250点の道中記(20点の案内記を含む)から『道中記に描かれた三木里曽根次郎坂太郎坂』を編集、刊行した。江戸時代に伊勢参詣と西国巡礼を行った旅人の旅日記=道中日記の所在調査を進め、群馬県立文書館、茨城県立歴史館、静岡県立歴史情報センター、沼津市立歴史民俗資料館等で新たに25点の道中日記を見出した。また関連史料として書肆が刊行した道中案内記、大坂の旅籠屋らによる定宿帳、旅籠屋と連携しつつ地域的に形成された講帳、旅籠屋の宣伝チラシ・引札類も合わせ調査し、上記機関のほか国立国会図書館、島根県立図書館等で調査・収集を行った。伊勢参宮後に熊野街道を辿った道中日記をこれまでに260点確認したが、その出身地は関東・東北地方で四分の三を占める。内容は形式化した記述が目立ち、実際に見聞していないことも含む。こうした点を踏まえ地域史研究に用いるための方法について検討し、論文にまとめ、交通史研究会例会において報告した。また関連史料も含めて当時の旅文化を支えたシステムについての検討を進めている。地域史料からのアプローチとして、尾鷲組大庄屋文書の財政帳簿に記載される貧しい旅人への救済記録を分析する作業を進めた。江戸中期から幕末にかけて6000件の救済記録があるが、それらを地域・時期・旅の目的・男女・身分などの要素で分け、検討している。その成果の一部は「江戸時代の貧しき旅人と地域社会-尾鷲組大庄屋文書から-」と題して、三重大学人文学部・伊勢湾熊野地域研究センターの研究会において報告した(5月29日)。また三重県教育委員会が行った熊野街道沿い(東紀州地域)の石像文化財調査に助言者として参加し、独自の調査をも行い、共同で報告書『三重県石像物調査報告I』を作成した。道中日記及び関連史料の補充調査を行い、全国の公共機関が所蔵する熊野街道経由の道中日記の複写収集についてはほぼ網羅に近いレベルまで達した。出身地、年齢、性別、村内の位置(階層)、同行者・人数などの詳細情報を含めたデータベースを、報告書に掲載する。熊野街道を経由しない大和越えの道中日記については、未見のものが多く整理が行き届かなかったため、今後の課題としたい。江戸時代の旅人は、伊勢参宮を目的としつつも寺院にも詣で、観音信仰に基づき西国巡礼を志しても神社参詣をしている。この様相は道中日記にも表れるが、江戸時代の民衆信仰における神と仏について、伊勢神宮領をフィールドとして検討を加え、論文にまとめた。

道中日記は裕福な旅人の記録であるが、貧しき巡礼の旅の実態を把握するため、尾鷲組大庄屋文書(尾鷲市中央公民館郷土室蔵)に見られる救済記録と、熊野市大泊町で発見された若山家文書・善根宿納札の調査を引き続き行った。まず救済記録は、18世紀半ばから幕末に至るまでの約7000件の事例について統計的に検討した。旅人の属性(宗教者、障害者、芸能民ら)や地域分布のほか、旅の目的(信仰の様相)、救済金額や病気療養、村送り制度などの救済の実態等について分析した(報告書に論考掲載)。故郷に帰ることなく巡礼地を廻り続ける旅人の姿を抽出できたことが大きな成果であり、これも論文にまとめた。善根宿の納札については、地元団体らと協力して整理を終え、調査報告書を刊行した。道中日記や救済記録に比し著しい特徴として、西国巡礼以外に四国巡礼、六十六部、神社参詣など極めて多種多様な信仰を持つ旅人の姿が見えたこと、女性の比重が高いこと、札所寺院の納札調査で明らかにされた地域分布とは大きく異なること、などが挙げられる。
運動性無月経の女子スポーツ選手における反応性充血時の血管拡張反応の検討

研究の目的:女子スポーツ選手における運動性無月経の問題点を血管内皮機能の面より明らかにする。研究の対象:全国大会レベルの某高等学校女子バレーボール選手。グループ1:運動選手:運動性無月経群(11名)グループ2:運動選手:正常月経周期群(15名)測定項目:本年度は、グループ1および2の測定を行い、グループ2の測定は卵胞期に行った。1)問診、2)身体組成3)血液検査:血計、総コレステロール、HDLコレステロール、中性脂肪、Estradiol、Progesterone、4)反応性充血時の血管拡張反応(血管内皮非依存性血管拡張反応)、5)glyceryl trinitrate(GTN)による血管内皮非依存性血管拡張反応の測定結果:対象者の23名のうち11名(46%)に月経異常を認めた。月経異常群と正常群では、体格、体脂肪率、安静時心拍数、血圧、血算、血中コレステロール、中性脂肪に差は認めなかったが、HDLコレステロールは有意に高値だった。月経異常群では正常群に比べて血中Estradiol濃度は有意に低値であったが、血中Progesteron濃度には有意差は認めなかった。月経異常群においては正常群に比較し、FMD(血管内皮依存性血管拡張反応)は有意に低下しており、GTNによる拡張反応(血管内皮非依存性血管拡張反応)には差は認めなかった。FMDは血中Estradiol濃度との間に有意な正の相関を認めた。以上より、運動性無月経では、血中Estradio濃度の低下によって血管内皮機能が低下している可能性が示唆された。(本研究の成果は英語論文にまとめ,現在投稿中である。)研究の目的:女子スポーツ選手における運動性無月経の問題点を血管内皮機能の面より明らかにする。)研究の目的:女子スポーツ選手におる運動性無月経の問題点を血管内皮機能の面より明らかにする。グループ1:運動選手:運動性無月経群(11名)グループ2:運動選手:正常月経周期群(12名)グループ3:対照群(年齢を一致させた運動していない健常女性)測定項目:本年度は、グループ1および2の測定を行い、グループ2の測定は卵胞期に行った。1)問診、2)身体組成4)反応性充血時の血管拡張反応(血管内皮非依存性血管拡張反応)、結果:対象者の23名のうち11名(46%)に月経異常を認めた。月経異常群では正常群に比べて血中Estradiol濃度は低い傾向を認めたが統計学的には有意ではなく、血中Progesteron濃度にも有意差は認めなかった。研究の目的:女子スポーツ選手における運動性無月経の問題点を血管内皮機能の面よつ明らかにする。研究の対象:高等学校女子バレーボール選手。グループ1:運動性無月経群(11名)グループ2:正常群(15名)測定項目:本年度は、グループ1および2の測定を行い、グループ2の測定は卵胞期に行った。1)問診、2)身体組成4)反応性充血時の血管拡張反応(血管内皮非依存性血管拡張反応):FMD結果:対象者の26名のうち11名に月経異常を認めた。

運動性無月経群と正常群では、体格、体脂肪率、安静時心拍数、血圧、血算、血中コレステロール、中性脂肪,HDLコレステロールに差は認めなかった。運動性無月経群では正常群に比べて血中Estradiol濃度は運動性無月経群で有意に低値であったが、血中Progesterone濃度には有意差は認めなかった。月経異常群のFMDは4.8±2.7%,正常群のFMDは9.8±6.8%と運動性無月経群は正常群に比較し、有意に低値であった。一方、GTNによる拡張反応(血管内皮非依存性血管拡張反応)には両群間に差は認めなかった。さらに、FMDは血中Estradiol濃度との間に有意な正の相関を認めた。結語:以上より、運動性無月経の若年女子スポーツ選手では、血中Estradiol濃度の低下が関連して血管内皮機能が低下している可能性が示唆された。女子スポーツ選手におけるスポーツ傷害のひとつとして,血中Estradiol濃度低下に伴う血管内皮機能の低下を示したはじめての研究であり、これが長期に及んだ場合には、動脈硬化の早期進展にもつながる可能性があり,今後follow up studyが必要と考えられた.