hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ナラティブアプローチによるうつ病者の自殺予防に関する研究

本研究を通して看護者による治療的介入としてうつ病者の自殺予防に貢献する上で、(1)看護師の面接技法の向上、(2)認知行動療法の理解と技術の習得、(3)治療的介入の効果の検証といった看護者の専門的技術に対する「質」の確立が最重要課題であり、早急に教育をすること、さらに行動に繋がるかフォローアップすることが重要であることが分かった。今後は対象者の認知と行動にそれぞれ働きかけ、うつ状態から自殺企図に至らない構造化されたまた個別性を重視した具体的プログラムの作成に取り組みたいと考えている。
北方文化研究の現状に関する調査と学術情報ネットワークの構築

中華人民共和国(平成7年7月4日7月17日)、北欧諸国(デンマーク、フィンランド、スウェーデン、ノルウェー、平成7年8月18日9月10日)、カナダ国(平成7年9月2日9月28日)において、北方研究の拠点である大学、研究機関等を対象に調査研究を実施し、北方文化研究の現状に関する情報を収集するとともに国際学術情報ネットワークの構築を行った。中華人民共和国においては、内蒙古大学、内蒙古博物館を対象に調査を行った。デンマーク国においては、コペンハーゲン大学エスキモー学科、デンマーク国立博物館民族誌部門、デンマーク極地センターの3機関を対象にして調査を行った。フィンランドにおいては、フィンランド国立博物館、国立文化財委員会、ラップランド大学北極センター、イナリ・サーミ博物館を対象にして調査を行った。スウェーデンでは、ストックホルム大学比較宗教学部、北方博物館、国立民族誌博物館を対象にして調査を行った。ノルウェーにおいては、オスロ大学の民族誌博物館および人類学部、ノルウェー民俗博物館、トロンハイム大学事務局、社会人類学部、図書館、大学博物館、およびトロンデラ-グ民俗博物館、トロムセ-大学トロムセ-博物館、サーミ研究センター、言語文学部、社会科学部などの機関を訪問し、調査を行った。さらに、カナダにおいては、ブリティッシュ・コロンビア大学人類学博物館、サイモン・フレーザー大学考古学・民族学博物館・アルバ-タ大学カナダ周極研究所、カルガリ-大学北アメリカ北極研究所、グレンボウ博物館、トロント大学人類学部、ラヴァール大学イヌイット・周極研究部局、マクギル大学北方研究調査センター、カナダ国立文明博物館、連邦政府インディアン問題、北方開発局において調査研究を行った。これら各研究機関において、(1)各研究機関の設立目的、(2)研究機関の事務・管理機構、(3)研究体制とその実施計画、(4)教育体制とその実施計画、(5)調査研究成果の公開方法(出版物、展示物、講演等)、(6)民族学的/考古学的/言語学的/文献学的収集資料、(7)北方研究の問題点と将来計画、について情報資料を収集、整理した。以上、6ヶ国において北方文化研究の拠点となる研究機関を対象に調査を実施し、研究の現状についての最新の情報の把握を行った結果、デンマークではグリーンランド・エスキモーの問題、ノルウェー、スウェーデン、フィンランドではサーミをめぐる問題、カナダではイヌイットおよびインディアンをめぐる問題というように、それぞれの国ごとに個別の問題を抱えるのみならず、研究機関を越えて共通に抱える問題の存在が明らかとなった。具体的には、北方少数民族に対する研究姿勢の問題、北方民族に関する保管資料の当該民族への返還の問題、教育プログラムの充実化の問題、人件費を初めとする経費の問題などである。ただし、経費の問題には、国ごと、研究機関ごとの違いが認められた。特に、カナダの研究機関では経費の削減は大きな問題となっていた。たとえば、ブリティッシュ・コロンビア大学人類学博物館では入場料による収入の確保が重要な問題となっていたし、連邦政府インディアン問題・北方開発局では学生に対する奨学金の削減などが行われていた。これに対し、デンマーク極地センター、ノルウェーのトロムセ-大学やフィンランドのラップランド大学北極センターなどでは、北方研究の拠点の充実化という国家的政策により、経費が比較的恵まれていたことが明らかとなった。今後、本国際学術研究により構築された国際学術情報ネットワークの活用により、北方地域研究の一層の国際協力と研究推進が可能となるものと考えられる。

具体的には、北方少数民族に対する研究姿勢の問題、北方民族に関する保管資料の当該民族への返還の問題、教育プログラムの充実化の問題、人件費を初めとする経費の問題などである。ただし、経費の問題には、国ごと、研究機関ごとの違いが認められた。特に、カナダの研究機関では経費の削減は大きな問題となっていた。たとえば、ブリティッシュ・コロンビア大学人類学博物館では入場料による収入の確保が重要な問題となっていたし、連邦政府インディアン問題・北方開発局では学生に対する奨学金の削減などが行われていた。これに対し、デンマーク極地センター、ノルウェーのトロムセ-大学やフィンランドのラップランド大学北極センターなどでは、北方研究の拠点の充実化という国家的政策により、経費が比較的恵まれていたことが明らかとなった。今後、本国際学術研究により構築された国際学術情報ネットワークの活用により、北方地域研究の一層の国際協力と研究推進が可能となるものと考えられる。
イスラム世界の都市空間構成に関する歴史学的研究ー庭園を中心にー

本年の研究調査は、トルコ、イラン、インドの3国で行なった。羽田、横山がこの3国を順に回り、トルコでは現地滞在中の林佳世子(東大東洋文化研究所)、イランでは小牧、インドでは小倉がこれに参加した。以下、各国別に調査の概要とその結果を記し、その後で全体の成果、今後の研究計画について述べることにする。トルコ:イスタンブルの都市空間において庭園がどのような位置を占めたのかを知ることを主たる調査目的とした。都市を歩き、都市の内外の庭園を実際に訪れて調査した結果、1.イスタンブルをトルコ都市の代表として考える限り、トルコでは庭園は王候のためのものであり、イランのバ-グに相当する都市郊外の庭園兼果樹園の存在は見られなかった。2.今日のイスタンブルに見られる庭園の多くは、19世紀以後のものであり、近代ヨ-ロッパ庭園の影響を受けている。イスタンブルにおけるイスラム的庭園の伝統は、トプカプ宮殿の内廷などごく一部に見られるにとどまる。3.都市住民の憩いのためにの空間として庭園に代わって、モスク、墓廟の中庭の存在が無視できない。4.イスタンブルとブルサを比較すると、都市プラン、空間の機能、建築物の役割など様々な点で相違が見られ、今後、トルコの地方都市の空間構造解明が必要である、などの点が明らかとなった。イラン:テヘラン、エスファハ-ン、シ-ラ-ズ、ヤズド、カ-シャ-ン、カズヴィ-ンの都市形態、諸建造物の配置と機能、庭園の分布などが調査の主眼となった。イラン都市の共通の特微として、1.郊外のバ-グ(庭園兼果樹園)の存在、2.金曜モスク、又は大モスクを中心とし、これにバ-ザ-ル、隊商宿、マドラサなどが加わった複合的宗教、商業空間の存在、が指摘された。また、イスラム庭園の原形が作られたとされるイランにおいても、古くからのプランをそのまま保った庭園はほとんどないこと(現存する最古のは17世紀に作られ、その後様々な改変が加えられている)、従って、ヨ-ロッパ庭園との相互関係を考える際に、現在のイラン庭園を基準とすべきではないかとも確認された。イランにおいても、都市空間の中で、モスク、マドラサ、聖廟など宗教建造物は、重要な機能を有しており、その社会的役割、空間構造の解明が必要である。インド:調査地は、デリ-、ア-グラ-のみであり、調査期間も短かったため、次回の本調査のための予備調査的なものとなった。それでも、問題を庭園と都市空間だけに限っても、中東イスラム世界と比較して、多くの研究材料が存在することが理解された。その主なものとして、以下の3点を挙げておく。1.デリ-(シャ-ジャハ-ナ-バ-ド)は、元来イラン的「イスラム都市」として建設された筈であるが、現在そのプラン、性格は当初とは全く変わっている。その変化の経緯をあとづけることにより、インドにおけるイスラムの変容の一面を捉え直することが可能となろう。2.北インドの庭園は、君主の墓廟をその中心に置いた巨大なものが多い。これとイラン・イスラム世界におけるバ-グとの相互関係はいかなるものであるのか。3.北インドのモスク、聖廟は、基本的にはイランから輸入されたものであるのに、その建築プラン、都市内部での機能は、イランのものとは大幅に異なっている。その変容の過程、意味を考えることは、両文化圏の特微を理解する際に重要である。本研究は、事実上来年度以降も継続するため、その成果はまだ部分的にしか発表されていないが、昨11月22日には、新潟市における公開講演会で、羽田、横山、小牧、小倉の4名が、それぞれ今回の調査の成果をスライドを交えて、一般に公開し、その模様は、新潟テレビで放送された。前近代のある時期(およそ1215世紀)には、イラン文化圏が大きく広がり、今回我々の調査した3国の大半を覆っいた。庭園文化も含めた都市文化が、その後各地でどのように変化していったのか、影響はどの程度残ったのかを見極めることが、今日の各国の文化を考える場合に重要である。そのためには、もう一度イラン文化の根幹を理解し直すとともに、それとトルコ、インド文化との接点を調査することが必要となる。我々の調査は、装いを新たにして、平成3年度以降継続するが、平成4年度には、トルコ、イラン国境の東アナトリアトイラン領アゼルバイジャン、再度北インドの調査を予定している。

3.都市住民の憩いのためにの空間として庭園に代わって、モスク、墓廟の中庭の存在が無視できない。4.イスタンブルとブルサを比較すると、都市プラン、空間の機能、建築物の役割など様々な点で相違が見られ、今後、トルコの地方都市の空間構造解明が必要である、などの点が明らかとなった。イラン:テヘラン、エスファハ-ン、シ-ラ-ズ、ヤズド、カ-シャ-ン、カズヴィ-ンの都市形態、諸建造物の配置と機能、庭園の分布などが調査の主眼となった。イラン都市の共通の特微として、1.郊外のバ-グ(庭園兼果樹園)の存在、2.金曜モスク、又は大モスクを中心とし、これにバ-ザ-ル、隊商宿、マドラサなどが加わった複合的宗教、商業空間の存在、が指摘された。また、イスラム庭園の原形が作られたとされるイランにおいても、古くからのプランをそのまま保った庭園はほとんどないこと(現存する最古のは17世紀に作られ、その後様々な改変が加えられている)、従って、ヨ-ロッパ庭園との相互関係を考える際に、現在のイラン庭園を基準とすべきではないかとも確認された。イランにおいても、都市空間の中で、モスク、マドラサ、聖廟など宗教建造物は、重要な機能を有しており、その社会的役割、空間構造の解明が必要である。インド:調査地は、デリ-、ア-グラ-のみであり、調査期間も短かったため、次回の本調査のための予備調査的なものとなった。それでも、問題を庭園と都市空間だけに限っても、中東イスラム世界と比較して、多くの研究材料が存在することが理解された。その主なものとして、以下の3点を挙げておく。1.デリ-(シャ-ジャハ-ナ-バ-ド)は、元来イラン的「イスラム都市」として建設された筈であるが、現在そのプラン、性格は当初とは全く変わっている。その変化の経緯をあとづけることにより、インドにおけるイスラムの変容の一面を捉え直することが可能となろう。2.北インドの庭園は、君主の墓廟をその中心に置いた巨大なものが多い。これとイラン・イスラム世界におけるバ-グとの相互関係はいかなるものであるのか。3.北インドのモスク、聖廟は、基本的にはイランから輸入されたものであるのに、その建築プラン、都市内部での機能は、イランのものとは大幅に異なっている。その変容の過程、意味を考えることは、両文化圏の特微を理解する際に重要である。本研究は、事実上来年度以降も継続するため、その成果はまだ部分的にしか発表されていないが、昨11月22日には、新潟市における公開講演会で、羽田、横山、小牧、小倉の4名が、それぞれ今回の調査の成果をスライドを交えて、一般に公開し、その模様は、新潟テレビで放送された。前近代のある時期(およそ1215世紀)には、イラン文化圏が大きく広がり、今回我々の調査した3国の大半を覆っいた。庭園文化も含めた都市文化が、その後各地でどのように変化していったのか、影響はどの程度残ったのかを見極めることが、今日の各国の文化を考える場合に重要である。そのためには、もう一度イラン文化の根幹を理解し直すとともに、それとトルコ、インド文化との接点を調査することが必要となる。我々の調査は、装いを新たにして、平成3年度以降継続するが、平成4年度には、トルコ、イラン国境の東アナトリアトイラン領アゼルバイジャン、再度北インドの調査を予定している。
ラットグリオーマ細胞における神経鞘腫由来成長因子(SDGF)の発現と機能解析

【目的】悪性脳腫瘍であるグリオーマにおいてはこれまでに、PDGF,TGF_a,bFGF,IGF-I等の増殖因子の発現が亢進し、また各々のレセプターも発現していることから細胞増殖に深く関与していると考えられている。本研究では、最近、シュワノーマ細胞培養上清より精製され、EGFファミリーに属するシュワノーマ細胞由来増殖因子(SDGF)が、グリオーマ細胞の増殖にどのように関わっているかを明らかにすることを目的とした。ラットグリオーマ細胞である9L,C6,T9等の細胞株では、SDGFが高発現し、またそのレセプターと考えられるEGFレセプターも発現していることより、SDGFはオートクリン増殖因子として機能していることが予想される。このSDGFの発現をアンチセンスRNAで抑さえ、グリオーマ細胞の増殖に与える影響を検討した。【方法】アンチセンスSDGFcDNAをヒトメタロチオネインプロモーターの下流につないだ発現ベクターを構築し、9L細胞に遺伝子導入し、アンチセンスRNA発現株を複数得た。アンチセンスSDGFmRNAの発現はNorthern法により、またSDGFmRNAの発現抑制はSemi-quantitativePCR法にて確認した。得られたクローンを用いて、in vitro(10%血清下),in vivo(ラット皮下腫瘍形成能)での細胞増殖能、腫瘍形成能を親株、或はベクターのみを導入したコントロール細胞と比較検討した。【結果】アンチセンスSDGFmRNAの発現量、内因性SDGFmRNA発現抑制度に相関し、9L細胞の増殖能がin vitroにおいてコントロール細胞と比較し、最大約50%までに、また、in vivoにおいてコントロール細胞移植により形成された腫瘍体積の約20%までに抑制されることがわかった。【結論】以上より、ラットグリオーマ細胞で高い発現が認められるSDGFが、それら腫瘍細胞の増殖、腫瘍形成に関与していることが明かになった。今後、SDGFのhuman counterpartを検索する予定である。
哺乳類胚輸送における透明帯分子の役割に関する萌芽的研究

本研究は、哺乳類卵管内における胚の輸送がどのような分子機構によって支配されているのかの手がかりを得るために行ったものである。1)マウスの卵管膨大部から1細胞期胚を採取し体外で発生させた2細胞期胚、屠畜卵巣卵胞から採取し、体外成熟、体外受精、体外発生させた2細胞期のウシ胚である。これらの胚を、精管結紮雄に交配後約12時間経た偽妊娠ICRマウスの卵管口にキャピラリーを用いて移植した。移植後5日ないし7日に卵管および子宮を摘出し、卵管-子宮接合部の数ミリ上部を切断・分離し、かん流した後、顕微鏡下で回収された胚の種類と数を観察ならびに測定した。移植したウシ胚の子宮への到達率を調べた計23回の実験の結果、ウシ胚を移植して、卵管から平均60±23%が、一方、子宮からは平均4±10%が回収され、ほとんどのウシ胚が卵管に留まっていることが認められた(P<0.001)。2)このようなウシ胚の卵管内滞留が、移植操作による物理的ストレスに起因している可能性も考えれることから、つぎに、2細胞期のマウス胚とウシ胚とを混合して卵管に移植し、それらの子宮への到達率を調べた。その結果、卵管かん流により、平均52±35%のウシ胚が、また、平均5±0%のマウス胚がそれぞれ回収された。これに対して、子宮かん流からは、2±6%のウシ胚と平均35±31%のマウス胚ならびに着床痕が確認された。3)これらの異種胚の卵管輸送の違いの分子機構を知るために、ZP抗体をマウス胚に作用させた実験を行った結果、マウス透明帯に発現しているZP-2や糖質(グルシド)が種特異的胚の輸送に重要な役割を果たしていることが認められた。1.マウス卵管を利用した牛体外受精(IVF)胚の培養を検討した。屠畜卵巣から採取した卵胞卵子をもとに作し、体外で発生させた2細胞期のIVF胚を偽妊娠マウスの卵管に移植し、57日後に、卵管および子宮を灌流することにより胚を回収した。一部の胚は対照として、体外培養を継続した。移植した胚の57.1%(180/307)が卵管より回収され、2.1%(6)が子宮より回収された。回収胚のうち、71.1%が桑実胚あるいは胚盤胞に発生し、一方、体外培養ではそれらに発生した割合は33.8%であった。以上の結果から、マウス卵管を利用した培養法がIVF牛胚の発生率を上げるのに有効な手段であることが示された。2.哺乳類胚の卵管内輸送における卵管の胚認識機構について調べた。1)マウス卵管での異種胚の輸送を調べるため、ウシ胚ならびにマウス胚を偽妊娠マウスの卵管に移植し、一定時間後、卵管、子宮から胚を回収した。ほとんどのマウス胚は子宮へ輸送されたのに対し、ウシ胚のほとんどは卵管膨大部に滞留した。2)ZP2およびZP3の一部ペプチド領域を抗原として作製した各種抗体をマウス胚に作用させ、マウス卵管に移植、回収した結果、各種動物の透明帯に共通ならびにマウス透明帯に特異的なペプチド配列を抗原として作製された抗ZP抗体を作用させた胚で子宮への輸送が有意に阻害された。3)タンパク質、糖質、脂質分解酵素をそれぞれ透明帯に作用させ、移植、回収した結果、ブタ卵では、neuraminidase処理のみで有意な輸送が、マウス胚では、trypsinならびにβ-glucosidase処理胚で有意な滞留が認められた。以上、透明帯表層の特異的ZP分子ならびに糖質が卵管の胚認識機構に重要であることが初めて示された。

3)これらの異種胚の卵管輸送の違いの分子機構を知るために、ZP抗体をマウス胚に作用させた実験を行った結果、マウス透明帯に発現しているZP-2や糖質(グルシド)が種特異的胚の輸送に重要な役割を果たしていることが認められた。
ハラスメントや性差別を生み出す各学問分野の構造分析

共著の学術論文は、不正行為やハラスメントの背景となる可能性がある。また、日本の慣習としての著者の決め方(オーサーシップ)と、グローバルな著者基準との板挟みとの中での葛藤が生じていると考えられる。自然科学系のトップ15大学の教員3000人にアンケート調査をしたところ、回答者の論文に記された著者の14. 1%しか、いわゆるグローバルな基準には当てはまらなかった。また、回答者の38. 8%がこれまで「ギフト・オーサーシップ」(貢献がないのに名前が載ること)や27. 7%が「ゴースト・オーサーシップ」(貢献したのに名前が載らないこと)を経験していると答えた。I文献の収集や議論の検討、II学会に関する情報の収集、III研究者インタビュー調査(理系分野の研究者(建築学・微生物学・物理学・生物学・工学・解剖学・工業化学・情報科学・地球環境科学等)合計15人にインタビュー調査を実施し、それぞれの研究キャリアや研究スタイル、ハラスメントについての考え方や経験などについて聴き取りをした。また、研究倫理問題の専門家1名に、研究倫理や研究成果の評価、オーサーシップをめぐる議論の動向などに関するインタビュー調査を行った。)IV研究交流。これらの作業により、次のような論点を抽出することができた。1)文系分野と比較すると、理系の研究者の業績は、オーサーシップ、発表言語、発表媒体(グローバル化)、論文の文字やページの量、生産する論文の数の平均などにおいて、大きな違いがあること。2)理系の中でも、各学問分野によって、オーサーシップや著者の順番の意味づけなどが異なること。3)い、オーサーシップなどいくつかの研究ルールの変化が起こっており、日本の理系研究者は、旧来の慣習とのダプル・バインドの問題に悩まされつつあること。5)アカデミック・ハラスメントが生じる背景として、オーサーシップや研究費や装置などの「共有」の構造がしばしば語られること。講座制の研究機関とそうでないところでは状況に差異があること。6)講座制におけるハラスメントも語られるが、同時に「理想的な共同研究関係」として、講座制の中での研究体験を有する研究者も少なくないこと。7)科学における不正(ミス・コンダクト)と、大学におけるハラスメント問題とは、密接に関連する問題であるにもかかわらず、これまで別々の主体によって議論が展開されてきたこと。本年度は、前年度のインタビュー調査によってオーサーシップをめぐる問題と自然科学系のアカデミック・ハラスメントが密接に結びついていることがわかったので、1)オーサーシップとハラスメントをめぐる先行研究や議論のサーベイ、および2)日本の自然科学系研究者を対象にする量的調査の設計を行った。具体的には、(1)科学研究の成果公表におけるオーサーシップをめぐる海外の議論・先行実態調査のサーベイ、(2)実際の科学雑誌の投稿規程の情報収集、(3)日本学術会議の会員を中心に自然科学系研究者の研究業績の形式、スタイルについての資料収集と検討をおこない、それらをふまえ、(4)日本での自然科学系研究者のアカデミック・ハラスメントの実態を把握するための量的調査にむけた準備を行った。研究会での議論を続ける中で、オーサーシップのあり方やそれへの意見、それらをめぐるハラスメント経験などは、研究スタイル(多くは分野による)や研究者として育ってくる過程が影響しているのではないかという仮説に行きついた。そこで量的調査で、・オーサーシップをめぐる不当な経験の有無、・オーサーシップをめぐる見解、研究者として育ってきた中での研究室の環境や指導教員との関係の性質、研究に関わる規範などについてひとまず医学系以外の日本の上位15大学の自然科学者に問う量的調査を行う方針を決定し、調査票の作成、対象となる大学・研究機関の選定と、分野の絞り込み、母集団の研究者リストの作成とサンプリング作業、調査票の印刷・発送作業などを行った。医学系以外の日本の上位15大学の自然科学者に問う量的調査の集計、分析作業を実施した。回収率:32.9%(回答者数986名)【研究スタイル等の主な特徴】「大型機器や装置が不可欠」が7割強、「外部資金が不可欠」が8割強、「企業との連携」は3割に留まる。研究室タイプは、いわゆる小講座制タイプが4分の3、研究室レベルでの研究費は1000万円以上が4割強、業績は論文が9割、うち共著者論文9割、英語論文9割、領域による発表スタイルの違いがみられた。【研究規範のありかた】「集団主義的規範」「成果主義」「科学的普遍性に対する信頼」の3つの規範すべて全体として高い傾向性、いずれも年齢、性別、職位による有意な差は無し→年齢による規範意識を想定した予想とは外れる。いずれも領域による違いが確認された(農学はすべて高い傾向性を示した、数学はすべてにおいて低い、工学は、どの領域でも概ね平均的な値を示した)【過去の指導教員との関係】全体で78割は良好な関係があった。

男性の方が「気軽に相談できた」が高く、「人格的に尊敬できた」も男性に高い。「気軽に相談できた」は工学でやや高い。学位別には「研究熱心だった」が理学、医学に高い。講座制タイプの研究室、工学系研究室では、サポーティブだが、自由度は低い。女性は、男性ほどにはサポーティブな環境で、かつ指導教員との良好な関係を経験していない。【論文のオーサーシップ】総計3500人の著者のうち、14.1%、494人だけが厳密にICMJEの基準を満たした人だった。ミドル・オーサーでは下働き的な作業をした者を入れる割合が高くなる傾向があった(17.9%31.1%:ミドル・オーサー全体で22.6%)。単なる「同じ組織の長」というだけの人も、ラスト・オーサーのうちの9.7%・66人、ミドル・オーサーのうちの6.3%・135人、全体の5,8%、存在した。・分野別では、著者数があまり多くない数学を除いて比較した場合、有意な差はみられなかった。38.7%の回答者が「ギフト・オーサー」の経験があり、27.8%がゴースト・オーサーにされた経験がある。この問題に関する見解は両義的であり、さまざまなとらえ方が自由記述欄等に記されていた。
抗腫瘍性抗生物質カプリマイシンA3の構造とDNA活性化の解明

カプリマイシンA_3は協和発酵が放線菌の生産物質から単離、構造決定した抗腫瘍性抗生物質で、プルラマイシン系抗生物質に特徴的なアンスラ-γ-ピロン骨格とピロン環の2位にビニルエポキシド側鎖を持っており、その絶対立体配置は最近(8S,14S,16S)と決定された。カプリマイシンA_3とDNAとの反応は、エポキシドの16位でDNA中のグアニンのN7位と高い効率で共有結合を形成することが示唆されている。グアニンN7位はDNAのメ-ジャーグループ側に位置しており、カブリマイシンA_3はメ-ジャーグループを認識していることが予想された。また、DNAとの反応部位であるエポキシドには、ビニル基が置換しているものの顕著な求電子的活性化は考えられない。本年度は、昨年度本研究により見出したABC環を含むカプリマイシンA_3アナログがDNAのグアニンを選択的に修飾することを利用して、さらに反応性の向上したABC環アナログの両対掌体を合成し、両者のDNAとの反応のジアステレオ選択性を検討した。その結果、カプリマイシンの14位、16位に相当するエポキシド炭素が共にS配置であるABCD環アナログが、R配置である物に比べてはるかに高い反応性をDNAに対して示した。また、連続するグアニンの5'側を選択的にアルキル化することも明らかにした。グアニンN7位はDNAのメ-ジャーグルーブ側に位置しており、カプリマイシンA_3はメ-ジャーグルーブを認識していることが予想された。本年度では、カプリマイシンA_3がDNA中のグアニンN7位に高い反応性を示す理由を明らかにし、DNAのメ-ジャーグルーブを認識、修飾する新規抗ガン剤を設計するために、カプリマイシンA_3の構造及び官能基を削ったアナログの合成を行った。合成したカプリマイシンアナログとDNAとの反応をスーパーコイル状プラスミドの高次構造変化により評価した結果、ABC環を含むカプリマイシンA_3アナログは天然物の約十分の一の活性を有していることを明らかにした。また、放射ラベルしたDNAとの反応解析により、ABC環を含むカプリマイシンA_3アナログは、カプリマイシンA_3と同様DNA中のグアニンを特異的に修飾することを見出した。グアニンN7はDNAのメ-ジャーグループ側に位置しており、カプリマイシンA_3はメ-ジャーグループを認識していることが予想された。本年度は、昨年度本研究により見出したABC環を含むカプリマイシンA_3アナログがDNAのグアニンを選択的に修飾することを利用して、さらに反応性の向上したABCD環アナログの両対掌体を合成し、両者のDNAとの反応のジアステレオ選択性を検討した。

その結果、カプリマイシンの14位、16位に相当するエポキシド炭素が共にS配置であるABCD環アナログが、R配置である物に比べてはるかに高い反応性をDNAに対して示した。また、連続するグアニンの5'側を選択的にアルキル化することも明らかにした。
原癌遺伝子Aktの選択的機能制御と創薬への応用

Aktは、細胞の増殖・生存・運動・極性・小胞輸送・グルコース代謝など、実に様々な過程において必須の役割を果たすキナーゼである。このような様々な機能を発揮する際、Aktは異なる基質をターゲットとしているが、それぞれのコンテクストにおいてAktがどのようにして必要な基質を選択しているのか、というメカニズムは不明であった。本研究では、我々が発見した新規スキャフォールド分子PAKがAktの基質特異性を制御することにより、Aktの細胞運動性/浸潤能に関わる機能を選択的に制御することを示した。多くの重要な機能を持つAktがコンテクストによりどのようにその機能の使い分けをしているのかは非常に興味深い問題であったが、本研究によってそのメカニズムの一端を明らかにすることが出来た。Aktは原癌遺伝子であり、様々な癌で異常な活性化が高頻度に観察されている。また、Aktの異常な活性化は癌の悪性度や抗癌剤耐性とも相関が高いことが報告されている。従って、Akt経路は癌の発生、悪性化、抗癌剤耐性における薬剤ターゲットとして有効であると考えられ、実際に多くのAkt経路を抑制する薬剤が開発されつつある。しかし、Akt経路を制癌の薬剤ターゲットとする際に非常に大きな問題点がある。すなわち、Akt経路は正常細胞の増殖・生存・代謝に重要である上に、Akt2のノックアウトマウスがインスリン抵抗性糖尿病の症状を示すことからも、Akt経路をやみくもに抑制することは生体にとって有害となる可能性が高いと考えられるのである。そこで申請者は「Aktの過度な活性化を抑制する」あるいは「Aktの癌悪性化により関わりの深い機能のみを選択的に抑制する」というストラテジーがAkt依存的な癌悪性化を制圧するのに有効であると考えた。申請者は最近、PAKというキナーゼがAktおよびAktの活性化因子PDK1に結合し、Aktの活性化効率を促進する「スキャフォールド分子」であることを見出した(Higuchi, et.al., Nat. Cell Biol., 2008)。さらに興味深いことに、PAKはAktの基質全てのリン酸化を促進するのではなく、一部の基質のみのリン酸化を促進するという結果を得た。このことはすなわち、スキャフォールド分子PAKがAktのターゲット特異性を制御している可能性を示唆している。そこで本研究では、PAKがAktのターゲット特異性を制御するメカニズムを明らかにすることを目的とした。これまでに、優性抑制型PAKの発現によりPAK依存的な経路を阻害すると、増殖因子刺激によるAktの活性化が部分的に抑制されるが、このときAktの基質であるFOXO3aのリン酸化は部分的に抑制される一方で、GSK3およびBadのリン酸化は抑制されない、という結果を得ている。さらに、PAKがAktの基質特異性を制御することに関連して、PAKがAktの一部の生物学的機能のみを選択的に制御する可能性について検討した。現在までに、PAKとAktの結合を阻害することが期待されるPAK上のAkt結合部位断片(350-407aa)を細胞に導入すると、増殖因子刺激依存的なマトリゲルへの浸潤性の上昇は顕著に抑制されるが、細胞生存およびタンパク質翻訳はあまり抑制されない、という結果が得られた。本研究より、Akt依存的な癌悪性化を制圧するための新しい薬剤ターゲットを提供することが出来ると考えている。申請者はこれまでに、PAKがAktの基質特異性を制御することを見出した。そこで本研究では、PAKがAktの一部の生物学的機能のみを選択的に制御する可能性について検討を行った。PAKとAktの結合を阻害することが期待されるPAK上のAkt結合部位断片(350-407aa)を細胞に導入すると、増殖因子刺激依存的なマトリゲルへの浸潤性の上昇は顕著に抑制されるが、細胞生存およびタンパク質翻訳はあまり抑制されない、という結果が得られた。これらの結果から、PAKがAktの持つ細胞運動性/浸潤能に関わる機能を選択的に制御する可能性が示唆された。さらに、PAKがAktの機能を選択的に制御するメカニズムについて、PAKがAktのアイソフォーム特異的にスキャフォールド分子として機能する可能性に注目して検討を行った。我々の用いている繊維芽細胞にはAkt1とAkt2が発現しているが、Akt1が細胞運動性を促進するのに対し、Akt2は細胞運動性への関与が少ないことをまず明らかにした。そこで、PAKとAkt1、Akt2の関係について調べたところ、PAKがAkt2に比べてAkt1とより強く結合すること、Akt2に比べてAkt1をより強く活性化することが明らかとなった。
ハイパーテキストのネットワーク対応マルチユーザ化によるCAIシステムの開発

本研究では、ハイパーテキストシステムに対して教材提示機能、画面参照機能など、一斉授業やグループ学習を支援するための各種機能の設計、実装を行ない、更にその評価を行なった。具体的には、以下の点を中心に研究および開発を行なった。1.教材提示機能、画面参照機能などの各種機能を統一的に表現できるように従来のハイパーテキストにおけるリンクやノードの拡張を行ない、この拡張に基づいて通信機能の設計、実装を行なった。2.ネットワーク上に分散している教材を管理し、遠隔地にある教材はWWFSやCERN httpdなどを利用してキャッシュすることによりアクセスの高速化を行う教材サーバを設計、実装した。3.高い拡張性を持たせるため、外部拡張機能として他のプログラムを容易に呼び出しできる機構を本システムに設計、実装した。また、この機構の利用例として、リアルタイム通信機能やVTR等の機器の遠隔操作機能などを本システムに拡張機能として実装した。4.上記の拡張機能を一斉授業などの負荷集中時においても十分な性能が得られるように、負荷分散機能を本システムに設計、実装した。また、2台の計算機と2台の端末を接続したシステムにおいて運用実験を行ない、教材提示機能や画面参照機能など、本システムで提供する基本的な機能については動作確認を行った。しかし、負荷分散に関しては、端末の台数が少ないため、効果を確認することはできなかった。なお、本システムでは、動画や音声などを含む教材の表示やリアルタイムの画面提示・参照は、現時点では行っていないが、これについてはQoS(Quality of Service)や同期の取り方にについて今後検討を進めていく予定である。本年度はCAIシステムに必要な機能を整理し,これまで開発してきたマルチメディア・ハイパーテキストシステムを基に本システムの基本設計を行い,その成果を学会などで次頁に示す4件の公表を行った.具体的には,教育支援用のハイパーテキストシステムの開発に向けて,通信機能の設計,教材の共有に関する研究を進めた。今年度は次の4点を中心に,CAIシステムの基本部分を今年度購入の設備であるワークステーションを用いて設計および一部開発を行った.(1)ネットワーク環境やマルチユーザでの使用に対応し、教材の共有が可能な教育支援(CAI)システムを実現するための核となる部分であるハイパーテキスト基本システムをX WindowSystem上で動作するグラフィックス操作言語処理系Tkで開発した.(2)ハイパーテキストシステムにおいて,マルチユーザによる加筆修正を考慮した教材の共有と部品単位の共有について検討し設計した.(3)UNIX上であるユーザから特定のユーザのグループに対して同一のメッセージを送出する機能(マルキャスト)を設計した.(4)一斉授業でのアクセス集中に対する対策として、負荷分散に関する基礎的研究を行い,新しい負荷推定方式を提案した.なお,本年度の反省としては,当初申請した設備が交付された金額で購入できなかったため,開発済みのハイパーテキストシステムが移植できず,研究の遂行に大幅な遅れを生じた.今年度に予定していたユーザインターフェースの設計ができなかった.本年度は昨年度におけるシステムの基本設計に引続き,通信機能の基本設計や負荷分散機能の設計ならびに基礎実験を行い,その成果を学会などで次頁に示す6件の公表を行った。具体的には,分散型教育支援用ハイパーテキストシステムにおける通信機能の実装,ウィンドウ環境におけるリアルタイム通信システムの開発,異機種混在環境における動的負荷分散機能の実装に関する研究を進めた。今年度は次の3点を中心に,CAIシステムの基本部分を今年度購入の設備であるワークステーションおよびパーソナル・コンピュータを用いて設計および一部開発を行った。1.通信機能の設計と実装において、1対1の通信,1対多の通信形態をハイパーテキストシステムの外部に通信サーバを設けることにより実現した。2.分散型教育支援システムにおける教材サーバの設計をNFSとamdを用いて行った。3.動的負荷分散によるCAIシステムの高速化について検討し,負荷分散アルゴリズを設計した。

なお,端末数が不足していたため,設備備品費で購入予定であったワークステーション(Sun Microsystems社SPARC-station IPX)をより高速で安価な後継機種のS-4/LXに変更し,差額を教官用端末用パーソナルコンピュータ(Apple Computer社Macintosh Quadra 840AV)に充当した。しかし,当初計画していたCAI基本システムの実現が初年度で大幅に遅れたため,通信機能についても実装の段階で遅れが生じている。さらに,ユーザインターフェース部分のCAIシステムへの組込みが遅れている状況にある。本年度は昨年度までの通信機能や負荷分散機能の設計及び基礎実験に引き続き、通信機能、教材管理機能、負荷分散機能及びいくつかの拡張機能の実装を行ない、その成果を学会などで公表した。具体的には、以下の点を中心に研究及び開発を行なった。1.本システムで提供する教材提示・画面参照機能などの各種機能を統一的に表現できるように従来のハイパーテキストにおけるリンクやノードの拡張を行ない、この拡張に基づいて通信機能の実装、改良を行なった。2.一般ユーザとのリアルタイム通信機能やVTR等の各種機器の遠隔操作機能などを本システムに拡張機能として実装し、本システムの拡張性を確認した。3.ネットワーク上に分散している教材を管理し、遠隔地にある教材はWWFSやCERN httpdなどを利用してキャッシュして教材へのアクセスの高速化を行なう教材サーバを実装した。4.負荷分散機能を異機種混在環境でも適応できるように改良し、本システムに実装した。また、マルチメディア教材格納用ワークステーション(平成4年度調達設備)、学生用ワークステーション、教官用端末(平成5年度調達設備)、学生用端末(平成6年度調達設備)を接続した環境において運用実験を行ない、教材提示機能や画面参照機能など、本システムで提供する基本的な機能については動作確認を行なった。しかし、負荷分散に関しては、端末の台数が少ないため、負荷分散による本システムの高速化が十分期待できるにもかかわらず、実際に確認することはできなかった。なお、本システムでは動画や音声などを含む教材の表示やリアルタイムの画面提示・参照は、その困難さから現時点では行なっていないが、これについてはQoS(Quality of Service)や同期の取り方について、今後検討を進めていく予定である。
日本語の複文構造が文の読みやすさ／読みにくさに及ぼす影響についての研究

従来、直観的・感覚的にしか言及されてこなかった、文の読みやすさ・読みにくさに対して、文の統語構造の視点から明示的な指標を与えることを目的として研究を行なった。具体的には、名詞を修飾する連体修飾節や、いわゆる接続助詞に導かれる節などの複文構造、すなわち文中に文が埋め込まれた構造が文の読みやすさ/読みにくさに及ぼす影響を、スコット・フィッツジェラルドの小説The Great Gatsbyの複数の翻訳からデータを採集し、相互を比較することによって検討した。本研究の目的は、従来、直観的・感覚的にしか言及されてこなかった、文の読みやすさ/読みにくさに対して、文構造、とりわけ名詞を修飾する連体修飾節、いわゆる接続助詞に導かれる節(以下、「接続節」と呼ぶ)などの複文構造という視点から明示的な指標を与えることにある。そこで、本研究においては、連体修飾節や接続節などの複文構造が文の読みやすさ/読みにくさにどのように影響するかを、ある程度まとまった量のデータをもとに検討する。ここではデータとして外国語を日本語に翻訳したものを用いる。これは、以下のような事情による。読みやすさ/読みにくさを検討する手法としては、同一事象を複数の書き手が記述したものを比較することが有効である。外国文学の、複数の翻訳者による翻訳は、そのような条件を満たしている。本年度に行なった具体的な作業は以下のとおりである。(1)The Great Gatsby(F. Scott Fiztgerald)原文から、関係節、及び従位接続詞の導く節、および分詞構文を含む文を抽出する作業を進め、完了した。これとと並行して、翻訳文の構造情報としてどのような情報を付加すべきかの検討を進め、暫定的な情報付加の仕方を決定した。(2)英語の原文(Nine Stories, The Grapes of Wrath)から関係節、及び従位接続詞(as, when, thoughなど)の導く節を含む文を抽出する作業を開始した。(3)The Great Gatsbyの翻訳(5種類)から、(1)で抽出した原文一文に対応する箇所を抽出、原文と共にExcelファイルに入力した(アルバイタ作業)。(4)(3)のアルバイタ作業による入力データを用いて、(2)で暫定的に定めた情報の適切性を検証した。(5)翻訳実務に携わっている翻訳者に協力を求め、分析方法等への助言を得るため、検討会を行なった。本研究の目的は、従来、直観的・感覚的にしか言及されてこなかった、日本語文の読みやすさ/読みにくさに対して、文構造、とりわけ名詞を修飾する連体修飾節、いわゆる接続助詞に導かれる節(以下、「接続節」と呼ぶ)などの複文構造という視点から明示的な指標を与えることにある。読みやすさ/読みにくさを検討する手法としてhあ、同一事象を複数の書き手が記述したものを比較することが有効である。(1) The Great Gatsby (F. Scott Fiztgerald)原文から抽出した関係節、従位接続詞の導く節、分詞構文を含む文に対応する訳文を、5種類の翻訳から抽出し、Excelファイルに入力する作業を進めた。(2)抽出されていなかった原文、すなわち関係節、従位接続詞などを含まない原文のうち、翻訳文で連体修飾節を用いているものを抽出し、(1)と同様に入力作業を行なった。(3)翻訳実務に携わっている翻訳者に協力を求め、分析方法等への助言を得るため、定期的に検討会を行なった。本研究においては、連体修飾節や接続節などの複文構造が文の読みやすさ/読みにくさにどのように影響するかを、ある程度まとまった量のデータをもとに検討した。データとして用いたのは、外国語を日本語に翻訳したものである。研究機関内に行なった具体的な作業は以下のとおりである。(A)The Great Gatsby(F. Scott Fiztgerald)原文から、関係節、及び従位接続詞の導く節、および分詞構文を含む文を抽出する作業を進め、完了した。これと並行して、翻訳文の構造情報としてどのような情報を付加すべきかの検討を進め、暫定的な情報付加の仕方を決定した。(B[The Great Gatsbyの翻訳(5種類)から、(1)で抽出した原文一文に対応する箇所を抽出、原文と共にExcelファイルに入力した(アルバイタ作業)。アルバイタ作業による入力データを用いて、暫定的に定めた情報の適切性を検証した。(C)

翻訳実務に携わっている翻訳者に協力を求め、分析方法等への助言を得るため、定期的に検討会を行なった。従来、直観的・感覚的にしか言及されてこなかった、文の読みやすさ・読みにくさに対して、文の統語構造の視点から明示的な指標を与えることを目的として研究を行なった。具体的には、名詞を修飾する連体修飾節や、いわゆる接続助詞に導かれる節などの複文構造、すなわち文中に文が埋め込まれた構造が文の読みやすさ/読みにくさに及ぼす影響を、スコット・フィッツジェラルドの小説The Great Gatsbyの複数の翻訳からデータを採集し、相互を比較することによって検討した。本年度は主として次の二つの作業を進めた。(2)抽出されていなかった原文、すなわち関係節、従位接続詞などを含まない原文のうち、翻訳文で連体修飾節を用いているものを抽出し、(1)と同様に入力する作業(1)(2)はほぼ完了し、点検作業を行なっている段階である。日本語学引き続き、検討対象となる用例の抽出・入力を進め、データベースの完成をめざす。蓄積したデータを用いて、日本語分の読みやすさ/読みにくさを左右する要因の特定を行なう。原文では関係節や従位接続詞などを含まないが、翻訳文では連体修飾節を用いている用例が一定数検出されている。このような用例を追加採録することで、さらに新しい知見が得られるものと期待される。The Great Gatsby(F. Scott Fiztgerald)原文から、対象となる用例の抽出を終え、データ入力もほぼ予定通りに進んでいる。その過程で、入力の際の注意点・検討事項も明らかになった。また、日本語文の読みやすさ/読みにくさを左右する要因として複文構造、文の構成要素の提示順など有力と思われるものがいくつか浮かびあがっている。引き続き、検討対象となる用例の抽出・入力を進め、データベース構築をめざす。蓄積されたデータを用いて、日本語文の読みやすさ/読みにくさを左右する要因の特定を行なう。データ入力のためのアルバイタ作業が予想よりも早く進んだため。翌年度のデータ入力謝金として用いる予定である。
樹木細胞壁の二次壁構造を模倣したセルロース材料の創製

樹木細胞壁の二次壁の特徴は、他の壁組織に比べ多量に存在するリグニンとその化学構造である。本研究では、二次壁模倣材料の創出を目的に、二次壁リグニン模倣高分子を創製して、その物性を明らかにした。さらに、ハニカムパターン化セルロースにリグニンを吸着させて二次壁模倣セルロース材料を創製して、その物性解析からリグニンが高湿度における細胞壁の強度低下を抑制することを見出すと共に、木材成分のみで高強度材料を創出できることを明らかにした。本研究は、樹木中で細胞の原形質が配列している状態を模倣した高分子材料を鋳型として作成し、その鋳型の周りにセルロースを人為的に堆積させることで、樹木二次壁の模倣材料の創製を目的としている。そこで、本年度は、鋳型の作成と、微小セルロース材料の力学特性を測定する機器の開発を行った。鋳型は二種の方法を検討した。一つは、木材の小片に粘稠なシリコン系ポリマーを流入し、硬化後、生成したエラストマーを小片から引き剥き鋳型を作成する方法である。この方法では、木材の空洞化した細胞の形態をよく反映した鋳型が作成できたが、長さが5mm程度であり、セルロースを堆積させるための酢酸菌の培養には、不適であった。そこで、第二の方法として、長い合成繊維を等間隔で巻き取る装置を試作して、酢酸菌の培養を試みた。この鋳型を用いると、任意な角度で培養が可能であったが、鋳型の内部まで菌の侵入が見られず、鋳型の極表面にしかセルロースが堆積しなかった。この理由は合成繊維を用いた結果と考えられるので、現在繊維表面を菌体に適合するよう改質を試みている。上記の方法で得られるセルロース材料は1cm^2程度のものであり、従来の強度試験機では、力学特性の評価に支障を来たす。そこで、本年度は微小な薄膜でも引っ張り強度が測定できる試験機を設計・試作した。この機器は、歪を測定するために、マイクロメーターとCCDカメラが附置されている。それにより、破壊過程をリアルタイムにモニターすることができ、さらに、微小なロードセルを用いることで、従来の機器より2桁程度小さな応力でも測定可能となった。この機器を用いることで、薄膜のセルロースは、ブロック状のセルロースとは異なる力学特性を発現することが見出された。現在、多孔質膜の引っ張り強度試験を行い、空洞と膜厚との関係を精査中である。当該年度は、昨年度作成した微小サンプル用引張試験機を用いて、人工細胞壁骨格となるハニカムパターン化セルロースフィルムの力学特性について検討した。その結果、引張強度はハニカムの孔径と負相関があることが示され、フィルムの強度はセルロース量に依存することが明らかとなった。より樹木細胞壁に近いモデルとして、前述のセルロースに単離リグニンを吸着させて、構成成分模倣人工細胞壁を調製した。この材料の引張強度を、常温低湿度と高温高湿度条件で測定した。その結果、リグニンがセルロースに耐水性を付与して、高温高湿度におけるセルロースの力学強度低下を抑制することが示唆され、従来から言われていたリグニンの樹木中での機能を証明するに至った。しかし、ハニカム状の孔を持たない平滑セルロースフィルムでは、リグニンの吸着効果は観測されなかった。SEM-EDX測定から、リグニンはフィルム表面のみに吸着することが示され、平滑フィルムでは、非晶性のリグニンはフィルムの肥厚のみに働き、セルロースへの強度付与に寄与しないことが示された。また、樹木二次壁のセルロースミクロフィブリル傾角を模倣した人工二次壁を創製する条件設定として、2種の機器を製作した。一つは、細径の合成繊維を細胞内腔模倣鋳型とするセルロース産生菌培養装置で、他方は、細径ガラス管を鋳型とする培養装置である。この2種を用いて培養を試みた結果、合成繊維はセルロース産生菌の接近を妨げ目的とする培養は行えなかったが、ガラス管は菌との親和性が高く、円筒状の孔が配列したセルロースフィルムが得られた。当該年度は、ハニカムパターン化セルロースフィルムに単離リグニンを吸着させて、細胞壁の好適モデルになるか否かについて、先ず、検討した。エネルギー分散型X線分光器が付いた走査型電子顕微鏡を用いて、リグニンの吸着部位を同定した。この結果、リグニンはハニカムフィルムの表層に多量吸着していることが示され、これは、樹木中のリグニンが細胞間層から1次壁にかけて濃度が高いという状況と酷似することから、リグニン吸着ハニカムセルロースフィルムは、細胞壁の好適モデル、言い換えれば、細胞壁解析用の人工細胞壁として有用であることが明らかとなった。しかしながら、このフィルムは薄いために、更なる力学的解析および分離幕等への応用を考え、フィルムの肥厚化を試みた。前年度の研究の結果から、細径ガラス管を鋳型とし、これを多数規則的に配列させて、バクテリアセルロースの培養を行った。

その結果、予想通り、厚さ1mmを超える多孔フィルムが調製できた。このフィルム中のミクロフィブリル配向を制御する目的で、様々な培養条件を検討した。その結果、セルロース繊維を鋳型材料に吸着させることで、ミクロフィブリルの配向制御が可能であることが見出された。また、二次壁中のリグニンの構造を模倣した人工リグニンも開発して、その物性も調べた。2次壁リグニンはβ-0-4結合に富むと推定されているので、β-0-4結合にみから構成される人工リグニンを合成した。この研究により、C6-C3型のリグニンは分子間相互作用をするために、直鎖状の合成高分子より分子運動性が低いことが明らかとなった。以上の成果は、今後、人工細胞壁を高強度機能性材料として利用するときの重要な知見を与えた。
粘液糖鎖による胃癌発生の制御

胃の腺粘液は糖鎖の末端にα1,4結合したN-アセチルグルコサミン残基(αGlcNAc)を含んでおり、この糖鎖はピロリ菌に対して抗菌的に作用すると共に、慢性炎症を抑えることで胃癌の発生を防御している。本研究ではヒト胃粘膜病変(胃癌、幽門腺型腺腫、慢性萎縮性胃炎)とバレット食道におけるαGlcNAcの発現とその病理学的意義を解析し、αGlcNAcの低下・消失は胃分化型癌や幽門腺型腺腫の悪性度に相関すると共に、慢性萎縮性胃炎とバレット食道ではそれぞれ胃分化型癌とバレット腺癌発生の危険因子となり得ることを示した。また、αGlcNAcによる胃癌発生機構の更なる解明に向け、新規遺伝子改変マウスを作出した。αGlcNAcは胃腺粘液に特徴的な糖鎖であり、これまでに我々はこの糖鎖を欠損したA4gntノックアウト(KO)マウスの胃幽門粘膜では慢性炎症を基盤に分化型腺癌が自然発症することを見出し、αGlcNAcが胃癌に対する腫瘍抑制分子としての役割を担っていることを明らかにした。本研究の目的はαGlcNAcによる胃癌発生の制御機構を解明することである。平成24年度はA4gnt KOマウスにおいて腫瘍の発生が胃幽門粘膜のみに限られていることに着目し、HID-AB染色を行うことでA4gnt KOマウスの幽門部では野生型マウスと比較し、スルフォムチンの産生量が特異的に多いことを見出した。次に、硫酸化糖鎖に対する質量分析を行うことで、A4gnt KOマウスの胃粘液ではο-グリカンのコア2分枝部に存在するGlcNAcに硫酸基が結合していることを示した。さらに定量PCR法により、GlcNAcの硫酸化に関わる3種類の硫酸転移酵素であるGlcNAc6ST-1、GlcNAc6ST-2、GlcNAc6ST-4をそれぞれコードする遺伝子Chst1、Chst4、Chst7の中で、Chst4 mRNAのみがA4gnt KOマウスの胃粘膜で野生型マウスに比べて有意に増加していることを明らかにした。以上の結果よりA4gnt KOマウスでは幽門部で多く産生された硫酸化糖鎖が胃癌の発生を促進している可能性が示唆された。そこでこの仮説を検証するためChst4 KOマウス(静岡県立大学川島博人博士より供与)とA4gnt KOマウスを交配し、A4gnt/chst4ダブルKO(DKO)マウスの作製を開始した。平成24年度の研究成果でA4gntノックアウト(KO)マウスの幽門腺細胞では硫酸化糖鎖の産生が亢進していることが明らかとなり、硫酸化糖鎖が胃癌の発生を促進している可能性が示唆された。この仮説を検証する為、平成25年度はA4gnt KOマウスとChst4 KOマウスを交配してA4gnt/Chst4ダブルKOマウスを作出、HID-AB染色を行うことでこのマウスの胃粘膜で硫酸化糖鎖の消失が確認できた。今後、このマウスを経時的に飼育し、胃粘膜の病理所見を解析する予定である。また、平成25年度はヒト胃癌を対象として、αGlcNAcの消失が胃癌の悪性度と関連するか否かについて免疫組織化学的に解析した。αGlcNAcはそのコア蛋白質であるMUC6を発現した分化型胃癌54症例中33症例において陰性であり、αGlcNAcの消失は腫瘍の壁深達度、病期、静脈侵襲、癌特異的5年生存率と有意に相関していた。一方、MUC6陽性の未分化型胃癌48症例中22症例でαGlcNAcは陰性であったが、αGlcNAcの消失と臨床病理学的因子並びに生存率との相関は認められず、胃癌細胞におけるαGlcNAcの消失は分化型胃癌の悪性度と相関することが明らかになった。さらにバレット食道におけるαGlcNAcの発現低下はバレット腺癌の発生にも関わっているか否かについて検討した。バレット腺癌の周囲に存在するバレット食道35症例、対照群としてバレット腺癌を有さないバレット食道35症例に対してαGlcNAcとMUC6の免疫染色を行った。MUC6陽性のバレット食道におけるαGlcNAcの発現は、対照群と比較してバレット癌発症群において有意に低下しており、αGlcNAcの低下はバレット食道の発癌にも関与している可能性が示された。慢性萎縮性胃炎は胃分化型癌発症の危険因子として知られているが、その機序については明らかにされていない。