hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自発的運動による長寿遺伝子の活性化は２型糖尿病誘発性心不全を改善するのか

対照群は、標準飼育ケージで飼育したOLETF(O標準群)とLETOラット(L群)である。1)糖尿病:高血糖と高HbA1cを示すO標準群に対して、O回転群の血糖とHbA1cは正常値であり、糖負荷実験の血糖値時間曲線下面積もL群と差がなかった。また、O回転群では、骨格筋GLUT4の増大によるインスリン感受性の亢進がみられた。2)心機能:超音波画像解析によりO標準群では左室弛緩機能が低下していたが、O回転群では低下していなかった。圧カテーテルによる心機能解析の結果、O標準群では±dP/dtの低下およびtauの延長が見られたが、O回転群の±dP/dtとtauはL群と同じ値であった。また、O標準群の左室SERCA2a発現量は低下していたが、O回転群では低下していなかった。3)腎機能:O標準群では、尿量、尿中蛋白質、BUN、クレアチニンが増加したが、O回転群では、これらの値はL群に近いものであった。尿細管障害マーカーの測定より、O標準群では糸球体、近位・遠位尿細管に障害があったが、O回転群では糸球体に僅かに障害があった。4)学習記憶能:回避型学習後50日目で、O標準群は記憶を保持していなかったが、O回転群は記憶を保持していた。O標準群の血中アミロイドβは増加していた。5)運動能:持久的運動能測定・握力測定・金網ぶら下がり試験では、O標準群・O回転群・L群の順番で運動パフォーマンスが高かった。O回転群の骨格筋では、速筋線維横断面積・HK活性・CS活性・FABP活性はO標準群に比し増加していた。6)遺伝子発現:骨格筋のDNAマイクロアレイにより、O回転群では糖尿病関連遺伝子1428個の内25個の遺伝子の発現に変化が見られ、現在、これらの遺伝子発現量と上記の生理機能との関連を調査している。心臓生理学昨年度に計画した測定(血液成分の測定、心臓・骨格筋の組織学的解析、内臓脂肪量の測定、骨格筋中のGLUT4の測定、DNAマイクロアレイによる遺伝子発現解析)を終え、得られた測定データを解析中である。既に、次年度で計画予定の下記の測定を終え、データを解析中である。1)糖負荷試験、2)インスリン負荷試験、3)心機能解析(圧カテーテルによる左室圧波形解析と超音波画像解析)、4)運動パフォーマンス上記の「現在までの達成度」で記載した測定に加えて、「骨格筋中の酵素活性の測定」、「ELISAによるアディポサイトカイン等の測定」、「骨格筋・心筋中のSERCA等の発現量の解析」、「骨格筋中のインスリン受容体発現量の解析」、「腎・膵臓の組織解析」などを行う予定である。さらに、「長寿遺伝子の発現量」と「心機能」・「腎機能」・「運動パフォーマンス」等との間に何らかの関係があるのか、について検討する。また、全データ解析を行った後に、成果をまとめて、学会発表と論文作成を行う。当初の計画通りに、引き続き次年度に予定している測定と解析を行う。上記の「現在までの達成度」で記載した測定に加えて、「血液成分の測定」、「心臓の組織学的解析」、「内臓脂肪量と脂肪サイズの測定」、「アディポサイトカインなどのELISA」、「骨格筋中の酵素活性とGLUT4の測定」、「DNAマイクロアレイによる遺伝子発現解析」などを行う予定である。当初購入する予定の「化学発光ゲル撮影装置」は高価(約200万円)であったが、使いやすく安価なゲル撮影装置(約40万円)が発売されたので、この安価な撮影装置を購入した。そのため、この繰越金が生じた。
歯髄血液を用いた不可逆性歯髄炎の診断に関する研究

歯髄炎の可逆・不可逆を診断することは、歯髄疾患の合理的な治療方針を決定するうえできわめて重要である。しかしながら、その診断は、現在でも主観の入る臨床的な診査を基準にしており、歯髄炎の客観的診断法は確立されていない。本研究では、露髄時の出血に着目し、歯髄血液の分析による歯髄診断法の開発を試みた。まず、自発痛や持続性の冷・温刺激痛より抜髄を余儀なくされた歯髄を炎症歯髄、補綴的要求から便宜抜髄された歯髄を正常歯髄とし、ナイロンファイバーにて露髄時の出血を採取し、血液中の炎症因子をELISA法にて定量した。その結果、正常歯髄のプロスタグランディンE_2(PGE_2)、エラスターゼがそれぞれ0.57ng/ml、17.14μg/mlであったのに対し、炎症歯髄では152.06ng/ml、123.37μg/mlと高値を示し、統計学的に有意差が認められた(PGE_2;P<0.01、エラスターゼ;P<0.05)。歯髄血液中の血球成分については、多形核白血球数とエラスターゼ値の間に弱い相関が認められた。また、歯髄炎を有する抜去歯を試料とし、摘出した歯髄を半切して、一方を組織学的に検索し、もう一方をホモジナイズしてから上清成分の炎症因子を検索したところ、浸潤した炎症細胞数が多ければ、炎症因子の濃度も高くなる傾向にあったが、今回の検索では有意差は認めなかった。以上の結果より、PGE_2およびエラスターゼが歯髄炎の進行に関係している可能性、さらにこれらの因子が不可逆性歯髄炎の診断における診断マーカーとして有用である可能性が示唆された。今後は、直接覆髄症例におけるPGE_2、エラスターゼ値とその術後成績との関連性について検討し、不可逆性歯髄炎の診断法を確立していく予定である。
ダブルハイパー核の研究

次世代ダブルハイパー核探索実験を新設されるJ-PARCへ提案した。実験課題採択委員会(PAC)でfull approvalされ、J-PARC当初の実験として実行できる見込みがついた。この実験の鍵となる高位置分解能(15ミクロン)の両面読み出しSSDとエマルションのハイブリッドシステムを、RCNPの陽子ビームを用いてテスト実験を行った。その結果約50ミクロンの精度でエマルションにあるべき飛跡を見つけられることがわかった。この結果は実験を行ううえで十分な性能であり、論文にまとめている。さらにK中間子と陽子とをトリガー段階で区別するためのindex 1.1のエアロジェル検出器のビームテストをドイツのGSIで行い、満足すべき結果を得た。一方過去に得たエマルションデータを再解析する作業を岐阜大学、東邦大学で進めた。その結果再解析によってあらたにダブルハイパー核の候補を発見した。京都大学では、カウンターと組み合わせるハイブリッド法によらない、general scanを新しく製作した高速自動解析装置で行い、ダブルハイパー核を探索している。このためにneural networkを用いる方法と形の複雑さによるパターン分析による方法を開発し、実際のダブルハイパー核を認識できることを確かめた。その結果は国際会議などで報告した。またMAPCOREというプログラムをたちあげた。これはダブルハイパー核をふくむエマルションの画像データをWeb上で公開して高校生をふくむ一般のひとびとに新しいダブルハイパー核を発見してもらおうという試みである。アウトリーチ活動と位置づけている。本研究の目的はダブルハイパー核の実験的研究を行うことである。このために本年度は高エネルギー研究所で得た原子核乾板のデータ解析を引き続き行い、ほぼすべてのデータを観測した。これまでに発見した軽いダブルハイパー核の候補は4イベントである。ひきつづき興味あるイベントの詳細な解析を行っている。さらにブルックヘブン研究所で予定している実験の設計を行った。特にK中間子スペクトロメーターと原子核乾板をつなぐ高位置分解能の検出器がその中心となる。その検出器である両面読み出しのシリコンストリップ検出器の設計を終了し、シリコンチップや読み出し回路の製作を開始した。大きさは32x64mmで50ミクロンのピンチのストリップで約15ミクロンの位置分解能を予定している。これは以前の高エネルギー研究所でのものにくらべて倍以上の分解能である。またこの検出器のテストを京都大学のタンデム加速器で行う予定だが、そのためのビームラインの整備を行った。さらにこの実験で得られる原子核乾板のデータ量が10倍以上になると考えられるので、原子核乾板の自動解析装置の解析速度をこれまでより10倍近く早くすることをかんがえている。このために新しく高速CCDカメラをそなえた自動解析装置を設計製作した。現在ソフトウェアーを開発テスト中である。さらにこれらの研究について昨年10月に行われたハイパー核の国際会議をはじめとしていくつかの会議などで招待講演を行った。本研究の目的はダブルハイパー核を数多く発見し、その性質を研究することである。そのためこれまでにKEKで実施したE373実験の解析をほぼ終了し、ダブルハイパー核は候補も含め7例の検出に成功した。また、ダブルストレンジネス状態がΣ粒子を含む弱崩壊した可能性のある事象を2例発見し、これが確定すれば世界で初めての発見となる。解析速度の向上を目指した開発では、従来の4倍以上の高速化を達成するに至り、ブルックヘブンでの実験の解析には十分な解析速度を得た。今後、再現性をより厳しく追及したい。さらにこの過程で得た経験に基づき、大型の原子核乾板を自動解析する解析装置の改良したものを設計製作し、着々と次の実験のエマルションデータ解析の準備も進めている。一方で、実験に用いる原子核乳剤(エマルション)の一部を購入し、これまでにない大型の乾板を製作する準備を開始した。前回に実験に使ったエマルションに比べて、粒子サイズが小さくなり、より高精度でのダブルハイパー核の検出が期待できる。ダブルハイパー核探索実験のハイブリッドエマルション装置のかなめの検出器として、両面読み出しのシリコン検出器の開発を行ってきた。今年度は設計を終えて、実機の製作を行った。シリコンは両面50ミクロンピッチのもので、15ミクロンの位置分解能が期待できる。VAチップをつかった読み出し回路もすべて設計を終えた。現在テスト実験のためのデータ取得システムを準備しており、4月からテストを行う予定である。ダブルハイパー核と関連したテーマとしてHダイバリオンがあるが、共鳴状態と思われるピークを2個のラムダ粒子の不変質量分布の中に見出した。これらについて、国際会議などで報告し、現在論文を準備中である。この研究の目的は、ストレンジネス=-2の原子核であるダブルハイパー核の系統的研究と、関連するH粒子やペンタクォークの探索を行うことである。KEK-E373で得た原子核乾板の解析では、・粒子の停止点から生成する荷電粒子の飛跡を追跡した・-と考えられる粒子を発見した。この事象はダブルハイパー核内で・・->・-pという弱崩壊が起こったものと解釈でき、世界で初めて観測されたものである。この崩壊の確率の大きさはダブルハイパー核のなかのストレンジネスが・・として存在するかHとして存在するかという重要な問いの答えを与えると考えられる。原子核乾板の自働解析装置の高速化に取り組み、これまでの速度にくらべ約3倍はやい装置の開発に成功し、新たに2台の自働解析装置を製作した。さらに高速化するべく解析のアルゴリズムの開発研究を行っている。

またE373で照射された原子核乾板にはハイブリッド方式では発見できない・粒子の静止吸収事象が1050倍あると考えられ、これらの事象を見つけることができるとダブルハイパー研究に飛躍を与えることができる。そのための解析アルゴリズムの研究をスタートさせ、すでに見つかっているNagara事象を同定することに成功した。次世代のハイブリッド実験のための高位置分解能(15ミクロン)Double Sided Silicon Strip (DSSD)検出器の開発製作を行った。このDSSDについてβ線を用いてテストを行い、最小電離粒子が20以上のS/Nで測定できることがわかった。これは目的にたいして十分な性能であり、結果を日米合同物理学会で報告した。さらにKEKでπや陽子ビームを用いてDSSDと原子核乾板のハイブリッドシステムのテスト実験を行った。次世代ダブルハイパー核探索実験を新設されるJ-PARCへ提案した。2回にわたって開催された実験課題採択委員会(PAC)で採択され、J-PARC当初の実験として実行できる見込みがついた。この実験の鍵となる高位置分解能(15ミクロン)の両面読み出しSSDとエマルションのハイブリッドシステムを、KEKのビームおよびRCNPの陽子ビームを用いてテスト実験を行った。その結果約50ミクロンの精度でエマルションにあるべき飛跡を見つけられることがわかった。この結果は実験を行ううえで十分な性能だといえる。さらにK中間子と陽子とをトリガー段階で区別するためのindexの大きなエアロジェル検出器のビームテストを行い、満足すべき結果を得た。一方過去に得たエマルションデータを再解析する作業を進めた。その結果再解析によっていままで見落としていた数十%新しいデータを得られることがわかった。岐阜大学、東邦大学などで再解析が進んでいる。京都大学では、カウンターと組み合わせるハイブリッド法によらない、general scanを新しく製作した高速自動解析装置で行い、ダブルハイパー核を探索するプログラムを開始し、neural networkを用いる方法と形の複雑さによるパターン分析による方法を開発し、国際会議などで報告した。さらにこのプログラムを一部19年度に繰越して、実際のダブルハイパー核を認識できることを確かめた。また、ダブルハイパー核との関連で注目されるHダイバリオンについて、別の実験で得られたΛΛの不変質量分布の閾値付近のピークを分析し、H共鳴生成の上限を与え論文として発表した。実験課題採択委員会(PAC)でfull approvalされ、J-PARC当初の実験として実行できる見込みがついた。この実験の鍵となる高位置分解能(15ミクロン)の両面読み出しSSDとエマルションのハイブリッドシステムを、RCNPの陽子ビームを用いてテスト実験を行った。
線虫遺伝子破壊による低分子量G蛋白質RABファミリーのゲノム機能解析

低分子量G蛋白質Rabのアイソフォームはヒトでは60種類以上存在し、Rasスーパーファミリーの中で最大のサブファミリーを形成しているが、詳細な機能解析が進んでいる分子はごくわずかである。線虫Rab遺伝子は哺乳類Rabの約半数であり、相同遺伝子の重複が少なくシンプルな遺伝子構成をしているため解析が行ないやすいと考えられる。本研究課題ではRab分子の体系的な機能解明に向けて、TMP/UV法により線虫の全Rab遺伝子のノックアウト変異体株を樹立した。これらの変異体株について、個体の生存、稔性、発生、運動・行動、薬剤感受性などの表現型を観察し、Rab表現型のデータベース化を進めた。さらにトランスジェニックマーカーを用いて、各変異体バックグラウンドにおけるエンドサイトーシス経路、エキソサイトーシス経路、およびオルガネラの形態を解析した。これらの解析から各Rabメンバーについて普遍的な細胞機能と特殊化した細胞機能を担うタイプへの遺伝学的な分類が可能となった。また、エンドサイトーシス経路においてRabエフェクター分子であるRabenosyn-5を介したRab-5とSec1/Munc18分子との機能的連関を明らかにし、制御因子群を含めた解析に研究対象を発展させた。現在、カルシウムイメージングによって変異体の神経機能を解析・評価する生体アッセイ系の構築を進めている。低分子量G蛋白質Rabファミリーは輸送小胞と標的膜とのヘテロティピックな膜融合や、均一な膜同士のホモティピックな膜融合に関与することが知られている。ヒトでは60種以上もの異なるRabが存在するため生理機能は不明なものが多い。本研究課題では、ヒトの約半数しかRab遺伝子をもたない線虫に着目し、Rab遺伝子および関連遺伝子変異体の網羅的作成と表現型解析によりRab蛋白質の生理機能に関する体系的知見を得ることを目的としている。本年度の成果は以下の通りである。1.Rabの活性化を阻害するRabGDI(GDP-dissociation inhibitor)遺伝子の欠失変異体をTMP/UV-PCR法で取得した。gdi-1変異体は致死となり、Rabの活性化が個体の発生・生存に必須であることが示された。2.線虫全Rab遺伝子の変異体38アリル(複数アリル取得した遺伝子も存在)について野生型線虫との戻し交配とバランサー株との交配により安定株を樹立した結果、全Rab変異体株の表現型は(A)ホモ接合体で生存維持可能、(B)不稔、(C)致死に分類された。これらの変異体と輸送経路やオルガネラを可視化するトランスジェニックラインとの交配を進めている。3RabはGEF(guanine nudeotide exchange factor)により活性化され、GAP(GTPase-activating protein)により不活性化されるが、各Rabを制御するGEFやGAPはほとんど同定されていない。線虫ゲノム上にはRabGAPドメインと考えられているTBC(rre2/Bub2/Cdc16)ドメインを持つ遺伝子がRab遺伝子よりも若干少ない数存在していた。Rab変異体とRabGAP変異体の表現型の対応付けを行うことにより各Rabを制御するRabGAPを同定するため、RabGAP欠失変異体の網羅的作成を進めている。
bFGF・ポリリン酸結合型ダブルプロセシング複合体の開発

インプラント複合体にbFGFおよびポリリン酸をダブルプロセシングさせた新規移植材は骨形成およびインプラント支持を回復する新規生体材料として有用であることを明らかとした.これらはin vitroでのbFGFおよびポリリン酸の骨分化誘導促進への相互活性作用,in vivoでの骨形成促進作用,において良好な結果を示した.インプラント複合体にbFGFおよびポリリン酸をダブルプロセシングさせた新規移植材は骨形成およびインプラント支持を回復する新規生体材料として有用であることを明らかとした.これらはin vitroでのbFGFおよびポリリン酸の骨分化誘導促進への相互活性作用,in vivoでの骨形成促進作用,において良好な結果を示した.bFGFおよびポリリン酸をプロセンシングさせた複合体のをめざし,次の研究を行った.bFGFおよび鎖長65ポリリン酸を骨芽細胞様細胞の培養液中に添加し,細胞増殖および分化促進作用を検討した結果,コントロール群と比較し優位に高い値となった.一方ポリリン酸単独群との有意差は認められなかった.動物実験にて製作した複合体を使用したところ,大腿骨における評価試験にて,オッセオインテグレーション;骨インプラント接触率,共振周波数測定;ISQ値,これらの評価試験にて,ポジティブコントロールの既存骨群と同等の値を示した.これらより骨再生およびインプラント支持を可能とする複合体としてのbFGFおよびポリリン酸のダブルプロセシングの有用性が示された.26年度が最終年度であるため、記入しない。歯科補綴26年度が最終年度であるため、記入しない。
ポリリジン生産放線菌におけるリジン生合成経路の解析

ε-ポリ-L-リジン(ε-PL)は、2535残基のL-リジンが直鎖状につながったホモポリアミノ酸であり、放線菌Streptomyces albulus NBRC14147によって生産される。S. albulus NBRC14147のドラフトゲノム解析を行いリジン生合成経路の各種遺伝子を同定したところ、複数のisozyme遺伝子が存在することを見出した。RT-PCRによって、これらisozyme遺伝子の転写量を評価したところ、一次代謝特異的あるいは二次代謝特異的に機能するisozyme遺伝子が存在することを明らかにした。ε-ポリ-L-リジン(ε-PL)は、2535残基のL-リジンが直鎖状につながったホモポリアミノ酸であり、数種の放線菌によって生産される。最近我々は、ε-PLの生合成メカニズムを明らかにし、また、ε-PL生合成遺伝子がε-PLの生産蓄積とともにその転写量が向上することを見出した。しかし、ε-PLの生合成出発原料であるリジンの生合成経路遺伝子の転写量は、ε-PLの生産性が向上するとともに低下する興味深い結果を得た。これは、リジンの供給が従来から知られているリジン生合成経路(ジアミノピメリン酸経路)ではなく、別経路で生合成される可能性を示唆しており、本研究では、この新規リジン生合成経路を同定することを目的とする。H25年度においては、まず、ε-PL工業用高生産変異株における変異点の同定を行った。ε-PL生産野生株と変異株のゲノムシーケンス(受託分析)にて変異点を同定したところ、数十カ所の変異、欠失が認められた。当初の研究計画では、変異が確認された遺伝子を野生株に導入しε-PL生産性の向上に関与する遺伝子を同定する予定であったが、検出された変異があまりにも多数であったため、現在、その変異遺伝子の絞り込み作業を行っている。さらに、当初の研究計画どおり、変異株のゲノムライブラリーを野生株に導入し、ε-PL生産性の向上に関与する遺伝子を同定する古典的手法(ショットガンクローニング)を行った。現時点で、候補となる遺伝子は同定されていないが、ゲノム解析によって絞り込めた候補遺伝子の導入実験を行っている。また、ε-PL生産野生株および工業用高生産変異株のゲノムライブラリーをS. lividansに導入するショットガンクローニングにて、ε-PL生産性の向上に関与する遺伝子を同定作業を続けている。これは、リジンの供給が従来から知られているリジン生合成経路(ジアミノピメリン酸経路)ではなく、別経路で生合成される可能性を示唆しており、本研究では、この新規リジン生合成経路を同定することを目的とした。平成25年度の研究では、ε-PL生産放線菌野生株と工業生産株のドラフトゲノム解析を行い、工業生産株における有用な変異点の探索を試みた。しかし、工業生産株はNTGによる変異育種により誘導された株であり、変異箇所が膨大であったため、有用変異を同定することは不可能であった。そこで、リジン生合成経路であるジアミノピメリン酸経路のみに着目し、変異点を探索した。しかし、多数の変異点と各生合成ステップの酵素遺伝子に複数のアイソザイムが存在したため、その絞り込みは困難であった。また、計画していた13C-グルコースの添加後、ε-PL生産に連動してどの生合成経路が向上するか調べたが、13C-グルコースの代謝フラックスは予想以上に早く、メタボローム的解析も困難であった。そこで、平成26年度はでは上記の諸問題を解決する第一歩として、ジアミノピメリン酸経路における各種反応ステップのアイソザイム遺伝子について、転写解析を行った。その結果、その多くは一次代謝に転写されているが、lysA遺伝子の一つのアイソザイムが二次代謝特異的に発現していることを突き止めた。現在、さらに解析を進めている。現在、ポリリジン生産菌のドラフトゲノム解析とリジン生合成遺伝子の各isozymeの転写解析について論文を作成中である。応用微生物学ε-PL生産野生株と変異株のゲノムシーケンス(受託分析)にて変異点を同定したところ、予想よりもはるかに多い数十カ所の変異、欠失が認められた。当初の研究計画では、変異が確認された遺伝子を野生株に導入しε-

PL生産性の向上に関与する遺伝子を同定する予定であったが、検出された変異があまりにも多数であったため、現在、その変異遺伝子の絞り込み作業に時間を要している。また、変異点が多数あり同定が困難である場合を想定し、当初計画に予定していた変異株のゲノムライブラリーを野生株に導入しε-PL生産性の向上に関与する遺伝子を同定する古典的手法(ショットガンクローニング)を開始した。しかし、ε-PLの検出試薬である色素Poly-R478が販売中止になったため(唯一、中国製のPoly-R478が存在するが日本には輸入できず入手不可であった)、代替できる色素の検討に時間を要した。幸いにも、赤色色素であるAmaranthが利用できることが判明し、現在、本実験を進めているところである。当初予定していた研究計画からやや遅れているが、その問題点はすでに解決されている。引き続き、当初の研究計画通り、進める予定である。また、H26年度に実施予定である「研究課題C野生株とε-PL生合成遺伝子破壊株におけるメタボローム解析」と「研究課題D ε-PL生合成における13C取り込み実験」に着手する。
ケモメトリックプロファイリングに基づく和漢薬複合成分の解析

本研究では多数の成分から構成される和漢薬の包括的な理解をめざし,従来から解析されていた和漢薬のHPLC法による成分プロファリングを行うとともに,NMRによる成分プロファイリングの導入し,より精度の高い和漢薬成分のプロファイリングを実現することを目指した.産地などが異なる複数のロットの芍薬,甘草を入手し,それぞれの熱水抽出物を作成した.1H NMRデータを用い、主成分分析を行った.また,定量NMR法についても検討を行い,従来のHPLC法では検出が困難で,定量分析が困難であった車前子のイリドイド成分の含量を見積もることに成功した.ボウフウ,コツサイホについては,成分プロファイリングを行うべくLC/MSによる指標成分の同定を行い,一部の化合物については,単離精製を行った.多数の成分からなる和漢薬は,各成分が複合的に作用し治療効果を示すと考えられる.しかしながら成分が複雑系であることから,その作用機構に関しては未解明な部分が多い.本研究では,和漢薬の特徴である複合成分の包括的な理解をめざし,従来から行われているHPLC法に基づく成分プロファイリングとともにNMRを活用した成分プロファイリング法を新たに導入することにより,より精度の高い和漢薬成分のプロファイリングを実現し,薬理活性成分の効率的かつ迅速な同定や,和漢薬複合成分の正確な理解による高精度の品質管理に貢献することを目的としている.本年度は車前子,ジンギョウの抽出物について1H NMRデータの取得を行い,新たに導入したメタボロームソフトウェアを用い成分プロファイリングについて検討を行った.ジンギョウについては主成分のゲンチオピクロサイドの含量が高かったため,他のマイナー成分のシグナルを考慮した分析を行うことが困難であったため,データ解析法について検討を進めている.また,生薬成分のqNMR法による精密定量法の確立では,車前子の成分であるアウクビンについて検討を行った.車前子の抽出物を直接用い,qNMR法でアウクビンを定量することはできなかったが,アウクビン標準品の純度をqNMRで定量した後,これを用いた検量線法でLCMS分析を行うことでアウクビンを精密に定量することが可能となった.研究を遂行するために必要な機器等については,本研究費の他,運営費交付金などを活用し順調に整備することができ,研究環境は整えることができた.一方で,実験の面では研究室メンバーの人的資源が不足していたことから,計画していた検討を一部実施することができなかったが,想定の範囲内である.しかしながら28年度は研究室メンバーが増員したため,この遅れを取り戻すべく,研究を進めていく.多数の成分からなる和漢薬は,各成分が複合的に作用し治療効果を示すと考えられる.しかしながら成分が複雑系であることから,その作用機構に関しては未解明な部分が多い.本研究では,和漢薬の特徴である複合成分の包括的な理解をめざし,従来から行われているHPLC法に基づく成分プロファイリングとともにNMRを活用した成分プロファイリング法を新たに導入することにより,より精度の高い和漢薬成分のプロファイリングを実現し,薬理活性成分の効率的かつ迅速な同定や,和漢薬複合成分の正確な理解による高精度の品質管理に貢献することを目的としている.本年度はボウフウ,コツサイホ,シャクヤクについて成分プロファイリングを行うための検討を行った.ボウフウについては,中国およびモンゴルにて採取した試料及び国内市場品のメタノール抽出物についてLC/MSを用いた分離条件を種々検討し,良好にピーク分離する条件を確立することができた.また,LC/MS/MS分析により数種のクロモンおよびクマリン誘導体を同定した.また,これらの定量分析を行うための標品として用いるため,化合物の分離を進めた.市場品コツサイホの熱水抽出物についてHPLC,LC/MSにて分析条件を確立した.LC/MSにて成分プロファイルを行い,フラボノイド類を同定した.定量分析を行う際の標品として用いるため,これら化合物の分離を遂行した.研究計画の一部変更はあったものの,研究に携わるメンバーが増えたため,ボウフウ,コツサイホについてLC/MS等での分析条件を確立することができた.また,標品として用いるための化合物の分離精製についても順調に進行中である.多数の成分からなる和漢薬は,各成分が複合的に作用し治療効果を示すと考えられる.しかしながら成分が複雑系であることから,その作用機構に関しては未解明な部分が多い.本研究では,和漢薬の特徴である複合成分の包括的な理解をめざし,従来から行われているHPLC法に基づく成分プロファイリングとともにNMRを活用した成分プロファイリング法を新たに導入することにより,より精度の高い和漢薬成分のプロファイリングを実現し,薬理活性成分の効率的かつ迅速な同定や,和漢薬複合成分の正確な理解による高精度の品質管理に貢献することを目的としている.ボウフウについては,昨年度に確立した条件を用い,中国およびモンゴル産の試料についてプロファイリングを行い,30成分(17種のクロモン類および13種のクマリン類)を同定・推定した.このうち16成分について定量分析の標準品とするため,防風抽出物より単離精製を行った.市場品コツサイホについては,成分プロファイルを行い同定したフラボノイド類について定量分析の標準品とするため化合物の分離を行い,5成分の単離精製を行った.これらの抽出物についてはNMRを用いたプロファイリングを,単離化合物についてはNMRによる定量法について鋭意検討を進めている.

度重なるLCMSの不調が重なり,修理を要したため,実験が滞ることがたびたびあったが,LCMSを用いた成分プロファイリングおよび,成分の定量実験に使用する標準品のカラムクロマトグラフィーによる単離精製は順当に進行している.しかし,NMR法を用いたプロファイリングおよび定量NMRについては,鋭意検討中であるが,本年度に予定した分の解析は充分に進んではいない.そのため,研究期間の延長を行った.本研究では多数の成分から構成される和漢薬の包括的な理解をめざし,従来から解析されていた和漢薬のHPLC法による成分プロファリングを行うとともに,NMRによる成分プロファイリングの導入し,より精度の高い和漢薬成分のプロファイリングを実現することを目指した.産地などが異なる複数のロットの芍薬,甘草を入手し,それぞれの熱水抽出物を作成した.1H NMRデータを用い、主成分分析を行った.また,定量NMR法についても検討を行い,従来のHPLC法では検出が困難で,定量分析が困難であった車前子のイリドイド成分の含量を見積もることに成功した.ボウフウ,コツサイホについては,成分プロファイリングを行うべくLC/MSによる指標成分の同定を行い,一部の化合物については,単離精製を行った.昨年度の検討で1H NMRを用いた成分プロファイリング法については,主成分が高含量であったジンギョウについては十分な条件が確立できていないため,マイナー成分のプロファイリングができる条件について検討を行う.さらに他の生薬のプロファイリングについても積極的に検討を進める.定量NMR法については,昨年度に検討を進めたものの,十分に条件を確立できなかった生薬について早急に検討を進める.28年度は,1H NMRを用いた成分プロファイリング法について十分に検討ができていないため,29年度ではNMRを用いた成分プロファイリングについて積極的に研究を遂行する.また,HPLC法で定量分析を行うべく,標品として用いる化合物の定量NMRでの純度測定を進めるとともに,これら化合物の定量NMRでの定量についても検討を進める.NMRを用いた成分プロファイリングおよび,単離した成分のNMRによる定量実験を積極的に進め,計画を達成する.また,定量に必要な標準品については,未精製のものがあるので,これらの単離精製を行う.その後,定量NMRで純度測定を進める.また,これらの成分について,ボウフウ,コツサイホ抽出物中の含量についてHPLC法で定量を行う.計画通りに経費執行を行ったが,予定していたソフトウェアが計画より安価に購入できたため,残額が生じた.これについてはあえて使い切りを行わなかったため,次年度に繰り越すことととしたため.計画的に経費執行を行ったが,試薬・消耗品類の在庫が充分にあったため残額が生じた.あえて使い切りを行わなかったため,次年度へ繰越すこととしたため.一部研究に遅れが生じ,研究期間の延長を行ったため,未執行であった額を繰り越すこととした.繰り越した分を消耗品,研究試薬などに充当し,効率的な研究ができるよう努める.次年度は,計画通りに試薬,器具などの消耗品を中心に使用していく予定である.昨年度の残金については,器具や備品の修理や,消耗品の購入に充て,より効率的な研究が遂行できるよう使用する予定である.次年度は,計画通りに試薬,器具などの消耗品を中心に使用していく予定である.今年度の残金については,器具や備品の修理や,消耗品の購入に充て,より効率的な研究が遂行できるよう使用する予定である.
KIAA遺伝子群の遺伝子欠損法による機能解析と巨大蛋白質複合体の同定

KIAA蛋白質を含めた巨大な蛋白質は蛋白質複合体の中心的働きをすると考えられるため、KIAA蛋白質を欠損させれば、機能蛋白質複合体の機能全体に影響を与え、遺伝子欠損マウスで明らかな表現型を示すという仮説を提唱している。KIAA遺伝子欠損マウスの中で、KIAA1440遺伝子欠損マウスは胎生E3.0E3.5の早期胚盤胞期で発生を停止し、アポトーシスが誘導された後に死滅することが明らかとなった。最近、KIAA1440はスプライシング因子であるU1/2 small nuclear RNA(snRNA)の成熟化を行う複合体である、Integrator複合体の最大サブユニット(Ints1)であるという報告がなされた。KIAA1440蛋白質のIntegrator複合体での機能を確認するために、遺伝子欠損マウス胚におけるsnRNAの変化を定量的PCR法で解析した。その結果、KIAA1440-/-ではKIAA1440+/-に比べて未成熟U2 snRNAの蓄積が明らかになった。このことは最大サブユニットであるKIAA1440の遺伝子欠損は、Integrator複合体のプロセシング活性を著しく低下させることを示している。KIAA1440蛋白質はインテグレーター複合体の構成蛋白質であることを別の角度から証明できただけでなく、KIAA1440はインテグレーター複合体の機能の不可欠な役割を果たす蛋白質であることを明らかにすることができた。また、別の遺伝子欠損マウスであるKIAA1447遺伝子欠損マウスの新生仔は生後直に死亡するが、詳細に機能解析を行ったところアルシアンブルーとアリザリンレッドによる骨染色の結果から、KIAA1447-/-新生仔の骨形成不全が観察された。更にゲルろ過法を用いてKIAA1447蛋白質が巨大な複合体を形成していることを生化学的に明確に示すことができた。既に作製済みのKIAA遺伝子欠損マウスの中で、KIM1440遺伝子欠損マウスは胎生致死の表現型を示し、完全な胚盤胞になることはできずにアポトーシスを引き起こされることを明らかにしてきたが、最近K1AA1440蛋白質がU1,U2 snRNAの3'側のプロセシングに関与するインテグレーター複合体の構成蛋白質であることが他のグループにより示唆された。そこでKIAA1440遺伝子の欠損がU2 snRNAの3'側のプロセシングに直接関与するかどうかを調べるために、成熟、未成熟型のU2 snRNAの量をリアルタイムPCRで定量を行なった。KIAA1440-/-の3.5日胚ではKIAA1440+/-の3.5日胚に比べて成熟型U2 snRNAの量が低下している一方、未成熟型のU2 snRNAの量は増加していた。このことから、KIAA1440蛋白質はインテグレーター複合体の構成蛋白質であるとともに、KIAA1440遺伝子欠損はインテグレーター複合体の機能の不可欠な役割を果たす蛋白質であることを明らかにすることができた。また、別の遺伝子欠損マウスであるKIAA1447

遺伝子欠損マウスの新生仔は生後直に死亡するが、詳細に機能解析を行ったところアルシアンブルーとアリザリンレッドによる骨染色の結果から、KIAA1447-/-新生仔の骨形成不全が観察された。更に、KIAA遺伝子群のin situハイブリダイゼーション法を用いて脳内の発現を調べたところ、KIAA1793遺伝子では特定の脳領域特異的にmRNAを発現させていることが明らかになった。KIAA蛋白質を含めた巨大な蛋白質は蛋白質複合体の中心的働きをすると考えられるため、KIAA蛋白質を欠損させれば、機能蛋白質複合体の機能全体に影響を与え、遺伝子欠損マウスで明らかな表現型を示すという仮説を提唱している。既に作製したKIAA遺伝子欠損マウスの中で明らかな表現型を示すKIAA遺伝子に焦点を絞り、実際に細胞内でこれらの巨大蛋白質を含む機能蛋白質複合体の同定し、巨大蛋白質を含む生体内のネットワークが存在することを示した。KIAA1447遺伝子欠損マウスは、大部分の仔マウスは生後すぐに死亡し、骨格の染色により骨格の成長不良が観察される一方、ごく稀にアダルトのステージまで成長できるKIAA1447-/-マウスが生じ、運動機能障害を示すことが明らかになっている。KIAA1447蛋白質は核に顆粒状に局在するが、この穎粒状の局在は核小体等の既知の核内構造体とは一致しないことから、KIAA1447蛋白質を中心とした新規な蛋白質複合体の存在が示唆された。このKIAA1447蛋白質を含む巨大蛋白質を含む複合体を生化学的な手法で明確にするために、KIAA1447蛋白質のC末端部分に精製用のTAPタグまたはEGFPを付加した後、テトラサイクリンの添加により発現誘導される安定発現細胞を作製した。安定発現株より調整した核抽出液をセファクリルS-300を用いたゲルろ過法を用いて、分子量の解析を行った。その結果、2000kDa以上の巨大な複合体として存在することが明らかになった。巨大複合体の構成蛋白質を同定することは今後の課題であるが、以上の結果からKIAA蛋白質を中心とした蛋白質複合体の存在を明確にすることができた。このような複合体の存在は、上記の仮説とよく一致している。
ApoEのAPP細胞内動態に及ぼす影響に関する分子生物学的研究

アルツハイマー病(AD)脳には、アミロイドβ蛋白(Aβ)の沈着によって生じる老人斑、血管アミロイドなどの病変がみられる。やがて神経原線維変化(NFT)が形成され、ついには神経細胞死にいたるとされている。一方、脂質関連の蛋白として知られるアポリポプロテインE(apoE)はAβ沈着、NFTという2つの特徴的な異常沈着構造物に存在することが明らかとなた。さらにapoEの主要な3つの遺伝子型(ε2,ε3,ε4)がADの発病に関して、ε4は促進的に、ε2は防御的に働くことが明らかにされてきている。本研究においてはapoEの3つのフェノタイプに注目して、Aβの前駆体蛋白であるAPPの代謝、分解処理過程に及ぼす影響を検討した。神経系由来の細胞株をそれぞれ培養した。フェノタイプの異なるapoEをそれぞれ患者血清から精製して培養系に加え、APPのmRNA、蛋白の発現量を調べ、APPの断片の性質を検討した。さらに細胞内小器官の分画を行ない、細胞内のAPP分解処理過程の変化について検討した。細胞の各分画、特にライソゾーム分画においてAPP断片が認められた。apoEの各フェノタイプにより相違が見られた。しかし通常の培養条件下ではAβを含むamyloidogeneticなAPP断片の発現量は、apoEのフェノタイプによる変化を検討するには十分といえず半定量的な分析に留まった。ライソゾーム酵素活性を阻害することによりAPP断片がより明瞭となることが知られており、こうした条件下で検討する必要がある。また培養細胞へのε4遺伝子のトランスフェクションによるapoE4(ε4)の過剰発現、及びジーンターゲッティング法による細胞のapoE発現抑制という条件下での、APPの発現および分解処理過程の変化について引きつづき検討を行っている。
数感覚の実態と育成に関するアジア圏比較研究

本研究では、アジア圏の数学における「隠れた学力」として数感覚(ナンバー・センス)の育成の実態について、比較検討を行うことを目的とした。本研究では、先行研究をもとに数感覚の概念を明らかにするとともに、数感覚の対象をこれまでの自然数・分数・小数から、正負の数、無理数など中等教育数学科の内容を含むように拡張した。さらに、確率を表わす数に対する感覚も、数感覚のなかに組み入れて、捉えるという新しい枠組みを構築した。また、ナンバーセンスの育成が、電卓やコンピュータを活用した数学教育においては将来重要であるとの考えから、数学教育におけるテクノロジーの活用についても考察を行った。さらに、アジア圏で数学学力が高いとされる大韓民国・シンガポールならびに日本、対照する国としてアメリカ合衆国を選び、そこでのナンバーセンスならびにテクノロジー(電卓・グラフ電卓・コンピュータなど)の活用の実態をカリキュラムならびに教科書のレベルでの比較を行った。その結果、大韓民国やシンガポール、アメリカ合衆国ではテクノロジーの活用が積極的に進められていること、また、数感覚の育成に関しては、アメリカ合衆国が積極的に取り入れており、日本もその育成を奨励していること、それに比べると大韓民国やシンガポールでは数感覚の育成に関しては考慮されているものの、あまり進められていないことが推測された。これらの検討のもとに、ナンバーセンスの実態を調査するための調査項目の作成を行った。開発された調査問題は、過去の数感覚関係の先行研究、博士論文、修士論文で使用された問題をカバーし、さらに今回の研究で開発されたものを含み、小学校算数から高校数学までを含む広範囲のものとなった。初期に企画した各国での実際の調査は実施できなかったが、シンガポール、大韓民国や香港での若干の現地見学を実施し、今後の実行に備えた。研究成果報告書には、カリキュラム分析の結果と、開発した調査問題を収録した。平成16年度は、上で述べたように研究の計画ならびに準備段階であると言える。その準備は、中心的には数感覚の実態についての調査の準備であり、それに加えてカリキュラム分析の準備が行なわれた。(1)数感覚の実態比較調査の準備基本的には、数感覚についての調査問題は次のような準備状況となっている。1)レイズらが作成した小学校段階の見積もり・概算についての調査問題2)レイズらが作成した数感覚についての調査問題3)清水・銀島が作成した中学生と高校生を対象とした数感覚についての調査問題4)Yangが作成した8年生向けの数感覚の調査問題これらの調査問題を持ち寄り、小学校2年、5年、中学校2年、高校2年向けの数感覚の実態についての縦断的な調査のアイテム・バッテリーを作成する準備を行った。また、調査対象人数、標本抽出の方法、ならびに調査の実施方法などについての検討した。(2)カリキュラム分析の準備基本的には、カリキュラム分析は調査結果から見出されるであろう差異の解釈を与えるものである。現在のところ、カリキュラム分析については確定的な手法は存在していない。TIMSSのカリキュラム調査とその分析を担当したミシガン大学のシュミット教授との共同研究を行なった「学習機会調査(SMSO調査)」のときの量的な調査方法を手法を取り入れることを検討した。海外研究協力者との共同会議を開催する予定であったが、今年度は開催することができなかった。次年度に開催する予定である。平成17年度は、(1)各国のカリキュラムの分析(2)数感覚の実態調査のための調査問題の開発(3)調査問題の韓国語、中国語、英語への翻訳などを計画していた。しかし、実際には新たにシンガポールを対象にすることを計画したために、シンガポールについての教育制度、カリキュラム、学力の実際などについての研究を中心的に行った。また、大韓民国についてのカリキュラム分析を進めた。調査問題の開発については、数感覚の適用範囲として従来考えられていなかった確率や統計の分野における数感覚の働きの可能性について検討することになった。

特に、平均や分散、分布などにおいて数感覚がどのような働きをするのかについて検討を加えた。さらに、数感覚がテクノロジーを使用したときにどのような働きをするのかについても可能性を探ることとした。そこで、図形分野においては、昨年の動的平面幾何ソフトに加えて、動的立体幾何ソフトを購入して実際に使用することで検討を加えた。また、統計ソフトを使用したときの数感覚の働きについての検討することとした。そこで、Fathomという教育用の統計ソフト、また、その小学校用のソフトであるTinker Bellを購入して、検討を行った。本年度は、当初の研究計画を大きく変更して、数感覚の新たな研究分野の可能性を探ることを中心に行った。来年度は今年度の研究をもとに、当初の目的である東アジア圏の数感覚の実態と育成に戻って研究を進める予定である。今年度は、日本、韓国、シンガポールの数学教育のカリキュラムの分析を完了した。その結果、数感覚の育成ならびに電卓・テクノロジーの使用に関して、シンガポールが電卓・テクノロジーの使用を積極的に進めているにも拘らず、基礎的な数学能力を維持していること、韓国も同様な傾向にあることがわかった。その一方、日本では電卓・テクノロジーを使用していないが、基礎的な能力に関しては他の2国に比べると、芳しくない傾向があることを見出した。また、韓国、シンガポールの代表的な教科書を入手して、その記述などを検討した結果、日本の教科書と比較すると、ナンバー・センスの育成に割かれる割合が低いこと、電卓・テクノロジーの使用に割かれるページ数が多い傾向にあることを見出した。このような数感覚の育成と電卓・テクノロジーの使用などの日本・韓国・シンガポールの実態を比較すると、国際比較調査などでの学力の高さとナンバー・センスがどのように実際に育っているかのさらなる分析の必要性が浮かび上がった。また、本年度はナンバー・センスに関する調査問題のアイテム・バンクを開発した。自然数から無理数までの数範囲を含み、小学生から高校生までを対象とすることができるナンバー・センスの調査問題を200題以上収集並び作成して、分類化を行った。このアイテム・バンクを利用して、今後の研究を進める予定である。
オンライン分離濃縮-化学発光検出による超微量分析法に関する研究

化学発光(CL)反応を利用する分析法は,従来の吸光,発光・蛍光分析法と比較して,一般に高感度で,検量範囲が広く,装置化も容易でコスト的にも有利という特長をもっており,超微量分析への応用が注目される。しかし,CL法は必ずしも選択性に優れているとは言えず,目的成分に対する干渉に留意する必要がある。本研究は,CL法の選択性を飛躍的に向上させる方策として,干渉成分のオンライン排除システムを確立する目的で検討を行ったものである。まず,CL活性な目的成分の抽出液を,ルミノールを可溶化させた逆ミセル溶液に混合すると,ミセル界面で逆抽出が起こり,その内殻の水相内で強いCLが誘発されることを見いだした。この知見を基に溶媒抽出-逆抽出-CL検出という一連の過程を連続的に行わせる新規なCL分析法を構築した。更に,生体系での反応中心に類似した反応場である逆ミセルの特異性を明らかにした。また,ケイ酸,ヒ酸のような弱酸がルミノールのCLを増感することを見いだし,これに基づいてこれら弱酸をイオン排除クロマトグラフ法で分別し,高感度でCL検出する方法を確立した。更に水溶液内では水素化物の生成が不可能なケイ酸について,新規な固相水素化還元反応系を開発するとともにシランとオゾンとのCL現象を見いだし,両者を複合させた新しい選択的高感度定量法を確立した。1.イオンクロマトグラフ分離ー化学発光分析法の開発イオン排除クロマトグラフ法を用いてAs及びSiを他の干渉イオン種から分離し、オンラインでルミノール系化学発光検出する方法を確立した。2.逆ミセル中での鉄(II)錯体の生成・分解反応に対する媒質効果逆ミセル中での化学発光反応に対する金属錯体の触媒能の発現因子解明の一環として、Fe(bpy)_3^<2+>錯体について検討した。その結果、逆ミセル界面でbpyは解離して有機相へ溶出し、鉄(II)は陽イオン性CTACの対陰イオンの求核攻撃でクロロ錯体を生成して分解が促進されること、また陰イオン性AOTでは、静電的な反発により求核試剤は内殻の水相中央部に局在して界面に位置する錯体を攻撃できないことを明らかにした。3.オンライン溶媒抽出/逆ミセル系化学発光法の開発(1)I_2とI^-の分別定量法既報のI^-のCTAC逆ミセル系化学発光法をフロー法に発展させ、酸化過程を挿入するか否かによって、それぞれI_2+I^-及びI_2を定量し、I^-は両者の差として求める方法を確立した。(2)光分解を併用する有機ヨウ素化合物の定量法TiO_2半導体を用いる不均一系光分解反応により有機ヨウ素化合物から定量的にI^-を生成させ、(1)のオンライン化学発光分析に供試して、甲状腺用薬剤などの有機ヨウ素化合物の定量法を確立した。(3)AuおよびRhの定量法CTAC逆ミセル中でAuCl^-_4やRhCl^-_4がルミノールの化学発光反応を触媒することを見いだし、これが水溶液系に比べて感度、精度、検量線の直線性に優れていることを明らかにした。4.オゾンー水素化物気相化学発光法の開発SiH_4が気相でオゾンと反応して化学発光を生じることを見いだした。また、ケイ酸イオンを含む微小量の水試料を乾燥後、LiAlH_4を加えて加熱すると、SiH_4が生成してケイ素を気化させることに成功した。これらの反応を組み合わせ、ケイ素の定量法を確立した。

まず,CL活性な目的成分の抽出液を,ルミノールを可溶化させた逆ミセル溶液に混合すると,ミセル界面で逆抽出が起こり,その内殻の水相内で強いCLが誘発されることを見いだした。この知見を基に溶媒抽出-逆抽出-CL検出という一連の過程を連続的に行わせる新規なCL分析法を構築した。更に,生体系での反応中心に類似した反応場である逆ミセルの特異性を明らかにした。また,ケイ酸,ヒ酸のような弱酸がルミノールのCLを増感することを見いだし,これに基づいてこれら弱酸をイオン排除クロマトグラフ法で分別し,高感度でCL検出する方法を確立した。更に水溶液内では水素化物の生成が不可能なケイ酸について,新規な固相水素化還元反応系を開発するとともにシランとオゾンとのCL現象を見いだし,両者を複合させた新しい選択的高感度定量法を確立した。
指押し反応法による身体イメージの測定

指押し反応法測定装置として、新たに小型軽量な電子天秤を導入し、ノートパソコンでのデータ収集システムを制作した。通信インターフェース(RS232C)を介したデータの収集がコンパクトに実現されたため、汎用性の高いシステムとなった。しかし当初より困難であった正確な時間制御とミリ秒単位の反応時間測定に問題を残している。根本的解決のためにはより高速なオペレーティングシステムの導入もしくはデジタルカウンタの接続が必要であるが、これは測定法の簡便化、普及の方向とは逆行する。代替策として、高速な開発言語を導入してプログラムを組むことで計時機能を補い、ソフト的に解決する方法が模索されている。身体イメージの測定実験は刺激語の収集段階は終え予備実験段階に入った。しかし装置の故障など予想外のアクシデントが多発したこともあり、実験の実施は遅れている。装置と測定プログラムの改善と平行して実験の準備がなされている。実験の測定法として繰り返し回数を最小限に抑制した簡便法を採用することにより、被験者に負担の少ない実験となるよう計画されている。当初予定されていた大規模な測定実験は来年度に実施される予定である。
日欧の高等教育と労働市場に関する実証的研究

本研究は、日欧12ヶ国(欧州側はオーストリア、チェコ、フィンランド、フランス、ドイツ、イタリア、ノルウェー、スペイン、スウェーデン、オランダ、イギリス)の高等教育修了者の大学経験と職業経歴について、共通の枠組みでの実証的な比較研究を実施した。日欧で共通の英語版マスター調査票を開発し、各国で翻訳し調査実施した。日本では、郵送調査をもとに、大卒後3年を経過した卒業者3421、大卒後810年を経過した卒業者2585のサンプルを収集し、欧州11ヶ国の収集した3万5千サンプルと比較し分析を行った。なお、対象者に対しては、こうして共通化されたデータを用いながら、A4版8頁の調査結果概要をまとめ、2000年3月に調査対象者へのフィードバックを行った。また、2000年56月には、欧州側研究者を招聘して、分析のためのワークショップ及び結果の一部を紹介するために国際セミナーを開催した。また、これと平行して、欧州各国の高等教育制度と労働市場への移行の特徴について、欧州各国から出されているカントリーレポートの翻訳および検討をおこなった。共同研究の成果は報告書に詳述されているが、特に、(1)就業体験との関連で、欧州における学生の入学前・在学中での経験の多様性と日本における就業経験の少なさ、若年で等質的・標準化したキャリアという基本的な差異を確認した。また、(2)日本における職業への移行の円滑さと支援システムの基礎が確立しているとともに、就職協定の廃止やインターンシップ導入などとともに、欧州の個人主導型の多様な職業への移行パターンが始まりつつあることが明らかになった。(3)大学知識と職業的な能力との関係は、日本でもっとも疑問視されているが、欧州でも、卒業者の年齢が若いフランスなどでも、同じような社会的な認識があり、彼らに対する職業的な能力の必要性の高さと現実の知識・技術への評価の低さは、そうした社会認識の産物でもあることが明らかになった。本研究は、日欧12ヶ国の大卒者の大学経験と職業経歴についての共通の枠組みでの実証的な比較を行うための、日本側の調査実施と、各国のデータを比較した分析を行う計画である。これは、高等教育の大衆化、労働市場の流動化などの社会変動が、日本でも欧州でもそれぞれの社会的文脈において大きな政策的課題を出現させ、また大学の知識と職業的能力に関するチャレンジングな理論的な研究領域が形成されてきたことに対応しようとするものである。初年度の本年度は、調査枠組みや調査票の設計においてこれまでに進めてきていた12ヶ国の研究者との慎重な協議を踏まえて、調査設計を具体化した。その結果、英語での共通調査票A4判16頁を作成し、それぞれの国の言語に翻訳して各国版調査票とした。実査は、12ヶ国の大卒者合計10万人を対象として調査を実施し、現在一部の国では調査継続中であるけれども、現段階でもすでに2万5千票あまりの調査票を回収しており、次年度にはデータ分析・検討にはいる予定である。日本の本研究課題においては、全国33大学の協力を得て大卒後8年10年を経過した卒業者9,500名の名簿を入手し、その後12月にハガキによる名簿住所の確認を行った。その結果、本調査の対象として住所不明を除く8,200サンプルが得られた。日本語調査票はほぼ共通調査票に準じて、一部項目を加除して、A4判16頁となり、これを1999年1月に対象者へ送付した。その後2月に、督促ハガキを送り、最終的に2,700サンプルを回収し、協力者への礼状を送った。