hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脊髄虚血後のＡＳＩＣ活性化制御による神経保護効果の検討

またASIC阻害薬(PcTX; ASIC1aホモマルチマーの選択的阻害薬、amiloride; ASICの非特異的阻害薬)の効果も引き続き検討中である。2、免疫組織染色法により、脊髄神経細胞における各アイソファーム(ASIC1-4)の局在についても実験を継続中である。現在遅れている研究項目(ラット脊髄培養神経細胞のASIC電流の電気生理学的検討、免疫組織染色法によるASICチャネルの局在、神経細胞死のASIC阻害薬による抑制効果)について研究を進めるとともに、ラット脊髄虚血モデルを用いたASIC阻害薬の脊髄保護作用について検討を行う。1、ラット脊髄培養神経細胞を用いて、細胞外液のpHを変化させた時に生じるASIC電流を電気生理学的手法(Whole-cell patch-clamp法)を用いて測定しチャネル特性を解析する実験、ASIC阻害薬のproton-gated currentに対する抑制効果の解析を終了させる。2、免疫組織染色法により、脊髄神経細胞における各アイソファーム(ASIC1-4)の局在について解析を終了させる。3、虚血性神経細胞死に対するASIC阻害薬の効果について検討する。ラット脊髄培養神経細胞を用いて、低pHの細胞外液投与により神経細胞死が生じることをCalcein AM/Ethidium homodimer-1を用いたviability assayにより確認する。ASIC阻害薬により、この神経細胞死が抑制されるかどうかを検討する。1.ラット脊髄培養神経細胞を用いて、細胞外液のpHを変化させた時に生じるASIC電流を電気生理学的手法(Whole-cell patch-clamp法)を用いて測定しチャネル特性を解析する実験、ASIC阻害薬のproton-gated currentに対する抑制効果の解析を終了させる。2.免疫組織染色法により、脊髄神経細胞における各アイソファーム(ASIC1-4)の局在について解析を終了させる。3.虚血性神経細胞死に対するASIC阻害薬の効果について検討する。4.ラット脊髄虚血モデルを用いてASIC阻害薬の脊髄保護作用を検討する。5.計画が遅れたために物品購入も遅れ、今年度に全額使用することができなかった。繰越金は来年度の計画で使用する。実験動物、薬品、顕微鏡用消耗品、組織培養消耗品、動物実験用消耗品に使用予定である。
数学的実践に着目したライプニッツ数理哲学の全体像の解明

ライプニッツの数理哲学の全体像を解明するという目的のもとで研究を進め、以下の点を解明した。まず、ライプニッツの空間論と幾何学研究の関連を先行研究よりもさらに精密に解明した。さらに、1695年以降の空間論の展開にはモナド概念が関わっていることも判明したので、合わせてモナドロジーに関する研究も行った。1695年以降のモナド概念の展開を明らかにし、さらに、ライプニッツによる単純実体であるモナドの存在論証に関して先行研究を批判的に検討し、モナドと合成実体との関係のように伝統的に解釈上の問題とされてきた点に関して、整合的な解釈を提示した。平成25年度は、主にライプニッツの幾何学研究と空間論との関係を解明する研究を行った。先行研究によれば、最晩年のライプニッツは幾何学研究とクラークとの往復書簡で議論される空間論を総合的に捉える構想を持っていたが、本研究はこの主張を一次資料の精査によって検証し、その主張の妥当性を確認した。さらに、中期(1695年頃)に関しても最晩年と同様の関連を主張する先行研究を批判的に検討し、これまでの研究と合わせて、この時期については両者の関連性を積極的に支持することは難しいことを一次資料の読解に基づいて論証した。こうした成果を踏まえた上で、特定の時期の関連性だけではなく、ライプニッツ哲学の初期からの展開を視野に入れた上で、より広い時期での幾何学研究と空間論の結びつきを解明するために必要な一次資料の整理も合わせて行った。ライプニッツの幾何学研究と空間論の結びつきの変遷については継続して研究を進める予定である。また、上記の研究に平行して、ライプニッツの幾何学研究の持つ現代性を解明する研究として、現代の数学の哲学における図形推論についての研究も行った。具体的には、ユークリッドの『原論』における図形を用いた証明に関する近年の研究を批判的に検討し、背理法を用いた証明において図形が果たす役割についての分析が十分なものではないことを指摘した上で、そうした不備を補完する新たな分析を試みた。また、幾何図形のみならず、他の数学の記号についても図形推論の形式化研究を応用させることで、推論の媒体という側面と数学的構造を記述する媒体という数学の記号の二つの側面に着目する必要があるという研究課題を得た。平成24年度は、ライプニッツの数理哲学に関して、主に初期草稿の検討を通じて、数学研究と数理哲学研究の連関を探る研究を行った。これにより、ライプニッツが実際の数学の定理の証明においては、図形の持つ特性を生かす仕方で定理の導出を行っている点を明らかにした。たとえば、無限小解析において、ライプニッツは、無限個の角を持つ多角形を円と見なすことで求積問題の解決を試みる。しかし、こうした極限への移行を図形上で正確に作図することは不可能である。ライプニッツは、定義上は幅を持たない線分をある場合には無限小の幅を持つ四角形と見なすことで証明の核となるアイデアを図形上で表現し、面積の計算自体は数式によって行うというように、図形と数式の特性を利用している。こうした図形の用法が、幾何図形を用いた証明での補助図形の作図のアルゴリズムの記号法化というライプニッツの幾何学研究の動機付けとどう関連付けられているのかについては、想像力概念の規定を解析と幾何学においては異なるものとして捉えていたという理由は既に明らかにしたが、ライプニッツ自身の数理哲学との関連は未だ十分に明確にされたとは言いがたい。この点に関しては今後も継続して研究を行うことで、ライプニッツの記号的認識が実際の数学にどのように具現化されているのかを明らかにしたい。また、上記の研究を通じて明らかにされたライプニッツの図形観の現代的意義を探る研究も合わせて行った。よく知られた、ヒルベルトによる公理的手法を用いたユークリッド幾何学の形式化とは異なる立場、すなわち、図形に文同様の推論機能を認める立場からの形式化研究が近年登場している。また、幾何学に限らず、数学のさまざまな分野において図形が果たしている機能を取り出す研究も行われている。これらの研究動向を踏まえた上で、図形推論の哲学的基礎や図形に関する研究がいかなる哲学的重要性を持つのかを検討した。最終年度(平成26年度)はライプニッツ哲学におけるモナド概念の展開と数学研究との関連性を解明する研究を進めた。具体的には、ライプニッツが単純実体であるモナドの存在にコミットする1695年以降のモナド概念の展開を、モナドと身体的部分、一性の原理としてのモナド、モナドと合成実体という観点から、一次資料の読解および二次資料の批判的検討によって明らかにした。

その結果として、1700年以降のモナド概念の展開と空間概念の展開との間には何らかの相関関係があるのではないかという見通しを得ることができた。この点に関しては今後の遺稿研究により解明を進める予定である。また、ライプニッツ哲学において単純実体であるモナドの存在がどのように正当化されているのかという点に関して、先行研究を踏まえつつ、解明を進めた。その結果、ライプニッツはまず実体の一性を論証し、続けて実体の単純性を論証することで、モナドの存在論証としていたことを明らかにし、さらに、合成実体の存在に対する態度が曖昧であるために、単純実体のみの存在論の確立には成功していないという先行研究の指摘を踏み入って検討し、近年刊行された全集に収録された資料などを参照すると、必ずしもそうとは言い切れないことを示すことができた。その上で、ライプニッツのモナドロジーは、存在者の世界を基礎的存在者を中心とした還元関係による構造を持つ世界として解明することを目指しているという解釈を提示し、この解釈であれば、最晩年のモナドロジーにおけるモナド概念の多義性など、伝統的にテキスト解釈上の問題とされてきた点を整合的に説明できるという道筋を示すことができた。今後は遺稿研究を進めることでこの解釈の説得力を高める研究を行う予定である。研究発表の資料などを公開している。哲学ライプニッツの幾何学草稿や空間論草稿を精読することで、かれの幾何学研究と空間論の結びつきを、中後期についてはある程度明らかにすることができた。また、得られた研究成果により、今後より踏み込んだ資料調査が必要な部分も明確にすることができた。現代的意義についての研究も具体的な問題点とその解決の見通しも得られている。以上より、研究はおおむね順調に進展していると判断できる。ライプニッツの初期数学草稿を精読することで、かれの数理哲学と数学研究のつながりはある程度明らかにすることができた。また、当初考えていた仮説のうち、より踏み込んだ資料調査が必要な部分も明確にすることができた。以上より、おおむね研究は順調に進んでいると判断できる。今後の研究としては、平成25年度までの研究成果を総合し、ライプニッツの数理哲学の全体像を解明する予定である。また、ライプニッツ数理哲学の現代的意義に関する研究として、図形推論に関する研究も進める予定である。研究成果は研究書として公刊することを目指しており、そのための準備作業も合わせて行う。今後は、平成24年度の研究により新たに明らかになった課題も含めた検討を行う。具体的には当初の予定通り、平成25年度はライプニッツの哲学草稿の検討を主に行い、平成26年度にそれまでの研究成果を総合し、ライプニッツの数理哲学の全体像を解明する予定である。また、平成24年度に入手予定であった資料のうち、既に電子化されて無償公開されているものや入手に時間のかかるものがあったため、その分の研究費は次年度に使用する予定である。平成25年度に入手予定であった資料のうち、既に電子化されて無償公開されているものや入手に時間のかかるものがあった。その分の研究費は平成26年度に使用する予定である。西洋近代哲学、数学史研究、数理哲学研究などに関する資料を揃える。また、より効率的に研究を進めるため、既に入手した資料の電子化も継続して行う。そのために必要な環境も整備する予定である。さらに、研究者と意見交換を行ったり、研究成果を学会等で発表するための旅費として研究費を用いる。
言語接触論・通言語学的観点から捉えた日本語の形成における漢文訓読の役割の再検討

本年度はプロジェクト期間中の成果をまとめると同時に、日本の訓点資料、韓国の口訣資料、ヨーロッパのグロス資料の比較研究を促進するための記述規範を定めた。本規範はこれまでに英語による本格的な研究がほとんど為されてこなかった訓点資料および口訣資料の用例を英語で記述するためのもので、日本の訓点語学会で発表する他、韓国の口訣学会およびアイルランド国立大学ゴールウェイ校で行われた比較グロッシング・ワークショップ「Glossing cultural change: Comparative perspectiveson manuscript annotation, c. 600-1200 CE」で発表し、広く好評を博した。この他、平安時代初期加点の西大寺本『金光明最勝王経』における借用転成(漢語の影響で本来とは異なる品詞に派生/転換した語)と借用統語(漢語の影響を受けた統語形式)を調査し、東北大学で行われた「第3回日本語と近隣言語における文法化ワークショップ」でその成果を発表した。本プロジェクトで行った訓点資料の調査は主に意味借用に注目したが、今回、意味借用以外の形式についても詳しく取り上げることができたのはひとつの大きな成果であると言える。プロジェクト期間中にあげた成果は今一冊の著書にまとめ、2020年頃の刊行を目指している。本年度の12月には2016年度より始めた『史記桃源抄』(全5冊)の電子テキスト化をようやく完了し、現在ネットで全文検索システムをデザインしている。近日中にはJSPS特別研究員奨励費11J07278および科研費25870077の助成金で電子テキスト化した『雑談集』『三国伝記』『毛詩抄』等の資料とともに「中古・中世漢字仮名交じり文コーパス」の形でネット上で一般公開する予定である。本年度は研究計画調書に記したように、日本の訓点資料における借用形式の調査に専念した。具体的には西大寺本『金光明最勝王経』平安初期点を調査資料とし、全10巻から翻訳借用語(loan translation)180語と借用転成(loan derivation)22語を採集した。採集した用例を分析した結果、翻訳借用語の場合は一対一の直訳が圧倒的に多いが、なかには音調を整えるために複合語の項を逆にしたものや、日本語において同様な概念がないため、一部を意訳したものがあることを明らかにした。また、転成借用については転成のパターンは基本的に日本語の形態統語論的法則に従っているが、転成の結果生まれた語形は意味の面で転成する前の語形から大きくかけ離れている場合が多いことがわかった。本調査の成果はThe 24th Japanese/Korean Linguistics Conferenceで発表し、後に同学会の機関紙で論文として公表した。もう一つの課題として、訓点資料における訓読みの定着過程を見てきた。その結果、古代において難解な字の訓を決める際に加点者は中国の字書や古典注釈書でその字を調べ、字書・注釈書の記述に現れる比較的容易な字を基準にして(reference character)、機械的に訓を選定したという仮説を立てた。本調査の成果は国内と海外(ドイツ)の研究会で発表した。また、この他、訓点語における文法化の種類について国内の研究会で発表した。上記の調査に加えて、本年度は2011年より構築を続けている「中古・中世漢字・仮名交じり文コーパス」の資料を大きく増加した。具体的には亀井孝・水沢利忠(1964-1973)『史記桃源抄の研究ー本文篇』(日本学術振興会)全5冊の内、第1冊と、第2冊の約半分程度(計約25万字)を電子テキスト化した。研究計画調書には平成28年度中に次の三つの仕事に従事すると述べた。1西大寺蔵『金光明最勝王経』平安初期点における借用形式を調査する。2調査結果をまとめたうえで、日本語における漢字・漢文を媒介とした言語借用形式の特徴を明らかにする。3亀井孝・水沢利忠(1964-1973)『史記桃源抄の研究ー本文篇』(日本学術振興会)全5冊の電子化を始めると同時にこれまでに電子化してきたテキストの再校正作業を行う。1・2についてはおおむね計画通りに研究成果が挙げられたと言える。3は予算削減のため、以前に電子化したテキストの再校正ができなかったが、史記桃源抄の全5冊の内、約1冊半が電子化でき、このペースで進むと、平成30年度までには全5冊の電子化が完了できそう。本年度は日本の訓点資料における借用形式の調査を続けると同時に、ヨーロッパに渡り、現地の研究機関に勤めるグロス資料研究者と情報交換を行った。訓点資料における借用形式の例として、和語「のる」「のす」を挙げ、これらの語が本来「乗り物の上または中に位置[する/させる]」という義しか持たなかったが、漢文訓読において「載」字の訓として定着することにより、「記載[される/する]」義を借用したことを明らかにした。意味借用の例として、以前に「写」字から「書写する」義を借用した「うつす」と、「著」字から「著述する」義を借用した「あらわす」を調査しているが、意味借用はこのような漢字伝来以前において未発達であった書記行為等の意味領域において起こりやすいと結論付け、機関誌『訓点語と訓点資料』で本調査の成果を公表した。また、一般向けの概説書『漢字』(日本語ライブラリー、朝倉書店)においてこれまでの字義・意味借用研究をまとめて公表した。以上の訓点

資料調査に加え、8月末から9月上旬にかけ、ゴールウェイ(アイルランド)とパリで各一周間ほど滞在し、アイルランド国立大学ゴールウェイ校とフランス国立科学研究センター(CNRS)に勤めるアイルランド語とラテン語のグロス資料研究者と情報交換を行いつつ、両者の比較研究をテーマにした論文集の企画を立てた。また、パリを訪れた際に、International Conference on the History of the Language Sciences 14(ICHoLS 14)で漢字を媒介とした意味借用の類型について発表した。これらの研究活動に加え、昨年から始めた『史記桃源抄』の電子テキスト化も本年度引き続き行い、全5冊の内、昨年度完成した第1巻に加え、第23巻及び第45巻の約半分ずつ(約50万字)を電子化し、来年度中には全5冊の電子化が完成する見込みである。研究計画調書には平成29年度中に次の三つの仕事に従事すると述べた。1調査:訓点資料の調査に専念しながら、一度ヨーロッパに渡り、グロス資料の現地調査を行う。2分析:上記の訓点資料とグロス資料調査の結果をもとに訓読とグロッシングの言語変化への影響を比較検討する。3コーパス作成:『史記桃源抄』の電子化を進め、本年度中に初校正を完了する。この内、1は計画通りに行えた。意味借用を中心に訓点資料調査を進め、その成果を雑誌論文や概説書、国際学会発表等という形で公表した。8月末から9月上旬にかけて、ゴールウェイ(アイルランド)及びパリにグロス資料調査に赴き、実際の資料を見るほか、現地の研究者と意見交換を盛んに行い、今後の調査に役立つ多くの助言をもらった。2についてはヨーロッパで得た調査結果や研究者の助言をもとに検討を始め、平成30年度中に国際学会発表または論文の形で調査結果を公表する予定である。3については、『史記桃源抄』の初校正は完了しなかったものの、テキストの約5分の4が電子化でき、平成30年度早期には完了する見込みである。本年度はプロジェクト期間中の成果をまとめると同時に、日本の訓点資料、韓国の口訣資料、ヨーロッパのグロス資料の比較研究を促進するための記述規範を定めた。本規範はこれまでに英語による本格的な研究がほとんど為されてこなかった訓点資料および口訣資料の用例を英語で記述するためのもので、日本の訓点語学会で発表する他、韓国の口訣学会およびアイルランド国立大学ゴールウェイ校で行われた比較グロッシング・ワークショップ「Glossing cultural change: Comparative perspectiveson manuscript annotation, c. 600-1200 CE」で発表し、広く好評を博した。この他、平安時代初期加点の西大寺本『金光明最勝王経』における借用転成(漢語の影響で本来とは異なる品詞に派生/転換した語)と借用統語(漢語の影響を受けた統語形式)を調査し、東北大学で行われた「第3回日本語と近隣言語における文法化ワークショップ」でその成果を発表した。本プロジェクトで行った訓点資料の調査は主に意味借用に注目したが、今回、意味借用以外の形式についても詳しく取り上げることができたのはひとつの大きな成果であると言える。プロジェクト期間中にあげた成果は今一冊の著書にまとめ、2020年頃の刊行を目指している。
磁性体/半導体ハイブリッド系材料のエピタキシャル成長とその応用

研究代表者らが独自に開発した、磁性イオンを大量に含むIII-V族磁性半導体、および強磁性金属とIII-V半導体とから成るヘテロ構造を、分子線エピタキシーによって原子レベルで構造と膜厚を制御しながら作製し、磁性体/半導体ハイブリッド系材料の形成技術を確立した。さらに、その物性を探索するとともに、従来の半導体または磁性体の単独物質ではみられない機能の実現とそのデバイス応用の研究を行い、下記の成果を得た。(1)磁性半導体(GaMnAs)および磁性半導体(GaMnAs)/非磁性半導体(InAs, GaAs, AlAs)から成る量子ヘテロ構造、さらにGaAs中にMnAsクラスタを埋め込んだグラニュラー構造における磁気光学効果の増大を実現した。これを利用した半導体磁気光学結晶を作製し、光アイソレータ応用の指針を示した。(3)磁性金属(MnAs)/III-V半導体(GaAs, AIAs)エピタキシャルヘテロ構造からなる強磁性トンネル接合デバイスを試作し、低温から室温に至るまでトンエル磁気抵抗効果を観測した。(4)強磁性(GaMnAs)/非磁性(ALAs)III-V半導体エピタキシャルヘテロ構造からなる強磁性トンネル接合デバイスを試作し、低温で最大75%に達する大きなトンエル磁気抵抗効果を観測し、このような単結晶強磁性トンネル接合におけるスピン依存トンネル現象ではキャリアの界面平行の結晶運動量ベクトルκ_<//>が保存されることを示した。平成11年度は、磁性体/半導体ハイブリッド系材料のエピタキシャル成長による形成技術の確立をめざし、以下の研究を行った。・低温非平衡成長条件による磁性半導体(GaMnAs)/非磁性半導体(InAs、GaAs、AlAs)から成る量子へテロ構造・超格子・量子井戸構造の分子線エピタキシー(MBE)成長技術を確立した(東京大学)。・MBEを用いたテンプレート法による強磁性金属(Mn-V,MnーIII)/III-V族化合物半導体(InAS,GaAs,AlAs)から成る異種物質へテロ構造・多重構造の分子線エピタキシー(MBE)成長(東京大学)を行い、多数の貴重な試料を作製した。・MBEでエピタキシャル成長した上記の磁性体/半導体ハイブリッド系材料の構造評価・反射高エネルギー電子線回折を用いた成長中のその場観察を行った。(東京大学)。また、X線回折、ラザフォード後方散乱法、透過型電子顕微鏡による断面観察などによる原子レベルでの構造評価をおこなった(米国ミネソタ大学)。・エピタキシャル強磁性金属薄膜(MnAs,MnGa)の原子配列と半導体/金属界面構造の評価を含む系への拡張、及び原子レベルにおけるエピタキシャル成長機構について調べ、格子緩和が界面の1原子層でおこっていることを明らかにした(東京大学とベルギー大学間マイクロエレクトロニクスセンター)。平成12年度には、磁性体/半導体ハイブリッド系材料の電子・光・磁気物性の解明に焦点をあてた以下の研究を行った。(1)強磁性体(MnAs)/非磁性半導体(InAs,GaAs,AlAs)から成るヘテロ構造の磁気特性・さまざまな結晶方位をもつMnAsエピタキシャル薄膜の磁気光学効果(磁気円2色性)スペクトルを測定し電子構造の理論計算との比較を行った。またその温度依存性を明らかにした。・低温-室温における磁気抵抗効果、特にスピンバルブ効果を観測し、その温度依存性およびスペーサの半導体の禁制帯幅依存性を調べることにより、キャリア熱励起の影響を明らかにした。(2)GaMnAs/AlAs/GaMnAsから成る強磁性半導体ヘテロ接合を成長し、強磁性トンネル接合デバイスを作製した。AlAs障壁幅が1.6nm以下の薄い場合には70%を越える非常に大きなトンネル磁気抵抗効果を低温で観測した。・GaAs/ErAs/GaAs埋め込みヘテロ構造を成長し、原子レベルで平坦かつ急峻なヘテロ構造を形成したことを確認した。・ダイオードを作製し垂直方向の電子伝導を調べたところ、室温で7.2,77Kで18.3という極めて大きなピーク/バレー比をもつ微分負性抵抗特性を観測した。

研究代表者らが独自に開発した、磁性イオンを大量に含むIII-V族磁性半導体、および強磁性金属とIII-V半導体とから成るヘテロ構造を、分子線エピタキシーによって原子レベルで構造と膜厚を制御しながら作製し、磁性体/半導体ハイブリッド系材料の形成技術を確立した。さらに、その物性を探索するとともに、従来の半導体または磁性体の単独物質ではみられない機能の実現とそのデバイス応用の研究を行い、下記の成果を得た。(1)磁性半導体(GaMnAs)および磁性半導体(GaMnAs)/非磁性半導体(InAs, GaAs, AlAs)から成る量子ヘテロ構造、さらにGaAs中にMnAsクラスタを埋め込んだグラニュラー構造における磁気光学効果の増大を実現した。これを利用した半導体磁気光学結晶を作製し、光アイソレータ応用の指針を示した。(3)磁性金属(MnAs)/III-V半導体(GaAs, AlAs)エピタキシャルヘテロ構造からなる強磁性トンネル接合デバイスを試作し、低温から室温に至るまでトンエル磁気抵抗効果を観測した。(4)強磁性(GaMnAs)/非磁性(AlAs)III-V半導体エピタキシャルヘテロ構造からなる強磁性トンネル接合デバイスを試作し、低温で最大75%に達する大きなトンエル磁気抵抗効果を観測し、このような単結晶強磁性トンネル接合におけるスピン依存トンネル現象ではキャリアの界面平行の結晶運動量ベクトルk_<11>が保存されることを示した。
重金属の慢性毒性予測モデルの構築と適用性評価

甲殻類、藻類の慢性影響におよぼす水質の影響を検討し、モデル化を検討した。甲殻類に対するニッケルの慢性毒性は硬度(カルシウム、マグネシウム)、pHの影響を受けることが明らかになった。モデルを構築し、実排水の結果を予測したが、EC50は3倍以内の誤差で予測できたが、EC20は誤差が大きかった。藻類にニッケルの慢性毒性は硬度(マグネシウム)、pHの影響を検討し、甲殻類同様の影響を受けることが明らかとなった。暴露中のNiの存在形態の変化、甲殻類・藻類のNi蓄積量と影響の関連についても検討した。ニセネコゼミジンコと藻類(ムレミカズキモ)において暴露実験(途中、修了)時におけるニッケルの存在形態別測定および体内蓄積量を評価するための試験法を検討した。藻類と溶液の分離においては遠心分離法ではなく、メンブレンフィルター(Φ0.2μm)によるろ過が有効であった。さらに、藻類試験の場合は、メンブレンフィルターをEDTA溶液で洗浄することにより、表面吸着(細胞外)金属と細胞内金属を分離でき、さらにメンブレンフィルターをマイクロウェーブオーブンにより湿式分解することでICP-MS用の試料がえられた。一方、ニセネコゼミジンコの場合は、回収した個体を湿式分解することが可能であったが、個体の重量がわずかであり、かつ、持込みの液の影響もあり、詳細な解析はできなかった。ニセネコゼミジンコ繁殖毒性試験では、Ca・Mg濃度、pHを変化させて、ニッケルの毒性に対する影響を検討した。その結果、硬度の増加によって急性毒性同様ニッケルの慢性毒性は減少することが明らかとなったが、pHの影響は毒性値によって傾向が異なった。全農度及びフリーイオンで示した毒性の変化からpHが低いほど慢性毒性は低いと考えられるが、pHの影響はさらに検討が必要である。本研究の試験水の硬度は85315mgCaCO3/Lである。日本の硬度は100mgCaCO3/L以下が多く、日本で適用させるには低硬度から実験が必要である。一方、藻類生長阻害試験では、pHが増加するとニッケルの毒性が減少する(EC10,EC50が増加)する傾向が認められた。しかし、NOEC、LOEC(設定値)はそれぞれ80μg/L、160μg/Lと変化は認められなかった。一方、Mg2+が増加すると毒性の減少が認められた。暴露濃度がするにつれて、表面吸着および細胞内金属が増加する傾向が認められたが、若干バラツキが大きく、モデル化するには至らなかった。Niのニセネコゼミジンコへの慢性毒性に与えるpHの影響を検討するために、5濃度区(Ni : 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0 &#181;g/L)を用意し、pHを6, 7, 8, 9を調整し試験を実施した。EC20およびEC50はECOTOXを用いて算出した。pH6では試験成立条件を満たさなかったが、Niの影響濃度(EC20、EC50)はpHが上昇するほど増加し、毒性が緩和する傾向が認められた。この傾向は、pHが上昇することで水中に存在する遊離Ni濃度が低下し、甲殻類への毒性が緩和されたと報告されているNiの急性毒性と同様の傾向であった。今回行った慢性毒性試験の結果は急性毒性と同様に、溶存態のNiの減少が毒性の緩和をもたらしたと推察された。一方、慢性毒性試験に用いる飼料(藻類、YCT)へのNi吸着量に及ぼすpHの影響を検討した。通常の試験時には、1時間で約70%、48時間でほぼ100%のNiが餌に吸着し、試験水中のNiは時間経過とともに餌に吸着し、溶存態Niの濃度が低下する傾向が認められた。また、pHが高くなると、餌に吸着するNi量が増加することが観察された。以上のように、pHと飼料がNiの存在形態に影響を与えることが明らかとなった。毒性の観点からは、水相経由の直接暴露(溶存態)と飼料経由の間接暴露(吸着態)がミジンコの体内摂取量に考えられる。pHの増加に伴い、前者が低下し、後者が増加するが、毒性は緩和されることから、前者の効果(溶存態の減少)が卓越していたと推察される。また、金属影響の予測モデルの検証データ取得のために、7事業場排水を採取し、ニセネコゼミジンコへの慢性試験を実施した。一般項目の水質分析、ICP-MSによる元素分析を行った。pHのNi慢性影響に関しては明確な影響が得られ、また、飼料への吸着量の影響も明らかにすることができた。しかし、吸着量の分析結果にばらつきが認められ、吸着量と溶存態の分配関係をモデル化することはできなかった。本研究では、甲殻類に対するニッケルの慢性毒性における経口摂取の寄与を明らかにすることを目的とした。具体的には、暴露中の飼料への吸着量の把握、pH変化が経口摂取毒性に与える影響を検討した。さらに、試験水経由の毒性値と経口摂取経由の毒性値を求めたうえでモデル作成を行い、毒性予測の可能性を検討した。Ni濃度0.58.0μg/Lの範囲で、異なるpH(7、8、9)条件下でのNOEC(無影響濃度)とEC20、EC50を検討した。pHの上昇に従って、NOECと影響濃度は増加し、毒性低下が認められ、既往の知見と一致した傾向を得た。

次に、経口摂取による毒性の寄与を検討するため、Niを吸着させた藻類(ムレミカヅキモ)を投与して試験を行った。藻類はニッケルを含んだC培地で24時間振盪培養しニッケルを吸着させた。調整した藻類を未暴露の藻類と混合して、先の液相暴露と同等の濃度になるように調整し飼料として与えた(0.58.0μg/L)。さらに、pHを7,8,9と調整して実験を行った。試験条件を満たしたpH8,9ではNOECはいずれも4μg/Lと同等であった。しかし、最大濃度での阻害率ではpH9で若干の緩和がみとめられ、液相と同様の緩和傾向が認められた。藻類濃度から餌の摂取速度の定量を試みたが試験容器内の沈降・吸着等の効果が摂取量自体よりも大きく正確な値を得ることができなかった。しかし、以上の結果から経口摂取より液相からの暴露の影響が大きいことが明らかとなった。繁殖阻害試験から得られた影響濃度により、ミジンコの経口摂取経由の毒性のモデル化を行い、過去に実際に採取された事業場排水のNi毒性値の予測を行った。本研究で得られた予測式では、暴露経路に関わらず、予測値が負の値を示した。予測モデルの精度を上げるためには飼育条件を改善して実験のバラツキを抑え、かつ、実験数を増やす必要があることが示唆された。甲殻類、藻類の慢性影響におよぼす水質の影響を検討し、モデル化を検討した。甲殻類に対するニッケルの慢性毒性は硬度(カルシウム、マグネシウム)、pHの影響を受けることが明らかになった。モデルを構築し、実排水の結果を予測したが、EC50は3倍以内の誤差で予測できたが、EC20は誤差が大きかった。藻類にニッケルの慢性毒性は硬度(マグネシウム)、pHの影響を検討し、甲殻類同様の影響を受けることが明らかとなった。暴露中のNiの存在形態の変化、甲殻類・藻類のNi蓄積量と影響の関連についても検討した。ミジンコの体内蓄積量を測定する以外は、基本的な試験方法は確立した。また、硬度による毒性緩和の影響は明確にとらえられたが、pHの影響に関してはばらつきが多く、明確な結論を得るには至らなかった。特にpH実験に関しては、pHの変動が大きくその影響があると推定される。設定pHに応じた適切な緩衝液の選択が重要であることが明らかとなった。正確な分析値を得るために、メンブレンフィルターの分解法(硝酸による湿式酸化硝酸)およびバックグランド値などについて今後検討が必要である。今後は分析方法を改善し、吸着量と溶存量の分配関係を明らかにし、モデル化を進める。同時に、他の金属(Cu,Zn)についても同様の実験を進めてモデルを構築する予定である。また、事業場排水で得られたデータをモデルの検証に用いて取りまとめを行う。環境工学今後は、実験の精度を上げながら、再現性のある結果を得る必要がある。同時に、溶存態ニッケルを測定するために用いたキレート樹脂の前処理条件(pH調整)に関しても見直す必要があることが明らかとなった。pHを5程度に調整するこの操作自体が存在形態を変化させるため、常に化学平衡予測モデル(MINTEQ)より実測値の方が過大評価される傾向が認められた。以上の点を再検討しながらニッケルの慢性毒性に関する硬度、pHの影響を再度確認しながら、次の金属種(Cu,Zn)について実験を進める予定である。分析にしたメンブレンフィルターが予想より使用量が少なく購入量が抑えられたため。実験補助のアルバイトが自己都合により年度末に出勤できずそのため余剰が生じた。価格高騰が予想されるアルゴンガス等の購入にあてる。
肥満関連液性因子ＡＮＧＰＴＬ２を介した、脂肪肝炎・肝臓癌の病態機序の解明

アンジオポエチン様分子の一つであるAngptl2は脂肪組織へのマクロファージの動員を惹起し脂肪組織局所の炎症を増悪させ、インスリン抵抗性および肥満を引き起こすadipocytokineである。メタボリックシンドロームの肝臓での表現形と考えられている非アルコール性脂肪肝炎(NASH)およびそれに関連した肝臓癌病態機序にAngptl2が重要な役割を果たす可能性が示唆される。そこで今回Angptl2遺伝子欠損マウスと、ヒトNASHおよび肝臓癌臨床検体を用いて、NASH発症・進展と発癌病態機序におけるAngptl2の果たす役割の解明を試みた。臨床応用を目指し、今後の研究を推進させる。我々は既に、Angptl2ノックアウトマウスを作成した。これらのノックアウトマウス・wildマウスに、CCL4 4週間投与、DMN 12週間投与、Bile duct ligation施行により各々肝硬変モデルを作成し、肝臓の線維化の程度を、各マウス間で比較検討施行中である。各群の肝臓より、RNA、タンパク質を抽出し、DNA array法、Real time PCR法、Western blot法、免疫沈降法、Gel shift assay法を用い、Akt、MAPK、AMPキナーゼ、PPARalpha,beta,gamma signal、サイトカインを初めとした各種パラメーター及び、転写因子の変化をさらに定量的に評価施行している。さらに、ミトコンドリア抽出により、その膜電位・ATP合成を定量評価している。また、各グループ内で、肝臓RNA・タンパク質、血清タンパク質に関して、DNAマイクロアレイ法およびprotein chip法をおこない、病態形成に有意義と考えられる遺伝子産物のピックアップも施行中である。肝臓癌モデルとして、Diethylnitrosamine 6週間投与、またはコリン欠損食+ethionine 9カ月投与を施行中である。さらに、近年報告された、高脂肪食摂取とDiethylnitrosamineの組み合わせによる肥満誘導性の肝臓発癌モデル(Park-EJ et al. Cell 2010; 140: 197-208)も作成中である。腫瘍形成における各マウス間の差異を比較検討するとともに、apoptosis、細胞増殖能に関わる各種マーカーの検討準備中である。各群の肝臓より、RNA、タンパク質を抽出し、DNA array法、Real time PCR法、Western blot法、免疫沈降法、Gel shift assay法を用い、Akt, MAPK, AMPキナーゼ、PPARalpha, beta, gamma signal、サイトカインを初めとした各種パラメーター及び、転写因子の変化をさらに定量的に評価施行している。肝臓癌モデルとして、Diethylnitrosamine 6週間投与、またはコリン欠損食+ethionine 9ヶ月投与を施行済みである。さらに、近年報告された、高脂肪食摂取とDiethylnitrosamineの組み合わせによる肥満誘導性の肝臓発癌モデル(Park-EJ et al. Cell 2010; 140: 197-208)も施行済みである。これらのモデルに関しては、腫瘍形成における各マウス間の差異を比較検討するとともに、apoptosis、細胞増殖能に関わる各種マーカーの検討中である。現在得られたデータより、Angptl2の肝臓構成細胞に対する直接作用のレベルで、非アルコール性脂肪肝炎・肝臓線維化・肝臓癌の病態機序に果たすAngptl2の役割が解明されつつある。Angptl2に関わるこれらの知見を、実際の臨床における診断・治療へ応用させるべく、今後の研究を推進させる。これらのノックアウトマウス・wildマウスに、メチオニン・コリン欠損食、コリン欠損食投与を、各群が同一カロリーを摂取するように12週間施行し非アルコール性脂肪肝炎モデルを作成した。また、我々は既にマウス肝臓に非アルコール性脂肪肝炎を発症させる高脂肪食を調整しているため、同食餌に関しても各群が同一カロリーを摂取するよう24週間投与を施行し非アルコール性脂肪肝炎モデルを作成した。その後、各群のマウスの肝臓、内臓脂肪、皮下脂肪、骨格筋、血清を採取し、脂肪肝・肝障害・肝臓線維化の差異を、組織学的・血清学的に評価検討中である。また、各群の肝臓より、RNA、タンパク質を抽出し、Real time PCR法及びWestern blot法を用いて肝細胞障害、肝炎、肝臓線維化の各種マーカー遺伝子につき解析施行中である。

さらにReal time PCR法、Western blot法、免疫沈降法、Gel shift assay法を用い、Akt、MAPK、AMPキナーゼ、PPAR signal、サイトカインを初めとした各種パラメーター及び、転写因子の変化を定量的に評価検討中である。また、各グループ内で、病態形成に有意義と考えられる遺伝子産物のピックアップをおこなうため、肝臓RNA・タンパク質、血清タンパク質に関してDNAマイクロアレイ法およびprotein chip法の条件検討を施行中である。前年度は、Angptl2ノックアウトマウス及びwildマウスに非アルコール性脂肪肝炎モデルを作成した。また今年度は、肝臓線維化モデルを作成し、解析中である。今年度はさらに肝臓発癌モデルも作成中である。おおむね順調に進展しているものと考えている。今年後は予定通り、Angptl2ノックアウトマウスを用いた非アルコール性脂肪肝炎モデルを既に作成し、その各種解析を現在施行中であり、おおむね順調に進展しているものと考えている。本年度はAngptl2ノックアウトマウス及びwildマウスを用いて肝臓線維化モデルを作成し、またさらに肝臓発癌モデルを作成中であり、肝再生モデルの作成も予定している。既に作成した非アルコール性脂肪肝炎モデルと併せて、今後一括して詳細な病態機序の解析を進める予定としている。さらに今後、肝臓星細胞特異的Angptl2欠損マウス、肝臓星細胞Angptl2過剰発現トランスジェニックマウスを作成し、それらを用いた検討を同様に施行し肝臓局所での病態機序の解明をおこなう予定としている。各マウスより分離した、初代培養肝細胞・Kupffer細胞・肝星細胞・類洞内皮細胞を用いたin vitro解析も併せて進め、Angptl2の肝臓構成細胞に対する直接作用の検討も施行し、またその際Angptl2下流のシグナル伝達のメカニズムの解明、Angptl2発現制御因子の解析を試みる。さらに、防衛医科大学校病院の単純性脂肪肝・非アルコール性脂肪肝炎患者、肝硬変患者、肝臓癌患者における血清Angptl2濃度の測定、Angptl2遺伝子のSNP解析を施行する。肝生検によって得られた組織よりRNAを回収し、各種マーカー遺伝子の発現量を検討するとともに、免疫組織学的検討もおこなう。上記の動物実験で得られた知見とヒト病態との相関の検討をおこなう。本検討は、防衛医科大学校倫理委員会の承認のもと、文書にて患者の承諾を得た上で施行する。以上の検討により、非アルコール性脂肪肝炎・肝臓線維化・肝臓癌の病態機序に果たすAngptl2の役割を明らかとすることができる。Angptl2に関わるこれらの知見を、実際の臨床における診断・治療へ応用させるべく、今後の研究を推進させる。
有機半導体マイクロリング結晶における高Q値リング共振器の研究

自己組織的に形成される有機マイクロリング結晶の光学応答について調べた。有機結晶としてπ共役系有機半導体として高い光・電子特性を有する(チオフェン/フェニレン)コオリゴマーを対象とした。二つのマイクロリング結晶について弱励起下で空間分解発光スペクトルを調べたところ、発光帯域全体にわたって極めてシャープなピークシリーズが現れた。これはリング共振器内に形成されるウィスパリングギャラリーモードであり、リング共振器として機能していることを示している。(チオフェン/フェニレン)コオリゴマー(TPCO)結晶は光励起レーザー発振や発光トランジスタの実現など極めて有望な有機光半導体として注目を集めている。これまでTPCOをKCl基板上に気相成長するとニードル状構造の結晶が基板結晶に対してエピタキシャルに成長することが報告されていた。申請者はこの手法で作製されたTPCOナノニードル結晶がファブリーペロー共振器として機能することをこれまで明らかにした。最近になりKCl基板上に稀にマイクロリング状結晶が同時形成していることを見出した。この結晶はリング共振器として機能し、極めて高いQ値とフィネスを示すウィスパリングギャラリーモード(WGM)の形成が発光スペクトルから確認された。本研究では特にTPCOの一種であるBP1Tを用いて研究を行った。BP1Tを気相成長することにより直径1数ミクロン程度のマイクロリング結晶がKCl結晶上に作製されていることを光学顕微鏡及び原子間力顕微鏡で確認した。これらはKCl結晶表面上に存在するディスク状原子ステップ周囲に形成されたものと考えられる。この単一のマイクロリング構造について顕微発光分光を行いその発光スペクトルを調べた結果、複数の極めて鋭い発光ピークのシリーズが観測された。これらの発光線幅は分光器の分解能程度であり、確認できる範囲では共振器Q値が最大2000程度にもなった。さらにフィネスは最大30程度となることがわかり、これらのQ値及びフィネスは有機材料を持ちいたWGMが現れる構造としては報告されている中では最大の値を示すことがわかった。これは自己組織的に形成されるリング状結晶の構造の結晶表面が極めてなめらかであるため、リング共振器として優れた機能を有していると考えられる。(チオフェン/フェニレン)コオリゴマー(TPCO)結晶は光励起レーザー発振や発光トランジスタなどの有機光デバイスへの応用が期待されている有望な有機半導体である。これまでTPCOをKCl基板上に気相成長するとニードル状構造の結晶が自己組織形成しファブリーペロー共振器として機能することを明らかにした。最近になりKCl基板上にマイクロリング状結晶が同時に形成していることを見出した。この結晶はリング共振器として機能し、極めて高いQ値とフィネスを示すウィスパリングギャラリーモード(WGM)を形成することを発光スペクトルから確認した。BP1Tを気相成長することにより直径数ミクロン程度のマイクロリング結晶がKCl結晶上に作製できる。これらはKCl結晶表面上に存在する円盤状の原子ステップ構造の周囲に分子が整列してエピタキシャルに付着し形成されたものと考えられる。この単一のマイクロリング構造について顕微発光分光を行いその発光スペクトルを調べた結果、WGMによる複数の極めて鋭い発光ピークのシリーズが観測された。その発光線幅より共振器Q値が最大2000程度、フィネスは最大30程度となることが判明し、有機材料を用いたWGMが現れる構造としては報告されている中では最大の値を示すことがわかった。これにより自己組織形成されるリング状結晶が極めて優れたリング共振器を構成することが明らかとなった。さらに個々のリング結晶において複数の系統だったモードが観測され、これらはそれぞれが異なるQ値依存性を持つことがわかってきた。このような振る舞いはリングの断面サイズ及び形状に依存して現れる横モードの違いで説明できる可能性があると考えられる。詳細なサイズ及び形状の情報を得ることで詳細な共振器特性についての知見が得られることが期待できる。これまで気相成長によりKCl結晶基板表面上にBP1Tを成長させ、KCl基板上に1個/cm^2以上の割合でリング結晶の自己組織化成長を行ってきた。まだ具体的な成長メカニズムは明らかにできていないが、基板となるKCl結晶表面の状態に依存する可能性が示唆され、結晶成長メカニズムの解明に向けて取り組むべき方向性が見えてきた。また多数のリング状構造について、これまで顕微発光分光測定を行うことにより様々なサイズ・状態のリング状構造の共振器特性について調べてきた。リングのサイズによる共振器特性の依存性の詳細について多数の情報が得られ、特にリング共振器の性能として共振器Q値とフィネスがこれまで観測された中でも最大の値(Q値:2000程度、フィネス:30程度)を示すリング結晶を見出すことができており、他グループによる有機材料系のリング共振器に比べ極めて高い性能をもつ自己組織形成リング共振器として機能することを示してきたが、新たに各リング結晶において複数の系統だったモードが現れること、単一のリング結晶にもかかわらずそれら異なるシリーズのモードではわずかに異なる有効半径を持つこと、さらにそれぞれが異なるQ値依存性を持つことが詳細な解析により明らかとなってきた。またこれらはリングの断面サイズ及び形状に依存する横モードの違いで説明できる可能性があることがわかってきた。本研究で得られる自己組織形成リング結晶が極めて優れたリング共振器として機能することだけでなく、個々のリング共振器のモード形成についても明らかにすることができた。

以上のことから本研究がおおむね順調に進展していると結論することができる。(チオフェン/フェニレン)コオリゴマー(TPCO)結晶は光励起レーザー発振や発光トランジスタなどの有機光デバイスへの応用が期待されている有望な有機半導体である。これまでTPCOをKCl基板上に気相成長するとニードル状構造の結晶が自己形成しファブリーペロー共振器として機能することを明らかにした。最近になりKCl基板上にマイクロリング状結晶が同時に形成していることを見出した。この結晶はリング共振器として機能し、極めて高いQ値とフィネスを示すウィスパリングギャラリーモード(WGM)を形成することを発光スペクトルから確認した。本研究では特にTPCOの一種であるBP1Tを用いて研究を行った。BP1Tを気相成長することにより直径数ミクロン程度のマイクロリング結晶がKCl結晶上に作製できる。これらはKCl結晶表面上に存在する円盤状の原子ステップ構造の周囲に分子が整列してエピタキシャルに付着し形成されたものと考えられる。この単一のマイクロリング構造について顕微発光分光を行いその発光スペクトルを調べた結果、WGMによる複数の極めて鋭い発光ピークのシリーズが観測された。その発光線幅より共振器Q値が最大2000程度、フィネスは最大30程度となることが判明し、有機材料を用いたWGMが現れる構造としては報告されている中では最大の値を示すことがわかった。これにより自己組織形成されるリング状結晶が極めて優れたリング共振器を構成することが明らかとなった。さらに個々のリング結晶において複数の系統だったモードが観測され、これらはそれぞれが異なるQ値を持つことがわかった。このQ値依存性はリングの断面サイズ及び形状に依存して現れる横モードの違いで説明できると考えられる。またモード間隔から各モードのWGMモード数を見積もることができ、リング共振器特性についての詳細を明らかにすることができた。自己組織的に形成される有機マイクロリング結晶の光学応答について調べた。有機結晶としてπ共役系有機半導体として高い光・電子特性を有する(チオフェン/フェニレン)コオリゴマーを対象とした。二つのマイクロリング結晶について弱励起下で空間分解発光スペクトルを調べたところ、発光帯域全体にわたって極めてシャープなピークシリーズが現れた。これはリング共振器内に形成されるウィスパリングギャラリーモードであり、リング共振器として機能していることを示している。これまで気相成長によりKCl結晶表面上にBP1Tを成長させてきたが、リング状構造確認できた例は極めて少なくKCl表面上に1個/cm2程度しか見いだすことができていなかった。形成メカニズムが十分理解できておらず、どのような成長条件が有効であるか把握できていなかったため、非効率に作業を進めてきた。しかし最近になり気相成長の最適温度条件を探しより効率的に多数のリング状構造を作製することに成功した。
神経特異的蛋白質遺伝子の発現調節機構の解明

脳神経系では多種多様の細胞が複雑でしかも整然とした構造を構築している。細胞に特有の性質を与えている根本には、その細胞で特異的に発現している蛋白質があるので我々は脳神経系で特異的に発現している蛋白質の遺伝子をクロ-ニングし、その遺伝子の発現の制御機構を解析したので報告する。われわれはニュ-ロンのマ-カ-遺伝子としてニュ-ロフィラメント(NF)遺伝子、アストロサイトはグリア線維性酸性蛋白質(GFAP)遺伝子、オリゴデンドロサイトはミエリン塩基性蛋白質(MBP)とミエリンプロテオリピド蛋白質(PLP)遺伝子を選び解析した。MBP遺伝子はグリオ-マとニュ-ロブラスト-マのハイブリッド細胞であるNG108-15細胞で効率よく転写されることが明かとなった。また、転写開始部位上流235bpあればMBPプロモ-タ-は効率よく転写されることが明かとなった。そこで上流200bpほどの部分をより細かく区切った欠失変異体が作成したところ、-139から-118に削られると、著しく活性の減少することが明かとなった。この領域には転写制御因子の1つであるNF-1の認識配列に近いboxが存在する。-89から-75に短くなっても活性がさらに減少するが、この領域にはGC box及びCAAT box様の塩基配列が存在する。次にどのような細胞因子がMBP転写に必須なのか調ベるためにin vitro転写によく用いられるHaLa細胞の抽出液でMBPプロモ-タ-領域を含むDNA断片を転写させたところ、in vivoの転写開始部位と同じ場所から転写されることがわかった。MBPプロモ-タ-領域のNF-1,GC box,CAAT box,TATAbox様の塩基配列の配列に変異を加えて解析したところ、CAAT box以外はすべて変異によって転写効率が減少し、NF-1,SP-1などの細胞因子がMBP遺伝子の転写に寄与していることが示唆された。なかでもNF-1結合部位はMBPの組織特異的な発現に必要であり、脳組織特異的なNF-1様因子の存在が示唆された。GFAP遺伝子の発現調節機構をMBP遺伝子と比較しながら解析を進めた。GFAP遺伝子は、GFAPcDNAをプロ-ブにしてマウスゲノムライブラリ-よりクロ-ニングし転写開始部位を決定し、その上流域2.5kbの塩基配列を決定した。種々の細胞でGFAP遺伝子プロモ-タ-の活性を調ベると、GFAP産生細胞で特に活性が高く、-256bp以内にこの細胞特異性を決めるcisエレメントが存在することが判明した。核内因子の結合部位をDNaseIフットプリント法を用いて解析すると、-82-104(I)、-104-124(II)、-140-163(III)の三つの領域に脳組織やC6の核内因子が結合した。Iの領域にはAPー2が、IIの領域にはNF-1が、IIIの領域にはCRE(cyclicAMP responsible element)のモチ-フがあった。これらのフットプリント領域について、塩基置換を起こすと核因子の結合能を失う。転写活性を測定しても、IIIの領域は細胞特異的な転写抑制領域であり、この抑制効果はIの領域と機能的に共役していることがわかった。正に働く最も重要なcisエレメントはIIの領域である。IとIIIを破壊するとGFAP産生細胞でのみ発現する特異性が消えて、NG108-15などニュ-ロン系の細胞やNIH3T3などの線維芽細胞でも発現する。このようにMBP,GFAP遺伝子ともにその中心的な組織特異性を示す活性化因子として、NF-1という普偏的な因子が見つかってきた。しかし、詳細に検討するとわずかながら精製NF-1と脳組織由来の核抽出液を用いたDNaseIフットプリントのパタ-ンの異なることがわかってきた。そこで、NF-1,cDNAをプロ-ブにマウス脳cDNAライブラリ-をスクリ-ニングしたところ脳特異的なNF-1様因子のcDNAを単離することができた。現在この因子の生理的意義について検討中である。68kDaニュ-ロフィラメント(NF)についても遺伝子をクロ-ニングし、その発現制御機構について検討した。NFプロモ-タ-はどの細胞においても強い活性を示した。また、5′末端から欠失変異体を作成しNFを発現しているPC12細胞と発現していないC6細胞に導入したが、同じようなパタ-ンで活性が変動した。また、HeLa細胞の抽出液を用いたin vitroの転写系においても非常に効率よく転写された。即ち、NF遺伝子は非神経系でNegative Regulationを受けている可能性がある。しかし、今のところどの領域で、どの様な因子によって抑制を受けているかわかっていない。さて、我々はグリア系の細胞に発現しているMBPとGFAP遺伝子はPositive Regulation、ニュ-ロンに発現しているNFは、Negative Regulationを受けていることを示唆したが、はたしてこのような機構はそれぞれの細胞で普偏的なものであろうか。ミエリンプロテオリピド蛋白質(PLP)は、MBP同様オリゴデンドロサイトで合成され、しかもその発現時期もMBPとともにミエリン形成期と同調している。この両遺伝子を比較することで、オリゴデンドロサイトで遺伝子が発現するためのシグナルが見つかるのではないかと期待された。