hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
グローバルエデュケーターとしての英語教員を目指す統合的留学プログラムの効果と課題

グローバルエデュケーターとしての英語教員を育成するための教員養成課程に統合された長期留学プログラムの効果と課題を検証する本研究から明らかとなったことは大きく分けて2つある。1つ目は、留学前に英語の多様性に対しどのような理解・態度を抱いているかにより、留学中の多様な英語話者との接触の解釈が異なること、2つ目は「留学」という体験の捉え方により、同じ事象でもそれに対する意味付けが異なることである。これらのことから、留学を留学前教育からの一つのパッケージとして捉え、留学前に英語の多様性への理解の促進・教員というキャリア形成の中での留学の意義付けを十分に行っていくことの高い必要性が窺える。平成29年度の研究に関しては、計画より遅れが生じているため、以下のように行っていく。【平成29年度46月:デスクワーク】a.平成28年度に行った現地インタビュー調査のデータ整理・分析の実施、b.留学後の学生に対するインタビュー調査の計画(参加者の募集・インタビューガイドの作成)、c. 6月中旬に行われるポスター発表の準備。【平成29年度7・8月:留学後調査/データ収集およびデスクワーク】a.留学終了後の学生へのインタビュー調査(1520名程度を予定)、b.インタビューデータの整理、c.第56回全国英語教育学会(8月29日31日)での論文発表の準備。【平成29年度9月3月:デスクワーク】a.帰国後インタビューのデータ分析、b.全てのインタビューデータ・アンケートデータからの学生の意識変化の掌握・検証、c.変化を与えた留学プログラムの要素の抽出・検証、及び課題の抽出・検証、d.地球市民教育従事者としての英語教員養成に有効な留学プログラムの要素の検証・提案、e.研究結果報告論文の作成・専門誌への投稿。【研究の遅れを取り戻す工夫】計画当初は平成29年度春に1回の現地調査を計画していたが、校務の都合により現地訪問が不可能であること、また平成28年度に行ったインタビュー調査のデータ整理・分析が遅れていることから、これを行わず、その時間をデータ整理・分析に充てることとする。インタビューデータの書き起こしは計画では研究代表者本人が行う予定だったが、想定よりも多くのデータを収集することができたため、外部業者に委託する。社会言語学計画では平成28年度2月にイギリスを訪問し現地調査を行う予定であったが、校務の都合により渡航期間を確保することができず、諦めざるを得なかった。その結果、滞在にかかる経費支出が減少したことで差額が生じた。繰り越された助成金については、インタビューデータの書き起こし費用に充てる予定である。当初はインタビューデータの書き起こしを研究代表者により行うこととしていたが、これを外部業者に委託する。
エピジェネティック因子MBD5による発達障害発症機序の解明

自閉症などの発達障害と診断される児童の数は年々増加傾向にある。近年の発達障害患者の全ゲノム解析により,MDB5(メチル化CpG結合ドメインタンパク質5)が欠失あるいは重複している症例が数多く報告された。そこで,本研究では神経細胞におけるMBD5のターゲット遺伝子の同定を試みた。その結果,MBD5がmicroRNAやsnRNAなどのnon-coding RNAの発現制御に関わっている可能性が示唆された。自閉症や学習障害,注意欠陥多動性障害などの発達障害と診断される児童の数は年々増加傾向にある。同じメチル化CpG結合ドメインをもつMeCP2は自閉症を主徴とするRett症候群の原因遺伝子であり,MBD5もまた脳の発達過程において何らかの重要な役割を担っていると示唆される。そこで,本研究では神経細胞におけるMBD5のターゲット遺伝子の同定さらに,その制御メカニズムを明らかにすることにより,MBD5の脳での機能を明確にすると共に,メチル化CpG結合ドメインタンパク質を介したエピジェネティクスと発達障害との関連を解き明かすことを目的とした。そこで,MBD5ヘテロ変異ヒト神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞(MBD5+/-)の樹立し,マイクロアレイ解析にて発現変化のあった遺伝子を同定した。その結果,発現上昇を認めた遺伝子(transcripts)を71個,発現低下を認めた遺伝子(transcripts)を92個同定した。そのうち95%以上はタンパク質をコードしないnon-coding RNAであった。従って,MBD5がPre-mRNAの選択的スプライシングやmicroRNAのプロセシングに関与している可能性が示唆された。更に,今回MBD5+/-でおよそ2倍の発現上昇を認めたmicroRNA,MIR548A1は6p22.3に位置し,自閉症患者で欠失が報告されている。また,発現量がおよそ半分まで減少しているMOG遺伝子はナルコレプシーとカタレプシー家系の解析で変異が同定されており,両者は特に症状との関連からも大変興味深い。しかしながら,MDB5はメチル化CpG結合ドメインを有するにもかかわらず,メチル化CpGへの結合能が明確に示されないため,その機能は未だに不明であり,発達障害の発症機序における役割は全く分かっていない。そこで本研究では,神経細胞におけるMBD5のターゲット遺伝子の同定,さらにその制御メカニズムを明らかにすることにより,MBD5の脳での機能を明確にすると共に,メチル化CpG結合ドメインタンパク質を介したエピジェネティクスと発達障害との関連を解き明かすことを目的とする。我々は神経分化におけるMBD5の役割を解析するため,ゲノム編集技術の一つであるジンクフィンガーヌクレアーゼを用い,神経細胞様に分化誘導出来るヒト神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞株でMBD5のノックアウト株を樹立し,マイクロアレイ解析によりMBD5+/-により発現変化を呈する遺伝子のスクリーニングを行った。その結果,microRNAやsnRNAなどのnon-coding RNAの占める割合が極めて高く,それらnon-coding RNAの発現制御に関わっている可能性が示唆された。最近,Rett症候群の原因遺伝子であるメチル化CpG結合ドメインタンパク質MeCP2がmicroRNAの発現制御や選択的スプライシングの機構に関与していることが報告され,メチル化CpG結合ドメインタンパク質の新たな機能として注目されている。そこで, MBD5がmicroRNAの発現制御や選択的スプライシングの機構にどのように関与しているのかを解析することにより,脳におけるMBD5の作用機序を明確にする。これまでの研究で,ジンクフィンガーヌクレアーゼを用い,神経細胞様に分化誘導出来るヒト神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞株でMBD5のノックアウト株を樹立し,マイクロアレイ解析によりMBD5+/-により発現変化を呈する遺伝子のスクリーニングを行った結果,発現上昇を認めた遺伝子(transcripts)を71個,発現低下を認めた遺伝子(transcripts)を92個同定しており,現在,MBD5のターゲット遺伝子の機能解析を行っており,概ね順調に進展している。同じメチル化CpG結合ドメインをもつMeCP2は自閉症を主徴とするRett症候群の原因遺伝子であることから,MBD5もまた脳の発達過程において何らかの重要な役割を担っていると示唆されるが,メチル化CpGへの結合能が明確に示されないため,その生理機能は不明であり,発達障害の発症機序における役割は全く分かっていない。そこで我々は脳におけるMBD5の役割を明らかにするため,ゲノム編集技術を用い神経細胞様に分化誘導出来るヒト神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞株でMBD5のノックアウトを行い,マイクロアレイで発現に変化のある遺伝子をスクリーニングした。その結果,MBD5ヘテロ欠失で遺伝子発現が1.5倍以上変化した遺伝子163の内,156(95.7%)はmicroRNAやsnRNAなどのnon-coding RNAであったことから,MBD5がそれらnon-coding RNAの発現制御に関わっている可能性が示唆された。

さらに,MBD5の生理機能を明らかにするため,プルダウンアッセイを行い,MBD5と相互作用するタンパク質を同定した。現在,それらについて,実際に神経細胞でMBD5とどのように相互作用をしているのかを解析している。さらに,本研究期間内に樹立したMBD5欠損ヒトiPS細胞の神経細胞への分化実験を行っており,正常iPSと比較し,分化速度,シナプス活動の増減等に変化が無いかを明らかにする。自閉症などの発達障害と診断される児童の数は年々増加傾向にある。近年の発達障害患者の全ゲノム解析により,MDB5(メチル化CpG結合ドメインタンパク質5)が欠失あるいは重複している症例が数多く報告された。そこで,本研究では神経細胞におけるMBD5のターゲット遺伝子の同定を試みた。その結果,MBD5がmicroRNAやsnRNAなどのnon-coding RNAの発現制御に関わっている可能性が示唆された。平成26年度は,樹立したMBD5ヘテロ変異ヒト神経芽細胞腫SH-SY5Y細胞(MBD5+/-)において,発現変化の認められた遺伝子についてリアルタイムPCR法で,その発現変化を確認し,MBD5がPre-mRNAの選択的スプライシングやmicroRNAのプロセシングに関与している可能性が示唆された。本実験に関しては,研究計画に記載した通り遂行できたと考えている。また,MBD5と相互作用する分子を同定することを目的に,タグ付きMBD5タンパク質をHEK293細胞やHeLa細胞で強制発現させ,プルダウンアッセイを行ったが,全長MBD5タンパク質を高発現させることが出来なかったため,短くしたいくつかのMBD5タンパク質を発現するコンストラクト構築を行うなど,臨機応変に結果に対して対応してきた。前年度自立したMBD5+/- iPS細胞株を神経細胞に分化誘導し,その分化能を解析する。MBD5と同様のメチル化結合タンパク質であり,精神神経疾患Rett症候群の原因遺伝子であるMeCP2変異iPS細胞では,神経細胞への分化誘導の際,成熟神経細胞への分化効率の低下,シナプス活動の減少,細胞体・核サイズの減少などが認められることから,MBD5+/- iPS細胞株でも同様の表現形が認められるか否かを注視して解析する。また,MeCP2はYB-1 (Y box-binding protein 1)と結合し,選択的スプライシングの調節に関与していることが報告されている。本研究で明らかにしたMBD5ターゲット候補遺伝子のほとんどは選択的スプライシングを受ける遺伝子であることから,同じドメイン構造を持つMBD5も同様の機構に関与している可能性が十分考えられる。そこで,MBD5とYB-1及びスプライシング関連分子SRタンパク群との相互作用をIPにより解析する。さらに,これまでの解析でMBD5のターゲットであり,脳において何らかの機能を持っていると考えられる遺伝子(transcripts)についてMBD5遺伝子領域を欠失,重複した発達障害患者のサンプルで,発現異常の有無を解析する。
フッ素置換による六方晶バリウムフェライト薄膜の作製と磁気光学特性の向上

薄膜形成に先立ち、直径2cm、厚さ5mmのペレットを焼結し、これを粉砕した粉末においてX線回折像およびヒステリシスループの測定を行ったところNi^<2+>で置換を行ったペレットにおいて置換量の増加に伴って、異方性が減少し、保磁力および残留磁化比の減少が観察された。一方、薄膜形成においては、原料に用いたCuF_2,NiF_2,CoF_2の純度が低かったこと、ターゲット作製条件の最適化に手間取ったこと、置換により結晶化温度が上昇したこと等の理由により、優れた結晶性や磁気特性をもつ膜の作製が困難であった。そこでBaF_2を原料として用いてO^<2->の5%をF^-で置換した焼結体ターゲットを作製し、対向ターゲット式スパッタ法により薄膜を形成した。スパッタガスには一般的に用いられるArとO_2に加えてXeを加えた混合ガスを用いることで、良好な結晶学的・磁気的特性を持ったBaMフェライト薄膜の作製を目指した。基板温度は600°C一定とし、ガス圧は本研究費にて備品として購入したマスフローコントローラにより、全ガス圧0.2Pa一定,O_2ガス圧0.02Pa一定とし、Xeガス分圧を00.18Pa、Arガス分圧を0.180Paと変えて膜作製を行った。エピタキシャル用下地層としてZnO層約2000Åを基板温度300°C、Ar分圧0.1Pa、O_2分圧0.1Paの混合ガス中で、表面熱酸化Si基板上に堆積した。Xe分圧の増加とともに(008)ピークよりsherrerの式により算出した結晶子サイズ<D>は増加し、c軸分散度Δθ_<50>は減少して、Xe分圧0.15Paにおいて、<D>は23.84nm、Δθ_<50>は約3.8°と最も小さく良好な結晶特性が達成された。磁気特性に関しては、飽和磁化はXe分圧0.1Paにおいて最大値3.6kGとさほど大きな値は得られず、保磁力もXe分圧に関わらず垂直・面内両保磁力H_<c⊥>とH_<c〃>が2.5kOe以上および0.30.4kOe程度と予想された保磁力の低下は起こらなかった。さらに、ヒステリシスループより求めた実効異方性磁界H_<k(eff.)>が7.5kOeとフッ素置換を行ったことで逆に若干大きくなった。H_<c⊥>やH_<k(eff.)>結晶子サイズの増加によっても減少するが、フッ素置換を行った膜の方が、概して結晶子サイズは小さくなっており、今後さらにサンプルを作製して、検討する必要がある点である。ただし、本研究から得られた結果から、F^-の置換が飽和磁化、保磁力および結晶磁気異方性に変化を与えることが判明し、フッ素置換がBaフェライト膜の磁気特性制御の点からも有効な一手法であることが確認できた。さらに、ヒステリシスループより求めた実効

異方性磁界H_<k(eff.)>が7.5kOeとフッ素置換を行ったことで逆に若干大きくなった。H_<c⊥>やH_<k(eff.)>結晶子サイズの増加によっても減少するが、フッ素置換を行った膜の方が、概して結晶子サイズは小さくなっており、今後さらにサンプルを作製して、検討する必要がある点である。ただし、本研究から得られた結果から、F^-の置換が飽和磁化、保磁力および結晶磁気異方性に変化を与えることが判明し、フッ素置換がBaフェライト膜の磁気特性制御の点からも有効な一手法であることが確認できた。
ホワイトノイズ解析と確率場

計画通り次の2項目について研究を行った。1.ホワイトノイズの超汎関数の解析確率過程の中で最も基本的なものの1つであるホワイトノイズを基礎にして、その非線型汎関数の解析を行うため、準備として数学の種々の分野の手法を用いてアプロ-チを試みた。本年度の研究において最も有効と思われたものは無限次元回転群により調和解析の方法であった。ホワイトノイズの測度分回転不変であるため、この回転群を基にする立場から、自然に超汎関数を導入する新しい方法が見出された。また、有限次元の場合にならって、ラプラス作用素を導くことができるか、その特徴づけを行うことができた。無限次元であるため、いくつかのラプラス作用素が考えられるが、確率論的に興味のある2種類について、応用も含め比較的詳しい性質が知られた。2.ガウス型確率場一般論は今後の問題として、多次元パラメ-タ-のホワイトノイズの線型汎関数として表され、多次元多様体を変数とするガウス型確率場扱った。ホワイトノイズ解析で知られる積分表現を用いて、テスト関数の線型汎関数としてこの確率場を表わし、通常の関数解析の手法によって解析をすすめた。著しい結果は、変数が球面の場合で、無限次元回転群を用いてこの場の変換を行い、特に2次元のときには、具体的な記述が可能となり、与えられた場の従属性を論ずることができた。さらに1と関連して、理論物理学へのいくつかの応用を見出すたとができた。それらはiファインマン積分、iiディリクレ形式、iiip(Φ)ユ-クリッド場である。iについては我々の立場から新しい定式化を、iiについては無限次元の特性を活かした展開を行った。iiiについては高次元の場合が今後の問題として残されている。
国内労働移動と郷鎮企業の行動からみた中国経済発展の理論的分析

過去、労働者管理企業および国際労働移動の理輪的分析について研究を行ってきており,その研究蓄積をもとに中国の経済発展について、中国の経済的特徴を考慮したモデルを構築して、分析したものである。中国の国内労働移動は西部地域から東部地域への大量の労働移動と農村地域から周辺の郷鎮企業への労働移動が存在する。前者は大都市におけるインフォーマルセクターの形成によって、ハリス・トダロ的条件を、後者は郷鎮企業の近代部門としての役割から、ルイス的条件をみたしていることを論証した。そして、郷鎮企業についてのコーポレトガバナンスに着目して、株式の状況や企業経営を概観することにより、郷鎮企業が労働者管理型の企業形態の特徴を備えていることを論じた。こうした点を踏まえて、経済発展におけるルイスモデルにおいて、その近代部門が労働者管理型企業であるとして、経済発展のための政策について分析を行った。いくつかの結果を得たが、通常のルイスモデルで主張される近代部門の育成政策は無効であり、ハリストダロモデルが主張する伝統部門の技術向上が有効であることが示された。さらに、この分析からのインプリケーションとして、郷鎮企業が資本主義的な利潤最大化行動をめざすような政策、例えば株式市場や資本市場の健全な育成が重要であることが引き出された。この研究の今後の発展として、ハリス・トダロ的側面と国営企業の存在を考慮した場合の分析を行うことで、分析の精緻化をはかることが考えられる。中国の経済発展を分析するために本研究が注目している2つの視点は、郷鎮企業の行動目的と国内労働移動の形態である。郷鎮企業の行動目的が従業員1人あたりの利益の最大化であるかどうかは中国の経済発展の分析の重要なポイントであり、昨年10月に南京大学を訪問して、範从来教授および経済学部の研究者と意見交換を行った。さらに文献研究による考察を加えて、現在、「郷鎮企業の所有形態と行動目的」として纏めつつある。これとは別に、企業が従業員1人あたりの利益の最大化を目的とする労働者管理企業の理論分析はここ数年間研究をしてきており、その成果の一部を昨年、論文としてStudies in Regional Science誌に発表した。一方、中国国内の労働移動についても、西部内陸部から東部沿岸部への地域間労働移動と農村地域から周辺の郷鎮企業に職をもとめての地域内労働移動の二面が認められることを、「中国国内労働移動の2面性」として、纏めつつある。来年度は現在のものをさらに精緻化したうえで発表していくことを考えている。これと同時に最終的にこうした結果を踏まえて、ルイスモデルやハリストダロ型の失業の可能性を考慮した経済発展モデルに労働者管理型の企業行動を取り入れた場合の経済発展の理論分析に取り組む予定である。そして、郷鎮企業が中国の経済発展に果たす役割を労働市場を通して明らかにしたい。過去、労働者管理企業および国際労働移動の理論的分析について研究を行ってきており,その研究蓄積をもとに中国の経済発展について、中国の経済的特徴を考慮したモデルを構築して、分析したものである。
アディポネクチンの結合蛋白を介する生理作用の分子基盤の解明

アディポネクチンは脂肪細胞から特異的に分泌され血液中に存在する蛋白である。アディポネクチンがある特定の組織・細胞に集積し、臓器保護作用を発揮することを明らかにした。アディポネクチンはT-カドヘリンに結合し、T-カドヘリンが高発現している大動脈・心臓・骨格筋に集積していた。特に、大動脈において詳細な検討を行った。定常状態でアディポネクチンはすでに血管内皮細胞に集積していた。動脈硬化部位では、アディポネクチンは内皮細胞のみならず、内膜に遊走してきた合成型平滑筋細胞や内皮に接着した単球表面にもその集積を認めた。アディポネクチン/T-カドヘリンは生体内の恒常性維持に必要なシステムと考えられる。血管内皮細胞に野生型(WT)マウスあるいはアディポネクチン欠損(Adipo-KO)マウス由来の血清を添加すると、Adipo-KOマウス由来の血清を添加した細胞では、T-cadherin(Tcad)蛋白の減少が見られた。この機序について、現在解析を進めている。WTマウスとC1q欠損(C1q-KO)マウスの血清を分析した結果、血中アディポネクチン濃度には差がなく、また多量体形成パターンにも差異はみられなかった。WTマウスあるいはAdipo-KOマウスにアンジオテンシンII(AngII)を持続投与して、心筋線維化モデルを作成した。結果、Adipo-KOマウスはより重篤な心筋線維化を呈し、C1q mRNAが上昇し、beta-cateninシグナル経路が活性していた。これらの変化はアデノウイルスによるアディポネクチン補充により有意に是正された。マウス大動脈でのアディポネクチン蛋白の発現を免疫染色にて検討したところ、正常大動脈の内皮細胞にアディポネクチン蛋白が局在していることを見いだした。LPS投与により、WTマウスに比してAdipo-KOマウスでは血管内皮の接着分子が有意に上昇した。現在、動脈硬化モデルマウスにおいても検討を進めている。T-cadherin (Tcad)蛋白は、大動脈・心臓・筋肉・脂肪組織に高発現しており、アディポネクチン蛋白も同様の組織分布を示した。アディポネクチン産生臓器である脂肪組織以外の大動脈・心臓・筋肉において検討を進めた。T-cadherin欠損(Tcad-KO)マウスでは、大動脈・心臓・筋肉においてアディポネクチン蛋白は消失していた。T-cadherin (Tcad)は、GPI-アンカー蛋白の1つであり、GPI-アンカー蛋白切断酵素であるPI-PLCやGPI-PLDによって切断されることが知られている。そこで、PI-PLCを野生型(WT)マウスに投与したところ、血中アディポネクチン濃度は上昇し数時間でピークに達し、48時間後にはベースラインに復した。また、PI-PLC用量依存性に血中アディポネクチン濃度が上昇し、このような現象はT-cadherin欠損(Tcad-KO)マウスでは観察されなかった。さらに、PI-PLCにより大動脈・心臓・筋肉におけるTcad蛋白およびアディポネクチン蛋白の減少を認めた。従って、in vivoにおいてアディポネクチンはTcadを介して組織に集積していることが明らかになった。in vitro血管内皮細胞においても、PI-PLC添加によりTcadが減少し、また細胞に集積するアディポネクチンが減少した。しかしながら、WTマウス由来血清を添加した後にPI-PLCを添加すると、Tcadの減少が見られなくなり、細胞に集積するアディポネクチンも保持されていた。一方、アディポネクチン欠損(Adipo-KO)マウスでは、血中GPI-PLDが上昇しており、血中アディポネクチン補充により上昇していたGPI-PLDは有意に低下した。以上より、アディポネクチンはGPI-PLDを負に制御することでTcad蛋白を正に調節し、組織に集積することが明らかになった。前年度までの研究成果により、アディポネクチンは生体内においてもT-cadherin蛋白と結合することを明らかにした。そのメカニズムとして、GPI-アンカー蛋白切断酵素であるGPI-PLDに着目し研究を遂行した。現在、GPI-PLDノックアウトマウス及びGPI-PLD過剰発現アデノウイルスを作製し、解析を進めている。同時に、アディポネクチンのT-cadherin蛋白への結合部位を明らかにするため、T-cadherinのdeletion mutantを数種類作製し解析を行っている。以前の研究において、アディポネクチンは単球やマクロファージに結合する可能性が示されている。しかしながら、このような免疫細胞へのアディポネクチンの集積が生体内においてどのように行われているかは不明である。そこで、生体内におけるアディポネクチンと免疫細胞との動的相互作用を明らかにするため、その第一歩として脂肪組織マクロファージの生体イメージングを試み、その手法を確立した。本解析により、超短期間での過栄養負荷により脂肪組織マクロファージが動的に活性化されること、そのinitial triggerとして新たな脂肪細胞分泌因子S100A8を同定した。興味深いことに、血中のS100A8とアディポネクチンとは逆相関を示していた。現在、蛍光蛋白を付加したアディポネクチンを作製し、生体イメージングを行っている。アディポネクチンはT-

カドヘリンに結合し、T-カドヘリンが高発現している大動脈・心臓・骨格筋に集積していた。特に、大動脈において詳細な検討を行った。定常状態でアディポネクチンはすでに血管内皮細胞に集積していた。動脈硬化部位では、アディポネクチンは内皮細胞のみならず、内膜に遊走してきた合成型平滑筋細胞や内皮に接着した単球表面にもその集積を認めた。アディポネクチン/T-カドヘリンは生体内の恒常性維持に必要なシステムと考えられる。アディポネクチンの組織集積のメカニズムを明らかにし、組織アディポネクチンの発現調節に対して新たな治療標的分子を同定したから。内分泌代謝内科学GPI-PLDの発現制御は、組織アディポネクチンの集積度を決める重要な一因になることから、GPI-PLDの生理的・病態的意義を明らかにしていく。また、アディポネクチンーTcad経路の破綻が病態に繋がるかをin vivoおよびin vitroで明らかにしていく。アディポネクチンとC1qとの関連に関しては、現状、マウスにおいては差異がなさそうである。その他の課題に関しては予定通り進行している。予定通り、「アディポネクチンとT-cadherin」、「組織アディポネクチン蛋白の局在」、「未知のアディポネクチン結合蛋白の同定」に関して、研究を進めて行く。
六国史時代文筆活動の研究

2018年度の具体的な研究計画は、次の4項目であった。「1.諸文献の電子テキスト化」、「2.注釈作業」、「3.『六国史時代漢語集成』の編集」、「4.近世六国史関連研究文献調査」。各項ごとの成果は次のとおりであった。1.すでに業者委託によって電子化の基礎作業が終了している『寧楽遺文』のデータの校正作業の続きを、大学院生の分担作業により行った。ダブルチェックもほぼ完了した。データは本研究の関係者間で共有し、今後の研究に利用することが可能となった。将来的には一般公開の方法を検討している。さらに今年度は『浄名玄論略述』の電子化も、業者委託で行った。今後、『日本詩紀』『古京遺文』『寧楽遺文』と同じ要領で、校正作業を行う必要があるが、本研究の期間内では不可能なので、今後の課題となる。2.昨年度に引き続き、『懐風藻』と渤海使関係文筆資料の注釈作業を行った。『懐風藻』は、8月1月以外の毎月研究会を開催、計10回の研究会を開催した。1回につき3首ずつ検討し、計30首の検討を終えた。研究会での検討を経て、担当者各自が改稿を加えることになっている。渤海使関係文筆資料については、原則隔月開催の研究会を計6回開催し、『日本後紀』『類聚国史』掲載の資料についての検討を行った。研究会での検討を反映させた注釈稿を、『早稲田大学日本古典籍研究所年報』第12号に掲載した。3.以前の科研費研究で作成した『8世紀日本漢語集成』作成の要領で、作業を進めた。4.本年度は中国遼寧省図書館・宮城県図書館等で文献調査を行った。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。2015年度の具体的な研究計画は、次の4項目であった。項目ごとの成果は次の通りであった。1.『日本詩紀』の国書刊行会,1911年刊版を、業者に委託し電子化を行った。出来した電子テキストは、誤入力多く校正が必要であったが、TA・研究補助の大学院生の分担作業により、ひととおりのチェックは終了。しかし、信頼できるデータの提供のためには、ダブルチェックが必要と思われ、現在、その作業に入るところである。2016年度にそなえ、『古京遺文』電子化にあたっての本文(日本古典全集,1929年刊版)チェック等も行った。2.『懐風藻』と渤海使関係文筆資料の諸テキストの注釈作業を行った。『懐風藻』は、8月に第1回の研究会を開催し、今後の方針等を参加者で協議した。その後、9月より3月まで、10月・2月を除いて毎月、計5回の研究会を開催し、1回につき3首ずつ程度の作品を検討した。3月までに検討した作品は、古典文学大系の詩番号で15,8,1214,16,19,21,44,52の14首である。研究会での討議を経て、担当者各自が改稿を加えることになっている。渤海使関係文筆資料については、10月11月1月3月の計4回の研究会を開催した。『続日本紀』掲載の外交文書を年代順に取り上げた。研究会での議論を反映した各資料の注釈稿を報告担当者に依頼中であり、『早稲田大学日本古典籍研究所年報』第10号(2017年3月刊行予定)に掲載予定である。3.以前の科研費研究で作成した『8世紀日本漢語集成』作成の要領で、鋭意作業を進めつつある。4.宮城県図書館の伊達文庫が所蔵する六国史版本の調査を8月に実施した。ほぼ研究計画に沿った進展であった。業者委託による電子データの校正作業をいかに効率的に進めるかが課題ではある。2016年度の具体的な研究計画は、次の4項目であった。1.すでに業者委託によって電子化の基礎作業が終了している『日本詩紀』のデータの校正作業の続きを、大学院生の分担作業により行った。ダブルチェックも完了した。『古京遺文』の電子化も、業者委託で行った。今後、『日本詩紀』と同じ要領で、2017年度に校正作業を完了させる予定である。『懐風藻』は、8月9月以外の毎月研究会を開催、計10回の研究会を開催した。

1回につき3首ずつ検討し、計30首(古典大系番号で6,7,9,10,11,15,17,18,22-29,31,33,35,37,39,40,42,50,51,53-55,85,87)の検討を終えた。研究会での検討を経て、担当者各自が改稿を加えることになっている。渤海使関係文筆資料については、原則隔月開催の研究会を計6回開催し、『続日本紀』掲載の資料についての検討を終えた。研究会での検討を反映させた注釈稿を、『早稲田大学日本古典籍研究所年報』第10号(3月刊)に掲載した。今号に掲載できなかった分が一部あるが、それらは次号掲載の予定である。3.以前の科研費研究で作成した『8世紀日本漢語集成』作成の要領で、作業を進めている。4.国文学研究資料館で、各機関所蔵の関連文献の基礎調査委を行い、名古屋市蓬左文庫、天理大学附属天理図書館等で文献調査を行った。ほぼ研究計画に沿った進展であった。業者委託による電子データの校正作業をいかに効率的に進めるかは、依然として課題ではあるが、協力の大学院生のチーム作業は、次第に要領を得てきているようである。2016年度の具体的な研究計画は、次の4項目であった。「1.諸文献の電子テキス化」、「2.注釈作業」、「3.『六国史時代漢語集成』の編集」、「4.近世六国史関連研究文献調査」。各項ごとの成果は次のとおりであった。1.すでに業者委託によって電子化の基礎作業が終了している『古京遺文』のデータの校正作業の続きを、大学院生の分担作業により行った。ダブルチェックも完了した。データは本研究の関係者間で共有し、今後の研究に利用することが可能となった。将来的には一般公開の方法を検討している。『寧楽遺文』の電子化も、業者委託で行った。今後、『日本詩紀』『古京遺文』と同じ要領で、2018年度に校正作業を完了させる予定である。2.昨年度に引き続き、『懐風藻』と渤海使関係文筆資料の注釈作業を行った。『懐風藻』は、8月1月以外の毎月研究会を開催、計10回の研究会を開催した。1回につき3首ずつ検討し、計28首の検討を終えた。また、この2年間あまりの研究会での成果の一部を、『早稲田大学日本古典籍研究所年報』第10号(3月刊)に掲載した。研究会での検討を反映させた注釈稿を、前記年報に掲載した。4.国文学研究資料館で、各機関所蔵の関連文献の基礎調査委を行い、山形県酒田市光丘文庫等で文献調査を行った。2018年度の具体的な研究計画は、次の4項目であった。「1.諸文献の電子テキスト化」、「2.注釈作業」、「3.『六国史時代漢語集成』の編集」、「4.近世六国史関連研究文献調査」。1.すでに業者委託によって電子化の基礎作業が終了している『寧楽遺文』のデータの校正作業の続きを、大学院生の分担作業により行った。ダブルチェックもほぼ完了した。さらに今年度は『浄名玄論略述』の電子化も、業者委託で行った。今後、『日本詩紀』『古京遺文』『寧楽遺文』と同じ要領で、校正作業を行う必要があるが、本研究の期間内では不可能なので、今後の課題となる。
エバネッセント光を利用したシリコンの光平滑化法の研究

本研究ではエバネッセント光により被加工物を平滑化する手法を提案し,その可能性を検討する.高屈折率の媒質(ガラスなどの透明体)から低屈折率の媒質(エッチャント)に臨界角以上で光を入射すると全反射が起こる.このとき,透明体表面付近にエバネッセント光が生じる.エバネッセント光とは境界面から1波長程度の深さまで浸透している光(電磁場)であり,界面のごく近傍しか照明しない.この特徴より,透明体表面近傍のエッチャントまたは被加工物のみに光照射できる.ここで,光照射した場合にのみ被加工物がエッチングされるエッチャントを選択し,近傍に被加工物をおくことで,被加工物の透明体表面に近い凸部のみを選択的に除去し平滑化することが期待できる.被加工物の対象としてシリコンを選択した.平滑化への要求が多いこと,多くのエッチングに関するデータがあるためである.昨年度,光源にアルゴンイオンレーザ,エッチャントにフッ化水素酸を用いた場合に弱いフルエンスでエッチングできることを明らかにした.この結果をうけ,本年度ではフッ化水素酸をつかった平滑化実験装置の設計試作,および加工実験を行った.その結果,エバネッセント光によりシリコン表面を変質させたり,除去したりすることができた.さらに平滑化を実現するためには,被加工物と透明体との間隔をより精密に計測,制御したり,被加工物表面へのエッチャントの供給などの問題を解決する必要があることを明らかにした.本研究ではエバネッセント光により被加工物を平滑化する手法を提案し,その可能性を検討する.高屈折率の媒質(ガラス)から低屈折率の媒質(エッチャント)に臨界角以上で光を入射すると全反射が起こる.このとき,ガラス表面付近にエバネッセント光が生じる.エバネッセント光とは境界面から1波長程度の深さまで浸透している光(電磁場)であり,界面のごく近傍しか照明しない.この特徴より,ガラス表面近傍のエッチャントまたは被加工物のみに光照射できる.こごで,光照射した場合にのみ被加工物がエッチングされるエッチャントを選択し,近傍に被加工物をおくことで,被加工物のガラス表面に近い凸部のみを選択的に除去し平滑化することが期待できる.被加工物の対象としてシリコンを選択した.平滑化への要求が多いこと,多くのエッチングに関するデータがあるためである.本年度は,エッチャント,光源の選定を行った.シリコンの光アシストエッチングでは,エッチャントに塩素などのガスを用いたドライエッチングと,KOHなどを用いたウエットエッチングなど様々な種類がある.そのメカニズムにも,熱的な作用,光化学的作用.キャリア生成による電気化学的作用の様々なメカニズムがある.そこで,まず直接レーザ照射し除去量を測定することで,加工可能な条件を選定し,平滑化実験装置の設計製作に向け,条件の絞り込みを行った.その結果,アルゴンイオンレーザとフッ化水素酸系のエッチャントの組み合わせが弱いレーザ出力でエッチングできることを明らかにした.本研究ではエバネッセント光により被加工物を平滑化する手法を提案し,その可能性を検討する.高屈折率の媒質(ガラスなどの透明体)から低屈折率の媒質(エッチャント)に臨界角以上で光を入射すると全反射が起こる.このとき,透明体表面付近にエバネッセント光が生じる.エバネッセント光とは境界面から1波長程度の深さまで浸透している光(電磁場)であり,界面のごく近傍しか照明しない.この特徴より,透明体表面近傍のエッチャントまたは被加工物のみに光照射できる.ここで,光照射した場合にのみ被加工物がエッチングされるエッチャントを選択し,近傍に被加工物をおくことで,被加工物の透明体表面に近い凸部のみを選択的に除去し平滑化することが期待できる.被加工物の対象としてシリコンを選択した.平滑化への要求が多いこと,多くのエッチングに関するデータがあるためである.昨年度,光源にアルゴンイオンレーザ,エッチャントにフッ化水素酸を用いた場合に弱いフルエンスでエッチングできることを明らかにした.この結果をうけ,本年度ではフッ化水素酸をつかった平滑化実験装置の設計試作,および加工実験を行った.その結果,エバネッセント光によりシリコン表面を変質させたり,除去したりすることができた.さらに平滑化を実現するためには,被加工物と透明体との間隔をより精密に計測,制御したり,被加工物表面へのエッチャントの供給などの問題を解決する必要があることを明らかにした.
エネルギー代謝からみた心臓悪液質の病態解明と新たな栄養療法に関する研究

男性32例、女性18例、計50例の心不全患者を対象とした。平均年齢は71.3歳であり、BMIは23.0であった。入院時の栄養状態をCONUTやGNRIなどの栄養スクリーニング手法、血液生化学検査にて評価し、心不全の重症度との関連を検討した。また炎症性サイトカインであるTNF-αやIL-6の血清レベルを測定し、心不全の程度との関連を検討した。さらに、In body S10を用いて体組成の測定を、間接熱量測定により安静時エネルギー消費量を実測し、心不全の程度や炎症性サイトカインとの関連についても解析した。その結果、血清brain natriuretic peptide (BNP)と血清アルブミン値、GNRIとは逆相関した。またBNP値は筋肉量、筋力とも逆相関した。このように、心不全の悪化に伴い栄養不良が進行することが明らかとなった。また、TNF-αやIL-6の血清レベルはBNP値と有意に正の相関を示し、心不全の重症度と炎症性サイトカインとの間には有意な関連が示唆された。さらにBNP200以上とBNP200未満の2群に分けて比較したところ、BNP200以上ではCONUTやGNRIで中等度以上の栄養不良と判定された割合が有意に高かった。一方、安静時エネルギー消費量は心不全の重症度と関連せず、BNP200以上群とBNP200未満群で有意差は認めなかった。心不全患者では、重症化に伴い栄養状態が悪化し、それには炎症性サイトカインが関与することが明らかとなった。したがって、心不全では早期からの栄養介入が重要であると結論づけられた。すでに50例の測定と解析を終えており、論文執筆の準備中である。次年度には、英語論文にて公表する予定である。滋賀医科大学の倫理委員会にて承認を得て、本臨床研究を開始した。現在までに、27例の心不全患者がエントリーされている。内訳は、男性16例、女性11例であり、平均年齢は73.7歳であった。対象症例に対して、入院時に血液生化学検査による栄養アセスメントを実施した。同時に、In Body s10を用いた体組成評価をおこない、総筋肉量、上肢や下肢の筋肉量、体脂肪量を測定した。同時に握力も測定した。さらに同日に、ミナト医科製間接熱量計AE-310Sを用いて安静時エネルギー消費量と呼吸商の測定もおこなった。喫食量の調査は測定前の3日間の平均を用いた。血液検査によるBNP値を心不全の程度を表す指標として用いた。血清BNP値は、心不全の重症度分類であるNYHAとも相関した。前述の方法で測定した栄養代謝病態との関連を検討したところ、BNP値と総筋肉量、上肢・下肢の筋肉量、握力とは有意に逆相関し、心不全が高度の場合は筋肉量や筋力が徐々に低下することが確認された。またBNP高値に伴い、血清IL-6は上昇し、血清BNP値と喫食量は逆相関した。しかし、安静時エネルギー消費量は心不全の進行にともない、むしろ減少傾向にあり、これは筋肉量を反映するものと考えられた。呼吸商には変化は見られなかった。以上の結果から、心不全患者は病状の進行により炎症性サイトカインIL-6が上昇し、喫食量の低下を促し、筋肉量が低下することが明らかとなった。その結果、筋力も低下し、サルコペニアの病態に進行すると推測された。目標症例数の約半分に達している段階ではあるが、仮説を証明するに必要な成績が明らかとなりつつある。今後、エネルギー代謝に関しては症例を重ねて、データ解析していく必要がある。順調にエントリーが進んでおり、中間解析では仮説を証明できる成績も得られている。今後、さらに症例数を重ねて研究を進めていく。

次年度には、英語論文にて公表する予定である。エントリー症例数が本年度の目標をわずかに下回った。そのため、一部、次年度の繰り越しとなった。エントリー患者数が目標より下回ったため、次年度も測定を継続します。そのために、一部、経費を次年度に繰り越しました。
デトリタス食性及び肉食性カイアシ類(甲殻類)の摂取生態に関する研究

1.デトリタス食性カラヌス目カイアシ類4科(Diaixidae科; Phaennidae科; Scolecitrichiae科; Trarybidae科)の11属の第2下顎の基節・内肢、顎脾の底節に生じる感覚毛には3タイプあり、虫状感覚毛、毛筆状感覚毛、その他、と分類された。通常、虫状・毛筆状感覚毛の両方を持つが、属によってその構成は異なる。いずれも化学受容器であると推定された。虫状・毛筆状感覚毛の内部微細構造は、内部を走る微小管束数、微小管末端の配置が異なり、感受性の相違を反映していると考えられる。Scolecitrichidae科3属の消化管から、甲殻類の破片、尾虫類ハウス等のデトリタスが頻繁に検出された。Phaennidae科に属するCephalophanes属は第2下顎に感覚毛を持つことに加え、ノ-プリウス眼が特殊化した大型反射板を1対持っているが、本属の特殊な消化管内容物から反射板がデトリタス検出に機能している可能性がある。紅海産ポエキロストム目Oncaea属9種も尾虫類ハウスを餌料として利用していた。2.主に中深層以深に生息するカラヌス目カイアシ類Heterorhabdidae科に属するHeterorhabdus属はコペポティドが主食である肉食者であった。本属の上顎咀嚼歯の最も腹側に位置する歯(V1歯)は筒状になっており、先端は注射針様構造になっている。この注射針の孔付近は底節の分泌腺由来と考えられるオパールで強化されていた。非捕獲時は、このV1歯基部は上唇の裏側にある1対の巨大分泌腺の開口部に密着している。この時にV1歯内部の空所に毒あるいは麻酔用物質が充填され、餌動物の捕獲時に注射針様先端からその分泌物を打ち込むと推定された。類似した構造は同科のHemirhabdus属とNeorhabdus属に見られたが、他4属には見られなかった。分岐分類学的解析によって7属間の系統関係を推定した結果、上顎咀嚼歯と上唇に上述の構造を持つ属が、系統的には派生的であった。このような特殊な摂餌様式は他のカラヌス目カイアシ類に類を見ない。1.深海性ヘテロラブトゥス属カイアシ類はカイアシ類コペポディッドを主食としていることが消化管内容物調査から判明した。本属の上顎咀嚼歯の最も腹側に位置する歯(以後V1歯という)は著しく伸長し、上唇から先端が突出している。V1歯先端は注射針のように鋭く尖り、さらに内径数μmの小孔がある。この歯は先端から基部まで中空になっており、エネルギー分散型X線解析装置を用いた解析から、先端のみシリカが沈着して硬度を増していたことも判明した。シリカの沈着を担うのは上顎咀嚼部基部の分泌腺であることも透過型電子顕微鏡の解析から推定された。

また、上唇裏面左右には巨大な分泌腺の開口部が1対あり(長さ約30μm)、巨大分泌腺開口以外にも多数の小型分泌腺が存在することが走査型・透過型電子顕微鏡の観察で判明した。V1歯基部孔と上唇の巨大分泌腺開口部は、非哺食時には完全に密着している状態にある。このような上顎,上唇の特殊な構造は他の浅海性肉食性カイアシ類にはまったく見られなかった。以上の事実から、この深海性肉食性カイアシ類が次のような極めて特殊な摂餌方法を用いていることが推定された。まず、上唇の巨大分泌腺開口部からカイアシ類などの餌動物の動きを止めるための麻酔あるいは毒がV1歯基部孔を通してその中空部へ非捕食時に補充される。第2下顎で捕られた餌をV1歯で突き刺して、先端の注射針からその分泌物を餌へ注射し、動きのなくなった餌を嚥下する。なお、上唇分泌物の物質同定は今後の課題であるが、テトロドトキシンである可能性は本研究によって否定された。2.デトリタス食的傾向の強い4科9属9種の外洋性カイアシ類の摂餌に関連した化学受容器と推定される第2下顎と顎脚の感隔毛の微細構造を走査型電子顕微鏡で観察し、その形態から6タイプを識別した。今後は透過電子顕微鏡で細胞レベルでの微細構造を明らかにし、機能の相違、食性との関連を推定する。1.デトリタス食性カラヌス目カイアシ類4科(Diaixidae科; Phaennidae科; Scolecitrichidae科; Tharybidae科)の11属の第2下顎の基節・内肢、顎脚の底節に生じる感覚毛には3タイプあり、虫状感覚毛、毛筆状感覚毛、その他、と分類された。通常、虫状・毛筆状感覚毛の両方を持つが、属によってその構成は異なる。いずれも化学受容器であると推定された。虫状・毛筆状感覚毛の内部微細構造は、内部を走る微小管束数、微小管末端の配置が異なり、感受性の相違を反映していると考えられる。Scolecitrichidae科3属の消化管から、甲殻類の破片、尾虫類ハウス等のデトリタスが頻繁に検出された。Phaennidae科に属するCephalophanes属は第2下顎に感覚毛を持つことに加え、ノ-プリウス眼が特殊化した大型反射板を1対持っているが、本属の特殊な消化管内容物から反射板がデトリタス検出に機能している可能性がある。紅海産ポエキロストム目Oncaea属9種も尾虫類ハウスを飼料として利用していた。2.主に中深層以深に生息するカラヌス目カイアシ類Heterorhabdidae科に属するHeterorhabdus属はコペポディドが主食である肉食者であった。本属の上顎咀嚼歯の最も腹側に位置する歯(V1歯)は筒状になっており、先端は注射針様構造になっている。この注射針の孔付近は底節の分泌腺由来と考えられるオパールで強化されていた。非捕獲時は、このV1歯基部は上唇の裏側にある1対の巨大分泌腺の開口部に密着している。この時にV1歯内部の空所に毒あるいは麻酔用物質が充填され、餌動物の捕獲時に注射針様先端からその分泌物を打ち込むと推定された。類似した構造は同科のHemirhabdus属とNeorhabdus属に見られたが、他4属には見られなかった。分岐分類学的解析によって7属間の系統関係を推定した結果、上顎咀嚼歯と上唇に上述の構造を持つ属が、系統的には派生的であった。このような特殊な摂餌様式は他のカラヌス目カイアシ類に類を見ない。
アポトーシスの細胞内分子制御によるびまん性汎細気管支炎の新しい病態理論と治療応用

1)びまん性汎細気管支炎(DPB)の呼吸細気管支領域に集積しているリンパ球はBaxをほとんど発現していなかったが、Bcl-2はほとんどのリンパ球が陽性に染色された。また、アポトーシス実行酵素であるcaspaseもほとんど発現しておらず、DPBにおけるリンパ球アポトーシス抑制の細胞内分子としてBcl-2の過剰発現が重要であることが判明した(Am J Respir Crit Care Med 167:A993,2003,Respir Med in press,2006)。2)健常成人より分離した末梢血リンパ球のマクロライド系抗菌薬によるアポトーシスの誘導をアポトーシス促進蛋白のBax,アポトーシス抑制蛋白のBcl-xLおよびcaspase3を用いたflowcytometryにて細胞内分子レベルで検討した。CD3とCD28に対する抗体で刺激されたリンパ球はマクロライド系抗菌薬100mg/lの濃度においてアポトーシスが誘導され、その誘導はBcl-xLの発現を抑制することによることが判明した。この抑制は14員環および15員環マクロライド系抗菌薬に特徴的であった。マクロライド系抗菌薬は細胞内シグナル、特にアポトーシス抑制蛋白に影響を及ぼしている可能性が示唆された(Int J AntimibrobAg 24:49-55,2004,Int Immunopharmacol 4:1201-1207,2004,Int J Antimicrob Ag 25:216-220,2005)。3)マクロライド抗菌薬投与後のマウスモデルの肺組織を経時的に採取し、光顕および電顕レベルにて検討した。慢性気道感染症成立時期の60日目よりマクロライドを投与すると、投与後80日目頃より緑膿菌の菌数の減少が認められ、気道内好中球数の減少とバイオフィルム形成の減少が観察された。このことはin vivoにおいても、マクロライド系抗菌薬を長期投与することで緑膿菌の排除とバイオフィルム形成を阻害することが実証された(Anitimibrob Agents Chemother 48:2251-2259,2004)。1.びまん性汎細気管支炎(DPB)の肺組織におけるアポトーシスの検討:外科的肺生検で得られた組織を抗Fas, Fas ligand抗体で免疫染色を行った。呼吸細気管支領域に集積しているリンパ球はFas, Fas ligandを全く発現していなかった。また、アポトーシスの確認のため、肺組織をTUNEL法にて染色したところ、リンパ球には陽性所見を認めず、リンパ球のアポトーシスは完全に抑制されていた。このことから、DPBの呼吸細気管支領域に集積しているリンパ球はFas-Fas ligand系を介するアポトーシスをおこしていないと考えられ、このことがDPBの慢性炎症に関与していると考えられた。現在、BaxやBcl-2などの細胞内アポトーシス関連蛋白を検討中である。2.マクロライドによるリンパ球アポトーシスの誘導(in vitroでの検討):健常成人より分離した末梢血リンパ球をクラリスロマイシンやアジスロマイシンのマクロライド系抗菌薬で2448時間培養し、アポトーシスの誘導をFas, Fas ligandの発現およびanexin Vを用いたflowcytometryにて検討した。無刺激のリンパ球は薬剤濃度が200mg/lの高濃度でアポトーシスが誘導された.

一方、CD3とCD28に対する抗体で刺激されたリンパ球は50100mg/lの濃度においてアポトーシスが誘導された。Fasの発現も誘導されたが、薬剤非添加群と変化なく、マクロライドは細胞内シグナルに影響を及ぼしている可能性が示唆された。3.緑膿菌性慢性気道感染症マウスモデルの検討:マウスモデルの肺組織を経時的に採取し、TUNEL法にて染色した。細気管支領域に浸潤したリンパ球は緑膿菌感染初期にはTUNELに陽性となり、アポトーシスが誘導されていたが、60100日にかけてTUNEL陽性細胞は減少し、アポトーシスが抑制されていた。これはヒトのDPBと同様の結果であり、リンパ球のアポトーシスの抑制と慢性気道感染症の成立とは重要な関連性があることが示唆された。1.びまん性汎細気管支炎(DPB)の肺組織におけるアポトーシスの検討:外科的肺生検で得られた組織を抗Bax, Bcl-2,caspase3抗体で免疫染色を行った。呼吸細気管支領域に集積しているリンパ球はBaxをほとんど発現していなかったが、Bcl-2はほとんどのリンパ球が陽性に染色された。また、アポトーシス実行酵素であるcaspaseもほとんど発現しておらず、DPBにおけるリンパ球アポトーシスの抑制の細胞内分子としてBcl-2の過剰発現が重要であることが判明した。2.マクロライドによるリンパ球アポトーシスの誘導(in vitroでの検討):健常成人より分離した末梢血リンパ球のマクロライド系抗菌薬によるアポトーシスの誘導をBax, Bcl-2およびcaspase3を用いたflowcytometlyにて細胞内分子レベルで検討した。CD3とCD28に対する抗体で刺激されたリンパ球はマクロライド系抗菌薬50100mg/lの濃度においてアポトーシスが誘導され、その誘導はBcl-2発現抑制に関連している結果が得られた。マクロライドは細胞内シグナル、特にアポトーシス抑制蛋白に影響を及ぼしている可能性が示唆された。3.緑膿菌性慢性気道感染症マウスモデルの検討:マクロライド抗菌薬投与後のマウスモデルの肺組織を経時的に採取し、光顕および電顕レベルにて検討した。慢性気道感染症成立時期の60日目よりマクロライドを投与すると、投与後80日目頃より緑膿菌の菌数の減少が認められ、気道内好中球数の減少とバイオフィルム形成の減少が観察された。このことはin vivoにおいても、マクロライドを長期投与することで緑膿菌の排除とバイオフィルム形成を阻害することが実証された。今後これらの機序としてquorum-sensing機構との関連性を検討していく予定である。前年度において、びまん性汎細気管支炎(PPB)の呼吸細気管支領域の病態形成に、リンパ球アポトーシスの抑制が重要で、その細胞内分子としてアポトーシス抑制蛋白であるBcl-2の過剰発現が重要であることが判明した。また、マクロライド系抗菌薬がリンパ球のアポトーシスをBcl-xL発現抑制を介して促進していることが明らかとなった。一方、緑膿菌性慢性気道感染症マウスモデルにおいて、マクロライドを長期投与することで緑膿菌の排除とバイオフィルム形成を阻害することが実証された。