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琵琶湖産野生型コイの遺伝的簡易識別法の開発と交雑状況の把握

琵琶湖産野生型コイは、大陸のコイとは遺伝的に明瞭に異なる特異な系統である。ところが、琵琶湖には大陸に由来する飼育型コイが何度も放流されており、交雑による遺伝子汚染が懸念されている。そこで本研究では、野生型コイを遺伝的に識別する核DNAマーカーを新たに複数個開発し、琵琶湖におけるコイの交雑状況を調べた。その結果、20m以深の深層には、比較的純粋な野生型集団が残存していることが判明した。初年度である昨年度の研究では、目標としていた2種類の簡易識別法の開発のうちの一つを完了することができた。すなわち、rDNA ITS領域における一塩基変異(SNP)識別プライマーを用いる方法と、マイクロサテライトマーカーに基づく方法のうち、前者を完成させることができた。完成した簡易識別法では、SNP識別プライマーを用いたPCRにより、ITS1領域における野生型と飼育型の塩基配列の違いを増幅断片の大きさの違いで判別できるようにした。すなわち、野生型と飼育型を区別するITS1領域の2ヶ所の塩基置換座位をターゲットにして、片方の座位には野生型の配列のみに、もう片方の座位には飼育型の配列のみにマッチするような下流プライマーを作成し(これがSNP識別プライマー)、野生型・飼育型どちらにもマッチするよう設計した単一の上流プライマーと合せてPCRを行なうという方法で、増幅断片の大きさは、簡単なアガロース電気泳動で区別できるように野生型は170bp、飼育型は360bpであるように設計した。この方法を用いると、野生型と飼育型の交雑に由来する個体では大小2つの増幅断片が得られる。さらに、2つの増幅断片間の濃度の違いは、サンプル中の両型の配列数の違いにおよそ対応することが確認できたので(人工的に両型のDNAを混合したサンプルを用いて検証)、交雑個体における両型の交雑の程度も、この方法によって大雑把に知ることができると考えられる(なお、ITSを含むrDNA遺伝子領域は多重遺伝子族であり、ゲノム中に複数のコピーが存在することが知られている)。2年目である昨年度の研究では、日本在来の系統(在来型)とユーラシア大陸由来の系統(導入型)を区別する核DNAマーカーとして、マイクロサテライトマーカーの隣接領域にある一塩基多型(SNP)を対象としたマーカーを5つ開発した。当初の計画では、マイクロサテライト領域の繰り返し配列の長さの多型をマーカーとして利用する計画であったが、開発を進めていく途上で隣接領域にSNPが存在することが判明したので、ホモプラシーの比較的少ないこちらをマーカーとして採用した。開発した5つのマーカーは、一度のPCR反応で同時に増幅することが可能であり、さらにそのまま、ダイレクトシーケンスにより塩基配列情報を得ることが可能である。このマーカーを開発するにあたっては、日本在来系統を代表するものとして、琵琶湖の野生型個体だけでなく、日本の他の地域から得られた個体も比較材料として用いた。これは、平行して進めていたミトコンドリアDNAの研究において、ユーラシア大陸の系統と姉妹群を成すのは、当初考えていた琵琶湖の野生型系統だけではなく、日本の他の地域にもこれと近縁な系統が存在し、これら全体が「日本在来系統」としてユーラシア大陸の系統と姉妹群をなすことが判明したからである(Mabuchi, et. al.2008)。琵琶湖以外の日本産の標本を比較材料とすることにより、本研究で開発した5つのマーカーは、琵琶湖の野生型系統だけでなく、日本の在来系統と大陸由来の系統とを区別できるものとなっている。最終年度である昨年度の研究では、前年度までに開発した核ゲノムのSNPマーカーを、琵琶湖の複数地点で採集されたコイについて適用し、琵琶湖におけるコイの交雑状況の把握を行った。その結果、解析された個体の多くは、日本在来の「在来系統」と、大陸から導入された「導入系統」との交雑個体であると判定されたが、琵琶湖の北部では純粋かそれに近い在来系統の核ゲノムを持つ個体が多く出現する一方、南部では純粋かまたはそれに近い導入系統の核ゲノムを持つ個体が多く出現した。このような傾向は、ミトコンドリアDNAハプロタイプの出現傾向とも整合的であった。以上の結果から、現在の琵琶湖におけるコイの交雑状況は以下のようであると推察された。すなわち、琵琶湖の南部には、導入個体からの遺伝的影響を強く受けた個体群が存在する一方で、北部には、その影響をまだ少ししか受けていない日本在来系統の個体群が残存している。本研究によって明らかにされたこのような状況は、世界的にも貴重な日本在来コイの保全という観点から非常に重要な意味を持つ。つまり、本研究の結果は、琵琶湖北部の個体群は、保全上非常に重要な個体群であることを示している。本研究の結果はさらに、南部の個体群は導入系統の遺伝的影響を強く受けているのに、なぜ北部の系統はそれほど影響を受けていないのかという問題も提起している。この問題への回答は、在来コイの保全の上で直接的に重要なだけでなく、琵琶湖における魚類の生態を知る上でも非常に興味深いものである。
現代中国の構造変動に関する学際的研究にかかわる予備的調査・作業

平成8年度からスタートする予定の重点領域研究「現代中国の構造変動:その現段階および21世紀に向けての展望に関する学際的研究」(領域代表者:毛里和子、領域番号・113)の準備・予備的研究作業のため、次のような調査・研究・調整作業を行った。1.現代中国の学際的研究を進める上での方法論・手法を開発するための研究と調査。研究分担者の打ち合わせ会合を開いて日本・中国・欧米の先行研究を検討するとともに、新しい方法論などの検討を行った。2.日本および欧米の先行研究について情報の収集と整理を行うとともに、現代中国に関する新聞雑誌などの第1次資料、基礎的文献などの所在状況の調査を予備的に行った。3.重点領域を各計画研究班の研究計画を吟味し精緻化するために企画・調査・調整会議を開いて検討を重ねた。4.平成8年度からの本研究の全体の研究計画、スケジュール、調査活動、広報活動などについて検討・調整を行い、初歩的なプランを作り上げた。5.本研究をスムースに進めるために、関連分野の研究者多数との意見交換、情報収集を行った。6.研究情報のネットワーク作りを検討するために図書館・研究機関・大学などの実態調査を進めた。7.「重点領域研究113」研究計画概要の作成および印刷を行った。
肺気管支神経上皮複合体の低酸素刺激応答と低酸素性肺血管収縮に関する研究

低酸素吸入時に肺血管が収縮し、血管抵抗が増す反応は、hypoxic pulmonary vasoconstriction(以下HPV)としてよく知られている。HPVは、低換気状態に陥った肺胞領域から正常換気領域へ血流をシフトさせ、低酸素血症の発現を防ぐ働きがあり、肺動脈の酸素分圧の低下よりも吸入気の酸素分圧の低下によって、より強い収縮反応が生じるとされている。しかしながら、体血管においては血管拡張性に作用する低酸素が、肺血管において逆に作用をすることについて、その機序は未解明である。われわれは、本研究において、HPVの本体を、肺気管支神経上皮複合体が低酸素吸入を感知し、興奮し、血管収縮性物質を含む(おそらくは5-HT)細胞内顆粒を放出し、肺血管を収縮させることと考え、ラットの分離肺潅流モデルを用いて、本反応に及ぼす、吸入麻酔薬、セボフルレンとイソフルレンの影響を検索した。また、HPV反応が、低体温時にいかなる影響を受けるかを検索するとともに、近年、重症呼吸不全時の治療において注目されている、部分液体換気法のHPV反応に及ぼす影響を検索した。吸入麻酔薬、セボフルレンおよびイソフルレンはdose dependentにHPVを抑制した。4%セボフルレン、3%イソフルレンは完全にHPV反応を抑制したが、吸入中止によって速やかに反応性は回復した。また、HPV反応は低体温にて抑制され、30度以下では認められず、33度以上で反応性が回復することが認められた。パーフルブロンによる部分液体換気はHPV反応には影響しなかった。2.1の実験結果を踏まえ、吸入酸素濃度を段階的に変化させることによって本実験系におけるHPVの強さと吸入酸素濃度の関係に負の相関があることがわかった。また、空気および低酸素換気時の左心室からの流出液中のserotonin(5-HT)濃度を高速液体クロマトグラフィーで測定し、HPV発現時に5-HTの濃度上昇を認めるか否かを検索したが,いずれの場合も5-HTは検出されなかった。3.2の実験で5-HTが検出できなかった原因が、潅流液にautologus bloodを使用したため,血球成分への取り込みや分解が生じたことにあるという可能性も考え,血球成分を除去して潅流実験を行ったが,BSAで膠質浸透圧を加えた電解質液による潅流では速やかに肺水腫が進行し,実験の継続が不能であった。本結果はautologus bloodに肺血管透過性の調節因子が含まれていることを示唆するもので今後この因子の検索も行う予定である。低酸素吸入によって生じる肺血管収縮の機序を解明するため以下の実験を行った。1.ラットをpentobarbital麻酔下で気管切開し、人工呼吸下で胸骨正中切開、心膜切開し、肺動脈にcannulation,また大動脈より左心室にcannulationし、perisaltic pumpによる肺動脈送血、左心室脱血の体外循環を行った(以下ラット分離肺潅流モデル)。潅流液はautologus bloodを30mmolHEPES buffer so1utionで希釈し、bovine serum albumin(BSA)3g/dlを加え膠質浸透圧を得、Hb5g/dlに調整した液を用いた。潅流速度を0.1ml/g/minと一定に保ち、吸入酸素濃度を21%から0%に変化させた時の肺動脈圧の変化を観察し,低酸素性肺血管収縮,HPV,のため約50%の肺動脈圧の上昇を認めた。2. 1の実験結果を踏まえ、吸入酸素濃度を段階的に変化させた時の本実験系におけるHPVの強さと吸入酸素濃度の関係を解明した。吸入酸素濃度10%以上ではHPV反応が生じないことが示された。3.次いで,パーフルブロン(1-Bromoheptadecafluorooctane)による液体換気時にHPVが生じるか否かを検索した。分離肺潅流モデルは1と同様のものを用い,人工呼吸をパーフルブロンによる部分液体換気とした。

本実験においても吸入酸素濃度低下によるHPV反応が保持されることが観察された。4.部分液体換気実験において,バーフルブロンにリドカインを添加し0.25%に調整した液を用いるとHPV反応は生じなかった。この時,潅流液中にはリドカインは検出されず,肺血管の収縮性の障害がHPV反応の抑制機序ではないことが示され,気管・気管支の酸素受容機構が局所麻酔薬リドカインによって抑制されたことが示唆された。低酸素吸入時に肺血管が収縮し、血管抵抗が増す反応は、hypoxic pulmonary vasoconstriction(以下HPV)としてよく知られている。HPVは、低換気状態に陥った肺胞領域から正常換気領域へ血流をシフトさせ、低酸素血症の発現を防ぐ働きがあり、肺動脈の酸素分圧の低下よりも吸入気の酸素分圧の低下によって、より強い収縮反応が生じるとされている。しかしながら、体血管においては血管拡張性に作用する低酸素が、肺血管において逆に作用をすることについて、その機序は未解明である。われわれは、本研究において、HPVの本体を、肺気管支神経上皮複合体が低酸素吸入を感知し、興奮し、血管収縮性物質を含む(おそらくは5-HT)細胞内顆粒を放出し、肺血管を収縮させることと考え、ラットの分離肺潅流モデルを用いて、本反応に及ぼす、吸入麻酔薬、セボフルレンとイソフルレンの影響を検索した。また、HPV反応が、低体温時にいかなる影響を受けるかを検索するとともに、近年、重症呼吸不全時の治療において注目されている、部分液体換気法のHPV反応に及ぼす影響を検索した。吸入麻酔薬、セボフルレンおよびイソフルレンはdose dependentにHPVを抑制した。4%セボフルレン、3%イソフルレンは完全にHPV反応を抑制したが、吸入中止によって速やかに反応性は回復した。また、HPV反応は低体温にて抑制され、30度以下では認められず、33度以上で反応性が回復することが認められた。パーフルブロンによる部分液体換気はHPV反応には影響しなかった。
化学物質を介した情報ネットワークの進化的安定性:群集構造との関わり

陸上植物の中には、植食者に食害を受けたとき、SOSシグナルと呼ばれる独特のにおいを発し、植食者の天敵を誘引して、効率的に植食者を駆除するものがある。このSOSシグナルシステムは、植物と、植食者の天敵の双方に利益があるため、それら二者の共進化によって生まれたと考えられる。しかし、このようなシグナルシステムが共進化の結果、安定に存続するためには、シグナルは、何らかのコストを伴うものでなくてはならない。なぜならば、コストが無い場合には、食害を受けていないのにも関わらず、シグナルを出して植食者の天敵を誘引する「嘘つき」突然変異体が野生型に比較して有利になり、植物集団中で広がってしまうからである。本年度は、前年度に引き続き、生理的コストの代わりに、「生態的コスト」がシグナルの進化的安定性を維持しているという仮説の妥当性を数理モデルの解析によって調べた。ここで、「生態的コスト」とは、植物がシグナルを出すことによって、植食者に見つかりやすくなり、結果として、さらに食害の危険を増してしまうという現象を指す。前年度の解析からは、「正直」な植物と、「嘘つき」な植物は、常に集団中で安定な多型をなすことがわかっていた。しかしながら、実際の植物集団においては、このような多型はこれまでのところ観察されていない。前年度に行った解析においては、植食者がシグナルを出している植物に出会う確率は、植食者自身によって完全にコントロールされているという仮定がなされていた。実際の集団では、植食者と、植物の確率的遭遇が多分に生じているはずなので、上記仮定はやや不自然である。そこで、本年度は、このような確率的遭遇の仮定をモデルに組み込み、結果がどのように変わるかを調べたところ、確率的遭遇がある場合には、「正直」な植物もしくは「嘘つき」な植物のどちらか一方が、広いパラメータ領域で集団中に固定することが明らかとなった。化学物質を介した植物間の情報伝達の進化についての研究成果を釧路での日本生態学会で発表した。植物、植食性昆虫,捕食性昆虫の三者系における、化学情報物質を介した共進化の数理モデルを構築し、解析を行った。このモデルでは、植物と捕食者は、情報伝達を維持するように進化し、一方で、植食者は、そのような伝達をかく乱するように進化すると仮定した。結果として、捕食圧や、食害の際の被害の大きさ、等のパラメータの値が変わると、系は、安定な不動点、「赤の女王」的な軍拡競争、また、三者のカオス的な軍拡競争など、さまざまな振舞いを示すことが明らかになった。結果は日本数理生物学会で発表した。複雑な三者系群集において、植物が出す化学シグナルの多様性がどのような進化的メカニズムで維持されているかを説明するための数理モデルを構築し、解析を行った。このモデルでは、コンピュータプログラムによって三者系群集をランダムに発生させ、共進化をシミュレーションした。植物のシグナルは潜在的に多数の型を持ち得るとし、また、捕食者のシグナルに対する好みもまた対応する複数の型を持ち得るとした。植物は出来るだけ多くの捕食者を誘引するようにシグナルの型を進化的に変化させ、一方、捕食者は出来るだけ多くの餌種を発見できるように好みを進化的に変化させると仮定した。結果として、シグナルの多様性が維持されるためには、捕食者当たりの餌種の数が小さくなくてはならないことが分かった。また、構造が時間的に浮動するような食物網においては、そうでない食物網に比べると、極めて多様性の維持が困難であることが分かった。しかしながら、捕食者が、餌でない植食者から放出されるシグナルを嫌うと仮定すると、構造の変化する食物網においても、多様性の維持は可能であることが分かった。結果は大阪で行われた日本生態学会で発表した。このSOSシグナルシステムは、植物と、植食者の双方に利益があるため、それら二者の共進化によって生まれたと考えられる。なぜならば、コストが無い場合には、食害を受けていないのにも関わらず、シグナルを出して植食者の点滴を誘引する「嘘つき」突然変異体が野生型に比較して有利になり、植物集団中で広がってしまうからである。それにも関わらず、SOSシグナルの生理的コストは、これまで過去の研究において、実験で見つけることができなかった。本年度は、生理的コストの代わりに、「生態的コスト」がシグナルの進化的安定性を維持しているという仮説をたて、その妥当性を数理モデルの解析によって調べた。解析の結果、生態的コストがあれば、生理的コストが無くても、SOSシグナルが安定に維持され、「嘘つき」の侵入を防ぐことができることが分かった。しかし、生態的コストがSOSシグナルの安定性に寄与する一方、生態的コストが大きいほど、「嘘つき」が侵入しやすいという逆説的で興味深い結果が得られた。すなわち、SOSシグナルの進化のためには、生態的コストは、「必要だが、小さいほど良い」ということになる。このような結果は、生理的コストからは生じない、生態的コストに特有のものであり、本研究領域に新しい知見をもたらすものである。これらの研究は、8月中旬から10月末にかけてオランダのアムステルダム大学に滞在し、同大学のM.Sabelis教授と共同して行った。

成果は、投稿論文に執筆中である。また、カナダの国際生態学会においては、前年度の研究成果を発表した。陸上植物の中には、植食者に食害を受けたとき、SOSシグナルと呼ばれる独特のにおいを発し、植食者の天敵を誘引して、効率的に植食者を駆除するものがある。このSOSシグナルシステムは、植物と、植食者の天敵の双方に利益があるため、それら二者の共進化によって生まれたと考えられる。しかし、このようなシグナルシステムが共進化の結果、安定に存続するためには、シグナルは、何らかのコストを伴うものでなくてはならない。なぜならば、コストが無い場合には、食害を受けていないのにも関わらず、シグナルを出して植食者の天敵を誘引する「嘘つき」突然変異体が野生型に比較して有利になり、植物集団中で広がってしまうからである。本年度は、前年度に引き続き、生理的コストの代わりに、「生態的コスト」がシグナルの進化的安定性を維持しているという仮説の妥当性を数理モデルの解析によって調べた。ここで、「生態的コスト」とは、植物がシグナルを出すことによって、植食者に見つかりやすくなり、結果として、さらに食害の危険を増してしまうという現象を指す。前年度の解析からは、「正直」な植物と、「嘘つき」な植物は、常に集団中で安定な多型をなすことがわかっていた。しかしながら、実際の植物集団においては、このような多型はこれまでのところ観察されていない。前年度に行った解析においては、植食者がシグナルを出している植物に出会う確率は、植食者自身によって完全にコントロールされているという仮定がなされていた。実際の集団では、植食者と、植物の確率的遭遇が多分に生じているはずなので、上記仮定はやや不自然である。そこで、本年度は、このような確率的遭遇の仮定をモデルに組み込み、結果がどのように変わるかを調べたところ、確率的遭遇がある場合には、「正直」な植物もしくは「嘘つき」な植物のどちらか一方が、広いパラメータ領域で集団中に固定することが明らかとなった。
遺伝子導入による制癌剤感受性増強の検討

5-FUのプロドラッグであるDoxifluridineやTegafurは、ヒトにおいては、主にthymidine phosphorylase(TP)によって5-FUに変換される。そこで、ヒトcell line(PC-3,PC-9,AGS,SW480,Lovo,Colo201,T47D)を対象にTP活性とin vitro Doxifluridine感受性との関係を検討したところ、両者には非常に強い相関性が見出された(r=0.92,P<0.01)。さらにTP活性を発現するplateletderived endothelial cell growthfactor(PD-ECGF)cDNAをヒト肺腺癌cell lineであるPC-9cellにトランスフェクトし、Doxifluridine、Tegafurに対する感受性の変化を検討した。トランスフェクタントのTP活性は約50倍に上昇し、それに伴い、Doxifluridine、Tegafurに対する感受性(IC_<50>)はそれぞれ160倍、26倍に増強した。また、5-FUに対する感受性も8倍増強した。bystander effectの検討では、トランスフェクタント1020%にてbystander effect陽性の結果を得た。今回のシステムでのbystander effectには、細胞の接触を必要としないことも確認された。これまでの結果は、PD-ECGF遺伝子が癌遺伝子治療に応用できる可能性を示唆するものと考えられる。今後、今回のシステムをin vivo薬剤感受性検査に発展させていく一方で、今回得られたトランスフェクタントを利用して、PD-ECGFの新生血管作用の研究も進めていきたい。また、トランスフェクタントにおいて、5-FUに対する感受性までもが増強したことは、興味深いことであり、そのメカニズムの解明も進めていきたい。
紫外線レーザーやセンサー応用としての酸化亜鉛(ZnO)ナノロッドアレイの合成

酸化亜鉛(ZnO)はワイドギャップ半導体(3.4eV)で、化学的・熱的な安定性に優れている上に、ピエゾ特性、電界放射、生体親和性などの数々のユニークな特性を発現させる物質で、カーボンナノチューブについで多くの研究がなされている。本研究はZnOのナノロッドやナノチューブの1次元配向を制御する新規な合成法を開発し、生成物の微構造と特性を解明することである。最終年度は生成したZnOのナノチューブやナノロッドの電界放射特性を調べた。ナノチューブアレイはナノロッドアレイよりも電界放射特性に優れていた。これは、前者がチップ先端の形状がより微細であることに起因していた。一方、チップ先端径が5nmφのコーン上のナノロッドはさらに電界放射特性が飛躍的に向上することがわかった。ターンオフ電圧は約2V/umで電流値は1mA/cm2でこの値はこれまでに知られている値を凌ぐものである。また、銀や白金などの金属を表面に付加させると、電界放射特性がさらに向上することを見出した。これらの成果はZnOナノ物質が電界放射材料として利用出来うること、さらに金属修飾をするとその特性が向上するなどの新しい科学的知見が得られた。本研究を通じて、ZnOのナノ構造物質の新規な合成法や電界放射特性等の解明が進んだ。酸化亜鉛(ZnO)のナノロッドはワイドギャップ半導体(3.4eV)で、化学的、熱的な安定性に優れている上に、ピエゾ特性、電界放射、生体親和性などの優れた特性を有する。また、ZnOは青色発光として、GaNよりも安価な発光材料として将来の応用が期待されている。本研究では、ZnOナノロッドのアレイを合成し、その紫外線レーザーやセンサー応用のための基盤技術を開発することを目的としている。初年度は、ZnOナノロッドの合成を目指した。MZn(NO_3)2・6H_2O溶液とHMTA(hexamethlteramine)を65-95°Cで攪拌し、NH_3・H_2Oを添加することにより、シリコン基板やガラス基盤状(面積は2x2cm^2)にZnOナノロッドを合成することに成功した。生成したZnOナノロッドは直径が25-500nm、長さが50-20umで1方向に配向し、その面積密度は10^9-10^<11>/cm^2であった。ナノロッドの表面は(0001)の極性面であることが高分解能電子顕微鏡観察により確認された。また、ZnOナノロッドはeosin Bのような有機物質を選択的に分解させる触媒活性機能があることを見出した。さらに、325nmの波長の紫外線を発光することを確認した。今後は、ZnOナノロッドの微細構造の観察、並びに高品質なZnO薄膜の作製、及びその触媒特性や紫外発光特性の高性能化に関する研究を行う。ナノチューブやナノロッドなどの1次元ナノスケール物質はバルクにはない新しい性質を示すため、次世代の新ナノ材料として注目されている。酸化亜鉛(ZnO)はワイドギャップ半導体(3.4eV)でご化学的・熱的な安定性に優れている上に、ピエゾ特性、電界放射、生体親和性などの数々のユニークな特性を発現させる物質で、カーボンナノチューブについで多くの研究がなされている本研究はZnOのナノロッドやナノチューブの1次元配向を制御する新規な合成法を開発し、生成物の微構造と緒特性を解明することである。今回、溶液法を用いて直径が20-500nm、長さが500nm-20umのZnOナノロッドを109-10ii/cm2の密度でSiのウエハー上に1次元配向することに成功した。これら配向体は2x2cm2の大きなサイズにまで作製することが可能であり、将来の実用化を切り開くものである。さらに、ナノロッドの芯部を選択的に溶解させることにより、ナノロッドをナノチューブ状に加工する新しナノチューブ合成法を開発した。また、ZnOのナノプレートと呼ばれる厚さの異なる3種類ナノ物質を合成し、それが量子効果を起こしうる厚さの限界である約10nm以下にまで薄く合成しうることを見出した。一方、ZnOの光触媒特性を調べた結果、Bを含むような有機物質と反応させると光特性が低下する現象を見出した。また、電界放射については、ナノチューブの方がナノロッドよりも優れていることを初めて明らかにした。この結果ら、ZnOナノチューブは電界放射材として将来実用化できうることが明らかとなった。これらの研究成果はAngewandte Chemie International Edition, Journal of Physical Chemistryに発表し、さらに2報は現在投稿準備中である。

ターンオフ電圧は約2V/umで電流値は1mA/cm2でこの値はこれまでに知られている値を凌ぐものである。また、銀や白金などの金属を表面に付加させると、電界放射特性がさらに向上することを見出した。これらの成果はZnOナノ物質が電界放射材料として利用出来うること、さらに金属修飾をするとその特性が向上するなどの新しい科学的知見が得られた。本研究を通じて、ZnOのナノ構造物質の新規な合成法や電界放射特性等の解明が進んだ。
中世日本の異国使節に関する基礎的研究

本研究は、1415世紀を中心に、来日した異国使節に関する文献史料を収集して多角的に分析し、その成果と異国使節が訪れた現地の景観や考古資料とを突き合わせて、行動した場を復元することを目的とする。前者の史料収集については、今年度は15世紀前半の日本側史料を中心として、刊本からの収集を継続した。また東京大学史料編纂所において、収集した刊本史料と写真帳との照合を行った。『満済准后日記』や『看聞日記』などの日記類を中心に、主要な史料については、ほぼ照合を終えた。収集した史料の概要を、表に整理する作業を継続している(未完成)。後者については、高麗朝・朝鮮王朝の使節が頻繁に訪れた大内氏を対象とした、現地調査を行った。大内氏の拠点である山口を訪れ、大内氏館跡および大内氏の菩提寺を対象として踏査した。また館跡から出土した遺物の一部を確認した。合わせて大内氏が朝鮮使節を出迎えた、赤崎浦(山口市。山口の外港にあたる)の現況を把握した。使節が必ず通過する赤間関(現在の下関市)を訪れ、15世紀の朝鮮使節である宋希璟が訪れた阿弥陀寺(現在の赤間神宮)・永福寺・専念寺などを踏査した。上記に加えて、琉球使節の航路にあたる徳島県の状況を確認するため、中世都市研究会徳島大会に出席した。異国使節が訪れた京都の醍醐寺の史料を確認するため、九州国立博物館で開かれた「醍醐寺展」を見学した。日本史研究会大会に出席し、本研究と密接な関係を持つ、中村翼「東アジア海域世界の境界人と政治権力ー14世紀の分水嶺を考えるー」を聞いた。同報告に対する批判を、『日本史研究』第680号(2019年)に掲載した。昨年度までに、史料調査の成果の一部を論文にまとめて発表する予定であったが、実現できなかったため。(1)過去3年間の調査成果に、本年度の成果を加えて、論文として発表する。学会における口頭報告を行い、論文を学会誌または『宮﨑大学教育学部紀要』などに発表する。(2)収集した刊本史料の整理(発表用)と追加の史料収集を行う。(3)宮内庁書陵部所蔵の「壬生家旧蔵本『宋朝僧捧返牒記』」の調査を行う。(4)高麗朝・朝鮮王朝の使節が訪れた対馬について、彼らの観察記録をもとに、現地や遺跡・遺物の調査を行う。前者の史料収集については、14世紀後半の日本側史料について、刊本をもとに史料を収集し、その概要を表に整理した(未完成)。また東京大学史料編纂所において、刊本史料と写真帳の照合を行った。国立国会図書館がインターネット上で写真を公開している史料(『師守記』)についても、同様に刊本との照合を実施した。中国・朝鮮側史料については、『明実録』のデータベースなどを利用しつつ、史料を検索した。後者については、平成29年度は、京都府京都市を対象に、異国使節が訪れた現地を踏査し、その場所と移動ルートを確認した。花の御所・相国寺など、将軍と接見した場所を踏査した。近年の研究をもとに、明使節が北山第(現在の金閣寺所在地)を訪れたルートを踏査した。なだらかな斜面を常に登らせ、頂上に至って初めて北山第を見せるという演出を、室町幕府がしていたことを確認した。朝鮮使節の宿泊地などがあった仁和寺周辺や、使節が訪れた鹿王院や祇園社(八坂神社)などを踏査した。考古資料の調査については、同志社大学歴史資料館において、相国寺旧境内発掘調査の遺物を、主要な遺構に即して実見し、報告書の内容を確認するとともに、遺物の組成について検討した。また本研究の成果の一部を反映させた著書・論文を発表した。『日朝関係史』において、異国使節などの中世日朝関係の概要を述べた。『十四世紀の歴史学』の分担部分において、倭寇と異国使節について言及した。「東アジア海域における中世山陰」において、朝鮮対馬山陰地域という航路を想定した。「海域交流の担い手倭人・倭寇」において、調査予定地である対馬島の倭人の活動について論じた。研究実績の概要に述べた成果の一部を、平成28年度中に論文にまとめる予定であったが、平成29年度において執筆して発表することにした。また異国使節に関する史料の情報をデータベースにする作業は、平成28年度分は予定していたほど(14世紀の史料の収集に目処をつける)は進んではおらず、平成29年度以降の作業ペースをあげる必要がある。前者の史料収集については、今年度は15世紀前半の日本側史料を中心として、刊本から収集した。東京大学史料編纂所において、刊本史料と写真帳との照合を行った。東寺百合文書については、京都府立京都学・歴彩館において調査を行い、刊本史料の収集と、同史料と写真(インターネット上で公開)との照合を行った。収集した史料の概要を表に整理した(未完成)。

また16世紀末、琉球使節に対する島津氏の対応について、史料の存在が確認できた。後者については、対象地域を広げ、以下のような調査を行った。(1)異国使節が訪れる博多(当初の研究計画では、時間・調査費の問題で外していた)については、重要文化財に指定されたことを機に遺物を実見する機会を得た。2017年5月に、福岡市埋蔵文化財センターにおいて、主要な遺物を実見して写真を撮影した。京都などの他地域と比較するための材料を得ることができた。(2)2017年9月、琉球使節の航路にあたる南九州を訪れた。日向国では志布志、大隅国では肝付を訪れ、中世の状況を確認するとともに、志布志埋蔵文化センターで遺物を見学し、発掘調査中の安良遺跡を見学して遺構を確認した。さらに琉球使節をはじめとする琉球史研究の成果を把握するため、2017年10月に日本古文書学会沖縄大会に出席し、琉球王国の構造や、その発給文書の特徴などの理解を深めた。本研究の調査から明らかになった点を論文として発表した。異国使節来日の契機になった倭寇、異国人と日本人の間に生まれた子どもについて論じた。昨年度までに、史料調査の成果の一部を論文にまとめて発表する予定であったが、実現できなかったため。本研究は、1415世紀を中心に、来日した異国使節に関する文献史料を収集して多角的に分析し、その成果と異国使節が訪れた現地の景観や考古資料とを突き合わせて、行動した場を復元することを目的とする。前者の史料収集については、今年度は15世紀前半の日本側史料を中心として、刊本からの収集を継続した。また東京大学史料編纂所において、収集した刊本史料と写真帳との照合を行った。『満済准后日記』や『看聞日記』などの日記類を中心に、主要な史料については、ほぼ照合を終えた。収集した史料の概要を、表に整理する作業を継続している(未完成)。後者については、高麗朝・朝鮮王朝の使節が頻繁に訪れた大内氏を対象とした、現地調査を行った。大内氏の拠点である山口を訪れ、大内氏館跡および大内氏の菩提寺を対象として踏査した。また館跡から出土した遺物の一部を確認した。合わせて大内氏が朝鮮使節を出迎えた、赤崎浦(山口市。山口の外港にあたる)の現況を把握した。使節が必ず通過する赤間関(現在の下関市)を訪れ、15世紀の朝鮮使節である宋希璟が訪れた阿弥陀寺(現在の赤間神宮)・永福寺・専念寺などを踏査した。上記に加えて、琉球使節の航路にあたる徳島県の状況を確認するため、中世都市研究会徳島大会に出席した。異国使節が訪れた京都の醍醐寺の史料を確認するため、九州国立博物館で開かれた「醍醐寺展」を見学した。日本史研究会大会に出席し、本研究と密接な関係を持つ、中村翼「東アジア海域世界の境界人と政治権力ー14世紀の分水嶺を考えるー」を聞いた。同報告に対する批判を、『日本史研究』第680号(2019年)に掲載した。引き続き、異国使節に関する文献史料の収集と、異国使節が訪れた現地の景観や考古資料の検討を行う。史料は、日本・中国・朝鮮の刊本史料を中心に収集する。当初の予定では、紙焼写真の収集を予定していた。しかし一部の史料についてインターネット上で写真を公開していることや、収集史料の多さや調査時間の関係から、刊本史料からの収集、および東京大学史料編纂所所蔵の写真帳・影写本と刊本との照合に重点を移すことにした。
神経内分泌小胞膜に特異的に存在する電子伝達系の構造と機能

(a)高等動物の生体内情報伝達を行う脳・神経内分泌組織中には神経伝達物質の貯蔵と放出に携わる小胞(生体アミン含有小胞、神経ペプチド含有小胞等)が存在する。これらの小胞膜では膜貫通型電子伝達素子チトクロムb561が細胞質アスコルビン酸から小胞内に存在する銅含有モノオキシゲナーゼへの電子伝達を行っている。この電子伝達はノルアドレナリン・アドレナリンなどの生体アミン、種々の視床下部・脳下垂体由来神経ペプチド、サブスタンスP・VIP・NPYなどの消化管ホルモン、等の脳・神経伝達物質の生成に必須であり、それらの貯蔵・放出において重要な役割を担っている。このチトクロムb561を脳神経組織と同じく外胚葉に由来する、ウシ副腎髄質組織より高純度・大量に精製する方法を確立した。精製した標品中には1分子中に2個のヘムBが結合していることを見出した。これは従来提唱されていた1分子中1個のヘムBという値とは完全に異なり、電子伝達機構の根本的な見直しが必要なことを示している。(b)ヒツジ、ブタのチトクロムb561cDNAクローニングよりアミノ酸配列を明らかにした。すでに知られているウシ、ヒト等の配列と比較検討した結果、アスコルビン酸・セミデヒドロアスコルビン酸結合部位と思われる2つの保存性アミノ酸配列領域が細胞質側、小胞膜内側にそれぞれ存在することを初めて見出した。また2つのヘムBの結合部位も2つの保存性領域近くにそれぞれ存在する事を提唱した。(c)それぞれのヘムBがアスコルビン酸・セミデヒドロアスコルビン酸との電子伝達反応において、電子受容、電子供与という特異的役割を持つことをパルスラジオリシス法により解明した。またDEPによる特異的化学修飾等によりそれぞれの反応を特異的に阻害できることを明らかにした。(d)一次構造の比較から、アスコルビン酸・セミデヒドロアスコルビン酸それぞれに対する結合部位と考えられる2つの保存性領域を見つけ出したが、これらの部位の生理的機能を解明し、分子全体の高次構造を推定するために、より下等な中枢神経系を持つ生物種、或いは生物学的に疎遠な生物種(例えば植物)との一次構造を比較検討している。最近、扁形動物プラナリア及び植物シロイヌナズナのチトクロムb561cDNAのクローニング・塩基配列解析に成功した。(e)現在、理化学研究所・播磨研究所神谷信夫博士、朴三用博士との共同研究により、ウシチトクロムb561の結晶化を試みている。高分解能X線結晶解析に耐え得るような良質の結晶の作製を目指している。
自閉症におけるα4β2ニコチン性受容体とオキシトシン投与効果：PET研究

自閉スペクトラム症(Autism Spectrum Disorder: ASD)は、社会的コミュニケーションの障害と限定された反復行動を中核症状とし、中核症状への治療薬は無い。α4β2ニコチン性アセチルコリン受容体(Nicotinic acetylcholine receptor: nAChR)の作動薬が中核症状への治療効果が見込まれているが殆ど検討されていない。本研究ではASD当事者での脳内α4β2nAChRの中核症状への関与を検討し、臨床開発につなげたい。またASDへのオキシトシンの治療効果とα4β2nAChRとの関係を検討することで臨床応用にもつなげたい。
ヒトiPS細胞による脂肪萎縮症の脂肪細胞再生―脂肪萎縮症ヌードマウスによる検討

我々はin vitroでiPS細胞の脂肪細胞への分化誘導を世界で最初に示した(FEBS Lett. 2009; 583:1029)。さらにin vivoでヒトiPS・ES細胞由来の分化細胞が生着し、機能するかに関しては外胚葉系細胞以外ではほとんど研究されていない。今回、脂肪萎縮性糖尿病の細胞治療の実現へ向けてin vitroにおいてヒトiPS・ES細胞由来脂肪細胞の分化誘導と分化細胞のヌードマウス生体内での生着に関する検討を行った。ヒトiPS細胞とヒトES細胞を胚様体形成を介する方法で脂肪細胞への分化誘導を行い、細胞(1×107個相当)を回収しmatrigelに懸濁し、8週齢の雄性ヌードマウスの皮下へ移植を行った。移植後、2週、4週で組織を摘出の後、パラフィン切片および凍結切片を作製し組織学的検討を行った。また2週のサンプルから核酸を抽出し脂肪細胞関連遺伝子の発現を検討した。In vitroの分化誘導においてヒトiPS・ES細胞が脂肪細胞に分化することを示しヒトiPS・ES細胞由来脂肪細胞がin vivoにおいて生着することを初めて示した。脂肪萎縮性糖尿病に対するiPS細胞を用いた細胞治療法の開発への着実なステップとなると考えられる。
ムスカリン性アセチルコリン受容体のGiおよびGg共役機構の解明

我々は、1回膜貫通受容体であるインスリン様増殖因子2型受容体(IGF-IIR)のシグナル伝達機構を解析してG蛋白活性化配列criteriaを得た。すなわち、(i)N端部分に最低2個の塩基性残基と(ii)C端のB-B-X-BあるいはB-B-X-X-B構造が必須であることと、経験則的に得られた(iii)残基数が10以上26残基以下というcriteriaである。今年度は、これをGiに共役することが証明された受容体(Gi共役受容体)のうち、ムスカリン性アセチルコリン受容体に適用してGi共役機構を検討した。具体的には、M4アセチルコリン受容体(M4AchR)を選び、当該領域の精製G蛋白活性化能をGi、Go、Gsについて調べた。M4AchRは第2細胞内ループの130-147残基領域(RYFCVTKPLTYPARRTTK)と第3細胞内ループのC端付近の382-400残基領域(RNQVRKKRQMAARERKVTR)にG蛋白活性化候補領域が存在する。2つのペプチドを合成して調べたところ、いずれの領域もGiとGoを等しいpotencyで活性化するが、Gsへの作用は極めて弱かった。第3細胞内ループ領域はnMオーダーで効果があり、すでに我々が明らかにしたβアドレナリン受容体のArg^<259>-Lys^<273>のGs活性化能のpotencyとほぼ等しかったが、第2細胞内領域のそれは1/10-1/30であった。また同じ活性化領域と言っても、Mg^<2+>に対する作用の依存性は質的に異なり、Mg^<2+>非存在下で第3細胞内ループ領域はGi活性化能を持たないが、第2細胞内領域はGiを活性化することが明らかになった。すなわち、第3細胞内ループ領域は受容体様にGiを活性化するが、第2細胞内領域は受容体様には作用しないということである。以上のことから、potencyとMg^<2+>依存性という点からみて、M4AchRは第3細胞内ループC端側領域を介してGiと共役している可能性が最も高い。以上より、1回膜貫通受容体から導き出されたG蛋白活性化配列が7回膜貫通受容体にも存在すること、さらに実際のGi共役機構を解析可能であるということが明らかになった。
神経細胞の形態形成と投射形成を制御する新規分子機構の解明

知的障害や言語障害並びに頭部の過成長を示す患者(姉弟)についてエキソーム解析を行ったところ、両患者のAPC2遺伝子にホモのフレームシフト変異が存在することが明らかになった。細胞生物学的解析から、変異APC2タンパク質は細胞骨格に共局在せず、それらに対する制御能も欠失していることから、変異APC2タンパク質は機能欠失型変異体であることが推定された。そこでApc2遺伝子欠損マウスについて行動学的解析を行ったところ、患者と同様に、記憶・学習能の障害を示すことが明らかになった。また、Apc2遺伝子欠損マウスの骨格並びに頭部構造についてX線CTスキャンにより解析したところ、体長に対する脳周囲の長さがApc2遺伝子欠損マウスにおいて顕著に大きいことが明らかになった。さらに、患者並びにApc2遺伝子欠損マウスに共通して、脳室の拡大が観察された。以上の結果から、患者に見られる知的障害や言語障害、頭部の構造の異常は、APC2遺伝子の機能欠失によって生じたと考えられた。患者がソトス症候群と呼ばれる特定の遺伝子疾患の症状を示すことから、本疾患の責任遺伝子であるヒストンメチルトランスフェラーゼをコードするNSD1の下流遺伝子としてAPC2が機能している可能性が示唆された。そこで、マウス由来初代培養神経細胞を用いたin vitroのノックダウン実験や、子宮内電気穿孔法を用いたマウス胎児大脳皮質におけるin vivoのノックダウン実験を行った結果、Nsd1の下流遺伝子としてApc2が機能していることが明らかになった。すなわち、APC2の発現はNSD1によってエピジェネティックに制御されており、ソトス症候群に見られる神経系の症状はAPC2の発現低下によるものと考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。神経細胞の移動や神経軸索及び樹状突起の伸長、シナプス形成においては、神経細胞内の細胞骨格系の動態の変化が重要な役割を果たしているが、外部からの情報に応じて細胞骨格系の動態を制御する機構については依然不明な点が多い。我々は、癌抑制因子であるAPC (Adenomatous polypolysis coli)と相同性が高く、神経系に特異的に発現するAPC2について研究を進めてきた。APC2は複数のドメイン構造を有する分子量約230キロダルトンの巨大分子である。我々は、APC2がアクチン繊維並びに微小管と共局在し、それらの動態を制御していることを見出している。また我々は、APC2遺伝子欠損マウスを作製し、詳細な解析を進めている。これまでに、APC2遺伝子欠損マウスの大脳皮質、海馬、小脳、嗅球等の脳内の様々な領域において、神経細胞の移動の異常に起因する層構造の異常を観察している。本研究においては、APC2遺伝子欠損マウスについてさらに詳細な解析を行うことにより、神経回路形成におけるAPC2が関与する細胞骨格制御機構の役割を明らかにすることを目的とする。大脳皮質の神経細胞の軸索投射について、DiI等のトレーサー試薬を用いて解析を行ったところ、APC2遺伝子欠損マウスの脳梁や皮質脊髄路等において軸索投射の異常を見出した。これらの結果から、APC2は様々な神経軸索の投射形成において重要な役割を果たしていることが推測された。また、APC2は、さまざまな軸索ガイダンス分子に対する応答性の決定に関与することにより、これらの投射形成において機能すると考えられる。現在、この点を明らかにするために詳細な解析を進めている。APC2遺伝子欠損マウスの解析について、おおむね予定通りに進行しており、また、当初の予想以上の興味深い結果を得られつつあるため。

昨年度までの解析を継続して進めるとともに、新たに下記の項目について解析を行うことにより、神経回路形成におけるAPC2が関与する細胞骨格制御機構の役割を明らかにすることを目指す。(1)APC2が関与する情報伝達機構の解析(2)知的障害をもつ患者で見つかったAPC2遺伝子の変異の解析
オリゴペプチドによる移植腎拒絶の回避の基礎的検討-アポトーシス誘導酵素阻害ペプチド利用の可能性-

1.293cellにおけるアポトーシスの誘導胎児腎尿細管由来の細胞株である293細胞について以下のアポトーシス刺激に対する感受性を検討した。(1)抗Fas抗体によるアポトーシスの誘導抗Fas抗体のうちIgMクラスに分類され、Fas抗原のintegrationを行うことのできるCH-11によるアポトーシス誘導の有無を検討したが、293細胞にはアポトーシスは誘導できなかった。(2)インターフェロンガンマー処理抗Fas抗体のアポトーシス誘導を増強することが知られているインターフェロンガンマーの処理を行ったが、やはりアポトーシスは誘導されなかった。TNF-alphaもアポトーシスを誘導するが,293細胞を標的としてTNF-alphaのアポトーシス誘導能を検討した。種々の濃度で作用させたが、アポトーシスは見られなかった。2..Fas発現ベクターの作成と293細胞への遺伝子導入Jurkat細胞より分離したRNAより、cDNAを作成した。これを鋳型としてRT-PCRを行なった。(2).FasのPCR生成物の発現ベクターへの組み込み発現ベクターへの組み込みを行い,この遺伝子配列を特定した.今後,このベクターを293細胞に遺伝し導入する予定である.1. 293cellにおけるアポトーシスの誘導胎児腎尿細管由来の細胞株である293細胞について以下のアポトーシス刺激に対する感受性を検討した。抗Fas抗体のうちlgMクラスに分類され、Fas抗原のintegrationを行うことのできるCH-11によるアポトーシス誘導の有無を検討したところ、293細胞にはアポトーシスは誘導できなかった。次に、抗Fas抗体のアポトーシス誘導を増強することが知られているインターフェロンガンマーの処理を行ったが、やはりアポトーシスは誘導されなかった。TNF-alphaもアポトーシスを誘導することが知られている。293細胞を標的としてTNF-alphaのアポトーシス誘導能を検討した。2. Fas発現ベクターの作成と293細胞への遺伝子導入Jurkat細胞より分離したRNAより、cDNAを作成した。これを鋳型としてヌクレオチドのmisincorporationの少ないエキソヌクレアーゼ活性を持つ耐熱性DNAポリメラーゼでPCRを行なった。現在進行中である。(2).FasのPCR生成物の発現ベクターへの組み込み発現ベクターへの組み込みを行い,この遺伝子配列を特定した.今後,このベクターを293細胞に遺伝し導入する予定である.
19世紀中葉以前における日中文化流史の総合的研究

我々の研究テーマは山形大学教育学部と吉林師範学院の姉妹校協定書づくりの相談の中から生れた。両者の代表国に歴史関係者がいたことと吉林師範学院の実績があったためだろう。それは「19世紀中葉以前における日中文化交流史の総合的研究」というものであり、相方から6名づつ研究者を選びそれぞれが個別テーマを設けた。これらを研究分担課題とした。横山は漂流民を通して、高橋は古民話伝承、石島は比較郷学史、中川は地名変改、阿子島は古環境復元、平田は翻訳語概念、伊藤は信仰史等々である。一方中国側は、ちょう-文化交流史、張-魏晋南北朝商業史、王-明清中日文化交流史、申-満州少数民族史、李-往来物と儒学、田-中日閉関鎖国史、鄭-中、日、朝貿易関係史、孟-「竜道日本道」と文化交流史等々であった。〓-満州移民史も加わった。1年に2人づつ相互訪問し、研究発表を行ない討論した。また大学教官・大学院生・学生に講演し質疑応答し親善も深めている。同時に著作権の問題、研究の方法、試料論、授業やゼミの進め方まで交流することができた。さらに、国立国会図書館、国立歴史民俗博物館、東京大学史料編纂所、山形大学附属図書館、吉林市博物館(焼失前)、吉林師範古籍研究所、同大学附属図書館他多くの施設で共同調査・討議をくりかえし、相互に数百点を越える資料や文献・地図等を閲覧・複写できた。これらのうち送付可能なものは交換し、両大学の附属図書館や研究所、研究室に収納することができた。日本側は歴史や中国・アジア関係の文献目録を多数大学図書館に蒐集できメンバー研究者以外の先生・学生等にも役立っている。新しい共同研究も芽生えている。ついで乍ら、こうした関係は中国側からこれとは別に2人の教官が教育学研究科に入学し、今1人の教官が客員研究員として今まさに来日途上にある。また学生4人が教育学部に留学し日本からも1人の学生が吉林師範学院に留学するなどの交流を生み出すのに役立っている。かくて3年たった。この間には通弁の問題、論文の書き方や研究発表(著作権他)、財政上の問題(協定書・中清書通りになりにくい)等予期せぬ問題も生じた。幸い、申請は2年次より中国側からの旅費も認められ研究が続行できたことは幸いである。現在、科学研究費補助金には印刷費の計上が禁止されているので途方にくれているところであるが、途中定年退官したり、留学のためメンバーの交代を含みながら相互に論文を出しあい何とか一書に編んで世に問いたいと思っている。財政難は中国側の方がひどく(?)日本側でしかも両国語での研究報告書を出版したい。現在、論文をよせている者は、横山、高橋、石島、平田、伊藤、中川、ちょう、王、孟、鄭、田、〓の猪氏であり、それぞれ翻訳やワープロ入力に努力している。「研究終了後の手続」に記載された期日には間にあわないかもしれないが、義務化されていないとはいえ、一書ができあがったら4冊は提出するつもりである。以上我々の研究テーマは山形大学教育学部と吉林師範学院の姉妹校協定書づくりの相談の中から生れた。かくて3年たった。

幸い、申請は2年次より中国側からの旅費も認められ研究が続行できたことは幸いである。現在、科学研究費補助金には印刷費の計上が禁止されているので途方にくれているところであるが、途中定年退官したり、留学のためメンバーの交代を含みながら相互に論文を出しあい何とか一書に編んで世に問いたいと思っている。財政難は中国側の方がひどく(?)日本側でしかも両国語での研究報告書を出版したい。現在、論文をよせている者は、横山、高橋、石島、平田、伊藤、中川、ちょう、王、孟、鄭、田、〓の猪氏であり、それぞれ翻訳やワープロ入力に努力している。「研究終了後の手続」に記載された期日には間にあわないかもしれないが、義務化されていないとはいえ、一書ができあがったら4冊は提出するつもりである。以上日中双方の共同研究者の相互訪問と調査を中心として、研究課題にかかわる調査・研究を進め、意見交換と共同討議を行い、個別テーマによる基礎研究を進めた。3年計画の初年度に当る今年度は、1つは文献資料の収集と研究方法についての討議を多くし、2つには共同研究者個別の中間的・基礎的な発表を行うこととした。以下は、講演・雑誌発表などの要約である。1.'94年9月、日本から横山・伊藤が吉林師範学院を訪問し、横山は、日本の鎖国と漂流民について、伊藤は、日本中国における日中宗教宗教交流について講演した。講演の中のいくつかの問題について、吉林師範学院の共同研究者との間で討議した。また中国側の研究関心などもだし合い、今後の研究方法についての意見交換も有意義であった。なお講演内容は、吉林師範学院の紀要に発表の予定である。2.'94年12月、中国からちゃう,鄭両氏が山形大学を訪問し、文献調査、講演、研究討議を行った。ちゃう氏は、1516世紀の日本の倭しに関するいくつかの問題をとりあげ、鄭氏は、清代の中日朝の三国間貿易について、これまでの持論、討論を発表した。その内容は、今年度紀要に発表しているが、その中には、日本側の研究にはなかった視点もみられ、今後大いに議論に値する問題が含まれているので、これからの討議が期待される。3.高橋は、個別テーマに沿って、中国山東省や北京郊外を旅行し、語り物、伝説の所在を確かめ、その調査研究の成果の一部を学界誌等に発表した。平田は、学術語の比較史的研究の立場から、ココロとオモイ(霊魂)について、とくに原日本語の特質を指摘した。また阿子島は、外モンコルの地形・地質・古墳について、紀行文で発表紹介し、今後の研究の布石を重ねている。日中双方の共同研究者の相互訪問と調査を中心に、研究課題にかかわる調査や研究交流を進め、意見交換と共同討議を行い、個々には個別テーマにそい基礎研究を進めてきた。3年計画による第2年度に当る今年は、ひき続き文献資料の収集と交換、研究方法論についての討議から、3年度成果の公刊に向けて討議を開始した。以下は講演・研究発表などの要約である。1.'95年9月、日本から高橋と平田が吉林師範学院を訪問し、高橋は民俗伝承の日中比較について、平田は市民教育の日中と諸外国比較について講演を行なった。この研究について吉林師範学院の共同研究者並に聴講した諸先生と討論した。研究方法論や諸問題についての意見交換は有意義であり、これら二つの講演は、いずれ吉林師範学院学報に掲載予定である。2.'95年7月、中国から王、田の両氏が山形大学を訪問し、文献共同調査、講演、研究討議などを行った。王氏は在中国朝鮮民族の文化や教育について、田氏は1618世紀にかけての西欧文化移入が中国と日本にどのような影響を与えたのかの比較研究について講演した。