hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
表面分光酵素電気化学による金属酵素-電極界面の理解

通常の酸化還元酵素反応では,酵素と基質が共存下で,更に還元剤/酸化剤となる試薬を加えることで酵素反応を駆動することができるが,タンパク質フィルム電気化学では金属酵素を固定化した電極を用いることで電極電位の制御により金属酵素の触媒活性を容易にON/OFFすることができる.また,特に多数の金属錯体を内包する金属酵素などにおいては,電位制御により特定の金属錯体の中心金属の価数制御が可能になる.このような価数制御を酸化剤や還元剤を用いて実施するのは極めて難しいため,タンパク質フィルム電気化学と分光手法,特に表面敏感な振動分光法を組み合わせることができれば,酵素反応機構などに関する知見を得ることができると期待される.本研究では,一酸化窒素(NO)を一酸化二窒素(N2O)へ還元する膜貫通型の金属酵素の一酸化窒素還元酵素(NOR)を,表面増強赤外吸収(SEIRA)分光計測が可能なAu電極基板表面へ固定化し,その電極触媒活性を評価した.酵素固定化法として,Au電極基板への直接固定化法と,末端官能基としてカルボキシ基を有するアルカンチオールにより形成された自己組織化単分子層(SAM)を介した固定化法の2つの方法を確立した.どちらの固定化法においても電極電位の制御により電極表面に固定化されたNORの触媒反応を確認することができた.また,分光プローブとして一酸化炭素(CO)を用いた電位依存SEIRA分光測定を実施し,触媒活性部位を構成する2つの鉄錯体,ヘム鉄錯体と非ヘム鉄錯体,の還元電位を決定することに成功した.本研究による還元電位の帰属により,提案されている3つの酵素反応機構のうちの1つを否定し,2つに絞りこむことができた.脱窒過程にておいて一酸化窒素(NO)を一酸化二窒素(N2O)へ還元する一酸化窒素還元酵素(NOR)の反応機構解明を目指し,本年度ではNOR修飾金電極の作製とその電極触媒活性評価を行なった.NORを固定化する金電極基板は,Siプリズム上に無電解メッキ法により金薄膜を形成させることで調製した.NORを金電極表面に固定化するための方法として,NOR水溶液を直接金電極表面に滴下することによる直接固定化法と,金電極表面を予め末端官能基として-NH2基または-COOH基アリルジアゾニウムの電気化学的還元により表面修飾を施した後に,NORと電極表面との間でアミド結合形成をさせることによる共有結合固定化法の2つの手法を試みた.それぞれの手法で作製したNOR修飾金電極を用いて非触媒活性(不活性ガス)雰囲気下でサイクリックボルタンメトリー(CV)による電気化学測定を行った.その結果,いずれの電極においてもNORの補因子である鉄錯体由来の酸化還元応答を観測することができた.このことは電極表面に固定化されたNOR内部にある触媒反応サイトの鉄錯体と金電極基板との間で電子移動が起きていることを意味する.次に,触媒活性条件下(一酸化窒素ガス雰囲気下)で電気化学測定を行なった結果,いずれの電極においても一酸化窒素還元に由来する電流応答を観測することができた.一般的に金などの貴金属電極表面に酵素などの生体分子を直接固定化した場合は変性により失活することがよくあるが,本研究で用いたNORの場合は,共有結合固定化法のみならず直接固定化法においてもNORを失活させることなく金電極表面に固定化できることが明らかとなった.本研究で作製したNOR修飾金電極は,NORの触媒活性を電位で制御できるだけでなく表面増強赤外吸収分光測定も可能なため,NOR修飾金電極の作製により電気化学と表面分光の融合によるNORの反応機構解明の礎を築くことができたと考えている.NOR修飾電極の作製法の確立およびその電気化学測定を当初の計画通り実施することができた.また,NOR電極によって生成するN2Oガスを検出するための電気化学質量分析装置(DEMS)も当初の予定通り構築できた.次年度に実施予定であるNOR修飾電極の表面増強赤外吸収分光測定およびN2Oガス生成物分析などの準備は万全である.一酸化窒素還元酵素(NOR)の電極基板であるAu/Siプリズムの表面への固定化を確認するため,NOR/Au/Siプリズムの表面増強赤外吸収(SEIRA)計測を実施した.その結果NORのアミド結合由来の吸収バンドを観測したことから,SEIRA計測によってNORの固定化を確認することができた.NORは表面残基としてシステインを1つ有しているため,AuーS結合を形成することでAu表面には直接固定化されているものと考えている.NORによる一酸化窒素還元反応の酵素反応機構を理解するうえで重要になるのが,触媒活性部位を形成するヘム鉄heme b3と非ヘム鉄FeBの酸化還元電位である.これらの酸化還元電位は過去に何度も報告されているが,報告の度に訂正されてきた歴史的背景がある.最新の報告では,heme b3の酸化還元電位のほうがFeBの酸化還元電位よりも正電位側と報告されていたが,この帰結はNORの電気化学測定結果のみに依存しており,信頼性が高いとは言い難い.本研究では,赤外プローブ分子として一酸化炭素(CO)を用い,NORの電位依存SEIRA測定により触媒活性部位の2つの鉄イオンの酸化還元電位を決定した.電気化学測定結果は過去の報告と同様に2つの酸化還元波を観測し,負電位側の酸化還元電位においてヘム鉄に配位子したCO由来の吸収バンドを観測した.これらの結果から,heme b3の酸化還元電位のほうがFeBの酸化還元電位よりも負電位側であることが明らかになった.

また, heme b3の酸化還元電位と,NOR固定電極による一酸化窒素の還元開始電位が一致したことから,NORによる一酸化窒素還元反応にはheme b3の鉄イオンが関与している可能性が非常に高いことが明らかになった.電極表面に固定化されているNORのSEIRAスペクトルを初めて入手することができた.NOR中のアミド結合部位におけるバンド強度比から,NORがαヘリックスを電極表面に対して垂直に配向した状態で固定されていると考えている.NORの2核鉄錯体触媒活性部位を構成するヘム鉄heme b3と非ヘム鉄FeBの2つの酸化還元電位を決定するために,赤外プローブ分子として一酸化炭素(CO)を用いて,CO吸着NORの電位依存SEIRA測定を実施した.Heme b3とFeBの酸化還元電位は過去に何度も報告されているが,全部で4つの鉄イオンを含有するNORにおいては各鉄イオンの帰属は非常に難しく,報告の度に酸化還元電位の帰属が覆されている.また,酵素電気化学測定の結果をもとにしたNORの鉄イオンの酸化還元電位の決定は過去に報告されているが,SEIRA計測と酵素電気化学を融合させた報告例はなかった. CO吸着NORの電位依存SEIRA測定の結果,heme b3の鉄イオンに配位したCOに由来する吸収バンドの出現を,鉄イオンのFeIIIからFeIIへの電気化学的還元により確認することができ,heme b3とFeBの酸化還元電位の位置を決定した.本研究で決定したHeme b3とFeBの酸化還元電位の帰属は以前の帰属と逆転しており,表面分光酵素電気化学を用いたからこそ正しく帰属できたと考えている.本研究によりNORの2核鉄錯体触媒活性部位の酸化還元電位を正しく帰属できたことで,NORによる酵素反応機構を電気化学の観点から考察できるようになった.今回決定されたHeme b3の還元電位は,NOR固定化電極における一酸化窒素還元開始電位と一致する.すなわちheme b3が還元されることでNORによる触媒反応が進行することを示唆しており,heme b3が触媒反応に関与することは間違いない.通常の酸化還元酵素反応では,酵素と基質が共存下で,更に還元剤/酸化剤となる試薬を加えることで酵素反応を駆動することができるが,タンパク質フィルム電気化学では金属酵素を固定化した電極を用いることで電極電位の制御により金属酵素の触媒活性を容易にON/OFFすることができる.また,特に多数の金属錯体を内包する金属酵素などにおいては,電位制御により特定の金属錯体の中心金属の価数制御が可能になる.このような価数制御を酸化剤や還元剤を用いて実施するのは極めて難しいため,タンパク質フィルム電気化学と分光手法,特に表面敏感な振動分光法を組み合わせることができれば,酵素反応機構などに関する知見を得ることができると期待される.本研究では,一酸化窒素(NO)を一酸化二窒素(N2O)へ還元する膜貫通型の金属酵素の一酸化窒素還元酵素(NOR)を,表面増強赤外吸収(SEIRA)分光計測が可能なAu電極基板表面へ固定化し,その電極触媒活性を評価した.酵素固定化法として,Au電極基板への直接固定化法と,末端官能基としてカルボキシ基を有するアルカンチオールにより形成された自己組織化単分子層(SAM)を介した固定化法の2つの方法を確立した.どちらの固定化法においても電極電位の制御により電極表面に固定化されたNORの触媒反応を確認することができた.また,分光プローブとして一酸化炭素(CO)を用いた電位依存SEIRA
頭頸部慢性疼痛患者のストレス付加時HPA系機能と疼痛閾値に関する分子生物学的研究

正常被験者に規格化されたストレス刺激(cold pressor刺激,CP刺激)を付加し,交感神経系反応動態の変化を確認する目的で心拍数ならびに血圧の変動を測定した.またCP刺激を付加した際の血液中のコルチゾル,副腎皮質刺激ホルモン(ACTH),副腎皮質刺激ホルモン放出因子(CRF)および内因性オピオイドの一つであるβエンドルフィンの濃度変化を測定し,CP刺激がこれらのHPA系関連のホルモン濃度変化に影響を及ぼすかどうか検討した.同時に三叉神経領域におけるストレス付加時の疼痛閾値の変動について検討した.[方法]1.被検者の右側上腕部に2分間のCP刺激を付加し,刺激直前,直後,5,15,30,45,60分後に血液を採取し,血漿を分離した.採取した血漿中のコルチゾル,ACTH, CRF,βエンドルフィンについてラジオイムノアッセイ法を用いて濃度を測定した.同じ実験系で心拍数,血圧も連続的に記録した.2.同様の実験系でMedoc社製温度痛覚閾値測定装置TSA-2001を用い,温熱刺激による疼痛閾値を計測した.計測部位は三叉神経領域の左側外耳道前方10mmの顔面皮膚とした.[結果]1.心拍数,血圧ともにCP刺激の影響を有意に受けており刺激中に最も高い値を示した(p<0.0001).2.ACTHはCP刺激5分後に濃度が最大となった.コルチゾルは刺激30分後に濃度が最大となった.βエンドルフィンは刺激直後に濃度が最大となった.これらは有意にCP刺激の影響を受けていた(p<0.0001).一方でCRFは有意な濃度変化がみられなかった.3.三叉神経領域での疼痛閾値は刺激直後から30分後にかけて上昇する傾向にあったもの,統計的な有意差は認められなかった.心拍数や血圧の変動が示すとおり,CP刺激により交感神経系ではより急速な応答が営まれていることが確認できた.一方HPA系では,急性ストレスであるCP刺激に対して交感神経系よりも緩やかな反応を示し、非常に長時間にわたってその影響が持続することから,本実験で用いたCP刺激はHPA系反応動態を測る上で有効な手段であることが明らかとなった.また,実験的なストレス刺激により三叉神経領域での疼痛閾値が上昇する傾向にあったことから,精神的,肉体的なストレスは,交感神経系や体液性のストレス反応を介して三叉神経系の疼痛閾値を変化させうることが示唆された.正常被験者に規格化されたストレス刺激(cold pressor刺激,CP刺激)を付加し,交感神経系反応動態の変化を確認する目的で心拍数ならびに血圧の変動を測定した.またCP刺激を付加した際の血液中のコルチゾル,副腎皮質刺激ホルモン(ACTH),副腎皮質刺激ホルモン放出因子(CRF)および内因性オピオイドの一つであるβエンドルフィンの濃度変化を測定し,CP刺激がこれらのHPA系関連のホルモン濃度変化に影響を及ぼすかどうか検討した.同時に三叉神経領域におけるストレス付加時の疼痛閾値の変動について検討した.[方法]1.被検者の右側上腕部に2分間のCP刺激を付加し,刺激直前,直後,5,15,30,45,60分後に血液を採取し,血漿を分離した.採取した血漿中のコルチゾル,ACTH, CRF,βエンドルフィンについてラジオイムノアッセイ法を用いて濃度を測定した.同じ実験系で心拍数,血圧も連続的に記録した.2.同様の実験系でMedoc社製温度痛覚閾値測定装置TSA-2001を用い,温熱刺激による疼痛閾値を計測した.計測部位は三叉神経領域の左側外耳道前方10mmの顔面皮膚とした.[結果]1.心拍数,血圧ともにCP刺激の影響を有意に受けており刺激中に最も高い値を示した(p<0.0001).2.ACTHはCP刺激5分後に濃度が最大となった.コルチゾルは刺激30分後に濃度が最大となった.βエンドルフィンは刺激直後に濃度が最大となった.これらは有意にCP刺激の影響を受けていた(p<0.0001).一方でCRFは有意な濃度変化がみられなかった.3.三叉神経領域での疼痛閾値は刺激直後から30分後にかけて上昇する傾向にあったもの,統計的な有意差は認められなかった.心拍数や血圧の変動が示すとおり,CP刺激により交感神経系ではより急速な応答が営まれていることが確認できた.一方HPA系では,急性ストレスであるCP刺激に対して交感神経系よりも緩やかな反応を示し、非常に長時間にわたってその影響が持続することから,本実験で用いたCP刺激はHPA系反応動態を測る上で有効な手段であることが明らかとなった.また,実験的なストレス刺激により三叉神経領域での疼痛閾値が上昇する傾向にあったことから,精神的,肉体的なストレスは,交感神経系や体液性のストレス反応を介して三叉神経系の疼痛閾値を変化させうることが示唆された.正常被験者に規格化されたストレス刺激(cold pressor刺激,CP刺激)を負荷した際の血液中のコルチゾル,副腎皮質刺激ホルモン(ACTH),副腎皮質刺激ホルモン放出因子(CRF)の濃度変化を測定し,CP刺激がこれらのHPA系関連のホルモン濃度変化に影響を及ぼすかどうか検討した.[方法]

被検者の右側上腕部に2分間のCP刺激を付加し,刺激直前,直後,5,15,30,45,60分後に血液を採取し,血漿を分離した.採取した血漿中のコルチゾル,ACTH, CRFについてラジオイムノアッセイ法を用いて濃度を測定した.同時に心拍数,血圧も連続的に記録した.[結果]1.ACTHはCP刺激5分後に濃度が最大となった.コルチゾルは刺激30分後に濃度が最大となった.これらは有意にCP刺激の影響を受けていた(p<0.0001).一方でCRFは有意な濃度変化がみられなかった.2.心拍数,血圧ともにCP刺激の影響を有意に受けており刺激中に最も高い値を示した(p<0.0001).心拍数や血圧の変動が示すとおり,CP刺激により交感神経系ではより急速な応答が営まれていることが確認できた。一方HPA系では,急性ストレスであるCP刺激に対して交感神経系よりも緩やかな反応を示し、非常に長時間にわたってその影響が持続することがわかった。以上のことより本実験モデルはHPA系機能を評価する有効な手段であることが示された.今後は正常者と慢性疼痛患者を比較することによりストレスと慢性疼痛との関連を検討していく予定である.正常被験者に規格化されたストレス刺激(cold pressor刺激,CP刺激)を付加した際の血液中のコルチゾル,副腎皮質刺激ホルモン(ACTH),副腎皮質刺激ホルモン放出因子(CRF)および内因性オピオイドの一つであるβエンドルフィンの濃度変化を測定し,CP刺激がこれらのHPA系関連のホルモン濃度変化に影響を及ぼすかどうか検討した.同時に三叉神経領域におけるストレス付加時の疼痛閾値の変動について検討した.[方法]1.被検者の右側上腕部に2分間のCP刺激を付加し,刺激直前,直後,5,15,30,45,60分後に血液を採取し,血漿を分離した.採取した血漿中のコルチゾル,ACTH, CRF,βエンドルフィンについてラジオイムノアッセイ法を用いて濃度を測定した.同時に心拍数,血圧も連続的に記録した.2.同様の実験系でMedoc社製温度痛覚閾値測定装置TSA-2001を用い,温熱刺激による疼痛閾値を計測した.計測部位は三叉神経領域の左側外耳道前方10mmの顔面皮膚とした.[結果]1.ACTHはCP刺激5分後に濃度が最大となった.コルチゾルは刺激30分後に濃度が最大となった.βエンドルフィンは刺激直後に濃度が最大となった.これらは有意にCP刺激の影響を受けていた(p<0.0001).一方でCRFは有意な濃度変化がみられなかった.2.心拍数,血圧ともにCP刺激の影響を有意に受けており刺激中に最も高い値を示した(p<0.0001).3.三叉神経領域での疼痛閾値は刺激直後から30分後にかけて上昇する傾向にあったもの,統計的な有意差は認められなかった.心拍数や血圧の変動が示すとおり,CP刺激により交感神経系ではより急速な応答が営まれていることが確認できた.一方HPA系では,急性ストレスであるCP刺激に対して交感神経系よりも緩やかな反応を示し,非常に長時間にわたってその影響が持続することがわかった。また,実験的なストレス刺激により三叉神経領域での疼痛閾値が上昇する傾向にあったことから,精神的,肉体的なストレスは,交感神経系や体液性のストレス反応を介して三叉神経系の疼痛閾値を変化させうることが示唆された.
生体機能二分子膜および高分子膜を反応場とする電子・イオン伝達系の構築と解析

ビオロゲンサイトの幾何学的配向が制御されたポリアルキレンビオロゲン(PAV)とアニオン性化合物(2C_<12>SO_3)から成るポリイオンコンプレックス膜をキャスト法にてQCME上に被覆し、薄膜内での酸化還元反応に伴う物質移動の挙動を評価した。このPAV(n=4)/2C_<12>SO_3膜を0.1M NaClO_4水溶液に浸したところ、大きな質量の増加が観察され、これを溶媒およびNaClO_4挿入の寄与として、それぞれを定量的に評価した。0.1M NaClO_4水溶液中では、ビオロゲンの還元に伴い膜の質量が減少し、酸化に伴い膜の質量が増加していることから、膜の電気的中性を保つために陰イオンであるClO_4^-イオンが支配的に放出移動していることがわかった。一方、0.01M NaClO_4水溶液中では、還元に伴い膜の質量が増加し、陽イオンであるNa^+イオンが挿入されることがわかった。これらの結果は、電子移動反応により誘起されるこの材料系における物質移動が電解質濃度に大きく支配されていることを示している。また、LangmuirーBlodgett(LB)法、電解重合法、およびキャスト法を用いて、ユビキノン固定化薄膜を作製し、その薄膜内における電荷移動反応速度を定量的に評価し、さらに生体関連物質の酸化還元に対する触媒材料としての評価を行った。アルキルアンモニウム塩、ポリビニル硫酸、ユビキノンから成るLB膜は、親水処理したITO電極基盤上に累積被覆され、その累積パタ-ンはZ型であった。この累積膜は、塩基性条件下で可逆性の良い酸化還元応答を与え、薄膜内における電荷移動は、膜内に固定化されたユビキノンサイト間の自己電子交換反応により進行し、その電荷移動の見かけの拡散係数(D_<app>)は8.7x10^<-12>cm^2S^<-1>と求めることができた。またこの薄膜は、酸化還元反応に対して触媒作用を示した。さらに、金とチオ-ル基との特異的な相互作用を利用してアルキルチオ-ル(CH_3-(CH_2)_n-SH)の単分子層から成る疎水的反応場を金電極表面に構築し(selfーassembly法)、その反応場に疎水性相互作用によりユビキノンを固定化することができた。この薄膜は酸化還元応答を示し、算出されたユビキノンの表面濃度が10^<-10>molcm^<-2>オ-ダ-であったことから、単分子層レベルでユビキノンが固定化されていることがわかった。
時空間統計解析に対する周波数領域における推測理論

時空間データを解析するための代表的確率モデル定常確率場に対するパラメトリック・モデルの妥当性を検定する際に、観測値のフーリエ変換に基づく新たな検定統計量を提案した。この検定統計量はピリオドグラムと呼ばれるフーリエ変換の絶対値の2乗を異なった周波数において計算しそれをカーネル関数で平滑化した量である。想定したパラメトリック・モデルが正しいという帰無仮説の下で、この統計量はカーネル関数の積分のみに依存し他の未知の量には依存しない簡潔な漸近期待値と分散をもつ。したがって実際のデータ解析にも簡単に応用できる。また現在確認中であるが漸近正規性も成立すると予想される。時空間データを解析する確率モデルとして定常確率場がある。確率場のパラメータは一般にベクトルであり、1次元すなわちスカラーで時点を表す場合は時系列に対するモデル、2次元で第1成分が経度、第2成分が緯度、さらに3次元になり第3成分が高さの場合は空間データに対するモデル、さらに4次元になり第4成分が時点の場合は時空間データに対するモデルになる。定常確率場とは確率場の中で、各地点(各時点)における観測値を確率変数の実現値と見なした場合、それが地点(時点)に依存せず一定であり、2つの異なった地点(時点)の観測値間の共分散が地点(時点)のベクトル差のみに依存する確率場である。定常確率場にたいしてさまざまなパラメトリックモデルが提案されている。本研究では特定のパラメトリックモデルが妥当か否かの統計的検定を行う際に、観測値のフーリエ変換に基づく新たな検定統計量を提案した。この検定統計量はピリオドグラムとよばれる各周波数におけるフーリエ変換の2乗をカーネル関数によって平滑化した統計量である。優れた点は観測地点(時点)がランダムで一様分布に従うとき、帰無仮説すなわち想定されたパラメトリックモデルが正しいという仮説の下ではその漸近期待値と分散がカーネル関数の積分のみに依存し他の未知の量には依存しないという実用上も有用なことである。現在確認中であるが漸近分布も正規分布に従うと予想される。またピリオドグラムの漸近分散、異なった周波数におけるピリオドグラムの漸近共分散は、定常過程において等間隔で観測された時系列データのピリオドグラムのそれと同じ性質をもち、定常過程において既に確立されているピリオドグラムに基づいたブートストラップ法の理論的正当性が同様に成立することが予想される。統計科学・計量経済学
4遺伝子シグネチャーによるⅠ期肺腺癌の再発予測システムの構築　国際共同試験

予後不良と言われている肺癌でさえ、近年の画像診断の進歩により、根治可能なI期肺癌の検出が可能になり,手術療法への期待は高まっている。しかしながらI期であっても根治手術後未だ30%は再発する。よって術後化学療法の必要性が問われているが、国内外でもその有用性に関してはコンセンサスが得られていない。よってI期の術後化学療法が必要な予後不良患者(再発高危険群)と不必要な予後良好患者(再発低危険群)を選択する必要がある。本研究は、I期肺癌における再発予測マーカーを構築し、さらに術後化学療法が必要な予後不良患者と不必要な予後良好患者を選択する治療選択マーカーを構築することを目的とした。学習セットおよびバリデーションセットの検体を用いて4遺伝子シグネチャーおよび病理学的バイオマーカーを用いて再発危険群および経過観察群を選択する。先の基盤研究Cでの4遺伝子シグネチャーによるI期肺腺癌の再発予測システムの構築では、FFPE切片からのRNA抽出およびその発現解析、病理学的検索の確立、さらに確固たるバイオマーカー診断法を構築するため代表者がすでに報告したACTN4や基盤研究C研究として報告したPD-L1発現やHOXA9メチル化、病理学的血管侵襲所見などをまとめ様々なmodalityで再発予測そして術後化学療法の有用性を示す診断システムを構築しつつある。確固たる診断システムの構築のためには代表者が以前所属していたNIHやThomas Jefferson Universityとの共同研究を行い米国での検体での検証も必要である。そのために、本年度は両施設分担者と研究内容の確認および実験計画をたて、次年度より実務を開始する礎を構築した。国内外問はずあらゆる施設でも使用されているFFPE検体を用いて人種、施設を超えた多施設の検体を用いることは、本診断キットの普遍性や信頼性を高めることになる。肺癌は早期、特にI期であっても30%は再発するといわれている。確固たる診断システムの構築のためには代表者が以前所属していた信頼関係にあるNIHやThomas Jefferson Universityとの共同研究を行い米国での検体での検証も必要である。よって比較的順調に経過していると思われる。代表者(野呂)はH25-H27にNCI/LHCに留学し肺扁平上皮癌を中心としたバイオマーカー研究(Journal of Thoracic Oncology 2015, 2017, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2016 )を行っており、責任者であるHarris Curtis博士との信頼関係や研究基盤はできている。また同ラボのHien Dang博士はThomas Jefferson UniversityのPIになり、同じく共同研究を行うことができる。また生物統計の専門家でありアドバイスを得ることができる。施設は肺癌大腸癌をはじめとしたトランスレーショナルリサーチ研究を行い、FDAへの診断キットの申請など成果を上げている。米国内から多数のFFPE検体が両施設に集められており、既に我々は解析のための研究手法を確立しており、障害なく発現解析に取り掛かることができると思われる。次年度からはNIHおよびThomas Jefferson Universityに往復し、研究を遂行する。内定年度:2017予後不良と言われている肺癌でさえ、近年の画像診断の進歩により、根治可能なI期肺癌の検出が可能になり,手術療法への期待は高まっている。

そのために、本年度は両施設分担者と研究内容の確認および実験計画をたて、次年度より実務を開始する礎を構築した。国内外問はずあらゆる施設でも使用されているFFPE検体を用いて人種、施設を超えた多施設の検体を用いることは、本診断キットの普遍性や信頼性を高めることになる。肺癌は早期、特にI期であっても30%は再発するといわれている。よって術後化学療法の必要性が問われているが、国内外でもその有用性に関してはコンセンサスが得られていない。よってI期の術後化学療法が必要な予後不良患者(再発高危険群)と不必要な予後良好患者(再発低危険群)を選択する必要がある。先の基盤研究Cでの4遺伝子シグネチャーによるI期肺腺癌の再発予測システムの構築では、FFPE切片からのRNA抽出およびその発現解析、病理学的検索の確立、さらに確固たるバイオマーカー診断法を構築するため代表者がすでに報告したACTN4や基盤研究C研究として報告したPD-L1発現やHOXA9メチル化、病理学的血管侵襲所見などをまとめ様々なmodalityで再発予測そして術後化学療法の有用性を示す診断システムを構築しつつある。確固たる診断システムの構築のためには代表者が以前所属していた信頼関係にあるNIHやThomas Jefferson Universityとの共同研究を行い米国での検体での検証も必要である。よって比較的順調に経過していると思われる。代表者(野呂)はH25-H27にNCI/LHCに留学し肺扁平上皮癌を中心としたバイオマーカー研究(Journal of Thoracic Oncology 2015, 2017, Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2016 )を行っており、責任者であるHarris Curtis博士との信頼関係や研究基盤はできている。また同ラボのHien Dang博士はThomas Jefferson UniversityのPIになり、同じく共同研究を行うことができる。また生物統計の専門家でありアドバイスを得ることができる。施設は肺癌大腸癌をはじめとしたトランスレーショナルリサーチ研究を行い、FDAへの診断キットの申請など成果を上げている。米国内から多数のFFPE検体が両施設に集められており、既に我々は解析のための研究手法を確立しており、障害なく発現解析に取り掛かることができると思われる。次年度からはNIHおよびThomas Jefferson Universityに往復し、研究を遂行する。
高度に機能制御されたナノダイヤモンド量子センサーの創出と応用

FND内部に存在する窒素空孔中心(NVC)のスピン量子状態は磁場・電場に対して鋭敏な応答を示し、これをNVCから発せられる蛍光信号を通して読み取ることができる。すなわち、FNDを細胞内に導入する事により、細胞内のナノスケールに生じる温度・磁場を計測することができる。しかし現状、FNDにはその物理・化学的性質に問題があり細胞内センシングは困難であり未だ達成されていない。本研究では、物質化学・有機化学を駆使し、高品質なFNDを調整することにより、FNDを細胞内量子センサーとして応用する基盤技術を確立する。そのうえで、細胞内温度センサーとしての有用性の検証を行う。
Xe-CTとSPECTを用いた感情障害の局所脳血流に関する基礎的、臨床的研究

1.Xe-CTによる局所脳血流量の研究結果から次の4点が明らかになった。(1)対照群、双極性障害群、大うつ病群のいずれも、rCBFの左右半球差を認めなかった。部位別に比較した結果大うつ病群では右前頭葉および両側前中心回において対照群に比べrCBFが有意に低下していた。双極性障害群では右側頭葉のみ有意に低下していた。(2)少数例であるが、感情障害患者においてうつ病相と寛解期での比較を行った。その結果、寛解期では右尾状核および左被殻でrCBFの有意な上昇が認められた。(3)正常者において総血流量と年齢との相関を検討した結果、r=-0.445と弱い負の相関を認め、年齢と共に脳血流が低下する傾向が認められた。(4)年齢補佐を行い、患者と正常者のrCBFを比較した結果、感情障害群において右前頭葉皮質、左中心前回、右側頭葉皮質で有意な低下を認めた。不安障害および感情障害の患者の多くがIomazenilの局所的或いは広範な取り込み低下を示した。局所的低下は前頭葉、前頂葉、側頭葉での低下が多く見られた。受容体結合に関しては患者群の前頭葉上部、前頂葉、側頭葉、後頭葉での低下が有意であった。3.動物実験の結果は予備的なものであるが、不安惹起物質がベンゾジアゼピン受容体を占有すること、ストレスに曝すとベンゾジアゼピン受容体が増加することが明らかになった。平成6年度はうつ病患者を対象に局所脳血流量を測定し正常対照群と比較した。対象は精神科に入院あるいは通院中の患者でいずれもDSMIIIRの大うつ病あるいは双極性障害うつ病性の診断基準に該当し、HRDS得点が15点以上の17例(男性11例、女性6例)で年齢は平均50歳であった。このうち、大うつ病(MD)は11例、双極障害(BD)は6例であった。対照は健康成人男子10例で平均年齢は40.4歳である。対象は本研究の目的、方法、安全性につき説明し、同意を得た者のみとした。被験者はCTスキャナーの撮影台に仰臥し、キセノンガス吸入装置より非放射性キセノンガス(30%)を吸入し、その間にCTの撮像と終末呼気中のキセノンガス濃度の定量を行った。得られたデータより脳血流解析専用装置を用いて局所脳血流量を算定した。【結果】対照群、MD群、BD群のいずれにおいても、局所脳血流量の左右半球間に差は認めなかった。部位別に患者群と対照群の間で比較したところ、MD群では右前頭葉および両側前中心回において対照群と比べ有意な低下が認められた。BD群は右側頭葉のみ有意に低下していた。また少数例(4例)であるがMD群の同一症例においてうつ病期と寛解期での比較を行った。その結果、寛解期では両側の前中心回で脳血流量の有意な上昇が認められた。【考察】今回の結果は、MD群で前頭部皮質での血流低下を示唆し、またMD,BD群といったタイプの相違による局所脳血流量の変化のしかたの違いが存在する可能性を示すものである。まだ症例数も少なく結論的なことは言えないが今後症例を増やして検討する意味はあると思われる。本年度は平成6年度にひきつづき、臨床研究として、感情障害患者を対象にstable Xe^-CTを施行した。平成6年度の症例も一部含めて大うつ病11例、双極性障害6例、計17例を正常対照10例と比較した。検討脳部位は前年度と同様、左右計14部位である。まず、14部位の合計から算出した総脳血流量を大うつ病と双極障害を合わせた感情障害群と対照群で比較したところ、感情障害群で有意な低下を確認した。左右差については感情障害群、対照群共に認められなかった。

以上の結果は年齢をマッチさせた群間比較においても同じ傾向を示した。局所脳血流に関しては、感情障害群の右前頭部、左右の前中心部、右側頭部で対照群に比して有意な低下を認めた。大うつ病では右前頭部、左右前中心部で低下し双極性障害では右側頭部でのみ低下していた。治療により改善を得た症例(6例)について治療前後の局所脳血流を比較したところ右尾状核と左被殻で治療後、有意の増加が見られたが、低下部位の増加はみられなかった。これまでの検討はすべて安静時に行ったものであるが、個体差を考慮すると安静時のみの検討では不十分である。そこで、脳血流を増加させる負荷を行って、安静時との差、すなわち変化量を求める方がより理論的と考えられた。そこで、現在、負荷条件の検討を開始しており、これが確立された段階で再度、患者を対象に変化量の検討を行う予定である。基礎研究に関してはラットを用いて放射性のイオマゼニールを用いたオートラジオグラフィー法による検討を行った。この方法により、ストレス負荷あるいは抗うつ薬の脳血流あるいは脳の神経伝達物質受容体に及ぼす影響を検討できる見通しが得られたので、次年度において実験結果を総合的に検討できることになった。平成8年度は臨床研究としては平成7年度に引き続き感情障害患者を対象にXe-CTによる脳血流量の測定を行なう一方、感情障害および不安障害患者を対象に中枢型ベンソジアゼンピン受容体のリガンドである^<123>I-Icomazenilを用いてSPECTによる受容体機能の検討を行った。対象はDSM-IVによる感情障害と不安障害あわせて11例である。被験者には安静閉眼状態で^<123>I-Icomazenilを静注し、早期像および後期像をSPECT装置にて撮像した。その結果、Iomazenilの取り込みは大半の症例で局所的あるいは広範な低下を示した。局所的低下は主に前頭葉、頭頂葉、側頭葉において明らかであった。受容体結合強度に関しては前頭葉上部、頭頂葉、側頭葉、後頭葉で有意な低下が見られた。感情障害あるいは不安障害を対象に中枢型ベンソジアゼピンの受容体機能をin vivoで測定した報告は本報告がはじめてである。局所的な受容体結合の低下は不安障害あるいは感情障害の病因・病態を明らかにする上で重要な意味をもつものと考える。基礎研究としては、上記の臨床研究を対応する形で脳内ベンゾジアゼンピン受容体が薬物あるいはストレス負荷によってどのような影響を受けるかを検討した。不安惹起物質として脳内に存在することが明らかにされていたβ-CCBをラットに投与し、脳内ベンゾジアゼンピン受容体結合の変化を検討した。その結果β-CCB投与によりベンゾジアゼンピン受容体結合が低下することが明らかとなった。また、2時間の拘束ストレスによりベンゾジアゼピン受容体結合が増加することも明らかになった。これらの所見はまだ予備的なものであるが、今後ヒトを対象としたin vivoの受容体研究を行う上で必要な基本的条件設定を決めるのに有用な所見と思われる。
ATRの新規基質の網羅的同定及び機能解析

ATRはDNA損傷応答を制御し、ゲノムの安定性を維持するキナーゼである。ATRはより広範なDNA損傷に応答し、多様な機能を示す事が明らかにされてきている。本課題ではATRのDNA構造依存的な活性化を基にATRの直接的な基質を網羅的同定し機能を明らかにする事を目的に研究を行った。成果として、DNA二本鎖切断部位における新規ATR活性化機構を見出した。またアナログ感受性ATR変異体を作成し、多くの未知基質の検出及び同定に成功した。真核生物のゲノムDNAは継続的に内的及び外的要因によって損傷の危機にさらされている。これらのDNA損傷による脅威に対抗するため、真核生物はDNA損傷応答により細胞周期、DNA複製、DNA修復、アポトーシス及び細胞老化等を制御する。ATMやATRはDDRの最上流において主要な役割を果たすキナーゼである。ATMとATRは主にSQ/TQ配列を標的としてリン酸化するなど、生化学的及び機能的に非常に良く似た性質を示すことが知られている。しかし、ATRは外的DNA損傷非存在下であっても細胞増殖に必須であることに対してATMは必須ではない。そこで本研究ではATRの抜本的な機能解析を遂行するためAnalog-Sensitive kinase (AS-kinase)法を用いた特異的リン酸化基質の網羅的解析を目的とする。これまで数種類のAS-ATR候補の作成に成功している。野生型ATP存在下におけるRad17 (Ser645)を基質として用いた評価において、WT-ATRに比べてAS-ATRは弱いキナーゼ活性を示す事が明らかとなった。またWTーATRは数種類のATPアナログを用いた際に,野生型ATP使用時にくらべて弱いながらも活性を示す事が認められた。現在ATRキナーゼドメインに更なる変異を導入、及びATPアナログのスクリーニングをあわせて行い野生型では活性を示さずAS-ATRでのみキナーゼ活性を示すAS-ATRとATPアナログの組み合わせの選定を進めている。この他に、AS-ATRを安定的に発現する様々な細胞を樹立するため、内在性のATRをコンディショナルにノックダウンするテトラサイクリン誘導性のshATR発現システム、及び、選定されたAS-ATRをテトラサイクリン誘導性に発現するシステムを掛け合わせ、テトラサイクリンによって内在性のATRとAS-ATRが入れ替わるシステムの構築も進めている。DNA損傷応答はDNA損傷を検出・認識し、シグナルへ変換することにより誘発される。ATMやATRはDNA損傷応答を最上流で制御するキナーゼでありATMはDNA二本鎖切断(DSB)に応答するのに対してATRはDNA複製ストレスを始めほぼすべてのDNA損傷によって生ずる一本鎖DNA(ssDNA)に応答する。ssDNA領域はDNA複製の進行に伴って二次的なDSBを生ずることや、DSBはその修復過程におけるDNAの削り込み(DSB resection)によりssDNAを生ずることから、ATMとATRは協調的に働くことによりゲノムの安定性を維持している事を示唆している。ATMとATRは生化学・機能的に良く似た性質を示すと考えられているが、ATRは細胞増殖に必須であることに対してATMは必須ではない。これまでに数種AS-ATR候補の作成に成功している。野生型ATP存在下におけるRad17 (Ser645)を基質として用いた評価において、WT-ATRと同様に活性を示すAS-ATR候補は少なく、その多くは活性を失う事が明らかとなった。現在ATRキナーゼドメインに更なる変異を導入、及びATPアナログのスクリーニングをあわせて行い野生型ATP使用時と同様の活性を示すAS-ATRとATPアナログの組み合わせの選定を進めている。この他に、ATR特異的な基質を調べる対象としてATR阻害剤(VE821)に対する細胞毒性試験を行い、感受性として数十倍異なる細胞株を選定した。これまでに60種類のAS-ATR候補の作成に成功している。野生型ATP存在下におけるRPA32 (Ser33)を基質として用いた評価において、WT-ATRと同様に活性を示すAS-ATR候補は少なく、その多くは活性を失う事が明らかとなった。このうち変異体AS-42はATPアナログのスクリーニングの結果、野生型ATP使用時に活性を示し、同時に6-(2-Mebu)-ATPアナログ存在下で活性を示すことが明らかとなった。

さらにAS-42を発現させた293E細胞から調整した核抽出液中において、AS-42は6-(2-Mebu)-ATP-gamma-S存在下でDNA構造依存的に活性化し、多くの基質をリン酸化する事が示された。この他に、WT-ATR及びAS-42をDox依存的に安定的に発現する293E細胞を樹立した。以上のことからATR特異的基質の網羅的解析に必要なAS-ATR(AS-42)と6-(2-Mebu)-ATP-gamma-Sの組み合わせ及びAS-ATRの活性化システムが確立された。研究代表者が昨年度研究施設を異動したため、研究環境の整備に時間を費やし、その遅れを取り戻すべく取り組んできたが、実験遂行に必須な試薬の調達(ATPアナログカスタム合成)に3カ月を要し足踏みを余儀なくされたため。ATMやATRはDNA損傷応答を最上流で制御するキナーゼであり、ATMはDNA二本鎖切断(DSB)に応答するのに対してATRはDNA複製ストレスを始めほぼすべてのDNA損傷によって生ずる一本鎖DNA(ssDNA)に応答する。ATMとATRは生化学・機能的に良く似た性質を示すと考えられているが、ATRは細胞増殖に必須であることに対してATMは必須ではない。本研究ではATR特異的リン酸化基質の網羅的な解析を行うため、ATPアナログを利用できるようにATRのキナーゼドメイン中のATP-binding pocketを改変した。60種類のATR変異体の中から6-(2-Mebu)-ATP-gamma-S存在下で活性を示すAnalog sensitive ATR (AS-ATR)を同定した。次にFlag-AS-ATRを免疫沈降法により精製し、6-(2-Mebu)-ATP-gamma-S存在下でAS-ATRを活性化させたところ、AS-ATRは多くの未知基質をチオリン酸化すること、またこれらのチオリン酸化はATR阻害剤存在下において抑制されたことから、ATR特異性の極めて高い基質が検出可能となった。次にがん遺伝子誘発性の内因性DNA複製ストレス応答を解析するため、変異型K-Rasを正常肺上皮細胞に導入する肺腺がんモデルを構築した。正常上皮細胞に比べて変異型K-Ras発現細胞はATR阻害剤に対して強い感受性が認められ、ATR依存性が高いことが示された。また変異型K-Ras発現細胞から調整した核抽出液中のリン酸化プロテオーム解析からDNA複製ストレス応答性のリン酸化基質を含む約400種類のリン酸化サイトを同定した。以上より、ATRは内因性DNA複製ストレスに応答し、外的要因DNA損傷応答時とは異なる基質群をリン酸化することにより染色体を安定に維持しがん細胞の生存を維持すると考えられた。ATRはDNA損傷応答を制御し、ゲノムの安定性を維持するキナーゼである。ATRはより広範なDNA損傷に応答し、多様な機能を示す事が明らかにされてきている。本課題ではATRのDNA構造依存的な活性化を基にATRの直接的な基質を網羅的同定し機能を明らかにする事を目的に研究を行った。
枯草菌sigma-H蛋白質をモデルとした機能複合体形成

細菌は2種(PrfA、PrfB)の、終止コドン認識の異なる[それぞれ(UAA、UAG)、(UAA、UGA)]ペプチド鎖解離因子を持つ。申請者が既に新規に取得しているprfB変異株では37°Cで胞子形成率が低下し、同時に胞子形成開始に必須なsigma-H蛋白質の半減期が野生株に比べ短くなっていた。prfB変異株のin vivoにおける翻訳のリードスルー率、フレームシフト率をそれぞれlacZ活性及びフレームシフトにより完全長の生成されるPefBタンパク質を指標にし観察したところ、ともに温度に依存して上昇していた。またこれはリードスルーの率をさげるリボゾーム蛋白質の変異により抑圧され、同時に胞子形成も回復した。従ってこれらのことより、prfB変異株では温度上昇にともないリードスルー率が上昇することで、sigma-Hが不安定化し胞子形成開始が阻害されていることが考えられた。温度のシフトアップ・ダウンがprfB変異株の胞子形成に与える影響を調べたところ、胞子形成のごく初期が温度感受性であることがわかった。この時期はまさにsigma-Hの安定・活性化の時期と呼応している。また、prfB変異の胞子形成復帰サプレッサー変異は、RNAポリメラーゼのβサブユニトをコードするrpoB遺伝子に起こった。このことは、sigma-Hの翻訳終結と、RNAポリメラーゼのホロ酵素形成がなんらかの形で共役している事を示唆する。同様に胞子形成の温度感受性を示すと報告のあったprfB1変異(Karow et al. J. Bacteriol. (1998)180:4166-4170.)を同様に解析している。この変異部位はC末端にあるが申請者の変異はそれよりN末端よりのコドン認識に関わるとされる領域にある。このときsigma-H蛋白質は活性化の中間段階である巨大複合体の状態のみ検出された。prfB変異株のin vivoにおける翻訳のリードスルー率を測定したところ、30°Cよりも37°Cでその率が上昇していた。PrfBは翻訳時にフレームシフトが起こる事に困り、完全長の産物が生成される。このフレームシフトはPrfBのコドン認識機能が関与する自己制御と考えられている。PrfBにFLAGエピトープタグを付加し、細胞内のPrfBの量をウエスタン法で解析したところ、PrfB変異株では37°CにおいてPrfBが高生産されており、リードスルーと共にフレームシフトも起こっていることが分かった。この時同様にエピトープタグを付加したPrfAの量に顕著な差はみられなかった。従ってこれらのことより、prfB変異株ではリードスルー率が上昇することで、sigma-Hが不安定化し胞子形成開始が阻害されているとが考えられた。現在、細菌細胞内で蛋白質の分解、安定に関与するClp蛋白質や翻訳後調節蛋白質等、種々の蛋白質にエピトープタグを付加し、sigma-H蛋白質複合体への関与を解析している。
歯周組織細胞におけるテロメア長と歯周病原性細菌由来リポ多糖に対する応答性の変化

近年,歯周炎の発症と進行に加齢が影響している可能性が示されている。本研究では11名の若年者,12名の高年者から採取した歯肉より分離・培養した歯肉線維芽細胞(HGF)を用いて,加齢による細胞応答性の変化をインターロイキン6(IL-6)産生およびプロスタグランジンE_2 (PGE_2)産生を指標として検討した。まず,被験者の歯肉から分離したHGFを7代継代培養した。7代継代細胞をリポ多糖(LPS)あるいはインターロイキン1β(IL-1β)で刺激して細胞増殖の変化およびIL-6産生量の変化を測定した。LPSあるいはIL-1βで刺激しても若年者および高年者とも細胞増殖の速度に大きな変化は認められなかった。また,若年者の方が,細胞数がプラトーに達するまでの時間は短かった。高年者については,LPS刺激群,IL-1β刺激群いずれの細胞においても,IL-6産生量は増加したが,IL-1β刺激群の細胞では有意に高い産生量を示した。この結果を踏まえて,刺激剤として細胞応答性の良いIL-1βのみを選択し継代培養によるIL-6およびPGE_2,産生量の変化を検討した。若年者の細胞では継代培養によりPGE_2,IL-6産生量が減少し,PGE_2,産生阻害剤であるインドメタシン添加によりPGE_2,IL-6産生は阻害された。この結果から,若年者の細胞においては細胞自身が産生するPGE_2によりIL-6産生がup-regulateされている可能性が示唆された。一方,高年者の細胞ではIL-6産生に関するPGE_2の関与は,明瞭ではなかった。これは,高年者群の7代継代細胞では,インドメタシン添加によってPGE_2産生が阻害されたにも関わらずIL-6産生が阻害されない細胞が一部に認められたことによると考えられる。本研究では,IL-1β刺激後のHGFからのPGE_2産生は継代培養により減少し高年者では若年者に比べて低い産生量を示したことから,加齢によりPGE_2産生は低下することが示唆された。しかし,IL-1β刺激後のHGFからのIL-6産生に関しては,細胞毎で調節機構が異なるため,加齢により一定の変化が認められない可能性も考えられた。また,歯周炎と加齢の関係をさらに詳細に解析するために,今後は研究に使用する歯肉線維芽細胞の数をさらに増やす必要性も考えられた。〈平成10年度〉北海道医療大学附属病院を受診した高齢者および若年者の患者からインフォームドコンセントを得た後,高齢者12献体および若年者11献体の歯肉を採取し,PBSで洗浄後outgrowth法によりヒト歯肉線維芽細胞を分離培養した。ヒト歯肉線維芽細胞を10%牛胎児血清およびストレプトマイシン,ペニシリンを含有したα-MEM培地を用い,5%CO_237°Cで培養した。高齢者および若年者の細胞を継代し続け,継代毎の生細胞数をalamar blue^<TM>Assayを使い測定することにより分裂可能限界を検討した。結果1)細胞中のDNA量は若年者の細胞のでは,P.gingivalisのLPS刺激によって有意に増加していましたが,高齢者の細胞では有意に減少していました。

本研究では,IL-1β刺激後のHGFからのPGE_2産生は継代培養により減少し高年者では若年者に比べて低い産生量を示したことから,加齢によりPGE_2産生は低下することが示唆された。しかし,IL-1β刺激後のHGFからのIL-6産生に関しては,細胞毎で調節機構が異なるため,加齢により一定の変化が認められない可能性も考えられた。また,歯周炎と加齢の関係をさらに詳細に解析するために,今後は研究に使用する歯肉線維芽細胞の数をさらに増やす必要性も考えられた。
美学と弁論術の交叉ーーコモン・センスを中心に

美学は、弁論術の影響のもとで創建されたが、美学の影響のもとで今度は弁論術が衰退していった。この大きな流れを、コモン・センセという考えかたを中心にして、エクフラシスやイマジネーションといった弁論術のここの術語にも焦点をあてて解明した。美学成立前夜は、弁論術を論理学から切り離す動きがある一方で、弁論術を論理学や哲学の中に取り込もうとする動きもあった。バウムガルテンはコモン・センスを常識という意味で用いてた。マラルメとポーは、言葉と意味の正しい遣い方という伝統的な弁論術のあり方を疑い、意味から切り離された言葉の世界を追求した。こうした言葉だけの世界を求める傾向は現代演劇にも認められる。本研究課題は、古代ギリシア・ローマにおいて成立した弁論術が西洋近代に受け継がれて変容していく過程を、西洋古典学および美学・芸術学の2つの観点から、思想史ないし理論的に究明するものである。美学と弁論術との関係を、弁論術から美学への変容と捉えるか、弁論術が衰退していくにつれて美学が成立したと捉えるのか。こうした思想史的ないし理論的な過程の全体像を把握するために初年度は、弁論術と美学との関係をあらためて問い直し、問題点を整理した。研究代表者の渡辺浩司は、バウムガルテン『美学』の読解を通して、バウムガルテンの世界観や哲学と古代ギリシア・ローマ弁論術を支える理論との違いを追究した。また研究分担者の石黒義昭と研究協力者の井奥陽子との協力を得て、G. F.マイアー『あらゆる美しい学問の基礎』の翻訳を継続した。研究分担者の田之頭一知は、音楽学の観点から言葉とイメージの関係を追究した。研究分担者の伊達立晶は、18世紀イギリスの詩人であり思想家でもあるコウルリッジにおけるイマジネーション論に焦点をあて、イマジネーションから創造的イマジネーションへの変容を明らかにした。研究分担者の石黒義昭は、夏目漱石の『それから』と森田芳光監督の映画作品〈それから〉とを比較検討し、修辞(レトリック)と映像イメージの関係を具体的に解析した。以上のような各研究者の個別研究とは別に、各研究者の知見を共有すために研究会を2回開いた。1回目の研究会では、研究代表者の渡辺浩司による「美学と弁論術の交叉」と研究協力者の井奥陽子による「言語の力ーヴォルフ学派の論理学と美学」の2つの研究発表があり、バウムガルテンの美学とヴォルフ哲学との関係を議論した。2回目の研究会は、東京藝術大学教授の松尾大先生によるバウムガルテンにおけるコモン・センスについての発表で、バウムガルテン美学におけるコモン・センスの意味について討議した。研究代表者および研究分担者、研究協力者による個別の研究については、全体として見れば各人が論文や共著で実績を公開しるが、具体的には論文が2点、共著が1点、書評等が2点と点数としては少ないかもしれない。とくに音楽表現における弁論術と美学の関係や18世紀イギリスとドイツにおける修辞学の影響等一部に遅れが見られる。とはいえ、東京藝術大学教授の松尾大先生による研究発表とその後の共同討議により、「コモン・センス」という一様には把握できない思想史上の考え方が整理され、「コモン・センス」とバウムガルテン美学との関係が明確になった。18世紀前半に「コモン・センス」をめぐる論争があり、バウムガルテンはその論争に巻き込まれることを嫌っていた観があるとの松尾大先生の指摘は、この科研の研究課題にとっては、重要な問題提起であり、かつ重要な研究指針となった。さらに、研究代表者の渡辺浩司と研究分担者の石黒義昭と研究協力者の井奥陽子はG. F.マイアー『あらゆる美しい学問の基礎綱要』を翻訳している最中で、その成果はまだ公表できる状態ではないが、本研究課題の3年間で公表できる目処がたちつつある。以上のように本研究課題は、やや遅れているものの、当初の研究計画に従って研究を遂行しており、2年目の来年度は、音楽表現における弁論術(レトリック)と美学との関係、イギリス哲学やフランス哲学(デカルトからライプニッツ・ヴォルフ学派へといたる哲学史上の流れ)の中でバウムガルテン美学をどう位置づけるか等、あまり研究が進んでいるとはいいがたい領域もでも実質的な成果があがると思われる。本研究課題は、古代ギリシア・ローマにおいて成立した弁論術が西洋近代に受け継がれ変容している過程を、西洋古典学および美学・芸術学という二つの観点から、思想史的ないし理論的に究明するものである。美学と弁論術の関係を、弁論術から美学への変容と捉えるにしろ、弁論術が衰退し美学がそれにとって代わったと捉えるにしろ、こうした思想史的ないし理論的な過程を概観するために、2年目となる平成28年度は、演劇と音楽と哲学に焦点を絞り2回研究会を開催した。10月22日に、研究協力者の井上由里子と研究分担者の田之頭一知が演劇および音楽と弁論術の関係について発表し、討議した。3月18日には杉山卓史先生(京都大学)をお招きし、近代哲学と現代哲学における共通感覚について講話をお願いし、哲学における共通感覚の意義について議論した。以上のように各研究者の知見を共有するとともに、各研究者の個別研究としては、研究代表者の渡辺浩司は、バウムガルテン『美学』の読解を継続、エクフラシスという修辞技法を研究した。また研究協力者の井奥陽子の協力を得てマイアーの美学の翻訳を継続した。研究分担者の田之頭一知は、音楽と弁論術の関係について研究を続け上記の発表をおこなうとともに、国際学会でも発表をした。