hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
免疫不全状態におけるウイルス感染症の再活性化の病態解明と予防・治療

近年、臓器・造血幹細胞移植の適応の拡大、技術の進歩などに伴い、免疫不全患者が増加しつつある。サイトメガロウイルス(CMV)、Epstein-Barr virus (EBV)、単純ヘルペスウイルスなどのヘルペス属ウイルスはほとんどすべての人に潜伏感染しており、免疫機能の低下に伴い再活性化してくる。我々は、免疫不全患者におけるヘルペス属ウイルス感染症の発症・重症化のメカニズムを解析し、これら感染症の発症予測、早期診断、治療に役立てるため以下のことを行った。1.ヒトヘルペス属ウイルス8種類に対するvirus load定量システムを確立し、臓器・造血幹細胞移植患者、新生児・未熟児など免疫抑制状態にある患者に応用し、ヘルペスウイルス感染症の迅速診断を行うとともに、これら感染症のモニタリングを行った(論文発表)。2.ウイルス特異的細胞性免疫を迅速に定量するために、テトラマーおよび発現・精製した可溶性ウイルス抗原を用い、CMV, EBV抗原特異的T細胞を迅速・簡便に測定する方法を確立した(論文発表)。3.造血幹細胞移植の重症合併症であるEBV関連リンパ増殖性疾患の診断に、real-timePCR法によるウイルス定量システムが有用であること、治療法の選択にウイルス特異的細胞性免疫の定量測定が役立つことも明らかにした。またEBV関連リンパ増殖性疾患の発症因子としてanti-thymocyte globulinの使用が重要であることを示した(論文発表)。4.新生児の単純ヘルペスウイルス感染症ではウイルスの型が中枢神経系後遺症および再発に関連していることを示した(論文発表)。5.未熟児へのCMV感染経路として母乳感染は重要であるが、症候性の感染症は少ないことを示した(論文発表)。平成13年度の研究成果は以下の通りである。3)上記の方法を用い、造血幹細胞移植患者でvirus loadおよびウイルス特異的細胞性免疫を測定し、ウイルス感染症の迅速診断を行うとともに、これら感染症が重症化するメカニズムを解析した(論文準備中)。4)造血幹細胞移植時の重症合併症であるEBV関連リンパ増殖性疾患の診断に、real-timePCR法によるウイルス定量システムが有用であること、治療法の選択にウイルス特異的細胞性免疫の定量測定が役立つことも明らかにした。免疫不全患者におけるヘルペス属ウイルス感染症の再活性化・重症化のメカニズムを解析し、これら感染症の発症予測、早期診断、治療に役立てるため以下のことを行った。1)造血幹細胞移植の重症合併症である(Epstein-Barr virus)EBV関連リンパ増殖性疾患の診断に、real-timePCR法によるウイルス定量システムが有用であること、治療法の選択にウイルス特異的細胞性免疫の定量測定が役立つことも明らかにした。2)Herpes simplex virus(HSV)による重症感染症である新生児ヘルペスにおいて、我々が開発したウイルス遺伝子定量システムが予後判定に有用であることを示した。さらに同疾患にてHSV-2に感染した場合、HSV-1に比べ、中枢神経系内でより多くウイルスが増殖していること、中枢神経予後が悪いことを明らかにした(論文発表)。3)極小未熟児の母親では、出産後4週をピークに母乳中にcytomegalovirus(CMV)が検出されること、母乳を介して10%程度の児に感染が成立していることを示した。一方で、CMVが感染した患児は無症状であり、未熟児へのCMV感染経路として母乳感染は重要であるが、症候性の感染症は少ないことを示した(論文発表)。
抗原ペプチドプロセシングにおける小胞体アミノペプチダーゼの作用メカニズムの解明

脂肪細胞由来ロイシンアミノペプチダーゼ(A-LAP)の小胞体内腔における貯留メカニズムを明らかにするために、それを制御しうる結合タンパク質の探索を行なった。本目的のため、A-LAPのC末端にFLAGタグを付加したA-LAP-FLAGタンパク質を恒常的に発現するHeLaS3細胞を作製した。作製した細胞の抽出液から、抗FLAG抗体を用いてA-LAP-FLAGを免疫沈降し、銀染色によって溶出画分に存在するタンパク質を可視化した。その結果、A-LAP-FLAG以外にも7種の分子が共沈していることがわかった。これら共沈分子の具体的な同定およびそのA-LAPの小胞体貯留への関与の検討は今後の課題として残った。前年度に引き続き、A-LAPの立体構造解明に向けたX線結晶構造解析に取り組んだ。これまでに解析可能な本酵素の結晶は得られていない。そこで、本酵素発現後の精製法および結晶化条件の再検討を行なった。その結果、バキュロウイルスを感染させたSf9細胞の培養液(3L)から、ハイドロキシアパタイトカラムクロマトグラフィー、キレートアフィニティーカラムクロマトグラフィー、疎水性カラムクロマトグラフィー、ゲルろ過カラムクロマトグラフィーの順で精製を行なうことで、非常に高純度のA-LAPが十分量(10mg)得られることを見出した。現在、この高純度酵素標品を用い、結晶化条件の検討を進めている。また、結合糖を低下させたA-LAPや小胞体アミノペプチダーゼに特異な領域を欠失させたもの、前年度までの解析にて同定した結合タンパク質であるSDF2L1とA-LAPの複合体を用いて、結晶化を試みている。小胞体アミノペプチダーゼA-LAPの小胞体内貯留に必須な分子内領域の同定に成功した。そこで酵母Two-Hybrid法を用いて、本領域に結合しうるタンパク質の単離を試みた。その結果、新規タンパク質AERAの単離に成功した。AERAは221アミノ酸からなる小胞体可溶性タンパク質であり、そのC末端にはHDELという4アミノ酸からなるモチーフ配列が存在し、本モチーフは小胞体貯留シグナルとして機能することが明らかとなった。HDEL配列を欠失したAERAを過剰発現させた細胞においては、A-LAPの細胞外への分泌が観察されたことから、AERAはA-LAPの小胞体貯留に重要な役割を果たしていることが示唆された。またAERA以外にもA-LAP結合タンパク質がいくつか存在していることが示唆されたため、免疫沈降法による結合タンパク質の同定を目指し、FLAGタグを付加したA-LAPを恒常的に発現する細胞株の作製を試み、発現株を得た。小胞体アミノペプチダーゼL-RAPの遺伝子発現調節機構について、ルシフェラーゼアッセイ系を用いた解析を行った。その結果、L-RAPの遺伝子の転写には、プロモーター領域-33-17が重要であることが明らかとなった。本領域には転写因子IRF結合配列が存在することから、定常状態ではL-RAP遺伝子発現にはIRF、特にIRF-1が関与していることが明らかとなった。一方、IFN-γによるL-RAP発現の亢進時には、IRF-2の機能が重要であることが明らかとなった。また、Tリンパ球などでは、Ets familyに属する転写因子PU.1がIRFと相乗的に機能してL-RAP遺伝子の転写を亢進することも明らかとなった。
酸化物系ナノ・マイクロチューブの創製とその機能に関する研究

酸化物系ナノ・マイクロチューブを合成する基礎検討を、昨年に引き続きキャピラリーチューブリアクターを用いた無機塩の熱分解で行った。昨年度に硝酸鉄をホルムアミド溶媒に溶解して調製した酸化鉄が目的のチューブ状になっているかどうかについて、透過型電子顕微鏡で形態観察を行ったが、チューブを示すトンネルは見えなかった。なお、硝酸鉄を電気炉を用いて熱処理した場合には、キャピラリーチューブでの熱分解に比べ150°C以上の高温でないと同じ結晶構造の酸化鉄が得られないことが明らかとなり、やはりマイクロチューブリアクターの特徴があることを確認できた。同じ方法論を用い、光学材料として興味ある性質を有する酸化亜鉛の調製を検討した。硝酸塩あるいはアセチルアセトナートを原料とし、それらの純物質の熱分解温度より低温の200°Cでの調製を検討した。亜鉛塩の場合、溶媒の選択により、生成物の結晶構造が異なること、また、酸化亜鉛となっていればないはずの重量減少が熱重量分析で認められた。更に赤外分光測定の結果、溶媒に由来する吸収が見られたことから、亜鉛塩がキャピラリーチューブ中で分解していく過程で溶媒和が起こり、これにより亜鉛塩の熱安定性が増し、結果的に十分な熱分解が起こらなかったと考えられた。これらの結果を総括すると、マイクロチューブリアクターを用いた塩の熱分解で、現状では目的とした酸化物系のナノ・マイクロチューブは得られていない。目的物を得るためには、チューブを開けるための添加物等の検討が必要と考えられる。マイクロチューブリアクターを用いることで、得られる酸化物の二次粒子の形態を制御できるという新しい知見が得られたので、更に基礎研究を続ける価値があると示唆された。酸化物系ナノ・マイクロチューブを合成する基礎検討として、キャピラリーチューブリアクターを用いて無機塩の熱分解を検討した。無機塩としては硝酸鉄(III)水和物を、溶媒としてはホルムアミドを選択した。溶媒の選択にあたっては、無機塩を溶解するための高い極性と無機塩の分解温度以上の沸点を持つことが必要条件であった。内径、材質や表面処理方法の違う4種類のキャピラリーチューブを用いて硝酸鉄(III)水和物の熱分解を行うと、硝酸鉄の分解速度と得られた酸化鉄の一次粒子径には大きな違いが認められた。即ち、有機系の材料であるポリイミドチューブ、また、内面を疎水化したガラスチューブを用いた場合には、一次粒子径は原料分解率に対し直線的に大きくなった。一方、ガラスチューブ(未処理)の場合には、一次粒子径に頭打ちの傾向が認められ、原料分解率によらず一定の一次粒子径の酸化鉄が得られる領域があると言う興味ある知見が得られた。比較として内容積50mlのオートクレーブも用いたが、原料分解率が低い場合には(40%以下)、一次粒子径がキャピラリーチューブの場合の半分以下となった。なお、結晶構造はいずれのリアクターの場合も同じ酸化鉄であった。これらの挙動には、2つの因子が関係していると考えられた。即ち、(1)反応器内表面積と溶液体積の比、(2)反応器表面物性である。キャピラリーチューブの方が反応速度が大きくなったのは、(1)の表面と原料塩との接触が良くなったためと推定できる。また、粒子径の頭打ち挙動については、(2)のキャピラリーチューブ内表面の親水性、疎水性が関係していると考えられるが詳細は今後の検討課題である。今回得られた酸化鉄がチューブ状になっているかどうかの確認を急ぐが、チューブ状でない場合にはチューブ状にするための方策を今後検討する。
霊長類の音声行動の変異性とその発達

昨年度までの結果から,野性チンパンジーの長距離音声であるパントフ-トには個体内,個体間,地域間の各レベルに変異性や可塑性がみられ,チンパンジーがこの音声を手掛かりに情報伝達を行なっていることが示唆された。今年度は,プレイバック実験を通じて,(1)音響特性の差異に応じた反応の変化みられるか,(2)反応する個体の側に個体差がみられるか,(3)通常時の行動とは違う反応パターンがみられるか,の各点について調査した。実験は京都大学霊長類研究所の放飼場で行い,タンザニアのマハレ国立公園と日本モンキーセンターで録音されたオスのパントフ-ト音を再生し,それに対する7個体の反応を記録した。その結果,(1)Climax部の基本周波数のピーク値が高くなるほど,またBuildup部のテンポが速くなるほど,パントフ-ト発声反応回数が増加した。これより,被験体が壮年期の20代にピークをもつ音響パラメータに対して鋭敏に反応することが示唆され,チンパンジーはパントフ-トの声性情報のうちオスの地位と順位に関する情報に対してセンシテイブであると考えられた。(2)飼育集団中でもっとも社会的影響力の強い,年長メスと2頭の雄が刺激音に対して強い反応を示した。この結果から,パントフ-トという誇示的な音声に対して,集団内の優位個体が誇示の応答をすると考えられた。(3)刺激音に対して被験体は平常時よりもより速いテンポのパントフ-トで応じた。これからも,被験体が誇示的な刺激に対してより誇示的に応じていることが示された。以上より,パントフ-トは基本的には地位を誇示する機能があると強く推察された。今後は,刺激音の音響パラメータを操作したプレイバック実験を行なう予定である。
神経親和性ヒトレトロウイルスによる神経障害機構の分子遺伝学的及び細胞生物学的解析

(2)上記PCR法のうち、pX領域を標的としたPCR産物をサブクローニングし、約1.6kbの領域の塩基配列の決定を行った。pXの上流域(0.9kb)を29クローンで、pXの下流域(0.9kb)を60クローンで塩基配列を決定した。計45ヶ所に塩基配列の変異を認めた。pX領域のtax蛋白とrex蛋白のcoding領域の大部分を含む60クローンのうち14クローンでdefectiveな変異を認めた。今回の検索により、HAM患者およびHTLV-I seropositiveなMS患者の剖検脳脊髄にHTLV-Iゲノムが存在することが確実となった。またヒト中枢神経組織に存在するHTLV-Iゲノムの塩基配列を初めて決定し得た。その結果、これらの患者の脳脊髄には調節蛋白をコードする最も重要なpX領域に多くの変異がみられることが初めて示された。これらの結果はヒトレトロウイルスであるHTLV-Iによる神経障害機構として、HTLV-Iの中枢神経組織への感染と異常な調節蛋白の産生による直接的な神経障害が重要であることを示唆している。(2)HAM患者末梢血単核細胞および剖検脳脊髄に少量のHTLVーIIproviral DNAが存在することを、polymerase chain reaction法を用いて明らかにした。HTLVーIIのコピ-数は末梢血ではHTLVーIのコピ-数の約1/1000程度に過ぎないが、HTLVーIIはHAM発症のcofactorとして重要な可能性を指摘した。(3)MS患者の一部で末梢血単核細胞にHTLVーIIproviral DNAが存在することを、polymerase chain reaction法を用いて証明した。MSの発症因子の一つとしてHTLVーIIが考えられることを指摘した。(4)現在MS患者末梢血由来の長期培養リンパ球からHTLVーIIゲノムのクロ-ニングを行っている。
心筋MRI遅延造影画像から再現した病理画像を用いた心筋症診断法の開発

本研究は、近年研究が盛んなディープラーニングの技術のうち、入力画像からスタイル変換させ、画像クロ病理画像を用いて学習を行い、心臓MR遅延造影画像から病理類似画像を作成する方法を構築する。
ヒトの歯のアルカリホスファターゼの遺伝子の発現調節

ヒトのアルカリホスファターゼ(ALP)は、遺伝子的に少なくとも4つのタイプ、すなわち臓器非特異型(骨、肝、腎)、小腸型、胎盤型、胎盤様型に分類され、近年、それらの遺伝子構造の解明が進んでいる。ヒトの歯の、特に歯髄のALPについては、酵素化学的性質から、骨のALPと同様に臓器非特異型に分類され、免疫学的にも臓器非特異型に対するモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体とも反応し、遺伝子レベルの研究でも、ヒト臓器非特異型のALP遺伝子とハイブリダイズすることを報告した。ヒトの臓器非特異型の遺伝子は、single geneとして存在するが(Weiss et al.,1988)、ヒトの肝ではその遺伝子から、骨とは別のmRNAが作られ、プロモーター領域の比較が注目されている。そこで、歯のALPでも、骨のALPと同じ遺伝子発現の調節機構が働いているのか、それとも別の歯組織特有の発現調節機構が存在するのかを明らかにするため、ヒトの骨または肝のALP遺伝子にそれぞれ特異的な第一エクソンの合成オリゴヌクレオチドプローブを作製し、ヒトの歯根膜細胞及び歯髄細胞のRNAについてノーザンブロット分析を行った結果、歯根膜細胞のRNAでは骨のALP遺伝子のプローブと明らかな反応が認められたが、歯髄細胞のRNAでは、明らかな反応が認められず、骨や肝とは別のRNAの存在が示唆された。そこで、さらに培養ヒト歯根膜細胞及び歯髄細胞より、RNAをAGPC法により調製し、オリゴ(dT)セルロースカラムを用いて、ポリ(A)、^+RNA(mRNA)を精製した。今後、このmRNAから、ヒト歯根膜細胞及び歯髄細胞のcDNAライブラリーを得て、5'上流域の遺伝子クローンを比較、検索し、歯のALPのプロモーター領域について詳細な研究を進めていくことを計画している。
トラウマを抱えた子ども・若者の養育者を対象とした包括的移行支援プログラムの開発

今年度は、米国人講師によるフォローアップ研修を那覇、上五島、長崎、青森、東京で実施した。参加者は34名であった。那覇市では里親会のメンバーのほかに児童相談所の職員が子どもの支援のためになると4名が研修に参加された。研修時とほぼ変わらないメンバーが参加してくれた。研修者らが研修提供者となって研修日程は2日間から1日半となり(通訳がないことによる)横浜で児童精神科看護師対象に実施、石垣島では緊急的に必要な研修であると要請があり実施した。岐阜市では里親対象に児童相談所が企画をして研修を実施した。参加者は14名であった。6月に日本精神保健看護学会において、これまで研究者らが移行支援を10年以上継続して行っている若者たち4名とともにトラウマを抱えた子どもの移行支援シンポジウムを企画して採択され実施した。このシンポジウムでは、若者たちの生きてきた体験と移行期の困難さ、どのような支援が必要かを個々の発表後、本研究で開発中の研修プログラムの目的及び内容を説明して参加者と意見交換を行った。参加者と若者たちは、必要であり支援者が知っておくべき内容であると評価は高かった。当初の予定にはなかった児童精神科看護師を対象に研修を実施できた。また、よりニーズの高かった石垣島で研修を実施できた。予算の関係で宮古島の研修は企画を中止。また、これまで10年以上移行支援を継続してきた若者たち4名に研修内容を説明して、当事者による意見を聞くことができた。この4名とともに研修内容の説明と当事者の移行過程の困難さと支援の必要性にについてシンポジウムをもつことができた。当初の予定どおりにフォローアップ研修を石垣島・横浜・岐阜で実施予定である。また東京の精神科病院より児童精神科看護師対象に研修依頼があるため日程調整中。台湾の国立成功大学(台南市)の児童虐待研究者(看護)と国際研究の予定で、そのプロジェクトの一環として6月に国立成功大学において研修内容を講義する。(費用は相手負担)災害時の子どものトラウマについて米国で開催される国際トラウマ学会に参加して情報収集を行う。最終的な研修内容を検討して日本版トラウマを抱えた子どもの養育者を対象とした研修プログラムを完成させる。研究計画フェーズ1の計画に沿って「複雑性トラウマを抱えた子どもの理解とかかわり方」の2日間の研修を、9月19日より那覇・青森・長崎・新上五島・東京の5か所で各2日間、講師にJean Carpenter-Williams. MS, CYC-P(University of Oklahoma Outreach)を迎えて実施した。参加者は、那覇は里親、里親支援員等17名、青森は里親のみ5名、長崎は集団ケア施設スタッフ6名、上五島は養護施設職員10名、東京は里親5名看護師1名の参加者であった。研修の内容は、乳幼児期のトラウマ体験が脳に与える影響と問題行動を起こしているとき、穏やかな時の脳の活性化の5つの段階と現象的にはどのように認識されるのか、トラウマの影響による子どもの問題行動と支援者が陥る傾向に気づくための演習、及びこのような子どもたちへの社会心理的なアプローチと養育的アプローチについて具体的な説明と演習であった。多くの場合、実際にケアしている子どもにはどうアプローチするのが良いのかという質問があった。首都圏では類似する研修も受講可能であり、類似する研修を受けていることで今回の研修内容も理解しやすいという意見があった。一方で地方都市では地域特性はなく必要と感じている研修が全くないという意見が等しくあった。参加者の子どもに対する認識や研修内容への親和性には地方特性なのか個人特性なのか、その両者が影響していると推測される違いがあった。また、児童相談所との関係がうまくいっている(平等な関係で)地域では、里親間の交流も多く里親支援員との信頼関係も深まっていると話す参加者が多かった。参加者から研修内容については好評であったが一部里親としては、専門的すぎるので難しいという意見も数名からあった。その都度研修内容を微調整しつつ、日本の現状に合ったコンテンツになるように毎回検討を重ねることができた。計画書の予定通りに準備が進み、参加者の確保、会場の確保、予定した米国からの講師による地域特性の違う5か所の会場で、6名程度の参加者で研修会を開催することができた。その都度研修内容を微調整しつつ、日本の現状に合ったコンテンツを精選することができた。SKYPEでのフォローアップは、現実的には難しく、多忙なこと、家庭でのできごとによっては時間を調整して相談に至らないないようであった。研修前後の尺度によって、ある程度の効果と満足度が得られていることが明らかになった。

6月に日本精神保健看護学会において、これまで研究者らが移行支援を10年以上継続して行っている若者たち4名とともにトラウマを抱えた子どもの移行支援シンポジウムを企画して採択され実施した。このシンポジウムでは、若者たちの生きてきた体験と移行期の困難さ、どのような支援が必要かを個々の発表後、本研究で開発中の研修プログラムの目的及び内容を説明して参加者と意見交換を行った。参加者と若者たちは、必要であり支援者が知っておくべき内容であると評価は高かった。当初の予定にはなかった児童精神科看護師を対象に研修を実施できた。また、よりニーズの高かった石垣島で研修を実施できた。予算の関係で宮古島の研修は企画を中止。また、これまで10年以上移行支援を継続してきた若者たち4名に研修内容を説明して、当事者による意見を聞くことができた。この4名とともに研修内容の説明と当事者の移行過程の困難さと支援の必要性にについてシンポジウムをもつことができた。15月にフォローアップ研修を同じ対象に実施する。フォローアップ研修は、昨年度の研修内容を踏まえて、子どもとかかわったことで生じた疑問や、質問、子どもとの関わり方の具体的なフォローを行う。それによってより研修内容が実用性のあるものとして参加者が使える知識やスキルとなることを目的とする。2半年間のプログラム終了後に尺度と自由記載による評価を行う。3希望があった、児童精神科病棟で働く看護師を対象に研修を研究者2名で2日間実施(横浜)4リクエストがあった、岐阜県児童家庭センターから依頼された里親と養護施設職員を対象として、宮古島および石垣島の離島の里親対象の研修を研究者2名で実施する。5今回の取り組みを、日本版トラウマを抱える子どもの理解とかかわり研修のプログラム開発について30年7月にプラハで開催される世界児童青年精神医学とその関連領域学会で発表を行う。当初の予定どおりにフォローアップ研修を石垣島・横浜・岐阜で実施予定である。また東京の精神科病院より児童精神科看護師対象に研修依頼があるため日程調整中。台湾の国立成功大学(台南市)の児童虐待研究者(看護)と国際研究の予定で、そのプロジェクトの一環として6月に国立成功大学において研修内容を講義する。(費用は相手負担)災害時の子どものトラウマについて米国で開催される国際トラウマ学会に参加して情報収集を行う。最終的な研修内容を検討して日本版トラウマを抱えた子どもの養育者を対象とした研修プログラムを完成させる。
リスク知覚遅れの診断・教育装置の実用化に関する研究

アイカメラを用いた先行研究によれば,事故反復者はハザードの発見が遅いことが明らかとなっている.しかし,より多くのドライバーの診断を行うためには,より低コストの方法の開発が必要である.本研究ではアイカメラを用いずに同様の結果を導きだすことを試みた.汎用コンピュータとタッチパネルディスプレイ,専用ソフトウエアを用いてハザード発見遅れ診断装置を開発した.30枚の交通環境の写真を乗用車運転席付近から撮影し,刺激画像とした.25名のタクシードライバーに,タッチパネルディスプレイ上に表示される刺激の中のハザードをタッチするよう求めた.その結果,事故反復者は最初のタッチが遅いこと,刺激提示から2秒までにタッチした潜在ハザードが少ないこと,いくつかのハザードに対するタッチが遅いことが明らかとなり,先行研究を支持する結果となった.アイカメラを用いた先行研究によれば,事故反復者はハザードの発見が遅いことが明らかとなっている.しかし,より多くのドライバーの診断を行うためには,より低コストの方法の開発が必要である.本研究ではアイカメラを用いずに同様の結果を導きだすことを試みた.汎用コンピュータとタッチパネルディスプレイ,専用ソフトウエアを用いてハザード発見遅れ診断装置を開発した.30枚の交通環境の写真を乗用車運転席付近から撮影し,刺激画像とした.25名のタクシードライバーに,タッチパネルディスプレイ上に表示される刺激の中のハザードをタッチするよう求めた.その結果,事故反復者は最初のタッチが遅いこと,刺激提示から2秒までにタッチした潜在ハザードが少ないこと,いくつかのハザードに対するタッチが遅いことが明らかとなり,先行研究を支持する結果となった.アイカメラを用いた先行研究によれば,事故反復者はハザードの発見が遅いことが明らかとなっている.従って,事故反復者のハザード発見遅れを診断し改善する必要があるが,アイカメラは高額かつ,使用や分析に専門知識を要するので,多くのドライバーに診断・教育を行うためには,より簡便な方法を用いる必要がある.そこで本研究ではハザード発見のタイミングをマウスクリックによって取得するソフトウエアを開発し,アイカメラで測定したハザード発見のタイミングと,マウスクリックにどの程度の整合性があるのかを検証した.自動車の運転席から撮影した40場面の刺激映像をPCモニタに映し10名の実験参加者に7秒間ずつ見せた.実験参加者には刺激映像中の危険だと思う対象をなるべく早くクリックするように求めた.開発したソフトウエアはクリックの座標とその座標にあったハザード,刺激提示開始からクリックまでの所要時間を記録した.実験参加者の注視行動はアイカメラを用いて記録した.記録されたアイカメラの出力映像をフレーム解析し,実験参加者がクリックした対象を最初に注視したタイミングを記録した.全ハザードで初回注視時間とクリック時間の相関係数を算出したところ,0.80であった.また,初回注視後すぐにクリックした対象のみの相関係数は0.96であった.なお発見クリックの平均遅れ時間は,全体で1397ms(SD=1010ms),初回注視直後のクリックで979ms(SD=451ms)であった.ハザードの発見とクリックとの間には高い相関関係があり,画面上のハザードをマウスクリックすることで注視行動取得の代用とすることが可能であると考えられる.今後は模範データとなる優良運転者のクリックタイミングのデータを蓄積し,事故反復者と比較する必要がある.また,効果的なフィードバック方法も検討する必要がある。アイカメラを用いた先行研究によれば,事故反復者はハザードの発見が遅いことが明らかとなっている.しかし、アイカメラは高額な上に分析に時間と専門知識が必要である.従って,より多くのドライバーのハザード発見遅れを診断するためには,コストの低い方法を開発する必要がある.本研究では汎用コンピュータとタッチパネルディスプレイ,専用ソフトウエアを用いてハザード発見遅れ診断装置を開発し,アイカメラを用いたのと同様の結果を導きだすことを試みた。交通環境の写真30枚を乗用車運転席付近から撮影し,刺激画像とした.実験参加者にはタッチパネルディスプレイ上に表示される刺激画像の中のハザードを普段運転するときに見るのと同じようにタッチペンでタッチするよう求めた.刺激画像の一部を用いた注視とタッチの一致度検証実験では,実験参加者は注視した対象のうち平均69.3%の対象をタッチしており,タッチした対象のうち平均80.7%の対象を注視していることがわかった.本実験は25名のタクシードライバーを対象にハザードタッチ実験を行った.その結果、事故反復者は刺激提示開始後の最初のタッチが遅いこと,刺激提示から2秒までにタッチした潜在ハザードが優良運転者に比べて少ないこと,いくつかの潜在的ハザードに対するタッチが遅いことが明らかとなった.この結果はアイカメラを用いた先行研究を支持する結果であり,アイカメラを用いないタッチパネル式の簡便な装置でもハザードの発見遅れを検出することができた.今後は,より多くのドライバーに水平展開を図るために,ハザード領域の指定や診断結果の出力などを自動化していく必要がある.
蝶の翅に集積した薬理成分の探索

昼行性の鱗翅目昆虫の中には食草に含まれる特異的な二次代謝物を体内に集積することによって身を守っているものが多く知られている.とくに鱗翅目成虫の翅に集積される化合物群に注目し,それらの蓄積過程について,植物側における二次代謝物質動態ならびに昆虫側における化学感覚受容,取込過程,集積・代謝効率などについて調べた.1)ウマノスズクサを食草とするジャコウアゲハ族各種およびギフチョウ族において,食草由来有毒成分ァリストロキア酸をはじめとするアポルフィン系アルカロイドの虫体含有量を調べた.トリバネアゲハの肉角防御分泌液よりアリストロキア酸ギフチョウの蛹からアリストラクタム類を検出した.しかしいずれも翅への蓄積は認められなかった.2)ウマノスズクサの培養細胞を作成し,脱分化したカルスから根および葉茎に再分化させた組織におけるアリストロンやアルカロイドのマグノフロリンなどの特異成分の含有量をHPLCなどを駆使して調べた.これら成分の生合成経路について考察した.3)アゲハチョウの一種ホソオチョウにおける寄主認識に関わる食草成分について追究した.その結果,幼虫の摂食刺激物質として,アリストロキア酸,セクォイトール,モノガラクトシル・ジリノレノイルグリセロールおよび糖類の協力作用を電気生理実験によって明らかにした.とくに,幼虫の口器styloconic sensillaにおける二次代謝物に対する刺激応答シグナルの精密な分析手法を確立した.これにより,虫体蓄積される物質に対する鋭敏な化学受容応答性が適応的に機能していることが判明した.鱗翅目昆虫の成虫の翅には,窒素代謝に関連した色素類のほか寄主植物など由来の防御性生理活性物質の蓄積が見られる.チョウ・ガ類の新鮮虫体の翅と胴部を分離抽出し,幼虫時代に生育した寄主植物抽出物と各種クロマトグラフィー,スペクトロメトリーによってプロフィールの比較を行ない共通成分を追跡した.1)ホソオチョウ(アゲハチョウ科)はウマノスズクサを食草とする.オスは白とメスはとらふ模様の性的二型を示すことから,鱗粉に含まれる物質の化学組成が大きく異なることが予想された.それぞれの翅の成分を分析した結果,薄層クロマトグラフィーにおいてメスに特有の成分の存在が確認された.微量のため構造解析には至っていないが,大量抽出による分析を進める計画で人工飼料による条件の検討中である,一方,ホソオチョウの幼虫は後頭部に一対の防御分泌器官である肉角を備えている.この成分分析の結果,食草由来の有毒アルカロイド(ニトロ誘導体)アリストロキア酸関連成分の蓄積を認めた.2)シロツバメエダシャク(シャクガ科)はイチイ(イチイ科)を食樹としている単食性のガである.イチイには,細胞毒性の強い抗がん剤として知られるtaxolが含まれていることから,同物質の摂取後の行方を追跡した.その結果,関連物質は幼虫の排泄した糞の中に認められ,虫体内へのintactな取り込みは確認できなかった.興味深いことに,終齢幼虫は営繭に際して糞・イチイ組織などをつづり合わせる習性をもつことから,繭自体が防御性の生理活性物質で覆われている可能性を示唆した.シャクガ科数種で同様の観点から分析を進めている.鱗翅目昆虫の中には食草に含まれる特異的な二次代謝物を体内に集積することによって身を守っているものが多く知られている.とくに鱗翅目成虫の翅集積される化合物群に注目し,それらの蓄積過程について,植物側における二次代謝物質動態ならびに昆虫側における化学感覚受容,取込過程,集積・代謝効率などについて調べた.1)ガ類におけるシアン配糖体の生体蓄積と,食草からの取り込み経路について調べた.タマダラエダシャクにおいては,寄主マサキに含まれるサーメントシンを効率的に取り込んでいる様相が認められた.15N-ラベル化イソロイシンの摂食による取り込み過程を追跡した.2)ジャコウアゲハおよびホソオチョウ(アゲハチョウ科)はウマノスズクサを食草とする.これらの種が食草から積極的に摂取蓄積する有毒成分アリストロキア酸が,植食者の被食によりどのように変動するかを各植物組織ごとに調べた.また,根に多く蓄えられているセスキテルペンのアリストロンやアルカロイドのマグノフロリンなどの特異成分の被食による影響についてLCMSなどを駆使して調べた.一方,ホソオチョウにおける寄主認識に関わる食草成分について追究した.3)オオゴマダラは食草ホウライカガミに特異的に含まれるピロリジディンアルカロイドを摂取,体内組織に蓄積する.血液中のアルカロイド濃度を調べる一方,雄成虫の性フェロモン腺『ヘアペンシル』におけるβ-ラクトンとダナイドンへの変換効率について調べた.昼行性の鱗翅目昆虫の中には食草に含まれる特異的な二次代謝物を体内に集積することによって身を守っているものが多く知られている.とくに鱗翅目成虫の翅に集積される化合物群に注目し,それらの蓄積過程について,植物側における二次代謝物質動態ならびに昆虫側における化学感覚受容,取込過程,集積・代謝効率などについて調べた.1)ウマノスズクサを食草とするジャコウアゲハ族各種およびギフチョウ族において,食草由来有毒成分ァリストロキア酸をはじめとするアポルフィン系アルカロイドの虫体含有量を調べた.トリバネアゲハの肉角防御分泌液よりアリストロキア酸ギフチョウの蛹からアリストラクタム類を検出した.しかしいずれも翅への蓄積は認められなかった.

2)ウマノスズクサの培養細胞を作成し,脱分化したカルスから根および葉茎に再分化させた組織におけるアリストロンやアルカロイドのマグノフロリンなどの特異成分の含有量をHPLCなどを駆使して調べた.これら成分の生合成経路について考察した.3)アゲハチョウの一種ホソオチョウにおける寄主認識に関わる食草成分について追究した.その結果,幼虫の摂食刺激物質として,アリストロキア酸,セクォイトール,モノガラクトシル・ジリノレノイルグリセロールおよび糖類の協力作用を電気生理実験によって明らかにした.とくに,幼虫の口器styloconic sensillaにおける二次代謝物に対する刺激応答シグナルの精密な分析手法を確立した.これにより,虫体蓄積される物質に対する鋭敏な化学受容応答性が適応的に機能していることが判明した.
コール酸の特性を活かした分子集合体の研究

1)コール酸トリポダント型分子による分子認識:コール酸は外側が疎水性、内側が親水性のL字型のステロイド分子であるがこの特性を活かすためにトリメジン酸、シクロトリベンジレン等に3分子のコール酸を配したトリポダント型のホスト分子によるデオキシリボヌクレオシド、AZTの認識を検討した。その結果、最高でdAを結合定数5x10^5M^<-1>で選択的に認識した。これは2環性のビシクロコーラファンよりも大きな値である。AZTに対しては10^2M^<-1>オーダーの結合定数しか示さなかった。2)ビシクロコーラファンの単結晶X線構造解析:ステロイド化合物を利用した大環状ホスト化合物のX線構造は皆無であるが、初めてビシクロコーラファンの単結晶X線構造解析に成功した。溶液中ではねじれに由来する配座異性体の混合物として存在するが、結晶はキラルでありP-ヘリシティーを有する単一のコンフォマーの集合体であることがわかった。3)コール酸誘導体の液晶化の試み:平面分子であるコレステロールがディスコティック液晶となることはよく知られているが、L字型に曲がったステロイド分子でも液晶化による配列制御が可能かどうか検討した。コール酸の3個の水酸基による水素結合の利用による自己集合型2量体の液晶分子を創製するために種々の長鎖を持つコール酸エステル誘導体を合成した。これらの偏光顕微鏡観察を行ったが液晶の発現にはいたらなかった。4)分子認識型液晶分子の創製:溶液中、固相中での分子認識は活発に研究されているが、液晶分子を利用してのメソフェーズでの例はほとんどない。そこでホモオキサカリックス[4]アレンを認識剖立でありかつコア部分として持つ柱状の超分子2量体型液晶ホスト分子の創製を目指した。ジアミンを利用して配列制御を行うことにより液晶化に成功した。本研究の目的は容易に入手が可能で安価なステロイドであるコール酸をもちいて機能性分子集合体を創製することにある。平成14年度はコール酸をメソゲンとする液晶分子の開発を目的として研究を行なった。コール酸末端に種々の長鎖の置換基、アルキル鎖(C_<16>)、フェニル基、ビフェニル基等をエステル基として導入したコール酸誘導体を合成し、その液晶性を検討した。しかしながら現在までのところ、偏光顕微鏡による観察では、合成したコール酸誘導体はすべて結晶から等方性液体への相転移のみであり液晶性の発現には至っていない。当初はコール酸クラスレート構造に見られるようなコール酸水酸基の関与による2量体型構造をとり、棒状となり液晶相の発現を期待していた。コール酸は平面性を有するコレステロールとは異なり曲がったL字型構造をとっているのでこのような構造の分子で液晶性を発現できれば興味深い。現在、コール酸の3個の水酸基をエステル化して長鎖置換基を導入した板状分子の構築およびその相変化、カリックス[3]アレンを用いた3量体型液晶分子の創製を検討している。また、ビシクロコーラファンを用いた包接によるアキラル分子の立体配座固定のために、新規ビシクロコーラファンの合成をおこなった。3分子のコール酸をアミド結合でつなぎ、コール酸水酸基とアミド基が認識部位となるような球状分子を設計した。現在、ゲスト分子の認識、ビシクロコーラファン内孔の不斉環境を利用した立体配座の固定化を試みている。前年度に引き続きコール酸をコアとする液晶分子の開発を試み、本年度はコール酸を3分子用いたトリポダント型分子によるディスコティック液晶の創製を試みたが、液晶化には至らなかった。コーラファンによる分子認識を精査するために、ビシクロコーラファンのX線構造解析を行なった。

コール酸を利用した大環状ホスト化合物の単結晶X線構造解析の例は今までにほとんどない。プロトン核磁気共鳴スペクトルより溶液中ではねじれに由来する、ジアステレオメリックなコンフォマー同士の平衡が存在することが示唆されていたが、得られた単結晶はキラル空間群を有することより、P-ヘリシティーを持つ単一のコンフォマーの集合であることが判明した。ビシクロコーラファンによるゲスト分子の包接を利用して、ゲスト分子へのキラリティートランスファーによる誘起CDを試みたが、溶液中では誘起することが出来なかった。単一のコンフォメーションを有することがわかっているキラル結晶を用いて包接化する必要がある。内部に包接空間を有するカプセル型分子の液晶化を目的として、低部リムに直鎖状の置換基、上部リムにカルボキシル基を配したホモオキサカリックスアレンの二量体型液晶を検討した。ジアミンをスペーサーとして用いると、水素結合により超分子化が起こる。配列制御の後、スペーサーのジアミンを真空中除去する事により、目的とする昇温時にスメクチックA相を発現する二量体型液晶の創製に成功した。ホモオキサカリックスアレンにより構築される中央のカプセル部はフラーレン等を包接可能なサイズの空間を有するので、それらの取り込みによる液晶化が期待される。
精神神経疾患に対する補助診断法としての事象関連電位波形分類法の有用性とその検証

事象関連電位は、認知機能の客観的指標とされている。いっぽう精神分裂病をはじめ多くの精神疾患で事象関連電位の異常が報告されており、本電位の異常を詳細に検討することにより各精神疾患の病態解明が進んでいる。しかし、本電位が臨床診断に寄与するまでには至っていない。そこで本研究では、事象関連電位の波形分類により精神疾患の診断を少しでも客観的に行えることを目的とした。対象は健常対照者100人、DSM-III-Rによる精神分裂病100人、大うつ病70人、不安神経症90人、アルコール依存症50人の計410人である。事象関連電位の記録は音刺激によるオドボール課題を用いて行い、各対象者ごとに低頻度・高頻度の各刺激波形、両刺激波形の引算波形の3種の波形について波形を分類した。分類は小椋ら(1990)の基準をもとに、パターンの異なる波形を8波型に自動的に分類できるようなコンピュータソフトを開発した。それをもとに波形を分類したところ、精神分裂病ではP300に異常を示すIII型と、P300とN200の異常を示すV型のいずれも、他の対象群に比較して多かった。いっぽううつ病では、高頻度刺激に対してもN200が出現するIIb型が70人中54人(77.1%)と高率であった。この型は、健常者でも執着性格の傾向が目立つ人に多いことを明らかにしているので(Oguraら,1991)、うつ病の状態を反映しているより、むしろtrait dependentな所見の可能性が考えられる。今後、補助診断としての有用性をさらに高めるために波形の分類基準を改善したいと考えている。精神科臨床の場で、本法が使用されることを期待したい。
受容体作動性Ca^2+透過型陽イオンチャネルとTRP関連蛋白質の分子的相関の研究

G蛋白質共役型受容体の刺激時に活性化されるCa2+透過型陽イオンチャネル(receptor-operated cation channels ; ROCCs)は、広く生体内に分布し、様々な生病理機能の発現・調節に関与している可能性が高いが、その分予的実体は全く不明であった。本研究では、ROCCsがショウジョウバエ視覚異常に関連したTRP蛋白質(transient receptor potential protein)の脊椎動物ホモログと分子レベルで密接に対応している可能性に着目し、その分子的対応関係を明らかにすることを目的にし、以下の実験を行った;(1)組換え発現したTRPホモログのイオンチャネルとしての特性を、細胞内Ca2+測定法やパッチクランプ法によってnativeROCCsのそれと詳細に比較検討した。(2)(1)でnative組織との対応が明らかになったTRPホモログのmRNA分布が、量的・質的に問題とするROCCのそれと一致するか、RT-PCR、in situハイブリダイゼーション法を用いて検討した。(3)(1)の組織由来の細胞を培養し、各TRPホモログに特異的なアンチセンスオリゴDNAで処理することによってROCCの発現及びその関連する機能が抑制されるか確認した。その結果、(i)血圧の調節に中心的な役割を果たしているalpha-1アドレナリン受容体活性化時に生じるCa2+流入の分子実体として、TRPホモログの一つTRP6が必須の構成蛋白質であることを明らかにし、新しい降圧薬開発の有望な分子標的であることを示した(Circ. Res.88,325-332,2001;日本臨床66(1),18-24,2002)。(ii)TRP6とTRP関連蛋白質のLTRPC2がヘテロ会合体を形成し、中枢神経、副腎クロム親和性細胞や消化管平滑筋のムスカリン受容体活性化陽イオンチャネルと極めて似た性質を示すチャネル活性を発現している実験証拠を得た(第75回日本薬理学会西南部会発表)。G蛋白質共役型受容体の刺激時に活性化されるCa^<2+>透過型陽イオンチャネル(receptor-operatedcation channels;ROCCs)は、広く生体内に分布し、様々な生病理機能の発現・調節に関与している可能性が高いが、その分子実体は全く不明であった。本研究では、TRP蛋白質(transient receptor potential protein)の脊椎動物ホモログとROCCsが分子レベルで密接に対応している可能性に着目し、その分子的対応関係を探索した。初年度は、TRP蛋白質の脊椎動物ホモログ、TRP6が、α_1アドレナリン受容体活性化に伴って生じるCa^<2+>流入チャネル(血管緊張性の維持に中心的な役割を果たしていると考えられている)の必須の構成分子として働いていることを、以下の実験結果から明らかにした。(1)マウスのTRP6をHEK細胞に組換発現すると、α_1アドレナリン受容体刺激で開口するCa^<2+>透過型陽イオンチャネル(NSCC)とほぼ同一の生物物理学的・薬理学的性質を示すチャネル活性が得られた。(2)ウサギ門脈を始めとする幾つかの血管平滑筋組織にはTRP6が豊富にかつ特異的に発現していることを、TRP6抗体による免疫組織学的手法やTRP6特異的プライマーを用いたRT-PCR法で確認した。(3)これらの組織から得られた平滑筋細胞をアンチセンスオリゴ処理すると、α_1アドレナリン受容体NSCCの活性やこれを介したCa^<2+>流入が著しく抑制されることを確認した(Circulation Research印刷中)。

今後は、消化管の筋細胞やCajal細胞、膵臓の内外分泌腺細胞など、TRP mRNAの発現が見られる組織において、G蛋白質共役受容体活性化時に生じるCa^<2+>流入にTRPのサブタイプが分子レベルでどのように関与しているか、更に検討してく予定である。G蛋白質共役型受容体の刺激時に活性化されるCa^<2+>透過型陽イオンチャネル(receptor-operatedcation channels ; ROCCs)が、がショウジョウバエ視覚異常に関連したTRP蛋白質(transient receptor potential protein)の脊椎動物ホモログと分子レベルで密接に対応している可能性に着目し、その分子的対応関係を明らかにすることを目的として、TRP蛋白質を組換え発現したHEK293細胞、native組織から急性単離した細胞を用いて、以下のことを明らかにした。血圧の調節に中心的な役割を果たしているa_1アドレナリン受容体(百日咳毒素非感受性、イノシトールリン脂質代謝と関連)活性化時に生じるCa^<2+>流入の分子実体として、TRPホモログの一つTRP6が必須の構成蛋白質であることを、TRP6遺伝子の組換発現・TRP6抗体による免疫組織学的手法・TRP6特異的アンチセンスオリゴヌクレオチド法によるnative血管組織の機能的ノックアウトによって明らかにした(Circ Res88,325-332,2001)。また、TRP6とTRP関連蛋白質のLTRPC2がヘテロ会合体を形成し、中枢神経、副腎クロム親和性細胞や消化管平滑筋のムスカリン受容体活性化陽イオンチャネル(百日咳毒素感受性)と極めて似た性質を示すチャネル活性を発現している実験証拠を得た(第54回日本薬理学会西南部会発表)。TRP関連蛋白質LTRPC7が網膜芽細胞腫の増殖サイクルの制御に重要なCa^<2+>経路として重要な役割を果たしている可能性を支持する証拠を得た(第75回日本薬理学会西南部会発表予定)。
EBウイルス蛋白質EBNA2の新しい作用

本研究はEBウイルス(EBV)による細胞がん化のメカニズム解明への一段階として、EBV蛋白質の一つEBNA2(Epstein-Barr virus nuclear antigen2)の機能を、発現の制御が可能な新しいベクターを利用して解析することを目的とした。現在までに以下の結果を得ている。1.EBV複製誘発とアポトーシス誘導に関わるEBNA2分子ドメインの決定RBP-Jκ結合部位を欠損する変異EBNA2遺伝子を作製し、テトラサイクリン制御発現ベクターに組み込み、バーキットリンパ腫細胞株Akataなどに導入したところ、RBP-Jκとの結合がEBV複製サイクル誘発には必要であるが、細胞増殖抑制やアポトーシス誘導には不必要であることが示された。2.EBNA2発現Akata細胞におけるCD40発現の増強EBNA2発現誘導後2-3日後のAkata細胞において、CD40を強く発現する細胞群が出現することがflow cytometryにより示された。この現象はEBV陰性Akata細胞では認められなかったため、EBNA2により発現が誘導される他のEBV遺伝子か関与すると推測された。EBNA2発現誘導後2-3日後のAkata細胞において、細胞表面IgGの発現量が著名に低下していることがflow cytometryにより示された。この現象はEBV陰性Akata細胞でも認められたため、他のEBV遺伝子を介さないEBNA2の直接の作用と推測された。本研究はEBウイルス(EBV)による細胞がん化のメカニズム解明への一段階として、EBV蛋白質の一つEBNA2(Epstein-Barr virus nuclear antigen2)の機能を、発現の制御が可能な新しいべクターを利用して解析することを目的としている。平成11年度はEBNA2によるEBV複製サイクル誘発とアポトーシス誘導のメカニズムに関して以下の実験が行われた。1.EBV複製誘発とアポトーシス誘導に関わるEBNA2分子上のドメインの決定RBP-Jκ結合部位を欠損する変異EBNA2遺伝子を作製し、テトラサイクリン制御発現べクターに組み込み、バーキットリンパ腫細胞株Akataなどに導入したところ、RBP-J κとの結合がEBV複製サイクル誘発には必要であるが、細胞増殖抑制やアポトーシス誘導には不必要であることが示された。2.EBNA2発現量とその作用の関係についてヒトT細胞株Jurkatに、EBNA2遺伝子をテトラサイクリン制御発現ベクターに組み込み導入した。この場合複数のクローンが得られ各々発現レベルが異なっていたため、比較検討したところ、EBNA2発現レベルの高いクローンにおいてのみアポトーシスが誘発されることが示された。3.Akata細胞以外の細胞株に対する遺伝子導入これまでに上記のヒトT細胞白血病株Jurkatに遺伝子導入が完了している。Akata細胞を含めたこれらのEBNA2遺伝子導入細胞において、EBNA2がc-mycなどのがん原遺伝子、サイクリンD2などの細胞周期制御遺伝子などの発現に与える影響を現在解析している。本研究はEBウイルス(EBV)による細胞がん化のメカニズム解明への一段階として、EBV蛋白質の一つEBNA2(Epstein-Barr virus nuclear antigen2)の機能を、発現の制御が可能な新しいベクターを利用して解析することを目的としている。平成12年度はバーキットリンパ腫細胞株AkataにおいてEBNA2発現誘導後の細胞遺伝子発現と表面マーカーの変化が解析された。1.EBNA2発現Akata細胞におけるCD40の発現増強EBNA2発現を誘導した後2日ないし3日後にフローサイトメトリーによりCD40分子の発現強度を調べたところ、EBNA2発現誘導後にCD40を強く発現するpopulationが出現した。この現象はEBV陰性のAkata細胞では認められなかったため、EBNA2によって発現が誘導される他のEBV遺伝子が関与することが推測された。EBNA2発現を誘導した後2日ないし3日後にフローサイトメトリーにより表面IgGの発現強度を調べたところ、EBNA2発現誘導後にIgG発現強度が著名に低下することが示された。

この現象はEBV陽性・陰性の両方のAkata細胞に認められたことから、他のEBV遺伝子を介さないEBNA2の直接の作用と考えられた。EBNA2発現を誘導した後1日ないし2日後にウエスタンブロット法により調べたところ、EBNA2発現後にc-myc発現レベルが著名に低下することが示された。Akataなどバーキットリンパ腫細胞の増殖にはc-mycの過剰発現が決定的な役割を果たすと考えられているため、EBNA2発現後のAkata細胞の増殖抑制には、c-myc発現レベルの低下が関与することが示唆された。
壁体の損失係数測定法の開発とSEA法による遮音解析

1.壁体の内部損失係数の定量化を目的として種々の測定法を検討した。まず残響時間法と時間逆転分析法により基本的な測定法の可能性を検討した。次にインパルスレスポンス法を導入し、これまで行ってきた残響時間法との測定精度の検討を行った。測定結果よりほぼ同程度の測定精度が得られており、インパルスレスポンス法導入により計測時間の短縮が可能となった。この方法により残響室に取り付けられた(単純支持)と無響室内に吊り下げた(自由端)アルミニウム単板の損失係数を多数の測定点で計測しその特性を明らかにした。2.音響インテンシティ計測法により残響室開口部に取り付けられたアルミニウム単板を圧電動板で加振し、音響放射特性の可視化を行った。1/3オクターブバンドの詳細な結果が得られ、周波数帯域毎の放射特性は単板の放射理論を検証する貴重な資料であると言える。また、音響放射効率を算出したところCrockerらの理論値と良好な一致することを確認した。3.SEA法による音響透過損失解析に関しては、共振透過の種々の音響放射効率理論式の検討および非共振透過の結合損失係数の検討を行い、解析手法を確率した。これによって内部損失係数および周辺吸収率の変化による透過損失への影響についての定量的な解析を行った。4.新しい計測手法を導入したので、測定方法や測定精度の検討を慎重に行わざるを得なかった。従って当初予定していた材質の異なる試料や、面積・支持条件を変化させた損失係数の測定をは実施することができなかった。これらについては鋭意研究を続行していく予定である。しかし、壁体の損失係数測定法の開発及びSEA法による遮音解析手法を確率することが出来たと言える。小型軽量な圧電振動板を試料パネルに貼付して、定常加振によって振動減衰時間の計測システムを構築した。減衰時間が短いため周波数分析器の応答の影響を受けるのでTime Reverse法を導入し、測定精度の確認を行った。平均化時間を種々変化させた詳細な実験結果より誤差の発生を防ぐ損失係数の測定手法を開発した。しかし、導入前後の絶対値の差は小さく、我々の計測システムではTime Reverse法を適用しなくても必要な精度が得られることがわかった。次に、試料パネルを圧電振動板で定常加振したときの音響放射パワーを音響インテンシティ法で計測し、パネルからの放射分布を検討した。コインシデンス周波数以下の低周波数領域でパネル周辺部の放射パワーが大きいことが確認された。これは理論上の放射特性を検証する結果となった。定常加振時のSEA法によるパワーバランス式より、上記で得られた測定結果を用いて結合損失係数および内部損失係数を分離算出することを可能にした。これらの結果を検討した結果、周辺支持部のエネルギー吸収が大きく定量化による周辺支持部の評価が可能であるという基礎的な知見を得た。また、SEAパラメータとして重要な共振透過の結合損失係数の理論的な検討として、種々提案されている音響放射の式を比較し、我々が従来使用しているMaidanik-Crocker式が現在のところ適切であることが確認された。さらに非共振透過の放射率としてRindelの式と我々が提案している式はほぼ等しい結果を与えることも確かめた。現在、周辺吸収のモデル化による数値解析の検討を行っている。1.内部損失係数測定にインパルスレスポンス法を導入し、これまで行ってきた残響時間法との測定精度の検討を行った。

2.音響インテンシティ計測法により残響室開口部にに取り付けられたアルミニウム単板を圧電振動板で加振し、音響放射特性の可視化を行った。1/3オクターブバンドの詳細な結果が得られ、周波数帯域毎の放射特性は単板の放射理論を検証する貴重な資料であると言える。また、音響放射効率を算出したところCrockerらの理論値と良好に一致することを確認した。3.SEA法による音響透過損失解析に関しては、共振透過の種々の音響放射効率理論式の検討および非共振透過の結合損失係数の検討を行い、解析手法を確立した。これによって内部損失係数および周辺吸収率の変化による透過損失への影響についての定量的な解析を行った。4.新しい計測手法を導入したので、測定方法や測定精度の検討を慎重に行わざるを得なかった。従って当初予定していた材質の異なる試料や、面積・支持条件を変化させた損失係数の測定を実施することができなかった。これらについては鋭意研究を続行していく予定である。しかし、壁体の損失係数測定法の開発およびSEA法による遮音解析手法を確立することが出来たと言える。