hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
白斑症治療を目的とした幹細胞からの色素細胞誘導とメラニン産生・蓄積制御機構の検討

ヒト脂肪組織由来の幹細胞から多能性幹細胞の一つであるMuse細胞を分離し、この細胞を特殊な分化誘導用の培養液で培養することにより、色素を産生する細胞へと分化誘導させることに成功しました。脂肪組織由来のMuse細胞から誘導された細胞は、正常の色素細胞に似た形態を持ち、メラニン色素を産生していました。このMuse細胞由来色素細胞を混ぜた混合した人工の3次元培養皮膚を作成したところ、この細胞は、生体の色素細胞と同じように皮膚の基底層に位置しており、表皮内でメラニン色素を産生し、またそのメラニン色素を周囲の表皮角化細胞に渡していることを確認できました。ヒト脂肪組織由来幹細胞から単離したMuse細胞を色素細胞へと誘導する方法を検討した。一般的に生体から採取した脂肪組織より得られる幹細胞は、採取される人の年齢や採取部位にその数は左右されると考えられている。私が今回行ったヒト脂肪組織からのMuse細胞単離の研究では、若年者由来の組織のほうがより多くヒト脂肪組織由来幹細胞を樹立することができ、その結果より多くのMuse細胞を単離することができた。採取部位の違いとしては、臀部の脂肪組織からはヒト脂肪組織由来幹細胞はあまり樹立できなかった。さらに、脂肪の採取量と得られるヒト脂肪組織由来幹細胞の関係には正の相関が得られた。α-fetoproteinの発現を認めた。このヒト脂肪組織由来Muse細胞を、Wnt3a、Stem cell factor、エンドセリンー3などを含む色素細胞分化誘導培地で6週間培養したところ、色素細胞に似た形態の細胞を誘導できた。また、この誘導した細胞が、色素細胞関連遺伝子であるチロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク1、DCT、gp100、MITF、KITを発現していることをPCR法、免疫細胞化学法で確認した。さらに、この細胞はチロシナーゼ活性を示すドーパ反応にも陽性であった。以上より、ヒト脂肪組織由来Muse細胞から色素産生能を持つ細胞を誘導できた考える。今回の研究結果から、ヒト脂肪組織由来幹細胞にMuse細胞が存在することを確認し、さらにこのMuse細胞が線維芽細胞由来のMuse細胞と同等の色素細胞への分化能を持つことを確認した。ヒト脂肪組織から単離したMuse細胞を色素細胞に分化誘導することに成功した。外科的手術の際に廃棄された余剰脂肪を1型コラーゲナーゼで酵素処理をすることによって、脂肪組織に存在する脂肪幹細胞を単離した。この脂肪幹細胞をstage specific embryonic antigen 3(SSEA-3)で染色し、FACSによりSSEA-3陽性細胞を選別することにより脂肪組織由来Muse細胞を樹立した。脂肪組織由来Muse細胞をWnt3a、stem cell factorなど10種類の試薬を含む誘導培地で6週間培養した結果、形態が色素細胞様になり、ヒト色素細胞とほぼ同レベルの色素細胞特異的な遺伝子、タンパク質の発現をしていることが確認された。また、この6週間培養した細胞をメラニン細胞刺激ホルモン(a-MSH)を含んだ誘導培地で、さらに3週間培養すると色調が黒色調に変化した。誘導後のMuse細胞はL-DOPA反応に陽性であった。以上のことから、脂肪組織から単離されたMuse細胞から色素細胞が誘導できることが分かった。このMuse細胞由来色素細胞を混ぜた3次元培養皮膚を作成し、H.E染色や免疫組織化学法で検討したところ、Muse細胞由来色素細胞は基底層に局在しており、tyrosinase、gp100など色素細胞特有の蛋白質を発現していた。また色素細胞周囲の角化細胞を観察した結果、gp100の陽性が確認できたため周囲の細胞にもメラニンの移譲を行っていることが分かった。以上により、脂肪組織由来Muse細胞から作成した色素細胞は生体内でもヒト通常色素細胞と同様の機能的役割を持ちうることが示された。26年度が最終年度であるため、記入しない。再生医療26年度が最終年度であるため、記入しない。ヒト皮下脂肪組織由来のMuse細胞が、ヒト線維芽細胞由来Muse細胞と同等の機能的な色素細胞へと分化することが確認された。このことからMuse細胞から色素細胞を誘導する方法はほぼ確立できたといえる。さらに、Muse細胞由来の色素細胞は、色素細胞刺激ホルモンやその他の下垂体ホルモンで細胞内でのメラニン産生が増加することを確認した。以上のことから、今後はMuse細胞由来の色素細胞を利用して、角化細胞へのメラニン移行分配の検討や、色素細胞の生体内での遊走因子の検討、また色素細胞の皮膚内での挙動の検討をおこなうことができる。今後の検討では1Muse細胞由来色素細胞と角化細胞を共培養し、メラノソームの角化細胞への移譲を観察する。

2Muse細胞由来色素細胞を混ぜた三次元培養皮膚を作成し、その三次元培養皮膚内での遊走能や局在、周囲角化細胞へのメラニンの移譲を確認していく。それと同時にMuse細胞から色素細胞へと効率よく分化誘導するための方法を検討していく。また、上記と同じ研究を市販のヒト色素細胞でもおこない、Muse細胞由来色素細胞との違いなどを検討する。
走査型近視野顕微鏡を用いた光機能界面の微小領域観察

本年度は、いままでに構築されたNSOM蛍光測定システムをもとに、金属担持酸化チタン光触媒に於ける反応生成物の光化学的2次元マッピングを数nmの分解能で行うことを目的にした。その結果から光触媒反応の機構について新たな知見を得、より高効率の新規触媒を探索する指針を得ることを目的に研究を遂行してきた。1.反応生成物の2次マッピングによる反応機構の考察:いままでに得た技術を用いて各種の貴金属を担持した酸化チタン触媒を作成し、この触媒上での反応生成物の2次元マッピングを、顕微蛍光測定に行い、担持する金属による反応生成物の分布の違いから、反応機構について考察した。2.in-situ観測のための装置改良:現有の走査型近視野野顕微鏡は感度の問題からマッピングに十数分の時間を要するため、触媒反応を実時間で追うin-situ観測を実現するためには装置、とくに検出部の改良が必要となり、具体的には、試料の蛍光を油浸対物レンズで集光し、光電子倍増管で検出し、フォトカウンティングユニットで光子数を算出した。平行して現有の装置を用い、金属担持酸化チタン触媒のトボグラフィー観察を行った。
アデノウイルスを用いた新たな時間空間的遺伝子相同組換え法による神経障害応答の解析

この実験系は大きく2本建てより成っている.1つは目的の細胞(この場合傷害神経細胞)に限局して組み換えを起こすことであるが、もう1つはいかに少数の遺伝子操作で効果が見られるかにある.我々が従来用いたような組織特異性の乏しいプロモーターでアデノウイルス感染細胞に発現を誘導した場合、神経切断断端より取り込まれ発現するものに加え、図らずも感染部位周辺の非神経細胞にも発現が現れてしまう.標的となる遺伝子が広く細胞の生存・維持に関わる場合などには、この厳密な時間空間的制御が強く要求される.このためアデノウイルスで用いるプロモーターに神経特異性を持たせる試みを行った.ウイルスに組み込む場合、そのサイズが有限であることが問題となるため、比較的小さなSCG10/RESTを用いて試行を繰り返したところ、ある程度の特異性は得られたものの、Creリコンビナーゼを発現させ解析したところ、'切れの良い'発現制御は得られていない.更にトランスジェニックマウスを用いた神経細胞特異的プロモーターの検索も(GAP-43,nestin enhancer)それぞれに問題点を残すことになった.しかし今後もこれらのチューニングを通じて、厳密な発現制御をまずは目指したい.次に標的とする遺伝子についても興味深い結果を得た.従来、神経細胞の生死決定を司る転写因子の1つとして、c-jun(特にそのリン酸化)が注目されていた.我々もこれを重視し、当初からサイレントノックアウトの候補に挙げている.また独立した実験系にて、このc-junに加えて別のAP-1ファミリーであるAtf-3が、神経細胞生死決定に関与する可能性を強く示唆するデータが得られた.今後は当遺伝子についても加えて検討を計画している.この実験系は大きく2本建てより成っている.1つは目的の細胞(この場合傷害神経細胞)に限局して組み換えを起こすことであるが、もう1つはいかに少数の遺伝子操作で効果が見られるかにある.我々が従来用いたような組織特異性の乏しいプロモーターでアデノウイルス感染細胞に発現を誘導した場合、神経切断断端より取り込まれ発現するものに加え、図らずも感染部位周辺の非神経細胞にも発現が現れてしまう.標的となる遺伝子が広く細胞の生存・維持に関わる場合などには、この厳密な時間空間的制御が強く要求される.このためアデノウイルスで用いるプロモーターに神経特異性を持たせる試みを行った.ウイルスに組み込む場合、そのサイズが有限であることが問題となるため、比較的小さなSCG10/RESTを用いて試行を繰り返したところ、ある程度の特異性は得られたものの、Creリコンビナーゼを発現させ解析したところ、'切れの良い'発現制御は得られていない.更にトランスジェニックマウスを用いた神経細胞特異的プロモーターの検索も(GAP-43,nestin enhancer)それぞれに問題点を残すことになった.しかし今後もこれらのチューニングを通じて、厳密な発現制御をまずは目指したい.次に標的とする遺伝子についても興味深い結果を得た.従来、神経細胞の生死決定を司る転写因子の1つとして、c-jun(特にそのリン酸化)が注目されていた.我々もこれを重視し、当初からサイレントノックアウトの候補に挙げている.また独立した実験系にて、このc-junに加えて別のAP-1ファミリーであるAtf-3が、神経細胞生死決定に関与する可能性を強く示唆するデータが得られた.今後は当遺伝子についても加えて検討を計画している.平成10年度8月に研究代表者の木山と分担者の加藤が英国へ渡航し、本共同研究の相手国側の代表であるN.Allen博士と研究の方針について細部を検討した.この話し合いにより、サイレントターゲッティングの候補遺伝子として、c-Junを選んだ.これは、従来の方法によるc-Junノックアウトでは、胎生早期に死んでしまいノックアウト動物を用いた研究は不可能であること.さらに神経再生においてc-Junはリン酸化が亢進すること、すなわちJNKの活性が亢進することが知られており、神経再生過程においてc-Junが何らかの役割を有することが考えられるからである.このため、平成10年度はc-Junサイレントノックアウトのためのゲノム遺伝子のクローニングと、それを用いたノックアウトベクターコンストラクトの作成を行った.これには、研究分担者の加藤が引き続き英国ベーブラハム研究所に残り研究を行った.サイレントノックアウト動物の作成に関しては、現在英国でES細胞の組換え体を得るべくスクリーニングを進めている.一方アデノウイルスによるCre発現系の構築は、日本(旭川)で涛川が行った.Creをコードする遺伝子をアデノウイルスに組込むことにことに成功し、培養細胞でウイルス感染によりCreが発現すること、同時にLoxPによりサイレントになっている遺伝子を別のアデノウイルスに組み込むことにより共感染時に目的の遺伝子が発現することを確かめた.同様のウイルスをラットに感染させ同様の結果が得られるかについても検討したが、予想通りの結果が得られた.(1)昨年度の継続として、c-JunのサイレントノックアウトのES細胞のクローニング、さらにそれを用いてサイレントノックアウト動物の作成を行うため、分担研究者の加藤が英国へ渡り共同研究を行った。現時点ではC-JunのサイレントノックアウトのESのクローンをとるには至っていないが、来年度も継続してクローニングを行う。(2)Creを発現するアデノウイルスはユニバーサルなプロモーターを用いた場合にはうまく作動しているので、さらに神経細胞特異的な発現を目指すためにREST配列などを含むSCG10のプロモーターを組み込んで、標的遺伝子のノックアウトを神経細胞特異的に行うことを試みた。SCG10プロモーター下にCreをコードした

ベクターコンストラクトと、通常のCAGプロモーターの下流にloxP-Stuffer-loxP、さらにその下流にレポーターとしてLacZを結合したコンストラクトを作成し、同時に発現させることを試みた。発言細胞種として、神経細胞種細胞株と非神経細胞株(シュワン由来、アストロサイト由来)、COSなどを用いて検討した。その結果、神経系細胞においてはリポーター分子の発現が強いがは。その他の細胞種においても弱いレベルでの発現が認められた。したがって、さらに'切れのよい'神経特異的プロモーターの検索とStufferの後の停止を強力にする必要があると考えられる。次年度の目標としたい。また、研究代表者の木山が研究の進展状況と来年度の研究の打合せのため年度末の3月に短期渡英した。本実験系に神経特異性を持たせる試みとして、3つの方向より検討を加えた.1つは、アデノウイルス側プロモーターに神経細胞特異性を持たせるものとして、SCG10/REST系を見た.この結果、下流lacZリポーター遺伝子の発現解析では一応の特異性を見たものの、Creリコンビナーゼを発現させると、その'切れの良さ'に問題があることが判明した.2つ目は、神経マーカーとしても用いられるGAP-43のプロモータートランスジェニック動物を作製し検討した.本プロモーターは挿入位置効果を強く受けることが判り、今後insulatorなどを用いて改良する必要があった.また更に、全て未分化神経細胞前駆体をマークすべく、nestinのエンハンサーを同様にトランスジェニックマウスで検討したが、これも1部の神経細胞で発現が欠落することが見られ、我々の目的には応用しがたい結果となった.標的遺伝子では、当初より計画していたc-junの役割についても興味深い結果を見た.細胞死をみる系において、c-junが別の転写因子atf-3と連動して働く可能性を見いだした.本実験系を用いて更に考察を加えたい.また英国側のテーマであった中脳ドーパミンニューロン発生に関連して、nurr-1のサイレントノックアウトを作成中であるが、半年間の試行においても未だにgerm line移行を見ていない.この点は、急いで実現したい.また共同研究で、精神分裂病患者におけるPSD-95の前頭野における特異的発現変異を見いだしたので、これについても本実験系での臨床医学への適応を探る上で、計画中である.
血管の早期新生によって移植細胞の生着を促進する骨増成法の開発

本研究により細胞移植が骨芽細胞の供給源として骨再生に及ぼす影響は限定的であり、ホスト由来の細胞を如何にして動員し、前駆細胞の骨芽細胞への分化を促進させることが効果的である可能性が示唆された。更に細胞誘導因子として知られるSDF-1の添加は骨再生を促進した。今後は動員された細胞特性の解析、血管新生のより詳細な解析が必要である。本研究計画では増殖因子を用いて血管新生を誘導することによりその生着を促し、より効果的な骨増成を試みる。本研究計画では移植体に間葉系幹細胞と血管新生能を有する増殖因子を併用するが、増殖因子は移植母床において血管新生を誘導するだけでなく、細胞への直接的影響、血管新生による血行性の細胞の供給等、骨増成の過程において多重的に影響を及ぼすことが考えられる。しかしながら血管新生が骨増生や修復過程において及ぼす影響については、未だ明らかでない点が多い。本研究計画では増殖因子が骨増成に対して、直接的、間接的に及ぼす影響とそのメカニズムを動物実験、細胞培養系を用いて、明らかにすることとした。アテロコラーゲン・スポンジ(MIGHTY,高研社製)に増殖因子(SDF-1, PDGF, BMP-2)を添加し、1時間静置した後に8週齢ラット頭頂骨欠損に移植を行った。組織標本上における解析では移植3日目には移植体内に細胞の集積が観察され、SDF-1が最も多い細胞数を示した。7日目には移植体内に血管新生が認められるようになった。現在、骨再生能の解析のため長期サンプルの調製を行なっている。骨増成法の多くは間葉系幹細胞や骨芽細胞前駆細胞の骨芽細胞への分化を誘導することを指標とした試みが成されてきた。しかしながら移植初期における細胞の生存とその生着は、細胞移植による骨増成の律速段階であり、この段階で細胞を失うことはその後の骨増成効果に大きく影響を及ぼす。血管新生は細胞が生着するための環境を整備するために極めて重要であるばかりでなく、血流の確保は血行性に幹細胞の供給を可能とすることから、骨芽細胞とその前駆細胞の増加にも寄与することが強くが推察される。本研究の目的は細胞移植に血管新生を誘導する因子を併用することによって、移植細胞の生存と生着を促し、より効果的な細胞移植による骨増成を達成するための術式を確立することである。各種増殖因子(PDGF、SDF-1,BMP-2)をアテロコラーゲンスポンジに含浸させ、8週齢雄性ラット頭蓋骨欠損部に移植した。移植1,3,7日後に組織標本を作成し、血管新生能、担体中の遊走細胞数の計測を行ったところ、SDF-1において優位に多くの遊走細胞数が認められたが、血管新生能については各群間に差は認められなかった。移植細胞の初期挙動および血管新生の検出には成功しており、概ね順調に進展している。歯科補綴学管新生と移植細胞初期挙動の解析移植初期における血管新生と移植細胞の挙動、および細胞の供給を解析するために、移植後1,3,7日後にラットを屠殺し、組織標本の作製を行う。血管の検出にはCD34抗体を用いる。移植細胞の検出には抗GFP抗体、アポトーシス細胞の検出にはTUNEL染色、細胞増殖能をPCNAおよびKi-67抗体にてそれぞれ検出を行う。さらに細胞移植時における血管新生能を有する増殖因子の添加がその後の骨増成に及ぼす影響を解析するために移植後より長期の観察を行う。移植後4,8,12週後に動物を屠殺し、μ-CTによる解析を行った後に脱灰組織標本を作製する。μ-CTのデータをもとに解析ソフト(TRI3D/BON、ラトック社)を用いて3次元構築、骨形態計測を行う。組織標本上では形態的な解析のみならず、骨芽細胞および骨細胞中における移植細胞の割合をGFP抗体を用いて検出、解析する。使用した動物数が予定していた物よりも少なかったため。余剰資金は抗体購入等の解析費用に充てる予定である。
深層海洋大循環像の解明に向けた南大洋における乱流混合の定量化

2016年1月の東京海洋大学練習船「海鷹丸」による南大洋観測航海時に研究代表者が実施した、南極周極流域における乱流混合強度・流速・水温の同時観測によって得られたデータを解析したところ、「南極周極流ジェット上で、既存の乱流パラメタリゼーションが真の乱流混合強度を過大評価する」傾向が確認された。そこで本年度は、その過大評価が何故生じるのか検証するために、観測データのより詳細な解析を行い、「南極周極流や中規模渦に伴う地衡流シアー」が「近慣性波や風下波に代表される内部波場」と共存する南大洋における乱流混合過程を明らかにすることを目的とした。過大評価傾向は、鉛直波長の短い流速・密度の変動成分である「内部波エネルギー」との相関が大きく、逆に鉛直波長の長い流速シアー(≒地衡流シアー)との相関は小さかった。そこで、過大評価傾向が見られた観測点における内部波エネルギーの鉛直波数スペクトルの特徴を調べたところ、鉛直長波長の「下向き伝播する近慣性波」や「上向き伝播する風下波」が鉛直波数スペクトルの低波数側に「こぶ」を作っており、これらに伴う「内部波場の異方性」や「鉛直波数スペクトルの歪み」が「乱流パラメタリゼーションによる過大評価傾向」の原因となっていたと考えられる。上記のスペクトルは、中規模渦による近慣性波の捕捉や、南極周極流による海底地形上での風下波励起によって形成されていたと考えられる。また、2018年1月には「海鷹丸」による南大洋航海に再度乗船し、最新型の乱流計VMP-Xを用いた乱流観測を実施した。南極周極流域の計9観測点において「海面から海底までの乱流混合強度の鉛直プロファイル」という貴重なデータを得ることに成功した。南極周極流域における「乱流パラメタリゼーションによる過大評価傾向」の原因を明らかにするために、いくつかの仮説を立てた上で、それらの仮説がもっともらしいかどうか、先行研究の詳細なレビューや、様々な観点からのデータ解析を行い、検討を重ねた。それらの作業に想定以上の時間を要したため、研究成果論文の投稿にも遅れが生じた。「内部波場の異方性」や「鉛直波数スペクトルの歪み」が乱流パラメタリゼーションの推定精度にどのように影響するのか、またこれまでの観測で確認された「乱流パラメタリゼーションによる過大評価傾向」は再現されるのか、定量的に検証する。そのために、Henyey et al. (1986)やIjichi and Hibiya (2016)で用いられた「波追跡シミュレーション」を用いて、南極周極流域の乱流混合過程を想定した数値実験を行う予定である。
太陽電池用高効率インバータの低ひずみ化に関する研究

太陽電池を用いた給電システムとしての太陽光発電は、無公害で無尽蔵のエネルギー源として、現在最も期待されている新エネルギー技術の一つである。しかし、太陽電池の出力は、日射量の変化や太陽電池での陰の存在によつて、大幅に影響を受ける。そこで安定した電力供給のために、蓄電池を備えたシステムおよび系統と連係したシステムを検討した。本研究では、太陽電池から最大の出力を得ることを目的として、以下の研究を行なつた。共振回路を用いた、簡単な回路構成の昇降圧形コンバータを提案し、シミュレーションと実験で検討した。その結果、太陽電池の最適動作点を追従しながら、負荷状態により、自動的に蓄電池の充電と放電を行なえることを確認した。(2)発電制御回路の研究太陽電池を直列接続した際に、太陽電池の一部に照度不足が生じると発電電力が低下した太陽電池が負荷となり、大幅な発電電力低下が生じる。この問題を改善する。新しい発電制御回路を提案した。シミュレーション、および系統連係での実験を行なつた。その結果、本回路を用いることで、発電効率の高い太陽電池発電システムを実現できることを確認した。(3)共振形マルチレベルPWMインバータの研究蓄電池を分割する簡単な回路構成で、太陽電池が発電した直流電力を、効率よくしかも波形ひずみの少ない、交流電力に変換するインバータを検討した。共振回路をもつ電源部を検討し、安定した動作を確認した。この問題を改善する。太陽光発電システムは、無公害で無尽蔵なエネルギー源として注目されている。しかし、太陽電池の出力は、日射量の変化や太陽電池での陰の存在によって、大幅に影響を受ける。太陽電池には最大の電力が取り出せる最適動作点が存在し、日射量や太陽電池の温度などの条件により、その動作点は大幅に変動する。太陽電池と蓄電池を直接に接続したのでは電圧が固定され、最大の電力を得ることはできない。そこで以下の研究を行なった。(1)常に太陽電池から最大の電力を効率よく利用できるような、DC-DCコンバータの研究。(2)太陽電池の一部が陰になると、その部分は負荷となって発電電力が大幅に低下するので、これを改善できる発電制御回路の研究。太陽電池を直列接続した際に、太陽電池の一部に照度不足が生じると発電電力が低下した太陽電池が負荷となり、大幅な発電電力低下が生じる。この問題を改善する、新しい発電制御回路を提案した。シミュレーション、および系統連係での実験を行なった。
ハスモンヨトウにおけるキチン合成阻害剤の不妊化機構

キチン合成阻害剤のクロルフルアズロンをハスモンヨトウ幼虫に処理し、その後の孵化阻害作用について調べた。この不妊化作用が精子数の減少によるものなのか、幼虫期に処理されたクロルフルアズロンが産下卵まで伝えられ、産下卵のはい発生時にクロルフルアズロンの影響(キチン合成阻害)により末孵化卵となるのか、または未受精のために未孵化卵になるのか検討した。まず、産下卵の胚発育をを詳細に観察し、胚発育がどの時点で止まるのかを調べた。その結果、未孵化卵の大部分(90%以上)は、胚発生の初期段階で発育が止まることを確認した。これは、未孵化がクロルフルアズロンの産下卵への伝搬によるものではないことを示している。また、5齢幼虫へのクロルフルアズロン処理による精子の発育遅延が、精子数の減少をもたらすのか、精子の性質(受精能力)に悪影響を及ぼすかについては、羽化成虫雄から雌に渡される精包中の精子数と孵化卵数とには高い相関があり、雄から雌に渡される精子数が重要であると考えられた。以上のことから、今後は、雄の精子発育のいかなる作用点にクロルフルアズロンが作用するのか明らかにしていきたい。また、5齢幼虫に対するクロルフルアズロン処理は、雄に対する影響が高いことが示されているが、雌の卵巣に対しても影響があることが明らかとなり、今後は雄のみならず雌に対する影響についても検討する必要があると考えられた。
遺伝子改変動物を用いた筋萎縮性側索硬化症の発症と病態進行に関する研究

遺伝性ALSのモデルマウスであるSOD1(G93A)マウスとアペリン欠損マウスから、ダブルミュータントマウスを作製し、ALSの病態進行について解析した。その結果、アペリンがALSの運動神経細胞死に対し保護作用を有すること、その保護作用には、血管内皮増殖因子(VEGF)との強調的な作用が重要であることを明らかにし、アペリンがALSの有用な創薬標的分子となりうることを示した。筋萎縮性側索硬化症(ALS)は、酸化ストレス、小胞体ストレス、神経保護因子といった様々な要因が複雑に絡み合っており、これらの因子のクロストークを詳細に解析することにより、ALSの病態解明および新規創薬標的分子の探索が可能になると考えられる。そこで本研究では、まず、ALSモデルマウスの病態進行における様々な因子の発現量を解析した。その結果、ALSマウスの腰髄において、既存の神経保護因子である血管内皮増殖因子(VEGF)の発現は、病態の進行とともに低下していた。さらに、VEGFと協調作用があるアペリンも同様に低下していることを見出した。アペリンの受容体であるAPJの脊髄内の局在を解析した結果、灰白質に広く存在する神経細胞の細胞体に発現していることを見出した。さらに、運動神経に特異的に発現するコリンアセチルトランスフェラーゼ(ChAT)抗体を用いた検討から、運動神経細胞体に発現するAPJが病態進行とともにその発現が低下しており、病態後期の運動神経には、APJが発現する細胞体しか残っていなかった。これらのことは、アペリン/APJシステムが脊髄内で運動神経の生存と機能維持に関与している可能性を示唆している。一方、神経細胞株を用いた研究において、小胞体ストレスが誘導する神経細胞のアポトーシスには、活性酸素種(ROS)が関与することを見出し、さらに、ROS発生源として、内在性NADPH Oxidase(NOX)が関与することを明らかにした。また、NOXのアイソフォームの中でも、NOX5が小胞体ストレスにより発現上昇してくること、さらにNOX5の活性に必要なカルシウムは、細胞外からの流入ではなく、小胞体からの放出が関与することを明らかにした。筋萎縮性側索硬化症(ALS)の病態には、酸化ストレス、小胞体ストレス、神経保護因子といった様々な要因が複雑に絡み合っており、これらの因子のクロストークを詳細に解析することが重要な検討課題である。本年度では、まず、生理活性を持つ活性酸素種(ROS)として知られる一酸化窒素(NO)が、ALSの病態進行に関与するミクログリアの機能調節に関与するか否かについて解析した。その結果、低濃度NOが、ミクログリアのNO産生を抑制することを明らかにした。特に、低濃度NOは、cGMPシグナルを介したiNos発現量の抑制によりミクログリアが持つNO合成能に対して、ネガティブフィードバックとして機能していることを見出した。また、ドパミンがミクログリアのNO産生を抑制すること、その作用がドパミン受容体を介さず、ドパミンキノン体になり獲得する作用であることを明らかにした。一方、ノルアドレナリンは、β_3受容体を介してアストロサイトの抗酸化物質グルタチオン産生を亢進させ、アストロサイトからグルタチオンを放出させることにより過酸化水素誘発神経細胞を保護することを明らかにした。昨年度までに小胞体ストレスによりROSを過剰に産生させる遺伝子としてNOX5を同定している。そこで、本年度ではNOX5のプロモーター領域の同定を試み、NOX5遺伝子の5'上流3kbをクローニングした。さらに、ルシフェラーゼアッセイにより、小胞体ストレスによりNOX5遺伝子の発現誘導に必要な領域は、-3kbから-2kbの1kbであることを見出した。また、小胞体ストレスにより誘導される神経細胞死のメカニズムを明らかにする目的で、アポトーシスシグナルを解析した結果、カスパーゼ4が直接カスパーゼ9を活性化させる経路を明らかにした。また、昨年度までの検討で、脊髄における運動神経の生存と機能維持へのアペリン/APJシステムの関与が示唆されている。そこで本年度は、ALSの病態進行におけるアペリンの役割を明らかにする目的で、ALSモデルマウスであるSOD1(G93A)transgenicマウスとアペリンノックアウトマウスを交配させ、ダブルミュータントマウスを作製し、運動神経細胞数、ミクログリアの活性化、運動機能障害について検討した。その結果、ダブルミュータントマウスにおいて、コリンアセチルトランスフェラーゼ抗体を用いた免疫組織化学的染色により染色された運動神経細胞数は、SOD1(G93A)マウスと比較して有意に減少した。また、ダブルミュータントマウスでは、SOD1(G93A)マウスでみられる運動機能障害が増悪する傾向を示した。さらに、ダブルミュータントマウスでは、Iba1陽性の活性化ミクログリア数も有意に増加した。

次に、アペリンが直接神経細胞に対し保護作用を示すか否かを明らかにする目的で、ラット胎児より初代培養神経細胞を調製し、代表的な活性酸素種である過酸化水素による細胞死に対するアペリンの保護作用を検討した。その結果、アペリンは、神経保護因子として知られる血管内皮増殖因子(VEGF)の神経保護作用を著明に促進した。このように本年度は、ALSでの運動神経細胞死に対し、アペリンが保護作用を示すこと、アペリンの神経保護作用にはVEGFとの協調的な作用が重要であることを明らかにした。
染色物の耐光性に関する集合説の再検討

セルロース上への反応染料の吸着及び吸着/拡散挙動、染料の本質的な性質と耐光性の関係及び環境条件と退色挙動との関係について検討し、次のような結果を得た。反応染料の中では高親和性に属する二つのモノクロロトリアジン(MCT)基を持つC.I.Reactive Red 120、MCT基一つの典型的なMCT系染料及び比較のために典型的な直接染料のセルロースへの吸着を広い塩及び染料濃度範囲で80°Cで調べた。スルホン酸基数、標準親和力の値(-Δμ°)、吸着の飽和値は異なるが、本質的には同じ吸着挙動を示し、飽和吸着現象が関係しない染料濃度の範囲内で、イオン強度が0.1以上では-Δμ°値は塩及び染料濃度に依存しない一定値を示し、Donnan吸着モデルでほぼ完全に記述できることが分かった。次に、フィルム巻層法によって、セルロース内におけるこれらの反応染料の拡散濃度分布を求め、上で求めた吸着挙動に基づいて吸着/拡散挙動を詳細に検討した。その結果、反応染料のセルロース中の拡散には、直接染料と全く同様に吸着/拡散モデルが成り立つことが分かった。また、飽和吸着の関与する濃度範囲では、拡散係数が濃度と共に著しく増加することも、このモデルで説明できることを示した。次に、10種のMCT系染料で染色した綿布を乾燥時に露光すると、かなりの初期退色とそれに続くゆっくりしたその後の退色という二段階の退色過程が見出される。また、染色セロハンを乾燥時に露光すると、織物でみられた初期退色は消える。環境条件を変えると、その酸化または還元退色挙動は変化を受けるが、両者が拮抗して見かけ上退色が進行しないこともある。染色フィルムの退色挙動にみられる濃度依存性は、殆どがフィルター効果によって説明できる。このように反応染料の吸着及び吸着/拡散過程と染色物の露光による退色挙動には、集合が関与するような現象は全く存在しない。10種のモノクロロトリアジン系反応染料スチルベンヒラゾリン系ジスアゾ(Yellow)、ウレイドアゾ(Yellow R)、フェニレンジアミンジスアゾ(Orange)、CI Rcactive Red4、CI Reactive Red 7、銅フタロシアニン(Cu-Pc)、1:1(Blue-1Cu)及び1:2(Blue-2Cu)型銅錯塩アゾ、CI Reactive Blue 2、ジスアゾ(Brown)で染色したセルロースフィルムを様々な水溶液中で露光し、光酸化及び光還元され易さ、光増感性等を調べた。その結果、好気性の水中でBlue-2Cu、Brown、Yellow R、Orangeは光還元退色を示した。染色物の退色は、染料の化学構造、環境条件に依存することがわかった。次に、異なる濃度のフィルムを乾燥状態で露光し、退色挙動と退色の濃度依存性について調べた。その結果Blue-2Cuを除いては淡色と濃色の退色の順位が一致し、淡色の方が退色が大きかった。更に綿布を染色し、乾燥状態でフィルムと同様に実験を行い、比較検討した。Yellow,Yellow R,Orange,Brownは、染色の際、吸収時間を長くし、表面染色の影響も調べた。布の退色は、初期退色とその後の退色との2段階に分けられた。フィルムに比べて表面積の大きい織物は、初期退色が大きいことがわかった。染色の際吸収時間を長くしたものは、初期退色が減少し、耐光堅ろう度を増進させた。

反応染料や比較的親和性が高く、集合を起こすと思われるものを調べたが、フィルム及び布上の退色挙動は染料の本質的な性質や環境条件に依存し、集合等の染料の物理的な性質に関係するという結果は求められなかった。更にこの事実を確かめるため、広い範囲の塩濃度(0.01ー0.5moldm^<-3>の硫酸ナトリウム)で、C.I.Reactive Red 120の吸着挙動を80°Cで調べた。低い塩濃度では、見かけの直接性が低下すること、飽和吸着現象が見出されること、この飽和吸着現象は塩濃度に依存しないこと等が確かめられたが、集合の証拠は見出せなかった。セルロース上への反応染料の吸着及び吸着/拡散挙動、染料の本質的な性質と耐光性の関係及び環境条件と退色挙動との関係について検討し、次のような結果を得た。反応染料の中では高親和性に属する二つのモノクロロトリアジン(MCT)基を持つC.I.Reactive Red 120、MCT基一つの典型的なMCT系染料及び比較のために典型的な直接染料のセルロースへの吸着を広い塩及び染料濃度範囲で80°Cで調べた。スルホン酸基数、標準親和力の値(-Δμ°)、吸着の飽和値は異なるが、本質的には同じ吸着挙動を示し、飽和吸着現象が関係しない染料濃度の範囲内で、イオン強度が0.1以上では-Δμ°値は塩及び染料濃度に依存しない一定値を示し、Donnan吸着モデルでほぼ完全に記述できることが分かった。次に、フィルム巻層法によって、セルロース内におけるこれらの反応染料の拡散濃度分布を求め、上で求めた吸着挙動に基づいて吸着/拡散挙動を詳細に検討した。その結果、反応染料のセルロース中の拡散には、直接染料と全く同様に吸着/拡散モデルが成り立つことが分かった。また、飽和吸着の関与する濃度範囲では、拡散係数が濃度と共に著しく増加することも、このモデルで説明できることを示した。次に、10種のMCT系染料で染色した綿布を乾燥時に露光すると、かなりの初期退色とそれに続くゆっくりしたその後の退色という二段階の退色過程が見出される。また、染色セロハンを乾燥時に露光すると、織物でみられた初期退色は消える。環境条件を変えると、その酸化または還元退色挙動は変化を受けるが、両者が拮抗して見かけ上退色が進行しないこともある。染色フィルムの退色挙動にみられる濃度依存性は、殆どがフィルター効果によって説明できる。このように反応染料の吸着及び吸着/拡散過程と染色物の露光による退色挙動には、集合が関与するような現象は全く存在しない。
頻発する大規模山火事に駆動される物質循環プロセスの解明：植生－土壌系の再精査

近年の全球的な温暖化に伴い、山火事の規模・頻度が増大している。山火事後の植生回復は、陸域における炭素動態を規定する主要因である。しかしながら、山火事攪乱後の植生回復を支える土壌代謝プロセスについては、きわめて限られた知見しかない。本研究では、山火事後の養分循環における土壌と植物の関わりに着目することで、これまでの陸域生態系の炭素動態の知見を一新する可能性を秘めた地下部養分動態の詳細を検証した。近年、全球的な温暖化に伴って、山火事(林冠火事)の規模・頻度が増大している。山火事は、陸域の炭素動態に関わる重要な事象である。とくに、山火事後の植生回復は、陸域における炭素隔離を規定する主要因である。しかしながら、山火事攪乱後の植物の成長(植生回復)を支える土壌代謝プロセスについては、きわめて限られた知見しかない。そこで本研究では、山火事後の養分循環における植物の地下部根系の役割に着目した。植物根系は地上部が燃焼しても土壌中に残存する傾向があるために、山火事後の生物相の回復は、根系からの可給態養分の供給に依存している可能性が高い。本研究では、この着想をもとに、これまでの陸域生態系の炭素動態の知見を一新する可能性を秘めた地下部養分動態の詳細を検証する。以上の目的のもと、アメリカ合衆国カリフォルニア州のヨセミテ国立公園において2014年夏に発生したエルポータル火事跡において、野外調査を開始した。2015年度においては、合計3度現地を訪問し、分解実験を開始し、適宜サンプルを回収している。同時に、植物相と土壌動物相さらには、土壌微生物量の測定を行っている。当初計画通りの野外実験を開始した。すでに複数回現地を再訪し、化学分析、生物相データの取得を開始した。すでに一部データに関しては、日本生態学会にて発表し、現在学術論文として公表する準備を進めている。1大規模な山火事(林冠火事)の後に燃えずに残った地下部現存量(根量)を把握する。2燃え残った樹木根系リターの分解速度(無機度速度)と分解に伴う養分放出量を把握する。3土壌動物相と植物相の回復に対する根リターの寄与率を定量化する。4得られた結果を依存の植生動態モデルに組み込み、大規模山火事後の陸域生態系回復の予測に地下部からの駆動による植生回復への影響を評価する。以上より、局所スケールにおける炭素・養分動態の定量化から、広域スケールにおける植生動態へと積み上げ、気候変動下における陸域生態系の物質循環プロセスを一新することを目指す。以上の目的のもと、アメリカ合衆国カリフォルニア州のヨセミテ国立公園において2014年に発生したエルポータル火事跡において、野外調査を実施した。2015-2016年度にかけて合計5回現地を訪問し、植生及び土壌調査、野外分解試験、植物及び動物相の調査、植物及び微生物バイオマスの調査を実施してきた。得られた成果については、日本生態学会などにおいて順次発表を行ってきた。当初計画通りの野外調査と野外試験を実施してきた。科学分析や生物相のデータの取得も順調に進んでおり、計画以上のデータも取得できた。すでに一部成果については、日本生態学会にて発表を行った。また、計画概要については、カナダ・トロント大学など海外においても発表をする機会を得た。近年の全球的な温暖化に伴い、山火事(林冠火事)の規模・頻度が増大している。本研究では、この着想をもとに、これまでの陸域生態系の炭素動態の知見を一新する可能性を秘めた地下部養分動態の詳細を検証した。

以上より、局所スケールにおける炭素・養分動態の定量化から、広域スケールにおける植生動態へと積み上げ、気候変動下における陸域生態系の物質循環プロセスを一新することを目指すものである。以上の目的のもと、アメリカ合衆国カリフォルニア州のヨセミテ国立公園において2014年に発生したエルポータル火事跡において、野外調査を実施した。2015-2017年度にかけて合計6回現地を訪問し、植生及び土壌調査、野外分解試験、植物及び動物相の調査、植物及び微生物バイオマスの調査を実施してきた。得られた成果については、日本生態学会などにおいて順次発表を行ってきた。近年の全球的な温暖化に伴い、山火事の規模・頻度が増大している。山火事後の植生回復は、陸域における炭素動態を規定する主要因である。しかしながら、山火事攪乱後の植生回復を支える土壌代謝プロセスについては、きわめて限られた知見しかない。本研究では、山火事後の養分循環における土壌と植物の関わりに着目することで、これまでの陸域生態系の炭素動態の知見を一新する可能性を秘めた地下部養分動態の詳細を検証した。今後も継続して現地調査を行う。山火事後の植物リターの分解過程、土壌代謝系への還元、生物相の回復と変化を継続してモニタリングする。今後も計画して現地調査を行う。山火事後の植物リター分解、土壌代謝や化学組成、生物相の回復の継続モニタリングを行う。得られた成果をまとめて学術論文を公表する。29年度が最終年度であるため、記入しない。森林生態学29年度が最終年度であるため、記入しない。
ＭＲＩ形態・定量情報と計算機シミュレーションを融合した腫瘍内治療予測システム開発

磁気共鳴(MR)分子イメージング技術と,計算機シミュレーション技術を融合した,腫瘍内治療効果予測システムの構築に向けて,微小領域の変化を経時的に取得した形態情報・多角的定量情報より検出するためMR撮像・定量画像化法を検討するとともに,その状態変化を計算機内で模擬するための数理モデルの検討を行った.微小領域の変化を捉えるためのMR撮像・定量画像化法の検討に関しては,臀部皮下に腫瘍細胞を移植したモデルマウスの形態・腫瘍内定量情報の経時的変化を捉えるため,種々のMR撮像法の適用・条件検討を実施した.形態変化に関しては,スピンエコー法を用いて取得したT1強調画像,T2強調画像により,体外から直接確認できない領域への拡大状況を取得できた.また,MR血管画像化法を用いることにより,腫瘍内部の血管構築の状況を捉えることができたこと,またグラディエントエコー法を用いて取得したT2*強調画像より,初期の段階から,微小な出血領域が存在し始めていたことを確認できた.定量情報としては,複数のエコー時間TEを用いて取得したT2*強調画像より導出したR2*値,複数の繰り返し時間TRとTEを組み合わせて取得したMR画像より取得したT1・T2定量値,MR拡散強調画像化法より取得した拡散係数が,経時的に変化していたことが確認できた.これらの定量値の変化を形態情報と組み合わせることで,腫瘍内の変化をより詳細に捉えることができると考えられた.また腫瘍内の状態変化を計算機内で模擬するための数理モデルの検討に関しては,他の研究分野において計算機シミュレーションを行うときに使用されている数理モデルの調査を行うとともに,計算機シミュレーションに使用する形態・多角的定量情報の検討を開始した.磁気共鳴(MR)分子イメージング技術と,計算機シミュレーション技術を融合した,腫瘍内治療効果予測システムの構築に向けて,微小領域の変化を経時的に取得した形態情報・多角的定量情報より検出するためMR撮像・定量画像化法を検討するとともに,その状態変化を計算機内で模擬するための数理モデルの検討を行った.微小領域の変化を捉えるためのMR撮像・定量画像化法の検討に関しては,臀部皮下に腫瘍細胞を移植したモデルマウスの形態・腫瘍内定量情報の経時的変化を捉えるため,種々のMR撮像法の適用・条件検討を実施した.形態変化に関しては,スピンエコー法を用いて取得したT1強調画像,T2強調画像により,体外から直接確認できない領域への拡大状況を取得できた.また,MR血管画像化法を用いることにより,腫瘍内部の血管構築の状況を捉えることができたこと,またグラディエントエコー法を用いて取得したT2*強調画像より,初期の段階から,微小な出血領域が存在し始めていたことを確認できた.定量情報としては,複数のエコー時間TEを用いて取得したT2*強調画像より導出したR2*値,複数の繰り返し時間TRとTEを組み合わせて取得したMR画像より取得したT1・T2定量値,MR拡散強調画像化法より取得した拡散係数が,経時的に変化していたことが確認できた.これらの定量値の変化を形態情報と組み合わせることで,腫瘍内の変化をより詳細に捉えることができると考えられた.また腫瘍内の状態変化を計算機内で模擬するための数理モデルの検討に関しては,他の研究分野において計算機シミュレーションを行うときに使用されている数理モデルの調査を行うとともに,計算機シミュレーションに使用する形態・多角的定量情報の検討を開始した.
炭素貯留効果を考慮した堆肥等家畜ふん尿由来有機質肥料利用の環境負荷低減効果の検証

家畜が排泄する栄養素量は、家畜ふん尿由来肥料の施用による環境影響を決める主要な要因の一つである。家畜が栄養素を1日・1頭あたりでどれだけ排せつするかを表す排せつ量原単位は、従来の原単位が提案されてから約20年が経過しており、特に鶏において実態との乖離が大きくなってきている。そこで、今年度は最新のデータを用いて、改めてブロイラーおよび採卵鶏排せつ量原単位の推定を行った。鶏排せつ量原単位は、全体量・全体の流れから推定するトップダウン法(全国ベース)と細部の結果を積み上げて推定するボトムアップ法(個体ベース)の、2つの手法を用いて推定した。その結果、推定された排せつ量原単位は、採卵鶏では両手法でよく一致しており、従来の値と比較して窒素では33%小さかった。ブロイラーでは、ボトムアップ法で得られた窒素排せつ量は従来の値と比べ29%小さかった。一方、リンとカリウムは従来の値と比較して同等か大きかった。ブロイラーでは、ボトムアップ法で得られた値がトップダウン法のものより大きいが、これは飼養羽数の統計調査法の変更に起因していた。ボトムアップ法において、飼養羽数/出荷羽数比に出荷日齢の短縮を加味して求めた係数0.154を出荷羽数に乗じて得られる補正後飼養羽数を用いることで、両手法を用いた窒素排せつ量はほぼ一致し、従来の算出法を用いた場合と比べて46%小さかった。改定された窒素排せつ量原単位を用いて我が国における鶏ふんに由来するN2O排出量を算出すると、従来の値を用いた場合と比較して、二酸化炭素量換算で年間約60万トン減少するものと算出された。本研究では、ローザムステッドカーボン(RothC)モデルを用いた土壌炭素量変化の予測から堆肥等家畜ふん尿由来肥料の炭素貯留効果を明らかにすると共に、適切な評価範囲を設定することで、ふん尿肥料の環境負荷低減効果を定量的に明示しその利用促進に資することを目的とする。本年度は、炭素貯留効果等、ふん尿肥料利用に関する環境への影響の解明に着手した。RothCモデルには家畜ふん用の初期パラメータが設定されているが、実際には畜種やふん尿処理方法により、ふん尿肥料の施用後の土壌中における分解性は異なると考えられる。そこで、RothCモデルを用いた土壌炭素量変化シミュレーションにふん尿肥料の分解性の違いを反映させることができるかどうか検討を行った。その結果、繊維成分含量を用いて分解性に関するパラメータを設定することが可能と考えられた。この結果に基づき、全国の農家や堆肥センター、試験場からのふん尿肥料サンプルの収集とその分析を進めた。現在、畜種等の要因による成分含量の差異を解析しているところである。続いて、ふん尿肥料製造すなわちふん尿処理プロセスからの環境負荷をどのように評価に含めるか、適切な評価範囲の設定方法を検討した。その結果、ふん尿処理の環境負荷を主産物である畜産物と副産物であるふん尿肥料の間で按分することを回避するため、畜産と耕種の両方を一つのシステムとして評価する(システム拡張)ことが有効であると考えられた。ふん尿肥料利用に関する環境への影響の解明に関して、畜種やふん尿処理方法により分解性の違いを考慮した炭素貯留効果について検討を進めるなど、おおむね計画どおりに進捗した。前年度に引き続き、ふん尿肥料サンプルの収集とその分析を行い、畜種等の要因による成分含量の差異の解析を進める。また、ふん尿処理プロセスからの環境負荷をどのように評価に含めるかに関する適切な評価範囲(システム境界)の設定方法について、設定したシステム境界に基づき実際に解析を実施し、その有効性を確認する。

次年度使用額206,400円は、研究費を効率的に使用したことおよび現地調査用旅費の使用が少額に留まったことによる残額である。本研究課題の推進のため、次年度使用額は次年度に請求する研究費と合わせて交付申請時の計画どおり使用する。
エンドトキシン投与によるマウス胸腺におけるアポトージス

エンドトキシン投与によるマウス胸腺細胞の細胞死がアポトージスによって引き起こされるかどうか検討した。4週令のBALB/cマウスに大腸菌0111由来エンドトキシンを100mg腹腔内に投与し、各時期に胸腺を摘出し、細胞浮遊液調製後、DNAの抽出を行った。fragmented DNAは、遠心によって高分子のDNAから分離され、アガロースゲル電気泳動で解析された。【.encircled1.】10mug以上のエンドトキシン投与でアポトージスが誘導され、投与量に依存して増大した。【.encircled2.】アポトージスは、エンドトキシン投与後、6時間目から検出され、18時間目に最も強く、4日目には消退した。【.encircled3.】PI染色による裸核当たりのDNA量は、エンドトキシン投与マウスに明らかに少ないものが検出された。【.encircled4.】エンドトキシン100mugを投与したマウスでは、胸腺のみに明らかなfragmented DNAが検出できたが、骨髄、脾臓、リンパ節では検出できなかった。【.encircled5.】副腎を摘出したマウスにエンドトキシンを投与したが、副腎摘出マウスでは、胸腺でのアポトージスが認められなかった。【.encircled6.】マウスより胸腺を摘出し、胸腺細胞の細胞浮遊液を作り、in vitroでエンドトキシンを作用させたが、アポトージスは全く認められなかった。【.encircled7.】エンドトキシン投与と同時に抗TNF抗体を投与したが、抗TNF抗体処理群ではアポトージスは誘導されたが、その程度は抗体非投与群に比較して弱かった。エンドトキシンによるマウス胸腺細胞の破壊が、アポトージスによって引き起こされることを明らかにした。この胸腺におけるアポトージスでは副腎皮質ホルモンが主要な役割を果たしていること、さらにTNFも部分的に関与していることも明らかにした。
超伝導素子を用いた心磁界計測技術の開発とその医学応用に関する研究

平成4年度においては、昨年に引続き心磁界計測の臨床的な有用性、特に致死的な不整脈に関して、その発生源位置を心磁界計測からはどの程度に正確に推定できるかを電気生理学的検査、核磁気共鳴法などを併用して検討した。心磁界計測は、当初の予定通り電子技術総合研究所において、一次微分型のDC-SQUIDを用いて行われた。対象例はWPW症候群例4例であった。福島県立医科大学においては、電気生理学的検査において心腔内マッピングにより不整脈発生源の位置確認が行われ、その位置を核磁気共鳴法による面像から解剖学的位置を推定した。内一例は副伝導路切断術をうけ、術中に心表面マッピングによっても副伝導路の位置を確認した。心磁界計測からの位置推定は前胸部の約90点より心磁図を得て、最小自乗法を用いて推定した。その結果、電気生理学的検査より獲られた不整脈発生源位置と、心磁界計測より獲られた位置との差は5mm以内であることが明らかとなった。この値は心磁界計測および電気生理学的検査における位置精度の誤差程度であった。以上より、心磁界計測による不整脈発生源の位置推定は比較的に正確であり、臨床的な有用性も示唆された。今日、薬剤抵抗性の不整脈に対してcatheter ablationが行われるようになっているが、この際の位置決め、また外科的治療時においても、本法は貴重な情報を提供するものと考えられた。平成3年度において,心磁界計測の臨床的な有用性,特に致死的な不整脈に関して,その発生源位置を心磁界計測からはどの程度に正確に推定できるかを電気生理学的検査,核磁気共鳴法などを併用して検討した。検討の場所,装置は当初の予定通り,電子技術総合研究所において一次微分型のDCーSQUIDを用いて行われた。対象例は心室頻拍例1例,WPW症候群例2例であった。福島県立医科大学においては,電気生理学的検査において心腔内マッピングにより不整脈発生源の位置確認が行われ,その位置を核磁気共鳴法による画像から解剖学的位置を推定した。心磁界計側からは最小二乗法を用いて発生源を推定した。その結果、電気生理学的検査より得られた不整脈発生源位置と心磁界計測より得られた位置との差は5mm以内であることが明らかとなり,心磁界計測が不整脈発生源の位置推定に極めて有用であることを明らかにした。今日,薬物低抗性の不整脈に対しcatheter ablationが行われるようになっているが,この際の位置次め,又,外科的治療時においても貴重な情報を提供する可能性を,我々の成果は指援しているものと考えられる。今後も例を重ね,又,実際の治療をも加え更に検討の予定である。
戦後台湾文学における「戦争記憶」に関する基礎的研究

戦争と文学というテーマは、東アジアの在り方、その後の人々の意識や価値観の変化と大きな関係を持つ。太平洋戦争は世代の異なる多くの台湾人作家が題材とし、読者に幅広く読まれてきた。本研究では、1戦後台湾文学における「戦争記憶」をめぐる作品について、三名の台湾人作家(陳千武、李喬、呉明益)による太平洋戦争にまつわる小説を読解し、その多元的な出現を解明する。2戦後台湾文学を70年の時間軸で捉え、「戦争記憶」の問題を扱う台湾文学が如何にして受容されてきたのかを問う。3多元的な創作の出現と読者の受容が如何なる社会的意味を持つのかを調査し、文学作品における「戦争記憶」が台湾人にもたらした意味を考察する。