hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
珪肺症とモデルとした環境要因に対する高感受性集団の分子生物学的解析

遊離珪酸SiO_2に長期にわたって曝露され,重症の珪肺症を発症した集団をこの環境要因に対する高感受性集団とし,この集団の遺伝学的解析をさらに進めた.これまでにHLAタイピングの完了した珪肺症の患者集団より無作為に46名を選んで末梢血白血球よりDNAを抽出し, HLAあるいは補体第4成分(C4)遺伝子DNAをプローブとして制限酵素DNA断片長多型(Restriction Fragment Length Polymorphism:RFLP)解析を行なった.この対象集団においても前回と同様,正常集団に比しHLA-Bw54, w59, DR4の増加とBw52, DR2の減少を認めた.HLA-クラスII領域は, DQαおよびDQβ遺伝子DNAをプローブにした場合のRFLPにより, AからJまで12種のハプロタイプに分けられるが,患者集団では, Dw12DB7と相関するCハプロタイプが有意に減少し, Dw15, DKT2, DRw8に相関するDハプロタイプがやや増加傾向を示した. C4遺伝子をプローブにしたRFLP解析では, Bw54, Bw59に相関するハプロタイプである3, 5, 7ハプロタイプが,急性増悪型で有意に増加し,特に自己免疫疾患合併群で最も強い相関を示した.自己免疫合併群に, HLAクラスIII領域の特定のタイプが有意に増加していることから,発症後の合併症の発症に宿主の遺伝要因,特にHLA-クラスIII領域の遺伝子が重要な役割を果たしていることが強く示唆された.自己免疫疾患合併群の中では,慢性関節リウマチ(RA)との合併が最も多く,一般集団においても, RAとHLA-Bw54+DR4との強い相関が報告されていることから,珪肺症患者集団においては遊離珪酸に曝露されることにより, RA発症が促進されることが示唆された.以上のように,発症後の予後あるいは合併症の発症率を患者のRPLP解析によりある程度予測することが可能であることが示された.今後さらに症例数を増やすと共に, HLAの他の領域あるいは,他の遺伝マーカーのDNAプローブを用いた詳細な遺伝要因の解析を進めてゆきたい.遊離珪酸SiO_2に長期にわたって曝露され,重症の珪肺症を発症した集団をこの環境要因に対する高感受性集団とし,この集団の遺伝学的解析をさらに進めた.これまでにHLAタイピングの完了した珪肺症の患者集団より無作為に46名を選んで末梢血白血球よりDNAを抽出し, HLAあるいは補体第4成分(C4)遺伝子DNAをプローブとして制限酵素DNA断片長多型(Restriction Fragment Length Polymorphism:RFLP)解析を行なった.この対象集団においても前回と同様,正常集団に比しHLA-Bw54, w59, DR4の増加とBw52, DR2の減少を認めた.HLA-クラスII領域は, DQαおよびDQβ遺伝子DNAをプローブにした場合のRFLPにより, AからJまで12種のハプロタイプに分けられるが,患者集団では, Dw12DB7と相関するCハプロタイプが有意に減少し, Dw15, DKT2, DRw8に相関するDハプロタイプがやや増加傾向を示した. C4遺伝子をプローブにしたRFLP解析では, Bw54, Bw59に相関するハプロタイプである3, 5, 7ハプロタイプが,急性増悪型で有意に増加し,特に自己免疫疾患合併群で最も強い相関を示した.自己免疫合併群に, HLAクラスIII領域の特定のタイプが有意に増加していることから,発症後の合併症の発症に宿主の遺伝要因,特にHLA-クラスIII領域の遺伝子が重要な役割を果たしていることが強く示唆された.自己免疫疾患合併群の中では,慢性関節リウマチ(RA)との合併が最も多く,一般集団においても, RAとHLA-Bw54+DR4との強い相関が報告されていることから,珪肺症患者集団においては遊離珪酸に曝露されることにより, RA発症が促進されることが示唆された.以上のように,発症後の予後あるいは合併症の発症率を患者のRPLP解析によりある程度予測することが可能であることが示された.今後さらに症例数を増やすと共に, HLAの他の領域あるいは,他の遺伝マーカーのDNAプローブを用いた詳細な遺伝要因の解析を進めてゆきたい.
日本固有のシティズンシップに基づく社会科教育内容の開発・実践・検証・改善

研究の結果、第1に日本の子ども達が市民性意識の第一要件として道徳心を置いていること、それは英国等のヨーロッパ諸国と大きく異なること。第2に日本の市民性教育実践は道徳心に基づく意思決定を論理的思考に変えるべく、思考力や分析力育成を目指す実践が多いことを明らかにした。それらの調査・分析を踏まえ、子ども達が持つ市民性意識を批判的に検討する社会科教育実践をデザインし、実践を通してその有効性を検証した。本年度は、(1)日英シティズンシップ教育における教育実践(教育内容と教育方法)の固有性を、教育思想並びに文化的基盤から明らかにすること、(2)シティズンシップ意識調査(学生並びに教員対象)とその研究方法論の分析と開発、という2点を主に進め、以下2点を明らかにした。第1は、本研究の分析フレームワーク(「文化心理学の研究成果を市民性意識調査研究へ応用し、調査研究を基盤に帰納的に授業構成の違いを分析する」)に基づき、法関連教育を事例に日英の教科書分析を行い、両国における教育実践の固有性を教材構成と学習環境の2点から明らかにした。その結果、日本の法関連教育が規範意識の上に態度があり、そこから社会的行動力を備えるという階層構造を採用していることを明らかにした。すなわち、社会的行動力は基本的生活習慣や規範意識といった、知識としての道徳的な素養を基盤としており、実践的な活動をベースに考える英国におけるシティズンシップ教育とその論理が大きく異なることを以下の論文で明らかにした。第2に、シティズンシップ教育実践とその授業構成論の違いを市民性意識の関係から帰納的に分析する研究方法論を明らかにした。その結果、諸外国で実施しているシティズンシップ教育に関わるカリキュラムや教材、授業分析から演繹的な方法で学習原理やその実効性という方法論ではなく、子どもの持つ市民性意識が教師による教育実践とどの程度接近しているかに焦点を当て、帰納的にシティズンシップ教育実践の違いとその論理を解明する研究方法論を開発し、具体的な調査結果とともに以下の論文に掲載した。田中伸「シティズンシップ教育実践の多様性とその原理-学習環境を基底する市民性意識の解明を通して-」『教育方法学研究』日本教育方法学会、第36巻、2011(印刷中)。本年度は、(1)シティズンシップ教育の固有性を授業開発と実践を通して解明すること、(2)シティズンシップ教育における固有性の基盤である日英の市民性教育研究方法論的特質を分析、その課題の解明を行うという2点を主に進め、以下2点を明らかにした。第1は、シティズンシップ教育の固有性として、目英において社会事象に対する価値判断基準が異なることを明らかにし、日本の子ども達の価値判断基準を分析するための授業を開発、それを実践した。具体的には、「インスタント商品」の使い分けを事例としたパイロット研究を大阪市内の小学校にて実践した。その結果、理解型ではなく探究学習の形を取る事で、価値判断基準の明確化、並びに相対化が可能であることを解明し、以下の論文にそれを示した。第2に、シティズンシップ教育の固有性の前提として、市民性教育研究方法論の違いが存在することを解明し、英国を事例に典型的な教育研究の論理を解明した。その結果、英国の市民性教育研究方法論が大きく(1)記述的アプローチ、(2)因果的推論アプローチ、(3)経験的推論アプローチという、大きく3つの方法論に分類することが出来ることを示し、各々の特質と課題を解明した。その結果を以下の論文に示した。田中伸「英国市民性教育研究の方法論的特質-3つのアプローチにみられる研究目的・内容・方法の特質と課題-」『社会科教育論叢』全国社会科教育学会、第48集、2012、pp.87-96。また、上記研究成果を通じて、過日から実施している市民性意識調査の質問に課題があることが分かり、質問内容の再検討を行った.その検討結果を踏まえて、意識調査の質問紙と調査方法の再構築を行った。本年度は、第1に前年度に引き続き市民性意識調査を実施、調査結果を整理、分析すること、第2に英国人市民性教育研究者を招聘し、調査結果の報告、国際的なレベルで成果の検討を行うこと、第3に地域固有の市民性を基盤とした学習材の開発、実際の学校現場で実践すること、以上3点を主眼とし、研究を進めた。その結果、以下2点を明らかにした。第1は、前年度までの調査結果をふまえ、英国及びギリシャの初等、中等学校でアンケート調査を実施し、その結果を分析した。その結果、一例として、日本では市民性の判断基準として62.7%の子ども達が道徳的要素を選択していることに対して、英国(イングランド)では4.5%がその第一要件として選択していた。英国の学校では、50%の子ども達がコミュニティーへの貢献を選択しているところから、国の違いに基づく市民性意識の要素、及び価値判断基準の違いを明らかにした。本分析結果は市民性教育研究国際学会(Citized, 2013)で発表する。

また、このような市民性意識の違いとして、国ごとに重視する市民性教育研究の内容と方法が異なること、それは学校教育現場への還元方法の相違へ直接的に結びついていることをCiceの論文で示した。第2に、2012年3月、University of Leicesterより市民性育成教育の研究者であるDr. Michalis Kakosを本学へ招聘し、研究結果の検討会を行った。その結果、地域固有の市民性の理論と実践の往還として、アクティビティー型の学習活動の提案を受け、高等学校の公民学習「自由って何?」を開発、大阪府内の高等学校で実践、授業結果の分析検討を行った。以上、2点を通して、地域及び国固有の市民性意識の比較分析、市民性に基づく学習材開発と実践を行った。その結果、地域固有の市民性教育内容開発の論理の解明、論理に基づく学習材を実践の場で検証した。研究計画に基づいた手続きに従い、資料収集、資料分析、分析枠組みの設定、仮説設定、仮説の検証(修正)まで、順調に進展しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は仮説の修正、並びに報告を中心に行う。具体的には、イギリスにおける当該領域の第一人者を日本へ招聘し、本研究で作成した指導案や研究仮説を共に検討する。また、可能であれば再度英国へ調査に行き、特徴的な市民性教育実践を行っている学校現場にて質的調査を行い、教師や子どもへのインタビュー調査を行うことが出来れば、より望ましいと考えている。
卵胞発育と閉鎖の調節因子に関する研究

1.ウサギ卵巣の潅流系を用いた基礎実験により以下の知見が得られた.(2)卵巣のrenin-angiotensin系がステロイド産生と卵の成熟に関与しており,さらに卵巣局所で産生されるangiotensin IIがprostaglandin産生を促進することにより,排卵を誘起する可能性が示唆された.2.体外受精胚移植症例の卵胞の内分泌環境と血中ホルモンの推移の検討により以下の知見が得られた.(1)形態学的に成熟した卵であっても授精分割能がないものがあり,そのような卵の卵胞液estradiol(E2)及びprogesterone濃度は授精分割卵の卵胞と同レベルであったが,androstenedione(A)濃度が高値であった.(2)血中A濃度が卵胞発育に伴う増加よりも高値になると,採取卵数,授精卵数,分割卵数が低下し,妊娠に至らないことが判明した.これより,血清A濃度は卵胞閉鎖の指標となる可能性が示唆された.(3)GnRHa-hMG刺激周期では,hMG単独刺激周期と比較して卵胞のステロイド産生が抑制されている可能性が示唆されたが,血清A濃度とA/E2比より卵胞のviabilityが高いことが判明した.これより,GnRHa-hMG周期ではリクルートされた卵胞の多くが継続的に発育し,卵胞閉鎖に至るものが少ないことが明らかとなった.しかし,血清LHはhCG投与の3日前までは両群間に有為さは認められず,この卵胞の閉鎖防止とviabilityの維持にはGnRHaによるLHの抑制以外の因子が関与している可能性が示唆された.以上より,卵胞の発育と閉鎖には中枢の因子だけでなく卵巣の局所因子が関与していることが明らかとなった.1.ウサギ卵巣の潅流系を用いた基礎実験により以下の知見が得られた.(2)卵巣のrenin-angiotensin系がステロイド産生と卵の成熟に関与しており,さらに卵巣局所で産生されるangiotensin IIがprostaglandin産生を促進することにより,排卵を誘起する可能性が示唆された.2.体外受精胚移植症例の卵胞の内分泌環境と血中ホルモンの推移の検討により以下の知見が得られた.(1)形態学的に成熟した卵であっても授精分割能がないものがあり,そのような卵の卵胞液estradiol(E2)及びprogesterone濃度は授精分割卵の卵胞と同レベルであったが,androstenedione(A)濃度が高値であった.(2)血中A濃度が卵胞発育に伴う増加よりも高値になると,採取卵数,授精卵数,分割卵数が低下し,妊娠に至らないことが判明した.これより,血清A濃度は卵胞閉鎖の指標となる可能性が示唆された.(3)GnRHa-hMG刺激周期では,hMG単独刺激周期と比較して卵胞のステロイド産生が抑制されている可能性が示唆されたが,血清A濃度とA/E2比より卵胞のviabilityが高いことが判明した.これより,GnRHa-hMG周期ではリクルートされた卵胞の多くが継続的に発育し,卵胞閉鎖に至るものが少ないことが明らかとなった.しかし,血清LHはhCG投与の3日前までは両群間に有為さは認められず,この卵胞の閉鎖防止とviabilityの維持にはGnRHaによるLHの抑制以外の因子が関与している可能性が示唆された.以上より,卵胞の発育と閉鎖には中枢の因子だけでなく卵巣の局所因子が関与していることが明らかとなった.1.体外受精胚移植症例の卵胞のhormonal microenvironmentと血中ホルモンの推移の検討により以下の知見が得られた。(1)形態学的に成熟した卵であっても受精分割能がないものがあり、そのような卵の卵胞ではestradiol及びprogesterone濃度は受精分割卵の卵胞と同レベルであったが、androstenedione濃度が高値であった。(2)血中androstenedione濃度が採卵前に卵胞発育に伴う増加よりも高値になると、採取卵数、受精卵数、分割卵数が低下し、さらに妊娠に至らないことが判明した。以上より、androstenedioneが卵胞閉鎖の指標となる可能性が示唆された。2.ウサギ卵巣の潅流系を用いた基礎実験により以下の知見が得られた。(4)gonadotropinが卵巣のrenin様活性物質及びangiotensin II(Ang II)の産生を促進し、さらにAng IIは卵巣のestradiol及びprostaglandin(PGE2,PGF2a)の産生を直接刺激することが明らかとなった。また卵巣のAng IIの産生を抑制すると、gonadotropinにより誘起される卵の減数分裂再開が抑制されることが判明した。これより、卵巣のrenin-angiotensin系がステロイド産生と卵の成熟に関与しており、さらに卵巣局所で産生されるAgn IIがPG産生を促進することにより、排卵を誘起する可能性が示唆された。ヒト体外受精胚移植症例において, hMG単独刺激周期とGnRHa-hMG刺激周期の内分泌動態と体外受精の成績を比較検討した結果,以下の知見が得られた.1.吸引卵胞数,採取卵数,受精卵数は全てGnRHa併用群がhMG単独群より有意に多数であった。2.血清LHは,day-3,すなわちhCG投与の2日前以降においてのみGnRHa併用群がhMG単独群より有意に低値であった。

血清FSH, estradiol(E2), progesteroneは測定の全期間において両群間に有意差は存在しなかった.このようにGnRHa併用周期では,吸引卵胞および採取卵胞数が有意に多いにもかかわらず,血清E2濃度には差が認められなかったより,卵胞のステロイド産生が抑制されている可能性が示唆された.3.血清androstenedione(A)濃度は卵胞の発育に伴い次第に増加したが,A濃度とA/E2比は全ての期間においてGnRHa併用群がhMG単独群に比し有意に低値であった.これより,GnRHa併用周期では卵胞のviabilityが高いことから明らかとなった.受精卵数,分割卵数とday-1の血清A濃度との間には,6ng/mlまでは正の相関があり,A濃度がそれよりも高くなると,受精卵数,分割卵数は低下し,妊娠に至らないことが判明した.これより,血清A濃度が卵胞発育に伴う増加よりも高値となった周期,すなわち卵胞が閉鎖の過程に移行しつつある周期では,体外受精・胚移植の成績が不良となることが明らかとなった.以上より,血清A濃度は卵胞閉鎖の指標となり得ると考えられた.またGnRHa-hMG周期では,リクルートされた卵胞の多くが継続的に発育し,卵胞閉鎖に至るものが少ないことが明らかとなったが,この卵胞の閉鎖防止とviabilityの維持には,GnRHaによるLHの抑制以外の因子が関与している可能性が示唆された.
非晶質合金における短波長原子振動の伝播挙動

申請者は、これまでに中性子非弾性散乱実験により"フォノン"分散をNi_<67>Zr_<33>非晶質合金において観測している。これより、分散曲線が原子振動状態密度における平均の振動エネルギー付近を中心として減衰振動していることがわかった。短波長になればなるほど原子構造に敏感になるはずで、短波長原子振動のメカニズムを明らかにすることにより非晶質物質の構造について知見を深める事が本研究の目的である。昨年度は、Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金およびNi_<33>Zr_<67>結晶粉末合金を作製し、そのフォノン分散曲線を中性子非弾性散乱により測定した。本年度は、Ni_<67>Zr_<33>非晶質合金との比較による非晶質合金におけるフォノン分散の組成依存性を、フォノン・ライフタイムと減衰振動に着目して詳細に比較・検討を行い、非晶質合金と粉末合金の相違は大きく、非晶質相の短範囲構造は結晶相のそれと全く異なることがわかった。このことはこれまで考えられていたことに反した新しい知見である。一方で、石英ガラスの場合にはフォノン分散は高い波数領域まで音響フォノン的であり、同様の波数領域では光学フォノン的になるNi-Zr非晶質合金とは大きく異なっていることがわかっている。また石英ガラスの場合、結晶相(クリスタバライト)とガラス相のフォノン分散は類似している。これら、Ni-Zr非晶質合金と石英ガラスのフォノン分散の相違は、動的な相関長という非晶質物質においては全く新しい構造スケールの相違であると考え、動的相関長の導出を試みている。平成10年度は,当初の予定通り,Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金およびNi_<33>Zr_<67>結晶合金について中性子非弾性散乱実験を行い,精度の高い動的構造因子S(Q,E)を得ることができた.Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金においても,Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金と同様な"フォノン分散関係"が観測された.すなわち静的構造因子S(Q)の第1ピークまでは音響フォノン的で,それよりもQの大きな領域では光学フォノン的に変化していく様子が観測された.組成の異なる非晶質合金におけるS(Q,E)の詳細な比較検討については現在進行中である.結晶合金には,顕著な光学モードピークが観測されたが,非晶質合金には全くみられなかった.非晶質合金の短距離構造は結晶と類似である,という回折実験に基づいた報告もあるが,ダイナミクスの観点からは類似性はほとんどないと考えている.結晶との違いについても,今後,詳細な比較検討を進める.SiO2ガラスの場合には,S(Q)の第1ピーク以降も音響フォノン的な振る舞いが観測されており,Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金とは全く異なることが明らかになっている.アルカリ金属液体の"フォノン分散開係"は,エネルギー領域こそNi_<33>Zr_<67>非晶質合金よりもずっと低いが,Qが大きくなるに従って光学フォノン的になるという振る舞いは類似している.このことは,Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金における原子配列の乱れは液体のそれに近い,ということを示唆しているのではと考えている.今後,Ni-Zr非晶質合金の組成依存や結晶との差異の検討にとどまらず,SiO2ガラスやアルカリ金属液体との違いに関しても考察を行い,Ni_<33>Zr_<67>非晶質合金における原子配列の乱れを定量的に捉えることを試みる予定である.申請者は、これまでに中性子非弾性散乱実験により"フォノン"分散をNi_<67>Zr_<33>非晶質合金において観測している。
手術材料の薬物代謝研究への利用に対する有用性・信頼性に関する検討

本研究では11例の肝臓(転移性肝癌4例、肝細胞癌7例)を試料として、代表的なcytochrome P450(CYP)分子種の基質8種を用い、疾患および病巣の状況(癌種、肝硬変の併発、線維化等)と薬物代謝能の関連性を中心に検討した。手術により摘出された肝臓を癌病巣、その周囲(病巣より1cm)および見掛け上正常と判断される部位(癌病巣より1cm以遠)に3分割し、それぞれの部位について検討した。CYP活性の測定は、各種CYPに対する選択的な基質を用いて常法に従って行った。対照として米国NDRIより供給されたヒト肝臓を用いた。なお、本研究の実施に当たっては、提供者に対して説明文書および口頭での説明を行った後、文書による同意を得た後行った。また、本研究は、昭和大学医学部医の倫理委員会の審査、承認を得た後実施した。癌患者での各CYP分子種の平均活性は、見掛上正常と考えられる部分においては転移性、原発性の両者間での著しい差はCYP2D6、2C19以外では認められなかった。また、肝硬変の併発や線維化が認められる患者においては転移性肝癌患者では原発性肝癌患者と比較して、CYP2C19、2E1及び1A2で低値が示されたのに対し、CYP3A4活性は高値が示された。更に、癌細胞等の浸潤との関連性に関して検討した結果、浸潤により、CYP2C9、2D6、2E1および3A4で活性の低下が認められ、逆に2D6や1A2では活性の上昇が認められた。癌患者での平均的な各CYP分子種活性は、米国の正常肝での活性と比較して総じて類似した活性が認められたが、CYP2C19に関しては殆どの肝臓で著明な低下が示された。これらの結果より癌、肝硬変等の肝疾患により、各種CYP分子種が受ける影響に差がある事を示唆しており、特にCYP2C19に関してその影響が顕著に認められる事が示された。我々は、平成11年度本研究事業において手術により切除された肝臓試料の研究目的での有効利用に関する基礎的検討を目的とし、提供された手術材料の各部位での代表的CYP分子種活性、含量の検討を行い、手術に伴う種々の影響との関連性について精査した。本年度は、原発性肝癌5例、転移性肝癌3例の計8例について、各種CYP活性、含量を検討した。CYP各分子種の活性測定は、CYP1A2,2C9,2C19,2D6,2E1および3A4について検討した。対照として、HAB協議会より供給されたヒト肝プールドミクロソーム(HPM)を用いた。なお、本研究の実施には、昭和大学医学部医の倫理委員会の審査・承認を受け、提供者より文書によるインフォームド・コンセントを得た。肝細胞癌試料(HCC)では、1A2活性が辺縁部で正常部より約20%の低下、腫瘍部位では、正常部位の約40%の活性を示した。また、2C9、2D6、2E1、および3A4においては、正常部位と比較して腫瘍辺縁部で各分子種とも平均で約10%の低下が示された。

一方、転移性肝癌試料(Meta)では、1A2は正常部位と腫瘍辺縁部でほぼ同等の活性を示したが、2C9、2C19で約20%の低下、2D6、および3A4では約40%の活性低下が認められた。さらに、HPMとの活性比較では、HCCでは正常部位での比較においてCYP1A2、2D6でほぼ同等の活性が示されたが、2E1で約40%の低下、3A4では約50%の低下が示された。更に2C19においては活性の著しい低下が示され、その残存活性はHPMの約10%程度であった。一方、Metaでは、1A2、2C9、2C19、2E1ではHCCとほぼ同様の活性を示したが、3A4の活性低下は若干軽度であった。一方、2D6の活性はむしろ上昇し、HPMの約4倍の高値が認められた。HCCはMetaと比較し、若干活性低下が著しい可能性が示された。
マクロファージを標的とした輸血後鉄過剰症治療薬の探索

輸血後鉄過剰症は、輸血依存患者の生命予後を悪化させる。治療には経口鉄キレート剤が有効であるが、副作用などのため継続できない患者が多い。本研究の目的は、輸血後鉄過剰症の主因であるマクロファージのフェロトーシス(鉄依存性細胞死)を抑制する薬剤の探索である。鉄キレート剤のフェロトーシス抑制効果を増強する薬剤の探索、鉄イオンを不活化するフェリチンの発現を増加させる薬剤の探索する。マクロファージのフェロトーシス評価するアッセイ系として、ヒト単球系培養細胞THP-1とへミンを用いて研究を進めていく。
消化器癌におけるキラーT細胞による自己腫瘍細胞の認識と破壊の分子機構と臨床応用

1.細胞障害性T細胞(CTL)活性はLFA-1-ICAM-1を介した接着とCD-2,CD3,CD8分子を介した結合を必要とし、LAK活性はLFA-1-ICAM-1を介した接着とCD3/TCRcomlexを介さないCD2,CD4を介した結合が関与しており、CTLとLAKの活性化は各々異なった分子を介したシグナルによることを明らかにした。2.胃癌の発生、浸潤増殖、転移の過程で腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の浸潤と共に癌細胞の膜表面に免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリー分子の1つであるICAM-1分子の新たな出現とHLA-ClassII抗原の消失を明らかにしている。また癌性胸、腹水中に存在するTILと癌細胞をT細胞増子因子(TCGF)の存在下で培養するとICAM-1^+の自己腫瘍を破壊するCD8^+CD116^-,CD8^+CD28^+のCTLが誘導されることを明らかにした。3.上記の様に癌に対する宿主の免疫応答はその接触点すなわち癌細胞増殖局所により直接的に現れる。このことと関連してIgM-γ型Igをモノクローナルに産生する形質細胞腫が胃粘膜固有層に限局する形で表層拡大増殖する稀れなしかし極めて示唆に富む症例を発見し発表した。4.全身性に転移した胃癌患者の末梢血リンパ球はCTL或いはLAK活性をeffector phaseで抑制することを示した。このことは末梢血リンパ球中には免疫抑制細胞が存在していることを示している。この免疫抑制細胞はNylen-Woolカラムを通過する細胞ではなく、Nylon-Woolカラムに付着する細胞より成っていることが明らかにされた。このNylon-Woolカラムに付着する免疫抑制細胞のphenotypeを決定するため、各種のモノクローナル抗体と免疫磁気ビーズによるNegative selection或いはpositive selectionを行い、そのeffeetor細胞はCD8^+T細胞とCD8^-CD11b^+細胞であることを明らかにした。(1)胃癌患者の癌性胸腹水中より腫瘍細胞を分離し自己のリンパ球との混合培養(MLTC)とTCGFを添加しキラ-T細胞の誘導を行っている。この際使用する自己のリンパ球はナイロン・ウ-ルカラムを通過するT細胞を用いると頻度高く誘導出来ることを明らかにしている。このキラ-T細胞のクロ-ン化を図るべく実験中である。(2)このキラ-T細胞(CTL)が標的自己腫瘍細胞を殺すためにはT細胞抗原レセプタ-/CD3抗原複合体の関与の前にCTL〓のLFAー1分子と腫瘍細胞上のICAMー1分子が必要であることを明らかにした。LAK細胞の標的細胞障害のメカニズムはCTLと同様LFAー1とICAMー1の結合は必須であるが,LAK細胞上のCD2分子の必要がつよくCTLのそれとは異なることを明らかにし得た。(3)ICAMー1の出現を胃癌細胞で検討したところ...(TwoーcolmFACS解析により)胃源発巣では出現していないことが多く,原発巣で増大,浸潤してゆく過程,ならびに転移巣(癌性腹水中癌細胞)でICAMー1の出現頻度が高いことが明らかにされた。この原因をさらに詳細に検討するため癌組織に浸潤するリンパ球(TIL)の解析を行った。TILではCD8^+CD11b^-,CD8^+CD28^+,CD4^+Leu8^+,HLADR

^+LeuM3^+細胞が多くこれらの細胞より産生されるサイトカインによって癌細胞上にICAMー1が表出されたものと考えられた。4)癌患者の末梢血リンパ球はCTL或いはLAK活性をeffector phaseで抑制するサプレッサ-細胞が存在することが明らかにされた。このサプレッサ-細胞はナイロン・ウ-ルカラムを通過する細胞ではなく,カラムに付着する細胞によっていることが明らかにされた。この付着細胞は現在検討中であるが少くともスクロファ-ジによっているのではなくCD8^+T細胞によっている可能性が大である。さらに詳細に実験し検討中である。2.胃癌の発生,浸潤増殖,転移の過程で腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の浸潤と共に癌細胞の膜表面に免疫グロブリン(Ig)スーパーファミリー分子の1つであるICAM-1分子の新たな出現とHLA-classII抗原の消失を明らかにしている。また癌性胸腹水中に存在するTILに癌細胞をT細胞増殖因子(TCGF)の存在下で培養するとICAM-1^+の自己腫瘍を破壊するCD8^+CDllb^-,CD8^+CD28^+のCTLが誘導されることを明らかにした。3.上記の様に癌に対する宿主の免疫応答はその接触点,すなわち癌細胞増殖局所により直接的に現れる。このことに関連してIgM-K型Igをモノクローナルに産生する形質細胞腫が胃粘膜固有層に限局する形で表層拡大増殖する稀れなしかし極めて示唆に富む症例を発見し発表した。4.全身性に転移した胃癌患者の末梢血リンパ球はCTL或いはLAK活性をeffector phaseで抑制することを示した。このことは末梢血リンパ球中には免疫抑制細胞が存在していることを示している。この免疫抑制細胞はNylon-woolカラムを通過する細胞ではなく,Nylon-woolカラムに付着する細胞よりなっていることが明らかにされた。このNylon- woolカラムに付着する免疫抑制細胞のphenotypeを決定するため,各種のモノクローナル抗体と免疫磁気ビーズによるNegative selection或いはpositive selectlonを行い,そのeffector cellはCD8^+T細胞とCD8^-CDllb^+細胞であるこを明らかにした。
繊毛虫テトラヒメナのII型ミオシン非依存的な細胞質分裂メカニズムの解明

細胞質分裂に関わるミオシンの候補を見つけるために、Tetrahymena thermophilaのゲノム中に存在する13種類のミオシン遺伝子について、cDNA配列と一次構造の特徴を調べ、ミオシンの尾部の機能ドメインを詳細に検討した。その結果、これら13種類のミオシンが尾部の機能ドメインから3種類のサブグループに分かれること、既知のミオシンとは全く異なる新奇ミオシンであることなどが明らかになった。これらの研究成果を論文にまとめGene誌に投稿し、受理された。また、これらのミオシンのうち、テトラヒメナの細胞質分裂に関与するミオシンの候補として、特にコイルドコイルを持つMyo13に注目した。テトラヒメナのMyo13は尾部のコイルドコイルドメインによって、自己会合することで双極性のテトラマーを形成し、収縮力を発生させる可能性が期待される。すなわち、Myo13が細胞質分裂の際にテトラヒメナの収縮環を収縮させる可能性が考えられる。そこでMyo13の機能を検証するために、ソマティックノックアウト法を用いたMYO13機能阻害株の作成を試みた。MYO13遺伝子の5'UTRおよび開始コドンから1kb下流の領域のそれぞれ1.5kbの配列で薬剤マーカーであるパロモマイシン遺伝子を挟み、導入配列コンストラクトとした。このコンストラクトを遺伝子銃によってテトラヒメナ細胞の大核内に導入した結果、ノックアウトに相当する細胞を2株単離することに成功した。こうして得られたノックアウト株について、細胞質分裂への影響を調べた。ノックアウト株について、増殖速度、分裂細胞の形態、各細胞集団中の分裂細胞の頻度をそれぞれ調べたが、今のところ、野生株と異なる明確な表現型は得られていない。現在さらに異なる培養条件下の細胞を解析中である。また、Myo13の局在性を調べるために、Myo13に対するペプチド抗体の作製を試みた。しかし、この抗体はMyo13を特異的に認識しなかった。現在GFP融合Myo13の発現を試みている。
Duchenne型筋ジストロフィーの治療法開発に向けての分子生物学的研究

研究者らは「ジストロフィン神戸」に発見以来、ジストロフィン神戸で認められるスプライシング異常の分子発生メカニズムの解明を行なってきた。そして、ジストロフィンのエクソン内の配列がスプライシング部位決定に重要な役割を果たしていることを世界で初めて明らかにした。この結果から、スプライシング部位決定に重要な役割を果たす塩基配列を人為的に破壊することによりスプライシング異常が誘導できると着想した。そこで、こうした配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて、その破壊実験をHeLa細胞の核抽出液を用いた試験管内のスプライシング系で行なった。その結果エクソン19に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることによりエクソン19がスキップされることを明らかにした。このことはジストロフィンのエクソン19を人為的にスプライシング時にスキッピングさせ、アミノ酸読み取り枠のずれを修正することによるDuchenne型筋ジストロフィーの新しい治療法の可能性を示した。そこで、試験管内の実験で得られた結果を細胞を用いた実験で検証した。同じエクソン19に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドをリンパ芽球の核内へトランスフェクトすることにより、ジストロフィンのエクソン19のスプライシングが誘導されることを確認した。これらの結果は、ジストロフィンmRNAのアミノ酸読み取り枠の修正というDuchenne型筋ジストロフィーの新しい治療法の新しい治療法の開発を大きく促進するものである。本研究はジストロフィンが全く欠損したDuchenne型筋ジストロフィーにおいて「リバータント」と呼ばれるジストロフィン陽性筋細胞が少数出現することに着目し、このジストロフィン陽性細胞の出現メカニズムを分子生物学的に解明し、そのジストロフィン産生機序をDuchenne型筋ジストロフィーの治療に応用しようとするものである。初年度の研究では、通常でも極く微量にしか存在しないジストロフィンメッセンジャーRNA(mRNA)を少数の筋細胞でも解析が可能とするため、超微量のmRNA解析手技の確立を計った。その結果、白血球内のジストロフィンmRNAを逆転写酵素を用いcDNAに変換し、さらに重複PCR法を行なうことによりジストロフィンmRNAの全領域を10断片に分け増幅することに成功した。さらに、「ジストロフィンmRNA前駆体のスプライシングを制御することによりDuchenne型筋ジストロフィーの治療が可能である」という斬新なアイデアに基づき分子生物学的手法を用い検討を行なった。これは、ジストロフィンのエクソン配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用い、スプライシング時にエクソンを人為的にスキップさせるものである。そして、試験管内でアンチセンスオリゴヌクレオチドの作用によりエクソンのスキッピングを誘導させることに成功した。今後、この画期的な結果に基づき筋細胞に直接アンチセンスオリゴヌクレオイドを作用させ治療への応用性を検討する予定である。Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)は頻度の高い極めて重篤な遺伝性筋疾患であるが、未だその根本治療法は確立されていない。本研究ではジストロフィンのmRNAレベルで遺伝情報を修整するDMDの新しい治療法を確立しようとするものである。そして、極く微量にしか存在しない末梢血中のジストロフィンのmRNAを逆転写酵素を用いcDNAに変換し、重複PCRを用いて増幅する超微量mRNA解析システムを確立することに成功した。また、本システムを用い培養細胞中のmRNA解析システムの確立を図ることができた。一方、人工的に作成したジストロフィンのミニジーンから転写されたジストロフィンmRNAのスプライシングをアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて人為的に操作する試験管内の実験を行ない、世界で始めてアンチセンスオリゴヌクレオチドによりスプライシングを制御することに成功した。これらの成果に基づきmRNAのスプライシングを制御することによりDMDの治療が可能だとする極めて斬新なアイデアが仮説として出された。現在この可能性を現実のものとすべく、その基礎実験を行っている。すなわち、ヒトリンパ芽球細胞株培養液にジストロフィンのエクソン配列に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを添加し、添加数時間後に転写されるジストロフィンmRNAを逆転写酵素PCRを用いて解析し、エクソンのスキッピング誘導を確認しようとするものである。

そして、現在までにこのエクソンのスキッピングの誘導が生きた細胞においても可能なことを示唆する予備的な結果を得つつあり、今後のこの研究の推進に大きな研究成果が期待される。本研究は研究者らが発見した「ジストロフィン神戸」で生じたスプライシング異常の発生に関する分子機構の解明結果を基盤として、研究者らが独自に着想したアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いたDuchenne型筋ジストロフィーの新しい治療法を開発しようとするものであ。昨年までに、ジストロフィンのエクソン19に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いることにより、このエクソン19のスキッピングが誘導させることを試験管内の実験系で明らかにしてきた。この結果は、アンチスセンスオリゴヌクチドを用いてエクソンスキッピングを誘導することによりジストロフィンmRNAのアミノ酸読み取り枠のずれを修正することが可能なことを示すものであった。そこで、今回Duchenne型筋ジストロフィーでみられるmRNA上のアミノ酸読み取り枠のいずれを修正する治療法を確立するために培養細胞を用いた実証実験を行なった。ヒトリンパ芽球細胞の培養液中にキャリアーとなるリポフェクタミンと混じったアンチスセンスオリゴヌクレオチドを添加し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの核内への導入を行なった。この導入後培養液中よりアンチセンスセレスオリゴヌクレオチドを除き、さらに12時間の培養を行なった。そして、産生されたジストロフィンmRNAをRT-PCR法で解析した。その結果、アンチスセンスオリゴヌクレオチド処理によりジストロフィンmRNAからエクソン19の配列が完全に消失することが判明した。これは、アンチセンスオリゴヌクレオチドによりエクソン19のスキッピングが誘導されることを世界で初めて示すものであった。これらの結果は研究者が独自に着想したDuchenne型筋ジストロフィーの新しい治療法の確立に大きく貢献するものである。
出土文献に基づく春秋史認識の再検討

第一に、上博簡・清華簡のうち、春秋戦国前期の楚に関わる「成王為城濮之行」「荘王既成」「申公臣霊王」「霊王遂申」「陳公治兵」「平王問鄭寿」「平王与王子木」「昭王毀室」「君人者何必安哉」「命」「柬大王泊旱」、その他の諸国に関わる「鄭武夫人規孺子」「曹沫之陳」「競建内之/鮑叔牙与隰朋之諫」「鄭文公問太伯」「子儀」「子犯子余」「晋文公入於晋」「鄭子家喪」「姑成家父」「競公瘧」「趙簡子」「越公其事」「呉命」について先行研究を批判的に整理した注釈を作成した。『左伝』『国語』との比較分析を進行中であり、前4前3世紀における春秋史認識の展開を解明しつつある。第二に、「『左伝』と鄭」(『中国史学』28、63-81頁、2018年10月)・「経伝長暦考」(『京都大学文学部研究紀要』58、35-142頁、2019年3月)を公刊し、「『史記』の秦史認識」(第63回国際東方学者会議東京会議:シンポジウムII「秦帝国の誕生:英語圏の研究者との対話」、2018年5月18日)・「前4世紀中国における歴史認識の変容:時代区分としての「春秋時代」の出現」(史学研究会大会、2018年11月2日)・「中国先秦史研究の現況:『左伝』とその周辺」(京都大学文学研究科公開シンポジウム「京大古代学の最前線:古代への誘い」、2018年12月8日予定)の講演を行った。第三に研究成果報告書を作成した。報告書の目次は以下の如くである。「周室東遷再考」「中国先秦史研究の現況:『左伝』とその周辺」「『左伝』と鄭」「経伝長暦考」「『左伝』『国語』の歳星記事」「前4世紀中国における歴史認識の変容:時代区分としての「春秋時代」の出現」「「春秋時代」の出現」「睡虎地秦簡年代考:日本における中国古代史研究の現状に寄せて」「The Shih-chi's Perception of Ch`in History」「『漢書』古今人表と春秋史」。平成28年度においては、第一に、近年の研究の進展を踏まえて、研究代表者が作成済みの『郭店楚簡』『上海博物館蔵戦国楚竹書』『清華大学蔵戦国竹簡』の電子テキストを改訂した。第二に、清華簡『繋年』第2章の東遷に関わる記述を素材に「周室東遷再考」(2017)を公刊した。研究代表者は、かつて「周室東遷考」(1990)において東遷の推移を復元したが、『繋年』は東遷に関わる独自の記述を含み、2011年以降、膨大ともいってよい研究が公刊されている。「周室東遷再考」は、〈第一章平王擁立の地〉1南陽の申・2姜姓・3西申、〈第二章攜王擁立の地〉:1カク・2攜、〈第三章平王・攜王の年代〉1平王東遷に関する諸文献の記述・2攜王に関する「旧説」・3『繋年』の年代観、の構成で、『繋年』およびそれに関連する研究の包括的な批判的検討を進めたものである。ついで「『左伝』『国語』の歳星記事」(印刷中)は、『左伝』成書年代に関する古典的研究というべき新城新蔵「歳星の記事によりて左伝国語の製作年代と干支紀年法の発達を論ず」(1928)を批判的に再検討し、『左伝』の歳星記事が385-374BCの歳星観測に基づくことを論じた。ついで「睡虎地秦簡年代考ー日本における中国古代史研究の現状に寄せてー」(印刷中)は、避諱および特定の語彙を手がかりに睡虎地秦簡諸篇の抄写年代を考証し、『秦律十八種』『効律』『秦律雑抄』『法律答問』『封診式』;始皇元年(246BC)五年(242BC)・『為吏之道』;昭襄王五十五年(252BC)荘襄王三年(247BC)・『日書甲種』『日書乙種』;孝文王元年(250BC)以前、という結論を得た。第三に、国際的学術交流として、陝西師範大学講師・王紅亮氏との共同研究「清華簡『繋年』の総合的研究」を発足させ、東方学会主催国際シンポジウム「帝国の誕生ー秦史再考ー」の企画に参加した。平成28年4月交付申請書の「平成28年度の研究実施計画」において、「第一に、近年の研究の進展を踏まえて、研究代表者が作成済みの『郭店楚簡』『上海博物館蔵戦国楚竹書』『清華大学蔵戦国竹簡』の電子テキストを改訂する。...第二に、清華簡『繋年』を素材に前4世紀楚地の先秦史認識を検討する。『繋年』の第14章は西周史に関わる。周武王・成王の周王朝建国に関する記述および厲王から平王の「東遷」に至る記述には独自の材料が窺われる。

『尚書』および清華簡の尚書類似諸篇、『逸周書』『竹書紀年』と相互参照することによって、おおむね前5前3世紀の西周史認識の推移を確認する。...第三に、海外に関連研究機関におもむき、最新の研究情報・研究資料の収集につとめる。...」と記した。「研究実績の概要」に上述の如く、第一は計画とおりに進めた。第二については、『繋年』において最も注目されている第2章の「東遷」について全面的な研究を進め、「周室東遷再考」を公刊することを得た。第三の海外の関連研究機関との学術交流については、中国語圏については、共同研究「清華簡『繋年』の総合的研究」を発足させ、英語圏については、国際シンポジウム「帝国の誕生ー秦史再考ー」の企画に参加した。平成29年度においては、第一に、近年の研究の進展、新資料の公刊を踏まえて、研究代表者が作成済みの『郭店楚簡』『上海博物館蔵戦国楚竹書』『清華大学蔵戦国竹簡』の電子テキストを改訂した。ことに『清華』6(2016)の鄭武夫人規孺子・鄭文公問太伯・子産・管仲・子儀、7(2017)の子犯子餘・晉文公入於晉・趙簡子・越公其事は春秋時代を扱い、本研究課題に直接的に関係する。第二に、戦国中期における春秋史認識の一端を解明するものとして、「左伝と鄭」(印刷中)を執筆した。『左伝』は春秋後期前半における晉の霸權の解体を記述の重点を置く。一方で、鄭人の発言もこの時期に集中している。『左伝』が、この時代を語るにふさわしいものとして鄭人を選好したこと、さらに『左伝』の成書が鄭の滅亡を一つの動機としたことを解明した。ついで後漢前期における春秋史認識の一端を解明するものとして「『漢書』古今人表と春秋史」(2018)を公刊した。まずは『漢書』古今人表が特定の王侯ないし事件に関連する人物を群として排列していること、春秋部分については『史記』以上に『左伝』に取材していることを確認し、後漢前期における左伝学の勃興が、春秋史認識を大きく規定したことを解明した。第三に、東方学会主催のシンポジウム「秦帝国の誕生ー英語圏の研究者との対話」(2018年5月19日)の予稿「『史記』の秦史認識」を執筆した。『史記』に先立つ戦国前漢文献の秦に関する記述を『史記』のそれと比較することで、『史記』の秦史認識の特異性を確認した。本研究課題に直接関連することとしては、まず周の東遷について、『左伝』が晉・鄭を特記するのに対し、『史記』が晉・鄭に全く触れず、もっぱら秦襄公に言及すること、ついで春秋期については『左伝』に由来する穆公に記述量が偏していることを確認した。平成28年4月交付申請書には、研究実施計画として、第一に『郭店楚簡』『上海博物館蔵戦国楚竹書』『清華大学蔵戦国竹簡』の電子テキストの改訂、第二に春秋史を中心とする先秦史認識の推移の解明、第三に国際的学術交流を掲げた。「研究実績の概要」に上述したように、第一については、とくに春秋時代を扱った『清華大学蔵戦国竹簡』6(2016)の鄭武夫人規孺子・鄭文公問太伯・子産・管仲・子儀、7(2017)の子犯子餘・晉文公入於晉・趙簡子・越公其事について電子テキストを作成した。これらはそれぞれ『国語』に類似した短編であり、『左伝』の「抄撮」である繋年と相俟って、戦国中期における春秋史認識の展開を具体的に解明する材料となる。第二については、「左伝と鄭」「『史記』の秦史認識」「『漢書』古今人表と春秋史」の三篇の論文を執筆し、それぞれ戦国中期・前漢中期・後漢前期の春秋史認識の一端を解明した。この作業によって、前4後1世紀のかなり長期間における春秋史認識の推移を展望することが可能となった。第三に国際学術交流としては、東方学会主催のシンポジウム「秦帝国の誕生ー英語圏の研究者との対話」(2018年5月19日)の準備を進めた。Lothar von Falkenhausen(UCLA)・Robin D.S.Yates(McGill Univ.)両教授の参加が予定されており、近年必ずしも活発ではなかった英語圏の研究者との交流に基づく研究の新展開が期待される。
1-ブロモプロパンの中枢神経毒性マーカーとしてのミクログリア活性化

オゾン層破壊化学物質の代替物質として導入されている1-ブロモプロパン0、400、800、1000ppmに一日8時間、週7日、4週間曝露した各群12匹のウィスターラットから剖出した小脳をホモジェネートしたサンプルを用い、thiobarbituric acid reactive substances(TBAS)、カルボニル化蛋白、reactive oxygen species(ROS)、nitric oxide(NO)を定量した。その結果、いずれの指標も量依存的に増加していることがわかった。一方、蛋白濃度は低下していたため、蛋白量あたりでも前記指標を調べたが、やはり量依存的に増加していた。抗CD11b/c抗体を用いて、蛍光免疫組織化学により小脳白質のミクログリアを同定した。CD11b/陽性のミクログリア領域ならびに突起長が1000ppmで有意に増加していた。顆粒層においてはミクログリアを見つけることが困難であったが、やはり活性化したと思われるミクログリアが観察された。変性したプルキンエ細胞の近傍に存在するミクログリアの存在も確認された。本研究により、ミクログリアの形態学的変化が、1-ブロモプロパン暴露による小脳への影響を検知するすぐれた指標であることがわかった。同時に本研究により、酸化ストレスが1-ブロモプロパンの中枢神経毒性の作用機序を説明するひとつの因子であることが明らかとなった。1-ブロモプロパンはヒトにおいて失調歩行を引き起すことが知られているが、その原因については、ヒト症例のさらなる解析とともに動物実験による検証が必要である。外国人特別研究員Kaviarasanは11月28日に来日した。実質4ヶ月の期間に、培養系の確立、詳細な動物実験計画の具体化など、翌年度以降に予定されている実験の準備を行った。最初に培養系の確立を行った。適切な部屋、培地の選定、抗生物質の選択に加え、リポポリサッカライド(LPS)のContaminationがないことの確認、さらにCell Growth、細胞形態が正常であることの確認を得た。入手した別の細胞については、マイコプラズマ感染の可能性があったため、使用しないこととした。翌年度に予定されている一群12匹、3群のウィスターラット(Wistar-ST、SLC)を用い実験に備えるために、灌流固定法、凍結切片作成法、免疫染色条件の最適化を行った。ラットを1-ブロモプロパンに曝露し、中性緩衝化された4%PFA液を用いて、左心室よりポンプを用いた灌流固定を行った。4%PFA液にて後固定し、30%スクロースに置換後、凍結し、クライオスタットを用いて10ミクロン厚の凍結切片を作成した。この切片を用いて、さまざまなグリア関連抗原に対する抗体を用いて免疫染色を行った。免疫染色の半定量的な性格を克服するために、グリア突起の同定など、形態学的な変化に着目した解析を行った。小脳、海馬に絞った解析を行った。また、Nrf2ノックアウトマウスを繁殖し、酸化ストレスと、ミクログリア活性化との間の関係を調べる翌年度の実験に備えた。1-ブロモプロパンがラット小脳のミクログリア活性化を引き起こすかどうか、そして1-ブロモプロパン中枢神経毒性における酸化ストレスの役割りを解明するために、動物実験を行った。48匹の雄性ウィスターSTラットを12匹ずつの4群にわけ、1-ブロモプロパン0、400、800、1000ppmに一日8時間、週7日、4週間曝露した。曝露終了時、各群9匹のラットを断頭し生化学的検索のための小脳、血液サンプルを採取した。カルボニル蛋白レベル,thiobarbituricacid reactive substances (TBARS), beta-amyloid, thrombin, reactive oxygen species (ROS)、nitric oxideを、小脳ホモジェネートを用いて測定した。残り3匹のラットを左心室より4%パラフォルムアルデヒドを用いて灌流固定し、抗cd11b(OX-42)抗体を用いた免疫組織化学のために用いた。1-ロモプロパンによって誘導される酸化ストレスは、小脳におけるカルボニル蛋白、TBARSレベルの上昇により明白であった。beta-amyloid, thrombin, ROS、nitric oxide levelsの量依存的増加も観察した。OX-42の免疫組織化学は、1000ppm群でのミクログリア活性化を示した。本研究は、1-ブロモプロパン曝露が小脳におけるミクログリア活性化を引き起こすことを示した。さらに、酸化ストレスが1-ブロモプロパン中枢神経毒性に関与していることがわかった。

顆粒層においてはミクログリアを見つけることが困難であったが、やはり活性化したと思われるミクログリアが観察された。変性したプルキンエ細胞の近傍に存在するミクログリアの存在も確認された。本研究により、ミクログリアの形態学的変化が、1-ブロモプロパン暴露による小脳への影響を検知するすぐれた指標であることがわかった。同時に本研究により、酸化ストレスが1-ブロモプロパンの中枢神経毒性の作用機序を説明するひとつの因子であることが明らかとなった。1-ブロモプロパンはヒトにおいて失調歩行を引き起すことが知られているが、その原因については、ヒト症例のさらなる解析とともに動物実験による検証が必要である。
原核・真核生物におけるDNAトランスポジションの調節機構の研究

転移DNA因子は、さまざまなDNA再編成を引き起こし、遺伝情報の大きな変化の原因の一つとなっている。このDNA転移は、原核生物においてはその頻度を低く保つことによって、また真核生物では発生過程での時期や組織を限定することにより調節されていると考えられている。これらの性質は、必要以上の変異を抑制し生物集団の中で変異を固定拡大していくために重要な意味を持っていると考えられる。我々は、原核生物の転移DNA因子としては、最も小さい因子であるIS1を、また真核生物のものとしては、トウモロコシのAc因子をとのあげ、それらの転移の調節機構を研究している。これまでの研究で、IS1転移にはinsAとinsBの二つの遺伝子領域が必要であるが、insA領域だけが発現するとinsAとinsBの発現を阻害し、転移を抑制することがわかった。つまり、insAタンパク質は、IS1転移を抑制するリプレッサー機能を持っていると考えられる。Ac因子の研究では、これまで、その転移を容易に検出する方法がなかったが、我々は、Ac転移反応が起こるとウイルスの感染が誘発される方法を開発している。今後は、IS1については、リプレッサーとトランスポゼースの発現様式の関係を、Acについては、方法が確立されれば、これを用いてAc転移を調節している要因を探る計画である。