hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
雇用政策法制/労働市場法制の統制手法に関する構造解明

日本国における職業能力訓練法領域と雇用政策法領域の分断ないし不整合に関する実態について、行政担当者への面接調査および文献調査を進行させており、この成果は、諸外国の同種領域における政策調査に照らして検討される予定である。なお、個別的労働法に関しては、最近の立法状況と法施行について小論を日本労働法学会誌に発表した(次頁参照)。本研究は労働市場を規制する法政策の実効性を高めるための理論構造を探求するものである。1.平成17年度は、労働市場における労働契約成立のプロセスを分析したうえで、雇用政策の法規制が個別契約にどの程度関与し、これを統制すべきかの観点で分析を進めた。日本における最近の構造改革は労働市場領域にも及び、労働者の個別処遇の進行と紛争処理の増加を背景に、私人間における法関係の安定を目指す労働契約法制等の制定が間近に迫っている。そこで労働契約法制の構造を調査分析し、契約の深化を通じた関係構築と紛争処理基準の確立の法政策について、まず研究報告をまとめ、これを共著作として出版した。同時に、若年者の雇用社会への参入と、労働契約の理解の仕方について、市場取引当事者の法的義務ないし責務の所在について、論稿をまとめた。2.1の作業と同時に、本年度は労働市場への参入、取引、あるいは契約成立の斡旋等に関する諸策の原理的考察を進めた。雇用政策の法は、これまで当事者への奨励、インセンティブ付与、規制逸脱者へのサンクション設定に工夫をこらすという手法を採用してきた。しかし最近では、労働市場の行動が、株式市場における評判と連結し、株価の上下を引き起こす事態となっており、つまり取引行動の基準化と、法順守の態様が重要視されている。そこで、労働市場における統制の新しい手法として、コンプライアンス、あるいは企業の社会的責任の類型に関する試論構築に取り組み、従来型手法との比較検討に着手した。この作業は、年度末に論稿をまとめ、他大学のCOEのプログラム内で発表、公刊が予定されている。3.日本における労働市場法の統制スタイルは、公法的な手法が用いられ、最大刑として拘束、懲役および罰金等のサンクションが課される。対して米国連邦法では、民事罰と私法手続きを容れた行政制裁による実行策による統制手法が採用されている。本年度は、行政制裁の運用メカニズムの不明点をなお探求し、これを日本における新しい個別紛争処理法制との比較検討を通じて論稿にまとめる作業を進めた。行政制裁の可能性と、労働審判廷にみる法実効性の異動と展望に関して、本研究の遂行過程が準備となったことになる。
ＧＡＰＤＨカスケードを基軸としたストレス性精神疾患の発症機序解明と治療戦略の構築

前年度までに、物理的ストレスモデルマウス(拘束水浸ストレス)を用いて、海馬GAPDHの遺伝子ノックダウン法および薬理学的手法を用いて、核内GAPDHがグルココルチコイド受容体(GR)と相互作用することで、脳由来神経栄養因子(BDNF)の発現および海馬歯状回における神経新生を抑制し、うつ・不安様行動を発症する可能性を示唆した。今年度は、より臨床病態に酷似する社会性ストレスモデルマウス(母子分離+個別飼育)を用いて検討を行った。その結果、社会性ストレスモデルマウスにおいても、海馬での参加ストレスの発生、腹側海馬錐体細胞におけるGAPDHの核移行および歯状回での神経新生抑制が認められた。さらに、行動薬理学的解析では、特に社会性相互作用が著名に減弱していることが明らかとなった。また、この社会的相互作用障害は、GAPDH核移行阻害剤の投与によって、ほぼ正常群と同値にまで回復した。以上の結果から、社会性ストレスにおいても、GAPDH核移行がうつ・不安様行動のトリガーとなっている可能性が示された。2種類のストレスモデルにおいて、GAPDHカスケードの核移行の関与を明らかとし、新規に導入した行動解析装置も順調に稼働し、計画通りに研究を推進できているといえる。社会性ストレスモデルにおけるGAPDH核移行の病態生理学的意義をより緻密に解析するために、「非」核移行型GAPDHを導入したゲノム編集マウスを作成し、社会性ストレスを付加することで、薬理学的な改善効果と同等の表現形が得られるかと検討し、GAPDH核移行がストレス性精神疾患の重要なトリガーであることを証明する。精神疾患の発症機序は未だ不明であるが、その背景には過度の身体的・社会的ストレスが指摘されている。また近年、ストレス性精神疾患の発症に、脳内酸化ストレスの産生が関与することが報告されている。申請者はこれまでに、酸化ストレス性神経疾患において、多機能酵素グリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素(GAPDH)が、2つのカスケード(凝集経路と核移行経路)を介して神経細胞死を惹起することを明らかにした(GAPDHカスケード)。そこで本研究では、ストレスモデルにおける脳内GAPDHカスケードの病理変化を探索し、申請者が開発した神経細胞特異的ノックダウン-アデノ随伴ウイルス(AAV2)レスキュー法を用いた行動試験により責任脳部位を同定することで、ストレス性精神疾患の新規発症機序の解明と、薬物治療戦略を構築することを目的とする。H28年度の実施計画として、1)ストレス性精神疾患モデルマウスの構築と2)脳内酸化ストレス産生とGAPDHカスケード発動の病理変化を検証し、脳内GAPDHカスケードとストレス性精神疾患の責任部位を解明を同定し、各カスケードの阻害剤を用いて治療効果(抗ストレス作用)の検討を行う。1)については、各社会性ストレス評価系のセットアップ(オープンフィールドテスト・ソーシャルインタラクションテスト・恐怖条件付け試験・尾懸垂テスト)を実施し、ストレスモデルとして、母子分離ストレスと個別飼育モデル(社会性孤立)の2つのモデル構築を実施した。各ストレス単独ではストレス性精神疾患を外挿できる行動変化は軽微であり、薬物評価を実施するため、母子分離後に個別飼育する新しいストレスモデルの構築をした。2)に関しては、先行して物理的ストレスモデル(拘束水浸ストレス)マウスを作製し、特に海馬で顕著な酸化ストレス(ヒドロキシラジカルと一酸化窒素)の発生を免疫染色法で確認し、またその際、海馬CA1錐体細胞と歯状回顆粒細胞におけるGAPDH核移行を免疫染色法と核ウエスタンブロットで確認した。同部位におけるGAPDH凝集はほとんど認められなかった。従って、少なくとも拘束水浸ストレスモデルでは、GAPDH核移行経路が主に関与することが示唆された。またIn vivo RNA干渉法とGAPDH核移行阻害剤(CGP3466B)を用いて海馬神経細胞GAPDHの核移行を阻害したところ、尾懸垂テストにおいて有意なうつ様行動改善効果が改善された。現在、本知見を纏め、論文を執筆中である。本年度は、主として2つの発見をした。前年度解明した物理的ストレス(拘束水浸ストレス)における海馬GAPDH核移行後の細胞内シグナリングを、SH-SY5Y神経芽腫とグルココルチコイド(GR)のレポータージーンアッセイを用いて、詳細に調査したところ、各GAPDHはGRの転写活性化を抑制し、BDNFなどのうつ様改善因子の発現を抑制することを解明した。また、物理的ストレスに加え、よりヒト・動物の環境因子ストレスをミミックした社会性ストレス(母子分離+社会性孤立)モデルを開発し、うつ不安様行動の出現を行動学的に確度を高く検出する方法を確立した。1つ目の発見に関しては、現在、さらにハイスペック型DNAマイクロアレイを用いてGR抑制に起因する遺伝子変化を評価中であり、2つ目に関しては、生後からの経時変化を追尾することで、GAPDHの核移行変化について蛋白質科学および免疫組織化学的手法を用いて検討中である。前年度解明した、拘束水浸ストレスにおける海馬GAPDH核移行がうつ不安行動の発現に重要であることを行動薬理学的に評価できたが、その分子メカニズムは不明であった。我々は、ストレス軸における要因子であるGRに注目し、核GAPDHとの関係性を探ったところ、レポータージーンアッセイにてGAPDHはGRに転写活性を負に調節していること、その作用はGAPDHの酸化により増強することを明らかにした。またこれを基点として、DNAマイクロアレイでの検討を実施しており、さらに詳細な細胞内シグナル伝達経路が解明されつつある。また、新たなストレスモデルとして、再現性の高い母子分離+社会性孤立ストレスモデルの開発に成功した。

本モデルは、人獣医療におけるベッドサイドでのうつ不安障害に極めて酷似し、核GAPDHがそのトリガーであることも明らかとなりつつある。前年度までに、物理的ストレスモデルマウス(拘束水浸ストレス)を用いて、海馬GAPDHの遺伝子ノックダウン法および薬理学的手法を用いて、核内GAPDHがグルココルチコイド受容体(GR)と相互作用することで、脳由来神経栄養因子(BDNF)の発現および海馬歯状回における神経新生を抑制し、うつ・不安様行動を発症する可能性を示唆した。今年度は、より臨床病態に酷似する社会性ストレスモデルマウス(母子分離+個別飼育)を用いて検討を行った。その結果、社会性ストレスモデルマウスにおいても、海馬での参加ストレスの発生、腹側海馬錐体細胞におけるGAPDHの核移行および歯状回での神経新生抑制が認められた。さらに、行動薬理学的解析では、特に社会性相互作用が著名に減弱していることが明らかとなった。また、この社会的相互作用障害は、GAPDH核移行阻害剤の投与によって、ほぼ正常群と同値にまで回復した。以上の結果から、社会性ストレスにおいても、GAPDH核移行がうつ・不安様行動のトリガーとなっている可能性が示された。2種類のストレスモデルにおいて、GAPDHカスケードの核移行の関与を明らかとし、新規に導入した行動解析装置も順調に稼働し、計画通りに研究を推進できているといえる。今後の研究の推進方策として、母子分離+個別飼育ストレスにより、薬物評価にたる行動変化を示す社会性ストレスモデルの構築を目指す。また、海馬においてGAPDH核移行経路の発動が認められたことから、拘束水浸ストレスモデルをポジティブコントロールとして、GAPDH核移行後のシグナル伝達経路として、転写因子p53とポリADPリボシル化反応に注目し、うつ様行動に至るエピジェネティック機能の解析をChIP法を用いて解析し、RNA干渉法と核移行阻害剤による抗ストレス効果の分子メカニズムを検証する。拘束水浸モデルでは、DNAマイクロアレイでのIPAを詳細に検討し、さらなる細胞内シグナル伝達系を明確することでGAPDH核移行のストレス性精神疾患の病態生理学的意義に関する研究を論文化し、シンポジウム(2018年12月3日主催)で新規ストレス性精神疾患薬を標的とした創薬研究のプロパガンバを積極的に実施する。また、社会性ストレスモデルでは、現在鋭意実施中である母子分離後の核GAPDH動態を詳細に解析し、ストレス全般において核GAPDHが重要な機能を担うことを論文化・学会発表する予定である。社会性ストレスモデルにおけるGAPDH核移行の病態生理学的意義をより緻密に解析するために、「非」核移行型GAPDHを導入したゲノム編集マウスを作成し、社会性ストレスを付加することで、薬理学的な改善効果と同等の表現形が得られるかと検討し、GAPDH核移行がストレス性精神疾患の重要なトリガーであることを証明する。
セクシュアリティの理論構築および、その文学/映像表象の実証研究

本研究は、近代社会における性の非対称性が社会的な次元を超えて、個人のセクシュアリティまでもを構造化しているという前提で議論していくものである。セクシュアリティ研究は、アメリカ合衆国では90年代に入って、日本では90年代なかばより学問的主題となりはじめているが、そのさいに「同性愛」の可視性を中心に論じられることが多く、同性愛/異性愛の二元論そのものを脱構築し、かつ「異性愛」のセクシュアリティの構造までも踏み込んで論じる文献はきわめて少なかった。本研究は、文学/映像におけるセクシュアリティ表象の研究とともに、セクシュアリティの布置そのものを理論的に解明していこうとするものであり、過去4年間の研究成果において、日本の文脈でのフェミニズムの意味を問い直し、かつフェミニズムをこえて、社会研究、政治学、思想、文学研究において、セクシュアリティの視座を持ち込みえたものと思われる。『思想』誌に連載した論文をはじめ、多様な媒体で発表した論文やインタヴュー、対談、解題、翻訳などは、精神分析、思想、哲学、政治理論、社会理論、言説理論を批判的に再読しつつ、セクシュアリティを消失点とする近代社会の構造を明らかにしようとした。その成果の一つとして、『フェミニズム』を2000年に上梓し、またここ数年における学術誌や啓蒙誌において、セクシュアリティ特集やフェミニズム特集のさいに中心的な役割を果たした。専門領域を異にする研究活動にも貢献したと思われる。本年度の成果は、以下の6点である。1.セクシュアリティ/ジェンダー研究とポストコロニアリズムの接点の追求。お茶の水女子大学に客員教授として招聘したトリン・T・ミンハに密着し、上記のテーマにそって共同セミナーや対談をおこなった(研究発表とした載せた対談以外にも、『思想』誌上で対談を発表予定)。ジェンダーとポストコロニアリズムの接続地点についてはトリンは明快であるが、セクシュアリティについては、理論/表象の両面において、彼女の業績には限界がみられる。精神性の審美化を避けて、解釈共同体としてどう理論づけるかが、わたし自身の今後の課題であることをあらためて確認した。2.セクシュアリティ研究を精神分析の批判的考察によって、解明しようとした。『思想』誌上に発表した「愛について」は、現在のセクシュアリティ研究を、異性愛の心的構造にふみこんで分析しようとしたものである。3.『ジェンダー・トラブル』の邦訳完成この著作は非常に難解だと評されているが、できるだけ原著に接近しながら、その趣旨を明晰に解釈して訳出することを心がけた。訳書ではあるが、わたし自身の研究に重要な位置をしめる仕事だと位置づけている。4.映画および小説における表象の分析をおこない、共編著図書および雑誌に発表した。また上野千鶴子さんとの対談で、セクシュアリティ研究を位置づけ、公表した。5.先行研究がほとんど皆無の領域なので、研究書を積極的、精力的に調査し、購入した。6.トリンとの共同セミナーのため(5-9月)、ニューヨークでの資料収拾は次年度以降に延期せざるをえなかったが、12月にサンフランシスコで開催されたMLAに参加した。本年度の研究目標は、次の二点であり、それにそって以下のような研究実績をあげた。1.母娘関係から照射したセクシュアリティ分析(1)『思想』(岩波書店)誌上に2回にわけて論文を掲載した。内容は、フロイトや対象関係理論などの精神分析、エクリチュール・フェミニンの理論、母娘に関するフェミニズム理論を批判的に分析し、主体形成・言語生成・ジェンダー配置が相互に関連して、「母」「娘」のカテゴリーが再生産されること、そのさいに母娘の一次的関係の「忘却」が重要な因子であることを明らかにした。新聞誌上や専門誌で推薦論文として取り上げられ、高く評価された。(2)日本英文学会のシンポジウム「フェミニズムの今」で、今世紀初頭のイギリス人作家ヴァージニア・ウルフの『ダロウェイ夫人』に焦点を当て、母が同時に娘でもあることを指摘して、母娘というカテゴリーの解体を論じた。

これも新しい知見であると評価された。2.社会構築性の理論の深化(1)『思想』の4回目の論文として「アイデンティティ/差異の政治/美学」を執筆中である。社会構築のラディカルな理論がラディカルな政治にどう接続しうるかは、理論的にも社会的にも目下の世界的な関心事であり、そのフロントに切り込みたい。(2)『社会構築主義について』(仮題)に掲載論文として、社会構築主義・本質主義・資本主義の相互関係を論じている。これは今年用意する著書のなかに組み入れるかもしれない。本年度の主な研究目標は次の2点であるが,それにそって以下のような研究業績をあげた.1.「アイデンティティの政治」の理論化(1)『思想』誌上に「アイデンティティの倫理-差異と平等の政治的パラドックスのなかで」を発表した。通例「アイデンティティの政治」が言挙されるが,「差異」は主張は,差別の解消を求める「平等」と齟齬をきたし,多文化主義のなかでその逆説が指摘されている。当論文では,差異を人のなか,集団のなかの亀裂や非連続としてとらえ,それを「倫理」として理論化した。同号にS・ベンハビブの「性差と集団的アイデンティティ」の訳出を提案し,その解題を付して問題を明確化した.(2)『構造主義とは何か』においては,アイデンティティ(同一性)の問題を,資本主義,本質主義,社会構築主義が交差する概念として提示した。異性愛主義をめぐる同一性の脱構築に焦点を当てた。(3)『現代思想』のバトラー特集の編集に協力し,普遍性の再定義をめぐるアイデンティティの位置と表象について対談で検証した。バトラーの掲載論文を選別し,解題を付した。2.資料収集と外国人研究者との交流昨年から引き続いて,セクシュアリティの出版物の収集は進んでいるが,海外に直接出向いての収集は,原稿執筆を優先させたためにまだ不十分である。K・カルース,E・K・セジウィック,D・コーネルなどの講演会には積極的に参加・企画している。本年度の成果でもう一つ付け加えなければならないのは,『フェミニズム』を上梓したことである。本書はフェミニズムの歴史的位置づけと問題点を解析する第一部と,現在の課題を考察する第二部からなるが,双方において「身体」「習慣」「グローバル化」が重要な軸であることを明らかにした。とくにグローバル化はあたらしい問題系であり,今後さらに論考する必要がある。本年度は補助金交付の最後の年なので、研究をある程度まとめるとともに、今後の方向性を探る作業をした。(1)まずまとめるという点については、過去数年間に発表してきた理論構築について、それを単行本にするために、50枚ほどの「序文」を執筆し、あわせて参考文献や資料の整理をおこなった。(2)また近年はおもに理論構築に力を注いだので、今年はむしろセクシュアリティの文学/映像表象の分析を試みた。その成果は、2000年にV・ウルフ協会の年次大会のシンポジウムで口頭発表した論文「ミスター/ミセス・ダロウェイ--二つのテクストの沈黙が交差するところ」を文章化する作業をおこない(國重純二編『アメリカ文学のミレニアム』(下)南雲堂2001年に収録)、またあらたに今年度W・フォクナー協会の年次大会のシンポジウムで口頭発表し、かつその論文「親族関係のブラック/ホワイトホール--
組成・構造制御した新規希土類マンガナイトの相状態のその場観察と機能発現の試み

様々な分野の研究者が集まり各得意分野を生かして新規酸化物合成および物性発現をめざし、設計から構造、相状態、相転移のメカニズム解析等を複合的手法により遂行し、研究成果を出すことができた。1.K_2NiF_4型構造を有する希土類マンガナイト酸化物の新相の探求低酸素分圧下での熱処理により、BaLnMnO_4(Ln=Nd,La)について新相が発現し、Mn^<3+>の一部が還元されたことにより酸素不定比による低対称性の新規結晶構造が発現した。2.ペロブスカイト型関連構造を有する酸化物の新相の探求希土類酸化物の新相の合成に成功し、構造解析、電気特性、熱特性などを詳しく議論することができた。中でも(A_<0.67>Ln_<0.33>)(Mn_<0.33>Ti_<0.67>)O_3(A:Ca,Sr,Ln:rare erath)については、CaとSrについてイオン半径、クーロンポテンシャル、Mn-Oの角度、距離等から電気特性と構造の関係を議論した。これにより今後の新酸化物設計において指針を得ることができた。3.高温測定による相状態のその場観察高温XRDや高温TEMによるその場観察により、層状構造を有するBaLn_2Mn_2O_7についてはこれまでにない一次相転移を見出すことができた。これは、高温で低対称の構造に相転移をするというもので、岩塩構造とペロブスカイト構造の間のひずみや電子構造に由来する相転移である。また一方で、ABO_3タイプの逐次相転移も新たに見出すことができ、これは酸素八面体の傾斜に基づくものであり、希土類イオン半径、Mn-0角度等との相関性を詳しく議論した。本研究は、新規希土類複合マンガナイト系酸化物の酸素分圧制御等による合成をし、新規構造およびそれによる新物性の発現を目的としている。18年度は、様々な分野の研究者が各得意分野を生かして新規酸化物合成および物性発現をめざし、設計、構造、相状態、相転移のメカニズム解析等を複合的手法により研究を遂行することができた。1.希土類マンガナイト酸化物の合成と新相の探求2.化合物の構造解析と物性の関連性2-1新相のCa系とSr系の構造解析をXRDおよび電子回折により行った結果、Ca系のほうが酸素八面体の傾斜が大きくひずみの大きい構造を有した。3.相状態、相転移その場観察3-2新相の(Sr_<0.67>Sm_<0.33>)(Mn_<0.33>Ti_<0.67>)O_3について、酸素八面体の傾斜によりコントロールされるタイプの構造相転移を、高温TEMにより観察することに成功した。これは、粒子内に多くのナノドメイン構造が観察されたことから、構造相転移の可能性を予想したもので、今後他の希土類にっいても可能性があると思われ、研究を継続する予定である。J.Am.Ceram.Soc.accepted(2006)本研究は、新規希土類複合マンガナイト系酸化物の酸素分圧制御等による合成をし、新規構造およびそれによる新物性の発現を目的としている。19年度は、様々な分野の研究者が各得意分野を生かして新規酸化物合成および物性発現をめざし、複合的手法により研究を遂行することができた。1.希土類マンガナイト酸化物の合成と新相の探求2.相状態、相転移

その場観察2-1 BaLn_2Mn_20_7については、これまで高温でI4/mmmになると解析されてきたが、Gdについて、高温TEMによるその場観察により、偶然にも、これまでに報告例のない一次相転移を見つけることに成功した。また高温XRDと合わせて、Prについても一時相転移を見出し、高温での構造変化のメカニズムを議論した。J.Am.Ceram.Soc.90(4)(2007)1342-1345.3-2新相の(Sr_<0.67>Ln_<0.33>)(Mn_<0.33>Ti<0.67>)O_3について、酸素八面体の傾斜によりコントロールされるタイプの構造相転移を、高温TEMにより観察することに成功した。これは、粒子内に多くのナノドメイン構造が観察された、これは冷却過程での構造相転移が遂行したためであり、希土類イオン種と相転移温度の相関性を議論した。J.Am.Ceram.Soc.90(4)(2007)1276-1279.
防災計画及び防災計画支援システムに関する日中共同研究

今年度は,研究期間の最終年であることから,中国北京市において研究ワークショップを行った.このワークショップには,研究分担者である天津市地震局の研究員3名のほか,中国地震局の研究員も加わった.ワークショップにさきだち,近年中国で整備が進められている防災指揮センターの施設視察を行った.ワークショップでは,日本側からは防災計画支援システムの現状と課題をこの一年間の日本の動向をふまえて講演が行われた.中国側からは天津市全域を対象とした計画支援システムの構成について講演が行われた.ディスカッションでは,日本と中国の社会経済状況の違いを踏まえた上で,防災計画支援システムのあり方について議論が行われた.学術的に開発された技術を如何に計画の現場で役立つものにするかが共有の課題であることが再確認された他,防災の専門家が行政組織にいないという日本の問題点,データの更新を意識していないという中国の問題点など,双方の立場から相互の問題点が指摘された.また,中国で来年度から始まる新地震防災首都圏5ヵ年計画の主要テーマ,共同研究を成立させる条件,共同研究のあり方などに関して広く議論が行われた.今回の研究成果は,議論の内容も含め,報告書に掲載するとともに,中国において出版されること確約された.今年度で,研究期間は終了するが,継続的に研究交流することが約束された.今年度は,研究期間の最終年であることから,中国北京市において研究ワークショップを行った.このワークショップには,研究分担者である天津市地震局の研究員3名のほか,中国地震局の研究員も加わった.ワークショップにさきだち,近年中国で整備が進められている防災指揮センターの施設視察を行った.ワークショップでは,日本側からは防災計画支援システムの現状と課題をこの一年間の日本の動向をふまえて講演が行われた.中国側からは天津市全域を対象とした計画支援システムの構成について講演が行われた.ディスカッションでは,日本と中国の社会経済状況の違いを踏まえた上で,防災計画支援システムのあり方について議論が行われた.学術的に開発された技術を如何に計画の現場で役立つものにするかが共有の課題であることが再確認された他,防災の専門家が行政組織にいないという日本の問題点,データの更新を意識していないという中国の問題点など,双方の立場から相互の問題点が指摘された.また,中国で来年度から始まる新地震防災首都圏5ヵ年計画の主要テーマ,共同研究を成立させる条件,共同研究のあり方などに関して広く議論が行われた.今回の研究成果は,議論の内容も含め,報告書に掲載するとともに,中国において出版されること確約された.今年度で,研究期間は終了するが,継続的に研究交流することが約束された.本年度の研修実績は大別すると、(1)市町村向けの地域防災計画支援システムの開発、(2)防災計画支援システムの日中共同開発、の2つである。(1)については、国際共同研究で開発するシステムの先行システムと位置づけている。本年度は、被災者対応の直接主体である市町村における地域防災計画の策定支援を目的としたシステムを開発した。地震被害の想定及び予測システムと計画支援システムで構成される。計画支援システムは、被災後の災害対応の最適化を図る「リアルタイム型計画支援」、事前計画の最適化、策定支援を行う「計画代替案評価」機能で構成される。本年度は、リアルタイム型計画支援機能として「避難場所の開設・閉鎖計画支援システム」を開発し、計画代替案評価機能として「延焼防止政策検討システム」を開発した。実際に開発したシステムを用いて計画づくりのケーススタディを行い、効率的かつ総合的な政策立案が可能であることを実証している。また、(2)については、天津市地震局においてワークショップを行った。ワークショップでは、日中の法制度の相違について意見交換、地震被害予測技術に関する意見交換、防災計画に関する課題認識の共有化、計画策定支援に関する議論を行った。ワークショップには、研究のパートナーである天津市地震局研究員の他、災害対応の中心組織となる天津市防災センター職員も参加した。またこの他に、国家地震局の地震予測システム開発のモデル事業を行ったウルムチ市において市の各局参加のワークショップを行った他、上海市同済大学において上海市防災研究所、同済大学構造研究所と地震予測技術に関する共同ワークショップを行った。今年度は,研究パートナーである天津市地震局の研究員4名を日本に招聘し,研究ワークショップを行った.ワークショップに先立ち,日本の地震防災システムの最新事例,及び,国際貢献型の地震防災システムの事例を視察し,開発担当者及び運用担当者と意見交換を行い,現状の課題について認識を深めた.なお,訪問先は,東京ガス,東京都,横浜市,川崎市,アジア防災センター,国連地域開発センター.ワークショップのディスカッションでは,日本側からは自治体向けに開発を行っている防災計画支援システム,防災まちづくり計画に関してプレゼンテーションを行った.中国側からは,天津市で開発を行っている地震被害推定システム,地震防災首都圏計画に関する講演が行われた.視察結果もふまえ両国の現状の課題を共有し議論を行った.議論の結果,双方で開発中の防災計画支援システムの今後の方向性が明確になった.双方の置かれた社会経済状況が異なるものの,相互の状況の違いをふまえた上での議論は有益であった.来年度は,今年度の成果をふまえて,再度研究ワークショップを行い,双方で開発した防災計画支援システムを相互に評価し,議論の結果をとりまとめる予定である.これまで細胞生物学の分野のFunctional genomicsは、酵母でしかできなかった。DT40細胞は、以下に我々の業績を述べながら説明するように、酵母に匹敵するFunctional genomicsを動物細胞でも行うことが可能になった先駆けと位置ずけることのできる実験系である。

我々は、DNA修復/チェックポイントシステムの変異細胞をDT40から作成し、その表現型を解析してきた。我々の研究成果を以下に列挙する。1)相同DNA組み換えが放射線照射によってゲノムに誘導された損傷を修復するのに重要な働きをすることを解明した(論文リスト:5)。2)相同DNA組み換えが減数分裂の時だけでなく体細胞分裂の各サイクル毎にDNA修復のために必須の働きをすることを証明した(論文リスト:3,4,6)。3)我々はDNA損傷によって活性化されるチェックポイント機構が、従来から解明されてきたように細胞分裂周期を一時停止するだけでなく、相同DNA組み換えによるDNA修復をアップレギレートすることを見い出した(論文リスト2)。4)Rad51は、大腸菌RecA分子と構造的な相同性を持つ相同DNA組み換えにおいて中心的役割をもつ分子である。そして、動物細胞は、Rad51と構造的に似た分子を5種類(Rad51B/Rad51C/Rad51D/XRCC2/XRCC3)さらに持っている。我々は、これらの分子の各シングルミュータトを作成、解析することによって、これら5種類の分子はコンプレックスを作ってRad51を補助することを証明した(論文リスト:1)。これらの研究成果は、単に新規にクローニングされた遺伝子を世界に先駆けてノックアウトしただけでなく、その表現型を注意深く、既存/新規の方法をトライしながら解析した結果、世界的に認められたものである。今年度は、研究期間の最終年であることから、中国北京市において研究ワークショップを行った。このワークショップには、研究分担者である天津市地震局の研究員3名のほか、中国地震局の研究員も加わった。ワークショップにさきだち、近年中国で整備が進められている防災指揮センターの施設視察を行った。ワークショップでは、日本側からは防災計画支援システムの現状と課題をこの一年間の日本の動向をふまえて講演が行われた。中国側からは天津市全域を対象とした計画支援システムの構成について講演が行われた。ディスカッションでは、日本と中国の社会経済状況の違いを踏まえた上で、防災計画支援システムのあり方について議論が行われた。学術的に開発された技術を如何に計画の現場で役立つものにするかが共有の課題であることが再確認された他、防災の専門家が行政組織にいないという日本の問題点、データの更新を意識していないという中国の問題点など、双方の立場から相互の問題点が指摘された。また、中国で来年度から始まる新地震防災首都圏5ヵ年計画の主要テーマ、共同計画を成立させる条件、共同研究のあり方などに関して広く議論が行われた。今回の研究成果は、議論の内容も含め、報告書に掲載するとともに、中国において出版されることを確約された。今年度で、研究期間は終了するが、継続的に研究交流することが約束された。
多機能マイクロバブルの生成・制御・破壊に関する研究開発

マイクロバブルドラッグデリバリーシステムに対する基礎的知見を得ることを目的とし,マイクロバブル表面への分子修飾や超音波音場によるマニピュレーション方法について実験的検討を行った.ビオチン修飾したマイクロバブルをアビジン修飾した壁面に選択的吸着させるための条件について調べ,実際に選択的吸着を行うことに成功した.また超音波音場によるマイクロバブルのマニピュレーションについて,集束超音波を用いた手法を検討し,2次元平面内で任意の軌跡でマイクロバブルを移動させるのに成功した.また,流れの存在かにて気泡をトラップすることにも成功し,将来の応用に向けて基礎的知見を得ることに成功した.マイクロバブルドラッグデリバリーシステムに対する基礎的知見を得ることを目的とし,マイクロバブル表面への分子修飾や超音波音場によるマニピュレーション方法について実験的検討を行った.ビオチン修飾したマイクロバブルをアビジン修飾した壁面に選択的吸着させるための条件について調べ,実際に選択的吸着を行うことに成功した.また超音波音場によるマイクロバブルのマニピュレーションについて,集束超音波を用いた手法を検討し,2次元平面内で任意の軌跡でマイクロバブルを移動させるのに成功した.また,流れの存在かにて気泡をトラップすることにも成功し,将来の応用に向けて基礎的知見を得ることに成功した.本研究は,様々な応用技術が考えられているマイクロバブルの機能のうち,特に超音波医療応用と関連した分野での技術開発を目指すものである.従来,超音波血管造影剤として利用されてきたマイクロバブルにさらに機能を追加し,ドラッグデリバリーシステム(DDS)としての機能を付与することを目指している.具体的な研究内容としては,マイクロバブルにDDSとしての寄与を付与するために気泡表面への様々な物質の添加および気泡の合体・消滅を防止するためのコーティング,さらに,ターゲットとした細胞にだけ特異的に接着するリガンドを表面修飾し目的部位に接着させた後,遠方(体外)から照射された超音波により表面コーティングされた気泡を破砕し,薬剤を放出する手法を確立させる.平成24年度は当初の予定通り,大きさおよびマイクロバブル表面へのコーティングを制御するために,T字型ジャンクションを持つマイクロチャネルにより微細気泡の生成を行った.その結果,オリフィス型のチャネルを用いることにより,単分散径の気泡としては,直径5mのものを,複数気泡径生成のものでは,最小径2mのマイクロバブルを生成することに成功し,T字型マイクロチャネルを用いたマイクロバブル生成法として,血管へ取り込み可能なサイズのものを生成することに成功した.また,従来の知見を参考にし,グリセリン10%,プロピレングリコール10%,純水80%を混ぜた溶液にポリエチレングリコールを1.0mg/ml混ぜることにより微細気泡の合体を阻害することに成功した.以上の成果より,得られたマイクロバブルは,DDSとし要求される条件の一部を満たすことが示され,次年度以降は,当初の予定通り,マイクロバブル表面へのタンパク質修飾と特定部位へマイクロバブル接着の研究を進めることが可能となった.平成25年度は,リガンド-レセプター結合を示すタンパク質として,ビオチンとアビジンを利用し,アビジン修飾したガラス流路の内壁に,ビオチンで表面修飾したマイクロバブルを吸着させることを試みた.結果として,静止流体中においては,ビオチン修飾したマイクロバブルがアビジン修飾した壁面に選択的に吸着することを確認することに成功した.さらに,超音波音場の制御により,マイクロバブルを移動させる技術の開発を行い,リング上のアレイトランスデューサーを用い,超音波照射の位相制御によりマイクロバブルを移動させることおよび,集束超音波を用い,超音波の焦点位置を移動させることによりマイクロバブルを任意の方向に移動させることに成功した.単一の気泡の運動に関しては,第一ビヤクネス力を考慮した気泡運動のモデル方程式による予測された気泡運動の軌跡と実際の気泡の軌跡が良好に一致することを示した.さらにクラスター状に集まった気泡群に対して,超音波を照射し,クラスターサイズと超音波の振動数の関係を調べ,クラスターサイズには上限があり,またそのサイズは,気泡クラスターとしての固有振動数で整理できることを示した.昨年度、達成に至らなかったアビジン修飾したガラス流路の内壁に,ビオチンで表面修飾したマイクロバブルを吸着させることに成功した。実験では、斜めに傾けたシャーレに対して、ビオチン修飾したマイクロバブルを含む水溶液を流し、浮力の影響で上昇していく気泡をアビジン-ビオチンの結合による捕獲することを試みた。ガラスでできたシャーレの底面全面をBSAでコーティングし、そのうちの半面のみアビジンコーティングを行った。その結果、アビジンコーティングした面のみに、ビオチン修飾したマイクロバブルを選択的に接着させることに成功した。昨年度との違いは、マイクロバブルを加えた水溶液の成分の影響を徹底的に検討した点にある。具体的には、マイクロバブル吸着に成功した溶液では、純水に体積比で10 %のグリセリンおよびプロピレングリコールを加えた混合水(GPW),リン脂質である1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPC)に加えて,(a) 1,2-distearoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine-N-[methoxy(polyethylene glycol)-2000](DSPE-PEG2000),(b) DSPE-PEG2000・NaCl ,(c)DSPE-PEG2000-biotin・NaClを混合した脂質溶液を用いた.(a)-(c)いずれの脂質もDSPCとモル比で1:9となる様に調合している.NaClを加えた影響が大きく、これにより最終的には選択的吸着が可能となった。

マイクロバブルを制御する技術に関しては、昨年度に引き続き超音波音場による気泡制御技術の開発を進め、本年度は同軸で径の異なる二種類の超音波発生器を用いて、超音波焦点で超音波が打ち消し合う素子を用いて、気泡を制御する方法について検討した。26年度が最終年度であるため、記入しない。工学26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の予定通り,マイクロバブルの表面に様々な物質をコーティングするためのチャネルを生成し,実際に有機相膜や脂質膜によるコーティングに成功した.さらに本年度は有機相の上に脂質の薄い膜をコーティングする手法を開発し,膜に蛍光物質を含ませることにより,マイクロバブル表面にコーティングされていることを確認した.現在タンパク質分子を表面修飾する段階であり,順調に進展していると判断できる.平成25年度は,当初の予定通り,気泡表面へのタンパク質の修飾について検討を行った.具体的には,リガンド-レセプター結合を示すタンパク質として,ビオチンとアビジンを利用し,アビジン修飾したガラス流路の内壁に,ビオチンで表面修飾したマイクロバブルを吸着させることを試みた.結果として,静止流体中においては,ビオチン修飾したマイクロバブルがアビジン修飾した壁面に選択的に吸着することを確認することに成功した.一方,せん断流中においては,表面修飾したマイクロバブルが有意に吸着しやすい傾向を示すことができず,平成26年度への継続検討課題となった.この部分については,当初の予定と異なっているが,超音波音場を用いた気泡の制御の部分については,大きな進展が見られ,全体としては,おおむね順調に進展していると判断した.26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の予定通り,超音波診断・治療と関連して,血管内に注入できる直径5ミクロン以下のマイクロバブルを対象に,気泡表面に様々な分子を修飾する技術の開発を進める.具体的には,表面修飾の機能を有するマイクロチャネルによるマイクロバブル生成手法の開発と,表面修飾物質による目的部位への吸着,超音波によるその破壊方法の検討を行なう.また,マイクロバブル内包型ベシクルの開発を進め,葵剤搬送システムへの適用可能性を検討する.平成25年度に得られた知見を基に,引き続き,アビジン-ビオチン結合を利用し,ビオチン修飾した表面を持つマイクロバブルについて,アビジンが埋め込まれた部位への吸着を検討する.また,他のタンパク質で修飾させたマイクロバブル内包型のベシクルについても検討を進め,T字型マイクロチャネルによるマイクロバブル生成および表面修飾システムを構築する.また,生成させたマイクロバブルを超音波音場中で制御し,目的部位へ移動後,集束超音波によりマイクロバブルを破壊する手法を構築する.26年度が最終年度であるため、記入しない。申請書の段階では,高速度カメラ(Photron製FASTCAM SA2)の購入を検討していたが,実質配分額が満額ではなかったために,このカメラを購入するのに十分な予算が得られなかった.
移動ロボット用超音波センサにおける環境認識能力の解析

移動ロボットにとって、自分の周囲の環境や自分の位置を認識するための外界センサは非常に重要である。特に、対象物までの距離を測定するセンサは、環境の物理的形状を知るために有用である。超音波の往復伝搬時間から距離を計測する超音波センサは、ハードウェアを簡単に構成でき、システムが小型で安価であるという利点を有するため、広く用いられている。一般の室内環境は、超音波の反射源として平らな壁,凹面のコーナー,凸面のエッジという3つの対象物から構成されていることが多い。この中で、特に凸面のエッジからのエコーは、それが着実に検出されることが切に要望されているにも拘らず、そのエコーは非常に弱く、その振幅がどれくらいであるのかも未だ明確にされてはいない。そこで本研究では、移動ロボット用超音波センサについてエッジからのエコー振幅を調査し、その環境認識能力を明らかにすることを目的とした。まず、各種対象物に対するエコー信号強度を調査するための計算機シミュレーションの方法について検討した。次に、このシミュレーション方法に沿って、センサで検知されるエコー信号作成のソフトウェアを開発し、移動ロボット用超音波センサのパルスエコー法による測距方法について、その近似モデルの妥当性について検討した。そして、平らな壁だけから構成されているような一般の室内環境を考え、移動ロボット用超音波センサの計算機シミュレーションを行って、エッジからのエコーの振幅を調査した。その結果、エッジ先端の曲率半径、エッジ先端の角度、および超音波の照射方向に対するエッジの向きなどのパラメータとエッジからのエコー振幅との関係が明らかになり、一般の室内環境における超音波センサの環境認識能力を明確にすることができた。
交感神経による血管支配におけるephrin-A1の機能解析

交感神経は心拍数や血圧を調節する重要な生理機能を担う器官である。交感神経と血管は密接に連動し生理機能を調節しており、過度の交感神経の活性化は脳卒中や高血圧などの様々な生活習慣病を引き起こすと考えられている。交感神経はストレス受容器でもあることから種々のストレスによる血管への影響に着目し、ストレスが引き起こす血管の機能的・組織学的変化が誘引する疾患における交感神経と血管の連関機能の解明を目指し、本研究では血行性転移における交感神経の機能解析を行った。マウスの皮下に腫瘍細胞を移植した担がんマウスにストレスを与えると転移が亢進する。一方、6-OHDAの投与により交感神経を除去した担がんマウスでは転移は顕著に減少した。また、交感神経の阻害薬であるβ遮断薬を一年以上服用していると非服用者と比較して顕著に生存延長に有意な差がある。転移における交感神経の機能を転移予定臓器で解析を行うと転移前微小環境形成が低下していることが明らかとなった。また、交感神経阻害薬であるPropranololの担がんマウスへの投与により、原発巣においては血管新生の阻害、および腫瘍増殖の遅延がみられた。しかしながら、血管新生関連分子を網羅的に定量PCR法で発現解析を行ったが既知の分子群では有意な差を示す血管新生関連分子は同定できなかった。腫瘍増殖の遅延については細胞増殖関連細胞内シグナル伝達分子を解析したところ、細胞の生存、増殖に関連する分子群の活性化レベルの低下が見られた。今後、肺における転移前微小環境形成における交感神経の機能を明らかにし、交感神経阻害薬の転移への有効性を明らかにしていきたい。26年度が最終年度であるため、記入しない。交感神経の活性化は末梢血管抵抗を亢進させ血圧を調節するだけでなく、骨髄において造血幹細胞の末梢血液中への供給に関与するなど多くの生理機能を調節している。「笑いが免疫力を高める」や「病は気から」といわれているように、気分が落ち込むとノルアドレナリンが分泌され交感神経を活性化し体に変調をきたす。特に癌における神経活動の関与は前立腺がんなど一部の癌を除いてその関連が明らかとなっていない。本研究では特に交感神経の活性化と血行性転移に着目し、血管と神経の機能的な連関関係を明らかにすることを目的とする。悪性新生物は新生物と表現されているが血液、血管、免疫担当細胞などが存在しヒトの体を形成する他の臓器や組織と同等にとらえることができる。マウス皮下に腫瘍を移植し担癌マウスを作成し原発巣の解析を行った。その結果、乳がん細胞E0771、肺がん細胞LLCおよび3LLなど複数の腫瘍において神経および神経活動の存在が確認された。また、低転移腫瘍LLCと高転移腫瘍3LLにおける交感神経の活性化を検討したところ、低転移腫瘍と比較して高転移腫瘍において交感神経の活性化が亢進していることが明らかとなり、交感神経の活性化の転移への関与を示唆する実験結果を得た。また、カテコールアミン作動性神経を選択的かつ可逆的に消失させるために6-OHDAをマウスに投与し転移における交感神経活動の機能を検討した。その結果、6-OHDA投与群で肺転移の阻害効果が確認された。今後、肺転移における交感神経の詳細な分子機構を解明し、癌治療における神経活動の重要性を明らかにしたい。肺転移モデルの担癌マウスを用いた実験により肺転移における交感神経活動の重要な機能を示唆する実験結果を得られ今後の発展が期待できるため。
アルベオラータ下界ミゾゾア門内の初期分岐系統に関する分類学的研究

助成期間中に合計59株の培養株を確立することに成功した。それらを用いた分類学的な研究から,過去にミゾゾア内のメンバーとして記載されたHemistasia phaeocysticolaが系統分類学的には,ユーグレノゾアに属すことを明らかにし,分類学的な組み替えを行った。その他の培養株についても分類学的な研究を行い,真核微生物の多様性に関する理解を推し進めた。難培養性の祖先的ミゾゾア類については,単離細胞を用いた解析を行い多様性把握に向けた研究を行った。得られた培養株を用いて,ミトコンドリアゲノム・遺伝子構造が複雑化するプロセスに関する研究を行い,知見を得た。研究代表者が行ったサンプリングと所属研究機関における活動で得られた水・底泥等を用いて、複数条件下で集積培養を行った。出現した原生生物を光学顕微鏡下で観察し、プロトアルベオラータ類・アピコモナス類と期待される原生生物について単離を行い培養株の確立を行った。またこれまでの研究活動の中で既に培養株として確立されていた原生生物についても系統分類学的な研究を進めた。平成26年度に行った集積培養サンプルから、24株の原生生物培養株を確立することに成功した。これらについては、現在形態観察を進めると同時に系統的位置の検証を行っている。過去に確立した培養株を用いた研究としては、YPF1303株についてその系統的位置を詳細に解析した。YPF1303株は詳細な形態観察の結果をもとに、Hemistasia phaeocysticolaと同定された。本種は1900年に現在プロトアルベオラートのメンバーとして扱われているOxyrrhis属の一種として記載されたが、長い間その系統学的位置は不明なままであった。今回行った18S rRNA遺伝子を用いた解析から、本種はディプロネマ綱に属する鞭毛虫でであることが示された。本成果と本成果をもとに行った分類学的な組み替えを報告する原著論文がJournal of Eukaryotic Microbiologyに受理され公開された。これらの成果によって、他のプロトアルベオラータ類・アピコモナス類への帰属が示唆されている原生生物についも、詳細にその系統的位置・分類学的位置を再検証していくことの重要性があらためて認識された。平成27年度は,新規プロトアルベオラータ類・アピコモナス類の探索と培養株としての確立を引き続き行った。平成26年度に成果として公表したHemistasia phaeocysticolaの培養株を用いた飼育培養実験を行い、その近縁種を効率的に培養株として確立する新手法を確立した。その手法により、35株の真核微生物の培養株を確立することに成功した。また最終年度でもある平成27年度は、これまでに確立した培養株の系統的位置の推定を行った。一部の培養株については、微細構造の観察を行い形態的特徴の把握も行った。特にYPF1610株は、過去にPhyllomitus amylophagusとして記載され、その後あまり研究がされず系統的位置も不明のまま残されている真核微生物と同定された。現在、YPF1610株はより詳細な微細構造観察とともに複数遺伝子解析による系統的位置の検証を進めている。他の培養株についても、同様に系統的位置と微細構造の観察を今後推し進める予定である。新たに確立した培養株を用いた研究と並行し、難培養性の原始的アルベオラータ生物であるグレガリン類についても研究を行った。これまでグレガリン類の寄生が知られていなかった複数種の多毛類を解剖し、そこからグレガリン類の探索を行った。その結果、ミズヒキゴカイ科多毛類の一種から未記載種と考えられるグレガリンを発見することに成功した。現在、本未記載種の系統的位置の把握と微細構造情報の収集を行い、新種として記載報告するための準備を進めている。また、得られた微細構造情報をもとにアピコンプレクサ亜門の初期進化についても議論を進める予定である。プロトアルベオラータのメンバーとして記載されたHemistasia phaeocysticolaの系統的位置を検証し、所属分類群の組み替えの提唱を含む原著論文が受理・公開されたため。新たに24株の原生生物培養株の確立に成功し、現在確立した株を用いた系統的位置の推定を進めているため。また、効率的なサンプリングと培養株の確立を進めることができたため。進化原生生物学設置可能な人工気象器を購入し、これまでに確立した系に組み込むことで更に効率的な培養株の確立を目指す。また得られた培養株を用いた分子生物学的研究と形態観察を遂行する。得られた情報をもとにミゾゾア門内における分類体系の再整理を進める。

平成26年4月に所属研究機関における組織改編と実験スペースの再配分によって、設置スペースの問題から購入予定であった人工気象器を変更する必要が生じ、その選定に時間を要したため。平成26年度は、既存の人工気象器(経過年数が長く、複数温度設定が出来ないなど機能的制限があるもの)を他の研究者と共同で利用した。また、所属機関の業務で得られた試料の一部を本研究課題の遂行に利用可能であったため、予定していたサンプリングを次年度に計画し直したため。人工気象器の購入と、予定している国内2箇所でのサンプリングの経費に充てる。
血管内皮細胞の臓器特異的な遺伝子発現制御機構のシステム的解析

ヒト脳血管毛細血管内皮、及び皮膚毛細血管内皮細胞を用いて低酸素刺激を加えることによる遺伝子変動を全ゲノムが網羅されたマイクロアレイを用いて包括的に追跡したところ、脳血管内皮で特異的に誘導されるものは88遺伝子存在し、脳ダメージに応答するRas induced senescence-1やERストレス応答性遺伝子が顕著に認められた。一方皮膚血管内皮選択的な誘導遺伝子は150存在し、PAI-1やPDGFが含まれた。これに対し、両内皮で共通に誘導される遺伝子は少数であり(34遺伝子)、その中に血管新生を強く誘起するVEGFやAngiopoietin-like 4が存在することが特徴的であった。このことから低酸素応答性においても内皮多様性が存在していることが示唆された。また低酸素後、常酸素下に2時間戻すことにより、急性期応答因子であるEgr-1,AP-1を除きほとんどの遺伝子の誘導がベースラインにまで下降することから、低酸素応答の多くが、代謝回転の速いHIF-1/2によって制御される可能性が示唆された。また皮膚毛細血管ではSTAT6の発現が低く、そのことがIL-4応答性が他臓器血管内皮(臍帯静脈、冠状動脈、肺動脈)に比べ乏しい一つの原因になっていることが、炎症に深く関わるVCAM-1遺伝子の誘導をマーカーとして追跡することにより明らかとなった。このことをin vivoで確認するため、マウスのVCAM-1 promoter 3kb,8kbの下流にlacZマーカーを繋いだコンストラクトをHprt-locusに組み込んだ組み換えES細胞を単離し、これらのTargetedトランスジェニックマウスの作製に着手した。現在chimeraマウスの状態であるが、今後LPSやVEGF刺激後、どの臓器血管内皮により強くVCAM-1が誘導されるのか、又それがpromoter上のどこに起因するのか明らかになると思われる。血管内皮細胞は、血管内皮細胞増殖因子(VEGF)、セリンプロテアーゼThrombin、腫瘍壊死因子TNF-αなどのアゴニストの存在により活性化される。臍帯静脈(HUVEC)を用いたこれらの血管新生関連刺激に伴う遺伝子変動の網羅的探索、時間的制御の比較システム解析から、これら活性化シグナルは転写カスケードを介して経時的に接着因子、増殖因子の発現誘導へと推移していくことが共通に認められた。そして特に刺激初期においてはthrombinとVEGFのシグナルの共通項が大きいこと。その共通項において最も強く両刺激で誘導される因子として、ダウン症候群関連因子、Down Syndrome Critical Region(DSCR)-1が見出された。RNase protection assay,ゲルシフト解析、点変異プロモーター解析、co-transfection解析よりDSCR-1はVEGF-flk-1/KDR-1及びthrombin-PAR-1の両レセプターの活性化を介して、転写因子GATA-2/-3,NF-ATc, NF-ATpが活性化され、それに続くinternal promoterの転写活性化により誘導されること。又、DSCR-1の安定的発現系をアデノウイルスから構築した状態ではNF-ATのさらなる核内移行が完全に阻害され、かつ本条件下で3次元コラーゲンゲル培養、FACS解析、マイクロアレイ解析を行った結果、DSCR-1が血管新生、炎症を含む内皮の活性化状態を顕著に抑制することが明らかとなった。さらにこの効果が実際にin vivoの系であてはまるかどうか確かめるために、マウス皮下でのmatrigel-plugアッセイ、腫瘍(メラノーマ)移植での抗癌活性を調べたところ、DSCR-1発現に基づくmatrigel内への微小血管内皮の遊走能の減少、及び腫瘍増大率の減少効果が有意に認められた。このDSCR-1が細胞内の因子であることから、これが将来毒性の少ない新規な抗血管病治療法として用いられることが期待される。

現在chimeraマウスの状態であるが、今後LPSやVEGF刺激後、どの臓器血管内皮により強くVCAM-1が誘導されるのか、又それがpromoter上のどこに起因するのか明らかになると思われる。