hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フォークロア・ナラティブ・アプローチに基づく「共同体地域計画」研究

本研究では,「地域活力の増進」を明示的にもたらし得る「地域計画」のあり方を研究し,それに基づき人文社会科学的な新しい「共同体・地域計画論」を提案することを目的として,都市における人々の活力ある実践を支援する学問である「民俗学」,ならびに,その「活力」を最も厳密なる科学として取り扱う「解釈学的方法」の方法論を援用し,「共同体・地域計画」の実践事例を取り上げ,その社会的動態を記述したものである.本研究では,「地域活力の増進」を明示的にもたらし得る「地域計画」のあり方を研究し,それに基づき人文社会科学的な新しい「共同体・地域計画論」を提案することを目的として,都市における人々の活力ある実践を支援する学問である「民俗学」,ならびに,その「活力」を最も厳密なる科学として取り扱う「解釈学的方法」の方法論を援用し,「共同体・地域計画」の実践事例を取り上げ,その社会的動態を記述したものである.LRTやBRTといった新しい交通システムの整備や公共交通利用促進策などの問題を進めるためには,行政の行政権限のみでは不十分であり,地域住民,地域コミュニティの自発的な活動が重要となっている.こうした視点から近年の地域計画では「まちづくり」が非常に重用視されるに至っている.この共同体・地域計画は,一面において,「合理的な交通計画論」を必要としている一方で,その一面において,「地域コミュニティによる自発的な“まちづくり論"」を必要としていることは間違いない.そしてこの“まちづくり論"において重要なのは地域コミュニティの活力の問題でもある.例えば,多くの場合,「地域のコミュニティ・バス」は,行政のみでなく,地域コミュニティそのもので支えていくことが必要である.ところが,地域コミュニティに,コミュニティ・バスを支えるための「活力」が不在であれば,行政単独でコミュニティ・バスを支えていかなければならなり,結局,その持続的な運用ができなくなってしまう.それ故,コミュニティ・バスの持続的運営のためには,これまで様々な形で蓄積されてきた技術と制度の質的向上に関する諸研究に加えて,地域コミュニティの活力の増進に関する研究が必要とされている本研究では,「共同体・地域計画」の具体事例を取り上げ,その社会的動態を民俗学的アプローチに基づいて記述する.すなわち,それぞれの共同体・地域計画活動に専門家として参画していくと同時に,様々な関係者への継続的なインタビュー調査を進め,これらを踏まえた上で,その共同体・地域計画の社会的動態を物語文を援用しつつ描写していく.そして,それを通じて,共同体・地域計画に資する知見の抽出を目指す本研究では,「地域活力の増進」を明示的にもたらしうる「地域計画」のあり方を研究し,それに基づき人文社会科学的な新しい共同体・地域計画論」を提案することを目的として,都市における人々の活力ある実践を支援するための学問である「民俗学」,ならびに,その「活力」を最も厳密なる科学にて取り扱う「解釈学的方法」の方法論を援用し,「共同体・地域計画」の実践事例を取り上げ,その社会的動態を記述した.具体的には,熊本県阿蘇における地熱発電事業に着目し,1週間ほど現地に滞在し,村の歴史や地熱発電事業の構想に至るまでの経緯を村民や事業関係者にヒアリングを行い,そこから浮かび上がった村民の地域活力の復活への期待と事業関係者の地域活力復活ビジネスにかける想いが融合し,地域が一体となって地熱発電の稼働に向けて想いを一つにしていく様子を物語描写した.また,南海トラフ地震によって最大34mの津波が襲来すると予測されている高知県黒潮町における防災対策に焦点を当て,町長のリーダーシップの基,町の職員や地域住民が一致団結して先進的な防災対策に取り組んでいる様子を物語として描写した.以上の研究を通じて,人口減少等によって活力を失った地域,あるいは,自然災害によって活力を失う可能性を有する地域において,その被害を最小限に留め,逸早く復活を遂げるために行政,住民,企業に求められる役割や資質を明らかにすることができた.土木計画学平成25年度は,研究メンバー間で,地域コミュニティの活力に関わる,交通計画学,および民俗学的研究についての認識共有を深める議論を行った.その中で,改めてそれぞれの専門領域における研究レビューを分担して行った.それと同時に,本研究のフィールドとして,いずれの地域が対象可能であるかを検討した.その結果,熊本県・小国町の地熱発電,高知県・黒潮町の地域防災をフィールドとして設定し,調査を行った.また,上記の具体的なコミュニティ施策現場に,個々の研究者が,具体的な現場に入り込み,それと同時に,民俗学的アプローチを踏まえ,各研究メンバーが,当該共同体・地域計画に関わる様々な人々に,持続的にインタビュー調査を実施した.研究最終年度となる平成26年度は,こうした関与・参画を通じて得られた「経験」を手がかりに,当該の活動の意味や意義,あるいは,その地域の伝統,文化,民俗性に関して,様々な角度からメンバー間で議論する.そしてそれと共に,そうした議論の過程で論ぜられた諸種の解釈を,様々な形で「記述」「描写」していく作業を,逐次的に実施する.なお,そうした「描写」においては,必ずしも数理的論文,OR的論文の形式に必ずしもこだわらず,民俗学等で広く採用されている,「解釈学的な定性的記述方法」を活用していく.ただし,心理学研究等で一般に採用されている従来型の「仮説の措定→統計分析による検定や探索的分析→その分析結果についての定性的解釈の記述」という方式も適材適所に採用することとする.以上の「コミュニティ内での実践」と「解釈」の濃密な繰り返しを通じて,「コミュニティの活力」を浮き彫りとしつつ,普遍性ある形で,万人が理解しうる形で記述していくことを目指す.
バクテリア細胞を反応場とする貴金属ナノ粒子触媒の新規調製法

1.貴金属ナノ粒子の生産速度の向上金属イオン還元細菌S.oneidensis細胞によるパラジウム(II)イオンの還元によるナノ粒子の合成実験を広範な操作条件下(初期貴金属イオン濃度110mM、細菌細胞濃度1×10^91×10^<10> cells/cm^3)において行い、貴金属ナノ粒子の生産速度が最大になる操作条件について検討した。その結果、S.oneidensis単一細胞あたりのパラジウム(II)イオンの還元速度は7×10^<-16> mol-Pd/cell/hとなり、原料溶液1リットルあたりのパラジウム粒子の生産速度は約700mg-Pd/hに達することが明らかになった。2.バイオ調製法と化学調製法の比較検討白金(IV)イオンの還元による白金ナノ粒子の生成速度に関して、S.algae細胞によるバイオ調製法(25°C、細胞濃度0.68×10^9 cells/cm^3)は、ギ酸塩を用いる化学調製法(65°C、ギ酸塩初期濃度100mM)と同程度であった。高温操作が必要となる化学調製法に比べて、バイオ調製法は室温で操作できる省エネルギー型の貴金属ナノ粒子の調製法である。バイオ調製法では、還元細菌の細胞(1×2μm程度)を反応場として貴金属ナノ粒子の生成が細胞外膜の近傍で起こり、貴金属ナノ粒子が細胞表面に分散した状態で生成した。化学調製法では、生成したナノ粒子を液相で安定に保つ(均一に分散させる)ためには、保護剤(可溶性高分子など)を添加する必要がある。したがって、バイオ調製法には、単に貴金属ナノ粒子を合成するだけでなく、担体(細菌細胞)表面に貴金属ナノ粒子が分散した状態に維持できる特色があることがわかった。3.バイオ調製粒子の触媒能の評価バイオ調製したパラジウム粒子を添加してモデル反応(クロム(VI)イオンの還元)を行ったが、現時点では顕著な触媒効果を見出すことはできなかった。本研究期間は満了するが、モデル反応系の選定を含めて、貴金属ナノ粒子触媒の調製法、バイオ調製触媒の添加量などについて検討を続けて行い、バイオ調製された貴金属ナノ粒子の触媒活性を評価するとともに、化学合成された貴金属ナノ粒子の触媒能と比較したい。1.還元細菌の選定と貴金属ナノ粒子の調製金属還元細菌Shewanella oneidensis(ATCC 700550株)を接種して、パラジウムイオン(Pd(II)Cl_4^<2->)の還元実験を温度25°C、溶液pH7の一定条件下、嫌気性雰囲気で行った。ただし、バイオ還元の電子供与体として乳酸ナトリウムをNa_2PdCl_4水溶液に添加した。初期Pd(II)濃度が15mMの場合、Pd(II)Cl_4^<2->イオンは全て60分以内にバイオ還元されて、パラジウム粒子が生成した。また、金属還元細菌Shewanella algae(ATCC 51181株)を用いて、白金イオン(Pt(IV)Cl_6^<2->)の還元実験を嫌気性雰囲気下で温度25°C、溶液pH7で行った。ただし、バイオ還元の電子供与体として乳酸ナトリウムを用いた。初期Pt(IV)濃度が1mMの場合、Pt(IV)Cl_6^<2->イオンの大部分が60分以内にバイオ還元されて、白金粒子が生成することがわかった。2.バイオ調製粒子の性状評価バイオ還元実験(初期Pd(II)濃度1mM)の終了後にS.oneidensis細胞を採取し、TEM観察およびEDX分析を行った。その結果、バイオ生成したパラジウムナノ粒子(5nm程度)が凝集体(50100nm)として細胞表面にほぼ均一に分散していることがわかった。また、バイオ還元実験後に採取したS.algae細胞の薄切片についてTEM観察、EDX分析を行った。バイオ生成した白金ナノ粒子(5nm程度)が細胞外膜と内膜の間のペリプラズム域に存在することがわかった。また、S.algae細胞に存在する白金のX線近吸収端構造(XANES)解析によって、細胞内の白金の原子価は0価(白金粒子)であることが明確になった。以上のように、金属還元細菌を反応場としてバイオ生成した貴金属ナノ粒子を細菌細胞(1×2μm)に担持させることができた。

バイオ調製法では、還元細菌の細胞(1×2μm程度)を反応場として貴金属ナノ粒子の生成が細胞外膜の近傍で起こり、貴金属ナノ粒子が細胞表面に分散した状態で生成した。化学調製法では、生成したナノ粒子を液相で安定に保つ(均一に分散させる)ためには、保護剤(可溶性高分子など)を添加する必要がある。したがって、バイオ調製法には、単に貴金属ナノ粒子を合成するだけでなく、担体(細菌細胞)表面に貴金属ナノ粒子が分散した状態に維持できる特色があることがわかった。3.バイオ調製粒子の触媒能の評価バイオ調製したパラジウム粒子を添加してモデル反応(クロム(VI)イオンの還元)を行ったが、現時点では顕著な触媒効果を見出すことはできなかった。本研究期間は満了するが、モデル反応系の選定を含めて、貴金属ナノ粒子触媒の調製法、バイオ調製触媒の添加量などについて検討を続けて行い、バイオ調製された貴金属ナノ粒子の触媒活性を評価するとともに、化学合成された貴金属ナノ粒子の触媒能と比較したい。
イスラム教徒の視点に根ざした多文化看護ケアの教材と看護実践能力指標の開発

近年、訪日外国人、特にイスラム圏からの訪日客が増加し、医療機関におけるイスラム教患者への対応整備は喫緊の課題となっているが、イスラム教患者の看護に関する教材や異文化看護能力の評価方法は開発されていない。本研究では、イスラム教の看護に関する文献レビュー、イスラム教患者の対応経験を有する看護職や専門家へのインタビューを元に、看護師用イスラム教患者へのケア教材及び看護実践能力指標を開発する。その後、看護職や市職員等を対象にしたワークショップを開催し、コメンテーターとしてイスラム教徒を招き、イスラム教の理解の促進をはかる。また、HPを開設し、開発したケア教材やイスラム教徒向けの医療情報を掲載する。
不完全知識下での法的推論機構の解明

本研究は法律エキスパートシステムの実現には、条文の欠けている知識を補完していく推論機構が必要であることから出発している。不完全知識を補完する推論には、アブダクション、仮説推論、事例ベース推論、状況推論、帰納推論、類推、およびファジィ推論等がある。これら各種不完全知識に基づく推論を統一的に説明するモデルとして、我々はKowalski教授グループのアブダクティブ論理プログラミングに注目した。今年度は、法律エキスパートシステムの法的発見機構と法的正当化機構を統合するプログラミング言語として、Kowalski教授グループの意味論研究を踏まえ、アグダクティブ論理プログラミング言語のメタインタプリタを試作した。アブダクティブ論理プログラミングは後ろ向き推論でアブダクション、すなわち仮説の生成を行い、前向き推論でその仮説が統合性制約を満足することを確認することで、その仮説の正当化を行う。本言語はS-4/2上のSictus Prologでインプリメントされている。本言語の有効性を確認するため、失敗としての否定、非単調推論の各種動作確認とYale Shooting問題の解決やフレーム公理の意味付けとの関連を明らかにした。現在、アブダクティブ論理プログラミングのPrologへのプログラム変換を行い、本言語の効率的なインプリメントを検討中である。また統一売買法から採られた各種例題の解法を検討する過程で、その法的発見・法的正当化機構向けの拡張を検討中である。
組織・心理学的観点に基づいた競争優位性をもたらす介護事業組織運営モデルの研究

本研究の目的は、「ICTとAI技術を活用した新たな組織運営のありかたとその仕組みづくり」について明らかにすることである。介護事業所では、認知症の利用者のケアにかかる職員の負担軽減と、利用者の感情機能の向上を目指したケアが求められている。さらに、サービス向上と業務の効率化の点から、職場内の情報共有のあり方を見直すことが求められている。そのために、本研究では次の2つの視点で検討を進めた。1双方向のコミュニケーションが可能なロボット(Pepper)の導入により、認知症の利用者の感情機能が変化するかどうかについて分析をすすめ、コミュニケーション・ロボットの介護現場でのケアの有効性を確認する。これを検証するために、AI機能を有した表情による感情認識ソフトを用いて、認知症の利用者がPepperとの交流(あり/なし)の場合についての差異を確認した。その結果、Pepperの導入によって、認知症の利用者の感情機能に変化(笑顔が増えるなど)が見られた。同時に、参与観察から、利用者間のコミュニケーションが増加することも確認された。よって、コミュニケーション・ロボットの導入が、職員負担の軽減にもつながる可能性が示された。2情報共有システムの導入により組織アイデンティティと情報共有の効果を分析すること。介護事業所内の情報共有の現状と課題を把握した。その結果、人手不足とアナログな情報共有により、迅速で詳細な内容が、特に遠隔での介護において伝達されにくいことが分かった。そこで、社内にICTを用いたコミュニケーション・プラットフォームを導入し、導入前後の違いについて、職員を対象に調査を行った。その結果、情報共有ツールの活用ルールを整備すれば、従来よりコミュニケーションが改善されることが確認された。また、職員の組織アイデンティティが、職場の情報共有に影響を与えていることも明らかとなった。本研究は、介護現場での人手不足と従業員間の情報共有のあり方を改善することを通じて、介護事業所の経営課題を克服しようとするものである。1介護現場の問題点と目標となる組織運営のあり方の把握については、介護事業所におけるインタビューや参与観察によって、進めることができた。サービス提供時の利用者の様子と介護スタッフの様子を調査した結果、一日のサービス提供のスケジュールの中で、業務が煩雑で手間がかかる時間帯や作業があることが分かった。また、介護スタッフの勤務形態の違いが、時間と場の共有を難しくしており、個人のアイデンティティの差異を生み出している。このことによっても、介護スタッフ間の部門横断的で有機的な情報共有が進みにくいことがわかった。これにより、「介護ロボットの導入」と「情報共有の仕組みの導入」の重要性が確認できた。現在はこれらについてのICTを活用した仕組みのあり方を検討している。2組織への介入前後の変化を評価する仕組みについても検討した。その結果、利用者の心理的・行動上の変化については、認知症である利用者も考慮しつつ、身体に現れる変化による測定手法の絞り込みを行った。また、介護スタッフに与える影響については、インタビューを実施することが良いと判断した。3情報共有のためのシステム構築については、介護事務・利用者情報に対応するパッケージソフトを導入していることが判明した。そこで介護スタッフの人間関係に特化し、低コストに情報を有機的に共有できるSNSの仕組みを提案することとした。1介護現場の問題点と目標となる組織運営のあり方の把握については、介護職員へのインタビューや、介護現場での参与観察を実施した(池田・小早川・中尾・井関)。介護現場の問題点としては、業務が煩雑で手間がかかる時間帯として、特に利用者の帰宅・送迎時に注目することにした。また、介護スタッフ間の情報共有のあり方について、情報共有ノートやツールについて、インタビューを行った。現在の職場での情報共有は、対面・口頭での伝達、ノート、携帯電話、個人間で独自に行うメール、によって行われていた。職務遂行のためだけでなく、人間関係を改善する上でも、組織横断的にスタッフがつながり、情報共有できるツールが必要であることが分かった。介護ロボット(Pepper)については、ソフトバンク社およびシステム会社への調査から、その機能と活用の可能性を検討した。現在はPepperを介して認知症の利用者が、相互にコミュニケーションをとることを可能にし、認知機能と感情機能に影響を与えることを想定したアプリケーションの検討をすすめている。介護事業所での調査(小早川)を行ったところ、すでに多くの利用者において、認知症の進行が認められたことが分かっている。利用者の心理的・行動上の変化については、これまでに想定した検査手法に加えて、唾液・心拍・表情等の変化を測定手法として導入することが、技術的に可能であるかを検討中である。介護スタッフへの調査については、調査時期の調整をすすめている(池田)。3情報共有のためのシステム構築については、介護スタッフの人間関係に特化し、低コストに情報を有機的に共有できる仕組みに着目し、すでに学内で運用を行っているmoodleをベースに活用を検討する(中尾・井関)に至った。本研究は、介護事業所の経営改善に向けて、介護現場の人手不足・情報共有の阻害等の問題点に着目し「利用者へのサービスの質の向上」、「介護職員の働きやすさの向上」を目指して行われるものである。今日、介護事業所では、その労働環境の特性から「職員の離職率の高さ」が問題視されている。調査では、職員の帰属意識や職場の疎外感についても、職員に違いが見られることが分かった。これを組織アイデンティティの視点から見ると、情報共有のあり方を改善すべきだと考えられる。

この為、ICTを用いた情報共有の仕組みを導入し、時間的・空間的な障害を越えて、職員が情報共有できるようにし、その結果として、組織の帰属意識や疎外感が改善されることを目指している。導入すべきは、低コストで安全性を確保でき、有機的にタテとヨコの情報共有が可能な仕組みを備えたコミュニケーション・プラットフォームであるという結論に至った。現在この仕組みの本格導入に向けて、手続きをすすめている。また、介護職員を取り巻く労働環境においては、インタビューの結果、認知症の利用者のケアにおける人手不足の理由として、その方に適した「声掛け」が必要であり、日によって体調も気分も異なるため、一律のマニュアルでの対応は難しいことが挙げられる。また、利用者の離席や不穏による他者とのトラブルも見受けられ、人手が必要である。この為、介護ロボット(Pepper)を導入することによって、介護職員の負担を軽減でき、かつ利用者の心理的な効果を確認できるかという点について調査をすすめてきた。Pepper導入前後で唾液アミラーゼの調査では有意な結果が見られなかった。利用者の表情解析に基づく心理的影響については、解析中である。介護事業所内の情報共有システムの試験的な運用を開始する件については、従来Moodleの導入を検討していた。しかし、メインテナンスおよびセキュリティの観点から、既存の企業が開発したものが好ましいという結論に達した。介護事業所が求めるニーズに照らし合わせて検討した結果、(株)TENDAが提供するコミュニケーション・プラットフォームを導入する方針となり、現在は限定された範囲で試験運用を進めている(池田・中尾)。介護ロボット(Pepper)を活用した利用者に対する調査については、平成29年8月9月にかけて、調査を行った。午前中に実施した「唾液アミラーゼの測定」においては、Pepperの「利用あり/利用なし」、で有意な差はみられなかった(小早川)。午後お茶の提供終了後からお迎えの時間にかけて実施した「脳トレ」や会話のシーンでは、利用者の様子をVTRで撮影し、心理的な変化の測定を試みた。これについては、感情認識AIプラットフォーム「Affectiva」を活用した。現在データを解析中である(池田・小早川)。本研究の目的は、「ICTとAI技術を活用した新たな組織運営のありかたとその仕組みづくり」について明らかにすることである。介護事業所では、認知症の利用者のケアにかかる職員の負担軽減と、利用者の感情機能の向上を目指したケアが求められている。さらに、サービス向上と業務の効率化の点から、職場内の情報共有のあり方を見直すことが求められている。そのために、本研究では次の2つの視点で検討を進めた。1双方向のコミュニケーションが可能なロボット(Pepper)の導入により、認知症の利用者の感情機能が変化するかどうかについて分析をすすめ、コミュニケーション・ロボットの介護
コミュニケ-ション障害児へのCAIシステムの適用に関する研究

本研究班では、研究の実施を大きく2つのグル-プに分けて展開して来ている。即ち、その第1は、主として精神薄弱児の概念学習への知的CAIシステムの適用であり、その第2は、主として聴覚・言語障害児の学習条件整備へのCAI利用の方策である。前者については、基本的幾何図形(円形、三角形、多角形他)および空間概念(ブロック積み木の位置関係他)の学習を細かくモジュ-ル化すると共に基本的原理(プリミティブ)を45の段階層化(ブレインサイズ)した推論エンジンを独自に開発した。この知的なCAIやシステムを軽度の精神薄弱児の概念学習に適用し、学習者の学習進度や誤りの「KR」(フィ-ドバック情報)をキャッチし即時に、その学習パタ-ンを診断し学習者に適切な指示を自動的にCRTをとおして提供することに成功している。他方、聴覚、言語障害教育の部分では、難聴児の、高出力補聴器のより適切なフイッテイン・システムを、知的な推論エンジンの活用と数多の性能の異なった補聴器のデ-タ・ベ-スの組み合わせによって、試験的に構築した。この一種の補聴器フイッテイングのエキスパ-ト・システムを聴覚障害児のコミュニケ-ション促進に役立てる利用者のオ-ジイオグラムの特性、片耳、両耳装用などの個別条件をシステムに自動的にインプットし、より精度の高い「専門部」システムの改良と再構成を試行した。
モンゴルの世界遺産ブルカン・カルドゥン山に関する歴史文献学及び文化遺産学的研究

2015年にユネスコ世界文化遺産に登録されたモンゴル国の「大ブルカン・カルドゥン山」は,13世紀にモンゴル帝国を創建したチンギス・カンの生誕地かつ埋葬地と見なされている。チンギス・カンの陵墓を探す試みは,1990年代から行われてきたが,今も確証を得るに至っていない。本研究は,1大ブルカン・カルドゥン山とチンギス・カンを結びつける歴史資料及び現地伝承を博捜し,チンギス・カンの陵墓所在地について歴史文献学的な結論を提示し,2大ブルカン・カルドゥン山の保存・保護,観光マネジメントに関して文化遺産学的研究を行い,3この貴重な遺産を過去から未来へといかに継承していくかを共同研究によって明らかにする。
加齢病態・疾病発病に関わる神経・免疫・内分泌相関の細胞分子・医療薬学的研究

神経・免疫・内分泌系相関における,臓器間,細胞間および細胞内情報伝達機構を,とくに新規情報伝達物質の関与という点,ならびに,加齢や遺伝子変異,環境ストレスに伴う病態,ならびに遺伝子診断,治療薬物の標的運搬法も考慮に入れた薬物の治療作用とその機序の点より,各研究分担者が研究し,企画・調査活動をするとともに,相互に密接な連絡をとって,本テーマについての基礎研究とさらに創薬に向けた戦略を討論した.すなわち,各班員が互いに連絡をとる一方,平成10年9月25日(金)に各班員が札幌に集まり,これまでの成果について報告し,また当課題について熱心な討論を行った.具体的には,神経・免疫・内分泌関連機構の生理と病態に関する研究に使用する病態モデルとして,老化促進モデルマウス(SAM),高血圧自然発症ラット(SHR),糖尿病マウス(IDDM/NIDDM),自己免疫疾患マウス(MRL),肝炎ラット(LEC)や担がんマウス(各種)などのほか,どのような新しい病態モデルを開発するか,どのようなモデル動物,細胞を使用すべきか,さらに,それらを使用し薬物治療とその合理的投与計画にどうアプローチするかについて調査・検討した.さらに,遺伝子診断,治療も考慮した新しい方法論,実験法をどのように導入すべきかについても予備調査し討論した.なお,このプロジェクトを以下の3グループに分けて取り組んだ.第1のグループは神経・免疫,免疫・内分泌,内分泌・神経のクロストークについて細胞間,細胞内情報伝達物質の作用と受容体応答の機能と機構とくに新規情報伝達物質とその応答の機能と機構に注目し最先端の研究の調査・検討を行った(野村靖幸,入村達郎,堅田利昭,工藤一郎,山内卓).第2のグループは神経・免疫,免疫・内分泌,内分泌・神経のクロストークをとくに病態の発症機序と病態モデル標本における動態,薬物作用機構についての第一線の研究の調査・検討を行った(長尾拓,大内和雄,中川秀夫,長友孝文,馬場明道).第3のグループは神経・免疫,免疫・内分泌,内分泌・免疫の情報伝達機構の正常と病態の機構に特異的に作用し治療作用を発現する薬物作用の詳細を解明し,さらに,これらの遺伝子診断,治療への応用の可能性と標的運搬法も考慮した投与法を検討し,医薬開発の戦略を調査・検討した(佐藤公道,乾賢一,杉山雄一,寺崎哲也,山本格,渡辺繁紀).本プロジェクトに取り組むためにまだ打ち合わせ会議の資料として,論文集を刊行した.神経・免疫・内分泌系相関における,臓器間,細胞間および細胞内情報伝達機構を,とくに新規情報伝達物質の関与という点,ならびに,加齢や遺伝子変異,環境ストレスに伴う病態,ならびに遺伝子診断,治療薬物の標的運搬法も考慮に入れた薬物の治療作用とその機序の点より,各研究分担者が研究し,企画・調査活動をするとともに,相互に密接な連絡をとって,本テーマについての基礎研究とさらに創薬に向けた戦略を討論した.すなわち,各班員が互いに連絡をとる一方,平成10年9月25日(金)に各班員が札幌に集まり,これまでの成果について報告し,また当課題について熱心な討論を行った.具体的には,神経・免疫・内分泌関連機構の生理と病態に関する研究に使用する病態モデルとして,老化促進モデルマウス(SAM),高血圧自然発症ラット(SHR),糖尿病マウス(IDDM/NIDDM),自己免疫疾患マウス(MRL),肝炎ラット(LEC)や担がんマウス(各種)などのほか,どのような新しい病態モデルを開発するか,どのようなモデル動物,細胞を使用すべきか,さらに,それらを使用し薬物治療とその合理的投与計画にどうアプローチするかについて調査・検討した.さらに,遺伝子診断,治療も考慮した新しい方法論,実験法をどのように導入すべきかについても予備調査し討論した.なお,このプロジェクトを以下の3グループに分けて取り組んだ.第1のグループは神経・免疫,免疫・内分泌,内分泌・神経のクロストークについて細胞間,細胞内情報伝達物質の作用と受容体応答の機能と機構とくに新規情報伝達物質とその応答の機能と機構に注目し最先端の研究の調査・検討を行った(野村靖幸,入村達郎,堅田利昭,工藤一郎,山内卓).第2のグループは神経・免疫,免疫・内分泌,内分泌・神経のクロストークをとくに病態の発症機序と病態モデル標本における動態,薬物作用機構についての第一線の研究の調査・検討を行った(長尾拓,大内和雄,中川秀夫,長友孝文,馬場明道).第3のグループは神経・免疫,免疫・内分泌,内分泌・免疫の情報伝達機構の正常と病態の機構に特異的に作用し治療作用を発現する薬物作用の詳細を解明し,さらに,これらの遺伝子診断,治療への応用の可能性と標的運搬法も考慮した投与法を検討し,医薬開発の戦略を調査・検討した(佐藤公道,乾賢一,杉山雄一,寺崎哲也,山本格,渡辺繁紀).本プロジェクトに取り組むためにまだ打ち合わせ会議の資料として,論文集を刊行した.
高血圧性疾患の重症化に関わる遺伝要因の解明とその成果に基づく栄養指導法の構築

高血圧患者において血圧日内変動の異常は心血管疾患の独立したリスクとなる。本研究では日本人高血圧患者の心血管疾患リスク亢進に関わる遺伝要因を解明することを目的とした。高血圧関連遺伝子の一塩基多型解析の結果、ACE2、ECE2、SCNN1A、SLC12A3、MOP4、PER2、PER3遺伝子多型が高血圧患者の夜間血圧上昇と関連を示すことが明らかとなった。また、EDNRAおよびNCX1遺伝子多型が慢性腎臓病発症に、VWF遺伝子多型が頸動脈肥厚の拡大に関わることが判明した。本研究の成果を応用することで、心血管疾患リスクの高い高血圧患者を早期に発見し、適切な栄養指導や投薬を実施できる可能性がある。高血圧患者において、血圧日内変動の異常は脳卒中をはじめとする心血管疾患発症の独立したリスク要因となる。また、高血圧では慢性腎臓病がしばしば合併し、心血管疾患リスクが亢進する。本研究では、日本人高血圧患者の血圧変動異常および慢性腎臓病発症に関わる遺伝要因を解明することで、心血管疾患リスクの高い患者を早期に発見し、適切な栄養指導や投薬を実践するための基盤とすることを目的としている。本年度は、対象高血圧患者の24時間自由行動下血圧測定を完了し、血圧変動異常の有無を判定した。また、全対象者の血清クレアチニン濃度を測定し、推算糸球体濾過量を算出して慢性腎臓病の有無を決定した。さらに、当初は予定していなかった両側頸動脈の内膜中膜複合体厚データも解析し、頸動脈肥厚の進行度を調べた。前年度に収集した候補SNPの遺伝子型判定解析を進め、合計40個の候補SNPについて、全対象者の解析を終了した。この40個のSNPについて、遺伝子型と血圧日内変動異常、慢性腎臓病発症および頸動脈肥厚との関連を解析した結果、ECE2遺伝子の2つのSNPが日本人高血圧患者における夜間血圧上昇と相関を示すことが明らかとなった。また、EDNRA遺伝子およびNCX遺伝子のSNPが慢性腎臓病発症に、VWF遺伝子のSNPが頸動脈肥厚の拡大に関わることが判明した。最終年度となる次年度は、残りの候補SNP遺伝子型解析を完了して、日本人の高血圧患者の重症度や合併症発症リスクに関わる遺伝子多型情報を集計する。高血圧患者において血圧日内変動の異常が虚血性心疾患や脳血管疾患の発生リスクとなることが知られている。本研究では、日本人高血圧患者の血圧変動異常および慢性腎臓病併発に関わる遺伝要因を解明することで、心血管疾患リスクの高い患者を早期に発見し、適切な栄養指導や投薬を実践する上での基盤を構築することを目的としている。本年度は、日本人高血圧患者を対象として、食塩感受性遺伝子と血圧日内変動との関連性を調べた。また、ヒトの概日リズムを制御する時計遺伝子と血圧日内変動との関連も解析した。合計101個の候補SNPについて、全対象者の解析を終了した。この101個のSNPについて、遺伝子型と血圧日内変動異常との関連を解析した結果、ACE2遺伝子、SCNN1A遺伝子、SLC12A3遺伝子、MOP4遺伝子、PER2遺伝子、PER3遺伝子が日本人高血圧患者における夜間血圧上昇と相関を示すことが判明した。本年度は、日本人高血圧患者を対象として、当初より予定していた12遺伝子に加えて、計32遺伝子のDNA塩基配列を解析し、マイナーアレル頻度5%以上の候補SNPを合計90個収集することに成功した。また候補SNPの収集が順調に進んだため、次年度に予定していた全対象者の遺伝子型判定を前倒しで開始している。対象者の24時間血圧測定、血清クレアチニン濃度測定も順調に進んでおり、次年度以降、血圧日内変動異常および慢性腎臓病症状と候補SNP遺伝子型との関連を解析する。現在までに、全対象者の臨床情報解析を完了し、当初予定していなかった頸動脈肥厚データも収集した。遺伝子解析を行う候補SNPも当初予定より多数の取得に成功しており、全体的な研究の進捗は当初の計画以上に進展している。一方、研究計画の規模が当初より拡大したことにより、遺伝子型判定解析に若干の遅延が生じた。これについては次年度中に解析を完了できる見通しである。当初予定の12遺伝子だけでなく、合計32遺伝子について遺伝子解析を進め、90個の候補SNPを収集することに成功したため。

また、2年目に予定していた遺伝子型判定解析を前倒しで開始したため。研究対象とする日本人高血圧患者の臨床情報および候補SNP収集は既に終了した。今後は候補SNPの遺伝子型解析を進め、日本人高血圧患者の血圧日内変動異常、慢性腎臓病発症および動脈硬化(頸動脈肥厚)形成に関わる遺伝子多型情報を集計する。日本人高血圧患者の血圧日内変動異常に関連する候補SNP遺伝子型解析を進める。また、高血圧患者の推算糸球体濾過量(eGFR)に基づいて慢性腎臓病の有無を判定し、慢性腎臓病併発に関わる候補SNP遺伝子型解析を行う。遺伝子解析を行う候補SNPが当初予定より増えたため、次年度の解析に必要な経費が生じた。このため、本年度の繰越金を次年度経費に加えて遺伝子解析用の消耗品に充てる。次年度は最終年度となるため、本研究の成果発表に必要な旅費、学会参加費、論文投稿料などの経費を、旅費およびその他の費目として使用する。DNA塩基配列解析が予定より順調に進んだため。初年度に繰り越し金が生じた。一方、遺伝子型判定解析を行う候補SNPを当初想定した以上に収集できたため、次年度経費に加えて初年度繰り越し金をこの解析用の消耗品費に充てる。また、国内外研究者との意見交換や本研究の成果発表に必要な経費を旅費およびその他の費目として使用する。
胆汁鬱滞による脂質代謝異常に対する小腸の役割の解明

コレステロール排泄機構として胆管を介して腸管へ排泄される経路が唯一の経路と考えられてきたが、新しく血管内コレステロールが、直接、小腸上皮細胞を介して腸管へ排泄する機構(TICE)が発見された。2018年度は胆汁鬱滞モデルが引き起こす脂質代謝異常とTICEとの関係、およびその際のTICEを担う分子機構の解明を目的とした。また、胆管ルート以外の排泄経路としてTICE以外に腎臓を介した尿中へのコレステロール排泄の有無、およびその分子機構についても検討した。肝内胆汁うっ滞を誘発するモデルとして、ANIT(α-Naphthylisothiocyanate)75mg/Kgをマウスに単回経口投与し、投与72時間後の血液、肝、糞と投与48時間後から72時間後の蓄尿中のコレステロール値と尿細管上皮細胞、および小腸上皮細胞のトランスポーターやレセプターの発現について解析した。コントロール群に比較してANIT投与群では、血中のビリルビン、胆汁酸、ALP、および総コレステロールの上昇と肝内の総コレステロールおよび胆汁酸の増加が認められたことより、ANIT投与により胆汁鬱滞と高コレステロール血症が誘導されることが確認された。また、ANIT群では糞中と尿中の総コレステロールの上昇が認められ、肝内胆汁鬱滞下では胆汁中へのコレステロール排泄が低下することより、糞中コレステロール増加の要因としてTICEを介した増加が示唆された。さらには胆汁鬱滞下でTICE以外に尿中へコレステロールが排泄されることが明らかとなった。遺伝子発現に関しては、ANIT群の空腸上皮細胞で血管側のLDLレセプターとSrb1の増加が認められ、これらのレセプターがTICEに関与している可能性が示唆された。また、尿細管上皮細胞の血管側のSrb1と管腔側のAbcg8の増加傾向が認められ、尿中コレステロール排泄に関与している可能性が示唆された。当初の計画通り、胆汁鬱滞誘発モデルの1つであるANIT(α-Naphthylisothiocyanate)をマウスに経口投与することで肝内胆汁鬱滞を誘発し、投与72時間後の糞におけるコレステロールを測定したところ、糞中の総コレステロールの増加を認めた。加えて、胆管ルート以外の他の排泄経路として、尿中総コレステロールを測定したところ、ANIT投与群で増加を認めた。また、TICEを担う分子機構に関して、空腸上皮細胞のコレステロール関連遺伝子の発現を解析したところ、血管から上皮細胞内へのコレステロール取り込みを担うLDLレセプターとSrb1の発現の増加を認めたことより、少なくとも、薬剤誘発性肝内胆汁鬱滞モデルにおけるTICEの増加とその担当分子が推察できた。これらの知見に関して、米国毒性学会で発表を行った。また、並行して総胆管結紮モデルを用いた研究が現在進行中である。2019年度は、薬剤誘発性肝内胆汁鬱滞モデルだけでなく、他のモデルとしてラットの総胆管結紮モデルを用いる予定である。総胆管を結紮することで完全に胆管ルートからのコレステロール排泄を遮断し、純粋に小腸や腎臓から糞便や尿へとコレステロールが排泄されるかどうか確認し、その際のTICEや腎臓を介したコレステロール排泄の担当分子機構に関して小腸上皮細胞と腎尿細管上皮細胞のコレステロール関連遺伝子の発現の変化を検討する予定である。また、ラットを用いることでマウスとの種差があるかどうかも確認する予定である。

当初の計画通り、胆汁鬱滞誘発モデルの1つであるANIT(α-Naphthylisothiocyanate)をマウスに経口投与することで肝内胆汁鬱滞を誘発し、投与72時間後の糞におけるコレステロールを測定したところ、糞中の総コレステロールの増加を認めた。加えて、胆管ルート以外の他の排泄経路として、尿中総コレステロールを測定したところ、ANIT投与群で増加を認めた。また、TICEを担う分子機構に関して、空腸上皮細胞のコレステロール関連遺伝子の発現を解析したところ、血管から上皮細胞内へのコレステロール取り込みを担うLDLレセプターとSrb1の発現の増加を認めたことより、少なくとも、薬剤誘発性肝内胆汁鬱滞モデルにおけるTICEの増加とその担当分子が推察できた。これらの知見に関して、米国毒性学会で発表を行った。また、並行して総胆管結紮モデルを用いた研究が現在進行中である。2019年度は、薬剤誘発性肝内胆汁鬱滞モデルだけでなく、他のモデルとしてラットの総胆管結紮モデルを用いる予定である。総胆管を結紮することで完全に胆管ルートからのコレステロール排泄を遮断し、純粋に小腸や腎臓から糞便や尿へとコレステロールが排泄されるかどうか確認し、その際のTICEや腎臓を介したコレステロール排泄の担当分子機構に関して小腸上皮細胞と腎尿細管上皮細胞のコレステロール関連遺伝子の発現の変化を検討する予定である。また、ラットを用いることでマウスとの種差があるかどうかも確認する予定である。
5型・11型コラーゲン分子の骨・軟骨・筋・歯牙における遺伝子発現及び機能解析

V/XI型コラーゲンは線維形成に必須である。六つのα鎖より構成され、時間的、空間的に特異的な発現を示す。本研究では骨芽細胞におけるα1(V)、α3(V)遺伝子、歯牙細胞におけるα2(XI)鎖遺伝子の転写調節について解析し、基本プロモーターの領域を明らかにした。また骨分化誘導因子Sp7/Ostrerixの結合部位をα1(V)、α3(V)遺伝子プロモーター上において同定した。さらに、創傷治癒モデルにおける、V/XI型コラーゲンα鎖の経時的な遺伝子発現パターンを明らかにした。間葉系幹細胞は種々の刺激を受けて、骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、筋芽細胞、線維芽細胞に分化する。分化後、これらの細胞はコラーゲン分子を産生する。その中で、私たちは組織に比較的微量に存在するV/XI型コラーゲンの遺伝子発現及び機能に関する研究を行っている。平成20年度は以下の2点について主に結果を得た。1)V型コラーゲンα3鎖遺伝子の転写調節:この遺伝子の骨芽細胞における主要転写開始点は、翻訳開始点上流-102bpであった。ルシフェラーゼアッセイの結果より、基本プロモーター活性は転写開始点上流-337bpまでの領域であった。ゲルシフトアッセイの結果より、基本プロモーター領域内に2箇所の転写因子結合部位が認められた。各々の領城には関与する結合因子はSp1/3及びCBF/NF-Yであると思われた。2)XI型コラーゲンα2鎖遺伝子の転写調節:従来、この遺伝子は軟骨に発現することが知られているが、私たちは歯牙組織で発現していることを以前より見出している。今回、象牙芽細胞を用いて転写調節機構の解析を行った。転写開始点は翻訳開始点の上流134bpに認められた。これは軟骨細胞における転写開始点下流384bpに位置しており、軟骨細胞での転写調節とは異なることが示唆された。ルシフェラーゼアッセイの結果より、基本プロモーター活性は転写開始点上流+133bpまでの領域であった。ゲルシフトアッセイの結果より、基本プロモーター領域内の2つの領域(+191+270及び+251+330)に結合する因子の存在が明らかになった。また、第1イントロンには軟骨と異なりエンハンサー活性は認められなかった。間葉系幹細胞より骨芽細胞、軟骨細胞、脂肪細胞、筋芽細胞、線維芽細胞が分化する。分化後、これらの細胞はコラーゲン分子を産生するようになる。平成21年度は以下の2点について主な結果を得た。1) V型コラーゲンα3鎖(α3(V))遺伝子の転写調節:平成20年度の研究により、この遺伝子の近位プロモーター領域に転写因子であるSp1/3及びCBF/NF-Yが結合することを認めた。本年度は骨芽細胞を用い、Sp1結合部位に同ファミリーメンバーであるSp7/Osterixの関与について調べた。Sp7/Osterixは骨芽細胞に特異的に発現する転写因子である。その結果、Sp7/OsterixはSp1結合部位に結合し、Sp1よりもV型コラーゲンα3鎖遺伝子の転写活性を増加させた。また、V型コラーゲンα3鎖遺伝子の転写はSp7/Osterixに特異的なRNAiで25%程度抑制することができた。また、前骨芽細胞を骨芽細胞に分化させると成熟するにつれ、Sp7/Osterixの発現が増加し、それに比例して、V型コラーゲンα3鎖遺伝子の転写活性が増加した。2) XI型コラーゲンα2鎖(α2(XI))遺伝子発現:従来、この遺伝子は軟骨に発現することが知られているが、私たちは歯牙組織で発現していることを以前見出した。本年度は歯根部及び歯冠部における転写産物をα1(XI)鎖、α1(V)鎖、α2(V)鎖遺伝子の転写産物とreal time RT-PCR法を用いて定量的に比較した。その結果、α2(XI)鎖遺伝子の発現量は歯冠部に多く、歯根部に少なく、α1(V)鎖、α2(V)鎖遺伝子と類似していた。一方、α1(XI)鎖遺伝子は歯根部に多く、歯冠部に少なく、両遺伝子の発現が異なることが示された。間葉系幹細胞より骨芽細胞、軟骨細胞、筋芽細胞、歯芽細胞が分化する。平成22年度は以下の2点について主な結果を得た。1)V型コラーゲンα1鎖(α1(V))

遺伝子の転写調節:以前、横紋筋肉腫細胞を用いた研究において、この遺伝子の近位プロモーター領域に転写因子CBF/NF-Yが結合することを認めた。本年度は骨芽細胞を用い、骨芽細胞に特異的に発現する転写因子Sp7/Osterixの関与について調べた。その結果、Sp7/OsterixはSp1結合部位に結合し、Sp1よりもV型コラーゲンα1遺伝子の転写活性を増加させた。また、特異的なRNAiで25%程度抑制することができた。また、前骨芽細胞を骨芽細胞に分化させると成熟するにつれ、Sp7/Osterixの発現が増加し、それに比例し、V型コラーゲンα1鎖遺伝子の転写活性が増加した。2創傷治癒におけるV型コラーゲンα3鎖(α3(V))遺伝子の発現:マウス背部に全層欠損マウスを作製し、フィブリル型コラーゲンの発現をRT-PCR法で定量した。その結果、他の鎖に比べ、発現量は低く、410日にかけて一過性であった。特異抗体を作製し、免疫電顕を行ったところ、α1鎖が細いフィブリルに存在しているのに対し、この鎖はコラーゲン線維や細いフィブリルには見られず、不定型な構造の中に存在していた。また、以前のin vitroの研究で示唆したように、ヘパラン硫酸と一緒に同部位に存在していた。
肝細胞癌新規血清腫瘍マーカーGPC3、AKR1B10の臨床応用

網羅的遺伝子発現解析による肝癌特異的発現上昇遺伝子として同定されたGPC3およびAKR1B10について、50例の切除検体の免疫染色と術前に採取した血清中濃度を比較して高い相関が得られることが示された。さらに術前に血清GPC3が高値であった症例の術後フォロー中の血清について経時的に測定することにより、再発時に上昇しTAEや再切除などの治療によって低下することが確認された。また、初回治療(肝切除による根治手術)後に血清GPC3が低下しない症例が約10%程度存在し、このような患者では有意に術後再発率が高いことも示されている。一方、包括的遺伝子発現解析を行った肝癌切除検体についてDNAを抽出し、SNPアレイを用いた肝癌コピー数解析も併せて行った。同一検体中のコピー数変化と発現レベルとの比較において高い相関性が認められ、遺伝子発現はゲノム変化に強く影響を受けていることが示された(Midorikawa, et al, Oncogene. 2006)。遺伝子治療としては、GPC3を高発現する細胞株HepG2をマウスに皮下移植した腫瘍に、ペプチド由来の抗GPC3モノクローナル抗体を血管内投与すると著名な抗腫瘍が認められ、抗体による肝細胞癌に対する治療効果が期待される。AKR1B10については、PLC/PRF/5細胞株をsiRNAによりノックダウンすることによりアドリアマイシンの感受性が有意に上昇していることが確認された。さらに、PLC/PRF/5をヌードマウスに皮下に移植し、アテロコラーゲンによりsiRNAを腫瘍に浸潤させてアドリアマイシンの感受性を比較したところ、AKR1B10ノックアウト群でアドリアマイシン投与による腫瘍縮小効果が有意であった。これらの実験結果から抗AKR1B10抗体とアドリアマイシンの併用による肝癌に対する分子標的治療の可能性が示された。外科的に切除された肝細胞癌よりRNAを抽出し、マイクロアレイによる網羅的遺伝子発現解析によりGPC3およびAKR1B10が肝癌で特異的に発現上昇していることを確認した。GPC3については、すでに血清マーカーとして臨床応用され得ることを報告している。また、画像診断技術の向上により、従来の古典的肝癌に加えて早期肝癌、肝細胞癌類似病変が発見されるようになり、肝細胞癌に対する治療を行うべきか否かの決定が、病理診断においてさえも困難である症例は増えている。このような症例に対し、GPC3を肝癌症例100例に対して免疫染色を行い、高率にGPC3により肝細胞癌の診断が可能であることを示し、GPC3が病理用マーカーとして実用化可能であることを報告した(Yamauchi et al, Modern Pathol. 2005)。遺伝子治療としては、GPC3を高発現するHepG2をマウスに移植して生じた腫瘍に、抗GPC3モノクローナル抗体を血管内投与すると腫瘍が著しく縮小することから、抗体による肝細胞癌に対する治療効果が期待される。一方、AKR1B10については、その糖代謝能よりアドリアマイシン耐性に関与していると推測し、以下の実験をおこなった。AKR1B10を高発現するPLC/PRF/5細胞株をsiRNAによりノックダウンすることにより、アドリアマイシン投与による細胞増殖能の変化を調べたところ、AKR1B10の発現低下によりアドリアマイシンの感受性が有意に上昇していることが確認された。

以上より、AKR1B10はアドリアマイシン抵抗性に関与する遺伝子であることが推察された。網羅的遺伝子発現解析による肝癌特異的発現上昇遺伝子として同定されたGPC3およびAKR1B10について、50例の切除検体の免疫染色と術前に採取した血清中濃度を比較して高い相関が得られることが示された。さらに術前に血清GPC3が高値であった症例の術後フォロー中の血清について経時的に測定することにより、再発時に上昇しTAEや再切除などの治療によって低下することが確認された。また、初回治療(肝切除による根治手術)後に血清GPC3が低下しない症例が約10%程度存在し、このような患者では有意に術後再発率が高いことも示されている。一方、包括的遺伝子発現解析を行った肝癌切除検体についてDNAを抽出し、SNPアレイを用いた肝癌コピー数解析も併せて行った。同一検体中のコピー数変化と発現レベルとの比較において高い相関性が認められ、遺伝子発現はゲノム変化に強く影響を受けていることが示された(Midorikawa, et al.,Oncogene.2006)。遺伝子治療としては、GPC3を高発現する細胞株HepG2をマウスに皮下移植した腫瘍に、ペプチド由来の抗GPC3モノクローナル抗体を血管内投与すると著名な抗腫瘍が認められ、抗体による肝細胞癌に対する治療効果が期待される。AKR1B10については、PLC/PRF/5細胞株をsiRNAによりノックダウンすることによりアドリアマイシンの感受性が有意に上昇していることが確認された。さらに、PLC/PRF/5をヌードマウスに皮下に移植し、アテロコラーゲンによりsiRNAを腫瘍に浸潤させてアドリアマイシンの感受性を比較したところ、AKR1B10ノックアウト群でアドリアマイシン投与による腫瘍縮小効果が有意であった。これらの実験結果から抗AKR1B10抗体とアドリアマイシンの併用による肝癌に対する分子標的治療の可能性が示された。
SLEモデルにおけるB1細胞遊走異常による免疫寛容破綻とその是正

SLEの動物モデルであるBWF1マウスにおいて、B細胞ケモカインBLC/CXCL13の異所性高発現がB1細胞の遊走異常を引き起こすことが、病態形成に重要な役割を果たしていることを示唆するこれまで蓄積されてきた成績に基づき、発症初期のBWF1マウスに抗BLC/CXCL13中和抗体を投与したところ、生存曲線の改善を認めた。B1細胞はその強力な抗原提示能によりTFH様のヘルパーT細胞を誘導することが明らかになったが、中和抗体投与はTFHレベルや抗DNA抗体のレベルには影響を及ぼさず、血中IL-17レベルが著明に抑制された。以上の結果から、B細胞ケモカイン(BLC/CXCL13)は、SLE治療における分子標的として有用であることが示唆された。我々はこれまでに代表的なSLE自然発症モデルである(NZBxNZW)F1マウスにおいて、B細胞ケモカインBLC/CXCL13の異所性高発現によるB1細胞の遊走局在異常がSLE病態形成に重要な役割を果たすことを示唆する成績を報告してきた。本年度研究において、BWF1マウスでは、CXCR5、MHCクラスII、ICOS、CD69発現など、いわゆる濾胞性ヘルパーT細胞のフェノタイプを有するCD4T細胞が加齢に伴い増加していることが明らかになった。さらにこのCXCR5陽性CD4T細胞がB1細胞のIgG抗体産生を促進することも明らかとなった。一方、B1細胞はB2細胞よりはるかに強い抗原提示能を有し、自己CD25^-XD4T細胞を活性化し、IgG抗体産生を促進するヘルパーT細胞を誘導することが明らかとなった。またB1細胞との共培養によりCD25^+CD4T細胞のFoxp3の発現は低下することも明らかとなり、B1細胞の移入実験ではFoxp3陽性細胞とB1細胞の細胞間相互作用を示唆する像も認められた。さらに、B1細胞により活性化されたT細胞(CFSE^<low>CD4T細胞)もT_<FH>のフェノタイプを共有しており、B1細胞やB2細胞のIgG抗体産生を促進し、この抗体産生促進は抗CD40L抗体により阻害されることが明らかとなった。以上の結果、B細胞ケモカインBLC/CXCL13の異所性高発現によるB1細胞のリンパ組織や標的臓器への遊走異常が、その微小環境下でT_<FH>への分化を促進しIgG自己抗体産生に関与する可能性が示唆された。またTregとの相互作用はFoxp3発現を低下させ、免疫寛容の破綻をもたらす可能性も示唆された。近年Treg、T_<FH>、Th17が相互に密接な関係を有することが明らかになりつつあり、SLE病態における病理学的意義の解明することにより、従来にない治療戦略が可能になることが期待される。その結果、BLCの異所性高発現が認められる5ヶ月齢のBWF1マウスにモノクローナル抗BLC中和抗体を2ヶ月間投与した群では、明らかに生存曲線の改善が認められた。抗体投与マウスでは末梢血中のB1細胞が増加が認められ、遊走阻止効果があることが示唆された。一方、濾胞性ヘルパーT細胞(CXCR5^+CD4T細胞)のレベルは末梢血および脾臓において有意な変化は認められなかった。血中IgGおよびIgG抗DNA抗体のレベルにも有意な影響は認められず、抗BLC中和抗体の治療効果はIgG自己抗体産生の制御によるものではないことが示唆された。今後、作用機序の解明やSLE発症マウスに対する治療効果の検討が必要と考えられる。SLEに対する生物学的製剤として期待された抗CD20抗体や抗BAFF抗体などが、臨床試験から撤退する状況のなかで、本研究により抗BLC中和抗体の有用性が示唆されたことにより、今後の臨床応用に向けた研究が期待される。この点を考慮し、本年度の研究成果は未発表としている。研究代表者は、全身性エリテマトーデス(Systemic lupus erythematosus,SLE)の自然発症動物モデルであるBWF1マウスを用いて、B細胞ケモカイン(BLC/CXCL13)異所性高発現の病理学的意義を明らかにし、抗BLC中和抗体の治療効果を明らかにしてきたが、本年度も引き続き、このモノクローナル中和抗体による治療効果の有無とその機序に関する検討を行った。22年度研究期間において、抗BLC中和抗体投与が生存曲線の改善をもたらすことが明らかとなったが、さらに異なる投与方法により抗BLC中和抗体を4ヶ月間投与した群でも、生存曲線の改善傾向が認められた。

抗体投与マウスでは末梢血中のB1細胞が増加が認められ、遊走阻止効果があること、濾胞性ヘルパーT細胞(CXCR5+CD4T細胞)のレベルは末梢血および脾臓において有意な変化は認められないこと、血中IgGおよびIgG抗DNA抗体のレベルにも有意な影響は認められず、抗BLC中和抗体の治療効果はIgG自己抗体産生の制御によるものではないことが昨年度研究で示唆されたが、さらに23年度研究では、抗BLC中和抗体の効果がIL-17産生抑制によるものである可能性が示唆された。SLEに対する生物学的製剤として期待された抗CD20抗体や抗BAFF抗体などが、臨床試験から撤退する状況のなかで、本研究により抗BLC中和抗体の有用性が示唆されたことにより、今後の臨床応用に向けた研究が期待される。この点を考慮し、本年度の研究成果は未発表としている。