hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
二次元の場の理論の可積分系への応用

共形場理論の一種であるWZW模型をRiemann球面上で考えた時、そのlevelがcritical level(Lie環のdual Coxeter数の(-1)倍)でない時は、理論は点の配置のmoduli空間上の可積分接続(KZ方程式)で記述される事は良く知られている。楕円曲線上の標準的なWZW模型に対してもこのような可積分接続があり、KZB方程式と呼ばれる。これまでに本研究者によってKZB方程式の解の積分表示等が研究された。本年度はこれを本研究者が導入した非標準的なWZW模型(twisted WZW model)に拡張してEtingofの楕円型KZ方程式についての結果を得ることを目標とし、楕円曲線がmoduli空間の境界(楕円型KZ方程式の特異点)上で退化して特異有理曲線になる場合を考察した。そこではconformal blockの空間の空間がorbifold WZW模型のconformal blockの空間へと分解する事が分かった。これは、楕円型KZ方程式の解の(確定特異点での)初期値がorbifold WZW模型のconformal blcokによって与えられることを示すもので、解の構造の解析への第一歩となる。論文は準備中である。また、monopoleのmoduli空間などの上の自然な可積分系を発見し、これのSklyaninの意味での変数分離を行った。共形場理論の一種であるWZW模型をRiemann球面上で考えた時、そのlevelがcritical level(Lie環のdual Coxeter数の(一1)倍)でない時は、理論は点の配置のmoduli空間上の可積分接続(KZ方程式)で記述される事は良く知られている。また、levelがcritical levelに近づくときの漸近挙動は、可積分な格子模型の一種であるGaudin模型やRiemann球面上の幾何学的Langlands対応と密接に関係する。楕円曲線上の標準的なWZW模型に対しても、これまでに本研究者によって・KZB方程式の解の積分表示;・脇本加群の理論を応用によるBethe vectorの構成;等が研究された。本年度はこれを本研究者が導入した非標準的なWZW模型(twisted WZW model)に拡張してEtingofの楕円型KZ方程式やXYZ Gaudin模型についての結果を得ることを目標とした。しかし、現在この模型に適用可能な脇本加群の理論が無いため、可解格子模型の研究で知られているintertwining vectorを応用して上記の標準的な模型の結果から非標準的な場合の結果を得る事を試み、楕円型KZ方程式について研究をしているオーストラリアのZhang, Zhao両氏らと意見交換を行った。また、量子重力理論や位相的弦理論に現れるVirasoro条件を調べるため、新しい無分散可積分系(dispersionless mKP hierarchy)を構成して解の特徴づけ等を行った。論文は準備中である。
サルモネラの自然免疫回避エフェクターの機能解析

本研究では炎症制御エフェクターSpvCが感染後期においてリン酸化スレオニンリアーゼ活性によりSalmonella enterica serovar Typhimurium (S. Typhimurium)のマウス脾臓内増殖性に関与することが明らかとなった。また、III型エフェクターSseK1、SseK2およびSseK3がNF-κB活性化を制御することが明らかとなった。SseK1、SseK2およびSseK3はサルモネラ属菌が保有する2つのIII型分泌機構T3SS-1およびT3SS-2から分泌されるエフェクタータンパク質である。これまでにこれらのタンパク質がサルモネラのマウスに対する病原性に関与することが明らかになっているが、その機能は不明である。そこでサルモネラ感染時におけるSseK1、SseK2およびSseK3の機能を詳細に解析することを試みた。SseK1、SseK2およびSseK3は腸管病原性大腸菌のIII型エフェクターNleBとそれぞれアミノ酸相同性をもつ。NleBはNF-κB活性化経路を不活化する機能を持つことから、SseK1-3も同様の機能を持つことが予想された。そこで、ヒト子宮頸癌由来上皮細胞株HeLaにNF-κBプロモーター部位をもつルシフェラーゼレポーターベクターとSseK1またはSseK2、SseK3をコトランスフェクションし、ルシフェラーゼアッセイによりSseK1-3がNF-κB経路を不活化するか否かを調べた。また、SseK1-3をそれぞれトランスフェクションしたHeLa細胞をTNF-αで刺激し、活性化したNF-κB経路を不活化するか否かを抗リン酸化IκBα抗体を用いたイムノブロッティングにより検証した。その結果、SseK1およびSseK3でNleBと同程度のNF-κB活性化の抑制がみられた。次にSseK1およびSseK3と相互作用する宿主因子を同定するために、SseK1およびSseK3をGST融合タンパク質として大腸菌内で大量発現させ、精製後、HeLa細胞の細胞溶解液と反応させ、GSTプルダウンアッセイによりGST-SseK1またはSseK3と結合する宿主因子を質量分析により同定することを試みた。しかし、これまでにSseK1またはSseK3と結合する宿主因子は同定できていない。本研究はサルモネラの自然免疫回避機構を解明することが目的である。平成24年度はサルモネラの自然免疫回避エフェクターSpvCに注目した。SpvCはリン酸化スレオニンリアーゼ(PTL)活性をもち、感染宿主のmitogen-activated protein kinases(MAPKs)を不活化する。報告者らは、SpvCはサルモネラ感染時に腸管において分泌され、MAPKsを不活化することで炎症を制御し、菌を全身に拡散させる役割を担うことを明らかにした(Cell Microbiol, 2012)。また、マウスを用いたin vivo感染実験により、SpvCによるマウス脾臓内増殖性(全身感染性)にはPTL活性すなわちMAPKsの不活化が関与することを示唆するデータを得た(データ未発表)。サルモネラが全身感染性を示すにはマクロファージ内で増殖することが重要であることから、まず、サルモネラ野生株またはSpvC変異株をマクロファージ様培養細胞RAW264.7に感染し、細胞内で増殖を比較した。その結果、SpvC変異株の細胞内増殖性は野生株と同程度であった。また、DBA2マウス大腿骨由来の骨髄マクロファージ(BMM)を用いて同様の実験を行ったが、サルモネラ野生株とSpvC欠失株に細胞内増殖性の違いは見られなかった。次にマクロファージ内でSpvCがPTL活性を示すか否かを調べるために、SpvCを発現させたRAW264.7細胞またはBMMを用いて、MAPKsの表現系(炎症性サイトカインの分泌性[p38 MAPK]、細胞増殖性[ERK1/2 MAPK]およびアポトーシス誘導性[JNK MAPK])を調べた。しかしながら、どの表現系もSpvCを発現していない細胞と同程度であった。以上のことからSpvCによるマウス臓器内増殖性にはマクロファージ内での増殖およびPTL活性は関与しないことが示唆された。本研究では、これまでに共にアミノ酸相同性を示すサルモネラ属細菌のIII型エフェクターSseK1、SseK2およびSseK3が宿主のnuclear factor-kappa B (NF-κB)活性化を制御することを明らかにした。これらのタンパク質は感染局所での炎症を制御し、菌の全身拡散を誘導する自然免疫回避エフェクターとして機能することが予想される。本年度はこれらタンパク質がどのようにNF-κB活性化を制御するかを明らかにするために、相互作用する宿主タンパク質を同定することを試みた。さらに腸炎モデルマウスを用いた感染実験によりNF-κB活性化制御が個体に与える影響をin vivoにおいて解析した。SseK1、SseK2およびSseK3は腸管病原性大腸菌のIII型エフェクターNleBとアミノ酸相同性を示す。

NleBはN-acetylglucosaminetransferase(N-AGT)活性をもち、GAPDHやDeath DomainファミリーであるFADDおよびTRADDと結合することが報告されている。そこで、SseK1、SseK2およびSseK3がN-AGT酵素活性をもつか否か、またGAPDHやFADDと結合するか否かを調べた。しかしながら、NleB、SseK1、SseK2およびSseK3共にN-AGT酵素活性が見られず、またGAPDHまたはDDファミリータンパク質との結合性を明らかにすることができなかった。一方、SseK1、SseK2またはSseK3がin vivoで自然免疫回避エフェクターとして機能するか否かを明らかにするため、これらIII型エフェクターをコードする遺伝子の欠失株、または全て欠失した三重変異株を腸炎モデルマウスに感染させ、盲腸の炎症の程度を野生株感染マウスと比較した。その結果、野生株、単独欠失変異株、または三重欠失変異株感染マウスともに、盲腸の炎症は同程度であった。このことから、サルモネラ属細菌において未知NF-κB制御タンパク質の存在が予想され、今後、全てのNF-κB制御タンパク質を同定したうえで、それらを包括的に機能解析することが必要である。医歯薬学平成25年度はサルモネラIII型エフェクターSseK1-3のうちSseK1およびSseK3にNF-κB活性化を抑制する機能をもつことを明らかにした。また、これらサルモネラエフェクタータンパク質と結合する宿主因子を同定することには至っていないが、同定するために必要なプラスミドまたは菌株を作成した。平成24年度はサルモネラの自然免疫回避エフェクターとして報告されているSpvCの全身感染性における役割を明らかにすることを試みた。実験は交付申請書に記載した研究計画どおりに進んだが、SpvCはマクロファージ内増殖性へには関与せず、またSpvCを発現させたマクロファージにおいてMAPKsの不活化を確認することが出来なかった。近年、他の複数の研究グループにより腸管病原性大腸菌のIII型エフェクターNleBと結合する宿主因子としてGAPDHやDeath Domainタンパク質(FADDおよびTRADD)が同定され、また、NleBはN-acetylglucosamine transferase活性を持つことが報告された。今後、SseK1またはSseK3が(1)これらタンパク質と結合するか否か、(2)この酵素活性をもつか否かを検討する。具体的な方法を以下に示す。(1)予想される宿主タンパク質との結合性の有無を調べるNleBとの結合が報告されたGAPDH、TRADDまたはFADDを哺乳動物発現ベクターにクローニングし、すでに作成済みのSseK1-FLAGまたはSseK3-FLAGとHeLa細胞にコトランスフェクションし、FLAGプルダウンにより結合したタンパク質をイムノブロッティングにより同定する。(2)酵素活性の有無を調べる平成25年度以降は別のIII型エフェクターSseK1、SseK2およびSseK3の機能解析を行う。SseK1、2および3はそれぞれがアミノ酸相同性を示すタンパク質であり、T3SS-1および-2から分泌されるIII型エフェクターであることが知られている。
琉球諸方言の指示詞の研究ー日琉祖語の解明を目指してー

琉球諸方言には二系列の指示詞を持つ方言と三系列の指示詞を持つ方言が存在する。しかし、それぞれの指示体系の実態がどのようなものか、また二系列指示体系と三系列指示体系がどのような歴史的関係にあるのかは明らかになっていない。本研究では琉球諸方言の指示体系について、直示用法・照応用法の調査を行い、その実態を明らかにするとともに、どのような祖体系からそれぞれの方言が変化してきたのかを明らかにする。また、そこで得られた琉球祖語の祖体系を古代日本語の指示体系と比較することにより、日本語と琉球語の祖語(日琉祖語)の指示体系にも迫っていく。
天然物を利用した体細胞核の初期化促進に関する研究

体細胞核移植卵の発生能は,核移植時にヒストン蛋白質のアセチル化を修整する処理(TSA処理)や初期化に関与するタンパク質(TCTP)の導入等を行うことで,多少改善されるが,劇的な向上には結びつかず,正常産子生産率は依然として数パーセント程度である。そのため,体細胞核を正しく初期化させて正常に発生させるには,ピンポイントの救済術では不十分である可能性があると考えられる。本研究では,体細胞全体,あるいは卵全体の潜在的な生命力を高めることを期待して,天然物を用いた初期化促進法の開発,ならびに,天然物による胚の質の改善と向上を試みた。本年度は下記を中心に実施した。前年度に引き続き,受精卵を用いて初期化を促進する天然物ならびに胚の質を改善する天然物の探索を行った。また,前年度までの結果から効果が見られた天然物数種類を用いて,受精卵の体内発生能の検討ならびに,核移植卵の発生能に及ぼす影響を検討した。核移植法は,当研究室の常法(Cloning and stem Cells., 10,133,2008.など)に従い,それぞれの天然物添加培地を用いて培養した。そして,受精卵,核移植卵のいずれも,胚盤胞への発生能とそれらを受胚雌へ移植後の妊娠中期の胎子,あるいは,正常産子への発生能を検討した。核移植卵においては,胚盤胞への発生能に対照区と大差がみられなかった。受胚雌へ移植後の体内発生能も,受精卵,核移植卵いずれにおいても,劇的な向上はみられなかった。体細胞クローン動物の作出効率は現在でも依然として低く,その原因は,様々な不具合が複雑に絡み合った結果であると考えられる。それらの不具合は,たとえばヒストン蛋白質のアセチル化を修整する処理(TSA処理)や初期化に関与するタンパク質(TCTP)の導入等を行うことで多少改善されるものの,劇的な向上には結びつかず,体細胞核移植後の正常産子生産率は,依然として数パーセント程度である。このことから,体細胞を核移植後,正しく初期化させて正常に発生させるには,ピンポイントの救済術では不十分である可能性があると考えられる。本研究では,体細胞全体,あるいは卵全体の潜在的な生命力を高めることを期待して,天然物を用いた初期化促進法の開発,ならびに,天然物による胚の質の改善と向上を試みる。すなわち,初期化を促進する天然物ならびに胚の質を改善する天然物の探索を行った。滋養強壮,不妊治療,傷の治療などに効果があるとされている生薬を中心とした約100種類の天然物の中から,平成16年度19年度の基盤A研究(研究分担者)「初期化誘導活性を持つ天然物の探索;クローン個体の作出,未分化対細胞株樹立への応用」の中で得られた知見に基づき初期化の促進に有効と考えられるものを選び出し,受精卵を用いて増殖能などが向上し胚の生命力に効果がみられる天然物を見つけ出すことを目的として実施した。約40種の天然物を用いて,受精卵の発生能を検討したところ,胚盤胞への発生能はいずれも対照区と大差がみられなかった。しかしながら,胚盤胞の細胞数(ICM, TE)が対照区と比較して有意に向上しているものがいくつかみられた。これらの結果を踏まえて,次年度は体細胞核移植卵の発生能に対する影響を検討する。
小学生における無気力感メカニズムと教師介入プログラムの検討

小学生の無気力感の構成要因として,随伴性認知・コーピングエフィカシー・思考の偏り・保護者との感情交流を同定し,測定尺度を作成した。続いて無気力感モデルを検討した結果,保護者との感情交流がコーピングエフィカシー・思考の偏りを媒介して随伴経験に影響し無気力感につながる経路が認められた。以上に基づき,小学生の無気力感の仕組みと対処方法を提案した教師用冊子を作成した。小学生の無気力感のメカニズムを探索的に検討するため,無気力感に認知的要因がどの程度介在しているのかを探索的に検討するために,本研究では以下の小学生4年生・5年生の児童を対象とした調査・分析を行った。以上の結果から,児童期の子どもの多くの子どもたちは抑うつ認知論的(Beck,1967)における抑うつスキーマが形成されるだけの経験の認知とそのモニタリングがまだ十分機能していない可能性があると考えられた。その一方で,自動思考あり群における「回避・嫌悪群」が自動思考なし群に比べて有意に得点が高い結果となったこと,また無気力感の理由に関して,無気力感低群の児童より高群の児童がコーピング・エフィカシーの低さと思考の偏りによる理由が有意に高い結果となったことから,非随伴経験の認知とそのモニタリングによる抑うつスキーマの原型が形成された結果,ネガティブな思考が生起して無気力感の高さにつながっている児童が存在する可能性も併せて示唆されたと考えられる。まず前年度の調査から,小学生の無気力感の構成要因として従来の認知変数以外の要因の関与可能性が示唆されたことから,児童期の無気力感との関連性が示唆される「児童用・感情交流尺度」を開発した。また中学生の無気力感の先行研究で関連性が示唆されている随伴経験・コーピングエフィカシー・思考の偏りについても,前年度の調査で関連性が示唆されたことから,児童用の測定尺度を作成した。いずれの尺度も,因子論的砂糖性・構成概念妥当性・内的整合性が認められた。続いて小学生における無気力感の構成要因を検討するため,作成した尺度を用いて,小学生を対象に調査を行いデータ解析した。無気力感を従属変数,随伴経験・コーピングエフィカシー・思考の偏り・感情交流を独立変数とした重回帰分析を行ったところ,感情交流尺度の下位尺度であるポジティブ感情の送受信・子どものネガティブ感情の送信・保護者のネガティブ感情の受信は有意な値が認められなかった。ただ感情交流尺度の第1・3因子と無気力感は中程度の有意な負の相関が,第2因子とは弱い有意な負の相関が認められたため,保護者との感情交流が他の変数を通じて,無気力感への間接的な影響を与えている可能性を踏まえ,小学生における無気力感モデル構築を試みた。その結果,経験から認知変数を経て無気力感につながる中学生の無気力感モデルとは違い,保護者との感情交流が認知変数につながり,認知変数が経験を経て無気力感につながる経路と,認知変数が直接無気力感につながる経路が確認された。以上から小学生における無気力感は,経験に基づく思考を媒介とした中学生の無気力感とは別経路で構成される可能性が示唆された。また教師介入プログラムの開発の参考にするため,保護者と子どもの感情交流の促進を主眼とした「体のことばに耳をすます-気持ちイメージワーク-」冊子を作成し,小学生の保護者対象の講演で試験的に実施した。昨年度までの研究で,先行研究および児童・教員への質的調査を通じて,随伴性認知・コーピングエフィカシー・思考の偏りに加えて,感情の社会化が児童期の無気力感に関与する変数として同定された。そしてこれらを測定する尺度を,大学附属小学校の児童を対象とした調査を通じて作成した。具体的には,児童用・随伴経験尺度(随伴経験・非随伴経験の2因子構造),児童用・コーピングエフィカシー尺度(1因子構造),児童用・思考の偏り尺度(1因子構造)に加えて,保護者への感情の社会化を測定する,児童用・感情交流尺度(肯定的感情の送受信・否定的感情の子ども送信・否定的感情の保護者受信の3因子構造)を作成し,信頼性・妥当性を検証した。本年度は昨年度調査のサンプルの偏りを補完するため,公立小学校の児童を対象に調査を行い,昨年度作成した尺度の因子構造,および信頼性・妥当性の再検証を行った結果,ほぼ同様の結果を得た。続いてパス解析を用いて探索的に小学生の無気力感のメカニズムを再度検証した。その結果,昨年度の調査同様,保護者との感情交流が子どもの考え方(コーピングエフィカシー・思考の偏り)を媒介して経験の認知(随伴経験)に影響を与え無気力感につながる経路と,保護者との感情交流に影響を受けた子どもの考え方が直接無気力感につながる経路とが併せて認められた。この結果は,経験の認知が子どもの考え方に影響を与え,無気力感の低減・増加への関与が認められた中学生(牧,2011)と構造的に異なることから,発達段階の違いにおける無気力感構造の違いが示唆された。以上の研究結果に基づき,小学生の無気力感の仕組みと対処方法を提案した教師用冊子を作成し,調査協力校へ配布した。今後は冊子に基づく教員研修,および効果検討を行い,本研究知見の現場での有用性を実証する必要があると考える。

続いて無気力感モデルを検討した結果,保護者との感情交流がコーピングエフィカシー・思考の偏りを媒介して随伴経験に影響し無気力感につながる経路が認められた。以上に基づき,小学生の無気力感の仕組みと対処方法を提案した教師用冊子を作成した。25年度の小学生の無気力感要因の探索的検討結果を踏まえ,26年度は予定どおり昨年度の調査結果の学会発表(日本心理学会・日本教育心理学会)を行った。またその調査結果に基づき,小学生の無気力感を構成する変数の同定,およびその測定尺度の作成・信頼性・妥当性の検討および測定尺度を用いたメカニズム検討も,予定通り概ね実施することができた。ただし調査対象が大学附属小学校に通う小学生であったため,平成27年度に公立小学校に通う小学生データを足した上で,最終的な尺度の完成を行う必要がある。また当初の予定にはなかったが,次年度の「小学生の無気力感教師介入プログラムの開発の参考にするため,「保護者と子どもの感情交流の促進」のための冊子の作成・実施を保護者向け講演にて試験的に試みた。臨床心理学平成27年度は,(1)小学生の無気力感モデルの完成(2)モデルに基づく「教師のための無気力感予防ブログラムの立案」(3)「教師のための無気力感予防ブログラム」の実施と効果検討を行う。具体的には,(1)公立小学校データを追加した上で,最終的な小学生における無気力感モデルを完成させる,(2)平成26年度試作した「体のことばに耳をすます-気持ちイメージワーク-」冊子に,最終的な無気力感モデルの知見を加えて,教師が学校生活の中で児童に実施できる対応を中心にまとめた「大人がいれる子どものやる気スイッチ」冊子を作成し,教員研修型の無気力感予防プログラムを完成させる,(3)(2)で作成したプログラムを小学校の教員研修で実施し,効果検討を行う予定である。児童の無気力感を探索的に検討するための調査は概ね計画通り実施・分析が進んでおり,2年目のH26年度はその分析結果を学会で発表する運びになっている。その一方で,教師を対象とした児童の無気力感に関する質的調査データが十分集まっていないこと,児童の無気力感とその構成要因に関する文献研究をまとめる段階には至っていないことが,H25年度に十分実施できなかった点であると考える。<調査関連費用>4つの尺度(随伴経験尺度・コーピングエフィカシー尺度・思考の偏り尺度・感情交流尺度)の信頼性・妥当性を高め,小学生の無気力感モデルを完成させるために,公立小学校データを追加し再分析する必要がある。このためサンプリングとして関西・四国・関東などの公立小学校への調査依頼が必要であり,そのための旅費・質問紙作成費・郵送費・データ入力費用などが必要である。また小学生の無気力感予防プログラム作成に伴う冊子および効果検討用の質問紙の印刷費,実施依頼・プログラム実施予定校への交通費なども必要である。<情報発信・収集費用>小学生の無気力感の最新知見を発信・収集するため,関係諸学会への参加と本研究知見の発表を行う予定あることから,学会への参加費用とそれにともなう旅費が発生する可能性がある。また最新知見の情報収集のための専門書(英書・和書)の購入を予定しているため,書籍関連費用が必要である。H26年度はまず,H25年度に実施しきれなかった教師を対象とした児童の無気力感に関する質的調査の追加データの収集と文献研究を進める予定でいる。またH25年度の探索的研究結果を受けて,小学生の無気力感のメカニズムを検証するための量的研究を実施する。
常染色体劣性若年性パーキンソニズムの原因遺伝子産物Parkinの機能解析

パーキンソン病は黒質ドーパミン神経細胞の欠落を特徴とする神経変性疾患である。常染色体劣性若年性パーキンソン病(AR-JP)の原因遺伝子parkinは、若年型の遺伝生パーキンソン病の約半数でその変異が報告されている。その遺伝子産物parkinは、ユビキチン-プロテアソーム経路のユビキチンリガーゼとしての活性をもち、パーキンソン病タイプの変異体にはこの活性が失われている。我々はparkinの基質として、ドーパミン神経細胞に豊富に発現する膜タンパク質パエル受容体を同定した。さらに、パエル受容体が、parkinにより分解されず小胞体内に蓄積すると、神経細胞死がおこることを示した。パエル受容体の生理機能を知るため、パエル受容体ノックアウトマウス(Pael-R KO)とパエル受容体トランスジェニックマウス(Pael-R Tg)を作製した。Pael-R KOは、線条件におけるドーパミン含量が60%程度まで低下しており、Pael-R Tgにおいては、その含量が120%程度増加していた。また、脳内ドーパミンの含量に応じて、Pael-R Tgでは活動量が増え、Pael-R KOでは活動力が減少していた。このことから、パエル受容体は、ドーパミン神経のドーパミン分泌の促進に関与していることが示唆された。さらに、Pael-R Tgにおいては、MPTP、6-OHDAといったドーパミン神経毒に対して高感受性であり、一方、Pael-R KOは抵抗性を持っていた。このことから、ドーパミンの過剰産生状態が、ドーパミン神経にストレスを与え、ドーパミン神経の選択的変性の一端をになうことが考えられる。Pael-R Tgの表現形は、別途作製したParkinノックアウトマウスの表現形と非常に似ていた。すなわち、体重の減少、線条体ドーパミン、DOPACの増加の傾向を示した。Pael-R Tgの老化後の表現形は解析予定。パーキンソン病は黒質ドーパミン作動性神経細胞の欠落を特徴とする神経変性疾患である。本疾患は大部分が孤発性であるが510%は遺伝性の形態をとり、その原因遺伝子を解析することがこの研究の端緒となっている。常染色体劣性若年性パーキンソン病(AR-JP)の原因遺伝子産物Parkinは、ユビキチン-プロテアソーム経路のユビキチンリガーゼとしての活性をもち、パーキンソン病タイプの変異体にはこの活性がない。我々はParkinの基質として、ドーパミン神経細胞に豊富に発現する膜タンパク質パエル受容体を同定した。パエル受容体を神経系培養細胞内で過剰発現させると、折り畳みに失敗し不溶化したパエル受容体が小胞体内に蓄積し、細胞死が観察された。野生型のParkinを遺伝子導入すると異常な折り畳みのパエル受容体の分解が促進されるとともに、細胞死も抑制された。さらに個体レベルでの研究において、ショウジョウバエ脳組織全体にPael-Rを過剰発現するとドーパミン神経細胞のみが変性欠落した。この変性は、内因性のParkinの発現抑制により重篤になった。以上の結果から、Parkinが異常な折り畳みのパエル受容体を基質として分解することにより、ドーパミン神経細胞死を防いでいるという仮説を立てた。さらにほ乳類動物レベルでの仮説の検証とパーキンソン病モデルマウスの作製の目的で、ParkinノックアウトマウスとPael-Rトランスジェニックマウスを作製し、現在解析中である。その他、Pael-Rがパーキンソン病病理の一大特徴であるタンパク質封入体Lewybodyに存在することを免疫染色で確認した。さらに、Parkinとプロモーターを共有し、発現が制御されているGlupが、封入体形成に関与し、神経細胞死を抑制することを示唆する結果が得られた。
新型の紫外光検出器を用いた粒子識別装置の開発

RICH法により粒子識別を行うためには、高い検出効率を高い位置分解能を持った、紫外光の検出器が必要となる。CsIを陰極面に蒸着したフォカソード形式の多線式比例計数箱(MWPC)が、紫外光の検出及び入射位置の測定に非常に有効であることが最近確認された。高い検出効率を得るためのCsIの蒸着条件などを探った後に、この新しい紫外光検出器を製作し、実際にチェレンコフ光を観測する事を目的として本研究を開始した。まず、有効面積が5x5cm^2の小型のMWPCを製作した。陰極面を矩形の9個のパッドに分割し、その表面にCsIを蒸着した。はじめに蒸着の厚さを変えて、量子効率がどのように厚さに依存するかを測定した。その結果、これまで言われていた500nmよりも100^-150nmの方がより高い量子効率が得られることが判った。次に、蒸着時の真空度が量子効率にどのように影響するかに関して調べた結果、10^<-5>Torr以下で有れば、量子効率には差がないことが判った。また、真空ポンプはオイルの入らないものを使用しなければならない事も判った。このように、いろいろ蒸着条件の最適化をはかった後、実際の紫外光検出器にCsIを蒸着した。光源を用いたテストでは15%程度の量子効率が期待できている。読み出し用電子回路の改良もほぼ終了したので、この紫外光検出器の前にフッ化カルシウムの輻射体を置いて、宇宙線を使用したチェレンコフ光検出のテストをまもなく開始する予定である。
極低温有機固体中での水素分子-マトリックス相互作用

1、極低温ガンマ線照射専用クライオスタットの改造と極低温被照射試料のラマン散乱用クライオスタットへの移送システムの確立化を行った。液体ヘリウム温度にて40時間ガンマ線照射を行えるように、冷却用窒素バスの容積を拡大し、かつ1時間毎に液体窒素を自動供給するシステムを作った。また、液体ヘリウム温度のまま被照射試料をラマン測定用クライオスタットへ移送するための小型ガラスジュワ-とサンプルホルダーシステムもうまく作動した。2、ラマン散乱測定を20250cm^<-1>領域で行った後のデータ解析用ソフトを開発した。これは照射により生成する水素分子-マトリックス相互作用を鮮明にするために、(イ)照射前後のラマン散乱スペクトルのスペクトル変化量のみ自動記録し、(ロ)ボ-ズアインシュタイン因子の補正を波数および測定温度に対して自動的に行うものであり、C言語によるプログラミングである。3、液体ヘリウム温度でエタノール、重水素化エタノール(d_1,d_6エタノール)中に生成する水素、重水素のラマン散乱測定を行った。これらの回転振動、伸縮バンドのピーク波数線巾を液体窒素温度照射試料のものと比較し、マトリックスとの相互作用に関して新しい知見を得た。またマトリックスの分子間振動(並進、秤動)モード、水素結合の伸縮モードに水素分子-マトリックス間の新たな相互作用を示す波数シフトや強度変化が明かになった。これらの結果について論文化の作業を行っているところである。
地域特性の相違性が大きい地域が内在する市町の保健師活動における地区管理方法

研究目的は、平成の大合併により、離島又は山村過疎地域とそれ以外の地域という異なる地域特性を有する市町の保健師活動における地区管理方法を明らかにすることである。結果、地区管理の方法として、「対象数の地区差」、「事業の費用対効果」、「地区ごとの地域性の明確化」等の地区管理の問題を捉える視点、並びに、「住民の保健事業へのアクセス」、「一人当たりの担当人口」、「住民の保健事業の利用機会」等の活動方法を選択・決定する視点が明らかになった。平成の大合併により、離島又は山村過疎地域を有する町村と合併した市町の保健師活動を詳細に調べて、へき地とへき地以外の地域という地域特性の相違性が大きい地域が内在する市町の保健師活動における地区管理方法を明らかにすることを目的に、今年度は以下のことを行った。離島を有する町村と合併した2市の保健師で、母子保健、健康増進、介護予防等、合併後、課題に感じている活動について、当該市全体を把握している、又は把握できる立場にいる各市1名の保健師並びに、山村過疎地域を有する町村と合併した2市町の保健師で、前述と同様の活動について、前述と同様の立場にいる各市町1名の保健師を対象に、課題解決のために取り組んでいること、又は今後、取り組もうと考えていることについて、合併後から平成22年度までの行政看護管理過程、つまり(1)アセスメント(2)プランニング(3)組織化(4)行動化(5)統制について、保健師の活動とその意図、判断を、半構成的インタビューにより調べた。山村過疎地域を有する町村と合併した1市については地区管理に関する検討会を1回開催し、地区単位の保健師活動方法や保健師の配置方法について検討し、この会における意見もデータとした。その結果、住民のヘルスニーズの把握に関する視点、つまり行政看護管理過程におけるアセスメント段階の地区管理の視点として、年齢構成、健康課題、社会資源、社会資源の利用行動、保健師の身近さ、人々の交流の機会、住民の価値観が明らかになった。また、保健師の活動方法の検討に関する視点、つまり行政看護管理過程におけるプランニング段階の地区管理の視点として、地区特有の健康課題の明確化の有無、事業・活動の評価に基づく事業・活動の必要性の明確化の有無、組織的・主体的な問題解決(支え合いやネットワーク)の有無、現任教育(人材育成)、地域特性に応じた地区活動の有無、情報管理、業務管理が明らかになった。平成の大合併により、離島又は山村過疎地域を有する町村と合併した市町の保健師活動を詳細に調べてへき地とへき地以外の地域という地域特性の相違性が大きい地域が内在する市町の保健師活動における地区管理方法を明らかにすることを目的に、今年度は以下のことを行った。昨年度の調査対象に離島を有する町村と合併した1市を加えて、計3市の合併後、課題に感じている活動について、当該市全体を把握している、又は把握できる立場にいる各市3名の保健師、並びに、昨年度の調査対象に山村過疎地域を有する町村と合併した1市を加えて、計3市町の前述と同様の活動について1市1町は前述と同様の立場にいる保健師各1名、1市は旧市町村毎の保健師7名を対象に、平成22年度から23年度までの地区管理に関わる活動を半構成的インタビューにより調べた。山村過疎地域を有する町村と合併した1市については地区管理に関する検討会を4回開催し、地区管理方法について検討し、この会における意見もデータとした。その結果、地区管理の課題は、保健事業・活動の浸透度、支援の必要な人の把握、保健医療福祉事業の利用しやすさ、保健福祉サービス提供の公平性、住民のヘルスニーズの充足状況等に地区差が生じていることから生じていた。地区管理の工夫を地区管理に影響する因子と照らして分析した結果、【地域・住民の状況に合わせた工夫】、【市町の状況に合わせた工夫】、【関係機関の状況に合わせた工夫】に大別された。【地域・住民の状況に合わせた工夫】には、住民の保健医療サービスへのアクセスを踏まえた工夫、生活文化や習慣、地縁によるネットワークなどの地区特性を活かして保健活動を浸透・発展させる等があった。【市町の状況に合わせた工夫】には、保健師数やその配置に関する工夫等があった。【関係機関の状況に合わせた工夫】には、医療福祉等の関係機関との距離を踏まえた工夫等があった。平成の大合併により離島又は山村過疎地域を有する町村と合併した市町の保健師活動を詳細に調べてへき地とへき地以外の地域という地域特性の相違性が大きい地域が内在する市町の保健師活動における地区管理方法を明らかにすることを目的に、今年度は以下を行った。離島を有する町村と合併した2市の保健師9名、山村過疎地域を有する町村と合併した3市町の保健師9名を対象に、昨年度までに半構成的インタビューにより収集した平成22年度から23年度までの行政看護管理過程(地区管理)に関わる活動のデータの不足データを収集した。

離島、山村過疎地域の各々が内在する場合、両者併せてへき地が内在する場合の地区管理方法を分析した。結果、へき地が内在する場合の地区管理の問題を捉える保健師の視点には、地区単位の健康課題の明確化・活動の優先順位、事業の利用機会の地区差、各地区の状況の保健師間共有の程度、要支援対象の情報を得る機会、保健師の経験があり、加えて離島が内在する場合には地区(島)単位の地域性の明確化が、山村過疎地域が内在する場合には地区単位の活動実施状況、対象数の地区差、事業の費用対効果、地区住民の主体性があった。へき地が内在する場合の地区管理の観点から活動方法を選択・決定する保健師の視点には、住民の保健事業へのアクセス、地区組織の主体性、担当地区内の社会資源の有無、住民の健康状態を把握できる客観的情報、担当地区の人口、関係者が話し合う場・機会があり、加えて離島が内在する場合には他地区(島)のよい活動が、山村過疎地域が内在する場合には地区ごとの保健師のマンパワー等があった。へき地が内在し地域特性の相違性が大きい市町の地区管理方法において、保健師は地区特有の状況の明確化や住民・関係者との接点、支援対象の優先順位、保健師の経験、他地区の活動等に目を向け、活動方法を選択・決定していくことが重要であると考えられる。平成23年度交付申請書に記載した研究実施計画をおおむね達成しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。分析方法の妥当性・信頼性を高めるために、研究者による研究班会議を開催し、データ分析方法と結果の解釈の検討を重ねるとともに、必要時、行政看護管理に関する研究に精通している研究者にスーパーバイズを受ける。また、これまでの研究成果を含めて、国内外の地域看護・公衆衛生看護関連の学会で発表し、学会参加者との意見交換により、研究結果や考察を精錬させる。
競争法によるオンライン・プラットフォーマー規制とギグ・ワーカーの保護に関する研究

近年、フリーランスやオンライン・プラットフォームを介して短期もしくは不定期の仕事を受注するギグ・ワーカーの労働条件・契約条件が問題視されている。彼らは、通常、個人事業主に分類され、労働法による保護を受けることができない。しかし、(1)役務発注者等によるギグ・ワーカー等に対する欺瞞的な勧誘、(2)ギグ・ワーカーらと発注者間の交渉力の不均衡、(3)役務発注者によってギグ・ワーカーらに課される不当な契約条項や不公正な取引慣行、といった問題が生じている。これら諸問題を改善する方策を主として経済法(競争法)の観点から探る。
バクテリアべん毛モーターによる回転機能発現の瞬間を観る

バクテリアべん毛モーターによる回転運動メカニズム解明を目指して、べん毛モーター1個による運動の高分解能計測を行った。モーターの基本特性としてトルク-速度関係を明らかにすると共に、開発した1分子計測用の温度制御システムを用いて計測した結果、トルクが高温時にステップ状に減少すること、さらには室温でステップ状に回復することを発見した。この結果は、トルク発生単位である固定子が、回転機能中にダイナミックに結合解離していることを示唆する。バクテリアベん毛モーターの回転運動のメカニズムに迫るため、固定子1個による運動の素過程を解析することを研究目的とし、平成20年は以下を行った。1.回転計測系の改良:レーザーと蛍光フィルタを導入し、現有システムのままでも、200nmのビーズで光センサを用いて計測できるようにした。また、顕微鏡に高速カメラを導入ことで、200nm以下のビーズの計測や、複数モーターの同時計測も行うことができるようになった。この実験系では、数10万フレームに対して画像解析を行う必要があるため、専用ソフトウエアの自作を進め、速度、角度等を高精度に、かつ実用的な速度で解析できるシステムを構築した。これらハード、ソフト両面の改良によって、計測システムの分解能と操作性の向上のほか、多様な運動解析を進めることができるようになった。2.蛍光観察の導入: GFP融合タンパクの細胞内分子イメージングのため、エバネッセント照明を用いたイメージング顕微鏡を開発した。現在、GFPタンパクのイメージングほか、ナトリウム感受性試薬を用いて、細胞内ナトリウム濃度計測を検討しているところである。3.固定子変異体の運動解析:固定子で保存されているアミノ酸残基に変異を与えるとトルクースピード関係が変化することは報告しているが、回転計測を進めた結果、これらの変異体の運動性は、温度にも依存することがわかってきたため、今後解析を進める予定である。バクテリアベん毛モーターの回転運動のメカニズムに迫るため、固定子1個による運動の素過程を解析することを研究目的とし、平成21年は以下を行った。1.回転計測系と解析系の改良:従来の光センサを用いた計測系に加えて開発してきた高速カメラによる回転計測系では、画像解析の精度と速度が重要なファクタとなる。昨年から開発してきたソフトウエアの自作を進め、位相差像だけでなく、明視野観察などのより一般的な計測システムでも、実用的な精度と速度で解析できるシステムを構築した。また温度制御実験で見出したトルクステップは個々の固定子の挙動を反映していると考えられるため、より客観的に評価するためのプログラムも作成し、温度応答のより詳細な解析を進めた。2.固定子変異体の温度依存性:キメラモーターに加えて、2種の固定子変異体についての温度依存性を計測した。いずれの変異体も元のモーターと比較して、より低い温度でトルク変化が見られ、温度感受性が高くなっていることが示唆された。またトルク変化はステップ状に起こり、その大きさにも変化が見られた。開発したステップ解析アルゴリズムでの評価を進めており、元のモーターも含めて、温度依存性のメカニズムを統一的に理解したい。3.細胞内分子イメージング:エバネッセント照明を導入したイメージング顕微鏡を用いて、GFP融合タンパクのイメージングを行った。蛍光強度のステップ状変化について、ステップ解析を行い、GFP融合タンパクの細胞内イメージングが、既報の通り可能であることを確認した。バクテリアベん毛モーターの回転運動のメカニズムに迫るため、固定子1個による運動の素過程を解析することを研究目的とし、以下を解析した。1.高温でのステップ状トルク変化のメカニズム:本研究で発見した温度依存トルクステップは、トルク発生単位である固定子個々の挙動を反映している可能性が考えられる。そこで、加熱条件を変えながら回転計測したところ、トルクステップは、加熱条件にしたがって、単位トルクが減少するものの、単位トルクの最大値は常に、11-13程度であり、1モーター中の最大固定子数と同等であった。この結果は、固定子は回転中であってもダイナミックに結合解離しており、温度制御によって、モーター中の固定子数を制御できることを示唆している。2.細胞内イメージングによるモーター構成タンパク質および膜電位ダイナミクスの解析:固定子のダイナミクスとトルク発生のメカニズムをさらに探るため、GFP融合タンパクや膜電位依存性色素を用いて、細胞内イメージング実験を行った。膜電位は、40°Cまでほぼ一定となったが、40°C以上に加熱した場合に減少し、回転計測時に見られた単位トルクの減少と同じ傾向を示した。また、GFP融合タンパクとして発現させた固定子を全反射顕微鏡で観察したところ、蛍光強度のステップ状変化を検出した。蛍光強度の変化は、退色による減少の可能性も含まれるが、ナトリウムイオン濃度変化に応じた上昇も観察されたため、固定子の結合解離を反映していると思われる。さらには、温度制御時における回転運動と膜電位の同時計測、また回転運動とGFP融合固定子ダイナミクスの同時計測を試みたが、同期情報の検出は今後の課題となった。
ホウ素-ケイ素結合活性化を鍵とする触媒的炭素-炭素結合形成反応の開発

10族遷移金属錯体触媒により,1,3-ジエン及び1,2-ジエン等の有機不飽和化合物への(ジメチルフェニルシリル)ピナコールボランの付加反応が収率良く進行することを見出した。シリルボランと非環式1,3-ジエンの反応にはニッケルアセチルアセトナート錯体とジイソブチルアルミニウムヒドリドから調製した触媒が最も高い触媒活性を示し,1,4-付加生成物であるcis-1-シリル-4-ボリル-2-アルケン類が高選択的かつ高収率で得られた。また,環状ジエンのシリルホウ素化は前記触媒系にホスフィン配位子を添加した場合にのみ高収率で進行した。特に,シクロヘキシルジフェニルホスフィンを用いると高い立体選択性でcis体の生成物を与えた。シリルボランと1,2-ジエン(アレン類)の反応はパラジウム触媒の存在下収率良く進行し,ボリル基がアレンの中心sp炭素に結合したβ-ボリルアリルシラン型の生成物が位置選択的に得られた。末端アレンを用いた反応はシリルボランが内部二重結合に付加した生成物を選択的に与えることを見出した。これらの新しいシリルホウ素化反応は有機化学における重要な官能基であるシリル基とボリル基を有機分子に一挙に導入できる効率的な方法である。アレンのシリルホウ素化によって合成されるβ-ボリルアリルシランのホウ素部位をパラジウム触媒によるヨウ化アリールとの反応によって選択的にアリール基へと変換し,β-アリールアリルシラン類を合成した。
内燃機関のピストン及びシリンダの変形に関する研究

1)シリンダボアの変形について各種ボア形状を持つ湿式ライナを用いたレベル方によるオイル消費測定およびピストンシリング・ボアの変形を考慮したリングボア間油膜挙動について理論的考察を行い、シリンダボア変形に由来するオイル消費機構について調べた。ボア正規曲率により大きい曲率を持つ部分が多いほどリングの追従性が悪化するため、非追従部分でリング:ボア油膜内慣性力によりオイルが上方に運ばれ、飛散・蒸発等にて消費されるオイル量が増加する。変形ボアを持つライナを用いリングの追従性について調べた結果、ボア変形曲率の大きい部分が多いほどその追従性が悪化する事が分かった。また変形量が大きく回転数が高いほどオイル消費量は多い。その消費量はリング・ボア間隙間の3乗及び回転数の2乗に比例するためであることが実験的・理論的考察により分かった。2)ピストンスカートの変形についてスカートオーバル値が変形・シリンダボアとの接触・衝突振動およびスカート部潤滑に与える影響を調べた。オーバル値が小さいとボア曲率に近くなるので側圧力作用による変形が小さくなり見かけ上の剛性が増し、また熱変形により剛性の高いスカート肩部で接触し易くなるため高出力時においてスラップ振動が極端に大きくなる。またスカート部スカッフについて調べたところ、オーバル値の大きいピストンはスカート上部での当たりが強く出ており、接触範囲が狭いと単位面積当たりの負荷容量が増すためであると推察され、接触範囲とスカート部の潤滑には強い関係がある事が分かった。またガス圧力による変形について静圧試験と実動試験との相違点について調べた。ピンボス部でのピンとの接触位置が変形量に与える影響が大きい事が分かったが、実動時回転数の増加にともない変形量が減少する現象との相関については明確な理由が得られなかった。内燃機関実働中のピストン・シリンダの変形を測定し次の成果を得た。1.シリンダボアの変形についてギャップセンサーを有する回転ピストンを用い、直列4気筒エンジン実働中のシリンダボアの変形及びそのオイル消費への影響を調べた。1)シリンダボアの変形については、第1気筒はスラスト方向、第2気筒はピン方向に引き延ばされた形となっていることがわかった。これより多気筒エンジンの場合、シリンダボア形状はヘッドボルトのみならず隣接する気筒の影響も受け、複雑に変形していることがわかった。2)あらかじめ真円ではないボア形状を有するシリンダライナーを使っての、各変形成分がオイル消費に及ぼす影響の測定については、各種の変形成分を持つシリンダライナーの製作に成功した。2.ピストンスカートの変形についてギャップセンサーを埋め込んだシリンダライナーを、その外周に取り付けたギヤによって周方向に回転させる事により、実働中のピストンスカート全周の変形を測定できる装置の開発に成功し以下の事がわかった。1)ギャップセンサーを有する回転シリンダは実働中のピストンスカート変形の測定にきわめて有用であることがわかった。2)ピストンのスカート部は、ピストン頂面に加えられる熱、ガス圧力、側圧力により複雑に変形しており、またピストンの設計の違いにより変形の傾向も大きく変化することがわかった。しかし、それらの要因が変形に及ぼす影響の詳細については、本年購入したワークステーションを活用し、構造解析を行う事により明らかにする必要がある。3)ピストン形状とピストン変形及びスラップ挙動・振動の間には密接な関係があることがわかった。この関係を明らかにするためには、更に測定及び解析が必要である。1)シリンダボアの変形について前年度の測定より、問題とされいた測定精度の向上のため、測定装置の改良を行った。その新しい装置を用いて、エンジン実働中の各種シリンダライナーのボア形状の測定を改めて行った。さらに、各種シリンダボア形状とオイル消費の関連を調べる予定であったが、そのために、やはりオイル消費量の測定方法の精度に問題があることが分かり、測定法の開発を行った。

開発方針としは、時時刻刻のオイル消費量変化を知ることができることを目的とし、レベルゲージ法をより精度良くする方針で進めた。現在ほぼ実用域に達しているため、測定とオイル消費量測定装置の改良を平行して進めている。2)ピストンスカートの変形について今年度の目的に掲げた、高回転・高負荷での測定のための装置の改良は、シール部の材料の適正化により、ほぼ達成された。さらに、同じく目的に挙げられていたガス圧力によるピストンスカートの複雑な変形については、静圧試験と有限要素解析結果との間には非常によい一致が見られるが、しかし実測値とは大きく異なる。従って、この点については本来度さらに解析が必要と思われる。代表的ピストン形状の一つであるスリットタイプのピストンについては、ストラットの効果を調べる。その結果及び前年度の焼き付きに至る過程の測定結果より、ストラットはピストンが高温になると予想通りピン方向にピストンを広げる作用を示すが、冷間時における隙間が最小隙間となるようなオーバル値を持つピストンでは、隙間の低減には効果がないことが分かる。1)シリンダボアの変形について各種ボア形状を持つ湿式ライナを用いたレベル方によるオイル消費測定およびピストンリング・ボアの変形を考慮したリング=ボア間油膜挙動について理論的考察を行い、シリンダボア変形に由来するオイル消費機構について調べた。ボア正規曲率より大きい曲率を持つ部分が多いほどリングの追従性が悪化するため、非追従部分でリング=ボア油膜内慣性力によりオイルが上方へ運ばれ、飛散・蒸気等にて消費されるオイル量が増加する。変形ボアを持つライナを用いリングの追従性について調べた結果、ボア変形曲率の大きい部分が多いほどその追従性が悪化する事が分かった。また変形量が大きく回転数が高いほどオイル消費量は多い。その消費量はリング・ボア間隙間の3乗及び回転数の2乗に比例するためであることが実験的・理論的考察により分かった。2)ピストンスカートの変形についてスカートオーバル値が変形・シリンダボアとの接触・衝突振動およびスカート部潤滑に与える影響を調べた。オーバル値が小さいとボア曲率に近くなるので側圧力作用による変形が小さくなり見かけ上の剛性が増し、また熱変形により剛性の高いスカート肩部で接触し易くなるため高出力時においてスラップ振動が極端に大きくなる。またスカート部スカッフについて調べたところ、オーバル値の大きいピストンはスカート上部での当たりが強く出ており、接触範囲が狭いと単位面積当たりの負荷容量が増すためであると推察され、接触範囲とスカート部の潤滑には強い関係がある事が分かった。またガス圧力による変形について静圧試験と実働試験との相違点について調べた。ピンボス部でのピンとの接触位置が変形量に与える影響が大きい事が分かったが、実働時回転数の増加にともない変形量が減少する現象との相関については明確な理由が得られなかった。
細菌ゲノムに潜む宿主免疫回避生存戦略の研究

細菌は、多剤耐性化因子である薬剤排出蛋白質を数多く保持している。一方、これら蛋白質が本来持っている生理機能について議論が盛んに行われている。これまで、薬剤排出蛋白質が菌体内で合成された鉄キレーターを排出していること、また、細菌病原性に関与していることを報告してきた。この事実から、薬剤排出蛋白質は、宿主環境適応や宿主の攻撃から細菌自身を保護する宿主免疫回避機能を担っていることが示唆される。昨年度は、サルモネラに存在する9個の薬剤排出蛋白質について解析を進め、薬剤排出蛋白質が宿主細胞内での増殖に関与していることを明らかにした。一方、これだけ多くの排出蛋白質が何故、コンパクトな細菌染色体に複数コードされているのかは謎であり、それを解くための方法の一つとして、排出システムの制御ネットワークを解析することが重要である。本年度は発現制御の解析を進め、以下の結果を得た。RNAシャペロンであるHfqは、sRNAとmRNAの両方に結合し、標的mRNAへのsRNAの結合を促進させる。Hfqは細菌病原性制御にも関与していることが分かってきたが、薬剤耐性とHfqの関係については不明であった。私達は、Hfqが、薬剤排出蛋白質AcrBの転写後調節を行うことで、薬剤耐性制御に関係していることを明らかにした。DsrAは細菌において最も研究が進んでいるsRNAであり、酸耐性や病原性に関与する遺伝子の制御に関与しているが、これまで、薬剤耐性との関連は不明であった。今回私達は、DsrAが、シグマ因子であるRpoSを介して、MdtEF薬剤排出システムを制御することにより、細菌多剤耐性制御に関係していることを見つけた。今後は、これら制御ネットワークがどのような環境で必要になり、排出蛋白質が誘導されるのかを明らかにし、薬剤排出システムのさらなる生理機能解明につなげ、耐性菌感染症克服に役立てたい。現在、臨床現場において様々な多剤耐性菌が出現し、耐性菌感染症は医療従事者が直面する重要な問題である。これまでに、細菌が保持する薬剤排出蛋白質遺伝子資源および、これらの制御ネットワークを、ゲノムワイドに包括的に解析し、耐性菌感染症克服のための基盤を構築してきた。最近になって、薬剤排出蛋白質は抗菌薬排出のみならず、病原性発現制御にも関与していることが分かってきた。このことから、薬剤排出蛋白質には、本来持ち備えている生理機能があると考えられる。本研究では、宿主免疫回避において、細菌ゲノムに潜む薬剤排出蛋白質がどのような役割を担っているのかを明らかにする。今年度は以下の内容を明らかにした。サルモネラは、貧食されたマクロファージ、樹状細胞内で生存・増殖することができる宿主の殺菌機構を回避する種々の特徴を有している。宿主細胞はサイトカインの産生によりマクロファージを活性化して細胞内殺菌能を亢進させるなどして、細菌に対する防御を発揮する。サルモネラ薬剤排出蛋白質が、マクロファージのサイトカイン(TNF-α)産生におよぼす影響を調べたところ、薬剤排出蛋白質欠損株は野生株に比べTNF-α産生誘導能が高いことが分かった。この産生誘導は、排出蛋白質を発現させることで抑えられる。よって、細菌の薬剤排出蛋白質には宿主免疫から回避するための機能が備わっていることが考えられる。この産生誘導能の差はMyd88ノックアウトマウスから採取したマクロファージでは見られないことから、薬剤排出蛋白質による細菌の変化がToll-like receptorにより認識されていることが示唆された。
革新的な新規リキッドバイオプシー法を用いた新しい乳癌の診断・治療法の探索

本研究の目的は、原発巣/転移巣における変異情報またはHot spot mutationの情報を用いることなく血漿循環がんDNAを高感度に検出可能な新規リキッドバイオプシー法を活用して、乳がん治療における新規診断法および治療法を開発することにある。<具体的な研究項目>1HER2陽性乳がん症例における新規リキッドバイオプシー法を用いた治療効果の予測2トリプルネガティブ進行再発乳がん症例における新規リキッドバイオプシー法を用いた治療抵抗性の解析3末期乳がん症例における新規リキッドバイオプシー法を用いたctDNA解析と予後予測本研究の目的は、原発巣/転移巣における変異情報またはHot spot mutationの情報を用いることなく血漿循環がんDNAを高感度に検出可能な新規リキッドバイオプシー法を活用して、乳がん治療における新規診断法および治療法を開発することにある。<具体的な研究項目>1HER2陽性乳がん症例における新規リキッドバイオプシー法を用いた治療効果の予測2トリプルネガティブ進行再発乳がん症例における新規リキッドバイオプシー法を用いた治療抵抗性の解析3末期乳がん症例における新規リキッドバイオプシー法を用いたctDNA解析と予後予測