hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Miyajima式腹部圧迫法の臨床応用-安全性と有効性の評価-

Miyajima式腹部圧迫法の臨床応用のために、臨床効果(効力/安全性の評価)を評価し、PhaseIIを行った。その結果、開発者の施行するMiyajima式腹部圧迫法の便秘者の有効性と安全性が担保された。次に、Miyajima式腹部圧迫法の用法・用量の妥当性について圧迫後1分での評価が最大であり、この時点で評価する必要性が示唆された。また、開発者からMiyajima式腹部圧迫法の指導を受けた看護師による効果と安全性の評価により、有効性と安全性が担保された。Miyajima式腹部圧迫法の臨床応用のために、臨床試験の方法に則り、4段階の研究段階を計画している。臨床効果(効力/安全性の評価)を評価し、適切な疾病状態にある限られた数の便秘患者において、Miyajima式用手腹部圧迫法の有効性と安全性とを検討し、適応疾患、用法・用量の妥当性など、Phase IIIに進むための情報を収集することを目的とした。平成18年度はPhase IIを行う前段階として、研究者の転勤による研究環境の調整を行った。研究環境はほぼ白紙状態となり、実験室の確保、実験環境の調整のための研究室の改造などを必要とし、また、実験補助者の確保や教育などを必要とした。実験室については、一般研究室を実験室に改造した。本研究では音を扱うため、音環境調整について検討を重ね、遮音設備の構築などを行った。また、室内更衣室の確保など改造を行った。また、予算の都合上、使用予定機械を変更したことから実験に有用な機械の習熟と得られるデーターの整合性について検討し、機械の設定と調整を行った。実験補助者は、実験経験の全くない補助者のため、実験方法についての教育を行った。実験開始後、開発者の施行するMiyajima式腹部圧迫法の有効性と安全性について、評価を行った。いずれも有効性と安全性が担保された。また、開発者からMiyajima式腹部圧迫法の指導を受けた看護師による効果と安全性の評価を行った。その結果の一部は、第33回日本看護研究学会学術集会・第27回日本看護科学学会学術集会に発表予定である。また、Japan Journal of Nursing Scienceにて査読中である。来年度はさらに現在分析中のデーター集計してまとめるとともに、便秘患者を対象にMiyajima式用手腹部圧迫法の安全性、有効性について検討する。臨床効果(効力/安全性の評価)を評価し、適切な疾病状態にある限られた数の便秘患者において、Miyajima式用手腹部圧迫法の有効性と安全性とを検討し、適応疾患、用法・用量の妥当性など、PhaseIIIに進むための情報を収集することを目的とした。平成18年度はPhaseIIを行う前段階として、研究者の転勤による研究環境の調整を行った。平成19年度は、開発者の施行するMiyajima式腹部圧迫法の有効性と安全性について、評価を行った。その結果の一部は、第33回日本看護研究学会学術集会で発表した。また、第27回日本看護科学学会学術集会に発表予定である。本年度は妊娠中のため、圧迫を伴う実験は行えなかったため、来年度はさらに現在分析中のデーター集計してまとめるとともに、便秘患者を対象にMiyajima式用手腹部圧迫法の安全性、有効性について検討する。本研究は、臨床効果(効力/安全性の評価)を評価し、適切な疾病状態にある限られた数の便秘患者において、Miyajima式用手腹部圧迫法の有効性と安全性とを検討し、適応疾患、用法・用量の妥当性など、Phase IIIに進むための情報を収集することを目的とした。平成20年度は約8ヶ月の育児休暇を含み、実験の継続と前年までの実験結果を基に研究内容の整理と雑誌投稿を主にまとめを行った。

また、前年度、開発者からMiyajima式腹部圧迫法の指導を受けた看護師による効果と安全性の評価を行った。いずれも有効性と安全性が担保された。この内容の発表は、第33回日本看護研究学会学術集会と第27回日本看護科学学会学術集会に発表したが、論文投稿準備中である。これらの研究成果を次のPhase IIIに向けて活用し、更なる開発を継続していきたい。
新規L型チロシン誘導体を用いる経口的鎮痛薬の開発に関する研究

4)結合親和性脳室内投与による鎮痛活性は:tail-flick testにおいてDmt>Det>EM(1:0.7:0.35)でありhot-plate testにおいて1:0.45:<0.1の結果であった。現在までに得られている結果ではDmtが最も良いと考えられる。
歯周炎における可溶型TNF受容体の解析

近年、可溶性TNFレセプターが歯周炎を含む炎症性疾患においてTNFの制御に大きく関わっていることが明らかになってきた。そこで慢性歯周炎罹患者のうち喫煙者と非喫煙者の歯肉溝浸出液(GCF)中ならびに血清中のTNF-α、可溶性TNFレセプターI型およびII型レベルを比較し、慢性歯周炎との関連について検討した。新潟大学医歯学総合病院を受診した初診時慢性歯周炎患者のうち、非喫煙者20名と喫煙者12名、また健常者15名を対象とした。全ての対象者より末梢血を採取、また歯周ポケットの深さに応じてGCFを採取・定量を行った。そして血清、GCF中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量を、ELISA法を用いて測定し統計解析を行った。(1)検体数が増えても、初診時の非喫煙者においてGCF中で歯周ポケットが深くになるに従いTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量が増加する一方、可溶性TNFレセプター2型/1型比は有意に減少することをさらに確認した。(2)GCF中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量ならびに可溶性T67NFレセプター2型/1型比との間に喫煙の明らかな関与は認められなかった。血清中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型濃度においても喫煙者にやや高い傾向はあるものの、有意差は認められなかった。(3)歯周基本治療によってGCF中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量は有意に減少するものの、可溶性TNFレセプター2型/1型比は有意に上昇することが明らかになった。以上のことより、TNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型は歯周炎の病態形成に深く関与する可能性が示唆された。TNFレセプター2型の遺伝子多型(塩基の変異)と歯周炎を含む炎症性疾患の感受性と関連性も報告されていることから、これらのデータをあわせて解析していくことは今後興味深いと考えられる。そこで慢性歯周炎罹患者のうち喫煙者と非喫煙者の歯肉溝浸出液(GCF)中ならびに血清中のTNF-α、可溶性TNFレセプターI型およびII型レベルを比較し、喫煙における局所への影響について検討した。新潟大学医歯学総合病院を受診した初診時慢性歯周炎患者のうち、非喫煙者15名と、喫煙者12名を対象とした。GCF量を採取部位の重症度別に喫煙者群と非喫煙者群に分けて比較したところ、喫煙者群で低い傾向が見られた。サイトカインについてはGCF中の(1)濃度ならびに(2)物質の絶対量の両方の解析を行ったところ、GCF中のTNF-α量は喫煙者で低い傾向にあるものの、いずれもの平均量は、喫煙者群と非喫煙者群において有意差を認めなかった。可溶性TNFレセプター2型/1型比においても同様であった。しかしGCF中の濃度においては、いずれも喫煙者でやや高い傾向にあった。血清中濃度も喫煙者群と非喫煙者群に分けて比較したが、いずれも有意差を認めなかった。これまでに我々は、初診時の非喫煙者においてGCF中で歯周ポケットが深くになるに従いTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量が有意に増加するにもかかわらず、可溶性TNFレセプター2型/1型比は有意に減少することを報告した。しかしこれらの値との間に喫煙の明らかな関与は認められなかった。だが、近年喫煙と血清中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型濃度との関連を示唆する報告も存在していることから、今後検体数を増やし更なる解析を予定している。

(2)GCF中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量ならびに可溶性T67NFレセプター2型/1型比との間に喫煙の明らかな関与は認められなかった。血清中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型濃度においても喫煙者にやや高い傾向はあるものの、有意差は認められなかった。(3)歯周基本治療によってGCF中のTNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型の量は有意に減少するものの、可溶性TNFレセプター2型/1型比は有意に上昇することが明らかになった。以上のことより、TNF-α、可溶性TNFレセプター1型・2型は歯周炎の病態形成に深く関与する可能性が示唆された。TNFレセプター2型の遺伝子多型(塩基の変異)と歯周炎を含む炎症性疾患の感受性と関連性も報告されていることから、これらのデータをあわせて解析していくことは今後興味深いと考えられる。
認知主義・状況主義学習理論からアプローチするＫＯＳＥＮ型実技教育の再評価と標準化

富山高専の実技教育を教育心理学理論に基づいて検証し、行動・認知主義のバランスと状況主義の要素導入が、教育効果に大きく影響することを見出した。その知見に基づいて教育プログラムを構築、実施、結果の分析、評価を行い、「KOSEN型実技教育」のモデル教育プログラムとして、内容、教授法、教材、教育環境整備、教育評価等を再検討した。研究手法として、研究協力者らで構成するデザイン研究ネットワーク研究会を、3年間で計79回開催し、WEBによる発信を行った。また、モデル教育プログラムを客観的・総合的に評価するため関係者が一堂に会しての研究会を平成25年8月に開催した。それらの成果をまとめた報告書を作成した。これまでの研究では、高専独自の実技教育を教育心理学理論に基づいて検証し、行動・認知主義のバランスと状況主義の要素導入が、教育効果に大きく影響していることを見出した。本研究では、変化が激しい情報化・グローバル化社会に適する技術者教育として、「KOSEN型実技教育」を標準化・国際化し、工学教育の充実に寄与することを目的としている。平成24年度の研究成果は以下の通りである。1、平成23年度の研究成果に基づき2順目のPDCAサイクルを回した。すなわち、23年度の研究成果に基づいてモデル教育プログラムを実施(DO)、実施した教育プログラムについて教育学理論に基づいた再分析・再評価を行い教育プログラムと教育評価方法の検討(CHECK)、「KOSEN型実技教育」として他の技術教育への応用を視野に入れた教育モデルを再検討(ACTION)、モデル教育プログラム(内容、教授法、教材、教育環境整備、教育評価等)を再検討し(PLAN)を繰り返した。2、平成24年度は、研究分担者及び協力者から構成されるデザイン研究ネットワークによる研究会、および他高専、他大学とのワークショップ研究会(議論・相互評価、情報交換)3月までに合計36回開催、海外事例調査も行い、WEBページにより発信を行った。3、最終年度に向けて、他高専や他大学での教育プログラム評価について情報交換を行い、統計ソフト等による教育プログラムの評価について検討を始めた。4、他機関における技術教育への応用の可能性や汎用性(標準化)をめざして、モデル教育プログラムを客観的・総合的に評価するため、他機関や外国より関係者が一堂に会してのワークショップ研究会(議論・相互評価、情報交換)を平成25年度に開催するため、情報収集とプログラム調整など準備を始めた。平成25年度の研究成果は以下の通りである。1、平成24年度までの研究成果に基づき3順目のPDCAサイクルを回した。すなわち、24年度までの研究成果に基づいてモデル教育プログラムを実施(DO)、実施した教育プログラムについて教育学理論に基づいた再分析・再評価を行い教育プログラムと教育評価方法の検討(CHECK)、「KOSEN型実技教育」として他の技術教育への応用を視野に入れた教育モデルを再検討(ACTION)、モデル教育プログラム(内容、教授法、教材、教育環境整備、教育評価等)を再検討し(PLAN)を繰り返した。2、平成25年度は、研究分担者及び協力者から構成されるデザイン研究ネットワークによる研究会、および他高専、他大学とのワークショップ研究会(議論・相互評価、情報交換)を3月までに合計43回開催し、WEBページにより発信を行った。3、他機関における技術教育への応用の可能性や汎用性(標準化)をめざして、モデル教育プログラムを客観的・総合的に評価するため、他機関や外国より関係者が一堂に会しての研究会(議論・相互評価、情報交換)を平成25年8月に開催した。4、平成23年度から25年度までの研究成果をまとめ、授業作りのマニュアルとして利用可能な報告書を作成した。本研究では、変化が激しい情報化・グローバル化社会に適する技術者教育として、「KOSEN型実技教育」を標準化・国際化し、工学教育の充実に寄与することを目的とする。平成23年度の研究成果は以下の通りである。1、富山高専で行っているいくつかの特長的な実技教育について、分析・評価を行った。まず専攻科の授業として、状況主義学習理論の色合いが濃いProblem-based Learningを用いて実施されている専攻科1年生の特別演習・特別実験、次に高学年の授業として認知理論に基づいた構成主義の特徴を活かしたProject-

based Learningを主として用いている5年生の材料科学実験・材料設計工学実験および3年生のプログラム概論機能材料基礎、そして低学年の授業として行動主義の学習法も取り入れている1年生の技術者倫理入門について、教育プログラムの再構築と教育評価方法の検討を行った。2、これらの授業について、他の授業への応用の可能性を調査しモデル作り(内容、教授法、教材、教育環境整備、教育評価等)を行った。3、研究分担者及び協力者から構成されるデザイン研究ネットワークによる研究会を8月から3月までに11回、また他高専との研究会を6月、11月、3月と3回開催、その他種々の研究会において発表、議論し、その成果を発信するためにWEBページを立ち上げた。また、一年間の総括として、3月に行われた平成23年度実験・実習技術研究会in神戸大学にて、研究成果を発表した。研究推進のために平成23年度に結成したデザイン研究ネットワークによる研究会を計画通りに開催し、その成果を随時WEBページにより発信している。WEBページでは、富山高専5年生高分子化学IIの授業をモデル教育プログラムのひな型とした。教育プログラム評価についても準備を始めており、適正な評価手法についておおむね目途がついている。また最終年度に向けて、他高専(熊本高専等)、他大学(富山大学、金沢大学、富山国際大学等)、海外大学(デンマーク・オルボー大学)および、その他の教育機関や団体とのワークショップ研究会(議論・相互評価、情報交換)の準備も始めている。研究推進のためのネットワーク組織を結成し定期的な研究会開催により研究を計画に沿って遂行している。また、情報発信のためのWEBページも立ち上げ、マニュアル作りに向けたコンテンツの整備も始めた。1、平成25年度は最終年度として、これまでの研究成果をまとめたマニュアル作成に向けて研究活動を推進する。2、作成するマニュアルは他の技術教育への応用の可能性や汎用性(標準化)をめざす。そのため、研究分担者及び協力者から構成されるデザイン研究ネットワークによる研究会を、平成24年度に引き続き30回程度開催しWEBによる情報発信を行う。また、8月には、モデル教育プログラムを客観的・総合的に評価するため、他機関や外国より複数の研究協力者ネットワークの協力を得て、関係者が一堂に会してのワークショップ研究会(議論・相互評価、情報交換)を開催する。3、特に、最終年度として本研究の成果に関するアウトリーチ活動を活発に行う計画である。重点検討項目は教育プログラム評価であり、他機関と情報交換を行いつつ、統計ソフト等による教育プログラムの評価について検討を行い、マニュアル作成に反映させる。1、平成23年度の研究成果に基づいた2順目のPDCAサイクルを回す。すなわち、23年度の研究成果に基づいてモデル教育プログラムを実施(DO)、実施した教育プログラムについて教育学理論に基づいた再分析
ポジトロン断層による腫瘍血管治療の効果予測法の研究

難治性癌・薬剤耐性癌に対する新たな治療戦略として、腫瘍血管をターゲットにした新しいがん治療法が注目されている。チュブリン合成阻害剤AC7700(AVE8062)は腫瘍血管に強力に作用し、腫瘍血流を遮断し、腫瘍を壊死に陥らせる薬剤である。AC7700の治療評価を、腫瘍血流、糖代謝、腫瘍体積、組織所見の変化で比較した。血流、糖代謝ともにAC投与直後に大きく低下したが、組織学的には浮腫が生じ、壊死は時間がたってから観察された。腫瘍体積の変化と比較して18Fフルオロデオキシグルコース(FDG)の集積は非常に鋭敏に変化し、治療の先行指標となることがわかった。また、腫瘍の糖代謝と血流が組織レベルでは一致せず、血管治療の24時間後に拡散などにより血流の一部は再開してもFDG集積は回復せず、しかも組織所見の変化は血流所見よりもFDG集積に近いことから、FDG集積が、腫瘍の生存を反映した信頼性の高い治療評価の指標であることが判明した。AC7700の活性型であるAC7739をターゲットとして種々の前駆体を設計し、18F標識する研究が行われた。しかし特殊な構造式であることから、種々の困難に直面し、成功していない。腫瘍などの細胞膜の脂質代謝の基質となるコリンの類似体、18Fフルオロメチルコリン(FCH)の腫瘍内分布特性を調べた。FCHの腫瘍内分布は腫瘍細胞に特異性が高く、マクロファージなど炎症細胞への集積が低く、腫瘍の生存を評価するのにはFDGよりも優れている可能性があり、腫瘍血管治療の評価により適した薬剤であると推定された。腫瘍の成長は血管の新生・成長に依存しており、腫瘍血管をターゲットにした新しい治療法が注目されている。新規開発されたチュブリン合成阻害剤AC7700は腫瘍血管に作用し、血流を遮断し、腫瘍を壊死に陥らせる薬剤であることが判明した。本年度の研究として、糖代謝トレーサー18Fフルオロデオキシグルコース(FDG)を用いてAC7700のin vivoにおける腫瘍への作用の特徴を調べた。LY80腫瘍を移植したラットにAC7700を投与し、1時間後にFDGを投与、更に1時間後に組織を摘出し、FDG集積を調べた。腫瘍へのFDG集積は対照の1/5に低下したが、全身の各組織への集積は、心筋および小腸で軽度の上昇が認められたのみで他には全く変化がなかった。AC7700の作用として腫瘍血管特異性が極めて高いことが示唆された。次に、AC7700の作用の時間経過を調べるために、AC7700投与1,6,24時間後に同様の実験を行った。腫瘍へのFDG集積は、1時間後に対照の5-10%に低下した後、6時間でも24時間でもほとんど回復せず、AC7700の作用が不可逆的であることが示された。一方心筋への集積は1時間後に著明に増加したが6時間以降は照と同じに戻っていた。チュブリン合成阻害剤に強心作用があるという報告があり、AC7700にもそのような作用があると考えた。次に腫瘍への治療効果をLY80の成長曲線と比較した。腫瘍移植後直径が1cmに達した時AC7700を一回投与したところ、腫瘍の成長は止まり、わずかに縮小し、5日目から再増大が始まった。FDG集積の変化を見ると、投与直後に大きく低下した状態が続き、4日目に治療前の80%まで回復し再発と判断できた。腫瘍体積の変化がわずかなのに対し、FDGの集積の変化は明瞭で、AC7700による腫瘍組織のviabilityの変化を、鋭敏に反映していると考えられた。

AC7700の全身への作用および腫瘍への治療効果を調べるのにFDG集積の変化は非常によい指標となった。腫瘍の成長は血管の新生・成長に依存しており、腫瘍血管をターゲットにした新しい治療法が注目されている。新規開発されたチュブリン合成阻害剤AC7700は腫瘍血管に作用し、血流を遮断し、腫瘍を壊死に陥らせる薬剤であることが判明した。昨年度までの研究で、この薬剤のラット/マウス移植固形腫瘍への腫瘍血流減少効果、治療効果、その作用の特徴を糖代謝トレーサー18Fフルオロデオキシグルコース(FDG)を用いた実験により明らかにしてきた。本年は、フィッシャーラットに3-メチルコラントレンを一回投与して誘発させた肉腫に対するAC7700の作用を調べた。その結果、移植腫瘍と同様に、原発腫瘍に対しても、著明な腫瘍血流遮断作用が認められ、腫瘍には広範な壊死が発生し、投与後増殖の抑制が見られた。しかし1回投与では腫瘍の縮小は2/5の腫瘍で観察されたのみで、他は1週間後より再増殖した。大きな腫瘍に対する単回投与の効果には限界が有るにせよ、本薬剤が移植腫瘍のみならず、原発腫瘍にも同様な腫瘍血流遮断作用があることが判明し、今後の臨床応用の展開に期待を抱かせる結果となった。また、移植腫瘍における実験では、AC7700投与後の腫瘍血流と糖代謝の変化はパラレルではなく、血流は投与24時間後には回復傾向が出てくるのに対し、糖代謝は低下したままで、腫瘍細胞は最初の血流遮断後、細胞死への過程を辿るのに対し、残存血管あるいは周囲からの拡散などによるわずかな血流の回復が起きていることが考えられた。これはAC7700の抗腫瘍作用の機序を考える上で有用な所見であり、今後オートラジオグラフィーによる実験を予定している。難治性癌・薬剤耐性癌に対する新たな治療戦略として、腫瘍血管をターゲットにした新しいがん治療法が注目されている。チュブリン合成阻害剤AC7700(AVE8062)は腫瘍血管に強力に作用し、腫瘍血流を遮断し、腫瘍を壊死に陥らせる薬剤である。AC7700の治療評価を、組織の糖代謝の変化:18Fフルオロデオキシグルコース(FDG)の集積を指標として調べた。その結果、腫瘍体積の変化と比較して非常に鋭敏にFDG集積が変化し、治療の先行指標となることがわかった。また、オートラジオグラフィーによる研究から、腫瘍の糖代謝と血流が組織レベルでは一致せず、血管治療の24時間後に拡散などにより血流の一部は再開してもFDG集積は回復せず、しかも組織所見の変化は血流所見よりもFDG集積に近いことから、FDG集積として評価した腫瘍の糖代謝が、腫瘍の生存を反映した信頼性の高い治療評価の指標であることがわかった。一方AC7700をフッ素18で標識する研究であるが、AC7700の活性型であるAC7739をターゲットとして種々の前駆体を設計し標識する作戦で試行錯誤が行われた。しかし特殊な構造式であることから、予想外の反応結果が出るなどの困難に直面し、成功していない。次に腫瘍などの細胞膜の脂質代謝の基質となるコリンのフッ素18標識体、18Fフルオロメチルコリン(FCH)の腫瘍内分布の特性を調べた。FCHの腫瘍内分布は腫瘍細胞に特異性が高く、メチオニンと極めてよく似ていたがFDGとは異なっていた。炎症モデルへにおいてFDGは炎症細胞層、特にマクロファージなどに一致して非常に高い集積を示したのに対し、FCHは肉芽組織に淡い集積が見られたのみであった。FCHはマクロファージなど炎症細胞への集積が低く、腫瘍の生存を評価するのにはFDGよりも優れている可能性があり、今後腫瘍血管治療評価にも応用する予定である。
「四国史」宣命の校本作成

平成12年度からの二年間で収集した宣命資料は、日本後紀・・・国会図書館蔵本・刊本続日本後紀・・・宮内庁書陵部蔵本・尊経閣文庫蔵本・天理大学附属図書館蔵本など9本日本文徳天皇実録・・・宮内庁書陵部蔵本・天理大学附属図書館蔵本・蓬左文庫蔵本など13本日本三代実録・・・宮内庁書陵部蔵本・蓬左文庫蔵本・神宮文庫蔵本など9本に及ぶ。現在、これらの諸本を用いて、宣命の校本を作成する作業を進めている。現段階で明らかになっていることは、続日本後紀宣命を例に挙げると、以下のような点である。1、集めた9種の諸本は、形態面では大きく分けて一頁8行の本と14行の本の二種類に分かれるが、文字の異同等、本文の内容面では三種類に分かれる。2、内閣文庫所蔵慶長写本と宮内庁書陵部所蔵谷森氏旧蔵本の二本・尊経閣文庫蔵本は、形態は前者が一頁8行、後者が一頁14行と異なるが、宣命本文では一致する箇所が多い。3、内閣文庫所蔵元禄四年写本と国学院大学蔵本は宣命本文の一致する箇所が多く、また寛文八年刊本とも近い関係にある。4、宮内庁書陵部所蔵谷森善臣手校本は神宮文庫豊宮崎文庫旧蔵本と一致する部分が多い。5、もっとも古態を残していると言われる高柳光寿氏旧蔵本(閲覧したのみで収集はできていない)は、上の2のグループの諸本と一致する箇所もあるが、他の諸本では「てい」が多用される「て」の万葉仮名に「弖」を用いるなど、独自の点が多く見られる。今年度は、「四国史」宣命の校本作成のための基礎作業として、各地の図書館・文庫に残されている資料の収集を行った。具体的には、国立国会図書館・国立公文書館(内閣文庫)・宮内庁書陵部・国学院大学附属図書館・天理大学附属図書館・大東急記念文庫・尊経閣文庫・蓬左文庫に行き、『日本後紀』『続日本後紀』『日本文徳天皇実録』『日本三代実録』の写本及び刊本の宣命部分の複写を行った。集めた資料により明らかになったことは以下の点である。1、『日本後紀』は全40巻のうち現存するものは10巻分のみであり、『続日本後紀』以下の三つの国史に比べ、所蔵している図書館・文庫の数がかなり少ない。2、『日本文徳天皇実録』と『日本三代実録』とは、同一人物の書写ないしは所蔵にかかるものが、同じ図書館・文庫にセットで残されている場合が多い。3、『日本文徳天皇実録』と『日本三代実録』の諸本には、ト部兼夏・兼豊・兼敦らの書写や補修について記した本奥書のあるものが多く、もともとト部家に伝存してきたものであることが分かる。また写本自体は多いものの同じト部本系に属しており、伝本の種類は少ない。今後は、今年度行くことができなかった水戸彰考館・東北大学附属図書館などに行き資料収集を行うとともに、集めた諸本の比較検討により、「四国史」宣命の校本作成を行う。
神経調節物質による樹状突起電位依存性チャネル制御の解析

本研究では、正常・疾患条件下での脳の高次機能発現機構への基礎的な知見を得、また向精神薬の作用機序について薬理学的な解析をするため、神経調節物質による樹状突起電位依存性チャネル制御の解析を行った。本年度は2年の研究計画の初年度として、研究課題を遂行するにあたっての系の確立と最初のスクリーニングを行った。神経細胞の活動はグルタミン酸が興奮性刺激として使われている。そこで、このグルタミン酸が電位依存性チャネルを制御しているかを調べた。分散培養神経細胞をグルタミン酸で刺激し、細胞から得られた蛋白質をウェスタンブロット法により解析した。ここでは様々な電位依存性チャネルに対する抗体を用い、どのチャネルがどのように制御を受けているのかを網羅的に解析する事を試みた。その結果、多くの分子は何の影響も受けないのに対し、神経細胞樹状突起に局在している電位依存性カリウムチャネルであるKv4.2分子がグルタミン酸刺激によって分子量の変化を起こす事が明らかとなった。更なる生化学的な解析から、これはグルタミン酸刺激後に特異的に起こる脱リン酸化によるものと同定された。また、薬理学的手法を用いる事で、このグルタミン酸によるKv4.2分子の脱リン酸化はNMDA型グルタミン酸受容体の活性化に伴う特異的なシグナル伝達の結果として起こるものであるという事が分かった。これらの結果は神経細胞樹状突起の生理学的機能に重要な役割を果たすKv4.2が神経活動そのものによって制御されている事を初めて発見したものであり、正常・疾患条件下における樹状突起の生理学・薬理学への新たな視点からの知見を与えるものである。
難純化ウイルスに対する複製型二本鎖RNAからの遺伝子のクローニングと抗血清の作製

本研究では、病原ウイルスの純化が困難なために現在まで抗血清が作製されていない難純化植物ウイルスを対象として、まずウイルスゲノムに対応した複製型二本鎖RNAをウイルス感染植物から抽出し、これを用いて病原ウイルスの遺伝子に対応したcDNAのクローニングを行うことを第一の目標としている。さらに、ウイルス遺伝子がコードするタンパク質に対応した塩基配列を決定し、大腸菌に融合タンパク質としてウイルスタンパク質を産生させ、それに対する抗血清を作製することを第二の目標としている。さらにこれらの成果を利用して、難純化ウイルスの検出・同定・系統判別を迅速に行えるようにすることを最終目標としている。果樹ではカンキツトリステザウイルス(CTV)、イチゴではイチゴマイルドイエロ-エッジウイルス(SMYEV)、野菜では純化は容易だが系統判別の困難なキュウリモザイクウイルス(CMV)を取り上げて実験を行い、以下のような知見が得られた。1. CTVでは複製型二本鎖RNAからCTV-RNAのクローニングに成功した。得られたcDNAクローンのひとつは外被タンパク質を大腸菌で産生する能力をもっており、その塩基配列を決定した。また塩基配列に基づいて作成したプライマーを用いて、PCR法により二本鎖RNA試料からCTV遺伝子が検出でき、さらにCTVの系統判別もできることが明らかとなった。2. CTVの外被タンパク質遺伝子が重複したと考えられる外被タンパク質類似タンパク質を融合タンパク質として大腸菌で生産させることに成功し、これに対する抗血清も作製することができた。3.SMYEVは、いまだにウイルス粒子の形態すら未確認であるため、接木試験で発病した多数のイチゴから複製型二本鎖RNAを抽出し、cDNAのクローニングに成功した。このcDNAの塩基配列を決定したところ、報告のある植物ウイルスの塩基配列とは一致しなかった。4.CMVでは、複製型二本鎖RNAをもとにして、世界で初めてテンペレートスイッチンング機構によりCMV-RNAに変異が生ずることを明らかにした。本研究では、病原ウイルスの純化が困難なために現在まで抗血清が作製されていない難純化ウイルスを対象として、まずウイルスゲノムに対応した複製型二本鎖RNAをウイルス感染植物から抽出し、これを用いて病原ウイルスの遺伝子に対応したcDNAのクローニングを行うことを第一の目標としている。さらに、ウイルス遺伝子のコードするタンパク質に対応した塩基配列を決定し、大腸菌に融合タンパク質としてウイルスのタンパク質を産生させ、抗血清を作製することを最終目的としている。平成7年度では、果樹ではカンキツトリステザウイルス(CTV)、イチゴではイチゴマイルドイエロ-エッジウイルス(SMYEV)を取り上げて実験を行い、以下のような知見が得られた。1.CTVでは複製型二本鎖RNAからCTV-RNAのクローニングに成功した。得られたcDNAクローンのひとつは外被タンパク質を産生する能力をもっていた。その塩基配列を決定し、日本産CTVの外被タンパク質遺伝子と米国産のものが比較できた。以上の点から、複製型二本鎖RNAを用いた植物ウイルス遺伝子のクローニングが実用的技法であることが証明された。2.さらに外被タンパク質遺伝子近傍のCTV-RNAの塩基配列を調べたところ、日本には未発生のbeet yellows closterovirusとCTVが近縁であることが明らかとなった。またCTVの各種系統が感染葉よりRT-PCR法で、CTVが検出でき、その塩基配列から系統を比較することができる。このcDNAの塩基配列をもとにしてプライマーを作成しRT-PCR法を行ったところ、2種のウイルス様因子が検出可能となった。

本研究では、病原ウイルスの純化が困難なために現在まで抗血清が作製されていない難純化ウイルスを対象として、まずウイルスゲノムに対応した複製型二本鎖RNAをウイルス感染植物から抽出し、これを用いて病原ウイルスの遺伝子に対応したcDNAのクローニングを行うことを第一の目標とした。さらに、ウイルス遺伝子のコードするタンパク質に対応した塩基配列を決定し、大腸菌に融合タンパク質としてウイルスのタンパク質を産生させ、抗血清を作製することを最終目的としている。平成8年度では、果樹ではカンキツトリステザウイルス(CTV)、イチゴではイチゴマイルドイエロ-エッジウイルス(SMYEV)、およびキュウリモザイクウイルス(CMV)を取り上げて実験を行い、以下のような知見が得られた。1.CTVでは複製型二本鎖RNAからCTV-RNAのクローニングに成功した。得られたcDNAクローンのひとつは外被タンパク質を産生する能力をもっていた。以上の点から、複製型二本鎖RNAを用いた植物ウイルス遺伝子のクローニングが実用的技法であることは証明された。CTVについては本法を用いてさらに塩基配列の決定を進め、現在は弱毒および強毒ウイルスの比較により病原性決定遺伝子の解析を行っている。2.CMVのサテライトRNA由来の複製型二本鎖RNAを解析中に、サテライトRNAの多量体が見いだされ、これはCMVのRNAポリメラーゼのテンペレートスイッチング機構により形成されることが明らかとなった。3.SMYEVは、いまだにウイルス粒子の形態すら未確認であるため、接木試験で発病した多数のイチゴから複製型二本鎖RNAを抽出し、cDNAのクローニングに成功し、このcDNAの塩基配列を決定した。この結果、日本では性状不明の2種のイチゴのウイルスがPCR法で検出可能となった。
ヘテロ原子を有する芳香族化合物類の革新的なメタルフリー酸化的結合形成

糖鎖医薬品や天然由来の生理活性配糖体を簡便かつ効率的に合成できるグリコシル化反応の開発は、有機合成上の重要なテーマである。近年の糖鎖合成において、チオグリコシドは、そのCーS結合が保護基となり得る一方で、反応剤を選択すると特異的に活性化できることから特に注目されているドナー基質(グリコシル化ドナー)である。今回、我々はこれまでに三価超原子価ヨウ素反応剤を用いた種々のカップリング反応の開発研究を行ってきた。そこでこれ迄の知見を活かし、新しい優れたグリコシル化反応の開発を検討した。その結果、無臭チオールから誘導したグリコシルスルフィドをドナー基質として用い、アルコールとの反応を行ったところ、グリコシル化反応が高収率で進行することが分かった。さらに2糖類の合成、3糖類の合成も本方法を用いることで可能であることがわかった。また研究代表者はこれまでに、ヘテロ芳香族化合物であるピロール類のクロスカップリング反応の開発に成功している。本反応ではピロール類において、ヨードニウム中間体を経由することで、選択的にクロスカップリング反応が進行する。しかし反応では当量のヨウ素反応剤を用いるために、反応終了後にヨードベンゼンの副生が見られた。そこで当研究室で開発に成功しているアダマンタン骨格を有するリサイクル型の新規ヨウ素反応剤を適用することにより、廃棄物の少ない実用的かつ、効率的なヘテロ芳香族ビアリール類合成法へと発展させることに成功した。新しい結合形成反応へと展開できており、またグリコシル化と芳香族のカップリングと新しい知見のもと実験を遂行できていると考えている。またヘテロ芳香族化合物であるピロール類の、効率的なクロスカップリング反応への展開にも成功している。生理活性配糖体を簡便かつ効率的に合成できるグリコシル化反応の開発は、有機合成上の重要なテーマである。研究代表者はグリコシル化反応を検討し、最近超原子価ヨウ素反応剤を用いたチオグリコシドのグリコシル化反応が効率的に進行することを明らかとした。そこで本年は超原子価ヨウ素反応剤を用いたチオグリコシドの活性化によるグリコシル化反応を検討する。またグリコシドは生体内で一般に見出される対応するグリコシドと異なり、加水分解等のアノマー位代謝分解を受けにくいため、糖分子が結合した配糖体や糖鎖を認識する酵素や蛋白質を標的とした医薬品開発において重要な分子と注目を集めている。そのため、現在までにも多くのグリコシル化反応が開発されてきているが、現在の方法は望まない副反応や副生成物が生じる等の問題点を有しており、有用なグリコシル化反応は報告されていない。またヘテロ原子を有する芳香族化合物のカップリング反応として、sp3炭素とのカップリングを検討する。本手法の確立により、現在用いられている重金属酸化剤や遷移金属を用いたグリコシル結合形成反応に代わる新たな手法として期待できる。ヘテロ原子を有する芳香族化合物の酸化による結合形成反応は合成化学的また生合成機構的にも、極めて重要な反応である。最近我々の研究室では、3価の超原子価ヨウ素化合物を用いた芳香族化合物類の酸化的クロスカップリング反応を見出した。最近では、フェノール類やアニリン類の触媒的クロスカップリング法を達成している。そこで本触媒的酸化法の更なる発展を目指し、フェノール類及びアニリン類といったヘテロ原子を有する芳香族化合物の結合形成反応による、新規骨格形成反応の展開を行った。芳香環上にOH基を有するフェノールを含むビアリール化合物は生物活性天然物などの有用物質に見られる部分骨格で、その合成法は重要な研究課題である。本年は研究代表者はヘテロ原子を有する芳香族化合物の有機触媒を用いたカップリング法による新規結合形成反応の開発を目的とする。研究代表者はフェノール類の酸化的カップリング反応のヨウ素反応剤の触媒化を検討し、最近フェノール類と芳香族化合物との分子間クロスカップリング反応が、効率的に進行することを明らかとした。有機金属触媒を用いても全く達成されていなかった、フェノール類と芳香族化合物との触媒的クロスカップリング反応にも成功した(Angew. Chem. Int. Ed. 2016, 55, 3652.)。そこで本反応を応用し、アニリン類の新規結合形成反応の開発を行った(Synlett,2017,28, 2941-2945)。本研究では研究代表者はヘテロ原子を有する芳香族化合物の有機触媒を用いたカップリング法による新規結合形成反応の開発を目的としている。計画通り平成29年度はフェノール類やアニリン類の新規触媒的結合形成反応と骨格形成反応の開発を行えた。今後はすでに研究代表者が有するヨウ素触媒の修飾の知見を併せて利用することにより、反応性の制御並びに生成物の選択性といったコントロールを行い本研究の達成を目指す。

その結果、無臭チオールから誘導したグリコシルスルフィドをドナー基質として用い、アルコールとの反応を行ったところ、グリコシル化反応が高収率で進行することが分かった。さらに2糖類の合成、3糖類の合成も本方法を用いることで可能であることがわかった。また研究代表者はこれまでに、ヘテロ芳香族化合物であるピロール類のクロスカップリング反応の開発に成功している。本反応ではピロール類において、ヨードニウム中間体を経由することで、選択的にクロスカップリング反応が進行する。しかし反応では当量のヨウ素反応剤を用いるために、反応終了後にヨードベンゼンの副生が見られた。そこで当研究室で開発に成功しているアダマンタン骨格を有するリサイクル型の新規ヨウ素反応剤を適用することにより、廃棄物の少ない実用的かつ、効率的なヘテロ芳香族ビアリール類合成法へと発展させることに成功した。新しい結合形成反応へと展開できており、またグリコシル化と芳香族のカップリングと新しい知見のもと実験を遂行できていると考えている。またヘテロ芳香族化合物であるピロール類の、効率的なクロスカップリング反応への展開にも成功している。ヘテロ原子を有する芳香族化合物の酸化による結合形成反応は合成化学的また生合成機構的にも、極めて重要な反応である。最近我々の研究室では、3価の超原子価ヨウ素化合物を用いた芳香族化合物類の酸化的クロスカップリング反応を見出した。最近では、フェノール類やアニリン類の触媒的クロスカップリング法を達成している。そこで本触媒的酸化法の更なる発展を目指し、フェノール類及びアニリン類といったヘテロ原子を有する芳香族化合物の結合形成反応の展開をとして生物活性天然物合成並びに不斉反応への応用を検討する。また本研究においては触媒として用いるヨウ素反応剤の修飾、設計を検討し、本研究を完遂する。本手法の確立は、現在汎用されている遷移金属を用いたクロスカップリング反応に代わるものになりうると期待できる。生理活性配糖体を簡便かつ効率的に合成できるグリコシル化反応の開発は、有機合成上の重要なテーマである。研究代表者はグリコシル化反応を検討し、最近超原子価ヨウ素反応剤を用いたチオグリコシドのグリコシル化反応が効率的に進行することを明らかとした。そこで本年は超原子価ヨウ素反応剤を用いたチオグリコシドの活性化によるグリコシル化反応を検討する。またグリコシドは生体内で一般に見出される対応するグリコシドと異なり、加水分解等のアノマー位代謝分解を受けにくいため、糖分子が結合した配糖体や糖鎖を認識する酵素や蛋白質を標的とした医薬品開発において重要な分子と注目を集めている。そのため、現在までにも多くのグリコシル化反応が開発されてきているが、現在の方法は望まない副反応や副生成物が生じる等の問題点を有しており、有用なグリコシル化反応は報告されていない。またヘテロ原子を有する芳香族化合物のカップリング反応として、sp3炭素とのカップリングを検討する。本手法の確立により、現在用いられている重金属酸化剤や遷移金属を用いたグリコシル結合形成反応に代わる新たな手法として期待できる。本年度に前倒し請求を行ったが、研究が順調に進行し、本年度の試薬等の購入には不要と考えたため来年度に繰り越した。
ＣＴＣＦによる神経細胞の多様化と神経回路形成

終脳領域の神経細胞で特異的にCTCFを欠損させたマウス(cKO)を作製した。cKOマウスは、生後の発達異常や行動異常を示し、生後1ヶ月以内に全て死亡した。遺伝子発現解析の結果、クラスター型Pcdhの発現が著しく低下していることが分かった。また、cKOマウスは、体性感覚野のバレルと呼ばれる特徴的な構造が全く形成されないことがわかった。さらに、CTCFを欠損した神経細胞では、樹状突起の分枝やスパインの発達に異常を示すことを明らかとした。以上の結果は、分化した神経細胞においてCTCFが体性感覚野のバレル形成に必用な因子であること、Pcdhの確率的な遺伝子発現に関与すること示す。終脳領域の分化した神経細胞で特異的にCTCFを欠損させたマウス(CTCF-cKO)を作製した。CTCF-cKOマウスは、生後の発達異常や行動異常が認められ、生後1ヶ月以内に全て死亡した。CTCF-cKOマウスにおける遺伝子発現変化を網羅的に解析した結果、特にクラスター型プロトカドヘリン(Pcdh)の発現が著しく低下していることが分かった。また、CTCF-cKOマウスでは、生後にヒゲからの入力刺激を受けることで大脳皮質に形成されるバレルと呼ばれる特徴的な構造が全く形成されないことを明らかにした。さらに、CTCFを欠損した神経細胞では、樹状突起の分枝やスパインの形成に異常を示すこと、興奮性後シナプス電流は正常でありながら、発火頻度が減少していることを明らかとした。以上の結果から、分化した神経細胞においてCTCFがクラスター型Pcdhの確率的な遺伝子発現に関与し、機能的な神経回路の発達に関わる重要な因子であることを示すことができた。一方、CTCFを神経幹細胞で特異的に欠損させると、生後1日以内に死亡し、上記の分化した神経細胞で欠損させた場合の表現型と大きく異なった。組織化学的な解析の結果、神経細胞の発生・分化過程で大量の細胞死を引き起こしていること、CTCFを欠損した神経幹細胞でも一部は神経細胞に分化することができることが分かった。これらの結果は、神経幹細胞から神経細胞への分化過程においてもCTCFが重要な役割を果たしていることを示唆する。CCCTC結合タンパク質(CTCF)は、ゲノム配列やエピゲノム修飾に依存してDNAに結合し、高次染色体構造を形成することで遺伝子の発現を制御する。しかし、神経系での役割については明らかでない。私は、終脳領域の分化した神経細胞で特異的にCTCFを欠損させたマウス(CTCF-cKO)を作製し、解析をおこなった。CTCF-cKOマウスは、メンデル比に従って生まれてくるが、生後に発達異常や行動異常を呈し、1ヶ月以内に死亡した。マイクロアレイによる網羅的な解析から、特にクラスター型プロトカドヘリン(Pcdh)のうち53のアイソフォームの発現が著しく低下していることが分かった。クラスター型Pcdhは、個々の神経細胞で異なるアイソフォームが確率的かつ組み合わせ的に発現することで神経細胞に分子的多様性を生み出すことが知られている。in situ hybridization法、および定量的RT-PCR法によりCTCF-cKOマウスでクラスター型Pcdhの発現が著しく低下していることが確認できた。また、マウスでは、生後にヒゲからの入力刺激を受けることで大脳皮質にバレル構造と呼ばれる特徴的な構造が形成されるが、CTCF-cKOマウスでは全く形成されないことを明らかにした。これらの結果は、CTCFがクラスター型Pcdhの確率的な遺伝子発現に関与し、機能的な神経回路の発達に関わる重要な因子であることを示す。中枢神経系におけるCTCFの役割について解析するため、終脳領域の分化した神経細胞で特異的にCTCFを欠損させたマウス(CTCF-cKO)を作製した。大脳皮質、および海馬の組織を用いてマイクロアレイによる遺伝子発現解析をおこない、Pcdh遺伝子群の発現が顕著に低下していることがわかった。Pcdh遺伝子群の発現変化は、定量的RT-PCR法、in situ hybridization法により確認し、CTCFがクラスター型Pcdh遺伝子群の確率的な遺伝子発現に関わる重要な因子であることを明らかとした。また、CTCF-cKOマウスは、体性感覚野のバレル構造が全く形成されないこと、樹状突起の分枝やスパイン形成の発達に異常を示すことを明らかにした。これらの成果は、英文査読付論文として発表(表紙に採用)、学会発表、新聞への掲載など通して国内外に発信することができた。よって、これまでのところ研究はおおむね順調に進展していると言える。

これまでの研究成果により、終脳領域の分化した神経細胞でCTCFがPcdhの発現制御と神経回路形成に重要な役割を果たしていることが分かった。次に、CTCFによる染色体構造の変換と神経分化との関係を大脳皮質の形成過程をモデルに解析をおこなう。分化した神経細胞特異的CTCF欠損マウスで、樹状突起やシナプスの発達に異常が見られた。樹状突起、およびシナプス形成過程をイメージング技術により継時的に観察することで、神経細胞の発達過程においてCTCF欠損マウスで何が起きているのかの詳細な解析をおこなう。Pcdh-γクラスターのエンハンサー領域は、未だ同定されていない。Pcdh-γクラスターのエンハンサー領域は、遺伝子領域から遠く離れたところに位置している可能性が高く、効率的に探索する必用がある。これまでの研究により、CTCFがPcdh遺伝子群の制御に重要であることがわかっており、Pcdh-γクラスターのエンハンサー領域にもエンハンサーが結合することが想定される。そこで、Pcdh-γ遺伝子クラスターに近いCTCF結合領域から選択的に解析することで、エンハンサー領域の同定を進める。本年度はおおむね順調に研究が進展し、研究の進展に伴い必用な研究費をその都度執行した。また、得られた研究成果をまとめて、論文として発表することにも注力した。そのため、当初の見込み額と執行額は異なったが、研究計画に基本的な変更はない。本年度は、前年度の研究費も含め、引き続き当初の計画通りに研究を推進する。
カーネーションの温度依存性異常花発生機構の解明

鉢物カーネーション'Cherie'の正常花系統(WT)および奇形花系統(mlf)を異なる温度条件で栽培したところ、WT株は正常花のみを咲かせ、mlf株は15°Cで92.2%の奇形花を形成し、20°Cおよび25/20°Cでは有意に低い奇形花率を示した。WTとmlfにおける差異は花芽発達のがく片形成期以降に認められた。RNA-seqによりHSC70, WushcelおよびLOG3などはmlf株花芽で発現が高かった。HSC70およびWushchelにおいてSNIPが検出された。異常花発生機構について考察した。背景異なる温度がカーネーションにおける異常花発生に及ぼす影響について検討した.材料および方法鉢物用カーネーション`シェリー'を供試し,正常および異常花系統株を平成27年5月に移植し,6月より15°C,20°Cおよび25/20°Cの温度条件下で各区12株ずつ栽培し,8から10月にかけて異常花の発生を調査した.花芽の形態観察と花器官の形態に関わるMADSbox遺伝子について調査した.結果と考察異常花系統区では15°C区では小花の93.3%が異常花となったのに対して,20°Cおよび25/20°C区では異常花はそれぞれ3.0および1.0%であった.全ての温度区において,正常花系統では異常花の発生は認められなかった.異常花の花芽の観察により,花芽形成期から花弁の形成の遅れなどが確認された.花の形態に関するMADSbox遺伝子の一部についてシーケンスを行ったところ,遺伝的変異は認められなかった.以上の結果から,この異常花は15°C前後で発生し,20°C以上で抑制される温度依存性であることが確認された.温度変化によって形態異常が誘導される機構についてさらに検討する.本研究で取り上げた異常花発生が温度によって制御されていることや発生時期を明らかにすることができた.この異常花の原因については引き続き探求する必要がある.カーネーション`シェリー'における異常花が発生する花芽分化ステージについて検討した.正常および異常花系統株を供試し,異常発生を誘導条件である15°Cおよび非誘導条件である20°Cの温度下で栽培し、異常花の発生を調査し,花芽の発育を観察した.花芽を採取し,パラフィン切片法,三重染色法を用い,縦断切片を顕微観察した.また,花芽を実体顕微鏡および走査型電子顕微鏡で観察した.花芽分化ステージは古里ら(1967)を参考にI未分化,II膨大期,IIIがく片形成期,IV花弁形成期,V雄雌ずい形成期,VI胚珠花粉形成期,VII花芽完成期として判別した.栄養成長期に尖っていた成長点が扁平になり花芽分化が開始した.花芽の分化開始からガク片形成期までは,正常花と異常花系統間に差異は認められなかった.花弁形成期において差異が認められ,異常花では花弁形成が不均一で遅れる傾向が認められた.雄雌ずい形成期において,異常花では花弁が形成されておらず,複数の雌ずいが形成されているものがあった.以上のように異常花においては,花弁形成期から形態的異常が生じ,花弁形成が遅れ,雄雌ずい形成期には雌ずいの連続的な形成および花器官の重複が始まることが明らかとなった.さらに,異常発生の原因を特定するために,正常と異常系統株のシュートからゲノムDNAを抽出し,リシークエンスを行い,変異箇所の探索を行った.結果をデータベース上の既知のゲノム配列にマッピングし,正常と異常株を比較したところ,多くのSNPが見つかった.今後,原因遺伝子を絞り込む必要がある.カーネーション奇形花の原因について,これまでに温度条件が重要であることと,花芽分化の花弁形成期に正常と異常の差異が発生することを明らかにした.また,正常および異常系統株のゲノムのリシークエンスを完了しており,原因解明に向けて順調に研究が進んでいると考える.鉢物カーネーション'Cherie'の正常花系統(WT)および奇形花系統(mlf)を異なる温度条件で栽培したところ、WT株は正常花のみを咲かせ、mlf株は15°Cで92.2%の奇形花を形成し、20°Cおよび25/20°Cでは有意に低い奇形花率を示した。鉢物カーネーション'Cherie'の正常花系統(WT)および奇形花系統(mlf)を異なる温度条件で栽培したところ、全てのWT株は正常花のみを咲かせたが、mlf株は多数のガク状器官をもつ葉化花、多花弁花、多雌ずい花、貫生花などの表現型を示した。mlf株は26°Cでは全く異常花を発生しなかった。17/5°Cで栽培したmlf株を23/18°Cに移したところ、奇形が緩和された。反対に、26°Cで正常であったmlf株を17/12°Cに移したところ、奇形花が発生したことから、この奇形は温度帯に可逆的に反応することが示された。15°C一定下のmlf株は92.2%の奇形花を形成し、20°C一定および25/20°C区ではそれぞれ3.1%および1.3%と有意に低い奇形花率を示した。

花芽の観察により、WTとmlfにおける差異はがく片形成期後に認められ、15°Cにおけるmlf株の花弁原基の分化はWTに比べて不明瞭であった。15°Cまたは20°Cの温度条件下の若い花芽についてRNA-seq解析を行った.また、WTおよびmlf株のゲノムシークエンスを行った。RNAseqにより,ストレスや低温反応に関わるHSC70,茎頂における幹細胞の密度を支配するWushcelおよびサイトカイニンの活性化に関わるLOG3,4および5などはmlf株花芽で発現が高かった。一方,花芽の頂端分裂組織の維持に関わる遺伝子はmlf株の花で発現が低下した。特に,HSC70およびWushchelにおいてSNIPが検出された。mlf株ではHSC70およびWuschelに何らかの変異があり,両者が15°Cで過剰に発現し,サイトカイニンの活性が高まった結果、花芽の分裂組織が拡大し、花の扁平化や器官の異常な増加につながった可能性が示唆された。花芽の異常が誘導されるステージを明らかにし,この時期に発現する遺伝子について解析を進め,原因の特定を目指す.正常花と異常花における遺伝子発現のトランスクリトーム解析を行い,原因遺伝子の絞り込みを行う.また,ファイトプラズマについても専門家の協力を得ながら,検討していく.園芸学温度による異常花発生の確認と花芽の形態観察に注力したために,遺伝子解析の費用がやや残った.人件費を使用しなかった.遺伝子解析についての経費において,委託解析によって余剰が生じたため.正常花と異常花の発現遺伝子群をシーケンスするためのライブラリー作成キット(物品)および委託費用(その他)に使用する.また,成果発表のための旅費を支出する.正常花と奇形花についての遺伝子発現差解析,研究成果発表などに使用する.