hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
雌雄異株植物を用いたY染色体と性決定機構に関する分子細胞学的研究

本研究では雌雄異株のモデル植物として、XY型の性染色体を持つナデシコ科の雌雄異株植物ヒロハノマンテマを用い、Y染色体上に存在する雄特異的な因子を同定するとともに、雌雄が形態的に初めて識別できるようになる段階における生殖器官分化の機構を分子細胞学的に解明することを目的とした。その際、植物において細胞に多様な機能を与える特徴的なオルガネラである色素体に着目し、その分裂・増殖機構に焦点を当てた。まず、ヒロハノマンテマにおいて、雄特異的なDNAとしてRAPD法により285アミノ酸に相当するORF(ORF285)を単離した。ORF285は、サザンハイブリダイゼーション解析・STS-PCR解析・FISH解析によりY染色体上におけるシングルコピーでの存在が示された。(Nakao et al.,2002)次に、雌雄の個体において異なる生殖器官を生成する機構を詳細に解析するために、植物細胞の機能を特徴づける色素体に着目し、各成長段階に応じた組織毎の色素体の分裂・増殖機構を解析した。色素体分裂に関与するFtsZリングを指標として用いたところ、子葉と本葉、あるいは雄と雌の花序の間でもタンパク質の発現量に差が見られ、相同な器官の間でも色素体の分裂制御機構は異なることが示された。また、FtsZリング自体を色素体から浮遊状態で単離することにも成功し、子葉でも本葉でも葉緑体サイズに関わらずリングの太さは同じであり、収縮の際に太さを変えることなく縮むことが明らかとなった。本葉では子葉よりもFtsZタンパク質の蓄積量が多く、このような蓄積量と色素体サイズの関係は、葉の成長に応じた色素体の増殖活性を反映しているとみられることから、色素体分裂とFtsZリングの動態は、器官分化の初期段階における特異性を裏打ちしていると考えられ、性分化の解析対象として適していることが示唆された。(日本植物学会大会(2002)にて発表)本研究では雌雄異株のモデル植物として、XY型の性染色体を持つナデシコ科の雌雄異株植物ヒロハノマンテマを用い、Y染色体上に存在する雄特異的な因子を同定するとともに、雌雄が形態的に初めて識別できるようになる段階における生殖器官分化の機構を分子細胞学的に解明することを目的とした。(日本植物学会大会(2002)にて発表)
在宅難病患者の緊急事態発生要因の分析とケアのための判断方法に関する実証的研究

目的難病患者の緊急事態について、その発生しやすい条件と判断過程を事例分析し共通性を抽出した。方法昭和61年9月に都立神経病院の在宅ケアチームが受持っていた患者84例中緊急事態発生患者43例から緊急問題領域別に代表例を選び、在宅ケアに見識の深い医師1名の協力を得て事例分析を61年10月62年2月に行なった。結果1.緊急事態が発生しやすい条件:(1)患者の病状が不安定(2)医療器具や衛生材料を使う患者(3)介護者の判断や行動パターンが不確立(4)家族が患者を受入れるための精神的・家族条件の準備不足(5)患者・家族が対応への時間的余裕を予測できない(6)必要な関係機関の連絡が一方通行的で相互確認のためのフィードバックがないなど対応側の協調・統合機能が不十分、特に上記(2)(3)(4)の条件不足の際に緊急事態は頻発しやすい。2.緊急問題が累積しやすい条件:(1)ある緊急問題への対応が不十分であると、時間経過に従って問題が累積し複雑かつ深刻化する(2)緊急事態で患者や家族に教育的な対応をしておかないと、緊急事態の予防や早期発見ができず問題が累積しやすい。3.在宅ケアチームの対応要件:(1)上記1.2の条件整備をまず在宅ケア開始期に整備し、不十分な条件はできるだけ短期間に改善しておく(2)ケアのための判断過程は、緊急事態→情報確認→事態の判断→解決方針(直接対応と指導)→実際対応→結果の確認までが広義の判断過程で.狭義では前半の事態の判断までであるが、対応要件を明らかにするには広義の判断過程で分析することが重要である。
垂直入反射利用の新しいX線干渉計の作成とその応用

ふつうに単色化して用いるX線の可干渉距離は10100μmであるので、X線干渉計として二光路が等しいボンゼ・ハート型のものが広く利用されている。しかし最近、大強度のX線源であるシンクロトロン放射による核共鳴散乱線を利用すると、可干渉距離がメートルのオーダーになるので、光路差のある干渉計も実現可能になった。本研究では核共鳴散乱X線を用いて光路差のある新しいタイプの干渉計を設計・製作することをめざした。干渉計は回折面が表面に平行な結晶板を2枚平行に配置したもので、入射線はその結晶板の間で垂直入反射を繰り返し起こさせ、干渉を得る。^<57>Feによる核共鳴散乱線を想定するとエネルギーは14.4KeVとなる。入射線は垂直入反射条件を満たす必要があり、完全性の高い結晶の中から探すと水晶の(0610)面が最良の候補であることを見出した。水晶からなる新型の干渉計を実現するためにつぎのような基礎実験を放射光を用いておこなった。水晶(0610)面への入射に対する反射・透過特性を調べた。つぎにその格子面間隔を(0610)面の垂直入反射条件下でシリコン結晶との組合せから高精度で決定し、水晶をおよそ85°Cに加熱すればよいことが分かった。また、水晶の完全性をSi(1240)と水晶(0610)の組合せによる平行に近い二結晶配置を用い評価した。ロッキングカーブを測定し計算曲線に近いプロファイルを得た。そのトポグラフからも完全性の高いことが判明した。さらに水晶からなるボンゼ・ハート型干渉計を作製したが、結晶の加工処理上の問題が残り、明確な干渉像は得られなかった。加工処理法の改良により干渉が見られると思われる。最後に垂直入反射型のX線干渉計を用いた結晶構造因子の位相を決定する方法を提案した。これは従来の方法と異なり、X線光学的な新しい手法である。本研究では可干渉距離がメートルのオーダー核共鳴散乱X線を用いて光路差のある新しい干渉計を設計・製作することをめざしている。これにはブラッグ角が90゚の垂直入反射の回折条件を用いる。^<57>Fe同位体でエンリッチした完全性の高いヘマタイト結晶の(777)面からの核共鳴散乱線を利用することを目論んでいる。そのエネルギー14.4keVに対して水晶を100°C近くにすると(6010)面で垂直入反射条件が満たされることが見出した。そこで完全性の高い水晶をさがしたところ、きわめてグレードの高いものを入手することができた。その水晶についてX線トポグラフィにより微小格子歪みの有無を調べている。さらに干渉計の設計に必要な水晶の格子定数と熱膨張係数の正確な値をX線回折法によって求める作業を行っている。完全結晶においてX線が90゚近くのブラッグ角をもつときの回折幅が格段に広がる特徴的な回折現象は、理論・実験両面で詳しく研究されている。しかし従来の研究はすべて無限に厚い結晶での反射特性に限られていたが、干渉計の光学素子として利用するには薄い結晶で反射特性とともに透過特性を調べることが必要である。高エネルギー物理学研究所の放射光を用い、厚さが100μm前後で表面が(911)面に平行なシリコン結晶板において波長0.85AのX線で反射線と透過線のロッキングカーブを測定した。

結晶板か薄くなるに従い、反射線強度が減少し、透過線強度が増大するのがみられた。ロッキングカーブの中心には同時反射による鋭いデイップが生じていた。これらの測定曲線を理論曲線と比較するためにダ-ウィン流の動力学的回折理論にもとづく計算を進めている。ふつうに単色化して用いるX線の可干渉距離は10100μmであるので、X線干渉計として二光路が等しいボンゼ・ハート型のものが広く利用されている。しかし最近、大強度のX線源であるシンクロトロン放射による核共鳴散乱線を利用すると、可干渉距離がメートルのオーダーになるので、光路差のある干渉計も実現可能になった。本研究では核共鳴散乱線を入射線として、ブラッグ角90°の垂直入反射条件を満たす結晶板が2枚平行に配置した新しい干渉計を実現させることをめざした。核共鳴散乱線としては^<57>Feでエンリッチした完全性の高いヘマタイト結晶α-^<57>Fe_2O_3からの核共鳴散乱線(14.4keV)の利用を想定している。この場合水晶の(0610)面が垂直入反射条件に近い。本年度は水晶からなる新型の干渉計を実現するために昨年度に引き続き、つぎのような基礎実験を放射光を用いておこなった。水晶(0610)面への入射に対する反射・透過特性を調べた。つぎにその格子面間隔を(0610)面の垂直入反射条件下でシリコン結晶との組合わせから高精度で決定し、水晶をおよそ85°Cに加熱すればよいことが分かった。また、水晶の完全性をSi(1240)と水晶(0610)の組合わせによる平行に近い二結晶配置を用い評価した。ロッキングカーブを測定し計算曲線に近いプロファイルを得た。そのトポグラフからも完全性の高いことが判明した。さらに水晶からなるボンゼ・ハート型干渉計を作成したが、結晶の加工処理上の問題が残り、明確な干渉像は得られなかった。加工処理法の改良により干渉が見られるようになると思われる。最後に垂直入反射型のX線干渉計を用いた結晶構造因子の位相を決定する方法を提案した。これは従来の方法と異なり、X線光学的な新しい手法である。
唾液腺癌に対するキメラ抗原受容体導入リンパ球を用いた養子免疫療法

我々は唾液腺癌におけるメソテリン(MSLN)分子の発現を調べるとともに、MSLN特異的キメラ抗原受容体(MSLN-CAR)導入T細胞を用いた養子免疫療法の有効性を検討した。16名の患者検体ならびに唾液腺癌細胞株A-253とその他4種の細胞株を用いてMSLNの発現を解析したところ、A-253ならびにほとんどの手術検体において、様々な発現強度のMSLNが確認された。さらにMSLN-CAR T細胞はメソテリン刺激後に用量依存的に活性化が上昇し、MSLN発現腫瘍細胞に対する細胞傷害活性を示した。1)唾液腺癌におけるMSLN発現の検討まず、ヒト唾液腺癌由来細胞株であるA-253株を抗mesothelin (MSLN)抗体にて染色後、flowcytometryにて測定したところ、A-253ではヒト悪性黒色腫由来Mel526細胞に比してMSLNが高発現していた。さらに当科で外科的治療を行った唾液腺癌10例について、摘出標本を用いてMSLN発現を免疫組織学的に検討したところ、粘表皮癌と腺様嚢胞癌でMSLNの高発現を認めた一方、腺房細胞癌では発現が低く、扁平上皮癌ではほとんど発現が認められなかった。唾液腺導管癌では標本毎でのバラツキが多かった。2)唾液腺癌に対するMSLN特異的CAR発現T細胞の抗腫瘍活性の検討MSLNに対する抗体クローンのss1から作成したchimeric antigen receptor (CAR)のmRNAをエレクトロポレーション法にてヒトCD8 T細胞導入し、これらの細胞をA-253細胞にて刺激したところ、T細胞の活性化マーカーであるCD107aの発現上昇が認められ、さらにこの反応は曝露される腫瘍細胞の数に依存していた。3)唾液腺癌に対するMSLN特異的CAR発現T細胞とNKT細胞免疫系の賦活化療法の併用の検討抗MSLN CARをレンチウイルスにて遺伝子導入したヒトCD3 T細胞を、中皮腫細胞株であるM108にて刺激、さらに純化したNKT細胞とαGalCerをパルスした抗原提示細胞、IFNγの中和抗体をそれぞれ添加後、共培養し、CD107aの発現を解析したところ、2)と同様にCD107aの発現上昇が確認されたが、活性化したNKT細胞の添加により容量依存的にCD107a発現が上昇した。また抗原刺激後72時間におけるCAR発現T細胞の増殖も活性化NKT細胞によって増強された。さらに、これらの反応はIFNγのブロックによって阻害された。目的:細胞傷害性T細胞を用いたがん抗原特異的免疫療法は、がん細胞表面の標的分子発現が必須であり、またT細胞受容体の抗原親和性や結合活性が細胞傷害能に大きな影響を及ぼす。従って、非常に多彩な組織をもつ唾液腺癌は抗体療法を含む抗原特異的免疫療法の対象になり難い。我々はキメラ抗原受容体(CAR)発現T細胞を用いて、標的抗原を中等度発現した唾液腺癌細胞株を含む種々の癌細胞に対する細胞傷害活性を検討した。材料・方法:標的分子として膵癌などで高発現を示すメソテリンを選択し、まず唾液腺癌手術検体における発現率を免疫組織学的に検討した。次に、マウス由来メソテリン特異的抗体クローンのSS-1から作製したSS-1 CARをヒトT細胞に遺伝子導入し、メソテリン特異的CAR発現T細胞を調製した。このT細胞を用いて、メソテリンを中等度発現するヒト顎下腺粘表皮癌由来細胞株であるA253ならびに様々なメソテリン発現率をもつ細胞株に対する活性化能、増殖能ならびに細胞傷害活性を検討した。結果:ヒト唾液腺癌手術検体を用いた検討では、予想された通り各組織型によりメソテリンの発現に大きな偏りが認められた。また、各細胞株に対するCAR T細胞の反応も標的分子の発現率に比例する傾向が認められた。考察:組織学的多様性の高い唾液腺癌は抗原特異的治療の対象とはなり難いと考えられ、有効なアジュバントとの併用により、その有効性を高める必要があると考えられた。免疫学当初計画していた、手術検体を用いた唾液腺癌におけるMSLN発現の検討と、唾液腺癌に対するMSLN特異的CAR発現T細胞の抗腫瘍活性の検討に加えて、唾液腺癌に対するMSLN特異的CAR発現T細胞とNKT細胞免疫系の賦活化療法の併用の検討も開始した。さらに、千葉大学医学部附属病院内に遺伝子導入可能なGMPグレードの細胞培養室が完成し、近い将来の臨床試験開始が可能となった。MSLNの機能については未だ不明な点が多いが、細胞接着に関与しているとの報告があり、癌細胞の浸潤・転移に関係があると考えられている。つまり、MSLNの発現レベルと癌の悪性度には正の相関がある可能性がある。

これまでの摘出検体による評価は検討数も少なく確定的ではないが、この仮説を支持するものであり、また標準治療のみでは根治することが難しい唾液腺高悪性度癌に対するMSLNを標的とした免疫治療の意義を示すものである。今後、さらに標本数を増やして検討を行っていく予定である。さらに、CAR発現T細胞の唾液腺癌に対する抗腫瘍活性を高める方法として、NKT細胞の賦活化療法との併用について検討を行ったが、CAR発現T細胞の特異抗原による刺激後の活性化や増殖は、活性化NKT細胞の添加により増強することから、CAR発現T細胞による養子免疫療法とNKT細胞免疫療法の併用による癌治療戦略の可能性が示された。そのメカニズムとして、これらの相乗効果はIFNγ阻害によって容易にブロックされることから、活性化NKT細胞から産生された大量のIFNγにより、抗原刺激後のCAR発現T細胞の活性化が強化されたと考えられた。これらの併用療法についても、現在in vivoで検討中である。今年度は手術検体を集積中であり、次年度に大規模に解析を行う予定である。また、今年度は実験環境構築に時間を要したため、in vitroの実験を中心に行ってきたが、次年度からin vivoの実験を行うため、より多くの研究費を要する。今年度に引き続き、分子生物学試薬・アイソトープ・実験動物・プラスチック器具などの消耗品に加え、成果発表のための国外学会参加費や論文校正費などに使用予定である。
コンクリートの耐久性に及ぼす初期養生条件及び環境条件の影響の定量的評価

コンクリートはセメントの水和により硬化し、所要の性能を発揮することから、所要の性能を得るまでに時間がかかること、配合条件のみでなく、養生条件や環境条件に強度および耐久性は大きく影響を受けること等の欠点も有している。そのため、コンクリートの配合設計を行う際には、初期の養生条件、環境条件を考慮し、長期にわたるコンクリートの耐久性を予測することが必要となる。本研究は、コンクリートの劣化現象を塩害に限定し、これら劣化現象に及ぼす配合条件及び養生条件の影響を定量的に評価し、コンクリートの耐久性を基礎的に評価することを目的として行った。配合条件及び養生条件の影響をコンクリートの細孔量とセメントの水和度で代表される物理化学的指標を用い定量化し、これらの物性値とコンクリートにおける塩化物の移動現象との関係を明らかにした。水セメント比3水準、高炉スラグ微粉末の置換率4水準の配合条件のモルタルを作製し、初期の水中養生期間3水準、養生温度3水準の養生条件下に暴露した。各養生下におけるモルタルの塩化イオン透過性を設備備品として購入した急速塩化物透過性試験装置を用いて測定した。各養生下におけるモルタルの細孔量を水置換法により測定するとともに、結合材の水和度の測定も行った。初期の水中養生期間が2日と短い場合には、高炉スラグ微粉末の置換により塩化物の透過性は増大するが、7日以上水中養生期間をとることにより、高炉スラグ微粉末の置換率の増加とともに塩化物透過性は低減された。この傾向は10°Cから30°Cまでの初期養生温度において認められるが、温度が低いほど置換率の影響は顕著である。モルタルにおける塩化物の透過性は、セメントの水和度及びモルタルの細孔量により定量的に評価できることが明らかとなった。
国際主義知識人のトランスナショナル・ネットワークと戦間期アジア太平洋国際関係

本研究は、IPR(太平洋問題調査会)に注目して、戦間期における国際主義知識人のトランスナショナル・ネットワークの政治的側面の分析を行った。日本IPRによる満洲国のIPRへの加盟推進、日本の抑止を目的としたオランダIPR・フランスIPRによるアメリカIPRへの接近、カーターIPR国際事務局長とアメリカ国務省の関係、中国政府、特に蒋介石によるIPRへの積極的な接近(金九の亡命政権、自由タイのIPR加盟推進)、ソ連IPRの設立過程およびソ連政府内での位置づけ、などがマルチアーカイヴァル・アプローチにより明らかになったと言える。研究代表者は、国際的民間団体「太平洋問題調査会」イギリス支部の関連史料を収集するため、British Library, London School of Economics, Reuter Archives, Cambridge University, National Archivesにおいて調査を行った。収集した史料の一部を利用して、「戦前期の松本重治と上海におけるイギリス帝国ネットワーク」と題して日本国際文化学会(山口県山口市)で報告し、「国際主義知識人のトランスナショナル・ネットワークと満洲問題」を『史学雑誌』に発表した。イギリス支部は、対米協調の手段として設立されたが、満洲事変以降、短期的な成果が見込めないことで見切りをつけた一部のビジネス関係者が日英協調のためにネットワークを活用したことを明らかにした。このことは、第二次世界大戦勃発以前の段階で、「太平洋問題調査会」が国家間関係と直接的な接点を持っていたことを示した点で重要な意義があり、イギリス支部内の対立状況と外交路線の連関を明らかにした点でも今後の研究に資するものである。また、国際政治と国際交流の関係をいかに論じるべきかというテーマで研究会(10月24日)を企画し、2名の講師を招いて検討を行った。研究分担者は、蒋介石の「太平洋問題調査会」およびYMCAとの関係を示す史料を収集するため、ミャンマー、台湾、京都における調査を実施した。また、本科研と基盤B「20世紀中国の政策決定過程における『世論』要因の分析(代表:家近亮子)」との共催による2度の研究会(7月11日、11月22日)を企画し、中国世論を含む国際世論に関する考察を深めることに貢献した。本年度は2回の研究会を開催した。第1回は、これまでのそれぞれの調査結果を分析し、5月に早稲田大学において、研究代表者の高光佳絵は「岩永裕吉と中国をめぐる日英米関係」、家近亮子は「中国IPRと国民政府の対応」と題して研究発表を行った。第2回は、ロシア政治史の専門家に講演を依頼し、ソ連IPR関連史料についてアドヴァイスを受けた。これまでロシア語史料に依拠した太平洋問題調査会(IPR)研究は皆無であったが、ソ連公文書に記録があることが明らかになり、ソ連政府の関与を跡づけることができた。また、高光は、アメリカ政府内の「対日強硬派」形成過程とIPRの関係、1940年代にアメリカ政府の要職に就いたアメリカIPR関係者が戦後秩序形成に与えた影響を明らかにすることを目的として、米国(ワシントンDC、ボストン)における史料調査を行った。ワシントンでは米国立公文書館において国務省の「太平洋問題調査会」関連文書を収集し、議会図書館において同調査会に関係していたフィリップ・ジェサップ、ロイ・ハワード文書を調査した。また、ボストンにおいてはハーヴァード大学公文書館でジェローム・グリーン文書、同ホートン図書館でジョセフ・グルー文書を調査した。前年度のイギリスにおける史料調査の成果については、日本国際政治学会年次大会(仙台国際センター)で発表した。家近は台湾において蒋介石の中国IPRへの関与を明らかにする史料の収集を行った。史料調査を行う場所は、効率を考えて、適宜調整しているが、全体としておおむね順調に進んでいる。本年度は9月17日(第6回、千葉大学)と1月(第7回、国際文化会館)に2回の研究会を開催し、ロシア史研究者(日中戦争期のソ連外交史料について)、ILO史研究者(第4回IPR上海会議におけるILOの活動について)から専門的な知見の提供を受けた。また、来日した赤見友子(オーストラリア国立大学)氏とIPRを含むさまざまな国境を越えた知識人の活動について議論する機会を得た。トランスナショナル・ネットワークと諸国家の相互作用解明の中間発表として、国際政治学会の部会企画に応募し、「国際的民間団体と日本外交ー「太平洋問題調査会」の第2トラック的側面を中心に」と題して報告を行った。一方、昨年度にロシア史研究者から提供していただいた専門的知見(ロシア語史料の読解)を基礎として、共同研究の成果を「「太平洋問題調査会」とソ連支部の設立と米ソ関係」として『渋沢研究』に発表した。史料調査としては、家近が韓国「金九記念館」「国立中央図書館」(ソウル市)・「国家記録院」(太田市)において戦時中の中華民国、特に蒋介石と中国に亡命していた金九(大韓民国臨時政府主席)との関係、韓国のIPR参加活動と独立運動との関係にかんする史料を収集したほか、京都大学・東京大学・愛知大学所蔵のIPR関連史料も収集した。高光は、ハワイ大学マノア校においてIPR史料の調査を行い、日米協会等の民間団体の日本側未公刊史料に詳しい飯森明子氏(常磐大学)の協力を得つつ、包括的な収集を行った。中間報告として、学会における部会企画に採用され、専門的知見の提供を受けての論考を学術雑誌に発表することができた。

本年度は、これまでの調査を踏まえて「ソ連IPRの設立と米ソ関係」(第1回研究会、早稲田大学アジア太平洋研究センター)、「戦時中国外交と朝鮮IPR加盟問題」(第2回研究会、明治大学)の報告を行った。また、タイ国立図書館およびカナダ国立公文書館における史料調査を実施した。従来の研究においては日米両国に関する研究が中心となっていたが、本共同研究はそれ以外の国から参加したアクターに注目することにより、アジア・太平洋戦争に至る過程と戦後秩序形成におけるトランスナショナル・ネットワークと諸国家の相互作用の解明をめざすものであり、両国からの参加者の認識を解明することは重要なステップと位置づけられる。両国は、官民の協力の上で、戦後秩序に自国の影響力を確保するために「太平洋問題調査会(IPR)」という民間の知識人ネットワークを積極的に利用したことが明らかになった。タイでの調査は、前年度までに実施した台湾・韓国での史料調査に基づき、中華民国政府が「自由タイ」や「大韓民国臨時政府」のIPR支部設立を支援することにより、「アメリカの秩序」とは異なる戦後地域秩序の実現をめざしていたことを明らかにするものであった。カナダでの調査は、前年度までに実施したイギリス、アメリカでの史料調査に基づき、英米との関係をめぐって内部対立を抱えつつ、戦後の国際秩序に影響力を行使するために、IPRを利用してアメリカに接近していく過程を明らかにした。これまでに分析してきたイギリス、ソ連、中華民国から参加したアクターに、タイ、カナダを加え、アジア・太平洋戦争に至る過程と戦後秩序形成におけるトランスナショナル・ネットワークと諸国家の相互作用の解明がより包括的なものとなった。本研究は、IPR(太平洋問題調査会)に注目して、戦間期における国際主義知識人のトランスナショナル・ネットワークの政治的側面の分析を行った。日本IPRによる満洲国のIPRへの加盟推進、日本の抑止を目的としたオランダIPR・フランスIPRによるアメリカIPRへの接近、カーターIPR国際事務局長とアメリカ国務省の関係、中国政府、特に蒋介石によるIPRへの積極的な接近(金九の亡命政権、自由タイのIPR加盟推進)、ソ連IPRの設立過程およびソ連政府内での位置づけ、などがマルチアーカイヴァル・アプローチにより明らかになったと言える。イギリスでの調査は順調に行われ、すでに一部を分析した成果を口頭発表、論文掲載へとつなげている。3回の研究会の開催により、共同研究の基盤も確立しつつある。本年は、本プロジェクトの中間報告としての学会報告を予定している。引き続き、ソ連IPRの解明を行い、国際連盟・国際労働機関などの国際組織との関係も検討する。また、太平洋問題調査会が創設され、1934年まで本部が置かれていたハワイにおいて史料調査を行う。今後は、1940年代にアメリカ政府の要職に就いたアメリカIPR関係者が戦後秩序形成に与えた影響を分析する予定であるが、調査地にカナダ(高光)、タイ(家近)を加え、視野の一層の拡大を図る。外交史イギリス、ミャンマー、台湾で収集した史料の分析を進める一方で、アメリカ、台湾での史料収集をすすめる。前年度に収集した史料の検討を共同で進めるため、23回の研究会を開催し、次年度の学会報告に向けての準備を行う。また、中間報告として、IPR研究会においてパネルを企画し、報告する。
新・光-電子相関顕微鏡法による異常形態ミトコンドリア形成過程と微細構造変化の解明

初年度(2018年度)は、当初の研究実施計画に沿い、各試薬(脱共役剤)投与後でのミトコンドリア形態変化をLive-imaging 3D-光・電子相関顕微鏡観察法(Live-imaging 3D-CLEM)を用いて追跡し、次年度以降の研究の準備を行った。本研究では培養細胞(マウス胎児由来線維芽細胞、HeLa)に試薬ストレスを与えた直後に起こるミトコンドリア形態変化の初動を光学顕微鏡と電子顕微鏡を用いて相関的に観察する技法を使用している。ミトコンドリアの動的変化を光学顕微鏡で動画撮影し、形態変化直後のミトコンドリアを電子顕微鏡FIB/SEMで微細構造を追跡する方針である。脱共役剤の一つであるCCCP投与後に、細胞内のミトコンドリアは光学顕微鏡でリング状に観察されるが、電子顕微鏡レベルの分解能では3次元形態は赤血球状、壷状といった膜の陥入を特徴とした独特の形態に収束する。本研究で予定しているCCCP以外の各脱共役剤投与にて、各試薬反応における形態変化のデータをまとめ、得られたデータを3次元解析ソフトにて形態解析を行い、定量解析を行っていく。今回の各種データからはCCCP投与モデルとは異なる形態様式を示すミトコンドリア形態変化を確認することができた。膜陥入モデルとの違いについてはボリュームの変化やクリステ構造の評価を合わせて解析を進めていく。また、形態変化を来した後のミトコンドリアDNAの局在もどのように変化するのかについても追跡していく。得られた結果はまとまり次第、学会発表・論文化を予定としている。研究実施計画に沿って、比較的予定通り進行中である。幾度か試料作製上のミス、撮影装置の故障・修理の必要性など技術的なエラーが起こり、実験の進行が滞ったこともあったが、予定していた試薬にてミトコンドリアの形態変化のデータを得ることが出来た。現在、得られたデータを3D解析ソフトにて三次元再構築中である。データ量が多いため、今後再構築には時間を要すると考えられる。次年度も更なるデータの蓄積を行っていく。当初の計画通り、3D-CLEM観察から得られたデータの解析を引き続き行っていく。現在は試薬投与直後の急性変化に焦点を当てているが、今後は形態変化を来したミトコンドリアが時間の経過とともにどのような運命を辿るのかの慢性変化にも注目していきたい。また、形態変化を来した時のミトコンドリアDNAの局在についても観察を進めていく予定である。(理由)平成30年度は学会出張に関する旅費や論文投稿費を支出しなかったことにより、次年度使用額が生じた。(使用計画)2019年実験計画に必要な試薬(電子顕微鏡試料作製に必要な消耗品や抗体等)の購入を予定している。また、本研究の成果を学会発表する場合には出張費として使用予定である。
マイクロサテライト解析によるびまん性汎細気管支炎の主要感受性遺伝子座の推定

びまん性汎細気管支炎は我々を中心としたこれまでの検討により、第6染色体短腕上のヒト白血球抗原をコードするHLA-A,-B両遺伝子座間に主要疾患感受性遺伝子が存在する可能性がある。そこでその候補領域を明確にする目的で、疾患群92例、対照群93例を対象に、計14の遺伝マーカーを利用したハプロタイプ解析と関連分析を行った。疾患群で高頻度に見られる7座位の対立遺伝子型のうちカイ2乗値が高い5座位で組まれるハプロタイプの頻度を最大尤度法により推定し、3種の疾患感受性ハプロタイプを見いだした。さらに患者11例については、14マーカー座位のハプロタイプを直接決定し、上記疾患感受性ハプロタイプの存在を確認した。それらの疾患感受性ハプロタイプで共有される領域(共有分節)は、200kbにわたり、その分節内のマーカー対立遺伝子は、韓国人患者、20名中17名に見いだされた。疾患とマーカーとの関連性の強さを表すオッズ比やデルタ値も、推定された領域の中で最大値を示した。すなわち、いずれの解析方法によっても、HLA-B遺伝子座より300kbほどテロメアよりにある、S遺伝子とTFIIH遺伝子に挟まれた200kbの領域に感受性遺伝子が存在する可能性が強く示唆された。この領域には既知の遺伝子は報告されていないが、各種遺伝子予測プログラムでその存在が予想される少なくとも12の部位が存在したため、さらに候補領域を絞り込む目的で、新たに3種のマイクロサテライトマーカーを開発してタイピングを行い、候補領域内のセントロメア側の100kbに疾患感受性遺伝子が存在する可能性が高いことを見いだした。現在、この候補補領域内のSNPsの同定を進めている。これら一連の研究に対して、遺伝要因の関わるヒトの疾患および遺伝子の国際番号であるMIM number:604809が初めて本疾患に対して付与された。
皮膚老化ホルモンPrl2c3の作用とそのメカニズム

・老化関連タンパクであるPrl2c3を認識する抗体はヒトの皮膚にも反応し、基底細胞や毛包組織が染色されることがわかった。人の組織で年齢や疾患によってPrl2c3の染色性に有意な差があるか現在検討中である。・Prl2c3トランスジェニックマウスでは、正常のマウスと比較して表皮が薄く、脂肪織が優位に厚いことがわかった。老化に関連した組織変化が起こっている可能性が考えられ、さらに詳しい免疫組織学的、遺伝子学的な検索をする予定である。・MEF細胞にPrl2c3を作用させると、細胞分裂が抑制されること、細胞周期サイクルを停止に導くp16, p19, p53のmRNAの発現が増加することを確認した。・SIRT1はPrl2c3の発現を抑制することがわかっており、この抑制作用が転写調整によるものか確認するために、ルシフェラーゼアッセイによってPrl2c3遺伝子のプロモーターのSIRT1による抑制機能を解析中である。また、Prl2c3タンパクの分解亢進によるものである可能性についても検討しており、脱アセチル化やユビキチン化による分解に着目して検討する。・MEF細胞にPrl2c3を作用させると、細胞分裂が抑制されること、細胞周期サイクルを停止に導くp16, p19, p53のmRNAの発現が増加することを見出した・Pr2c3の細胞膜上のレセプターについては免疫ブロット法等による同定も試みているが、同定には至っていない。・Prl2c3トランスジェニックマウスの組織学的な変化や、遺伝子の発現の変化については解析中である。・Prl2c3のトランスジェニックマウスを用いて、同齢の正常マウスと比較して詳細な解析を行う。表皮、脂肪組織、毛包などの形態、あるいはSIRT1などの老化に関する遺伝子の発現を免疫組織学的に比較する。・ヒトの皮膚組織での免疫組織学的染色によるPrl2c3の発現部位、そして老化による分布や発現の変化を調べ、老化との関連を明らかにする。・マウスの表皮由来細胞を用いて、Prl2c3と結合してシグナル伝達に関わる細胞膜上のレセプターを同定する。FLAG-tagを持つPrl2c3を細胞に作用させた後、タンパク質架橋剤を使ってPrl2c3とその受容体をcross-linkさせ、Prl2c3に結合した膜タンパクを抗FLAG抗体を用いて精製し、Mass解析法を使ってPrl2c3のレセプターを同定する。Prl2c3の細胞内シグナル伝達経路については、文献的に関連している可能性が考えられるチロシンリン酸化、JAK-STAT系との関与を調べる。・Prl2c3による細胞周期サイクルへの作用を、BrdU取り込みやフローサイトメトリーによって分析し、P16, p19,p21, p27, p53などの分子への作用機序やシグナル伝達経路について検討する。

・Prl2c3による細胞周期サイクルへの作用を、BrdU取り込みやフローサイトメトリーによって分析し、P16, p19,p21, p27, p53などの分子への作用機序やシグナル伝達経路について検討する。
E6×SU(2)超対称大統一理論の現象論

超対称性は、標準模型の階層性問題を解決するなど多くの魅力がある模型であるが、未だに実験的な兆候はない。また近年のヒッグス粒子の発見によって、超対称性の破れのスケールが少なくとも数TeV程度にあると予想されている。これによって弱い階層性問題がより深刻になっている。また宇宙論からの制限としてグラビティーノ問題があるが、これは一般的に超対称性の破れのスケールが小さいほど深刻になり、弱い階層性問題と相反する傾向にある。私たちは、グラビティ伝達とアノマリー伝達が共存し、アノマリー伝達の寄与がある程度大きいことによりグラビティーノ問題が発生しないような状況を考える。このとき、グラビティ伝達の量子補正の寄与はアノマリー伝達の寄与によってある程度相殺され、見かけのカットオフスケールが小さくなる。このような状況はミラージュ伝達模型によく似ているが、私たちの模型ではミラージュ伝達のように特別な境界条件ではなく、より一般的な境界条件の適用が可能となる。これによって、例えばE6×SU(2)大統一理論に基づいた自然な超対称スペクトラムが適用でき、また将来的に超対称粒子の質量を測定することができれば、D項を含んだ大統一理論の兆候を直接観測できる可能性を持っている。A項も同様に自由度があるので、ストップ質量を大きくしすぎることなくヒッグスが重くなるようなA項を実現することも可能である。またこの模型では、ヒッグス場の量子補正が小さくなることに合わせて、2つのストップ質量が縮退する傾向にあるといった特徴もある。本模型の特徴から、E6×SU(2)超対称大統一模型をLHC実験における情報から検証できる可能性が新たに1つ追加された。したがっておおむね順調に進展していると判断した。(抄録なし)本年度は、まず前年度から行なっていたE6×SU(2)超対称大統一理論におけるニュートリノセクターの解明の研究を引き続き行った。先行研究で考慮していなかった項の寄与を含めて再計算した結果、先行研究で指摘されていた第2世代のニュートリノ質量がゼロになってしまうという問題は発生しないということが確認できた。またこの模型が予言するニュートリノ混合角θ13は、実験により得られた値と同じオーダーであることがわかった。この成果はPhysical Review D誌に査読を経て発表された。2012年7月にLHC実験によりHiggs粒子と考えられるスカラー粒子が質量125GeV付近で見つかった。その一方、超対称粒子はまだ見つかっていない。以上の状況から、超対称模型の「弱い階層性問題」を真剣に検討する必要性が出てきた。私と前川氏は、弱い階層性問題を軽減しうる超対称模型であるmirage mediation模型に注目した。この模型では、軽いstop質量を維持したまま大きなHiggs質量を出すためのA項を出すことはできないが、この模型を一般化することで、弱い階層性問題を改善する一方で大きなA項を出しうることに気づいた。この成果は、日本物理学会年次大会で発表した。現在、この「一般化されたmirage mediation模型」について、E6×SU(2)超対称大統一理論への適用などを含めてさらなる研究を進めている最中である。ニュートリノセクターの解明について順調に研究が進み、また弱い階層性問題の解決について新たな成果が挙がったため。弱い階層性問題を起こさない超対称模型の構築に向けて、一般化されたmirage mediation模型というアイデアをより詳細に研究する。またこの模型をE6×SU(2)超対称大統一理論に適用する。(抄録なし)
一般住民における血清シスタチンC値と心血管病発症の関係:久山町研究

一般住民を対象として血清シスタチンC値(sCysC)と動脈硬化性疾患との関係を検討した成績は未だ少ない。本研究では、2002年に福岡県久山町における循環器病健診を受診した40歳以上の久山町住民3,328人を対象とした疫学調査の成績を用いて、sCysCと動脈硬化性疾患との関連を検討した。まず、sCysCと末梢動脈疾患(PAD、足関節上腕血圧比<0.9)との関連を検討した。その結果、sCysCの上昇に伴いPADの有病率(無調整)直線的に増加した。しかし、多変量解析では、sCysCとPADの間に有意な関連を認めなかった。続いて、同対象者を平均7.1年追跡した調査の成績を用いて、sCysCと心血管病発症の関係を検討した。sCysCの上昇に伴い心血管病の発症率(無調整)は有意に上昇したが、この関係は多変量調整後に消失した。最後に、上記追跡調査において日本人用のsCysCにより推定された糸球体濾過値(eGFR-CysC)と心血管病発症の関係を検討したところ、多変量調整後もeGFR-CysCの低下は、心血管病発症や死亡の危険因子であった。平成22年度、本研究では血清シスタチンC値、糸球体濾過値(eGFR)、尿中アルブミン・クレアチニン比(UACR)の3つの腎障害マーカーと末梢動脈疾患(PAD)の有病率の関係を検討した。平成14年の久山町における循環器健診を受診した40歳以上の久山町の一般住民3,328人(久山町第4集団、受診率78%)のうち、研究への参加への非同意者、血液・尿サンプル未採取の者、足関節上腕血圧比(ABI)未測定者を除いた3,059名を研究対象とした。ABI<0.9をPADありと定義した。研究対象者のうち、45名(1.5%)にPADを認めた。初めに血清シスタチンC値の4分位値(<0.65、0.65-0.71、0.72-0.81、≧0.82[単位mg/L])別にPADの有病率(無調整)を検討したところ、それぞれ1.0%、0.9%、1.2%,3.0%と血清シスタチンCの上昇に伴い直線的に増加した(p for trend<0.001)。eGFR、UACRについても同様の解析を行ったところ、eGFRの低下及びUACRの上昇に伴い、PADの有病率は上昇した(eGFR[単位ml/分/1.73m^2]:〓90,1.0%;77-89,0.8%;67-76,1.1%;<67,4.0%;UACR[単位mg/g]:<5.3,0.4%;5.3-9.9,0.5%;10.0-21.9,1.6%;〓22.0,3.4%;両p for trend<0.001)。しかしながら、年齢、性、収縮期血圧、降圧薬使用、糖尿病、高コレステロール血症、高感度CRP、心血管病の既往、喫煙、飲酒で多変量調整を行ったところ、血清シスタチンC及びeGFR値とPADの間に有意な関連を認めなかった。一方、UACRの上昇に伴いPADを有する相対危険(RR)は有意に上昇した(<5.3,RR=1.00;5.3-9.9,RR=1.13;10.0-21.9,RR=2.69:〓22.0,RR=4.42;p for trend=0.004)。以上の成績から、3つの腎障害マーカーの中で、UACRが最もPADとの関連が強いことが明らかとなった。また、本研究では、上述の久山町第4集団を対象とした追跡調査を行った。この追跡調査では、健診、健診未受診者および転出者に対するアンケート調査、町内外の病院や開業医における医療記録や画像診断等の臨床情報の収集、剖検による死因の同定を行っている。

この追跡調査の成績をもとに、平成14年から21年の7年間における心血管病発症と死亡に関するデータベースを整備した。追跡期間中に354名の心血管病発症と352名の死亡を認めた。今後も引き続き追跡調査を継続し、上述の3つの腎障害マーカーと心血管病発症や死亡との関係を検討する予定である。平成23年度は、血清シスタチンC値、糸球体濾過値(eGFR)、尿中アルブミン・クレアチニン比(UACR)の3つの腎障害マーカーと心血管病発症との関係を検討した。平成14年の久山町における循環器健診を受診した40歳以上の久山町の一般住民3,328人(久山町第4集団、受診率78%)のうち、研究への参加への非同意者、心血管病既発症者、血液・尿サンプル未採取の者を除いた3,041名を平均7.1年間追跡した。追跡期間中に154名の心血管病発症を認めた。初めに血清シスタチンC値の4分位値(<0.65、0.65-0.71、0.72-0.81、>0.81[単位mg/L])別に心血管病の発症率(対1000人年)を検討したところ、それぞれ2.8、5.8、4.4、17.2と血清シスタチンCの上昇に伴い直線的に増加した(p for trend<0.001)。eGFR、UACRについても同様の解析を行ったところ、eGFRの低下及びUACRの上昇に伴い、心血管病の発症率は上昇した(eGFR[単位m1/分/1.73m2]:≧90.8、5.5;77.8-90.7、6.6;66.7-77.7、6.1;<66.7、11.6;p for trend=0.001;UACR[単位mg/g]:<5.28、3.7;5.28-9.93、3.0;9.94-22.16、7.8;>22.16、15.7;p for trend<0.001)。しかしながら、年齢、性、高血圧、糖尿病、血清総コレステロール値、血清HDLコレステロール値、血清中性脂肪値、高脂血症薬服用、肥満、心電図以上、喫煙習慣、飲酒習慣、運動習慣で多変量調整を行ったところ、血清シスタチンC及びeGFR値と心血管病発症の間に有意な関連を認めなかった。一方、UACRの上昇に伴い心血管病発症の相対危険は有意に上昇した(<5.28、1.00;5.28-9.93、0.78;9.94-22.16、1.67;>22,16、2.33;p for trend<0.001)。以上の成績から、3つの腎障害マーカーの中で、UACRと心血管病発症との関連が最も強いことが示唆された。なお、心血管病の病型別解析や他の危険因子による層別解析などの詳細な解析を行うには、発症数が不十分であった。さらに本研究では、上述の久山町第4集団の追跡調査を本年度も継続した。この追跡調査では、健診、健診未受診者および転出者に対するアンケート調査、町内外の病院における医療記録や画像診断等の臨床情報の収集、剖検による死因の同定を行った。今後は、この追跡調査の成績をもとに追跡期間を平成14年から平成23年の9年間に延長し、上述の3つの腎障害マーカと心血管病発症や死亡との関係に関する詳細な検討を行う。平成23年度までに、血清シスタチンC(Cys-C)値、血清クレアチニン値から推定した糸球体濾過値(eGFR-cr)、尿中アルブミン・クレアチニン比(UACR)の3つの腎マーカーと心血管病発症との関係を検討した結果、UACRと心血管病発症との関連が最も強く、Cys-C値やeGFR-cr値と心血管病発症の間に有意な関連を認めなかった。平成24年、日本人用のCys-C値を用いた糸球体濾過値の推定式(eGFR-cys)が発表された(Am J Kidney Dis2013;61:197)。そこで、本年度は、平成14年の久山町健診を受診した40歳以上の久山町住民3,328人(受診率78%)のうち、研究参加への非同意者、心血管病既発症者、血液や尿検体未採取者を除いた3,041人を平均7.1年間追跡した調査の成績を用いて、eGFR-cys値と心血管病発症や総死亡の関係を検討した。追跡期間中に154例の心血管病発症と235例の死亡を認めた。
神経伝達物質受容体およびイオンチャンネルの構造と機能に関する研究

(ア)変異を導入したニコチン性アセチルコリン受容体(nAChR)の機能解析から、チャンネルの内壁、狭小部を構成する部位、イオン選択性に関わる部位を同定した。(イ)変異Na^+チャンネルの機能解析より、活性化の電位感受機構に直接関与する部位、不活性化に関与する部位を同定した。またチャンネル外側開口部あるいは内壁を形成すると推測される部位を同定した。(ウ)cDNAクロ-ニングより心筋Ca^<2+>ジハイドロピリジン(DHP)受容体の全一次構造を決定し、cDNAよりL型C^<2+>チャンネルを発現させた。cDNAクロ-ニングより脳Ca^<2+>チャンネルの一つの全一次構造を解明し、本チャンネルが小脳に多く、活性化閾値の高いニフェジピンやωコノトキシンに非感受性のチャンネルであることを示した。骨格筋DHP受容体が興奮収縮連関(EーC coupling)に必須の成分(おそらくvoltage sensor)およびslow Ca^<2+>チャンネルとして二重の機能を果たし、charge movementの成因に深く関与していることを示した。DHP受容体のEーC couplingのタイプ(骨格筋型あるいは心筋型)を決定する領域、活性化の速度を決定する領域を同定した。cDNAクロ-ニングにより骨格筋および心筋のリアノジン受容体の全一次構造を明らかにし、cDNAから機能を有するCa^<2+>放出チャンネルを発現させた。(エ)ムスカリン性アセチルコリン受容体(mAChR)サブタイプの特性を検討した。mACHRサブタイプが異なるeffector systemと選択的に共役することを明らかにした。キメラmAChRの機能解析からeffector systemとの選択的共役およびアゴニストの結合に関与する部位を示した。NG108ー15neuroblastomaーglioma雑種細胞の2種のK^+チャンネルおよび網膜光受容細胞cGMPーgatedチャンネルのcDNAクロ-ニングと発現を行った。(オ)CHO細胞または培養昆虫細胞にイオンチャンネル蛋白を発現させ、精製した蛋白を用いて、結晶化条件(界面活性剤、pH、温度、沈澱剤など)の検討を行った。ア)組換えDNA技術を用いて点変異を導入したニコチン性アセチルコリン受容体チャンネルcDNAをアフリカツメガエル卵母細胞で発現させ、変異チャンネルの機能をパッチクランプ法を用いて解析し、各サブユニットの疎水性領域M2近傍の負電荷を持つアミノ酸残基が3つの環状構造を形成して、本受容体チャンネルのイオン透過速度を決定していること明らかにした。イ)ア)と同様の手法でcDNAの人工的改変によってNa^+チャンネルの電位感受性部位または不活性化に関わると推測される領域に種々の変異を導入した。現在これらのcDNAから変異Na^+チャンネルを発現させて、その機能を解析中である。ウ)E-C couplingを欠損する変異であるmuscular dysgenesisを有するマウスの骨格筋細胞に、インジェクトスコープを用いて骨格筋Ca^<2+>チャンネルブロッカー受容体cDNAを注射し発現させることによって、E-C couplingを回復させることに成功し、本受容体がE-C couplingに必須の成分(おそらくvoltage sensor)としておよびCa^<2+>チャンネルとしての二重の機能を果たしていること明らかにした。

エ)4種類のムスカリン性アセチルコリン受容体サブタイプcDNAをNG108-15 neuro-blastoma-glioma雑種細胞に発現させアゴニストに対する応答を比較することによって、本受容体サブタイプが異なるeffector systemと選択的に共役することを明らかにした。さらに、本受容体サブタイプIとIIIはアゴニストに対する感受性を異にすることを見出した。また本受容体サブタイプのmRNAの組織分布を明らかにした。オ)cDNAと発現ベクターを用いてCHO細胞にニコチン性アセチルコリン受容体αサブユニットまたはムスカリン性アセチルコリン受容体(mAchRI)を発現させ、これらの蛋白を産生する細胞株を得た。現在、遺伝子増幅などの技術を用いて産生蛋白量の増加を図るとともに大量培養を計画中である。ア)網膜光受容細胞cGMP-gatedチャンネルのcDNAをクローン化し、その塩基配列を決定することにより一次構造を明らかにした。さらに、組織中のチャンネルと同様の性質を示すカチオンチャンネルをcDNAから発現させることに成功した。イ)Na^+チャンネルのsegment S4(正電荷を有するアミノ酸残基を持ち電位依存性チャンネルの特徴的構造をなす)に変異に導入し、変異Na^+チャンネルの性質の電気生理的解析から、segment S4がチャンネル活性化の電位感受機構に直接関与していることを示した。またrepeat間を切断したNa^+チャンネルの解析から、repeatIIIとIVの間の部位がチャンネルの不活性化に関与することを示した。またrepeat IのS5とS6の間に位置し、387番目の残基であるグルタミン酸残基の変異により、Na^+チャンネルのテトロドトキシン、サキシトキシンに対する感受性が失われることを示した。3種のNa^+チャンネルI、II、III mRNAのラット脳における分布が発生段階で異なることを示した。ウ)心筋Ca^<2+>チャンネルブロッカー受容体cDNAのクローン化、塩基配列決定により本受容体の一次構造を明らかにし、発現させることによりL型Ca^<2+>チャンネル活性を証明した。骨格筋リアノジン受容体cDNAをクローン化し、その塩基配列を決定することにより本受容体の一次構造を明らかにした。さらにクローン化したcDNAをCHO細胞に発現させることにより、リアノジン結合活性を検出し、Ca^<2+> releaseチャンネルの機能発現に成功した。エ)NG108ー15 neuroblastoma-glioma雑種細胞よりK^+チャンネルのcDNAをクローン化し、その塩基配列から本チャンネルの一次構造を決定し、cDNA発現によりdelayed rectifierの性質を持つチャンネルであることを示した。オ)cDNAと発現ベクターを用いてニコチン性アセチルコリン受容体サブユニットを発現させたCHO細胞の大量培養を行い、これらの細胞から膜蛋白を精製して相当量の標品を得ている。