hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
男子大学生のライフスタイルの変化が動脈硬化性疾患の危険因子の変化に及ぼす影響-在学時3年間のコホート研究及び介入研究-

血圧、BMI、体脂肪率は変化しなかったが、総コレステロール、中性脂肪は減少し、HDL-コレステロールは増加した。都内在住の男子大学生で入学時健康診断を受診した者のうち、4年時の定期健康診断を再度受診した74名(追跡率74/85=87.0%:4年時平均年齢22.3歳)を対象とし、入学時から4年時にいたる間の食習慣を中心としたライフスタイル、および動脈硬化性疾患危険因子のうちの体脂肪率、血圧、血清脂質および血漿フィブリノーゲン(FIB)の変化について、同一コホート内での検討を行った。4年生においては、1年生と比べて朝食を抜く者(84.9% vs 59.4%)、夜食を取る者(83.6% vs 60.3%)、外食する者(82.2% vs 66.2%)の割合が有意に増加した。また4年時においては1年時と比べて魚介類、野菜類の摂取頻度が有意に減少し、油脂類の摂取頻度は有意に増加した。また常用飲酒者(87.7% vs 70.3%)および喫煙者の割合(63.0% vs 25.7%)は4年時に有意に増加した。動脈硬化性疾患危険因子のうち、最小血圧(68.1mmHg vs 64.9mmHg)およびFIB(244.4mg/dl vs 222.3mg/dl)について4年時は1年時と比較して有意な上昇を認めたが、最大血圧、体脂肪率、血清T-chol、HDL-cholの平均値に変化はみられなかった。また魚介類の摂取頻度が1年時と比べて4年時で減少した者(n=42)においては、増加あるいは不変であった者(n=30)と比較して、1年時のFIBには差を認めなかったが、4年時では有意に高値を示した。(259.0mg/dl vs 222.1mg/dl)。男子大学生においては、循環器疾患予防の観点よりみて4年時は1年時と比較して、食習慣、ライフスタイルの悪化を認め、それが動脈硬化性疾患の危険因子の増大に反映している可能性が示された。都内在住の男子大学生で入学時健康診断を受診した者のうち、4年次の定期健康診断を再度受診した125名(追跡率125/170=74%:4年次平均年齢22.3歳)を対象とし、入学時から4年時にいたる3年間の食習慣を中心としたライフスタイル、および動脈硬化性疾患危険因子のうちの体脂肪率、血圧、血清脂質・脂肪酸および血漿フィブリノーゲン(FIB)の変化について、同一コホート内での検討を行った。4年次においては、1年次と比べて朝食を抜く者(83% vs 58%)、外食する者(82.% vs 70%)の割合が有意に増加した。また4年次においては1年次と比べて魚介類、野菜類、乳製品、卵の摂取頻度が有意に減少し、油脂類の摂取頻度は有意に増加した。また常用飲酒者(85% vs 61%)および喫煙者の割合(58% vs 30%)は4年次に有意に増加した。動脈硬化性疾患危険因子のうち、体脂肪率(19.3% vs 18.6%)、最大血圧(117.9mmHg vs 115.6mmHg)および最小血圧(66.9mmHg vs 62.5mmHg)、血漿FIB(240.1mg/dl vs 221.8mg/dl)について、4年次は1年次と比較して有意な上昇を認めた。血清脂肪酸構成については飽和脂肪酸および一価不飽和脂肪酸の構成割合の有意な上昇、多価不飽和脂肪酸の構成割合(n3系多価不飽和脂肪酸、n6系多価不飽和脂肪酸ともに)有意な低下を認めた。さらにn3/n6比は4年次で1年次と比較して有意な低下を認めた。
動詞の屈折形態と統語位置に関する通時的・共時的研究

異なった言語の構造的特徴を比較対照し,そこに見られる共通点や差異に理論的な説明を与える比較統語論の分野において,時制を標示する定動詞の現れる位置が言語間で異なることは1970年代末より議論されてきている.本研究課題では,生成文法理論において動詞の「移動」として説明が与えられることが多いこの現象に,語彙特性の違いという観点からの提案を行う.さらに当該現象に関する同一言語の方言間の違いや言語構造の経年変化も屈折形態の豊かさの消失という語彙特性から説明ができることを示す.2014年度に実施した研究の成果は主に2点にまとめられる.1点は屈折形態に関してパラダイム基盤分析を進めたことである.とりわけ,これまでの主にゲルマン諸語を対象とした主語の人称,数,性などとの一致素性に対する活用形態に加え,ムード,モダリティを始めとするCP領域に関する素性に対する活用形態の豊かさと動詞の統語的出現位置に関して,一定程度の関係を見いだすことに至ったことである.さらに対象とする言語もケルト諸語,ロマンス諸語に広げ,より類型論的,対照言語学的な視点から当該現象に関して考察を加えた.この成果については,年度末にエセックス大学における研究会で議論し,有益なフィードバックを得た.2015年度には,より広く成果発表の機会を求めた後,論文として完成させる段階にあると判断している.2点目は,パラダイム基盤の分析の際に問題となる同形性(syncretism)について具体的な理論的扱いの考察を行ったことである.この問題に関しては,派生的な課題としてチュクチ語において形態的には逆受動態(antipassive)が統語的には他動性を維持する現象の理論的に解明することに,エセックス大学のAndrew Spencerとともに取り組み始めた.この研究に関しても,年度末の訪英の際に,同氏との研究打ち合わせ,意見交換を行い,研究進展に大きな成果となった.まだ詳細を詰める必要があるため,2015年度中にその他の課題と並行して研究を進め,研究課題終了時までに論文としてまとめる方向性で進めている.2015年度の実績は大きく4つに分けられる.1点目は屈折形態と統語位置に関しての形式化が一定程度進み,学会発表なども経て1本論文としてまとめることができたことである.ゲルマン諸語の通時的な活用形態の変化およびロマンス諸語,とりわけポルトガル語,における共時的なバリエーションをパラダイム基盤の形態理論においてモデル化し,それらの統語構造上の位置を様々な統語的テストによって示し,その理論的帰結を示した.2点目は統語構造におけるCP領域に関する研究で,情報構造が句構造の配置によらず,独立したレベルの構造でコード化されるアプローチの有効性を示したことである.語彙機能文法においては,近年の研究で情報構造を意味構造からの写像として形式化し,統語構造とは切り離して扱う提案が見られるが,そのアプローチが妥当であることを,いわゆるカートグラフィに代表される統語構造内で情報構造を扱うアプローチを批判的に考察し,代替案を提示することで示した.3点目として動詞と形容詞の活用形態と統語的・意味的時制の標示には一対一対応ではないことを日本語の関係節と属性修飾句の研究において示したことである.日本語の動詞過去形は過去時制を表さず,属性修飾句として機能しうることは先行研究においても指摘されており,それをさらに形容詞と並行的にとらえ,時制辞を機能範疇の具現形として扱うアプローチが妥当でないことを示し,パラダイム基盤の分析を行った.最後に4点目として同形性(syncretism)およびゼロ形態に関して,諸々の形態理論で生じる問題点などを整理し,パラダイム基盤のモデルにおける素性の標示について提案を行ったこと.これは比較的広範に渡る上述の研究を収束させ大きな研究としてまとめる土台を作ったと言える.研究概要にもまとめた通り,量的な観点から見るとおおむね順調に進展していると見ることができる.当初計画していた時制,一致の活用形態に関するパラダイム基盤による分析,及び語彙機能文法による統語構造との連携もほぼ形式化することができている.より大きな範疇の構造である情報構造についても大きな枠組みはできあがり,具体的な分析も進んでいる.一方で,CP領域におけるムードやモダリティと屈折形態の関係,及び通時的な視点からの研究が不足している.これらの点は研究概要に示した1点目と連続性があり,研究が進むことで,研究課題としての一貫性が保持されるため,今年度の課題のとして重点的に取り組む必要がある.本研究課題は,英語およびその他のゲルマン諸語,ロマンス諸語を中心に,定動詞の屈折形態と句構造上の生起位置との関係について共時的・通時的両面から考察し,数理的な文法理論である語彙機能文法(Lexical Functional Grammar; LFG)での分析を試みることを目的としているが,最終年度はそれに加え情報構造の観点を取り入れ,定動詞の句構造上の位置は複合的な要因によって決定されることを示し,統合的な分析を提案した.

LFGは複数の構造が並列的に存在しそれらが関数で対応付けられる文法理論であり,構成素の線形順序と階層関係を表示するc(onstituent)構造,文法関係や素性を表示するf(unctional)構造,語の形態情報を表示するm(orphosyntactic)構造,意味を表示するs(emantic)構造に加え,題目,焦点などの談話情報を表示するi(nformation)構造に関する研究が近年進んでいる.本研究課題は,特にアイスランド語に関してc構造での動詞の句構造上の位置,m構造での動詞の屈折形態の情報,f構造での動詞と項との一致関係のみならず,i構造に表示される情報構造の分布との相互関係を形式化した分析を提案した.先行研究において焦点や題目といった情報構造上の役割と句構造上の位置との関係は生成文法のカートグラフィを始め盛んに研究されているが,それが通時的な構成素順の変化,一致などの構成素間の関係,屈折形態の豊かさなどとどう関わるかという議論は充分に行われているとは言えず,その意味において記述的・理論的貢献が高いものと考えられる.またアイスランド語は形態・統語に関して他のゲルマン諸語より古い特性を残している点および一致現象などに関して方言差が見られる点から,言語変化に関する考察を行うことが可能でありその他の言語の通時的側面にも示唆も得ることができた.異なった言語の構造的特徴を比較対照し,そこに見られる共通点や差異に理論的な説明を与える比較統語論の分野において,時制を標示する定動詞の現れる位置が言語間で異なることは1970年代末より議論されてきている.本研究課題では,生成文法理論において動詞の「移動」として説明が与えられることが多いこの現象に,語彙特性の違いという観点からの提案を行う.さらに当該現象に関する同一言語の方言間の違いや言語構造の経年変化も屈折形態の豊かさの消失という語彙特性から説明ができることを示す.やや当初の計画より遅れている理由は,第一子誕生に伴う育児及び勤務校の校務が,申請時の見通しよりかなり大きな時間的制約を生んだため,研究課題に費やすエフォートが当初の予定より大幅に割り込んだことによる.2年目以降改善に向けて対応中である.最終年度に向けて重要となるのは,業績概要に記載したうちの主に2点目から4点目に関わる部分である.語彙機能文法の枠組みにおいて情報構造を独立したレベルで扱うことにより,CP領域は動詞屈折形態により直接的に関連したムードやモダリティに関する投射という予測が立てらる.その予測の正否を諸言語,とりわけゲルマン,ロマンス諸語を中心に考察することになる.また活用形態と統語位置の関係を考えると,同形態が時制の標示と属性修飾の標示両方に用いられるような言語は動詞が低い位置にとどまっているという予測が立てらる.日本語の動詞の句構造上の位置は生成文法においても主要部移動の有無を中心に盛んに議論されている点であり,本研究課題でも別の視点から考察を加えることを目指す.また進捗状況でも言及したように,現時点では通時的な視点の研究が不充分であり,特にデータの豊富な古英語,中英語,初期現代英語への変遷と動詞屈折形態,句構造に関して,これまでの研究を土台に考察を進め,現在行われている多くの研究に,語彙機能文法というアプローチで新たな視点を提示できるよう試みる.こららは比較的広範なトピックに渡り,それぞれを研究成果として別個に発表していくことも重要であるが,研究をパラダイム基盤の形態論という観点から大きな一連の研究として収束させ,最終年度に研究課題に一定の区切りをつけて終了させることを目標として進めていく.
高温超伝導コイルを利用した磁気セイル宇宙機に関する研究

本研究は、次世代宇宙推進システムである磁気セイルの推進性能(推力質量比)向上を目的として、同宇宙機用高温超伝導コイルシステムの研究開発を進めている。特に、磁気セイルの推力は、搭載するコイルの磁気モーメント(電流×ターン数×コイルが囲む面積)に比例するため、高温超伝導コイルの高磁気モーメント化(電流×コイルターン数×コイルが囲む面積の増大化)に取り組んでいる。本年は、システム全体の熱安定性を制約条件として高温超伝導コイルおよび関連システムを最適化し、磁気プラズマセイル用高温超伝導コイルシステムの磁気モーメント質量比最大化に取り組んだ。非線形な特性を持つ超伝導抵抗は、通電電流および自己磁場、温度に依存するため、超伝導体に流れる電流密度分布の算出は自己無撞着に解き進める必要がある。本研究では、京都大学のスーパコンピュータシステムKDKを用いてコイルターンごとにMPI領域分割した数千ターンの超伝導コイルにおいて電磁界および熱解析を行い、磁気プラズマセイルにおいて最適なコイルシステムを決定した。システム全体としての熱バランス(コイル冷却、コイル内発熱・熱伝導、コイルへの熱侵入)や電源出力変動等による影響を考慮して、超伝導コイルの強度、温度、熱安定性を制約条件とし、コイルシステムの磁気モーメント質量比が最大となるようにシステムの最適設計を行った。パラメータとして様々な運転温度・コイル形状(円形コイル・マルチポール型コイル・レーストラック型コイル)を仮定した。最適化の結果、コイル運転温度20 Kにおいて、コイル高さが大きく、レーストラック型と呼ばれるコイルにおいて磁気モーメント質量比が最大となり、先行研究による成果に比べて磁気モーメント質量比約3倍の向上が可能であることを明らかにした。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、次世代宇宙推進システムである磁気セイルに搭載する高温超伝導コイルシステムの研究開発を目的としている。現在、同コイルの最適設計に向けた基礎検討として、高温超伝導コイルの電磁的熱的諸特性の解析コードを構築している。本年は、磁気セイル高温超伝導コイルシステムの電源系に軽量かつ低消費電力なDC-DCコンバータを適用することを想定し、DC-DCコンバータの出力変動(リプル)によって高温超伝導コイル内に誘導される遮蔽電流について調査を行った。すなわち、これまで構築した高温超伝導コイルの解析コードを発展させ、遮蔽電流が磁気セイル用コイルの磁場・熱安定性に与える影響について検討を行った。非線形な超伝導抵抗は遮蔽電流自身および自己磁場に依存するため、超伝導線材内の電流密度分布の算出は自己無撞着に解き進める必要がある。シミュレーションにおいては、京都大学生存圏研究所のKDKシステムを用いて、コイルターンごとにMPIで領域分割したシミュレーションコードを開発し高速な並列計算を行った。本研究室のビスマス系超伝導コイルにおける実験結果と解析結果の比較を行うことで、コイル内遮蔽電流のモデル化および減衰特性について検討した。その結果、ループ長の小さい遮蔽電流を仮定することによって、実験より得られた遮蔽電流の減衰特性を解析において定量的に再現することに成功した。また、遮蔽電流磁場のヒステリシス特性についても実験・解析で一致することを確認し、コイル磁場に対する遮蔽電流磁場の割合は約1-2%と比較的小さいことを明らかにした。さらに、遮蔽電流によって発生する損失がコイルの熱安定性に与える影響について解析を行った。その結果、通電電流の交流成分の振幅が大きくなるに従って、コイル温度が急速に上昇(常伝導転移)することを明らかにした。今後、開発した解析コードを用いて磁気セイル用高温超伝導コイルの最適設計を行う。本研究は、次世代宇宙推進システムである磁気セイルの高推力化を目的とした高温超伝導コイルシステムの研究開発を行っている。特に、磁気セイルの推力は、搭載するコイルの磁気モーメント(電流×ターン数×コイルが囲む面積)に比例するため、高温超伝導コイルの高磁気モーメント化に取り組んでいる。本年は、高温超伝導コイルの最適設計、および展開式コイルの検討を行った。コイル高磁気モーメント化方法として以下の2種類の検討を行っている。方法1ロケット搭載可能サイズ(径<4 m)において、起磁力(電流×コイルターン数)増加を目的としたコイル形状最適化(目標:107 A-turn)。方法2宇宙空間でコイルを展開し、コイル径すなわちコイルが囲む面積を増加させる展開式コイルの検討。コイルには通電電流と自己磁場による電磁気力によって、コイルを外側に拡げる力(フープ力)が働く。宇宙機質量最小化のために、フープ応力を利用したコイル展開について検討する。構築した解析モデルを用いて、コイル熱安定性を制約条件として磁気モーメント質量比が最大となるコイル形状を明らかにした(研究方法1)。形状最適化の結果、一般的な円形コイルではなくレーストラック型と呼ばれるコイル形状において磁気モーメント質量比が最大となり、従来の研究結果に比べて推力質量比5倍の向上が可能であることを明らかにした。また、更なるコイル高磁気モーメント化を目指して、宇宙空間で超伝導コイルを展開し、コイル面積の増加を図る展開式コイルについて検討を行った(研究方法2)。径10 m程度の超伝導コイルをロケット内(径4 m以内)に折り畳み収納し、打ち上げ後宇宙空間で展開する。

フープ応力を利用したコイル展開の数値シミュレーションにより、高さ方向に折り曲げたコイルが電磁気力によって径方向に拡がり、コイルが展開されることを明らかにした。本研究は、次世代宇宙推進システムである磁気セイルの推進性能(推力質量比)向上を目的として、同宇宙機用高温超伝導コイルシステムの研究開発を進めている。特に、磁気セイルの推力は、搭載するコイルの磁気モーメント(電流×ターン数×コイルが囲む面積)に比例するため、高温超伝導コイルの高磁気モーメント化(電流×コイルターン数×コイルが囲む面積の増大化)に取り組んでいる。本年は、システム全体の熱安定性を制約条件として高温超伝導コイルおよび関連システムを最適化し、磁気プラズマセイル用高温超伝導コイルシステムの磁気モーメント質量比最大化に取り組んだ。非線形な特性を持つ超伝導抵抗は、通電電流および自己磁場、温度に依存するため、超伝導体に流れる電流密度分布の算出は自己無撞着に解き進める必要がある。本研究では、京都大学のスーパコンピュータシステムKDKを用いてコイルターンごとにMPI領域分割した数千ターンの超伝導コイルにおいて電磁界および熱解析を行い、磁気プラズマセイルにおいて最適なコイルシステムを決定した。システム全体としての熱バランス(コイル冷却、コイル内発熱・熱伝導、コイルへの熱侵入)や電源出力変動等による影響を考慮して、超伝導コイルの強度、温度、熱安定性を制約条件とし、コイルシステムの磁気モーメント質量比が最大となるようにシステムの最適設計を行った。パラメータとして様々な運転温度・コイル形状(円形コイル・マルチポール型コイル・レーストラック型コイル)を仮定した。最適化の結果、コイル運転温度20 Kにおいて、コイル高さが大きく、レーストラック型と呼ばれるコイルにおいて磁気モーメント質量比が最大となり、先行研究による成果に比べて磁気モーメント質量比約3倍の向上が可能であることを明らかにした。平成26年度の研究では、磁気セイル用高温超伝導コイルの最適設計を行い、磁気セイル推力5倍の向上に成功するなど十分な成果を上げている。また、展開式コイルについても電磁気力を利用した新たな方法を提案し、シミュレーションで展開可能であることを確認するなど初期成果をあげている。また、本研究成果に関する発表論文が国際学術誌のBest paperに選ばれるなど、研究成果が高く評価されている。27年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、コイル支持材・冷却系がコイル展開へ与える影響を考慮してコイル展開のシミュレーションを行う。また、折り曲げた超伝導コイルの通電特性の測定および、電磁気力を利用したコイル展開についても実験的に検証する。さらに、それぞれのミッションスケール(木星探査ミッション、小型実証機)に合わせた磁気セイル用超伝導コイルシステムの最適設計を行い、他推進系に対する優位性を明確化し、磁気セイルを利用した深宇宙探査ミッション提案へとつなげる。今年度は高温超伝導コイルの遮蔽電流を解析するコードを開発し、コイルの磁場および熱安定性に与える影響について国際学術誌へ2報の論文を投稿しており、研究は順調に進展している。また、本コードの開発によって、磁気セイルの高推力化という課題解決に向けて今後より詳細な高温超伝導コイルの設計を行うことが可能となった。
血行性転移癌細胞膜成分に対するモノクロ-ナル抗体を用いた転移抑制に関する研究

近年、癌細胞のinvitroの転移・浸潤モデルとして再構成基底膜(マトリケル)を用いた実験系が広く使われている。今回われわれは、この実験系の根本であるマトリゲルコ-ティングが均一かつ確実に行なわれているかを赤血球沈降試験にて検査した。その結果従来の方法ではコ-ティングが不確実である可能性が示唆され、これはコ-ティング時のマトリゲルの液面が曲面となることが原因と考えられた。われわれは、コ-ティングに用いる培養カップの内壁を揆水処理することによりコ-ティング時のマトリゲルの液面をfilter membraneと水平に保つことに成功し、コ-ティングの均一性、確実性とも著明に改善された。また、浸潤細胞数の定量を従来の鏡検によるcantに代わり、MTTassayの応用による比色定量法にて行い、より簡便かつ客観的なものとした。培養カップ底面のfilter membraneへのマトリゲルコ-ティングを用いた従来の癌浸潤モデルに、上述の培養カップ内壁の揆水処理および浸潤細胞のMTTassayによる定量的評価の工夫をくわえ、Modiffied Invasion MTTassayを考案した。また、異なる細胞間の比較を容易にするためにINDEXを定めた。複数の細胞についてAssayを行った結果、実験に用いたすべての悪性細胞は良性細胞より強い浸潤を示し、良性細胞はほとんど浸潤を示さなかった。今回、われわれが考案したModiffied Invasion MTTAssayは、基底膜との相関における癌細胞の転移・浸潤の研究のための適切なinvitroのモデルとして、きわめて有用と考えている。最近開発された人工基底膜Matrigel上にヒト内皮細胞を培養、その上に癌細胞を播腫し、できるだけ生体に近いin vitroでの癌浸潤モデルの作成を目的として、研究を進行中である。ヒト臍帯内皮細胞のDish上での初代培養法を確立した。すなわち、生後24時間以内の臍帯を用い、Type I collagenaseによる酵素法にて内皮細胞を採取した。培養用Mediumは、Flow Laboの199を使用した。培養細胞は単層の敷石状配列を呈し、間接蛍光抗体法にて第VIII因子の存在がみとめられ、血管内皮細胞であることが確認された。次に、この内皮細胞を利用して人工基底膜Layer(Matrigel 1mm layer)上での内皮細胞の培養を試ているが、現在のところ細胞の十分なシート上の増殖を認めず、実験進行中である。これと並行して、当教室にてcell line化した癌細胞を直接人工基底膜layer(Matrigel lmm layer)上にまき、基底膜への癌細胞の経時的な浸潤形態を観察した。観察は浸潤方向に平行な薄切片をつくり、HE染色を施行、光顕的に行った。1日目に基底膜上に接して存在した癌細胞は、2日目頃より基底膜内への浸潤を開始し、5日目には、ほぼ完全に基底膜内に侵入埋没した。これは、癌細胞のin vitroでの浸潤モデルとして、有用と考えられた。今後、正常細胞および移転能が異なると考えられる数種の癌細胞について実験を行い、基底膜への浸潤形態を比較検討する予定である。また、癌細胞浸潤モデルの培養液中のコラゲナーゼ活性を測定し、癌細胞の浸潤能とコラゲナーゼ活性との関連を検討する予定である。HPLCを用いた上記培養液の成分分析も試みているが、いまだ結果は得られていない、なお、当教室で作成した皮下移殖にて肺転移を示すヌードマウス可移植ヒト胃癌株を用いて基底膜上での培養を試みている。血行性転移のメカニズムの中で最も重要なステップは癌細胞の基底膜(basement membrane)への浸潤であると考えられる。

本研究ではこの点に着目し、basement membraneへの浸潤能と転移能との関連性を検討するため、癌細胞のbasement membraneへの浸潤能測定を目的として、MTT assayを利用したinvasion-MTT assayの開発を進めている。現在までの結果では、まずMTT assayによる細胞数と吸光度の関係は、細胞数1.25×10^25×10^4の範囲で正の相関を示した。このことは少ない細胞数でもassayが可能であるばかりでなく、極少ない浸潤細胞の評価が可能となることを示している。次いで、培養細胞株;SCK99,MFH,BALB3T3,NIH3T3を用いてinvasion-MMT assayを試みた結果、吸光度は時間の経過とともに上昇し、浸潤細胞数の時間経過を反映した。また、その程度は癌細胞の種類によって異なっていた。以上の結果から本法は浸潤能の定量化に有用であることが示唆された。また浸潤および移転には癌細胞膜の糖鎖とくに糖蛋白の関与が指摘されている。今回我々は、RCA-1およびWGAレクチンの細胞膜レセプタ-に対するモノクロ-ナル抗体を作成した。現在、胃癌、大腸癌の原発巣と転移巣の免疫組織化学染色を行っている。これらの結果は、第47回日本癌学会で発表し、また第48回の本学会でも発表予定である。近年、癌細胞のin vitroの転移・浸潤モデルとして再構成基低膜(マトリゲル)を用いた実験系が広く使われている。今回われわれは、この実験系の根本であるマトリゲルコ-ティングが均一かつ確実に行なわれているかを赤血球沈降試験にて検査した。その結果従来の方法ではコ-ティングが不確実である可能性が示唆され、これはコ-ティング時のマトリゲルの液面が曲面となることが原因と考えられた。われわれは、コ-ティングに用いる培養カップの内壁を揆水処理することによりコ-ティング時のマトリゲルの液面をfilter membraneと水平に保つことに成功し、コ-ティングの均一性、確実性とも著明に改善させた。また、浸潤細胞数の定量を従来の鏡検によるcountに代わり、MTT assayの応用による比色定量法にて行い、より簡便かつ客観的なものとした。培養カップ底面のfilter membraneへのマトリゲルコ-ティングを用いた従来の癌浸潤モデルに、上述の培養カップ内壁の揆水処理および浸潤細胞のMTT assayによる定量的評価の工夫をくわえ、Modiffied Invasion MTT Assayを考案した。また、異なる細胞間の比較を容易にするためINDEXを定めた。複数の細胞についてAssayを行った結果、実験に用いたすべての悪性細胞は良性細胞より強い浸潤を示し、良性細胞はほとんど浸潤を示さなかった。今回、われわれが考案したModiffied Invasion MTT Assayは、基底膜との相関における癌細胞の転移・浸潤の研究のための適切なin vitroのモデルとして、きわめて有用と考えている。
ラットにおける新しい歯周病モデルの確立

疫学研究は、歯周病の増悪因子として血清脂質の増加を指摘している。本年度の研究では、ラットに高コレステロール食を与えて血清脂質を増加させ、その状態がラット歯周病モデルに与える影響を検討した。8週齢のWistar系雄性ラット40匹を用いた。ラット20匹に対して、標準食に1%コレステロール(w/w)を添加した飼料(高コレステロール食)を与えた。残り20匹には、標準食を与えた。実験開始から4週間後、ラットをさらに2群に分け、歯周病病原因子もしくはpyrogen-free waterを3.0μlずつ、上顎第1臼歯口蓋側歯肉に1日1回、4週間投与した。なお、歯周病病原因子として、E.Coli由来lipopolysaccharide(LPS)溶液25mg/ml、1.5μlとStreptomyces griseus由来プロテアーゼ2.25unit/μl、1.5μlを併用した。実験期間終了後、屠殺と同時に採血を行い、酵素法を用いて血清脂質(総コレステロール、トリグリセライドおよびHDL-コレステロール)の濃度を計測した。また、歯周組織を固定・脱灰してパラフィン切片を作製し、ヘマトキシリン・エオジン染色および抗proliferating cell nuclear antigen(PCNA)抗体による免疫染色を行った。組織定量分析として、接合上皮の根尖側移動距離と歯槽骨の吸収量を計測した。さらに、接合上皮のPCNA陽性細胞を計数した。対照群(標準食およびpyrogen-free waterを与えた群)と比較したとき、高コレステロール食を与えた2群において、血清中の総コレステロール濃度の上昇とHDL-コレステロール濃度の低下がみられた。一方、トリグリセライドについては、群間で一定の傾向はなかった。接合上皮の根尖側移動距離は、対照群、高コレステロール食群、LPSとプロテアーゼ投与群、高コレステロール食およびLPSとプロテアーゼ投与群の順に大きくなった。接合上皮のPCNA陽性基底細胞数も同様の傾向を示した。また、対照群を除く全ての群において、歯槽骨吸収が観察された。高コレステロール食を与えたラット歯周病モデルでは、標準食を与えた歯周病モデルよりも大きな接合上皮の根尖側移動と上皮細胞の増殖活性がみられた。このことから、コレステロール食による血清脂質の変化は歯周病を増悪させることが考えられる。さらに、高コレステロール食群で接合上皮の根尖側移動と歯槽骨吸収が現れたことは、高コレステロール食の摂取自体が歯周病のリスク要因であることを示している。A.a.LPSの精製:A.a.を37°C,嫌気条件下で培養した。遠心分離により菌体を集め,洗浄後に凍結乾燥した。乾燥菌体からホットフェノール法でLPSを抽出し,減圧濃縮と凍結乾燥を行い、粗製LPSを得た。再溶解した粗製LPSを超遠心処理と透析を行った後,超遠心処理を繰り返し,精製LPSを得た。乾燥菌体約1gあたり70mgのLPSが得られた。エンドトキシン定量システムにより約153倍に精製されたことを確認した。P.g.プロテアーゼの精製:P.g.を37°Cで嫌気培養した。培養上清を遠心分離で回収し,硫安塩析(80%飽和)を行った。沈渣を回収し,透析を行った。遠心分離を行った後,上清を陰イオン交換クロマトグラフィーを用いて分画した。なお,プロテアーゼの活性は,benzoyl-L-Arginine-p-nitroanilideを基質として測定した。酵素は,培養上清より約580倍に精製され,酵素活性の回収率は18%であったが,依然として不純物を含んでいる。平成15年度は,精製したLPSをラット歯肉溝に濃度と期間を変えて投与し,ヘマトキシリン・エオジン染色で炎症性細胞浸潤の出現が最も著明となる条件を検討する。また,P.g.プロテアーゼの精製を継続するが,精製しても凍結保存すると経時的に失活が起こることが知られている。そのため,場合によっては精製を断念し,A.a.ロイコトキシンやP.g.線毛などの他の細菌由来物質を精製してラット歯周病モデルの確立に使用することとする。本研究の目的は、ラット歯周組織に慢性炎症を起こす実験モデルを、Actinobacillus actinomycetemcomitans由来のリポポリサッカライド(LPS)とPorphyromonas gingivalis由来のプロテアーゼを用いて確立することである。平成15年度は、精製したLPSをラット歯肉溝に濃度を変えて投与し、ヘマトキシリン・エオジン染色で炎症性変化が最も著明となる条件を検討した。ラット歯肉に対して、異なる濃度のLPS(5μg/μl、10μg/μl、20μg/μl、40μg/μl)を1日1回、マイクロピペットを用いて4週間投与した。その結果、付着上皮の根尖側移動の大きさは、20μg/μlのLPS濃度で最大値を示した。また、結合組織における炎症性細胞数は、5μg/μlと10μg/μlのLPS濃度で多くなった。P.g.プロテアーゼに関しては、精製しても凍結保存の間、経時的に失活が起こることが想定されたため、精製を断念した。そして、A.a.ロイコ

トキシンを代わりに精製し、0.5mg/ml、2.0mg/ml、4.0mg/mlの各濃度で4週間投与した。しかし、どの濃度においても著明な炎症性変化は観察されなかった。平成16年度は、細菌性の病原因子に着目するだけではなく、糖尿病や高脂血症などの歯周病の危険因子とされる全身疾患を実験的に誘発させ、より顕著な炎症性変化を示す歯周病モデルを作製する予定である。疫学研究は、歯周病の増悪因子として血清脂質の増加を指摘している。本年度の研究では、ラットに高コレステロール食を与えて血清脂質を増加させ、その状態がラット歯周病モデルに与える影響を検討した。8週齢のWistar系雄性ラット40匹を用いた。ラット20匹に対して、標準食に1%コレステロール(w/w)を添加した飼料(高コレステロール食)を与えた。残り20匹には、標準食を与えた。実験開始から4週間後、ラットをさらに2群に分け、歯周病病原因子もしくはpyrogen-free waterを3.0μlずつ、上顎第1臼歯口蓋側歯肉に1日1回、4週間投与した。なお、歯周病病原因子として、E.Coli由来lipopolysaccharide(LPS)溶液25mg/ml、1.5μlとStreptomyces griseus由来プロテアーゼ2.25unit/μl、1.5μlを併用した。実験期間終了後、屠殺と同時に採血を行い、酵素法を用いて血清脂質(総コレステロール、トリグリセライドおよびHDL-コレステロール)の濃度を計測した。また、歯周組織を固定・脱灰してパラフィン切片を作製し、ヘマトキシリン・エオジン染色および抗proliferating cell nuclear antigen(PCNA)抗体による免疫染色を行った。組織定量分析として、接合上皮の根尖側移動距離と歯槽骨の吸収量を計測した。さらに、接合上皮のPCNA陽性細胞を計数した。対照群(標準食およびpyrogen-free waterを与えた群)と比較したとき、高コレステロール食を与えた2群において、血清中の総コレステロール濃度の上昇とHDL-コレステロール濃度の低下がみられた。一方、トリグリセライドについては、群間で一定の傾向はなかった。接合上皮の根尖側移動距離は、対照群、高コレステロール食群、LPSとプロテアーゼ投与群、高コレステロール食およびLPSとプロテアーゼ投与群の順に大きくなった。接合上皮のPCNA陽性基底細胞数も同様の傾向を示した。また、対照群を除く全ての群において、歯槽骨吸収が観察された。高コレステロール食を与えたラット歯周病モデルでは、標準食を与えた歯周病モデルよりも大きな接合上皮の根尖側移動と上皮細胞の増殖活性がみられた。このことから、コレステロール食による血清脂質の変化は歯周病を増悪させることが考えられる。さらに、高コレステロール食群で接合上皮の根尖側移動と歯槽骨吸収が現れたことは、高コレステロール食の摂取自体が歯周病のリスク要因であることを示している。
調和解析の数学一般への応用

本研究の成果は以下のものに大別される。1.種々の関数空間に属する関数のアトム分解について考察した。2.ベゾフ空間やトリーベル・リゾルキン空間における基本性質として良く知られている命題の証明を与えた。この基本性質は多くの書籍、論文に書かれているが明確な証明は知られていなかった。3.モレー空間とその周辺の種々の関数空間の性質を調べた。4.再生核ヒルベルト空間を用いたディラックのデルタの構成方法を試みた。Morrey空間の種々の作用素の有界性への応用を含むMorrey空間のアトム分解に関しての結果を得て、特にそれを双線形評価へと応用した。このMorrey空間のアトム分解は、種々の関連する空間に対しても考案され、証明を与えた。投稿するための原稿を準備している最中である。長年、未解決問題であったMorrey空間の前双対の性質を示した。具体的には次の性質である。単調増大列で、ノルム有界なものが与えられるとその極限関数もやはりMorrey空間の前双対の関数になる。この定理により、実に多くの作用素の有界性の証明が簡略化される。さらに、バナッハ関数空間の正値作用素の列が収束する必要十分条件を与えた。また、バナッハ関数空間においてサンプリング定理が成り立つための必要十分条件を平行移動作用素の言葉で記述した。逆写像の公式を拙著の「ベクトル解析」の本に初等的な証明を与え、出版の準備を整えた。この書籍は2014年5月15日に発行予定である。変動指数ルベーグ空間は1951年の中野氏が最初であるが、空間の構造が複雑であるために1991年ごろまであまり研究されていなかった。1991年に変動指数ソボレフ空間が定義されて、さらにその13年後2004年にハーディー・リトルウッドの極大作用素が有界となる非自明な条件が提唱された。1991年の結果は専門家の間ではよく知られているが、1951年の中野氏の結果は日本の出版社の書籍として公表されているために、世界的には詳しく知られていない。また、2009年ごろから日本の多くの研究者により変動指数ルベーグ空間とその周辺の空間の性質が詳論された。この事情を150ページほどのサーベイとしてまとめた。ハーディー空間のアトム分解の理論を応用して,モレー空間のアトム分解の理論を展開した。モレー空間以外ではオーリッツ空間のアトム分解も得ることができた。モレー空間におけるオルセンの不等式を用いて、種々の非線形微分方程式に応用した。また、海外講演を数回行い、得られた結果を周知した。トリーベル・リゾルキン空間の解析は、ピートル型極大作用素を用いて,今までに得られている種々の結果をまとめ、穴の開いていた部分を埋めることに成功した。この論文はDissertationes Mathematicaeから出版される予定である。また、non-doubling measureの解析は既知の理論の修正を必要とするとされているが,修正が実際に必要であることを例示するために,反例を構成した。この反例はCollectanea Mathematicaに採録されている。さらに,non-doubling measureの解析の実例として,ガウス測度を取り上げた。この実例に関しては,Journal of geometric analysisに掲載されている。また、これらの実例などを議論するべく、Eurasian National UniversityからVictor Burenkov, Tamara Tararykova両氏を招聘し,国際会議Harmonic analysis and its applications at Tokyoにて研究討論を行った。再生核の理論に関しては、線形微分方程式の解の近似的な構成方法を提唱した。また、著書の細部の検証を行い、出版社を見定めるに至った。再生核の理論の研究者にあい、直接討論することで,著書の記述を明確にすることに努めた。モレー空間を中心とした関数空間の分割理論を展開し、偏微分方程式に応用した。モレー空間の応用としては、滑らかではないを中心に考えた。この考え方は一般化モレー空間,一般化オーリッツ・モレー空間などに拡張した。この考え方のもととなったのは変動指数ハーディー空間である。また、モレー空間の周辺の関数空間そのものの性質をしらべた。主要なものはブロック空間として知られているモレー空間の前双対である。このブロック空間は単調増大極限に関して閉じているかどうかは知られていなかった。この単純かつ基本的な性質は作用素の有界性を示す際に使われているが,証明は今まではどこにもなかった。おそらくは直感的に正しいと知られていて、暗黙の裡に使ってきていたと思われる。この定理により、ブロック空間の関数の分解に関する基本定理が得られたことになる。この考え方は前述のモレー空間の分割にも適用される。偏微分方程式への応用としてリースポテンシャルの有界性が成り立たないと知られている関数空間の対が与えられた時に、定義域と値域のどちらかを改良して最善の不等式を得ることができるかどうかを考察した。

ベゾフ空間に関しては、斉次ベゾフ空間の基本的な定理の証明をした。これも命題としては知られているようであるが、証明はだれも知らなかったようである。再生核ヒルベルト空間の理論では著書の情報を更新した。また、再生核ヒルベルト空間を用いたディラックのデルタの近似を考えた。調和解析逆写像の公式に関しては十全な理解を得ることができ、簡明な証明を与えることができた。アトム分解に関しては、分解ができることがわかっているが個別の関数空間ごとに手法を若干変えなくてはいけないために本質がわかっていない箇所が残っている。アトム分解の応用先として、当面はカールソン作用素を想定している。アトム分解を使うことで,カールソン作用素を若干簡略化できることまでは何とかこぎつけたが,そこから先がまだ見えてこない。関数の分解が何かという問題に特化して考えることにする。国内、国外の研究者と協力して、研究を進めていく。国外の研究者は特に、中国、インドネシアなどを想定している。また、首都大学数理解析セミナーも回数や参加者が増えてきており、多くの研究者からの情報提供が可能になっている。本年度はこの点に特に重点を置いて、研究集会などを発展させていきたい。前年度は、ドル安の傾向にあり、論文筆耕料が安めになってしまい、剰余金が生じた。そのために、前年度の剰余金も充当していくことを検討している。
下部尿路知覚神経伝達におけるイオンチャネルの役割と新規治療応用に関する研究

特に尿路上皮に発現するイオンチャネルについてメカノセンサーとしての可能性を追求し、前述のTRPチャネルファミリーのなかでもTRPV4が伸展刺激に対して強く反応し、さらに求心性伝達機構に重要と考えられるATPの分泌に関与することを証明した。また、臨床検体を用いてこれらのイオンチャネルの発現程度と臨床データとの関連を調べた。さらに、同様のイオンチャネルである酸感受性イオンチャネル(Acid-sensing ion chanels : ASICs)についても、若干の知見を得た。【方法】(1)膀胱上皮細胞の初代培養細胞を作製し、これらの細胞からからm-RNAを抽出し、各種TRPチャネル遺伝子の発現をRT-PCR法を用いて確認した。(2)マウス膀胱全層標本に対しTRPV4抗体を用いた免疫組織染色を行い、その局在について調べた。また、膀胱上皮初代培養細胞に対し膀胱上皮のマーカーであるCK7およびTRPV4抗体を用いた免疫染色を行った。(3)WTとTRPV4KOマウスの膀胱上皮培養細胞において、TRPV4の選択的アゴニストである4-αPDDを投与した際の細胞内カルシウム濃度の変化についてカルシウムイメージング法を用いて比較・検討した。(4)細胞を直接伸展させることができる装置を用いた実験系を確立させた。シリコンチャンバー上で膀胱上皮細胞を培養し、これに伸展刺激を加えた際の細胞のカルシウム応答を調べた。(5)さらに伸展刺激を与えた際の細胞からのATP放出についてフォトンイメージング装置を用いて調べた。【結果】(1)膀胱上皮初代培養細胞において、他のTRPチャネルと比較し、TRPV4のm-RNAレベルでの発現がより強く認められ、さらにCK7の発現も確認した。(2)膀胱組織では上皮、特に基底部に局在するTRPV4のタンパク発現が認められた。これらはTRPV4KOマウスではみられなかった。また培養細胞におけるCK7は遺伝子レベル同様、タンパクレベルにおいても陽性で、上皮としての特性が維持されており、またWTマウスにおいてTRPV4タンパクの発現が確認された。(3)WTマウスでは視野内で約半分程度の細胞が4-αPDDに反応して細胞内カルシウム濃度の増加を示した。免疫染色法によって、これら応答細胞はTRPV4を発現しており、機能的発現についても確認できた。(4)機械伸展刺激に対して膀胱上皮培養細胞は細胞内カルシウム濃度の上昇を示し、TRPV4KOマウスではWTマウスに比較し、有意に減弱することが示された。さらにTRPチャネルのアンタゴニストであるRuthenium RedをWTマウス培養細胞に投与した際、TRPV4KOマウス培養細胞とほぼ同等の応答となることも実証した。(5)機械伸展刺激に対する膀胱上皮培養細胞からのATP放出はWTに比べTRPV4KOマウスでは有意に低下することが示された。
緑内障モデル動物を用いた神経保護研究

徐々に視野が狭くなり、それを脳が疑似的に補正するために気付きづらいという特性がある緑内障は、進行し視野狭窄に至れば、仕事や日常生活に支障を来したり、自動車運転では加害の危険性もあり、医学的にも社会的にも治療の意義は大きい。眼圧下降による治療薬はあるものの、今後の緑内障治療においては、眼圧以外の病態寄与因子の解明や新たな神経保護療法の開発が求められる状況にある。これを探求するのが研究の目的である。房水の排出経路は、線維柱帯から集合管を通り上強膜静脈に吸収される経路が主たるものと考えられている。最近の知見により、集合管は眼内において360度平均的に分布するのではなく、鼻側に多い事がわかってきている。このように、房水の流れを理解し、その流れに異常があるのであればそれを改善することが新たな治療になりうると考えられる。このために我々は、UCLAのAlex Huang MDと協力し、眼内の房水の流出経路の可視化を行った。結果として、既報にあるように集合管は鼻側に多いことが分かった。また、房水流出が少ない部位においてもistentのような、房水流出を促すデバイスを使うことでその部位の還流量が増加した。これらの成果は、Xie X, Akiyama G, Bogarin T, Saraswathy S, Huang AS. Visual Assesment of Aqueous Humor Outflow. APJO 2019.に報告した。房水流出路をOCTを用いて可視化し、低流量の領域を治療にて排出量を増加できることが分かりAPJOに投稿することができたため。今後は、房水流出経路の可視化を通じて、緑内障における病態の把握に努める。また、房水排出におけるリンパ管経路の寄与について検討し、引き続き緑内障の多面的な病態の把握とともに新しい治療を模索していく予定である。(理由)消耗品費の節約などにより、支出の抑制に成功した。(使用計画)学会発表、論文出版費なども含めて、消耗品などを中心に使用予定である。
アルツハイマー病に対する発達期環境要因の同定

アルツハイマー病(AD)の発症において成人期以降の後天的要因が重要であると考えられてきたが、最近の知見では発達期の環境要因もADの重要な誘因であるということが示唆されている。研究代表者はADと発達期の環境要因の関連性を解明することを目的とし、実験を実施した。昨年度、母子分離ストレスがADモデルマウスであるAPPヘテロ変異マウスの空間認知記憶の障害、ADの病理症状であるアミロイドβタンパク質(Aβ)のプラーク形成を促進することを報告した。その後の実験より、以上の所見は、同マウスの1.5ヶ月齢では認められないことを確認している。通常、ヘテロ変異マウスではプラーク形成が9ヶ月と遅いことから、発達期のストレスが発達障害の形成ではなく、AD様症状を促進したと考えられる。血管性認知症だけでなく、多くのAD型認知症でも血管症状が認められる。母子分離ストレスを暴露した場合、ヘテロ変異、野生型ともに前頭前野において血管の狭小化や血管周皮細胞であるペリサイトの減少が認められた。一方で、フィブリノーゲンと血管外流出から同定した血液脳関門(BBB)の破綻が母子分離ストレスを暴露したヘテロ変異マウスでのみ認められた。したがって、環境要因(母子分離ストレス)による影響が血管の狭小化やペリサイトの減弱を惹起し、ここに遺伝的要因(APP変異)が加わることが血管系症状の重症化、すなわちヒトADの病理所見であるBBBの破綻を引き起こし、AD様症状の顕在化を促進すると考えられる。現在は、環境要因がどのような因子に作用し、このような血管障害を引き起こすかを検討している。我々は、ADモデルマウスにおいて、発達期におけるストレス暴露が成長後の認知機能障害やADの病理症状の発現を促進することを明らかにした。さらに、発達期のストレス暴露が血管系の異常を引き起こすことを明らかし、これらの現象がAD様症状の発症促進につながると考えている。今後は、発達期のストレス暴露がどのような因子に影響を与え、血管系の異常を引き起こすのかを検討する。さらに、薬理学的手法や遺伝的手法を用いて、上記で同定した因子が成長後の認知機能、血管にどのような影響を与えるか、因果関係を直接的に検討する。げっ歯類においても、発達期に母子分離ストレスに晒されることにより、ADの原因物質であるアミロイドβタンパク質(Aβ)が脳内に蓄積することが報告されているが、ADの危険因子としての発達期ストレスに関する研究は数も少なく、発達期のストレスが生涯にわたって行動に及ぼす影響は明らかとなっていない。代表者はADと発達期の環境要因の関連性を解明することを目的とし、実験を実施した。動物はヒトアミロイド前駆体タンパク質(APP)ノックインマウスのヘテロ変異マウスと野生型マウスを用い、げっ歯類における発達期のストレスである母子分離ストレスによる影響を検討した。3ー4ヶ月齢のマウスに対して認知運動課題を実施したところ、物体位置認識試験において母子分離ストレスを処置したヘテロ変異マウスでのみ空間認知記憶の障害が認められた。また、電気生理学的検討により、同マウスの海馬において覚醒時γ波の低下傾向が認められた。さらに、上記の機能障害に付随して、前頭前皮質において明確なAβプラークの形成が観察された。これらの症状は加齢したAPPノックインマウスのホモ変異マウスで認められる症状と類似しており、発達期のストレスにより早期にAD様症状を発症したと考えられる。現在は、発達期のストレスにより影響を受け、Aβ沈着に関与する因子の同定をおこなっている。当初、ヒトアミロイド前駆体タンパク質(APP)ノックインマウスのホモ変異マウスと野生型マウスを用いる計画だったが、ADが優性遺伝であることやホモ変異マウスでは症状が早期に認められ、発達期ストレスの影響を検討するのに不向きであると考え、症状の発現が非常に遅いヘテロ変異マウスと野生型マウスを用いた。これが功を奏し、母子分離ストレスがAD様症状の発症を促すという結果が得られた。

したがって、環境要因(母子分離ストレス)による影響が血管の狭小化やペリサイトの減弱を惹起し、ここに遺伝的要因(APP変異)が加わることが血管系症状の重症化、すなわちヒトADの病理所見であるBBBの破綻を引き起こし、AD様症状の顕在化を促進すると考えられる。現在は、環境要因がどのような因子に作用し、このような血管障害を引き起こすかを検討している。我々は、ADモデルマウスにおいて、発達期におけるストレス暴露が成長後の認知機能障害やADの病理症状の発現を促進することを明らかにした。さらに、発達期のストレス暴露が血管系の異常を引き起こすことを明らかし、これらの現象がAD様症状の発症促進につながると考えている。発達期のストレスによりAβプラークの形成が促進されるという結果から、A βの産生・沈着と除去のバランスに変化が生じていると考えられる。Aβの除去はミクログリアやアストロサイトなどのグリア細胞が深く関わっている。これらの細胞を軸に発達期のストレスにより影響を受け、Aβ沈着に関与する因子の同定を行う。また、覚醒時だけでなく、空間認知記憶の障害に繋がる生理学的変化を探索する。今後は、発達期のストレス暴露がどのような因子に影響を与え、血管系の異常を引き起こすのかを検討する。さらに、薬理学的手法や遺伝的手法を用いて、上記で同定した因子が成長後の認知機能、血管にどのような影響を与えるか、因果関係を直接的に検討する。物品購入時に数社から見積を取り、安価で納入できる業者を選択したため、若干の節約ができたと考えている。残額以内で購入を希望する物品が無かったため、次年度へ繰り越した。