hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
GUS-D6を用いた新たなCSPG分解療法の確立とそのALSへの応用

本研究では、運動神経の主病変部位に蓄積するコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)を標的とした薬剤による家族性筋萎縮性側索硬化症(ALS)性神経障害の治療方法の確立を目的としている。初年度ではマウス脊髄由来神経芽細胞腫であるNeuro-2aの培養系を用いて、CSPG条件下でのNeuro-2aの細胞体の減少を5,000 U/gのGUS投与によって抑制することを観察している。また、β-グルクロニダーゼ(GUS)投与群で神経細胞特異的マーカーであるMAP-2の陽性タンパク質の増加と軸索様形態が観察された。これにより、GUS-D6の神経細胞への有用性が推察された。よって次年度はALPモデルマウスに対する酵素投与療法の前臨床試験の条件決定を主として行う予定であった。ALPマウスに投与するのに先駆けて、自然型のマウスを用いて、GUSの酵素組織移行性について検討した。NativeGUSをマウス尾静脈注射を行い、投与20分後の大脳皮質と脊髄を摘出してGUS酵素活性を検討したところ、250 U/mLの投与に対して、大脳皮質では426.9 μU/mLであり、脊髄では515.13 μU/mLであった。大脳皮質の平常時でのGUS濃度は213.1 μU/mLであり、脊髄での平常時のGUS濃度が242.4 μU/mLであるため、250 U/mL濃度の静脈注射であっても、20分後には中枢神経系へ通常時の2倍の濃度になるGUSを送達することが可能であることが明らかとなった。GUSの半減期が約5分であり、GUS-D6の半減期が約30分であるのでそれを加味し、ALPモデルマウスへの投与計画を検討中である。また、一方で、GUS-D6は市販されている酵素ではなく、我々の研究グループのみ所持するものであり市販されていないので自主精製が必要である。使用量に応じた酵素精製が必要なため、酵素精製も進行中である。初年度と次年度の目的として(1)GUS-D6酵素精製サイクルを申請者の所属研究室で立ち上げ、本研究終了までに必要となる酵素を精製し蓄積する。(2)GUS-D6の神経細胞への有用性をin vitro解析により証明する。(3)酵素療法条件設定のためにALSモデルマウス検体を投与計画別に準備する。(4)投与計画別の脊髄中GUS-D6活性を指標とし、酵素療法の至適条件を決定する。であった。このうち、native型のGUSの実験が先行している状況である。前年度から遅延の理由の最大原因として、本研究計画申請後にアメリカ合衆国大統領が変ったことにより、組み換え遺伝子を持つベクターといったような生物学的資源の移譲や分譲の規則が厳しく変更になったため、ベクター入手までに予想以上の時間がかかっているということがあったが、結果としてrecombinantのGUS-D6のベクターの入手が不可能となり、native型のベクターを入手したことによる。それにより、組み替え型の作成から進めているため、recombinant型のGUS-D6の計画が遅れているため、native型のGUSの研究が先行している状況である。そのため、進捗状況を「やや遅れている」と判断した。今後とも、GUS-D6の酵素精製を最優先課題とする。また、GUS-D6の神経系への及ぼす影響について神経突起伸長マーカー(Gal-1,GAP43)や樹状突起マーカー(MAP-2)をウエスタンブロット法(WB)や免疫染色法(IHC)によって精査が必要である。よって、初年度に行ったNeuro-2aを用いた検討をGUS-D6の精製で十分な量が確保でき次第行う。CSPGによる神経突起伸長阻害モデルはおおよそ確立できているため、初年度研究計画と次年度研究計画を随時検討可能であり、本研究目的は十分に達成可能である。また、当初予定では1,000 U/g、2,500 U/g及び5,000 U/gのGUS-D6を用いた酵素投与療法の計画であったが、次年度の検討結果より、低用量のnativeGUS投与でも20分後には中枢神経系へ通常時よりも2倍の酵素活性を示せるほど酵素が送達されていることが明らかとなったので、低濃度の250 U/mLの条件での6日間の治療計画を予定している。静脈投与を1初日単回投与した群、23日間隔で投与した群(2回投与群)、32日間隔で投与した群(3回投与群)の3群に分けて行う。その後、屠殺解体し脊髄検体を採取し脊髄中のGUS酵素活性をGUSアッセイキットにより測定と、脊髄の神経の形態学的な変化とCSPGの免疫染色により、効果的な投与計画の設定を組み直す。その投与計画をもとにALPモデルマウスへの酵素投与実験を行い、酵素療法によるALS病態進行遅延効果を行動実験により証明する。家族性筋萎縮性側索硬化症(ALS)のモデルラットにおいて、運動神経の主病変部位にコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)の進行性の沈着が起こる事が報告されている。そして運動神経へのCSPGの沈着は、神経突起伸長を阻害し、神経回路網の再構築を妨げる事が知られており、ALS病態発現の一旦を担っていると考えられる。

生体内でのCSPG分解酵素としてβ-グルクロニダーゼ(GUS)が知られているが、申請者らは天然型のGUSよりも3倍中枢神経系へ移行するGUS-D6を開発した(Oikawa H, et al. Mol Genet Metab. 2008)。本研究では、CSPGを標的とした薬剤によるALS性神経障害の治療方法の確立を目的としている。初年度はGUS-D6の神経細胞への影響解析をするために、天然型のGUSの神経細胞への影響解析を培養実験で検討した。マウス脊髄由来神経芽細胞腫であるNeuro-2aに対して、5,000 U/gのGUS投与群と非投与群の2群に分けて、1, 10, 100,そして1,000 μg濃度のCSPG条件下で培養を行なったところ、GUS投与によりCSPG適用による培養細胞の細胞体減少が抑制された。また、GUS投与群で神経細胞マーカーであるMAP-2の陽性タンパク質の増加と軸索様形態が観察された。これにより、GUS-D6の神経細胞への有用性の影響解析が可能となった。一方で、GUS-D6は市販されている酵素ではなく、我々の研究グループのみ所持するものであり自主精製が必要である。現在、GUS-D6オリジナルを持つアメリカの研究室よりベクターを輸入し、CHO-K1細胞にヒトGUS-D6を遺伝子導入をおこない、GUS-D6酵素生成細胞作成に着手している。また、本研究に必要な量の酵素を得るため、その細胞の培養に着手している。初年度の目的では、(1)GUS-D6酵素精製サイクルを申請者の所属研究室で立ち上げ、本研究終了までに必要となる酵素を精製し蓄積することと、(2)GUS-D6の神経細胞への有用性をin vitro解析により証明することであった。そして、研究申請時にGUS-D6オリジナルを持つアメリカ合衆国DuPont Hospitalの戸松俊治教授からベクターの譲渡許可を得ており、日本への移譲予定であった。しかしながら、本研究計画申請後にアメリカ合衆国大統領が変ったことにより、組み換え遺伝子を持つベクターといったような生物学的資源の移譲や分譲の規則が厳しく変更になったため、ベクター入手までに予想以上の時間がかかった。よって、進捗状況を「やや遅れている」と判断した。本研究では、運動神経の主病変部位に蓄積するコンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)を標的とした薬剤による家族性筋萎縮性側索硬化症(ALS)性神経障害の治療方法の確立を目的としている。初年度ではマウス脊髄由来神経芽細胞腫であるNeuro-2aの培養系を用いて、CSPG条件下でのNeuro-2aの細胞体の減少を5,000 U/gのGUS投与によって抑制することを観察している。また、β-グルクロニダーゼ(GUS)投与群で神経細胞特異的マーカーであるMAP-2の陽性タンパク質の増加と軸索様形態が観察された。これにより、GUS-D6の神経細胞への有用性が推察された。よって次年度はALPモデルマウスに対する酵素投与療法の前臨床試験の条件決定を主として行う予定であった。ALPマウスに投与するのに先駆けて、自然型のマウスを用いて、GUSの酵素組織移行性について検討した。NativeGUSをマウス尾静脈注射を行い、投与20分後の大脳皮質と脊髄を摘出してGUS酵素活性を検討したところ、250 U/mLの投与に対して、大脳皮質では426.9 μU/mLであり、脊髄では515.13 μU/mLであった。大脳皮質の平常時でのGUS濃度は213.1 μU/mLであり、脊髄での平常時のGUS濃度が242.4 μU/mLであるため、250 U/mL濃度の静脈注射であっても、20分後には中枢神経系へ通常時の2倍の濃度になるGUSを送達することが可能であることが明らかとなった。
系列推定等化器を用いたピコセル用超高速マルチメディア無線データ通信方式の研究

本研究では、マルチメディア伝送用のピコセル(半径数10m)超高速(2550Mビット/秒)デジタル無線通信方式の提案を最終目標として始められた。最尤系列推定理論を適用し、従来にはない超高速準移動体用無線変復調システムの開発(理論解析およびシミュレーション実験)を行うことを目的とした。平成10年度12年度の3年間を各年度毎に目標を立てた。基本的な方式としては、過去に研究実績があり良好な特性が期待できる位相連続FSK信号(CPFSK信号)のエネルギー検波系列推定方式及びCPFSK信号やGMSK信号のリミッター・ディスクリミネータ検波系列推定方式を用いることとした。これらの非同期検波方式をベースに、送信側の相関符号化などを併用して、最終的なシステム構成を提案しようとするものである。最大系列推定利得(dB)やビット誤り率などを理論解析及び計算機シミュレーションにより確認し、新方式の提案を行うことを目的とした。平成10年度では、2値CPFSKリミッタ・ディスクリミネータ検波系列推定方式及び2値CPFSKエネルギー検波系列推定方式を考え、理論的検討及び計算機シミュレーションを行い、ピコセルマルチメディア情報伝送用超高速デイジタル変調方式の理論の構築及び基本シミュレーション実験を行った。平成11年度では超高速ビット速度準移動体用無線データ伝送にとって克服すべき最大のポイントである遅延波の重畳による符号間干渉を効率よく補償する系列推定方式の理論解析を行った。平成12年度は、これらの成果を踏まえて研究をさらに発展させ、CPFSKやGMSKなどのディジタルFM信号のリミッタ・ディスクリミネータ検波列推定方式に対する軟判定出力ビタビアルゴリズム(SOVAアルゴリズム)の適用によるビット誤り率のさらなる改善、ターボ符号などの連接符号を用いる高性能誤り訂正符号の検討を行い、理論解析及び計算機シミュレーションによる実験を行った。以上の各年度の研究の結果、CPFSKやGMSK信号などの定包絡線信号を高速度マルチメディア移動体通信に用いる場合の基礎提案がなされたと考えられる。平成1012年度に得られた成果は、次ページにその一部を掲げるが、2編の電子情報通信学会英文論文誌(審査有)、6編のIEEE国際会議論文(審査有)、1編の口頭発表(審査無)で報告されている。本研究では、マルチメディア伝送用のピコセル(半径数10m)超高速(2550Mビット/秒)デジタル無線通信方式の提案を最終目的としている。符号化変調及び最尤系列推定の理論を適用し、従来にはない超高速準移動体用無線変復調システムの開発(理論解析およびシミュレーション実験)を行うものである。平成10年度12年度の3年間を1)理論の構築、2)実験、3)検証と最適化、に分けて、各年度毎に目標を立てている。基本的な方式としては、過去に研究実績があり良好な特性が期待できる位相連続FSKのエネルギー検波系列推定方式及びリミッター・ディスクリミネータ検波系列推定方式を用いることとした。これらの非同期検波方式をベースに、送信側のさらなる相関符号化やアンテナダイバーシティーなどを併用して、最終的なシステム構成を提案しようとするものである。最大系列推定利得(dB)やビット誤り率などを理論及び計算機シミュレーションにより確認し、新方式の提案を行うことを目的とする。

平成10年度:マルチパス伝送路における超高速ディジタル無線変復調方式の理論の構築超高速(2550Mbit/sec)ビット速度準移動体用無線データ伝送にとって克服すべき最大ポイントである遅延波の重畳による符号間干渉を効率よく補償するための理論を構築する。すなわち、マルチパス伝送路による符号間干渉を補償し受信系列間の距離特性を確保する。系列間最大距離特性(系列推定利得)に関し、理論解析および計算機シミュレーションを行った。このためには64ビットウィンドウズNT及びLinux対応高速ワークステーションシステム(ビジュアルテクノロジー(株)社製)が必要であり主要設備備品として購入した。具体的な変調方式としては、簡易な非同期検波方式で高速変復調が可能な、2値CPFSKリミッタ・ディスクリミネータ検波系列推定方式、及び2値CP-FSKエネルギー検波系列推定方式を考えた。無線伝送路のマルチパスモデルとして、2波固定及びライスフェージングモデルを考え、トレーニング系列によるチャネルのインパルス応答の同定方法や非線形復調方式であるリミッタ・ディスクリミネータ検波及びエネルギー検波方式に付随する効果など、理論的検討及び計算機シミュレーションを行い、ピコセルマルチメディア情報伝送用超高速ディジタル変調方式の理論の構築及び基本シミュレーション実験を行った。これらの結果は、主として2編のIEEE国際会議論文、ISITA'98(Mexico city,Mexico)及びICC'99(Vancouver,Canada)に報告されている。本研究では、マルチメディア伝送用のピコセル(半径数10m)超高速(2550Mビット/秒)デジタル無線通信方式の提案を最終目的としている。符号化変調及び最尤系列推定の理論を適用し、従来にはない超高速準移動体用無線変復調システムの開発(理論解析およびシミュレーション実験)を行うものである。平成10年度12年度の3年間を各年度毎に目標を立てる。基本的な方式としては、過去に研究実績があり良好な特性が期待できる位相連続FSK信号(CPM信号)のエネルギー検波系列推定方式及びリミッター・ディスクリミネータ検波系列推定方式を用いることとする。これらの非同期検波方式をベースに、送信側のさらなる相関符号化やアンテナダイバーシティーなどを併用して、最終的なシステム構成を提案しようとするものである。最大系列推定利得(dB)やビット誤り率などを理論解析及び計算機シミュレーションにより確認し、新方式の提案を行うことを目的とする。平成11年度:マルチパス伝送路における超高速ディジタル無線変復調方式の理論解析とシミュレーション実験超高速(2550Mbit/sec)ビット速度準移動体用無線データ伝送にとって克服すべき最大のポイントである遅延波の重畳による符号間干渉を効率よく補償する系列推定方式の理論解析を行った。
昆虫概日時計の複眼依存性光同調の分子機構

本研究では、昆虫概日時計の複眼依存的な光同調機構の解明を目指している。フタホシコオロギを用いた実験系では、1c-fosBの下流にあると想定されるF-box and leucin rich repeat proteins (Fbxl)とBromodomain And WD Repeat Domain Containing 3 (BRWD3)について,主観的夜前半と後半でそれぞれ2時間の光照射後に採取した視葉でのmRNA発現レベルを検討したところ、顕著な光依存的転写制御は認められなかった。そこで、これら以外にc-fosBにより発現誘導される遺伝子を探索するため,同様に主観的夜前半と後半で2時間の光照射後に採取した視葉から抽出したRNAを用いて,RNA-seqを実施し、光照射により誘導される遺伝子が多数あることを確認した。今後、これらの遺伝子について同定と機能解析を進める計画である。2c-fosBの下流で機能するcry1,cry2遺伝子がコードするタンパク質をin vitro合成し、それを用いて,ラットとマウスを免疫し抗体を作成した。現在、この抗体を用いて免疫組織化学およびWestern BlotによりCRY1,CRY2タンパク質の発現解析の予備実験を行っている。3光同調機構への時計遺伝子群の関与を検討するため、perおよびClock遺伝子のRNAi処理個体を用いて、明暗周期への同調性を検討し、これらの発現低下で同調が即座に生ずることが明かとなった。マダラシミで,コオロギ同様のc-fos、cry2系が光同調に関る可能性を検討するため、cry2遺伝子の2本鎖RNAの合成を進め、RNAi実験に着手する準備を進めている。キイロショウジョウバエでは、tim-Gal4にUAS-c-fosRNAi,UAS-FbxlRNAi, UAS-BRWD3RNAiを組み合わせた形質転換体を作成し、光同調にこれらが関与する可能性を検討する実験準備を整えた。本年度の計画を概ね当初の計画に沿って実施することができた。本年度は光で発現亢進する遺伝子の探索、抗体の作成、さらには機能解析のためのハエ系統作成など、次年度に本格的な解析を行うための準備を整えることが重要な課題であった。今後はこれらの準備の上に、光依存的に発現する遺伝子の同定と機能解析、抗体を用いた免疫組織化学、ウエスタンブロットによる解析、作成したハエ系統を用いて行動リズムを指標とした複眼依存性光同調機構の解明を進める計画である。
高等植物三量体G蛋白質に関与する情報伝達因子の解析

酵母、高等動物の三量体G蛋白質αサブユニットは、受容体や情報増幅因子と相互作用することが明らかになっている。しかし高等植物においては、三量体G蛋白質を介した情報伝達系が存在することが示唆されているにすぎず、その実態は未だ不明のままである。そこで、イネのαサブユニットと相互作用する分子を検索することを通して、植物細胞で未だ同定されていない、三量体G蛋白質と共役した受容体や情報増幅因子を単離・同定することを試みた。本年度は、イネの三量体G蛋白質αサブユニットと相互作用する因子を酵母のtwo-hybrid systemを用いてスクリーニングした。1×10^7個のスクリーニングの結果、アラビドプシスのcDNAライブラリーから2個の陽性クローンを得た。これら2個のクローンの塩基配列の決定を行い、遺伝子バンクに対するホモロジー検索を行った結果、どちらのクローンもchorismate mutase/prephenate dehydrataseと全長に渡って約30%の相同性を示した。しかしchorismate mutase/prephenate dehydrataseと三量体G蛋白質αサブユニットが生体内において相互作用しているとは考えにくい。むしろ得られたクローン中にイネの三量体G蛋白質αサブユニットと偶然強い相互作用を示すアミノ酸残基が存在した結果であろうと考えられる。ただ現時点では酵母、高等動物で三量体G蛋白質αサブユニットと相互作用することがわかっている既知の蛋白質と共通するアミノ酸配列は見つかっていない。今後は得られたクローンの欠失変異株を作成し、αサブユニットと相互作用する領域の決定を行う予定である。
浮力噴流のための2方程式熱乱流モデルの適用

水素の市民社会への普及には安全・安心の確保と低コスト化が課題である.この課題解決の手段の一つとして高度な解析技術を必要としないCFDの解析手法の開発が待たれている.解析結果を可視化することにより安全対策の提言が容易になり,理解もされやすくなる.その結果,過剰な安全対策が避けられ,大幅な低コスト化も期待できる.固体高分子形燃料電池の作動圧力は低圧であること,燃料電池自動車の高圧部からの漏洩でも車内及び車外への漏洩は低圧であることから,市民社会に近い所における水素の漏洩は低圧で低速が多いと考えられる.低圧に限定すればCFD解析は少し容易になる.ブシネスク近似に基づく熱対流計算のアナロジーで水素拡散を解く試みは定量的にも明るい見通しが立ってきたので,この検証を精力的に行った.これと並行して研究室で開発したADVENTURE_sFlowでの領域分割法を用いた大規模解析も可能になったので,モデルの規模を従来の10万自由度程度の小規模から100万さらには1000万自由度規模と規模を2桁大きくした研究を進め,計算精度の確認が大きく前進した.さらに現在のアプローチの限界を見極める意味でも圧縮性を考慮した水素拡散モデルの検討も行った.研究員は,これに加えて独自の立場からブシネスク近似が成り立たない場合の浮力噴流の研究や境界層理論にもとづく研究を精力的に行い英文のResearch ReportのPublicationsにリストアップされている多くの論文をまとめた.外国人特別研究員のここでの研究目的は、受入研究室が進めている有限要素法による3次元熱・流れ解析ソフトウェアを乱流解析機能も含めて開発することに繋がる。主な応用分野として21世紀水素利用社会を睨みながら、水素漏洩拡散シミュレータとして機能することを目指している。特に水素拡散シミュレータではブシネスク近似に基づく熱対流計算のアナロジーで解く試みを行っており、今後外国人特別研究員が研究する浮力噴流の研究は直接有用になってくると考えている。本年度はFLUENT等による試行計算と計算結果の検証のための計測システムの立ち上げを図った。特に共同研究先である地球資源システム工学部門の井上雅弘准教授との打ち合わせにより実験データが収集された。この実験データをHiemenz flow modelやいくつかの数値計算モデルを使いながら比較している。中間報告的であるが、年度末にエジプトに帰国する際、学会発表を予定している。ブシネスク近似に基づく熱対流計算のアナロジーで水素拡散を解く試みは定量的にも明るい見通しが立ってきたので、この検証も精力的に行っていく予定である。これと並行して研究室で開発したADVENTURE_sFlowでの領域分割法を用いた大規模解析も可能になったので、1ケースにかかる計算時間が大幅に短縮された。Case Studyを十分に行い、モデルの検証を加速させていく。外国人特別研究員のここでの研究目的は、受入研究室が進めている有限要素法による3次元熱・流れ解析ソフトウェアを乱流解析機能も含めて開発することに繋がる。特に水素拡散シミュレータではブシネスク近似に基づく熱対流計算のアナロジーで解く試みを行っており、外国人特別研究員が研究している浮力噴流の研究は直接有用になってくると考えている。ブシネスク近似に基づく熱対流計算のアナロジーで水素拡散を解く試みは定量的にも明るい見通しが立ってきたので、この検証を精力的に行っている。これと並行して研究室で開発したADVENTURE_sFlowでの領域分割法を用いた大規模解析も可能になったので、モデルの規模を従来の10万自由度程度の小規模から100万さらには1000万自由度規模と規模を2桁大きくした研究を進め、計算精度の確認が大きく前進した。さらに現在のアプローチの限界を見極める意味でも圧縮性を考慮した水素拡散モデルの検討も別途開始した。水素の市民社会への普及には安全・安心の確保と低コスト化が課題である.この課題解決の手段の一つとして高度な解析技術を必要としないCFDの解析手法の開発が待たれている.解析結果を可視化することにより安全対策の提言が容易になり,理解もされやすくなる.その結果,過剰な安全対策が避けられ,大幅な低コスト化も期待できる.固体高分子形燃料電池の作動圧力は低圧であること,燃料電池自動車の高圧部からの漏洩でも車内及び車外への漏洩は低圧であることから,市民社会に近い所における水素の漏洩は低圧で低速が多いと考えられる.低圧に限定すればCFD解析は少し容易になる.ブシネスク近似に基づく熱対流計算のアナロジーで水素拡散を解く試みは定量的にも明るい見通しが立ってきたので,この検証を精力的に行った.これと並行して研究室で開発したADVENTURE_sFlowでの領域分割法を用いた大規模解析も可能になったので,モデルの規模を従来の10万自由度程度の小規模から100万さらには1000万自由度規模と規模を2桁大きくした研究を進め,計算精度の確認が大きく前進した.さらに現在のアプローチの限界を見極める意味でも圧縮性を考慮した水素拡散モデルの検討も行った.研究員は,これに加えて独自の立場からブシネスク近似が成り立たない場合の浮力噴流の研究や境界層理論にもとづく研究を精力的に行い英文のResearch ReportのPublicationsにリストアップされている多くの論文をまとめた.
フラクタルおよびパーコレーションの概念を用いた溶液の混合状態と相分離過程の研究

近年、フラクタルやパーコレーションの概念は、不規則系の構造の表現の一つとして様々な分野で用いられている。本研究の目的は、X線小角散乱から始め、二成分溶液系において臨界点にいたる過程がこれらの概念で表されるか否かを検討し、溶液の混合状態の表現として新たな概念の導入の可能性を探るものである。報告者は、転任したてのため、このテーマを行うための実験装置を現有していない。したがって、本研究を行うためのX線小角散乱装置の製作と、前任大学で測定したデータをこのテーマに沿って見直すことの二本立てで行った。まず、実験装置の立ち上げを完了した。製作した装置は以下のとおりである。LiF単結晶を高さ方向および横方向両方に湾曲させ、ポイント・フォーカスの集光を兼ねたモノクロメータを製作した。また、X線の通過する部分はすべて真空系とした。測定の効率を考慮して、PSPCを用いた一次元検出方式を採用している。以前収集したアセトニトリル水溶液系をサンプルとして、フラクタル次元解析を行った。この水溶液系は、アセトニトリルのモル分率にして38%、温度-1°Cに上部臨界点を有する。様々な濃度の溶液において、それぞれ25°C、6°C、0°Cの温度で測定したX線小角散乱強度データを用いた。クラスターの成長に伴いマスフラクタルと解釈できる次元が増加していく様が見いだされた。しかし、今回用いたデータはライン・フォーカス方式で収集されたデータであり、縦分散の効果が完全には除去できていない。今回たちあげた装置を用いて、精度の良い強度データを収集することが今後の課題として残った。
Ia遺伝子導入トランスジェニックマウスの系統化と遺伝的モニタリング

(1)BALB/cマウス由来のE^d_d遺伝子を導入されたC57BL/6トランスジェニックマウスを継代・維持すると共に,ヘテロ接合体どうしを交配させ,ホモ接合体のトランスジェニックマウスを作製した.ホモ接合体か否かは正常B6マウスとの交配実験により確かめた.(2)ヘテロ接合体の状態で継代・維持されているトランスジェニックマウスについて,いくつかの世代から選び出されたマウスについてその導入されたE^d_d遺伝子のコピー数をサザンハイブリダイゼーション法にて測定した.その結果,各世代に於て導入されている遺伝子のコピー数は約20コピーであり,このE^d_d遺伝子は比較的安定して子孫に伝達されることが明らかにされた.またその遺伝子産物の細胞表面における発現量を蛍光抗体法を用いて測定した.その結果,細胞表面における発現量も各世代のマウスに於てほぼ一定していることが明らかにされた.(3)E^d_dトランスジェニックマウスのE^d_d遺伝子産物は正常のBALB/cあるいは(BALB/c×E6)Fマウスに比べて大量に存在することがノザンハイブリダイゼーション法にて明らかにされた.この大量のE^d_d遺伝子産物が内因性のA_B遺伝子産物と会合して細胞表面に発現されるか否かを検討した. ^<3E>Sメチオニンで標識されたトランスジェニックマウスの脾細胞を可溶化し, A_B分子に対して反応するモノクローナル抗体で免疫沈降させ2次元電気泳動法にて解析すると,正常のE^d_d分子と同一の場所にスポットがみられた.これは,今までに報告されていないアイソタイプが混合したIa分子がin vivoにおいて存在している可能性を示唆するものである.(4)ホモ接合体E^d_dトランスジェニックマウスとBALB/cマウスを交配させFマウスを作製し,それをBALB/cマウスに戻し交配することによりH-2dのハプロタイプを有するトランスジェニックマウスを得た.このマウスに発現されるIa分子の構造と機能を解析する予定である.(1)BALB/cマウス由来のE^d_d遺伝子を導入されたC57BL/6トランスジェニックマウスを継代・維持すると共に,ヘテロ接合体どうしを交配させ,ホモ接合体のトランスジェニックマウスを作製した.ホモ接合体か否かは正常B6マウスとの交配実験により確かめた.(2)ヘテロ接合体の状態で継代・維持されているトランスジェニックマウスについて,いくつかの世代から選び出されたマウスについてその導入されたE^d_d遺伝子のコピー数をサザンハイブリダイゼーション法にて測定した.その結果,各世代に於て導入されている遺伝子のコピー数は約20コピーであり,このE^d_d遺伝子は比較的安定して子孫に伝達されることが明らかにされた.またその遺伝子産物の細胞表面における発現量を蛍光抗体法を用いて測定した.その結果,細胞表面における発現量も各世代のマウスに於てほぼ一定していることが明らかにされた.(3)E^d_dトランスジェニックマウスのE^d_d遺伝子産物は正常のBALB/cあるいは(BALB/c×E6)Fマウスに比べて大量に存在することがノザンハイブリダイゼーション法にて明らかにされた.この大量のE^d_d遺伝子産物が内因性のA_B遺伝子産物と会合して細胞表面に発現されるか否かを検討した. ^<3E>Sメチオニンで標識されたトランスジェニックマウスの脾細胞を可溶化し, A_B分子に対して反応するモノクローナル抗体で免疫沈降させ2次元電気泳動法にて解析すると,正常のE^d_d分子と同一の場所にスポットがみられた.これは,今までに報告されていないアイソタイプが混合したIa分子がin vivoにおいて存在している可能性を示唆するものである.(4)ホモ接合体E^d_dトランスジェニックマウスとBALB/cマウスを交配させFマウスを作製し,それをBALB/cマウスに戻し交配することによりH-2dのハプロタイプを有するトランスジェニックマウスを得た.このマウスに発現されるIa分子の構造と機能を解析する予定である.
放射線ばく露ヒト造血幹細胞における放射線誘発白血病発症機構の解明

本研究では造血幹細胞としてヒト胎盤/臍帯血から高純度にCD34陽性細胞を分離精製し,ヒト造血幹細胞の放射線影響に関与する遺伝子及びその発現に至るシグナル伝達を明らかにすることを目的とした.造血サイトカイン非存在下では2 Gy X線照射後にRB/E2FやEst、p53などの発がんに関係した発現調節の他、C/EBPなどの発生に関連した発現調節経路が亢進していた一方で、放射線防護効果を発揮するサイトカインの組み合わせ(遺伝子組換えヒトTPO + IL3 + SCF)による培養では、CD44シグナル伝達の特異的な亢進が認められた。ヒト造血幹細胞の放射線応答に対するCD44シグナルの重要性が示唆された。全ての血球を産生する「造血幹細胞」は、多分化能と自己複製能を有する生体の恒常性維持に必須の細胞であるが、その高い増殖能ゆえに放射線の標的細胞となる。造血幹細胞への放射線ばく露により細胞障害や細胞老化が起こり、場合によっては白血病発症に至ることがげっ歯類による動物実験で明らかにされている。これらをヒトで検証する事は不可能であるが、放射線と白血病発症との間に強い因果関係がある事は被ばく者などの疫学研究から明らかである一方、ヒトでの発症機構の詳細は不明のままである。本研究では、臍帯血からヒト造血幹細胞を分離精製し、放射線ばく露後の遺伝子発現変化や細胞から放出される様々な液性因子や小胞粒子の解析から、ヒト白血病発症過程の解明を目的とした。本研究の成果は、造血幹細胞への放射線被ばくがどの程度まで造血系へのリスクとなるかを含めた各個体のリスク評価確立への可能性が期待される。平成28年度は、本研究に用いるヒト臍帯血由来造血幹細胞採取源であるヒト臍帯血の安定的な確保に尽力し、社会福祉法人・函館共愛会共愛会病院から定期的にヒト臍帯血を頂いた。ヒト臍帯血から高度に分離精製したCD34抗原陽性細胞をヒト造血幹細胞として-150°Cフリーザーに保存し、現在も引き続きサンプルを回収している。本年度は、計画当初に予定していたヒト臍帯血から各種解析に十分な造血幹細胞数を確保出来なかったため、分離精製した造血幹細胞は今後の解析に向けサンプル貯蔵に努めた。この点を補う目的で、0.55Gy照射マウスの血清中に検出されるマイクロRNA(miRNA)の網羅的解析を行い、照射線量に依存して増減するmiRNAを見出した。現在白血病発症との関連性について報告されている遺伝子との関連性について解析を進めている。全ての血球を産生する造血幹細胞は,多分化能と自己複製能を有する生体の恒常性維持に必須の細胞であるが,その高い増殖能ゆえに放射線の標的細胞となる.造血幹細胞への放射線ばく露により細胞障害や細胞老化が起こり,場合によっては白血病発症に至ることがげっ歯類による動物実験で明らかにされている.これらをヒトで検証する事は不可能であるが,放射線と白血病発症との間に強い因果関係がある事は被ばく者などの疫学研究から明らかである一方,ヒトでの発症機構の詳細は不明のままである.本研究では造血幹細胞としてヒト胎盤/臍帯血から高純度にCD34陽性細胞を分離精製し,ヒト造血幹細胞の放射線影響に関与する遺伝子及びそのシグナル伝達を明らかにすることを目的とした.無血清培地環境下で2 GyのX線を照射したヒト造血幹細胞を造血サイトカイン存在又は非存在下で6時間培養し,cDNAマイクロアレイ及びKeyMolnetを用いて遺伝子発現プロファイルを解析した.造血サイトカイン非存在下ではX線照射後にRB/E2FやEst, p53などの発がんに関係した発現調節の他,C/EBPなどの発生に関連した発現調節経路が亢進していた一方で,放射線防護効果を発揮するサイトカインの組み合わせ(遺伝子組換えヒトTPO + IL3 + SCF)による培養では,CD44シグナル伝達の特異的な亢進が認められた.更に,未刺激の造血幹細胞とサイトカイン非存在下でX線照射した造血幹細胞では,細胞分化や細胞寿命を調節しているCDK inhibitorシグナル伝達やFOXOシグナル伝達などの発現調節の関与が特徴的であった.今後は,造血幹細胞への放射線被ばくによる造血系へのリスク及びその発症機構に関連するシグナル経路に着目した更なる解析が必要である.本研究では造血幹細胞としてヒト胎盤/臍帯血から高純度にCD34陽性細胞を分離精製し,ヒト造血幹細胞の放射線影響に関与する遺伝子及びその発現に至るシグナル伝達を明らかにすることを目的とした.造血サイトカイン非存在下では2 Gy X線照射後にRB/E2FやEst、p53などの発がんに関係した発現調節の他、C/EBPなどの発生に関連した発現調節経路が亢進していた一方で、放射線防護効果を発揮するサイトカインの組み合わせ(遺伝子組換えヒトTPO + IL3 + SCF)による培養では、CD44シグナル伝達の特異的な亢進が認められた。

引き続きヒト臍帯血からヒト造血幹細胞としてCD34抗原陽性細胞を高度に分離精製し貯蔵していくとともに、各種サイトカインコンビネーション刺激下においてヒト造血幹細胞の培養を行い,可変型連続照射装置を用いた低線量放射線の連続ばく露(200 mGy)及び高線量放射線の単回ばく露(3000 mGy)ののち、培養過程で一部の細胞を取り出し、各段階の細胞について以下の6項目を検討する。1白血球、赤血球、巨核球及び混合系前駆細胞由来コロニー形成能の測定、2未分化抗原、サイトカイン受容体及び分化抗原等の細胞表面抗原の発現解析、3アポトーシスやオートファジィ等細胞死、老化関連分子の評価、ミトコンドリア機能の解析、4微小核及びコメットアッセイ、γH2AX等の測定によるDNA損傷及び修復機構評価、5細胞及び培養溶液中から抽出したRNAを用いたmiRNA,mRNAなどのマイクロアレイ解析及びリアルタイムPCRによる絶対定量解析、6細胞及び培養溶液中から抽出したタンパク質を用いた質量分析さらに、本研究の最終課題である放射線ばく露後の造血幹細胞の遺伝子発現変化及び細胞から放出される様々な液性因子や小胞粒子解析によるヒト白血病発症過程の解明のため、以下の2点に関する最終評価へと繋げる。さらに本研究の延長上にあるヒト造血幹細胞の血球産生能に対する放射線のリスク予測法の確立へと向けた示唆を得る。また、得られた成果を国内外の専門学会での発表や論文投稿による情報発信を積極的に行う。1ヒト造血システムに対して障害が危惧される線量レベルはどの程度か.またその場合の放射線感受性の個体差はどの程度か、2ヒト造血幹細胞の血球産生能に対する放射線障害や白血病発症を規定する因子は何か29年度が最終年度であるため、記入しない。放射線科学29年度が最終年度であるため、記入しない。
ヒト皮膚の部位特異性を決定する遺伝子クラスター解析による限局性皮膚症の病態解明

申請者等は本研究課題で、同一個体の体幹と足底皮膚での遺伝子発現の違いを、トランスクリプトーム解析により網羅的に検討した。獲得免疫を担う樹状細胞の一つであるランゲルハンス細胞は、ランゲリンとCD1aのRNA発現量から足底では体幹皮膚の1/26と1/18に減少していることが確認できた。逆に足底皮膚に豊富に分布する樹状細胞が存在することもCD膜抗原の発現量の定量により明らかにできた。自然免疫を担う抗菌ペプチドでるS100A8/S100A9や、Dermcidinは、足底では体幹より10倍以上と高発現していた。これらは、皮膚マイクロバイオームの部位による差異を説明する事象であると思われる。掌蹠の皮膚の厚さ、中でも角層の肥厚を説明しうる特異的な角化機序としては、セリンプロテアーゼであるKallikrein-related peptidase (KLKs)と、これを可逆的に阻害するKazal型セリンプロテアーゼインヒビター(SPINKs)、不可逆に阻害するセルピンスーパーファミリー(SERPINs)がある。各遺伝子群の発現バランスによって掌蹠型の角化が調節されると考えられる。体幹と足底の皮膚では15種のKLKsのうち、KLKs活性化カスケードのイニシエーターであるKLK5を含めKLK7, KLK8, KLK9, KLK11の5種類が高発現していた。KLKsの発現は足底皮膚では体幹部と比較し総体的に低下していた。SERPIN型インヒビターとしては、長島型掌蹠角化症の原因遺伝子であるSERPINB7の発現には体幹と掌蹠で差はみられなかった。しかしながらSERPINB3, B4, B12,B13は体幹よりも足底で数倍10数倍高発現していることが確認できた。1)同一患者の掌蹠と躯幹の皮膚の検体数を増やし、掌蹠独自の角層の形成と肥厚、有棘層の角化の方向性、基底膜の接着能の増強、荷重による過角化機序、色素細胞が乏しい理由など、掌蹠の皮膚の特徴を説明しうる遺伝子発現の違いを拾い上げる。2)口唇部皮膚の手術検体の余剰部分からRNAを抽出し、同様のトランスクリプトーム解析を行う。毛包と汗腺を欠き、不全型の粘膜角化に寄与する蛋白や、表皮型免疫よりも免疫寛容に強く働く、粘膜型免疫に寄与する樹状細胞や分子群が差分化されると考える。3)頭部皮膚の手術時の余剰部分からRNAを抽出し、同様のトランスクリプトーム解析を行い、毛包型角化に寄与する分子を拾い上げる。4)粉瘤の検体を多数集め同様の解析を行う。この結果を病理学的な、表皮嚢腫(epidermal cyst)と外毛根鞘嚢胞(trichilemmal cyst)間で差分し、顆粒層を形成する遺伝子群や毛包形成に機能する分子群を決定する。1)に関しては検体数も増え、十分なサンプル数のトランスクリプトームデータの解析を行なっている。2)3)4)に関しては口唇、頭部皮膚、粉瘤の検体数が少なく十分なサンプル数でトランスクリプトーム解析が行えていない。平成30年度は下記の件、研究を行う計画であった。この結果を病理学的な、表皮嚢(epidermal cyst)と外毛根鞘嚢胞(trichilemmal cyst)間で差分し、顆粒層を形成する遺伝子群や毛包形成に機能する分子群を決定する。

掌蹠の皮膚の厚さ、中でも角層の肥厚を説明しうる特異的な角化機序としては、セリンプロテアーゼであるKallikrein-related peptidase (KLKs)と、これを可逆的に阻害するKazal型セリンプロテアーゼインヒビター(SPINKs)、不可逆に阻害するセルピンスーパーファミリー(SERPINs)がある。各遺伝子群の発現バランスによって掌蹠型の角化が調節されると考えられる。体幹と足底の皮膚では15種のKLKsのうち、KLKs活性化カスケードのイニシエーターであるKLK5を含めKLK7, KLK8, KLK9, KLK11の5種類が高発現していた。KLKsの発現は足底皮膚では体幹部と比較し総体的に低下していた。SERPIN型インヒビターとしては、長島型掌蹠角化症の原因遺伝子であるSERPINB7の発現には体幹と掌蹠で差はみられなかった。しかしながらSERPINB3, B4, B12,B13は体幹よりも足底で数倍10数倍高発現していることが確認できた。1)同一患者の掌蹠と躯幹の皮膚の検体数を増やし、掌蹠独自の角層の形成と肥厚、有棘層の角化の方向性、基底膜の接着能の増強、荷重による過角化機序、色素細胞が乏しい理由など、掌蹠の皮膚の特徴を説明しうる遺伝子発現の違いを拾い上げる。2)口唇部皮膚の手術検体の余剰部分からRNAを抽出し、同様のトランスクリプトーム解析を行う。毛包と汗腺を欠き、不全型の粘膜角化に寄与する蛋白や、表皮型免疫よりも免疫寛容に強く働く、粘膜型免疫に寄与する樹状細胞や分子群が差分化されると考える。3)頭部皮膚の手術時の余剰部分からRNAを抽出し、同様のトランスクリプトーム解析を行い、毛包型角化に寄与する分子を拾い上げる。4)粉瘤の検体を多数集め同様の解析を行う。この結果を病理学的な、表皮嚢腫(epidermal cyst)と外毛根鞘嚢胞(trichilemmal cyst)間で差分し、顆粒層を形成する遺伝子群や毛包形成に機能する分子群を決定する。1)に関しては検体数も増え、十分なサンプル数のトランスクリプトームデータの解析を行なっている。2)3)4)に関しては口唇、頭部皮膚、粉瘤の検体数が少なく十分なサンプル数でトランスクリプトーム解析が行えていない。平成30年度は下記の件、研究を行う計画であった。この結果を病理学的な、表皮嚢(epidermal cyst)と外毛根鞘嚢胞(trichilemmal cyst)間で差分し、顆粒層を形成する遺伝子群や毛包形成に機能する分子群を決定する。
ハンドル体結び目と不変量

ハンドル体絡み目とは、3次元球面に埋め込まれたハンドル体のことです。ハンドル体結び目は成分数1のハンドル体絡み目のことです。種数1のハンドル体結び目は通常の結び目に対応しています。つまり、ハンドル体結び目は結び目の自然な一般化になっています。本研究の研究成果は次にあげる通りです:multiple conjugation quandleと呼ばれる部分的に群の構造を持ったカンドルに対して(コ)ホモロジー理論が導入されました。本年度に実施した研究の成果は、昨年度に構築したホモロジー・コホモロジー理論をより精密に補正したことです。この研究はScott Carter氏と齋藤昌彦氏との共同研究です。本年度に実施したホモロジー・コホモロジー理論の精密な補正は、高次元のfoamを複数回の射影を用いることによって平面上に射影し、その組み合わせ構造を観察することで得られました。高次元のホモロジー・コホモロジー理論を正確に構築することはホモロジー・コホモロジーを一般的な見地から扱うために重要です。高次元にも対応できるホモロジー・コホモロジー理論を構築したことが研究の成果です。このような研究成果を得るためには、科学研究費補助金を用いて出張を行い、研究会議で国内外の研究者と議論を交わすことが重要でした。特に、本研究に関連した研究会議として「ハンドル体結び目とその周辺VI」が10月に開催されました。この研究会議では、谷山公規氏による空間グラフの様々な同値関係についてのまとめ、安原晃氏によるMilnor不変量とlink homotopyのまとめ、水澤篤彦氏によるハンドル体絡み目の絡み数とneighborhood homotopyの研究、大城佳奈子氏によるtwisted Alexander polynomialの具体的な計算の提示がありました。またハンドル体結び目に関連した低次元トポロジーの重要な問題についても話し合われました。本年度に実施した研究の成果は、multipleconjugation quandleを導入し、ホモロジー・コホモロジー理論を構築したことです。multiple conjugation quandleは研究代表者と岩切雅英氏、大城佳奈子氏、張娟姫氏との共同研究で導入したG-family of quandlesのassociated quandleを拡張した代数構造であり、幾何的には頂点での彩色条件を最大限に緩めたものということができます。ハンドル体結び目や空間グラフの不変量を組み合わせ的に状態和として得るためには、交点と頂点にダイアグラムの基本変形から定まる条件を満たす重みを付けることが必要です。この組み合わせ的な条件をホモロジー・コホモロジー理論に取り込まれる形で再現したことが研究の成果です。特に、本研究に関連した研究会議として「ハンドル体結び目とその周辺V」が10月に開催されました。この研究会議では、張娟姫氏によるG-family of quandlesのまとめ、鄭仁大氏による結び目とハンドル体結び目のアレキサンダー不変量の違いの研究、井上歩氏によるアレキサンダー多項式と彩色数の関係の研究、北山貴裕氏によるハンドル体結び目のねじれアレキサンダー不変量の研究がありました。本年度に実施した研究の成果は、multipleconjugation quandleのホモロジー・コホモロジー理論の具体的な例においてコサイクルの構成を試み、Nosaka cocycleを用いた場合にコサイクルが分離していることを明らかにしました。この研究はKokoro Tanaka氏との共同研究です。また、Akira Masuoka氏との共同研究でユニモジュラー・ホップ代数から得られるハンドル体結び目の不変量に関する論文を発表しました。特に、本研究に関連した研究会議として「ハンドル体結び目とその周辺VII」が10月に開催されました。この研究会議では、Seiichi Kamada氏による分岐ブレイドとqualgebraについての研究、Ishii Atsushiによるハンドル体絡み目とハンドル体組み紐の研究、Tomo Murao氏によるbind mapについての研究、Yoshiro Yaguchi氏によるひねる操作「Hurwitz action」の紹介と具体的計算についての研究、Kokoro Tanaka氏による多重共役カンドルのホモロジーについての研究がありました。低次元トポロジー研究実績の概要で述べたように研究成果が出ている。本研究に関連する研究会議も滞りなく開催されている。研究実績の概要で述べたように研究成果が出ている。補正したホモロジー・コホモロジー理論に対して,具体的な例の構成とコサイクルを見つけます。

研究を効率よく進めるために関連する研究会議やセミナーなどに参加し情報収集を行います。また研究成果の発表を通して、研究成果に対するフィードバックを得ることで、研究成果をさらに洗練させます。このように適切に出張を行うことに加えて、研究会議「ハンドル体結び目とその周辺VII」を開催します。研究会議の開催によって人的交流を促進し研究者同士の活発な議論を引き起こすことで、深みのある研究を加速させます。multipleconjugation quandleはホモロジー・コホモロジー理論を持つ適切な代数構造であることが分かったが、実際に不変量を構成するためには具体的な例の構成とコサイクルを見つけることが必要です。multiple conjugation quandleの中の重要なクラスであるG-family of quandlesのassociatedquandleを手掛かりに例とコサイクルを構成し、ハンドル体結び目の鏡像の判別などに役立てます。このように適切に出張を行うことに加えて、研究会議「ハンドル体結び目とその周辺VI」を開催します。国内外で開催される研究会議への参加旅費、研究会議「ハンドル体結び目とその周辺VI」開催のための会議費、トポロジーセミナーや研究会議での講演依頼時における講演謝金など、本研究を円滑に進めていくために科学研究費補助金を使用します。
ポジトロン標識マルチトレーサーを用いた神経再生移植治療の生体内評価の研究

本年度は再生の阻害因子である炎症を評価すべく、末梢性ベンゾジアゼピン受容体をターゲットとしたミクログリア・イメージングによる評価を試みた。本研究においてはPETによるミクログリア・イメージングの方法を確立し、その妥当性有用性を検討した。エタノール注入モデルラット、lateral fluid percussionモデルラットを作製し、それぞれin vitro autoradiography、免疫染色、microPETによるPET studyを行った。エタノール注入モデルでは、主に末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現部位、ミクログリアとアストロサイトの挙動に関して免疫染色を中心に検討した。障害部位では早期より両者の増加を認めるが、その増加はミクログリアに顕著であった。このミクログリアの増加は7-14日目をピークとしていた。また、ミクログリアが障害部位を取り囲むように移動してゆく現象を認めた。末梢性ベンゾジアゼピン受容体はミクログリアとアストロサイト両者において発現を認めたが、その発現はミクログリアが主体であった。以上のことから、障害後の末梢性ベンゾジアゼピン受容体をイメージングすることで、ミクログリアの活性をイメージングできることがわかった。Lateral fluid percussionモデルでは、エタノール注入モデルと同様に病理組織学的検討を行い、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の発現部位と時間的・空間的挙動を検討し、エタノール注入モデルとほぼ同様な結果を得た。microPETによるPET studyを[11C]DAA1106を用いて行い、同一固体において障害部位で7日目をピークに集積を認め、徐々に低下していく過程を示すことができた。同時に行ったFDG-PETでは、同一部位において糖代謝の低下を認めた。また、本年度はパーキンソンモデル動物の行動とPETの相関に関して更なる検討を行った。まず、パーキンソンモデルマーモセットの作成とその行動評価・in vivo, in vitroでのpre-,post-synaptic changeを免疫染色・autoradiography, PETにておこなった。特に行動評価ではUPDRSをmodifyしたもののほかに、24時間の自発運動量測定の有用性を明らかにした。(北米神経科学会・Neurotrauma Researchにて発表)また、スナネズミを用いたパーキンソンモデルを作成し、そのドパミン受容体とトランスポーターの評価を行動実験とあわせて行い、スナネズミにおいてもラット同様の有用な片側パーキンソンモデルが作成できることを明らかにした。続いて各種新規トレーサーの動態評価や正常動物での脳内分布の検討を行った。特にmicro PETを用いて、サル、ラット、マウス、スナネズミ等におけるsubstance P受容体の分布を明らかにし、またパーキンソン病モデル動物におけるsubstance P受容体の変化を明らかにした(一部Synapseにて発表)。このことは、今後パーキンソン病患者における欝症状の解明と治療に寄与しうる可能性を示唆したものであった。また、末梢性ベンゾジアゼピン受容体の測定を用いたミクログリアイメージングをin vivo, in vitroにておこない、micro PETを用いることで、in vivoでの経時的評価を可能にした。これにより、ミクロダリアをイメージすることで、神経損傷のイメージングを可能にすることを明らかにした(脳神経外科学会他で発表)。
『古逸叢書』の編纂・出版およびそのテキストの研究

『古逸叢書』は近代以降の中国古典籍研究と影印出版事業に大きな影響を与えたのにも関わらず、その編纂、出版及びテキストの問題については個別の研究を除き、系統的な研究は未だになされていない。本研究はこの懸案の解明を目指すものであり、地道な文献考証を通してこの歴史・思想・文学などの多分野にわたる基本文献の本文の性質を正確に捉え、底本選択、校勘作業におけるさまざまな問題を十分把握しないままで研究の基本テキストとして使用するといった現状を是正するものである。なお、本叢書の編纂と出版とに対する日本人学者の協力や刊刻技術に関する考察は、近代日中両国間の学術史の新発見へと誘うものであり、重要な意義を有している。平成26年度において、まず『古逸叢書』の編纂・出版に関わる基本的な資料を調査、収集し、黎庶昌・楊守敬の著作、古典籍の題跋、書簡、日本人との筆談の記録、総理衙門に提出した公文書、『古逸叢書』の出版事情を知る人物の記録および現存する『古逸叢書』の校正刷りなどの関係情報について調査を行い、『古逸叢書』の編纂・出版の過程についていままで不明瞭の点の解明に勤めた。資料蒐集のため、国外においては、中国国家図書館、北京大学図書館、上海図書館、台湾故宮博物院、台北の国家図書館、中央研究院歴史語言研究所、国内においては東京、名古屋、京都、大阪、仙台、福岡の各所蔵機関で調査を行い、紙焼きなどの研究上有用な資料を収集した。また、『古逸叢書』所収の各書のテキストの書誌調査を行い、26点中の6点のテキストを、その底本といわれるものや、他のテキストおよび校正刷りとの校合作業を行った。これらの作業により、当時の校訂作業の手法を分析し、校勘時に使われた底本・校本について明らかにした。明治十年代に清国公使黎庶昌および公使館随員の楊守敬が東京で刊行した『古逸叢書』は、近代以降における中国古典籍の影印叢書の先駆的な存在であり、そのテキストは現在でも古典籍校勘・翻刻の際の底本や校本として利用されている。しかしながらその編纂・出版の過程、所収の各書の底本やテキストの性質について、十分に研究されてはいない。本研究は文献学の方法を用いてこれらの問題を考察し、その編纂・出版における日本人学者・印刷業者との交流、校訂作業の手法、編纂・校勘の際に使用された底本・校本、さらには刊刻・印刷の際の技術的な特徴などについて系統的に考察・分析を行い、その本文の性質を正確に把握し、この近代における古典籍研究史上の一大懸案の解明を目指すものである。平成27年度は前年度の作業に続き、『古逸叢書』所収の各書のテキストの書誌調査を行い、そのテキストを、底本といわれるものや、他のテキストと校合し、本文の異同の分析を通して校訂作業の手法を分析し、当時使われていた底本・校本の解明を努めた。叢書本の他に、単行本・補修本などについての調査を行い、叢書本と単行本、初印本と補修本、後印本などの具体的な流布情況について検討した。前年度に引き続き中国国家図書館、北京大学図書館および日本国内の東京、名古屋、京都、大阪などにある図書館・文庫での文献調査を行い、一部の関連成果について、学会発表あるいは研究論文の形で発信した。平成27年度はほぼ計画通り資料調査を行い、また、諸本の書誌調査・校合作業を進めてきた。また、明治時代の木版印刷技術の改良や写真術の利用などについも研究を進み、一定の成果を得ることができた。南京図書館、揚州印刷博物館および台北の国家図書館、台湾故宮博物院での文献調査は実施できなかったが、平成28年度に行う予定である。本年度は、前年度に引き続き、『古逸叢書』所収の各書のテキストの校合作業に努め、底本・校本を解明すると同時に、『古逸叢書』全体の校勘方法および本文の性質の分析を行った。また、日本で印刷された初印本と中国で刷られた補修本・後印本とを比較し、料紙、墨、摺印技術などの相異について調査を行った。これらの研究調査の成果の一部は「羅振玉旅日時期刊印日蔵漢籍事業概観」(「学人羅振玉研討会」、中国・旅順博物館、2016.10.19-20)、「和刻本的変種:流入中国的日本版片及其印本」(「東亜古代雕版印刷与版片国際学術研討会」、中国・揚州雕版印刷博物館、2016.10.21-26)、「十九世紀日蔵漢籍回流与広州」(「2016