hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ポリグルタミンの凝集体形成、細胞障害におけるストレス蛋白質の役割

さらに、ポリグルタミンの凝集体形成はHsp104に依存するが、その依存度はポリグルタミンの長さや発現量によって異なることを示した。すなわち、ポリグルタミンの長さが短いと、その凝集体形成はHsp104に大きく依存するが、逆にポリグルタミンの長さが長くなる程、Hsp104がなくても凝集体形成をいくらかは起こすようになった。この事実を利用して、hsp104欠損変異株に長いポリグルタミンと短いポリグルタミンを共発現させると、本来hsp104欠損変異株では起きない短いポリグルタミンの凝集体形成が、促進される事を明らかにした。そして、その促進効果は、長いポリグルタミンの凝集体によるseedingの効果である事を示した。従って、Hsp104の役割がseedingによって部分的に置き換わられる事から、ポリグルタミンのアミロイド形成におけるHsp104の作用点が、アミロイドの"核"形成ではないかと考えられた。発症の原因となる長いポリグルタミンは、コンフォーメーションの変化における分子シャペロンへの依存度が低いので、単独でもコンフォーメーションの変化を起こし得ると考えられる。そして、この長いポリグルタミンがいったんアミロイド凝集体を形成してしまうと、これが種となり、本来分子シャペロンの助けなしでは起きない短いポリグルタミンの凝集体形成も、促進されてしまうと考えられる。
食道がん化学療法に影響を与える腸管内microbiomeの網羅的解析

Microbiomeとは人体に生存する微生物群とその遺伝子および代謝活性の総称である。人体においては13兆のヒト細胞が130兆の細菌細胞と共存しており、また、2万のヒト遺伝子が、500万800万の細菌遺伝子、いわゆるmicrobiomeと共存しており、化学療法の効果にも影響を及ぼすことが示唆されている。食道がんにおける化学療法はある一定の効果が得られるものの、治療効果を予測するバイオマーカーの発見は急務と言える。食道がんにおける化学療法前後のmicrobiomeの変化、および特定のmicrobiomeが化学療法の治療効果につながるという仮説は我々のオリジナルであり独創的である。
Subtraction Tomographyの研究

初年度:フィルム断層から暈け像を除去する手段としてフィルム断層像をA/D変換しSubtractionを行うことを考案した。基礎実験として円軌道断層によってファントムを撮影した。即ち1回転360度の円軌道でサンプリング間隔を実験によって10度が適当であることが分った。つまり360/10=36枚の単純写真から1枚の断層像を合成するアルゴリズムを開発した。第2年度:subtractionの方式を改良した。即ち36枚のA/D変換したデジタル単純写真から1枚の断層写真を合成するときに10度毎にデータを処理するアルゴリズムとした。そのことによって断層像作製が高速化した。と同時に円軌道断層のみでなくどのような軌道の断層にも対応出来るようになった。第3年度:本法を生体に応用するための欠点として被曝線量が多いことがあげられる。それを改善した。即ちテレビカメラとVTRを組み合わせて被曝線量の軽減とデータ収集の更に高速化することをはかった。更に将来は薄層重ね合わせ法にすることによって鮮明な画像が得られることを証明したのでこれを応用し解像力の向上と1回転で収集したデータから任意の深さの層の断層像が得られるアルゴリズムを開発する(極く近い将来実現可能の見通しである)。それを改善した。
歌唱訓練を導入した英語発音指導法の効果

本研究では、日本人学習者を対象とした英語の発音指導における歌唱訓練の有効性を調査することによって、歌唱訓練を導入した英語音声表現教育の可能性を検証することを目的とし、次のような予備的実験を行った。20名の被験者を指導方法の異なる2つのグループに分け、グループAでは、ある英語の歌詞を音読を中心として朗読訓練を行い、グループBでは、グループAと同一の指導者によって同一の英語の歌詞をメロディーにのせて歌う訓練を集中的に一定期間行った。指導期間の直前と直後に各被験者の英語朗読を録音し、その音声を複数のネイティブ・スピーカーに5段階で評価させ、評価の伸びをグループ間において比較考察した。指導前に採取した被験者の音声の評価に基づいて行った等質性検定において、2つのグループは等質であることが判明した。評価の対象となった発音要素の項目は、母音・子音の発音、リズム、イントネーション、音のつながり具合、発話のスピード、全体的印象、などである。指導後の音声の評価を得たのち、指導前後の発音を比較した結果、両グループで全体的発音は上達していることが判明した。次に、グループ間で各項目における指導前後の発音の伸び率を比較したところ、リズム、音のつながり具合、スピード、全体的印象の項目において、歌唱訓練を行ったグループの方が音読訓練を行ったグループに比べて発音の伸び率が大きく、グループ間での差は、それぞれの項目において有意であった。また、母音・子音、すなわち、英語の単音の発音においては、両グループにおいて上達率に有意な差は認められなかった。以上の結果から、本研究においては、歌唱訓練は、英語発音指導において、英語のリズム、音のつながり具合、スピード、そして英語発話の全体的印象、すなわち、英語音声の超音節要素の訓練に、従来の音読指導よりも効果があるらしい、ということが確認された。
Chlamydia Pneumoniae感染と虚血性心疾患の関係に関する疫学研究

虚血性心疾患とChlamydia pneumoniae(C.pneumoniae)感染あるいは血清脂質など各要因間の関係を疫学研究により明らかにすることを目的とした。循環器疾患の治療を専門分野のひとつにしている秋田県内の一医療機関を対象として患者対照研究を行なった。急性冠症候群(Acute coronary syndrome, ACS)のIncidence caseを症例群(ACS群、男性31例)とした。コントロール群(男性62例)は、この医療機関に基本健康診査のために来院した者の中から、虚血性心疾患の既往がなく安静時の心電図が正常な者とした。入院時あるいは外来時に健康調査を目的とした質問票を用いて、高血圧症や糖尿病等の既往歴あるいは食生活や喫煙、飲酒に関して聞き取りを行なった。この研究の参加者からは同意を得ている。C.pneumoniae IgG抗体およびIgAの測定は、ELISA法にて行なった。統計解析には、SPSSを用いた。オッズ比(OR)および95%信頼区間(95%CI)を求め、p<0.05を有意差ありと判断した。虚血性心疾患とChlamydia pneumoniae(以下、C. pneumoniae)感染の関係に関する臨床病理学的研究の多くは、ほぼ一致した結論に達しており、冠動脈に粥状硬化を認める患者ではそれを認めない者に比較して、冠動脈にC. pneumoniae感染が高頻度に認められ、それらの頻度は粥状硬化に比例することが報告されている。欧米諸国の疫学研究からは、虚血性心疾患とC. pneumoniae感染の関連性について、肯定的な報告から否定的な報告までいろいろあり明確になっていない。しかしながら、我が国における虚血性心疾患とC. pneumoniae感染の関係に関する疫学研究はほとんどない。さらに、日本人と欧米人との間には虚血性心疾患に対するC. pneumoniae感染のリスクの相違があることも否定できない。本研究は、患者対照研究により虚血性心疾患とC. pneumoniae感染の関係について、冠動脈の狭窄程度や生活習慣因子も含め疫学的に検討することを目的としている。秋田県内の医療機関のうち1施設を対象とした。虚血性心疾患(心筋梗塞、不安定狭心症など)を患者群、検査目的のため来院した外来患者で冠動脈造影に異常のない者および当該施設で基本健康診査を受け安静時心電図が正常な者をコントロール群とした。初年度は、患者群84人、コントロール群80人であった。C. pneumoniaeのIgG抗体価およびIgA抗体価(ヒタザイムCニューモニエAb-IgG、日立化成、東京)の測定は、ELISA法にて行なった。IgG抗体陽性率に関して、患者群は50.0%、コントロール群Iは35.7%、コントロール群IIは40.7%であった。IgA抗体陽性率については、それぞれ56.0%、57.1%、40.0%であった。コントロール群IとHあるいは患者群の間に、IgG抗体陽性率およびIgA抗体陽性率について有意差は認められなかった。しかしながら、初年度においては症例数が少ないこともあるため、2年度以降症例数を増やし、さらに詳細な検討を行なっていく予定である。臨床病理学的研究では、虚血性心疾患とChlamydia pneumoniae(以下、C. pneumoniae)感染の関係についてほぼ一致した結論に達しており、冠動脈に粥状硬化を認める患者ではそれを認めない者に比較して、冠動脈にC. pneumoniae感染が高頻度に認められ、それらの頻度は粥状硬化に比例しているといわれている。一方、疫学研究では、虚血性心疾患とC. pneumoniae感染の関連性について肯定的な報告から否定的な報告までいろいろあり、明確になっていない。また、これら疫学研究の大部分は欧米人を対象にしたものであり、日本人を対象にした疫学研究はほとんどないのが現状である。そこで、本研究では、患者対照研究により、虚血性心疾患とC. pneumoniae感染の関係について日本人を対象として検討することを目的とした。秋田県内のA医療機関の入院および外来患者を対象として本研究を行った。A医療機関で冠動脈造影を受け、冠動脈の狭窄が確認されたIncidence caseを患者群とした。一方、対照群はコントロールI群とコントロールII群のダブルコントロールとした。冠動脈造影検査のために来院し、検査の結果、冠動脈に異常のなかった者をコントロールI群とし、当該施設で基本健康診査を受け安静時心電図が正常であった者をコントロールII群とした。

2年間における男性症例数は、患者群333人、コントロールI群91人、コントロールII群47人であった。C. pneumoniaeのIgG抗体価およびIgA抗体価(ヒタザイムC.ニューモニエAb-IgG/ヒタザイムC.ニューモニエAb-IgA、日立化成工業、東京)をELISA法により測定した。C. pneumoniaeのIgG抗体陽性率は、患者群で46.9%、コントロールI群で51.9%、コントロールII群で57.4%であった。C. pneumoniaeのIgA抗体陽性率はそれぞれ62.5%、60.2%、53.2%であった。C. pneumoniaeのIgG抗体陽性率およびIgA抗体陽性率は、患者群とコントロールI群およびコントロールII群の間に、有意な差は認められなかった。しかし、結論を導くには、対照群の症例数が十分ではない。最終年度には症例数を増やし、さらに詳細な検討を行なっていく予定である。虚血性心疾患とChlamydia pneumoniae(以下、C.pneumoniae)感染の関係に関する臨床病理学的研究の多くは、ほぼ一致した結論に達しており、冠動脈に粥状硬化を認める患者ではそれを認めない者に比較して、冠動脈にC.pneumoniae感染が高頻度に認められ、それらの頻度は粥状硬化に比例することが報告されている。欧米諸国の疫学研究からは、虚血性心疾患とC.pneumoniae感染の関連性について、肯定的な報告から否定的な報告までいろいろあり明確になっていない。しかしながら、我が国における虚血性心疾患とC.pneumoniae感染の関係に関する疫学研究はほとんどない。さらに、日本人と欧米人との間には虚血性心疾患に対するC.pneumoniae感染のリスクの相違があることも否定できない。本研究は、患者対照研究により虚血性心疾患とC.pneumoniae感染の関係について、冠動脈の狭窄程度や生活習慣因子も含め疫学的に検討することを目的としている。秋田県内の医療機関のうち1施設を対象とした。この医療機関に入院した急性冠症候群で、冠動脈造影を行い診断が確定したincidence caseを、患者群、当該施設で基本健康診査を受け、過去に虚血性心疾患の既往がなく安静時心電図が正常な者をコントロール群とした。C.pneumoniae IgG抗体とIgA抗体(日立化成工業、東京)の測定は、ELISA法にて行なった。患者群は31例、コントロール群は62例であり、いずれも男性を対象とした。ACS群とコントロール群を比較した結果、C.pneumoniae抗体陽性率については、IgG抗体、IgA抗体ともに有意な結果は得られなかった。しかしながら、BMI、喫煙、LDL-CおよびHDL-Cに関してはロジスティック回帰分析を行なった結果、統計的に有意差が得られた。
単一の抗原特異的T細胞クローンを用いた自己免疫疾患治療法の開発

「単一の抗原特異性を持つクローンを用いて自己免疫疾患を治せるか」というテーマに取り組む。免疫学が発展したにもかかわらず、自己免疫疾患の治療法は相変わらずステロイド剤を主軸とした「抗原非特異的」な免疫抑制法である。最近、関節リウマチには抗サイトカイン抗体が著効を示してはいるが、これも「抗原非特異的」な免疫抑制法である。このような戦略は、感染症が起こりやすくなるなどの副作用が問題になっている。自己免疫疾患では、自己抗原が標的となっている。抗原が不明なケースが多いが、中には抗原が明確な疾患もある。同じ抗原を認識できるTregを患者に投与することができれば、これらの自己免疫疾患を治せる可能性があると考えた。関節リウマチモデルであるskgマウスの標的抗原の一つがリボゾームタンパクRPL23aであること、この抗原に特異的なTCR(R7-39)をだすヘルパーT細胞の単一クローンで関節炎を誘導できることが坂口志文らにより報告されている。そこで本研究では、R7-39を発現するTregを作製し、そのTregがskg関節炎を「予防できるか」さらに「治療できるか」をテストする。具体的には、IL2KO/CTLA4Tg/skg/R7-39Tgマウスを作製し、そのCD4T細胞を用いる。また再生医療への応用を見据えてIL2KO/CTLA4Tg/skg/R7-39TgマウスからiPS細胞を作製し、そのiPS細胞から再生したCD4T細胞の治療効果もテストする。申請者らは坂口らとは良好な共同研究関係を築いており、本研究に関してもすでに坂口研の協力の元に進めてきている。i)すでに坂口らからskgマウスを入手済みで、skgマウスとRagKOを掛け合わせたマウスも作製済みである(関節炎誘導R7-39-Th細胞を作製するのに必要:skg/Ragマウス骨髄細胞にR7-39のTCR遺伝子を発現させてRagKOマウスに移入してR7-39-Th細胞を作る)。ii)iのマウスを用いて、R7-39-TCRレトロジェニックマウスで関節炎が発症することを確認できている。iii) IL2KO/CTLA4Tgマウスも入手済みであり、このマウスを使ったR7-39-TCRレトロジェニックマウスの作製にすでに取りかかっている。iv)マウスiPS細胞からCD4T細胞の作製に成功した。以上のように計画は順調に進んでいる。最終年度である31年度は単一の抗原特異性Tregが関節炎モデルマウスで治療あるいは予防効果を示すかどうかを検証する。すなわち、R7-39を発現するヘルパーT細胞(R7-39-Th)の投与で関節リウマチを発症するモデルに、R7-39を発現するTreg(R7-39-Treg)を投与することで予防あるいは治療効果が見られるかどうかを検証する。R7-39-Tregは、IL-2KO/CTLA4Tgマウスを用いて、以下i)ii)iii)の要領で作製する。i)IL-2KO/CTLA4Tg/skgマウスを作製する。ii) IL-2KO/CTLA4Tg/skgマウスの骨髄前駆細胞にR7-39を発現させ、RagKOマウスに移植する。iii)生成したCD4T細胞を人工Tregとして用いる。こうして作製したTregとしての機能を関節リウマチモデルの系で調べる。R7-39-Thを用いた関節リウマチモデルは既報に準じて作製する。すなわち、skgマウスとRagKOマウスを掛け合わせたマウスの胎仔肝臓前駆細胞にR7-39をレトルウイルスで導入し、RagKOマウスに移入してT細胞に分化させ、関節リウマチの発症を誘導する。この関節リウマチ発症マウスに、上記i)ii)iii)で作製したR7-39-Tregを輸注し、治療効果を見る。治療効果が認められなかった場合は、R7-39-Tregを先に移入し、その後R7-39-Thを移入し、予防効果の有無を調べる。

また再生医療への応用を見据えてIL2KO/CTLA4Tg/skg/R7-39TgマウスからiPS細胞を作製し、そのiPS細胞から再生したCD4T細胞の治療効果もテストする。申請者らは坂口らとは良好な共同研究関係を築いており、本研究に関してもすでに坂口研の協力の元に進めてきている。i)すでに坂口らからskgマウスを入手済みで、skgマウスとRagKOを掛け合わせたマウスも作製済みである(関節炎誘導R7-39-Th細胞を作製するのに必要:skg/Ragマウス骨髄細胞にR7-39のTCR遺伝子を発現させてRagKOマウスに移入してR7-39-Th細胞を作る)。ii)iのマウスを用いて、R7-39-TCRレトロジェニックマウスで関節炎が発症することを確認できている。iii) IL2KO/CTLA4Tgマウスも入手済みであり、このマウスを使ったR7-39-TCRレトロジェニックマウスの作製にすでに取りかかっている。iv)マウスiPS細胞からCD4T細胞の作製に成功した。以上のように計画は順調に進んでいる。最終年度である31年度は単一の抗原特異性Tregが関節炎モデルマウスで治療あるいは予防効果を示すかどうかを検証する。すなわち、R7-39を発現するヘルパーT細胞(R7-39-Th)の投与で関節リウマチを発症するモデルに、R7-39を発現するTreg(R7-39-Treg)を投与することで予防あるいは治療効果が見られるかどうかを検証する。R7-39-Tregは、IL-2KO/CTLA4Tgマウスを用いて、以下i)ii)iii)の要領で作製する。i)IL-2KO/CTLA4Tg/skgマウスを作製する。ii) IL-2KO/CTLA4Tg/skgマウスの骨髄前駆細胞にR7-39を発現させ、RagKOマウスに移植する。iii)生成したCD4T細胞を人工Tregとして用いる。こうして作製したTregとしての機能を関節リウマチモデルの系で調べる。R7-39-Thを用いた関節リウマチモデルは既報に準じて作製する。すなわち、skgマウスとRagKOマウスを掛け合わせたマウスの胎仔肝臓前駆細胞にR7-39をレトルウイルスで導入し、RagKOマウスに移入してT細胞に分化させ、関節リウマチの発症を誘導する。この関節リウマチ発症マウスに、上記i)ii)iii)で作製したR7-39-Tregを輸注し、治療効果を見る。治療効果が認められなかった場合は、R7-39-Tregを先に移入し、その後R7-39-Thを移入し、予防効果の有無を調べる。
プラントライフサイクル情報を利用した安全運転管理システム開発の実現

既存の運転支援システムは対象プロセス固有に設計されたものが多く,プロセス安全管理に関する知識,情報の整理,メンテナンス等において多くの課題を残している.本研究課題では,リスク管理情報をプラントの安全運転管理に利用する方法を提案した.1.安全運転管理システムの知識ベースとなるプラントライフサイクルにわたるリスク管理情報の獲得と整理方法を検討した.また,従来の設計論理表現モデルを拡張し,安全対策の候補,及び最終的な設計結果とその選定根拠の関連を記述するモデルを提案するとともに,簡易的な情報検索システムを提案した.この方法を基に,リスク管理情報を安全運転管理支援に利用するための方法について検討し,プラント運用時の変更管理支援を目的としたフレームワークとプラント異常発生時にオペレータによる操作決定を支援する方法を提案した.2.従来提案されている符号付き有向グラフを用いた異常診断法,プロセス制御に関する情報を用いた異常時対応操作決定について,各々の出力情報を基に一連の安全運転管理を支援するための情報の流れを見直し,運転支援システムのあるべき姿をまとめた.また,know-howとして蓄積された異常診断や対策立案に関する知見を他の情報と組み合わせ,さらに,類似のトラブル事象を参照することにより異常診断と対策立案の連携を支援する方法を提案した.その他,設計に関するデータ,現場で使われる用語集,ビューポイントなど整理したオントロジーなどを連携させることで,類似事象のトラブルレポートも活用できることを示した.3.バッチ制御の国際標準規格ISA-S88のモデルを基に,安全インターロックを基本構成要素としたバッチ制御システムのモジュール化を促すバッチプラント設計指針を示し,設計から実装までの各段階で必要となる情報を整理した.例題プラントのモデル作成を通じて,ISA-S88のプラント設計,及び実装への利用について検証した.既存の運転支援システムは対象プロセス固有に設計されたものが多く,プロセス安全管理に関する知識,情報の整理,メンテナンス等において多くの課題を残している.本研究課題では,リスク管理情報をプラントの安全運転管理に利用する方法を提案した.1.安全運転管理システムの知識ベースとなるプラントライフサイクルにわたるリスク管理情報の獲得と整理方法を検討した.また,従来の設計論理表現モデルを拡張し,安全対策の候補,及び最終的な設計結果とその選定根拠の関連を記述するモデルを提案するとともに,簡易的な情報検索システムを提案した.この方法を基に,リスク管理情報を安全運転管理支援に利用するための方法について検討し,プラント運用時の変更管理支援を目的としたフレームワークとプラント異常発生時にオペレータによる操作決定を支援する方法を提案した.2.従来提案されている符号付き有向グラフを用いた異常診断法,プロセス制御に関する情報を用いた異常時対応操作決定について,各々の出力情報を基に一連の安全運転管理を支援するための情報の流れを見直し,運転支援システムのあるべき姿をまとめた.また,know-howとして蓄積された異常診断や対策立案に関する知見を他の情報と組み合わせ,さらに,類似のトラブル事象を参照することにより異常診断と対策立案の連携を支援する方法を提案した.その他,設計に関するデータ,現場で使われる用語集,ビューポイントなど整理したオントロジーなどを連携させることで,類似事象のトラブルレポートも活用できることを示した.3.バッチ制御の国際標準規格ISA-S88のモデルを基に,安全インターロックを基本構成要素としたバッチ制御システムのモジュール化を促すバッチプラント設計指針を示し,設計から実装までの各段階で必要となる情報を整理した.例題プラントのモデル作成を通じて,ISA-S88のプラント設計,及び実装への利用について検証した.安全運転管理システム開発のために必要となる業務分析,及びシステム開発のためのプラットフォームを決めるとともに,まず安全運転管理のあるべき姿を検討し,必要な技術,サブシステムを個別に開発していくこととした.さらに,国内外における運転支援システム開発に関する調査・資料収集を行い,企業での取り組みや問題点について協議した.既に開発されているシステムは対象プロセス特有に設計されたものが多く,知識,情報の整理,メンテナンスにおいて多くの課題を残していることが明らかとなった.以下,個別の取り組み内容をまとめる.(1)安全運転管理のあるべき姿をまとめるために,過去の研究会等で作成されたアクティビティモデルを収集し,整理した.(2)製造業における情報システムとアクティビティの国際標準であるISA S95に関する調査を行い,安全運転管理システムにおけるサブシステムの切り分けに関する検討を行った.(3)知識ベースとしてプロセス設計情報を再利用するための情報の整理方法について検討した.論理に則した運転支援を行うためには,プロセス安全設計に関する論理情報を獲得,整理する必要があり,そのための基本設計論理モデルを提案した.知識ベースには,このモデルに従って表現されたプラント情報とプロセス設計論理情報を格納し,運転支援のための論理的根拠情報として利用する.(4)異常診断システムとして,プラントの安全性評価の際に検討された異常発生時シナリオを基に,危険グラフを作成し,これを異常発生原因の絞り込みに利用する方法を提案した.(5)バッチプロセスを対象とした場合の運転管理の在り方として,生産スケジューリングと異常時処理,及び設備管理スケジュール情報を統合管理するための環境について検討している.(6)開発を目指すシステムの検証のために必要となるバーチャルプラントとして,ダイナミックシミュレータ環境を導入した.プラントライフサイクル情報を用いた安全運転管理のあるべき姿についてまとめるとともに,リスク管理情報をプラントの安全運転管理に利用する方法を提案した.また,従来提案されている異常診断システムや操作決定支援システムの問題点を整理するとともに,統合的な安全運転管理システムを構築するための情報,データの内容,及び受け渡し環境,異常時の対策立案の考え方についての新たな知見を整理している.以下,個別の取り組み内容をまとめる.1.安全運転管理システムの知識ベースとなるプラントライフサイクルにわたるリスク管理情報の獲得と整理方法を検討した.

従来の設計論理記録モデルを拡張し,安全対策の候補,及び最終的な設計結果とその選定根拠の関連を記述するモデルを提案するとともに,簡易的な情報検索システムを提案した.また,リスク管理情報を安全運転管理支援に利用するための方法について検討した.一つの適用例としてプラント運用時の変更管理支援を目的としたフレームワークを提案した.2.統合的な安全運転管理支援システムを開発するために,従来提案されている符号付き有向グラフを用いた異常診断法,設計情報に基づく操作決定法,プロセス制御に関する情報を用いた異常時対応操作決定について,それぞれの出力情報を基に,一連の安全運転管理を支援するための情報の流れを見直し,問題点を整理した.これに対して,安全運転管理支援システムの位置付け(目的)を明確にし,緊急時にオペレータによる意思決定を支援する内容(操作内容,出力手段など)について検討した.次年度,この考え方をベースに安全運転管理システムの開発を試みる.3.バッチプラント制御の国際標準モデル(ISA-S88)を基に,安全インターロックをシステムの基本構成要素とした階層的なバッチシステムを構築することにより,柔軟性および安全性を実現するバッチプラント設計手法を提案した.1.プラント異常発生時にオペレータによる操作決定を支援するための安全運転支援システムを提案した.本支援システムでは,プラントライフサイクルにわたり検討され,アップデートされたリスク管理情報を基に,明示されたプラントの設計意図や操作手順の目的をオペレータに提示する.PVCバッチプロセスを例題プラントとして用い,提案する操作決定手順の有用性を確認した.2.様々な形態の異常発生に対して漏れなく,かつ効率良く安全管理を行うために,プラントで発生する事故,異常に対する防止対策を整理・分類した.これを基に,事故防止対策における運転支援システムの位置付けを明確にするとともに,運転支援システムとしてのあるべき姿を提案した.さらに,know-howとして蓄積された異常診断や対策立案のレポートとそれらの知見を他の情報と組み合わせることで,know-whyレベルの知識・情報として活用し,それを基に類似のトラブル事象を参照し,異常診断と対策立案の連携を支援する方法を提案した.異常診断と対策に関するデータベース,設計に関するデータベース,現場で使われる用語集,着目したい観点を整理したオントロジーなどを連携させることで,類似の事象のトラブルレポートを蓄積されたレポートの中から探索できるようになる.
microRNAによる骨髄由来抑制細胞の制御が及ぼす敗血症時免疫抑制病態の解明

(動物研究)ラットを用いた敗血症病態の動物モデルにおいて、リンパ組織、脾臓、血液中のmiRNA、MDSCcの遺伝子発現の経時的変化を網羅的に観察する。LPS投与により敗血症マウスモデルを作成し、経時的な以下の変化を観察する。miRNAの定量評価:敗血症ラットモデルから回収した脾臓、リンパ組織、血液マクロファージ内のmiRNAの発現を、次世代シーケンサーを用いて網羅的に解析した。b.次世代高速シーケンサーを用いた包括的miRNAのプロファイリング網羅的なmiRNA発現プロファイリング、未知のnon-cording RNA (miRNA/lincRNA)発現量の違いを定量評価でき、感度、正確性、再現性などにおいて従来のマイクロアレイより優れている次世代高速シーケンサーIon PGMTMシステムを使用して行った。ライブラリ調整(Ion Total RNA-seqキットを使用)→ビーズ調整(エマルジョンPCRを行い、DNA断片をビーズ上に増幅する。)→シーケンシング(エマルジョンPCR後のサンプルをマイクロチップに注入しIonPGMシーケンサにて塩基配列を検出し、miRNAの発現定量を行う。)→データ解析(Ion PGMシーケンサで選出したデータはTorrentサーバーに転送され、解析ソフト:Genomic Work Bench, CLCバイオ社を用いて解析した。)c.特定miRNAの検出と定量b.にて発現変化していたmiRNAから選別した特定のmiRNAをReal-Time PCR法を用いて定量し、発現の確認を行った。なお、我々は予備実験からmiRNA miR-211,-204,-106b,-346,-708などに注目している。mRNAの定量評価:脾臓及びリンパ組織からMDSCcをキット(Miltenyi Biotech社)により単離し、mRNA発現変化を、miRNA同様のプロトコールで、次世代シーケンサーを用いて網羅的に解析する。当初は初年度に、培養細胞に、miRNAの遺伝子導い入を行う予定にしていたが、動物研究が遅れて、次年度になった。次年度は、以下の実験プロトコールで研究を推進する予定である。(培養細胞研究)動物実験で、有意に上昇変化の変化のあったmiRNAを、マウスMDSCcにTransfectionし、その経時的な遺伝子発現の変化を次世代シーケンサーを用いて、mRNAを網羅的解析する。また、T細胞の機能抑制に影響を及ぼすとされるS100A8/A9, S100A12, arginase 1等の産生能の変化を解析する。次年度も、次世代シーケンサーによるmiRNAの遺伝子解析、細胞への遺伝子導入実験を行うので、それに必要な実験消耗品を購入する予定である。
口腔癌の浸潤能獲得に関わる因子の分子機構の解明と診断・治療への応用

腫瘍から生体を防御する免疫系において、細胞表面レセプター群が異物認識の最前線にあたることから、免疫系の機能制御にはこのリガンド分子認識機構の理解が欠かせない。これが解明され、疾患の発症機序が解明さることで、ワクチン療法と自己反応性T細胞や制御性T細胞を標的とした治療・発症予防への応用が可能となる。HLAは細胞膜上に存在する蛋白質で、抗原提示という免疫の初期ステップに重要な役割を果たしている。HLAに生じる人種差は、その病態とタイプを比較することで、より疾患特異的な分子構造の解析に繋げることが可能で、最終的に副作用の少ない分子標的治療薬の開発に繋がる。本年度は、HLA関連疾患の研究で世界的に有名な、Oxford大学P. Bowness教授の協力を得て研究を遂行した。私と共同研究者は、KIR3DL2CD3εを発現させたJurkutT細胞を作製し、このレポーター細胞がB27ダイマーを発現する細胞において、他のHLAクラス1細胞と比較し、IL2発現が亢進することを明らかにした。この相互作用は、KIR3DL2とB27ダイマーの結合を阻害する各種抗体やレコンビナント蛋白で抑制された。更に、この相互作用が炎症サイトカインの発現にいかに影響を及ぼすかを検討した。また、KIR3DL2陽性CD4^+T細胞ではIL17が過剰に発現することを明らかにした。これら炎症性物質の産生が病態惹起に繋がると考えられるので、B27ダイマーがKIR3DL2に結合するのを阻害する抗体の開発は治療薬として応用可能であると考えられる上、免疫破綻に関わる各種疾患の治療薬としても応用可能であると考えられる。私と共同研究者は既にB27ダイマーとKIR3DL2蛋白を独自に作りだす技術を開発した。今後、免疫細胞における各種HLAクラス1との結合機構について解明することで、この抗体を新しい治療薬開発へと応用できると考えている。高い浸潤能を有する口腔癌では、IFNによって誘導されるIFITM1の発現が亢進している。しかし、癌進展の制御を考えたとき、浸潤能だけでなく、浸潤・転移先での増殖能をいかに抑制するかが非常に重要な問題となる。癌の浸潤巣では炎症反応が亢進し、IFNが過剰に発現しているという報告は散見されるが、その直接的な増殖能の亢進については不明な点が多い。B細胞においてIFNによりRHAMMが誘導されて増殖能が亢進するという文献があり、口腔癌でもRHAMMが高率に発現亢進していた。IFITM1が癌の浸潤に寄与する因子とすると、RHAMMはその増殖に寄与する因子と考えられた。そこで顎顔面において、特に増殖能の亢進のみが著しい腫瘍、骨形成線維腫について検討を行うことにした。骨形成線維腫は硬組織の形成を伴い、線維性組織が腫瘍性に増殖する病変である。手術標本より培養した細胞を不死化させ、細胞株を樹立、マイクロアレイにて正常顎骨骨芽細胞と遺伝子発現を比較したところ、RHAMMが高発現していることを見出した。そこで、siRNAを用いてRHAMMをノックダウンしたところ、細胞増殖は抑制され、細胞周期G2/M期への進行も抑制された。また、RHAMMはERK1/2と相互作用し、ヒアルロン酸添加により誘導されるERK1/2のリン酸化に必要であることが明らかとなった。今回の研究で、RHAMMはERK1/2と相互作用することにより,細胞増殖に重要な役割を担っている可能性が示唆された。RHAMMは、口腔癌をはじめとする顎顔面の各種腫瘍の増殖因子と考えられ、臨床的に診断に応用できるだけでなく、治療ターゲットとして期待できる。高浸潤能口腔癌ではIFITM1の発現が亢進し、浸潤・転移に重要な役割を果たしていることをこれまでに明らかにした。しかし、審美的に重要な顎顔面の腫瘍では、特に増殖能の制御も重要な課題である。そこで、顎骨を膨隆させ増殖する良性腫瘍、骨形成線維腫に着目した。本腫瘍の発症原因は未だ不明である。同疾患部から不死化細胞株(HCF細胞)を樹立し、高発現遺伝子としてRHAMMを同定した。HCF細胞でRHAMMをノックダウンすると細胞の増殖能が著しく低下した。HCF細胞で各種シグナル伝達経路の検討を行い、HIA添加によりRaf/MEK/ERKリン酸化が亢進し、更にRHAMMがERKの活性化に直接関与すること、RHAMMがEGFRを活性化しシグナル伝達経路を加速することを明らかにした。続いて、RHAMMのノックダウンで細胞周期が停止しRHAMMの発現はM期の紡錘体に局在すること、HA添加でRHAMMが核内のTPX2と複合体を形成しAurora Aリン酸化に関与し細胞分裂を誘導することを明らかにした。更に、正常骨芽細胞にRHAMMを過剰発現させ、細胞の増殖と分化機構の破綻について明らかにした。また、内在性のRHAMMと過剰発現しているRHAMMの作用動態の違いを明らかにした。すなわち、正常細胞でのRHAMMの発現レベルは高くなく合成後細胞膜に局在し細胞膜上でのRHAMMはHAとCD44の結合を促進しシグナル伝達経路を活性化すること、過剰発現時のRHAMMは細胞内に一度プールされ多くは細胞質や核内に局在しERKのリン酸化に直接関与することを明らかにした。

実際の症例でも検討を行い、骨形成線維腫症例で特にRHAMMの過剰発現を認め、腫瘍組織中の線維芽細胞様細胞の多くにRHAMMの陽性所見を認めた。以上から、本研究は顎骨関連腫瘍における病態解明に寄与し、口腔外科学分野の発展に貢献するところが大きい。腫瘍から生体を防御する免疫系において、細胞表面レセプター群が異物認識の最前線にあたることから、免疫系の機能制御にはこのリガンド分子認識機構の理解が欠かせない。これが解明され、疾患の発症機序が解明さることで、ワクチン療法と自己反応性T細胞や制御性T細胞を標的とした治療・発症予防への応用が可能となる。HLAは細胞膜上に存在する蛋白質で、抗原提示という免疫の初期ステップに重要な役割を果たしている。HLAに生じる人種差は、その病態とタイプを比較することで、より疾患特異的な分子構造の解析に繋げることが可能で、最終的に副作用の少ない分子標的治療薬の開発に繋がる。本年度は、HLA関連疾患の研究で世界的に有名な、Oxford大学P. Bowness教授の協力を得て研究を遂行した。私と共同研究者は、KIR3DL2CD3εを発現させたJurkutT細胞を作製し、このレポーター細胞がB27ダイマーを発現する細胞において、他のHLAクラス1細胞と比較し、IL2発現が亢進することを明らかにした。この相互作用は、KIR3DL2とB27ダイマーの結合を阻害する各種抗体やレコンビナント蛋白で抑制された。更に、この相互作用が炎症サイトカインの発現にいかに影響を及ぼすかを検討した。また、KIR3DL2陽性CD4^+T細胞ではIL17が過剰に発現することを明らかにした。これら炎症性物質の産生が病態惹起に繋がると考えられるので、B27ダイマーがKIR3DL2に結合するのを阻害する抗体の開発は治療薬として応用可能であると考えられる上、免疫破綻に関わる各種疾患の治療薬としても応用可能であると考えられる。私と共同研究者は既にB27ダイマーとKIR3DL2蛋白を独自に作りだす技術を開発した。今後、免疫細胞における各種HLAクラス1との結合機構について解明することで、この抗体を新しい治療薬開発へと応用できると考えている。口腔癌の浸潤・転移機構を明らかにし、その制御を目的に研究を行ってきた。倫理・臨床上の問題も多く、IFITM1の臨床応用へは未だ至っていないものの、病態に関する研究を行う過程で、発展的に癌の進展に関わる他の遺伝子を発見し、その機能を解析し、顎骨関連性の他の腫瘍の病因解明に寄与し、非常に有意義な結果を得ている。
新規α-アミラーゼTVAIIの3次元構造情報に基づく基質認識機構の解明

好熱性放線菌(Thermoactinomyces vulgaris R-47)は,2つのα-アミラーゼ(TVA1,TVA2)を持つ。これらは,デンプンに加えて,通常のα-アミラーゼがほとんど加水分解できない環状オリゴ糖であるシクロデキストリン(CD)やα-1,4,α-1,4,α-1,6が規則正しく繰り返す多糖であるプルランも分解できるという興味深い基質特異性を持つ。これらの酵素の基質認識機構を解明するために,以下の研究・発表を行った。(1)TVA2がどのように基質を認識するかを明らかにするために,不活性型ミュータント酵素E354AおよびD325Nと基質との複合体のX線構造解析を行った。E354A/β-CD(3.0Å分解能),D325N/メチルβ-CD(3.5Å),D325N/マルトヘキサオース(3.5Å)の3種類の構造を決定することができ,Phe286がβ-CDを認識するのに極めて重要な役割を果たしていること,マルトヘキサオースは,CDとは,異なった配向で酵素に結合しているがわかった。さらに,TVA2のβ-CD認識機構を明らかにするため,Phe286を他の疎水性アミノ酸(Ala, Leu, Tyr, Trp)に置換したミュータント酵素を合成,反応動力学パラメータを測定し,X線構造からの知見を支持する実験データを得た。(2)Domain Nの役割を解明するため,Domain Nを削除したミュータント酵素を合成し,酵素活性が著しく低下することを見出した。(3)TVA2とアイソザイムであるTVA1について,1.6Å分解能で構造を決定した。TVA1も,TVA2同様,通常のα-アミラーゼと異なり,N末側にDomain Nを持っていたが,その配向は異なっていた。TVA2においては,Domain Nがダイマー形成に関わっているのに対し,TVA1においては,酵素全体の構造安定性に大きく関わっていることが解明された。これらは,デンプンに加えて,通常のα-アミラーゼがほとんど加水分解できない環状オリゴ糖であるシクロデキストリンやα-1,4,α-1,4,α-1,6が規則正しく繰り返す多糖であるプルランも分解できるという興味深い基質特異性を持つ。これまでに,TVA2の3次元構造をX線結晶解析により2.6Å分解能で明らかにし,TVA2は,通常のα-アミラーゼが持っていない120残基からなる新たなドメイン(Domain N)をN末側に持つこと,シクロデキストリンを認識できると考えられるPhe286残基を活性部位付近に持つこと,TVA2の活性部位は他のα-アミラーゼに比べて浅くプルランを認識するのに都合がよいことを明らかにしてきた。平成12年度においては,以下の研究および発表を行った。(1)TVA2がどのように基質を認識するかを明らかにするために,触媒活性残基であるGluをAlaに置換したミュータント酵素(E354A)を合成し,基質の1つであるβ-シクロデキストリン(β-CD)との複合体のX線データを放射光(SPring-8)を用いて収集し,3.0Å分解能で精密化を行い(R-factor=0.208),Phe286がβ-CDを認識するのに極めて重要な役割を果たしていることを確認した。

さらに,Phe286を他の疎水性アミノ酸(Ala,Leu)に置換したミュータント酵素を合成,反応動力学パラメータを測定し,X線構造からの知見を支持する実験データを得た。これらの成果は,J.Biochem.誌に発表した。また,低分解能(3.5Å)ながら,他のミュータント酵素(D325N)を用いて,α-1,4結合によりグルコースが6つ結合したオリゴ糖(G6)との複合体の構造もX線結晶解析により決定し,G6は,シクロデキストリンとは,異なった配向で酵素に結合している可能性が示唆された(Biosci.Biotechnol.Biochem誌に発表)。現在,高分解能での構造解析をすすめている。(3)TVA2とアイソザイムであるTVA1について,X線結晶解析に適した結晶化条件を決定したのでProtein and Peptide letters誌に発表した。好熱性放線菌(Thermoactinomyces vulgaris R-47)は,2つのα-アミラーゼ(TVA1, TVA2)を持つ。これらは,デンプンに加えて,通常のα-アミラーゼがほとんど加水分解できない環状オリゴ糖であるシクロデキストリン(CD)やα-1, 4, α-1, 4, α-1, 6が規則正しく繰り返す多糖であるプルランも分解できるという興味深い基質特異性を持つ。これらの酵素の基質認識機構を解明するために,平成13年度においては,以下の研究および発表を行った。(1)TVA2がどのように基質を認識するかを明らかにするために,触媒活性残基を置換したミュータント酵素E354AおよびD325Nを合成し,基質との複合体のX線データを放射光を用いて収集し構造解析を行った。E354A/β-CD(3.0Å分解能),D325N/メチルβ-CD(3.5Å),D325N/マルトヘキサオース(3.5Å)の3種類の構造を決定することができた。その結果,Phe286がβ-CDを認識するのに極めて重要な役割を果たしていること,マルトヘキサオースは,シクロデキストリンとは,異なった配向で酵素に結合しているのがわかった(J.Biochemistry誌,Biosci. Biotechnol. Biochem誌に発表)。現在,高分解能での構造解析を他の基質複合体も含めてすすめている。(4)TVA2とアイソザイムであるTVA1について,結晶化条件を決定し(Protein and Peptide letters誌に発表),1.6Å分解能で構造を決定した。TVA1も,TVA2同様,通常のα-アミラーゼと異なり,N末側にDomain Nを持っていたが,その配向は,大きく異なっていた。TVA2においては,Domain Nがダイマー形成に関わっているのに対し,TVA1においては,酵素全体の構造安定性に大きく関わっていることが解明された(J.Mol.Biol.印刷中)。
新たな自動皮質骨埋入型アンカースクリューを用いた顎整形力付与治療システムの考案

矯正治療において顎整形力を付与する各種装置は、歯を固定源とするため、歯性の変化が起こり、骨格性の改善が小さくなる欠点がある。本研究では、皮質骨部の維持力強化と歯周組織損傷の危険因子を排除した新規歯科矯正用アンカースクリューを開発し、骨内固歯を介さない上下顎骨にダイレクトな矯正力を負与したときの顎整形力の効果について検証し、顎整形力を安全かつ効果的に発揮できる新たな矯正治療システムを確立することを目的とした。本研究は、新規アンカースクリューを骨内固定源として用い、歯を介さない上下顎骨にダイレクトな矯正力を負与したときの顎整形力の効果について、実験動物による基礎的な検証を行った後、ヒトを対象とした臨床的効果を検証することで、顎整形力を安全かつ効果的に発揮できる新たな矯正治療システムを確立することを目的とする。本年度は、研究実施計画のうち、実験1である生体骨モデルによる自動皮質骨埋入型アンカースクリューのデザインの検討を行った。具体的には、ヒト生体骨モデルを用いて、新規アンカーのアウターとインナーの形状、最適な直径、長さと維持力の関係、適切な挿入トルクに必要なパイロットホールの大きさ、ネジ部のテーパー角度と植立に必要な推進力、ネジ部のピッチ幅など、デザインを検討を行った。その後、新規アンカースクリューについて、ウサギを用いて動物実験を行い、マイクロCT撮影によるボーンコンタクトの評価、圧縮試験機による機械的維持力の定量的評価を行った。これらの研究成果は、国際雑誌に投稿、受理された。本研究では、新規アンカースクリューを骨内固定源として用い、歯を介さない上下顎骨にダイレクトな矯正力を負与したときの顎整形力の効果について、実験動物による基礎的な検証を行った後、ヒトを対象とした臨床的効果を検証することで、顎整形力を安全かつ効果的に発揮できる新たな矯正治療システムを確立することを目的とする。本年度は、研究計画のうち検証2である動物実験による検証を行った。動物実験は2種用い、ウサギの大腿骨とビーグル犬との上下顎骨に新規アンカーを植立後、経時的に、新規アンカーの安定性、μCT撮影によるボーンコンタクトの評価、圧縮試験による物理的維持力、下顎骨に対する顎整形力の効果を評価した。現在、これらのデータを取りまとめ国際雑誌投稿準備中である。研究計画のうち検証2である動物実験による検証を進めており、ウサギの大腿骨に埋入した新規アンカーに関するデータを取りまとめ国際雑誌投稿準備中であるので、当初の研究実地目標はクリアできたと考えている。本研究では、私共の開発した皮質骨部の維持力強化と歯周組織損傷の危険因子を排除した自動皮質骨埋入型アンカースクリューを骨内固定源として用い、歯を介さない上下顎骨にダイレクトな矯正力を負与したときの顎整形力の効果について、実験動物による基礎的な検証を行った後、ヒトを対象とした臨床的効果を検証することである。顎整形力を安全かつ効果的に発揮できる新たな矯正治療システムを確立することを目的に、本年度は、研究計画のうち検証2である動物実験による検証を行った。本研究の結果、歯科矯正用アンカースクリューに本補助装置を併用して埋入した場合、アンカースクリュー単独に比べ、埋入後4週時で2.2-2.6倍、埋入後8週時で2.0-2.1倍と大きな維持力を示した。これは、スクリュー頭部に側方から加わった荷重は、スパイク部がスクリューの傾斜に抵抗する支点として作用したと考えられる。また、補助装置のワッシャー部が皮質骨表面から約1.5mm離れた位置にあることにより、スクリューの抵抗中心が、スクリュー単独で埋入した場合と比較して上方に変化し、スクリュー頭部に側方への荷重が加わった際に生じるモーメントが小さくなったためと考えられる。従って、より短く径の細いアンカースクリューと本補助装置を併用することにより、成功率の向上と歯周組織損傷のリスクを減少できる可能性が示唆された。本研究結果は、国際学会で発表し、さらに、現在、これらの内容について現在、国際雑誌投稿中である。ビーグルを用いた実験については現在実験を継続している。ヒトの皮質骨と海面骨と同様の厚み・硬度をもつ生体骨モデルを用い、自動皮質骨埋入型アンカーのデザイン検討、および、圧縮試験による維持力と強度の検討を行った。その後、ウサギを用いた動物実験により、アンカーを植立した周囲骨のマイクロフォーカスX線CT撮影による新規アンカーと皮質骨とのボーンコンタクトの三次元評価を行った。これらの研究成果は、国際雑誌に投稿、受理され、当初の研究実施計画の目標をクリアできたと考えている。今後は、現在進めているよりヒトの口腔内環境に近い条件のもと、ビーグル犬を用いた実験を進め、新規スクリューの安定性、炎症の有無、マイクロCT撮影によるボーンコンタクト、圧縮試験による維持力のなどを検討し、データを蓄積していく予定である。歯科矯正学分野

今後は、矯正力を新規アンカースクリューに付与した場合の維持力の評価、また、ビーグル犬を用いて口腔内に植立した場合の炎症の有無など、臨床応用に向けて安定性を評価していく予定である。具体的には、新規アンカー植立後、1週(主に初期固定の時期)、4週(初期固定+二次固定開始時期)、8週(二次固定完了の時期)、各時点で、マイクロフォーカスX線CT撮影による新規アンカーと皮質骨とのボーンコンタクトを非破壊的に三次元評価する。また、ビーグル犬に用いたアンカースクリューについて、サンプルブロックを作成し、圧縮試験機を用いて、物理的維持力を定量評価する予定である。動物実験の進行が予定より遅れ、スクリューの支出が少なかったため。国内の学会費用を旅費として計上していたが、スケジュールの都合で参加することができず、予定より旅費の支出が少なかったため。今後の使用計画としては、主に動物実験に必要な物品や施設費用およびこれまで蓄積したデータを海外の国際学会で発表する旅費として計上している動物実験における、消耗品に使用する予定である。
歴史人口学における人口指標算出およびグラフィック化のためのプログラム開発

本研究は,歴史人口学におけるグラフィックス,特に3次元グラフィックスの有用性を検証することを目的とした。その理由としては,歴史人口学者は日常的に暦年,年齢,人口指標という3変数を同時に扱うことが多いということ,およびグラフィックス機能が充実したソフトウェアが最近一般に出回ってきたことがあげられる。本研究では,山形県天童市内旧山家村に残された1760年から1870年にわたる110年あまりの宗門改帳を人口資料として使い,この村の人口構成,出生率および死亡率の算出および3次元グラフィックス化を行い,その歴史人口学的な意味を検討した。まず,人口構成の3次元グラフィックスは人口全体の趨勢を知るだけではなく,出生と人口移動のトレンドに関する予測を可能にする。出生に関しては,年齢別出生率と有配偶出生率の3次元グラフィックスを試みた。これらの図は,それぞれの人口指標の趨勢を把握することに役立つだけではなく,異常と思えるようなデータを見つけ出すことにも有効である。死亡については,死亡分布と年齢別死亡確率の3次元グラフィックスを作成した。これらの図から,あたかも鳥瞰図をみるように,死亡分布が手に取るようによくわかること,および男女間の微妙な死亡パターンの違いも見つけ出すことができる。これから判断すれば,人口指標の3次元グラフィックスは,従来の2次元表示に比べ,研究対象の人口学的特徴を把握するのに適している。このような3次元グラフィックスは,研究者にとってただ単に表示された人口指標を視覚的に捉えるということのみにとどまらず,それを観察することによって研究を次のステップへ導いてくれるというメリットもあり,今後の歴史人口学研究にもっと利用されるべきであるという結論に至った。