hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規動物実験モデルを用いた嚥下の中枢制御機構の解明

生体内のサブスタンスP濃度を上昇させる薬物は嚥下改善薬として着目されているが、嚥下運動に対する直接の効果は明らかでない。そこで、麻酔薬や標本自体の循環や呼吸機能に影響されずに脳幹の機能を解析できる除脳動物動脈灌流標本を用いて各種の嚥下改善薬の効果を調べた。嚥下は、下咽頭入り口にポリエチレンチューブを介して精製水を注入することで誘発した。その結果、生体内でサブスタンスPを増やすとされるイミダプリル塩酸塩あるいはシロスタゾールの投与で、迷走神経の嚥下様活動が非投与群に比べて有意に増大した。以上の結果から、イミダプリル塩酸塩、シロスタゾールの投与で、嚥下障害が改善される可能性が示唆された。嚥下は延髄に存在する嚥下の中枢パターン形成機構(CPG)によって制御されると考えられるが、呼吸・循環中枢と部位的に重なることなどから実験操作が難しく、嚥下のCPGの実態は不明であった。そこで今年度は、心臓移植時に行われる体外循環法を適用した除脳ラット灌流標本を用いて、その基本的特性の確認と、灌流液の二酸化炭素濃度を変化させた時の呼吸活動と舌骨下筋群の活動の関連性を調べる目的で実験を行った。実験には生後3-4週齢のWistarを用い、イソフルレン麻酔下にて横隔膜直下で下半身を離断し、上丘の前端で除脳を行った。次いで下行大動脈の断端からカテーテルを挿入し、送液ポンプを用いて人工脳脊髄液を灌流した。灌流液は室温下で95% O2-5%CO2混合ガスで曝気し、膠質浸透圧調整剤および抗凝固剤を加えた。実験は31°Cの温度環境下で行った。コントロールでは、横隔神経の吸息性活動とほぼ同期して上喉頭神経および舌骨下筋群を支配する第1から第2頸神経(C1-2)から神経活動が記録された。CO2濃度を上昇させると、呼吸頻度は0。32Hzから0。27Hzに減少した。また、吸息に一致した横隔神経、上喉頭神経およびC1-2活動の振幅は、それぞれ20.6%、11.1%、26.3%に増大した。また、横隔神経活動に対してC1-2の活動がより先行した(コントロール:0.28秒、CO2濃度上昇:0.83秒)。このような変化はCO2濃度を変えずにO2濃度を低下させたガス(90% O2-5% CO2)を用いた場合は観察されなかった。以上の結果から、生後3-4週齢の除脳ラット灌流標本においてCO2濃度を上昇させpHを変化させると、呼吸頻度の低下および舌骨下筋群の活動開始タイミングが早まることが明らかになった。このような変化は、高CO2濃度負荷時の呼吸パターンの変化に対応していると考えられる。嚥下は延髄に存在する嚥下の中枢パターン形成機構(CPG)について、今年度は昨年度に行った除脳ラット灌流標本を用いた高CO2濃度負荷時の呼吸活動と舌骨下筋群の活動の関連性を調べる実験を継続するとともに、運動ニューロンの活動性の調節機構をスライス標本を用いて調べた。生後3-4週齢のWistarラットを用いてイソフルレン麻酔下にて、横隔膜直下で下半身を離断し、上丘の前端で除脳を行い、下行大動脈の断端からカテーテルを挿入し、送液ポンプを用いて人工脳脊髄液を灌流し、除脳ラット灌流標本を作製した。高CO2濃度負荷を行うと頸神経、舌下神経、上喉頭神経および反回神経の活動が呼気相にも出現し、その中では反回神経の活動が一番遅れることが明らかとなった。また、高CO2濃度負荷によって呼息筋である肋間神経の活動が上昇し、その持続時間は、頸神経活動の持続時間と有意の正の相関があることが明らかとなった。運動ニューロンの活動性の調節機構については、新生ラット脳幹スライス標本を用いて実験を行った。咬筋運動ニューロンからパッチクランプ記録を行い、スライス標本にケージドグルタミン酸を投与し、レーザー光を照射してグルタミン酸を局所的に解離して咬筋運動ニューロンの樹状突起に誘発されたグルタミン酸応答の、セロトニン(5-HT)投与による変調を解析した。5-HTあるいは5-HT2A受容体刺激薬を投与すると、グルタミン酸応答の振幅が増大し、5-HT2A/2C受容体拮抗薬で5-HTの増強効果は抑制された。5-HTによる増強効果は、NMDA型グルタミン酸受容体の拮抗薬投与で抑制されたが、AMPA型グルタミン酸受容体の拮抗薬の投与では抑制されなかった。以上の結果から、5-HTはMMN樹状突起上の5-HT2A受容体を介してNMDA型受容体の活性化に影響し、グルタミン酸性入力を増強することが示唆された。本研究において正常動物に近い状態で機能する除脳ラット灌流標本の作製が必須である。本除脳ラット灌流標本の状態を評価するためには、すでに多くの報告がある呼吸の報告と比較することが最も確実な方法と言える。

本年度は、昨年度に続いて除脳ラット灌流標本に適切な状態で呼吸が誘発されているかについて二酸化炭素濃度を上げた時の変化などを指標に評価を行い、CO2濃度上昇により、呼吸頻度の低下および舌骨下筋群の活動が呼息相から出現するとともに活動量が上がるという学術的に価値ある知見が得られるとともに、適切な状態で機能する除脳ラット灌流標本の開発に成功した。その成果をPLOS ONE誌に投稿し、現在、修正中である。嚥下の実験モデルの開発が遅れているため、嚥下のパターン形成機構を先取りして解析する意味で、閉口筋活動の変調メカニズムを脳幹スライス標本によって解析した。その結果、セロトニンが5-HT2A受容体を介してNMDA受容体の活性を増大させ、閉口筋運動ニューロンの樹状突起のグルタミン酸応答を増強していることが明らかとなった。現在、免疫電顕を用いて樹状突起上のNMDA受容体と5-HT2A受容体の分布を検索するとともに、5-HT2A受容体を介するNMDA受容体のキネティックスを変調させる細胞内機構を検索中である。したがって本研究課題はおおむね順調に進展していると評価できる。除脳ラット灌流標本を用いて、延髄に存在する嚥下の中枢パターン形成機構(CPG)について調べるため、今年度は除脳ラット灌流標本で嚥下の誘発を試みた。生後3-4週齢のWistarラットを用いて、イソフルレン麻酔下にて、横隔膜直下で下半身を離断し、上丘の前端で除脳を行い、下行大動脈の断端からカテーテルを挿入し、送液ポンプを用いて人工脳脊髄液を灌流し、除脳ラット灌流標本を作製した。口腔から下咽頭入り口まで外径0.9 mmのポリエチレンチューブを挿入し、精製水を10 ml/minの速度で0.5-1 ml注入したところ、嚥下運動が見られた。筋弛緩薬であるvecuroniumを投与し、舌下神経、迷走神経、横隔神経から複合活動電位を記録したところ、注水後に、舌下神経と迷走神経にのみ1-10数回のバースト発射が見られた。この間、横隔神経の吸息活動は抑制された。また、薬剤による嚥下の誘発を試みるため、灌流液中にsubstance P (10-500 microM)を溶かして投与した。substance Pの投与で、舌下神経と迷走神経に10数回続くバースト発射がみられ、この間、吸息活動は抑制された。これらの結果より、下咽頭への注水やsubstance Pの投与で、除脳ラット灌流標本に嚥下を誘発できることが示された。このような標本で、延髄孤束核周辺の嚥下に関連する活動を調べるため、頭蓋骨を延髄背側全体が見えるように除去し、次いで、小脳を除去した。橋・延髄の部分に膜電位感受性色素であるDi-2-ANEPEQ (0.1 mg/ml)を滴下して染色し、嚥下による膜電位変化を調べているところである。昨年度は、まず、正常動物に近い状態で機能する除脳ラット灌流標本の作製を優先した。本除脳ラット灌流標本の状態を評価するために、すでに多くの報告がある呼吸の報告と比較し、除脳ラット灌流標本に適切な状態で呼吸が誘発されているかについて二酸化炭素濃度を上げた時の変化などを指標に評価を行った。その結果CO2濃度上昇により、舌骨下筋群の活動が呼息相から出現するとともに活動量が上がるという学術的に価値ある知見が得られ、その成果をPLOS ONE誌に発表した。このように、昨年までに適切な状態で機能する除脳ラット灌流標本の開発に成功したため、今年度は、嚥下の実験モデルの開発を試みた。その結果、下咽頭への注水と薬剤投与の2つの方法で、除脳灌流標本に嚥下を誘発することに成功した。また、除脳灌流標本を用いて、孤束核周囲を膜電位感受性色素で染色することにも成功し、現在、嚥下に伴う、橋、延髄での神経活動を解析中である。最終年度は、麻酔薬の影響を受けない除脳ラット灌流標本の特徴を生かして、口腔内への注水によって同標本に誘発された嚥下活動を指標に、嚥下障害の改善薬とされている種々の薬物の効果を調べた。
かびによる有用または新規ヒドロキシ脂肪酸の発酵生産

水酸化脂肪酸は、生分解性ポリマー、香料、医薬品などの工業原料として利用価値の高い化合物である。一方、カビFusarium oxysporumのチトクロムP450foxy(P450foxy)は、脂肪酸の亜末端(ω-1ω-3位)の水酸化酵素であり、P450還元酵素との融合酵素である。また、P450fokyは他のシトクロムP450に比べて反応が迅速だという特徴をもつ。昨年度までに、P450foxyを発現させた組み換え大腸菌を作成していた。そこで、この組み換え大腸菌を利用することによって、P450foxyを利用した各種脂肪酸誘導体の発酵生産技術を構築した。本技術によれば、たとえば、P450foxyを発現させた組み換え大腸菌を、ラウリン酸(LA)を添加した培地で培養することによって、11-hydroxy LA、10-hydroxy LA、9-hydroxy LAやこれらのα-ケトール誘導体を培地中に分泌生産できる。生産量の最も多かった11-hydroxy LAでは、150mg/l(収量25%)の効率で生産できる。また、炭素数1016の脂肪酸についてもそれぞれの(ω-1ω-3)monohydroxy脂肪酸に変換することが可能である。また、この技術は、廃油の有効利用法として応用できる。たとえば、各種食用油の廃油中の脂肪酸を14-hydroxyおよび13-hydroxyバルミチン酸に変換できる。本生産系は脂肪酸誘導体の生産系として有用である。本研究は、ヒドロキシ脂肪酸の微生物による発酵生産を目的とする。具体的には、第一に、P450foxy、P450foxyの改変体、新規に探索して得られた水酸化酵素を用いた発酵生産系を確立し、既にその有用性が示唆されているヒドロキシ脂肪酸の発酵生産を試みる。第二に、基質特異性の異なる新規な脂肪酸水酸化酵素をかびよりスクリーニングし、これを発酵生産に利用する。初年度はP450foxyをモデルとした実験系の構築と新規な酵素のスクリーニングを目標とする。(1)P450foxyの酵素学と既知の有用脂肪酸の生産。組み換え型P450foxyの様々な脂肪酸との反応性を評価した。また、反応生成物についてガスクロマトグラフ・ガスクロマトグラフ質量分析計などを用いて同定を試みた。一方、組み換え型P450foxyを用いてin vitroでヒドロキシ脂肪酸の合成に成功し、さらに現在、P450foxyを発現させた大腸菌によるヒドロキシ脂肪酸の発酵生産を試みる。(2)酵素の機能改変。タンパク質工学的手法を用いてP450foxyの基質特異性の改変を行い、異なる種類の有用脂肪酸の生産を試みる。研究の第一段階として、P450foxyのP450ドメインと、P450 reductaseドメインをそれぞれ大腸菌で大量調整することに成功した。その結果、両ドメイン間の共有結合が、P450foxyの高い反応性に必要であることが示された。(3)新規な有用脂肪酸生産菌のスクリーニング。新規な脂肪酸水酸化酵素活性を有するかびを自然界よりスクリーニングした。具体的には、培養した菌体の細胞内酵素活性の測定を行い選抜した。その結果、高lipoxygenase生産性のかびを得ることができた。また、未同定の脂質を生成する活性が高いかびを複数得ることができた。
全国１５万人の不登校・外国籍生徒のためのＹｏｕＴｕｂｅ版算数・数学コンテンツ開発

平成28年度文部科学省学校基本調査によると,不登校児童生徒数は,小学校で約3万1千人,中学校で約10万3千人にのぼるなど,約13万4千人の不登校児童生徒が存在する。この数を全体の児童生徒数と比較すると,小学校では約208人に1人,中学校では約33人に1人が不登校という計算になる。一方,文部科学省の「日本語指導が必要な児童生徒の受入状況等に関する調査」によると,公立学校に通う外国籍児童生徒数は年々増加傾向にあり,とりわけ,日本語指導が必要な児童生徒数は,平成16年度は約2万人であったのに対し,平成28年度は約3万4千人と急増している。本研究の目的は,教員養成課程に在籍する大学生,及び日本の大学に在籍する留学生が,小・中学校の不登校児童生徒,及び外国籍児童生徒を対象にした様々な場面での学習支援のための算数・数学コンテンツを開発することである。期待される効果としては,1)不登校児童生徒の自宅での個別学習支援,2)外国籍児童生徒の学校での個別学習支援,3)不登校児童生徒が適応教室で学習する際の指導員(臨床心理士)の指導支援,4)海外に在住する日本人児童生徒の翻訳・学習支援,5)教員養成課程に在籍する大学生のコンテンツ開発能力の向上などが挙げられる。平成30年度研究実績としては,中学校数学コンテンツ日本語版の開発と,中学校数学コンテンツの多言語翻訳版の開発を行った。併せて,専用のホームページを開設し,全国から無料で閲覧可能とした。現在,京都市,京都府長岡京市,神奈川県横浜市,静岡県浜松市各教育委員会などから問い合わせがあり,外国人の子どもの学習支援や不登校児童生徒のための学習支援に活用する動きが広まっている。平成30年度は,中学校数学2,3学年日本語版コンテンツを100本開発し,それぞれボルトガル語,中国語,ベトナム語,英語,韓国・朝鮮語に翻訳している。また,中学校数学練習用テキストを作成し,専用ホームページにおいて,いずれも無償で閲覧可能な環境を設定した。このように当初の計画通り進んでいることから,上記の自己点検による評価区分とした。平成31年度は,中学校数学日本語版コンテンツの,ポルトガル語,中国語,ベトナム語,英語,韓国・朝鮮語翻訳を完成する。開発したコンテンツは,検索用中学校数学版ホームページに掲載し,全国から無料で閲覧可能な環境を充実する。また,各教育委員会,学校現場の使用状況を調査し,動画コンテンツの改善に努める。平成29年度研究実績としては,小学校算数コンテンツ日本語版の開発,中学校数学コンテンツ日本語版の開発と,小学校算数コンテンツの多言語翻訳版の開発を行った。現在,島根県出雲市,福井県越前市,群馬県高崎市,神奈川県大和市,三重県四日市市,奈良県奈良市各教育委員会などから問い合わせがあり,外国人の子どもの学習支援や不登校児童生徒のための学習支援に活用する動きが広まっている。平成29年度は,小学校算数日本語版コンテンツを100本開発し,それぞれポルトガル語,中国語,ベトナム語,英語,韓国・朝鮮語に翻訳した。また,中学校数学第1学年日本語版コンテンツを40本開発した。検索用中学校数学版ホームページを開設し,全国から無料で閲覧可能な環境を設定した。これらはおおむね当初の計画通り進んでいることから,上記の自己点検による評価区分とした。

期待される効果としては,1)不登校児童生徒の自宅での個別学習支援,2)外国籍児童生徒の学校での個別学習支援,3)不登校児童生徒が適応教室で学習する際の指導員(臨床心理士)の指導支援,4)海外に在住する日本人児童生徒の翻訳・学習支援,5)教員養成課程に在籍する大学生のコンテンツ開発能力の向上などが挙げられる。平成30年度研究実績としては,中学校数学コンテンツ日本語版の開発と,中学校数学コンテンツの多言語翻訳版の開発を行った。併せて,専用のホームページを開設し,全国から無料で閲覧可能とした。現在,京都市,京都府長岡京市,神奈川県横浜市,静岡県浜松市各教育委員会などから問い合わせがあり,外国人の子どもの学習支援や不登校児童生徒のための学習支援に活用する動きが広まっている。平成30年度は,中学校数学2,3学年日本語版コンテンツを100本開発し,それぞれボルトガル語,中国語,ベトナム語,英語,韓国・朝鮮語に翻訳している。また,中学校数学練習用テキストを作成し,専用ホームページにおいて,いずれも無償で閲覧可能な環境を設定した。このように当初の計画通り進んでいることから,上記の自己点検による評価区分とした。平成30年度以降は,中学校数学1年生日本語版コンテンツを,それぞれポルトガル語,中国語,ベトナム語,英語,韓国・朝鮮語に翻訳する。また,中学校数学2年生日本語版コンテンツを開発する。開発したコンテンツは,検索用中学校数学版ホームページに掲載し,全国から無料で閲覧可能な環境を充実する。平成31年度は,中学校数学日本語版コンテンツの,ポルトガル語,中国語,ベトナム語,英語,韓国・朝鮮語翻訳を完成する。また,各教育委員会,学校現場の使用状況を調査し,動画コンテンツの改善に努める。翻訳のスタッフの日程の関係で,昨年度未翻訳のコンテンツ翻訳代を,次年度使用額に回し,本年度翻訳代として使用するため。最終年度において,学校や教育委員会での多言語対応版算数・数学コンテンツ使用の調査を予定しており,それらの交通費や分析費用に活用するために次年度額に繰り越して使用する予定である。多言語翻訳中学数学コンテンツのホームページであり,現段階では,中学校第1学年の数学コンテンツ47本がアップロードされている。今後,多言語に翻訳したコンテンツをアップロードしていく予定である。
肺と他臓器のエクソソームによる相互コミュニケーションに着目したCOPD病態の解明

2018年度はCOPD患者由来肺線維芽細胞エクソソームの分離解析を試みた。肺癌手術患者の切除肺検体から、非癌部分肺組織を切り出し、肺組織を酵素処理し得られた肺細胞より、接着様式の違いにより分離培養した初代培養肺線維芽細胞を樹立した。肺線維芽細胞はそれぞれ、非喫煙者肺癌患者、喫煙者non-COPD患者、およびCOPD患者の肺癌手術肺検体から樹立され比較検討ができるようにした。ヒト初代培養肺線維芽細胞を通常血清含培地で培養した後、培地を無血清培地の交換し、24時間培養、上清を回収した。上清を0.22 microMのフィルターにてろ過した後、培養上清を超遠心沈降法にてエクソソームが濃縮された浮遊液を回収した。回収した浮遊液の蛋白濃度をQubit蛍光光度計にて測定したあと、エクソソームの相対定量をExoscreen法により(Nature Commun 2014;5:3591)実施した。ヒト初代培養肺線維芽細胞にもCD9陽性のエクソソームが含まれていることを確認した。現在、上清中に放出されるエクソソームの放出量が、非喫煙者肺癌患者、喫煙者non-COPD患者、およびCOPD患者の肺癌手術肺検体から樹立された線維芽細胞群にて差異がないか解析中である。さらに、肺線維芽細胞由来エクソソームの生理活性がそれぞれの患者群で異なるかについて、培養ヒト気道上皮細胞に投与した。まず、分離したエクソソームを蛍光色素(PKH-67)によるラベリングを実施、取り込みを解析したところ、COPD患者由来肺線維芽細胞エクソソームはヒト上皮細胞に有意に取り込まれることが判明した。ヒト肺肺線維芽細胞をCOPD患者や対照者より樹立し、エクソソームの回収にも成功している。現在生理活性について解析中である。今後は分離されたエクソソームのmicroRNAなどの生理活性物質の解析を実施予定である。エクソソームの生理活性物質に対する網羅的発現解析が、次年度に実施することになったため、次年度使用額が生じた。次年度早期に実施する予定であり、実験予定全体には影響しない。
アセトバクター属細菌を用いたサイレージの新しい品質マネジメント

バンカーサイロで調製したトウモロコシホールクロップからAcetobacter pasteurianusを優勢菌として分離した。A. pasteurianusの存在はDGGEでも確認され、岡山だけでなく北京(中国)で行った実態調査でもA. pasteurianusが高頻度で検出された。分離株を用いてサイレージへの添加実験を行ったところ、A. pasteurianusはトウモロコシサイレージでのみ開封後の好気的変敗を遅延させた。この効果はBacillus spp.の生育抑制を介したものと考えられたが、変敗抑制効果は確実なものではなく、イタリアンライグラス、ギニアグラスおよび飼料イネサイレージではまったく見られなかった。また、開封後にA. pasteurianusを添加すると、トウモロコシサイレージでは好気的変敗が促進した。空気が侵入しやすいバンカーサイロはA. pasteurianusの好適な生息場所であり、嫌気貯蔵と好気的変敗の両者において、他の細菌群集と相互作用していることが明らかとなった。1.小規模サイロを用いたA. pasteurianusの添加実験A. pasteurianusをトウモロコシに添加し、パウチサイロに詰め込んで0.5および2ヶ月間貯蔵した。生菌数、発酵生成物および開封後の好気的安定性を調べてA. pasteurianusの有用性を明らかにするとともに、PCR-DGGEを行ってA. pasteurianusの生残性および他細菌との共生関係について検討した。サイレージは4回調製し、一部は8ヶ月間貯蔵して同様の調査を行った。A. pasteurianusの添加効果は4回中2回認められた。酢酸含量は最大で約3倍となり、開封時の酵母数は102cfu g-1程度まで減少した。効果が認められない場合は酢酸含量の増加や酵母数の減少がみられず、開封後の好気的変敗も抑制されなかった。PCR-DGGEで細菌群集を調べたところ、変敗抑制効果が認められたサイレージでのみA. pasteurianusのDNAが確認できた。対照サイレージの細菌群集は維持されており、A. pasteurianusは他細菌を駆逐することなく、付加的に共生するものと考えられた。2.実規模サイロにおけるA. pasteurianusの検出岡山県のコントラクタが調製したバンカーサイロからトウモロコシサイレージを採取した。サンプリングは3件の酪農家から行い、それぞれのバンカーサイロから8つのサンプルを採取して、PCR-DGGEによる細菌群集の調査を行った。乳酸、エタノールなどの発酵生成物量は、サイロ間およびサイロ内部で違いが認められた。一方、細菌群集は3つのバンカーサイロで似かよっており、すべてに共通する細菌として、多数の乳酸菌とともにA. pasteurianusが検出された。このサイレージは好気的安定性が高く、実規模サイレージでもA. pasteurianusは好気的安定性を高める可能性がある。1.小規模サイロを用いたA.pasteurianusの添加実験-牧草種による添加効果の差異-A.pasteurianusをイタリアンライグラス、ギニアグラスおよびトウモロコシホールクロップに添加して、実験室規模のサイレージを調製した。生菌数、発酵生成物および開封後の好気的安定性を調べてA.pasteurianusの効果を明らかにするとともに、PCR-DGGEを行ってA.pasteurianusの生残性および他細菌との共生関係について検討した。A.pasteurianusはイタリアンライグラスサイレージの発酵に影響せず、開封後の変敗を防止することもなかった。ギニアグラスサイレージでは乳酸および酢酸含量が減少したが、A.pasteurianusの添加に関わらず好気的変敗は起こらなかった。一方、トウモロコシサイレージでは開封後の温度上昇が2日間遅延し、他のサイレージと異なりDGGEでA.pasteurianusのDNAも確認できた。イネ科牧草サイレージに比べ、トウモロコシサイレージではA.pasteurianusの添加効果が期待できると判断されたが、変敗抑制を説明する有機酸含量等の変化はなかった。2.開封後にA.pasteurianusを添加したトウモロコシサイレージの好気的安定性A.pasteurianusを含む酢酸菌は偏性好気性菌であり、サイレージ調製における位置づけはこれまで好気的変敗の原因菌であった。我々の研究成果はそれらの知見を修正するものだが、開封時の生菌数が多ければ活発に増殖して変敗を促進するかもしれない。それらを確認するため、イタリアンライグラスサイレージおよびトウモロコシホールクロップサイレージの開封時にA.pasteurianusを添加して、好気的安定性とA.pasteurianusの生残性を調べた。

A.pasteurianusの添加に関わらず、イタリアンライグラスサイレージは開封後変敗したが、トウモロコシサイレージは変敗しなかった。開封時に添加したA.pasteurianusは好気的変敗試験7日後も生残したが、温度上昇が早まることはなかった。すなわち、従来の知見とは異なり、酢酸菌であるA.pasteurianusに変敗促進作用はないことが確認された。1.A.pasteurianusの添加試験-サイロ開封後の添加は好気的変敗を促進するか?-好気性菌のA.pasteurianusは、サイレージ開封後の変敗を促進する微生物と考えられてきた。我々の知見はそれらを修正するものであるが、実規模サイロから分離した独自株を、開封後に添加して変敗促進作用の有無を調べる実験を行っていなかった。そこで、小規模サイロおよび実規模サイロで調製したトウモロコシサイレージを材料として用い、サイレージ開封後にA.pasteurianusを添加して、細菌フローラの変化およびエタノールから酢酸を生成する鍵酵素alcohol dehydrogenase(adh)遺伝子の存在について調査した。小規模サイロで調製したトウモロコシサイレージでは、A.pasteurianusを添加しても好気的変敗が促進されることはなかった。DGGEでA.pasteurianusの存在が確認され、adhも明確に検出されたが、開封後の発熱が早まることはなかった。一方、実規模サイロで調製したトウモロコシサイレージに添加した場合は、A.pasteurianusが開封後の発熱を早めた。この実験では、A.pasteurianusによってBacillus属細菌が抑制されることが示されたが、調製時の添加効果と同様、開封後の添加効果も確実なものではなかった。細菌フローラおよびα励の有無で添加効果の違いを説明することはできなかったが、A.pasteurianusが好気的変敗の起因菌であるというこれまでの知見は修正すべきであると考えられた。2.実規模サイロにおけるA.pasteurianusの検出中四国地方には、我々がA.pasteurianusを分離したコントラクタ以外に、バンカーサイロでサイレージを調製している酪農家はほとんどない。実規模サイロにおけるA.pasteurianusの存在を確認するため、中国北京周辺(半径300km圏内)の大規模酪農家14件を訪れてサンプリングを行った。DGGEで細菌フローラを調べたところ、A.pasteurianusは11件のバンカーサイロで存在が確認された。好気的変敗の程度は調査できなかったが、A.pasteurianusが実規模サイロに高頻度で検出されることが明確に示された。
英語卒業論文作成支援を目的とした学習者コーパス構築と教育システム開発

日本人大学生の英語論文作成支援の為の教育システムを開発した。システムの設計にあたり、既提出の完成論文212編で学習者コーパス(総語数約95万語)をびに、接続語の使用位置、法副詞の法助動詞との共起等の未修得項目を特定した。それら一連の研究結果に基づき、キーワード検索による論文コーパス参照を中核とした、複合機能相互参照オンライン学習支援システムとして完成させた。日本人大学生英語卒業論文作成が、高等教育における教育目標を総合的に高め、社会が求める英語力達成への最適の教育方法であるとの仮定に基づき、当該研究機関で課してきた200篇余りの英語卒業論文(約50万語)の集積データを、学習者コーパスとして構築・分析するために以下に示す作業と研究を行った。●上記で作成した学習者コーパスを論文の評価グレードにより、(1)Aグレード・レベルのペーパー、(2)B,Cグレード・レベルのペーパーの2種類にサブ・コーパス化を行った。1)前年度構築した日本人大学生英語卒業論文(212編)コーパス(約93万語)をPaulNation/Averil/CoxheadのGSL/AWLを対照とした分析結果より、量ならびに段階別基礎語彙と学術語彙の包含率の観点から、学習者用Concordance Search Systemのデータとして妥当であることを明らかにした。3)当Concordance Search Systemに、学習効果を目して、以下の機能を付与した。(1)単語または語句による検索可能;(2)分野、セクション、発行年別にクロスオーバー検索可能;(3)andlor二様検索可能;(4)検索結果の表示でKWICながら、keyword(s)および前後の単語それぞれ識別マークした上でfull sentenceを表示;(5)更に前後のsentences表示可能。5)秋季に研究協力者のAveril Coxheadを招聘し、システムの拡張として、AverilのAWL Vocabulary ExercisesとTom CobbのLexical Tutorの既存sitesを統合することとした。6)冬季に韓国の研究者を招聘し、隣国におけるコーパス研究、特に教育利用と学習者コーパス研究の現状について得た情報を基に、本研究の在り方を再検討・確認した。7)更に本研究の方向性を、英国はじめヨーロッパの研究者の見解ならびに日本語のコーパス研究の最新の動向から多角的に検証する予定であったが、大震災により繰り越した。当該年度は最終年度として以下の3点を、研究目的・内容とした。(1)英語卒業論文作成のための自立学習システムの、特にチュートリアルの教材コンテンツ部分の確定。(2)システム使用による学生の自立学習支援効果の測定・評価。(3)研究成果の発表・公表と、今後の課題の提案。結果、(1)については、学習者コーパスのレベル別サブコーパス化、ならびに対照コーパスとして英語母語話者大学生論文コーパス:MICUSP(Michigan Corpus of Upper-Level Student Papers)の精選適正化を基に、3種類のサブコーパスの比較分析を行い、学習者の段階的習得特性を、未習熟度に比例した傾向として、以下4項目を明らかにした。(1)当該学習者においては、論の展開・転換を担う接続語(because,therefore,however,on the otherhand,the fact that等)を、同一の語句について文頭ないしは文中の固定的位置で使用する傾向が強い。(2)接続において3単語以上よりなる接続語句(節導入語句を含む)の使用に比して単一語の使用傾向が強い。(3)アカデミック・ライティングにおける説得力に関与する法副詞・法付接詞(certainly,apparentIy,probably,perhaps等)の使用頻度が少ない、且つ固定的位置で使用する傾向が強い。(4)また、法副詞・法付接詞使用において、法助動詞(will,would,could等)との共起頻度が少ない。(3)に関して、システムの学習支援機能の一層の強化を図ることを目的に、基本的にコーパス研究に基づく他の参照資源を外部調達により組み込み統合型オンライン教育学習システムを完成させた。結果、以下の機能をクロスレファレンス・プラットフォームにて使用可能となった。(1)A-grade papersのコンコーダンス・サーチ・システム(2)ウェブ学習辞書(3)母語話者コーパス情報サイト(Native Checker)(4)AWL(Academic Word List)Exercises(5)上記(1)の研究結果に基づいた、学習者コーパスからの例文による英語卒業論文作成に役立つ解説、を加えたチュートリアルサイト。システムの使用実践評価部分は、次年度前期に繰り越した。(3)について、国際語用論学会等3件発表し、1件採択発表予定。
中国私営企業のコーポレートガバナンスについての調査・研究

中国は、1993年頃より、社会主義市場経済の建設を目指して、近代企業制度(その重点は国有企業の株式会社化)の確立を開始した。その主要な理由としては、とりわけ問題とされてきたのは、会社資産の不正流用、粉飾決算、虚偽情報の開示、相場操縦、インサイダー取引などの不祥事が多発したからであり、界貿易機関(WTO)加盟という事実もそれに拍車をかけている。本調査においては、そうした中国のガバナンスの現状を把握するとともに、中国企業数社にインタビューした。表面的な制度は作りつつあるものの、中国特有の「関係」に基づく人脈経営などは、把握が困難な側面もあり、実質的なガバナンスは不明なままに残されているように思われる。本研究は,中国私営企業のコーポレートガバナンスについての調査・研究であり,研究の目的に記述したように,発展過程にある中国企業(特に私営の形態をとっている)のコーポレートガバナンスの実態調査・研究である。中国企業は,今や世界的に注目を浴び,かっ世界的な戦略を打ち出している企業も少なくないが,それだけに,グローバルな企業行動基準やコンプライアンス,そして株主対策やCSR等の諸問題に直面しつつある。そうした状況を踏まえて,特に個々の経営者の意識や行動理念・哲学を踏まえた調査に本研究の特徴がある。本研究の実地計画にも示したように,平成19年度は初年度として,まずアンケート調査票を作成を行なった。そして,これを中国での協力関係にある,蘇州大学の教授グループに現地(蘇州工業園区)での試験的アンケート調査を依頼した。(平成20年2月)この調査は,本年(平成20年)の5月から6月にかけて行われる予定である。さらにもう一つの協力大学である,上海理工大学管理学部の教授グループの協力によって,上海の製薬会社を訪問し試験的インタビューを行った。また更に,上海における日系企業(カシオ)も訪問し,ガバナンスに関する中国での一般的意見の交換を行った。ただ平成19年度の助成金の交付が,同年秋であったことにより,全体的な進捗は,当初より数ケ月遅れて始まったことはご理解いただきたい。なお,平成20年度については蘇州での予備調査の検討と,本調査の実施,ならびに企業への更なるインタビューが行われる。中国が世界的な生産基地となり、中国企業がその担い手であることは論を待たないが、その経営実態に応じた企業経営とその社会的関係性、すなわちガバナンスとの関係に関する対応関係はまだ未熟な段階である。それだけに、グローバルな企業行動基準やコンプライアンス、そして株主対策やCSR等の諸問題に直面しつつある。そうした状況を踏まえて、特に個々の経営者の意識や行動理念・哲学を踏まえた調査に本研究の特徴がある。本研究の実地計画にも示したように、平成20年度は上海理工大学管理学部の教授グループの協力によって、上海の企業を訪問しインタビューを行った。また更に、上海市政府当局にも出向き、市政府の企業のガバナンスに対する考えについても聞き取りを行った。ただ、当初予定した蘇州大学の教授グループとの(蘇州工業園区)での試験的アンケート調査については、先方の事情により来年度(平成21年度)への延期となった。なお、平成21年度については蘇州での予備調査の検討と、本調査の実施、ならびに企業への更なるインタビューを行い、最終的な取りまとめが行われる。そうした理由としては、(1)中国においては、社長(総経理ないし董事長)の権限が強いこと。つまり、社長は取締役会によって任命されるが、社長は、取締役会から授権された権限のほか、定款や法定の権限も行使できる。(2)当時の現行法では、社長の業務執行が適切であるかどうかを取締役会が監視・監督する規定がなかったこと。(3)独立取締役の機能の問題。2001年8月に「上場会社における独立取締役制度の確立に関する指導意見」が出され、上場会社においては独立取締役の設置が義務付けられたが、はたしてどこまで機能しているかが不明なこと。なおわれわれは、最近下記の2社を訪問調査を行った。(1)華誼集団公司集団(HUAYI)ならびに(2)用友軟件株式有限公司(UFIDA)である。本稿では詳細は省くこととする。
新規経シナプス性トレーサーによる味覚情報コーディング機構の解明

われわれが感じる5つの基本味の味情報は末梢の味蕾では別々の細胞集団で受容されることが明らかになってきた。一方、受容された味情報の神経伝達や中枢での認識という味覚情報のコーディング機構は不詳である。その解明のため、本研究では、2種以上の細胞を起点とする情報伝達神経回路の可視化を実現する新規の経シナプス性トレーサー・トランスジーンを開発した。開発したトレーサー・トランスジーンを用いてトランスジェニックメダカを作出することで、2種の異なる味細胞を起点とした情報伝達神経回路の相関を明らかにした。本年度は、まず、トランスジェニックメダカを用いた新規経シナプス性トレーサー・トランスジーンの評価系の改善を目指し、コンストラクト構成の変更、遺伝子注入量の最適化、解析時期の検討などを行い、評価系を確立した。この評価系によって約2-3週間でトレーサー・トランスジーンの評価が可能となり、評価の効率化が実現した。次に、この評価系を用いて、トレーサー・トランスジーン候補を2種選定して、これらについて発現コンストラクトを作製し、検討を行ったところ、両者共にトレーサー・トランスジーンとして利用可能であることが強く示唆された。この結果、本申請研究の核となる新規トレーサー・トランスジーンの開発に成功したと考えている。新規トレーサー・トランスジーンの開発によって複数の情報伝達神経回路の相関の解析が可能となった。現在、両者のトレーサー・トランスジーンとしての性質の差をしらべ、より有効な方を今後の解析に用いることを計画している。メダカ味細胞特異的に発現を誘導するプロモーター候補として、各味細胞に発現する遺伝子数種の上流配列を取得した。これらをGFP遺伝子の上流に結合したコンストラクトを作製して、メダカ受精卵に微量注入した。味蕾細胞でのGFP蛍光を観察し、評価を行った。現在のところ目的とするプロモーターの取得には成功していないため、受精卵への微量注入を引き続き行うと共に、BACトランスジェニックメダカ作出用のコンストラクト作製の計画を行った。一方、受容された味情報の神経伝達・中枢での認識という味覚情報のコーディング機構は不詳である。本申請研究は、12種以上の細胞を起点とする情報伝達神経回路の可視化を実現する新規の経シナプス性トレーサー・トランスジーンをメダカを用いて開発し、2新規トレーサーを用いて、マウスおよびメダカにおいて、2種以上の基本味の情報伝達経路を区別して可視化し、各経路の相関を明らかにすることを最終目標としたものである。本年度はまず、昨年度に引き続き、開発に成功した2種の新規経シナプス性トレーサー・トランスジーンと、既知のトランスジーンである小麦胚芽レクチン(wheat germ agglutinin, WGA)との性質の違いをしらべることを目的にトランスジェニック(Tg)メダカの系統化を進めた。系統化したTgメダカに対して各種染色を行い、その輸送活性を評価した。2種の新規経シナプス性トレーサー・トランスジーンは、WGAよりは弱いが、十分な活性を有していることを明らかにした。また計3種の経シナプス性トレーサー・トランスジーンを用いて、情報伝達神経回路の相関解析が行えるかを検討した。メダカホスホリパーゼC-beta 2 (mfplcb2)プロモーターでトランスジーンを発現誘導したTgメダカ系統と、t1r1プロモーターで異なるトランスジーンを発現誘導したTgメダカ系統とを掛けあわせて二重Tgメダカを作出し、各種染色に供した。その結果、各トレーサーを別々に検出出来る系を確立し、情報伝達神経回路の相関解析が可能であることが強く示唆された。本年度はまず、昨年度の研究によって開発に成功した2種の新規経シナプス性トレーサー・トランスジーンと、既知のトランスジーンである小麦胚芽レクチン(wheat germ agglutinin, WGA)との性質の違いをしらべることを目的にトランスジェニックメダカ系統の作出を行った。メダカホスホリパーゼC-beta 2 (mfplcb2)プロモーターにWGA、2種の新規トランスジーンを接続した3種のコンストラクトをメダカ受精卵に微量注入し、得られた稚魚を選別して、G0世代のトランスジェニックメダカをそれぞれ数匹得た。G0メダカを野生型に掛けあわせて得たF1メダカをさらに野生型と掛けあわせて、各コンストラクトの系統を数系統ずつ得た。F2世代では各トレーサーに対する抗体を用いて、免疫組織染色を行い、味蕾細胞および神経細胞で強い染色が得られる系統を選別した。今後、これら系統を用いて、トランスジーン間の違いを評価する予定である。

昨年度に引き続き、メダカ味細胞特異的に発現を誘導するプロモーター候補として、各味細胞に発現する遺伝子数種の上流配列を取得した。これらをGFP遺伝子の上流に結合したコンストラクトを作製して、メダカ受精卵に微量注入した。味蕾細胞でのGFP蛍光を観察し、評価を行った。その結果、plcb2発現細胞に発現が内包されるt1r1のプロモーターの取得に成功した。これとトレーサー・トランスジーンを接続したコンストラクトを作製し、トランスジェニックメダカ系統の作出を行なっている。今後さらに、plcb2発現細胞と排他的に発現する遺伝子のプロモーターの取得を目指す。メダカ味細胞特異的に発現を誘導するプロモーターの評価が十分に行えていない。トレーサー・トランスジーン候補が複数得られるという良い意味で想定外の結果となり、それらの候補間の比較が必要となった。25年度が最終年度であるため、記入しない。メダカ味細胞特異的に発現を誘導するプロモーターの取得に手間取っている。以上の解析に時間がとられ、トランスジェニックマウス作出が行えていない。メダカ味細胞特異的に発現を誘導するプロモーターについて、現在取得している候補配列の評価を優先的に行う。有望なプロモーターが得られない場合は研究計画を変更し、BACトランスジェニックによる発現誘導を検討する。トレーサー・トランスジーン候補については、想定外に複数が得られたため、研究計画にはなかったが、候補間での性能評価のための解析を導入する。これら以外については、研究計画通りに、トランスジェニックメダカの作出、トランスジェニックマウスの作出を行い、味情報伝達神経回路の相関関係の比較を行う。メダカ味細胞特異的に発現を誘導するプロモーターについて、新たに取得した候補配列の評価を優先的に行う。トレーサー・トランスジーン候補については、想定外に複数が得られたため、研究計画にはなかったが、候補間での性能評価のための解析を行う。本年度中にトランスジェニックマウスの作出を達成する。
雄ラットにおける性行動の加齢性変化に関する研究

ヒトおよび家畜、実験動物の性行動は加齢に伴い低下し、ついには廃絶に至ることが知られているが、性行動並びにその加齢性変化の詳細については不明の点が多い。本研究において、雄動物の性反応周期における自律神経系と動向と、その加齢性変化を明らかにしたので報告する。実験には生後10-12、67-70週齢のWistar-Imamichi系ラットを用いた。麻酔下にて雄動物の頸背部の皮膚を切開し、当該皮下に小動物用テレメータ送信器を埋め込み、双極誘導心電図をテレメトリー自動計測システム(プライムテック社製、Pysio Tel DATAQUEST III)により記録した。交尾行動に伴う心拍数の測定は暗期の午後7時から1時間、赤色ライト下で行われた。最初に雄1匹を観察ケージに収容し、その5分後に発情雌1匹を導入した。雄の安静時、即ち発情雌導入前5分間の平均心拍数は370±6beats/minであった。雌の導入直後に心拍数は上昇(482±33 beats/min)し、その後若干の変動が見られたが、射精時まで増加傾向を示した。射精時の平均心拍数は519±13beats/minであった。その後平均心拍数は激減(1分後、397±11 beats/min)し、性的不応期に低値を示した。このような心拍数の推移は各射精シリーズにおいても認められた。これに対して、高齢(67-70週齢)雄ラットの心拍数は雌の導入直後一過性の小さな上昇を認めたが、以後は観察期間中、導入前と同様の値を示した。以上の如く、性反応周期において自律神経系が関与しており、射精を境に交感神経系優位から副交感神経系優位な状態に移行することが示唆された。さらに高齢動物においては、性反応周期における自律神経系機能の低下が推測された。
下垂体前葉ホルモン分泌調節に関わる新規の細胞内シグナル伝達機構の解明

本研究計画は、カルシウム-リン脂質結合タンパク質、アネキシンVが、下垂体前葉細胞における新規のシグナル伝達因子である可能性を明らかにしようとするものである。研究は、2年度にわたって実施された。まず、バキュロウイルス発現系でラットのアネキシンVを合成し、リン脂質への親和性と逆相カラムを組み合わせた精製法を確立した。ラット下垂体前葉細胞の初代培養系を実験系とし、アネキシンVがプロラクチン放出を抑制すること、黄体形成ホルモン(LH)放出を著しく促進することを発見した。既に我々は、アネキシンVがLH産生細胞(ゴナドトロフ)に特に多量に存在することを確かめており、アネキシンVがゴナドトロフにおけるホルモン分泌の調節因子である可能性が示唆された。そこで次に、アネキシンVのゴナドトロピンサブユニット合成に対する影響を検討した。RT-PCR法を用いて、アネキシンV投与後のLHβサブユニットmRNA量を測定することで、アネキシンVのLH合成促進作用が明らかになった。アネキシンVがゴナドトロフで生産されることは、ゴナドトロフの株化細胞であるαT3-1細胞が、アネキシンVmRNAを有することから推定された。一方、アネキシンVのプロラクチン放出抑制作用は、培養系に抗アネキシンVを添加することで、プロラクチン放出の促進されることでも確かめられた。更に、この作用はアネキシンVのプロスタグランジン産生抑制作用に依ることが明らかとなった。従って、本研究の結果から、まずアネキシンVがゴナドトロフで生産され、LH分泌(合成と放出)を促進すると同時にプロラクチン産生細胞に作用してプロラクチン放出を抑制することが示唆された。アネキシンVが、下垂体前葉ゴナドトロフにおいてシグナル伝達因子として働くばかりでなく、パラクリン因子としても作用する新しい機能分子であることが推察された。本研究計画は、我々が下垂体前葉での発現を発見した新規のカルシウムーリン脂質結合タンパク質、アネキシン5の下垂体ホルモン分泌とそのシグナル伝達機序を検討するものである。本年度は、プロラクチンとLH分泌に対するアネキシン5の影響を中心に検討した。下垂体前葉細胞の初代培養系を用いて組換えアネキシン5のプロラクチンとLH放出に対する影響を観察した。まず、バキュロウイルス発現系で作製した組換えラットアネキシン5を精製する方法を開発した。アネキシン5は、カルシウムイオン依存的にリン脂質に結合する。そこで、この性質を利用して生体組織(卵巣)から調節した膜分画を用いてアフィニティ精製を行った。即ち、組換えアネキシン5を含む昆虫細胞培養液を膜分画と混和し、カルシウム加緩衝液でこれを洗浄後、EDTAを含む緩衝液で溶出した。次いでこれを逆相カラムを接続したHPLCで分画することで、電気泳動で1本のバンドに観察されるまでに精製した。精製組換えアネキシン5を培養液に添加し、下垂体細胞のプロラクチンとLH放出に与える影響を観察した。ホルモンは、ユーロピウム標識ホルモンを用いた時間分解免疫測定法で測定した。組換えアネキシン5(1μg/ml)は、プロラクチン放出を有意に抑制した。特に、プロラクチン放出因子である甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン(TRH)負荷時にその効果は顕著だった。

培養液に抗アネキシン5血清を添加することでプロラクチン放出は促進され、常態でアネキシン5がプロラクチン放出に抑制的に作用していることが示唆された。一方、LH放出は同濃度のアネキシン5の添加によって著しく促進された。アネキシン5は、LH放出因子(GnRH)のLH放出促進作用も促進した。本年度の成果は以上のごとくで、下垂体前葉局所におけるアネキシン5を介するLH、プロラクチンの分泌調節機序の存在が示唆された。本研究計画は、我々が下垂体前葉における発現を発見した新規のカルシウム-リン脂質結合タンパク質、アネキシンVの下垂体のホルモン分泌とその産生細胞におけるシグナル伝達機序への関与を検討するものである。昨年度は、プロラクチンと黄体形成ホルモン(LH)分泌に対するアネキシンVの影響を中心に検討し、下垂体前葉細胞初代培養系で、アネキシンVがプロラクチン放出には抑制的に作用するのに対し、LH放出には極めて強力な促進作用を示すことを明らかにした。ホルモンの「分泌」は、ホルモンの合成から放出までの一連の過程からなることを踏まえ、本年度は主にアネキシンVのゴナドトロピンサブユニット合成に対する作用を中心に検討した。合成活性の検定には、RT-PCR法を用いたmRNAの半定量法を採用した。まず、同一チューブ内で対照に用いたG3PDH遺伝子とLHのβサブユニットmRNA由来cDNA断片を同時に増幅し、mRNA量を推定する方法を検討し、この方法で再現性のある定量性の得られることを確認した。下垂体前葉細胞の初代培養系にアネキシンVを添加すると、LHβmRNAの増加することが明らかになった。この結果は、アネキシンVが、LHの合成を促進することを示している。次に、アネキシンVがLH産生細胞(ゴナドトロフ)で合成されるのか否かを知るために、ゴナドトロフの株化細胞であるαT3-1細胞から抽出したRNAにアネキシンVmRNAが含まれるか否かを検討し、この細胞種がアネキシンVの合成能を持つことを明らかにした。以上の研究結果から、下垂体のゴナドトロフでは、自らの産生ずるアネキシンVをシグナル伝達に用い、少なくともLHのβサブユニットの合成からLHの放出までの過程を促進的に調節する機序の存在することが示唆された。
フルオロエラストマーとチタンで補強した耐衝撃性の高いセラミックス補綴に関する研究

本研究ではチタン-セラミックス複合体とその接着システムの開発に関する実験を行った.チタン-セラミックス複合体の作製はキャスタブルセラミックスのインゴットに純チタン粒子を微量混ぜて鋳造を行ったもの,純チタン粒子と焼成陶材の混合物を薄膜としてセラミックス表面に焼付けたもの,スパッタリングによりセラミック表面にチタンをコーティングしたもの以上3種類の方法を試した.スパッタリングは装置の出力不足により十分な厚みのコーティングはできなかった.インゴットにチタン粒子を混ぜての鋳造に関しては,チタンの割合が総重量の0.5%以上になると融解がうまくいかず鋳造できなかったが,チタンの量を加減することにより複合体を作製することができた.焼成陶材を用いる方法では比較的多いチタンの量でも容易に複合体の作製ができたので,以降の接着の実験にはこの焼成法を用いた.接着耐久性を比較するために対照として市販のキャスタブルセラミックスを用い,熱サイクル耐久試験後に接着強さの測定を行った.接着剤としてはメタクリル酸メチルをトリブチルボランで重合開始させるMMA-TBBレジンとフルオロエラストマーのMMA溶液をトリブチルボランで重合開始させるレジンの2種類を用い,プライマー処理を行った.熱サイクル試験後,接着強さが最も強かったのはプライマー処理を行いフルオロエラストマーで接着したもの,次いでプライマー処理を行いMMA-TBBレジンで接着したものであった.プライマー処理なしの場合は熱サイクル後では自然脱離もしくは非常に弱い接着強さであった.以上のことからセラミックスにチタン成分を微量混ぜること,リン酸エステル系モノマーとシランカップリング剤を含有するプライマーで表面処理すること,そしてフルオロエラストマーによる弾性接着を利用することにより,セラミックスの接着耐久性が向上することが明らかとなった.本研究ではチタン-セラミックス複合体とその接着システムの開発に関する実験を行った.チタン-セラミックス複合体の作製はキャスタブルセラミックスのインゴットに純チタン粒子を微量混ぜて鋳造を行ったもの,純チタン粒子と焼成陶材の混合物を薄膜としてセラミックス表面に焼付けたもの,スパッタリングによりセラミック表面にチタンをコーティングしたもの以上3種類の方法を試した.スパッタリングは装置の出力不足により十分な厚みのコーティングはできなかった.インゴットにチタン粒子を混ぜての鋳造に関しては,チタンの割合が総重量の0.5%以上になると融解がうまくいかず鋳造できなかったが,チタンの量を加減することにより複合体を作製することができた.焼成陶材を用いる方法では比較的多いチタンの量でも容易に複合体の作製ができたので,以降の接着の実験にはこの焼成法を用いた.接着耐久性を比較するために対照として市販のキャスタブルセラミックスを用い,熱サイクル耐久試験後に接着強さの測定を行った.接着剤としてはメタクリル酸メチルをトリブチルボランで重合開始させるMMA-TBBレジンとフルオロエラストマーのMMA溶液をトリブチルボランで重合開始させるレジンの2種類を用い,プライマー処理を行った.熱サイクル試験後,接着強さが最も強かったのはプライマー処理を行いフルオロエラストマーで接着したもの,次いでプライマー処理を行いMMA-TBBレジンで接着したものであった.プライマー処理なしの場合は熱サイクル後では自然脱離もしくは非常に弱い接着強さであった.以上のことからセラミックスにチタン成分を微量混ぜること,リン酸エステル系モノマーとシランカップリング剤を含有するプライマーで表面処理すること,そしてフルオロエラストマーによる弾性接着を利用することにより,セラミックスの接着耐久性が向上することが明らかとなった.