hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
弾性表面波デバイスの高性能化に伴う高度設計技術の開発

SAW(Surface Acoustic Wave)と略称される弾性表面波デバイスは、エレクトロニクス産業におけるキ-デバイスの一つとして2の地位を確立しているが、特に最近になって、より高周波化、低損失化、小型・軽量化を目指した高性能SAWデバイスの研究が活発化するのに伴い、その信頼性、再現性がさらに一段と厳しく要求されるようになり、一部経験に頼らざると得なかった従来の設計法に代る高精度な設計技法開発に対する要望が急速に高まっている.本研究では、SAWデバイスの高周波化、低損失化、小型・軽量化などの要請に対応できる高度なSAWデバイス設計技術を開発するとともに、SAWデバイスの高性能化実現の指針となる設計資料を提供することを目的として研究を進め、下記の成果を得た.1.SAWデバイスの基本構造であるグレ-ティング、すなわち周期構造導波路を伝搬するSAWのブリルアンダイアグラムを算出するための有限要素法に基づく高精度な解析法を開発した.2.SAW反射器の反射特性ならびにSAW励振用すだれ状電極の励振特性を資価するためのもモ-ド結合理論、あるいは等価回路理論に基づく解析法を開発した。モ-ド結合方程式中の結合係数や変換係数、また、等価回路中の回路定数は、従来、経験的に、あるいは実験的に定められることが多かったが、本研究では、1.の有限要素法によって算出されたストップバンドに関する情報から、これらの諸定数をすべて理論に定めることを可能とした。3.SAWとともに、移動体通信用デバイスへの応用が活発化している静磁波の伝搬特性を評価するための解析法を開発した.SAW(Surface Acoustic Wave)と略称される弾性表面波デバイスは、エレクトロニクス産業におけるキ-デバイスの一つとして2の地位を確立しているが、特に最近になって、より高周波化、低損失化、小型・軽量化を目指した高性能SAWデバイスの研究が活発化するのに伴い、その信頼性、再現性がさらに一段と厳しく要求されるようになり、一部経験に頼らざると得なかった従来の設計法に代る高精度な設計技法開発に対する要望が急速に高まっている.本研究では、SAWデバイスの高周波化、低損失化、小型・軽量化などの要請に対応できる高度なSAWデバイス設計技術を開発するとともに、SAWデバイスの高性能化実現の指針となる設計資料を提供することを目的として研究を進め、下記の成果を得た.1.SAWデバイスの基本構造であるグレ-ティング、すなわち周期構造導波路を伝搬するSAWのブリルアンダイアグラムを算出するための有限要素法に基づく高精度な解析法を開発した.2.SAW反射器の反射特性ならびにSAW励振用すだれ状電極の励振特性を資価するためのもモ-ド結合理論、あるいは等価回路理論に基づく解析法を開発した。3.SAWとともに、移動体通信用デバイスへの応用が活発化している静磁波の伝搬特性を評価するための解析法を開発した.SAW(Surface Acoustic Wave)と略称される弾性表面波デバイスは、エレクトロニクス産業におけるキ-デバイスの一つとしての地位を確立しているが、特に最近になって、より高周波化、低損失化、小型・軽量化を目指したSAWデバイスの研究開発が世界的に活発化するのに伴い、その信頼性、再現性がさらに一段と厳しく要求されるようになり、一部経験に頼らざるを得なかった従来の設計法に代る高精度な設計技法開発に対する要望が急速に高まってきている。ここでは、SAWデバイスの高周波化、低損失化、小型・軽量化などの要請に対応できる高度なSAWデバイス設計技術を開発するとともに、SAWデバイスの高性能化実現の指針となる設計資料を提供することを目的として研究を進め、下記の成果を得た。1.SAWデバイスの基本構造であるグレ-ティング、すなわち同期構造導波路を伝搬するSAWのブリルアンダイアグラムを算出するための有限要素法に基づく高精度な解析法を開発した。2.SAW反射器の反射特性ならびにSAW励振用すだれ状電極の励振特性を評価するためのモ-ド結合理論、あるいは等価回路理論に基づく解析法を開発した。モ-ド結合方程式中の結合係数や等価回路中の回路定数は、従来、経験的に、あるいは実験的に定められることが多かったが、本研究では、1.の有限要素法によって算出されたブリルアンダイアグラムに関する情報から、これらの諸定数をすべて理論的に定めることを可能とした。今後は、上記の設計技術に適したソフトウェアを開発し、これをSAWデバイスの高性能化のかなめとなるすだれ状電極の設計に応用して、最適設計のための指針となるデ-タを提供するとともに、本設計技術の信頼性について多方面から検討する。SAW(Surface Acoustic Wave)と略称される弾性表面波デバイスは,エレクトロニクス産業におけるキ-デバイスの一つとしての地位を確立しているが,特に最近になって,より高周波化,低損失化,小型・軽量化を目指した高性能SAWデバイスの研究が活発化するのに伴い,その信頼性,再現性がさらに一段と厳しく要求されるようになり,一部経験に頼らざるを得なかった従来の設計法に代る高精度な設計技法開発に対する要望が急速に高まっている。

本研究では,SAWデバイスの高周波化,低損失化,小型・軽量化などの要請に対応できる高度なSAWデバイス設計技術を開発するとともに,SAWデバイスの高性能化実現の指針となる設計資料を提供することを目的として研究を進め,下記の成果を得た。1.SAWデバイス設計支援システムの開発を進めた.SAWデバイス設計支援システム構築用ツ-ルには,広く利用者が見込める等価回路法とモ-ド結合理論を採用した.これらはSAWデバイス設計のための標準的な解析理論として産業界においてもよく利用され,定着しているものであるが,設計段階において具体的な数値として必要となる等価回路中の回路定数やモ-ド結合方程式中の結合係数を,いわゆる理論的に定めることは一般に難しく,一部経験に頼らざるを得ないのが実情である.ここでは,上記の回路定数や結合係数を,有限要素法を用いて決定する,全く新しい方法を開発し,この方法を基にして,プリプロセッサ,ソルバ-,ポストプロセッサといった複数階層の機能からなるSAWデバイスの設計支援システムの構築を図った.2.SAWとともに,移動体通信用デバイスへの応用が活発化している静磁波の伝搬特性を評価するための解析法を開発した.
レーザーによる根管内スミヤーレーヤーの除去による研究

本実験に用いたレーザーは、Pulsed Nd-YAG Laser(D-Lase300,American Dental Laser社製)、CO_2(OpeLaser-03S,Yoshida社製)、Argon Laser(hgm社製)である。ヒト単根抜去歯を蒸留水を用いて根管洗浄しつつ、通報に従い45号まで拡大し、2つの実験群に分けた。実験1として、ファイバー先端をアピカルシートよりさらに1mmアンダーに固定し、各種レーザーを用いて、さまざまな出力、照射時間でレーザー照射、サーモグラフィーを用いて歯根表面の経時的な温度変化を計測した。実験2として、実験1の結果をもとにした出力、時間で抜去歯根尖にレーザー照射した。照射した標本を根管に平行に切断し、アルコール脱水、金蒸着を行った後、走査型電子顕微鏡にて観察、撮影した。実験1より、Nd-YAGレーザーでは、1Wで2秒照射、2Wで1秒照射が生体に安全と考えられる5°C以内の温度上昇となった。同様にCO_2レーザーでは、0.5Wで1秒照射、1Wで0.5秒照射、Argonレーザーでは、1Wで6秒照射、2Wで3秒照射であった。電顕所見ではそれぞれのレーザーにおいて、Smear Layerの除去されている領域が観察されたがファイバー先端の形状が直線的であるために、根尖を全体的に清掃している所見はなかった。波長が高いレーザーほど、炭化やひびわれを起こしている領域が多く観察された。結論として線香花火状に周囲にレーザー放射するファイバーの開発が必要と考えられる。
MIFによる神経幹細胞制御機構の統合的理解

マウスおよびヒト神経幹・前駆細胞において、MIF(Macrophage migration inhibitory factor)がその細胞増殖能や幹細胞性維持に貢献することを長年にわたって明らかにしてきた。近年の研究成果により、CHD7, TPT1, SOX6などの因子がMIF下流において機能していることが明らかとなった。今回、マウス培養神経幹・前駆細胞にMIFを作用させた際にZFHX4(Zinc Finger Homeobox 4)の遺伝子発現が亢進することを見出した。また、ZFHX4がマウス胎生期および成体脳で神経幹細胞発現部位においても発現していることから、ZFHX4の機能解明を神経幹・前駆細胞を対象として行うことにした。当該目的を達成するために、ゲノム編集技術を駆使してZFHX4ノックアウトマウス(コンディショナルノックアウト用ZFHX4floxおよび単純型KO)を作製した。作出した69個体をスクリーニングすることにより、各3系統のZFHX4floxおよび単純ノックアウトマウスを得ることに成功した。ZFHX4floxマウスに関しては、戻し交配を経てホモ接合体にライン化することができた。また、それらマウスに目的の遺伝子変異があるかについてもDNAシークエンシングにより確認を行った。単純ノックアウトマウスでは、成体ホモ接合体を胎生致死のために得ることはできなかった。Nestin-CreマウスとZFHX4floxを交配し、胎児期や成体脳における神経幹細胞や神経新生の性状解析を実施している。新たに、子宮内胎児脳電気穿孔法を用いたり、Foxg1-Creマウスを導入して、神経幹細胞および神経発生における当該分子の機能に関して解析を行う予定である。ゲノム編集技術によりノックアウトマウスを作製する場合、オフターゲット効果(予想外のゲノム部位におけるターゲティングベクターのインテグレーション)のリスクが伴う。今回、それらの可能性を排除するためにスクリーングを行った結果、作出された69個体より各3系統のコンディショナルおよび単純ノックアウトマウスを得ることに成功した。コンディショナルマウスに関しては、ホモ接合体に交配させた後に遺伝子改変部のDNAシークエンスも行った。その結果、予測した通りの改変遺伝子配列を確認することができた。また、得られたヘテロ接合体単純ノックアウトマウスにおいてホモ接合体を得るために交配を行ったが、胎生致死であることが判明した。このことは、当該遺伝子の重要性を示しているものと考える。現在、Nestin-CreマウスとZFHX4floxマウスを交配させて、胎生期および成体脳サンプルの回収をほぼ終了し、神経幹細胞や神経新生における当該因子の機能に関して解析を行っている(Nestin-Cre:ZFHX4flox/+の作出に時間を要した)。また、ZFHX4floxマウス胎児脳に子宮内胎児脳電気穿孔法によりCAG-Cre発現ベクターを導入し、新生神経細胞の性状変化を観察している。さらに、アデノウィルス発現系を用いてCre蛋白をマウス新生児脳に発現させた後、成体海馬における当該因子の神経新生等に及ぼす役割を解明することも計画し、必要な準備を整えた。最終年度は、Foxg1-Creマウス(現在無菌化中)とZFHX4floxマウスの交配によるZFHX4の機能解析を計画している。これらに加えて、ZFHX4の遺伝子発現抑制によりグリオーマ幹細胞の細胞増殖抑制が起こることが明らかとなったが、グリオーマ幹細胞における当該因子の機能に関しても解析を進行させている。Nestin-Cre:ZFHX4floxおよびZFXH4 KO(+/-)マウスを用いて、胎児期および成体における神経幹細胞および新生ニューロンの性状変化を免疫組織化学方法(Nestin, Sox2, Pax6,Tbr2, Ascl1,Ki67等での染色)や初代神経細胞培養法を駆使して解析する。さらに、ZFHX4flox胎児脳に子宮内胎児脳電気穿孔法によりCAG-Cre発現ベクターを導入し、当該因子が神経新生に与える効果を継続して検証する。これらとは別に、成体マウス海馬でのZFHX4の発現に着目し、新生児ZFHX4flox脳にアデノウィスルをもちいてCREタンパクを発現させ、成体脳海馬における当該因子の機能を明らかにすることを目指す。in silico解析による、胎児マウス脳におけるFoxg1とZFXH4の共発現情報にもとづき、Foxg1に新たに着目する。Foxg1-Creマウスを微生物学的クリーニングしたのち繁殖させ、ZFHX4floxと交配させ、先と同様に胎児および成体マウス脳において、ZFHX4による神経幹細胞・神経細胞新生の機能制御機構を検証する。マウス神経前駆細胞において、ZFHX4の新たな標的因子を見出したため、その制御機構の解明を目指す。また、ヒトグリオーマ幹細胞におけるZFXH4の機能に関してより詳細な研究を実施する予定である。具体的には遺伝子編集技術,RNA-Seqおよびエピジェネティック制御に着目した分子生物学的解析手法や代謝機能解析、さらに免疫不全マウスを用いた担癌マウスモデルなどの解析手法を活用し、MIFを起点としたZFXH4のグリオーマにおける機能解析を予定している。マウス神経幹細胞やヒト神経幹細胞培養系において、MIF(Macrophage migration inhibitory factor)がその細胞増殖能や幹細胞性維持に貢献することを長年明らかにしてきた。近年の研究成果により、CHD7, TPT1, SOX6などの因子がMIF下流において機能していることが判明した。

今回、マウス神経幹細胞にMIFを作用させた際にZFHX4(Zinc Finger Homeobox 4)の遺伝子発現が増大することが明らかとなった。また、ZFHX4がマウス胎生期および成体脳で神経幹細胞発現部位においても発現していることから、ZFHX4の機能解明を神経幹細胞を中心として行うことにした。当該目的を達成するために、ゲノム編集技術を駆使してZFHX4ノックアウトマウスを作製した。さらに、作出した69個体をスクリーニングすることにより、各3系統のFloxマウスおよび単純ノックアウトマウス(標的遺伝子欠失体)を得ることに成功した。Floxマウスに関しては、戻し交配を経てホモ個体にライン化することができた。また、それら各系統に目的の遺伝子変異があるかについてもDNAシークエンシングにより確認を行った。単純ノックアウト体に関しては、成体ホモ個体を胎生致死のために得ることはできなかった。さらに、Nestin-Creマウスの繁殖も開始した。これらの結果、ZFHX4 Flox変異体とNestin-Creマウスの交配が実現可能となった。今後、これらのZFHX4 Floxマウスおよび単純ノックアウトマウスを用いて、神経幹細胞および神経発生における当該分子の機能に関して解析を行う予定である。ゲノム編集技術によりノックアウトマウスを作製する場合、オフターゲット効果や、予想外のゲノムローカスにおけるターゲットベクターのインテグレーション等のリスクが伴う。今回、それらの可能性を排除するためにスクリーングを行った結果、作出された69個体のうちより各3系統のFloxおよび単純ノックアウトマウス(標的遺伝子欠失体)を得ることに成功した。また、Floxマウスに関しては、ホモ体に交配させた後に遺伝子改変部のDNAシークエンスも行った。その結果、予測した通りの改変遺伝子配列を確認することができた。また、得られたヘテロ体単純ノックアウトマウスをホモ個体を得るために交配したが、胎生致死であることが判明した。このことは、当該遺伝子の重要性を示しているものと考える。Floxマウスと交配させる予定のNestin-Creマウス(理研より購入)を施設内で繁殖中でもある。以上のことより、当初の予定どうりにFloxシステムを用いてNestinエンハンサー・プロモーター依存的にZFHX4をマウス胎生期脳において破壊する準備が整った。また、Foxg1-Creマウスを導入するために、米国ソーク研究所とのMTA締結も終了した。これらとは別に、培養マウス神経幹細胞においてMIFの制御下でZFHX4が発現制御を受けうることをshRNAシステムで検証することができた。さらに、ヒトES細胞由来神経幹細胞において、MIF下流で制御されるmiR-338がZFHX4を標的とすることも新たに明らかとなった。このように、マウスおよびヒト神経幹細胞においてZFHX4の機能解析を行う準備が予定どうりに進捗している。
児童養護施設における心理職による家族援助モデルの構築に関する研究

本研究は児童養護施設において心理職が入所児童とその家族に対して心理的援助を行う際の実践援助モデルを構築することを目的とした。研究1では心理職による家族支援に関するインタビュー調査研究,研究2ではグループインタビューを実施した。その結果,本研究では施設心理職による家族とのかかわり方に関する3層構造(子どもの内的家族像への援助,間接的援助,直接的援助)が示唆された。また研究3の事例研究からは子どもとその家族への支援は,親子それぞれが安心し安全と感じる情緒的距離を探す場となりうること,また子どもが家族との作業をとおして主体性を回復する場として機能しうることが示唆された。平成25年度は児童養護施設における家族支援に関する最近の文献研究を行った。以前に研究代表者が行った、2010年以前の児童養護施設における家族支援に関する文献は、(1)児童相談所・市町村・児童福祉施設等における治療的・心理教育的グループ支援プログラムの開発、紹介、実施報告、および効果についての検討、(2)虐待が生じる家族、および虐待を行う親の特性や力動に関する調査や研究、(3)虐待を行う親に対する支援の事例研究または質的研究、の3群にまとめることができた(髙田・田附,2011)。そこで本研究において2010年度以降の文献をレビューした結果、(4)児童福祉施設入所児童の親や家族も援助を必要としており,児童福祉施設における援助が必要であるいうことが共通理解となってきていること、(5)入所児童の家族に対する支援が目指すものとして,家族の「ありよう」の変化(増沢,2011)、あるいは家族関係の良い循環への転換(穐山,2011)、が必要であること、すなわち親子や家族の「関係性」への支援という視点の導入がますます強調されていること、(6)実在する現実の家族との交流や関係改善への支援のみならず、家族支援の観点からの子どもへの援助が重要であること。すなわち,子どもの家族イメージを育んだり、自分の人生にどんなことが起こって施設に来ることになったのかを理解し、今後のことをともに考えるような支援が重要であることの指摘(村瀬,2011;島川,2011;厚生労働省,2013;塩田,2013など)、の3点が加えられた。一方、本研究のテーマである、児童養護施設の心理職による家族支援に関する論考はほとんど蓄積がないことがわかった。したがって本研究が目的としているような、児童養護施設における心理職による援助モデルの構築を行う必要性があることが再確認された。これまでに実施した質問紙およびインタビューによる調査からは,児童養護施設における心理職による家族支援実践には3タイプあることがわかった(田附,2012)。1.家族合同面接,親面接など直接的な家族支援を行う「直接援助型」,2.直接は家族と会わないがFSW等と一緒に家族についての理解・アセスメントを話したり,関係者会議に参加したりして,支援の可能性を検討する「間接援助型」,3.子どもの内的な家族イメージを肯定的に育んだり,子どもが語る家族像を丁寧に聞いたり,面会・外泊等の際に子どもが感じたことや経験したことをきちんと聞くといった「子ども援助重視型」の3つである。そこで本年度はまず、1.「直接援助型」の援助モデルを具体的に提示することを目的として,児童養護施設において心理職が直接家族を支援している事例を複数蓄積し,考察を行った。その結果,(1)心理職が家族支援に積極的に関わるための施設内のシステム作りの重要性,(2)心理職が個人心理臨床と家族臨床を統合的にとらえ,システミックな視点をもってクライエント家族と関わることの重要性,(3)クライエント家族が時に応じて必要とする援助をとらえ,柔軟に他職種との協働を行うことの重要性,の3つが示唆された。次年度以降は,直接援助型の事例をさらに蓄積するとともに,心理職に対するインタビューや文献レビューをとおして,2.間接援助型および3.子ども援助重視型の支援モデルの精査に取り組む予定である。本年度は児童養護施設における心理職による家族支援のモデル構築の一環として、(1)児童養護施設において心理職として家族支援に携わっている専門職などによる実践報告とその分析、および(2)児童養護施設における家族支援に関する事例研究を行った。(1)に関しては、児童養護施設において家族支援に深く関わっている心理職、他の児童福祉施設において家族支援に携わっている専門職、および当該分野の研究者による公開シンポジウム(討論会)およびフォーカストグループインタビューを実施した。その結果を逐語記録に起こして分析したところ、1.児童養護施設において家族支援に心理職がかかわるきっかけや経緯、2.児童養護施設において心理職が家族支援にかかわるための工夫や体制作り、3.家族に関するアセスメントの重要性の3つの観点にまとめられた。1.は施設における子どもへの援助として、心理面接のみを重点的に行っていた時期に、その効果に限界を感じたことが契機であるとされた(心理面接の限界)。さらに子どもが家族について知りたいという声に耳を傾けたことにより、子どもの重要な環境への働きかけのひとつとして家族への支援に携わることになったとされた。2.については、例えばライフストーリーワークを使う、子どもの心理療法を実施するための許可や説明を行う、など、直接家族支援を行うよりは、間に何らかの媒介物を挟んでやりとりをする、という方法などがあげられた。3.に関しては、親や家族のタイプを分類することにより、どのようなアプローチが有効性が高いのかという点で分析がされた。なお(1)の一部はシンポジウムとして公開され、報告書としてまとめられている。

(2)に関しては、児童養護施設において9年間暮らした子どもとその親の関係調整を行った事例について検討し、レジリエンスを中心とした考察を行って、子ども虐待防止学会において発表した。2015年度は,2014年9月に名古屋国際会議場にて開催された,日本子ども虐待防止学会名古屋大会の公募シンポジウムで討議された議論の内容を記録,整理,分析し,考察を加えた。その結果を「児童養護施設における心理職による家族支援の実践と課題ー入所児と家族に心理的サポートを届けるためにーシンポジウム報告書」にまとめて,関係諸機関に配布した。2015年5月より産前産後休暇および育児休業期間に入っており,研究が中断している。計画書作成時の本来の予定よりは遅れているが,研究再開後に修正した計画で継続できると考えている。本研究は児童養護施設における心理職による家族援助のモデル構築に関する研究であり,1.心理職の関わりがより有効な家族はどのような特徴を持つ家族であるかという援助対象に関する指針と,2.具体的にどのような心理的援助を行える可能性があるかという実践モデルの構築の2つが含まれるような援助実践モデルの構築を目的とした。本年度はこれまでの逐語データをカテゴリー化して整理・分析し,上記の2点から考察を行った。結果の概要としては,1.家族の特徴という点については,親や子どもの素質に関する複数の特徴とともに,児童相談所と施設の認識の差が大きい場合や,援助側のアセスメントがうまくいかない場合などがあげられた。次に,2.児童養護施設において心理職が家族援助を実施する際のモデルに関しては,次の3つの観点からまとめられた。(1)施設に家族支援を導入する際の工夫,(2)入所児童の家族との関係を構築し,継続的な支援を実施するための工夫,(3)具体的な援助実践の工夫である。まず施設への家族支援導入に際しては,心理職が以前に施設で子どもと関わった体験や異なる職場での子どもとの関与経験を背景に,主に入所児童が抱える家族への想いをくみ取ることが動機づけになっていることがわかった。次にそのような個人的体験を施設文化としてどのように位置づけるかという工夫が重ねられるのだが,そこでもっとも重要だと考えられていたのは事例のカンファレンスであることがわかった。また事例の検討と考察を行うことが,より現場で具体的に実践可能な家族支援のモデルの構築にも寄与することが示唆された。今後の課題としては,カンファレンスのあり方を工夫することが施設における家族援助の実施,有効性の向上に高く寄与することが明らかとなったことから,カンファレンスを中心とした,児童養護施設における家族支援に関する教育研修の必要性が挙げられた。本研究は児童養護施設において心理職が入所児童とその家族に対して心理的援助を行う際の実践援助モデルを構築することを目的とした。研究1では心理職による家族支援に関するインタビュー調査研究,研究2ではグループインタビューを実施した。その結果,本研究では施設心理職による家族とのかかわり方に関する3層構造(子どもの内的家族像への援助,間接的援助,直接的援助)が示唆された。
超塑性の新しい展開

本総合研究は、平成8年度発足予定の重点領域研究「超塑性の新しい展開」の準備作業を行うためのものである。この重点領域研究の計画班への参加が予定されている総ての研究者によって、効率的な研究体制の構築、各研究グループにおける研究の進め方とグループ間の相互協力などについて調整と意見交換することが主要な課題である。平成7年10月に研究代表者(重点領域研究の領域代表者)をはじめ、グループリーダー、評価委員が会合し、運営全体について総括的な打ち合わせを行った。これをベースに平成8年3月に総合研究(B)に参加されている全メンバーが集まり、最終的な打ち合わせととりまとめを行う。
抗癌剤耐性に関連する因子の発現が動物の腫瘍に対する化学療法におよぼす影響

犬皮膚肥満細胞腫7例について抗癌剤耐性関連因子であるP糖タンパク質、MRP、メタロチオネインについての発現を免疫組織化学的に検索し、プレドニゾロン、ビンブラスチン、ロマスチン、ドキソルビシンの投与により化学療法を実施したが、因子発現と抗癌剤の効果および予後との関係を明らかにすることはできなかったため、さらに30例の症例を加え、継続して研究を実施している。犬軟部組織肉腫57例について組織学的グレード分類と免疫組織化学的に抗癌剤耐性関連因子の発現を検索した。P糖タンパク質を介した耐性機序が主体であったが、組織学的グレードとの関連性は低かった。猫乳腺癌81例において抗癌剤耐性関連因子、c-erbB-2産物、変異型p53産物、エストロジェン受容体の発現に関して免疫組織化学的に検索し、組織学的悪性度と予後との関連性を検討した。猫の乳腺癌は抗癌剤に対する自然耐性が高率にみられたが予後との関連性はなかった。c-erbB-2産物を発現する症例の1年以内の死亡率は80%であり、予後決定因子のひとつとして重要であると考えられた。変異型p53産物発現と1年以内の死亡率とには関連性はなかった。エストロジェン受容体の発現は低頻度であり、腫瘍細胞の増殖はエストロジェン依存性ではないことが明らかとなった。動物の各種腫瘍において免疫組織化学的方法により抗癌剤耐性関連因子の発現を検索することは、化学療法を含む治療計画に対して重要な情報になることは明らかであるが、猫乳腺癌におけるc-erbB-2産物発現と予後との密接な関係に類似するような予後因子の候補は見出すことができず、今後も回顧的研究によるデータの蓄積と化学療法を実施している症例に対する検索が必要である。今年度、本研究では間葉系悪性腫瘍に含まれる犬の皮膚肥満細胞腫及び軟部組織肉腫に対する抗癌剤耐性について免疫組織化学的に検索した。外科的に切除された化学療法前の皮膚肥満細胞腫7例について、P糖タンパク質は7例中5例、MRPは7例中6例、メタロチオネインは7例中1例で発現が見られた。予後の情報が入手できた7例中5例については、プレドニゾン・ビンブラスチン・ロマスチン・ドキソルビシンの投与を行った4例中2例が完全寛解となり、他の2例が自然死であった。プレドニゾロン・サイクロフォスファマイドの投与を行った1例は転移及び再発後に死亡した。次に57例の軟部組織肉腫について組織学的グレードに分類すると、グレードIが35.1%、グレードIIが5.6%、グレードIIIが19.3%であった。免疫組織化学的検索における評価が可能であった38例については、P糖タンパク質が86.8%、MRPが55.3%、メタロチオネインが60.5%で陽性を示し、P糖タンパク質の陽性が有意に高かった。グレード別の陽性率はP糖タンパク質及びMRPでは有意差が認められなかったが、メタロチオネインではグレードIIIにおける陽性率がグレードI及びIIよりも有意に低かった。犬の皮膚及び軟部組織の間葉系悪性腫瘍は一般的に化学療法が有効でないと考えられており、本研究で検索した症例ではP糖タンパク質の発現が高頻度であったことから、細胞外への薬剤排出能亢進による細胞内の抗癌剤濃度の低下が主な耐性機序であることが示唆された。さらにMRP及びメタロチオネインも多くの症例で発現しており、複数のタンパク質が重複して作用することにより強固な耐性を示す腫瘍が多いことが考えられる。

しかしながら、これらのタンパク質についての免疫組織化学的検索結果と抗癌剤の効果及び予後との関係は、皮膚肥満細胞腫7例からは見出せなかった。猫の乳腺癌において抗癌剤耐性に関連する因子であるタンパク質として、P糖タンパク質、多剤耐性関連タンパク質、メタロチオネインの発現を免疫組織化学的に検索するとともに、癌遺伝子c-erbB-2産物、変異型の癌抑制遺伝子p53産物、エストロジェンレセプターの発現に関しても同様に検索し、組織学的悪性度と予後との関連性を検討した。まず、組織学的悪性度をGrade I、II、IIIに分類して予後との関連性を検討した結果、外科的切除後の1年以内の死亡率がGrade Iで55.6%、Grade IIで50.0%、Grade IIIで90.9%であり、Grade IIIは大部分が1年以内に死亡すると考えられるが、Grade IおよびIIに関しては、組織学的な分類のみで予後の差異を推察することはできなかった。次に、免疫組織化学的検索の結果、P糖タンパク質が58.9%、多剤耐性関連タンパク質が72.6%、メタロチオネインが56.2%の検体で発現がみられ、各タンパク質は組織学的悪性度の上昇に伴って発現頻度が高くなる傾向があった。猫の乳腺癌は抗癌剤に対する自然耐性が高率にみられ、薬剤排出ポンプ機能の亢進や薬剤の無毒化作用により、化学療法を本質的にも困難にしていると推察される。しかしながら、これらのタンパク質の発現と予後との関連性はなかった。癌遺伝子c-erbB-2産物の陽性率は36.0%で、Grade Iで16.0%、Grade IIで34.3%、Grade IIIで69.2%の検体に発現がみられ、組織学的悪性度の上昇とともに発現頻度が高くなった。c-erbB-2産物を発現する検体の1年以内の死亡率は80%であり、予後決定因子のひとつとして重要であると考えられた。変異型のp53産物の陽性率は30.6%で、Grade Iが8.0%と低頻度であったが、発現の有無と1年以内の死亡率とには関連性がなかった。一方、エストロジェンレセプターの発現は2.74%と著しく低頻度であり、腫瘍細胞の増殖はエストロジェン依存性ではないことが明らかとなった。本年度は最終年度であるため総括を行った。まず、化学療法前の犬皮膚肥満細胞腫7例について抗癌剤耐性に関連する因子であるP糖タンパク質、MRP、メタロチオネインについての発現を免疫組織化学的に検索し、続いてプレドニゾロン、ビンブラスチン、ロマスチン、ドキソルビシンの投与により治療したが、因子発現と抗癌剤の効果および予後との関係を明らかにすることはできなかったため、さらに30例の症例を加え、継続して研究を実施している。次に57例の犬軟部組織肉腫について組織学的グレード分類と免疫組織化学的に抗癌剤耐性関連因子発現を検索し、P糖タンパク質を介した耐性機序が主体であることを示唆したが組織学的グレードとの関連性は低かった。さらにMRPおよびメタロチオネインなどの複数の因子が重複して作用してより強固な耐性を示すことが考えられた。猫乳腺癌において抗癌剤耐性関連因子、c-erbB-2産物、変異型p53産物、エストロジェン受容体の発現に関して免疫組織化学的に検索し、組織学的悪性度と予後との関連性を検討した。猫の乳腺癌は抗癌剤に対する自然耐性が高率にみられたが予後との関連性はなかった。c-erbB-2産物を発現する症例の1年以内の死亡率は80%であり、予後決定因子のひとつとして重要であると考えられた。変異型p53産物発現と1年以内の死亡率とには関連性がなく、エストロジェン受容体の発現は低頻度であり、腫瘍細胞の増殖はエストロジェン依存性ではないことが明らかとなった。
モノアミン系神経伝達物質に関連した睡眠時ブラキシズムの神経生理学的検討

睡眠時ブラキシズム(SB)は、覚醒反応に関連した、GrindingやClenchingを特徴とする反復性の咀嚼筋運動と定義され、その力学的作用は顎口腔系へ破壊的に作用し、歯科治療の予後を大きく左右し得るが、発症メカニズムは不明な点が多い。また、ブラキシズムは、ストレスや薬物、遺伝的要因など、さまざまな因子が複合的に関与する多因子疾患であり、マウスピース等の対症療法が第一選択となっているのが現状である。従って、より良い歯科診療ならびに口腔環境の向上のためにはブラキシズムの治療法の開発は必須であり、睡眠時ブラキシズムの発生メカニズムを解明することは歯科医学分野にとって急務である。睡眠時ブラキシズムのリスクインジケーターとして、先天的要因である遺伝子多型、後天的要因であるストレス、薬物等が報告されている。薬物においては、SSRI:セロトニン再取り込み阻害薬、SNRI:セロトニン・ノルアドレナリン再取り込み阻害薬、合成麻薬などとの関連が報告されており、特にSSRIは、抗うつ薬の一種で、シナプス間隙にあるセロトニン量を増やすことで薬効を発揮する一方、ブラキシズムを誘発する可能性が報告されている。これまで、ヒトのSB増悪が報告された薬物(SSRI:シタロプラム)を動物モデル(マウス)に慢性的に投与して咬筋筋活動を24時間記録し、Non-REM睡眠中の高い筋活動を示す時間が有意に増加することを示した。当該年度は、これまでに示したSSRI投与による咬筋活動への影響を、生理化学的に検討するため、ELISAを用い、SSRIを慢性的に投与したマウスの血中セロトニン濃度の測定を行った。所属機関で長期的に筋電図を取得する装置を留置することが困難であり、計画を変更したため、少し遅れている。当該年度は、動物実験計画を再度検討し、データ取得を行っている。今後は、SSRIを投与したことによるセロトニンの血中濃度や脳内の濃度を、投与期間による影響や日内変動について検討するため、さらにマウスを用いて実験を行い、データの解析、学会発表、論文の執筆を行う。睡眠時ブラキシズム(SB)は、GrindingやClenchingを特徴とする反復性の咀嚼筋運動と定義され、顎口腔系への破壊的な作用は歯科治療の予後を大きく左右し得るが、発症メカニズムは不明な点が多い。SBの治療法開発のため、発症メカニズムの解明は我々歯科医師が負う重要な責務である。これまで、ヒトのSB増悪が報告された薬物(SSRI:選択的セロトニン再取り込み阻害薬、シタロプラム)を動物モデル(マウス)に慢性的に投与して咬筋筋活動を24時間記録し、Non-REM睡眠中の高い筋活動を示す時間が有意に増加することを示した。当該年度は、脳波の解析を行い、SSRIの作用部位の特定の準備を進めている。研究における記録環境の整備に時間を要しており、研究プロトコールの再検討を行ったことにより当初の予定より遅れているが、おおむね順調である。今後は、暗期・明期のない状態での睡眠ー覚醒サイクルと筋活動の検討、ヒトに長期投与することによってブラキシズムが増加したとの報告があるほかのSSRI、SNRIの作用部位について検討を行う。本研究では次年度以降もマウスの長期的な管理、投与する薬剤や慢性投与に必要な材料が多く必要である。また、薬剤の作用部位の検討に高価な試薬を要する。

さらには、研究成果を広く公開するため、国内外の学会での発表、また情報交換をするための旅費として使用する予定である。マウス、試薬の購入に使用する予定である。また、研究の成果を広く一般に公表するための学会発表に関わる費用および論文作成費に使用する予定である。
戦後日本の構造変動と大学入学者選抜制度の変容に関する実証的研究

本研究は戦後日本において普及した新しい選抜制度を実証的に検討し、日本の教育システムの現代的状況を適正に位置づけることを目指すものである。まず第一に、本研究では日本・アメリカ・韓国の入学者選抜制度の文献研究を行い、日本、アメリカ、韓国でともに共通テストの依存度が高まっていること、また韓国では日本同様に調査書を重視した選抜が広まっていること、などの理解が得られた。第二に、教育拡大という構造変動が選抜制度の変容をもたらすという本研究の成果を補強するために、高校入試においても教育拡大が制度変容をもたらしていることを明らかにした。この成果は近刊『子どもと教育の社会学』第二巻において発表される予定である。第三に、入試競争の一因を成すと目される就職格差に関する共同調査に参画し、性別・出身校と学生の意識との関連を検討し、日本教育社会学において発表するとともに、入試制度と就職格差との関連を分析した。以上により、教育拡大を中心とする戦後の日本の構造変動が入試制度および選抜意識面で分極化傾向を示するとともに、それが日本のみの現象ではない可能性があることが明らかとなった。本研究は現代日本の教育システムの等質を、1)選抜制度の国際比較、2)選抜制度の歴史・実態を把握する資料の検討、3)アンケート調査による選抜制度の計量分析、によって明らかにするものである。本年度は、1)については文献収集による整理・検討を予定していたが、アメリカ・韓国の大学入学者選抜関係の文献を収集・整理はほぼ予定通り行い、今後さらに資料を集めて検討に入る予定である。2)については、大学入試案内のデータベース作成作業を行なった。これに基づく研究成果を日本教育社会学会大会および東京大学大学院教育学研究科紀要にて発表した。ただし、歴史的資料の収集については来年度に実施する予定である。3)については、「大学入学者の意識と行動に関する調査」を実施し、データを集計したうえで、これに基づく研究成果を日本教育社会学会大会および東京大学大学院教育学研究科紀要にて発表した。なお、この調査の結果を元に、より大規模なアンケート調査を12月に実施し、現在データの整理・集計作業を進めている。本年度は以上の研究により、日本の大学入学者選抜が諸外国とは異なる特徴を持っていること、また日本の中で「多様化」といわれながら実態としてエリートの選抜と大衆の選抜へと二極化しつつあることが明らかとなった。来年度はこの成果を踏まえ、さらなる資料収集・データ分析を行う予定である。
肺高血圧症における血管内皮ROCK1の機能解析

ROCK1による血管病の発症進展の制御機構についてROCK1欠損マウスを用いた解析等を行ない、以下の知見を得た。1.総頸動脈結紮モデルを用いて血管リモデリングにおけるROCK1の機能解析をおこなった。野生型(WT)マウスとROCK1ヘテロ欠損(ROCK1^<+/->)マウスの間で比較検討し、ROCK1^<+/->マウスでは、WTマウスに比べて血管壁の肥厚と内腔狭窄が抑制されていることを明らかにした。2.ROCK1^<+/->マウスでは、結紮後の血管炎症が軽減しており、血管壁細胞の増殖が低下していることを明らかにした。3.ROCK1^<+/->マウスより得た骨髄をWTマウスに移植したところ、ROCK1^<+/->マウス同様に病変の軽減を認めた。4.ROCK1^<+/->マウスより初代培養した血管内皮細胞はWTマウスより初代培養した血管内皮細胞に比べ、ROCKの活性化が低下しており、接着分子ICAM-1やVCAM-1の発現の低下を認めた。5.ROCK1^<+/->マウスより初代培養した血管平滑筋細胞はWTマウスより初代培養した血管平滑筋細胞に比べ、ROCKの活性化が低下しており、運動能の低下を認めた。6.ROCKの阻害により、接着班の成熟が抑制され、運動能が低下していることを明らかにした。7.ROCKの阻害により、BH_4産生が増加し、NO産生が増加することを明らかにした。1.血管内皮特異的ROCK1欠損マウスの作製マウス作製中である。2.血管リモデリングにおけるROCK1の役割血管リモデリングは、高血圧、炎症、動脈硬化における血管病変の形成、進展に重要な役割を果たしている。血管リモデリングにおけるROCK1の役割について、総頸動脈結紮モデルを用いて野生型マウスとROCK1ヘテロ欠損マウスを比較検討した。総頸動脈結紮後28日後において、野生型マウスでは結紮部近位側に著明な血管壁の肥厚と内腔狭窄をきたしたが、ROCK1ヘテロ欠損マウスでは、血管壁の肥厚は優位に抑制されており(21800±3400versus4200±400μm^2,P<0.01)、それに伴い、内腔狭窄も優位に抑制されていた(43300±7800versus19600±5200μm^2,Pく0.01)。また、対側のsham手術側の総頸動脈には両群間ともに病変を認めなかった。血圧は両群間に差を認めなかった。結紮後3日後及び、7日後に血管内皮へ接着した白血球の数を計測したところ、野生型マウスに比べ、ROCK1ヘテロ欠損マウスにおいて、接着した白血球の数は優位に少なく、ROCK1ヘテロ欠損マウスでは血管炎症が軽減していると考えられた。結紮後14日後において、PCNA染色により、血管平滑筋細胞を主とした血管壁細胞の増殖能を評価したところ、野生型マウスに比べ、ROCK1ヘテロ欠損マウスにおいては新生内膜、中膜どちらにおいても増殖能が優位に低下していた。両群マウスより、血管内皮細胞を初代培養し、ROCKキナーゼ活性を測定したところ、ROCK1ヘテロ欠損マウスより得た血管内皮細胞は野生型マウスより得た血管内皮細胞に比べ、優位にROCKキナーゼ活性が低下していた。それに伴い、血管内皮細胞における接着分子ICAM-1やVCAM-1の発現もROCK1ヘテロ欠損マウスより得た血管内皮細胞において減弱しており、ROCK1ヘテロ欠損マウスにおける白血球の接着抑制の一因と考えられた。

また、同様に、両群マウスより、血管平滑筋細胞を初代培養し、ROCKキナーゼ活性を測定したところ、ROCK1ヘテロ欠損マウスより得た血管平滑筋細胞は野生型マウスより得た血管平滑筋細胞に比べ、優位にROCKキナーゼ活性が低下していた。1.血管内皮特異的ROCK1欠損マウスの作製floxROCK1マウスのコンストラクトに問題があることがわかり、改めてflox ROCK1マウスを作製し直した。2.血管リモデリングにおけるROCK1の機能解析昨年度、総頸動脈結紮モデルを用いて野生型(WT)マウスとROCK1ヘテロ欠損(ROCK1^<+/->)マウスを比較検討し、ROCK1^<+/->マウスでは、WTマウスに比べて血管壁の肥厚と内腔狭窄が優位に抑制されていること、これは結紮後の血管炎症の軽減に伴い、血管壁細胞の増殖が低下していたことによることを報告した。血管炎症の軽減の原因が血管にあるのか、白血球にあるのかを骨髄移植を用いて検討した。ROCK1^<+/->マウスより得た骨髄をWTマウスに移植したところ、ROCK1^<+/->マウス同様に病変の軽減が認められたことから、少なくとも、骨髄細胞由来の白血球中のROCK1が関与していると考えられた。3.細胞高次機能におけるROCK1の機能解析ROCK1^<+/->マウスより血管内皮細胞を初代培養した。ROCK1^<+/->マウスより得た血管内皮細胞はWTマウスより得た血管内皮細胞に比べ、トロンビン刺激下でのROCKの活性化が低下しており、接着分子ICAM-1やVCAM-1の遺伝子発現が低下していた。同様に、ROCK1^<+/->マウスより血管平滑筋細胞を初代培養した。ROCK1^<+/->マウスより得た血管平滑筋細胞はWTマウスより得た血管平滑筋細胞に比べ、血小板増殖因子刺激下でのROCKの活性化が低下しており、遊走能の低下を認めたが、増殖能は低下していなかった。
初発および再発円錐角膜の進行予測及び予防に関する研究

円錐角膜は進行性に角膜の突出と菲薄化を来たし視力低下をきたす疾患で人口10万人に対して50ー230人程度の有病率とされている。治療は、初期にはハードコンタクトレンズによる視力矯正、進行例においては角膜移植が行われる。近年は角膜クロスリンキングという進行予防のための新しい治療法が欧米を中心に実施されているが、日本では保険適応になっていない。本研究の目的は、1再発円錐角膜の進行予防をすること、2再発円錐角膜のリスクファクターや形態的特徴を調べること、3初発、再発含む円錐角膜に関する進行予測のバイオマーカを調べることであった。そしてこれらの結果を診療にフィードバックすることで患者の治療に役立てることが最終目標である。1に関連して、円錐角膜患者に対する角膜クロスリンキングの自費診療が開始できる体制が整った。2に関して、再発円錐角膜の特徴を調べるため全層角膜移植術後平均27年経過している症例群100例を角膜屈折力の変化や再移植の有無などについて調査したところ、他疾患群とくらべて、円錐角膜群においては、術後数十年たっても角膜の突出が進むことが示された。また、全層角膜移植後の急性水腫はホストグラフト接合部におこりやすいことが明らかになり、これは初発円錐角膜での急性水腫の好発部位と異なるうえ、他疾患群では急性水腫を発症したものはなかったことから、再発円錐角膜の特徴的所見といえた。現在これらの症例群の詳細な形状解析をさらに進めており、円錐角膜再発のリスクファクターの検索をさらに進めていく計画である。3に関しては涙液サイトカインのみならず患者検体から得られた角膜実質細胞に対するin vitroでの実験も進めていく。再発円錐角膜に関する論文が2報受理された。円錐角膜再発のリスクファクター検索も現在のところ順調に進んでおり、論文投稿準備を進めていく。再発円錐角膜の進行予防に関しては倫理委員会の対応に時間を要している。再発円錐角膜の特徴およびリスクファクターの検索を進めるほか、随時論文投稿を進めていく。円錐角膜発症・再発に関する涙液バイオマーカ検索に関しては、サイトカイン等のみならず、RNA、DNAなどの検索にも対応できるよう倫理委員会などの対応を進めていく。また全層移植後得られた角膜実質内ケラトサイトなどの解析も検討する。臨床研究の開始が遅れたため。研究は継続するため次年度以降に使用予定である。
肺パスツレラ菌のRTX toxinの機能解析とその検出・同定法の開発

本研究では、肺パスツレラ菌が保有するRTX (repeat in structural toxin) toxinを同定しその機能を明らかにし、さらにその検出法を開発することを目標に実験を遂行した。これらの結果、PnxIA、PnxIIAおよびPnxIIIAという3つのRTX toxinを肺パスツレラ菌が産生することがわかった。PnxIAおよびPnxIIAはヒツジとマウス由来の赤血球に対して弱溶血性を示したが、PnxIIIAは明確な溶血性を示さなかった。細胞傷害性については、J774A.1細胞株を用いてラクトースデヒドロゲナーゼの放出量を指標に検証したところ、3種のRTX toxinとも細胞傷害性を示し、とくにPnxIAとPnxIIAが高い細胞傷害性を示した。PnxIIIAについては、部分的にイムノグロブリン様ドメインや赤血球凝集に関与するリピート配列が存在することから、細胞外マトリックス(ECMs)への付着能やヒツジ赤血球に対する凝集反応性について試験を行った。その結果、供試したECMsの中でもラット由来のコラーゲンタイプIに対してとくに付着性が高く、約30 ng/mlで赤血球凝集反応を起こすことが明らかになった。免疫電顕などの結果からPnxIIIAは肺パスツレラ菌の細胞外膜上に存在することからPnxIIIAは付着因子として働くことが示唆された。これら肺パスツレラ菌のRTX toxinの野生株からの検出には、PCRやサザンハイブリダイゼーションなどの遺伝子からの検出も可能であるが、非特異反応が起こる場合も多く、抗体を用いたタンパク質の検出のほうが高い正確性を示した。しかしながら、野生株においてはとくにPnxIIAやPnxIIIAの多様性が高く、RTX toxinの同定や検出法の開発には様々な手法をさらに検証する必要がある。Pasteurella pneumotropica(以下肺パスツレラ菌)はげっ歯類におけるパスツレラ症の病原体であるが、その病原性因子は未だ明らかになっていない。Pastemllacneの病原体にはRTX(repeats in structural toxin)toxinという、特徴的な構造をとる高分子タンパク質を産生する菌種が多数存在し、重要な病原性因子と考えられている。肺パスツレラ菌もRTX toxinを産生する可能性があると考えられるが、肺パスツレラ菌とRDX toxinに関連する報告は皆無である。肺パスツレラ菌の病原性因子を明らかにするため、RTX toxinに着目し、肺パスツレラ菌からの検出と同定、さらにそのRTX toxinタンパク質の解析を試みた。肺パスツレラ菌ArCC35149のgenomic DNAからクローンライブラリーを作製し、得られたクローンを近縁種のRTX toxinをコードするプローブなどを用いてスクリーニングを行い、これにより得られた部分的な遺伝情報からinversePCRによってRTX toxinタンパク質と分泌に関連する全遺伝子配列を決定した.これらの結果、2種類のRTX toxinをコードする遺伝領域が同定された。そのうち、pnxlと命名したRTX toxinをコードする領域は、分泌されるRTX toxiiとTypeI分泌機構をコードする領域から構成されているが、pnxIIは分泌されるRTX toxinのみをコードしていた。何れのRTX toxinタンパク質もC末端側にRTX toxinの保存配列が複数存在し、N末端側に疎水性ドメインがありporeを形成するものと考えられた。これらの遺伝子産物はCaイオン存在下でヒツジとマウスの赤血球溶解能を有しており、当菌の病原性に関与していることが示唆された。また、肺パスツレラ菌野生株約40株の保有状況を調査した結果、pnxIは約8割、pnxIIは約4割の株が保有しており、多くの野生株に分布していることが明らかになった。

Pasteurella pneumotropica (以下肺パスツレラ菌)はげっ歯類におけるパスツレラ症の病原体であるが、その病原性因子は未だ明らかになっていない。本研究はその病原因子の特定と同定手法の開発を目的に実施している。昨年度までの大規模なスクリーニングから、肺パスツレラ菌には、2種類のRTX toxinをコードする遺伝子が存在し、その2種類のRTX toxinともにヒツジ赤血球やマウス赤血球に対して溶血性を示すことが明らかになった。さらに昨年度はその2種類のRTX toxinのマウス由来の単球・マクロファージ細胞株に対する細胞障害性とプロテアーゼ活性の有無について検索した。J774A.1細胞株に可溶化させた組換えPnxIAまたはPnxIIAタンパク質を段階的に添加していくと、J774A.1細胞からの乳酸還元酵素(LDH)の放出量が高まり、細胞障害が起こっていることが観察された。ともに添加4時間後には約70%の細胞障害性があることから、PnxIAおよびPnxIIAはともにロイコトキシンでもあることが示唆された。また、アゾカゼインに対するプロテアーゼ活性を測定したところ、PnxIIAがアゾカゼインに対する高い分解活性を示すことから、PnxIIAはプロテアーゼの作用も有しており、肺パスツレラ菌の重要な病原性因子であるものと考えられた。さらに、肺パスツレラ菌ATCC35149のゲノムを再スクリーニングしたところ、PnxIIAのCa結合サイトと相同性が高い第三のRTX toxin-PnxIIIAが存在することが明らかになった。この遺伝子情報と詳しい機能について現在検討している。本研究では、肺パスツレラ菌が保有するRTX(repeat in structural toxin)toxinを同定しその機能を明らかにし、さらにその検出法を開発することを目標に実験を遂行した。これらの結果、PnxIA、PnxIIAおよびPnxIIIAという3つのRTX toxinを肺パスツレラ菌が産生することがわかった。PnxIAおよびPnxIIAはヒツジとマウス由来の赤血球に対して弱溶血性を示したが、PnxIIIAは明確な溶血性を示さなかった。細胞傷害性については、J774A.1細胞株を用いてラクトースデヒドロゲナーゼの放出量を指標に検証したところ、3種のRTX toxinとも細胞傷害性を示し、とくにPnxIAとPnxIIAが高い細胞傷害性を示した。PnxIIIAについては、部分的にイムノグロブリン様ドメインや赤血球凝集に関与するリピート配列が存在することから、細胞外マトリックス(ECMs)への付着能やヒツジ赤血球に対する凝集反応性について試験を行った。その結果、供試したECMsの中でもラット由来のコラーゲンタイプIに対してとくに付着性が高く、約30ng/mlで赤血球凝集反応を起こすことが明らかになった。免疫電顕などの結果からPnxIIIAは肺パスツレラ菌の細胞外膜上に存在することからPnxIIIAは付着因子として働くことが示唆された。