hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
腸管上皮タイトジャンクション透過性制御因子としての乳成分の役割

本研究は、腸管の吸収上皮細胞がシグナル受容等にも関与する細胞であることを「乳成分がシグナル因子として腸管機能の調節を行うというプロセス」を例にとって検証しようとするものである。腸管の吸収上皮細胞モデルとしてはヒト大腸癌由来のCaco-2を用い、これを透過性膜上で培養してその粘膜側コンパートメントに乳画分等を添加した。培養によって細胞層タイトジャンクション(TJ)の状態にどのような変化が現れるかを観察したところ、乳タンパク質分解ペプチドのある画分やサイトカインによってTJにおける物質透過性が高まることを見出した。一方、腸管上皮細胞の近傍には免疫系細胞、神経系細胞などが存在し、それらが腸管上皮細胞間隙に進入することが知られるようになったことから、Caco-2細胞層を透過性膜の下側に単層培養し、上側から免疫系細胞を加える新規な共培養法を開発した。このモデル系を用いて、乳成分等が腸管上皮細胞を中心とした細胞間相互作用にどのような影響を及ぼすかを検討する基盤を構築した。乳成分によって細胞間のTJ透過性亢進を引き起こした時に免疫系細胞の挙動がどのように変化するかについての結果はまだ得られていないが、TJ透過性を高めることが知られているある種の食品成分によって、マクロファージ系細胞が腸管上皮細胞間隙に進入することを観察することに成功している。また副次的な成果として、腸管上皮細胞の炎症状態を誘起する新たな実験系を本研究の過程で構築することが出来た。本研究で得られた成果は、腸管上皮の機能や乳の機能に関する新規の知見を提供するのみならず、アレルゲン透過性を抑制する機能を持った調製粉乳や、管透過性亢進の抑制を意図した機能性食品の開発にもつながると考えられる。本研究では、乳成分が(1)腸管上皮細胞間タイトジャンクション(TJ)の形成プロセスに及ぼす影響と(2)TJの損傷プロセスに及ぼす影響の2点について検討するが、本年度は特に後者の研究を進めるために必要な実験系の構築を行った。まず、ヒト腸管上皮細胞Caco-2を透過性膜上に単層培養し、ついで基底膜側のチャンバーに免疫系細胞を培養する複合培養系を構築した。その結果、ヒト単球系細胞THP-1をCaco-2細胞の基底膜側で培養することによってCaco-2細胞層の損傷が誘導され、TJ透過性が亢進することが見出された。この実験系は一種の腸管上皮炎症モデルとして利用可能であると考えられる。次に基底膜側からサイトカインを加えてTJ透過性の充進を誘導するものを探索した。Caco-2細胞層の経上皮電気抵抗(TER)を指標に検討した結果、インターフェロンγに顕著な作用が見出され、サイトカイン単独でも類似の腸上皮炎症モデルが構築できる可能性が示された。さらに、免疫系細胞と腸管上皮細胞の直接的な接触を介した相互作用と、それによる腸管上皮炎症モデルの構築を目指して、透過性膜の下側にCaco-2細胞層を形成させ、上側から免疫系細胞を加える新しい複合培養系の構築に着手した。その結果、TERの値がほぼ同じような下向きCaco-2細胞層の作成や、免疫系細胞をケモカインで誘導して透過性膜に進入させることが可能であることを見出した。このような実験系を用いて、次年度はTJ損傷への乳成分の影響について解析を開始する。同時に腸管上皮細胞間タイトジャンクション(TJ)の形成プロセスに及ぼす影響についても予定通り実験を進める予定である。
疎水性モノマーを用いた新規歯科用レジン材料の開発とその生体適合性に関する研究

研究者らは、腐敗臭や機械的性質などの低下につながる、MMA系の吸水性を改善するためにMMAレジンの疎水性化を計画した。疎水性モノマーとして、Phenyl methacrylate(PHMA)の合成方法および疎水性モノマーであるPHMAおよびNorbonyl methacrylate(NBMA)を用いた。これらモノマーにより疎水性化が可能となり、レジンの機械的性質にも向上が認められた。培地に対する疎水性や揮発性モノマー(Bis-GMA)の分散性と疎水性モノマーを分散させるための分散剤や分散媒を検討した。Bis-GMAは、培地の下層に比べ上層の濃度が高く培地に均一に分散していない。このことは、細胞毒性試験から得られた濃度と毒性との関係が必ずしも正しくないことを示す。一方、本研究で検討した分散剤は、細胞に対し低濃度でも毒性を示し、分散剤として適切でなかった。また、分散媒についても適切なものがなかった。新規疎水性モノマーであるフェニルメタクリレート(PH)を合成し、PHを含む各種メタクリレートモノマー、たとえば、ノルボニル、シクロ、ベンジル、ヘキシル、ドデシルメタクリレートなどについて細胞毒性および、それらモノマーとMMAの共重合体の機械的性質などについて検討した。これら疎水性モノマーの細胞毒性試験を行うにあたり、親水性培地への疎水性モノマーの分散性を検討した。すなわち、疎水性歯科用ベースモノマーであるBis-GMAは、細胞毒性試験の報告は多いが、研究者により結果が相違していたが、本研究により培地に対する分散性が問題であることが分かった。さらに、モノマーの培地への分散を助長する分散剤や分散媒の、種類、濃度および細胞毒性などについて検討した。その結果、分散性能や操作性が良好でかつ毒性の無いなどの全ての条件を満たす、分散剤および分散媒は、見出せなかった。ついで、蛋白質の解析より細胞に対する傷害性を評価する方法を確立するため、新規疎水性モノマーなど各種モノマーを歯髄線維芽細胞に作用させ、DNA合成能やALPase活性を測定し、従来の生体適合性試験と比較した。その結果、ほとんどのモノマーにおいてコントロールに対する50%細胞毒性は、モノマー濃度で0.61mMであった。また、これら疎水性モノマーとMMAの共重合体の機械的性質について、各種試験により検討した結果、各種疎水性モノマー共重合体はPMMAと同様の優れた機械的性質を示した。合成した新規疎水性モノマーであるフェニルメタクリレートを含めその他各種疎水性メタクリレートモノマー、例えば、ノルボニル、シクロ、ベンジル、ヘキシル、ドイデシルメタクリレートなど、あるいはメチルメタクリレートモノマー(MMA)との共重合は、MMAのみを重合させたポリメチルメタクリレートに比べ優れた機械的性質を示すものがある。これら重合体を生体に使用するには、モノマー単独の細胞毒性を評価する必要がある。細胞毒性の評価法としては、これまで歯髄線維芽細胞(HPF)に及ぼす影響をDNA合成能などで検討している。この細胞毒性の評価をさらに進めるためには、HPFの蛋白質に及ぼす影響についても検討する必要があり、その研究を行っている。蛋白質を分離および確認する手法としては、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)による方法、および二次元電気泳動法を用いる方法があり、各々どのような利点あるいは欠点を有するかを検討する必要があるのでその比較を行った。HPFの上清蛋白質を試料として逆相HPLCにより分離分析を行った。一方、HPFの上清蛋白質の未変性試料を用い、電気泳動法により分離した。その結果、前者は操作が容易で短時間でデーターが得られ、カラムより分離された蛋白質の分取が簡便であり、次のステップである蛋白質のシーケンスのための試料量採取も容易であることが分かった。しかし、分離能は電気泳動法に比べ劣っていた。一方、電気泳動法は測定用ゲルの調製に注意が必要であり、測定時間が長く、測定終了後の各種染色時間も長いなどの欠点があった。しかし、二次元による電気泳動は、HPLCより高い分解能を有していた。逆相HPLCもしくはGPCを用い、極性もしくは分子量の差により大きく分けた後、必要に応じ電気泳動法を使用するのが良いと考える。生体適合性に優れた新規歯科用レジン材料を開発するために,種々の官能基をもつモノマーおよびポリマーについて,分子構造と細胞毒性の関係を調べるために,それら化合物を接種したヒト歯髄線維芽細胞(HPF)に対する応答性(増殖)から検討した.

その結果,歯科用モノマーの基本となるアクリル酸(A)やメタクリル酸(M)におけるHPFに対する応答性を,AおよびBの飽和化合物であるプロパン酸(P)と2-メチルプロパン酸(I)を比較として用い調べた.AとPの50%細胞増殖阻止濃度(IC50)は約2mMであり,細胞毒性の強さは,A=P>M>Iとなった.分子量が小さい直鎖脂肪酸は毒性が強く,分子鎖長が長く,分枝状で飽和のものほど毒性は低い.さらにカルボキシル基の数を増した飽和多価カルボン酸について検討した.リンゴ酸,酒石酸,クエン酸,トリカルボン酸,テトラヒドロフラン-2,3,4,5-テトラカルボン酸,およびポリマーのポリアクリル酸,ポリマレイン酸,ポリイタコン酸,ポリアコニット酸では,5mM濃度の添加培養液をHPFに接種しても細胞毒性は認められなかった.分子のカルボキシル基の数は,細胞毒性にほとんど影響されなかった.また,カルボキシル基以外の官能基をもつ機能性モノマーについて検討した.用いた機能性モノマーとしては,アクリル酸(A),3-アクリロキシプロパン酸(AP),2-アクリロキシエチルリン酸(AEP),2-アクリルアミド-2-メチルプロパンスルホン酸(AMPS)である.リン酸基をもつAEPの細胞毒性は,1mM接種で著しい細胞毒性を示し,ほとんどの細胞は死滅した.一方,スルホン基をもつAMPSの毒性は,非常に少なく,歯髄や歯肉に触れる可能性が高い接着機能性モノマーの官能基として有効であることが分かった.
現実的クォーク模型バリオン間相互作用による軽いハイパー核の研究

本研究の目的は、現実的クォーク模型バリオン問相互作用であるfss2やFSSを用いて軽いΛハイパー核のFaddeev計算やBrueckner理論に基づく詳細なG-行列計算を行い、ハイパー核やハイペロン・核子相互作用の新しい実験データとの比較検討を通じて、より正確なハイペロン・核子相互作用やハイペロン・ハイペロン相互作用の理解を得ることである。最近の大きな成果である、クォーク模型B_8B_8相互作用fss2,FSSの完成、および二体RGM kernelを用いた三体クラスター方程式の定式化のもとに、種々のハドロン系におけるFaddeev計算が大きく進展した。1.fss2とFSSを用いた少数多体系のFaddeev計算:これには、HypertritonのΛNN-ΣNNチャンネル結合Faddeev計算、2Λα模型による^6_<ΛΛ>He(長良イベント)のFaddeev計算、および^9_ΛBeの励起5/2^+,3/2^+状態のspin-orbit splittingの検討が含まれる。それぞれ、実験との比較によりハイペロン核子相互作用やΛΛ相互作用に対する重要な知見が得られた。2.二体クラスターRGM kernelを用いた三体クラスターFaddeev formalismの発展:このformalismを三体クラスター系の直交条件模型に適用し、新たにalmost redundant Faddeev componentという重要な概念を明らかにした。3.fss2,FSSの改良とQMPACK homepageの開設:アイソスピン基底以外に物理的粒子基底で計算できる計算コードを開発し、クーロン力の取り扱いにも改善を加えた。更に、これらをウエブページにより一般に公開した。URLはhttp://www.qmpack.homelinux.com/qmpack/index.php本研究の目的は、現実的クォーク模型バリオン問相互作用であるfss2やFSSを用いて軽いΛハイパー核のFaddeev計算やBrueckner理論に基づく詳細なG-行列計算を行い、ハイパー核やハイペロン・核子相互作用の新しい実験データとの比較検討を通じて、より正確なハイペロン・核子相互作用やハイペロン・ハイペロン相互作用の理解を得ることである。URLはhttp://www.qmpack.homelinux.com/qmpack/index.php本研究の目的は、現実的クォーク模型バリオン間相互作用であるfss2やFSSを用いて軽いΛハイパー核のFaddeev計算やBrueckner理論に基づく詳細なG-行列計算を行い、ハイパー核やハイペロン・核子相互作用の新しい実験データとの比較検討を通じて、より正確なハイペロン・核子相互作用やハイペロン・ハイペロン相互作用の理解を得ることである。具体的には、これまでの成果である二体クラスターRGM kernelを用いた三体クラスター方程式の定式化に基づいて、種々のハドロン系におけるFaddeev計算を行う。今年度の新しい成果は1.深いααポテンシャル(BFW potential)を用いた3αOCMでは複合粒子系のFaddeev方程式に正確に[21]対称にならないalmost redundant statesが存在し、その取り扱いによって基底状態が大きな結合エネルギーを持つ場合とそうでない場合の二通りの結果が得られる。2.ααRGMkernelを用いたααΛ三体模型による^9_ΛBeのFaddeev計算では、中心力の範囲内での昨年までの研究を延長し,クォーク模型バリオン間相互作用のスピン軌道力を直接用いた励起5/2^+、3/2^+状態のspin-orbit splittingの検討をjj-couplingschemeのFaddeev計算により行った。Nijmegen模型等の中間子交換ポテンシャルよりは実験に近い小さい値が出るが、まだ十分ではなく、更に進んだΛN有効相互作用の取り扱いが必要である。3.クォーク模型バリオン間相互作用を直接角いたHypertritonのFaddeev計算が可能になった。fss2はNijmegenNSC89と似た結果を与えるが、高い部分波の寄与がかなり大きい。ΛN相互作用の^1S_0状態と^3S_1状態の相対的な引力の強さは、P_Λ=200MeV/c領域で位相差が3°7°位のものが望ましい。

本研究の目的は、現実的クォーク模型バリオン間相互作用であるfss2やFSSを用いて軽いΛハイパー核のFaddeev計算やBrueckner理論に基づく詳細なG-行列計算を行い、ハイパー核やハイペロン・核子相互作用の新しい実験データとの比較検討を通じて、より正確なハイペロン・核子相互作用やハイペロン・ハイペロン相互作用の理解を得ることである。具体的には、これまでの成果である二体クラスターRGM kernelを用いた三体クラスター方程式の定式化に基づいて、種々のハドロン系におけるFaddeev計算を行う。今年度の特徴はこれらの詳細な計算を通じて、もっとも新しい模型であるfss2に対しても幾つかの点で不十分さが現れ始めたことである。まずHypertritonから分かるΛN相互作用の^1S_0状態と^3S_1状態の相対的な引力の強さについては、その差は以外に小さく、p_Λ=200MeV/c領域で位相差が0°2°程度のものが望ましい。有効中間子交換ポテンシャルであるκ中間子massを少し大きくとると改善できるが、他のΛN相互作用への影響を検討する必要がある。またααRGMkernelを用いたααΛ三体模型による^9_ΛBeのFaddeev計算では、Born近似によるバリオン間相互作用のスピン軌道力の取り扱いの限界を乗り越えるためにG-行列計算に基づく一体スピン・軌道力のScheerbaum因子の検討を行った。その結果、この実験データに関する限りfss2の様にスカラー中間子交換ポテンシャルにLS力を含めることは得策ではなく、むしろFSSの様にLS力の起源をすべてクォーク部分からの寄与とするほうが有利であることが分かった。一方fss2,FSSとも同様な結果を与えている場合も多い。その一例としてΣ^+p相互作用があるが、その中間エネルギー領域におけるKEK実験データの解析が進み,我々のクォーク模型相互作用のNijmegensoft-coreポテンシャルに対する優位性が示された。今年度は、まずfss2とFSSの改良の面で、スピン・アイソスピン因子の計算のためのアルゴリズムを改善することにより、全ての八重項バリオン間の相互作用に対して、アイソスピン基底と粒子基底の双方での計算が可能になった。粒子基底では、荷電、中性パイ中間子の質量の差やクーロン力等による荷電対称性の破れも採り入れている。
Death receptorによるアポトーシス誘導及びNF-κB活性化機構の解析

セスキテルペンに属するサントニンを出発材料として一連の関連物質を合成し炎症性サイトカインIL-1によるICAM-1の発現誘導に対する構造活性相関を検討した結果、α-メチレン-γ-ラクトン構造を持たないがA環に臭化ケトンを有するSRC2に強い阻害活性が見い出された。SRC2はNF-κBの核移行およびIκB蛋白質の分解を阻害した。また、TNFによるICAM-1の発現を選択的に抑制する物質としてE-73を単離した。E-73は、TNFによって誘導されるNF-κB核移行およびIκB蛋白質の分解を抑制した。E-73によるNF-κB活性化阻害には、少なくともp38MAPキナーゼの活性化が関与していることが示唆された。マイコトキシンの1つであるペニシリン酸はFasリガンドによる細胞死誘導を阻害した。ペニシリン酸はFasリガンドによるDISC複合体形成は阻害せず、DISC複合体に含まれるcaspase-8の自己限定分解を阻害した。ペニシリン酸は無細胞系におけるチトクロームC添加によるcaspase-9の活性化を阻害したが、いったん活性化したcaspase-3には影響しなかった。したがって、ペニシリン酸はcaspase-8、caspase-9のinitiator caspaseに選択的に作用し、その自己限定分解による活性化を抑制することが示唆された。ヒト末梢T細胞において、抗CD3抗体で誘導される増殖反応がFasリガンドの添加によって増強され、転写因子NF-κBおよびAP-1活性化とともにCaspase-8阻害蛋白質であるFLIPのDISC複合体への会合が認められた。FLIPはアダプター蛋白質TRAF-1、TRAF-2、RIP、MAPKKKであるRaf-1と相互作用し、NF-κBおよびErk活性化を誘導した。T細胞においては、FLIPがT細胞レセプターの刺激と協調的に働き、NF-κBやErk活性化を増強し、IL-2産生が亢進することが明らかとなった。ヒトB細胞リンパ腫Raji細胞においてペニシリン酸は可溶性Fasリガンドで誘導したアポトーシスを阻害した。ペニシリン酸はFasへのFADDやCaspase-8の会合(DISC複合体形成)を阻害しなかった。しかしながらペニシリン酸はDISC複合体に含まれるCaspase-8の限定分解を阻害することが認められた。したがってペニシリン酸はCaspase-8の自己限定分解による活性化を選択的に阻害していると思われる。ヒト肺癌腫A549細胞においてはIL-1やTNF-αなどの炎症性サイトカインによってその誘導蛋白質の1つであるICAM-1が細胞表面に発現する。セスキテルペンに属するサントニンを出発材料として一連の関連物質(Santonin-related compound;SRC)を合成しICAM-1の発現誘導に対する構造活性相関を検討した。その結果、α-メチレン-γ-ブチロラクトン構造を持たないがA環に臭化ケトンを有するSRC2に強い阻害活性が見い出された。SRC2は細胞内蛋白質輸送や高分子合成には影響を与えず、NF-kBサブユニットの1つp65蛋白質の細胞質から核内への移行を阻害した。さらにSRC2はIkB蛋白質の分解も阻害した。以上の結果からSRC2はIL-1やTNF-αによるNK-kB活性化シグナル伝達においてIkB蛋白質分解の上流を阻害していることが示唆された。

また、IL-1/TNF-αによるICAM-1の発現誘導を阻害する物質を微生物代謝産物等の天然物より探索した。その結果、一放線菌培養液中にTNF-αによるICAM-1の発現を選択的に阻害する活性を見い出した。この活性成分を精製し、その物理化学的性質を検討したところ、E73(アセトキシシクロヘキシミド)であることが判明した。E73はTNF-αによるNF-kBの核移行とIkBの分解を選択的に抑制した。TNFによる細胞接着因子ICAM-1の発現を抑制する物質としてE-73(アセトキシシクロヘキシミド)を単離した。E-73は、蛋白合成阻害作用とは異なる機構によって、TNFによって誘導されるNF-κB核移行およびIκBαの分解を抑制した。E-73はTNFレセプターに会合するアダプター蛋白質TRADD,RIP,TRAF2の発現量には影響を与えなかった。一方、E-73処理細胞では顕著なp38MAPキナーゼおよびSAPK/JNKのリン酸化が観察された。また、p38MAPキナーゼの特異的阻害剤SB203580で前処理するとE-73によるIκBα分解阻害がうち消されることが認められた。以上の結果から、E-73によるNF-κB活性化阻害には、少なくともp38MAPキナーゼの活性化が関与していることが示唆された。マイコトキシンの1つであるペニシリン酸はFasリガンドによる細胞死誘導を阻害した。ペニシリン酸はFasリガンドによるDISC複合体形成は阻害せず、DISC複合体に含まれるcaspase-8の自己限定分解を阻害した。一方、ペニシリン酸はスタウロスポリンによるミトコンドリア経路で誘導される細胞死も抑制することが明らかとなった。そこで、無細胞系におけるチトクロームC添加によるcaspase-9およびcaspase-3の活性化に対する影響を検討したところ、caspase-9の活性化は阻害したが、いったん活性化したcaspase-3には影響しなかった。以上の結果から、ペニシリン酸はcaspase-8、caspase-9のinitiator caspaseに選択的に作用し、その自己限定分解による活性化を抑制していることが示唆された。FLIPはESTデータベースの相同性検索によって1997年にクローニングされた抗アポトーシス蛋白質である。FLIPはFADDやcaspase-8と結合し、death receptorを介して誘導されるcaspase-8の活性化およびそれに続くアポトーシス誘導を阻害する。ヒト末梢T細胞においては、抗CD3抗体で誘導される増殖反応がFasリガンドの添加によって増強され、転写因子NF-κBおよびAP-1活性化とともにFLIPのDISC複合体への会合が認められた。FLIPはアダプター蛋白質であるTRAF-1、TRAF-2、RIP、MAPKKKであるRaf-1と相互作用し、NF-κBおよびErk活性化を誘導した。T細胞においては、FLIPがT細胞レセプターの刺激と協調的に働き、NF-κBやErk活性化を増強し、IL-2産生が亢進することが明らかとなった。
内在性antisense RNAによるセレノプロテインP翻訳制御機構の解析

昨年度引き続きCCDC152によるSelenoprotein P (SeP)mRNAの翻訳抑制メカニズムの探索を行った。昨年行った実験によって、CCDC152によるSeP mRNAの翻訳抑制にはCCDC152とSeP mRNAの配列一致領域以外の領域が必要なことが分かっている。そこで、非一致領域以外を細かく断片化して必要領域の絞り込みを行った。しかし、断片化したCCDC152をトランスフェクションすることによってSeP mRNA量に変化が見られる領域があり、領域の絞り込みが行えなかったため、遺伝子導入方法の検討など条件検討が必要になっている。次に、CCDC152の発現を制御する化合物の探索、メカニズム解析を行った。これまでに分かっているSeP mRNAの発現を増減させる刺激(培地中のグルコース濃度、酸化ストレス)ではCCDC152の発現量はSeP mRNAの発現パターンと逆の増減パターン(SeP mRNAが増加するとL-ISTは減少し、Sep mRNAが減少ずるとSePは増加する)を示し、SeP mRNAとCCDC152は同じシグナルによる異なる転写因子によって制御されている可能性が示唆された。次に、EGCGと同様に抗糖尿病作用が報告されている食物由来のポリフェノールがCCDC152の発現に与える影響を調べた。その結果、高濃度のクルクミン処理でCCDC152の発現量が増加していることが見いだされた。EGCG、クルクミンはともに抗酸化能があることが報告されているため、α-トコフェロール(ビタミンE)処理を行ったが、ビタミンE処理ではCCDC152の発現量に変化は認められず、脂質に対する抗酸化能がCCDC152の発現に関連していないことが分かった。本年度はnoncoding RNA-CCDC152-によるSelenoprotein P (SeP)の翻訳抑制メカニズム解析を中心に研究を行った。初めに、CCDC152がSeP mRNAと直接結合できるかをビオチン化cdc152を用いたPull down assay法で解析を行ったところ、CCDC152とSeP mRNAは直接結合する事が分かった。それに対し、他のSECIS配列を持つmRNA (glutathione peroxidase 1 (GPx1)等)とCCDC152は結合していなかった。次に、SeP mRNAに対する影響を検証した。その結果、CCDC152はSeP mRNAの分解速度およびmRNAの核外移行には影響を与えない事が分かった。翻訳段階のmRNA量を調べるためにポリソーム解析をおこなったところ、CCDC152を過剰発現させることによりSeP mRNAとリボソームの結合が阻害されるというデータが得られた。その原因として、Se含有タンパク質の翻訳に必須のタンパク質であるSBP2とSeP mRNAの結合がCCDC152過剰発現により減弱している事が確認された。これらの結果から、CCDC152によるSePのmRNA量の変化を伴わないタンパク質量の減少のメカニズムは、SeP mRNAとSBP2との結合を阻害する事による翻訳抑制が原因であると考えられる。CCDC152の翻訳抑制メカニズムの解明と並行してSeP以外のSECISに与える影響を検討した。その結果、CCDC152はGPx1, TR1などの他のSECISを持つSe含有タンパク質のタンパク質量・mRNA量には影響を与えなかった。そのため、CCDC152の影響はSECISに対するものではなくSeP mRNA特異的であることが分かった。CCDC152によるSeP転写後調整メカニズムが、SeP mRNAのSECISとSBP2との結合阻害である事が確認できたため。昨年度引き続きCCDC152によるSelenoprotein P (SeP)翻訳抑制メカニズムの探索を行った。特に、CCDC152によるSeP翻訳抑制に必要な配列の探索を中心に行った。SeP mRNAとCCDC152の一致配列をSeP mRNAのセレノシステイン挿入配列(SECIS配列)、3'UTR配列など、複数の部位に分け、それらに対するCCDC152配列をHepG2細胞に発現させSePタンパク質量・mRNAの変化を解析した。その結果、SePのmRNA、タンパク質量ともに有意な変化が認められず、SeP mRNAとCCDC152の一致配列内の配列だけでは翻訳抑制を行えないことが分かった。そこで、3'側、5'側の配列の必要性を検討した。その結果、3'側、5'側の配列だけでは翻訳抑制効果は弱く、CCDC152-SeP mRNAの一致配列と3'側、5'側の配列の配列が必要なことが分かった。次に、CCDC152の発現を制御する化合物の探索を行った。抗糖尿病作用が報告されている食品由来成分のスクリーニングを行い、緑茶に多く含まれるカテキン類がCCDC152の発現亢進が見られ、SePのタンパク質を減少させることが分かった。特にエピガロカテキンガレート(EGCG)はSeP mRNAの発現量に変化を与えることなくCCDC152の発現量を上昇させ、SePタンパク質を減少させた。そのためEGCGによるSePタンパク質の減少はCCDC152の発現増加を介していると考えられる。EGCGを投与したマウスでは肝臓でのCCDC152の発現上昇が起こり、血漿中のSePの減少が確認された。この時の肝臓ではSeP mRNAの発現量に変化は見られず、CCDC152はin vivoにおいてもSePの翻訳を抑制することが示唆された。CCDC152によるSeP翻訳抑制メカニズムは解析ができており、必要配列の絞り込みも順調に進んでいる。CCDC

152を介した糖尿病治療を行う際に必要になるSeP mRNAに影響を与えずCCDC152の発現を増加させる化合物としてカテキンファミリーを同定した。特にEGCGはin vivo, In vitroどちらでもCCDC152の発現にのみ影響を与える化合物であり、有望な候補物質の必つであると考えられる。昨年度引き続きCCDC152によるSelenoprotein P (SeP)mRNAの翻訳抑制メカニズムの探索を行った。昨年行った実験によって、CCDC152によるSeP mRNAの翻訳抑制にはCCDC152とSeP mRNAの配列一致領域以外の領域が必要なことが分かっている。そこで、非一致領域以外を細かく断片化して必要領域の絞り込みを行った。しかし、断片化したCCDC152をトランスフェクションすることによってSeP mRNA量に変化が見られる領域があり、領域の絞り込みが行えなかったため、遺伝子導入方法の検討など条件検討が必要になっている。次に、CCDC152の発現を制御する化合物の探索、メカニズム解析を行った。これまでに分かっているSeP mRNAの発現を増減させる刺激(培地中のグルコース濃度、酸化ストレス)ではCCDC152の発現量はSeP mRNAの発現パターンと逆の増減パターン(SeP mRNAが増加するとL-ISTは減少し、Sep mRNAが減少ずるとSePは増加する)を示し、SeP mRNAとCCDC152は同じシグナルによる異なる転写因子によって制御されている可能性が示唆された。次に、EGCGと同様に抗糖尿病作用が報告されている食物由来のポリフェノールがCCDC152の発現に与える影響を調べた。その結果、高濃度のクルクミン処理でCCDC152の発現量が増加していることが見いだされた。EGCG、クルクミンはともに抗酸化能があることが報告されているため、α-トコフェロール(ビタミンE)処理を行ったが、ビタミンE処理ではCCDC152の発現量に変化は認められず、脂質に対する抗酸化能がCCDC152の発現に関連していないことが分かった。現在、CCDC152による翻訳抑制に必要な配列の絞り込みを行っており、同定され次第、他のSECISを持つmRNAに対しても同様の結果が得られるか検証を行う。並行して、CCDC152の発現制御メカニズムの解析も行う。本年度は引き続きCCDC152によるSeP翻訳抑制に必要な領域の絞り込みを行う。その後、CCDC152-SeP mRNAの解析によって得られた情報をもとにグルタチオンペルオキシダーゼをはじめとしたSESIS配列を有するSe含有タンパク質全般でも同様の翻訳抑制メカニズムが働くかの検討を行う。CCDC152を利用した糖尿病治療の観点から、糖尿病モデルマウスにEGCGによってCCDC152を発現亢進させ、SePによる糖尿病態の変化を検証する。CCDC
１９世紀イギリスの植民地間ヒト移動と帝国ネットワークの形成

本課題は19世紀イギリス帝国における帝国植民地間のヒト(人間)移動の検証から、ヒトおよびそのコミュニケーションの連鎖と循環で形成されるネットワークと、諸制度や文化、思想への影響の解明に取り組んだ。具体的な対象としては、北米への子ども移民、東西インドでの女性宣教師の活動、インド植民地政策と植民地主義を扱った。その結果判明した(1)ヒト移動およびネットワークの多様性・重層性と顕著な活発さ、(2)ヒト移動にともなう植民地経験や諸制度、文化および思想の伝搬という現象の存在とその重要性、(3)これらの動態の帝国の枠をも超える高い越境性、という特色は、間帝国的視角からの帝国史研究に寄与するものである。本研究の目的は、19世紀イギリス帝国における帝国植民地間のヒト(人間)移動の精査な事例検証によって、ヒトおよびそのコミュニケーションの連鎖と循環で形成される帝国規模のネットワークと、諸制度や文化、思想への影響を明らかにし、イギリス帝国の構造と様態を、新たな視角から解明・検証することである。地理的にはイギリス本国およびインド、オーストラリア、カナダ、アフリカなどの各帝国植民地を基本的な調査対象とし、代表者の吉村は子ども移民と軍リクルート、分担者の中沢と連携者の水谷は、それぞれ女子教育と人種観、インドを中心とする高等教育政策を分担した。平成25年度は、まず24年度に生じた研究分担者の変更にともなう研究計画の調整を行い、各メンバーの担当と予算配分の確認を行った。メンバーは24年度に引き続き、それぞれの分担研究を進めつつ、関連の学会や研究会に積極的に参加して、外部研究者の知見を得るとともに本課題の中間成果を報告した。特に、平成25年4月に設立された関西イギリス史研究会の第2回例会(平成25年12月26日)においては、代表者の吉村と分担者の中沢が本研究の中間報告となる研究発表を行い(連携研究者水谷も出席してコメントを行った)、外部の専門研究者からきわめて有益な示唆と助言を得ることができた。また25年度には年度当初の予定通り、各メンバーがイギリスおよびインドへの資料調査を行い、東洋女性教育協会や児童友援協会、インド孤児収容施設など関連団体や諸機関についての貴重な一次史料を入手することができた。これらの研究の成果を受け、現在本課題は帝国植民地のみならず、日本や韓国を含めた非英領のアジア諸地域(いわゆる「非公式帝国」およびその周辺)をも視野に入れ、それらの諸地域と「イギリス公式帝国」との比較差異検討の可能性を模索するという新たな展開をみている。本研究の目的は、19世紀イギリス帝国における帝国植民地間のヒト(人間)移動の精査な事例検証によって、ヒトおよびそのコミュニケーションの連鎖と循環で形成される帝国規模のネットワークと、諸制度や文化、思想への影響を明らかにし、イギリス帝国の構造と様態を、新たな視角から解明・探究することである。イギリス本国およびインド、オーストラリア、カナダ、アフリカなど帝国諸地域を視野に入れ、吉村は子ども移民と軍リクルート、中沢は女子教育と人種観、連携研究者の水谷は現地エリートの高等教育政策をそれぞれ分担して調査を進め、最終的に総括する予定となっている。平成24年度は、まず予定した通り全体計画についての確認および、配分額にあわせた予算執行計画の修正を行った。次にメンバーそれぞれのテーマを中心に、国内外で発表されたイギリス帝国史研究に関連する成果および情報を収集した。またメンバーは、それぞれの分担領域に関連する学会・研究会に出席して、研究成果の報告や学際的な知見の獲得につとめた。特に、2012年12月のフィリッパ・レヴァイン氏(オースティン・テキサス大学)の来日に際しては、詳細な情報と意見の交換によって、本科研の今後の展開に大きく寄与する有益な知見を得られた。なお当該年度には、吉村および水谷が資料収集のための海外機関への出張を予定していたが、年度途中で研究分担者1名の辞退が生じ、研究計画の修正を余儀なくされたため、準備期間を設けるために、いずれも次年度実施に順延している。本課題は、19世紀イギリス帝国における帝国植民地間のヒト(人間)移動の精査な検証から、ヒトおよびそのコミュニケーションの連鎖と循環で形成される帝国規模のネットワークと、諸制度や文化、思想へのその影響の解明に取り組んだ。吉村は、Children's Friend Society他の諸団体による子ども移民をとりあげ、19世紀以前の関連事例を含めて多角的に検討した。中沢は女性宣教師の西インドおよび東インドにおけるその活動の実態を検証した。また反奴隷制運動を指導したトマス・クラークソンなど、宣教師派遣団体に影響を与えた福音主義者の移動と活動も検証した。水谷は、植民地におけるイギリス植民地主義やそれにたいする抵抗の、別の植民地的文脈との関係に注目して植民地教育政策をとりあげ、イギリスのインドにおける経験が、エジプト支配に及ぼした影響について検証した。

三者の成果の照合によって植民地間移動とその影響のパターン析出に務めた結果得られた結論の一つは、従来「本国ー植民地」間の往来を中心に考えられてきたヒト移動の際立った活発さと越境性である。またヒトとともにその植民地経験や、経験を反映した諸制度・諸活動も移動したことが判明した。さらにこのような動きは、当該植民地や植民地間、帝国の枠を超えて「外国」にまで及ぶことも例証された。2014年12月にイギリス帝国史研究会と共催したワークショップにおける、アデル・ペリー氏(カナダ・マニトバ大学)、松田ヒロ子氏(神戸学院大学)、藤川隆男氏(大阪大学大学院)らの、アジアを含めた広範な地域を視野に入れた移民・帝国史研究の意見交換でも、これらの結論は裏付けを得た。特にフランスや日本など他の近代帝国への影響については今後分析・検証を進める余地があること、そしてそれは国際的な帝国史研究への大きな寄与となるだろうとの展望で意見の一致を見た。イギリス近代史、イギリス社会史24年度に英領インドを担当していた研究分担者(川村朋貴)が外れたため、連携研究者の水谷を中心にインドについての研究をさらに分担して補うという計画修正を行った。メンバーと研究計画の変更にともない、25年度当初はやむなく研究の遅れがやや生じたが、現在は予定通り順調に進展している。またこの計画変更によって、「非公式帝国」を含めたアジア諸地域を視野に入れた、新たな方向性への展開の可能性が出てきたため、26年度からは水谷を研究分担者として加え、より一層の進展をめざしている。研究分担者1名の辞退にともなう研究計画の変更が生じたため、現時点においては交付申請時の計画予定よりも若干の遅れが生じている。欠落が生じたのは、「インド人囚人の強制移送制度」についての研究であるが、地域としてのインド、および強制移民制度については、他のメンバーの分担テーマとも関連が深いため、各メンバーでカバーすることとした。期間を通じての研究計画全体には大きな支障はないものと考えられる。資料収集、関連学会などでの知見獲得など、それ以外の当初予定していた研究計画予定については順調に進んでいる。25年度は、所蔵機関における現物閲覧のみが可能な一次史料の海外調査を実施することで、特にオリジナリティの点で大きな研究の進展がみられた。また文書館への直接訪問によって、他の関連資料の現地における所蔵状況やその内容の詳細もより正確に把握することが可能になったため、26年度も引き続き海外資料調査を行うことでさらに一次史料を入手し、実証研究としての充実をはかる予定である。また26年度は12月に海外研究者を招聘してワークショップを公開で開催する予定である。招聘研究者としては、海外のイギリス帝国史研究者の専門領域や近年の活動などの情報を収集し、慎重な審議を繰り返して選考したカナダ・マニトバ大学のアデル・ペリー(Adel Perry)氏との交渉を進め、すでに内諾を得ている。
ストレスによる眼内グリア細胞の分子的変化解明の試みと網膜変性疾患病態形成との関連

視細胞、ミューラーグリア、マイクログリアを網膜から単離する手法を複数の表面抗原の組み合わせにより立ち上げた。正常、薬剤投与により網膜変性を誘導した網膜から、それぞれの細胞分画をセルソーターで精製し、RNA-seqを行った。変性時の、異なる細胞系列た特異的な遺伝子発現について明らかにした。さらに、視細胞変性後の時間軸に沿った遺伝子発現状態を各細胞系列ごとに検討し、細胞間の相互作用を明らかにした。ストレス負荷モデル(心不全モデル)、老齢マウスを用い視細胞変性が自然発症するかどうか検討を加えた。変性初期のサイン、マイクログリアの活性化についてはいずれも変化を観察することができなかったが、眼内サイトカインのレベルには変化があった。そこで、加齢マウスN-methyl-N-nitrosourethane(MNU)あるいはNaIO3といった視細胞変性を誘導することがしられている薬剤投与を行ったところ、ミューラーグリア、マイクログリアともにその活性化パターンはコントロールと異なっており、加齢による影響があることが示唆された。正常(若齢)、ストレスマウス、加齢マウスにおけるミュラーグリア、マイクログリアを表面抗原とセルソーターで単離し、その遺伝子発現パターンをRNAseqで解析することを目標としたが、これまで用いていたCd44が不安定で、再現性の良い単離が行えないため、ミューラグリア細胞を単離するためのマーカーを検索した。様々な表面タンパク質の抗体を試し、あるたんぱくの抗体が、視細胞を標識するCd73と組み合わせることによりセルソーターでミューラーグリアの単離に至ることが明らかになった。RNAseqのためにソーティングを繰り返して細胞を収集している。同様に、マイクログリアの単離も当初予定していたマーカーではマクロファージも含まれてくるため、別のマーカーを利用することにし、このマーカーにより集められた細胞群から予想どうりの遺伝子発現パターンを得ることができたため、RNAseq及びChIPseqように細胞を収集した。モデルマウスを用いってミューラグリア、マイクログリアが加齢などにより若年マウスと異なる性状を示すとことを明らかにすることができたば分子基盤の研究に移るためこれらの細胞を単離する段階で、これまで用いてきたマーカーがやや不安定であることが明らかになったため新たなマーカーを探すためにやや研究の進展が遅延した。しかし最終的に適切な、より良いマーカーを単離したため、やや遅れたが予定にしたがって研究は進展しておりまた遅れは取り戻すことができると考えている。ストレス負荷モデル(stress-induced leaky gut modelなど複数)、老齢マウスを用い視細胞変性が自然発症するかどうか検討を加えたが、個体差が大きく、明瞭にストレスや老齢が原因で視細胞変性が起こっているという結果が得られなかった。このため、N-methyl-N-nitrosourethane(MNU)、NaIO3など、視細胞変性を誘導することがしられている薬剤投与のモデルを使って、変性の発症・進展について、時間軸をおって視細胞、マイクログリア、ミューラーグリアについて、その形態学的変化と遺伝子発現の変化を比較検討した。さらに我々の開発したタモキシフェン投与によって視細胞内でジフテリア毒素が発現し視細胞変性が誘導される系についても導入し比較検討をした。続いてこれらのモデルマウスを用い、正常時、変性時のミューラーグリア、マイクログリア、視細胞を特異的表面抗原とセルソーターを用いて単離し、RNAseqにより、遺伝子発現の変化を検討した。その結果、それぞれの細胞特異的に、変性の時間軸に伴って発現が変化していく複数の分泌蛋白質が同定された。これらを正常マウスの単離した網膜に転化するとミュラーグリアの活性化、あるいは変性時の過活性化が観察された。マイクログリアの活性を阻害する系の開発のため、マイクログリア阻害剤を練りこんがマウスの餌を注文し、これによりマイクログリアの活性化が抑制され、その結果視細胞変性、ミューラーグリアの活性化に影響があることが示唆された。ほぼ予定どうりに進めるが、ChIPseqの系を小さくすることが困難であったため、計画中でも述べられているChIPqPCRで進めることが現実的であると考えている。分子生物学眼科学モデルマウスを用いってミューラグリア、マイクログリアが加齢などにより若年マウスと異なる性状を示すとことを明らかにすることができたば分子基盤の研究に移るためこれらの細胞を単離する段階で、これまで用いてきたマーカーがやや不安定であることが明らかになったため新たなマーカーを探すためにやや研究の進展が遅延した。一方、ChIPseqの系を小さくする条件検討を行ったが、少ない細胞数では結果が不安定になるため、当初予定していた通り、ChIPqPCRで実験を進めることにした。このため初年度に予定していたRNAseqが2年度の始めに行うこととなり次年度使用額が生じた。次年度使用額を用いて、初年度に計画していたRNAseqをまず行う。この実験については、細胞表面抗原の選定が、すぐれた分子を見出したため、順調に進むことが期待される。続き、少数細胞からのChIPqPCRの条件検討も初年度に正確に完成したため、遅れを取り戻し、本来2年度に予定されていた、解析、機能評価を行う計画である。
明治から昭和前期までの愛媛県における幼稚園の創設・発展・変動に関する研究

愛媛県は,地理的に東予・中予・南予の3つの地域に分けられる。東予地域に限ってみると,この地域には,幼稚園は大正末までに3園しかなく,その内の1園は開園の翌年には経営の問題もあって廃園しており,実質2園(今治・三島幼稚園)しか開園されていなかった。この2園は,ともに仏教系幼稚園である。今治幼稚園は,1905(明治38)年に設立され,愛媛にあっては,仏教寺院における幼児教育の嚆矢であり,日本の仏教系幼稚園の歴史においても,黎明といっていい時期に創立されている。両園は,若き住職がその設立に関わっているが,設立の契機については相違がある。今治幼稚園の場合,近所の幼児が自然発生的に寺院に集まるようになり,それを準幼稚園といってもいい共話会幼稚部が世話をし,さらに幼稚園へという形で発展している。キリスト教系の幼稚園の多くが,その前身に,子どもを集めた日曜学校があったように,今治幼稚園にもその萌芽に,類似の現象を認めることができる。三島幼稚園については,住職が常々抱いていた地域の文化的状況への危機感が,その設立の動機を形成していた。将来の文化の担い手としての幼児に期待をかけるという,長期の展望をもった動機が,そこにはあった。両園の設立の経緯がこのように少々異なろうと,もちろん,園の活動は仏教的見地を加味した保育を共通にしていた。両園ともに,檀家をふくめ地域から好意的に受け止められ,愛媛の仏教系幼稚園の先達として歴史を重ねてきている。愛媛県において、大正末までに設立された幼稚園の数は18である。地域別に見ると、東予地域3園、中予地域8園、南予地域7園である。中予・南予地域に多く設立され、東予地域はそれに比較すると少なかったことがわかる。ただ、東予地域は量的には劣るものの、3園のうち2園が仏教系の幼稚園で占められ、愛媛の仏教系幼稚園の先駆となっている点は注目される。この2園(伊予三島・今治)については、距離的には離れてはいるものの,設立にあたっては何らかの情報交換があったと思われる。あと南予地域では、7園のうちの3園がキリスト教系の幼稚園で、県都のある中予地域(2園)よりも多く設立されていたことが、際だった特徴となっている。設立団体別でみると、公立4園、私立14園と圧倒的に私立幼稚園が多い。愛媛の幼児教育が民間によって支えられていた事実を知ることができる。また、公立の幼稚園が4園ということから、当時の県内行政機関の幼児教育政策への関心の程度も判定できる。私立幼稚園の内訳は、宗教に関係のない個人立7園、仏教系2園、キリスト教系5園で、宗教系幼稚園の占める割合が大きい。特にキリスト教系幼稚園は大正期に入り類増し、県内幼稚園の普及・拡大に貢献している。なかでも、南予地域の卯之町幼稚園の設立に関わった清水伴三郎、村井幼稚園の設立に関わった村井保固、両名とも敬虔なクリスチャンであるが、かれらの貢献には特筆すべきものがある。全国的にそうであったように、愛媛においても民間の熱意と奉仕がなければ、幼稚園の設立そして普及は覚束なかったという実態が確認できる。
角膜内皮機能障害に対する遺伝子治療法の開発

角膜の透明性維持のためには角膜内皮細胞及び上皮細胞の構造、機能が保たれていることが重要である。本研究では上記2種類の細胞の機能制御におけるサイトカイン、増殖因子の影響を検討するためにTGF-βスーパーファミリーの各因子及びその受容体の発現を観察した。角膜上皮、内皮両細胞ともに、TGF-β1、2、3を発現していた。さらに受容体としては、TGF-βI型受容体,II受容体、アクチビンI、IA型受容体,II受容体、骨形成因子(BMP)IA、IB型受容体,II受容体、ALK-1が発現しており、多くの因子によりその機能が多重に制御されていることが示唆された。角膜上皮細胞を剥離してその創傷治癒モデルをラット角膜で作成し上皮細胞の再生過程でのTGF-βスーパーファミリーの働きを検討したところ、上皮細胞が遊走、進展する際にはTGF-β1、2、3および受容体は発現しているが、上皮が創傷部を覆った時期には一時的に受容体の発現が低下し、上皮の層状化に際しては再び受容体が発現することが示された。これらのことより上皮創傷治癒過程においてTGF-βは初期の細胞遊走進展及び後期の上皮細胞の分化に関与することが示された。角膜内皮細胞は角膜透明性維持のためには主要な働きをしている。コンフルエントな条件ではG0/G1期で停止している。その制御メカニズムを検討した。細胞周期をG0/G1期からS期へと進行させる因子としてTGF-β1、2が有効でありアクチビンAは促進、抑制双方の作用が見られなかった。TGF-β1、2が細胞周期進行の作用機序としてはPDGFを介する二次的な作用であることが分かった。機能分子としての水及びイオンチャンネルのクローニングは牛角膜内皮細胞ライブラリーから現在塩素イオンチャンネルの一部フラグメントがPCR法を用いた研究から得られて、その全長を得るべく研究が進行している。角膜内皮細胞が何らかの因子を分泌する機能を有することが示唆されている。
非アルコール性脂肪肝疾患の病態におけるレクチン経路、第二経路の影響の解明

本研究は、補体活性化経路の中でもレクチン経路と第二経路に注目し、非アルコール性脂肪肝疾患(NAFLD)の病態におけるそれぞれの関連を、ヒトNAFLD患者の血清や、MASP-2欠損マウス、そしてMASP-3欠損マウスを用いて解明することである。現在、レクチン経路を欠損しているMASP-1欠損マウス、そして第二経路を欠損しているMASP-3欠損マウスを用いてNASHモデルマウスを作成中である。モデルの作成ができ次第、補体活性化経路とNASHモデルにおける病態との関連を、血清そして肝組織を評価することで解析する予定である。MASP-1欠損マウス、MASP-3欠損マウスはそれぞれ欠損マウスは出生しにくく、また出生しても死亡してしまうことがあるためモデル作成が遅れている。MASP-1欠損マウス、MASP-3欠損マウスの交配数を増やして、解析に必要なマウス頭数を確保する。また、モデル化ができ次第、補体活性化経路とNASHモデルにおける病態との関連について、血清における補体やサイトカイン、そして肝組織における障害や補体沈着の程度を評価することで解析する予定である。マウスの作出がおくれているため、物品購入しなかったため。
問題解決終了後の自己参照的活動に関する基礎的研究

本研究における,本年度の具体的な目標は,(1)「一応の解決終了後の自己参照的活動を捉える理論的枠組みについての探求」,(2)「一応の解決終了後の自己参照的活動に関する実態把握」,(3)「その種の活動を鼓舞するような教授的発問や指導に関する検討」であった。目標(1)は昨年度からの懸案であったが,本研究では「当該問題に対する理解の深度」として措定されることとなった。ただし,その具体的な枠組みについては,当該問題に依存して設定されるものとして捉えられるものであるため,早急に具体的な問題が設定され,目標(2)の達成のための研究が実行される必要があった。実際,目標(2)の達成のためにも,具体的な問題に焦点化して,その解決過程と解決終了後のインタビューに関するデータを収集する必要があったた。そこで,本年度は,大学生に,構造化されたインタビューを介在させた「正方形の裁ち合わせ問題」に取り組んでもらい,その問題解決過程と解決終了後の解決活動に関するビデオデータの収集を行った。また,データの収集に先立って,数件のパイロットテストを行い,構造化されたインタビューのインタビュー・スクリプトも作成した。そこでは,「正方形の裁ち合わせ問題」の性質故か,いくつかの事例で「一応の解決終了後(のインタビュー)においてこそ,当該問題に対する数学的理解が始まり,真の解決が進行していった」様子が観察された。目標(2)に関してはこういった事例や知見の蓄積はなされたが,得られたデータが大量であり詳細な分析が済んでいないため,具体的な論文としての成果には至っておらず,それは今後の課題として残ることとなった。また,目標(3)に関しては,前述のインタビューが指導的インタビューの性格を帯びているため,そのインタビュー・スクリプトの作成が成果の一部となった。本研究における、本年度の具体的な目標は、「一応の解決終了後の自己参照的活動を捉える理論的枠組みに関して理論的に検討すること」であった。そのため、まず、問題解決に関する"Looking Back"と「振り返り」に関連する先行研究を収集、レビューした。先行研究の収集は、ERICのデータベースと日本数学教育学会の会誌を主なリソースとした。ただし、比較的最近の研究には、上述のようなキーワードを含む研究が見当たらず、古いものも含めて10件程のレビューしかできなかった。レビューによる具体的な知見としては、(1)「「振り返り」という活動自体は、かなりの指導された後でさえ自発的にする生徒は少ないこと」、(2)「Polyaの4段階では、とりわけ「計画」段階での活動に指導上の興味が集中し、実際の指導においても「振り返り」の段階は軽視されがちであったこと」、さらには、(3)「研究に関してもそういった興味の集中の傾向があったこと」等の示唆を得ることができた。これらは研究発表論文の一部に反映されている。また、「一応の解決終了後の自己参照的活動を捉える理論的枠組み」に関して、オリジナルの「自己参照的活動を捉える枠組み」に関する理論的改編に関する検討も加えられたが、現時点ではアイデアの段階に留まってしまっている。なお、次年度の目標である「一応の解決終了後の自己参照的活動に関する児童・生徒の実態把握」と「その種の活動を鼓舞するような教授的発問や指導に関する検討」のためのビデオデータ作りのノウハウ蓄積は、本年度の機材購入によりかなり達成されたと思われる。
選択的な集積型キラル多核錯体の自己組織化と化学的機能

本研究では、集積型キラル多核錯体について、キラル錯体配位子の自己集積化で形成される多重キラル中心に依存する化学的機能の観点から検討した。まず、集積型キラル多核錯体の酸化数や電子配置とその性質について、種々の酸化数を取り得るレニウム多核錯体を用いて追及した。レニウムイオンを取り込んだ新規多核錯体は、キラル中心を有する錯体配位子と過レニウム酸塩を還元剤を用いた反応で合成した。不対電子配置を有するレニウム(III)イオンに依存する酸化還元特性や磁気的性質などの物性および反応性について検討し、興味深い知見を得ることができた。次に、キラル中心を有する錯体配位子を集積化した硫黄架橋キラル多核錯体の立体選択的な反応性とその化学的性質について追及した。キラル中心を有し2つの架橋硫黄原子をもつ置換しやすいニッケルの多核錯体を選択的に創成し、この錯体配位子の選択的な置換反応を用いて、種々のキラル中心を有する多核錯体の合成法を確立した。また、硫黄架橋多核錯体の電気化学的な手法による酸化還元を用いて生じた混合原子価状態に関する分光化学的性質について追及し、かなりのデータを集積した。この研究は、今後さらに検討を続ける予定である。さらに、生体関連モデル錯体の配位環境とその性質について、生体中の閉核電子構造を有する金属イオンをモデルに、その立体化学と化学的性質との関係について追及した。金属と硫黄との結合距離と遠赤外やラマンスペクトルとよい相関関係のあることを明らかにできたこれらの結果は、活性中心の金属まわりの情報を得る手段の開発に役立つと考えられる。以上のように、得られた集積型キラル多核錯体の多重キラル中心に起因すると考えられる化学的機能性、および従来にない複合的な物性をそなえた新規物質の開発や多重機能性を有する材料設計のための基礎データの集積などを行うことができた。