hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多次元定量計測技術を用いた絶滅危惧種イトウの行動生態の解明

本研究では,イトウの生息範囲を正確にとらえ,そのデータを活用した生態学的なアプローチにより,本種の行動メカニズムを明らかにし,将来的な保護や周辺環境の保全に寄与する情報を得ることを目的とし,バイオテレメトリー手法を用いてイトウの正確な位置・時間とその移動の情報を収集・蓄積した。調査は,厚岸郡厚岸町の別寒辺牛川水系において,2006年4月下旬から同年12月上旬,2007年4月下旬から同年11月下旬の期間に行った。イトウは2006年に2個体、2007年に5個体捕獲し,超音波発信器を装着した。超音波受信機を河川内の定点(間隔約2km5km)に設置し,並行してカヌーの舷側に取り付け,GPSで位置情報を取得しながら河川内を移動した。受信機データから放流した全個体の受信が確認でき,受信回数は2006年に130回,2007年に37,683回であった。産卵後の降下行動の平均時間は44.1±29.1時間(Mean±S.D.),平均距離は33.4±12.5km,平均速度は0.46±0.21BL/sであった。受信機の結果から季節別の分布は,春季(5,6月);中流域から河口域,夏季(7,8月);中上流域から中流域,秋季(9,10,11月);下流域から河口域,であった。また,下流域の水温が急激に上昇した際た,中流域まで遡上した個体も見られ,その移動距離は最大約13kmに及んだ。さらに,季節間だけではなく昼,夜間においても行動の傾向が異なっており,春季では夜間の1時間あたりの受信数が昼間の受信数の約2倍あり,夏季では日出,日入時刻の受信数が多かった。以上より,産卵直後の降下行動においては,イトウは好条件の生息場所の確保を目的に降下していると推察された。季節移動には,水温と餌環境が影響していることが推察される。また,比較的短期での行動は,昼夜,潮汐,降雨などの影響を受けていることも考えられた。本研究では,イトウの生息範囲を正確にとらえ,そのデータを活用した生態学的なアプローチにより,本種の行動メカニズムを明らかにし,将来的な保護や周辺環境の保全に寄与する情報を得ることを目的とし,バイオテレメトリー手法を用いてイトウの正確な位置・時間とその移動の情報を収集・蓄積した.調査地は厚岸郡厚岸町の別寒辺牛湿原を流れる別寒辺牛川で,調査は平成18年4月24日から平成18年12月6日まで行われた.イトウの捕獲は網・釣りにより行い,捕獲した2個体に麻酔を施し,超音波発信器(発信間隔40秒90秒)を装着した.超音波受信機を河川内の定点(間隔約2km5km)に設置し,並行してカヌーの舷側に取り付け,GPSで位置情報を取得しながら河川内を移動した.設置受信機の受信は,主に下流域の広い範囲で頻発した.また,カヌー受信の結果からは中流域にも散在的にイトウが生息することが確認された.これらの結果から別寒辺牛川イトウ生息域は流域の広範にわたり,下流域では本種が数キロレベルでの移動を行っていること,中流域では受信機の設置間隔よりも狭い範囲で活動していることが示唆された.下流域でのイトウの行動は,河口の潮汐タイミングおよび潮位との間に対応がみられた.また,受信記録は夜間(21時から翌6時)に集中していた.したがって,本種は知見どおり夜行性であることが確認される一方,今回の発見により潮汐と移動行動との潜在的な関係が示唆された.平成18年度は個体レベルの行動に注目することで,詳細情報を得ることができたが,サンプル数が少なく,移動生態の解明に至らなかった.したがって平成19年度は,装着個体数を増やし,より多くの個体の行動モニタリングを試みる予定である.本研究では,イトウの生息範囲を正確にとらえ,そのデータを活用した生態学的なアプローチにより,本種の行動メカニズムを明らかにし,将来的な保護や周辺環境の保全に寄与する情報を得ることを目的とし,バイオテレメトリー手法を用いてイトウの正確な位置・時間とその移動の情報を収集・蓄積した。

また,下流域の水温が急激に上昇した際た,中流域まで遡上した個体も見られ,その移動距離は最大約13kmに及んだ。さらに,季節間だけではなく昼,夜間においても行動の傾向が異なっており,春季では夜間の1時間あたりの受信数が昼間の受信数の約2倍あり,夏季では日出,日入時刻の受信数が多かった。以上より,産卵直後の降下行動においては,イトウは好条件の生息場所の確保を目的に降下していると推察された。季節移動には,水温と餌環境が影響していることが推察される。また,比較的短期での行動は,昼夜,潮汐,降雨などの影響を受けていることも考えられた。
模本制作の第一人者・田中親美を中心とした近現代の書の受容に関する基礎的研究

(1)田中親美制作の模本・複製本の所在確認とデータ収集:昨年度に引き続き、田中親美が制作した模本について、これまで展示や論文などで紹介された記録から所在を確認していく作業を行った。そのほか所在に関係するようなデータを収集し、デジタルデータとして入力した。(2)模本・原本の比較調査:東京国立博物館が所蔵する「平家納経模本」(原本は広島・厳島神社蔵)一組全33巻と別本1巻を、大倉集古館が所蔵する同じ模本一組と比較調査した結果をデータ化し、分析を進めた。また、原本「平家納経」の調査を行ない、模本との比較分析を進行した。調査参加者:連携研究者の島谷九州国立博物館館長、嚴島神社禰宜福田氏、同権禰宜山田氏。(3)田中親美遺族の聞き取り調査:遺族に関係資料を見せてもらいながら、親美の模本制作にかかわる情報を聞き取りした。調査協力者:土屋貴裕東京国立博物館主任研究員(4)関係資料・情報の収集:生前に田中親美が発言した記録や雑誌・図録等資料より、関係する内容の記事を抜き出し、データ化を進めた。また、模本や原本の所蔵先と連絡打ち合わせをして、情報収集を行った。(5)本研究の成果:論文で発表した。また、次年度に研究成果を展示公開するべく、準備を進めた。東京国立博物館にて特集「平家納経模本の世界」として成果公開することが決まっている。3年計画の2年目で、田中親美が関わった模本や複製本の所在情報の収集をさらに進めて、情報は充実してきた。また、昨年度行なった大倉集古館が所蔵する模本との比較調査の結果の分析を進めた。書跡、絵画、染織に関わる研究者により、分析を多角的に進行することができた。同時に、親美遺族からの聞き取り調査と、原本「平家納経」の調査も実施できた。関係模資料の実見調査や関係資料の情報収集も着実に進めることができ、成果は論文で公開するほか、次年度には東京国立博物館の展示施設において展示公開することが決まっており、当初計画を十分に達成できたといえる。田中親美が関わった模本や複製本の所在情報のデータベース化を実施する。同時に、それらの模本類の実見・比較調査を行い、原本の調査と関連作品の調査も進めることから、その歴史的意義を検討する。以上の研究成果をすみやかに論文で発表するとともに、東京国立博物館において展示公開し、成果を広く普及するように努める。(1)田中親美制作の模本・複製本の所在確認とデータ収集:田中親美が制作した模本について、これまで展示や論文などで紹介された記録から所在を確認していく作業を行った。(2)模本の比較調査:東京国立博物館が所蔵する「平家納経模本」(原本は広島・厳島神社蔵)一組全33巻と別本1巻を、大倉集古館が所蔵する同じ模本一組と並べて比較を行った。調査参加者:連携研究者の島谷九博館長、研究協力者の大倉集古館・田中学芸員、徳川美術館・安藤学芸員、大和文華館・古川学芸員、織物文化館・小柳学芸員。また、調査には、田中親美遺族も出席し、聞き取り調査も同時に行った。この調査においては、同じ作品の模本においても違っている点が多く確認された。(3)模本の実見調査:個人所蔵の田中親美制作模本の実見調査を実施した。とくに、前記の「平家納経模本」の別本の実見調査も行うことができた。(4)関係資料・情報の収集:生前に田中親美が発言した記録や雑誌・図録等資料より、関係する内容の記事を抜き出し、データ化を進めた。(5)本研究の成果を論文で発表した。3年計画の1年目は、まず、田中親美が関わった模本や複製本の所在情報を収集した。以前より蓄積してきた所在情報に加えて、あらたに8件の所在を確認できた。また、大倉集古館が所蔵する模本との比較調査を実施した。書跡、絵画、染織に関わる研究者に参加してもらうことで、比較調査を多角的に進行することができた。同時に、親美遺族からの聞き取り調査も実施できた。関係模本の実見調査や関係資料の情報収集も着実に進めることができ、早々に成果を論文で公開できたことは当初計画を十分に達成できたといえる。(3)田中親美

遺族の聞き取り調査:遺族に関係資料を見せてもらいながら、親美の模本制作にかかわる情報を聞き取りした。調査協力者:土屋貴裕東京国立博物館主任研究員(4)関係資料・情報の収集:生前に田中親美が発言した記録や雑誌・図録等資料より、関係する内容の記事を抜き出し、データ化を進めた。また、模本や原本の所蔵先と連絡打ち合わせをして、情報収集を行った。(5)本研究の成果:論文で発表した。また、次年度に研究成果を展示公開するべく、準備を進めた。東京国立博物館にて特集「平家納経模本の世界」として成果公開することが決まっている。3年計画の2年目で、田中親美が関わった模本や複製本の所在情報の収集をさらに進めて、情報は充実してきた。また、昨年度行なった大倉集古館が所蔵する模本との比較調査の結果の分析を進めた。書跡、絵画、染織に関わる研究者により、分析を多角的に進行することができた。同時に、親美遺族からの聞き取り調査と、原本「平家納経」の調査も実施できた。関係模資料の実見調査や関係資料の情報収集も着実に進めることができ、成果は論文で公開するほか、次年度には東京国立博物館の展示施設において展示公開することが決まっており、当初計画を十分に達成できたといえる。田中親美が関わった模本や複製本の所在情報をより収集し、データベース化を進める。また同時に、それらの模本類の実見・比較調査を行い、関連作品の調査も進めることから、その歴史的意義を検討する。以上の研究成果をすみやかに論文で発表するとともに、東京国立博物館において展示を企画し、成果を広く普及するように努める。田中親美が関わった模本や複製本の所在情報のデータベース化を実施する。同時に、それらの模本類の実見・比較調査を行い、原本の調査と関連作品の調査も進めることから、その歴史的意義を検討する。以上の研究成果をすみやかに論文で発表するとともに、東京国立博物館において展示公開し、成果を広く普及するように努める。関係者への聞き取り調査・打ち合わせについて日程調整がうまくいかず、次年度へ持ち越しとなったため。原本調査と関係者との打ち合わせについて日程調整ができず、次年度へ持ち越しとなったため。
明治初期の欧州製と日本製の日本図に関する比較地図学的研究-特にR.H.ブラントンのNippon[Japan]の特質と意義について-

R.H.ブラントンの名は日本の灯台建設の父として知られ、幾つもの研究があるが、彼が作成した地図類、特に、帰国後に編纂しロンドンで出版した日本図Nippon〔Japan〕(1876)については、従来ほとんど注目されてこなかった。しかし、この図は、当時日本で出版されていた日本図のどれよりもすぐれた内容を備えた作品として、またブラントンのお雇い外国人としての事績が明確に盛り込まれた図として注目に値する。やはりお雇い外国人であったE.クニッピングの編になる日本図Stanford's Library Map of Japanが出版されたこの3年後の時点では、既に陸軍参謀局「大日本全図」(1877)は出ていたものの、内務省地理局編「大日本国全図」が出版されたのは1881年のことだったし、当時の日本に存在した大部分の日本図の水準はこれら欧州製日本図の水準を下回るものだった。このようないわば逆転現象が生じたのは、何よりもブラントンやクニッピングがお雇い外国人の立場を生かして、国の基本地図の整備を急務としていた当時の国家機関がその作成のために収集・保持していた最高の地図情報-それには伊能図、「官板実測日本地図」も含まれる-もを入手することができたからである。また、そのようなローマ字表記された日本図の需要があったことも無視できない。そこで、本研究では、近代日本図に関する研究の立ち遅れの克服とブラントン研究の展開をも目指して、ブラントン図に関する詳細な書誌的・地図学的検討を行い、新たな多くの知見を提示した。この成果については、雑誌「地図」に発表し、そこに、原寸大の精巧な複製図4シートを併せ出版することになっているが、このような研究のために、精緻な複製図の見本印刷を作成したり、国会図書館や内閣文庫・神戸市立博物館・横浜開港資料館での調査と、写真や複写の形で収集した所蔵資料の分析を行い、また、当時の世界の地図や地理学の水準を示す書籍を購入しての検討も行った。
かげのしくみに着目した「月・惑星の運動」の系統的な学習プログラムに関する研究

本研究の目的は、かげのしくみに着目した月の満ち欠け、食現象、惑星の視運動等の「月・惑星の運動」の系統的な学習プログラムを新たに開発するための基本的知見を得ることである。研究方法では、小・中学生、高校生に対する質問紙調査、面接調査を行った。児童・生徒が持つ、「月の満ち欠け」、「食現象」、「惑星の視運動」に対する理解の特質を、これらの調査から明らかにした。これまでの授業実践の評価に基づき、空間認識を高める具体的内容として、アメリカやイギリスの理科カリキュラムに見られる「観察活動」、「光とかげ」、「相対運動などのモデル化」を導入した授業を開発、試行した。授業後、その評価を行い、児童・生徒の空間認識の変容について調査した。小学生の月の満ち欠けに関する調査からは、月の反射の認識が低い実態、中・高校生の食現象に関する調査からは、多くの生徒に、「日食」現象を「月食」現象の混同や、食現象と月の満ち欠け現象を混同している生徒が多数見られた。また、食現象を立体的に捉えた正答が非常に少ない実態が明らかとなった。空間認識を高める具体的内容である「光とかげ」、「相対運動などのモデル化」などを導入した授業として、小学校では月の満ち欠け現象に関して「2種類のかげ(影、陰)」に着目した授業実践を行った。2種類のかげの区別の内容を中心に、観察活動やモデル化などを密接に関連させた授業展開を行った結果、3割程度だった月の満ち欠けに関する理解度が、授業後には、約8割へと大幅に増加した。加えて、中・高校生への「食現象」、「惑星の視運動」に関する授業実践でも、物体によってできる『影』と物体そのものにできている『陰』、また陰と影を結ぶ空間にできる『隠』の3種類のかげの区別や、立体的なモデル化を密接に関連づけることで、多くの生徒に視点移動能力の発達傾向が見られ、系統的な空間認識能力の高まりが確認できた。
シロイヌナズナの花成遺伝子の作用機構の解明

花成制御機構が最もよく研究されているシロイヌナズナにおいて、様々な制御経路からの情報の集約点に位置づけられるFT遺伝子の作用機構を明らかにすることは、花成という現象の本質を理解するために必須である。本研究では、FT遺伝子の作用機構を明らかにするために、FT遺伝子と協同的にはたらく花成時期遺伝子FDとFT相同遺伝子TSFの2つの遺伝子に着目した。まず、研究期間中にFD遺伝子を同定した。bZIP型転写因子であるFD蛋白質の制御標的のひとつが花成に続く花芽形態形成の初発段階に関わる鍵遺伝子AP1であることを明らかにし、FT遺伝子の発現にいたる花成制御過程と花芽形態形成過程がFD蛋白質を介して結びつけられることになった。FD蛋白質とFT蛋白質は植物細胞内で蛋白質間相互作用し、相互依存的に機能すること、FD遺伝子の発現は茎頂部に限局されること、さらに、FT遺伝子を本来の発現部位(維管束篩部)とは全く重ならない茎頂部において発現させてもft変異の表現型が完全に相補されることなどから、FT蛋白質の作用部位は茎頂であると考えられる。このことは、主に子葉の維管束篩部で発現したFT遺伝子産物が何らかの形で茎頂まで移動することを示唆する。これらの知見は本研究の主要な成果として、Science誌に投稿して受理され、印刷中である。TSF遺伝子についてはFT遺伝子と非常によく似た発現制御(日長による制御・日周変動・COによる直接的な制御、FLCによる発現抑制と春化による抑制解除)を受けることが明らかになった。発現の空間的パターン、変異体・過剰発現体の表現型、遺伝学的相互作用などの解析から、FTとともに花成経路統合遺伝子として機能すること、他の経路統合遺伝子との関係の一端などが明らかになった。TSF遺伝子もFT遺伝子と同様に維管束篩部で発現することから、花成経路統合の場のひとつは維管束篩部であるとする見方を提唱した。これらの知見は本研究の主要な成果として、Plant & Cell Physiology誌に投稿して受理され、印刷中である。以上のほか、イネと柑橘類のFT相同遺伝子についても共著論文を公表した。本研究では、FT遺伝子の作用機構を明らかにするために、FT遺伝子と協同的にはたらく遺伝子群の研究を進めた。特に着目したのは、劣性の花成遅延突然変異により知られていた花成時期遺伝子FDとわれわれが新規に同定した遺伝子CRPである。まず、fd変異がFT遺伝子の過剰発現による早咲き表現型をほぼ完全に抑圧することを明らかにした。この抑圧効果は、SOC1/AGL20遺伝子の過剰発現による早咲き表現型に対してはみとめられず、FT遺伝子に特異的なものであることが明らかになった。また、lfy変異体との二重変異体の表現型解析から、FD遺伝子はLFY遺伝子とともにAP1遺伝子の転写制御に関わっている可能性が示唆された。FD遺伝子のクローニングと解析の結果、その産物はbZIP型転写因子であること、発芽直後から非常に低レベルで構成的に発現し、光周期による制御を受けないことが明らかになった。

さらに、FD蛋白質とFT蛋白質は酵母細胞内で相互作用しうることも明らかにした。これらの結果から、FT蛋白質は蛋白質間相互作用により、何らかの機構でFD蛋白質の活性を調節し、FD蛋白質はAP1遺伝子を含む花芽分裂組織の運命決定に関わる遺伝子の転写を制御する、という仮説を立て、検証を進めている。CRP遺伝子は、FT遺伝子の過剰発現による早咲き表現型を劇的に昂進する優性変異により同定し、転写メディエータの構成因子のひとつTRAP230と相同性を持つ蛋白質をコードすることを明らかにしたものである。機能喪失変異体を得たところ、遅咲き表現型を含む多面表現型を示すことが判った。同遺伝子の花成における役割について解析を進めている。花成制御機構が最もよく研究されているシロイヌナズナにおいて、様々な制御経路からの情報の集約点に位置づけられるFT遺伝子の作用機構を明らかにすることは、花成という現象の本質を理解するために必須である。本研究では、FT遺伝子の作用機構を明らかにするために、FT遺伝子と協同的にはたらく花成時期遺伝子FDとFT相同遺伝子TSFに着目した。FD遺伝子については、発現解析をほぼ終了した。FD蛋白質(bZIP転写因子)の制御標的については、有力候補と考えたAP1,CAL, FUL, FLC(いずれもFD遺伝子が発現している茎頂で発現する転写因子遺伝子)を中心に解析をおこなった。一方、マイクロアレイ解析による網羅的な制御標的の探索も並行して進め、FDにより転写抑制される遺伝子の候補を1つ見いだした。これらと並行して、fd変異体と種々の花成関連変異体の二重変異体の表現型解析をおこなった。FT遺伝子については、特異性の高いプロモーターを用いた組織特異的なFT機能回復実験をおこなった。本来の発現部位とは全く重ならないPDF1プロモーター(主に茎頂付近のL1層特異的)、FDプロモーター(茎頂特異的)による発現によってもft変異の表現型が完全に相補されることから、FT幾能の著しい細胞非自律性が予想された。これと関連して、胚軸接木法を用いてFT過剰発現による花成促進効果の接木伝達性の検討を試みている。FTと最も高い相同性を持つTSF遺伝子についても解析をおこなった。これまでに検討した範囲内では、TSF遺伝子はFT遺伝子と非常によく似た発現制御を受けることが判った。T-DNA挿入による機能喪失変異体を用い、TSF遺伝子がFTと冗長な花成遺伝子である可能性を見いだした。なお、昨年度の報告書に記載した論文が第11回(2004年度)日本植物生理学会論文賞を受賞した。FD蛋白質(bZIP転写因子)の制御標的については、花成に続く花芽形態形成の初発段階に関わる鍵遺伝子AP1を中心に解析を進めた。その結果、RT-PCR解析,Ap1::GUSレポーターを用いた解析から、異所発現させたFDがFT依存的にAP1の転写を活性化することが強く示唆された。
コバルトを含む金属人工格子のNMR

人工格子で巨大磁気抵抗効果が見つかっていらい、金属人工格子の研究がさかんに行われるようになった。巨大磁気抵抗効果には磁性層・非磁性層界面の構造が深く関わっている。そこで磁気抵抗効果を制御するには界面の構造を制御する必要がある。従って、界面を評価する手段が、必要である。Coを含む、金属人工格子ではCo核の強磁性核磁気共鳴の強度から界面構造を評価するということが行われてきた。しかしながら、NMR信号強度は、核スピン間の相互作用に帰因するスピンスピン緩和時間に依存するので、単純な強度解析だけでは、原理的に正しくない結果を与える。むしろ、ある核がその周囲に同種核を見出す確率が、本質的に強度に影響する。そこで我々はNMRの基礎にたち返って、内部磁場分布と強度の関係を深く考察するとともに、積極的に緩和時間を界面構造評価に利用する方法論を搏索している。
常伝導・超伝導近接接合系でのマイスナー効果の理論

常伝導金属(N)と超伝導金属(S)を接合した系では,常伝導金属の電子も超伝導適性質を帯びることが知られており,近接効果と呼ばれている.超伝導近接効果の理論的研究は比較的取り扱いの簡単な不純物を多く含むdirtyな系を対象にして1960年代に盛んに研究された.しかし,最近微細加工技術の進歩によって不純物が少なく界面のきれいなN-S接合試料が作られるようになり,cleanな系での理論が必要になってきた.本研究では,N-S接合系でのN層のマイスナー効果を調べ,cleanな系ではマイスナー電流がN層内を全く一様に流れており,dirtyな系の理論から予想される結果とは全く異なることを示した.この結果を用いて,Au-Nb接合系での実験で報告されている遮蔽長の温度依存性を説明することができた.(J.Phys.Soc.Jpn,64 549-564(1995))現在,cleanな極限から不純物を加えていくとき,どのような形でdirtyな系の理論につながっていくかを検討中である.N-S接合系において,N層が正または負の対相互作用を持つ場合,近接効果によって誘起される対ポテンシャルの効果によって,N層の物性が影響を受ける.我々は,手始めとして,N層の準粒子状態密度を調べ,有限の対相互作用が存在するときにはN層内の状態密度が場所によって変化すること,また,斥力の場合はゼロエネルギー付近に束縛状態が存在することを示した.このことは,現状では超伝導性を示さない物質がどのような対相互作用を持つか判定するのに有用な情報を提供する.有限の対相互作用がマイスナー効果にどう現れるかは現在検討中である.(J.Phys.Soc.Jpn,64 No.5,in press)常伝導金属(N)と超伝導金属(S)を接合した系では,常伝導金属の電子も超伝導適性質を帯びることが知られており,近接効果と呼ばれている.超伝導近接効果の理論的研究は比較的取り扱いの簡単な不純物を多く含むdirtyな系を対象にして1960年代に盛んに研究された.しかし,最近微細加工技術の進歩によって不純物が少なく界面のきれいなN-S接合試料が作られるようになり,cleanな系での理論が必要になってきた.本研究では,N-S接合系でのN層のマイスナー効果を調べ,cleanな系ではマイスナー電流がN層内を全く一様に流れており,dirtyな系の理論から予想される結果とは全く異なることを示した.この結果を用いて,Au-Nb接合系での実験で報告されている遮蔽長の温度依存性を説明することができた.(J.Phys.Soc.Jpn,64 549-564(1995))現在,cleanな極限から不純物を加えていくとき,どのような形でdirtyな系の理論につながっていくかを検討中である.N-S接合系において,N層が正または負の対相互作用を持つ場合,近接効果によって誘起される対ポテンシャルの効果によって,N層の物性が影響を受ける.我々は,手始めとして,N層の準粒子状態密度を調べ,有限の対相互作用が存在するときにはN層内の状態密度が場所によって変化すること,また,斥力の場合はゼロエネルギー付近に束縛状態が存在することを示した.このことは,現状では超伝導性を示さない物質がどのような対相互作用を持つか判定するのに有用な情報を提供する.有限の対相互作用がマイスナー効果にどう現れるかは現在検討中である.(J.Phys.Soc.Jpn,64 No.5,in press)
サチライシンYaBのプロ体の構造解析

サチライシンYaBはサチライシンBPN'と同様にプレ・プロペプチドを持つ前駆体として生合成される。プレ配列は当該前駆体の細胞膜透過過程でシグナルペプチダーゼの作用で切断され、プロ体が培地中に分泌され、プロ体分子内で酵素の自触作用で成熟体、即ち活性型酵素になると考えられる。然るにサチライシン族酵素では、まだ何人もこの分泌されたプロ体の単離ならびにその構造決定に成功していない。サチライシンBPN'に於いてはプロ配列は活性型酵素の構造形成のガイド配列として機能しているという多くの情況証拠があるのでプロ体の構造解析は是非とも必要である。我々は平成9年度にサチライシンYaBのプロ体を得る実験系を構築した。即ちサチライシンYaB活性中心変異体(Ser214Cys)をコードするプラスミドを保持する枯草菌各種を培養した場合、変異株WB600(6種の菌体外プロテアーゼ欠損変異株)の場合のみ菌体外にウエスタンブロティング反応性の蛋白質(プロ体なら分子量36,000の筈が電気泳動上では分子量52,000と異常に高い分子量を示す)を分泌することを認めた。これは実験系の構築から考えてプロ体と想定されるがこのような異常分子量を示すものの報告は従来ない。恐らく構造上特異な形をしていると考えられる。ただこの想定プロ体の生成量は少なかった。平成10度はこの生産性の向上とこれが真のプロ体であるかの確認をすることが目的であった。生産性の向上に関しては、坂口フラスコによる菌の培養では条件を色々変えてもうまく行かず、結局L字管による小規模培養を多数行なう以外によい方法が見つかっていない。プロ体の単離はなかなかに難しく従ってプロ体が特異な構造をしているかどうかまだ分かっていない。好アルカリ性Bacillus sp.の生産するサチライシンYaBは枯草菌菌体外アルカリ性プロテアーゼ、サチライシンBPN'とアミノ酸レベルで55%のホモロジーを有し、共にプレ・プロペプチドを持つ前駆体として生合成されプロ体が培地中に分泌される。プロ体分子内で酵素の自触作用で成熟体、即ち活性型酵素になる。本研究ではサチライシンYaBを独自の材料としてプロ体の単離とその構造を明らかにしようとした。プロ体を得るためには活性中心変異体を作成しなくてはならない。自触作用が働かず成熟体が生じないためである。サチライシンYaB活性中心変異体(Ser214Cys)をコードする遺伝子を調製し、これを枯草菌用プラスミド上に乗せた。この際、IPTG添加で誘導可能なspacプロモーターを付けたものと付けないものの2種の構築を行なった。プロ体はプロテアーゼにより分解を受けやすい可能性を考慮して宿主菌としては、枯草菌の主要菌体外プロテアーゼ2種の欠損変異株DB104および6種の菌体外プロテアーゼ欠損変異株WB600を用いた。上記プラスミドを枯草菌宿主に導入してサチライシンYaBプロ体の生成をウエスタンブロティングにより調べたところ宿主にWB600株を用い、培地にIPTGを添加した時にのみ培養液中にゲル電気泳動で52kdの分子量を示すプロ体と思われる蛋白質バンドを検出した。

この蛋白質を多量に得るためにスケールアップ並びにIPTG添加時期・方法などを検討したがいずれもうまく行かなかった。現状ではL字管培養でL字管の数を増やして培養しプロ体を精製・取得しようとしている。サチライシンYaBはサチライシシBPN'と同様にプレ・プロペプチドを持つ前駆体として生合成される。プレ配列は当該前駆体の細胞膜透過過程でシグナルペプチダーゼの作用で切断され、プロ体が培地中に分泌され、プロ体分子内で酵素の自触作用で成熟体、即ち活性型酵素になると考えられる。然るにサチライシン族酵素では、まだ何人もこの分泌されたプロ体の単離ならびにその構造決定に成功していない。サチライシシBPN'に於いてはプロ配列は活性型酵素の構造形成のガイド配列として機能しているという多くの情況証拠があるのでプロ体の構造解析は是非とも必要である。我々は昨年度にサチライシンYaBのプロ体を得る実験系を構築した。即ちサチライシンYaB活性中心変異体(Ser214Cys)をコードするプラスミドを保持する枯草菌各種を培養した場合、変異株WB600(6種の菌体外プロテアーゼ欠損変異株)の場合のみ菌体外にウエスタンブロティング反応性の蛋白質(プロ体なら分子量36,000の筈が電気泳動上では分子量52,000と異常に高い分子量を示す)を分泌することを認めた。これは実験系の構築から考えてプロ体と想定されるがこのような異常分子量を示すものの報告は従来ない。ただこの想定プロ体の生成量は少なかった。本年度はこの生産性の向上とこれが真のプロ体であるかの確認をすることが目的であった。生産性の向上に関しては、坂口コルベンによる菌の培養では条件を色々変えてもうまく行かず、結局L字管による小規模培養を多数行なう以外によい方法が見つかっていない。一方、ウエスタンブロッティングを行なうための抗サチライシンYaB抗体を使い尽くしたので新たにウサギの抗体を作成したところ、うまくサチライシンYaBと反応せず、想定プロ体の検出が困難な状態にある。従ってまだ想定プロ体の単離には至っていない。
新しいタイプの癌抑制蛋白質パラフィブロミンの機能解析

パラフィプロミンは「顎腫瘍を伴う副甲状腺機能充進症」の原因遺伝子HRPZ2がコードする癌抑制蛋白質である。パラフィプロミンは細胞増殖抑制能を有するが、SV40ウイルスのlarge T抗原(LT)の存在下では、逆に細胞増殖を促進する。本研究ではパラフィプロミンとLTの相互作用部位の同定およびパラフィプロミンが関わる癌化機構に関与する分子の同定を試みた。パラフィブロミンは家族性副甲状腺機能亢進症の1種である「顎腫瘍を伴う副甲状腺機能亢進症」の原因遺伝子HRPT2がコードする531アミノ酸残基からなる蛋白質で、癌抑制蛋白質として考えられている。申請者はこれまでにパラフィブロミンは通常、癌抑制蛋白質として細胞増殖を抑制しているが、癌蛋白質として知られているSV40ウイルスのlarge T抗原(LT)の存在下では、この癌蛋白質と相互作用することにより逆に細胞増殖を促進するという知見を得ている。このことは、パラフィブロミンは特定の条件下では癌蛋白質として作用する新しいタイプの癌抑制蛋白質であることを示唆するものである。またパラフィブロミンはユビキタスに発現が認められることから、副甲状腺癌だけでなく、様々な癌発生に関与している可能性がある。そこでパラフィブロミンのLT発現細胞の増殖促進に関与する分子と、パラフィブロミン不活化による細胞増殖に関与する分子を明らかにするため、パラフィブロミンを過剰発現させた293FT細胞とHEK293細胞のマイクロアレイ解析をそれぞれ行ったところ、パラフィブロミン過剰発現により5倍以上発現が変動する遺伝子がHEK293細胞では571種、293FT細胞では998種同定された。今後これらの遺伝子のリアルタイムRT-PCRによる発現変動の確認を行い、パラフィプロミンによる細胞増殖に関与する分子を絞り込む必要があると考えられる。パラフィブロミンは通常、癌抑制蛋白質として細胞増殖を抑制しているが、癌蛋白質として知られているSV40ウイルスのlarge T抗原(LT)の存在下で、この癌蛋白質と相互作用することにより細胞増殖を促進することを明らかにした。パラフィブロミンのLT発現細胞の増殖促進に関与する分子と、パラフィブロミン不活化による細胞増殖に関与する分子を明らかにするため、パラフィブロミンを過剰発現させた293FT細胞とHEK293細胞のマイクロアレイ解析をそれぞれ行い、パラフィブロミン過剰発現により5倍以上発現が変動する遺伝子をHEK293細胞では571種、293FT細胞では998種同定した。これらの遺伝子の中で細胞周期調節タンパク質に焦点を当て、リアルタイムRT-PCRによる発現変動の確認を行ったが、現在のところ、パラフィブロミン過剰発現細胞とコントロール間で有意に差がある遺伝子は同定されていない。そこでマイクロアレイの結果により、差が顕著であった他の候補遺伝子の発現差異をリアルタイムRT-PCRで確認する。
完全長cDNAライブラリを用いたダニアレルギーワクチンの開発

ダニアレルギーワクチンの開発基盤の確立を目的として、11,520のコナヒョウヒダニ由来完全長cDNAとその塩基配列を基に、新規ダニ抗原のスクリーニングを行った。これまでの研究成果により選択された20の既知抗原クローン群Dおよび20の新規抗原候補クローン群HAを、GeneGunを用いてマウスに免疫し、免疫応答を解析したところ、D, HAともに、ダニ抗原特異的な脾臓および所属リンパ節細胞の増殖およびサイトカイン産生量が、コントロールに比べて上がっていた。このことから、免疫したこれらのクローンによるマウス体内でのダニ特異的免疫応答の誘導が確認された。HAを、発現量の多かったものから5クローンずつ4つのサブセット(HA1, HA2, HA3, HA4)に分割し、同様の手法でマウスに免疫した後、ダニ特異的免疫応答を解析した。その結果、HA3を免疫したマウスの脾臓細胞において、ダニ抗原特異的なサイトカイン産生量が上昇しており、また、HA3免疫マウスの血清中に、ダニ抗原特異的なIgG産生が確認された。次に、HA3を構成する5クローンを個別にマウスに免疫し、同様の手法で免疫応答を解析したが、ダニ特異的な免疫応答を有意に誘導したクローンは無かった。これらの結果より、HAを構成する20のクローンのうち、マウスに免疫する事によりダニ特異的な免疫応答を誘導するクローンはHA3を構成する5つのクローンに絞り込まれた。しかし、これらの5つを個別に免疫するとその効果が見られなくなったことから、ダニ特異的免疫応答を誘導するためには複数のクローンを同時にマウスに免疫する必要がある可能性が示唆された。ここまでの成果は、第42回日本免疫学会にて発表した。(抄録なし)ダニアレルギー特異的ワクチンの開発基盤の確立を目的として、コナヒョウヒダニ(D.farinae)の完全長cDNAライブラリのうち、既に塩基配列決定済みの11,520クローンを基に、新規ダニ抗原候補分子のスクリーニングを行った。これまでの研究成果により選択された20の既知抗原クローン群(Group D)および20の新規抗原候補クローン群(Group HA)を個々に、真核細胞用発現プロモーターCEを有するベクター(pCE-FL4)に組換えた。D,HA,およびコントロールの空ベクター(pCE-FL4)を、GeneGunを用いてマウスに免疫し、免疫応答を解析したところ、D,HAともに、ダニ抗原特異的な脾臓細胞および所属リンパ節細胞の増殖およびサイトカイン産生量が上がっていた。このことから、免疫したこれらのクローンによるマウス体内でのダニ抗原特異的免疫応答の誘導が確認された。次に、D,HAでマウスを免疫した後、ダニ粗抗原のチャレンジによりアレルギー性喘息を誘導し、ワクチンによるダニアレルギー抑制効果を気管支肺胞洗浄により解析した。その結果、肺に浸潤した好酸球数はD,HA群ともコントロール群と差が無く、これら計40クローンによるダニアレルギー予防効果はみられなかった。ここまでの成果は、第41回日本免疫学会にて発表した。一方で、近年アレルギーにおける役割が注目されてきているTh17細胞が産生するIL-17が、B細胞クラススイッチに与える影響を解析し、論文発表した(Cytokine 2012)。この解析結果を踏まえ、今後さらにワクチンの探索と評価を進めていく。交付申請書の目的通り、既知抗原(20クローン)および選択した新規抗原候補(20クローン)を用いてマウスの系で、ワクチン効果の評価をおこなった。患者サンプルを用いた診断用抗原パネルについても、これら40クローンから抗原を発現タンパク質として順次作製しているところで、全て揃ったら速やかに解析を開始出来る状況である。引き続き、ダニアレルギー予防効果のあるワクチン候補遺伝子のスクリーニングをマウスの系でおこなっていく。

今回、D,HAともに十分な免疫応答を誘導したにも関わらず、予防効果が見られなかった原因の一つとして、実験的に誘導したダニアレルギーが強すぎた可能性も考えられたため、現在の方法よりマイルドなチャレンジの方法を検討中である。また、HAは発現量の高いものから20遺伝子選んだものであるが、遺伝子解析により、Dに含まれる既知抗原は発現量と相関していない事が判ったため、今後は発現量からではなく、機能的にアレルギーに関与すると予測される遺伝子を候補として選択していく予定であるもまた、診断用抗原パネルの検討も引き続き進めていく。(抄録なし)
パーコレーション制御による複相鋼板の高機能化

複相鋼の力学特性を支配するメゾスケールな基本因子を明らかにすることを目的に,軟質+硬質オーステナイト複合組織を有するFe-Ni合金を用いて,その0.2%耐力に及ぼす硬質オーステナイト分率の影響を調査した.0.2%耐力は硬質オーステナイト分率の増加に従って連続的に上昇したが,その増加挙動はある分率を境に非線形的なものであった.この非線形的な強度の増加挙動は,硬質オーステナイトのパーコレーション挙動と一致した.これらの結果から,個々の硬質オーステナイト粒がしっかりと連結し,複合組織の母相となることで,塑性ひずみが軟質,硬質オーステナイトともに均一に分散し,顕著な強化をもたらすことが明らかとなった.第二相の体積率を連続的に増大させた場合の複相組織鋼の機械的特性,とくに降伏強度の変化ならびに母相/第二相間のひずみ分配挙動の変化を調査するため、Fe-30mass%Niオーステナイト合金に対して、適切な条件でサブゼロ処理と焼鈍処理を施した。これにより、組織の一部で、fcc →bcc →fccの2度のマルテンサイト変態が生じ、(軟質オーステナイト+硬質オーステナイト)複相鋼が得られた.さらに、サブゼロ処理温度を変化させることで第二相である硬質オーステナイト相の体積率を任意に変化させることに成功し,硬質オーステナイト相の体積率が,0,34,50,70,86%となる試料を準備した。以上の様にして得られた(軟質オーステナイト+硬質オーステナイト)複相鋼の引張特性を調査した結果、その降伏強度が第二相体積率に依存して増加するものの、その増加挙動が線形的ではないことが明らかとなった.具体的には,第二相の体積率がある臨界値に達したとき,降伏強度が急激に増加することがわかった。以上の結果は、複相組織鋼の強度特性が、第二相の体積率のみではなく、その分散状態や連結化(パーコレーション)にも支配されることを明示している.本研究課題の新規性といえるパーコレーションによる複相組織鋼の強度特性変化をすでに確認することが出来ており、当初の予定通りに研究が進行していると判断される。ただし、引張変形中の軟質オーステナイト/硬質オーステナイト間のひずみ分配挙動を評価することが出来なかったことが、若干の課題となった。前年度までに,Fe-30mass%Niオーステナイト合金を溶製し,この鋼に対して,適切な条件でサブゼロ処理とその後の焼鈍処理を施すことでfcc→bcc→fccのマルテンサイト変態・逆変態が部分的に生じ,硬質オーステナイト相の体積率を0,34,50,70,86%と連続的に変化させた(軟質オーステナイト+硬質オーステナイト)複相組織鋼の作製に成功した.そして,引張試験によって,この鋼の力学特性を調査したところ,硬質オーステナイトの体積率増加に起因して降伏強度が増加するものの,その増加挙動は体積率に対して非線形であることが明らかとなった.本年度は,この降伏強度増加の非線形な第二相体積率依存性について,マイクロメカニクスを用いた解析を行った.具体的には複相組織を構成する軟質および硬質相の力学特性を入力値として,複相組織鋼の力学特性を予測するSecant法を用いた強度予測を実施し,実験と計算の比較を行った.この際,Secant法では構成する軟質相と硬質相のどちらを母相とするかと任意に決定することが出来るため,その母相選択を考慮した強度予測を実施した.その結果,第二相体積率が一致値より小さい場合は,軟質オーステナイトを母相とした計算結果,体積率がこれより大きい場合は,硬質オーステナイトを母相として計算結果と実験結果がよく一致することを証明した.つまり,非線形な降伏強度の増加は,軟質オーステナイトから硬質オーステナイトへの母相遷移に起因しており,硬質相の連結化(パーコレーション)が複相組織鋼の強度特性に大きく寄与することを証明した.当初予定していた引張変形中の軟質オーステナイト/硬質オーステナイト間のひずみ分配挙動の評価は実施できなかったが,Secant法を用いた理論解析を実施することで,組織連結性の重要性を証明するという,本研究課題の大きな目的を達成できたため.前年度までにFe-30mass%Niオーステナイト合金を溶製し,この鋼に対して,適切な条件でサブゼロ処理とその後の焼鈍処理を施すことでfcc→bccマルテンサイト変態ならびにその後のbcc→fccマルテンサイト逆変態が部分的に生じ,硬質オーステナイト相の体積率を0,34,50,70,86%と連続的に変化させた(軟質オーステナイト+硬質オーステナイト)複相組織鋼の作成に成功した.そして,この鋼の引張特性を調査したところ,降伏強度が硬質オーステナイトの体積率に依存して非線形的に増加することを明らかにした.さらに,この非線形な降伏強度の増加が軟質オーステナイト相から硬質オーステナイト相へ母相が遷移することに起因することを弾性論に基づいて解析し,硬質相の連結化(パーコレーション)が複相組織鋼の強度特性に大きく寄与することを実験的に証明した.本年度は,ランダム分布を仮定した金属組織のパーコレーション挙動を計算機シミュレーションを用いて実施し,その計算結果と実際の降伏強度の非線形増加挙動を比較することで,組織連結性に伴う降伏強度特性の変化について,パーコレーションの観点から定量的な解析を行った.

その結果,ランダム分布を仮定した計算結果と実験結果の間には明瞭な誤差があり,金属の力学特性をパーコレーションによって議論するためには,金属組織形成における不均一核生成ならびに連結した組織の結合力を加味する必要があることを明示した.複相鋼の力学特性を支配するメゾスケールな基本因子を明らかにすることを目的に,軟質+硬質オーステナイト複合組織を有するFe-Ni合金を用いて,その0.2%耐力に及ぼす硬質オーステナイト分率の影響を調査した.0.2%耐力は硬質オーステナイト分率の増加に従って連続的に上昇したが,その増加挙動はある分率を境に非線形的なものであった.この非線形的な強度の増加挙動は,硬質オーステナイトのパーコレーション挙動と一致した.これらの結果から,個々の硬質オーステナイト粒がしっかりと連結し,複合組織の母相となることで,塑性ひずみが軟質,硬質オーステナイトともに均一に分散し,顕著な強化をもたらすことが明らかとなった.残課題となった軟質オーステナイト/硬質オーステナイト間のひずみ分配挙動を実験的に調査するとともに有限要素法解析を用いたシミュレーションを実施する。そして、第二相のパーコレーションを実測するため、通常の2次元での組織観察に加えて、連則的に研磨と観察を繰り返す、逐次組織観察法により、軟質オーステナイトと硬質オーステナイトの3次元的な分布状態や連結性を定量的に評価する。(軟質オーステナイト+硬質オーステナイト)複相組織鋼の詳細な組織観察を実施し,硬質オーステナイト体積率に依存した硬質オーステナイトの組織連結性を評価し,降伏強度の非線形な硬質オーステナイト体積率依存性との相関性を吟味する.そして,ランダム分布を仮定した理想的なパーコレーション挙動と比較することで,複相組織鋼において強度上昇を可能にする硬質相のパーコレーションを積極的に活用するための組織制御指針を明らかにする.鉄鋼材料
Characterization of plant genes encoding signal-transducing GTP-binding proteins

(和訳)ras関連のGTP結合タンパク質は細胞の増殖、分化、細胞骨格形成、膜糸への転送、分泌等、多面的な機能に関与する。近年、これらのタンパクをコードする遺伝子が検出されているが遺伝子の発現制御、産物の機能については不知な部分が多い。我々は、このような遺伝子の一つWgp7を小麦より得た。この遺伝子の転写物は二酸化イオウ、二酸化窒素添加によりすみやかに(30分以内)、かつ、大量に蓄積することを見いだした。さらに当遺伝子は酸素ラジカルによっても誘発され、酸素ストレスにより反応することが示唆された。Wgp7を有するトランスジェニック植物を作成し、これらが酸素あるいは二酸化イオウ、二酸化窒素ストレスに反応するかどうか検討中である。さらに誘発に必要なプロモーター領域の解析のためpWgp7-GUS遺伝子の組み換え体を作成中である。得られたタンパクを用いて抗体を作りWgp7産物の局在化を調べる。
大規模シミュレーションと次世代超広視野分光観測で解き明かすダークマターの正体

本研究の目的は、様々なダークマターモデルを採用した大規模な宇宙論的N体シミュレーションと準解析的手法を用いて、銀河ハローにおけるサブハローの数、空間分布、内部構造、運動を定量化する。そしてそれらを、すばる望遠鏡のHSCやPFSをはじめとした将来の矮小銀河の観測と詳細に比較し、ダークマターモデルを制限する。2018年度は、暖かいダークマターモデルを採用した高分解能宇宙論的N体シミュレーションの解析を進めた。シミュレーションは一辺8Mpc/h共動距離の立方体内に、ダークマター質量解像度4e4Msun/hを実現している。暖かいダークマター素粒子の質量は3eVと5keVの2モデルを採用した。銀河サイズのダークマターハロー内に存在する低輝度矮小楕円体銀河サイズのサブハローの中心密度が、ダークマターが冷たいモデルよりも暖かいモデルにおいて優位に小さいことを見出した。違いは最大回転速度が20km/sより小さいサブハローで特に顕著である。また暖かいダークマター素粒子の質量が小さいほど、冷たいモデルより中心密度がより小さくなる。一方、ホストハローによる差異が確認され、大ボリュームのシミュレーションを行い、統計的精度を上げることが重要である。さらに2019年度に行う予定の、ダークマター自己相互作用を考慮したシミュレーションの準備を進めた。自己相互作用をシミュレーションコードに組み込み、孤立したハローにおけるシミュレーションに成功した。暖かいダークマターモデルを採用した高分解能シミュレーションの解析が進むとともに、もう一つの主要なダークマターモデルである、自己相互作用するダークマターのシミュレーションの準備が進み、2019年度中に大規模シミュレーションが可能となった。シミュレーションを一辺16Mpc/hに拡張し、銀河ハローにおけるサブハローの数、空間分布、内部構造、運動をより精度よく定量化する。また暖かいダークマターモデルだけでなく、自己相互作用するダークマターモデルを採用した宇宙論的シミュレーションを行い、モデルによるサブハローの分布の違いを定量化する。準解析的モデルを用いて、シミュレーションでは考慮していないバリオンの効果を評価する。ハローの中でのガスの冷却、超新星爆発や再電離加熱、星形成などをモデル化し星質量を見積もり、特定の粒子にタグを付けて恒星成分の空間分布を定量的に見積もる。そして銀河系外縁部の恒星ハロー集積過程やストリーム構造の、ダークマターモデルによる違いを検証する。
HIV調節因子nef蛋白質によるヒト大腸リンパ由来ヘルパ-T細胞への作用の解析

HIV調節遺伝子nef(3'orf)はHIV遺伝子3'末端LTRと一部が重複した位置に存在する遺伝子で、レンチウイルスのHIV、SIVに特異的に見られる。nef遺伝子産物NEF蛋白は25、27kdの分子量を持ち、前者はミリスチン化による細胞膜後者は細胞質内に局在する。免疫系への影響として、nef遺伝子の発現により、CD4マ-カ-の減少が報告されているが、その意義は明らかではない。そこで、nef蛋白が免疫不全の一要因としてT細胞に作用するという仮説を立て、昨年以来大腸菌発現ベクタ-によりnef遺伝子の発現と精製を行なって来た。さらに、精製標品の健康人末梢血リンパ球への添加によりT4/T8比の減少を観察した。そこで、今年度は、この変化が細胞増殖能の変化によるか否かを検討する為、末梢及び大腸リンパ由来のT細胞株にnef蛋白を添加した。増殖能においてCD8細胞株では促進、一方CD4細胞株では抑制の傾向が観察された。このことから、HIV感染によりnef蛋白が血中に遊離すると、感染宿主に影響を及ぼす可能性が示唆された。今後、nef蛋白の変異体を発現、精製しnef蛋白の生物活性部位を検討すると共に、nef蛋白がHIV感染にどの様な影響を及ぼすのかを追及する計画である。
絶滅危惧種イトウの環境ＤＮＡによる遺伝的多様性、個体群構造と分布の解明

本研究は日本最大の淡水魚で絶滅危惧種であるイトウの生態に関する新たな知見を得るため、昨今進展目覚ましい環境DNAを用いた手法を核DNAの種内多型に応用する技術開発を目標としている。現在環境DNA技術は主に細胞内小器官の一つであるミトコンドリアのDNAを基に解析されているが、ミトコンドリアDNAは一般に種内多型に乏しく、同一種内でおこる変異の多くを反映していない。そこで、環境水中の核DNA情報をより高密度で集積することにより、「一すくいの水から希少種・野外集団の遺伝的多様性評価」へとつなげるのが本研究プロジェクトの狙いである。この技術開発が実現すれば、イトウに限らず希少種を捕獲したり傷つけたりすることなく彼らの遺伝的多様性を評価できるばかりか、過去のボトルネック、集団間の遺伝的交流といった歴史についても推定が可能となることが期待される。これにはRAD-seqと呼ばれる手法を用い、本解析に適したゲノムスケールでの核DNAマーカー探索を行う必要があるため、H29年度はこの解析を実施するためのサンプル収集と予備的な解析を実施した。共同研究者であるマシュー・キャンベル(JSPS外国人特別研究員)の着任がH29年10月末であったことから、昨年度は5カ月間という限られた期間ではあったが、研究協力者らの協力の下、約30個体のイトウ組織サンプルからのDNA抽出が実現し、これらのサンプルを基にRAD-seq法による核DNAマーカー開発の準備が整いつつある。共同研究者であるマシュー・キャンベル(JSPS外国人特別研究員)の着任がH29年10月末であったことを考慮すると、現状の進捗状況は妥当な推移と考えられる。日本国内・北海道内でのイトウの繁殖期が4ー5月と限られるため、遡上親魚の地域集団の遺伝的多様性を評価するにはこの時期に全道各地で採水を実施するほかない。このため、まずはこの時期にイトウの安定個体群が存在する各河川を周りサンプル収集を試みると共に、各機関協力者よりRAD-seqに供するイトウ組織標本の更なる充実を図る。