hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
国際貿易体制の規範構造

国際貿易体制の法的性格について歴史的かつ実証的な観点から検討を行った。特に同体制の創設と変容に大きな影響を与えた締約国の通商政策とその経済的・政治的な背景、及びそれらの要因が同体制における貿易交渉のあり方、実体的な義務の内容、紛争解決手続の態様等にいかなる影響を及ぼしていったのかの検討を通じて、保護貿易を前提とした2国間の権利義務関係の束から、自由貿易の実現を目的とした客観的な法秩序としての同体制の性格変容の過程を論理内在的に明らかにした。本研究は、国際貿易体制の規範構造を(1)戦間期の米国互恵通商協定、(2)前期GATT、(3)後期GATT、及び(4)WTO体制という4つの時代区分に応じて分析し、その歴史的展開を実証的に明らかにすることを目標とするが、今年度は、特に(3)後期GATTと(4)WTO体制について検討・分析を行った。(3)後期GATTについては、特に東京ラウンドにおけるGATT19条の改正交渉や紛争解決手続の改正交渉について検討した。これら検討によって、GATT/WTO体制の「公法化」の端緒としてのケネディ・ラウンド、GATT/WTO体制の「公法化」にともなう「法の欠缺」の現れとしての一方的措置、そしてかかる「法の欠缺」を補充する「立法過程」としての東京ラウンドという仮説の論証が補強された。(4)WTO体制については、特にWTO体制成立後の紛争解決手続における実行について分析を進めた。かかる検討によって、WTO体制成立後の紛争解決手続は、WTO法の「公法化」にともなって、2国間の紛争解決手続から、法そのものの遵守を確保する司法的な国際コントロール手続としての性格を有するようになったという仮説の論証が補強された。これら研究は、国際貿易体制の成立と発展に関する包括的な歴史研究としての意義のみならず、例えば、TPPのような地域的な経済連携協定においてWTO協定に矛盾する規定を置くことの意味や、ドーハ・ラウンド交渉の停滞を受けて近年批判を集めている多角的貿易交渉における意思決定の在り方といった国際貿易体制をめぐる焦眉の課題に対する処方について検討する上でも、重要な意義を有する。本研究は、国際貿易体制の規範構造を1戦間期の米国互恵通商協定、2前期GATT、3後期GATT、及び4WTO体制という4つの時代区分に応じて分析し、その歴史的展開を実証的に明らかにすることを目標としたが、今年度は、特に1戦間期の米国互恵通商協定から2前期GATTへの移行過程に関して、日本では入手できない資料を収集するため米国国立公文書館を訪問するなどして、調査・研究を行った。その結果、1942年相互援助協定第7条の規定に基づいて開催された英米両国の専門家会合においては、多角的かつ一律的な関税削減と詳細な通商規定、及びかかる通商規定の遵守を監督する国際機関の設置という方法によって、文字通りの貿易自由化を目的とした多角的自由貿易体制の創設が模索されていたこと、これに応じて1943年から44年にかけて策定された米国の戦後国際通商協定案においては、戦間期の互恵通商協定に挿入されたエスケープ・クローズに代わって、「既得権者の新たな状況への適応を容易にするための方法」が考案されていたこと、しかしながら、その後1945年の互恵通商協定法の延長に際する国内産業及びその代弁者としての議会からの圧力によって、米国の戦後国際通商協定案は国別・産品別の関税譲許とその効果を保護することを目的とした戦間期の互恵通商協定類似の規範構造を有するようになったこと、これに応じて一度は「既得権者の新たな状況への適応を容易にするための方法」へと姿を変えた戦間期の互恵通商協定のエスケープ・クローズが、再び姿を現すことになったことが明らかになった。上記の点は、GATTからWTOへと至る戦後国際貿易体制の発展が、いわば戦間期の英米両国の専門家によって構想された国際貿易体制への回帰の過程として位置づけられることを示唆するもので、国際貿易体制の歴史的展開の理解に対して重要な知見を加えるものと考えられる。東京ラウンド交渉の分析に予想以上の時間がかかったため、当初の計画より若干の遅れが生じているが、研究の内容自体はおおむね順調である。24年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度よりもエフォート率を高くして、研究のスピードアップを図る。研究計画の変更の必要性や研究を遂行する上での問題点等は、特に生じていない。
光駆動型高分子ナノアクチュエーターの開発

近年、光トラッピングや光圧を利用して、μm程度の大きさの物体の移動や回転を制御するマイクロマシンの開発が盛んになっている。しかし、光圧を利用した場合はハンドリングできる物体の大きさが限られてしまうので、一般的な用途には利用しにくい。我々はこれまでに規則正しい網目構造を有する高分子ゲルの研究を行ってきた。その研究過程で、剛直な高分子鎖中に光応答性を有するアゾベンゼンを導入すると、紫外光照射により高分子ゲルの網目サイズが2.1nmから0.8nmに変化し、それに伴ってゲルが収縮することを見いだした。また、可視光を照射すると、網目サイズは元に戻り、ゲルは元の大きさに戻った。このゲルをロッド状に加工し、紫外光を照射すると、ゲルの表面だけが光を吸収・収縮し、約30秒でロッドが直角に曲がることを見いだした。また、このロッドに可視光を照射すると、ロッドは元の状態に戻り、しかもその反応が可逆的であることを見いだした。また、我々は大きな二光子吸収断面積を有する、光重合開始剤を開発した。この色素をフォトレジストに混合し、赤外レーザーで励起するとアトリットルスケール(100x100x500nm)の空間分解能を有する三次元光造形が可能になった。二光子励起を利用した三次元光造形法により反応容器を作製し、その中で高分子ゲルの重合を行うことにより、幅700nm、長さ10μm程度の光応答性フレキシブルナノカンチレバーの作製に成功した。また、このフレキシブルカンチレバーを用いて、チューブ状のゲルを作成すると、光照射によりぜんどう運動するアクチュエーターが作成できることが判明した。現在までの所、これらのゲルは空気中の水分と反応して分解されてしまうが、ゲルの化学構造をアミド酸からエステルへと変化させることにより、安定性も向上することが判明した。我々は、光応答性部位を組み込んだビニルモノマーを合成し、これを架橋することによりハイドロゲルを作製した。ケトーエノール互変位性を示す、アセチルアセトンを高分子鎖に導入したハイドロゲルに光を照射すると、水溶液中ではpHが減少し、プロトン乖離によって生じた浸透圧によりゲルが膨潤した。このゲルを薄片状にし、片面から紫外光を照射すると、ゲル表面の光吸収、膨潤のために平面状であったゲルを折り曲げることができた。ゲルのモノマー溶液にビススチリルベンゼンをドープし、チタンサフブァイヤレーザーを照射すると、2光子励起過程により重合が進行し、任意のパターンを作製することができた。特に、ゲルをカンチレバー状に加工すると、紫外光の照射によりレバーの運動を任意に制御することができた。水溶液中ではエノラートイオンが安定なために、アセチルアセトンは光照射前のエノール型には戻りにくく、可逆的な反応得られなかった。そこで、この問題を克服するためにアゾベンゼン部位を有するハイドロゲルを作製した。ただし、アゾベンゼン部位が側鎖として導入されていると、光照射によるシスートランスの異性化は、ほとんど高分子全体の変形に影響しない。そこで、アゾベンゼン部位を比較的リジッドな主鎖骨格中に導入し、規則的な架橋構造を導入することにより、分子鎖で生じた小さな変形が、マクロな応答としてとりだせるように改良した。この系の運動は可逆的であり、可視光レーザーにより、自由に曲げたり、伸ばしたりできる。

我々はこれまでに規則正しい網目構造を有する高分子ゲルの研究を行ってきた。その研究過程で、剛直な高分子鎖中に光応答性を有するアゾベンゼンを導入すると、紫外光照射により高分子ゲルの網目サイズが2.1nmから0.8nmに変化し、それに伴ってゲルが収縮することを見いだした。また、可視光を照射すると、網目サイズは元に戻り、ゲルは元の大きさに戻った。このゲルをロッド状に加工し、紫外光を照射すると、ゲルの表面だけが光を吸収・収縮し、約30秒でロッドが直角に曲がることを見いだした。また、このロッドに可視光を照射すると、ロッドは元の状態に戻り、しかもその反応が可逆的であることを見いだした。また、我々は大きな二光子吸収断面積を有する、光重合開始剤を開発した。この色素をフォトレジストに混合し、赤外レーザーで励起するとアトリットルスケール(100x100x500nm)の空間分解能を有する三次元光造形が可能になった。二光子励起を利用した三次元光造形法により反応容器を作製し、その中で高分子ゲルの重合を行うことにより、幅700nm、長さ10μm程度の光応答性フレキシブルナノカンチレバーの作製に成功した。
感情の構造と作用-コア・アフェクト理論の検証と応用-

Fear&Russell(1984)は、感情概念間の関係は「感情」を上位概念とする階層構造を示し、さらに「感情」の典型的属性を備えた「中心概念」と典型的属性が不足する「周辺概念」に分けられること、またさらに感情概念はしばしば感情以外の心理学的概念に内包されることを報告した。われわれ(朴他、2010)は日本人と、韓国人を被験者として感情を上位概念とする感情の下位概念を調査し、出現率が80%を超す概念は日本人では「悲しい」、韓国人では「キップン(pleasure)」と「スルプン(sadness)」であり、感情語によってその出現頻度が異なることを報告し、出現頻度の高い語を中心概念、低い語を周辺概念と定義した。この結果に基づき、まず、中心概念に分類された語と、周辺概念に分類された語の上位概念を調べたところ、日本人では周辺概念に分類された語に比べ、中心概念に分類された語の上位概念は「感情」であると同定されることが多かったのに対し、韓国人ではそのような傾向はあまり見られなかった。また、感情の周辺概念の語を挿入した感情エピソード文よりも、中心概念の語を挿入した文の方が、より自然であると、日本人は評価することが示された。これらの成果は、ISRE(International Society for Research on Emotion)2011や日本心理学会で報告し、現在執筆中である。またこの他、本年度、中心概念とされるごと、周辺概念とされる語、各15語ずつの計30項目を用いて、この語を3,6,11,14のグループに分類させる実験を行い、その類似性を調べ、MDS(多次元尺度構成法)によって布置し、クラスター分析により、グループ分けした。その結果、中心概念は快-不快の軸に関係し、周辺概念は活性-不活性の軸に関係するという非常に明確な関係性が示された。この成果も外国誌に投稿すべく準備を進めている。「感情」が、どのような事象を示すかに関し、研究者間で統一的な見解はまだない。感情の主要理論の一つである基本感情説では、6つ(Ekman)あるいは9つ(Izard)の基本感情があるとされ、それぞれ固有の表情や音声、生理的反応などの特異的反応があり、神経回路も違うことが仮定されている。これに対し、Russell(2009)を中心とする次元説の立場からは、基本感情説が主張するような特異的反応も神経回路も見出されていないとする批判がなされている。基本感情説では、感情に関する日常概念(fear,angerなど)は普遍的なものであると考えられているが、一方、言語・文化の違いによって感情を表現する語彙や意味、言語・心理学的作用が異なることが知られている。このような立場からしばしば欧米人と日本人の比較が行われてきた。しかしながら、日本人と韓国人、中国人などは、言語、風土、文化、生活様式などが異なっており、感情の概念構造や意味、心理学的作用は異なっていることが想定される。そこで、本実験では韓国人、日本人に対し、「感情」という言葉を提示し、その概念に収まる関連概念を自由に列挙させ、その結果をFehr & Russell(1984)と比較した。その結果、日本人(196名)で2度以上出現した感情語は101語、韓国人(207名)では189語の感情語が抽出された。日本人では「悲しい95.4%」、「楽しい73.5%」、韓国人では「キップンpleasure84.5%」「スルプンsadness84.1%」が上位を占めた。これに対しアメリカ人では「happiness76.0%」「anger74.5%」が上位であった。なお、日本人と韓国人を比較すると、韓国人の方が上位10の感情語に含まれるポジティブな感情語が若干多いこと、また、日本では「悲しい」「楽しい」「うれしい」「怒り」の後著しく他の言葉の出現頻度が下がり、こうした傾向はアメリカの結果と同じであったのに対し、韓国では上位2語の後の出現頻度が下がるが、8番目にいたってもまだ30%を維持し、得られた感情語が豊富である点が異なっていた。

またこの他、本年度、中心概念とされるごと、周辺概念とされる語、各15語ずつの計30項目を用いて、この語を3,6,11,14のグループに分類させる実験を行い、その類似性を調べ、MDS(多次元尺度構成法)によって布置し、クラスター分析により、グループ分けした。その結果、中心概念は快-不快の軸に関係し、周辺概念は活性-不活性の軸に関係するという非常に明確な関係性が示された。この成果も外国誌に投稿すべく準備を進めている。
精子幹細胞の放射線による細胞死誘導の分子メカニズムの解明

放射線は生体成分の水に作用して活性酸素(ROS)を産生させDNA損傷等の悪影響を引き起こす。本研究では精子幹細胞(SSCs)の放射線耐性に関わる分子の同定を行った。その結果、Nox3遺伝子、及びBcl6b遺伝子がSSCsの自己複製に関わる転写因子である事を見出した。SSCsにおいてMapk14又はMapk7遺伝子を活性化させるとNox1遺伝子が誘導されROSが増加した。Mapk14又はMapk7遺伝子をノックダウンしたSSCsを精巣内に移植するとコロニー数が減少した。本研究においMAPK14-MAPK7-BCL6B経路がROSの産生を介したSSCsの自己複製に重要な役割を果たす事が分かった。(1)p53ノックアウト(KO)マウス由来精子幹細胞の細胞死誘導の確認:精子幹細胞(SSCs)及び生殖幹細胞(GSCs)においてp53遺伝子KO又はノックダウン(KD)すると放射線照射による細胞死が減少した。(2)pumaKO由来精子幹細胞の細胞死誘導の解析:GSCs,多能性生殖幹細胞(mGSCs)およびマウス胚性繊維芽細胞(MEF)においてpuma遺伝子をKDすると放射線照射による細胞死が減少し、puma遺伝子を導入すると細胞死を誘導した。(3)GSCsにおけるTnfsf10-Tnfrsf10b経路の細胞死誘導の解析:放射線照射後のGSCs培養液の上澄みにはTNFRSF10BのリガンドであるTNFSF10が大量に含まれていた。この上澄みを照射していないGSCsに加えると細胞死を誘導した。放射線照射後のGSCsではTnfrsf10b遺伝子の発現が増加し、Tnfrsf10b遺伝子をKDすると放射線照射による細胞死が減少した。しかし、GSCsにTnfrsf10b遺伝子を導入しても細胞死を誘導しなかった。(4)Trp53inp1によるTnfrsf10b誘導の解析:GSCsにおいてTrp53inp1遺伝子をKDすると放射線照射による細胞死が減少した。GSCsにTrp53inp1遺伝子を導入するとTnfrsf10bの発現が増加し、KDすると放射線照射後のTnfrsf10bの発現が低下した。しかし、GSCsにTrp53inp1遺伝子を導入しても細胞死を誘導しなかった。精子幹細胞(SSCs)の放射線耐性に関わる新規ターゲット分子の同定を行った。放射線は生体成分の水に作用して活性酸素(ROS)を産生させ、DNA損傷等の悪影響を引き起こす。この事からROSによって産生される分子の中でSSCsの自己複製制御に関わる分子の同定を行った。その結果、NADPHoxidase 3(Nox3)がSSCsの自己複製制御に関わる分子である事を見出した。生殖幹細胞(GSCs)においてNox3をノックダウン(KD)するとROSが減少した。更に、Nox3のKDは細胞死(アポトーシス)を引き起こし、GSCsの増殖を低下させる事が分かった。また、GSCs、又は精巣から単離した直後の細胞においてNox3をKDし、その後その細胞を精巣内に移植するとコロニー数が減少した。この結果より、GSCsや単離直後の精巣の細胞においてNox3がSSCsの自己複製制御に関与する事が分かった。しかし、GSCsにおいてNox3のみを強制発現(OE)してもGSCsの増殖、又はSSCsの活性に影響を与えなかった。今年度の研究計画では精子幹細胞(SSCs)の放射線耐性に関わる新規ターゲット分子の同定を予定していた。本研究において、放射線照射から生じる活性酸素(ROS)によって産生される様々な分子の中でNADPHoxidase 3(Nox3)がSSCsの自己複製制御に関わる事を示した。この為ROSは生殖細胞に悪影響を及ぼすと考えられてきた。精子幹細胞(SSCs)は精子形成の源となる細胞である。SSCsは個体が一生に亘り自己複製分裂を行い、精子を作り続ける基盤となっている。ROSはSSCsにおいても同様に悪影響を及ぼすと考えられてきた。しかしこれまでの研究においてNox1遺伝子によるROS産生がSSCsの自己複製分裂に必要であることを見出していた。そこで本研究においてSSCsにおけるROSがどのようなシグナル伝達を行い自己複製を促進するのかを解明することを目的とした。その結果ROSを産生する様々な転写因子の中でSSCsの放射線耐性に関わる転写因子(Bcl6遺伝子)を同定した。Bcl6b遺伝子はNox1遺伝子の発現を増加させてROSを産生しSSCsの自己複製に関わる因子である事が分かった。SSCsにおいてMAPK14を活性化させるとその下流でMAPK7が活性化された。また、SSCsにおいてMapk14またはMapk7遺伝子を活性化させるとNox1遺伝子が誘導されROSが増加した。反対にMapk14またはMapk7遺伝子をノックアウトしたSSCsを精巣内に移植するとその後コロニー数が減少した。更に、インヒビターを用いたスクリーニングを実施する事によりMAPK7が活性化されるとBcl6b遺伝子がNox1遺伝子の発現を増加させてROSを産生する事が分かった。これらの事から本研究においてMAPK14-MAPK7-BCL6B

経路がROSの産生を介したSSCsの自己複製に非常に重要な役割を果たす事が分かった。放射線は生体成分の水に作用して活性酸素(ROS)を産生させDNA損傷等の悪影響を引き起こす。本研究では精子幹細胞(SSCs)の放射線耐性に関わる分子の同定を行った。その結果、Nox3遺伝子、及びBcl6b遺伝子がSSCsの自己複製に関わる転写因子である事を見出した。SSCsにおいてMapk14又はMapk7遺伝子を活性化させるとNox1遺伝子が誘導されROSが増加した。Mapk14又はMapk7遺伝子をノックダウンしたSSCsを精巣内に移植するとコロニー数が減少した。本研究においMAPK14-MAPK7-BCL6B経路がROSの産生を介したSSCsの自己複製に重要な役割を果たす事が分かった。本年度の研究計画で予定していた以下の2項目についてはそれぞれ確認及び解析作業が完了した。(1)p53ノックアウト(KO)マウス由来精子幹細胞の細胞死誘導の確認、及び(2)pumaKO由来精子幹細胞の細胞死誘導の解析本年度はこれらに加えて以下の項目を実施した。(3)生殖幹細胞(GSCs)を用いた放射線に対する細胞応答の解析また、放射線照射による細胞死誘導に関与する遺伝子(Trp53inp1, Tnfrsf10b)を見出した。平成27年度以降の研究計画において精子幹細胞(SSCs)の放射線耐性に関わる新規ターゲット分子の同定を予定していた。本年度の研究においてNADPH oxidase 3(Nox3)をSSCsの放射線耐性に関わる新規ターゲット分子として同定した。今後は放射線による細胞死誘導のメカニズムを明らかにする為、インヒビター等の薬剤を使用したスクリーニングやレンチウィルスを用いた遺伝子導入を実施する事でSSCsの自己複製制御に関与する候補遺伝子を絞り込む。更にレンチウィルスによる遺伝子導入で候補遺伝子の発現を抑制したGSCsを不妊マウスの精巣内に移植しそれらを解析する事で制御機構を解明する。細胞生物学平成27年度以降の研究計画において以下の2項目を予定していた。(1)生殖幹細胞(GSCs)を用いた放射線に対する細胞応答の解析、及び(2)精子幹細胞の放射線耐性に関わる新規ターゲット分子の同定。(1)については既に解析が完了している為、(2)を実施する。先ず、野生型とp53ノックアウト(KO)マウス由来のGSCsに放射線照射を行い、mRNAを回収してマイクロアレイを実施する。マイクロアレイの結果から野生型GSCsで誘導され、p53KOマウス由来のGSCsでは誘導されないmRNAに着目し新規ターゲットの候補分子とする。新規ターゲット分子の同定には、第一段階としてshRNAを発現するレンチウィルスを用いてGSCsに遺伝子を導入する事でスクリーニングを行う。第二段階としてレンチウィルスによる遺伝子導入で候補遺伝子の発現を抑制したGSCsに放射線を照射し、その後不妊マウスの精巣内に移植する。これにより放射線を照射後に生存している細胞が幹細胞である事を確認する。更に必要であればKOマウスも利用する事で標的遺伝子を確定する。海外に発注した試薬の到着が遅れた為。
アトピー性皮膚炎の病態の全容は未だ解明されていない。アトピー性皮膚炎モデルマウスであるマウスAではC型レクチン受容体の発現が消失している。マウスAのC型レクチン受容体の発現を修復した結果、皮膚炎が改善したことから、C型レクチン受容体の機能不全が病態の原因の1つであることが示唆された。本研究ではアトピー性皮膚炎におけるC型レクチン受容体の機能を明らかにすると共に、受容体のリガンドを同定する。また、ヒトにおける機能的相同分子の同定と、ヒトアトピー性皮膚炎への関与を検証する。これにより糖鎖成分のアトピー性皮膚炎の病態における役割を解明し、新規制御法開発に向けた基盤的知見を得る。
雌雄異株植物の擬似性転換現象を利用した性分化開始機構の顕鐘解剖学的解析

雌雄異株植物ヒロハノマンテマにクロボ菌Ustilago violaceaを感染させることで、擬似雄蕊を誘導させて形態学的観察を行った.走査型電子顕微鏡を用いて詳細に観察した結果、形態学的変化から性分化が開始する特定領域を決定した.この形態学的変化の報告を論文としてまとめ欧米学術雑誌Plantaに投稿した。クロボ菌により擬似雄蕊が雄花および雌花双方に形成されることが判明した。クロボ菌に感染したヒロハノマンテマの葯にはクロボ胞子が形成される.興味深いことに,クロボ菌の感染によって、雄性決定因子がなく雄蕊が未発達な雌花(XX)にも雄蕊が誘導される.本研究では,発芽後10日目の茎頂分裂組織にクロボ菌を感染させ、湿度100%,16度,長日条件でヒロハノマンテマを栽培した.栄養生長期に形態的変化はなかったが,花成は通常より約1ヶ月遅れて感染後3ヶ月目に開始した.花序の数と位置に変化はなかった.花の外部形態を低真空SEMと実体顕微鏡を用いて比較した.感染個体の花の基部は丈夫で花持ちがよく,偏平な葯室と太い花糸が発達し,クロボ胞子を長く保持していた.花原器の内部構造の変化とクロボ菌の局在の関係を調べるために,テクノビット切片を微分干渉顕微鏡法と蛍光染色法で観察した.未発達な非感染雌花の雄蕊原器では,胞原細胞は分化するが花粉母細胞には発達せず,葯の側壁細胞が分化しない.感染雌花では,雄花と同様に,側壁細胞から内被・中間層・タペート組織が分化した.花の初期原器で均一に分布していたクロボ菌は、胞原細胞の間隙で数を増し,胞子形成を開始した.その際,胞原細胞は花粉母細胞に分化せず,タペート組織も未成熟のまま退化した.一方,表皮・内被・中間層は形態的に正常に発達し,花糸が伸張し,花粉の代わりにクロボ菌の胞子を内包した雄蕊が発達した.アメリカストックカルチャーセンターATCCよりクロボ菌Ustilago violaceaを取り寄せ培養を行った。A1タイプとA2タイプを顕微鏡下で接合させ、2倍体を形成することを確認した。A1タイプとA2タイプを宿主であるナデシコ科草本雌雄異株植物ヒロハノマンテマに感染実験を行った。日本系統、アメリカ系統に感染実験を行った結果、アメリカ系統に対する感染効率が高く、今後の実験にはアメリカ系統を用いることにした。感染部位の検討を播種後各ステージの茎頂及び葉に対して行いクロボ菌Ustilagoviolaceaのナデシコ科草本雌雄異株植物ヒロハノマンテマに対する感染法を確立した。感染個体を走査電子顕微鏡および実体顕微鏡で観察して以下の感染個体の特徴を見出した。1.感染雌株の蕾においては分化が抑制された雄蕊が分化した。成熟した葯の中には花粉の代わりにクロボ菌の胞子が観察された。雌蕊の発達は悪く、蜜腺における分泌物が多量であることも判明した。2.感染雄株においても成熟した葯の中には花粉の代わりにクロボ菌の胞子が観察された。3.感染した個体の花糸は導管と師管が形態学的に野生株と異なることが示された。このような形態学的な差を生み出す機構を遺伝子発現の側面から解析するために、細胞分裂特異的な発現を示すサイクリンおよびヒストン遺伝子を単離した。各遺伝子をプローブにin situ hybridization解析を行って花芽原基形成過程における転写産物蓄積変化を調べた。その結果、分化が抑制された器官においては細胞分裂特異的遺伝子の発現が特異的に低下していることが判明した。クロボ菌に感染したヒロハノマンテマの葯にはクロボ胞子が形成される.興味深いことに,クロボ菌の感染によって、雄性決定因子がなく雄蕊が未発達な雌花(XX)にも雄蕊が誘導される.本研究では,発芽後10日目の茎頂分裂組織にクロボ菌を感染させ、湿度100%,16度,長日条件でヒロハノマンテマを栽培した.栄養生長期に形態的変化はなかったが,花成は通常より約1ヶ月遅れて感染後3ヶ月目に開始した.花序の数と位置に変化はなかった.花の外部形態を低真空SEMと実体顕微鏡を用いて比較した.感染個体の花の基部は丈夫で花持ちがよく,偏平な葯室と太い花糸が発達し,クロボ胞子を長く保持していた.花原器の内部構造の変化とクロボ菌の局在の関係を調べるために,テクノビット切片を微分干渉顕微鏡法と蛍光染色法で観察した.未発達な非感染雌花の雄蕊原器では,胞原細胞は分化するが花粉母細胞には発達せず,葯の側壁細胞が分化しない.

感染雌花では,雄花と同様に,側壁細胞から内被・中間層・タペート組織が分化した.花の初期原器で均一に分布していたクロボ菌は、胞原細胞の間隙で数を増し,胞子形成を開始した.その際,胞原細胞は花粉母細胞に分化せず,タペート組織も未成熟のまま退化した.一方,表皮・内被・中間層は形態的に正常に発達し,花糸が伸張し,花粉の代わりにクロボ菌の胞子を内包した雄蕊が発達した.
全ゲノムを対象とした遺伝性眼疾患のマイクロサテライトマッピング

本研究では、遺伝性眼疾患を対象とし、マイクロサテライト(MS)マーカー約2万5000個を用いて、ゲノムワイドな疾患感受性遺伝子のマッピングおよび同定を行っている。各疾患の研究の進捗について以下に報告する。強度近視:534検体を収集した。pooled DNAを用いた3段階のMSスクリーニングが終了し、156個の陽性マーカーが得られた。得られた陽性マーカーについて、individual DNAタイピングを行った結果、26個まで候補領域が絞り込まれた。現在、絞り込まれた領域に関して、SNP解析を行っている。ベーチェット病:427検体を収集した。三段階のMSスクリーニング、individualDNAタイピングが終了し、11個の候補領域が得られた。現在、これらの候補領域においてSNP解析を行っている。また、引き続き検体の収集を行っている。網膜格子状変性:397検体を収集した。100検体で一次スクリーニングを行い、約12.1%の陽性マーカーが得られた。引き続き検体の収集を行っている。また連鎖解析を行うための家系サンプルの収集も行っており現在まで1家系、4検体を収集した。高血圧:508検体を収集した。MSスクリーニングが終了し、135個の陽性マーカーが得られた。得られた陽性マーカーについて、individualタイピングを行った結果、55個まで候補領域が絞り込まれた。緑内障:192検体を収集した。138検体で一次スクリーニングを行い、13.8%の陽性マーカーが得られた。現在、得られた陽性マーカーについて二次スクリーニングを行っている。またGene ChipによるSNPタイピングも併せて行っている。本研究では、強度近視、ベーチェット病、網膜格子状変性および緑内障といった遺伝性眼疾患を対象とし、マイクロサテライトマーカー約3万個を用いて、ゲノムワイドな疾患遺伝子のマッピング及び同定を行っている。また、多因子性遺伝疾患である高血圧の原因遺伝子のスクリーニングの進捗も加えて報告する。強度近視:520検体を収集した。3次スクリーニングまで終了し、156個の陽性マーカーが得られた。現在、得られた陽性マーカーについて、individualタイピングを行い、候補領域の絞り込み、確認を行っている。ベーチェット病:389検体を収集した。現在までに第1番、2番、6番、17番、19番の5本の染色体の5546個のマーカーについてスクリーニングが終了し、10.3%の572個の陽性マーカーが得られた。今後、全染色体を対象に解析を進め、疾患感受性領域を絞り込む。また、引き続き検体の収集を行い、500検体の収集を目指す。網膜格子状変性:現在までに307検体を収集した。150検体で1次スクリーニング用pooled DNAを作成し、スクリーニングを開始する。緑内障:現在までに209検体を収集した。引き続き検体の収集を行い、500検体の収集を目指す。3次スクリーニングまで終了し、135個の陽性マーカーが残った。残った陽性マーカーについて、individualタイピングを行った結果、55個まで候補領域が絞り込まれた。今後、絞り込まれた領域に関して、SNP解析を行う。本研究では、強度近視、ベーチェット病および網膜格子状変性といった遺伝性眼疾患を対象とし、マイクロサテライト(MS)マーカー約3万個を用いて、ゲノムワイドな疾患遺伝子のマッピングおよび同定を行っている。

また、多因子性遺伝疾患である高血圧の原因遺伝子のスクリーニングの進捗も加えて報告する。強度近視:520検体を収集した。pooled DNAを用いた3段階のMSスクリーニングが終了し、156個の陽性マーカーが得られた。得られた陽性マーカーについて、individual DNAタイピングを行った結果、26個まで候補領域が絞り込まれた。現在、絞り込まれた領域に関して、SNP解析を行っている。ベーチェット病:418検体を収集した。全染色体において一次スクリーニングを終了し、約9.3%の陽性マーカーが得られた。現在、得られた陽性マーカーについて二次スクリーニングを行っているところである。今後、三次スクリーニングおよびindividual DNAタイピングを行い、疾患感受性領域を絞り込む。また、引き続き検体の収集を行い、500検体の収集を目指す。網膜格子状変性:現在までに345検体を収集した。150検体で1次スクリーニング用pooled DNAを作成し、スクリーニングを開始する。高血圧:508検体を収集した。MSスクリーニングが終了し、135個の陽性マーカーが得られた。得られた陽性マーカーについて、individualタイピングを行った結果、55個まで候補領域が絞り込まれた。本研究では、遺伝性眼疾患を対象とし、マイクロサテライト(MS)マーカー約2万5000個を用いて、ゲノムワイドな疾患感受性遺伝子のマッピングおよび同定を行っている。各疾患の研究の進捗について以下に報告する。強度近視:534検体を収集した。ベーチェット病:427検体を収集した。三段階のMSスクリーニング、individualDNAタイピングが終了し、11個の候補領域が得られた。現在、これらの候補領域においてSNP解析を行っている。また、引き続き検体の収集を行っている。網膜格子状変性:397検体を収集した。100検体で一次スクリーニングを行い、約12.1%の陽性マーカーが得られた。引き続き検体の収集を行っている。また連鎖解析を行うための家系サンプルの収集も行っており現在まで1家系、4検体を収集した。
免疫抑制蛋白の構造解析・遺伝子クローニングと肝移植・癌遠隔転移における役割

肝移植における免疫寛容機序の解明を臨床では生体肝移植症例、実験的にはマウス、ラット肝移植を用いて検討した.1.臨床では3名の患者が免疫抑制剤投与から完全離脱し・免疫寛容状態にあることを確認している.3.IDOの阻害物質であるトリプトファンの異性体を自然に寛容を獲得するマウスの肝移植を行い投与してみたが、この寛容状態をブロックすることはできなかった.4.ラットのIDOのDNA構成を確定し、同種肝移植での誘導を確認した.肝移植における免疫寛容機序の解明を臨床では生体肝移植症例、実験的にはマウス、ラット肝移植を用いて検討した.1.臨床では3名の患者が免疫抑制剤投与から完全離脱し・免疫寛容状態にあることを確認している.3.IDOの阻害物質であるトリプトファンの異性体を自然に寛容を獲得するマウスの肝移植を行い投与してみたが、この寛容状態をブロックすることはできなかった.4.ラットのIDOのDNA構成を確定し、同種肝移植での誘導を確認した.(1)肝移植に発現する免疫抑制蛋白の分離精製と構造解析と遺伝子クローニングを行う.(2)癌の遠隔転移の機構を担癌個体における免疫学的変化、すなわち免疫抑制蛋白に求め蛋白質、遺伝子レベルで解明する.成果A.肝移植における免疫抑制蛋白自験例生体肝移植ではHLAの近似するdonorからの移植では免疫抑制剤から離脱しても拒絶反応の兆候を認めず6年を経過中である.同様の症例をもう1例有し近日中に免疫抑制からの離脱を計画中である.これら臨床例にの血清中にもDAからPVG系ラット肝移植において移植後60日目の血清中に含まれる免疫抑制作用のある蛋白と同様の物質が存在する可能性が推測され、これを追及中である.最近は台湾(中国)との共同研究の中からCLUSTERINや、IDOという酵素の存在が免疫寛容に深く関与するとの見解から、現在臨床検体におけるIDOの活性や存在の検証を行うと共にアッセイ系の確立を目指している.B.担癌個体における免疫機構の解明動物実験で正常免疫系の有無別に癌の遠隔転移モデルを作成し、免疫系の存在が経時的な遠隔転移の程度に影響することを明らかにした。また、癌増殖過程において担癌個体の免疫系に変化が生じていることが示唆された.結果の一部は本年度の癌転移研究会、癌学会において報告した.また、IDOinhibitorの制癌効果も検討予定である.12年度の成果12年度において臨床では生体肝移植症例を増やし、免疫寛容確立症例も2例増加し3例となった.すべての血清を保存し、新しい蛋白探究法としてSELDI-Protein Chipsを導入して検した.また、米国David H.Munnが1999年のImmunology Todayに報告した内容に準じ、必須アミノ酸であるトリプトファンを異化する酵素IDO:indoleamine 2,3-dioxygenaseを新しい免疫寛容関連物質として検討を行った..1.肝移植における免疫寛容自験例生体肝移植では40例中3例に免疫抑制剤から離脱した症例を経験し、血清中の蛋白の変化をSELDI法により検索している.臨床から得た肝移植後の免疫寛容に関する知見を国際移植学会・アジア移植学会・Transplant Proceedingsに報告した.未発表ではあるが臨床生体肝移植における血清をSELDI-Protein Chipsにかけ結果数種の蛋白が移植後発現することを明らかにした.2.新しい免疫寛容関連物質の検討IDOのinhibitorをInnovative Research ofAmerica社のpolymer pelletに含ませたものを輸入し、これを自然に免疫寛容誘導されるmice肝移植に投与した.結果、投与量の関係が影響し、免疫寛容をブロックするに至っていない.台湾ではratにおけるIDOのsequenceと肝移植でIDOが誘導されることを明らかにし、ともに結果をTransplantation Immunologyに発表した.
無機材料合成プロセスの制御性と機能の向上

本総合研究では、無機材料を合成する手段として、固体高圧反応法、流体高圧反応法、超急冷法、融液反応法、溶液反応法、物理蒸着法、化学蒸着法等、多くの手段を横系のごとく、また合成される材料とその特性や機能を縦糸のように考え、手段の間の域際的な討論や協力関係を通じて無機材料合成工学あるいは技術の総合的な展開を目指し、特に合成プロセスの制御性の検討とその向上、及びその結果として得られる生成物の特性や機能の向上を目的としている。役割分担は固相合成(第1)、液相合成(第2)および気相合成(第3)に係わる夫々の合成プロセスの機構解析と機能評価を行う3グル-プに大別して、研究を進めた。2年の研究期間にわたる成果は以下のように位置づけ出来よう。プロセスの制御性に関しては、(1)合成環境の制御により、合成される材料の特性・機能の調整・制御に関するものが多く、その中で、特定分子または成分の選択的な生成のように、極めてファインな制御が実現されている。また(2)構造などのイン・プロセス評価による制御性向上への取り組み、自己燃焼、光エネルギ-や超高温および付帯反応の利用、高効率インタカレ-ションなど、新プロセスというべき成果も少なくない。ほかに、(3)組成や相変態の制御、機構解明、(4)実用性を考慮した研究(コ-ティング)、さらに(5)新物質での成果も上げられている。材料、物質の観点では、ダイヤモンド、cBNのような超硬質・超高伝熱性のもの、CIC、窒化物、炭化物、酸化物等の複合材料やガラス材料、酸フッ化物系の新物質が扱われ、それらにおける組成、構造、機能の制御、向上が成果として得られた。また高性能超伝導材、コ-ティング材、磁性体、誘電体等の実用機能の評価、向上に関する成果も得られ、無機材料における無限ともいうべき可能性が次々に見えてきたと言える。今後もこの延長線上は一層おく深いものを蔵していると思われる。本総合研究では、無機材料を合成する手段として、高圧法、固相反応法、融液法、溶液法、気相法(PVDおよびCVD)など、多くの手段を横糸のごとく、また合成される材料およびその機能(特性)を縦糸のように考え、手段の間の域際的な討論や協力関係を通じて無機材料合成工学あるいは技術の総合的な展開を目指し、特に合成プロセスの制御性の検討とその向上、およびその結果として得られる生成物の機能の向上を目的としている。役割分担は固相反応法、液相反応法、気相反応法の3グループに大別して、研究を進める。今年度の研究成果は以下のように位置付けできよう。まず、材料合成環境の解析と最適化を基盤としているもの(4,7,9,10,12,13,14,17)が多い。次に、プロセスの幅(生成物特性の幅や適用範囲など)を広げ(18,20,22,23)たり、新しい可能性の発見(7,12,14,22)に至ったもの。更にそれが成長して新プロセスとして考えられるものも少なくない(5,6,8,11,15,19)。材料に重きを置き、新物質探索と考えられるもの(3,16,21)、逆にIN PROCESSSENSING(2)や合成条件の維持制御(1)など、反応解析やプロセス制御の基礎もあった(( )内の数字は添付資料、研究発表会要旨集の発表番号)。

材料の種類としては、フッ化物系新化合物、CaO、ダイヤモンド、A1N、SiC、β-ZrNCl、黒鉛層間化合物、超伝導酸化物単結晶、ZrO2、ベリル、TiO2、Fe-Co系酸化物磁性薄膜、Al203、A1P04-A1203系ガラス、各種無機被覆膜、MoN-NbN薄膜TiB2/TiN被覆材などに対して上記のようなプロセス上の多くの成果が得られている。なお、平成元年1月に研究発表会を開催したので、その要旨巣を参考資料として添付する。本総合研究では、無機材料を合成する手段として、固体高圧反応法、流体高圧反応法、超急冷法、融液反応法、溶液反応法、物理蒸着法、化学蒸着法等、多くの手段を横糸のごとく、また合成される材料とその特性や機能を縦糸のように考え、手段の間の域際的な討論や協力関係を通じて無機材料合成工学あるいは技術の総合的な展開を目指し、特に合成プロセスの制御性の検討とその向上、及びその結果として得られる生成物の特性や機能の向上を目的としている。役割分担は固相合成(第1)、液相合成(第2)および気相合成(第3)に係わる夫々の合成プロセスの機構解析と機能評価を行う3グル-プに大別して、研究を進めた。2年の研究期間にわたる成果は以下のように位置づけ出来よう。プロセスの制御性に関しては、(1)合成環境の制御により、合成される材料の特性・機能の調整・制御に関するものが多く、その中で特定分子または成分の選択的な生成のように、極めてファインな制御が実現されている。また(2)構造などのイン・プロセス評価による制御性向上への取り組み、自己焼燃、光エネルギ-や超高温および付帯反応の利用、高効率インタカレ-ションなど、新プロセスというべき成果も少なくない。ほかに、(3)組成や相変態の制御、機構解明、(4)実用性を考慮した研究(コ-ティング)、さらに(5)新物質での成果も上げられている。材料、物質の観点では、ダイヤモンド、cBNのような超硬質・超高伝熱性のもの、GIC、窒素物、炭化物、酸化物等の複合材料やガラス材料、酸フッ化物系の新物質が扱われ、それらにおける組成、構造、機能の制御、向上が成果として得られた。また高性能超伝導材、コ-ティング材、磁性体、誘電体等の実用機能の評価、向上に関する成果も得られ、無機材料における無限ともいうべき可能性が次々に見えてきたと言える。今後もこの延長線上は一層奥深いものを蔵していると思われる。
CD8陽性T細胞を介した大腸発酵水素の抗炎症作用の解明

難消化性糖質による大腸H2の脂肪組織への蓄積が、脂肪組織中Il6 mRNA量を減少させる。これは大腸H2が脂肪組織の炎症の軽減を示唆している。脂肪組織で活性化T細胞から分泌されたIL6は炎症を増悪することから、大腸H2の脂肪組織炎症に与える影響を調べた。FOS摂取マウスの脂肪H2濃度はコントロール食群に比べ4倍以上高い値を示した。しかし、血液と脂肪組織のCD4陽性、CD8陽性、FOXP3陽性およびRORγT陽性のT細胞サブセットに有意な変化はなかった。以上の結果より、FOS由来の大腸H2は脂肪組織に移行し、IL6分泌量を低下させ、この変化にT細胞サブセットが関与していないことがわかった。本研究の目的は発酵基質の摂取によって生体内に広く分布した水素分子が、CD8陽性T細胞の活性化抑制を介して肥満および肥満に付随する全身の慢性炎症を軽減することを明らかにすることである。今年度は肥満モデル動物を用いて大腸水素が脂肪組織炎症に与える影響を検討した。具体的には、13週齢のob/obマウスに標準脂肪(C)食およびC+5%フラクトオリゴ糖(FOS)食を2週間与えた。試験最終日に腎周囲脂肪H2濃度を測定した。血液中および脂肪組織から分泌されたIL6およびTNFα量、T細胞サブセットを分析した。その結果、FOS摂取マウスの腎周囲脂肪H2濃度はC食群に比べ4倍以上高い値を示した。また、腎周囲脂肪細胞から分泌されたIL6量はC食群に比べFOS食群で減少した。以上の結果より、FOS由来の大腸H2は脂肪組織に移行し、IL6分泌量を低下させるが、この変化にT細胞サブセットの変化は関与していないことがわかった。続いて本年度は5週齢のC57BL/6Jマウスを28日間飼育し、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪、腎周囲脂肪、門脈血および末梢血を採取し、密度勾配遠心分離法によりTリンパ球画分を単離、培養する予定であったが、Bリンパ球および顆粒球の変化について検討する必要が発生した。そのため、現在Bリンパ球および顆粒球の変化について検討中である。来年度はBリンパ球および顆粒球の変化ならびにTリンパ球の活性の変化を検討した後、大腸発酵水素と短鎖脂肪酸の効果を分離して評価していく。今年度は大腸発酵水素と短鎖脂肪酸の効果を分離して評価することを目的とした。具体的には高スクロース高脂肪コントロール(HSFC)食で肥満を誘導したラットに、HSFC食およびHSFC+5%FOS食(HSFF)を4週間与えた。HSFC食ラットの一部に飽和水素水を飲水投与した(HSFH)。試験3週後に腹腔内グルコース負荷試験(IPGTT)を実施した。試験最終日に腎周囲脂肪H2濃度を測定する。血液中および脂肪組織から分泌されたIL6、TNFαおよびCCL2量、リンパ球および顆粒球サブセットを分析した。また、サブセットだけでなくCD8陽性T細胞中のグランザイム量を測定し、活性化の程度を観測した。その結果、試験期間中の体重増加量とエネルギー摂取量に差はみられなかった。飲水量は飽和水素水を摂取した群で摂取していない群に比べ有意に増加した。IPGTTにおける血糖値のAUC0-2hは、HSFF群でHSFC群の80%、HSFH群で86%だった。HSFF群の脂肪H2濃度はHSFC群とHSFH群に比べ有意に高かった。このことから、大腸H2による肥満ラットの耐糖能改善傾向が示唆された。HSFC群に比べ、脂肪細胞からのIL6分泌量は、HSFF群で有意に低く、HSFH群で低い傾向を示した。TNFαおよびCCL2分泌量に群間差はみられなかった。CD8陽性T細胞中のグランザイム量にも変化は無かった。以上の結果より、FOS由来の大腸H2は脂肪組織に移行し、IL6分泌量を低下させ、この変化にCD8陽性T細胞の寄与が弱いことが示唆された。

本年度の研究目的は大腸発酵水素がCD8陽性T細胞をはじめとするリンパ球の活性化および増殖を抑制することをin vitroおよびin vivoの両面から明らかにすることであった。詳細な計画としては、13週齢のob/obマウスに標準脂肪コントロール(C)食およびC+5%FOS食を2週間与えた。試験最終日に腎周囲脂肪H2濃度を測定した。その後、腎周囲脂肪組織から分泌されたIL6およびTNFα量、T細胞サブセットを分析した。その結果、腎周囲脂肪H2濃度はC食群とFOS食群でそれぞれ0.364±108、1.201±0.670 nmol/腎周囲脂肪であった。また、野生型マウスおよび肥満型マウスのいずれにおいても腎周囲脂肪細胞から分泌されたIL6量はC食群に比べFOS食群で減少した。TNFα量はC食群とFOS食群の間で差がなかった。しかし、血液と脂肪組織のCD4陽性、CD8陽性、FOXP3陽性およびRORγT陽性のT細胞サブセットに有意な変化はなかったことを明らかにした。続いて5週齢のC57BL/6Jマウスを28日間飼育し、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪、腎周囲脂肪、門脈血および末梢血を採取し、密度勾配遠心分離法によりTリンパ球画分を単離、培養する予定であったが、Bリンパ球および顆粒球の変化について検討する必要が発生したため、本年度の実施を見合わせた。現在はBリンパ球および顆粒球の分離、測定を行うために予備検討を行っている。従って、当初の予想と異なる結果が得られたため来年度の計画に修正を要するが、本年度の実験計画は概ね達成できたと考えられる。栄養化学立案当初の来年度の研究計画は、大腸発酵水素と短鎖脂肪酸の効果を分離して評価することを目的として、2つの実験を計画していた。本年度の結果からまずは、Bリンパ球および顆粒球の変化について検討する実験を実施する。具体的には高スクロース高脂肪コントロール(HSFC)食で肥満を誘導したラットに、HSFC食およびHSFC+5%FOS食(HSFF)を4週間与える。HSFC食ラットの一部に飽和水素水を飲水投与する(HSFH)。試験3週後に腹腔内グルコース負荷試験(IPGTT)を実施する。試験最終日に腎周囲脂肪H2濃度を測定する。血液中および脂肪組織から分泌されたIL6、TNFαおよびCCL2量、リンパ球および顆粒球サブセットを分析する。また、サブセットだけでなくCD8陽性T細胞中のグランザイム量を測定し、活性化の程度を観測する。その後、当初の計画通り5週齢のob/obマウスおよびその野生型を用い28日間飼育し、毎日8時間毎に20分の短鎖脂肪酸または水素水の経結腸投与を行う。飼育最終日に解剖を行い、腸間膜脂肪、精巣上体周囲脂肪、腎周囲脂肪、門脈および末梢血を採取し、フローサイトメーターを用いてリンパ球サブセットを解析する。続いてob/obマウスを28日間飼育した後、結腸灌流ループ処置を行い70 mM酢酸/生理食塩水、10 mMプロピオン酸/生理食塩水、20 mM酪酸/生理食塩水または水素水を60分間灌流する。灌流開始時、開始10、30、60分後に門脈より採血する。解剖時に腸間膜脂肪を採取し、リンパ球サブセットを解析する。本年度の結果からin vivoの実験を一つ増加させた。
局所血管機能の調節における血小板由来マイクロパーティクルの役割の検討

動脈硬化巣周囲の血栓形成にて血小板は必須の役割を演じる。血管内皮細胞機能障害部位に集積した血小板は活性化しmicroparticleを放出する。これは血管内皮、炎症性細胞機能調節、凝固系活性化にも寄与する。産生されたトロンビンは、トロンビン受容体刺激を介してさらに血小板の活性化を促進させることを示した。また、血栓形成に関与する各種細胞機能が、活性化血小板から産生されたmicroparticleにより調節されるメカニズムを示した。また、細胞内小器官であるミトコンドリアの関与を示した。血管壁損傷部位に速やかに集積し、集積部位において活性化し、細胞内に畜積されていた生理活性物質を局所放出する血小板は、局所血管機能の調節において重要な役割を演じる。われわれは、活性化された血小板がセロトニン、CD40 ligandなどの生理活性物質を単体として放出するのみでなく、細胞膜の一部をsheddingすることにより、細胞膜の構成成分である脂質と同時放出することを示した。細胞膜の一部がsheddingにより膜を構成する脂質成分と一体となって放出されるmicroparticleには、生理活性物質が陰性荷電したリン脂質とともに放出されることになる。単球に代表される炎征性細胞は、陰性荷電したリン脂質を認識してmicroparticleを貪食することを平成19年度の研究おいて示した。さらに、活性化血小板由来microparticleが単球の増殖を促進させること、microparticleによる単球増殖促進効果はCD40 ligandなど蛋白性サイトカイン単体の効果に勝ること、活性化血小板由来microparticleに結合している蛋白性の生理活性物質は単一ではなく複数であること、などを確認した。平成19年度の研究において、多色蛍光顕微鏡を用いることにより血小板由来のmicroparticleを緑、単球系細胞を赤色に認識し、単球系細胞がmicroparticleを貪食することを形態学的に、かつ動的に証明した。同様の方法により血管内皮細胞によるmicroparticleの貪食を検証できることを確認した。心筋梗塞、心不全などの心疾患においてmicroparticleの血液中濃度を計測する基盤整備を行った。Microparticleが炎症性細胞の機能を効率的に調節すること、およびmicroparticleが炎症性細胞により貪食されること、を平成19年度において別個に示したものの、貪食されたmicroparticleが白血球細胞の機能を細胞内から調節するか否かの確認に平成20年度の研究課題に残した。社会の高齢化とともに動脈硬化を基盤とする血栓性疾患である心筋梗塞、脳梗塞の本邦における有病率が増加している。動脈硬化巣の形成、動脈硬化巣破綻部位の血栓形成において血小板は必須の役割を演じる。糖尿病などのリスク因子により血管内皮細胞が機能的に障害された部位に血小板が集積する。集積された血小板は活性化されmicroparticleを放出し、放出されたmicroparticleが血管内皮細胞機能をさらに修飾することにより血栓の形成速度が影響されることを示した。Microparticleは血管内皮細胞、炎症性細胞の機能に影響を与えるのみならず血小板血栓周囲における凝固系の活性化をも促進する。血小板表面膜上の凝固系活性化の結果産生されたトロンビンは、トロンビン受容体刺激を介してさらに血小板の活性化を促進させる効果を有することを示した。血管内皮細胞、炎症性細胞、血小板、凝固系は各々別個に作用するのみならず相互に緊密に作用することにより心筋梗塞、脳梗塞などの動脈血栓性疾患の発症に影響を与えていることを示した。動脈血流の条件下にて活性化された血小板からのMicroparticle産生メカニズムについて、細胞内小器官であるミトコンドリア、好気性代謝が一定の役割を演じていることを示唆する実験結果を得た。Microparticleによる各種細胞機能の調節機構については、多くの研究成果をあげたが、血小板以外の他細胞にも共通すると想定されるmicroparticle産生、放出のメカニズムについてはさらなる研究が必要である。