hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低出生体重児とその母親への早期介入プログラム開発研究

上記の研究活動と並行して、本研究の一部である研究を学会報告したり、本研究の予備調査として位置づけられる小規模の調査研究を実施した。この予備調査については、現在継続中であり、結果は得られていない。また、本研究に関連した論文を書き、投稿した。その中で掲載されたものについては、次ページに報告したが、多くは投稿中である。また、本研究の代表・分担研究者と、NCAST研究会の会員が協力して、米国のZero to Threeから出版された「乳幼児精神保健の事例集」を和訳している。こちらも4月には完了する予定である。本研究の「低出生体重児とその母親への早期介入プログラム作成」に活用するため、また、国内の実践家や研究者による育児支援や早期介入研究に活用してもらうため、出版を予定している。以上が、平成17年度の研究実績である。本年度の研究実施計画にそった研究活動を遂行した。2.NCATS日本版の妥当性・信頼性を検証するため、先行研究で得たデータに追加して、約250例の母子相互作用の場面をビデオ撮影した。合計400組の母子相互作用データを収集した。3.上記データのコーディング作業に現在取り組んでいるところである。4.NCATS日本版を用いた低出生体重児と母親に対する育児支援による介入研究の計画書を作成し、介入プログラムの考案をすすめている。5.育児支援による介入研究実施のため、研究協力病院の確保と東京医科歯科大学医学部附属病院の倫理審査委員会に申請書を提出した。以上、順調な進捗状況にあるが論文等の成果は不十分である。来年度に取り組みたい。平成18年度における研究計画は、低出生体重児を充てる母親への育児支援による早期介入プログラムの試行的な実施であった。しかし、介入研究実施のための倫理委員会の審議とその結果のための期間、倫理委員会からの許可をえてからの対象母子から協力を得るための、臨床施設からの許可を得る期間等が予定より大幅に延長し、データ収集中である。3病院のNICUから退院する低体重出生児母子をコントロール群と介入群に分け、家庭訪問を実施中である。なお、予備調査として実施された研究の結果は、NCATS日本語版の妥当性・信頼性を裏付けるものであり、上記介入効果の評価に用いることができる。それらの研究については、学会発表を行った。しかし論文発表については、準備中である。この他に、介入の手法としての乳幼児精神保健の理解を深め、かつ多くの専門家に周知をはかるため、「乳幼児精神保健ケースブック」を翻訳、出版した。本年度は、研究最終年度であるが、早期介入による低出生体重児とその母親の育児支援および、データ収集が予定期日を超えて継続中であり、現在も育児支援介入とデータ収集を行っている。しかし、コントロール群母子のデータ収集はほぼ完了した。現在は、家庭訪問による介入の続行と、遠隔介入(携帯電話使用による育児支援)対象母子のルクルートと育児支援を遂行中である。したがって、結果の分析を実施していない。しかし、本研究における主要な尺度であるNCAST(Nursing Child Assessment Satellite Training)の日本語版を完成させ、かつ尺度の標準化とデータ・ベースを作成した。
次世代ネットワーク型印刷工程管理のための異種間データベース自動変換システム

1.異種間データベース自動変換システム本体の開発を行った.研究予算で新設したシステム開発用ワークステーションを,現有の印刷システム運用管理イントラネットシステムと組み合わせ開発環境を整備した.印刷各工程に関する協力関連企業の公開可能なデータベースの書式とコード体系を分析し,国際標準規格に照らした書式の適応箇所を調査した.この結果に基づき適応関数を作成し,これを装備したネットワーク・インターフェース・ソフトウェアを作成した.これより,任意の形式のデータベース情報を入力したとき,インターフェースを介してその書式とデータコードを検索・自動変換した上で,さらにインターネット公開用変換を行うシステムを構築した.2.異種間データベース自動変換システムの動作検証を行った.従来から共同研究を行っている協力印刷機器メーカーおよび印刷材料(インキや紙)メーカーが所有する公開可能な複数のデータベースの情報を,今回開発した異種間データベース自動変換システムにより標準規格に変換した.適正な標準変換を確認後,インターネット上への公開用変換を行い,情報をオンライン化した.この際,公開データベース情報は公開運用専用の新設印刷システム管理ワークステーションに移管し,システム運用の安全性と効率化を確保した.現在公開データベースとしての利便性や有用性などを関連企業サイトからフィードバックとシステム改良の継続中ではあるが,一応の成果は得られた.1.異種間データベース自動変換システムハードウエア開発今年度の申請によって新たに「異種間データベース自動変換システム開発WS」を構築し,現在本研究室にて稼動中の「印刷システム運用管理イントラネットシステムWS」とネットワーク接続した.そしてこれらのシステムを用いて,システム構築,システムの連携運用,データベース運用に関する調査を行った.2.関連情報の収集・整理と適応化関数の作成印刷前工程における印刷物の設計情報,印刷工程における印刷材料情報および印刷機械情報,印刷後工程における製本・配送情報など,各印刷工程に関する協力関連企業の公開可能な情報を収集し,更に,その情報交換時に利用されているデータベースの書式とコード体系を分析し,ISO/JISなどの国際標準規格に照らした書式の適応箇所の調査を行った.そしてこの調査結果に基づき,上記システムで運用するのに必要な種類の適応関数をJava言語によって開発した.3.異種間データベース自動変換システムの構築上記で開発した適応関数を装備したネットワーク・インターフェース・ソフトウェアを作成した.さらに,任意の形式のデータベース情報を入力したとき,インターフェースを介してその書式とデータコードを検索・自動変換した上で,さらにインターネット公開用変換を行うシステムを構築した.プログラム言語にはプラットフォームフリーおよびネットワーク運用時に有用なJavaを用いた.1.異種間データベース自動変換システム本体の開発を行った.研究予算で新設したシステム開発用ワークステーションを,現有の印刷システム運用管理イントラネットシステムと組み合わせ開発環境を整備した.印刷各工程に関する協力関連企業の公開可能なデータベースの書式とコード体系を分析し,国際標準規格に照らした書式の適応箇所を調査した.この結果に基づき適応関数を作成し,これを装備したネットワーク・インターフェース・ソフトウェアを作成した.これより,任意の形式のデータベース情報を入力したとき,インターフェースを介してその書式とデータコードを検索・自動変換した上で,さらにインターネット公開用変換を行うシステムを構築した.2.異種間データベース自動変換システムの動作検証を行った.従来から共同研究を行っている協力印刷機器メーカーおよび印刷材料(インキや紙)メーカーが所有する公開可能な複数のデータベースの情報を,今回開発した異種間データベース自動変換システムにより標準規格に変換した.適正な標準変換を確認後,インターネット上への公開用変換を行い,情報をオンライン化した.この際,公開データベース情報は公開運用専用の新設印刷システム管理ワークステーションに移管し,システム運用の安全性と効率化を確保した.現在公開データベースとしての利便性や有用性などを関連企業サイトからフィードバックとシステム改良の継続中ではあるが,一応の成果は得られた.
石井十次と岡山孤児院の養護実践の基礎的研究

本共同研究が意図したのは、これまでの石井十次と岡山孤児院史研究を継承するとともに、「養護実践」という視点から、その今日的意義を検証するための基礎研究を行うことである。そこで、最優先したのが、「石井十次資料館」所蔵資料の整理とその目録化の作業を継承することであった。その成果が『石井十次資料館蒐・所蔵仮目録手紙文書の部』(2004年)である。また、石井記念友愛社から『石井十次資料館研究紀要』を継続して刊行し、研究成果を発表するとともに資料紹介を行ってきた。例えば、菊池は岡山孤児院の養護実践と家庭舎の建設との関係を明らかにした。細井は、石井十次のキリスト教信仰と慈善事業との関係を明らかにした。今回の研究成果報告書は、4つの研究報告、1つの解説、4つの資料紹介から構成されている。研究報告では以下のことを明らかにした。池田は、石井の慈善事業は、個人の自由と尊厳を求めていくものであったが、近代日本における上からの公共性を受容せざるを得なかったことを明らかにした。菊池は、石井がその養護実践を通じて到達した「岡山孤児院一二則」は、養護実践の原理を初めて示したもので、その家族主義、里親委託制、非体罰主義、密室教育等には、ソーシャルワークとしての原理に通じる意味があることを示した。細井は、石井の孤児教育実践の変遷過程は、ミュラー主義と独立自活主義との間で大きく揺れるものであったこと、それはまた、孤児教育実践と伝道事業との関係の変化でもあったことを明らかにした。また、石井十次が炭谷小梅に送った手紙を検討し、岡山孤児院運営において炭谷小梅が重要な位置を占めたことを確認した。元村は、石井十次資料館蒐・所蔵仮目録手紙文書の部』の解説を行った。なお、資料として以下の4つを紹介した。すなわち、石井十次から炭谷小梅への書簡、小野田鉄弥原稿、石田弁所感、ある農場学校卒業生の日誌である。1)石井十次資料館所蔵資料の整理作業を継続して実施した。簿冊関係の資料整理を一応終え、『石井十次資料館蒐・所蔵仮目録簿冊の部』が完成したが、分類の一部変更を行った。このため8月28日から9月2日まで共同作業を実施し、資料の再整理を行い、仮目録と原資料との照合を用意にした。なお、書簡の目録化の作業に着手した。2)岡山孤児院ないし農業学校の出身者ないしその子孫が現在の石井記念友愛社(宮崎県児湯郡木城町)のまわりで居住されている。出身者として存命の方にヒアリングを実施、その内容は『石井十次資料館研究紀要(以下『研究紀要』)』第3号に発表予定である。そのため、8月末にヒアリングを実施し、3月末にも現地訪問して確認作業をした。3)未刊行の岡山孤児院日誌の解読作業を継続して実施した。すでに解読した岡山孤児院日誌は『研究紀要』第2号に掲載した。今回解読した日誌は『研究紀要』第3号に掲載予定である。4)各研究者としての調査研究活動は以下の通りである。細井は石井十次の支援者の検討がテーマであるが、今回石井の聖書理解について考察した。『研究紀要』第3号に発表予定。池田は、石井十次の慈善事業を意義を検討、「石井十次と近代日本」(『研究紀要』第2号)として纏めた。

菊池は、引き続き岡山孤児院の運営体制を分析・検討、3編の論文に纏めた。池本は先行研究の検討であるが、柴田善守著『石井十次の生涯と思想』を取り上げ『研究紀要』第2号で発表した。1)石井十次資料館所蔵資料の整理作業を継続実施した。本年度は書簡の目録化に向けた作業に本格的に着手した。8月29日から9月2目まで、共同作業を石井記念友愛社(宮崎県児湯郡木城町)にて行い、未着手の書簡約700通について必要事項を記入した資料封筒に治める作業を行った。2)岡山孤児院あるいは農業学校の出身者で、現在まで存命の方が数名おられる。その方のヒアリングを実施してきたが、今回その内容について『石井十次資料館研究紀要(以下「研究紀要」と記す)』(第3号)に「マーばあちゃんの歩んだ道」として纏めた。3)石井十次資料館所蔵資料の共同による整理作業においては、地域貢献として「石井十次セミナー」を毎年開催し、研究成果を発表してきた。そうした活動を通じて、岡山孤児院職員の子孫の方等との交流も深まっている。岡山孤児院職員、末籐新一氏の書簡はこうして発見されたものであり、その内容を菊池が公表するに至った。4)岡山孤児院日誌の解読作業を継続して実施、本年度は明治27年岡山孤児院日誌を『研究紀要』に掲載した。5)各研究者の調査研究活動は以下の通り。細井は、石井の聖書理解と実践との関係について論文に纏め『研究紀要』に掲載した。菊池は、末籐新一の日記を紹介すると共に、大正期の岡山孤児院経営について継続的に研究、その成果を『研究紀要』等に掲載した。池本は先行研究の検討を継続、今回児島虎一郎の「石井十次と茶臼原」を取り上げ、『研究紀要』に掲載した。1)石井十次資料館所蔵資料の調査整理作業を今年も継続して実施した。具体的には8/269/3まで宮崎県児湯郡木城町にある石井記念友愛社に付設された石井十次資料館に行き、書簡目録の作成にむけ、共同作業を実施した。そして仮目録(案)を冊子化した。3/223/25に再び細井と山田が同資料館を訪問し、校正作業を行った。2)夏の共同作業の期間を利用し、菊池は継続して関係者からのヒアリングを実施した。3)未刊の岡山孤児院庶務日誌及び石井十次発炭谷小梅書簡の解読作業を進めた。本年度は明治30年代の同日誌を『石井十次資料館研究紀要』(4号)に掲載した。4)地域貢献として、8/30に石井十次セミナーを開催、細井が「近代日本のキリスト教と石井十次」とのテーマで講演した。5)研究報告として、菊池は「マーおばあちゃんの歩んだ道(2)」、「石井記念協会での養護実践と財政概要」を『石井十次資料館研究紀要』に掲載した。菊池は他に「1907年前後の岡山孤児院の物的環境条件の拡充整備の実態」等を発表した。1)平成14年度より石井十次資料館の所蔵された手紙資料の整理作業を共同作業として本格実施してきたが、平成16年8月、ようやく科研費報告書として『石井十次資料館蒐・所蔵資料仮目録手紙文書の部』(全112頁)を刊行することができた。2)高鍋町立図書館所蔵の石井十次および岡山孤児院資料(422件)について整理に着手した。3)菊地は、岡山孤児院の建物の様式とその変化を調査研究し論文にまとめた。また、岡山孤児院の養護実践の特徴について、これまでの財政史、管理運営史の研究を土台として検討してきた。その内容は成果報告書に掲載する予定である。
高齢心不全患者の望む生活と最期を支える訪問看護師の判断と実践の明確化

本研究の目的は、高齢心不全患者に焦点をあて、在宅で心不全患者が望む生活と最期の実現に有効な訪問看護師の判断と看護実践を明らかにすることである。本研究は、終末期ケアの適切な介入タイミングとなる予後予測が難しい高齢者心不全患者に対する訪問看護師の判断と実践の実態から高齢心不全患者が望む在宅療養生活の継続と最期の実現との関連を明らかにすることにある。それにより増悪を繰り返す高齢心不全患者のQOLの維持向上およびQODを可能とし、さらに、多職種ケアチームと共有することにより高齢者心不全患者の地域包括ケアの実践の一助となる。
次世代細胞治療に向けた細胞製剤のステルス化・標的指向化

細胞を利用した治療法の効果増強を目的に、体外から投与した細胞の体内動態を精密に制御することのできる新規方法の開発を試みた。前年度までに確立した細胞の体内動態評価システムを用い、マウス線維芽細胞株NIH3T3の体内動態に及ぼす各種処置の影響について定量的に評価した。まず、投与経路・部位の影響について評価するために、細胞懸濁液を種々の臓器に注入し、その後の体内動態を経時的に追跡した。その結果、細胞の体内動態ならびに生存期間は投与部位に大きく依存することが示され、中でも脂肪組織や骨格筋に投与した場合に長期間生存することが明らかとなった。一方、マウスの全層皮膚欠損に対する細胞治療を目的とした検討では、NIH3T3細胞を損傷皮膚表面に滴下、あるいは近傍に皮内注射した場合には非常に速やかに消失した。また、GFPトランスジェニックマウス由来骨髄細胞を用いて同様の検討を行ったところ、骨髄細胞でも同様の傾向が認められた。このとき、静脈内投与でも損傷部位への集積が観察され、損傷が速やかに修復する傾向も認められた。組織内に注射により投与した場合には、投与された細胞近傍では血流が乏しく、酸素供給が不十分である可能性がある。低酸素条件下においては、低酸素誘導性因子HIF-1の安定化が生じたり、活性酸素生成が亢進することが報告されている。そこで、酸化ストレスの抑制を目的に、過酸化水素を消去するカタラーゼで細胞を処理したところ、移植後の残存細胞数が有意に増加した。従って、移植細胞の急激な消失を抑制するには、カタラーゼ誘導体などにより酸化ストレスを抑制することが有望であることが示された。細胞を利用した治療法の効果増強を目的に、体外から投与した細胞の体内動態を精密に制御することのできる新規方法を開発する。まず、細胞の体内動態を定量的に解析するために、ルシフェラーゼを安定発現させた細胞を用い、マウスに投与後の体内動態評価システムの開発を行った。既に樹立した各種ルシフェラーゼ発現癌細胞と同様、マウス線維芽細胞株NIH3T3をモデル細胞として選択し、ルシフェラーゼ発現プラスミドを用いて標識細胞を調製した。ルシフェラーゼ発現が安定でかっ高レベルの株を選択し、種々の経路からマウスに投与後の体内動態を評価した。静脈内投与した場合には、投与後初期に肺中に多数のNIH3T3/Luc細胞が検出されたが、その値は時間経過とともに速やかに減少した。この動態・分布特性は、これまでに検討した癌細胞と類似しており、細胞間に大きな違いは認められなかった。一方、マウスの全層皮膚欠損に対する細胞治療を目的とした検討において、損傷皮膚表面に滴下、あるいは近傍に皮内注射した場合にも投与した細胞は非常に速やかに消失した。細胞を投与した局所は血流が乏しく、他の部位と比較して酸素供給が不十分である可能性がある。低酸素条件下においては、低酸素誘導性因子HIF-1の安定化が生じたり、活性酸素生成が亢進するとされる。そこで、この速やかな細胞消失における酸化ストレスの関与について検討することを目的に、過酸化水素を消去するカタラーゼを含む溶液でNIH3T3/Luc細胞を投与した。その結果、移植1日後の残存細胞数はカタラーゼ添加により有意に増加したことから、移植細胞の急激な消失には酸化ストレスが少なくとも一部関与することが示唆された。今後、カタラーゼ遺伝子導入、または他の方法を利用することで、移植細胞の延命化を実現し、ステルス型・標的指向化型細胞治療剤の開発を目指す。
生体親和性金ナノロッドを用いた近赤外光応答性遺伝子キャリアの構築

本研究では、棒状金ナノ粒子である金ナノロッド(NR)の光学特性を活かした生化学分野への応用展開を目的とした。特に、代表的な最新医療技術の遺伝子治療や光線力学治療を題材とし、NRが既存の材料に劣らない機能を発揮しうることを報告した。PC-NRはカチオン性を示すため、プラスミドDNA(pDNA)と静電的に相互作用し、複合体を形成した。そこで、PC-NRを用いたpDNAの近赤外光による放出制御を試みた。近赤外レーザー光により球形に変化するNRの光反応をトリガーとして、PC-NRとpDNAの複合体からpDNAが放出されることを見い出した。また、放出したpDNAはsupercoiled状を維持しており、pDNAにダメージを与えることなく放出させることが確認された。このような光反応、特に近赤外光をトリガーとして利用できる反応は、遺伝子デリバリーを機能化する手段として大変有効であると思われる。PC-NRは細胞毒性が低く、細胞にダメージを与えることなく、生細胞に吸着することが確認された。近赤外光は生体にダメージを与えない光であることに着目し、PC-NRと近赤外レーザー光の組み合わせによる選択的な細胞破壊を試み、ガン細胞などの光線力学治療への可能性について検討した。NRはパルス光を吸収して瞬間的に温度を上昇させるため、PC-NRと相互作用した細胞にのみ局所的なダメージを与えることに成功した。この光反応を利用することにより、単一細胞の細胞死を誘起することも可能であった。本研究の成果は、NRの光学特性が生化学分野へ応用可能であることを示唆するものである。本研究では、棒状金ナノ粒子である金ナノロッド(NR)の近赤外光に対する高い反応性を利用し、新規な遺伝子デリバリーシステムの構築を目指した。NR生成時に必要不可欠なカチオン性界面活性剤hexadecyltrimethylammonium bromide(CTAB)は高い細胞毒性を示す。そこでまず、NRの細胞毒性を抑制するためにCTABをNR溶液から除去し、同時にリン脂質のphosphatidylcholine(PC)によってNRの表面修飾を行った。具体的には、PCを含むクロロホルムにNR溶液を加えてCTABをクロロホルム相に抽出した。この抽出操作を3回繰り返すことにより、NRのゼータ電位は+67mVから+15mVまで減少した。また、energy-dispersive X-ray spectroscopy(EDX)を用いた測定により、PCで修飾されたNR(PC-NR)の作製が確認された。培養細胞を用いた細胞毒性評価の結果、PC-NRは遠心分離によって得られるNRに比べて細胞毒性が非常に低いことが分かった。複合体にNd:YAGレーザー光(1064nm)を照射したところ、PC-NRは融合して球形粒子へ変化した。照射前後の複合体についてゲル電気泳動を行った結果、PC-NRの形状変化に伴い、複合体からpDNAが一部脱離することが分かった。脱離したpDNAはsupercoiled状のpDNAと同じ泳動距離を示したことから、放出したpDNAの構造は変化していないことが確認された。以上の結果から、PC-NRの光化学特性を利用することで、近赤外光によるpDNAの放出制御が可能であることが明らかになった。本研究の成果は、近赤外光を利用した遺伝子デリバリーシステムの構築を期待させるものである。
痴呆性老人の日常生活改善プログラムによる痴呆発生予防の研究

高齢者の知的機能低下予防を目的に日常生活改善プログラム作成の基礎資料とするために、平成9年および10年度に在宅で生活している地域高齢者の知的機能の変化と生活スタイルの関連を実施調査した。対象は、平成9年度にベッドタウン在住高齢者116人(男47人,女69人,平均年齢73.2±5.2歳)、平成10年度に村落地域在住高齢者108人(男33人,女75人、平均年齢74.2±5.6歳)の計224名である。平成11年度は両地域の高齢者の生活スタイルに焦点を当てて比較検討を詳細に行い、地域の実情にあわせた高齢者の日常生活プログラム改善案を創出することを目的に分析にとり組んだ。各地域在住の高齢者の30-40%に協力が得られたが、比較的健康度の高い高齢者が対象であり、結果を一般化できにくいが以下のことが明らかとなった。ベッドタウン在住の高齢者は独居ないし夫婦世帯が半数に上ることに比し、村落地域在住の高齢者は2世代・3世代同居家族の割合が7割以上であった。外出の頻度、家族内での役割、趣味や生き甲斐などを持っている、新聞への関心や異性への関心の高い高齢者はベッドタウン在住者の方が若干多かった。ベッドタウン在住高齢者の趣味や生き甲斐の中身は水墨画や陶芸、パソコンなど知的活動を要求されるものや太極拳やグランドゴルフ、体操教室など身体活動的なものがみられ多様性が特徴であった。一方、村落地域においては、日常的に田畑や家内工業の重要な担い手として生活している人も少なくなく、また、老人会などの加入など地域活動への参加の割合は8割以上に上り、地域の拠点(寺社や公民館など)を中心とした活動に熱心であることが明らかとなった。ベッドタウン在住の高齢者では多様な趣味・生きがい活動を開講し、週間スケジュールを検討すること、村落地域では地域の拠点を中心とした活動に高齢者が参加できるような支援が重要であろう。引き続き、本地域の高齢者の痴呆予防活動への介入を図りたい。今年度は、痴呆発生予防の具体的な活動の手がかりを得る目的で、在宅で暮らす高齢者の知的機能のスクリーニング結果と日々の生活スタイルの実態を調査し、両者の関連について検討した。対象は、金沢市近郊のベッドタウンに在住する65歳以上の高齢者のうち調査会場まで出向くことが出来た116名である。研究の趣旨を伝え同意を得た後、知的機能をN式精神機能検査によりスクリーニングし、基本属性、健康状態、受療状況、生活習慣や嗜好、対人関係、社会活動への参加状況、趣味や関心、生活への思いなどを質問紙にて調査した。分析方法は、N式精神機能検査の判定区分別に基本属性と生活スタイルの調査項目との関連を検討し統計的な処理を行った。結果の概要は、対象は男47名、女69名、平均年齢73.2±5.2歳であった。家族構成は1人暮らしが22名、夫婦のみが34名と半数を占めた。平均在住年数は19.1±5.7年であった。N式精神機能検査の結果は、高齢になるほど正常群の割合が減少する傾向にあり、女性の方が有意に平均得点の低下がみられた。一方、75歳末満の前期高齢者層にも境界・軽度痴呆群がみられた。また、N式判定区分と基本属性・生活スタイルとの関連は、N式判定区分別に比較して有意差があった項目は「学歴」「聴力の程度」「持病の有無」「異性への関心」であり、知的レベルの高い群ほどこれらの項目の程度や関心の高い者が多くみられた。反対に「老人会への参加」は知的レベルの低い群に参加者の割合が高かった。高血圧・糖尿病など持病を有している者は、全体の8割であった。今回の調査で特徴的なことは、「異性への関心」と知的レベルの高さとの関係である。異性との交流を支える仲間づくりの活動が重要と考えられた。今後、農村部など地域を変えて調査を継続し、次年度は、在宅で暮らす高齢者への痴呆予防のプログラム試案を作成したいと考えている。本年度は昨年に引き続き、在宅で生活している高齢者の知的機能の変化とライフスタイルの関連をみて、日常生活改善プログラム作成の基礎資料とするために、村落地域の65歳以上高齢者を対象に調査を実施した。調査依頼に同意した108名の基本属性、健康状態、受療状況、生活習慣や嗜好、対人関係、社会活動への参加状況、趣味や関心、生活への思いなどを自作の質問紙にて調査した。また、知的機能はN式精神機能検査を用いてスクリーニングした。結果は、男性33名、女性75名、平均年齢74.2±5.6歳、知的機能の変化は、正常47名(44.8%)、境界37名(35.2%)、軽度低下20名(19.0%)、中等度低下1名(1.0%)であった。昨年調査したベッドタウン地域の高齢者に比較すると高齢化しており、知的機能の境界域の者が多くみられた。また、家族と同居している割合が高く、就学年数が短く、地域とのつながりも強い伝統的な村落の特徴が明らかとなった。職業歴では男性は漁業から転職した高齢者が多く、女性は現在も畑仕事など農業に従事しているものが多くみられた。年齢、知的機能の変化に関係なく老人会への参加など社会参加の割合が高く、外出の機会も多くみられた。

一方、趣味活動や異性への関心は高くなく、近隣の友人と集まって時を過ごすパターンが多いことがわかった。ベッドタウンと村落地域両者の検討を通して知的機能低下予防への生活改善プログラムは、集団的予防活動よりも今までの生活史を重視した個別あるいは小グループのプログラムの必要性が示唆された。高齢者の知的機能低下予防を目的に日常生活改善プログラム作成の基礎資料とするために、平成9年および10年度に在宅で生活している地域高齢者の知的機能の変化と生活スタイルの関連を実施調査した。対象は、平成9年度にベッドタウン在住高齢者116人(男47人,女69人,平均年齢73.2±5.2歳)、平成10年度に村落地域在住高齢者108人(男33人,女75人、平均年齢74.2±5.6歳)の計224名である。平成11年度は両地域の高齢者の生活スタイルに焦点を当てて比較検討を詳細に行い、地域の実情にあわせた高齢者の日常生活プログラム改善案を創出することを目的に分析にとり組んだ。各地域在住の高齢者の30-40%に協力が得られたが、比較的健康度の高い高齢者が対象であり、結果を一般化できにくいが以下のことが明らかとなった。ベッドタウン在住の高齢者は独居ないし夫婦世帯が半数に上ることに比し、村落地域在住の高齢者は2世代・3世代同居家族の割合が7割以上であった。外出の頻度、家族内での役割、趣味や生き甲斐などを持っている、新聞への関心や異性への関心の高い高齢者はベッドタウン在住者の方が若干多かった。ベッドタウン在住高齢者の趣味や生き甲斐の中身は水墨画や陶芸、パソコンなど知的活動を要求されるものや太極拳やグランドゴルフ、体操教室など身体活動的なものがみられ多様性が特徴であった。一方、村落地域においては、日常的に田畑や家内工業の重要な担い手として生活している人も少なくなく、また、老人会などの加入など地域活動への参加の割合は8割以上に上り、地域の拠点(寺社や公民館など)を中心とした活動に熱心であることが明らかとなった。ベッドタウン在住の高齢者では多様な趣味・生きがい活動を開講し、週間スケジュールを検討すること、村落地域では地域の拠点を中心とした活動に高齢者が参加できるような支援が重要であろう。引き続き、本地域の高齢者の痴呆予防活動への介入を図りたい。
高周期14族元素を含む3次元拡張π電子系化合物の創成

[1] Ar-OMe基からAr-OH基への変換反応:本研究で興味を持った点として、Ar-OH基とシリル基の共存可能性がある。通常、酸性度の高いO-H基が存在した場合、Ar基に結合したSi基は脱離しやすいが、分子内相互作用が存在した場合に脱離反応が抑制される効果があるのではないかと予想した。しかしながら、合成上、酸性条件下にさられる段階が必ず存在してしまうため、合成自体が困難であるという問題がある。そこで、三臭化ホウ素を用いたAr-OMe基からAr-OH基への変換反応について、条件検討を行った。しかしながら、Ar基からのSi基の脱離を抑制しながら変換できるような条件は見つけることはできなかった。[2]ヘテロ五員環へのシリル基の導入:目的物の部分構造を構築する過程で、3-bromothiopheneの位置選択的な有機金属試薬への変換反応がある。はじめに3位のAr-BrをAr-Mに変換したのちにSi基を導入し、続いて2位のAr-HをAr-Mに変換してもう一つのSi基を導入する。はじめの変換反応について、有機リチウム試薬やGrignard試薬等を用いて、条件検討を行った。低温でnBuLiを用いることによって、定収率ながら目的の反応が進行したが、高分子量成分や望まない異性体などが生成しており、反応条件の最適化には成功していない。[3]二つの異なるArユニットの結合反応の検討: TerPh-Liと[2]で合成したArユニットを結合させる反応を検討した。反応物は複雑な混合物であったが、目的のヘテロカップリングした化合物が低収率ながら生成した。しかしながら、反応試薬のnBuLiがヘテロ五員環部位に部分的に付加反応を起こしていることが分かった。効率的かつ副反応を抑制するために、反応方法を工夫する必要がある。本研究でターゲットとする化合物は、孤立電子対、Si-E σ*軌道、それぞれのπユニットがねじれを伴って結合したσ結合、などを介してπ共役が3次元的に広がった化合物である。最終目的物における、Si-E σ*軌道のルイス酸性度について明らかにすることを目的としている。設計した分子は、最終段階に至るまでに、各パーツに分けることができる。本年度は各パーツの合成経路の確立や反応条件の検討によって反応を最適化することを目的とした実験を行った。また、合成の最終段階に困難な反応が含まれるため、本テーマの範疇に入るより合成経路の短い比較化合物の設計と合成検討を行った。[1]臭素置換ヘテロ五員環化合物のリチオ化と続くクロロシランの導入についてヘテロ五員環化合物へのシリル基の段階的な導入がどれくらい制御できるかについて検討を行った。実際には、リチオ化後にアニオン転位が起きている可能性があり複雑な混合物を与える。更なる条件検討や合成上の工夫が必要である。[2] π共役系ユニットがシロキサン結合によって連結拡張された化合物の設計と理論計算についてπ共役系ユニットにシリル基を導入し、シロキサン結合によって連結拡張する反応とそれに続くπ共役系の官能基変換を検討した。生成物には構造的に異性体が存在するので、その相対エネルギーに関する知見を得るため、理論計算を行った。反応は複雑な混合物を与えるが、シリカゲルカラム後にGPCによって更に精製を行った。生成物は、複雑なNMRスペクトルを与えるが、温度可変測定や各種NMR測定などから判断して想定した化合物が生成していると判断した。続く官能基変換の検討はまだ十分に行えていない為、最終目的物を得るために更なる検討が必要である。計画の合成経路にはいくつか困難な反応が含まれており、計画した以外にも何通りかの合成経路を考えることができる。合成経路の中には、検討の結果、既に反応が進行しない段階も明らかになっており、新たな合成経路を計画検討している。最終目的物の合成までは達成できていないものの、合成に関する知見を蓄積している。また、本研究の範疇に入る比較化合物については最終目的物の前駆体の段階まできている。これらを総合的に判断して、本研究の進捗状況はやや遅れていると判断した。最終目的物は、置換基同士の角度を高度に構造制御した5配位様の4配位ケイ素化合物で、アピカル位に存在するSi-E σ*軌道のルイス酸性度について明らかにすることを目的としている。29年度も前年に引き続き、各パーツの合成経路の確立や反応条件の検討によって反応を最適化することを目的とした実験を行った。28年度までの研究で以下が課題となっていた。[1]本研究の範疇に入る比較化合物について、最終段階の官能基変換についての検討: 28年度に既に合成を行なった対象としている化合物を用いて官能基変換の検討を行なったが、良い結果は得られていない。条件検討のため、再度合成を何度か試みたが、収率に再現性がとれていない。合成条件の最適化が必要である。

[2]ヘテロ五員環を芳香族環に変更した類縁化合物についての合成検討: o-位がハロゲン置換されたベンゼンについて合成検討を行なったが、副反応で系中に発生するベンザインの制御が困難であり、うまく進んでいない。段階的な反応に変更して進める必要がある。[3]関連する化合物の部分構造の合成:ジクロロシランの取り扱いについて、安全面や合成上の課題があったため、関連する化合物の合成を検討した。これらを使用して、関連する化合物の合成を進める。当初に計画した合成経路にはいくつか困難な点があったため、別ルートの反応を検討中である。当初の予定では、合成段階を短くするためにやや無理をした段階があったので、合成段階は増えてしまうが、段階的な合成方法を選んで研究を進める必要がある。また、各反応で条件を最適化する必要がある。この状況から判断して、本研究の進捗状況はやや遅れていると判断した。[1] Ar-OMe基からAr-OH基への変換反応:本研究で興味を持った点として、Ar-OH基とシリル基の共存可能性がある。通常、酸性度の高いO-H基が存在した場合、Ar基に結合したSi基は脱離しやすいが、分子内相互作用が存在した場合に脱離反応が抑制される効果があるのではないかと予想した。しかしながら、合成上、酸性条件下にさられる段階が必ず存在してしまうため、合成自体が困難であるという問題がある。そこで、三臭化ホウ素を用いたAr-OMe基からAr-OH基への変換反応について、条件検討を行った。しかしながら、Ar基からのSi基の脱離を抑制しながら変換できるような条件は見つけることはできなかった。[2]ヘテロ五員環へのシリル基の導入:目的物の部分構造を構築する過程で、3-bromothiopheneの位置選択的な有機金属試薬への変換反応がある。はじめに3位のAr-BrをAr-Mに変換したのちにSi基を導入し、続いて2位のAr-HをAr-Mに変換してもう一つのSi基を導入する。はじめの変換反応について、有機リチウム試薬やGrignard試薬等を用いて、条件検討を行った。低温でnBuLiを用いることによって、定収率ながら目的の反応が進行したが、高分子量成分や望まない異性体などが生成しており、反応条件の最適化には成功していない。[3]二つの異なるArユニットの結合反応の検討: TerPh-Liと[2]で合成したArユニットを結合させる反応を検討した。反応物は複雑な混合物であったが、目的のヘテロカップリングした化合物が低収率ながら生成した。しかしながら、反応試薬のnBuLiがヘテロ五員環部位に部分的に付加反応を起こしていることが分かった。効率的かつ副反応を抑制するために、反応方法を工夫する必要がある。[1]本研究の範疇に入る比較化合物について、最終段階の官能基変換について検討する。[2]ヘテロ五員環は、シランのハロゲン化の段階において耐性が低いので、芳香族環に変更した類縁化合物について合成検討を行う。または、ヘテロ五員環に嵩高い立体保護基を導入した後に同様の反応を検討する。[3]当初設計した化合物の最も困難な段階についての反応条件を最適化するために、よりアクセスしやすい化合物に関して反応条件の検討を行う。また、新たな反応経路についても検討する。[4]現在のところ合成に成功している部分構造を基に、そこから派生して合成できる化合物について合成を行う。
組織幹細胞マーカーによる膵癌幹細胞の同定と周囲微少環境との相互作用の解明

膵癌における癌幹細胞と間質の関係を中心に検討した。膵癌細胞において、膵組織幹細胞マーカーであるsry-box 9(SOX9)の発現が強度の症例は予後不良であった。膵癌細胞株にてSox9の発現を低下させると抗癌剤感受性が増強し、Sox9は薬剤耐性に関与していた。癌幹細胞と間質の関連を検討するため、膵癌間質量を測定し、その中央値で症例を2群に分けると間質量が少ない症例は予後不良で、血行性転移の頻度が高かった。また、細胞外マトリックスのTenascin C(TNC)の発現も予後に関与しており、膵癌細胞の遊走能を誘導した。癌間質と癌幹細胞が密接に関わり、これを標的とした治療法の開発が期待できる。本研究の目的は膵癌悪性化の分子機構を明らかにし、新規治療法を開発することにある。本研究では癌と周囲間質との相互作用に着目し、これが癌悪性の本質であるとされる癌幹細胞へどのような関連があるかの解明を目指した。これまでに膵の組織幹細胞のマーカーであるSox9の癌細胞における発現の強弱が膵癌の予後と相関することを明らかにしてきた。多変量解析の結果でも癌細胞のSox9発現の強弱は独立した予後因子であった。その中でも術後に5-FU prodrugであるS-1を使用した症例ではその予後の差が明らかに大きく、本因子の発現が5-FUへの耐性に関わっていることが示された。次に、周囲間質と癌細胞との相互作用について検討した。乳癌で癌幹細胞nicheに発現するとされる細胞外マトリックスの一つのTenascinC(TNC)の膵癌における発現を検討したところ、TNCが癌細胞を取り巻くように発現しており、その発現が強い症例は予後不良であった。またTNCと相互作用を持つFibronectin(FN)の発現も検討したところ、TNCとFNは共通の部位に発現しており、両者が発現している症例はより予後が不良であった。加えて、このような症例は特に血行性転移を術後起こしている症例が多かった。そこで、膵癌細胞株を利用し、TNCでコートした培養皿におけるこれらの細胞の変化を検討した。すると、膵癌細胞株の遊走能、浸潤能が高くなることが示され、このような条件下では膵癌細胞がN-cadherin, Vimentin, Snailといった上皮間葉系移行(EMT)に関わる蛋白質の発現が上昇していることが示された。以上より、癌間質のTNCが膵癌細胞のEMTを誘導し、癌の悪性化をきたしていると考えられた。本研究の目的は膵癌の悪性化の分子機構を明らかにし、新規治療法を開発することにある。特に、膵組織における幹細胞のマーカーであるSox9に注目し、膵癌でSox9発現細胞が果たす役割について検討した。まず、膵癌外科切除標本を使用して、Sox9の発現を免疫染色法で検討した。膵癌組織では癌細胞の一部に発現を認めた。癌細胞中のSox9発現細胞の割合が25%以上発現する強発現群と25%未満の弱発現群に分け、臨床病理学的因子との比較を行ったが、分化度、ステージなどの因子との関連は認めなかった。両群における生存期間を検討すると術後無再発生存期間は両群間に差がないものの、全生存期間では有意にSox9弱発現群の予後が良好であった。また、多変量解析ではSox9の発現の強弱は独立した予後因子であった。癌肝細胞がその形質を維持するためには周囲の微小環境(niche)が重要とされる。そこで、nicheに発現する細胞外マトリックスのTenascin C (TNC)の膵癌組織における発現を免疫染色にて検討した。TNCは癌細胞を取り巻くように存在した。TNCの発現を認める症例と認めない症例に分けて生存期間を検討したところ、TNC発現症例は非発現症例に比して無再発生存期間、全生存期間ともに予後不良であり、TNCが癌細胞に対し悪性化の一助をになっている可能性が示唆された。また、膵癌の悪性進展に関与するとされ、TNCと重合するとされるFibronectin (FN)の発現も免疫染色で検討したところ、これらの両者が近接して発現しており、これらが重合して癌細胞に対し何らかの影響を与えている可能性が示唆された。今後、Sox9発現細胞とTNCとの相互作用がないか、免疫染色法、および細胞株を利用した実験により解明していく予定である。膵癌はdesmoplastic changeといわれる豊富な間質組織を持つ特徴があり、これが癌細胞と相互作用することで癌悪性化を引き起こしているとされる。本研究ではその分子機構の詳細を検討した。

膵癌組織の間質量の多寡の予後に対する影響を膵癌切除標本を用いて検討した。単位面積あたりの間質面積の比率を求め、その中央値で2群に分けたところ、間質が少ない症例では予後が悪く、単位面積あたりの微小血管数も多かった。また、術後再発形式を見ると、血行性転移の割合が間質量が多い症例に比し少ない群で有意に高かった。このことから、間質の量が多寡でなく、構成成分が重要であることが考えられた。そこで、細胞外マトリックスに着目した。Tenasxin C(TNC)は組織幹細胞の維持に関わるマトリックスとされ、乳癌ではその発現と予後に関連があることが報告されている。膵癌外科切除標本にてTNCの発現を検討したところ、TNCは癌細胞を取り巻くように発現しており、その発現が強い症例では予後が不良であり、加えて術後遠隔転移の可能性が高かった。TNCの癌細胞に対する役割を検討するため、TNCでコートしたプレートで膵癌細胞株を培養すると、何もコートしていないプレートでの場合に比較し、細胞遊走能、浸潤能が亢進することを認め、TNCが癌細胞の運動を亢進させることで癌の悪性化を引き起こしていると考えられた。この様な結果より、間質のマトリックスが癌細胞の遊走浸潤能をコントロールしていることが示され、その相互作用を阻害する事で、転移を阻止する新しい治療法の開発が見込まれることが示唆された。肝胆膵外科上記の研究概要に記したとおり、本年度は特に細胞実験を用いたin vitroの解析に力点を置いた。これによって、間質のマトリックスであるTNCが癌の浸潤能、遊走能を引き出し、その結果として遠隔転移が増加する可能性を証明することができた。ただし、現在まではこのような癌間質が癌細胞の中の幹細胞と言われる一群に対してどのような効果を持っているかが十分には証明できておらず、その点が今後の研究の課題になってくると思われる。当初目的とした免疫染色によるSox9の膵癌組織での発現を検討し、臨床病理学的因子との関連を検討することを達している。現在は細胞株における実験を中心に施行しており、次年度はこれによりSox9の機能を検討する予定である。本年度は間質と癌細胞の相互作用が癌幹細胞に与える影響について検討する予定である。TNCの培養により、癌細胞に幹細胞マーカーと考えられるSox9, Sox2, Oct3/4と言った因子の発現、活性化がおきないかを注目していきたい。また、Sox9発現細胞の薬剤耐性機構についても詳細に検討していく予定である。具体的にはSox9のover expressionにより、どのような薬剤に対して感受性が変化するか、また、それによる幹細胞機能の変化、Sphere形成能の変化などについて検討していきたい。このような研究を通して、今後、癌間質と癌細胞、特に癌幹細胞との相互作用の分子機構の解明を目指し、その結果を新規治療法開発に応用していきたいと考えている。膵癌細胞株のSox9およびTenascinCの発現について検討している。これらの発現が認められれば、発現している細胞株を用いて、幹細胞としての能力が存在するかどうかをSphare assayを行う。これにSox9の発現をsiRNA等を使用して低下させることでSphare形成能、細胞増殖能などに変化が起きないか検討する。このような検討を加えて膵癌におけるSox9発現幹細胞の働きについて検討していく。主として消耗品購入に充てる予定である。特に細胞実験用の培養液、試薬、免疫染色用の抗体などである。また、成果発表のための旅費についても計上する予定である。
一酸化窒素による細菌感染時応答の時間的・空間的制御機構の解明

単純な2原子分子である一酸化窒素(NO)は,思いがけない多彩な能力を生体内で発揮する。生体内で通常NOSはLアルギニンを基質とし,NOを合成する。現在,iNOSによるNO産生の効果は殺菌効果と炎症収束効果として理解されている。しかしながら,「細菌感染の場」で時間的、空間的に発現が変化するNOS群,濃度が変化するNOは不明な部分が多い。我々はTLRによる細菌由来分子の認識機構,シグナル伝達経路に着目し,NOがTLRを起点とした自然免疫応答に及ぼす影響を解析した。マウスの腹腔にLPSを投与すると,著名な体温の上昇が観察されるが,eNOS欠損マウスではその上昇の開始が早く開始されていた。また,iNOS欠損マウスでは数十分後にみられる一過性の体温低下が見られないことが分かった。従って,LPSが誘導するTLR4を介した生体防御応答に対して,eNOSとiNOSは,共に抑制効果を示す。LPS投与2時間後の腹腔内のMIP-2やIL6の産生においてもeNOSとiNOSは抑制効果を示していた。eNOSの抑制効果について解析を進めたところ,eNOS欠損マウスでは,LPS刺激後のIRAK-1の活性化とデグラデーションが異常に早く誘導されていることが分かった。細胞培養系による実験により,LPS刺激後に細胞膜に移行するMyD88がNOによって妨害され,細胞質に留まる傾向が観察された。これらNOのMyD88機能抑制効果は一過性であり,グルタチオンの添加によって抑制効果は喪失することが分かった。マウスの肺ではMyD88のSニトロシル化が観察されたが,eNOS欠損マウスの肺ではほとんど観察されなかった。以上の結果から,NOSによって産生されるNOはMyD88をSニトロシル化することで一過性に機能を抑制することが示唆された。
反応性メタラサイクルを経由する触媒的環拡大反応の開発

本年度はシクロブタノンを用いる環拡大反応を3形式開発し、5,6,および7員環ケトンの合成に成功した。1.Rh触媒による分子内付加/開環反応によるベンジル位四級炭素を有するインダノンの合成:3位にo-ボリルフェニル基を有するシクロブタノンを1価ロジウム触媒存在下加熱したところ、トランスメタル化により生じたアリールロジウムのシクロブタノンのカルボニル基への分子内付加が起こり、続くロジウムシクロブタノラートからのβ炭素脱離、プロトノリシスにより5員環ケトンを与えた、また不斉反応への展開を行なったところ、光学活性インダノン誘導体が最高88%eeで得られた。2.Ni触媒によるアルキンのシクロブタノンへの分子間挿入反応によるシクロヘキセノンの合成:0価ニッケル触媒存在下、シクロブタノンとアルキンを加熱したところ、多置換シクロヘキセノンが得られた。本反応は、まず0価ニッケル上でのシクロブタノンのカルボニル基とアルキンからの酸化的環化によってオキサニッケラシクロペンテン中間体が生成し、これからのβ炭素脱離によって7員環メタラサイクルを与え、最後に還元的脱離によって6員環α,β不飽和ケトンを与えている。3.Rh触媒によるアルキン置換シクロブタノンのアリール化/環拡大反応による7員環ケトンの合成:3位にo-アルキニルフェニル基を有するシクロブタノンとアリールボロン酸を1価ロジウム触媒存在下加熱したところ、付加/環拡大反店が進行し、ベンゼン縮環7員環ケトンを与えた。この反応は1)アリールロジウムのアルキンへの付加によるビニルロジウムの生成、2)シクロブタノンのカルボニル基への分子内付加によるロジウムシクロブタノラートの生成、3)環拡大を伴うβ炭素脱離によるアルキルロジウムの生成、4)連続するβ水素脱離/再付加によるη^3-オキサアリルロジウムの生成、5)プロトノリシスによる7員環ケトンの生成とロジウム触媒の再生、によって進行したと考えられる。本年度はシクロブタノンの2位にo-スチリル基を導入した基質を用いてロジウム触媒による反応を行い、ロジウムへの酸化的付加により5員環ロジウムメタラサイクルを発生させ、その分子内オレフィンに対する反応性について検討した。また、ロジウム触媒によるシクロブタノンとアリールボロン醸の反応を行い、アリールロジウム種によるシクロブタノンの付加-開環反応についても検討した。2-(o-スチリル)シクロブタノンをロジウム(I)-トリアリールホスフィン触媒存在下140°Cで加熱したところ5員環ロジウムメタラサイクルのロジウム-アシル結合間へのビニル基の挿入の後に、β-水素脱離が進行して8員環ケトンを2種の異性体混合物として与えた。一般的に合成が困難とされる中員環化合物を1工程構築できる本反応は合成化学的に意義深い。この反応はロジウムの配位子として少なくとも1つのo-メトキシフェニル基を有するトリアリー-ルホスフィンを用いた場合にのみ進行した。3-フェニルシクロブタノンとフェニルボロン酸をロジウムI)-トリアルキルホスフィン触媒存在下100°Cで加熱したところアリールロジウム中間体のシクロブタノンのカルボニル結合への付加の後に、β-炭素脱離が進行してブチロフェノン誘導体を与えた。この反応はロジウムの配位子としてトリ-tert-ブチルホスフィン、塩基として炭酸セシウムを用いた場合に最も効率的に進行した。アリールロジウムのカルボニル結合への付加、続くロジウム(I)アルコレート中間体からのβ-炭素脱離によって生成するアルキルロジウム(I)中間体が、β-水素脱離-再付加を2回繰り返し最終的にロジウム(I)エノレート中間体になった後に、カルボニルのα位がプロトン化されることが重水素化実験により明らかになった。この反応は1)アリールロジウムのアルキンへの付加によるビニルロジウムの生成、2)シクロブタノンのカルボニル基への分子内付加によるロジウムシクロブタノラートの生成、

3)環拡大を伴うβ炭素脱離によるアルキルロジウムの生成、4)連続するβ水素脱離/再付加によるη^3-オキサアリルロジウムの生成、5)プロトノリシスによる7員環ケトンの生成とロジウム触媒の再生、によって進行したと考えられる。
オートファジー細胞死誘導による頭頸部癌新規治療法の開発

オートファジーは細胞内蛋白分解系の重要な機構で、恒常性維持のために不要な蛋白等を順次分解し、再利用する役割をしている。癌細胞は代謝要求性が高く、オートファジーによる自己分解を介したアミノ酸や脂肪酸、糖質の供給は、その生存、増殖に寄与する。上咽頭癌組織を用いた実験で、化学療法前後におけるオートファジー関連タンパクのBeclin1の発現を免疫組織学的に検討したところ、化学療法前と比べ化学療法後でオートファジーが増加していることが分かった。さらに上咽頭癌細胞株を用いた実験で、頭頸部癌のキードラッグであるシスプラチンを加え、そこにオートファジー抑制物質を加えると、細胞死が増えるという結果を得た。オートファジーは細胞内蛋白分解系の重要な機構で、恒常性維持のために不要な蛋白や古くなった細胞内小器官を順次分解し、リサイクルする役割を果たしていると考えられている.細胞が飢餓条件下におかれると、細胞質に隔離膜と呼ばれる小胞が出現しその後、膜は細胞質を取り込みながら伸長し、先端どうしが融合して、オートファゴソームが形成されるが、その形成にはBeclin1などが必要である.オートファゴソームがリソソームと融合すると、内包物は分解され、自己消化で得られたアミノ酸は栄養源として再利用される.一方、オートファジーはアポトーシスと同様に細胞死に関連した細胞応答であることがわかってきた.近年癌細胞とオートファジーの研究がさかんに進められているが、癌細胞死に抑制的に働く場合、促進的に働く場合ともに確認されている.代謝要求性の高い癌細胞において、オートファジーによる自己分解を介したアミノ酸、脂肪酸や糖質の供給は、その生存、増殖に寄与する.一方、正常細胞においては、恒常的に起こっているオートファジーによりミトコンドリアなどのオルガネラーホメオスタシスやシグナル伝達を担う分子の量的調整が行われ、腫瘍化が抑制される.したがって,オートファジーは腫瘍抑制効果があると同時に、腫瘍がいったん確立されるとその代謝要求性を満たす、いわば諸刃の剣である.これまでに我々は上咽頭癌組織において、化学療法前後におけるオートファジー関連蛋白のBeclin1の発現について免疫組織学的に検討したところ、化学療法前に比べ、化学療法後でオートファジーが増加することを発見した。癌化学療法は従来の腫瘍非選択的な抗がん剤から分子標的薬への移行もしくは併用が試みられている。従来の放射線・抗がん剤、さらには新兵器である分子標的薬は主としてアポトーシス誘導を活性化する。したがって、アポトーシスという共通の経路をこれ以上強化しても抗腫瘍効果に限界があると考えられる。近年、アポトーシス分子機構が明らかになるにつれ、非アポトーシスタイプの細胞死、特にマクロオートファジー(以下オートファジー)死の関与が注目されている。オートファジーは病的あるいは不要な細胞成分が二重の膜によって周囲から隔離、リソゾームにより消化して再利用する細胞生存維持機構である。通常は小規模のオートファジーが活性化され、細胞の新陳代謝が営まれている。しかし、細胞が飢餓状態になったり、DNA障害等の多大なストレスの際に、大規模なオートファジーが誘導され、修復不能の際には細胞死が誘導される。では、臨床における癌細胞はオートファジーをどのように利用しているのであろうか。これまでのところ、発癌段階では抑制的に働くものの、栄養供給に乏しい臨床的な癌組織では、癌細胞はオートファジーを活性化して増殖浸潤していることが推測される。栄養や酸素供給の乏しい厳しい環境下で生存する癌細胞ほどアポトーシスやネクローシスには耐性を獲得し、オートファジーを活性化して生存していると考えられる。これまでに我々は上咽頭癌組織において、シスプラチンベースの化学療法前後におけるオートファジー関連蛋白のBeclin1の発現について免疫組織学的に検討したところ、化学療法前に比べ、化学療法後でオートファジーが増加することを発見した。今後は上咽頭癌EBV癌タンパクであるLMP1とオートファジー関連タンパクBeclin1やLC3との関連を検討する予定である。オートファジーは細胞内蛋白分解系の重要な機構で、恒常性維持のために不要な蛋白等を順次分解し、再利用する役割をしていると考えられている。またオートファジーが発癌、神経変性疾患、2型糖尿病等の生活習慣病、心不全、腎症、感染症、各種の炎症など、さまざまな重要疾患の発症を抑止していること、また発生・分化、老化、免疫などにおいて重要な生理機能を持つことが明らかになり、オートファジー研究は現在大きな注目を集めている。オートファジーは細胞死に関連した細胞応答であることがわかってきて、癌細胞死に抑制的に働く場合と促進的に働く場合が確認されている。一方、正常細胞では恒常的に起こっているオートファジーにより、オルガネラーホメオスタシスやシグナル伝達を担う分子の量的調整が行われ、腫瘍化が抑制される。つまり、オートファジーは腫瘍抑制効果があると同時に、腫瘍が一旦確立されるとその代謝要求性を満たす一面もある。われわれのこれまでに、上咽頭癌組織を用いた実験で化学療法前後におけるオートファジー関連タンパクのBeclin1の発現を免疫組織学的に検討したところ、化学療法前と比べ化学療法後でBeclin1の発現が増加することを明らかにした。さらに上咽頭癌細胞株であるCNE2やC666-1を用いた実験で、これらの細胞に頭頸部癌のキードラッグであるシスプラチンを加え、ウィスタンブロッティングでBeclin1の増加を認めた。