hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Cキナーゼの神経網膜における機能的役割りについて

[目的]神経網膜には高いCキナーゼ活性が存在し、その酵素学的緒性質(【Ca^(2+)】やフォスファチジルセリン等の基質のキネティクス)や発癌プロモーターであるTPAによる活性化の機構なども脳内の酵素と同様である。そこで本酵素の神経網膜における役割、時に初期過程における意義を探る目的で神経伝達物質であるドーパミンの分泌放出に及ぼす、TPAその他のCキナーゼ賦活剤の影響を検索した。[結果]1.単離網膜神経細胞分画網膜をパパイン酵素処理し、神経細胞をバラバラにし、メトリザマイド(10/15%)密度勾配法にて遠心分離し、比較的大きな細胞体分画(恐らく水平細胞、アマクリン細胞、神経節細胞からなる)を小さな細胞体分画(視細胞や双極細胞からなる)から分離採取した。この細胞分画中にドーパミン性アマクリン細胞の存在は螢光組織化学法にて同定した。2.TPAによるドーパミン分泌放出の促進上記のドーパミン細胞を含む単離網膜神経細胞分画(【10^6】cells)に【^3H】-ドーパミンを取り込ませた後、5×【10^9】MのTPAを灌流液中に添加し、放出される放射性ドーパミンの量をカウントした。TPAにより有意のドーパミンの放出(40%)がおこり、その最小有効濃度は【10^(-10)】Mと低濃度で、【10^(-7)】Mを最大約2倍の放出が促進された。他方発癌プロモーター作用のないフォルボールでは【10^(-7)】Mでもドーパミン放出は惹起できなかった。TPAの放出促進は【H_7】や外液の【Ca^(2+)】を除去すると完全にブロックされた。[考察]以上の事実から網膜ドーパミン細胞からのドーパミンの放出にCキナーゼが何らかの調節をしていることが明らかとなった。現在その内在性基質や【Ca^(2+)】の動員の機構について生化学的実験を押し進めている。
人工癌幹細胞ニッチの構築による癌幹細胞維持シグナルの解明と新規治療戦略の開発

ラットC6グリオーマの癌幹細胞分画を用いたスクリーニングでウレタン系ポリマーPU10が同癌幹細胞のニッチ機能を有することを見出し、PU10結合性ニッチ分子として鉄運搬蛋白トランスフェリン(Tf)を同定した。C6癌幹細胞のマウス脳内移植で形成される腫瘍中のCD204陽性腫瘍随伴マクロファージ(TAM)に3価鉄の存在を確認した。データベース解析から、グリオーマにおけるTf受容体やCD204の発現と腫瘍の悪性度に正相関を見出した。同癌幹細胞集団が産生するGM-CSFがCD204陽性TAM分化に寄与することも示した。他の結果も総合して癌幹細胞はニッチを自ら構築し癌進展を図る生存戦略を持つと考察する。癌幹細胞の特性解明や癌幹細胞を標的とした治療法の開発において、癌幹細胞周辺微小環境(ニッチ)側からのアプローチの重要性が認識されているものの、ニッチの分子基盤やニッチシグナルの役割は未解決の問題である。本研究課題では今年度特に、化学合成ポリマーを用いたニッチ構造ミミクリーのスクリーニングや、癌幹細胞由来の非癌幹細胞のニッチシグナル解析などによる、癌幹細胞ニッチ構造の探索とニッチシグナルコンポーネントの同定を通じて、癌幹細胞ニッチの分子基盤を確立し、癌幹細胞維持シグナルを明らかにすることを目的に実施された。多種類の化学合成ポリマーをスライド上にドットしたアレイを用い、その上で癌幹細胞を培養して評価する方法で、ニッチ構造ミミクリーの探索を行った。約400種類のポリマーアレイについて、蛍光蛋白発現ラットグリオーマC6の癌幹細胞画分のトラップ能や増殖能をレーザースキャニングと蛍光画像解析により評価し、候補ポリマーを得た。中規模ポリマー合成による検証段階に入りつつ、新規ポリマーの探索も行っている。また、C6グリオーマの癌幹細胞画分はin vitroで培養すると、多くは非癌幹細胞に分化するが、この分化した非癌幹細胞を癌幹細胞と共に培養することで癌幹細胞画分の維持と拡大に寄与するという知見ならびに、その寄与様式が細胞外マトリクスを介するものであることを示唆する実験結果を得た。これは、癌幹細胞が分化することでニッチ環境を構築するという癌の生存戦略の存在を示唆するもので興味深い。癌幹細胞を支持する能力のある非癌幹細胞により多く発現する分子をcDNAマイクロアレイ解析により探索し、種々のタイプのコラーゲン遺伝子を高発現していることを見出した。これらの成果は癌幹細胞とそれに由来する分化した細胞の相互作用を治療標的として捉えることの意義を示す点で重要と考える。癌組織を構成する細胞に多様性があり、その中でも治療抵抗性を有し癌組織構成細胞への分化能と自己複製能を維持する癌幹細胞は、癌根治に向けて治療標的として重要な細胞であるが、その性状については未知の点が多い。本課題では、癌幹細胞の維持に寄与する癌幹細胞周辺微小環境(ニッチ)の分子基盤解明を介してその解決を図った。(1)昨年度用いた約400種類の化学合成ポリマーをドットしたマイクロアレイと、新規のマイクロアレイによるスクリーニングの結果得たヒットポリマー(4種類のポリアクリレート系と1種類のポリウレタン系)を、マイクロドット規模から培養ディッシュ規模に拡大して、C6グリオーマ中の癌幹細胞集団(side population,SP)の維持能を指標に癌幹細胞ニッチ構造ミミクリー性の検証を行った。その結果、ポリウレタン系のポリマー1種類について、培養基材として用いることで、SP細胞集団の性質(自己複製能および造腫瘍能)が効率よく維持されることを見いだした。(2)昨年度までに、癌幹細胞集団に由来する非癌幹細胞が作り出すニッチが癌幹細胞ひいては癌組織の生存戦略に利用されていることを示した。C6のSP細胞と非SP細胞のマイクロアレイ解析で得た遺伝子発現プロファイルの情報をもとに行った実験から、非SP細胞に発現の高いコラーゲンとラミニンが、少なくともin vitroの培養基質とした場合にSP細胞集団の維持に寄与することを示すことができた。(3)C6グリオーマSP細胞をNOD/SCIDマウスに移植すると高い造腫瘍性を示すが、前項の関連研究により移植脳の腫瘍血管の周辺にコラーゲンとラミニンの存在量が高いことを見出した。(4)その腫瘍血管が、ホストマウス由来だけでなくSP細胞由来の細胞からも構成されることをSP細胞導入遺伝子と血管内皮マーカーの解析から明らかにし、それが薬剤抵抗性であることも示した。癌の理解と癌の根絶に向けて、癌幹細胞の特性解明はもとより癌幹細胞の生存維持に関わる微小環境(ニッチ)の解明が重要視されているが、その分子基盤には不明な点が多い。本課題では人工ニッチという独自の観点から癌幹細胞ニッチの分子基盤の構築を介して、その解決を図った。

(1)昨年度までに、数百種類のポリマーのスクリーニングから1種類のウレタン系ポリマーPU10が高い癌幹細胞ニッチミミクリー性を有することが明らかとなったため、PU10に結合する蛋白質を本領域内の北林班員との共同研究により質量分析したところ、3種類の興味深いニッチ候補分子を同定することに成功した。(2)そのうちの一つに鉄運搬分子として知られるtransferrin(Tf)が含まれていたことから、C6グリオーマSP細胞(癌幹細胞)移植腫瘍組織を鉄染色したところ、CD204陽性の腫瘍随伴マクロファージ(tumor-associated macrophage; TAM)において3価鉄(貯蔵鉄)の存在が確認され、癌の進展における鉄貯蔵TAMの関与が示唆された。(3)SP細胞(癌幹細胞)とMP細胞(非癌幹細胞)に発現する遺伝子についてcDNAマイクロアレイ解析を行ったところ、単球の動員やマクロファージ(Mφ)前駆細胞の増殖およびMφ分化を担うCCL2、CXCL12、GM-CSFなどの遺伝子発現が、SP細胞において亢進しており、癌幹細胞自身がTAMの発生を多面的に制御する作用を持つものと考察された。(4)National CancerInstituteより公開されているグリオーマ患者376例の癌部遺伝子発現データベースの解析からも、Tf受容体やCD204の発現と、予後を含む腫瘍の悪性度との間に正相関が確認されており、癌幹細胞は腫瘍内にニッチを自ら構築して利用する巧みな生存戦略をとるものと考えられた。本研究では合成ポリマーによる人工ニッチを用いた独創的なアプローチで癌幹細胞の生存維持に関わる微小環境「癌幹細胞ニッチ」に取り組んでおり今年度は以下の成果を得た。(1)昨年度までにウレタン系ポリマーPU10がグリオーマ幹細胞ニッチとして作用することを見出し、同ポリマーに結合するニッチ構成分子候補のひとつがtransferrin (Tf)であったため、グリオーマにおけるTf受容体(TfR)の発現と悪性度の関係をデータベース情報から解析した結果、TfRの発現が高値を示すグリオーマ患者が有意に予後不良を示すことを見出した。(2)Tfに関連して癌幹細胞と鉄代謝との関係について解析を進めた。5-ALAから種々の中間体を経てPPIXが合成され鉄が配位されHemeとなるが、グリオーマの幹細胞集団は非幹細胞集団に比べてPPIX含有量が低いことがわかった。グリオーマの術中検出や光線力学療法に5-ALAからのPPIX合成系が利用されるためこの知見の意義は大きく、治療成績向上に向けた展開研究を実施中である。(3)本研究のグリオーマ幹細胞移植モデルで形成される腫瘍中に鉄貯蔵性の腫瘍随伴マクロファージ(TAM)が多く観察されたことから癌幹細胞によるTAMの誘導機構を解析した。グリオーマ幹細胞集団においてマクロファージ分化を担うGM-CSFの遺伝子発現亢進を見出し、次いで抗GM-CSF中和抗体を用いた解析により同集団が産生するGM-CSF依存性にCD204陽性TAMの分化が誘導されることを示唆した。(4)さらに同集団では単球の動員やマクロファージ前駆細胞の増殖を担うCCL2の発現が亢進していたことからCCL2受容体阻害作用をもつ薬剤を用いた実験を行ったところ、in vitroで単球の遊走阻害効果を確認した。
社会経済的要因による健康格差に関する国際比較-心理社会的ストレスからの検討

健康格差とその背景要因に関する国際比較研究の結果、日本の公務員の健康格差は、英国やフィンランドと異なって健康リスク行動(喫煙、不健康な食習慣、運動不足)と肥満の格差では説明しにくく、心理社会的ストレスやワーク・ライフ・バランスの格差が健康格差の背景要因として重要であった。健康格差の国家間の類似点や相違点を把握することは、その国における特異的で効果的な健康格差対策につながる。日本、英国、フィンランドの公務員を対象に実施している疫学調査のデータを使用して、社会経済的要因による健康格差の程度や国家間の差異を明らかにする。また、職域の心理社会的ストレスやワーク・ライフ・バランス、健康リスク行動(喫煙、飲酒、運動、栄養)などの健康リスク要因の格差から、国家内の健康格差及び国家間の健康格差の差異を説明可能か明らかにすることを目的とする。日本、英国、フィンランドの公務員を対象に実施している疫学調査のデータを使用して、社会経済的指標と健康との関連性を明らかし、また、職域の心理社会的ストレスや健康リスク行動(喫煙、飲酒、運動)から健康格差の説明が可能か検証することを目的とした。分析の結果、社会経済的要因による健康格差として、日本、英国、フィンランドの3カ国とも身体的健康度は職階が低くなるほど低かった。精神的健康度は、日本では職階が低くなるほど健康度が低かったが、英国では一貫した結果が得られず、フィンランドでは職階が低くなるほどむしろ健康度が高かった。社会経済的要因と心理社会的ストレスとの関係については、3カ国とも、職階が低いほど、裁量度が低かったが、要求度や長時間勤務の割合も低かった。また、3カ国の健康格差や心理社会的ストレスの格差の程度は、フィンランドにおいて若干小さく、日本と英国は同程度であった。また心理社会的ストレスと健康リスク行動との関係については、心理社会的ストレスは、いくつかの健康リスク行動と関連があったが、3カ国間での一貫性はなく、また関連性もそれほど強いものではなかった。社会経済的要因による健康格差は、心理社会的ストレスや健康リスク行動を調整すると、男性では縮小傾向、女性では不変かやや拡大傾向にあった。したがって、特に男性では、心理社会的ストレスや健康リスク行動の職階差が、健康格差の形成に関与している可能性が示唆された。日本、英国、フィンランドは社会福祉体制が異なっており、フィンランドにおける社会民主主義的な体制は、経済格差などの格差縮小的に作用するとされる。横断研究による解釈の限界があるが、フィンランドにおいて心理社会的ストレスや健康格差の程度が他の国と比較してやや小さいことは、社会福祉体制が健康格差の拡大や縮小において重要な役割を担っていることを示唆していると考えられる。自由主義、保守主義、社会民主主義という異なる福祉国家体制をもつ英国、日本、フィンランドにおける公務員を対象として、社会経済的要因の健康影響を評価した。その結果、フィンランドにおいて職域における心理社会的ストレスおよび身体的精神的健康度の職階差は小さく、社会民主主義的な平等政策が格差を小さくする可能性が示唆された。こうした社会民主主義的な政策は性差をも縮小させる可能性がある。そこで3力国の職域における心理社会的ストレスの要素(仕事の裁量度と要求度)や労働時間、精神的身体的健康度の性差について評価した。その結果、フィンランドの女性はむしろ男性より心理社会的ストレスの要素が少なかった。逆に、日本は、女性は男性より心理社会的ストレスの要素が多く、また、長時間勤務者も多かった。精神的身体的健康度の性差は、3力国とも女性のほうが男性より精神的身体的健康度が低かったが、この健康度の性差は日本や英国で大きく、フィンランドで小さい傾向にあった。こうした健康度の性差は、心理社会的ストレスや労働時間の性差を調整したところ、3カ国とも性差が縮小する傾向にあったが、日本において最も性差が縮小した。労働者集団における精神的身体的健康度の性差は、心理社会的ストレスの性差によってある程度説明できることを示している。したがって福祉国家体制は、社会経済的要因による健康格差だけではなく、性差を含めた健康格差にも影響を与えている可能性が示唆された。また、日本の集団の分析では、女性のワーク・ライフ・バランスは男性より悪く、このことが日本の女性における精神的健康度の低下につながっている可能性が示唆された。ワーク・ライフ・バランスは3カ国の中ではフィンランドの女性が高かった。以上から、政策は、心理社会的ストレスやワーク・ライフ・バランスなどを介して、その国の労働者の健康格差に影響を与えている可能性が示唆された。日本、英国、フィンランドの公務員を対象に実施している疫学調査のデータを使用して、社会経済的要因による健康格差の程度や国家間の差異を明らかにすることを目的とした。また、職域の心理社会的ストレスやワーク・ライフ・バランス、健康リスク行動(喫煙、飲酒、運動、栄養)などの健康リスク要因の格差から、国家内の健康格差及び国家間の健康格差の差異を説明可能か明らかにすることを目的とした。国際比較研究の結果、(1)ワーク・ライフ・バランスは、フィンランドで良好で、日本の女性は3カ国で最も悪かった。

(2)仕事の心理社会的ストレスは、3カ国とも社会経済的地位が低い人ほど仕事の裁量度が低く、要求度も低く、長時間勤務者も少なかったが、フィンランドにおいて社会経済的地位と心理社会的ストレスとの関連性は比較的小さかった。(3)健康リスク行動(喫煙、不健康な食習慣、運動不足)と肥満の格差は、英国とフィンランドで社会経済的地位が低いほどリスク行動は多かったが、日本では社会経済的地位と健康リスク行動とに有意な関係を認めなかった、(4)身体的健康度は、3カ国とも社会経済的地位が低いほど健康度が低い傾向にあったのに対して、精神的健康度は日本では社会経済的地位が低いほど健康度が低かったが、英国では地位と健康度に有意な関連がなく、フィンランドでは地位が低いほど健康度が高かった。(5)心理社会的ストレスは健康リスク行動と関連する傾向にあるが国家間で一貫性がなかった。(6)心理社会的ストレスの格差は3カ国において精神的身体的健康度の格差の格差を部分的に説明した。以上から、日本の被雇用者の健康格差は、健康リスク行動の格差では説明しにくく、心理社会的ストレスやワーク・ライフ・バランスの格差が背景要因として重要であり、これらの適正化が日本の健康格差の縮小には有用であると考えられる。本研究課題は、日本、英国、フィンランドという異なる福祉国家レジームにおける社会経済的要因による健康格差及びその背景の類似点や相違点について検討することで、健康政策に資することを目的としている。当該年度は、社会経済的要因による睡眠格差の国際比較を行い、3か国とも職階が低いほど睡眠の質が低いことが明らかとなった。睡眠の質が低いと心臓血管疾患等の発生率が高まることが知られており、睡眠格差の縮小が求められる。また、睡眠格差の背景として、日本では特に心理社会的ストレスやワーク・ライフ・バランスの寄与が大きいことが示唆された。また、QOL質問票を用いた健康格差の縦断的分析も行った。その結果、日本は、英国やフィンランドと比較して社会経済的要因による健康格差の拡大が幾分小さかった。福祉国家レジームによる格差への影響は、経済的格差だけでなく社会的格差としての性差についても影響が出ることから、心理社会的要因や労働時間の性差や健康度の性差に関する国際比較を行った。その結果、日本は、年齢や社会経済的地位を調整後の心理社会的ストレスや勤務時間の性差が3か国の中で最も大きく、フィンランドにおいて最も小さかった。健康度の性差についても3か国の中で最も大きかったが、心理社会的ストレスや勤務時間を調整後に健康格差が最も縮小した。日本は女性に負担がかかりやすい保守的福祉国家に分類されるが、今回の研究からストレスや健康指標でもそのことが裏付けられた。また、共同研究者会議を実施して、今後の方向性を討議するとともに世界睡眠学会2011シンポジウムにて共同研究の成果について公表した。最終年度のため、本研究課題の既発表論文に基づくレビュー論文を出版した。
数理計画法を活用した大規模集積回路網のシミュレーション技法に関する研究

1.本研究ではまず、線形計画法を用いた区分的線形回路のすべての解を求める非常に効率のよいアルゴリズムを開発した。従来の符号テスト型アルゴリズムでは、超領域に区分的線形方程式f_i(x)=0(i=1,2,・・・,n)の解曲面が存在するか否かを判定していたが、本手法ではそれらの解曲面が交わるかどうかを判定するために、解の存在しない超領域を効率よく除去することができる。また数値実験により、従来型アルゴリズムでは到底解析不可能な線形領域数の極めて大きな問題に対しても、非常に効率よくすべての解を求められることを実証した。2.次に、非線形回路の安定解を求める効率的なアルゴリズムを開発した。具体的には、非線形回路の大域的求解法であるホモトピー法に対し、ホモトピー法が安定解に収束するような初期点を見つけるための条件式を導出した。このような条件式を満足する初期点を選ぶことにより、ホモトピー法は安定解に収束するので、非常に効率よく安定解を求めることができる。3.回路シミュレーションで多用される修正節点方程式に対し、大域的収束性の保証された新しいホモトピー法のアルゴリズムを開発し、その大域的収束性を証明した。4.上記の成果を非線形理論とその応用国際シンポジウムで発表し、大きな反響を得た。またIEEE論文誌、電子情報通信学会論文誌等に投稿し、すべて採録となった。5.今後は、線形計画法を用いた区間解析などについて研究を行い、大規模非線形方程式のすべての解を求める強力な方法論として確立する予定である。
病態腎におけるRhoおよびRhoキナーゼ作用の分子メカニズムの検討

(背景)Rho/Rhoキナーゼ系は、多くの標的分子の活性化を介して細胞増殖など多彩な細胞機能の調節に関与することが知られるようになった。一方、腎における検討では、我々はRhoキナーゼ阻害薬が慢性腎不全モデルにおいても腎保護作用を有する事を報告した。しかし、肥満・インスリン抵抗性動物における腎障害でのRhoキナーゼの役割は検討されていない。慢性肥満における腎機能障害のメカニズムについての詳細は不明であるが、機能的に腎血流量の上昇、血圧の緩やかな上昇、著明なglomerular hyperfiltraionを呈している。これら血行動態の変化が糸球体内圧の上昇を惹起し、腎障害をもたらしている可能性がある。さらに、肥満における腎微小循環異常として、輸入細動脈でのインスリンによる拡張反応の減弱が認められる。糖尿病モデルラットの血管平滑筋細胞において、血管インスリン抵抗性の機序にIRS-1とRho/Rhoキナーゼ系の関連が報告されており、腎機能障害の成因の一部にRho/Rhoキナーゼ系がかかわっていることが推察された。(方法、結果)肥満・インスリン抵抗性のモデル動物を片腎摘し、肥満慢性腎障害モデルを作成した。その後、Rhoキナーゼ阻害薬(Fasudil)を投与し、腎障害の進展阻止効果を検討した。投与後24週まで経時的に尿蛋白量を計測したが、明らかな尿蛋白減少効果は認められなかった。また、実験終了時点で腎組織を病理標本に供し、糸球体の肥大に対する影響を検討したが、改善効果は認められなかった。しかし、、片腎摘をしない肥満ラットにRhoキナーゼ阻害薬を投与したところ著明な血糖降下作用を認めた。骨格筋内のインスリンシグナルをウェスタンブロッティングにより検討したところ、IRS-1のセリンのリン酸化がfasudilによって減少していた。(考察)肥満に伴うインスリン抵抗性の進展に、Rhoキナーゼの活性亢進が関与することが示唆された。(目的)Rho/Rhoキナーゼ系は、多くの標的分子の活性化を介して細胞増殖など多彩な細胞機能の調節に関与することが知られるようになった。一方、腎における検討では、一過性腎障害を示すThy1腎炎でRhoキナーゼ阻害薬が細胞増殖を抑制することが報告されているが、慢性腎障害における検討はされていない。今回、高血圧を伴う慢性腎障害の腎障害進展機構において、Rhoキナーゼの役割を検討した。(方法)6週令の雄SHRに対し5/6腎摘を施行し、高血圧合併慢性腎障害モデルを作成した。作成後コントロール群とRhoキナーゼ阻害薬(fasudil,3mg/kg/日)投与群に分け、2週間毎に血圧・尿蛋白を測定し、食餌変更後6週で、血液データならびに腎組織の評価を行った。(結果)腎障害作成8週目において、血圧は軽度の上昇(217±14mmHg)を示した。fasudil投与により血圧は軽度低下したが(208±8mmHg)、無投薬群と有意差を認めなかった(p>0.1)。一方、蛋白尿は無投薬群(124±16mg/日)に比しfasudil投与群(79±12mg/日)で有意な減少を示した。腎組織に対する影響では、腎障害作成により発現した細動脈硬化病変、糸球体メサンジウム細胞の増殖亢進、ならびに尿細管の萎縮、間質の炎症性変化が、fasudilにより有意に改善した。さらに、5/6腎摘により糸球体ならびに尿細管間質のPCNA陽性細胞は増加したが、この変化はfasudil慢性投与により有意に抑制された。腎組織におけるRhoキナーゼの発現ならびに活性をウエスタンブロッティングにより検討したところ、同週令のSHRに比し5/6腎摘により、腎皮質のRhoキナーゼの蛋白発現、活性はともに増加し、fasudil投与によりRhoキナーゼ活性は有意に抑制された。さらにfasudilはサイクリン依存性キナーゼ阻害蛋白であるp21の発現には影響を与えなかったが、p27の発現を亢進させた。(考察)高血圧合併腎障害の進展に、Rhoキナーゼの活性亢進が関与することが示唆された。さらにRhoキナーゼの抑制は、血圧には依存しない腎局所での保護作用を示すことが明らかとなった。(方法、結果)肥満・インスリン抵抗性のモデル

動物を片腎摘し、肥満慢性腎障害モデルを作成した。その後、Rhoキナーゼ阻害薬(Fasudil)を投与し、腎障害の進展阻止効果を検討した。投与後24週まで経時的に尿蛋白量を計測したが、明らかな尿蛋白減少効果は認められなかった。また、実験終了時点で腎組織を病理標本に供し、糸球体の肥大に対する影響を検討したが、改善効果は認められなかった。しかし、、片腎摘をしない肥満ラットにRhoキナーゼ阻害薬を投与したところ著明な血糖降下作用を認めた。骨格筋内のインスリンシグナルをウェスタンブロッティングにより検討したところ、IRS-1のセリンのリン酸化がfasudilによって減少していた。(考察)肥満に伴うインスリン抵抗性の進展に、Rhoキナーゼの活性亢進が関与することが示唆された。
エクソン45-55を欠失した短縮型ジストロフィンの機能とその役割の解析

DMDはジストロフィン(Dys)遺伝子変異が原因で発症し、骨格筋・心筋に重篤な臨床症状を起こす一方で、Dys遺伝子のexon45-55を欠損した患者はほぼ無症状である。この短縮型Dys(Δ45-55Dys)の機能をΔ45-55Dysのみが発現するマウス(Tg/mdx)を作出し検討した。Δ45-55Dysは全長Dysと同等の機能を有していた。一方で、SRのリアノジン受容体(RyR1)はmdxと同程度ニトロシル化され、細胞内Ca2+濃度の上昇を惹起していたものの、その機能とSERCAの機能は野生型と同程度であった。細胞内Ca2+動態を調節することがDMDの治療法を考えるうえで重要である。【目的・方法】Duchenne型筋ジストロフィーはdystrophin遺伝子変異が原因で発症し、骨格筋・心筋に重篤な臨床症状を起こす一方で、dystrophin遺伝子のexon45-55を欠損した患者の骨格筋症状はほぼ無症状である。このexon45-55を欠失する短縮型Dys (Δ45-55Dys)の機能的役割を明らかにするため、Ex.45-55を欠失させたdystrophin遺伝子が発現するマウス(Δ45-55Tg )を作出し、mdxマウスと交配させてΔ45-55dystrophinのみが発現するマウス(Δ45-55Tg/mdx)を産出し、Δ45-55dystrophinの機能を検討した。【結果・考察】Δ45-55Tg/mdxの筋機能を野生型と比較したところ、Δ45-55dystrophinは全長dystrophinとほぼ同等の機能を有する一方で、Δ45-55Tg/mdxでは成長に伴う体重の増加が野生型と比較して緩やかで、20週齢前脛骨筋では重量、平均筋断面積で有意な低下を認めた。Fibertype解析ではΔ45-55Tg/mdxではType 2A線維の増加と、Type 2B線維の萎縮が認められた。その背景としてΔ45-55Tg/mdxでは、一部のnNOSの局在が細胞膜から細胞質に変化しており、細胞質で活性化されたnNOSが筋小胞体のRyR1をニトロシル化し、恒常的に細胞内Ca2+濃度を上昇させることで、筋萎縮や筋線維組成の変化を惹起させるシグナル経路を活性化させていることが示唆された。Duchenne型筋ジストロフィーはdystrophin (Dys)遺伝子変異が原因で発症し、骨格筋・心筋に重篤な臨床症状を起こす一方で、Dys遺伝子のexon45-55 (Ex.45-55)を欠損した患者の骨格筋症状はほぼ無症状である。このEx.45-55を欠失する短縮型Dys (Δ45-55Dys)の機能を明らかにするため、Ex.45-55を欠失させたDys遺伝子が発現するマウス(ΔTg)を作出し、mdxマウスと交配させてΔ45-55Dysのみが発現するマウス(Tg/mdx)を産出し、その機能を検討した。Tg/mdxの筋病理所見・筋機能を野生型、mdxマウスと比較したところ、Tg/mdx骨格筋ではジストロフィン糖タンパク質複合体(DGC)の発現が回復しており、Δ45-55Dysは全長Dysとほぼ同等の機能を有していた。一方で、DGCに含まれるnNOSの局在がTg/mdxでは細胞膜から細胞質へ変化しており、細胞質で活性化されたnNOSが筋小胞体(SR)のリアノジン受容体(RyR1)をニトロシル化し、mdxマウスと同様に恒常的に細胞内Ca2+濃度を上昇させた。しかし、RyR1のアゴニストを用いてRyR1の機能を検討したところ、刺激に対するTg/mdxのRyR1機能はmdxマウスと異なり正常マウスと同程度維持されていた。そこで、SRにCa2+を取り込む役割を担うSERCAの機能を比較したところTg/mdxのSERCA活性はmdxマウスより有意に回復していた。以上よりTg/mdxではSERCAの機能が維持され、SRにCa2+を取り込むことで、刺激に対するRyR1応答性が正常マウスと同程度維持されていたと考えられる。このことは筋細胞膜の安定性だけでなくSRを含む細胞内小器官の機能が筋ジストロフィーの病態と治療を考えるうえで重要であることを初めて示した。

筋生理学exon45-55を欠失させた短縮型ジストロフィンのみを発現するΔ45-55Tg/mdxマウスを作出することができ、ウエスタンブロットにより、タンパク質レベルでの発現を確認した。同マウスを用いて骨格筋・心筋の機能解析を行い、正常マウス・mdxマウスとの比較検討したところ、exon45-55を欠失した短縮型ジストロフィンの機能は全長ジストロフィンと同等の機能を有することを明らかにすることができた。一方で、Tg/mdxマウスではジストロフィン糖タンパク質複合体に含まれるnNOSの局在が正常マウスとは異なり細胞膜から細胞質に局在を変えていることも明らかにし、細胞質に局在を変えたnNOSが産生するNOが筋小胞体のリアノジン受容体をニトロシル化すること、さらにこのリアノジン受容体のニトロシル化により筋小胞体から細胞質へカルシウムの放出が増加し、筋萎縮・筋線維タイプの変化が惹起することを明らかにすることができた。以上より、exon45-55を欠失した短縮型ジストロフィンの機能だけでなく、この短縮型ジストロフィンが発現することによっておこる2次的な現象を元に、生体におけるNOと細胞質内カルシウム濃度の調節機構を明らかできる可能性まで示せたと考えている。exon45-55を欠失したジストロフィンが発現しているTg/mdxでは筋細胞質のカルシウム濃度が増加していることを明らかにすることができたが、この現象はニトロシル化されたリアノジン受容体のみに起因するのか、同じく筋小胞体膜の局在するIP3受容体や、筋細胞膜に局在するL-typeカルシウムチャネルも関与するのか否かを阻害剤等を用いてin vitroレベルで検討する。また、Duchenne型筋ジストロフィーやBecker型筋ジストロフィー患者の筋細胞を用いて、リアノジン受容体のニトロシル化や細胞内カルシウム濃度の程度と病態との関連をより詳細に検討したいと考えている。必要試薬・消耗品等が研究室内の在庫で賄うことができたため、購入予定数よりも少なくて済んだことに合わせて、学会の参加を次年度多くの学会に参加できるように計画を変更したため。国内学会2回分の旅費に充てる。併せて、ヒトの筋細胞を用いた研究を計画しているために新たに培地等の実験消耗品を購入する予定である。
薬物代謝酵素の遺伝子多型と飲酒・喫煙習慣の交互作用に関する肝細胞癌の症例対照研究

C型肝炎ウイルス(HCV)とB型肝炎ウイルス(HBV)がわが国における肝細胞癌の主要な原因である事は明らかであるが、近年cytochrome P450(CYP)やN-acetyltransferase(NAT)などの薬物代謝酵素の遺伝子多型が肝癌リスクと関連しているという報告がなされた。これらの遺伝的要因と環境要因が相互的にどの様に肝発癌に影響を及ぼしているかは十分に解明されていない。本研究では、薬物代謝酵素の中でCYP2E1とNAT2の遺伝子多型が肝癌リスクと関連しているかどうか、また飲酒・喫煙習慣との間に交互作用が見られるかどうか、について症例対照研究の手法により検討した。肝癌群41名(男性71%、anti-HCV陽性80%、HBs抗原陽性17%)および病院対照群104名(男性71%、anti-HCV陽性8%、HBs抗原陽性2%)について専任の調査員(看護婦)がインフォームドコンセントを得た後、面接調査と遺伝子解析のための採血を行った。遺伝子型はPCRによって多型部位を含む領域を増幅し、制限酵素断片長多型により判定した(CYP2E1については5'-flanking領域のRsal多型、NAT2についてはコード領域のAsp718/BamHI/Taq多型)。CYP2E1のc1/c1、c1/c2、c2/c2型は、肝癌群においてそれぞれ73%、22%、5%において観察されたのに対して、対照群においては63%、35%、2%であった。c1/c1型のオッズ比は1.6(95%信頼区間0.7-3.5)と推定された。c1/c1型のオッズ比は、多飲歴のある男性ではかなり上昇していたのに対して(オッズ比=9.0)、多飲歴のない男性ではその様な傾向は見られなかった(オッズ比=0.9、P for interaction=0.09)。c1/c1型と喫煙との間にも同様の交互作用が観察された(オッズ比:4.3vsO.8)。全体としては、NAT2多型・表現型と肝癌リスクとの間に関連は見られなかった。しかし、rapid acetylatorのオッズ比は男性喫煙者において1.9と上昇する傾向にあったのに対して、非喫煙者・禁煙者においては0.8と上昇が見られなかった。これらの結果より、CYP2E1とNAT2多型が飲酒あるいは喫煙習慣との交互作用のもとに肝発癌に影響を及ぼしている可能性が示唆された。本症例対照研究では、発癌物質の代謝活性化に関与するcytochrome P450(CYP)の中で、飲酒により酵素誘導が起こり、ニトロソアミンなどの代謝活性化に関与するCYP2E1、代謝活性化された発癌物質(芳香族アミンなど)の不活化に関与しているN-acetyltransferase(NAT)の中でNAT2に注目し、両酵素の遺伝子多型および飲酒・喫煙習慣が肝細胞癌(以下肝癌)の発生リスクにどの様に影響しているか、を検討する事を目的とした。肝癌患者は九大病院および福岡市内の基幹病院の入院患者(目標数100名)から選定し、対照者は保健所の成人健診受診者(目標数400名)より選定する様に計画した。科研費交付内定通知が平成11年10月末であった事もあり、今年度は肝癌患者20名・対照者40名前後の調査を行う予定であった。研究協力機関との交渉、調査票の開発、研究に係る同意書の作成、遺伝子多型の予備実験などを終了し、平成12年2月より開始する様に準備を進めた。しかしながら、厚生省より平成12年2月「遺伝子解析研究に付随する倫理問題等に対応するための指針(案)」が公表され、研究の開始に当たって、学内の倫理委員会の承認が不可欠と考えられたため、現在このための準備を進め、調査開始を延期している状況である。対象者の調査開始は平成12年度となる見込みである。

c1/c1型のオッズ比は1.6(95%信頼区間0.7-3.5)と推定された。c1/c1型のオッズ比は、多飲歴のある男性ではかなり上昇していたのに対して(オッズ比=9.0)、多飲歴のない男性ではその様な傾向は見られなかった(オッズ比=0.9、P for interaction=0.09)。c1/c1型と喫煙との間にも同様の交互作用が観察された(オッズ比:4.3vsO.8)。全体としては、NAT2多型・表現型と肝癌リスクとの間に関連は見られなかった。しかし、rapid acetylatorのオッズ比は男性喫煙者において1.9と上昇する傾向にあったのに対して、非喫煙者・禁煙者においては0.8と上昇が見られなかった。これらの結果より、CYP2E1とNAT2多型が飲酒あるいは喫煙習慣との交互作用のもとに肝発癌に影響を及ぼしている可能性が示唆された。本症例対照研究では、発癌物質の代謝活性化に関与するcytochrome P450(CYP)の中で、飲酒により酵素誘導が起こり、ニトロソアミンなどの代謝活性化に関与するCYP2E1、代謝活性化された発癌物質(芳香族アミンなど)の不活化に関与しているN-acetyltransferase(NAT)の中でNAT2に注目し、両酵素の遺伝子多型および飲酒・喫煙習慣が肝細胞癌(以下肝癌)の発生リスクにどの様に影響しているか、を検討する事を目的とした。年度当初、研究代表者は九州大学大学院医学研究院に所属していたが、平成12年9月より佐賀医科大学に転任となり、佐賀医科大学病院において調査を開始するための準備を進めた。肝癌患者群は佐賀医科大学内科受診者(目標数100名)、対照群は佐賀医科大学総合外来受診者(目標数200名)より選定する事とした。対象者選定のための協力各科の予備調査(年間患者数、総合外来受診者の性・年齢分布および疾病特性など)、飲酒歴・喫煙歴などの生活習慣に関する調査票の開発、九州大学よりの実験機器(サーマルサイクラーおよび超低温槽)の移管を含む実験環境の整備、薬物代謝酵素(CYP2E1およびNAT2)の遺伝子型決定のための予備実験を行った。本年度の研究費は、主に検査試薬・実験器具に充当した。研究計画について佐賀医科大学倫理委員会の承認を受けた後、対象者の調査を行った。
思想としてのサディズム・マゾヒズムとその現代的展開

本年度は、サディズム・マゾヒズムと西洋近代資本主義の関係を考察すべく、『プロテスタンティズムの倫理と資本主義の《精神》』において、M・ウェーバーがなしたジャンセニズムとB・パスカルについての議論に着目した。特にここで念頭にあったのは、ほとんどマゾヒスティックとも言える禁欲主義の本態と、それが西洋近代資本主義を生み出したとするウェーバーの議論を検討することであった。論文「理念型としてのB・パスカル--M・ウェーバーとジャンセニズム--」では、ジャンセニズム及びパスカルが、J・カルヴァンとほとんど違いのない教義を持っていたにもかかわらず、なぜ「資本主義の精神」に至らなかったのかについて、「決して神の意思(救いの確証)を得ることができない」というジャンセニズムの教義が、いかなる変容もなく伝播されることを、パスカルの「賭けの議論」から確認した。また、この考察は、禁欲主義と西洋近代資本主義の接続を、J・カルヴァンの教義の伝播に即して再検討する必要性を示すものであり、そのためには、聖書伝播史や聖書翻訳史、読書(読者)史の知見を導入し、それらを総合する視座を持たなければならない。この視座を獲得するために、いまだ明らかにされたとは言いがたいM・フーコーの晩年の歴史記述の方法を考察したものが、論文「M・フーコーにおける現代性moderniteと現在性actualite--歴史を書く方法としての--」である。そこでは、フーコーの歴史記述の態度に一貫して存在する「現代をいかにして記述するか」という問題意識を見取ると同時に、フーコーの「問題化」という概念を、この問題意識に対する、彼の最終的な答えとして理解できることを確認した。また、この概念をさらに発展させれば、聖書(あるいは書物)と、それをめぐる人々との関係を、布置(史)として記述することができることを、併せて示した。本年度は「サディズム」という言葉の起源とされる、D・A・F・サドの著作の「異常性」が、近代という現象の中でいかなる形態をとり、また同時に隠蔽されるのかを考察した。その際、一方では思想史として順を追いながら、サディズムの系譜を観察すべく、I・カントの「教育学」にその端緒を見出すかたちで議論を行った。それは、日本教育社会学会第56回大会での「サドの説得とカントの教育学--両者の「人間」像の比較から--」という報告と、大阪教育大学公民学会紀要公民論集における「カントと"共にある"ということ、サドと"共に"あるということ」という論文に結実された。他方で、サドと現代思想の関連を考察すべく、M・フーコーの思索におけるサドの扱いに着目した。フーコーはその初期の歴史学・考古学的考察において、近代への転換点としてのサドを持ち上げるが、権力論が考察の中心課題になる中期に至って、主要な著作にサドの名が現われなくなる。特にここでは、彼の2つの権力論のちょうど結節点である1975-6年に行われた「サド、性の法務官」という対談と、そこで提示された「反有機化された身体」とその「喜悦」と呼ばれるものの本態を見ることで、フーコーが権力に絡め取られる人間の何を問題にしようとし、そこにサドがどのようなかたちで関係しているのか、そして、それらは彼が晩年に辿ろうとした「性の歴史」という系譜にどのように関わるのかを考察した。このような問題系の端緒を、日本社会学会第77回大会での「「サドと社会性」という問題系--サドの説得を巡って--」という報告で開いた。さらに、このテーマについては、G・ドゥルーズ&F・ガタリが語る「器官なき身体」との比較という課題もあり、これらのことを主題とした論文を完成させた。今年度は、現代社会を考察する上で重要に思われる「情報」あるいは「管理」という問題について、サディズム・マゾヒズムの観点を組み込みながら、一つの論文と、解説あるいは書評という体裁をとった数本の論文を完成させた。以下、種別に三つの点から、今年度の研究実績を記しておく。第一に、前年度に着手した、M・フーコーの思索におけるマルキ・ド・サドの扱いに着目した議論を再構成すべく、M・フーコーがサドに言及する際に提示した「反有機化された身体」とその「喜悦」という概念と、G・ドゥルーズ&F・ガタリの「器官なき身体」という概念とを綿密に比較した。帰結として、現代の「管理社会」の問題点にまで言及するに至ったこの考察は、現代社会理論研究第15号に掲載の「反有機化された身体とその喜悦を巡って--後期フーコーの一視座軸--」に結実した。第二に、現代を代表する思想家東浩紀について、彼の展開する情報社会論から、一見錯綜的に見える彼が行ってきた一連の活動を概括した。その解説は、大航海No.55「現代日本思想地図」の東浩紀の項目「東浩紀人間はいかに人間たりうるか」として掲載された。第三に、雑誌10+1において、「新たなコミュニケーションの座標軸」という題で、数冊の本をとり上げ、既存のコミュニケーション概念あるいは関係の問題点を指摘し、新たなコミュニケーションのあり方の機軸を提示する報告を数回行った。それらは、「共感とテレパシーのあわいで」(No.40)、「今、芸術作品に出会うということ」(No.41)、「ポピュラー・サイエンスは何と等しいのか?」(No.42)として結実した。

なお、今年度の9月より、相愛女子短期大学にて、「近代的人間観の諸問題」と題する講義を行った。そこでは、動物からの差分として定義される人間としての近代的人間、あるいはそのように説明する近代的人間観を検討した。本年度は、サディズム・マゾヒズムと西洋近代資本主義の関係を考察すべく、『プロテスタンティズムの倫理と資本主義の《精神》』において、M・ウェーバーがなしたジャンセニズムとB・パスカルについての議論に着目した。特にここで念頭にあったのは、ほとんどマゾヒスティックとも言える禁欲主義の本態と、それが西洋近代資本主義を生み出したとするウェーバーの議論を検討することであった。論文「理念型としてのB・パスカル--M・ウェーバーとジャンセニズム--」では、ジャンセニズム及びパスカルが、J・カルヴァンとほとんど違いのない教義を持っていたにもかかわらず、なぜ「資本主義の精神」に至らなかったのかについて、「決して神の意思(救いの確証)を得ることができない」というジャンセニズムの教義が、いかなる変容もなく伝播されることを、パスカルの「賭けの議論」から確認した。また、この考察は、禁欲主義と西洋近代資本主義の接続を、J・カルヴァンの教義の伝播に即して再検討する必要性を示すものであり、そのためには、聖書伝播史や聖書翻訳史、読書(読者)史の知見を導入し、それらを総合する視座を持たなければならない。この視座を獲得するために、いまだ明らかにされたとは言いがたいM・フーコーの晩年の歴史記述の方法を考察したものが、論文「M・フーコーにおける現代性moderniteと現在性actualite--歴史を書く方法としての--」である。そこでは、フーコーの歴史記述の態度に一貫して存在する「現代をいかにして記述するか」という問題意識を見取ると同時に、フーコーの「問題化」という概念を、この問題意識に対する、彼の最終的な答えとして理解できることを確認した。また、この概念をさらに発展させれば、聖書(あるいは書物)と、それをめぐる人々との関係を、布置(史)として記述することができることを、併せて示した。
金利ファクターを組み入れた信用リスク評価 : モデリングと推定

金融システムの状態は我々の人間の毎日の生活に直接に関わっていて、金融危機が起こし金融システムが崩壊すれば景気後退や失業率の上昇などのような不幸を招く可能性がある。すなわち、金融システムの健全性を維持することは極めて重要なことなのである。そのためには、過去の危機の教訓を踏まえれば、リスクを認識し正しく評価する必要があるというのである。リスクの評価に当たって一つの問題点として指摘されるのは、評価モデルに十分に経済の先行き見通しを組み入れなかったということである。経済の先行き見通しは将来経済がどのような状況にあるであろうかを事前に知らせてくれる重要な情報で、それを考慮すべきだという考えである。経済先行き見通しとして国内総生産(GDP)に基づいた指標があるが、GDPは頻繁に観測できず低頻度のデータしか得られないため評価に遅れが現れやすい。一方、金利は日々観測可能である上、将来の経済成長、インフレおよび景気後退の有力な予測情報を含んでいると知られている。そう言った問題意識の下で本研究の目的は経済先行き見通しの指標として解釈可能な金利ファクターを組み入れた信用リスク評価モデルを構築し推定することである。昨年度実施した研究から分かるように、インプライド倒産確率と回収率を同時に推定することが困難なため、今年度では信用リスク評価モデルに着目する本来の研究計画は進展できなかった。しかし、今年度の実績として、国債の金利期間構造モデルに着目した研究をあげられる。具体的には、昨年度行った国債の金利期間構造モデルに関する研究を拡張しレジーム・シフトを考慮するNelson-Siegelモデルについての実証研究を行った。経済循環や金融政策などを通じて国債の金利はレジームに依存すると知られるからである。レジーム・シフトを考慮したNelson--Siegelモデルは、レジーム・シフトを考慮しないモデルよりもZero Lower Boundを上手く捉えられるだけでなく、良い予測パフォーマンスを与えるので、レジーム・シフトを考慮したNelson--Siegelモデルの方が望ましいということが分かった。研究の目的は経済先行き見通しを考慮した信用リスク評価モデルを構築し、それを考慮した場合とそうでない場合の相違についてはまだ考察することである。そのために、まず将来の経済状況に関する情報を含む国債金利期間構造に着目した研究を行ったのである。しかし、信用リスク評価モデルに着目したものの、目的は達成できなかった。なぜなら、インプライド倒産確率と回収率を同時に推定する方法がまだ開発されていないからである。経済先行き見通しの指標として用いる可能な金利ファクターを考慮したCDS評価モデルを構築したが、経済先行き見通しを考慮した場合とそうでない場合の相違についてはまだ考察していない。問題点は、モデルを推定するために用いられる従来のアプローチでは、昨年度の実績として示したように、インプライド倒産確率及び回収率を正しく推定できないことである。経済先行き見通しの考慮による効果を考察するのに、インプライド倒産確率及び回収率を同時に推定する方法をまず開発しなければならない。そう言った問題意識の下で本研究の目的は金利ファクターを組み入れた信用リスク評価モデルを構築し推定することである。今年度の実績として、1金利期間構造モデルを構築し米国債と日本国債の利回りデータを用いて推定した。良いパフォーマンスを持つモデルである上、モデルを構成する金利ファクターが経済先行き見通し指標として解釈可能だということを示した。2さらに、その金利期間構造モデルのファクターを組み入れたクレジット・デフォルト・スワップ(CDSモデルも構築しCDS期間構造データで推定しシミュレーションも行った。CDS期間構造データのみ用いてインプライド倒産確率と回収率を同時に推定するというアプローチを取ると正しく推定できないことを示した。

そう言った問題意識の下で本研究の目的は経済先行き見通しの指標として解釈可能な金利ファクターを組み入れた信用リスク評価モデルを構築し推定することである。昨年度実施した研究から分かるように、インプライド倒産確率と回収率を同時に推定することが困難なため、今年度では信用リスク評価モデルに着目する本来の研究計画は進展できなかった。しかし、今年度の実績として、国債の金利期間構造モデルに着目した研究をあげられる。具体的には、昨年度行った国債の金利期間構造モデルに関する研究を拡張しレジーム・シフトを考慮するNelson-Siegelモデルについての実証研究を行った。経済循環や金融政策などを通じて国債の金利はレジームに依存すると知られるからである。レジーム・シフトを考慮したNelson--Siegelモデルは、レジーム・シフトを考慮しないモデルよりもZero Lower Boundを上手く捉えられるだけでなく、良い予測パフォーマンスを与えるので、レジーム・シフトを考慮したNelson--Siegelモデルの方が望ましいということが分かった。研究の目的は経済先行き見通しを考慮した信用リスク評価モデルを構築し、それを考慮した場合とそうでない場合の相違についてはまだ考察することである。そのために、まず将来の経済状況に関する情報を含む国債金利期間構造に着目した研究を行ったのである。しかし、信用リスク評価モデルに着目したものの、目的は達成できなかった。なぜなら、インプライド倒産確率と回収率を同時に推定する方法がまだ開発されていないからである。経済先行き見通しの指標として用いる可能な金利ファクターを考慮したCDS評価モデルを構築したが、経済先行き見通しを考慮した場合とそうでない場合の相違についてはまだ考察していない。問題点は、モデルを推定するために用いられる従来のアプローチでは、昨年度の実績として示したように、インプライド倒産確率及び回収率を正しく推定できないことである。経済先行き見通しの考慮による効果を考察するのに、インプライド倒産確率及び回収率を同時に推定する方法をまず開発しなければならない。経済先行き見通しを考慮したCDS評価モデルを構築したが、それを考慮した場合とそうでない場合の相違についてはまだ考察していない。さらに、1つ企業のみ信用リスクモデルに重点を置いたが、信用ポートフォリオモデルまでまだ考えていない。問題点は、モデルを推定するために用いられる従来のアプローチでは、今年度の実績として示したように、インプライド倒産確率及び回収率を正しく推定できないことである。