hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ＮＥＬＬ１タンパク質を用いた骨組織再生治療法の基盤技術の開発

これにより、NELL1の骨分化誘導能においてインテグリンを中心とした細胞接着シグナルが関与することが示唆された。頭蓋骨縫合早期癒合症(Craniosynostosis)患者の骨癒合部位で高発現している遺伝子として発見されたNELL1は分子量約140 kの分泌タンパク質をコードし、種々のモデル系を用いた動物実験において骨分化を促進することから、新しい骨形成促進因子として骨再生治療への臨床応用が期待される。しかしながら、NELL1の受容体およびそのシグナル伝達機構はよくわかっていない。本研究課題では、(1) NELL1受容体の探索および同定、(2) NELL1の骨分化シグナル伝達経路の解明、(3) NELL1タンパク質の機能領域の解析、(4) NELL1およびNELL1受容体の機能を応用した骨組織再生治療法の基盤技術の確立を目的とした。平成23-25年度の実施期間において、実験材料となるNELL1タンパク質の発現系の構築からスタートし、NELL1受容体の探索及びシグナル伝達機構の解明に取り組んだ結果、beta1サブニットを含むインテグリンがNELL1の細胞接着活性を担う受容体として機能し、骨分化誘導シグナルを活性化することを見出した。これには、NELL1タンパク質のC末端側に位置するvon Willebrand factor type Cドメインに存在するインテグリン結合領域とその立体構造が重要な働きをしていることを見出した。また、NELL1タンパク質のコイルドコイル領域を介した多量体形成に伴い、インテグリンを介したNELL1の細胞接着活性が調節されていることを明らかにした。平成26年度(最終年度)は、これらの結果を投稿論文にまとめて発表した。分子細胞生物学NELL1の受容体としてインテグリンファミリー分子を同定した。しかしながら、依然として骨分化誘導に必要な別の受容体の存在も示唆される。発現クローニング法およびプロテオミクス的手法によるNELL1受容体のスクリーニングを継続中であるが、いずれの方法でも受容体の候補となる陽性クローンは得られていない。前者に関しては、NELL1と結合する受容体発現細胞を選別する一細胞自動単離装置の機器の不調の時期があり、また一細胞PCRの条件の見直しが必要であったため、スクリーニング総数はあまり増えなかった。後者については、数通りの方法を試行したが、NELL1特異的なタンパク質バンドが得られず、さらなる条件検討が必要であると考えている。その他の研究計画については、おおむね順調に進展している。本研究により、NELL1の受容体としてインテグリンファミリー分子を同定した。また、細胞表面のヘパラン硫酸プロテオグリカンが共受容体として機能する可能性が示唆された。
インフルエンザ-細菌の混合感染での重症肺炎発症に関する病原因子の検索

インフルエンザウイルスと口腔細菌との混合感染によるマウス致死率の検討を行った。その結果、非致死量のウイルス感染2日後に非致死量の口腔レンサ球菌(Streptococcus mutans,S.sanguis,S.salivarius,S.equi)を感染したところ、ウイルスとS.mutansとの混合感染により60%,その他の各種細菌とウイルスとの感染によって100%マウスが肺炎により感染死した。一方各種細菌のみもしくはウイルスのみでの経鼻感染ではすべてのマウスは感染死を免れた。この結果はDental Caries以外にさしたる病原性を示さないと考えられていた口腔レンサ球菌がインフルエンザウイルス存在下で致死性肺炎を起こす可能性を提示するものであり、最近論議されている致死的インフルエンザ感染症と口腔清掃状態との因果関係を示す重要な知見になりうると思われる。病原性については不溶性グルカンの炎症性免疫応答の可能性が部分的な要因と考えられたものの、この期間内に明確に同定することができず、今後の検討課題として残された。一方、このようなインフルエンザウイルスこの状態を予防するためにはワクチン接種が有効であると考えられる。しかし、インフルエンザヘマグルチニン(HA)ワクチンの接種を行った場合、有効な感染防御効果を誘導することができなかった。この実験で死亡したワクチン接種マウス肺での観察ではインフルエンザ感染後でも少数ながらインフルエンザ感染細胞が存在しており、この部分に細菌が付着、増殖していた。そこで、インフルエンザワクチンの防御免疫効果増強を誘導するアジュバントの検索を行った。そして、ポリ-γ-グルタミン酸ナノ粒子(γ-PGA-NPs)をワクチンと混合することで抗インフルエンザ防御免疫応答の増強が認められ、HAワクチン接種マウスでも全例死亡する大量のウイルス量の感染に対しても80%のマウスが感染死を免れた。平成18年度は、インフルエンザウイルスと口腔細菌との混合感染によるマウス致死の条件検討および各種口腔レンサ球菌群を用いての混合感染によるマウス致死率の検討を行った。使用ウイルス株(A/FM/1/47株[H1N1])のLD50値の100分の1である25FFUを経鼻感染するだけではマウスに何ら病原性を与えることがないが、ウイルス感染2日後に非致死量の黄色ブドウ球菌(10^7 CFU)を経鼻感染することによって80%ものマウスが細菌性肺炎で感染死した、以上の条件に基づき、ウイルス感染2日後に口腔レンサ球菌(Streptococcus mutans, S. sanguis, S. salivarius, S. equi)を10^7 CFU感染したところ、ウイルスとS. mutansとの混合感染により60%,その他の各種細菌とウイルスとの感染によって100%マウスが肺炎により感染死した。各種細菌のみもしくはウイルスのみでの経鼻感染ではすべてのマウスは感染死を免れていることから、ウイルスと口腔レンサ球菌との混合感染により、黄色ブドウ球菌と同等もしくはそれ以上の致死毒性を発揮することが示唆された、この結果はDental Caries以外にさしたる病原性を示さないと考えられていた口腔レンサ球菌がインフルエンザウイルス存在下で致死性肺炎を起こす可能性を提示するものであり、最近論議されている致死的インフルエンザ感染症と口腔清掃状態との因果関係を示す重要な知見になりうると思われる。インフルエンザと口腔細菌との混合感染により感染症の重症化が顕著にみられる。この状態を予防するためにはワクチン接種が有効であると考えられる。しかし、インフルエンザ全粒子型ワクチンの接種を行った場合でも混合感染後の生存率は約80%と有意な予防効果がみられたものの、完全な予防効果を示すことはできなかった。肺での観察ではインフルエンザ感染後でも少数ながらインフルエンザ感染細胞が存在しており、この部分に細菌が付着、増殖していた。この結果は、インフルエンザ感染後の細菌の二次感染の予防に徹底的なインフルエンザ感染予防が重要であることが考えられる。

インフルエンザワクチンは現在HAスプリットワクチンを使用していることから、このタイプのワクチンでウイルス感染をより強力に抑制できるシステムを作ることがインフルエンザ-細菌の混合感染症の発症予防に重要であると思われる。そこで、インフルエンザワクチンにポリ-γ-グルタミン酸ナノ粒子(γ-PGA-NPs)を混合することでインフルエンザに対する感染防御免疫効果について検討した。その結果、抗インフルエンザ防御免疫応答の増強が認められた他、HAワクチン接種マウスでも全例死亡する大量のウイルス量の感染に対しても80%のマウスが感染死を免れた。以上の結果から、γ-PGA-NPsをアジュバントとしたインフルエンザHAワクチンの接種が、重度のインフルエンザ感染に対しても感染防御効果を示すとともに、インフルエンザ感染後の二次的な細菌感染に対しても防御する可能性が考えられた。
東海地域近世・近代能楽資料の収集・整理とアーカイブ化

・小原家所蔵の戦前の観世左近吹き込みの謡曲レコードの提供を受け、研究室ホームページより配信した。・熱田神宮の翁太夫である大岡宮福太夫が、近世において和歌を用いた勧進活動も行っていたことが蓬左文庫の堀田家資料より明らかになったので「<資料紹介>熱田猿楽大岡宮福太夫の勧進活動」として2019年3月発行の東海能楽研究会年報第23号に掲載した。・佐藤友彦師所蔵九冊本間狂言を調査させていただき第八冊目の「応答」(安宅の冊)を2019年3月発行の椙山女学園大学研究論集第50号に投稿した。・佐藤友彦氏所蔵の山脇得平本を翻刻して他の間狂言の本文と比較し、《雲林院》の作品の意図を個々の間狂言がどのように把握しているかを検討して「紫明」に投稿した。平成10年代のこれまで東海地域能楽番組データベースに漏れていた能楽番組を提供していただいたことから、それらの漏れていた番組の整理やデータ入力を優先して行った。このため当初行う予定だった平成29年・30年の能楽番組の整理と入力作業がやや遅れている。蓄音機レコードやラジオ放送による謡曲の質に関する研究は小原正哉氏はじめ複数の方から資料いただいたことから順調に進捗しており、デジタル化して成果をホームページで公開する準備を行っている。平成30年の東海地域の能番組の収集・整理とデジタル化、入力など能番組のデータベースの更新に力を入れたい。能番組をいつも提供してくださった方が高齢化して稽古をやめられてなかなか能番組が集まらなくなっているため、指導の能楽師さんに番組をいただけるように依頼したい。平成28年・29年に東海地域で行われた番組を収集・整理した。番組の入力・校正及び能楽番組データベースへ加えるのは平成30年度の課題とする。東海地域の観世流の謡曲の謡い方が大正十四年のラジオ放送開始以降急激に東京の観世宗家の謡い方に統一されてゆく原因として当時の観世宗家観世左近(元滋)が謡本付きの蓄音機レコードを発売し、観世流の愛好者にこのレコードに合わせて練習するよう薦めたということが挙げられる。この観世左近の吹込みのレコードを中日新聞長谷義隆記者の仲介で入手しデジタル化して小原正哉コレクションとして飯塚研究室ホームページより公開した。http://zeami.ci.sugiyama-u.ac.jp/izuka/erito1/ohara-youkyokureko.htmlこの経緯については2018年01月09日中日新聞夕刊のコラムで仲介いただいた長谷義隆記者により紹介された。近世以降、東海地域の能楽が民間に広まって隆盛であったのは能楽の囃子が寺社の祭礼に取り入れられ、特に山車の中で演奏する山車囃子を演奏する旦那衆の間に能楽囃子を習う人が多かったことによる。本年度は能楽小鼓方で岐阜伊奈波神社祭礼の安宅車の山車囃子を指導されている後藤孝一郎先生に能の囃子とそれがどのように変えられて山車囃子に取り入れられているのかのインタビューを行った。30年度はさらに詳しい内容を後藤先生に伺って能楽囃子から取り入れられた山車囃子について報告書にまとめたい。謡曲蓄音機レコードの収集やデジタル化と配信、幸清流小鼓方後藤孝一郎先生の聞き書きなどおおむね順調に進展している。東海地域の能番組の収集と整理も順調だが、入力に至っていない点が完全に予定通りとは言えない大きな理由である。昨年度までに収集・整理した東海地域の能楽番組をアルバイトを雇用して入力・校正を行い、能楽番組データベースに加える。西枇杷島町の祭礼にも能楽囃子から取り入れられた山車囃子が行われているので、西枇杷島の山車囃子保存会の半田実氏より聞き書き調査を行いたい平成30年の東海地域の能番組の収集・整理とデジタル化、入力など能番組のデータベースの更新に力を入れたい。予定していたアルバイトさんが一月以降出勤できず、4月以降に依頼せざるを得なかった。

平成29年30年の東海地域の能番組の入力に使用する予定だったが資料収集と整理が間に合わず昨年度中に入力依頼をすることが出来なかったため次年度使用額が生じた。今年度中できるだけ早く番組の整理を行い、入力を業者に依頼したい研究室で収集した謡曲レコード音源などもこのホームページより配信している
船舶火災時の避難安全性と人的要因に関する研究

現在、船舶の防火に関するSOLAS条約は新技術の導入等に困難性が指摘され、新しい防火思想に基づく防火体系および避難体制の構築、およびSOLAS条約II-2章の抜本的改正は国際的に重要な課題となってきている。船舶火災時における安全性確保の方策を考える上での難しさは、火災現象の複雑さと人的要因が事態の進展に極めて大きく影響することである。特に、瞬時に拡がり、火源から遠くに離れた所の人命をも脅かす煙の流動が火災安全性に対して複雑な様相を加えるため、避難行動の予測に非常時の不可測行動のあいまいさを含めた冗長性が必要となり、安全システムとしての信頼性が問題となる。本研究では、まず船舶居住区の火災時における煙流動状態の解析法および避難シミュレーション計算の方法を確立した。特に、避難に関しては、非常時における人間の行動パターンを把握する必要があり、非常時の人的要因の解析を行った。この結果に基づき、避難者に個々の歩行速度と異常行動率を属性として付与し、種々の個性をもつ避難者の組合せに対して避難シミュレーションを行った。また、防排煙の効果および避難安全性を評価するには、煙の流動と避難行動に関する数値シミュレーションを並行して行って判定を行うことが考えられるが、その安全性を調べる尺度がなく、また各種の防煙・排煙システムの効果を比較する尺度が必要である。このため、本研究では避難安全設計のために、煙流動と避難状態に関する数値シミュレーションの結果を用いて、煙流動および避難経路の危険度を定義した。この危険度を、客船の居住専用区画および公共区画における火災時の煙流動と避難に適して、安全性評価のための尺度としての有効性を調べ、さらに、各種の安全対策について危険度を算出し、その比較を行うことにより対策の効果の程度を明らかにした。現在、船舶の防火に関するSOLAS条約では、新しい防火思想に基づく防火体系および避難体制の構築、およびII-2章の抜本的改正が国際的に重要な課題となってきている。特に、煙の流動が火災安全性に対して複雑な様相を加えるため、避難行動の予測に非常時に不可測行動のあいまいさを含めた冗長性が必要となる。本年度は、まず船舶居住区の火災時における火災伝播と煙流動状態の把握のために現象解析を行った。なお、次年度はこの結果に基づき、避難者に個々の歩行速度と異常行動率を属性として付与し、種々の個性を持つ避難者の組み合わせに対して避難シミュレーションを行う。本研究では火災区画の熱伝達の状態と防熱構造の断熱性能、および隣接区画の発火の成否と熱的状態を把握するため、酸素の消費、ガスの生成に関しては瞬時拡散の仮定をとり、区画内気体の対流熱伝達、壁体間の放射熱伝達および、壁体内の熱伝導を考慮したフィールドモデルを用いた数値解析による火災シミュレーションを行った。まず、加熱物の配置を変化させた場合の火災シミュレーション計算を行い、火災区画内の火災現象、防熱構造内の温度分布、および隣接区画の発火の成否と熱的状態を調べた。さらに、火災拡大の限界条件を把握するために、火災荷重と防熱材の厚さを変化させた場合について火災伝播シミュレーションを行い、不完全系フィールドモデルによる多区画における火災伝播解析の有用性を調べた。

本研究では、まず船舶居住区の火災時における煙流動状態の解析法および避難シミュレーション計算の方法を確立した。特に、避難に関しては、非常時における人間の行動パターンを把握する必要があり、非常時の人的要因の解析を行った。この結果に基づき、避難者に個々の歩行速度と異常行動率を属性として付与し、種々の個性をもつ避難者の組合せに対して避難シミュレーションを行った。また、防排煙の効果および避難安全性を評価するには、煙の流動と避難行動に関する数値シミュレーションを並行して行って判定を行うことが考えられるが、その安全性を調べる尺度がなく、また各種の防煙・排煙システムの効果を比較する尺度が必要である。このため、本研究では避難安全設計のために、煙流動と避難状態に関する数値シミュレーションの結果を用いて、煙流動および避難経路の危険度を定義した。この危険度を、客船の居住専用区画および公共区画における火災時の煙流動と避難に適して、安全性評価のための尺度としての有効性を調べ、さらに、各種の安全対策について危険度を算出し、その比較を行うことにより対策の効果の程度を明らかにした。
発芽の鍵を握るラジカルスカベンジャーの機能解析と応用

イネ科およびマメ科作物の子実の成熟および発芽過程について主に活性酸素およびラジカルスカベンジャーの機能に注目して調べた。吸水後のコムギおよびオオムギ種子のアリューロン細胞で生成されるH_2O_2は、抗酸化物質であるアスコルビン酸により消去されることを明らかにした。また、子実の登熟過程において、穂発芽抵抗性のコムギ"農林61号"は、ラジカルスカベンジャーであるアスコルビン酸による発芽抑制効果が登熟後期の開花28日目から顕著となり、H_2O_2を消去するカタラーゼ活性が著しく高くなった。さらに、コムギのアスコルビン酸散布処理は、いずれの登熟ステージにおいても有効な穂発芽抑制物質となることが示された。デンプン種子だけでなく、油糧種子の成熟や発芽過程についても基礎的な知見を得た。ラッカセイでは、H_2O_2処理により90%以上の発芽率を示し、対照区に比べ著しく改善された。含水率は子葉および下胚軸ともに吸水に伴い漸増したが、下胚軸の増大は顕著だった。水の動態を示すT2は、下胚軸では吸水1日後から5日目まで漸増し自由水が出現した。乾燥子実へのH_2O_2処理により下胚軸および幼根においてエチレン生成が3倍となることが明らかになった。そこで、エチレン応答性遺伝子群の発現を正に制御する転写因子抗GmEin3抗体によるイムノブロットを行った結果、H_2O_2処理によりラッカセイの下胚軸および幼根に明瞭な交差シグナルが早い時期から検出された。また、ダイズ種子の成熟過程の子実の成熟過程における含水率の変化とオートファジー関連遺伝子であるATG8ファミリーとの関係にも着目し、GmATG8iは含水率の低下に伴い開花28日目からその発現程度が低くなることも合わせて報告した。イネ科作物では、登熟期の降雨や低温が引き金となり植物体上で子実が一斉に発芽する「穂発芽」が見られることがある。収穫期が梅雨と重なる日本ではこの現象は特に深刻な問題となっている。穂発芽特性は、種子の休眠性が大きな要因となり、休眠が浅いと穂発芽を引き起こし、逆に休眠が深いと発芽の均一性が失われ、いずれも栽培する上では望ましくない特性である。種子休眠は気象要因に加え子実内の水、植物ホルモンであるジベレリンやアブシジン酸の拮抗作用と複雑に関連するため、穂発芽の回避技術の構築は困難を極めていた。穂発芽しやすい性質をもつ"シロガネコムギ"は製粉特性が優れているため国内で広く栽培されており、穂発芽抵抗性の"農林61号"と比較した。その結果、登熟後期では、穂発芽抵抗性の品種では含水率は変わらないのに関わらず自由水を失い結合水のみに代わる時期が14日早かった。登熟中の子実において、結合水の状態に1日でも早く変わることは、穂発芽耐性の獲得に有効であることを示唆したことから、本研究に2つの品種を供試した。一方で、ムギ類の播種時の発芽を揃えるため、種子の過酸化水素(H_2O_2)処理が施されることがあるが、必ずしもその機構は解明されていなかった。吸水後のコムギおよびオオムギ種子のアリューロン細胞で生成される過酸化水素は、抗酸化物質であるアスコルピン酸により消去された。子実の登熟過程において、穂発芽抵抗性の"農林61号"の特性として、アスニルビン酸による発芽抑制効果が登熟後期の28日目から顕著となり、過酸化水素を消去するカタラーゼ活性が著しく高くなることを明らかにした。また、水ストレスに対応するササゲのアクアポリンの機能に関する研究も合わせて行った。

イネ科およびマメ科作物の子実の成熟や発芽過程について主に活性酸素およびラジカルスカベンジャーの機能に注目して調べた。吸水後のコムギおよびオオムギ種子のアリューロン細胞で生成されるH_2O_2は、抗酸化物質であるアスコルビン酸により消去されることを明らかにした。また、子実の登熟過程において、穂発芽抵抗性のコムギ“農林61号"は、ラジカルスカベンジャーであるアスコルビン酸による発芽抑制効果が登熟後期の開花28日目から顕著となり、H_2O_2を消去するカタラーゼ活性が著しく高くなった。さらに、コムギのアスコルビン酸散布処理は、いずれの登熟ステージにおいても有効な穂発芽抑制物質となることが示された。デンプン種子だけでなく、油糧種子の成熟や発芽過程についても基礎的な知見を得た。ラッカセイ子実は、H_2O_2処理により90%以上の発芽率を示し、対照区に比べ著しく改善された。含水率は子葉および下胚軸ともに吸水に伴い漸増したが、下胚軸の増大は顕著だった。水の動態を示すT_2は、下胚軸では吸水1日後から5日目まで漸増し自由水が出現した。乾燥子実へのH_2O_2処理により下胚軸および幼根においてエチレン生成が3倍となることが明らかになった。そこで、エチレン応答性遺伝子群の発現を正に制御する転写因子抗GmEin3抗体によるイムノブロットを行った結果、H_2O_2処理により下胚軸および幼根に明瞭な交差シグナルが早い時期から検出された。一方、ダイズ種子の成熟過程の子実の成熟過程における含水率の変化とオートファジー関連遺伝子であるATG8ファミリーとの関係にも着目し、GmATG8iは含水率の低下に伴い開花28日目からその発現程度が低くなることを明らかにした。
擬等角写像の変分公式の研究

任意に固定した正則函数について,これを含む1パラメータファミリーを正則性を保ったまま構成するには,一旦正則性を諦め,より弱い条件である擬等角性を持ったファミリーを考え,それをさらに正則になるように擬等角写像を用いて修正するという方法が有効である.この為には,擬等角写像がBeltrami微分がどのように依存するかを記述する変分公式を求めておくことが重要である.上記の動機と発想のもとで擬等角写像の変分公式の研究に取り組んできた.実際には過去,研究代表者により得られていた漸近展開による変分公式を絶対収束級数による展開へと深化させることを目標として研究を遂行してきた.しかしながらこの問題は擬等角写像の変分公式というよりは,より深い擬等角写像の大域的な構成法に関わる重要な問題であることが判明してきている.従来大域的な擬等角写像の構成法としては,AhlorsやBersによるBeltrami方程式の局所的な解として得られる局所的な擬等角写像を合成等により張り合せるという方法が用いられてきた.これが本研究中に示された方法を用いればBeltrami方程式自体が大域的に解け,これより擬等角写像が張り合せによらず一挙に構成することができる.このような大域的な構成法は,研究者によるもの以外は知られておらず,新しい方法である.現在この新しい方法についての論文を執筆中である.また本来の正則写像の変分公式の応用について,目標とする所のBloch函数について,歪曲定理と増大度の評価についての結果を得て学会や研究集会で発表し,さらには論文を雑誌に送りアクセプトされている.任意に固定した正則函数について,これを含む1パラメータファミリーを正則性を保ったまま構成するには,一旦正則性を諦め,より弱い条件である擬等角性を持ったファミリーを考え,それをさらに正則になるように擬等角写像を用いて修正するという方法が有効である.この為には,擬等角写像がBeltrami微分がどのように依存するかを記述する変分公式を求めておくことが重要である.上記の動機と発想のもとで擬等角写像の変分公式の研究に取り組んできた.実際には過去,研究代表者により得られていた漸近展開による変分公式を絶対収束級数による展開へと深化させることを目標として研究を遂行してきた.しかしながらこの問題は擬等角写像の変分公式というよりは,より深い擬等角写像の大域的な構成法に関わる重要な問題であることが判明してきている.従来大域的な擬等角写像の構成法としては,AhlorsやBersによるBeltrami方程式の局所的な解として得られる局所的な擬等角写像を合成等により張り合せるという方法が用いられてきた.これが本研究中に示された方法を用いればBeltrami方程式自体が大域的に解け,これより擬等角写像が張り合せによらず一挙に構成することができる.このような大域的な構成法は,研究者によるもの以外は知られておらず,新しい方法である.現在この新しい方法についての論文を執筆中である.また本来の正則写像の変分公式の応用について,目標とする所のBloch函数について,歪曲定理と増大度の評価についての結果を得て学会や研究集会で発表し,さらには論文を雑誌に送りアクセプトされている.任意に固定した正則函数について,これを含む1パラメータファミリーを正則性を保ったまま構成するには,一旦正則性を諦め,より弱い条件である擬等角性を保ったファミリーを考え,それをさらに正則になるように擬等角写像を用いて修正するという方法が有効である.この為には,擬等角写像がBeltrami微分にどのように依存するかを記述する変分公式を求めておくことが重要である.上記の動機と発想のもとで擬等角写像の変分公式の研究に取り組んできたが,研究が進むにつれ,この問題は変分公式のみならず擬等角写像の大域的な構成法に関わる重要な問題であることが判明してきている.従来大域的な擬等角写像の構成法としては,Beltrami方程式の局所的な解として得られる局所的な擬等角写像を合成等により張り合せるという方法が用いられてきた.これが本研究中に示された方法を用いればBeltrami方程式自体が大域的に解け,これより擬等角写像が張り合せによらず一挙に構成することができる.残念ながらこの新しい方法では,擬等角写像の定義域を大域的にすることができるものの,Beltrami微分のノルムについては十分小さく無ければならないという付帯条件が付く.この付帯条件をどれだけ弱められるかが今後の課題である.また本来の正則写像の変分公式の応用について目標とする所のBloch函数について,歪曲定理と増大度の評価についての結果を得ている.任意に固定した正則函数について,これを含む1パラメータファミリーを正則性を保ったまま構成するには,一旦正則性を諦め,より弱い条件である擬等角性を持ったファミリーを考え,それをさらに正則になるように擬等角写像を用いて修正するという方法が有効である.この為には,擬等角写像がBeltrami微分にどのように依存するかを記述する変分公式を求めておくことが重要である.上記の動機と発想のもとで擬等角写像の変分公式の研究に取り組んできた.

実際には過去,研究代表者により得られていた漸近展開による変分公式を絶対収束級数による展開へと深化させることを目標として研究を遂行してきた.しかしながらこの問題は擬等角写像の変分公式というよりは,より深い擬等角写像の大域的な構成法に関わる重要な問題であることが判明してきている.従来大域的な擬等角写像の構成法としては,AhlorsやBersによるBeltrami方程式の局所的な解として得られる局所的な擬等角写像を合成等により張り合せるという方法が用いられてきた.これが本研究中に示された方法を用いればBeltrami方程式自体が大域的に解け,これより擬等角写像が張り合せによらず一挙に構成することができる.残念ながらこの新しい方法では,擬等角写像の定義域を大域的にすることができるものの,Beltrami微分のノルムについては小さく無ければならないという付帯条件が付く.この付帯条件についての定量的な評価を一応は行うことができたが,まだまだ粗い評価に留まっている.これをどれだけ精密化できるかが今後の課題である.また本来の正則写像の変分公式の応用について目標とする所のBloch函数について,歪曲定理と増大度の評価についての結果を得ている.
ブドウ球菌スーパー抗原毒素の生体内環境に適応した病原戦略の解明

1.宿主とTSST-1の相互作用を明らかにするために、TSST-1産生及び非産生YFP発光黄色ブドウ球菌を作製し、各YFP黄色ブドウ球菌をマウスに経静脈感染させ脾臓・肝臓・腎臓からsingle cellを分離し、gene profile分析を行う実験を計画したが、本学のflow cytometryに感染材料を使用する許可が得られず、実験が実施できなかった。また、データベースにおけるこれらの細胞のgene profileの有効性が高くなかったために、材料をマウスからヒト末梢血単核球(PBMC)に切り替えることとした。本学倫理委員会の許可を得、健常人ボランティアから得たPBMCをTSST-1で刺激し、single cellレベルでの遺伝子発現(オートファジー関連遺伝子群、炎症性関連遺伝子群)の解析を進めている。2.TSST-1がオートファゴソームの形成を抑制し、その関連分子としてseptin7を同定した。Septin7全身ノックアウトマウスは胎生致死であるため、ケラチノサイト特異的コンディショナルマウスを作製し、黄色ブドウ球菌の細胞内寄生による持続感染におけるオートファジーの関与を明らかにするため、flox/floxマウスを得るべく繁殖をしているが、実験に供するまでには至っていない。そこで、先にケラチノサイト特異的Atg5 flox/floxマウスを作製し、黄色ブドウ球菌を皮膚感染させたところ、野生マウスに比べ菌の排除能が低下していた。この結果は、オートファジー欠損あるいはオートファジー抑制状態では、黄色ブドウ球菌の細胞内持続感染が促進されることを示唆している。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。1. TSST-1をマウスの子宮頚管内に投与し、全身への分布を観察したところ、投与24時間後に子宮、脾臓、血清中に高濃度のTSST-1が検出された。この結果は、子宮内のTSST-1が全身を循環する可能性を示唆している。一方、TSST-1のスーパー抗原活性発現を調べるために、TSST-1あるいはスーパー抗原活性欠損TSST-1変異タンパク質(mTSST-1)を子宮内投与し、血清と脾臓抽出液中のIFN-gammaを測定したところ、投与24時間後にTSST-1、mTSST-1ともに血清と脾臓で検出されたが、IFN-gammaはTSST-1投与群のみで検出された。脾臓中のIFN-gammaは投与48時間後まで検出された。2.Staphylococcus aureus 834株(wild-type)あるいはTSST-1ノックアウト株(Δtst)をBALB/cマウスの子宮頚管内に感染させたところ、子宮におけるIFN-gammaはwild-type及びΔtst感染でともに検出されたが、脾臓ではwild-typeのみで検出された。一方、wild-type及びΔtstともに子宮内感染にとどまり他臓器への拡大は認められなかった。これらの結果は、子宮におけるIFN-gamma応答は、TSST-1ではなく菌体が主体であるのに対し、全身では菌体ではなく産生されたTSST-1によるIFN-gamma応答であることを示唆している。3.S. aureus 834株(wild-type)あるいはTSST-1ノックアウト株(Δtst)を経静脈感染させ、脾臓、肝臓、腎臓中の生菌数を経時的に追跡すると、感染早期(3日)では、wild-typeの生菌数が勝っていたが、持続感染期(20日)では、wild-typeとΔtstの生菌数が同等であった。これまでの知見と総合すると、TSST-1によりオートファジーが抑制されることにより、細胞外の菌は効率よく排除されていることが考えられた。研究計画の各項目について、データが得られている。1.TSST-1のスーパー抗原活性の影響を排除するため、スーパー抗原欠損TSST-1 (mTSST-1)遺伝子を組み換えたStaphylococcus aureusとTSST-1非産生株をマウスの子宮頚管に感染させた。子宮の生菌数はmTSST-1遺伝子組換え菌で多く、子宮腔付近の上皮において菌の局在と組織傷害が顕著であった。また、子宮におけるオートファジーの発現強度はmTSST-1遺伝子組換え菌で低かった。これらの結果は、mTSST-1はスーパー抗原活性非依存性にオートファジーを抑制し、子宮における細胞外菌の生育を促進していることを示唆している。2.TSST-1以外の病原因子の関与を排除するため、S. aureus非病原株(RN4220株)にTSST-1遺伝子を組み換えた株を作製し、マウスに経静脈感染させた。感染5日目の脾臓、肝臓、腎臓中の生菌数を評価すると、RN4220株感染と差が認められなかった。両株の比較実験はさらに詳細な検討が必要である。3.本研究者らがオートファジーの抑制を示す分子を発見し、その遺伝子欠損マウスを作製したが胎生致死であったため、改めてコンディショナルマウスを作製し、現在継代により皮膚特異的欠損ホモマウスのスクリーニングを行っている。一方、オートファジー関連分子の皮膚特異的コンディショナルノックマウスを作製し、欠損ホモマウスのスクリーニングを行っている。平成29年度に予定していた実験は順調に進み、データが得られている。1.宿主とTSST-1の相互作用を明らかにするために、TSST-

1産生及び非産生YFP発光黄色ブドウ球菌を作製し、各YFP黄色ブドウ球菌をマウスに経静脈感染させ脾臓・肝臓・腎臓からsingle cellを分離し、gene profile分析を行う実験を計画したが、本学のflow cytometryに感染材料を使用する許可が得られず、実験が実施できなかった。また、データベースにおけるこれらの細胞のgene profileの有効性が高くなかったために、材料をマウスからヒト末梢血単核球(PBMC)に切り替えることとした。本学倫理委員会の許可を得、健常人ボランティアから得たPBMCをTSST-1で刺激し、single cellレベルでの遺伝子発現(オートファジー関連遺伝子群、炎症性関連遺伝子群)の解析を進めている。2.TSST-1がオートファゴソームの形成を抑制し、その関連分子としてseptin7を同定した。Septin7全身ノックアウトマウスは胎生致死であるため、ケラチノサイト特異的コンディショナルマウスを作製し、黄色ブドウ球菌の細胞内寄生による持続感染におけるオートファジーの関与を明らかにするため、flox/floxマウスを得るべく繁殖をしているが、実験に供するまでには至っていない。そこで、先にケラチノサイト特異的Atg5 flox/floxマウスを作製し、黄色ブドウ球菌を皮膚感染させたところ、野生マウスに比べ菌の排除能が低下していた。この結果は、オートファジー欠損あるいはオートファジー抑制状態では、黄色ブドウ球菌の細胞内持続感染が促進されることを示唆している。Septin-7遺伝子欠損マウスの作製については、コンディショナルノックアウトマウス作製に切り替えることによって、計画の推進が可能であると考えている。現在スクリーニングをしているSeptin-7皮膚コンディショナルノックアウトマウス及びAtg5皮膚コンディショナルノックアウトマウスの早期使用を目指し、黄色ブドウ球菌持続感染におけるオートファジーの役割を解明する一方、子宮頚管感染による毒素性ショック症候群の発症とTSST-1の関係性を生体レベルで立証したい。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
環境に応答した葉緑体mRNA翻訳制御機構の研究

葉緑体では光合成が行われており,光エネルギーを利用して,有機物の合成や酸素発生を行う.本研究では,その反応に必要なタンパク質合成(翻訳)がどのように行われ,どのように環境に応答した調節を受けるのかを明らかにする目的で,いくつかの遺伝子について解析を行った.その結果,翻訳に重要なmRNA上の配列やmRNAのプロセシングの重要性を明らかにした.また,翻訳共役についても解析した.さらに,翻訳を制御する可能性のあるタンパク質を同定した.葉緑体では光合成が行われており,光エネルギーを利用して,有機物の合成や酸素発生を行う.本研究では,その反応に必要なタンパク質合成(翻訳)がどのように行われ,どのように環境に応答した調節を受けるのかを明らかにする目的で,いくつかの遺伝子について解析を行った.その結果,翻訳に重要なmRNA上の配列やmRNAのプロセシングの重要性を明らかにした.また,翻訳共役についても解析した.さらに,翻訳を制御する可能性のあるタンパク質を同定した.タバコ葉緑体ゲノムには約80種類のタンパク質をコードする遺伝子があり,それらは葉緑体中で発現する.葉緑体遺伝子発現は,光合成などに関与する機能複合体の分子構築に必須の過程であり,光などの周囲の環境に依存した制御を受けることが知られている.しかし,最も重要な過程である翻訳(タンパク質合成)制御のメカニズムについては不明な点が多い.葉緑体翻訳制御では,mRNA上の特別な領域とそこに結合する制御タンパク質(トランス因子)が重要な役割を果たしていると考えらている。その同定を目指して,平成20年度には以下の解析を行った.1,タバコ葉緑体に由来する無細胞翻訳系を用いて,psbAおよびpsbDについて,mRNA上のどの領域が翻訳開始に最低限必要であるかを詳細に解析した.その結果,両者で全く異なる翻訳制御(制御の有無も含めて)が行われている可能性を示す結果を得た.2.トランス因子の精製にRNAをリガンドとしたアフィニティー精製法が有効であるかを調べるために, bacL, psbNなどのいくつかの異なるRNAを用いて,それらに結合するタンパク質のアフィニティー精製を行った.その結果,用いたRNAの種類によって,回収されるタンパク質の種類が異なっていた.精製の過程でのそれらの挙動はゲルシフト法などの方法でモニターした結果と一致していた.この結果は,各RNAに特異的に結合するタンパク質の回収がうまく行われていることを示すと考えられ,アフィニティー精製法の有効性が確認できた.3.葉緑体の遺伝子発現が翻訳の段階でどのように光環境などに制御されているかを調べるために,in vitro翻訳系を用いた解析を行った.その結果,翻訳が反応液のレドックス状態に強く依存することが確認できた.このことは,翻訳に必要なタンパク質の活性が光合成電子伝達反応を介して調節される可能性を示していると思われる.葉緑体遺伝子発現は,光合成などに関与する機能複合体の分子構築に必須の過程であり,主に翻訳の段階で,光などの周囲の環境に応答した制御を受けることが知られている.しかし,その詳細なメカニズムには不明な点が多い.そこで,本研究では葉緑体翻訳開始機構を詳細に解析した.まず,タバコ葉緑体in vitro翻訳系を用いて,psaAおよびycf4 mRNAs上の翻訳開始に必要な領域を決定した.その結果,psaAの翻訳開始はSD様配列にほぼ完全に依存し,それを含む短い領域があれば効率よく翻訳が起こることが分かった.このことは,psaAの翻訳が開始よりむしろそれ以降の段階で制御されている可能性を示唆している.一方,SD様配列を持たないycf4の翻訳開始に必要なシス配列が比較的開始コドン近くにあることが確認できた.この情報は,翻訳制御を担うトランス因子の精製の際に役立つものと考えられる.上記の遺伝子以外に,SD様配列のないclpP1の翻訳開始機構の解析も行った.その結果,clpP1の翻訳開始を促す正のシス配列が開始コドンの数十塩基上流にあり,開始コドンのすぐ上流には翻訳を抑制する負の制御配列が存在することを示す証拠を得た.このことは,葉緑体タンパク質の品質管理に関わるclpP1の翻訳制御のメカニズムがかなり複雑であることを示唆している.さらに,psbA, psbNおよびrps2などの翻訳開始に関与すると思われるトランス因子の候補をいくつか同定した.rps2の場合,別の生物種の翻訳に関与することが明らかになっているタンパク質のオーソログが含まれていた.一方,psbAおよびpsbNの場合,トランス因子の候補として核酸結合能を有する代謝系タンパク質が含まれていた.その生理活性はレドックス状態に依存するため,これが環境に応答した翻訳制御に関与しているのかもしれない.葉緑体遺伝子発現は,光合成などに関与する機能複合体の分子構築に必須の過程であり,主に翻訳の段階で,光などの周囲の環境に応答した制御を受けている.そのメカニズムの解明に向け,種々の葉緑体mRNAの翻訳開始機構を解析した.前年度にrps2 mRNAの翻訳においてS1タンパク質の関与を示唆する結果を得ていたため,その遺伝子をクローニングし,大腸菌で発現・精製を行った.このタンパク質はrps2 5'-UTRと強く相互作用したため,rps2の翻訳開始に関わっていると思われる.タンパク質コード領域が重なりあった二組のmRNAsの翻訳開始機構を解析した.ATP合成酵素のβ,ε

サブユニットをコードするatpB-atpE mRNAでは,これまでatpEの翻訳がatpBの翻訳に強く依存すると考えられてきたが,実際にはそうでないことを証明した.atpE mRNAの翻訳は自身の翻訳制御領域に強く依存していた.一方,光化学系IIのD2,CP43サブユニットをコードするpsbD-psbC mRNAでは,psbCの翻訳がpsbDの翻訳に強く依存していた.これらの結果は,機能複合体の分子構築とその損傷と修復の過程を理解する上での重要な情報になると思われる.psbD, psbCおよびリボソームS2タンパク質をコードするrps2 mRNAsの翻訳開始効率が,5'-非翻訳領域(5'-UTR)のプロセシングにより大幅に上昇することを明らかにした.rpS2では,プロセシングによる5'-UTRの二次構造の変化が翻訳開始を促進すると考えられる.このことは,RNAプロセシングが翻訳開始複合体の形成において重要な役割を果たすことを示している.植物に必須のタンパク質分解酵素のサブユニットをコードするClpP1 mRNAの翻訳開始でも5'-UTRの二次構造が大きく影響していた.その変換に関与する因子の同定は今後の課題である.
マラリア原虫配偶子認識・膜融合機構の解明とその普遍性の検証

これまで本研究課題において明らかにしたことは、マラリア原虫の雄側受精因子であるGCS1が動植物に共通した受精因子であり、受精因子として機能するためにはGCS1が雄原虫細胞膜上に結合していることが必須であることである。このことは、メス側に存在する受容体様分子の存在を示唆する。これらを背景として、本年年度はGCS1受容体様分子を含めた受精因子の探索を行った。マラリア原虫生殖母体特異的に発現している遺伝子をマイクロアレイにより抽出し、その中から特に1)細胞膜タンパク、2)細胞内タンパクをコードしている遺伝子を候補分子として選択した。これら候補遺伝子を欠損した原虫株の受精能を調べることで、受精因子をコードする遺伝子を探索した。その結果、マラリア原虫の性分化は正常なものの、a)雄原虫の性成熟(鞭毛放出)に必須な因子、b)受精に必要な因子を同定した。b)は、そのアミノ酸配列から核タンパクをコードしていることが推察される。従って、この遺伝子産物自体は受精因子ではなく、転写因子複合体の一部として機能すると推察される。この仮説によれば、標的遺伝子の中には受精因子が含まれることが期待できる。現在、Chip Assayにより標的遺伝子を探索している。これまでのマラリア原虫の生物学的ツールは逆遺伝学的手法が主流であり、順遺伝学は未開発の状態である。そこで、ゲノムワイドに高頻度で突然変異が発生するマラリア原虫(ミューテーター)を作成し、これが順遺伝学的ツールとして使用できるかを検証した。すなわちミューテーターを継代感染を繰り返すことで原虫ゲノムにおける高頻度突然変異の有無を次世代シークエンサーを用いて解析した。その結果、野生株よりも100倍程度高い変異発生率を示した。以上から、受精現象を含むマラリア原虫生物の研究ツールが確立したと結論した。本年度は、GCS1タンパク部分欠損ネズミマラリア原虫株を複数種類作製し、それらの受精能を精査することにより、GCS1タンパクの「受精に必須な領域、および必須ではない領域」を調べた。GCS1は細胞外領域:膜貫通領域:細胞内領域の3つの領域から構成されている。各種GCS1部分欠損原虫株の受精能を調べた結果、1)細胞内領域は受精には一切必要ないこと。2)膜貫通領域は必須であること、3)細胞外領域のsignal peptideは必須であること、4)細胞外領域のほとんどの領域は欠損することで受精能が著しく低下すること、を明らかにした。つまり、GCS1は細胞膜に結合した状態で膜の外側に存在することが必須であることを明らかにした。ところで、植物アラビドプシスGCS1について同様の研究をアメリカのグループが行い論文を報告しているが(Wong et al.,PLoS Genetics, 2010)、彼らは「細胞内領域は受精に必須である」ことを主張し、マラリア原虫GCS1を用いた我々の研究結果と異なっていた。そこで、我々のグループは独自に同様な実験をアラビドプシスを用いて行ったところ、アラビドプシスGCS1の細胞内領域は受精に一切必要ない結果を得た。このことは、マラリア原虫と植物という全く異なる生物において、類似した作用機構類を通してGCS1がこれら生物の受精を制御していることを示唆する。(Mori et al.,PLoS One, 2010).さらなる動植物に共通した新規受精因子探索を、本学術領域研究グループ員との共同研究により推進している。
光学活性2-アミノエチルスルフィド類の簡便合成法の開発とその応用

2-アミノエチルスルフィド類は,有機合成の重要な中間体としてしばしば用いられ,またその光学活性体は有機金属化合物のカルボニル化合物に対する不斉付加反応において有用なキラルリガンドとして働くことも報告されている.2-アミノエチルスルフィド類の最も簡便な合成法としてはアジリジンとチオールを反応させる方法が知られているが,アジリジンは発癌性が指摘されているため現在市販されておらず,その他の方法も複数の工程数を必要とする.申請者らは,2-オキサゾリジノンにチオラートアニオンを反応させると2-アミノエチルスルフィドが高収率で一挙に得られることを見出した.したがって本反応は,2-オキサゾリジノンがアジリジン等価体として働く有用な反応であるといえる.本研究で申請者は本反応を詳細に検討し,種々の光学活性2-オキサゾリジノン類にチオフェノール類を反応させるとそれぞれ対応する光学活性2-アミノエチルスルフィド類が収率良く得られることを明らかとした.種々の2-オキサゾリジノンは市販されており,またその合成も容易であるため,本法は2-アミノエチルスルフィド類の簡便な合成法であるといえる.また申請者らはラジカル環化反応に関する研究を行っているが,ラジカル前駆体であるN-(o-ブロモベンジル)エナミド類の合成に本法で合成した2-アミノエチルスルフィド類が有効利用できた.本法で得られる種々の光学活性2-アミノエチルスルフィド類のキラルリガンドとしての利用,本反応を用いる光学活性な含硫含窒素複素環化合物合成法の医薬品創製への応用が期待される.2-アミノエチルスルフィド類は、有機合成の重要な中間体としてしばしば用いられ、またその光学活性体は有機金属化合物のカルボニル化合物に対する不斉付加反応において有用なキラルリガンドとして働くことも報告されている。2-アミノエチルスルフィド類の最も簡便な合成法としてはアジりジンとチオールを反応させる方法が知られているが、アジりジンは発癌性が指摘されているため現在市販されておらず、その他の方法も複数の工程数を必要とする。申請者らは2-オキサゾリジノンにチオラートアニオンを反応させると2-アミノエチルスルフィドが高収率で一挙に得られることを見出した。本研究で申請者は、種々の光学活性2-オキサゾリジノン類にチオフェノールを反応させるとそれぞれ対応する光学活性2-アミノエチルスルフィド類が収率良く得られることを明らかとし、本法が簡便でかつ一般性の高い合成法であることを示した。また光学活性2-オキサゾリジノンにチオグリコール酸エチルを反応させると光学活性なチアジノンが、チオサリチル酸メチルを反応させると光学活性なペンゾチアゼピノンがそれぞれ得られ、本法が光学活性な含硫含窒素複素環化合物の合成に応用できることも明らかとした。さらにL-プロリノールから一工程で合成できる光学活性な二環性オキサゾリジノンにチオグリコール酸エチルを反応させると対応する光学活性なチアジノンが得られ、このチアジノンからipalbidineの合成を達成し、本法がアルカロイド合成に応用できることも明らかとした。2-アミノエチルスルフィド類は,有機合成の重要な中間体としてしばしば用いられ,またその光学活性体は有機金属化合物のカルボニル化合物に対する不斉付加反応において有用なキラルリガンドとして働くことも報告されている.2-アミノエチルスルフィド類の最も簡便な合成法としてはアジリジンとチオールを反応させる方法が知られているが,アジリジンは発癌性が指摘されているため現在市販されておらず,その他の方法も複数の工程数を必要とする.申請者らは,2-オキサゾリジノンにチオラートアニオンを反応させると2-アミノエチルスルフィドが高収率で一挙に得られることを見出した.したがって本反応は,2-オキサゾリジノンがアジリジン等価体として働く有用な反応であるといえる.本研究で申請者は本反応を詳細に検討し,種々の光学活性2-オキサゾリジノン類にチオフェノール類を反応させるとそれぞれ対応する光学活性2-アミノエチルスルフィド類が収率良く得られることを明らかとした.種々の2-オキサゾリジノンは市販されており,またその合成も容易であるため,本法は2-アミノエチルスルフィド類の簡便な合成法であるといえる.また申請者らはラジカル環化反応に関する研究を行っているが,ラジカル前駆体であるN-(o-ブロモベンジル)エナミド類の合成に本法で合成した2-アミノエチルスルフィド類が有効利用できた.本法で得られる種々の光学活性2-アミノエチルスルフィド類のキラルリガンドとしての利用,本反応を用いる光学活性な含硫含窒素複素環化合物合成法の医薬品創製への応用が期待される.
教師教育のための「かかわり学び創造プログラム」の開発とその有効性の検討

本研究は、教師教育のための「かかわり学び創造プログラム」の開発を目的にしている。理論的には「からだ気づき」思想に依拠し、実践的には「からだ気づき」実習を多くの教育現場に導入する方法をとった。3年間にわたり、「教材開発」「授業実践」「映像教材」の妥当性を実証的に研究した。具体的には次に示す4点から整理した。(1)「かかわり学び創造プログラム」の開発は「からだ気づき」思想に依拠して開発された教材を、乳幼児から教員に至るまで実践した上で、多くの受講者にとって有効な実習を選別した。(2)それらの実習の教授方法と内容の妥当性については、中学生や大学生に実践し、自他の心身を肯定的に受容できる効果が確認された。また、教授方法としては「教師のインストラクション技術」「教師の相互作用」「安全で快適な授業の場づくり」が際立つとともに、他者とのかかわりを重視していることが特徴的であった。(3)「かかわり学び創造プログラム」を実現する為には「参画型授業」の方法が有効であることが明らかになった。(4)「映像教材」として選別された11の実習(ねらい・やり方・実践場面)を教員に視聴してもらい、映像プログラムの妥当性を検証した。その結果、「からだ気づき」実習の体験の有無にかかわらず、指導できるとした教員が多くいたことから、教師にとって具体的な授業方法や内容の支援に有効であることが明らかになった。今後の課題としては、さらなる映像教材の作成が必要なこと。その留意点としては、各発達段階における授業展開揚面や本研究者以外の指導者による授業提示なども加味する必要があること、などが考えられる。「かかわり学び創造プログラム」の開発は、乳幼児(川崎市母親学級)、小学校(横浜国立大学附属鎌倉小学校・山形大学附属小学校・旭川市立東光小学校)、中学校(横浜国立大学附属鎌倉中学校・横浜ふた葉中学校)、高等学校(埼玉県立川口青陵高校)、大学(横浜国立大学・関西大学・藤沢市立看護専門学校・川崎市立看護短期大学)、リカレント教育(神奈川県立保健福祉大学実践教育センター)、からだ気づき教育研究会ワークショップ(横浜ふれあえ場2005・湘南ふれあえ場2005)において、プログラムの検証を行った。その結果、(1)教師のインストラクション技術、(2)教師の相互作用技術、(3)安全で快適な授業の場づくり、(4)優れた教材(典型的ボディワークモデル)が、プログラム開発並びに映像教材作成にあたって、重要な視点として明かになった。また、優れた教材の映像化を試みるために、人間の原初的な感覚が覚醒される「ふれる」を重視した典型教材とした実習「与えること・受け取ること」と、「ひと・もの」との関係性を重視する典型教材とした実習「新聞紙」を試作した。その映像を、「からだ気づき教育研究会」主宰の明日香ワークショップ(平成18年3月2123日)に参加した大学教員(青山学院大学・横浜国立大学・関西大学・三重大学)、臨床心理士(国際リラクゼーションセラピー協会・ホリスティック心理教育研究所・Center of East-West Dialogue)に視聴させ、問題点や課題を明かにした。それらの専門家らの指摘を踏まえて、再度映像を試作中である。今後は、優れた教材の映像化をさらに図り、教員養成系大学並びに現職教育の研修プログラムとして提示していく。「かかわり学び創造プログラム」の開発は、平成17年度に引き続き、乳幼児(旭川市トーマスチャイルドハウス)、小学校(横浜国立大学附属鎌倉小学校・徳島市立中野島小学校)、中学校(横浜ふた葉中学校)、大学(横浜国立大学・関西大学・藤沢市立看護専門学校・川崎市立看護短期大学)、リカレント教育(埼玉県養護教諭研修会・神奈川県立保健福祉大学実践教育センター)、からだ気づき教育研究会ワークショップ(横浜ふれあえ場2006、新潟ニュー・カウンセリングワークショップ、明日香村ふれあえ場)において、プログラムの検証を行った。

その結果、(1)教師のインストラクション技術、(2)教師の相互作用技術、(3)安全で快適な授業の場づくり、(4)優れた教材(典型的ボディワークモデル)が、プログラム開発並びに映像教材作成にあたって、重要な視点であることが、昨年度と同様明かになった。また、優れた教材の映像化を試みるために、人間の原初的な感覚が覚醒される「ふれる」を重視した典型教材とした実習「与えること・受け取ること」と、「ひと・もの」との関係性を重視する典型教材とした実習「新聞紙」、ならびに世界の三大ボディワークのひとつであるボディ・マインド・センタリングの手法を援用した「背骨探索」を試作した。その映像を大学教員に視聴させ、問題点や課題を明かにした。それらの専門家らの指摘を踏まえて、再度映像を試作中である。さらに、典型教材の「自然探索」「卵は立つ?」を大学生並びに、看護のリカレント教育関係者に参画型の授業で実施し、教材の成果をラベルワークを使って検証した。今後は、優れた教材の映像化をさらに図り、教員養成系大学並びに現職教育の研修プログラムとして提示していく。「かかわり学び創造プログラム」の開発は、平成18年度に引き続き、小学校(横浜国立大学附属鎌倉小学校・徳島市佐古小学校)、中学校(横浜国立大学附属鎌倉中学校),特別支援学校(横浜国立大学附属特別支援学校高等部)、大学(横浜国立大学・東邦大学・日本赤十字秋田短期大学)、リカレント教育(藤沢市教育文化センター、青森県教育センター)、からだ気づき教育研究会ワークショップ(横浜ふれあえ場、新潟ニュー・カウンセリングワークショップ、コンタクトインプロビゼーション、明日香村ふれあえ場)においてプログラムの検証を行った。その結果、プログラム開発並びに映像教材作成にあたって、(1)教師の教授技術、(2)安全で快適な授業の場づくり、(3)優れた教材(典型的なボディワークモデル)が,重要な視点であることが明確になった。これらの視点に基づき11個の典型教材を選定し、それらの映像化を行い、教員(教員養成大学の学生を含む)に対して、映像の妥当性の検証を質問紙調査法により行った。その結果、学生並びに教員において、映像教材(DVD)の有効性が検証されるとともに、課題も明らかになった。本研究は、平成17年度から平成19年度の3年間にわたる実証研究を実施してきた。研究は3つの視点である、教材開発、授業実践、教材の提示(DVD作成)の妥当性を検証する形でおこなったが、教師にとっての具体的な授業方法や内容の支援に有効であることが明らかになった。今後は、教材提示のみならず、DVD作成にあたり、各発達段階における実際の授業展開場面の挿入や、本研究者以外の指導者による授業提示などが課題として残った。