hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
独自のin vivo部位特異的遺伝子導入法による、コンディショナル発現系の開発

本研究計画では、申請者が開発したターゲットトランスジェニック(Tg)マウス作製法(PITT法)の有用性、汎用性の向上を目指し、1)組織特異的プロモーターの使用と有用性の証明、2)Dre-rox組換え系への応用、3)floxedコンストラクトを挿入可能とする新たな種マウス作製、4)誘導遺伝子発現系の構築、を実行し、技術的可能性を評価すると同時に、学術的研究に有用なマウスリソースの開発を行った。本研究計画では、申請者が開発したターゲットトランスジェニック(Tg)マウス作製法(PITT法)について、1)組織特異的プロモーターの使用、2)Dre-rox組換え系への応用、3)floxedコンストラクトの挿入系の確立、4)誘導遺伝子発現系の構築、を実行し、技術的可能性を評価すると同時に、学術的研究に有用なマウスリソースの開発を行うことを目指した。以下が最終年度までの結果である。1)、2)腎臓タコ足細胞での遺伝子発現を目的としたNephrinプロモーター、脳神経系での発現を目的としたThy-1プロモーターのTgマウス作製を行い、共に目的のTgマウスを得ることに成功した。NephrinプロモーターTgマウスの解析からは、Rosa26座位における組織特異的プロモーターの有用性を明らかにした。Thy-1プロモーターではDre組換え酵素を発現させたが、実際に個体内でDre-rox系が働くことも確認できた。3)本研究期間内に新たな種マウスを作製したが、これはCre-loxPに加えφC31integrase系も利用できるように構築されており、floxedコンストラクトが挿入可能となっている。φC31系が動くことは既にin vivo実験で確認済みである。4)哺乳類Kox1遺伝子のKRABリプレッサードメインを用いたドキシサイクリン誘導系の確立を進め、細胞レベルでの実験による検証後、上述した新たな種マウスを利用して誘導系遺伝子発現Tgマウスを作製した。現在その検証を個体レベルで行っている。初年度の進行がやや遅れたことから、現時点で当初の計画の8割程度が達成できた状況ではあるが、上述した結果に加え、研究期間内にPITT法の大幅な挿入効率改善にも成功している。引き続き研究を進めて各種リソースを整備するとともに、本研究成果を多くの研究者に還元していきたいと考えている。当該年度は、以下の3点に関して進めた。1)遺伝子導入効率の改善:これまでDNAで供給していたCre組換え酵素をmRNAで供給することにより、より効率良く目的遺伝子をゲノムに挿入できる(従来の効率である4-5%以上)可能性がある。そこで今回、Cre mRNA(コドン最適化されたiCreを使用)を合成し、既に動くことが分かっているドナーベクターと共に受精卵に顕微注入した。その結果、11-45ng/ulの濃度のmRNAを注入した場合は胚が全く得られず、5ng/ulで顕微注入した時のみ、わずか2個体の胚を回収することができた。そのうち1個体(50%)が目的の組換え体であることが分かった。mRNAを用いることにより効率改善が期待される結果が得られたものの、胚の致死率が予想以上に高かった。2)時期・組織特異的な遺伝子発現系の確立:哺乳類Kox1遺伝子のKRABリプレッサードメインを用いたドキシサイクリンによる遺伝子発現誘導系の確立を目指した。まず、そのための発現コンストラクトを作製し、細胞レベルで検証を行うために、piggyBacトランスポゾンシステムを利用してES細胞へ導入した。得られたクローンの解析を行った結果、1ug/mlのドキシサイクリンで目的遺伝子発現が誘導できること、及び遺伝子ノックダウンにも応用可能であることが分かった。なお、組織特異的プロモーターを用いた遺伝子発現系のPITT法への応用も進めつつある(新たに作製したコンストラクトを用い、現在Tgマウスを作製中である)。3)Dre-rox系による、コンディショナル発現系の開発:Dre組換え酵素依存的に緑(eGFP)から赤(tdTomato)に蛍光が変わるDreレポーターマウスをPITT法で作製した。そこから得た受精卵の2細胞期受精卵の片方の細胞核にDre発現ベクターを顕微注入し、赤緑蛍光モザイク個体になることを確認した。当初の計画より進行がやや遅れている理由は以下の2つによる。1)コンストラクト作製に時間を費やしたこと、及び2)顕微注入は学内の研究支援センターを利用して行っているが、2011年度中後半は予想に反して他の利用者のマウス作製依頼が集中してしまったため、顕微注入予定を遅らせざるを得なかったこと、による。特にTg作製法自体の技術的な理由ではないため、次年度は本研究計画を継続し結果を出していく予定である。前年度に、学内の研究支援センターを利用して行う予定の顕微注入について、他の利用者のマウス作製依頼が集中して予定が遅れてしまったので、2012年度に行うこととする。それを含め、以下の3点について研究を進める予定である。

1)Cre mRNA導入による遺伝子導入効率の改善:当該年度の実験では、Cre mRNA濃度が適切でなかったためか胚の致死率が予想以上に高かったため、mRNAの至適濃度を検討していきたい。それにより、10%以上(CreをDNAとして注入していた場合の2倍以上)の挿入効率を達成できるようにしたい。2)コンディショナルアリル(floxedアリル)の挿入:当初は、loxP配列をメチル化して挿入時のfloxedカセットの欠失を抑制することによって、floxedアリル挿入を計画していたが、最近の報告から別の酵素(PhiC31インテグラーゼ)を用いて部位特異的遺伝子挿入が可能であると分かったため、よりシンプルなPhiC31の系を我々のシステムに付加することとする。その為に、変異loxP配列の他にattP配列も有する種マウス(目印がゲノムに挿入されたマウス)を新たに作製してfloxedアリルの挿入法を確立する。新たな種マウスは既にキメラマウスまで作製されており、今後、その実用性を検討していく。3)時期・組織特異的な遺伝子発現系の確立:Nephrin、及びThy1プロモーターを用いてeGFP、あるいはDre酵素を発現するTgマウスをPITT法で作製し、その組織特異的遺伝子発現パターンを検証する。Dre発現マウスに関しては、Dreレポーターマウスと交配して得られたダブルTgマウスを用いる。また、ドキシサイクリンによる遺伝子発現誘導型コンストラクトのTgマウスも作製して、in vivoでの発現誘導能を検証する。「次年度使用額」分については、進行が遅れていたTgマウス(組織特異的プロモーターを用いたもの)の作製に使用する。また解析を効率よく進め、研究が遅れている分を補うために、実験補助員を雇用する予定である。2012年度の直接経費を用い、コンストラクトを作製する際に大腸菌の培養を行うために必要なインキュベーターを購入する。また、マウスへの顕微注入、コンストラクトの塩基配列の確認等については、学内の研究支援センターを利用して行うため、それらに要する費用に研究費を用いる。また、その解析には実験補助員に手伝ってもらうが、「次年度使用額」で不足する謝金分を2012年度の直接経費から補う。得られた成果は、国内外の学会で発表すると同時に英文原著論文として投稿する予定であり、それらに要する費用として研究費を用いる。
重症身障児、神経障害児における胃食道逆流症および腹腔鏡下噴門形成術に関する検討

大分県下の障害児施設と連携し、各施設で療育中の重症身障児の中で胃食道逆流症(GER)の疑われる症例に対し、臨床症状、管理状況の調査およびGERの検査による評価を行った。スクリーニングとしてpHモニタリングを、主に当該施設の通常の管理下にて行い、大分医大での解析後、さらに疑診例に対し消化管造影検査、内圧検査を行った。治療方針については合同のカンファレンスにて決定した。2年間の検討で2施設の2例がpH<4の時間率:15.8%(13歳男性)および11.8%(41歳男性)と手術適応に該当し腹腔鏡下噴門形成術を行った。また他の2例に単独の胃瘻造設術を行った。噴門形成手術に際し、強度の脊椎変形による体型および噴門部の位置異常からワーキングスペースが狭く鉗子類の相互干渉が問題となり、手術体位とtrocarの部位設定に工夫を要した。両者とも肺合併症を有し全身状態も不良であったが、通常の8-10mmHgの気腹下で周術期の合併症は見られず、各種モニタリングにも異常なく、術後の早期、中期のQOLも良好であった。療育者のQOLも良好となり、訪問による懇談、教育講演と合わせ手術療法についての理解も進んできている。今後スクリーニングを継続するとともに、長期的な視点で手術適応例、疑診例を含め各症例における病態の変化を追跡する予定である。大分県下の障害児施設への往診、懇談を行い、大分医大、恵聖母の家、および国立西別府病院の小児科医と連携し、各施設で療育中の(重症)身障児の中で胃食道逆流症(GER)の疑われる症例に対し、臨床症状、管理状況の調査およびGERの検査による評価を行った。評価の方法としては、まず科研費にて購入したpHモニタリング装置をスクリーニングとして用い、検査は主に当該施設の通常の管理下にて行い、大分医大での解析後、さらに疑診例に対し消化管造影検査、内圧検査を行った。治療方針については合同のカンファレンスにて決定することとした。これまでに手術適応症例が1例認められた。pH<4の時間率が15.8%の13歳の重症身障児例に対し精査後、協同での検討会を行い、インフォームドコンセントを得た後、腹腔鏡下噴門形成術を行った。周術期には手術侵襲に対する各種モニタリングを行った。術後の臨床的評価に加えて、定期的な患者および療育者のQOLについての評価を療育施設とともに行っている。今後長期的な視点で手術適応例、疑診例を含め各症例における病態の変化を追跡する予定である。また現在の3施設に加え,県下の他の重身児施設を含めて,精神発達遅滞児および重身児に対するGERの体系的なスクリーニングを行う予定である。
運動による免疫機能の変化.サイトカインを介する制御機構に関する研究

健康な成人を対象として運動負荷を行ないリンパ球機能、NK細胞機能、単球機能、などの免疫機能を測定すると同時に、インターロイキン、TNF、インターフェロンなどのサイトカインを分析した。この結果、運動により変化する免疫機能の内リンパ球やNK細胞活性などの変動に伴い、TNFなどのサイトカインおよびそのレセプターが変動することを示唆する成績を得た。この結果は免疫系の情報伝達物質として最も重要な役割を担っているとされるサイトカインの動態に運動が影響を与えことを反映する結果と推察され、運動による免疫系の変化の制御にサイトカインが関わっている可能性は高いと考えられた。現在、細胞培養系を用いてin vitroでの検討を進める段階にいたっている。また、近年運動との関係が注目されている活性酸素も免疫を含めた生体防御機構に関連が深い。このことから運動による免疫系の変化に及ぼす活性酸素の影響をサイトカインとの関連を考慮しつつ検討した。この結果好中球の産生する活性酸素種は急性の運動負荷では負荷直後に上昇しその後低下するなどNK細胞活性に近い変動パタ-を示すことが明らかとなった。また、長時間の有酸素運動負荷では運動終了後も数日にわたって上昇を続ける傾向を認めた。この活性酸素種の産制にも情報伝達物質が関与しているとの報告もあり、運動による免疫機能変化の機序にはサイトカインを含めた情報伝達物質の関与が強く示唆された。
視覚刺激と報酬の連合形成過程におけるサル側頭葉の情報処理機構の解明

視覚刺激と報酬の連合が形成される過程に関わる脳内の情報処理を電気生理学的手法を用いて解明することを目的としている。今回の実験では、同じパターン刺激が、その前に呈示される色刺激によって、「報酬あり」か「報酬なし」に関係づけられている。実験動物は、色刺激を記憶し、続いて呈示されるパターン刺激を見て報酬の有無を連想できる。平成24年度はマカクサルTE野と傍嗅皮質の情報処理の比較を行った。また、傍嗅皮質において、状況に応じて同じパターン刺激が呈示されていても、異なる視覚刺激の意味、すなわち「報酬の有無」を表現することが分かった。本研究により、傍嗅皮質が状況に応じて行動を変える際に重要である可能性が示唆された。本研究成果は国際一流誌であるThe Journal of Neuroscienceに掲載された。傍嗅皮質は、高次視覚野であるTE野から多くの神経線維連絡を受けている。状況に応じて異なる視覚刺激の意味を表現する処理が、傍嗅皮質あるいは傍嗅皮質以下の領域で起こっているのかどうかを調べるために、記録したTE野のニューロン活動のシグナルを傍嗅皮質のニューロン活動のシグナルと比較した。その結果、報酬の有無の情報の潜時は傍嗅皮質とTE野で同じだった。また、色刺激とパターン刺激の組み合わせの情報の潜時は、TE野よりも傍嗅皮質で先に現れた。本研究結果は、状況に応じた柔軟な視覚刺激の意味の表現が、TE野よりも下流で起こっていることを示唆している。本研究成果を学術雑誌へ投稿するために準備している。人は膨大な情報を自分にとって利用しやすいように、相互に関連付けて記憶・理解している。複数の情報を関連づける能力、"連合"は学習やコミュニケーションに重要である。本研究では、連合を形成する過程における脳の情報処理を明らかにする。連合形成過程におけるマカクサル傍嗅皮質の情報処理機構を調べるため、報酬に基づいた視覚刺激と視覚刺激の連合課題を開発した。この課題では、2つの視覚刺激、カラー刺激とパターン刺激を経時的を呈示する。カラー刺激とパターン刺激の組合せにより、課題正解後に報酬が与えられるか、あるいは無報酬となる。従って、サルは先行呈示したカラー刺激を記憶し、続いて呈示するパターン刺激を見ることで報酬あるいは無報酬を期待できる。課題を遂行中のサルの傍嗅皮質から単一ニューロン活動を記録した。各試行イベントにおけるニューロン活動を解析した結果、パターン刺激呈示期間に課題に関係する活動を示すニューロンの数が、他の試行イベントに比べて有意に多かった。また、報酬を期待するシグナルがパターン刺激呈示後から現れた。本研究成果は、傍嗅皮質が報酬に基づく視覚刺激-視覚刺激の連合に重要であることを示唆している。今後、本課題を用いて学習過程の傍嗅皮質の情報処理を調べることで、学習や記憶に関わる脳のメカニズムの解明に大きく貢献することが期待される。本研究成果を、2010年度日本神経科学大会や北米神経科学大会で発表した。包括型脳科学研究推進支援ネットワーク夏のワークショップにおける発表では若手優秀発表章を受章するなど、高い評価を得た。現在は本研究成果をまとめ、学術論文への投稿の準備中である。また、論文の執筆と平行して、傍嗅皮質と双方向に神経投射があり、報酬に基づく視覚刺激-視覚刺激の連合に重要であることが示唆されているTE野のニューロン活動を記録し、傍嗅皮質との情報処理を比較するため、データの解析を行っている。これまで、視覚刺激-視覚刺激-報酬の連合を形成後の傍嗅皮質の情報処理を調べた。課題では、2つの視覚刺激(Cue1,Cue2)を経時的に呈示した。2つの視覚刺激の組合せによってのみ、現在の試行が報酬あるいは無報酬試行かが分かる。この課題を遂行中のサルにおいて、傍嗅皮質のニューロンが、Cue2呈示期に「視覚刺激の物理的特徴の情報」、「特定の試行の情報」、「報酬期待の情報」をコードした。「報酬期待の情報」の潜時は、「視覚刺激の物理的特徴の情報」の潜時よりも遅かった。また。「特定の試行の情報」の潜時は、両方の潜時の中間の値を示した。本結果は、傍嗅皮質において「視覚刺激の物理的特徴の情報」の連合により、「特定の試行の情報」が作られ、「特定の試行の惰報」と「報酬期待の情報」の連合により、Cue2呈示期に「報酬期待の情報」を表現することを示唆する。「視覚刺激の物理的特徴の情報」は腹側視覚経路のTE野に由来していると考えられる。もし上記のような情報処理が傍嗅皮質で行われているとすれば「特定の試行の情報」と「報酬期待の情報」はTE野よりも傍嗅皮質で先に現れると考えられる。そこで平成23年度は、同課題を遂行中のサルのTE野からニューロン活動を記録し、傍嗅皮質のニューロン活動と比較した。「特定の試行の情報」と「報酬期待の情報」の潜時は、傍嗅皮質の方がTE野よりも早かった。視覚刺激-視覚刺激-報酬の連合においては、傍嗅皮質で視覚刺激の物理的特徴の情報から報酬期待の情報への変換が起こっている可能性を示唆している。これまで、内側側頭葉の記憶システムにおいては、傍嗅皮質は視覚刺激の物理的特徴の統合に機能があるとされてきた。本研究により、傍嗅皮質の記憶システムに対する寄与は視覚刺激の物理的特徴の情報処理のみでなく、視覚刺激の意味すなわち報酬期待の情報処理も寄与していることが示唆された。本研究成果を第41回北米神経科学大会で発表した。

視覚刺激と報酬の連合が形成される過程に関わる脳内の情報処理を電気生理学的手法を用いて解明することを目的としている。今回の実験では、同じパターン刺激が、その前に呈示される色刺激によって、「報酬あり」か「報酬なし」に関係づけられている。実験動物は、色刺激を記憶し、続いて呈示されるパターン刺激を見て報酬の有無を連想できる。平成24年度はマカクサルTE野と傍嗅皮質の情報処理の比較を行った。また、傍嗅皮質において、状況に応じて同じパターン刺激が呈示されていても、異なる視覚刺激の意味、すなわち「報酬の有無」を表現することが分かった。本研究により、傍嗅皮質が状況に応じて行動を変える際に重要である可能性が示唆された。本研究成果は国際一流誌であるThe Journal of Neuroscienceに掲載された。傍嗅皮質は、高次視覚野であるTE野から多くの神経線維連絡を受けている。状況に応じて異なる視覚刺激の意味を表現する処理が、傍嗅皮質あるいは傍嗅皮質以下の領域で起こっているのかどうかを調べるために、記録したTE野のニューロン活動のシグナルを傍嗅皮質のニューロン活動のシグナルと比較した。その結果、報酬の有無の情報の潜時は傍嗅皮質とTE野で同じだった。また、色刺激とパターン刺激の組み合わせの情報の潜時は、TE野よりも傍嗅皮質で先に現れた。本研究結果は、状況に応じた柔軟な視覚刺激の意味の表現が、TE野よりも下流で起こっていることを示唆している。本研究成果を学術雑誌へ投稿するために準備している。実験の過程において、予想をしていなかったデータ(「特定の試行の情報」)が得られた。本研究課題を遂行する上で、このデータが重要であると判断したため、実験データの追加、解析を行ったため。11,現在までの達成度でも記したように、本課題を遂行する上で、「特定の試行の情報」が、傍嗅皮質の情報処理の解明に重要である。そこで、「特定の試行の情報」の特性を詳細に調べる必要がある。そのため、実験データの追加、解析を行う。
周波数選択特性を有するロバストフィルタによる画像処理

平成16年度における研究成果は,主に,次に述べる3点について得られた.1.GWMフィルタの基礎的検討の推進2.DSPボードによるGWMフィルタの実時間処理の実現3.GWMフィルタを援用した雑音にロバストな領域分割手法の実現1.では,特にフィルタ荷重の設計に確率的探索手法を援用し,フィルタ荷重の準最適解の探索に関する手法を提案し,その有効性を検証した.2.では,テキサスインスツルメンツ社製TMS320DM642と呼ばれるDSP評価ボード上に,GWMフィルタを実装し,動画像のビデオ信号を入力させ,実時間でフィルタ処理を実現する研究を行った.最終的な目標である実時間リアルタイム処理は実現できなかったものの,DSPチップのハードウェアとそのアーキテクチャから生じる特性を十分に組み入れたアルゴリズムとソフトウェア開発を行い,工夫のない通常のソフトウェアによるDSP実現と比べ,40%以下の処理時間を実現した.3.では,雑音により劣化した状況下においても適切に処理ができるように,GWMフィルタにより実現されたハイパスフィルタを用いたエッジ抽出処理とWatershed処理を組み合わせた領域分割手法の検討を行った.これにより,条件の厳しい撮影環境において得られた画像に対しても安定した領域分割が実現された.応用例として,撮影したカラー画像に対して,提案手法により領域分割を行い,色覚障害者向けのカラー画像処理に利用し,本手法の有効性を確認した.平成15年度における研究成果は,主に,次に述べる3点について得られた.1)画像のエッジ抽出を実現するためのハイパス的な周波数特性を有するGWMフィルタの設計法,2)雑音で劣化した画像信号の強調処理,復元処理に最適なGWMフィルタの設計法,3)最適なゲイン値を調整するGWMフィルタ処理.1)では,フィルタ設計の具体的方法として,観測される画像信号を,フィルタ窓内の標本信号ごとに周波数特性,統計的性質に応じてクラスタリングを行い,それぞれのクラスに対して最適なフィルタ構成,および,フィルタ荷重を設計する手法を提案し,その有効性を検証した.2)では,エッジ抽出技法を利用した画像強調処理について検討した.画像の強調においては,信号の直流成分を保存しながら高周波成分を増幅する周波数特性が必要となる.そこで,ローパスフィルタとハイパスフィルタの役割を果たすGWMフィルタをそれぞれ別個に用意し,それぞれに望まれる周波数特性を有するようにフィルタ設計した.雑音除去を果たしながらボケの劣化を取り除く画像復元フィルタを実現した.画像復元においても画像強調手法と同様に,雑音除去を目的とするローパス特性を有するGWMフィルタと,ボケを取り除く逆フィルタとしての役割を果たすハイパス特性を有するGWMフィルタに分け,それぞれのフィルタを設計した後,フィルタ処理を施す処理を提案し,その有効性を検証した.3)では,出力値のゲインを最適に調整する機能を有した画像処理のためのフィルタ処理を実現し,その画像処理への有効性について検証した.平成16年度における研究成果は,主に,次に述べる3点について得られた.1.GWMフィルタの基礎的検討の推進2.DSPボードによるGWMフィルタの実時間処理の実現3.GWMフィルタを援用した雑音にロバストな領域分割手法の実現1.では,特にフィルタ荷重の設計に確率的探索手法を援用し,フィルタ荷重の準最適解の探索に関する手法を提案し,その有効性を検証した.2.では,テキサスインスツルメンツ社製TMS320DM642と呼ばれるDSP評価ボード上に,GWMフィルタを実装し,動画像のビデオ信号を入力させ,実時間でフィルタ処理を実現する研究を行った.最終的な目標である実時間リアルタイム処理は実現できなかったものの,DSPチップのハードウェアとそのアーキテクチャから生じる特性を十分に組み入れたアルゴリズムとソフトウェア開発を行い,工夫のない通常のソフトウェアによるDSP実現と比べ,40%以下の処理時間を実現した.3.では,雑音により劣化した状況下においても適切に処理ができるように,GWMフィルタにより実現されたハイパスフィルタを用いたエッジ抽出処理とWatershed処理を組み合わせた領域分割手法の検討を行った.これにより,条件の厳しい撮影環境において得られた画像に対しても安定した領域分割が実現された.応用例として,撮影したカラー画像に対して,提案手法により領域分割を行い,色覚障害者向けのカラー画像処理に利用し,本手法の有効性を確認した.
悪性リンパ腫に対する放射免疫療法の基礎的研究

悪性リンパ腫に対する放射免疫療法の基礎的検討として前年度は抗体の反応性を中心に評価した.引き続いて,本年度は抗体を放射性同位元素(以下RI)により標識法する方法を検討した.さらに,腫瘍親和性のあるRI標識薬剤がどのように腫瘍細胞に摂取され,細胞内で分布するかを検討した.マウスIgGにイットリウム-90(Y-90)およびインジウム-111(In-111)を標識する方法を検討した.通常,タンパクに金属RIを標識するにはキレート剤を介して行われる.今回,検討したキレート剤としてはisothiocyanatobenzyl ethylenediaminetetraacetic acid(SCN-Bz-EDTA)であり,まず,IgGにSCN-Bz-EDTAを結合させた.その後,RIを加えることにより標識が完成する.この場合,In-111標識ではSCN-Bz-EDTA結合IgGから未結合のキレートを除くことによってその最終的な標識率は80%を越えたが,これを除かなかった場合,その標識率は0%であった.それに対し,Y-90の場合は必ずしも未結合のキレートを除く必要はなく,除かなくても十分な標識率が達成できた.In-111標識の場合,標識率が高くても,大量のEDTAを後から加えるチャレンジテストを行うと,容易にIn-111ははずれてしまう.それに対し,Y-90標識の場合,60%前後の標識ではあるが,EDTAチャレンジでは30%程度しか遊離しなかった.腫瘍親和性を有するTc-99m-MIBIやTc-99m-tetrofosminの培養腫瘍細胞への取り込みを検討し,nigericin,ouabain及びcarbonyl cyanidem-chlorophenylhydrazoneにて前処置を加えることによる取り込みの変化を調べた.その結果,MIBIやtetrofosminでは細胞内のミトコンドリアがその集積に関与していることが示唆された.これらの所見は従来,腫瘍シンチ用剤として使用されているT1-201とは異なっていることが示された.悪性リンパ腫に対する放射免疫療法の基礎的検討としてまず用いる抗体の反応性(免疫活性度)を評価した。ヒトBリンパ腫由来の細胞株(HBL-1)を免疫源として作成されたマウスモノクローナル抗体であるFUN-1(IgG2a)を放射免疫療法に使いうる抗体として我々は選択しており,その反応性を以下の細胞ないし組織を抗原として用いることにより検討した.1)免疫原として用いたHBL-1培養細胞,2)異なるヒトBリンパ腫由来細胞株(HBL-2),3)手術により摘出されたヒト腹腔内正常リンパ節.各材料をPLP固定後、切片を作成しPAP法により反応性を評価した.なお,抗体の対照として市販のBリンパ球表面抗原の一つであるCD20を用いた。結果はFUN-1とHBL-1との反応性は非常に良好であり,1000倍希釈を行っても細胞の膜はよく染まった.それに対し,FUN-1とHBL-2の反応性は不良であり,非特異的に壊死傾向のもののみが染まった.FUN-1と正常リンパ節との反応性は、明瞭な陽性像を呈していた。対照としたCD20とHBL-1との反応性は膜において染まっており反応性が認められた。CD20とHBL-2との反応性は見られなかった。CD20と正常リンパ節との反応性は濾胞およびその周囲に認められた。以上,FUN-1はHBL-1と反応することが確認されたが、これはモノクローナル抗体作成の免疫源であることは考えると当然の結果である。ただ,正常のリンパ節とも反応したことはこの抗体がBリンパ腫に必ずしも特異的ではないということを示すものである。悪性リンパ腫に対する放射免疫療法の基礎的検討として前年度は抗体の反応性を中心に評価した.引き続いて,本年度は抗体を放射性同位元素(以下RI)により標識法する方法を検討した.さらに,腫瘍親和性のあるRI標識薬剤がどのように腫瘍細胞に摂取され,細胞内で分布するかを検討した.マウスIgGにイットリウム-90(Y-90)およびインジウム-111(In-111)を標識する方法を検討した.通常,タンパクに金属RIを標識するにはキレート剤を介して行われる.今回,検討したキレート剤としてはisothiocyanatobenzyl ethylenediaminetetraacetic acid(SCN-Bz-EDTA)であり,まず,IgGにSCN-Bz-EDTAを結合させた.その後,RIを加えることにより標識が完成する.この場合,In-111標識ではSCN-Bz-EDTA結合IgGから未結合のキレートを除くことによってその最終的な標識率は80%を越えたが,これを除かなかった場合,その標識率は0%であった.それに対し,Y-90の場合は必ずしも未結合のキレートを除く必要はなく,除かなくても十分な標識率が達成できた.In-111標識の場合,標識率が高くても,大量のEDTAを後から加えるチャレンジテストを行うと,容易にIn-111ははずれてしまう.それに対し,Y-90標識の場合,60%前後の標識ではあるが,EDTAチャレンジでは30%程度しか遊離しなかった.腫瘍親和性を有するTc-99m-MIBIやTc-99m-tetrofosminの培養腫瘍細胞への取り込みを検討し,nigericin,ouabain及びcarbonyl cyanidem-chlorophenylhydrazoneにて前処置を加えることによる取り込みの変化を調べた.

その結果,MIBIやtetrofosminでは細胞内のミトコンドリアがその集積に関与していることが示唆された.これらの所見は従来,腫瘍シンチ用剤として使用されているT1-201とは異なっていることが示された.
再処理の抽出過程における“第三相"に関する基礎的研究

1.Zr-MBP(モノブチル燐酸)系においては、zr-DBP(ジブチル燐)系に比べ、MBPの濃度がDBPの濃度の10分の1において速やかに沈殿を生成することが判明した。従って放射線による溶媒の劣化が進行するとともに加速度的に第3相形成が促進されるものとおもわれる。さらにDBPとMBPとが共存する場合には、相乗効果の存在することも認められた。2.ジルコニウム(Zr)-ジブチル燐酸(HDBP)系は第三相形成の主要原因の一つであり、DBP/Zrモル比2.5において沈澱生成量は最大となる。しかし、DBP/Zrモル比の増加と共に沈殿生成量は次第に減少し、モル比10以上になると沈殿の再溶解現象がみられる。これに反しZr-モノブチル燐酸(H_2MBP)系ではこのような再溶解現象はみられない。この原因としてZr-HDBP系沈殿はOH^-による架橋でZrが鎖状の構造をなしHDBP中で次第にこの鎖が切断されることによるものと考えられる。他方Zr-H_2MBP系の沈殿はOH^-による架橋のみならず燐酸による架橋もあって層状構造を形成しているため、再溶解現象は起らない。これらは、高分解能^<31>P-NMRの測定により確認された。(発表予定)3.高エネルギ-研究所の放射光により得られたEXAFSスペクトルを解析した結果、a)ZrO^<2+>イオンは存在しないこと、b)Zr-MBP沈殿は層間距離16Åをもつ層状構造をもつこと、C)Zr-DBP沈澱はOH_-により架橋された鎖状構造をもつこと、が確認され、X線回析やその他の測定結果とも矛盾しないことが判明した。1.ジルコニウム(Zr)-ジブチル燐酸(HDBP)系は第三相形成の原因の一つであり、DBP/Zrモル比2.5において沈澱生成量は最大となる。しかし、DBP/Zrモル比の増加と共に生成沈澱生成量は次第に減少し、モル比10以上になると沈澱の再溶解現象がみられる。2.Zr-H_2MBP系の沈澱あるいはエマルジョン生成は、Zr-HDBP系よりも一桁低濃度で起り、さらにH_2MBPとHDBPが共存する場合には協力現象がみられる。3.H_2MBPは水溶性であり、水相中に生じた沈澱あるいはエマルジョンはTBPの添加により直ちに有機相に移行する。4.Zr-H_2MBP系沈澱にはZr(MBP)_2、Zr(MBP)_2・0.5H_2MBPおよびZr(MBP)_2・H_2MBPの3種が存在する。NO_3-イオンは含まれない。5.上記3種の沈澱についてのX線回析パターンは同じで、16〓の層間距離をもった層状構造が基本となっている。6.筑波高エネルギー研究所の放射光によるEXAFSスペクトルの解析結果ならびに元素分析、赤外吸収スペクトル、X線回析パターン等の結果を考慮すると次のようになる。

燐酸で架橋されたZrが二次元的に広がった面が層状構造をとり、その層間距離16〓は、このZr面から垂直に伸びたブチル基が上下の面から互に向い合っているものとすると、ブチル基の鎖の長さの約2倍が層間距離となり、今回のZr-H_2MBP系の沈澱の基本構造をうまく説明できる。1.ジルコニウム(Zr)ージブチル燐酸(HDBP)系は第三相形成の主要原因の一つであり、DBP/Zrモル比2.5において沈澱生成量は最大となる。しかし、DBP/Zrモル比の増加と共に沈澱生成量は次第に減少し、モル比10以上になると沈澱の再溶解現象がみられる。これに反しZrーモノブチル燐酸(H_2MBP)系ではこのような再溶解現象はみられない。この原因としてZrーHDBP系沈澱はOH^ーによる架橋でZrが鎖状の構造をなしHDBP中で次第にこの鎖が切断されることによるものと考えられる。他方ZrーH_2MBP系の沈澱はOH^ーによる架橋でZrが層状構造をもつので再溶解現象は起らない。これらは、高分解能^<31>PーNMRの測定により確認された。(発表予定)2.ルテニウム(Ru)ーTBP系の抽出挙動について2)Ru(200PPm)ー抽出系では、抽出反応は見かけ上一次反応である。速度安定は4.76.8×10^<ー5>secである。3)有機相への抽出種は主としてRuNO(NO_3)(TBP)_2である。4)水相からのRuNO(NO_3)NO抽出に伴う見かけのエンタルピ-変化の,△H,は-300-250KJmol^<-1>である。即ち30°C60°Cの範囲で発熱反応である。5)プロトン核磁気共鳴吸収法により、RuNO(NO_3)_3抽出種は反磁性であることが判明した。従ってRuの酸化状態は2価であり、RuNO^<3+>の形を保持しているものと考えられる。6)Ruの元素分析は、原子吸光法により3NーHNO_3水相について行った。有機相については、有機物質による増感効果のため適用できない。7)RuーTBPの劣化生成物HDBP、系の抽出挙動についてはHDBPが水相中にも溶解するため、Ruの分析が不可能となり、調べてない。8)ZrーDBPおよびMBP系と同条件下ではRuーDBP沈澱生成はない。
生殖細胞形成機構の動物種を超えた共通原理と種特異性

(1)マウス始源生殖細胞による潜在的多能性獲得機構の解明始源生殖細胞は、生体内では卵・精子のみに分化するが体外へ取り出し特殊な培養条件下で培養すると、多能性幹細胞へ脱分化する。我々は以前、始源生殖細胞の前駆細胞であるエピブラスト様細胞に転写因子PRDM14を誘導的に発現させることで、ES細胞への脱分化を誘導できることを明らかにした。これらの結果から、始源生殖細胞で発現する他の転写因子がPRDM14による多能性誘導の潜在化に関わると考え、転写因子BLIMP1に着目した。エピブラスト様細胞にPRDM14とBLIMP1を発現させたところ、多能性細胞への脱分化が起こらず始源生殖細胞へ分化することを明らかにした。(2)PRDM14の分子系統・進化解析Prdm14は刺胞動物のゲノムからその存在が確認できる。マウスにおいては生殖系列特異的に発現しており、ES細胞の未分化性維持に必須である。そこで、PRDM14が分子進化的にマウスES細胞の未分化性維持活性を獲得した時期を推定するために、ウニ、ナメクジウオ、ゼブラフィッシュPRDM14によるマウスPRDM14の機能補完実験を行った。その結果、ナメクジウオおよびゼブラフィッシュPRDM14は、マウスPRDM14の機能を補完できたが、ウニPRDM14にその活性は観察されなかった。マウスPRDM14は転写調節因子CBFA2T2と結合して機能を発揮することが報告されている。そこで、ウニCBFA2TとウニPRDM14の共発現による機能補完実験を行ったところ、機能を補完できることが明らかとなった。また、ナメクジウオ胚におけるPrdm14の発現解析を行ったところ、生殖系列での発現は観察されず、運動ニューロンで発現していることを突き止めた。29年度が最終年度であるため、記入しない。(PRDM14の分子系統・進化解析)マウスの生殖細胞形成やES細胞の多能性維持に必須の転写因子であるPRDM14は、二胚葉動物であるイソギンチャクから存在し、後口動物に広く分布している。そこで、マウスにおいて観察される多能性維持活性が分子進化的にどの段階で獲得されたのかを解析するために、ウニ、ナメクジウオ、ゼブラフィッシュPRDM14オルソログをマウスPrdm14欠損ES細胞へ発現させ、未分化性維持実験を行った。その結果、ウニPRDM14はES細胞の未分化性維持活性を持っていなかったが、ナメクジウオPRDM14にはES細胞の未分化性維持活性が存在した。興味深いことに、ウニPRDM14はES細胞の未分化性維持活性は持たないものの、マウスPRDM14の標的遺伝子領域への結合が観察された。そこで、PRDM14複合体の構成因子であるCBFA2T2とそれぞれのオルソログとの結合を解析したところ、ウニPRDM14のみがCBFA2T2との結合活性を持たないことが明らかとなった。PRDM14とCBFA2T2との結合に関しては、X線構造解析がすでに報告されていたため、それぞれのオルソログにおけるCBFA2T2との結合表面の構造及び表面電荷を比較したところ、ウニPRDM14はCBFA2T2との結合に必要な負の電荷が低いことが明らかとなった。これらの結果から、ウニとナメクジウオの共通祖先からナメクジウオに進化する過程で、CBFA2T2との結合ポケットの構造及び電荷が変化することで、PRDM14-CBFA2T2による多能性維持活性が進化的に出現した可能性が考えられる。共同研究先のアホロートルのコロニーがウイルス感染で全滅したことと、ヒト始原生殖細胞誘導に関する学内の倫理委員会の整備に時間を要したため、アホロートルとヒト始原生殖細胞の研究が進んでいない。マウスPRDM14は転写調節因子CBFA

2T2と結合して機能を発揮することが報告されている。そこで、ウニCBFA2TとウニPRDM14の共発現による機能補完実験を行ったところ、機能を補完できることが明らかとなった。また、ナメクジウオ胚におけるPrdm14の発現解析を行ったところ、生殖系列での発現は観察されず、運動ニューロンで発現していることを突き止めた。1.アホロートル始原生殖細胞形成機構の解明アホロートル胚におけるPrdm14の発現パターンをin situ hybridizationによって解析する。また、アホロートルの胚発生及び始原生殖細胞形成におけるPrdm14の機能解析を行う。2.ヒト始原生殖細胞形成に関与する遺伝子群の機能解析アホロートルを用いた解析によって、ERKシグナル、転写因子ELK1、メディエーターMED23が始原生殖細胞の形成に重要であることが示されている。そこで、ヒト多能性幹細胞からPGCLCへの分化誘導におけるERKシグナル、ELK1及びMED23の機能解析を行う。また、昨年度までにPRDM14がヒト始原生殖細胞の前駆細胞である中胚葉性多能性細胞の多能性維持に関与している可能性突き止めている。そこで、本年度はPrdm14の条件的ノックアウトiPS細胞を作製し、PRDM14の標的遺伝子の網羅的探索と機能解析を行う。3. PRDM14の分子進化・系統解析昨年度までの解析から、PRDM14は硬骨魚類の出現以前は運動ニューロン特異的に発現し、両生類もしくは爬虫類が出現する時期に多能性細胞や生殖細胞で発現するようになった可能性が考えられている。そこで、有尾両生類であるアホロートル、爬虫類であるソメワケササクレヤモリにおけるPrdm14の発現解析を行う。また、マウス及びヒトにおけるPrdm14の発現制御解析も行う予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。
低反応レベルレーザー治療の鎮痛作用における神経成長因子の役割

ラットおよびマウスの皮膚炎症性疼痛モデルを用い神経成長因子(NGF)および細胞性免疫に対する低反応レベルレーザー治療(LLLT)の効果について研究を進めた。1.ラット炎症性疼痛モデルにおけるLLLTの効果:ラットの両側足踵へのカラギニン注入により24時間持続する炎症性腫脹が誘発される。低反応レベルレーザー(60mW、1-3分間)の短時間照射では、炎症部の腫脹および疼痛閾値に関して、非照射部との有意差は認められなかった。NGFの足踵への単独注入は炎症を誘発しなかった。NGFとカラギニンの同時注入によっても、炎症の増悪、疼痛閾値のさらなる減少など認められず、レーザー照射によっても有意な変化は無かった。より高出力のレーザー(1mW、3分間)照射はカラギニン浮腫を増悪し、疼痛閾値を減少した。これはレーザーによる温度効果と考えられた。2.マウス4型アレルギー反応性皮膚炎に対するLLLTの効果:ddYマウス(♂)の腹側両頚部、腋窩および鼠径部に塩化ピクリル溶液を塗付し、塩化ピクリルに対する感作を行った。5日後、セボフルラン麻酔下に片側耳介に30分間および60分間のレーザー照射(60mW)を施行後、塩化ピクリル溶液を照射側耳介に塗付した。24時間後、LLLTによる細胞性免疫抑制効果を耳介厚変化から評価した。その結果、レーザー照射時間と耳介厚には負の相関性が認められた。また、60分照射群では、非照射群と比較し、有意に炎症による耳介腫脹が抑制された。30分照射群では有意差は見られなった。以上の成績より、LLLTの長時間照射は地縁過敏型アレルギー反応による炎症を緩和することが示唆された。現在、炎症の相違による適切なLLLTの照射条件について、さらに研究を進めている。
メダカ生殖腺分化形成に於ける遺伝子発現解析

哺乳類では最初期の性決定の過程でY染色体上のSryが発現する事により生殖原器が精巣へと分化する。メダカでもこの時期にSry様遺伝子が働いているかを調べる事はメダカで生殖腺分化形成過程を調べる上で重要である。一方、メダカは性決定後の生殖腺形成中にステロイドホルモンを投与する事で性転換を引き起こさせる事が可能である。そこで、雌性ホルモンを産生させる酵素の遺伝子P450aromとSry様遺伝子に着目し、その単離、発現解析を行い、以下の結果を得た。1)メダカゲノムから単離していたSry様配列を用いてゲノミックサザンを行い、雌雄両ゲノムに複数Sry様配列がある事が明らかとなった。またノーザンブロット解析により胚発生中に2種類の転写物を見出したため、cDNAを単離し、whole mount in situ hybridizationにより発現様式を明らかにした。その結果、生殖細胞に発現が見られ、受精後も、胞胚までは胚中に均一に発現が認められた。その後発現は、恐らく神経になりうる細胞系譜に限定される事が示された。2) whole mount in situ hybridizationによりP450aromの発現様式が初期卵濾胞と成熟期近くの卵濾胞とで異なる事を明らかにした。一方、P450aromは転写レベルで制御されている事が示唆されていたため、遺伝子を単離し、転写開始点を決定、しかも初期、後期双方の濾胞で同じプロモーターが使われている事が5'RACEにより示唆された。
花粉症対策の基礎研究ー我が国におけるスギ・ヒノキ花粉の生産量と飛散について

本研究においては次の四つの課題について研究した。1.日本列島のスギ林の着花状況について:鹿児島県から秋田県まで各地のスギ林の着花状況を調査した。スギ林の着花は地方によって著しく差があった。一般に関東・東海・関西及び四国地方の実生スギ造林地帯は雄花の着生が多く,九州・北山・智頭などさし木スギ造林地帯は雄花の着生が少ない傾向がみられた。また品種系統,樹齢,年度などによってスギ林の着花に著しい差がみられた。オモテスギの実生林は30年生位から、ウラスギのさし木林は5060年生から着花が盛んになった。2.スギ林・ヒノキ林における花粉生産量について:森林の花粉生産量は品種,林齢,生育場所,年度などによって著しく差があった。スギ林では、実生林はさし木林よりも生産量が多く、また老齢林や神社等の老木は豊作年に多量の花粉を生産した。豊作年における花粉生産量は、スギの中・壮齢林で250660Kg/ha,老齢林で1.050Kg/ha,ヒノキ壮齢林で93620Kg/haと推定された。3.スギ・ヒノキ花粉の飛散動態について:花粉の飛散時期は年度及び生育場所によって著しく差があった。関西地方ではスギ花粉は2月上・中旬に,ヒノキ花粉は3月中旬4月上旬に飛散を開始し、飛散期間はスギで6080日、ヒノキで4070日に及んだ。花粉の飛散数は、年度、場所、森林の状態によって著しく差があった。スギ花粉は豊作年には1シ-ズンに林地で最高17,000個/cm^2落下した。都市部でも1,0006,000個/cm^2の花粉が落下した。ヒノキ花粉は壮齢林の近くで豊作年に1,000個/cm^2程度落下した。しかし、凶作年には花粉の飛散数は著しく減少した。3。薬剤によるスギ雄花の着花抑制:マレイン酸ヒドラジッド,NAA,Bーナインなど成長調整剤によってスギの雄花を枯殺することができた。これらの処理は、花芽分化直前から花芽分化初期が有効である。3。これまでの研究結果は次の通りである。1.日本列島におけるスギ林の着花状況について九州から秋田県まで主要林業地のスギ林の着花状況を調査した。一般に関東・東海・関西及び四国地方の実生スギ造林地帯は雄花の着生が多く、九州・北山・智頭地方などさし木スギ造林地帯は雄花の着生が少ない傾向がみられた。また品種系統、樹齢、生育場所、年度などによってスギ林の着花に著しい差がみられた。九州の在来品種やサンブスギなどは壮齢林でも着花が少なく、今後はこのような着花性の劣る品種を人工造林に使用することが花粉症対策上重要である。2.スギ林、ヒノキ林における花粉生産量について条件の異なるスギ林、ヒノキ林にリタ-トラップを設置して雄花を回収し、花粉生産量を推定した。

花粉生産量は、品種、林齢、生育場所、年度などによって著しく差があった。スギ林では実生スギの林はさし木スギの林よりも生産量が多く、また老齢林や神社等の老木は豊作年に多量の花粉を生産した。豊作年における花粉生産量は、スギ林で1021,032kg/ha、ヒノキ林で94156kg/haと推定された。3.スギ花粉の飛散動態について日本列島におけるスギ花粉の飛散時期は年度及び生育場所によって差があった。関西地方では花粉前線は2月上・中旬に始まり、飛散期間は6080日に及んだ。花粉の飛散数は年度、場所、森林の状態によって著しく差があった。豊作年には1シ-ズンに林地で最高17,000個1cm^2花粉が落下した。都市部でも1,0006,000個/cm^2の花粉が落下した。しかし、凶作年には花粉の飛散数は著しく減少した。平成2年度には関東地方及び山陰地方のスギ林の着花状況を調査し,更にスギ林11林分,ヒノキ林3林分で雄花の落下量を調査して,林分の花粉生産量を推定した。また薬剤によるスギ雄花の枯殺について研究した。1.1990年のスギ林の着花状況:関東地方は豊作,山陰地方は並作程度であった。千葉県では,サンブスギの造林地は雄花の着生が少なく,実生スギ造林地は雄花の着生が多かった。栃木県のスギ林は実生林で,雄花を多く着生した。日光スギ並木の老木も着花量が多かった。関東地方の実生スギは10年生で雄花を着生し,2030年生から着花が旺盛になった。しかし,サンブスギ林は壮・老齢でも着花が著しく少なかった。2.スギ林・ヒノキ林の花粉生産量:スギ林におけるha当り花粉生産量は,鳥大樹木園の1014年生実生林で255693kg,鳥大蒜山演習林の3034年生実生林で62562kg,新庄スギさし木林で3.5187kg,智頭町の95年生さし木林で30376kg,新庄村の50年生実生林で7.4664kg,同老齢天然林で71,054kgであった。林分,年度,樹齢などによって花粉生産量に大きな差がみられた。豊作年には,中・壮齢の実生林で250660kg/ha,老齢林で1,050kg/haの花粉が生産されことがわかった。一般にウラスギのさし木林は実生林に比べて花粉の生産量が少ない傾向がみられた。ヒノキ林のha当り花粉生産量は,蒜山演習林の20年生林分で9.6164kg,山口奥国有林の80年生林分で1.393kg,山陰支場の60年生林分で80621kgで,やはり林分及び年度によって差がみられた。花粉生産量は豊作年には最高620kg/ha,凶作年には10kg/ha以下であった。3.薬剤によるスギ雄花の着花抑制:マレイン酸ヒドラジッド,NAA,Bーナインなど植物成長調節剤の散布によってスギの雄花を枯殺することができた。これらの処理は,雄花分化直前初期が有効であった。
近代における国境線の画定と島嶼の帰属にかんする東南アジアの事例研究

本研究では、19世紀から20世紀にかけての国境線画定時に、無人島を含む島嶼の帰属がどのように扱われたのかを考察するための事例研究を、東南アジアを中心におこなった。そのために、イギリス議会文書やイギリス東インド会社文書などを整理し、考察した。その結果、漁業活動など利用権を主張するものはあっても、居住・耕作地を除いて、排他的占有権を主張するものはあまりなく、実質的な国境が曖昧なままであったことがわかった。(1)本研究目的の直接的な背景には、竹島(独島)や尖閣列島(魚釣台)の例にみられるように、近年、海底資源や漁業資源などの開発をめぐり、無人島を含む島嶼の領有権が国際的な問題になっていることがある。本研究では、19世紀から20世紀にかけての国境線画定時に、これらの島嶼の帰属がどのように扱われたのかを考察するための事例研究をおこなう。(2)あわせて、研究分担者になっている「一九一二〇世紀転換期における「戦争ロマン」の表象についての比較文化史的研究」(平成2123年度、基盤研究(B)、研究代表者:京都大学人文科学研究所山室信一教授)で、理論的な考察をおこない、マクロな視点とミクロな視点の両方から考察を進める。本研究目的の直接的な背景には、竹島(独島)や尖閣列島(魚釣台)の例にみられるように、近年、海底資源や漁業資源などの開発をめぐり、無人島を含む島嶼の領有権が国際的な問題になっていることがある。本年度は、イギリス東インド会社文書やイギリス議会文書を整理、考察した。東インド会社文書は200頁ほど翻刻し、議会文書を基に英文の論文を発表した。また、東南アジアの国境線の問題は、194245年の日本占領期に顕現化したことから、関連する「戦記もの」の資料調査をおこない、フィリピン関係1300点余の文献目録を作成中である。本研究目的の直接的な背景である日本の国境問題の現状と、国境地帯の歴史と文化を理解するために、尖閣列島が所属する沖縄県与那国町など八重山諸島、竹島が所属する島根県隠岐諸島、歴史的に遣唐使船の最終寄港地となった五島列島でフィールド調査をおこなった。あわせて、研究分担者になっている「空間思想の比較的検討とそれに基づく人文・社会科学理論の構築」(平成1720年度、基盤研究(B)、研究代表者:京都大学人文科学研究所山室信一教授)で、理論的な考察をおこない、マクロな視点とミクロな視点の両方から考察を進めた。東インド会社「マカッサル商館文書」を翻刻し、論文を発表した。また、東南アジアの国境線の問題は、194245年の日本占領期に顕現化したことから、関連する「戦記もの」の資料調査をおこない、フィリピン関係1300点余の文献目録を作成した。あわせて、研究分担者になっている「一九一二〇世紀転換期における「戦争ロマン」の表象についての比較文化史的研究」(平成2123年度、基盤研究(B)、研究代表者:京都大学人文科学研究所山室信一教授)で、理論的な考察をおこない、マクロな視点とミクロな視点の両方から考察を進めた。ロンドンの公文書館(National Archives)には、現在Public Record Office(PRO)が含まれ、キューにある文書館には、英領マラヤを管轄した植民地省のほか、外務省、商務省、海軍省、インド・ビルマ省(1937年にビルマ省独立)などの文書があり、今回のテーマに直接関係のある資料が多く所蔵されている。また、英国図書館(British Library)には、Oriental and India Office Collectionsがあり、イギリス東インド会社文書や航海記録などが保存されている。これらの文書から、イギリス人が認識した東南アジアの人びとの領域概念を探った。本研究に関係する文書は、国内にも所蔵されている。

たとえば、イギリス議会文書が京都大学、アメリカの公文書館文書の一部が国会図書館に所蔵されているほか、それぞれ印刷・刊行されたものが一部あるため、それらを利用して研究を進めた。東インド会社「マカッサル商館文書」を翻刻し、論文を発表した。あわせて、研究分担者になっている「一九一二〇世紀転換期における「戦争ロマン」の表象についての比較文化史的研究」(平成2123年度、基盤研究(B)、研究代表者:京都大学人文科学研究所山室信一教授)で、理論的な考察をおこない、マクロな視点とミクロな視点の両方から考察を進めた。本研究目的の直接的な背景には、竹島(独島)や尖閣列島(魚釣台)の例にみられるように、近年、海底資源や漁業資源などの開発をめぐり、無人島を含む島嶼の領有権が国際的な問題になっていることがある。本研究では、19世紀から20世紀にかけての国境線画定時に、これらの島嶼の帰属がどのように扱われたのかを考察するための事例研究をおこなう。本年度は、引き続きイギリス東インド会社文書やイギリス議会文書を整理、考察した。ロンドンの公文書館(National Archives)には、現在Public Record Office(PRO)が含まれ、キューにある文書館には、英領マラヤを管轄した植民地省のほか、外務省、商務省、海軍省、インド・ビルマ省(1937年にビルマ省独立)などの文書があり、今回のテーマに直接関係のある資料が多く所蔵されている。また、英国図書館(British Library)には、Oriental and India Office Collectionsがあり、イギリス東インド会社文書や航海記録などが保存されている。これらの文書から、イギリス人が認識した東南アジアの人びとの領域概念を探った。本研究に関係する文書は、国内にも所蔵されている。あわせて、研究分担者になっている「一九-二〇世紀転換期における「戦争ロマン」の表象についての比較文化史的研究」(平成2123年度、基盤研究(B)、研究代表者:京都大学人文科学研究所山室信一教授)で、理論的な考察をおこない、マクロな視点とミクロな視点の両方から考察を進めた。