hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト生体における骨格筋スティフネスの定量化の確立と生理学的重要性の解明

本研究では,生体組織の硬度測定に対して応用化が進んでいる超音波剪断波エラストグラフィ法が,骨格筋の剪断弾性率測定に対して応用可能であるか再現性や妥当性の面からを検証し,さらに,骨格筋における剪断弾性率の特性を明らかにすることを試みた.結果,骨格筋測定において,1)エラストグラフィによる剪断弾性率測定の再現性が高いこと,2)剪断波と筋線維の走行方向に角度があったとしても測定に支障をきたすレベルではないこと,3)等尺性筋力発揮において, kPa/%MVC(相対的発揮筋力に対する剪断弾性率の増加)は個人間で差がないこと,4)皮膚の存在によって骨格筋の筋硬度は保たれている,ことなどが明らかになった.骨格筋の機械的特性を示す筋スティフネスは,加齢変化や神経・筋疾患患者における筋強剛や筋固縮などの評価指標にしばしば用いられる.また,スポーツアスリートにおいて,パフォーマンス(100m走タイム,ジャンプ力)は筋スティフネスと強い関連性がある.さらに,筋収縮中の筋内部はアクチン-ミオシンの架橋形成が強固になることから,筋スティフネスおよび筋内圧が増加し,その変化は血液循環に大きな影響を与える.このように,筋スティフネスは,神経・筋生理,発育・加齢,スポーツ,呼吸・循環などの多種多様な研究分野に渡り,ヒト生体の骨格筋機能メカニズムを解明するうえで非常に重要な生体情報である.したがって,その定量方法の確立は,筋組織固有の特性や活動様相を解明するうえで重要な意味を持つ.本研究では,生体組織スティフネスの絶対定量が可能な最新超音波技術である勇断波エラストグラフィー法を駆使し,筋組織固有スティフネスの絶対定量化とその生理学的重要性の解明を目的とする.当該年度においては,健常な若齢成人10名の上腕二頭筋による肘屈曲動作を対象とした.発揮筋力は,最大随意筋力(MVC)の1560%の4段階とし,発揮した力が安定した区間のエラストグラフィー画像から,筋スティフネスをヤング率として算出した.測定は,2回ずつ,2日間に分けて行い,日内,日間変動からエラストグラフィの再現性を検証した.その結果,2回の測定の級内相関係数は,日内で0.978,日間で0.948であり,エラストグラフィの測定精度の高さが立証された.また,発揮する力の増大にともない筋ヤング率は直線的に増大した.さらに,その増加の傾き(kPa/%MVC)は,全対象者でほぼ同一の直線上に位置していた.以上のことから,単位面積の単位筋力あたりの筋スティフネス(固有スティフネス)は個人差がないことが明らかとなった.近年,ヒト骨格筋ヤング率をより直接的に測定可能とされている剪断波エラストグラフィ法の測定精度が向上し,基礎研究から応用研究に幅広く応用されてきている.我々は,前年度の研究において,上腕二頭筋による肘屈曲動作を対象とした等尺性筋収縮におけるヤング率は試行間および日間において高い再現性があることを示した.また,発揮する力の増大にともない筋ヤング率は直線的に増大することを確認した.今年度においては,力発揮にともなうヤング率の増加の傾き(kPa / % MVC)が全対象者でほぼ同一の直線上に位置していたことに着目し,トルク値および生理学的横断面積から測定対象である上腕二頭筋の筋力の推定を行い,ヤング率との関連性を検証した.その結果,筋力の絶対値とヤング率は正の相関関係があり,かつ,それは個体差がなかった.したがって,骨格筋ヤング率は,単位面積の単位筋力あたりの筋スティフネス(固有スティフネス)を反映していると言える.さらに,単独指での随意的な力発揮時に,他指にも不随意的な力が生じるenslaving現象のメカニズム解明の一環として,本研究では,超音波剪断波エラストグラフィ法によって浅指屈筋のコンパートメントごとの筋ヤング率の評価を試みた.課題は,条件1:環指での等尺性最大屈曲力発揮,条件2:条件1で不随意的に発した中指および小指の力を目標値とした各指での随意的力発揮とし,各条件における中指および小指の浅指屈筋コンパートメントの筋ヤング率を定量化した.条件1での不随意的に発揮した中指および小指の力は各指MVCの41%,31%であった.筋ヤング率は,中指,小指ともに条件2よりも条件1で有意に値が大きかった(P < 0.05).Enslaving現象が神経系の要因によるものであれば条件1,2は同一の筋ヤング率を呈するはずであるが,本研究の結果より,不随意的力の発生は神経系の要因は少なく,他の因子の貢献度が高いと考えられる.エラストグラフィは,剪断波を対象物質に投射し,その剪断波の伝達速度により物質の硬度(剪断率)を算出する.算出する伝達速度のベクトルは,探触子に対し平行である.したがって,筋線維が腱に対し角度を持って付着している羽状筋や,平行筋(紡錘状筋)であったとしても,形状的に皮膚表面に対し角度が存在する場合は,探触子と筋線維の走行方向に対し角度が生じる.このような測定状況下では,筋線維の長軸方向の剪断率を測定していないことになる.筋間(羽状角が違う)での比較,トレーニング(羽状角が増加)や加齢(羽状角が低下)に対する適応などを明らかにする場合,エラストグラフィは測定適応外になってしまう.

そのため,本年度は,剪断波超音波エラストグラフィのヒト骨格筋に対する更なる測定適応を目指し,骨格筋の多くを占める羽状筋測定の妥当性を検証することを目的とした.つまり,外因的に,探触子と筋線維の走行方向の角度の有無を生成し,その角度の存在の有無がエラストグラフィによる剪断率評価に違いを生じさせるか検証した.その結果,角度の有無によって剪断率の値は変化しないことが明らかとなった.本研究の結果より,今後,あらゆる筋の硬度評価に剪断波超音波エラストグラフィが適応出来るといえる.さらに,新鮮遺体を対象に,皮膚および筋膜の存在が,骨格筋の筋硬度(剪断率)の保持に貢献しているかどうか検証した.5体のご遺体の腓腹筋内側頭を対象に,外科的に皮膚そして筋膜の順番で除去を行ない,エラストグラフィーによる剪断率の測定を行なった.その結果,皮膚除去によって有意に剪断率が低下したが,筋膜除去後は変化しなかった.骨格筋の形状を保つために,筋そのものの機械的特性に加え,皮膚の存在が貢献していることが明らかとなった.超音波剪断波エラストグラフィは,剪断波を対象物に投射した際のその伝達速度より対象物の硬度(剪断弾性率)を算出する.これまでの研究により,剪断波エラストグラフィにより,発揮筋力の増大に伴い剪断弾性率は増加すること,探触子に対する筋繊維の走行の角度の如何に関わらず,骨格筋の剪断弾性率測定がある程度可能であること,骨格筋の剪断弾性率は,筋を覆う皮膚などの結合組織の影響を多大に受けること,が明らかになった.以上の結果を基に,本年度は,単独指での随意的な屈曲力発揮時に,他指にも不随意的に屈曲力が生じるenslaving現象のメカニズムの解明に取り組んだ.具体的には,超音波剪断波エラストグラフィ法による浅指屈筋の各筋の収縮を司る筋コンパートメントごとの筋硬度(筋剪断弾性率)の評価を試みた.健常成人男性の右手浅指屈筋を対象とした.課題は,条件1:環指での等尺性最大屈曲力(MVC)発揮,条件2:条件1で不随意的に発生した中指および小指の力を目標値とした各指での随意的力発揮,とした.各条件において,中指および小指のコンパートメントの筋剪断弾性率をエラストグラフィにより定量化した.条件1で不随意的に生じた中指および小指の力は,各指MVCのそれぞれ41%および31%であった.筋剪断弾性率は,中指,小指ともに条件2よりも条件1で有意に大きかった.Enslaving現象が神経系の要因によるものであれば条件1,2は同一の剪断弾性率を呈するはずであるが,本研究の結果より,不随意的な力の発生は神経系の要因はもちろん,筋間の結合組織の存在など他の因子の貢献も含まれる可能性が高いことが示唆された.今後,筋の機械的な要因も含め,詳細に検討する必要がある.本研究では,生体組織の硬度測定に対して応用化が進んでいる超音波剪断波エラストグラフィ法が,骨格筋の剪断弾性率測定に対して応用可能であるか再現性や妥当性の面からを検証し,さらに,骨格筋における剪断弾性率の特性を明らかにすることを試みた.結果,骨格筋測定において,1)エラストグラフィによる剪断弾性率測定の再現性が高いこと,2)剪断波と筋線維の走行方向に角度があったとしても測定に支障をきたすレベルではないこと,3)等尺性筋力発揮において, kPa/%MVC(相対的発揮筋力に対する剪断弾性率の増加)は個人間で差がないこと,4)皮膚の存在によって骨格筋の筋硬度は保たれている,ことなどが明らかになった.研究目的に沿い,概ね計画通りに進行している.27年度が最終年度であるため、記入しない。応用生理学羽状角(探触子と筋線維の走行方法の成す角度)の存在が,超音波剪断波エラストグラフィで得られた骨格筋剪断率の値に及ぼす影響は,ほぼ存在しないことが明らかとなった.しかしながら,これはあくまでも角度が20度以内,筋は安静時に限られた条件である.
個性を尊重した社会科授業づくりとフレネ教育法

フレネ教育研究会の研究集会における講演、[1989年8月三重県榊原温泉]「フレネと精神分析」宮ケ谷徳三(神戸大学)・「認知発達と個性」滝沢武久(電気通信大学)、[1990年2月東京都本郷]「フェリエ-ルと活動学校について」古沢常雄(法政大学)「フレネ学校だより」原章二(早稲田大学)や実践報告を通して、フレネ教育技術の今日的意義を検討した。なかでも、子どもの興味から学習を出発させる時、その中心に位置づく「自由作文」の教育的意義を検討し、さらにその社会科学習指導への活用を展望した。子どもたちが主体となり、学べ・調べ・表現する社会科授業=「調べる社会科」については、拙著「地域学習と社会科」(民衆社1984年)にまとめたが、その後一貫してその実践的深化を追求してきた。この間の研究を踏まえて、近く「溜め池」などいくつかの教材に限定し、フレネ教育技術を取り入れた社会科授業づくりの具体化を図り、「地域学習と調べる社会科」の実践編としてまとめる予定である。また、同様な観点から講義「社会科教材研究」「社会科教育法」の授業改善をすすめ、それを山口大学教育学部付属教育実践研究指導センタ-の紀要にまとめた。生活を交流する「自由作文」の背後にあるのは、「教える喜び」である。授業改善では地域調査・模擬授業など調べる活動・表現活動を重視しー教える必要から教える喜びへーと講義を質的に転換しようとした。小学校の社会科授業づくりについては、郷土学習の教材開発にかかわって、子どもの興味を尊重し、生きた生活・文化を学ぶこと、自ら調べ、感性豊かに表現することなどフレネ教育技術を生かす必要について述べた。なお、I Ecole Moderne FrancaiseのB.Tについては、今後内容を検討し、自由研究の指導の参考にしていく予定である。
言語・行為・信念の相互関係についての研究

本研究の目的は、言語を中心に行為・信念との連関を探るとともに、その際、言語をめぐる諸問題への様々な接近方法を反省的に捉え、いわばそれらの統合をめざすことであった。とはいえ、言語と行為や信念との連関は、予め明瞭に跡づけることができるようなものではない。それぞれの概念を詳細に分析した後に初めてそれらの連関が窺えるのである。従って、各研究はまず特定の概念に関する個別的な問題を設定し、それらの問題を分析・解明する過程において他の概念との相互関係を探るという道を採らざるを得なかった。本研究の多くがこうした方向でなされている。一方、それらの研究はまた、言語や行為のプラクティカルな実態に即した地点から出発するホーリスティク(全体論的)な立場の研究と、いわば分子論的な研究とに分類することができる。こうした研究手法の違いは、研究者の性向の単なる反映ではない。むしろ言語・行為・信念の作りだす錯綜した全体を解きほぐすには、いずれか一方のアプローチで十分ということはないのである。本研究の第一の成果は、多様な研究が互いに相補的に進められることによって、部分的にではあるが、言語・行為・信念の関係にも相補的関係が窺えることを示した点にある。またホーリスティクな立場を採るべきか、分子論を採るべきかという問題は、単なる方法論的な前提ではなく、言語や行為を了解する際の基本的前提、例えば真理の概念といったものに本質的に関係することが明らかにされた。さらに研究分担者は各自の専門領域内において、これらの概念の分析という点で一定の成果を生み出している。本研究の最終的な到達目標は次のようなもであった.言語をめぐる諸問題への二つの接近方法,すなわち言語の一定部分を一定の論理構造をもった対象と規定し,それを拡張・修正してゆくことによって日常言語に接近し,ひいては信念・行為との関連を定めてゆくという方途と言語現象を独立した事象とは見なさずに,むしろわれわれの知識・信念・行為等との様々な関連から成る一つの全体へと織り込まれたものとしてしか言語は把握され得ないとする観点との間に接点を求め,そのような探究に基づいてわれわれの概念図式の内における言語・信念・行為・実在といった概念の位置づけを再確定することであった.とはいえ,これら二つの接近方法自体を現在の水準以上に解明することが両者の関連や接点を探る上では不可欠の作業となる.したがって初年度としては先ず研究分担者の各専門領域に沿った形での上記問題への取り組みが行なわれた.その結果として,古代から現代へと至る哲学の多様な状況において言語をめぐるあるいは信念・行為に関する様々な問題の解明作業が進められた.その中でも特に,故意行為をめぐる行為概念の分析カントの平和論を中心に据えた諸概念の分析,信念文をめぐるフレーゲのパズルの解決へ向けての第一歩が踏み出されたこと,本研究の脈絡における中世およびルネサンス哲学の解明等に一定の前進を見ることができた.これらの成果は,一部は下記の雑誌論文・図書として発表され,一部は発表予定となっている.本研究の目的は、言語を中心に行為・信念との連関を探るとともに、その際、言語をめぐる諸問題への様々な接近方法を反省的に捉え、いわばそれらの統合をめざすことであった。とはいえ、言語と行為や信念との関連は予め明瞭に跡づけることができるようなものではない。それぞれの概念を詳細に分析した後に初めてそれらの関連が窺えるのである。本研究の多くがこうした方向で為されている。一方、それらの研究はまた言語や行為のプラクティカルな実態に即した地点から出発するホーリスティクな(全体論的な)立場の研究と、いわば分子論的な研究とに分類することができる。

こうした研究手法の違いは研究者の性向の単なる反映ではない。むしろ言語・行為・信念の総体が作り出す錯綜した全体を解きほぐすには、いずれか一方のアプローチで十分ということはないのである。本研究の第一の成果は、多様な研究が互いに相補的に進められることによって、部分的にではあるが、言語・行為・信念の関係にも相補的関係が窺えることを示した点にある。またホーリスティクな立場を採るべきか、分子論を採るべきかという問題は、単なる方法論的な前提ではなく、言語や行為を了解する際の基本的前提、例えば真理の概念といったものに本質的に関連することが明らかにされた。さらに、研究分担者は各自の専門領域内において、これらの概念の分析という点で一定の成果を生み出している。
TRECK法を用いた神経変性疾患モデルマウスの作製とその利用

私たちはこれまでTRECK法で作製されたモデルマウスがヒト疾患の原因解析に役立つことを示した。本計画では、このTRECK法をさらに改良し、2種類のプロモーターと2種類の蛍光蛋白質で、非侵襲的に標的細胞の特異的破壊が観察できる系を考案した。また、標的としては神経変性症を選んだ。新たに開発したTRECKベクターはNIH3T3などの培養細胞では予想通り機能することを確認した。モデルマウスの作製には、NeuroDプロモーターを用いたトランスジェニックマウス、またはNestinプロモーターを用いたノックインマウスの2種類を作製した。現在、これらのマウスによる発現解析を行ない、有用性の確認を行なっている。本研究は、これまで我々が行なってきた毒素受容体仲介性細胞特異的破壊法(TRECK)法をさらに進展させ、複数の組織特異的プロモータを用いて、より特性の高いTRECK法を樹立するために計画したものである。今年度は、初年度のため、特に本研究に必要なBACクローンの蒐集、改変TRECKベクターの構築、改変TRECKベクターを用いた、改変BACクローンの構築を行なった。研究の進捗状況は以下の通りである。1)BACクローンの蒐集、Nestin、CamKII等の蒐集、単クローン精製、DNA抽出を行ない、in vitroBAC改変法(Recombineering)の材料を準備した。2)従来のTRECKベクターにtdTomato遺伝子を導入した改変TRECKベクターを構築し、3T3細胞を利用したin vitroでの形質転換を行ない、tdTomatoの発現を確認した。さらにloxP配列で挟んだAzami Green遺伝子を導入し、そのin vitroでの形質転換によるAzami Greenの発現と、Cre/loxPシステムが正常に機能するか否かの確認を行なう実験を計画している。3) Recombineeringに必要なGalK置換BACを作製するため、Nestin、CamKII等のBACの第1エクソン部分をGalKで置換したBACを作製し、成功した。4)2)の改変TRECKベクターをGalK置換BACクローンに導入・置換するためのベクターの構築を行なった。現在、その改変BACを獲得するための実験を行っている。TRECK法は、「組織特異的プロモーターにヒト由来のジフテリア毒素受容体(hDTR)のcDNAを連結したベクターを構築後、Tgマウスを作製し、そのTgマウスが成長した後の任意の時期にジフテリア毒素を投与することによって、hDTRを発現している細胞を標的として、体内から除去する」方法である。この方法は特異性が非常に高いため、DT投与後のマウスの表現型を観察することによって、その標的細胞(群)の生体内での機能を解析することができる非常に有用な方法である。我々はこれまで、この方法により糖尿病を含む6系統以上のヒト疾患モデルマウスを作製してきた。しかしながら、近年発展が著しい神経系疾患に対するモデルマウスを作製することにこれまで成功していない。そこで、本計画では神経系疾患に対するマウスモデルの作製に着手した。中枢神経系には神経細胞の他にグリア細胞、その他の細胞が複雑に絡み合って存在するため、最終的に標的となるhDTR発現細胞とその前駆体細胞を蛍光蛋白により染め分ける方法を考案・選択した。それと共に特異性を高めるために、通常のプラスミドを使用したプロモーター断片の他、recombineeringによるin vitroBAC改変法を用いて、厳密な組織特異性を有するTRECK法の確立も目指した。現在、前者の目的のためのベクター構築はほぼ完成し、特異性の高いプロモーターの連結を行なっており、この作業が終了し次第、Tgマウスの作製に着手の予定である。一方、in vitroBAC改変法については、ベクターのDNA鎖が4.5kb以上と長いため、目的の改変BACをうまく樹立できないでいる。最終年度にあたる今年度は、Tgマウスの樹立、in vitroBAC改変法の開発を重点的に進める予定である。TRECK法は、「組織特異的プロモーターにヒト由来のジフテリア毒素受容体(hDTR)のcDNAを連結したベクターを構築後、そのベクターを用いてTgマウスを作成し、そのマウスの成長後の任意の時期にジフテリア毒素(DT)を投与することにより、hDTRを発現している細胞をマウス体内から特異的に除去する」方法である。この方法は特異性が極めて高いため、DT投与後のマウスの表現型を観察することによって、その標的細胞(群)の生体内での機能を解析できる優れた方法である。我々はこれまで、I型糖尿病を含む6系統のマウスをヒト疾患モデルとして作製してきた(欧文総説準備中)。しかし、近年発展が著しい神経系疾患に対するマウスモデルは未着手であったため、本計画ではそれに着手することにした。中枢神経系には、神経細胞の他にグリア細胞など多種類の支持細胞が存在するため、最終的に標的となるhDTR発現細胞とその前駆細胞を蛍光蛋白により染め分ける方法を考案し、研究を進めた。当初は、組織特性の厳密性を高めるため、in vitro BAC改変法を用いる予定であったが、改変のために用いるDNA組換え体が4.5kbpと長いため、本方法の応用が困難であるため、これまで成功しているプロモーター断片を用いることにした。ベクターの構築には成功し、NIH3T3を用いたin vitroの発現と分染実験にも成功した。このベクターを用いてTgマウスを作製したところ、トランスジーンの発現は見られたものの、蛍光蛋白の発現が見られないため、現在ベクターの検討を行なっている。

ベクターの構築は完成し、NIN3T3マウス培養細胞を用いた、発現実験、蛍光蛋白による分染実験にも成功した。しかし、肝心の本ベクターを用いたTgマウスの作製において、トランスジーンの確認により、Tgマウスは樹立できたが、蛍光蛋白の発現が見られなかった。現在、その原因を調査すると共に、新たなるベクターの構築を行なっている。TRECK法は「組織特異的プロモーターにヒト由来のジフテリア毒素受容体(hDTR)のcDNAを連結したベクターを構築後、そのベクターを用いてトランスジェニック(Tg)マウスを作製し、そのマウスが成長した後の任意の時期にジフテリア毒素(DT)を投与することにより、hDTRを発現している細胞(群)を生きているマウス個体から特異的に除去する」方法である。このことによって、その標的細胞の生きた個体内での機能を解析できる優れた方法である。我々はこれまで、I型糖尿病を含む6系統のマウスをヒト疾患モデルとして作製してきた(欧文総説論文作製中)。しかし、近年発展が著しい神経系疾患に対するモデルは未着手であったことと、特異性の低い組織特異的プロモーターにも本方法を応用可能とすることを目的とし、本計画を実施した。神経系には、神経細胞をはじめとしグリア細胞など多種類の支持細胞が存在するため、最終的に標的となるhDTR発現細胞とそれらに関連する細胞とを識別するため、異なった蛍光タンパク質を用いたTRECK法を考案し、最終的に標的細胞の識別と、DTによるその標的細胞の除去、そしてその除去による表現型の変化を観察することにした。まず、このベクターが細胞で機能することを確認するため、2種類の培養細胞を利用して発現実験を行なった。その結果、培養細胞での発現には成功した。そこで、このベクターを用いて、神経特異的プロモーターを用いてTgマウスを作製し、発現解析を行なった。その結果、Tgマウスは数系統得られたものの、そのうちのどの系統にも蛍光色素の発現は見られなかった。現在、神経特異的プロモーターの種類を変えて、Tgマウスの作製を行なっているほか、同一のベクターを用いて、ノックインマウスの作製を行なっており、その作製に成功し発現を確認中である。私たちはこれまでTRECK法で作製されたモデルマウスがヒト疾患の原因解析に役立つことを示した。本計画では、このTRECK法をさらに改良し、2種類のプロモーターと2種類の蛍光蛋白質で、非侵襲的に標的細胞の特異的破壊が観察できる系を考案した。また、標的としては神経変性症を選んだ。新たに開発したTRECKベクターはNIH3T3などの培養細胞では予想通り機能することを確認した。モデルマウスの作製には、NeuroDプロモーターを用いたトランスジェニックマウス、またはNestinプロモーターを用いたノックインマウスの2種類を作製した。現在、これらのマウスによる発現解析を行ない、有用性の確認を行なっている。
DAA耐性型HCVに対する治療法の開発

Direct-acting antiviral (DAA)はC型肝炎に有効であるが,耐性変異が問題となる.本研究にて,1)治療前プロテアーゼ阻害薬あるいはNS5A阻害薬耐性変異を有する症例ではダクラタスビル+アスナプレビル療法の効果が低下すること,2)DAA療法非SVRでは使用した薬剤に対する耐性変異が高率に出現すること,出現したプロテアーゼ阻害薬耐性変異は次第に減少するがNS5A阻害薬耐性変異は長期的に維持されること,3)非SVRに出現したプロテアーゼ阻害薬は次第に減少するが,同薬剤に対する感受性は低下しており,再治療により容易に耐性変異が再増加することを見いだした.薬剤耐性型C型肝炎ウイルス(HCV)とインターフェロン非使用DAA併用療法の効果の関連をC型肝炎患者およびヒト肝細胞キメラマウスを用いて検討した.Genotype 1b型C型肝炎患者においてダクラタスビル+アスナプレビル療法前26例中16例でdeep sequenceにて0.2%以上のNS5A-Y93変異が検出された.NS5A-Y93変異が検出されなかった10例では全例でダクラタスビル+アスナプレビル療法によってSVRが得られた.NS5A-Y93変異が0.2-18%の症例が6例存在したが全例でSVRが得られた.NS5A-Y93変異が21.9-100%の症例が7例存在し,うち3例でSVRが得られた.NS3-D168変異とダクラタスビル+アスナプレビル療法の効果との関連はヒト肝細胞キメラマウスを用いて行った.4頭のマウスに種々の割合のNS3 D168変異型genotype 1b型HCVを感染させ,ダクラタスビル+アスナプレビルを4週間投与したところ,投与中にすべてのマウスで血中HCVは陰性化した.投与前のNS3-D168変異が3.3%および13.2%であった2頭のマウスでは投与終了9週後まで血中HCVは陰性であり,ウイルス排除が得られたと思われ.一方,NS3-D168変異が57.7%および86.1%であった2頭のマウスでは投与終了1週後および3週後に血中HCVは再陽性化し,その後ウイルス量は増加した.C型肝炎患者およびHCV感染マウスを用いた検討から,薬剤耐性変異が存在していても,その頻度が少ない場合はダクラタスビル+アスナプレビル療法が有効である可能性が示された.Genotype 1b型C型肝炎患者においてダクラタスビル+アスナプレビル療法の非SVR例では,deep sequneceにて,高頻度のNS3-D168,NS5A-L31/Y93変異が出現していたこれら耐性変異を経時的に測定したところ.NS3-D168変異は次第に減少していったが,NS5A-L31/Y93変異は長期間,維持されていた.プロテアーゼ阻害薬にて非SVRとなった場合,出現したNS3-D168変異がその後のDAA治療にどのように影響するかをヒト肝細胞キメラマウスを用いて検討した.ヒト肝細胞キメラマウスにDAA未治療あるいはダクラタスビル+アスナプレビル療法breakthrough例の血清を投与後,シメプレビル(20 mg/kg/日)あるいはソフォスブビル(80 mg/kg/日)を連日経口投与し,NS3-D168変異をdeep sequenceにて解析した.ダクラタスビル+アスナプレビル療法breakthrough例の血清を投与したマウスにシメプレビルを投与したところ,DAA未治療例のHCVを感染させたマウスに比べ,より早期に高頻度のNS3-D168変異が出現した.またシメプレビル+ソフォスブビルを投与したところ,NS3-D168変異の出現は,シメプレビル単独投与に比べ遅れたものの,DAA未治療例のHCV感染マウスに比べ高頻度に出現した.これらの結果からプロテアーゼ阻害薬治療の非SVR例に出現したNS3-D168変異は,治療終了後,減少するが,プロテアーゼ阻害薬の再投与により,速やかに再増加しており,プロテアーゼ阻害薬耐性変異はdeep sequenceにより検出感度以下になったとしても,体内に残存している可能性が示された.平成27年度の目標にあげた新たに出現したDAA耐性株の体内の残存期間の検討について達成した.またヒト肝細胞キメラマウスを用いて,NS3-D168耐性変異とDAA併用療法の治療効果の関連の検討も達成した.Genotype 1型のC型慢性肝炎患者において,シメプレビル+Peg-interferon (PegIFN)/リバビリン(RBV)療法の非SVR例では,Direct-acting antiviral (DAA)未治療例に比べ,ダクラタスビル+アスナプレビル療法のSVR率は低値であった.シメプレビル+PegIFN/RBV非SVRにより生じたNS3-D168変異がdeep sequenceにより感度以下に低下したことを確認後,ダクラタスビル+アスナプレビル治療を導入したにも関わらず,開始早期にbreakthroughを生じた例もあった.ダクラタスビル+アスナプレビル療法でbreakthroughを生じ,治療60週後にdeep sequenceにてNS3-D168変異が感度以下となった患者の血清あるいはDAA未治療の患者血清をヒト肝細胞キメラマウスに接種し,シメプレビルを経口投与した.投与前,いずれのマウスもNS3-D168変異はdeep sequenceにて感度以下であったが,ダクラタスビル

+アスナプレビル療法非SVR例の血清投与マウスでは,シメプレビル投与により,すみやかにNS3-D168変異が出現し増加した.一方,ダクラタスビル+アスナプレビル療法非SVR例の血清投与マウスに対し,耐性プロファイルの異なるソホスブビル+テラプレビルを投与したところ,NS3-D168変異の増加は抑制され,血中HCV RNAの持続低下が得られた.DAA治療非SVRにより出現したNS3-D168変異は,その後,deep sequenceで消失したかのように見えても,プロテアーゼ阻害薬の再投与により,容易に再上昇することが示された.これらの症例に対する再治療の際には,耐性プロファイルの異なる薬剤を選択することが望ましいと考えられた.Direct-acting antiviral (DAA)はC型肝炎に有効であるが,耐性変異が問題となる.本研究にて,1)治療前プロテアーゼ阻害薬あるいはNS5A阻害薬耐性変異を有する症例ではダクラタスビル+アスナプレビル療法の効果が低下すること,2)DAA療法非SVRでは使用した薬剤に対する耐性変異が高率に出現すること,出現したプロテアーゼ阻害薬耐性変異は次第に減少するがNS5A阻害薬耐性変異は長期的に維持されること,3)非SVRに出現したプロテアーゼ阻害薬は次第に減少するが,同薬剤に対する感受性は低下しており,再治療により容易に耐性変異が再増加することを見いだした.平成26年度に目標としてあげたC型肝炎患者のDAA療法前の耐性変異と治療効果の関連についての検討を達成した.またヒト肝細胞キメラマウスを用いて,NS3-D168変異型HCVとDAA併用療法の治療効果の関連の検討も達成した.平成28年度の目標としてあげている,HCV感染マウスを用いて薬剤耐性型HCVに対する有効なDAA併用療法のスクリーニングを行う.またDAA療法により治療failureとなったC型肝炎患者の血中耐性ウイルスのdynamicsの長期的な検討を行っていく.肝臓病学平成27年度の目標としてあげている,HCV感染マウスを用いて薬剤耐性型HCVに対する有効なDAA併用療法のスクリーニングを行う.またDAA療法により治療failureとなったC型肝炎患者の血中耐性ウイルスのdynamicsの長期的な検討を行っていく.
マルチクロックドメイン・システムオンチップのテスト容易化設計に関する研究

プロセッサコア、機能コア、メモリコアなどのコア毎に異なるクロック周波数で動作するマルチクロックドメイン・システムオンチップに対するテスト容易化設計に関する研究を行った。その結果、高品質かつ高速テストを実現するための課題を明確化し、その課題を解決するテストアーキテクチャおよびテストスケジューリング手法の確立を行った。平成18年度は、マルチクロックドメインコアに対して、IEEE std.1500に準拠したラッパー設計法を提案し、VLSIテストに関するワークショップである「IEEE WRTLT'06」にて研究成果発表を行った。また、平成19年5月にはVLSIテストに関する国際会議である「IEEE VLSI Test Symposium」で発表予定である。これにより、IEEE標準に準拠しながらも、消費電力制約下で短いテスト実行時間を実現可能である。また本年度は、各コアはシングルクロックドメインで動作するが、コア毎に動作周波数の異なるマルチクロックドメイン・システムオンチップを対象とし、それに対するテストアーキテクチャおよびテストスケジューリング手法に関する研究を行った。テストアーキテクチャとしては、マルチクロックドメイン・システムオンチップに存在する既存のシステムバスをテスト時に利用する手法と、既存のシステムバスを利用せずに新たにテスト専用のバスを付加する手法の2つの観点で研究を行った。それぞれの手法に適したテストアーキテクチャおよび消費電力制約下で短いテスト実行時間を達成するテストスケジューリング法を提案し、VLSI設計に関する国際会議である「IEEE International Conference on Computer Design」、「Asia and South Pacific Design Automation Conference」にて研究成果発表を行い、「IEEE International Symposium on Circuits and Systems」においても研究成果を発表予定である。また本年度は、マルチクロックドメイン・システムオンチップ(以下、SoC)におけるデータ転送の一つの実現方法であるネットワークオンチップ(以下、NoC)をベースとしたSoCを対象とした研究を行った。SoCに存在する既存のネットワークをテスト実行時に効率良く再利用することを目的としたコアに対するラッパー設計法、テストアーキテクチャおよびテストスケジューリング手法を提案した。これにより、小さい面積オーバーヘッドでテストアクセス機構の実現が可能となる。また、テスト実行時にNoCの帯域幅を効率良く複数のコアで共有することにより短いテスト実行時間の実現が可能となる。これらの成果をVLSI設計に関する国際会議である「IEEE European Test Symposium」や「IEEE Asian Test Symposium」等にて研究成果発表を行った。本年度は、各コアはシングルクロックドメインで設計され(ただし、コア毎に周波数は異なる)、NoCは同期式データ転送モデルで設計されているSoCを対象とした。しかし、NoCそのものの実現方法としては非同期式データ転送モデルを用いたものも数多く提案されており、提案手法は非同期式データ転送モデルにも応用可能であると考えられる。平成20年度は、マルチクロックドメインSoCにおけるコア間のデータ転送の一つの実現方法であるネットワークオンチップ(以下、NoC)をベースとしたSoCを対象とし研究を行った。NoCのデータ転送帯域幅をテスト時にも効率よく利用可能なコアラッパー設計法、およびコアラッパーの面積オーバーヘッドとSoCのテスト時間を目的関数としたシステム全体のテスト最適化(テストスケジューリング)手法を提案し、2008年7月にIEICE Transactions on Infomation and Systemsに掲載された。さらに、平成18年度に提案したマルチクロックドメインコアに対するラッパー設計法の拡張も行った。これにより、消費電力制約下でさらなるテスト実行時間の削減を可能とした。この成果は、2008年11月にVLSIテストに関するワークショップである「IEEE WRTLT'08」にて研究成果発表を行った。また、マルチクロックドメインSoC設計の課題の一つである熱設計についても研究を行った。テスト時は通常動作時よりも消費電力が高く、発熱量が大きい。そこで、テスト時の最高温度を制約とし、テスト時間の最小化を目的としたテストスケジューリング法を提案した。本成果は、2008年10月にIEICE Transactions on Information and Systems、2009年1月に設計自動化に関する国際会議ASP-DAC'09にて成果発表を行った。
光駆動型ナトリウムポンプ：イオン輸送素過程の解明と機能改変の試み

ロドプシンは自然界に普遍的に存在する光受容膜タンパク質である。内包する色素レチナールの光異性化反応をきっかけとして、種々の光中間体を経由する光化学反応を示し、その間に機能を発現する。本研究は、近年、真正細菌から見出された外向きNa+ポンプ(NaR)の分子機構解明を目的としている。今年度は、天然環境下でのNaRの光化学反応を明らかにするため、NaRをナノディスクへ挿入した。ナノディスクは、膜骨格タンパク質(MSP)が脂質二分子膜を取り囲んだ円盤状の構造体であり、その中に膜タンパク質を挿入することで、天然に近い環境下にタンパク質を置くことができる。また、ナノディスクは溶液中での分散性が良いため、分光測定にも適している。ナノディスクへの再構成とそれを用いた測定によって、以下の知見を得た。なお、NaRには、アルカリ塩湖から単離された真正細菌Indibacter alkaliphilus由来のNaRであるIaNaRを用いた。1)IaNaR、MSP、大腸菌脂質を1:1:130のモル比で混合した場合に、最も収量良くIaNaRを再構成できることがわかった。2)ナノディスクに再構成したIaNaRの光化学反応は、界面活性剤で可溶化した場合とは異なり、7つの速度論的に区別される状態を経ることがわかった。3)Na+濃度と静水圧を擾乱として用い、光化学反応に現れる変化を観察した。Na+を取り込んでいると考えられるO1,O2中間体は、いずれの条件においても、過渡的な平衡状態を形成しなかった。したがって、O1からO2への移行は不可逆過程であることが示唆された。4)静水圧を加えるに従って、O1の蓄積量が減少した。O1では疎水的な細胞質側チャネルが水和しており、これによってNa+を取り込み易くなっていると考えられた。NaRを含む複数の微生物ロドプシンの光化学反応は、可溶化処理によって変調されることが知られている。ナノディスクは天然状態の膜タンパク質の性質を調べられる優れた試料である。この試料を用いて、より正確な光化学反応の解析が可能となった。NaRは細胞外側表面に、他の微生物型ロドプシンにはない特徴的な構造を複数持つことが分かっている。これらの部位にアミノ酸変異を加え、輸送活性と光化学反応に現れる変化を調べることで、輸送機構の詳細を明らかにしていく予定である。本年度は以下の知見を得た。1)アルカリ塩湖から単離された真正細菌Indibacter alkaliphilusが持つNaR(IaNaR)の大腸菌発現系を構築した。種々の発現ベクターと大腸菌ホストの組み合わせを検討した結果、1 L培地あたり約40 mgの精製タンパク質を得るに至った。2)IaNaRの光化学反応サイクルを過渡吸収分光測定によって詳細に解析した。その結果、光化学中間体として、K, LM, O1, O2, IaNaR'が順に生成することがわかった。NaRは長波長側に吸収を持つO中間体の生成・崩壊時に、Na+を取込み、次いで放出すると考えられている。本解析によって、O中間体には吸収波長の異なる二つの中間体O1,O2が存在することを見出した。また、O1は直前の中間体であるLMとNa+濃度依存的な平衡状態を形成したが、O2は単独で出現し、その生成・崩壊にNa+濃度依存性は見られなかった。よって、O1,O2はともにNa+をタンパク質内部に取り込んだ状態であるが、O1からO2への遷移時にNa+はタンパク質内を移動し、O2では外部溶媒から隔離されていることが示唆された。膜輸送担体の輸送素過程は、以下の3つの過程から成ると考えられている:1)物質の取込み、2)物質のタンパク質内移動、3)物質の放出。このうち、2)はスイッチ過程とも呼ばれており、膜輸送を実現する上で最も重要な過程であると考えられている。上述したO1からO2中間体への遷移は、NaRのスイッチ過程に対応すると考えられる。今後、この過程の詳細な解析によって、Na+輸送を駆動する仕組みの解明が期待できる。

1)IaNaR、MSP、大腸菌脂質を1:1:130のモル比で混合した場合に、最も収量良くIaNaRを再構成できることがわかった。2)ナノディスクに再構成したIaNaRの光化学反応は、界面活性剤で可溶化した場合とは異なり、7つの速度論的に区別される状態を経ることがわかった。3)Na+濃度と静水圧を擾乱として用い、光化学反応に現れる変化を観察した。Na+を取り込んでいると考えられるO1,O2中間体は、いずれの条件においても、過渡的な平衡状態を形成しなかった。したがって、O1からO2への移行は不可逆過程であることが示唆された。4)静水圧を加えるに従って、O1の蓄積量が減少した。O1では疎水的な細胞質側チャネルが水和しており、これによってNa+を取り込み易くなっていると考えられた。NaRを含む複数の微生物ロドプシンの光化学反応は、可溶化処理によって変調されることが知られている。ナノディスクは天然状態の膜タンパク質の性質を調べられる優れた試料である。この試料を用いて、より正確な光化学反応の解析が可能となった。上述の光化学反応の解析では界面活性剤に可溶化したIaNaRを用いた。しかし、他のNaRは、可溶化状態において膜再構成状態とは異なる光反応サイクルを示すことが報告されている。そこで、IaNaRをナノディスクへ再構成し、膜環境での光反応サイクルを明らかにする。ナノディスクは、膜骨格タンパク質が脂質二分子膜を取り囲んだ円盤状の構造体であり、その中に膜タンパク質を挿入することができる。ナノディスクの表面は浸水的なため、可溶化状態と同様に分散性が良く、可視光領域の分光測定に適している。NaRは細胞外側表面に、他の微生物型ロドプシンにはない特徴的な構造を複数持つことが分かっている。これらの部位にアミノ酸変異を加え、輸送活性と光化学反応に現れる変化を調べることで、輸送機構の詳細を明らかにしていく予定である。上述した通り、IaNaRの大腸菌での大量発現が可能となった。そのため、IaNaRを大腸菌から精製するときに用いる高額な界面活性剤の使用を少なくできた。次年度では、IaNaRを可溶化状態ではなく、ナノディスクに再構成して種々の測定を行う予定である。そのために必要となる脂質を多く購入する必要がある。そのほか、変異体を作成するための遺伝子工学用試薬、光学部品、及び、学会出席のための旅費に使用する。前年度の研究によって、IaNaRを大腸菌から大量に精製することが可能となっている。そのため、この精製に必要となる高額な界面活性剤の使用を少なくできている。次年度は、遺伝子工学用試薬、大腸菌脂質、蛍光試薬などを多く購入し、効率的に研究を進める予定である。
ＡＤＡＭ１７によるＨＢ－ＥＧＦのエクトドメイン・シェディングに関与する制御機構

HB-EGFと、その受容体の1つErbB4はいずれもADAM17によって切断を受ける。本研究では、HB-EGFの切断分泌とこれによる細胞増殖の抑制が必須であるマウス心臓弁形成過程に焦点を当てその制御機構の解析を行った。その結果HB-EGFによる増殖抑制にはErbB1/ErbB4ヘテロ二量体が機能し、さらにこの時ErbB4の切断とそれに伴う細胞内領域遊離が増殖抑制に重要であることが示唆された。またこの抑制過程ではp38MAPK及びJNKシグナルが必須であることも解った。これらの結果は、この過程でADAM17が増殖因子側だけでなく受容体側の制御にも同時に重要な機能を果たしていることを示唆する。HB-EGFはEGFファミリーに属する増殖因子で膜結合型蛋白として合成され、細胞表面において種々の刺激によって酵素的切断(エクトドメイン・シェディング)を受け、その細胞外領域が分泌される。HB-EGFのシェディングを担う主たる酵素としてADAM17が知られている。しかしADAM17によるHB-EGF切断の制御機構は未だ不明である。そこで本研究ではこの制御の分子機構を明らかにすることを目的とする。計画当初、用いる細胞系として一般的な種々の株化細胞を予定していたが、生体内においてADAM17やHB-EGFが実際に機能していることがわかっている細胞系を用いる方が真の制御機構にアプローチできると考え、研究初年度(24年度)に、用いる細胞系をマウス胎仔心臓弁初代培養細胞に変更した。これはマウス心臓弁の発生過程においてADAM17による切断がHB-EGFの生理機能発揮にとって必須であることが各種ノックアウトマウスの解析からわかっているからである。25年度は、昨年度に確立したこの心臓弁初代培養系でのレンチウイルスベクター系遺伝子導入法を用いて、以下のことを明らかにした。(1)HB-EGFによる細胞増殖抑制には受容体としてEGFR/ErbB4ヘテロ2量体が機能し、その下流でJNK及びp38MAPKカスケードが関与している。(2)この時のErbB4の作用様式は、ADAM17とそれに続くPS1による切断が関与するErbB4細胞内領域(E4ICD)の核内移行である事が強く示唆される。(3)HB-EGF欠失時の細胞増殖昂進には受容体としてEGFRホモ2量体が機能し、その下流でRas-MAPKカスケードが関与している。今後は、特に細胞増殖抑制においてHB-EGFの切断とErbB4の切断の両方に関与するADAM17の制御機構を明らかにする。HB-EGFのシェディングを担う酵素としてADAM17/TACEが知られている。研究計画当初、用いる細胞系として一般的な種々の株化細胞を予定していた。しかし生体内においてADAM17やHB-EGFが実際に機能していることがわかっている細胞系を用いる方が本当の制御機構にアプローチできると考え、用いる細胞系をマウス胎仔心臓弁初代培養細胞に変更した。しかしこの初代培養系では遺伝子導入の系が未だ確立されておらず、今年度この確立から研究をスタートした。そこでリポフェクション法やエレクトロポーレーション法などを含めた種々の導入系の検討を重ねた結果、高濃縮レンチウイルスベクター感染法が最適であることがわかった。またこれと並行して、この培養系においてHB-EGFのシェディングに影響を与える細胞内シグナルについて各種シグナル分子の阻害剤を用いた検討によって、p38MAPKあるいはJNKの阻害がHB-EGFの生理活性(弁間質細胞の増殖抑制)を阻害することや、MEK阻害がHB-EGF欠失細胞の過増殖を抑制することを見いだした。これらのHB-EGFのシェディング制御における重要性は知られており、本細胞系でもADAM17の活性化にこれらが関与している可能性があり、今後確立した変異遺伝子導入法等によりさらに検討する。計画当初、用いる細胞系として一般的な種々の株化細胞を予定していたが、生体内においてADAM17やHB-EGFが実際に機能していることがわかっている細胞系を用いる方が本当の制御機構にアプローチできると考え、研究初年度(24年度)に、用いる細胞系をマウス胎仔心臓弁初代培養細胞に変更した。そして翌25年度には、前年度に確立したこの培養系でのレンチ

ウイルスベクター系遺伝子導入法を用いて、HB-EGFによる細胞増殖抑制には受容体としてErbB4が機能している事、さらにErbB4のADAM17による切断とそれに伴うErbB4細胞質領域による核移行の重要性も強く示唆され、これらのことを生体レベルでも検証する必要が生じた。そこで26年度は主にErbB4 KOマウスの情報収集や凍結胚の輸入手続き、そしてその後の凍結胚からの個体作製と繁殖を行った。今後は、得られたErbB4 KOマウスの心臓弁発生過程に関する表現型解析と培養系の実験から、特に細胞増殖抑制においてHB-EGFの切断とErbB4の切断の両方に関与するADAM17の制御機構を明らかにする。前年度の平成26年中に、ADAM17によるHB-EGFの切断機構について培養系での解析を予定していたが、この解析でHB-EGFの受容体としてErbB4が機能することが示唆されたため、これを生体レベルでも検証する必要が生じ、ErbB4 KOマウスを海外より入手・解析することとなった。そして本年度において、入手したErbB4 KOマウス及びその胎仔弁由来細胞を解析したところ、野生型に比べてその増殖性が昂進していることが認められた。さらに、ErbB4のスプライシングバリアントの各フォーム(切断型JM-aあるいは非切断型JM-b)を野生型あるいはErbB4 KO細胞に導入することで、このうち切断型JM-aタイプの方が、ErbB4 KO細胞の増殖性昂進異常を正常に戻すことができたこと、逆に非切断型JM-bタイプの導入によって野生型細胞の増殖性が昂進したことなどから、HB-EGFによる心臓弁間質細胞の増殖抑制には、受容体としてErbB4が関与することを明らかにし、さらにこの活性化に伴ってADAM17によるエクトドメイン・シェディングとそれに引き続くpresenilin-1による膜内切断、そしてこれらによって生じるErbB4細胞内領域ICDによる各シグナル経路の活性化が重要であることが強く示唆する結果を得た。HB-EGFと、その受容体の1つErbB4はいずれもADAM17によって切断を受ける。本研究では、HB-EGFの切断分泌とこれによる細胞増殖の抑制が必須であるマウス心臓弁形成過程に焦点を当てその制御機構の解析を行った。その結果HB-EGFによる増殖抑制にはErbB1/ErbB4ヘテロ二量体が機能し、さらにこの時ErbB4の切断とそれに伴う細胞内領域遊離が増殖抑制に重要であることが示唆された。またこの抑制過程ではp38MAPK及びJNKシグナルが必須であることも解った。これらの結果は、この過程でADAM17が増殖因子側だけでなく受容体側の制御にも同時に重要な機能を果たしていることを示唆する。26年度に、ADAM17によるHB-EGFの切断制御機構について心臓弁間質細胞の初代培養系での解析を予定していたが、この系での予備的実験の結果から、HB-EGFの受容体としてErbB4が機能している事が新たに示唆され、これを生体レベルでも検証する必要が生じ、ErbB4 KOマウスを海外より入手・解析することとなった。そしてそのための情報収集や実際の輸入手続き、その後のマウス繁殖などに相当の時間を要し、予定していた培養系での解析が遅延した。
物語における時間情報に基づく視点取得メカニズム

時間情報と空間情報を独立に操作した物語を作成し、時間推移の検出に与える主観的時間評価の効果を検討した結果、物語における時間推移の検出において、読者の主観的時間評価が影響することが明らかになった。読者は、自分の身体フィードバックに基づいて物語に書かれた時間情報を体験し、空間認知能力によって物語に書かれた空間情報を理解していることがわかった(Komeda et al., 2015)。この研究成果は、国際学会(Annual Meeting of the Society for Text and Discourse)で発表をした。現在、論文を執筆中である。自閉スペクトラム症成人の視点取得方略を明らかにするために、fMRI (functional Magnetic Resonance Imaging、機能的核磁気共鳴画像法)を用いた検討した結果、自閉スペクトラム症成人は、物語における視点取得を、時間情報を使わずに空間情報に基づいて行うことがわかった。さらに、参照時から「1時間後」という時間の経過において、定型発達成人の場合、前部帯状回および補足運動野が活動することが明らかになった。自閉スペクトラム症成人の場合は、この領域の活動は時間経過と相関しなかった。以上の研究成果は、「こころの時間地図を脳に描く」という領域の目標達成に寄与すると考えられる。27年度が最終年度であるため、記入しない。自閉スペクトラム症(ASD)者は、他者の視点を理解することが不得意であり(Frith, 2003)、その原因は、同時並行的な時間の認知に関する障害が原因であるかもしれない(熊谷, 2011)。ASD者による時間情報処理の困難さを示す重要な症例として、昔の出来事を予期せず鮮明に思い出す症状がある(杉山, 2000)。加えて、特定の感覚に対して過度に強く反応してしまう感覚過敏がある。感覚過敏の特性は、時間がもつ連続的変化を知覚することを難しくさせる。視点取得メカニズムを解明するために、第一に、大学生を対象として、時間情報と空間情報を独立に操作した物語を作成し、時間推移、空間変化の検出に与える主観的時間評価の効果とメンタルローテーションによる表象操作の効果を検討した。第二に、時間的展望をもつことや他者感情の推測に困難をもつASD者を対象に、機能的核磁気共鳴画像法(fMRI)を用いた検討を行った。大学生を対象とした研究は、2015年7月にミネアポリスで行われるSociety for Text & Discourseで発表をする。ASD者を対象としたfMRI研究は、現在データを取得している段階で、今年の前期には終了し、成果を論文としてまとめる。大学生を対象とした時空間視点取得の研究が、順調に進展している。さらに、2年目後期で行う予定であったASD者を対象としたfMRIの実験が、前期で終了する見込みである。以上のことから、当初の計画以上に進展していると考える。大学生を対象とした時空間視点取得の研究に関して、成果を国際学会で発表し、国際学術雑誌に投稿する。ASD者を対象としたfMRI研究に関して、データを解析し、成果を国際学会で発表し、国際学術雑誌に投稿する。