hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
標準化と地域医療への活用を目指した波形伝送・交換プロトコールの検証

標準化が遅れていた医用波形について、我が国で開発された波形記述規約MFERを標準プロトコルとする診療施設間連携のための波形情報配信システムを構築した。MFER波形配信機能を波形変換機能から分離することで、レスポンスの確保とともに既存波形情報とMFERの共存を短時間で容易に実現できた。MFERは波形精度が高くデータサイズが小さいので狭帯域通信に対応するとともに、診療機関を跨いだ波形情報リポジトリ構築や遠隔バックアップにも好適であることが示された。波形表示をIHE-Jの統合プロファイルに準拠させた表示・閲覧系は2008年のコネクタソンに合格した。本研究の成果を心電図に適用したシステムを用い、基幹施設間におけるMFERを用いた波形情報の日常的相互参照が開始されている。1.MFERプロトコール変換・配信最適化に関する実験(1)MFER変換サーバと配信サーバを兼用させた場合に生じる配信遅延の原因が、変換処理プロセスに起因する事を解明し、変換機構と配信機構の分離が有効である事を明らかにした。(2)MFERフレーム情報付加によるオーバーヘッドの増加が通信遅延に及ぼす影響を調べ、ヘッダ情報種の増加およびそれによって生じるペイロード容量減少の影響は小さく、12誘導心電図の伝送では問題が生じない事を明らかにした。(3)同様の実験をSVGで行った場合には、ペイロードサイズがMFERに較べて大きい事によるペイロ-ド容量減少の影響か大きい事(28倍の遅延)が判明した。2.SVG方式を用いた細密ベクターデータ記述コード群の開発と実装(1)理想的(ノイズのない)状態で保存したビットマップ画像の2次元ベクターデータへの変換は良好な結果を示したが、実データを用いた実験では、変換前にビットマップ画像から波形以外の情報を除去する前処置が必須となる事が判明し、実用に際して、この事が問題となる可能性が示された。(2)SVG化されたデータ精度の向上には、データの高精度化に比例(約2乗)してデータサイズを増大させる必要がある事が判明した。逆に、2次元ベクターデータのビットマップ変換に際しては、この問題は発生せず、SVGをMFERのプレゼンテーションツールとして用いることの有用性が示唆された。3.配信実験環境の構築(1)上述の結果および2008年1月に実施されたIHE-Jコネクタソンの結果をもとに、実際の遠隔診断環境を模した波形情報検証環境を構築した。2.回線、サーバおよび閲覧端末のセキュリティについて、模擬攻撃、データ奪取シミュレーションなどを用いて検証し、PCIDSSおよびIPSec/X509v3に準じてシステム、伝送路、認証機構を整備することで、HL7J-CDA-002,003に準拠した地域医療での使用に耐えると考えられるセキュアな環境を構築した。3. MFER(波形データ)およびHL7-CDA(属性情報)を用いた波形情報と電子カルテのURL連携モデルを構築した。また、既存のベンダ固有波形システムとMFER波形情報システムの共存環境の構築に成功し、既存ベンダ固有波形からMFER波形への円滑・安全・簡便な移行シナリオを構築した。加えて、実証試験によってシナリオの妥当性を証明した。4.波形情報を用いた診療・研究のuse case・プロシジャについて検討し、MFER波形参照サーバとMFER波形情報閲覧端末間の心電図リストの読み出し(Card-5:Retrieve ECG List)およびMFER心電図データの読み出し(Card-6:Retrieve ECG Document for Display)の2つのトランザクションをIHE-J循環器テクニカルフレームワークのRetrieve ECG for Display統合プロファイルに準拠させた。この成果に基づいた波形情報システムのIHE-Jコネクタソン2008への参加・合格によって、IHE-Jのテクニカルフレームワークに基づいた他システムとの相互接続性を確認した。
分子回路工学を目指したπ共役系高分子ワイヤのナノギャップ電極接続技術の開発

本年度は、ナノギャップ電極対の大量生産を片方の電極から高分子ワイヤを重合成長させることおよび分子ワイヤの成長末端をもう一方の電極表面に信頼性高く接続する技術の開発を目的に、下記の検討項目を実施した。ナノギャップ電極の分子配線の予備検討として、両親媒性ブロック共重合体にリチウム塩をドーピングした複合膜のミクロ相分離構造に基づく異方性イオン伝導膜の作製を行った。イオン伝導の絶対値は低いものの垂直配向PEOナノシリンダードメインが伝導経路となる異方性比が4桁におよぶ薄膜材料を作製した。受入研究者の開発した両親媒性ブロック共重合体薄膜のミクロ相分離構造をテンプレートとする周期20ナノメートルの銀ナノ粒子アレイの大面積作製に成功した。本法は、六方格子配列した親水性ミクロドメインを反応場とする銀イオンの選択的ドーピングと電子線照射によるポリマー薄膜のエッチングと銀イオンの還元反応を同時進行させる簡便なプロセスである。ブロックコポリマーの体積分率および分子量を変えることにより、銀ナノ粒子間距離を系統的に制御できるため、表面プラズモン特性の検証用材料ならびにナノギャップ電極に配置した場合に単電子トランジスターの高信頼性作製プロセスに展開可能である。上記高分子ワイヤの作製と複合化することにより、分子回路工学の要素技術として、一方の電極から他方の電極へ向かって成長する高分子ワイヤの理想的接点接続法の可能にするものである。平成17年度(5ヵ月間)は、主にナノギャップ電極作製における最適な実験装置のセットアップを行った。以下に検討した2種類のアプローチを示す。1)電気化学的手法はじめに、従来のフォトリソグラフィーによってマイクロギャップ電極を作製した。金属電極素材には、AuおよびPtを用いた。約20□mの電極間ギャップを作製し、動作確認を行った。更に、同様の手法により、5□m程度の小さな電極ギャップの作製にも成功した。金属電極厚はおよそ150ナノメートルとした。電気化学的手法によるナノギャップ電極の作製においては、漏出イオン電流を減らすために厚さ1□mの電極層により、絶縁層ギャップ領域以外(面積:25マイクロメートル×20マイクロメートル)の全ての表面を被覆した。ここでは、赤外光領域において透明な非ドープのシリコンウエハおよび可視光から紫外光領域まで高い透明性を示す石英ガラスの2絶縁基板を利用した。両基板上の電極ギャップは、固定される分子ワイヤの分光学的特性評価に応用可能である。作製したマイクロギャップ電極を用い、電解めっき法(Au、Pt、Ag、その他を含む)によるナノギャップ電極の作製を行った。2)光化学的手法今研究期間において、ナノギャップ電極の新規作製方法を確立した。ブロック共重合体ナノ相分離構造テンプレートのナノドメインを反応場として利用し、ドメイン内における銀イオンの光化学還元による金属銀ドットの基板配列制御を試みた。これまでに、ブロック共重合体の親水性ナノドメインが金属陽イオンの還元反応場として利用できることを予備的に確認した。本年度は、ナノギャップ電極対の片方の電極から高分子ワイヤを重合成長させることおよび分子ワイヤの成長末端をもう一方の電極表面に信頼性高く接続する技術の開発を目的に、下記の検討項目を実施した。金電極表面に重合開始剤を化学結合させ、各種分光学手法により結合状態を評価した。さらに、極上に固定化された開始剤から4-クロロピリジンの連鎖的縮合重合反応を行い、カチオン性π共役ポリピリジニウムブラシの作製を行った。ポリピリジニウムの分子量制御には、開始反応、生長反応、停止反応の再検討が必要であるが、現象論的には分子量分布の狭いリビング重合様の挙動が確認された。

上記高分子ワイヤの作製と複合化することにより、分子回路工学の要素技術として、一方の電極から他方の電極へ向かって成長する高分子ワイヤの理想的接点接続法の可能にするものである。
ロケットターボポンプに関する先端的翼列設計支援データベースの開発

ロケットターボポンプ用の翼列を対象とする極低温気液2相流れを数値的に解析する手段として、均質非平衡混合体モデルを用いた設計支援計算コードを完成した。本解析コードは、移流項にTVDスキームを適用し有限体積法に基づく統一的3次元流れ解析コードであり、特に、キャビテーションが問題となるインデューサーの設計や、その流体力学的性能の予測に威力を発揮するものと期待される。これまでの解析結果から、2相流れにおいてはボイド率により音速が大きく変化し、容易に超音速流入状態となるため、2次元翼列に特徴的なユニーク・インシデンス条件の制約がインデューサーに課されること、および気液間の相変化の影響を含めると、気相の圧縮性効果を弱める傾向が生じることなど興味ある結果が示されている。航技研角田支所における液化窒素を作動流体としたロケットポンプ2相吸込特性の実験によれば、ボイド率がある値を越えると急激にポンプヘッドが下降する現象が見出されており、本解析コードによるそうした実験結果の数値シミュレーションの結果から、本研究で確立されたソフトウェアが設計支援トールとして、充分有用性をもつことを示唆している。ロケットタ-ボポンプの主要な流体要素であるインデュ-サ-や遠心ポンプおよびタ-ビンなどに利用される翼列に対し、2相流体を含む包括的な保存形式に基づく有限体積法数値解析コ-ドの作成をほぼ完了した。さらに、計算安定性を増すためのTVD化を進め、市販ワ-クステ-ション(16MBコアメモリ-,2Mflops程度)により、コ-ド検証を行った。インデュ-サ-やポンプさらにタ-ビンなど流動過程の異質な各要素に対する統一的な開発コ-ドの適用に関しては、物理現象そのものが境界条件を介して逆に解析方法を抱束する要因もあり、純粋に数学的な手順を抽出し共通化することに制限が生じるものの、プログラムのブロック化、および計算モデルの前提条件やインプット境界条件など各要素特性が顕在化する因子を分離することによって、汎用コ-ドの性格を最大限に活かす検討を行った。実験解析においては、実機液酸タ-ボポンプのインデュ-サ-をモデルにして閉水管路における回転試験を行い、キャビテ-ションの発生とポンプ特性の関係を調べた。さらに液体素を使用しての極低温環境の実験を行いつつある。これら実験には、レ-ザ-流速計を主体とする新しい計測手法の確立が急務であり、位相ドップラ-法など極低温環境下におけるボイド率計測という初の試行を含んでいる。最後に、デ-タベ-ス構築作業の一貫として、米国や欧州の液水液酸エンジン用タ-ボポンプ諸元について文献調査を行った。また、入手可能になった旧ソ連における同諸元に関しても情報収集を進めている。
炭素質薄膜の電子物性の制御とそのデバイス化

本研究では第一段階として熱CVD法により1000°C以下の低温で調製した炭素質薄膜の電子物性に着目し,調製条件等が及ぼす薄膜の生成過程、得られる薄膜の電子物性への影響等を検討した。その結果、ピロメリット酸二無水物を原料とした時450°C付近から薄膜の堆積が確認され,500°Cでは10^<-2>S/cmの電気伝導性を有する薄膜が堆積することを確認した。また,700°Cを境にそれ以下の温度ではp型半導体の性質を有し,それ以上でn型半導体的性質を示すことを見出した。さらに炭素質薄膜は薄膜の成長速度が得られる電子物性に大きく影響し、これらを通して,電子物性制御の可能性を示唆した。この結果をもとに第二段階として炭素質薄膜を新しい半導体として位置付け、シリコンとのアロイングにより電子デバイスの作成を試みた。その結果、n型シリコンと500°C前後で堆積させた炭素質薄膜との積層体が光電効果を示すことが見出され,太陽電池として機能することを示した。そして,炭素質薄膜の調製条件が与えるダイオード特性・太陽電池特性に及ぼす影響について検討した。その結果、本太陽電池は有機系としてはこれまでになく高い変換効率を示し(本研究中では7.0%)、さらに、セノレ構成を改良することにより、さらなる高効率化の可能性があることを示唆した。今後本研究を基礎に、より実用性の高い太陽電池の開発を行うとともに、炭素を用いた新しい電子デバイス作成の可能性を追及していく。
音声単位に関するメタ言語能力の発達と形成-方言を話す子どもを対象に-

本研究は、従来取り上げられてこなかった、方言使用地域の幼児および就学期児童の、メタ音声的能力の発達を明らかにすることを目標とした。この目標のために、まず、山形県庄内の保育園、小学校児童の方言と共通語の交替現象に関する会話分析を行って基礎的データをえた。特定のクラスを保育園から小学校1年まで追跡し、音声・映像資料を収集し文字化して談話コーパスを作成した。方言を授業の公式度の違いを表示、理解するリソースにしていることが明らかになった。次に音声に対する自覚的な構えを実験的に調べるために、方言と共通語を用いる絵カード選択課題を作成し、就学前幼児のメタ音声能力の発達過程を検討した。仮名文字という書き言葉の習得と、共通語に対する分解や方言の自覚が相関していることが明きらかになった。本研究は、従来問題にされてこなかった、方言使用地域の幼児および就学期の児童が音声単位のメタ認知過程を、方言と共通語(書きことば)の相互影響・干渉の観点から明らかにすることを目的にしている。今年度は、(1)調査方法の開発とその予備的実施と、(2)メタ言語能力の形成プログラムの開発のための音韻論および文字論のレビューの2点を具体的な作業目標にした。(1)については、調査方法の開発を重点的にすすめ予備調査を行なうことはできなかったが、共通語・文字能力に関する調査、ならびに方言-共通語の使い分けと書きことばに関する自覚性の度合いを測定するテスト項目を作りパイロットスタディー的に山形県庄内地方の少数の幼児に実施した。具体的にいえば、a幼児および児童の共通語化の度合い、b一般的な音声単位分析能力、c文字能力、e方言語彙の音声単位分析、f複数の分析単位間の移行テストからなるテストを開発した。(2)については日本語音声のモ-ラおよびリズムに関してレビューした。また調査予定地の北奥羽方言に関する特徴をリストアップし、従来報告された共通語化の項目について整理した。また従来の音声能力の発達研究および書きことば能力の発達研究を総覧して研究方法をまとめた。以上の今年度の作業から、私たちの目的と方法が、生活語である方言と生活語を拡張する書きことば=共通語の相互関係を問題にするという意味において、ユニークであり新しい観点から言語発達過程に光を当てる研究であることを再確認した。幼児・児童の音声単位に関するメタ言語意識を記述する基礎資料を得ることを目的にして、方言使用地域の小学生の授業場面における、方言と共通語のコードスイッチング現象に注目した。小学1年生から4年生までの教室談話を分析して、以下の3点を明らかにした。(1)方言音声ならびに語彙の特徴の記述(2)方言音声の使用される環境、使用の手掛かり(3)共通語への移行の環境と手掛かり特に(3)について共通語へ移行する際には、これが共同行為として成立し、教師の発するさまざまな身体的アーチファクトが利用されているという、従来にない新しい知見を得ることができた。次に音声に対する自覚的な構えを実験的に調べるために、方言と虚通語を用いる絵カード選択課題を作成し、就学前幼児のメタ音声能力の発達過程を検討した。
微化石の分子科学的情報を活用した人類紀の新しい古環境解析

本研究では、これまでほとんど用いられてこなかった微化石の分子科学的情報を活用して、どのような古環境復元が可能かについて、第四紀の日本列島を対象として、具体的に明らかにすることを目指した。この過程では、内陸域に分布する火山灰土中に含まれる植物珪酸体の酸素同位体比分析を一つの柱におき、これに、花粉や有機物のDNA解析・系統解析をもう一方の柱として検討を進めた。いずれの視点からの解析についても、日本はもちろん、世界的にみてもまだ十分手のつけられていない研究分野である。最終年度は、これまでの研究成果をふまえつつ、実験計測設備の点検と稼働をすすめ、火山灰土試料の採取調査および現生植生調査および土壌中有機物試料の採取も継続して実施した。サンプリングした堆積層序の解析とESR/TL/OSL年代測定、AMS14C年代測定を進め、火山灰試料からの酸素同位体比分析に供する植物珪酸体を抽出し、最終報告書の作成に向けた各種の作業を行った。また、植物微化石のDNA系統解析を行うための現生植物試料DNAの基礎的な解析を行った。さらに、尾瀬ヶ原湿原の泥炭試料を対象として、DNA解析のための単粒子花粉化石の抽出方法を確立し、複数層準から、各層準300粒以上の花粉化石を抽出した。微化石や土壌有機物のDNA解析・系統解析については、種亜種レベル以下での遺伝子情報の差異から、植物体の適応・移動・拡散・絶滅などを推定し、その年代も加味しながら、環境変化との対応性について検討する必要があるが、化石花粉を対象とした実験計測条件を確立するため、それらの基礎となる現生植物のDNA解析について、更なる基礎的な検討が必要であることがわかった。以上のような経過をふまえ、最終報告書の作成を進めている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、これまでほとんど用いられてこなかった微化石の分子科学的情報を活用して、どのような古環境復元が可能かについて、第四紀の日本列島を対象として、具体的に明らかにすることを目指している。この過程では、内陸域に分布する火山灰土中に含まれる植物珪酸体の酸素同位体比分析を一つの柱におき、これに、花粉や有機物のDNA解析・系統解析をもう一方の柱として検討を進めたいと考えている。前者については、古環境解析用の試料採取などの段階から研究が開始できるが、後者については、現生植物の系統解析など基本的な分析検討から始める必要があり、いずれの視点からの解析についても、日本はもちろん、世界的にみてもまだ十分手のつけられていない研究分野であると捉えている。上記の目的に照らし、初年度は、まず、事例的に火山灰土から植物珪酸体を抽出・濃集する方法について検討した。また、現生植生を対象とした植物珪酸体の酸素同位体比データを収集するための試料採取にも努めた。前者については、重液などを用いた各種の分離抽出を試したが、まだルーチン的な処理方法を確立するところまでは到達できていないので、次年度も継続して検討をすすめ、早い段階である程度の目どをつけたいと考えている。合わせて、現生植生のサンプリングも継続して進め、より多くの現生植生の植物珪酸体に関する酸素同位体比の基礎データを蓄積することに努めたい。花粉や有機物のDNA解析・系統解析については、既存研究の洗い出しと問題点・課題を整理するために、共同研究者とともに定期的な勉強会を行った。そして、泥炭層に含まれる花粉化石の抽出・濃集方法に関して具体的な検討を始めた。併せて、研究代表者研究室所蔵の各種試料からDNA解析・系統解析に適すると思われる試料のピックアップを行った。初年度ということもあり、とりあえずは、当初の予定にそった形で大方の作業に手をつけることができたと捉えているので、上記のような評価とした。上記の目的に照らし、昨年度は、火山灰土から植物珪酸体を抽出・濃集する方法について検討し、現生植生を対象とした植物珪酸体の酸素同位体比データを収集するための基本的な調査も継続した。前者については、重液などを用いた各種の分離抽出を試行錯誤的に組み合わせ、何とかルーチン的に抽出できる段階まで近づいたと考えている。これと併せて、現生植生の植物珪酸体に関する酸素同位体比の基礎データを蓄積するための基本的な調査を継続し、一部、分析用の試料を採取した。花粉や有機物のDNA解析・系統解析については、既存研究の洗い出しと問題点・課題を整理し、泥炭層に含まれる花粉化石の抽出・濃集方法に関して具体的な検討を進めた。

そして、必要な分析実験機器類の調達を行い、研究代表者研究室所蔵の各種試料からDNA解析・系統解析に適すると思われる試料のピックアップと花粉化石の抽出を試験的に実施した。思った以上に、DNA解析用の花粉化石の抽出に、技術的な困難さがあることがわかってきた。密度勾配を利用した花粉化石の濃集方法や一粒毎の花粉粒子ピックアップに工夫が必要で、実験器具類も、特殊なものを用意する必要があることが分かってきた。これらの対策に少々時間を要したため、上記のような評価とした。本研究では、これまでほとんど用いられてこなかった微化石の分子科学的情報を活用して、どのような古環境復元が可能かについて、第四紀の日本列島を対象として、具体的に明らかにすることを目指している。この過程では、内陸域に分布する火山灰土中に含まれる植物珪酸体の酸素同位体比分析を一つの柱におき、これに、花粉や有機物のDNA解析・系統解析をもう一方の柱として検討を進めたいと考えている。前者については、古環境解析用の試料採取などの段階から研究が開始できるが、後者については、現生植物の系統解析など基本的な分析検討から始める必要があり、いずれの視点からの解析についても、日本はもちろん、世界的にみてもまだ十分手のつけられていない研究分野であると捉えている。上記の目的に照らし、本年度も火山灰土から植物珪酸体を抽出・濃集する作業を進め、現生植生を対象とした植物珪酸体の酸素同位体比データを収集するための基本的な調査を継続した。前者については、重液などを用いた各種の分離抽出を試行錯誤的にみ合わせた方法で酸素同位体比分析用の試料の抽出を進めた。これと併せて、現生植生の植物珪酸体に関する酸素同位体比の基礎データを蓄積するための基本的な調査を継続し、分析用の試料処理も進めた。花粉や有機物のDNA解析・系統解析については、泥炭層に含まれる花粉化石の抽出・濃集方法に関してこれまで検討してきた具体的方法を基に、研究代表者研究室所蔵の各種試料や新たに採取した試料などからDNA解析・系統解析に適すると思われる試料のピックアップと花粉化石の抽出を進めた。上記のような前処理によって、酸素同位体比計測やDNA解析を行える試料の抽出についておおよその目途をつけることができた。最終年度は、いくつかの具体的な事例について、その古環境復元の解析を深める予定である。花粉化石や植物珪酸体等の効率的な抽出について試行錯誤的に検討を進めることが必要な部分があり、この点に関する作業に予想以上に課題があることが見えてきている。これまでの研究で、最終年度に向けてこの部分は、何とかクリアできるところまで辿りついたとは考えているが、上述のような点から、進捗状況についてはやや遅れているとした。本研究では、これまでほとんど用いられてこなかった微化石の分子科学的情報を活用して、どのような古環境復元が可能かについて、第四紀の日本列島を対象として、具体的に明らかにすることを目指した。この過程では、内陸域に分布する火山灰土中に含まれる植物珪酸体の酸素同位体比分析を一つの柱におき、これに、花粉や有機物のDNA解析・系統解析をもう一方の柱として検討を進めた。いずれの視点からの解析についても、日本はもちろん、世界的にみてもまだ十分手のつけられていない研究分野である。最終年度は、これまでの研究成果をふまえつつ、実験計測設備の点検と稼働をすすめ、火山灰土試料の採取調査および現生植生調査および土壌中有機物試料の採取も継続して実施した。
日本庭園の特徴的構成に対する認知科学的解析

日本庭園の特徴的構成のうち、異なるパターンの対植と透かしのある植栽とない植栽を対象に中国、北米の人々の認知過程を比較・解析した。異なるパターンの対植に対する日本人と韓国人の眼球運動を比較した朴ら(2006)を踏まえ、アメリカ人(佐野ら,2009)、中国人、カナダ人の眼球運動を解析した結果(Sonet.al.,2012)、日本人の特異的な認知特性がより明確になった。また、透かしの有無に対する日本人の眼球運動と脳血流量の同時計測を行った結果、透かした樹木は日本人にとって視覚刺激が少なくリラックスさせる効果があることが明らかとなった(Joetal,2012)。日本庭園の特徴的構成のうち、(1)異なるパターンの対植、(2)透かしのない植栽とある植栽、を対象に、韓国、中国、アメリカ合衆国の人々の認知過程を比較・解析し、日本庭園の特徴的構成と日本人の認知特性の関係を解明することを目的としている。異なるパターンの対植に対する日本人と韓国人の眼球運動を比較した朴ら(2006)と同様のパターンの対植に対するアメリカ人30名の眼球運動を解析した結果、個人差が大きく属性による細かな比較検討が難しかったことから、2008年11、12月にさらに50名を対象に追加多験を行った。また、その実験では典型的な2樹種について透かし剪定の有無による眼球運動の比較解析も行った。その結果、対植に対するアメリカ人の停留点分布には朴ら(2006)で報告した韓国人の傾向と類似し、日本人とは異なるζとがわかった。これは、対植やグリ,ド植栽の多い韓国やアメリカと、それらが少ない日本に生まれ育った人々の間で対植に対τる眼球運動に違いが見られたことであり、それぞれの国に一一般的な植栽の特徴と眼球運動0問の関連性を示唆するものである。また、透かしの有無については、多くのアメリカ人被題者が透かしていない樹形を好んでおり、日本人とは大きく異なった。こうした室内実験の一方、実際の庭園における対植の視覚心理的効果を実験的に検討した結果、幾何学式庭園の車線を強調する効果のあることが明らかとなった(須田ら、2009)。これらの実験も含めて9月には韓国・緑地環境デザイン学会で緑地の視覚心理的効果について招待講演し(藤井、008)、合わせてオリエンタルハーブとウエスタンハーブの香りに対する脳血流反応の違い1:ついて発表した(Jo et aL, 2008)。脳血流については、異なる芝草に対する視覚・触覚の反応の関係についても研究発表した(小埜木ら、2008)。さらに、平成21年3月に次年度予定の対植に対する中国人の眼球運動計測について北京林業大学で打ち合わせするとともに、中国庭園の植栽や石組みの特徴について現地調査し、文植が一般的であることを確認した。2008年11,12月に実施した異なるパターンの対植に対するアメリカ人の眼球運動を解析し、日本人・韓国人の同様のデータ(朴ら、2006)と比較した結果、アメリカ人の停留点分布が韓国人の傾向と類似し日本人とは異なることがわかった(佐野ら、2009)。また、円錐形と円形の樹形て透かし剪定の有無と眼球運動の関係を解析した結果、アメリカ人被験者の多くは透かしていない樹形を好み、停留時間に違いが見られた。一方、日本人の男女40名を対象に透かしの度合いと好みや眼球運動の関係を解析した結果、適度に透かした樹形が好まれたことから、透かしに対する日本人とアメリカ人の評価に違いがあることが確認てきた。また、枝抜き剪定に切り詰め剪定を加えた対象木の印象評価ては男女で明らかな違いがあり、男性で評価が高く、女性で低かった。樹木の透かしに対する日本人の特徴を解明するため、2010年3月に中国の盆栽を調査した結果、中国盆栽では日本盆栽のような細かな手入れは為されず観賞視点も日本に比べて遠いと判断された。このような実態を踏まえ、次年度に中国人の対植と透かしに対する眼球運動解析を実施する。脳血流については、小埜木ら(2008)を踏まえ、男女各々20名の被験者を対象に異なる芝草に対する視覚・触覚の反応と男女による違いを解析した結果、「硬い」「荒々しい」「痛い」等の印象をもった芝草ては関係部位の脳血流か増加し、一方「落ち着く」「潤いのある」「快適な」「柔らかい」なとの印象をもった芝草ては脳血流が減少し、沈静化する傾向か認められた。また、男性は芝草に対して見た時も触った時も同様の印象をもつ傾向が見られたか、女性は見た時と触った時て明らかな違いが見られた。

本研究は、日本庭園の特徴的構成のうち、1)異なるパターンの対植、2)透かしのない植栽とある植栽、を対象に、韓国、中国、アメリカ合衆国の人々の認知過程を比較・解析し、日本庭園の特徴的構成と日本人の認知特性の関係を解明することを目的としている。1)異なるパターンの対植に対する日本人と韓国人の眼球運動を比較した朴ら(2006)、それらとアメリカ人の眼球運動を比較した佐野ら(2009)を踏まえ、中国人を対象にした実験を行う予定であったが、尖閣列島近海での中国漁船衝突事件によって中国での実験が困難になったことから、韓国と日本の代表的庭園構成樹種であるマツとウメの香りに対する韓国人、日本人被験者の反応を比較した結果、ウメの花の香りに対する日本人被験者の反応は交感神経系優位で言語・運動・記憶野の脳血流量が増加し言語評価で心地よく評価され活気も増したことからウメの花の香りが生理・心理的に活性化させる効果があることが明らかとなった。また、マツの葉の香りに対する韓国人被験者の反応においては運動・記憶野・感情・判断領域の脳血流量が増加し言語評価では自然で農村的な印象が持たれ活気が大きく増加した(Jo,H. et al,2010)。したがって、日韓の代表的庭園構成樹種が両国の人々の生理・心理に大きな反応をもたらすことが明らかとなった。2)透かしの有無に対する眼球運動及び脳血流量を同時計測する実験を日本人被験者を対象にして行った。対象樹種は日本庭園の代表的構成樹種であるマツと世界の庭園で広く見られる縦長楕円形の樹形をもつ常緑広葉樹としてツバキを対象に樹冠が密な個体と透かした個体を用いた。眼球運動と脳血流量の同時計測は長年の課題であったが、最新の眼球運動計測装置を使うことで多くの被験者で同時計測ができ、目下データ解析を進めているところである。1)異なるパターンの対植に対する日本人と韓国人の眼球運動を比較した朴ら(2006)、それらとアメリカ人の眼球運動を比較した佐野ら(2009)を踏まえ、中国人、カナダ人を対象にした実験を行った結果、韓国人、アメリカ人と類似する結果となり(Son et al.,2012)、日本人の特異的な認知特性がより明確になった。2)透かしの有無に対する眼球運動及び脳血流量を同時計測する実験を日本人を対象にして行った結果、透かした樹木は日本人にとって視覚刺激が少なくリラックスさせる効果があることが明らかとなった(Joo,et al.,2012)。そして、平成23年度予算を一部執行延期して調査したニューヨーク州ソネンブルグの日本庭園は、1906年に日本人が設計・施工し、1915年にアメリカ人によって拡張されたことから、日本人とアメリカ人の日本庭園の捉え方や表現に明確な違いがみられた(Ristovska,2013)。つまり、日本人設計・施工区域とは異なり、アメリカ人拡張区域には曲折のある流れや凹凸のある地形でおいても規則的な列植が為され、また植栽の形状を維持し奥行き感を保つ透かし剪定が為されていなかったために日本庭園の多様な自然的構成や空間的広がりが失われていた。したがって、本研究で解析対象とした日本庭園の特徴的構成が妥当であることが確認できた。24年度が最終年度であるため、記入しない。
甲状腺癌幹細胞の放射性ヨードに対する感受性

甲状腺癌組織には癌幹細胞と通常の癌細胞が存在し、放射性ヨードに対する感受性が異なっているという仮説のもと、甲状腺癌細胞から癌幹細胞の同定・単離を試みた。まず甲状腺癌細胞株を用いた実験から、癌幹細胞マーカーを効率よくスクリーニングできるアッセイ系を確立し、マーカー候補として、ALDH1活性やCD326等を同定した。しかし、すべての癌細胞に共通のマーカーは無く、各症例ごとにマーカーが異なっている可能性も示唆された。上記マーカーによって分離した細胞に放射線照射を行い比較検討したところ、放射線感受性自体にはマーカーとの関連は認められなかった。本年度は、まず癌細胞株を用いた実験より開始した。現在までのところ、癌幹細胞の直接的・明確な証明となるのは、ヌードマウス等の免疫不全マウスでの腫瘍形成能を見る実験である。種々の甲状腺癌細胞株を用い、ヌードマウスでの腫瘍形成能を検討したところ、4つの細胞株に腫瘍形成能を認めた。さらに細胞外マトリクスであるマトリゲルを併用したところ、かなり少数の癌細胞(50個)からでも腫瘍形成が見られた。ただし、マトリゲルを使用しても、上記4細胞株以外の細胞では腫瘍形成は見られず、マトリゲルは細胞株の腫瘍形成を促進するものの、新たに腫瘍形成能を付与する訳ではないと考えられた。本実験によって、腫瘍形成能のある(=検証可能な癌幹細胞を含む)甲状腺癌細胞株を同定し、今後の研究の基盤とする事ができた。次に、特殊な低接着培養面を持つプレートと、無血清、種々の成長因子を含んだ培地を組み合わせる事によって、癌幹細胞に対するスフェロイド培養法を構築した。上記4種類の細胞株ではスフィア形成が観察されたが、他のヌードマウスで腫瘍を作らない細胞株では、スフィア形成は認められなかった。この培養法は、ヌードマウスでの腫瘍形成とよく相関する事から、癌幹細胞を選択的に培養できていると考えられる。少なくとも、形成されたスフィアは、癌幹細胞を含んでいる事が示唆される。今後、この培養法とセルソーターを組み合わせる事によって、効率的な癌幹細胞のアッセイ法を確立できる可能性があると考えられた。FACSVantageのCloneCytオプションを利用することによって、正確な数の細胞を直接multi-wellプレートにソート出来ることが分かった。これに、前年度に確立できた低接着表面加工されたプレートと特殊な無血清培地を粗み合わせることにより、種々の癌幹細胞マーカーに対して、細胞スフィア形成を指標としてスクリーニングできるアッセイ系を確立できた。現在まで固形癌の癌幹細胞マーカーと言われている種々の表面抗原や、Side population法、Aldefluor法により、上記アッセイ系を用いて、癌幹細胞マーカーの検索を行った。現在までのところ、ALDHI活性、さらに2つの表面マーカーの発現がスフィア形成能と高い相関を示すことが分かった。このことより、甲状腺癌の癌幹細胞マーカーの候補を絞り込むことが出来たと考えられる。また、上記の低接着表面加工プレートと無血清培地での培養法は、ある程度癌幹細胞を選択的に増殖させることが出来ることが示唆され、この方法によって培養された細胞、通常の接着培養法、そしてヌードマウスで実際に形成された腫瘍から取り出した細胞を用い、これら細胞の表面抗原等の発現の変化も検討した。スフィア細胞とマウスから取り出した細胞では、通常の接着培養における表面抗原の発現パターンと若干異なったパターンが確認され、スフィア細胞は、より生体内に近い状態を反映している可能性が示唆された。前年度までに甲状腺癌幹細胞のマーカー候補としてALDH1活性、CD326等を同定したが、複数の甲状腺癌細胞株で検討を進めたところ、すべての細胞種で共通のマーカーは確認できなかった。また、マーカーが発見できない細胞株も存在した。次に、これらマーカーによって分離した細胞に放射線照射を行い、放射線感受性の比較検討を行った。非照射細胞におけるコロニー形成率は、マーカー陽性分画の細胞では、マーカー陰性分画の細胞よりも2倍以上高かったが、放射線感受性自体の差は認められなかった。このことから、今回同定したマーカーと放射線感受性は関連していないと考えられた。しかしながら、症例ごとに癌幹細胞マーカーが異なっている可能性も示唆され、未だ未知のマーカーが関与している可能性もある。今後もさらなる研究の継続が必要と考えられた。さらに我々は、甲状腺癌初代培養細胞に対する新たな培養法を確立した。細かく切断した甲状腺癌組織をコラゲナーゼ処理し、遊離してきた細胞を特殊培地にて培養すると、細胞が増殖を開始し、種々の実験に使用できることがわかった。これら細胞を前年度までに確立したスフェロイド培養法(特殊な低接着培養面を持つプレートと、種々の成長因子を含む無血清培地を組み合わせる事によって、癌幹細胞を選択的に増殖させる培養法)により培養するとスフィアを形成することから、甲状腺癌組織からの初代培養細胞に対しても、癌幹細胞に対するアッセイを行うことができるようになった。

以上、甲状腺癌幹細胞のマーカー候補をいくつか同定する事ができた。また、本研究で確立した癌幹細胞スクリーニング法は、他の臓器の癌における癌幹細胞の研究にも有用なツールとなり得ると考えられた。癌幹細胞マーカーの絞り込みに時間を要したが、おおむね予定通り進展していると考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。基本的には、当初の予定通り研究を進める方針であるが、甲状腺癌初代培養細胞の数が限られていることより、種々の甲状腺癌細胞株の利用頻度をやや増やしていく予定である。
ウシ卵巣の局所機能調節機構に関する多角的解析

黄体で合成される生理活性物質の局所における生理的役割を知るために黄体細胞ならびに黄体内血管内皮細胞の機能ならびに各種生理活性物質のレセプター発現に及ぼす作用について検討し、以下のような知見を得た。1.ウシ初期および中期黄体のプロスタグランジン(PG)F2αに対する感受性の変化は黄体で産生されるプロジェステロン(P4)、オキシトシン(OT)により調節されていることを見いだした。2.発情周期の各ステージの黄体および妊娠黄体について、腫瘍壊死因子(TNF)のレセプター発現を検討し、すべてのステージの黄体にTNFレセプターの発現を認めた。また、TNFが培養黄体細胞からのPG類の分泌を促進することを見いだし、黄体に発現しているTNFレセプターは機能的であることを示した。さらにウシ中期黄体におけるPGF2α産生におよぼす腫瘍壊死因子の作用は細胞内シグナルであるmitogen-activated protein kinaseおよびホスホリパーゼA2の経路を介していることを明らかにした。3.ウシ黄体細胞のPG類産生におよぼす線維芽細胞成長因子(bFGF)の影響とその細胞内シグナル伝達機構について検討し、bFGFが細胞内のフォスフォリパーゼ(PL)CおよびPLA2の活性化を介してPG類の産生を促進することを示した。4.発情周期の各ステージの黄体および妊娠黄体について、黄体形成ホルモン(LH)のレセプター発現を検討し、妊娠黄体にも黄体期中期と同じ濃度のLHレセプターの存在することが確認し、妊娠黄体の機能維持機構へのLHの関与を示唆した。5.ウシ黄体に由来する血管内皮細胞にTNFレセプターが発現し、TNFが黄体細胞のみならず、黄体内の血管内皮細胞の内分泌機能(PGE2およびエンドセリン産生)調節に関与すること、アンギオテンシンレセプターの存在することを明らかにした。6.ウシ黄体でEstradiolo-17β(E2)が合成されていることを初めて明らかにするとともに、E2が黄体のPGF2αの合成促進因子であることを見いだした。7.ウシ黄体退行時の細胞死にFas/FasLの機構を介して経路の存在することを明らかにするとともに、そのFas/FasLを介した黄体の細胞死には免疫細胞由来のサイトカインの関与していることを示唆した。本年度は卵巣における幾つかの生理活性物質のレセプター発現や生理的役割について検討した。得られた主な知見は次の通りである。1.ウシ初期および中期黄体のプロスタグランジン(PG)F2αに対する感受性の変化は黄体で産生されるプロジェステロン、オキシトシンにより調節されていることを見いだした。本研究の成果はアメリカの専門誌であるBiology of Reprosuction誌に掲載された。2.発情周期の各ステージの黄体(1)および妊娠黄体(2)について、腫瘍壊死因子(TNF)のレセプター発現を遺伝子レベルおよび蛋白レベルで検討し、すべてのステージの黄体にTNFレセプターの発現を認めた。また、TNFが培養黄体細胞からのPG類の分泌を促進することを見いだし,黄体に発現しているTNFレセプターは機能的であることを示した。

(1)の成果はBiology of Reprosuction誌に掲載され、(2)の成果はMolecular Reproduction and Development誌への掲載が決定した。4.発情周期の各ステージの黄体および妊娠黄体について、黄体形成ホルモン(LH)のレセプター発現を検討し、妊娠黄体にも黄体期中期と同じ濃度のLHレセプターの存在することが確認し、妊娠黄体の機能維持機構へのLHの関与を示唆した。本研究の成果はオーストラリアの専門誌であるReproduction Fertility and Development誌への掲載が決定した。5.ウシ黄体に由来する血管内皮細胞に(1)TNFレセプターが発現し、TNFが黄体細胞のみならず、黄体内の血管内皮細胞の内分泌機能(PGE2およびエンドセリン産生)調節に関与すること、(2)アンギオテンシンレセプターの存在することを明らかにした。(1)、(2)の成果はともにBiology of Reprosuction誌に掲載された。本年度は、卵巣におけるさまざまな生理活性物質の生理的役割およびそのシグナル伝達機構について検討した。得られた主な知見は以下の通りである。1.ウシ中期黄体におけるプロスタグランジン(PG)F2α産生におよぼす腫瘍壊死因子の作用は細胞内シグナルであるmitogen-activated protein kinaseおよびホスホリパーゼA2の経路を介していることを明らかにした。本研究の成果は、Molecular Reproduction and Development誌に掲載された。2.ウシ黄体細胞におけるオキシトシン(OT)、プロジェステロン(P4)およびPGs産生に及ぼすノルアドレナリン(NA)および一酸化窒素(NO)の影響について検討するとともにPGF2α刺激下におけるOTおよびCa^<2+>産生におよぼすNAまたはNOの影響について検討した(1)。本研究において、NAは黄体細胞におけるP4、OTおよびPGs産生を促進することが明らかになった。一方、NOはPGs産生を促進し、P4およびOT産生を抑制することが明らかになった。また、NAはPGF2α刺激下における細胞内Ca^<2+>濃度を減少させるが、NOはCa^<2+>濃度を増加させることが明らかになった。さらに、NO合成酵素阻害剤を用い、内因性のNOがPGF2α,E2およびP4分泌におよぼす影響について検討した(2)。この結果、NAは黄体維持因子として、NOは黄体退行因子として働く可能性が示唆された。(1)の成果はBiology of Reproduction誌に掲載され、(2)の成果はProstaglandins and Other Lipid Mediators誌に掲載された。また、昨年度およびに本年度で得られた成果を4編の総説としてまとめた。本年度は、黄体細胞ならびに黄体内血管内皮細胞の機能ならびに各種生理活性物質のレセプター発現に及ぼす作用について検討し、以下のような知見を得た。1.ウシ黄体でEstradiolo-17β(E2)が合成されていることを初めて明らかにするとともに、E2が黄体のPGF2αの合成促進因子であることを見いだした。2.ウシ黄体の局所調節因子としてアラキドン酸カスケードの中のリポオキナーゼ化合物が関与していることを示唆した。
アルキル化変異原処理によるマウス生殖細胞のDNA損傷とその修復

本年度は、アルキル化変異原のうち雄マウスの精原細胞に高率に突然変異を誘発することで知られているエチルニトロソウレア(ENU)に焦点をしぼった。雄マウスにENU100mg/kg処理後、液体クロマトグラフィ-で検出した生殖細胞DNA中のエチル化塩基は、N7-エチルグアニン(N7-EG)、06-エチルグアニン(06-EG)及びN3-エチルアデニン(N3-EA)であった。ENU投与4時間後における誘発生成量は、mgDNA量当たりN7-EGが約13pmol、06-EGが約7pmol、N3-EAは3pmolであった。24時間後においては3種のエチル化塩基とも処理直後の約1/2に減少していた。一方、オ-トラジオグラフィ-で検出した不定期DNA合成(UDS)は、前期精原細胞から前期精子細胞にかけて誘発され、後期精子細胞から精子にかけては誘発されなかった。また、ENU処理直後、Labeling Indexで検出した精原細胞のDNA合成はENUの投与量に比例して増加し、250mg/kgでは、A型精原細胞において無処理の約4倍も誘発された。これらの結果をまとめると、ENUはマウス精子形成期における精原細胞のDNAに損傷(少なくともエチル化塩基)を与える。ところが、精原細胞はその損傷を除去し、修復合成(UDS)を行う能力を有している。しかし、ENUは精原細胞のDNA複製も同時に誘発する。この結果、DNA損傷を持ったままS期に至る精原細胞が増加し、遺伝子変異を有する娘細胞がさらに多く誘発されることが想像される。今後、これらの細胞由来の配隅子でさらに検討し、今年度検出した3種の塩基以外の損傷も定量する必要がある。
分子レベルでの癒着胎盤の病態解明と新規バイオマーカー診断法の開発

マイクロアレイにて癒着胎盤における高発現遺伝子ADAM8、カテプシンL、カテプシンS、MMP19、ADAM2を抽出。臨床検体でのRT-PCRではいずれも癒着部絨毛にて2-3倍の発現亢進を認めた。病理標本を用いた免疫染色による検討では非癒着部と癒着部の比較にてADAM28、MMP19、カテプシンSでは有意差を認めず、カテプシンLでは胎盤絨毛、EVT共に癒着部で有意に強発現していた。ELISAにより血清カテプシンL濃度を正常妊娠、前置非癒着胎盤、前置癒着胎盤で比較したところ癒着胎盤で有意に高値を示した。以上、癒着胎盤の絨毛浸潤にカテプシンLの関与が示唆され、血清マーカーとしての可能性が示された。本年はカテプシンLに関して機能的な検討を行うことを目標とした。これまで、癒着胎盤症例において免疫染色を行った結果、カテプシンL発現はvilliにおいては明確な差を認めなかったがEVTでは癒着部分での発現亢進を示していた。In vitroの検討として、HTR-8細胞・BeWo細胞・JEG3細胞・Jar細胞においてはウエスタンブロットにてカテプシンLの発現を確認していたが、EVTのcell lineであるHchEpc1b細胞においても発現を確認した。HTR-8細胞にリポフェクトアミン法にてsiRNA導入を試みたがカテプシンL発現は約13%の低下を示したのみであった。HchEpc1b細胞においても同様にsiRNA導入したが発現抑制は20%強であった。HTR8に対しエレクトロポレーション法にて遺伝子発現抑制を試みたところ、約30%の抑制を示すにとどまった。妊婦血清中カテプシンLの正常曲線コントロール作成のため、妊娠初期(8ー12週)、妊娠中期(20ー28週)、妊娠後期(35ー37週)にて検体を収集した。また同時に3次救急施設における癒着胎盤症例の臨床データを収集、解析した。癒着胎盤発症の母体となる帝王切開既往のある前置胎盤98例においてその発症リスクを検討したところ、既往妊娠3回以上、全前置胎盤、前壁付着胎盤、前回帝王切開時の子宮内膜側の連続縫合が独立因子として抽出された。従来より血清マーカーとして報告されているAFPに関しては有用性は認められなかった。(Sumigama etal. BJOG 2014)。24年度は癒着胎盤絨毛のDNAマイクロアレイから絨毛浸潤に関与する遺伝子群をスクリーニングし,発現解析を行った.まず癒着胎盤症例における癒着部絨毛と非癒着部絨毛よりtotal RNAを抽出しcDNAにおいてマイクロアレイを行ったところ全54357遺伝子中3倍以上の発現亢進がみられた遺伝子は104あった。この中からgene ontologyにて浸潤に関与する遺伝子を以下のごとく抽出した: ADAM8;4.83倍、カテプシンL;3.73倍、カテプシンS;3.46倍、MMP19;3.41倍、ADAM28;3.1倍。同一症例を含む癒着胎盤3症例より抽出したtotal RNAよりrealtime RT-PCRを行ったところ、いずれの遺伝子においても癒着部絨毛においては2.4ー3.1倍の発現亢進を確認した。次に癒着胎盤12症例の病理組織にて免疫染色を行った。ADAM8、ADAM28においては絨毛で染色されることが確認されたが癒着部と非癒着部での差に乏しく、またMMP19では絨毛において染色されなかった。カテプシンL、カテプシンSはvilliとEVTが染色され,villi、EVT共に非癒着部に比べ癒着部で濃く染色された.本年はカテプシンLに関して詳細な検討を行うこととした。免疫染色における染色強度をスコアリングしたところEVTにおいて有意差(P=0.01)が得られた。In vitroとしてHTR-8細胞・BeWo細胞・JEG3細胞・Jar細胞においてウエスタンブロットにてカテプシンLの発現を確認。HTR-8細胞にsiRNAを導入しカテプシン発現を抑制しようと試みたが期待どおりsiRNAが導入できなかった。ELISAにより妊婦血清レベルを測定したところ、正常妊娠、前置胎盤(非癒着症例)に比較し癒着胎盤症例では血清レベルの上昇を認めた。これまでの経過から本年は臨床検体の症例数を増やすことに注力した。癒着胎盤23症例において、病理検体の免疫染色から染色強度をスコアリング(0-3)し同一症例内の非癒着部と癒着部における各マーカーの発現強度を比較した。それぞれ(非癒着部)vs(癒着部)の中央値(最小-最大)(以下同)の比較においてADAM28:0(0-1)vs0(0-1)、MMP19:2(1-3)vs2(1-3)、cathepsin S:0(0-2)vs0(0-2)と有意差を認めなかった。cathepsin Lは胎盤絨毛、EVTが染色され、共に非癒着部に比べ癒着部で濃く染色された。スコアリングでは(非癒着部)vs(癒着部)の中央値(最小-最大)=2(1-3)vs3(1-3)であり統計学的に有意差を認めた。

癒着胎盤の血清マーカーとしてこれまで報告されているAFP、βHCGについて、前置非癒着胎盤と前置癒着胎盤において血清濃度を比較するとAFP(ng/ml):313±122 vs 317±112でP値0.91、HCG(x10^4 IU/L):3.66±2.53 vs 2.96±1.83でP値0.34とともに差を認めずマーカーとしての意義を確認できなかったが、ELISAにより血清cathepsin L濃度を定量し正常妊娠、前置非癒着胎盤、前置癒着胎盤で比較したところそれぞれ中央値(四分位範囲)(ng/ml)は正常妊娠:6.23(3.85-7.92)、前置非癒着胎盤:6.37(4.44-9.23)、前置癒着胎盤:10.89(7.54-14.05)であり、癒着胎盤で有意に高値を示した(vs正常妊娠:P<0.01、vs前置非癒着胎盤:P<0.05)。以上より癒着胎盤の絨毛浸潤にcathepsin Lの関与が示唆され、また血清中の疾患特異的分子マーカーとしての可能性が示された。マイクロアレイにて癒着胎盤における高発現遺伝子ADAM8、カテプシンL、カテプシンS、MMP19、ADAM2を抽出。臨床検体でのRT-PCRではいずれも癒着部絨毛にて2-3倍の発現亢進を認めた。病理標本を用いた免疫染色による検討では非癒着部と癒着部の比較にてADAM28、MMP19、カテプシンSでは有意差を認めず、カテプシンLでは胎盤絨毛、EVT共に癒着部で有意に強発現していた。ELISAにより血清カテプシンL濃度を正常妊娠、前置非癒着胎盤、前置癒着胎盤で比較したところ癒着胎盤で有意に高値を示した。以上、癒着胎盤の絨毛浸潤にカテプシンLの関与が示唆され、血清マーカーとしての可能性が示された。癒着胎盤症例の臨床検体について、当初の予想より症例を増やすことに難渋している。これは臨床的に癒着胎盤治療法の進歩によって大学病院以外の三次施設にても管理可能な症例が増加し、大学に紹介される例が減少していることが考えられる。またoverexpression vectorの提供依頼をしているもののまだ入手できていない。産婦人科機能実験に関しては遺伝子発現コントロールが難しい点があり努力を続ける必要がある。vivoのデータを充実させることも重要である。臨床検体の数を増やしマーカーとしてのデータの信頼性を上げていきたい。当大学の関連施設に協力を要請し、癒着胎盤のリスクを有する症例の集積を行っていきたい。24年度にマイクロアレイを行い、多数の発現亢進遺伝子(ADAM8、カテプシンL、カテプシンS、MMP19、ADAM28)から免疫染色によりカテプシンLを候補遺伝子として抽出し、25年度のin vitroでの機能研究を進める予定であったが、EVTの細胞株HTR-8、HchEpc1bでsiRNA導入による発現抑制が20ー30%程度と期待どおりにいかず、また絨毛癌細胞株であるBeWo細胞、JEG3細胞を用いても導入できなかった。24年度はマイクロアレイより抽出した発現亢進遺伝子ADAM8、カテプシンL、カテプシンS、MMP19、ADAM28から、免疫染色にて候補遺伝子を絞り込みカテプシンLにfocusし研究を行うことができた。臨床検体を使用したrealtime RT-PCR、免疫染色によるスコアリングでは同一症例の内部コントロールを使用して非癒着部絨毛に比較して癒着部絨毛でカテプシンLの発現が亢進していることを示した。また妊婦血清を用いたELIZA法にて、非癒着前置胎盤患者に比較して癒着胎盤患者の血清ではカテプシンLレベルが有意に高値であることを示した。