hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
言語は小児の脳内でどの様に形成され障害でどの様に変化するか

言語習得前に失聴し、日常生活で音声言語習得の機会がなかった小児では、聴覚連合野の可塑的再編成により、側頭連合野で言語の視覚的側面の情報処理が行われ、視覚優位の言語処理が行われる事が示された。また、これらの小児において人工内耳等で聴覚情報入力を補った場合、側頭連合野における視覚情報処理が減少して健聴成人のパターンに近づく事が見出された。難聴小児では脳機能も勘案した療育方針の選択が重要である。視覚的な言語刺激課題負荷を行なった言語習得前失聴小児群と健聴成人群を比較すると、難聴小児群で活動が亢進していた領域は、右中心前回、右中心後回、左上および下頭頂小葉、左および右上側頭回(聴覚連合野)、右中側頭回(聴覚連合野)であり、視覚情報処理の背側経路に加えて聴覚連合野である上および中側頭回の賦活が観察された。聴覚活用の程度が相対的に低い例ではいわゆる聴覚連合野に相当する上および中側頭回の読話による有意の賦活が見られたが、聴覚活用の程度が進んだ症例では代謝の亢進部分が減少して左半球優位となり、聴覚連合野の賦活が少なくなった。高度難聴があっても十分な聴覚活用ができる例では健聴成人との間に読話による脳賦活で有意の差がなくなった。また、1例では人工内耳手術前と、術後1年2か月の2回FDG-PET検査を行った。術前のFDG-PET検査では右上側頭回の聴覚連合野、左頭頂小葉、右楔部、両視覚連合野に賦活の亢進を認めた。5歳3ヶ月で人工内耳手術を行い、語音の弁別、表出ともに改善したが、また読話と手話を主に使用しており、今後の方針を検討するために、6歳5ヶ月時にFDG-PETの再査を行った。その結果、後頭葉視覚野の賦活は不変であったが、左頭頂葉の賦活が増加し、右半球の頭頂葉にも有意の賦活領域が出現した。一方、右上側頭会の賦活は、その位置は不変であったが、t値と閾値上のボクセル数は減少しており、上側頭回での視覚言語処理が相対的に減少していると推測された。これは、人工内耳手術で聴覚信号が入力されるようになり、それまで視覚情報処理を行っていた聴覚連合野が、本来の聴覚情報処理を行うように可塑的に再編成された結果と推測された。これらの結果により、FDG-PETを用いることで、難聴小児の言語処理における視覚と聴覚の相互関係の基盤となる脳活動を画像として観察、評価することができることが示された。本年度も高度難聴小児の脳機能計測を継続した。初回の検査後に人工内耳埋め込み術を受けたがその後の言語発達が停滞している小児例で、再度計測を行った。この例では視覚言語刺激による聴覚連合野の賦活は認められず、言語発達停滞の原因は視覚との拮抗によるものではないと推測された。また、言語習得前失聴小児の年齢と脳代謝の相関を観察すると、頭頂葉の代謝が年齢と共に減少する傾向が見られ、先天性高度難聴小児では聴覚の活用が進むことで頭頂葉視覚連合野への依存が軽減することが推測される。また、われわれの研究プロトコルを用いて支援している他の研究施設の症例では、先天性高度難聴小児で聴覚活用が不十分な例において視覚的言語刺激によって一次聴覚野が賦活される場合があることが明らかになり、反対側聴覚野の活用を期待して人工内耳手術が同側の蝸牛に行われた。この事例は人工内耳手術適応と術側を検討する上で脳機能検査が寄与できることを示唆する。さらに、広汎性発達障害を有する高度難聴小児の人工内耳術後経過の検討を行ったところ、術後に言語発達が改善する例と改善しない例があり、高度難聴小児における言語発達の阻害には高度難聴による2次的なものと、当初から障害がある場合とがあるものと考えられた。これらが脳内の神経機構の機能異常として脳機能画像で観察することができるかどうかは極めて興味深い課題である。次年度も高度難聴小児の言語発達について、脳機能画像と生理学的機能検査を詳細に検討し、今後の臨床応用にどのように活用できるか考察を進める。前年度までの研究を継続し、小児の音声言語発達、特に高度難聴の影響とその克服について臨床研究を行った。前年度までに、言語習得前に失聴し、日常生活で音声言語習得の機会がなかった小児では、聴覚連合野の可塑的再編成により、側頭連合野で言語の視覚的側面の情報処理が行われ、頭頂葉の視覚連合野の活動亢進も加わり、視覚優位の言語処理が行われる事が示された。本年度は、これらの小児の人工内耳手術後経過を分析し、人工内耳で聴覚情報入力を補った場合でも、日常的に母親など養育者と接触する時間を十分に確保し、音声言語優位のハビリテーションを行わないと円滑な音声言語の習得に至らないことが見出された。

また、同じ脳機能計測プロトコルを使用して連携している研究施設では、脳機能計測結果と遺伝子変異、ウイルス感染等の難聴原因との相関を検討し、低年齢の乳児期から高度難聴をきたすGJB2遺伝子変異例では成人になった段階でも上側頭回の側頭連合野での視覚的情報処理が認められたが、乳幼児期当初には聴覚が残存していたと推測されるSLC26A4変異例では上側頭回の有意な賦活が認められなかった。以上の結果から、小児の円滑な音声言語習得に低年齢乳幼児期からの聴覚補償と日常的な音声言語使用が重要であることが再確認され、そのために脳機能計測や遺伝診断などの客観的なデータに基づいた療育方針の選択が重要であると考えられた。
新規がん抑制遺伝子DANおよびその産物の機能の解析

1.ヒトDANゲノム遺伝子のクローニングと構造解析P1ライブラリーのスクリーニングを行うことにより、最終的にヒトDAN遺伝子を含むゲノムDNA(約20kb)をクローニングし、全塩基配列を決定した。また、ラットのゲノム遺伝子(約15kb)については、その上流配列に、DAN遺伝子発現を正および負に制御する領域を、-55+118および--1232-636にそれぞれ同定するこができた。神経芽細胞腫51例につき、RT-PCR-SSCP法によりDAN遺伝子の変異の有無を検索したが、現時点では検出されていない。2.DAN発現と神経突起形成分化能の関係神経芽細胞腫株RTBM1やSY5Yをレチノインで7日間処理すると神経突起の伸長が誘導される。DANmRNAの発現量は、この神経細胞分化時に上昇することを見い出した。SY5Y細胞でDANを強制発現させたクローンを作成した。これらの細胞では、レチノイン酸添加により神経突起伸長が親株に比べてより容易に起こること並びに飽和密度が低下することが観察された。ラット肺由来のcDNAライブラリーを用い、酵母のTwo-hybrid法により、DANタンパク質に結合するタンパク質cDNAの検索をい、582アミノ酸をコードする新規遺伝子(DA41)を得た。DA41mRNAの発現はG1とS期の間で顕著に上昇していた。また、3Y1細胞を各種の発がんウイルスで形質転換した細胞でその発現を調べると、v-src,v-mos,SV40でがん化した細胞では親株に比べて同等であったが、v-Ha-rasによるものでは抑制を受けていることが判明した。そこで、v-Ha-ras-3Y1細胞にDA41を強制発現させたクローンについて細胞特性を調べた。その結果、DA41過剰発現株では細胞倍加時間の延長、細胞飽和密度の低下のみならず、軟寒天培地中でのコロニー形成能の低下が見られた。また、これらの細胞では形態的にも細胞は扁平化し、接触阻害を受けることが判明した。
RETに基づく器官形成、発癌のSPROUTYタンパク質による調節機構の解析

生理的発生過程での臓器の形成には、RETの活性化に伴う正のシグナルと、これを抑制する負のシグナル間の調和が必要であるとされている。RETチロシンキナーゼのシグナルを負に制御する因子としてSproutyファミリータンパク質が重要であることが遺伝子改変動物を用いた研究で報告された。本研究では、細胞株レベルでRETチロシンキナーゼ下流におけるSproutyファミリータンパク質の役割を明らかにした。HEK293案細胞で検討したところ、Sproutyファミリータンパク質は、同程度にERKの活性を抑制し、p38,Akt,JNKなどの活性化には影響は認めなかった。ヒト神経芽細胞腫株TGWでは、GDNF刺激に伴いSprouty2のより高い発現誘導が観察された。さらにTGWにドミナントネガティブ変異を有するSprouty2を導入した結果、GDNF刺激に伴う突起伸長、増殖の著しい抑制が観察された。こうした結果よりRETチロシンキナーゼのシグナルを負に制御する因子としてのSprouty2の役割について細胞株レベルでも明らかにすることができた。この結果は、CancerScience誌に報告した(Cancer Sci 98:815-821,2007)。次にSprouty2欠損およびRET遺伝子改変(Y1062F)間のダブルノックアウト・ノックインマウスを作成し器官形成における両者の役割を検討した。RET遺伝子改変(Y1062F)ノックインマウスでは胃から遠位結腸における神経細胞数が激減し巨大結腸症が観察される。一方Sprouty2欠損マウスでは、過去の報告のように胃から結腸近位部に至る神経細胞の数の増加が観察された。両者のダブルノックアウト・ノックインマウスでは、RET遺伝子改変(Y1062F)ノックインマウスに比して、胃までの神経細胞の減少に改善が見られた。この結果により個体内でSprouty2がRETチロシンキナーゼのシグナルを実際に制御してくること再確認できた。現在Sprouty2欠損マウスとの交配による発癌に対する影響の観察を進めている。本研究によりRETチロシンキナーゼにより制御される器官形成、発癌過程におけるSprouty2の役割の一端が明らかになった。本研究はRETチロシンキナーゼ下流におけるSproutyファミリータンパク質の役割を解明し器官発生、発癌過程の新たな知見を得ることにある。まずHEK293T細胞にRET, GFRα1とともにSprouty1, 2, 3または4を導入し、下流シグナルへの影響を検討した。Sproutyファミリータンパク質は、同程度にERKの活性を抑制した。一方p38, Akt, JNKなどの活性化には影響は認めなかった。生体内ではSprouty1は腎臓の発生に、Sprouty2は腸管神経の形成に重要な役割を果たすとされているが、2つの機能の違いは発達過程における発現レベルにより調整されていることが強く示唆された。そこでRETの機能性レセプターを発現するヒト神経芽細胞腫株TGWを用いて、GDNF刺激に伴うSproutyファミリータンパク質の誘導を検討した結果、神経芽細胞腫株においてはSprouty2のより高い発現誘導が観察された。

これまでに遺伝子改変動物によってSprouty2の腸管神経形成における重要な役割が示唆されてきたが、細胞株レベルにおいても確認することができた。こうした結果はCancer Scienceに投稿し受理された(in press)。続いて個体のおけるSproutyファミリータンパク質の役割をさらに明らかにするためにSprouty2に対するsiRNAを用いた臓器培養における検討を予定し、約10種類の合成siRNA、3種類のshRNAの活性を検討した。しかしすべての配列はSprouty2のタンパク量を十分に減弱させるには至らなかったため、臓器培養への導入は断念した。平成18年度の研究計画に挙げた、他の項目は現在も研究を継続している。本研究はRETチロシンキナーゼ下流におけるSproutyファミリータンパク質の役割を解明し器官発生、発癌過程の新たな知見を得ることにある。昨年度は細胞株レベルでSprouty2がRETチロシンキナーゼの下流で神経の増殖、分化を制御していることを明らかにした。今年度はSprouty2欠損およびRET遺伝子改変(Y1062F)間のダブルノックアウト・ノックインマウスを作成し器官形成における両者の役割を検討した。RET遺伝子改変(Y1062F)ノックインマウスでは胃から遠位結腸における神経細胞数が激減し巨大結腸症が観察される。一方Sprouty2欠損マウスでは、吉村らの報告のように胃から結腸近位部に至る神経細胞の数の増加が観察された。両者のダブルノックアウト・ノックインマウスでは、RET遺伝子改変(Y1062F)ノックインマウスに比して、胃までの神経細胞の減少に改善が見られた。この結果により個体内でSprouty2がRETチロシンキナーゼのシグナルを実際に制御してくること再確認できた。次にRET遺伝子改変(Y1062F)ノックインマウスでは野生型に比して腎臓の低形成所見が観察されるが、この表現形がSprouty2欠損を加えたダブルノックアウト・ノックインマウスとした場合には、腸管神経と同様に低形成が改善された。興味深いことに単独のSprouty2欠損のみでは腎臓に変化は観察されない。この事実は生理的環境ではSprouty2は腎臓の形成にも重要な役割をしていることを示唆している。現在後根神経節細胞の神経培養により、下流シグナルの変化に検証を加えている。なお当初の実験計画ではMEN2A型変異RETタンパクを発現したトランスジェニックマウスとSprouty2欠損マウスとの交配による発癌に対する影響の観察も同時に行う予定であったが、MEN2A型変異RETタンパクを発現したトランスジェニックマウスの理研BRCよりの本学への分与に時間を要し、本研究終了時までに結論を得ることは困難となった。本研究終了後もさらに1年以上の観察を続け、検討を加えることを予定している。
太陽電池式自動圃場作業装置の研究

省コスト、省エネルギーにつながるキャリヤ駆動式ガントリーシステムの研究を、昭和61年度から同63年度まで行い、次のような成果をえた。1.キャリヤ駆動型のガントリーシステムを開発するために、ガーダーフレーム、キャリヤ、レールおよび載せ換え装置、駆動系、制御系などの角構成要素について検討し、その基本条件を求めた。2.ガーダーフレームの構造解析を有限要素法によって行い、軽量でたわみを最小にするトラス寸法を求めた。3.牽引力1250Nの簡易耕起作業を最大負荷とし、駆動系およびその電源を設計し、630Wの太陽電池系と商用電力との併用システムを採ることとした。そしてキャリヤへの作業負荷試験を行って、作業抵抗と消費電力との関係を求めた。4.台車走行、キャリヤ牽引、キャリヤ旋回、作業機昇降などの制御を検討し、位置精度の向上に努めた。しかし長いチェンによる駆動機構をとっているキャリヤの位置精度を高めることが難しかった。5.キャリヤ位置精度向上のため、超音波センサによる制御を考え、センサの性能を試験した。6.ガントリーシステムによる基本作業方法を検討し、2種類の方法について、キャリヤ移動にともなう作業の精度や能率を比較した。両方法とも大差のないことが分かった。7.ガントリーシステムによる新しい作業方法を種々検討し、その1例として圃場内移植をとりあげ、そのための移植用ロボットを開発した。本年度は自動作業装置の設計、試作を中心として次のような研究を行った。1.ガーダーフレームにかゝる負荷荷重を想定して、有限要素法による構造力学計算を行い、フレームの諸えを決走し、設計を行った。2.本装置の大きな特徴である駆動式キャリヤのメカニズムを種々検討し、諸えを決め、設計を行った。3.上記の設計図にもとづいて装置の試作を行い、各部が予定通り作動することを確認した。また荷重を加えて、フレームの歪が計算通りであることを確めた。4.ガーダーの走行系の試作を行い、コンピュータによる速度制御を試みた。5.各種圃場作業を想定して、キャリヤへの作業機装着機構およびその昇降機構を試作した。6.超音波を用いて作業機を作物列等に対し、位置制御するための研究を行い、複数のセンサーによって距離および角度を捻出して、作業機を対象物に正確に近ずけることが可能になった。7.太陽電池系とのパワーマッチングをはかり、電池系の設計を行うために各種負荷条件下で、キャリア駆動用モータの電流・電圧を測定し、所要電力等、必要な特性を調べた。8.隣の圃場に移るためのガーダーフレーム移動装置について種々検討した結果、車輪およびレールの1部を90゚旋回させる方式をとった。明年度以降は、各種作業に対するシーケンス制御を行うとともに、本装置を太陽電池系と結合し、太陽エネルギーで駆動することを試みる。またガーダーフレームの90゚移動についても、自動機構を組みこんで、自動化をはかる。本年度は、試作したガントリーシステムの作業精度の向上と、新しい作業方式を主眼として研究を行った。1.作業精度向上のため、超音波センサによるキャリPの位置制御を行い、テュン駆動式の本装置の位置精度を高めるのに有効であることを確かめた。しかし、対象物としては、あまり小さな植物体などは検出が難しく、基準となる反射板マーカーによって制御するか、あるいは超音波センサ自体の改善が必要と考えられる。2.キャリヤの位置精度の向上を前提として、精密な播種、施肥、間引、防除、除草等の諸作業について、その方式を検討した。また、これらを組み合わせて、間作、混作など、これまで機械化が難しかった新しい栽培法について考察した。3.TVカメラの圃場面情報に基づいて、ガントリーシステムを制御するため、圃場面の2次元画像解析を行い、圃場面特性の数値化を試みた。4.ガントリーシステムによる新しい栽培方式の1つとして、圃場内移植をとり上げた。これは植えかえの必要な作物について、省力、省コストをはかりながら生産性を高めるものである。このため、キャリヤに装着できる移植用ロボットを開発した。

ロボットのマニピュレータは、移植爪が平行リンクによって水平に開閉しながら、上下に動く機構をとっており、この2つの運動をコンピュータで連動、制御することによって、移植爪の刃面が土をほとんど攪乱することなく、直線的に貫入、採苗し、植付け時にも根についている土をくずさないようにした。5.これまで3年間の試作、試験結果をとりまとめ、研究成果報告書を作成した。
単一成分有機・電導体の開発

新規な有機半導体であるビス〔1,2,5〕チアジアゾロ-P-キノビス(1,3-ジチオール)(BTQBT)の各種誘導体ならびにその類似体を合成し、それらの物性を検討した。BTQBTのチアジアゾール環をピラジン環に換えた分子BPYQBTでは、分子内での1,3-ジチオール環の間の共役が強くなるために、ドナー性が増し、電導度が約1桁上昇した。さらに、BTQBTの分極を強めるために、1つの1,3-ジチオール環をカルボニル基に置換したBTQTを合成した。この分子はカラム構造をとっており、カラム間にS...S,S...N,S...Oの短いヘテロ原子接触が見られた。この結晶構造は、1,3-ジチオール環のS...S接触で特異なシート構造をしているBTQBTとは異なるものである。BTQTは1,3-ジチオール環からカルボニル基への分子内電荷移動のために、BTQBTより吸収が長波長シフトしている。物性では特異な電流-電圧特性が見られ、電圧を上げると電流値の急上昇が観測された。また、BTQBTの1つのチアジアゾール環をベンゼン環にしたTBQBTを合成した。この分子は、ベンゼン環のペリ位の水素の立体障害で非平面であるが、単一成分でBTQBTに匹敵する電導性を示した。ファン型の分子であるが、結晶状態でスタッキング方向にπ-軌道の重なりがよいためと考えられる。なお、TBQBTのジベンゾ体は良好な電導性の1:1カチオンラジカル塩を生成した。一方、バンドギャップの小さな導電性ポリマーとして、非古典的ヘテロペンタレンを構成単位として有するポリチオフェン誘導体を合成した。このポリマーは、0.9eVの小さなバンドギャップを示し、P-ドーピングもn-ドーピングも容易に行うことができた。さらに、分極率の大きい1,3-ジチオール環を有する新しいポリマーを合成し、約50Scm^<-1>の高い電導度を実現できた。このポリマーでは長鎖アルキル基の導入にも成功している。高電導有機単体の設計条件としてHOMOーLUMOギャップが小さいこと、分子内ク-ロン反発が少ないこと、分子の重なりが大きく分子間相互作用が強いことが考えられる。こうした条件をある程度満足させる分子としてキノイド骨格を有するTTF類似体に二つのチアジアゾ-ル環が縮合したビス[1,2,5]チアジアゾローPーキノビス(1,3ージチオ-ル)(BTQBT)の各種誘導体を合成し、その物性を検討した。合成は、WittigーHorner反応を利用して行なわれた。これらの化合物は高融点(>300°C)であり、昇華性がある。BTQBTの母体は、ニトロベンゼンから再結晶法で作成した結晶が1.0×10^<ー3>Scm^<ー1>(Ea=0.21eV)の高い電導性を示した。昇華法によって得られた結晶は、再結晶の場合より幅広となり、電導度は1.0×10^<ー5>Scm^<ー1>(Ea=0.24eV)と低下した。

この場合、電導度の異方性測定が可能であり、カラムに垂直方向の電導度は、カラム方向の約1/2であった。また、BTQBTでは有機電体としてはこれまであまり例のないホ-ル効果が観測され、ホ-ル移動度が約4cm^2/Vsecと見積られた。BTQBTの誘導体(Me,SMe,S_<CH2CH2>S,benzo置換体)では、電導度が低下しており、BTQBTの特異な結晶構造が電気伝導に必要なことが推察された。このことは、Me置換体のXー線構造解析で母体とは異なる結晶構造をとる事実より支持された。さらに、BTQBTのチアジアゾ-ル環をセレナジアゾ-ル環に一つ置換したTSQBTおよび二つ置換したBSQBTを合成した。これらはBTQBTより粉末試料で電導性がよく、昇華法で作成したTSQBTの単結晶は、5.6×10^<ー5>Scm^<ー1>の電導性を示した。TSQBTの構造はBTQBTと同型であり、3.26Åの短いS...S接触によってつくられたシ-トが積層している。シ-ト間の面間距離は3.48ÅとBTQBTと等しく、高導電性はSをSe原子に援えたために分子間相互作用が増大したためと解釈できる。先に開発した新規な有機半導体であるビス[1.2.5]チアジアゾローPーキノビス(1,3ージチオール)(BTQBT)を基に新分子の開発研究を行った。まず、その類似体として、チアジアゾール環をピラジン環に換えた分子BPYQBTを合成した。この分子では分子内での1,3ージチオール環の間の共役が強くなるためドナー性が増し、電導度が約1桁上昇した。さらに、BTQBTの分極を強めるために、1つの1,3ージチオール環をカルボニル基にしたBTQTを合成した。BTQBTが1,3ージチオール環のS...S接触で特異なシート状のネットワークを形成していたのとは異なり、BTQTはカラム構造をとっており、カラム間にS...S,S...N,S...Oの短いヘテロ原子接触が見られた。BTQTは分子内の1,3ージチオール環からカルボニル基ヘの電荷移動のために、BTQBTより吸収は長波長シフトしている。物性では特異な電流ー電圧特性が見られ、電圧を上げると電流値の急上昇が観測された。また、BTQBTの1つのチアジアゾール環をベンゼン環にしたTBQBTを合成した。この分子は、ベンゼン環のペリ位の水素の立体障害で非平面であるが、単一成分でBTQBTに匹敵する電導性を示した。ファン型の分子であるが、結晶状態でスタッキング方向にπー執道の重なりがよいためと考えられる。なお、TBQBTのジベンゾ体は良好な電導性の1:1カチオンラジカル塩を生成した。一方、バンドギャップの小さな導電性ポリマーとして、非古典的ヘテロペンタレンを構成単位として有するポリチオフェン誘導体を合成した。このポリマーは、0.9eVの小さなバンドギャップを示し、Pードーピングもnードーピングも容易に行うことができた。さらに、分極率の大きい1,3ージチオール環を有する新しいポリマーを合成し、約50Scm^<-1>の高い電導度を実現できた。
Helicobacter pylori感染胃粘膜におけるMIFの動態

MIF(Macrophage Migration Inhibitory Factor)は活性化T細胞から分泌されるリンフォカインの一つである。しかし最近免疫担当細胞以外にも、脳下垂体前葉細胞、眼レンズ細胞、表皮細胞など様々な上皮細胞での発現が認められ、また癌化に伴ってその発現が増加するとの成績が得られつつある。胃においても、H.pylori感染によって惹起される慢性炎症に、MIFが深い関わりを持つことが予想され、また炎症から生ずる発癌の過程にも大きな役割を果たしている可能性がある。本研究の目的は、胃粘膜におけるH.pyloriの慢性感染が、萎縮性変化、腸上皮化生、発癌、リンパ腫の発生など多彩な変化を引き起こす過程において、MIFがどのように関わっているかを検討することである。まず、正常ラット消化管におけるMIF mRNAおよびMIF蛋白の発現の検討から、MIFが食道から大腸まで消化管粘膜に広く発現していること、特に胃に強い発現がみられることが明らかとなった。一方、生理的壁細胞刺激物質であるガストリンは、一過性にMIFmRNAの発現を低下させた。これらの結果から、MIFが壁細胞の生理機能に重要な役割を果たしていることが推測された。ヒト正常胃粘膜では、ラット同様、壁細胞に強い染色を認めたが、H.pylori感染胃粘膜においては、浸潤リンパ球にもMIFの強い発現が認められた。以上より、H.pyloriの慢性感染が、MIFを介して胃の機能に様々な影響を与えている可能性が示唆された。また、H.pylori感染者の血清MIF濃度を除菌前後で検討した。H.pylori感染者において、除菌前の血清MIF濃度は、健常コントロールよりも有意に低値を示したが、除菌後正常値に復するという興味深い結果を得た。その意義づけは今後の課題であるが、胃粘膜局所の慢性炎症が全身の免疫系に影響を与える可能性を示唆するものと思われる。まず、ノザンブロット、ウエスタンブロットをもちい、正常ラット消化管におけるMIF mRNAおよびMIF蛋白の発現を検討した。その結果、MIFが食堂から大腸まで消化管粘膜に広く発現していること、特に胃に強い発現がみられることが明らかにされた。さらに、免疫組織化学的検討では、MIFの染色性は、主として壁細胞の細胞質にみとめられた。これらの結果から、MIFが壁細胞の生理機能に重要な役割を果たしているとが推測された。

以上より、H.pyloriの慢性感染が、MIFを介して胃の機能に様々な影響を与えている可能性が示唆された。MIF(Macrophage Migration Inhibitory Factor)は活性化T細胞から分泌されるリンフォ力インの一つである。しかし最近免疫担当細胞以外にも、脳下垂体前葉細胞、眼レンズ細胞、表皮細胞など様々な上皮細胞での発現が認められ、また癌化に伴ってその発現が増加するとの成績が得られつつある。胃においても、H.pylori感染によって惹起される慢性炎症に、MIFが深い関わりを持つことが予想され、また炎症から生ずる発癌の過程にも大きな役割を果たしている可能性がある。本研究の目的は、胃粘膜におけるH.pyloriの慢性感染が、萎縮性変化、腸上皮化生、発癌、リンパ腫の発生など多彩な変化を引き起こす過程において、MIFがどのように関わっているかを検討することである。まず、正常ラット消化管におけるMIF mRNAおよびMIF蛋自の発現の検討から、MIFが食道から大腸まで消化管粘膜に広く発現していること、特に胃に強い発現がみられることが明らかとなった。一方、生理的壁細胞刺激物質であるガストリンは、一過性にMIF mRNAの発現を低下させた。これらの結果から、MIFが壁細胞の生理機能に重要な役割を果たしていることが推測された。ヒト正常胃粘膜では、ラット同様、壁細胞に強い染色を認めたが、H.pylori感染胃粘膜においては、浸潤リンパ球にもMIFの強い発現が認められた。また、H.pylori感染者の血清MIF濃度を除菌前後で検討した。H.pylori感染者において、除菌前の血清MIF濃度は、健常コントロールよりも有意に低値を示したが、除菌後正常値に復するという興味深い結果を得た。その意義づけは今後の課題であるが、胃粘膜局所の慢性炎症が全身の免疫系に影響を与える可能性を示唆するものと思われる。
性同一性障害当事者の自己実現過程と心理的変化に関する研究

本研究の目的は、性同一性障害(以下、GID)当事者を対象とし、治療前と治療を経て概ね望む性別での生活を実現した時点とを比較することにより、当事者の自己実現のあり方及び心理的変化を明らかにすることである。対象者として、GID包括医療を求めて受診し、初診時及び治療経過時点での心理検査を実施し、経過を経て概ね望む性別での生活を送っている当事者6名を選定した。客観的変化の指標として、対象者6名の初診時及び治療経過後の心理検査データを入手した。主観的変化を調べる資料として、2018年度までに対象者5名への半構造化面接を終了し、文字起こしを完了した。残り1名の対象者については、連絡がとれないため半構造化面接の実施を断念した。半構造化面接及び分析の参考とするため、各種学会や研修会に参加し、専門的知識の教授を受けた。当事者の自己実現過程について理解を深めるために、トランスジェンダー生徒交流会、日本児童青年精神医学会、日本心理臨床学会等への参加を通して自己研鑽に努めた。また、本研究を含めた学びの内容について、講演活動(研修講師)を務める中で伝えた(小牧市教育委員会「性同一性障害(性別違和)への対応」、名古屋市教育委員会生涯学習課「性別違和のある子どもたちへの理解と支援」等)。現在、研究協力者と心理検査の分析を進めている。半構造化面接の内容分析についても進めていく。※性同一性障害(GID)という診断名は、DSM-5への改定に伴い性別違和(GD)に変更されているが、対象者の診断確定時点ではGIDであったため、本研究の関連書類において必要は箇所ではGIDという用語を使用する。対象者の心理検査及び半構造化面接を終了し、データの収集を終了した。2019年度は収集したデータ分析を進める。心理検査データを入手した対象者6名のうち1名について、2016年度2018年度の3年間にわたり連絡がとれなかったため、研究の遂行と当該者への負担等も考慮し、半構造化面接の対象からは除外することとする。よって、6名の心理検査データおよび5名の半構造化面接データの分析を進める。本研究の目的は、性同一性障害(以下、GID)当事者を対象とし、治療前と治療を経て概ね臨む性別での生活を実現した時点とを比較することにより、当事者の自己実現のあり方および心理的変化を明らかにすることである。対象者として、GID包括医療を求めて受診し、初診時および治療経過時点での心理検査を実施し、経過を経て概ね望む性別での生活を送っている当事者6名を選定した。客観的変化の指標として、対象者6名の初診時および治療経過後の心理検査データを入手した。主観的変化を調べる資料として、対象者への半構造化面接を実施中であり、H28年度内に3名実施終了している。また、半構造化面接および分析に必要な専門的知識の教授(家族関係の聴き取り方、ジェノグラム面接の意義、児童思春期における性別違和にかかわる問題、性別違和を訴える子どもたちの家族が抱える課題、など)を受けた。その一部を「児童思春期の性別違和における心理的支援」として公表した。当事者の自己実現過程について理解を深めるために、トランスジェンダー生徒交流会やGID学会への参加を通して自己研鑽に努めた。トランスジェンダー(性別違和)をとりまく社会的環境や最新の研究の動向を把握するため、第24回World Professional Association for Transgender Health(WPATH, in Amsterdam)に参加し日本の主たる研究者と交流する機会を得た。現在、研究協力者(臨床心理士:丸山智美氏など)との打合せを重ね、心理検査データの評定を進めている。残り3名の半構造化面接を実施するとともに、実施済の面接データの文字起こしを依頼中である。※性同一性障害(GID)という診断名は性別違和に変更されているが、対象者の診断確定時点ではGIDであったため、本研究の関連書類においてはGIDという用語を使用する。研究代表者の異動に伴い、当初想定していたよりも対象者とのコンタクトがとりにくい状況となったため、入手した心理検査データの分析よりも、新たに聴取する半構造化面接の実施を優先して遂行した。H28年度に半数の面接を実施済であり、H29年度に残り半数の面接を完了する予定である。本研究の目的は、性同一性障害(以下、GID)当事者を対象とし、GID包括治療前と治療を経て概ね望む性別での生活を実現した時点とを比較することにより、当事者の自己実現のあり方および心理的変化を明らかにすることである。主観的変化を調べる資料として、対象者への半構造化面接を実施中であり、H28年度までに4名実施終了し、文字起こし済である。また、半構造化面接および分析に必要な専門的知識の教授(児童思春期の性別違和における学校でのかかわり、性別違和を訴える子どもたちの家族が抱える課題、研究デザインの構成、など)を受けた。当事者の自己実現過程について理解を深めるために、トランスジェンダー生徒交流会、日本児童青年精神医学会、日本心理臨床学会などへの参加を通して自己研鑽に努めた。また、本研究を含めた学びの内容について講演活動の中で伝えている(「性別違和における心理的支援」日本臨床発達心理士会北陸支部研修、他)。

現在、研究協力者との打合せを重ね、心理検査データの評定を進めている。残り2名の半構造化面接を実施するとともに面接データの文字起こしを進める。※性同一性障害(GID)という診断名は性別違和(GD)に変更されているが、対象者の診断確定時点ではGIDであったため、本研究の関連書類においては必要な箇所ではGIDという用語を使用する。対象者6名中4名の心理検査および半構造化面接の実施を完了し、面接の音声データの文字起こし作業を行った。心理検査データの評定者間一致を終え、さらに1名の半構造化面接についてもH30年4月に実施予定である。本研究の目的は、性同一性障害(以下、GID)当事者を対象とし、治療前と治療を経て概ね望む性別での生活を実現した時点とを比較することにより、当事者の自己実現のあり方及び心理的変化を明らかにすることである。対象者として、GID包括医療を求めて受診し、初診時及び治療経過時点での心理検査を実施し、経過を経て概ね望む性別での生活を送っている当事者6名を選定した。客観的変化の指標として、対象者6名の初診時及び治療経過後の心理検査データを入手した。主観的変化を調べる資料として、2018年度までに対象者5名への半構造化面接を終了し、文字起こしを完了した。残り1名の対象者については、連絡がとれないため半構造化面接の実施を断念した。半構造化面接及び分析の参考とするため、各種学会や研修会に参加し、専門的知識の教授を受けた。当事者の自己実現過程について理解を深めるために、トランスジェンダー生徒交流会、日本児童青年精神医学会、日本心理臨床学会等への参加を通して自己研鑽に努めた。また、本研究を含めた学びの内容について、講演活動(研修講師)を務める中で伝えた(小牧市教育委員会「性同一性障害(性別違和)への対応」、名古屋市教育委員会生涯学習課「性別違和のある子どもたちへの理解と支援」等)。現在、研究協力者と心理検査の分析を進めている。半構造化面接の内容分析についても進めていく。※性同一性障害(GID)という診断名は、DSM-5への改定に伴い性別違和(GD)に変更されているが、対象者の診断確定時点ではGIDであったため、本研究の関連書類において必要は箇所ではGIDという用語を使用する。対象者の心理検査及び半構造化面接を終了し、データの収集を終了した。2019年度は収集したデータ分析を進める。今後は、対象者の半構造化面接データを聴取し終え、面接データおよび心理検査データの分析に着手する。当初の予定では、対象者15名を目標としていたが、研究代表者の異動および共同研究者の変更に伴い目標数の確保が困難な状況となったため、データ数が減った分、質的な内容分析をより詳細に行う予定としている。残り2名のうち1名はH30年4月に実施予定であるが、もう1名とは連絡がとりづらい状況である。再度連絡を試みる予定である。
明治以降『伊蘇普物語』諸本の文章史的研究

近代『伊蘇普物語』の文章史的意義を究めるために、現在考えているテーマとして、1.諸本の書誌的研究、2.英訳本との比較表現論的研究を試みた。1.は、特に、明治初期の日本語訳本の木文研究を行い、初期の『イソップ物語』における文章が、どういう形で近代の文章に参加したかということの一端を明らかにした。2.は、英訳本とその日本語翻訳本との比較表現論的研究では、『AESOP′S FABLES』(BY STIKNY)とその邦訳本『直訳講義伊蘇普物語』の本文を比較対照することで『直訳講義』が、『クライブ直訳』や、『ロングマン第一』などにならった一連の英文学習書としての教育効果をねらったものであり、こうして『直訳講義』が、多くの若年読者層を得て、欧文脈としての直訳体に馴染んでいったことが推測されることを論じ寓話の本文研究に新しい展開が期待されることを述べた。また、今回の調査でさらに『イソップ解説教訓叢話』(西片寒川明治44)を入手、英訳本『Aesop′s Fables』(K.Miyamoto)も加えて、本文のより細かな比較考察が可能となった。さらに、近代初期の翻訳である『通谷伊蘇普物語』については、日本近代文学館本、国立国会図書館本、及び、広島大学本の三種について調査を試みた。その結果、諸本の巻巻における刊行年に異同があり、必ずしも一系統のものではないことが明らかになった。今後の研究内容として、諸本の収集、文体面からの考察、英訳本とのさらに綿密な対照研究、語彙面からの考察などへの展開が考えられる。
遺伝性皮膚疾患（GGCX症候群）における石灰化関連因子と石灰化抑制の研究

これまでに石灰化経路に関わる多数の分子が発見されており、その発現機構や体内動態の研究が進められてきた。なかでもfetuin-Aは循環における強力な抗石灰化因子と考えられており、動脈硬化性疾患で研究が進められている。研究代表者はこれまで、GGCX (γ-glutamyl carboxylase)症候群の研究を行ってきた。GGCX症候群では、γ-グルタミル基のカルボキシル化不全により特異な皮膚症状を呈するのみならず、ビタミンK依存性血液凝固因子の著明な減少を特徴とする。本研究ではGGCX症候群患者と、対照として類似疾患であるPXE患者および健常人の線維芽細胞を用い、石灰化関連分子を比較することで、それぞれの疾患の石灰化経路の検証を行う。本研究では、まずGGCX症候群におけるfetuin-Aの変動と、その他石灰化関連因子との関わりを明らかにする。fetuin-Aの関与が認められた場合、石灰化抑制剤として遺伝性結合組織疾患の新規治療薬に繋がる可能性をさらに検討する。本年度は、GGCX患者皮膚から線維芽細胞を培養し、その培養上清を抽出してサンプルとした。GGCX線維芽細胞上清および健常人線維芽細胞上清について、fetuin-AELISA kitにて吸光度測定し、マーカーとの比較によってfetuin-Aを定量化した。結果、いずれの培養上清においてもfetuin-Aは全く検出されなかった。一方、健常人血漿においては、平均1142 ug/mlのfetuin-Aが検出された。通常の線維芽細胞のみならずGGCX患者においても、線維芽細胞はfetuin-Aを産生しないことが示された。線維芽細胞を用いて、fetuin-Aをはじめとした抗石灰化因子の測定・解析を予定していたため、使用する検体のソースを再検討する必要がある。通常の培養方法において、線維芽細胞はfetuin-Aを産生しなかった。次のステップとして、石灰化誘導メディウムの培養条件下にて、GGCX患者線維芽細胞が分化し、石灰化に対する恒常性維持機構としてfetuin-Aを産生するか検討する。その後他の抗石灰化因子についての検討をすすめることとする。
ヒト型抗体を利用したインフルエンザウイルス感染予防に関する研究

樹立した抗インフルエンザウイルス(Flu)ヒト型抗体5A7はB型Fluの膜タンパク質HAの高保存領域を認識し、広域に中和能を示した。マウス感染実験においても治療効果を示したことよりペプチドワクチンの候補になり得ると考えられた。またHAの抗原決定基Sbを認識する中和抗体5E4を用いて2009年パンデミックFluの変異を追跡した。選択圧によるSb基の抗原変異と遺伝子変異の有意な増加が確認された。GenBankの配列比較から世界的にもSb基の変異株が増加しており、次節ワクチン製造にはSb基の変異を考慮に入れる必要があることが示唆された。インフルエンザ(Flu)ワクチン接種者または感染患者の末梢血単核球から、10個の広域中和抗体(抗A:7個、抗B:3個)と10個の狭域中和抗体(抗H1:4個、抗H3:3個、抗2009H1pdm:3個)を含む計47個の抗Fluヒト型抗体産生ハイブリドーマを樹立した。抗B抗体(5A7、3A2、10C4)を用いた広域中和抗体の研究では13A2と10C4は2系統あるB型ウイルスのうち山形系統に強い中和能を示し、膜タンパク質HAの受容体結合部位近傍の190helixをエピトープとする25A7は両系統のウイルスに対し中和能を示す35A7のエピトープはHAの高保存領域の316G,318C,321Wで新規性がある45A7はin vivo実験でも中和能を示すことが明らかとなった。5A7はB型Fluに対するペプチドワクチンの候補として有効であると考えられる。一方抗A抗体は2009H1pdmや高病原性鳥Fluを含むグループIウイルスを広域に中和することが確認された。狭域抗体の研究ではHAの抗原決定基Sbを認識する中和抗体5E4を用いて2009H1pdmウイルスの変異を追跡した。2009/10、2010/11の2シーズンに分離された計58ウイルス株に対する5E4の中和能とHAタンパク質のシークエンス解析の結果、2010/11に大阪府下で流行した同ウイルスで宿主選択圧の下Sb基変異株の顕著な増加が確認された。世界的にもSb基は他の抗原決定基に比べ変異頻度が高いことがGenBankの遺伝子情報から判明した。次節流行株はSb基変異株が主流となることが予想されるが、2011年以降大きな流行がないため結論はでておらず今後の追跡調査が必要である。以上の成果は国内外の学術集会で発表された。また学術誌PLoS PATHOGENS(IF=9.1)に掲載され、現在新たな論文を投稿中である。さらに国際特許出願を行った。インフルエンザワクチン接種者または感染患者の末梢血単核球とフュージョンパートナー細胞SPYMEGとの細胞融合により計47個の抗インフルエンザウイルスヒト型抗体産生ハイブリドーマを作製した。反応性を評価したところ10個の広域中和抗体(抗A型抗体7個ならびに抗B型抗体3個)と10個の狭域中和抗体(抗H1抗体4個、抗H3抗体3個ならびに抗パンデミックH1抗体3個)が含まれていた。広域中和抗体の研究ではヒト型抗体の報告がないB型ウイルスに焦点を当て詳細な性状解析ならびにエピトープマッピングを行った。3個の抗体は全てウイルス膜タンパク質HAを認識した。抗体3A2と10C4は2系統に分かれるB型ウイルスのうち山形系統のみに強い中和能を示し、またエスケープミュータントの作出から、HAタンパク質の受容体結合部位近傍に位置する190helixがエピトープであることが明らかとなった。この領域は変異が入りやすいためペプチドワクチンの候補抗原としては不適合であると判断した。一方抗体5A7はB型ウイルスの両系統共に中和能を示した。狭域抗体の研究では、発生当初ほとんどの人が特異抗体を持っておらず、そのため現在まで明らかな抗原変異が出現していない2009パンデミックH1ウイルスを研究対象とし、それに対する特異抗体を選択した。3個のハイブリドーマの性状解析からHAタンパク質を認識する2個に対象を絞りエスケープミュータントを作出した。その結果、両抗体とも受容体結合部位近傍に位置する抗原決定基Sbがエピトープであることが明らかとなった。過去の報告からその領域は変異が起こりやすいと予想されたので、この抗体を用いて研究を進行した。また2009年春・2009/10の分離ウイルスに加え、2010/11シーズンにも府下のクリニックの協力の下、インフルエンザ感染患者の鼻腔スワブ検体を入手しウイルスを分離した。

H23年度の目標として中和抗体の作製、樹立ハイブリドーマの性状解析ならびにエピトープ同定、エスケープミュータントの作製、そして流行ウイルス株の分離を掲げて研究を進めた。上記の通り、おおむね目標に沿った成果を得ることができたため、順調に進展していると判断した。ヒト型中和抗体の作製において当初ワクチン接種ボランティアから採取された末梢血単核球を用いた。しかしハイブリドーマ作製効率が非常に悪く(のべ30名のボランティアから11個の抗体)、方法の改善がせまられた。そこで感染患者の単核球を用いたところ作製効率が飛躍的に改善された(2名の患者から36個の抗体)。この改善により本研究を進めるために必要なハイブリドーマをより多く準備することができた。ハイブリドーマの性状解析のための認識タンパク質の同定ならびに中和能評価は、既に研究室内で確立された技術を用いることで迅速に進められた。一方、その後のエピトープ同定・エスケープミュータント作製には時間を要し、現在までに対象広域抗体10個中2個、狭域抗体2個中2個の同定が終了した。現在までにペプチドワクチンの抗原として適した抗体エピトープは定まっておらずペプチド合成には至っていない。また狭域抗体のエピトープ部位について異なるエピトープに対する抗体を期待したが結果は同領域を認識していた。流行ウイルス株の分離では府下の病院の協力の下スムーズに検体を収集することができた。しかし2011/12シーズンは対象となる2009パンデミックH1ウイルスの流行は見られず検体を採取することができなかった。広域抗体においては、B型ウイルスに対して広域な中和能を示す抗体5A7のエピトープマッピングを早急に完了させ、保存性の高さならびに新規性を評価した上でペプチドワクチンの候補としてペプチド合成ならびにその評価を行いたい。また抗A型抗体ではエピトープ同定ならびに鳥型ウイルスへの中和能の評価を行った上、現在までに報告されているヒト型抗体と区別化できるか、新たなるペプチドワクチン候補となりうるのか評価する。その後ペプチドの合成に進みin vitroならびにin vivoでのペプチドワクチンの有用性を検討する。狭域抗体の研究では既に分離されているウイルス株を用いてヒト型抗体との反応性をHIならびに中和試験で評価する。またHA遺伝子配列を決定しSb領域の変異とHI・中和試験との相関性を検討する。比較対象として、ポリクローナル抗体である感染フェレット標準血清(既に国立感染症研究所より分与済)を用いて同試験を行う。それらデータを基に、今後ターゲットである抗原決定基Sbの変異株が増加するのか予測する。最終的に2012/13シーズンの流行株を分離しヒト型抗体との反応性ならびにHA遺伝子配列におけるSb領域の変異出現頻度を確認し、予測が合致したのか評価し、本研究の実験系が抗原変異予測に有用であるか検証する。H23年度に引き続き、必要な経費は実験用消耗品費、得られた成果の発表に関する経費が主である。作製した中和抗体産生ハイブリドーマの維持ならびに分離ウイルス培養のために、細胞培養試薬ならびにプラスチック製品が必要である。エピトープ同定においてはウイルスからのRNA抽出・RT-PCR・プラスミド作成・細胞への導入、シークエンス解析を行うため、その試薬、キットならびにプラスチック製品が必要となる。ペプチド合成・抗体精製には蛋白精製関連製品が必要であり、またペプチド合成を受託した場合にはその費用が発生する。in vivoの実験においてはマウスならびに飼育経費が必要となる。
海産仔稚魚のビタミンE要求性

本研究は、ワムシおよびアルテミア摂餌期、すなわち全長15mmサイズまでの仔稚魚期におけるビタミンE(VE)の必要性を明らかにすることを目的に、ブリおよびマダラ仔稚魚を用いて、酢酸型と遊離型などVEの形態の違いによるワムシおよび魚体への取り込みの相違や両魚種のVE要求性について明らかにしようとしたものである。まず、遊離型と酢酸型のVEを用いてワムシへの取り込みを調べたところ、それぞれ以下の回帰式が得られた。酢酸型VE:y_2=0.077x_2+0.078(r^2=0.996)y_2:ワムシに取り込まれたVE含量(mg),x_2:各水槽への遊離型VE添加量(mg)これらの結果から、強化水槽10lに対してVE添加量が100mg程度までは、遊離型VEおよび酢酸型VEともにほぼ同様の割合で取り込まれるが、添加量がそれ以上になると、遊離型の方がワムシに取り込まれやすいことが明らかとなった。次に、酢酸型合成、遊離型合成および天然型の各VEを用いてワムシを強化し、それらをブリおよびマダラ仔魚に投餌して飼育試験を行った。その結果、ワムシは酢酸型のVEを体内で遊離型に変えることができずそのまま保持すること、仔稚魚では酢酸型VEを加水分解する能力が劣り、遊離型のものに比較し利用しにくいため、魚体への蓄積が劣ることなどが明らかになった。しかし、ブリおよびマダラの成長や生残率については形態の違いによる差はほとんどなく、ワムシ中に含まれるDHA含量に左右された。なお、ユ-グレナを用いて同様の実験を行ったが、ユ-グレナに含まれるVEは魚体へ反映されないことから、その利用性は低いものと推察された。本研究は,ワムシ摂餌期,すなわち全長15mmサイズまでの仔魚期におけるビタミンE(VE)の必要性を明らかにすることを目的に,マダラおよびブリ仔魚を用いて、酢酸型と遊離型などVEの形態の違いによるワムシおよび魚体への取り込みの相違や両魚種におけるVE要求量を明らかにしようとするものである。まず,種々の濃度のドコサヘキサエン酸(DHA)で強化したワムシをマダラ仔魚に与え,成長,生残率および水腫魚などの出現率に及ぼす影響を調べた。その結果,全長410mmにおける異常魚の出現率は,ワムシ中の脂質の質に大きく関わっており,特にワムシ中のDHA含量は1%前後が望ましいことがわかった。しかし,魚体中にビタミンE(VE)を含有していた区では,DHAが2%含まれていたワムシを与えても優れた成績を示したことから,DHAの利用にVEが関与していることが明らかになった。そこで次に,ブリ孵化仔魚の成長および生残率に及ぼすDHAとVEの影響を調べるため,ワムシの栄養強化にDHA強化ユ-グレナを用い,タイプおよび濃度の異なるVEを取り込ませ,このワムシを用いて孵化仔魚に対する遊離型とエステル型のVEの効果の違いを検討した。その結果,生残率は遊離型VEを取り込ませたユ-グレナ強化区が生残率,成長ともに優れ,対照区のクロレラ区は成長,生残率,活力(干出試験)ともに劣る結果を得た。飼育終了時の魚体中にはいずれの区においてもVEは検出されず,今後適正なVEの量とタイプについて検討する必要性のあることが示唆された。本年度は、ビタミンE(VE)の形態の違いによるワムシへの取り込み、それらワムシのブリおよびマダラ仔魚への取り込み、およびアルテミア摂餌期におけるマダラ仔稚魚のVEの要求性について実験した。

酢酸型VE:y_2=0.077x_2+0.078(r^2=0.996)y_2:ワムシに取り込まれたVE含量(mg),x_2:各水槽への遊離型VE添加量(mg)。これらの結果から、強化水槽101に対してVE添加量が100mg程度までは、遊離型VEおよび酢酸型VEともにほぼ同様の割合で取り込まれるが、添加量がそれ以上になると、遊離型の方がワムシに取り込まれやすいことが明らかとなった。次に、酢酸型合成、遊離型合成および天然型の各VEを用いてワムシを強化し、それらをブリおよびマダラ仔魚に投餌して飼育試験を行った。その結果、ワムシは酢酸型のVEを体内で遊離型に変えることができずそのまま保持すること、仔稚魚では酢酸型VEを加水分解する能力が劣り、遊離型のものに比較し利用しにくいため、魚体への蓄積が劣ることなどが明らかになった。しかし、ブリおよびマダラの成長や生残率については形態の違いによる差はほとんどなく、ワムシ中に含まれるDHA含量に左右された。次に、アルテミア摂餌期におけるマダラ仔稚魚のビタミンE要求性について検討した結果、VE無添加区でも成長や生残率は特に低下せず、これはアルテミア中にVEが含まれていたためと推察された。しかし、魚体中にはVEがほとんど消失していたことから、若干のVE添加が望ましいことがわかった。
自然免疫系におけるアポトーシス細胞の貧食に伴う炎症調節機構の解明

食細胞によるアポトーシス細胞の貧食に関与するMFG-E8以外の分子を同定する目的で、マクロファージ細胞株BAM3細胞の表面抗原に対するモノクローナル抗体を作成し、この細胞の死細胞貧食に影響を与える抗体をスクリーニングしたところ、貧食を阻害する複数の抗体を得た。この抗体の認識する分子をアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、質量分析により解析したところ、すべてSHPS-1と呼ばれる分子に対する抗体であった。種々の解析によりSHPS-1はターゲット細胞上のCD47分子と結合することにより、アポトーシス細胞をマクロファージにつなぎとめる(tethering)働きを持ち、死細胞の効率のよい貧食に寄与する分子であることが明らかとなった。また我々は、上述のMFG-E8分子と高い相同性を持つ、Del-1と呼ばれる分子の発現と機能解析を行った。Del-1はMFG-E8と同様にそのC末端のC1,C2damainでアポトーシス細胞上のフォスファチジルセリンに結合し、N末端のEGF-like domainでインテグリンに結合することにより、死細胞の貧食を促進する分子であることが分かった。またDel-1は種々のマクロファージに発現を認めたが、興味深いことに、各々のマクロファージはMFG-E8かDel-1のどちらか一つの分子のみを発現していることが分かった。現在、MFG-E8を含めたこれらの分子の生体内での機能について詳細に検討を行っている。アポトーシス細胞の貧食に伴う炎症調節の分子機構の解明については、現在までのところ、腹腔マクロファージにおいて貧食後にLPS刺激を行うと、抗炎症作用を有するサイトカインの産生量が5-10倍程度増加することを確認しており、アッセイ系の確立とそれによるマクロファージ表面抗原に対するモノクローナル抗体のスクリーニングにより、この現象に関与する分子群の同定を進めている。