hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
定量的PCR法を用いたCOPD患者の増悪と肺炎発症メカニズムの検討

急性増悪時,安定時のCOPD患者の喀痰を用い,半定量PCR法で35種の病原微生物の検出を試み,バイオマーカー,質問票を用いて,COPD増悪の危険因子の検索を行った.結果,喀痰培養と喀痰半定量PCRを併せると,COPD増悪群で17/24例(70.8%),COPD安定群で12/30例(40%)と従来の検査より高頻度で病原微生物を検出したが,下気道の菌の定着は,増悪や症状との関連を指摘できず,全例でウイルスは喀痰から検出しなかった.安定群において,エントリー時のCATスコアはFSSG,誤嚥リスク,気腫化スコアと相関した.CATスコアの変動は気腫化スコアと,増悪頻度は誤嚥リスクスコアと相関した.安定期のCOPD症例においては,CATスコア,急性増悪の頻度などの臨床指標と,逆流性食道炎を含む誤嚥リスク,肺気腫の程度との関連が指摘された.ウイルスを標的としたPCR,また,保存血清,喀痰上清を用いたバイオマーカー測定,回収した質問票の解析がやや遅れている.COPDの増悪は肺機能の悪化とQOLの低下に関連し,予後に影響を与える.増悪の原因は主に細菌,ウイルス感染であるが,従来の喀痰培養や抗原,抗体検査では,原因微生物を同定しえない場合が多く,臨床的な増悪の危険因子も明らかになっていない.本研究室で開発された喀痰半定量PCR(HIRA-TAN法)はヒト細胞由来DNAをコントロールとし,多数の気道の病原微生物を同時に,半定量的に評価する方法である.今回COPD患者の喀痰を用い,このPCR法で25種の病原微生物の検出を試み,COPD増悪因子の検索を行った.COPD急性増悪での入院症例を増悪群,COPD外来通院症例を安定群にエントリーし,喀痰検査(培養,PCR),血液検査(CRP,プロカルシトニン,Chlamydophila IgG,IgA,バイオマーカー用血清を含む),呼吸機能検査,胸部CTを施行,また各種質問票(CATスコア,FSSGスコア,誤嚥リスク質問票)を用いて評価を行った.結果,安定群に30例,増悪群に24例エントリーされた.喀痰培養で病原微生物を検出した例は,安定群で6.6%,増悪群で37.5%であったのに対し,PCRでは,安定群で40%,増悪群で70.8%と高い率で病原微生物を検出し,有用性が示唆された.PCRでの検出菌は,H.Influenza,M.Cataarrhalis,S.Pneumonia等が多く,COPD患者の定着菌として妥当な結果であった.現時点で,菌検出の有無,菌種と,増悪の頻度には明らかな相関を指摘なかった.血清TNF-alpha,adiponectin,E-cadherin,MMP-7などバイオマーカーを測定したが,増悪との関連は指摘できなかった.エントリー時のCATスコアとFSSG,誤嚥リスク,CTでの気腫化の程度,また,CATスコアの変動と気腫化の程度,増悪頻度と誤嚥リスクはそれぞれ相関した.急性増悪時,安定時のCOPD患者の喀痰を用い,半定量PCR法で35種の病原微生物の検出を試み,バイオマーカー,質問票を用いて,COPD増悪の危険因子の検索を行った.結果,喀痰培養と喀痰半定量PCRを併せると,COPD増悪群で17/24例(70.8%),COPD安定群で12/30例(40%)と従来の検査より高頻度で病原微生物を検出したが,下気道の菌の定着は,増悪や症状との関連を指摘できず,全例でウイルスは喀痰から検出しなかった.安定群において,エントリー時のCATスコアはFSSG,誤嚥リスク,気腫化スコアと相関した.CATスコアの変動は気腫化スコアと,増悪頻度は誤嚥リスクスコアと相関した.今後,増悪時,肺炎発症時の喀痰中の微生物につき,11種類のウイルスを含めて検討を行い,安定期の定着菌との関連について明らかにする.臨床検体のサンプリングが予定より遅れたため.本年度は収集した誘発喀痰、血清を用いたバイオマーカー測定を開始するため、IL-6, E-cadherinなどのELISAキットを購入する.また,27年度までの検討で,誤嚥リスク,気腫性変化,CATスコア,増悪頻度の間に有意な関連が示唆された.こうした所見は呼吸筋力の低下と慢性気道感染に関連する可能性がある.そこで本年度は呼吸機能測定装置を購入し,呼吸筋力測定を行う予定である.
中国明清時代の民間宗教と文化・社会構造

本研究は中国の明清時代、華北における大乗教系民間宗教の成立と展開に焦点を当てて研究した。大乗教系民間宗教とは、西大乗教・東大乗教・大乗円頓教を指す。なぜこれらの教派を研究の対象にした理由は、大乗教系民間宗教が、明清時代の民間宗教結社の中心的教派であり、しかもこれらの教派によって代表的宝巻経典が作成されているからである。大乗教系民間宗教を研究することにより、明清時代の民間宗教の形成と展開の重要部分を明らかにすることができるからである。4年間にわたる研究の結果、初期の目的を達成する見通しがつき、研究書を作成し刊行する計画が進捗している。研究内容を要約すれば次のようになる。まず、明代天順年間(14571464)に創建された勅賜順天保明寺は普通の尼寺ではなく、尼姑の呂〓を教主とする民間宗教的性格を有していた。この保明寺の中から民間宗教西大乗教が形成されていく。西大乗教はやがて15世紀末から16世紀初に成立した羅教の教義や弥勒下生信仰などを入れ、やがて万暦年間(15731620)には、新たに帰円という尼姑により、経典宝巻である西大乗教五部六冊を刊行した。一方、羅教の教義と弥勒下生信仰とが結びついた東大乗教(聞香教)が万暦年間に成立し、この教派は官憲の弾圧を受けるが、天啓2年(1622)に山東省・河北省を中心に明代最大の宗教的民衆叛乱を引き起こす。東大乗教徒の反乱が平定された後、その教徒弓長は天啓4年に大乗円頓教を立て、末劫の災難に苦しむ衆生を救済することを唱えた。大乗円頓教の3つの重要な宝巻は、西大乗教から東大乗教・大乗円頓教に至る歴史と、この間の教義の形成過程を明らかにしている。大乗教系教派の特徴は、(1)阿弥陀浄土信仰を基礎に置いている、(2)弥勒下生信仰を説いている、(3)無生父母信仰で全体をまとめている、(4)内丹法による修煉をおこなう、(5)男女を含む民衆を組織している、ということである。これらの諸特徴の内容、その歴史的形成過程を論じた。大乗教系三教派は互いに密接な相互関連の中で形成されたことを明らかにした。本年度は4年計画の第1年目として、課題とする研究を進める一方で、基本となる史料の収集に努めた。その成果は以下の通りである。(1)民間宗教結社の研究としては、明代の北京の西の郊外の保明寺を根拠地とする西大乗教の教義とその展開を研究中である。この論文は平成14年中に完成する予定である。(2)民間宗教の経典たる宝巻の形成過程の研究。

特に『金剛科儀』と羅教の宝巻をはじめとする後代の諸宝巻との関係を考察し、そこに見られる教義上と形式上の継承関係を明らかにしつつある。(3)本年度において収集した主な宝巻は、羅教の『仏説三皇初分天地嘆世宝巻』、西大乗教の『銷釈大乗宝巻』『銷釈顕性宝巻』『西王聖母諸仙慶賀蟠桃宝巻』『仏説大慈至聖九蓮菩薩化身度世尊経』、黄天道の『虎眼禅師遺留唱経巻』『仏説普静如来鑰匙宝懺』等であり、いずれも民間宗教研究に貴重な史料である。(4)民間宗教結社と王朝権力との関係、その社会的存在形態についてはまだ研究が進んでいない。ただし、その基本史料となる『清代秘密結社档案輯録』を購入したので、今後この史料を中心に研究を進めたい。(5)当初の計画では、海外共同研究者である中国の馬西沙・韓秉方両氏が来日して、共同研究会を開く予定であったが、馬氏の家族の病気により、来日できなくなった。代わりに浅井が訪中し、北京で研究会を開いた。浅井は西大乗教について、馬西沙氏は道教と民間宗教について、韓秉方氏は民間宗教と民俗について話しをした。また、西大乗教の保明寺の遺跡を調査し、写真を撮った。以上の研究についての論文はいまだ作成中であり、平成14年度もしくは15年度に学会誌等に発表するが、最終的には単行本として刊行する予定である。本年度は主として明清時代の民間宗教西大乗教の研究と宝巻の収集に多きな成果があった。先ず、平成14年10月31日から11月6日の間の中国訪問で、北京の国家図書館と大鐘寺博物館において、西大乗教の根拠地保明寺に残された石碑の拓本と梵鐘の銘文を閲覧した。また、天津においては、天津図書館で西大乗教の宝巻を3点収集することができた。これらの史料により、中国の明代(13681644)初期に始まり、華北の民間宗教の淵源の一つと考えられる西大乗教の歴史と教義を明らかにするめどがたった。この研究は従来の学説をかなり大きく変更するものとなる。次いで、平成15年3月13日から21日にかけての中国訪問で、再度北京と天津を訪ね、西大乗教を中心とする民間宗教に関する史料を収集した。先ず、北京では国家図書館と大鐘寺博物館で西大乗教の本拠地保明寺の石碑の拓本と関係史料、そして梵鐘の銘文を改めて調査した。また、天津図書館においては、西大乗教関係の宝巻を含む十種類ちかくの宝巻を閲覧し、その一部を複写した。この調査を通して、保明寺の創建と西大乗教の形成と展開の過程がより明らかになり、それにともなって、明代の華北における民間宗教諸教派の形成過程を明らかにする研究がいっそう進展した。この成果の一部は「明代の保明寺と西大乗教」という題目で本年6月に発表される予定である。(次頁参照)西大乗教の研究は以下の点において重要である。(1)宝巻流民間宗教の教義の形成過程とその特質が明らかになる。ことに東大乗教・大乗円頓教等のいわゆる大乗教系民間宗教の教義の形成過程が明らかになる。(2)民衆的組織としての民間宗教の存在形態、その社会的機能が明らかになる。ひいては中国的民衆社会の特質が明らかになる。以上のことは、数年以内に刊行する予定の専著の内容となる。今年度は、中国の明代の華北における民間宗教結社の形成と展開、を主たる研究内容とした。具体的には、明代天順年間(1457-1464)に皇帝英宗の勅命で、北京郊外の黄村に建てられた尼寺の保明寺を根拠地とする教派と、その後継教派を研究した。保明寺は外見は尼寺で、その教義は観音信仰を中心としていた。しかし実際は、その教義・修行・儀礼には道教の内丹法が混入しており、仏教と道教の折衷的性格が強かった。保明寺の初代住持である呂〓は仏教の尼僧と道教の女道士を折衷した姿をしていた。また、その教徒も多数の男女により構成されており、華北各地にその組織が作られ、指導的教徒により管理されていた。
幼児は相手の視点を取ってことばの意味の推測を行うか：教示行動からの検討

本研究の目的は、幼児がどのような教示行動を用いて他者にことばの意味を伝えるかに関して調べることである。H30年度では、3歳児と5歳児に対して産出実験を行い、他者の視点取得や教育的意図行為を行うかについて調べた。H29年度に用いた手法と同様の、ぬいぐるみに事物を持たせ、その事物の部分または全体に対し教示行動を子どもに見せるという手法により、部分-全体関係を持つ入れ子構造となった事物の部分についての教示行動を理解・産出できるかを調べた。今年度は、Kobayashi and Yasuda (2012)で用いた非言語的手がかりである指さしと円運動を伴う指さしを教示時に使用し、子どもがどのように解釈及び産出するのかを調べるものであった。実験者が接触指さしで部分を教示する場合では、3歳児は教示された場所と同様に部分に対して指さしを用いて名称教示を行っていたが、5歳児は教示された箇所以外にも様々な指さしを用いて名称教示を行っていた。一方、実験者が円を伴うような指さしを部分に対して行い名称教示していた場合には、3歳児と5歳はほぼ同じような行為を行い、部分に対して名称教示しようと試みていた。なお、いずれの条件においても、実験者の行為をそのまま模倣しようと試みた幼児は少なかった。母親が部分名称教示を行っているビデオを分析する観点に関しては、教育的意図行為の観点から分析を行い、名称教示のレベルによって、母親が自然に教育的意図の伝達を変えている可能性が示唆された。これらの研究は、International Cognitive Linguistics Conference (ICLC15)で発表することが予定されている。また、これらの研究から得られた知見を利用し、発達障害児とその親の支援活動を行った。親の相談活動(カンファレンス)に加え、実験結果等のフィードバックを行った。幼児は相手の視点をとって、ことばの意味理解や他者への教示行動を行うかについて調べることが、本研究の目的である。大人がある指示行為とともに提示する言語の意味を子どもが知るためには、その教示行動をしている大人の視点に立って教示内容を推測することが必要である。他者視点取得(perspective taking)を利用した指示意図推測プロセスが教示行為に寄与するという仮説の基に、子ども自身による教示行動の発達過程を明らかにすることを目指す。平成28年度では、定型発達幼児と高機能自閉症児(小学生)および比較のため大学生を対象とする教示行動理解・産出の2つの実験を行なった。定型発達児では、プラスチック製の動物(ゾウ、ウマなど)のフィギュアを用いた、体の部分に関する名称(足、ひずめなど)の理解・産出と、ボルト・ナットなどを用いた見慣れない事物の部分名称理解について調べた。2歳でも自分がよく知っている部分名称の場合には、ある程度の割合の子どもが、適切な教示行動、たとえば提示したいフィギュアの動物の体の部分を、提示したい相手に対し、部分に接触した指さしをして教えるなどの行動を行えることがわかった。一方、相手の視点をあまり考慮しない場合もあるため、難しさもあることがわかった。高機能自閉症児では、自転車などの事物を持った動物のぬいぐるみを使用し、事物の部分(例:サドル)に関する実験者の教示行動の理解と、参加者自身による行動産出を調べた。当初の予想とは異なり、他者の視点を考慮して自分の教示行動をある程度うまく調整できる自閉症児もいた。28年度の定型発達児を対象とした実験計画では、「先生はこれを触っています」という明示的な教示に加え、「先生はこれを見ています」という非明示的な教示の効果を調べる予定であったが、前者の実験は行なった一方、後者の実験は行わなかった。明示的教示を行なっても2歳児では理解が困難であったため、今後は2歳児でもわかりやすい明示的教示の性質を解明すべきであることがわかった。自閉症の小学生を対象とした実験では、当初計画よりも実験計画を洗練させ、独自の新たな実験パラダイムによる実験を実施した。ぬいぐるみに事物を持たせるという手法による実験で理解・産出を調べることにより、入れ子構造となった部分-全体関係が理解・産出できるかを調べた。自閉症の小学生は、ある程度高い能力を持っているが、入れ子構造への対処では限界もある可能性を見出した。本年度は、大人の教示行動をどのように理解し、他者(ここでは、パペット)に適切に指示意図を伝えられるかについて産出実験を行い、教示行動のしかたを調べた。また、教示時によく利用する「これは」という指示詞に着目し、どのような使われ方がされているかを成人を対象に調べた。H28年度に引き続き、ぬいぐるみに事物を持たせ、その事物の部分または全体に対し教示行動を子どもに見せるという手法により、部分-全体関係を持つ入れ子構造となった事物の部分についての教示行動を理解・産出できるかを調べた。定型発達児/者と自閉スペクトラム児/者に対して、H28年度に開発した上記の課題を用いて、暗示的/明示的情報の観点から、産出実験を行った。明示的な情報(「先生はこれを触っています」)や暗示的な情報(「先生はこれを見ています」)をいう情報を与えた場合、H28年度で得られた知見とほぼ同様の傾向の結果が得られた。明示的・暗示的いずれの情報でも、子どもの教示行動は似た傾向であり、また入れ子構造のある事物を用いた場合、教示行動時に非接触

指さしを子どもが観察しても、接触指さしに置き換えて行う傾向があった。一方上記の情報を与えた場合に、他者の視点を考慮しないで教示行動を行った自閉スペクトラム症児は少なかった。指示詞使用に関しては、他者と状況が共有できている場合は、「あれ」を使用することがなく、「これ」が多く使用される場面が多く観察された。教示行動研究を応用し発達障害児とその親の支援活動を行い、親の相談活動(カンファレンス)に加え、実験結果等のフィードバックとそれに基づく個別支援を実施した。H28年度に引き続き、ぬいぐるみに事物を持たせるという手法による実験で理解・産出を調べることにより、入れ子構造となった部分-全体関係が理解・産出できるかを調べた。新たに、明示的な情報(「先生はこれを触っています」)や暗示的な情報(「先生はこれを見ています」)をいう情報を教示時に与え、子どもがどのような産出/理解を行うのかを調べた。H28年度で得られた知見とほぼ同様の傾向であり、指さしの違いにかかわりなく、教示行為を行っており、非接触指さしをそのまま模倣して産出することが少なく、接触指さしに置き換える傾向があった。また、「これは」という指示詞使用に教示行動が影響している可能性を考慮し、どのような使われ方がされているのかを成人を対象に調べた。よって、「これは」という発話に関しては、教示提示時に共同注意を促進する役割を果たすと推測され、教示行動と言語の関係への示唆を得た。上記の知見に関しては、国際学術雑誌に投稿を行い、採択された。以上のことから、おおむね順調に進展していると考えることができる。本研究の目的は、幼児がどのような教示行動を用いて他者にことばの意味を伝えるかに関して調べることである。H30年度では、3歳児と5歳児に対して産出実験を行い、他者の視点取得や教育的意図行為を行うかについて調べた。H29年度に用いた手法と同様の、ぬいぐるみに事物を持たせ、その事物の部分または全体に対し教示行動を子どもに見せるという手法により、部分-全体関係を持つ入れ子構造となった事物の部分についての教示行動を理解・産出できるかを調べた。今年度は、Kobayashi and Yasuda (2012)で用いた非言語的手がかりである指さしと円運動を伴う指さしを教示時に使用し、子どもがどのように解釈及び産出するのかを調べるものであった。実験者が接触指さしで部分を教示する場合では、3歳児は教示された場所と同様に部分に対して指さしを用いて名称教示を行っていたが、5歳児は教示された箇所以外にも様々な指さしを用いて名称教示を行っていた。一方、実験者が円を伴うような指さしを部分に対して行い名称教示していた場合には、3歳児と5歳はほぼ同じような行為を行い、部分に対して名称教示しようと試みていた。なお、いずれの条件においても、実験者の行為をそのまま模倣しようと試みた幼児は少なかった。
サイコサポニンの腸内細菌による構造変換と抗炎症作用における構造活性相関

saikosaponin c(sc)を人工胃液で処理すると異環共役二重結合を有するsaikosaponin h(sh)及び、同環二重結合を有するsaikosaponin i(si)が誘導された。そこで、これら三種のサポニンをマウス腸内細菌とともに培養すると、それぞれのアグリコンであるsaikogenin E.C.Bが単離された。しかし、部分加水分解物であるprosaikogenin類は収率が低く、単離,構造決定するには至らなかった。そこで、アグリコンのエーテル環を開裂させないアルカリ条件下での分解反応を検討した。若干の水を含有するスピクトル用ブタノールに金属ナトリウムを加え、これにscを溶解させ、80°Cで、24時間反応を行うと、糖鎖の部分的に切断されたprosaikogenin【E_1】(【PSE_1】:glc-glc-SE),【E_2】(【PSE_2】:rham-glc-SE),【E_3】(【PSE_3】;glc-SE)が収率よく得られた。さらに、これらprosaikogenin類を酸処理することにより、異環共役二重結合を有するprosaikogenin【C_1】,【C_2】,【C_3】及び同環共役二重結合を有するprosaikogenin【B_1】,【B_2】,【B_3】を単離した。なお、今回得られたprosaikogenin類は全て新物質であった。次に、昨年までに得られたsaikosaponina,dの消化管内代謝物15種と、今回得られたscの代謝産物15種について、下垂体一副腎系刺激作用を、内在性ステロイドホルモンであるコルチコステロンを指標に検討した。sasdの誘導体においては、真性アグリコン構造を有するsa,sdにのみ0.10.4mmol/kgで活性が認められたがscの代謝産物では、代謝中間体と考えられるprosaikogenin【E_1】,【E_2】にのみ活性が認められた。このことはコルチコステロン分泌活性がエーテル環の有無、糖鎖構造の違いに由来する化合物の極性に支配されている可能性を示唆しており、saikosaponin体謝物の標的細胞における細胞膜とのinteractionの違いが、活性に影響を及ぼしていることが考えられる。
パーキンと相補的な新規レビー小体構成蛋白Siah-1による凝集体形成機序の解析

Synphilin-1はパーキンソン病に特徴的な封入体であるレビー小体の構成蛋白の一つとして報告されている。本研究ではSynphilin-1を過剰発現させたトランスジェニックマウスを確立し、パーキンソン病モデルマウスとして解析し、以下の結果を得た。1)プリオンプロモーター下にSynphilin-1を発現するコンストラクトを作成し、C57BL/6マウスの受精卵に導入することにより、トランスジェニックマウスを作製した。HAタグに対する免疫染色にて大脳皮質、海馬、嗅球などに発現を認めた。また中脳黒質のドーパミン作動性神経細胞においても発現が確認された。2)過剰発現させたSynphilin-1はユビキチン化アッセイにてポリユビキチン化されていることが確認された。同蛋白はTriton可溶性/非可溶性分画いずれにも回収され、一部が不溶化していることが明らかになった。3)ドーパミン作動性神経細胞に発現する蛋白質(Tyrosine hydroxylase、ドーパミンD2受容体)のトランスジェニックマウスにおける発現量の変動をウェスタンブロットで確認したところ、増減はみられなかった。またドーパミン作動性神経細胞数の変化も見られなかった。4)運動機能解析ではトランスジェニックマウスは野生型に比してロタロッドテストで機能低下を認め、歩行時の歩幅が小さいことが明らかになった。現在脳内のドーパミン代謝産物をHPLCで解析し、トランスジェニックマウスの運動機能低下についてさらに検討中である。平成17年度は、Siah-1による凝集体形成機序の研究を進めるにあたり、解析に適したパーキンソン病モデル神経の作製を試みた。a-synucleinは常染色体優性遺伝性パーキンソン病PARK1およびPARK4の原因遺伝子であり、またその遺伝子産物はレビー小体の構成蛋白質であることから、α-synucleinはパーキンソン病の発症に関与する重要な蛋白質として注目されている。われわれはA30P、A53T変異型(PARK1)および野生型(PARK4)のα-synucleinを発現させたマウス胚性幹細胞(ES細胞)を確立し、ドパミン神経に分化誘導した。この細胞は、脱分極刺激によりドパミンを放出し、パッチクランプ法を用いた解析では中脳黒質緻密層のドパミン神経細胞とほぼ変わらぬ特性を示した。また、長期培養すると神経細胞死を来たした。この神経細胞ではα-synucleinからなる細胞内凝集体が観察されるとともに、パーキンソン病発症の分子機構に関与するSynphilin-1、Parkin、PINK-1などの発現がみられた。現在、このパーキンソン病モデル神経を用いて解析を進めている。その過程で、われわれはSiah-1が、常染色体劣性遺伝性パーキンソン病(PARK7)の原因遺伝子であるDJ-1と結合することを発見している。PARK7発症の原因となる変異型DJ-1(M261,L166P)、野生型DJ-1遺伝子を作製し、Siah-1との結合実験、ユビキチンアッセイなどによる解析を進めている。最終年度となる来年度は、Siah-1のパーキンソン病発症における機能の解析をさらに進めていく予定である。ユビキチンリガーゼParkin、Siah-1はともにα-synuclein、α-synuclein結合タンパク質Synphilin-1を基質とし、パーキンソン病発症に関わる重要なタンパク質として注目されている。これらの蛋白質をコードする遺伝子を改変したモデル動物を詳細に解析することにより、パーキンソン病の発症過程を明らかにすることが可能であると考えられる。Siah-1による凝集体形成機構を解析するためSiah-1ノックアウトマウスの作成を試みたが困難であったため、基質であるSynphilin-1をプリオンプロモーター下に脳内に高発現するトランスジェニックマウスを作成することとした。8系統のトランスジェニックマウスを樹立し、ウェスタンブロットにて脳内のSynphilin-1発現量の多い3系統について行動解析を行った。

ロタロッド、、、、いずれにおいてもコントロールとトランスジェニックマウスの間で有意差は見られなかった。免疫組織化学的検索ではいわゆる封入体の形成は認められず、Synphilin-1は細胞質内にびまん性に分布していた。ヒトにおいてはパーキンソン病発症にα-synucleinのgene dosage効果が関与することが報告されているが、マウスではSynphilin-1のgene dosage効果は認められないことが明らかになった。パーキンソン病モデルマウスの樹立を今後Parkinノックアウトマウスとの交配を行った上で、あらためて各種の行動解析を行う予定としている。
自己免疫性水疱症における炎症性老化と免疫老化による自己免疫発症機序の解明

自己免疫性水疱症は,自己免疫寛容破綻に伴う自己反応性T細胞の出現と、自己抗体による組織傷害によって惹起される.自己免疫発症の原因のひとつに老化があるが,特に水疱性類天疱瘡群は、免疫能低下と胸腺T細胞分化成熟が終了した中高年で高頻度の発症が知られており、免疫老化と炎症性老化(慢性炎症)に基づいた発症病態が考えられる.miRNAは細胞内のみならず、細胞を含まない検体の血清にも多くの種類が存在し、個々の発現量が様々な疾患のバイオマーカーとなる可能性が示唆されている。本研究では、自己免疫性水疱症における炎症性老化(慢性炎症)と免疫老化の自己免疫発症への関与を,血清由来のエクソソーム包含マイクロRNA(miRNA)の発現パターン解析を通じて解明することを目的とする.血清エクソソームmiRNAの一部には、加齢や自己免疫性疾患で数十倍に増加するものが知られており、自己免疫性水疱患者のエクソソームのmiRNA発現情報と関連バイオマーカーの分析が可能になれば、免疫寛容破綻の解明にもつながると期待される。過去に渉猟された血清サンプルよりトータルRNAを抽出し、成熟型miRNAの選択的なラベル化とハイブリダイゼーションを行い、miRNAマイクロアレイによりmiRNA発現量の網羅的解析を行った。発現量に有意差のあるmiRNAについては、TargetScanでmiRNAが制御する可能性のあるターゲット遺伝子リストを介して、DAVIDにて機能解析を行った。水疱性類天疱瘡患者の血清において複数のmiRNAの発現量の有意な上昇あるいは低下を認め、年齢層別の比較や尋常性天疱瘡との比較では発現量に差異が認められるものがあった。免疫老化と炎症性老化(慢性炎症)に関わる可能性のあるmiRNAは文献上見いだせなかったが、新規バイオマーカーとしての可能性が考えられた。自己免疫性水疱症の病態解明を目的とする、エクソソーム解析を基にしたアプローチによる免疫寛容破綻機構の研究はこれまで試みられていない。自己免疫性水疱症の分子病態を多数の患者血清で解析できるバイオマーカーとして、例えば、エクソソームに包含され体内血液で末梢を循環するmtDNAが近年注目されており、年齢と共に増え,RAなど自己免疫性疾患では数十倍に増加するとされる。自己免疫性水疱患者でのエクソソーム解析をもとにした様々なバイオマーカーの分析により炎症性老化を背景にした免疫寛容破綻の解明の糸口を見出す可能性があり、研究推進の意義があると考えられる。本年度は、自己抗原が既に明らかな天疱瘡群,類天疱瘡群の疾患に加え,自己抗原が未同定あるいは同定されたばかりの自己免疫性水疱症の患者について、久留米大学医学部皮膚科学で渉猟されているデータの中で,発症年齢やCBC,生化学検査,内分泌代謝関連の検査結果,悪性腫瘍の有無など,個々の患者の老化に関連し得る背景因子をどのくらいの症例数で収集できるかについて、その全体像を明らかにするために調査を行った。皮膚症状を中心とした臨床症状,治療と経過,病理組織学的検査,免疫学的な診断の結果や免疫では慢性炎症に関連したバイオマーカーなどの情報を集め統合した病態関連情報データベースを構築するために必要な準備項目について、施設間での研究支援体制や倫理審査に必要と考えられる情報の収集も含めて検討中である。年度途中の異動で所属機関が変わり、倫理委員会の審査などを初年度に双方の機関において手続き終了し、患者情報のデータベース構築の準備段階を完了することができなかった。また、データベース構築についての共同研究者との情報共有が遅れ、十分な議論を尽くした準備を行うことができなかった。自己免疫性水疱症の病態解明を目的として、免疫寛容破綻解明に関連するエクソソーム解析を基にしたアプローチを試みた。自己免疫性水疱症患者血清で解析できるバイオマーカーとして、エクソソーム包含mtDNAがあり、加齢や自己免疫性疾患では数十倍に増加するため、多数の自己免疫性水疱患者のエクソソーム解析をはじめとした、またmiRNA発現パターン解析などの様々なバイオマーカーの分析が可能になれば、炎症性老化を背景にした免疫寛容破綻の解明につながることが期待され、研究推進の意義があると考えられる。本年度は、自己免疫性水疱症の患者から効率よくエクソソームを抽出するために、エクソソームの回収方法を近年新たに開発された方法を用いて比較検討した。抗CD9,CD63,CD89などのエクソソームマーカーに対する抗体を用いた抗体結合磁気ビーズを用いる方法や、試薬によるエクソソームペレットの遠心分離法、カラム分離法などを用いて解析した。コントロールヒト血清や細胞培養液からエクソソームを抽出後、ELISAによる収量確認やタンパク量、RNAの精製量のエクソソーム回収前後での比較などを行った。その結果、miRNA発現プロファイリング解析や電気泳動によるタンパク質解析等の目的に応じて、抽出したエクソソームを利用するためには、最適化された抽出手段が必要があることが明らかになった。今後、慢性炎症に関連したバイオマーカーなどの情報を集め統合した病態関連情報データベースを構築するために必要とされる具体的な解析内容とその項目の詳細に関して、施設の研究支援体制や倫理審査に関連する情報の収集も含めて検討中である。患者データベースについて、現所属機関では加齢や各種自己免疫疾患に加えて自己免疫性水疱症の患者受診者数が少なく、解析の前段階としての準備については、予定よりかなり時間を要する状況である。また、所属機関内で解析実験を行う形で研究を進めているが、実験設備等についても、解析用機器の準備などが遅れており、アウトソーシング先との交渉も進めている段階である。

自己免疫性水疱症の免疫寛容破綻・慢性炎症に関連した病態解明を目指している。自己免疫性水疱症患者血清で解析できるバイオマーカーとして、エクソソーム包含miDNAが近年注目されている。加齢や自己免疫性疾患では数十倍に増加するため、自己免疫性水疱患者のエクソソームのmiRNA発現パターンを基にバイオマーカーの分析が可能になれば、炎症性老化を背景にした免疫寛容破綻の解明にもつながることが期待される。今後、DAVID解析による関連遺伝子とシグナル伝達経路の推定や慢性炎症にかかわる血清サイトカインなどのバイオマーカーとの関連性についてさらに検討を続けたいと考えている。久留米大学医学部皮膚科および久留米大学皮膚細胞生物学研究所との協力体制を再開し、アウトソーシングによる解析方法の実験計画再構築と分析も再開した。当初の実験計画に沿って、血清エクソソーム由来miRNAのマイクロアレイ解析を施行したが思わしい結果が得られず、血清由来のmiRNAアレイ解析に変更した。しかし、Affymetrix社アレイでは感度の問題もあり解析ができない事例も起こり、Agilent社のアレイを用いることにした。実験キットや分析方法の変更のため、想定以上の時間が研究遂行に必要となった。自己免疫性水疱症は,自己免疫寛容破綻に伴う自己反応性T細胞の出現と、自己抗体による組織傷害によって惹起される.自己免疫発症の原因のひとつに老化があるが,特に水疱性類天疱瘡群は、免疫能低下と胸腺T細胞分化成熟が終了した中高年で高頻度の発症が知られており、免疫老化と炎症性老化(慢性炎症)に基づいた発症病態が考えられる.miRNAは細胞内のみならず、細胞を含まない検体の血清にも多くの種類が存在し、個々の発現量が様々な疾患のバイオマーカーとなる可能性が示唆されている。本研究では、自己免疫性水疱症における炎症性老化(慢性炎症)と免疫老化の自己免疫発症への関与を,血清由来のエクソソーム包含マイクロRNA(miRNA)の発現パターン解析を通じて解明することを目的とする.血清エクソソームmiRNAの一部には、加齢や自己免疫性疾患で数十倍に増加するものが知られており、自己免疫性水疱患者のエクソソームのmiRNA発現情報と関連バイオマーカーの分析が可能になれば、免疫寛容破綻の解明にもつながると期待される。過去に渉猟された血清サンプルよりトータルRNAを抽出し、成熟型miRNAの選択的なラベル化とハイブリダイゼーションを行い、miRNAマイクロアレイによりmiRNA発現量の網羅的解析を行った。発現量に有意差のあるmiRNAについては、TargetScanでmiRNAが制御する可能性のあるターゲット遺伝子リストを介して、DAVIDにて機能解析を行った。水疱性類天疱瘡患者の血清において複数のmiRNAの発現量の有意な上昇あるいは低下を認め、年齢層別の比較や尋常性天疱瘡との比較では発現量に差異が認められるものがあった。免疫老化と炎症性老化(慢性炎症)に関わる可能性のあるmiRNAは文献上見いだせなかったが、新規バイオマーカーとしての可能性が考えられた。初年度と次年度の研究計画の推進については、久留米大学医学部皮膚科との協力体制も必要であるが、アウトソーシングの活用や、所属機関の基礎医学分野の研究者との協力も視野に入れて、ある程度の研究計画の変更についても検討していく予定である。
運動器不活動に伴う慢性痛発症予防に向けた運動処方開発のための基盤研究

本研究は,慢性痛発症前の運動負荷が慢性痛に及ぼす影響について基礎的検証を行った.ランニングホイールで2週間の自発運動を行った(前運動)群と行わなかった(未運動)群に対して,片側後肢に2週間のギプス固定を行い,ギプス固定後慢性痛(CPCP)モデルラットを作製した.両群について,行動学的および免疫組織学的に比較検証を行った.前運動群は,未運動群よりも機械的痛覚増強が減弱した.中でも,固定部位より最も離れた尾部における機械痛覚増強が大きな減弱を示し,尾髄ミクログリアの活性化も抑制されていた.これらの結果から,慢性痛発症前の運動負荷に運動器不活動後の慢性痛発症の予防効果が存在する可能性が示唆された.慢性痛の有効的な治療法の開発を目的に、予防的見地から運動療法の効果について基礎的検証を行った。後肢不動化慢性痛モデル動物に対して、モデル動物作成前に2週間、ランニングホイールを用いて自発運動を行わせた。自発運動後に2週間のギプス固定を行い、ギプス除去後の機械痛覚増強を足底・下腿皮膚・尾部において測定を行った。結果、後肢不動化慢性痛モデル動物と運動+モデル処置群(運動群)を比較すると、運動群において非固定側の尾部への機械痛覚増強は優位に抑制していた。そのほかの部位においては若干の減弱にとどまり、優位な抑制にはつながらなかった。本年度はこれらの動物群を用いて免疫組織学的検討を行った。慢性期の中枢神経系の可塑的変容の指標となる脊髄アストロサイトの活性化に着目して、両群において、機械痛覚増強の測定部位である足底の支配髄節である第4腰髄で検討を行うと、モデル動物群の慢性期に見られる脊髄アストロサイトの活性化が走行距離の伸びた群でわずかに減弱している組織像が確認された。その所見は足底や下腿の機械痛覚増強の変化と同様に、優位な減弱には至らなかった。しかし、今回の結果から運動量に応じて脊髄でのアストロサイト活性化像にわずかではあるが変化がみられたことや、非固定側の尾部への広範囲機械痛覚増強の拡大の抑制が確認されたことにより、運動が広範囲機械痛覚増強の維持・拡大の抑制に対して何らかの影響を与える可能性が示唆された。以上により、予防的運動処方は機械的痛覚増強の広範囲への拡大抑制に対して主要な役割を担うことが予測される。本研究は,慢性痛の有効的な治療法の開発を目的に,予防的見地から運動療法の効果について基礎的検証を行ってきた。23年度は,ギプス固定後慢性痛(CPCP)モデル動物に対して,モデル動物作製前にランニングホイールを用いて,2週間の自発運動を行わせた。モデル動物作製後,機械痛覚増強行動の測定を行った。その結果,CPCPモデル動物に対して,前運動を負荷した群は未運動群よりも慢性的機械的痛覚増強行動の強度,拡大が抑制される傾向が確認された。24年度は,CPCPモデル動物の広範囲機械痛覚増強行動の誘因・維持として明らかとなった脊髄グリア細胞の活性化を指標として,モデル動物群と前運動+モデル動物群に対して免疫組織学的検討を行った。モデル動物群の慢性期に確認されていた脊髄アストロサイトの活性化は,自発運動の走行距離が伸びた群においてわずかに活性化が減弱している傾向が確認された。25年度は,23年・24年度の結果をもとに,サンプル数を増やし自発運動量と機械痛覚増強行動との関係に着目して統計学的検討を行い、さらに行動学的及び免疫組織学的検討を行った。その結果,慢性的機械痛覚増強行動の拡大が前運動の運動量に依存して抑制傾向を示した。さらに前運動+モデル動物群において,障害部位より最も離れた尾部の機械的痛覚増強行動の抑制に伴い,尾髄のミクログリアの活性化が減弱傾向を示した。以上により,慢性痛の発症・拡大に対して,障害を受ける前の運動習慣の有無が関与する可能性が示唆された。本研究は,慢性痛発症前の運動負荷が慢性痛に及ぼす影響について基礎的検証を行った.ランニングホイールで2週間の自発運動を行った(前運動)群と行わなかった(未運動)群に対して,片側後肢に2週間のギプス固定を行い,ギプス固定後慢性痛(CPCP)モデルラットを作製した.両群について,行動学的および免疫組織学的に比較検証を行った.前運動群は,未運動群よりも機械的痛覚増強が減弱した.中でも,固定部位より最も離れた尾部における機械痛覚増強が大きな減弱を示し,尾髄ミクログリアの活性化も抑制されていた.これらの結果から,慢性痛発症前の運動負荷に運動器不活動後の慢性痛発症の予防効果が存在する可能性が示唆された.慢性痛の代表として複雑局所性疼痛症候群Iがある。この患者の半数近くは、発症起点としてギプス固定やスプリントによる患肢の廃用を経験しており,運動器の不活動に慢性痛の大きな誘因が含まれることが予想される。近年、慢性痛の病態解明により中枢神経系の可塑的変容が明らかとなってきているが、有効性の高い治療法の開発までには至っていない。本研究では慢性痛の有効的な治療法の開発を目的に、予防的見地から運動療法の効果について基礎的検証を行った。慢性痛モデル動物として、我々が運動器の不活動に伴う慢性痛のメカニズム解明のために開発したギプス固定後慢性痛モデルを使用する。

予防的運動が慢性痛にもたらす影響を検証するために、このモデル動物作成前に2週間ランニングホイールを用いて自発運動を行わせた。自発運動後2週間のギプス固定を行い、ギプス除去後の痛み行動の測定を足底部・下腿部および尾部の機械的痛覚過敏行動をvon Frey testにて、また筋圧痛閾値にはpush-pull gaugeを用いて計測を行った。結果、下肢不動化慢性痛モデル群と運動+モデル処置群を比較すると、機械的痛覚過敏行動は固定側で足底・下腿において若干の減弱傾向を示し、非固定側で優位に減弱を示した。また尾部および筋圧痛閾値においても両側性に優位に減弱を示した。さらに、運動+モデル処置群間においてもランニングホイールの走行距離が伸びない群では機械的痛覚過敏行動の優位な減弱は示さなかった。以上の結果から予防的運動が機械的痛覚過敏行動の亢進および筋圧痛閾値の低下を抑制し、さらに非固定側への拡大を抑制する可能性が示唆された。本研究で予定している計画はやや遅れている。現在、モデル処置前に運動を実施後、慢性的広範囲機械痛覚増強に与える影響について行動学的解析を行い、予防運動における慢性的広範囲機械痛覚増強の非固定側の尾部への拡大に抑制傾向が確認された。これらの動物群を用いて、中枢神経系の可塑的変容への影響について免疫組織学的検討を行っている。後肢不動化慢性痛モデル動物において、慢性期に第4腰髄アストサイトの活性化所見が確認されている。この所見をもとにモデル動物群と運動群において比較検討を行った。その結果、第4腰髄アストロサイト活性化は運動群の中で運動量の多い群において、わずかにアストロサイトの突起伸長が抑制された所見が確認されているが、大きな活性化の減弱とまでは言えない。しかし、運動が慢性的広範囲機械痛覚増強の尾部への拡大を抑制している結果から考察すると、行動学的所見に平行する尾髄のグリア細胞の検討をまだ十分に行うことができていない。その検討を行うことで広範囲機械痛覚増強の拡大に関する脊髄グリア細胞の関与の可能性をより検討することができると考えており、この研究を年度内に行うことができていない点でやや計画が遅れていると判断する。本研究で予定している初年度の計画はほぼ実行できている。現在、モデル処置前に自発運動を実施後、慢性的機械的痛覚過敏行動に与える影響について行動学的解析を行い、予防運動効果による慢性的機械的痛覚過敏行動の減弱傾向が確認れてきた。慢性的機械的痛覚過敏行動に対する予防的運動効果について、運動+モデル処置群の例数を増やし、運動量の規定や期間など細部の検討を行う必要があり、より確実な予防運動効果を提示できるように現在取り組んでいる。これまで臨床的に運動習慣のある人は痛みが慢性化しにくく、慢性痛発症後も自発運動を生活で取り入れることで改善につながるケースがあるにもかかわらず基礎的検証が不十分であった。今回の研究で予防的運動が慢性的機械痛覚過敏行動の拡大に対して抑制傾向が確認されている。これらの群に対して、中枢神経系の可塑的変容の指標として脊髄グリアの活性化に着目して免疫組織学的解析を行ってきた。今までモデル動物において確認されてきた第4腰髄のアストロサイトの活性化は、運動処方によって優位な減弱傾向は確認されていない。しかし、今回の結果から、運動処方は慢性的機械痛覚過敏行動の非固定側の尾部への拡大において減弱傾向を示している。この減弱傾向が見られる部位に相当する髄節における免疫組織学的検討をさらに行い、またこの慢性的機械痛覚過敏行動の拡大に関与する因子について生化学的手法を用いて分子生物学的解析を行う。
生体吸収性ポリマーシートをを用いた膀胱再生療法

今回、独自に開発した生体吸収性ポリマーシート(BAPS)を用い、膀胱壁が再生可能かを検討した。ブタの膀胱を様々な大きさに部分切除した後に、同等にトリミングしたBAPSを移植し、肉眼的、組織学的に評価した。その結果、膀胱壁部分切除後にBAPSの移植により膀胱壁を良好に再生させることが可能であった。しかし、より広範囲の欠損ではBAPSの著しい収縮のため、膀胱容量の確保が問題となった。しかし移植後の膀胱の形状を維持する工夫を施したところ、早期に良好な膀胱再生が得られた。本素材を用いることにより、膀胱壁欠損分に代替素材をパッチ状に移植するという新規治療開発の可能性が示された。本研究は、雑種ブタの膀胱壁を部分的に切除した後に、独自に開発した生体吸収性ポリマーシート(BAPS)をパッチ状に移植し、膀胱壁の良好な再生を得ることを目的としている。初期の実験で、およそ4×3cm大の大きさに膀胱頂部を切除し、同等の大きさのBAPSを移植して3か月後には肉眼的、組織学的にもnativeに類似した形で良好な再生結果が得られた。しかし臨床的にはより大きな膀胱壁の欠損が問題となる。よって膀胱壁を大きく欠損させた後にBAPSを移植した場合、同様に良好な再生が得られるかが課題であった。今回、膀胱のおよそ1/2に相当する9×7cm大の膀胱壁を切除し、同等のBAPSを縫合移植する実験を試みた。4週後、移植部の破綻などは認めなかったが、BAPSは約30%に著しく収縮していた。また組織学的にはほとんどが炎症性細胞の塊で、膀胱壁の成分の再生はみられなかった。この著明な収縮では、本来の目的でもある膀胱容量を維持することは困難となる。収縮の原因を検索した結果、BAPSを大きく移植した際、移植直後にBAPSが折りたたまれた形となり、この状態で吸収が進むことが収縮の一因であると考えられた。この問題を解決するため、BAPS移植後に、移植部が膀胱壁のドーム状の形状を維持するような工夫を施した。方法は、網状の柔らかいプラスチック材料を膀胱の形状に見立ててラグビーボール状に形作り、膀胱壁切除後の内腔へ挿入、それを覆うようにBAPSを移植することでBAPSのドーム状の形状を一定に保った。4週後、移植部周囲の癒着は強かったが、移植部は組織学的に移行上皮のみならず筋層まで全層性に良好な再生が認められた。また、プラスチック材料による移植部の損傷などもみられなかった。大きく膀胱壁を欠損させ同部にBAPSを移植した場合、膀胱壁の形状を維持するような工夫を施すことで良好な再生が得られるという結果を得た。本研究は、ブタの膀胱壁を部分的に欠損させた後、同部に独自に開発した生体吸収性ポリマー(BAPSポリ乳酸:ポリカプロラクトン=50:50共重合体、ポリグリコール酸の線維で補強。約8週間で完全加水分解吸収)をパッチ状に移植し、移植部がnative同様に再生するかを試みた研究である。まず前段階として、雑種ブタ(20kg30kg)の膀胱壁を5×4cm大に欠損させ、同じ大きさにトリミングしたBAPSを移植、3カ月後再開腹すると移植部の破綻や尿漏は認めず、摘出した移植部は肉眼的、組織学的にnative同様の膀胱壁が再生したことを確認した。しかし、5×4cm大の欠損は比較的小さい欠損であり、欠損部を直接縫合閉鎖した場合のものと比較して膀胱容量など著変が無い可能性が考えられ、それでは本手技の臨床的意義は少ない。よって、膀胱壁をより大きく9×7cm大に欠損させ(およそ膀胱の1/2)、同様にBAPSでパッチ状に移植した。4週後に膀胱を摘出し観察すると、移植部の破綻は認めないものの厚く大きな潰瘍を形成しており、移植部は約30%程度にまで著しく収縮していた。9×7cm大に欠損させ直接縫合閉鎖したものと、4週後の膀胱容量を比較すると、BAPS移植群において有意な増加はみられなかった。よって今後は、BAPSの収縮をいかに予防し、膀胱容量を確保するかの工夫が必要である。本研究は、ブタの膀胱壁を部分的に全層切除した後に、独自に開発した生体吸収性ポリマーシート(BAPS)をパッチ状に移植し、膀胱壁の良好な再生を得ることを目的としている。初期実験では、およそ4×3cm大の大きさに膀胱頂部を切除し、同等の大きさのBAPSを移植して3か月後には肉眼的、組織学的にもnativeに類似した形で良好な再生結果が得られた。しかし臨床的には、より大きな膀胱壁の欠損が問題となる。

今回、膀胱の約1/2に相当する9×7cm大に切除し、同等のBAPSを移植する実験を試みた。4週後、移植部の破綻や尿漏などは認めなかったが、BAPSは約30%程度に著しく収縮することが分かった。また組織学的にはほぼ炎症性細胞の塊で、膀胱壁成分の再生はみられなかった。この著明な収縮では本来の目的でもある膀胱容量を維持することは困難となる。収縮の原因を検討した結果、大きなBAPSを移植した際は、移植直後にBAPSが折りたたまれた形となり、この状態で吸収が進むことが収縮の一因だと考えられた。この問題を解決するために、BAPS移植後に移植部が膀胱壁のドーム状の形状を維持するような工夫を施した。方法は、網状の柔らかいプラスチック材料を膀胱の形状に見立ててラグビーボール状にトリミングし、膀胱壁を大きく切除した後の内腔へ挿入、それを覆うようにBAPSを移植することで移植部の形状を一定に保った。4週後、移植部周囲の癒着は強かったが、BAPS移植部は移行上皮のみならず筋層まで全層性に良好な再生所見が認められた。また、プラスチック材料による移植部の損傷や迷入も見られなかった。大きく膀胱壁を欠損させ同部にBAPSを移植した場合、膀胱壁の形状を維持するような工夫を施すことで良好な再生が得られるという結果を得た。消化器外科、移植外科膀胱壁がBAPSによる部分移植で再生し得る事は既に実証済みであったが、本研究においてはより大きく膀胱壁を切除した際に、膀胱容量を保った状態で良好に再生し得るかが課題であった。初期の実験においては、膀胱壁を全体の約1/2の9×7cm切除し、同等のBAPSを移植したが、移植部は約30%にまで著しく収縮した。平均膀胱容量も、膀胱壁切除後に直接縫合閉鎖した群の容量と有意差なく、十分な膀胱容量を維持できなかった。しかし膀胱の形状を維持するように、膀胱内腔にプラスチック素材の「支柱」を組み込んだ実験を行った結果、4週後という早期の段階で移行上皮から筋層まで全層性に再生が得られ、且つ収縮は約90%程度に留まった。移植した材料を一定の形状に保つことで、より早くより良い組織再生が得られるという知見を得たことは、今回の研究の一定の成果であると考えている。今回の研究における問題点としては、膀胱壁を広範囲BAPSで置換した場合、周囲の癒着が著明であることであり、この問題の解決は重要であると思われる。今後、癒着を防止するための対策を検討することが更なる課題である。本研究は、膀胱壁をBAPSの移植によってnative同様に再生させることを目的としているが、BAPSを移植することで膀胱容量の増加がえられなければ、臨床的な意義は少ないと思われる。膀胱にはある程度の伸展性があるため、小さな欠損では同部を直接縫合閉鎖しても頻尿などのQOL低下に繋がらないと考えられるからである。今回、より大きくブタの膀胱壁を欠損させ、同部にBAPSを移植して肉眼的、組織学的にnativeに類似した形で再生し得るか実験を行った。これまでの5×4cmの欠損に比べ、9×7cmとより大きく膀胱壁を欠損させてBAPSを移植(n=3)し、4週間後に犠牲死させ膀胱を摘出、評価した。また膀胱容量を比較するため、BAPSを移植せず欠損部を直接縫合閉鎖(n=2)した群も作成した。4週間後のBAPS移植群では、肉眼的に移植部の破綻や尿漏は認めなかったが、同部を硬く触知した。内腔面をみると大きな潰瘍を形成し、移植部は約30%程度にまで収縮していた。
G蛋白β3サブユニット遺伝子のハプロタイプによる疾患リスクと予防医学的応用

高血圧症、肥満、心疾患等の慢性疾患の遺伝は多因子遺伝と考えられており、これらの遺伝子の影響との組み合わせによる効果の検討、及び遺伝子と宿主側の要因(生活習慣等)との組み合わせによる効果の検討を行う必要がある。G蛋白β3サブユニット遺伝子(GNB3)のC825T多型は、高血圧、糖尿病、肥満、高尿酸血症、高脂血症に関して欧米で注目され、有意な関係が認められている。一方われわれの日本人での大規模調査では、十分な検出力を有していたのにもかかわらず高血圧、肥満、高尿酸血症について同様の結果が得られなかった。この人種間の違いについて、GNB3のその他の遺伝子多型である、A-350G、CI429Tなどとのハプロタイプが異なっているためであると予想している。そこで、本研究では、日本の一般人でこれらのハプロタイプについて検討し、遺伝子のリスクを明らかにし、予防医学的に評価することを目的としている。本年度の本研究の実績としては、GNB3のC825T遺伝子のほか、C1429T遺伝子の測定を終了し、解析を行い、まず高コレステロール血症(総コレステロール値≧240mg/dL)の発症について検討を行った。ハプロタイプの解析については、C825TとC1429T遺伝子は男女とも連鎖不平衡の状態にあることが明らかとなった。一方高コレステロール血症の発症とG蛋白β3サブユニットのC825T、C1429T及びA-350G遺伝子のハプロタイプについては関連が明らかではなかった。またpooled logisticregresion解析により、C1429T遺伝子が、男性対女性において、毎年の年齢、BMI、飲酒、喫煙、運動習慣について補正しても、有意に高コレステロール血症の発症と関連していることが明らかになった。TT型の男性遺伝子保有者の、CC型に対する高コレステロール血症発症のオッズ比は、2.27(95%信頼区間:1.04-4.94)であった。今後高コレステロール血症を予測し、予防する上で、この遺伝子がマーカーとして役立つことが示唆された。分子生物学の医学への応用が急速に進歩し近年は後天性の慢性疾患でも関連遺伝子が報告されている。高血圧症、肥満、心疾患等の慢性疾患の遺伝は多因子遺伝と考えられており、複数の遺伝子が相互作用しつつ、あるいは環境因子や宿主側の要因(生活習慣等)から影響を受けつつその相互作用によって発症すると考えられる。したがって大規模な一般人の集団に対しこれらの遺伝子の影響とその組み合わせによる効果の検討、および遺伝子と宿主側の要因(生活習慣等)との組み合わせによる効果の検討を行う必要があるとの考えに至った。G蛋白β3サブユニットのC825T遺伝子多型は、高血圧、糖尿病、肥満、高尿酸血症、高脂血症に関して欧米で注目され、有意な関連が認められている。この人種間の違いについて、われわれは、G蛋白β3サブユニットのその他の遺伝子多型である、G814A、C1429T、G5177Aとのハプロタイプが異なっているためであると予想している。