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家族内コミュニケーションを支援するデジタルストーリーテリングシステムの開発研究

本研究の目的は,コンピュータ上で親子で行う物語作り(デジタルストーリーテリング)を通して,家族内コミュニケーションを活性化することである.家庭の教育力の向上支援を念頭に,物語作りを通じて家族内コミュニケーションの機会を充実させていく.その方法として情報通信技術(ICT)の適切な支援環境を活用し,絵本の読み聞かせでは実現しえなかった効果的なコミュニケーションを支援することを目指している.そこで,家族内コミュニケーションの支援活動のデザインと評価のための実験を行った.活動は、「未来の君に贈るビデオレター」ワークショップと称して,家族で10年後の子どもに贈るビデオレターをデジタルストーリーテリング形式にして作成するという内容である.本年度は,それらの実験から得たデータをもとに,デザインした活動により家族内コミュニケーションがどのように変化したかについて分析を行った.評価の結果,家族内コミュニケーションにテーマに関する一貫性が向上されたとともに,インタラクションが増える様子が観察された.さらに家族に対する信頼感も向上するケースがみられた.全体的に向上した家族には,相手の発言を受け止め,意見を出し合いながらテーマに対する家族の意味を構築している様子がみられた.また,この活動自体の家族にとっての意味を考え,ワークシートの記述を詳細に行っていた.一連の調査内容と活動デザイン,その評価については、論文としてまとめ、投稿している.また,活動は夫婦でお互いの考えを確認し、家族としての意味をまとめるワークシートを活用しながらデジタルストーリーテリングを行っていくワークショップとしてデザインされている.これらをワークショップを一般に普及できるようWebで公開する準備をすすめている.本研究の目的は,コンピュータ上で親子で行う物語作り(デジタルストーリーテリング)を通して,家族内コミュニケーションを活性化することである.家庭の教育力の向上支援を念頭に,物語作りを通じて家族内コミュニケーションの機会を充実させていく.その方法として情報通信技術(ICT)の適切な支援環境を活用し,絵本の読み聞かせでは実現しえなかった効果的なコミュニケーションを支援することを目指している.そこで,家族内コミュニケーションの支援活動のデザインと評価のための実験を行った.活動は、「未来の君に贈るビデオレター」ワークショップと称して,家族で10年後の子どもに贈るビデオレターをデジタルストーリーテリング形式にして作成するという内容である.本年度は,それらの実験から得たデータをもとに,デザインした活動により家族内コミュニケーションがどのように変化したかについて分析を行った.評価の結果,家族内コミュニケーションにテーマに関する一貫性が向上されたとともに,インタラクションが増える様子が観察された.さらに家族に対する信頼感も向上するケースがみられた.全体的に向上した家族には,相手の発言を受け止め,意見を出し合いながらテーマに対する家族の意味を構築している様子がみられた.また,この活動自体の家族にとっての意味を考え,ワークシートの記述を詳細に行っていた.一連の調査内容と活動デザイン,その評価については、論文としてまとめ、投稿している.また,活動は夫婦でお互いの考えを確認し、家族としての意味をまとめるワークシートを活用しながらデジタルストーリーテリングを行っていくワークショップとしてデザインされている.これらをワークショップを一般に普及できるようWebで公開する準備をすすめている.本研究の目的は,コンピュータ上で行う親子で行う物語作り(デジタルストーリーテリング)を通して,家族内コミュニケーションを活性化する環境をデザインすることである.家庭の教育力の向上支援を念頭に,物語作りを通じて家族内コミュニケーションの機会を充実させていく.その方法として情報通信技術(ICT)の適切な支援環境を活用し,絵本の読み聞かせでは実現しえなかった効果的なコミュニケーションを支援することを目指している.平成22年度は,本研究で支援する家族内コミュニケーションを支援する要件を明らかにした.まず,過年度研究の結果として得られた知見を整理し,本研究で援用できる部分を抽出,さらに多岐にわたり研究が行われている家族のコミュニケーションに関わる先行研究から,家族内コミュニケーションに潜む問題とその問題を克服する方法について検討し,望ましいコミュニケーションパターンへと導くデジタルストーリーテリング活動の要件を明らかにした.具体的には,子どもの発達は家族システムに埋め込まれており,子どものNarrativeもまた,家族が日常語り合うFamily Narrativeに影響されるという.本研究では,子どもに影響があるとされる家族のNarrative(家族ナラティブ)を支援することにし,その実現方法としてデジタルストーリーテリングの活動を提案する.語り手にとって物語や体験がどういう意味があるのかを深く考え,意義があるとされるこの活動を援用し,家族として意味,意義について深く考えていく活動をデザインすることとした.本研究の目的は,コンピュータ上で行う親子で行う物語作り(デジタルストーリーテリング)を通して,家族内コミュニケーションを活性化する環境をデザインすることである.家庭の教育力の向上支援を念頭に,物語作りを通じて家族内コミュニケーションの機会を充実させていく.その方法として情報通信技術(ICT)の適切な支援環境を活用し,絵本の読み聞かせでは実現しえなかった効果的なコミュニケーションを支援することを目指している.平成23年度は,前年度明らかにした要件をもとに、家族内コミュニケーションの支援活動のデザイ・ンと評価のための実験を行なった.具体的には,子どもの発達は家族システムに埋め込まれており,子どものNarrativeもまた,家族が日常語り合うFamily Narrativeに影響されるという.本研究では,子どもに影響があるとされる家族のNarrative(家族ナラティブ)を支援することにし,その実現方法としてデジタルストーリーテリングの活動を提案する.語り手にとって物語や体験がどういう意味があるのかを深く考え,意義があるとされるこの活動を援用し,家族として意味,意義について深く考えていく活動をデザインした.実験は、募集に応じた14組の家族を対象にワークショップの形式にて行なった。デジタルストーリーテリングでは、未来の子ども贈るという設定のもと、ビデオレターを作成した。活動の参加

前と後で、家族ナラティブがどのように変化したか分析するためのデータを収集した。現在は、データ分析とともに、結果を論文化する作業を行なうている。本研究の目的は、コンピュータ上で親子で行う物語作り(デジタルストーリーテリング)を通して、家族内コミュニケーションを活性化することである。家庭の教育力の向上支援を念頭に、物語作りを通じて家族内コミュニケーションの機会を充実させていく。その方法として情報通信技術(ICT)の適切な支援環境を活用し、絵本の読み聞かせでは実現しえなかった効果的なコミュニケーションを支援することを目指している。平成24年度は、家族内コミュニケーションの支援活動のデザインと評価のための実験を行った。「未来の君に贈るビデオレター」ワークショップと称して、家族で10年後の子どもに贈るビデオレターをデジタルストーリーテリング形式にして作成するものである。本年度は、それらの実験から得たデータをもとに、デザインした活動により家族内コミュニケーションがどのように変化したかについて分析を行った。評価の結果、家族内コミュニケーションにテーマに関する一貫性が向上されたとともに、インタラクションが増える様子が観察された。さらに家族に対する信頼感も向上するケースがみられた。全体的に向上した家族には、相手の発言を受け止め、意見を出し合いながらテーマに対する家族の意味を構築している様子がみられた。また、この活動自体の家族にとっての意味を考え,ワークシートの記述を詳細に行っていた。本年度はさらに、一連の調査内容と活動デザイン、その結果について論文としてまとめ、投稿した。また、デザインした活動においては、単にデジタルストーリーテリングを行うというものではなく、夫婦でお互いの考えを確かめ合えるようなワークシートや家族の気持ちをまとめるためのテンプレートを用意している。これらをワークショップとして一般に普及できるようWebで公開する準備をすすめている。活動デザインとともに実証実験を完了している。収集したデータの分析と論文化の作業も開始している。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は論文の執筆と得られた知見を社会に還元する作業を行なう予定である。
『神道集』校注のための基礎的研究

本研究は、『神道集』の古本系諸本・流布本系諸本を比較検討して校本を作成することから始発し、訓読文を作成しつつ、語注を加えるという作業を『神道集』全編にわたって完成させることが最終目的であるが、研究期間(2年)内においては、『神道集』五十話のうち、その内容が<物語的縁起>として分類されている諸話について作業を終了し、全編を校注・訓読する第一段階とすることを計画した。研究期間(2年)内における研究実績は次のとおりである。(1)物語的縁起に分類される諸話につき、旧赤木文庫蔵本を底本として、真福寺蔵本二種・神宮文庫蔵本二種など、他の主要伝本との校合作業が終了した。但し、旧赤木文庫蔵本は貴重古典籍叢刊(角川書店)の影印本により、旧赤木文庫蔵本を含めた天理図書館蔵の二種の伝本については、原本を披見することが叶わなかった。(2)前記(1)の成果にもとづき、巻六・巻七・巻八の十七話の訓読文作成と、その電子テキスト化が完了した。(3)注釈作業に必要な資料・情報の収集、並びに従来の研究成果の把握については、ほぼ計画どおり進み、実地調査の成果と統合する段階に至った。特に、上野国関係話の注釈に必要な予備作業はほぼ終了した。(4)前記(3)に関する作業の過程で、『神道集』所収話と質的に連接する『鹿嶋大明神縁起草紙』、『神道集』所収話の在地的展開を考える上で有益な視点を提供する『常福寺事蹟縁記』などを見いだし、翻刻紹介した。本研究の成果をふまえ、『神道集』全編の校注に向けて今後も作業を継続していくが、福田晃・石井行雄・小助川元太の各氏と共に、伝承文学全注釈叢書(三弥井書店)の一書として『神道集(上)・(下)』を平成21年中に刊行することを予定している。本研究は、『神道集』の古本系諸本・流布本系諸本を比較検討して校本を作成することから始発し、訓読文を作成しつつ、語注を加えるという作業を『神道集』全編にわたって完成させることが最終目的であるが、交付申請期間(2年)内においては、『神道集』五十話のうち、その内容が<物語的縁起>として分類されている諸話について作業を終了し、全編を校注・訓読する第一段階とすることを計画した。平成17年度研究実施計画に記した「1.校本作成」「2.訓読文作成」「3.注釈作業」の各項目の遂行状況は次のとおりである。1.校本作成主要伝本のうち、最終確認の済んでいなかった神宮文庫蔵の二本について閲覧・調査した。二本のうち、豊宮崎文庫旧蔵本については必要な箇所の調査を終えたが、林崎文庫旧蔵本については調査の行き届かなかった箇所があるため、平成18年度に再度、閲覧・調査を行う予定である。校本の電子テキスト化に必要な本文入力については、赤木文庫旧蔵本の主要箇所の作業を終えた段階である。2.訓読文作成訓読文の作成に関しては、上野国関係話の半数を終えた段階である。3.注釈作業注釈作業に必要な資料・情報の収集、並びに従来の研究成果の把握についてはほぼ計画どおり進んだが、本年度に予定していた「熊野権現事」に関する実地調査を実施することができなかったので、平成18年度に他話に関する実地調査と併行することとする。

本研究は、『神道集』の古本系諸本・流布本系諸本を比較検討して校本を作成することから始発し、訓読文を作成しつつ、語注を加えるという作業を『神道集』全編にわたって完成させることが最終目的であるが、研究期間(2年)内においては、『神道集』五十話のうち、その内容が<物語的縁起>として分類されている諸話について作業を終了し、全編を校注・訓読する第一段階とすることを計画した。前年度の成果を承けた本年度の研究実績は次のとおりである。(1)物語的縁起に分類される諸話につき、旧赤木文庫蔵本を底本として、真福寺蔵本二種・神宮文庫蔵本二種など、他の主要伝本との校合作業が終了した。但し、旧赤木文庫蔵本は貴重古典籍叢刊(角川書店)の影印本により、旧赤木文庫蔵本を含めた天理図書館蔵の二種の伝本については、原本を披見することが叶わなかった。(2)前記(1)の成果にもとづき、巻六・巻七・巻八の十七話の訓読文作成と、その電子テキスト化が完了した。(3)注釈作業に必要な資料・情報の収集、並びに従来の研究成果の把握については、ほぼ計画どおり進み、実地調査の成果と統合する段階に至った。特に、上野国関係話の注釈に必要な予備作業はほぼ終了した。(4)前記(3)に関する作業の過程で、『神道集』所収話と質的に連接する『鹿嶋大明神縁起草紙』、『神道集』所収話の在地的展開を考える上で有益な視点を提供する『常福寺事蹟縁記』などを見いだし、翻刻紹介した。本研究の成果をふまえ、『神道集』全編の校注に向けて今後も作業を継続していくが、福田晃・石井行雄・小助川元太の各氏と共に、伝承文学全注釈叢書(三弥井書店)の一書として『神道集(上)・(下)』を平成21年中に刊行することを予定している。
A.actinomycetemcomitans線毛機能の遺伝子からの解析

1昨年度の結果からActinobacillus actinomycetemcomitansの線毛サブユニットタンパクの遺伝子flpの下流には,5つのorfがflpと同じ向きで存在することが判明している。この5つの遺伝子(それぞれorfA,orfB,orfC,orfD,orfEと命名)の予想アミノ酸配列の解析から,次のことがわかった。・orfBがコードするタンパクは,タイプIV線毛リーダーペプチダーゼと高い相同性を示した。さらにタイプIVリーダペプチダーゼが認識するアミノ酸配列モチーフがflpとorfAのコードするタンパクのアミノ酸配列中に見出された。・orfDがコードするタンパクは,細菌菌体外分泌にかかわるタンパク群と高い相同性を示した。flpから始まる一連の遺伝子群はタイプIV線毛構成のかかわる遺伝子群である可能性が高いことが判明した。2線毛のクローニングに用いたA.actinomycetemcomtans線毛発現株304-a株と他の菌株をflpの塩基配列の違い,mRNAへの転写の違い,両面から比べてみた結果,・304-a株とそれを継代して線毛を発現しなくなった304-b株では,flpの構造遺伝子の塩基配列は上流のプロモーター領域を含めて完全に一致していた。mRNAの解析から304-b株はflpの転写開始が起こっておらず,転写開始の段階で制御されていることがわかった。・臨床分離株の1つは線毛非発現株であるが,そのflpにはフレームシフトが存在して,タンパクとしてFLPを発現できないことがわかった。すなわち線毛発現の違いにはmRNAに転写する段階での制御に基づくものと,構造遺伝子の変異に基づくものとがあることが明らかになった。Inverse PCRによるflp下流遺伝子のクローニング,シークェンスActinobacillusactinomycetemcomitans 304a株において,flpを含む3300bpの配列を既にクローニング・シークェンス済みである。この配列からInverse PCR用のprimerセットを設計し,Inverse PCRを試みた。その結果,flpの下流の領域を含めて5709bpのDNA配列を確定した。DNAシークエンスの解析flp geneの下流には,このorfと同じ方向に,orfA,orfB,orfC(orfの一部のみ)があることは既に報告済みである。その下流を決定したことによって,orfCの全長とさらに下流にorfD,orfE(一部)の存在が明らかになった。このorfD,orfEは,最近Haase,EMらが報告している2つのタンパクRcpA,RcpBと一致した。この2つのタンパクはA.actinomycetemcomitansがラフ型のコロニー形態をとるときのみ外膜に発現するタンパクで,線毛関連タンパクであると示唆している。これらの遺伝子が同方向に,orf同士が位置的に緊密にあることから,その可能性は大きいであろう。線毛遺伝子のトランスクリプションの解析flpを含む領域のmRNAの転写様式を調べるため,primer extension,ribonuclease protection assayを行った。その結果,転写開始点は,flp構造遺伝子の上流102bpであることが同定できた。まだ転写終結は,flpの構造遺伝子のすぐ下流に存在するステムループ配列で転写が止まるものと(モノシストロン),さらに下流のorfAまで転写が続くもの(ポリシストロン)とが存在した。この転写のアテニュエータによって,線毛構築のための各タンパクコンポーネントの構成モル比を調節しているのかもしれない。
上皮細胞の機能調節を介した肺炎マイコプラズマの持続感染機構の解析

呼吸器感染症の原因細菌である肺炎マイコプラズマは気道の上皮細胞を感染の足場にするが、本菌の産生する過酸化水素は感染上皮細胞を傷害することで感染症状の発現に寄与する一方で、感染の足場の破壊を招くことで本菌の感染の成立と維持の妨げとなっている可能性がある。このような仮説が正しかった場合、肺炎マイコプラズマは過酸化水素による感染上皮細胞の剥離を何らかの方法によって抑制することで感染を維持していると推測される。本研究では、肺炎マイコプラズマが感染を成立・維持するための戦略として上皮細胞の剥離を制御するか解析する。さらに分子機構の解析により、本菌の持続的感染を抑制する新規治療法確立の基盤構築を目指す。
『ファンタジア2000』を起点にした20世紀音楽からの鑑賞教材収集と指導法の開発

【研究目的】1.ディズニー音楽映画「ファンタジア2000」(DVD)を起点に、聴いて楽しい20世紀の音楽作品を収集し、子どもたちに音楽を聴く喜びをいっそう深めること。2.ICT環境を充実するとともに関連鑑賞教材の指導法を開発することで,どの子どもにも音楽を味わって聴く態度を身に付けること。【研究方法】これらの2点について平成23年1月3月まで、和歌山大学教育学部附属小学校5/6年生児童(5学級)を被研対象とした。《火の鳥》(『ファンタジア2000』収録/ストラヴィンスキー/1919年版)のアニメーション映像を見せて関心を高め、4曲から「カスチェイの凶暴な踊り」の音楽に焦点化し、1.オリジナル(1910年全曲版)の音源(CD:デュトワ指揮:モントリオール)、2.同管弦楽演奏映像(DVD:ラトル指揮ベルリン)、3.同バレエ映像(DVD:ゲルギエフ指揮マリインスキー&バレエ)と、広範な関連鑑賞資料を駆使して鑑賞活動を行った。とくに1の活動ではこの楽曲特有のモチーフの「反復」に着目させることで、2での楽器による音色の変化の認知に効果が表れた。本研究の有意性を確かめるために、3授業についてそれぞれ研究協力本学教員,初等音楽科教育法受講学生(150名)及び現職教員による参観レポート及び被研全児童からのワークシートを回収し分析した。【研究成果】子どもたちは4種類の『火の鳥』すべてに興味を示し、とりわけバレエ音楽への興味は、後日、強い要望で被験者全員が3(約50分)を鑑賞するまでになった。考察の結果、楽曲のドラマティックな魅力とともに、旋律と楽曲の構造を捉えた1、2の鑑賞の活動がこのような効果を生んだと考えられる。
ニワトリ消化管における生体防御応答の包括的理解

飼料栄養として抗原受容体の発現を変動させることが知られているフィチン酸給与、そして動物側の要因として免疫関連遺伝子発現や細菌叢に関与する要因として加齢を取り上げた。1日齢の雄ヒナに、市販幼雛用飼料または市販幼雛用飼料に0.1%のフィチン酸を添加した飼料を3週間給与した。腸管部位としては回腸末端に着目しその組織と内容物中細菌を試料とした。腸管組織では腸管バリアに関連する免疫関連遺伝子として、抗原受容体であるトール様受容体(TLR) 2,4および7、βディフェンシン(AvD) 2,4,7,9及び10、免疫グロブリン(Ig)A、ムチン、B及びT細胞の指標であるBu-1及びCD3,4と8のmRNA発現量を測定した。タイトジャンクションの指標としては、ZO2,オクラジン、クラリジン1,3,4,5,16 mRNA発現量を、また、内容物では総細菌, Enterobacteriaceae, Clostridium group, Lactobacillus group, Bacteroides group, Enterococcus sppの16srDNA量を測定し細菌量を推定した。総細菌数とBu-1及びCD3と4、TLR2,4と7、ムチン、IgA、AvD2、オクラジン、クラリジン4,5,16mRNA発現量には正の相関が認められ、また、Clostridium group数とTLR4, CD3と4, IgA, AvD9と10発現量には正の相関が認められた。一方、EnterobacteriaceaeまたはEnterococcus spp数とCD3と4, IgA,ムチン, AvD2発現量には負の相関が、ZO2,オクラジン、クラリジン5,16mRNA発現量には弱い負の相関が認められた。本年度、予定していた動物実験は終了した。さらに、孵化後72時間の飼料給与制限が腸管バリアと細菌叢に及ぼす影響に関する試験においては、遺伝子の分析はほぼ終了し、現在結果の解析を行っている。科学研究費(学術研究助成基金助成金)の廃止申請承認(学振助ー第905号)をうけ研究は実施しない。本年度はフィチン酸給与がニワトリ腸管免疫関連遺伝子発現に及ぼす影響を検討した。フィチン酸はイノシトール類縁物質であり、IL-8産生抑制などフィチン酸は免疫に対して抑制的に作用すると考えられている。本試験では腸管免疫免疫に対する作用研究の一環として、フィチン酸給与がニワトリの腸管免疫関連遺伝子発現に対する作用を調査した。ボリスブラウン雄初生ヒナに市販のヒナ用飼料または0.1%フィチン酸添加飼料を21日間給与した。0日、6日及び21日齢時に回腸末端とその中の腸管内容物及び血液を採取した。血液は血漿調製後、カルシウム、リン及び亜鉛濃度を比色法により測定した。また、免疫グロブリン(Ig)A及びG濃度をそれぞれELISA法により測定した。腸組織は総RNAを抽出し、市販のキットによりcDNA調製後、real-time PCR法により、抗原受容体であるトール様受容体(TLR)-2及び4、7、T細胞数の指標としてCD3、B細胞数の指標としてBu-1、炎症関連遺伝子としてIL-1β,IFN-γ,TL1A ,IL-6,IL-10及びIL-17発現量を測定した。6日及び21日齢における体重、リン及び血漿亜鉛濃度はフィチン酸給与の影響を受けなかった。カルシウム濃度はフィチン酸給与により低下する傾向にあった。21日齢時腸管のTLR-2,4及び7mRNA発現量はフィチン酸給与により低下した。その他の炎症に関与する因子のmRNA発現量もフィチン酸給与により低い値を示した。一方、CD3、IL-2及びBu-1 mRNA発現量はフィチン酸給与の影響を受けなかった。血漿IgG及びIgA濃度はフィチン酸給与により低下する傾向にあった。これらのことからフィチン酸は腸管免疫関連遺伝子発現を低下させる因子であることを確認し腸管免疫を調査する物質として有用と考えられた。腸管免疫に関連する生物学的要因すなわち腸管免疫反応から、腸バリア機能に影響すると考えられる生物学的要因は探索できたが、環境要因である腸内細菌叢や物理化学的要因である腸管上皮細胞間のタイトジャンクションやムチン、抗菌ペプチドの測定完了まで至らず、平成29年度の研究目標を達成できなかったことが、本評価の主な理由である。なお、これらの分析は現在継続して実施している。本研究を通じて、腸管上皮細胞間のタイトジャンクションとムチンmRNA量と腸内微生物8種の測定のための条件を設定し、そのDNA標準品を生成した。タイトジャンクションの指標としては、ZO2,オクラジン、クラリジン1,3,4,

5,16 mRNA発現量を、また、内容物では総細菌, Enterobacteriaceae, Clostridium group, Lactobacillus group, Bacteroides group, Enterococcus sppの16srDNA量を測定し細菌量を推定した。総細菌数とBu-1及びCD3と4、TLR2,4と7、ムチン、IgA、AvD2、オクラジン、クラリジン4,5,16mRNA発現量には正の相関が認められ、また、Clostridium group数とTLR4, CD3と4, IgA, AvD9と10発現量には正の相関が認められた。一方、EnterobacteriaceaeまたはEnterococcus spp数とCD3と4, IgA,ムチン, AvD2発現量には負の相関が、ZO2,オクラジン、クラリジン5,16mRNA発現量には弱い負の相関が認められた。本年度、予定していた動物実験は終了した。さらに、孵化後72時間の飼料給与制限が腸管バリアと細菌叢に及ぼす影響に関する試験においては、遺伝子の分析はほぼ終了し、現在結果の解析を行っている。また平成29年度に実施予定していた「孵化後の飼料給与制限が腸バリア機能に及ぼす影響」の動物試験を実施する。あわせて、フィチン酸給与による腸バリア機能の変化を再確認するための試験か、腸内細菌叢を変化させることが予想されるオリゴ糖の給与試験を行う予定である。また、平成29年度試験の未分析項目の測定と評価解析する予定である。T細胞の表面抗原であるCD3,4および8についてはニワトリ交差抗体を用いて測定する予定であったが、適当な抗体を入手できない可能性が高いことからmRNA発現量レベルで評価することが可能になるようにプライマーやPCR条件を確立する予定である。以上のように、遺伝子発現レベルでの研究を中心として本年度の研究を進める予定である。当初予定していた培養細胞を用いる試験については、研究経費に余裕ができた場合に実施する予定としている。科学研究費(学術研究助成基金助成金)の廃止申請承認(学振助ー第905号)をうけ研究は実施しない。
肝内移植法を用いた活性癌遺伝子の肝前癌細胞に対する働きの解析

本研究は分離肝増生結節細胞に癌遺伝子を導入してそれらを肝臓内に経門脈的に移植し、その後の増殖態度、マーカーの発現、発癌率などにどのような影響を与えるかを研究することにより、ある特定の癌遺伝子が発癌のpromotionやprogressionにどの様に関わっているかを調べることを目指している。本年度は特に分離肝細胞へ外来遺伝子を導入する条件について検討する目的で、電気穿孔法により正常ラット肝細胞に種々の条件でpSV2 CATの導入を試みた。遺伝子導入肝細胞を培養し、in vitroでのCAT活性の発現を調べたところ、少なくとも1週間目まで発現した。また、これらの細胞を脾臓内に移植したところin vivoでも2週間目までCAT活性の発現が確認された。さらに抗CAT抗体によりin vitro、in vivoでのCAT蛋白の発現を調べたところいずれの条件でも陽性細胞が確認されたが、in vitroで経時的に調べたところ時間の経過とともに陽性細胞は減少した。これらの結果から肝細胞に外来遺伝子を導入し、それをin vivoで発現させることが可能である見通しができたので、現在、(1)分離肝増生結節細胞にpSV2 CATを導入して肝内に移植した場合に、肝内でCAT活性が発現するか否か、及び(2)ウィルス性癌遺伝子を導入した肝細胞ではin vitroで増殖性の変化があるか否かについて検討中である。さらに、今回、遺伝子導入操作により細胞のviabilityの低下が起こり、移植後の生着率が著しく低下することが明らかになったので今後、遺伝子導入条件、移植条件の検討をさらに行う予定である。
幹細胞の老化を規定する細胞表面糖鎖の探索と臨床応用に向けた技術開発

近年、iPS細胞の研究が進む一方で、成人の体内にも種々の幹細胞が存在することが明らかになり注目されている。しかし、再生医療製品等の原料の元となる細胞のきょう子宮由来の組織や月経血の使用に際しては「幹細胞の老化」という視点が重要であり、効率良い分化誘導の為には、幹細胞そのものの性質を理解することが必須と考えられる。体細胞の老化過程における細胞表面糖鎖を検討し、細胞の分化、増殖、老化に際して、細胞表面の糖タンパク質や糖脂質上の糖鎖が動的に変動することを明らかにした。体性幹考え細胞は、再生医療や細胞移植において有用な細胞である。特に女性の場合には、子宮内膜組織や医療廃棄物である月経血からの幹細胞調製が注目されている。しかし、子宮に由来する細胞の採取には加齢による年齢制限があり、将来的には若い時期の幹細胞保存も視野にいれた対応が必要とされる。その為には「加齢による幹細胞の老化」を意識し、幹細胞そのものの性質を理解することが不可欠とる。申請者らは、「細胞表面の多様な糖鎖は、分化、増殖、老化の状態を反映する」という事実に鑑み、年齢に伴う幹細胞の糖鎖変化に焦点を絞った解析を行う。その結果より、幹細胞の質を担保するマーカー糖鎖を特定し、その抗体による幹細胞の分取・保存を行う。また、iPS細胞についても採取組織の老化と糖鎖発現との関係を探る。容易に入手できる子宮内膜組織や、医療廃棄物である月経血から体性幹細胞やiPS細胞を調製する手法は、今後、再生医療や細胞移植が身近な治療法として定着普及するために、重要な技術になると考えられる。申請者らの研究により、特定の糖鎖の発現が上記の子宮由来の細胞で明らかになれば、造血幹細胞におけるCD34(抗原は糖鎖である)と同様に、その抗体は良好な幹細胞の質を担保するマーカーとして使用でき、さらには、抗体カラムによる濃縮を介した幹細胞の長期保存、安定的な供給につながる。また、子宮由来の細胞から作成したiPS細胞に関しても、糖鎖の変化が検出されれば、同様な技術の発展に貢献できる。体性幹細胞は、再生医療や細胞移植において有用な細胞である。しかし、子宮に由来する細胞の採取には加齢による年齢制限があり、将来的には若い時期の幹細胞保存も視野に入れた対応が必要とされる。その為には「加齢による幹細胞の老化」を意識し、幹細胞そのものの性質を理解することが不可欠と考える。その結果より、幹細胞の質を担保するマーカー糖鎖を特定し、その抗体による幹細胞の分取・保存を行った。また、iPS細胞についても採取組織の老化と糖鎖発現の関係に関する検討を実施した。申請者らは、「多様な糖鎖は、分化、増殖、老化の状態を反映する」という事実に鑑み、年齢に伴う幹細胞の糖鎖変化に焦点を絞った解析を行う。また、ES細胞を含む多能性幹細胞についても老化と糖鎖発現との関係を検討した。特に、子宮内膜組織や月経血由来の幹細胞において、加齢に伴う糖鎖発現の変化の全体像を、網羅的レクチンマイクロアレイ解析により検討した。また、特定の糖タンパク質や糖脂質の糖鎖が幹細胞の質を担保するバイオマーカーの可能性について検討した。さらに、鍵となる糖鎖に対する抗体を用いて、良質な幹細胞の検出方法を確立し、抗体カラムによる幹細胞の分取・保存の手法を検討した。また、新たに体細胞から作成したiPS細胞に関しても、細胞老化の影響について、糖鎖発現との関係から解析を実施した。申請者らの研究により、特定の糖鎖の発現が上記の子宮由来の細胞で明らかになれば、造血幹細胞におけるCD34(抗原は糖鎖である)と同様に、その抗体は良好な幹細胞の質を担保するマーカーとして使用することが可能となる。

前年度に引き続き、年齢の異なる成人から採取した正常子宮内膜組織あるいは月経血を用いて幹細胞やiPS細胞を調製した。その細胞を用いて、間葉系細胞への分化能や、テロメラーゼ活性、分化マーカータンパク質の発現等を調べる。得られた幹細胞について、レクチンマイクロアレイを使用した糖タンパク質の解析や糖脂質の解析を行う。更に、テロメラーゼ活性から見える幹細胞を指標として注目すべき糖脂質を特定し、糖鎖を認識するモノクローナル抗体を作製する。細胞生物学糖鎖プローブにより細胞を選別し、細胞老化を指標として得られた幹細胞について、in vitro、in vivoの系で増殖能、分化能、腫瘍化能に関して検証する。年齢の異なる成人から採取した正常子宮内膜組織あるいは月経血を用いて幹細胞やiPS細胞を調製した。その細胞を用いて、間葉系細胞への分化能や、テロメラーゼ活性、分化マーカータンパク質の発現等を調べた。得られた幹細胞について、レクチンマイクロアレイを使用した糖タンパク質の解析や糖脂質の解析を行った。2015年4月に都内移動費が発生する可能性が生じたために、バス代に充当すべく545円の繰越金額を設定した。糖タンパク質・糖脂質の糖鎖に対する抗体の作成を行う。注目すべき糖タンパク質や糖脂質が特定され、その糖鎖を認識する抗体が市販されていない場合には、モノクローナル作成する。糖脂質の抗体作成に関しては、「単離した目的の糖脂質ではなく、その糖脂質が含まれるラフト画分を調製して免疫する」優れた方法が確立されている(Katagiri Y., Glycoconjyugate J. 2001)抗体を用いた効率的な幹細胞の選別とそのin vitro, in vivoにおける特性解析を行う。目的の幹細胞を選別する方法として、抗ー糖鎖抗体を用いたカラムを検討する。細胞は、ビオチン化抗ー糖鎖抗体を結合後、アビジンーマグネットビーズを介してカラムにトラップし、洗浄後、マグネットを除去することにより目的の細胞のみをカラムから溶出する。細胞老化を指標として得られた幹細胞について、in vitro, in vivoの系で増殖能、分化能、腫瘍化能に関して検証する。テロメラーゼ活性から見える幹細胞を指標として注目すべき糖脂質を特定し、糖鎖を認識するモノクローナル抗体を作製する。都内移動のためのバス代に充当する。移動費が発生しなかった場合は消耗品費として適切に使用する。本年度は、提供者より細胞リソースの提供を受け、年齢に伴う幹細胞の糖鎖変化に焦点を絞った解析を行う予定であった。また、その結果より、幹細胞の質を担保するマーカー糖鎖を特定し、その抗体による幹細胞の分取・保存を予定していた。しかしながら新規の細胞リソースの提供数が少なく、既存の細胞リソースの解析がメインとなった。外注による解析を行い、統計データとして十分なデータ量を確保できた。しかしながら、新規細胞リソースの樹立、新規の細胞培養、iPS細胞の樹立を行わなかったことから、本年度の科学研究費補助金、助成金の経費使用に関して予定を下回る支出額となったため、次年度使用額が生じた。次年度以降は、新規の細胞リソースはもちろんのこと、既存リソースについても外注による解析のみならず、研究室内における抗体、糖鎖マーカーを用いた解析を積極的に行う予定である。新たな細胞リソースの培養、iPS細胞の樹立の試みが既にスタートしているため、次年度使用額と合わせた金額を使用する経費計画となる。
情報収集型無線センサネットワークのためのネットワークコーディング技術開発

本研究では、情報収集型無線センサネットワークにおいて、マルチパス構成あるいはマルチシンク構成とすることでデータ収集の信頼性を高め、かつネットワークコーディング(NC: Network Coding)を適用してパケット中継回数を削減することでシステム寿命への影響を抑えることを試みた。マルチパス構成では、冗長パケットを迂回パスで送信するSTNC方式を、マルチシンク構成では、双方向フローに対するNC適用においてPassive ACKを組み合わせるIFNCPAを提案した。シミュレーション実験等によりその有効性を確認し、センサネットワークのためのネットワークコーディング技術の開発に寄与した。本研究の目的は、情報収集型無線センサネットワーク(WSNs: Wireless Sensor Networks)においてシステム寿命への影響を抑えつつ、耐故障性を向上し、情報収集率を高めることである。情報収集型WSNsでは、一般に、シンクに最も近いレベル1のノードの中継パケット数が他の上位レベルのノードに比べて多くなる。レベル1のノードのバッテリが完全に消耗すると、そのノードのみならず、そのノードが中継する必要がある上位レベルのノードのセンシングデータもシンクは受信できなくなる。一方、シンクから遠い上位レベルのノードは、中継パケット数が少ないため、システム寿命への影響はレベル1のノードに比べると少ない。そこで本年度は、昨年度開発した、センシングデータの冗長パケットを迂回パスで送信することで耐故障性の向上を図る情報収集プロトコルST(Side Trip)方式と、さらにネットワークコーディング(NC: Network Coding)によりシステム寿命への影響を低減するSTNC(Side Trip with NC)方式をIEEE CCNC2014において成果発表するとともに、ノード配置密度にばらつきがある環境での特性改善を行った。また、ネットワークシミュレータScenargieに情報収集型センサネットワーク評価環境を実装し、NCを適用した場合の簡易スループット特性評価を行った。さらに、Android端末による情報収集タイミング制御の実証実験、ならびに二次元シート型センサネットワークにおけるノード給電技術として複数点給電方式を開発し、実証実験を伴った論文発表を行った。そこで本年度は、センシングデータの冗長パケットを迂回パスで送信することで耐故障性の向上を図る情報収集プロトコルST(Side Trip)方式と、さらにネットワークコーディング(NC: Network Coding)によりシステム寿命への影響を低減するSTNC(Side Trip with NC)方式を考案し、既存マルチパス方式とシミュレーションにより比較し、提案方式の有効性を確認した。シミュレーション結果から、従来方式であるH-SPREAD(hybrid-secure protocol for reliable data delivery)およびSMRP(Sub-branch Multipath Routing Protocol)に比べ、STNC方式がシステム寿命への影響を抑えつつ、高いノード故障耐性をもつことが確認できた。情報収集型無線センサネットワークは、防災分野やスマートメータなどへの応用が考えられている。ノードの消失や故障などが発生しうる災害時のような過酷な環境下においてセンシング情報を安定して収集し、かつ可用性を維持することが重要である。そこで本申請では、ネットワークコーディングを応用した情報収集型無線センサネットワーク通信プロトコルを開発し、その実用化に向け、シミュレーションと実証実験を行い、有効性を検証した。まず、(1)センシングデータの冗長パケットを迂回パスで送信することで耐故障性の向上を図る情報収集プロトコルST(Side Trip)方式と、さらにネットワークコーディングによりシステム寿命への影響を低減するSTNC(Side Trip with Network Coding)方式を考案し、(2)評価シミュレータを構築、既存マルチパス方式とシミュレーションにより比較し、従来方式であるH-SPREAD(hybrid-secure protocol for reliable data delivery)およびSMRP(Sub-branch Multipath Routing Protocol)に比べ、STNC方式がシステム寿命への影響を抑えつつ、高いノード故障耐性をもつことが確認し、(3)設置が容易な小型Android端末にネットワークコーディングを実装して実証実験を行い、その有効性を検証した。(4)最終年度は、信頼性を更に高めるために情報収集ポイント(シンク)が複数ある情報収集型センサネットワークに適したデータ転送プロトコルIFNCPA(Inter Flow NC with PA)方式を考案し、商用シミュレータScenargieに実装し、高負荷においても高い情報収集率を維持できることを確認した。情報通信工学計画していたとおり、本年度、経路構築に工夫をこらすことでマルチパス経路を空間的に分離するST方式ならびにネットワーク符号化技術を応用することで送信パケット量削減を狙ったSTNC方式の海外成果発表を実施できた。また、商用ネットワークシミュレータSenargieへのネットワークコーディング機能をもったマルチホップ性能評価基盤を構築し、スループット性能評価を実施できた。これらのことから、おおむね当初の計画どおりかそれ以上に進展していると考えられる。

計画では、サーベイをしながら、経路発見に工夫を加えることで、従来方法よりも、送信パケット数が少ない方式の実現が可能になるのではないかと考え、検討を進めることを予定していた。また、簡易シミュレータに通信プロトコルを実装し、性能評価を行うことを予定していた。本年度、経路構築に工夫をこらすことでマルチパス経路を空間的に分離するST方式ならびにネットワーク符号化技術を応用することで送信パケット量削減を狙ったSTNC方式を考案した。また、簡易シミュレータによる評価により、提案方式の有効性を示すことができた。これに加え、提案方式の実証実験に向け、外部発表には至っていないものの、実機実装への準備ならびに、簡易実験も行っている。これらのことから、おおむね当初の計画どおりかそれ以上に進展していると考えられる。今後の研究の推進方策最終年度は、開発した情報収集プロトコルの学術論文投稿のための準備を行う。また、商用ネットワークシミュレータによる評価実験を十分に行い、提案方式の有効性を検証する。ノード間の干渉などの影響を評価する必要があることから、実証実験を行い、ノード間干渉がある場合のスループット特性モデルの開発を行う。次年度の研究費の使用計画性能評価用端末の導入ならびに、論文別刷代、研究会、総合大会での発表と情報収集のための国内旅費に研究費を充当する予定である。次年度は、建物による見通外通信の影響、フェージングの影響など、より現実的な状況を考慮できるネットワークシミュレータにより性能評価を行う。現時点では、商用シミュレータScenargieの利用を想定している。また、最終年度は、実用化に向けた技術開発が目的であるので、実証実験による有効性の検証を行う。実証実験にあたっては、多数の端末を配置する必要があるので、設置が容易な小型Android端末を用いることを予定している。但し、Android端末は、アドホック通信をサポートしておらず、マルチホップ通信の実装例は少ない。
農村における〈女性〉の構築過程－１９７０年代以降の農村女性政策・運動・表象

本研究の目的は、「フェミニズム以降」の1970年代以降の農村における〈女性〉の構築過程を農村女性政策・運動・表象の相関に着目して明らかにすることである2017年度は、昨年度までの研究で深められていなかった運動による代表/表象(representation)と地域社会における女性たちの実践に着目した研究をすすめた。農村女性が生活改善普及事業に参加する中で執筆した手記の分析を行い、だれが「農村女性」を代表するのか、女性たちによる自己表象のあり方とアイデンティティについて検討した。昨年度までの研究過程で新たに面識を得た近現代の日記に関する研究グループとの交流を通して、上記の課題について研究報告をおこない、農村における家計簿や日記と理想的な女性像の変遷についての研究者ともディスカッションを行うことが出来た。また、昨年度韓国で行われたパーソナルドキュメント/エゴドキュメント研究に関するカンファレンスを経て執筆した論文が今年度韓国で出版された。また、これまでの研究をまとめた博士論文『戦後日本における〈農村女性〉の構築過程ーエンパワーメントの批判的検討を通してー』も完成させることができ、提出と審査を経て2018年1月に学位を取得した。2017年度後半は出産と育児のため出張ができず、論文執筆とこれまでに収集した資料の整理・分析にあてた。29年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、「フェミニズム以降」の1970年代以降の農村における〈女性〉の構築過程を農村女性政策・運動・表象の相関に着目して明らかにすることである。農村に則した〈女性〉の構築過程を、(1)マスメディアおよび政策による表象、(2)運動による代表/表象、(3)地域社会における実践の3つの側面から検討することを課題としている。本年度は、(1)を中心に研究を行う予定だったが、体調により遠方での調査が難しかったため、(3)の調査準備と予備調査を中心に行った。また、同様に体調に関する理由から、9月に予定していたラオスでの学会報告を見送った。京都府の旧久美浜町を事例地に選定し、これまで交流のあったインフォーマントと連絡をとった他、旧久美浜町地域で1960年代に開始され、1970年代から80年代にかけて最も重要な産業となった機業に関する資料収集を京都府立総合資料館および京都府立図書館で行った。これによって地域の産業と女性の生活に関する基礎データを得ることができたのみならず、地域の人びとによる自分史や作文などの資料も発掘することができ、今後の分析にあたり、重要なデータとなると思われる。また、地域における1970年代以降の〈女性〉をめぐる実践を分析するにあたって、地域で〈女性〉に向けて展開されてきた政策の働きかけは重要な要素となる。本年度は研究(3)の分析を準備するため、前年度までの研究と調査を踏まえて、1950年代から70年代にかけて展開された農村女性政策(生活改善普及事業、農協婦人部活動、婦人教育・婦人会活動)の実態を明らかにし、同時代史学会関西研究会で口頭報告を行った。報告依頼を受けて初めて参加した学会であったが、日本史研究者を中心とした参加者から、有意義なコメントをもらうことができた。研究では、農村に即した〈女性〉の構築過程を、(1)マスメディア及び政策による表象、(2)ウーマン・リブなどの〈女性〉運動による代表/表象、(3)地域社会における実践の3つの課題に沿って検討することを目的としている。本年度は、研究(1)を中心に行った。第二次世界大戦後、占領下で日本の「民主化」の名のもとで開始された複数の政策が農村の女性を対象としていたことに着目し、農村女性に特異的に展開された政策の代表例である生活改善普及事業と、農村にかぎらず女性の地位向上を目的としていた政策の中で、最も地域による影響が大きいものとして社会教育(婦人教育)をとりあげ、それらが地域での展開過程でどのように重なりあい、相互に関係していたのかを明らかにし、査読付き雑誌論文として出版された。査読の過程では、戦後民主主義のもとでの「主体」のあり方と〈女性〉の構築について考察を深め、本研究の主題のひとつである「農村女性政策」という概念を精緻化することができた。また、次年度に中心的に行う予定である研究(2)に向けて農村女性が執筆した文集を1950年代から1970年代にかけて収集・整理し、通覧中である。本年度は、昨年度の研究を踏まえ、それを学会誌論文としてまとめることができた。また、次年度に進める予定の研究課題についての資料収集も順調に進み、スムーズに次の研究課題にとりかかることができる。また、当初予定していなかった、オランダ・ワーヘニンゲン大学での研究交流を行うことができ、本研究の進展にとって重要な視座を得ることができた。本研究では、農村に即した〈女性〉の構築過程を、(1)マスメディア及び政策による表象、(2)ウーマン・リブなどの〈女性〉運動による代表/表象、(3)地域社会における実践の3つの課題に沿って検討することを目的としている。昨年度の資料収集

・先行研究の読解を踏まえて、今年度は(3)の研究課題を中心にすすめた。とくに、戦後日本で見られる「活躍する農村女性」のイメージと、その活躍の基盤となった1950ー60年代の地域での女性の地位向上プログラムに参加した女性たちの自己表象やアイデンティティとのズレに焦点をあてて分析を行った。本年度は3つの国際学会で口頭報告を行ない、そこでのディスカッションを通して、そのような女性たちの実践に見られる農村性と女性性の結合のしかたや家族との関係などに、日本社会の特徴や東アジア的なあり方の特徴などについて分析を深めることができた。以上の分析の結果を国際学会に提出するフルペーパーにまとめることができ、現在投稿論文にむけても準備中である。上記の学会報告・論文執筆のテーマとは別に、日本の農村社会と生活の近代化による変化について、今年度新たに調査を開始した。これまでの調査・研究では、農村女性個人の内面などに焦点をあてることが多かったが、新たな調査では、農村社会の共同組織や共同労働のあり方など、社会の共同の側面に焦点をあてることで、これまでの農村女性に関する調査・研究をより深めることのできる知見を得ることができた。昨年度の資料収集・先行研究の読解を踏まえて、今年度は国際学会での報告と英語論文の執筆に力をいれた。今年度は、4年に1度開催される農村社会学分野最大の国際学会であるWorld Congress of Rural Sociologyの開催年であり、2年に1度開催される東アジアの農業・農村史学の国際大会である日中韓農業史学会の開催年でもあったため、これら2つの国際学会での口頭報告を行なった。また、日中韓農業史学会で面識を得た韓国の研究者に、その後韓国社会科学会主催で開催される国際会議への招待を受け、国際会議「近代東アジアにおける個人資料研究の潮流」でも報告を行った。これらの学会報告を通して、論文の執筆も進めることができた。本研究の目的は、「フェミニズム以降」の1970年代以降の農村における〈女性〉の構築過程を農村女性政策・運動・表象の相関に着目して明らかにすることである2017年度は、昨年度までの研究で深められていなかった運動による代表/表象(representation)と地域社会における女性たちの実践に着目した研究をすすめた。農村女性が生活改善普及事業に参加する中で執筆した手記の分析を行い、だれが「農村女性」を代表するのか、女性たちによる自己表象のあり方とアイデンティティについて検討した。昨年度までの研究過程で新たに面識を得た近現代の日記に関する研究グループとの交流を通して、上記の課題について研究報告をおこない、農村における家計簿や日記と理想的な女性像の変遷についての研究者ともディスカッションを行うことが出来た。また、昨年度韓国で行われたパーソナルドキュメント/エゴドキュメント研究に関するカンファレンスを経て執筆した論文が今年度韓国で出版された。また、これまでの研究をまとめた博士論文『戦後日本における〈農村女性〉の構築過程ーエンパワーメントの批判的検討を通してー』も完成させることができ、提出と審査を経て2018年1月に学位を取得した。2017年度後半は出産と育児のため出張ができず、論文執筆とこれまでに収集した資料の整理・分析にあてた。9月から育休を取得したため、10月以降は研究が進められなかった。
炎症性腸疾患におけるエトリックス分解酵素の発現解析

マトリックスメタロプロテアーゼ(以下MMP)はマトリックス分解酵素群の代表であり、種々の細胞外マトリックスを分解することにより、組織発生、組織再構築、そして癌細胞の浸潤転移の際に重要な機能を営んでいる。炎症性腸疾患は原因不明の腸管における慢性炎症性病態である。現在マトリックス分解酵素の炎症における意義は、当初の組織破壊に力点をおく考察からしだいに組織再構築へと観点が移ってきている。本研究においては、膜型マトリックスメタロプロテアーゼ(MT-MMP),MMP-1,MMP-2,MMP-8,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2を取り上げ、その組織内局在を検討した。もっとも高発現部位は潰瘍形成部であり、MMP-1,MMP-8,MMP-9が集中し、かつTIMP-1も同様であった。細胞同定は二重免疫染色によった。MMP-1は線維芽細胞、MMP-8は好中球、MMP-9はおもに好中球とマクロファージ、TIMP-1は線維芽細胞であった。この領域では小静脈の中膜平滑筋にもMMP-1,TIMP-1,I型プロコラーゲンの陽性像をみいだした。また活動性の線維化巣ではMMP-1,TIMP-2,I型コラーゲンの発現を線維芽細胞にみた。潰瘍底では潰瘍形成の結果におこる高度な炎症に対する反応としてこれらマトリックス分解酵素が発現され、I型コラーゲンの発現があるにもかかわらず、マトリックスは沈着せず、炎症巣が形成されると解釈された。また、線維化のおこる領域ではMMP-1,MMP-8,MMP-9が抑制され、コラーゲン沈着に傾くと考えられた。以上から炎症性腸疾患ではマトリックス分解酵素は組織破壊よりもむしろ組織再構築に関与し、かつ、それは炎症現象の維持あるいは線維化による修復へ密接に関与していると判断された。本年度は炎症性腸疾患の凍結標本(25例)を用いて、免疫組織化学,一部in situハイブリダイゼーション法(ISH)にて検討をすすめ以下の結果をえた。検討は潰瘍底(さらに炎症部とそのまわりの線維化反応部に細分)、活動性の炎症を伴う粘膜、炎症の寛解した領域の三者に分けて行った。各種細胞同定は以下の通りであった。MMP-1:線維芽細胞、MMP-2:線維芽細胞、MMP-8:好中球、MMP-9:マクロファージと好中球、MT1-MMP:マクロファージ、TIMPs-1,-2:線維芽細胞。その分布は以下の様であり、分布に著明な差があった。MMP-1,MMP-9,TIMP-1はいずれも潰瘍底の強い炎症巣にもっともつよい発現が見られた。これに対してMMP-2(mRNA)、TIMP-2はほぼ一致して潰瘍底周囲の活動性の線維化巣につよく発現した。そしてI型プロコラーゲンは両部位で発現が高度であった。潰瘍形成をともなわない粘膜炎症巣ではマトリックス分解酵素の発現はすくなかった。以上よりマトリックス合成と分解の相関を考慮すると、マトリックス分解酵素の発現は単に組織破壊に関与するのみならず、線維化をともなわないのが特徴である炎症巣の成立と、それに対する修復過程の双方に関与している事が推察された。また、同時に新鮮材料から上皮細胞と単核球とを分離して、ノーザンブロット解析で、MT1-MMP mRNAは炎症性細胞からもつよく発現していることをみている。これの確認もさらにおこないつつある。

マトリックスメタロプロテアーゼ(以下MMP)はマトリックス分解酵素群の代表であり、種々の細胞外マトリックスを分解することにより、組織発生、組織再構築、そして癌細胞の浸潤転移の際に重要な機能を営んでいる。炎症性腸疾患は原因不明の腸管における慢性炎症性病態である。現在マトリックス分解酵素の炎症における意義は、当初の組織破壊に力点をおく考察からしだいに組織再構築へと観点が移ってきている。本研究においては、膜型マトリックスメタロプロテアーゼ(MT-MMP),MMP-1,MMP-2,MMP-8,MMP-9,TIMP-1,TIMP-2を取り上げ、その組織内局在を検討した。もっとも高発現部位は潰瘍形成部であり、MMP-1,MMP-8,MMP-9が集中し、かつTIMP-1も同様であった。細胞同定は二重免疫染色によった。MMP-1は線維芽細胞、MMP-8は好中球、MMP-9はおもに好中球とマクロファージ、TIMP-1は線維芽細胞であった。この領域では小静脈の中膜平滑筋にもMMP-1,TIMP-1,I型プロコラーゲンの陽性像をみいだした。また活動性の線維化巣ではMMP-1,TIMP-2,I型コラーゲンの発現を線維芽細胞にみた。潰瘍底では潰瘍形成の結果におこる高度な炎症に対する反応としてこれらマトリックス分解酵素が発現され、I型コラーゲンの発現があるにもかかわらず、マトリックスは沈着せず、炎症巣が形成されると解釈された。また、線維化のおこる領域ではMMP-1,MMP-8,MMP-9が抑制され、コラーゲン沈着に傾くと考えられた。以上から炎症性腸疾患ではマトリックス分解酵素は組織破壊よりもむしろ組織再構築に関与し、かつ、それは炎症現象の維持あるいは線維化による修復へ密接に関与していると判断された。