hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
組織特異的遺伝子破壊法による生体内におけるGPIアンカー型蛋白の機能解析

グリコシルフォスファチジルイノシトール(GPI)は、真核細胞膜に広く分布する糖脂質であり、GPI-アンカー型膜蛋白を細胞膜表面につなぎ止めるための必須の構造である。哺乳動物細胞においてGPI-アンカー型蛋白は、細胞膜蛋白の微量成分である。哺乳動物細胞の培養系においてGPl-アンカー型蛋白欠損は、なんら細胞の増殖あるいは形態に関し影響を与えていない。しかし、遺伝子破壊マウスの実験結果によりGPI-アンカー欠損は致死性でありマウス個体発生において、GPI-アンカー型蛋白が必須の役割を果たしていることが明らかにされつつある。本研究は、組織特異的に遺伝子破壊ができるCre/loxPを利用しマウス個体発生における種々の器官形成あるいは特定の細胞におけるGPIアンカー型蛋白の役割を明らかにした。1) Tリンパ球におけるGPIアンカー型蛋白の役割の検討。2) GPIアンカー欠損個体の検討。発生のどの段階で致死かがわからなかったので、Piga-loxPマウスとhCMV-Creマウスを交配して検討した。hCMV-Creマウスは、着床以前よりCreが発現しているといわれている。GPIアンカー完全欠損マウスは胎生8日で個体発生がストップした。一方、約半分の組織でGPIアンカーが欠損する雌個体では発生がもっと進むが、頭部神経管不全によるオープンブレイン状態と上部口蓋形成不全がみられた。3)表皮におけるGPIアンカー型蛋白の役割の検討。ケラチンK5プロモーターは表皮基底細胞特異的な発現を規定する。そのプロモーター領域15kbをクローニングし、そのプロモーターの下流にCreを接続したコンストラクトを構築しトランスジェニックマウス(K5-Cre)を作成しPiga-loxPマウスと交配した。交配したマウスにおいて、皮膚特異的にターゲット遺伝子であるPig-aに遺伝子破壊が認められ、しかも皮膚の角化異常が認められた。その角化異常は、脂質の再構成に起因することが明らかになった。GPI-アンカー欠損は致死性であり、マウス個体発生におけるGPI-アンカー型蛋白の役割を組織特異的に遺伝子破壊ができるCre/loxPを利用し以下の3種類の組織で検討した。1)Tリンパ球におけるGPIアンカー型蛋白の役割の検討。Pig-a遺伝子へのloxP部位挿入マウス(Piga-loxP)とLck-Creマウスを交配し、胸腺におけるTリンパ球の選択機構あるいは成熟Tリンパ球の活性化にGPIアンカー型蛋白がどのように関わっているかを解析した。その結果、驚いたことにGPIアンカー型蛋白陰性細胞も陽性細胞と同程度に選択機構あるいは成熟Tリンパ球の活性化が起こっていることが判明した。2)GPIアンカー欠損個体の検討。発生のどの段階で致死かがわからないので、Piga-loxPマウスとhCMV-Creマウスを交配して検討した。hCMV-Creマウスは、A.Nagyから供与されたマウスで着床以前よりCreが発現しているといわれている。Pig-a遺伝子はX染色体上に存在するため雄マウスではほとんどすべての組織でGPIアンカーが陰性になるが、loxP部位が片方のX染色体に挿入された雌マウスはX染色体不活化機構のため、約半分の細胞がGPI-アンカー陰性になるはずである。雄個体では胎生8日で個体発生がストップしていた。一方、雌個体では発生がもっと進むが、頭部神経管不全によるオープンブレイン状態と上部口蓋形成不全がみられた。3)表皮基底細胞

特異的Cre発現トランスジェニックマウスの作成と表皮でのGPIアンカー型蛋白の役割の検討。ケラチンK5プロモーターは表皮基底細胞特異的な発現を規定する。K5-Creトランスジェニックマウスを作成しPiga-loxPマウスと交配した。交配したマウスにおいて、皮膚特異的にターゲット遺伝子であるPig-aに遺伝子破壊が認められ、しかも皮膚の角化異常が認められた。角化異常を起こした角層に、薄層クロマトで異常脂質の増加が認められた。GPI-アンカーは、細胞膜にGPI-アンカー型蛋白をつなぎ止めるために必須の糖脂質である。その生合成不全は、多数のGPI-アンカー型蛋白の細胞表面への発現不全を引き起こす。GPI-アンカー生合成の初期段階に関わっているPig-a遺伝子の欠損マウスは、胎生致死であり生体でのGPI-アンカーが有する役割の重要性を示した。GPI-アンカーの機能を各臓器別に検索するために、組織特異的遺伝子破壊法を利用しGPI-アンカーの役割を検討した。1)表皮でのGPI-アンカー型蛋白の役割の検討。表皮特異的にGPI-アンカーを欠損させると、基底細胞、有棘細胞、顆粒細胞には顕著な症状は現れないが、角層間脂質の異常が生化学的、形態学的に認められた。さらに経皮水分蒸散量も顕著に上昇しており、表皮特に角層形成にGPI-アンカーが重要な役割を果たしていることが明らかになった。2)カテコラミン作動性神経でのGPI-アンカー型蛋白の役割の検討。Dopamine βhydroxylase(DBH)プロモーター下流にCreを接続したトランスジェニックマウスは、カテコラミン作動性神経と末梢神経で遺伝子改変を誘導することが明らかになった。それらの組織でGPI-アンカーを欠損させると運動失調が起こるので、形態学的に末梢神経を解析中である。
フレッティング摩耗の環境依存性

本研究は国際学術研究として,韓国慶北大学と,原子炉材料のZr合金の環境依存性,特に大気中,腐食溶液中,純水中でのフレッティング摩耗特性を求めること,および往復すべり試験で腐食摩耗を検討することである.Zr合金の耐食性を静的条件(動電位法)と動的条件(電位急変法)の分極特性から求めると,静的には不動態被膜の形成で良い耐食性を示すが,動的状態では耐食性がないことを得た.フレッティング摩耗の結果においては,試験機に依存するが,Zr合金のクリティカルな振幅が大気中及び蒸留水中で100μmであり,荷重と振幅の増加が摩耗を増加させることを得たが,一部,荷重の増加が摩耗を減少させた.これは摩耗状態がgross-slipからpartial-slipに遷移するためであり,フレッティング摩耗形態図を作成した.Na_2SO_4溶液中でのフレッティングにおいては電気化学的要因が支配的であることを得たが、摩耗痕面積をアノード面積と評価することはそれの過大評価になる.腐食摩耗については,Zr合金を用い,Na_2SO_4溶液の濃度,電位,荷重,試験片面積を変化させ,機械的摩耗(低電位,及び純水中)と電気化学的摩耗の比率を比較した.濃度の影響は10^<-3>mol/l以下では腐食の影響が無視できること,また,荷重と試験片面積を変えることはアノード/カソード面積比を変えることになり,面積比が大きくなると腐食の影響が小さくなること,フレッティング摩耗では電気化学的要因が大きくなることを得た.また,10^<-1>mol/lの濃度では機械的摩耗は80%以上となり,Zr合金の腐食の影響は小さい.本研究は国際学術研究として,韓国慶北大学と,原子炉材料のZr合金の環境依存性,特に大気中,腐食溶液中,純水中でのフレッティング摩耗特性を求めること,および往復すべり試験で腐食摩耗を検討することである.Zr合金の耐食性を静的条件(動電位法)と動的条件(電位急変法)の分極特性から求めると,静的には不動態被膜の形成で良い耐食性を示すが,動的状態では耐食性がないことを得た.フレッティング摩耗の結果においては,試験機に依存するが,Zr合金のクリティカルな振幅が大気中及び蒸留水中で100μmであり,荷重と振幅の増加が摩耗を増加させることを得たが,一部,荷重の増加が摩耗を減少させた.これは摩耗状態がgross-slipからpartial-slipに遷移するためであり,フレッティング摩耗形態図を作成した.Na_2SO_4溶液中でのフレッティングにおいては電気化学的要因が支配的であることを得たが、摩耗痕面積をアノード面積と評価することはそれの過大評価になる.腐食摩耗については,Zr合金を用い,Na_2SO_4溶液の濃度,電位,荷重,試験片面積を変化させ,機械的摩耗(低電位,及び純水中)と電気化学的摩耗の比率を比較した.濃度の影響は10^<-3>mol/l以下では腐食の影響が無視できること,また,荷重と試験片面積を変えることはアノード/カソード面積比を変えることになり,面積比が大きくなると腐食の影響が小さくなること,フレッティング摩耗では電気化学的要因が大きくなることを得た.また,10^<-1>mol/lの濃度では機械的摩耗は80%以上となり,Zr合金の腐食の影響は小さい.★本年度は以下の相互交流を行った.1) 5月26-31日/岩渕・清水訪韓(奨学寄付金による派遣)・科研費あ内容についての打ち合わせ・韓国のフレッティング試験機の説明と大気中の実験の結果を考察2) 7月27-31日/金教授来学(科研費による招へい)・岩手大学の既存のフレッティング装置及び摩耗試験機の説明.(制御・計測系を含む)・韓国側のデータ報告/室温及び純水中のフレッティング摩耗特性3) 9月24-28日/岩渕・清水・八代訪韓(科研費による派遣)・腐食についての討議/純水中での腐食摩耗の検討・韓国で使用しているZr合金を岩手大学での腐食摩耗試験にて検討4) 2月18-22日/金教授来学(科研費による招へい)・岩手大学で行ったZr試験片の摩耗結果の討議とTOF-SIMS,ESCAによるZr合金の摩耗痕の表面分析★結果の概要韓国が韓国側から提供されたZr合金の腐食摩耗特性を検討した.その結果,1) Zrの分極特性はNa_2SO_4溶液中ではSUS304鋼よりも不動態化が著しいが,PP(電位急変)法による分極特性からは新生面の腐食速度は非常に大きい.2)純水中の自由電位における摩耗実験では電位の急激な変化が見られた.Zr合金の不動態化が大きいことを理解した.3)腐食中でのフレッティング装置を設計・製作.本年度は2年目であり,韓国慶北大学とのさらなる情報交換を行い,摩耗特性について検討した.1)相互訪問:5月清水助教授の訪韓:摩耗試験機のPCによる自動計測システム(C言語によるプログラム)や2次元粗さ計を3次元に改良する摩耗評価システムの構築.8月金教授の来日:岩手大学でのZr合金の試験結果の中間報告の討議.10月清水助教授の訪韓:試験装置のシステム構築についての打ち合わせ及ぴZr

合金試料の再入手.11月岩渕教授,八代助教授の訪韓:金教授の論文草稿についての討議,および摩耗試験におけるZr合金の電気化学的考察について意見交換.2)Zr合金のフレッティング摩耗試験・昨年度製作したフレッティング摩耗試験装置の評価:振幅50μmを保証するために試験片ホルダー部の剛性の再検討・摩耗実験:Zr合金の大気中,純水中,Na2SO4溶液中の室温での実験.また比較のためにSUS304鋼でも行った.その結果,Zr合金は静的環境では電気化学的には安定であるが、フレッティング状態では電気化学的作用が大きいこと、その特性を電位急変法による分極特性から評価できること、新生面の大きさはHertzの接触面積での評価が良いことをえた.同様の実験を韓国においてもなされており,来年度早々にデータの交換を行う.本年度は,研究の最後の年であり,韓国慶北大学とのさらなる情報交換を行い,摩耗特性について検討した.1)相互訪問:5月岩渕,清水の訪韓.昨年度実施した,Na2SO4溶液中でのジルコニウム合金のフレッティング摩耗特性の報告と,韓国で実施したジルコニウム(Zr)合金の純水中での摩耗特性の結果を討議した.10月ITC-2000長崎(日本トライボロジー学会国際会議)において,2件(岩渕,金)の発表1月慶北大学の研究員2名が1ヶ月岩手大学に滞在し,高温大気中のフレッティング摩耗実験を実施3月岩渕,清水,八代が訪韓.最終の報告会を慶北大学で実施2)ジルコニウム合金の摩耗特性今年度は,Zr合金の往復すべりでの検討を行った.特に,Na2SO4溶液中での荷重の影響と面積比の影響を求めた.Zr合金は不動態被膜を形成し,耐食性をもつが,動的腐食状態ではその被膜が壊れる.摩耗により生じるアノード領域と,その周りのカソード領域の大きさが,フリーポテンシャルの状態での電位の低下を決定するため,カソード面積を変化させることで,電位の変化を検討した.また,荷重の変化は摩耗痕の大きさを変化させることになり,同様に電位の低下を変化させる.実験の結果は,いずれの場合も電位が変化し,定性的な確認をした.また,Zr合金は腐食摩耗よりも機械的摩耗の割合が比較的大きいことを得た.これらの結果から,腐食摩耗中における真実接触面の大きさを評価できる可能性があり,今後検討する.3)まとめ今回の国際共同研究において,岩手大学はZr合金の腐食溶液中のフレッティング摩耗と腐食摩耗の検討を行い,慶北大学ではZr合金の大気中,純水中のフレッティング摩耗特性を検討した.今後も,情報の交換を行い,その特性を一層明確化する.
磁化シ-トプラズマと反応性ガスとの接触現象の解析的研究

本年度の研究成果は次の通りである。1.磁化シ-トプラズマ実験装置を建設し、一様な密度分布を持つシ-トプラズマの生成法の確立に着手した。2.シ-トプラズマに対し垂直に反応性ガスを注入するための導入部及び反応部の真空容器を製作した。3.アルゴンのシ-トプラズマに対し反応性ガスとしてメタンガスを用い、注入前後に於ける電子温度・電子密度を測定した結果、以下の事実が明らかになった。(1)メタンガスの流量を変えて注入した場合、注入前に較べて流量の増加と共に電子温度は減少し、電子密度が増加した。(2)上記と同じく流量の増加と共に、電子のエネルギ-分布はマックスウェル分布からのずれが大きくなってくる。これらは、シ-トプラズマ中の電子が衝突してメタンガスを電離するため生ずることを示しており、シ-トプラズマとメタンガスとの反応が有効に行われていることを意味している。4.ガス分析に関しては排気系が不十分なためバックグラウンドと同程度となり、反応後に生ずる詳細な分子等の構成の決定には至らなかった。5.今後は電子のエネルギ-分布の詳細な測定並びにガス分析部の排気系を整備することによってシ-トプラズマ内でのメタンガスの衝突過程を定量的に解析する予定である。これらによってメタンガス等の反応性ガスのプラズマ生成過程を定量的に解析する方法を確立することを目指している。
老親介護を行う雇用労働者のための社会的支援に関する調査研究

産業化が進行する現代において、労働者福祉施策の重要性は高まる一方、高齢社会を迎え、高齢者の介護問題が深刻化しているが、雇用労働者の老親介護問題についても社会問題化してきている。にもかかわらず、雇用労働者の老親介護の状況とその問題解決に資する調査研究はきわめて少ない。本研究では、高齢化社会先進国の研究成果や行政や企業における試みについて把握するとともに、国内における、介護状況を分析し、介護問題を解決するためのより実効のある労働者福祉施策や、社会支援のあり方を明らかにすることを目的とする。〔結果〕1.国内における企業内福祉制度については、介護休業制度の普及率は、徐々にではあるが普及してきており、従業員500人以上の事業所では51.9%の普及率となっていた。しかしながら、中小企業においての普及は進まず、企業規模による企業間格差は広まってきている。現在、介護休業制度の法制化について労働者、使用者、労組の三者間で協議を行っているが、法制化に非常に積極的である行政が、労使の調整を行い、法案を作成、成立させるところまできている。2.諸外国については、公共部門での高齢者介護が最も発達しているとされるスウェーデンでは「親族等介護有給休暇法」を1989年7月に施行して以来、介護休暇取得を積極的に推進し、社会保険制度の中に介護休暇を導入したため、所得補償つきの60日間の休暇を保障している。アメリカでは「1993年家族および医療休暇法」において高齢者介護についても12週間まで無給の休暇を取得できることになっている。アメリカでは雇用労働者の家族的責任の支援施策が、企業側の反対等の背景から他の先進国に較べ遥かに立ち遅れており、この法律は育児休暇を主として対応したものである。3.その他の企業内福祉制度は、短時間休業制度の導入等があげられるが、これは介護休業制度と同じく休暇制度の導入に属するものであり、その他の制度、サービスの実施は特にみられない。4.ごく一部の企業であるが、介護に関する相談や情報提供の電話サービス会社と契約していた。電話サービスでは、(1)相談、(2)病院の紹介、(3)介護のノウハウ、の順に情報を提供していた。福祉事務所と在宅介護支援センターの機能の持ち合わせ、病院・施設の最新の情報量が多く、簡便で即時性がある点が従来あるサービスと比較して特に優れ、一種のケースマネジメント機能を果たしていた。
フレーバー物理で探る素粒子標準模型を超える新物理の研究

本研究の目的は、精密測定が進むフレーバー物理現象を通し、素粒子標準模型を超える新物理の姿を見出すことである。本年度は、標準模型からのずれが報告されているB中間子とK中間子の崩壊現象に注目し、それらのずれを説明できる新物理のモデルを検討し、将来実験での検証可能性を調べた。特に、LHC実験をはじめとする新物理探索が盛んに行われているヨーロッパに長期滞在することで、最新の実験結果と議論の動向を積極的に取り入れた研究を行うことができた。現在、B中間子の精密測定実験から、3σ程度の標準模型からのずれ(アノマリー)が様々な崩壊モードで報告されている。たとえば、lepton universalityのチェックとなる物理量: B →Kμμ崩壊とB →Kee崩壊の崩壊分岐比の比R(K)は、標準模型では良い精度で1になるが、LHCb, Belle, BaBar実験における結果はそれより低い値を出している。また、K中間子の直接的CP非対称度において、格子QCDの計算を取り入れた標準模型の予言値と実験値との間に、ずれがあることも報告されている。現在のところ、それらのずれは有意ではないものの、新物理の兆候が見え始めている可能性がある。このような状況の中、これらの標準模型からのずれを説明できる新物理のモデルに注目し、その効果が他の観測量に与えうる影響や相関を明らかにすることで、種々のモデルの峻別可能性を議論した。これらの結果は、新物理に対する制限を与え、また将来実験の指針にインパクトを与えうることが期待される。精密測定が進むフレーバー物理現象を通し、素粒子標準模型を超える新物理の姿を見出すことを目的に、本年度は、標準模型からのずれが報告されているB中間子とK中間子の崩壊現象に注目し、それらのずれを説明できる新物理のモデルを検討した。これらの物理量は、Belle II実験やLHCb実験の第二期運転でより高精度で測定されることが期待され、将来モデルの峻別が可能になるこが期待される。ここで取り組んだことは、新物理に対する制限を与え、また将来実験の指針にインパクトを与えうることが期待されるため、新物理の発見やモデルの制限に関して身を結ぶことが十分に期待できる。また、現在報告されている標準模型からのずれが新物理の影響によるものならば、他の物理量にも影響が現れ、相関を持つことが予想される。その中でも、新物理への感度が高いことが知られているK中間子崩壊現象への影響を、U(2)フレーバー対称性の枠組みで包括的に調査中であり、これを明らかにすることを当面の目標とし研究を継続している。以上により、現在までの進捗状況は、おおむね順調に進展していると評価できる。今後の研究の推進方策としては、まずBelle II, LHCbから報告される最新のデータを解析に取り込み、1年目の検討をより詳細なものにする。また、実験的進歩が見込まれる、レプトン崩壊や終状態運動量依存性は強い相関を持ち、モデルを判別しうる物理量となるため、これらの相関を各モデルで計算し、模型の峻別可能性を議論する。具体的には以下のような内容に取り組む。1 B →πτν崩壊は、標準模型からずれが報告されているB →D*τν崩壊と似た過程で生じるため、フレーバー対称性を持つ新物理において特徴的な相関が現れることが期待される。また、Belle II実験で測定されることが期待されている。B →D*τνにおけるずれを説明できる新物理において、B →πτν崩壊との相関を明らかにすることで、Belle II実験での可能性を示す。2現在、フレーバー物理現象において報告されている標準模型からのずれは、lepton universalityの破れを示唆しており、これはミューオンの異常磁気能率(g-2)とも相関を持つことが予想される。標準模型からのずれが報告されているB→K(*) mu mu、B →D*τν、(g-2)が説明できる新物理を導入し、その相関を明らかにすることで、将来実験への感度を明らかにする。

これらの結果は、新物理に対する制限を与え、また将来実験の指針にインパクトを与えうることが期待される。精密測定が進むフレーバー物理現象を通し、素粒子標準模型を超える新物理の姿を見出すことを目的に、本年度は、標準模型からのずれが報告されているB中間子とK中間子の崩壊現象に注目し、それらのずれを説明できる新物理のモデルを検討した。これらの物理量は、Belle II実験やLHCb実験の第二期運転でより高精度で測定されることが期待され、将来モデルの峻別が可能になるこが期待される。ここで取り組んだことは、新物理に対する制限を与え、また将来実験の指針にインパクトを与えうることが期待されるため、新物理の発見やモデルの制限に関して身を結ぶことが十分に期待できる。また、現在報告されている標準模型からのずれが新物理の影響によるものならば、他の物理量にも影響が現れ、相関を持つことが予想される。その中でも、新物理への感度が高いことが知られているK中間子崩壊現象への影響を、U(2)フレーバー対称性の枠組みで包括的に調査中であり、これを明らかにすることを当面の目標とし研究を継続している。以上により、現在までの進捗状況は、おおむね順調に進展していると評価できる。今後の研究の推進方策としては、まずBelle II, LHCbから報告される最新のデータを解析に取り込み、1年目の検討をより詳細なものにする。また、実験的進歩が見込まれる、レプトン崩壊や終状態運動量依存性は強い相関を持ち、モデルを判別しうる物理量となるため、これらの相関を各モデルで計算し、模型の峻別可能性を議論する。具体的には以下のような内容に取り組む。1 B →πτν崩壊は、標準模型からずれが報告されているB →D*τν崩壊と似た過程で生じるため、フレーバー対称性を持つ新物理において特徴的な相関が現れることが期待される。また、Belle II実験で測定されることが期待されている。B →D*τνにおけるずれを説明できる新物理において、B →πτν崩壊との相関を明らかにすることで、Belle II実験での可能性を示す。2現在、フレーバー物理現象において報告されている標準模型からのずれは、lepton universalityの破れを示唆しており、これはミューオンの異常磁気能率(g-2)とも相関を持つことが予想される。標準模型からのずれが報告されているB→K(*) mu mu、B →D*τν、(g-2)が説明できる新物理を導入し、その相関を明らかにすることで、将来実験への感度を明らかにする。
日本のカキ養殖業における家族経営の再生産条件と市場対応に関する研究

現在、日本のカキ養殖業においては規模拡大が進行しつつあることが明らかとなった。その背景には、漁家による積極的な市場対応と、陸上作業における外国人労働力への置き換えがあることが明らかとなった。また、その中でそうした対応ができる漁家とそうではない漁家の2極化傾向が現れてきていることもわかった。つまり、漁家経営の規模の拡大と縮小、優劣、作業分担配置の再編成、外部経済との関わりが次第に現れてきていることが明らかとなった。本研究は、世界的にカキの産地間競争が激しくなる中で、日本のカキ産地がどのような状況にあり、かつ市場対応をしようとしているのかを明らかにすることを通じて、小規模な家族経営の再生産条件を解明しようとするものである。本年度は、主に統計や既存文献を用いて、現在の日本のカキ産地の状況を明らかにした。その結果、日本におけるカキ養殖の生産量は1989年以降減少傾向にあること、生産金額は90年代に入り徐々に大きくなったものの最近は減少傾向にあること、大規模・専業が特徴の広島県が圧倒的に大きいシェアを示しているが、そのシェアは年々小さくなってきていること、一方で最近では新興産地が形成され、これら産地において経営規模は小規模ながらも、既存産地との差別化を目指し、ブランド化の試みやオーナー制など市場対応に工夫を凝らしていること等を明らかにした。以上のことから、今後の日本のカキ養殖産地の再生産のあり方については、いかに規模拡大していくかというよりも、むしろ今日的な市場対応のあり方を検討していくことが重要な要件となってきていることが示唆された。(1)世界的にカキ養殖の産地が形成されている中で、日本国内においても産地間の競争が激しさを増している。その中でこれまで企業的な大規模経営によって日本のカキ養殖における圧倒的なシェアを占めていた広島県の地位は下落傾向を示し、他方で岡山県やその他の新興産地が、市場対応に工夫を凝らすことでシェアを伸ばしつつある。以上より、本申請研究では、日本のカキ養殖業における家族経営の存立構造と市場対応の状況を明らかにし、小規模な家族経営の再生産条件を解明しようとするものであった。(2)今年度は広島県呉地区・地御前地区、北海道厚岸地区、佐賀県大浦地区・大浦浜地区・唐津地区でヒアリング調査と資料収集を実施した。(3)上記のヒアリング調査の結果、次のような知見を得ることができた。1これまで広島県では仲卸業者へ出荷する形態が中心であったが、若手層を中心に生産者自らが取引相手を開拓し、直接取引する動きがみられるようになってきたこと、2北海道では漁協の直売所におけるカキ販売が順調なことから、生産量も増えつつあること、3佐賀県ではカキ小屋が展開する中で殻付きカキの生産や出荷が増えつつあること等が明らかとなった。(4)以上のことから、生産者による販売の展開や市場対応のあり方の工夫によって、生産量が増加しつつあることが明らかとなった。また、少しずつではあるが、規模の拡大傾向もみられることが明らかとなった。つまり、カキ養殖においては、規模拡大をすすめる経営体とそうではない経営体の二極化傾向が進みつつあることが明らかとなった。つまり、単に生産における規模拡大をしているわけではなく、生産者らによる流通や販売への進出や取り組みによってそれらがなされているということが明らかとなった。1.世界的にカキ養殖の産地が形成されている中で、日本国内においても産地間競争が激しさを増している。その中でこれまで企業的な大規模経営によって日本のカキ養殖における圧倒的なシェアを占めていた広島県の地位は下落傾向を示し、他方で小規模な家族経営の宮城県や岡山県、その他の新興産地が、市場対応に工夫を凝らすことでシェアを伸ばしつつある。本研究は、日本のカキ養殖業における家族経営の存立構造と市場対応の状況を明らかにし、小規模な家族経営の再生産条件を解明しようとすることを目的としている。2.本年度は、(1)岡山県におけるカキ養殖産地におけるヒアリング調査と資料収集、(2)広島県におけるカキ養殖産地の全体状況についてのヒアリング調査および資料収集、(3)福岡県におけるカキ養殖の現状に関するヒアリング調査などである。3.上記の現地調査の結果、以下のような知見を得ることができた。(1)家族経営を中心としながら経営を行ってきた岡山県においては、カキのむき身作業において日本人労働力から外国人労働力への置き換えが着実に進んでおり、産地によっては経営体の二極化が進みつつある。(2)地位が下落傾向を占めつつある広島県において、以前は地域によってカキの浜値が平均化されていたが、最近は経営体間で格差が出てきており、各経営体における生き残り競争が激しくなっている。(3)カキ養殖の新興産地である福岡県においてはカキ養殖業者がカキ小屋を経営することで、生産者が小売部門まで進出しつつある。25年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の中心となる広島県や岡山県などでの現地調査を順調に進めているため。
高度に進化した２種のシャペロニンによる細胞機能制御

シャペロニンは、タンパク質のフォールディングを介助する分子シャペロンの1グループである。本研究では、ヒトをはじめとする真核細胞において重要な機能を担っているCCT(細胞質に分布)とHSP60(ミトコンドリアに分布)という2種のシャペロニンについて研究を行った。CCTについては、ATPase活性の他に、GTPase活性をもつことを見出した。HSP60に関しては、様々な解析の結果から、シングルリングから、ダブルリングを介して、フットボール型複合体へと変化し、フットボール型複合体が重要な機能を担っているものと考えられた。これらの結果は、シャペロニンの機能を知る上で重要な知見である細胞内で生合成される蛋白質は、アミノ酸の鎖であるポリペプチドとして翻訳されるが、正しい立体構造を獲得しなければ、その機能を発揮することができない。しかしながら、生合成直後のポリペプチド鎖は、他のタンパク質との不必要な相互作用を高頻度に起こしてしまうため、常に変性や凝集の危険にさらされている。このため、分子シャペロンと呼ばれる一連の蛋白質が正しい構造をつくるまで介助する。CCTとHSP60はタンパク質成熟を介助すシャペロニンである。シャペロニンは、2重リング型の複合体を作って、中央の空洞の中でタンパク質の折りたたみを促進する分子シャペロンであり、細胞質にはCCTが存在し、ミトコンドリアにはHSP60が分布している。CCTとHSP60は、ヒトを初めとする全ての真核細胞においてタンパク質のフォールディングに必須の分子であるが、その作用機構はの詳細は不明なままである。そこで、本研究は、これらのシャペロニンのもつ機能を明らかにすることを目的とした。昨年度は、CCTについて、動物組織から精製して機能解析を行い、CCTにはGTPase活性があることを明らかにした。さらに、HSP60については、昨年度、大腸菌を使ったリコンビナントの発現系により、タンパク質を精製し、その構造と機能に関して、基礎データを得ることができた。この結果、HSP60はGroELとは異なる反応サイクルを持っていることが示唆されたので、本年度はその詳細について解析を行った。その結果、HSP60の基質フォールディンク反応サイクルにおいては、GroELと異なり、シングルリング状態を経由して制御されていることがわかった。HSP60の機能制御においては、シングルリングからダブルリングへの転換が重要な意味を持っているものと考えられた。細胞内で生合成されるタンパク質は、様々なストレスにより常に変性や凝集の危険にさらされている。このため、分子シャペロンと呼ばれるタンパク質が正しい構造をつくるまでの過程を介助する。本研究では、CCTとHSP60というタンパク質の折りたたみ(フォールディング)を介助する分子シャペロン(シャペロニン)に注目して解析を進めている。シャペロニンは、2重リング型の複合体を形成し、中央の空洞の中でタンパク質のフォールディングを促進する。細胞質にはCCTが存在し、ミトコンドリアにはHSP60が分布している。CCTとHSP60は、全ての真核細胞においてタンパク質のフォールディングに必須の分子であるが、その作用機構の詳細は不明なままである。そこで、本研究は、これらのシャペロニンのもつ機能の詳細を明らかにすることを目的とした。昨年度までに、CCTにはGTPase活性があることを明らかにした。さらに、HSP60については、HSP60の基質フォールディンク反応サイクルにおいて、GroELと異なり、シングルリング状態を経由して制御されていることがわかった。これにより、HSP60の機能制御においては、シングルリングからダブルリングへの転換およびフットーボール型複合体の形成が重要な意味を持っているものと考えられたので、より詳細な解析を行った。その結果、HSP60は、ATPおよびコシャペロンHSP10依存的に、シングルリング→ダブルリング→フットボール型複合体へとその構造を変化させるが、フットボール型複合体が反応サイクルにおいて中心的な働きを担っているものと考えられた。CCTとHSP60はタンパク質成熟を介助するシャペロニンである。CCTは、ヒトを初めとする全ての真核細胞の細胞質においてアクチンやチューブリンのフォールディングに必須の分子である。

CCTは8種類ものサブユニットを介した非常に複雑で巧みなシャペロン機能を備えていると考えられているが、この8種類あるサブユニットの役割と作用機構は明らかになっていない。HSP60についても、その機能の詳細は不明なままである。そこで、本研究は、これらのシャペロニンのもつ機能を明らかにすることを目的とした。本年度は、CCTについては、動物組織から精製したものを用いて、機能解析を行い、CCTにはGTPase活性があることを明らかにした。さらに、HSP60については大腸菌を使ったリコンビナントの発現系により、タンパク質を精製し、その構造と機能に関して、データを得ることができた。この結果、HSP60はGroELとは異なる反応サイクルを持っていることが示唆された。HSP60の構造と機能を解析し、そのデータから、HSP60はGroELと異なるユニークな反応サイクルを持っていることがわかった。具体的には、HSP60においては、GroELと異なり、シングルリングからダブルリングへの転換が重要な意味をもつと考えられた。これらの発見は、シャペロニンの機能を考える上で、重要な知見であるとともに、今後のさらに詳細な解析にとって、根幹をなす重要な知見であるので、おおむね順調に進展していると言える。CCTに関して機能解析を行い、GTPase活性があることを見出した。さらに、HSP60の構造と機能を解析し、そのデータから、HSP60はGroELと異なるユニークな反応サイクルを持っていることが示唆された。これらの発見は、シャペロニンの機能を考える上で、重要な知見であるとともに、今後の詳細な解析において、重要な基盤となるので、おおむね順調に進展していると言える。昨年度と今年度に得たデータの基盤の上に立ち、最終年度において、さらに詳しい機能解析を行うことにより、シャペロニンの機能を明らかにする。特に構造と機能の関係に関して、詳しく調べて、最終的な結論を導きたい。今年度に得たデータの基盤の上に立ち、さらに詳しい解析を行うことにより、シャペロニンの機能を明らかにしてゆく。特にサブユニットの働きに関して、詳しく調べて行きたい。今年度の研究により、新しい発見があったため、次年度(最終年度)にこの発見に関する詳しい解析を行うことが必要となった。このため、研究費の一部を次年度(最終年度)に繰り越して、さら詳細な解析のために役立てることとした。細胞を凍結保存するための液体窒素保存容器の購入を行おうとしたところ、当該製品が輸入待ちとなっており、次年度にならないと納品できない状況であったため、当該研究費を次年度に繰り越して、次年度に購入することとした。
薬剤耐性グラム陰性桿菌におけるメタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子型別と臨床的検出法

グラム陰性桿菌におけるメタロ-β-ラクタマーゼは、現在40種類をこえる報告がある。このうち、伝達性プラスミドに遺伝子がコードされているIMP-1型、IMP-2型、VIM-2型メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子の我が国における保有状況は、すでに報告した(N.Shibata, et al., JCM41(12), in press, 2003)。しかし、我が国では、ChryseobacteriumやStenotrophomonas maltophiliaなどの染色体性メタロ-β-ラクタマーゼ産生菌に関しては、遺伝子学的な観点から研究はほとんどされていないのが現状である。こうしたメタロ-β-ラクタマーゼの遺伝子型別を行い、SMAディスク法の鑑別によっておこなうことは、臨床現場で、簡易に安価に行う別の鑑別法がない現状では、独創的な方法と考えられる。また、こうした鑑別法、型別を行うことにより、新しいタイプのメタロ-β-ラクタマーゼ産生菌の検出にもつながると考えられる。こうした遺伝子の型別が終了すれば、院内感染対策における疫学調査を行う上でも、大きく寄与すると考えられる。本研究では、クラスAβ-ラクタマーゼに属する基質拡張型β-ラクタマーゼ(ESBLs)産生菌を鑑別するNCCLSのディスク拡散法を改良し、SMAディスク法と組み合わせ、産生菌の鑑別を試みた、さらにその遺伝子型別も行い、比較検討した。その結果、この方法は、ESBLs産生菌やメタロ-β-ラクタマーゼ産生菌、クラスC型産生菌を区別することができた。それだけでなく、複数β-ラクタマーゼを産生する菌株も検出することが可能であることが示唆された。成果の一部はAntimicrob.Agents and Chemotherapy, 50(2), 2006に発表した。メタロ-β-ラクタマーゼ産生菌の検出に関しては、メルカプト酢酸ナトリウムを利用したディスク拡散法によるメタロ-β-ラクタマーゼ産生菌の検出を確立している。したがって、グラム陰性桿菌感染症において、こうした耐性菌のスクリーニング検出は容易になった。本研究の実施に関しては、臨床分離株の収集は不可欠であるが、すでにプラスミド性メタロ-β-ラクタマーゼ産生株に関しては、約450株を解析し、メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子の型別を行った(N.Shibata et al.,JCM(41),12,5407-5413)。その内約85%がIMP-1型メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子、約1%がIMP-2型メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子、約14%がVIM-2型メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子を各々保有していた。一方、染色体牲メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子を保有する菌として、ChryseobacteriumやS.maltophiliaがあるが、約60株の臨床分離株を収集しており、GOB-型、blaB型、IND-型およびL1メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子に関して、それらを検出する特異的プライマーを作成し、PCR法により、メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子の型別を行っている。遺伝子型別と同時進行で、安易な耐性菌の分別を目指し、遺伝子型別と比較検討するため、抗菌薬のディスクを用いた、ディスク拡散法も行い、解析を進めている。このうち、伝達性プラスミドに遺伝子がコードされているIMP-1型、IMP-2型、VIM-2型メタロ-β-ラクタマーゼ遺伝子の我が国niおける保有状況は、すでに報告した(N.Shibarta, et al., JCM41(12), in press,2003)。

しかし、我が国では、ChryseobacteriumやStenotrophomonas maltophiliaなどの染色体性メタロ-β-ラクタマーゼ産生菌に関しては、遺伝子学的な観点から研究はほとんどされていないのが現状である。こうしたメタロ-β-ラクタマーゼの遺伝子型別を行い、SMAディスク法の鑑別によっておこなうことは、臨床現場で、簡易に安価に行う別の鑑別法がない現状では、独創的な方法と考えられる。また、こうした鑑別法、型別を行うことにより、新しいタイプのメタロ-β-ラクタマーゼ産生菌の検出にもつながると考えられる。こうした遺伝子の型別が終了すれば、院内感染対策における疫学調査を行う上でも、大きく寄与すると考えられる。本研究では、クラスAβ-ラクタマーゼに属する基質拡張型β-ラクタマーゼ(ESBLs)産生菌を鑑別するNCCLSのディスク拡散法を改良し、SMAディスク法と組み合わせ、産生菌の鑑別を試みた、さらにその遺伝子型別も行い、比較検討した。その結果、この方法は、ESBLs産生菌やメタロ-β-ラクタマーゼ産生菌、クラスC型産生菌を区別することができた。それだけでなく、複数β-ラクタマーゼを産生する菌株も検出することが可能であることが示唆された。成果の一部はAntimicrob. Agents and Chemotherapy, 50(2), 2006に発表した。
プリオン病におけるFK506の薬理作用の検討

プリオン病は異常型プリオンタンパクの蓄積、ミクログリア、アストロサイトの活性化(グリオーシス)、空胞変性を特徴とする疾患である。我々は免疫抑制剤FK506がプリオン感染マウスの生存期間を延長させることを見出した。さらにその作用はミクログリアの抑制とタンパク分解経路(オートファジー)の活性化の2つに分けられると考えられた。今回我々はFK506のグリオーシス、空胞変性への影響とオートファジー活性化のメカニズムの検討を行った。FK506は部分的にグリオーシス、空胞変性を抑制するプリオン感染マウスを発症後(感染110日後)に解剖し、免疫染色法及びヘマトキシリン・エオジン染色グリオーシスと空胞変性の程度を解析した。グリオーシスは有意な差ではないものの、FK506投与群の脳の各部位で抑制されている傾向が認められた。また、空胞変性は海馬と視床において有意に抑制されていた。これまでの報告でFK506はアストロサイト、ミクログリアのそれぞれの活性を抑制すると報告されてきたが、その効果はプリオン病においてはミクログリアの方が強いことが分かった。ミクログリアやアストロサイトの活性がが空胞変性を引き起こすと考えられており、これらの抑制が空胞変性の抑制につながっていると考えられる。FK506はFOXO3を活性化させることでオートファジーを促進するFK506はFKBPと呼ばれるタンパクと結合することが知られているが、このうちFKBP52はオートファジー活性を司るFOXO3を抑制すると報告されている。そこで培養細胞をFK506で処理すると、濃度依存的に活性型のFOXO3が増加し、オートファジーも活性化していることが分かった。この結果からFK506がFOXO3を介してオートファジーを活性化することが示唆された。
スピン偏極ヘリウムイオン生成に関わる電界イオン化の基礎過程の解明

次世代高機能イオン顕微鏡として大きな期待を寄せられているヘリウムイオン顕微鏡にスピン分析機能を持たせるためのイオン源開発の中で、特にスピン偏極イオンの生成手法として最も有望と考えられる表面過程を利用した電界イオン化に着目した。その電子遷移過程のメカニズムを深く理解することを目標に、マイクロプローブホール電界イオン顕微鏡を用いて試料表面上を直径30pmという極めて微小な領域からの放射されて来る電荷イオンの示す放射特性を直接的に計数計測することで、単一表面原子位置での電場形成とガス粒子の供給過程に及ぼす周辺原子の影響を定量的に捉えることに始めて成功した。スピン偏極ヘリウムイオン顕微鏡の実現を目標とするヘリウムイオン源技術の確立のためには、スピン偏極ヘリウムイオンが生成される上で鍵となる電界イオン化過程のメカニズム解明が不可欠である。そこで、単一原子寸法以下の未だ嘗て計測されたことのないミクロな領域でのイオン生成量を取得することにより、イオン生成率を決める重要な因子である電場、気体原子の供給経路と供給率、イオン化率、電界吸着構造とその安定性等の相互関係をサブアトミックな視点から明らかにすることを助成期間内の目的とする。そこで、平成26年度は研究室現有の電界イオン顕微鏡(FIM)装置のイオン検出部の改造を行った。即ち、1.内径70mmΦのイオンビーム飛行用チャンバーと、2. 40mmΦの大口径検出器が配置され、同時に2軸方向に位置移動可能なX-Yステージが組み込まれた検出器用チャンバーを設計、製作した。これにより、改造前のFIM装置では、電界イオンの検出領域の広さは単一のタングステン原子の直径(0.27nm)を少し上回る程度であり、隣接する原子を含めたより広い範囲の結晶面領域を詳細に調べることが出来ないという制約を克服して、電界イオンの出射位置を隣接原子まで広げて検出し、周辺原子の影響を明確に捉えたイオン生成の空間的分布をより広範囲で測定可能となった。実際に、変位精度50μmのマイクロメータを取り付けた高精度なプローブ駆動機構により、目標通り1.0nm×1.0nmの試料表面の領域にある個々の単一タングステン原子(直径0.27nm)を水平分解能0.03nmの精度で計測出来ることを、取得した電界イオン生成量の二次元マップ像から確認した。次世代高機能イオン源の開発は、イオンビームをプローブ粒子とする顕微鏡あるいはイオンビームを用いた微細加工装置の高精度化・高機能化に直結し、科学技術分野への波及効果が極めて大きい点において、表面科学の基礎的側面だけでなく工業技術的な応用の観点からも極めて重要である。本研究課題は、イオン源開発の技術的な問題の中で、特にそのイオン発生の微視的過程を明らかにする事を目的として、従来の電界イオン顕微鏡(Field Ion Microscope: FIM)にマイクロプローブホール(μPH)を装備して特殊化し、直径30pmという極めて高い空間分解能で試料表面上の単一原子の大きさよりも十分に狭い領域から放出される電界イオンの数を直接的に計数計測(カウンティング)した。昨年度のイオン検出部の改良により、観察のための全操作範囲を1.0nm×1.0nmに拡大出来ており、その成果を踏まえて本年度はタングステン試料表面上の結晶面(112)のステップ端に位置する原子に着目し、その原子および周辺位置での電界イオン生成率の違いを観測し精査した。その結果、蛍光板を用いて取得される従来のFIM像の輝点の濃淡では到底識別出来なかった重要な知見を見出す事に成功した。即ち、従来は一つの輝点に対応した単一原子内でのイオン化率は輝点の中心から等方的に分布すると考えられていたことに対して、実際には着目する原子に隣接する周辺の原子配置と、その間を縫ってイオン化位置まで供給されるイメージングガス原子の流束を反映して異方性が現れることである。測定されたイオン化率分布を、実際の原子配置に基づく試料表面上の電場分布とイメージングガスの供給量および方向を考慮したイオン化モデルを用いて解析することで、極めて局所的な領域でのガス流の動きを、その量だけでなく方向を含めて定量的に捉えるという大きな成果を得ることが出来た。研究の目的および研究計画に基づいて、研究室現有の電界イオン顕微鏡(FIM)装置のイオン検出部の改造を行い、実際に電界イオン生成量の二次元マップ像を取得することで、所定の目標が達成されていることが確認出来ている。また、得られた成果に対しては、国際会議と国内学会および論文により発表を行っており、更に現時点でも複数の論文執筆と学会発表の準備が進行中である。以上により、現時点での達成度はおおむね順調に進展していると言える。表面物理、イオンビーム工学助成初年度は、研究計画通りの進展を得たので、今後は昨年度に改造を終えたFIM装置を使って、生成イオンの計数計測を実施する。

電界イオン化の初期過程として本質的に重要な役割を果たす電界吸着構造および電界イオン化が効率的に起こる領域(ionization zone)の場所依存性を調べる上で注目すべき試料表面上の位置は、表面上の特徴的な場所(サイト)、即ち、テラス及びステップ端である。それらを、異なる結晶面、結晶軸上のサイトで精査ことにより、結晶学的に異なる環境に置かれた原子位置でどのような違った(または同じ)電界吸着構造を取るのかという事実を突き止め、その背後にある物理機構を明らかにする。平成26年度助成額180万円に対して、研究計画に基づいて検出器位置移動用X-Yトランスファーステージおよび検出器用超高真空チャンバーを設計、製作した費用が上記の179万9280円であったため、若干の残額(720円)が生じた。当初の研究計画書において必要とした予算額からすると助成額は約6割であったため、製作に必要な部品や費用の不足分は研究室既存の真空部品および研究代表者の研究室予算から供出または補填した。生じた次年度使用額は僅か(720円)であるため、既に提出済みの交付申請書に記載の通り、平成27年度分の助成金(120万円)と合わせて検出部補助排気用ポンプ一式の購入を進める予定である。
骨発現Klothoによるミネラル代謝制御機構の解明

生体のカルシウム,リン代謝の恒常性維持は,尿生成と活性型ビタミンD産生の場である腎臓,副甲状腺ホルモン(PTH)を産生する副甲状腺,さらにカルシウム,リンの貯蔵庫である骨を中心とする精緻な制御システムによって成り立っている。近年,このシステムに関与する新たな因子として発見されたのが線維芽細胞増殖因子23(FGF23)である。FGF23は骨細胞により産生されるホルモンで,腎臓を主な標的臓器とし,尿中へのリン排泄および活性型ビタミンD産生を抑制する。FGF23がその生理作用を発揮するためには,標的細胞にFGF受容体とともに膜蛋白Klothoが共受容体として必要となる。しかしながら,骨細胞におけるFGF23分泌調節機構の詳細は未だ明らかではない。これまでの検討でリン,PTH,活性型ビタミンDがFGF23分泌を促すことが示されているが,これに加え,骨細胞に発現するFGF受容体もFGF23産生調節に関与していることが相次いで報告されている。しかし,この機構におけるFGF受容体のリガンドは明らかでない。このような状況の中,近年,骨細胞にKlothoが発現していることが明らかとなった。また遺伝子転座によりKlotho発現が顕著に増加した患者において,FGF23が過剰に産生され,低リン血症性くる病をきたしたことが報告された。以上の知見より,われわれはFGF23がFGF受容体とKlothoの複合体を介し骨細胞に作用し,FGF23分泌を刺激するというpositive feedback仮説を着想するに至った。そこで本プロジェクトでは,骨組織特異的にKlothoを過剰発現するマウスを作製し,FGF23分泌調節におけるKlothoの役割を解明することを目指す。骨特異的Klotho過剰発現マウスを,Cre-loxP部位特異的組換え法を用いて作成するため,われわれはまずKlotho-loxPマウスの作製を試みた。大塚正人氏らが開発したPITT法を用いて,目的通りにKlotho-loxPマウスを作製し得た。今後,骨組織特異的Klotho過剰発現マウスの表現型を詳細に解析し,FGF23分泌制御におけるKlothoの役割を検討する予定である。生体のカルシウム,リン代謝の恒常性は,腎臓,副甲状腺,骨を中心とする精緻な制御システムによって維持されている。さらに近年,このシステムに関与する新たな因子として発見されたのがFGF23である。しかしながら,骨細胞におけるFGF23分泌がどのような機序で調節されているかに関しては,未だ完全には明らかでない。これまでの検討でリン,副甲状腺ホルモン(PTH),活性型ビタミンDがFGF23分泌を促すことが示されているが,さらに骨細胞に発現するFGF受容体もFGF23産生調節に関与することが報告されている。しかし,そのリガンドは未だ明らかでない。近年,骨細胞がFGF受容体とともにKlothoを発現することが示されており,FGF23がこの共受容体のリガンドとなり,その結果,FGF23自身がFGF23分泌を刺激するというpositive feedback機構が存在する可能性が考えられる。骨特異的Klotho過剰発現マウスを,Cre-loxP部位特異的組換え法を用いて作成するため,Klotho-loxPマウスの作製を試みた。大塚正人氏らが開発したPITT法を用いて,目的通りにKlotho-loxPマウスを作成し得た。自然交配により繁殖しなかったが,体外受精により系統を維持できており,安定的な繁殖・維持を目指している。一方,骨特異的に遺伝子組換えを起こすためのCreマウスとして,Col1a1-Creマウスを理化学研究所バイオリソースセンターより入手し,体外受精による清浄化後,維持を行うことができている。

また遺伝子転座によりKlotho発現が顕著に増加した患者において,FGF23が過剰に産生され,低リン血症性くる病をきたしたことが報告された。以上の知見より,われわれはFGF23がFGF受容体とKlothoの複合体を介し骨細胞に作用し,FGF23分泌を刺激するというpositive feedback仮説を着想するに至った。そこで本プロジェクトでは,骨組織特異的にKlothoを過剰発現するマウスを作製し,FGF23分泌調節におけるKlothoの役割を解明することを目指す。骨特異的Klotho過剰発現マウスを,Cre-loxP部位特異的組換え法を用いて作成するため,われわれはまずKlotho-loxPマウスの作製を試みた。大塚正人氏らが開発したPITT法を用いて,目的通りにKlotho-loxPマウスを作製し得た。現在,Klotho-loxPマウスとCol1a1-Creマウスの交配を開始しており,当該年度において骨特異的Klotho過剰発現マウスを作製し,その表現形を解析することを目標とする。今後,骨組織特異的Klotho過剰発現マウスの表現型を詳細に解析し,FGF23分泌制御におけるKlothoの役割を検討する予定である。当該年度に支給された助成金はほぼ全額使用され,6766円が余剰となった。余剰金は試薬や備品の購入費用に充てる予定である。当該年度に支給された助成金はほぼ全額使用されたが,解析が円滑に進捗し,想定より少量の試薬で済んだため,60,279円が余剰となった。