hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
日本人大学生を対象としたオンライン型英語ライティング教材の開発

平成14年度は英語ライティング能力の向上を目的としたオンラインでの学習教材を作成した。本教材は初級・中級・上級レベルに区分されており、生徒は各自のレベルに応じて学習できるように工夫した。例えば初級では基本的な文法について説明しているほか、接続詞の使用方法、文章やパラグラフの構成の仕方についてアドバイスした。中級ではフォーマルなビジネスレター、履歴書や留学願書など実用的な英文の書き方について説明した。上級ではエッセーや研究論文等、学術的な英文を書く際の注意点について解説した。平成15年には前年に作成した上記の学習教材に改良を加えた。まず、FLASH MXを用いてユニークなフロントページを作成するとともに、様々なタイプの文法問題例(TOEIC, TOEFL式の選択式問題、穴埋め問題、マッチング問題など)を豊富に盛り込んだ。また、指示に従って英文を書いていくと、構成のはっきりした的確なエッセーが完成される、いわゆるガイデッド・パラグラフ・ライティングも加えた。中級レベルではe-mailでよく使用される約100の表現を紹介し、さらに、これらの表現を用いて書かれた実際のe-mailも紹介した。つまり生徒はこれらの表現が、いつ、どのように使われるのか、理解をより深めることができると考えられる。上級レベルには様々な分野から出版された6の論文(著者及び出版者の許可済)を掲載した。これは中級レベルの教材と同様、生徒は紹介された表現をクリックすることで、実際の論文における各表現の使われ方を学ぶことができる(詳しくはhttp://flare.media.hiroshima-u.ac.jp/english/writing/movie.htmlを参照)。近いうちに、Hot Potatoesのソフトを用いて新たな文法問題例をオンラインにより提供する予定である。また広大生のためのチャットとEメール交換広場も実施する予定である。初年度は、1)既存の幾つかのライティング支援サイトを調査するとともに、2)これから実現すべきコースに必要な練習問題群を作成し、3)ひな型となる最初のライティング支援コースを開発した。「広島大学生のため英語ライティングセンター」と名付けられたこのコースは、以下のURLですでに公開中である。http://flare.media.hiroshima-u.ac.jp/english/writing/frontpage.htm既存サイトの調査や応用言語学分野の先行研究からは、ライティングにおける文法の役割、ウェブデザイン、課題のタイプ、そして日本人の若者がその職業において必要とする英語ライティング能力の多様性についての知見を得た。それに基づき、多くの練習問題とライティング課題を作成したが、これらのvalidityとreliabilityについては、広島大学生を被験者とした各種テストによってチェックした。その詳細については、参考文献Lauer (2003)を参照されたい。開発中のコースは初級編、中級編、上級編の3セクションからなる。初級編では、文法の説明や練習に重点が置かれ、それには幾つかのユニークなゲームも含まれる。ここでの目的は、質の良い英文パラグラフや短いオピニオンエッセイの練習である。ガイドに従って、ステップごとにオンライン上で作文していくうちに、まとまったエッセイ等を書きあげられるような構成になっている。またこのセクションには、英語によるe-mail交換のための掲示板や英文チャットなども含まれる。中級編の課題は、英語で手紙(履歴書や応募書類等を含む)やメールを書くなどの特定の課題に特化した作文練習である。実例にリンクが貼られているので、様々な表現が実際のコンテクストの中でどのように使われるか見ることができる。上級編の主たる課題は、長めのオピニオンエッセイや研究論文を書くことである。様々な学問分野で実際に刊行された短い研究論文を例に取り、そこで使われている表現を解説している。今後の課題は、上記のすべてのセクションをより洗練し、改善していくことである。

平成14年度は英語ライティング能力の向上を目的としたオンラインでの学習教材を作成した。本教材は初級・中級・上級レベルに区分されており、学習者が各自のレベルに応じて学習できるように工夫した。例えば初級では基本的な文法について説明しているほか、接続詞の使用方法、文章やパラグラフの構成の仕方についてアドバイスした。中級ではフォーマルなビジネスレター、履歴書や留学願書など実用的な英文の書き方について説明した。上級ではエッセーや研究論文等、学術的な英文を書く際の注意点について解説した。平成15年には前年に作成した上記の学習教材に改良を加えた。まず、FLASH MXを用いてユニークなフロントページを作成するとともに、様々なタイプの文法問題例(TOEIC, TOEFL式の選択式問題、穴埋め問題、マッチング問題など)を豊富に盛り込んだ。また、指示に従って英文を書いていくと、構成のはっきりした的確なエッセーが完成される、いわゆるガイデッド・パラグラフ・ライティングも加えた。中級レベルではe-mailでよく使用される約100の表現を紹介し、さらに、これらの表現を用いて書かれた実際のe-mailも紹介した。つまり学習者はこれらの表現が、いつ、どのように使われるのか、理解をより深めることができると考えられる。上級レベルには様々な分野から出版された6つの論文(著者及び出版者の許可済)を掲載した。これは中級レベルの教材と同様、学習者は紹介された表現をクリックすることで、実際の論文における各表現の使われ方を学ぶことができる(詳しくはhttp://flare.media.hiroshima-u.ac.jp/english/writing/movie.htmlを参照)。近いうちに、Hot Potatoesのソフトを用いて新たな文法問題例をオンラインにより提供する予定である。また広大生のためのチャットとEメール交換広場も実施する予定である。
神経活動依存的な遺伝子発現誘導とシナプス構築の分子機構

マイクロアレイ技術を用い、ショウジョウバエの神経筋シナプスにおいて、シナプス形成の前後や有無に対応したシナプス後細胞(筋肉細胞)での遺伝子発現の変化を検出することにより、シナプス形成・成熟過程において誘導される遺伝子を系統的にスクリーニングし、さらに機能を調べた。その結果、神経支配により発現が抑制される遺伝子のひとつである、転写因子longitudinals lacking(lola)が、筋肉において、グルタミン酸受容体などの複数のシナプス機能分子の発現を転写レベルで制御することを見いだした。シナプスの形成や可塑的過程における長期的な状態変化には、遺伝子発現を介した新たな蛋白質合成が必要であることが知られている。しかし、実際に、どのような遺伝子の発現が誘導され、さらに誘導された遺伝子がどのような働きをすることが、シナプスの形成・成熟や可塑的変化につながるのかについては、ほとんど分かっていない。本研究申請では、この問題に対する解答を得ることをめざし、ショウジョウバエの神経筋シナプスを材料とし、マイクロアレイ技術を用いた解析を行った。昨年までの研究において、神経支配の前と後の発生時期の筋肉を単離し、遺伝子発現のプロファイリングを行ない、約500個の遺伝子の発現量が、再現性よく変化していることを見出した。本年度は、さらに神経支配が起こらない突然変異体prosperoを利用し同様の実験を行い、神経支配依存的に発現に変化を生じるような遺伝子を絞り込むことを試みた。prospero変異体の胚を解剖して展開した試料から、マイクロピペットを用いて個々に筋肉を40本単離した。回収した筋肉よりmRNAを抽出し、増幅後、マイクロアレイ解析のためのプローブとして用いた。得られた遺伝子発現のプロファイルの比較解析により、神経支配の有無によって発現に差のある遺伝子を同定した。さらに、この比較と、シナプス形成の前後の比較のデータをあわせることにより、神経支配により発現誘導されていることが強く示唆される候補遺伝子を71遺伝子、発現抑制されていると示唆される候補遺伝子を11遺伝子同定することに成功した。現在、これらの遺伝子について、機能解析を行なうことにより、シナプス形成における役割を調べている。本研究申請では、この問題に対する解答を得ることをめざし、ショウジョウバエの神経筋シナプスを材料とした研究を行った。昨年度までの研究において、マイクロアレイを用いて、神経支配の前と後、正常胚と神経支配が起こらない突然変異体の比較発現解析を行い、シナプス後細胞(筋肉細胞)において神経支配により発現量が変化し、したがって活動依存的シナプス形成過程に関与する可能性のある遺伝子を約80個同定した。本年度はこれらについて機能解析を進め、転写因子Lola(Longitudinals lacking)が、神経伝達物質受容体であるグルタミン酸受容体のシナプス部の発現量を制御する働きを持つ事を見いだした。RNA干渉法により筋肉細胞のみでlolaをノックダウンしたところ、グルタミン酸受容体サブユニットGluRllA, GluRllBおよびGluRlllのシナプス部の発現量が著しく減少した。またLolaは、受容体以外にも、シナプス後部に局在するシナプス機能分子PAKの発現にも必要であった。さらに解析を行なった結果、Lolaはこれらのグルタミン酸受容体およびシナプス機能分子について、その転写産物量を正に制御していることが明らかになった。本研究の結果は、ショウジョウバエの神経筋結合系において、シナプス部に局在する機能分子を転写レベルで制御する分子を示した最初の例である。Lolaは同時に複数の分子の転写量を制御することで、シナプス構造の形成・維持において非常に重要な役割を果たしていると考えられる。
超音波振動を制御した高速切削による高品位テクスチャの加工

本研究課題では,高速超音波振動切削により,被削性の改善と加工面への規則テクスチャ生成能力を両立した,付加価値のある加工技術を構築することを目的とする.平成30年度は,前年度までに製作した高速超音波切削装置を用いての切削実験ならびにトライボ特性の評価実験装置について改良・整備を行った.まず,規則テクスチャ切削実験であるが,市販の高速スピンドルと電動送りステージを組み合わせた小型自動旋盤形態の加工機に超音波切削装置を組み合わせたものである.規則テクスチャは,超音波振動の条件により変えられることがわかっている.この装置で,主にチタン合金の高速切削試験を行った.試験の結果,チタン合金の通常切削ではびびり振動を引き起こしたが,超音波切削でこれを大幅に減少できることを認めた.また,規則テクスチャは,チタンでもアルミニウムやステンレス鋼と同様に得られることを確認した.このほか,より凹凸の大きな規則テクスチャを得ることを目的に,超音波振動に同期した半径方向振動を与えられる装置の開発を試みたが,満足のいく性能を得ることはできなかった.トライボ特性の評価実験装置について,昨年度は長手方向にストローク運動させる装置へと改良し,旋削面を評価できるようにしたが,試験装置の剛性不足が確認された.そのため,試験装置各部を強化する改良を行った.これにより,トライボ試験中のがたつきを低減し,より安定した試験ができるようになった.以前示したように,超音波切削で生成した規則テクスチャによる摩擦のばらつきが少なく安定した摺動面となることを確認している.そのため,課題研究期間終了後も,多種の試験片を用意し,トライボロジー特性の評価・改善を継続して行っていく予定である.本研究課題では,超音波振動切削加工により,難削材料の被削性を向上させるとともに,規則的な凹凸を切削面に残すことにより,トライボロジー特性(摩擦・摩耗に強い特性のこと)に優れた切削面を得ることを目的とする。そのため,初年度は研究に供するための精密切削試験装置の設計,製作を行った。従来の試験装置では,切削速度,送り速度の設定が有段であり,任意の切削面テクスチャが得られないと考えられるため,市販の高速スピンドル,送りステージを用い,かつ超音波切削工具の傾斜角度を容易に調整できる構造の装置とした。また,切削面へのテクスチャ生成は加工機の精度が大変重要となるため,主軸を空気静圧構造とした方法も検討,試作を行ったが,実用に供せる段階までには至っていない。規則テクスチャの生成の基礎試験として,振動方向を変えて切削した試験片を数種作成,研究協力先でトライボロジー特性の評価試験を行った。試験は,試験片の円筒面にステンレス製のピンを一定荷重で押し当て,油中で軸方向に摺動させたときの軸方向摩擦力を測定し評価した。その結果,主分力方向振動を与えて切削した試験片で摩擦係数の減少ならびに安定性を認めたが,送り分力方向振動を与えて切削した試験片では,トライボロジー特性の改善は認められなかった。試験片のテクスチャを分析・比較すると,主分力方向振動を与えて切削した試験片のほうがテクスチャの凹凸高さが高いことから,トライボロジー特性の改善にはテクスチャ凹凸の高さが重要になると考える。今回,申請時と一部順序が入れ替わって計画が進行している状態である。そのため,1年目で実施予定の振動方向を変化させる手法の開発よりも,3年目で実施予定のトライボロジー特性の評価試験を先に実施しており,全体計画としてはやや遅れている状態であると判断した。本研究課題では,超音波振動切削により,高速切削を行いつつ加工面に規則テクスチャを残す,付加価値のある加工技術を構築することを目的とする。平成28年度は,高速切削で規則テクスチャを得るための切削実験装置ならびにトライボ特性の評価実験装置について設計・製作・整備を行った。まず,規則テクスチャ切削実験装置であるが,市販の高速スピンドルと電動送りステージを用い,小型自動旋盤形態の加工機を製作している。これに,超音波切削装置を組み合わせ,規則テクスチャ加工機とした。超音波切削装置だが,市販の超音波駆動電源,振動素子に,独自設計の工具ホルダーを取り付け,工具選択の自由度を高めている。現在までに製作したホーンでは,TNGG110304形状の超硬合金チップの振動に成功している。以上のように要素された装置で,アルミニウム合金ならびにチタン合金の試験切削を行ったところ,アルミニウム合金の高速切削は可能であったが,チタン合金の切削ではびびり振動を引き起こし,剛性不足があることが判明した。トライボ特性の評価実験装置については,市販の3分力ロードセルと測定物に相対運動を与える駆動機構を製作し組み合わせ構築した。超音波振動を付与して端面切削を行った試験片のトライボ特性を測定した結果,超音波振動なしの慣用切削に比べ摩擦係数の平均値が低減(μ=0.38→0.12)することを確認できた。しかし,被削材材質によっては逆に摩擦係数が増加したものもある。その原因については,切削面の3次元テクスチャの分析などを行い,解明していく予定である。昨年に引き続き,実施項目の順序が入れ替わっている状態である。現在のところ,3年目に実施予定であった,トライボ特性の評価方法の検証,難削材加工性能の評価試験について進行しており,振動方向制御システムについてはシステムが複雑であり,現在のところ実施に至っていない。以上の事から,全体として進行状態がやや遅れていると判断した。

本研究課題では,超音波振動切削により,高速切削を行いつつ加工面に規則テクスチャを残す,付加価値のある加工技術を構築することを目的とする.平成29年度は,前年度に製作した高速切削で規則テクスチャを得るための切削実験装置ならびにトライボ特性の評価実験装置について改良・整備を行った.まず,規則テクスチャ切削実験装置であるが,市販の高速スピンドルと電動送りステージを組み合わせ,小型自動旋盤形態の加工機を製作した.これに,超音波切削装置を組み合わせ,規則テクスチャ加工機としたものである.この装置で,試験切削を行ったところ,アルミニウム合金の高速切削は可能であったが,チタン合金の切削ではびびり振動を引き起こし,剛性不足があることが判明し,剛性の改良に大幅な時間を費やしてしまった.現在は,ステンレス鋼,チタン合金の切削でも安定した切削が可能となったため,試験回数を増やしていく予定である.トライボ特性の評価実験装置については,前年度に市販の3分力ロードセルと測定物に回転運動を与える駆動機構を組み合わせた,「ピンオンディスク」形態の試験機を構築したが,今年度これを長手方向に往復運動させる装置へと改良し,旋削面を評価できるようにした.電磁ステンレス鋼を旋削した試験片のトライボ特性を測定したところ,超音波振動なしの試験片に比べ,超音波切削した規則テクスチャの付いた試験片は平均摩擦係数が低減(μ=0.123→0.116)すること,また摩擦のばらつきが少なく安定した摺動面となることを確認した.摩擦痕の観察の結果,超音波切削し規則テクスチャとなった面では摩耗部が少ないことも確認している.しかし,詳細な現象については解明されていないこと,テクスチャのピッチ・深さなどの影響については調査しきれていないため,これらを継続的に研究していく予定である.昨年に引き続き,実施項目の順序が入れ替わっており,超音波切削装置よりも切削実験の方に重きを置いている状態である.現在のところ,3年目に実施予定であった,トライボ特性評価装置の改良とトライボ特性の評価方法の検証,難削材加工性能の評価試験について進行中で,比較的難削材である,ステンレス合金,チタン合金のトライボ試験片の製作ができるようになった.しかし,加工装置の改良に予想以上の時間を要したため,工具振動装置の改良は後回しとなってしまった.以上の事から,全体として進行状態がやや遅れていると判断した.本研究課題では,高速超音波振動切削により,被削性の改善と加工面への規則テクスチャ生成能力を両立した,付加価値のある加工技術を構築することを目的とする.平成30年度は,前年度までに製作した高速超音波切削装置を用いての切削実験ならびにトライボ特性の評価実験装置について改良・整備を行った.まず,規則テクスチャ切削実験であるが,市販の高速スピンドルと電動送りステージを組み合わせた小型自動旋盤形態の加工機に超音波切削装置を組み合わせたものである.規則テクスチャは,超音波振動の条件により変えられることがわかっている.この装置で,主にチタン合金の高速切削試験を行った.試験の結果,チタン合金の通常切削ではびびり振動を引き起こしたが,超音波切削でこれを大幅に減少できることを認めた.また,規則テクスチャは,チタンでもアルミニウムやステンレス鋼と同様に得られることを確認した.
新規な生体適合性高分子添加材の合成と医用材料の改質に関する研究

本研究ではMPCポリマーをSPUに高分子添加材としてブレンドし、分散状態と表面特性との関係を明らかにすると共に優れたタンパク質吸着抑制及び血小板粘着抑制効果を発現することを見いだした。SPUと共通溶媒に可溶であること、またSPUのソフトセグメント及びハードセグメントとの親和性を期待して、アルキルメタクリレートを共重合モノマーとしたMPC重合体を合成した。SPU、MPC共重合体の溶液を混合し、テフロンシャーレに流延し、SPU/MPC重合体ブレンド膜を得た。得られた膜はMPC共重合体の組成が10wt%まで極めて良好な形状と柔軟性を示していた。SPU/MPC重合体ブレンド膜のXPS分析の結果、リン脂質極性基由来のリンのピークが確認され、MPC重合体のブレンド組成の上昇に伴ってリンの相対比の増大が確認された。また、製膜時に生じる空気面に比較して基材面にMPC共重合体の濃縮が確認された。SPU膜ではドメインは確認されなかったが、ブレンド膜では0.52μmのドメインとして確認された。空気面側に比べ基材面側にドメインが多量に存在し、その分散状態も均一であることが認められた。ブレンド組成の増加による分散状態の大きな変化は認められなかった。ブレンド膜ではSPU膜と同様の応力-歪み曲線を示した。SPU/MPC重合体ブレンド膜の血液適合性に関して、血小板の粘着過程より評価した。静的条件下ではSPU膜では多数の血小板が粘着し、粘着した血小板に活性化が見られ変形しているのが認められた。ブレンド膜では血小板の粘着を効果的に抑制した。SPU/MPC重合体ブレンド膜より口径2mmの人口血管を作製し,ウサギを対象動物として評価したところこれまでにない8ヵ月以上の開存が認められた.本研究ではMPCポリマーをSPUに高分子添加材としてブレンドし、分散状態と表面特性との関係を明らかにすると共に優れたタンパク質吸着抑制及び血小板粘着抑制効果を発現することを見いだした。SPU/MPC重合体ブレンド膜より口径2mmの人口血管を作製し,ウサギを対象動物として評価したところこれまでにない8ヵ月以上の開存が認められた.医用エラストマーとして広く利用されているセグメント化ポリウレタン(SPU)の機械的特性を維持しつつ血液適合性を改善することを目的として,血液適合性に優れた2-メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン(MPC)重合体を高分子添加材として複合化することを企画した.本年度はSPUとの親和性と共通溶媒への溶解性に着目した高分子添加材としての新しいMPC重合体の合成と,MPC重合体を添加したSPU複合膜の特性について検討する.SPUとしてTecoflex 60(TF)を用いた.MPC重合体は対応するモノマーを溶媒に溶解し,AIBNを開始剤としたラジカル重合により合成した.TF及びMPC重合体を塩化メチレン/エタノール混合溶媒にそれぞれ溶解し,均一溶液とした.これを所定の割合で混合しテフロン皿中に流延,溶媒を揮散させることにより均一膜を得た.TFにPMEあるいはPMCを10wt%添加しても均一膜が作成できた.XPSの分析で,SM複合膜表面にリン原子に由来するピークが現れ表面にMPCユニットが存在していること及びPMCを用いると表面に比較的濃縮されて混合されていることがわかった.SM複合膜を水あるいは40%エタノール水溶液に浸漬してもMPC重合体の溶離は認められなかった.力学的特性をS-S曲線より判断すると,MPC重合体の複合化によってもTF膜と変化が認められない.PRPと接触した際の血小板の表面への粘着数はTF膜に比較してSM複合膜では著しい減少が観察された.以上の結果,MPC重合体を高分子添加材としてSPUと複合化することができ,SPUの問題点の一つである血液適合性の改善が可能と結論できた.本研究ではMPCポリマーをSPUに高分子添加材としてブレンドし、分散状態と表面特性との関係を明らかにすると共に優れたタンパク質吸着抑制及び血小板粘着抑制効果を発現することを見いだした。

SPUと共通溶媒に可溶であること、またSPUのソフトセグメント及びハードセグメントとの親和性を期待して、アルキルメタクリレートを共重合モノマーとしたMPC重合体を合成した。SPU、MPC共重合体の溶液を混合し、テフロンシャーレに流延し、SPU/MPC重合体ブレンド膜を得た。得られた膜はMPC共重合体の組成が10wt%まで極めて良好な形状と柔軟性を示していた。SPU/MPC重合体ブレンド膜のXPS分析の結果、リン脂質極性基由来のリンのピークが確認され、MPC重合体のブレンド組成の上昇に伴ってリンの相対比の増大が確認された。また、製膜時に生じる空気面に比較して基材面にMPC共重合体の濃縮が確認された。SPU膜ではドメインは確認されなかったが、ブレンド膜では0.52μmのドメインとして確認された。空気面側に比べ基材面側にドメインが多量に存在し、その分散状態も均一であることが認められた。ブレンド組成の増加による分散状態の大きな変化は認められなかった。ブレンド膜ではSPU膜と同様の応力-歪み曲線を示した。SPU/MPC重合体ブレンド膜の血液適合性に関して、血小板の粘着過程より評価した。静的条件下ではSPU膜では多数の血小板が粘着し、粘着した血小板に活性化が見られ変形しているのが認められた。ブレンド膜では血小板の粘着を効果的に抑制した。SPU/MPC重合体ブレンド膜より口径2mmの人工血管を作製し,ウサギを対象動物として評価したところこれまでにない8ヶ月以上の開存が認められた.
プレシナプスにおけるCaチャネル複合体の形成及び制御機構に関する研究

シナプス前終末からの神経伝達の放出においては、活動電位依存的な細胞外からのカルシウムイオン(Ca^<2+>)流入が不可欠であり、それを制御しているのが電位依存性Ca^<2+>チャネルである。我々は、Rab3結合タンパク質として同定されたRIM1が電位依存性Ca^<2+>チャネルβサブユニットに結合してCa^<2+>チャネル活性を持続させ、その結果として神経伝達物質の放出が増大されることを報告した。RIMタンパク質には、4種類のサブタイプ(RIM1-4)が報告されている。そこで、RIM2-4に着目し、その生理的意義の解明を行った。様々な実験結果から、RIM2-4もRIM1と同様にCa^<2+>チャネル活性を制御することで神経伝達物質放出に関わっていることが明らかになった。これまでに申請者が見出したRIM1タンパク質以外にも、アクティブゾーンタンパク質として知られるMunc18がβサブユニットに結合することを見出した。そこで、Munc18とβサブユニットとの結合部位を免疫沈降法、GSTプルダウン法を用いて確認した。また、電位依存性Ca2+チャネル活性に対するMunc18の効果をBHK細胞を用いた組み換え発現系によって評価した。RIM1はPKAあるいはSADキナーゼによるリン酸化を受ける。興味深いことに、SADキナーゼによるリン酸化部位はβサブユニットとの結合部位に含まれており、相互作用を修飾する可能性が高い。そこで、これらのリン酸化がRIM1とβサブユニットとの結合にどのような影響を与えるかを評価した。SADキナーゼの発現プラスミドは、大塚稔久准教授(富山大学)から供与していただき、BHK細胞を用いた電位依存性Ca2+チャネル安定発現株を用いて、SADキナーゼの効果を評価した。昨年度までに、Rab3結合タンパク質として同定されたRIM1が電位依存性Ca^<2+>チャネルβサブユニットに結合してCa^<2+>チャネル活性を持続させ、その結果として神経伝達物質の放出が増大されることを報告した。そこで、本年度は、RIM2-4に着目し、その生理的意義の解明を行った。RIM2-4の発現分布についてウェスタンブロッティングおよびin situハイブリダイゼーション法を用いて評価したところ、RIM1と同様に主に脳に多く発現することがわかった。Ca^<2+>チャネルに対する親和性について評価したところ、RIM2はRIM1と同様の親和性を持っていたが、RIM3およびRIM4の親和性はRIM1に比べて低かった。Ca^<2+>チャネル活性に対する各RIMサブタイプの効果は、Ca^<2+>イメージングおよび電気生理学的手法を用いて評価した。BHK細胞を用いた組み換え発現系において、RIM1と同様に、RIM2-4の過剰発現によりCa^<2+>チャネル活性が劇的に持続した。また、内在的にRIM2-4を発現するPC12細胞においては、siRNAを用いたRIM2-4のノックダウンによりCa^<2+>チャネル活性が減弱し、またその遺伝子レスキューによりCa^<2+>チャネル活性が回復したことから、nativeの細胞においてもRIM2-4はCa^<2+>チャネル活性を制御していることが分かった。神経伝達物質の放出に関してPC12細胞を用いて評価したところ、RIM2-4を過剰発現することで上昇し、RIM2-4をノックダウンすることで損なわれた。すわなち、RIM2-4もRIM1と同様にCa^<2+>チャネル活性を制御することで神経伝達物質放出に関わっていると言える。
マウス運動神経培養系の確立と応用-新規運動神経栄養因子の同定-

マウス生後脊髄の長期組織培養法を確立した。脊髄採取時期について、生後2日目が、4日目、8日目に比較して、運動神経細胞が、数および形態に関して、良好に保たれることを明らかにした。この系を利用し、グルタミン酸毒性に対して、抗てんかん薬として広く使われているバルプロ酸(VPA)が神経細胞死を抑制することを明らかにした。さらにSOD1マウス(G93A low copy)に投与し、発症時期はかわらないものの罹病期間を36日延長することを明らかにした。近年VPAは、抗てんかん薬としての作用以外に、Bc12、HSP70の増加、HDAC(histone deacetylase)、GSK 3βの抑制などを介した、細胞死抑制作用が、注目されている。我々は、神経変性疾患モデルにおいて、はじめてVPAの治療薬としての可能性を明らかにできた点は、当研究の大きな成果である。また、VPAは、抗てんかん薬として広く使われており、ヒトへの応用について早急に検討すべき薬剤である。マウス生後脊髄の長期組織培養法の有用性が示されたことから、さらに有効な薬剤のスクリーニングの準備が整った。増殖因子であるhepatoma-derived growthfactor(HDGF)の神経系における役割を検討した。HDGFは、神経細胞核内に局在し、細胞外に分泌されること、さらに細胞外に添加すると神経栄養因子として働くこと、核内HDGFは、神経細胞の生存に深くかかわっていることを明らかにした。今後は、神経細胞の発生過程での役割、神経変性疾患などにおける病的状態における役割の解明、さらには、治療薬としての可能性が期待される。1.マウス生後脊髄の組織培養法の確立(slice culture):脊髄の組織培養は、今までラットで行われてきたが、遺伝子改変動物は主にマウスであり、マウスの脊髄組織培養法を確立することは意義が大きい。しかし、一般にマウスの神経細胞は、ラットに比較し、脆弱であり困難であった。我々は、生後の脊髄採取時期の検討をおこなうとともに、各過程を再検討し、生後2-4日の脊髄にて、再現性のある培養が可能であることを明らかにした。現在培養下で筋萎縮性側索硬化症モデルを作製し、様々な薬剤の効果について、検討中である。2.マウス胎生期準純運動神経培養系の確立:胎生期13日のマウス脊髄腹側を単離し、トリプシン、DNase処理にて細胞を採取し、Optiprepにより分画することで、再現性のある運動神経細胞が、90%以上の純度で培養できることを明らかにした。3.新たな神経栄養因子の同定-発現部位、発現時期の検討-:HDGF(Hepatomap-derived growth factor)は神経組織以外では、細胞増殖因子として報告されているが、神経組織において検討した報告はない。我々は、in situ hybridizationおよび免疫組織染色にて、生後マウスでは主に神経細胞が染色されることを明らかにした。またnecrosisによる細胞死モデルではHDGFが放出されるが、、apoptosisモデルでは核にとどまることを明らかにした。今後は、海馬および2.のマウス胎生期準純運動神経培養系にて、autocrineあるいはparacrineに働く神経栄養因子としての可能性に関して解析するとともに、様々な病態におけるグリア細胞に対するHDGFの役割について検討していく予定である。生後マウス脊髄組織培養系の応用:ALSの治療薬をめざした研究は、ヒト変異SOD1 transgenic miceに投薬評価して行われるのが一般的であるが、必要なtransgenic miceの維持に経費、労力、時間がかかるなど、問題点がある。昨年度、当研究にてマウス脊髄の組織培養法を確立した。これらの系は、通常ラットで行われるが、マウスでは細胞死に陥りやすいなど困難であった。マウスを使用することで、変異SOD1を含むtransgenic miceや細胞死関連のknock out miceが使えるなど、応用範囲が急速に広くなった。この系を利用し、我々は、薬剤Yの有用性を明らかにした。

さらにSOD1マウス(G93A low copy)に投与し、発症時期はかわらないものの、罹病期間を37日延長した(論文投稿中)。この薬剤Yは、既に他の目的で使用されている薬剤であり、かつ罹病期間を延長したことは、発症後服薬をはじめる患者にとってすぐにでも投与できる点で、早急に検討すべき薬剤と考える。新たな神経栄養因子HDGF:増殖因子であるhepatoma-derived growthfactor(HDGF)の神経系での役割について検討した。海馬神経細胞培養系にて、HDGFは神経細胞核内に局在し、細胞外に分泌されること、さらに細胞外にHDGFを添加することにより神経栄養因子として働くこと、またsiRNAを使ったHDGF産生抑制実験から、核内HDGFは神経細胞の生存に深くかかわっていることを明らかにした(論文投稿中)。
口腔扁平上皮癌の非侵襲的診断用検査ツールの開発

本研究では口腔扁平上皮癌細胞が発現異常を示す分泌タンパク質を解析し唾液・血液等から分泌異常が検出可能な口腔扁平上皮癌の有力な分子マーカーの同定を試みた。表皮角化細胞株、口腔扁平上皮癌由来細胞株(6株)、および各々の培養液を使用した。2D-DIGE法、LC/MS/MS法を用いて口腔扁平上皮癌由来細胞株およびその培養液に共通して発現異常が認められるタンパク質を解析した。本研究の結果、口腔扁平上皮癌細胞の7種類の分泌タンパク質の異常を検出することに成功した。本研究では口腔扁平上皮癌細胞が発現異常を示す分泌タンパク質を解析し唾液・血液などから分泌異常が検出可能な口腔扁平上皮癌の有力な分子マーカーの同定を試みた。実験材料は、表皮角化細胞株、口腔扁平上皮癌由来細胞株(6株)、および各々の培養液を使用した。同定したタンパク質群からSwiss-Protデータベースを用いて分泌タンパク質をリストアップした。表皮角化細胞と比較して口腔扁平上皮癌由来細胞株に共通して統計学的に有意に発現亢進を示すタンパク質は49スポット、発現低下を示すタンパク質は77スポットであった。これらをLC/MS/MS法にて解析し重複したタンパク質を除く92種類のタンパク質を同定した。その中でデータベースを検索した結果、分泌タンパク質はSYK、ANXA2、AMBPの3種類であった。培養液中のタンパク質の比較では統計学的に有意な発現異常タンパク質は39スポット認められたが、そのうち36スポットはウシ血清由来でありヒト由来のタンパク質はJHD2C、PRSS3、TM14Eの3種類であった。今回は他科領域で発現異常の報告のあるAnnexinA2について解析を進めた。免疫組織化学染色法を用いて臨床検体を用いた検証実験を行ったところ31症例中23症例(74%)にAnnexinA2の発現低下が検出さた。本研究の結果、口腔扁平上皮癌に関連した6種の分泌タンパク質の異常が検出された。とくにAnnexinA2は口腔扁平上皮癌細胞で高頻度に発現が低下する分泌タンパク質であり、口腔癌患者の唾液から実際にAnnexinA2の発現異常が高精度に検出可能であれば、低侵襲で採取可能な唾液を用いた口腔癌のスクリーニング検査法の開発などに貢献できる可能性が示唆された。リストアップされたタンパク質群については、GO Slim機能解析、およびPathway解析を行った。2D-DIGE法の結果、表皮角化細胞と比較して口腔扁平上皮癌由来細胞株に共通して統計学的に有意に発現亢進を示すタンパク質は49スポット、共通して発現低下を示すタンパク質は77スポット認められた。これら126スポットを質量解析し、翻訳後修飾などの影響で重複したものを除く92種類のタンパク質を同定した。GO Slim機能解析の結果、リストアップされたタンパク質群の局在は細胞全体が最も多かった。分子機能では結合に関与するタンパク質が多かった。また既知の遺伝子ネットワークにアクセスした結果、29の既知pathwayがヒットした。分泌タンパク質はSYK、ANXA2、AMBPの3種類であった。培養液中のタンパク質の比較では統計学的に有意な発現異常タンパク質39スポットのうち36スポットはウシ血清由来でありヒト由来のタンパク質はJHD2C、PRSS3、TM14Eの3種類であった。今回、口腔扁平上皮癌細胞の6種の分泌タンパク質の異常が検出された。JHD2C、TM14Eについては報告がなく未知のタンパク質であるが新規分子マーカーとなる可能性が示唆された。平成23年度の実験計画は以下の通りであった。(1)正常口腔粘膜表皮角化細胞と口腔扁平上皮癌由来細胞株を蛍光標識二次元電気泳動法(2D-DIGE)を用いて網羅的にタンパク質発現解析を行う。(2)口腔扁平上皮癌由来細胞株に共通して発現亢進しているタンパク質スポットを質量分析し、ペプチドマスフィンガープリンティング法にて同定する。(3)正常口腔粘膜由来表皮角化細胞の培養液と口腔扁平上皮癌由来細胞株の培養液を2D-DIGE法を用いて網羅的にタンパク質発現解析を行う。(4)口腔扁平上皮癌

由来細胞株の培養液に共通して発現亢進しているタンパク質スポットを質量分析し、ペプチドマスフィンガープリンティング法にて同定する。(5)(1)(2)でリストアップした口腔扁平上皮癌細胞に共通して発現亢進しているタンパク質でありかつ(3)(4)でリストアップした口腔扁平上皮癌由来細胞株の培養液中でも発現亢進しているタンパク質が、口腔扁平上皮癌細胞が、特異的に培養液中に分泌しているタンパク質であることが期待できる。(6)(5)のタンパク質をWestern blotting法により、抗体を用いた確認実験を行う。であった。口腔扁平上皮癌由来細胞株とその培養液に共通して発現亢進しているタンパク質は同定できなかったが、口腔扁平上皮癌由来細胞株に共通して統計学的に有意に発現亢進を示すタンパク質を49種類、共通して発現低下を示すタンパク質は77種類の126種類を質量解析し、翻訳後修飾などの影響で重複したものを除く92種類のタンパク質を同定できたこと。また培養液中のタンパク質の比較では統計学的に有意な発現異常タンパク質39種類のうち36種類はウシ血清由来でありヒト由来のタンパク質はJHD2C、PRSS3、TM14Eの3種類のみであったが、目的の候補タンパク質を多数リストアップすることができた。平成24年の研究計画としては以下の通りである。(1)今回リストアップできた候補タンパク質が口腔癌患者の唾液、血液から検出可能か検討する。実際に検体を用いた解析となる。Western blotting法による抗体を用いて、健常者全唾液、口腔癌患者の手術前の全唾液、手術後3カ月の全唾液、手術後6カ月以降の全唾液から候補タンパク質が検出可能か解析する。期待する目的タンパク質は、健常者全唾液からは検出されず、口腔癌患者の手術前の全唾液からは検出され、さらに腫瘍切除術術後の全唾液からは検出されなくなるタンパク質であり、このようなタンパク質を多数リストアップし、診断用キットの作成に利用する。(2)同定した候補タンパク質群についてパラフィン包埋手術検体を用いて抗体による免疫組織化学染色を行い、タンパク質の局在と口腔扁平上皮癌組織での発現亢進を確認する。また、手術時に採取した臨床検体より直ちにmRNAおよびDNAを採取し、定量的Real-Time PCR法を用いて、口腔扁平上皮癌組織のmRNAの発現亢進、DNAのコピー数異常を確認する。(3)さらに抗体を用いてWestern blotting法により検体数を増やして全唾液中のタンパク質発現状況を解析する。平成24年の研究費の使用計画はプラスチックウェアー類、一般核酸用試薬、抗体用試薬などの消耗品がほとんどである。残りは論文作成費用、国内外学会出張旅費等である。設備品などの購入予定はない。
国民的歴史学運動の京都地域における展開過程に関する研究

本研究は、1950年代に全国各地で展開された国民的歴史学運動の、京都地域(京都市及び周辺地域)における展開過程や、教育現場・文化行政などへの影響を明らかにするものである。京都民科歴史部会・京都教職員組合・奥丹後地方教職員組合の資料の調査・検討、関係者の聴き取り調査を行い、1950年代当時の状況を知り、各団体の所蔵資料目録を作成した。また紙芝居「祇園祭」(1952)の再現上演を行い、これらの背景や影響を分析した。(1)目的本研究は、第二次世界大戦後、1950年代を中心に日本各地で展開された国民的歴史学運動の、京都地域(京都市及び周辺地域)における展開過程や、教育現場・文化行政などへの影響を、新出史料の調査検討と関係者からの聴き取りによって明らかにする。地域の戦後史を知る上で基礎となる史料情報を発掘・整理し、同時期に広く見られた他の文化・教育運動との相互関連について考察することで、この運動を様々な立場の人々にとっての「文化的経験」として定義し直す。(2)内容(1)日本史研究会・京都民科歴史部会等の学会所蔵資料、京都教職員組合・奥丹後地方教職員組合や地方史サークル等の資料の所在を確認し、調査して目録を作成する。(2)戦後歴史学・地域教育を担った研究者・教育者や一般市民から、1950年代の京都周辺地域における歴史学研究や教育運動等の実態に関する聴き取り調査を行い、貴重な証言を記録する。(3)調査・研究結果を随時公開するとともに、データベース化し、今後の利用に供する。以上を研究代表者が主催する「戦後歴史学ワーキンググループ」の関西の若手研究者数名(研究協力者)とともに進めていく。1950年代を中心に京都地域で展開された国民的歴史学運動の展開過程、教育現場・文化行政などへの影響を明らかにするため、本年度は以下の活動を行った。(1)資料調査京都教職員組合所蔵資料については、京都教育センター資料室での資料整理・目録作成作業を計13回実施し、国民的歴史学運動関係資料についての概要をとらえるとともに、今後の資料保全作業の見通しを立てた。奥丹後地方教職員組合所蔵資料については、2008年3月16・17日に研究協力者7名とともに調査を行い、全容を確認した。京都民科歴史部会所蔵資料については全体の確認後、紙芝居「祇園祭」(1952年作成)フィルム版のデータ化を行うとともに、国民的歴史学運動に関わる資料を選んで写真撮影した。さらに熊本・福岡・東京・浦和にて藤間生大氏関連資料の調査を行い、年譜と著作目録を作成した。(2)聴き取り調査市原寿文氏(静岡市文化財保護審議会)・井ケ田良治氏(同志社大学名誉教授・藤間生大氏(元熊本学園大学教員)から、国民的歴史学運動の実体験について聴き取りを行い、音声データを記録し、一部を文字化した。(3)研究成果の公表2007年11月11日に京都大学で行われた京都教研集会特別分科会にて、「若者の歴史意識の現状」に関する報告をワーキンググループとして準備した。また2008年2月24日に京都教育センターにおいて、『昭和史論争を問う』(日本経済評論社)の書評会を開催し、和田悠氏(共著者)・岩井忠熊氏(立命館大学名誉教授)をコメンテーターとして招いた。研究協力者の里井直彦(大阪市立大学大学院)は本研究の調査で得た知見をもとに修士論文「戦後地域社会における教育活動の展開-京都旭丘事件を事例として-」を提出し、現在投稿中である。また(1)の京都民科歴史部会所蔵資料調査で確認した紙芝居「祇園祭」については、2008年7月に日本史研究会主催の市民講演会で研究代表者が報告することが決まり、現在関連資料の調査・検討中である。1、資料調査京都教職員組合所蔵資料については、京都教育センター資料室での資料整理・目録作成作業を実施し、概要をとらえるとともに、今後の資料保全作業の見通しを立てた。奥丹後地方教職員組合所蔵資料については、2008年10月4・5日と2009年3月12・13日に、研究協力者5名(3月は8名)とともに調査を行い、全容を確認した。さらに東京にて関連資料の調査を行った。2、聴き取り調査松尾尊兌氏(京都大学名誉教授)、脇田修氏(大阪大学名誉教授)、池田富氏(元京都市立小学校教員)、奥丹後教職員組合教員(堀江保次氏ほか5名)、から、国民的歴史学運動や戦後京都における教育運動について聴き取りを行い、音声データを記録し、一部を文字化した。3、研究成果の公表

2008年7月13日に京都市内で行われた日本史研究会・京都民科歴史部会共催の市民講演会『祇園祭-よみがえる歴史とイメージ-』で研究代表者が「紙芝居『祇園祭』の再発見」と題する報告と、半世紀ぶりに復原した紙芝居の学生サークルによる実演を行い、150名余の参加者から好評を博した。『毎日新聞』や『京都新聞』等の地方紙、NHK京都ローカルのニュースでも本企画が取り上げられた。また2009年1月24日に京都教育文化会館において開催された京都教育センター研究集会にて、研究協力者の生駒佳也(京都大学大学院)が、京都教職員組合資料を用いた修士論文の内容をもとに、1950年代の京都の教育状況に関する小報告を行った。1950年代を中心に京都地域で展開された国民的歴史学運動の展開過程、教育現場・文化行政などへの影響を明らかにするため、以下の活動を研究協力者とともに行った。(1)継続中の資料調査:京都教職員組合所蔵資料については目録を作成し、概要をとらえるとともに、今後の資料保全作業の見通しを立てた(計5回)。奥丹後地方教職員組合所蔵資料については目録を作成し、全資料を京丹後市史編さん室へ移管した(計2回)。さらに国会図書館等にて関連文献・資料の調査・収集作業を行った(計2回)。(2)新資料の発掘および聴き取り調査:奥丹後教職員組合教員堀江保次氏所蔵の映像資料を調査した。また戦後京都における科学運動・部落解放運動について東上高志氏(元部落問題研究所長)の聴き取りを行い(計2回)、録音データを原稿化するとともに、氏の手元に紙芝居『祇園祭』の別版があることを確認した。さらに、神話学・日朝関係史研究者の故三品彰英氏(元大谷大学・同志社大学教授)旧蔵資料を守山市にて発見し、内容の調査と目録の作成を行った(計3回)。(3)研究成果の公表:2009年9月13日に京都教育文化会館で開催された京都教育センター公開研究会にて、研究協力者の生駒佳也(徳島市立高等学校教員)が戦後京都の教育状況について、また櫻澤誠(日本学術振興会特別研究員)が戦後沖縄の教職員運動について、上記(1)の調査成果などを基にした報告を行った。また研究代表者(田中)が三品彰英氏関係資料を用いて、戦前・戦時中の神話学史の論考「三品彰英の神話研究-その出発点」を作成した(『近江の文化と伝統』上巻所収、2010年秋刊行予定)。さらに、昨年度に発掘・再現した京都民科歴史部会所蔵の紙芝居『祇園祭』について、花森重行が「国民的歴史学運動期における政治の多様性-民科京都支部歴史部会の紙芝居『祇園祭』に即して-」と題する論文を公表した(『新しい歴史学のために』275号)。奥丹後地方教職員組合所蔵資料については目録を作成した(計2回)。さらに国会図書館等にて関連文献・資料の調査・収集作業を行い、歴史学研究会大会に参加して情報交換を行った(計3回)。(2)新資料の発掘および聴き取り調査:京都府の高津八幡宮にて、近代の神社に関する文書調査を行った(計1回)。(3)研究成果の公表:研究代表者(田中)が2009年度に調査した三品彰英氏関係資料を用いた論考「三品彰英の神話研究-その出発点」を発表した(『近江の文化と伝統』上巻所収、2010年6月)。
特異な確率偏微分方程式に対する近似理論の正則性構造理論による研究

また正則性構造理論やパラコントロール解析自体に手を加え,その応用範囲を広げるという目標を持って研究を行なった.特異な確率偏微分方程式の繰り込みに関する理論にはHairer氏の正則性構造理論とGubinelli氏,Imkeller氏,Perkowski氏のパラコントロール解析があるが,それぞれに長所と短所がある.正則性構造理論は繰り込み計算を高度な代数構造に昇華している一方,新しい概念が多く,理論展開は複雑である.パラコントロール解析では代数的な考察は進んでいないが,既存の実解析の道具を使えるという利点がある.現在はどちらの理論もトーラス上で展開されているが,より複雑な問題を扱うにはいまの理論自体に手を加える必要がある.そのため,まずはトーラス上で二つの理論が完全に同値であることを示すことにより,両者の長所を組み合わせた新しい理論を展開しようとした.今年度は以下の考察を得た.1.与えられた確率偏微分方程式に対し,正則性理論の意味での解はパラコントロール解析を使って書き直すことができる.この時いくつかの係数は不要となり,情報が簡略化される.2.パラコントロール解析の意味での解を正則性構造理論で書き直すには,代数的な条件を課す必要があると思われるが,解決には至っておらず,現在も研究を進めている.翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。今年度は特異な確率偏微分方程式(SPDE)の時間大域的可解性について研究した。Hairerの正則性構造理論やGubinelli-Imkeller-Perkowskiの擬被制御解析によって、いくつかの特異なSPDEの「繰り込み」理論が確立されたが、いくつかの非線形な方程式については時間局所的適切性しか分からなかった。報告者は次の二点の研究を行い、ある条件下では時間大域的適切性を示すことに成功した。特異なSPDEの「繰り込み」の意味での解の性質を調べることが目標であったが、そのためにはまず時間大域的可解性を示すことが必要であった。この点で今年度は研究が順調に進展したと言える。研究実績1.の多成分KPZ方程式については、係数にある条件を課す必要があるものの、時間大域的適切性だけでなく平衡測度の具体的な形まで求めることができ、大きな成果が上がった。研究実績2.の3次元CGL方程式については、平衡測度に関する結果は得られていないが、ひとまず時間大域的可解性が分かったことで今後の研究の足がかりを十分に築くことができた。また正則性構造理論やパラコントロール解析自体に手を加え,その応用範囲を広げるという目標を持って研究を行なった.特異な確率偏微分方程式の繰り込みに関する理論にはHairer氏の正則性構造理論とGubinelli氏,Imkeller氏,Perkowski氏のパラコントロール解析があるが,それぞれに長所と短所がある.正則性構造理論は繰り込み計算を高度な代数構造に昇華している一方,新しい概念が多く,理論展開は複雑である.パラコントロール解析では代数的な考察は進んでいないが,既存の実解析の道具を使えるという利点がある.現在はどちらの理論もトーラス上で展開されているが,より複雑な問題を扱うにはいまの理論自体に手を加える必要がある.そのため,まずはトーラス上で二つの理論が完全に同値であることを示すことにより,両者の長所を組み合わせた新しい理論を展開しようとした.今年度は以下の考察を得た.1.与えられた確率偏微分方程式に対し,正則性理論の意味での解はパラコントロール解析を使って書き直すことができる.この時いくつかの係数は不要となり,情報が簡略化される.2.パラコントロール解析の意味での解を正則性構造理論で書き直すには,代数的な条件を課す必要があると思われるが,解決には至っておらず,現在も研究を進めている.今年度残された課題の一つである3次元CGL方程式の平衡測度の研究を進めたい。また多成分KPZ方程式について得られた結果を、周期境界条件だけでなく一般の境界条件または非有界領域に拡張する研究も行っていく。正則性構造理論や擬被制御解析の一連の研究では、定義域の拡張についてはいくつか関連研究があるものの、平衡測度まで踏み込んだものはまだ多くない。また別の問題として、近年確立されてきた高階擬被制御解析についての研究も行いたい。これは擬被制御解析の適用範囲を広げるためにBailleul氏(Universite de Rennes 1)らによって提案された理論である。その試験運用として2階確率微分方程式の繰り込みをBailleul氏らと研究する予定である。
新規抗アポトーシス遺伝子BSACの機能解析

BSACの標的配列を決定するために、種々のプロモーター配列を有するレポーターベクターを用いて検討した結果、BSACはCArG boxと呼ばれるA+Tに富む特異的なDNAの配列を認識して、強い転写活性化能を発揮していることが明らかとなった。また酵母の転写因子であるGAL4のDNA結合配列とBSACの種々の欠失変異体との融合タンパクを用い、GAL4依存性の転写活性化能を検討した実験より、BSACの転写活性化ドメインはC末側に存在するプロリンに富む185個のアミノ酸よりなる領域に存在することが明らかとなった。一方BSACの種々の欠損変異体をMyc-tagを付加して発現させ、その転写活性化能をCArG boxを有するプロモーターベクターを用いて検討したところ、GAL4融合タンパクとして発現させた場合とは異なり、N末より373個のアミノ酸を欠損させると、BSACの転写活性化能は完全に消失することが明らかとなった。このメカニズムを検討するために、欠損変異体の核内局在を検討した結果、全長のBSACは主に核に存在するのに対し、N末353個のアミノ酸の欠損変異体は主に細胞質内に存在していた。欠損させた領域には核移行シグナルと思われる塩基性のアミノ酸に富む領域が存在することから、このドメインがBSACの核内移行には必須であると考えられた。そこで、最後に種々のBSAC変異体をtraf2^<-/->traf5<-/->MEFに恒常的に発現させ、TNF誘導性細胞死に対する感受性を検討したところ、BSACのN末およびC末側の欠失変異体は,全長のBASCを導入した細胞株と異なり、TNF誘導性細胞死に対する抑制効果はほとんど認められないことが明らかとなった。これらの変異体は転写活性化能が消失していることを考慮すれば、BSACは何らかの細胞死抑制遺伝子の発現上昇を介して抗アポトーシス機能を発揮していると考えられた。BSACはt(1,22)転座により生じる白血病においてOTT/RBM15と呼ばれる遺伝子と融合することが明らかにされている。今後、OTT/RBM15の機能を明らかにし、OTT-BSAC融合遺伝子がどのようなメカニズムにより白血病をもたらすかを明らかにしていく予定である。
福山型筋ジストロフィー（ＦＣＭＤ）の病態の解明と治療法の開発

本課題では福山型筋ジストロフィー(FCMD)の発症機構の解明および治療法の開発を目的として研究を行った。FCMDは日本人に特異的に多い小児期筋ジストロフィーであり、1998年に所属研究室から原因遺伝子がfukutinであることを報告した。所属研究室では2009年独自にFCMDモデルマウスを樹立しており、研究代表者は本年度、個体レベル・分子レベルで病態解析を行った。1.個体レベルでは、寿命・体重の変化・握力を測定し、また、週齢ごとに採取した骨格筋標本の染色により、組織病態を観察・記録した。さらに病気の進行の指標として、細胞膜の脆弱化が原因で起こるCK(クレアチンキナーゼ)の血中への流出を調べた。これら全ての結果から、樹立されたモデルマウスがFCMD患者を模した病態を示し、今後の研究において治療効果の評価に使用可能であることを明らかにした。2.分子レベルでは、fukutinの機能に着目して研究を行った。fukutinはα-ジストログリカンへの糖鎖付加に機能することが既に示唆されており、糖鎖が付加されたα-ジストログリカンが基底膜ラミニンと結合することで筋肉の膜の整合性が保たれる。本課題で用いるモデルマウスは筋特異的にfukutinを欠損させたものであり、このマウスのα-ジストログリカンには成熟型の糖鎖が付加されず、ラミニンとの結合も欠落していた。この結果より、FCMD治療にはα-ジストログリカン糖鎖の回復が重要であることを示した。FCMDの治療法は現在のところ全く見つかっていない。本課題は、新たに樹立したモデルマウスがFCMDの治療効果の評価に使用し得ることを示し、また治療ターゲットとしてα-ジストログリカン糖鎖を提示した点において新規であり、大きな成果を挙げた。