hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
物産・商品陳列所の建築と立地環境の変容に関する研究：都市経営上の役割に着目して

研究機関全体を通じて、〈陳列所〉と立地に関してあげた区分にもとづき、領域内移転、都市内移転、都市外移転を経験した〈陳列所〉について都市整備との関係を検討し、〈陳列所〉の施設と設置主体および有力関係者との関係を踏まえて、それぞれの都市における〈陳列所〉の意義を明らかにした。とりわけ都市内で陳列施設を移転したり再興させたりした京都と茨城の事例については、それぞれ論考としてまとめることができた。本研究の対象は、近代日本の都市に存在した物産陳列所や商品陳列所と称した勧業を目的とした公立の常設陳列施設(いわゆる陳列所)である。都市ごとに異なる陳列所の容態は同地の都市経営ビジョンが都市空間へ表出した局面であろうという認識から、施設の立地環境や設備などの空間的変容と、活動や関係者を通時的に把握し、それらと都市経営との相関関係を明らかにすることを研究の目的とした。とくに施設が移転した事例に着目し、公園等の領域内での移転、都市内での移転、別の都市への移転に分類して調査分析をおこなうとともに、陳列所関係者が参照していたフィラデルフィア、ブリュッセル、シュツットガルトの事例について調査した。おおむね計画通り進展しているため。海外事例の現地調査は次年度に見送ったものの、先行して実施した国内で閲覧できる関連史料の蒐集によって効率的に現地調査を実施できる準備が整った。次年度は最終年度であり、個別の事例調査を進めるとともに、横断的な視点で陳列所の都市経営上の役割について総括したい。平成28年度に実施できなかった欧州での事例調査と、京都府の事例調査を実施する。これらの調査を踏まえて、陳列所と都市経営との関わりについての全体的な分析・考察を行う。建築史・博物館史次年度以後は行政文書や議事録などを重点的に調査するとともに、個別事例の調査を踏まえた横断的な視点からの分析を心がけたい。本年度計画していたフィラデルフィアへの現地調査は、より良い体制が整う次年度以後に実施する予定である。予定していた欧州関連施設への現地調査が実施できなかったため。予定していた調査が実施できなかったため、研究期間の延長を申請し、これが認められた。本年度計画していたフィラデルフィアへの現地調査を見送り、次年度以後に実施することとしたため。現地調査を円滑に進めるため、先行して国内史料の調査と現地協力者との連絡を進めることを重点的に行った結果、より効率的な現地調査を実施するために調査時期を繰り下げた。平成28年度に欧州関連施設についての調査を実施する。次年度使用額はこの延長した調査を実施するために使用する。具体的には、欧州での事例調査と、京都府歴彩館(旧京都府立総合資料館)での史料調査を行う。本年度に予定していたフィラフェデルフィアへの現地調査を、平成27年度以後に実施する。
デュアルフェーズエンジニアリングによるIoT社会に貢献する広帯域電波吸収体の創製

本研究では,磁性ソフト相・ハード相を含み,その二相組織が制御されたモディファイドデュアルフェーズ磁性微粒子によって,次世代通信帯域で機能できる広帯域かつ薄型の電磁波吸収体の開発を目的とする。ハード磁性相にはハードフェライト微粉末,ソフト磁性相には水素プラズマ金属反応法などにて作製したFe合金系微粒子を用い,メカノフュージョン法などによって両相を複合化してモディファイド磁性微粒子とする。
c-Metを介した細胞内情報伝達機構が口腔癌の浸潤に及ぼす影響

1)23症例の口腔扁平上皮癌組織標本について、c-Metの発現を免疫組織学的に検索したところ、過剰発現が認められものは全体の78%であった。また、リンパ節転移をきたした症例や予後不良例でc-Metの発現が強くなる傾向が得られた。2)低浸潤性の口腔扁平上皮癌細胞にc-met遺伝子を導入したところ、8種類の安定した形質転換細胞が得られた。これらの形質転換細胞はすべてノーザンブロットやウェスタンブロットでc-metの過剰発現が確認された。3)HGFの存在下においても形質転換細胞の運動能や浸潤能の顕著な亢進は認められなかった。また、これらの細胞のHGF添加によるscattering effectの変化も明らかでなかった。4)細胞外マトリクッスに対する接着活性について,形質転換細胞と親細胞とを比較検討したところ、HGF存在下においても顕著な差は認められなかった。また、その際に形成される接着斑に集積してくる分子(ヴィンキュリン、パキシリン)や、HGF刺激によるP125FAKのリン酸化についても、両細胞間での顕著な違いは検出できなかった。5)インテグリン分子の発現こついて検索したところ、高浸潤性の癌細胞と低浸潤性の癌細胞で大きな差は認められなかった。しかしながら、高浸潤性の癌細胞はラミニンに対する細胞接着に、複数のインテグリン分子が関与しており、インテグリン分子の機能が亢進していることが推察された。これらのことから、c-metの過剰発現は、ロ腔扁平上皮癌の浸潤能と関連していることが推察されたが、c-metの過剰発現だけでは癌細胞が高浸潤性の細胞形質を獲得するための、充分な条件とは成りえないことが考えられた。癌細胞が高浸潤性となるためには、インテグリンの機能やインテグリンを介する細胞内情報伝達機構が変化することも必要であることが示唆された。現在我々が保有している口腔扁平上皮癌細胞のうち、比較的低浸潤性の細胞形質を呈するCa9-22細胞にc-Metの遺伝子導入を行った。G418含有培養液で選択培養されたクローンがいくつかとれたが、ウエスタンブロットの結果これらのクローン間におけるc-Metの発現レベルはそれぞれのクローン間で異なっていた。比較的高いレベルでc-Metを発現しているクローンを用いて、細胞の運動性や細胞分散などについて実験を行った。まず、クローン上に発現しているc-Metが機能しているかどうかについて検討する目的で、HGFを添加して同受容体のチロシンリン酸化を検討したところ、クローン上に発現しているc-Metのチロシンリン酸化は正常に起こっていることが認められた。同クローンならびにCa9-22親細胞との間の運動能変化をボイデンチャンバーを用いて検索した。HGF添加あるいは非添加の条件下で両細胞間に運動能の大きな差は認められなかった。また、Ca9-22親細胞ならびに同トランスフェクタントともにHGF添加による細胞分散(scattering effect)は観察されなかった。さらにHGF添加時における同クローンの浸潤能の増強は明らかでなかった。これらのことによりc-Metの発現増強は、低浸潤性の癌細胞が高浸潤性の細胞形質を獲得するのに必要かつ充分な条件でなく、癌細胞間における細胞内情報伝達機構の違いが癌細胞の浸潤性関与している可能性が推察された。加えて、細胞外マトリックス受容体インテグリンについて研究を行ったところ、高浸潤性と低浸潤性の癌細胞間にはインテグリンの発現様式には大きな差が認められなかった。しかしながら、インテグリンの基質特異性はこれらの細胞間で異なる結果が得られ、このことが癌細胞の浸潤能と関連している可能性が推察された。このことについてはすでに報告を済ませ、今後さらに詳細な検討を行う予定である。

これらのことから、c-metの過剰発現は、ロ腔扁平上皮癌の浸潤能と関連していることが推察されたが、c-metの過剰発現だけでは癌細胞が高浸潤性の細胞形質を獲得するための、充分な条件とは成りえないことが考えられた。癌細胞が高浸潤性となるためには、インテグリンの機能やインテグリンを介する細胞内情報伝達機構が変化することも必要であることが示唆された。
古典学のための多言語文書処理システムの開発

1.ブータンにおけるチベット文字の一種であるゾンカ文字について、ブータンにおいて現地調査を行って、字形や用法の特殊性について資料を収集するとともに、チベット語の動詞活用表等を入力して、特殊な文字結合等のデータをさらに収集した。2.こうした調査に基づいて、チベット文字の特殊な結合などについての調査結果をデータベース化した。3.上記調査および前年度の調査に基づいて、チベット語処理システムを実装した。4.サンスクリット起源の単語と混在した資料の処理が可能なチベット語のソートシステムを実装した。5.タイのチェンマイにて現地調査を行い、ランナータイ文字に関して、現地でのタイ文字およびランナータイ文字併用の実態を調査し、資料を収集して異体字の様態、文字構成法の分析を行い、メタフォントの試作を行った。6.前年度の調査に基づいて、通常のタイ文字処理システムを実装した。7.前年度の調査に基づいて、クメール文字処理システムを実装した。8.公募研究としての前期2年間の成果とあわせて、ローマ字転写、ナーガリー文字、グランタ文字、カンナダ文字、タミル文字、マラヤーラム文字、ベンガル文字、オリヤー文字、テルグ文字、チベット文字、クメール文字、タイ文字を印刷出力することの出来るシステムを完成させた。1.平成1112年度に開発したシステムに基づき、ベンガル文字・オリヤー文字・テルグ文字の処理系を追加して、インドの主要公用語に用いられる10種の書記体系のうちの8種までを統合して処理して文字出力できるようにシステムを拡張した。2.タイにおいて現代出版資料を収集し、それに基づいて、タイ文字のフォントのプロトタイプをMetafontによって開発した。3.チベット文字のフォントのプロトタイプをMetafontによって開発した。チベットにおける現代出版資料の収集に基づいて、今後完全な形に修正する予定である。4.パーリ語からの借用語を含むクメール語文字システムでの音節型の分析を行うために、『トリピタカ』(南伝大蔵経)のパーリ語版およびカンボジア語版の対訳の第1巻(約400ページ)の入力を行った。5.チベット文字によるサンスクリット表記、及び古代チベット文字文献におけるチベット文字表記の実態調査のために、辞書、古写本、及び金石碑文等のテキスト入力を行い、そのデータに関して、通常のチベット文字の範囲を逸脱する結合文字表記のリストを作成した。6.チベット文字金石碑文に関しては、現地において調査を行った。7.チベット文字のソートプログラムのプロトタイプを開発した。
脊髄小脳変性症の経頭蓋磁気刺激治療法-機能的MRIによる改良

脊髄小脳変性症に対する経頭蓋磁気刺激治療法の刺激最適部位を、機能的MRIを用いて解析した。脊髄小脳変性症患者12例を対象とし、運動課題およびネットワーク解析を行った。老年健常人と比較して、補足運動野-大脳運動野間の機能連関の亢進を認め、補足運動野が経頭蓋磁気刺激治療法の刺激最適部位であることが解明された。次に脊髄小脳変性症患者2例を対象に、補足運動野刺激の経頭蓋磁気刺激治療法を行ったところ、ICRSで「姿勢および歩行」と「運動機能(四肢協調運動)」で改善を認めた。以上より、補足運動野刺激の有用性とその理論的裏付が明らかになった。(目的・方法)脊髄小脳変性症に対し,運動野に反復経頭蓋磁気刺激(rTMS)を行うことで,失調症が改善する報告があるが,画期的な成果を得るには至っていない。rTMSは脳皮質のごく狭く,浅い領域の脳機能を抑制するため,刺激部位の選定が極めて重要である。小脳は大脳皮質運動関連野と回路を形成し,回路内で機能亢進している部位を磁気刺激すると,効果が大きいことが予想されるが,小脳障害による回路内の活動変化は過去検討されておらず,rTMSに最適な刺激部位は不明である。我々は機能的MRI(fMRi),運動課題およびネットワーク解析を用いて,小脳-大脳運動皮質回路および大脳基底核運動回路の機能変化を,非侵襲的にヒトで解析する方法を,世界で初めて開発した。本年度は脊髄小脳変性症患者7例(SCA6とCCAの小脳のみ障害されるタイプ)を対象としてこの方法を用いて, fMRIによる脊髄小脳変性症の病態モデルの作成を試みた。(結果)脊髄小脳変性症患者では,老年健常人と比較して,大脳基底核運動回路の機能連関の亢進を認め,特に運動前野一被殻間で亢進していた。小脳-大脳運動皮質回路の機能連関は低下していた。(意義-重要性)基底核障害モデル(パーキンソン病)では,小脳-大脳運動皮質回路の機能連関が亢進したことから,脊髄小脳変性症では大脳基底核運動回路の機能連関の亢進は予想されていた。しかし,我々の課題では健常人において補足運動野-被殻-大脳運動野間の機能連関が亢進していたが,脊髄小脳変性症で運動前野一被殻間で亢進していた点が,新しい発見であった。rTMSに最適な刺激部位は,補足運動野と予想していたが,今回の結果より運動前野の可能性も出てきた。fMRIで信頼できる結果を得るには最低12例の結果が必要であるので,本年度中にモデルを形成し,補足運動野刺激,および運動前野刺激のrTMSを行う予定である。(目的・方法)脊髄小脳変性症に対し、運動野に反復経頭蓋磁気刺激(rTMS)を行うことで、失調症が改善する報告があるが、画期的な成果を得るには至っていない。rTMSは脳皮質のごく狭く、浅い領域の脳機能を抑制するため、刺激部位の選定が極めて重要である。小脳は大脳皮質運動関連野と回路を形成し、回路内で機能亢進している部位を磁気刺激すると、効果が大きいことが予想されるが、小脳障害による回路内の活動変化は過去検討されておらず、rTMSに最適な刺激部位は不明である。我々は機能的MRI(fMRI)、運動課題およびネットワーク解析を用いて、小脳-大脳運動皮質回路および大脳基底核運動回路の機能変化を、非侵襲的にヒトで解析する方法を、世界で初めて開発した。そこで脊髄小脳変性症患者(SCA6とCCAの小脳のみ障害されるタイプ)を対象としてこの方法を用いて、fMRIによる脊髄小脳変性症の病態モデルの作成を試みた。前年度では7例であったが本年度は10例まで症例を増やした。(結果)脊髄小脳変性症患者では、老年健常人と比較して、補足運動野-大脳運動野間の機能連関の亢進を認めた。(意義・重要性)基底核障害モデル(パーキンソン病)では、小脳-大脳運動皮質回路の機能連関が亢進したことから、脊髄小脳変性症では大脳基底核運動回路、特に補足運動野-被殻-大脳運動野間の機能連関の亢進が予想されていた。今回の結果はこれを支持するもので、rTMSに最適な刺激部位は、補足運動野であることが解明された。現在、1例の脊髄小脳変性症患者に補足運動野刺激のrTMSを行い、刺激前後の臨床症状の変化をICRSで検討している最中である。(目的・方法)

脊髄小脳変性症に対し、運動野に反復経頭蓋磁気刺激(rTMS)を行うことで、失調症が改善する報告があるが、画期的な成果を得るには至っていない。rTMSは脳皮質のごく狭く、浅い領域の脳機能を抑制するため、刺激部位の選定が極めて重要である。小脳は大脳皮質運動関連野と回路を形成し、回路内で機能亢進している部位を磁気刺激すると、効果が大きいことが予想されるが、小脳障害による回路内の活動変化は過去検討されておらず、rTMSに最適な刺激部位は不明であった。我々は機能的MRI(fMRI)、運動課題およびネットワーク解析を用いて、小脳-大脳運動皮質回路および大脳基底核運動回路の機能変化を、脊髄小脳変性症患者12例を対象として解析した。その結果、補足運動野-大脳運動野間の機能連関の亢進を認め、rTMSに最適な刺激部位は、補足運動野であることが解明された。そこで、脊髄小脳変性症患者2例で補足運動野のrTMS(円形コイルで、刺激強度は運動野刺激閾値の1.3倍、運動頻度は0.2Hz、回数は1日100回の刺激を週1回、8週間行い、刺激前後の臨床症状の変化をICRS(International Cooperative Ataxia Rating Scale)で検討した(結果)rTMS開始後、1-8週後で、ICRSの「姿勢および歩行」の項目で13-31%の改善を認めた。12週後(rTMS終了4週後)には改善は消失した。一方「運動機能(四肢協調運動)」、「構音障害」、「眼球運動」では変化なかった。(意義・重要性)脊髄小脳変性症では補足運動野刺激のrTMSにより、小脳症状のうち「姿勢および歩行」が改善することが示された。さらにrTMSの作用機序の理論的裏付けを提供できた。
主要点解析法に基づいたビッグデータのスモールデータ化に関する研究

主要点解析法に基づくビッグデータのスモールデータ化に関する研究では、データの分析が難しいとされる、複雑な構造を持ち、かつ変数の数が膨大となっているようなデータに焦点を当てて研究を展開していった。この研究では、(1)データのクラスタリングを考慮した多変量クラスタワイズ回帰分析法、(2)3相以上の複雑な構造を有するデータの分析方法に着目し、それらの効率的かつ妥当性のあるアルゴリズムを構築した。さらに実際のマーケティングデータにこれらのモデルを適用し、モデルの妥当性について検証するとともに、得られた結果の可視化を考慮したモデルへと拡張した。今年度は主に次の2点に関する研究を展開した.(1) 3相以上のデータ構造を持つ,という複雑な対象問題のための分析アプローチの提案及びその効率的な解の探索アルゴリズムの構築(2)主要点の超平面への拡張とその探索アルゴリズムの提案(1)について,これまでの主要点解析法に関する研究は主に品質管理の諸問題に対して提案され,議論されてきたため,3相以上の複雑なデータ構造が存在する(例えば,顧客ごとの時系列の購買データなど)という課題が存在していた.これに対して2相構造のデータ(例えば,部品ごとの特性値)の分析を想定していた主要点解析法を,3相以上のデータ(例えば,顧客ごとに取る製品ごとのいくつかの項目に対するアンケートデータ)の主要行列解析法へと拡張すると同時に,得られた代表行列の解釈をサポートするような方法論を提案した.また,その適用例を示した.(2)については,これまで点として定義されてきた主要点解析法を超平面へと拡張した.また,その超平面の効率的な求め方について提案するとともに,適用例を示した.ビジネスデータの中には,変数間に線形構造を有しているようなデータが数多く存在するため,そのようなデータのスモールデータ化を考えた場合,線形構造(超平面)を主要点として解釈することが望ましい場合がある.そこで,主要超平面の提案およびその効率的なアルゴリズムの構築を行った.また,可視化方法を提案しそのシミュレーション実験,実データへの適用により,その有効性を示した..(1) 3相以上のデータ構造を持つ,という複雑な対象問題のための分析アプローチの提案及びその効率的な解の探索アルゴリズムの構築に関する研究では,当初の計画通りに研究成果を上げることができた.(2)主要点の超平面への拡張とその探索アルゴリズムの提案に関しては,当初の計画にはない内容であったが,研究を推進するにあたり,重要なトピックであると判断したことから今年度,取り組むことにした.これにより,研究計画が変更になったが,成果を上げる見込みもあり,おおむね順調に進展していると評価することができる.今年度は1年目に引き続き,様々な尺度水準をもつ複数の変量が混在する場合の新しい主要点の解析方法を提案するとともに,これまで得られてきた研究成果をもとにビッグデータのスモールデータ化のための主要点解析法を体系化し,適用例の蓄積進める.さらに,実際に得られた知見をもとに企業にテストマーケティングを行ってもらい,提案手法のビジネス有効性を示すことを目的に研究活動を展開してきた.まず、これまで主要点解析法は離散値をとる変数における代表値を求める問題であったが,これを連続,整数,カテゴリカルな変数が混在している場合の主要点解析法へと拡張していったところ,それまで,別の領域で研究が進められてきた潜在クラスモデルに帰着することがわかった.そこで,潜在クラスモデルを基にした主要点を求めるための方法を提案し,それを実際の企業での複数のデータに適用し,その妥当性について検討した.また,時系列の構造をもつデータに対しても主要点を定義し,その分析方法に関する考察,および正規性の検定の方法を提案した.さらに,前年度から提案してきた様々な手法を実データへと応用し,様々なビジネスにおける問題点を解決してきた。これらの成果については,今後も継続して論文にまとめていく予定である.しかしながら,当初の目標としていた分析結果を基にしたテストマーケティングについては,企業との調整がつかない,または長期的に観測しなければ効果として評価することができないという理由から結果として示すことができなかった.分析結果を実際の意味のあるビジネスアクションに有意につなげることができなかった点に関しては,今後も継続して研究を行い,改善していきたい.主要点解析法に基づくビッグデータのスモールデータ化に関する研究では、データの分析が難しいとされる、複雑な構造を持ち、かつ変数の数が膨大となっているようなデータに焦点を当てて研究を展開していった。今後は、データに含まれる変量を単一のものと限定していた主要点解析法を,連続,整数,カテゴリカルな変数が混在している場合の主要点解析法へと拡張していく..さらに,これまで提案してきた方法論を包括した新しい分析アプローチとしての体系化(多様な尺度水準をもち,かつ3相以上の相構造をもつデータの解析方法を提案すること)に取り組んでいく.これにより,今までは解析することが困難とされていたビッグデータの解析をスモールデータの分析へと変換し,企業における大規模かつ多様なビッグデータの分析を強力にサポートしうる方法へと発展させる.また、様々なビジネスデータを分析し,その適用例を示していく.機械学習当初,行くことを予定していた国際学会が変更になり,また,大学の研究費からの支出が可能となったため、旅費に大きな差が生じた.

また,パソコンの性能が想定よりも良く,自分で研究を展開することができたため,謝金が不要になった.今年度は,大規模データの解析を積極的に行うため,ワークステーションの購入,解析ソフトの購入を計画している.また,成果の発表を国際会議にて行う予定である.
間葉系幹細胞の免疫抑制能に関する研究

難治性急性GVHDの治療法として、MSC投与が試みられているが、その作用機序には不明な点が多い。一方、Th17やTregなどが、急性GVHDの病態生理に深く関わっていると推測されている。我々は、MSCがもつ免疫抑制機序の解明のため、MSCのTh17、Treg分化に及ぼす影響を解析した。その結果、MSCはTreg分化を維持し、Th17分化を抑制することが確認された。さらに、プロスタグランジン阻害薬や、トリプトファン分解酵素阻害薬を添加すると、MSCによるTh17分化誘導抑制が解除された。MSCの産生するPGE2やトリプトファン分解酵素が、Th17分化抑制に重要であると考えられた。初めに、マウス間葉系幹細胞(mMSC)が、マウス脾細胞由来のナイーブCD4陽性T細胞(nCD4)のTh17分化に対する作用を解析した。その結果、mMSCがnCD4のTh17分化を抑制することを見出した。Th17細胞が産生するIL-17は、近年、炎症性サイトカインとして注目されており、GVHDをはじめとする様々な免疫反応において、主要な役割を果たすことが報告されている。mMSCは、Th17分化を抑制することにより、免疫抑制能を発揮すると考えられた。一方、過去の報告とは異なり、我々の実験系においては、mMSCはnCD4のinduced Treg(iTreg)分化については促進しなかった。続いて、mMSCによるTh17分化抑制作用の、原因因子の同定を試みた。transwellを用いて、mMSCのTh17分化に対する作用が、リンパ球-mMSCの直接的な接着によるものなのか、あるいは液性因子などによるものなのか、あるいは両方の因子によるものなのかを検討した。その結果、Th17分化抑制は、主として液性因子によるものであると推測された。そこで次に、その液性因子の同定を試みた。nCD4をTh17分化誘導条件下でmMSCと共培養し、各作用発現候補分子の阻害薬や中和抗体を加え、mMSCのTh17分化抑制作用が、解除されるかを確認した。その結果、過去に我々がmMSCの重要な免疫抑制因子として報告した一酸化窒素(NO)や、EAEマウスに対するMSC治療モデルでTh17分化抑制作用が報告されたCCL2は、Th17分化抑制に関与していないことを見出した。間葉系幹細胞(MSC)は、臨床試験や症例報告などにおいて重症急性GVHDに対する治療薬として良好な治療成績が報告されている。しかしその作用機序はいまだ不明な点も多い。申請者の研究室で行なったTh1,Th2分化誘導条件下でのマウスMSCの免疫抑制能に関する検討から、MSCはTh1分化誘導条件下では著明な分化誘導抑制を示す一方、Th2分化誘導条件下では分化抑制能が軽微である事を明らかとなった。本研究ではTh17、Treg分化に及ぼすマウスMSCの影響について検討した。Th17分化誘導条件下でマウスCD4陽性T細胞を培養すると、マウスMSC共培養群では著明なTh17分化抑制が確認された。続いてそのメガニズムを解析したところ、インドメタシン(プロスタグランジン阻害薬)添加にて、マウスMSCによるTh17分化誘導抑制が解除された。マウスMSC存在下ではPGE_2が多く産生されており、マウスMSCの産生するPGE_2がTh17分化を抑制している事が示唆された。また、1-MT(トリプトファン分解酵素阻害薬)を添加した場合も、Th17分化誘導抑制は解除され、MSCの産生するIDO(トリプトファン分解酵素)がTh17分化を抑制されている事が示唆された。Th17分化にかかわるIL-21やIL-23などのサイトカインや、マウスMSCの重要な免疫抑制因子であるNOの関与は、ほとんど認められなかった。また、申請者の実験系では、マウスMSCによるTregの分化誘導促進能は確認できなかった。これらの結果により、急性GVHDの発症や促進あるいは抑制に大きく関与すると考えられている、新しいT細胞サブセットであるTh17とTregに対するマウスMSCの作用の一端が明らかとなり、免疫抑制メカニズムについての新たな知見が得られた。
遺伝的多様性を高めるヒトの配偶者選択と繁殖行動に関する行動遺伝学的解析

婚姻に関する社会的規制がヒト集団内において繁殖行動にもたらす生物学的意義について分析する目的で、近親婚を好むインドネシア・東ヌサトゥンガラ州の人類集団を対象に、母親もしくは父親の配偶者選択が出自集団の繁殖に及ぼす影響を調査した。近親婚は非近親婚より多産で、死亡する子の数も多かった。近親婚による両親から生まれた子は、異質な遺伝子ハプロタイプに富む集団と比べて、配偶者選択が遺伝的多様性に及ぼす影響が大きく、親によるアレンジ婚では異胞きょうだいが増えることも示唆された。このような社会規制や繁殖行動が家系内への異質素因の取り込みに寄与し、多様性の損失を回避させている可能性が示唆された。グローバル化が進み、社会共進化に伴って伝統的に好まれてきた近親婚が衰退し始めている。近親婚を好む社会では、非近親婚と比べて多産の傾向がある。グローバリゼーションが進み多産から少産に移る過渡期に、このような近親婚を好む社会的慣習が残っている人類集団において、母親もしくは父親の配偶者選択が出自集団の繁殖に及ぼす影響を、ヒト個体群別に生物学的側面から調査解析することを目的とする。対象集団は、インドネシア・ヌサトゥンガラ諸島から選定し、スンバ島とその近隣の島々から抽出することとした。近親婚を好む社会制度が現在も維持されている地域において、縦断的な人口センサスを収集した。これまでに生んだ子どもの出生年、性別、子どもの生存年数、子供を設けた異性の数、子どもの世話(同居)の有無、パートナーとの同居期間、パートナーとの血縁関係、自身の両親の血縁関係、について聞き取り調査を継続した。静脈血もしくは指先穿刺による濾紙血を収集し、DNAを抽出後、母親、父親、子、それぞれについて母親由来のミトコンドリアDNAと父親由来のY染色体のジェノタイピングおこない、シークエンス多様性を調べる。母親もしくは父親の繁殖行動が子どもの生存と配偶者選択に及ぼす遺伝的影響と社会的要因を検証する。また、パートナー間のHLAハプロタイプを同定し、ハプロタイプ類似度を世代間で比較する。親と子それぞれのハプロタイプが、子の配偶者選択において異なるハプロタイプを好むかどうかについて検証する。この検討により血縁婚がヒトの繁殖行動にもたらす生物学的意義について、科学的な実証を試みる。増え続ける世界人口と食糧安全保障の観点から、出生コントロールは次世代環境を保証し評価する上で重要な課題である。また一方で、集団規模の小さい部族社会の弱小化と固有文化の消失を招き、そのような集団は今まさに淘汰される途上におかれている。インドネシア・ヌサトゥンガラ諸島に残っている、近親婚を好む人類集団では、出自による婚姻の社会規制を設けることで、種族としての存続と有資財産や人間の出戻りを防止してきた。このような社会慣習や規制が、集団内の実際のヒトの繁殖行動にもたらす生物学的意義について、家系別に遺伝的多様性と繁殖率を分析することを本研究の目的とする。血縁婚を好むヒト集団について、東スンバ以外に、ヌサトゥンガラ諸島のティモール島、ロンボク島において探索を試みたが、東スンバのものほど社会規制が明白な集団は見つからなかった。調査の対象集団は、近親婚を好む社会制度が現在も維持されている東スンバ県に絞り、縦断的な人口センサス、すなわち人の出生・流入および死亡・転出に関するデータ収集を継続し、世代を遡った血縁関係についての聞き取り調査を実施した。DNA試料を用いた遺伝的解析では、母親由来のミトコンドリアDNA(mtDNA HV1)とY染色体(Y-STR)ハプロタイプを同定し、配偶者間と親子間の比較を検討中である。東スンバとの比較を検討していた別の調査地の選定には至らなかったが、既に収集したDNA試料に関する血縁情報は更新できた。近親婚を好む社会は、グローバル化が進み、社会共進化に伴って衰退し始めている。研究代表者はこれまでに、近親婚は非近親婚と比べて多産の傾向がある一方で、成人前に死亡する数も多い傾向があることを示した。また、配偶者選択において自身に類似する顔をパートナーとして好むかどうかの検証もおこなった。現在、多産から少産に移る過渡期に、このような近親婚を好む社会的慣習が残っている人類集団において、母親もしくは父親の配偶者選択が出自集団の繁殖に及ぼす影響について、遺伝学的な側面から解析することを目的とする。近親婚を好む人類集団では、heterogeneousな集団と比べて、配偶者選択が遺伝的多様性に及ぼす影響が大きい。このような集団では、社会的慣習として自己の意思に寄らない婚姻も多いため、離別も多く、きょうだいは異胞である場合が多い。今年度は、集団内における繁殖行動が子孫の遺伝的多様性を実際に高めている仮説について検証を試みる。対象集団は、血縁婚を好むヒト集団で、インドネシア・ヌサトゥンガラ諸島のスンバ島のスンバ人とした。繁殖行動に関する情報は現地で聞き取り調査により収集した。DNA試料は凍結した全血から抽出した。個体差を生じる因子として、後天的な遺伝子修飾機構に着目し、DNAメチル化解析の手法についての検討に着手した。MeDIP microarrayを用いた網羅的なCpGメチル化解析、バイサルファイトシークエンスによるメチル化部位の同定、遺伝子発現変動との関連について分析方法を開発中である。研究代表者が研究機関を異動したため、研究環境が一変し、当初に計画通りに進まなかった。一方で、新しい実験手法への取り組みを開始し、分析対象の拡充へとつながっている。出生コントロールは、増え続ける世界人口と食糧安全保障の観点から、重要な保健課題である。

近年、社会のグローバリゼーションにより、集団規模の小さい部族社会の弱小化と固有文化の消失を招き、そのような集団は今まさに淘汰される途上におかれている。部族の母集団を維持し、子孫存続や物資調達のために継承されてきた婚姻に関する社会的規制が、実際のヒト集団内において繁殖行動にもたらす生物学的意義について、遺伝的多様性と繁殖率を分析することを本研究の目的とした。近親婚を好む対象集団にインドネシア・ヌサトゥンガラ諸島の東スンバ人を選定した。近親婚が奨励されていて、婚姻を親がアレンジする慣習の残っている対象集団において、母親もしくは父親の配偶者選択が出自集団の繁殖に及ぼす影響を、ヒト個体群別に生物学的側面から調査解析した。近親婚による出生数は、非近親婚のそれを上回り、近親婚では多産の傾向があった。母親もしくは父親の繁殖行動が子どもの生存と配偶者選択に及ぼす遺伝的影響と社会的要因を検証した。近親婚を好む人類集団では、異質な遺伝子ハプロタイプに富む集団と比べて、配偶者選択が遺伝的多様性に及ぼす影響が大きい。また親によるアレンジ婚では、自己の意思に寄らない婚姻が多いので離別や不貞が増加し、異胞きょうだいの増大をもたらしていることが示唆された。そして、家系内の遺伝的多様性は、このような社会規制や繁殖行動により、異質素因の取り込みに寄与し、遺伝多型の均一化を回避するなど遺伝的多様性の増大に成功している可能性が考えられた。婚姻に関する社会的規制がヒト集団内において繁殖行動にもたらす生物学的意義について分析する目的で、近親婚を好むインドネシア・東ヌサトゥンガラ州の人類集団を対象に、母親もしくは父親の配偶者選択が出自集団の繁殖に及ぼす影響を調査した。近親婚は非近親婚より多産で、死亡する子の数も多かった。近親婚による両親から生まれた子は、異質な遺伝子ハプロタイプに富む集団と比べて、配偶者選択が遺伝的多様性に及ぼす影響が大きく、親によるアレンジ婚では異胞きょうだいが増えることも示唆された。このような社会規制や繁殖行動が家系内への異質素因の取り込みに寄与し、多様性の損失を回避させている可能性が示唆された。調査対象地での新たな研究協力者を、インドネシアのティモール島・クパン県、スンバ島・西スンバ県、ロンボク島・中央ロンボク県からそれぞれ得ることができた。インドネシア現地において新しい調査協力者として、インドネシア・マカッサルのハサヌディン大学の研究者に加わってもらえることになった。遺伝子分析において、当初計画にはなかったが遺伝子解析ツールの刷新により、DNAメチル化解析を取り入れた新たな展開を予定している。今年度はDNAメチル化の網羅的解析について新しい研究手法と技術取得に精力を注いだおかげで、先駆的な分析に挑戦することができている。ヒトのメチル化解析の技術は未だ発展途上であるので、情勢を見極めて効率的な手法を鋭選択し、既収集のDNA試料で新しい分析を試みる。計画ではキサ島を対象地としていたが、現地へのアクセスや研究協力者の現況を考慮して、サヴ島もしくはロンボク島において新たな対象者を募る計画である。新しい対象地における研究倫理審査について承認を受けることが先決である。
美的意識の無意識的過程に関する認知脳科学的解明：処理過程と影響過程の統合的理解

人がいかにして美を感じるかという人間性に関わる根源的な問題は近年,心や脳の働きや機能の問題として捉えられるようになり,急速な展開を遂げている。本研究では,「美しさ」の視覚的意識として価値表象に至る時間的過程について,意識に到達する前段階の無意識的処理過程と,美しさの意識化に影響を与える無意識的影響過程について,心理物理実験,脳波測定,fMRI計測等を通して,美が顕在的に意識に至るまでの時間的過程とそれに影響を与える諸要因の因果的過程について,それぞれを無自覚的過程(潜在的,暗黙的)と閾下過程とに切り分けて検討する。
アルツハイマー病モデルラットの記憶障害に対し社会的孤立が及ぼす影響

【目的】「社会的孤立」により認知症の症状が悪化したり、新たな認知症の発症が増加することがある。動物実験では、単独飼育されたラットは集団飼育されたものに比べ、他のストレッサーに対する脆弱性があると言われている。アルツハイマー病の障害の一つに場所見当識障害があるが、疾患モデル動物を用いてこの障害を調べたものはない。本研究で用いた居住型迷路課題は、海馬依存的学習課題であり、一度正しい道順を学習すると1ヶ月経ってもその記憶が保持され、場所見当識の解析に適した課題であるといえる。先行実験によって、アミロイドβ(Aβ)脳内持続注入ラットが、居住型迷路課題において新規学習障害は起こさないが、長期の参照記憶障害を引き起こすことを掴んでいた(第35回日本神経科学大会にて発表)。この結果を踏まえ、本研究では単独飼育という居住環境がAβ投与により生じた参照記憶障害にどのような影響を及ぼすかを検討した。【方法】単独飼育群は生後13週以降60日間単独飼育し、その後Aβ脳内持続注入を行った。注入から2週間後、居住型迷路の学習(30分、4日間)を行い、学習終了2週間後と5週間後に参照記憶テストを行った。【結果】集団飼育Aβ投与群では学習最終日に比べ、学習終了2週間後、5週間後の課題遂行能力が低下し、単独飼育Aβ投与群でも学習終了5週間後の成績が低下する傾向があった。しかしながら、どの結果もばらつきが大きく、統計的に有意な差はみられなかった。【考察】先行実験では迷路学習を2・3匹で同時に行っていたが、本実験は単独飼育状態を維持するため全ての被験体が1匹ずつ学習を行った。この手続きの変更が課題習得の程度にばらつきを生んだと考えられる。今後は、十分に課題習得できるまで学習を行った上で参照記憶テストを行うことで、アルツハイマー病の記憶障害に対する社会的孤立の影響を検討できるのではないかと考える。
NC(数値制御)放電加工を用いた新しい補綴物製作システムの開発

歯科補綴物を製作するために、新しく数値制御のできる複合放電加工機を試作した。この加工機でけ通常の形彫放電加工のほかに、単純な円柱状、棒状の電極を用いて三次元形状を加工するNC形彫放電加工、二次元の切り落とし加工ができる二次元NCワイヤ放電加工、特殊な滑車とホルダ-を用いてワイヤ電極で三次元形状の加工が可能な三次元NCワイヤ放電加工、更にカッタ-を用いた機械加工ができるNCミリングなどの種々の加工ができる。チタンを用いて加工特性を検討した結果、形彫放電加工では従来のケロシン油中の加工に比べて、脱イオン水中で加工した方が非常に高い加工速度が得られることが伴明した。また水中では直視ができ操作性も良いので技巧操作上も有効であることが判明した。簡単なNCプログラムを作製して、三次元形彫放電加工および三次元ワイヤ放電加工を検討した結果、三次元形彫放電加工では細かい加工も径の小さい電極を使用すると可能であるが、電極の消耗が生じるため精度を保つためには電極の形状修正や補正のプログラムが必要でなり、また電極材質についても更に検討が必要であることが認められた。一方三次元NCワイヤ放電加工ではワイヤ電極を送りながら加工するため電極の消耗がなく高精度の加工が可能であった。しかし先端の滑車の径に制限があり、形状では歯冠咬合形状に対応できず更に改善が必要であることが認められた。放電加工をCAD/CAMシステムに応用するために、本加工機を用いていくつかの可能性に取り組み、NCミリング加工で機械的に電極を作製し、これを用いて形彫放電加工する方法が現状では複雑形状に対応するのにむいていると考えられた。放電加工は、電気条件の設定により常に一定の品質の加工ができ、しかも、ステンレス鋼、クロム系合金、チタン、チタン合金など鋳造の難しい材料や機械加工性の悪い材料の高精度の加工が可能である。マイクロコンピュータを中心とするエレクトロニックス技術の発展は工作機械の分野にも波及し、NC化、CAD/CAM対応化が伸展している。形彫り放電加工機においてもNC化が急速に発展し、その機能が一段と拡張されたものになったが、現在のところ精密に加工した複雑形状の工具電極を複数個必要とする欠点がある。この問題を解決するために、単純形状電極を用いて複雑な三次元形状を加工する。この加工法は円筒形、角柱形など標準化した工具電極を用い、これらの電極を制御プログラムによって適宜交換し、各軸をNC制御して三次元形状を放電加工するもので、現在開発途上にあり多くの問題を含んでいる。今回我々は、新しい考え方として、形彫り放電加工とワイヤー放電加工の組み合わせる方法を考案した。従来のワイヤーの前方運動に加えてワイヤーを対にしてドリル加工に似た回転運動を加味した方法である。この方法によると高精度な三次元形状の加工が可能となる試作放電加工機の完成について、本年度の研究はついやされ、ほぼ完全な試作機が得られた。今後の研究計画として1.工具電極消耗に対する補正を自動的に行えるシステムを試作し、三次元形状加工に関する基礎的な研究を進める点である。2.電極変形量の把握が容易な様にワイヤー径を統一して回転を与えることとし、電極形状の自動計測機構のシステムを組み込んで計測の自動化である。放電加工は、鋳造や機械加工の難しい金属材料の精密加工が可能であるので、歯科においてもクロム系合金やチタン系合金の使用頻度が高まるにつれて導入に対する期待が高まりつつある。一方補綴物をCAD/CAMシステムで製作する試みも検討されている。放電加工をCAD/CAMシステムに組み込むためには加工機のNC化が必要である。そこで初年度に形彫放電加工とワイヤ放電加工機能を備えたNC放電加工機の設計試作を行った。本年度はワイヤ放電加工機の先端の滑車部の改造を行い。三次元のディンプル加工が可能になった。

1.試作機では形彫放電加工も脱イオン水中で行うため、特にチタンを用いて、水加工による加工性を検討した。その結果、ケロシン油中の加工と同程度の加工特性が得られ、しかも表面の汚染が少ないことが判明した。2.ワイヤ放電加工は、形彫放電加工と電源を共有しているため。加工速度には限界があるが、高精度のディンプル加工が可能であった。3.直線および円孤の軌跡のNCプログラミングを作製し、単純な円柱状棒電極を用いてNC加工を行った。また単純な咬合面形状を計測してCAM用のプログラムを作製し、形彫放電加工で三次元形状の加工を検討した。三次元形状の加工は可能であるが、適正な加工を行うには、加工速度と加工機の工具およびテ-ブルの速度(送り)について詳細な検討が必要であることが判明した。4.今後の研究計画は、咬合面の三次元加工を完成するために、加工デ-タの集積と加工プログラムの改良である。また通常の形彫放電加工とNC放電加工を併用した補綴物の製作法について検討を加える。高齢化社会に移行しつつある我が国では、高機能、高品質の補綴物に対する需要が増大し、医療従事者の作業性の改善、生体情報の管理の点からも補綴物の新しい製作システムの開発が望まれている。生体親和性に優れたノンプレシャス合金や形状記憶合金などの機能性材料を補綴物製作に利用するために、我が国では、加工方法として放電加工の検討を行ってきた。放電加工には形彫放電加工とワイヤ放電加工があり、海外では歯冠形状を転写した総型電極を用いた形彫放電加工の適用が行われている。形彫放電加工では電極消耗が問題であるので、電極消耗がなく高精度の加工ができ、しかも数値制御による加工が可能なワイヤ放電加工に注目して研究を進めてきたが、従来のワイヤ放電加工は、切り落としに二次元形状に歯科対応できなかったため、本研究では新たに三次元形状の加工が可能なワイヤ放電加工機の試作を行った。またこの試作機では単純形状の電極を用いたNC形彫放電加工、またグライングを取りつけてNC切削加工を行うこともできる。材料として主にチタンを用いて放電加工特性を検討した結果、従来のケロシン油中の加工よりも脱イオン水中の加工の方が、加工速度が大きくまた表面性状も良好であることが判明した。単純な形状のプログラムを作製して三次元NCワイヤ放電加工を検討した結果、高精度のディンプル形状の加工が可能であったが、歯冠形状に対応するためには工具先端の滑車の寸法について更に検討が必要であることが認められた。放電加工をCAD/CAMシステムに応用するために、直接三次元形状をNC放電加工する方法のほかに、従来の形彫放電加工用の電極製作にNCミリング加工を応用する方法についても基礎的検討を行った。今後計測やCADについても検討を進めていく予定である。
マルチメディア技術と地理情報システムによる橋梁画像データベースに関する研究

戦後50年を経て,橋梁は維持管理が重要な課題になってきた.そのために,国土全域の橋梁あるいは県域全の橋梁など,広域的な橋梁全体の状態を把握しておく必要がある.従来,橋梁の維持管理は,個々の橋梁諸元や補修の経歴が記載された橋梁台帳に基づいて実施されてきた.本研究の目的は,橋梁台帳をパーソナルコンピューター上で運用できる,地理情報システムをインターフェイスとするマルチメディア技術を適用した画像データベースにより実現することにある.パーソナルコンピュータ上で運用する画像データベースでは,橋梁の文字情報だけでなく橋梁の画像や補修の事例を,机上で必要な時に検索できる.この検索において,膨大な数の集団から特定の橋梁を検索するために,文字情報ばかりでなく,河川,道路など,人間が自然に認識できる,地図の情報から検索することが必要である.本研究では,(1)個人が机上で使用する形式の画像データベースと(2)インターネットを介して多数の技術者が広域的に使用する形式の画像データベースを対象にした.この研究の成果を要約すると,次のようになる.(1)地図情報をインターフェイスとする,画像データベースを構成した.地図情報をインターフェイスとすることにより,地形の情報を認識しながら,視覚的に目的の橋梁を検索できる.(2)個人が机上で使用する画像データベースの骨格を,Windows95環境上にあるVisual Basicの言語を使用して構成した.地図情報をインターフェイスとする検索画面を構成にし、CD-ROMに書き込むことにより,簡単に持ち運べるようになる.また,様々な,マルチメディア技術を導入することができる.(3)インターネット上で運用する画像データベースの骨格を,MacintoshをWWWサーバーとするデータベースであるマイバトラ-を使用して構築した.クイッカマブルマップとデータベースをリンクすることにより,地図情報をインターフェイスとする画面を構成した.戦後50年を経て,橋梁は維持管理が重要な課題になってきた.そのために,国土全域の橋梁あるいは県域全の橋梁など,広域的な橋梁全体の状態を把握しておく必要がある.従来,橋梁の維持管理は,個々の橋梁諸元や補修の経歴が記載された橋梁台帳に基づいて実施されてきた.本研究の目的は,橋梁台帳をパーソナルコンピューター上で運用できる,地理情報システムをインターフェイスとするマルチメディア技術を適用した画像データベースにより実現することにある.パーソナルコンピュータ上で運用する画像データベースでは,橋梁の文字情報だけでなく橋梁の画像や補修の事例を,机上で必要な時に検索できる.この検索において,膨大な数の集団から特定の橋梁を検索するために,文字情報ばかりでなく,河川,道路など,人間が自然に認識できる,地図の情報から検索することが必要である.本研究では,(1)個人が机上で使用する形式の画像データベースと(2)インターネットを介して多数の技術者が広域的に使用する形式の画像データベースを対象にした.前者の場合,Windows95上で使用できる.Visual Basicの言語を使用して画像データベースを構成した.また,後者の場合は,MacintoshをWWWサーバーとするデータベースであるマイバトラ-を使用した.この研究の成果を要約すると,次のようになる.(1)地図情報をインターフェイスとする,画像データベースを構成した.地図情報をインターフェイスとすることにより,地形の情報を認識しながら,視覚的に目的の橋梁を検索できる.(2)個人が机上で使用する画像データベースの骨格を,Windows95環境上にあるVisual Basicの言語を使用して構成した.地図情報をインターフェイスとする検索画面を構成にし、CD-ROMに書き込むことにより,簡単に持ち運べるようになる.また,様々な,マルチメディア技術を導入することができる.(3)インターネット上で運用する画像データベースの骨格を,MacintoshをWWWサーバーとするデータベースであるマイバトラ-を使用して構築した.クイッカマブルマップとデータベースをリンクすることにより,地図情報をインターフェイスとする画面を構成した.
Liquid biopsy法による新規副腎マーカーの開発

原発性アルドステロン症は治療抵抗性の高血圧患者の20%を占める。原発性アルドステロン症は外科的処置(腹腔鏡下手術)で治癒が期待できる二次性高血圧であるが、手術後も遷延する高血圧症が約半数に見られ、治療効果が十分とは言い難く、治療効果を正確に反映するバイオマーカーの確立が望まれている。本研究では、治療抵抗性や治療効果を反映する糖鎖構造やcell free DNA(cfDNA)を血液サンプルの網羅的解析から定量検出するLiquid biopsy法の確立を行う。更に摘出組織と比較することにより、Liquid biopsyのサロゲートマーカーとしての有用性を検証する。
実験用魚類の遺伝子破壊低コスト化のための変異濃縮技術の開発

TILLING法による遺伝子変異個体の作製は、数千個体よりなるランダムミュータジェネシスした変異ライブラリーから、目的の遺伝子に変異が導入されている個体を選別するという手順を経る。小型脊椎動物で手軽に扱えるモデル動物として注目を集めているメダカやゼブラフィッシュでは、すでにこの手法により数百種類の遺伝子破壊体が作られている。現在は、数千個体すべてについて目的遺伝子を直接塩基配列決定ないし温度融解曲線を使用する方法で変異探索を行っているが、変異の頻度が低いために効率が極めて悪い。そのために、変異をキャプチャーできるMuトランスポゾンをビオチンタギングし、変異を濃縮する方法を試みた。Muトランスポザーゼが結合するDNA断片を合成し、その末端にビオチンを結合させた。不要部位を後に切断除去するために制限酵素部位を導入した変異型DNAは、大腸菌で発現させたMuトランスポザーゼと結合し、タンパク-DNA複合体を形成した。すでにTILLING法で作製し報告済みのp53変異体と野生型のメダカよりそれぞれ変異部位を含むDNA断片をPCR増幅し、熱変性、アニールによりヘテロデュプレクスを形成させてMuトランスポザーゼ-DNA複合体を反応させたところ、転移反応が観察された。DNAを回収し、塩基配列を決定したところ、目的の部位以外にも転移するなど、感度、特異性ともに十分満足のいく結果が得られなかった。そのため、Muトランスポザーゼによる転移反応から、ビオチン化したオリゴヌクレオチドをT4リガーゼによりアダプターライゲーションする方法に変更した。Muで確立した手法によりp53ヘテロデュプレクスからDNA断片を回収して塩基配列を決定したところ、変異を含む断片が効果的に沈降されていることが確認された。現在イルミナGAIIxを用いた大規模シーケンスにより、変異部位の単離同定を進めているところである。申請者は、数年前にメダカに大規模なランダムミュータジェネシスを施し(Taniguchi, et al. Genome Biol. 7:R116, 2006)、二年間の間に、約40の遺伝子の破壊体の作製を試みた。しかしながら、1つのミュータントを作製するコストが100万円と魚にしては割高である反面、変異体がヌルになるのは偶然に支配されること、変異導入頻度が数百キロ塩基に一つ程度と決して高くはないこと、変異の多くはイントロンやアミノ酸置換を伴わないサイレントな変異であることから、遺伝子破壊が成功する確率は50%とかなり低いのが現実である。本研究の目的は、トランスポゾンによる変異の沈降と、SAGEを応用した数珠状構造の形成という二段階の変異の濃縮を行うことにより、低コストな新たな変異同定法を開発するものである。本年度は、タイプ2制限酵素で切断可能になるように変異を導入したDNA断片を用いて、それが精製Muトランスポザーゼと複合体を形成することを確認した。また、変異DNA-Mu複合体が、二本鎖DNAのミスマッチ部位に結合すること、さらに、磁気を利用して回収したから沈降物から制限酵素によりミスマッチ部位を切り出すことが可能であることを証明した。しかしながら、提案後半部分にあるコンカテマーの形成、さらにそれをシーケンスするところまでは至らなかった。コンカテマー形成効率の悪さは、切断端が片側にのみ生じる5'突出末端であり、酵素的にfill-inした後、blunt end ligationを行うことによるためであると思われる。そのため、新たな制限酵素サイトを付与するなどして、この点を改善する。