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20世紀と21世紀のフランス現代文学を通して見た日本文化について

この3年間では私は特に、次の3つの主たる目的を設定した。まず第一には国際シンポジウム「ミシェル・ビュトール-境界にて、あるいは移動の芸術」を開催することである。シンポジウムの目的は、ビュトール作品にみられる日本文化の影響を明らかにすることであった。研究の2つ目の目的は、フランス現代作家の作品にみられるアジア文化の影響、特に日本文化の影響について、書物を準備・刊行することであった(『ノマドのエクリチュール-フランス作家と極東』)。研究の3つ目の目的は、上記シンポジウムの成果に基づく、共著を出版することであった(『ミシェル・ビュトール-境界にて、あるいは移動の芸術』、ディジョン大学出版局)。本年度は、21世紀のフランス現代文学における日本文化の関わりを中心に研究を進めてきた。具体的な活動として、4月の初めから、9月26日と27日に立教大学で開催される、国際学会「ミシェル・ビュトール、境界にて-移動の芸術-」の企画準備に取りかかった。主催者としてまた、学会実行委員として、他の実行委員とともに連日意見の交換を重ねてきた。同学会では、研究発表とともに、ビュトール氏と作家の絲山秋子氏の特別講演、そしてビュトール夫妻の対談の司会も努めた。この学会は連日50名から60名、特別講演においては100人以上の聴講者が集まり、文学専門誌のみならず、新聞にも特集され、大成功を収めたと評価されている。具体的な成果としては、雑誌『早稲田文学』編集者の迅速な仕事により、講演会での発表の一部が、12月に発行された『早稲田文学』に、「『失われた横顔』の自画像、あるいは日本女性のような作家の小さな肖像(抄)」と題され載せられている。11月9日には、日本フランス語フランス文学会の2008年度秋季大会(於岩手大学)ではワークショップのコーディネーターを努め、パネリストとしてFrangois Bizet氏(青山学院大学助教授)、森田秀二氏(山梨大学教授)、小川美登里氏(筑波大学準教授)らを迎え、「なぜ映画を教えるのか?」をテーマとして、活発な議論を展開した。また、12月25日から29日まで、サンフランシスコで開催された、現代言語学会の「ポール・クローデルと音楽」と「ポール・クローデルと極東」という二つの討論会に参加し、その成果は、現在執筆中である、フランコフォニーの作家と日本の関係についての本の第一章で論じられている。本年度は、平成21年9月にマルグリット・デュラスの国際シンポジウム「マルグリット・デュラスの東洋」(東北大学)において、発表(H Story,ou pour une adaptation "relevante")を行った。また、平成21年12月25日から平成22年1月1日までフィラデルフィアで開催された,MLA学会のいくつかの講演会に出席した。そこでは、私の研究対象である作家(クローデル、《Claudel and polyphony》and《Claudel Today》、エレーヌ・シクスーなど《Memory, History and the Literary Text》について、あるいはフランコフォニーの文学理論に関する講演に参加した(《Envisioning and expanding the Disciplinary and Geographic Boundaries and Limits of Our Expertise》;《Buddhism and Literature》and《Postcolonial Comparisons:Race and Aesthetics》)。それから、平成22年2月には、2年以上前から行ってきた著書の作業を終えた。(タイトルEeritures nomades-Japon, Extreme-Orient etlitteraturesfrancaisescontemporaines)それは平成22年(to be published in 2010 by Editions Universitaires de Dijon)にフランスの出版社(ディジョン大学出版)より刊行される予定である。本年度も、昨年同様、21世紀のフランス現代文学における日本文化の影響を中心に研究を進めてきた。具体的な成果としては、2010年3月にパリ第三大学のセミナーで「性的差異の態度表明(Le Parti pris des Differences Sexuelles)」と題された報告を行った。また12月にはパリ第八大学で開催された「旅の詩学」と題されたシンポジウムに参加し、研究報告「旅のエクリチュールからノマドのエクリチュールへ-ポストモダンのある視点(De l'ecriture du voyage a l'ecriture nomade : une perspective postmoderne)」を行った。本年度は、さらに二つの出版物の刊行準備を進めた。2011年1月にディジョン大学出版局から刊行された『ノマドのエクリチュール-フランス作家と極東(Ecritures nomades : Ecrivains francais et Extreme-Orient)』(単著)と2011年4月に刊行を予定している『ミシェル・ビュトール-境界にて、あるいは移動の芸術(Michel Butor-A la frontiere ou l'art des passages)』(共編著)がそれである。

前者は、フランス現代文学における日本文化の影響に関するこれまでの自身の研究成果に統一的視座を与え、一冊の書物として纏めたものであり、旅のエクリチュールとノマドのエクリチュールを問題を通して、エクリチュールの本質に迫ろうとするものである。後者は国際学会「ミシェル・ビュトール、境界にて-移動の芸術-」の成果であり、編者としてすべての原稿に繰り返し目を通し、用語の統一など複雑な編集作業を担当した。またこの書物には、自身の研究論文に加え、すべての論考を紹介・分析する序論を準備した。
高齢化社会における生涯学習圏域設定と社会教育施設の有機的連携に関する調査・研究

本報告は,福島市の生涯学習振興計画を特に市民の生涯学習活動を支える学習条件整備の観点に基づき把握した。具体的には,福島市が推進する「生涯学習圏域」の設定にかかわり,社会教育施設としての公民館が新たな生涯学習関連施設として登場している「地域学習センター」とどのような関係構造をもつて「刷新」・「再編」されていこうとしているのかを把握した。確かに,福島市の「生涯学習圏域」の設定の背景には,今日展開されている地方分権推進法('95)ならびに生涯学習審議会答申「社会の変化に対応した社会教育行政の在り方について」('98),「地方分権一括法」(2000.4施行)による「社会教育法一部改正」等の影響を確認できる。こうした状況の下で,福島市の生産学習振興計画が準備されていく動向とそれが「刷新」・「再編」されていく構造を概結してみた時に,捉えられる特徴はきわめて単純化すれば次のようなものである。すなわち,「地方分権推進」に対応して進められる「行政改革大綱」は地方自治体の組織・機構の再編を必然とし「総合行政としてのネットワーク型行政」を要求している。そしてこの「総合行政としてのネットワーク型行政」は「市民の力」に期待する新しいスタイルの「地域づくり構想」が前提とされるものであり,その結果,「市民の力」(民間活力)を生涯学習ボランティアとして計画的に養成することを担う「生涯学習推進計画」・「生涯学習ボランティア(生涯学習アドバイザー)養成講座」等が全面的に展開されたという特徴である。戦後公民館学習実践が残してきた歴史的遺産とも言える「自己教育・相互教育」の観点から上記の特徴をもつ「福島市生涯学習振興計画」を検討し,今後の高齢化社会に対応する「生涯学習圏域設定」に関わる課題の整理に努めた。高齢化社会における生涯学習の推進とそれを支える社会教育施設の基本的機能とその諸課題を把握することが本研究の基本的テーマである。具体的には、生涯学習の推進にともなう社会教育施設の「インテリジェント化」が地域の中で促進されていく際に、どのような影響が市民の学習活動に及ぼされるのかを把握しながら、社会教育施設の今後の学習社会における位置とその諸課題を実証的に把握することを指向したい。本研究は2年間にわたる研究として計画されているが、本年度は基本的調査にベースをおいた研究活動を展開した。フィールドとしては福島市に視点を置きデータ・資料・文献等を収集しその分析に着手しつつある。福島市は、市レベルでの生涯学習センターの設置を意欲的に進めており、30万市民の地域にしては複数館の生涯学習センターを建設すると言った全国的にも希有な地域と言える。すでに、そうした文化政策が展開され始め5年以上が経過し、そうした政策の具体的成果・影響等が地域住民の学習活動にあらわれ始めている。福島市では、既存の社会教育施設(公民館等)と生涯学習センターとの関係をいかに整合性をもたせていくかという議論が始まりつつあり、社会教育委員の会議の議題としても設定される今日を迎えている。教育・文化施設の「インテリジェント化」は今後の情報社会に対応し望まれるところではあるが、それが既存の社会教育施設とどのような関係を持って展開され得るのか。基本調査の結果、市民の日常生活の中に一定の役割を持って構成づけられている既存の社会教育施設(公民館等)はまさに小規模ながらも地域館として設置されているところにその有効性の一つが見出され得ると推測されるが、生涯学習センターと言った諸機能が集中する大規模館の新設により、市民の文化活動圏域・学習関係がどのような影響を受けつつあるのか、今後の調査活動の主要な柱の一つである。
清朝宮廷演劇文化の研究

満洲人が中国を支配し、東アジアにユーラシア帝国、「大清グルン」という満洲帝国を構築する中で、占領下の様々な伝統文化に再処理を施して国家統治の道具とした。演劇も娯楽的要素とは別に儀礼的な要素が加えられ、儒教の古典的礼楽とは異なる新たな礼楽として、国内・国外へ発信することになった。これが清朝宮廷演劇であり、地方都市や郷鎮各地で演じられていた宗教儀礼の色彩濃い民間の演劇とは性格を異にする。(1)テキスト・資料、政治性研究(1)清朝宮廷演劇の主要な大戯作品内容と伝存テキストの全貌、及び文学史・芸能史上の流れを明らかにする。(2)国家事業としての宮廷演劇が持つ政治性を明らかにする。(2)文化・社会史的影響研究(1)清朝宮廷演劇資料の整理と出版に反映する中国の近現代政治史的動向を明らかにする。(2)清朝宮廷演劇が、地方演劇形成に与えた影響を導き出す。(3)外国使節が宮廷演劇をいかに理解したかを明らかにする。(3)中国社会の特性研究(1)中国人の意識構造や社会秩序などに宮廷演劇文化が果たした役割を検証し、清帝国以降の中国の性格を明らかにする。本年度は、清朝内府演劇研究に必要な基礎的資料の所在調査と収集、関連する先行研究の分析を中心に研究を進めた。連台大戯研究では、昇平宝筏の安殿本をデータ化し、後日複印するための準備を整えた。また、上海図書館所蔵2種の安殿本「進瓜記」・「江流記」のデータ入手に見通しをつけ、これも複印化する準備をした。また、武英殿による套印本「昭代簫詔」が、清代に印刷されているのを発見した。そして、台湾の故宮博物院において、南府・昇平署で使われていた旧北平図書館本の鼎峙春秋、忠義〓図、昇平宝筏各鈔本の所蔵確認をする一方、それぞれの鈔写された本文には貼り紙をし、文字を改める箇所が随所に見られることから、従来は1種と見られがちであった内府鈔本の戯曲テキストは、その性格が伝来を含めてかなり複雑であることを解明し、テキストごとに精査すべき問題点を摘出した。台湾故宮博物院蔵勧善金科(套印本)の表紙には、乾隆帝の文集反古紙が用いられている点が注意を引き、大阪府立中之島図書館本と比較する必要性を認めた。また一方で、東北大学鈔写本とは本文比較の必要性が浮き彫りにされた。節戯では、内抄鈔本「如是観等四種」及「四郎探母等四種」の原典を発見し、その作品内容と清朝の演劇政策や清代演劇との関係を分析した。同時に、研究を含む資料集を世界で初めて原色印刷で発刊、もしくはその準備を整え、研究資料の公開と保存作業を行った。宮廷演劇を共同で研究を進めるために、研究会を2回実施し、中国社会科学院や中山大学の研究者から、中国での内府宮廷演劇の研究状況について報告を受けるなど、メンバーが情報を共有する機会を設けた。本研究活動を紹介するために、ホームページを新たに立ち上げ、新着情報を中心に研究成果の公表を開始した。連台大戯研究班では、楚漢春秋・鼎峙春秋・昇平宝筏・昭代簫韶それぞれの内容分析と関連する明刊本小説との関係を検証した。同時に、内府本研究班の協力のもと中国および台湾に所蔵される写本について分担して調査した。北京故宮博物院では、故宮図書館に所蔵される内府劇本データおよび熱河離宮での演劇図を入手し、宮廷劇本の悉皆調査の着手に取りかかる準備となった。この他、上海図書館や北京国家図書館で、安殿本系写本2種を発見した他、上海図書館の江流記及び慶応大学の四郎探母他四種の内容分析を付した資料集を刊行し、宮廷演劇の資料提供をした。一方、呉暁鈴の研究資料から、古本戯曲叢刊九集の編集及び影印出版に到った経緯が判明し、文化大革命の発動と宮廷演劇研究及び資料刊行とが直接連動したことが明らかにされた。節戯研究では、作品は単に季節の演目のみならず、『九九大慶』のような節戯の叢書の中には、乾隆帝の外征や四庫全書編纂などの軍事・文化事業を賛える作品も多いことがわかった。同時に、康煕帝が五台山へ文殊礼拝に赴く演劇もあり、満洲朝廷と文殊信仰との関係が、宗教のみならず演劇を通しても、政治利用されていることに気づいた。研究会では、民国期の京劇戯班と宮廷劇との関係、楚漢物語の特定化、昇平宝筏と江流記の関係及び異本の存在について報告された他、清朝宮廷演劇が内廷での儀礼として位置づけられていること、ダライラマが中国演劇を観劇していたことなどが研究参加者、協力者から入手できた。

また、宮廷演劇は、王侯士大夫が家門で行なうものと区別すべきで、テキストも当然区別される可能性があると、研究分担者内で見解が共有された。本年度の研究進展から、明代宮廷演劇と清朝宮廷劇との連続性、清代在京戯班研究を深める必要が出て来た。さらに、宮廷儀式の研究と清朝八旗社会の分析が新たに必要となり、この方面の充実のため、組織と研究方法の変更を次年度に反映させることとした。連台大戯については、昇平宝筏及び鼎峙春秋・昭代簫韶・楚漢春秋に加え、如意宝冊の鈔本相互の比較、テキスト所蔵調査が進展し、内容の取りまとめ、儀礼としての作品が持つ特徴、依拠した小説との検討に入っている。その中で、『進瓜記』を影印出版し、四色写本の性格と宮廷演劇本の基準本設定に向けての研究が進んだ。節戯方面では、九九大慶に収録される演劇の他、古本戯曲叢刊編集の動向を分析した呉暁鈴の序跋の訳注、「四海昇平」テキスト研究が行われた。また、内府演劇本の分類と定義について、細分類が提示された。政治史方面では、清朝満洲帝国(グルン)の国家体制における内務府の性格と八旗体制の特色、演劇機構たる南府や昇平署の官庁としてのあり方が明確にされ、宮廷・八旗社会の意向が大戯・節戯の内容に反映していることを明らかにした。これら内廷演劇史からも、清朝が以前の中華帝国だけでは捉えきれない側面を持つことが明らかになりつつある。一方、清朝とベトナム、朝鮮の燕行使の記録から、ベトナム人が中国演劇全般に理解を示していたこと、朝鮮使節が漢文記録とは別にハングル文で北京の地方劇を記録していたこと、琉球王朝も御座楽などの宮廷音楽や唐踊りに間接的ながら清朝の宮廷演劇と関係していたことが判明した。一方、若手研究者の参加から忠義〓図・混元盒の研究協力を得ることになり、連台大戯全容の解明に更なる前進が見られた。国外関連資料調査では、ロシア及びアメリカ、中国での資料調査が実施された。ドイツ・フランス方面の事前調査も着手し、北京以外の宮廷演劇・中国小説版本調査によるデータも集まりつつある。国内の研究会では、毎回、全員が報告して情報を交換するとともに、国際会議において関連発表を実施した。ホームページには、新着情報の他、英文を新たに加えて情報発信をしている。連台大戯は、昇平宝筏・楚漢春秋・鼎時春秋・昭代蕭韶・如意宝冊の梗概を完了し、関連する元明の北曲・南曲及び明代小説が与えた影響について把握した。つまり、宮廷演劇長編は、関連する内容の戯曲や小説を根本とする長編小説に組み込んで編纂される傾向にあった。そして、昇平署の〓案(道光朝・光緒朝)を通して、内廷での承応劇は連台大戯の一部分を抜粋した総本を用いることが多く、清朝国家としての儀式に使用する連台大戯全体とは区別されていた可能性がある。熱河〓案や内廷出版〓案及び清実録と対比することにより、この想定はより鮮明に明らかに出来つつある。一方、南府・昇平署の節戯は、必ずしも季節の題材に限らず、長編小説や南曲の一部を総本としたものも多く、道光以降になると民間の劇本も採用され、外班の役者によっても宮廷演劇が行なわれていたことが判明した。これは、昇平署の恩賞〓案などの史料からも裏付けられる。しかも、民間芸人の宮廷入朝は、地方劇形成において、作品内容ばかりではなく、衣裳や小道具、舞台演出に深く係わり、民国時代の京劇などが、宮廷楽人や芸人、総本等の影響下に成立した道筋を示すことが出来た。宮廷演劇の底本は、清帝が収集した小説や戯曲であるが、天禄琳琅や内閣蔵書といった皇家の善本や稀覯本とは別に所蔵されていたらしく、紫禁城内に分蔵された昇平署以外の官署の蔵書に着目している。宮廷演劇本は傅惜華・鄭振鐸旧蔵本にも含まれ、中国地方戯曲集成に収録した京劇などの作品群との一定の相関性を見いだした。
太陽光エネルギーの利用効率向上を実現する新規な光アップコンバーターの創製

太陽光を太陽電池・水分解光触媒・人工光合成系により電力・水素・炭化水素に変換する際,系に特有な閾値エネルギーより低エネルギーの光子(閾値波長より長波長の光)は利用されず,エネルギー損失となって変換効率を制限する要因となっている.この捨てられている未利用エネルギーを利用可能にするのが光アップコンバージョン(UC)である.本研究ではエネルギー輸送分子の運動媒体にイオン液体を使用し先行研究の問題を解決したが,さらなるUC効率の向上には分子間エネルギー移動のキネティクス解明が必須である.本研究はこの点について研究を行い従来知られていなかった多くの知見を獲得,今後のUC効率向上に有用な指針を得た.太陽光を太陽電池・水分解光触媒・人工光合成系により電力・水素・炭化水素に変換する際,系に特有な閾値エネルギーより低エネルギーの光子(閾値波長より長波長の光)は利用されず,エネルギー損失となって変換効率を制限する要因となっている.この捨てられている未利用エネルギーを利用可能にするのが光アップコンバージョン(UC)である.本研究ではエネルギー輸送分子の運動媒体にイオン液体を使用し先行研究の問題を解決したが,さらなるUC効率の向上には分子間エネルギー移動のキネティクス解明が必須である.本研究はこの点について研究を行い従来知られていなかった多くの知見を獲得,今後のUC効率向上に有用な指針を得た.今年度は,開発した光アップコンバーターの特性および媒体であるイオン液体がアップコンバージョン量子効率(UC-QY)にどのように影響するのかのメカニズムの解明に向け,アップコンバージョン光強度の時間応答を調べるためのシステムを構築,実験を実施し,結果の解析から一定の知見を得た.構築したシステムは,パルス励起光源としてナノ秒波長可変OPO,光検出系として光電子増倍管,信号処理系として高速デジタイザからなる.これにより,光アップコンバーターからの発光強度の時間応答カーブ(decay curve)を計測した.得られたdecay curveの形は励起パルス強度に顕著に依存し,弱励起の極限ではsingle exponentialの線形減衰が,それ以外では非線形な減衰挙動が観測された。続いて,実験結果を理解するために解析を行った.まず,本現象が「平均場近似を採用した二体消滅のレート方程式でよく記述できる」と仮定し,解析を進め,decay curveを表現するオリジナルの無次元解析方程式を導出した.この無次元解析解は,様々な実験条件で得られたいかなるdecay curveについてもよく一致し,そのfitting解析を通じて一次のdecay rateと二次のdecayrateの分離に成功,それぞれの値を得ることができた.これから,エネルギーキャリア分子の媒体として用いられるイオン液体のカチオン分子のある特徴分類によって,エネルギーキャリア分子の一次の励起寿命(一次のdecay rateの逆数)が顕著に変化することが判明した.この知見は,UC-QYのさらなる向上を目指す上で有用な指針を与えるものである.さらに,用いたイオン液体の粘度を測定し,媒体であるイオン液体のバルク粘度とエネルギーキャリア分子間でのエネルギー移動レートの間に,イオン液体の分子構造に依存した特徴的な関係を見出した.H25年度の交付申請書においては以下2項目を研究実施計画に挙げた.以下,それらの要旨を【】内に再記し,今年度の研究実績を記載する.■項目1再記(要旨)【「三重項-三重項消滅」という光物理現象に関して抱いている仮説が立証できれば,学術的意義が大きいだけでなく,太陽光エネルギー高効率利用を行う光アップコンバージョン(以下,UC)において効率向上の指針獲得につながり,工学的意義も大きい.本検証には高額な計測システムを要し,これを自前で行うにはH.25年度の交付額(直接経費80万円)では不足である.従って,共同研究などでこれを実施する可能性を,少なくとも現時点では検討している.】■研究実績:今年度,当該計測システムを保有する共同研究先を見つけることはできず,具体的検証は行えなかった.本年度はその予備段階として,装置システムの設計検討を実施した.■項目2再記(要旨)【多数種類のイオン液体を用いて効率向上の探索を実施し,メカニズム解明に向けた系統的知見を積み重ねてゆく.本項目は,帰納的なメカニズム解明の土台となる可能性があるだけでなく,実際的な高効率化の探索としても重要な項目である.】■研究実績:今年度は,精製を行い純度を上げたイオン液体14種類を用い,昨年度から信頼性を格段に改善した試料を作製し,それらの系統的計測を通じ,明確な「イオン液体粘度とUC量子効率(ΦUC)との相関」を得た.これにより仮説の基礎が一層健全なものとなった.また,この探索から,ΦUC = 15%という赤→青のUCに関して知る限り現在世界最高のUC効率を達成した.さらに,発光分子のスピン三重項状態寿命もイオン液体粘度に強く相関することを発見し,独自のモデル構築を行い,そのメカニズム提案を行った.これらの今年度得られた成果は,いずれも新規性が極めて高いものであり,現在成果公表に向けて論文執筆を進めている.当該年度交付申請書の「研究実施計画」に記載した二項目(下記)を,当初の予想以上かつ十分に達成した.■項目1:以下【】内に交付申請書より要約して再記【光禁制な励起三重項準位にアクセス可能な手法である,過渡吸収測定の実験系を構築・完成し,エネルギー輸送を担う分子間の,スピン三重項エネルギー移動効率のイオン液体依存性を定量的に測定する.】まず,過渡吸収測定系を完成させた.そして,イオン液体5種類において,エネルギーキャリア分子間のスピン三重項エネルギー移動効率を定量的に決定した.

「この移動効率の定量的決定は,光アップコンバージョンの研究分野において初」という点は強調される.この成果により,光アップコンバージョンのメカニズムに関し重要な知見が得られた.成果はJournal of Physical Chemistry B(米国化学会)から論文出版された.また,上記に加え,三重項-三重項消滅過程における分子キネティクスの研究を行い,時間分解発光測定とモデル解析を元に,メカニズムに関する極めて重要な知見を得た.この知見もまた(上とは別の論文として)Journal of Physical Chemistry Bから出版された.■項目2:以下【】内に交付申請書より要約して再記【系統的なメカニズム解明を行うためのイオン液体を可能な限り多く購入し,試行する.これによって,環境(媒体)としてのイオン液体が,UC量子効率や分子間エネルギー移動ダイナミクスにどのような影響を与えるのかの系統的検討が可能になる.】この項目に関し,今年度は大手イオン液体メーカーとの協力関係構築に成功し,無償でイオン液体の提供を受けることが出来た.結果,15種類以上ものイオン液体を入手し,それらを用いて試験・評価を行った.その結果,イオン液体粘度とアップコンバージョン効率との間に,明確かつ重要な相関関係が見出された.上記「研究実績の概要」に記載の通り,H.23年度交付申請書「本年度の研究実施計画」に記載した計画項目1および2ともに達成あるいは順調に進行中であり,査読付国際雑誌への論文出版・国際会議での口頭成果発表などの成果も出始めていることから,おおむね順調に進展していると考えらねる.25年度が最終年度であるため、記入しない。上記「研究実績の概要」に記載したように,当初の予想を上回る達成が得られている.その具体的理由は以下の通り.■「項目1:分子間スピン三重項エネルギー移動効率の定量的測定」■このために行う過渡吸収測定は,一般に難しく,かつ,多大な労力を要するものである.本研究では,実験方法および測定系の改良を丹念に重ねてゆき,注意深い実験を行うことで,信頼性あるエネルギー移動効率を定量的に決定することに成功した.これは,所属機関(東工大)化学専攻の光化学を専門とする共同研究者をして「非常に綺麗な結果で,ここまでしっかり実験で求めた例はなかなか無い」と言わしめるものであった.これにより,「スピン三重項状態を利用した光アップコンバージョンの研究分野で,このエネルギー移動効率を定量的に測定したのは初」という新規性を達成した.本成果は上述のようにJournal of Physical Chemistry Bから論文出版されたが,査読者2人共が"This paper representsa significant new contribution andshould be publishedas is."の高評価であった.さらに,この成果に加え,「研究実績の概要」に記載のように,発光の時間分解測定とモデル解析を通じ,メカニズムに関する非常に重要な知見を得た.この知見もまた(上とは別の論文として)
C型肝炎ウイルスの免疫寛容獲得及びその破綻による慢性炎症

C型肝炎ウイルス(HCV)は感染後、高率に持続感染化し、慢性肝炎、更に高率に肝細胞癌を発症する。HCV感染ヒト肝臓組織ではHCVが持続的に複製し、特異的細胞障害性T細胞(CTL)が誘導されているにも関わらず、ウイルス感染細胞が完全には排除されないことが知られている。このことから持続感染が成立する理由の一つとしてHCVに対して宿主側が免疫寛容状態になっていることが推測される。我々はCre/loxPシステムでHCV遺伝子を導入したトランスジェニック(Cre/loxP/HCV-Tg)マウスと、IFN誘導性のCreを発現するトランスジェニック(Mx-Cre-Tg)マウスを交配させることにより、任意の時期にHCV遺伝子をスイッチング発現するトランスジェニック(Cre/loxP/HCV-MxCreTg)マウスを作製した。Poly(I:C)投与により発現させた肝臓内のHCV蛋白は、完全に排除されることなく、600日以上の持続的な発現が確認された。形態学的には遺伝子発現後67日で壊死を伴う比較的高度の炎症細胞浸潤が認められ、その後、門脈域を中心とした弱い炎症反応が持続的にみられた。他の病態としては肝細胞の膨化、脂肪変性、グリコーゲン変性、肝細胞索の乱れ、線維化、肝細胞癌およびリンパ腫などがみられた。脂肪変性1に関しては遺伝子発現後21日から認められた。以上より、スイッチング発現システムを樹立したことにより、発生段階でのHCV遺伝子の発現はなくなり、胎仔に影響を与えることなくHCV持続感染時に似た免疫反応状態をつくることができた。C型肝炎ウイルス(HCV)は感染後、高率に持続感染化し、慢性肝炎を発症する。これまでHCVの病原性発現機序を解析するためにHCVのcDNAを組み込んだトランスジェニックマウスの開発が行われてきたが、HCV遺伝子が導入されたマウスは出生時からすでにHCV蛋白の発現があるために免疫寛容状態となり、宿主の免疫反応の解析が困難であった。そこで我々は任意の時期にHCV遺伝子をスイッチング発現するトランスジェニックマウスを作製し、その病態解析を行った。Cre/loxPシステムでHCV遺伝子を導入したトランスジェニック(Cre/loxP/HCV-Tg)マウスと、IFN誘導性のCreを発現するトランスジェニック(Mx-Cre-Tg)マウスを交配させることにより、任意の時期にHCV遺伝子をスイッチング発現するトランスジェニック(Cre/loxP/HCV-MxCreTg)マウスを作製し、マウスの肝臓におけるHCV蛋白の定量と、形態学的および免疫学的検索を行った。Cre/loxP/HCV-MxCreTgマウスの肝臓におけるHCV蛋白は完全に排除されることなく、1年以上の持続的な発現が確認され、肝臓における炎症や脂肪変性、線維化等の慢性肝炎の病態を示した。さらに、免疫抑制分子であるPD-1、PD-L1、CTLA-4およびFoxP3の肝臓内におけるmRNAの発現を検索したところ、慢性肝炎状態ではそれぞれ発現量の低下が認められた。Cre/1oxP/HCV-MxCreTgマウスは正常な免疫応答下で持続的にHCV蛋白を発現させることができ、慢性肝炎を発症させることができるHCV持続感染モデルとして非常に有用であった。さらに、慢性肝炎状態における宿主免疫反応の解析から、新たな免疫寛容獲得メカニズムによる可能性が示唆され、解析を進めている。
サルの視覚認識地図と側頭葉前腹側部及びTE野神経細胞の応答

サルに注視課題を行っている間に、視野内のさまざまな位置にスリット・円・正方形・十字などの単純な刺激を提示し、a)受容野の性質、b)方位選択性、c)方向選択性、d)色選択性、e)図形選択性等を調べた。現在までに、2頭のサルの海馬傍回から498個の神経細胞の活動を記録し、その応答性を解析した。これらの神経細胞の43%は、上記のような単純な視覚刺激に対し応答した。スリットの傾きに対する応答選択性を調べた神経細胞の11%は方位選択性を示した。色に関して調べた神経細胞の31%は色選択性を示した。また、動く刺激に対する応答性を調べた神経細胞の25%は、静止刺激よりも動く刺激に強く応答した。このような神経細胞の50%は方向選択性を示した。以上の結果は、サル海馬傍回には形態視により関与していると考えられる神経細胞と運動視により関与していると考えられる神経細胞か両方存在することを示唆するものである。受容野はさまざまであったが、84%の神経細胞が対側視野からの情報を主に受けていた。同側視野からの情報を強く受けていた神経細胞も10%強あった。更に眼球位置によって発火頻度を変えるニューロンも見られた。眼球位置によって応答性を変化させる神経細胞は、広く頭頂葉系(視覚の背側経路)で見られる。この結果は、サル海馬傍回が背側経路からの情報を受けていることを示唆するものである。記録部位は後頭-側頭間溝とその内側部に広がるTF野で、麻酔下のサルの実験では視覚応答が認められなかった領域であった。学習課題を行った覚醒ザルから記録したため、先行研究と異なる結果が得られた可能性が考えられる。現在、2頭のサルの側頭葉前腹側部の前方部(側頭極皮質・嗅周囲皮質)から神経細胞の活動を記録し、その応答性を調べている。今後データを増やし、側頭葉前腹側部の前方部と後方部のデータを直接比較することで領野の機能差を明らかにしていく。
成長因子の2つの細胞内トラフィック

本研究はヘパリン結合性成長因子ミッドカイン(MK)が細胞内に取り込まれた後の2つのトラフィック、つまり分解系へのそれと核移行の2つを区別し、特に後者の存在を確かめることを目的とした。MKはヒト癌の発生進展、神経細胞の生存分化、炎症細胞のリクルートをはじめとする重要な機能を生体内で発揮する。その受容体のひとつとしてLDL受容体ファミリーに属するLRPがある。平成15年度までにLRPがMKのエンドサイトーシスを担うこと、エンドサイトーシスされたMKは細胞質で細胞質・核シャトル蛋白であるヌクレオリンと結合すること、ヌクレオリンと結合したMKは核へ移行する。この核移行がMKの抗アポトーシス活性に重要であることを示した。平成1617年度の研究補助金を得て、MKのエンドサイトーシス後の分解にはリソゾーム系のみならずプロテアゾーム系が関与することを明らかにした。すなわち、細胞内に取り込まれたMKの分解に対して、プロテアゾーム阻害剤とリソゾーム阻害剤は両者ともに同程度の抑制効果があった。重要なのは核画分のMKの分解はプロテアゾーム阻害剤のみが抑制した。実際に細胞質内でMK蛋白を発現させると、MKはユビキチン化を受けた。さらにMK分子のN末側半分が特に分解に関与が強く、一方、C末側半分は核移行を担った。以上により、エンドサイトーシス後にエンドゾームから細胞質へ移行し、さらに核へ移行するトラフィックの存在が確認された。本研究ではさらに腎障害(間質性腎炎、シスプラチン腎症、糖尿病性腎症)の発症にMKが関与し、その治療に重要な標的分子となりうることも明らかにした。本研究では成長因子の2つのトラフィック(分泌系生合成とエンドサイトーシス後トラフィック)に取り組んできた。今年度は特にエンドサイトーシス後のトラフィックについて進渉があった。ヨードラベルしたMKのエンドサイトーシス後の分解をみると、リソゾーム阻害剤、プロテアゾーム阻害剤両者とも同等の分解抑制を示したが、核画分に注目するとプロテアゾーム阻害剤のみがMK分解を抑制した。一方、小胞体・ゴルジ体間輸送の阻害剤は抑制効果を示さなかった。そこで、細胞質で産生されるMK(シグナルシークエンスを欠く)を発現させた。細胞質で産生されるMKは核へと移行した。そしてこの核移行はプロテアゾーム阻害剤で増強した。さらに細胞質で産生されるMKはユビキチン化を受けた。これらのデータは成長因子MKがエンドサイトーシス後に細胞質へ何らかの機構で確かに移行すること、そして細胞質あるいは核へ移行したMKがプロテアゾームによって分解されることを示唆している。エンドサイトーシス後のトラフィックについては、神経芽腫TGW細胞のレチノイン酸処理あるいはCHO細胞のMK過剰発現の解析から、MKが未熟はLDL receptor-related protein(LRP)と結合して小胞体内で凝集体を形成していることを証明した。そこでLRPの小胞体シャペロンであるRAPの発現を補うとMKの分泌が促進された。RAPの導入により凝集体形成が抑えられ、レチノイン酸による細胞死も抑制された。そして、RAPの高発現がヒトの癌組織で実際に起こっており、MKの発現プロフィールと一致することを見出した(投稿準備中)。また、虚血再灌流による腎障害、シスプラチン腎症さらには癌進展に対してMKアンチセンスオリゴヌクレオチドが効奏することを示した。これらの病気の治療にMKが分子標的となりうることを示せたといえる。前年度までに成長因子ミッドカイン(MK)がエンドサイトーシス後にエンドゾームから細胞質へ移行し、さらに核へ移行するトラフィックの存在を確認した。本年度はこのような機構を含めて、MKによるシグナリングが、生体にどのような影響を及ぼすかを調べるために、腎障害モデルを中心に解析を行った。

その結果、腎障害(間質性腎炎、シスプラチン腎症、糖尿病性腎症)の発症にMKが関与し、その治療に重要な標的分子となりうることを明らかにした。間質性腎炎ではMK欠損マウスの症状が野生型に比べて軽い。そこでMKアンチセンスオリゴヌクレオチド(ODN)を全身性に投与すると、MK ODNは尿細管上皮に取り込まれ、尿細管上皮のMK発現が抑制され、症状が回復した。シスプラチン腎症でもMK欠損マウスの症状が軽く、MK ODNを投与することで野生型の症状も軽減した。糖尿病性腎症でもMK欠損マウスの症状が軽いことが分かった。以上の3つの腎炎の発症に共通して関わるのは炎症であり、いずれのモデルでもMK欠損マウスで炎症細胞の浸潤が低かった。好中球やマクロファージなどの炎症細胞がMKの標的細胞になっている可能性がある。MKのエンドサイトーシスによる細胞内のシグナリングが炎症細胞の遊走に関わる可能性も考えられる。今後は、左記の可能性に迫るとともに、MKの核移行を阻害することによって、細胞および個体レベルでどのような影響が出るのかに注目していきたい。
放射性重元素の高感度測定等による、カムランド太陽ニュートリノ高精密測定の研究

本実験は,カムランド実験グループで行われた太陽ニュートリノ観測のための純化工程後のカムランドにおいて,高精度のエネルギー較正と放射性不純物量の測定を実施し,これらのデータを基に,信頼性の高い太陽ニュートリノ信号を抽出することを目的に研究を行った.本研究では,エネルギー較正用の装置を作成し,外部から放射性不純物を持ち込むことなく,高精度でエネルギー較正を行うことに成功した.同時に,純化後のカムランドで主なバックグランドであるクリプトンの量を高精度で測定する装置の開発・研究に成功した.本実験は,カムランド実験グループで行われた太陽ニュートリノ観測のための純化工程後のカムランドにおいて,高精度のエネルギー較正と放射性不純物量の測定を実施し,これらのデータを基に,信頼性の高い太陽ニュートリノ信号を抽出することを目的に研究を行った.本研究では,エネルギー較正用の装置を作成し,外部から放射性不純物を持ち込むことなく,高精度でエネルギー較正を行うことに成功した.同時に,純化後のカムランドで主なバックグランドであるクリプトンの量を高精度で測定する装置の開発・研究に成功した.平成19年度は,5月よりカムランドの液体シンチレータの純化を行った.この作業では,液体シンチレータの3つの構成成分(ドデカン,プソイドクメン,ジフェニルオキサゾール)の沸点の違いに応じ3つの蒸留塔を使用して,鉛を始めとする放射性不純物の除去を行った.この純化作業は,カムランドの液体シンチレータを取り出す一方で,それと同量の純化された液体シンチレータをカムランド上部から,新旧の液が混合しないよう,密度を調整して導入した.ところが,純化した液体シンチレータの総量が,全体の凡そ半分となった時,純化後の液体シンチレータと純化後の液体シンチレータが突然混合し始めた.このため,高度に純化された液体シンチレータに純化前の放射性重元素が混合してしまい,所定の純度に到達することが出来なかった.現在は純化前後の液体シンチレータを混合させないようにするため,密度ばかりでなく,液体シンチレータ温度も調整する装置を設置し,早期にカムランドの放射性重元素を除去し,太陽ニュートリノ観測を開始すべく,研究を進めている.また,この純化作業と並行して,気体シンチレータ中の放射性クリプトンの測定装置の開発を行った.この装置は,液体シンチレータ中のクリプトンを高純度のヘリウムガスで追い出し,その試料気体を液体窒素温度の吸着体で冷却し,クリプトンを濃縮することで高感度の検出能力を持つ.この装置は,原理的にクリプトンのトラップ部と,その検出装置部(RGAを使用)が最も重要な部分となるが,これらの作成とテストを終え,クリプトンの検出効率が,所定の性能を有している事を確認した.一方で,この開発研究の過程で,ヘリウムガス中に,水分や液体シンチレータのガスが混入すると,それらがバックグランドとなり,クリプトンの高感度検出の妨げとなることが分かった.現在,これらバックグランドガスを高温のタングステンリボンでイオン化して取り除く装置を導入し,テストを行っている最中である.カムランド実験グループは,ベリリウム太陽ニュートリノの観測に向けて,カムランド液体シンチレータの純化に取り組んできた.本実験の目的は,この液体シンチレータ中の極僅かな放射性不純物の量を精密に測定し,バックグランドを精密に見積もることにより,太陽ニュートリノ観測データの品質を高め,太陽ニュートリノをより詳細に研究することにある.昨年度に引き続き,液体シンチレータの純化を行った.液体シンチレータは,カムランドから取り出しては純化し,それをカムランドに戻すという形で進められ,純化した液体シンチレータは総量で, 4855m^3に達した.この量はカムランド液体シンチレータ(1200m^3)の4サイクルに相当する.この純化作業には,予定よりも多くの期間が費やされた.その主な理由は,主要なバックグランドであるクリプトンを更に減少させるために,純化のサイクルを増やしたこと,そのためにカムランド液体シンチレータの密度を再調整する作業が必要とされたからである.この間に,外部から放射性不純物を持ち込むことなしにエネルギー較正を行うための,装置を開発し,カムランド上部に設置した.また,液体シンチレータ中のクリプトンを測定する装置に残留ガス焼却装置を組込んで,その性能を調べた.その結果,焼却装置のみではである耐久性が不足していることが分かったので,更に油分除去のためのトラップを追加して,現在,最終の性能試験を行っており,試験後にクリプトン量を測定する.液体シンチレータの純化作業は2月まで行われ,その後エネルギーの較正作業が実施された.現在のカムランドは,液体シンチレータ中の対流等が治まり装置が安定病態になることと,短寿命の放射性不純物の崩壊の終了を待っているところである.カムランドの放射性不純物の量は常時モニターされており現状問題点は見えておらず,あと数週間で,太陽ニュートリノ観測を実施できるものと期待されている.
抗ヘルペスウイルス剤耐性の迅速検索用細胞株の樹立と複製開始に特異的な阻害剤の創製

水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)ORF9プロモーターについて欠失変異を作製し、感染に伴う活性化に必要十分な最小プロモーター領域をORF開始点上流17-166の93塩基対に同定した。この領域内に転写活性化因子USFの結合配列が見出されたので、点突然変異を導入した結果、プロモーター活性の低下が見られた。VZVのORF28プロモーターでもUSF結合配列が重要であることが示されていることから、VZVの転写活性の中心的役割を果たすIE62蛋白とUSFの間に何らかの相互作用があることが推測される。なお、VZVのVZV ORF9プロモーター最小領域93bpをタンデムに結合すると活性が倍化した。ORF9の最小プロモーター領域をタンデムに結合したレポータープラスミドを利用してMeWo細胞よりVZVの感染力価を測定できる細胞株を樹立し、その感度と特異性を明らかにした。この細胞株を用いて、プラーク法を用いて報告されている感染初期過程に対する阻害剤の50%阻害濃度を現在より遥かに短い期間である2日間で測定できることを実証した。さらに、共培養の方法によりDNA複製阻害剤であるアシクロビル(ACV)の効果を検証した。細胞フリーウイルスの感染に比して、感染細胞を接種すると、ACVの阻害濃度が数倍高くなることが見られた。チミジンキナーゼ欠損によりACV耐性となったVZV株2株を例に、4倍程度の阻害濃度の差に基づき樹立した細胞株を用いて簡便に薬剤耐性株を同定できることを検証した。1.感受性細胞がないためウイルス力価の測定ができなかったヒトヘルペスウイルス8(HHV-8)について、前初期蛋白により活性化される初期遺伝子プロモーターを利用し容易に力価を測定できるリポーター細胞株をすでに報告した。この細胞株を用いて測定した中和抗体価とウイルス粒子を抗原として測定したIgG抗体価に相関があること、HIVとHHV-8の重感染者におけるカポジ肉腫発症及び非発症群間でHHV-8に対する中和抗体価に有為な差が認められないことから中和抗体が発症抑制には一義的な役割を果たさないこと、DNA複製阻害剤であるphosphonoformic acidよりもインターフェロンα処理を行った方が血管内皮細胞におけるHHV-8の増殖・粒子産生を阻害できることを示した。2.水痘帯状庖疹ウイルス(VZV)感染を迅速に検出できるリポーター細胞株の樹立の第1ステップとして18遺伝子のプロモーター1kb程度の領域について感染に伴う活性化を検討した。ORF9、61及び66で他と比べて高い活性化が見られ、それぞれ活性化モチーフを100-150塩基領域にマップした。また、感染の代わりにORF62発現プラスミドを導入することによる各プロモーターの転写活性化を測定すると感染に伴う活性化の間に強い相関があり、ORF62蛋白が他のVZV転写活性化因子以上に遺伝子発現に中心的な役割を果たしていると考察された。3.サイトメガロウイルス(CMV)についても同様の解析を行った。CMV感染によりTRL4プロモーター活性化が最も顕著に見られたので、詳細な解析を行い転写開始点上流27126bpの領域に活性化モチーフをマップした。この領域を用いてリポーター細胞株を樹立した。4.DNA複製のイニシエーターである複製起点(origin)結合蛋白OBPとorigin DNA配列との結合の詳細を明らかするためHHV-6のDNA認識に必須である約100アミノ酸からなるドメインについて酸性もしくは塩基性残基をアラニンに置換した変異蛋白15種類を作成した。現在、変異蛋白を用いてorigin配列との結合をゲルシフト法により検討している。
分裂酵母モデル系を用いたストレス応答機構の解析

本研究は、分裂酵母モデル系を用いて、HSP、転写因子、MAPキナーゼあるいはカルシニューリンなどが複雑に関与するストレス応答機構を、主に分子遺伝学的手法により解明することを目的としている。平成10年度は、以下のような成果を得た。1.ストレスにより活性化される新規MAPキナーゼ系について我々が発見した分裂酵母の第3のMAPキナーゼであるPmk1は、細胞を高浸透圧あるいは高温度下におくとそのチロシン燐酸化が増加する。これらのストレスから燐酸化にいたる経路は不明であるが、我々は既に、遺伝学的手法により、Pmk1を脱リン酸化するフォスファターゼを同定し、昨年度報告した。今年度は、Pmk1を燐酸化するキナーゼPek1を同定した。Pek1は上流のキナーゼにより燐酸化されるとPmk1を活性化するが、燐酸化されていない場合は、Pmk1を抑制ナることが明らかとなった。この上うなPek1の性質は、本MAPキナーゼ系にall-or-none的な性質を付与すると考えられ、燐酸化によってコントロールされる分子スイッチとしての役割を果たしていると予測された。2.過剰発現により亜砒酸ナトリウム抵抗性を与える新規転写因子について亜砒酸ナトリウムは熱ショックに類似したストレス反応を細胞に引き起こすことが良く知られている。昨年、過剰発現した場合、細胞に亜砒酸ナトリウム抵抗性を付与するb-zip型の転写因子をコードする遺伝子のクローニングを報告した。本年度は、転写因子以外にGTP結合蛋白質のGEFをコードする遺伝子とグルタチオン代謝に関連すると思われる遺伝子を新たにクローニングした。
瞬時に分解すれば見えてくる、MCMヘリカーゼとコヒーシンの共役と多彩な機能

本研究は、オーキシンデグロン法を駆使し、MCM複製ヘリカーゼや、姉妹染色分体接着因子コヒーシン及び他のSMC複合体の機能と、これら因子の共役の解析を目的とした。まず、昨年度に続いてMCM複製ヘリカーゼやコヒーシンの解析を続けたが、期待に反して興味深い表現型は見つからなかった。一方、コヒーシンとの機能関連があると考えられる、同じくSMC複合体のSMC5/6の解析において興味深い結果が得られたので、SMC5/6の解析を中心に行った。その結果、SMC5/6は複製等の染色体上の反応によって生じる、染色体DNA間の「絡まり」の解消に機能しており、SMC5/6が不活化された場合は、染色体分配の異常、微小核の形成とDNAダメージ発生を伴ったG1期停止を示す事を見出した。また、ゲノム上のSMC5/6の結合部位を解析した結果、セントロメア等の高度なリピート配列や遺伝子密度の高い領域に多く結合し、一部でコヒーシンと共局在する事がわかった。さらに、SMC5/6は染色体上の反応によって生じるDNAの「ひずみ」(スーパーコイル)の調節にも関わる事を示唆する結果を得た。本研究は、未だ論争の的であるSMC5/6の役割が、DNAの「絡まり」や「ひずみ」といったトポロジカルストレスの制御にある事を示した。SMC5/6の異常によって観察される染色体分配異常や微小核の形成は、癌を含め様々な疾患と関連がある。また最近、SMC5/6がB型肝炎ウィルスの感染に対する宿主制限因子である事が報告された。今後は、SMC5/6のさらなる解析に加え、これら疾患の分子機構の解明にも取り組む。本結果に関しては現在論文発表の準備中である。本研究は、オーキシンデグロン法を駆使し、MCM複製ヘリカーゼや、染色分体接着因子コヒーシン及び他のSMC複合体の機能とこれら因子の共役の解析を目的としている。本年度はまず、ヒト細胞を用いてMCMヘリカーゼ及びコヒーシンのデグロン細胞の構築を行った。次に、ヒトHCT116細胞株を中心として、細胞周期同調下でのこれら因子の分解と表現型の解析を行った。<MCMヘリカーゼ>HCT116細胞においてG1期にMCMヘリカーゼを分解すると、DNA合成を伴わずに細胞周期が進行し、最終的にG2期で停止する興味深い表現型を得た。また、S期に複製フォーク上のMCMヘリカーゼを分解すると、パラログであるMCM8-9ヘリカーゼ依存的なバックアップDNA合成が生じることを見いだし、論文発表した。<コヒーシン>G1期に分解した場合、S期の進行には大きな問題がないという当初の予想に反して、G1後期の制限点の手前で停止することがわかった。一方、G2期に分解した場合は、予想通り、M期における染色体の分配異常が見られた。このように、細胞周期特異的に分解することにより、これまで見逃されてきたMCMヘリカーゼやコヒーシンの役割が見え始め、次年度以降の分子メカニズムの解析の土台が出来上がった。さらに、出芽酵母においてコヒーシンと染色体上の局在パターンが類似して強い機能的関連がある、SMC5/6複合体のデグロン株の作成も進め、本因子の表現型解析の準備が整った。もう一つのSMC複合体であるコンデンシンに関しては、共同研究において、細胞周期特異的な分解を行う事により、分裂期染色体における役割を明確に示すことができ、論文発表をした。それぞれの因子のデグロン株の作成と解析がおおむね予定通り進み、興味深い表現型が見え始めてきた。一方、MCMヘリカーゼとコヒーシンの共役の解析が少し遅れているため、次年度に集中的に行う。

本結果に関しては現在論文発表の準備中である。基本的に当初の予定通りに今後も研究を進める。特に、HCT116細胞のみではなく、RPE-1細胞などの他のヒト細胞種も同時に解析することにより、観察される現象の普遍性や違いを確かめる。また、MCMヘリカーゼとコヒーシンの共役に集中的に取り組み、さらに、MCMヘリカーゼ及びSMC複合体間の機能連携にも特に注目する。計画にもあるとおり、遺伝学的解析や生化学的な解析にも取り組む。当初本年度に開始を予定していたクロマチン免疫沈降や質量分析実験を次年度に実行するように変更したため、それに必要な試薬消耗品等は次年度に購入する。
新規内因性コリン作動性ポリペプチドの免疫系細胞における発現と生理作用の薬学的研究

新規内因性α7ニコチン受容体作動性ペプチドSLURP-1の気道上皮細胞における特異的発現を免疫組織化学的手法により発見した.喘息モデル・マウスでは気道におけるSLURP-1発現が低下しており,喘息の病態生理におけるSLURP-1の関与が示唆された.SLURP-1は,T細胞の分化とコリン作動系活性に影響を及ぼすことが判明した.さらにSLURP-1の血中濃度を測定して喘息などの疾患における役割の解明を目指して,SLURP-1のELISAを開発するために2種類の抗体を作製した.新規内因性α7ニコチン受容体作動性ペプチドSLURP-1の気道上皮細胞における特異的発現を免疫組織化学的手法により発見した.喘息モデル・マウスでは気道におけるSLURP-1発現が低下しており,喘息の病態生理におけるSLURP-1の関与が示唆された.SLURP-1は,T細胞の分化とコリン作動系活性に影響を及ぼすことが判明した.さらにSLURP-1の血中濃度を測定して喘息などの疾患における役割の解明を目指して,SLURP-1のELISAを開発するために2種類の抗体を作製した.新規内因性ポリペプチドSLURP (secreted mammalian Ly-6/urokinase-typeplasminogen activator receptor (uPAR)-related protein)-1は,ニコチン性アセチルコリン(ACh)受容体(nAChR)α7サブユニットのアロステリック・リガンドとして働いている.本研究では, SLURP-1の肺組織における発現を免疫組織学的に検討した.独自に作製,あるいは市販の特異抗体を用いて,(1)C57BL/6Jマウスの肺におけるSLURP-1,コリン作動性神経マーカーCHT1,マクロファージ(MΦs)マーカーF4/80,神経マーカーPGP9.5および粘液分泌細胞マーカーmucin5ACの発現を検討した.(2)Westernblotにより,肺と気道におけるSLURP-1発現を検討した.(1)気管支線毛上皮細胞にSLURP-1の特異的発現を発見した.(2)Western blotの結果から,肺と気道におけるSLURP-1発現を確認した.(3)気管支の線毛上皮細胞と固有層PGP9.5陽性神経にCHT1発現を確認した.(4)線毛上皮細胞とコリン作動性神経の近傍にF4/80陽性MΦsの浸潤を観察した.線毛上皮細胞は,ACh産生能をもち,α7nAChRを発現している.さらにSLURP-1が発現していた.これらの結果から,線毛上皮細胞が産生したAChとSLURP-1は,(1)自身のα7nAChRに,オートクライン的に働いてホメオステーシス維持に関与し,(2)線毛上皮細胞および固有層コリン作動性神経の近傍では, MΦsのα7nAChRに働いて, TNF-α遊離の調節に関与している可能性が考えられる.新規内因性ポリペプチドSLURP(secreted mammalian Ly-6/urokinase-typeplasminogen activator receptor (uPAR)-related protein)-1は,α7 nAChRに対するリガンドである.SLURP-1は皮膚のケラチノサイトで発見された.しかしながら,我々は,気管支線毛上皮細胞がSLURP-1を産生していることを発見した(平成20年度).気管支線毛上皮細胞上のα7 nAChRは,増殖,分化,傷害からの保護や修復に関与している.そのため,SLURP-1は,気管支線毛上皮細胞のホメオステーシスの維持に重要な働孝をしているものと考えられる.そこで,平成21年度の研究においては,喘息モデル・マウスを作製し,気管支におけるSLURP-1産生の変化を検討した.(1)RT-PCRおよびWestern Blottingによって,喘息モデルの肺組織におけるSLURP-1の遺伝子と蛋白質の発現は,正常マウスと比較して有意に低下していることが発見された.(2)組織化学および免疫組織化学的検討結果から,喘息モデルの気管支におけるSLURP-1産生低下が確認された.喘息モデルでは気道上皮細胞の肥厚と線毛上皮細胞に置き換わって粘液分泌杯細胞化生が起こっていることが判明した.その結果として,気管支におけるSLURP-1の産生が低下したものと考えられる,喘息におけるSLURP-1産生低下は,気道に起こった傷害の修復を遅延させ,さらなる悪化を誘導する可能性が考えられる.さらに,SLURP-1産生低下によって,α7 nAChRを介する気道に侵出したマクロファージからの炎症促進性サイトカイン遊離抑制効果も低下することから,喘息悪化を誘導する可能性が考えられる.本研究結果より,SLURP-1産生を増強させる処置,またはSLURP-1そのものが,喘息の治療における手段の一つとなる可能性が明らかになった.α7nAChRの新規内因性ペプチド性アロステリック・リガンドであるSLURP-1発現が,喘息モデル・マウスの気管支では低下している.また最近SLURP-1がT細胞の活性化に必須であることが報告された.