hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト口腔内のバイオフィルム内における微量細菌の動態に関する研究

そのため外来でのサンプルの採取は一時中断して、研究者自身の口腔内から採取したバイオフィルムを使用して各種培地による細菌の培養、電顕試料の作成や蛍光抗体法などの予備実験を行なっています。学内の倫理委員会の承認と患者さんの承諾を受け、付属病院の外来患者さんの口腔内からバイオフィルムを採取し、走査電顕による観察並びにISH法による微量細菌の検出を行った。また、選択培養による微量細菌の検出に備えて採取したバイオフィルムの一部を凍結保存した。走査電顕ではラセン菌、桿菌、真菌などが観察された。またPorphyromonas gingivalisの線毛らしき構造物が観察された。この線毛はバイオフィルムの形成やヒトの上皮細胞への接着に重要な役割を演じていることが報告されているが、これまで走査電顕による線毛の観察例は報告されていない。走査電顕によってP.gingivalisの線毛が観察できるかどうか確認するため、純粋培養したP.gingivalisの線毛を壊さぬように工夫して走査電顕で観察したところ、多数の線毛が立体的に観察された。また線毛がコロニーの形成や赤血球凝集にも深く関わっている様子も観察できた。バイオフィルム内に微量に含まれている病原性の強い細菌を検出するために、緑膿菌、インフルエンザ菌、マイコプラズマ、アシネトバクター、クレブジーラなどの細菌の16SrRNAの配列の中からその菌に特異的な配列を選び、相補鎖をプローブにしてISH法による染色を試みた。緑膿菌を検出する事ができたが、その他の細菌はまだ検出には至っていない。標的とする細菌の選択やISH法に関する技術的な不備もあったと思われるので、今後は検出方法を改善しながら実験していく所存である。バイオフィルム内におけるP.gingivalisの線毛の役割について走査電顕による観察結果から考察し、論文を作成中である。また、2005年3月のIADRで研究発表を行った。
NK細胞活性測定の臨床的意義及びらいの免疫学的動態についての基礎的研究

(1)ハンセン病の各病型のnatural killer cell活性値(NK活性)測定を行った結果,Myco bacterium lepraeに対する細胞性免疫(CMl)不全が比較的強いLLやBLではNK活性は治療経過中に変動が見られるが比較的高値を,比較的にCMlが備わるTTやBT等で正常範囲内の値を示す傾向が認められ,宿主の病原菌に対する特異的CMl不全状態に対応するNK細胞代償機転が存在する可能性が推定された。(2)多菌型化学療法期間は最低12年間で,その短縮を模索中である。LL等では菌に対し細胞-マクファージ系が有効に機能せず貪食しても消化出来ないと考えられ漢方製剤(補剤)によるIL-2,IFN-μ,IL-12等を介するマクロファージ活性化やNK活性上昇による宿主殺菌能向上を期待した。補剤(補中益気湯)を化学療法剤や末梢循環改善剤と併用投与し,化学療法期間の短縮や末梢神経障害による後遺症の予防・治療の可能性を検討中である。(3)LLのNK活性の経時的測定でleprosy reaction(LR)発生とNK活性に相関が推測され,補剤投与でNK活性上昇以降は同反応は認められなかった。LLやBLのerythema nodosum leprosum(ENL)やdown grade reactionではTh2やCD8が主体の反応と考えられ,NK活性低下はTh2由来のINF-γ等を介すると推測された。なおlL-2投与4例でもLRは抑制されTh2やCD8主体のdown grade reactionに対しfeed back reguration(サイトカイン依存性抑制機構)が働いた可能性が推定され,補剤投与例でも同様の免疫学的反応が推測されると伴に主として多菌型LR予防の可能性が考えられた。以上の結果から同疾患の免疫ネットワークの一端を臨床サイドから検討し,具体的な臨床応用の可能性がある程度明らかになった。しかしENLとborderline leprosyreactionの病理組織及び免疫学的反応の異同に関する検討が不十分であり,さらに検討を行う必要がある。NK細胞活性(NK活性)は免疫感作が明かにない正常個体のリンパ球がIn vitroの細胞障害性を示す現象で,病原菌M.Iepraeに特異的免疫不全状態の明かなIepromatous type(LL)でNK活性値の変動が顕著に観察されると期待された。LL5症例(50検体),bourderline lepromatous(BL)6症例(43検体),middle borderline(BB)6症例(10検体),borderline tuberculoid(BT)10症例(17検体),tuberculoid type(TT)2症例(2検体),indeterminate group(I群)3症例(3検体)の未治療例及び治療中の症例に関し検討した。LLは2075歳(平均44歳),BLは4470歳(53.7歳),BBは3555歳(43歳),BTは2191歳(65.2歳),TTは65歳と55歳,I群は2655歳(42.3歳)だった。LLの未治療4例では1169%(平均36.3%)と一定の傾向はないが臨床所見や治療経過との相関が推定された。LLの全例で治療経過中に低下傾向を示し,病原菌破壊と病原性喪失の結果として代償機転低下に転じたものと推測された。その低下傾向はerythema nodosumleprosum(ENL)やdowngrade (borderline)

reaction時に大きく,この反応はTh_2やCD8T細胞活性主体との考えに一致する。BL4例の初診時測定値は,長期ステロイド投与中症例(20%)を除き,ほぼ基準値内(1840%)だが3543%(平均38.3%)と比較的高値を示した。BB4例の初診時は1976%,治療例1376%で一定の傾向は見られない。BTは病原菌に対する比較的強い細胞性免疫のため低値が予想されたが初診時及び治療中の測定値とも高値傾向を示した。BTではborderline upgrade reaction状態で発症し早期治癒に至るケースが比較的多く,この反応がTh_1活性主体とする考えに一致し,活性値の高値傾向の誘因と推測された。しかしHIV感染leprosy患者では,この反応が多いとの報告に矛盾すると考えられ,さらに検討を要する。またBT例に関し,漢方医学での実証症例で比較的高値,虚証例で比較的低値,中間証例では中間の値を示す傾向が見られた。今後,証を正確に取っていきたい。TTの2例は基準値内の比較的低値で免疫不全代償機転の関与は小さいと推測された。I群の3例は1940%(基準値内)で一定の傾向は見られない。現在,各病型の臨床所見及び治療経過とNK活性値やTh1,Th2,CD8T細胞,CD4/8,CON-A,PHA,IL-2,IL-2リセプター等との関係を検討中である。2)LLなどは病原菌に対する特異的細胞性免疫不全状態にあるとされマクロファージが貧食しても消化・殺菌できない。これらの症例に対してNK細胞の殺菌能に期待して漢方製剤(補剤)を投与して臨床効果を観察中であるが化学療法剤との併用で副作用の軽減や治療期間短縮が期待できる。またLLやBLの各1例で経時的にNK活性を測定した結果、NK活性とleprosy reactionとの相関が推定された。さらに漢方製剤投与後にNK活性の上昇傾向が見られると共にreactionが生じなくなった。LLやBLなどのerythema nodosum leprosumを含むdown grading reactionではTh2やCD8主体の反応と考えられておりTh2由来のINF-γなどを介してNK活性が低下することが推測される。従って、前述の症例では漢方製剤によるNK活性値上昇がIL-2などサイトカインの上昇を伴い、その結果サイトカイン依存性抑制機構が働きreactionを抑制したと推測される。これらの臨床経過より漢方製剤によるreacitonのコントロールが可能ではないかと推測された。BTなど病原菌に対する細胞性免疫がある程度存在する場合に生じるreversalreaction(up garding reaction)はTh1主体の細胞性免疫活性化やIL-2,INF-γ,IL-12などのサイトカインによる反応と考えられており更に症例を重ねて臨床的側面から検討していきたい。また以上の臨床所見を基に文献的検討を行っているが、同疾患の免疫ネットワークの一端を解明できるのではないかと期待される。
PLLA:ポリーL-乳酸を用いた歯科修復材料の検討

近年、幅広い分野での応用が検討されている生体吸収性高分子材料のうち、ポリグリコール酸とポリ-L-乳酸を用いて、乳歯用歯科根管用ポスト成形品(以下:乳歯用スクリューポスト)の臨床応用に向けた基礎研究を行った。ISOおよびJIS規格に従った4種の歯科材料適正試験と加水分解試験を行った結果、生体吸収性高分子材料を用いた乳歯用スクリューポストの臨床応用の可能性が示唆された。乳幼児に対する小児歯科医療は、成長発達期に遂行される咀嚼や発音・構音といった口腔の機能形成という役割を十分に考慮した医療の提供が必要である。なかでも乳歯に対して歯内療法後に歯冠修復を行う場合、歯の交換期における乳歯歯根の生理的吸収を十分に考慮した処置を施さなければならない。そこで、これまで歯科口腔領域での使用目的として研究されていない生体吸収性高分子素材: PGAとPLLAを用いて、乳歯用ポストの試作と臨床応用への可能性を視野に入れた研究を行った。PGAとPLLAを歯科材料としての適合をみるために、ISOおよびJIS規格による1.曲げ強度試験、2.歯科用セメントとの接着性試験のほか、3.曲げ弾性率試験4.根管内ポストの設計、5.加水分解試験を行った。1.曲げ強度試験では、ISOおよびJIS規格を超えた値を示し、歯科用支台築造用レジンと同程度の強度が認められた。2.歯科用セメントとの接着性試験では、接着性が認められた。3.曲げ弾性率試験では、歯科用支台築造用レジンと同程度の弾性率が認められた。4. PGAとPLLAを溶融後に押出成型を行うことにより、精密な根管内ポストの成型が可能であった。5. PBS浸漬下において、十分な加水分解様相が確認された。加水分解速度は、乳歯歯根の吸収速度よりもわずかに速い値であった。乳幼児期から学童期の問にのみ認められる乳歯の特徴を考えながらも、個体の成長発育を十分に考慮した修復材料としての可能性が徐々に明らかになってきた。乳幼児に対する小児歯科医療は、成長発達期に遂行される咀嚼や発音・構音といった口腔の機能形成を十分に考慮した医療提供が必要となる。そこで、これまで歯科口腔領域での使用目的として研究されていない生体吸収性高分子素材のうちポリグリコール酸(PGA)とポリ-L-乳酸(PLLA)を用いた乳歯用ポストの試作と臨床応用への可能性を視野に入れた研究を行った。ポリグリコール酸とポリ-L-乳酸を歯科材料としての適合をみるために、ISOおよびJIS規格による1.曲げ強度試験、2.弾性率試験、3.歯科用セメントとの接着性試験、4.歯科用レジンとの接着性試験、5.根管内ポストの設計、5.リン酸酸性緩衝溶液による加水分解試験を行った。2.弾性率試験では、歯科用支台築造用レジンと同程度の弾性率が認められた。3.歯科用セメント、4.歯科用レジンとの接着性試験では接着性が認められた。4.ポリグリコール酸とポリ-L-乳酸を溶融後に押出成型を行うことにより、精密な根管内ポストの成型が可能であった。5.PBS浸漬下において、乳歯根の生理的吸収速度に近い加水分解様相が確認された。生体吸収性高分子材料であるポリグリコール酸とポリ乳酸は、幼児期から学童期の間にのみ認められる乳歯の生理的歯根吸収という特徴を考慮しながらも、個体の成長発育や口腔の機能獲得を十分に考慮できる歯科修復材料となりうる可能性が明らかになった。
下部消化管手術後の敗血症マーカー、プレセプシンの推移の検討

術後の感染性合併症は、入院期間の延長や医療費の増大・死亡率の上昇に影響するため、早期診断・治療の重要性は高い。プレセプシンはその高い感度・特異度、敗血症重症度、治療効果判定に有用であることから優れた敗血症診断マーカーとして知られているが、プレセプシン値に対する下部消化管手術の影響や術後感染症診断に関する臨床試験はいまだ存在しない。本研究では、下部消化管手術後感染性合併症の早期診断にプレセプシン測定が有用であるかを明らかにする。
感染センサーによるウイルスリボ核タンパク質複合体（ＲＮＰ）認識機構の解析

本研究では、ウイルス感染に応答した自然免疫誘導において、細胞内ウイルスRNAセンサーであるRIG-I-like receptor (RLR)によるウイルスリボ核蛋白質複合体(RNP)の認識機構をin vitroの再構成系を用いて明らかにすることを目的とした。インフルエンザウイルス(IAV)をモデルウイルスとしてRIG-IによるRNP認識を検討した結果、人工的な基質である5'三リン酸RNAと同様に、IAV RNPがRIG-Iを介したシグナルを誘導し得ることを初めて明らかにした。今後、ウイルスRNAセンサーによるウイルス感染検知の分子機構がさらに明らかになることが期待される。本研究では、抗ウイルス自然免疫誘導に必須な役割を担う細胞内ウイルスRNAセンサーRIG-I-like receptor(RLR)に注目し、RLRによるウイルスリボ核蛋白質複合体(RNP)認識の分子機構と、そこに存在する普遍性を明らかにすることにより、RLRを標的とした新規の抗ウイルス治療あるいは予防薬剤開発へとつながる知見を見いだすことを目的としている。平成23年度は、3種のRLRのうちRIG-Iに焦点を絞り、RIG-IによるRNP認識をin vitro(試験管内)で再構成する実験系の構築を目指した解析を進めた。その結果、リコンビナントRIG-Iと基質である人工RNAを、培養細胞抽出液の可溶性画分およびミトコンドリア画分とATP存在下で反応させることにより、下流の転写因子であるInterferon regulatoryfactor(IRF)-3の活性化の誘導を検出することが可能となった。また、これまで報告があったように、この反応系には4つ以上のポリユビキチン鎖が必要であることも確認された。さらに、基質となるRNPの調整を平行して進め、モデル系としてインフルエンザウイルス(IAV)の人工的RNPの調整を完了した。現在、これらを用いたin vitroの再構成系の樹立を進めており、それに引き続き、そこに関与する分子の同定へとつなげてゆく予定である。一方、ウイルス感染細胞内でRIG-Iが形成する凝集体の機能解析を行い、そこに関与する分子の同定を進めた。今後はこれらの知見を統合することにより、RLRによるウイルス検知の分子機構を明確にすることを目指したい。前年度までに、RIG-IによるRNA認識をin vitro(試験管内)で再構成する実験系の構築を行い、リコンビナントRIG-Iと基質である人工RNAを、培養細胞抽出液の可溶性画分およびミトコンドリア画分とATP存在下で反応させることにより、下流の転写因子であるInterferon regulatoryfactor (IRF)-3の活性化の誘導を検出することに成功した。平成24年度は、構築したIn vitro再構成系の基質としてウイルスRNPを用いた検討を行うことで、より生理的なウイルス検知機構へアプローチする計画であり、モデルRNPとしてインフルエンザウイルス(IAV)の人工的なRNPを用いる計画であった。しかし、IAV RNPの調整において技術的な問題が生じたため、実施計画に遅延が生じることとなった。平成25年度には、繰り越した研究費を用いてIAV RNPの調整における至適条件の決定を行い、RIG-IによるIAV RNP認識の検討を開始するところまでのサンプル調整が完了した。その後、予定通りRNPを用いた検討を継続している。一方で、ウイルス感染細胞内でRIG-Iが形成する凝集体の機能解析を通じて、そこに関与する分子の同定を進めており、今後は、これらの知見を統合的に理解することによりRLRによるウイルス検知の分子機構を明らかにしてゆく計画である。本研究では、抗ウイルス自然免疫誘導におけるウイルス感染センサーであるRIG-I-like receptor (RLR)に注目し、RLRによるウイルスリボ核タンパク質複合体(RNP)認識の分子機構と、そこに存在する種々のウイルス感染応答における非自己核酸認識の普遍性を明らかにすることにより、RLRを標的とした新規抗ウイルス薬剤開発へとつながる知見を得ることを目的としている。平成24年度までの解析から、RIG-Iによる基質RNA認識と下流へのシグナル活性化をIn vitroで再構成する実験系の構築に成功し、基質である5'三リン酸を持つ合成RNAによるシグナル活性化の検出が可能になった。そこで平成25年度には、この系を用いてRIG-IによるウイルスRNPの認識について検討を行うため、モデルRNPとしてインフルエンザウイルス(IAV)の人工RNPを調整して解析に供した。人口RNPの調整のための条件検討に時間を費やしたことから研究遂行に若干の遅延があったが、平成26年度第1四半期までに調整が終了した。

それを用いた解析の結果、IAV RNPによってもRIG-Iを介したシグナルが活性化されることが明らかとなり、ウイルス感染細胞内でのRNA認識を試験管内で再現することに成功した。今後は、本実験系を有効に用いることにより、RIG-IによるウイルスRNP認識についてより詳細なの分子メカニズムの理解を目指したい。26年度が最終年度であるため、記入しない。分子生物学26年度が最終年度であるため、記入しない。in vitroでのRLRシグナル再構成系確立のための条件検討に若干の時間がかかり、当初の計画にあったウイルスRNPを用いた解析まで踏み込んだ解析へ到達できていない。しかし、年度中に再構成系の条件を決定することに成功し、現在RNPを用いた解析を遂行中である。(理由)in vitroでのRLRシグナル再構成系の確立に成功し、当初の計画であるウイルスRNPを用いた解析を進行させる予定であったが、RNP調整の至適反応条件の決定に技術的な問題が生じ、研究に遅延が生じた。従って、24年度の計画であるRNP認識に関与する制御分子の同定の解析へは進むことはできず、24年度配分予算を一部繰り越すと共に、25年度中の計画完了を目指した解析を行った。予定からの若干の遅れはあったものの、RNPの調整の条件検討を実行し、目的とするサンプル調整を完了し、それを用いた解析へと進行している。23年度中に確立したRLRによるシグナル活性化のin vitroでの再構成系と調整済みであるウイルスRNPを用いた実験系を完成させ、それらを用いることにより、RLRによるウイルスRNP認識に関与する分子あるいはそこで働く分子メカニズム解明のための検討を加速させる。材料となるシステムの確立は進んでおり、24年度には目的に沿った解析を加速することができると考えている。これまでに調整を終わらせたRNPサンプルを用い、RLRによるシグナル活性化のin vitro再構成系に供することにより、ウイルスRNP認識のモデル実験系を確立する。それを用いることにより、RLRによるウイルスRNP認識に関与する制御分子の同定およびそこで働く分子メカニズム解明のための解析を加速する。一方で、RLRが形成する細胞内凝集体の構成分子の同定についての検討も平行して行っており、それらの成果と連携することにより、RLRによるウイルス認識の理解を深める。
言葉によるコンピューティングのための時系列データの言語化基盤技術の開発

複数の時系列データの関係を言語化する手法を開発した.時系列データの相関関係を捉え,SAXにより数値情報を記号化し,データ間の距離を改良した編集距離により計測され言葉で表現する.さらに動画に映る物体と人との相互作用を言語化する枠組みを提案した.時系列データをSAXおよび動的計画法により記号化・圧縮し,対数線形モデルを用いることによりそのパターンと対応する意味ラベルとの関係を学習した.人の動作を説明する様々な文章を基にバイグラムモデルを構築し,尤もらしい文を生成した.また,転移学習を適用し,不足する言語資源を補う手法を提案した.提案手法は実験によりその有効性が検証された.(1)概要:時系列データ言語化のアプリケーションとして、時系列データの取得対象を動画像中の人の動きと設定し、前年度において開発した時系列データ解析手法を用いた人の動作を言語化する研究を進めた。人の動作取得には、MicroSoft社で開発されたKinectカメラを用い人の骨格情報を取得し、開発した時系列データ解析手法を用いて動作パターンを抽出した。(2)時系列データの解析:前年度において開発を行った、複数の時系列データの関係を捉える手法を拡張し、ymbolic Aggregate approXimatoin (SAX)を用いて記号化したラベル系列を定量的な動向を表す情報としてデータ圧縮する手法を開発した。これにより系列のパターンを定量的に表現することができるようになった。このようにすることで、複数の時系列データのパターンにおける関係を捉えることが容易になることや、パターンを言語化する際の解釈知識と対応させ易くした。(3)時系列データ解釈知識の体系化:時系列データの状態を表現する語彙オントロジーを述語論理式の記述形式の下に、体系化する作業を行った。具体的には人の動作を表現する意味内容を表すための解釈知識であり、言語を生成するための時系列データと言語をつなぐ意味表現となる体系を構築した。(4)機械学習を用いた時系列データのパターンと解釈知識の対応関係の取得:人の動きが時系列データのパターンとして表現され、そのパターンがこの解釈知識によって動作の内容を示すものとして選択されるために対数線形モデルを用いて、パターンと解釈知識の対応関係をそれらがペアになったデータから機械学習を行い、解釈モデルを構築した。それにより、選択された内容を表現する解釈知識の下、適切な言語表現が選ばれて、時系列データ(人の動作)の振る舞いを示す言語が生成される手法を開発した。【最終年度研究成果】(1)データ収集:前年度に引き続き、MicroSoft社で開発されたKinectカメラを用い、動画に映る人の動作の時系列データを収集した。(2)時系列データの解析:前年度においては採用したSAXでは、正確な時系列データの振る舞いを抽出することができなかったため、動的計画法を導入し、データの挙動に合わせた適切な間隔でデータを分割し記号化できる手法を導入し、精度向上を図った。(3)時系列データ解釈知識の体系化:人の動作ごとに意味ラベルを用意し、その意味を表現するための言語資源からなるバイグラムネットワークを構築し言語化を行う手法では、意味ラベルごとにバイグラムネットワークを構築する必要があり、テキスト生成においてスケール性が存在しないため、バイグラムネットワークにおける単語出現頻度、単語遷移確率を変数として言語資源に対してどの意味ラベルも共通して利用可能にする手法を考案した。(4)転移学習の導入:言語資源が不足すると満足の行く言語化が実現できないため、言語資源の転移学習を行うことにより擬似的に言語資源を増やす手法を提案し、手法の有用性を確認した。【研究期間全体を通じて実施した研究の成果】(1)時系列データの取得と圧縮手法に関して、機械学習に適する手法を提案した。(2)言語化に確率的言語生成手法を採用し、言語資源の転移学習の導入と共にその有効性を示すことができた。(3)言語化における体系的な知識については、もう少し深く考察したかったが、言語化を柔軟に行うためにどのように体系化すべきかについて知見を得ることができた。(4)言語化の応用については、主に動画中の人の動作の言語化を具体例に研究を進め、新しい手法の提案を行うことができた。提案する手法は、他の時系列データの言語化にもそのまま適用でき汎用性のある手法の開発を行うことができた。複数の時系列データの関係を言語化する手法を開発した.時系列データの相関関係を捉え,SAXにより数値情報を記号化し,データ間の距離を改良した編集距離により計測され言葉で表現する.さらに動画に映る物体と人との相互作用を言語化する枠組みを提案した.時系列データをSAXおよび動的計画法により記号化・圧縮し,対数線形モデルを用いることによりそのパターンと対応する意味ラベルとの関係を学習した.人の動作を説明する様々な文章を基にバイグラムモデルを構築し,尤もらしい文を生成した.また,転移学習を適用し,不足する言語資源を補う手法を提案した.提案手法は実験によりその有効性が検証された.平成23年度において、時系列データの大局的認識手法において整理を行い、これまでに提案してきた手法をさらに頑健にすることを行った。また、言語化の手法をテキスト生成手法と対応付けを行うことにより、全体の処理のモジュール化を行った。それらの研究成果は以下の2つの論文にまとめた.1.小林一郎:時系列データの言語化への取り組み、第26回人工知能学会全国大会、3B3-NFC-4-2、山口、6月、2012.; 2. Ichiro Kobayashi: Verbalizing Time series Data from

a Macroscopic Viewpoint, 31th NAFIPS, California Berkeley, Aug.6-8, 2012.さらに、時系列データを記号化するSAX法を導入し、複数の時系列データを高速に比較することを可能にした.複数の時系列データどうしの相関関係を取ることにより、(i)高い相関関係を持つ時系列データどうしにおける非類似箇所、(ii)負に高い相関関係を持つ時系列データどうしにおける類似箇所、(iii)相関関係が見られない時系列データどうしにおける類似箇所、を言語化する手法を提案した.その研究成果は以下の2つの論文において報告を行った.1.小林瑞季、小林一郎:複数の時系列データの関連性発見に基づく言語化の一考察、第74回情報処理学会全国大会、3月、2012.(学生奨励賞受賞)2.小林瑞季、小林一郎:複数の時系列データの関連性に基づく言語化のための基礎的考察、第22回Webインテリジェンスとインタラクション研究会、3月、2012.時系列データの言語化を行うにあたり、必要となる時系列データの解析手法の拡張を行った。データから動向に関するパターンを取り出すためにデータを定量化しつつ圧縮する手法を開発した。これにより時系列データからパターンを抽出することが容易になった。また、複数の時系列データのパターンの間の関係を捉えることが容易になり、様々な時系列データ間の関係やパターンを処理することができるようになった。時系列データを言語化する対象ドメインのひとつとして、動画像に映っている人の動作を言語化することを中心に進めた。時系列データとしては、Kinectを用いて人の骨格情報を取得したものを用いた。上述の開発した時系列データ解析手法を用いてデータを解析し、抽出したパターンを構築した解釈知識の体系における知識との対応関係を対数線形モデルを用いて学習し、人の動作を判別するためのモデルを構築した。また、被験者実験により収集した文章から、言語を生成するためのバイグラムモデルを構築し、判別された解釈知識に基づき言語を生成する手法を構築することができた。上記の代表的な成果は、下記の会議、研究会において発表された。・小林瑞季、小林一郎、Sergio Guadarrama、動画像中の人の行動に対する言葉での説明への取り組み、言語処理学会第19回年次大会、2013.・小林瑞季、小林一郎、Sergio Guadarrama、麻生英樹、動画中の人の動作を入力情報とする動的計画法を用いた言語生成モデル、ARG WI2 No.2, 2013.・小林瑞季、小林一郎、麻生英樹、動画像中の人の動作を表現する確率的言語生成に関する取組み、2D5-OS-03b-3、第27回人工知能学会全国大会、2013.平成23年度は、これまでに開発してきた時系列データの大局的認識手法において整理を行い、様々なアプリケーションへ適用可能になるように言語化の処理過程をモジュール化した。また、複数の時系列データに対して、効率的な処理を行うために時系列データを記号化することにより編集距離に基づきマッチングを行うSAX法を導入した。
8の字型骨格を持つ縮合芳香族系の分子設計と構築

8の字型骨格をもつ非平面型縮合芳香族分子の合成研究にあたり、ベンゼン環が14個と10個つながった8の字型[14]サーキュレン及び8の字型[10]サーキュレンを分子設計した。これらの分子は全く新しい発想のもとで分子設計されたものであり、特異なねじれバイ電子系に基づく新規な物性の発現が期待できる。これらの分子の合成法として、本年度は目的化合物の外周骨格をもつジベンゾクリセノファジエンとビフェニレノジベンゾクリセノファジエンの合成を行った。2,6-ジブロモメチルナフタレンより誘導されるホスホニウム塩とp-トルアルデヒドからジオレフィンに導き、これを光環化させて5,13-ジメチルジベンゾクリセンを得た。これを臭素化してジブロモメチル体に変え、次いでチオ尿素法にてジチオール体に導いた。このジブロム体とジチオール体を炭酸セシウム存在下高希釈条件でカップリングさせシスルフィドとした後、スチーブンス転移により環縮少し、次いで、ジスルホキシドをへて熱分解すると8の字型[14]サーキュレンの前駆体となるジベンゾクリセノファジエンが合成できた。同様の方法で、5,13-ビスブロモメチルジベンゾクリセンと4,4'-ビスメルカプトメチルビフェニルから8の字型サーキュレンの前駆体となるビフェニレノジベンゾクリセノファジエンを合成した。これらの前駆体を用いて目的化合物への誘導を試みたところ、ビフェニレノジベンゾクリセノファジエンから8の字型[10]サーキュレンへの誘導が可能であることが分かった。8の字型骨格をもつ非平面型縮合芳香族系の合成研究にあたり、ベンゼン環が14個つながった8の字型[14]サ-キュレン分子を設計した。この分子は全く新しい発想のもとで分子設計されたものであり、特異なねじれパイ電子構造に基づく新規な緒物性の発現が期待できる。この分子の合成方法として、本年度は目的化合物の外周骨格をもつジベンゾクリセノファンの合成を行うことにした。2,6-ジメチルナフタレンをNBSで臭素化してジブロモメチルナフタレンとした後、トリフェニルホスフィンによりホスホニウム塩に変えた。これをp-トルアルデヒドとWittig反応させジオレフィンに導き、光閉環により2,10-ジメチルジベンゾクリセンを合成した。次いで、これをNBSで臭素化してジブロモメチル体に変え、更にチオ尿素法でジチオール体に導いた。このようにして得られたジブロム体とジチオール体を炭酸セシウム存在下、高希釈条件でカップリングさせるとジベンゾクリセン2分子が硫黄で架橋されたジスルフィドが収率30%で得られてきた。これを過酸酸化してジスルフォンとした後、減圧下熱分解を行うと8の字型[14]サ-キュレンの前駆体となるジベンゾクリセノファンが合成できた。本年度は前駆体の合成法を確立することができたので、今後はこの前駆体を多量に合成し、種々の条件を検討して目的化合物の合成を完成させたいと考えている。8の字型骨格をもつ非平面型縮合芳香族系の合成研究にあたり、ベンゼン環が14個と10個つながった8の字型[14]サ-キュレン及び[10]サ-キュレン分子を設計した。これらの分子は全く新しい発想のもとで分子設計されたものであり、特異なねじれパイ電子系に基づく新規な物性の発現が期待できる。これらの分子の合成法として、本年度は目的化合物の外周骨格をもつジベンゾクリセノファンとビフェニレノジベンゾクリセノファンの合成を行った。2,6-ジブロモメチルナフタレンとトリフェリルホスフィンより誘導されるホスホニウム塩をp-トルアルデヒドとWittig反応させ、得られるジオレフィンを光閉環により2,4-ジメチルジベンゾクリセンに導いた。これをNBSで臭素化してジブロムメチル体に変え、次いでチオ尿素法でジチオール体を得た。このジブロム体とジチオール体を炭酸セシウム存在下高希釈条件でカップリングさせジスルフィドとした後、ジスルホンをへて熱分解を行うと8の字型[14]サ-キュレンの前駆体となるジベンゾクリセノファンが得られた。同様の方法で、ジブロム体とビフェニルのジチオールとから8の字型[10]サ-キュレンの前駆体となるビフェニレノジベンゾクリセノファンが得られた。今後は、これらの前駆体を用いて目的化合物の合成を完成させたいと考えている。2,6-ジブロモメチルナフタレンより誘導される

ホスホニウム塩とp-トルアルデヒドからジオレフィンに導き、これを光環化させて5,13-ジメチルジベンゾクリセンを得た。これを臭素化してジブロモメチル体に変え、次いでチオ尿素法にてジチオール体に導いた。このジブロム体とジチオール体を炭酸セシウム存在下高希釈条件でカップリングさせシスルフィドとした後、スチーブンス転移により環縮少し、次いで、ジスルホキシドをへて熱分解すると8の字型[14]サーキュレンの前駆体となるジベンゾクリセノファジエンが合成できた。同様の方法で、5,13-ビスブロモメチルジベンゾクリセンと4,4'-ビスメルカプトメチルビフェニルから8の字型サーキュレンの前駆体となるビフェニレノジベンゾクリセノファジエンを合成した。これらの前駆体を用いて目的化合物への誘導を試みたところ、ビフェニレノジベンゾクリセノファジエンから8の字型[10]サーキュレンへの誘導が可能であることが分かった。
鉄タンパクに存在する二核高スピン鉄二価三価混合原子価錯体のモデル化合物の開発

最近、生体系に存在する二核鉄タンパクは、高スピン二価三価混合原子価状態を取りえることが明かとなてきた。例えば、Pink Uteroferin,Methane Monoxygenase,Ribonucleotide Reductase,Hemerithrin等であり、その機能は、加水分解、酸素化、酸化、酸素運搬など多岐にわたっている。これら鉄タンパク物性を理解するうえで二価三価混合原子価状態は重要な酸化状態である。しかし現在のところ、二核高スピン二価三価混合原子価錯体の合成例は、我々が先に報告した【Fe_2(bpmp)(RCOO)_2】^<2+>(bpmp=2,6ーbisー【bis(2ーpyridylーmethyl)aminomethyl】ー4ーmethylphenolato)がはじめてであり、まだほんの数例しかない。二核二価三価混合原子価錯体を得るには、金属イオンを二つ取り込み、且つ二つの金属イオンの酸化状態の制御が可能な配位子の設計が必要である。本研究では、この目的で1,3ーbis{bis【2ー(6ーmethylpyridyl)methyl】aminoーmethyl}ー2ーpropanolato(6Meーtpdp)を合成した。本配位子では二価二価、二価三価、三価三価の全ての酸化状態を持つ錯体が得られた。二価二価錯体(【Fe_2(6Meーtpdp)(RCOO)】^<2+>)は、低温(-20°C)で酸素と可逆的に反応し、μーパ-オキソ二核鉄錯体を生成することが明かとなった。更に、フッ化物イオンの存在下酸素と反応させると、黒緑色の結晶が得られ、Xー線結晶構造解析の結果、二つのアルコキソ架橋二核鉄(II,III)錯体が更にフルオロ架橋により結ばれた四核鉄(II,III,II,III)混合原子価錯体(【{Fe_2(6Meーtpdp)F(OH)(H_2O)}_2】(BF_4)_4)であることが明かとなった。また、非対称的配位環境を持つ二核化配位子でも二価三価混合原子価錯体を得ており、今後詳しい構造・物性等を調べていく予定である。
二光子顕微鏡多次元画像における血管および細胞の定量解析に関する研究

【目的】認知症や精神疾患による脳疾患はそれらに密接に関わる神経細胞の周囲の血流低下が観察されることから,神経の機能不全や低下によるものと考えられている.しかし神経と血管およびグリア細胞間の関係性については未解明な点が多い.そこで本研究では認知症や精神疾患などを含めた脳血管障害において,神経,グリア細胞,血管をミクロ領域で生きたまま同時観察可能な二光子レーザー顕微鏡法(二光子顕微鏡)で観察し,これら病態の発症に関わる脳微小領域での血流低下と細胞環境や神経機能の変化との因果関係を明らかにすることを目的とした.【内容】脳の活動はダイナミックに変化するため,脳の活動に伴う脳血管の応答において,個々の神経活動と血管運動とを同時に計測することは両者の定量的関係性を理解する上で重要である.そこで本年度も引き続きマウス大脳皮質3次元空間における神経細胞と血管反応との定量的関係性について検討した.また脳血管の可塑性に伴う周辺グリアとの相互作用を明らかにするため,慢性低酸素下における血管新生時のミクログリアの挙動に着目し,血管形状および細胞運動の評価と薬理実験を実施した.【成果】機能的な神経活動に対する微小血管の応答は約86%の毛細血管部位では変化がみられず,残り14%の毛細血管部位が拡張収縮することが明らかとなった.本成果は二光子顕微鏡画像の大規模解析によってはじめて定量的に特徴付けることが可能となり,これにより毛細血管血液量の変化をより高精度に推定することが可能となった.その結果,従来の脳活動イメージングの信号源が動脈血液量の増加によるものであるという知見を強く支持する結果となった.さらに,本研究により毛細血管の動脈性・静脈性による極性の違いがあまり問題ではないことが分かった.すなわち,健常時の脳活動に対する脳血流の反応性を決定する因子は,細動脈の反応性であることを強く示唆する.体調を崩すことが多く,計画通りの進捗は望めなかったと考える.医師との相談の上,休養を取ることが度々あったが,自宅での作業環境がもう少し整っていればと感じることもあった.また,今年度はコンピュータで解析不可能な領域を人の目で確認しつつ計測できる解析支援グラフィカルユーザーインターフェース(GUI)の開発も行っていたので,当初の計画とは遅れていると考える.しかし,このGUIによりMATLABプログラミングが不得意な人でも容易に今までの計測ができると考える.機能的な刺激に対する脳微小血管の反応性については,細動脈の機能が重要であることが示唆された.しかし,脳実質を隙間なく連絡する毛細血管が何も機能的な役割をしていないとは言い切れない.したがって,健常時の毛細血管密度そのものが果たす機能を調べる必要がある.このことは,加齢によって毛細血管密度が減少することで脳血流の低下,しいては脳機能の低下につながるという因果関係を説明するうえでも重要な検討課題である.一方で,減り続ける毛細血管をどのようにして回復させるのかという点について,脳卒中や神経編成疾患に対する細胞治療,あるいは神経血管ユニットの再構築の実現の観点からも重要である.本年度はミクログリアが新生毛細血管の接続において重要であることを見出したが,そもそも血管新生のトリガーとなる因子については未解決である.次年度以降,血管周皮細胞や内皮細胞自体のフェノタイプの変化に着目した研究を展開する.【背景・目的】認知症や精神疾患による脳疾患はそれらに密接に関わる神経細胞の周囲の血流低下が観察されることから,神経の機能不全や低下によるものと考えられている.しかし,神経と血管およびグリア細胞間の関係性については未解明な点が多い.そこで本研究では認知症や精神疾患などを含めた脳血管障害において,神経,グリア細胞,血管をミクロ領域で生きたまま同時観察可能な二光子レーザー顕微鏡イメージング(二光子顕微鏡)に着目した.これら病態の発症に関わる脳微小領域での血流低下と細胞環境や神経機能の変化との因果関係を明らかにし,病気の早期診断法および予防医学の確立に結びつく基礎データの取得を目的とする.【実施内容】脳の活動はつねにダイナミックに変化するため,脳の活動に伴う脳血管の応答(神経血管連関)において,個々の神経活動と血管運動とを同時に計測することは両者の定量的関係性を理解する上で重要である.そこで昨年においてはマウス大脳皮質3次元空間における神経細胞と血管反応との定量的関係性について検討した.【成果】従来は計測点数が100点余りであり,個体や生体特有のばらつきなどが問題であったが,本研究により計測点数が5,00010,000余りとなり,従来不可能であった大規模な血管形態の定量評価に成功した.工夫した点として,異なる時間における計測データ間の計測点の位置合わせを自動化した点が挙げられる.【課題】ここで計測点ごとの移動補正を行う際に関心領域(ROI)のサイズが大きい方が目標の血管以外の血管も含めて相関を計算することができるため,脳の表面(脳表)に対して垂直に走る血管には垂直方向の補正の精度が上がるが,一方でROIのサイズが大きいと3次元領域の端で相関を取った際に実際よりも内側に相関が大きく表れるという問題が明らかになった.・体調を崩したことにより,月単位でのPDCAサイクルが順延していたことも要因である.・時間ごとの計測データにおける追跡のための,移動補正においては,脳表に対し垂直に走る血管のように補正対象の形状によって,移動補正を行うROIのサイズを今後は考慮する必要があると考えている.・分岐点の定義およびその分岐点における血管径の定義を再度考慮すべきであると考えている.

【目的】認知症や精神疾患による脳疾患はそれらに密接に関わる神経細胞の周囲の血流低下が観察されることから,神経の機能不全や低下によるものと考えられている.しかし神経と血管およびグリア細胞間の関係性については未解明な点が多い.そこで本研究では認知症や精神疾患などを含めた脳血管障害において,神経,グリア細胞,血管をミクロ領域で生きたまま同時観察可能な二光子レーザー顕微鏡法(二光子顕微鏡)で観察し,これら病態の発症に関わる脳微小領域での血流低下と細胞環境や神経機能の変化との因果関係を明らかにすることを目的とした.【内容】脳の活動はダイナミックに変化するため,脳の活動に伴う脳血管の応答において,個々の神経活動と血管運動とを同時に計測することは両者の定量的関係性を理解する上で重要である.そこで本年度も引き続きマウス大脳皮質3次元空間における神経細胞と血管反応との定量的関係性について検討した.また脳血管の可塑性に伴う周辺グリアとの相互作用を明らかにするため,慢性低酸素下における血管新生時のミクログリアの挙動に着目し,血管形状および細胞運動の評価と薬理実験を実施した.【成果】機能的な神経活動に対する微小血管の応答は約86%の毛細血管部位では変化がみられず,残り14%の毛細血管部位が拡張収縮することが明らかとなった.本成果は二光子顕微鏡画像の大規模解析によってはじめて定量的に特徴付けることが可能となり,これにより毛細血管血液量の変化をより高精度に推定することが可能となった.その結果,従来の脳活動イメージングの信号源が動脈血液量の増加によるものであるという知見を強く支持する結果となった.さらに,本研究により毛細血管の動脈性・静脈性による極性の違いがあまり問題ではないことが分かった.すなわち,健常時の脳活動に対する脳血流の反応性を決定する因子は,細動脈の反応性であることを強く示唆する.体調を崩すことが多く,計画通りの進捗は望めなかったと考える.医師との相談の上,休養を取ることが度々あったが,自宅での作業環境がもう少し整っていればと感じることもあった.また,今年度はコンピュータで解析不可能な領域を人の目で確認しつつ計測できる解析支援グラフィカルユーザーインターフェース(GUI)の開発も行っていたので,当初の計画とは遅れていると考える.しかし,このGUIによりMATLABプログラミングが不得意な人でも容易に今までの計測ができると考える.【平成30年度】今年度は,神経・グリア細胞の位置関係と血管の反応部位との空間的な関係や血管の変動部位と変化しない部位において何が異なるのか,流体力学的観点や細胞構造の違いに着目して研究を発展させる.【さらなる発展】認知症のモデルマウスとして,アミロイドβの前駆体(APP)を脳内に過剰発現させたアミロイド蛋白の過剰発現マウス(APP23; PNAS 1997)およびタウ蛋白の変性マウス(rTg4510;science 2005)を実験に用いる.これらは別途研究費で購入する.前年度に確立した二光子顕微鏡画像の定量評価法を用いて,健常から病態発症の急性期・亜急性期における血管・グリア・神経細胞の形態および機能変化を定量化する.
現実的制約条件を考慮した経済政策のデザイン

本研究を通して多くの成果が得られたが、その最大のものは「経済政策をデザインする際に、利害関係者のインセンティブを折り込むことの重要性」を再確認できたことだろう。本研究は3部から構成される。第1部「我国の公共事業におけるインセンティブ問題」では、1990年代の不況期に非効率的な公共事業が推進された構造的な理由が、政策立案段階において利害関係者のインセンティブを考慮しなかったためであると考え、このようなインセンティブを制約条件として考慮した経済政策について分析した。研究実績の概要本研究の目的は、家計と企業の最適化行動を織り込んだうえで、実行可能な経済政策の効果を、実証的・規範的に分析することである。(研究計画調書「研究目的」参照。)3年計画の初年度である、平成14年度では、以下のような研究成果が得られた。1.The effects of Aggregate Demand Composition on the Economic Growth in Aging Societies;この研究では少子・高齢化による経済のサービス化の加速が、マクロとミクロレベルでの経済パフォーマンスに与える影響および経済政策の効果を分析したものである。主要な発見として、少子・高齢化の進行によるサービス産業の拡大は、労働生産性が相対的に高い製造業の縮小を伴うために、全体としてのマクロ的パフォーマンスの低下を引き起こす一方、資本・労働比率が上昇するために、一人当りの厚生水準が悪化するわけではないことが示された。本研究から導かれる2つめのメッセージは、人口が縮小しても一定の総支出額を維持しなければならないような公共支出が、少子・高齢化の進行する下では深刻な問題となる可能性があることである。(国内・海外のセミナーで報告。「広島大学経済論叢」2003年掲載予定。)本研究の目的は、家計と企業の最適化行動を織り込んだうえで、実行可能な経済政策の効果を、実証的・規範的に分析することである。)3年計画の2年目である、平成15年度では、以下のような研究成果が得られた。1.菅壽一、「財政赤字と財政再建-政府予算制約の含意を中心に-」広島大学経済論叢、第27巻第1号、2003.7わが国の財政はいずれ自動的に均衡を回復し、破綻の懸念はないといえるのであろうか。どのようなメカニズムで、このような深刻な事態に陥ったのか。わが国の政府は、この財政赤字に対処できる能力をもっているのだろうか。長期停滞のなかで、財政政策は文字通り財政赤字の罠に嵌り、身動き取れない状況にある。破綻の道への歩みを食い止めるには、どのような処方箋を描けばよいのか。政府予算制約から得られる財政赤字と公債に関する基本的な算術と論点の再整理を通して考える。2.二村博司,Internalizing Technological Externality under Default Risk、November,2003広島大学ディスカッションペーパーNo.2003-5(学術誌に投稿中):第2次世界大戦後の復興期において、我国政府は鉄・石炭・電力といった、全産業の基盤となる部門の回復を優先目的とした「傾斜生産方式」を試みた。傾斜生産方式の軸となるのは(i)目的産業の生産費用を補填すること、(ii)国策銀行である「復興金融公庫(日本開発銀行)」を通じた、目的産業への優先的資金配分という、2つの政策手段であった。本研究では、(1)生産関数における技術的外部効果と、(2)債務者である企業による貸倒れリスクという、2種類の市場の失敗が存在する経済においては、上述した傾斜生産方式によって、社会的に最適な(ファーストベストな)資源配分を実現できる可能性を示した。現在長期の不況に陥っている我国が復興するためには、情報化産業を軸とした企業間・産業間ネットワークを構築し、これを利用することによって生産性を向上させることが期待されている、しかしながらネットワーク外部性の存在による過小投資や、新技術導入の伴う貸し手・借り手間の情報の非対称性など、今日の我国が抱える問題は、戦後復興期と共通する点が多い。このことから、本研究における経済政策分析から得られた知見は、今後の我国における経済政策の運営に対して重要な支店をあたえるものと期待される。本研究の目的は、家計と企業の最適化行動を織り込んだうえで、実行可能な経済政策の効果を、実証的・規範的に分析することである。)3年計画の最終年度である、平成16年度では、以下のような研究成果が得られた。1.二村博司、「我国の公共事業問題」、広島大学経済論叢、第28巻第3号、2005年3月、pp.7-34。この研究では我国の公共事業に関わる問題の現状を、データを概観することによって整理した。研究内容は以下の3つの節から構成される。

まず第1節で我国の経済状況および公的部門の財政状況を把握した上で、以下の研究の基盤となる、公共事業に関する統計データについて概観した。続く第2節では戦後の我国における経済政策を、公共事業を中心として概観し、今日のような公共事業の肥大化に至った経緯について考察した。第3節では、先述した経済政策の果たすべき3つの役割について、公共事業を中心とした考察を行った。具体的には、1990年代の不況下で顕在化した我国の抱える構造的な問題を(i)政治的要因、(ii)地方財政制度、及び(iii)情報の非対称性という3つの側面から考察し、更にこの問題を解決することが困難な理由を「効率性と公平性のトレードオフ関係」に求めた上で、具体的な問題解決方法にっいての提言を試みた。2.二村博司、「公共財需要過大予測問題」、広島大学経済学部ディスカッションペーパーシリーズNo.2005-2。この研究では政府をプリンシパル、公共財生産企業をエージェントとして、「家計による公共財需要」が企業の私的情報であるために、企業が政府に対して「家計による公共財需要」を過大に申告するために生じる問題を分析した。これら以外に現在執筆中のものとして、次の2つがある;3.二村博司、「公共財費用過大予測問題(仮題)」4.二村博司、内藤達郎^*、「公的医療保険制度改革の厚生分析(仮題)」^*広島大学社会科学研究科
１０カラーフローサイトメトリーを用いた造血細胞の分化抗原解析と白血病診断法確立

10-カラーフローサイトメトリーを用いて、T細胞についてはCD45 / 7/ 5/ 2/ 1a/ 3/ 4/ 8/ 56/ 99、B細胞についてはCD45 / 19/ 10/ 34/ 20/ 38/ 58/ 44/ 45RA/ B-細胞以外の系統マーカーに対する抗体のカクテルの組み合せによる、細胞系統特異的抗原と、分化段階に応じて発現が変化する抗原の同時検出により、非腫瘍性細胞と腫瘍性細胞を解析した結果、各分化段階の正常リンパ球の抗原発現の特徴と、リンパ系腫瘍の抗原発現様式との差が明らかになり、約9割の症例で微少残存白血病(MRD)検出が可能であった。10-カラー解析Brilliant Violet / FITC / PE / ECD / PC5.5 / PC-7 / APC / APC-AlexaFluor-700 / APC-AlexaFluor750 / KromeOrangeの10種の蛍光色素を用いて、正常および腫瘍性の種々の分化段階のT細胞について抗体カクテルCD45 / 7/ 5/ 2/ 1a/ 3/ 4/ 8/ 56/ 99を用いて検討を行ない、分化の過程において、CD5の発現が陰性強陽性に、逆にCD99の発現が強陽性弱陽性に変化し、特に腫瘍細胞でその傾向が著しいことから、両者の組み合せによって腫瘍細胞と正常細胞を区別できる可能性が示された。これに、CD4, 8, 1a, 3の発現と、症例に応じて適宜異常発現している抗原を組み合わせることで、ほとんどの症例で微少残存病変(MRD)の検出が可能と考えられた。正常検体に含まれるNK細胞はCD7, 2あるいは5陽性かつCD3陰性であり、未分化型のT細胞性白血病との鑑別が必要となるため、そのマーカーであるとCD56をパネルに加えておく必要性があることが明らかになった。B前駆/B細胞の分化過程を解析するためのパネルとして、CD45 / 19/ 34/ 10/ 20/ B細胞以外の細胞系統に対する除外用抗体のカクテルを基本として、昨年度はCD58/ 38/ 44/ 45RAのパネルを用いることで約9割の症例でB前駆細胞性白血病細胞と正常のB前駆細胞とを区別可能であることを示した。上記で区別できない白血病症例について検討し、さらにCD72/ 73/ 86/ 200、およびCD123/ 133/ 27の2つのパネルを併用する事で、その約半数は白血病細胞を正常細胞から区別可能である事が明らかになり、この3つのパネルと、症例に応じて適宜異常発現している抗原を組み合わせることによりほとんどのB前駆細胞性白血病の症例に対してMRD検出が可能と考えられた。10-カラー解析用として、Pacific Blue / FITC / PE / ECD / PC5.5 / PC-7 / APC / APC-AlexaFluor-700 / APC-AlexaFluor750 / KromeOrangeの10種の蛍光色素を用いて、種々の抗体の組み合せについて検討し、蛍光補正が可能であること、測定上問題となる抗体相互の競合は生じないことを明らかにした。また、Pacific Blueと同等の蛍光特性を有するBrilliant Violetを比較し、後者の方がより強い蛍光強度を得ることができる点で優れていることを示した。B前駆/B細胞の分化過程を解析するためのパネルとして、CD44/CD45RA/CD20/CD38/B細胞以外の細胞系統に対する抗体のカクテル/CD58/CD34/CD10/CD19/CD45の組み合せが優れており、正常のB前駆/B細胞は分化段階に応じて、常に一定の抗原発現パターンを示すことを明らかにした。これに対して、腫瘍性のB前駆細胞(白血病、リンパ腫)の場合は、CD44/CD45RA/CD38/CD58のうち、いずれかの発現量が正常と異なる場合が多く、約9割の症例で正常のB前駆細胞と区別可能であり、微少残存病変(MRD)検出に有用であることが明らかとなった。一方、腫瘍性のB前駆細胞に異所性の抗原(骨髄系抗原等)の発現を認める場合は、MRDの指標として有用であるものの、必ずしもすべての芽球に均一に発現しているわけではないため、活用できる症例は限定されることが明らかとなった。T細胞についても同様の検討を行ったが、T細胞性腫瘍の場合は、抗原の発現パターンが多様であり、症例ごとに初発時のマーカー解析の結果をもとにMRD検出用の抗体の組み合せを考える必要があり、今後検討が必要と考えられた。当初の計画に沿って、予定していた研究を実施し、ほぼ期待通りの成果が得られている。

当初の計画通り研究を進め、さらに例数を増やして腫瘍性B細胞と非腫瘍性のB細胞の抗原発現様式を詳細に比較検討し、B前駆細胞性リンパ芽球性白血病の臨床検体に対する10-カラー解析による微少残存病変(MRD)検出法の有用性について結論を得る。また、T細胞およびT細胞性腫瘍についても、同様の解析を進め、T細胞性腫瘍のMRD検出法についても確立を目指す。該当なし