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複式教育における創造性を育む算数科の「授業構成」の研究

算数科複式授業の授業構成では、教材の共有性と単純化が不可欠である、教材の単純化は算数的活動の広がりを促し創造性を育む要因になる、導入場面では既習内容を視野に入れた操作活動が算数的活動を誘発する、「わたり」と「ずらし」の教師の判断は授業理解の枠組みが効果的である、複式授業でも教師の教科力が重要である。これらのことは協力校の継続した実践的研究で教師や子どもたちの変容から確認できた。本研究は、複式授業における「わたり」と「ずらし」の位置づけ、創造性を育む教材の開発とその活用方法、「授業理解の枠組み」を用いて算数科の複式授業のあり方を明らかにすることを目的としている。平成19年度は、対馬(1校)、壱岐(1校)、上五島(2校)の複式学級を有する小学校4校の協力を得て、複式授業の学習指導案の協議、授業実践、授業研究を継続的に行ってきた。「わたり」と「ずらし」の位置づけは、「授業理解の枠組み」を用いて子ども達の算数的活動の視点から授業の図解化・分析を行い、学習指導案や授業研究の中で「わたり」「ずらし」を、教師の経験ではなく子ども達の算数的活動の視点から判断できる基準について研究を進めている。同時に、先生方に教材の数学的価値と活用の理解を深め、創造性を育む授業のあり方について実践的な研究を進めている。成果の一部は、研究発表、学会発表で行った。この結果、4校の授業では教師の授業力アップのテーマのもとで積極的な協力を得ており、来年度も継続して授業研究を続けることになっている。それぞれの学校においても職員室での話題が教材や授業展開、子ども達の活動などが多くなり、子ども達の授業への態度も変容しているという。また、上五島では2つの小学校が共同で授業研究を行い、それぞれの学校の授業スタイルへの構築に取り組みを行われている。本研究は、複式授業における「わたり」と「ずらし」の位置づけ、創造性を育む教材の開発とその活用方法、研究代表者および分担者とともに研究を行っている「授業理解の枠組み」を用いて算数科の複式授業のあり方を明らかにすることを目的としている。平成20年度は昨年度までの対馬(1校)、壱岐(1校)、上五島(2校)の複式学級を有する小学校4校に加え、長崎市内の複式学級を有する小学校と長崎大学教育学部複式学級の協力を得て、授業理解の枠組みの視点から授業構成の考察、学習指導案の協議、授業実践、授業研究を行った。複式学級における算数科の授業では、子ども達による筑数的活動と教師の「わたり」と「ずらし」のあり方は大変関係が深い。しかし、「授業理解の枠組み」を用いて子ども達の算数的活動の視点から授業の図解化・分析を行い、学習指導案の検討および授業研究の中で「わたり」「ずらし」を、教師の経験ではなく子ども達の算数的活動の視点から客観的に判断できる基準作りの研究を進めている。同時に、先生方に教材の算数・数学的価値とその活用の理解を深め、教材をシンプルにすることにより、翻造性を育む授業の実践的な研究を進め、成果の一部は、研究発表、学会発表で行った。最終年度は、これらの成果を踏まえて、複式授業における教師の授業力アップをテーマにして授業研究を続ける予定である。研究協力校では職員室での話題が教材や授業展開、子ども達の活動などが多くなり、子ども達の授業への態度も変容している。これらの成果を精査し、複式学級における算数科授業のあり方について学会での発表および提言を行う。今年度は、これまでの研究協力校(壱岐・対馬・上五島の複式を有する小学校)での学習指導案の検討およびその授業実践と授業研究を行い、これらの結果をもとに上五島の研究協力校で創造を育む授業構成の実践的研究を行った。この結果以下のような結論を得た。研究目的(1)「わたり」と「ずらし」の位置づけ「わたり」と「ずらし」を効果的に行うためには、教材の単純化および各学年で扱う教材の共有化が重要であること。これは子ども達がこれまでの学習内容を思い出す可能性を広げ、教師の「わたり」と「ずらし」の判断を容易にすることができるようになる。研究目的(2)創造性を育む教材の開発創造性を育む教材を開発することは単式授業においてもなかなか容易なことではないが、教科書の教材を数学の活動の視点から考察することは可能である。操作活動を伴う教材の算数の扱われ方、これまでの算数科の教材としての見方とこれからの学年で扱われる算数的な考え方の双方を考察することは、複式授業の方が単式授業よりも容易である。これは研究協力校の先生方の多くが経験されている。そのため、教科書の教材の算数的意味について考察を深めることが教材開発への道筋となる。研究目的(3)授業理解の枠組みと複式授業の構成授業理解の枠組みを用いた授業構成では、教材のもつ算数性の考察、子ども達の算数的活動の予測することに意義がある。

そのためには教材の算数的価値について低学年から高学年までの扱いと算数的方法を考察することが必要である。これらの成果を、長崎大学教育学部附属小学校算数科及び算数研究会において実践的授業研究を進めており、導入のための導入教材の研究が重要になること、またこのことから算数的活動を誘発できるいくつかの実践研究を進めている。
映画作家、メディア、社会――戦中・戦後の小津安二郎作品

本年は小津安二郎に関する研究をまとめるために、本研究「映画作家、メディア、社会ー戦中・戦後の小津安二郎作品」を、2015年までにおこなった科学研究費の支援を受けた研究プロジェクト「『動き』と『明るさ』の美学ー小津安二郎初期映画と戦間期日本における映画言説」(とくにサイレント映画が主題)と総合し、2019年度中に出版を予定している単著(小津のサイレント映画美学が主題だが、戦中・戦後作品についても十分に言及し、日本映画、社会、メディアとの関連において小津作品と小津の映画美学が持つ原意について論じる)の用意をすすめた。同時に、これは今までの研究を見直し、膨大な資料や作品への再確認の作業でもあった。新しい論文や研究発表というかたちでのアウトプットはなかったが、研究の蓄積につとめ、近いうちに研究成果として発表されるためには必要な作業をおこなった。また、一般向け講演として、小津安二郎生誕の地である江東区の古石場文化センターにおいて、全5回にわたる市民講座「本当は怖かった小津映画」を、サイレント作品から戦後後期作品までを縦断して論じたを担当し、研究の社会に対する還元につとめた。市民講座に出席した方々との意見交換を通じて、狭い意味でのアカデミックな研究にとどまらない小津作品が現代社会において持つ意味と芸術性(および娯楽性)について、広い視野から考察する機会となり、さらには研究の社会発信というかたちで社会貢献ができた。三カ年を計画している本研究の1年目は、主として小津安二郎作品そのものを綿密に検証することを目指した。その成果として、サイレント作品を対象としてだが、小津後期作品までを射程に含めた〈視線の一致しない切り返し〉に関する論考“The Moment of Instability: The Textual and Intertextual Analysis of Ozu Yasujiro's Passing Fancy"(『城西国際大学紀要』24号5巻(2016)、1-18頁)と、後期サイレント作品を対象としつつも、『晩春』や『麦秋』を含めた戦後の有名作品までを射程に収めた、小津の演出に関する論考「小津安二郎映画における〈演出〉の美学ー1934年から1936年までの作品とトーキー化の問題」(『城西国際大学紀要』24号5巻(2016)、19-37頁)を論文として発表することができた。また、小津と社会の関係を、作品分析としての綿密さを失わず試みた研究発表として、『風の中の牝どり』や『晩春』を論じた、「階段、暴力、結婚ーキング・ヴィダー『結婚の夜』ならびに小津サイレント作品を背景とした、小津安二郎戦後作品の考察」(表象文化論学会第10回研究発表会、東京大学、2015年11月)などを行い、主として作品分析を行いながら、小津作品とコンテクストの関わりまで考察の地平に含めた研究を進めた。加えて、映画、メディア、社会の関係について考察した、古典的文献、最新の研究成果、同時代の一次資料の読解を進め、次年度以降の研究の準備を進めた、先述したように、初年度は小津安二郎の作品分析に関する二本の研究論文を発表することができ(“The Moment of Instability: The Textual and Intertextual Analysis of Ozu Yasujiro's Passing Fancy"『城西国際大学紀要』24号5巻と「小津安二郎映画における〈演出〉の美学ー1934年から1936年までの作品とトーキー化の問題」『城西国際大学紀要』24号5巻)、この点において、十分な成果が上がったと言える。これらの研究では、サイレント作品を扱いながらも、いずれの最終章も、小津の戦後作品までを射程に収めた議論を行っている。加えて、先述の研究発表(「階段、暴力、結婚ーキング・ヴィダー『結婚の夜』ならびに小津サイレント作品を背景とした、小津安二郎戦後作品の考察」表象文化論学会第10回研究発表会、東京大学、2015年11月)に加え、その準備段階でさまざまなアイディアを盛り込んだ研究発表「戦後小津安二郎作品におけるヴィダーへの参照についての考察」城西国際大学メディア論研究会、城西国際大学、2015年10月も行った。これらの発表は、戦後作品の綿密なショット分析の成果である。以上のように、当初の計画通りに研究を進めているが、論文や研究発表として成果を出すことには至っていないものの、将来の研究への基礎となる、映画、メディア、社会の関係について考察した、古典的文献、最新の研究成果、同時代の一次資料の読解も進めている。さらには、小津戦後作品のテクスト分析も行い、大島渚、吉田喜重、篠田正浩の作品など、小津以降の松竹作品(小津と対比される松竹ヌーベルバーグの作品)の分析も進め、小津と戦後の関係をより包括的に研究・考察する準備を行っている。3カ年を予定している本研究にとって、本年は2年目にあたる。二年目の研究として、小津作品の詳細なテクスト分析のみならず、小津作品周辺のコンテクストをも考慮に入れたより多角的な研究が試みられた。とはいえ、もっとも重要な研究内容は、小津作品そのものの詳細な分析であることにかわりはない。本年の実績として、まず論文「階段と田舎ーキング・ヴィダー『結婚の夜』を背景とした小津安二郎『風の中の牝鷄』と『晩春』の分析」『城西国際大学紀要』25号5巻(2016)、1-19頁の発表が挙げられる。

この論文は、前年における学会での口頭発表を大幅に発展させたもので、小津戦後作品の『風の中の牝鷄』と『晩春』を分析するとともに、戦後日本におけるアメリカニズムという観点から1930年代のハリウッド・スクリューボールコメディの受容を考察したものである。狭義においては小津論ではないが、松竹という文脈、戦後日本の大衆文化・若者文化という観点から、大島渚(および他のニューウェーブ監督)の考察も開始し、研究会での口頭発表として、「大島渚の政治映画」城西国際大学メディア論研究会、城西国際大学、2016年9月をおこなった。くわえて、松竹にとどまらない戦後日本における映画の役割・変化を、日活をはじめとする他の撮影所との関連において調査を行い、また通史として、本研究者が長年に渡っておこなっている小津安二郎研究(サイレント映画期以降)という広い文脈の中にも、本研究で得られた成果を随時位置付けている。先述したように、本年は1本の論文を発表することができ(「階段と田舎ーキング・ヴィダー『結婚の夜』を背景とした小津安二郎『風の中の牝鷄』と『晩春』の分析」『城西国際大学紀要』25号5巻(2016)、1-19頁)、この点で順調に成果を上げていると言える。この論文では、まさに本研究が大きな問題として取り上げている戦後アメリカニズムの文脈の中での小津作品の位置を考察したものであり、多くの論文や研究がなされている小津戦後作品に対し、新しい視点からアプローチができたものと考えている。また小津作品の文脈を捉えるため、松竹ニューウェーブ作品についても、当時の日本映画や松竹の状況を考慮に入れながら着手し、今後における小津作品分析との総合の端緒としている。これに関しては、昨年度からの研究の継続であるが、本年は研究発表を行うことができた(「大島渚の政治映画」城西国際大学メディア論研究会、城西国際大学、2016年9月)。本年は本研究プロジェクトの3年目にあたる。3年目の研究として、小津作品そのもの(1年目の成果)および小津作品周辺のコンテクスト(2年目の成果)を包括的に考察することが試みられた。本年の研究内容は、まず第一に、小津作品が同時代的にどのように受容されたかを検証するために、『キネマ旬報』や『映画評論』などの映画雑誌をあらためて精読し、とりわけ巨匠・映画作家小津という像がいかに1940年代後半から1950年代にかけて構築されたかを同時代批評から読み解いた。第二に、本研究で明らかにしている戦中・戦後の小津作品と歩みを、1920年代以降の小津の全フィルモグラフィーのなかで位置づけるために、主としてサイレント映画を中心とするモダニズム期と、トーキー映画を中心として「日本的映画作家」としての評価が確立される戦中・戦後期とのあいだの共通点および相違点を検証している。この考察については、大衆娯楽としての映画の社会的地位、検閲システム、イデオロギー装置のしての映画の役割など、社会的コンテクストのなかで考察される必要があり、本研究では小津研究という切り口から、日本映画史や日本近代史の考察を進めた。最後に、1950年代中盤以降の小津後期から始まる日本映画全体の変化として、大島渚や吉田喜重をはじめとするニューウェイヴ映画の台頭、戦後民主主義体制と高度経済成長、テレビという対抗メディアの出現を、巨匠・小津安二郎という視点を通じて捉え直す研究も行っている。
変形性関節症制圧を目指した新規免疫ネットワーク解析手法を用いた治療薬の開発

軟骨破片、マクロファージ、軟骨細胞を用いた関節内を模擬するvitro共培養モデルを作成した。4週齢の野生型マウス大腿骨頭軟骨より採取した軟骨を、組織破砕機を用いて粉砕して軟骨破片を作成した。また同様の方法で人工膝関節置換術時に破棄されるヒト関節軟骨正常部分を使用し、ヒト軟骨破片を作成し、これらについて走査型電子顕微鏡及び、粒度分布計で計測を行った。また、骨髄由来MΦと軟骨細胞をマウスから採取し軟骨破片との共培養を行った。さらに人工関節置換手術時に破棄される軟骨組織、ヒト骨髄液を回収し、軟骨組織から軟骨破片を、骨髄液から骨髄細胞を骨髄由来マクロファージに分化させヒト軟骨破片との共培養を行った。作成したマウス、ヒトの軟骨破片は不整で、大きさはマウスが直径平均3.11μm(0.54-55μm)、ヒトは5.20μm(0.34-65μm)であった。作成したマウス、ヒトの軟骨破片について、これらの形状・大きさは疾患患者における軟骨破片とほぼ同等であった。1.形状・大きさがOA患者における軟骨破片とほぼ同等なマウス、ヒト軟骨破片の作製に成功した2.作製した軟骨破片を用いたマクロファージ共培養モデルの作成に成功した。3.本モデルにおいて作製した軟骨破片がマクロファージを介する炎症反応を惹起し、軟骨細胞のcatabolic factorを増加させた。4.遺伝子発現の網羅的解析を終えている。これらの成果から、おおむね研究計画に沿った研究モデルの作製に成功し、解析が進められていると考えられた。本研究で作成した軟骨破片共培養モデルを用いたマクロファージおよび軟骨細胞の網羅的遺伝子発現解析結果を元に、変形性関節症における重要なシグナル分子群を同定し、そのシグナルの抑制による効果を評価していく。本研究ではこれらの軟骨破片を用いてMΦを介する軟骨細胞への影響を解析するために、マクロファージ共培養モデルを作成した。本モデルにおいて軟骨破片はマクロファージを介する炎症反応を惹起し、軟骨細胞のcatabolic factorを増加させた。軟骨破片は免疫細胞と反応し炎症反応を惹起するDAMPs (Damage associated molecular patterns)として作用し、マクロファージから炎症性サイトカインが放出したためと考えられた。1.形状・大きさがOA患者における軟骨破片とほぼ同等なマウス、ヒト軟骨破片の作製した。2.作製した軟骨破片を用いたマクロファージ共培養モデルの作成に成功した。これらの成果から、おおむね研究計画に沿った研究モデルの作製に成功したと考えられた。本研究で作成した軟骨破片共培養モデルを用いて、本モデルでのマクロファージ、軟骨細胞の網羅的遺伝子発現解析を予定している。

将来的な展望としては、それにより変形性関節症における重要なシグナルを同定し、そのシグナルの抑制による効果を評価していくことで変形性関節症の新たな治療薬の開発につなげていく。本研究で作成した軟骨破片共培養モデルを用いたマクロファージおよび軟骨細胞の網羅的遺伝子発現解析結果を元に、変形性関節症における重要なシグナル分子群を同定し、そのシグナルの抑制による効果を評価していく。次年度予定しているトランスクリプトーム解析にかかる費用確保のため、約30万円を繰り越した。次年度第1四半期中に同解析に繰り越費用を使用する予定である。
歴史的建造物保存・修復論についての日中比較史研究

歴史的建造物保存・修復の考え方は、東アジアの中で日本、韓国、台湾が近い考え方を示すのに対し、中国だけは大きく異なっている。日中の考え方の差異を、それぞれの形成過程から比較、再考し、両者の特質を探ることを今年度の課題とした。日本近代の建造物保存・修復は、明治期に19世紀ヨーロッパの考え方を取り入れることから開始された。ところが、それ以降、ヨーロッパとの積極的な交流のないまま長期を経たため、その後のヨーロッパでの考え方の変遷については断片的にしか反映されなかった。とりわけ修復については、19世紀ヨーロッパを席巻した様式的修復の考え方を基礎として、伝統的な修復方法を近代化することとなり、その核心に復原に対する強い志向性が刻み込まれることとなった。日本に関しての以上の内容を、論文として発表した。一方、中国では、戦前の段階から日本及び中国自身による建造物保存が始まっていたが、戦後の共産主義体制のなかでその流れは断ち切られた。新しい文化財保護は、1961年に制定された全国重点文物保護単位に象徴されるよう、日本とは全く異なる枠組みで進められた。また、修復については、木造を基調とする構造をもつため、解体修理の手法を取る点では日本と共通しているものの、解体に及ぶ修復は破損が大きい場合にやむを得ずおこなうもので、現状維持を前提にしているところがうかがえる。修復方法についての言及においても、解体をおこなわずに修復するための技法が強調されており、むしろ近代以前の伝統的手法を正当に受け継いでいるように感じられる。戦後になって西洋的な考え方を本格導入した中国においては、様式的修復が批判されてから以降の考え方が導入されていったために、我彼の差異が生じたのだと考えられる。以上の考察から、木造建築の根本修理手法としての解体修理は、近代的な思考のなかで評価を異にするに至ったのだと結論付けられる。本年度は、木造建造物の保存・修復論の国際比較をおこなうための準備として、中国における保存・修復論についての情報収集と、それをふまえての日本の建造物保存・修復論の歴史の再考をおこなった。前者にかんして、現代中国における歴史的建造物保存・修復史叙述をみると、解放後の中華人民共和国政府による事業に限って叙述されており、それ以前の状況との関係の叙述が欠如している。そこで、今年度は日中戦争以前における日本政府による中国の文化財保存事業の概要を把握するために、資料収集および現地視察をおこなった。とりわけ、中国東北地方における文化財保存事業の概要を知るために承徳を訪れ、歴史的建造物の現状把握をおこなった。現在、収集資料を整理、読解している段階にある。並行して、日本における明治から現在に至る建造物保存・修復論を、中国との比較に留意しつつ考察した。現段階での成果は別掲の論文として報告し、その他にも数編の論文を準備している。中国における建造物保存・修復の方法は1950年代以降に培われていった側面があるために、19世紀までに培われてきた建造物維持修理システムおよびその技術基盤との間に懸隔がある。一方の日本の修理システムには伝統的な方法が色濃く継承されており、日中の修理システムの差異は伝統の継承と断絶のあり方に由来するであろうことが指摘できる。別掲論文ではとりわけ明治の建造物修理開始期において、伝統的方法と西洋的な修理への思想との融合過程を明示している。次年度は、1950年代以降の中国における修理方法の確立過程を、日本の修理方法との比較のもとに明らかにしていく作業を予定している。
ウイルスに対する免疫応答を規定する非感染状態の免疫システムに関する研究

ウイルス感染において必須のインターフェロン(IFN)は,非感染状態においても,非常に微量に産生されていることが知られており,この構成的に産生されるインターフェロンとそのシグナルは,ウイルス感染後に強力に誘導されるインターフェロン産生に寄与することが知られている.これまで研究代表者らは,ウイルス感染に対する感染防御システムの研究を推進し,ウイルス感染時に誘導されるI型およびIII型インターフェロンの発現誘導やその制御機構に関する研究を行ってきた(Nature Immunology 2011 12:37-44; Immunity 2015 42:123-32; Nature Immunology 201617:687-94).一般的にウイルスに対する免疫応答はウイルス感染後に活性化する自然免疫応答が重要であると考えられているが,こうした研究を実施する中で,感染後に活性化される自然免疫応答の重要性と同時に,非感染状態における細胞の状態が抗ウイルス応答に大きく影響を受けるのではないかと考えるに至った.つまり感染症に対する生体防御は,感染前の状態によって規定されると考えられる.本研究課題では,非感染時の定常状態における免疫システム,特に構成的に産生されるインターフェロンとそれを制御する制御因子に着目して研究を推進し,このような非感染時の免疫システムを制御することによって,これまでにない新しいアプローチでの感染症やがんに対する予防法を開拓するための分子基盤を構築することを目指している.本研究では, [1]構成的なインターフェロンの産生誘導メカニズムとその制御機構について,[2]非感染時の定常状態における免疫システムを制御するシグナルについて,の2点を中心に研究を進める予定である.2018年度の研究計画としては,HEK293T細胞を用いたpreliminaryな実験から,構成的な微量なインターフェロン産生には,RNAセンサー分子が関与することをsiRNAを用いたノックダウンの実験から示唆されたことから,これを検証する(代表:亀山武志,分担:高岡晃教).RNAセンサーとそのシグナル伝達経路に関与する因子を,siRNAを用いてノックダウンした細胞やCRISPR/Cas9 (Science 2013 339:819-823)システムを用いてノックアウト細胞(分担:佐藤精一)を用いて,これらのシグナル伝達分子と構成的に産生される微量なIFNの発現誘導との関連性について,IFN-βのルシフェラーゼアッセイ,ならびに定量的RT-PCR, ELISAを用いて検証する(分担:山田大翔)ことを予定していた.これらの研究計画に沿って研究を遂行し,構成的な微量なインターフェロン産生のシグナル伝達経路について詳細な解析を行う一方で,自然免疫シグナルの各種ノックアウト細胞を樹立することが出来たため,概ね順調であると言える.2019年度の研究計画としては,2018年度に作製・樹立した各種ノックアウト細胞を用いて自然免疫の各種シグナル伝達分子と構成的に産生される微量なインターフェロンの発現誘導との関連性について,IFN-βのルシフェラーゼアッセイ,ならびに定量的RT-PCR, ELISAを用いて検証する(代表:亀山武志,分担:高岡晃教,分担:山田大翔).一方で他のシグナル伝達因子が構成的なインターフェロン産生に関与するかについて検証する(分担:佐藤精一).さらに,内因性のRNAがこの応答に関与する結果が得られたことから,内因性RNAが関与するのかについて(代表:亀山武志,分担:山田大翔)や,この内因性RNAを制御する新規シグナル伝達因子について探索(分担:佐藤精一)を行うことを予定としている.これらの得られた結果は,適宜取りまとめて成果の発表を行う予定である.また研究代表者亀山は,適宜分担者と連絡を取ることで研究の方向性等についてdiscussionしていく予定としている.ウイルス感染において必須のインターフェロン(IFN)は,非感染状態においても,非常に微量に産生されていることが知られており,この構成的に産生されるインターフェロンとそのシグナルは,ウイルス感染後に強力に誘導されるインターフェロン産生に寄与することが知られている.これまで研究代表者らは,ウイルス感染に対する感染防御システムの研究を推進し,ウイルス感染時に誘導されるI型およびIII型インターフェロンの発現誘導やその制御機構に関する研究を行ってきた(Nature Immunology 2011 12:37-44; Immunity 2015 42:123-32; Nature Immunology 201617:687-94).一般的にウイルスに対する免疫応答はウイルス感染後に活性化する自然免疫応答が重要であると考えられているが,こうした研究を実施する中で,感染後に活性化される自然免疫応答の重要性と同時に,非感染状態における細胞の状態が抗ウイルス応答に大きく影響を受けるのではないかと考えるに至った.つまり感染症に対する生体防御は,感染前の状態によって規定されると考えられる.本研究課題では,非感染時の定常状態における免疫システム,特に構成的に産生されるインターフェロンとそれを制御する制御因子に着目して研究を推進し,このような非感染時の免疫システムを制御することによって,これまでにない新しいアプローチでの感染症やがんに対する予防法を開拓するための分子基盤を構築することを目指している.

本研究では, [1]構成的なインターフェロンの産生誘導メカニズムとその制御機構について,[2]非感染時の定常状態における免疫システムを制御するシグナルについて,の2点を中心に研究を進める予定である.2018年度の研究計画としては,HEK293T細胞を用いたpreliminaryな実験から,構成的な微量なインターフェロン産生には,RNAセンサー分子が関与することをsiRNAを用いたノックダウンの実験から示唆されたことから,これを検証する(代表:亀山武志,分担:高岡晃教).RNAセンサーとそのシグナル伝達経路に関与する因子を,siRNAを用いてノックダウンした細胞やCRISPR/Cas9 (Science 2013 339:819-823)システムを用いてノックアウト細胞(分担:佐藤精一)を用いて,これらのシグナル伝達分子と構成的に産生される微量なIFNの発現誘導との関連性について,IFN-βのルシフェラーゼアッセイ,ならびに定量的RT-PCR, ELISAを用いて検証する(分担:山田大翔)ことを予定していた.これらの研究計画に沿って研究を遂行し,構成的な微量なインターフェロン産生のシグナル伝達経路について詳細な解析を行う一方で,自然免疫シグナルの各種ノックアウト細胞を樹立することが出来たため,概ね順調であると言える.2019年度の研究計画としては,2018年度に作製・樹立した各種ノックアウト細胞を用いて自然免疫の各種シグナル伝達分子と構成的に産生される微量なインターフェロンの発現誘導との関連性について,IFN-βのルシフェラーゼアッセイ,ならびに定量的RT-PCR, ELISAを用いて検証する(代表:亀山武志,分担:高岡晃教,分担:山田大翔).一方で他のシグナル伝達因子が構成的なインターフェロン産生に関与するかについて検証する(分担:佐藤精一).さらに,内因性のRNAがこの応答に関与する結果が得られたことから,内因性RNAが関与するのかについて(代表:亀山武志,分担:山田大翔)や,この内因性RNAを制御する新規シグナル伝達因子について探索(分担:佐藤精一)を行うことを予定としている.これらの得られた結果は,適宜取りまとめて成果の発表を行う予定である.また研究代表者亀山は,適宜分担者と連絡を取ることで研究の方向性等についてdiscussionしていく予定としている.
言語行為論的観点からのジョン・ロックの言語論の研究

ジョン・ロックの言語論を言語行為論的な観点から読み解くという作業を遂行するために以下のことを行なった。1.従来、私的言語説を表明したにほかならないものとして受け取られてきたロック言語論の基本テーゼに着目し、これが私的言語説を示すものではないことを明らかにした。具体的には、「言葉は、その一次的ないし直接的な意味表示において、その言葉を使う人の心の中にある観念のみを表わす」という基本テーゼが、知覚や思考の原理的な次元における意味媒介性という事実と日常的な言語使用における規範を示していること、そしてこのことが言葉の意味の公共的な側面を示す「共通の使用法」の存在を前提にしていること、これらを明らかにすることによって、基本テーゼが私的言語説を示したものでないこと、また、言語行為の主体として「人格」が想定されていることを明らかにした。そして、この研究成果を「ロック言語論における事実と規範--基本テーゼの分析から--」の題目の下に論文にまとめ、日本イギリス哲学会編『イギリス哲学研究』第30号に提出し、掲載された。2.ロックの実在的本質の議論の中に科学実在論的態度を見出すという近年支配的な読みに対し、それとは異なる見方を提示した。具体的には、ロックの言う実在的本質が個物に関わる本質であること、そして実在的本質が類種に関わるとしたら、抽象観念を媒介してのみであること、その意味でそれはクリプキ・パトナム的な類種の本質ではないこと、このことを明らかにすることによって、ロックがクリプキ・パトナム的な科学実在論ではなく、言語行為を前提する制度的実在論とも言うべき立場を採っていたことを明らかにした。そして、この研究成果を「ジョン・ロックの本質論」の題目の下に論文にまとめ、東京大学哲学研究室『論集』25に提出し、掲載された。ジョン・ロックの言語論を言語行為論的な観点から読み解くという作業を遂行するために以下のことを行った。具体的には、「言葉は、その一次的ないし直接的な意味表示において、その言語を使う人の心の中にある概念のみを表わす」という基本テーゼが、知覚や思考の原理的な次元における意味媒介性という事実と日常的な言語使用における規範を示していること、そしてこのことが言葉の意味の公共的な側面を示す「共通の使用法」の存在を前提にしていること、これらを明らかにすることによって、基本テーゼが私的言語説を示したものでないこと、また、言語行為の主体として「人格」が想定されていることを明らかにした。そして、この研究成果を「ロック言語論のテーゼと規範性」の題目の下に日本イギリス哲学会第30回大会個人研究発表で発表した。2.従来、矛盾を孕むものと捉えられてきたロックの知識の定義に着目し、これが矛盾を孕むものではないことを言語行為論的な観点から明らかにした。具体的には、「観念の一致・不一致」という知識の定義の中に「実在」の知識が含められている点に着目し、一件矛盾を孕んでいるように見えるこの事実が、言語行為における規範という観点から見れば、「実在」の知識も「観念の一致・不一致」を前提するがゆえに、矛盾を孕むものでないことを明らかにした。そして、この研究成果を「ジョン・ロックの命題論」の題目の下に論文にまとめ、東京大学哲学研究室『論集』24に提出した。
炭酸固定反応を触媒する脱炭酸酵素の機能発現解析とその応用

2,4-ジヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素は、これまで存在は示唆されていたが、活性を持つ微生物株の分離と酵素の精製は報告されていなかった。土壌から集積培養によって、本酵素活性を示す微生物を分離した。酵素を単一に精製し、反応特性と分子特性を検討したところ、新規性の高い脱炭酸酵素であることが判明した。逆反応による炭酸固定反応では、副生成物が生じずに位置選択的な炭酸固定反応が進行した。種々のヒドロキシ安息香酸の脱炭酸反応を触媒する酵素がこれまでに発見され、酵素サブユニット構成は基質特異性にもとづいて2つのグループに大別してきた。2,4-ジヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素は水酸基の位置にもどついて考えると、いずれのグループに属するかは不明である。2,4-ジヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素を持つ微生物が存在することが示唆されているが、微生物を分離した報告はなかった。そこで、集積培養法を用いて本酵素活性を持つ微生物の分離を進めた。前年度には分離に至らなかった。その原因は環開裂を優先する微生物群が目的の微生物より生育が早いためと考え、集積培養後の培養液を希釈して分離を試みた結果、目的活性を持つ微生物を10株得た。培養条件を検討して活性を向上させ、基質特異性を検討した。没食子酸(3,4,5-トリヒドロキシ安息香酸)の脱炭酸酵素は腸内細菌の1種で諸性質を報告しているが、そのN末端アミノ酸配列とデータベース上で相同性を示すタンパク質は存在しない。反応機構上では上述の2つのグループに属すると考えられる。応用面でもピロガロールの生産に適用できる酵素であることから、安定で活性の強い没食子酸脱炭酸酵素の探索も進めた。没食子酸が互いにエステル結合したタンニン酸を用いた集積培養で、本酵素活性を持つ細菌とカビを見いだした。カビでは本酵素活性を初めて見いだし、安定な酵素を持つと考えられ、特徴解析を進めた。2,4-ジヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素は、これまでに存在が示唆されながらも活性を示す微生物株が分離されていなかった。集積培養を行い、培養液を希釈するなどの技法を用いることで、本酵素活性を持つ細菌株を分離することに成功した。一般的な集積培養では振とう培養を行うが、水酸化反応が優先するため、静置培養して脱炭酸活性を持つ微生物の生育を配慮する必要があり、これまで活性菌の分離が困難である原因が判明した。酵素誘導物質を検討した結果、2位および4位の水酸基が共に活性誘導に重要であることが判明した。活性を高めた菌体を用いた反応で、基質特異性などの反応特性を明らかにした。また、逆反応による炭酸固定機能を評価したところ、レゾルシノールへの位置選択的なカルボキシル基導入が可能で、副生成物を生じないことを示した。培養菌体から単一の精製酵素標品を調製し、これまでに報告のあるヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素と分子特性を比較した。熱安定性が極めて高く、精製過程で処理が効果的であった。精製酵素のサブユニット分子質量は25 kDaでホモダイマー構想をとり、既知の類縁酵素の中で最も小さく、一次構造上での相違があると考えられる。N末端アミノ酸配列は既知脱炭酸酵素との相同性は認められず、腸内細菌科の機能未知タンパク質と末端10残基が一致した。これらの結果から、本研究で見いだした2,4-ジヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素は、炭酸固定機能を備えた新しい構造特性を持つ酵素であり、タンパク質分子が最も小さいため、炭酸固定機能を発揮する酵素構造特性の解明に適すると考えられる。今後、酵素遺伝子のクローニングを進め、酵素高次構造解明などを検討する。ピロール-2-カルボン酸脱炭酸酵素は効率的に炭酸固定反応をも触媒する酵素であるが、これまでに大腸菌などで機能発現しなかった。一方、4-ヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素を用いた実験から、少なくとも活性発現には3つのサブユニットが必要であることが分かってきた。そこで、未同定のタンパク質サブユニットが活性発現に不可欠であると考え、2種の微生物からピロール2-カルボン酸脱炭酸酵素を精製し、活性発現に関与するタンパク質因子の探索を進めた。イオン交換樹脂を使用した精製ステップにおいて顕著に比活性が低下し、弱く会合したサブユニットが解離することが予想された。微弱に残存する活性を指標とし、脱炭酸酵素を部分精製し、機能発現に関与する候補タンパク質の同定を進めた。電気泳動像の解析から候補タンパク質を推定した段階である。炭酸固定反応を触媒する新たな脱炭酸酵素を見いだすために、2,4-ジヒドロキシ安息香の酸脱炭酸酵素を探索することとした。好気条件で集積培養を行なったところ、ベンゼン環の開裂反応が優先的に進行し、脱炭酸反応を触媒する微生物を集積することは困難であった。そこで、微好気条件(静置培養)で集積培養を行なった結果、脱炭酸反応で生じるレゾルシノールを生成する培養ロットが認められた。

微生物を未分離の状態で休止菌体を調整し、目的酵素反応を持つ微生物が潜在することを確証した。また、基質特異性を予備的に調べた結果、幅広い基質の脱炭酸反応を触媒することが明らかと成った。今後、活性菌の単離と酵素精製と特徴解析を進めることを計画している。目的とする新規の脱炭酸酵素活性を持つ微生物群を見いだすことができ、活性菌をライブラリー化することに成功した。2,4-ジヒドロキシ安息香酸脱炭酸酵素は諸性質の報告は全くなく、カビの没食子酸脱炭酸酵素も微生物分布が確認されておらず、新しい知見を蓄積することができた。炭酸固定反応を触媒する脱炭酸酵素の機能発現に必要と考えられる複数のタンパク質因子を見いだすために、2種類のピロール-2-カルボン酸脱炭酸酵素の精製を進め、予想した候補タンパク質を見いだすことができた。この結果にもとづき、次年度の実験計画が予定通りに実施できる状況にある。新規の可逆的脱炭酸酵素の探索については、数多くの試料を対象としたスクリーニングを実施した結果、新しい酵素反応を持つ微生物が自然界に存在することを確証した。この成果を踏まえて、次年度以降に活性を持つ微生物株の単離、酵素特性解明が進展すると考えられ、目的とする研究の展開が達成できている。新しく見いだした新規脱炭酸酵素の反応特性の解明と、酵素構造の解析、酵素遺伝子のクローニングを実施する。また、応用的側面として、脱炭酸反応の基質特異性のデータにもとづいて、逆反応である炭酸固定反応を活用したヒドロキシ安息香酸およびそのアナログの酵素合成法を検討する。没食子酸脱炭酸酵素については、組換え大腸菌によるタンニン酸から没食子酸を経るピロガロールの酵素合成に活用する。酵素の機能発現に寄与するタンパク質サブユニットの構造情報を取得し、遺伝子クローニングと発現、既知酵素遺伝子産物との相互作用の解析を進める。このことによって、効率的な炭酸固定反応プロセスの構築の基盤を築くことができる。一方、新規脱炭酸酵素については、活性株の純粋分離と活性向上を図り、反応特性を基礎的に解析する。また、精製酵素を調製し、酵素遺伝子クローニングに必要なタンパク質情報を取得する。本年度の予算に対して残額が生じたのは、もう一つの研究予定であった熱安定性を示す脱炭酸酵素の探索を予定通りに遂行できなかったためである。これは2,4-ジヒドロキシ安息香酸の脱炭酸酵素の探索と並行して実施することを計画したが、2,4-ジヒドロキシ安息香酸を用いた集積培養から微生物が数多く得られ、その評価に時間を要したためである。熱安定性脱炭酸酵素の分離のための集積培養は実施しているため、その分離と活性評価を次年度に行なうこととする。酵素精製用の試薬、基質特異性を検討するための種々のヒドロキシ安息香酸およびそのアナログの購入が必要となる。また、酵素タンパク質情報を解析するための分析や遺伝子組換え実験の反応試薬に経費を要する。酵素スクリーニングを実施していた前年度よりも経費がかかるため、今年度の残額を次年度に充当する。酵素タンパク質一次構造解析の分析費用が多額を要する予定である。また、さらに未同定のタンパク質因子を決定するために、多量の精製酵素標品を調整する必要があり、クロマトグラフィー担体とカラムの購入が必要となる。その後には、遺伝子組換え実験の汎用試薬とシーケンシング用試薬にコンスタントに経費を要する。
鎌倉時代公家権門の家政機構に関する基礎的研究

研究の目的は、鎌倉時代の公家権門として摂関家および天皇家(治天)の家政組織とその執行形態を明らかにし、それぞれの家政組織がどのような命令系統のもと、家政機関・職員を統括し、家政運営がなされたのかを明らかにすることである。今年度は鎌倉時代の摂関家および院の家政関係史料の収集と整理にあたり、研究のまとめを行っている。まず昨年度作成した鎌倉時代の記録目録をもとに、宮内庁書陵部・京都大学附属図書館・国立国会図書館の各所蔵する史料を現地調査し、複写を行った。また東京大学史料編纂所は現地調査のみ、国立歴史民俗博物館は所蔵史料の複写のみを行った。調査の結果として複写を行ったのは、宮内庁書陵部分が頼業記・公通卿記・禅中記・定長卿記・賀茂定平朝臣記・親宗卿記・資実卿記・資経卿記・業資王記・顕俊卿記・頼資卿記・葉黄記・公光公記・今出川相国記・山階左相府記・仁部記・鴨社司記・雅言卿記・公親公記・憲説記・頼親卿記・信嗣公記・公衡公記・良季記・伏見天皇宸記・公秀公記・頼藤卿記・師宗記・万一記・為兼卿記・良枝記・後光明照院関白記・資清王記・玉英などであり、京都大学附属図書館分が宗雅記・後中記、国会図書館分が吉槐記である。国立歴史民俗博物館は仲資王記・業資王記の複写を行った。いずれも未公刊史料あるいは未公刊部分を含むものであり、現在該当史料の検索を行っている。この研究は、研究代表者の任期終了により平成16年9月30日をもって廃止となったが、研究代表者は今後引き続き史料の整理を行い、論文を作成していく。研究の目的は、鎌倉時代の公家権門として摂関家お主び天皇家(治天)の家政組織とその執行形態を明らかにし、それぞれの家政組織がどのような命令系統のもと、家政機関・職員を統括し、家政運営がなされたのかを明らかにすることである。平成15年度・16年度の2カ年計画のうち、今年度は「研究計画調書」に記したとおり、鎌倉時代の摂関家および院の家政関係史料び収集と整理にあたった。まず関係史料収集のために、鎌倉時代の記録目録を作成した。これには書名・著者・年代・刊本の有無・写本の所蔵先・写真版の有無などの項目によって、160件以上をリストアップした。これにより鎌倉時代古記録の全体像をつかみ、活字による公刊史料と未公刊史料(部分公刊と写真版のみの公刊も含む)の分類と、特に未公刊史料の調査先を決め、今年は東京大学史料編纂所・東京大学総合図書館・国立公文書館内閣文庫・東北大学狩野文庫などの調査を行った。調査では、未公刊史料であっても、印影版として公刊されている『歴代残闕日記』に載せられている場合の多くあることが判明し、個々の記録については慎重に検討しなければならないものの、これにより実地調査の手間が大きく省けた。その結果、愚昧記(全28冊)・仲資王記(全4冊)・殿記(全6冊のうち「上ノ壱」1冊)・洞院摂政御記・顕朝朝臣記・仁部記・実躬卿記(全20冊のうち、刊本のない1520の6冊)・基俊記・吉槐記(全2冊)・八条内府公秀公記・業顕王記・万一記・中納言資兼卿記などの未公刊史料を収集することができ、該当史料の検索に当たっている。また刊本のある玉葉・山槐記・吉記・明月記・定長卿記・兼光卿記・猪隈関白記・業資王記・岡屋関白記・深心院関白記・平戸記・経俊卿記・外記日記・吉続記・勘仲記・花園天皇宸記などについては、該当史料の検索にあたり、順次史料整理を行っている。

国立歴史民俗博物館は仲資王記・業資王記の複写を行った。いずれも未公刊史料あるいは未公刊部分を含むものであり、現在該当史料の検索を行っている。この研究は、研究代表者の任期終了により平成16年9月30日をもって廃止となったが、研究代表者は今後引き続き史料の整理を行い、論文を作成していく。
農林生態系における天敵多様性の生態系機能

本研究では、森林および草地生態系において、植物ー植食者ー捕食者(天敵)の各栄養段階間での相互作用により、生物多様性が維持される機構の解明を目指した。森林における、植食者群集全体からカエデ属樹木を利用するハマキホソガ(Caloptilia属)群集、そして、草地のチョウ類個体群、一方、植物の葉を利用する葉食者から木材を利用する材食者まで、対象とする群集を変えることで、植物-植食者の共進化関係から植物の餌資源としての質の変異、さらに、生息環境の構造まで、様々な要因を検討し、植食者多様性の維持機構の解明を目指した。本研究では、植物-植食者-天敵の量的食物網を描くことで、天敵群集の多様性が食物網を通じてもつ生態系の安定化効果を明らかにすることを目的としている。具体的には、森林生態系と草地生態系において、植物-植食者-天敵の量的食物網の記載、天敵多様性への土地利用様式の影響の評価、天敵多様性の植食者群集安定化効果の解明に取り組んでいる。本年度は、これらの課題について、植物-植食者-天敵の量的食物網の記載に取り組んだ。森林生態系、および、草地生態系において、1.カエデ科樹木を利用する鱗翅目、2.樹幹を利用するアンブロシアキクイムシ類、3.アブラナ科草本とモンシロチョウ類の調査を行い、それぞれ、量的食物網を描くためのデータを集めた。また、1については、各樹種への選好性を検討するために、カエデ科樹木種の葉の機能特性を測定した。2についても、キクイムシ類と共生する、酵母および糸状菌の単利を試みている。現在、これらの成果を学術論文として発表を準備中である。また、3については、アブラナ科草本における特徴的な防御物質(2次代謝物質)である、カラシ油配糖体(glucosinolate)の多様性について、メタボローム解析を行っている。さらに、生息環境の効果を検討するために、GISを用いて、千葉県北部の草地の空間分布を解析中である。本研究では、植物-植食者-天敵の食物網を描くことで、天敵群集の多様性が食物網を通じてもつ生態系の安定化効果を明らかにすることを目的としている。具体的には、森林生態系において、植物-植食者-天敵の量的食物網の記載、天敵多様性への土地利用様式の影響の評価、天敵多様性の植食者群集安定化効果の解明に取り組んでいる。森林生態系において、1.カエデ科樹木を利用する鱗翅目、2.樹幹を利用するアンブロシアキクイムシ類、3.アブラナ科草本とモンシロチョウ類の調査を行い、それぞれ、量的食物網を描くためのデータを集めた。2についても、キクイムシ類と共生する、酵母および糸状菌の単離を行い、DNAバーコーディングによる同定を行った。これらの成果のうち、1,2については、学術論文として成果を発表した。また、3については、アブラナ科草本における特徴的な防御物質(2次代謝物質)である、カラシ油配糖体(glucosinolate)の多様性について、メタボローム解析を行ない、現在、論文投稿を準備中である。本研究では、生物多様性が担う生態系機能として、天敵群集多様性の生態系安定化効果の解明に取り組んだ。ここでは、森林その他の生態系において、植食者ー寄生蜂系を中心とした生物群集について、群集構造の決定機構について様々な方向からアプローチし、その解明を目指した。具体的には、森林生態系における、植物ー植食者ー寄生蜂系について、その、食性幅および食草選択性に関して、トップダウンアプローチとして、その全球的なパターンの記述を、一方、ボトムアップアプローチとして、樹種選択に関わる化学特成分を含む要因を検討した。ここでは、植食者として葉食者と材食者について、多様性に対する植物の形質と植食者系統関係の影響を確認した。また、草原生態系において、植食性昆虫のパッチ間での移動分散の程度を決定する要因として、パッチのサイズのみならず、パッチの質が影響することを明らかにした。さらに、共同研究者の研究では、材食者の植樹選択に関わる、共生菌の効果を明らかにしている。また、これらのデータを基に、海外の多数の研究者と協働して、植食者(葉食者、材食者その他のギルド)の食性幅の緯度傾度を検討し、これが緯度に沿って広がる、つまり、熱帯ではより細かく植物資源を分割することが、多様性の一部を説明することを明らかにしている。

さらに、植食性昆虫の天敵として、寄生性のハチ、ハエ、そして、線虫を含めた、食物網を記載し、これらの間の多様性のパターン、つまり、食物網構造を記載している。これらの結果から、植物-植食者-寄生者の間ではたらく、多様性の創出・維持機構について、いくつかの重要な点が明らかになっている。それは、植物の形質の変異が植食者の資源選択に影響するが、ここで、計測されていない、あるいは、これらの複合体として個々の形質では表現されない形質群が、植食者の系統関係に沿って多様性の創出に寄与している可能性を示唆する。26年度が最終年度であるため、記入しない。群集生態学26年度が最終年度であるため、記入しない。現在までに、森林生態系において、1.カエデ科樹木を利用する鱗翅目、2.樹幹を利用するアンブロシアキクイムシ類、草原生態系において、3.アブラナ科草本とモンシロチョウ類、について、サンプリングを行い、群集構造を記載している。さらに、キクイムシ類については、それらと共生する、菌類群集の組成の解析に取り組み、培養法までの確立を終えた。これらのデータを元に、2については、その結果を、国際学術雑誌に近日中に投稿予定である。また、1についても、原稿をまとめている。このほかのテーマについても、次年度(25年度)中に、学術雑誌への投稿の目処が立っており、おおむね、当初の計画に沿って進展していると言える。既に、2本の学術論文を、国際誌を含む雑誌に発表し、また、さらに3本の論文を投稿中、2本の投稿を準備中である。それ以外にも、データ収集を終え、解析を進める研究が多数あり、当初の予定を超える成果が確実である。野外調査を継続すると共に、分子手法による食物網の記述法の開発、さらに、土地利用様式の変化による生態系機能の損失の予測について検討を進める。また、相互作用関係の年次変動を考慮して、量的食物網に関する野外調査を行う。植物-植食者-寄生者系については、幼虫での種同定が困難で有り、また、寄生蜂に寄生され、成虫にならない個体が多いので、DNAバーコーディングの手法を用いて昆虫の同定を行うことで、より詳細に食物網を記述する。死亡個体のうち、同定ができないものについて、DNAバーコードを作成する。菌類についても検体からDNAを抽出し、塩基配列を解析する。ITS1およびITS2領域を第1候補として、既存の病原菌のデータベースと照らし合わせて同定を進める予定である。野外調査については、最低限のフォローアップに限って実施する。一方、分子手法による食物網の記述法の開発を進める。植物ー植食者ー寄生者系については、幼虫での種同定が困難で有り、また、寄生蜂に寄生され、成虫にならない個体が多いので、DNAバーコーディングの手法を用いて昆虫の同定を行うことで、より詳細に食物網を記述する。ITS1およびITS2領域を第1候補として、既存の病原菌のデータベースと照らし合わせて同定を進める。カナダゲルプ大学のDDBIと連携して、解析を進める予定である。期間の最後に、少額の経費が残ったので、帳尻を合わせることはせず、次年度の経費と併せて使うことにした。残額はわずかであるので、次年度計画を進める中で、消化する予定である。研究全体は、順調に進捗しているので、次年度は、当初の計画に従い研究費を使用する。また、分担者との意見交換のために、旅費を用いる予定である。
潜在型TGF-β陽性細胞除去カラムを用いた新規子宮内膜症治療法の確立

昨年度の研究成果を鑑み、潜在型TGF-β陽性細胞除去カラムの安全性と性能およびその効果について、子宮内膜症を有するカニクイザルを用い評価した。昨年度使用した2個体のうちカラム治療効果を認めたカニクイザルは治療効果の再現性評価目的として使用し、カラム治療により不変であったカニクイザルをカラム性能評価目的として使用した。2週間に1度の頻度でカラム治療を施行し、これらを計6クール施行した。各カラム治療における体外循環前後の血液を採取し解析を行った。性能評価個体におけるカラムは、後半の3回を吸着カラムのリガンド量を低減したものを使用し、リガンド量における効果を検討した。それ以外は昨年度と同じものを使用している。実験は予定通り完遂できた。治療個体のLAP陽性細胞、TGF-βは昨年度と同様、activated Tregは不変からやや低下との結果であった。カラム性能評価個体では単球のLAP陽性細胞比率は体外循環前後では前半3回は低下、後半3回は上昇から不変であったが、カラムの入口側と出口側では一定の傾向は認めなかった。リンパ球のLAP陽性細胞比率、activated Tregにおいてもカラム治療前後、カラム入口側および出口側の比較で一定の傾向は認めなかった。TGF-βはカラム治療前後、カラム入口側および出口側の比較で共に上昇を認めた。子宮内膜症病変は、治療評価個体で体外循環3回目に月経再開しそれに伴い病変の著明な悪化を認め、体外循環終了後4週間で一度改善認めたがその後再増悪した。カラム性能評価個体では、体外循環中やや増悪を認め、体外循環終了後7週間で一度改善認めたがその後再増悪している。両個体とも体外循環施行中のバイタルサインや体重の変化は認めなかった。実験開始前のヒト血液を用いた予備実験と、カニクイザルを用いた本実験との間でカラム性能が異なる結果となった。これらが種差によるものか、in vitroおよひin vivoの差に起因するものか現在判断しかねる状況となっている。また本年度の試験において、治療効果の再現性を認めることができなかった。ただ、カニクイザルを用いたカラム治療の方法に関してはサルの体重減少、死亡などの副作用を認めずカラム治療を完遂する方法を本研究により確立できたことは成果として挙げることができる。本年度までの実験においてカラムの性能および効果を証明することができなかった。血液検査・子宮内膜症病変の変化がカラムの治療効果によるものか体外循環操作によるものかを検討するために、新たな2個体を用いて潜在型TGF-β陽性細胞除去性能のないコントロールカラムと潜在型TGF-β陽性細胞除去カラムを用いて治療カラムの性能評価を行う。子宮内膜症を有するカニクイザルに潜在型TGF-β陽性細胞除去カラムを用い安全性と性能およびその効果を評価した。使用したカニクイザルはチョコレート嚢胞を有し、子宮内膜症の診断が確定した2頭を用いた。治療計画は2週間に1度の頻度で計4回、カラムを用いた体外循環により免疫抑制性因子の吸着治療を試みた。開始当初はカラム内圧の上昇および脱血不良等にて中断することがあったが、流量を下げることによりその問題を解決することができた。カラム前後の血液を用いた比較試験において、免疫抑制性因子であるactivated TregおよびTGF-β濃度はカラム後の血液にて低下を認めた。ヒト血液を用いた予備実験において当カラムが潜在型TGF-β陽性細胞を除去することが確認できていたため、同様にカラム前後の血液を用いて検証を行ったが、カニクイザルを用いた試験においては単球の同陽性細胞比率は予想に反しカラム後に上昇し、リンパ球の同陽性細胞比率は一定の傾向は認められないという結果であった。子宮内膜症病変は月に1回全身麻酔下に腹腔鏡を用いて病変を直接観察することにより評価した。1頭は治療開始後に一度増悪した後所見は変化せず。もう1頭も一度増悪するが治療前に比べ病変の改善を認めた。しかし、改善を認めた個体は治療期間中無月経であり、無月経のため子宮内膜症が軽快したのか、カラムにより疾患が軽快したのかの判断は困難であった。両個体とも体外循環施行中のバイタルサインや体重の変化は認めず、1クール目の生化学検査値異常も認めなかった。その後両個体とも計8週間無治療で経過観察したところ、両個体とも疾患は増悪した。現在、経過観察後2クール目を施行し、1クール目で治療効果を認めたカニクイザルは治療効果の再現性評価目的として使用し、治療により不変であったカニクイザルをカラム性能評価目的として使用し検討中である。実験開始前のヒト血液を用いた予備実験とカニクイザルを用いた本実験との間で、カラムの性能が異なる結果となった。これらが種差によるものかin vitroおよびin vivoによるものかの判断は現在できていない。ただ、治療により1頭は改善傾向を示し、治療終了後に2頭とも疾患が増悪したことから、カラム治療によるある一定の効果があった可能性も指摘できる。そこで、本来2頭とも改善傾向があれば次のステップに進む予定であったが、1頭を治療効果の再現性の判断に、1頭をカラムの性能評価目的に使用し検討することとしたため当初の予定よりは進捗が遅れているという判断になった。ただ、カニクイザルを用いたカラム治療の方法に関してはサルの体重減少、死亡など副作用を認めずカラム治療を完遂する方法を確立できたことは成果として挙げることができる。