hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
炎症が癌の血管新生と悪性化を促進する分子機構-がん微小環境の重要性

がんの発症や悪性進展にがんの微小環境や間質の炎症応答が重要な鍵を握っている。我々は間質の反応である血管新生やリンパ管新生に注目し、特にがん関連マクロファージに焦点をあて、新しい診断や治療のバイオマーカーの探索研究をすすめている。炎症反応に応答して誘導される血管新生やリンパ管新生には活性化マクロファージの浸潤が関与すること、マクロファージから産生されるVEGFA, VEGFC, VEGFDは転写因子であるNF-κBを介して産生されること、マクロファージ標的薬剤(リポソーム化クロドロネート)はマウスモデルにおける血管新生やリンパ管新生を著明に阻害することを観察した。がんの発症と進展に炎症が関与しそいることが近年注目されている。我々は過去に炎症性サイトカインであるIL-1βがVEGFと同等にマウス角膜の血管新生を誘導すること、この血管新生にはCOX-2を発現したマクロファージの浸潤を伴っていること、このマウス角膜はVEGF-A、MIP-2やENA78の発現が亢進していることを報告した。本研究ではIL-1βを高発現したLLC/IL-1β他細胞のマウス移植モデル系とマクロファージ細胞とのを駆使して以下の結果を得た。1)LLC/IL-1β細胞はinvitroの細胞増殖はコントロールと同等であったが、移植マウスの腫瘍増大を誘導した。2)LLC/IL-1β細胞はVEGFとマクロファージは走化因子であるMCP-1の産生の亢進を認めた。3)抗体アレイの結果より、マクロファージ細胞をIL-1βで刺激するとVEGR-AやMCP-1の発現を亢進した。4)マクロファージ細胞におけるIL-1β刺激はMMP-9の活性化を誘導し、この活性化はNF-κB阻害薬により抑制された。このことより、IL-1βにより、NF-κBの活性化が関与していることを示唆した。5)LLC/IL-1β細胞とヒトマクロファージ細胞との共培養はマクロファージからのIL-8とMCP-1の発現とマウスモデルでの血管新生を亢進した。6)LLC/IL-1β細胞移植モデル系での腫瘍は血管密度の上昇とマクロファージの浸潤の亢進を認めた。がんの発症や悪性進展に、がんの微小環境や間質の炎症応答が重要な鍵をにぎっている。我々は間質の血管新生やリンパ管新生に注目しがん関連マクロファージを中心に新しい診断・治療のバイオマーカーの探索研究を進めている。特に、1、炎症反応に応答して誘導されるリンパ管新生に活性化マクロファージの浸潤とマクロファージから産生されるVEGF-CやVEGF-Dが深く関与していた。2、腫瘍関連のマクロファージを標的とした治療薬(リポソーム化クロドロネート)はマウスモデルでの血管新生やリンパ管新生やがんの骨転移を著明に阻害した。3、転移抑制遺伝子であるNDRG1/Cap43は膵癌においてマクロファージや好中球のがんへの集積を制御することを明らかにした。現在、そのメカニズムについて検討している。以上、がん間質の浸潤マクロファージのがんの悪性進展を膵癌細胞株やヒト膵癌の組織標本で促進する作用機序とそれらを制御する因子の役割を明らかにし、新しい診断治療の開発への基盤を確実なものにしつつある。がんの微小環境や間質の構築を対象とした研究は、がんだけでなく炎症が関与する他疾病の病態の把握や診断、治療の創出にむけて貢献できると確信している。我々の身体の中で最も大きなネットワーク形成が血管新生やリンパ管新生などの脈管形成である。がんをはじめとして炎症、虚血、感染症、免疫疾病などの病気に観察される。疾病と関連する脈管新生はしばしば調節制御から逸脱して誘導されることも知られている。炎症や感染症とがん発症や進展が密接に関連することは、1863年ウィルヒョー博士が"Lymphoreticular infiltrate reflects origin of cancer at sites of chronic inflammtion"と論文中に述べている。炎症とがんを結び付ける1つの間質応答として炎症性の血管新生の関与が挙げられる。特にがん間質細胞(マクロファージや線維芽細胞を含む)や血管/リンパ管新生ががんの悪性進展に関与する研究は最近多大な注目を集めている。我々はがんの血管新生におけるマクロファージや好中球などの浸潤と役割の機構を明らかにし、血管新生の悪性進展とその病態の新しい観点による研究を進めている。特に、1.正常組織より採取した単球/マクロファージと腫瘍内に浸潤してきた腫瘍関連マクロファージでの様々な因子の発現を確認したところ、MCP-1などのケモカインや炎症性サイトカインであるIL-1αや血管内皮細胞増殖因子であるVEGF-Aなどの発現が上昇していた。

2.転移抑制遺伝子であるNDRG1/Cap43は膵癌においてマクロファージや好中球のがんへの集積を制御することを明らかにした。さらにその抑制機構にはNF-κBシグナルを介したケモカインの発現制御が関与していた。以上、がん間質の浸潤マクロファージのがんの悪性進展を膵癌細胞やヒト膵癌の組織標本で促進する作用機序とそれらを制御する因子の役割を明らかにし、新しい診断治療の開発への基盤を確実なものにしつつある。がんの微小環境や間質の構築を対象とした研究は、がんだけでなく炎症が関与する他疾病の病態の把握や診断、治療の創出にむけて貢献できると確信している。
肝臓における細胞外マトリックスの産生、分解系の制御機構に関する分子生物学的検討

1.in vivoの系:ヒト肝疾患における各種コラーゲンをはじめとするマトリックスの局在については既に報告済みであるが、今回はマトリックス分解酵素の局在とその遺伝子発現を検討した。つまり、慢性肝炎、肝硬変の肝生検材料から、RNA法を抽出しPCRを用いてmetalloproteinase(MMP)-II,IXと、tissue inhibitor of metalloproteinase(TIMP)-I,IIの発現を検討中である。MMP-IIの組織内局在については、肝臓の主として類洞内皮細胞、伊東細胞に局在することが確認された。また、活性型のものは、内皮細胞膜、肝細胞膜上にも表出され、分泌された酵素が活性型として働く部位として、これらの細胞膜上が示唆され、現在追試中である。また、これらの結果は第28回肝臓学会西部会の主題示説において発表した。一方、実験的肝線維化過程とその回復過程における、各種MMPとTIMPの発現についても検討した。MMP-Iは肝線維化初期で発現がみられるが、それ以後は著明に発現が抑制され、TGF-βによる制御が考えられた。MMP-IIは線維化過程において、著明に増加し、線維化回復過程において徐々に低下し、TIMP-IIの動態もほぼ同様であった。組織内での発現は、主として類洞内皮細胞、伊東細胞であり、以上の結果は上記の学会で発表し、すでに投稿、掲載予定となっている。2.in vitroの系:当科保有のヒト肝癌細胞株における、TIMPの産生とその遺伝子発現における各種薬剤について検討した。つまり、all-trans retinoic acidを添加すると、培養上清中のTIMP-Iの発現は増強するがTIMP-IIは低下した。また遺伝子発現でも同様の結果がえられ、現在その他のサイトカインの影響を検討中である。
ニューロン・グリアの信号伝播同時イメージングによる神経可塑性の解析

炎症によって生じる痛みと(炎症性疼痛)、痛みを伝える神経の損傷によって生じる痛み(神経損傷性疼痛)ではその発生メカニズムに違いがあると考えられてきた。我々はそれを明確に示すために、神経細胞の活動を記録するための膜電位イメージングとグリア細胞の活動を記録するためのカルシウムイメージングを行った。その結果、炎症性疼痛にはアストロサイトが、神経損傷性疼痛にはミクログリアが関与していることが明らかになった。炎症性痛覚過敏と損傷性痛覚過敏のモデル動物を作成し、それらの脊髄後角神経興奮の増強へのグリア細胞の関与を、膜電位イメージングとカルシウムイメージングによって調べた。実験の結果、脊髄後角での神経興奮は、コントロールに比べて炎症、損傷のどちらのラットでも増大していたが、神経損傷ラットには、ミクログリアが深く関与しており、炎症ラットにはアストロサイトが深く関与していた。また、神経損傷ラットでは、ATPの還流によってカルシウムシグナルを示す細胞の数が増大しており、これはミクログリアの抑制およびP2X4受容体の拮抗によって抑制された。さらに、Sulforhodamine101(SR101)とFluo-4/AMを同時に投与してアストロサイトの同定とその細胞でのカルシウムイオンの定量を行った。プリンP2受容体の作動薬であるATPおよび代謝型グルタミン酸受容体の作動薬であるDHPGを投与して脊髄後角でのカルシウムイオン動態を解析した結果、コントロールマウスに比べ、末梢組織に炎症を起こし、痛覚過敏となっているマウスでは、ATPに対してカルシウム応答を示す細胞がSR101陽性細胞で有意に増加していた。また、カルシウム応答を示した細胞の数は、ATPの受容体のうちのP2X受容体の阻害薬であるBrilliant Blue Gによって有意に減少した。本研究では、痛覚過敏がどのような機序で起こるのか、脊髄内の神経伝達の異常、特にグリア細胞の役割について、ニューロンの活動およびグリア細胞の活動をイメージングし、明らかにした。このことは、さまざまな痛覚過敏状態で、神経細胞とグリア細胞の活動がどのように変化しているのか、また、これらは相互にどのような影響を与えているのかを示すものであり、慢性痛や痛覚過敏などの我々に激しい苦痛を与える痛みを緩和するための有効な方法を発見するブレークスルーになると考えられる。末梢組織の炎症や、神経の損傷によって、痛覚過敏と呼ばれる痛みが生じる。この痛みは、末梢の病巣が治癒しても持続する特徴を持ち、痛覚を処理している中枢神経系での変化が原因だと考えられている。脊髄内神経の可塑性によって起きる中枢性感作は、そのメカニズムの1つであると考えられている。また、近年、グリア細胞が神経可塑性に深く関わっていることが示唆されている。一方で、痛覚過敏を起こしている動物では、脊髄後角内のグリア細胞の増殖や、肥大化が見られることや、このような形態変化に伴ってグリア細胞が活性型となり、さまざまな神経伝達物質を放出することが知られている。また、グリア細胞の働きを薬理的に阻害すると、痛覚過敏が抑制されることも報告されている。しかし、グリア細胞が脊髄での神経可塑性や中枢性感作にどのように関与しているのかを直接示した研究は今までにない。本研究では、炎症性痛覚過敏と損傷性痛覚過敏のモデル動物を作成し、それらの脊髄後角神経興奮の増強へのグリア細胞の関与を、膜電位イメージングとカルシウムイメージングによって調べた。脊髄後角での神経興奮は、コントロールに比べて炎症、損傷のどちらのラットでも増大していたが、神経損傷ラットには、ミクログリアが深く関与しており、炎症ラットにはアストロサイトが深く関与していた。さらに、SR101によって脊髄スライスを染色することによって、アストロサイトのみを染色でき、他の細胞と識別できることがわかった。本研究の今年度の目的は、ニューロンとグリア細胞を識別してカルシウムイメージングをすることであった。当初の計画通り、SR101で脊髄スライスを染色することによって、アストロサイトのみを染色でき、ニューロンとグリア細胞のカルシウムシグナルを識別して計測できたため、研究はおおむね順調に進展している。ATPによってミクログリア、およびアストロサイト内のカルシウム濃度が上昇(活性化)するのかをノーマルラット、炎症ラット、神経損傷ラットで調べ、カルシウムシグナルの大きさ、シグナルを示す細胞の数を比較する。また、ATPで活性化されたグリア細胞は、ニューロンの活動にどのような変化を起こすのかを隣接するニューロンの活動を同時にイメージングすることによって調べる。全額を消耗品に使用する。
心筋ナトリウムチャネル関連遺伝子解析に基づく抗不整脈薬の個別投与設計法の構築

心筋Naチャネル関連遺伝子多型に着目して、Naチャネル遮断薬の臨床効果における個人差の原因を調査した。Naチャネルのプロモーター領域の遺伝子変異は、Naチャネル遮断薬の有効血中濃度範囲を低濃度へシフトした。また、β1アドレナリン受容体の遺伝子変異は、臨床効果の減弱と関連した。これらの遺伝子多型の影響をNaチャネル遮断薬の投与設計において考慮することで、Naチャネル遮断薬による不整脈治療の成功率を高めることができる可能性がある。ナトリウム(Na)チャネル遮断薬による不整脈治療では、一般的に有効血中濃度とされている濃度より低濃度でも効果がある患者や濃度範囲内でも効果のない患者が存在する。心筋Naチャネルの発現量や機能に影響する遺伝子多型に着目することで、有効血中濃度範囲の個人差を明らかにし、適切な投与方法を作成できる可能性がある。本年度は、心筋NaチャネルαサブユニットSCN5A遺伝子のプロモーター領域とβ1アドレナリン受容体の遺伝子変異が、Naチャネル遮断薬の有効血中濃度範囲の個人差におよぼす影響について検討した。Naチャネル遮断薬フレカイニドの臨床効果については、SCN5AプロモーターのハプロタイプB保有患者において300ng/mL未満の低濃度でも奏功するケースが多かった。一方で、ハプロタイプB保有患者では、300ng/mL以上の血中濃度でフレカイニドによる刺激伝導遅延が過剰に起きている可能性が考えられた。よって、フレカイニドの有効血中濃度は、ハプロタイプB保有患者において野生型の患者より低い可能性が示唆された。また、β1アドレナリン受容体の遺伝子変異については、フレカイニドの臨床効果がArg389gly変異によって減弱する傾向がみられており、症例数を増やして検討する予定である。さらに、フレカイニドの投与設計を行うために必要な情報として、フレカイニドの体内動態と薬物トランスポーターの関連について検討を行ったところ、フレカイニドが一部の薬物トランスポーターの基質となることが確認された。本年度は、β1アドレナリン受容体の遺伝子変異が、Naチャネル遮断薬フレカイニドの臨床効果におよぼす影響について前年度に引き続き症例数を増やして検討した。フレカイニドの臨床効果は、β1アドレナリン受容体のArg389gly変異によって減弱することが確認されたが、患者背景の違いにより遺伝子変異の影響が異なる傾向がみられており、さらに検討を進めている。また、他のNaチャネル遮断薬のプロパフェノンについてもフレカイニドと同様に検討を開始した。プロパフェノンの臨床効果や副作用について、血中濃度を用いて評価するために適切な採血時間に関して検討し、最高血中濃度付近が適切であることを確認した。ナトリウム(Na)チャネル遮断薬による不整脈治療では、一般的に有効血中濃度とされている濃度より低濃度でも効果のある患者や濃度範囲内でも効果のない患者が存在する。そこで、本研究では、心筋Naチャネルの発現量や機能に影響する遺伝子多型に着目することで、Naチャネル遮断薬の臨床効果における個人差の原因を明らかにすることを目的とした。β1アドレナリン受容体の遺伝子変異がNaチャネル遮断薬フレカイニドの臨床効果におよぼす影響について検討したところ、β1アドレナリン受容体のArg389gly変異により臨床効果が減弱することが確認された。さらに、Arg389gly変異による臨床効果の減弱は、すべての患者にあらわれるわけではなく、β遮断薬を服用している患者で顕著にあらわれることを明らかにした。また、他のNaチャネル遮断薬のプロパフェノンについてもフレカイニドと同様に検討を進め、血中濃度を用いて臨床効果や副作用を評価するために適切な採血時間は、プロパフェノンの最高血中濃度到達時間の前後であることを確認した。Naチャネルのプロモーター領域の遺伝子変異は、Naチャネル遮断薬の有効血中濃度範囲を低濃度へのシフトすることが明らかになっている。よって、Naチャネルのプロモーター領域の遺伝子変異と本研究で明らかになったArg389gly変異の影響を考慮することで、Naチャネル遮断薬による不整脈治療の成功率を高めることができる可能性がある。Naチャネル遮断薬フレカイニドに関する検討はおおむね終了し、心筋NaチャネルαサブユニットSCN5A遺伝子のプロモーター領域とβ1アドレナリン受容体の遺伝子変異の影響について結果をまとめているところである。Naチャネル遮断薬プロパフェノンについても検討を進めており、一部の内容を学会発表する準備を進めているが、症例数が十分に集まっていないため、症例数の確保に努めていきたい。臨床薬理学プロパフェノンの症例数の確保が十分ではないため、研究協力者として他の循環器内科の医師にも研究協力を依頼し、症例の集積を続ける。プロパフェノンについて、心筋NaチャネルαサブユニットSCN

5A遺伝子のプロモーター領域とβ1アドレナリン受容体の遺伝子変異の影響を明らかにすると共に、母集団薬物動態解析を進める。また、心筋Naチャネル関連遺伝子多型に基づいた有効血中濃度を得るために必要な投与量について、得られた母集団薬物動態パラメータを用いて推定し、投与設計ノモグラムの検討を進めていく。Naチャネル遮断薬フレカイニドの有効血中濃度におよぼす心筋Naチャネル関連遺伝子多型の影響についておおむね明らかにして、学会発表することができた。β1アドレナリン受容体の遺伝子変異については、次年度以降の検討においてさらに症例数を増やすことでフレカイニドの臨床効果におよぼす影響を明らかにできると考えている。Naチャネル遮断薬プロパフェノンについても検討を進めているが、症例数が十分に集まっていないため、症例数の確保に努めていきたい。研究成果発表のために必要なグラフ作成ソフトを購入するためには、助成金の残額が不足していたため。症例数をさらに確保する必要があるため、症例の集積を続ける。特にプロパフェノンの検討において、症例数の確保が十分ではないため、研究協力者として他の循環器内科の医師にも研究協力を依頼する。フレカイニドやプロパフェノンの体内動態と薬物代謝酵素や薬物トランスポーターなどとの関連が十分に明らかになっていない場合は、in vitro試験において積極的に検討して母集団薬物動態解析に反映する。また、心筋Naチャネル関連遺伝子多型に基づいた有効血中濃度を得るために必要な投与量を、得られた母集団薬物動態パラメータを用いて推定し、投与設計ノモグラムの作成を進めていく。翌年度の助成金と合わせて、グラフ作成ソフトを購入する予定である。
地域主権時代における現代版井戸端会議導入によるコミュニティマネジメントの実証研究

本研究は、地域活性化を目的として地方自治体で推進されてきたソーシャルメディアの導入状況(特に地域SNS)に焦点を当て、ICTの利活用が地域の活性化にどのように寄与しているのか明らかにするために全国1,742市区町村への質問紙調査と追跡調査を行った。調査結果からは地域SNSとFacebookやTwitterなどの新たなソーシャルメディアでは、各自治体が期待している効果に違いが見られることや、地域SNSの運用上の問題点が窺え、行政が関与する地域SNSの成功要因と課題に関する知見を得ることができた。1.全国地方自治体を対象としたアンケート実施全国の1742の地方自治体を対象にSNSの取り組み状況を調査するアンケートを実施した。返答のあったアンケートからは貴重な情報を得ることができ、いくつかの地方自治体へは直接ヒアリング調査も行った。2.調査結果のデータ入力とデータ・クリーニング回答が得られた687件のアンケート結果のデータ・クリーニングを行った。3.入力データの集計と分析アンケートの調査結果に対して分析を行い、地域SNSの現状や導入の運営形態からみた分析を試みた。分析結果は、日本計画行政学会、情報コミュニケーション学会などで報告した。1.地域課題における地域活性の概念整理地域社会のつながり喪失をどのようにして取り戻すかというテーマに絞って、地域活性の概念の整理に取り組んだ。コンパクトシティを進めている青森市を訪問し、現地調査を実施や地域活性化学会での研究活動に参加するなど地域活性化の概念整理に参考になる情報を多く得ることができた。しかしながら、どのような現象を指して「活性化」していると定義すべきかは継続して検討しなければならず、次年度も引き続き調査研究に取り組む予定である。2.地域情報化施策におけるソーシャル・メディア活用の研究地域活性化にICTがどのように寄与するかを具体的に捉えるため、実際に地域SNSを運営している自治体への調査を実施した。具体的には兵庫県の地域SNS「ひょこむ」を運営する担当者を招いての勉強会開催や青森県八戸市が運営する地域SNS「はちみつ」を運営する八戸市総務部情報システム課への調査を実施し、地域SNSにおける現状とSNS運営の諸問題などについて貴重な情報を得ることができた。地域SNSの存続に大きな影響を及ぼしてきているFacebookやTwitterなどの最新のソーシャルサービスについても専門家を招いて勉強会を継続的に実施しており、地域SNSとの比較研究に取り組んでいる。第4回地域活性化学会にて「地方自治体が関与する地域SNSの現状と地域活性への寄与SNS運営団体へのヒアリング調査から」と題して成果報告を行った。3.アンケートの設計と作成地域活性を目的とする地方自治体の情報化施策におけるソーシャル・メディア活用と官民連携の実態を調査するためのアンケート制作に取り組み、八戸市総務部情報システム課などへのヒアリング結果をもとにアンケートのひな形を作成した。このアンケートは次年度に実施する計画である。今年度はこれまでの取り組んできたアンケート調査ならびにヒアリング調査で得た知見を元に地域SNSと地域活性の関係について議論を重ね、学会発表、出版、研究報告書にその成果を発表した。本研究では、地域SNSが地域活性化に与える効果について評価することを目的に、全地方自治体に対し地域SNSをはじめとするソーシャルメディアの活用に関するアンケート調査を実施した。アンケート調査は全国1,742の地方自治体の情報システム担当者に対して、SNSの活用状況の実態調査アンケートを実施し、回収数は696件(40.0%)であった。さらにアンケート結果よりソーシャルメディアをうまく活用している地域に対してはヒアリング調査を行い、ソーシャルメディア導入の成功要因を見出す事に努めた。これらの調査より、ユーザーニーズが地域SNSからFacebookやTwitterなどのグローバルなコミュニケーションツールへの替わっている中で少なからず地域SNSが地域活性化に寄与していると思われる地域があることが明らかとなった。地域SNSが順調に運用されている自治体では交流を促進する人物が存在し、なかには行政職員自らがその役を担っている自治体も見られた。一方で地域SNSを導入した多く自治体が利用者確保に苦労している状況にあり、行政職員自らが誹謗中傷等の対応も含めたサイト運用を行い、それが負担になってサービスを停止した自治体も少なくないことから、地域SNSの行政主体の運営には限界がみられるなど課題も明らかとなった。また、今後のソーシャルメディアの活用については、地域SNS、Facebook、Twitterでそれぞれ期待している効果や導入目的に違いがあることや総務省の「e-コミュニティ形成支援事業」は、「地域SNSの導入による地域の活性化を目的」としたものであったが、システムを導入しただけで十分な成果が出せないまま失敗に終わった事例も少なくないことも明らかとなった。情報工学全国地方自治体を対象としたアンケート実施も無事終了し、有意義な調査を行う事ができた。アンケート調査より次年度にヒアリングに訪問する地方自治体も抽出することができ、研究活動は順調に取り組めており計画通りに進展している。「地域課題における地域活性の概念整理」における「活性化」の定義については結論を出さず引き続き検討することとしているが、他の計画については調査活動も順調に取り組めておりいずれも計画通り進展している。

1結果の考察と地域情報化施策における地域SNSの評価、成功要因抽出のための地域選定地域SNS導入の成功地域と成功に至らなかった地域の地域特性や、コミュニティ成員間のコミュニケーションテーマなどから、どのような要因が地域活性に寄与するかの考察を行う。また成功要因の詳細調査を実施する地域の選定と調査依頼を行う。この研究を含め以降は全員で研究を進める。2成功事例からの成功要因と運営組織に必要な要件抽出活発に地域SNSが利用されている要因を抽出するためのヒアリング調査を実施する。また活発なコミュニケーションから生まれる活動、すなわち活性化した地域活動などをこの調査から見つけ出す。地域課題の解決は官民連携の運営が重要であると言われている。地方自治体とどのような連携を組んでいるのか、その組織はどのようにマネジメントされているのか、などヒアリングから成功要件を抽出する。この検証から地域マネジメントのあり方を探り、ソーシャル・メディアを導入した組織マネジメントの研究に資する成果を提示したい。また、SNS利用者に対して支払意思額を問い仮想市場評価法(CVM)による便益を測定する。この測定と自治体対象のアンケート調査から得られる経費分析から、地域SNSの費用便益分析を試みる。組織論を専門とする坂本を中心に研究を進める。3地域情報化施策へのソーシャル・メディアの新たな適用の可能性インターネットをベースとしたメディア技術は新しい技術が常時出現している。アンケート調査で地方自治体に対してこのようなICT手段の活用を問うが、新しい情報技術の持つ特性を考慮して、行政課題への適用について可能な領域を検討し、行政施策への適用を提案する。1.全国地方自治体を対象としたアンケートの実施全国の地方自治体を対象にアンケートを実施する。調査票と返送用封筒を同時に配布し、記入済み調査票を返送用封筒による回答方法とする。回収は2/3程度を見込んでおり、回収状況が悪い場合ははがきによる督促も考慮に入れている。調査時期は繁忙期の年度当初を避け5月を予定している。2.調査結果のデータ入力とデータ・クリーニング返送された調査票の確認・整理は、作業を迅速に行うために外部に委託する予定である。7月頃にデータの入力作業を終了し、その後調査データの集計および分析作業に取り掛かる予定である。3.入力データの集計と分析調査データに対して多変量解析を適用し、地域SNSの現状や導入の運営形態からみた分析を試みる。分析結果は、地域活性学会、日本地方自治研究学会、日本情報経営学会などで報告し、フロアからの意見を参考にして研究を深めていく。
多様体に関する諸問題

1.代数幾何学・数論的幾何学・複素解析学の見地からは,トーリック多様体に関する交差コホモロジー等の組合せ論的に重要な成果や,ファノ多様体,正標数楕円曲面,対数スキームに関する成果を得た.数論および数論的幾何学の見地からは,代数多様体,特に,代数曲面の有理点やp進解析的曲面に関する新知見を得た.代数解析学・表現論・数理物理学の見地からは,代数多様体の同変ホロノミー系の研究,p進対称空間,非平衡格子モデル,量子群の表現,共形場理論に関して研究の進展を見た.大域解析学・微分幾何学・複素幾何学の見地からは,調和写像,調和葉層構造,電磁場の幾何学・量子エルゴード理論,アインシュタイン・エルミート計量,箙多様体,自己双対計量に関して成果を挙げた.これらの成果は,多様体関係のこれまでの膨大な研究成果をデータベースにより検索・整理し,また分担者それぞれが専門的視点のもとで得た研究成果を持ち寄り相互関係や新しい発展の可能性を総合的見地から検討することによって得られたものである.これらの研究成果を世界各地に発信し,研究交流にも努めた.1.代数幾何学・数論的幾何学・複素解析学の見地からは,トーリック多様体に関する交差コホモロジー等の組合せ論的に重要な成果や,ファノ多様体,正標数楕円曲面,対数スキームに関する成果を得た.数論および数論的幾何学の見地からは,代数多様体,特に,代数曲面の有理点やp進解析的曲面に関する新知見を得た.代数解析学・表現論・数理物理学の見地からは,代数多様体の同変ホロノミー系の研究,p進対称空間,非平衡格子モデル,量子群の表現,共形場理論に関して研究の進展を見た.大域解析学・微分幾何学・複素幾何学の見地からは,調和写像,調和葉層構造,電磁場の幾何学・量子エルゴード理論,アインシュタイン・エルミート計量,箙多様体,自己双対計量に関して成果を挙げた.これらの成果は,多様体関係のこれまでの膨大な研究成果をデータベースにより検索・整理し,また分担者それぞれが専門的視点のもとで得た研究成果を持ち寄り相互関係や新しい発展の可能性を総合的見地から検討することによって得られたものである.これらの研究成果を世界各地に発信し,研究交流にも努めた.1.代数幾何学的側面からは,トーリック多様体のドラーム・コホモロジーや交差コホモロジーの完全に代数的な記述に成功し,また,準楕円曲面のモーデル・ヴェイユ群や一般ヤコビ多様体のコンパクト化につき新知見を得た.2.数論的側面からは,代数体上の代数多様体の有理点を考察し,有理点を持つ線織面の構成および不分岐被覆との関連に関し新知見を得た.3.代数解析的側面および数理物理的側面からは,同変D加群の基礎付けおよびヤン・バックスター方程式の楕円関数解に関する新知見を得た.4.大域解析学,微分幾何学および複素幾何学的側面からは,双曲空間内の非有界凸多面体間の調和写像,スペクトル幾何,アインシュタイン計量に関する多くの新知見を得た.5.上記の諸成果の大部分は,いろいろの側面からの異なった視点の持ち寄りとそれらの総合化によって初めて可能となった.6.これまでに得られている関連知見をデータベースにより極めて高能率に検索できた.7.研究成果の受信・発信を活発に行なった.1.代数幾何学・数論的幾何学・複素解析学の見地からは、トーリック多様体に関する交差コホモロジー等の組合せ論的に重要な成果や,ファノ多様体,正標数楕円曲面,対数スキームに関する成果を得た.2.数論および数論的幾何学の見地からは,代数多様体,特に,代数曲面の有理点やp進解析的曲面に関する新知見を得た.3.代数解析学・表現論・数理物理学の見地からは,代数多様体の同変ホロノミー系の研究,p進対称空間,非平衡格子モデル,量子群の表現,共形場理論に関して研究の進展を見た.4.大域解析学・微分幾何学・複素幾何学の見地からは,調和写像,調和葉層構造,電磁場の幾何学・量子エルゴード理論,アインシュタイン・エルミート計量,箙多様体,自己双対計量に関して成果を挙げた.これらの成果は,多様体関係のこれまでの膨大な研究成果をデータベースにより検索・整理し,また分担者それぞれが専門的視点のもとで得た研究成果を持ち寄り相互関係や新しい発展の可能性を総合的見地から検討することによって得られたものである.これらの研究成果を世界各地に発信し,研究交流にも努めた.
ヌードマウス自然転移実験系によるヒト口腔扁平上皮癌の転移に関する研究

【方法】1)in vivo転移実験系:ヌードマウス移植実験を当科で樹立したヒト舌扁平上皮癌由来の癌細胞株MOK-101,ヒト歯肉扁平上皮癌由来の癌細胞株MOK-201を用いて行った。各癌細胞を約1×10^6個/mlのHank's BSS浮遊液に調整し,ヌードマウス(BALB/c nu/nu,6週齢,雄)の背部皮下,左足(foot pad)の皮下,または舌の粘膜下に,それぞれ癌細胞浮遊液0.05ml,0.025ml,0.025mlを移植。移植14日後,28日後,42日後に移植部位における腫瘤形成の状態,および所属リンパ(膝窩リンパ節,そ径リンパ節,頸部リンパ節)への転移,遠隔臓器への転移を肉眼的かつ組織学的に検索する。2)in vitro浸潤実験系:1)と同じ癌細胞を使用してコラーゲンゲル浸潤実験法により各細胞の浸潤能を検討した。【実験経過および結果】1)MOK-101は背部皮下,舌粘膜下に移植14日後から腫瘤を形成した。足皮下には腫瘤形成を認めなかった。引き続き,経日的に観察を行っている。MOK-201についても,現在観察中である。2)MOK-101は,コラーゲンゲル内に線維芽細胞(Swiss 3T3またはMRC-5)を混合することによってゲル表面からゲル内へ侵入した。MOK-201も同様の結果であった。【今後の方針】観察途中のマウスについて経日的に検索を続け,その結果とコラーゲンゲル浸潤実験の結果との比較検討を行う。
異性双子で生まれた雌子牛の繁殖性の予知に関する試験研究

1)異性双子雌牛の臨床所見,染色体分析およびPCR法による分析結果異性双子として生まれた雌子牛の膣長を測定したところ,膣長が10.0cm以下の雌牛は7頭で,その長さは4.5-6.5cm(平均5.7cm)であった.また,膣長が10.0cm以上の雌牛は2頭であった.これらの雌牛から,性染色体キメラの有無,PCR法によるY染色体特異的反復配列の有無を分布した.その結果,膣長が10.0cm以下の雌牛では,すべて性染色体キメラが認められ,そのXY細胞比は16.0-96.7%(平均57.3%)であった.また,これら全例とも,PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在が確認された.一方,膣長が10.0cm以上の雌牛は2頭のうち,1頭では性染色体キメラが認められず,PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在は否定された.さらに,残りの1頭では,性染色体キメラ(XY細胞比:53.8%)が認められるとともに,PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在が確認された.2)ホルモン剤投与試験の結果異性双子の雌として生まれ,染色体およびPCR法によってフリーマーチンと診断された9頭(FM群)と,正常雌牛と診断された5頭(Normal群)にeCGとhCGを投与して,投与期間中の血中E_2値およびP値をRIA法とEIA法によって測定した.その結果,Normal群ではホルモン処置後に血中E_2値は上昇を開始し,8日にはピークに達して,その後は減少した.また,P値はE_2値の上昇に伴って上昇し,12日にはピークに達した.それに対して異性双子で出生し,性染色体キメラを示すFM群では血中E_2とP値のいずれもが低い値で推移した.また,簡便なEIAキットを用いて血中P値を測定したが,RIA法による測定結果とよく一致することが認められた.1)異性双子雌牛の臨床所見,染色体分析およびPCR法による分析結果異性双子として生まれた雌子牛の膣長を測定したところ,膣長が10.0cm以下の雌牛は7頭で,その長さは4.5-6.5cm(平均5.7cm)であった.また,膣長が10.0cm以上の雌牛は2頭であった.これらの雌牛から,性染色体キメラの有無,PCR法によるY染色体特異的反復配列の有無を分布した.その結果,膣長が10.0cm以下の雌牛では,すべて性染色体キメラが認められ,そのXY細胞比は16.0-96.7%(平均57.3%)であった.また,これら全例とも,PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在が確認された.一方,膣長が10.0cm以上の雌牛は2頭のうち,1頭では性染色体キメラが認められず,PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在は否定された.さらに,残りの1頭では,性染色体キメラ(XY細胞比:53.8%)が認められるとともに,PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在が確認された.2)ホルモン剤投与試験の結果異性双子の雌として生まれ,染色体およびPCR法によってフリーマーチンと診断された9頭(FM群)と,正常雌牛と診断された5頭(Normal群)にeCGとhCGを投与して,投与期間中の血中E_2値およびP値をRIA法とEIA法によって測定した.その結果,Normal群ではホルモン処置後に血中E_2値は上昇を開始し,8日にはピークに達して,その後は減少した.また,P値はE_2値の上昇に伴って上昇し,12日にはピークに達した.それに対して異性双子で出生し,性染色体キメラを示すFM群では血中E_2とP値のいずれもが低い値で推移した.また,簡便なEIAキットを用いて血中P値を測定したが,RIA法による測定結果とよく一致することが認められた.平成6年度に立案した研究計画に従って、大学近郊の酪農地帯で生産された9組の異性双子として生まれた雌子牛(9頭)を対象に腟長の測定を試みた。その結果、腟長が10.0cm以下の雌牛は7頭(A群)で、その長さは4.5-6.5cm(平均5.7cm)であった。また、腟長が10.0cm以上の雌牛は2頭で、うち1頭(B群)の腟長は12cm、他の1頭(C群)のそれは14.5cmであった。これらの雌牛から、無菌的にヘパリン加血液を採取して、培養し、染色体標本を作製して性染色体キメラの出現の有無を分析した。また同時に、全例について、PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在の有無を分析した。その結果、腟長が10.0cm以下の雌牛(A群:7頭)では、すべて性染色体キメラ(XX/XY)が認められ、そのXY細胞比は16.0-96.7%(平均57.3%)であった。また、これら全例とも、PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在が電気泳動により確認された。一方、腟長が10.0cm以上の2頭の雌牛のうち、1頭(B群)では性染色体キメラが認められず、PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在は否定された。

また、残りの1頭(C群)では、性染色体キメラ(XY細胞比:53.8%)が認められるとともに、PCR法によってY染色体特異的反復配列の存在が確認された。これらの結果から、性染色体キメラを有するものの、腟長が10.0cm以上と、正常な雌牛と同程度に生殖器が発育するものがあることが窺われた。前年度の試験で用いた異性双子として生まれ,染色体およびPCR法によってフリーマーチンと診断された9頭(FM群)と,異性双子として生まれたが染色体およびPCR法によって正常雌牛と診断された1頭および単子で出生した雌牛4頭の計5頭(Normal群)を材料とした.これら生後4カ月齢の14頭にPMSGを1,000IU,1.5ないし2日後にhCGを1,500IU投与して,投与後14日まで隔日に採血し,血中estradiol-17β(E_2)値およびprogesterone(P)値をRIA法によって測定した.同時にEIAキット(オブチェックEIAキット)によって血中P値の測定を試みた.その結果,Normal群ではホルモン処置後に血中E_2値は上昇を開始し、8日にはピークに達して,その後は減少した.また,P値はE_2値の上昇に伴って上昇し、12日にはピークに達した.それに対して異性双子で出生し,性染色体キメラを示すFM群では血中E_2とP値のいずれも低い値で推移した.この結果より,異性双子で出生した雌牛の繁殖性を出生後の早期に調べる方法の一つとして,ホルモン処置とその後の血中性ステロイドホルモンの測定が有効であること,およびEIAキットを用いて血中P値を測定することにより簡便に判定できることが示唆された.
赤外用誘電体内装導波路の新しい製作法と応用に関する研究

炭酸ガスレーザ光を伝送することを目的として開発されている誘電体内装金属中空導波路の新しい製作法と応用について、次のような事が明らかになった。1.誘電体内装導波路の新しい製作法(1)高周波スパッタリング法による内装導波路の製作本手法で製作する場合、低損失化を妨げる大きな原因は、電気めっき法にある事に着目し、めっき応力について検討した結果、高応力めっき洛が低損失化に有利である事を見出した。また、従来、金属としてニッケルを用いていたが、銀の薄膜を高周波スパッタリングで形成し、その後、導波路の補強の為にニッケルめっきを行なった。真空薬着法についても検討した。(2)ゲルマニウムめっきによる内装導波路の製作プロピレングリコール中の7vol.%の四塩化ゲルマニウム溶液を浴とし、アノードに白金緑を用いることで、やや内径の大きなパイプ内にゲルマニウムを内装する技術を確立し、導波路を得た。特性も良好であった。(3)ガラス線【P_1】法による内装導波路製作の基礎研究ゲルマニウム,硫黄からなるガラスを合成した。ロッキング炉で合成する場合の合成時間,クエンチ法,撹拌法についての知見を得た。(4)陽極酸化法を用いる内装導波路製作の基礎研究アルミニウムの陽極酸化を用いてアルミナ薄膜形成の検討を行なった。薄膜の形成速度は非常に大きい事を見い出した。損失の測定も行なった。2.薄膜内装導波路型レーザの試作内装導波路の1つの応用として、内装導波路を用いて導波路型レーザを構成した。理論的にも、実験的にも、従来のレーザに比較し、出力が大幅に増大し得ることを示した。特性も良好であった。
放射線照射による宿主の免疫応答を利用した治療法の開発

B16悪性黒色腫細胞移植後の血清および脾細胞培養液中のサイトカイン値は照射により上昇し、0-30Gyでは線量依存性を認めた。また、67匹のマウスを用いて移植後7-8mm大となった時点で放射線照射を施行したTCD50は40Gyであった。そこで、この線量を10匹のマウスに投与し、局所制御できたマウスと局所非制御であったマウスの28日目の脾細胞培養中のサイトカインは局所制御群で有意に高かった。以上から、照射後の局所効果には宿主免疫が寄与している可能性が示唆された。(1)マウスにB16悪性黒色腫細胞にLuciferase導入を行い、マウス大腿皮下に移植した。移植7日目には画像的に腫瘍の増殖が確認された。(2)B16の増殖曲線および放射線照射後のTCD50について検討した結果、40Gy-46Gyであり、さらに現在詳細な検討を行っている。(3)移植腫瘍に対して照射0Gy,10Gy,20Gy,30Gy,40Gy,50Gyの血清および脾細胞培養液ではTNF-α,INF-γ,GM-CSF値を測定した結果、照射10日目の血清、脾細胞培養液いずれも照射群でサイトカイン値はいずれも上昇した。また、30Gy以上の照射は10Gy,20Gyに比較して有意な誘導が認められたが、30Gy,40Gy,50Gyでは差は認めらなかった。以上より、サイトカイン上昇には少なくとも30Gyの照射が必要であることが示された。現在、サイトカイン上昇がアポトーシスなど細胞死誘導および腫瘍組織中のアポトーシス関連分子とどのような関係を有するのか解析中である。2.転移性乳がん症例に対する定位照射前後のサイトカインを測定し、予後にどのような影響を有するかについて検討した。測定した12種類のサイトカインでGM-CSFおよびIFN-γ値が照射後に上昇した症例で、更なる転移の発生までの期間を延長することが示された。また、これらの患者血清には乳癌細胞に対するIgG抗体誘導が認められた。(1)マウスにB16悪性黒色腫細胞の増殖曲線および放射線照射後のTCD50についての検討TCD50は40Gyであった。(2)移植腫瘍照射後の血清および脾細胞培養液中サイトカインの動向0-50Gy照射10日目、照射28日目のTNF-α,INF-γ,GM-CSF値血清、脾細胞培養液はいずれも照射群で上昇し、0-30Gyでは線量依存性に上昇が認められた。(3)TCD50照射後のサイトカイン値と局所コントロールとの関係TCD50の線量を10匹に照射し、照射28日目に摘出した脾細胞培養液中のGM-CSF,局所制御できたマウスでのそれぞれのサイトカイン値は37.8±10.1 pg/ml,5.4±6.9 pg/ml,and 21.2±6.6 pg/mlであったのに対し、局所不制御群では23.7±13.0 pg/ml,0.6±0.6pg/ml,and 13.1±5.6 pg/mlと低値であった。血清サイトカインの値も同様の結果であったことから、照射によるサイトカインの誘導が抗腫瘍免疫活性に有利に機能している可能性が示唆された。以上については現在論文作成中であり、国際学会発表予定である。(4)転移性乳がん症例に対する定位照射前後の血清サイトカインを測定し、予後にどのような影響を有するかについて検討した。測定した12種類のサイトカインでGM-CSFおよびIFN-γ値が照射後に上昇した症例で、照射後再発期間を延長することが示された。また、これらの患者血清には乳癌細胞に対するIgG抗体誘導が認められ、IgG抗体の発現とサイトカイン値には相関が認められた。
バソプレシンの生合成機構に関する研究

研究代表者はCa^<2+>/カルモデュリン依存性キナーゼIIIに注目して実験研究を始めた。この酵素はElongation Factor2(EF2)をその唯一の基質とする。EF2はmRNAに結合したリボゾームを移動させ、ペプチド鎖を伸長させるモータータンパク質である。EF2がリン酸化されると、mRNAからの翻訳が止まると報告されている。しかし、最近になって、リン酸化されることによって、かえって合成が増すタンパク質が存在することが培養神経細胞で発見された。これまでに研究代表者は次のことを明らかとしてきた。1、室傍核と視索上核の神経細胞群が生理的条件下で特異的にリン酸化型EF2を持つ。また、小脳Purkinje細胞や小脳核にもリン酸化型EF2が存在する。2、これらの神経核においてリン酸化型EF2がバソプレシン、あるいはオキシトシンと共存する。3、ラットに高浸透圧刺激を与え、血中バソプレシンの上昇を惹起させると。これらの神経核で、リン酸化型EF2が増加する。しかしこの刺激は小脳のリン酸化型EF2を増加させない。4、脱リン酸化型EF2とCa2+/カルモデュリン依存性キナーゼIIIは脳内に普遍的に存在する。5、リン酸化型EF2の働きを模倣するシクロヘキサマイドを投与すると、生理的条件下で、血中バソプレシンが増加した。これらの結果は、高浸透圧刺激に応答するバソプレシン合成の増加にはmRNAからの翻訳の促進による過程が存在すること。そしてその促進にはEF2のリン酸化が関与することを示唆する。バソプレシン、オキシトシンおよびそれらの前駆体mRNAは核周部や細胞体ばかりでなく、樹状突起や軸索にも存在することが明らかとなっている。細胞内周辺局所での翻訳制御機構が存在することが予想されるが、これまでのところ全く解明されていない。研究代表者らの研究結果はEF2のリン酸化修飾が、特定のmRNAの翻訳制御を行う可能性を同時に示している。この酵素はElongation Factor 2(EF2)をその唯一の基質とする。EF2はmRNAに結合したリボゾームを移動させペプチドを伸長させるモーター蛋白質であり、56番目のスレオニンがCa^<2+>/カルモデュリン依存性キナーゼIIIによってリン酸化されるとモーター活性が停止し、mRNAからの翻訳が止まると報告されている。しかし最近になって、リン酸化されることによってかえって合成が増す蛋白質が存在することが培養神経細胞で発見された。これまで、研究代表者らは次のことを明らかとしてきた。1、間脳視床下部室傍核と視索上核の神経細胞群が生理的条件下でリン酸化EF2を持つこと。また、小脳Purkinje細胞、小脳核にもリン酸化EF2が存在すること。2、これらの視床下部神経核において、リン酸化型EF2とバソプレシン・オキシトシンが共存すること。3、ラットに脱水による高浸透圧刺激を与え、血中バソプレシンの上昇を惹起させると、これらの神経核でリン酸化EF2が増加すること。しかし、この刺激は、小脳のリン酸化EF2は増加させないこと。4、EF2は脳内に普遍的に存在すること。5、Ca^<2+>/カルモデュリン依存性キナーゼ

IIIは脳内に普遍的に存在すること。これらの結果から、高浸透圧刺激に応答するバソプレシン合成の増加にはmRNAからの翻訳の促進による過程が存在すること。そしてその促進にはEF2のリン酸化が関与することが示唆される。バソプレシン、オキシトシンあるいはその前駆体mRNAは細胞体ばかりでなく、樹状突起や軸索にも存在することが明らかとなってきている。局所での翻訳制御による合成調節機構の存在が想像されているが未解明である。研究代表者らの研究結果は、EF2のリン酸化、脱リン酸化によって、特定のmRNAの局所での翻訳制御が行なわれる可能性を同時に示す。研究代表者はCa2+/カルモデュリン依存性キナーゼIIIに注目して実験研究を始めた。この酵素はElongation Factor2(EF2)をその唯一の基質とする。EF2はmRNAに結合したリボゾームを移動させ、ペプチド鎖を伸長させるモータータンパク質である。EF2がリン酸化されると、mRNAからの翻訳が止まると報告されている。しかし、最近になって、リン酸化されることによって、かえって合成が増すタンパク質が存在することが培養神経細胞で発見された。これまでに研究代表者は次のことを明らかとしてきた。1、室傍核と視索上核の神経細胞群が生理的条件下で特異的にリン酸化型EF2を持つ。また、小脳Purkinje細胞や小脳核にもリン酸化型EF2が存在する。2、これらの神経核においてリン酸化型EF2がバソプレシン、あるいはオキシトシンと共存する。3、ラットに高浸透圧刺激を与え、血中バソプレシンの上昇を惹起させると。これらの神経核で、リン酸化型EF2が増加する。しかしこの刺激は小脳のリン酸化型EF2を増加さない。4、脱リン酸化型EF2とCa2+/カルモデュリン依存性キナーゼIIIは脳内に普遍的に存在する。5、リン酸化型EF2の働きを模倣するシクロヘキサマイドを投与すると、生理的条件下で、血中バソプレシンが増加した。これらの結果は、高浸透圧刺激に応答するバソプレシン合成の増加にはmRNAからの翻訳の促進による過程が存在すること。そしてその促進にはEF2のリン酸化が関与することを示唆する。バソプレシン、オキシトシンおよびそれらの前駆体mRNAは核周部や細胞体ばかりでなく、樹状突起や軸索にも存在することが明らかとなっている。細胞内周辺局所での翻訳制御機構が存在することが予想されるが、これまでのところ全く解明されていない。研究代表者らの研究結果はEF2のリン酸化修飾が、特定のmRNAの翻訳制御を行う可能性を同時に示している。
ポルフィリンを軸配位子とした新規ルテニウム(II)ポルフィリン錯体の合成と特定

国内外を通して、ポルフィリン錯体を軸方向に直接結び付けたポルフィリンオリゴマーやポリマーの合成・特定ならびに性質の解明の報告例は極めて少ない。本研究目的は種々の金属ポルフィリンを軸配位子としてもつ各種ルテニウムおよびオスミウムポルフィリンオリゴマーやポリマーの合成、ならびにこれらの錯体の構造、電子状態、反応性、特に光化学反応や分子内電子移動反応に及ぼす分子内ポルフィリン環の相互作用の解明にある。本研究では上記の目的を目指した研究を進め、以下に示すことを明らかにした。1.各種ポルフィリンを軸配位子または架橋配位子とした種々の形状をもつポルフィリンオリゴマーの合成単離に成功した。すなわち種々のポルフィリンユニットをもつT字型(2量体)、H字型(3量体)、十字型(3量体)、環状(4量体)、および風車状(5量体)のルテニウムやオスミウムポルフィリンオリゴマーの合成単離に成功し、各種スペクトル法によって特定を行った。2.T字型2量体の単結晶X線構造解析に成功した。3.これらのオリゴマーに種々の金属イオンを導入できた。4.T字型(2量体)やH字型(3量体)の電気化学的挙動はポルフィリン軸配位子またはポルフィリン架橋配位子のトランスの位置にある軸配位子に大きく依存した。5.十字型3量体は金属-配位子間電荷移動(MLCT)吸収帯を示すことが明らかになった。
新規高分子量GTP総合蛋白質の細胞内局在の動態と細胞生理学的機能の解析

我々は、先にマウス脳から新規の高分子量GTP結合蛋白質のcDNAを単離した。このcDNA(nLG)は、Dynamin等の高分子量G蛋白質に類似した明確なGTP結合ドメインをもつものの、それ以外の部分においては既知の蛋白質と相同性を有しない。今回、C末端に対する抗体を用いて、コードされる蛋白について解析し、以下の知見を得た。(1)マウス脳の蛋白を用いたwestern blotでは、予想される分子量(120kDa)より小さい100と90kDaの2本のバンドが観察された。(2)cDNAを導入していない293T細胞では蛋白の発現は観察されず、導入した細胞では、120,100と90kDaの3本のバンドがみられた。組織学的にはvesicle状の細胞内局在を示した。(3)2nd MetをAlaに変えた点変異体でも発現蛋白に差異はなかった。(4)N端にFLAG-tagを付加したクローンでは、120kDaの蛋白のみが発現し、vesicle状の細胞内局在は顕著に観察されなかった。以上より、この蛋白の合成過程でN端においてプロセシングが行われること、このプロセシングが特徴的な細胞内局在に寄与することが示唆された。さらに、nLGの生理機能解明の端緒を探るべく、酵母two-hybrid法によりnLGに結合する蛋白質の検索を試みた。その結果、マウス脳cDNAライブラリーより複数種の陽性クローンを単離した。その中にはESTのみで登録されている新規遺伝子以外に、GABA_A受容体αサブユニットの1サブタイプの細胞内ドメイン、並びに3量体G蛋白質シグナル伝達系の調節因子であるRGSの1サブタイプも含まれていた。