hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しい敗血症診断システムの開発

【研究1:新しい後方散乱法を測定に用いたESPのポータブルプロトタイプ開発と評価】ポータブルプロトタイプでのESPに最適化された反応条件を検討しこの機器の基本的性能を検証する。平成30年度以前に、水系のエンドトキシン測定計を用いて、後方散乱光検出型ESP法を前方・側方散乱光検出型ESP法に比較して、迅速にエンドトキシンが検出できることを確認した。平成30年度には、後方散乱ESP法に最適化された反応条件や前処理薬についても検討を行い、臨床検体の測定を行った。後方散乱光検出型ESP法の基本特許が受理された。後方散乱光検出型ESP測定装置の量産のための自動解析ソフトの開発も行い、プロトタイププログラムが完成し、水系の検量線では良好な解析結果を得ることができるようになった。今後は、血漿系での測定で自動解析プログラムを検証していく必要がある。【研究2:ポータブルプロトタイプにより臨床検体での評価】新しく開発されたポータブルプロトタイプにてさまざまな敗血症患者でのESP-Et値を測定して臨床状態と評価を行う。「新しい敗血症診断の探索的研究(UMIN000023085)」として倫理委員会に研究計画の承認を得た。前向き観察研究として滋賀医科大学救急集中治療医学講座および外科学講座に外来・入院診療を行う患者で敗血症を呈する患者(目標症例数:敗血症患者100名)の採取を終了した。ヒト血漿検体は目標数が集まったので、後方散乱光検出型ESP法によるエンドトキシン測定を行った。その他のパラメーターの収集を行い、データ解析を予定している。平成28年前半に基本となる原理確認用の基盤装置を用いて後方散乱ESP法の反応性について確認した。その結果、後方散乱光検出型ESP法を前方・側方散乱光検出型ESP法に比較して、迅速にエンドトキシンが検出できることを確認した。後方散乱光の検出方法にも工夫がされ、特許出願が行われた。後方散乱ESP法のポータブルプロトタイプが平成28年12月に完成した。水系試料にてエンドトキシン測定を行い、既存の前方および側方散乱光を用いるESP法の測定装置より迅速にエンドトキシンを測定きることを確認した。平成29年度には後方散乱ESP法に最適化された反応条件や前処理薬についても検討を行っていく。前向き観察研究として滋賀医科大学救急集中治療医学講座および外科学講座に外来・入院診療を行う患者で敗血症を呈する患者(目標症例数:敗血症患者50名)の採取を平成28年7月11日より開始している。現在までに31名の患者検体を同意を得て採取することが可能であった。ヒト血漿検体は目標数が集まった段階で、後方散乱光検出型ESP法によるエンドトキシン測定を行う予定である。その他のパラメーターの収集は予定通り行われている。【研究1:新しい後方散乱法を測定に用いたESPのポータブルプロトタイプ開発と評価】ポータブルプロトタイプの完成が予定よりやや遅れたため、反応条件や前処理薬についての検討がやや遅れている。平成29年度に検討が可能である。【研究2:ポータブルプロトタイプにより臨床検体での評価】臨床検体の採取は順調に進んでいる。研究1:新しい後方散乱法を測定に用いたESPのポータブルプロトタイプ開発と評価】ポータブルプロトタイプでのESPに最適化された反応条件を検討しこの機器の基本的性能を検証する。その結果、後方散乱光検出型ESP法を前方・側方散乱光検出型ES P法に比較して、迅速にエンドトキシンが検出できることを確認した。平成29年度には、後方散乱ESP法に最適化された反応条件や前処理薬についても検討を行った。前向き観察研究として滋賀医科大学救急集中治療医学講座および外科学講座に外来・入院診療を行う患者で敗血症を呈する患者(目標症例数:敗血症患者100名)の採取を平成28年7月11日より開始している。現在までに100名の患者検体を同意を得て採取することが可能であった。ヒト血漿検体は目標数が集まったので、平成30年度に後方散乱光検出型ESP法によるエンドトキシン測定を行う予定である。

目標症例数の敗血症患者100名の採取終了したので、平成30年度に後方散乱光検出型ESP法によるエンドトキシン測定を行う予定である。その他のパラメーターの収集は予定通り行われている。【研究1:新しい後方散乱法を測定に用いたESPのポータブルプロトタイプ開発と評価】ポータブルプロトタイプでのESPに最適化された反応条件を検討しこの機器の基本的性能を検証する。平成30年度以前に、水系のエンドトキシン測定計を用いて、後方散乱光検出型ESP法を前方・側方散乱光検出型ESP法に比較して、迅速にエンドトキシンが検出できることを確認した。平成30年度には、後方散乱ESP法に最適化された反応条件や前処理薬についても検討を行い、臨床検体の測定を行った。後方散乱光検出型ESP法の基本特許が受理された。後方散乱光検出型ESP測定装置の量産のための自動解析ソフトの開発も行い、プロトタイププログラムが完成し、水系の検量線では良好な解析結果を得ることができるようになった。今後は、血漿系での測定で自動解析プログラムを検証していく必要がある。【研究2:ポータブルプロトタイプにより臨床検体での評価】新しく開発されたポータブルプロトタイプにてさまざまな敗血症患者でのESP-Et値を測定して臨床状態と評価を行う。「新しい敗血症診断の探索的研究(UMIN000023085)」として倫理委員会に研究計画の承認を得た。前向き観察研究として滋賀医科大学救急集中治療医学講座および外科学講座に外来・入院診療を行う患者で敗血症を呈する患者(目標症例数:敗血症患者100名)の採取を終了した。ヒト血漿検体は目標数が集まったので、後方散乱光検出型ESP法によるエンドトキシン測定を行った。その他のパラメーターの収集を行い、データ解析を予定している。【研究1:新しい後方散乱法を測定に用いたESPのポータブルプロトタイプ開発と評価】平成29年度の前半に水系と血漿系での基本的な反応条件を検討する。【研究2:ポータブルプロトタイプにより臨床検体での評価】臨床検体の採取を完了し、血漿系での基本的な反応条件が決定次第、血漿サンプルのエンドトキシンを測定する。敗血症患者の臨床情報の収集を完了し、血液データを比較検討を行う。学会発表、論文発表を平成30年度に行う。物品費としての試薬・実験機器の費用が予定より多かったこと、その他の費用として英文校正費を計上していなかったが、旅費より充当したため、旅費としての残額が発生しました。ほぼ予定通りに使用できているが、\4,168のみ繰り越しを行いました。残額は、旅費として次年度に使用する予定です。
中国四川省・龍門山断層の力学的・水理学的性質とWenchuan地震の発生機構

本年度の研究では,四川省都江堰市近郊の虹口に露出した龍門山断層の内部構造の記載と,現地で採取した断層ガウジを用いて数mmから1.3mm毎秒までの幅広い速度領域で摩擦実験を行った.断層記載の研究では,(1)およそ30mにわたって断層ガウジ帯・角礫帯が帯状に分布していること,(2)地震時の変形は5-10mmの非常に薄いゾーンに集中していること,(3)断層岩には広くアモルファスカーボンが含まれており,coseismicな断層面近傍にはグラファイトが顕著に濃集していることが明らかになった.また,広島大学に設置した高速摩擦試験機を用いた摩擦実験では(1)断層ガウジは顕著なすべり弱化を示すこと,(2)数十cm毎秒以上の高速領域では顕著な速度弱化を示すこと,(3)slip-weakening-distance (Dc)は垂直応力・速度依存性があることなどが明らかになり,これらの結果から地震時などの高速度の断層運動では,摩擦挙動にすべり距離-速度依存性(distance-rate law)が成り立つことが明らかになった.本研究の目的である地震の発生機構を明らかにするためには,地震を引き起こした断層帯の内部構造を調べ,断層の物理的性質を実験的に決めることが不可欠であり,それらを比較・検討することにより,物理シミュレーションなどに提供できるパラメーターが得られると考えられる.そこで,本年度は2本の論文として現地調査と実験の結果を発表したことで,発生メカニズム解明のための基礎となるデータを公表することができた.今後の課題としては実験後のサンプルの詳細な解析と,現地で行われている掘削コアとの比較,水理学的特性の決定が挙げられる.今後はこれらの課題に取り組んでいきたい.本年度の研究では,四川省都江堰市近郊の虹口に露出した龍門山断層の内部構造の記載と,現地で採取した断層ガウジを用いて数mmから1.3mm毎秒までの幅広い速度領域で摩擦実験を行った.断層記載の研究では,(1)およそ30mにわたって断層ガウジ帯・角礫帯が帯状に分布していること,(2)地震時の変形は5-10mmの非常に薄いゾーンに集中していること,(3)断層岩には広くアモルファスカーボンが含まれており,coseismicな断層面近傍にはグラファイトが顕著に濃集していることが明らかになった.また,広島大学に設置した高速摩擦試験機を用いた摩擦実験では(1)断層ガウジは顕著なすべり弱化を示すこと,(2)数十cm毎秒以上の高速領域では顕著な速度弱化を示すこと,(3)slip-weakening-distance (Dc)は垂直応力・速度依存性があることなどが明らかになり,これらの結果から地震時などの高速度の断層運動では,摩擦挙動にすべり距離-速度依存性(distance-rate law)が成り立つことが明らかになった.本研究の目的である地震の発生機構を明らかにするためには,地震を引き起こした断層帯の内部構造を調べ,断層の物理的性質を実験的に決めることが不可欠であり,それらを比較・検討することにより,物理シミュレーションなどに提供できるパラメーターが得られると考えられる.そこで,本年度は2本の論文として現地調査と実験の結果を発表したことで,発生メカニズム解明のための基礎となるデータを公表することができた.今後の課題としては実験後のサンプルの詳細な解析と,現地で行われている掘削コアとの比較,水理学的特性の決定が挙げられる.今後はこれらの課題に取り組んでいきたい.
心血管系バイオマーカーとヒト薬効評価実験系に関する臨床薬理学的研究

今後の抗動脈硬化薬の開発や心血管イベント予防においてはより病態の本質をついたメカニズムの解明や指標の同定が必要となる。我々は今回糖尿病患者のみならず耐糖能障害患者においても血管内皮機能低下と選択的な血管平滑筋のNOへの感受性低下が認められ、これらはインスリン感受性と関連すること、そのメカニズムとして遊離脂肪酸負荷は白血球の活性化と共に白血球内でのアンジオテンシンII産生を亢進させ、血管内皮機能障害、心筋微小血管における血液レオロジーの障害、インスリン抵抗性を惹起すること、これらはRAS系阻害薬やカルシウム拮抗薬で抑制され、白血球のRASの関与とジヒドロピリジン感受性カルシウムチャネルの病態への関与が示唆された。遊離脂肪酸負荷はこれらのメカニズムを模す実験系であり、今後抗動脈硬化薬の評価に有用である。1.遊離脂肪酸とレニン-アンジオテンシン系、白血球活性化内蔵肥満と高血圧、動脈硬化の関連は明らかであるが、その機序は完全には解明されていない。我々は内蔵脂肪からの遊離脂肪酸(FFA)が血管内皮機能低下をひきおこし、それがレニン-アンジオテシン系(RAS)活性亢進を介していることを報告したが(ATVB 2006)、どのように、あるいはどこのRASが活性化されて内皮機能に影響するのかは明らかではなかった。本研究は白血球のRASおよび白血球活性化と血管内皮機能の関連に焦点をあてた。結果1.FFA上昇は血管内皮機能を低下させ、白血球接着能の亢進、全血通過時間の延長、MPO濃度の上昇をもたらしたがARB前投与はそれらを予防した。白血球活性化に関してIn vitroでも同様の結果が得られた。2.FFA上昇は血中のRAS活性マーカーには影響を及ぼさなかったが、単核球、多核球におけるAIIFAを亢進させた。3.FFA上昇による血管内皮機能低下はヘパリンによるMPOの内皮細胞からの乖離により改善した。本研究の新規性、独創性白血球モバイルレニン-アンジオテンシン系の提唱これまでもFFAは脂肪毒性という観点からin vitroおよびin vivoで血管内皮機能への影響が検討されてきた。しかしヒトにおいてFFAの白血球活性化への影響を評価して内皮機能低下と関連づけた研究はなく、今後の内皮研究の一方向を示すものである。RAS活性が肥満などで亢進していることはこれまでにも報告があるが、機序について組織RASに焦点をあてた研究はヒトで行われていなかった。我々は以前からFFAはRAS系を介して内皮機能障害をひきおこすという仮説を提唱しており、今回の研究ではFFAが白血球のRASを活性化すること、それが白血球自体のAT1受容体を介して白血球の活性化を引き起こし、血管内皮機能を障害するという系の存在を示すことができた。白血球のRASは脂肪酸上昇で活性化され、mobile RASとしていわば「運び屋」のように白血球それ自身やアンジオテンシンIIやMPO,サイトカインなどを内皮細胞に調達し、高血圧や動脈硬化の進行に関与している可能性がある。1.遊離脂肪酸負荷時の炎症性マーカーに関する探索的研究(植田、松下)1)対象患者健常者、若年性高血圧患者2)方法対象者に文書による同意を得た上で遊離脂肪酸を経静脈的に負荷し、血漿および白血球を採取する。白血球の炎症性蛋白(NFκB,IκB)、血漿中のマイクロパーティクルを測定する。ウシ胎児大動脈から血管内皮細胞を採取し、遊離脂肪酸をアプライし、炎症性蛋白の発現や膜のfractionationによりTLR4の活性化を評価した。3)結果従来塩用されていたBSAにコンジュゲイトさせた遊離脂肪酸はLPSのコンタミネーションを引き起こすため、ベジクルによるアプライを開発した。この方法ではこれまで報告されていたような,飽和脂肪酸によるTLR4の活性化は認められず,逆に不飽和脂肪酸は酸化された場合、TLR4の活性化を来すことを証明した。2.塩分制限/負荷食摂取を組み合わせた脂肪負荷(植田、浦田、松岡研究協力者松下、井上)1)対象若年高血圧患者口頭文書による説明と文書による同意を取得する。3)塩分制限/負荷プロトコル琉球大学医学部附属病院栄養課で塩分3g食を作成し、臨床薬理学分野研究室において三食を供する。塩分制限プロトコルは第一日目にフロセミド40mgを服用する。塩分負荷プロトコルでは食塩を17g/day追加する。5)結果現在実施中1.遊離脂肪酸負荷時の炎症性マーカーに関する探索的研究(植田、松下)1)対象健常者、若年性高血圧患者を対象とした。

2)方法対象者に文書による同意を得た上で遊離脂肪酸を経静脈的に負荷し、血漿および白血球を採取する。白血球の炎症性蛋白(NFκB,IκB)を測定する。ウシ胎児大動脈から血管内皮細胞を採取し、遊離脂肪酸による炎症性蛋白の発現や膜のfractionationによりTLR4の活性化を評価した。3)結果これまで報告されていたような,飽和脂肪酸によるTLR4の活性化は認められず,逆に不飽和脂肪酸は酸化された場合、TLR4の活性化を来すことを証明した。2.塩分制限/負荷食摂取を組み合わせた脂肪負荷(植田、浦田、松岡)1)対象若年高血圧患者2)方法クロスオーバー法にて抗アルドステロン薬またはプラセボを一週間投与する。4日間の塩分制限食(3g/day)および負荷食(20g/day)の後、脂肪負荷(Intralipid 90ml/hr+heparin 0.3U/kg/min)前後の血管内皮機能および平滑筋機能、白血球接着能、Heparin-induced liberation後の血漿ミエロペルオキシダーゼ(MPO)濃度を測定する。3)塩分制限/負荷プロトコル琉球大学医学部附属病院栄養課で塩分3g食および17g食を作成し供する。塩分制限プロトコルは第一日目にフロセミド40mgを服用する。血管内皮機能の評価はアセチルコリンを動注し、前腕血流量の変化をstraingaugeplethymographを用いて測定した。現在実験終了し解析中研究計画のうち若年者高血圧患者を対象とした臨床薬理試験において対象となる患者の登録がやや遅れている。1人の患者において高塩食、低塩食摂取期間にそれぞれプラセボと実薬を比較する2×2デザインであるため時間がかかる。24年度が最終年度であるため、記入しない。若年高血圧患者を対象とした介入研究に関しては、24年度中に目的症例数登録を達成できる見込みである。達成後解析を行い、学会発表および論文作成を行う。
卵巣でのGDF-9レセプター探索とGDF-9/c-kitソガンドの相互機能解明

ヒト293細胞にマウスGDF-9の発現ベクターを導入した細胞クローンの細胞質でGDF-9前駆体タンパクが発現していることの確認は、昨年度(1997年)作成したウサギ抗GDF-9ペプチド抗血清によって行い、少なくとも細胞質中に推定分子量を示す前駆体タンパクの発現していることを確認した。しかし、抗血清の特異性が低いため、過去にGDF-9-1-ミュータントで作成した抗GDF-9抗血清を用いて行った検出の際の結果に比べ感度が劣ることが明らかとなった。また、培地中からは分泌されていると考えられるGDF-9タンパクは検出できなかった。この為、バクテリアで作成した(His)_6-GDF-9抗原を用いてウサギを免役し、ウサギ抗マウスGDF-9抗血清を再度作成した。これはまた、Steel panda変異マウスの卵巣の免疫組織染色を目的としたものである。Steel panda変異マウスの卵巣解析に関しては昨年(1998年)5月にヘテロザイゴートを3つがい入手できたが、これらにはwt(wild type)が混入していたためか、1998年秋までSteel panda変異マウス(白色)を得ることはできなかった。産まれた仔マウスには+1-(heterozygote)が混ざっているものと推定し、子供同士の交配を試みたところ、10月末から、若干のSteel panda変異マウスを得ることが可能となった。この為、少数のSteel panda変異マウスより卵巣を取得し、固定、パラフィン包埋後in situハイブリダイゼーションを行った。この結果、再度の検討が必要と思われ、断定はできないが、Steel panda変異マウス卵巣の卵胞でGDF-9の発現が低下している可能性が示唆される結果を得た。昆虫細胞を使ってGDF-9を大量に得るための実験を行っているが、これに関しては昆虫細胞sf-9よりマウスGDF-9遺伝子を持つベクターヴイールスか生産され、これが感性性を持つことも確認したが、現在までに細胞質への蓄積や、培地中への分泌を含めタンパクの生産は確認できていない。
転写因子としてのポリADPリボース合成酵素(PARP)の役割の解明

研究代表者は、インスリン産生細胞再生増殖因子であるRegの発現はReg遺伝子の転写誘導によること、またその転写誘導は、ポリADPリボース合成酵素(PARP)が転写因子としてReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合し、その他複数の因子をリクルートし転写複合体を形成することで引き起こされることを明らかにした。そこで本研究ではPARPが転写因子として機能する際にPARP蛋白のどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合して機能しているのかを明らかにすることで、転写因子としてのPARPによる遺伝子発現機構を解明する。平成16年度の研究は以下のように進行した。2.野生型PARPはラットReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合した。DNA probeに一塩基ずつ変異を導入したcold competitorを用いてEMSA法を行い、PARPの結合認識配列を検討したところ、GC box類似の配列5'-TGCCCTCCCAT-3'において下線で示す塩基がPARPの結合に必須の塩基配列であることを明らかになった。また、この配列はラット、マウス、ヒトのReg遺伝子プロモーター領域においてよく保存されていた。申請者は、インスリン産生細胞再生増殖因子であるRegの発現はReg遺伝子の転写誘導によること、またその転写誘導は、ポリADPリボース合成酵素(PARP)が転写因子としてReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合し、その他複数の因子をリクルートし転写複合体を形成することで引き起こされることを明らかにした。そこで本研究では(1)PARPが転写因子として機能する際にPARPのどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合するDNA結合ドメインとして機能しているのか、(2)Reg遺伝子上流域に形成されるPARPを含む転写複合体がどのような因子から成るのかを同定し、(3)PARPのこれらの因子との結合ドメインを明らかにすることで、転写因子PARPによる遺伝子発現機構を解明する。平成14年度の研究は以下のように進行した。1. PARPがReg遺伝子プロモーター領域と特異的に結合する際に機能しているPARPのDNA結合ドメインを同定するため、以下のように野生型および変異型PARPの発現系を確立し、精製を行った。RT-PCR法により得た野生型PARP cDNAおよびsite-directed mutagenesisにより作製した変異型PARP cDNAをバキュロウイルストランスファーベクターに組み込み、昆虫細胞(Sf9)に導入してhomologous recombinationにより野生型および変異型PARPのリコンビナントバキュロウイルス液を得ることに成功した。得られたリコンビナントウイルス液からPlaque Assayを用いてそれぞれ十数クローンのウイルスを単離し、昆虫細胞に感染させ、PARP蛋白質の発現を確認した。数回のウイルス増幅により感染率の高いウイルス液を得た後、これを昆虫細胞にMOI(multiplicity of infection)=3の条件で感染させPARP蛋白質を発現させた。感染昆虫細胞の細胞抽出液中には大量のPARPを認め、PARP発現系の樹立に成功した。PARP蛋白質の精製は、硫安分画法およびDNA-cellulose chromatographyを用いて行った。2. PARPを含む転写複合体の構成因子を分離・同定するために使用するDNA-affinity columnの作製に成功した。具体的には、PARPが特異的に結合するReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列P1、およびこの配列への変異導入によりPARPが結合しない配列M1のオリゴヌクレオチドを合成し、これらをタンデムにつないで得た二本鎖DNAをNHS-activated sepharose columnに結合させた。この結果、P1配列については3.1nmol DNA/ml matrix、M1配列については3.7nmol DNA/ml matrixのDNA-affinity columnの作製に成功した。研究代表者は、インスリン産生細胞再生増殖因子であるRegの発現はReg遺伝子の転写誘導によること、またその転写誘導は、ポリADPリボース不合成酵素(PARP)が転写因子としてReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合し、その他複数の因子をリクルートし転写複合体を形成することで引き起こされることを明らかにした。そこで本研究では(1)PARPが転写因子として機能する際にPARP蛋白のどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合して機能しているのか、(2)Reg遺伝子上流域に形成されるPARPを含む転写複合体がどのような因子から成るのかを同定し、(3)PARPのこれらの因子との結合ドメインを明らかにすることで、転写因子としてのPARPによる遺伝子発現機構を解明する。平成15年度の研究は以下のように進行した。1.PARPがReg遺伝子プロモーター領域と特異的に結合する際に機能しているPARPのDNA結合ドメインを同定するため、平成14年度に確立した昆虫細胞PARP発現系でPARPとその変異体を発現させ、精製を行った。具体的には、野生型およびPARP内のzincfinger motif変異型PARPを、低張液による細胞溶解、硫安分画法およびDNA-cellulose chromatographyを用いて精製した。3.精製PARPの純度については銀染色法にて検討し、いずれも約90%以上の純度であることを確認した。4.これらの精製蛋白質をもちいて、southwestern法、Electromobility Shift Assayにより、RegI promoter領域への配列特異的結合について精査を開始した。

そこで本研究ではPARPが転写因子として機能する際にPARP蛋白のどのドメインがReg遺伝子プロモーター領域に特異的に結合して機能しているのかを明らかにすることで、転写因子としてのPARPによる遺伝子発現機構を解明する。平成16年度の研究は以下のように進行した。2.野生型PARPはラットReg遺伝子プロモーター領域のGC box類似配列に特異的に結合した。DNA probeに一塩基ずつ変異を導入したcold competitorを用いてEMSA法を行い、PARPの結合認識配列を検討したところ、GC box類似の配列5'-TGCCCTCCCAT-3'において下線で示す塩基がPARPの結合に必須の塩基配列であることを明らかになった。また、この配列はラット、マウス、ヒトのReg遺伝子プロモーター領域においてよく保存されていた。
図形シンボルシステムの発達障害幼児への早期適用と教育現場への応用

1.図形シンボルシステムの早期適用図形シンボルを用いたコミュニケーション指導は、東京学芸大学特殊教育研究施設に通う子どもで、言語理解はあるが、表出言語のない自閉症、言語発達遅滞等の3歳5歳の幼児を対象に行った。(1)発達障害幼児への早期適用3歳児は、まだ応答の指さしが定着せず、応答性、学習の構えも悪く、図形シンボルの適用は難しかったが、4歳児は要求行動・表現に関する動機づけが高まるとともに、指さしの発達、応答性、学習へのレディネスの発達がみられ、図形シンボルの適用が可能であった。(2)コミュニケーション指導言語発達遅滞幼児(1名)に対して、図形シンボルを用いたコミュニケーション指導を行い、114語(名詞75語、動詞27語、形容形12)の言彙を習得し、最高5語連鎖まで可能となった。自発的な要求表現が増加するとともに音声言語も出現し、現在では35語の有意味語を状況に応じて適切に使用することが可能となり、図形シンボルによる言語指導が、音声言語表出を促進することが示唆された。自閉症幼児(3名)のうち、1名は絵カードによる選択課題を実施中で、コミュニケーションボードへの移行を開始している。もう1名は、応答の指さしの定着化を目標に、指さしの語用論的アプローチを行っており、最後の1名は現在アセスメント中である。2.教育現場への適用統合保育を受けている言語発達遅滞児の場合、行動範囲も広く、家庭や大学で使用しているボードは、携帯性がネックとなってうまく使用できなかった。そこで幼稚園生活で必要な語彙に限って、携帯用のボードを試作した。しかし、首から下げたり、腰にぶら下げたり、ポケットに入れたりしてみたが、どれも不自然で対象児が身につけるのを嫌がる、まどろこしくてボードを使用しないなどの理由で、継続的な使用が不可能であった。図形シンボルと自然音声を用いた電子機器のうち、本研究ではa-VOCALとおしゃべりくんハイの検討を行った。a-VOCALは幼児の使用や教育現場の使用には、重量や大きさの点で、まだ無理なところがあった。おしゃべりくんハイは、小型軽量、比較的安価で、教育現場での使用の可能性が示唆された。今後は幼児通園施設での適用可能性について検討する予定である。
ヘリコバクター・ハイルマニ感染症の病理および病態の解明と診断法の開発

本研究では、病理組織学的、疫学的、血清学的、および分子生物学的手法を用いて、H.heilmannii感染と胃粘膜病変との関わり検討した。ヒト胃生検組織の検討により、1)本国におけるH.heilmannii罹患率は0.1%で、2)大部分の症例は慢性胃炎を示しているが、3)低悪性度胃原発マルトリンパ腫(MALToma)との関わりも高く、4)H.heilmanniiの除菌はH.heilmannii関連胃MALTomaの治療に有効であることが示された。一方、スナネズミを用いたH.heilmannii感染胃粘膜の長期観察により、1)H.heilmanniiにより、潰瘍の発生はみられないものの、2)慢性胃炎が惹起され、3)H.pylori感染と比べ、胃粘膜には高度の慢性炎症性細胞浸潤が長期に持続して、MALTom様の病変が高率に発生することが確認された。これらの結果は、ヒト胃生検組織による検討に一致するものであった。スナネズミ感染モデルの検討により、H.heilmannii感染スネネズミ胃粘膜にみられる病態は、H.pylri感染胃粘膜にみられるものとは異なっていることが示され、H.pylri感染スナネズミ胃粘膜では、1)Th1およびTh2サイトカインの変動と2)CagA PAI胃粘膜病変と関連が確認された。また、H.heilmannii感染スナネズミの胃粘膜に、高度の慢性炎症が認められることより、免疫応答が起こっていることが推測され、H.heilmannii感染スナネズミ血清とH.pylori感染スナネズミ血清を用いることにより、H.heilmanniiにより特異性の高い抗原を見出した。今後、この抗原の精製により、ヒトにおけるH.heilmannii感染血清診断法が確立でき、H.heilmannii感染症の実態がより明らかになるものと期待される。本年度、我々はH.heilmannii感染ヒト胃粘膜病変の検討、マウスおよびスナネズミを用いたH.heilmannii感染動物実験モデルの開発、H.heilmannii分離培養法の開発と糞便を用いたH.heilmannii感染の遺伝子診断法の開発を試みた。ヒト胃生検組織の観察から、H.heilmannii感染によりヒト胃粘膜に惹起される病変は、軽度の慢性胃炎を主体とするが、希に胃潰瘍およびMALTリンパ腫が惹起されることが確認され、H.heilmanniiの除菌により、これらの病変が治癒することが確認された(第45回日本消化器病学会大会で発表)。H.heilmannii感染陽性者の胃粘膜組織をホモジナイズしてマウスおよびスナネズミに経口投与することによりH.heilmannii感染動物モデルが作製できた。H.heilmannii感染動物モデルにみられる胃粘膜病変の経時的観察により、H.heilmannii感染により惹起される慢性胃炎の進展過程を観察することができた(第16回欧州ヘリコバクター会議にて発表)。現在さらに経時的変化の観察中である。H.heilmannii分離培養法の開発に関しては、H.heilmannii感染動物の胃粘膜のホモジナイズから、H.heilmanniiを回収するための免疫磁気ビーズ法の条件を検討中である。H.heilmannii感染の遺伝子診断法の開発に関しては、H.heilmanniiに特異的なprimer(16SrRNA遺伝子領域)を設定しnested PCRを行うことにより、H.heilmannii感染動物の胃粘膜のホモジナイズからH.heilmanniiを同定することができた。現在、H.heilmannii感染動物の糞便中のH.heilmanniiの同定条件を検討中である。

本研究では、病理組織学的、疫学的、血清学的、および分子生物学的手法を用いて、H.heilmannii感染と胃粘膜病変との関わり検討した。ヒト胃生検組織の検討により、1)本国におけるH.heilmannii罹患率は0.1%で、2)大部分の症例は慢性胃炎を示しているが、3)低悪性度胃原発マルトリンパ腫(MALToma)との関わりも高く、4)H.heilmanniiの除菌はH.heilmannii関連胃MALTomaの治療に有効であることが示された。一方、スナネズミを用いたH.heilmannii感染胃粘膜の長期観察により、1)H.heilmanniiにより、潰瘍の発生はみられないものの、2)慢性胃炎が惹起され、3)H.pylori感染と比べ、胃粘膜には高度の慢性炎症性細胞浸潤が長期に持続して、MALTom様の病変が高率に発生することが確認された。これらの結果は、ヒト胃生検組織による検討に一致するものであった。スナネズミ感染モデルの検討により、H.heilmannii感染スネネズミ胃粘膜にみられる病態は、H.pylori感染胃粘膜にみられるものとは異なっていることが示され、H.pylori感染スナネズミ胃粘膜では、1)Th1およびTh2サイトカインの変動と2)CagA PAI胃粘膜病変と関連が確認された。また、H.heilmannii感染スナネズミの胃粘膜に、高度の慢性炎症が認められることより、免疫応答が起こっていることが推測され、H.heilmannii感染スナネズミ血清とH.pylori感染スナネズミ血清を用いることにより、H.heilmanniiにより特異性の高い抗原を見出した。今後、この抗原の精製により、ヒトにおけるH.heilmannii感染血清診断法が確立でき、H.heilmannii感染症の実態がより明らかになるものと期待される。
遺伝学と生理学の融合によるヒト寒冷適応進化の実証研究

グリーランドのイヌイット人を対象としたゲノムワイドな進化遺伝学解析から、同集団の寒冷環境や特殊な食生活への遺伝的適応に寄与していると予想されている2つのゲノム領域FADS1-2-3遺伝子群領域およびTBX15-WARS2遺伝子群領域の一塩基多型(SNP)について、特異的な熱産生組織である褐色脂肪組織の活性への影響および、寒冷曝露時の生理状態の変化への影響を、日本人成人のゲノムコホートを用いて検証した。その結果、FADS1-2-3遺伝子群領域のSNPが褐色脂肪組織活性との関連を示した。さらに、寒冷曝露時の鎖骨上窩(ヒト成人における褐色脂肪組織の主要な集積箇所の一つ)の皮深部の温度変化と有意な関連をしめし、グリーランドイヌイットでほぼ固定されているアレルの保有者が、寒冷曝露中より高い深部皮下温を維持していることが明らかになった。一方、TBX15-WARS2遺伝子群領域のSNPは褐色脂肪組織活性や深部皮下温との関連を示さなかった。FADS1-2-3遺伝子群は不飽和脂肪酸の高度不飽和化に関与する酵素群をコードしており、当初はイヌイットの食生活と関係した適応進化に寄与していると予想されていたが、本成果により、褐色脂肪組織による熱産生能の調節を介して、低温への適応にも寄与している可能性が浮上した。同時に、褐色脂肪組織活性の個人差に寄与するゲノム領域を探索する目的で、日本人を対象としてAxiomジャポニカアレイを用いたゲノムワイドSNP遺伝型判定実験を実施し、アディポネクチン2型受容体遺伝子等の近傍のSNPに有意な関連を認めている。これらのゲノム領域が北方のヒト集団で寒冷適応に関する自然選択を受けたか否かについても検証中である。当初の計画であった北方東アジア人集団のゲノムワイドSNP遺伝型情報の取得が、サンプル入手時期の見通しが立たず実施できていないが、それを補って興味深い成果が得られている。東北アジア人集団のゲノムワイドSNP遺伝型情報を取得し、東北アジア人集団が経験した正の自然選択の痕跡を探索する。この結果と、すでに取得済みの日本人の褐色脂肪組織活性のゲノムワイドSNP関連解析の結果と統合することにより、東アジア人の寒冷適応に寄与した可能性が高い領域を抽出する。抽出された領域に存在するSNPについて、寒冷曝露実験での生理計測値との関連を検証し、寒冷適応反応への寄与を明らかにする。
思考脳波解析とカオス解析による大脳高次機能情報処理過程解析の基礎的検討

思考に際して重要な役割を担う記憶想起に関して、逐次差分法を用いて事象関連脳波を解析し、検討を行った。化学元素記号を視覚刺激として提示した時に、その記号名を想起することを作業課程条件とした。逐次差分法を適用することで、検出の困難な記憶想起時の脳波を検出することができた。計測された脳波をトポグラフ表示した後、各人のトポグラフデータを個人ごとに規格化し、6人分のデータを平均してその分布を求めた。その結果、記憶想起課題ではFp_2およびFzを中心に右側前頭前野で負電位として脳波が現れている傾向が見られた。次に、高次機能である理論数学的知性について調べた。被験者に簡単な数式を提示し、逐次差分法を用いて被験者が暗算を行っている場合の計算関連脳波を計測し、検討を行った。その際、左視野に数式を提示し、右視野には数式と同じ面積のランダムドットを提示して計算を行わせる実験と、左右視野の刺激を交替させた実験を行い、左右視野刺激別に検討を行って、計算脳波の左右差を解析した。その結果、左脳に計算式の視野刺激が入った場合には、波形のピークで左半球のC3を中心とした頭頂野で活動が見られた。また右脳に視覚刺激が入った場合には、波形ピークではF4の右側前頭野で活動が見られ、その直後にはC3を中心とした左側頭頂野で活動が見られた。最後に、被験者が計算を行っているときの脳波を取得し、リアプノフ解析およびフラクタル解析などのカオス解析を行った。その結果、計算を行うことでリアプノフ次元は安静な場合に比べて次元数が上昇し、相関次元は逆に下がることがわかった。
独自ラット肺移植モデルを用いた間葉系幹細胞による拒絶抑制法の開発

近年間葉系幹細胞は抗炎症効果と共に免疫抑制効果があるとされる。間葉系幹細胞が組織に生着できれば、拒絶反応の強い肺移植においても免疫抑制剤を減量、あるいは中止できる可能性がある。我々はレシピエント脂肪幹細胞は免疫抑制剤と相加効果を持って免疫反応を減弱させることを証明してきた。我々が独自に確立した“ラット肺移植-脂肪幹細胞投与モデル"を発展させ、1レシピエント由来幹細胞、ドナー由来幹細胞、他家由来幹細胞の免疫抑制効果比較、2頻回投与モデルで慢性拒絶が抑制できるか、3肺移植モデルで免疫寛容を促せるかを検証する。従来の免疫抑制法に追加もしくは補完する形で、拒絶反応への新たな幹細胞治療の確立を目指す。
燐化ガリウムを中間層に用いたシリコン基板上への窒化ガリウム結晶成長に関する研究

これまで窒素ガリウム(GaN)は主にサファイア基板上に結晶成長が行われてきた。しかし、サファイアは絶縁体であるためにデバイス構造に制限があり、導電性基板上への結晶成長が注目されている。本研究では有機金属気相成長法(MOCVD)でシリコン(Si)基板上に燐化ガリウム(GaP)を中間層としてGaNの結晶成長を行った。(100)Si基板に900°Cで約2μmのGaPを成長した後、結晶成長温度を610から810°Cまで変えて約2μmのGaNを成長し、表面モホロジー、走査電子顕微鏡、X線回折等によって評価した。結晶成長温度が610°Cでは表面にクラックは発生しているものの結晶は比較的平坦であるが、結晶成長温度を上げると表面モホロジーは悪化した。走査電子顕微鏡観察によると610°Cで成長したGaNはコラム状をしているが表面は平坦である。結晶成長温度の増加と共にGaPの膜厚が薄くなり、同時に表面が荒れていた。従って、成長温度が高いとアンモニアがGaPと反応することによって表面が荒れた窒化物ができ、その上のGaNの表面モホロジーが悪くなると考えられる。X線回折から成長温度610°CではGaN(0002)の大きなピークが得られたことから、GaNはc軸に配向していると考えられ、Si(100)基板上に六方晶であるGaNがエピタキシャル成長していることがわかる。成長温度を増加すると(0002)ピーク強度は減少し、(10-11)ピークが現れ、多くの積層欠陥が発生していることを示している。610°Cで成長したGaNの2結晶X線半値幅は5.9minであり、良好な結晶が得られている。
次世代シークエンサーが明らかにしたJCウイルスゲノム変異とPMLの病態

病理組織学的に進行性多巣性白質脳症(PML)と確定された6症例の脳組織よりDNAを抽出し、次世代シークエンサーにてJCウイルス(JCV)ゲノムの変異を解析したところ、全例に共通して早期タンパク質のT抗原に共通した変異(V392G)を有する株が野生株と共存して3-19%に認められた。In vitroの実験系で変異株は野生株と比較し、ウイルスタンパク質発現及びウイルス増殖能が著しく低下した。変異株が検出されたいずれの症例のPML病変部でも、免疫組織化学ではT抗原の発現が認められた。JCVは、ウイルス増殖に抑制的な作用を有する変異株と共存した状態でPML病変部で増殖していることが明らかとなった。進行性多巣性白質脳症(progressive multifocal leukoencephalopathy)はヒト免疫不全ウイルス感染や臓器移植後など主に免疫抑制状態にある患者においてJCウイルス(JCV)により惹起される脱髄性疾患である。近年は多発性硬化症やクローン病の治療薬として使用されるnatalizumabなどの抗体医薬によるPMLの発症が報告され、抗体医薬使用時の副作用としてPMLへの関心が急速に高まっている。PMLに対する有効な治療法は未だに確立されておらず、その開発が強く求められている。国立感染症研究所感染病理部において、PMLの臨床検体6例より検出されたJCVのゲノムを次世代シークエンサーにて解析したところ、6例全例に共通して、JCVのT抗原内にアミノ酸置換を伴う変異を有することが明らかとなった。実際のPML検体由来のJCVに特異的なコーディング領域の変異はこれまで知られておらず、変異はウイルスの全ポピュレーションの3%程度しか存在しないが、検索した全てのPML症例に共通して存在する変異であることから、PMLの病態に極めて重要な関与をしていると考えられる。本研究では、次世代シークエンサーにて明らかとなった変異型T抗原のJCV増殖およびPML発症に関する影響について、in vitroの系で分子生物学的手法を用いて解析を行う。平成26年度はまず、PML検体より検出されたJCVの次世代シークエンサー解析で明らかとなった変異を有するT抗原発現ベクターおよびウイルスを作製し、JCV感受性ヒト神経芽細胞腫細胞株IMR-32に変異型T抗原発現ベクターをトランスフェクション、また変異ウイルスの感染実験を行うことで、変異型がJCVタンパク質の産生やウイルス増殖に与える影響について、解析を進めている。進行性多巣性白質脳症(progressive multifocal leukoencephalopathy)はヒト免疫不全ウイルス感染や、血液系悪性腫瘍、自己免疫疾患、臓器移植後などで主に免疫抑制状態にある患者において、JCウイルス(JCV)により惹起される脱髄性疾患である。近年、多発性硬化症やクローン病の治療薬として使用されるnatalizumabなどの抗体医薬によるPMLの発症が報告され、抗体医薬投与によるPMLへの関心が急速に高まっている。しかし、PMLに対する有効な治療法は未だ確立されておらず、その開発が強く求められている。国立感染症研究所感染病理部において、PMLの臨床検体6例より検出されたJCVのゲノムを次世代シークエンサーにて解析したところ、全例に共通してJCVのT抗原内にアミノ置換を伴う変異を有することが明らかになった。本研究では、次世代シークエンサーによる解析で明らかとなった変異型T抗原の、JCV増殖およびPML発症に関する影響について、in vitroの系で分子生物学的手法を用いて解析を行う。現在までに、PML検体より検出されたJCVの次世代シークエンサー解析で明らかとなった変異を有するT抗原を発現するJCVゲノムを作製し、JCV感受性ヒト神経芽細胞腫細胞株IMR-32に変異型T抗原発現JCVをゲノムトランスフェクションし、変異型がJCVタンパク質の発現や、ウイルス増殖に与える影響について、解析を行った。現在までに、まずPML検体より検出されたJCVの次世代シークエンサー解析で明らかとなった変異を有するT抗原を発現するJCVゲノムを作製した。次に、JCV感受性ヒト神経芽細胞腫細胞株IMR-32に変異型T抗原発現JCVをゲノムトランスフェクションし、変異型ベクターがJCV早期および後期タンパク質の発現に与える影響を検討した。続いて、変異型ベクターがウイルス増殖に与える影響について、リアルタイムPCRにてウイルスコピー数を定量して検討を行った。なお、これらの実験では、変異型からのrevertantベクターも作成して実験を追加し、結果を併せて検討した。さらに、野生型と変異型を種々の割合で混在させたゲノムトランスフェクションの実験も行い、JCVタンパク質発現やウイルスコピー数の変化に与える影響を検討した。進行性多巣性白質脳症(progressive multifocal leukoencephalopathy, PML)は、主に免疫抑制状態にある患者においてJCウイルス(JC virus, JCV)により発症する脱髄性の致死的疾患である。本研究では実際のPML症例の脳組織検体よりDNAを抽出し、次世代シークエンサーを用いてJCVゲノムの変異を解析するとともに、変異株が病態にもたらす影響について分子生物学的手法にて検討を行った。国立感染症研究所感染病理部に解析依頼があり、病理組織学的にPMLと確定診断された6症例の脳組織よりDNAを抽出し、次世代シークエンサーにてJCVゲノムの変異を解析した。

続いて、解析にて明らかとなった変異株のウイルスゲノムを作成し、in vitroの実験系で分子生物学的手法により、変異株がウイルス増殖に与える影響について検討した。検索したいずれの症例においても共通して、早期タンパク質であるT抗原に共通した変異(V392G)を有する株がquasispeciesとして3-19%に認められた。In vitroの実験系では、野生株と比較し、変異株はウイルスタンパク質発現及びウイルス増殖能が著しく低下した。また、野生株と変異株を種々の割合で混合した場合、ウイルスタンパク質発現およびウイルス増殖能は保たれた。なお、変異株が検出されたいずれの症例のPML病変部においても、免疫組織化学ではT抗原の発現が認められた。JCVは、ウイルス増殖に抑制的な作用を有する変異株と共存した状態で、PML病変部で増殖していることが明らかとなった。病理組織学的に進行性多巣性白質脳症(PML)と確定された6症例の脳組織よりDNAを抽出し、次世代シークエンサーにてJCウイルス(JCV)ゲノムの変異を解析したところ、全例に共通して早期タンパク質のT抗原に共通した変異(V392G)を有する株が野生株と共存して3-19%に認められた。In vitroの実験系で変異株は野生株と比較し、ウイルスタンパク質発現及びウイルス増殖能が著しく低下した。変異株が検出されたいずれの症例のPML病変部でも、免疫組織化学ではT抗原の発現が認められた。JCVは、ウイルス増殖に抑制的な作用を有する変異株と共存した状態でPML病変部で増殖していることが明らかとなった。PMLの臨床検体より検出されたJCVを次世代シークエンシンサーにより解析することで明らかとなった変異型T抗原発現ベクターおよびウイルスを作製し、平成26年度は、変異型がJCVタンパク質の産生やウイルス増殖に与える影響について、解析を進めている。初年度として実際に実験を開始するにあたり、遺伝子組換え実験についての手続きおよび審査に時間を要したことで、変異型T抗原を発現するベクターおよび変異型JCVを作成するための実験の開始に遅れが見られたことによる。現在までに行った実験につき再現実験を行い、結果を確認する。また新たに得られた結果に応じて、変異型T抗原がJCVタンパク質の発現、ウイルス産生に与える影響の機序についての解析を行うことも検討する。再現実験の結果をまとめて、論文を作成する。病理学作製した変異型T抗原発現ベクターを、IMR-32にトランスフェクション、あるいは作製した変異ウイルスの感染実験を行うことで、変異型がJCV増殖に与える影響について、引き続き野生型と比較した解析を行う。
国境地域における自然資源管理のクロスナショナル・ガバナンス

各メンバーは、ペルー・コロンビア、ボリビア・ブラジル、ガラパゴス諸島、サラワク・カリマンタン、ミャンマー・中国、およびベトナム・中国の国境地方で現地調査を行った。その調査結果を国内外で行われた学会や研究会で発表した。またメンバー各自が複数の研究論文を執筆するとともに、メンバーのうち4人はプロジェクトに関する書籍の執筆分担者となった。さらに各メンバーはプロジェクトの調査結果の理論的な枠組みに関する論文を公表した。本プロジェクトに関わる研究者は、民族国家境界が数人の操作された動作主の相互作用から形成されるという国境地方の地域で天然資源管理についての調査するために合計5つのフィールドワーク旅行を研究対象になる地域に引き受けました。デ・ヨン教授は、9月から10月まで、それから2月にペルー-コロンビア国境地方で天然資源管理を調査するためにペルーへの2つの訪問を引き受けました。軍を含む政府機関の介入および個人的動作主の介入はこの地域で漸増しています。経済的なポテンシャルのためのこの地域のペルーの、そして、コロンビアの政府からの関心はその地域のインフラストラクチャ改良計画で特に示されます。主に不十分に規制されて、モニターされた森林と川の資源開発に基づいて、その地域の進歩的な景気拡大のタイプは政府機関の、よりよく狙っている介入を必要とします。しかしながら、トランスナショナル調整は異なった規制制度、プライオリティ、および能力によって妨げられます。田中教授は、中国にそれらのサブプロダクトの輸出のためゴムと桐油木の商業農園の拡大について調査するためにミャンマーと中国の間にある国境地方の地域で2009年8月20日から9月4日まで野外作業フィールドワーク行いました。桐油木の伝統的な農園と対照して、ゴム園の最近の拡大は国境地方の地域に位置する高地で土地利用パターンを変えました。赤嶺准教授はワシントン条約(CITES)第15回締約国会議が2010年3月13日から25日まで、カタールのドーハで開催された会議に主席し、マグロ、鮫、プレシャス・コーラル、およびナマコの商業海産種の上の政治的交渉を観測したところです。活動の25年後にだけ、CITESは商業海産種に注意を向け始めます。CITESは代わりに最近まで海産種について議論するのを避けて、国際捕鯨委員会(IWC)にクジラの問題を持ち越して、国際連合食糧農業機関(FAO)に魚関連の問題を持ち越します。柳澤準教授は15日間にペルーと、コロンビアとブラジルの間の国境地方でのトランスナショナル境界天然資源管理に関して2010年1月30日から2月13日までフィールドワークを行いました。天然資源管理の地方組織の研究では、天然資源管理での企業内情報通信網がまだ重要ですが、現金需要収入がことによると地方管理システムへの脅威になるのを示しました。ペルーとブラジルの間の国境地方では、地元の農業者が肥料などのように投資なしで川に沿った砂堆の粗放農業の高い生産力を達成します。石川準教授は、2月にサラワクとカリマンタンの境界に沿って地域を訪問して、いくつかのタイプの農園の拡大は現地人でどう風景と自然の認知を形成しているかと調査しました。ウィル・デ・ヨンは2010年度、ボリビアとペルーの国境地域およびペルー・コロンビア国境地域でフィールドワークを行った。それらの地域では新政権の下で国境地域における森林資源のガバナンスの問題に焦点した国際レベルあるいは国レベルの森林資源ガバナンスとローカルな資源管理との関係に関する調査を行って、森林ガバナンスに関する書籍の刊行を行った。研究分担者の石川は、マレーシアとインドネシアの国境地帯におけるマラリア疾病の発生に関する調査を継続している。ついては、マレーシア領国境地帯における大規模アブラヤシ農園開発、そこで働くインドネシア人の労働移動経路、ならびにマラリア罹患率の増加のあいだの相関関係についての調査を進めてる。プランテーション開発をめぐる社会経済的。要因に加えて、国境地帯の植生変化、降水量変化、気温変化などのデータ解析を行っている。研究分担者の柳澤は、ブラジルとペルーの国境近くに位置するペルー領アマゾンのロレート県にて、4つの集落を対象に、森林利用の歴史に関する現地調査を行った。その結果、アマゾン川本流の流れによって河岸が浸食と堆積を長期の時間軸の中で繰り返され、河川沿岸沿いの農民は農地面積の緩やかな増減に応じて農地と狩猟採集の場を移動させること、また、河川沿いの集落の人口の増減は、この農地と狩猟採集の場の移動と深く関係することが分かった。連携研究者の赤嶺は、ワシントン条約(CITES)の附属書IおよびIIに掲載された水棲動物を分析した結果、2000年以降に食料資源としての水産物の記載が目立つ傾向をあきらかにした。このことは、野生生物の保護と食料の安全保障とが対立しうる課題であることを意味しており、より多角的な検討が必要であるとの認識にいたった。また、インドネシアにおいてナマコや鯨類などを中心とした希少生態資源の利用に関する環境NGOの対応について実態調査をおこなった。デ・ヨングは、ペルー北部国境地域の森林をベースにした気候緩和への取り組みの導入と、これらの努力が森林住民の社会にどのように理解され、またどう影響しているかということを研究した。

森林と気候変動の言説は全国的、地域的、そして局地的に行っている様々な関係者たちの間で進展している。彼らは重要な期待を生成している。彼らは森林利用や管理への関心及び実施を徐々に変更しているように思える。赤嶺氏は、2011年7月にイギリスのジャージー島で開催された第63回IWC(国際捕鯨委員会)に出席し、捕鯨問題における賛成派と反対派の両方を観察した上で、生態学政策を述べた。彼はまた2012年2月にフィリピンでジンベイザメ観光事業の実地調査に着手した。彼は、そのことがWWF(世界野生生物基金)フィリピンによって促進され、またジンベイザメの生態学観光事業が地域市町村の収益増加に貢献しているが、恩恵を受けた漁師はほんのわずかだったということがわかった。島民の間で乾燥肉として以前はよく配布されていたが、食用のためにそれらを収穫する興味を示した漁師も中にはいたけれども、長期間禁止された。石川氏は主に木材や非木材、またカリマンタンサワラク州の国境にある植林地帯拡大のための森林抽出活動に焦点を当てた。森林資源の実施は植林地帯開発の進展に伴い変更されている。しかし、このことが森林利用の実際や生物多様性保全のいずれかにのみ損害ではないことを暗示する予期しない結果もある。柳沢氏は森林資源の変化とMatses土地特有民族、ブラジルとペルーアマゾン地域の国境に住んでいるのだが、この民族の生計体制を調査した。アマゾン川の変化と並行して、湖や池などがその形状や水の流れを変化させた、そしてそのことが人々の居住地域や天然資源利用に影響を及ぼした。田中氏は行政会議に出席し、そのプロジェクト(企画)に関連する調査結果行事の報告をする。