hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
敦煌文献および四川石窟資料から見た道教・仏教の社会への受容と浸透

現在、蒲江石窟に関する報告、論考等を集めて分析を行っている。ここには唐代に造像されている天尊像の存在があるだけに、全体に亘る再度の調査が必要と考えている。遊佐は敦煌道教文獻の調査を進めており、特に校録を作成したBD1219、BD7620については全体の構成から細部の分析に至るまで、検討を加えている。また、P3021、3876を研究に重要な文獻と確認し、長文であるが、現在原文の読み取りの作業を進めている。研究分担者の荒見泰史は、敦煌文献中の仏教文獻を中心に俗講、唱導をキーワードとして研究を進めている。同じく劉勛寧は石窟における碑文の分析を進めている。敦煌文献を用いての研究では、当初の期待を超えた成果を上げていると考えているが、そこから新たな着想が生まれてきていて、再度の敦煌現地、及び四川省内の石窟、道観等の調査を行いたい状況にある。(2)とした理由である。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の推進に当たっては、当初の考え通り四川石窟資料と敦煌文獻を主たる資料として進めてきている。「道教・仏教の社会への受容と浸透」に関しては、兩教ともに人々への橋渡しの手段として用いた俗講と唱導をその手掛かりとして研究を進めている。この研究は更に発展する方向性をはらんでおり、更に進めていきたい。また、この研究を遂行する中で分かってきたことは、場と人に対する視点の重要性である。この点についても、敦煌の場、四川省各地の石窟、寺観等への現地調査を重ねることで進めていきたい。
加齢はアポトーシス機構を亢進させるか-ヒト舌粘膜上皮細胞における分子病理学的解析

アポトーシスは発生・分化段階であらかじめプログラムされた細胞死である。加齢の過程におけるアポトーシスの役割を検索するため、近年アポトーシス関連抗原として注目されているLewis^Y(Le)^Y抗原を用いて、ヒト舌粘膜上皮におけるアポトーシスの加齢変化を検索し、増殖細胞マーカーである増殖細胞核抗原(PCNA)の発現の加齢変化と比較検討した。【材料および方法】剖検例より得られた肉眼的に病変のみられないヒト舌を舌尖部と舌盲孔を結ぶ中点で前頭断し、10%中性ホルマリンにて固定後、通法に従いパラフィン包埋、3μmの連続切片を作製した。ヘマトキシリン・エオジン染色を施し、病変のみられない舌(20歳代、50歳代、80歳代)を検索の対象とした。抗Le^Y抗原マウスモノクローナル抗体BM-1/JIMRO(日本抗体研究所)および抗PCNAマウスモノクローナル抗体(DAKO社)を用いてストレプトアビジン・ビオチン法にて免疫染色し、顕微鏡下(x400倍)にて舌背部の粘膜上皮細胞(基底層・有棘層・角化層)500個中の陽性細胞の分布と数を計測した。【結果】1.抗Le^Y抗原陽性細胞は、20歳代、50歳代、80歳代のいずれにおいても、有棘層・角化層に多数みられ、わずかに基底層にも認められた。2.抗Le^Y抗原陽性細胞率は20歳代、50歳代、80歳代で加齢による有意差はみられなかった。3.抗PCNA陽性細胞は20歳代、50歳代では基底層と一部有棘層に、80歳代では基底層にのみみられた。4.抗PCNA陽性細胞率は20歳代、50歳代、80歳代で加齢とともに有意(p<0.05)に減少していた。【考察】ヒト舌粘膜上皮細胞においては、抗Le^Y抗原の発現により示されるアポトーシスの加齢による変化は認められず、舌粘膜上皮の菲薄化などの老化に伴う肉眼および組織形態的変化はアポトーシスの亢進よりもむしろ加齢による細胞増殖能の低下によるものと考えられた。
判決効の主観的範囲と当事者論

本テーマに関する本研究は、申請の際に記載したように、徹底的な比較法研究に基づいて、既判力を中心とする判決効の主観的範囲に関する議論の方向性を探ろうとするものである。筆者の学問的限界もあって、比較法の対象は、ヨーロッパ大陸(EU法を含む)の諸国との比較に限られると予測されるが、判決効の拡張を受ける第三者の範囲を決める基準、客観的範囲との関係、適用条文(民訴114条、115条、信義則に関する2条など)と適用の結果のあり方、適用を受ける第三者の救済方法などを考究して、判決効の主観的範囲に関する解釈論、立法論を展開するものである。
細胞および生体レベルにおけるFas抗原の作用機構

Fasを介するアポトーシス誘導のシグナル伝達糸と、そのシグナルを阻害する細胞内分子機構を解析し、以下の諸点を明らかにした。1.Fasを介するアポトーシス誘導刺激で特異的に活性化されるプロテインキナーゼを精製し、部分アミノ酸列配を決定した。そして、これが酵母STE-20のファミリーに属する哺乳類のプロテインキナーゼMST/Krsであることを明らかにした。また、クローニングしたMSTのcDNAを発現させる実験によって、分子量55kDaのMSTがアポトーシス誘導時にカスパーゼの作用によって切断され、分子量34kDaの活性化したキナーゼとなることを明らかにした。2.がん化していない線維芽細胞マウス3T3を用いて、Fasを介するアポトーシス誘導シグナルに抵抗性を与えるcDNAを発現クローニング法でクローニングした。その結果、がん遺伝子c-K-rasが線維芽細胞でFasを介するアポトーシス誘導シグナルを抑制することを明らかにした。また、活性化型ras(ras12V)は、より強い抵抗性を与え、ドミナントネガティブのrasであるras17Nを発現させると、Fasを介するアポトーシス感受性が高まった。一方、癌化した細胞株jurkatではc-K-rasはFasを介するアポトーシスを抑制できなかったが、活性化型のras12Vは抑制活性を示した。rasが活性化して癌化した細胞では、細胞傷害性T細胞が誘導するFasを介するアポトーシスに抵抗性を示すことが明らかとなった。生体、特に高等動物の生体において、発生時の形態形成、ホメオスタシスの維持に必要不可欠の現象であるアポトーシスは、がんの発生や除去においても重要な働きをしている。アポトーシス誘導シグナルを細胞内に伝達する細胞表層レセプター分子Fasを介するアポトーシス誘導シグナルを明らかにし、また、Fasの生理的役割と機能を免疫系を含む色々な組織で明かにすることを目的として研究を行い、以下の結果を得た。(1)抗Fasモノクローナル抗体特異的にFasと共精製される分子量90kdのタンパク質を精製し、その部分アミノ酸配列を決定した。(2)Fasを刺激して90分でその活性が最大となる分子量34kdのプロテインキナーゼを、ヒストンを基質とするゲル内リン酸化法で検出し、精製した。現在、このキナーゼの部分アミノ酸配列の決定を試みている。(3)ヒト成人T細胞白血病ウイルス(HTLV-1)の発がん遺伝子産物TAXが、T細胞においてFasを介するアポトーシス誘導シグナルを特異的に抑制することを、一過性の遺伝子発現実験により証明した。また、Taxのミュータントを用いた実験により、この活性にはTaxによるCREBの活性化経路は関与せず、NF-κBの転写活性化経路の関与することが示された。(4)アポトーシス誘導活性を有する抗マウスFasモノクローナル抗体RK-8をマウスに投与する実験を行い、卵巣では黄体細胞や濾胞細胞(卵胞内で卵を取り囲む細胞)にアポトーシス誘導能を有するFasが発現し、機能していることを見いだした。(5)Fasリガンドのミュータントマウスであるgldマウスに、抗Fasモノクローナル抗体RK-8を投与することにより、gldマウスに発症するlymphoadenopathyが、ほぼ完全に治癒した。細胞表層レセプター分子Fasを介するアポトーシス誘導シグナルを明らかにすると同時に、Fasの生理的役割と機能を免疫系を含む色々な組織で明かにすることを目的に研究を行い、以下の結果を得た。(1)Fasを介するアポトーシス誘導刺激で特異的に活性化されるプロテインキナーゼDARKを見いだし、これがFas以外の刺激によるアポトーシス誘導時にも活性化されるアポトーシス特異的キナーゼであること、DARKがアポトーシス誘導に必須のプロテア-セであるcaspaseカスケードの下流で活性化されることを明らかにした。さらに、DARKを精製し、cDNAクローニングを行った。そして,caspaseによってC末端領域が切断除去されることにより、DARKが活性化されることを示した。(2)ヒト成人T細胞白血病ウイルス(HTLV-1)の発がん遺伝子Taxの作用を解析し、TAX蛋白質がFasを介するアポトーシス誘導シグナルを特異的に抑制することを、一過性の遺伝子発現実験により証明した。また、Taxはp53を介するアポトーシスも抑制すること、Taxのアポトーシス抑制能は転写因子CREBやNF-κBの活性化とは関係せず新しい分子機構によることを示唆した。(3)アポトーシス誘導能を有する抗マウスFasモノクローナル抗体PK-8を雌マウスに投与すると、卵巣において卵胞の顆粒層細胞と黄体の黄体細胞にアポトーシスが誘導され、黄体が生産する黄体ホルモンの低下と、排卵される卵細胞数の低下が認められた。また、Fas機能不全マウスであるlprマウスでは、加齢とともに未成熟卵胞数の増加と成熟卵胞数の低下が認められた。卵巣においてFasの機能していることを示した。

また、クローニングしたMSTのcDNAを発現させる実験によって、分子量55kDaのMSTがアポトーシス誘導時にカスパーゼの作用によって切断され、分子量34kDaの活性化したキナーゼとなることを明らかにした。2.がん化していない線維芽細胞マウス3T3を用いて、Fasを介するアポトーシス誘導シグナルに抵抗性を与えるcDNAを発現クローニング法でクローニングした。その結果、がん遺伝子c-K-rasが線維芽細胞でFasを介するアポトーシス誘導シグナルを抑制することを明らかにした。また、活性化型ras(ras12V)は、より強い抵抗性を与え、ドミナントネガティブのrasであるras17Nを発現させると、Fasを介するアポトーシス感受性が高まった。一方、癌化した細胞株jurkatではc-K-rasはFasを介するアポトーシスを抑制できなかったが、活性化型のras12Vは抑制活性を示した。rasが活性化して癌化した細胞では、細胞傷害性T細胞が誘導するFasを介するアポトーシスに抵抗性を示すことが明らかとなった。
マルチデティテクタ無侵襲組織反射光オキシメータシステムの開発研究

(1)全血用反射光センサの開発ー直接血液からの反射光を計測し、ヘモグロビン酸素飽和度(SO_2)およびヘマトクリット(Hct)を検出するためのハイブリッド型センサの開発を行なった。センサの設計には光拡散理論を用い、最適な波長、センサ形状、信号処理方法等について三次元的にシミュレーションを行った。波長に関しては、従来から使用されている665nm,805nm,910nm波長に代わり、660nm,730nm,830nmを使用し、ホトダイオードとLED間の距離は2.1mmとした。牛の新鮮血を用いて、HctおよびSO_2計測の精度について検討した結果、830nm波長での反射光値で得られたHctの誤差は3.37%であった。SO_2計測に関して、830/730又は830/660とSO_2との相関を比較したところ、前者の方が精度が良いことが判明した。誤差は4.24%であった。人工心臓や体外循環装置に応用し、酸素化の評価に応用できることが示唆された。(2)反射型パルスオキシメータの精度向上に向け、(1)の場合と同じように三次元光光子拡散論を用い、最適波長、センサ形状、信号処理等について検討を行った。波長に関しては、従来の波長である665nm/910nmに代わって730nm/880nmを使用することによって両波長における組織内への浸透距離を等しくすると同時にSO_2変化に対する線形性を増すことを目的とした。センサ形状に関しては、バックグランド信号に対するパルス信号の比率を最大にすることを目的に光源・光検出器の距離を7mmとした。成犬を用いた実験で、動脈血酸素飽和度を任意に変化させた時の反射光値を口内組織からセンサで計測した。動脈血をサンプルし、そのSO_2とHctの値を計測し、センサで得られた2波長の比との相関を解析した。730/880は660/910に比べて、低酸素飽和度の20%領域まで線形性を維持し、誤差は2.69%と優れた結果を示した。続いて、健常な被験者30名にて、指尖、前頭部、胸部での反射光脈波成分の比較を行った。結果、前頭部は指尖に比べて、脈波成分が約30%に減衰した。胸部は10%であった。また、730nm波長の脈波成分は、体のどの部位においても他の波長の脈波成分よりも約50%大きく、730nm波長の有効性が示唆された。臨床応用を前提とした健全は被験者6名を使用したセンサの評価実験では、局部麻酔下、トウコツ動脈にカテーテルを挿入し動脈血を採取し、へモグロビン量及び酸素飽和度を計測し、前頭部から得られた反射光パルスオキシメータから得られた信号との相関を求めた。730・880nmセンサが従来の660・910nmセンサに比べて優れた精度を示した。730/880の誤差は4.2%で、660/910の誤差は6.3%であった。得られた較正曲線を基に、6名の患者で長期モニタリングを試みた結果、従来のセンサに比較して、730・880nmセンサは長期間(6時間)安定した性能を示した。(3)組織内のHctおよびSO_2を反射光で測定する研究では、血液層と無血層より成る2層組織モデルを作成し、血液層内のHctおよびSO_2を任意に変化させ、モデル表面から反射光を測定し、血液層のHctおよびSO_2の測定方法の検討を行った。この研究では、1mmピッチで46素子で構成されたマルチアレーホトダイオードを使用し、光源からの距離が12.5mmから52.5mmに変化できるシステムを構築した。照射波長は、(1)の全血用センサと同じ660,730,830nmの3波長を用いた。無血層としては、ハムを用いその厚さを0,2,4,6mmと変化させた時のモデル表面から計測された反射光値を各センサ素子で計測し、血液層のみの結果と比較検討することにより組織層の影響について検討した。結果、組織層が厚くなるに連れ、光源から遠距離のセンサ素子での感受性が増したことより、光源と光検出器の距離を選択することで、組織表面から任意の深さに焦点を合わせた計測が可能になることが示唆された。このことは、生体組織内の酸素量の三次元マッピングが可能であることを意味する。(4)続いて、2層組織モデルにおいて、ピコ秒システムを用いて時間分解能計測を行い、モデル組織内での光伝播過程を求めた。トップ層の厚さが3mm以内であれば、光検出器を適切な位置に配置することで、トップ層の影響を受けないで2層目の計測が可能であることが示唆された。このことは、組織内酸素量の三次元マッピングが可能であることを意味する。

波長に関しては、従来から使用されている665nm,805nm,910nm波長に代わり、660nm,730nm,830nmを使用し、ホトダイオードとLED間の距離は2.1mmとした。牛の新鮮血を用いて、HctおよびSO_2計測の精度について検討した結果、830nm波長での反射光値で得られたHctの誤差は3.37%であった。SO_2計測に関して、830/730又は830/660とSO_2との相関を比較したところ、前者の方が精度が良いことが判明した。誤差は4.24%であった。人工心臓や体外循環装置に応用し、酸素化の評価に応用できることが示唆された。(2)反射型パルスオキシメータの精度向上に向け、(1)の場合と同じように三次元光光子拡散論を用い、最適波長、センサ形状、信号処理等について検討を行った。波長に関しては、従来の波長である665nm/910nmに代わって730nm/880nmを使用することによって両波長における組織内への浸透距離を等しくすると同時にSO_2変化に対する線形性を増すことを目的とした。センサ形状に関しては、バックグランド信号に対するパルス信号の比率を最大にすることを目的に光源・光検出器の距離を7mmとした。成犬を用いた実験で、動脈血酸素飽和度を任意に変化させた時の反射光値を口内組織からセンサで計測した。動脈血をサンプルし、そのSO_2とHctの値を計測し、センサで得られた2波長の比との相関を解析した。730/880は660/910に比べて、低酸素飽和度の20%領域まで線形性を維持し、誤差は2.69%と優れた結果を示した。続いて、健常な被験者30名にて、指尖、前頭部、胸部での反射光脈波成分の比較を行った。結果、前頭部は指尖に比べて、脈波成分が約30%に減衰した。胸部は10%であった。また、730nm波長の脈波成分は、体のどの部位においても他の波長の脈波成分よりも約50%大きく、730nm波長の有効性が示唆された。臨床応用を前提とした健全は被験者6名を使用したセンサの評価実験では、局部麻酔下、トウコツ動脈にカテーテルを挿入し動脈血を採取し、へモグロビン量及び酸素飽和度を計測し、前頭部から得られた反射光パルスオキシメータから得られた信号との相関を求めた。730・880nmセンサが従来の660・910nmセンサに比べて優れた精度を示した。730/880の誤差は4.2%で、660/910の誤差は6.3%であった。得られた較正曲線を基に、6名の患者で長期モニタリングを試みた結果、従来のセンサに比較して、730・880nmセンサは長期間(6時間)安定した性能を示した。(3)組織内のHctおよびSO_2を反射光で測定する研究では、血液層と無血層より成る2層組織モデルを作成し、血液層内のHctおよびSO_2を任意に変化させ、モデル表面から反射光を測定し、血液層のHctおよびSO_2の測定方法の検討を行った。この研究では、1mmピッチで46素子で構成されたマルチアレーホトダイオードを使用し、光源からの距離が12.5mmから52.5mmに変化できるシステムを構築した。照射波長は、(1)の全血用センサと同じ660,730,830nmの3波長を用いた。無血層としては、ハムを用いその厚さを0,2,4,6mmと変化させた時のモデル表面から計測された反射光値を各センサ素子で計測し、血液層のみの結果と比較検討することにより組織層の影響について検討した。結果、組織層が厚くなるに連れ、光源から遠距離のセンサ素子での感受性が増したことより、光源と光検出器の距離を選択することで、組織表面から任意の深さに焦点を合わせた計測が可能になることが示唆された。このことは、生体組織内の酸素量の三次元マッピングが可能であることを意味する。(4)続いて、2層組織モデルにおいて、ピコ秒システムを用いて時間分解能計測を行い、モデル組織内での光伝播過程を求めた。
歌仙絵の資料調査とその成立及び流布に関する総合的研究

鎌倉時代以降、多様に展開する「三十六歌仙絵」は、有名な佐竹本の系譜ではなく、業兼本(なりかねぼん)の系譜が主流を形成する。それは業兼本が「時代不同歌合絵(じだいふどう-うたあわせ-え)」の影響を受け、歌合絵としての属性を継承し、創造性を発揮したからである。例えば、「左書き」という元来日本語にはない表記が生み出されるのも、歌合として左と右を対向させる強い志向に発するものであった。歌仙絵の展開を究明するためには、歌合絵との関係を鮮明にすることが必須となる。また、それが未だに実態が明らかではない「百人一首絵」の成立の謎を解く鍵となるはずである。研究2年目の平成24年度は、前年度計画どおりに進め得なかった部分の補遺を含め、おおむね当初計画案通りに実施することができた。実績の概要は以下の4点にまとめられる。すなわち、(1)資料の調査と収集、(2)資料の検討・整理のための基礎作業、(3)論文の執筆、(4)招待講演の実施である。(1)資料の調査と収集は、基本的に扁額歌仙絵を中心に、以下の各神社・美術館等所蔵資料を対象とした。京都市の北野天満宮蔵の三十六歌仙絵、米国のボストン美術館蔵の三十六歌仙絵、鳥取県倉吉市の小鴨神社蔵の三十六歌仙絵、及び広島県廿日市市の厳島神社蔵の扁額歌仙絵。いずれも書誌調査を行い、デジタル画像の収集を行った。(2)資料の検討・整理のための基礎作業は、主として、上記(1)の資料のほか、先行研究に紹介された諸作品のデータを対象とした収集を行った。(3)論文は、平成23年度から準備したものと併せ、2本執筆した。前者は、かねて研究を進めてきた業兼本三十六歌仙絵と時代不同歌合絵の関わりを論じたもので、平成24年度末に刊行された。後者は、平成23年度に調査した神宮文庫蔵三十六歌仙絵を比較の対象に据えたもので、平成24度末に投稿し、平成25年度中に刊行の予定である。(4)招待講演は、歌仙絵に関わる内容のものである(2本)。24年度の実績と同様に、平成25年度も概ね当初通りに研究を遂行できた。その概要は以下の通りである。三十六歌仙絵につき、鹿児島県出水市の市立歴史民俗資料館蔵愛宕神社本、同市箱崎八幡神社蔵本、香川県三木町の和爾賀波神社蔵本、香川県琴平町の金刀比羅宮蔵本(2点)を対象に、調査に行い、許可された資料に関しては、デジタル画像収集を実施した。時代不同歌合絵については、諸本の図像の比較検討を行った。また、徳川美術館・根津美術館をはじめとする諸美術館・博物館の貴重資料展示の熟覧を重ねた。上記の調査・収集資料を整理し、歌仙図と書式を主に三十六歌仙諸本との比較分析を加えた。平成23・24年度の調査・収集及び資料分析の成果をも踏まえ、上述の分析から考察したところをもとに、論文を2本執筆した。1本は、藤房本三十六歌仙の特異性を論じたものである。具体的には、諸本には見られない歌仙絵の描かれ方に関し、身体の向きと服飾への関心が主となっていることを導き、それが本作固有の錯簡と関連する可能性に及ぶ新たな見解を公表した。別の1本は、三十六歌仙の系統において佐竹本とともに二つの主要な系譜を築く業兼本の特質を、従来指摘されてはいない書式の面から新たな考察を加えたものである。平成24年度の成果で言及した「時代不同歌合絵」との関連性についての解明をさらに発展させ、二首本三十六歌仙絵系統の俊忠本の特質等から、「左書き」という特異な形式の問題を含め、新たな観点からの考察を試みた。これは現在投稿中で、平成26年7月刊行の予定である。研究計画1年目の平成23年度は、当初の計画通り三十六歌仙絵を中心に据え、研究を進めた。具体的に行った作業は大きく三つあり、一つは従来収集した調査データの整理、二つは新たな調査・収集に向けた実施可能な計画案の策定、そして三つは重要資料の調査である。一つ目については、海外所蔵資料を含む既調査資料を再検討するとともに、諸先行論文を収集し、それらを検討することを通して、現状を把握し、問題の所在を確認した。二つ目については、本務との関わりを踏まえ、資料所蔵機関・文庫の状況を調査し、実行可能な調査・収集計画を策定した。

三つめについては、三十六歌仙絵のうち、具体的に藤房本に関する調査・収集を行い、その詳細な研究を行った。三つ目の調査・収集に関しては、そもそも藤房本三十六歌仙は伝存資料が少なく、知られているのはニューヨーク公立図書館スペンサーコレクション蔵本、国文学研究資料館蔵本、及び三重県伊勢市の神宮文庫蔵本が主なものである。そのうち前二者は調査済みであり、本研究において神宮文庫本の調査及び画像撮影による収集を行った。その上で、前二者との比較・検討を行い、論文作成に向けて検討を開始した。それら三十六歌仙絵の研究を中心に進める一方、平成24年度以降に研究を進める予定であった時代不同歌合についての検討を行い、その考察を進めた。具体的にその歌合の性格と歌仙絵の分析からその編者の思惑を推論する作業を重ね、論文原稿を作成した(現在入稿中)。最終年度に実施した研究は、初年度以降の調査研究を踏まえた総まとめとして、論文を執筆するともに、その内容を国際的に公表すべく第14回EAJS国際研究集会に応募し、採用されて研究発表を行ったことである(当初予定の調査費は海外研究発表旅費に変更した)。公表した成果は、三十六歌仙絵において系統を異にする佐竹本系と業兼本系諸本の本源的な差異につき検討を加え、その両歌仙絵の性格の異なりを導いたことである。佐竹本系と業兼本系の最も本質的な差異は、歌人を二人ずつ番える際に、向き合う形式を意識するか否かに存し、後者に顕著となる流れは業兼本固有の独創に発していた。左方・右方からなる歌合を意識化して、画面上に強く左右対称の明示を企図したのであり、それが徹底化すると、向かって右に登場する左方歌人の歌を、左から右への行移りで書く「左書き」という日本書記史上例のない書式が誕生する。しかもその書式は、中国書画に類似する形式ながら、歌合を起源とすることにおいて、向き合う身体方向に「声」が発せられる実態を可視化する工夫と認められ、極めて注目される。さらに中世扁額歌仙のうち、白山神社本・和爾賀波神社本等にも左書きが現れ、特に後者は、神殿壁面に掲載される図像として、神に奉仕する機能が付与されたものと判断される。それも京都での扁額書式とは異なり、近江・讃岐国等に固有の書式と見ることが可能であり、中央と地方の差異も知られる。なお、歌仙絵研究においては、「百人一首絵」の絵画化が『百人一首』成立時点か否かが残された課題である。賛否両論が拮抗する状況において、その絵が業兼本の絵を介して、「時代不同歌合絵」との共通性を有することが謎を解く鍵となる。「時代不同歌合絵」が有する二歌人対比の構図を『百人一首』自体が有しており、両作の成立の近さと対抗意識に照らせば、絵の相関・類似は当初成立説の論拠となることが導かれる。和歌文学細かく見ればすべきであったことは残っているものの、閲覧がかなり困難であった貴重資料を含めて、予定していた資料の調査と収集をすることができ、基礎データの収集もほぼ望ましい結果が得られた。また、論文も公表できたので、おおむね順調と判断される。当初計画では、上記の三つめの調査機関・文庫等を複数箇所想定していたが、少ない箇所しか調査できなかったのは、勤務先の業務が予想を超えた過大なものとなり、出張が困難になったことが最も大きな原因である。その対応策として、当初計画では平成24年度以降に研究を進める予定の時代不同歌合絵の考察を進めることとし、論文を作成することとした。既調査資料を分析する作業と考察は、研究室においても可能であるからである。それにより大幅な遅れを取ることは避け得た。平成24年度までの成果を踏まえ、収集資料の整理をした上で、それらの比較・検討を行うともに、調査・収集を当初計画の通りに進める。
覚醒剤少量反復投与ラットの神経細胞障害の解析～小胞体ストレスからのアプローチ～

少量のMethamphetamine(METH)を反復投与し、中脳に小胞体ストレス蛋白の増加を認めるモデル動物に対して多量のMETHを投与した。この動物の中脳の解析により、小胞体ストレス蛋白のGrp78および活性化ATF6の有意な増加を認めた。さらに、酸化ストレスのマーカーである4-HNEの増加の抑制や抗酸化ストレス蛋白であるSOD1の早期の増加を認めた。また、アポトーシスの指標が抑制され、少量のMETH反復前投与は、多量のMETH投与における中脳の神経細胞に対する感受性に影響することが示唆された。まず、酸化ストレス産物の1つである4-hydroxy-2-nonenal(4-HNE)修飾タンパク質を認識する抗4-HNE抗体によるWestern blottingにおいて酸化ストレスについての解析を行った。その結果、溶媒を前投与した動物では有意な増加を認めるものの、METH少量前投与動物では4-HNEの増加は抑制されており、METH少量前投与により酸化ストレスが低減されることを確認した。次に、apoptosis pathwayに関係する抗ASK1抗体および抗リン酸化ASK1抗体を用いたWesternblottingによる解析では、多量のMETH投与において増加するリン酸化ASK1がMETH少量前投与により抑制されており、さらに、抗AKT抗体および抗リン酸化AKT1抗体を用いた解析により、METH少量前投与におけるAKT1のリン酸化の有意な増加を認めた。これは、多量のMETH投与により引き起こされるASK1を介したapoptosisが、METH少量前投与により抑制されていることを示唆する結果と考える。また、小胞体ストレスpathwayのマーカーについて検討を行ったところ、METH少量前投与においてATF6が、リン酸化AKT1の増加やリン酸化ASK1の抑制を認めるタイミングで活性化していることが認められた。一方、spliced XBP1の発現量に変化を認めなかった。これらの結果は、METHを前投与した動物の中脳では、単に酸化ストレスの低減により細胞障害が抑制されるだけでなく、小胞体ストレスpathwayを介したapoptosisの抑制機構が存在している可能性を示唆しているものと考える。まず、神経細胞にGrp78が発現していることを抗KDEL抗体、ドーパミン作動性神経(DA神経)の指標であるTyrosine hydroxylaseを認識する抗TH抗体、GABA作動性神経(GABA神経)の指標であるGlutamic-acid decarboxylaseを認識する抗GAD67抗体を用いたIHCにより解析した。Grp78は、DA神経およびGABA神経と一致しており、これらの神経細胞にGrp78が発現していることが確認された。次に、上記神経マーカーと抗mTOR抗体、または抗AKT抗体を用いたIHCによる解析では、mTORやAKTは、TH陽性細胞の一部およびGAD67陽性細胞の一部と一致した染色像が観察された。抗mTOR抗体および抗AKT抗体、抗mTOR抗体および抗ATF6抗体によるIHCでは、mTORとATF6、mTORとAKTの陽性像は一致していた。これらの結果は、ATF6を介した小胞体ストレスpathwayおよび、mTOR/AKT pathwayがDA神経の一部及びGABA神経の一部では活性化されていることを示唆しており、これらのpathwayが、多量のMETH投与における中脳黒質の細胞障害に対する神経保護効果に寄与していると考える。少量のMethamphetamine (METH)を前投与することにより、中脳に小胞体ストレス蛋白が増加した動物へ多量のMETHを投与することによる神経細胞のMETH耐性の評価を行った。ドーパミン作動性神経細胞のマーカーであるTH、アストロサイトの活性化の指標となるGFAP、小胞体ストレスのマーカーとしてGrp78、酸化ストレスのマーカーであるSOD1、アポトーシス関連蛋白のBcl-2、BaxおよびCHOPをWestern Blottingにより解析した。その結果、生食を前投与された動物では多量のMETHの投与後にTHの減少、GFAPの増加およびCHOPの増加というMETHによる神経毒性を示す結果を得た。しかし、GRP78レベルには、有意な変化を認めなかった。また、SOD1は多量のMETH投与後3日目に有意な増加を示した。対照的に、少量のMETHを前投与し中脳に小胞体ストレス蛋白が増加した動物へ多量のMETHを投与すると、中脳のGRP78レベルのさらなる増加とBcl-2の有意な増加を認め、CHOPの増加抑制が認められた。さらに、THやGFAPに有意な変化を認めず、METHによる神経毒性を示す結果は得られなかった。また、多量のMETH投与後8時間にSOD1の発現が認められ、生食を前投与した動物よりも早期の発現増加を認めた。これらMETHを前投与した動物の小胞体ストレスの結果は、早期のSOD1の発現やBcl-2の増加と関連していると考えられた。

そのため、少量のMETHの前投与は、小胞体ストレスに関連したPathwayを介して、酸化ストレスとアポトーシスのメカニズムを部分的に抑制することで、中脳のMETHの神経毒性に対して保護的に作用している可能性を示唆した。低容量のMethamphetamine (METH)を前投与することにより、中脳に小胞体ストレス蛋白が増加した動物へ高容量のMETHを投与することによる神経細胞のMETH耐性を評価するため、apoptosis pathwayに関する蛋白のリン酸化状態、小胞体ストレスに関するマーカーの解析を行った。その結果、ASK1-JNK phathwayの抑制とリン酸化AKT1の増加を認め、少量のMETH前投与がMETHの多量投与によるapoptosisを抑制することを示唆する結果を得られた。さらに、小胞体ストレスpathwayの1つである、ATF6の活性化パターンに差異を認め、酸化ストレスの低減による細胞障害の抑制だけでなく小胞体ストレスpathwayを介した細胞障害の抑制メカニズムの可能性が考えられた。このように当初の計画であるMETH耐性の評価を行えたことから、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。低容量のMethamphetamine (METH)を前投与することにより、中脳に小胞体ストレス蛋白が増加した動物へ、高容量のMETHを投与することによる神経細胞のMETH耐性を評価するため、ドーパミン作動性神経細胞のマーカーや、小胞体ストレス、酸化ストレスのマーカー、アポトーシス関連蛋白の解析を行った。その結果、小胞体ストレス蛋白のさらなる増加や、細胞障害やアポトーシスが抑制されていると考えられる結果が得られ、さらに、抗酸化蛋白のSOD1が早期に発現することが認められた。これらの結果は、低容量のMETH前投与によりMETH耐性が認められ、このMETH耐性にSOD1が関与していることが考えられた。中脳に小胞体ストレス蛋白が増加した動物へ高容量のMETHを投与時のストレス応答をmRNAレベルにて評価する。モデル動物の中脳よりmRNAを抽出し、Real Time PCRによる解析を行う。さらに、引き続きタンパク質を抽出し、Western Blottingによる解析を行う。中脳に小胞体ストレス蛋白が増加した動物へ高容量のMETHを投与した時のストレス応答をタンパク質レベルにて評価する。モデル動物の中脳より蛋白質を抽出し、Western Blottingによる解析を行う。さらに、リン酸化抗体を用いてWestern Blottingを行いストレス応答の経路を解析する。該当なしWestern Blottingの感度改善のため、高効率なBlotting方法へ変更した。これに伴う試薬単価の上昇により、年度内の試薬購入を見送ったが、次年度の研究費と合わせることで、研究計画を変更することなく研究を遂行することが出来ると考える。
精巣癌に特異的な質問票EORTC QLQ-TC26 を用いた大規模横断的研究

平成30年度は東北大学および共同研究施設(北海道大学、筑波大学、神奈川県立がんセンター、京都大学、京都府立医科大学、大阪大学、大阪国際がんセンター)の協力を得て、各施設で倫理委員会の承認を得た。その後、共同研究施設にQOL質問票および医師記入票を郵送し研究を開始した。対象となる精巣癌サバイバーに本研究について十分な説明を行い、文書により同意が得られた症例にQOL質問票を渡した。共同研究施設の研究協力者と密に連絡をとりながら、質問票および医師記入票を郵送にて回収している。平成31年3月までに527例からQOL質問票を回収することができ、データの入力作業を開始した。また、本研究に参加した精巣癌サバイバーの基本情報である医師記入票も研究協力者から郵送してもらい、データ入力を開始した。本研究の登録期間は平成31年3月末日までであり、それらのQOL質問票を回収しデータ入力が終了次第、データ解析に取りかかる予定である。平成31年3月までに精巣癌サバイバー527例からQOL質問票を回収することができ、目標症例数に達することができた。平成31年度は回収したQOL質問票のデータ入力を行い、データ解析に着手する予定である。平成30年度のQOL質問票の回収(郵便代)の一部およびデータの入力・管理の支払いが平成31年度になったため次年度使用額が生じたが、平成31年度分として請求した助成金と合わせて計画通りに使用する予定である。
ヘリコバクター・ピロリCagA抗体の迅速検出キットの開発

我々はこれまで、ヘリコバクター・ピロリの病原因子CagAが日本を含む東アジアにおいて胃癌と関係していることを報告している。さらに日本のピロリ菌感染者の血清CagA抗体価は組織学的胃炎の程度と相関していることも報告した。今回、大腸菌を用いCagAの全長を発現することに成功し、イムノクロマトグラフィーの原理のもと、血清CagA抗体検出キットの作製に成功した。作製したキットでは、ピロリ菌陽性/CagA抗体陽性のものは陽性となり、ピロリ菌陰性/CagA抗体陰性のものは陰性となった。ピロリ菌陽性にも関わらずCagA抗体陰性の血清については現在条件設定中である。当初の計画通りCagAの全長をターゲットとし、PCRで増幅、pGEXベクターに挿入し、大腸菌を用いてCagA発現系を確立した。CagA蛋白発発現はウェスタンブロットにて確認した。次にこの組み換えCagA蛋白を抗原とし、固相化したニトロセルロース膜を用いた抗CagA抗体検出用イムノクロマトキットを試験的に10テストキット構築した。テストデバイスには、検体を滴下する検体窓(S)及びテストライン(T)、コントロールライン(C)を確認する判定窓を作製した。判定窓のテストライン上にはCagA蛋白を、コントロールライン上には抗ヒトIgGモノクローナル抗体(マウス)を固相化した。血清抗CagA抗体価の高い血清において良好に判定窓に陽性バンドが出現することを確認できた。ピロリ菌非感染の血清抗CagA抗体陰性の検体ではバンドは確認できなかった。ピロリ菌には感染しているが血清抗CagA抗体がELISAにて陰性と判断された血清ではキットにてバンドを確認できなかった。次にこれまで試験参加への同意を得ている血清を使用し既製のELISA法にて血清CagA抗体価を測定した。この中から陽性コントロール、陰性コントロールを選別し、現在キットの最適化を行っているところである。ELISAにてCagA抗体価を測定し、その中から4種類の血清を選別した(A:ピロリ菌抗体陰性、CagA抗体陰性、B:ピロリ菌抗体陽性、CagA抗体陽性(高力価)、C:ピロリ菌抗体陽性、CagA抗体陽性(低力価)、D:ピロリ菌抗体陽性、CagA抗体陰性)。次にスティックタイプのイムノクロマトキットを作製した。固相化抗原CagAと金コロイド標識抗ヒトIgG抗体の組み合わせで、抗CagA抗体検出用イムノクロマトキットの構築は可能となった。結果、A:陰性血清による非特異反応は見られなかった。BおよびC検体では強い陽性反応を認めたが、バンドには差は認めなかった。バンドの強さはB、C検体よりは弱かったが、D検体でも陽性反応を認めた。次に非特異的バンドを抑制するため、非特異吸収剤の効果を検討した。その結果C検体ではバンドのやや薄くなったが、その他の検体ではバンドの強さは変化を認めなかった。今後、プラスミドベクター由来の蛋白の影響、弱陽性反応を示しているヒト正常血清についてのCagA抗体の有無について、検討が必要である。消化器内科当初の計画通りCagAタンパクの精製、ならびにヒト血清を使用したELISAでの血清CagA抗体価測定が順調に進んでいるので。キットの最適化にてキットの大量生産を行う。次に同意が得られた患者血清を用い、作製したキットで血清CagA抗体が検出可能であるかを検討する。血清における抗体濃度が高いと考えられる場合は、段階希釈を行い、ELISAの結果を最もよく相関する希釈倍率を設定する。疾患ごとのキット陽性率の比較:上記キットの開発の後、疾患ごとのキットの陽性率を検討する。具体的には萎縮性胃炎50例、胃潰瘍20例、十二指腸潰瘍20例、胃癌20例を登録し検討する。それぞれのキットの陽性率に差があるかはカイ二乗検定にて検討し、年齢、性差がある際はロジスティック回帰分析にて多変量解析で検討する。尿中CagA抗体測定キットの開発:血清の抗体検出に成功したのちに、尿中の抗体を検出できるかの検討を行う。東アジア型CagA、欧米型CagAを抗原とするキットの開発:CagAはC末側成分の違いにより病原性の高い東アジア型CagAと病原性の低い欧米型CagAに分けられることが報告されている。キットのテストラインに固相化するCagA抗原の種類を変えることにより、東アジア型CagA陽性菌に感染したものだけをスクリーニングすることも可能となる。本研究ではまず東アジア型CagAの全長を用いてキットを作製するが、CagAのC末側成分のみの蛋白を発現することで東アジア型CagA特異的キット、欧米型CagA特異的キットの開発も可能となる。今年度はCagAタンパク精製に時間を要し、キット製作費に使用する額が少なかったため。

次年度はキットの最適化を行うための大量のCagAタンパク精製のため、PCR用酵素、プライマー合成、クローニング費用が必要である。ならびにキットの最適化を行うためキット自体の作製費も必要である。最適化が終了したのちはキットの大量生産に入るため、さらなるキット作製費を必要とする。またヒト血清を用いキットの有用性も検討する為、ELISAキットの購入も必要である。また、低温型自動O2/CO2インキュベーターの購入を検討している。その他、成果報告のための学会参加費、論文校閲料、投稿料、掲載料、実験補助員のための人件費として使用する。
プロスタイド受容体欠損マウスの骨の解析

骨のリモデリングは、今ある骨を吸収することと新たに骨を形成することから成り、骨の量を維持するのに必要なプロセスである。プロスタグランジン(PG)E2は骨吸収と骨形成の両方を促進することがこれまでに知られている。4つあるPGE受容体(EP)サブタイプのうち、いずれかを欠損したマウスにPGE2を投与することにより、そのうちの1つEP4がPGE2の骨形成作用を介する受容体であることが示された。これと一致して、野生型マウスにEP4に選択的なアゴニストを投与すると骨形成が誘導されたが、他の受容体サブタイプに選択的なアゴニストでは骨形成が起こらなかった。野生型マウスから採取した骨髄細胞の培養では、PGE2によりRunx2/Cbfa1(runt-related gene 2/core-binding factor α1)の発現が誘導され、同時にmineralized nodules(カルシウム沈着した骨基質)の形成が促進されたが、EP4欠損マウスから得た骨髄細胞の培養ではこのいずれもが認められなかった。そのうえ、卵巣摘出したラットや片側の坐骨神経・大腿神経の切除により後脚を不動化したラットでは骨の量および強度が減少するが、EP4アゴニストを投与することによりそれらが回復した。骨形態計測からは、不動化したラットでEP4アゴニストは海面骨体積・類骨形成・骨芽細胞数を有意に増加させることが分かり、EP4の活性化により新生骨の形成が誘導されることが示された。さらに、増加した骨表面には対照とほぼ同じ密度で破骨細胞が認められた。これらの結果から、EP4の活性化により新たな骨リモデリングが誘導されること、EP4に選択的なアゴニストは骨粗鬆症の治療に役立つ可能性があることが示唆された。PGE2のもつ骨形成促進作用を明らかにするために以下の実験を行った。1)EP受容体欠損マウス及び野生型マウスの大腿骨に浸透圧ポンプでPGE2及び各EP受容体に対する選択的アゴニストを6週間局所投与し骨形成効果を調べた。2)各EP受容体欠損マウス及び野生型マウスの大腿骨から骨髄細胞を培養しPGE2および各EP選択的アゴニストを添加してmineralized nodule formationを調べた。以下のような結果が得られた。1)PGE2はEP1,EP2,EP3の各欠損マウスで野生型マウスと同様の新生骨形成を示したが、EP4欠損マウスは反応しなかった。EP4選択的アゴニストだけが野生型マウスで新生骨形成促進作用を示した。3)PGE2を添加した骨髄細胞ではCbfa1の発現が蛋白・RNAレベルの両方で増加した。EP4欠損マウス骨髄細胞ではCbfa1発現の増強を認めなかった。1)から、以前から報告されているin vivoでPGE2の持つ骨形成促進作用はEP4を介して発揮されることが示され,2)からin vitroでも確認された。3)から骨形成促進におけるPGE2の標的の一つがCbfa1であり、EP4を介していることが示唆された。2)各EP受容体欠損マウス及び野生型マウスの大腿骨から骨髄紬胞を培養しPGE2および各EP選択的アゴニストを添加してmineralized nodule formationを調べた。

EP4選択的アゴニストだけが野生型マウスで新生骨形成促進作用を示した。3)PGE2を添加した骨髄細胞ではCbfa1の発現が蛋白・RNAレベノレの両方で増加した。EP4欠損マウス骨髄細胞ではCbfa1発現の増強を認めなかった。1)から、以前から報告されているin vivoでPGE2の持つ骨形成促進作用はEP4を介して発揮されることが示され、2)からin vitroでも確認された。3)から骨形成促進におけるPGE2の標的の一つがCbfa1であり、EP4を介していることが示唆された。
光グリッドにおけるハイブリッド制御を用いた計算機資源・波長資源の動的管理技術

本研究では,制御工学で近年注目されているハイブリッド制御を光グリッドの資源管理に導入した.本方式では,ジョブ伝送量を変動させるコントローラと光パスの動的設定・解放を処理するコントローラを高度に連携させることで,計算資源と波長資源の有効利用を実現する.具体的には,PID制御を資源管理に用いて多数のユーザが計算資源と波長資源を有効利用できることを示した.さらに,PID制御をハイブリッド制御に拡張し,光パスの動的設定・解放処理をモデルに組み込むことで資源管理の性能向上を行った.シミュレーション結果から,ハイブリッド制御を用いることで光パス設定・解放処理の影響を考慮して資源管理を行えるようになった.またさまざまな性能評価から,本研究で確立した方式が光グリッドの資源管理に有効であることを解明した.本研究では,制御工学で近年注目されているハイブリッド制御を光グリッドの資源管理に導入した.本方式では,ジョブ伝送量を変動させるコントローラと光パスの動的設定・解放を処理するコントローラを高度に連携させることで,計算資源と波長資源の有効利用を実現する.具体的には,PID制御を資源管理に用いて多数のユーザが計算資源と波長資源を有効利用できることを示した.さらに,PID制御をハイブリッド制御に拡張し,光パスの動的設定・解放処理をモデルに組み込むことで資源管理の性能向上を行った.シミュレーション結果から,ハイブリッド制御を用いることで光パス設定・解放処理の影響を考慮して資源管理を行えるようになった.またさまざまな性能評価から,本研究で確立した方式が光グリッドの資源管理に有効であることを解明した.光ネットワーク上でグリッドコンピューティング環境を提供する光グリッドでは,計算機資源間を光パスで接続してグリッドジョブを超高速伝送し,大容量ジョブの高速処理を実現する.光グリッドで複数ユーザが効率よくジョブを実行するには,計算機資源だけでなく光ネットワーク内の波長資源も有効利用することが必要不可欠である.しかしながら,従来研究では両資源を独立に管理するため,結果としてどちらかの資源が高速グリッド処理のボトルネックとなってしまう.それゆえ,高性能な光グリッド環境を構築するには,両資源を協調管理して有効利用することが重要となる.そこで本研究では,制御工学で近年注目されているハイブリッド制御を光グリッドに導入し,ジョブ伝送量を変動させるコントローラと、光パスの動的設定/解放を処理するコントローラの高度な連携を目指す.本技術の確立には制御理論の導入が必要であるが,光グリッドの資源管理に制御理論を使用した研究はこれまで行われていない.そこで平成19年度は,まず初めに,制御工学で広く使用されているPID制御を用いた資源管理方式を提案した.提案方式では,計算機内バッファと光パス設定/解放処理を数理モデルで表現し,PID制御によって(1)バッファ内ジョブ量を一定にするジョブ送信処理と,(2)波長使用数が最小となる光パス設定/解放処理を同時に実現する.本方式の性能をシミュレーションで評価し,様々な環境下で有効性を確認した.数値結果から,PID制御を資源管理に用いることで,多数のユーザが両資源を有効利用できることが判明した.さらに,本研究の最終目標であるハイブリッド制御の導入に向けて,数理モデルを拡張した.具体的には,光パスの設定/解放処理を離散変数として数理モデルに組み込んでハイブリッド制御の利用を可能にし,拡張モデルの妥当性をシミュレーションで確認した.光ネットワーク上でグリッドコンピューティング環境を提供する光グリッドでは,計算機資源間を光パスで接続してグリッドジョブを超高速伝送し,大容量ジョブの高速処理を実現する.光グリッドで複数ユーザが効率よくジョブを実行するには,計算機資源だけでなく光ネットワーク内の波長資源も有効利用することが必要不可欠である.しかしながら,従来研究では両資源を独立に管理するため,結果としてどちらかの資源が高速グリッド処理のボトルネックとなってしまう.それゆえ,高性能な光グリッド環境を構築するには,両資源を協調管理して有効利用することが重要となる.そこで本研究では,制御工学で近年注目されているハイブリッド制御を光グリッドに導入し,ジョブ伝送量を変動させるコントローラと、光パスの動的設定/解放を処理するコントローラの高度な連携を目指す.前年の19年度には,制御理論の効果を調査するためにPID制御を用いた資源管理方式を提案し,シミュレーションによりその有効性を示した。その結果を受けて,今年度はPIDを用いた方式を拡張してハイブリッド制御(モデル予測制御)を用いた資源管理方式を提案した.本方式では,計算機内バッファと光パス設定/解放処理を数理モデルで表現し,モデル予測制御によって将来の未処理ジョブ量と使用波長数を予測しながら,ジョブ伝送量の決定と光パス設定/解放処理を実行する.これにより,計算機資源と波長資源の有効利用を実現する.本方式の性能をシミュレーションで評価し,様々な環境下で有効性を確認した.数値結果から,ハイブリッド制御を資源管理に用いることで,多数のユーザが両資源を有効利用できることが判明した.さらに, PID制御を用いた先行研究よりもグリッド計算資源と波長資源の両者を有効利用できることが分かった.以上のことから,ハイブリッド制御を用いた資源管理方式は光グリッド環境で有効であり,今後の利用が期待される.
ＳＯＦＣコンポジット空気極電極反応機構の解明

GDC紛体をCold Isostatic Pressing (CIP法)により200MPaで圧縮し,焼結させることで緻密なGDC電解質ペレットを作成した.この電解質の片面にNi/YSZ燃料極を焼成した後,その反対面にLSCF/GDCコンポジット電極をスクリーン印刷し,電気炉で焼成することで空気極を作成した.その際,LSFC/GDCの混合割合を変化させ,体積分率の異なるセルを作製した.作製したSOFCの発電実験を行い,コンポジット電極における反応機構解明を行った.同時に,FIB-SEM(収束イオンビームー走査型電子顕微鏡)を用いてLSCF/GDCコンポジット電極の3次元構造を取得した.比表面積,三相界面密度,各相の屈曲度を算出し,分極特性との比較を行った。26年度が最終年度であるため、記入しない。
菌根菌の外生菌糸の浸出物に含まれる酸性ホスファターゼによる有機態リン酸の利用

各種土壌からアーバスキュラー菌根菌を単離し、コンパートメントポット培養により菌糸の浸出物を含む土壌溶液を回収し、酸性ホスファターゼ活性を測定したところ、泥炭土壌から単離したGlomus clarumが高い酸性ホスファターゼ活性を示した。この酸性ホスファターゼ活性はフッ化ナトリウム及びモリブデン酸ナトリウムにより阻害された。SDS-PAGEにより菌糸の浸出物中の酸性ホスファターゼは菌特異的であることが明らかとなった。リン酸質肥料の原料であるリン鉱石の枯渇が予想され、また農耕地に施用・蓄積した有機態リン酸は作物には直接利用されにくいことから、作物による土壌からのリン酸獲得能の向上が必要とされている。本研究では、陸上植物の7割と共生関係を形成しているアーバンキュラー菌根菌が土壌中に放出する酸性ホスファターゼを利用した有機態リン酸の利用効率の向上を目指す。今年度は(1)高ホスファターゼ分泌菌のスクリーニング、(2)毛状根を用いた高ホスファターゼ分秘菌の培養による酸性ホスファターゼの精製と性質解明を試みる。(1)高ホスファターゼ分泌菌のスクリーニング国内外の各種土壌からアーバスキュラー菌根菌をトラップ培養により分離し、これらをタマネギに接種し、コンパートメントポットで生育させ、菌糸コンパートメント及び根コンパートメントから土壌溶液を回収し、p-ニトロフェニルリン酸と反応させ、生成したp-ニトロフェノール量よりホスフォモノエステラーゼ活性を測定した。GlomusclarumおよびGigaspora decipienceの外生菌糸の浸出物が他の菌と比べて高い酸性ホスファターゼ活性を示した。(2)毛状根を用いた高ホスファターゼ分泌菌の培養による酸性ホスファターゼの精製と性質解明ニンジン毛状根に(1)で得られた高ホスファターゼ分泌菌を接種し、無菌的に培養した。胞子の発芽と外生菌糸の伸張が観察されたが、菌根形成は観察されなかった。本研究では、陸上植物の7割と共生関係を形成しているアーバスキュラー菌根菌が土壌中に放出する酸性ボスファターゼを利用した有機態リン酸の利用効率の向上を目指す。今年度は(1)各種有機態リン酸を添加した土壌におけるAM菌を接種した植物による有機態リン酸の可給化、(2)遠心管を接着したシャーレを用いたAM菌と植物の二員培養法を試みる。(1)地上部乾物重はグリセロリン酸を添加したタマネギで非接種区より接種区において有意に高かった。また、地上部乾物重はすべての有機態リン酸において、接種区のほうが非接種区よりも高い傾向が見られた。このことから、AM菌の外生菌糸からの酸性ボスファターゼの分泌による有機態リン酸の利用の可能性が示唆されたる(2)二員培養法によって植物根とAM菌Gigaspora margarita及びGlomus clarumの菌根形成が観察された。