hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
組織常在性自然IL-5産生細胞の活性化機構と炎症及び線維化制御

本研究では、我々が独自に新しく開発したIL-5レポーターマウスの解析より肝臓や腎臓などの非リンパ系組織内にも常在することが明らかになった自然免疫系IL-5産生細胞(2型自然免疫系リンパ球様細胞:ILC2)及びIL-5によって活性化される好酸球の役割を解明することが目的である。研究の結果、慢性炎症によって誘導される肝臓の線維化にはILC2からのIL-5は必須ではないこと、コンカナバリンA(ConA)による肝臓炎症モデルにおける好酸球増加はILC2が産生するIL-5を介していないことが明らかとなった。そのため最終年度には肺組織の炎症についても解析を行ったが、その結果、免疫抑制剤シクロスポリンA (CsA)がパパイン投与後の肺組織中のILC2の数と活性化(IL-5の発現)を間接的に抑制することを明らかにした。今後はこの結果が肝臓など他の組織でも同様かどうかを解析していく必要がある。また様々な油脂成分をマウス腹腔内投与した際の肝臓内ILC2の活性化については腹腔内の細胞が必要であることは明らかにしていたが、最終年度にはマクロファージを特異的に除去する試薬の投与により腹腔内マクロファージが重要であることを明らかにした。またILC2を活性化することが知られているサイトカインIL-33、TSLPの受容体欠損マウスを用いた実験よりどちらかのサイトカインが存在すれば肝臓内ILC2の活性化が起こることを解明した。この結果は生体内での新たなILC2活性化機構の存在を示唆しており非常に興味深い。研究代表者の異動によって研究計画から大きな遅れが生じてしまった。今後はこの研究結果を元にILC2の活性化機構の解明を続けていきたい。近年、アレルギーなどに重要なTh2サイトカインを産生する細胞として2型自然リンパ球(ILC2)が発見され、様々な炎症疾患に重要であることが分かってきている。我々はILC2のIL-5産生に着目し肝臓での炎症、繊維化におけるILC2の役割を調べた。その結果ILC2のIL-5産生および好酸球の活性化は肝臓の炎症に必須ではないことが分かった。また油脂成分の腹腔内投与によりマクロファージ、サイトカインIL-33、TSLPを介した肝臓ILC2の活性化が誘導できることも新たに分かった。今後も計画に従って研究を遂行していくが、IL-5が慢性炎症による肝臓の線維化誘導に必要ではないことが判明したため、当初計画していた抗IL-5抗体を用いたIL-5の阻害実験は行う必要がなくなった。IL-5によって活性化される好酸球は組織修復に必要であるという報告もあるため、今後は肝臓に障害が与えられた後の組織修復におけるIL-5、好酸球の役割について検討を進めたい。また肝臓ILC2と共に、油脂溶媒投与でより活性化される脂肪ILC2についても解析を進めていきたいと考えている。研究代表者の異動と動物の飼育環境の変化によって当初の予定よりも進行が遅れているが、研究分担者との連携を密にし、今後も計画に従って研究を遂行していく。IL-5によって活性化される好酸球は組織修復に必要であるという報告もあるため、肝臓に障害が与えられた後の組織修復におけるIL-5、好酸球の役割について引き続き検討を進めたい。油脂溶媒投与による肝臓、脂肪ILC2活性化機構についても反応を媒介する細胞、サイトカインの産生機構等の解析を進めていきたいと考えている。免疫学研究代表者の異動によってこれまで通りの実験用マウスの飼育、使用が困難となり、予定していた研究が遂行できなかったため平成28年度分の経費を一部平成29年度へと繰り越した。
実験動物の心・血管系に及ぼす環境温度の影響

実験動物の心・血管系に及ぼす環境温度の影響を明らかにすることを目的とし,テレメトリー自動計測システムを用い,高温(33°C)及び低温(15°C)環境下におけるラットの血圧・心拍数・体温を測定した。さらに、各々の環境下におけるラットの血漿心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)濃度をラジオイムノアッセイ(RIA)にて測定し,心房筋細胞内のANP分泌顆粒を免疫組織化学的並びに電子顕微鏡学的に検索した。【結果及び考察】(1)血圧・心拍数・体温:高温暴露群では心拍数に変化は見られなかったが,血圧・体温は時間経過と共に徐々に上昇する傾向にあった。その後,通常環境下に戻すと23時間後に正常値になった。低温暴露群では血圧・体温共に変化は見られなかったが,心拍数は暴露後正常値に比べ有意に上昇し、通常環境下に戻すと1時間後に正常値になった。(2)血漿ANP濃度:高温暴露後何れも対照群に比べ有意に高値であった。高温暴露から通常環境下に戻し1時間後の血漿ANP濃度は対照群と比べ有意に高かったが、3時間後には正常値になった。低温暴露後は,暴露1時間後のみ対照群に比べ有意に高値であったが、その後対照群と比べ有意な変化は認められなかった。(3)免疫組織科学的及び電顕所員:高温暴露後,心房筋細胞は対照群に比べANP抗体に強く反応し、24時間後が最も強く反応した。高温暴露から通常環境下に戻し1時間後の心房筋細胞はANP抗体に強く反応したが,その後対照群と比べ差は認められなかった。低温暴露群の心房筋細胞は,暴露1時間後のみ対照群に比べANP抗体に強く反応したが,その後差異は認められなかった。電顕的に各群の心房筋細胞内のANP顆粒数は,免疫組織化学的に反応が強いものは多く、弱いものは少なく,免疫組織化学的な結果と一致していた。以上の結果より,高温環境はANP合成・分泌機序に顕著な影響を与えることが示唆された。実験動物の心・血管系に及ぼす環境温度の影響を明らかにすることを目的とし、本年度(平成8年度)は以下の研究を実施した。1.テレメトリー自動計測システムによる血圧・心拍数・体温測定;ラットを用い、高温暴露群として通常環境下(飼育温度;22°C)から高温環境下(33°C)にて24時間飼育後、通常環境下に戻し24時間観察した。同様に低温暴露群として通常環境下から低温環境下(15°C)にて24時間飼育後、通常環境下に戻し24時間観察し、各群における血圧・心拍数・体温の変化をテレメトリー自動計測システムにて測定した。尚、通常環境下にて飼育したラットでの血圧・心拍数・体温を正常値とした。(1)高温暴露群;血圧は高温暴露1時間後より正常値に比べ有意に上昇し、時間経過と共に徐々に上昇する傾向にあった。その後、通常環境下に戻すと23時間後に正常値になった。心拍数は高温暴露後正常値との差は見られなかったが、通常環境下に戻すと有意に上昇し、1820時間程正常値に戻らなかった。体温は高温暴露後正常値に比べ有意に上昇し、時間経過と共に徐々に上昇する傾向にあり、その後、通常環境下に戻すと12時間後に正常値になった。(2)低温暴露群;

血圧、体温共に変化は見られず、通常環境下に戻しても正常値のままであった。心拍数は暴露後正常値に比べ有意に上昇し、24時間上下を繰り返し推移した。その後、通常環境下に戻すと1時間後に正常値になった。2.内分泌学的検索のための検体採取時期の決定;1で得られたデータより、高温暴露群では暴露後血圧・体温に変化が生じ、通常環境下に戻すと心拍数に変化が認められた。また、低温暴露群では暴露後心拍数のみに変化が認められた。従って、高温・低温暴露群共に、暴露1、3、6、12、24時間後に、さらに、暴露後通常環境下に戻し同様の経過時間に血漿・心臓を採取することを決定し、実施した。実験動物の心・血管系に及ぼす環境温度の影響を明らかにすることを目的とし,本年度(平成9年度)は以下の研究を実施した。【材料及び方法】生後11週齢のJcl:Wistar系雄ラット66例を用い,高温(33°C)及び低温(15°C)飼育群として各々暴露1,3,6,12及び24時間後に,さらに24時間高温及び低温暴露後,通常環境下に戻し同様の経過時間に血漿・心臓を採取した。なお対照群として22°C飼育群を用い,各群の血漿心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)濃度をラジオイムノアッセイ(RIA)にて測定し,心房筋細胞内のANP分泌顆粒を免疫組織化学的ならびに電子顕微鏡学的に検索した。【結果及び考察】高温暴露後の血漿ANP濃度は,何れも対照群に比べ有意に高値であり,高温暴露6時間後に3時間後に比べ減少したが,その後24時間後まで上昇し続けた。高温暴露から通常環境下に戻し1時間後の血漿ANP濃度は対照群と比べ有意に高かったが,3時間後には正常値になった。低温暴露後の血漿ANP濃度は,暴露1時間後のみ対照群に比べ有意に高値であったが,その後対照群と比べ有意な変化は認められなかった。免疫組織化学的に心房筋細胞は,高温暴露3時間後対照群に比べANP抗体に強く反応し,6時間後には対照群に比べ弱くなったが,その後12時間後に反応は強くなり,24時間後には最も強く反応した。高温暴露から通常環境下に戻し1時間後の心房筋細胞は免疫組織化学的に強く反応したが,その後対照群と比べ変化は認められなかった。低温暴露群の心房筋細胞は,暴露1時間後のみ対照群に比べANP抗体に強く反応したが,その後変化は認められなかった。電顕的に各群の心房筋細胞内のANP顆粒数は,免疫組織化学的に反応が強いものは多く,弱いものは少なく,免疫組織化学的な結果と一致していた。以上の結果より,高温環境はANP合成・分泌機序に顕著な影響を与えることが示唆された。
サーカディアン共鳴現象の解明と応用による高機能組換えレタスの高生産

植物の体内時計(サーカディアンリズム)が昼夜サイクルと"共鳴"すると、植物の成長や光合成効率が最大になる。この現象はサーカディアン共鳴現象と呼ばれ、レタスにも観察できることから閉鎖型植物工場でも十分な効果が期待できる。この現象は時計遺伝子の遺伝子発現レベルにおける共鳴現象に起因すると推測されており、メカニズムの解明によって分子レベルの制御への発展も期待できる。そこで本研究では、(1)多様な人工環境を実現できる閉鎖型植物工場の機能を活かしたパルス同期制御法の研究、(2)体内時計の最適化によってもたらされる生育促進効果やタンパク質生成促進効果、形態形成へ与える影響などを数値化し評価する、ことを行った。そこで本研究では、(1)分子メカニズムの理論方程式の構築と、(2)その理論方程式を応用した高機能組換えレタスの高生産を実現するモデル追従型栽培アルゴリズムの創出を試みる。平成22年度は(1)サーカディアン共鳴現象のメカニズムの解明について研究を行なった。1.ルシフェラーゼ遺伝子導入レタスを用いて、様々な周期をもつ明暗サイクル条件におけるサーカディアン共鳴現象を詳細に観察した。サーカディアン共鳴現象の最適解(最適周期)は、植物種や照度や光質に依存すると考えられる。そこで、グリーンウエーブレタスやシスコレタスなどの3品種において、最適周期の解明を行なうと共に、赤色LED光や赤青混合LED光(赤青比8:2など)の場合における最適周期解を求めた。2.明暗サイクルとサーカディアンリズムの位相関係を解析し、サーカディアン共鳴現象のメカニズムの解明を試みた。サーカディアン共鳴現象のメカニズムの解明には、明暗サイクルとサーカディアンリズムの位相関係を綿密に調べることが重要であると考えられる。そこで、評価の精度を高めるために、数理モデルを作成し、コンピューター・シミュレーションを利用しながら解析を行なった。そこでH23年度は、(1)多様な人工環境を実現できる閉鎖型植物工場の機能を活かしたパルス同期制御法の研究、(2)体内時計の最適化によってもたらされる生育促進効果やタンパク質生成促進効果、形態形成へ与える影響などを数値化し評価する、ことを行った。(1)多様な人工環境を実現できる閉鎖型植物工場では、最適解(最適な環境条件)も多様であると考えられる。そこで、多様な光条件をデザインすることができるパルス同期制御法をさらに発展させることを目的に行った。まず、1.ルシフェラーゼ遺伝子導入レタスを用いて、各種パルス刺激(赤色パルス光、青色パルス光)に対するサーカディアンリズムの応答関数を求めた。次に、2.位相応答関数を利用した同期現象の数理モデルを作成し、コンピューター・シミュレーションを行なった。3.コンピューター・シミュレーションで得られた最適解を、実験で検証した。(2)体内時計の制御が生育やタンパク質生成、形態形成に与える影響に関する研究は、体内時計の状態を正確に計測し制御する技術がこれまで無かったため、研究そのものが不可能であった。そこで、パルス同期制御法などを利用して、このような研究を可能にできる手法の研究を試みた。今回、生重量、乾物重、クロロフィル濃度、ルシフェラーゼタンパク質の生成量に関する定量を行い、体内時計制御の生産性への影響を明らかにした。
AI陽性極酸化メンブレンを用いた廃水からの金属・細菌類選択分離プロセスの研究

本研究ではAl陽極酸化皮膜を支持膜に用い、ゾルーゲルは法により細孔壁表面にZr酸化物を被覆することにより細孔径が縮小され、かつ耐酸性が付与された分離膜を作製し、最初にその分離膜を用いた電気透析によるクロム酸イオンの分離特性について調査した。支持膜には、細孔径が20nmで膜厚が64nmの市販のものと、Al基板をスルホサリチル酸-硫酸混合水液中にて定電圧電解後、逆電剥離法により作製した細孔径が約1nmで膜厚が94μmのものを用いた。これらの指示膜を、Zr酸化物を被覆する場合はZr(n-OBu)_4:DEG:H2O:EtOH=1:2:2:50、水酸アパタイトを被覆する場合はCa(OEt)_2:P(OEt)_3:EG:Et-OH:H_2O:DEG=10:6:359:942:2.5:10の各々のモル比に調整したゾルに浸漬し、一定速度による引き上げ、自然乾燥、573Kの加熱処理からなる操作を26回繰り返すディップコーティングに供した。電気透析実験では、硫酸ナトリウム水溶液の陽極室とクロム酸(IV)水溶液の陰極室との間に分離膜を置き、両極室の電極間に30Vを加え1.8ksの透析を行った。細孔径が20nmの陽極酸化皮膜を用いた場合の分離率は、ゾルーゲル被覆前では0%であったが、1回の被覆により9093%に著しく増加した。一方、細孔径が1nmの陽極酸化皮膜の場合の分離率は、被覆前にすでに8890%の分離率を有していたが、12回の被覆を行うと9599.5%まで増加した。また、細孔径の異なる二つの分離膜を用いた電気透析により、クロム酸(IV)と分子径が1.635nmの有機染料を含む混合溶液からクロム酸(IV)と有機染料の分離を試みたところ、各々の分離が確認された。次に、ゾルーゲル被覆により細孔径を制御したAl陽極酸化分離膜を用い、M13バクテリオファージを混入させたアルブミン溶液からの簡易的な圧透析法によるヒト血清アルブミンとM13バクテリオファージの分離の可能性について調査した。分離実験では、最初にメチレンブルー水溶液、次にヒト血清アルブミンを1%含む水溶液を用いて分離膜の各々の透過時間が0.24ksまでの透過性を確かめた上で、大きさが約φ6×850(nm)のM13バクテリオファージを5.4×10個/mlの割合で添加したアルブミン溶液からの圧透析法による分離を行った。メチレンブルー水溶液および1%アルブミン水溶液を用い各々の流量が5ml/minの透過実験の結果、全ての分離膜において透過率が90100%の良好な透過性が確認された。なお、いずれの分離膜においても、目詰りに起因した水圧の変化は見られなかった。アルブミン溶液からのM13バクテリオファージの分離実験では、Zr酸化物と水酸アパタイトの何れの場合も、2回のコーティングにおいて分離率が最も増加し、その分離率は8690%に達したが、コーティング回数の増加とともに次第に分離率が低下する傾向が認められた。今後、分離膜を直列に並べるなどの方法を取れば、一層の分離率の向上が期待される。

次に、ゾルーゲル被覆により細孔径を制御したAl陽極酸化分離膜を用い、M13バクテリオファージを混入させたアルブミン溶液からの簡易的な圧透析法によるヒト血清アルブミンとM13バクテリオファージの分離の可能性について調査した。分離実験では、最初にメチレンブルー水溶液、次にヒト血清アルブミンを1%含む水溶液を用いて分離膜の各々の透過時間が0.24ksまでの透過性を確かめた上で、大きさが約φ6×850(nm)のM13バクテリオファージを5.4×10個/mlの割合で添加したアルブミン溶液からの圧透析法による分離を行った。メチレンブルー水溶液および1%アルブミン水溶液を用い各々の流量が5ml/minの透過実験の結果、全ての分離膜において透過率が90100%の良好な透過性が確認された。なお、いずれの分離膜においても、目詰りに起因した水圧の変化は見られなかった。アルブミン溶液からのM13バクテリオファージの分離実験では、Zr酸化物と水酸アパタイトの何れの場合も、2回のコーティングにおいて分離率が最も増加し、その分離率は8690%に達したが、コーティング回数の増加とともに次第に分離率が低下する傾向が認められた。今後、分離膜を直列に並べるなどの方法を取れば、一層の分離率の向上が期待される。Al陽極酸化皮膜を支持膜に用い、ゾル/ゲル法により細孔壁表面にZr酸化物を被覆することにより細孔径が縮小され、かつ耐酸性が付与された分離膜を作製し、その分離膜を用いた電気透析によるクロム酸イオンの分離特性について調査した。支持膜には、細孔径が20nmで膜厚が64nmの市販のものと、Al基板をスルホサリチル酸-硫酸混合水液中にて定電圧電解後、逆電剥離法により作製した細孔径が約1nmで膜厚が94μmのものを用いた。これらの支持膜を、モル比でZrテトラ-n-ブトキシド:ジエチレングリコール:イオン交換水:脱水エタノール=1:2:2:50の割合に調整したゾル溶液に浸漬し、一定速度による引上げ、大気中乾燥、573Kの加熱処理または常温における紫外線照射からなる操作を15回繰り返すディップコーティングに供した。電気透析実験では、硫酸ナトリウム水溶液(7×10^<-4>mol/l)の陽極室とクロム酸(IV)水溶液(0.2mol/l)の陰極室との間に分離膜を置き、両極室の電極間に30Vを加え1.8ksの透析を行い、次式から分離率を求めた。分離率=(透析前の陰極室中のCr^<6+>濃度-透析後の陽極室中のCr^<6+>濃度)/(透析前の陰極室中のCr^<6+>濃度)×100(%)その結果、細孔径が20nmの陽極酸化皮膜を用いた場合の分離率は、ゾル/ゲル被覆前では0%であったが、1回の被覆により9093%に著しく増加した。一方、細孔径が1mmの陽極酸化皮膜の場合の分離率は、被覆前にすでに8890%の分離率を有していたが、12回の被覆を行うと9599.5%まで増加した。また、細孔径の異なる二つの分離膜を用いた装置により、クロム酸(IV)と有機染料(赤色106号)を含む混合溶液からクロム酸(IV)と有機染料の電気透析による分離を試みたところ、混合溶液からのクロム酸(IV)と有機染料の分離が確認された。ゾル-ゲル被覆により細孔径を制御したAl陽極酸化分離膜を用い、M13バクテリオファージを混入させたアルブミン溶液からの簡易的な圧透析法によるヒト血清アルブミンとM13バクテリオファージの分離の可能性について調査した。指示膜には、膜厚が64μmで細孔径が20nmと100nmの二種類のAl陽極酸化分離膜を用いた。この指示膜を、Zr酸化物を被覆する場合はZr(n-OBu)_4:DEG:H_2O:EtOH=1:2:2:50、水酸アパタイトを被覆する場合はCa(OEt)_2:P(OEt)_3:EG:Et-OH:H_<>O:DEG=10:6:359:942:2.5:10の各々のモル比に調整したゾルに浸漬し、一定速度による引き上げ、自然乾燥、573Kの加熱処理からなる操作を26回繰り返すディップコーティングに供した。
血小板膜蛋白GPIV(CD36)の機能と発現調節に関する研究

池田らは血小板輸血不応者の血小板にCD36欠損を発見した。CD36欠損者の血小板の凝集機能は正常と変わらず出血傾向も認められない。しかし低カルシウム条件下では種々のアゴニストによる凝集能の低下が観察された。CD36の機能として動脈硬化の主要因子である酸化LDLや不飽和脂肪酸の細胞内取り込みなどが報告されている。CD36欠損者は白人種には極めて稀であるが日本人には数%ある。血小板の不適切な活性化は動脈硬化の要因の1つである。そこでCD36欠損血小板を用いて、脂質代謝と関連する血小板機能の解明を目的に、不飽和脂肪酸の血小板シグナル伝達機構への影響を解析した。結果をまとめると1.様々な生理活性物質を産生するアラキドン酸カスケードの出発物質であるアラキドン酸には血小板凝集阻害効果がある。不飽和脂肪酸取り込み機能を持つCD36欠損血小板ではアラキドン酸によるTxA2凝集阻害効果が正常血小板の25%程度に低下している。2.さらにアラキドン酸による血小板のTxA2凝集阻害は、CD36経由で取り込まれたアラキドン酸が細胞質内で多価不飽和脂肪酸としての機能を発揮する(カルシウム非依存性にPKCを活性化する)結果であることを証明した。すなわち、カルシウム非依存性PKCが細胞質で膜リン脂質、カルシウムとは無関係にPLCβをリン酸化する結果カルシウム依存性PKCのPLCβによる活性化が抑制されることを示し、初めてシグナル伝達上でのPKCアイソザイム相互の関連性を明らかにした。PKCが持つ矛盾する作用(不可逆凝集での主要な役割を果たす一方で凝集阻害効果を持つ)は、アイソザイムが役割分担する形でおこなわれ、生理的に重要な意味を持つと思われる。1.正常血小板と比較したCD36欠損血小板のアラキドン酸の取り込みを、アラキドン酸による凝集反応で検討すると、どちらも個体差が大きく、抗CD36抗体でCD36をブロックした報告ほど大きな差は認められなかった。またアラキドン酸代謝物であるTxA2アナログのU46619による凝集反応には差は全く認められなかった。一方、アラキドン酸代謝を阻害した条件下では、アラキドン酸は低濃度域でTxA2アナログのU46619による凝集反応を阻害した。CD36欠損血小板は正常血小板と同等の阻害効果を示すためには510倍のアラキドン酸を必要とした。以上の結果より膜蛋白CD36は、アラキドン酸の細胞への取り込み段階で何らかの機能を担っていることが判明した。この機能は、CD36を弱く発現している血小板では正常であった。膜蛋白CD36は高度に発現されているので、放出されたアラキドン酸は効率よく取り込まれTxA2に代謝される。したがってアラキドン酸放出が低レベルである低カルシウム条件でのみCD36欠損血小板の凝集活性の低下現象が認められると考えられる。2.アラキドン酸を含む多価不飽和脂肪酸がカルシウム非依存性PKCを活性化する濃度とU46619の凝集阻害反応を示す濃度(<50μM)がほぼ一致することから凝集反応阻害は、カルシウム非依存性PKCによるものと推定される。フローサイトメトリーによる検討では、域値以下のPMAはU46619とシナジズムを示すのに対して阻害反応を示すアラキドン酸濃度範囲では凝集に必須のIIb/IIIaの活性化にも放出反応にもシナジズムは認められなかった。

3.現在、これらのアラキドン酸を含む多価不飽和脂肪酸によるカルシウム非依存性PKCの機能とカルシウム依存性PKCのIIb/IIIaの活性化と放出反応を促進する機能とがどのように血小板機能の生理的制御(不必要な血栓形成の阻止と止血)に関連するのか、より詳細なアイソザイム分析を検討中である。膜蛋白CD36がアラキドン酸を含む多価不飽和脂肪酸(PUFA)の細胞への取り込みに関与していることがしられでいるが、CD36欠損血小板の各種アゴニストに対する応答低下との関連性を調べるためにアラキドン酸によるU46619凝集反応の阻害を検討した。CD36欠損血小板のIC_<50>は正常血小板のIC_<50>の4倍であった。正常血小板のU46619凝集反応は50-100μMのアラキドン酸により完全に阻害されるが、fura-2による[Ca_i]測定、反応液中にフィブリノーゲンを共存させた実験結巣から、このとき細胞内カルシウム動員は影響を受けず、llb/lllaの活性化も阻害されない、従って放出反応の阻害による凝集阻害である事が判明した。血小板のTxA2受容体はGqα-PLCβ経由のシグナル伝達と、これとは別のシェイプチェンジとカルシウム動員をもたらす2種類の応答をを引き起こすことが知られているが、アラキドン酸は前者のみを阻害した。アラキドン酸を含む多価不飽和脂肪酸カルシウム非依存性PKCを活性化する濃度とU46619の凝集阻害反応を示す濃度(<50μM)がほぼ一致することから、凝集反応阻害はカルシウム非依存性PKCによるものと推定した。このメカニズムを解明するためにカルシウム非依存性PKCの特異的阻害剤であるGo6976存在下でのU46619凝集反応を検討したところ、アラキドン酸と同様なカルシウム動員に影響を与えない凝集阻害反応が見られた。PKCによるGqα-PLCβ経由のシグナル伝達阻害はPLCβの燐酸化の結果、Gqαとの相互作用が妨げられるためと考えられている。現在、「アラキドン酸によるカルシウム非依存性PKC活性化→PLCβの燐酸化→Gqα-PLCβ経由のシグナル伝達阻害」の作業仮説をたててアラキドン酸により燐酸化される蛋白の同定を進めている。アラキドン酸を含む多価不飽和脂肪酸(PUFA)は、血小板凝集を阻害する。一方、アラキドン酸の代謝物TxA2は血小板活性化に中心的な役割を担っている。昨年度我々は、血小板に対するアラキドン酸とTxA2の相反する作用は活性化するPKCのアイソザイムが異なるためであるとの結果を得た。即ち、カルシウム非依存性PKCがアラキドン酸により活性化されると、細胞質内PLCβが燐酸化され、その結果Gqα-PLCβの相互作用が妨げられる。結果的にGqα-PLCβ経由のシグナル伝達が抑制され、TxA2による血小板凝集も阻害されると推定した。今年度は、昨年度のカルシウム依存性PKC特異的阻害剤Go6976による結果を更に確実にするためにアラキドン酸によるPLCβの燐酸化をウェスタンブロッテイングにより検討した。血小板凝集を阻害する濃度のアラキドン酸はフォルボールエステルと同様にPLCBを燐酸化した。PKCのアイソザイム(カルシウム依存性、カルシウム非依存性)の特性のひとつに膜結合と細胞質内での活性化がある。アラキドン酸はカルシウム非依存性PKCの細胞質内での活性化を行い、TxA2はカルシウム依存性PKCの膜結合での活性化に関連している。即ちそれぞれの細胞内における作用の場は機能と密接に関係していると推定される。「アラキドン酸→CD36→カルシウム非依存性
皮膚悪性リンパ腫におけるB細胞の腫瘍増殖、腫瘍免疫逃避機構の解析

皮膚T細胞リンパ腫患者の末梢血中においては、制御性B細胞および制御性B細胞を含んでいる分画の割合が減少しており、それらの数は病勢マーカーと逆相関を示しており、皮膚T細胞リンパ腫の進展に関与している可能性が示唆された。また、皮膚T細胞リンパ腫の病変部皮膚、血中ではVEGF-Aの発現が上昇しており、病勢マーカー、痒みの程度をあらわすマーカーと相関していたことより、VEGF-Aが皮膚T細胞リンパ腫の進展及び痒みの発現に関与している可能性が考えられた。本研究は皮膚悪性リンパ腫において、様々なサイトカインを産生しているB細胞がどのような役割を果たしているのかを臨床検体を用いて解析することを目的としている。昨年度はサイトカイン産生B細胞の中でも、近年注目を集めているIL-10産生B細胞(制御性B細胞)について検討を加えた。皮膚悪性リンパ腫の中でももっとも頻度の高い菌状息肉症、セザリー症候群の患者の血液中のIL-10産生B細胞の割合は健常人と比較して、有意に低下していた。また、IL-10産生B細胞を豊富に含んでいることが知られているCD24(hi)CD27(+)B細胞やCD24(hi)CD38(hi)B細胞に関しても、その頻度が低下していた。また、菌状息肉症、セザリー症候群それぞれを分けて、健常人と比較した場合においても、健常人より有意に低下しており、過去に報告されているIL-10を産生している制御性T細胞がこれらの患者において頻度が低下しているという結果と免疫学的な方向性は一致していると考えられた。臨床検体に関しては、さらにサンプル数を増やして、更なる解析を加える予定にしている。本研究は皮膚悪性リンパ腫において、さまざまなサイトカインを産生しているB細胞がどのような役割を果たしているか、さらにはB細胞が産生しうるサイトカインの皮膚悪性リンパ腫のおける病態への関与について検討することを目的としている。平成28年度はIL-10産生制御性B細胞についての更なる検討を加えると同時に、B細胞も産生することが報告されている血管増生因子についての検討を加えた。昨年度、皮膚T細胞リンパ腫である菌状息肉症、セザリー症候群の患者の末梢血中では、IL-10産生制御性B細胞およびその細胞を多く含んでいる分画であるCD24(hi)CD27(+)B細胞やCD24(hi)CD38(hi)B細胞の割合が減少していること、それらの数が菌状息肉症、セザリー症候群の病勢マーカーである血清LDH値と逆相関を示していることを報告したが、今年度はさらに症例数を増やして検討したところ、やはり同様の結果が得られた。菌状息肉症、セザリー症候群の患者では制御性T細胞も減少していることが知られており、これらの制御性細胞群が腫瘍性T細胞の活性を抑制している可能性が示唆された。さらに、本年度はB細胞も産生しうる血管増生因子であるVEGF-Aの皮膚T細胞リンパ腫における役割の検討を行った。菌状息肉症、セザリー症候群の患者の皮膚ではVEGF-A mRNAの発現が上昇しており、病勢マーカーとなる皮膚組織中のCCL27 mRNAの発現と正の相関を認めた。さらに、末梢血中におけるVEGF-Aの発現も健常人と比較して上昇しており、治療後には低下するという病勢と並行した動きが確認された。また、血清中VEGF-A値はかゆみの程度を反映するさまざまなマーカーと相関しており、VEGF-Aを抑制することが菌状息肉症、セザリー症候群の病勢、かゆみを抑制する上で、有効な治療戦略になる可能性が示された。昨年度はIL-10産生B細胞(制御性B細胞)に関しての臨床検体を用いた検討を進め、制御性B細胞が皮膚悪性リンパ腫患者で減少しており、病勢の進行に関与している可能性を提示することができた。これにより、B細胞をターゲットとした皮膚悪性リンパ腫の治療ができると考えられた。27年度が最終年度であるため、記入しない。医歯薬学今後は上記に記載したように、さらにサンプル数を増やして、臨床データの検討をする予定である。また、マウスの皮膚にリンパ腫細胞株を接種し、IL-10産生B細胞を同時にadoptive transferすることによって腫瘍の発育の違いを検討する予定としている。この実験系ではin vitroの実験系とは異なり、リンパ腫細胞株への直接の影響のほかに腫瘍細胞の周囲の微小環境への影響にも左右されるため、実際の患者の病変部において、起きていることをより模倣できると考えられる。

サイトカイン産生B細胞により腫瘍の成長に変化が見られた場合には、そのサイトカインの中和抗体全身投与することで、腫瘍の成長の変化が中和抗体によって阻害されるかどうかも検討する。27年度が最終年度であるため、記入しない。
in vivo脳深部で多ニューロン活動を可視化する一次世代ツールを目指して

多ニューロン活動のカルシウム画像法は次世代ツールとして注目されているが、しかしながら、現時点では、脳スライス標本において成功を収めていたに過ぎなかった。そこで、本研究では、この新技法を個体動物の脳に応用し、生きた動物でニューロン活動を記録することに挑戦した。しかも、大脳皮質のような脳の表層部位ではなく、脳の深部での観測法を確立を試みた。とりわけ従来はまったく不可能であった海馬からの記録に挑戦した。最終年度である20年は、特別設計された尖端状の極細対物レンズを用いることで、実際に、脳深部からのイメージングが可能であることを証明した。具体的な実験としては、血管造影剤FITCdextranを静脈内投与し、血流速と血液細胞数を同時に観察した。脳のエネルギー代謝における恒常性は、脳への安定した血流供給により維持されている。たとえば、脳には急激な血圧変化に対しても、脳血流を一定に保つような機構が働く。これは自動調節能と呼ばれ、古くから知られている。しかし、海馬のような脳深部から1本1本の毛細血管の解像度で自動調節能を観察した研究は過去になく、本研究で新たに開発したスティック型の細径対物レンズがこれを可能とした。薬理学的に血圧を一過性に変化させ、海馬と末梢組織の毛細血管で血流速度変化を比較し、脳実質内血管における自動調節能の存在を確認した。一方、その速度変化は個々の血管で様々であったことから、自動調節能とは脳全体での調節だけではなく、個々の血管レベル、すなわち局所的な調節も関与することが本研究より初めて明らかとなった。もちろん、脳スライス標本における研究でも、神経回路システムの演算様式に対する理解が格段に進歩すると考えられるが、それはあくまでも生体から切り離された単離系であり、環境由来の影響を正確に知ることはできない。そこで、申請研究では、この新技法を個体動物の脳に応用し、生きた動物でニューロン活動を記録することに挑戦する。とりわけ従来はまったく不可能であった海馬からの記録に挑戦している。本年度はこの第一歩として、血管造影剤を用いて、深部脳からの血流測定に成功した。FITCdextranを静脈内投与し、極細の対物レンズを用いることで、血流速と血液細胞数を同時に観察した。その結果、脳血流は、末梢血流に比較して、血圧変動の影響を受けにくいことがわかった。この成果は来年度の日本神経科学会で発表予定である。また特筆すべき事項として、オリンパス株式会社バイオ開発2部との共同研究「スティック対物レンズを用いた小動物の脳深部観察の実現」が開始されたことがある。これによりin vivo観察がより容易に実現できると期待される。
植物の成長制御エンハンソソームの解析

本研究では植物の主要な成長抑制因子DELLAによる転写制御機構を解析した。ジベレリン(GA)はDELLAの分解を介して転写活性化因子の抑制解除により転写を促進するとされてきた。しかしGAによる転写への影響は主に抑制的であるので、未知のメカニズムの存在が示唆された。我々はDELLAが転写因子GAF1のコアクティベーターとして機能すること、GAF1はコリプレッサーTPRとも結合することを明らかにした。GAF1転写促進複合体はGA刺激を受けると転写抑制複合体に機能転換する。すなわちDELLAはタイトレーションとコアクティベーションの二つの機能でGAに関連した二つの遺伝子群を統括制御しているのである。植物の成長は遺伝的プログラムと外部環境により制御されている。転写因子複合体は内外の様々な刺激に応じて構成要素や修飾状態をダイナミックに変動させながら、遺伝子発現のパターンを決定する。本研究では光などの外部情報とジベレリン(GA)などの内部情報が、いかにして転写複合体の再構成・修飾により遺伝子発現を制御するのかを解明する。GAと環境刺激の信号伝達のクロストークの分子的実体を、転写因子複合体の再構成・修飾と捉え、転写サイクルにおける複合体の機能と動態の解析を目的とする。GA信号伝達の負の制御因子として同定されたDELLAは、複数の信号伝達経路のノードである。DELLAの生化学的な機能は不明であった。我々はDELLAが転写因子のコアクティベーターとして機能することを明らかにし、さらにDELLAの結合因子として新たに転写因子GAF1を同定した。これまでGAの信号伝達は全てDELLAの分解を介すると考えられていた。これを検証するためにシロイヌナズナのDELLA遺伝子をすべて欠損する五重変異体を用いて、次世代シーケンサーによるmRNAの3'タグプロファイリングを行った。その結果、DELLA五重変異体においてもGAに応答して発現が変動する遺伝子の存在が示唆された。分子遺伝学的解析からSPYはGA信号伝達の抑制因子であり、DELLAの機能を促進することが示唆されていた。SPYはGlcNAc化酵素であると予想されたが、その証明は無く標的タンパク質も不明であった。前年度、大腸菌でSPYの発現・精製を試みたが、速やかに分解され精製は困難であることが示されたので、本年度は高効率のin vitro翻訳系によるSPYの発現・精製を試みた。詳細な条件検討の結果、これまで困難であったSPYの発現に成功した。本年度はGAF1-DELLA複合体の標的遺伝子を同定するために、GAF1の発現を誘導可能な形質転換体を作製した。この形質転換体では植物には存在しないエストロゲンの投与によりGAF1の発現を10倍まで増加させることができる。次年度以降、これを用いてGAF1の標的遺伝子を探索する分子遺伝学的解析からSPYはGA信号伝達の抑制因子であり、DELLAの機能を促進することが示唆されていた。ヒトのゲノムにはGlcNAc転移酵素遺伝子は一コピーしか存在しないが、シロイヌナズナにはSPYの他にもう一つGlcNAc転移酵素をコードすると思われるSECが存在する。SPYとSECの相同性は高く、SECもSPYと同様の機能をもつと考えられた。ところが我々がSPYとSECの機能欠損変異体を詳細に解析したところ、spyは徒長形質を示したのに対し、secは逆に矮性の形質を示した。これまで大腸菌において活性のあるSPYを発現させることは困難であった。本年度の研究により高効率のin vitro翻訳系を導入することによりSPYの発現・精製に成功した。また転写因子RSGをリン酸化し14-3-3との結合を促進するカルシウム依存性タンパク質リン酸化酵素NtCDPK1は基質であるRSGだけでなく14-3-3とも直接結合することが示された。14-3-3とNtCDPK1の結合の維持にはリン酸化が必要でなく、14-3-3とリン酸化RSGとの結合に比べ弱い。この結果はNtCDPK1がRSGキナーゼとしての機能に加え、結合していた14-3-3をリン酸化RSGへ受け渡すシャペロンとしての役割をもっていることを示唆している。さらに14-3-3とNtCDPK1の結合様式は、その成立にはNtCDPK1のリン酸化が必要であるが維持にはリン酸化を必要としないというこれまでに知られていないものであり興味深い。全体としての達成度はほぼ順調と考えられる。

これまでSPYとSECの相同性は高く、またspy sec二重変異体が致死性を示したことから、SPYとSECの機能は重複すると考えられていた。ところが我々がSPYとSECの機能欠損変異体を詳細に解析したところ、spyは徒長形質を示したのに対し、secは逆に矮性の形質を示した。この結果はSPYとSECがGAに関する転写制御において、互いに相反する機能をもつことを示唆している。また転写因子RSGをリン酸化し14-3-3との結合を促進するカルシウム依存性タンパク質リン酸化酵素NtCDPK1は基質であるRSGだけでなく14-3-3とも直接結合することが示された。今年度、GA処理によりNtCDPK1がリン酸化されることを見出した。さらにin vitroの解析からNtCDPK1がカルシウムにより自己リン酸化されることが明らかになった。CDPKは分子内にカルシウム結合部位をもつセンサー型キナーゼである。したがってNtCDPK1の自己リン酸化はカルシウムを介する信号伝達の初発反応と考えられる。興味深い知見が得られているので、全体としての達成度はほぼ順調と考えられる。植物の成長は遺伝的プログラムと外部環境により制御されている。転写因子複合体は内外の様々な刺激に応じて構成要素や修飾状態をダイナミックに変動させながら、遺伝子発現のパターンを決定する。本研究では光などの外部情報とジベレリン(GA)などの内部情報が、いかにして転写複合体の再構成・修飾により遺伝子発現を制御するのかを解明する。GAと環境刺激の信号伝達のクロストークの分子的実体を、転写因子複合体の再構成・修飾と捉え、転写サイクルにおける複合体の機能と動態の解析を目的とする。GA信号伝達の負の制御因子として同定されたDELLAは、複数の信号伝達経路のノードである。DELLAの生化学的な機能は不明であった。我々はDELLAが転写因子のコアクティベーターとして機能することを明らかにし、さらにDELLAの結合因子として新たに転写因子GAF1を同定した。本年度はGAF1の発現を誘導可能な形質転換体を用いて、ChIP-seqとmRNAの3'タグプロファイリングによって植物の成長を制御する未知の遺伝子を探索した。得られたGAF1標的候補遺伝子の一つALP1059の機能欠損変異体の表現型を解析したところ、徒長、花成の促進などが観察された。分子遺伝学的解析からSPYはGA信号伝達の抑制因子であり、DELLAの機能を促進することが示唆されていた。シロイヌナズナにはSPYに高い相同性を示す関連遺伝子SECが存在する。SECもSPYと同様の機能をもつと考えられていた。本年度はSPYとSECの発現部位をレポーター遺伝子GUSを用いて観察した。その結果、SPYとSECは互いに異なる領域で発現していることが明らかになった。次世代シーケンサーを用いた解析によりGAF1の標的遺伝子を探索した。その中には植物の成長制御に関与すると思われる遺伝子が複数含まれていた。実際、候補遺伝子の一つALP1059の機能欠損
文脈依存的な行動シフトを実現する脳神経回路の機能遷移の解明

生物は、異なった文脈においても同じ行動を発現すべき時には同一運動を発現するが、大脳皮質の広域にわたる回路(一次運動野、M1と高次運動野、M2)の活動が異なった入力に対してどのように遷移してひとつの安定した出力を実現するかは不明である。平成29年度は、頭部固定マウスが内発性(自発的)におよび外発性(音刺激誘導性)にレバーを引くオペラント課題を実行中に、3次元2光子カルシウムイメージングをM1のみならずM2でも行う系を確立した。カルシウム感受性蛍光タンパク質のひとつ、R-CaMPの遺伝子をコードするAAVをマウスM2に導入し、その後2週間経ってタンパク質発現量が十分高くなってから、頭部固定下で右前肢レバー引き運動を内発性に(好きな時に)、または外発性に(音が鳴って数百ミリ秒以内にレバーを引くと水がもらえる)行うことを約2週間学習させた。またレバー軌道だけではなく、同時に前肢の動きや舌運動も高速CCDカメラを用いて計測した。課題実行中に2光子カルシウムイメージングをM2およびM1において3次元的に行い、2層から5層までの細胞活動のデータを取得することが出来た。その結果、M2にも内発性選択的に、または音刺激選択的に活動を示す細胞があること、両条件で同様に活動する細胞があることがわかった。さらにこの課題を実行中に様々な脳領域を不活性化させ、課題パフォーマンスに対する影響を解析することで、この課題に必要な領域を明らかにした。29年度が最終年度であるため、記入しない。
埋め込み式遠心血液ポンプのモータ駆動電流による心機能評価に関する研究

本研究では埋め込み式センサを用いずに、左心補助循環中の遠心血液ポンプ駆動信号の一つであるモータ駆動電流波形を継続的に解析することで左心機能の評価を行い、自己心の心機能に応じた知能的な補助循環制御を行うことを目指して研究を行っている。昨年度までの研究結果より、モータ駆動電流波形の周波数解析値を利用し心機能評価の一指標である左室内圧を継続的にモニタリングすることで心機能評価が可能であることが示された。しかしながら急性動物実験による評価においては、部分補助時に顕著になる大動脈圧変動に依存した誤差や大動脈圧変動に付随する血液ポンプの回転状態の変化に起因した誤差が生じうることも確認された。本年度は、モータ駆動電流波形の周波数解析値を利用した心機能モニタリングをより信頼性の高い手法とするために、生体の循環動態変化による影響や循環動態変化に付随して受動的にもたらされる遠心血液ポンプの駆動状態変化の影響について検討を行った。その結果、急性動物実験にて観察されたような大動脈圧依存性は、大動脈弁の開閉状態(完全補助/部分補助)に依存して傾向が変わる様子が示された。また、遠心血液ポンプの回転数変化に伴う測定感度変化も観察されたため、生体の循環動態変化に合わせた回転数制御を平行して行う際には、回転数変化に従った補正が必要であると考えられた。さらに、模擬循環回路による評価においてはモータ駆動電流波形の周波数解析値と大動脈血流量に対するポンプ流量の比率(補助率)との間に相関性が見られたが、急性動物実験においては両者に相関性は見られず、これらはすべて生体の大動脈圧の変動に起因した誤差であると考えられた。すなわち、遠心血液ポンプにおけるモータ駆動電流波形の周波数解析値にて左室内圧に代表される心機能評価を行う際には、大動脈圧変動に関する信号を付加することでより信頼性の高い評価が可能であると考えられた。本年度はモータ駆動電流波形を周波数解析し、自己心心拍数に対応する周波数成分パワーのピーク値(以下、モータ駆動電流周波数解析値)を求めることで、左室内圧で代表される心機能の評価・推定が可能であるか検討した。評価方法は、1:リザーバ、模擬左心室、コンプライアンスタンク、末梢抵抗からなる一巡回路に、遠心ポンプによる左心心尖部脱血・大動脈送血型のバイパスモデルを付加した模擬循環回路における評価と、2:遠心ポンプによる左心心尖部脱血・下行大動脈送血型補助循環を行った急性動物実験における評価の2方法にて行った。模擬循環回路による結果より、遠心ポンプ回転数1500-2100rpmの範囲において、左室内圧ピーク値とモータ駆動電流周波数解析値との間に高い相関関係があることが示され、さらに大動脈弁の開閉状態(完全補助/部分補助)に応じて線形相関式の傾きに大きな差異が見られたために、補助状態の判別が可能であると考えられた。しかしながら、モータ駆動電流周波数解析値と左室内圧ピーク値との関係は、特に部分補助状態において大動脈圧に大きく依存し、モータ駆動電流周波数解析値からの直接的な左室内圧の評価には注意を要すると考えられた。また、急性動物実験においても同様な結果が示され、左室内圧の増大に伴いモータ駆動電流周波数解析値が増加する傾向が認められた。今後は、本研究にて検討したモータ駆動電流周波数解析値を利用した左室内圧の定量下及び遠心血液ポンプ自動制御条件に組み込んだシステムの構築を進めていく予定である。

すなわち、遠心血液ポンプにおけるモータ駆動電流波形の周波数解析値にて左室内圧に代表される心機能評価を行う際には、大動脈圧変動に関する信号を付加することでより信頼性の高い評価が可能であると考えられた。
男性高齢者にむけた介護予防サービス開発に関する研究

高齢男性の参加が得られる介護予防プログラムの開発を目指して、一年目に明らかにしたプログラム開発上留意すべき事項、二年目に実施した当該地域での介護予防ニーズ調査に基づき、男性むけの全6回からなる男性前期高齢者に向けたプログラムを自治体の協力を得て実施した。プログラムの実施にあたっては、(1)男性だけの教室とする(2)企画に男性自身に参加してもらう(3)事業のネーミングの工夫(介護予防を前面に出さない)(4)勧誘は身近な人に個別に実施してもらう(5)プログラムの中に料理を組み込む(6)それぞれの回の目的が明確なものにする(7)参加者が役割を持てるようにするをポイントとし、具体的な内容として料理、歯の手入れ、園芸などを行うとともに、各回に地域を知る内容の短い講座をいれつつ、仲間づくりを意図したプログラムを展開した。うち、1回は参加者の希望に基づいたプログラムを行った。結果、定員20名のところに20名の参加が得られ(応募者死亡等があり、実際は18名)、毎回の参加率の減少はほとんど見らなかった。質問紙による評価を行ったところ、新しい知識の獲得、新しい健康づくりの活動の開始等に関しては一定の成果が得られた。しかし、要介護状態リスク尺度を用いた要介護状態のリスクの軽減については、参加時点と終了時点において有意な変化はみられなかった。自由記載からは、地域の食生活推進員にプログラム支援に入ってもらった事は評価が低かったが、全般的には肯定的な評価を得た。要介護状態のリスクの変化が得られなかったことは、実施期間の問題があったと考えられる。また、食生活推進員の評価が低かったことは、推進員が男性の支援者的な行動を取れなかったこと原因があると思われた。その他、地域への波及等の課題は残るものの、男性の主観からは満足度の高いプログラムの展開ができたと考えられ、本プログラムに取り入れた要素を盛り込むことにより、男性の参加が得られるプログラム展開の可能性が示唆された。本研究の目的は、高齢男性が職業生活から引退後に、要介護状態に移行することなく地域社会で健康的な生活を送ることを支援するような介護予防サービスプログラムを開発することである。本年度は(1)国内外の文献の検討と、(2)全国の市区町村が実施している介護予防を目的としたプログラムのうち、男性の参加を意識したプログラムないしは実際に男性の参加率が高いプログラムの有無と、その簡単な内容及び考慮した点、男性のプログラムに必要な要素についての記述調査を実施した。(1)国内の論文に関しては、性差に着目した健康状態の分析が引退に着目したものも含めて数件みられるものの、具体的なプログラムに言及したものは1件のみであった。海外に関しては、「Men's Health」のキーワードで多くの論文があり、Men's Healthのスペシャリストがいる国もあった。ただし内容は健康状態の性差に着目した内容が多く、具体的なプログラムのあり方に言及したものはなかった。(2)に関しては、2,380通を送付し、950通の回答を得た。その結果、当該対象者に対して、全国で広く実施されているプログラムは男性向けの料理教室、続いて筋力増強を目的としたプログラムであった。交流を目的としたプログラムは実施しても、活発な参加は得られていない状況がみられた。

男性に向けたプログラムで重要なことは、レクリエーションや交流が中心ではないこと・スキルの獲得といった明確な目的を有すること・男性がプログラムの中で役割を持てる内容であること・集団として集めても個別の対応が行われること、等が必要であり、具体的な工夫としては、男性だけに限定する、あるいは男女の募集人数を示すことにより男性をダーゲットにしていることを明確に提示する、企画自体に男性を入れると同時にそれを周知する、広く不特定多数を募集するのではなくダーゲットを絞って募集を行う等が参加につながっていた。本研究の目的は、高齢男性が職業生活から引退後に、要介護状態に移行することなく、地域社会で健康的な生活を送ることを支援するような介護予防サービスプログラムを開発することである。本年度は、介護予防ニーズの性差に焦点をあてて調査を実施した。対象は某地域の55歳74歳の男女である。5歳刻みの年代別性別での1/4の層化抽出を行った。配布数は、男性1,152名、女性1,326名であった。調査内容は、属性、病気の有無、日常生活の状況(ブレスローの7つの生活習慣を基本にした)、介護予防に関わるニーズ(特定高齢者の把握のための項目に、本調査独自の項目を加えた)である。それぞれ692名、746名からの回答が得られ、全体での回収率は58.0%であった。分析は、性別年代別に、数値の質に応じてカイ二乗検定、T検定を行った。分析の結果、日常生活習慣は、全般的には女性のほう男性に比較するとよかった。性別で生活習慣に違いが見られたのは、喫煙、飲酒(男性が悪い)、間食、睡眠(女性が悪い)であった。設定した18の介護予防ニーズで男女差が見られたもののうち男性のほうがニーズを有する割合が高いものは、IADL(家事)、友人知人との交流、家庭内外での役割であり、女性のほうがニーズを有する割合が高かったのは、健康管理に関するセルフケア、地域行事への参加、地域活動(ボランティア)への参加、趣味・楽しみの有無であった。日常生活習慣は男性のほうが女性に比較して全般的にはよくないことは、過去の文献等でも一般的な結果ではあり、今回の結果もそれを追試した結果となっていた。しかし、今回それと同時に設定した介護予防ニーズに関しては、本調査結果では必ずしも男性のほうが悪いということではなかった。これは本地域のコミュニティの規範が、地域行事への男性の参加を求めること等も関係していると考えられた。性差と同時に地域の特性を考慮した介護予防プログラムの必要性が示唆された。高齢男性の参加が得られる介護予防プログラムの開発を目指して、一年目に明らかにしたプログラム開発上留意すべき事項、二年目に実施した当該地域での介護予防ニーズ調査に基づき、男性むけの全6回からなる男性前期高齢者に向けたプログラムを自治体の協力を得て実施した。プログラムの実施にあたっては、(1)男性だけの教室とする(2)企画に男性自身に参加してもらう(3)事業のネーミングの工夫(介護予防を前面に出さない)(4)勧誘は身近な人に個別に実施してもらう(5)プログラムの中に料理を組み込む(6)それぞれの回の目的が明確なものにする(7)参加者が役割を持てるようにするをポイントとし、具体的な内容として料理、歯の手入れ、園芸などを行うととともに、各回に地域を知る内容の短い講座をいれつつ、仲間づくりを意図したプログラムを展開した。うち、1回は参加者の希望に基づいたプログラムを行った。