hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
イネの葉中デンプン過剰蓄積変異体を用いた光合成産物の転流・代謝機構の解明

イネにおける光合成産物の転流・代謝機構を解明するために、葉身にデンプンを高いレベルで蓄積する5系統の突然変異系統を用いて、それらの原因遺伝子の単離と生理機能の解析を行った。その結果、1系統についてはデンプン分解酵素のひとつであるα-glucanwaterdikinaseをコードする遺伝子の機能欠損が原因であることがわかった。他の系統についても原因遺伝子の座乗染部位や生理形質が明らかになった。本研究は、世界的な主要作物であるイネを研究対象とし、ソース葉からシンク器官への光合成産物の転流の制御要因を遺伝子レベルで明らかにすることを目的としている。光合成産物の転流が抑制されるとソース葉にデンプンが過剰蓄積すると予想されることから、代表者がこれまでに見いだしたイネの葉中デンプン過剰蓄積突然変異体を材料とし、その原因遺伝子の特定と生理特性の解析を通じて転流の制御要因を明らかにすることを計画している。平成22年度は、1)5系統の葉中デンプン過剰蓄積突然変異系統それぞれについて原因遺伝子のマッピング作業を進め、2)各系統の遺伝子発現解析し、3)生理機能解析の第一歩としての成長および収量特性の調査・解析をおこなった。その結果、1)5系統のうち1系統は、その原因遺伝子が第6染色体に座乗することがわかり、この変異系統をLSE1と名付けた。2)LES1を中心に遺伝子発現解析を行い、主としてデンプン合成系および分解系の遺伝子を対象に、正常系統との比較解析を進めた。3)圃場での栽培試験の結果、LSE1系統はその生育期間全般にわたって葉身中に多量のデンプンが蓄積され、蓄積されたデンプンの量は夜間にもほとんど低下せず、終日高いレベルを保つことがわかった。一方、LSE1の葉中のショ糖レベルは原品種との間に差がなかった。また、LSE1系統は原品種に比べて穂数、一穂籾数、登熟歩合および千粒重が有意に低下し、結果的に減収となることが見いだされた。これらの結果から、LSE1変異体では何らかの原因によって葉中にデンプンが蓄積され、そのために光合成産物のシンク器官への転流が十分に行われないために、収量が低下していることが推察された。平成23年度における研究実績は以下のように要約できる。1.前年度までに座乗染色体が明らかになった1系統(LSE1)の原因遺伝子の特定マッピングおよび配列解析の結果、LSE1の原因遺伝子は第6染色体に座乗するOsGWD1である可能性が示された。そこで、同変異系統に正常系統のOsGWD1を導入したところ、デンプン過剰蓄積が起こらなくなり、また逆に、正常型系統のOsGWD1の機能を抑制するとデンプン過剰蓄積が起こった。以上より、LSE1変異の原因遺伝子がOsGWDlであることが明らかになった。2.LSE1系統の生理特性の解析LSE1個体は葉身中に著しく多量のデンプンを蓄積するにも関わらず、個体の初期成育速度や個葉光合成速度に正常型個体との差異は認められなかった。3.それ以外の変異系統(LSE2a、2b、2cおよび3)の原因遺伝子単離の継続4系統のデンプン過剰蓄積変異系統のうち、2系統(LSE2a、LSE2b)は第5染色体に座乗する同一の遺伝子が原因で変異を生じている可能性が高いことがわかった。また、別の1系統(LSE2c)の原因遺伝子は第3染色体に座乗していることがわかった。さらに、別の1系統(LSE3)についてもマッピングを開始した。本研究は、世界的な主要作物であるイネを研究対象とし、ソース葉からシンク器官への光合成産物の転流の制御要因を遺伝子レベルで明らかにすることを目的とした。光合成産物の転流が抑制されるとソース葉にデンプンが過剰蓄積すると予想されることから、代表者がこれまでに見いだしたイネの葉中デンプン過剰蓄積突然変異体を材料とし、その原因遺伝子の特定と生理特性の解析を通じて転流の制御要因を明らかにすることをめざした。平成24年度の研究実績は以下のように要約できる。1)LE1変異系統の生理機能と収量関連形質の解析前年度までにOsGWD1遺伝子が変異の原因遺伝子であることがわかったLSE1について生理機能解析をさらに進め、LSE1では32個のエキソンのうち後半の11個を欠いた異常な転写産物が蓄積していることがわかった。また葉中デンプンのリン酸含量が低下しており、OsGWD1の機能がデンプンのリン酸化であることが強く示唆された。

さらに、LSE1変異系統を圃場で栽培し、その収量関連形質の詳細な解析を行った。その結果、LSE1系統は野生型に比べて一穂籾数や登熟歩合が低く、その原因の一つとして出穂後の茎葉蓄積デンプンの再転流が不十分であることが示唆された。LSE1は地上部全体に著しいデンプン蓄積がおこるのに対して、LSE2およびLSE3ではデンプン蓄積が生じるのは前者では成熟葉の葉身、後者では成熟中の葉身に限られること、また、LSE1では葉中の可溶性糖濃度には野生型と差がないのに対して、LSE2およびLSE3ではデンプンに加えて可溶性糖も高濃度で蓄積していた。さらに、LSE1では葉肉細胞の葉緑体にデンプンが蓄積していたが、LSE2およびLSE3では葉肉細胞に加えて維管束鞘細胞や維管束内の柔細胞の葉緑体にもデンプンが蓄積していた。デンプン過剰蓄積変異系統の原因遺伝子の特定はほぼ順調に進捗しており、最終年度に残りの4系統のうち、少なくとも3系統で遺伝子単離が見込まれる。また生理機能解析もcDNAアレイ解析も含めてほぼ順調に進捗しているため上記の評価とした。24年度が最終年度であるため、記入しない。最終年度となる本年は、原因遺伝子単離の完了を目指す。そのため、遺伝子マッピングのデータと、生理機能解析のうちの特にcDNAアレイ解析のデータとの比較解析を重点的に行う。またLSE1については、これまでに取得したデータの整理を行い、当該変異と糖転流との関連を考察して論文投稿を行う。
情報ネットワークによる学校と公共図書館の連携システムの構築と学校図書館の役割

本調査では、主に学校側における情報ネットワークの構築が、総合学習など資料を活用した授業で注目されてきた公共図書館(地域)との連携にどのような影響を与え、またその変化の中で学校図書館が果たす役割がどのように考えられているのか、について調査をおこなった。この目的のために、主に文部科学省の「学校図書館資源共有型モデル地域事業」に採択された地域の教育委員会および学校、教育事務所などを訪問し、担当者等へのインタビューにより調査をおこなった。同「モデル地域事業」に関連して訪問調査をおこなった地域は、熊本県熊本市、鹿児島県川内市、山形県温海町、青森県八戸市の教育委員会および公立図書館、教育センター等および岩手県千厩教育事務所である。ごのほかに宮崎県宮崎市、青森県岩木町の事例についてもそれぞれ調査をおこなった。この結果、従来は比較的学校単位で閉じていた学校図書館が、ネットワーク化にともない開かれ、他館からの資料貸借が容易になることで活動的となり、従来以上に学校図書館の役割が重要となる一方で、資料の貸借に伴う「物流」が新たな問題として現れてきていることが判明した。また同時に、情報化の進展に伴い学校図書館担当者に求められる役割が拡大し従来の図書館運営に関する技術の他、情報化に対応するスキルが求められるようになっていることが確認できた。これらの調査結果は、2003年10月の日本図書館学会研究大会で報告したほか、今後の学会等での発表を予定している。情報ネットワークにより、学校と公共図書館のネットワークが形成されている自治体を調査し、学校と公共図書館が情報ネットワークにより接続される場合に、「学校の図書館」としての役割を期待された学校図書館の役割がどのように変化するか、またそのような変化の中で司書教諭に求められる役割がどのように認識されているかを分析している。2002年度は訪問調査と資料収集に充てた。訪問調査は以下の4自治体(10機関)に対しておこなった。文部省の「学校図書館情報化・活性化推進モデル地域」(19982000年度)の指定を受けた青森県岩木町(中央公民館)、文部科学省の「学校図書館資源共有型モデル地域事業」(2001)に採択されている熊本県熊本市(市立図書館、教育委員会、教育センター)鹿児島県川内市(教育委員会、市立図書館)、およびNPOへの市立図書館業務の一部委託をおこなっている宮崎県宮崎市(市立図書館、市役所、市民活動支援センター、教育情報研修センター)である。いずれにおいても学校の情報ネツトワークに関わる部署の担当者から導入の経緯や運営の課題について聞き取りをおこなうことができたほか、公共図書館の担当者から学校支援の取り組みについて話を聞くことができた。資料収集としては、学校図書館と公共図書館の連携に関わる研究の一環としてそれぞれに関する文献収集にあたったほか、地元仙台市における取り組みについて資料収集をおこなった。
トランスジェニック技術によるイモリ網膜再生メカニズムの解明

本研究ではトランスジェニック(TG)・イモリを用いた網膜再生研究を実践する。特に、網膜の外傷直後に再生起源細胞(網膜色素上皮細胞:RPE細胞)で活性化するMEK-ERK経路と、RPE細胞由来の網膜幹細胞様細胞および網膜前駆細胞で活性化すると考えられているFGF受容体- MEK-ERK - Pax6経路にフォーカスし、これらの経路分子の遺伝子発現や活性を人為的に制御することにより、再生開始、増殖、パターニングにおけるこれらの役割を明らかにすることを目的とする。この目的を達成するために、終分化RPE細胞特異的遺伝子RPE65のプロモーター(ORFの上流1kb)に標的遺伝子の機能を撹乱しうるDNA配列をつないだコンストラクトを作製し、I-SceI法によりTGアカハライモリを作製した。しかし、導入遺伝子の発現量や組織特異性が不安定であり解析困難であった。そこで、Insulatorを組み込んだコンストラクトを新たに作製し評価した結果、非常に効果的で、個体の生存率も向上した。しかし、詳細な分析から、ここで用いたRPE65プロモーターが成熟したRPE細胞だけでなく、発生中の他の組織でも活性化することが判明したため、発生期を避けて、変態後の個体において遺伝子機能を撹乱する目的でCreERT2-LoxPシステムを組み合わせたコンストラクトを新たに作製し評価した。その結果、タモキシフェン投与により人為的に遺伝子発現を誘導できることが分かった。しかし、再び導入遺伝子の発現が不安定になり、解析が困難になってしまった。この原因を調査した結果、一般的なコンストラクトの調製過程に問題があることが判明した。すでにこれらを改善した新たなプロトコルを確立した。また、ドミナントネガティブ法やshRNAによりが機能することも明らかにした。現在、これら新手法を組み合わせTG個体を量産している。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究ではトランスジェニック・イモリを用いた網膜再生研究を実践する。特に、網膜の外傷直後に再生起源細胞(網膜色素上皮細胞:RPE細胞)で活性化するMEK-ERK経路と、RPE細胞由来の網膜幹細胞様(RSC-like)細胞および網膜前駆細胞で活性化するFGF受容体->MEK-ERK->Pax6経路にフォーカスし、これらの経路分子の遺伝子発現や活性を人為的に制御することにより、再生開始、増殖、パターニングにおけるこれらの役割を明らかにすることを目的とする。本年度、RPE特異的遺伝子RPE65のプロモーター領域(ORFの上流1kb)をアカハライモリ・ゲノムライブラリーから単離することに成功した。次に、pRPE65-mCherry:pCAGGs-EGFP(Sce)ベクターを作製し、I-SceIメガヌクレアーゼ法によりトランスジェネシスを試みた。その結果、幼生眼球中の分化したRPEと視細胞でmCherryの発現が確認された。これによりRPE細胞の遺伝子機能制御に向けた基礎ができた。網膜再生系にcanonicalとnon-canonicalの両方のPax6が発現していることが分かった。Non-canonical Pax6は正常なRPE細胞でも発現しており、細胞周期侵入前にアップ・レギュレートされることが分かった。一方、canonical Pax6はRPE細胞由来のRSC-like細胞から網膜前駆細胞が分離する際に発現することが分かった。

トランスジェニック技術により網膜再生起源細胞に遺伝子を発現させることができたこと、対象とすべき分子種(アイソフォームなど)と発現様式、抗体などの検出ツール、機能に関する作業仮説が得られたことから、機能解析の準備は整ったと言えるが、特定の分子の機能を綱御するコンストラクトの作製にまでは至らなかった。24年度が最終年度であるため、記入しない。RPE細胞特異的な遺伝子発現制御を実現するためにpRPE65を用いたが、RPE細胞だけでなく視細胞でも外来遺伝子が発現した。I-SceI法では、ゲノムに挿入された外来遺伝子とその周辺の遺伝子発現制御領域との間の相互作用により発現が予想外に抑制されたり活性化されたりすることが知られている。そこで時空間的な発現制御の信頼性を高めるため、Insulatorを組み込んだコンストラクトを作製し、その効果を検証する。同時に、MEK2やERK1/2、FGFRの機能阻害に有効なドミナントネガティブフォーム、さらにはPax6をノック・ダウンするためのshRNAを胚や幼生を用いて選び出す。最終的に、これらにCre-loxPシステムを組み合わせたコンストラクトを作製し、機能解析用のトランスジェニック個体を量産する。
細胞および動物モデルを用いたAMPD遺伝子群の機能解析

本研究ではプリンヌクレオチドサイクルにおいて重要な役割を果たすAMPD遺伝子群について、細胞および動物モデルを用いて機能解析を行うために、マウスAmpd遺伝子群の単離と解析を行い、遺伝子ターゲティング実験を進めた。まず、心筋型AMPD(Ampd3)遺伝子を単離し、さらにAmpd1とAmpd2の単離を行った。cDNAの単離に引き続いて各遺伝子ゲノムDNAの単離を進めた。その結果、マウス各AMPD遺伝子はヒトAMPD遺伝子群と構造上、機能上相同であると考えられた。AMPD1遺伝子変異がコーカシア人に極めて多いことが知られるが、ミオパチーとの関連は未だ十分に明らかでなく、また、最近、この変異と心機能との関係が注目されてきており、AMPD遺伝子群の組織、個体レベルでの機能をマウス個体で検討するために遺伝子ターゲティング実験をすすめた。まず、得られたゲノムDNA断片を利用してポジティブネガティブ選別の行えるAmpd1遺伝子およびAmpd3遺伝子ターゲティングベクターを構築した。これらのベクターを胚幹細胞に導入し、G418耐性コロニーの選別を行った。PCRによる相同組換え確認にてAmpd1遺伝子およびAmpd3遺伝子欠損胚幹細胞を単離し、新たにそれぞれ6クローンの細胞を樹立した。これら樹立ES細胞について染色体核型を検索し、うち2クローンは得られた核型はすべて正常であった。この細胞を胚盤胞への顕微注入した結果、ES細胞由来の比率の高いAmpd1遺伝子およびAmpd3遺伝子欠損キメラマウスを得た。さらに交配によりAmpd1遺伝子およびAmpd3欠損マウスの作製を継続している。また、最近、新たなAMPD1遺伝子変異を同定し、機能解析を進めている。本年度は、プリンヌクレオチドサイクルにおいて重要な役割を果たすAMPD遺伝子群について、細胞および動物モデルを用いて機能解析を行うために、マウスAmpd遺伝子群の単離と解析を行い、遺伝子ターゲティングを開始した。まず、心筋型AMPD(Ampd3)遺伝子の解析を進め、さらにAmpd1とAmpd2の単離を進めた。Ampd3遺伝子の大腸菌による発現を行い抗体反応性を検討し、Ampd3ゲノムDNAを単離し、塩基配列を決定した。Ampd3は抗心筋型AMPD特異抗体に反応するAMPD活性を有するペプチドを産生した。ゲノム解析によりAmpd3はマウス第7番染色体に位置する40kb以上の遺伝子であり15個のエキソンからなることが明らかとなった。エキソンイントロン境界はヒトAMPD3遺伝子と一致していたが、5'非翻訳領域ならびにプロモーター領域には相同性が認められなかった。また、RT-PCR法によりAmpd1とAmpd2のcDNAを単離し、塩基配列を決定した。マウスAmpd1、Ampd2はラット、ヒトの遺伝子と極めて相同性が高くそれぞれ746アミノ酸(Ampd1)、798アミノ酸(Ampd2)からなるペプチドをコードしていることが明らかとなった。単離した各Ampd3遺伝子ゲノムをもとにターゲティングベクターを構築し、ES細胞に導入し、相同組換えの生じたクローンがAmpd1及びAmpd3において単離された。さらに、樹立ES細胞のインジェクションによる遺伝子欠損キメラマウス作製を続けており、さらに検討が必要である。本年度は、プリンヌクレオチドサイクルにおいて重要な役割を果たすAMPD遺伝子群について、細胞および動物モデルを用いて機能解析を行った。まず、昨年度に引き続きマウスAMPD遺伝子群の解析を行った。遺伝子ターゲティングについてはAmpd1遺伝子およびAmpd3遺伝子ターゲティングベクターを胚幹細胞に導入し、G418耐性コロニーの選別を継続し、PCRによる相同組換えの確認にてAmpd1遺伝子およびAmpd3遺伝子欠損胚幹細胞を単離し、新たにそれぞれ6クローンの細胞を樹立した。これら樹立ES細胞について染色体核型を検索し2クローンは得られた核型はすべて正常であった。

この細胞を胚盤胞への顕微注入した結果、ES細胞由来の比率の高いAmpd1遺伝子および,Ampd3遺伝子欠損キメラマウスを得た。さらに交配により,Ampd1遺伝子およびAmpd3欠損マウスの作製を継続している。また、活性染色にてAMPD活性の低下を認めたミオパチ一患者について筋生検標本をもちいてRNAを抽出し、cDNA合成をおこなって、AMPD1遺伝子の塩基配列を決定したところ、エキソン9及びエキソン10にミスセンス変異をきたす塩基置換を認めた。この変異はゲノムDNAの直接塩基配列決定においても確認された。これまで、AMPD1遺伝子異常は選択的スプライシングをうけ除去されうるエキソン2の異常しか報告されていないことから、本症例の詳細な検討はAMPD遺伝子の機能解析に重要であると思われ、さらに検討中である。
薬物動態制御因子としてのトランスポーターアダプターの役割

細胞膜裏打ちタンパク質PDZKは、これまでの加藤らの検討から、多くの薬物トランスポーターと相互作用することがin vitroで示されているが、その薬物動態制御因子としての役割は全く不明であった。本研究では、2年間に渡る研究成果を基に次の結論を得るに至った。1.PDZK1は薬物を輸送するトランスポーターであるPEPT1、PEPT2(いずれもペプチドトランスポーター)、OCTN1、OCTN2(いずれも有機カチオン/カルニチントランスポーター)の薬物輸送能に影響を与える制御因子であること。一方で、PDZK2は少なくともOCTN2の制御因子であること。2.PDZK1はPET1、OCTN2、有機アニオントランスポーターOATP1Aと、小陽吸収上皮細胞または腎近位尿細管刷子縁膜表面において共局在する一方、PDZK2は近位尿細管刷子縁膜直下でOCTN2と共局在すること。3.PDZK1が小腸の細胞膜表面におけるPEPT1、OCTN2、OATP1Aの局在に必須の因子であり、PDZK1の欠損によってこれらトランスポーターの機能および局在不全が起こること。4.低分子量GTP結合タンパク質Rab8が、PEPT1およびグルコーストランスポーターSGLT1の小腸細胞膜表面での局在に必須であり、その遺伝子欠損は栄養吸収不全を引き起こすこと。以上の知見は薬物を輸送するトランスポーターやひいてはトランスポーターによる薬物動態の制御因子としてのアダプター分子(PDZK1、Rab8)の役割をin vivoおよびin vitroで実証した初めての例であり、複数のトランスポーターが複数のアダプターを介したネットワークとして機能することを示し、今後の医薬品開発や臨床における適正使用において薬物動態を考える上での重要な知見である。種々の臓器の細胞膜に発現するトランスポーター群は、医薬品の体内動態、薬効、毒性に深く関わっていることが知られており、近年の研究代表者らの検討から細胞内裏打ちタンパク質であるアダプター分子による制御を受けることが示唆されつつある。本研究は、アダプター分子であるPDZタンパク質(PDZK1およびPDZK2)によるトランスポーターの機能および局在制御のメカニズムと、トランスポーターやアダプターの薬物動態に及ぼす役割の解明を目的とし、本年度は以下に示す新たな知見を得ることができた。(i)PDZタンパク質であるPDZK1がorganiccation/carnitine transporter OCTN2と小腸刷子縁膜微絨毛で相互作用し、共局在すること。(ii)PDZK1の変異がトランスポーターOCTN1の細胞内局在に影響を与えること。<iii>PDZK1と同一の遺伝子familyに属するPDZK2が、腎臓刷子縁膜直下でOCTN2と共局在し、OCTN2の細胞膜上での発現量の制御に働くこと。(iv)Organic aniontransporting polypeptide Bがヒト小腸上皮細胞Caco-2刷子縁膜でループ利尿薬の吸収方向の取り込みに働くこと。(v)ジおよびトリペプチドを取り込むoligopeptide transporterPEPT1が、βラクタム抗生物質cephalexinのL体に対するpeptidaseと機能的にカップリングすること。以上の知見は、経口投与された薬物の吸収臓器である小腸の上皮細胞において、各トヲンスポーター分子がアダプターであるPDZタンパク質と複合体を形成し、薬物の取り込み(吸収)に働くことを示唆するとともに、その機能が薬物の生体膜透過ばかりでなく、薬物代謝とも連関する可能性を示した。細胞膜裏打ちタンパク質PDZK1は,これまでの加藤らの検討から,多くの薬物トランスポーターの制御因子であることがin vitroで示されているが,in vivoでは実証されていなかった。そこで今年度は,PDZK1の遺伝子欠損マウスを用い,その役割の解明を試みた。欠損マウス

小腸上部では,ペプチドトランスポーターPEPT1やカルニチントランスポーターOCTN2が刷子縁膜から消失し,PEPT1は細胞内にも局在が認められた。特に小腸上部では刷子縁膜に発現するトランスポーターの発現量も低下していた一方,小腸中部での発現量は,正常マウスとさほど違いがなく,小腸下部では細胞膜での局在にも違いがなかった。それぞれのトランスポーターの基質であるcephalexinとcarnitineの消化管吸収は欠損マウスで遅延していた。これらの結果は,PDZK1が特に小腸上部において,PEPT1とOCTN2の細胞膜表面での局在に必須であることを示した。群馬大学原田彰宏教授らの作成した低分子量GTP結合タンパク質Rab8の遺伝子欠損マウスでは,離乳後に栄養吸収不全が認められたことから,その原因を明らかにするため,反転腸管を作成し,トランスポーターによる刷子縁膜からの基質取り込み能を観察した。その結果,PEPT1の基質であるglycylsarcosine,グルコーストランスポーターSGLT1の基質であるalpha-methylglucoseの取り込みがRab8欠損マウスで,ほぼ完全に消失していた。免疫染色の結果,これらトラシスポーターの刷子縁膜での発現が消失しており,Rab8がPEPT1およびSGLT1の細胞膜表面での局在に必須であることが示された。このようにPDZK1,Rab8ともに,-つの分子が複数のトランスポーターを制御することから,複数のトランスポーターがネットワークとして機能する可能性が示唆された。
機能的細胞集団の活動と記憶の因果関係の解明

学習時に活動した神経細胞集団を標識し、後にこれらの細胞集団を選択的に再活動させることが可能な遺伝子改変マウスの作製を行った。このマウスを用いることにより、ヒトのPTSDの暴露療法モデルである消去訓練により消去された恐怖記憶が、恐怖条件付け学習刺激により標識された細胞集団の人工的な再活性化により再生することを示した。つまり、学習時に活動した細胞集団が恐怖記憶の構成要素(痕跡)であることの因果十分性を示すと同時に、見かけ上はいったん消去された様に見えるトラウマ記憶が実際には脳内から消し去られたわけではなく、その痕跡が脳内に残存していることを示唆する。申請者らが開発した"任意の時期に任意の行動刺激により活動した細胞集団のみに、任意の遺伝子操作を行うことが可能なトランスジェニックマウス"のシステム(Science 2007, 2008)を用いて、記憶の獲得時に活動した細胞選択的にチャネルロドプシン(ChR2)やDREADD(Designer Receptors Exclusively Activated by Designer Drug)などの神経活動操作分子が発現するマウスを作製する。これらのマウスを用いて、記憶獲得の一定期間(24時間、30日)後に、様々な脳領域の機能的細胞集団の人為的再活動操作を行い、記憶の想起を誘導することができるかを行動実験により明らかにする。その時期・脳領域と、記憶想起の関係について解析を行い、記憶情報がコードされる基本メカニズムに関して時空間的な観点を加えて考察する。初年度は、そのために必要なtetO-ChR2Tgマウスの作製を行った。ChR2は、特定波長の光により活性化して陽イオンを透過し、発現神経細胞の脱分極を引き起こす膜タンパク質である。ChR2は様々なタイプのものが存在するため、その特性が本研究課題の目的に合致するものを検討した(Yizhar et al., Neuron 2011)。また、通常のtet0プロモーターでは、誘導されたChR2の作動期間はChR2タンパク質の半減期に依存する一時的なものである。そこで、記憶獲得時に活動した神経細胞集団においてChR2を長期的に発現させるために、Dox非依存的な変異型tTA(H100Y)を利用したポジティブフィードバックループ発現システムを導入した。ベクターの作製を行い、精製DNA断片をC57BL/6Jの受精卵に注入し、4匹のファウンダーマウスを得た。研究代表者らが開発した“任意の時期に任意の行動刺激により活動した細胞集団のみに、任意の遺伝子操作を行うことが可能なトランスジェニックマウス"のシステム(Science 2007, 2008)を用いて、記憶の獲得時に活動した細胞の活動操作を行った。恐怖条件付け学習時に活動した細胞集団に選択的にDREADD (Designer Receptors Exclusively Activated by Designer Drug)の発現を誘導・標識し、その特異的合成リガンドであるclozapine-N-oxide (CNO)を投与することにより、これらの細胞集団に選択的な人為的活性化を行い、その記憶に与える影響を行動解析により行った。また、人為的活動による神経細胞群の活性化状態を最初期遺伝子群に対する抗体を用いた免疫組織化学染色により明らかにし、活動パターンの解析を行った。これらの研究は、記憶という実体の捉えがたいものが、脳内に散在する特定の一部の神経細胞集団の活動として存在することの因果関係を実証し、また、記憶を人為的に操作することが出来ることを示すものである(論文投稿中)。また、初年度に作製して得られた4系統のtetO-ChR2トランスジェニックマウスをそれぞれ、cfos-tTAトランスジェニックマウスと交配することにより2重トランスジェニックマウスの作製を行い、その発現様式および機能解析を行った。遺伝子改変マウスを用いて、文脈依存的恐怖条件付け学習課題の際に活動した神経細胞群をDREADD(Designer Receptors Exclusively Activated by Designer Drugs)のhM3Dqタイプにより標識を行った。その後、PTSDの暴露療法のモデルと考えられる消去訓練を行い、行動学的に恐怖記憶の表出を消去した。その後、hM3Dqの特異的合成リガンドであるclozapine-N-oxide(CNO)を、マウスに投与することにより学習時に活動した神経細胞群を選択的、人為的に再活動させた。その結果、消去されていた恐怖記憶が再び誘導されることを見いだした(論文投稿中)。この結果は、学習時に活動した脳内の一部の特定の神経細胞群の再活動が、記憶の再生に十分であることを示唆する。言い換えれば、機能的な細胞集団と記憶の因果関係を示すものとなる。さらに、消去訓練によりいったん消失したかのように見える恐怖記憶の痕跡は、実際には完全に消去されたわけでは無く、脳内に残存していることを示唆する。26年度が最終年度であるため、記入しない。神経科学26年度が最終年度であるため、記入しない。

本研究課題の申請時に記載した内容をほぼ達成しているので、おおむね順調に進展していると言える。研究期間内に明らかにすることとして、下記の3つの課題を掲げた。(1)記憶の獲得時に活動した神経細胞集団の再活動が本当に記憶の想起に十分なのか?(2)記憶情報をコードする神経細胞集団の一部を活性化するだけで、記憶全体を再生することができるのか?出来るとすれば、一体どの脳領域の再活動が記憶の想起を誘導することができるのか?また、この時にどの領域間で機能的な活動連携が起きているのか?(3)記憶の再生に必要な脳領域・細胞は経時的に変化するのか?これらのうち(1)と(2)について、ほぼ達成した。26年度が最終年度であるため、記入しない。作製したマウスの評価および解析を予定通り行う。(1)記憶の獲得時に活動した神経細胞集団の再活動が本当に記憶の想起に十分なのか?(2)記憶情報をコードする神経細胞集団の一部を活性化するだけで、記憶全体を再生することができるのか?出来るとすれば、一体どの脳領域の再活動が記憶の想起を誘導することができるのか?また、この時にどの領域間で機能的な活動連携が起きているのか?(3)記憶の再生に必要な脳領域・細胞は経時的に変化するのか?これまでに(1)と(2)については、ほぼ達成したので、残りの研究期間で(3)の達成を目指す。作製した遺伝子改変マウスの誕生が予定より若干遅れたことに伴い、飼育費や餌費用を次年度に繰り越した。これらの費用は計画した研究を遂行するために、適正に使用する。作製した遺伝子改変マウスの数が若干少なかったことに伴い、飼育費や餌費用を次年度に繰り越した。
金属ー半導体界面:マイクロエレクトロニクス発展への基礎研究

本研究は平成元年度よりスタートする重点領域研究「金属ー半導体界面:マイクロエレクトロニクス発展への基礎研究」を滞りなく遂行し、充実した研究成果を得るための準備研究であり、本研究では、そのための企画・調査や研究会・討論会を行なった。上記重点領域研究の目的は、21世紀に向けての超々LSIを中心とした、半導体マイクロエレクトロニクス発展の鍵を握る「金属ー半導体界面」を基礎的に解明し、その発展に必要な技術を開発することである。このために必要な学問分野を結集し、抜本的研究を遂行することにより、基礎学問および産業両面に貢献しようとするものである。そこで、本総合研究(B)の研究組織メンバーが中心となり、広い分野に亘る学界の研究者層および産業界の第一線の研究者層との間で討論を重ねることにより、問題点を整理し、研究方針の樹立に役立てた。中でも最も重要でかつ基本的問題は、「何故、例えば共有結合している強力な半導体の結合が、金属と接することにより、容易に破壊され、界面反応が生じるのか」と言うことであり、この解答を得ることにより、実用的には、例えばコンタクト特性の良い、制御された界面形成技術がもたらされることになる。新たに発足する重点領域研究の強力な研究遂行のため以下のような4つの主要研究課題をとりあげ、充実した実行的な研究体制と組織とを作り上げている:1.金属ー半導体積層界面の基礎、2.界面の作製とその精密制御、3.積層界面の評価と界面反応過程の解明、および4.界面反応の物理・化学。したがって、本総合研究(B)により、次年度からスタートする重点領域研究「金属ー半導体界面:マイクロエレクトロニクス発展への基礎研究」遂行の準備は滞りなく完了できた。
熱拡散・水蒸気浸透圧による体内ガス輸送の光合成関与に関する研究

浮葉植物でみられる換気の機能は、還元的環境にある根やそのまわりの土壌中の酸素条件を改善し、根の高い活性を維持することであると考えられてきた。換気によって葉の光合成速度も増加すると考え、スイレン属のNymphea odorata、N.alba,コウホネ属のNuphar luteaなどを用いて葉柄からの換気速度と葉身の光合成速度を同時に測定し、わずかな増加率であったがハスNelumbo nucifera以外で予想どうりの結果を得た。さらにチャンバー内の空気圧力を高めて強制的に一定の速度で換気するシステムを構築し、換気速度と光合成速度の増加とは正の相関があることを確認した。換気速度を変化させると葉柄から地下部に送り込まれる空気の炭酸ガス濃度は速やかに変化した。この空気の炭酸ガス濃度は換気速度が充分速い場合でもかなりの頻度で1000ppmをこえることがあり、これは葉柄および葉身の空隙付近の細胞の呼吸のためと思われる。このこと自体は換気による光合成速度増加量の計算にはほとんど影響しない。しかし、光合成が盛んにおこなわれている葉の上部の柵状組織細胞近くの空隙および換気の主な通り道と思われる葉下部の大きな細胞空隙とでは、炭酸ガス濃度が大きく異なっている可能性を示唆するものである。ところが、換気によって葉の光合成速度も増加することを示唆する実験結果を得た。そこで測定方法の改良をさらに進めて実測値の信頼度をあげとともに、種々の環境条件下での気孔コンダクタンス、葉温、葉内および葉柄内炭酸ガス濃度の変化を同時に測定することを試みている。これまでの予備的実験の結果、日本では鑑賞用であるスイレンNymphoides odorataが現在最も適した実験植物と思われる。学内の実験池で育てたスイレンの葉を用いて、光、湿度、温度条件を変えて光合成、蒸散、換気の相互関係を実験的に求めるための測定システムの構築と調整にかなりの時間を費やしている。なお、浮葉は葉の表に気孔が分布するため特殊な同化箱が必要であるが、ドイツ滞在中に試作した改良型同化箱が実用に耐えることがわかった。現在、得られた測定結果の有効性の検討に着手したところである。測定システム構築や調整に重点をおいており、換気速度と光合成速度との詳しい関係の解明はまだ始まったばかりである。特に、蒸散速度の測定には既存のバイサラを用いているが、測定精度が問題となり、葉内炭酸ガス濃度の絶対値の推定には慎重な対処が必要である。ところが、換気にとって葉の光合成速度も増加することを示唆する実験結果を得た。そこで測定方法の改良をさらに進めて実測値の信頼度をあげるとともに、スイレン属の種Nymphoides odorataやミズヒナゲシHydrocleys nymphoidesなどを用いて種々の環境条件下での気孔コンダクタンス、葉温、葉内および葉柄内炭素ガス濃度の変化を同時に測定することを試みている。本年度は同時に、最も単純な実験系としてチャンバー内の空気圧力を高めて強制的に一定の速度で換気するシステムを構築した。換気速度と光合成速度の増加との関係は正の相関があるが、まだ精度の点で満足いく結果は得られていない。その空気の炭酸ガス濃度は換気速度が充分速い場合でもかなりの頻度で1mPa Pa^<-1>をこえることがあり、これは葉柄および葉身の空隙付近の細胞の呼吸のためと思われる。このこと自体は換気による光合成速度増加量の計算にはほとんど影響しないが、光合成が盛んにおこなわれている葉の上部の柵状組織細胞近くの空隙と換気の主な通り道と思われる葉下部の大きな細胞空隙での炭酸ガス濃度が大きく異なっている可能性を示唆するものである。今後は炭酸ガス濃度やコンダクタンスの葉内分布を測定する方法を考える必要がある。

浮葉植物でみられる換気の機能は、還元的環境にある根やそのまわりの土壌中の酸素条件を改善し、根の高い活性を維持することであると考えられてきた。ところが、換気によって葉の光合成速度も増加することを示唆する実験結果を得た。そこで測定方法の改良をさらに進めて実測値の信頼度をあげるとともに、スイレン属の種Nymphoides odorataやミズヒナゲシHydrocleys nymphoidesなどを用いて種々の環境条件下での気孔コンダクタンス、葉温、葉内および葉柄内炭酸ガス濃度の変化を同時に測定することを試みた。本年度は同時に、実験系としてチャンバー内の空気圧力を高めて強制的に一定の速度で換気するシステムを構築し、換気速度と光合成速度の増加とは正の相関があることを確認した。換気速度を変化させると葉柄から地下部に送り込まれる空気の炭酸ガス濃度は速やかに変化した。その空気の炭酸ガス濃度は換気速度が充分速い場合でもかなりの頻度で1mPa Pa^<-1>をこえることがあり、これは葉柄および葉身の空隙付近の細胞の呼吸のためと思われる。このこと自体は換気による光合成速度増加量の計算にはほとんど影響しないが、光合成が盛んにおこなわれている葉の上部の柵状組織細胞近くの空隙と換気の主な通り道と思われる葉下部の大きな細胞空隙での炭酸ガス濃度が大きく異なっている可能性を示唆するものである。
インフルエンザウイルス感染に伴う細菌性肺炎の重症化機構の解析

インフルエンザによる主な死因の一つは,肺炎球菌による細菌性肺炎の合併である.ウイルスの先行感染による細菌感染への感受性亢進はこれまでに報告されてきた.しかし,重複感染の初期段階における詳細な病態形成機構は不明である.我々はA型インフルエンザウイルス(IAV)の感染による気道上皮細胞でのストレス応答性分子群の表在化が細菌の定着や重症肺炎の発症に繋がると考えた.本研究では,IAV感染気道細胞において表在化する宿主分子を探索し,二次的に感染する肺炎球菌に対する宿主レセプターとしての機能を検討した.ヒト肺胞上皮細胞株にIAV A/FM/1/47株(H1N1)を感染させ,感染により発現量が変化する分子群を質量分析により同定した.その結果,小胞体に局在する分子シャペロンであるGP96がIAV感染に伴い,ストレスタンパクとして細胞表層へ誘導されることを確認した.また,GP96の表在化に伴い,GP96のクライエント分子であるインテグリンの表出も認めた.そこで,IAV感染細胞に肺炎球菌D39株(2型)を感染させ,感染2時間後における菌体付着量を検討した.IAV感染細胞への菌体付着量はウイルス非感染細胞と比較して有意に増加したが,GP96阻害剤もしくはGP96抗体の添加により非感染細胞への付着量と同等レベルまで減少した.以上の結果から,IAV感染により上皮アピカル部位に表出したGP96は,肺炎球菌の菌体表層タンパクに対する宿主レセプターとして機能することにより菌体付着を亢進させることが示唆された.インフルエンザウイルス感染により表在化する宿主分子としてGP96を同定し,これが二次的に感染する肺炎球菌に対する宿主レセプターとして機能することを証明できたため,おおむね順調である.IAV感染に伴い表在化するGP96と相互作用する細菌分子を検索する.IAV感染上皮細胞の細胞間接着障害に繋がるシグナルを検索し,細菌の上皮バリア突破との関連性を検証する.また,表在化GP96が細菌の定着と病態形成に及ぼす影響をマウス感染モデルで検証する.インフルエンザによる主な死因の一つは,肺炎球菌による細菌性肺炎の合併である.ウイルスの先行感染による細菌感染への感受性亢進はこれまでに報告されてきた.しかし,重複感染の初期段階における詳細な病態形成機構は不明である.我々はA型インフルエンザウイルス(IAV)の感染による気道上皮細胞でのストレス応答性分子群の表在化が細菌の定着や重症肺炎の発症に繋がると考えた.本研究では,IAV感染気道細胞において表在化する宿主分子を探索し,二次的に感染する肺炎球菌に対する宿主レセプターとしての機能を検討した.ヒト肺胞上皮細胞株にIAV A/FM/1/47株(H1N1)を感染させ,感染により発現量が変化する分子群を質量分析により同定した.その結果,小胞体に局在する分子シャペロンであるGP96がIAV感染に伴い,ストレスタンパクとして細胞表層へ誘導されることを確認した.また,GP96の表在化に伴い,GP96のクライエント分子であるインテグリンの表出も認めた.そこで,IAV感染細胞に肺炎球菌D39株(2型)を感染させ,感染2時間後における菌体付着量を検討した.IAV感染細胞への菌体付着量はウイルス非感染細胞と比較して有意に増加したが,GP96阻害剤もしくはGP96抗体の添加により非感染細胞への付着量と同等レベルまで減少した.以上の結果から,IAV感染により上皮アピカル部位に表出したGP96は,肺炎球菌の菌体表層タンパクに対する宿主レセプターとして機能することにより菌体付着を亢進させることが示唆された.インフルエンザウイルス感染により表在化する宿主分子としてGP96を同定し,これが二次的に感染する肺炎球菌に対する宿主レセプターとして機能することを証明できたため,おおむね順調である.IAV感染に伴い表在化するGP96と相互作用する細菌分子を検索する.IAV感染上皮細胞の細胞間接着障害に繋がるシグナルを検索し,細菌の上皮バリア突破との関連性を検証する.また,表在化GP96が細菌の定着と病態形成に及ぼす影響をマウス感染モデルで検証する.ウイルス-細菌重複感染マウスモデルの構築を行う予定であったが,ウイルス感染により表在化する分子の検索に時間を要したため,マウスモデルを用いた実験は次年度行うように研究計画を修正した.このため,次年度使用額が生じた.
光合成生物の分子化石を用いた白亜紀絶滅境界の有光層内無酸素環境形成機構の解明

昨年に引き続き、中部イタリアで得られた、白亜紀中期の海洋無酸素事変(OAE)時にテチス海西部に堆積した黒色頁岩試料について、様々な構造を持つ化石ポルフィリンを抽出・分析した。その結果、光合成生物一般を起源とするポルフィリン(DPEP)について、(a)窒素同位体組成は窒素固定を行うシアノバクテリアに特徴的な値を示し、(b)炭素同位体組成はシアノバクテリアなどにみられる基質炭酸の細胞内への能動輸送やPEPE酵素を用いた炭素同化が、当時の光合成一次生産において重要であったことを示唆した。さらに、藻類だけが持つクロロフィルbやクロロフィルcを期限とするポルフィリンが確認され、それらの安定同位体組成は、これら真核藻類が窒素固定生物と親密な関係にあったことを示した。よって、OAE当時の海洋では、窒素固定シアノバクテリアが供給する窒素に依存する生態系が存在したことが示された。OAE黒色頁岩試料からは、ヘムを起源とする構造を示すポルフィリンが見いだされた。このポルフィリンの窒素と炭素の同位体組成は、クロロフィルを起源とするそれらとは大きく異なる同位体組成を示した。このことは、従来決着がなされていなかった化学構造だけに基づくこの化合物の起源に関する議論に決定的な証拠を提示するものであり、また、新しい古環境指標としての大きな可能性を示すものである。化石ポルフィリン分析手法の確立・改善動的な温度コントロールが可能なカラムオーブンをHPLCに導入し、分析効率を改善させた。同位体測定では、EA-IRMSの分析感度を大幅に改善させ、窒素及び炭素同位体組成を決定することに成功した(従来の10^3倍の分析感度)。また、ボルフィリンをマレイミド化しGC/C/IRMSを用いて同位体測定することで、極微量のポルフィリンの窒素の同位体組成を決定する手法を確立した(従来の10^4倍以上の分析感度)。以上により、掘削コアのような少量の堆積物試料に用いうる実用的な化石ポルフィリンの同位体組成分析法を世界で初めて確立した。X線結晶構造解析による微量の化石ポルフィリンの構造決定法の確立NMR分析で障害となるバナジウムをキレートさせた化石ボルフィリンについて、微量の試料(100μg程度)から単結晶を得、X線結晶構造解析により化学構造を決定する手法を確立した。これにより、これまで報告のな:かった化合物を報告した。白亜紀黒色頁岩のポルフィリン窒素・炭素同位体組成分析中部イタリアで得られた、白亜紀中期の海洋無酸素事変(OAE)時にテチス海西部に堆積した黒色頁岩、即ちセリ層(OAE-1a)及びボナレリ層(OAE-2)の各試料について、化石ポルフィリンを抽出・分析した。その結果、光合成生物一般を起源とすると考えられるボルフィリン(DPEP)について、(a)窒素同位体組成は窒素固定を行うシアノバクテリアに特徴的な値を示し、(b)炭素同位体組成からは、炭素同化に際しての炭素の同位体分別が通常の海洋藻類に比べて有意に小さく、シアノバクテリアなどにみられる基質炭酸の綱胞内への能動輸送やPEPC酵素を用いた炭素同化が、当時の光合成一次生産において重要であったことが示唆された。よって、OAE当時の海洋では、窒素固定シアノバクテリアが主要な一次生産者であったことが示された。
イタリア・ルネサンス最後の建築家V.スカモッツィの建築六原理に関する研究

本研究はイタリア・ルネサンス最後の建築家であるヴィンチェンツォ・スカモッツィ(1548-1616)の主著『普遍的建築のイデア』(1615)に収められている建築六原理の内容と相関を明らかにしている。本研究はイタリア・ルネサンス期の最後の建築家とされるV.スカモッツの建築理論の構成の中心にある建築六原理(ordine, disposizione,distribuzione,correspondenza,venusta,decoro)の意味と各概念の関連性を明らかにする研究である。研究開始となる平成22年度は、スカモッツィに影響を与えたと考えられる建築理論家のウィトルウィウス、アルベルティ、パッラーディオ、バールバロが思考した六原理に関する解釈を把握することを目指した。原資料の収集が当初計画通りにいかず遅れたため、今年度は解釈を把握するところにまでは至っていないが、原資料の収集後、直ちに訳出作業等に入り、ウィトルウィウス、アルベルティ、パッラーディオ、バールバロの建築六原理に関する項目を抽出し、該当箇所について訳出を完了した。本作業を通じて、スカモッツの六原理に直接影響関係を持っていると考えられる人物として、ウィトルウィウス、アルベルティ、バールバロを挙げることができると考えられる。このことは更に注意深く内容を吟味し、早急に正確な把握を試みたいと考えている。本研究はイタリア・ルネサンス最後の建築家ヴィンチェンツォ・スカモッツィが自らの建築理論の中心におく建築六原理、すなわちordine,disposizione,distribuzione,corrispondenza,venusta,decoroの意味内容と、それら原理間の関連を明らかにすることを目的としている。この六原理は古代ローマの建築理論家ウィトルウィウス以降の古典主義的建築理論の根幹を成し、建築制作の根拠として用いられてきた。いまだ解明されていないスカモッツィの建築理論の全体像と細部を明らかにするために、本研究は実施される。23年度上半期は22年度の遅れを引き継ぎ、22年度に国外で収集した関係資料を基に、スカモッツィに影響を与えたと考えられるウィトルウィウス、アルベルティ、バールバロの六原理の意味を把握する作業に努め、その結果を纏めた。下半期は、スカモッツィの六原理の訳出と意味の把握を試み、さらに国外で関係資料の閲覧・収集に努めた。この関係資料を参照しながら意味の把握に誤りがないか、現在(24年5月現在)研究を進行中である。平成24年度上半期の早期に、スカモッツの六原理の意味を確定した上で、原理間の関連を明らかにする作業を進めていきたいと考えている。本研究はイタリア・ルネサンス最後の建築家ヴィンチェンツォ・スカモッツィが建築理論の中心におく建築六原理(ordine, disposizione, distribuzione, corrispondenza, venustà, decoro)の内容を明らかにすることを目的としている。いまだ解明されていないスカモッツィの建築理論の全体像と細部を明らかにするために、本研究は平成22年度から実施された。研究最終年度となる今年度は、国内外で収集した資料を基に、ウィトルウィウス、アルベルティ、バールバロの建築六原理を参照しながら、スカモッツィの六原理の内容を確認した。スカモッツィの建築六原理はウィトルウィウスに準じて類似の原理解釈を行っているが、各原理の解釈においてアルベルティやバールバロの影響も見られる。特に学(scienza)を中心としたスカモッツィの原理構成から、ウィトルウィウスには見られない六原理間の階梯が建築制作の基本に添えられていたことを確認した。平成22年度の資料探索に時間がかかり過ぎてしまい、国外での収集時期が遅れたことが原因である。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度はその遅れを引き継ぎ、やや遅れたまま進行中であったが、現在その遅れを取り戻しているところである。この進捗状況から研究計画の変更は必要ないと考えている。平成24年度の上半期中に遅れを取り戻し、建築六原理を纏めたうえで、下半期に日本建築学会への論文の投稿を行いたいと考えている。
精神科new long stay患者を対象とする退院支援プログラムの開発

退院支援看護プログラムは、「患者へのアプローチ」、「多専門職チームへのアプローチ」、「家族・身近な支援者へのアプローチ」のほか、退院支援に取り組もうとする看護師個人に向けた「看護する私自身へのアプローチ」、新しい精神科病棟の文化や風土を創造するための提言を含む「組織へのアプローチ」の5つの柱から構成される。このプログラムの臨床での活用により、長期入院を余儀なくされている方々の退院促進と地域ケアを推進する一助となることが期待できる。本研究では、new long stayといわれる精神科医療施設への入院期間が15年の患者を対象として、患者の強みや力量に焦点を当て、それを生かす退院支援看護プログラムの開発を目指している。(1)平成19年度は、退院支援の課題とニーズを明らかにすることを目的として、入院期間15年の患者を対象に聞き取りを実施する。(2)平成20年度は、退院支援の状況について患者の視点から明らかにすることを目的として、(1)の成果を基にしたアンケート調査を実施する。(3)平成21年度は、看護専門職の視点からnew long stay患者の退院支援の現状と課題を明らかにすることを目的として聞き取り調査を実施する。(4) (1)(3)の研究成果について、患者、看護師双方の視点から退院支援についての検討を重ね、入院期間15年の患者を対象とした退院支援看護プログラムを作成し、精錬する。初年度である平成19年度は、入院期間1年5年未満の患者の退院支援のニーズと課題を当事者の視点から明らかにすることを目的として、聞き取り調査を実施した。異なる3都道府県の精神科入院施設3ケ所をフィールドとし、入院15年未満で統合失調症圏の診断を受け、研究参加の同意が得られた患者を対象とした。聞き取りの内容は、療養生活の実態、生活の中での工夫や努力、今後の生活に向けた希望や目標、退院に向けての心配や困難、医療者との関係、医療者への希望や要望などであり、これらについて研究者から質問を投げかけ、対象者に自由に語ってもらった。その後に、対象者の許可を得て、病棟看護師から患者の状況や退院支援状況等について聞き取り、あわせて診療録と看護記録から情報収集した。得られたデータは、質的帰納的に分析した。対象者は皆、「退院を希望」していたが「退院希望時期は曖昧」であり、「退院予定日は未確定」であった。「退院に向けた準備」をすすめていることが述べられたが、目標期限を設けた「時間軸に乗った支援」よりも「患者のペース・状況優先の支援」が中心であった。また、本人が希望/予定している退院先は、アパート/自宅での一人暮らし、グループホーム/福祉ホーム入居であり、「自立生活が求められている現状」があった。退院に向けた医療者への要望は、"特にない""良くしてもらっている"など「医療者への要望の希薄さ」が抽出された。そして、対象者自身の捉える生活の状況、努力していること、困難には、「看護師のアセスメントとの間のギャップ」が少なからず存在することが明らかとなった。これらのニーズと課題が対象者の語りから抽出されたことは、当事者の視点に立った支援のあり方を検討する上で基盤となる要素であり、大変重要であると考える。New long stay患者の退院支援の状況について患者の視点から明らかにすることを目的として,アンケートを実施した.調査項目は前年度の聞き取り調査の結果および先行研究の検討から,「退院に対する考え」「退院に向けた準備状況」「退院に向けた支援の状況」に関する計15問を作成した.平成20年度に日本精神科看護技術協会に登録している精神科医療施設から選択した100施設の看護部長に対し, 20歳以上で入院15年の患者3名へのアンケート配布を依頼した(計300部).対象者の研究参加への同意はアンケートの返送をもって得ることとした.142名から回答を得(回収率47.3%),うち回答者記載による入院期間が15年である103部を有効回答とした(有効回答率72.5%).回答者は男性53%,女性47%,年齢は20-30代19%, 40-50代60%, 60-70代21%,統合失調症が73%を占め,平均入院期間は27.8月であった.「退院に対する考え」では, 85%が退院を考慮し, 82%が退院を希望し, 68%が条件が整えば退院できると評価していた.「退院に向けた準備状況」では,退院時期が未確定/不明の者82%,退院先が未確定/不明の者49%であった.また,退院後の心配の上位は,対人関係45%,金銭管理41%,新しい環境への適応35%であった(複数回答).「退院に向けた支援の状況」では,適切な支援が行われている者31%,自分の意向や希望が尊重されている者26%であった.