hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
温度応答性と生分解性を兼ね備えた高分子ミセル薬物運搬体

我々の研究グループでは、親水性のポリエチレングリコールとアスパラギン酸からなるブロック共重合体に抗ガン剤であるアドリアマイシンを結合させると水中で安定な会合体(高分子ミセル)を形成することを見いだしている。本研究では、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド)(PIPAAm)と疎水性の生分解性連鎖を併せ持つブロック共重合体を合成し、温度応答性高分子ミセルへの展開を検討した。PIPAAmは相転移温度以下では親水性を示すことから、低温側で親水-疎水型のミセルを形成し、高温にすると分子全体が疎水性になり凝集・不溶化すると考えられた。すなわち、ある特定部位を局所的に加温すれば、安定に存在していたこの高分子ミセルが凝集し、集積する。このようなシステムを用いれば、外部からの温度変化という信号に応答した薬物ターゲティングが実現すると期待される。水酸基を有するチオール化合物を用いてテロメリゼーション法により片末端に水酸基を有するPIPAAmを合成した。さらにPIPAAmの片末端の水酸基を利用して、D,L-ラクチドの開環重合を行い、PIPAAm-ポリ乳酸(PDLLA)のブロック共重合体を合成した。分画操作によって分子量分布が比較的小さい高分子量側成分のPIPAAm-OHを用いて得られたPIPAAm-PDLLAブロックコポリマーのDLS測定を行った。5°Cでは測定が不可能であったが、温度上昇に伴い会合体を形成することが確認された。20°C以上で粒径の測定が可能となり粒径が若干低下する傾向が観察された。その後、35°Cにおいて急激に粒径の低下が観察され、約65nmの粒径の会合体が得られた。このときの多分散度はほぼ0.1程度であったことからほぼ球形の会合体の生成が示唆された。このような挙動は相対的に低分子量のPIPAAm-OHから得られたブロックコポリマーにおいても観察された。さらに温度を上昇させると会合体は凝集し始め、沈殿を生じた。すなわち、比較的分子量分布の狭いPIPAAm-PDLLAブロックコポリマーから得られた会合体は、生体温度の近いところでほぼ球形に近い高分子ミセルを形成し、そのサイズも65nmと小さいものであった。この高分子ミセルは温度上昇に伴い会合体の凝集・沈殿を生起することが明らかとなった。本年度の計画に従い、温度応答性高分子ミセルの調製とそのキャラクタリゼーションを行った。1.片末端に水酸基を有するポリイソプロピルアクリルアミド(PIPAAm)の合成とキャラクタリゼーション水酸基を有するチオール化合物を用いたテロメリゼーション法により片末端に水酸基を有するPIPAAmを合成した。合成したポリマーを限外濾過膜を用いて分画を施すことにより、おおむね数平均分子量が5,000程度のものと2,500程度のものを得た。合成したPIPAAm水溶液の濁度測定及び示唆走査型熱分析を行うことにより、下限臨界溶液温度の測定を行い、それぞれ40°Cと50°Cという結果を得た。

2.PIPAAmの末端の水酸基を開始点とするラクチドの重合PIPAAmの片末端の水酸基を利用して、D,L-ラクチドの開環重合を行い、PIPAAm-ポリ乳酸(PDLLA)のブロック共重合体を合成した。GPCにより分子量を、また^1H-NMRにPIPAAmとPDLLAの組成比を算出した。D,L-ラクチドの重合反応によって高分子量化しており、また、^1H-NMRの測定結果によりポリ乳酸のピークが観察されたことからPIPAAm-PDLLAブロック共重合体の合成が確認された。合成したPIPAAm-PDLLAブロックコポリマーを用いて透析法により高分子ミセル溶液を調製した。ミセル溶液の動的光散乱測定を行い、粒径および多分散度を測定した。その結果、比較的分子量分布の狭いPIPAAm-PDLLAブロックコポリマーから得られた会合体は、生体温度の近いところでほぼ球形に近い高分子ミセルを形成し、そのサイズも65nmと小さいものであった。さらに、この高分子ミセルは温度上昇に伴い会合体の凝集・沈澱を生起することが明らかとなった。温度応答性高分子であるポリイソプロピルアクリルアミド(PIPAAm)とポリ-D,L-ラクチドとからなるブロック共重合体を用いて透析法で調製した会合体は、PIPAAmの相転移温度以下ではD,L-ラクチド連鎖の疎水性凝集によってミセル様の会合体を形成するが、相転移温度以上ではPIPAAmが不溶化するために会合体は凝集・沈殿する。相転移温度前後での会合体の凝集挙動を動的光散乱測定と原子間力顕微鏡(AFM)により詳細に調べた。その結果、会合体の凝集に伴うサイズ変化は可逆的であることが明らかとなった。すなわち、凝集した会合体を一晩静置後降温させると、会合体のサイズは昇温前と一致した。さらに、相転移前後で乾燥させた資料をAFMのより観察すると、球形で比較的サイズのそろった像が得られた。すなわち、凝集・沈殿が生起しても、内核が融合するのではなく、個々の会合体の疎水化に基づく可逆的な凝集であることが確認された。PIPAAm単独で用いると、相転移温度は32°C付近であるが、この会合体を薬物の運搬を担う薬物キャリアーとして展開するために、また抗ガン剤封入後、温熱療法との併用を考慮すると相転移温度は体温以上である必要がある。そこで、会合体の殻を形成する温度応答性高分子の相転移温度を上昇させるために、親水性のモノマーであるN,N-ジメチルアクリルアミドとの共重合を行った。これまでと同様に、メルカプトエタノールを連鎖移動剤としたテロメリゼーション反応により片末端に水酸基を有するIPAAm/DMAAコポリマーを合成した。このポリマーを用いてD,L-ラクチドの開環重合を行いブロックコポリマーを合成し、透析法により会合体を調製した。得られた会合体の沈殿・凝集を生起する温度は体温付近であり、現在、この会合体への抗ガン剤の封入を検討している。我々の研究グループでは、親水性のポリエチレングリコールとアスパラギン酸からなるブロック共重合体に抗ガン剤であるアドリアマイシンを結合させると水中で安定な会合体(高分子ミセル)を形成することを見いだしている。本研究では、ポリ(N-イソプロピルアクリルアミド) (PIPAAm)と疎水性の生分解性連鎖を併せ持つブロック共重合体を合成し、温度応答性高分子ミセルへの展開を検討した。PIPAAmは相転移温度以下では親水性を示すことから、低温側で親水-疎水型のミセルを形成し、高温にすると分子全体が疎水性になり凝集・不溶化すると考えられた。
アポトーシスと補体系-活性化機構と生物学的意義の研究

i;アポトーシスによる同種補体活性機構の解析我々は、アポトーシスに伴って細胞表面へ露出し、同種補体活性化を誘導する未知活性化分子の探索を進めた。アポトーシス細胞として、T細胞株をシクロヘキシミド処理したものを用いた。その可溶化画分をSDS-PAGEで分離し、膜に転写したのち、正常血清と処理した。活性化分子が転写された部位では、補体活性化を誘導し、その分子上にC3b沈着が観察されるはずである。この作業仮説に立って活性化分子を探索したところ、C3b沈着を誘導する50kDaの分子がアポトーシス細胞や正常細胞の膜画分から検出された。これは、この活性化分子はアポトーシスに伴う細胞膜変化により細胞内から細胞表面へ移行し、同種補体活性化を誘導することを示唆する。アポトーシス細胞を血清処理すると多量のiC3bが沈着する。マクロファージにこのiC3b沈着細胞を貪食させ、iC3bのオプソニン効果を調べた。貪食実験には、補体活性化を抑制した条件下で血清処理したアポトーシス細胞と正常血清処理したアポトーシス細胞を用いた。正常血清処理したアポトーシス細胞の方が、補体活性化を抑制した条件下で血清処理したアポトーシス細胞よりも約2倍多く貪食された。この貪食上昇効果はiC3bに対する抗体処理で阻害されたことから、マクロファージはアポトーシス細胞のiC3bをリガンドとして認識していることが示唆された。さらに、CR3に対する抗体もこの貪食応答を阻害した。これらの結果から、アポトーシス細胞に沈着したiC3bはマクロファージのCR3のリガンドとして働き、アポトーシス細胞のクリアランス促進に寄与していることが示された。マクロファージによるアポトーシス細胞の貧食応答は補体活性化により亢進されるTリンパ球系の培養細胞,Jurkat,を蛋白合成阻害剤の存在下で培養すると、アポトーシスにより死滅する。この細胞をマクロファージに加えても、ほとんど貧食されない。しかし、アポトーシス細胞をヒト血清で前処理したものは、速やかに貧食されるようになった。加熱処理したヒト血清やEDTA-添加血清で処理したアポトーシス細胞では貧食亢進は見られなかった。これは、アポトーシス細胞がヒト補体系を活性化し、補体C3bで標識されるために、マクロファージの補体レセプター,CR3/CR4,を介した貧食応答が亢進した可能性を示唆した。そこで、CR3/CR4を特異抗体でブロックしたところ、貧食応答が阻害された。さらに、C3bに対する抗体添加によっても貧食応答が阻害された。これらの知見から、アポトーシスに伴って自己補体活性化因子が膜表面に露出し、自己補体を活性化し、オプソニン作用のあるC3bフラグメントがアポトーシス細胞表面に結合し、CR3を介したアポトーシス細胞の貧食応答が亢進したことが明らかになった。抗ガン剤処理によりアポトーシス死を起こしたガン細胞も自己補体を活性化するヒト肺ガン由来の培養細胞を抗ガン剤のVincristinで処理すると、核の断片化を伴うアポトーシス細胞死を起こす。この死細胞をヒト血清処理すると補体を活性化し、補体フラグメント,C3bやiC3b,により標識されることを見いだした。この自己補体活性化の機構を検討し、ガン細胞膜表面の補体制御因子が減少していることの他に、未知の補体活性因子がガン細胞表面に発現している可能性を示唆する知見を得た。i;アポトーシスにより同種補体活性機構の解析我々は、アポトーシスに伴って細胞表面へ露出し、同種補体活性化を誘導する未知活性化分子の探索を進めた。

アポトーシス細胞として、T細胞株をシクロヘキシミド処理したものを用いた。その可溶化画分をSDS-PAGEで分離し、膜に転写したのち、正常血清と処理した。活性化分子が転写された部位では、補体活性化を誘導し、その分子上にC3b沈着が観察されるはずである。この作業仮説に立って活性化分子を探索したところ、C3b沈着を誘導する50kDaの分子がアポトーシス細胞や正常細胞の膜画分から検出された。これは、この活性化分子はアポトーシスに伴う細胞膜変化により細胞内から細胞表面へ移行し、同種補体砥性化を誘導することを示唆する。アポトーシス細胞を血清処理すると多量のiC3bが沈着する。マクロファージにこのiC3b沈着細胞を貪食させ、iC3bのオプソニン効果を調べた。貪食実験には、補体活性化を抑制した条例下で血清処理したアポトーシス細胞と正常血清処理したアポトーシス細胞を用いた。正常血清処理したアポトーシス細胞の方が、補体活性化を抑制した条件下で血清処理したアポトーシス細胞よりも約2倍多く貪食された。この貪食上昇効果はiC3bに対する抗体処理で阻害されたことから、マクロファージはアポトーシス細胞のiC3bをリガンドとして認識していることが示唆された。さらに、CR3に対する抗体もこの貪食応答を阻害した。これらの結果から、アポトーシス細胞に沈着したiC3bはマクロファージのCR3のリガンドとして働き、アポトーシス細胞のクリアランス促進に寄与していることが示された。
英文創出訓練アプリケーションの開発と実践研究

H30年度は、各中学校検定教科書、及び高校検定教科書を購入し、これらの教科書の中で使用されている語彙、特に動詞を中心に取り上げ、意味の調査、分析を行った。H30年度は各中学校検定教科書で取り上げられている動詞をExcel表にまとめ、どれくらいの意味が取り扱われているか分析するとともに、対照表を作成し、足りない情報が把握できるようにするとともに、中核の意味、イメージをExcelに書き込むことを行った。また、この教科書調査・分析に基づき、動詞の中核イメージを理解し、文創出訓練を行うアプリケーション10種類、及び文法項目を取り上げて文創出訓練を行うアプリケーション10種類を作成した。作成したアプリケーションは、中学校2校で使用していただき、英文の意味、扱っている英語の難易度に関するフィードバックを得た。難易度に関するコメントに対しては、現場の教師から見ると馴染みがないものでもコミュニケーション上は必要であることを示し、英文のレベルとアプリケーションの効果に関して意見交換を行いながら、アプリケーションの内容の充実と改善を行なっている。本研究でのアプリケーションは、文字情報だけでなく、音声を聞くことも可能している。H31年度は、小学校での使用も視野にいれ、アプリケーションの中にイメージ図、もしくは絵を挿入したものに発展していく予定である。本研究の目的である英文創出アプリケーションの開発は順調に進展している。文字情報によるコンテンツだけでなく、音声によるコンテンツを組み込むアプリケーションを作成している。H31年度は、このアプリケーションに視覚的情報、絵などの情報を組み込む予定であり、発展型が容易に創造できる段階にあると言える。この発展型アプリケーションは、小学校での応用も期待できることから、効果をH31年度に検証する予定である。この意味において、本研究はおおむね順調に進展していると言える。また、H30年度は、アプリケーションに入れるコンテンツを精選するために教科書分析に重点を置き研究を行った。特に、中学校の検定教科書の分析を行い、Excel対照表を作成している。この対照表に、高校生用教科書にみられる同一語彙の取り扱い、及び高校での新出語彙を加えて、意味情報の不足を明らかにしていく予定であるので、おおむね研究は順調にすすんでいると判断できると思われる。さらに、デモ版による実践を中学校2校で実施し、フィードバックをえているのでコンテンツの改善を加えることができる。効果の検証はまだ十分ではないが、今後検証を重ね、学会発表を行う予定である。英文創出アプリケーションは、語彙分析の進展とともにその数を増やしていく予定であり、文字、音声情報の追加に加えて、視覚的情報を追加し、アプリケーションの内容を充実させていく予定である。H31年度は、高校検定教科書の分析を進め、既に作成しているExcel語彙対照表を発展充実させる予定である。また、英文創出アプリケーションの充実とともに実践での効果の検証と実践者によるフィードバックをもとにコンテンツの改善と充実をさらに図っていく予定である。英文創出アプリケーションの使用、実践者との意見交換において、英文精選の理由づけ、狙いが見えないものがあるとのコメントをいただいているので、これまでの文法項目の捉え方と異なるコンテンツを有するものは、その根拠となる研究、及び考え方を明示するものを作成するようにする。また、中学校、高校教員が理解していないイメージスキーマについても同様に、その根拠となるものをアプリケーションとは別にデータとともに示すようにする。

英文創出アプリケーションは、語彙分析の進展とともにその数を増やしていく予定であり、文字、音声情報の追加に加えて、視覚的情報を追加し、アプリケーションの内容を充実させていく予定である。H31年度は、高校検定教科書の分析を進め、既に作成しているExcel語彙対照表を発展充実させる予定である。また、英文創出アプリケーションの充実とともに実践での効果の検証と実践者によるフィードバックをもとにコンテンツの改善と充実をさらに図っていく予定である。英文創出アプリケーションの使用、実践者との意見交換において、英文精選の理由づけ、狙いが見えないものがあるとのコメントをいただいているので、これまでの文法項目の捉え方と異なるコンテンツを有するものは、その根拠となる研究、及び考え方を明示するものを作成するようにする。また、中学校、高校教員が理解していないイメージスキーマについても同様に、その根拠となるものをアプリケーションとは別にデータとともに示すようにする。H30年度は、データ分析用として中学校検定教科書、及び高校検定教科書、関連分野の参考図書の購入に研究費をあて、実際に分析を行った。H30年度は、購入した全ての中学校検定教科書の動詞の分析を重点的に行い、Excelによる対照表とイメージスキーマ、中核イメージの説明表の作成を行ったため、高度なアプリケーション作成に必要な機器は次年度に購入することとした。また、H30年度はデモ版による実践とフィードバックによるコンテンツの改善にあてたため、効果の検証を科学的に分析し、発表する段階には至っていないことから成果発表のための出張を行っていない。H31年度は進捗状況を見極めながら、機器の購入費とアプリケーション開発に必要な専門知識習得のための指導を受ける経費などを計上していく予定である。
糖尿病診断後早期の患者のための学習支援教材の開発

本研究は2型糖尿病診断後早期の患者にとって必要な学習支援の教材を作成し、その評価を行うことを目的とした。学習支援の教材を作成するために、エキスパートナースを対象とし手実施した調査結果に基づき健康信念モデルに基づく知識獲得、自己の振り返りおよびセルフモニタリングのための学習支援教材を作成した。その評価のために1ヶ月間の介入研究を行った結果、介入群において介入1ヶ月後に有意な体重減少がみられたが、健康信念、自己効力感、セルフケア行動、HbA1c、血糖値においては有意な変化は認められなかった。本研究では2型糖尿病診断後早期の患者にとって必要な学習支援の教材を作成して、その評価を行うことを目的としている。平成21年度は、教材作成のために以下の計画に沿って研究を実施した。2.糖尿病看護のエキスパートに対する調査(1)対象:糖尿病看護のエキスパート17名(2)方法:半構造化面接(3)期間:平成21年57月(4)分析:インタビュー内容を逐語録とし、内容の類似性に基づいて比較し分析した。(5)倫理的配慮:倫理委員会の承認を受けるとともに対象の自由意志の尊重、匿名性の厳守等を説明して同意を得た。(6)結果: 2型糖尿病診断後早期の患者の特徴は、行動面から積極的に生活修正に取り組もうとする反面、生活修正が容易ではない状況と継続の困難さが窺えた。知識面では、保有する知識に個人差があるものの、十分ではない状況が窺えた。また、認識面においても糖尿病の受け入れには個人差があり衝撃を受ける者もいる一方、糖尿病の実感や危機感がなかったり、軽視している者、その人なりに受け入れの努力をしている状況も窺えた。教育面は、看護師からは教育しやすいという評価がなされていることが窺えた。2型糖尿病診断後早期患者への看護介入については、療養環境の調整を行い、患者に寄り添う姿勢を示し、個々の状況に応じた指導・教育を行っている状況が窺えた。さらに、正しい知識の提供を行っている一方、知識面だけではなく、患者の糖尿病の受け入れやそれに伴う心理状態への配慮や対応、患者の負担感への配慮が窺えた。平成22年度は、21年度の研究成果に基づき、教材作成とその評価尺度の検討を行った。平成21年度の糖尿病看護のエキスパートに対する調査では、初期2型糖尿病患者の特徴と教育の実際を明らかにした。その結果、患者の特徴として、糖尿病の実感や危機感がなかったり、軽視しているものがおり、これらが自己管理上の問題となると捉えられた。一方、看護師は糖尿病の合併症について知識提供する一方、患者にとって負担の少ない自己管理方法の提案を行ったり、達成可能な目標を一緒に考え支援しているという現状から、初期2型糖尿病患者の学習支援教材の概念枠組みとして、健康信念モデルが活用できると考えた。そこで、健康信念モデルに基づき、患者の糖尿病の罹患性と重大性の認知および自己管理による利益の認知を高め、自己管理に対する障害の認知を下げ、さらに自己効力感を高めるような学習支援教材を考案した。教材は健康信念に働きかけるように情報を整理したパンフレット、セルフモニタリング、健康信念についての振り返りシートの3点から構成し、研究者間で概念枠組みとの整合性を評価した。学習支援教材の評価尺度として、Beckerらの健康信念尺度を翻訳し、アメリカの医療施設で勤務する日本人看護師に意味内容を確認したのち、糖尿病患者15名を対象に尺度の評価を得た。その結果、下位尺度において、クロンバックαは0.450.68であった。初期の患者9名に限定したところ、0.550.75であった。信頼性の低さを補うために、自己効力感尺度、自己管理尺度および質的な評価も加えて、学習支援教材の評価を行うこととした。本研究では2型糖尿病診断後早期の患者にとって必要な学習支援の教材を作成し、その評価を行うことを目的としている。平成23年度は、22年度に実施した学習支援教材作成と評価尺度の検討結果に基づき、介入研究を行った。1)目的:教材を用いた糖尿病診断後早期の患者に対する学習支援プログラムの実施し、その効果を評価する。2)対象:2型糖尿病と診断されて概ね3年以内の外来通院患者、男性8名、女性4名。3)方法:介入群と対照群を性別によりマッチングし多準実験デザインで学習支援教材を用いた教育プログラムを実施し、評価した。4)結果:(1)健康信念:介入群、対照群ともに介入1ヶ月後、3ヶ月後の時点において有意な変化は認められなかった。両群間においても有意な差は認められなかった。(2)糖尿病自己効力感:介入群、対照群ともに介入1ヶ月後、3ヶ月後において有意な変化は認められなかった。

(3)糖尿病セルフケア行動:介入群、対照群ともに介入1ヶ月後、3ヶ月後において有意な変化は認められなかった。両群間においても有意な差は認められなかった。(4)HbA1c:介入群では介入1ヶ月後において有意に低下したが、3ヶ月後では有意な差は認められなかった。対照群では介入1ヶ月後、3ヶ月後において有意な変化は認められなかった。(5)質的検討:介入群では学習支援プログラムに含まれるセルフモニタリングや看護面談を通して自己への気づきが深まっていた。5)結論:対象者は早期のため、セルフケアや血糖コントロールの状態が良く、学習支援プログラムによる自己管理上の成果を見出すことは困難であった。糖尿病患者が増加している現在、学習支援プログラムについてさらに内容や期間を検討することや、対象者を増やして検討する必要がある。
非局所微分方程式および畳込み方程式の代数解析的研究

有界超函数および周期性をもつ超函数の層を定義し、周期的な係数を持つ微分方程式に対し、将来において有界な解があれば周期解が存在する、というMassera型の定理を超函数の枠組みで定式化し、証明した。さらに、超幾何函数を初期値とするある種のフックス型の微分方程式を考察することにより、多変数の特殊函数を得ることができた。次に、正則自己被覆を持つ無限型リーマン面および,正則自己被覆から導かれるTeichmuller空間上の正則写像の力学系に関して研究した。そして、Z^Nの、Cuntz環O_2への作用がRholinの性質を持つこと、およびそれらが互いにcocycle conjugateであることを示した。また、未だ投稿中ではあるが、非局所擬微分作用素に対し可逆性定理を証明し、これを用いることにより非局所擬微分方程式の複素領域における可解性および解の解析接続定理を証明した。さらに、定数係数の場合に解を具体的に構成する公式を与えた。また、特に、微分・差分方程式に対して、演算子法公式を得ることができた。本研究は,無限階の擬微分作用素および擬微分方程式に対し,交付申請書および研究計画書に記載した以下の次の3つの目標に沿ってすすめられた:[1]非局所擬微分方程式および畳込み方程式の演算子法と可解性の研究。[2]1点において定義される非局所擬微分作用素の定式化と対応する方程式の可解性。[3]整函数の空間における無限階微分方程式の研究。このうち[2][3]については最終的な結論には至らず,さらに継続して研究中であるが,[3]については,昨年度までの科学研究費による研究では,擬指数を持つ整函数の空間に連続に作用する線型作用素を,指数が1より大きいという意味で高階の場合に考察し,これらの作用素を,考えている場合に対応したGevrey的な増大度を持つ無限階微分作用素,として特徴付けられたが,本年度の研究で,擬指数が一般の場合にも,定式化をより簡略化し,また議論の精密化を行うことによって,同じように無限階微分作用素が自然に対応することが証明された。整函数の空間における連続線型自己準同型の無限階微分作用素としての特徴付けが一般の場合に完成した,と言うことができる。非局所擬軽微分作用素に対し可逆性定理を証明し、これを用いることにより非局所擬軽微分方程式の複素領域における可解性および解の解析接続定理を証明した。また、有界超函数および周期性をもつ超函数の層を定義し、周期的な係数を持つ微分方程式に対し、将来において有界な解があれば周期解が存在する、というMassera型の定理を超函数の枠組みで定式化し、証明した。そして、Z^Nの、Cuntz環0_2への作用がRholinの性質を持つこと、およびそれらが互いにcocycle conjugateであることを示した。
中世西欧文学の「間テクスト性」に関する文献学的・言語学的研究

ラテン語・古フランス語・中世ポルトガル語・中世英語を専門とする各研究者が、次のような点を念頭において中世西欧文学における間テクスト性を考察した。(1)中世西欧における翻訳に関する文献学的研究、(2)翻訳および翻案文献の言語学的分析、(3)翻訳および翻案文献と言語学的特徴の間の関連性。4言語に関連する共通の作品としては、ローマの哲学者ボエティウス(ca.480-524)の『哲学の慰め』を調査対象とした。本作品は西欧において人気を博し、各国語への種々の翻訳が存在するので、中世西欧の間テクスト性研究のためにもっとも適切な作品といえる。他にも、言語ごとに作品を取り上げて分析を行った。また、中世から近代初期に至る辞書も間テクスト性研究の考察対象とした。研究成果報告書(冊子体)に所収の主な論考は以下のとおり。ラテン語関係では、『哲学の慰め』のなかでオルペウス神話が語られる箇所を特に取り上げて、ギリシア・ローマ文学におけるオルペウス神話の系譜を確かめ、中世における『哲学の慰め』の翻訳について論じた。英語関係では、『哲学の慰め』の古英語訳と中英語訳を取り上げて原典と照合し、内容と文法の面から翻訳のあり方を具体的に検討した。ポルトガル語関係では『夫の庭』を取り上げて、テクストの伝承・構成・言語的特徴について検討し、作品中の全語形を提示した。フランス語関係では、カエサル『ガリア戦記』の古フランス語訳『ローマ人の偉業』を取り上げて、構文と語彙の面から翻訳の問題について論じ、地名と部族名の扱いについて検討した。研究成果報告書(冊子体)以外に、既に発表した成果については下記の一覧表のとおりである。中世文学作品ほかを対象にして、語彙・文法・方言などの観点から考察を行った。初年度である平成15年度は、中世西欧文学の「間テクスト性」(intertextuality)に関する研究の出発点として、主に、ローマの哲学者Boethius(ボェチウス:ca.480-524 AD)の代表作De Consolatione Philosophiae(『哲学の慰め』)の流布と翻訳の状況を文献学的に考察すべく、一次資料(原文、翻訳)、および二次資料の調査を行った。本作品が西欧において人気を博したことは、各国語への種々の翻訳があったことからも知られる。例えば、英国では、古くは9世紀のKing Alfredによる古英語訳、14世紀のGeoffrey Chaucerや15世紀のJohn Waltonによる中英語訳、また、16世紀のQueen Elizabeth Iによる初期近代英語訳などがあった。フランスでも幾種類もの翻訳が行われた。中でも14世紀のJean de Meunによる翻訳は影響力が大きく、Chaucerもその影響下にあった。これら以外の言語でも翻訳がなされた。また、注釈書も物され、翻訳への影響が考えられる。一部には写本の実地検分を含め、一次資料の調査を行った。次年度は、最近の研究成果を踏まえて、本作品の各種テクストを文献学的・言語学的に分析し、原文と翻訳、翻訳と翻訳などの「間テクスト性」を具体的に解明することを目指す。また、対象を広げて、他の著者の作品についても研究を深める予定である。昨年度に引き続き、主にローマの哲学者Boethius(ボエチウス:ca.480-524AD)の代表作De Consolatione Philosophiae(『哲学の慰め』)に関して、一次資料(原文、翻訳)および二次資料に関する調査を進めるとともに、本作品の各種テクストを文献学的・言語学的観点から検討した。フランス語に関しては、『哲学の慰め』の写本伝統を調べ、Jean de Meunによる有名な翻訳、および他の古フランス語訳と古プロヴァンス語訳の断片の異同などを中心に先行研究の渉猟を行った。

ポルトガル語に関しては、『哲学の慰め』の直接の中世語訳は知られていないが、14世紀末か15世紀にかけての作品にその影響があるとする説もある。特に、その時期に匿名の修道僧によって著された『夫の庭』(Horto de Esposo)はローマ哲学の伝統を継承し、ボエチウスにも触れている。本年度は、関連する文献の収集やテクストそのものの検討を行い、間テクスト的な観点からの分析並びに考察へ向けての準備を整えた。英語に関しては、9世紀のKing Alfredの古英語訳、14世紀のGeoffrey Chaucerや15世紀のJohn Waltonの中英語訳、また、16世紀のQueen Elizabeth Iの初期近代英語訳の『哲学の慰め』を対象として、先行研究の調査を進めるとともに、テクスト間の異同について具体的な分析に着手した。昨年度に引き続き、ローマの哲学者Boethius(ボエチウス)の代表作De Consolatione Philosophiae(『哲学の慰め』)を主たる研究対象とし、本作品の各種テクストを文献学的・言語学的観点から検討し、原文と翻訳、翻訳と翻訳などの「間テクスト性」を具体的に考察する作業を進めた。フランス語に関しては、『哲学の慰め』の複数の古フランス語訳がフランスでどのように受容されていたのかを文献学的に調査した。またラテン語の原典からの翻訳の問題を、いくつかの観点(否定形、指示詞・冠詞)において言語学的に対照分析した。英語に関しては、14世紀のGeoffrey Chaucerよる中英語訳を中心に『哲学の慰め』の英訳テクストを比較検討し、言語的特徴を体系的に分析するための基礎データを整備した。ポルトガル語に関しては、14世紀末から15世紀にかけて匿名の修道僧によって著された『夫の庭』(Horto de Esposo)に対する、ボエチウスの影響等について検討した。この作品には、様々な先行作品の影響が指摘されているが,特にボエティウスに関連する部分についていくつかを選び,部分的ではあるものの考察した。また、翻訳作品における間テクスト的な影響を、特に言語形式の観点から分析並びに考察するために、『聖杯の探索』(Demanda do Santo Graal)について、Bogdanowのエディションの古仏語オリジナルが存在する部分と中世ポルトガル語テクストを対照し、言語的特徴を体系的に分析するための基礎データを整備した。なお、本研究を遂行するなかで文献資料を中心に物品購入費が予定よりも必要となり、経費の全額を物品費に充てることになったが、研究環境の充実により本年度の成果をあげることができ、次年度への土台を築くことができた。ボエチウス(Boethius)原作の『哲学の慰め』(De Consolation Philosophiae)ほかを対象として、原文と翻訳、翻訳と翻訳などの「間テクスト性」に関する具体的考察を行った。ラテン語に関しては、『哲学の慰め』の中世における各種ラテン語注釈書を比較検討し、注釈者の言語的あるいは思想的な観点の相違を観察するとともに、この作品の後世における翻訳への注釈の影響を考察した。
低湿地からのメタン放散量推定に関する研究

本研究では低湿地からのメタン放散をモニタリングし、気候、地下水文、土穣物理・化学、地形、植生及び微生物生息条件とメタン放散との関連を明らかにしようとしたものである。特に土穣層におけるメタンの発生ゾーンと消費ゾーンのゾーニングと地下水位との関係、メタン発生速度影響因子及び地表面への輸送に影響する因子を明らかにし、反応(発生と消費)と運送のモデルからメタン放散のモデルを構築することである。地中の温度は季節によって大きく変動しており、微生物活性に大きく影響を与えることが予想される。そこで地中温季とメタンフラックスとの関係を調べると地表下20cmの温度と最も相関が高く、メタンフラックスが温度の対数に比例することが示された。メタンフラックスに影響を与える因子しとしては他にもいろいろな因子があるが、主として次の二つの因子、関与している微生物(メタン生成および酸化細薗)の相対的な活性に影響を与える因子および輸送速度に影響を与える因子がある。調査を行っている月ヶ湖湿原では別に調査を行ったアラスカツンドラ地帯と異なり、メタン生成・酸化細薗数ともに12オーダー少なく、生物活性が相対的に低いことが示された。これは恐らく亜寒帯湿原が泥炭化しており(高濃度フミン酸を含んだ低pH土穣)、微生物の生息にとって厳しい環境であるためと思われる。このように有機物を大量に含んだ湿潤な環境であるにもかかわらず、メタンフラックスがそれほど大きくならないものと思われる。
協同的思考と問題解決を基軸としたデザイン学習の開発と実証的研究

本研究は、中学校美術科のデザイン領域において、協同的思考と問題解決を軸にして題材を設定し、実践を行うことでその有効性を検証したものである。初年度は、教材開発の基盤となるデザイン理論や学習における協同的思考や問題解決、そしてデザインの作品鑑賞の観点から調査研究を行った。さらに、研究協力者とともにデザイン学習研究会を開催し、実践に向けた教材開発を行った。二年目は、協同的思考と問題解決を軸にして指導案を作成し、4校の中学校で検証授業を行うと共に、生徒に対してデザインに関する項目で意識調査を行った。実践題材名は「ティッシュBOXのリ・デザイン」「プロダクトデザイン・プロジェクト三方よし」「粟中発!夢のデザイナーになろう」「人や環境にやさしいプロダクトデザイン」などである。その結果、いずれの授業においても、共同で問題解決する楽しさを味わった生徒が多い反面、最初の問題発見の段階において学習の困難性が高いことがわかった。意識調査は「デザイン・イメージ」、「商品購入の条件」、「共同思考や問題解決への興味・関心」、「デザイン鑑賞への興味・関心」、「デザイン題材への興味・関心」の観点で行った。その結果、特に「協同的思考による学習」は男女とも必要性が高く、楽しいと答えている。一方、「鑑賞や題材への興味関心」の項目では、男女差が明確にあり、男子は「映像メディア関係」、女子は「アクセサリーやファッション」への興味関心が高い。生徒の興味関心を喚起しながら、鑑賞を中心としたデザイン学習の実践が今後の課題である。そして、本研究に関連したデザインの歴史研究として、昭和30年代の普通教育におけるデザイン教育の動向や教師も間所春に焦点をあてた研究を行った。平成18年度は、デザイン学習に関する基礎的な文献収集及びデザイン学習試案のための理論的背景を調査研究することを目的とした。まず、国内の専門および普通教育におけるデザイン教育に関する論文、教科書、文献などの収集、調査によって、現在のデザイン教育の目的、方法、内容について先行研究を行った。特に、調査の観点として、協同的思考や問題解決、デザイン分野の鑑賞をキーワードとして、基礎的な文献調査を行った。そこでは、認知心理学にみられる状況的なアプローチやアフォーダンス理論、相互行為などの学問領域にみられる知見も含まれ、さらに「総合的な学習」との関連及び発展に関しても視野に入れつつ、文献及び実践資料の収集を行った。特に、総合的な学習における課題解決学習とデザイン学習の共通点及び相違点、グループ学習や協同的思考の有効性等の知見を得ることを目的とした。また、「問題解決(デザイン・プロセス)」理論では、ピーター・グリーンによる「デザイン・プロセス理論」や企業、専門家でとられている発想法やアイデア創出、デザイン方法論についての各種文献を収集や調査をおこなった。一方で戦前・戦後のデザイン教育実践に影響を与えた構成教育に焦点をあて、間所春を通してデザイン教育の一面を浮き彫りにすることができ、成果を論文としてまとめることができた。以上のような基礎的な研究成果をふまえつつ、中学校美術教師4名(研究協力者)とともに研究会を開催し、次年度で実施するデザイン学習の具体的な題材開発と分担について協議した。平成19年度は,中学校4校の研究協力者と共同で中学校デザイン題材案を作成し,検証授業を行うと共に中学生のデザインに対する意識調査を行った。デザインの学習題材においては,「協同的思考」と「課題解決」を主軸にして,「ティッシュBOXのリ、デザイン」「プロダクトデザイン、プロジェクト三方よし」「粟中発!夢のデザイナーになろう」「人や環境にやさしいプロダクトデザイン」などの題材を作成した上で実践を行い、成果を検証した。その結果として,デザイン学習を通して社会と美術のつながりをより意識するようになった生徒や共同で問題を発見し,解決していく学習の楽しさを味わった生徒が多かったという結果が出た。しかし,一方で既成の製品に対して疑問や問題点を指摘する,いわゆる問題発見の部分において,生徒の困難性が高いことがわかった。

また,デザインに関する中学生の意識調査では,「デザイン、イメージ」,「商品購入の条件」,「共同思考や問題解決への興味、関心」,「デザイン鑑賞への興味、関心」,「デザイン題材への興味、関心」の観点で行った。その結果,共同思考による学習は男女とも必要性があり楽しいと答えている生徒が多い。鑑賞や題材への興味関心の項目では男女差があり,男子は「映像メディア関係」,女子は「アクセサリーやファッション」への興味関心が高い。この研究に関連した歴史研究として,デザイン学習における実践の意義を探るため,昭和30年代の普通教育におけるデザイン教育の動向および,間所春のデザイン学習に焦点をあてた研究を行った。
中枢性疼痛の発症機序における長鎖脂肪酸受容体 GPR 40 の関与

脳卒中後疼痛(CPSP)は、脳卒中後の難治性合併症であり、神経障害性疼痛の一つとして知られる。これまでに我々は、長鎖脂肪酸の受容体であるGPR40が、視床下部でのβ-エンドルフィンの遊離を介して疼痛を制御することを報告した。そこで本研究では、CPSPを模する全脳虚血モデルを用いて、CPSPに対するGPR40の関与について検討した。BCAO3日後の後肢において認められた痛覚過敏反応は、GPR40アゴニストであるGW9508の処置によって有意に抑制され、その作用はアンタゴニストであるGW1100によって消失した。すなわち、CPSPに対する治療標的として、GPR40が有用である可能性が示唆された。しかしながら、CPSPに対する有効な治療薬はほとんど無く、早期の治療法確立が望まれている。さらに近年、長鎖脂肪酸の遊離を制御する因子の一つとして、グリア細胞であるアストロサイトが注目されている。そこで本研究では、CPSPを模する全脳虚血モデルを用いて、CPSPに対するGPR40およびアストロサイトの関与について検討した。5週齢のddY系雄性マウスに、30分の両側総頸動脈閉塞法(BCAO)を施し、全脳虚血モデルを作成した。BCAO 3日後に、GPR40の選択的アゴニストGW9508 (0.1, 1 μg/mouse)を脳室内投与し、von Frey testにより機械的刺激に対する疼痛評価を行った。GPR40の選択的アンタゴニストGW1100 (10 μg/mouse)は、GW9508投与10分前に脳室内投与した。BCAO 3日後の後肢において認められた痛覚過敏反応は、GW9508の処置によって有意に抑制され、その作用はGW1100によって消失した。BCAO1、3、7日後のGPR40の発現量はなんら変化しなかった。一方で、BCAO 5時間後において、アストロサイトの指標であるglialfibrillaryacidic proteinの発現量がBCAO群で有意に抑制された。以上の結果から、CPSPに対する治療ターゲットして、GPR40が有用である可能性が示唆された。さらに、CPSPの発現機序の一部に視床下部におけるアストロサイトの関与が考えられた。脳卒中後の難治性の後遺症の1つである脳卒中後疼痛(central post-stroke pain : CPSP)は、神経障害性疼痛の1つとして分類され、脳卒中患者の約1-14%に発症する。現在は、神経障害性疼痛治療ガイドラインに準じた薬物治療や外科的治療が行われているが、根治させることは困難であることが言われており、有効な治療法の確立が急がれている。今年度の研究では、脳卒中後疼痛に関与する因子を網羅的に検討するために、脳卒中後疼痛を模倣する動物モデルに対し、二次元電気泳動法によるプロテオソーム解析を用いて、新規関連因子の同定を行った。さらに、本モデルに対し、既存の神経障害性疼痛治療薬の効果を検討した。BCAO 1日後の疼痛発現に関与する因子をプロテオーム解析によって網羅的に解析した。その結果、関与する可能性のある4つの因子(N(G), N(G)-dimethylarginine dimethylaminohydrolase-1, dihydropyrimidinase-related protein-2 or -3, myosin regulatorylight chain-2)の同定に成功した。BCAO 3日後の後肢において認められた機械的アロディニアは、イミプラミン、ガバペンチン、メキシレチンおよびモルヒネ投与群において、対照群に比較して有意な抑制が認められた。しかしながら、インドメタシンおよびカルバマゼピン投与群では、対照群と何ら変化が認められなかった。以上の結果から、脳卒中後疼痛に関与する因子が明らかとなり、その関連を詳細に検討することによって、脳卒中後疼痛の新規治療戦略を確立できる可能性が示唆された。精神神経薬理(理由)平成25年度の計画では、長鎖脂肪酸受容体GPR40と脳卒中後疼痛との関連について解明することを主軸としていたが、本実験条件下における脳内GPR40の発現変化を検討するのに予想より時間がかかってしまった。しかしながら、有益な結果を得ることができ、現在論文投稿中である。平成26年度の計画の沿って行う予定である。

特に、脳卒中後疼痛に関与する因子を網羅的に検討するために、マイクロアレイまたは、二次元電気泳動法を用いたプロテオソーム解析を用いて、新規関連因子の同定に着手する。
日本の芸能「能」の演奏技法の伝承過程に関する歴史的研究‐能管を中心に‐

本研究は、「能」という芸能で用いる「能管」という横笛の演奏技法の形成と伝承の歴史的過程を、現存する古楽譜の所蔵調査・網羅的収集・丹念な分析と解読を通して明らかにしようとするものである。今年度は、早稲田大学坪内博士記念演劇博物館と早稲田大学中央図書館を中心に史料調査を進めた。そして、一噌流宗家伝来の史料として、『貞享三年符』、『順勝院噌善手記』、『能学(ママ)秘伝書』などをはじめとする重要な史料の存在を確認した。『貞享三年符』は能一曲ごとの笛の手を記した頭付譜で、享保三年の奥書を持ち江戸初期の四世一噌六郎左衛門の手によると推定される。常用演目から稀曲までが網羅的にまとめられており、流儀の初期段階の、いまだ流動的であった演奏技法を窺うことができる頭付譜と考えられた。一方、『順勝院噌善手記』は『能学秘伝書』と併せて一冊だった史料で、享保十六年六世一噌又六郎の奥書を持ち、全文が「多吉」とされる人物へ相伝した内容を持つ。演奏の心得や、〈翁〉〈高砂〉の頭付譜を記しており、流儀の演奏技法の大筋が確立した江戸中期の実態が具体的に窺える史料と位置づけられた。以上の主に三点は、流儀の演奏技法が形成されてから確立するまでの時期に編まれたもので、演奏技法の形成と伝承の過程を具体的に知ることのできる重要な史料と判断し、翻刻作業を進めた。この作業は分析に向けての土台をつくる基礎研究であるが、今年度はそこに終始してしまったので、今後の研究に活かしていきたい。一噌流宗家伝来の史料として、江戸時代初期から中期にかけての宗家の手による重要な伝書と頭付譜を数点確認できたことは収穫であった。しかし、1各史料の翻刻作業に時間を要したこと、2頭付譜は演奏家の備忘録であるため、記述内容に差異があり、それぞれの史料の性質を読み解くのに時間を要する、などの研究上の制約があり、今年度は史料調査と翻刻という基礎研究に終始し、収集した史料を具体的に読み解いて、研究成果を口頭発表や論文の形などにまとめられなかった。そのため、進捗状況は「やや遅れている」としたい。引き続き、史料調査を進めるとともに、『貞享三年符』『順勝院噌善手記』『能学(ママ)秘伝書』などの重要な史料の翻刻を完了させる。併せて、新たに調査・収集した史料の翻刻作業も行う。翻刻を終えた史料は、具体的に内容を解析する。その際、必要に応じて専門能楽師の協力を仰ぎ、様々な解釈の可能性を追求したい。

調査の優先度により、遠方での史料調査を行わなかったため、当初予定していたより旅費が不要となった。今年度は史料調査を拡大し、旅費ならびに史料の複写製本費として使う予定である。
タンパク質に新たに見出された結び目構造のフォールディング機構の解明

タンパク質は、リボソームでポリペプチドとして合成された後、自発的にあるいはシャペロンの力を借りて正しくフォールディングすることにより、機能を獲得する。申請者らは、まずタンパク質合成に必須なtRNAのアミノ酸受容末端である3'CCA末端の合成・修復に働くCCA付加酵素とtRNAプライマーと新たに結合すべきATPの複合体のX線結晶構造解析を行い、CCA付加酵素がいかにDNAの鋳型なくして特定の配列のRNAを重合できるのかを世界にさきがけて解明した(Nature,2004)。さらに、申請者らは、リボソームRNAおよびtRNAのメチル化修飾に携わるSpoUファミリーメチル基転移酵素(それぞれRrmA、TrmH)が、その触媒ドメインに特徴的な結び目(knot)構造を持つこと、そのknot構造は、触媒部位の構築、メチル基供与体(S-アデノシルメチオニン)の結合部位の構築、分子の2量化を介するRNA依存的メチル基転移反応に働いていることを明らかにした(Structue,2004)。これらメチル基転移酵素のknot構造がどのようにフォールディングし形成されるのかを解明するため、TrmHに様々な変異を導入した結果、knotよりC末端側に変異を導入するとknotが巻かなくなることから、C末端側のペプチド部分がループをくぐって結び目ができることがわかった。さらに、TrmHの変性実験を行ったところ、尿素では変性せず、5Mグアニジン塩酸で変性するものの、10ms以内に準安定な状態(約半分の2次構造が復活した状態)になり、そこから約8時間という長い過程を経て、もとのknot構造に巻き戻り、活性も回復することが明らかになった。さらに、TrmHがknotを巻くとN末端ヘリックスとC末端ヘリックスが寄り合うことを利用し、N末端のヘリックス中に存在するArg17をCysに置換し、これをIAEDANCEで標識し、C末端ヘリックス上のTrp191によって励起された結果のFRETを観測する事で、変性状態から巻き戻る過程を経時的に観測した。その結果、経時的にFRETが上昇し、TrmHがknotを巻く過程を視覚化する事に初めて成功した(論文準備中)。すべての生物でtRNAのG18をメチル化するGm18 methyltransferase (TrmH or SpoU)の結晶構造を1.85Å分解能で決定した(Structure,2004)。その結果、その触媒ドメインには「深い三つ葉様結び目」が存在し、N末端のヘリックスとC末端のヘリックスは近づいてcoiled-coilを形成していた。変異体の反応速度論的な解析から、この結び目構造は、活性部位の形成、メチル基供与体であるS-adenosyl-methionineの結合ポケットの形成、分子の2量体化に寄与していることが明らかになった。さらに、分子が2量体を形成すると、1サブユニットのArg41がもう1サブユニットの活性部位に入り込み、そこにtRNAのG18が結合すると、そのリン酸基によってArg41が活性化され、逆にG18の2'OHのプロトンを引き抜き、活性化された2'OHがS-adenosyl-methionineのメチル基を求核攻撃するという、「RNA-dependent methylation」メカニズムを提唱することができた。この反応機構に、結び目構造が寄与していることになる。さらに、この重要な結び目構造がどのようにフォールディングするのかを明らかにするために、変性実験を行ったところ、5Mの尿素では全く変性が見られず、塩酸グアニジンを用いて変性することができた。巻き戻し実験を行ったところ、瞬時に半分の2次構造が巻き戻った中間状態になるものの、完全に巻き戻るには8時間がかかることが明らかになった。この中間状態の構造を決定するため、高圧NMRでの解析を行うとともに、このゆっくりとした巻き戻り過程をFRETを用て解析するための変異体を作成し、解析を行っている。また、この巻き戻り過程にGroEL/ESが関わっている可能性があり、結び目を作らない変異体を用いて、無細胞タンパク質合成系での巻き戻り実験を行っている。

さらに、TrmHの変性実験を行ったところ、尿素では変性せず、5Mグアニジン塩酸で変性するものの、10ms以内に準安定な状態(約半分の2次構造が復活した状態)になり、そこから約8時間という長い過程を経て、もとのknot構造に巻き戻り、活性も回復することが明らかになった。さらに、TrmHがknotを巻くとN末端ヘリックスとC末端ヘリックスが寄り合うことを利用し、N末端のヘリックス中に存在するArg17をCysに置換し、これをIAEDANCEで標識し、C末端ヘリックス上のTrp191によって励起された結果のFRETを観測する事で、変性状態から巻き戻る過程を経時的に観測した。その結果、経時的にFRETが上昇し、TrmHがknotを巻く過程を視覚化する事に初めて成功した(論文準備中)。
生体内におけるインクレチンGIPの骨代謝に及ぼす影響について

骨芽細胞特異的GIP受容体欠損マウスの表現型を解析した。まず、各臓器のGIP受容体の発現量を検討したが、野生型(floxed GIP受容体)マウスと比較して、骨芽細胞特異的GIP受容体欠損マウスでは骨、膵島、脳、腸、内臓脂肪、皮下脂肪、褐色脂肪の各臓器でのGIP受容体発現量に有意差を認めなかった。次に、軟X線を用いて骨芽細胞特異的GIP受容体欠損マウスの全身骨長を測定したが、こちらも野生型マウスと比較して有意差を認めなかった。さらに、骨芽細胞特異的GIP受容体欠損マウスと野生型マウスに対して糖負荷試験を行い、糖代謝を解析したが、耐糖能、GIP、インスリン分泌能、いずれにも有意差を認めなかった。また、μCTを用いて骨密度解析を行ったが、こちらも有意差を認めなかった。一方、骨芽細胞培養、破骨細胞培養、cell lineでのGIP受容体発現を確認したが、これまでに報告があったGIP受容体発現は、初代培養を用いても確認することができなかった。骨芽細胞特異的GIP受容体欠損マウスを作成できたが、骨代謝に変化が見られなかったことから、骨芽細胞培養、破骨細胞培養、cell lineでのGIP受容体発現を検索したが、こちらでもGIP受容体発現を確認できなかったことから。破骨細胞特異的GIP受容体欠損マウスの作成、さらには骨芽細胞および破骨細胞特異的GIP受容体ダブル欠損マウスを作製し、骨芽細胞および破骨細胞に発現する、GIP受容体の双方が欠損した状態での骨組織を評価する。
心血管組織におけるアドレノメデュリンの役割の分子機構の解明

食塩負荷ラットの解析:高食塩負荷時のAMの役割を解明することを目的として、ラットに高塩食(8%NaCl)を負荷した。食塩負荷28日後に血中AM濃度が上昇し、腎臓と副腎におけるAMとAM受容体(RAMPとCRLR)のmRNA発現も増加した。食塩負荷により血中アルドステロン濃度が低下しており、アルドステロン分泌を含めた水電解質調節におけるAMの役割が示唆された。AM受容体の解析:hRAMP1の細胞外ドメインにおいて、受容体特異性を決定する部位を特定することを目的として以下の実験を行った。hRAMP1のアミノ酸残基78-80、88-90、91-94、96-100、101-103の欠損変異体を作成して、hCRLRとともにHEK293細胞に発現させたところ、91-94、96-100、101-103の欠損変異体は、CGRP結合とCGRPまたはAMによる細胞内cAMP上昇を完全に抑制した。また、78-80、88-90の欠損変異体は、AMによるcAMP反応を抑制した。一方、91-103のアミノ酸残基を1残基ずつアラニンに置き換えて、cAMPの反応性を観察したが、アラニン置換によりCGRPに対する反応性にほとんど変化はみられなかった。すなわち、この部位がCGRPやAMとの結合に直接的に関与するのではなく、間接的に受容体の特異性を決定していると考えられた。心臓への圧・容量負荷とAM受容体発現:ラットにおける心臓への圧または容量負荷により左室CRLR、RAMP-2または3の遺伝子発現が増加し、それらの発現は、左室AM遺伝子発現の増加と有意に相関していた。すなわち、圧または容量負荷モデルの左室では、AMとAM受容体構成蛋白の遺伝子発現が関連して増加しており、左室の局所調節因子としてのAMの役割を裏付ける結果が得られた。目的と方法:AMは強力な降圧作用を有する生理活性ペプチドであり、PAMPはAMの前駆体ペプチドから生成され、AMと同様に降圧作用を有するペプチドである。本研究では、1)培養心筋細胞からのAMの分泌におけるprotein kinase C(PKC)とCa-カルモジュリン系の関与、2)心筋細胞におけるAMの受容体(CRLRとRAMPs)の発現とその調節、3)ヒト血管平滑筋細胞からのAMとPAMPの分泌とその調節を検討した。結果:1)培養新生児ラット心筋細胞からのAM分泌は、アンジオテンシンII(AngII)やウシ胎児血清などの液性因子により分泌が亢進した。PKCやCa-カルモジュリン系のagonistまたはantagonistを添加して、AMの分泌とpreproAM遺伝子発現を観察したところ、AM分泌とpreproAM遺伝子発現は、フォルボルエステルやCaイオノフォアにより増加し、これらの増加はPKC阻害薬やCaチャンネル拮抗薬により抑制された。2)エンドセリン-1(ET-1)は心筋細胞のAMに対するcAMPの反応を増幅させ、RAMP-3の発現を増加させた。3)培養ヒト血管平滑筋細胞にアルドステロン(Ald)を添加したところ、preproAM遺伝子発現が増加してAMの分泌が増加したが、PAMPの分泌には変化がなかった。結論:1)AngIIはPKCやCa-カルモジュリン系を介して心筋を肥大させるが、これらの細胞内伝達系は同時にAM分泌を亢進させる。分泌されたAMは心筋細胞の肥大を抑制し心線維芽細胞の増殖を抑制することを考慮すると、AMが心肥大や心筋リモデリングに対して抑制的に作用している可能性が高い。