hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フランス・モダニズム研究―ダダ・シュルレアリスムの周辺

本研究を構成する5つの柱に則して、今年度の成果を以下にまとめる。1.レーモン・ルーセル研究-ルーセルの『新アフリカの印象』における挿絵に注目して、ルーセルにおけるイメージの問題に取り組んだ。ルーセルの作品における文章と挿絵の関係を、彼が『アフリカの印象』中でも使っている活人画の変奏として見る可能性が見出されたと考えている。今後は、その裏づけをおこなわねばならないだろう。2.アルチュール・クラヴァン研究-本年度は、これまでのまとめとして、彼の残した数少ない文章や書簡を再検討してクラヴァン像をさらに掘り下げるとともに、クラヴァンが滞在した時期のバルセロナ、ニューヨーク、メキシコ市の文化状況について調べ、20世紀初頭のモダニズムにおけるクラヴァンの位置も明確になってきている。3.ミシェル・レリス研究-レリスの文学活動をモダニズムとエキゾティシズムの交錯点からとらえる視点が、昨年度来、われわれにはもたらされたわけだが、1950年代までの闘牛への関心と、その後顕著になってくる舞台芸術(とりわけオペラ)への関心に注目するとともに、両者を結ぶものとして民族学における憑依の問題に焦点を絞る可能性を検討した。4.ダダ・シュルレアリスム研究-昨年度に注目したベンヤミンとシュルレアリスムの類似点をさらに探求するとともに、とりわけ無意識という観点から、シュルレアリスムと視覚芸術のかかわりを調べた。メディアとして新しく、まさにモダニズムとは切り離せない写真や映画とダダ・シュルレアリスムの関係は、今後、重要なテーマとなるはずである。5.20世紀文化・社会・思想研究-上記の14のテーマからはややずれるものとして、ヴィクトル・セガレンによって提唱されたエキゾティシズムをポスト・コロニアリズムの問題とからめて見直すとともに、20世紀の視覚芸術の展開を「無意識」と「身体性」をキーワードにして探った。両者に共通するのは「外」の問題系であることも明らかになりつつある。1.レーモン・ルーセル研究-『新アフリカの印象』の挿絵から出発して、ルーセルの作品におけるイメージの問題を、活人画・写真、映画と比較しつつ調べ、それが彼独特の死と再生のテーマにかかわっていた点を明らかにし、仏語の論文にまとめた(2003年中に刊行の予定)。2.アルチュール・クラヴァン研究-これまでのアルチュール・クラヴァン研究を一冊にまとめ、『詩人とボクサー-アルチュール・クラヴァン伝』として上梓した。これにより、いままで謎に包まれてきたこのダダの先駆者に光を当て、さらに、その周辺の動きをとおして、20世紀初頭のモダニズムを照射することもできたと考えている。3.ミシェル・レリス研究-レリスの文学活動をモダニズムとエキゾティシズムの交錯という視点からとらえ、彼の自伝的エッセーと民族学関係の著作の関係に注目し、とりわけ憑依の問題についての研究を進めている。4.ダダ・シュルレアリスム研究-シュルレアリスムをブルトン以外の視点から見直す意味でも、ロベール・デスノスに注目し、その作家論に着手した。一方、一昨年度に分析したベンヤミンとシュルレアリスムの類似点をさらに探求し、映画などの「複製技術時代の芸術」とも関連づけて論文にまとめた。5.20
骨肉腫におけるメソトレキセート耐性機構の分子生物学的解析

14例の骨肉腫臨床材料を使用した。1、Rb変異とメソトレキセート(MTX)耐性:Rb遺伝子のSouthern blot解析またはRb蛋白の免疫染色性より6例においてRb変異を認めた。これらは全て画像上も組織学的にもMTX耐性と判定され、変異が検出されなかった8例と比較し有意差を認めた。これはRb変異をもつ細胞株がMTX耐性を示したin vitroの実験結果と同様であった。2、p53変異とMTX耐性:p53遺伝子のPCR-SSCP-direct sequence解析またはp53蛋白の免疫染色性より10例において変異を認めた。このうちMTX耐性と判定されたものは5例であり、p53変異はRb変異と異なりMTX耐性機構への関与は少ないことが示唆された。以上より臨床において骨肉腫のMTX耐性機序としてはRb遺伝子変異が重要であり、昨年度のデータと合わせるとRb変異例でのdihydrofolate reductaseの発現増強が直接関与すると考えられた。一方、p53変異やMTAP欠失はMTX耐性への関与は少ないと思われた。4、cDNA microarrayによるMTX耐性に関与する分子の検索:今回、in vitroではMTX耐性骨肉腫株が得られなかったため、ヌードマウス可移植株MNNG/HOSを用いてin vivoでの耐性獲得を試みている。2、臨床材料におけるMTX耐性機構:原発巣の生検材料で臨床および感受性試験上、MTX耐性を示した7例と感受性のあった11例で、DHFR mRNAの発現量に差はなかった。転移巣8例は全例MTX耐性を獲得しており、このうち6例では原発巣に比してDHFRの発現が増強していた。DHFRの発現増強が骨肉腫におけるMTXの耐性獲得機構として重要であり、自然耐性にはその他の因子の関与が示唆された。3、DHFR遺伝子増幅の解析:Southern blottingでは、用いた全ての細胞株、臨床材料においてDHFR遺伝子増幅を認めなかった。4、cDNA microarrayによるMTX耐性に関与する分子の検索:生検材料のMTX耐性例と感受性例それぞれ3例を用いて、Atlas^<TM>cDNA Expression Arrayで遺伝子発現プロフィールを比較した。全体としてプロフィールは近似していたが、いくつかの遺伝子で発現の差を認めた。しかし差を認めた遺伝子群に一定の傾向はなかった。今後は樹立したMTX耐性株と親株で比較する予定である。
屋外環境構築における積雪造形手法の研究

降雪現象に現れる雪景がどのように変化するか、原寸モデルを制作し実雪による観察実験を行った。北欧の諸都市における降雪状況と人との関わりを調査し、次なるアイディアの示唆を得た。簡易モデルを幾つか制作し、模型雪による風洞実験を行い雪の形状変化の検証を行った。最終モデルを決定し旭川郊外の観光名所と協働し、最終年度には展覧会を開催した。雪国特有の環境を活かした景観の創出を広く市民に紹介した。1.調査1-1.冬季海外調査:北欧(2月14日3月5日:デンマーク、ノルウェー/1名)を訪ね、冬の屋外環境の様子について調査を行ない、資料を収集した。デンマークでは、例年になく積雪が多かったコペンハーゲン街中における積雪状況と人々の関わり方を観察した。また、ノルウェーにおいてはフィヨルドのダイナミックで迫力ある自然のランドスケープを視察することなどにより、積雪造形手法のヒントを得ることができた。1-2.研究機関訪問・樹氷視察:雪氷防災研究センター新庄支所、及び蔵王を訪ね(2月18日21日:新庄市・山形市/3名)、実験設備、樹氷の着雪の様子を視察、資料を収集した。積雪のしくみ、雪質、温度による形態形成への影響について知見を伺い、様々な形態が成立する樹氷を観察することにより、実験・観察の方法についてのアイデアの示唆を得ることが出来た。2.実験観察計画2-1.実験場所策定:実験モデル(原寸)設置・観察場所の候補地(旭川市郊外)を策定し、協力の可能性を打診、承諾を得た。実験モデル設置場所が確定されたことにより、22年度は具体的な実験計画を立案することが可能となった。3.実験形態創出計画3-1.形態アイデア創出:形のバリエーションをスケッチや、簡易モデルを制作し、形態形成についてのアイデアを作成・集積した。作成したアイデアの中から2案を選出し、民間会社と共同でモニュメントを公募していたデザインコンペへ応募(2009年12月)した。3-2.実験モデル試作:原寸のモデルを設計・試作(高さ違い3種)したことにより、積雪形態創出について、実寸で具体的に可能性を検討することができた。1、調査/冬季海外調査:北欧(1月25日2月2日:フィンランド/1名)を訪ね、冬の屋外環境の様子について文献・フィールド調査を行ない、資料を収集した。ロバニエミでは、ラップランド大学やアルヴァ・アアルト設計の図書館を訪ね、雪の造形物の歴史、意義などについて文献を調査した。街中では人工物(住宅、庭のフェンスなど)の積雪状況、それらと人々の関わり方を観察した。サーリセルカでは、自然のランドスケープを活かした人工環境を観察し、屋外環境構築についての人工物のアイデアの示唆を得ることができた。2、実験/(1)縮尺モデルによる実験:最終実験(設置・観察想定場所)の候補地(旭川市郊外"上野ファーム")のジオラマを制作し、積雪状況の予測と、モデル設置場所策定を行った。積雪アイデア検証のための縮尺モデルをジオラマ上に並べ、北方建築総合研究所(地方独立行政法人北海道立総合研究機構建築研究本部)にて、模型雪を使い風洞実験を行った。この実験は、最終実験想定場所における効果的な設置場所策定に有効であると考える。(2)原寸モデルによる実験:旭川キャンパス(東海大学芸術工学部)構内にて原寸モデル(3種)を使い実雪による原寸モデル設置方法、積雪状況の観察実験を行った。原寸モデルは、降雪前に設置、積雪の状況を適宜観察し、年間を通して設置可能な形態についての検討を行うため、雪が完全に解けた後も設置状態を保つよう計画した。(3)成果:上記2種の実験を通して、最終年度に行う旭川郊外の設置・観察想定場所での設置計画、設置モデルのアイデアがほぼ固まり、最終実験の計画立案が可能となった。3、経過報告/21年度の成果、22年度の途中までの実験の経過について、環境芸術学会で発表、芸術工学部紀要へ投稿した。平成23年度は、平成22年度に行った風洞実験による縮尺モデルの実験、原寸モデルの実験・観察を踏まえ、設置モデルを決定し、学外に設置、実雪による現場実験・観察により環境造景効果を検証した。また、研究成果を学外へ発表し、報告書にまとめた。1.設置モデルの決定・平成22年度に行った縮尺モデルによる風洞実験、原寸モデルによる設置実験(旭川キャンパス内)の内容を検討し、風雪によりモデル自体が揺れるアイデアをまとめ、簡易モデルにて検証し、最終設置モデルを決定した。2.設置モデルによる実験及び展覧会開催・設置モデルは、旭川市郊外の観光名所「上野ファーム(旭川市永山町のガーデン)」へ設置し、積雪状況や形態変化について観察・記録を行った。・設置モデルによる実験と並行して市民に開かれた展覧会「降雪現象に現れる雪景展」を開催した。会期中は旭川市の情報誌に紹介され、積雪から生まれる美しい形を広く市民に紹介することができた。また、展示期間中の記録写真をまとめた小冊子を作成し、道内外の関係者に配布し意見を求めた。

道外の関係者からは、北国特有の環境を活かした景観の創出である、という評価を得た。3.成果発表・寒地技術シンポジウム、東海大学産学連携フェア2011、旭川デザイ協議会「クローズアップデザイン」で発表、及びパネル展示を行った。また寒地技術シンポジウム論文・報告集に投稿した。一般住民や子供を対象として開催された雪氷学会北海道支部・地域講演会では、雪国の住民がどのように雪氷と付き合うかについて基調講演を行った。4.報告書侮成
マイクロ・フレーム・ツールの実現と微視的火災構造の実験的研究

マイクロフローム(以下、MFと略す)を基礎燃焼工学的な観点から研究することは、分子拡散作用による燃焼メカニズムを理解する新しいアプローチとなり、現況の数値燃焼解析能力と相互刺激することにより、微視的な領域での燃焼メカニズムが解明されるだけでなく、新しい知見が得られる可能性を秘めている。また、MFを医用工学にまで発展させることは、MFの持つ学術的な守備範囲を広げるだけでなく、多様な火炎の活用方法を生み出す原動力となる。さらにMFの基礎燃焼特性だけでなく医用工学的な観点から観察することを試み、特に、消化器系を対象に喉内から食道・胃・腸管に至る各部位の体内でMFを燃焼させることの意義とその可能性を検討した。本報では、体内燃焼における熱工学的な活用を具体的な課題から検討するために、MFの下限レイノルズ数付近での、熱源となる火炎領域の空間状態を直接撮影法により静止カメラとCCDカメラで可視化し、必要に応じて同時撮影を試み、MFを体内で燃焼させるために、0.8x0.3x1000mmの銅パイプを製作し、水平設置されたマイクロ火炎の火炎領域の空間状態とCHラジカルの燃焼工学的な観察を行った結果を示す。1)消化器系(喉内・食道・胃・腸管)に挿入可能なマイクロバーナを製作し、メタン燃料によるマイクロ拡散火炎を形成できることを示した。2)マイクロフレームの水平設置に対する火炎の空間的な状態を把握し、熱源としての火炎領域の特性をCHラジカル分布より静止カメラ,CCDカメラ直接撮影を行い、その空間特性を明らかにした。拡散火炎の本質を把握する上で、分子拡散作用による燃焼過程から火炎構造を理解することは、微視巨視的火炎構造の燃焼特性を明らかにする上で、極めて興味深い。特に、本研究で開発されたマイクロバ-ナ直径上に形成された拡散火炎(マイクロフレームと呼ぶ)は、定常拡散火炎が形成可能な下限レイノルズ数を具体的な数値で定量化することができ、分子拡散作用による火炎形成限界を明確にすることができた。これらの研究成果は、微視的拡散火炎構造からの燃焼限界や燃焼範囲等の物理的燃焼特性を詳細に説明するに留まらず、分子レベルでの燃焼工学的考察による深い議論を可能にする。また、近年機械制御分野では、マイクロロボット本体の研究開発は邁進しており、そのマイクロ・ツールとしての利用方向も十分に考えられ、工学・医学等の各分野に大きな成果が期待できる。本研究では、通常のマイクロフレームをさらに微小並びパルス化し制御する目的のために、マイクロバ-ナによる2重管を製作し、マイクロツールとしての拡散火炎の燃焼特性を直接撮影法により可視化し、その可能性を示唆した。2重マイクロバ-ナは、中心バ-ナから62.2%H_2+ 37.8%CH_4混合燃料を、周囲バ-ナからH_2燃料を噴出することにより、拡散火炎を形成した。形成された拡散火炎の直接撮影を行った。この火炎では、2重拡散火炎が形成されていることがうかがえる。周囲バ-ナには、水素拡散火炎を形成させているため、単独燃焼ではOH発光(306.4nm)のため直接撮影法では可視化できない。この結果、中心バ-ナからの混合燃料中のメタン燃焼によるCHバンド発光がOH発光と重なるため火炎の存在が可視化できることを示している。2重に観察される内側の火炎輪郭は、中心バ-ナからの水素燃料による火炎領域を表しており、その外側には、周囲バ-ナからの水素燃料による火炎領域が広がっている。この方式により単純バ-ナ時の拡散火炎長さ(1=3.48mm)の1/3の拡散火炎を形成できることを示した。これを利用することにより単純バ-ナで形成不可能な微小拡散火炎と安定した拡散火炎を実現でき、マイクロツールとしての火炎を実現できる可能性を示した。
連鎖球菌由来SLS関連因子の分子機能解析と感染制御への応用

連鎖球菌が産生する細胞溶解毒素、分子内環状構造形成毒素、N末端追加ドメイン含有毒素、のファミリーから膜コレステロール依存性、ヒト特異性、小児川崎病との関連性などに目を向けて機能解析を行った。細菌感染臓器における深部膿瘍形成因子であるコレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)やインターメディリシン(ILY)、小児川崎病発症因子の可能性が高いヒト血小板凝集因子(Sm-hPAF)、流産との関連が疑われるバジノリシン(VLY)、を題材として、細菌感染時に対症療法的に使用される非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)の連鎖球菌由来毒素の活性修飾についての解析を進めた。1)SortaseA機能を利用した膜間ペプチド転移ツールに関する解析:グラム陽性菌が産生するSortaseA(SrtA)の転移反応を利用した薬物送達システムの構築を試行した。転移対象タンパク質中の転移配列(LPXTG, Xは任意のアミノ酸)を認識してTG間で切断し、そのN末端側を受容配列オリゴG(≧GGG)のN末端αアミノ基に転移する機能を持つSrtAを用いて、転移基質あるいは受容基質となるペプチドを調節することで、標的化分子であるLTBPを含むペプチドを転移したリポソームは、標的がん細胞に対する結合性を示した。2)細胞溶解活性における静電ポテンシャルフィールドの役割:カルジオトキシン(CT)への2個のアミノ酸挿入によって生じたカルジオトキシン様塩基性タンパク質(CLBP)は細胞溶解活性を持たない。CLBPが細胞溶解活性を消失した要因を動的構造解析から検証した。CTとCLBP間で挿入部位の二面角などの変化はみられず、また、立体疎水性度の変化も確認できなかったが、静電ポテンシャルフィールドの分布様式がCTとCLBPで顕著に異なることを見いだした。また、CLBPは血液凝固阻害因子であるX因子結合タンパク質(X-bp)と相同性を有し、2量体化したCLBPが、X-bp様な機能を有している可能性を報告した。3)ボンクレキン酸アナログによるエネルギー産生の制御:ミトコンドリアADP/ATP透過担体の阻害剤として知られるボンクレキック酸の誘導体17個を作成し、そのADP/ATP透過担体阻害について検証した。KH-1、KH-7、KH-16、およびKH-17がスクリーングで検知され、そのなかで、KH-7は内膜の電子伝達系を阻害することなく、ADP/ATP透過担体を特異的に阻害することが明らかになった。本研究課題に関わるウェット系の実験手法(遺伝子操作、細胞培養、タンパク質の生成・修飾、ツールの設計・合成など)はこれまでに十分な運用実績があり、実施過程で不具合が生じにくい。また、各種ライブラリーも整備されてきており、柔軟かつ迅速に対応できる体制が構築できつつある。ドライ系の実験に関しても、低分子からタンパク質まで幅広く対応できるツール(分子力学法MM、分子動力学法MD、分子軌道法MO、ホモロジー解析、ドッキング解析、キャビティー解析など)が整っており、研究の進捗に応じてきめ細かく調節が可能である。また、共同研究者、研究協力者との定期的な打ち合わせによって、得られたデータを開示して議論することで、問題点や研究の進め方が明確にできた。これらの理由から、概ね順調に進展している。3)CDCにおいて糖との相互作用が報告された。S.intermediusが産生しヒト型CD59を受容体とするILYについて単糖との相互作用を検討した。ILYの溶血活性および細胞膜結合性はD-ガラクトースの存在下で抑制され、in silico解析からILYとD-ガラクトースの相互作用はILYの膜作用部位で予測された。D-ガラクトースはILYの細胞膜結合を阻害して溶血活性を抑制し、D-ガラクトース誘導体はS.intermedius感染症の新規治療薬として期待される。本研究に関わる実験系(ウェット)は、遺伝子操作や細胞培養、タンパク質の生成・修飾、ツールの設計・合成などこれまでの運用実績が十分にあり、実施過程で不具合が生じにくい。万が一、不具合が生じても即座に対策を講じることができる。また、各種ライブラリーも整備されつつあり、柔軟かつ迅速に体制が構築できている。解析系(ドライ)に関しても、低分子からタンパク質まで幅広く対応できる解析ツール(分子力学法MM、分子動力学法MD、分子軌道法MO、ホモロジー解析、ドッキング解析、キャビティー解析など)が整っており、研究の進捗に応じてきめ細かく調節が可能である。また、共同研究者、研究協力者との定期的な打合せによって、得られたデータを開示して議論することで、問題点や研究の進め方が明確にできた。細菌感染臓器における深部膿瘍形成因子であるコレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)、ヒト細胞にのみ親和性を示し重篤な症状を引きおこすインターメディリシン(ILY)、小児川崎病発症因子の可能性が高いヒト血小板凝集因子(Sm-hPAF)、流産との関連が疑われるバジノリシン(VLY)、を題材として考えるとき、細菌感染時に対症療法的に使用される非ステロイド性抗炎症薬(NSAIDs)の連鎖球菌由来毒素の活性修飾についての解析を進めた。N-phenylanthranilic acid構造を持つNSAIDのミトコンドリア透過性遷移(mPT)誘導能を立体疎水性パラメータ(dGW)を指標に検証した。

メフェナム酸は無機リン酸依存的にmPTを誘導した。ジフェニルアミンはPiに非依存的にmPTを誘導した。メクロフェナムは低濃度からmPT誘導した。また、セレコキシブによるmPT誘導はシクロスポリンA (CsA)で阻害されず、カルシウムによるmPT誘導とは異なる性質と確認できた。セレコキシブはSF6847の脱共役作用を阻害し、ミトコンドリアマトリックスからALDH2、HMGCS2の遊離を誘発するなど膜作用を介して機能を発現していた。現在、標的細胞認識機構を解析し、感染および症状発現の制御、ならびに、治療薬開発について模索している。また、グラム陽性菌由来SrtAの転移反応を利用し薬物送達システムを構築した。転移基質あるいは受容基質となるペプチドを調節することで、標的化分子LTBPを含むペプチドを転移したリポソームは標的がん細胞に結合性を示した。連鎖球菌が産生する細胞溶解毒素、分子内環状構造形成毒素、N末端追加ドメイン含有毒素、のファミリーから膜コレステロール依存性、ヒト特異性、小児川崎病との関連性などに目を向けて機能解析を行った。細菌感染臓器における深部膿瘍形成因子であるコレステロール依存性細胞溶解毒素(CDC)やインターメディリシン(ILY)、小児川崎病発症因子の可能性が高いヒト血小板凝集因子(Sm-hPAF)、流産との関連が疑われるバジノリシン(VLY)、を題材として、細菌感染時に対症療法的に使用される非ステロイド性抗炎症薬(NSAID)の連鎖球菌由来毒素の活性修飾についての解析を進めた。1)細菌に由来する細胞溶解毒素(サイトライシン)によって膜孔が形成したヒト細胞内へのカルシウム流入と、それによる小胞体からのカルシウム流出によって、ミトコンドリア内膜が受ける影響について検証する。指標の1つとして透過性遷移の亢進があり、ミトコンドリアの膨潤とそれにともなう膜間スペースからのタンパク質の放出を検知する。古典的CDCとILYでは膜コレステロールへの親和性が異なることから、これら毒素によるカルシウム誘発性カルシウム放出に差異が生じることが予想される。2)S. anginosusに由来するSLSペプチドは膜修飾能を有している。細菌感染にともなって、膜孔を経由してSLSペプチドが細胞内へ到達することは十分に考えられる。SLSは広く細胞膜へ作用を示すことから、ミトコンドリア内膜への効果を検証する。内膜構造が変化したことに伴う、電子伝達系の機能失調のひとつであるATP産生の低下などを指標として検証する。1)S.mitis由来Sm-hPAFは従来のCDCが持つ4つのドメイン(d1-d4)に加えてN末端側にエクルトラのドメイン(d0)を有し、細胞溶解と血小板凝集という多機能性を示す。Sm-hPAFの他にもA21-10AやNm-76といったエクストラドメイン保持毒素(Ex-CDC)が存在する。現在これらEX-CDCのd0およびd1-d4の構造機能解析を順次進めている。また、d0とd1の間を連結する部分の構造に関する報告は未だなく、その解析を試行する。2)Ex-CDCの細胞膜認識と接着にはd4が関与するが、細胞溶解時の分子全体の挙動は不明である。
シオミズツボワムシ腸管内における魚病細菌の病原性関連遺伝子群の解析

シオミズツボワムシを介して仔魚に疾病を引き起こす魚病細菌の発症機構を解明するため、ワムシと魚病細菌の関係について研究を行った。実験に用いた細菌(A. hydrophila、E. tarda、P. damuselae、P. plecoglossicida、V. anguillarum、V. ichthyoenteri)は、パルスフィールドゲル電気泳動によるジェノタイピング法で分類して最適株を選択した。ワムシ培養液に魚病細菌を添加した結果、培養液1ml当たり4乗の魚病細菌を添加してもワムシの生活史に影響がないこと、ワムシ1個体当たり3.67E+2 CFUの細菌が取り込まれることを明らかにした。シオミズツボワムシの腸管内に取り込ませた魚病細菌と通常の人工培地で培養した魚病細菌のタンパク質発現パターンを網羅的に比較し、発現の異なるタンパク質と魚病細菌が生産する病原性物質との関連を明らかにすることで、魚類における細菌性疾病の発症機構の一端を明らかにするのが本研究の目的である。昨年度の研究で、魚病細菌のシオミズツボワムシに対する病原性の有無、効率よくシオミズツボワムシ腸管内に魚病細菌を取り込ませる菌濃度を明らかにした。今年度は、シオミズツボワムシに取り込ませる魚病細菌の菌株の違いによるタンパク質発現の相違を遺伝的に解析するため、パルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)による全ゲノムDNA用いたジェノタイピングを行った。PFGEを行う為に、損傷のないゲノムDNA精製法、ジェノタイピングに最適な制限酵素の選択、制限酵素断片長多型解析に最適なアガロースゲル濃度、バッファー濃度と温度、パルスタイム、電圧、パルス角度、泳動時間などの条件を最適化した。その結果、由来の異なるEdwardsiella tardaのPFGE解析には、終濃度0.8%の低融点アガロースで菌体を包埋しリゾチームとプロテイナーゼKで消化することで損傷の少ないゲノムDNAが精製可能であった。このゲル包埋DNAを制限酵素Spe IもしくはXba Iで2日間消化し、0.5×TBE Buffer 2.2 L、電圧6 V/cm、泳動時間18時間、パルスタイム0.525秒、パルス角度120°、水温14°Cの条件で泳動することでジェノタイピングに最適な制限酵素断片長多型解析が可能であることを見出した。PFGE解析の結果、E. tarda14菌株は由来毎に4タイプに分類され、遺伝的に異なることを見出した。よって、シオミズツボワムシ内でのタンパク質発現を解析するためには、遺伝的に異なる4タイプでの比較が必要であることが明らかとなった。本研究は、魚病細菌の発症機構を解明する為、仔魚と成魚で発症する共通魚病細菌があまりいない現象から、仔魚と成魚で魚病細菌との接触様式が異なることが、魚病を発症させるか否かを決める一因であると考え、種苗生産における仔魚期にのみ用いられるシオミズツボワムシ(以下ワムシ)に着目した。ワムシの腸管内に取り込ませた魚病細菌と通常の培地で培養した魚病細菌のタンパク質発現パターンを網羅的に比較し、発現の異なるタンパク質と魚病細菌が生産する病原性物質との関連を明らかにすることで、細菌性疾病の発症機構解明の一助とすることを本研究の目的とした。H24年度は、ワムシ培養液に7種類の魚病細菌(Aeromonas hydrophila、Edwardsiella tarda、Photobacterium damuselae subsp. piscicida、Pseudomonas plecoglossicida、Vibrio anguillarum、Vibrio ichthyoenteri、Citrobacter freundii)を別々に添加し、これらの魚病細菌がワムシに及ぼす影響を解析した。その結果、1 mLあたり4乗オーダーの菌濃度ではワムシ生活史に影響は無かった。これより、本菌濃度であれば、ワムシにとって過度なストレス無く、ワムシに魚病細菌を取り込ませることが可能である。使用した魚病細菌のうちVibrio ichthyoenteriをワムシ培養液に添加しワムシの無給餌飼育を行うことで、ワムシの腸管内に本菌が取り込まれることを顕微鏡で確認した。シオミズツボワムシの腸管内に取り込ませた魚病細菌と人工培地で培養した魚病細菌のタンパク質発現パターンを比較することで、魚類の細菌性疾病の発症機構を解析することを目的に研究を実施した。昨年度までに、1魚病細菌のシオミズツボワムシに対する病原性の有無、2効率よくシオミズツボワムシ腸管内に魚病細菌を取り込ませる菌濃度、3PFGEによる全ゲノムDNA用いたジェノタイピングによる魚病細菌の遺伝的な解析、以上3項目を明らかにした。これらの条件をもとに、ワムシ腸管内からの魚病細菌およびワムシ腸管内から飼育水中に排出した魚病細菌の回収法を検討し,これら細菌のSDS-PAGEによるタンパク質解析を行った。

また,本菌がワムシ腸管内で消化されることなく生存しているかTCBS寒天培地を用いて調べた。魚病細菌はVibrio ichthyoenteriを主として用いた。これらの結果、魚病細菌を取り込んだワムシを破砕もしくは腸管に取り込んで排出した魚病細菌をタンパク質解析が可能な量として効率よく分取することは困難であった。ワムシと細菌を分離せずに、1.0E+9 cells / mLの菌液を含む汽水で24時間飼育したワムシを破砕してSDS-PAGEに供した結果、魚病細菌のタンパク質バンドが確認出来た。また、この破砕液の濁度から推定した菌数および人工培地に塗布して計数した菌数は、それぞれ、ワムシ1個体あたり5.45E+4 cells,3.67E+2 CFUであった。本結果より、ワムシ腸管内に取り込まれたV. ichthyoenteriのうちの約1%がTCBS培地にコロニーを形成する能力を有しており、ワムシが摂餌した菌は腸管内において短期間で完全に消化されることはないが,コロニー形成能が低下することが明らかとなった。魚病学外環境が異なる条件下での菌体のタンパク質発現を解析するためには、遺伝的な相違を明らかにする必要がある。従来の菌株の分類は、数個の遺伝子配列や血清型別でおこなわれており、これらの解析では全ゲノムレベルでの相違が不明であった。これまで魚病細菌ではほとんど解析されていないPFGEによる全ゲノム配列の相違を解析する手法を確立し、由来の異なる細菌株の遺伝的な相違を数値化することが出来た。以上のことから、全体として順調に研究が進んでいると判断した。ワムシ内での魚病細菌のタンパク質発現解析に必要な、魚病細菌がワムシに及ぼす影響、およびワムシ腸管内に魚病細菌を取り込ませるための細菌添加濃度などの基礎的知見が得られている。これらは、H24年度の実験実施計画に沿って実験が進んでいることを示している。よって、概ね順調に進展していると判断した。H25年度に実施した研究をもとに、遺伝的な相違を確認した病原細菌(Edwardsiellaの他に、Vibrio、Streptococcus等)を無菌的に培養したシオミズツボワムシの腸管内に取り込ませ、この腸管内の細菌と人工培地で培養した細菌よりタンパク質を単離する。この単離したタンパク質を2次元電気泳動により分離し、発現の有無、もしくは発現量が異なるタンパク質をピックアップしたのち、質量分析機器で解析することで、タンパク質機能の特定を試みる。さらに、これらのタンパク質の遺伝子配列を解析し、遺伝子レベルでの発現量の変化を明らかにする。これらのタンパク質と既知の病原因子との関連を解析することで、環境変化と病原性の関連を明らかにする。H24年度に実施した研究をもとに、さらにワムシ腸管内に効率的に魚病細菌を取り込ませるワムシの培養条件を検討すると共に、ワムシ腸管内に取り込まれた魚病細菌の分離方法を確立する。ワムシ腸管内より分離した魚病細菌と通常の培地で培養した魚病細菌よりタンパク質を精製し、SDS-PAGE、2D-PAGEを行い、異なる環境下で発現が変化するタンパク質の特定を行う。これらの実験から、ワムシ腸管内に取り込まれた魚病細菌の代謝や形質の変化に関与する遺伝子を特定し、病原性との関連を解析することで、細菌性疾病の発症機構の一端を解明することを試みる。
様相論理とその実時間制御及び人工知能への応用

時制論理や区間論理を含む様相論理を応用して,プログラミングシステムの形式的記述や,人工知能における知識表現に有効な方法論や言語を構成する研究を試みた。言語RACCOは,時制様相論理を実行可能にした論理型言語で,モジュラ-構造を明示に表現する機能を有する。この言語を使用すれば,実用上の論議の対象となりうるほどに,十分に複雑な実時間プロセス制御システムの形式的記述が可能になる,処理系はCommon Lispで書かれ,プロトタイピングのためのグラフィック・シミレ-タも設計中である。一方,知識表現への応用としては,医療の分野を検討した。従来この分野では医療診断をエキスパ-ト・システムで自動化することをめざす研究が中心であったが,ここでは,従来のカルテを進化させた概念であるハイパ-・テキスト・システムの画面と対話しつつ,汎用及び個有知識ベ-スにアクセスしながら,医師が患者の検査,診断,治療を行うシステムを概念設計し,これを多世界多時間モデルに基づいて様相論理を拡張した論理系を用いて形式的記述を行った。加えて,当研究グル-プが,ここ数年間,外部団体などと共同に研究開発を行っている分散オペレ-ティング・システムであるToMの形式記述に様相論理を用いることも試みた。ToMではカ-ネル部分に最小限の並列性,分散性の機能を組み込み,この部分の正当性を確認することが,中心的な課題となるが,この目的のためには区間論理や時制論理による形式的記述と,それにもとづいて可能になる相互排除などの重要な性質の成立の確認が可能になることが示された。この研究の主な結果は,'90年にドイツのキ-ルで行われた国際学会の紹待講演で発表した。様相論理型言語RACCOを用いて、実験的に種々の実時間プロセス制御システムの記述を行い、その実用上の問題点を検討した。その結果、インターバル論理を用いる言語による記述可能性との比較が可能になった。また、分散オペレーティング・システムや、医療関係などの知識システムへの様相論理の応用を考え、多世界多次元様相論理を導入した。その結果、ハイパーテキストと知識システムを同一の形式体系で記述することが可能になり、ユーザ・インターフェースへの形式的なアプローチへの道を開いたと考える。これらの経験を通じて、二つの研究プロジェクトが進行中である。一つは医者のカルテ作成、診断、検査、治療を支援する知識ハイパーテキストのプロトタイプ作成とその形式的基礎づけ、二には、ATMやキャッシュ・レジスターなど、非常に限定されたプログラム領域上でのソフトウェア作成システム(CASE)の研究開発である。(非常に限定されているが、すこぶる労働集約的な開発方法に依存しているのが、現状である。)前者については、糖尿病に限定して、様相論理に基づく知識ハイパーテキストのモデル化を行って、現在検討中である。いずれのプロジェクトも、研究計画の第2年目へ継続する。様相論理の分散システムの応用として、本研究グル-プが、産業界や他大学と共同研究開発中の分散オペレ-ティング・システム、ToMのカ-ネル機能の形式的仕様を、時制論理を用いて与えた。この結果を用いて、分散オペレ-ティング・システムに限らず、すべての実時間(real-time)システムにとって、本質的な並列プログラムをデバッグすることに応用することを試みている。一方、ユ-ザ・インタ-フェ-スに対する様相論理の応用としては、とくにMOAなる病療診診や、検査、治療を支援するハイパ-・テキスト・システムを考案し、その数学的形式化を行った。更に進んで、一般的にユ-ザ・インタ-フェ-スを形式的に記述する言語を検討し、設計を試みている。他方、実行可能な様相論理に基づくプログラミング言語の研究を集大成し、1990年ドイツのキ-ルで行われる国際学会第4回VDM会議の紹介講演として発表する予定である。

この中で、Temporal prolog、RACCO、AYAなど、本研究グル-プによる過去数年間の様相論理プログラミングとその実時間プロセス制御ソフトウェアの実行可能仕様言語としての応用、知識表現言語としての応用を論じる。実際のシステム構築としては、上記分散オペレ-ティング・システムToMに加え、ハイパ-・テキスト・システム(推論機構を含む)をワ-クステ-ション上に開発している。また制約論理を応用した文書システムも計画中である。区間論理や,時制論理を含む様相論理が,コンピュ-タ・サイエンスの中で最も困難な課題であるソフトウェアの仕様や検正,自動生成などの領域で,いかに応用されるかを研究した.加えて,知識システムや,ハイパ-テキストなど,レベルの高いユ-ザ・インタ-フェ-スを体系的に,記述するための,多次元,多世界様相論理を導入した.この応用として病療診断治療システムを考案した.従来,人工知能の医療への応用は,エキスパ-トシステムによる自動診断に重点がおかれていたが,ここでは,医者が,診断や治療のために,知識ベ-スにアクセスしつつ,対話的,視覚的に診断や検査,投薬のプロセスをワ-クステ-ション上で,サポ-トする.このようなシステムを形式化するために様相論理が有意義であることを示した.これは医療のみならず,知識システムと高レベルインタ-フェイスシステムの統一的形式化に一般的に応用される.一方,本研究グル-プが開発中の分散オペレ-ティング・システムTOMのカ-ネルに様相論理による形式的仕様記述を試みた.分散システムのモデル化に役立つ形式的体系として,区間論理のディビエ-ションを,設計し,カ-ネルの必要な外部インタ-フェイス機能の記述を試みた.この仕事を検討することにより,いわゆる,ハ-ド・リアル・システムをいかに設計すべきかに重要な示唆が与えられることを指適できた.将来への課題として,UIMS(ユ-ザ・マネ-ジメント・システム)やマルチ・メジア・システムへの応用が考えられる.
肺動脈血栓塞栓にもとづく心筋傷害の形態学的研究

[方法]肺塞栓による死亡例18例(肺塞栓群:血栓塞栓14例および脂肪塞栓4例)と、コントロール群として交通外傷等の外因による短時間での死亡例10例、計28例の剖検例を対象とした。心を定法によりホルマリン固定パラフィン包埋の後、約2-3μの切片を左右両心室について作製、CD68抗体を用い免疫染色した。標本を光顕、強拡大(対物×40)で検鏡、メカニカルステージを同一視野が重複しないようスクロールさせ、左右両室自由壁の無作為な100視野について、陽性細胞(マクロファージ)数をカウントし平均値を算出比較した。[結果]コントロール群では、1視野中の平均マクロファージ数は、全例で左右両室とも1.0/視野以下であり、両室間に有意差は認められなかった。肺塞栓群においては、18例中右室ないし左室に平均1.0/視野以上のマクロファージを認めた例が15例あり、両室とも1.0以下であった症例は3例のみであった。10.0/視野以上の高度のマクロファージ浸潤を認めた例は5例あったが、これらはいずれも血栓塞栓例であり、右室優位に高度のマクロファージ浸潤を認めた。本年度は特に、抗HLA-DR抗体等を用いて浸潤マクロファージの性状についての解析を試みたが、明瞭な結果は得られなかった。[考察]一般に右室は左室に比し壁厚が薄く、また拡張期にも血液が供給されるなどの理由により虚血状態に陥り難いとされるが、肺塞栓時には循環血液量の減少、右室内圧の上昇による灌流圧の低下等のため右室単独梗塞が生じうるとの報告がある。心筋虚血の程度が軽く微小循環が保たれている場合、好中球よりもマクロファージが浸潤細胞として目立つとの報告もある。右室は左室に比し虚血に陥り難いため、右室内圧が高度に上昇しても典型的な梗塞には至らない程度の虚血状態が生じていた可能性も考えられた。[考察]一般に、右室は左室に比し壁厚が薄く、また拡張期にも血液が供給されるなどの理由により、虚血状態に陥りにくいとされているが、肺塞栓時には、循環血液量の減少、右室内圧の上昇にともなう灌流圧の低下等により右室単独梗塞が生じうるとの報告がある。今回認められたマクロファージ数増加の明確な意義付けは困難だが、心筋梗塞時には、その程度が軽く・微小循環が保たれている場合、好中球よりもマクロファージが浸潤細胞として目立つとの報告もある。先述のように、右室は左室に比し虚血に陥り難いため、右室内圧が高度に上昇しても、典型的な梗塞には至らない程度の虚血状態が生じていた可能性も考えられた。

本年度は特に、抗HLA-DR抗体等を用いて浸潤マクロファージの性状についての解析を試みたが、明瞭な結果は得られなかった。[考察]一般に右室は左室に比し壁厚が薄く、また拡張期にも血液が供給されるなどの理由により虚血状態に陥り難いとされるが、肺塞栓時には循環血液量の減少、右室内圧の上昇による灌流圧の低下等のため右室単独梗塞が生じうるとの報告がある。心筋虚血の程度が軽く微小循環が保たれている場合、好中球よりもマクロファージが浸潤細胞として目立つとの報告もある。右室は左室に比し虚血に陥り難いため、右室内圧が高度に上昇しても典型的な梗塞には至らない程度の虚血状態が生じていた可能性も考えられた。
ヴィジュアル・ナラティヴによる保育実践の省察に関する研究

保育の質保証や質改善を巡る研究は、保育実践の言語化を前提に敷くという意味において言語の使用に重心をおいて展開してきた側面がある。だが、保育実践の言語化を前提とするリフレクション研究においては、言語による意味づけが困難な事象を如何に取り扱うかといった課題や、現職の保育士においては実践の言語的な意味づけに負担を覚えるケースもあるという課題が見出された。こうした現況に対し、本研究では保育実践の省察と改善に関わるアプローチにヴィジュアル・ナラティヴの考え方を導入することによって、言語とは異なる手法によって実践の省察と意味づけを行う手法を開発し、その効果を言語による実践の省察との比較において検証する。
珪酸塩化合物により惹起されるヒト免疫異常の解析

本研究の目的は、珪酸塩化合物により惹起されるヒト免疫異常のメカニズムを解明することである。これまでの我々の研究結果より、in vitroでは、じん肺症症例の末梢血単核細胞(PBMC)は珪酸塩化合物であるchrysotile B (CB)と共培養しても、アポトーシスが起こり難いことが想定されるが、その詳細な検討は行っていない。そこで本年度ではまず、健常人PBMCのCB誘導アポトーシスについて、Annexin-V法によるアポトーシス検出ならびに活性型caspase-3検出を行った。健常人3名のPBMC(1×10^6個/ml/well)を17日間CB(50μg/ml)と共培養したところ、非添加群に比して添加群では培養時間が長いほど、アポトーシス細胞(Annexin-V陽性細胞)(%)および活性型caspase-3陽性率(%)が高値を示したものの、健常人の間での差(個人差)が認められた。そこで、この個人差が単に実験操作上の差ではないことを確かめるために、上記健常人3名のPBMCについて、36日間CBと共培養した時のアポトーシス検出を3回通り行った。上記の結果と同様に個人差がみられたことより、健常人を10名に増やしてPBMCを36日間CBと共培養した。その結果、添加群と非添加群の差、すなわちCBによって誘導されるアポトーシス細胞(%)および活性型caspase-3陽性率(%)は、培養5日目で最も高かった。本研究で用いたCBは石綿の1種である。そこでじん肺症症例の中でも石綿肺症症例(n=10)に限定し、5日間培養でのCB誘導アポトーシスについて健常人の場合と比較検討した。CBによって誘導されるアポトーシス細胞(%)および活性型caspase-3陽性率(%)は両者の間で有意差がみられなかったが、健常人と同様、症例間でも個人差がみられた。従って、PBMCをCD3およびCD28に対する抗体、あるいはPHAなどのマイトジェンで刺激してT細胞を活性化した状態、おそらくはこうすることで個人差が目立たなくなると思われるが、この時のCB誘導アポトーシスについて検討する必要があると思われた。
代数多様体上の連接層の導来圏について

本年度は,昨年度に引き続き圏論的力学系の研究を行った.昨年度は, K3曲面上の連接層の導来圏の正の圏論的エントロピーを持つ自己同値であってBridgeland安定対象のモジュライ空間上に正の位相的エントロピーを持つ自己同型を誘導するものを発見した.この状況のもとで,圏論的エントロピーと位相的エントロピーの関係は不等式のレベルでしか得られていなかった.圏論的エントロピーとK群上に誘導される線形写像のスペクトル半径の関係を調べるGromov-Yomdin問題は,上の不等式が等式になるかを調べる上で重要である.本年度はK3曲面上の連接層の導来圏上の自己同値の中でも代表的なものである球面捻りの圏論的エントロピー及びGromov-Yomdin問題に取り組んだ.まず,一般にdg三角圏上の球面捻りの圏論的エントロピーを計算した.この計算結果から,球面捻りについて, Gromov-Yomdin問題は肯定的に解けることがわかった.Fanは4次元以上の偶数次元Calabi-Yau超曲面上に球面捻りと直線束テンソルを用いてGromov-Yomdin問題の反例を構成した.それを受けてK3曲面上に球面捻りと直線束テンソルを用いてGromov-Yomdin問題の反例を構成した.このことから,昨年度の不等式が等式であることを示すには, K3曲面上の連接層の導来圏の自己同値に何らかの制限をつけないといけないことがわかった.また,昨年度発見したK3曲面上の自己同値の例を用いて, O'Grady型の10次元超ケーラー多様体上の正の位相的エントロピーを持つ自己同型が構成できることがわかった.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は新しいホモロジー的射影双対の例の発見を目指す予定であったがこの方向では成果をあげることはできなかった。しかし、計画にあった4次元3次超曲面やK3曲面の研究は進めることができた。これら2つの代数多様体は、高次元超ケーラー(複素シンプレクティック)多様体の例の構成において重要である。超ケーラー多様体の対称性は、格子理論などを用いて盛んに研究されている。近年では、マシュー群やコンウェイ群などの例外型有限単純群がある種の超ケーラー多様体の自己同型群と関係することがわかってきておりその神秘性は増す一方である。本年度は、超ケーラー多様体の対称性について先に述べたような有限群論的な視点とは異なる無限自己同型の位相的エントロピーといった複素力学系的な視点に基づいて研究した。まず、代数的K3曲面の連接層の導来圏上に正の圏論的エントロピーをもつ自己同値が存在することを示した。そして、そのような自己同値が導来圏の安定対象のモジュライ空間上に正エントロピー自己同型を誘導し得るかという問題に取り組んだ。K3曲面上の安定対象のモジュライ空間は超ケーラー多様体の重要な例である。結果として、正エントロピー自己同値であってモジュライ空間上に正エントロピー自己同型を誘導する例、しない例をそれぞれ発見した。この違いは安定性条件の空間の壁の様子によって生じることがわかった。ピカール数2で6次元以上の超ケーラー多様体で正エントロピー自己同型をもつ例はこれまで知られていなかったが上記の方法で構成することができた。また、判別式74の一般の4次元3次超曲面上の直線のファノスキーム上に正エントロピー自己同型が存在することを、KuznetsovのK3圏とK3曲面の同値と上記の手法を合わせることで示した。この4次元3次超曲面はKuznetsov予想とGalkin-Shinder予想において重要な例である。ホモロジー的射影双対性についての成果は得られなかったものの、自己同型の研究について予期していなかった成果をあげることができた。この自己同型の研究は当初計画にあった4次元3次超曲面の有理性に関するKuznetsov予想とGalkin-Shinder予想の研究にも関係する。また、導来圏の半直交分解を用いて代数多様体の幾何学を調べるというのは計画当初にもあったアイディアである。圏論的力学系の応用に関する論文が書けたものの,当初予定していた導来圏の半直交分解に関する研究は進められなかった.本年度は,昨年度に引き続き圏論的力学系の研究を行った.昨年度は, K3曲面上の連接層の導来圏の正の圏論的エントロピーを持つ自己同値であってBridgeland安定対象のモジュライ空間上に正の位相的エントロピーを持つ自己同型を誘導するものを発見した.この状況のもとで,圏論的エントロピーと位相的エントロピーの関係は不等式のレベルでしか得られていなかった.圏論的エントロピーとK群上に誘導される線形写像のスペクトル半径の関係を調べるGromov-Yomdin問題は,上の不等式が等式になるかを調べる上で重要である.本年度はK3曲面上の連接層の導来圏上の自己同値の中でも代表的なものである球面捻りの圏論的エントロピー及びGromov-Yomdin問題に取り組んだ.まず,一般にdg三角圏上の球面捻りの圏論的エントロピーを計算した.この計算結果から,球面捻りについて, Gromov-Yomdin問題は肯定的に解けることがわかった.

Fanは4次元以上の偶数次元Calabi-Yau超曲面上に球面捻りと直線束テンソルを用いてGromov-Yomdin問題の反例を構成した.それを受けてK3曲面上に球面捻りと直線束テンソルを用いてGromov-Yomdin問題の反例を構成した.このことから,昨年度の不等式が等式であることを示すには, K3曲面上の連接層の導来圏の自己同値に何らかの制限をつけないといけないことがわかった.また,昨年度発見したK3曲面上の自己同値の例を用いて, O'Grady型の10次元超ケーラー多様体上の正の位相的エントロピーを持つ自己同型が構成できることがわかった.圏論的エントロピーの基礎理論は十分整備されているとは言えない。また、今回自己同値がモジュライ空間上の自己同型を誘導する例を構成した際に、ピカール数1のK3曲面上の安定性条件の空間が連結であることを用いた。この事実はピカール数が1より大きい場合にはまだわかっていない。今後今回用いた概念に関する基礎研究も視野に入れる。圏論的力学系については,さらなる応用を期待して基礎研究を行う.導来圏の半直交分解については,最近拡張されたホモロジー的射影双対性に関する基本定理をの応用についても考えたい.29年度が最終年度であるため、記入しない。29年度が最終年度であるため、記入しない。
プロスタノイド受容体遺伝子欠損マウスの作成と応用

8種類のプロスタノイド受容体遺伝子のエクソン内にネオマイシン耐性遺伝子を組み込んだターゲティング・ベクターをそれぞれ129ola由来胚性幹細胞(ES細胞)に導入し、相同細換えを起こした。C57BL/6マウスの胚にES細胞を注入後、擬妊娠したICRマウスの子宮に戻してキメラマウスを作出した。キメラマウスをC57BL/6マウスと交配し、F1マウスを得た。組換えalleleをもつF1ヘテロ接合体同士を交配し、F2ホモ接合体を得た。結果、8種類の各プロスタノイド受容体欠損マウスが得られた。また、遺伝的背景を均一にする目的で、各プロスタノイド受容体欠損マウスをC57BL/6マウスに繰り返し交配する戻し交配を行った。現在、一部のプロスタノイド受容体欠場マウスで房し交配が完了し、他のものは継続中である。また、balb/cやDBA1マウスなどへの戻し交配も予定している。IP欠損マウスの解析により、PGI_2は心血管系での抗血栓作用以外に炎症反応の場での血管透過性の亢進や疼痛の伝達等非常に重要な役割を持つことが示された。FP欠損マウスの解析では、分娩時にPGF_<2α>がまず黄体退縮を引き起こし、これが血中プロゲステロン濃度を低下させ、続いて子宮でのオキシトシン受容体の発現を誘導するという一連の機構が解明された。EP4受容体欠場マウスの解析により、PGE_2はEP4受容体を介して出生直後の動脈管の閉鎖に重安な役割を果たすことが示された。以上、本研究によりプロスタノイド受容体欠損マウスの作成がなされ、その解析を通してプロスタノイドの重要な生理・病態生理的役割の一端が解明された。今後、これらの結果が各プロスタノイドの示す多彩な作用を選択的に制御する薬物の開発とその適用の指標に資することが期待される。1)プロスタノイド受容体欠損マウスを以下のように作出した。マウスプロスタノイド受容体遺伝子のエクソン内にネオマイシン耐性遺伝子を組み込んだターゲッティングベクターを129Ola由来胚幹細胞(ES細胞)に導入し、相同組換えを起こしたES細胞クローンをPCRとサザンブロッティングで同定した。C57BL/6マウス胚にES細胞クローンをマイクロインジェクション後、擬妊娠ICRマウスの子宮に戻してES細胞とC57BL/6のキメラマウスを作出した。各遺伝子につき、少なくとも2つの独立したESクローンに由来するキメラマウスを得た。キメラマウスをC57BL/6と交配し、F1マウスを得た。組み換えalleleをもつF1ヘテロ接合体同士を交配し、生まれたF2マウスにホモ接合体が存在することを確認した。現在までに、DP、IP、FP、TP各受容体の遺伝子組換えホモ接合体が得られた。DP、IP受容体については、F2マウス中の、野生型ホモ接合体、ヘテロ接合体、組換えホモ接合体の比率は1:2:1に近かった。EP1、EP2、EP3、EP4の各受容体遺伝子については、F1を作出中である。2)受容体欠損C57BL/6congenicマウスの作出を行なった。遺伝子バックグラウンドを均一にする目的で、F1ヘテロ接合体をC57BL/6に戻し交配し、その仔のヘテロ接合体の戻し交配を繰り返して、F3まで進んでいる。3)受容体欠損マウスの異常の有無について検討をした。

妊孕性の検討では、DP、IP、FP各受容体欠損マウスについて、いずれの受容体欠損マウスもオス、メス共に不妊ではなかった。DP、IP受容体欠損マウスはホモ接合体同士で交配、維持が可能だが、FP受容体欠損マウスの出産した仔マウスは生存しなかった。現在、これらのマウスの炎症反応、免疫、腎・循環器、中枢神経系、につき検討を進めている。1)プロスタノイド受容体欠損マウスの作出マウスプロスタノイド受容体遺伝子のエクソン内にネオマイシン耐性遺伝子を組み込んだターゲティングベクターを1290la由来胚幹細胞(ES細胞)に導入し、相同組換えを起こしたES細胞クローンをPCRとサザンブロティングで同定した。C57BL/6マウス胚にES細胞クローンをマイクロインジェクション後、擬妊娠ICRの子宮にもどしてES細胞とC57BL/6のキメラマウスを作出した。このようにして、各遺伝子につき、少なくとも2つの独立したESクローンに由来するキメラマウスを得た。キメラマウスをC57BL/6と交配し、F1マウスを得た。組換えalleleをもつF1ヘテロ接合体同士を交配し、生れたF2マウスにホモ接合体が存在することを確認した。現在までに、8種類の全てのマウスプロスタノイド受容体の遺伝子組換えホモ接合体が得られた。2)プロスタノイド受容体欠損C57BL/6congenicマウスの作出遺伝的バックグラウンドを均一にする目的で、F1ヘテロ接合体をC57BL/6に戻し交配し、その仔のヘテロ接合体の戻し交配を繰り返して実施している。現在も交配が進んだものではN6マウスが得られている。3)プロスタノイド受容体欠損マウスの解析妊孕性の検討では全ての受容体欠損マウスにおいて、不妊を認めなかった。しかし、FP受容体欠損マウスでは分娩遅延があり、全ての仔は死産であった。また、EP4受容体欠損マウスでは、その仔はほとんど生後数日で死亡した。さらに、EP2受容体欠損マウスでは、出産仔数が少なく排卵あるいは着床の異常が疑われた。現在、これらのマウスの炎症反応、発熱反応、痛覚過敏、免疫、腎・循環器、中枢神経系等の検討を進めており、一部のものでは興味ある知見が得られつつある。