hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アラビア湾岸における先史・古代文化の交流

ウンム・ル・マアの積石塚はいずれも埋葬施設であり、主体部の種類には石室、石棺、小竪穴などがある。主体部型式の検討及び出土品の検討によると、ウンム・ル・マアの積石塚の造営は、上限が青銅器時代、下限がイスラーム時代直前という非常に広い年代幅の中にプロットされる。カタル半島にはウンム・ル・マア以外にも相当数の積石塚群が知られているが、今後の研究によって、バハレーンを中心とするバルバル文化とオマン半島を中心とするウンム・アン・ナール文化の中間に、もう一つの未知の文化が所在したことを証明する糸口になる可能性が生じてきた。
各種透水・脱水工法によるコンクリートの品質向上に関する定量評価とメカニズムの解明

本研究の目的は,透水・脱水によるコンクリート内部の物理性質の変化およびそのメカニズムについて圧密理論を用いて定量化することによって,各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法を確立することである。研究最終年である本年度は,圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果の把握と,各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法に関して研究を行うとともに,3年間の研究結果を踏まえた今後の課題および展望ををりまとめた。以下に得られた知見を列挙する。1、圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果の把握各調合条件が圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果に及ぼす影響を把握するため,研究2年目に行った圧密試験後の試験体を用いて,硬化後の密度分布および圧縮強度分布の測定を行った。その結果,圧密処理された硬化後の各試料の品質改善効果は,試験体全層にわたること,および脱水量で補正したセメント水比と平均圧縮強度(各層の圧縮強度の平均)は,一本の直線式で表すことができること,などを明らかにした。2、各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法の確立フレッシュモルタルおよびフレッシュコンクリートの圧密特性(研究2年目)お.よび圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果(研究最終年)の実験結果に基づき,圧密理論を立脚した,ブリーディング現象および透水性型枠工法による密度分布および圧縮強度分布の推定フローを提案し,その適用性に関する検証を行った。その結果,ブリーディング現象に関しては,内部の密度分布および圧縮強度分布は,誤差は残るものの,おおむね良好な推定精度が得られた。また,透水性型枠工法に適用した場合には,複雑な2次元的な密度分布および圧縮強度分布を,極めて簡易な手法で推定できる可能性を示した。本研究の目的は,透水・脱水によるコンクリート内部の物理性質の変化およびそのメカニズムについて圧密理論を用いて定量化することによって,各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法を確立および新たな工法の提案することである。研究初年度である本年度は,真空脱水処理に関する検討を中心に行った。1、フレッシュコンクリートにおける圧密挙動の定量化のための圧密試験装置の作製これまで使用してきた圧密試験装置の試作品には,1)直接載荷であるため大載荷力が得られない,2)間隙水圧の測定が不可能である等の問題があった。そこで,それらの問題点を改良した新たな試験装置を設計・試作した。2、真空脱水処理による実大コンクリート床スラブおよび実験室試験体の品質評価の比較真空脱水処理によるコンクリート床スラブの実大施工実験および実験室実験を行い,その品質改善効果を把握するため,表面性状および圧縮強度を測定した。脱水口近傍での品質改善効果に関して,実験室実験で得られる効果は実施工の特性を概ね再現できていると判断できることが明らかとなった。3、真空脱水処理時のコンクリート内部における間隙水圧分布発生メカニズムの解明これまでに,真空脱水処理時のコンクリート内部の間隙水圧の測定結果から,上層ほど間隙水圧が減圧される傾向があることを明らかにし,真空脱水処理に対しては圧密圧力を変化させて圧密理論を適用できることを示した。しかし,間隙水圧分布の発生メカニズムは不明であった。そこで,コンクリート内部に形成されるメニスカスに着目し,真空脱水処理時の間隙水圧分布の発生メカニズムについて検討した。その結果,真空脱水処理時の間隙水圧分布発生メカニズムの主要因の一つとして,メニスカスの影響が考えられることが明らかとなった。本研究の目的は,透水・脱水によるコンクリート内部の物理性質の変化およびそのメカニズムについて圧密理論を用いて定量化することによって,各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法を確立すること,および新たな工法を提案することである。研究2年目である本年度は,フレッシュモルタルおよびフレッシュコンクリートの圧密挙動の把握と,真空脱水処理時の間隙水圧分布の発生メカニズムを明らかにするためのモデルの構築を中心に研究を進めた。1、フレッシュモルタルおよびフレッシュコンクリートの圧密挙動の把握各調合条件がフレッシュモルタルおよびフレッシュコンクリートの圧密挙動に及ぼす影響を系統的に把握するため,研究初年度に設計・試作した圧密試験装置を用いて圧密試験を行った。その結果,モルタルおよびコンクリートの脱水過程には,既往の圧密理論の適用が可能であることを確認した。また,各調合条件がフレッシュモルタルおよびフレッシュコンクリートの圧密挙動に及ぼす影響を明らかにし,圧密モデルのパラメータの定量化の前段階に至った。2、真空脱水処理時のコンクリート内部の間隙水圧分布発生メカニズムの解明これまでに,真空脱水処理時のコンクリート内部の間隙水圧は,上層ほど減圧される傾向があることを実験的に明らかにし,真空脱水処理に対しては,圧密圧力を変化させて圧密理論を適用できることを示した。研究初年度は,珪砂を用いて実験的な検討を行ったが,本年度は,毛管現象に立脚した細管モデルを提案することにより解析的な検討を行った。その結果,提案した細管モデルを用いた真空脱水間隙水圧分布の定量化の可能性が示された。

研究最終年である本年度は,圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果の把握と,各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法に関して研究を行うとともに,3年間の研究結果を踏まえた今後の課題および展望ををりまとめた。以下に得られた知見を列挙する。1、圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果の把握各調合条件が圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果に及ぼす影響を把握するため,研究2年目に行った圧密試験後の試験体を用いて,硬化後の密度分布および圧縮強度分布の測定を行った。その結果,圧密処理された硬化後の各試料の品質改善効果は,試験体全層にわたること,および脱水量で補正したセメント水比と平均圧縮強度(各層の圧縮強度の平均)は,一本の直線式で表すことができること,などを明らかにした。2、各種透水・脱水処理を行ったコンクリートの品質推定手法の確立フレッシュモルタルおよびフレッシュコンクリートの圧密特性(研究2年目)お.よび圧密処理されたモルタルおよびコンクリートの品質改善効果(研究最終年)の実験結果に基づき,圧密理論を立脚した,ブリーディング現象および透水性型枠工法による密度分布および圧縮強度分布の推定フローを提案し,その適用性に関する検証を行った。その結果,ブリーディング現象に関しては,内部の密度分布および圧縮強度分布は,誤差は残るものの,おおむね良好な推定精度が得られた。また,透水性型枠工法に適用した場合には,複雑な2次元的な密度分布および圧縮強度分布を,極めて簡易な手法で推定できる可能性を示した。
アルツハイマー病におけるシグマ1受容体の関与とそれに基づいた治療法開発の研究

シグマー1受容体(Sig1R)は小胞体(ER)膜上タンパク質である。本研究において、我々はSig1RがERストレスにおいてATF4によって転写的にアップレギュレートされることを実証した。Sig1R遺伝子のプロモーター領域を用いたレポーター活性は、ERストレスにおいて、またはATF4単独によって増強されることが示され、ATF4はSig1R遺伝子のプロモーター領域に直接結合することが示された。更に、病原性多型(GC-241-240TT、T-485A)を用いたレポーター活性は低下することが示された。また、ERストレスが誘導するカスパーゼ4のプロセシングはSig1Rによって阻害された。これらの結果は、Sig1RはPERK-eIF2a-ATF4経路を介して転写的にアップレギュレートされ、ERストレスによる細胞死を改善することを示している。フルボキサミン(Flv)は、Sig1Rに対して高い親和性を有する選択的セロトニン再取り込み阻害剤(SSRI)である。さらに本研究では、Flvを用いた神経芽細胞腫細胞の処理は、PERK経路の関与なしに、それ自身の活性化を通じて直接ATF4翻訳を増加させることによってSig1R発現を誘導することが示された。このSig1RのFlvによる誘導は、ERストレスから生じる神経細胞死を防ぐことが示された。このFlv誘導性ERストレス耐性は、局所脳虚血後のマウスにおいて梗塞領域を減少させることも示された。したがって、臨床現場で頻繁に使用されているFlvはERストレスを病態過程の1つと考えられているアルツハイマー病などの治療への応用が期待される。当該年度は、まずシグマ1受容体の細胞死抑止効果の検証を行った。シグマ1受容体をHEK293細胞に遺伝子導入して過剰発現させると、tunicamycinによるERストレスに抵抗性を示し、細胞死がMOCK導入細胞に比べて減少することが示された。すなわち、ERストレスによって誘導されるシグマ1受容体は一種のUPRとして細胞死抑止効果をもたらすと考えられた。統合失調症やアルコール依存症ではシグマ1受容体のプロモーター領域における遺伝子多型が報告されている(T-485A、GC-241-240TT)。これら遺伝子多型を持ったプロモーターと野生型のプロモーターをルシフェラーゼ遺伝子にヒューズしたレポーターアッセイ系を構築し、ERストレスによるシグマ1受容体発現について検討した。これら多型を持ったプロモーターでは野生型に比し、シグマ1受容体の発現が低く、ERストレスによるシグマ1受容体発現という生理的な細胞死抑止効果が抑制されていることが、これらの精神疾患の病態に関与していることが示唆されている。以前の我々の検討で、SSRIであるフルボキサミンはシグマ1受容体を発現誘導することが示されている。従って、シグマ1受容体の発現は細胞死抑止効果をもたらすため、フルボキサミンにも細胞死抑止効果が期待できる。実際、神経芽細胞腫にフルボキサミンを投与しておくとERストレスによる神経細胞死を軽減できることが示された。更に、マウスの中大脳動脈閉塞による脳梗塞モデルを用いてフルボキサミンの細胞死抑止効果について検討した。脳梗塞巣のペネンブラ領域ではERストレスが起き、梗塞巣の拡大につながるとされているが、フルボキサミンの腹腔内投与により、閉塞24時間後の梗塞巣が減少していた。当該研究は追加交付であったため、実際の研究開始が11月以降となってしまった。昨年度、SSRIであるフルボキサミンがシグマ1受容体誘導効果を介して神経細胞死を抑止することを示したが、本年度はフルボキサミンのシグマ1受容体誘導メカニズムについて検討を行った。我々は以前に、小胞体ストレスに応答するシグマ1受容体発現の増加が、小胞体ストレスに対する細胞応答の1つであるPERK経路を介することを示している。そこで、フルボキサミン処理した神経細胞で、PERKの下流にあるATF4発現の変化を調べたところ、フルボキサミン処理に応答するシグマ1受容体発現の増加は、ATF4による転写活性化によるものであることが示された。さらに、シグマ1受容体発現に対するATF4ノックダウンの効果を調べた。ATF4およびシグマ1受容体発現は、フルボキサミンで処置した対照およびATF4過剰発現細胞の両方で増加したが、ATF4ノックダウン細胞では、フルボキサミン処理でもシグマ1受容体タンパク質発現の増加は認められなかった。また、シグマ1受容体遺伝子プロモーター領域(-582-156)をホタルルシフェラーゼプラスミド(pGL4.12 [luc2CP])に融合させたレポーターアッセイシステムを用いて、ATF4の役割をさらに解析した。フルボキサミン処理は、対照細胞におけるシグマ1受容体発現を誘導したが、フルボキサミン処理に応答するシグマ1受容体の発現は、ATF4ノックダウン細胞において減少した。これらの結果は、フルボキサミンが誘導するシグマ1受容体発現がATF4によって媒介されることを示している。本年度は、治療薬候補のフルボキサミンの作用メカニズムを検討することが必要と考え、これを集中して行ったため、アルツハイマー病治療戦略に対する実験が若干遅れた。

更に、病原性多型(GC-241-240TT、T-485A)を用いたレポーター活性は低下することが示された。また、ERストレスが誘導するカスパーゼ4のプロセシングはSig1Rによって阻害された。これらの結果は、Sig1RはPERK-eIF2a-ATF4経路を介して転写的にアップレギュレートされ、ERストレスによる細胞死を改善することを示している。フルボキサミン(Flv)は、Sig1Rに対して高い親和性を有する選択的セロトニン再取り込み阻害剤(SSRI)である。さらに本研究では、Flvを用いた神経芽細胞腫細胞の処理は、PERK経路の関与なしに、それ自身の活性化を通じて直接ATF4翻訳を増加させることによってSig1R発現を誘導することが示された。このSig1RのFlvによる誘導は、ERストレスから生じる神経細胞死を防ぐことが示された。このFlv誘導性ERストレス耐性は、局所脳虚血後のマウスにおいて梗塞領域を減少させることも示された。したがって、臨床現場で頻繁に使用されているFlvはERストレスを病態過程の1つと考えられているアルツハイマー病などの治療への応用が期待される。平成29年度には、前年の遅れを取り戻すべく、動物実験と治療薬開発を並行して施行する予定である。次年度は、アルツハイマー病治療戦略に対する実験を集中して行い、研究をまとめる。追加交付であったため、当該年度の実験が次年度に繰り越されるため。当該年度の積み残した実験費用に充てる。
直接電気化学によるブルー銅タンパク質の酸化還元過程の個別的検討

6種のブルー銅タンパク質(プラストシアニン、プランタシアニン、アズリン、シュードアズリン、ステラシアニン、ウメシアニン)の直接電気化学を、グラシーカーボンおよびビス(4-ピリジル)ジスルフィドなどで修飾した金電極において実現し、速度論的解析を行った。まず、低分子化合物なみの良好なサイクリックボルタンメトリーを可能にし、電解質の濃度やプロモーターの種類などを変化させることによって、タンパク表面と電極との相互作用の様式が極めて重要で、ほとんど疎水性相互作用の場合から、親水性相互作用と疎水性相互作用の両方が寄与している場合まであることがわかった。ついで、2-ポテンシャルステップボルタンメトリーによって、タンパク分子が電極表面において、ミリ秒オーダーで拡散や方向転換などをおこなっていることを明かにした。さらに、1-ポテンシャルステップボルタンメトリーによってタンパクの銅中心と電極表面の間における酸化と還元両方向の電子移動反応の速度定数とそれに伴う熱力学的パラメータ(活性化エンタルピーとエントロピー)を決定し、銅の配位グループの一つであるヒスチジンのイミダゾール基を通じて電子が出入りしているという結論に至った。以上の結果の主たる部分は投稿中である。なお、現在、ブルー銅タンパク質の関与する分子内過程をさらに詳細に明かにするべく、タンパク質の改変を行いつつある。
機能性食品の過剰摂取又は医薬品との相互作用に伴うリスクに関する基礎研究

高齢化社会の進行や医療費の増加などから,機能性食品などを利用したセルフメディケーションに取り組む人々が増えている.しかし,その機能性に反して,過剰摂取や医薬品との相互作用による副作用も出現している.本研究では,機能性成分の生体内挙動に関して,クランベリー成分およびエラジタンニンの尿中代謝物の検索,さらにクランベリーとワルファリンの食品-医薬品間相互作用の疑いが持たれていることから,その相互作用の解明の一環として,クランベリー成分の薬物代謝酵素に与える影響についても検討した.クランベリージュースをボランティアに飲用後,採取した尿を分析し,ジュース中には存在しない成分が代謝物として排泄されていることを確認し.中にはProanthocyanidin A-2のモノメチル化体など,新規代謝物の存在も明らかにした.またクランベリーの代謝物の中には,バイオフィルム形成抑制を示唆する低分子代謝物の存在も見出した.エラジタンニンをラットに経口投与後の尿中代謝物として,7種の新規代謝物を単離し,各種スペクトルデータの解析結果から,その化学構造を明らかにした.その代謝物の中には,抗酸化活性が顕著なエラジタンニンと同等の活性を有する代謝物も存在することを明らかにした.クランベリー成分の薬物代謝酵素(CYP2C9, CYP3A4)阻害活性をin vitro実験系にて評価した結果,高分子ポリフェノール画分が阻害活性を示し,また,in vivo系実験においてもワルファリンの体内からの消失を遅延させることを示唆するデータが得られ,クランベリー成分がワルファリンの主要代謝酵素を阻害する可能性が示された.本研究成果から,生体内代謝物が機能性本体として作用していることが十分考えられることから,機能性成分の評価には,生体内挙動の知見を考慮しながら遂行することが重要であることが示された.高齢化社会の進行や医療費の増加などから,機能性食品などを利用したセルフメディケーションに取り組む人々が増えている.しかし,その機能性に反して,過剰摂取や医薬品との相互作用による副作用も出現している.本研究では,機能性成分の生体内挙動に関して,クランベリー成分およびエラジタンニンの尿中代謝物の検索,さらにクランベリーとワルファリンの食品-医薬品間相互作用の疑いが持たれていることから,その相互作用の解明の一環として,クランベリー成分の薬物代謝酵素に与える影響についても検討した.クランベリージュースをボランティアに飲用後,採取した尿を分析し,ジュース中には存在しない成分が代謝物として排泄されていることを確認し.中にはProanthocyanidin A-2のモノメチル化体など,新規代謝物の存在も明らかにした.またクランベリーの代謝物の中には,バイオフィルム形成抑制を示唆する低分子代謝物の存在も見出した.エラジタンニンをラットに経口投与後の尿中代謝物として,7種の新規代謝物を単離し,各種スペクトルデータの解析結果から,その化学構造を明らかにした.その代謝物の中には,抗酸化活性が顕著なエラジタンニンと同等の活性を有する代謝物も存在することを明らかにした.クランベリー成分の薬物代謝酵素(CYP2C9, CYP3A4)阻害活性をin vitro実験系にて評価した結果,高分子ポリフェノール画分が阻害活性を示し,また,in vivo系実験においてもワルファリンの体内からの消失を遅延させることを示唆するデータが得られ,クランベリー成分がワルファリンの主要代謝酵素を阻害する可能性が示された.本研究成果から,生体内代謝物が機能性本体として作用していることが十分考えられることから,機能性成分の評価には,生体内挙動の知見を考慮しながら遂行することが重要であることが示された.機能性食品の機能に関してマスコミなどの過大報道や,機能性食品製造のメーカー間による機能性成分の含量の違いや,適切な摂取方法の徹底などが図られていないこともあり,消費者の過剰摂取や医薬品との相互作用などに起因するリスクが生じている.本年度は機能性食品に広く含まれているポリフェノールの生体内利用性の解明を目的として,多種多様なポリフェノール成分を含有するクランベリージュースを飲用後,どの種のポリフェノール成分がどれだけ吸収され,どのような形となって排泄されるかを検討した.まず,ポリフェノールの中でもクランベリーに豊富に含まれているアントシアニンに注目し,ジュース中およびジュース飲用後のボランティアから採取した尿サンプルについて,HPLC-ESI-MS-MSを用いた各種アントシアニンの分析を行った.種々分析条件の検討を行った結果,HPLCグラジエント法により,1分析あたり30分で16種のアントシアニンを定量できるHPLC-ESI-MS-MS法を確立した.本法によりクランベリーから16種のアントシアニンの存在を確認し,そのうち3種はクランベリーに含まれるアントシアニンとしては未報告のものであった.また,11人のボランティアについてクランベリージュース飲用後,24時間までに採取した尿を本法によりアントシアニンの定量分析を行った結果,定量可能な6種のアントシアニンのうちPeonidin 3-O-galactosideが最も多く尿中に排泄され,また投与量に対する全アントシアニンの尿中排泄率は5%と高い値を示した.以上の結果から,クランベリーのアントシアニンは他の食材に含まれるアントシアニン(尿中排泄率1%以下)に比べて,高い生体内利用性(吸収,排泄)を示すことが明らかとなった.機能性食品に広く含まれているポリフェノールの生体内利用性の解明の一環として,多種多様なポリフェノール成分を含有するクランベリージュースを飲用後,どの種のポリフェノール成分がどれだけ吸収され,どのような形となって排泄されるかを検討した.昨年度

クランベリーに豊富に含まれているアントシアニンのヒトにおける尿中排泄について検討し,その排泄率がクランベリーアントシアニンは他の食材のアントシアニンに比べて高いことから,クランベリーアントシアニンの高い生体内利用性が示唆され,その結果を本年度論文発表した.また他のクランベリーポリフェノール成分についてもジュース飲用後のボランティアから採取した尿サンプルをHPLC-ESI-MS/MS法により分析を行った結果,低分子ポリフェノール酸のVanillic acidなどが多量に尿中に排泄され,さらに飲用したジュース中には含まれていなかったポリフェノールも数種類高濃度に排泄されていることを認めた.また,今までに吸収されないと考えられていたフラボノイド配糖体も各種尿中に排泄されていることを確認し,今回の実験結果ではフラボノイドは配糖体としても吸収され尿中に排泄されていることが明らかとなった.一方,クランベリーの特徴的なポリフェノール成分であるA-typeのProanthocyanidin類も尿中にメチル化体として排泄されていること,またカテキンもメチル化された形で尿中排泄されていることも明らかにした.以上の研究より生体内に吸収されていることが明らかになった代謝物の中から,ワルファリン服用患者の副作用の原因のひとつとして考えられるCYP2C9の活性阻害物質をクランベリー成分中から現在探索中であり,医薬品と身近な飲料との相互作用のリスクアセスメントの基礎データを構築している.クランベリージュースおよびエキスについてCYP2C9およびCYP3A4阻害活性を指標に分離,精製を行った結果,クランベリーに特徴的な成分であるプロシアニジンAタイプ構造を有するプロアントシアニジンポリマーが,CYP2C9およびCYP3A4に対して比較的強い阻害活性を示した.次に実験動物レベルでの評価を行った.予めクランベリージュースおよびプロアントシアニジンポリマー画分を強制経口投与したラットに,ワルファリンを投与する.投与後48時間まで,経時的に1)ワルファリンの血中濃度の変化,2)タンパク質結合率,および3)ワルファリンの抗凝血作用の指標とされているINR値の測定を行い,クランベリーを投与していないコントロールと比較して,上記3項目を総合して相互作用の評価を行った.その結果,ワルファリンの血中濃度-時間曲線下面積(AUC)については,コントロールと比べて,クランベリージュース投与では変化は見られなかったが,ポリマー画分投与では弱いながらもAUCの増加が観察された.さらにポリマー画分投与では,ワルファリンの半減期の延長も観察されたことから,ポリマー画分がワルファリンの体内蓄積性の増加に寄与していることが示唆された.またINR値については,ジュース投与群とコントロール群では有意な差は示されなかった.さらにタンパク結合率の変化を検討した結果,ジュースおよびポリマー画分投与群とも,コントロール群との差は認められなかった.以上のin vitro系およびin vivo系実験のいずれの結果からも,クランベリーのプロアントシアニジン画分がCYPの作用を阻害し,ワルファリンの体内からの消失を遅延させ,長期投与するとワルファリンが蓄積し,さらに副作用の一因となる可能性が示唆された.
視床原基増殖期・神経核形成期を司る分子メカニズム

本研究においては脊椎動物視床発生の分子機構を特に増殖シグナル、位置情報を与える分子に着目して明らかにすることを目的としている。Sonic hedgehog(Shh)ノックアウトマウスの解析によって、視床原基増殖期にはShh→Fgf15→Tcf4カスケードによって神経前駆細胞の増殖が促進されていることが示唆された(Ishibashi and McMahon,2002)。この遺伝子発現制御の分子機構を明らかにするため、Fgf15遺伝子の調節領域と思われるゲノム断片を単離した。この断片は、Shhシグナルを細胞内で核に伝達する因子GLIの結合配列に似た配列を含むだけでなく、神経管の中で脳になる部分を決定するのに重要と考えられるOtxの結合配列も含んでいた。単離したゲノム断片がFgf15の発現に十分な調節領域を含んでいるか調べるため、これをlacZ遺伝子に融合させたベクターを作成し、lacZの発現パターンを解析中である。また、同様の断片をルシフェラーゼ遺伝子と融合させたベクターを作成し、これを導入した培養細胞中でShhシグナルによってルシフェラーゼ活性が上昇するか検討中である。Shhはまた、視床原基における特徴的な発現パターンから、神経核形成において位置情報を供給していることが示唆される。まず、視床神経核特異的に発現するホメオボックス型遺伝子を単離するため、マウス胎児視床原基組織よりRNAを精製し、RT-PCRを行った。その結果、複数の遺伝子が単離された。現在これらの遺伝子の視床原基における発現パターンを確認中である。また、これらの遺伝子の発現パターンがShhの異所性発現によって変化するか調べる予定である。
酸化ストレスによる加齢性筋力低下の分子機構解明

筋細胞におけるミトコンドリア内酸化ストレスは呼吸鎖を障害し著しい運動能力の低下をきたす筋細胞におけるミトコンドリア内酸化ストレスは呼吸鎖を障害し著しい運動能力の低下をきたすミトコンドリア呼吸の副産物として発生する活性酸素による組織傷害は加齢による生体機能低下の主要な原因と考えられている。我々は骨格筋機能低下における活性酸素傷害モデルとして、骨格筋特異的Mn-SOD欠損マウスを作製した。Mn-SODはミトコンドリ内腔のマトッリックスに局在し活性酸素の一種であるスーパーオキサイドを分解する活性を持つ。本欠損マウスは正常に発育し、体重等の形態学的な異常は認められなかった。骨格筋重量は若齢および30ヶ月齢においても変化なく筋萎縮は認められなかった。組織学的な解析で、腓腹筋において中心核が顕著に認められ、筋繊維の再生像が観察された。さらに、ミトコンドリア呼吸酵素活性を調べたところ、呼吸酵素複合体II活性が著しく低下していた。運動機能を調べるために自発行動量と強制走行能を調べた。その結果、自発行動量は野生型マウスと有意差は認められなかったが、トレッドミルによる強制走行能力が著しく低下していた。またその低下は著しい血中乳酸値の増加と骨格筋内ATP量の低下を伴っていた。抗酸化剤による運動機能レスキューを試みるために、SOD/カタラーゼ活性を有するサレン-マンガン錯体を腹腔内単回投与した。その結果、24時間後に著しく強制走行時間が延長し、96時間まで走行能力が持続した。また投与により、骨格筋内ATP量は野生型マウスと同レベルに回復していた。以上の結果から、骨格筋特異的Mn-SOD欠損マウスは骨格筋内ATP量が枯渇することで強制走行能力が低下し、抗酸化剤投与によりATP量が回復し、走行能力が延長することが明らかとなった。ミトコンドリア呼吸の副産物として発生する活性酸素による組織傷害は加齢による生体機能低下の主要な原因と考えられている。骨格筋における活性酸素の影響を明らかにするために、骨格筋特異的CreマウスとMn-SOD floxマウスとの交配にて骨格筋特異的Mn-SOD欠損マウスを作製した。本欠損マウスを解析したところ正常に発育し、伸長、体重等の形態学的な異常は認められなかった。骨格筋重量は若齢および30ヶ月齢においても変化なく筋萎縮は認められなかったがミトコンドリア内スーパーオキサイドの過剰発生、DNA酸化障害の更新が確認された。組織学的解析では腓腹筋において中心核が顕著に認められ、筋繊維の再生像が観察された。ミトコンドリアに顕著な形態学的異常は認められなかったが、ミトコンドリア呼吸酵素活性を調べたところ、呼吸酵素複合体II活性が著しく低下していた。本欠損マウスの運動機能低下に対する抗酸化剤のレスキュー効果を明らかにするために、SOD/カタラーゼ活性を有するサレン-マンガン錯体を腹腔内に単回投与した。投与により、骨格筋内ATP量の著明な回復が捉えられた。以上の結果から、骨格筋特異的Mn-SOD欠損マウスは骨格筋ミトコンドリア呼吸鎖が障害されATP量が枯渇することで強制走行能力が低下し、抗酸化剤投与によりATP量が回復し、走行能力が延長することが明らかとなった。
悪性リンパ腫の進展形式と接着遺伝子発現に関する臨床的・免疫組織化学的研究

昨年度は、過去11年間に当科にて治療した初発非ホジキンリンパ腫168例について原発部位、進展形式、およびその予後について検肘した。本年は、その研究をさらに進め、1,再燃を起こした中悪性度、高悪性度リンパ腫のうち、一つのリンパ節領域または隣接する二つのリンパ節領域にのみ再燃した、限局性再燃13例について検討した。放射線治療は全例に施行され、また通常量の化学療法を併用しているものは8例であった。この救済治療後の5年生存率は80.2%、5年無病生存率は76.2%であり、良好な治療成積が得られていた。これにより、限局性再燃では、末梢血幹細胞移植を併用した大量化学療法などの強力な治療は必すしも必要ないことが示唆された(論文投稿中)。2,この限局性再燃例のうち、病理標本(パラフィンブロック)の利用できる症例を選び出し、接着因子CD44の発現の有無を調べたが、コントロールと有意な差は検出できなかった。3,完全寛解に至った非ホジキンリンパ腫における経過観察時のガリウムシンチの有用性について検討した。1987年から1998年までに当科にて治療し、完全寛解に至った171例のうち、66例に再燃が認められた。完全寛解中にのベ227件のガリウムシンチが施行されたが、無症状の再燃を検出できたものはわずか1件のみであった。再燃の確定の契機となったものは、大部分は自覚症状または他覚症状であった(71.2%)。しかし、再燃確定後に施行したガリウムシンチでは83.3%が陽性であった。また、再燃前に陰性とされたガリウムシンチから3.3%が1ケ月以内に、15%が2ケ月以内に、38.3%が3ケ月以内に再燃しており、ガリウムシンチは必ずしも症状の出現する以前に再燃を検出できるわけではないことが示唆された(論文準備中)。1. 1988年から1998年の11年間に当科で治療した頭頸部原発の非ホジキンリンパ腫168例について、原発部位、進展形式についてCT、ガリウムシンチを用いて検討した。また、全例の予後調査を行った。2.臨床病期は、I期が78例、II期が44例、III期が16例、IV期が30例であった。原発部位は、ワルダイエル輪が55例、頸部リンパ節42例、歯肉、口蓋13例、眼窩13例、鼻腔12例、副鼻腔12例、耳下腺部6例、甲状腺4例、その他11例であった。3.進展形式は、II-IV期の90例について検討した。両側の頸部リンパ節腫大は、III期、IV期で全身性に播種したものや、上咽頭原発など原発部位が正中に及ぶものに認められた。一方、原発部位が片側性でII期の場合にはほとんどが患側の頸部リンパ節のみに浸潤しており、対側を侵すことはまれであった。腋窩リンパ節への浸潤は10例にみられたが、ほとんど(80%)がIII期、IV期の全身性に播種したものであった。胃への浸潤のあるものは8例で、すべてがB細胞由来であり、ワルダイエル輪原発は4例(50%)であった。HTLV1抗原が陽性のものは、皮膚、骨への浸潤が多かった。4. 5年生存率は、I期が82.4%、II期が56.6%、III期42.8%、IV期が17.7%であった。5.現在、パラフィンブロックを用いてCD44などの接着因子の発現を検査中であり、今後接着因子発現と非ホジキンリンパ腫の臓器特異性、進展形式、予後などとの関連を検討する予定である。

再燃の確定の契機となったものは、大部分は自覚症状または他覚症状であった(71.2%)。しかし、再燃確定後に施行したガリウムシンチでは83.3%が陽性であった。また、再燃前に陰性とされたガリウムシンチから3.3%が1ケ月以内に、15%が2ケ月以内に、38.3%が3ケ月以内に再燃しており、ガリウムシンチは必ずしも症状の出現する以前に再燃を検出できるわけではないことが示唆された(論文準備中)。
植物発生進化のグランドプランとしての細胞分裂軸制御機構とその時空間制御機構の解明

[研究1]1ー1)野生型、las1 las2二重欠失変異体について、4器官の固定サンプルを用いて細胞セグメンテーションを行い、細胞分裂面制御は分裂面の面積を最小にするような基本法則に従っている可能性があることがわかった。las1 las2二重欠失変異体では細胞体積が大きくなっていた。1ー2)RNA-seqの結果、4器官で共通に変化している遺伝子で細胞分裂軸形成に関わるものは見つからなかった。1ー3)LAS誘導時にin vitro胚と葉原基で分裂速度を調べたところ、分裂速度が上昇している可能性が高いことがわかった。1ー4)オーキシン排出タンパク質が細胞分裂軸決定に関わっている可能性が高いことがわかった。[研究2]2ー1)SHRは細胞間を移動しないことがわかった。2ー2)SCRがSHRを正にLASがSHRを負に細胞特異的に制御していることがわかった。[研究3ー1]オーキシン合成酵素遺伝子、輸送体遺伝子末端に蛍光タンパク質遺伝子を挿入し発現解析を行っている。また、GH3オーキシン応答性プロモーターを用いて細胞レベルでのオーキシン分布を調べている。[研究3ー2]ミカヅキモでチューブリンー蛍光タンパク質融合タンパク質を発現する形質転換体を作製し、微小管観察に成功した。[研究3ー3]タバコBY2を用いて高解像度顕微鏡によって表層微小管形成時の微小管動態観察に成功した。[研究3ー4]in vitro胚での細胞壁と核の同時染色をいろいろな試薬を用いて試みたが成功せず、さらに継続実験をしている。[研究3ー5]in vitro胚と葉の頂端幹細胞で微小管とアクチンの動態を観察し、in vitro胚で微小管雲ができることが分裂軸形成の初期過程であることがわかった。アクチンについては解析が難航している。細胞膜脂質については分裂軸との関連は見つからなかった。当初は微小管結合タンパク質などの微小管制御因子が得られると予想していたが、オーキシン輸送体という従来の細胞分裂制御因子とは異なった機構で細胞分裂軸を制御する因子が見つかった点は、想定外であり、予定以上の成果が上がったと自己評価している。さらに、ヒメミカヅキモの前期前微小管束の発見は、従来の陸上植物進化の常識を覆す発見であり、予定以上の成果である。当初計画に沿うが、新しい発見に応じて臨機応変に研究計画を修正し、当初目的を達成する。[研究1]1)欠失変異体と野生型の違いを細胞レベルで明示するため、LAS欠失変異体について葉原基、造精器、造卵器、in vitro胚を用いて、SCRとSHR欠失変異体については葉原基を用いて共焦点顕微鏡画像をMORPHOGRAPHXでセグメンテーションする系を立ち上げた。2) LAS遺伝子欠失変異体の造精器原基、造卵器原基、in vitro胚、葉原基から、垂層分裂から並層分裂への転換が起きている段階の細胞塊(50細胞程度を100サンプル)を単離、少数細胞RNA-seq法で野生型と発現比較を行った。その結果、予想に反し、数個の遺伝子のみが複数器官で重複して発現していた。3)Alpha-tubulin遺伝子末端にGFP遺伝子を挿入し微小管を可視化したラインに対して候補遺伝子を欠失させ、さらに、CURLYLEAF遺伝子を破壊してin vitro胚を誘導した。4)で局在が分裂面制御に関わる可能性のある因子を選抜し、それらについて遺伝子ターゲティングによる遺伝子欠失変異体を作成し機能喪失実験を行った。4)遺伝子末端にCitrine遺伝子を挿入して融合遺伝子の発現細胞、細胞内局在を解析した。5)in vitro胚、切断葉、2細胞系で細胞分裂におけるオーキシン制御モデルを検討した。[研究3]ミカヅキモに1)構成的プロモーター::Tubulin遺伝子ーGFP遺伝子を導入して微小管を可視化したラインを確立した。2)LAS、SCR、SHR、RBR、CycD6;1ホモログをゲノム情報から探索した。4器官でトランスクリプトーム比較を行ったが、予想外に共通に変動している因子が少なかったが、in vitro胚と葉原基に研究を集中させることで、大きな問題にはならなかった。[研究1]1)LAS欠失変異体は4器官、SCRとSHR欠失変異体は葉原基の共焦点顕微鏡画像の取得を完了し、in vitro胚のセグメンテーションを完成した。2)十分量のin vitro胚を用いてLASの有無によって発現変動する遺伝子をRNA-seq法で探索し、昨年度の少量RNAseqの結果を確認した。3)in vitro胚において、RNAseqによって得られた候補遺伝子産物、オーキシン関連因子、細胞骨格関連因子などについて局在を調べた。分裂軸と関連した挙動を示す因子について、遺伝子破壊体を作出した。4)オーキシン誘導プロモーター応答性、オーキシン極性輸送因子局在、合成遺伝子の発現解析用の形質転換体を作成し、観察を行っている。5)微小管形成の自己組織化機構とshortest wall ruleとの関連についてタバコBY2細胞を用いて微小管動態の解析を行った。6)茎葉体頂端幹細胞の分裂軸制御の新機構を見つけた。7)幹細胞と隣の細胞の分裂面形成の関連について解析した。[研究2]1)SHRの細胞間移動を調べるため、SHR-GUS-GFPとSHR-GFPをshr欠失変異体に導入し相補出来ることを確認した。

2)3つのRBR関連遺伝子、2つのCycD6関連遺伝子の発現解析を行った。また、免疫沈降法でSCR、SHRの相互作用を調べた。3)MADS-box遺伝子を欠失すると茎葉体の分裂が抑制され形態変化がおこることからRNA-seqにより分裂因子との関連を調べたがGRAS転写因子を介した制御は見つからなかった。STEMIN遺伝子は細胞分裂を制御するCycD遺伝子を制御していることがわかった。[研究3]1)昨年度作成したヒメミカヅキモの微小管可視化ラインを観察し、微小管動態と細胞分裂の関連を調べ、特異な微小管動態を示すことを発見した。2)GRAS遺伝子破壊体の作出を行っている。候補遺伝子の解析が順調に進行している。in vitro胚の観察から、予想外に、分裂軸がエレラ則に従って分裂している可能性がわかり新展開が開けつつある。エレラ則が成り立つ理由を微小管の自己組織化によって説明できる可能性がでてきた。当初予想とは異なるが、分裂面形成機構の解明に向けて、順調に研究が進展している。[研究1]1ー1)野生型、las1 las2二重欠失変異体について、4器官の固定サンプルを用いて細胞セグメンテーションを行い、細胞分裂面制御は分裂面の面積を最小にするような基本法則に従っている可能性があることがわかった。las1 las2二重欠失変異体では細胞体積が大きくなっていた。1ー2)RNA-seqの結果、4器官で共通に変化している遺伝子で細胞分裂軸形成に関わるものは見つからなかった。1ー3)LAS誘導時にin vitro胚と葉原基で分裂速度を調べたところ、分裂速度が上昇している可能性が高いことがわかった。1ー4)オーキシン排出タンパク質が細胞分裂軸決定に関わっている可能性が高いことがわかった。[研究2]2ー1)SHRは細胞間を移動しないことがわかった。2ー2)SCRがSHRを正にLASがSHRを負に細胞特異的に制御していることがわかった。[研究3ー1]オーキシン合成酵素遺伝子、輸送体遺伝子末端に蛍光タンパク質遺伝子を挿入し発現解析を行っている。また、GH3オーキシン応答性プロモーターを用いて細胞レベルでのオーキシン分布を調べている。[研究3ー2]ミカヅキモでチューブリンー蛍光タンパク質融合タンパク質を発現する形質転換体を作製し、微小管観察に成功した。[研究3ー3]タバコBY2を用いて高解像度顕微鏡によって表層微小管形成時の微小管動態観察に成功した。[研究3ー4]in vitro胚での細胞壁と核の同時染色をいろいろな試薬を用いて試みたが成功せず、さらに継続実験をしている。[研究3ー5]in vitro胚と葉の頂端幹細胞で微小管とアクチンの動態を観察し、in vitro胚で微小管雲ができることが分裂軸形成の初期過程であることがわかった。アクチンについては解析が難航している。細胞膜脂質については分裂軸との関連は見つからなかった。
レーザーを用いたマウス内耳への低侵襲遺伝子導入法の確立

高度感音難聴に対する治療は耳鼻咽喉科領域では最も重要なテーマであるが実際の治療はきわめて困難である。補聴器も使用できないほどの高度難聴者はわが国でも数十万人いると推測されている。人の内耳を直接生検することや侵襲的な生理学的検査は困難であり、有用な動物モデルを用いての検討は発症機序の解明や根本的治療の確立に極めて重要である。また、将来のヒトの内耳への薬物投与・遺伝子導入に貢献するものである。これまで報告された様々な方法による内耳への薬物投与法を行い、その発現と侵襲を比較した。発現はCMVプロモーターを用いたGFPを発現するアデノウィルスベクターにて、侵襲はABRによる聴力の測定を手術前後で行った。低侵襲に投与するためアルゴンレーザーを用いて蝸牛外側壁に血管条をめやすにして内部に影響のない強さ(100w/0.2sでsingle burst)で200μm以下の穴を開け、チューブを挿入する。そこからGFPを発現するアデノウィルスベクターを内耳を破壊しない速度(1μl/h)で注入。その後、発現と聴力の評価を行った。今回検討する投与法では十分にしかも聴力を下げることなく低侵襲で内リンパ腔への投与を実現できる可能性がある。これは様々な内耳疾患モデルマウスに応用できることが判明した。現在、動物モデルは主にマウスが用いられているが、小動物であるため内耳への薬物投与は困難とされてきた。我々はマウス内耳に侵襲を最低限に抑えて投与できる方法の開発に取り組んでいる。マウスにおける内耳への薬物投与・遺伝子導入を現在まで報告された様々な方法で試みて、それらと我々の新しい投与法の比較を行う。マウスにおける低侵襲で十分な内リンパ腔への投与法の確立これまで報告された様々な方法による内耳への薬物投与法を行い、その発現と侵襲を比較した。低侵襲に投与するめアルゴンレーザーを用いて蝸牛外側壁に血管条をめやすにして内部に影響のない強さ(100w/0.2sでsingle burst)で200μm以下の穴を開け、チューブを挿入した。そこからGFPを発現するアデノウィルスベクターを内耳を破壊しない速度(1μl/h)で注入し、その後、発現と聴力の評価を行ない、低侵襲の方法であることが判明した。
中世におけるイスラム天文学のアラビア語およびラテン語文献の研究

10世紀のイスラムの天文学者アル=カビースィーによる占星術書(Introduction to Astrology)は、ロンドン大学ウォーバーグ研究所から2004年6月に出版された。それは、8種類のアラビア語写本に基づいた校訂版とその英語訳、12世紀に作られたラテン語訳の校訂版、そしてさらにアラビア語・ラテン語およびラテン語・アラビア語の語彙集から構成されている。またラテン語訳のみで残っている天文学論文も英語訳つきで、付録(pp.375-385)として収められている。その他に付録として、アル=キンディーの占星術文献の一部のアラビア語校訂版と英語訳が載っている。「惑星の距離と大きさについて」(Treatise on distances and bodies)という論文については、アラビア語テキストの校訂のみがほぼ完成している。最後に、9世紀の天文学者アル=ファルガーニーの「天文学綱要」に対するアル=カビースィーによる注釈については、ひとつしかないアラビア語写本(Istanbul, Ayasofya 4832)の状態が悪く、校訂作業を十分に進めることができなかった。またアル=ファルガーニーの著作自体も写本によってバリエーションが大きく、アル=カビースィーの注釈以前に、まずアル=ファルガーニーの著作の校訂を行なう必要性が出てきた。10世紀のブワイフ朝時代の天文学者,アル=カビースィー(ラテン名,アルカビティウス)による,天文学関係のアラビア語論文を編集し,英訳することが本研究の目的である。編集する予定の論文は,(1)『占星術師資格試問』,(2)『惑星の距離と大きさ』,(3)『アル=ファルガーニーの天文学書注解』の3つである。(1)については,ダマスクス,ザーヒリーヤ写本とカイロ,ダール・アル=クトゥブ写本の2点が存在する。(2)は,イスタンブル,アヤソフィア写本とダブリン,チェスター・ビーティ写本の2点が知られている。(3)は,アヤソフィア写本1点しか現存していない。すでに,これらすべての写本のコピーを入手し終えた。テキストの校訂と英訳は,全体で約70パーセントを終えている。また,(3)の基になった,9世紀の天文学者アル=ファルガーニーによる天文学書の写本についても,調査と資料収集を行なった。まず,カイロにある2点の写本のうちひとつ(Cairo, Dar al-Kutub,944)については,昨年9月に山本が現地調査をした。そのほかに,イスタンブルにある写本2点(Ayasofya 2843,Callurah 1279)のコピーも,バーネット教授を通じて入手することができた。この結果,写本9点のコピーが利用できることになった。なお,当初,本研究に含まれるはずであった,アル=カビースィーのラテン語テキスト(De coniunctionibus planetarum)の校訂版については,われわれ3人の共同研究者が,今年5月に出版する予定である,アル=カビースィーによる占星術書の校訂版(Al-Qabisi [Alcabitius] : The Introduction to Astrology ; Warburg Institute Studies and Texts 2,London,2004)の中で発表することになった。昨年度で終了したアル=カビースィーの『占星術入門』の校訂および英語訳作業に引き続き、16年度は「占星術師資格諮問」(The treatise on the testing of those who call themselves astrologers)の校訂と英語訳を中心に研究を行なった。アラビア語テキストの一部に不明な点がいくつか残ったが、大体においてテキストと英語訳が終了した。特に、序文部分はもっとも興味深い内容であるにもかかわらず、判読しにくい1種類の写本しか存在しないために、完全にそれを解明することはできなかった。しかし、アル=カビースィーを通じて、大筋においては当時の天文学者・占星術師の基本的な考え方を捉えることができたと思われる。同著者の「惑星の距離と大きさについて」(Treatise on distances and bodies)という論文については、アラビア語テキストの校訂のみがほぼ完成している。これは明らかにプトレマイオスの『アルマゲスト』に基づいた小論であり、写本に見られる図も、『アルマゲスト』のものとほとんど同じであることがわかった。

しかし、基本的なテキストはすでにコンピュータに打ち込んであり、今後別の資料などを利用することによって、完成にいたることを期待したい。またアル=ファルガーニーの著作自体も写本によってバリエーションが大きく、アル=カビースィーの注釈以前に、まずアル=ファルガーニーの著作の校訂を行なう必要性が出てきた。
十二指腸液の逆流に注目した胃切除後の逆流性食道炎の病態の検討

平成12年度から13年度にかけて以下の研究を遂行した。胃癌の診断にて幽門側胃切除、billroth-I法再建術が施行された術後の患者で、逆流性食導炎の症状を有する以外には術後の全身状態が良好で、同意の得られた患者約12名に以下の検査を施行した。1.食道、胃内視鏡検査:逆流性食道炎による変化の有無(Los Angels分類による重症度分類)2.食道、胃バリウム造影検査:食道裂孔ヘルニアの程度、及び残胃の大きさ(長軸x短軸)の評価3.食道内庄検査:下部食道括約筋の圧測定、及び食道体部の運動機能の評価4.24時間食道pHモニタリシグ検査、及び食道ビリテック検査にて食道内の胆汁の逆流の程度及びpHを計測し、専用の解析ソフトにてデータの解析を行った。現在までのデータの集積にて、胃切除後の食道内視鏡検査にて重症の逆流性食道炎所見を有する患者は以下の所見を示す傾向が強かった。1.食道、胃バリウム造影検査にて食道裂孔ヘルニアを認め、残胃は小さい。2.食道内圧検査にて下部食道括約筋の圧は低下しており、食道体部の運動機能障害を認める。3.24時間食道pHモニタリング検査では、残胃の酸分泌能は低下していることが多く、食道内に胃酸が逆流することは少ない。4.食道ビリテック検査にて、食道内に胆汁を含む十二指腸液の高度な逆流を認める。5.胃切除後の逆流性食道炎の重症化には、胃酸の逆流よりもむしろ十二指腸液の逆流が関与している可能性が高い。上記に加え、さらに詳細な統計学的解析を行った後、最終的な結論を出す予定である。平成12年度は以下の研究を遂行した。平成12年10月から12月の間に、北里大学東病院消化器外科外来を受診し、胃癌の診断にて幽門側胃切除、Billroth-I法再建術が施行された術後の患者に逆流症状の有無とその頻度に関するアンケート調査を実施した。現在その調査結果を解析中である。さらに、流性食道炎の症状を有する以外には術後の全身状態が良好で、同意の得られた患者約5名に以下の検査を施行した。1.食道、胃内視鏡検査:逆流性食道炎による変化の有無(Los Angels分類による重症度分類)2.食道、胃バリウム造影検査:食道裂孔ヘルニアの程度、及び残胃の大きさ(長軸x短軸)の評価3.食道内圧検査:下部食道括約筋の圧測定、及び食道体部の運動機能の評価4.24時間食道pHモニタリング検査、及び食道ビリテック検査にて食道内の胆汁の逆流の程度及びpHを計測し、専用の解析ソフトにてデータの解析を行った。現在までのデータの集積にて、食道内視鏡検査にて重症の逆流性食道炎所見を有する患者は以下の所見を示す傾向が強かった。3.24時間食道pHモニタリング検査では、食道内に胃酸が逆流することは少なく、むしろ食道ビリテック検査にて食道内に十二指腸液の高度な逆流を認めた。平成13年3月までにさらに、5名の対象患者に上記検査を施行し、データを追加蓄積させた後に結果の解析を行う予定である。