hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規なＸ染色体がん抑制遺伝子Ｎｒｋ欠損マウスによる細胞増殖抑制機構の解明

健常マウスでは,半定量的PCR解析によって卵巣でNrkの発現上昇が認められること,乳腺腫瘍を発症したNrk欠損マウスの血中エストロゲン濃度が著しく上昇することに加え,野生型個体で非妊娠時にほとんど認められないNrkの遺伝子発現が乳腺で妊娠時に誘導されること,Nrkを欠損するとエストロゲン受容体発現が亢進し,ホルモンの組織感受性の上昇に繋がることが原因で健康に異常をきたす可能性が高いことがわかった。マウスメス成獣における主要なエストロゲン産生組織が卵巣であることを考慮すれば,Nrkが卵巣におけるエストロゲン生合成を制御し,乳腺腫瘍の主因となる乳腺上皮細胞の過増殖を抑止するものと考えられる(Yanagawa, Denda et al.)。以上の今年度の研究の進捗によって,当初の方針に若干の修正を加えながらも,乳腺上皮における未知の細胞増殖制御機構を知る上で重要な情報を獲得することができ,今後の新たな治療法開発に繋がることを期待したい。妊娠出産をくり返したNrk遺伝子欠損マウスのメス個体においては,エストロゲン感受性の致死性の乳腺腫瘍を好発する。したがって,Nrkが細胞増殖を制御するがん抑制遺伝子であり,その機能が損なわれると乳腺上皮組織の秩序に不具合を生じ,細胞増殖亢進による悪性腫瘍発症のリスクが高くなるものと考えられる。乳腺腫瘍の発症メカニズムの作用点をつきとめるとともに,健康な哺乳動物個体で通常Nrkがどのような生理的役割を果たしているかを明らかにすることを目的として,乳腺腫瘍を生じたNrk欠損マウスの卵巣およびエストロゲン感受性組織を対象とした生理学的研究を行った。その結果,健常マウスでNrkの発現上昇が認められ,乳腺腫瘍を形成したNrk欠損マウスの血中エストロゲン濃度が著しく上昇するという知見に加え,乳腺においては野生型個体で通常ほとんどみられないNrkの遺伝子発現がメス妊娠個体の乳腺に発現誘導されること,Nrkを欠損するとエストロゲン受容体の発現量が亢進し,ホルモン感受性組織における不適切で持続的な助長作用が続くことを原因として生体内に異常をきたす可能性が高いことがわかった。以上の実験データは,マウスメス成獣における主要なエストロゲン産生組織が卵巣であることを考え併せると,Nrkが周産期の卵巣におけるエストロゲン生合成の変動を制御するために乳腺上皮細胞の過増殖が抑えられる効果によって,乳腺腫瘍の発症が起こりにくくなる可能性が考えれられる。以上のことから,今年度の研究の進捗によって,当初の実験計画に対して若干の軌道修正を要しながらも,未知の乳腺上皮組織における細胞増殖制御メカニズムを知る上で重要な知見を取得することができた。従って本研究課題は現在までにほぼ当初の実験計画に見合うに値する前進があったものと判断している。本研究成果は,米病理学会誌および朝日新聞(平成28年10月12日)に掲載された。本研究では,がん抑制遺伝子産物である新奇なセリン/スレオニンキナーゼNRK (Nik-related kinase)の生理機能解明を見据え,この遺伝子欠損がもたらす顕著な表現型のひとつである乳腺腫瘍発症に力点を置いて分子生理学的解析を行った。その結果,NRK遺伝子欠損によるプロテオミクス動態解析により発現変動するタンパク因子群が認められた。再現性を考慮し複数回の試行により,10あまりのリン酸化基質の可能性が期待されるタンパクスポットの質量分析を行い,Nrk欠損が発現に影響を与えると考えられる有意な細胞内タンパクを同定した。
硫酸化修飾のPAPS輸送体制御による統合的機能解析

硫酸化は広汎に認められる翻訳後修飾の一種である。我々は、硫酸化の鍵となるPAPS輸送体を取り上げた。そのノックダウンES細胞とノックアウトマウスを用いて、硫酸化修飾を受けた糖鎖がWnt、BMP、FGFシグナルを制御してES細胞の未分化性・多能性の維持や分化方向の決定、初期胚における細胞運命の決定に働いていること、また、PAPS輸送体の機能が低下すると様々な疾病を引き起こすことを明らかにした。硫酸化修飾は翻訳後修飾の一種であり、モルフォゲンの分布の決定やリガンド分子の受容体への結合などに際し、重要な機能を果たしている。2種のPAPS輸送体(PAPST)が存在し、これらは様々な硫酸転移酵素にドナー基質を供給して硫酸化を制御している。本研究では、PAPSTのノックアウトマウスとRNAiノックダウンES細胞を併用して機能解析を行い、硫酸化修飾の役割を明らかにする。本年度は、以下の解析を行った。1.PAPSTコンディショナルノックアウトマウスの作製PAPST1については、コンディショナルノックアウトに用いるfloxedマウスの作製を行い、floxedマウスの候補が得られた。また、PAPST2のゲノム配列をターゲッティングベクターに組み込み、PAPST2ノックアウトマウス作製の準備を行った。2種のマウスES細胞株において、PAPST1、PAST2を一過性にRNAi法によりノックダウンし、ES細胞の未分化性、多能性維持について解析を行った。両者のノックダウンにより、アルカリフォスファターゼ陽性コロニーの減少、Nanog、Oct3/4の低下が認められ、PAPST1、及び、PAPST2がマウスES細胞の未分化性維持に重要な働きを持つことが明らかになった。また、増殖性の低下も認められ、増殖においても重要な働きを持つことが示された。さらに、両者の安定RNAiノックダウンES細胞株を作製した。三胚葉へ分化させたところ分化の異常が認められ、両者が各胚葉の分化にも関わっていることが分った。1.PAPSTコンディショナルノックアウトマウスの作製得られたPAPST1 floxedマウスの候補について検討を行った。2種のマウスES細胞株において、PAPST1、PAPST2を一過性にRNAi法によりノックダウンし、どのようなシグナルがES細胞の未分化性、多能性維持の低下に関与しているか、検討を行った。両者のノックダウンES細胞では、Wnt、BMPシグナルが低下しており、これらが、未分化性、多能性維低下の原因であることが明らかになった。すなわち、硫酸化修飾が、Wnt、BMPシグナルを介して、マウスES細胞の未分化性、多能性維持に関与していることがわかった。さらに、ヘパラン硫酸の硫酸化に関与する硫酸転移酵素をノックダウンしたところ、同様な効果が認められた。この事実から、マウスES細胞においては、コンドロイチン硫酸ではなく、ヘパラン硫酸の硫酸化修飾が重要な働きをしていることが、示された。1.PAPSTコンディショナルノックアウトマウスの作製PCR及びサザンブロット解析の結果、PAPST1 floxedマウスが作成できたことが確認された。全身性にCreを発現させヌルマウスを作成したところ、胎生致死となり、中胚葉誘導に異常が認められた。ヌルマウス胚は、アルシャンブルーで殆ど染色されず、硫酸化修飾が顕著に阻害されていた。これらの事実から、マウス胚における中胚葉誘導にPAPST1を介した硫酸化が重要な働きをしていることが明らかになった。作製したPAPST1、PAPST2の安定RNAiノックダウンES細胞株の三胚葉への分化の異常にどのようなシグナルが関与しているか、検討した。ノックダウンES細胞株から胚葉体を誘導すると、中胚葉、内胚葉の分化が抑制され、外胚葉の分化が促進された。ノックダウン胚葉体では、Wnt、BMPシグナルが低下しており、これらが、中胚葉の分化を抑制して外胚葉の分化を促進していることがわかった。この過程には、ヘパラン硫酸とコンドロイチン硫酸の両者が関わっていた。
薬物の口腔粘膜吸収に関与する特殊輸送系の解析

口腔粘膜において特殊輸送機構で吸収される物質について、重層扁平上皮での特殊輸送系の特性を明らかにすることを目的として、口腔粘膜を構成する上皮細胞によるD-glucose及びジペプチドglycylsarcosineの取り込み機構に検討を加えた。ヒト舌背および頬粘膜から単離した細胞へのD-glucoseの取り込みを検討したところ、L-glucoseに比較して著しく大きく、また頬細胞より舌背細胞の方が大きいことが明らかになり、ヒト口腔内各部位にセルを装着して行った還流実験の結果と一致した。速度論的解析の結果、見掛けのKmに違いはないが、Vmaxに差が認められ、舌背細胞の方に細胞あたりのトランスポータ発現量が多いことが示唆された。D-Glucose輸送に関与するトランスポータの性質を検討した結果、SGLT1による能動輸送系のほかに促進拡散輸送系の関与が示唆された。口腔粘膜上皮細胞に発現している促進拡散トランスポータの分子種を検討した結果、GLUT13の発現が示唆された。これはウエスタン・ブロットにより裏付けられた。Glycylsarcosineの口腔粘膜単離細胞への取り込み機構の検討の結果、口腔粘膜上皮細胞にオリゴペプチド・トランスポータも発現していることが示された。さらに、ヒト口腔細胞を重層に培養する方法を確立し、D-glucose及びglycylsarcosineについて重層状態での輸送機構の解析を行った結果、口腔粘膜上皮細胞に発現するトランスポータは、細胞自身の栄養源補給のために細胞内へ取り込みに機能しているのみならず、重層の細胞層を通しての輸送にも機能していることが示され、薬物の口腔粘膜吸収に関与する可能性を明らかにすることができた。口腔粘膜において特殊輸送機構で吸収される物質について、重層扁平上皮での特殊輸送系の特性を明らかにすることを目的として、本年度は口腔粘膜を構成する上皮細胞によるD-glucoseの取り込み機構に検討を加えた。D-Glucose輸送に関与するトランスポータの性質を明らかにするために、Na^+依存性や各種輸送阻害剤の影響を検討した結果、輸送の一部にのみNa^+依存性およびphlorizinによる阻害が認められ、SGLT1による能動輸送系のほかに促進拡散輸送系の関与が示唆された。口腔粘膜上皮細胞に発現している促進拡散トランスポータの分子種を明らかにするために、促進拡散で輸送される2.deoxy-D-glucoseの取り込みに及ぼす各トランスポータ分子種に特異的な基質糖の影響を検討した結果、GLUT13の発現が示唆された。これはウエスタン・プロットにより裏付けられた。ヒト舌癌由来SCCKN細胞についても同様にD-glucoseの輸送に関与するトランスポータの解析を行ったところ、SGLT1の発現は認められず、促進拡散トランスポータについてもGLUT1およびGLUT3の発現は認められたが、GLUT2は認められないなど正常細胞と異なることが明らかになった。現在、ヒト口腔細胞を重層に培養する方法を検討しており、平成11年度は重層状態でのD-glucose輸送機構の解析を行う予定である。口腔粘膜での特殊輸送系の特性を明らかにすることを目的として、まず、ペプチド輸送機構に検討を加えた。

ヒト舌背及び頬粘膜から単離した上皮細胞へのジペプチドglycylsarcosineの取り込みを検討したところ、高濃度で取り込み速度が飽和する傾向が認められ、ペプチドトランスポータによる輸送が明らかにされているβ-ラクタム抗生物質により取り込みが阻害されたことから、口腔粘膜上皮細胞にペプチドトランスポータが発現していることが示唆された。しかし、その取り込みのpH依存性を検討した結果、プロトンとの共輸送が認められず、促進拡散輸送系の寄与が大きいことが示唆された。口腔粘膜は単層上皮である胃腸管と異なり重層上皮であるため、上皮細胞に存在する特殊輸送系が重層の場合にどのように働くかは全く不明である。前年度、ヒト舌背及び頬粘膜から単離した上皮細胞について、D-glucoseの輸送特性を解析したので、本年度は重層を成す上皮細胞ではD-glucoseの特殊輸送系(能動輪送トランスポータと促進拡散トランスポータ)がそれぞれどのように働くかを明らかにすることを目的として、重層を形成する培養細胞系を用いて検討を行った。はじめに、ヒト口腔の手術時に摘出した組織から上皮細胞を単離して、その重層を形成する培養法の検討を行った。本実験は岡山大学歯学部倫理委員会において認められたもので、患者の承認を得た組織を使用した。種々の検討の結果、培養細胞に重層を形成させることに成功した。つぎに、多孔性フィルター上に重層を形成した培養細胞系を用いて、D-glucoseの透過速度を測定したところ、L-glucoseに比較して著しく大きいことが認められ、D-glucose輸送系が上皮細胞の生存のために細胞内への取り込みに機能しているのみならず、重層を形成した細胞層の透過にも役割を果たしていることを明らかにすることができた。
後期発生における背腹パターン形成機構の普遍性と分子メカニズム

我々は、脊椎動物の後期発生において背腹での細胞・組織のパターンを形成する普遍的制御機構を分子レベルで解明することを目的とし、体節および体節由来組織の背側で発現することで外部形態の背腹パターンを制御する転写因子Zic1/Zic4の分子機能を解析した。我々は、Zic1/Zic4の体節における発現が特異的に消失したメダカ変異体Daを用いた網羅的遺伝子発現解析によりZic1/4の下流遺伝子を同定し、Zic1/Zic4が背腹でNotchシグナルの活性レベルを変化させることで背側特異的形態形成に関わる可能性を見出した。さらに、Zic1/4の保存された機能および発現制御を明らかにするためマウスを用いた解析も行った。生物のからだが正常に機能するためには、個々の細胞・組織が正しい空間的配置(パターン)をとることが重要である。従って、発生過程においてパターンを形成し、そのパターンを維持していく基本原理を理解することは基礎生物学および医学的な観点からも極めて重要であると考えられる。そこで我々は、脊椎動物の後期発生において背腹での細胞および組織のパターンを形成する新規の普遍的制御機構を分子レベルで解明することを目的とし、体節および体節由来組織の背側で発現することで外部形態の背腹パターンを制御する転写因子Zic1/Zic4の分子機能を解析した。我々は、野生型およびZic1/Zic4の体節における発現が特異的に消失したメダカ変異体Daの胚から体節を単離し、マイクロアレイ解析を行った。その結果、Da変異体において発現が減少あるいは増加した遺伝子を同定することができた。Daにおいて発現が減少している遺伝子には細胞間相互作用や細胞運動に寄与するものが多く、増加している遺伝子にはクロマチン制御因子が多く存在した。Zic1/4がこれらの遺伝子の発現を介して背側特異的な体節細胞の性質を規定している可能性がある。現在これらの遺伝子群について発現解析を行っており、野生型での背・腹特異的な発現を示す遺伝子などについては機能阻害実験などによるさらなる解析を行う。また、Zic1/4の転写制御機構を明らかにするために、Zic1にビオチン化タグを付加した細胞株(マウス筋芽細胞)の樹立を試みており、複合体精製により相互作用因子の同定を目指す。さらに、Zic1/4の保存された機能および発現パターンを明らかにするためのノックアウトおよびトランスジェニックマウスの作製も進行中である。これらの解析を通して、後期発生における背腹パターン形成の普遍的な分子機構を明らかにすることができると考えている。従って、発生過程においてパターンを形成し、そのパターンを維持していく基本原理を理解することは極めて重要である。そこで我々は、脊椎動物の後期発生において背腹での細胞・組織のパターンを形成する普遍的制御機構を分子レベルで解明することを目的とし、体節および体節由来組織の背側で発現することで外部形態の背腹パターンを制御する転写因子Zic1/Zic4の分子機能を解析した。我々は、野生型およびZic1/Zic4の体節における発現が特異的に消失したメダカ変異体Daの胚から体節を単離し、マイクロアレイ解析およびRNA seq解析を行った。候補遺伝子の詳細な発現解析によりZic1/4の下流遺伝子を同定し、lunatic fringe(lfng)、fhl2という二つの遺伝子に特に着目して解析を行った。LfngはNotchシグナルの活性を調節する因子として知られており、Zic1/4が背腹でNotchシグナルの活性レベルを変化させることで背側特異的形態形成に関わる可能性を示唆している。Fhl2は遅筋前駆細胞における発現がZic1/Zic4に依存しており、Da変異体において成体における遅筋組織の顕著な減少が見られたことから、Zic1/Zic4は遅筋組織の形成にも寄与していることが示唆された。さらに、Zic1/4の保存された機能および発現パターンを明らかにするためのノックアウトおよびトランスジェニックマウスの作製も進行中であり、メダカの体節における発現制御領域(約40kb)がマウスにおいても体節背側での発現を誘導することを示した。また、zic1遺伝子座にH2B-EGFP遺伝子をノックインしたマウスの解析から、zic1の背側特異的発現が発生後において細胞自律的に長期間維持されうることも明らかにした。
ガーナのパイナップル産業の発展

サブサハラアフリカにおいて近年発展を遂げている園芸産業は、貧困削減への役割から多くの注目を集めているが、その効果を定量的に示したものは少なく、特にリスクの重要性に焦点を当てたものは少ない。本研究では、農家のリスク選好を測定するゲームを行い、リスク選好が市場退出の決断に影響を及ぼすかを検証した。その結果、a)リスク回避的であれば退出の確率が高まること、b)EU市場での需要の変化がそれ以降のパイナップル市場に参入する農家の退出確率を上げたこと、c)教育年数が高ければ、リスク選好が退出の確率に与える影響が緩和されることが明らかになった。本研究では、貧困削減の一助となるとして注目を集める付加価値の高い輸出園芸産業の一例として、ガーナのパイナップル産業を事例に調査を行っている。H19年に筆者が行った調査では、同市場に零細農家が参入するためにはリスク分散能力が重要であることが判明した。しかし、H19年の調査では個々人の農家のリスク選好を計測する質問は行わなかったため、実際にどのくらい重要であるのかを定量的に分析することはできなかった。そこで、H23年度に本研究費を使って再度現地を訪れ、ガーナ大学統計社会経済研究所の協力を得て、前回調査を行った農家約250世帯に対してインタビューとリスク選好を計測するための簡単な実験を行い、パネルデータを作成した。H24年度は、収集したデータの分析を開始した。まず質問票を整理し、分析に使用可能なサンプルとそうでないものに仕分けし、その後、時間を掛けてデータクリーニングを行った。また、リスク選好の測定を行い、それがパイナップル農家として長年生き残る要因になっているかどうかの分析を行った。それらの結果を元に論文の作成を進めてきたが、以下の理由から研究は計画通りに進まなかった。第一点には、分析開始後に、現地機関から入手したデータに不備があることが判明し、先方に修正依頼を行った。そのため、しばらく分析ができない期間が生じた。第二点には、データ再入手後に分析、論文執筆を進めたが、H24年度は妊娠中で予定していた国外の学会参加が難しくなり、予定していた学会に応募できなかったことがある。第三点には、結果として年度中に産前休暇に入ったため、本研究を一時中断することとなったことである。H25年度後半から研究を再開する予定である。本研究では、貧困削減の一助になるとして注目を集める付加価値の高い輸出園芸産業の一例として、ガーナのパイナップル産業を事例に調査を行った。H24年度の後半からH25年度前半の育児休暇を経て、H25年度後半に研究に復帰し、収集したデータの解析を行い、論文を執筆した。その結果、農家のリスク選好はパイナップル生産という技術採用に影響を及ぼしており、更にその技術を長期間採用し続けていくこと(サバイバル)にも影響を与えていることが分かった。つまり、リスク嫌いの度合いが高い農家は、パイナップルを栽培しても、栽培し続ける期間が短かった。更に、生産者の教育年数はリスク選好が技術の長期間の採用に及ぼす影響を補完する役割があることが分かった。また、パイナップルは近年、世界的に新品種(MD2)へ移行したが、伝統品種のみを栽培していたガーナの生産者がどのような影響を受けたのかを分析した。その結果、MD2以降は市場のリスクが高まったことが認識されたのか、パイナップルを継続して栽培する期間がそれ以前よりも短くなったことが分かった。しかし、リスク選好が技術の長期間の採用に及ぼす影響は、MD2前後の時点で、統計的に有意な差は見られなかった。一方で、リスク選好がパイナップル栽培の採用に与える影響自体は、近年拡大していることが明らかになった。本研究では、貧困削減の一助となるとして注目を集める付加価値の高い輸出園芸産業の一例として、ガーナのパイナップル産業を事例に調査をしている。2007年に行った調査では、同市場に零細農家が参入するためにはリスク分散能力が重要であることが判明した。しかし、2007年にはリスク選好に関する調査は行わなかったため、2010年度に再度現地を訪れ、ガーナ大学統計社会経済研究所の協力を得て、前回調査を行った農家約250世帯に対してインタビューとリスク選好を計測するための簡単な実験を行った。現在このデータを分析中である。

また、前回調査時以降に輸出先のEU市場で起こった変化を受け、ガーナの生産者レベルで市場がどう変化してきたのかを知るため、政府担当者、輸出業者協会、加工業者協会や個別の輸出業者を訪れ、ヒアリングを行った。明らかになったのは、同産業における大規模生産者の役割は増しており、全輸出量のうち零細農家が生産した果実の割合は以前の30%から5%ほどまでに激減していることである。これには、資本集約的な新品種へ移行できなかった零細農家が多くいること、また食品規制強化により、輸出業者にとって自社の大規模農地での栽培に比べて、多くの零細農家から果実を購入する利点が減ったことなどがある。輸出業者数は減っているが、生き残った会社の規模は拡大傾向にある。一方で、国内の加工産業は以前よりも発達しており、加工業者協会が組織化され、ジュースなどの加工品をあちこちで見かけるようになった。加工業は、零細農家が供給できる市場を増やし、輸出産業における零細農家の役割の衰退を補っていた。グローバル市場の変化が途上国の生産者ほかのアクターにどのような影響を与えているのか、その具体例としてある産業の変容を数年にわたって観察できたことは、非常に意義深い。集めた情報をもとに、丁寧に研究論文をまとめて広く公表していきたい。上述のとおり、研究が遅れてしまった理由は主に三つある。第一に現地機関から入手したデータに不備があることが判明し、修正を依頼したために分析できなかった期間が生じたこと、第二に妊娠中であったために国外の学会参加が難しかったこと、第三に、年度内に産前休暇に入り、研究を一時中断せざるを得なかったことが挙げられる。当初計画通り、研究初年度で現地調査を行い、分析に必要なデータを収集することができた。また、現在そのデータを分析中であるので、達成度は良好だと思われれる。H25年度後半から研究を再開する予定であるが、研究再開後は、これまでに行ってきた家計データの分析と、その結果に基づいた学術論文の執筆を継続して行い、学術誌や学会報告への投稿を行う。論文では、ガーナ・パイナップル産業の変容を記述的に丁寧に説明するとともに、パイナップル生産農家と非生産農家のリスク選好の違いや、現在でもパイナップル生産農家として(あるいは契約農家として)生き残っている農家と、パイナップル生産をやめてしまった農家の違いなどにつき仮説を立て、それらを実証するため、入手したデータを計量経済学の手法を用いて定量的に分析する予定である。具体的な発表の媒体としては、日本経済学会や国際開発学会などの国内の学会、またオクスフォード大学アフリカ経済研究所、太平洋開発経済学会(PACDEV)などの国外の学会を目指している。また、最終的な研究成果はガーナ国の政策担当者にも報告し、実際の政策現場で活用してもらえれば幸いである。研究初年度(H23年度)に現地調査で集めた情報とデータをもとに、分析を行い、学術論文を執筆する。ガーナ・パイナップル産業の変容を記述的に丁寧に説明する内容とともに、パイナップル生産農家と非生産農家のリスク選好の違いや、現在でもパイナップル生産農家として(あるいは契約農家として)生き残っている農家と、パイナップル生産をやめてしまった農家の違いなどにつき、計量経済学の手法を用いて量的にも分析する予定である。
国内における中小規模病院への院内急変対応の普及と症例レジストリーの確立

2014年1月より、2015年3月までに、当初の計画通り、中小規模病院を10施設、500床以上の大規模病院を15施設、RRSオンラインレジストリに登録することができた。登録から1年間で、817症例が登録され、2015年3月までに、1060症例の登録に及んでいる。この1060症例を、小規模、中規模、大規模、超大規模の4群に分け、それぞれの病院サイズによるRRSの特徴を解析した。病院規模が大きくなるに従い、患者年齢層は若くなり、より重症になってから院内心停止で起動される件が多くなっている。研究の骨子は、アンケート調査、院内心停止調査、RRSオンラインレジストリの導入である。[アンケート調査]院内急変対応の現状と予期せぬ院内死亡に関するアンケート調査を行なった。全国の病院職員を対象に職種を問わず、医療職だけでなく事務職も含め施行した。2014年2月の時点で127施設、1064名からの回答を得た。2013年度には、国内学会報告で2演題を発表した。[院内心停止調査]院内心肺停止症例の多施設共同研究の2013年度3月31日現在の参加施設は、10施設である。第41回日本集中治療医学会学術集会の中間報告では、6施設の症例は143例、平均年齢72歳、生存退院は13例(9%)であった。この症例でCode statusは、DNRが12%あり、DNRであっても心肺蘇生が行われている事が判明した。又、コードブルー要請がかかった症例は11%で、コードブルーが整備されていても必ずしも有効活用されていない。全症例の中にPreventable deathが13%含まれており、医療安全上問題有りとされた症例が4%と存在していた。心停止前にバイタルサインの変化の兆候が見られた症例は48%あった。これはRRS介入で予後を改善しうる潜在的症例であり、RRSを導入するための我が国独自の医学的根拠となる。[RRSオンラインレジストリ]各施設のRRS起動症例のde-identificationしたデータを、UMIN-インターネット医学研究データーセンター(INDICE)症例登録を用いオンライン登録を2014年1月より開始した。現在、参加施設13施設登録症例総数282例(2014/4/27現在)、参加予定施設14施設となっている。9施設が登録しており、そのうち4施設が400床以下の中小規模病院である。2013年度には、国内学会報告で2演題発表している。平成24年度の目標は、ウツタイン形式をアレンジしたRRSの報告書を作成しており、その内容を各施設の院内医療安全対策室にてデータベースとして保管管理できるようにしていく。平成24年度に各地域でRRS研修導入会と、導入施設のデータベース化のフォローアップを行うということであった。日本臨床救急医学会の院内救急対応システム委員会のコアメンバーとなり、学会と共催で、2013年2月9日に中小規模病院へのRRS導入セミナーを開催した。17施設から約50名の医療安全担当者、管理職、RRS現場実働医療者の3名がチームとして参加していただいた。また、2012年8月12日に第9回日本集中治療リフレッシャーセミナーにて、RRSの講演を日本集中治療学会員に対して行った。2013年2月17日には、沖縄にておきなわクリニカルシミュレーションセンター(ちゅらSIM)設立1周年で、RRSに関しての講演を行った。アンケート調査数は、300近く集まり、そのデータ解析を現在行なっており、2013年7月12ー13日に第16回日本臨床救急医学会にて報告する。RRSの導入を予定している施設に、CPA症例の事例を検討していただくために、聖マリアンナ医大で倫理委員会を通し、現在10施設を対象に倫理委員会を通していただけるように依頼中である。この研究の最大の目標である、RRSのデータベースを、オンラインレジストリができるように、UMINに現在問い合わせ中である。ファイルメーカープロにて、入力項目はすでに作成しており、聖マリアンナ医大で倫理委員会の承認を受ける予定である。平成24年度から平成26年度の3年間で、国内における中小規模病院への院内急変対応の普及と症例レジストリーの確立を終了した。この3年間で24施設1060症例を登録した。平成26年度日本救急学会、日本集中治療学会では、オンラインレジストリの登録データの解析を行った。内訳は、300床以下が4施設、301床から500床以下が6施設、501床から1000床以下が12施設、1001床以上が2施設の計24施設である。

2014年8月は、17施設435例、2014年10月21施設593症例、2015年1月23施設、2015年3月24施設となっている。500床以下の中小規模病院は、10施設であり、当初目標としていた10施設のRRSオンラインレジストリの目標施設登録は達成した。症例は、登録数10症例未満が6施設となっており、登録開始から半年が経過しているにもかかわらず10症例未満が、そのうちの3施設である。2013年11月から2014年7月までの期間に4大学病院と13市中病院にRRSオンラインレジストリーに登録された患者を後ろ向きに検討した結果、大学病院vs.市中病院は、GCS 9.4±5.1 vs. 10.8±4.0 (p=0.005)、ICU搬入率36.3% (53/146)vs. 10.2 (25/246) (p<0.001)であり、大学病院では、より重症でRRSが起動される可能性が示唆された。集中治療医学院内急変対応の現状と予期せぬ院内死亡に関するアンケート調査を行い、得られた回答を集計した。また、院内心肺停止調査を行い、RRS介入で予後を改善できる潜在的症例の割合を得た。これは、我が国のRRS導入の医学的根拠となる。さらに、RRSオンラインレジストリを導入し、各施設のRRS起動症例のデータをオンライン登録可能にした。以上より、当初の計画通り順調に進展している。RRSを導入してくれる施設の選定が済み、現在、導入前のCPA症例、院内死亡率を算定して頂く予定である。オンラインレジストリが、UMINに依頼しているため、承認されるまでに2014年1月ごろまでかかってしまう可能性がある。そのため、ファイルメーカープロのデータ入力ソフトを各施設に配布して、オンラインレジストリが完成するまで、暫定的にデータ入力を行なっていただく予定である。[アンケート調査]今後、更なるアンケート調査を行いRRS導入施設と非導入施設の比較、あるいはRRS導入前後での比較を行い、論文作成を行なう予定である。[院内心停止]院内心停止に関する研究への、参加施設が合計で11施設になる予定であり、最終報告として、2014年10月開催の日本救急医学会総会にて報告予定である。その後に、英語論文作成をする予定である。日本臨床救急学会の患者安全検討推進委員会の小委員会で、藤谷班と日本臨床救急学会学会の後援で、院内心停止オンラインレジストリを作成し、今後、RRSの普及とともに、導入施設で院内心停止に関するアウトカムがどのような変移をきたすか調査する予定である。[RRSオンラインレジストリ]現在、RRSに関する情報を公開、共有するためにホームページを制作した。この中で、RRSオンラインレジストリのサイトも公開している。現在、成人の院内心停止のオンラインレジストリも製作中である。今後は、小児対象のRRSオンラインレジストリや院内心停止オンラインレジストリにも対応できるようにしていく。藤谷班は、患者安全検討推進委員会の小委員会であるRRSワーキンググループの委員長であるため、今後このプロジェクトを、臨床救急医学会で公認としてもらい。全国共同行動とも協力し、これらのオンラインレジストリを日本全国に普及し、中小規模病院のデータ集積を図る。今後は、共同研究者を含めた一般病院や大学病院での講演が全国であり、RRS導入を予定している施設にCPA症例の登録と今後のRRS症例のオンラインレジストリを協力要請し、施設数の拡大を図る。
酸素透過性セラミックスにおけるヤーン・テラーイオンの導入効果

本研究では、ヤーン・テラーイオンに注目することで、酸素透過性セラミックスの高性能化の有効指針を見出すことを目的とした。そのために、Fe系混合導電性ペロブスカイト酸化物に着目し、ヤーン・テラーイオン(Fe4+)を系統的に導入し、ヤーン・テラーイオン導入量と酸素透過性・酸素欠陥拡散性との相関関係を調査した。La1-xSrxFeO3-dの全導電率の酸素分圧依存性、導電率緩和法より得られた化学拡散係数は、Fe4+量の少ない低酸素分圧領域に比べ、高酸素分圧領域において、酸素欠陥が拡散しやすいことを示唆した。このことから、ヤFe4+に伴う局所歪みが酸素欠陥の拡散を促進させる一要因となると考えている。本研究では、酸素透過性セラミックスにヤーン・テラーイオンを導入した際の酸化物イオン輸送へ与える影響を調べ、ヤーン・テラー歪みの観点から酸素透過性向上のための新しい指針を得ることを目的としている。本年度は、酸素透過性を示し、高温で立方晶ペロブスカイトを有するLa0.5Sr0.5FeO3-dについて、通常の固相反応法にて緻密セラミックスを作製し、700°C, 900°Cにて、Log(PO2)=-1-25の範囲で全導電率の酸素分圧依存性を調べることから取り組んだ。この酸素分圧依存性により、La0.5Sr0.5FeO3-dにおいて、Fe3+が支配的な酸素分圧領域がLog(PO2)=-5-20であり、ヤーン・テラーイオンであるFe4+が支配的である酸素分圧領域がLog(PO2)=-1-5であることが分かった。これらそれぞれの酸素分圧領域において、導電率緩和法にて測定し化学拡散係数を見積もったところ、ヤーン・テラーイオン(Fe4+)が支配的な酸素分圧領域で、Fe3+が支配的な酸素分圧領域に比べ、より大きな化学拡散係数を有することが分かった。この化学拡散係数はイオンの移動度と関連していることから、ヤーン・テラーイオンが多く存在する領域では酸化物イオンが輸送しやすいことを示唆する。したがって、Fe4+に伴うFe4+周囲のヤーン・テラー歪みの存在が、酸化物イオン輸送を向上させる可能性があると考えている。酸素透過性を示す典型例であるLa-Sr-Fe系ペロブスカイト系の中で、La0.8Sr0.2FeO3-dに着目し、高温700-900Cにおいて、logPO2=-1-25での全導電率の酸素分圧依存性を評価した。酸素分圧をlogPO2=-1から下げていくと、全導電率はlogPO2=-5まで減少し、その後一定の導電率を示した後、再度logPO2=-15付近より下がり始め、logPO2=-20で極小値を示した後、さらに低い酸素分圧では再び全導電率は上昇した。これはLa0.5Sr0.5FeO3-dと同じ酸素分圧依存性の傾向を示している。ただし、logPO2=-1付近での全導電率は、La0.5Sr0.5FeO3-dの方が約10倍高い。以上の結果は、導電率にとって、高酸素分圧領域ではホール(Fe4+)が支配的であり、logPO2=-20以下では電子(Fe2+)が支配的であることを示唆する。La0.8Sr0.2FeO3-dについて、Fe4+の多い高酸素分圧領域と、Fe4+が少ない低酸素分圧領域について導電率緩和法により、化学拡散係数Dchemを評価した。Fe4+の多い高酸素分圧領域の方が低酸素分圧領域よりも化学拡散係数が高いことが分かった。この結果もLa0.5Sr0.5FeO3-dと同様の傾向を示す。Fe3+,Fe4+周囲の局所構造の違いが、異なる化学拡散係数を示した一因であると考えている。試料作製、全導電率測定、導電率緩和測定を順調に行うことができているため。今年度は、酸素透過性を示すLa-Sr-Fe系ペロブスカイト混合導電性酸化物について、700°Cおよび900°Cにおいて酸素分圧を変化させ全導電率測定を行い、丸いイオンであるFe3+が多い領域、ヤーンテラーイオンと考えるFe4+が多い領域を調べた。いずれの温度においても、高酸素分圧領域(PO2=10-110-5 atm)では、酸素分圧の低下とともに導電率も低下する典型的なホール伝導の挙動を示した。従って、この領域では、ヤーンテラーイオンFe4+の存在割合がFe3+に比べ大きいことが分かった。一方で、低酸素分圧領域(PO2=10-510-20 atm)では、酸素分圧の変化に伴う導電率の変化が小さいことや、酸素分圧の低下に伴い導電率が上昇する挙動を示していることから、Fe3+あるいはFe2+の存在割合が大きいことが示唆された。これら二つの領域に注目し、化学拡散係数の酸素分圧依存性を測定した。低酸素分圧領域(PO2=10-20→10-5 atm)と比較して、高酸素分圧領域(PO2=10-5→10-1atm)における化学拡散係数の方が高い値を示した。この領域は、上述のようにヤーンテラーイオンであるFe4+が多い領域である。従って、ヤーンテラーイオンが酸化物イオンの拡散を促進したことが示唆された。これは、ヤーンテラーイオンが局所的な構造に歪みを発生させることで、酸化物イオンの拡散に影響を与えた結果であると考えている。

本研究を遂行する過程において、導電率緩和法でイオン拡散を評価することが、当初予定した手法に比べより有効であることが分かったため、その装置をハンドメイドで立ち上げるのに新たに時間を要した。また、その立ち上げ途中による不具合の改善や、精度の高い測定を実現するための改良に時間を要した。本研究では、ヤーン・テラーイオンに注目することで、酸素透過性セラミックスの高性能化の有効指針を見出すことを目的とした。そのために、Fe系混合導電性ペロブスカイト酸化物に着目し、ヤーン・テラーイオン(Fe4+)を系統的に導入し、ヤーン・テラーイオン導入量と酸素透過性・酸素欠陥拡散性との相関関係を調査した。La1-xSrxFeO3-dの全導電率の酸素分圧依存性、導電率緩和法より得られた化学拡散係数は、Fe4+量の少ない低酸素分圧領域に比べ、高酸素分圧領域において、酸素欠陥が拡散しやすいことを示唆した。このことから、ヤFe4+に伴う局所歪みが酸素欠陥の拡散を促進させる一要因となると考えている。酸素透過性を示すSm-Ca-Fe系及びLa-Ca-Fe系ペロブスカイト混合導電性酸化物に着目し、固相反応法及び有機錯体重合法にてこれらの固溶体群を作製した。得られた試料の室温における粉末X線回折によれば、SmxCa1-xFeO3-d(x=0.5-0.8)は直方晶(Pbnm)のペロブスカイト構造であることを確認した。LaxCa1-xFeO3-dにおけるx<0.4の試料群では、ブラウンミラライト構造あるいはグラニエ構造をとり、x>0.4の試料群では、直方晶(Pbnm)のペロブスカイト構造をとることが分かった。これらの得られた各試料について、全導電率、酸素透過速度の温度依存性及び酸素分圧依存性を評価した。SmxCa1-xFeO3-d(SCF)では、測定した試料のうち、x=0.5の試料が最も高い酸素透過速度を示した。LaxCa1-xFeO3-d(LCF)では、800-1000°Cの温度範囲で、x=0.65の試料の全導電率、酸素透過速度が、測定試料中で最大値を示した。LCFの化学拡散係数を測定したところ、810°Cにおいて、La固溶量がx=0.6, 0.65, 0.7, 0.4, 0.5の順で高い値を示した。格子体積の観点から考えれば、以上の組成の中でx=0.7が最も大きな格子体積を有することから、より高い化学拡散係数を示すはずである。実験結果が以上の推測と異なるのは、各La固溶量で酸素欠損量が異なること、ホールキャリアかつヤーンテラーイオンであるFe4+の存在割合が異なることと関係があると考えている。LCF(x=0.6, 0.65)の試料は、現存の混合導電体の代表例であるL0.8Sr0.2Co0.2Fe0.8O3-dに比べ、高い酸素透過速度を示すことから、工業用酸素セパレータ、固体酸化物形燃料電池用空気極材料として応用が期待できる。当初の予定どおり、ヤーン・テラーイオンFe4+を導入した混合導電性酸化物試料が作製でき、またそのヤーン・テラーイオンの導入量について、定性的に見積もることができているため。導電率緩和測定装置の改良を行い、化学拡散係数の評価精度を上げる。酸素分圧を制御したIn situの状況で回折実験等を行い、Fe4+が多い領域、少ない領域での結晶構造等の違いを検討する。本年度に調べた試料に加え、その他の本研究で対象とするFe系混合導電性酸化物のFe4+, Fe3+の割合を変化させた各試料について、上記で立ち上げた測定手法によりイオン拡散を系統評価する。これより、ヤーンテラーイオンであるFe4+がイオン拡散に与える影響を明らかにする。無機物性今後は、メスバウアー分光測定を補足的に用いることにより、より定量的にヤーン・テラーイオン導入量を評価する予定である。
プラトン『クラテュロス』における語源論の位置づけと哲学的意味

申請者は、プラトン『ュクラテュロス』篇について新しい発想で高水準の研究を行うことを目的としている。古代哲学の研究であることは勿論だが、伝統としての語源学それ自体の意義を明らかにし、プラトンがこれをいかに批判的に吸収したかを解明する。また、『クラテュロス』篇の後代への影響を、哲学だけではなく、広く文化史的におさえる。古代文学・修辞学・文法学との関連、近現代の言語哲学・言語学との関連を重視したプラトン研究、ひいてはより広く、古代哲学研究を志す。それにより、古代哲学研究が真の意味で開かれたものとなることに貢献したい。以上の研究を遂行するための基礎訓練を受けるために、ケンブリッジ大学へ一年間留学した。プラトン研究だけではなく、現在ストア哲学研究の第一人者であるDavid Sedley教授にご指導を仰ぐことができたことにより、『クラテュロス』篇の後代への影響(とりわけ、語源論の伝統を肯定的に吸収し、さらに発展させたストア派への影響)を多角的にとらえることができた。また、日本西洋古典学会からの依頼を受けて執筆した、R.M.van den Berg,Proclus'Commentary on the Cratylus in Contextについての書評では、『クラテュロス』篇の後代への影響を広く文化史的におさえるという目的を遂行することができ、さらに、語源論に哲学的意味を見出すための足掛かりとなるいくらかの論点を見出すことができた。このことは、今後の『クラテュロス』篇研究において非常に意義のあるものとなるに違いない。英国ケンブリッジ大学にて、第一線で活躍する研究者や教授との議論のやりとりを通し、『クラテュロス』篇についての最先端の研究に従事することができたから。2011年に出版されたFrancesco Ademolloの『クラテュロス』篇についての初のコメンタリーを比較検討しながら、『クラテュロス』篇についての博士論文の執筆に取り組む。申請者は、プラトン『クラテュロス』篇について新しい発想で高水準の研究を行うことを目的としている。以上の研究を遂行するための基礎訓練を受けるために、ケンブリッジ大学へ3か月間留学した。世界的に著名なDavid Sedley教授のご指導のもとで、『クラテュロス』篇における「取り決め」と「類似性」についての論文を執筆し、Sedley教授の本を批判吟味したこの論文に関して高い評価を得ることができた。また、非常に示唆的な問題点も与えられ、現在、論文をさらに発展させている段階である。Sedley教授には4月にまた議論をさせていただく了解を得ている。さらに、留学期間中にCambridge University Pressから『クラテュロス』篇についての注釈書が初めて出版され(日本ではまだ購入不可能)、すでに購入したため、今後はさらに最前線での研究が可能となった。また、ストア派研究においても世界的に著名なSedley教授のもとでストア派思想について学び、語源論を肯定的に受け取ったストア派哲学についての理解を深めている。これにより、語源論それ自体の意義を明らかにするという研究目的を実行することができた。
シスタチンCの結合タンパクの検索と骨形成における機能解析

骨吸収性疾患である骨粗鬆症の罹患は年々増加しているがゆえに、失われた骨を再生することが急務であるが適切な薬剤はみつかっていない。システインプロテアーゼインヒビターの一種としてよく知られておりシスタチンCは、骨に骨吸収を抑制すること等が報告されている。我々は、シスタチンCの骨の組織での作用とその作用機構について明らかにすることを目的として、Yeast Two hybrid法によりシスタチンCの結合タンパクの検索をおこなった。シスタチンCは、非糖鎖性のアミノ酸120残基からなる分子質量13.359ダルトンの一本鎖のポリペプチドで、システインプロテアーゼインヒビターの一種としてよく知られている。細胞外に分泌されるシスタチンCは、唾液や乳汁、尿、脳脊髄液に多く分布しており、近年、ES細胞が神経幹細胞への分化をシスタチンCが促進することや、海馬の細胞の増殖因子として働くとの報告もされ、再生療法を目指した研究においても有望な分子として着目されつつある。そこで、シスタチンCが骨の形成に与える影響を明らかにすることを目的として実験を行った。実験にはヒト尿から精製されたnativeのシスタチンCを用いた。マウスあるいはヒトの骨髄由来の間葉系幹細胞にシスタチンCを添加し、石灰化誘導培地で培養したところ明らかに石灰化組織形成が向上し、アルカリフォスファターゼ活性およびカルシウム濃度の上昇が確認された。骨芽綿胞の転写因子や分化のマーカーの発現解析を行ったところ、骨芽細胞の分化が促進しており、石灰化能が向上することが示唆された。さらに、シスタチンCがどのように機能しているのかを知るために、相互作用するタンパク質の同定することを目的としてYbast Two hybid法により解析した。マウスシスタチンC全長をbaitにして、マウス脳のcDNAライブラリーから相互作用する候補をスクリーニングした。200個の陽性コロニーを選出し、その中からベーターガラクシドシダーゼの発色が濃いコロニーを48個選出した。酵母からプラスミドを精製し、DNAシークエンスをして、9個の既知の候補タンパクを見出した。今後invitroあるいはinvivoで相互作用をしているのかどうか検索していく予定である。シスタチンCは、非糖鎖性のアミノ酸120残基からなる分子質量13.359ダルトンの-本鎖のポリペプチドで、システインプロテアーゼインヒビターの一種としてよく知られている。われわれはシスタチンCが骨芽細胞の分化を促進させ、硬組織形成を向上させることを見出した。そこで、シスタチシCの機能を明らかにするためにYbast Two hybrid法によりbinding proteinを解析し、9個の既知の候補タンパクを見出した。その中で、複数の独立したクローンとしてとれてきたS100Bタンパクとの関係を検索した。S100Bは、単量体(S100β)分子質量10.7kDaのポリペプチドで、helix-loop-helix(EF-hand)を2つ有しCaイオンとの結合能を持っている。そして、水中においては主に2量体(S100B)として存在していることが知られている。S100Bは神経膠細胞で高発現していることが報告されており、神経細胞の伸展、細胞増殖、3分化、アポトーシスなどに関するさまざまな機能が報告されているが、骨代謝における役割については知られていない。本研究課題により、骨芽細胞においてシスタチンCがS100Bと発現していることをRT-PCRおよびWestern blotting、免疫細胞化学により確認した。さらに相互作用の有無をGST-pull down assayによりマウス骨および脳組織で確認した。
新規抗アルツハイマー病分子の基盤的研究:初のアルツハイマー病根治薬開発をめざして

アルツハイマー病(ア病)は痴呆性疾患の半数を占める、高齢化社会において重大な疾患の一つであるが、根治療法は存在しない。我々はア病侵害刺激による細胞死を抑制する24残基のペプチド、ヒューマニン(HN)を世界で最初に発見し、2001年報告した。今回、HNのア病に対する強力かつ特異的な神経保護作用機序の詳細を検討した。最初に、HNの一次構造と機能連関の詳細として、1)Pro3-Pro19までが活性中心である、2)そのうち、Pro3,Cys8,Leu9,Leu12,Thr13,Ser14,Pro19が必須である、3)Arg4,Phe6のいずれもAlaに置換して、トリプシン、キモトリプシン切断部位が消失すると3-10倍活性が上昇する、4)Ser7,Leu9はHNの2量体化に必須である、5)2量体化がHN活性化に必須である、6)HNのSer14がL体からD体に変換されると1000倍活性が上昇する、7)HNは分泌蛋白であり、Leu9-Leu11,Pro19-Val20は分泌に必須である、ことを明らかにした。次に、分泌されたHNが神経細胞膜上の受容体に結合して神経細胞死を抑制すること、また、HNはIGF-1,ADNFなどとともに抗Abeta作用を持つが、全てのア病侵害刺激による神経細胞死を抑制できるのは唯一HNのみであることを報告した。さらにHN結合分子の解析から、Ring fingerドメインを持つTrim11と結合してユビキチン・プロテアソーム蛋白分解系を介して発現量が制御されること、IGFBP3と結合して血中を輸送されることを示した。HNは3週齢マウスで睾丸と大腸、12週齢マウスで、睾丸に発現する。また、ヒト正常大脳では発現が弱いが、ア病後頭葉神経細胞や大脳全域のグリア細胞に発現がみられる。最後に、HNのSer14のD体化で生じる活性の上昇にグリア細胞に発現するセリンラセメースが関与する可能性を示した。以上の一連の研究により、HNは生体内で、精巧に調節されているア病特異的な細胞死抑制因子であることが明らかとなった。今後は、HNの臨床応用に向けて、その受容体同定とともに、in vivoにおいてのア病治療薬としてのHNの有効性検討実験が待たれる。研究計画通りHN分子の基礎的解析を実施した。[1]HNはPro3からPro19までを活性ドメインとする。[2]Pro3、Cys8、Leu9、Leu12、Thr13、Ser14、Pro19が[1]の17残基の活性ドメインの中の必須アミノ酸残基である、[3]Cys8はArg、もしくはLysに置換してもHNの細胞死抑制機能は低下しない、[4]Arg4とPhe6をいずれもAlaに置換えして、17残基の活性ドメイン中に存在するトリブトシン切断部位とキモトリプシン切断部位を消失させたS14G-HN(HNG)誘導体は、HNGの3-10倍に活性を上昇させる、[5]

これらの細胞死抑制活性は、初代培養神経細胞におけるAβ誘導性細胞死、培養神経細胞株における家族性アルツハイマー病原因遺伝子(V642I-APP、K595N/M596L-APP、M146L-PS1、N141I-PS2)誘導性細胞死のすべてに共通であった。これらはHNの細胞死抑制作用が特異的な分子機構を介して行われること、HNはアルツハイマー病関連神経細胞死のすべてに共通の分子機構で抑制すること示している。L9R変異体は細胞外へ分泌されない一方、L9R変異体はcDNAで発現しても細胞死は抑制されないがペプチドで細胞外に加えると細胞死は抑制されることからHNは細胞外からのみ作用できることを明らかにした。HNは、IFG-I、bFGF、ADNFと共に、抗Aβ作用を有するが、すべてのアルツハイマー病原因遺伝子の誘導する細胞死を抑制する能力を有しているのはHNGのみであった。HNペプチドは3週齢正常マウスの睾丸、大腸に発現し、12週齢では睾丸に発現が限られる。ヒトでは正常大脳には、ほとんど発現が見られないが、アルツハイマー病大脳の後頭部葉神経細胞、大脳全域の反応性グリア細胞に発現が見られた。今後、HNの作用機構、調節機構に焦点をあてて検討する。平成14年度はHNの作用機構、調節機構に焦点をあてて検討してきた。HNの分泌機構および神経細胞死防御作用にたいするHNの必須アミノ酸残基を検討したところ、{1}HNペプチドの各アミノ酸残基のAla置換は、HN分泌に全く影響しない、{2}Argスキャンにより、Leu9-Leu11ドメインとPro19-Va120はHNの分泌に必須である、{3}Aspスキャンにより、L10Dは、HNを分泌させなくなりLeu10は、必須アミノ酸残基である。ただし、Leu9及びLeu11は、必須ではない、{4}Ala置換により、Ser7とLeu9はHNの二量体化に必須であることが判明した。これ等から、Leu10は中心的役割を果たす事が解り、さらにHNそのものがシグナルペプチドと同様の活性を有し、Leu9-Leu11はそのコアドメインであることが示めされた。また、HNの二量体化が神経細胞死抑制機能の本質的な過程であることが示唆された。HNは天然のライブラリーから単離された遺伝子でありながらS14G体(HNG)はHNの約1000倍の活性を有した。これはHNが翻訳後の修飾により活性体に変換されている可能性を示しているが、Ser14をD体化するとその活性が約1000倍上がりセリンラセメースの存在が示唆される結果となった。HNの調節機構を研究するために、イーストtwo-hybrid法によりHNの結合蛋白を探索した。その結果TRIM11というTripartiteモチーフ(TRIM)を有し、E3ユビキチンリガーゼのRINGフィンガードメイン、Bボックスドメイン、Coiled-coilドメイン、B30.2ドメインから構成される蛋白を同定した。HNとTRIM11を共発現するとHNの発現量が激減し、TRIM11がユビキチンを介したタンパク分解経路をとうして細胞内HN量を調節していることを示唆した。
多目的総合統計データバンクの基本システムに関する研究

本特定研究では58年度に確立した、統計データベースの設計法に基いて、59年度にその結果をデータベース上に実現する統計データベース管理システムを試作したが、それは筑波大学に設置された分散型データベースマシン、IBMシステム/38上のソフトウェア体系であった。60年度は、本プロジェクトの成果が一大学ではなく、他大学でも利用可能であることを実証することにある。そのため、上記のシステムがIBMシステム/38以外のデータベース管理システムでも同様に構築可能であることを示すため、データベース管理システムとして大型計算機上で利用可能なADABASを選択し、まず筑波大学学術情報処理センタ上でそのことを示した。なお、システムの移植は、磁気テープに必要情報を全部作成しておき、大型計算機センタでは、その磁気テープに含まれているプログラムを起動するだけで統計データベース管理システムができ上る方式を採用した。大型計算機上で動作するプログラム自身もIBMシステム/38を利用して作成したが、これは統計データベース管理システムの設置先に技術的な負担をかけないための配慮である。筑波大学学術情報処理センタでADABASを利用しての統計データベース管理システムを設置した後、同じ実験を慶応大学計算センターでも行ない、我々のシステムが、別センタでも動作可能であることを確認した。更に分散処理システム環境で統計データベースの実現を図るため、IBMシステム/38とMV/10000との間に回線を設置し、双方向のファイル転送の機能を開発し、実験した。本研究の成果を分り易いマニュアルの形で整備することを計画し、各種マニュアルを完成した。