hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しいリンパ球natural helper細胞の寄生虫感染における免疫機構の解析

産生経路として、T細胞株ではTCR刺激によるp38を介した転写因子GATA-3のリン酸化がTh2サイトカイン産生を増強することが報告されている。NH細胞ではGATA-3の発現がmRNAレベルで確認されていることから、IL-33刺激によるp38-GATA3を介したサイトカイン産生経路があるのではないかと考え解析を行った。その結果、IL-33刺激によってNH細胞のGATA-3のリン酸化が誘導され、さらにSBはGATA-3のリン酸化を顕著に抑制した。以上の結果から、NH細胞のIL-33シグナル伝達経路にはp38を介したGATA-3の活性化機構が存在することが明らかになった。実際にGATA-3コンディショナルノックアウトのNH細胞ではIL-33刺激によるIL-5、IL-13の産生が顕著に抑制されていたことから、GATA-3はNH細胞のIL-33誘導性Th2サイトカイン産生を正に制御していることが強く示唆された。ナチュラルヘルパー(natural helper:NH)細胞は腸間膜などの内臓脂肪組織に存在する自然免疫系のリンパ球で、寄生虫感染時やアレルギー発症時に破壊された血管内皮細胞や上皮細胞などから放出されるサイトカインであるIL-33に反応することでIL-5、IL-6、IL-13などのTh2サイトカインを多量に産生する。IL-33に反応し、Th2サイトカインを産生する既知の細胞としてTh2細胞、好塩基球、肥満細胞が知られているが、NH細胞のサイトカイン産生量はこれらの細胞と比較して1,000倍から10,000倍多い。本研究では、NH細胞のTh2サイトカイン産生機構を、IL-33シグナル伝達に着目して解析した結果、NH細胞ではIL-33刺激によりMAPKファミリー分子であるp38を介して転写因子GATA3のリン酸化が誘導され、リン酸化を受けたGATA3がII-5/IL-13プロモーター領域に結合することを明らかにした。p38の活性化はIL-6の発現にも必須であったが、GATA3の欠損はIL-5/IL-13の産生は激減するもののIL-6産生にほとんど影響を与えなかったことから、IL-6発現の調節機構はIL-5やIL-13とは異なることも明らかになった。さらにNH細胞の分化に関しても検討を行った。NH細胞は骨髄由来の細胞であることがわかっているため、Cre-ERT2:Gata3^<flox/flox>マウス由来の骨髄を、NH細胞を欠損するγc^<-/->Rag2^<-/->マウスへ移植し、タモキシフェン投与によるGATA3欠損を誘導した。その結果、野生型ドナーを用いた場合、骨髄を移植することにより腸間膜に出現してくるNH細胞が、GATA3欠損ドナーの骨髄移植では見られなかった。また、NH細胞に高発現する核内オーファン受容体ファミリーのRora変異マウス由来の骨髄移植の系においてもNH細胞の出現が抑制されたことから、NH細胞の分化にGATA3およびRORαが重要な役割を担うことが分かった。一方、Rorα変異マウスの腸間膜には少ないながらもNH細胞が存在し、GATA3やIL-33Rの発現レベルは野生型のNH細胞と同程度であった。さらにこれらのNH細胞はIL-33刺激によるTh2サイトカイン
中枢性自律神経領域におけるニューロン構築と神経回路網の解析

視床下部諸神経核におけるペプチドニューロンとアミンニューロンとの機能的関連性について研究を進めているが、今回は【◯!1】視交叉上核に分布するペプチドニューロンに対する入力関与と【◯!2】脊髄灰白質に分布するサブスタンスP線維終末の分布、特に腰髄前角に分布する終末の性差について観察を行った。方法:ラットを用い【◯!1】については下行性セロトニン線維の選択的破壊は5,6-dihydrcxytryptamine(5,6-DHT)の内側前脳束への注入により行い、視交叉上核のペプチドについてはVIP及びバソプレシンを対象としてそれぞれの抗血清を用いPAP法による免疫細胞化学法により行った。【◯!2】についてはサブスタンスPの抗血清を用い上記と同様免疫細胞化学法により行うと共に、腰髄前角ニューロン支配域とそのニューロンへのサブスタンスPの入力関係についてはHRPの陰部大腿神経への注入による逆行輸送と免疫細胞化学法の併用を行った。結果及び考察:【◯!1】については、セロトニン線維終末は視交叉上核の腹側部に密に分布しているが、この線維の破壊により、視交叉上核腹側部に分布するVIPニューロンの免疫陽性反応が著しく減弱した。しかし背内側部に分布するバソプレシンニューロンについては全く変化は認められなかった。この結果より下部脳幹より視交叉上核へ投射するセロトニンニューロンはの産生、細胞内輸送に強く関与し日内リズムの維持などに対し影響しているものと考えられる。【◯!2】については、サブスタンスPの脊髄での分布は一般的には後角の表層に密に終末分布が後角、側角に細胞体の分布が認められる。また、胸、腰髄側角中間質外側核の交感神経節前ニューロンの周囲にも終末が認められる。今回、前記の領域以外に腰髄第1、第2分節の前角細胞の周囲に雄性ラットでは非常に密な雌性ラットでは非常に疎なサブスタンスP線維終末の分布が認められた。この前角細胞は雄では挙睾筋を支配している事が明白だった。
同期・非同期融合型VLSIシステムの設計技術に関する研究

本研究では、同期・非同期融合型VLSIシステムの設計モデルとして、配線遅延を無視し得る、あるいは配線遅延は全て既知である局所領域の設計において、遅延情報を利用したSDIモデルに基づく局所同期型VLSIの設計方式を提案した。また、本設計方式に基づく非同期式システム設計支援CADシステム「AINOS」を開発し、ライブラリの整備を行って同期・非同期融合型VLSIシステムの設計支援環境を構築した。本CADシステムでは、同期式回路の設計スタイルで記述されたVerilog RTL記述を入力とし、非同期として実現するモジュールに関しては要求-応答信号線の付加、タイミング信号生成回路の付加などの処理を行い、非同期式システムを実現する。同期式システム設計と同じ仕様記述を用いることが出来るため、同期・非同期融合型VLSI設計支援CADシステムとして有効利用することが出来る。また、非同期式制御回路の論理合成技術に関して焦点を当てた。第一に、配線遅延問題の解決策の一つとして、得られた論理回路が入力配線遅延に依存せずに正しく動作するように、配線遅延に非依存なインタフェースの導入法を提案した。また、論理合成後の回路最適化手法として、トランスダクション法と呼ばれるboolean最適化手法を非同期式制御回路のために拡張した。また、同期回路の高位設計の一環として、可変遅延演算器の利用を考慮した、制御回路設計手法を提案した。さらに、ハードウェア設計において、動作仕様から詳細設計に至るまでには様々なリファインメントが行われるが、そのようなリファインメントの前後の設計が、機能的に等価かどうかということを検証するための手法を提案した。本年度は、同期・非同期融合型VLSIシステムの設計モデルとして、配線遅延を無視し得る充分小さな局所領域と、複数の局所領域を含み配線遅延を無視し得ない大域的領域を定義し、局所領域を非同期システムとして実装するための設計支援CADシステムの構築を行った。本CADシステムでは、同期式回路の設計スタイルで記述されたVerilog RTL記述を入力とし、要求-応答信号線の付加を自動的に行い、クロックを全く持たない非同期式回路を設計する。回路はDDL(Differential-Domino-Logic)回路を用いて実現し、要求-応答ハンドシェイクに伴うオーバーヘッドを隠蔽するために細粒度化を行う。遅延モデルとしては、設計時に遅延情報を利用できることを仮定し、SDI(Scalable-Dalay-Insensitive)モデルに基づく回路設計を行う。SDIモデルに基づいた回路設計では、仕様で定められた信号遷移の順序関係を保証するため、共通の信号遷移元から各々の信号遷移が生じるまでのパスの遅延差がK倍以上となるようにする。DDL回路を用いて実現された非同期式細粒度パイプラインデータパスに関して、SDIモデルに基づいて回路が正しく動作するために満たすべき速いパスと遅いパスの関係を自動生成し、遅延の比較・レイアウト時の制約生成を行うツールを実装した。また、同期・非同期融合型モジュールを結合するインタフェース技術として、DIモデルに基づくインタフェースを持つ非同期式制御回路を設計する手法を提案し、評価を行った。本年度は昨年度に引き続き非同期式システム設計支援CADシステム「AINOS」を開発し、ライブラリの整備を行って同期・非同期融合型VLSIシステムの設計支援環境を構築した。同期式システムとして実現する場合でも、非同期式システムとして実現する場合でも同様の仕様記述を用いることが出来るため、同期・非同期融合型VLSI設計支援CADシステムとして有効利用することが出来る。

また、本年度はマルチプレクサとファンクション、レジスタから構成されるデータパスに対して、遅延情報を利用して要求-応答信号を共有化する手法を提案した。さらに、消費電力の評価として、2線2相式のデータ転送を実現する回路構成はどのような入力が与えられても遷移回数がほぼ等しくなることに着目し、2線2相式のデータ転送を行う暗号化回路を設計し、消費電力測定による暗号の解析手法に対して強いことをシミュレーシヨンにより電力を測定して確認した。
東アジア文化圏における宗教的対立と融和に関する研究

本研究は、東アジア文化圏において仏教移入以前に存在していた儒教や、仏教との関わり合いの過程で発展していった道教、さらに極東アジア日本の古代からの神祇信仰などの諸宗教が、それぞれどのように対立し合い、またその対立をどのように超克していったかという問題を、仏教を基軸にして中国・日本を中心に古代から中世の時代に亘って、それぞれの地域、それぞれの時代ごとにトピックを設定して検討したものである。本研究は、東アジア文化圏において仏教移入以前に存在していた儒教や、仏教との関わり合いの過程で発展していった道教、さらに極東アジア日本の古代からの神祇信仰などの諸宗教が、それぞれどのように対立し合い、またその対立をどのように超克していったかという問題を、仏教を基軸にして検討しようと意図するものである。本研究は扱う地域、扱う時代が幅広い上、検討トピックも多岐に亘るため、研究代表者はじめ全員が、まず各地域、各時代における必要文献資料の収集に務めた上でそれぞれ各自のトピックの検討を行った。研究代表者は、日本仏教の分野で中世鎌倉時代の仏教者明惠を取り上げ、日本の神祇に対する信仰が彼の中で仏教思想とどのように折り合っているのかという問題を検討し、日本の神祇信仰と仏教とが個人の中で混然と融和している様相を明らかにした。これは日本における神仏習合の一つのケーススタディである。また研究代表者は、古代より叡山天台を中心に日本仏教の中で大きな影響力をもった『法華経』経典が、中世を経て室町時代に至る間にどのように唱導されてきたかという問題を取り上げ、日本の神祇との関わりに注意を払いつつ検討した。研究分担者は中国とインドの領域においてそれぞれトピック研究に従事し、それぞれ別紙記載のような成果を得た(別紙記載の論文は成果の一部である)。本研究は検討トピックが多岐に亘るため、平成17年度に引き続き研究代表者はじめ全員が、まず各地域、各時代における必要文献資料の収集に務めた上でそれぞれ各自のトピックの検討を行った。研究代表者は、日本仏教の分野で中世末近世始めに出現した談義所における談義講説の所産の一つ、『法華経直談鈔』を取り上げ、その成立と後世における影響を検討した。それは日本の中世末から近世にかけて天台を中心とする日本仏教が、民衆教化にどのような手段を用い対応したかを探る目的であり、またその時代に神仏習合がどのような状況にあったのかを探るためであった。研究代表者は、『法華経直談鈔』の成立に大きな影響を及ぼした『法華経鷲林拾葉鈔』とを対比し、両者の内容検討を行って「直談」のあり方を検討したが、それが従来いわれているような民衆教化のための仏教の平易化とは異なるものであるという結果を得た。また他の研究分担者もそれぞれのトピック研究を行い、中国分野では別紙記載の成果の外に、明代における「気」の哲学、また朱子学と陽明学に関する成果があり、仏教と朱子学、仏教と陽明学の対立と融和の基礎的事例研究となった。インド分野では仏教論理学と関わりをもつクマーリラ研究の成果があり、また原始仏教における『雑阿含』道品と部派仏教の『根本説一切有部毘奈耶薬事』との文献上の関係を解明する成果があった。19年度は当初設定したトピック「朝鮮半島における仏教と儒道二教の対立と融和」の問題を佐藤錬太郎、〓和順の両研究分担者が手がけたが、今年度中にトピックについて論文としての形ではまとめ上げるに至ってはいない。ただし、儒教については〓研究分担者は『論語』の基本思想について著作を上梓し、佐藤研究分担者は陽明学についての成果論文がある。研究代表者は、昨年度から引き続き日本仏教における唱導の一形態としての直談の所産としての『法華経直談鈔』についての検討を行い、同時に設定トピックの「日本における仏教と神祇信仰」の問題を主として神仏習合の視点から検討を行った。この成果は次年度において成果論文としてまとめることになる。また、細田研究分担者は、インド仏教における『雑阿含』研究と『ブリハッド・アーラニヤカ・ウパニシャッド』研究に住持し、吉水研究分担者は仏教論理学との関わりでクマーリラ研究に従事した。最終年度である平成20年度は、研究分担者全員と7月、9月、21年3月の3回に亘って成果についての打ち合わせ会議をもち、「東アジア文化圏における宗教的対立と融和」に関して大きな一つの共通認識を形成することに務め、それぞれの専門領域において認識を深めた。その結果は本年度中に形ある成果としてはまとめられるには至っていないが、近い将来、研究分担者それぞれの立場から上記テーマに関して東アジアの宗教思想について提言が行われるはずである。研究代表者は、年度前半に唱導の一形態としての直談物、『法華経直談鈔』についての検討を行い、これを二つの国内学会において発表した。細田研究分担者は、前年度に続いてインド仏教における『雑阿含』研究とに従事し、〓研究分担者は中国哲学全体について学会展望を行い、これを発表した。

佐藤研究分担者は陽明学についての成果論文があり、また禅と武道についての著作を刊行した。また、2008年7月25目から8月2日にかけて、フランス国立高等研究院(EPHE)の宗教学部門教授、Jean-Noel Robert博士を研究協力者として招聘して研究発表会を開催した。同博士は「言語と宗教」というテーマで発表し、言語のもつ普遍性と特殊性が宗教によってどのような意義が賦与されているかについて興味深い見解を提示し、それについて全員で討議した。さらに、研究代表者は2009年3月10日から16日にかけて、フランス国立高等研究院を訪れRobert博士ほかスタッフとこれまでの成果について総括的検討を行い、発展的テーマとして東アジア宗教文化圏におけるシンクレティズム研究の可能性について賛意を得た。
マラリア原虫の赤血球結合ロプトリータンパク質の受容体の同定

マラリア原虫メロゾイトは、宿主赤血球侵入時に先端部小器官からタンパク質を分泌する。先端部小器官から分泌されるタンパク質の中で、ロプトリーから分泌される高分子ロプトリータンパク質複合体(RhopH複合体)の赤血球侵入における役割は分かっていない。本研究では、RhopHの赤血球侵入時における機能の解明に向けて、RhopH複合体と相互作用する赤血球タンパク質の検索を行った結果、RhopH複合体と結合するタンパク質を見いだすことに成功した。マラリア感染成立には、赤血球への侵入型であるメロゾイとの先端部小器官に局在する虫体側リガンドが赤血球側レセプターを認識することが必須である。先端部小器官のロプトリーに局在するRhopH複合体の赤血球表面レセプターでタンパク質を同定することを目的として本研究を行った。本年度は、ネズミマラリア(Plasmodium yoelii)のRhopH複合体に対する特異的モノクローナル抗体(mAb#25)をホルミル・セルロファインに結合させ、mAb#25アフィニティ・カラムを作成した。ネズミマラリア原虫(P.yoelii 17XL)感染マウス血液からパーコールを用いて精製した分裂体粗抽出液を材料として、mAbアフィニティ・カラムを用いてRhopH複合体を精製した。次に、精製したRhopH複合体をホルミル・セルロファインに結合させて、RhopH複合体アフィニティ・カラムを作成した。このRhopH複合体アフィニティ・カラムを用いて、マウス赤血球膜タンパク質抽出液からRhopH複合体に親和性を持つ分子の分離を行った。同様にホルミル・セルロファインのみのコントロールカラムを用いて結合する赤血球膜分子を分離し、陰性コントロールとした。これら2つのサンプルをSDS-PAGEにて展開し、両者を比較してRhopH複合体アフィニティ・カラムに得意的なバンドを選択した。ゲルから切り出したバンドに含まれるタンパク質の性状解析を質量分析装置(LC/MS/MS)によって行っている。マラリア感染成立には、赤血球への侵入型であるメロゾイとの先瑞部小器官に局在する虫体側リガンドが赤血球側レセプターを認識することが必須である。本年度は、ヒト赤血球タンパク質をコードする遺伝子のマウスオーソログの検索を試みた。そして592種のヒト赤血球タンパク質から488種のマウスオーソログを選択した。選択した488種のマウス遺伝子をPCR増幅によりRNAポリメラーゼ結合部位・翻訳促進用配列・ビオチン標識用配列を5側に、長鎖の非翻訳配列を3側に付加し、in vitroで転写しでmRNAを調製したところ、455種のmRNAを作成することが出来た。これらのmRNAを用いてコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系により、組換えタンパク質を調製したところ、430種のビオチン標識組換えタンパク質の合成に成功した。作成した430種のビオチン標識組換えタンパク質とRhopH3に特異的に反応ずる単クローン抗体mAb#32を用いたAlpha Screen法によってRhopH複合体に結合するタンパク質の検索をおこなった。その結果、PyRhopH複合体との結合を示唆する高い蛍光強度を発する1分子を同定した。RhopH複合体を構成する別のタンパク質RhopH2に特異的に反応する単クローン抗体mAb#25を用いたAlpha Screen法によっても有意に高い蛍光強度が得られた。更に、この反応の量反応関係を確かめたところ、マラリア原虫タンパク質濃度と蛍光強度との間に正の相関が認められた。以上の結果から、PyRhopH複合体に特異的に結合する赤血球側のレセプターである可能性が高く、さらに詳細な解析を継続している。
マーモセット造血幹細胞の同定とBLTマウスの作製

本研究は、ヒト免疫系モデル動物としての、非ヒト霊長類であるコモンマーモセットの有用性を評価するため、造血幹細胞の同定と重度免疫不全マウスへの免疫再構築を行った。その結果、マーモセットCD117陽性CD34陽性細胞からの顆粒球系、赤芽球系、リンパ球系それぞれへの分化をコロニーアッセイ及び重度免疫不全マウスであるNOGマウスへの異種移植により確認し、マーモセットCD117陽性CD34陽性細胞は、造血幹細胞を含むことが明らかとなった。本研究は、マーモセット細胞及びリンパ臓器を用いたBLTマウスの作製を目的としている。そこで本年度は、まず、マーモセット造血幹細胞の同定を目的として、マーモセットCD34抗体、CD117抗体を用いて骨髄細胞を染色し、セルソーターにより各画分を精製した。これらの細胞を重度免疫不全マウスであるNOGマウスに移植し、移植後4週間で各種リンパ臓器を摘出した後、細胞浮遊液を調製し、蛍光ラベルした抗マーモセット抗体で染色し、分化した細胞をフローサイトメトリーにより解析した。また、これらの組織をマーモセット組織を認識することが明らかになっている抗HLA抗体による免疫組織染色、およびトルイジンブルー、アルシアンブルー、サフラニンOによる特殊染色を行い解析した。さらに、骨髄細胞の各画分をin vitroにてSCF存在下で培養した。その結果、CD34+CD117+細胞はマーモセットミエロイド系細胞、特にマスト細胞へin vitro, in vivoどちらにおいても分化する事が明らかとなった。(論文投稿中)更にCD34+CD117+CD3-CD20-細胞よりさらにCD14+細胞を除くと、移植後5週間でCD3+細胞が出現し、これらの細胞がミエロイド系のみならずリンフォイド系にも分化する可能性が示唆された。これらの結果は、マーモセット造血幹細胞を含む画分の同定に成功したことを示唆する。本研究は、マーモセット造血幹細胞及びリンパ臓器を用いたBLTマウスの作製を目的としている。本年度は、新生仔個体の骨髄を用い、昨年度に引き続きマーモセット造血幹細胞の同定を目的として、抗マーモセットCD34モノクローナル抗体、CD117抗体を用いて骨髄細胞を染色し、セルソーターにより各画分を精製した。これらの細胞を重度免疫不全マウスであるNOGマウスに移植し、移植後4週間から12週間で各種リンパ臓器を摘出した後、細胞浮遊液を調製し、蛍光ラベルした抗マーモセット抗体で染色し、分化した細胞をフローサイトメトリーにより解析した。また、これらの組織をマーモセット組織を認識することが明らかになっている抗HLA抗体による免疫組織染色、CD117抗体染色による共焦点顕微鏡およびフローサイトメトリー、各種マーカー遺伝子のプライマーを用いたRT-PCRにより、マスト細胞を含むミエロイド系への分化およびCD19陽性B細胞とCD3陽性CD8陽性T細胞を含むリンパ球系への分化を確認した。さらに、移植後4週のNOGマウスにおけるCD34+CD117+細胞(造血幹細胞)の同定に成功した。(論文作成中)。これらの結果は、CD34+CD117+細胞がミエロイド系、リンパ球系の両者に分化する多分化能を有し、また、NOG個体中での自己複製能も有していることを示しており、造血幹細胞を含むことを示している。つまり、本研究における造血幹細胞の同定という目的は既に達せられたと考えられる。24年度は、これらの造血幹細胞を用いてBLTマーモセット作製を試みる。本研究は、ヒト免疫系モデル動物としての、非ヒト霊長類であるコモンマーモセットの有用性を評価するため、造血幹細胞の同定と重度免疫不全マウスへの免疫再構築を行うことを目的としている。本年度は、集大成の年として、マーモセット造血幹細胞のさらなる解析と論文作成を主として行った。その結果、マーモセットCD117陽性CD34陽性細胞からの顆粒球系、赤芽球系、リンパ球系それぞれへの分化をコロニーアッセイ及び重度免疫不全マウスであるNOGマウスへの異種移植により確認することができた。この結果より、マーモセット骨髄中に存在するCD117陽性CD34陽性細胞は、造血幹細胞を含むことが明らかとなった。ヒト造血幹細胞と同様にマーモセット造血幹細胞からもマスト細胞を含むミエロイド系の細胞が分化し、移植マウス脾臓での局在が観察された。また、リンパ球分化については、T細胞およびB細胞の分化が観察されたものの、ヒトと異なり、B細胞がT細胞に先行して優位に分化するという傾向は観察されなかった。本研究の結果の内、特にマスト細胞分化については、論文として纏め、Int. Immunol.に受理された。また、造血幹細胞同定については、日本ノートバイオロジー学会で発表の後、論文として纏め現在投稿中である。

マーモセット造血幹細胞が同定され、免疫系再構築が可能になったことにより、今後、この系を用いた霊長類免疫担当細胞の分化研究が可能となると考えられる。今後は、本研究で確立した系を用いて、ヒト及び非ヒト霊長類の免疫系がどの程度類似しており、分化過程のどの部分は非ヒト霊長類でもヒトモデルとして用いることができるのかを正確に評価していくことが重要であると考えられる。本研究の大きな目的である造血幹細胞の同定が計画通りに達成されているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、造血幹細胞を同定した後、造血幹細胞及び胎仔リンパ系組織を用いたBLTマウスを作製し、免疫系の再構築を諮る予定である。ただ、近年ヒトBLTマウスの作製と解析が進展し、当初の推測ほどヒト免疫系が再構築されないことが明らかとなっており、BLTの作製について、改変が求められる事が予想される。本研究では、マーモセットBLTマウス作製の後、ヒト同様に遺伝子改変NOGマウス作製などが求められる。これに関しては、同時に勧めている基盤Sのプロジェクトと協調して開発に当たる予定である。
スクールソーシャルワークのメゾ・マクロ実践モデル構築

スクールソーシャルワーク事業の確立のために、実証的研究を重ね、実践モデルを模索してきた。そのモデルを本格的に実施できるようプログラム化し、実際に試行調査を行い、その効果を明らかにした。実践モデルに沿ったスクールソーシャルワーカーの動きを表すDVDを作成し、そのモデルの普及に努めた。さらに、その評価を得て、進化すべく新しくメゾ・マクロ実践における課題を取り入れてスクールソーシャルワークのあり方を追求した。本研究の目的は、全国的には始まったばかりのスクールソーシャルワーク事業の確立のために、今までに海外研究も含めて実践モデルを模索してきたが、そのモデルを本格的に実施できるようプログラム化し、その効果を明らかにすること、実践モデルに沿ったスクールソーシャルワーカーの動きを表すDVDを作成しそのモデルの普及に努めること、その評価を得て、進化すべく新しくメゾ・マクロ実践における課題を取り入れてスクールソーシャルワークのあり方を追求していくことである。この目的を遂行するために、2010年度は、予定通り、(1)マクロ実践の明示化:海外の文献レビュー、シカゴの調査を行った。また海外との交流を行うためにもモデル提示を英文化し、HPにアップした。(2)今までの研究、グラウンデッド・セオリー・アプローチによって明らかにした、教員が最も困難を抱えている領域における実践プロセスを実際に実行できるよう、試行調査を行い、M-D&D研究開発の手続きによって改良した。結果をハンドブックとして、冊子にまとめた。ほか学会誌に投稿し、すでに掲載された論文1本、掲載予定となった論文1本を執筆した。本領域は、2008年度から始まったばかりで、マクロアプローチとして、追試可能な形に作成することは、ソーシャルワーク全体にとっても意義があると考える。学校のなかで、特にスクールソーシャルワークの必要とされる領域を明確化し、その領域におけるスクールソーシャルワーク実践のプロセスを示してきた。それは、単なるミクロ実践や技術ではなく、学校という実践の場であることや、教師の価値観や認識からなる学校文化(志水2005)に、そして教育委員会という教育行政に大きく影響していた。これらも含めてのプロセスを考える必要があり、日本における学校におけるソーシャルワーク実践の独自性である。これを明らかにする目的で、今までの研究成果をさらに発展させて、今年度は以下、3点に取り組んだ。(1)マクロ実践の明確化:海外ヒアリング調査を実施し、そのシンポジウムを実施し、海外を日本との比較で紹介する論文と調査論文とに取り組んだ。前者は掲載され、後者は掲載予定で発刊を待っている。日本の実践や政策の位置づけを海外比較のなかで明らかにした意義は大きい。今後、ホームページにアップしていく。(2)実践モデルの完成:実践モデルを場面特化する形でわかりやすくDVD化し、全国に発送した。また、海外ジャーナルに発表し日本の位置づけを海外にも明らかにし、HPに公開した。(3)効果測定の準備:コスト評価法などを学習の機会を設け、量的調査を実施し、分析の準備を行った。以上、取り組んできたことは、今までの研究で明らかにされていない、以下2つのことを明らかにした意義がある。1つは、教員が最も困難を抱えている領域-保護者に問題意識のない領域-において、実践モデルを試行、普及させる。もう1つは、まだ始まって時間も経ていないスクールソーシャルワーク事業にマクロ実践としの取り組みを海外の比較、海外への紹介という海外へのアクションを起こしたことの意義は大きい。この目的を遂行するために、2010年度・2011年度は、1マクロ実践の明示化:海外の文献レビュー、シカゴの調査を行った。2今までの研究、グラウンデッド・セオリー・アプローチによって明らかにした、教員が最も困難を抱えている領域における実践プロセスを実際に実行できるよう、試行調査を行い、M-D&D研究開発の手続きによって改良した。3実践モデルに沿ったスクールソーシャルワーカーの動きを表すDVDを作成しそのモデルの普及に取り組んだ。そして2012年度は、1スクールソーシャルワークの効果測定の調査を実施、発表し、まとめてコンパクトなリーフレットを作成し普及した。2英文による著書に取り組んだ。学会発表を5本、論文発表1本掲載済み、3本投稿中である。予定通り進行している。24年度が最終年度であるため、記入しない。順調に進んでおり、特に問題はない。
能動的視覚情報処理の神経回路モデルによる研究

第1次視覚野に見られる複雑細胞のように,最適刺激が受容野内のどこに提示されても反応する細胞を,自己組織的に形成させるための新しい学習則を提唱した.この学習則によれば,入力層を横切って動く種々の方位の直線を学習刺激として与えているだけで,単純型や複雑型の受容野を自己組織的に形成させることができる.この新しい学習原理の有効性を,入力層,S細胞層(単純細胞型の受容野),C細胞層(複雑細胞型の受容野)で構戚される3層の神経回路を用いて,シミュレーションで実証した.新しい学習則では,S細胞への入力結合は,ネオコグニトロンの場合と同じようにwinner-take-all型の競合学習(後シナプス側の細胞間の競合)によって形成される.C細胞への入力結合も,S細胞と同じように競合学習によって形成されが,S細胞がその瞬時出力の大きさに基づいて競合するのに対して,C細胞はその出力の残効(traceすなわち時間平均)に従って競合する.また,S細胞は競合による勝者だけが入力結合を強める(勝者への入力結合にLTPを起こす)のに対し,C細胞の場合は,勝者が入力結合を強める(LTPを起こす)と同時に,敗者は入力結合の強度を減らしていく(LTDを起こす).このときC細胞層にも抑制性細胞を導入し,興奮性シナプスだけでなくC細胞への抑制性シナプスも同時に強化することが,C細胞の自己組織化にとって重要である.以前筆者らが示したように,抑制性細胞がなくても廖雑な学習則を用いれば位置不変性受容野を自己組織的に形成させることは可能であるが,抑制性細胞があると窟単な学習則で自己組織化が可能になる.なおC細胞への抑制結合は,興奮性入力信号の総和が抑制性入力信号を上回ることがないように,興奮性結合の増加につれて増加させる.第1次視覚野に見られる複雑細胞のように,最適刺激が受容野内のどこに提示されても反応する細胞を,自己組織的に形成させるための新しい学習則を提唱した.この学習則によれば,入力層を横切って動く種々の方位の直線を学習刺激として与えているだけで,単純型や複雑型の受容野を自己組織的に形成させることができる.この新しい学習原理の有効性を,入力層,S細胞層(単純細胞型の受容野),C細胞層(複雑細胞型の受容野)で構戚される3層の神経回路を用いて,シミュレーションで実証した.新しい学習則では,S細胞への入力結合は,ネオコグニトロンの場合と同じようにwinner-take-all型の競合学習(後シナプス側の細胞間の競合)によって形成される.C細胞への入力結合も,S細胞と同じように競合学習によって形成されが,S細胞がその瞬時出力の大きさに基づいて競合するのに対して,C細胞はその出力の残効(traceすなわち時間平均)に従って競合する.また,S細胞は競合による勝者だけが入力結合を強める(勝者への入力結合にLTPを起こす)のに対し,C細胞の場合は,勝者が入力結合を強める(LTPを起こす)と同時に,敗者は入力結合の強度を減らしていく(LTDを起こす).このときC細胞層にも抑制性細胞を導入し,興奮性シナプスだけでなくC細胞への抑制性シナプスも同時に強化することが,C細胞の自己組織化にとって重要である.以前筆者らが示したように,抑制性細胞がなくても廖雑な学習則を用いれば位置不変性受容野を自己組織的に形成させることは可能であるが,抑制性細胞があると窟単な学習則で自己組織化が可能になる.なおC細胞への抑制結合は,興奮性入力信号の総和が抑制性入力信号を上回ることがないように,興奮性結合の増加につれて増加させる.
色素増感太陽電池を取り入れた,「物の色と補色」に関する学生実験用教材の開発

本研究の目的は「物の色と補色の関係」について理解させるための基礎科学実験用教材としての色素増感太陽電池の利用可能性を調べることである.本研究は次の手順により行った.1.導電性ガラスに酸化チタン膜を焼付けた後,色素の水又はエタノール溶液に入れて色素を吸着させて,太陽電池を作製した.2. 1つの色の太陽電池に対して,光源(ハロゲンランプ)と太陽電池との間にカラーフィルターを置き,当てる光の色を変えた場合のその発電電流値(短絡電流)を測定した.3. 2の結果と太陽電池の色とを比較し,色相環から期待される結果が得られているか調べた.4.その他の色の太陽電池でも同様に調べ,実験教材として,色素増感太陽電池が利用可能か否かの検討をした.なお,用いた色素は赤:エオシンY,青:ブリリアントブルーFCF,黄:クマリン343,緑:銅クロロフィリンナトリウムである.上記手順で研究を行った結果,どの色素を吸着した太陽電池に対しても,当てる光の色を変えることにより短絡電流値の変化が観られた.特に変化が大きく観測された色素はエオシンYとクマリン343であった.電池の色と短絡電流値の変化の関係を補色の観点からみると,色相環から期待される結果と微妙に色のズレが見られた色素もあったものの,概ね電池の色に近い色の光を当てると極小に,その補色に近い色の光を当てると極大になった.色のズレの原因は,人間の色感覚の違いや,吸着させた色素の可視光領域での吸収帯が比較的ブロードであることに加え,カラーフィルターを使っているために当てる光の波長もシャープではなかったためと考えられる.以上の結果より,色素増感太陽電池はそれを製作する楽しさを教えるという教材としてだけでなく,使用する色素が限定されるが,物の色と光の吸収(補色)との基本的な関係を教える実験教材としても利用可能あることが分かった.本研究の目的は「物の色と補色の関係」について理解させるための基礎科学実験用教材としての色素増感太陽電池の利用可能性を調べることである.本研究は次の手順により行った.1.導電性ガラスに酸化チタン膜を焼付けた後,色素の水又はエタノール溶液に入れて色素を吸着させて,太陽電池を作製した.2. 1つの色の太陽電池に対して,光源(ハロゲンランプ)と太陽電池との間にカラーフィルターを置き,当てる光の色を変えた場合のその発電電流値(短絡電流)を測定した.3. 2の結果と太陽電池の色とを比較し,色相環から期待される結果が得られているか調べた.4.その他の色の太陽電池でも同様に調べ,実験教材として,色素増感太陽電池が利用可能か否かの検討をした.なお,用いた色素は赤:エオシンY,青:ブリリアントブルーFCF,黄:クマリン343,緑:銅クロロフィリンナトリウムである.上記手順で研究を行った結果,どの色素を吸着した太陽電池に対しても,当てる光の色を変えることにより短絡電流値の変化が観られた.特に変化が大きく観測された色素はエオシンYとクマリン343であった.電池の色と短絡電流値の変化の関係を補色の観点からみると,色相環から期待される結果と微妙に色のズレが見られた色素もあったものの,概ね電池の色に近い色の光を当てると極小に,その補色に近い色の光を当てると極大になった.色のズレの原因は,人間の色感覚の違いや,吸着させた色素の可視光領域での吸収帯が比較的ブロードであることに加え,カラーフィルターを使っているために当てる光の波長もシャープではなかったためと考えられる.以上の結果より,色素増感太陽電池はそれを製作する楽しさを教えるという教材としてだけでなく,使用する色素が限定されるが,物の色と光の吸収(補色)との基本的な関係を教える実験教材としても利用可能あることが分かった.
ビデオベース視線検出アルゴリズムの開発・実装と教育工学への応用

通常のカメラで撮影した人物顔画像から視線方向を推定するシステムを提案、開発した。画像中の人物顔特徴点を抽出し、特徴点の位置関係を利用して顔姿勢の推定及び眼球位置の推定を行い得られた眼球周辺画像と、眼球の回転と瞼の開閉度をパラメータとして持つモデルにより生成したCG画像とのマッチングを行い、マッチングが最大となるときの眼球回転角を採用することで視線方向の推定を行う。被験者頭部を固定した場合と固定しない場合の推定誤差評価実験を行い、瞼モデルの導入の有効性を示した。頭部を固定しない状態では精度が大幅に悪化した。顔姿勢や眼球位置の個人差や撮影画像中の影やまつげ等の影響が大きいと考えられる。顔画像の見え(appearance)のみによる視線推定を行う場合の問題点を整理し、瞼の開閉など、眼球部以外の見えが誤差の大きな原因であることを解明し、瞼の開閉検出を含めた視線検出アルゴリズムを開発し、評価した。まず、顔を含む画像を撮影し、顔の特徴点を抽出して目の周辺領域を切り出す。次に、眼球の回転と瞼の開閉度をパラメータとしてもつモデルから生成したコンピュータグラフィック画像とのマッチングを行い、マッチングが最大となる時の眼球回転角を採用することで視線方向の推定を行う。マッチングの評価としては、ゼロ平均正規化相互相関が適していると考えている。この方法を実装して実験した結果、目と同じ高さまたは下方の対象を注視するとき、瞼モデルの導入で精度が向上することがわかった。しかし、頭部を固定した実験で、視線角度推定誤差の平均が約5度とかなり大きく、また頭部を固定しない場合は13.7度と誤差がさらに大きくなった。撮影条件により目周辺画像の明るさや色相などが大きく異なり、また特に頭部を固定しない場合は影などの影響も大きくなっているため、次年度はこれらを解決することを課題とする。また、視線推定時間の短縮も課題である。通常のカメラで撮影した比較的低解像度の不特定の人物顔画像から、視線方向を推定するシステムを提案、開発した。提案システムは、画像中の人物顔特徴点座標を抽出し、顔表情の影響が少ない特徴点の位置関係を利用して顔姿勢の推定及び眼球位置の推定を行い得られた眼球周辺画像と、眼球の回転と瞼の開閉度をパラメータとして持つモデルにより生成したコンピュータグラフィック画像とのマッチングを行い、マッチングが最大となるときの眼球回転角を採用することで視線方向の推定を行う。瞼モデル導入の効果を確認するため、被験者頭部を固定し眼球位置を既知とした上で、被験者へ注視対象を提示し、瞼モデルの有無による推定誤差評価実験を行った。その結果、目より上方を注視する時は推定誤差に大きな違いは無かったが、目に対し同じ高さおよび下方の対象を注視する時、瞼モデルによる大幅な推定精度改善が見られた。上方の対象を見る時は瞼が虹彩をあまり隠さないが、同じ高さ、下方を注視する時は瞼が虹彩を隠しがちのため、瞼モデルの導入が有効であることが示された。次に頭部を固定しない状態での実験を行った結果、平均誤差は13.7°となり、眼球位置が既知の場合の実験での誤差5.00°から大幅に悪化した。提案システムでは顔特徴点の位置関係から、個人差に適応せずに顔姿勢や眼球位置の推定を行うため、それらが既知の場合と比べ推定精度が悪化しと考えられる。目と同じ高さの対象を注視するときは、上下方向を注視するときよりも精度が高かった。顔を固定しない場合、上下方向を見ると、虹彩の見える面積が単調に減り、提案システムにおいて考慮されていない撮影画像中の影やまつげなどが推定精度に大きく影響するためだと考えられる。提案システムを用いることで、撮影カメラ近傍から遠い距離にある不特定の被験者に対して、どちらの方向を見ているかの大まかな分析が可能になった。信号処理、教育工学完全受動のビデオベース視線推定の基本方式を検討し、実装、評価まで行った。精度の面で目標から未だ遠いが、目周辺画像の前処理、瞼モデルと眼球回転モデルの分離、等により精度向上が図れるものと考えている。平成27年度は、前年度に開発した基本アルゴリズムを再検討し、もし必要があれば改良を加える。また、精度向上のために、顔周辺画像を前処理し、明度、色相などの影響を極力取り除く。また影等が映り込む可能性もあるので、それを排除する方策も考える。またこれまでは瞼開閉モデルと眼球回転モデルを同時に考慮していたが、それを分離することにより、精度と処理時間の両方を向上できるのではないかと考えている。これらを検討、実装し、本研究の完成を目指す。
スポーツ・インティグリティ教育促進のための研修プログラムデザインの開発と実践

本研究は、スポーツに親しむ小中学生がスポーツの本質を学び考えることのできる機会を創出し、Well-beingの観点からアスリート育成パスウェイを整備することを目的とする。そのために、日本のスポーツ環境におけるスポーツ・インティグリティ教育の促進を目指し、学校教育機関や地域のスポーツクラブにおいて使用可能な教材と研修デザインおよび教育プログラムを開発・実践する。
化学反応を駆使した多官能基性天然物の構造と作用機序研究

海洋生物からは、医薬品への応用が期待される有用成分が数多く見出されている。しかしながら、そのような成分は一般的に天然資源からの収量が少なく、分子構造も複雑であることが応用研究の障壁となっている。本研究では微量の天然成分を用いた化学反応を駆使し、そのような物質の三次元的な構造、および薬理作用の発現に必要な部分構造を明らかとする。これにより化学合成による供給への道筋を作るとともに、その作用メカニズム解明にも着手する。
産業革命期イギリスの貧困と福祉に関する社会史的研究

本研究は、「メイクシフト・エコノミー」makeshift economy概念に依拠しながら、産業革命期イギリスの貧困と福祉に関する社会史的研究を行うものである。具体的には、貧民に関する「パーソナル・ナラティヴ」「エゴ・ドキュメント」と呼ばれる史料を用いながら、貧困の原因、貧民の生存維持の手段、生存戦略を発見し、またそれらを言語論的転回以降の文化史研究の視座のなかにも位置づけ、「貧民の語り」のレトリックの分析を行うものとなった。平成21年は、基本的には、福祉と貧困に関する研究の基礎的文献を読了、内容を把握して研究の概要をつかむことに主眼をおいた。その成果は、「メークシフト・エコノミー論の射程」(未投稿)、「近世化のなかのコモンウェルス」『近代ヨーロッパの探求福祉』(ミネルヴァ書房、2010年刊行予定)、「物語の復権/主体の復権ポスト言語論的転回の歴史学」『思想』(2010年8月刊行予定)などの論文にまとめられた。また秋からはサバティカル休暇を利用して、ロンドン大学歴史学研究所に滞在して研究活動を行った。研究所滞在中は、関連するセミナーや学会に出席して、欧米における研究動向の確認を行いつつ、当該領域の研究者との交流を行った。帰国後は、「貧民の語り」を通じて貧困の範疇分類化とそのレトリックの分析に取り組んだ。第一に、貧困の原因の発見である。貧困の原因を不況による失業、不作・凶作など社会経済的要因のみによるものではなく、高齢期、病気、寡婦や孤児になった場合など、個人のライフサイクルのなかでも貧困に陥りやすいリスキーな時期があることを重視して分類した。第二に、そうした貧困に対応する生存維持の手段の発見である。救貧やヴォランタリズムに加えて、家族・親族ネットワーク、近隣関係、質入れ、売春、犯罪など、多様な貧民の生存戦略を明らかにしようとした。第三に、「貧民の語り」をめぐるレトリックの分析を言語論的に分析、語りのパターンを発見して、言語論的位相と社会経済的次元の接合を試みた。その成果は、「産業革命期イングランド民衆の生存の技法をめぐって貧困のナラティヴ」として身体医文化論研究会ワークショップ「病と物語」にて報告を行った。平成22年は、基本的には、福祉と貧困に関する研究の基礎的文献を読了、内容を把握して研究の概要をつかむことに主眼をおいた。その成果は、「メークシフト・エコノミー論の射程」(未投稿)、「近世化のなかのコモンウェルス」『近代ヨーロッパの探求福祉』(ミネルヴァ書房、2012年刊行予定)、「物語の復権/主体の復権ポスト言語論的転回の歴史学」『思想』1036号(2010年8月)などの論文にまとめられた。その後、「貧民の語り」を通じて貧困の範疇分類化と、そのレトリックの分析に取り組んだ。また、6月には社会経済史学会全国大会のシンポジウムにて「ヨーロッパ福祉国家研究史のへの視座」と題する報告を行った。関連する文献、ピーター・バーク『文化史とは何か』(法政大学出版局)、ギャレス・ステッドマン・ジョーンズ『階級という言語』(刀水書房)を翻訳・刊行した。平成23年は、昨年度に引き続き、基本的には「貧民の語り」を通じて貧困の範疇分類化とそのレトリックの分析に取り組んだ。第一に、貧困の原因の発見しようと試みた。第二に、そうした貧困に対応する生存維持の手段の発見しようと試みた。夏には、前年度繰り越し分から、ノルウエーのオスロ大学で開催された国際文化史学会に参加して、歴史学方法論の最新の手法を吸収することにつとめた。これらの成果は、「イギリス労働者文化のメタヒストリー」『歴史評論』737号などの論文にまとめられた。

また秋には、遅塚忠躬先生を記念するシンポジウム『これまでの歴史学、これからの歴史学』にて「言語論的転回と文化史」と題する報告を行い、明治大学特別記念講演にて「パーソナル・ナラティヴ論の射程」と題する講義を行なった。これまで研究成果は、単著としてまとめられ、平成24年度には刊行される予定となっている。平成25年は、昨年度に引き続き、基本的には「貧民の語り」を通じて貧困の範疇分類化とそのレトリックの分析に取り組んだ。その内容は、以下の通りである。第一に、貧困の原因を発見しようと試みた。貧困の原因を不況による失業、不作・凶作など社会経済的要因のみによるものではなく、高齢期、病気、寡婦や孤児になった場合など、個人のライフサイクルのなかでも貧困に陥りやすいリスキーな時期があることを重視して分類した。第二に、そうした貧困に対応する生存維持の手段の発見しようと試みた。救貧やヴォランタリズムに加えて、家族・親族ネットワーク、近隣関係、質入れ、売春、犯罪など、多様な貧民の生存戦略を明らかにしようとした。第三に、「貧民の語り」をめぐるレトリックの分析を言語論的に分析、語りのパターンを発見して、言語論的位相と社会経済的次元の接合を試みた。夏には、前年度繰り越し分から、ベルギーのゲント大学で開催された国際歴史理論学会に参加して、歴史学方法論の最新の手法を吸収することにつとめた。これらの成果は、「社会運動史とニューレフト史学」『歴史として、記憶として』共著(御茶の水書房、2013年5月)、「現代歴史学の挑戦」歴史学研究会編『歴史学のアクチュアリティ』(東京大学出版会、2013年5月)、「文化史研究の射程」「特集ピーター・バーク」『思想』1074号(2013年10月)として発表された。これまでの研究全体を通じた成果は、単著『イギリス福祉国家の歴史的源流近世・近代転換期の中間団体』(東京大学出版会、2014年3月)としてまとめられ刊行された。平成24年は、昨年度に引き続き、「貧民の語り」を通じて貧困の範疇分類化とそのレトリックの分析に取り組んだ。貧困の原因を不況による失業、不作・凶作など社会経済的要因のみに求めるものではなく、高齢期、病気、寡婦や孤児になった場合など、個人のライフサイクルのなかでも貧困に陥りやすいリスキーな時期があることを重視して分類した。第三に、「貧民の語り」をめぐるレトリックの分析を言語論的に分析、そこに語りのパターンを発見して、言語論的位相と社会経済的次元の接合を試みた。その成果としては、5月には日本西洋史学会小シンポジウム「語りのかたち」(明治大学)で本研究で検討した方法論について「問題提起」として報告を行なった。6月にはシンポジウム「二宮宏之と歴史学」(東京外国語大学)および「社会運動史の時代」(東洋大学)で本研究で検討した「主体」概念に関する報告を行なった。12月には歴史学研究会創立80周年を記念するシンポジウム「歴史学のアクチュアリティ」で報告を行なった。
酸化触媒反応による抗生物質及び抗菌剤の分解と抗菌活性に及ぼす腐植物質の影響

鉄(III)へム触媒の光増感SMMXの酸化分解能を明らがにするために、4種のCu錯体(Cu-BPAC, Cu-MPAC, Cu-PHAC, Cu-MPHAC)、フタロシアニン錯体およひ鉄ポルフィリン、マンガンポルフィリンについて検討した結果、鉄ポルフィリン錯体が最も活性が高いことが明らかになった(分解率74%)。また、非ヘム、ラッカーゼモデル触媒における活性種と考えられるヒドロキシラジカルおよび一重項酸素の検出に関して、ヒドロキシラジカル測定はDMPOによるスピントラップ法を採用し、ESRの基本測定条件を設定した。また、一重項酸素の検出は2,2,6,6-テトラメチルピペリジンの酸化反応により安定なニトロオキシラジカル量から一重項酸素を求める方法について検討中である。PPCPsの酸化生成物の解析ピリジル基を含む環状窒素で形成された非ヘム錯体の2,4,6tnbromophenol(TrBP)酸化に対する触媒活性を常温、常圧条件下で検討したところ、ピリジン配位子の数が多い非ヘム錯体Fe(tpa)とターピリジン誘導体を配位子とした非ヘム錯体Fe(terpy)は、TrBPの分解に対して高い触媒活性を示した。GC/MSおよびLC/MSによる分析の結果、酸性条件(pH4-7)において100%に近い分解率と70%以上の脱臭素率をそれぞれ示した。しかしながら、TrBPの分解率と脱臭素率は、塩基条件になるにつれ減少し、pH9よりも高い条件になるとTrBPの分解はほとんど確認されなかった。大腸菌アッセイによる抗菌活性の評価抗生物質の毒性を評価するための電気化学バイオアッセイを開発した。これは,大腸菌の呼吸鎖活性に関してフェリシアン化カリウムを電子伝達メディエーターからの電流応答から評価する方法である。大腸菌を懸濁させた数十マイクロリットルの液滴は回転ディスク電極を用いて高速かく拌させ,そこにメディエーターを添加することで高い触媒電流値が得られることを見出した。さらに,開発した試験法でテトラサイクリン誘導体3種とアンピシリンの毒性をサブマイクロモーラーレベルで評価可能であることを確認した。28年度が最終年度であるため、記入しない。
慢性関節リウマチのクローン化滑膜細胞におけるCD44分子の機能と役割に関する研究

(1)慢性関節リウマチ(RA)および変形性骨関節症(OA)患者の滑膜組織から分離した、fibroblast様滑膜細胞株(Fb)の細胞表面抗原を比較検討したところ、CD44抗原のみが、RA由来のFb細胞においてOAに比し有意に発現量が亢進していた。(2)かかるRAのFbの接着能は、OAのそれに比べ非常に強いことがわかり、しかもその接着現象にはCD44分子とヒアルロン酸(HA)関与が認められた。さらに、同時に樹立したRA滑膜由来のEBV感染B細胞株とFbとの強い接着現象において、異なる抗CD44抗体による抑制反応もみられ、細胞の種類によってCD44分子の調節機構や役割が異なっている可能性が示唆された。(3)RAのFbにおいて、HAを前処理させることによりCD44抗原の一部がupregulateされたり、あるいは反対に、各抗CD44抗体(一部除く)で先に処理していることでHAとの結合が増強されたことから、CD44分るとHAとの間でautocrineなupregulationのメカニズムが働いていることが明らかとなった。(4)増殖力の非常に強いRAのFbの少なくとも一部に、質的に異なるCD44分子、すなわち、変異型エクソン分子をもつ滑膜細胞が存在することが、RT-PCR法により判明し、今後、RAの異常増殖する滑膜細胞におけるCD44分子の質的異常を分子レベルで詳細に追研する必要があると考えられた。さらにCD44分子の特定の変異型エクソンに対するモノクローナル抗体を用いて、その細胞の増殖や浸潤を抑制できるデータも示されている。したがって、RAのFbに特定の、あるいは固有のアイソフォームのCD44分子が存在することが証明されれば、それに対するモノクローナル抗体を用い、かかるFbの機能および浸潤・増殖を抑制でき、RAの新しい分子免疫学的治療法の開発につながる可能性が期待できる。【研究要旨】慢性関節リウマチ(RA)の関節滑膜病変の病態を解明する目的で、われわれはこれまで、RAの滑膜組織より分離・増殖させた種々の細胞株を樹立してきた。今回は、かかる細胞株のうち、fibroblastoid cell-line(fb細胞)を用いて、発現が亢進している細胞表面上のCD44分子の機能、および分子生物学的特徴について検討した。その結果、RA由来のfb細胞の細胞表面上のCD44分子は、変形性骨関節症(OA)の滑膜由来のfb細胞に比較して、ヒアルロン酸との結合能が明かに亢進していた。しかも、かかるCD44分子を分子生物学的に検索したところ、RA由来のfb細胞の、少なくとも一部は、定常部以外に変異型エクソンの挿入の可能性が強く示唆された。そこでCD44分子の変異型エクソンに対するプライマーとプローベを用いて同定を試みた。fb細胞からRNAを取りc-DNAを合成し35サイクルのRT-PCR法を用いたのち、1.2%アガロースゲルで電気泳動した。その結果、RA滑膜fbの3つの細胞とも、定常分子しか存在しなければ、197bpのところのバンドのみが認められるはずであるが、いずれもが320bpのところあるいは、それ以上のbpのところにバンドが認められ、定常部以外に変異型エクソンが挿入されている可能性が強く示唆された。そこで、次に、4つのRA滑膜fbをsouthern blottingで変異型エクソンに対するプローベを用いて同定を試みたところ、4つのうち3つのfbに、194bp以外に3801200bpのところに3本から4本の太いバンドを認めた。よって、少なくとも3つのRA滑膜fb細胞に於て明らかに異常な変異型エクソンが挿入されていることが明らかとなった。

これより、かかる異常増殖を認めるRAの滑膜fb細胞において、異常CD44分子の重要性が明かに認められた。(1)慢性関節リウマチ(RA)および変形性骨関節症(OA)患者の滑膜組織から分離した、fibroblast様滑膜細胞株(Fb)とCD4陽性Tリンパ球株(CD4+T)の細胞表面抗原を比較検討したところ、CD44抗原のみが、RA由来の両細胞においてOAに比し有意に発現量が亢進していた。(2)かかるRAのFbとCD4+T細胞の接着能は、OAのそれに比べ非常に強いことがわかり、しかもその接着現象にはCD44分子とヒアルロン酸(HA)およびCD44分子どうしの相互作用の関与が認められた。さらに、同時に樹立したRA滑膜由来のEBV感染B細胞株とFbとの強い接着現象において、異なる抗CD44抗体により抑制反応もみられ、細胞の種類によってCD44分子の調節機構や役割が異なっている可能性が示唆された。(3)RAのFbにおいて、HAを前処理させることによりCD44抗原の一部がupregulateされたり、あるいは反対に、各抗CD44抗体(一部除く)で先に処理してやることでHAとの結合が増強されたことから、CD44分子とHAとの間でautocrineなupregulationのメカニズムが働いていることが明らかとなった。(4)増殖力の非常に強いRAのFbの少なくとも一部に、質的に異なるCD44分子、すなわち、変異型エクソン分子をもつ滑膜細胞が存在することが、RT-PCR法により判明し、今後、RAの異常増殖する滑膜細胞におけるCD44分子の質的異常を分子レベルで詳細に追究する必要があると考えられた。