hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
借用形式に観察されるモンゴル帝国期の多重言語状況の研究

モンゴル帝国期における多重言語状況の様相は、端的には、翻訳仏典の行文中に保存されている借用形式が如実に示している。その種の翻訳仏典の一つに、大阪外国語大学石浜文庫所蔵の『仏頂尊勝陀羅尼経』があり、研究代表者は既にその概要を紹介し、その校訂テキストを公刊しているが、本研究課題の趣旨に沿って、改めて分析を進め、その結果を平成9年7月ハンガリー・ブダペスト市で開催された第31回国際アジア・北アフリカ人文学者会議で報告して、米国、中国、ドイツ、ハンガリーなどの研究者とその内容をめぐって討議した。さらに、これとは別の、未発表の仏典『聖吉祥真実名経』についても、本研究課題の趣旨に沿った調査・分析を進め、その成果を平成10年7月フィンランド・マイヴィク市で開催された第41回常設国際アルタイ学会で発表し、ハンガリー、ドイツ、中国などの研究者とその内容をめぐって討議した。これらの個別の文献資料に関する研究を進め、新知見を得た研究代表者は同年10月韓国アルタイ学会の招聘を受け、大韓民国ソウル市で開催された第3回韓国国際アルタイ学会で研究発表を求められた際、多重言語状況下における言語接触の実相を物語る誤訳の意義を、上記の諸成果を十二分に活用しつつ、解き明かした研究を公けにした後、モンゴル、中国内蒙古自治区、韓国、日本の研究者と討議した。そこで仰いだ意見・批判をもとに改稿した論文は、同学会で刊行されているAltai Hakpo 11に掲載される予定である。また、同年12月京都大学言語学懇話会では、以上の成果を十全に取り入れて、借用形式とそこにうかがえる多重言語状況を総括的に解明する研究を発表している。モンゴル帝国期における多重言語状況の様相は、端的には翻訳仏典の行文中に保存されている借用形式が如実に示している。その種の翻訳仏典の一つに、大阪外国語大学石浜文庫所蔵の『仏頂尊勝陀羅尼経』があり、研究代表者は既にその概要を紹介し、その校訂テキストを公刊している。このたびの研究課題の趣旨に沿って、改めてこれに対する分析をすすめ、その結果を昨夏ハンガリー・ブダペスト市で開催された第31回国際アジア・北アフリカ人文学者会議で報告して、各国の研究者の批判を仰いだ。その成果は、Zentral-Asiatisch Studien第28号に掲載される予定である。さらに、これとは別の、未発表の仏典についても現在本研究課題の趣旨に沿った調査・分析が進行中であり、その成果を今夏フィンランド・ヘルシンキ市で開催予定の第41回常設国際アルタイ学会で発表し、各国の研究者の批判を仰ぎたいと考えている。なお、平成7・8年度の科学研究費補助金交付によって蓄積された借用形式に関わる知見の一端は、研究成果公開促進経費の公布を得て本年2月に刊行された拙著『蒙古語訳「牛首山授記経」の研究』においても開陳されているが、本研究課題によって得られた知見とこれとを十全に活用し、借用形式の総合的な整理と体系化に着手する予定である。また、近年進展が著しい社会言語学に関する研究成果を十全に活用し、モンゴル帝国期における多重言語状況の実相の解明を試みる所存である。

さらに、これとは別の、未発表の仏典『聖吉祥真実名経』についても、本研究課題の趣旨に沿った調査・分析を進め、その成果を平成10年7月フィンランド・マイヴィク市で開催された第41回常設国際アルタイ学会で発表し、ハンガリー、ドイツ、中国などの研究者とその内容をめぐって討議した。これらの個別の文献資料に関する研究を進め、新知見を得た研究代表者は、同年10月韓国アルタイ学会の招聘を受け、大韓民国ソウル市で開催された第3回韓国国際アルタイ学会で研究発表を求められた際、上記の諸成果を活用することを通じて多重言語状況下における言語接触の実相を物語る好個の素材として見なし得ることが明らかとなった誤訳の意義に関わる研究を公けにした後、モンゴル、中国内蒙古自治区、韓国、日本の研究者と討議した。そこで仰いだ意見・批判をもとに改稿した論文は、同学会で刊行されているAl tai Hakpo 11に掲載される予定である。また、同年12月京都大学言語学懇話会では、以上の成果を取り入れて、借用形式とそこにうかがえる多重言語状況を総括的に解明する研究を発表している。
ヒスタミンに応答するインテリジェント人工細胞の開発

本研究の目的・課題は:(1)SELEX法により新たに選択されたヒスタミンアプタマーを用いて、無細胞翻訳系において、ヒスタミンに応答するRNA遺伝子スイッチ(リボスイッチ)を設計する。(2)同リボスイッチをリポソームに内包し、ヒスタミンに応答する人工細胞を作成する。(3)培養細胞により放出されるヒスタミンに応答する人工細胞を作成する。本年度は主に(1)を遂行した。ヒスタミンアプタマーの解析:SELEX法を用いて新規に発見したヒスタミンアプタマーA1について、各種化学的解析を行った。等温滴定型カロリメトリー(ITC)により解離定数および熱力学的定数の測定を行った。また、変異解析により、分子認識機能に重要な塩基を特定した。ヒスチジン、イミダゾールなど、類似化合物に対する結合能評価を行い、ヒスタミンに対する特異性を確認した。これらの基礎情報は下記のリボスイッチ設計に活用した。ヒスタミン応答性リボスイッチの作成:無細胞翻訳系(PUREfrex)において機能するヒスタミン応答性リボスイッチの、半合理的設計法による設計および評価を行った。RNA二次構造予測を利用して、約20種類のリボスイッチ配列を設計し、その中からヒスタミン存在下で、最大30倍ものレポータータンパク質発現を示すリボスイッチが得られた。さらに、アプタマー部分に変異を入れるなどして、リボスイッチが確かにヒスタミンに特異的に応答していることを確認した。また、一般的なS30無細胞翻訳系においてもリボスイッチの機能を確認した。これらの実験により、極めて性能が高いヒスタミン応答性リボスイッチを得ることができた。当初の計画であるヒスタミン応答性リボスイッチの作成に成功した。リボスイッチの性能(最大30倍の遺伝子発現活性化)としては当初の期待以上の値が得られた。開発に成功したリボスイッチをリポソーム内に封入し、その機能を確認する。また、リボスイッチにより様々なタンパク質の発現制御を行い、人工細胞の表現型を制御する。学会参加を見合わせたため、旅費を使用しなかったことと、リボスイッチの実験が予想よりも早く進行したため、PUREfrex試薬の消費が予定よりも少なかった。次年度には学会発表と、人工細胞実験およびリボスイッチの性能向上のための、高スループットスクリーニングのための消耗品を購入するために使用する予定である。
太陽発電システムに関する総合研究

研究組織の中の総合システムの分担者が企画グループを組織し、以下の3つのフェーズで、昨年度の総合研究で策定した宇宙太陽発電システムの研究計画の再調整、再組織化を実施した。第1フェーズ(平成6年7月から9月)では、企画グループが重点領域設定再申請の基本的な方針を示し、それを受けて研究分担者は、それぞれ関連する研究のしぼり込みについての考え方を検討した。「宇宙建設学の確立とSPSへの応用」、「太陽発電衛星開発の地球生態・経済システムへの影響評価に関する研究」、「月面における太陽発電関連材料の製造に関する研究」の3計画研究については分科会を開催し、それぞれの計画研究の考え方を整理した。9月には、全体会議を開催し整理の方向について全体的な議論を行うとともに、計画研究を精選するためのシンポジウムの開催を企画した。第2フェーズ(10月及び11月)では、「マイクロ波の生態系への影響に関するシンポジウム」、「宇宙輸送系に関する小研究会」、「SPS用送受電技術シンポジウム」、「シリコン文明とSPSに関するシンポジウム」を開催した。これらのシンポジウムでの議論を基に、各分野の研究計画の整理を行った上で、11月末には全体会議を開催し、全体的な研究の枠組みを合意した。第3フェーズ(12月及び1月)では、第2フェーズで決まった研究の枠組みに基づき、各計画研究の代表者及びその分担者は12月末までに具体的な研究計画をまとめた。企画グループは個々の計画研究をインテグレートして申請書素案を作成した。平成7年1月13日には第3回全体会議を開催して申請書素案を審議し、総合研究(B)の参加研究者の総意として、本年度に重点領域申請を行なうことを決定した。
拡散強調画像を利用した側脳室内脳脊髄液の温度測定における基礎的検討

脳温度をMagnetic resonance imagingで非侵襲的に測定する方法のひとつとして、拡散強調画像から得られる側脳室内の脳脊髄液の拡散係数を利用する方法が近年提案されている。本研究では、この手法の安定性や、撮像条件・体温の違いによる影響を明らかにするために計画されたものである。健常成人の検討によって、この手法は安定的に脳室温度を計測することが可能であった。また撮像条件のうち、スライス厚は算出される温度に影響を与え、より薄いスライス厚のほうが望ましいという知見が得られた。また脳室温度は体温の影響を受けることも明らかとなった。脳の温度は代謝による熱産生と、主に脳血流による熱の除去のバランスの維持によって一定に保たれている。今年度は体温と脳温度の関係を明らかにするために、MRIの拡散強調画像を利用して脳室温度を計測する手法を用い、異なる体温下において脳室温度に変化が生じるかについての検討を行った。MRIの撮像条件に関しては、前年度の当該研究の結果から、motion-probing gradientを15軸とし、スライス厚に関しては3mm厚を用い、同一の被験者を2週続けて撮像を行い(6-7日後に再撮像)、それぞれの脳室温度のデータを取得した。またそれぞれの頭部MRIの撮像前に、左右の鼓膜温度の計測を行い、鼓膜温度と脳室温度の変化の比較を行った。被験者は頭部疾患のない健常成人ボランティア15名(男10女5 2532歳平均27.1±1.7)であった。得られたデータの解析により、鼓膜温度の変化と脳室温度の変化には正の相関が得られ(P=0.032)、体温は脳室温度に影響を与える可能性が示された。脳の代謝活動によって発生した熱が、脳血流によって頭蓋外に運び出されることによって、脳内の温度は一定に保たれているが、体温が上昇すると血液の温度も上昇するため、その結果脳の熱の除去の効率が低下することが、今回の脳室の温度変化の原因と考えられた。今回の研究結果により、この手法を用いた様々な検討を行う際には、体温の違いも考慮に入れる必要があることが明らかとなった。脳温度を非侵襲的にmagnetic resonance imaging (MRI)を用いて測定する手法のひとつである、拡散強調画像から得られる拡散係数を利用する方法の検討を、頭蓋内の側脳室内の脳脊髄液の温度を算出することによって行った。MR装置はPhilips社製Gyroscan Intera 1.5 teslaを使用し、頭部疾患のない健常成人ボランティア10名(男:6女:4 2532歳平均27±2歳)の頭部MRIの撮像を行った。その際、拡散強調画像はスライス厚を3mmおよび5mm、motion-probing gradientに関しては、3軸、6軸、15軸、32軸の4種をそれぞれの組み合わせで各々3回連続撮像を行い、側脳室の温度を算出した。続いてMR spectroscopy(MRS)にて左右の脳実質温度の計測を行った。MR撮像前に耳式体温計にて左右の鼓膜温度の測定を行い、その平均値を鼓膜温度とした。頭部の拡散強調画像を同一条件で3回連続撮像を行ったが、得られた脳室温度の間に有意差はなく安定的に温度を算出可能であった。スライス厚に関しては5mm厚の方が有意に低い脳室温度が算出され、さらにばらつきも大きい結果が得られた。4種類の軸数に関してはこれらの間に有意差は認められなかった。鼓膜温度から想定される脳室温度の理論値と算出された脳室温度との差に関しては、スライス厚が3mmでは0.7°C、5mmでは1.1°C低く算出された。MRSを用いた脳実質温度との比較に関しては、得られた左右の脳実質温度の差が2.3°Cと大きな値となったため、今回の検討対象から除外することとした。今回の検討より拡散強調画像を用いて脳室温度を安定的に計測可能であることが明らかとなった。撮像条件のうち、スライス厚の違いは算出される温度に有意差を生じスライス厚のより薄い撮像が適切と考えられた。脳温度をMagnetic resonance imaging (MRI)にて非侵襲的に測定する方法のひとつとして、拡散強調画像から得られる脳室内脳脊髄液の拡散係数を利用する手法が近年提案されている。この撮像は、他に提案されているMRIによる温度計測方法とは異なり、一般の臨床現場で既に広くルーチン検査に組み込まれているため、日常臨床に活用されやすいという利点を有している。しかしながら、この手法の検討はまだ端緒についたばかりであり、この手法に関する種々の検討が必要な状況である。これまでに行った過去2年間の検討において、1.5 TeslaのMR装置を使用し、頭部疾患のない10名の健常成人ボランティアで研究を行った。その結果、まずこの手法により脳室温度は安定的に計測可能であることが確認された。

また撮像条件のうち、motion-probing gradientの値の違いは、算出される温度に影響を与えないものの、スライス厚の違いは算出される温度に有意差を生じ、この手法を用いた検討を行う際には、スライス厚のより薄い撮像が望ましいことが明らかとなった。また脳室の温度は、鼓膜温度の変化とともに変動することも判明し、この手法を用いて様々な検討を行う際には、対象者の体温の違いも考慮に入れる必要があることが明らかとなった。放射線科学中枢神経領域頭部疾患のない健常成人ボランティアのリクルートが問題なく完了し、撮像あるいはデータ解析にも支障を生じず、研究は順調に進展している。頭部疾患のない健常成人ボランティアのリクルートも問題なくできており、撮像あるいはデータ解析にも支障を生じず、研究を順調に行えている。過去2年間で得られたデータや知見をまとめ、国際学会に発表するとともに、英語論文を作成し、英文雑誌に投稿を進めていく。次年度に関しては、同一被験者において2回のMRIの撮像を行う予定であり、これまで以上に被験者に研究の意義を丁寧に説明し、健常成人ボランティアのリクルートを行っていく。本研究には高性能の演算能力および画像解析を可能にする高速ワークステーションが必要不可欠であり、その購入にあてる予算を計上していたが、既存の機器にて代用したため、使用額に変更が生じた。今後の国際学会の旅費および論文作成に必要な諸費用などに使用していく。データ解析をより円滑に行うため、ハード面での整備を行うための費用に使用していく。また国内および海外の学会を通じて、この領域に関して新しい知見が生まれていないかなどの情報収集を行っていくための費用に使用していく。
RhoファミリーG蛋白質シグナル伝達系の神経細胞移動における働き

神経細胞移動は複雑な脳組織の形成において必須の発生段階であるが、そこに関わる分子機構についてはまだあまり良く知られていない。その過程で神経細胞が大きく細胞形態を変化させるために、細胞骨格制御め鍵分子であるRhoファミリーG蛋白質の関与が予想されてはいたが、Rac1などのノックアウト動物では早期致死となるため、その神経細胞移動における働きは未解明であった。そこで、我々は「子宮内エレクトロポレーション法」を活用し、発生途上のマウス胚の局所脳に特定の遺伝子を導入することによって、以下のことを明らかにした。1)Rac1のエフェクターのーつであるPak1が神経細胞移動に関与しているということが、子宮内エレクトロポレーションによる過剰発現やshRNA導入によるloss of functionでの観察などで示唆された。まだ予備的結果に過ぎないので、今後さらに良く詰めて行きたい。2)神経細胞移動の鍵分子と言われていたCdk5が、細胞周期に関連するp27kip1をリン酸化することで安定化し、移動神経細胞におけるアクチン細胞骨格系を制御することによって、神経細胞移動に関与していることを明らかにした。その過程でp27kip1がRhoファミリーG蛋白質RhoAの活性を抑制することで、アクチン結合蛋白質コフィリンの機能を活性化し、アクチン細胞骨格を制御していることが示唆された。3)Ptflaが下オリーブ核神経細胞の移動と分化にも関わっていることが明らかになった。1 RNAi-子宮内エレクトポレーション法によるRac1,RhoAエフェクターのスクリーニングRac1およびRhoAの全ての既知エフェクターに対するRNAiをマウス胚の脳組織へ導入し、神経細胞移動への阻害効果を観察することによって、神経細胞移動に関与するエフェクターを同定を試みた。今のところ、PAK1を初めとしていくつかのエフェクターの同定に成功している。PAK1に関しては、RNAiだけでなく、変異を入れた蛋白質の発現によっても、その重要性を確認している。どうやら、異動神経細胞の極性形成に関与しているということが明らかになってきた。2薬剤による神経細胞移動に関与する分子のスクリーニング現在では様々な分子の機能阻害剤が市販されている。GFP発現ベクターを子宮内エレクトロポレーションによりE14胎児脳に導入し、E16でその脳組織のスライス培養+タイムラプス観察を行った。様々な分子の機能阻害剤(特にRhoファミリー情報伝達系に関与することが知られている分子、特にキナーゼ)を加え、GFPで標識された移動神経細胞の動態に影響を与えるものをスクリーニングし、いくつかのキナーゼ阻害剤が得られた。これらの阻害する蛋白質について、1と同様にRNAi-子宮内エレクトロポレーション法で検定しており、現在いくつか関与分子が同定されている。子宮内エレクトロポレーションによってPtf1a遺伝子または空ベクターを導入された神経細胞をそれぞれFACSによって集め、両者で異なる発現をする遺伝子をマイクロアレイで選択し、その発現様式・機能を、個体レベルおよび細胞生物学レベルで調べようとしているが、これは未だにRNAを採取した段階である。今後これを精力的に行って行く。
三陸沿岸地域における観光地特性と旅行者特性の適合性評価手法に関する研究

本研究は、三陸沿岸地域におけるSNSに投稿されたデータを分析し、観光地や旅行者の特性を把握するとともに、これまで発見されなかった潜在的な観光スポットの発見を行なった。まず、アンケート調査によりSNSデータを旅行者や観光地の特性把握に用いることの妥当性を確認した。次に、チェックインデータと写真データの分布の違い、SNS写真投稿者の国籍と季節ごとの写真数の分布を調査した。その結果、例えば、三陸沿岸地域は秋に米国人による写真の存在が多いなどのことがわかった。今後は、本研究成果をベースに、旅行者の嗜好、公共交通機関の時刻表データと組み合わせ、旅行者特性に適合した旅行プラン作成システムの開発を行なう。本研究は東日本大震災被災地の復興を加速することを目的に,短期的な経済効果が期待できる観光業に着目し,観光者増加のための施策作りに貢献する基礎資料を得ることを目的としている.平成27年度は,三陸沿岸地域の観光リソースを調査・分類し,それぞれの地域の観光地特性を明確にすることを目標としている.上記の目標に沿って,平成27年度(後期)は,Webで公開されているデータや文献,現地訪問によって,三陸沿岸地域の観光資源について調査・分類を行い,調査したデータをGoogle Map上に表示する作業を行った.また,観光資源だけでなく,生活衛生同業組合に加盟している店舗の被災状況を岩手県生活衛生指導支援センターの協力を得て調査した.これらのデータもGoogle Map上に表示する作業を行っている.これらの作業には時間を要するため,平成27年度は50%程度の達成率であり,平成28年度も継続して作業を行う.一方,観光地特性の分類手法についての理論研究も行っている.この研究では,テスト理論の中の項目反応理論に着目し,観光履歴データと遺伝的アルゴリズムを用いて観光地の定量的分類を行い,項目反応理論を用いることにより個別のユーザに合った観光地を推薦するシステムの実現をめざしている.また,ユーザの嗜好や時間制約に基づく観光ルートの作成,SNSデータを用いた最新の観光地情報の取得方法,SNSに投稿された写真データの分析による観光地特性の表現などのサブテーマを設定し,研究を進めている.これらの研究は平成27年度においては,企画計画段階にあり,平成28年度には具体的な成果を出せるレベルまで進捗させる予定である.研究のスタートが遅れたため我が国の地方においては観光産業の活性化が求められている.本研究では,地方における潜在的な観光資源及びターゲットユーザの発見を目的とし,SNSデータを用いたツーリズム・デスティネーションの可視化を行った.具体的には,SNS中のユーザプロフィール,写真投稿サイト,チェックインサービスのデータを用いて,訪問者が多いスポットを,旅行者の属性ごと(性別,年代別,出身地別)に表示するシステムを試作した.また,写真投稿サイトユーザの写真撮影箇所と,投稿された写真の被写体ついて調査した.これにより,旅行者の属性によって人気のある観光スポットが異なることと,ユーザ特性と観光スポットの関係を明示することができた.本年度は,Flickr写真の被写体を手動で分析することにより,Flickrは,一般の人よりも風景や建造物の写真が多く掲載されている傾向が高く,人物や食べ物の写真はあまり掲載されていないことがわかった.また,地方においては,多様な観光スポットに外国人旅行者を呼び寄せることが求められている.本研究では,Flickrに投稿した写真撮影者を出身国別に分類し,撮影された写真枚数の多い観光スポットと撮影者の国籍との関係を可視化した.ケーススタディとして,外国人が岩手県内で撮影した写真を分析した結果,訪問した場所について,出身国別や季節別に差異があることが分かった.これらの分析結果は,出身国に基づく観光推薦ができるだけでなく,潜在的な魅力ある観光資源を発見し,外国人旅行者の嗜好をつかみ,新たな観光サービスの展開などにも活用できる.しかし,これまで行った分析は,手作業が多く,膨大な写真データに対する分類と分析については大きな負担が必要である.今後は本作業の自動化が求められる.SNSデータを用いて岩手県内の旅行者行動を分析し,観光地の特性(観光資源,好まれる旅行者のプロフィール,季節特性など)の分析,潜在的観光スポットを発見できた.ただし,三陸沿岸地域の特性についてはSNSデータが不足しているため,他のデータと合わせて分析する必要がある.本研究は,近年急増する個人旅行者を三陸沿岸地域へ誘導することを目的に,SNSデータを活用した個人適合型の観光推薦手法について研究するものである.平成29年度は,三陸沿岸地域におけるFlickr等のSNSに投稿された写真データを分析し,観光スポットの可視化を行なった.また,一般の観光冊子やWebサイトに掲載されている観光スポットと本研究で得られた観光スポットを比較し,SNSデータを用いることで,これまで発見されなかったマニアックな観光スポットも発見することができた.これらの観光スポットについては,実際に現地を訪問し,観光ルート,移動時間,滞在時間,交通の利便性等についても調査した.この結果,SNSで発見された観光スポットは通常は気づかないスポットであるが,見方によっては魅力的でことを確認した.また,三陸沿岸地域は,道路が複雑であり自家用車を使った場合でも予想以上に移動時間,滞在時間がかかることがわかった.さらに,SNS写真投稿者の国籍と季節ごとの写真数の分布を調査した.この結果,三陸沿岸地域は秋に米国人による写真の存在が多いことがわかった.冬にはまったくSNS写真データが存在しなくなることから,冬季における旅行者誘導対策が必要と思われる.今後は,増大している訪日外国人(インバウンド)

特に,中国,韓国,台湾からの観光旅行者を三陸沿岸地域に誘導する方法について研究する.また,三陸沿岸地域の公共交通手段は利便性が悪いが,旅行時間を工夫することで,効果的・効率的な周遊が可能であることがわかった.このため,今後は三陸沿岸地域を対象とした乗り換え案内システムの開発を行なう予定である.本研究は、三陸沿岸地域におけるSNSに投稿されたデータを分析し、観光地や旅行者の特性を把握するとともに、これまで発見されなかった潜在的な観光スポットの発見を行なった。まず、アンケート調査によりSNSデータを旅行者や観光地の特性把握に用いることの妥当性を確認した。次に、チェックインデータと写真データの分布の違い、SNS写真投稿者の国籍と季節ごとの写真数の分布を調査した。その結果、例えば、三陸沿岸地域は秋に米国人による写真の存在が多いなどのことがわかった。今後は、本研究成果をベースに、旅行者の嗜好、公共交通機関の時刻表データと組み合わせ、旅行者特性に適合した旅行プラン作成システムの開発を行なう。研究のサブテーマを設定することができたため,計画的かつ着実に研究を推進することができるようになった.SNS写真データの位置情報だけでなく,写真の被写体を自動分析する手法について研究を進める.また,Flikrだけでなく,他のSNS利用ユーザの行動分析も行い,多様なユーザデータから新たな観光資源の発見に役立つデータを収集する.また,季節特性,移動時間を考慮した,三陸沿岸地域に誘導できる観光ルート推薦システムの構築を目指す.さらに,外国人旅行者に対しては有効な交通手段も含めた観光ルート推薦システムを開発を目指していく.情報システム研究のスタートが遅れたため人件費,謝金が発生しなかった.今年度は理論研究,データ分析に時間要し,三陸沿岸地域に出張して実態調査との比較を行うことができなかったため.研究が進捗してきたため人件費,謝金として使用する.次年度は,分析データから得られた観光スポットの確認のため,三陸沿岸地域の実態調査を行なう.また,本研究で提案された手法による観光ルート推薦システムの評価を行う.このための出張費として使用する計画である.
超臨界流体クロマトグラフィー質量分析を用いた大腸がん早期診断法の開発

代謝物総体(メタボローム)解析は、疾患バイオマーカー探索や病態解析における有望技術とされるが、分析の困難さゆえにさまざまな疾患に関与すると考えられるある種の脂溶性代謝物は対象とされてこなかった。本申請課題では、超臨界流体クロマトグラフィーや超臨界抽出を世界に先駆けて検体の分析に応用し、重要であるにも関わらず解析されてこなかった分子群を分析対象に加えることでがんの早期診断に向けた分析技術の開発を行った。超臨界流体を移動相に用いた超臨界流体クロマトグラフィー/質量分析(SFC/MS)では、メタボロミクスに一般的に用いられているガスクロマトグラフィー/質量分析や液体クロマトグラフィー質量分析(LC/MS)、キャピラリー電気泳動(CE/MS)などでは分離が困難であった代謝物の解析が可能であり、これまで解析の対象とならなかった代謝物に関する情報を得ることができる。本申請課題ではSFCにタンデム型質量分析計(MS/MS)を接続した新しい分析システムを構築し、担がんマウスモデル、ならびに、がん患者血清中の酸化脂質を含む脂溶性代謝物を網羅的に解析する。これまで解析の対象とならなかった脂質、酸化脂質、および、胆汁酸などの重要な脂溶性代謝物に関する様々な情報を獲得し、これまでの研究成果などとも照らし合わせて評価を行うことで、治療効果予測や予後判定を含む新たながん早期診断法の開発へ向けた研究を行う。当該年度は、SFC/MS/MSによる代謝物分析システムの構築に取り組んだ。まず標準品を用いて、SFCの操作圧力や流量,温度、添加剤などさまざまな条件を検討することにより、脂溶性代謝物分析システムの構築を試みた。結果として、これまでに、脂質、酸化脂質、カロテノイド、カロテノイド酸化物、胆汁酸などの脂溶性代謝物の分析系を構築することに成功し、それぞれの代謝物の質量電荷比と保持時間に関するデータベースを構築した。次に、構築した分析系のバリデーションテストを行い、直線性や再現性など、実用に耐えうる分析システムであることを確認した。また、血清や組織など生体試料への適用性も評価した。平成26年度は、引き続き代謝物分析技術を構築し、主にオンライン超臨界流体抽出(SFE)システム構築に資する検討に取り組んだ。気体様の高い拡散性および液体様の物質溶解性を併せ持つ超臨界流体を用いたオンラインSFEシステムでは、抽出/分離/分析を一工程で行うことを可能であり、抽出物が酸素や光に触れることがないため、不安定な代謝物の分析に有用である。さらに、オンラインSFE-SFCは煩雑な前処理を必要とせず、分析の完全自動化が可能であることから、多検体連続分析が必要とされる臨床検体分析には理想的な手法である。試料としては侵襲度が低く保存運搬などの取扱いが簡便なことから近年注目されているろ紙血を用いることとし、各種分析条件の最適化や、生体試料への適用性を評価した。まずSFEによりどのような代謝物が抽出されるのか、抽出物をLC/MSすることにより調べた。SFEに用いる超臨界流体二酸化炭素は極性が低いとされるため、対象代謝物は脂溶性代謝物に限定されることが予想されたが、少量のメタノールを加えて抽出を行うことで、アミノ酸やベタイン、核酸関連代謝物などの水溶性代謝物に関しても抽出が行えることを明らかとした。次に、モディファイヤー、温度、圧力、ならびに、抽出時間などのSFEによる代謝物の抽出条件を最適化した。最後にヒトろ紙血清への適用性を検討し、SFEにより脂溶性、水溶性代謝物合わせて200種以上が抽出され、そのうち160種類以上の代謝物が安定に分析できることを示した。以上によりオンラインSFE-SFC/MS/MSによる全自動高精度メタボローム解析システム構築の礎となるデータを蓄積できた。今後、本システムの発展により従来の代謝物情報とともに易分解代謝物、重要脂溶性代謝物などの情報を獲得し、治療効果予測や予後判定を含む新たながん早期診断法の開発へ向けた研究を行われることが期待される。26年度が最終年度であるため、記入しない。超臨界流体メタボロミクス26年度が最終年度であるため、記入しない。これまでメタボロミクスの解析対象とならなかった脂質、酸化脂質、および、胆汁酸などの重要な脂溶性代謝物をターゲットとした代謝物解析技術を構築し、世界初の脂溶性代謝物臨床メタボローム解析システム確立の礎となるデータを蓄積することができた。引き続き、脂溶性代謝物の分析系を構築し、質量電荷比と保持時間に関するデータベースを構築する。また血清や組織など生体試料への適用性も評価する。しかし、脂質の中には抽出・精製段階で容易に酸化され安定に測定することが困難な代謝物が存在することが予想される。そのような代謝物に対しては、オンライン超臨界流体抽出(SFE)システムの適用を検討する。

オンラインSFEシステムでは、抽出/分離/分析を一工程で行うことが可能であり、抽出物が酸素や光に触れることがないため、不安定な代謝物の分析に有用である。次に早期大腸がん患者と進行大腸がん患者、ならびに、健常人から血清を提供していただき、SFC/MSに供し、得られた測定データを用いて多変量解析のひとつである主成分分析により統計処理を行うことで、早期大腸がん患者、進行大腸がん患者、健常人の血清の脂溶性代謝物の存在パターンがそれぞれ異なるのか否かを統計学的に明らかにする。さらに、実際に変動している脂溶性代謝物を、構築したデータベースを用いることで同定し、大腸がん患者と健常人との間で変動するものや、早期大腸がんと進行大腸がんとの間で変動するもの、さらには、手術前後で変動する脂溶性代謝物などを明らかにしていき、早期診断や治療効果予測に採用できるバイオマーカー候補を決定する。これらの研究成果をまとめることで、SFCを用いた超早期診断法の開発への足がかりとする。さらに、これまでGC/MSを用いて得られた代謝物データと統合し、精度の高いがん診断システムを開発する。
In vivo RNA干渉の効率的誘導に基づく新規癌治療法の開発

癌細胞の転移を促進する可能性のある遺伝子として、低酸素応答性転写因子hypoxia-inducible factor-1(HIF-1)に着目した検討を行った。その結果、マウス門脈内にマウス結腸癌細胞を注入することで作製したマウス肝転移モデルにおいてHIF-1のサブユニットの一つであるHIF-1αの発現が、肝臓構成細胞において上昇していることを見出した。そこで、HIF-1αに対するshort hairpin RNA発現plasmid DNA(pshRNA;pshHIF-1α)を構築し、大容量の核酸水溶液を尾静脈内に急速に投与するハイドロダイナミクス法を用いてマウスに投与した。このとき、癌細胞移植前にpshHIF-1αを投与することにより肝臓構成細胞中のHIF-1αを抑制したところ癌細胞の増殖は有意に抑制された。また、肝転移成立後に肝臓構成細胞および癌細胞におけるHIF-1αの発現を抑制することで、より強力な増殖抑制効果が得られた。以上の結果からHIF-1αを標的としたin vivo RNA干渉が、肝転移抑制に有効であることが示された。一方、前年度の検討において、RNA干渉による遺伝子発現抑制効果の定量的評価を目的としてモーメント解析を用いた評価法を開発し、siRNAによる濃度依存的な効果の定量的評価に適用可能であることを明らかとした。そこで、本解析法をpshRNAによる遺伝子発現抑制効果の評価に用いた。その結果、本解析法はpshRNAによる遺伝子発現抑制効果についてもモデルの構築を必要とすることなく定量的評価が可能であることを明らかとした。本解析法は、siRNAとpshRNAとの比較に際しても有用であり、1分子のpshRNAにより100分子のsiRNAと同等以上の遺伝子発現抑制効果が得られることを明らかとした。癌細胞の肝転移過程において、肝臓構成細胞での遺伝子発現変動が癌細胞増殖に及ぼす影響について検討した。標的遺伝子としてmatrix metalloproteinase-9(MMP-9)を選択し、これに対するshort hairpin RNA発現plasmid DNA(pshMMP-9)を構築した。マウスへの投与には、大容量の水溶液を尾静脈より急速に静脈内投与するハイドロダイナミクス法を用いた。pshMMP-9を予め投与したマウス門脈内にマウス結腸癌細胞を注入したところ、癌細胞の肝転移により亢進する肝臓中MMP-9活性が抑制された。また、癌細胞増殖も対照群と比較して有意に抑制可能であった。一般に癌細胞においては遺伝子の変異が生じやすいため、遺伝子の変異による耐性の獲得がしばしばがん治療における大きな問題の一つとなっている。一方、正常細胞は癌細胞と比較して遺伝子の変異を生じにくい。本研究の成果により、正常細胞を標的としてMMP-9発現を抑制することで耐性の生じにくい新規癌分子標的治療が可能になるものと考えられる。MMP-9の発現は種々の因子により制御されていることが知られているが、本研究においては転写因子hypoxia-inducible factor-1(HIF-1)に着目した。HIF-1は恒常的に発現しているHIF-1bと低酸素状態において発現が上昇するHIF-1aの2つのサブユニットからなる転写因子である。癌転移過程におけるHIF-1aの発現変動を調べることを目的として肝転移モデルマウスの肝臓を採取し、HIF-1aの免疫染色を行なったところ、肝臓構成細胞におけるHIF-1aの発現上昇が観察された。
スイッチを含むシステムの解析と設計に関する研究

・リファレンスガバナとレギュレータ理論を用いたサーボ系のオンライン参照入力整形サーボ系においてリファレンスガバナを用いてリファレンス信号の大きさをオンラインで調節する方法があるが、過渡特性の改善がそれほど顕著に効果を発揮できない場合がしばしばあった。本研究では、サーボ系の外側にレギュレータのフィードバックループを設けることにより、過渡特性を大幅に改善する方法を考案し提案した。・リファレスンスガバナを用いる際の処理の高速化リファレンスガバナを用いてリファレンス信号の大きさを調節するためには、現時点での状態ベクトルと各大きさのリファレンス信号に対する不変集合との位置関係を判断する必要がある。本研究では計算幾何学的方法を用いることによりこの操作高速化を実現する方法を提案した。・非線形連続時間システムに対する最大許容集合の計算法連続時間システムに対する最大許容集合の計算法は、不確かさを持たない線形システムに対する結果しかなかったが、本研究ではこれを不確かさを含む非線形連続時間システムに対するものに拡張した。・非線形ディジタルサーボ系の設計非線形ディジタルサーボ系の設計に当たっては、設計に用いるための制御対象の正確な離散時間モデルを得ることが困難であるため、連続時間システムとして制御器を設計し、それをディジタル制御器で実現する方法がよく用いられる。本研究では、この際に問題になるサンプリング時間の定め方の具体的な計算法を提案した。また、保守性を軽減するために、設計において凸多面体リヤプノブ関数を用いることと、凸多面体リヤプノブ関数の候補の更新に区分的線形リヤプノブ関数の構成法を応用する方法を提案した。・スライディングモード制御系に対するオンライン参照入力整形オンライン参照入力整形の手法をスライディングモード制御系に応用し、制約のあるシステムに対するライディングモード制御手法を提案した。・モデル予測型制御の提案モデル予測制御は通常有限時間の最適化を繰り返して制御する方法であるが、各ステップで有限時間の問題を解くために局所最適な制御を行うことになる。最大許容集合の考え方と動的計画法を応用することにより、大域的に最適な制御を行う方法を提案した。主な成果は以下のようにまとめられる.・リファレンスガバナとレギュレータ理論を用いたサーボ系のオンライン参照入力整形サーボ系においてリファレンス入力を整形することによって過渡特性を大幅に改善できることが知られているが、これは対象システムに不確かさがなく、初期値が既知である場合に最適問題を解いてリファレンス入力を決定する方法であるが、初期値を観測してから制御をかけ始めるまでの時間が短い場合には適用できない。一方、リファレンスガバナを用いてリファレンス信号の大きさをオンラインで調節する方法があるが、これは過渡特性の改善がそれほど顕著に効果を発揮できない場合があった。本研究では、サーボ系の外側にレギュレータのフィードバックループを設けることにより、過渡特性を大幅に改善する方法を考案し、提案した。

・非線形ディジタルサーボ系の設計非線形ディジタルサーボ系の設計に当たっては、設計に用いるための制御対象の正確な離散時間モデルを得ることが困難であるため、連続時間システムとして制御器を設計し、それをディジタル制御器で実現する方法がよく用いられる。この際に問題になるのがサンプリング時間の選択である。本研究ではこのサンプリング時間の定め方の具体的な計算法を提案した。また、保守性を軽減するために、設計において凸多面体リヤプノフ関数を用いることと、凸多面体リヤプノフ関数の候補の更新に区分的線形リヤプノフ関数の構成法を応用する方法を提案した。・リファレンスガバナとレギュレータ理論を用いたサーボ系のオンライン参照入力整形サーボ系においてリファレンスガバナを用いてリファレンス信号の大きさをオンラインで調節する方法があるが、過渡特性の改善がそれほど顕著に効果を発揮できない場合がしばしばあった。本研究では、サーボ系の外側にレギュレータのフィードバックループを設けることにより、過渡特性を大幅に改善する方法を考案し提案した。・リファレスンスガバナを用いる際の処理の高速化リファレンスガバナを用いてリファレンス信号の大きさを調節するためには、現時点での状態ベクトルと各大きさのリファレンス信号に対する不変集合との位置関係を判断する必要がある。本研究では計算幾何学的方法を用いることによりこの操作高速化を実現する方法を提案した。・非線形連続時間システムに対する最大許容集合の計算法連続時間システムに対する最大許容集合の計算法は、不確かさを持たない線形システムに対する結果しかなかったが、本研究ではこれを不確かさを含む非線形連続時間システムに対するものに拡張した。・スライディングモード制御系に対するオンライン参照入力整形オンライン参照入力整形の手法をスライディングモード制御系に応用し、制約のあるシステムに対するライディングモード制御手法を提案した。・モデル予測型制御の提案モデル予測制御は通常有限時間の最適化を繰り返して制御する方法であるが、各ステップで有限時間の問題を解くために局所最適な制御を行うことになる。最大許容集合の考え方を動的計画法をおようすることにより、大域的に最適な制御を行う方法を提案した。
インドネシア硝子絵の研究(ヨーロッパ絵画技法のアジアへの伝播の過程として)

昭和58年村第一次調査によるジャワ,スマトラ各地の,61年度第二次調査によるスラヴェシ,モルッカ,セーラム,NTB(バリ,ロンボック)各地の硝子絵分布状況を概観し夫々の地方的性格を持つ各地の様式と呼べるものを記録,後の資料整理により相当の精度で分類し得た.19世紀に始まり現在も民衆の中に生続けるインドネシア硝子絵を近世以降の全アジア的視野に位置付ける為,技法・素材(マテリアル)の地域特性・時代差等を考察する観点と描かれた内容・主題(コンセプト)を焦点に比較検討するという二方向からの接近方法による次の知見を得た.そのコンセプト面ではー1.主題の大半はコーランの章句等を装飾アラビア文字で示すカリグラフィー等イスラム的主題とワヤン代表とするヒンドゥー的主題に二分される.2.前者は人像・生物等の具象表現を許されない回教文化圏硝子絵の基本的性格を示し,後者は主にジャワ民衆の現在に至るヒンドゥー的規範の様相を伝え,画像のイコン的性格も看取され背後に絵画の言語化あるいは記号化というジャワ文化に通底する重要な要因を含むと見られジャワ絵画史の精査等の作業を継状中である.3.全般的主題分布は歴史状況そのものにヒンドゥー,イスラム両文化の影響下にある作例と中国硝子絵等の混在と見るべきであるが,ジャワ,NTB内の大半の地域では明確な分布特性せ示し同時に様式的特徴も識別される.又,現時点でのヨーロッパ,中国硝子絵よりの様式上の影響は曖昧であり精査を要す.4.数量分布ではジャワが他を圧しており殊にNTBけ除く第二次調査対象地域は稀薄といえ近年ジャワ渡りの作状が散見される事などからインドネシア硝子絵がジャワ中心の文化として成立したことが窺える.5.バリ,ロンボック中・西部では中国系硝子絵が多く残り両島間の歴史的縁戚関係を垣間見せるが同地域の他とは異なる中国文化の位置付けは中国硝子絵技法伝播に重要な示唆を与える比較資料といえ同地域内に於ける技法変遷と歴史的背景を追跡中である.又,マテリアル面ではー1.地域差はあるものの全般的には1930年代を境としてインドネシア硝子絵溶媒の大転換期を迎える.旧技法では水溶性溶媒が主体である新技法とは油性溶媒への転向であった.その初期には所謂油彩技法も存在したと見られるが大半は廉価な油性ペイント類(ペンキ)の使用を意味していた.この急激な変化は以後の硝子絵表現と表現効果に決定的な方向性を与え,現在の合成樹脂塗料の強烈ではあるが直截で卑俗な表現選択への潜在性(経済的要因と内在する色彩願望)を示し同時にその歴史の初期の極僅かな期間を除きインドネシア硝子絵が民衆芸術の領域に属していた事を示唆している.又,1930年代の板ガラスの急激な価格低下による大衆化も上記を裏付けジャワ硝子絵の盛期を迎えた証査である.2.旧技法溶媒として当初この国の各地に見られる柑橘類jeruk bali(ジュルックバリ)のガムが想定されたが復元試作の結果複雑な彩色技法に不適,これに対し昨年度の調査成果である魚膠技法が基本的に肯首され得るとの判断に至った.注目すべきはこの技法が本来ワヤン彩色技法である在来伝統丞法起源の浮上であるが,この考察は1930年代を中心にしておりそれ以前の技法伝播を否定するものではない.又,ガム技法の局地的存在についても同様である.3.伝統中国技法ー水性・油性絵具併用技法はバリに於て最終的に水性絵具のみというジャワ硝子絵と同一の技法へ変貌し技法伝播過程に於けるインドネシア化を示す例として2.に深く関ると共に異文化間の文化伝播に於けるコンセプトとマテリアルの断面を覗かせている.4.顔料分析結果よりインドネシア硝子絵に使用された顔料の技法的正当性を見出すことは他の技法と異なり困難であり混乱が見られるのみである.顕著な例として白色の数量的多用が掲げられ一作例に4種の白が発見され無差別な顔料選択・30年代以降の既製塗法の混用に端を発する姿が想像される.又,有機染料・白色の多用等,分析上準知不能な点も多く全容解明の方法を再検討中である.上記のようにインドネシア硝子絵のコンセプトが基本的に西アジア型である事が確認された.又,裁法的には,東アジア型である事自体比較文化的性格付けとなり得るが,技法起源・伝播については修正点が明確化されつつあり,その詳細は本年8月発行予定の多摩美術大学紀要4号に発表される.昭和58年村第一次調査によるジャワ,スマトラ各地の,61年度第二次調査によるスラヴェシ,モルッカ,セーラム,NTB(バリ,ロンボック)各地の硝子絵分布状況を概観し夫々の地方的性格を持つ各地の様式と呼べるものを記録,後の資料整理により相当の精度で分類し得た.19世紀に始まり現在も民衆の中に生続けるインドネシア硝子絵を近世以降の全アジア的視野に位置付ける為,技法・素材(マテリアル)の地域特性・時代差等を考察する観点と描かれた内容・主題(コンセプト)を焦点に比較検討するという二方向からの接近方法による次の知見を得た.そのコンセプト面ではー1.主題の大半はコーランの章句等を装飾アラビア文字で示すカリグラフィー等

イスラム的主題とワヤン代表とするヒンドゥー的主題に二分される.2.前者は人像・生物等の具象表現を許されない回教文化圏硝子絵の基本的性格を示し,後者は主にジャワ民衆の現在に至るヒンドゥー的規範の様相を伝え,画像のイコン的性格も看取され背後に絵画の言語化あるいは記号化というジャワ文化に通底する重要な要因を含むと見られジャワ絵画史の精査等の作業を継状中である.3.全般的主題分布は歴史状況そのものにヒンドゥー,イスラム両文化の影響下にある作例と中国硝子絵等の混在と見るべきであるが,ジャワ,NTB内の大半の地域では明確な分布特性せ示し同時に様式的特徴も識別される.又,現時点でのヨーロッパ,中国硝子絵よりの様式上の影響は曖昧であり精査を要す.4.数量分布ではジャワが他を圧しており殊にNTBけ除く第二次調査対象地域は稀薄といえ近年ジャワ渡りの作状が散見される事などからインドネシア硝子絵がジャワ中心の文化として成立したことが窺える.5.バリ,ロンボック中・西部では中国系硝子絵が多く残り両島間の歴史的縁戚関係を垣間見せるが同地域の他とは異なる中国文化の位置付けは中国硝子絵技法伝播に重要な示唆を与える比較資料といえ同地域内に於ける技法変遷と歴史的背景を追跡中である.又,マテリアル面ではー1.地域差はあるものの全般的には1930年代を境としてインドネシア硝子絵溶媒の大転換期を迎える.旧技法では水溶性溶媒が主体である新技法とは油性溶媒への転向であった.その初期には所謂油彩技法も存在したと見られるが大半は廉価な油性ペイント類(ペンキ)の使用を意味していた.この急激な変化は以後の硝子絵表現と表現効果に決定的な方向性を与え,現在の合成樹脂塗料の強烈ではあるが直截で卑俗な表現選択への潜在性(経済的要因と内在する色彩願望)を示し同時にその歴史の初期の極僅かな期間を除きインドネシア硝子絵が民衆芸術の領域に属していた事を示唆している.又,1930年代の板ガラスの急激な価格低下による大衆化も上記を裏付けジャワ硝子絵の盛期を迎えた証査である.2.旧技法溶媒として当初この国の各地に見られる柑橘類jeruk bali(ジュルックバリ)のガムが想定されたが復元試作の結果複雑な彩色技法に不適,これに対し昨年度の調査成果である魚膠技法が基本的に肯首され得るとの判断に至った.注目すべきはこの技法が本来ワヤン彩色技法である在来伝統丞法起源の浮上であるが,この考察は1930年代を中心にしておりそれ以前の技法伝播を否定するものではない.又,ガム技法の局地的存在についても同様である.3.伝統中国技法ー水性・油性絵具併用技法はバリに於て最終的に水性絵具のみというジャワ硝子絵と同一の技法へ変貌し技法伝播過程に於けるインドネシア化を示す例として2.に深く関ると共に異文化間の文化伝播に於けるコンセプトとマテリアルの断面を覗かせている.4.顔料分析結果よりインドネシア硝子絵に使用された顔料の技法的正当性を見出すことは他の技法と異なり困難であり混乱が見られるのみである.顕著な例として白色の数量的多用が掲げられ一作例に4種の白が発見され無差別な顔料選択・30年代以降の既製塗法の混用に端を発する姿が想像される.又,有機染料・白色の多用等,分析上準知不能な点も多く全容解明の方法を再検討中である.上記のようにインドネシア硝子絵のコンセプトが基本的に西アジア型である事が確認された.又,裁法的には,東アジア型である事自体比較文化的性格付けとなり得るが,技法起源・伝播については修正点が明確化されつつあり,その詳細は本年8月発行予定の多摩美術大学紀要4号に発表される.
受精・胚発生過程で卵膜の制御にあずかるプロテアーゼ

1.アフリカツメガエル初期胚の外胚葉と中胚葉の組み合わせ、あるいは外胚葉のみからなる外植体を利用し、孵化腺細胞の分化機構の解析を行った。対照胚が孵化期に達するまで外植体を培養し、抗UVS.2抗体で抗体染色を施し、孵化腺細胞が分化したか否かを確認した。種々の組み合わせ実験から以下の結論を得た。(1)ツメガエルの孵化腺細胞は、中胚葉からの誘導により予定頭部外胚葉から分化する。(2)陥入する中胚葉の先端部付近の細胞群が誘導能をもっている。(3)少なくとも後期嚢胚期まで誘導能を持ち続けている。(4)中期嚢胚期では、将来の頭部よりも背側後方に位置する外胚葉が自律分化能を持つが、何らかの抑制または、他の細胞への再分化が起き、正常発生ではこの領域から孵化腺細胞は分化しない。(5)後期嚢胚期では、予定頭部外胚葉の細胞が孵化腺細胞への自律分化能を持つ。2.輸卵管直部由来のプロテアーゼについては、ヒキガエルを材料に用い、オビダクチン蛋白質のN末端アミノ酸配列と、セリンプロテアーゼに特徴的なアミノ酸配列でデジェネレートプライマーを設定した。輸卵管直部のRNAをテンプレートとしてRT-PCR法により、両者に挟まれる領域を増幅し、クローニングした。得られたcDNA断片は、570塩基対の長さで、そこから予想されるアミノ酸配列は、アフリカツメガエル・オビダクチン蛋白質の一部分として登録されているアミノ酸配列と高い相同性を持つ(57%)ことが明らかになった。残念ながら現段階では、ヒキガエルオビダクチンの全長cDNAを得るには至らず、輸卵管直部のcDNAライブラリーを作製するにとどまっている。しかしcDNAの断片を得たことにより、全長のクローニングに見通しがついた。さらに、in vitroでホルモン刺激により、オビダクチン遺伝子の転写を誘導できることが明らかになった。卵膜を基質として機能するプロテアーゼのうち、孵化酵素に関しては、エゾアカガエルを材料に用い、酵素学的性質の解明に関してめざましい進展があった。本種はアフリカツメガエルに比べ、多量の酵素を集めることが可能であるため、酵素学的解析に適している。尾芽胚の飼育液中に分泌された孵化酵素(孵化液)を回収して、ゲル濾過、陰イオン交換カラムを利用して高度に精製した。その結果、エゾアカガエル孵化酵素は、55.7kDaのタンパクとして分泌される金属プロテアーゼで、トリプシンタイプのセリンプロテアーゼとしての特徴を兼ね備えていることが明らかになった。また、活性型の酵素は、合成後に糖鎖修飾されている。さらに尾芽胚頭部には、孵化液中に存在する酵素よりも分子量が大きく(63kDa)、孵化酵素特異的な抗体に反応性をもつタンパクが存在していることから、孵化酵素はプレタンパクとして合成された後、部分的な分解を受けて活性型の酵素となることが示唆された。上記の結果は、以前我々が明らかにした、アフリカツメガエル孵化酵素の一次構造から推測される性質と非常によく合致しており、両生類の孵化酵素に共通の性質であると考える。なおエゾアカガエル孵化酵素の酵素学的研究については、現在論文を投稿中である。一方、輸卵管直部由来のプロテアーゼについては、ヒキガエルを材料に用いて、タンパクの精製を行い、N末端から12個のアミノ酸配列を決定した。その結果、既に部分的なアミノ酸配列としてアメリカのグループから報告されている、アフリカツメガエルoviductinと非常に高い相同性を示した。

残念ながら我々が明らかにしたアミノ酸配列は、ヒキガエルoviductin cDNA単離のためのプローブを合成するには適さず、輸卵管直部のcDNAライブラリーを作製するにとどまり、一次構造決定には至らなかった。1.孵化酵素に関しては、アフリカツメガエル初期胚の外植体を作製し、孵化腺細胞の分化機構に関する解析を行った。嚢胚期のアフリカツメガエル胚から、外胚葉および中胚葉を実体顕微鏡下で切り出し、外胚葉を単独、あるいは外胚葉と中胚葉を組み合わせた。手術を施さなかった対照胚が、孵化期に達するまで培養した外植体は、固定した後孵化酵素を特異的に認識する抗体を用いて染色し、孵化腺細胞の有無を調べた。2.輸卵管直部由来のプロテアーゼについては、ヒキガエルを材料に用いて、N末端のアミノ酸配列と、セリンプロテアーゼに特徴的なアミノ酸配列からデジェネレートプライマーを作製した。輸卵管直部から抽出したRNAを鋳型にRT-PCRを行い、プライマーに挟まれた領域をクローニングした。得られた570塩基対から予想されるアミノ酸配列は、アフリカツメガエルのオビダクチンとして報告されている配列と相同性が高かった。しかし、オビダクチンの全アミノ酸配列はいかなる種においても依然明らかにされていない。そこでこのcDNAをプローブとして、ヒキガエル・オビダクチンの全長cDNAを釣り上げることを試みている。現在までにクローンを得るは至っていない。その原因として、ライブラリーに利用したRNA中に含まれる、オビダクチンのメッセンジャー量が非常に少なかったことが予想されるた。この点を改善するため、才ビダクチン・メッセンジャーの相対量を増やすことを試みた。その結果、生体より切り出した輸卵管直部を生殖腺刺激ホルモンで処理すると短時間の内にオビダクチン転写量に著しい増加が見られることが判明した。現在、上述の方法でオビダクチンmRNAを多量に含むcDNAライブラリーを作り直し、全長cDNAの単離を再度試みている。