hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
へき地診療所における看護実践のための看護技術の構築

目的は、へき地診療所で働く看護者の看護実践の指針となる看護技術の構築を図ることで、へき地診療所の看護者を対象に、聞き取り調査とアンケート調査を行った。結果、へき地診療所の看護技術は、地域生活者の健康回復、看取りへの支援を基盤に、緊急時に生命を守り、困りごとへの支えとなり、限られた資源を工夫活用し生活を整えること。また、診察や多様な診断治療への効果的な補助、地域や関連職種と持てる力を相互発揮し、状況を判断し創意工夫による看護実践への看護技術が必要であることが示された。地域における生活者にとって、受ける医療・看護の差を少しでも是正し、よりより健康生活への支援となるように、へき地の診療所における看護技術の構築を図ることを目的に、本年度はA県におけるへき地診療所で働く看護者を対象に、診療所においてどのような看護技術が実践されているか、その実態を把握するために聴き取り調査を実施した。聴き取りの内容は、へき地の診療所において実践されている看護技術であり、聴き取り調査の結果看護技術としては7つのカテゴリーが抽出された。その7つの看護技術の内容は「身の回りの世話に関する看護技術」「指導・相談への看護技術」「診療の補助に関する看護技術」「往診・訪問時の看護技術」「終末期看取りの看護技術」「多職種連携の看護技術」「緊急対応の看護技術」であった。その中でも、緊急対応の看護技術は、医師不在時に看護者のみで看護実践が必要なこともあることから重要となる。そこで、その緊急対応の看護技術をまとめてみると、6つのカテゴリーが抽出された。その6つの看護技術の内容は「急激に生じた健康状態の変化を把握する看護技術」「緊急搬送への見極める看護技術」「健康状態悪化への緊急処置技術」「遠隔地の医師との連携技術」「緊急時周りの力を得る技術」「緊急受け入れに向けた調整技術」であった。次年度は、聴き取り調査で得られて看護技術の内容を基に、全国のへき地の診療所で働く看護者へと対象範囲を広めアンケート調査を実施し、へき地の診療所で必要な看護技術としてまとめる予定である。本研究は、へき地診療所で働く看護者へのよりよい看護実践のための指針となる看護技術の構築を行うことを目的としており、昨年は、診療所で実践している看護技術の聞き取り調査を行った。そして、看護技術の特徴から身の回りの世話に関する技術、診療の補助に関する技術、往診・訪問に関する技術、緊急対応の技術など、7つの看護技術のカテゴリを見出し、それをもとにアンケート用紙を作成した。本年度は、そのアンケート用紙を、全国のへき地診療所の看護者を対象に、診療所で必要な看護技術の実施頻度や重要度、学習上の課題などの調査を行い、配布数710部に対し回収数222部を得た。調査結果は、看護技術の実施頻度として、無床診療所・有床診療所の形態に関わらず、診療の補助に関する技術の割合が多くみられた。この看護技術は、周囲に医療機関がない診療所が、地域の人々の健康回復に向けた診断・治療の場であることから、その補助を行う上で多く用いられていると考える。また、看護技術の重要度では、緊急対応の技術であり、これは、実施頻度は多くはないが、医師不在時等に人々の生命を守る上で、不可欠となる重要な看護技術である。看護実践上の課題では、取り巻く環境や看護技術への戸惑いがみられ、これはへき地診療所における支援が得られにくいことや、限られた技術を反映した状況である。本研究から看護の概要をまとめると、へき地診療所で働く看護者にとっての看護技術は、地域の生活者の健康の維持・回復、看取りへの支援を目標として、緊急時に生命を守り、人間関係をもとに困りごとへの支えとなる共通な看護技術を基盤とし、限られた資源を工夫・活用し日常生活を整える技術、診察や多様な診断・治療への効果的な補助を、地域や関連職種と相互に持てる力を活用しながら、状況を見極め、創意工夫による実践をする能力が必要となり、これらを指針として提示することができる。
異種心臓移植における超急性期アポトーシスの免疫学的解明と生着期間延長の試み

【目的】異種心臓移植(ハムスターからラット)における拒絶反応の病理学的所見、浸潤細胞の同定、およびアポトーシス関連蛋白の経時的発現を明らかにする。また、アポトーシスと拒絶反応の関係を明らかにすることにより生着期間延長の方法を検討する。【方法】Golden Syrian Hamsterをドナー、Lewis Ratをレシピエントとし異所性異種心移植モデルを作成した。移植後0、4、8、24、48時間に移植心を摘出し、HE染色、TUNEL染色、抗Fas抗原抗体による免疫染色を行った。【結果】1)Hematoxylin-Eosin染色においては、48時間後の標本に大きな形態的変化は認めなかった。24時間後より血管周囲に多核球様の炎症性細胞の浸潤を認めはじめ、48時間後には特に心外膜下及び心内膜下の心筋に巣状に浸潤していた。リンパ球の浸潤は全経過を通してわずかに認めたのみだった。48時間後には心筋細胞の壊死像を多数認めた。448時間までの標本に血栓を伴った血管炎は認めなかった。2)TUNEL染色においては、移植後4時間から48時間まで心内膜、血管内皮細胞核が陽性であった。3)Fasに関しては、移植後4時間から8時間まで心内膜、血管内皮細胞核がFas陽性で移植後8時間以降は免疫反応は減少した。【結論】concordant異種移植では、血管炎を主体とし血栓形成を伴わない心筋壊死が拒絶反応の主体であった。これは、浸潤細胞が多核球主体である点で、同種移植と大きく異なっていた。また、移植後数時間の超急性期の血栓形成による心筋壊死が主体となるdiscordant異種移植の病理像とも大きく異なる。concordant異種心移植における拒絶反応では血管炎などの形態的変化が認められる以前にFas抗原によるアポトーシスが心内膜、血管内皮で進行しており、急性期アポトーシス抑制により拒絶反応抑制効果が得られる可能性が示唆された。平成12年度は異種心臓移植(ハムスターからラット)における拒絶反応の病理学的所見、浸潤細胞の同定、およびアポトーシス関連蛋白の経時的発現を明らかにし、アポトーシスと拒絶反応の関係を検討することを目的とした。そのために、Golden Syrian Hamsterをドナー、Lewis Ratをレシピエントとし異所性異種心移植モデルを作成した。Hematoxylin-Eosin染色においては、48時間後の標本に大きな形態的変化は認めなかった。HE染色では移植後24時間まで心筋障害は軽度であった。移植後24時間より血管周囲に炎症性細胞侵潤を認め、移植後48時間では心外膜下及心内膜下の心筋に強く侵潤していた。リンパ球の侵潤は全経過を通じてわずかであった。TUNEL染色においては、移植後4時間から48時間まで心内膜、血管内皮細胞核が陽性であった。

Fasに関しては、移植後4時間から8時間まで心内膜、血管内皮細胞核がFas陽性で移植後8時間以降は免疫反応は減少した。以上より、concordant異種移植では、浸潤細胞が多核球主体である点で、同種移植と大きく異なっていた。異種心移植における拒絶反応では形態的変化が認められる以前にFas抗原によるアポトーシスが心内膜、血管内皮で進行していると考えられ、アポトーシス抑制により拒絶反応が抑制される可能性が示唆された。【目的】異種心臓移植(ハムスターからラット)における拒絶反応の病理学的所見、浸潤細胞の同定、およびアポトーシス関連蛋白の経時的発現を明らかにする。また、アポトーシスと拒絶反応の関係を明らかにすることにより生着期間延長の方法を検討する。【方法】Golden Syrian Hamsterをドナー、Lewis Ratをレシピエントとし異所性異種心移植モデルを作成した。移植後0、4、8、24、48時間に移植心を摘出し、HE染色、TUNEL染色、抗Fas抗原抗体による免疫染色を行った。【結果】1)Hematoxylin-Eosin染色においては、48時間後の標本に大きな形態的変化は認めなかった。24時間後より血管周囲に多核球様の炎症性細胞の浸潤を認めはじめ、48時間後には特に心外膜下及び心内膜下の心筋に巣状に浸潤していた。リンパ球の浸潤は全経過を通してわずかに認めたのみだった。48時間後には心筋細胞の壊死像を多数認めた。448時間までの標本に血栓を伴った血管炎は認めなかった。2)TUNEL染色においては、移植後4時間から48時間まで心内膜、血管内皮細胞核が陽性であった。3)Fasに関しては、移植後4時間から8時間まで心内膜、血管内皮細胞核がFas陽性で移植後8時間以降は免疫反応は減少した。【結論】concordant異種移植では、血管炎を主体とし血栓形成を伴わない心筋壊死が拒絶反応の主体であった。これは、浸潤細胞が多核球主体である点で、同種移植と大きく異なっていた。また、移植後数時間の超急性期の血栓形成による心筋壊死が主体となるdiscordant異種移植の病理像とも大きく異なる。concordant異種心移植における拒絶反応では血管炎などの形態的変化が認められる以前にFas抗原によるアポトーシスが心内膜、血管内皮で進行しており、急性期アポトーシス抑制により拒絶反応抑制効果が得られる可能性が示唆された。
選択的小胞体分解（ERファジー）に着目した心不全における細胞内品質管理の意義

心不全におけるERファジーの病態意義について解明することを目的とする。分子生物学的および顕微鏡的アプローチによりERファジーを視覚化して解析する。ERファジー不全における不良タンパク質の特徴を同定し、不良タンパク質の蓄積が心筋障害から心不全の病態へと関与するのかを明らかにする。
外来生物除去後に目指すべき群集の推定方法－小笠原の外来植物の例－

侵略的外来生物の防除事業が行われ,在来種が回復するケースもでてきた.この研究では外来種除去後の群集における種の優占度をアセンブリールール(生物相の種特性から群集を予測する統計・機械学習モデル)で予測する.これにより,さまざまな管理シナリオ(任意の外来種の除去,任意の在来種の追加)において成立する群集の予測地図を求めることができる.研究の流れでは(a)種プールの変化研究,(b)アセンブリールール解析,(c)生態特性データベース構築,(d)生態特性と環境解析,(e)生態特性地図作成,(f)地点での多種の生態特性取得,(g)地点の群集予測と群集地図作成を行う.特に小笠原諸島母島で野外調査を行った.小笠原諸島母島において外来植物アカギ除去後の回復目標とすべき生態系の推定をめざして,初年度は多様な群集での植生調査と,多種の種特性調査を開始した.(1)群集の植生調査:最も高度の高い乳房山地域において,湿性低木林とモクタチバナ亜高木林の植生調査を行った.モクタチバナ亜高木林はアカギの侵入が顕著であり純林は希少になってきているため緊急の調査が必用である.湿性高木林については桑の木山地域にて調査を行った.(2)種特性調査:島内の多くの種において促成する予定であるが,まず初めに,アカギの最大樹高について母島全域(乳房山山塊の海岸から山頂まで,南崎方面北方面まで)での分布を測定した.回帰モデルを利用した解析によると,アカギの最大高は山の中腹で最大となり,山頂や海岸,山塊から離れた半島では小さくなっていた.最も樹高が高いのは高度150m-200mにある谷間で樹高20mを超える高さとなる.海岸近くの尾根では樹高8m程度,山頂の尾根では樹高4m程度であった.観察結果として,はじめて訪れた1980年頃や集中的に調査を行っていた1990年代と比べて,登山道沿いではアカギの優占度が高まりうっそうとしてきている.当時林冠を形成していたムニンハツバキの同じ個体が,すでにアカギに覆われて枯死しかけていた.かつてはアカギの樹冠下にもモクタチバナの下層植生が存在したが,現在ではアカギが優占している地域では下層のモクタチバナも消滅しつつある.アカギの除去作業も進行中であるが,在来植生の優占種(亜高木層)であるモクタチバナが消滅する前にアカギを除去しなければ,もとの生態系の回復は困難に見える.小笠原で最も自然が豊かな母島では,同じ世界自然遺産の屋久島などと比較して研究が遅れているが,学生などが安価に長期滞在して研究できる宿泊施設があれば,研究レベルが飛躍的に向上する可能性がある.これまで母島中央部の乳房山周辺にて,垂直分布に注目した内陸高地における群集調査と種特性調査を行ってきたが,2014年度は乾燥した半島部と海岸を中心に調査した.南崎を中心として海岸や稜線の植生から内陸の植生まで6地点の群集調査を行い,この地域での出現種について50地点で最大樹高の測定を開始した(ムニンアオガンピ,アカテツ,アデク,ムニンイボタ,ウラジロエノキ,シマオオタニワタリ,オオトキワイヌビワ,オオバシマムラサキ,ガジュマル,ギョクシンカ,ギンネム,クサトベラ,コヤブニッケイ,シマギョクシンカ,シマグワ,シマザクラ,シマシャリンバイ,オオバシロテツ,ムニンナキリスゲ,ヤエヤマアオキ,タコノキ,タマシダ,テリハボク,トキワイヌビワ,ハハジマトベラ,ムニンネズミモチ,ハツバキ,テリハハマボウ,オガサワラビロウ,ムニンアオガンピ,モクタチバナ,モクマオ,トクサバモクマオウ,ムニンモチ,モモタマナ,ヤロード,コブガシ,ムニンイヌグス,ムニンシュスラン等).このデータを用いた予備的な予測モデルの解析では,海岸やその近くの稜線では在来種アカテツの樹高を外来種ギンネムが凌駕することが予測される結果となり,海岸の岩地では外来種が優占する状況が予想された.このような立地には希少種マルバシマザクラやカツオドリの繁殖地もあり,影響が危惧される.また全島的な状況を知るため,島内の歩道や車道沿いにおいて外来生物や在来希少種の広域な分布調査を開始した.また群集予測にて分布拡大中の種をとりあつかうための準備として,侵入状況(未侵入適地,広域には侵入済みだがローカルに分布拡大中,飽和した地域,などのinvasion status)の判定に関する解析方法を検討した(Thiri Aung & Koike. Journal of Arid Environments, in press).2015年度には種特性のひとつとして,主に小笠原諸島母島周辺において植物の耐陰性の測定を行った.この調査ではライン上の規則的な位置に地点を設定し,そこから最近接の個体を種ごとに測定することで,恣意的でないサンプリングを行った(Koike 2001).普通種では地点間隔を長くすることで広域からまばらなサンプリングを行うことができる.また植物が作り出す環境とさまざまな外来生物の分布の関係を知る目的でライントランセクトによる分布調査を行った.

野外調査では全天写真を撮影し,自作の自動読み取りソフト「空と森」を利用して相対光強度をもとめ,種ごとの耐陰性を求めた.対象種は外来種のギンネム,セイロンベンケイソウ,サンセベリア,アカギ,オオバナセンダングサ,キバンジロウ,シマグワ,テリハボクなどや,在来種のアカテツ,ヤンバルタマシダ,ムニンテイカカズラ,アデク,ムニンイボタ,オオバシマムラサキ,シマギョクシンカ,キンモウイノデ,オガサワラクチナシ,ムニンイヌグス,コヤブニッケイ,オガサワラシコウラン,シマオオタニワタリ,シマザクラ,シマホルトノキ,シマシャリンバイ,ムニンシュスラン,オオシラタマカズラ,オガサワラススキ,タコノキ,タマシダ,ツルダコ,テリハハマボウ,トキワイヌビワ,トキワシダ,ハハジマノボタン,ハチジョウシダ,ムニンハツバキ,ヒメツバキ,オガサワラビロウ,ヘゴ,シマゴショウ,ホシダ,マルハチ,ムニンアオガンピ,モクタチバナ,オガサワラモクマオ,ワダンノキ,ヤロードなどであった.地域に分布する生物の種特性から,その地域に成立する群集を個々の種の優占度のレベルまで予測する技術(Koike 2001)を利用して,新たな外来種の侵入や,根絶事業などによる人為的な除去後など,生物相のさまざまな変化の後での生物群集を予測することで,未来の望ましい自然を設計することをめざしている.調査地である小笠原諸島は海洋島であり,専門家アンケートによって最も外来生物対策が必用なハビタットと見なされている(小池ほか2015).これまでに,(1)ライントランセクトによる主な外来種と在来種の分布調査,(2)多様な立地の極相群集における種ごとの優占度調査,(3)極相群集において重要な種特性である最大高と耐陰性の測定,を行ってきた.最終年度はこれらの情報を利用して,さまざまな立地における種特性をもとにした群集予測(群集全体の高さや,種ごとの植物高,種ごとの優先度の予測)を行う統計モデルを作成する予定である.このように予定された調査は順調に進捗している.小池文人・小出可能・西田智子・川道美枝子.2015.専門家アンケートをもとにした一対比較による在来植物の脅威となる外来生物の重要度評価.保全生態学研究20 : 87-100.新たな外来種の侵入や,根絶事業などによる人為的な除去後など,生物相のさまざまな変化の後での生物群集を予測することで,未来の望ましい自然を設計することをめざしている.調査地である小笠原諸島は海洋島であり,専門家アンケートによって最も外来生物対策が必用なハビタットと見なされている(小池ほか2015,保全生態学研究20: 87-100).この研究では,立地環境の影響を受ける種特性値を環境の関数としてモデル化し,地域に分布する生物の種特性(環境の影響を受けている)から,地域に分布する生物の種特性をもとにその地域に成立する群集を個々の種の優占度のレベルまで予測する技術(Koike 2001, Journal of Vegetation Science 12: 327-336)を利用して,さまざまな環境における群集を予測する.この群集予測技術によって外来種の優占や開発の影響を受ける前の自然の群集を予測し,また特定の外来種を除去した後の群集予測や,特定の在来種を保全するための管理方法の策定などを行うことが可能となる.これまでに,(1)ライントランセクトによる主な外来種と在来種の分布調査,(2)多様な立地の極相群集における種ごとの優占度調査,(3)極相群集において重要な種特性である最大高と耐陰性の測定(約75種),を行ってきた.この結果を用いて環境が種特性に与える影響のモデル化を進めている.主要な群集と主要な種の調査が一通り終了し,一部の地域で環境から種特性値を予測するモデルを作成した.これをもとに予備的な群集予測を行い,結果を日本生態学会大会(東京)にて発表した(http://www.esj.ne.jp/meeting/abst/64/C01-02.html).
東洋における木の文化に関する研究―木彫像および遺跡出土木材の分析

わが国は森林植生が豊富で、古来より木造寺院が多数建造され、かつ多くの木彫像が保存されるなど木の文化が栄えてきた。わが国の木の文化を象徴する木彫像に関して、美術史分野で最近材料となる樹種の調査の必要性が高まってきている。申請者は文化庁、京都国立博物館内にある全国唯一の国宝修理所である美術院と共同して木彫像の樹種の調査を継続している。時代によって木彫像の用材が異なる傾向があるが、それはいかなる理由によるのかについては全く不明である。また、飛鳥時代の木彫像にのみクスノキが使用されている理由も不明である。一部の木彫像は隣の中国から持ち込まれたものもあり、これらの交流は樹種同定を行うことによって明らかになる場合もあり、用材から見た日中間の木彫像の比較により両国での木の文化の比較研究に貢献をすることが期待できる。このような理由により、木彫像の樹種同定をおこなった。楽浪文化財修理所(滋賀県)から依頼のあった仏像19体および財団法人美術院から依頼のあった仏像27体について樹種の同定をおこなった。また、平成15年12月17日から平成16年1月7日までヨーロッパに出張し、ブリュッセルのロイヤル美術館(ベルギー)とケルンの東洋美術館(ドイツ)を訪問し、中華人民共和国起源の木彫像15体から50サンプルの提供を受けた。さらに、ロンドンのビクトリア-アルベルト博物館と大英博物館を訪問し、中華人民共和国起源の木彫像の写真撮影をおこなった。伏見工業会の例会ならびに京都スタンフォードセンターで伝統木工芸の技法と樹種に関する講演をおこなった。木彫像に関する研究資料収集のため木彫像の最初の樹種同定をおこなった小原二郎氏および現在木彫像の樹種同定をおこなっている能城修一氏を訪問し、木彫像の用材観について討議した。
イヌ炎症性腸疾患の免疫学的アプローチによる病態解明と新規治療ターゲットの探索

イヌの炎症性腸疾患(IBD)の病態を解明する目的で,ヒトのIBDの病態に関与があり,治療への応用の報告のある因子のうち,特にtumor necrosis factor (TNF)-αに着目し,イヌの腸管組織における発現量,発現分布について検討をおこなった。イヌのIBDでは,健常なイヌとくらべ,TNF-αの発現量は低下していたが,TNF受容体(TNFR1)の発現は高値を示した。イヌの消化管免疫におけるTNF-αは,炎症を促進するよりも,炎症を制御する機構に重要な役割がある可能性が示唆され,ヒトとイヌとの免疫応答に違いがある可能性も示唆された。イヌの炎症性腸疾患(IBD)は,除外診断,病理組織学的検査,治療に対する反応性から総合的に診断される原因不明の慢性腸炎であり,治療に対するエビデンスも少ない。そこで,消化管免疫機構の観点から,イヌIBDの病態の解明,新規の治療ターゲット因子の探索,予後予測に有用な成果を得ることを目指し,本研究に着手した。平成24年度は,内視鏡または開腹術による切除生検で得られたイヌの小腸組織のパラフィン包埋切片を用いて,ヒトIBDで発現の増強が認められ,中和抗体を用いた治療効果も報告されている,腫瘍壊死因子(TNF)αの関与について解析を行った。健常群では粘膜筋板上部を主体に発現がみられ,IBD群では粘膜固有層にび慢性に発現が検出されたが,間質においてもび漫性に染まり,染色の特異性の評価が困難であった。そこで,TNFαmRNAのin situ hybridization解析を実施することとした。TNFαmRNAの発現は,健常群, IBD群,慢性(IBD以外の慢性腸炎)群のいずれにおいても,上皮細胞に認められ,IBD群では,他の2群と比べて発現量の減少が認められた。また,IBD群と慢性群との間に有意な差はみられなかった。次に,TNF受容体(R)1の発現を免疫組織化学染色法で解析した。TNF-R1の発現は,3群とも上皮細胞に認められ,IBD群では,慢性群および健常群に比べ,増加する傾向が見られたが有意な差は認められなかった。さらに,TNFαmRNAおよびTNF-R1の発現量と,臨床症状の重症度との関連を検討した。臨床症状の重症度とTNFαmRNA発現量との間に相関は見られなかったが,TNF-R1発現量との間には正の相関が認められた。TNFαmRNAとTNF-R1発現量の動態は,IBD群では他の2群と異なったため,他の腸炎との鑑別診断や治療への活用が期待されると考えられた。イヌの炎症性腸疾患(IBD)は,原因不明の慢性腸炎であり,治療に対するエビデンスも少ない。そこで,消化管免疫機構の観点から,病態の解明,新規の治療ターゲット因子の探索,予後予測に有用な成果を得ることを目指し,本研究に着手した。前年度は,イヌ小腸組織において,ヒトIBDで発現増強をみとめ,中和抗体を用いた治療効果も報告されている腫瘍壊死因子(TNF)αに着目し,in situ hybridization法によるTNFαmRNA発現を,健常群, IBD群で比較した。IBD群では健常群よりもTNFαmRNAの発現低下を観察したことから,イヌの小腸では炎症性サイトカインであるTNFαに炎症の保護作用を有する可能性が示唆された。そこで平成25年度は,健常な消化管組織におけるTNFαmRNAの発現を詳細に解析することで,イヌの腸管免疫機構の特徴を見いだすことを目的とした。健康なイヌの胃,十二指腸,空腸,回腸,結腸組織におけるTNFαmRNAの発現を市販の試薬キットを用いたin situ hybridization法で解析を進めていたが,検出されるシグナルが,推奨される陽性シグナルと比べて弱いことが判明した。既存の機器では十分な反応条件(温度と湿度)を得ることができないことがわかり,機器の新規導入の検討が望まれるという結論を得た。また,TNFαmRNAのリアルタイムPCR法による定量解析も開始し,消化管粘膜組織でのTNFαmRNA発現は,十二指腸で最も多く,次に空腸で多く認められ,回腸,結腸では発現量が少ないことがこれまでに観察され,イヌの消化管の部位でのTNFαmRNAの発現の違いは,イヌの消化管免疫機構の解明,またIBDの病態解明に通ずると期待される。

平成23年度は,内視鏡または開腹術による切除生検で得られたイヌの小腸組織のパラフィン包埋切片を用い,イヌIBDでみられる免疫反応について広く解析することを目的とし,ヒトIBDの病態への関与が示唆されている免疫因子であるHeme oxygenase (HO)-1,Toll様受容体(TLR)2,腫瘍壊死因子(TNF)αの発現の解析を免疫組織化学染色法で行った。HO-1は抗炎症作用への関与が着目されている因子で,ヒトIBDでの発現の増加,病態モデル動物での炎症抑制作用の報告がある。本研究では,イヌの小腸におけるHO-1発現は,健常群(7頭)と比べ,慢性腸疾患群(IBD:16頭,その他の慢性腸炎:6頭)で増加をみとめ,ヒトと同じくマクロファージに発現を認めた。IBD群では,その他の慢性腸炎と比べ,臨床症状の重症度(canine IBD activity index)は有意に高かったが,HO-1の発現の程度に有意な違いは認められなかった。イヌにおいても,HO-1は,腸での炎症への関与が示唆されるが,現在のところ,IBD特有の反応とはいえず,今後,症例を増やし,さらなる検討が望まれる。イヌIBDでmRNA発現の増加が報告されているTLR2,ヒトIBDの治療のターゲット因子であるTNFαについても,免疫組織化学染色法で発現解析を試みた。抗原の賦活化の方法,抗体の濃度など,種々の染色条件で検討したが,現時点まで特異的な染色を認めず,イヌIBDにおける発現解析には至らなかった。原因不明の慢性腸炎で,治療に対するエビデンスも少ない,イヌの炎症性腸疾患(IBD)について,病態の解明ならびに新規治療ターゲット因子の探索,予後予測に有用な成果をえるために本研究に着手してきた。ヒトのIBDで発現増加がみられ,治療にも応用されているTNFαの発現について前年度までに,IBD疾患犬では健常犬よりも発現が低く,TNFαは,犬の腸管免疫において保護的な働きを持つ可能性が得られた。平成26年度は,健常犬の腸管におけるTNFαの発現量ならびに発現の局在について精査を試みた。合わせて,ヒトでTNFα同様,治療標的因子であるIL-6についても解析を実施した。健常な犬の腸管におけるTNFα,IL-6の発現は,大腸(結腸)よりも小腸(十二指腸,空腸,回腸)で発現が高いが,小腸間の差はみられなかった。TNFαは,陰窩よりも絨毛に多く発現がみられ,上皮細胞よりも粘膜固有層により多くの発現を認めた。一方,IL-6は,陰窩と絨毛に発現量の差は無かったが,粘膜固有層よりも上皮細胞の発現が多かった。さらに,TNFαの発現細胞は,IL-6発現細胞よりも少ないが,1つの細胞あたりの発現シグナル数は,TNFαはIL-6より多かった。続いて, IBD,IBD以外の慢性腸炎,急性腸炎の犬の十二指腸におけるTNFα,IL-6の発現を比較すると,いずれの疾患においてもTNFα発現量は健常犬よりも低く,IL-6は増加がみられ,IBD特有の変化ではなかったが,IL-6の腸炎への関与の可能性が示唆された。今回着目したTNFα,IL-6は,イヌIBDへの大きな関与がみられなかったが,今後も,発現細胞の分布,1つの細胞あたりの発現パターンの違いについて解析をすすめることで,着目因子の腸管免疫機構における役割,病態把握に通じると期待される。臨床獣医学イヌIBDでみられる免疫反応について解析することを目的とし,ヒトIBDの病態への関与が示唆されている免疫因子であるTNFαの発現について免疫組織
界面ナノ構造解析と特性評価に基づく高信頼性アルミニウム/鋼異材接合プロセスの構築

アルミニウム合金/鋼異材接合部の界面ナノ構造解析と局部特性評価による高信頼性接合プロセスを構築するとともに,これを自動車車体接合へ適用した.接合界面反応層の形成機構の解明し,合金元素をコントロールすることで制御法を確立した.界面反応層の物性値評価ならびに微小引張試験を行うことで微小領域での継手特性評価と変形破壊挙動を基礎的に解明した.得られた知見を実用的な接合法に適用してAl合金母材部で破断する良好な接合界面を得た.アルミニウム合金/鋼異材接合部の界面ナノ構造解析と局部特性評価による高信頼性接合プロセスを構築するとともに,これを自動車車体接合へ適用した.接合界面反応層の形成機構の解明し,合金元素をコントロールすることで制御法を確立した.界面反応層の物性値評価ならびに微小引張試験を行うことで微小領域での継手特性評価と変形破壊挙動を基礎的に解明した.得られた知見を実用的な接合法に適用してAl合金母材部で破断する良好な接合界面を得た.界面ナノ構造解析と局部特性評価に基づいた高信頼性アルミニウム/鋼異材接合プロセスを構築することを目的とし,2009年度には界面ナノ構造解析には透過電顕観察を,その特性評価にはナノインデンテーションならびに微小引張試験を適用し,界面ナノ構造の原子レベル解析ならびに界面ナノ構造が局部的な継手特性に及ぼす影響および微視的な破断機構を基礎的に検討した.電顕観察により6000系アルミニウム合金/鋼接合では拡散接合によりFe側およびAl側にはそれぞれAl_5Fe_2, Al_3Feの2元化合物が形成した.一方,アルミニウム合金にSiやCuを添加することでAl側の反応層にはそれぞれ添加元素が濃化していることがEPMA分析において確認された.そして界面部の透過電顕観察によりAl側の反応層はAl-Fe-Si(+Cu)3元化合物であることがわかり,添加元素により形成される界面反応層の結晶構造が変化することが明らかになった.ナノインデンテーション試験により反応層内では母材に比べて著しく硬さが増加することが確認され,Al側においては添加元素により反応層硬さが減少することが明らかとなった.さらに脆弱な斜方晶系のAlリッチ化合物(Al_5Fe_2, Al_3Fe)に比べ,立方晶系のFeリッチ化合物(AlFe_3, AlFe)の硬さが小さいこともわかり,接合界面で形成されたAl-Fe-Si(+Cu)3元系化合物は,Feリッチ化合物に性質が類似していくものと考えられた.微小引張試験結果より,界面で形成されるAl-Fe系金属間化合物,特にAlリッチな組成を有すものは非常に脆弱であることがわかり,反応層内部で塑性変形を起こすことはほとんどなく破断に至るものと考えられた.またマクロ的な接合界面のその内部では,機械的性質は大きなばらつきを示すことも明らかとなった.本研究は界面ナノ構造解析と局部特性評価に基づいた高信頼性アルミニウム/鋼異材接合プロセスを構築することを目的としている.2010年度では昨年度の成果で得られた界面組織制御指針を基に,その自動車車体接合への適用を検討した.まず,接合部の個々の領域での強度特性を把握することが可能な微小領域強度試験機を独自に作製した.この試験では,平行部がミリメートルサイズ,その垂直方向がマイクロメートルサイズの試験片の引張強度が評価可能である.また,その変形挙動の動的なその場観察も可能にした.実用的なアルミニウム合金/鋼異種金属の固相内接合の各領域において,接合箇所により接合強度が大きく異なることが認められた.さらに微小領域での引張試験により,アルミニウム合金内部で母材破断を呈すほど強固な接合界面を有する領域があることがわかった.これら強度変化は接合界面組織に大きく依存し,すなわち,界面部に撹搾作用が加わった非常に薄い非晶質が形成することに起因していることが明らかとなった.また,溶融・凝固過程を含む実用的接合法については,インサート材のめっき組成を最適化することで,低温,低エネルギーの接合が可能であることが実験的に示された.そのような接合材では接合外周部のアルミニウム合金母材部において曲げ変形が生じることがその場観察にて認められ,信頼性の高い接合部が得られることが明らかとなった.以上のことから,接合部の各部位の個々の強度特性を評価する手法は,高信頼性化組織制御のための接合プロセスの構築に非常に有用であることが示された.
受精成立における卵子・精子のインターアクション機構の研究

精子核のcell-free脱凝縮実験系として(1)dithiothreitol(DTT)及びTritonX-100ないしlysolecithin-Tris塩を用いたcell-free実験系,(2)同期した卵を大量に排卵する両生類の卵の抽出液を用いたcell-free実験系の2系統の脱凝縮系を作製し,ヒト精子核膨化に関与する条併を検索し,又脱凝縮過程における核変化および受精過程においてヒト精子核膨化機構に関与する精子核タンパクについて検討した。塩の存在(Na^+で1.0M以上),細胞膜の除去,ジスルフィド結合還元という条件を満たす,0.05%lysolecithin-5mM DTT-1.0M NaCl Tris溶液によるcell-free精子核脱凝縮実験系を用いて成熟精子核におけるヒストンの存在を示し,また抗ヒストン抗体を用いて蛍光下で膨化精子核の経時変化を検討した。ヒト精子は,細胞膜の除去と核蛋白であるブロタミンのジスルフィド結合の還元のために5mM DTT-1% Triton X-100のTris溶液で処理して用いた。nucleoplasminを含むXenopus卵抽出液では比較的緩徐に脱凝縮を生じたが,0.5M NaClに調整したXenopus卵抽出液では極めて急速に脱凝縮に至った。nucleoplasminを介する脱凝縮は塩濃度に影響を受け,又精子形態により脱凝縮過程に相違があることが示唆された。ヒト精子核を上記in vitro脱凝縮系で膨化させ,35%酢酸溶液により塩基性核蛋白を抽出した。抽出蛋白に対し,抗ヒトヒストンH2Bポリクローナル抗体を使用したWestern blottingによる検索では,精子形成過程で核蛋白のほとんどがプロタミンに置換されるという過去の報告に反し,相当量の抗ヒストンH2B抗体に結合する蛋白バンドが検出された。抗ヒストンH2B抗体およびFITC標識2次抗体を使用して蛍光下で精子核の脱凝縮過程を検討した。脱凝縮に伴い,結合可能なヒストンの量に変化があったことが示唆された。しかし,精子形態により膨化に差を認め,tapering spermでは膨化の径の変化が有意に少ないことが判明した。精子核はその成熟過程で核蛋白がヒストンからブロタミンに置換され形態的機能的にコンパクトとなるが,射出精子核にも相当量のヒストンを含有しており,また脱凝縮過程でヒストンの結合性に変化を生じることが示唆された。精子核のcell-free脱凝縮実験系としてdithiothreitol(DTT)及びTritonX-100-Tris塩を用いたcell-free実験系、同期した卵を大量に排卵する両生類の卵の抽出液を用いたcell-free実験系の2系統の脱凝縮系を作製し、ヒト精子核膨化に関与する条件を検索し、又脱凝縮過程における核変化を検討した。ヒト精子は5m_MDTT-1%Triton X-100のTris溶液により、細胞膜の破壊とジスルフィド結合の還元処理を行った系で、NaCl溶液、CaCl_

2溶液の各種塩濃度等について様々な条件で精子核の変化を経時的に観察した。Na^+は0.5_M以下、Ca^<2+>は0.2_M以下では脱凝縮が起こらず、各々0.51.0_M、0.20.4_Mに脱凝縮に関する塩濃度の臨界点があると考えられた。又、精子核の脱凝縮速度は精子形態と関連が示唆される結果を得た。又、脱凝縮過程におけるDNAと核蛋白との結合離解の機転では、DTT及びTritonX-100による細胞膜の破壊と塩基性蛋白の還元のみでは脱凝縮には至らず、塩の存在がこの結合の離解に必要であることを示唆した。Xenopus laevis成熟卵抽出分画によるcell-free実験系に関しては、XenopusにhCG1500単位を皮下注射の後に産卵された卵子を回収し、2%cysteineを用いてゼリー層を除去し、超遠心による各々の上清の可溶性分画を抽出することにより作製した。ヒト精子は、細胞膜の除去と核蛋白であるprotamineのジスルフィド結合の還元のために5m_MDTT-1% Triton X-100のTris溶液で処理して用いた。Nucleoplasminを含むXenopus卵抽出液では比較的緩徐に脱凝縮を生じたが、0.5_MNaClに調整したXenopus卵抽出液では極めて急速に脱凝縮に至った。又何れの条件でもtapering spermでは脱凝縮を認めないか、あるいは経時的変化が遅延した。精子核のcell-free脱凝縮実験系においてnucleoplasminを介する脱凝縮は塩濃度に影響を受け、又精子形態により脱凝縮過程に相違があることが示唆された。精子核のcell-free脱凝縮実験系を用いて、受精過程においてヒト精子核膨化機構に関与する精子核タンパクについて検討した。塩の存在(Na^+で1.0M以上)、細胞膜の除去、ジスルフィド結合還元という条件を満たす、0.05%lysolecithin-5 mM dithiothreitol(DTT)-1.0 M NaCl Tris溶液によるcell-free精子核脱凝縮実験系を作製した。この系を用いて成熟精子核におけるヒストンの存在を示し、また抗ヒストン抗体を用いて蛍光下で膨化精子核の経時変化を検討した。ヒト精子核を上記in vitro脱凝縮系で膨化させ、35%酢酸溶液により塩基性核蛋白を抽出した。抽出蛋白に対し抗ヒトヒストンH2Bポリクローナル抗体を使用したWestern blottingによる検索では、精子形成過程で核蛋白のほとんどがブロタミンに置換されるという過去の報告に反し、相当量の抗ヒストンH2B抗体に結合する蛋白バンドが検出された。抗ヒストンH2B抗体およびFITC標織2次抗体を使用して蛍光下で精子核の脱凝縮過程を検討した。この方法により光顕的には観察が不可能であった膨化精子核が明瞭に観察可能となった。0.05%lysolecithinにより膜成分を除去した精子核に5mM dithiothreitol(DTT)-1.0 _M NaCl Tris溶液を添加することで脱凝縮を開始させると添加直後から精子核の径の増加が確認され、3分後には精子核の径が2倍以上となる完全膨化を示した。
拘縮の病態およびその治療法の解明に関する実験的研究

研究1:拘縮の病態解明に関する実験的研究関節の不動化は骨格筋の弾性低下を招き,これが原因で発生する関節可動域制限を拘縮という.しかし,拘縮の発生メカニズムについては未だ明らかにされていない点が多い.そこで,本研究ではラットヒラメ筋を弛緩位で1,2,4,8,12週間不動化した後の1)足関節の可動性,2)ヒラメ筋を伸張した際の他動張力,3)ヒラメ筋の筋節長,筋内膜コラーゲン線維網の形態,ヒアルロン酸の変化について検索した.その結果,足関節の可動性は不動期間の延長に伴って減少し,不動後のヒラメ筋の他動張力は増加していた.また,筋節長は不動1週後に短縮を認め,その後不動期間を延長しても同様に短縮していた.一方,筋内膜を構成するコラーゲン線維の走行は,不動1,2週後はControlと同様で筋線維の長軸方向に対して縦走していたが,不動4週後以降は横走するコラーゲン線維が増加していた.さらに,ヒアルロン酸含有量は不動1週後に増加を認めたが,その後は不動期間を延長しても横這いの推移であり,組織化学的検索では,不動後のヒアルロン酸の増加は主に筋内膜で生じていることが確認された.以上の結果から,不動後は骨格筋の弾性低下によって拘縮が発生することは明らかで,これは不動期間の延長に伴って進行するといえる.そして,拘縮の発生メカニズムとして,初期の段階は筋線維の短縮が直接的に影響し,その後,コラーゲン線維網の構築変化が起こり,進行すると考えられる.また,筋組織内におけるヒアルロン酸の蓄積も骨格筋の弾性低下に影響していると思われるが,拘縮の進行との相関関係はないことから,その発生メカニズムに対する関与は本研究では明らかにできず,今後検討を要すると思われる.研究2:拘縮の治療法解明に関する実験的研究骨格筋の持続伸張法は,拘縮の予防・治療法として日常の臨床で広く実施されている.しかし,その効果については科学的に証明されていない.そこで,マウスの実験モデルを用いて拘縮を予防するために必要な実施時間の検討を行った.その結果,拘縮の予防は1日10分間の実施時間では困難であったが,20分,30分の実施時間では可能で,持続伸張法の効果が認められた.しかし,30分の実施時間でも拘縮の発生を完全に予防することは困難であり,今後は実施時間の再検討などが必要と思われた.次に,4週間不動化した後にラットヒラメ筋を1日30分間持続的に伸張した場合と(伸張群)と自然回復させた場合(非伸張群)の廃用性筋萎縮の回復状況を検討した.その結果,伸張群と非伸張群の筋線維直径を比較すると不動を終了した1週目ではType I線維のみに,3週目ではType I・II線維の両方に有意差を認め,伸張群のそれが大きかった.したがって,持続伸張法は拘縮の発生によって起こる廃用性筋萎縮の治療に有効であることが示唆された.研究1:拘縮の病態解明に関する実験的研究関節の不動化は骨格筋の弾性低下を招き,これが原因で発生する関節可動域制限を拘縮という.しかし,拘縮の発生メカニズムについては未だ明らかにされていない点が多い.そこで,本研究ではラットヒラメ筋を弛緩位で1,2,4,8,12週間不動化した後の1)足関節の可動性,2)ヒラメ筋を伸張した際の他動張力,3)ヒラメ筋の筋節長,筋内膜コラーゲン線維網の形態,ヒアルロン酸の変化について検索した.その結果,足関節の可動性は不動期間の延長に伴って減少し,不動後のヒラメ筋の他動張力は増加していた.また,筋節長は不動1週後に短縮を認め,その後不動期間を延長しても同様に短縮していた.一方,筋内膜を構成するコラーゲン線維の走行は,不動1,2週後はControlと同様で筋線維の長軸方向に対して縦走していたが,不動4週後以降は横走するコラーゲン線維が増加していた.さらに,ヒアルロン酸含有量は不動1週後に増加を認めたが,その後は不動期間を延長しても横這いの推移であり,組織化学的検索では,不動後のヒアルロン酸の増加は主に筋内膜で生じていることが確認された.以上の結果から,不動後は骨格筋の弾性低下によって拘縮が発生することは明らかで,これは不動期間の延長に伴って進行するといえる.そして,拘縮の発生メカニズムとして,初期の段階は筋線維の短縮が直接的に影響し,その後,コラーゲン線維網の構築変化が起こり,進行すると考えられる.また,筋組織内におけるヒアルロン酸の蓄積も骨格筋の弾性低下に影響していると思われるが,拘縮の進行との相関関係はないことから,その発生メカニズムに対する関与は本研究では明らかにできず,今後検討を要すると思われる.研究2:拘縮の治療法解明に関する実験的研究骨格筋の持続伸張法は,拘縮の予防・治療法として日常の臨床で広く実施されている.しかし,その効果については科学的に証明されていない.そこで,マウスの実験モデルを用いて拘縮を予防するために必要な実施時間の検討を行った.その結果,拘縮の予防は1日10分間の実施時間では困難であったが,20分,30分の実施時間では可能で,持続伸張法の効果が認められた.しかし,30分の実施時間でも拘縮の発生を完全に予防することは困難であり,今後は実施時間の再検討などが必要と思われた.

次に,4週間不動化した後にラットヒラメ筋を1日30分間持続的に伸張した場合と(伸張群)と自然回復させた場合(非伸張群)の廃用性筋萎縮の回復状況を検討した.その結果,伸張群と非伸張群の筋線維直径を比較すると不動を終了した1週目ではType I線維のみに,3週目ではType I・II線維の両方に有意差を認め,伸張群のそれが大きかった.したがって,持続伸張法は拘縮の発生によって起こる廃用性筋萎縮の治療に有効であることが示唆された.拘縮発生時の筋線維と筋内膜コラーゲン線維網の形態変化を検索し,併せて拘縮に対する伸張運動の影響も検索した.Wistar系ラットを実験群と対照群に分け,実験群は,足関節を最大底屈位で1,2,4,8,12週間ギプス固定した.また,4週間固定した群の一部は,固定後に麻酔下で1日30分間(週6回),述べ3週間ヒラメ筋を伸張し(伸張群),その比較対照には,固定後に同期間,麻酔のみをかけた(非伸張群).実験終了後は,麻酔下で足関節背屈角度を測定し,一部のヒラメ筋の凍結横断切片を光学顕微鏡で検鏡,一部は3%グルタールで組織固定,その縦断切片を光学・透過電子顕微鏡で検鏡した.また,一部は筋内膜コラーゲン線維網を走査電子顕微鏡で検鏡した.足関節背屈角度は,対照群に比べ固定1週で17%,2週で29%,4週で57%,8週で68%,12週で72%減少した.筋節長は,対照群に比べ固定1週で有意に短縮し,結合組織も固定1週で増生していた.一方,筋内膜コラーゲン線維網の形態は,固定1,2週では多くのコラーグン細線維が筋線維の長軸方向に対して縦走し,対照群と同様であったが,固定4週以降は横走するコラーゲン細線維が増加した.伸張群と非伸張群を比較すると筋節長は伸張群が有意に長く,結合組織の増生や筋萎縮の程度も伸張群が軽度であり,筋内膜コラーゲン線維網の形態変化も伸張群で著しく改善していた.以上の結果から,1,2週間の固定で起こる拘縮は,筋線維自体の伸張性低下や結合組織の増生によるもので,4週間以上の固定になるとコラーゲン線維網の形態も変化し,拘縮はコラーゲン線維の滑動性低下の影響が加わることでさらに進行すると推察された.一方,4週間のギプス固定によって生じた筋線維やコラーゲン線維網の形態変化は,自然回復の場合より伸張運動を行う方が改善しており,伸張運動は拘縮に対して有効な治療手段であることが示唆された.拘縮発生時の筋線維と筋内膜コラーゲン線維網の形態変化、ならびに筋組織内のヒアルロン酸含有量を検索するとともに拘縮に対する伸張運動の影響も検索した.Wistar系雄ラット124匹を実験群(n=74)と対照群(n=50)に分け,実験群は,足関節を最大底屈位で1週間(n=10),2週間(n=10),4週間(n=34),8週間(n=10),12週間(n=10)ギプス固定した.また,4週間固定した群の一部は,固定後に麻酔下で1日30分間(週6回),述べ3週間ヒラメ筋を伸張し(伸張群、n=12),その比較対照には,固定後に同期間、麻酔のみをかけた(非伸張群、n=12).実験終了後は、麻酔下で足関節背屈角度を測定し、ヒラメ筋を摘出後,検索材料に供した。すなわち、一部のヒラメ筋はその凍結横断切片を光学顕微鏡で検鏡し、一部は3%グルタールで組織固定後、その縦断切片を光学・透過電子顕微鏡で検鏡するとともに、筋内膜コラーゲン線維網を走査電子顕微鏡で検鏡した.また、一部のヒラメ筋は湿重量当たり50倍量の0.01Mリン酸緩衝液中でホモジナイズし、遠心分離後の上清液内のヒアルロン酸含有量をサンドイッチバインディング法にて測定した。結果、足関節背屈角度は,対照群に比べ固定1週で17%,2週で29%,4週で57%,8週で68%,12週で72%減少した.筋節長は,対照群に比べ固定1週で有意に短縮し,これはすべての固定期間で同様であった。
安全・安心な食の流通のための情報伝達制度設計

安全で安心な食品の流通のために必要な情報公開の方法を検証するため、一般的な人々の嘘に対する意識を金銭的インセンティブがある実験環境で検証した。実験の結果は、嘘をつく割合は全体で約40%であった。匿名性で貰える金額が多く、対象者が若い人の場合が一番嘘をつく割合が多かった(約50%)。相手の顔が見える場合は、匿名性の場合に比べて、嘘をついたことを自白する人が多い傾向が観察された。嘘をつかれて、その通りの行動をした(騙された)人の割合は、嘘をつかれた人達の中で約68%であった。騙された人は、実験の種類や個人属性に大きな差がなかったが、相手を信じる傾向が観察された。21年度の研究目的である、消費者が信頼する情報の検証では、まず、扱う食材と人々のうそに対する選好を調べる実験を先行して実施した。食材に関しては、研究者の主観的判断ではなく、人々の主観性に基づいた食品を扱うことにより、実験環境で被験者の食品偽装事件に対して、より想起させやすくさせるためである。うその選好に関しては、人々がうそに対してどのような選好を持つかを知ることにより、食品偽装事件が人々の中でのどのような位置づけとなっているかを客観的に示すものさしとすることができる。この先行実験では、お金をより多く得るためにうそをつくかどうかを、2人1組のゲーム形式で行った。ゲームは、匿名性・得られる報酬の差が高額の場合(1000円差)、匿名性・少額の場合(100円差)、そして、直接相手の顔を見る・高額の場合(1000円差)を、それぞれ行った。対象者は一般人と学生からなる、計314人である。ゲーム終了後のアンケートでは、印象に残る食品偽装事件、個人属性等を記入してもらった。実験の結果は、お金を得るためにうそをつく人は、全体の4割であった。一般人と学生のうそ行動は、報酬の差が高額の場合の方が、少額に比べて、統計的に差が出ることが分かった。また、直接相手の顔を見る場合と匿名性の場合とでは、うそに対して、統計的に差はなかった。個人属性では、女性よりも男性が、また、B型やO型が、うそをつく傾向が観察された。これらの結果は、他の実験研究や心理研究と類似する結果となった。さらに、食品偽装事件を想起させやすい食材は牛肉、牛乳、お菓子類であることがわかった。以上より、一般人や学生を対象としても、お金を得るためのうその行為は、ゲーム形式の実験でも確認された。本研究の目的である、安全で安心な食品の流通のために必要な情報公開の方法を理論と実験を相互にフィードバックして検証することを考える上で、人々の嘘に対する意識とその嘘を告白する要因を探るために金銭的インセンティブがある実験環境で検証した。具体的には、20代から60代の人を対象に、嘘をつくと貰えるお金が多い場合と少ない場合、また、相手の顔を見る場合と匿名性の場合の計4種類の実験を行った。この実験では、計544名の被験者を集めた。4種類の実験の中で、匿名性で貰える金額が多く、対象者が若い人の場合が一番嘘をつく割合が多かった(約50%)。この研究の意義は、現実社会で発生している複数の詐欺行為(架空請求詐欺・オレオレ詐欺・偽装)に関わる要因を検証し、どの要因が嘘をつく人や騙される人に影響を与えるのか、また自白を促す要因を探ることで予防策の可能性を検証できる点である。この研究の重要性は、嘘をつく動機は金銭であること、その嘘の告白に影響を与えるのは相手との接触であること、そして、騙される人はどのような場合でも相手を信じる傾向があることを示した点である。この研究は、2010年7月のESA World Meetingで英語報告され、海外の研究者らから意見を得た。また、大阪大学社会経済研究所のディスカッションペーパーとして公刊され、現在、投稿準備中である。
リプログラミング技術を用いたヒト型慢性骨髄単球性白血病マウスモデルの作成と解析

染色体転座(46XY, +1, der(1;7)(q10;p10))を有するCMMoL患者からエピゾーマルベクターを用いてOCT3/4、SOX2、KLF4、L-MYC、LIN28、p53-shRNAを導入し、CMMoL患者由来のiPS細胞(CMMoL-iPS)を樹立した。CMMoL-iPS細胞をiPS-Sac法で血球へ分化誘導し、造血幹・前駆細胞のCD34陽性CD43陽性細胞を用いて、半固形培地にてコロニー形成能を評価した。CMMoL-iPS細胞由来血球はNormal-iPS細胞由来血球と比較して、多数のサイズの大きい造血コロニーを形成した。さらに、CMMoL-iPS由来造血コロニーは多数の単芽球により構成されていた。表面マーカー解析を行った結果、CMMoL-iPS由来造血コロニーではCD34+の幹・前駆細胞、CD13+の骨髄系細胞の増加を認めた。特にCD13+細胞の中でもCD14+の単球系細胞およびCD14-CD24+の未熟な顆粒球系細胞の増加を認めた。末梢血におけるCD14-CD24+細胞の増加はCMMoLに特徴的な所見であった。半固形培地を用いてcolony replating assayを行った結果、3継代目以降ほとんどコロニー形成が認められなかったが、CMMoL-iPS細胞由来血球は4継代目以降も多数の造血コロニーを産生した。さらに、サイトカインを含まない半固形培地にてコロニー形成能を評価した結果、Normal-iPS細胞由来血球はほとんどコロニー形成不可能であったが、CMMoL-iPS細胞由来血球は多数の自発的コロニー形成を認めた。これらの結果は、CMMoL-iPS細胞由来血球が元のCMMoL細胞の白血化能を反映していることを示していると考えられた。以上より、世界初のCMMoLヒト疾患モデルが作製できた。本研究者は、慢性骨髄単球性白血病(CMMoL)患者よりエピゾーマルベクターを用いてOCT3/4、SOX2、KLF4、L-MYC、LIN28、p53-shRNAを導入し、CMMoL患者由来iPS細胞(CMMoL-iPSCs)を樹立した。患者検体と同様の染色体異常やEZH2変異、NRAS変異、RUNX1変異もiPS細胞でも確認された。CMMoL-iPSCs由来造血コロニーではCD34陽性の造血幹・前駆細胞、CD13陽性の骨髄系細胞の増加を認めた。更に、CMMoL-iPSCs由来血球は、コロニー形成のreplatingやサイトカインなしでの培養が可能であった。これらの結果は、CMMoL-iPS細胞由来血球が元のCMMoLCsの白血化能を反映していることを示していると考えられた。CMMoL-iPSCsをOP9細胞株とともにiPS細胞を免疫不全マウスの皮下に移植すると、形成された奇形腫内および骨髄内で造血幹・前駆細胞が生じた。テラトーマ内のCD34陽性CD45陽性の造血幹・前駆細胞を免疫不全マウスに2次移植したところ、CD13陽性の単球細胞やCD34陽性細胞の芽球が認められ、患者検体と同様のEZH2変異、NRAS変異、RUNX1変異を持っており、患者由来ヒト型CMML-iPSCs由来マウスモデルを作製した。この疾患iPS由来テラトーマを介したヒト化マウスモデルの手法は、CMMoL-iPSのみならず、その他の疾患由来iPSにも応用可能であり、汎用性があると考えられた。CMMoL-iPSCs由来血球は、pERKの活性化を来しており、RAS阻害剤やMEK阻害剤によるRAS/MEK/ERKシグナルの阻害により、増殖が阻害された。CMMoL-iPSCs由来血球を用いたRAS/MEK/ERKシグナルの制御が治療標的となる可能性が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。CMMoL患者と健常者からのCD34陽性細胞(元検体)、iPS細胞と分化させた造血細胞においてトランスクリプトーム・メチローム解析を行い以下の成果があった。この結果、CMMoL-iPS細胞由来血球は、表面マーカーにより選別した健常者の元検体よりも、いったんiPS細胞を経て血球に再分化させた検体がトランスクリプトーム・メチロームが類似しており、より均一かつ分化段階が揃った細胞が得られる可能性が示唆された。iPS細胞由来血球においてもCMMoLの病態が反映されていることから、健常者の元検体との比較よりもリプログラミング/再分化を行うことで得られた造血細胞を比較した方がCMMoLの病態を引き起こす候補遺伝子を絞ることに有用であると考えられた。その結果、GSEAでp53のターゲット遺伝子が全体に不活性化している傾向が見いだされ、リアルタイムPCR法で実際に発現低下を確認できた。また、CMMoL-iPS細胞由来血球においてプロモーター領域が低メチル化状態かつ遺伝子発現が高い遺伝子に着目し、SLITRK4、ADAMTS4、PLA2G4C、FAAH等を同定した。難治性疾患の1つである慢性骨髄単球性白血病(CMMoL)患者

由来iPSを用いて、ゲノム・エピゲノム異常、シグナル伝達異常、転写制御異常、蛋白質結合状態の変化の解析などのプロテオーム解析等を統合するfunctional genomicsの網羅的解析を行い、新たな発症機構を同定した。CMMoL-iPSを用いて、ハイスループットの化合物スクリーニングによる新規治療法開発を行う。