hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
消化管内視鏡における抗血栓薬の適正使用に関する研究

抗血栓薬内服者における消化器内視鏡の周術期管理として、内視鏡下の組織生検については抗血栓薬の休薬が不要であることを明らかにし、また出血高危険度の内視鏡手技においてもアスピリン単剤継続であれば安全に手技を施行できることを明らかにした。また成果を元に、チエノピリジン単剤継続下での出血高危険度内視鏡手技、ワルファリン単剤継続下ので出血高危険度内視鏡手技の安全性を検討する臨床試験を開始することができた。平成24年7月の日本消化器内視鏡学会ガイドラインの改訂を受けて当初の計画より前倒して実施された「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」においては、平成25年2月のUMIN INDICEサービスの稼働後に本格的な症例登録が開始された。登録症例数は平成26年3月時点で28症例となったが、その間で出血症例を7症例認めたため、開始前に設定されていた中断基準(30症例集積までに5症例以上の出血症例を認めた場合)を満たし症例登録は一旦中断となっている。26年3月末現在、試験中断までの登録症例を解析しての学会発表(JDDW・UEGW)を計画しており、同時に投稿論文を執筆中である。平成25年度は、上記以外にも抗血栓薬内服者に対する低侵襲手技を検討するため、細径鉗子を用いた組織生検の安全性の検討(UMIN000011140を開始すると共に細径内視鏡を用いた内視鏡に伴う苦痛の検討なども並行して行い、後者に関しては二本の論文発表(World J Gastrointest Endosc. 2013 Jul 16;5(7):346-51., World J Gastroenterol. 2014 in press.)を行った。「抗凝固薬・抗血小板薬内服中の消化管内視鏡検査における組織生検の安全性の検討(UMIN000003750)」を論文(J Gastroenterol. 2012 Jul;47(7):770-4.)および学会(第83回日本消化器内視鏡学会総会,東京)で発表して抗凝固薬・抗血小板薬内服中の消化管内視鏡検査における組織生検の安全性を示した。また平成24年7月に日本消化器内視鏡学会のガイドラインが大幅に改訂され、抗血小板薬内服中の高侵襲処置も許容されるようになったことを受け、研究計画を前倒しする形で多施設共同研究「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」を開始することとして、各施設での倫理委員会申請を行い、平成24年度末で当院を含め7施設での承認が得られている。またデータ集計センターとしてのUMIN INDICEサービスの利用準備も完了して本格稼働を開始した。平成24年7月の日本消化器内視鏡学会ガイドラインの改訂を受けて当初の計画より前倒して実施された「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」は、出血症例数が試験中止基準に満たしたことから平成26年3月末で新規症例集積を中断し、それまでの解析結果を論文発表(Ono S, et al.Thienopyridine derivatives as risk factors for bleeding following high risk endoscopic treatments: Safe Treatment on Antiplatelets (STRAP) study.Endoscopy. 2015 Jan 15. [Epub ahead of print])、学会発表(JDDW2014・UEGW2014)した。現在は同研究の結果を受けて、新規臨床試験「チエノピリジン系薬剤単剤内服継続下での胃腫瘍性病変に対する内視鏡的粘膜下層剥離術の安全性に関する探索的臨床研究」を計画し、平成27年4月より症例集積を開始している。また同時に新規臨床試験「ワルファリン内服継続下での大腸ポリペクトミー/EMRの安全性に関する探索的前向き試験」も平成26年12月より症例集積を開始している。平成24年7月の日本消化器内視鏡学会ガイドラインの改訂を受けて当初の計画より前倒しして実施された「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡手技の安全性の検討(UMIN000009176)」は、出血症例数が試験中止基準を満たしたことから平成26年3月末で新規症例集積を一旦中断し、それまでの解析結果を論文発表(Ono S, et al, Thienopyridine derivatives as risk factors for bleeding following high risk endoscopic treatments: Safe TReatment on Antiplatelets (STRAP) study. Endoscopy. 2015)、学会発表(JDDW2014・UEGW2014)した。

また、同時に新規臨床試験として「ワルファリン内服継続下での大腸ポリペクトミー/EMRの安全性に関する探索的前向き試験」、「ワルファリン内服継続下での胃腫瘍性病変に対する内視鏡的粘膜下層剥離術の安全性に関する探索的前向き試験」についても症例集積を開始している。抗血栓薬内服者における消化器内視鏡の周術期管理として、内視鏡下の組織生検については抗血栓薬の休薬が不要であることを明らかにし、また出血高危険度の内視鏡手技においてもアスピリン単剤継続であれば安全に手技を施行できることを明らかにした。また成果を元に、チエノピリジン単剤継続下での出血高危険度内視鏡手技、ワルファリン単剤継続下ので出血高危険度内視鏡手技の安全性を検討する臨床試験を開始することができた。多施設共同研究「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」の結果を受けて、新たな臨床試験「チエノピリジン系薬剤単剤内服継続下での胃腫瘍性病変に対する内視鏡的粘膜下層剥離術の安全性に関する探索的臨床研究」、「ワルファリン内服継続下での大腸ポリペクトミー/EMRの安全性に関する探索的前向き試験」を実施することができたため。消化器内科学上記の臨床試験の症例集積に加え、新規臨床試験として「ワルファリン内服継続下での胃腫瘍に対する内視鏡的粘膜下層剥離術の安全性の検討(仮)」の実施を検討している。多施設共同研究「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」は上記のように一旦中断となっているが、少ない症例数の解析の中でアスピリン単剤内服者における出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性を示唆すると同時にチエノピリジン系薬剤併用者においては出血のリスクが高いという問題点を明らかにし、現行の日本消化器内視鏡学会ガイドラインにおける今後検証すべき問題点を明確にすることができたため。平成24年度途中の日本消化器内視鏡学会のガイドライン改訂により当初予定されていた計画を前倒しする形で多施設共同研究「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」を開始したが新しいガイドラインに対する各施設の対応が予想以上に慎重であるため症例蓄積には長期間を要するものと考えられるため、研究計画を前倒しして開始した点と相殺されるものとして上記区分とした。新規臨床試験の申請手続きが遅れ、臨床研究保険の支払いが年度内に間に合わなかったため。上記を踏まえ、チエノピリジン系薬剤併用者に対する出血予防策を検討すると共に、ワルファリンなど抗血栓薬内服者における内服継続下での出血高危険度の消化管内視鏡的手技の可能性について検討する予定である。今後は多施設共同研究「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化管内視鏡的手技の安全性の検討(UMIN000009176)」を研究の中心として症例集積を進めると同時に参加施設を増やすよう積極的に他施設に働きかけてゆく。また細径内視鏡や細径生検鉗子の低侵襲性に着目し、これらの活用により抗血栓薬内服者に対する消化管内視鏡検査がより安全に施行できる可能性を検討するため臨床データを集積することも検討していく。新規臨床試験の臨床研究保険料および試験遂行の経費として使用する。多施設共同研究「血栓塞栓症の高リスク症例におけるアスピリン単剤継続下の出血高危険度の消化
癌化、進展に関与する発現遺伝子の新たな検出法の開発

癌の発生、進展に関与する発現遺伝子を検出する新たな方法を開発する目的で、遺伝子上で実際に発現している遺伝子領域をvisualに検出する手段として、Comparative mRNAHybridization(CmRH)を考案し実用化に向けて検討を行った。本手法は、(1)目的組織と対象組織より抽出したtotal RNAから、digoxigenin、あるいはbiotin標識したそれぞれのcDNA probeを作製する。(2)これを正常リンパ球のmetaphase上に同時にhybridizationさせた後、FITC(緑)、Rhodamine(赤)で二次標識する。(3)蛍光顕微鏡とCCDカメラにてに検出し、画像処理にて緑と赤の蛍光量を比較・定量化する。以上の3つのstepからなる。研究期間中に以下の知見を得た。1.total RNAからのcDNA probeの作製:oligo(dT)primer,biotin-dUTP,digoxigenin-dUTP存在化に逆転写酵素を用い標式cDNAprobeを作製する方法では、probe sizeが2-3kbとなりcomparative hybridizationには長すぎたが、いったんcDNA作成後、Nick translationで標識することで至適size(500-1000bp)のprobe作製が可能であった。2.hybridizationの問題:cDNA probeの場合DNA probeに比べhybridization効率が悪く、洗浄過程のstringencyを下げ試みたが、非特異的なhybridizationの増加にため解析困難であった。この原因はDNAとcDNAとのhybridizationにおけるイントロン領域でのミスマッチと考えられ、この問題の解決がCmRHの実用化に不可避と考えられた。癌の発生、進展に関与する発現遺伝子を検出する方法を開発する目的で、遺伝子上で実際に発現している遺伝子領域をvisualに検出する手段として、Comparative mRNAHybridization(CmRH)を考案した。本手法は、(1)目的の新鮮組織、培養細胞より、oligo(dT)primerと逆転写酵素を用い、cDNAを作製した後、これをNick translationにてbiotinあるいはdigoxigenin標識する。(2)これを正常リンパ球のmetaphase上にhybridizationさせた後、FITC(緑)、Rhodamin(赤)で二次標識する。(3)蛍光顕微鏡とCCDカメラにて高解像・高感度に検出し、画像処理にて緑と赤の蛍光量を比較・定量化する。平成7年度は、total RNAからのcDNA probe作製技術の確立に重点を置いた。当初の計画では、oligo(dT)primer,biotin-dUTP,digoxigenin-dUTP存在化に、逆転写酵素を用い直接に標識する計画であったが、この方法では、probesizeが2-3kbとなり(長すぎる)、制限酵素を用いる必要がでた。このため、いったんcDNA作製後、Nick translationで標識することにより、500-1000bpの至適sizeのprobe作製に成功した。CCDカメラ・画像解析装置の導入はすでに終了し、平成8年度はstep(2)、(3)に入れる状況である。癌の発生、進展に関与する発現遺伝子を検出する新たな方法を開発する目的で、遺伝子上で実際に発現している遺伝子領域をvisualに検出する手段として、Comparative mRNAHybridization (CmRH)を考案した。本手法は、(1)目的の新鮮組織、培養細胞より、oligo (dT)primerと逆転写酵素を用い、cDNAを作製した後、これをNick translationにてbiotinあるいはdigoxigenin標識する。(2)これを正常リンパ球のmetaphase上にhybridizationさせた後、FITC (緑)、Rhodamin (赤)で二次標識する。平成8年度は、(1)cDNAからbiotinあるいはdigoxigenin標識したprobeを作製し、(2)正常リンパ球のmetaphase

上にhybridizationさせ、(3)実際に観察を行った。この結果以下の問題点が明らかになった。cDNA pbobeの場合、DNA probeよりhybridizationの効率が悪い。この原因はcDNA probeの場合イントロンを含まないためDNAとのhybridizagtionにおいて、イントロン領域でミス・マッチを生じるためと推測される。この問題点は本手法の可否を決定する重要な課題であり、現在、probe sizeをより短くし同一probe内に複数のエクソンを含む割合を減らす、hybridization後の洗浄のstringencyを下げる、によって解決可能か検討中である。癌の発生、進展に関与する発現遺伝子を検出する新たな方法を開発する目的で、遺伝子上で実際に発現している遺伝子領域をvisualに検出する手段として、Comparative mRNAHybridization(CmRH)を考案し実用化に向けての検討を行った。本手法は、(1)目的組織と対照組織より抽出したtotal RNAから、digoxigenin、あるいはbiotin標識したそれぞれのcDNA probeを作製する。(2)これを正常リンパ球のmetaphase上に同時にhybridizationさせた後、FITC(緑)、Rhodamine(赤)で二次標識する。(3)蛍光顕微鏡とCCDカメラにてに検出し、画像処理にて緑と赤の蛍光量を比較・定量化する。以上の3つのstepからなる。研究期間中に以下の知見を得た。1.total RNAからのcDNA probeの作製:oligo(dT)primer,biotin-dUTP,digoxgenin-dUTP存在下に逆転写酵素を用い標識cDNA probeを作製する方法では、probe sizeが2-3kbとなりcomparative hybridizationには長すぎたが、いったんcDNA作成後、Nick translationで標識することで至適size(500-1000bp)のprobe作製が可能であった。2.hybridizationの問題:cDNA probeの場合DNA probeに比べhybridization効率が悪く、洗浄化過程の]stringencyを下げ試みたが,非特異的なhybridizationの増加のため解析困難であった。
遺伝子組み換えオオムギを用いた家畜疾病予防法(食べるワクチン)開発のための基礎研究

本研究は、オオムギを用いた食べるワクチンの開発を目指し、感染防御抗原である豚回虫As16および毒素産生性大腸菌fedF抗原をコードする遺伝子を、従来のアグロバクテリウム法に加え、花粉(microspore)への遺伝子導入法によりオオムギへの導入を試みた。アグロバクテリウム法では、fedF導入およびAs16導入オオムギ各1個体ずつの再分化体が得られたが、PCRにより染色体への導入遺伝子の組込みは確認されなかった。花粉への遺伝子導入では、コムギでは再生体が得られたが、オオムギ花粉を用いた実験では、再生体は得られず、さらなる改善が要された。本研究は、平成20年8月までにコドン改変遺伝子を作成し、本年度中にワクチン抗原遺伝子導入オオムギを作成し、並行して、それらの遺伝子を元にコムギ胚芽無細胞蛋白産生系による蛋白産生とマウス免疫抗体作成を平成21年7月までに行う予定であった。オオムギに導入する候補ワクチン抗原を探索する過程で、リーシュマニア症のワクチン候補蛋白の中に、粘膜免疫に特異的に防御効果を発揮するものがあることを発見した。従来、粘膜免疫法に用いるワクチン抗原は、注射により有効性が確認されたものを利用する場合がほとんどであり、本発見は、粘膜免疫法の重要性・有効性に関し、新しい概念をもたらし、本研究成果を発展させるのみならず、当該研究分野に革新的な寄与をもたらすものと期待される。平成21年度に、ワクチン遺伝子導入オオムギの作出に用いる予定であったpAM470ベクターのプロモーター領域が間違った配列であることが判明したため、平成21年度は、オオムギ種子特異的遺伝子導入用ベクターの作出を行った。遺伝子導入用ベクター作成の効率化のため、ゲートウェイ法を利用した発現ベクターの構築を計画し、ベクター作成を行った。また、リーシュマニア原虫の粘膜特異的免疫活性化エピトープ領域を同定し、注射免疫した場合とエピトープ特異的ヘルパーT細胞の活性化効率が異なることを明らかにした。我々は、これまでに、ブタ回虫の感染防御抗原であるAs16蛋白を産生するイネを作出し、その種子をマウスに摂食させることにより、ブタ回虫感染防御効果を得られることを明らかにしたが、産生されるワクチン抗原産生のさらなる効率化を目指す必要があることも課題として残った。一方で、穀類の中で、コメは家畜飼料ではないが、トウモロコシやオオムギは家畜飼料として実際に利用されており、家畜用の食べるワクチンとしては適用しやすい。本研究は、ワクチン発現媒体としてオオムギに注目し、ブタ大腸菌症およびブタ回虫症をモデルとして、ブタの感染症予防のためのワクチン投与法として、組換えオオムギの種子を用いた食べるワクチンの作出およびその傾向免疫効果の評価を目指している。本年度は、海外研究協力者から供与されたオオムギにワクチン蛋白遺伝子を導入するベクターに誤りがあることが塩基配列の道程により明らかになったため、新たにAs16および毒素産生性大腸菌のfedF抗原タンパク質をコードする遺伝子を、バイナリーベクター系のプラスミドPAM470のオオムギの種子貯蔵蛋白の一つであるホルディンD(D-Hordein,Hor3)のプロモーターの下流に組込み、オオムギの胚乳に蓄積するような発現ベクターを構築した。また、オオムギへの遺伝子導入法として、従来のアグロバクテリウムを用いた遺伝子導入法に加え、コムギにおいて新たに開発された花粉(microspore)への遺伝子導入法を次年度試みることを計画に加えた。一方、新たな粘膜免疫法の適応モデルと考えられるリーシュマニア原虫の感染防御エピトープに関しては、前年度同定された経鼻免疫特異的に認識されるエピトープと注射免疫時にも認められるエピトープの双方において経鼻免疫時にある程度の感染防御効果が認められた。我々は、これまでに、ブタ回虫の感染防御抗原であるAs16蛋白を産生するイネを作出し、その種子をマウスに摂食させることにより、ブタ回虫感染防御効果を得られることを明らかにしたが、産生されるワクチン抗原産生のさらなる効率化が必要であった。また、コメは家畜飼料ではないが、トウモロコシやオオムギは家畜飼料として実際に利用されていることから、本研究は、ワクチン発現媒体としてオオムギに注目し、ブタ大腸菌症およびブタ回虫症をモデルとして、ブタの感染症予防のためのワクチン投与法として、組換えオオムギの種子を用いた食べるワクチンの作出およびその傾向免疫効果の評価を目指している。本年度は、前年度に新たに作成したAs16および毒素産生性大腸菌のfedF

抗原タンパク質をコードする遺伝子を、バイナリーベクター系のプラスミドPAM470内に挿入したホルデインDプロモーターの下流に組込んだ発現ベクターを、従来のアグロバクテリウムを用いた遺伝子導入法、および花粉(microspore)への遺伝子導入法を試みた。アグロバクテリウム法では、合計1,312の胚性カルスを用いたが、選択培地上のカルスよりビアラホス耐性のシュートは22個認められたが、再分化体は、fedF導入オオムギおよびAs16導入オオムギで各1個体ずつであった。fedF導入個体では、PCRにより染色体への導入遺伝子の組込みは確認されず、一方、As16導入個体では、PCRにより、再生体の葉より導入遺伝子断片らしきバンドが得られたが、増幅遺伝子内にオオムギ由来と思われる遺伝子が挿入されていた。花粉への遺伝子導入では、同時に行ったコムギでは再生体が得られたが、オオムギ花粉を用いた実験では、再生体は得られなかった。一方、fedF蛋白の活性部位を大腸菌において産生することに成功し、マウスに免疫したところ、抗体産生が確認された。これらの抗体は、今後組換え植物内に産生されたfedFの検出に使用可能であると思われる。
自律訓練法がもたらす周術期患者のリラクセーション効果

周術期の患者に自律訓練法を実施し、そのリラクセーション効果を検証することを目的に実施した。通常通りのケアのみの群と自律訓練法を実施した群を比較した結果、倦怠感・疼痛・睡眠状態に有意な差はなかったが、術後7日目に心拍変動と唾液中分泌型免疫グロブリンAに有意差が認められた。これらのことから、手術後に自律訓練法を実施することによりリラックスし免疫機能が向上する可能性が示唆された。自律訓練法は,不安や緊張に関連して引き起こされる様々な症状を緩和するリラクセーション効果があることが明らかとなっている.本研究の目的は,心理的ストレスが強い患者が多いと報告されている周術期のがん患者を対象に自律訓練法を行ない,そのリラクセーション効果を主観的指標と客観的指標から評価することである.手術を受けるがん患者を対象に,自律訓練法を実施する対象者(実験群)と自律訓練法を実施せず,通常のケアのみの対象者(対照群)に無作為に振り分け,手術前日から術後7日目までを実験期間とした.不安(新版STAI),疼痛(VAS),倦怠感(VAS),睡眠(自作質問紙)を主観的指標とし,心拍変動(LRR-03,MemCalc/Tarawa),唾液アミラーゼ(唾液アミラーゼモニター),唾液IgA(SRL社)を客観的指標とした.自律訓練法は,群馬大学医学部附属病院リラクセーション外来作成のCDを患者に配布し1日3回実施することを課した.30名の患者の参加協力が得られ,研究計画通りに実施できた.有害事例等はなく,実験群では対照群に比較して,不眠時に活用して有効だったという声が多く聞かれた.引き続き症例の蓄積と詳細な分析を行い,研究成果を発表する予定である.自律訓練法は不安や緊張に関連して引き起こされる様々な症状を緩和するリラクセーション効果があることが明らかとなっている。本研究の目的は、多くの患者の心理的ストレスが高いと報告されている周術期の乳がん患者を対象に自律訓練法を行い、そのリラクセーション効果を主観的指標と客観的指標から評価することである。自律訓練法を実施する対象者(実験群)と自律訓練法を行わず通常のケアのみを受ける対象者(対照群)に無作為に割り付け、手術前日から術後7日目までの入院期間を実験期間とした。状態不安(新版STAI),疼痛(VAS),倦怠感(VAS),睡眠(自作質問紙)を主観的指標とし、心拍変動(LRR-03, Mem/Calc Tarawa),唾液中分泌型免疫グロブリンA(S-IgA)を客観的指標とした。自律訓練法は、群馬大学医学部附属病院リラクセーション外来で作成したCD教材を実験群の対象者に配布し、1日3回実施してもらった。有害事例はなく、途中脱落者もなかったことから、周術期の患者にも取り入れやすい方法であることが推察された。結果、主観的指標は両群で有意差はなく、客観的指標も有意差は部分的にとどまった。状態不安が高い対象者が少なく、心理的ストレスに適応していたためだと考えられる。本研究の目的は,告知から手術まで,また,手術後も心理的ストレスが強いことが報告されているがん患者を対象に,周術期に自律訓練法を行い,そのリラクセーション効果を,主観的指標と客観的指標から評価することである.本年度上半期は,無作為化比較試験を行うため,研究対象施設の関係スタッフと研究プロトコールについて検討,確定し,研究実施のための環境を調整した.研究者所属大学の倫理審査委員会および研究協力施設の倫理審査委員会の承認を得て,乳がんの手術を受ける患者を対象としてデータ収集を開始した.手術前日から手術後7日目まで自律訓練法を行ない,不安,疼痛,倦怠感,睡眠の状態を主観的指標とし,心拍変動,唾液アミラーゼ,唾液IgAを客観的指標とした.看護ケアとしての自律訓練法の効果を評価するために,自律訓練法は臨床心理士が指導を行うのではなく,看護師である研究者が指導した.また,対象者が自己練習できるように群馬大学医学部附属病院リラクセーション外来作成の自律訓練法のCDを配布し,CDレコーダーを貸し出した.12名の患者の参加協力が得られ,事例ごとに検討しながら,進めていった.その結果,不眠時に有効だったとの声が多く聞かれた.また,対照群も,希望すればデータ収集終了時に自律訓練法の指導を受けることができることを説明していたところ,比較的若い世代の患者から,指導を受けたいとの希望が出され,自律訓練法を含めた補完療法への関心の高さが示された.来年度は引き続き症例の蓄積と詳細な分析を行う.今年度まででデータ収集を終える予定であったが、手術予定者に認知症や高齢のため研究対象に該当しない患者が相当数おり,また,なかなか研究参加の同意が得られない場合もあり、予定者数に達していない。今後も研究対象病院の協力を得ながら、症例数を増やしていく予定である。

研究対象施設を,乳腺専門医院と乳腺外科のある病院の複数施設を研究対象施設とし,研究者への患者紹介の方法やデータ収集のプロトコールなどの実施方法を検討,それぞれの倫理委員会の承認を得て,データ収集を開始できた.12例実施したが,特に問題なくこのまま継続できる見込みである.本年度は症例数が少ないので,事例検討を中心に行い,統計的な比較はしていないが,統計ソフトは現有しており問題ない.また,パイロットスタディで行った結果を国内外の学会(15th East Asian Forum of Nursing Scholars,第31回日本看護科学学会学術集会)で発表しており,本年度計画したことは遅滞なく実施でき,おおむね順調に進展している.研究対象病院の外来及び病棟看護師,乳腺外科医師とこれまでの成果を共有しながら,協力関係をさらに深め,症例数を増やしていく予定である。今年度後半は,不安,疼痛,倦怠感,睡眠の状態を主観的指標とし,心拍変動,唾液アミラーゼ,唾液IgAを客観的指標としたデータを現有のSPSSを使用して統計解析を行い,論文としてまとめる予定である.引き続き計画したプロトコールに沿って,症例数の蓄積と分析を行う.研究対象施設の関係者とコミュニケーションを良く保ち,何かあったときには,迅速に対応する.国内外の学会で最新の情報を収集,知識を深め,人脈を広げ,本研究を推進させる.また,ある程度症例数が得られたら,統計的に比較し,中間評価をする.研究計画の変更,研究を遂行する上での課題等は,今のところ見当たらない.旅費として,ICN 25th Quadrennial Congress(Melbourne)への参加・研究発表費に30万円,国内学会参加・研究発表費に10万円,その他として英文校正代に10万円,雑誌掲載料に5万円,IgAは外部委託の検査であるので検査料として検査料に15万円使用する計画である.心拍変動解析のデータを収集するための心電図電極,唾液アミラーゼを測定するための唾液採取チップ,主観的指標のうち不安の大きさを測定する質問紙であるSTAI質問紙など約30人のデータを収集するための物品の購入に30万円,旅費は17th International Conference on Cancer Nursingでの発表と国内学会参加や発表に30万円,SIgA検査は外部委託であるため検査料に20万円,英論文の英文校正,データ入力のアルバイト雇用の人件費および研究参加者への謝礼に10万円を使用する予定である.
ナノ領域に局在するローカルプラズモンを利用した高密度バイオチップの作製

本研究の目的は、DNAチップ等の既存のバイオチップ部分を超小型化、超高密度化することである。そのため、蛍光プローブを利用した既存の手法とは異なる手法であるナノ領域に局在化した表面プラズモンを利用したセンシングプローブを作製して、実際にその検出システムを構築する。この手法は、蛍光等のラベリングなしに対象分子の検出が可能であるため、対象分子を選ばず汎用的な手法である。本研究により以下の知見を得ることができた。1.高い効率で局在化した表面プラズモン共鳴を起こす表面としてナノメートル構造を持つAu表面を構築する手法の開発を行った。具体的な方法として、蒸着薄膜のラフネスを大きくする方法、および、基板表面にエッチングなどによる凹凸を作製して、良好な表面プラズモン共鳴表面を作製する方法を見出した。2.各々の直径が10μm100μmのセンシングドットを紫外線フォトリソグラフィーによりシリコンウエハー上に作製する方法を開発した。3.シリコンウエハー上のセンシングドット表面上に検出対象分子にアフィニティーを持つ分子層を自己組織化法により作製した。そして、検出対象分子を含む試料を暴露した場合にアフィニティーを反射率変化として光学的に検出するシステムの開発を行った。このシステムはCCDカメラを用いてアレイ全体を画像として捕らえるため、既存の手法に比べて高スループットな検出を行うことができる。また、得られたデータは並列的に処理できるソフトウエアの開発を行った。
プラバーカラ派による音声の永遠性論証の解明

音声とは我々の日常的な伝達の媒体であり、また、聖典を構成する基本的要素であるが、その音声が一体永遠なのか否かをめぐる問題は、古典インドの哲学における一大論争点を形成している。例えば、音声に限らず一切存在の刹那性を説く仏教の刹那滅論や、聖典を神の著作とみなすニャーヤ学派の神学論など、各学派の根幹的教義と相容れないため、この〈音声の永遠性問題〉という教説をめぐっては多くの学派が論争にコミットした。本研究では音声の永遠性を主張する聖典解釈学派の中から、プラバーカラ派の議論の分析を主な目的とした。このについて、特に同学派の別分派であるバッタ派の論証と比較することで2つの学派間の論証の差異に焦点を当てて分析を進めた。具体的には、シャーリカナータの著作『プラカラナパンチカー』第9章における音声の永遠性論証の箇所を取り上げた。方法論としては、まずは刊本の十分な読解を前提とした上で、関連する思想家との影響関係を網羅的に分析するために、周辺年代の関連資料をデジタル化して検索の速度と精度の向上を図った。また、一方で将来的に原典写本による再校訂を見込んで入手済みの原典写本の校合を進めつつ、インドの各写本図書館において関連文献の写本調査するというように、テキストの電子化、入手済み写本の校合、新写本の調査を3本の柱とした。すでに入手済みであったネパール将来の写本に加えて、聖典解釈学関係の写本を多く保管している南インドの図書館を調査することでマラヤラム文字写本・テルグ文字写本など新写本のデジタルデータの蒐集も行った。その成果の一部は平成23年7月の西日本インド学仏教学会(広島大学)、平成24年1月の第15回国際サンスクリット学会(インド・デリー)などで口頭発表し、『多田孝文先生古稀記念論文集』へも投稿した(近日刊行予定)。本研究の目的は、インドの古典哲学学派の一つプラバーカラ派が提唱した音声の永遠性論証を、原典写本の校訂と翻訳により明らかにすることであり、本年はその準備段階として、既に入手済みの写本のデジタル化、新写本の調査と蒐集、テキストの校合に焦点を絞った。経費申請段階では、京都大学インド古典学研究室の老朽化したマイクロフィルムリーダーの修理について、コストとの兼ね合いで柔軟に対応する予定としていたが、部品の調達の都合から部分的な修理に留め、リール状のマイクロフィルムを画面上で確認する機能を回復した。また、別のプロジェクトでインド・ケーララ州の写本図書館を調査した際、奇しくも本プロジェクトがターゲットとする『プラカラナ・パンチカー』のマラヤラム文字写本を5本発見したため、その撮影を現在依頼中である。その他、川尻洋平氏より上記テキストのデーヴァナーガリー文字写本(チャンディーガルDAV College所蔵)を提供いただき、それも含めて諸写本の校合作業を開始している。また、上記作品の著者が著した別の哲学注釈文献『リジュ・ヴィマラー』についても、謝金事業として該当箇所のテキストを電子化した。古典インドの正統バラモン系を代表する聖典解釈学派は、バラモン教の聖典ヴェーダの権威を教義の中心に据え、ヴェーダの権威論証との関連から、音声の永遠性という特有の教義を形成した。本研究が主眼としたのは、聖典解釈学派の一派プラバーカラ派による<音声の永遠性論証>の文献実証的解明である。2年間という期間の中で、以下の3点すなわち(a)テキストと写本の電子化(b)写本の校合及び翻訳・訳注の作成(c)新写本の調査、を目標とした。結論としては3点ともおおむね順調に進展した。

昨年度(2011年2月)にインド・ケーララ州の写本図書館の調査において撮影した『プラカラナ・パンチカー』のマラヤラム文字写本など蒐集済の原典写本の中から3本を選び、特に同文献の中で音声の永遠性論証を主題とする第9章について、既刊本と合わせて校合し、同時に内容分析を進めた。その成果の一部は、2011年7月の西日本インド学仏教学会において発表し、また『多田孝文先生古稀記念論文集』に投稿した(近日刊行予定)。また、新写本の調査のために、2012年1月の国際サンスクリット学会の直後に、インド・ラージャスタン州およびグジャラート州の写本図書館を調査した際、当該のプラバーカラ派の原典写本は発見されなかったが、関連の深い仏教・サーンキヤ学派の写本の写真を入手することができた。『プラカラナ・パンチカー』9章の訳注プロジェクトについては、今回は校合に使用しなかった他のマラヤラム文字写本や読解が難しいテルグ文字写本の校合、さらには聖典解釈学派のもう一つの学派、バッタ派の教義との細かな差異の検討が今後の課題として残された。
網膜神経幹細胞におけるBMPアンタゴニストTsukushiの機能解析

私達がクローニングしたTsukushiは、decorinやbiglycanが属するスモールロイシンリッチプロテオグリカンファミリーのメンバーである。アフリカツメガエル胚を用いたmRNA微量注入法、ニワトリ初期胚での移植実験、生化学的解析により、Tsukushiは新しいタイプのBMPアンタゴニストであり、形づくりにおいて重要なコンポーネントのひとつであることを報告している(Ohta et al., Dev.Cell 2004 ; Ohta et al., Development 2006 ; Kuriyama et al., Development 2006)。網膜に置いて、Tsukushiは生物種を越えて成体網膜幹細胞を多く含む毛様体周縁部に発現している。神経網膜幹細胞とは、眼を構成する6つの神経細胞と1つのグリア細胞に分化する「多能性」とその多能性を維持したまま増殖できる「自己複製能」を兼ね備えた細胞と定義でき、適切なフィードバックのもとに分化と自己複製を繰り返しながら、生体内ではその数が一定に保たれている。Wnt2bは、網膜幹細胞を未分化状態で増殖させることが報告されているが、私達はTsukushiがWnt2bによる細胞増殖効果を抑制することを見出している。Wntは細胞外で受容体であるFrizzled、LRP5/6と複合体を形成することにより細胞内へシグナルを伝える。Wnt経路を細胞外で阻害するアンタゴニストは2つに分類され、1つはWntに直接作用してその受容体への結合を妨げる分子群、もう一方は、LRP5/6に結合して複合体の形成を阻害するDkk-1である。私達は、TsukushiがFrizzledに直接結合してWnt2bの機能を間接的に阻害することを明らかにしており、これは細胞外における、全く新しいタイプのWntシグナル伝達経路の阻害機構である。本研究では、私達が単離した新規BMPアンタゴニストTsukushi遺伝子の網膜神経幹細胞における細胞増殖・分化機構の解明を目的とし、ニワトリ胚眼胞に遺伝子を導入する系を主に用いてBMP-Tukushiシグナルの幹細胞における役割を検討した。私達は、Tukushiが様々な動物種を越えて、網膜幹細胞が局在する毛様体辺縁部に発現していることを見出している。また、ニワトリ胚の眼におけるTukushiの発現パターンがWnt2bと全く同じであることに気付き、TukushiとWnt2bの分子間相互作用の検討を行った。ステージ9-10のニワトリ胚眼胞にWnt2bをRCASベクターを用いて導入し、過剰発現させると、網膜前駆細胞は分化することなく増殖を続けることが理研の中川らのグループから報告されている。そこで私達は、Wnt2bと共にTukushiを共発現させ、細胞増殖への影響を調べた。Wnt2bを眼胞に単独で感染させ、1週間培養した場合には、切り出した網膜組織片1個あたりの細胞数はコントロールと比べ約200倍に増えるが、Wnt2b+Tukushiを感染させた場合には、細胞の増殖がコントロールの約2倍しか増加しなかった。また、生化学的解析を行ったところ、TukushiはWnt2bの受容体であるFrizzled8と結合することが明らかになった。以上の結果から、TukushiはWnt2bと競合してFrizzled8に結合することにより、網膜前駆細胞の増殖を制御していることが明らかになった。今後は、TukushiのFrizzledに対する特異性や網膜前駆細胞の分化への影響を調べていく予定である。
TTCP/DCPAリン酸カルシウムセメントによる象牙質のコーティング効果

リン酸四カルシウム(TTCP)とリン酸二カルシウム(DCPA)の等モル混和物であるリン酸カルシウムセメント(CPC)は水との練和によってハイドロキシアパタイト(HA)に転化し硬化するため、象牙細管を封鎖することができる。そこでこのCPCと新規に開発された粉部がα-リン酸三カルシウム(α-TCP)とTTCPが同じ粒子中に均一に分散する均一二相性リン酸カルシウム(BCP)セメントの象牙質封鎖性について走査型電子顕微鏡(SEM)による形態的観察により比較検討を行った。凍結ウシ抜去前歯を解凍後、象牙質が露出するよう耐水研磨紙を用いて#100で面出しを行い次に#360から順に#2000まで研磨した。これをアイソメットを用いて長さ10mm、幅5mm、厚さ1.5mmの象牙質切片を作製し実験試料とした。この試料の象牙質表面にCPCとBCP2種類のリン酸カルシウムを塗布し、2分間放置後蒸留水で十分洗浄した。各試料を疑似体液(pH7.40)に1日または7日間浸漬した。浸漬後、試料をデシケーターで7日間乾燥し、ニッパにて象牙細管に沿って切断して象牙質割断試料とした。この試料表面に白金蒸着を行いFE-SEM観察試料とした。FE-SEM観察の結果からCPC塗布試料では、疑似体液1日浸漬群で象牙質表面に約10μmの厚さを持つリン酸カルシウムによる石灰化層が観察されたが、7日間浸漬群では石灰化層は見られず表層より深さ約10μmの象牙細管内は石灰化物の沈着によって封鎖されていた。一方でBCP塗布試料では1日浸漬群で象牙質表面に12μmの厚さを持つ石灰化層が観察され象牙細管の一部に石灰化物の沈着による閉鎖がみられたが、7日間浸漬群では石灰化層は67μmでほとんどの象牙細は石灰化物の沈着により閉鎖していた。以上の結果からCPCに比べてBCPで象牙細管の封鎖性が高いことが分かった。近年、齲蝕・歯周病に次ぐ第三の歯科疾患と言われるTooth wear(歯の損耗)が注目されているが、その中でもエナメル質の酸蝕や亀裂の発生に伴って象牙質知覚過敏症が高頻度に生じる。そこで本研究は、知覚過敏症を伴う歯への対処として露出した象牙細管の封鎖を目的として、リン酸カルシウムを各種の溶液で練和したものを象牙質表面にコーティングを行い、象牙細管を封鎖することにある。酸性リン酸カルシウム溶液を蒸留水で3.0倍(1:3.0)、3.5倍(1:3.5)および4.0倍(1:4.0)に希釈した溶液を用いてBCP-cementと練和し、硬化時間をGilmore Needle法にて温度37°C、相対湿度50%の条件下で注入可能時間、充填可能時間および硬化時間を測定した。BCP-cement練和物は、溶液中でも極めて良好な形状保持性と流出抵抗性を示した。BCP-cementの硬化時間は、1:3.0で最も早く6.1±0.1分、1:4.0は8.1±0.1分で最も硬化時間が延長した。硬化時間の測定から臨床応用可能な即時硬化性を示すことが明らかとなった。平成27年度における本研究は,実験試料であるTTCP/DCPAリン酸カルシウムを溶液として蒸留水(コントロール),リン酸水素ナトリウム水溶液,フッ化ナトリウム,ケイ酸ナトリウム水溶液の計4種類を用いて,Calcium Phosphate Remineralizing Slarry(以下CPRS)を作製し,硬化時間の測定,pH変化,硬化物のSEM観察および元素組成分析を行い,材料学的特性について検討する予定であった。しかし,当初実験試料に供したTTCP/DCPAリン酸カルシウムと比較して,TTCPとα-TCPが同じ粒子中に均一に分散し,作製が容易で材料的に均一で安定性を示す均一二相性リン酸カルシウムセメント(Biphasic Calcium Phosphate-based Cement:BCP-cement)を比較検討材料として使用する実験計画を追加することになった。このため、BCP-cementの有用性を明らかにするために硬化時間の測定とダイヤメトラル引張り強さの測定を先行して行ったことで実験計画の進捗に遅れを来たした。研究内容:TTCP/DCPAリン酸カルシウムセメント(以下、CPC)をアクリル系充填用レジンに含有させて、象牙質接着性と石灰化誘導能を具備するレジンコーティング材の開発を行った。材料と方法:アクリル系充填用レジンとしてボンドフィルSB(サンメディカル社、以下SB)を用いて、SB粉末にCPCを0(SB-0,コントロール)、20(SB-20)、40(SB-40)、60(SB-60)及び80wt%(SB-80)添加させた粉末を実験試料とした。製造者指示に従って各試料を重合溶液(ボンドフィルSB液材:キャタリスト=3滴:1滴)と練和または筆積み法にて実験試料を作製した。1硬化時間は重合熱のピーク時間(DSC法)により測定した。2曲げ強さは3点曲げ試験により測定した。3象牙質に対する接着強さは、#180まで研磨したウシ抜去象牙質及に対する引張り強さを測定した。さらに4引張り強さ測定後の破断面の走査型電子顕微鏡(SEM)観察から石灰化物形成誘導能の評価を行った。

結果と考察:硬化時間は、SB-0の4.1分に比べSB-20、SB-40で3.84.9分とほぼ同程度であったが、SB-60以上では5.9分以上に延長した。曲げ強さは、SB-0の65.5MPaに比べSB-20で49.7MPaを示しCPC添加率の上昇に伴い低下した。ウシ象牙質に対する接着強さは、SB-0で10.8MPaに比べSB-20で7.7MPaであったが、CPC添加率の上昇に伴い低下しSB-60で6.1MPaとSB-0に比べ43.4%接着強さが低下した。水中浸漬24時間後の引張り接着強さ試料破断面にSEM観察からCPCを添加させた試料でハイドロキシアパタイト様の析出物が観察された。以上の結果から、レジンコーティング材としてアクリルレジンへのCPC添加量は、物性と象牙質接着性を考慮して20wt%程度が適切であると思われる。以下の理由によって実験計画の進捗に遅れを来している。1本実験計画で使用するTCP/DCPAリン酸カルシウムセメントと比較検討する目的で、もう一つの実験材料としてTTCPとα-TCPからなる新規均一二相性リン酸カルシウムセメントと練和溶液の開発を昨年度から取り組んできたが、予定よりも作製に期間を要したこと。2本研究遂行に必要なエフォートが、当初の予定よりも研究以外の教育等他の職務に関わる時間に費やされたため、研究実施のために時間を費やすことができなかったこと。リン酸四カルシウム(TTCP)とリン酸二カルシウム(DCPA)の等モル混和物であるリン酸カルシウムセメント(CPC)をアクリル系充填用レジンに含有させてその機械的物性を評価するため、TTCPとDCPAの粉砕条件と粒度について検討し、このCPCをアクリル系充填用レジンに含有させた試料の1硬化時間、2牛歯象牙質に対する引張接着強さと3ヒト抜去歯象牙質に対する微小引張試験を行った。材料と方法:前年度まで市販CPC粉末(商品名ティースメイトディセンシタイザー、クラレメディカル)を使用してきたが、研究の発展性を考慮して、新たに平均粒径8.0μmのTTCPと凍結粉砕により平均粒径10.0μmに調整したDCPAを作製し、アクリル系充填用レジン(ボンドフィルSB、サンメディカル)に0(対照群)、60および80wt%含有させた試料に対して実験を行った。結果と考察:1発熱ピーク時間(DSC法)測定した硬化時間は、0wt%で3.5分、60wt%で5.0分、80wt%で8.6分と含有量の増加と共に遅延した。操作時間を考慮した場合5分以内であれば臨床使用可能であると思われる。2#180で研磨した牛象牙質に対して各試料を筆積み法でアクリル棒を接着し、24時間水中に浸漬後、引張接着強さを測定した。その結果、0wt%で10.1±3.1MPa、60wt%で10.0±2.3MPa、80wt%で5.0±2.8MPaで60wt%までは対照群と同等の接着性を示したが、80wt%では1/2まで接着性が低下した。3更にヒト抜去象牙質を#180にて研削後アクリルブロックを圧接し、24時間後に厚さ1mmスライスした試料の微小引張接着強さの結果も60wt%までは対照群と同様の接着性を有したが、80wt%の接着強さは1/4まで低下した。以上の結果からCPCを60wt%まで添加しても機械的物性に影響がないことが分かった。12016年10月から学部の教務担当職を拝命し、その職務の遂行や学生教育に多くの時間を割く事となり、研究の実施に必要なエフォートを確保することが出来なかった。2本実験計画では、他研究者と共同開発中であったTTCPとα-TCPからなる新規二相性リン酸カルシウムセメントとその練和液を実験材料として使用することを企画していたが、その材料開発と供給までに想定外の期間を要してしまった。
神経疾患におけるTrk受容体の病的意義解明

近年,神経栄養因子(neurotrophin,NT;NGF,BDNF,NT-3,NT4/5)は、各々に対する特異的なチロシンキナーゼ受容体(TrkA,TrkB,TrkC)および低親和性受容体(LNGFR)を介してその作用を発現することが明らかになってきている。さらに、近年gene targettingや実験的神経障害動物モデルを用いた研究から特にBDNFは運動ニューロンの発育と機能維持に必須なfactorであることが明らかにされつつある。当該年度の研究では、運動ニューロンが選択的に障害される筋萎縮縮性側索硬化症(ALS)に焦点を絞り、患者脊髄に於けるBDNFとその受容体TrkBの発現動態を明らかにしそれがALSの病態形成に如何に関与するかを検討した。このため、ALS患者10例、正常対照7例の脊髄を用い、TrkB蛋白発現量を抗-TrkB抗体(自家製)を用いた免疫沈降(IP)とWestern blotを用い半定量化した。また、発現する細胞を同定するため免疫組織化学的に同抗体を用い検討した。さらに、発現するTrkBの活性化状態を検討するため抗-燐酸化チロシン抗体を用いたWestern blot及びIP-チロシンキナーゼ活性測定を行った。その結果1)患者脊髄では、コントロールに比し明らかに大量の受容体発現をみた。2)しかし、これらup-regulateされた受容体の自己燐酸化はコントロールに比し低下していた。3)IP-チロシンキナーゼ活性測定でも、患者サンプルでは明らかにその活性は低下していた。4)BDNFのmRNAの発現をRT-PCR法により検討したが、患者脊髄でもそのmRNAの発現は確認された。しかし、その発現レベルに患者-コントロール間で明らかな差異を見いだせなかった。以上の事実は、ALS患者脊髄には少なくともBDNF-TrkBの系を介する神経細胞維持機構に何らかの障害があることを示唆しておりALSの病態形成あるいはその進展に深く関与する可能性があることを推定させる。
酸素欠陥・電子移動度と光触媒活性の相関解明による高活性な光触媒の合成

光触媒の高活性化に向けて、これまで微粒子化と形態・露出面の制御、金属カチオンドーピングによる結晶性向上などを行ってきた。本年度はこれまでの研究をもとにコアに結晶性の高いチタン酸カルシウム、シェルに可視光応答性を有するチタン酸カルシウムを配置したコアシェル型粒子を作成し、高活性な可視光応答型光触媒を作成することを目的に研究を行った。可視光応答性を付与するために金属カチオンをドーピングする際に問題となるのが、ドーピングした金属カチオンが励起電子や正孔のトラッピングサイトとしても働いてしまうことである。そこで、結晶性の高いコアを用いることで、内部で励起された電子が反応場である最表面にスムーズに移動することができると考えた。また、シェル部分で励起された電子はバンド構造の関係から内部へ移動することが難しくなることから表面にとどまる確立が高くなりこちらの電子も効率的に利用できるようになると考えた。粒子均一に1mol%の鉄をドーピングしたチタン酸カルシウム微粒子および粒子表面1-3nmの厚さに1mol%の鉄をドーピングしたチタン酸カルシウムシェルを有する微粒子を作成し可視光照射下における光触媒活性を評価した。結果として高活性な可視光応答型光触媒の合成はうまくいかなかったが、得られた粒子を用いることで、表面欠陥・トラッピングサイトの影響を明らかとした。光は粒子に対して数百nm程度侵入すると考えられているが、表面わずか数nmの厚さに存在する欠陥・トラッピングサイトが光触媒活性の大きな低下を招くことを明らかとした。(抄録なし)光触媒の高活性化に向けて、これまで微粒子化と形態・露出面制御を行ってきた。今回の研究ではそれらに加え、金属カチオンドーピングによる結晶性向上、可視光応答性の付与を行うとともに、電子・正孔の移動度と光触媒活性の相関を明らかとすることを目的として、チタン酸カルシウム微粒子に様々な金属カチオンのドーピングと光触媒活性評価を行った。金属カチオンをドーピングすることにより結晶性を高めることは光励起した電子と正孔の再結合サイトとなる欠陥の減少や、電子の移動度の向上につながるため、反応場である触媒表面へのスムーズな電子・正孔の移動が期待でき、励起電子を有効に使えるようになると考えられる。本研究ではそこで得られた知見をもとに最終的には高活性なコアシェル型光触媒を合成する予定であり、本年度は主にSTEP2のチタン酸カルシウムに対するアルミニウムドーピングの影響およびSTEP3のチタン酸カルシウムに対する鉄ドーピングの影響に関する実験を行った。STEP2に関する結果であるが、以前の実験からチタン酸カルシウムにアルミニウム、ガリウム、亜鉛などをドーピングすると光触媒活性が向上することを発見していたので、今回はアルミニウムと亜鉛に関しドープ量の最適化およびキャラクタリゼーションを行った。その結果1mol%のアルミニウムをドープしたチタン酸カルシウムが高い光触媒活性を示すことを見出した。STEP3に関しては鉄のドーピングやそのドープ量制御には成功した、現在可視光活性を評価中である。2年間で4つのSTEPを行う予定である。本年度は予定通り、STEP2の実験であるチタン酸カルシウムへのアルミニウム・亜鉛のドーピングとドープ量の最適化・光触媒活性評価、STEP3の鉄のドーピングを行うことができたことから研究はおおむね順調に進展していると考えられる。STEP2とSTEP3に関し、得られた結果をまとめると同時に最も高い活性を示した粒子を用いて、STEP4のCaTi_(1-x)Al_xO_3/CaTi_(1-y)Fe_yO_3コアシェル型粒子を作成する。2回水熱合成を行い、1回目にコア粒子を作成し、2回目にシェル粒子を作成する。この際、2回目の合成における前駆体の濃度を調節することでシェルの厚さを調節し、可視光応答性を有しつつ、高い光触媒活性を示す粒子を作成する。その後、光触媒活性評価、電子の移動度の評価を行う予定である。(抄録なし)
ペプチドによる神経修飾作用とペプチド開口放出調節の分子生理学的解析

・GnRHニューロンのイオンチャネル活動・細胞内Ca^<2+>濃度のリアルタイム同時測定従来の岡らの研究成果から,環境の変化は神経伝達物質やホルモンという形で神経系・内分泌系の信号を生成することにより終神経GnRH細胞の細胞膜に存在する伝達物質・ホルモン受容体を活性化し,それと共役する細胞内情報伝達機構によって,終神経GnRH細胞の細胞体および脳内に広く分布する神経突起からのGnRH放出量を調節し,これによって,広範囲の神経系の機能を修飾して動物の神経系が環境の変化に柔軟に適応することを可能にする,と考えられる。このような考えを支持するために,まず,GnRH放出をリアルタイムに測定しつつ,神経伝達物質やホルモンなどを作用させたときにGnRH放出がどう変化するかを知る必要がある。また、一般に開口放出が起きるには細胞内Ca^<2+>濃度の上昇が必要だが,ペプチドニューロンにおいては細胞内Ca^<2+>濃度の時空間的変化と,SNARE蛋白質などの開口放出分子装置の働きとの関係が未解決である。そこで,まず脳スライスを用いて単一終神経GnRH細胞からパッチ電極で電気活動記録を行いつつ,電極を通じて細胞内に導入したCalcium Green, fura-2等の蛍光指示薬により細胞内Ca^<2+>濃度を計測するための予備実験を行った。また,同時に,今後平行して行う予定の,GnRHおよびGnRH受容体の単一細胞PCRを用いた解析を行うための予備実験も行った。