hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大学生がキャリア構築を行うための協調学習教材のデザイン

その後、複数地点の未来における働き方を表す文章の空欄(〇〇の箇所)を過去・現在ラウンドで得られた情報などをヒントに想像して回答する活動を行う。「ストーリー構築」ラウンドでは、これまでの結果を踏まえて、各参加者は就職時点、5年後、10年後、20年後にどのように働いていたいかをシートに記入する活動を行う。実践では参加者のキャリア観に揺らぎを与えた上で、変化の激しい時代に対応するためのキャリア観を育むことを目指した。実践の結果、ゲームは楽しいものであり「他者のアイデアを知ること」や「これまで気づかなかった新しい考え方をする」ことなどが可能であり、一定の成果が得られた。昨年度の報告の通り、教材開発は一旦昨年度で完了していたが、実際に大学生を対象とした授業で試験的に実施をした結果、公募のテストプレイとは異なり「やや突飛なアイデア」や「面白い回答」に終始してしまい、狙ったようなディスカッションが行えないことがあった。このため、教材内の質問の精査と、テストを繰り返すことになり、教材開発の最終的な完了が本年度の夏頃までずれ込む結果となった。また期間延長申請に記したとおり、研究者の家庭の事情から研究活動が行えない期間があり、今年度に研究を完了することが出来なかった。雇用形態の多様化・グローバル化の進展に伴う経済的な変動・大学進学者の増加、多様化など問題に対応し、社会の流動性の増加につれて、社会構成主義な新しいキャリア理論である「キャリア構築理論」に位置づく教材開発を進めた。本研究では大学生が自身のキャリアストーリーを他者と創発的に構築する活動を実現するゲーム教材「私の未来の仕事」を開発した。開発した教材「私の未来の仕事」の概要を述べる。ゲームは「過去・現在」、「未来」、「ストーリー構築」の3つのラウンドで構成されている。「過去・現在ラウンド」では、アイスブレイクとお互いの仕事観を知るための質問に対して、他の参加者の答えを予測して回答する活動を行う。未来ラウンドでは、「大学生の頃、一番なりたかった職業は××だった。しかし、私が最初についた職業は勢いでエントリーした○○だった」のような設問を出題する。参加者はまず現在のキャリアについての質問(××の箇所)について一人ずつ回答する。本年度は昨年度の課題であった、一部の参加者が「やや突飛なアイデアや面白い回答に終始してしまい、狙ったようなディスカッションが行えない」という問題に対応するための調整と新たな大学2校での実践を行った。実践の結果では、これまでの結果と同様にゲームは楽しいものであり「他者のアイデアを知ること」や「これまで気づかなかった新しい考え方をする」ことなどが確認され、一定の成果が得られたといえる。しかし、本研究に関する論文は投稿中であり、研究期間内での採録はならなかった。
精子形成遺伝子群の網羅的解析による精子形成メカニズムの解明

ヒト無精子症に関連する遺伝子群を同定し、精子形成メカニズム、特に精子形成時の減数分裂過程の異常を解明することを目的にこれまで研究を重ね多くの遺伝子と無精子症との関連を報告してきた。本年度はクロマチン構造の認識に関与し、細胞周期G1のイニシエターの役割を担い、かつ、ノックアウト雄マウスで無精子症を呈するLRWD1遺伝子に着目し、ヒト無精子症、特にsertoli cell only syndrome (SCOS)患者のLRWD1遺伝子異常に関し検討した。SCOS患者100例、減数分裂停止による無精子症患者(MA)30例および正常精子形成群100例を対象としてLRWD1遺伝子の異常が認められるかどうか検討を行い、以下の結果が得られた。LRWD1のmutation解析を施行したところSCOSおよびMAによる無精子症患者にmutationは認められなかったが、3つのsingle nucleotide polymorphism(SNP1,2,3)を同定した。Genotypeおよびアレルの出現頻度の解析を行ったところ, SCOSによる無精子症患者とコントロール群の間にSNP1とSNP2において有意差が認められ(p<0.05)、LRWD1遺伝子はヒト精子形成に重要な役割を担うことを明らかにした。今後は昨年度同定したHORMAD1遺伝子および本年度同定したLRWD1遺伝子の精子形成に関与するメカニズムを明らかにするために機能解析に取り組むとともに、精子形成に関与する新たな遺伝子群を同定し、機能解析を行う予定である。ヒト無精子症に関連する遺伝子群を同定し、精子形成メカニズム、特に精子形成時の減数分裂過程、sertolicell only syndrome (SCOS)の発症メカニズム解明することを目的に解析を進め、これまLMTK2,PARP2,SPATA17,HORMAD1遺伝子がヒト減数分裂異常による無精子症に関連することを明らかにした。また、SCOSにおいてLRWD1遺伝子多型が関与することも報告した。さらに、SEPTIN12遺伝子に関し減数分裂停止またはSCOSによる無精子症発症との関連を日本人無精子症例を対象として解析した結果、減数分裂停止, SCOSともにSEPTIN12遺伝子の多型が密接に関与する結果が得られた。近年、Plk4(Polo-like Kinase 4)にヘテロにmutationをもつマウスが精巣のサイズが減少し、組織学的にもgerm cellの完全な消失を呈するSCOSによる無精子症を示すことが明らかにされた。体細胞分裂後期の進展に必須であり、細胞分裂課程の中心小体複製機能を有するPlk4遺伝子異常がヒトSCOSの発症にも関与するか否かを解析するため、日本人SCOS患者90名を対象にmutation解析を行った結果、PlK4遺伝子のヘテロ欠失を有する症例があることを見いだした。今後、機能異常が検出されれば、初めてヒト無精子症の一つであるSCOS原因遺伝子の証明に繋がるものと期待される。ヒト無精子症に関連する遺伝子群を同定し、精子形成メカニズム、特に精子形成時の減数分裂過程の異常を解明することを目的にこれまで研究を重ね多くの遺伝子との関連を報告してきた。本年度はノックアウト雄マウスでsynaptonemal complexの形成が阻害され、減数分裂停止による無精子症を呈するHORMAD1遺伝子に着目し、ヒト無精子症におけるHORMAD1遺伝子の役割に関し検討した。減数分裂停止による無精子症患者30例および正常精子形成群80例を対象としてHOMRMAD1遺伝子の異常が認められるかどうか検討を行い、以下の結果が得られた。HORMAD1のmutation解析を施行したところ減数分裂停止による無精子症患者にmutationは認められなかったが、exon 3, 8, 10領域に3つのcoding single nucleotide polymorphism(SNP1,2,3)を同定した(c. 163A>G, c. 501T>G, 918C>T)。Genotypeおよびアレルの出現頻度の解析を行ったところ,減数分裂停止による無精子症患者とコントロール群の間にSNP1とSNP2において有意差が認められ(p<0.05)、HORMAD1遺伝子はヒト精子の減数分裂に関与することを明らかにした。今後はHORMAD1遺伝子の精子形成に関与するメカニズムを明らかにするために機能解析に取り組むとともに、精子形成に関与する新たな遺伝子群を同定し機能解析を行う予定である。減数分裂停止(MA)およびSCOSによる無精子症患者の遺伝子異常に関連する論文を国際雑誌にacceptされた。無精子症患者の遺伝子異常に関連する論文を国際雑誌に掲載された。前年度までに同定したヒト無精子症を引き起こす新規遺伝子群に関して、それらの遺伝子が精子形成にどのように携わっているのか、そのメカニズムを解析する。精子形成に関与するマウスcDNAをヒトcDNAとマウスゲノムのシークエンス配列の相同性を利用して単離する。単離されたマウスcDNAはClontech社のマウスcDNAパネルを用いてPCR法にてその発現パターンを解析する。特異的な発現を示したcDNAはさらに詳細に解析するためin situ hybridization及び免疫染色法を施行する。その後、重要と判断された遺伝子のノックアウトマウスを全て作成し、詳細に解析を行う。発現量に明らかな差を認めるが遺伝子のmutationが認められない場合は、bisulphite処理後、PCR法により遺伝子のメチル化の状態などエピジェネティクな修飾に関しても解析をすすめる。前年度に同定されたヒト無精子症を引き起こす新規遺伝子群に関して、それらの遺伝子が精子形成にどのように携わっているのかそのメカニズムを解析する。マウスのcDNAをヒトcDNAとマウスゲノムのシークエンス配列の相同性を利用して単離する。

単離されたマウスcDNAはClontech社のマウスcDNAパネルを用いてPCR法にてその発現パターンを解析する。精巣特異的な発現を示したcDNAはさらに詳細に解析するためin situ hybridization及び免疫染色法が施行される。その後、重要と判断された遺伝子のノックアウトマウスを全て作成し、詳細に解析を行う。wild type及びノックアウトマウスからそれぞれ精原細胞及び精母細胞を取り出し、double dimension electrophoresisにて異なる蛋白の発現を解析する。wild typeには存在しノックアウトマウスには存在しない蛋白はmass spectrometryにて同定される。蛋白の機能はbinding protein,もしくは他の重要な蛋白を翻訳するもしくは転写するといった形で解析される。同様にその機能が細胞内外に蛋白を輸送するものであるか解析する。また、さらに広く精子形成に関与する遺伝子群を同定するために精巣組織がhyposmermatogenesis,maturation arrestの精巣総組織を持ちいい同様に解析を進める。また、発現量にに明らか差を認めるが遺伝子のmutationが認められない場合は、bisulphite処理後、PCR法により遺伝子のメチル化の状態などエピジェネティクな修飾に関しても解析をすすめる。該当なしマイクロアレイ用試薬、PCR関連試薬、クローニング関連試薬、シークエンス関連試薬、核酸抽出キットコンストラクト作製に関する試薬などに関連し研究費が必要となる。
肝細胞癌に対する遺伝子治療の試み

肝個体発生時における細胞間のコミュニケーションを担うgap結合と、胎児蛋白(AFP)および成人蛋白(ALB)の発現変化を観察し、gap結合形成の細胞分化への関わりについて検討した。ノーザンブロット法によるgap構成蛋白connexin(Cx)32mRNAの発現は、胎生後期から既に見られ、序序に増加し、Cx26mRNAの発現も既に胎生後期に見られ、生直後にピークを認め、一時減少、その後漸増した。胎生後期の肝組織では、肝細胞と造血細胞が混在し、細胞間は粗で、免疫蛍光法によるCx32陽性班は粗大で、Cx26班と同様散見されるのみであった。インサイツハイブリダイゼーションや免疫組織化学法でAFPの発現を観察すると、すべての肝細胞でみられ、ALBの発現は一部の細胞で認めた。生直後Cx32、Cx26陽性班は増加し、電顕的にgap構造を認めた。なおAFPはすべての肝細胞で発現を認めるが、減弱し、ALBの発現はすべての肝細胞に見られた。生後1週目以後には、Cx32陽性班はすべての肝細胞に多数みられ、Cx26班は門脈周囲肝細胞のみに認め、超微形態的に数多くのgap構造が観察された。AFPは中心静脈周囲の一部肝細胞のみに、ALBはすべての細胞に、とりわけ門脈周囲肝細胞に増強して観察された。以上の事から、肝個体発生時のgap結合はAFPの発現がALBにスウィッチされる時期や領域に一致して形成、発達し、肝細胞分化と密接に関与している事が示唆された。このことは、癌細胞にgap構成蛋白Cxを強制発現させれば、AFPの発現がALBにスイッチされ、gap形成は癌の分化誘導に関与し、肝癌細胞にCxの遺伝子を導入・発現させる事は、肝癌の治療に有用と考えられた。肝細胞癌のα-Fetoprptein(AFP)発現の抑制機構を解明することが肝細胞癌の遺伝子治療の応用につながると考えられる。肝個体発生時のAFP発現は生直後より抑制され、albumin(ALB)の発現は促進される事は周知の事実であるが、AFPの発現は細胞のcontact inhibitionの消失とともに抑制されるとの報告がある。そこで今回我々はcell tocell contactに関わる細胞間結合小器官gap junction形成とAFP、ALB発現との関連生について検討した。すなわち胎生後期および生直後のラット肝におけるAFP、ALB、gap junction構成蛋白connexin(Cx)26、32の発現について光顕、電顕免疫組織化学、in situ hybridi-zation法で観察した。胎生後期のAFP発現はすべての肝細胞で、ALBは一部の細胞で見られた。Cx32は一部肝細胞膜上に点状に見られ、Cx26は見られなかった。生直後のAFP発現は依然すべての肝細胞に見られるが、減弱し、ALBはすべての細胞に発現が見られた。Cx32はすべての細胞膜上に不規則に点状として、Cx26は一部細胞膜上に散見された。生後1週目にはAFP発現は消失し、ALBはすべての肝細胞で発現され、Cx32はすべての肝細胞膜上に規則的な大きさの点状に、Cx26は門脈周囲肝細胞のみに観察された。以上のごとくAFPからALB発現へのスイッチの時期はgap junction形成と一致し、AFP発現の抑制はgap junction形成と深く関わる。Northern blot法でみたgap構成蛋白connexin (Cx) 32mRNAの発現は胎生後期から既にみられ、序序に増加し、Cx26 mRNAは胎生後期既に見られ、生直後にピークを認め、一端減弱するもその後序序に増多した。

胎生後期の肝組織は、肝細胞と造血細胞が混在し、肝細胞間は粗で、免疫蛍光法で見たCx32陽性班は粗大で、Cx26班とも散見されるのみであった。同期のAFPの発現をin situ hybridizationや免疫組織化学方で観察すると、すべての肝細胞で見られ、ALBの発現は一部細胞で認めた。生直後Cx32、Cx26陽性班は増加し、超微形態的にgap構造を認めた。AFPはすべての肝細胞で発現するが、減弱し、ALBの発現はすべての肝細胞に見られた。生後1週目以後にはCx32陽性班はすべての肝細胞に、Cx26は門脈周囲肝細胞のみに認め、超微形態的に数多くgap構造物が観察された。AFPは中心静脈周囲の一部肝細胞に、ALBはすべての肝細胞に見られ、門脈周囲に増強して観察された。以上の事からgap形成はAFPからALBに発現変化する時期や領域に見られ、gap結合形成は肝細胞分化と密接に関連し、gap形成は癌細胞の分化誘導に重要な役割を果たすと考えられ、肝癌細胞でgap構成蛋白を強制発現させれば、肝癌の治療につながる事が示唆された。
運動は本当に認知機能を向上させるのか？

身体運動はアセチルコリンなどの神経修飾物質を介して認知機能を改善する可能性が指摘されている。そこで本研究は、視覚認知機能に対する脳内AChの効果およびその作用機序を解明することを目的として、ラットを用いた行動実験・電気生理実験・神経薬理実験を実施した。脳内アセチルコリン濃度を薬理学的に増加させると、視覚刺激検出課題(認知行動課題)により評価される刺激検出能は改善し、逆に減少させると課題に関わる長期記憶の想起障害により課題遂行そのものが困難になった。アセチルコリンは、一次視覚野ニューロンの視覚応答を応答ゲイン調節と呼ばれる様式により促通性および抑制性に修飾し、視覚情報処理を最適化した。神経修飾物質であるアセチルコリン(ACh)が視覚認知機能に及ぼす影響をニューロンレベルで調べるために、ラット視覚皮質領野ニューロンの視覚応答に対する反応修飾効果を検討した。その結果、AChはムスカリン性ACh受容体を介して視覚刺激入力強度ー反応強度の比率(ゲイン)を変化させる「反応ゲイン調節」を行うこと(PLOS ONE 2013)、また、その変化の様式(促通性・抑制性)は視覚皮質の6層構造内のニューロンの位置によってバイアスがあること(Scientific Reports 2013)が明らかになった。しかし、この反応ゲイン調節が実際に視知覚にどのような影響を及ぼすのかは不明である。この点を検証するために、覚醒ラットを用いて視覚刺激検出能を測定するための新たなシステムの構築に着手しこれを完成させた。このシステムにより、動物は短期間で視覚刺激検出課題を習得でき、また、刺激検出限界能を高い分解能で計測することが可能となった。このシステムを用いてラットの視覚検出能に及ぼすAChの効果を検討した。ACh分解酵素の阻害薬である塩酸ドネペジルをラットに腹腔内投与し、視覚刺激検出能を測定した結果、検出課題の難易度に依存してコントラスト感度が改善することを見出した(Behav. Brain Res. 2013)。ヒトのレビー小体型認知症の臨床治験から中枢性のACh欠乏が視覚認知障害の原因となる可能性が指摘されおり、それらと合わせ、本研究の結果から、私たちの正常な視覚認知機能の発現にAchが必須であることが示唆される。H25年度、ラットの視覚刺激検出能をグレーティング刺激のコントラスト感度として行動学的に計測する実験システムを開発し、これを用いてアセチルコリン(ACh)分解酵素の阻害薬である塩酸ドネペジルの腹腔内投与の効果を検討したところ、検出課題の難易度が高く視覚刺激が検出し難い条件ほどコントラスト感度を改善させることを見出した(Behavioural Brain Research, 2013)。これは、AChの脳内濃度がただ単に視覚刺激検出能に影響するだけでなく、見にくいモノを見る際にこそ影響が顕著に表れるという刺激文脈依存的効果であることを定量的に証明した重要な研究となった。しかし、覚醒動物を用いた行動学的な視覚刺激検出能計測の実施には、ラットによる視覚刺激検出課題そのものの学習が不可欠であり、通常数週間の訓練を必要とすることから、研究遂行上のボトルネックとなっていた。そこで、視覚刺激や報酬の与え方などに工夫を凝らした新たな実験プロトコルを確立し、効率よく1週間以内でラットに課題を学習させることが可能になった(Physiological Reports, 2014)。そこで次に、視覚刺激検出課題遂行中に分泌されるAChの機能的意義を調べるためにムスカリン受容体の拮抗薬を腹腔内投与したところ、ラットはまったく課題を行わなくなること、また、時間とともに拮抗薬の効果が弱まるにつれて、課題の訓練で学んだ手順どおりに記憶が想起され行動するようになること、最終的には通常通りの課題遂行が可能になることが明らかになった(Frontiers in Aging Neuroscience, 2014)。これらの結果は、通常レベルで分泌されるAChがムスカリン性受容体の活性化を通して、認知的課題についての記憶の正常な想起に関与していることが分かった。動物の脳が行う情報処理は、生理状態や行動文脈などに応じて動的に修飾・調節され、状況に合うよう最適化される。この動的ダイナミクスの神経基盤として状況依存的に分泌される種々の神経修飾物質による神経活動修飾効果が関与すると考えられている。平成25-26年度に自由行動下のラットで実施した二肢強制選択法による縞刺激の検出課題の結果から、課題遂行中のラットの脳内のアセチルコリンは、刺激の検出感度(コントラスト感度)調節とともに、課題遂行に関わる認知的・非認知的記憶の想起に関与することが明らかになり、神経修飾物質による視覚認知機能改善の可能性が示唆された。そこで本年度は、運動強度依存的に分泌量が増加するノルアドレナリンおよび周期的運動時に分泌されるセロトニンの視覚認知機能に及ぼす影響を、先述の縞刺激検出課題を用いて検討した。ノルアドレナリンα受容体またはβ受容体を薬理的にブロックすると、β受容体選択的にコントラスト感度が低下することから、課題遂行中に脳内に分泌されるノルアドレナリンは、α受容体ではなく、β受容体を介して刺激の検出感度を上昇させていることが明らかになった。また、選択的セロトニン再取り込み阻害薬などにより脳内のセロトニンを上昇させると、コントラスト感度が上昇することから、セロトニンもノルアドレナリンと同様に刺激検出感度の調節に関与することが明らかになった。

ノルアドレナリンおよびセロトニンの効果はいずれも視覚刺激の空間周波数に依存性を示し、ラットにとって最も刺激検出感度の高い空間周波数で顕著に観察されることから、空間周波数に高い選択性を示すニューロンが多く存在する一次視覚領野などが、その作用点になっている可能性が示唆された。身体運動はアセチルコリンなどの神経修飾物質を介して認知機能を改善する可能性が指摘されている。そこで本研究は、視覚認知機能に対する脳内AChの効果およびその作用機序を解明することを目的として、ラットを用いた行動実験・電気生理実験・神経薬理実験を実施した。脳内アセチルコリン濃度を薬理学的に増加させると、視覚刺激検出課題(認知行動課題)により評価される刺激検出能は改善し、逆に減少させると課題に関わる長期記憶の想起障害により課題遂行そのものが困難になった。アセチルコリンは、一次視覚野ニューロンの視覚応答を応答ゲイン調節と呼ばれる様式により促通性および抑制性に修飾し、視覚情報処理を最適化した。平成26年度の目標は、ラット視覚認知機能に及ぼす中枢性神経修飾物質の同定とその神経機序解明である。これまでの研究から、アセチルコリン(ACh)が視覚刺激検出能を上昇させるだけでなく、視覚認知における記憶の想起にも不可欠であることを明らかにして、その結果をFrontiers in Aging Neuroscience (2014)に発表することができた。そのため、本実験計画は全て順調に進行していると言える。27年度が最終年度であるため、記入しない。認知行動科学平成25・26年度に確立した視覚機能計測システムを基礎としてこれに修正を加えることで、新たな視覚記憶・認知計測システムの開発を目指す。そして、それらの実験システムを活用して、本研究の「前向きな関わり仮説」を検証することが最終年度の目標である。平成25年度の目標は、ラット視覚認知機能の基礎的データの取得であり、そのためには視覚刺激検出課題を実施するための実験システム(行動実験装置、トレーニングプロトコル、計測プロトコル)の確立が必要不可欠であった。予定通り、視覚刺激検出課題にもとづくコントラスト感度計測システムを確立し、実際にラットのコントラスト感度を計測して、その結果をBehav. Brain Res (2013)に発表することができた。本年度は、実験システムの構築および予備実験の段階で終了したため、実質支出額が予定支出額より少なかった。認知症患者における認知障害は、記憶機能の障害に起因するところが大きい。この記憶機能を評価するための実験システムの構築が平成26年度の目標である。平成25年度に確立した実験システムを基礎としてこれに修正を加えることで、新たな視覚記憶・認知計測システムの開発を目指す。昨年度構築した実験システムおよび予備実験データをもとにして、本実験を実施する。多数のラットを使った薬理・行動実験を予定していたが、これを実施する前に検証すべき課題が見つかったため、その検証実験を優先して行ったことにより予定額に至らなかった。昨年度予定の薬理・行動実験を実施する。
高等菌類が保有する植物・動物性多糖のホスホリラーゼ依存型糖代謝機構の解明

高等菌類であるキノコは,地球上の生態系における炭素循環システムの維持に大きく貢献しており,植物性・動物性多糖の代謝機能に優れた微生物種の一つである。キノコはこれら多糖を効率的に分解・資化するための多様な糖関連酵素を保有していることが知られているものの,その細胞内代謝に関わる酵素についてはあまり解析が進められていない。そこで本研究では,キノコが保有する植物性・動物性多糖の細胞内代謝に関与する酵素群、特に効率的なエネルギー消費を特徴とする加リン酸分解酵素(ホスホリラーゼ)依存型新規代謝機構を明らかにすることを目的にしている。研究初年度に引き続き,申請者がキノコの菌糸体細胞内成分より見出した,植物性・動物性多糖の分解産物として得られうるオリゴ糖の細胞内分解に寄与する酵素群の生産条件、精製条件を検討するとともに、タンパク質の部分構造解析と関連する酵素遺伝子のクローニングに着手した。精製した酵素タンパク質から得られる部分アミノ酸配列情報と酵素の基質特異性もしくは糖関連酵素(CAZy)データベースより属すると考えられた糖加水分解酵素ファミリーや糖転移酵素ファミリーからアミノ酸配列の相同性を元にプライマーを設計した。解析を進めているキノコ種より塩化ベンジル法によりゲノムDNAを抽出し、設計したプライマーとともにPCRを行い酵素遺伝子をコードする塩基配列の取得を行っている。また同様のキノコ種についてはmRNAを取得し、逆転写酵素によりcDNA合成を行うとともに酵素遺伝子をコードするcDNAのクローニングを目指している。マルトオリゴ糖やキチンオリゴ糖の分解に関与する酵素については当初の計画通り進行し酵素的諸性質の評価と酵素の一次構造の解析が進行中であり、内部アミノ酸情報の備蓄が進んでいるが、関連する遺伝子の特定やcDNAの取得には至っていない。また、一部の加リン酸分解酵素はキノコ中での生産性が低く安定しないためにその解析が困難な状況となっている。そこで現在は見出された酵素活性と類似した活性を保有する糖関連酵素ファミリー中で保存されたアミノ酸配列情報を元に酵素遺伝子の探索を行っている。最終年度の研究計画に従い,キノコからmRNAを抽出し逆転写酵素により,関連する酵素遺伝子をコードするcDNAの取得と発現系の構築を目指す。大腸菌での発現が困難であった場合、キノコ中で組換え酵素の生産系を構築することも考えている。本研究は,キノコが保有する効率的なエネルギー消費を特徴とする加リン酸分解酵素(ホスホリラーゼ)依存型新規代謝機構を明らかにすることを目的にしている。研究初年度は,申請者がキノコの菌糸体細胞内成分より見出した,植物性・動物性多糖の分解産物であるマルトオリゴ糖,イソマルトオリゴ糖,セロオリゴ糖,キシロオリゴ糖,キチンオリゴ糖の細胞内分解に寄与する酵素群の生産条件(誘導に関与する基質や培地、培養条件など)を調べるとともに,各種カラムクロマトグラフィーを用いた酵素の精製とプロテインシークエンサーやMALDI-TOF-MSを用いたタンパク質の部分構造解析に着手した。研究当初の問題点として,上述したオリゴ糖の代謝に関連する酵素の生産性が安定しないことがあった。そこで培養法や添加する培地(酵素の生産誘導に関与すると考えられるオリゴ糖やリン酸塩など)を検討した結果,マルトオリゴ糖とキチンオリゴ糖の細胞内分解に寄与する酵素の生産性を向上させることが出来た。さらに,関連する酵素タンパク質を硫安分画,疎水性相互作用カラム,陰イオン交換カラムに供することによりSDS-PAGE上でほぼ単一のバンドまで精製できた。現在プロテインシークエンサーを用いたN末端アミノ酸配列の解析やMALDI-TOF-MSを用いた内部アミノ酸配列の解析を進行中である。マルトオリゴ糖やキチンオリゴ糖の分解に関与する酵素の性状評価と一次構造解析は当初の計画通り進行している。キノコの大量培養を行い,得られた酵素の特性と酵素の一次構造の解析を引き続き進行する。生産性が低く現状では解析が困難な一部の酵素については,引き続き培養条件を精査する予定である。

マルトオリゴ糖やキチンオリゴ糖の分解に関与する酵素については当初の計画通り進行し酵素的諸性質の評価と酵素の一次構造の解析が進行中であり、内部アミノ酸情報の備蓄が進んでいるが、関連する遺伝子の特定やcDNAの取得には至っていない。また、一部の加リン酸分解酵素はキノコ中での生産性が低く安定しないためにその解析が困難な状況となっている。そこで現在は見出された酵素活性と類似した活性を保有する糖関連酵素ファミリー中で保存されたアミノ酸配列情報を元に酵素遺伝子の探索を行っている。次年度の研究計画に従い,キノコからmRNAを抽出し逆転写酵素により,cDNAライブラリーを取得する。酵素の一次構造を十分に解析できなかった場合は,トランスクリプトーム解析によりmRNAのシーケンシングとマッピングを計画している。酵素遺伝子を取得し,大腸菌や酵母などを宿主とした組換え酵素の生産系を構築する。最終年度の研究計画に従い,キノコからmRNAを抽出し逆転写酵素により,関連する酵素遺伝子をコードするcDNAの取得と発現系の構築を目指す。大腸菌での発現が困難であった場合、キノコ中で組換え酵素の生産系を構築することも考えている。タンパク質の一次構造解析に使用するMALDI-TOF-MSの使用料として,一部残額を残した。翌年度分として請求した助成金と合わせて,引き続きタンパク質の一次構造解析を行うとともにmRNAのシークエンス解析(外注の予定)に使用していきたい。
肺扁平上皮癌・小細胞癌の革新的進展制御法の確立： 細胞膜スフィンゴ脂質からの攻略

肺癌(非小細胞性及び小細胞性)の進展・転移における癌細胞ならびに浸潤先進部の反応性線維芽細胞の細胞膜におけるスフィンゴ脂質動態の変容の関与に関して研究を行い、以下の成績が得られた。1.前回申請の関連申請課題である肺腺癌におけるsphingosin kinase-1(SK-1)の発現と腺癌のドライバー遺伝子であるepidermalgrowthfactor receptor (EGFR)遺伝子変異との関連を肺腺癌54症例を用い検討した。腫瘍胞巣辺縁部におけるSK-1の発現はEGFR変異陽性例と比較し、EGFR陰性例で有意に亢進していた。一方、肺腺癌腫瘍胞巣中央部におけるSK-1の発現は、EGFR変異陰性例と比べ、陽性例で有意に増強していた。これらの結果は予想と反していたが、腺癌腫瘍胞巣では肺胞上皮置換性増殖lepidic growthを伴うことが多いこと、lepidic growth成分を含む腺癌は発生学的にEGFR変異の頻度が高いことが知られていること、さらに、今回の関連課題である前回の研究で明らかになったようにlepidic growthを呈する腺癌細胞は浸潤性とは関係しない内因性のSK-1発現を示すことが今回の結果に寄与した可能性が推測された。2.肺扁平上皮癌と腺癌におけるSK-1の発現をwestern blot法で解析した。腺癌と比べ扁平上皮癌で有意にSK-1の発現が亢進していることが、定量的に示された。3.肺扁平上皮癌におけるSK-1の発現と浸潤形態、epithelial mesenchymal transition (EMR)および増殖マーカーとの関連を免疫組織学的に検討した。膨張性発育部(肺胞内置換性を含む)と比較し、浸潤部ではSK-1とEMTマーカーの発現亢進を認めた。SK-1の発現は増殖活性との関連は見なかった。非小細胞性肺癌外科摘出標本を用いた免疫組織学的検討ならびにWestern blot法によるSK-1を始めとする標的分子の半定量ならびに定量解析は順調に進んでいるが、計画していた小細胞癌での検討のための外科摘出標本が、肺小細胞癌外科手術症例が極めて少ないことから十分得られていない。In vitroでの検証実験に関しては、実験条件の設定段階にとどまり、未だ有意な研究成績の獲得には至っていない。肺癌(非小細胞性及び小細胞性)の進展・転移における癌細胞ならびに浸潤先進部の反応性線維芽細胞の細胞膜におけるスフィンゴ脂質動態の変容の関与を明らかにするために以下の研究を進める。2.In vitroでの検証実験を行う。具体的には、1)Sphingomyelin産生・細胞膜分布の変化による細胞膜上での浸潤・転移関連分子群の再分配,セカンドシグナル活性化・集積の関係;2)増殖因子刺激によるsphingosine kinase (SK)1活性によるsphingosine-1-phosphate (S1P)産生を介したERMの活性化とlamellipodia形成の関係;3)SK1系の活性化とがん幹細胞マーカー陽性細胞の関係の解析を行う。肺癌(非小細胞性及び小細胞性)の進展・転移における癌細胞ならびに浸潤先進部の反応性線維芽

細胞の細胞膜におけるスフィンゴ脂質動態の変容の関与を明らかにするために以下の研究を進める。2.In vitroでの検証実験を行う。具体的には、1)Sphingomyelin産生・細胞膜分布の変化による細胞膜上での浸潤・転移関連分子群の再分配,セカンドシグナル活性化・集積の関係;2)増殖因子刺激によるsphingosine kinase (SK)1活性によるsphingosine-1-phosphate (S1P)産生を介したERMの活性化とlamellipodia形成の関係;3)SK1系の活性化とがん幹細胞マーカー陽性細胞の関係の解析を行う。
電離放射線損傷により誘導される損傷記憶と遅発性組み換えの制御機構の解析

本研究課題は、電離放射線によるゲノム損傷の影響が損傷の修復完了後も被ばく細胞の子孫クローンに波及しつづけ、約10世代にわたって相同組み換え頻度が上昇したままになる「遅発性組み換え変異」の分子機構の解明を目標としている。平成22年度は、遅発性組み換え関連因子である相同組み換えタンパク質Rad52/Rad22の相互作用因子を同定し、それらに対する強制発現実験を通じてRad22の活性を直接あるいは間接的に調節する因子の検索を試みた。Rad22精製時に共沈してくるRNA種の同定に関しては、構成成分が非常に複雑で質量分析による同定が難航した。次世代シークエンサーを用いた網羅的な同定は可能と考えられるが、その後の候補因子をスクリーニングするプロセスに必要な時間に鑑み、タンパク質因子の研究に集中するよう方針を変更した。γ線照射の前後と照射後約6世代後の細胞からRad22とともに精製される相互作用タンパク質に大きな差は観察されなかった。そこで、Rad22との安定な相互作用が観察された10種の因子をRad22、Rti1とともに強制発現ベクターにクローニングし、おのおのの因子が引き起こす細胞の形態変化、相同組み換え頻度の変化、Rad22フォーカス形成率の変化を観察した。強制発現されたタンパク質がRad22を直接あるいは間接的に活性化すれば、細胞の伸長、組換え頻度ならびにフォーカス形成率の上昇が、抑制すれば逆の現象が起こるはずであり、実際に、表現型が予測と合致するRvb2とBag1が見出された。Rvb2の哺乳類ホモログTIP49はRad51活性化の上流で機能するという報告があることから、Rvb2が新規のRad22活性化因子である可能性は非常に高い。また、相同組み換えの抑制機構に関してはほとんど報告がないため、Rad22抑制因子と考えられるBag1の機能は非常に新規性が高く、今後の研究の広がりが期待される。
磁場強度が異なるMR装置での血管撮像の測定精度の研究

3Tという強い磁場強度を持つMR装置が臨床に用いられる様になり、MR血管撮像の画質が大きく変化した。本研究は、それにより動脈瘤及び狭窄性病変の描出能がどのように変化したかを比較検討した。それと同時に、高磁場における撮像条件の最適化を行った。高い磁場により増加したSNRを、マトリックス数を増加させることによる高分解化に利用する事で、評価を向上させる事ができる。また、最適化した撮像条件において視覚評価及び定量評価両面において、画質が向上している事が確認出来た。3Tの磁場強度を持つMRI装置が臨床に使用されるようになり画質が大きく変化している事が報告されている。それによってMR Angiographyによる血管描出能がどの様に変化したか、また、最適な撮像条件は1.5Tと比較して差異があるかを把握することは重要である。今回の研究は、昨年研究助成を受けた若手研究(スタートアップ)に引き続き行っているものであり、本年度は、特に3DTOFMRAでの頭部動脈瘤の描出能の変化をファントムを用いて比較検討した。それぞれの磁場強度で最適な撮像パラメータを検討し、磁場強度による比較を行った。今回、15mmの大きさの異なる動脈瘤の評価を行った。撮像パラメータとしては、マトリックス数および撮像時間を中心として検討したが、1.5Tでは、256×256マトリックス以下の評価が高く、それ以上にすると評価が下がったのに対し、3Tでは逆に、256×256での評価は1.5Tと差が少なかったが、それ以上のマトリックス数に設定する事により評価が高まった。動脈瘤のサイズとしては、1mmの動脈瘤は両磁場強度とも描出できなかったが、2mm3mmの小さい動脈瘤で特に磁場強度による差が大きく、3Tでマトリックス数を増やし高分解能撮像を行う事により、より描出能を高くすることができた。撮像時間も3Tではパラレルイメージングを併用し4分程度で十分な描出能を確保できた。また、高磁揚化によりサセプタビリティーアーチファクトの増加で治療用のプラチナCoilによる画質の劣化が考えられるが、TEを、1.5Tで通常使用しているOut-of-phaseである6.5msec程度を、3TでのOut-of-phaseである3.3msec以下に短縮し、高分解能撮像することにより、アーチファクトを軽減し、1.5Tより残存動脈瘤の描出能を向上させる事ができた。次年度は、狭窄ファントムを用いた躯幹部四肢領域のMRAの評価を行う。それによってMR Angiography(MRA)による血管描出能がどの様に変化したか、また、最適な撮像条件は1.5Tと比較して差異があるかを把握することは重要である。昨年度は、特に3DTOFMRAでの頭部動脈瘤の描出能の変化をファントムを用いて比較検討し、それぞれの磁場強度で最適な撮像パラメータを検討し、磁場強度による比較を行った。本年度は、躯幹部のMRAについての検討を主に行った。現在躯幹部のMRAに使用されているシークエンスは、造影剤を使った方法が主であるが、近年NSF等の副作用が問題となり非造影のMRAが注目をあび、NATIVEやFBI等と呼ばれるシークエンスでの撮像も盛んに行われるようになった。今回はこの造影、非造影の両シークエンスにおける3Tと1.5Tの血管狭窄の描出能の比較を行った。評価方法としては、6mm径の血管に10%から90%の狭窄率を持つ血管ファントムを用い、撮像パラメータとしてはマトリックスを変えて評価した。評価としては、視覚的に描出能を5段階に評価する視覚的評価と、画像の狭窄率を測定し、実際のファントムの狭窄率との違いを比較する定量的評価の二通りで行った。詳細は、今後論文で発表するが、造影、非造影MRAともに、視覚的評価では、狭窄率によっても評価に違いが見られたが、3Tの評価が有意差を持って高かった。また、定量的な評価では、3Tと1.5Tでの差が見られなかった。造影MRAと非造影MRAの比較では、視覚、定量評価共に有意差を持って造影MRAが高評価であった。また、マトリックスサイズの違いによる評価の差は、若干あったが昨年行った頭部MRAでの3DTOFの評価のような顕著な差は見られなかった。
鋳鉄の拡散接合に関する研究

球状黒鉛鋳鉄の接合に拡散接合法を適用した際の接合部の衝撃特性、接合部靱性に及ぼす黒鉛粒数の影響並びに接合部のねじり特性について検討した。得られた結果は次の通りである。1.球状黒鉛鋳鉄拡散接合部の衝撃特性(1)球状黒鉛鋳鉄同志を直接接合した接合部靱性は、非常に低かった。しかし、ニッケル箔をインサ-ト材に用いて接合すると、接合部靱性は大きく改善され、50μm厚のニッケル箔を用いるときは母材の靱性と同等のレベルまで改善された。(2)球状黒鉛鋳鉄と軟鋼とを直接、900°C以上で接合するとJIS規格値を満足する高い吸収エネルギ-が得られた。2.接合部靱性に及ぼす黒鉛粒数の影響(1)直接接合材の接合部靱性は、黒鉛粒数が少ない場合には接合温度の上昇にともなって若干劣化する。しかし、黒鉛粒数が250個/mm^2以上になるときは、接合温度の上昇によってその接合部の吸収エネルギ-は次第に上昇した。(2)これは黒鉛粒数が多くなるとフェライト化速度が速くなり、主に接合界面よりも球状黒鉛鋳鉄内部の球状黒鉛粒に炭素が集積し、接合部の靱性が改善されたものと考えられる。3.接合部のねじり特性(1)直接接合材をフェライト化焼鈍したときの疲労寿命には、大きなバラツキが生じS-N曲線を描くことができなかった。これは接合界面に黒鉛が析り出したためである。(2)10μm厚のニッケル箔をインサ-ト金属に用いて接合すると、疲労寿命のバラツキは非常に小さくなり、母材強度が410及び560MPaのいずれの強度レベルの場合にもS-N曲線を求めることができた。(3)10μm厚のニッケル箔をインサ-ト金属に用いた接合材のS-N曲線は、球状黒鉛鋳鉄の強度レベルによって大きな変化は認められず、また、疲労限度も強度レベルにあまり依存せず、160170MPaであった。本年度はフェライト基地球状黒鉛鋳鉄FCD37同志を拡散接合し、その接合部の切欠靱性について検討した。接合実験は10^<-2>Pa台の真空容器内において11x11x40lのFCD37の端面同志を突合せてセットし、接合温度を820、900及び950°Cの3水準に変化させて行った。接合はインサート金属を用いない場合と10、20、50又は100μmの厚さのNi箔を用いて行う場合の2通りについて行った。接合部靱性の評価はUノッチシャルピー衝撃試験を0°Cにて行い、吸収エネルギを求めた。得られた結果を要約すると次の通りである。なお、衝撃試験を行う前に、予め試験片にはフェライト化焼〓が施してある。1.直接接合材の吸収エネルギはいずれの接合温度においても、JIS規格(>12.7J)の約半分と非常に小さかった。これは接合界面に黒鉛が多量に折出し、切欠効果及び接合面積が減少するためである。2.10μm厚Ni箔を用いて接合したときの靱性は直接接合材に比較して大きく改善され、820及び900°Cで接合を行うと、JIS規格値以上の吸収エネルギが得られた。

しかしながら、950°Cで接合した場合にはその靱性は、却って劣化することがわかった。これは直接接合の場合と同様に黒鉛の折出現象と密接に関係している。3.Ni箔の厚さを50μmと厚くすると、その接合部靱性はさらに改善されて、ほぼ母材並みのレベルになった。これは主に、衝撃試験した際のクラックがNi箔の厚さが厚くなるほど母材側にそれるためである。4.FCD37と軟鋼との接合部靱性は接合温度の上昇に併って直線的に上昇し、900°C以上で接合すればJIS規格値を溝足した。5.この接合をNi箔をインサート材に用いて接合したときの靱性は、Ni箔厚が1050μmのときFCD37と同等の結果が得られた。前年度は球状黒鉛鋳鉄の拡散接合部の衝撃特性について検討した。本年度は球状黒鉛鋳鉄の接合部靱性に及ぼす黒鉛粒数の影響と接合部のねじり特性について検討した。得られた結果は次の通りである。1.接合部靱性に及ぼす黒鉛粒数の影響(1)直接接合材の接合部靱性は、黒鉛粒数が少ない場合には接合温度の上昇にともなって若干劣化する。しかし、黒鉛粒数が250個/mm^2以上になるときは、接合温度の上昇によってその接合部の吸収エネルギ-は次第に上昇した。(2)これは黒鉛粒数が多くなるとフェライト化速度が速くなり、主に接合界面よりも球状黒鉛鋳鉄内部の球状黒鉛粒に炭素が集積し、接合部の靱性が改善されたものと考えられる。(3)ニッケル箔をインサ-ト金属に用いて接合すると、接合部靱性は改善され、特に、50μm厚のニッケル箔を使用するときは母材と同等の吸収エネルギ-が得られた。これはいずれの黒鉛粒数においても認められた。2.接合部のねじり特性(1)直接接合材をフェライト化焼鈍したときの疲労寿命には、大きなバラツキが生じS-N曲線を描くことができなかった。これはフェライト化焼鈍を行なった際に接合境界に微小な黒鉛が析出し、これが疲労寿命を低下させると同時に寿命のバラツキの原因にもなったと考えられる。(2)10μm厚のニッケル箔をインサ-ト金属に用いて接合すると、疲労寿命のバラツキは非常に小さくなり、母材強度が410及び560MPaのいずれの強度レベルの場合にもS-N曲線を求めることができた。(3)10μm厚のニッケル箔をインサ-ト金属に用いた接合材のS-N曲線は、球状黒鉛鋳鉄の強度レベルによって大きな変化は認められなかった。また、疲労限度も強度レベルにあまり依存せず、160170MPaであった。
サル・シカの生息保護地域の森林保全と改良に関する研究

1.シカのための森林保全と森林の改良千葉県の房総丘陵の鳥獣保護区では、ニホンジカの生息密度が高くなり、採食によって林床植物が破壊され、裸地化しているところが多い。野生動物に相応しい生息環境に改良するために、シカ防護柵を設置した結果、ニホンジカによる食害が皆無となったことから、伐採地における萌芽更新が促進され、林地の保全が達成された。(1)東京大学千葉演習林東ノ沢の場合柵設置16カ月後で、柵内の最大樹高はアカガシ113cmで、柵外のそれは、アカガシ54cmであった。柵外では、不嗜好のシロダモを除いて、全ての個体が枯れるのか樹高が低くなった。柵内の出現種数と嗜好性植物の現存量はそれぞれ23種、118g/m^2、柵外のそれらは6種、1g/m^2であった。(2)東京大学千葉演習林前沢の場合柵設置10カ月後で、柵で囲わない場所(柵外)と比べて単位面積あたりの木本の平均個体数、木本の種数、最大樹高、植被率、シカの可食部の草本を含めた現存量は、それぞれ8倍、3倍、4倍、15倍、28倍となった。優占種のアカメガシワに限れば、柵内の最大樹高は54cm、1m^2あたりの個体数は13本、柵外のそれは、それぞれ3cm、0.6本であった。2.サルのための生息環境の改良千葉県君津市の高宕山天然記念物指定地域のスギ・ヒノキ皆伐地において、天然更新による広葉樹林への林種転換のために、刈りだしの回数の異なる施業を行った。いずれの回数においても、最大樹高に差は見られなく、目的樹種の密度は、7,000本/ha以上であった。皆伐後4,5年のうちに、刈だしを行うことによって、人工植栽と比べて人出のかからない、多様度の高い広葉樹林を造ることができた。1.サルのための森林保全と改良10月と11月に千葉県富津市の国有林のスギ・ヒノキ人工林伐採跡地に、A.無手入れ区、B.6月に目的樹種を刈だす区、C.6月、10月に目的樹種を刈だす区を3処理、3回繰り返しで試験区を設定した。伐採1年度に芽生えたサルの嗜好種(ヤマグワ、ネムノキ、イヌビワ、ヤマザクラなど)はhaあたり5000本であり、手入れの仕方次第で野生動物の収容力の高い林が造成できることが予測された。2.シカのための森林保全と改良(1)8月末に、東京大学千葉演習林郷台作業所管内の広葉樹天然生林の伐採跡地にA.無手入れ区、B.広葉樹刈だし区、C.無手入れ・シカ防護柵設置区、D.広葉樹刈だし・シカ防護柵設置区を2回繰り返しで試験区を設定した。広葉樹の萌芽が少ないので、刈だしは未だ実行していない。11月末の調査では、シカ防護柵内ではアカガシ、ウラジロガシ、モチノキなどの萌芽が伸長成長をなしているが、柵外ではシカの採食によってほとんど伸びていないことが分かった。7月末に東京大学秩父習林大血川作業所管内のヒノキの若い造林地に、同様の試験区を設定した。9月末に植生調査をしたところ、柵外はムラサキシキブ、リョウブ、ススキなどに食痕が目立ったが、柵内ではシカによる採食の痕がなかった。

(2)12月中旬に、千葉県君津市にある東京大学千葉演習林札郷作業所管内の34年生の広葉樹天然生林(林床の相対照度4%)伐採して、若い萌芽林を造成のための試験区を造った。この試験区では森林の内外の環境条件(光、地温、気温、土壌水分量)をデータロガーを使って測定を行っている。1.サルのための森林保全と改良(1)10月に、前年度に設置した千葉県富津市の国有林のスギ・ヒノキ人工林伐採跡地の目的樹種を刈出す区の3区画において刈出しを行い、樹高を測定した。伐採2年後までに芽生えたサルの嗜好種(ヤマザクラ、エノキ、クスノキ、リュウキュウマメガキなど)はhaあたり2900本あり、樹高成長は1m/年も成長するものもあり、刈出しによって野生動物の収容力の高い林が造成できることが予測された。2.シカのための森林保全と改良(1)12月に、東京大学千葉演習林郷台作業所管内の広葉樹天然生林の伐採跡地にA.シカ防護柵設置区、B.シカ防護柵外区において、植生調査を行った。シカ防護柵内ではアカガシ、ウラジロガシ、モチノキなどの萌芽の伸長成長が著しい一方、柵外ではシカの採食によってほとんど伸びていなかった。(2)昨年度、千葉県君津市にある東京大学千葉演習林札郷作業所管内の34年生の広葉樹天然生林(林床の相対照度4%)を伐採して、若い萌芽林造成のためにシカ防護柵で囲んだ試験区を造った。1年後の柵内の植生はカラスザンショウ、アカメガシワ、ヌルデ、イイギリなどの先駆性樹種が多かった。柵内の被度、最大植物高、現存量はそれぞれ27.1±2.5%、50±4.6cm、143±23g/m^2、柵外はそれぞれ0.6±0.15%、11±1.6cm、7±2.5g/m^2で、大きな差があった。森林の内外の環境条件(日射量、地温、気温)をデータロガーを使って継続測定を行った。伐採後の裸地では地表温が8月では40°Cを越える日が多く、日較差が20°Cを越える日が多かったが、林内の地表温は最高で33°Cで日較差は9°C以下であった。
中国西部における地域開発と環境保全-黄土高原の生態建設モデル作り

本研究計画では、中国西部で生態系悪化が進行している黄土高原地域における持続可能な発展のあり方を、とりわけ2001年来、この地域で進んでいる西部大開発、小城鎮建設計画との関連で明らかにすることを目的としている。そのため、先ず西部開発政策の概要、西部経済の特徴、生態的脆弱性とそれに対する開発政策のインパクトを検討している。第二に、小城鎮建設など都市化の進展状況の評価、そこでの環境問題を具体的に調べ、小城鎮、都市化のさまざまなパターンとそこに現れている環境問題を明らかにした。第三に、西部開発政策の柱の一である資源開発政策の概況、その環境に及ぼした影響を分析した。第四に、同じく西部開発政策で、環境保全策として重視されている退耕還林政策を陝西省、山西省、貴州省の農村地域で調べ、退耕還林政策が成功する条件、また、必ずしも成功につながらない場合を分析し、8年間の補助金給付期間内に、農村がたんに出稼ぎに頼らず自活できる条件として、市場へのアクセス、付加価値形成につながる産業化、住民の環境保全努力への参加等を挙げた。第五に、貧困地域の自立、内発的発展の条件としては根本に教育普及が重要だが、現在の西部開発政策では、インフラ作り、資源開発、都市開発、退耕還林政策が中心に据えられ、必ずしも草の根レベルでの教育保健等、人間開発、社会開発のソフト面での努力が遅れていることを明らかにした。以上、2年間の調査研究を経て、黄土高原地域の生態建設にとって重要なことは、たんに上からの土木工事にとどまらず、地元イニシアチブをとり入れ、住民の環境保全への参加を促進すること、そのために教育保健等の人間開発、社会開発面にさらに努力が払われなければならないことを、見出した。本研究課題については、2002年5月に第1回研究会を開催し、研究の方法論、調査日程、各人の分担課題を討議し、確定した。6月-7月の期間に資料収集に努め、かつ本研究の現地パートナーである西安交通大学西部発展研究センターに事前調査を依頼した。現地調査は、2002年8月下旬の2週間こ、陜西省感陽市永寿県、楡林市米脂県、甘粛省定西地区を中心に行った。この現地調査は、西部発展研究センターと合同の形で遂行した。研究調査の成果の一部を、研究代表者西川は、同年9月8-9日に北京大学で開催された早稲田大学と北京大学の国際共同シンポジウム「西部開発政策と循環型経済の形成」において、「黄土高原における生態建設と扶貧開発」と題して、報告した。8月調査の成果を、12月16日に第2回研究会をワークショップの形で、早稲田大学で開催し、各人が報告を発表、討論した。このワークショップに提出された報告は次のとおりである。西川潤「黄土高原地域の持続可能な発展へ向けて-村鎮地域開発と国際協力-」(A4版15ページ、1万5000語)宇野和夫「陜西省北部の経済と重点小城鎮建設」(A4版17ページ、1万7000語)大島一二「陜西省山間地域農村における地域開発戦略-環境保護政策と農村開発」(A4版12ページ、1万2000語)また、研究協力者から次の2つの報告が提出された。蔡艶芝「村鎮区域の開発及び環境保全-中国西部黄土高原地域の生態建設」(A4版13ページ、6500語)谷村光浩「中国農村地域の貧困問題-扶貧政策の分析」(A4版11ページ、9000語+図表)

谷村からは、現地調査(永寿県及び米脂県)で収集した資料の分析レジュメも提出された。12月ワークショップでの討議に基き、各人が中間報告書に手を入れ、1月下旬までに提出した。これらの報告書について、2月初旬に第3回研究会を開催し、2004年度各人の研究分担課題を確認した。2004年度においては、西川、宇野は8月15-30日の期間に陜西省丹鳳県、西安市、楡林市米脂県、靖辺市、定辺市、寧夏回族自治区銀川市、固原市を訪問し、人民政府、環境保護局、貧困対策室、石油・天然ガス工場等の責任者にインタビューするかたわら、資料収集に努めた。これは、西部開発政策に伴う、都市開発、小城鎮発展、退耕還林政策、貧困軽減政策、資源開発、工業化・インフラ開発、教育発展、環境問題、汚染防除政策等の実地をしらべることを目的としたものである。また、大島は11月4-10日の期間に山西省大原市、中陽県を訪問し、人民政府、農村等で資料収集を行うと共に、関係者インタビューを遂行した。これは、農村開発、労働力移動、退耕還林政策の遂行状況を調査し、先年調査した陜西省の事例と比較研究することを目的とする。2年間の研究調査を、中国側への委託研究も含めて、「総説」「西部経済の特徴と脆弱性」「都市建設の課題」「退耕還林と農村発展」「資源開発と環境問題」「中小都市と汚染、環境保全」「貧困地域の生態建設-貴州省と延安市の事例から」「貧困地域発展の方向-固原市山間村から見る」「市場経済化と教育開発」「黄土高原地域の持続可能な発展と国際協力の課題」の10点にまとめて出版すべく、現在編集中である。以上