hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
慢性炎症を背景とした大腸発癌を規定するマイクロＲＮＡの同定

非腫瘍原性のヒト大腸腺腫細胞株(FPCK-1-1)をヌードマウスに誘発した慢性炎症下に存在させると大腸癌へと進展し、その発癌責任分子としてfascin-1 (fascin)を見いだした。本研究は、fascinの発現機構をマイクロRNAの観点から解き明かすことを目的とした。大腸癌組織から培養樹立したFPCKpP1-4細胞株と、親細胞のFPCK-1-1間のマイクロRNA発現をマイクロアレイによって解析した結果、炎症と関連するマイクロRNA-XがFPCKpP1-4細胞で亢進していることを明らかにした。マイクロRNA-Xに対して特異的な活性阻害に働くtough decoy (TuD) RNAをFPCKpP1-4細胞に導入すると、fascin発現ならびに造腫瘍性と相関する3次元培養環境下での細胞増殖塊の形成能(スフェア形成能)が低下した。このマイクロRNA-X機能阻害株にプロテアソーム阻害剤を添加すると、減少したfascinタンパク量がFPCKpP1-4細胞の非機能阻害株と同等にまで回復したことから、マイクロRNA-Xはfascinタンパクのプロテアソームによる分解を抑制することを初めて発見した。次に、マイクロRNA-Xの発現亢進機構について取り組んだ。マイクロRNA-Xを発現誘導することが知られている炎症性サイトカインのtumor necrosis factor-α(TNF-α)およびinterleukin-1β(IL-1β)に着目し、リコンビナントTNF-αあるいはIL-1βをFPCK-1-1細胞に添加したところ、いずれのサイトカインを添加した場合においてもマイクロRNA-Xの発現が亢進することを検証した。以上の成果より、fascin発現の亢進は炎症性サイトカインにより誘導されたマイクロRNA-Xがfascinタンパクの分解を抑制することで安定して維持されることを明らかにした。28年度が最終年度であるため、記入しない。慢性炎症を背景としたヒト大腸腺腫細胞の癌化機構として、アクチン収束タンパク質であるfascin分子の発現亢進とアノイキス抵抗性の獲得を見出してきた。しかしながら、fascin発現の制御機構は未だに不明である。我々の研究室では、大腸腺腫細胞とこれを慢性炎症環境下に置くことで癌化させた細胞株を所有している。従って、炎症により癌化する前後の細胞株のマイクロRNA発現パターンを比較することが可能となる。ヒト大腸腺腫細胞株(FPCK-1-1)と、これが慢性炎症下で癌化した癌細胞株(FPCKpP1-4)のマイクロRNA発現パターンの違いをマイクロRNAアレイにて解析した。その結果、FPCK-1-1細胞に対しFPCKpP1-4細胞において4種類のマイクロRNAが2倍以上に発現増加していた。これら4種のマイクロRNA発現と炎症発癌との関連を明らかにするために、造腫瘍性と相関するスフェア形成能を検討した。その結果、FPCKpP1-4細胞に各マイクロRNAの機能を阻害するTough Decoy RNAを遺伝子導入すると、4つの候補マイクロRNAの中のひとつ(マイクロRNA-X)では有意にスフェア形成が抑制された。次に、炎症による癌化を規定する分子として報告済み(Proteomics 14: 1031-1041, 2014)のfascin発現への当該マイクロRNAの関与について解析した。その結果、マイクロRNA-Xを機能阻害することでFPCKpP1-4細胞のfascin発現が有意に低下することを見出した。以上より、fascinの発現制御を担う新たな分子としてマイクロRNA-Xを見出した。FPCK-1-1細胞に対しFPCKpP1-4細胞で2倍以上に発現量が増加している4種類のマイクロRNAの炎症発癌への関与を明らかにするために、各マイクロRNAミミックをFPCK-1-1細胞に遺伝子導入し、造腫瘍性と相関するスフェア形成能の影響を検討した。その結果、FPCK-1-1細胞に各マイクロRNAを発現増強させてもスフェア形成の亢進は認められなかった。一方、FPCKpP1-4細胞にTough Decoy RNAを遺伝子導入することでマイクロRNA-Xの機能を阻害させると有意にスフェア形成が低下した。我々は既に慢性炎症組織に由来する一酸化窒素が大腸腺腫細胞にアノイキス抵抗性を獲得させて発癌に至ることを証明している(Exp Cell Res 319: 2835-2844, 2013)。一酸化窒素のマイクロRNA-X発現への関与を検討した。その結果、FPCK-1-1細胞に一酸化窒素のドナー試薬を添加してもマイクロRNA-Xの発現は増加しなかった。次に、炎症による癌化を規定する分子として報告している(Proteomics 14: 1031-1041, 2014)fascin発現をマイクロRNAが制御しているか否かをタンパク質発現(ウエスタンブロット法)あるいはRNA発現(リアルタイムPCR法)を用いて比較した。その結果、マイクロRNA-Xの機能を阻害させるとFPCKpP1-4細胞のfascin発現が有意に減少した。以上の結果より、fascinの発現制御を担う新規の分子として、マイクロRNA-Xを見出した。また、マイクロRNA-X発現は一酸化窒素によるものとは独立した制御を受けることを明らかにした。

大腸癌組織から培養樹立したFPCKpP1-4細胞株と、親細胞のFPCK-1-1間のマイクロRNA発現をマイクロアレイによって解析した結果、炎症と関連するマイクロRNA-XがFPCKpP1-4細胞で亢進していることを明らかにした。マイクロRNA-Xに対して特異的な活性阻害に働くtough decoy (TuD) RNAをFPCKpP1-4細胞に導入すると、fascin発現ならびに造腫瘍性と相関する3次元培養環境下での細胞増殖塊の形成能(スフェア形成能)が低下した。このマイクロRNA-X機能阻害株にプロテアソーム阻害剤を添加すると、減少したfascinタンパク量がFPCKpP1-4細胞の非機能阻害株と同等にまで回復したことから、マイクロRNA-Xはfascinタンパクのプロテアソームによる分解を抑制することを初めて発見した。次に、マイクロRNA-Xの発現亢進機構について取り組んだ。マイクロRNA-Xを発現誘導することが知られている炎症性サイトカインのtumor necrosis factor-α(TNF-α)およびinterleukin-1β(IL-1β)に着目し、リコンビナントTNF-αあるいはIL-1βをFPCK-1-1細胞に添加したところ、いずれのサイトカインを添加した場合においてもマイクロRNA-Xの発現が亢進することを検証した。以上の成果より、fascin発現の亢進は炎症性サイトカインにより誘導されたマイクロRNA-Xがfascinタンパクの分解を抑制することで安定して維持されることを明らかにした。マイクロRNA-Xが造腫瘍性の獲得に関わるか否かについて、機能阻害ベクターを導入した大腸癌細胞をヌードマウスに移植して現在観察中である。加えて、マイクロRNA-Xの発現異常が炎症性腸疾患を背景とした大腸発癌等の過程に普遍的に見られるか否かについても今後検討する予定である。そのために炎症性腸疾患(クローン病および潰瘍性大腸炎)を母地として発生した大腸癌の組織標本を用いる。マイクロダイセクション法を用いて癌部(癌細胞のみ)と非癌部(各癌組織近傍の非腫瘍組織)のそれぞれを回収する。その後に、癌部と非癌部における当該分子の発現を比較する。以上の実験によって、大腸の炎症発癌を規定するマイクロRNA発現異常を決定する予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。
アフリカツメガエルの単離肺組織を用いた生理活性ペプチドの肺吸収性の評価

本研究で得られた知見を以下に挙げる。1、雌性アフリカツメガエルから摘出した肺組織をUssing chamberに装着し、donor側からreceptor側へのインスリンの透過量を経時的に測定した。その結果、添加物を併用しないコントロールでのインスリンの累積透過率は0.06%となり、見かけの透過係数(Papp)は5.6×10^<-7>cm/secとなった。次に、インスリンの透過性に及ぼす各種吸収促進剤およびタンパク分解酵素阻害剤(以下、酵素阻害剤)の効果についても検討した。吸収促進剤にはLaurylmaltoside(LM)、Sodium glycocholate(NaGC)、Sodium caprate(NaCap)を、酵素阻害剤にはBacitracin、Soybean trypsineinhibitor(STI)をそれぞれ10mM(STIは10mg/mL)の濃度で用いた。LMを併用した場合、累積透過率およびPappはコントロールの約10倍、8倍と有意な増大を示した。しかし、他の吸収促進剤や酵素阻害剤を併用した場合はコントロールに比べて有意な値の増大は認められなかった。本実験では比較的高濃度のインスリン溶液を用いており、酵素による分解の寄与が小さいため酵素阻害剤併用時に有意な効果が認められなかったものと考えられる。2、吸収促進剤または酵素阻害剤の膜への作用を検討するため、これら添加剤の膜抵抗の変化について検討を行った。添加剤による膜抵抗の減少率は透過促進作用の強さとほぼ同じ順となり、吸収促進剤や酵素阻害剤の作用は膜抵抗の減少と何らかの関係があることが示唆された。以上の結果から、アフリカツメガエル肺組織を用いた本研究は薬物の肺上皮細胞における透過性や添加物の効果を検討する系として有用な手段であることが示唆された。
肝性脳症における時計遺伝子の発現動態に関する検討

1.肝組織のおける時計遺伝子発現と発現に影響を与える因子の解析健常成人について末梢血単核球のmClock、mPer2発現の有無を検討し、いずれも発現を認めた。肝硬変患者では末梢血中の単核球数が少なく十分なRNA回収が難しい例が多く、そのためmPer2発現の再現性に問題が生じた。そこで、全血中のRNA回収方法に切り替え検討中である。1.肝組織における時計遺伝子発現の確認マウスおよびラットそれぞれ45匹をネンブタール麻酔下に開腹し、肝組織を摘出。肝組織を-80度Cにて凍結保存した。時計遺伝子の発現には日内変動を認めるため、基礎的検討としてAM9:00,PM3:00,PM9:00,AM3:00に肝組織を採取した。結果として、肝組織におけるClock mRNA、Period2 mRNAの発現を確認した。さらに日内変動の観察によりClock mRNAの発現は各時間で変わらなかったが、Period2mRNAの発現は夜間(PM9:00,AM3:00)に強く発現し、日中(AM9:00,PM3:00)には発現減弱をみた。これらの成績は従来の報告の結果に矛盾しない結果であった。なお、脳組織についても測定予定であったが、未だ技術的な問題があり本年度は検討していない。次年度に脳組織での検討を可能とし、肝硬変モデルを作成して測定する予定である。2.マウス初代肝細胞における時計遺伝子mRNAの経時的な発現動態の確認マウス肝よりコラゲナーゼ灌流により肝細胞を分離し培養24時間後より6時間毎に48時間までClock mRNA、Period2 mRNAの発現を検討したが、Clock mRNA、Period2 mRNAともその増減は確認出来なかった。実験条件(光刺激)を変えてさらに検討する必要がある。さらに、Clock mRNA、Period2 mRNAの発現に及ぼすEGFの影響を検討したところ、EGF添加後経時的に発現低下を認めた。健常成人数名について末梢血リンパ球のClock mRNA、Period2 mRNA発現の有無を検討し、その発現を認めた。次年度に肝硬変患者について検討し、血液アンモニア、肝機能、脳症の有無などとの関連を検討する予定である。
悪性リンパ腫におけるヒストン脱アセチル化酵素が制御するmiRNAの網羅的探索

悪性リンパ腫におけるHDAC阻害剤により発現回復するmicroRNAの探索から、HDAC阻害剤によりCCR4が発現低下することを見出していた。当該年度においては、より臨床的な観点から、T細胞リンパ腫患者におけるHDAC阻害剤(ロミデプシン、ボリノスタット)治療を受けた症例におけるCCR4の発現変化の推移を経時的に測定した。これまでのin vitroでの検討と同様に、HDAC阻害剤により速やかにCCR4の発現が低下することを確認し、さらにHDAC阻害剤投与終了後にも、1-2週の比較的早い段階でCCR4の発言が回復することを見出した。これら解析の中で、T細胞リンパ腫におけるもう一つの重要な治療標的抗原であるCD30の発現が低下することも同時に見出し、現在追加の解析を行っている。悪性リンパ腫におけるHDAC阻害剤の重要な標的蛋白としてCCR4を同定した。すでに臨床応用されている抗体薬であるモガムリズマブは、このCCR4タンパクを標的としており、悪性リンパ腫の治療戦略上重要な知見と考えられる。さらに、追加の知見として、T細胞リンパ腫におけるもう一つの重要な治療標的であるCD30の発現が変化することも見出しつつある。実際にHDAC阻害剤が投与された臨床検体を用いて、CCR4タンパクの変動が確認できており、今後はCCR4発現の変化と治療効果との関連、CCR4抗体であるモガムリズマブの治療効果への影響を検討する。さらに、併せて見出したCD30の発現変化についても解析を追加する予定である。悪性リンパ腫におけるHDAC阻害剤により発現回復するmicroRNAの探索から、その標的蛋白と考えられるケモカインレセプターの発現制御を見出した。中でも悪性リンパ腫において、治療標的としても重要なケモカインレセプターCCR4がHDAC阻害剤により発現低下することを見出した。HDAC阻害剤によるCCR4の発現低下は、mRNAレベルの低下から確認でき、フローサイトメトリーにてその蛋白発現の低下を確認した。成人T細胞白血病/リンパ腫の他、皮膚T細胞リンパ腫、NK/T細胞リンパ腫など種々のT細胞リンパ腫細胞株において広く認められた。さらに、CCR4の発現低下により、実際にこれらの細胞の遊走能が低下することをマイグレーションアッセイにて確認した。CCR4はT細胞リンパ腫における分子標的薬、モガムリズマブの標的蛋白として知られている。実際に、HDAC阻害剤により前処理したT細胞リンパ腫細胞株において、モガムリズマブによるADCC(抗体依存性細胞障害)活性を測定すると、HDAC阻害剤処理によりこのADCC活性が低下すること、すなわちモガムリズマブの治療効果を損なう可能性があることを見出した。今後T細胞リンパ腫の新規治療としても広く用いられるであろうHDAC阻害剤によりCCR4が発現低下することは、T細胞リンパ腫の治療戦略上非常に重要な知見と思われる。本知見は第59回米国血液学会において、口演発表にて報告した。実際にHDAC阻害剤が投与された臨床検体を用いて、CCR4タンパクの変動を確認していく。また、T細胞リンパ腫の臨床検体を用いて、細胞株で見出した結果が、臨床検体でも同様に生じるかを確認する。さらに、臨床検体でのmicroRNA解析から、HDAC阻害剤がいかなるmicroRNAを介してCCR4発現制御に関与しているか、その詳細な機序を明らかにしていく。今年度はmiRNAの網羅的解析を施行する回数が少なかったため、次年度使用額が発生した。来年度は、患者検体における発現解析に使用する予定である、また、現在準備中の英語論文、国内外の学会参加費も支出予定である。来年度は、患者検体における発現解析に引き続き使用する予定である、また、現在準備中の英語論文、国内外の学会参加費も支出予定である。
地域在住の軽度認知機能低下者の追跡と痴呆進展に対する予防的介入―香北町縦断研究―

香北町在住高齢者に対し、検診による軽度認知機能低下者(MCI)のスクリーニングを行い、痴呆進展の予防のための予防的介入として、グループワークプログラムを実施し、その効果を3年間、引き続き検討した。2001年よりの軽度認知機能低下対象者35人、2002年より24人、2003年より20人を対象として加え、予防的介入としてのプログラムとしては、音楽療法、芸術療法、運動療法、園芸療法、現実見当識訓練、回想法、作業療法、子供との交流会を組み合わせて実施し、包括的機能評価を行った。認知機能におけるKohs立方体テストの改善、QOLの改善、うつスケールの改善を認めた。また、香北町地域在住高齢者の生活機能とうつ状態が、将来の認知機能低下と痴呆進展への関連要因となるかについて、5年間の縦断研究を施行した。1998年に65歳以上の香北町地域在住高齢者1658人に対し、痴呆性老人の日常生活自立度判定基準(厚生省)により、正常、ランクI、II、III、IV、Mに分類した。縦断的には、2つの比例ハザードモデルにて解析した。初年に正常(正常またはランクI)と判定され、2年以上継続追跡しえた者、1463人(1646人)のうち、5年間で154人(118人)がランクI(ランクII)以上に悪化した。高次生活機能低下とうつ状態は、将来の認知機能低下や痴呆に関連することが明らかになった。香北町在住高齢者に対し、検診による軽度認知機能低下者のスクリーニングを行い、痴呆進展の予防のための予防的介入として、グループワークプログラムを実施し、その効果を検討した。軽度認知機能低下者35人を対象とし、2グループに分けて、前期と後期で各4ヶ月で終了し、その後交代して施行し、クロスオーバー法にて解析した。前期グループは、5月より8月まで、19人(男5、女14人)、79.5歳、出席率:平均83%、後期グループは、9月より12月まで、16人(男9、女7人)、79.4歳出席率:平均62%であった。予防的介入としてのプログラムとしては、音楽療法、芸術療法、運動療法、園芸療法、現実見当識訓練、回想法、'作業療法、子供との交流会を組み合わせて実施し、包括的機能評価を行った。認知機能では、記憶力に対しては効果を認めなかったが、構成能力をみるKohs立方体テストにおいて、参加前後で有意に改善し、不参加前後で有意に悪化した(repeated measure AN0VAによるgroup time interaction : p<0.05)。QOL(life satisfacyion index)において、参加前後で有意に改善し、不参加前後で変化がなかった。(repeated measureANOVA.: p<0.05)ADL、うつ尺度に対しては、効果を認めなかった。以上より、軽度認知機能低下者に対して、認知機能とQOLにおいて、グループワークの効果を認めた。今後さらに人数を増やして縦断的に検討していく予定である。香北町在住高齢者に対し、検診による軽度認知機能低下者(MCI)のスクリーニングを行い、痴呆進展の予防のための予防的介入として、グループワークプログラムを実施し、その効果を2年目も引き続き検討した。1年目の軽度認知機能低下対象者35人は2年目も引き続き参加した。2年目も新たに24人を対象として加え、予防的介入としてのプログラムとしては、音楽療法、芸術療法、運動療法、園芸療法、現実見当識訓練、回想法、作業療法、子供との交流会を組み合わせて実施し、包括的機能評価を行った。文化教室継続参加者30人と不参加者180人の1年間の効果を比較検討すると、認知機能では、長谷川式スケールと実行機能検査において、参加者が有意に改善、不参加者は変化がなかった。(repeated measureANOVAによるgroup time interaction : p<0.05)アンケート検査での主観的QOL(生活満足度)において参加者が改善、不参加者(698人)は低下した(repeated measure ANOVAによるgroup time interaction : p<0.05)。

前年度の効果に引き続き、住民レベルでの比較においても、グループワークプログラムの認知機能とQOLに対する効果を認めた。今後さらに人数を増やして縦断的に検討していくとともに、うつ状態の有無と認知機能低下との関連や教室参加の効果の違いについてもくわしく検討していく予定である。また、痴呆進展の予防効果の検討も含めて3年間の縦断的検討を継続していく予定である。香北町在住高齢者に対し、検診による軽度認知機能低下者(MCI)のスクリーニングを行い、痴呆進展の予防のための予防的介入として、グループワークプログラムを実施し、その効果を3年目も引き続き検討した。2001年よりの軽度認知機能低下対象者35人、2002年より24人、2003年より20人を対象として加え、予防的介入としてのプログラムとしては、音楽療法、芸術療法、運動療法、園芸療法、現実見当識訓練、回想法、作業療法、子供との交流会を組み合わせて実施し、包括的機能評価を行った。認知機能におけるKohs立方体テストの改善、QOLの改善、うつスケールの改善を認めた。また、香北町地域在住高齢者の生活機能とうつ状態が、将来の認知機能低下と痴呆進展への関連要因となるかについて、5年間の縦断研究を施行した。1998年に65歳以上の香北町地域在住高齢者1658人に対し、痴呆性老人の日常生活自立度判定基準(厚生省)により、正常、ランクI、II、III、IV、Mに分類した。縦断的には、2つの比例ハザードモデルにて解析した。初年に正常(正常またはランク1)と判定され、2年以上継続追跡しえた者、1463人(1646人)のうち、5年間で154人(118人)がランクI(ランクII)以上に悪化した。高次生活機能低下とうつ状態は、将来の認知機能低下や痴呆に関連することがわかった。
イヌ腫瘍関連エキソソームとｍｉｃｒｏＲＮＡ解析によるスマート診断・治療戦略の確立

本研究の一つ目の目標は腫瘍特異的エクソソームを確認することである.腫瘍特異的エクソソームが同定されれば,含有smallRNAの解析により,本申請研究のゴールであるスマートな診断・治療戦略が確立できる.研究開始2年目の平成30年度は平成29年度に抽出したエクソソームのウエスタンブロットによるエクソソーム同定分子のたんぱく質発現も確認でき、質の高いエクソソーム抽出が確認できた.腫瘍株とイヌの血液中のエクソソーム分画の分子の大きさの確認をNanoCheckerで行いサンプルによる特徴を確認した.正常なイヌの血液、腫瘍罹患イヌの血液、メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出したエクソソーム表面マーカーのスクリーニングとして、糖鎖分子の網羅的スクリーニングを洗いシステムで行えた.さらに,エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析にイルミナ社のHi-Seqシーケンサで行った.平成29年度は培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子のプロファイルを確認したが、サンプルの数を倍増した.次に研究では腫瘍サンプルでスクリーニングし発見できた新規のsmall RNA(特にマイクロRNAを中心)の新規腫瘍関連分子として位置づけて解析を行い,腫瘍発生・転移メカニズムを解析するものである.平成30年度はエクソソームに含有されるsmall non-coding RNAを次世代シーケンサで網羅的に解析した.特にメラノーマ腫瘤事態とメラノーマの細胞株での解析を行えた.研究計画の目的であるエクソソームの抽出と表面の糖鎖蛋白の発現をスクリーニングできた.抽出は正常なイヌの血液,メラノーマとメラノーマの細胞株の上清から抽出した.また,培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子を次世代シーケンスで解析し,複数の特異的発現候補を同定出来た.ターゲットとするマイクロRNAのエクソソームへの遺伝子導入は行えていないが,細胞株への導入には成功している.エクソソームの表面マーカーのスクリーニングがほぼ終了して、メラノーマ特に転移株に特徴的なパターンの解析を行う.また,初年度と同様に含有small RNAのスクリーニング解析は順調に進んでおり,今後はそのスクリーニングの結果からを各ターゲットとなるsmall RNA分子のリアルタイムPCR等にて行う.さらに,細胞株で行っている実験により発見できたマーカー分子と含有small RNA分子を臨床例で確認する.本研究の一つ目の目標は腫瘍特異的エクソソームを確認することである.腫瘍特異的エクソソームが同定されれば,含有smallRNAの解析により,本申請研究のゴールであるスマートな診断・治療戦略が確立できる.研究計画の初年度である平成29年度は当初の目的であるエクソソームの抽出方法を検討した.その結果,安定して抽出でき,抽出分子の大きさの解析でもエクソソーム分画の抽出を確認できた.抽出は正常なイヌの血液、腫瘍罹患イヌの血液、メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出した。次に,エクソソーム表面マーカーのスクリーニングの条件を調整検討した.その結果,抽出エクソソームの表面発現マーカーの一次スクリーニングは完了した.今後、スクリーニングした結果を再度,解析予定である.さらに,エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析にイルミナ社のHi-Seqシーケンサで行った.今回は培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子のプロファイルを確認することができた.次年度にかけて詳細プロファイル解析を行う。次に研究では細胞株で発見できた新規のsmall RNA(特にマイクロRNAを中心)の新規腫瘍関連分子として位置づけて解析を行い,腫瘍発生・転移メカニズムを解析する.平成29年度はエクソソームに含有される複数のマイクロRNAの発現をリアルタイムPCRで確認できた.特に確認できたメラノーマサンプル間での発現の変化を確認した.イヌの腫瘍サンプル,メラノーマ腫瘍細胞株,細胞株上清のエクソソームの比較で,含有マイクロRNAの比率に変化があることを確認し,エクソソームへの選択的なマイクロRNAの濃縮が確認された.研究計画の初年度の目的であるエクソソームの抽出を行えた.抽出は正常なイヌの血液,腫瘍罹患イヌの血液,メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出した.エクソソーム表面マーカーのスクリーニングを行えた.抽出エクソソームの表面発現マーカーの一次スクリーニングは完了した.翌年解析予定.エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析を行った.培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子を次世代シーケンスでシーケンスを読みとった.次年度にかけて詳細プロファイル解析を行う.ターゲットとするマイクロRNAの遺伝子導入は行えていない.現在,試薬など検討中.本研究の一つ目の目標は腫瘍特異的エクソソームを確認することである.腫瘍特異的エクソソームが同定されれば,含有smallRNAの解析により,本申請研究のゴールであるスマートな診断・治療戦略が確立できる.研究開始2年目の平成30年度は平成29年度に抽出したエクソソームのウエスタンブロットによるエクソソーム同定分子のたんぱく質発現も確認でき、質の高いエクソソーム抽出が確認できた.腫瘍株とイヌの血液中のエクソソーム分画の分子の大きさの確認をNanoCheckerで行いサンプルによる特徴を確認した.正常なイヌの血液、腫瘍罹患イヌの血液、メラノーマと肝細胞癌の細胞株の上清から抽出したエクソソーム表面マーカーのスクリーニングとして、糖鎖分子の網羅的スクリーニングを洗いシステムで行えた.さらに,エクソソーム含有small RNAの次世代シーケンス解析にイルミナ社のHi-Seqシーケンサで行った.

平成29年度は培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子のプロファイルを確認したが、サンプルの数を倍増した.次に研究では腫瘍サンプルでスクリーニングし発見できた新規のsmall RNA(特にマイクロRNAを中心)の新規腫瘍関連分子として位置づけて解析を行い,腫瘍発生・転移メカニズムを解析するものである.平成30年度はエクソソームに含有されるsmall non-coding RNAを次世代シーケンサで網羅的に解析した.特にメラノーマ腫瘤事態とメラノーマの細胞株での解析を行えた.研究計画の目的であるエクソソームの抽出と表面の糖鎖蛋白の発現をスクリーニングできた.抽出は正常なイヌの血液,メラノーマとメラノーマの細胞株の上清から抽出した.また,培養細胞上清から抽出したエクソソームの含有small RNA分子を次世代シーケンスで解析し,複数の特異的発現候補を同定出来た.ターゲットとするマイクロRNAのエクソソームへの遺伝子導入は行えていないが,細胞株への導入には成功している.初年度のスクリーニング解析はおおむね順調に進んでいる.今後はそのスクリーニングの結果を確認する.確認は各ターゲットとなるsmall RNA分子のリアルタイムPCR等にて行う.同時に表面マーカーに関しては特異的な検出方法を検討する.さらに,細胞株で行っている実験により発見できたマーカー分子を臨床例で確認する.エクソソームの表面マーカーのスクリーニングがほぼ終了して、メラノーマ特に転移株に特徴的なパターンの解析を行う.また,初年度と同様に含有small RNAのスクリーニング解析は順調に進んでおり,今後はそのスクリーニングの結果からを各ターゲットとなるsmall RNA分子のリアルタイムPCR等にて行う.さらに,細胞株で行っている実験により発見できたマーカー分子と含有small RNA分子を臨床例で確認する.
２型糖尿病に伴うドライマウス発症メカニズムをターゲットとした新規治療法の開発

糖尿病は口腔乾燥症と関連があるとされるが,その詳細なメカニズムについては不明な点が多い.本研究では2型糖尿病モデルマウスであるKK-Ayを用い,糖尿病が口腔乾燥症を引き起こすメカニズムを解明することを目的とした.その結果,小胞体からのCa2+放出が低下することによりCa2+濃度の上昇が抑制され,唾液分泌が低下していることが明らかになった.また唾液中のNa+およびClー濃度は有意に低値を示し,導管細胞の増加による再吸収促進の関与が示唆された.近年,本邦において高齢社会の進展と食生活の欧米化などが原因となり糖尿病患者数は増加し続け,2012年の国民健康・栄養調査では「糖尿病」と「糖尿病予備群」の合計は2,050万人に及び,国民の5人に1人が糖尿病とも言われている.一方,糖尿病と口腔乾燥症との関連はこれまでに多く報告されて(Jawed et al, Journal of Diabetes and Its Complications, 2011,Carolina et al, Journal of Oral Science, 2010.)いるものの,そのメカニズムについては統一した見解が得られておらず,根本的な治療法も確立していないのが現状である.そこで本研究では2型糖尿病モデルマウスを用いてEx vivo顎下腺灌流実験を行うことにより糖尿病と唾液分泌との関係について明らかにし,さらに分泌に関わる膜タンパクやシグナル伝達について解明することを目的とした.本研究では,2型糖尿病モデルマウスである(KK-Ay mice)を用い,まず形態・組織学的解析を行った.その結果,2型糖尿病モデルマウスではコントロールマウスと比較して顎下腺重量が有意に増加していることおよび,HE染色像より導管細胞の割合が増加していることが確認された.その一方,免疫組織染色により2型糖尿病モデルマウスおいてもAQP5やNKCC1といった唾液分泌に重要なチャネルやトランスポーターは正常に局在していることが確認された.次いで,Ex vivo顎下腺灌流実験を用いて顎下腺自体の唾液分泌能を評価した.その結果,Ex vivoモデルにおける唾液分泌量には差が見られなかった.しかし,糖尿病により誘発される血漿の高浸透圧を再現するため,灌流液の浸透圧を増加させたところ,唾液分泌量が有意に抑制された.糖尿病は様々な臨床症状を引き起こし、口腔乾燥症もそのひとつであるとされる。口腔乾燥症は患者QOLを大きく低下させるだけでなく、歯科補綴治療のリスク因子となる。しかし、糖尿病により唾液分泌量が低下するメカニズムには不明な点が多く、その治療法も確立されていないのが現状である。そこで本研究では2型糖尿病モデルマウスを用いて、その唾液分泌低下の原因を解明しさらに新規治療法の開発を目指す。糖尿病モデルマウスとしてKK-Ayマウスを、コントロールマウスとしてC57BL/6用いた。まず、Ex vivo顎下腺灌流モデルによる腺レベルでの唾液分泌機能を評価した。その結果、4週齢から12週齢まですべてにおいてKK-Ayマウスではコントロールと比較して唾液分泌量が有意に低下していた。次いで、唾液腺重量および組織切片における腺房細胞の割合を計測し、腺房細胞量を比較したところ、KK-Ayマウスとコントロールマウスの間に有意な差は認められなかった。また、免疫組織染色法を用いて、水チャネルであるAQP5と腺房細胞にCl-を供給するNKCC1の発現を評価したが、いずれもKKAyマウスにおいても発現が認められた。口腔乾燥症はカリエスリスクの上昇や歯周疾患の増悪を引き起こし,歯科補綴治療にとってリスクとなる疾患である。糖尿病は口腔乾燥症と一因とされるが,その詳細なメカニズムについては不明な点が多い.そこで本研究では2型糖尿病モデルマウスを用い,糖尿病が口腔乾燥症を引き起こすメカニズムを解明することを目的とした.糖尿病モデルマウスとしてKK-Ayを,コントロールとしてC57Bl/6Jを用いた.唾液腺機能の評価には,Ex vivoマウス顎下腺灌流モデルを用いてCarbachol(CCh: 0.3 μM)刺激による唾液分泌量,唾液中イオン濃度(Na+,Clー)を測定した.腺房細胞と導管細胞それぞれの面積はHematoxylin-Eosin染色像から解析した.膜タンパク質の発現の評価は免疫組織化学を用いた.さらに,分散細胞を用いたCa2+イメージングを行い,CChもしくはThapsigargn(TG: 1mM)刺激による細胞内Ca2+濃度の上昇を評価した.KK-Ayではコントロールと比較して,ex-vivoモデルにおける唾液分泌量と唾液中のNa+およびClー濃度が有意に低下していた.組織学的にはKK-Ayで導管細胞容積が上昇していたが,腺房細胞容積はKK-Ayとコントロールで同等だった.また,免疫組織化学においてAquaporine5,NKCC1,TMEM16Aの発現はKK-Ayとコントロールいずれにもみられた.CChによる細胞内Ca2+の上昇は,細胞外のCa2+の有無に関わらずKK-Ayにおいて有意に低値を示した.一方でTGによる細胞内Ca2+上昇に有意差はなかった.以上の結果より,KK-Ayマウスでは,小胞体からのCa2+放出に低下しCa2+濃度の上昇を抑制され唾液分泌が低下していること,導管細胞の増加が唾液中Na+およびClー濃度の低下に関与することが示唆された.糖尿病は口腔乾燥症と関連があるとされるが,その詳細なメカニズムについては不明な点が多い.

本研究では2型糖尿病モデルマウスであるKK-Ayを用い,糖尿病が口腔乾燥症を引き起こすメカニズムを解明することを目的とした.その結果,小胞体からのCa2+放出が低下することによりCa2+濃度の上昇が抑制され,唾液分泌が低下していることが明らかになった.また唾液中のNa+およびClー濃度は有意に低値を示し,導管細胞の増加による再吸収促進の関与が示唆された.糖尿病モデルマウスにおける唾液分泌機能や組織学的な評価が完了したので、研究はおおむね順調に進展していると考える。歯科補綴学今後、細胞内シグナリングとして重要である細胞内Ca2+濃度や、Ca2+依存性Cl-チャネルであるTMEM16Aの発現や機能を解析し、糖尿病モデルマウスで唾液分泌量が低下する詳細なメカニズムを解明し、学会発表や論文投稿を行う予定にしている。当初の予定通り,2型糖尿病モデルマウスを用いた組織的解析および唾液腺機能評価は遂行され,2型糖尿病において唾液腺機能が低下するメカニズム解明に向けて順調に経過している.平成26年度に実施予定であった、糖尿病モデルマウス唾液腺腺房細胞における膜タンパク質の発現評価の一部に遅れが生じたため、イオントランスポーターの機能解析の一部を次年度に行うこととした。これにより次年度使用額が生じた。これまでの結果より,2型糖尿病における唾液分泌低下に血漿の高浸透圧が関与している可能性が示唆された.今後,高浸透圧がNKCC1やNHE1、AE、AQP5など唾液腺膜タンパク質の機能、さらに細胞内カルシウムシグナルに及ぼす影響について検討する予定としている。イオンイメージングシステムを用いたイオントランスポーターの機能解析のため、マウスや細胞内pH指示薬などの薬剤に使用する。
プラトン哲学における「対話篇」構造の意図するものとその必然性の解明

所期の課題に関わる最近の研究は、欧米を中心として、予期した以上に盛んになされていることに、改めて気づかされ、初年度においては、それらを可能な限りにおいて広範にフォローし、国際的な研究状況を把握することに努めた。同時に、プルタルコス、アルビノス、ヘルメイアスなどの古代ギリシア哲学者による「対話篇」についての受けとめ方、および近代におけるシュライエルマッハ-、ツェラ-らの見解の再評価からも学ぶ点が少なくなかった。問題は、一面において、懐疑主義的プラトン理解(たとえばPh.Merlan)やJ.Cramerらによる「書かれざる教説」の強調に対する対処とも連動し、これらについても一定の取り組みが必要となった。この過程での成果を踏まえて、まず平成8年3月に古代哲学研究会において、「プラトンの対話篇構造の意味するもの」についての口頭発表を行い、そのさいの討論を通じて多くの更なる示唆を与えられた。『哲学研究』(京都哲学会刊)第562号に発表の論文は、こうした経過を経て纏められたものである。これについては、さらに続編の執筆を現在継続中であり、「想起説」の導入を経てイデア論および後期のディアレクティケ-の発展に至る展望を試みつつある。またこの間に刊行された編著書『フィロソフィアの源流と伝統』においては、ソフィスト思想およびプラトンを扱った2つの章の執筆をも担当し、特にプラトンについて新規点の導入を図るなど、所掲課題の遂行との関連においても得るところが多かった。2カ年にわたる研究の第1年目に当たる本年度は、基礎作業として関連文献資料の網羅的な収集と諸家の見解の批判的検討に主眼点をおいた。この遂行課題に関連した最近の研究成果は、米国のものを中心にかなりの数にのぼっている。また研究の主要対象となるべきプラトンの対話篇-特に若干の重要な初期対話篇および『メノン』と、『饗宴』『パイドン』『国家』などの中期著作-については、依然として多数の充実した注釈書・研究書が相次いで刊行されている。現在これらの成果を総覧しつつ、プラトン哲学そのものの理解を深めることに努めるとともに、古代哲学専門誌Boston Ares Colloquim in Ancient PhilosophyおよびAncient Philosophyなどで盛んに交わされている議論、K. SeeskinやA. Hylandなど特に考察上の接点の多い論者たちの見解をフォローし、取りまとめつつある。また、一時代前の、P. FriedlanderやL. Edelsteinらの議論にも新たな検討に値する主張が見られ、これらについても注意をはらっている。この過程での成果を踏まえて、現段階における中途経過的な報告を目下取りまとめているところで、当面3月末の学内の古代哲学研究会において発表を予定している。また、同じく本年4月初めに刊行予定の編著書『フィロソフィアの源流と伝統』においては、ソフィスト思想およびプラトンを扱った2つの章の孰筆をも担当し、所掲課題の遂行との関連においても得るところが大きかった。

これについては、さらに続稿の執筆を現在継続中であり、「想起説」の導入を経てイデア論および後期のディアレクティケ-の発展に至る展望を試みつつある。またこの間に刊行された編著書『フィロソフィアの源流と伝統』においては、ソフィスト思想およびプラトンを扱った2つの章の執筆をも担当し、特にプラトンについて新視点の導入を図るなど、所掲課題の遂行との関連においても得るところが多かった。
スポーツ競技者の健康と競技力向上のためのマインドフルネス・プログラムの開発

スポーツ競技者が求める心理サポートの効果は、主にパフォーマンス発揮・向上であり、従来、一般的に広く行われている、健康の維持増進を目的とした心理サポートでは、対象者のニーズに答え切れておらず、結果的に必要な支援にスポーツ競技者が繋がりにくいことが指摘されている。そこで本研究では、スポーツ競技者のパフォーマンスとメンタルヘルスの双方にアプローチすることが可能であることが予想されるマインドフルネスに注目し、スポーツ競技者に対するマインドフルネスの役割について検討することを目的とした。以下にその成果をまとめる。1.平成27年度から実施している縦断調査を継続し、スポーツ競技者のマインドフルネスがメンタルヘルスとパフォーマンスに対してどのように寄与するのかという点について、量的な検討を行った。その結果、スポーツ競技者のマインドフルネスがメンタルヘルスを調整すること、またマインドフルネスによって調整されたメンタルヘルスが客観的なパフォーマンス評価を予測することが明らかとなった。2.1の研究から得られた知見をより実践現場に近い視点から解釈するために、混合研究法を参考に、1の研究によって得られた、変数間の関係性を示したモデルの質的な説明を試みた。その結果、マインドフルネスが高いスポーツ競技者は、自身の心理状態や身体の反応を情報として活用し、それによってメンタルヘルスやパフォーマンスを調整することが明らかとなった。3.1および2の研究結果をもとに、スポーツ競技者に適応し、かつメンタルヘルスとパフォーマンスに対して効果が期待される支援法の枠組みについて検討を行った。具体的には、スポーツ場面において体験する身体感覚への気づきや意識を高めるワークの導入を行うことが、スポーツ競技者のメンタルヘルスやパフォーマンスに影響することが期待され、そのような枠組みによるマインドフルネス・プログラムを提唱した。28年度が最終年度であるため、記入しない。スポーツ競技者のバーンアウトは、深刻なメンタルヘルスの問題を導く危険性がある(大隈・西村,2002; Smith, 1986)。そのため、早急な支援が求められる一方、従来のメンタルヘルス向上を目的とした心理サポートでは、スポーツ競技者が期待するパフォーマンス面への効果を得ることは難しく、心理サポートの利用率の低さを導く可能性がある。そのことから、スポーツ競技者のニーズである、パフォーマンスとメンタルヘルスの双方を向上させることが可能な支援法の提供が求められる。そのような効果を有することが期待される支援法として、マインドフルネスが挙げられる。しかし現在に至るまで、スポーツ競技者のマインドフルネスとメンタルヘルスおよびパフォーマンスとの関係性については検討されていない。そこで、平成27年度は、縦断調査による、スポーツ競技者のマインドフルネスと将来のメンタルヘルスやパフォーマンスとの関連性および、マインドフルネス技法の効果について、質的に検討することを目的とし、以下の知見をまとめた。1.縦断調査による、スポーツ競技者のマインドフルネスと将来のバーンアウトおよびパフォーマンスとの関連性について検討を行った。その結果、マインドフルネスが将来の感情抑制傾向や抑うつと負の関係を示し、その結果バーンアウトに対して負の関係性を示すという間接効果が確認された。さらに、スポーツ競技者のマインドフルネスが、将来の自信や試合時の実力発揮を導くことが示された。2. 1の研究結果をもとに、マインドフルネス技法がスポーツ競技者に与える効果について質的に検討するために、実験的な介入研究を行った。その結果、「注意制御」、「思考制御」、「感情制御」、「自己客観視」、「身体感覚への気づきの鋭敏化」といった効果が示された一方、マインドフルネス・プログラムの阻害要因も明らかとなった。平成27年度の研究の進捗状況として、当初の計画以上に進展していると評価することができる。本研究課題は、スポーツ競技者の健康と競技成績向上を目的としたマインドフルネス技法の開発を目的としているが、実際にマインドフルネス技法をスポーツ競技者に対して実践するためには、その技法の「安全性」と「効果のエビデンス」の双方を確認する必要がある。そこで申請者は、総計200名を超える現役の大学生スポーツ競技者を対象とし、スポーツ競技者が有するマインドフルネス特性が、将来のメンタルヘルスとパフォーマンスに対してどのように作用するのか検討するために、4回にわたる縦断調査を実施している。すでに3回目の調査が終了しており、調査は概ね順調に進んでいる。また、これらの調査を参考に、スポーツ競技者個人と集団に対する、マインドフルネス・プログラムの実践を行い、その効果検証を質的に検討している。その結果、マインドフルネス・プログラムを実践することによって、認知・心理・身体的効果が確認された一方、従来のマインドフルネス・プログラムをスポーツ競技者に対して実践するには、様々な課題が散見されることが明らかとなった。上記の研究成果は、すでに合計4本の学術論文が本年度において学術雑誌に受理・掲載され、2本の学術論文は投稿中である。つぎに、ポスター発表として「競技者の内発的動機づけ向上へのマインドフルネスの活用ー調和的・執着的情熱を基準とした競技者のタイプ別比較ー(第2回マインドフルネス学会最優秀研究賞)」、「パフォーマンス発揮の阻害とマインドフルネスとの関係性」、「スポーツ競技者のパフォーマンス低下体験に対するマインドフルネスの抑制効果」、「体育実技へのマインドフルネス・プログラムの導入」の4件の報告を行い、研究成果の報告を積極的に行っている。

そこで本研究では、スポーツ競技者のパフォーマンスとメンタルヘルスの双方にアプローチすることが可能であることが予想されるマインドフルネスに注目し、スポーツ競技者に対するマインドフルネスの役割について検討することを目的とした。以下にその成果をまとめる。1.平成27年度から実施している縦断調査を継続し、スポーツ競技者のマインドフルネスがメンタルヘルスとパフォーマンスに対してどのように寄与するのかという点について、量的な検討を行った。その結果、スポーツ競技者のマインドフルネスがメンタルヘルスを調整すること、またマインドフルネスによって調整されたメンタルヘルスが客観的なパフォーマンス評価を予測することが明らかとなった。2.1の研究から得られた知見をより実践現場に近い視点から解釈するために、混合研究法を参考に、1の研究によって得られた、変数間の関係性を示したモデルの質的な説明を試みた。その結果、マインドフルネスが高いスポーツ競技者は、自身の心理状態や身体の反応を情報として活用し、それによってメンタルヘルスやパフォーマンスを調整することが明らかとなった。3.1および2の研究結果をもとに、スポーツ競技者に適応し、かつメンタルヘルスとパフォーマンスに対して効果が期待される支援法の枠組みについて検討を行った。具体的には、スポーツ場面において体験する身体感覚への気づきや意識を高めるワークの導入を行うことが、スポーツ競技者のメンタルヘルスやパフォーマンスに影響することが期待され、そのような枠組みによるマインドフルネス・プログラムを提唱した。平成27年度において、スポーツ競技者に対するマインドフルネス・プログラムの予測を行うための縦断調査および、マインドフルネス・プログラムを実践することによる効果について質的な検討を行った。その結果、縦断調査においては、スポーツ競技者に対するマインドフルネス・プログラムの効果が予想されたものの、従来のマインドフルネス・プログラムをスポーツ競技者に対して実践することについて、「時間的な制約」や「スポーツ競技とマインドフルネス・プログラムの条件の不一致」といった課題が散見された。そのため、平成28年度においては、上記の縦断調査を継続し、4時点におけるスポーツ競技者のマインドフルネス特性が将来のメンタルヘルスやパフォーマンスの変化に及ぼす影響性について予測し、より強固なエビデンスの構築を実施する。さらに、先の質的研究によって得られた、マインドフルネス・プログラムの課題をもとに、臨床・健康・スポーツ心理学の専門家間での協議を行い、スポーツ競技者を対象としたマインドフルネス・プログラムの開発を行う予定である。プログラム開発後、そのプログラムをスポーツ競技者に対して実践し、効果について量的・質的な視点から実験的な検討を行う。トライアルを数回実施したのち、完成したプログラムだけではなく、従来、一般的に実践されている心理プログラム法やコントロール条件を交えて、効果の比較検討を行う予定である。
無アルブミンラットによる癌研究

無アルブミンラットの生産は順調に続けられ,要望どおり各班員に分与された.本年度に得られた主な研究成果は次の如くである.無アルブミンラットのBBNに対かる高感受性の機構についての検討が行われ,無アルブミンラットの膀胱では, BBNに代謝物で癌原性物質であるBCPNが対照群の数倍の高値を示し,尿中BCPNの膀胱への移行が亢進している事が明らかにされた.膀胱内にアルブミンを注入し,コートすると其の移行亢進が阻止され,正常ラットと同レベルに低下した. IgG等では其の作用は認められず,細胞膜の安定性や或る種の物質の透過性にアルブミンの関与が大きい事が示唆された.また,無アルブミンラットにおいて発癌物質で誘導された肝細胞アルブミン生成復帰突然変異の機構を究明する為に,以前に用いられた3′ーMeDAB等以外のフレームシフト型の発癌物質, GluーPー1及びMeIQxによる実験が行われた.これらの物質の投与では約20週後で2%内外の細胞が陽性になる事が判明した.これらの陽性細胞は1つづつ独立しているものや,クラスターを作る物もある.3′ーMeDAB投与では大きいクラスターを作るので,此の部分を切り出し, in vitro amplication法により, Intron欠損部位近傍を適格なprimerを用いてamplifyさせ,塩基配列を決定する為の努力が続けられている.その他AAFや, PBに対する感受性がNAR等8系統のラットで調べられ, NARではSDより低い感受性を示す事等が判明した.其の他の, NARの肝細胞初代培養系を用い,増殖刺激に対する応答や,増殖の停止機構等についての検討が行われ, NAR肝細胞でも正常肝細胞と同様な調節機構が働いている事が確認された.其の他,アゾキシメタン投与ラット血清中のCEA様蛋白を調べた結果,組織学的に殆ど変化の認められない早期から此の蛋白が大きく変動する事実が認められた.また乳癌,膀胱癌等でも此の蛋白は増加するが腸癌でも最も高値を示した.無アルブミンラットの生産は順調に続けられ,要望どおり各班員に分与された.本年度に得られた主な研究成果は次の如くである.無アルブミンラットのBBNに対かる高感受性の機構についての検討が行われ,無アルブミンラットの膀胱では, BBNに代謝物で癌原性物質であるBCPNが対照群の数倍の高値を示し,尿中BCPNの膀胱への移行が亢進している事が明らかにされた.膀胱内にアルブミンを注入し,コートすると其の移行亢進が阻止され,正常ラットと同レベルに低下した. IgG等では其の作用は認められず,細胞膜の安定性や或る種の物質の透過性にアルブミンの関与が大きい事が示唆された.また,無アルブミンラットにおいて発癌物質で誘導された肝細胞アルブミン生成復帰突然変異の機構を究明する為に,以前に用いられた3′ーMeDAB等以外のフレームシフト型の発癌物質, GluーPー1及びMeIQxによる実験が行われた.これらの物質の投与では約20週後で2%内外の細胞が陽性になる事が判明した.これらの陽性細胞は1つづつ独立しているものや,クラスターを作る物もある.3′ーMeDAB投与では大きいクラスターを作るので,此の部分を切り出し, in vitro amplication法により, Intron欠損部位近傍を適格なprimerを用いてamplifyさせ,塩基配列を決定する為の努力が続けられている.その他AAFや, PBに対する感受性がNAR等8系統のラットで調べられ, NARではSDより低い感受性を示す事等が判明した.其の他の, NARの肝細胞初代培養系を用い,増殖刺激に対する応答や,増殖の停止機構等についての検討が行われ, NAR肝細胞でも正常肝細胞と同様な調節機構が働いている事が確認された.其の他,アゾキシメタン投与ラット血清中のCEA様蛋白を調べた結果,組織学的に殆ど変化の認められない早期から此の蛋白が大きく変動する事実が認められた.また乳癌,膀胱癌等でも此の蛋白は増加するが腸癌でも最も高値を示した.
農村地域における在宅ケアとコミュニティ・ケアに関する比較研究

岩手県沢内村と長野県武石村を主たるフィールドとし、長野県佐久地区や新潟県大和町をも対象地として、在宅ケアとコミュニティ・ケア・システムに関する比較研究を進めた結果、次の7点にわたって新たな知見をえた。1.コミュニティ・ケア・システムにおけるすぐれた医師の存在の不可欠性がいよいよ明らかなった。地域医療に献身する医師の存在がなければ在宅ケアのためのコミュニティ・ケア・システムの展開はありえない。2.医療と福祉のネットワーキングがなければ、コミュニティ・ケア・システムは十全に作動しえないことが判明した。3.在宅ケアのためのコミュニティ・ケア・システムには適性規模があることが、判明した。つまり、一つには、村立診療所に二人の医師と数人の看護婦がいて、午前中は外来を診察し午後は在宅ケアのためにその地域を往診するという体制が不可欠であり、さらには、先端的な中核病院とのネットワークが必要である。4.中核的病院がコミュニティ・ケア・システムのために前提とされるのだが、そうした中核的な病院は、大規模であるだけに、それ自体のシステム維持の問題に直面していることが、判明した。大規模な病院の存立維持というこの問題は、現行の医療体制そのもののかかえる諸問題の集中的表現であるとみなされてよい。5.家族内介護をおこなっている女性の過剰負担がいよいよ明らかになった。6.コミュニティ・ケア・システムにおいてはボランティア活動が不可欠なのだが、それには本来のボランティア活動とは違う側面があることが判明した。ボランティアとはいいながらも、みずからの生計のおぼつかない高齢者にとって、ボランティア活動が多少の収入につながる必要がある。7.在宅ケアのためのコミュニティ・ケア・システムの要請それ自体は、コミュニティの崩壊と関連しているのだが、コミュニティ・ケア・システムの展開は、活性化しているコミュニティを必要としていることが明らかになった。在宅ケアのためのコミュニティ・ケア・システムには、結局のところ、その地域の住民がその地域で生き抜くことのできる産業が不可欠である。岩手県沢内村、長野県武石村をはじめ、長野県佐久地区、新潟県大和町および秋田県五城目町において、在宅ケアとコミュニティ・ケア・システムの展開過程についての事例研究を進め、さらに在宅ケアの対象者と介護者についての生活史的分析を行った。それらの分析をとおして次の知見をえた。1)地域医療システムにおける関係諸機関のネットワーキングの形成にとって、自治体の関係者と医療当事者との密接な連携プレイが必要不可欠であると同時に、その実行の困難であることが確認された。2)地域医療システムの規模の拡大が医療の質の向上と必ずしも連動せず、小規模なシステムの有効性が判明した。システムの構造がいかにすぐれていても、規模が拡大すると、システムの本来の機能よりも、システムの存続維持が重視されがちなことが明らかになった。3)同時に、小規模な地域医療システムという点で成功している沢内村や武石村の事例では、経済的効率の低さが否めず、住民にとって質の高い医療の実現が、自治体の財政を限りなく圧迫しており、この「優良な」コミュニティ・ケア・システムの存廃をめぐって、住民を二分する「政争」が少なくとも潜在的に進行中である。4)現在のところ、コミュニティ・ケア・システムの良質な作動にとって、現行の医療体制は重大な攪乱要因となっていることが明確にされた。日本社会システム全体の駆動原理が、効率第一主義の工業社会のパラダイムから、人間と自然の共生をはかる生態学的な原理に移行することが、回り道のようにみえながら、地域医療システムの確立の根本前提であることが少しずつ判明しつつある。