hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
歯周病細菌の鉄獲得機構の研究

鉄は細菌の生育にとって必須の元素である。そのため,病原細菌の多くは鉄濃度の極めて低い生体内では独特な鉄獲得機構により,鉄を獲得している。この鉄獲得機構は細菌の増殖だけでなくその病原性の発現にも関係している。本研究では歯周病細菌Actinobacillusactinomycetemcomitans(Aa)およびPorphyromonas gingivalis(Pg)の鉄獲得機構について研究を行い,以下のような成果を得た。1. Aaについて:AaY4株から鉄結合蛋白フェリチンをコードする遺伝子をクローニングし,塩基配列を解析し,その特性について調べた。その遺伝子は,486bp(161アミノ酸)と498bp(165アミノ酸)の2つ並んだopenreading frameから構成されていた。それらは,Haemophilus influenzaeのフェリチン様遺伝子と高い相同性(夫々80%および85%)が認められた。Aaの菌体には大腸菌抗フェリチン抗体と反応する2種類の蛋白がウェスタンブロット法で確認でき,それらは遺伝子の塩基配列から推定される分子量に夫々相当していた。mRNAレベルでは好気条件でその発現が増加していた。Aaのフェリチンは鉄獲得や保持だけでなく,酸素の影響(毒性)にも応答しているようである。2. Pgについて:Pgの近縁のBacteroides fragilis(Bf)のヘミン結合蛋白hemin-uptake protein A遺伝子(hupA)を手がかりにPgの増殖に必須であるヘミン獲得に関連する遺伝子を捉えようと試みた。本年度はhupA遺伝子と相同性のある遺伝子をPgFDC381株からPCR法により増幅し,増幅された遺伝子断片(約1.3kbp)の塩基配列を解析し,その特性について調べた。その結果,PgではBfのhupA遺伝子に相当する遺伝子は赤血球凝集素あるいは蛋白分解酵素遺伝子であった。Pgはヘミンの豊富な赤血球に獲り付き,分解(破壊)し,積極的にヘミンを獲得していると考えられる。鉄は細菌の生存と増殖にとって必須の元素である。鉄濃度の少ない生体内では,細菌は特殊な鉄獲得機構により鉄を獲得している。本研究はこのような鉄獲得機構から歯周病細菌の増殖を制御,阻止しようとするものである。本年度は代表的な歯周病細菌であるActinobacillusactinomycetemcomitans(Aa)およびPorphyromonas gingivalis(Pg)の鉄獲得機構を分子生物学的に解明することを目的に実験を行い,以下のような成果を得た。1.Aaについて:Aaの増殖や代謝を制御するfnr(hlyX)様遺伝子の5`側上流部分の塩基配列を分析し,新規の鉄結合蛋白バクテリオフェリチンをコードする2つのopenreading frameを見いだした。この鉄結合蛋白は細菌が取り込んだ鉄を細菌内で蓄えて置く際に特に重要である。2.Pgについて:Pgや近縁のBacteroides属の細菌の増殖にはヘミンが必須である。ヘミンと特異的に結合する外膜蛋白がBacteroides fragilis(Bf)には存在することが明らかにされ,Bfではこの蛋白を介してヘミンを獲得し,細胞内へヘミンを取り込んでいると想定されている。Bfのヘミン結合外膜蛋白をコードする遺伝子断片をプローブとしてサザンハイブリダイゼーション法で調べたところ,PgにもBfのヘミン結合外膜蛋白と相同性のある遺伝子の存在を認めた。PgもBfのヘミン結合外膜蛋白に類似した蛋白を介し,ヘミンを細胞内へ取り込んでいる事が判った。

現在,AaのバクテリオフェリチンおよびPgのヘミン結合外膜蛋白をコードする遺伝子について,それぞれをクローニングし,それらの塩基配列を分析中である。これらの結果を基に両細菌の鉄獲得機構の解明を進めている。1. AaについてAaY4株から鉄結合蛋白フェリチンをコードする遺伝子をクローニングし,塩基配列を解析し,その特性について調べた。その遺伝子は,486bp(161アミノ酸)と498bp(165アミノ酸)の2つ並んだopenreading frameから構成されていた。それらは,Haemophilusinfluenzaeのフェリチン様遺伝子と高い相同性(夫々80%および85%)が認められた。Aaの菌体には大腸菌抗フェリチン抗体と反応する2種類の蛋白がウェスタンブロット法で確認でき,それらは遺伝子の塩基配列から推定される分子量に夫々相当していた。mRNAレベルでは好気条件でその発現が増加していた。Aaのフェリチンは鉄獲得や保持だけでなく,酸素の影響(毒性)にも応答しているようである。2. PgについてPgの近縁のBacteroides fragilis(Bf)のヘミン結合蛋白hemin-uptake protein A遺伝子(hupA)を手がかりにPgの増殖に必須であるヘミン獲得に関連する遺伝子を捉えようと試みた。本年度はhupA遺伝子と相同性のある遺伝子をPgFDC381株からPCR法により増幅し,増幅された遺伝子断片(約1.3kbp)の塩基配列を解析し,その特性について調べた。その結果,PgではBfのhupA遺伝子に相当する遺伝子は赤血球凝集素あるいは蛋白分解酵素遺伝子であった。Pgはヘミンを結合するというよりはむしろ,ヘミンの豊富な赤血球に獲り付き,それを分解(破壊)し,積極的にヘミンを獲得していると考えられる。
高周波パルス法の脊髄後角細胞における鎮痛作用機序の電気生理学的解明

本研究は坐骨神経絞扼モデルラットの坐骨神経にパルス高周波法(PRF)を施行し、電気生理学実験パッチクランプ法にて脊髄後角膠様質細胞の興奮性シナプス電位の大きさ、頻度を測定する。正常ラットおよび、PRFを施行しない群と比較しパルス高周波が脊髄後角ニューロンにおける興奮性シナプス後電流に与える影響を検討することで、PRFの重要な作用機序と考えられる抗侵害受容作用のメカニズムを明らかにする研究である。坐骨神経絞扼モデルラットに対しパルス高周波法(PRF)を行い、機械刺激に対する閾値測定で治療効果を確認した。現在免疫染色による観察、パッチクランプ法による計測、得られたデータの解析を行っている。平成30年4月から職場が異動となり研究に割り当てられる時間が減少したため。また得られたデータについて、経時的な変化を観察するうえで追加実験が必要な状態である。引き続き追加実験を行い、取得したデータの解析を進め、当初の計画通りに進める努力をする。神経障害性疼痛モデルとして坐骨神経絞扼ラットを作成しPRFの神経障害性疼痛の発症に与える効果について検証した。ラットの右坐骨神経に絞扼モデルを作成した群(対照群)と、予めパルス高周波法(PRF)を行った後に絞扼モデルを作成した群(PRF群)の間で、von Frey試験を用いて患肢の疼痛閾値を処置前後に測定し比較を行った。この結果、対照群ではCCI作成後に逃避閾値が有意に低下したのに対し、PRF群ではCCI前後で閾値に有意差は認めなかった。処置前後の閾値の変化量を2群で比較すると、PRF群の方が小さく有意差が認められ、PRFが神経障害性疼痛の発症を予防することが示唆された。このことはこれまで報告がなく、PRFの神経細胞に及ぼす影響から抗侵害作用のメカニズムを解明するうえで意義がある。また両群の脊髄後角に免疫染色を行ったところ、PRF群ではミクログリアの増加が抑制されており、PRFの神経障害性疼痛予防効果にはミクログリアの増加抑制が関与することが示唆された。免疫染色の結果が安定するまで試薬の調整に時間を要したことと、電機生理学的実験の手技確立に時間がかかっている。来年度は実験器具を購入し、電気生理実験を円滑に実施できる環境を整えたい。本年度は電機生理学的実験に比較し、手技修得までの期間が短い免疫染色を行うことを優先させたため物品購入額が少なくなった。次年度は電機生理学的実験を安定して進めるために機材を購入し、免疫染色に必要な試薬も併せて購入する計画である。理由:研究の遅れにより、物品費、人件費・謝金に余剰が生じた。使用計画:研究環境が整いつつあるので、初めの経費計画通り執行を進める。また、追加実験に必要な試薬などの購入費として執行する。
自然免疫認識機構に基づく難治性炎症性・感染性肺疾患の病態解析

炎症性・感染性肺疾患の病態における自然免疫応答の認識機構、自然免疫と獲得免疫の相互作用を検討した。肺高血圧の発症に自然免疫の内因性リガンドHMGB1が作用していること、一部の非結核性抗酸菌を認識する受容体としてDectin-2が判明した。さらに、膠原病に関連した間質性肺疾患のバイオマーカーとしてB cell-activationg factor(BAFF)が有用であることが明らかとなった。重症喘息やCOPD、肺非結核性抗酸菌症をはじめとする感染症、間質性肺炎などの難治性炎症性・感染性肺疾患の病態解明と、それに基づく新規治療法の開発は急務である。近年、Toll様受容体に加え、C型レクチン受容体や免疫グロブリン様受容体なども自然免疫応答の重要な認識機構であること、さらに自然免疫と獲得免疫の相互作用が多くの基礎研究から明らかになってきた。本研究では、炎症性・感染性肺疾患の病態におけるC型レクチン受容体や免疫グロブリン様受容体の役割を明らかにすることを目的とした。平成25年度の研究では、まず夏型過敏性肺炎の抗原であるTrichosporonAsahiiの免疫応答を調べたところ、macrophageを活性化して炎症性サイトカイン産生を促すことが判明した。この受容体の候補として、C型レクチン受容体であるMincleとDectin-2を解析したが、Trichosporonを認識せず、これら以外の受容体を介しているものと考えられた。また、肺非結核性抗酸菌症の原因菌であるMycobacteriumを認識するレクチン受容体を解析したところ、Dectin-2が一部のMycobacteriumを認識することが判明した。一方、免疫グロブリン様受容体のリガンドの一つが、慢性炎症性肺疾患患者の肺組織で高発現してることを見出した。さらに、間質性肺疾患の新規血清マーカーについてもその有用性の検討を行った。本研究では、炎症性・感染性肺疾患の病態におけるC型レクチン受容体や免疫グロブリン様受容体の役割、脂質メディエーターと自然免疫の相互作用を明らかにすることを目的とした。まず、夏型過敏性肺炎の抗原であるTrichosporon Asahiiの免疫応答を調べたが、MincleやDectin-2ではなく、これら以外の受容体を介しているもの考えられた。一方、肺非結核性抗酸菌症の原因菌であるMycobacteriumを認識するレクチン受容体を解析したところ、Dectin-2が一部のMycobacteriumの受容体として働き、特にリポアラビノマンナン(LAM)を認識することが判明した。また、LAMは樹状細胞を活性化し、免疫応答を促進させるが、Dectin-2欠損マス由来の樹状細胞ではLAMによる活性化は見られず、Dectin-2はLAMの働きを担う重要な受容体と判明した。免疫グロブリン様受容体のリガンドの一つangiopoietin-like protein (Angptl)-“X"が、間質性肺炎などの慢性炎症性肺疾患患者の末梢血血清で増加していることを見出した。また、COPDや特発性肺線維症などの慢性炎症性疾患は高頻度に肺癌を合併する。自然免疫応答の認識機構として、Toll様受容体、C型レクチン受容体、免疫グロブリン様受容体などが注目され、さらに自然免疫と獲得免疫の相互作用が明らかになってきた。また蛋白をコードしないmiRNAは、数多くの遺伝子発現を制御しており、miRNA発現の変化が様々な疾患に関与している。本研究では、(1)肺疾患の病態における自然免疫と脂質メディエーターとの相互作用を明らかにすること、(2)肺癌のmiRNA解析から炎症と癌の関連性を解明することを目的とした。本年度は、以下の研究を行った。間質性肺疾患の新規血清マーカーとして、B細胞の分化,生存,増殖に重要な役割を果たしているサイトカインBAFFに注目した。IPFやidiopathic NSIPなどの慢性線維化性間質性肺炎に比べて膠原病関連間質性肺炎で血清BAFF値が上昇し、膠原病関連間質性肺炎の肺組織においてBAFFの過剰発現を認めた。生体膜リン脂質を加水分解する酵素で細胞外に放出される分泌型ホスホリパーゼA2 (sPLA2 )の各種アイソザイムの欠損マウスを用いて、喘息モデルを作成し、各種sPLA2アイソザイムの慢性炎症性疾患での役割を検討した。免疫グロブリン様受容体のリガンドの一つAngptl-“X"が、肺胞上皮細胞で高発現していること、Angptl-X欠損マウスの間質性肺炎モデルでは、肺線維化が増強していることを見出した。肺癌の進展や転移に関与する癌抑制性miRNAを解析し、細胞外マトリックスに関連する遺伝子群を制御するmiRNAがあることを明らかにした。

肺高血圧の発症に自然免疫の内因性リガンドHMGB1が作用していること、一部の非結核性抗酸菌を認識する受容体としてDectin-2が判明した。さらに、膠原病に関連した間質性肺疾患のバイオマーカーとしてB cell-activationg factor(BAFF)が有用であることが明らかとなった。慢性過敏性肺炎の病態を明らかにするために、夏型過敏性肺炎の抗原であるTrichosporon Asahiiを認識する受容体を検索したが、明らかにすることはできなかった。しかし、肺非結核性抗酸菌症の原因菌を認識する受容体が判明したため、肺非結核性抗酸菌症の発症の詳細な機序について研究を進めている。さらに、Angptl-“X"の間質性肺疾患における役割を、間質性肺疾患の患者由来サンプルや、Angptl-“X"欠損マウスの間質性肺炎モデルを用いて明らかにする。27年度が最終年度であるため、記入しない。医歯薬学各肺非結核性抗酸菌を認識する受容体Dectin-2の動態を明らかにするとともに、サイトカインの産生機序と制御機構を検討する。ヒトの末梢血から単核球を単離して、Dectin-2発現やLAMによる反応を非結核性抗酸菌症患者と健常者で比較する。慢性炎症性肺疾患におけるAngptl-“X"の役割を、間質性肺疾患を有する患者の気管支肺胞洗浄液、Angptl-“X"の欠損マウスのブレオマイシン間質性肺炎モデルを用いて明らかにする。さらに、間質性肺疾患の新規血清マーカーのバイオマーカーとしての有用性の検討を行う。研究費は、動物モデルでの解析、ヒト検体の解析、および消耗品に使用する予定である。しかし、肺非結核性抗酸菌症の原因菌を認識する受容体が判明したため、その詳細な機序について研究を進めている。各肺非結核性抗酸菌を認識する受容体を明らかにするとともに、サイトカインの産生機序と制御機構を検討する。慢性炎症性肺疾患における免疫グロブリン様受容体リガンドの役割を、動物モデルを用いて明らかにする。
頭蓋顎顔面領域の形態形成におけるオーガナイザー領域の検索〜頭蓋顎顔面と歯胚の発生機序シグナル中心の解明〜

脊椎動物の頭部顔面発生は、脳となる神経板前方部、その領域に由来する神経堤細胞、頭部中胚葉、および前腸内胚葉などの複数の組織から形成される。この頭部の発生機構を理解することは、先天異常の理解に繋がるだけでなく、喪失された頭部顔面の再建治療に対する基礎的データを提供する。本研究によって得られた主な知見は以下の通りである。1.下顎の形成は、第一鰓弓基部の口腔側における外胚葉および前腸内胚葉由来の上皮と、中脳後方部神経堤細胞由来の間葉の相互作用によって起きる。2.歯胚発生は、外胚葉由来の口腔上皮、頭部神経堤細胞および前腸内胚葉由来の上皮が出会う領域で開始される。3.腺性下垂体は、神経板のすぐ直前に局在する外胚葉が、将来的に腹側へと位置を変えて前腸内胚葉と接して口咽頭膜となった後にラトケ嚢として陥入し、腺性下垂体から分泌される副腎皮質刺激ホルモンの産生細胞へと分化する。4.頭蓋冠の主な成長の場である頭蓋冠縫合部は、神経堤細胞に由来する骨と中胚葉由来する骨の境界に形成される。また骨の発生は、大脳半球力が後方へと成長する際に、神経堤細胞由来の髄膜層が引っ張られて骨形成層を裏打ちするようになる直後に起きると考えられる。5.発生に不可欠な細胞の増殖・分化・成長と、そのための転写調節が細胞レベルで密接に関連している。これらは、上述の組織が単独に頭音器官を形成するのではなく、複数の組織が、時間的・空間的に特異的な相互作用することによって器官形成が開始されることを示す、または強く示唆するものであった。これはMeinhardtが提唱した、複数の組織の境界部分に位置情報が設定されて器官形成が開始するという仮説を支持する物であった。今後の課題は、この相互作用の中心的な役割を果たす分子の同定やその分子の発現調節、および相互作用の過程について検討することである。-哺乳類胚の歯胚の発生機序とシグナリング機構の解明-昨年までに、全胚培養と下顎の器官培養を組み合わせた長期器官培養系を用いて、歯胚上皮の近傍に内胚葉由来の細胞が存在するかどうかを確かめていた。平成10年は、神経堤細胞を蛍光色素(DiO)で前腸内胚葉を蛍光色素(DiI)で標識しておき長期器官培養を行った結果、前腸内胚葉と口腔外胚葉と神経堤細胞が存在する領域で歯胚のinitiationが、おこることを明らかになった。-前脳部神経板の発生機序とシグナル中心の検索-(分担者;今井、飯村)前脳などの前方の神経板の形成には、脊索前板が重要であることが示されている。本研究室では、すでに、この脊索前板は、前腸内胚葉と同じ内胚葉細胞層に由来することを確かめている。平成10年は、脊索前板と脊索が、内胚葉層から形成される様子を形態学的にさらに詳細に解析した。-顎の発生機序とシグナリング機構の解明-昨年度までに、第1鰓弓の口腔側基部がメッケル軟骨様構造物の発生に重要であることを明らかにしていた。

1)この異所性の下顎(メッケル軟骨)の発生にFgf-8およびShhが関係していることを示すため、第一鯉弓口腔側基部を目の後方に移植し、48時間後の胚にin situ hybridizationを行い、移植片にこれら分子の発現が維持されていることを確かめた。2)この領域の上皮が肢芽におけるAERに相当し、間葉が肢芽のPZに相当することを示すために以下の実験を行なった。第一鰓弓口腔側基部の上皮と間葉を分離し目のの移植実験を行い、in situ hybridizationとBrd Uを用いて、上皮のみの移植片ではFgf-8の発現が維持され、近傍の宿主の間葉細胞の増殖を促進することを示した。一方、間葉のみの移植片では増殖が維持されないことを確認した。これらのことは、口腔側基部の上皮と間葉の両方が、顎の発生に重要であることを示唆している。まず、哺乳類胚の歯胚の発生機序の解明では、囓歯類胚の口咽頭膜が破れる前の内胚葉細胞層を蛍光色素DiIあるいは標識遺伝子を組み込んだアデノウイルスで標識した後、全胚培養を行い、咽頭胚期および器官形成期胚における内胚葉細胞の存在領域を確かめた。その結果、原始口腔の前腸内胚葉は、神経管の形態形成に重要な役割を演ずる脊索前板や脊索最前端に近接した内胚葉細胞層に由来し、同部位ではShhが発現しており、前腸内胚葉におけるshhシグナリングは顔面の形態形成に重要な役割を演じているという可能性が示唆された。さらに、内胚葉を標識後に全胚培養と器官培養を組み合わせた長期培養法を用いて9日間培養した結果、initiation期と蕾状期の歯胚上皮に隣接して内胚葉細胞が存在することが明らかになった。このことから、哺乳類の歯胚形成のinitiationに内胚葉細胞か関わっていることが強く示唆された。顎の発生機序とシグナリング機構の解明では、まず、Fgf-8を発現する第一鰓弓の口腔側の付けねの領域の上皮は間葉細胞の増殖を維持することができ、近傍の宿主の間葉細胞の増殖を促進する一方、間葉のみの移植片では増殖が維持されないことを確認した。よって口腔側基部の上皮と間葉の両方が、顎の発生に重要であることが示唆された。さらに、第一鰓弓の口腔側の付けねになる口咽頭膜の下方の領域は、移動直後の中脳後方由来の神経堤細胞にはメッケル軟骨を誘導できるが、中脳前方の神経堤細胞にはできないことを明らかにし、顎の発生には中脳の神経堤細胞の移動経路と移動先の環境の両方が顎のinitiationに重要であることを明らかにした。また、この過程における上皮-間葉相互作用をBMP-MSXカスケードに注目し、BMPビーズの埋入実験からBMPがMSXシグナリングを介して下顎の部位特異的な細胞増殖と細胞死を制御して軟骨形態を変化させることを明らかにした。また、頭蓋冠癒合症の解析からFGFRを介するシグナリングが頭蓋骨の発生に重要であることを明らかにした。まず、顎の発生機序とシグナリング機構の解明では、まず、FGF-8を発現する第一鰓弓の口腔側の付けねの領域の上皮は間葉細胞の増殖を維持することができ、近傍の宿主の間葉細胞の増殖を促進することを示した。しかし、間葉のみの移植片では増殖が維持されないことを確認した。さらに、第一鰓弓の口腔側の付けねになる口咽頭膜の下方の領域は、移動直後の中脳後方由来の神経堤細胞にはメッケル軟骨を誘導できるが、中脳前方の神経堤細胞にはできないことを明らかにした。これらのことは、顎の発生には、中脳の神経堤細胞の移動経路と移動先の環境の両方が顎のinitiationに重要であることを示唆している。また、本年度は、哺乳類胚の口腔上皮の機能のひとつとして、口腔上皮の陥入によって形成されるラトケ嚢から腺下垂体が発生する機序の解明を試みた。すなわち、哺乳類胚の下垂体形成において、口腔外胚葉が寄与していることを明らかにし、前腸内胚葉と口腔外胚葉と神経堤細胞の相互作用が下垂体の発生機序にどのように関わっているかを解明することを目的とした。
成体由来幹細胞からの三次元心筋組織作製法の開発と臨床応用

成体心臓由来幹細胞(ラット)を用いて、梗塞が起こった心臓に移植するための3次元培養法の確立を目指した。心臓由来幹細胞は、c-kit陽性細胞から得た。同じ方法を用いて採取されたc-kit陽性細胞であっても、長期培養により、異なった遺伝子発現パターンが観察された。GATA4を高発現する細胞は、心筋細胞に分化しやすい傾向が見られ、また、共存培養した心筋細胞の寿命を延ばす効果が見られたので、再生医療に適する細胞であると考えられた。さらに、TGF-βスーパーファミリーが筋細胞への分化に関与することを示した。心筋梗塞、心不全、心筋症など、臓器移植のみが根本的治療法の疾患に対して、臓器移植に代わる再生医療をめざす。ソースの細胞を、心臓由来幹細胞とした。その理由は、自己の心臓由来の幹細胞が最も心臓の再生に適合するであろうと考えたからである。また、幹細胞の性質あるいは心筋細胞へ分化のプロセスを研究することにより、さらに簡便な治療法の開発が可能と考えて、研究を進行させている。ラット成体心臓にある幹細胞(c-Kit陽性細胞)を生体内に移植すると、心筋細胞に分化して心筋細胞の機能を獲得することが米国の研究者たちによって報告された(Cell,114,2003)。我々は、このような幹細胞または、心筋前駆細胞(progenitor cell)を分離して、どのような性質をもつ細胞が拍動する心筋細胞に分化し得るか、またそれを不全心(心筋梗塞巣境界領域など)に移植した際に心機能を回復させるかを研究している。現在、ラットのc-Kit陽性細胞を分離・培養して60代以上継代培養可能な細胞を14種類以上得た。それぞれをクローニングして、200種類以上の心臓由来幹細胞様細胞を樹立した。これらの細胞は、stemness(幹細胞らしさ)遺伝子を発現しており、複数の分化した細胞に分化が可能であることが分かった。また、得られたクローン化細胞の中にcardio-shpereと呼ばれる細胞塊として増殖するものも存在した。特に、心筋の形成に重要な転写因子の一つであるGATA4の発現の高い細胞に注目してin vitroで分化誘導を行ったところ、拍動する心筋細胞を得ることに成功した。今後、得られた細胞を用いて心筋特異的なタンパクを発現させる、最も有効な移植細胞の同定と細胞の樹立方法の確立を目指す。幹細胞から心筋細胞への分化に関する分子を解析することで、不全心に対する有効な遺伝子導入法や新たな薬物療法の開発など、新たな治療法開発が期待できる。我々は、このような幹細胞または、心筋前駆細胞(progenitor cell)を分離して、どのような性質をもつ細胞が拍動する心筋細胞に分化し得るか、またそれを不全心(心筋梗塞巣境界領域など)に移植した際に心機能を回復させるか否やを研究している。ラットc-Kit陽性細胞を分離・培養して60代以上継代培養可能な細胞を得たのちに心臓由来幹細胞様細胞を樹立した。これらの細胞の中より自律拍動する心筋細胞を得ることに成功した。その上、GATA4を発現する細胞株の中には、心筋細胞と共培養すると近接する心筋細胞に対してパラカイン作用により培養心筋細胞のIGF-1の発現を極めて高くし、延命効果をもたらすものがあるのを確認した。さらにこのように得られた幹細胞について、我々が作製したコラーゲンスキャッフォールドを用いて三次元培養法を開発し、細胞増殖を検討したところ、2次元培養に比べて増殖速度が増加することが確認された。今後は、これらの細胞を用いて心筋細胞そのものの延命効果を上昇させる可能性のある、これら細胞の発現するタンパクを解析・同定することにより、新たな治療法の開発を行っていく予定である。本研究の目的は、成体心臓から採取した幹細胞を使って、三次元心筋組織を作製し、臨床応用をめざすことにある。我々は、成体ラットの心臓から、c-kit陽性細胞を採取して、拍動する心筋細胞を樹立することができたが、この細胞を心筋梗塞ラットに直接移植しても、心臓内にとどまる確証を得ることができなかった。そこで、三次元心筋組織を作製して、これを心臓に移植することを試みようとした。そのために、まず、コラーゲンスキャッフォールドを用いた三次元培養法の確立から手がけた。Dr.HosseinHosseinkhaniの協力を得て、三次元培養に用いる媒体を開発した。コラーゲンスキャッフォールドをベースとして、強度を増すため、PGA(poly glycolic acid)を添加した。

このことによる細胞の接着性、増殖能に対する影響を検討したところ、ある割合で混ぜると有意に接着性、増殖能双方上昇することが明らかになった。また、どのような幹細胞を用いたら心筋細胞に分化しやすいのかについても、別途研究を行った。そのために、骨格筋/心筋細胞に分化する幹細胞を用いて、未分化細胞と分化細胞の発現レベルを比較するマイクロアレイ解析を行ったところ、TGF-βスーパーファミリーがこの分化に影響することがわかり、TGF-βスーパーファミリーのサイトカインを用いることで、拍動する細胞をかなりたくさん増やすことができるようになった。コラーゲンスキャッフォールドには、サイトカインを浸潤できるので、有効に拍動する心筋細胞を得ることができる可能性は極めて高く、成体の組織幹細胞を使って、拍動する三次元心筋組織を世界で初めて完成させることができる見込みができた。このことは、幹細胞を用いた心筋梗塞治療法を大きく前進させることができることを意味する。今年度は、最終年度に相当するので、これまでの研究成果を公表していくことに重点を置き、論文発表、ならびに学会報告を行った。心臓の再生医療研究のため、従来は、c-kitの発現にのみ注目して幹細胞を分離選択していたが、c-kit陽性細胞を、さらにGATA4の発現レベルの大小に分け、心筋細胞への分化能、および、共培養した成体心筋細胞への延命効果に違いを及ぼすか否かを比較検討した。GATA4の発現が高いと、これら両方に良好な効果があることが明らかになった。したがって、GATA4の発現が高い心臓由来幹細胞が再生医療に有効であると結論された。さらに、心筋細胞への延命効果に関するシグナル伝達系について検討したところ、IGF-1が重要であること、および、その下流のAktがリン酸化されることが重要であることも分かった。このことをウェスタンブロットなどにより、確認した。一方、我々が樹立した左心房由来幹細胞(LA-PCs)を用いて、未分化細胞、脂肪細胞分化細胞、骨格筋・心筋分化細胞の間でマイクロアレイ解析を行い、TGF-β,Wntシグナル系が有意に変化していること、これらの分子が脂肪細胞分化を抑えて、筋分化を誘導すること、さらに、nogginが心筋細胞を多く形成する働きを有することを示した。今後、この研究により、有効であると分かった分子を用いて、心臓の中に存在する幹細胞を利用した心臓の再生医療の発展に結びつけられると期待される。以上の結果を、合計6本の原著論文、2つの国際学会に発表した。
アトピー性皮膚炎女性の月経周期におけるスキンケア・メイクアップに焦点化した看護

成人期AD女性患者、皮膚症状のある成人期膠原病女性患者,成人期ドライスキン女性を対象に、皮膚状態の評価を行い、作成したリーフレットとDVDを用いて、月経周期におけるスキンケアの見直しを行った。また、カウンセリング手法を用いたメイクセラピーを行い、対象者の自己表現ができるようメイクアップについて指導を行った。結論として、本研究の月経周期におけるスキンケア指導、自己表現できるメイクセラピーが、ADのみならず、皮膚症状のある成人期女性患者の皮膚状態を改善し、ストレスを軽減することができた。本プログラムは、スキントラブルや外見上に悩みを抱えている女性患者のストレスの軽減に有効ではないかと考えられる。日程等の関係で、まだ未印刷ではあるが、アトピー性皮膚炎患者を対象としたスキンケア・メイクセラピーについての教育媒体(案)を作成した。実際に、アトピー性皮膚炎患者と特徴的な皮膚症状のある皮膚筋炎の患者に対して、外来においてスキンケア指導とメイクセラピーを取り入れた看護支援を提供した。結果、患者の皮膚状態(水分量・油分量)およびメイクセラピーの前後のPOMS尺度得点、唾液アミラーゼ量においては、改善がみられた。つまり、スキンケア指導とメイクセラピーを取り入れた看護支援は患者の治療効果を高め、患者の精神心理的状態を改善する効果があると評価できる。本研究は、アトピー性皮膚炎女性の生活の質を高めるために、作成した月経周期におけるスキンケアとメイクアップスキルを高める教育媒体を基に、開発したアトピー性皮膚炎女性の月経周期におけるスキンケアとメイクアップスキルに焦点化した看護支援プログラムの有効性を検討する目的で行われている。看護支援プログラムの視聴覚教材(「アトピー性皮膚炎女性の月経周期におけるスキンケア」)は、モデル予定者の都合のため、撮影日程は平成25年67月に延期となった。2種類の小冊子(「月経周期における全身性変化」「月経周期における基礎スキンケアのコツ」を作成した。平成24年7月に中国山西中医学院附属病院および看護学部にて、リラクゼーション中医学的アプローチ(ヨガと呼吸法)に関する情報を収集した。研究協力施設にて研究分担者である担当医による研究対象者のリクルートを行い、選定基準(1アトピー性皮膚炎と診断されている;22045歳の女性である;3定期受診する必要がある;4症状が軽微あるいは軽度の症状が持続するも、急性に悪化することはまれで悪化しても遷延化しない;5本研究の主旨を理解し、セルフモニタリングができる)に満たした患者に研究への協力を依頼し、承諾を得た2名の患者を対象に、プレテストを行った。1カ月に1回(毎回の定期受診日)、合計6回で毎回は60分程度の体験型学習を行った。結果として、対象者の皮膚油分量、水分量の値、バランスには改善がみられた。湿疹、掻痒感等の臨床所見にも軽減した。また、慢性的なストレスの改善が見られなかったが、スキンケアやメイクアップ、リラクゼーションのセッションの前後に、唾液アミラーゼによる評価される急性ストレスの軽減がみられた。さらに、臨床において、このような看護支援を取り入れることに、患者による好評が得られた。本年度は、アトピー性皮膚炎をはじめ皮膚トラブルのある女性患者のQOLを維持・向上するため、月経周期におけるスキンケア・メイクアップ看護に関するDVD教材(「自分らしく楽しい日々を送るためのメイクセラピー看護」)を作成した。今回作成したDVDと以前作成したリーフレットを用いて、実際にアトピー性皮膚炎女性患者3名、顔面湿疹のある皮膚筋炎女性患者2名を対象に、メイクセラピー(スキンケア・メイクアップの指導を含めた患者の心理面へのアプローチ)を行った。スキンケア指導を行い、月経周期における望ましいスキンケアに関する知識を持ち、日頃のスキンケア方法を見直した結果、皮膚の状態(水分量・油分量)の改善がみられている。また、患者の自己実現を支えるためのメイクセラピーを実施した結果、患者のストレス・不安が軽減し、QOL尺度のスコアが向上した。開催予定の第4回日中韓看護学会は開催されなかったが、中国山西省太原市の山西医科大学附属病院、山西人民病院、山西中医学院にて、皮膚疾患を有する女性患者へのメイクアップを含むトータルスキンケアプログラムに関する研究成果を発表し情報交換を行った。これまで、皮膚疾患患者へのケアはスキンケアが中心となっていたが、現在女性の社会進出に伴い、女性患者は自己表現ができ、社会生活を円滑に送るようなケアが必要となっている。患者の自尊感情、QOLを高めるために、疾患症状を上手くコントロールしつつ、メイクアップで自己表現できるアピアランスケアとして本研究プログラムに取り入れたメイクセラピーが極めて重要な意味をもつ。今年度からアトピー性皮膚炎の患者のみならず、スキンケアとメイクアップを含めたメイクセラピーを受けたいニーズのある皮膚筋炎患者も対象とした。今後、対象者の疾患をさらに拡大し、プログラムを進めていく必要がある。成人期のアトピー性皮膚炎女性患者のみならず、皮膚筋炎やSLEの患者の場合は、月経周期において皮膚症状の増悪がみられるうえにステロイド剤の副作用として、皮膚トラブルやムーンフェイスが出現する。また、顔面神経麻痺のある患者の場合は肌のトラブルがないものの、表情筋のアンバランスのため、外見上の問題が生じてしまう。これらの患者は社会、家庭において重要な役割を担っているため、円滑な社会生活を送ってもらう目的で、本学附属病院で「メイクセラピー看護外来」を開設し、研究者はその外来の運営担当者となっている。今年度は、30歳代の皮膚筋炎患者2名とアトピー性皮膚炎患者1名、5060歳代の顔面神経麻痺の患者5名を対象に、トータルスキンケア看護支援プログラムを実施した。

顔面神経麻痺のある患者は、月経周期における症状の変化がないため、今回は閉経後の患者も対象とした。最終的なデータ分析が途中ではあるが、皮膚トラブルのある患者には、皮膚状態の改善、またほとんどの患者には、POMS(気分評価尺度)等のスコアの改善がみられている。つまり、今回のプログラムは患者の皮膚状態の改善とストレスの軽減には有効ではないかと考えている。疾患、治療内容によって、同じく外見上の悩みを抱いている患者でも、スキンケアやメイクセラピー、治療生活に伴うセルフマネジメントの助言等が異なる部分があると、今年度の研究を通して感じている。今後より患者の個別性に対応できるプログラムの内容となるよう、そこの違いを整理し分析していく必要もある。成人期AD女性患者、皮膚症状のある成人期膠原病女性患者,成人期ドライスキン女性を対象に、皮膚状態の評価を行い、作成したリーフレットとDVDを用いて、月経周期におけるスキンケアの見直しを行った。また、カウンセリング手法を用いたメイクセラピーを行い、対象者の自己表現ができるようメイクアップについて指導を行った。結論として、本研究の月経周期におけるスキンケア指導、自己表現できるメイクセラピーが、ADのみならず、皮膚症状のある成人期女性患者の皮膚状態を改善し、ストレスを軽減することができた。本プログラムは、スキントラブルや外見上に悩みを抱えている女性患者のストレスの軽減に有効ではないかと考えられる。学部生の実習指導を含む教育業務と大学運営業務とのバランス関係で、1回のプログラムには、1名あるいは2名の患者のみの参加となっていますので、対象者を増やすのは計画よりやや遅れている。実際のプログラムの進行においては、おおむね計画通りに進めている。慢性期看護学今後は、アトピー性皮膚炎以外の皮膚トラブルのある患者も対象として、リクルートしていく。そのため、皮膚科以外の医師等からの協力も必要となるため、現在膠原病内科、耳鼻科等の診療科の医師との連携が取れている。研究機関の患者受療状況と学内業務内容の関係で研究者間の調整が少し不十分な点があった。現在遅れている理由としては、1視聴覚教材のモデル予定者の都合のため、撮影日程は平成25年67月に延期となった。2研究者の日程と対象者となるアトピー性皮膚炎女性患者の受診日に合わないことが多かったことがあげられる。参加予定の国際学会は開催されなかったこと、対象者のリクルートは計画より遅れていることより、次年度使用額が生じた。26年度は、研究をスムーズに進めるため、研究者は研究施設外来での研究日を確保している。また、他の医療施設にも研究協力の依頼を行う。研究予定の日程より、遅れているが、研究の展開方法について、研究分担者と再検討した結果、2か月に1回の介入より1か月に1回のほうがより対象者にとって負担が少なく、迅速に皮膚の状態の変化に応じた教育的看護援助を提供することが期待できる。そのため、最終的に研究目的の到達度に大きく影響がないと考えられる。
非線形振動子群における秩序形成に基づくセンシング手法に関する基礎的研究

本研究では非線形振動子における秩序形成を用いた化学センシングの可能性を検討するため、第1ステップでは、塩水振動子群のシミュレーションを行い、第2ステップでは、非線形振動子群としてpoly(IPAAm-co-Ru(bpy)_3)ゲルを用いた自律振動ゲルによって繊毛状のマイクロ構造体を作製し、そこにおける秩序形成の確認と外部環境との相互作用についての基礎研究を遂行した。その結果、以下の成果を得た。1.塩水振動子群のシミュレーションでは、1つの塩水振動子では、パラメータ変化による周波数の挙動変化が、ほとんどないことがわかった。それに比べ、9つの非線形振動子群では、パラメータ変化による周波数の挙動に大きな変化が現れた。このことより、1つの非線形振動子では検出できない挙動のわずかな変化を非線形振動子群の秩序形成を利用することにより、非線形振動子の周波数の大きな変化として検出可能であることが明らかになった。2.世界で始めて自律振動高分子ゲルに3次元突起アレイを形成した非線形振動子群を作製し、高分子ゲル突起アレイに形成される秩序構造としての化学反応波の伝播様式の観察と、化学反応に伴う高分子ゲル突起アレイの伸縮運動の観察に成功した。突起付きpoly(IPAAm-co-Ru(bpy)_3)ゲルでは、どこか一点に強い振動(刺激)があれば、その点を起点とした秩序が形成され、周期的な膨潤収縮が起こることがわかった。非線形振動子群の秩序形成に基づいたセンシング方法が、新しい化学量の検出原理として可能性があることがシミュレーションによって明らかとなった。今後の展開研究において、高分子ゲルを保持する環境の変化が化学反応波の伝播様式に与える影響を解明すれば、これらの高分子ゲル突起アレイの伸縮運動をセンシングに適用できる見通しを得た。本研究の目的は、非線形・非平衡状態を積極的に利用する生物の持つ優れた情報処理機能を模倣したセンシング手法の実現可能性を探ることである。まず非線形振動子の例として塩水振動子と呼ばれる微小容器における塩水の流出・入の非線形振動系を用い、13個の非線形振動子における実験を行った。その結果、2個以上の振動子間に相互作用があると一定のリズム(秩序)が形成されることが確認できた。次にシミュレーションにより相互作用がある9個の振動子の系における秩序を調べた。その結果、9個の振動子の系における秩序は非線形振動子のパラメータに強く依存することが明かとなった。これより、非線形振動子群における秩序状態から非線形振動子のパラメータ変動を推定できることが示唆された。また研究の課程で、非線形振動子群を実現する媒体として高分子ゲルが有望であることが明かなり、次年度からは高分子ゲルアレイを用いた実験に着手する予定である。本研究の目的は、非線型・非平衡状態を積極的に利用する生物の持つ優れた情報処理機能を模倣したセンシング手法の実現可能性を探ることである。非線型振動子の例として塩水振動子と呼ばれる微小容器における塩水の流出・入の非線型振動系を用い、シミュレーションにより相互作用がある9個の振動子における振動挙動を解析した。その結果、9個の振動子において明確な秩序形成が観測され、その秩序は非線型振動パラメータに強く依存することが明らかとなった。この秩序構造を観測することにより、単一の振動子の挙動からは検出不可能であった非線型振動パラメータのわずかな変化を、明確に検出することが可能であった。次ステップとして、非線型振動子の例として高分子ゲル中でのBZ反応を応用した振動現象に着目し、高分子ゲルを用いた振動子アレイの試作に取り組んだ。X線リソグラフィを用いた3次元加工技術と成型技術を駆使して、直径100μm、高さ150μmの高分子ゲル突起をアレイ状に配置したデバイスの製作に成功した。

来年度はこの高分子ゲル突起アレイの振動における秩序形成とその解析実験に着手する。本研究の目的は、生物の持つ優れた情報処理機能を応用したセンシング手法の実現可能性を探ることである。従来のセンサにおける検出原理には主に線形でかつ平衡な系における挙動を利用してきた。ところが生物の持つ優れた情報処理の特徴は非線型・非平衡状態の利用にあるといわれている。従って、非線型・非平衡状態を積極的に利用するセンシング手法を理論および実験の両面から基礎的に検討することによって、生物の持つ優れた情報処理機能を応用したセンシング手法の実現可能性を探る。本年度は研究の最終フェーズにあたり、過去2年間の塩水振動子を用いたシミュレーションによる研究成果を踏まえ、実際の非線型振動子群として高分子を用いた自律振動ゲルにターゲットを絞った。自律振動ゲルによって繊毛状のマイクロ構造体を作製し、そこにおける秩序形成の確認と外部環境との相互作用についての基礎研究を遂行した。その結果、世界で始めて自律振動高分子ゲルに3次元突起アレイを形成した非線型振動子群を作製し、高分子ゲル突起アレイに形成される秩序構造としての化学反応波の伝播様式の観察と、化学反応に伴う高分子ゲル突起アレイの伸縮運動の観測に成功した。高分子ゲル突起アレイにおける繊毛運動に類似の伸縮運動は化学反応波の伝播様式によって支配される。今後の展開研究において、高分子ゲルを保持する環境の変化が化学反応波の伝播様式に与える影響を解明すれば、これらの高分子ゲル突起アレイの伸縮運動をセンシングに適用できる見通しを得た。
脳波を用いた手首運動に係る脳内身体表現の学理とその可視化

本研究では、運動の種類に応じて複数の筋肉が強調して活動する(筋シナジーが存在する)という仮定のもとに、脳活動と筋シナジー制御との関わりを脳波から調べることを目的としている。今年度は同じ新学術領域に所属する他の研究グループおよび海外の研究機関との共同研究を推進し、指運動を用いてシナジー制御の解明を進めた。指運動中の脳波と筋電信号の同時計測を行い、8方向の指運動の識別を脳波から行うとともに、筋電信号からは、指運動に関する筋シナジーの推定を行なった。脳波を用いた識別では、これまでに確立している脳波から筋活動信号を推定する技術(Yoshimura et al., Neuroimage, 2012)を用いることで、高い識別率で8方向の運動が判別できることが確認され、その成果については論文投稿中である。一方、脳活動信号から運動の情報を抽出する技術と、それらの情報を用いて手のロボットを動かす取り組みについては、3件の国際論文にて発表を行なった。28年度が最終年度であるため、記入しない。運動の種類に応じて複数の筋肉が協調して活動する(筋シナジーが存在する)という仮定のもとに、脳がどのように筋シナジーを制御しているかを脳活動信号から調べることを目的として、今年度は第一段階として、筋電信号を用いて筋シナジーを推定する取り組みを主に行った。健常者と片麻痺患者の筋シナジーを推定した結果、両者でシナジーパターンが異なるものが見出され、健常者では同時に活動しない筋肉が片麻痺患者の場合には同時に活性する傾向をシナジー推定から検出することができた。また、同じシナジーパターンであっても、時系列的パターンが異なることも示した(電子情報通信学会にて発表)。運動強度の違いによるシナジー解析を健常者の跳躍タスクについて行ったところ、シナジーパターンはほぼ同じで時系列パターンが異なることを示した(計測自動制御学会にて発表)。今年度は筋電信号による筋シナジー推定を通して手法を確立することができた。また脳波から筋活動信号の推定法および脳活動信号の可視化技術の確立にも取り組み、次年度で脳活動信号を用いた筋シナジーの推定に取り組む基盤を整えることができたことから、おおむね順調に進展していると考えられる。今後は脳波および機能的MRIデータを用いて、手や足の運動に関する脳内情報処理過程と筋シナジーの可視化に取り組む。
温度感受性ポリマーを用いた成熟網膜神経節細胞の選択的培養法の確立

"成熟哺乳動物の網膜神経節細胞の選択的培養法の確立"というテーマに基づき検討を行った。1,温度感受性ポリマーと抗体(Thy-1.1)を用いた培養法の確立。一次抗体(Thy-1.1)と二次抗体を結合した磁気ビーズに、酵素消化した網膜の細胞浮遊液を反応させ、ビーズに神経節細胞を結合させた。他の細胞を除去した後、磁気ビーズより神経節細胞を切り離し、培養を行った。培養された細胞は蛍光抗体染色により目的の細胞であることを確認した。抗体を結合した磁気ビーズを使用することにより成熟網膜神経節細胞を選択的に分離することが出来た。酵素消化後の細胞浮遊液中には神経節細胞は十分確認されたが、ビーズより切り離し培養された培養皿中の神経節細胞の数は僅かであった。今後、細胞の回収率を上げる為、ビーズより切り離す条件を検討する必要がある。当初、温度感受性ポリマーを用いて神経節細胞を分離する予定であったが、この実験手技では温度感受性ポリマー本来の特性が十分に生かされないため、磁気ビーズを用いた。2,脳可溶性コンドロイチン硫酸プロテオグリカン(CSPG)のフォスファカンコア蛋白の大腸菌を用いた融合蛋白の発現と精製。大腸菌により目的とする融合蛋白の十分な発現が確認された。しかし、精製の段階で融合蛋白は可溶化せず精製できていない。今後、融合蛋白を可溶化する方法または、他の方法にて融合蛋白を発現させることを検討する必要がある。
腫瘍血管内皮細胞の抗原提示能を活かした次世代がん免疫療法の基盤研究

腫瘍血管内皮細胞(EC)の抗原提示能を活かして、腫瘍組織に腫瘍抗原特異的T細胞の浸潤を促す免疫療法を開発する。本研究では、以下の3つを達成したい。1)機械学習を用いた、HLA class II-結合性ペプチドの予想platformの作製2)ペプチド免疫によるTh、CTL誘導効率を高めるため、担体Mとペプチドおよびアジュバントを混ぜて皮内注射する方法を、Mなしの免疫と比較する。3)人のペプチド免疫療法で誘導されがちな、アミノ酸変異のない腫瘍抗原に対するCTLについて、in vivoにおける抗腫瘍活性を検討する。また、より高い抗腫瘍活性を誘導する免疫法を開発する。2)ペプチド免疫によるTh、CTL誘導効率を高めるため、担体Mとペプチドおよびアジュバントを混ぜて皮内注射する方法を、Mなしの免疫と比較する。
エポキシドの光および熱誘起アニオン重合

1.前年度において,触媒の中心金属における配位子(Cl,O^iPr,OPh等)のシクロヘキセンオキシド(CHO)の重合反応における役割について実験的に検討し,一応の結論を得たが,本年度はこれに関するNMR等の実験を補充し,現在論文を作成中である。2.化合物Iと金属アルコキシドとの二元触媒がCHOの光誘起重合に有効であるという知見に基づいて,新しい光誘起重合触媒として,Iと同様な構造を金属アルコキシドの配位子内に持つものを設計し,その前駆体である化合物IIの合成を試みた。前年度にこの合成にほぼ成功していたが,収率,純度が低かったので反応経路の改良を行い,オルト体,パラ体のIIの合成法を確立した。IIとTi(O^iPr)_4,T(O^iPr)_2Cl_2等の金属アルコキシドとの二元触媒を用いてCHOの重合反応を試みたが,予期に反して,VV照射による効果は殆ど見られず,光誘起重合は起らなかった。3.新しい光誘起重合触媒の開発を目的として,いくつかの試みを行ったが成功するに至らなかった。一例として,金属アルキン/ケトン系触媒がエポキシドの重合に有効であることが知られているので,VV照射によりケトンを発生するような化合物の合成を試みた。まず,O-ニトロベンジルブロミドとエチルアミンとの反応により四級アンモニウム塩を合成し,次に我々が成功している前例に従って,アセトンとの反応によりIIに類似した構造を持つエノ-ルエ-テルを合成することを試みたが,二段目の反応は殆ど起らなかった。4.これ迄の結果から推論して,金属塩化物/クラウンエ-テル系触媒あるいはこれに類似した触媒系がエポキシドの新しい重合触媒となり得ると考え,現在CHOの重合反応を検討中である。1.我々はTi(O^iPr)_4(I)はシクロヘキセンオキシド(II)の重合に対する触媒活性は低いが、これにフェノールを添加すると触媒活性が著しく増大することを見出した。この知見に基づいてUV照射あるいは加熱することによりフェノール類を放出するような化合物(例えば、それぞれIIIあるいはIV)とIとの二成分系触媒を用いてIIの光誘起あるいは熱誘起重合に成功した。生成重合体の解析から、その末端の大部分はPhO基ではなく、^iPrO基であることが判明した。これらの事実から重合機構は配位アニオン重合と考えている。2.上記の重合反応における触媒作用を解明し、新しい触媒を設計するために、金属アルコキシドの金属、配位子を変換させてIIの重合を行い、以下の結果を得た。(1)Zr(OPr)_4は単独でも相当の重合活性があるが、室温以下で上記と同様な光誘起重合を行うことができる。(2)遷移金属塩化物によるIIの重合では、ToCl_4、TaCl_5が特に高い触媒活性を示すこと、生成重合体制の末端にClが存在すること、また上記と同様に、この場合にもフェノール類の添加効果があることなどを見出した。以上の結果を総合して、遷移金属化合物の重合活性は金属に結合した配位子のエポキシドへの攻撃力と金属のルイス酸性を増す働きの二つにより支配されており、前者はCl>O^iPr>OPhの順であり、後者はOPh、Cl>O^iPrの順であると結論した。3.新しい型の光誘起重合触媒として、IIIの様な構造を金属アルコキシドの配位子内に持つものを設計し、その合成を試みた。その一つとして化合物Vの化合を行い、O-体、P-体の合成に成功し、現在遷移金属アルコキシドあるいは塩化物との二成分系触媒等によるIIの重合反応を検討している。

4.これ迄の結果から推論して,金属塩化物/クラウンエ-テル系触媒あるいはこれに類似した触媒系がエポキシドの新しい重合触媒となり得ると考え,現在CHOの重合反応を検討中である。
オブジェクティヴィストの詩の技法におけるイディッシュ語の影響

2010年度に執筆した論文「チャールズ・レズニコフの『証言』とアメリカン・フォークバラッド」において,バラッドを定点とすることにより、階級や性差といった問題を含め総体的にチャールズ・レズニコフの詩におけるイディッシュ語の影響を抽出し検討した。また、この成果を踏まえて,イディッシュ語とヘブライ語の伝統的なジェンダー的役割に注目し、「母子関係」という新たな視座を研究に取り入れ、2011年度に研究発表(二回)でその成果を公開した。研究成果として、オブジェクティヴィストの一人であるチャールズ・レズニコフの『証言』におけるイディッシュ語の影響について、バラッドを媒介にして明らかにしようと試みた論文「チャールズ・レズニコフの『証言』とアメリカン・フォーク・バラッド」が挙げられる。研究課題を明らかにする上で、本論文の意義は、バラッドという定点を設定したところにある。バラッドを導入することで、ともすれば漠然とした散漫な指摘の羅列に終わる危険性を回避しつつ、イディッシュ語を言語の問題のみならず、階級や性差といった問題を含めた総体として、その影響を検討し抽出することが可能になった。バラッドは古くから広く流布している詩形であり、東欧のイディッシュ語コミュニティーにも伝えられ、オブジェクティヴィストたちが生まれ育ったアメリカのユダヤ系コミュニティーでもイディッシュ・バラッドがうたわれていた。『証言』とイディッシュ・バラッドを比較検討し、オブジェクティヴィストの作品におけるイディッシュ語の影響を明らかにするのが最終的な目的であるが、本論文はまずその下準備として『証言』とバラッドを比較検討した。バラッドは『証言』と同様に事件を描くことが多く、重点は事実を綴ることに置かれ、因果関係や動機の解明には至らない。「控えめなトーン」と「因果関係」の排除は、バラッドと『証言』の両者ともに顕著な特徴としてまず挙げられるものである。更に重要なのは、これらの特徴が、両者の語り手や登場人物が因果関係の決定権も持たず、社会的にも文学の伝統的にも主流へのアクセスを持たないことの帰結であったということである。このような共通点にも関わらず、『証言』とバラッドの類似性は指摘されてこなかった。この成果は、レズニコフとイディッシュ・バラッドの比較検討の一工程として欠かせないものであり、次年度での両者の直接的検討につながる重要な礎である。研究成果として,主に二つの研究発表「チャールズ・レズニコフの『証言』とバラッド的詩学」および「ユダヤ系アメリカ文学における父子/母子関係」が挙げられる.前年度に執筆した論文「チャールズ・レズニコフの『証言』とアメリカン・フォークバラッド」において,オブジェクティヴィストの一人であるチャールズ・レズニコフの『証言』におけるイディッシュ語の影響の一端を明らかにした.バラッドを定点とすることにより,階級や性差といった問題を含め総体的にイディッシュ語の影響を検討し抽出することができた.その研究成果を踏まえて,イディッシュ語とヘブライ語の伝統的なジェンダー的役割に注目し,「母子関係」という新たな視座を研究に取り入れ,先に挙げた二つの研究発表でその成果を公開した.伝統的にヘブライ語は聖なる言語であり,男性の言語とされてきた.それに対してイディッシュ語は世俗的な領域に属する言語であり,女性の言語とされてきた.この比喩は家庭内の関係にも敷衍され,ヘブライ語は父,イディッシュ語は母とみなされてきた.そこでユダヤ系アメリカ文学における「母子関係」を探ることによって,イディッシュ語の影響を探ることができると考えた.「父子関係」が優位であるユダヤ系アメリカ文学において,「母子関係」は後景化されていることが多い.そこでユダヤ系アメリカ文学の基本形を確認しつつ,主にチャールズ・レズニコフの詩のなかで「母子関係」が前景化された作品群に注目し,その技法におけるイディッシュ語の影響を探った.当該年度の研究成果において,イディッシュ語の影響をさぐる上で「母子関係」という視座を得たことが一番大きなものであった.この視座は平成24年度から新たに始まる科研プロジェクトへの橋渡しへとなった.