hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Girdinによるダイナミン識別・活性化と癌細胞の浸潤・転移機構の解明

GirdinによるダイナミンGTPaseの活性化機構を、GirdinとのX線共結晶構造解析などによって検討した。Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構については、TIRF顕微鏡でのエンドサイトーシスの動態観察により検証し、これまでに真核細胞中の様々な輸送に特有のアダプターこそ同定されていたものの、完全には理解されてはいなかった選択的なクラスリン依存性エンドサイトーシス(CME)のためのメカニズムが新規のdynamin GTPase結合タンパク質Girdinによってコントロールされることを明らかにした。エンドサイトーシスの小胞生成の基盤であり、細胞内膜構造の変化によって悪性腫瘍細胞の浸潤に関与すると考えられているGTPaseダイナミンと、癌の浸潤・転移の促進と密接な関係があるAktのリン酸化基質として発見されたアクチン結合分子Girdinとの相互作用について(1) GirdinによるダイナミンGTPaseの活性化機構(2) Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構(3) Girdinによるダイナミン2識別機構の解析を検討し、エンドサイトーシス制御機構と癌の浸潤・転移機構の関係を探ることによって、癌の浸潤・転移機構解明への展開を計ることを目的としている。平成25年度は、(1)GirdinのダイナミンGTPaseの活性化機構を、ダイナミン2 GTPaseの反応速度論的解析、ダイナミン2とGirdinとの相互作用領域の探索、ダイナミン2とGirdinとのX線共結晶構造解析によって検討する。(2)Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構については、TIRF顕微鏡でのエンドサイトーシスの動態観察により検証していたが、(1)GirdinのダイナミンGTPaseの活性化機構の検討の中でダイナミン2とGirdinとの相互作用領域の探索とGirdinのダイナミン2との結合部位のX線共結晶構造解析の検討を行った。ダイナミン2とGirdinとの相互作用領域に関しては来年度に学会発表および学術論文として報告を予定している。また、Girdinのダイナミン2との結合部位のX線共結晶構造解析に関しては、既に結晶化条件を決定し、単結晶を安定して得ることに成功している。この単結晶については高エネルギー加速器研究機構放射光科学研究施設やSPring-8での解析を予定している。平成26年度までに、(1)GirdinのダイナミンGTPaseの活性化機構を、ダイナミン2とGirdinとのX線共結晶構造解析などによって検討した。また、(2)Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構については、TIRF顕微鏡でのエンドサイトーシスの動態観察により検証し、これまでに真核細胞中の様々な輸送に特有のアダプターこそ同定されていたものの、完全には理解されてはいなかった選択的なクラスリン依存性エンドサイトーシス(CME)のためのメカニズムが新規のdynamin GTPase結合タンパク質Girdinによってコントロールされることを明らかにし、雑誌論文として報告した。ダイナミン2との結合部位のX線結晶構造解析に関しては、単結晶を安定して得る条件を決定し、単結晶を高エネルギー加速器研究機構放射光科学研究施設(PF)やSPring-8で解析を行ったが良好な反射を得られず、標的とする結晶化タンパク質の領域などを変えて、結晶化を行い単結晶を安定して得られる条件を決定した。PFやSPring-8で解析を行う予定である。エンドサイトーシスの小胞生成の基盤であり、細胞内膜構造の変化によって悪性腫瘍細胞の浸潤に関与するGTPaseダイナミンと、癌の浸潤・転移の促進と密接な関係があるAktのリン酸化基質アクチン結合分子Girdinとの相互作用について(1) GirdinによるダイナミンGTPaseの活性化機構(2) Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構(3) Girdinによるダイナミン2識別機構の解析を検討し、エンドサイトーシス制御機構と癌の浸潤・転移機構の関係を探った。本研究課題では、(1)GirdinのダイナミンGTPaseの活性化機構を、ダイナミン2とGirdinとのX線共結晶構造解析などによって検討した。その結果、(2)Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構については、TIRF顕微鏡でのエンドサイトーシスの動態観察により検証し、これまでに真核細胞中の様々な輸送に特有のアダプターこそ同定されていたものの、完全には理解されてはいなかった選択的なクラスリン依存性エンドサイトーシス(CME)のためのメカニズムが新規のdynamin GTPase結合タンパク質Girdinによってコントロールされることを明らかにし、雑誌論文として報告した。

ダイナミン2との結合部位であるGirdinのN末端部位のX線結晶構造解析に関しては、単結晶を安定して得る条件を決定し、単結晶を高エネルギー加速器研究機構放射光科学研究施設などで解析を行い、低分解能ながらも4.0 &Aring;データでの構造情報を得ることに成功し、構築したモデルの検証のためセレノメチオニン標識した蛋白質結晶を調製し、モデルの確認を試みた、また、詳細な分子認識の議論のためにコンストラクトや精製条件の改良等を含む結晶化条件の再検討を行い、データの質と分解能の向上を試みた。GirdinによるダイナミンGTPaseの活性化機構を、GirdinとのX線共結晶構造解析などによって検討した。Girdinのエンドサイトーシスおよび膜リモデリングへの影響とその機構については、TIRF顕微鏡でのエンドサイトーシスの動態観察により検証し、これまでに真核細胞中の様々な輸送に特有のアダプターこそ同定されていたものの、完全には理解されてはいなかった選択的なクラスリン依存性エンドサイトーシス(CME)のためのメカニズムが新規のdynamin GTPase結合タンパク質Girdinによってコントロールされることを明らかにした。選択的なクラスリン依存性エンドサイトーシス(CME)のためのメカニズムのdynamin GTPase結合タンパク質Girdinによる制御機構に関して新たな知見を得て、既に研究成果を雑誌論文として発表し成果を得ている。今年度、ダイナミン2との結合部位のX線結晶構造解析が発展すれば、研究計画を大きく上回る成果だと判断できる。分子生物学来年度も引き続き、研究分担者湯澤聡助教の主導でGirdinのダイナミン2とGirdinとのX線共結晶構造解析に集中して、研究を進める。また、その情報を基盤として、次の研究計画につなげる。概ね予定通りであるが、ダイナミン2とGirdinとの相互作用が弱いことが予想されたために共結晶での解析検討を延期し、Girdinのダイナミン2との結合部位のX線共結晶構造解析に切り替えたため、やや遅れていると判断した。ただし、結果として既に結晶化条件を決定し、単結晶を安定して得ることに成功しており、放射光施設での解析が可能な状況になっている。学会発表を予定していたが、来年度にまとめて報告することにしたために次年度使用額が生じた。来年度は、研究分担者湯澤聡助教の主導でGirdinのダイナミン2との結合部位のX線共結晶構造解析に集中して研究を進めて、構造を決定する。また、その情報を基盤として以降の検討を行う。理由に記載したように、学会発表および論文発表をまとめて計画している。論文発表を予定していたが、来年度にまとめて報告することにしたために次年度使用額が生じた。理由に記載したように、論文発表をまとめて計画している。
心臓再生ニッチの探索と構築

本研究は、急性心筋障害後における心筋組織内の液性因子や細胞外基質分子の経時的変化を調べ、内因性心筋再生に関わる可能性のある因子を網羅的にScreeningした。その結果、心筋梗塞の中心と境界領域以外に、遠隔健常心筋領域にも多くのサイトカイン/ケモカインおよび細胞外マトリックス/接着分子などの関連遺伝子の発現変化が認められた。しかし、心筋再生に盛んな梗塞と正常心筋の境界領域には、Interleukinなどの炎症性サイトカインや細胞外マトリックス関連タンパク酵素の発現変化が梗塞後の経過と共に徐々に減少していたことが判明した。これらの因子は内因性心筋再生を制御していると思われる。1、健常マウスを冠動脈左前下行枝の結紮により心筋梗塞モデルを作製し、1,3,7,14日後の心筋梗塞領域、梗塞外側境界領域、および遠隔健常心筋組織を採取した。3、遠隔健常心筋組織に比べ、梗塞領域や境界領域に多くの細胞外基質・接着分子の発現が異なっており、また一部の炎症性サイトカインの変化も認められていた。心筋梗塞後に梗塞と境界領域における細胞外基質・接着分子および炎症性サイトカインの発現を網羅的に解析でき、多くの因子の経時的な発現変化を見出した。本研究の目的は心筋再生に適切な組織環境、即ち「再生ニッチ」を分子・細胞レベルで解明することである。昨年度に続いて、本年度は健常マウスに心筋梗塞を作製し、1,3,7,14日目に梗塞の中心領域、遠隔健常心筋領域、及び両社の間の境界領域から、それぞれ組織を採集した。採取した各領域の組織からRNAを抽出し、Pathway-focused PCR array解析により炎症性サイトカイン、細胞外マトリックスおよび接着分子の発現を網羅的に調べた。その結果、心筋の再生に盛んな境界領域の組織には、Inleukin-1betaなど多数の炎症性サイトカインの上昇が検出した。一方、心筋再生の乏しい梗塞中心領域には、Collagen 3などの多くの細胞外基質分子が上昇していた。また、過去の研究で報告されている心筋再生関連因子(Inleukin-1betaなど)をいくつか選定し、RT-PCRやWestern Blotによる定量評価を行った。その結果、境界領域の組織中にはInleukin-1betaが有意に上昇していたことを明らかにした。さらに、Inleukin-1betaが心筋細胞や心筋幹細胞の生存と増殖に与える影響をin vitro実験で調べた。その結果、Inleukin-1betaは心筋細胞の生存および心筋幹細胞の増殖に対する促進効果を確認した。上記の結果から、Inleukin-1betaなどの炎症性サイトカインや細胞外基質分子は心筋再生ニッチの構成分子であることを示唆した。今後は、組織学的解析を含め、さらなる心筋再生ニッチの全容解明を進んでいく予定である。心筋梗塞後に梗塞中心領域、境界領域、及び遠隔健常心筋領域における炎症性サイトカインや細胞外基質分子の経時的変化を明らかにした上、個々の代表的な因子が心筋幹細胞などに与える影響などのin vitro実験も行った。心筋再生ニッチの関わる因子の同定に貢献する研究結果を得られたと考えている。昨年度に続いて、本年度はマウス梗塞心筋モデルを用いて、手術後1,3,7,14日目に心臓を摘出し、梗塞領域、境界領域、および遠隔正常心筋組織における炎症性サイトカイン、細胞外マトリックスおよび接着分子の発現変化をPCR array解析により経時的に詳しく調べた。意外なことに、遠隔正常心筋組織にも多くの因子の発現変化が認められた。そのため、PCR array解析データは同じマウスの遠隔正常心筋組織の発現レベルに補正し、梗塞領域と境界領域に特異的な変化を示す因子を見出すこととした。その結果、梗塞心筋組織内にはCcl3, Ccl4, Ccl5, Cxcl13, Il1b, Il6など多く炎症性関連性サイトカインやケモカインの上昇が手術後の14日までに継続的な上昇を認められた。一方、境界領域にはCdh1, Ingae, Ingax, Ingb4, Cntn1, Emilin1などの細胞外マトリックスおよび接着分子が梗塞14日目に特異的に低下していたことを明らかにした。これら因子の発現変化は免疫組織学染色法で確認した。しかし、in vitro実験でこれら因子が心筋細胞、内皮細胞、心筋幹細胞の生存や増殖に与える影響を調べたところ、安定したデータが得られず、それぞれの因子が内因性心筋再生に対する作用は不明である。以上の結果から、様々な炎症性サイトカインや細胞外基質分子は内因性心筋再生に寄与している可能性が示唆された。今後は、さらなるin vitroおよびin vivo実験により内因性心筋再生を誘導する因子の確認を行い、心筋再生ニッチの全容解明を進んでいく必要がある。

In vitro解析により、心筋再生に重要な役割を果たす因子を同定し、再生ニッチの構成をすこしずつ明らかにしていきたい。前年度に続き、さらに代表的なる炎症性サイトカインや細胞外基質分子を新たに選んで、心筋細胞や心筋幹細胞の生存、増殖、分化・脱分化に与える影響を調べ、心筋再生ニッチの全容解明に進めていく予定です。心臓血管外科学同一研究テーマで財団や大学内部から別にすこし資金を得られていたため。同研究テーマに関して、別途に財団法人や研究所内部から研究費の補助が得られており、それらの資金を実験の消耗品の購入に充てていた。研究全体に必要な資金は科学研究費補助金よりも多額と予想されるため、今年度の余剰金はその不足分を賄う。本年度は、他のところから研究費の支給がなく、心筋細胞や心筋幹細胞の培養に高額の消耗品費が必要である。また、次年度は本研究の最終年度であるため、成果発表のための出版費や学会出張経費が多く掛かる見込みである。
インフルエンザウイルスによる宿主mRNAのプロセシング阻害

目的と意義:我々はインフルエンザウイルス感染細胞で2.4-10kbの大きさのHSP70遺伝子の転写産物が核内に蓄積することを発見した。本研究ではポリA部位を跨ぐプローブを作製してRNaseプロテクション試験を行い、この長い転写物がポリA部位下流の配列を持った通過転写物であるか否か調べた。材料と方法:ウイルスはインフルエンザA/Udorn/72株を、細胞はイヌ腎由来細胞株MDCKを用いた。結果:(1)MDCK細胞DNAをEco RIで消化し、Eco RIカセットを連結して行ったカセットPCRにより、HSP70mRNAの3'端539bとポリA部位の下流配列57bを含む596bの遺伝子断片が得られた。この断片の3'端190bを鋳型にしてリボプローブを作製して、RNase T1を用いたプロテクション試験を行った。(2)ウイルス感染3時間目に亜ヒ酸ナトリウムを加えHSP70の誘導を開始し、さらに3時間培養を続けた後に細胞を核と細胞質に分画してRNAを抽出した。核内RNAでは通過転写物に対応する190bバンドと正常mRNAに対応する139b及び149bバンドの3本のプロテクトバンドが見られた。非感染対照細胞では正常mRNAが圧倒的で通過転写物は19%であったが、ウイルス感染細胞では通過転写物が82%に増えていた。(3)細胞質RNAでは感染、非感染ともに正常mRNAがほとんどであった。考察:ウイルス感染によりポリA部位の下流配列を含む転写物の比率が増えることが示され、感染細胞に蓄積する2.4-10kbの長いHSP70転写物はポリA部位通過転写物であることが証明された。真核細胞のpre-mRNA3'末端のプロセシング反応は通過転写物のポリA付加部位での切断と数百塩基のアデニンの付加である。得られた結果はインフルエンザウイルス感染細胞では宿主mRNAのポリA付加部位での切断が阻害されることを示す。
難治性疾患であるミトコンドリア病の一病型であるMELASの患者より多分化能を有するiPS細胞の樹立に成功した。樹立したiPS細胞では各々のラインで変異率は異なり、低いものは3.6%から高いものは99.4%と広く分布していた。未分化iPS細胞から分化した線維芽細胞について変異率やミトコンドリア機能について解析した。解析した変異率の高いラインでは電子伝達系複合体Iでの機能低下を認めた一方、変異率が低いラインでは機能低下を認めなかった。これはMELAS患者の臨床的特徴として報告されているが、ここまでの研究において我々はMELASにおける病態モデルを構築することに成功した。ミトコンドリア脳筋症は脳、筋肉、心臓など多臓器において機能異常をきたす全身疾患であるが、現時点では有効性が証明された治療法はない。本研究はiPS細胞を用いてミトコンドリア脳筋症の病態解明さらにはドラッグスクリーニングをおこない難治性疾患であるミトコンドリア脳筋症の治療薬開発を目的とする。ミトコンドリア病(MELAS)および健常人からiPS細胞樹立を開始して、20ライン樹立することに成功した。MELASの患者の皮膚生検をおこない皮膚線維芽細胞からiPS細胞を樹立した。樹立したiPS細胞は1免疫染色(Oct3/4、Nanog、SSEA3・4、TRA1-60・81の未分化マーカーの発現の確認)2RT-PCR法(Oct3/4、Nanog、REX1などの未分化マーカーの発現の確認)で未分化性を証明し、3奇形腫形成能の確認(SCIDマウスへの移植実験)で多分化能が示された。それぞれのラインについて継代数20の段階でDNAを抽出し、Real time PCR法を用いてそれぞれのミトコンドリアDNAの変異率を解析した。MELAS由来のiPS細胞の変異率は4%から99%まで幅広く分布していた。iPS細胞から分化したfibroblastの変異率および呼吸機能を解析した。分化したfibroblastおよび心筋細胞の変異率はiPS細胞の変異率が維持されていた。MELASのiPSから分化したfibroblastの呼吸機能をspectrometerを用い解析したが、複合体Iでの機能低下が顕著であり、臨床でのこれまでの報告された病態と一致していた。iPS細胞を用いてMELASの病態モデルを構築することに成功した。この病態モデルを用いて今後の治療薬開発および病態解明を進めていく方針である。ミトコンドリア病の病型であるMELASの患者の皮膚生検をおこない、皮膚線維芽細胞からiPS細胞を樹立した。まず一カ月生検皮膚組織を培養し、皮膚線維芽細胞を樹立後、レトロウイルスベクターを用いて転写因子(Oct3/4、Sox2、Klf4、±cMYC)を同細胞に導入し、フィーダー細胞であるマウス線維芽細胞(SNL細胞)上でES細胞用培地で約1カ月間培養した後、出現したES細胞様コロニーをピックアップし、継代培養を経てiPS細胞株が樹立された。樹立したiPS細胞は免疫染色(未分化マーカーの発現の確認)および奇形腫形成能の確認で多分化能が示された。樹立された20ラインについてDNAを抽出し、Real time PCR法を用いてそれぞれのミトコンドリアDNAの変異率を解析した。変異率は4%から99%まで広く分布していた。継代を重ねる過程で修飾が加わり変異率が変化する可能性があり、継代数10と継代数40で変異率を解析し比較した。各々のラインについて異なる継代数で大きな差は認めなかった。浮遊培養により胚様体を形成した後に胚様体から線維芽細胞に分化し、分化細胞について変異率、ミトコンドリア機能について解析した。各々のラインについてiPS細胞とiPS由来分化細胞では変異率に変化は認めなかった。解析したラインについては電子伝達系複合体1での酵素活性低下が認め、これはMELASの臨床的特徴として報告されている。ここまでの研究において我々はMELASの病態モデルを構築することに成功し、FEBS Open Bio 5 (2015) 219-225において報告した。今後の研究としてドラッグスクリーニングをおこなうことが可能となった。また、将来的には変異率が低いラインを選択してMELAS患者に細胞移植することで有効な治療法となる可能性もあり、本研究を発展させていく必要がある。人文MELAS患者由来のiPS細胞からfibroblastに安定して分化誘導させる系を構築することには成功したが心筋細胞へ安定して分化させることに難渋している。それに伴いミトコンドリア病iPS細胞由来心筋細胞の解析(細胞構造解析、電気生理学的解析)をおこなうことができていない。またMELAS由来の心筋細胞を用いたドラッグスクリーニングについても計画通りに進んでいない。
iPS細胞からfibroblastおよび心筋細胞へ分化させる際に各種薬剤を濃度を添加する。これらの分化細胞を薬剤を添加しなかったコントロール群と比較して変異率、ミトコンドリア呼吸機能、心筋の収縮能を解析する。薬剤としては、まずこれまでにミトコンドリア病に対して効果が期待されて使用されてきたN-アセチルシステイン、コエンザイムQ10、ビタミンB2、イデベノン、レベラトロールについて効果を再検証する。薬剤を加えて呼吸機能の改善を認めた分化fibroblastおよび心筋細胞のROS、autophagy、MPTを測定し、如何にして呼吸機能改善が得られたか探りメカニズムについても解析することとする。当初は平成25年度に予定していたミトコンドリア病iPS細胞由来心筋細胞および健常人iPS細胞由来心筋細胞の解析を平成26年度に行うことになったため。MELAS由来のiPS細胞から分化させた心筋細胞についての細胞構造解析(電子顕微鏡で心筋細胞のサルコメア、Z帯を含む構造の観察)
ヌクレオソームにおける紫外線DNA損傷の収納と認識の分子機構

本研究の目的は、紫外線損傷を受けたDNAのクロマチン収容機構および認識機構を明らかにすることである。遺伝情報の担体であるゲノムDNAは、様々な内外的な要因によって損傷を受けることが知られている。特に、隣接するピリミジン残基が架橋されるシクロブタン型ピリミジン二量体(CPD)や6-4光産物などの塩基損傷は、紫外線によって導入されることが知られている。生物において、これらの紫外線塩基損傷は生体内で必須の各反応機構の妨げとなるため、ヌクレオチド除去修復経路によって修復される。一方、真核生物のゲノムDNAはヌクレオソームを基本単位としたクロマチンを形成し、細胞核内に収納される。従って、紫外線による塩基損傷の導入やその修復はクロマチン上で行われると考えられる。しかし、紫外線によって損傷を受けた塩基がどのようにしてクロマチンに収納され、ヌクレオチド除去修復関連因子によって認識・修復されるかは未だ不明であった。そこで本研究では、特定の位置に6-4光産物を導入したDNAを用いてヌクレオソームを試験管内で再構成し、X線結晶構造解析および損傷認識タンパク質を用いた生化学的解析によって上述の問題の解明を目指した。6-4光産物をヒストン側および溶媒側に配置したヌクレオソームのX線結晶構造解析の結果、導入した6-4光産物が相補鎖と塩基対を形成できないために導入した損傷箇所のDNAが大きく揺らいでいることを2種類のヌクレオソームに共通して見出した。次に、紫外線損傷認識タンパク質UV-DDBを用いてヌクレオソーム中の6-4光産物の認識機構を生化学的に解析した。その結果、UV-DDBは導入された損傷塩基の向きに依存せずに、6-4光産物の導入によって生じた不安定な塩基対の揺らぎを認識することが明らかになった。これらの成果について、研究代表者が第一著者として論文投稿中である。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、紫外線損傷DNAのヌクレオソーム収納機構および認識機構を明らかにすることである。遺伝情報を担うゲノムDNAは、紫外線によってシクロブタン型ピリミジン二量体(CPD)や6-4光産物などの塩基架橋損傷を受けることが知られている。これらの架橋損傷は、ヌクレオチド除去修復経路によって修復される。真核生物において、ゲノムDNAはヌクレオソームを基本単位としたクロマチンを形成し、細胞核内に収納されている。そこで本研究では、特定の位置に損傷塩基を挿入したDNAを用いて、損傷塩基を含むヌクレオソームの試験管内再構成を行い、生化学的解析および構造生物学的解析によって上述の問題の解明を目指している。これまでに、6-4光産物をヒストン側(内側)もしくは溶媒側(外側)に配置したヌクレオソームのX線結晶構造解析を行い、その立体構造を明らかにした。その結果、ヌクレオソーム中の損傷塩基の揺らぎが導入される位置によって異なることを見出した。次に、紫外線損傷塩基認識タンパク質UV-DDBによるヌクレオソーム中の損傷塩基の認識機構を明らかにするために、生化学的解析を行った。先行研究よりUV-DDBは損傷塩基を含むDNAへの結合活性を有することが報告されているため、DNAを検出する方法ではヌクレオソームとの特異的な複合体のみを検出することが困難であった。そこで、ヌクレオソームとUV-DDBとの特異的な複合体を検出するために、ヒストンを蛍光標識する系を新たに確立した。蛍光標識したヒストンを含むヌクレオソームを再構成し、UV-DDBとの結合を生化学的に解析した結果、UV-DDBは損傷塩基の位置に関わらずヌクレオソームに結合することが明らかになった。

その結果、UV-DDBは導入された損傷塩基の向きに依存せずに、6-4光産物の導入によって生じた不安定な塩基対の揺らぎを認識することが明らかになった。これらの成果について、研究代表者が第一著者として論文投稿中である。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究において、特定の位置に6-4光産物を配置したヌクレオソームを試験管内で再構成し、X線結晶構造解析法によりその立体構造の解明に成功した。これにより、これまで未解明であった紫外線損傷DNAのクロマチン収容機構の解明に重要な知見が得られた。並行して、ヌクレオソーム中の損傷塩基の認識機構を明らかにするために、損傷認識タンパク質UV-DDBとの結合を生化学的手法によって解析した。そこで、ヌクレオソームとの特異的な複合体のみを検出するために、ヒストンを蛍光標識する系を新たに確立した。これにより、本研究の結合能解析にとどまらず、蛍光ヒストンを含むヌクレオソームを用いた分光学的な解析に発展させることが可能となった。以上より、これらの成果は当初の計画を大きく上回り、本研究の進展が得られたと考えられる。本年度の研究により、特定の位置に6-4光産物を含むヌクレオソームの立体構造を明らかにすることに成功した。今後は、他の塩基架橋損傷であるシクロブタン型ピリミジン二量体(CPD)を同様に配位したDNAを含むヌクレオソームのX線結晶構造解析を行い、各損傷塩基のヌクレオソームへの収納機構の差異について詳細に解析を行う。また、損傷塩基の構造を模したDNAを調製し、損傷認識タンパク質によるヌクレオソーム中の損傷塩基の認識機構を本年度確立した手法を用いて明らかにする。
ＤＮＡ損傷部位で停止した転写装置が及ぼす複製フォークの進行阻害とその回復機構

本研究の目的は、DNA損傷により停止した転写装置がDNA複製フォークの進行にどのような影響を与えるのかを分子レベルで解明し、転写装置により進行が阻害されたDNA複製がどのようにして回復するのかを明らかにすることである。そのために、申請者らが開発したin vitro oriCプラスミドDNA複製系での複製フォークの進行をモニターする実験系を基盤として、特定の部位にDNA損傷を導入した鋳型DNAを用いることにより損傷部位で停止した大腸菌RNAポリメラーゼによる複製フォークの進行阻害の状況を詳細に解析する。さらに、停止した転写装置を鋳型DNAから排除する働きを持つMfdタンパク質による複製の再開の検証、および遺伝学的な研究から複製フォークの進行と転写の進行をモジュレートすると考えられている一群のDNAヘリカーゼ(DinG、Rep、UvrD)の働きを生化学的に解析する。本年度は、in vitro oriCプラスミドDNA複製系に用いる特定の部位にDNA損傷を導入した鋳型DNAの新規の調製法の確立と、それにより得られた鋳型DNAを用いた複製フォークの進行の阻害および回復の過程の解析を中心に研究を進めた。DNA損傷としてはベンツピレンがグアニンに付加したものを用い、それを含むオリゴDNAをoriCプラスミドに制限酵素とDNAリガーゼの反応で組み込み、超遠心分離機とゲル電気泳動により精製して、調製法を確立した。oriCプラスミドDNA複製系でリーディング鎖上の損傷により複製フォークが阻害すること、さらにDNAポリメラーゼIVの添加により複製フォークが再開することを生化学的に検出・解析することに成功した。24年度が最終年度であるため、記入しない。そのために、申請者らが開発したin vitro oriCプラスミドDNA複製系での複製フォークの進行をモニターする実験系を基盤として、特定の部位にDNA損傷を導入した鋳型DNAを用いることにより損傷部位で停止した大腸菌RNAポリメラーゼによる複製フォークの進行阻害の状況を詳細に解析することとした。さらに、停止した転写装置を鋳型DNAから排除する働きを持つMfdタンパク質による複製の再開の検証、および遺伝学的な研究から複製フォークの進行と転写の進行をモジュレートすると考えられている一群のDNAへリカーゼ(DinG、Rep、UvrD)の働きを生化学的に解析する予定である。本年度は、採択された時期が遅かったために、in vitrooriCプラスミドDNA複製系に用いる特定の部位にDNA損傷を導入した鋳型DNAの新規の調製法の確立と、それにより得られた鋳型DNAを用いた複製フォークの進行の阻害および回復の過程の解析を中心に研究を進めた。単一損傷を持つプラスミドDNAの調製を御効率良く行える方法の開発に成功したために、本研究計画で用いる転写装置が損傷部位で停止した状況を作り出す道が開けたと考えている。数ヶ月の研究期間ではあったが、試験管内DNA複製系に用いる鋳型DNAの効率良い、また純度の高い調製法の開発に成功したため、来年度の研究の進展が見込まれるため。当初の計画では、1年目に転写装置を導入するプラスミドの作成を考えていたが、すぐに着手できる状況であるので、研究計画を変更する必要はないと考えている。平成24年度では、rrnB遺伝子のプロモーター配列をoriCプラスミドにクローン化し、単一のDNA損傷を特定の部位に持つ鋳型DNAでの転写装置の挙動を最初に調べる。それが順調に進めば、複製フォークの進行についての解析を進める。Mfdタンパク質の精製にも取り組む。
心筋梗塞における線維芽細胞の時空間的制御メカニズムの解明

虚血性心疾患は先進国において男女ともに致死率の高い疾患である。心筋梗塞は、冠動脈が血栓や動脈硬化によってつまり血液の供給が滞り心筋細胞が壊死しいく。心筋梗塞後の心臓の線維化は心機能を低下させ心不全へと誘導することが知られている。そこで、この線維化を制御することはとても重要である。本研究では、梗塞領域内における心線維芽細胞の細胞内代謝適応を破綻させることが心筋梗塞後の線維化を抑制する新規の治療法になり得ることを提案している。心臓発作で知られる心筋梗塞は、冠動脈が血栓や動脈硬化によってつまり血液の供給が滞り心筋細胞が壊死していく。心筋の壊死後、線維芽細胞の増殖及び移動が活性化され過剰なコラーゲンの蓄積を引き起こし心臓の線維化が起こる。この線維化は心機能への悪影響はもちろん、梗塞領域内における心筋や血管の再生においても悪影響を及ぼしている。そのため、線維化に対するより効率的な治療法の開発が心筋梗塞やその他の心疾患のためには必要不可欠である。そこで本研究では、我々は心線維芽細胞が低酸素及び低栄養条件下において細胞内代謝適応メカニズムによって生存及び増殖していると仮説し、この細胞内代謝適応メカニズムの破綻が心筋梗塞に対する新規治療法の開発につながるのではないかと考えその有効性を検討した。近年、グルコース飢餓環境下において抗がん作用があると報告されている回虫駆除薬(パモ酸ピルビニウム)を心線維芽細胞に処置した場合、グルコース飢餓条件下においてがん細胞と同様に細胞毒性を示した。この細胞毒性の作用メカニズムの一つに細胞内代謝の変化が影響していることを細胞培養レベルで明らかにした。さらに、マウス心筋梗塞モデルに当薬剤を2週間連続投与した結果、心機能の改善及び線維化の抑制がみられた。本研究での成果は、細胞内代謝を新規治療ターゲットにしているがん細胞以外でも心線維芽細胞の細胞内代謝調節をコントロールすることが心筋梗塞を初めその他の疾患における新しい治療法になりうることを提案している。心臓病は世界中で重大な罹患率と死亡率を占めている病気である。わが国でも心臓病による死亡率はがん(30%)に次ぐ2番目に高い約16%を占めており、心臓病に関する研究は重要な研究分野である。本研究では、心筋梗塞後の左室のリモデリング過程における線維芽細胞の変化、特にコラーゲン瘢痕内での線維芽細胞の消失に着目し、心筋梗塞後の瘢痕内での線維芽細胞の細胞死を制御するメカニズムを解明することを最大の目的とし研究を遂行している。本年度は、マウス心筋梗塞モデルを作成し左室のリモデリング過程における線維芽細胞の変動を経時的に観察するために、免疫染色法やフローサイトメトリー法にて実験を行った。結果、線維芽細胞が心筋梗塞後一定の時期まで増殖しそれ以降はあまり増殖していないことが分かった。また、心筋梗塞後の過剰な線維化は心機能の低下に関与しているため、線維芽細胞特異的に細胞死を誘導することで線維化を抑制し、心機能を改善できるのではと考え新規治療法の提案のため線維芽細胞に細胞死を誘導する薬剤の同定を細胞培養レベルで行った。その結果、心筋梗塞の梗塞領域内環境に近い虚血環境下あるいは栄養飢餓環境下のみで、マウス心臓由来線維芽細胞に細胞死を誘導する薬剤を同定した。さらに、この薬剤をマウス心筋梗塞モデルに梗塞後2週間連続投与することで、線維化の抑制及び心機能の改善がみられた。現在、この薬剤による線維芽細胞の細胞死を誘導するメカニズムを網羅的に解析中である。この薬剤の詳細なメカニズムの解明は心筋梗塞の新規治療法確立に役立つであろう。本年度は心筋梗塞における線維芽細胞の消失メカニズムを解明する研究の一貫として、マウス心臓由来の線維芽細胞に直接細胞死を誘導する薬剤を同定することが出来た。また、この薬剤をマウス心筋梗塞モデルに投与することで線維化を抑制及び心機能の改善が観察された。今後はこの薬剤の詳細な作用メカニズムを解明することが必要不可欠である。この薬剤の作用メカニズムの解明はマウス心臓由来の線維芽細胞を用いて、遺伝子レベル、細胞内代謝産物レベル、たんぱく質レベルで解析中である。以上のように本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。今後の研究方針として、同定した薬物の作用メカニズム解明のため薬剤処置後の線維芽細胞の電子顕微鏡解析による超微細構造の形態変化の観察を行い細胞死メカニズムの解明を行う。また、遺伝子レベルでの解析をリアルタイムPCRあるいはマイクロアレイにて解析する。これらの解析を研究者本人が行うのが困難な実験に関しては受託研究として依頼する予定である。細胞内代謝産物の定量及び同定はメタボローム解析にて行う。薬物の作用メカニズムを同定後、得られた研究成果を学会発表及び論文投稿を行う予定である。次年度の研究費は本年度同様、主に実験に必要なマウスの購入や維持費あるいは各種試薬、抗体やアッセイキットの購入費に充てる。

当初本年度中に受託解析実験を予定していたマイクロアレイ受託実験や本研究において実験及び解析を研究者本人が行うのが困難な実験に関しては受託研究として依頼する予定のため平成24年度中の予算を25年度へと繰り越している。また、平成24年度中には参加出来なかった国内学会および国際学会において研究成果の発表を行うための学会参加費及び旅費の予算を25年度へと繰り越し、その予算を確保している。
N分木離散ウェーブレット変換とスパース表現を用いた信号源分離

N分木離散ウェーブレット変換を定義し,変換・逆変換および前処理・後処理のアルゴリズムを開発した.双直交ウェーブレット関数など実装できるウェーブレットの種類を増やした.N重の冗長性を持つ変換の利点を生かし,画像・音声の電子透かしを埋め込めることを確認した.この変換が音声・画像分離問題の解法に使えることを示した.回転と平行移動を伴った元画像の重ね合わせを分離する問題を考えて,回転角度の推定方法のアイデアを提案した.複数のセンサーで捉えた複数の観測信号から,信号源ごとの元信号を推定する逆問題をブラインド信号源分離と呼ぶ.情報の発信者とその内容である元信号を分離することは,実環境下で働く自立型ロボットには必要不可欠な基本技術である.信号源分離に対する一般的なアプローチは独立成分分析であるが,我々はウェーブレット解析を用いた時間(空間)スケール解析に興味があり,この問題に対する解法を考案し,その数学的背景を調べてきた.本研究では次の3点を明らかにする.1.N分木離散ウェーブレット変換・逆変換のアルゴリズムおよびプログラムを完成させる.2.音声・画像の分離問題に適したN分木離散ウェーブレット変換を探し,それを用いた信号源分離の解法を提案する.3.複数種類のN分木離散ウェーブレット変換を用いて,フレームに対するスパース表現を応用し,観測信号の数が信号源の数より少ない場合の信号源分離問題を考察する.最初に1.に対する研究実績は以下のとおりである.N分木離散ウェーブレット変換を行うためには,双直交ウェーブレット関数の分数べきヒルベルト変換に対応する性質の良い双直交スケーリング関数が必要である.これらの関係を調べ,離散ウェーブレット変換に必要なフィルター係数の対応を決定した.CDF双直交ウェーブレットに対して,48種類のフィルター係数を計算した.Coiflet正規直交ウェーブレットに対して,17種類のフィルター係数を用意した.これらのフィルター係数を用いたN分木離散ウェーブレット変換・逆変換のプログラムを1次元・2次元信号に対して周期境界条件で完成させた.次に,2.に対しては,N分木離散ウェーブレット変換で得られる詳細(あるレベルのバンドパス成分に相当する)は十分長いフィルターの場合にはシフト不変に近くなるので,平行移動を含んだ混合画像の分離問題の解法を研究した.複数のセンサーで捉えた複数の観測信号から,信号源ごとの元信号を推定する逆問題をブラインド信号源分離とよぶ.情報の発信者とその内容である元信号を分離することは,実環境下で働く自立型ロボットには必要不可欠な基本技術である.信号源分離に対する一般的なアプローチは独立成分分析であるが,我々はウェーブレット解析を用いた時間(空間)スケール解析に興味があり,この問題に対する解法を考案し,その数学的背景を調べてきた.本研究では次の3点を明らかにする.1.N分木離散ウェーブレット変換・逆変換のアルゴリズムおよびプログラムを完成させる.2.音声・画像の分離問題に適したN分木離散ウェーブレット変換を探し,それを用いて信号源分離の解法を提案する.3.複数種類のN分木離散ウェーブレット変換を用いて,フレームに対するスパース表現を応用し,観測信号の数が信号源の数より少ない場合の信号源分離問題を考察する.2015年度の研究実績は以下の通りである.最初に1.については,双直交ウェーブレット関数の分数べきヒルベルト変換に対応する性質の良い双直交スケーリング関数についてITNG 2015で研究発表を行った.次に,2.に対しては,N分木離散ウェーブレット変換で得られる詳細(あるレベルのバンドパス成分に相当する)は十分長いフィルターの場合にはシフト不変に近くなることを示し,平行移動を含んだ混合画像の分離問題の解法について,ICWAPR 2015および10th ISAACで研究発表を行った.3.に対しては,簡単なプログラムを作成中である.また,N分木離散ウェーブレット変換・逆変換を用いた音声信号への電子透かしの研究を行い,ICWAPR 2015およびInformation'20l5で発表した.本研究期間内に明らかにすることは次の3点である.1.Meyer以外のウェーブレット関数を用いたN分木離散ウェーブレット変換・逆変換のアルゴリズムおよびプログラムを完成させる.必要ならば,前処理・後処理を設計する.ノイズ除去・特徴抽出・電子透かしなどに応用し性能を他の方法と比較する.2.音声信号・画像の分離問題に適したN分木離散ウェーブレット変換(正規直交または双直交ウェーブレット関数)を探し,それを用いて混合モデルの各パラメータを推定する.3.解析に適したウェーブレット関数が複数種類見つかれば,フレームに対するスパース表現を応用し,観測信号の数が信号源の数より少ない場合の信号源分離問題に手を付ける.目的1.に対しては,ほぼ完成してITNG2015で研究発表を行った.Steerable pyramidなどのシフト不変でダウンサンプリグを伴う変換との比較を行っている.音声信号の電子透かしへの応用については,ICWAPR 2015およびInformation'20l5で研究発表を行った.目的2.に対しては,CDF13とCDF17などから得られたほぼシフト不変性を持つ詳細を利用して平行移動を含んだ混合画像の分離問題の解法を研究した.得られた研究結果をICWAPR 2015および10th ISAACで発表した.目的3.に対しては,スパース表現を用いて画像のエッジ強調を行うプログラムなどを開発した.以上のことから,2年目としては,おおむね順調に進展している.複数のセンサーで捉えた複数の観測信号から,信号源ごとの元信号を推定する逆問題をブラインド信号源分離とよぶ.情報の発信者とその内容である元信号を分離することは,実環境下で働く自立型ロボットには必要不可欠な基本技術である.

信号源分離に対する一般的なアプローチは独立成分分析であるが,我々はウェーブレット解析を用いた時間(空間)スケール解析に興味があり,この問題に対する解法を考案し,その数学的背景を調べてきた.本研究では次の3点を明らかにする予定であった.1.N分木離散ウェーブレット変換・逆変換のアルゴリズムおよびプログラムを完成させる.2.音声・画像の分離問題に適したN分木離散ウェーブレット変換を探し,それを用いて信号源分離の解法を提案する.3.複数種類のN分木離散ウェーブレット変換を用いて,フレームに対するスパース表現を応用し,観測信号の数が信号源の数より少ない場合の信号源分離問題を考察する.前年度までに1.2.はほぼ終わっていて,本年度は3.の研究に着手した.しかしながら,N分木離散ウェーブレット変換は(空間)周波数帯域をオクターブ(2倍)ごとに分離できるだけなので,本研究のキーアイデアである一つの信号源のみが活動している時間(空間)周波数領域を検出するには周波数分解能が悪すぎることが判明した.したがって,このフレームによる元信号のスパース表現も難しい.そこで本年度は,元画像の平行移動と回転を含む重ね合わせを観測した画像を分離する問題を考察し,円環分割マルチウェーブレット変換を用いた解法の基礎を研究し,いくつかの研究発表を行った.また円環分割マルチウェーブレット変換の離散化を考察し,逆変換アルゴリズムを作成した.N分木離散ウェーブレット変換を定義し,変換・逆変換および前処理・後処理のアルゴリズムを開発した.双直交ウェーブレット関数など実装できるウェーブレットの種類を増やした.N重の冗長性を持つ変換の利点を生かし,画像・音声の電子透かしを埋め込めることを確認した.この変換が音声・画像分離問題の解法に使えることを示した.回転と平行移動を伴った元画像の重ね合わせを分離する問題を考えて,回転角度の推定方法のアイデアを提案した.本研究期間内に明らかにすることは次の3点である.1.Meyer以外のウェーブレット関数を用いたN分木離散ウェーブレット変換・逆変換のアルゴリズムおよびプログラムを完成させる.必要ならば,前処理・後処理を設計する.ノイズ除去・特徴抽出・電子透かしなどに応用し性能を他の方法と比較する.2.音声信号・画像の分離問題に適したN分木離散ウェーブレット変換(正規直交または双直交ウェーブレット関数)を探し,それを用いて混合モデルの各パラメータを推定する.
接触吸着による電極表面エネルギー変化の絶対量測定

1.金電極表面エネルギー変化の絶対量を電極表面に照射したレーザ光の反射角変化より測定するレーザビームデフレクション法を開発した。この手法により、ヨウ化物イオンおよび臭化物イオンを含む過塩素酸塩水溶液中における金電極の電気毛管曲線の測定に成功した。2.電気毛管曲線から、表面エネルギーが極大となる電位、すなわち表面電荷密度が零となる零電荷電位(pzc)を求めることが可能となった。金電極のpzcは、ヨウ化物イオンおよび臭化物イオンの添加により、それぞれ約0.8Vおよび0.4V卑にシフトすることがわかった3.さらに、接触吸着したヨウ化物イオンおよび臭化物イオンの電荷移行反応、すなわち接触吸着相の構造変化が起こる電位付近で金電極の表面エネルギーは急激に減少することが明らかになった。電気毛管曲線から得られる表面エネルギー変化の電位微分はサイクリックボルタモグラムから得られる表面電荷密度とは必ずしも一致せず、両者の相違は接触吸着相の構造変化が起こる電位付近で最大となった。4.上記結果は圧電応答法によるこれまでの結果とも良く一致した。表面エネルギー変化の電位微分と表面電荷密度の不一致から、接触吸着相の構造変化にともなう表面歪みの増加が正の符号を持つ表面電荷を誘起することが示唆された。
中小企業の自己革新能力を支えるビジネス・エコシステムの役割に関する会計学的研究

本研究の成果は以下の3つに分類される。1つ目は実態調査による探索的研究成果である。山形県米沢地域においては地域人材育成における産金官学連携について、京都地域においては地域金融機関による企業再生実務について、長崎県佐世保地域および近隣造船業関連地域においては造船ビジネス・エコシステムについて詳細な調査を行った。2つ目は理論的、制度的研究である。制度論を踏まえた学際的な理論研究を行った。3つ目は本研究課題の研究者と外部の研究者、実務家との連携により、実務に資する知見の提供・交換・議論の場、すなわちビジネス・エコシステムをとりまく「知のエコシステム」構築を試みた点である。初年度にあたり、まずは関連諸分野の書籍、論文のレビューを各自が行った。学際的領域であるため、進化経済学、産業地理学、企業・組織論、産業論、地域連携、地域金融、その他、関連領域について広く文献を精査した。同時に、実際の中小企業における経営課題調査として、有機的実践を行っている中堅企業へのヒアリング調査を行い、また、製造業を中心に課題意識を持つ企業コンソーシアムに参加することにより、実務課題への研鑽を深めた。それらの相互確認を含め、2回の研究打合せ、3回の研究会、および1回のSkypeによる研究打合せを行い、それぞれの研究進捗を確認するとともに、各自の分担領域をカバーしあう相互報告を行った。また、期中より、当該研究会および学会発表(後述)に、ビジネス・エコシステムを専門分野とする熊本学園大学、吉川晃史准教授を研究協力者としてむかえ、本研究進捗の充実を図ることとした。同氏は次年度以降も研究協力予定である。そのうちの1回は、学会発表準備を兼ねて、関連分野の専門家のアドバイスを受けた合同研究会であった。北海道大学、小樽商科大学の地域関連研究者の指摘を受けることで、地域をキーワードにビジネスエコシステムの形成と発展についての相互知見を深めた。また、別の1回は、研究途上で明らかになった、地域ビジネス・エコシステムにおける地域金融機関の重要性を精査するため、他プロジェクトとの合同開催により、金融機関関係者に呼びかけた金融サミットを開催した。学術・実践の両面において有効な知見交換ができたことで、次年度以降も、継続開催を検討することとなった。これらの研究成果をまとめた学会発表を初年度末の3月の進化経済学会において実施した。当初予定していた3地域についての地域実践を報告するにあたり、期中より参加した研究協力者も一緒に報告し、次年度以降も研究協力を継続することとなった。中間年度にあたり、初年度に実施したレビュー結果等について研究会を実施した。相互に知見交換し、今後の研究進展に必要なものについては、各自追加レビューできるようにすり合わせた。研究テーマが学際的領域のため、初期レビューは多岐にわたったが、その中で基本的理論枠組みを進化経済学の基礎理論と管理会計理論との統合におくことで合意し、依拠する基本論文(Bans&Scapnese2000,澤邉2006,澤邉2007)を定め、本研究PJの成果の方向性を定めた。その他に4回の研究進捗確認(打合せ)を行った。遠隔地の研究者が集まるために、学会共同参加や調査等、全ての機会を利活用して研究進捗を相互に確認し、各自のテーマの研鑽に努めた。また、初年度期中より研究協力者としてむかえた熊本学園大学の吉川准教授は引き続き全局面において協力して研究にあたった。これは最終年度も継続する。2回の学会参加は、進化経済学会オータムコンファレンスおよび全国大会である。このうち全国大会において、研究休力者の吉川准教授を含むメンバーが学会報告し、様々なコメント、知見を得ることができた。また、熊本学園大学付属産業経営研究所シンポジウムにおいてパネラーとして招待講演を行った。さらに、初年度開催の金融サミットは、規模を拡大し、研究対象地域でもある米沢地域で開催した。地元山形の複数金融機関をはじめ、京都、佐世保など遠隔地からも金融関係者が参加し、ビジネスエコシステムにおける金融の役割について両面の議論を行った。当該サミットについては、東京大学CARFーPJおよび山形大学学内プロジェクトとの共催が実現し、研究拠点の連携を培う一助ともなった。また、今年度も東京大学CARFーPJと合同で愛媛県の地域金融機関の地域支援実践について調査を行い貴重な知見を得た。これらについて整理・分析し、最終年度は論文等で発信していく予定である。文献レビューおよび、各自が分担する地域においての実践、事例研究が予定とおり進捗している。その上で、最終年度は期首から継続的に研究会(集合あるいはSkype等利用)を予定し、最終年度の成果とりまとめと発信へと進める予定である。最終年度にあたり、初年度の先行レビュー、中間年度における基本論文の設定・分析に基づいて、研究PJメンバー各自の専門分野を加味した個別事例分析と理論化をめざして議論を重ねてきた。その間に、5回の研究会と1回の学会(部会)共同発表(メンバー全員が報告)を行った。また、遠隔地の研究者による共同研究であるため、この他に3回のSkype研究会を実施することで、共通の理論ベースをもとに、各自の分析テーマについても相互に報告、議論を重ねることができた。これらの活動はすべて、当初からの3名の研究者および、初年度からむかえた研究協力者1名の連携により進められた。学会報告は、進化経済学会北海道・東北部会であり、発表テーマは別途記載の通りである。さらに、金融サミットについても継続拡大し、今回は、京都大学東京オフィスにおいて、東京大学CARF-PJ「地方金融機関における地域支援のための実践課題

2ー製造現場の会計課題と実務課題」、京都大学経営管理大学院管理会計(サンフロンティア不動産)寄附講座、山形大学YU-COE(C)-PJ「地域価値創成に貢献するUniversity Entrepreneurship研究拠点」との共同開催で、今回は特に、『地域金融機関と会計人の連携』のご著者である総合経営グループ代表長谷川佐喜男氏による特別講演も加え、より深い議論と地域金融機関の直接的交流と知見交換を実現した。金融機関と地域ビジネスエコシステムに関わる調査としては、関東経産局の地域実践について詳細なヒアリングを行い、かつ、今後の知見共有について合意するに至った。これらをもとにした研究論文の執筆についてはまだ継続中であるため、補助事業期間延長申請を行い、承認されている。最終年度にあたり、共通の基本理論にもとづく、各自テーマの深耕とまとめまでは進捗し、その成果は学会部会報告で公表されているが、論文執筆については、現在進行中である。当初期間3年間の実施事項を踏まえ、京都大学主催の寄付講座シンポジウムにおける意見交換、集合での研究会1回およびメールベースでの知見交換を継続した。その成果物としては、当初のジャーナル投稿の前段階として山形県南陽市のアパレル企業を対象に詳細なケーススタディを作成した。当該企業は本研究機関初年度に研究代表者・分担者全員で現地調査をしており、さらにその後に主として研究代表者が複数回のヒアリングを重ねてきた。対象先企業の中野社長はじめ従業員の方々、また、山形大学国際事業化研究センターのインストラクター諸氏の協力を得てケーススタディが作成されており、今後、メルコ学術振興財団のケーススタディに投稿予定である。金融サミットについても初年度から継続4回目となり「地域ビジネス・エコシステムにおける金融機関の役割」第4回金融サミットin東京2018と題して2018年1月に、東京大学CARF-PJ「地方金融機関における地域支援のための実践課題3ー製造現場の会計課題と実務課題」、京都大学経営管理大学院管理会計(サンフロンティア不動産)寄附講座、山形大学YU-COE(C)-PJ「地域価値創成に貢献するUniversity Entrepreneurship研究拠点」の共催の形で実施された。リバースモーゲージの第一人者である特定非営利活動法人リバースモーゲージ推進機構理事長の倉田剛氏および地域金融機関のモデルケースとして著名な第一勧業信用組合理事長の新田信行氏の特別講演2本と参加各位による事例報告がなされた。あいにくの東京地方大雪の中、30名の参加者を得て活発な知見交換が実現した。なお、本研究の全期間を通じての研究取組による知見は、研究者代表者・分担者全員が基盤研究B 16H03679に参加することで発展的に研究継続・継承されている。本研究の成果は以下の3つに分類される。1つ目は実態調査による探索的研究成果である。
ヒトの自己認識と社会性―脳内神経基盤の観点から

自己に関わる情報をそれとして処理し、自己と他者とを区別するという我々の自己認識能力はどのようなプロセスを経て形成されているのだろうか。この自己認識を形成するひとつの要素であり、「自分が何者であるのか」に関する有形無形の知識の集合体である自己表象は我々の自我形成に大きな役割を果たしており、その認知的特性を明らかにすることは自己認識の成り立ちを理解する上で必要不可欠であると考えられる。本年度は記憶における自己参照効果と関わる脳内神経基盤について、自己および他者に対する参照プロセスのみならず、それぞれの表象と結び付けられた単語の検索・再認プロセスにも着目した検討を行った。まず自己表象および他者表象に対する参照プロセスが必要とされると考えられる評定課題においては、後の再認課題において単語を正しく再認できたかどうかに関わらず、自己参照条件では他者参照条件との比較によって前頭前野腹内側部(VMPFC)や島皮質をはじめとする複数の領域の活動が示唆された。続いて再認課題においては、評定課題によって自己および他者表象と結び付けられた単語を正しく再認できた場合においてのみ、自己参照条件では他者参照条件との比較によってVMPFC・中帯状回・角回・海馬傍回といった複数の領域の活動が示唆された。このことから、自己表象への参照プロセスにおいて特にVMPFCが重要な役割を果たしているとする先行研究の結果が裏付けられたと共に、自己表象と結び付けられたアイテムの検索および再認プロセスにおいて自己に関わる内的表象が再活性化しており、かつその単語が記憶痕跡としてより強く残っていた可能性が初めて示唆された。本研究は我々の自己表象を支える脳内神経基盤を検討した諸研究の中でも、その検索および再認プロセスにおける再活性化に着目したという点において独自なものである。本年度はこの自己表象への参照プロセスを脳内神経基盤の観点から検討するために、自己参照課題および他者参照課題を遂行する際の脳活動を脳イメージング手法のひとつであるfMRIによって測定し、この両者を支える脳内神経基盤が互いに異なるかどうかについて検討した。その結果、両者は基本的に共通する脳領域(前頭前野背内側部、後部帯状回など)の活動を示したが、自分自身について「よく考える」ことが求められるような単語が呈示された場合には前頭前野腹内側部が、他者に対して「よく考える」場合には中側頭回がそれぞれ特異的に活動することが示された。本研究は同様の諸研究の中において、自己参照プロセスがある特定の脳領域(前頭前野内側部など)に特に依拠しているのかどうかという問題に関し、個々人が対象に対して判断を行う際の「処理の深さ」に着目し比較検討を行った点において特に新奇な知見を得られたものである。本研究の成果は日本心理学会第74回大会、International Workshop for Young Researchers "Knowing self, knowing others"等で発表された。