hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アレルギー疾患の慢性化機序の解明とそれに対する治療戦略の確立

さらにRNAiがトランスジェニックマウスにおいて有効であることも見出しており、やはり同様に今後モデルマウスを用いて解析を可能としている。27年度が最終年度であるため、記入しない。膠原病・アレルギー内科学ペリオスチンによるNF-kB活性化機構についてレポーター遺伝子の強制発現細胞株を用いて解析を進める予定である。低分子化合物、RNAiをモデルマウスに適用してその効果を検討するとともに、引き続き阻害抗体の探索を進める。(理由)今年度すでに3次元細胞培養法を用いてペリオスチンが関与した上皮細胞ー間質細胞相互作用の分子メカニズムを明らかにすることができた。また、NF-&#61547;Bプロモーター領域配列を含んだレポーター遺伝子を線維芽細胞に強制発現させた細胞株の樹立やペリオスチントランスジェニックマウスの作製に成功しており、今後の解析の遂行を可能としている。研究計画に示しているように、in vitro系、あるいはモデルマウスを用いて、1ペリオスチンによるアレルギー性炎症の慢性化機序の解明、2アトピー性皮膚炎以外の炎症性疾患の慢性化におけるペリオスチンの役割の解析、3ペリオスチンを標的としたアレルギー疾患に対する治療薬の開発の課題解析を進めていく予定である。平成25年度は他の予算により物品費を賄うことができたため、当初の計画と異なり、物品費の支出を必要としなかった。未使用分を平成26年度の物品費に充てて当初の予定額と合わせて使用する予定である。
植物の「立ち聞き」における匂い受容と間接防衛活性化の分子機構

昨年度において(Z)-3-へキセニルビシアノシド(へキセニル配糖体)合成遺伝子の単離・同定をするために利用した、栽培トマトと近縁野生種の交配によって生じたヘキセニル配糖体合成能を失ったトマトを用いて、ハスモンヨトウ食害に対する抵抗性の違いを検証した。その結果、へキセニル配糖体合成能を失ったトマトを食べたハスモンヨトウ幼虫の成長は、へキセニル配糖体を合成できるトマトを食べたハスモンヨトウ幼虫の成長に比べて有意に大きかった。この結果から、へキセニル配糖体がハスモンヨトウ幼虫に対する防衛物質として植物内においても機能する事が強く示唆された。この研究結果はヘキセニル配糖体が防衛物質としてin plantaにおいて働くことを示唆する結果であり、へキセニル配糖体の防衛機能、ひいては揮発性化合物の受容に関して、生理・生態学的な検証を行うための足がかりとなる結果である。一方で、交配導入による遺伝子機能の解析では、複数遺伝子の導入がどうしても起こってしまう。本研究で得られた証拠をより確実なものとするためには、形質転換によって配糖体化遺伝子の発現のみを特異的に抑制させた植物を作製する必要があるが、これには長い期間が必要となるため、将来の課題とする。昨年度までの生化学的な解析結果からへキセニル配糖体が、揮発性化合物に曝露された植物だけではなく、食害を受けた葉にも蓄積することが明らかになっている。今年度の研究結果は、生化学的な解析結果の生物学的な機能を示唆する重要な進展結果である。26年度が最終年度であるため、記入しない。申請者らは、未食害トマトが食害トマトから放散される(Z)-3-ヘキセノールを取り込み、配糖体化することで有効な防衛を行っていることを提唱している。本年度の研究成果では(Z)-3-ヘキセノールを配糖体化する酵素の候補遺伝子を得ることができた。今後、候補遺伝子の中から(Z)-3-ヘキセノール配糖体化遺伝子を同定することで、植物による(Z)-3-ヘキセノール受容メカニズムの一端を明らかにできる。また当該遺伝子の変異体を選抜することで、揮発性化合物に曝露された植物が行う誘導防衛に配糖体化がどの程度貢献しているのかを調査することが可能となる。〈外来(Z)-3-ヘキセノール配糖体化酵素遺伝子の同定〉多種の植物に(Z)-3-ヘキセノールを曝露し、その植物に蓄積した配糖体化合物を分析したところ、ほぼすべての植物が(Z)-3-ヘキセノール配糖体を蓄積した。この結果は、(Z)-3-ヘキセノールの配糖体化が植物一般にみられる戦略であることを示唆している。酵素遺伝子の同定やノックダウン植物の作製が比較的容易であるシロイヌナズナの葉を用いて酵素活性測定法を検討したところ、(Z)-3-ヘキセノールとUDP-グルコースを用いることで配糖体化の第一ステップ酵素反応を測定することができた。上記にあるように、様々な植物種による配糖体化を検討した際に配糖体可能の異なるトマト近縁種を見出した。この結果を受けて、トマトとその近縁種の交配植物の中から(Z)-3-ヘキセノールを曝露しても配糖体を蓄積しないトマトを選抜した。当該植物の遺伝学的な解析から、第二段階目の配糖体化酵素の候補遺伝子を4つの候補遺伝子に絞り込むことに成功した。4つの候補遺伝子の配列は非常に似ていたため、現在は各遺伝子をクローニングし、組み換え酵素を用いた生化学的な方法で機能同定を目指している.本研究課題では、未食害トマトが食害トマトから放散される(Z)-3-ヘキセノールを取り込み、配糖体化することで有効な防衛を行っていることを提唱している。本年度の研究成果では、昨年度に得られた(Z)-3-ヘキセノールを配糖体化する酵素の候補遺伝子の生化学的素性を明らかにし、真の(Z)-3-ヘキセノール配糖体化遺伝子を同定することに成功した。この成果は、大気中に存在する揮発性化合物を植物体内で配糖体へと変換するための遺伝子を同定した初の成果である。〈配糖体化酵素遺伝子の同定〉一昨年度の研究成果である、配糖体化候補遺伝子をそれぞれクローニングし、組み換えタンパク質を用いて(Z)-3-ヘキセノール配糖体化活性を調査した。その結果、いくつかの遺伝子で(Z)-3-ヘキセノール配糖体を合成する能力があることを見出した。遺伝子によっては転移させる糖の種類が異なることも明らかになった。トマトが大気中の(Z)-3-ヘキセノールを配糖体化する場合はピシアノース配糖体として主に蓄積することが分かっているが、外部刺激などの変化によってさまざまな種類の配糖体を蓄積する能力があるのかもしれない。また、トマトのビシアノース配糖体、シロイヌナズナのグルコース配糖体を合成する能力を持つ遺伝子も複数存在することが見出された。〈シロイヌナズナの(Z)-3-ヘキセノール再放散現象〉予備的な実験結果より、(Z)-3-ヘキセノールにさらされたシロイヌナズナは(Z)-3-ヘキセノールを放散することが見出された。しかし(Z)-3-ヘキセノール配糖体化

酵素遺伝子が冗長であるため、配糖体合成能力を持たないシロイヌナズナの作出が困難であった。よって(Z)-3-ヘキセノールの放散と配糖体生合成に相関があるかどうかは今後の課題として残っている。昨年度において(Z)-3-へキセニルビシアノシド(へキセニル配糖体)合成遺伝子の単離・同定をするために利用した、栽培トマトと近縁野生種の交配によって生じたヘキセニル配糖体合成能を失ったトマトを用いて、ハスモンヨトウ食害に対する抵抗性の違いを検証した。その結果、へキセニル配糖体合成能を失ったトマトを食べたハスモンヨトウ幼虫の成長は、へキセニル配糖体を合成できるトマトを食べたハスモンヨトウ幼虫の成長に比べて有意に大きかった。この結果から、へキセニル配糖体がハスモンヨトウ幼虫に対する防衛物質として植物内においても機能する事が強く示唆された。この研究結果はヘキセニル配糖体が防衛物質としてin plantaにおいて働くことを示唆する結果であり、へキセニル配糖体の防衛機能、ひいては揮発性化合物の受容に関して、生理・生態学的な検証を行うための足がかりとなる結果である。一方で、交配導入による遺伝子機能の解析では、複数遺伝子の導入がどうしても起こってしまう。本研究で得られた証拠をより確実なものとするためには、形質転換によって配糖体化遺伝子の発現のみを特異的に抑制させた植物を作製する必要があるが、これには長い期間が必要となるため、将来の課題とする。昨年度までの生化学的な解析結果からへキセニル配糖体が、揮発性化合物に曝露された植物だけではなく、食害を受けた葉にも蓄積することが明らかになっている。今年度の研究結果は、生化学的な解析結果の生物学的な機能を示唆する重要な進展結果である。26年度が最終年度であるため、記入しない。初年度の研究計画では、シロイヌナズナを用いて(Z)-3-ヘキセノール配糖体化活性を測定するための酵素反応条件を検討することを第一の目的としていた。実際に、シロイヌナズナの粗酵素液を用いて配糖体化活性を測定することに成功した。加えて、原種トマトを用いた遺伝学的解析から、配糖体生合成に関与する染色体領域を推定することに成功し、配糖体化酵素の候補遺伝子を得ることができた。これは、研究計画から大きく前進した点である。また、(Z)-3-ヘキセノール曝露植物からの(Z)-3-ヘキセノール再放散を解析する計画は、実験システムの構築が完了したところである。推定された(Z)-3-ヘキセノール配糖体化酵素の候補遺伝子の生化学的解析を行い、(Z)-3-ヘキセノール配糖体化活性を有する遺伝子を同定した。また、当該遺伝子のシロイヌナズナにおけるホモログも(Z)-3-ヘキセノール配糖体化活性をもつことを明らかにできた。予定通り1年以内に候補遺伝子を同定できたことから、おおむね順調な進展であると考える。遺伝学的解析から(Z)-3-ヘキセノール配糖体化酵素の候補遺伝子が得られたため、組み換え酵素タンパク質や逆遺伝学的手法を用いて遺伝子の同定をいち早く進めることを目指す。特に、逆遺伝学的な解析では植物がなぜ(Z)-3-ヘキセノールを配糖体化するのかを推測するための情報につながるため、遺伝子機能同定後の変異体作製などに注力する。また、シロイヌナズナを食害する植食者集団が現われるのが春と秋の2シーズンのみであるので、手早く昆虫の行動実験を行うようにする。昨年度の研究からトマトおよびシロイヌナズナの(Z)-3-ヘキセノール配糖体化酵素遺伝子は、それぞれゲノム中に複数存在することが見出された。
遺伝情報の組換え制御に関する調査研究

この総合研究班においては平成5年9月4日-5日に「遺伝的組換えとその制御」ワークショップを開催し、平成7年度の重点領域研究の申請の準備を行ない、次のような方針を決定した。遺伝的組換えは、その機構の違いによって相同組換え(長い相同性のあるDNA間の組換え)と非相同組換え(相同性のない、あるいは短い相同な領域間の組換え)の二種類に大別される。相同組換えは正常な遺伝情報の再構成を行ない、生命の維持にとって重要な役割を果たしている。この組換えには数多くの機能的蛋白質が関与し、それらによる高次の反応機構が存在し、且つ緻密に制御されている。非相同組換えは、組換えの部位に特別な塩基配列が関わっていない反応と、トランスポゾンや免疫グロブリン遺伝子の再編のように特異的な塩基配列が関わっている反応とに分けられ、いずれの場合にもそれぞれに特異的に働く制御機構が備わっている。組換えにおけるこのような制御の機構に関する諸問題を研究するために、「遺伝情報の再編成とその制御機構」という領域を設定し、次の二つの班を組織する。(A)遺伝情報の再構成とその制御、(B)遺伝情報の動的変化とその制御、の二つである。(A)班は、真核生物の種々の普遍的組換えに関与する遺伝子機能と染色体構造を分子レベルで解明し、その機構と制御を明確にすることを目的とする。(B)班は、内的シグナルあるいは外的ストレスによって引き起こされる非相同組換えとその制御機構、非相同組換えと染色体異常の発生機構との関連、トランスポゾンやレトロトランスポゾンの組込みとその制御機構を解析し、遺伝情報の変化の仕組みを染色体構造の変化との関連も含めて解明しようとするものである。
学童・生徒を対象としたBasic Life Support教育プログラムの開発

本研究は、学校内で発生した高校生徒の心肺停止を契機として開始された。心肺停止を慶應義塾に属する1小学校、3中学校、4高等学校(学童生徒数約7000人)を対象に、小学校5年生、中学1年生、高等学校1年生を対象に、BLS教育を学校で実施するプログラムを導入した。適切なプログラムの実施のために、学校内に事務局(BLS委員会)を組織し、各学校からの教員、塾内の救命専門家、東京救急協会担当者などをメンバーとした。BLS指導は東京救急協会の指導員が行い、指導員1人に学童生徒10人、マネキン1体に学童生徒4人の体制で普通救命講習を行った。講習の終了後に、共通のアンケートを行い、事務局が収集し、解析評価した。2002年から2004年の3年間に、6352人が受講し、受講率は95.9%、アンケート回収率は99.0%であった。多変量解析を行うと、「講習が楽しかった」「講習後に自信がついた」に関与する変数は、指導員の教え方、実技時間、および説明時間に対する評価であり、年齢と講習年度は有意に逆相関する独立変数であった。すなわち、若年ほど、また初年度の講習ほど、楽しく、自信がついたと評価された。この結果は、普通救命講習の学校教育への導入学年は、小学生が中学、高校生よりも適切である可能性を示すものと考えられた。学校にBLS教育を導入する際には、受講者評価などにより講習内容を評価することが重要である。本研究の遂行中に、1高等学校で生徒の心肺停止が発生し、教員と生徒により適切な蘇生法が施行されたが、救命できなかった。しかし、これを契機として、全学校にAEDが配備された。1学内におけるBLS教育・推進組織の確立「BLS委員会」を組織し、支援体制を整備した。2 BLS実施計画諸学校学童・生徒7095人中、小学校5年生、中学1年生、高校1年生2214人を対象に、2-3年毎に反復教育する計画とし、外部指導者(救急救命士)により普通救命講習にて3時間の講習を行った。教育の質を評価するため、履修者に逆評価アンケート(5段階尺度法)を実施した。3 BLS計画の実行平成14年4月から平成15年2月までに2067人(93.4%)の学童・生徒にBLS講習を実施した(逆評価アンケート回収率は100%)。4逆評価の解析結果、信頼性分析はα=0.582。小学生(126人)、中学生(519人)、高校生(1422人)間の比較では、講習に対する満足度(興味)は小・中学生が高校生よりも高く(P<0.0001、Kruskal-Wallis検定)、救命手技(CPR)に対する自信も、小・中学生が高校生よりも高かった(P<0.0001)。すなわち、当初の予想とは異なり、1低学年生徒へのBLS教育が可能であるとともに、2対象年齢により教育方法を変更すべきであることが明らかとなった。5学校活動への影響学校内にBLS教育を支援する機運が盛り上がり、運動会におけるBLSのデモンストレーション、BLS履修生徒による市民の指導補助、保健体育の授業におけるBLSの補習、などが施行された。6テキストの作成逆評価の結果を踏まえ、受講者の年齢を考慮した「生徒用のテキスト」を作成し、本学のみならず全国の学校で使用可能とした。7次年度への試行指導員、マネキンに対する生徒数の適正な数、ビデオの使用による技術獲得効率の向上、窒息への救命処置用マネキンの採用、などの試みが開始された。

1)BLS実施計画諸学校学童・生徒7,073人中、小学校5年生、中学1年生、高校1年生2,240人を対象に、外部指導者(救急救命士)により普通救命講習にて3時間の講習を継続実施した。教育の質を評価するための、履修者による逆評価アンケート(5段階尺度法)を継続実施した。2)逆評価の解析結果逆評価アンケート回収率は100%、信頼性分析はα=0.531であった。小学生131人、中学生398人、高校生1278人間の比較では、講習に対する満足度(興味>は小・中学生が高校生よりも高く(P<0.0001、Kruskal-Wallis検定)、救命手技(CPR)に対する自信も、小・中学生が高校生よりも高かった(P<0.0001)。すなわち、1)低学年生徒へのBLS教育が可能であるとともに、2)対象年齢により教育方法を変更すべきである傾向が、昨年度と同様に確認された。3)新テキストの使用受講者の年齢を考慮して昨年度に作成した「生徒用のテキスト」を使用した。4)次年度への試行医学部クリニカルシミュレーションセンターを用いて、一般人にBLSとともに体外式自動除細動器の使用を教育するプログラムを開始した。一般成人を対象として、3時間以内にBLSに体外式自動除細動器の使用を加えた教育は十分に可能であった。この結果から、学童生徒を対象として、BLSに体外式自動除細動器を加えたプログラムを開発し、履修した技能をOSCEにより評価する方法の導入を検討中である。1)BLS講習の継続実施諸学校学童・生徒7009人中、小学校5年生、中学1年生、高校1年生の合計2114人を対象に、外部指導者(東京救急協会指導員)により普通救命講習3時間を実施した。講習の質を評価するための、受講者による逆評価アンケート(5段階尺度法)を実施した。2)逆評価の解析逆評価アンケートの信頼性分析はα=0.693であった。小学生128人、中学生466人、高校生1145人の比較では、講習に対する満足度(興味)は小・中学生が高校生よりも高く(P<0.0001、Kruskal-Wallis検定)、救命手技(CPR)に対する自信も、小・中学生が高校生よりも高かった(P<0.0001)。この結果は低学年生徒へのBLS教育の可能性と有用性を示すものである。3)市民公開講座、講演集の出版14年度、15年度に実施した市民公開講座の講演集を2000部出版し、全国の消防機関、教育機関等に配布した。4)学校内での心肺停止の発生と学校へのAED導入研究の施行中に学校内スポーツ活動中の高校生徒に心肺停止が発生し、現場に居合わせた教員と生徒により心肺蘇生法が適切に実施され、学校内CPR教育の有用性が示された。しかし救命はできなかったため、安全確保に学校内AEDが必要と判断し、平成16年5月に、本邦の学校では始めて、AEDの配備が行われた。5)教職員へのBLS、AED講習平成17年度中には新たに3高等学校、3中学校、1小学校にAEDが配備の予定である。この準備のため、学校教職員を対象とするBLS、AED講習を医学部シミュレーションラボで開始し、平成16年度に56人の教職員が受講した。平成16年7月から、一般市民がAEDを使用することが認可され、平成17年度からは学童生徒へのBLS講習にもAEDが含まれることとなった。この準備過程として、平成16年7月以後の講習では、指導員によるAED使用の展示が実施された。
専門職教育と専門職性に関する異業種間比較研究―成人教育学の観点から

本研究では、多様な専門職教育の異なる実態や共通課題を、医師・医療者(看護師・理学療法士など)養成、企業内教育、現場型行政官教育(海上保安官養成など)、教師・保育士養成、社会教育関連専門職(学芸員・社会教育主事・図書館司書)養成、法律家養成、学術的研究者養成などを手がかりに、領域を超えて横断的に探究する。多職種連携教育(InterProfessional Education)の実践交流モデルの開発・構築への取り組みとそれを踏まえた異業種間比較研究からなり、先行研究の乏しい専門職教育と専門職性に関わる研究領域で、専門職性の包括的研究への契機・可能性を得ることを目指した。本研究では、多職種連携教育(Interprofessional Education)の実践交流ネットワークモデルを開発・構築する試行的取り組みとそれを踏まえた異業種間比較研究を通し、先行研究の乏しい専門職教育と専門職性に関わる研究基盤を形成するとともに、異なる領域の専門職の実践的課題の共有化がもたらす自己・相互教育のメカニズムと、専門職性へのより深い洞察の契機と可能性を追究する。当該年度は、11年目の実践事例の共有化と議論、2特定の大学授業科目での異業種教員の連携の取り組み、3医学教育への教育学専攻者の関わりの参与的考察、3成人・生涯教育研究の第一人者Peter Jarvis教授を迎えてのIPEセッションの企画・運営、4ネットワークモデルに関する実践的考察(京都IPE研究会と東京IPEとの連携・交流に関する模索)などに取り組んだ。具体的には、1では、「IPE実践・振り返りセッション」を2回開催し、そのうち1回は看護教育や助産師教育の担当者、学芸員、ユースサーヴィスなどに携わる新メンバーとともに、医学教育の富士研プログラムに向けて翻訳・編纂したテキストを共同で読み、フリーディスカッション形式で実践的課題と論点を抽出した。2京大内で医学・薬学合同実施の医療安全学の授業を参与観察後、医学・薬学の担当者とともに意見交換や振り返りなどを行った。3では、募集した30人弱の参加者(看護学・助産学・薬学・医学・企業教育・学芸員・ユースサーヴィス・俳優養成など)とともに、Jarvis教授のレクチャーを踏まえ、「職業人の成長と経験をシェアするー英国成人教育・生涯学習研究者ピーター・ジャービスとともに」(「IPE実践交流セッション」)を実施し、参加者からかなり有益との好評を得た(記録は作成中)。4については、新たなインターネットサイトの設立の準備とともに、議論を継続中である。本研究は、多様な専門職における教育の異なる実態や共通課題を、医師・医療者(看護師・理学療法士など)養成、企業内教育、現場型行政官教育(海上保安官養成など)、教師・保育士養成、社会教育関連専門職(学芸員・社会教育主事・図書館司書)養成、法律家養成、学術的研究者養成などを手がかりに、領域横断的に探究する中で、多職種連携教育(InterProfessional Education)の実践交流モデルを開発・構築する試行的取り組みとそれを踏まえた異業種間比較研究からなる。それらを通し、先行研究の乏しい専門職教育と専門職性に関わる研究基盤を形成し、複数領域の専門職の実践的課題の共有化による自己・相互教育のメカニズムと専門職性の包括的研究への契機・可能性を得ることを目指した。初年度は、京都大学IPE研究会として英国フィールド調査、専門職教育に関わる実践へのアクションリサーチと参与観察、メンバー用HPの立ち上げを行い、2011年8月に賛同メンバーが東京IPE研究会を結成、両IPE研究会は情報交換しつつ独自の活動を展開した。2013年2月、京大IPE研究会を関西IPE研究会に拡大・再編し、大阪総合保育大学・佐伯知子氏が研究協力者として参画、同3月にジャーヴィス博士を迎えた第2回IPEセッションを開催した。以後、定例研究会と同時に新たなwebサイトでIPE情報ネットワークの実験的試行に努めた。2014年3月には京都大学総合博物館の特別展示と連動するIPE公開ワークショップを開催し、多様な領域の専門職者が共通テーマを異なる観点から話し合うIPE学習モデルを提起した。また3年間の経験を専門職教育ハンドブックの試行版の編纂、学会発表や論文執筆、最終報告書などの学術的成果として発信した。同研究会活動は、今後も京都大学大学院教育学研究科教育実践コラボレーションセンターの事業の一環として行い、IPE基盤型・領域横断型の専門職教育研修プログラムの開発、ハンドブック改訂などに携わる。当該年度は、学内において京都大学IPE研究会を組織し、主に次の研究活動を行った。これらは今後の研究活動の基盤となるものであり、異業種専門職比較研究のために不可欠なIPEネットワークモデルの構築に向けた作業である。(1)研究会の開催:2011年度計10回、IPEの実施についての基本理解と実態に関する認識の共有化に向けた議論、調査計画の企画立案、実施後の振り返り、IPEネットワークの組織化とインターネットサイトの立ち上げと活用方法など。

(2)IPE(Interprofessional Education)の実践と参与観察:2011年7月日本医学教育学会プレコングレスワークショップ、8月新潟大学社会教育主事講習、および京都大学臨床指導医ワークショップ、京都大学Eフォーラム、12月「第38回医学教育者のためのワークショップ」(於富士教育研修所)、3月IPEワークショップの参与観察(於ロンドン大学クィーンマリー校)、京都大学での学校教員を対象とするEフォーラムなど。(3)「医学教育者のためのワークショップ」に企画運営サポーターとして関与:ロンドン大学Dane Goodsman博士のワークショップ・セッションのためのテキスト翻訳、企画・運営への参画・進行補助。(4)IPEに関わる専門家との対話・セッション:日本医学教育学会メンバー、Goodsman博士、John Weinman博士、学校教員、その他。(5)東京の研究会メンバーの組織化と連携によるIPEネットワーク立ち上げの準備作業。当該年度の前半期は、研究分担者をはじめとする当初メンバーの個人的事情により、研究会や研究活動が停滞したため、一時は研究計画の大幅変更も検討した。だが、夏以降に新たな異業種メンバーとの連携が生まれ、刺激的な異業種コミュニケーションが可能となってきたために、当初計画を軌道修正しつつもより創造的な方向性をめざすべく、この数ヶ月は活動を進めてきている。9月に代表者が兵庫県立大学の看護教員研修会で講師を務めたことを契機に、同大看護学部の岡田彩子准教授を研究協力者に迎え、看護・助産学の教員や看護協会職員との連携が生まれ、学内でも医療安全学の授業を契機に、薬学教員との接点ができ、3月23日のIPEセッションの参加者はすでに、ほぼ全員がIPEのメーリングリストのメンバーとして登録しており、次年度の活動に参画予定である。本研究は、生涯教育学研究において従来、研究的蓄積の乏しい「専門職教育」と「専門職性」について、抽象的議論や単独業種による考察ではなく、異業種専門職教育や異業種専門職の連携やネットワークに向けた取り組みを通して比較検討しつつ、その共通基盤となる要素や側面を成人教育学的観点から、多面的・構造的に捉えようとするものである。当面の主たる具体的対象は、医師と博物館学芸員であり、企業の人材育成や教員養成など、他の業種における教育・研修のあり方も、比較検討の対象となる。初年度は、このような研究の第一歩として、京大内で研究会を組織して本研究の基盤を明確化し、多様な場所や対象での多業種の参与観察を行い、東京や他地域にいる研究協力者とのネットワークづくりを行うことができ、本年度は、それらの基盤の上に研究活動を開始している。次年度は、活動の本格的発展と中間報告の取りまとめの2つの課題に取り組む。とりわけ、当該年度最後に行った「職業人の成長と経験をシェアするー英国成人教育・生涯学習研究者ピーター・ジャービスとともに」(「IPE実践交流セッション」)の実践的成果が、本研究に占める位置と重要性を鑑み、これを詳細に記録化し、共同で分析・考察することが、当該年度と次年度を橋渡しする重要な作業になると考えている。次年度の具体的研究活動は、次のように予定している。
非国家行為体に対する自衛権の研究

非国家行為体による攻撃に対して、国家は自衛権を行使することができるのか、という問題をめぐり、学説は長らく対立している。この問題について、本研究は、自衛権行使対象となる非国家行為体の性質に着目した検討を行う。特に、テロ組織などの非国家行為体が、単に一国への脅威にとどまらず、国際社会全体にとっての脅威と捉えられるような場合について、自衛権行使の可否や基準を明らかにしようとする。
抗体ファージライブラリを用いた胃癌特異的構造・翻訳後修飾をもつ新規癌抗原の探索

癌の早期発見、治療や病態のモニタリングの為の診断マーカーの開発を目的とする。以前に構築した胃癌患者リンパ球由来の抗体ファージライブラリの評価を行った。構築した抗体ファージを用いて、胃癌患者・健常者の血清サンプルにより、癌抗原に特異的に結合する抗体ファージの濃縮を行った。その結果、特異的に結合する抗体ファージの濃縮が認められたため、現在クローン化を行い癌抗原特異的抗体ファージの単離を行っている。癌の早期発見、治療や病態のモニタリングのための診断バイオマーカーの開発、新規治療法及び個人に合わせた治療法のための治療薬(抗体医薬)の開発は急務となっている。そこで本研究は、胃癌患者由来の抗体ファージライブラリを用いて、胃癌の新規バイオマーカーの探索・癌抗原特異的抗体の単離を目的とした。本研究により、従来の方法では同定できない胃癌特異的抗原の発見が期待される。以前に構築した胃癌患者由来のヒト一本鎖抗体(scFv)ファージライブラリを用いて、胃癌患者の血清・腹水の癌抗原に特異的に結合する抗体の探索を行った。まず初めに、胃癌患者と健常者のそれぞれの血清・腹水をHu-14カラムによりhigh-aboundant proteinを除去した後、イムノチューブに固定化を行い、抗体ファージライブラリを用いて吸収操作(健常者の血清抗原との反応)と濃縮操作(胃癌患者の血清抗原との反応)を繰り返し行い、胃癌患者の血清抗原に特異的に結合する抗体ファージの濃縮を行った。濃縮がどのくらい行われているかをELISAにより検討をおこなった。その結果、健常者の血清サンプルと比較して胃癌患者の血清サンプルに結合する抗体ファージが濃縮されていることが確認された。現在、濃縮された抗体ファージの大規模な検証を行うために、ファージのクローンを用いた抗体アレイの作製の予備検討をおこなっている。アレイを作製した後、それぞれの血清抗原をラベル化を行い、アレイに反応させて胃癌患者由来の血清抗原に特異的に反応する抗体の単離を行う。まずは、胃癌患者由来のヒト一本鎖抗体(scFv)ファージライブラリの構築を行った。胃癌患者由来のヒトscFv抗体ファージライブラリの構築を行う為に15名の胃ガン患者のリンパ球からmRNAを精製し、抗体遺伝子を増幅させ、ファージミドベクターに組み込み抗体ファージライブラリの構築をした。その後、遺伝子配列の解析、ファージ表面への抗体分子の提示効率の解析から今後の実験を行うに十分な多様性を有することが分かった。作製した胃癌患者由来の抗体ファージライブラリを用いて、胃癌患者の血清・腹水の癌抗原に特異的に結合する抗体の探索を行った。胃癌患者と健常者のそれぞれの血清・腹水をHu-14カラムによりhigh-aboundant proteinを除去した後、イムノチューブに固定化を行い、吸収操作と濃縮操作を繰り返しおこなった。この操作により癌抗原に特異的に結合する抗体ファージの濃縮がおこなわれていると予想され、現在、濃縮された抗体ファージのクローン解析を進めるための準備を行っている。今年度の目標は、抗体ファージの作製から癌抗原に特異的に反応する抗体ファージの濃縮、クローン化を行い、癌抗原に特異的に反応する抗体の単離を行うところまでであった。しかし、今年度達成できたのは、抗体ファージの作製と癌抗原特異的抗体ファージの濃縮のところまでであった。進捗度としては、目標の2/3ぐらいだったので、達成度は低い。来年度は、もう少しスピードを上げて抗体の単離、抗原の同定へと進んでいく予定である。1.癌抗原に特異的に結合する抗体ファージの単離:抗体ファージの作製は完了し、癌患者血清・腹水の癌抗原に結合する抗体ファージの濃縮を終えたので、抗体アレイを用いたスクリーニングにより、癌抗原に特異的に反応する抗体クローンの単離を行っていく。2.特異的抗体に結合する癌抗原の同定:単離した癌抗原特異的抗体を用いてcDNAタンパク質アレイまたは、免疫沈降法・次世代質量分析計を用いることにより癌抗原の同定を行う。3.癌抗原、自己抗体の腫瘍マーカーの有用性の検討:数百の血清・血漿を用いて、同定した癌抗原、その抗原に対する自己抗体の腫瘍マーカーとしての臨床的有用性の検証を行う。該当なし
自然条件下における生物同調現象

「生物の同調現象」として植物の応答を研究することにより、それにかかわるメカニズムの機能を自然条件下で理解することが目的である。時系列トランスクリプトーム解析を元に3つの研究課題を実施した。1新規に発見した`生育終了'同調現象の制御因子を同定し機能を解析すること。2複雑な自然状況下での遺伝子ネットワークの機能を理解すること。3遺伝子発現の応答をバオイマーカーとして利用し、環境を推定すること。1シロイヌナズナ生育終了時期にいたる繁殖プロセスの詳細解析により、開花のピークが生育終了に先立って同調することを見出した。そこで新規因子のミュータントライン解析に併せて、既知因子の形質転換体を用いた閉鎖温室実験により、生育終了同調現象の制御因子候補を同定した。2自然の複雑な状況における機能に焦点を当て、年間を通した季節トランスクリプトームを世界で初めて論文発表し(Nature Plants, 2019)、データベースを公開した。ヒストン修飾(活性修飾H3K4me3と抑制修飾H3K27me3)について、鍵となる花成抑制因子FLCについて、H3K27me3が過去の転写状況を反映して制御されること、またこのヒストン修飾が季節に沿った応答変化を逆行させないラチェットとして働くことをを見出した(論文準備中)。全ゲノムについては抑制型ヒストン修飾H3K27me3が多くの遺伝子で同調的の変化するという現象を発見したので、この同調的変化現象をより高次元のクロマチン構造として検出する実験を行った。3トランスクリプトームをバイオマーカーとし、自然集団における植物ウイルスの感染の有無と感染量の推定を行った。ニューラルネットワークによる機械学習を用いた方法を開発した(論文準備中)。また、植物ウイルスとホスト植物の長期共存が成立するために季節バランスについての詳細解析を実施した(論文準備中)。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度は、主に以下の4点をすすめた。1:植物の同調応答を定量的に検出する「連続播種実験」を実施し、シロイヌナズナの複数系統についてRNAサンプルを取得した。これは、毎週播種した植物を野外条件で生育させ、その後の花成、開花、生育終了の同調を調べるものである。同調現象を説明するために、気象データと併せた解析と遺伝子発現からの解析をすすめている。2:ハクサンハタザオを対象に、年間の日長と気温変化の位相差を自然(Natural)、位相一致(In-phase)、逆相(Anti-phase)に設定した、1年間にわたるグロースチャンバー実験を行った。その結果、位相差が自然条件と異なる時に、大きな適応度の低下が起こった。この結果は、日長と気温変化の自然の位相差が開花調節経路の機能に重要であることを示している。また、時系列トランスクリプトームの結果、多くの季節変化を示す遺伝子が温度に依存して変化していることを示した。3:ハクサンハタザオの自然集団を対象とし、時系列トランスクリプトームと並行してヒストン修飾解析を実施した。活性/抑制型修飾であるH3K4me3/H3K27me3抗体を用いたクロマチン免疫沈降法によるFLC遺伝子の解析を実施した。また、網羅的解析(ChIP-seq)データが得られており、現在データ解析中である。4:`生育終了'同調の突然変異体スクリーニングを、野外圃場条件下で開始した。突然変異源処理後の自殖系統と野生型をのべ3,600株鉢植えにして栽培している。これらのうち、生育の終了が同調しないものを得る予定である(平成27年6月に実験終了予定)。1シロイヌナズナにおける繁殖期間終了の遺伝的変異を利用して、植物繁殖期間の終了を制御する因子を同定することを目的とした研究を実施した。まず、原因遺伝子の同定を目指して、繁殖期間の終了に関するミュータントスクリーニングを実施した。さらに、野外で育成させたシロイヌナズナの繁殖同調における老化関連遺伝子の発現タイミングを調べた。合計2590株のEMS変異系統の栽培を行い、同時期に植えた野生型よりも枯死の遅いものを選抜した。その結果、193個体のEMS変異系統が対照である野生型よりも遅く枯死した。これら選抜系統には、矮性あるいは不稔のものが多く含まれていた。野生型と変わりない草丈のものが68系統選抜され、そのうち標準的な鞘の形成をしたものが26系統得られた。今後は、これら26系統について再度、栽培実験を行うと共に変異した遺伝子の特定、単離を行い、さらに遺伝子の機能解析へと研究を進める予定である。2鍵遺伝子FLCのヒストン修飾を介して自然条件下でのバーナリゼーション応答を評価した。自然条件下におけるFLC遺伝子座領域におけるH3K4me3(活性型ヒストン修飾)とH3K27me3(抑制型ヒストン修飾)の動態についての2年間にわたる解析が終了し、その動態をモデリングした。また、グロースチャンバーを用いて、気温変化のパターンを操作した実験を行い、ヒストン修飾を解析した。3ハクサンハタザオのトランスクリプトームデータをもとに、過去の長期の気温と遺伝子発現の関係を解析した。また、トランスクリプトーム解析により、植物ウイルスの検出とハクサンハタザオの遺伝子応答を同時に検出できることを見出した。ウイルス感染の有無により発現が異なる遺伝子群をリストアップした、また、そのリストは季節によって変化することが明らかとなった。

本研究は、全体期間を通してとして1生育終了'の同調をもたらしている鍵因子の同定、2自然の複雑な状況に焦点を当てた自然集団の時系列ヒストン修飾解析による機能理解、3トランスクリプトームデータのバイオマーカーとして利用を目指している。1については、生育終了のスクリーニングという大規模な野外栽培を実施し、合計2590株のEMS変異系統の栽培の結果、26系統の候補変異体を得た。2については、開発した自然条件下でのヒストン修飾免疫沈降実験方法のプロトコルを整備し「フィールドChIP法」として報告した(Nishio et al., 2016)。また、FLCのヒストン修飾動態の結果により、環境記憶機構としてのヒストン修飾のモデリングに成功した。投稿に向けて解析中である。3については、物理要因と生物要因の両方で、トランスクリプトームをマーカーに使うための遺伝子群が明らかとなった。予定を越えることとしては、トランスクリプトーム解析によりウイルス感染の有無を検出したことである(投稿中)。このことにより、植物ウイルスと宿主植物の応答における同調性についても解析が可能となる道が開けた。本研究の概念的基礎となるアイデアを総説に発表し、分子フェノロジー(Molecular phenology)を定義した(Kudoh, 2016)。以上のように、当初の予定通り進捗している。自然環境下での生物同調現象を理解することを目的に、分子遺伝学的アプローチと生態学的アプローチを融合した研究を行う。モデル植物シロイヌナズナを用いた解析と近縁のハクサンハタザオ自然集団の長期モニタリングとを組み合わせて、1因子同定、2機能理解3応答利用の観点から、植物の季節同調を研究する。1シロイヌナズナにおける繁殖期間終了の遺伝的変異を利用して、植物の繁殖期間終了を制御する因子を同定することを目的とした研究を実施した。原因遺伝子の同定を目指して、26-27年度シーズン(シロイヌナズナは秋発芽、初夏生育終了)に引き続き、27-28年度シーズンも生育終了を決定する因子に変異を起こしたミュータントラインのスクリーニングを実施して候補ラインを得た。そのうち6ラインについてリシーケンスを行い、ゲノム配列を決定した。現在塩基多型(SNP)解析が進行中である。また、野生型のRNA-Seqとsmall-RNA時系列データを取得した。2自然の複雑な状況における機能に焦点を当て、自然集団の時系列ヒストン修飾解析を実施している。ヒストン修飾(活性修飾H3K4me3と抑制修飾H3K27me3)について、鍵となる花成抑制因子FLCについては2週間毎に2年間のデータを得た。全ゲノムについては1ヶ月回毎に1年間のデータを取得し、環境の長期傾向に対する応答を解析した。その結果、2週間以上の気温の長期傾向に応答する遺伝子のリストを作成することができた。また、日長と気温の年間位相差を操作する実験の解析を終了し、野外の昼夜変温を再現する実験を開始した。
準定常強磁場発生用クライオジェニック・マグネットの試作

1.クライオジェニック・マグネットの設計と製作(1)コイル:液体窒素温度に冷却されたコイルをもつ常伝導マグネットとして、外側のビッタ-型コイルと内側のポリヘリックス型コイルを組合わせたものを試作した。その設計に当たっては電磁力と発熱とを十分に考慮した。(2)電源:既存の大量力水冷マグネット用の定常的な直流電源にパルス通電操作ユニットを付加し、準定常強磁場マグネットの電源とした。定格電流23kAまで1秒ないし2秒で上昇させ、03秒間その値に保持できるようになっている。(3)クライオスタット:コイルに液体窒素を循環させるためのクライオスタットと9m^3の液体窒素貯槽からの配管を設置した。2.クライオジェニックマグネットのテスト(1)常温での通電テスト:常温ではコイルの抵抗が大きく定格電流23kAより遥かに小さい電流しか流せないが、電源の性能テストとコイルの温度上昇テストのために通電した。その結果はほぼ予想通りになった。(2)液体窒素によるコイルの冷却テスト:常温のコイルに液体窒素を注入しはじめてからコイルが完全に冷却されるまで約10分を要した。(3)液体窒素温度での通電テスト:コイルの電気抵抗が常温の約1/8になったため、十分大きい電流を流すことができた。本来は液体窒素を循環させながら通電すべきであるが、このテストでは通電中は循環を止め、温度が上昇したコイルに再び液体窒素を循環させて冷却するという方法をとった。発生磁場の値など設計通りの結果が得られた。本研究で試作したコイルを用いて物性測定を行うことには至らなかったが、本試験研究の主目的である準定常強磁場発生用クライオジェニック・マグネットの特性の研究はほぼ達成することができた。1.本年度はまずクライオジェニックマグネットの詳細な設計を行い、コイル本体ならびにマグネットケ-スの仕様を決定した。当初はポリヘリックスコイルを単独で使用する予定であったが、経費の都合により、既存のビッタ-コイルと組合わせることに変更した。最高磁場が40Tをやや下まわることになるが、液体窒素による冷却効率についてポリヘリックスコイルとビッタ-コイルを比較することができるので将来の発展の基礎をつくるためにはむしろ有効であると思われる。ポリヘリックコイルとピッタ-コイルは電気的には直列に接続されるが、冷却系統からみると並列におかれている。2.既存の大電力直流電源装置をパルス的な通電も可能になるように改良した。すなわち350V、23kAの規格値まで1秒ないし2秒で増減できるようにすると共に、クライオジェニックマグネットのための接続ケ-ブルおよび断路器を設置した。そして既存のビッタ-コイルを用いて常温におけるテスト通電を行い、その性能を確認した。3.容量7000lの液体窒素貯槽から直接クライオジェニックマグネットに液体窒素を供給できるような配管を設けた。そしてコイルの模型を用いて冷却の予備実験を実施した。4.本年度購入したポリヘリックスコイルと既存のビッタ-コイルを組合わせ、本年度購入したマグネットケ-スに収納して、クライオジェニックマグネットの組立てを行った。平成2年度にはこのマグネットのテスト運転を行うが、そのための電源及び冷却設備については、上記2及び3にそれぞれ述べたように、すべて準備が完了している。本研究で試作したクライオジェニック・マグネットのコイル及びクライオスタットの組立、大電力電源及び液体窒素冷却システムの整備などはほぼ前年度に行われたので、今年度はそのマグネットのテストが主であった。テストは次の三段階に分けて行われた。

1.常温での通電テスト常温ではコイルの抵抗が大きいので、定格電流23kAよりも遥かに小さい電流しか流すことができない。電流の変化速度を23kA/s、最大電流値を2.3kAに設定すると、0.1sで最大電流値に達するはずであるが、電流の過渡特性のためにかなりの遅れがみられた。そこでフラットトップの時間を2s程度とし、その間のコイルの温度上昇を調べた。その結果はコイルの設計デ-タに基づく計算値とよく一致した。2.液体窒素による冷却テスト容量9m^3の液体窒素貯槽とマグネットのクライオスタットを配管で直結してコイルを冷却した。急激な窒素の蒸発による圧力上昇を避けるため、常温から液体窒素温度まで約10分で冷却した。液体窒素の循環は通電中のコイルを冷却する場合にも十分に行えるよう設計されている。3.液体窒素温度での通電テストコイルの電気抵抗が常温の約1/8になったため、十分大きい電流を流すことができた。本来は液体窒素を循環させながら通電すべきであるが、安全性を考慮して、電通中は液体窒素の循環を止め、通電によって温度が上昇したコイルに再び液体窒素を循環させて冷却するという方法をとった。発生磁場と電流との関係など設計通りの結果が得られた。本研究で試作したコイルを用いて物性測定を行うことには至らなかったが、本試験研究の主目的である準定常強磁場発生用クライオジェニック・マグネットの特性の研究はほぼ達成することができた。
精子形成・成熟過程で発現する新規受容体と水チャネルの機能解明

精子形成・成熟の分子機構を明らかにするために、精巣および精巣上体における新規アクアポリン11(AQP11)遺伝子およびタンパク質の発現を調べた結果、AQP11は精母細胞と精子細胞に強く発現していた。またAQP11ノックアウトマウス精巣を光顕および電顕レベルで調べた結果、生殖細胞とくに精母細胞のアポトーシス像が多数観察された。これらの結果から、AQP11の欠損は精子形成細胞の細胞死(アポトーシス)に関与することが推察された。精子形成・成熟には生殖細胞自身の遺伝子発現と精巣・精巣上体における生殖細胞・周囲環境の相互作用とが重要と考えられる。この機構を明らかにするために、細胞膜や細胞内オルガネラに存在し、水や小分子の吸収排出に関与する水チャネル・アクアポリン分子に着目した。本年度はアクアポリン11(以下、AQP11)の遺伝子発現を調べ、標的遺伝子組み替え法を用いて作成されたAQP11ノックアウトマウスを細胞組織レベルで解析を行った。1.PCR法とIn situハイブリダイゼーション法を用いて調べた結果、AQP11mRNAは生後2週目以降の精巣で発現がみられ、とくに後期精母細胞と円形精子細胞に強く発現していた。2.電子顕微鏡を用いてAQP11ノックアウトマウス精巣を調べたところ、精母細胞や精子細胞の細胞死および変性像が多数観察された。これらの細胞死はTUNEL反応陽性を示したことから、アポトーシス像と考えられた。以上の所見から、AQP11の欠損は精子形成細胞のアポトーシスに関与することが推察された。さらに、3.マウスAQP11のアミノ酸配列の両末端に対応するペプチドに対する抗ウサギポリクローナル抗体を作製したところ、各末端側を認識する合計4種類の特異抗体を得ることができた。これらの抗体を用いたAQP11タンパク質の発現・局在解析を次年度に行う計画である。また、4.精子形成細胞へAQP11発現ベクターDNAを導入するために、遺伝子導入装置を用いて精巣内微小注入実験を行った。その結果の解析は次年度に行う予定である。今後もさらに興味深いデータが出ることが予想される。本年度はアクアポリン11(以下、AQP11)のタンパクレベルでの局在を調べ、さらに標的遺伝子組み替え法を用いて作成されたAQP11ノックアウトマウス精巣について細胞組織レベルで解析した。1.AQP11タンパク質の局在解析:マウスAQP11のアミノ酸配列の両末端に対応するペプチドに対する抗ウサギポリクローナル抗体を作製したところ、各末端側を認識する合計4種類の特異抗体を得ることができた。これらの抗体を用いてAQP11タンパク質の局在を免疫組織学的に調べた結果、AQP11は生後2週目以降の精巣で発現がみられ、とくに後期精母細胞と円形精子細胞の細胞質に強く発現・局在していた。2.AQP11ノックアウトマウス精巣の形態学的解析:光学顕微鏡を用いてAQP11ノックアウトマウス精巣を調べたところ、精母細胞や円形精子細胞に核濃縮した丸い細胞が多数観察された。これらについて電子顕微鏡を用いて観察した結果、細胞の縮小と核クロマチンの濃縮・断片化、それに続くセルトリ細胞による貪食像が観察され、典型的な生殖細胞のアポトーシス像を示した。以上の所見から、AQP11タンパク質は精母細胞および精子細胞の細胞質に局在し、その欠損は精子形成細胞のアポトーシスに関与することが推察された。
高温超伝導体の平均場理論

銅酸化物高温超伝導体の発現機構を理論的に理解するには、その低エネルギー励起を正しく記述する有効ハミルトニアンから出発するのが適切であろう。そのようなハミルトニアンとしてホッピング項と超交換相互作用の項から成るt-Jモデルが採用されることが多いが、それには含まれない他の項が重要な役割を果たす可能性がある。我々はこれまで摂動計算及びクラスター計算により有効ハミルトニアンを導出し、スピンに依存した3-サイトホッピング項の係数が強磁性的であることを示し、さらにその大きさが超交換相互作用と同程度になることから、t-J+スピン依存3-サイトホッピング項モデルが銅酸化物高温超伝導体の適切な有効ハミルトニアンであろうと主張してきた。そしてスレーブボソンを用いた平均場理論により強磁性的3-サイトホッピング項がRVB状態を大きく増強することを示した。今年度我々は、これまで行ったクラスター計算の結論の定量的信頼性を高めるため、クラスターをより大きくして計算を行い、より精密な有効ハミルトニアンの導出を行った。そしてやはり、t-J+スピン依存3-サイトホッピング項モデルが適切な有効ハミルトニアンであろうとの結論を得た。これらの結果については現在投稿準備中である。スピンギャップのある状態での諸物性の振る舞いが高温超伝導体の抵ドープ域の異常金属相との関係で注目を集めている。我々は1次元ではボソン化法により信頼できる解析計算ができることに注目し、1次元スピンギャップ系の研究を行った。従来、反平行スピン間の後方散乱が引力的だとスピンギャップが生じることは知られていたが、その物性ははっきりしなかった。我々は物性の研究の第一歩として1粒子グリーン関数を自己無憧着調和近似の範囲内で厳密に計算し、その明確な形を得た。諸物理量の計算は現在進行中である。
In,situ,hybridization法による単純ヘルペス脳炎の研究

〔対象と方法〕1.HSV-1をVero細胞に感染させ、経時的に採取後、スライドガラスに塗抹固定し、免疫組織化法とハイブリダイゼーション法を行い、ウイルス抗原およびウイルス核酸の検出を行った。2.単純ヘルペス脳炎剖検凍結脳を用いて、1と同様にウイルス抗原と核酸の同時検出を行った。3.単純ヘルペス脳炎剖検パラフィン包埋組織でウイルス核酸の検出を試みた。4.HSV-1プローベとして【^(35)S】-,【^3H】-,ビオチン標識したものを用いたが、CDNAはpRB103(BamH1-Q),Chλ4aD(EcoR1-D)であった。〔結果〕1.HSV-1感染24時間后では約半数のVero細胞にHSV-1mRNAが検出された。抗原の検出では半数にみられず、茶褐色の色素顆粒は細胞質にみられた。感染3日後のVero細胞のなかにSyncytial cellsがあったが、抗原は細胞質周辺に濃染したが、HSV-1mRNA量は少なかった。2.抗原の検出はHSV-1脳炎羅患患者血清を一次抗体とし、ビオチン化標識IgGを二次抗体としABC法にて検出したがglia及び神経細胞細胞質内に陽性顆粒が多数みられた。ウイルス核酸も同様の分布であった。3.単純ヘルペス脳炎剖検パラフィン包埋組織でビオチン標識プローベで感染グリア,神経細胞核で陽性所見を呈した。【^3H】標識プローベでも同様の所見を呈したが、浸潤細胞では陰性であった。〔今後の研究〕2年間にHSV-1感染細胞,ヘルペス脳炎剖検凍結脳およびパラフィン包埋組織でHSV-1抗原および核酸の検出に成功したので、今後、感染マウスの三又神経節を中心とする感染病態、すなわち、初感染,潜伏,再燃機構の研究を行なう、さらにウサギ眼球結膜感染による脳炎で経時的に後頭下穿刺によりCSF(髄液)を採取し、髄液細胞でのHSV-1感染病態とヘルペス脳炎の迅速診断の可能性を検討する。
造血器腫瘍におけるタンパク質チロシンフォスファターゼの意義と機能解析

遺伝子の構造の解析からLC-PTP遺伝子が11個のエクソンからなり複雑なエクソン-イントロン構造を有することを明らかにした(Oncogene9,3031-3035,1994)。LC-PTP遺伝子は,T細胞において高い遺伝子発現を認めるため,IL-2シグナルとの関連性を検索し,mRNA発現がIL-2刺激後6-9時間でピークを示す誘導を受けることを見いだした。この誘導は,蛋白合成を必要とせず,early response geneであることが判明した(FEBSL ett ,338:47-52,1994)。以上の研究成果からLC-PTPは,増殖シグナルと関連していることが示唆された。SH-PTP2遺伝子を染色体12q24.1にマップした(Oncogene9,1751-1753,1994)。同部位は,慢性リンパ性白血病,杯細胞腫瘍,平滑筋腫などにおいて異常を起こすことから,,これらの病態との関連性が注目される。また,SH-PTP2蛋白を精製し,これに対するポリクローナル抗体を作製し,SH-PTP2蛋白が特に血管平滑筋に多く発現していることを明らかにした(投稿中)。また,前川博士(滋賀医大)との共同研究によって,SH-PTP2蛋白がインスリンセレプターと結合し,リン酸化され,SH-PTP2蛋白の酵素活性が調整されていることを明らかにした(Biochem.Biophys.Res.Commun.199,780-785,1994)。申請者らがPre-B細胞株NALM-6よりRT-PCR法を用いて新しくクローニングした2つの細胞質型PTP(LC-PTP及びSH-PTP3)遺伝子の構造異常と癌化との関連性及び機能解析を目的として以下の研究を行なった。1.SH-PTP3の染色体マッピング:SH-PTP3 cDNAプローブを用きてSH-PTP3遺伝子のゲノムDNAをクローニングした。これを用いてSH-PTP3遺伝子の染色体位置を決定した。ヒトSH-PTP3遺伝子は染色体12q24.1にマップされた。(Oncogene,in press富山医科薬科大学磯部正治博士との共同研究)この部位は慢性リンパ性白血病、胚細胞腫瘍、平滑筋腫などにおいて異常をおこすことが知られており、これらの病態との関連性を検索してゆく。LC-PTP遺伝子が癌化といかなる関連性を持つかを明らかにするために遺伝子の構造を解析した。LC-PTP遺伝子は,11個のエクソンからなり複雑なエクソン-イントロン構造を有することを明らかにした(Oncegene 9,3031-3035,1994)。この研究によってLC-PTP遺伝子のゲノムプローブを得たためにゲノム近傍の構造異常を解析できるようになった。さらにPCRによって容易にLC-PTP遺伝子のゲノムDNAがクローニングできるようになったために点突然変異が解析できるようになった。現在,これらの解析が進行中である。2.SH-PTP2蛋白の発現解析SH-PTP2蛋白をSH-PTP2cDNAをバクテリア発現ベクターに組み込み,大量に精製した。これを用いてポリクローナル抗体を作製し,SH-PTP2蛋白のラット各臓器における発現レベルを解析した。その結果SH-PTP2蛋白は,全身に発現しているが,特に血管平滑筋に多く発現していることが明らかになった(投稿中)。現在,血管平滑筋におけるSH-PTP2蛋白の機能を解析中である。3.シグナル蛋白とPTP蛋白との相互作用の検索SH-PTP2蛋白と物理的会合する蛋白を前川博士(滋賀医大)との共同研究によって解析した。その結果,SH-PTP2蛋白は,インスリンレセプターと結合し,リン酸化され,SH-PTP2蛋白の酵素活性が調節されていることが判明した(Biochem.Biophys.Res.Commun.199,780-785,1994)。