hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
分化転換・再プログラム化の応用による歯髄培養細胞の硬組織形成機構の解明

歯髄細胞中には多くの未分化間葉細胞が存在し,種々の刺激によってこれらの細胞が硬組織形成を有する細胞に分化すると言われている。このことから歯髄組織は本来硬組織を形成する細胞に誘導される機能を有していることが認められる。本研究では,この分化転換と再プログラム化を応用し,硬組織形成能を有する細胞に分化するメカニズムとそれを誘導する因子の検索を行い,臨床に応用することを目的としている。本研究に充分な理解を示した患者の第三大臼歯から歯髄を取り出し,out growthさせ,69代培養したものを歯髄細胞とした。5-アザシチジンで脱メチル化を行った細胞と行っていない細胞に50μMアスコルビン酸(AA),10mM β-glycerophosphate(β-GP),100nMデキサメタゾン(DEX)を加えると脱メチル化をした細胞の方がALP活性が強くなる傾向を示し、1mM 5-アザシチジンで1日間脱メチル化をした細胞に石灰化環境を与えた条件が石灰化環境を与えない条件との差が最も多く示した。また、脱メチル化した細胞の再プログラム化の指標として、石灰化機構に関わる因子であるBMPおよびIGFsのmRNA発現について、検討を行った。脱メチル化をした細胞に50μM AA,10mM β-GP,100nM DEXを添加することによって、2時間後から48時間後にかけて、BMP-2,4,6のmRNA、48時間から72時間にかけてIGF-1およびIGF binding protein-5のmRNAの発現が上昇した。また、cDNAアレイを用いて、石灰化への環境で刺激することにより多くの遺伝子の発現を認めた。以上の結果から、5-アザシチジンによる脱メチル化によって、分化転換が起こり、その細胞に環境を整えることにより、再プログラム化が可能であることが示唆され、臨床応用への期待できる。本研究では分化転換を5-アザシチジンを用いて,DNAの脱メチル化し,続いて,アスコルピン酸,β-glycerophosphate,デキサメタゾンを添加した環境で石灰化を有する細胞に再プログラムを狙うものである。研究に供した細胞は日本大学松戸歯学部付属歯科病院に来院し,矯正学的理由で要抜去とされた下顎第三大臼歯を持ち,本研究に充分な理解を示した患者の第三大臼歯から歯髄を取り出し,out growthさせ,69代培養したものを歯髄細胞とした。6cmディッシュに歯髄細胞を培養し,IMDM培養液5mlに対し,5-アザシチジン0.1,1.0,10.OmMを15μlを加え,24,48,72時間培養し,その後,通常の培地(10%ウシ胎児血清を含むα-MEM)に50μMアスコルビン酸,10mMβ-glycerophosphate,100nMデキサメタゾンを添加し、培養を続け,12,15,18日後に硬組織形成能を有する細胞への分化の指標としてアルカリフォスファターゼ活性を測定し,分化転換・再プログラムの評価とした。その結果,5-アザシチジンで脱メチル化を行った細胞と行っていない細胞に

50μMアスコルビン酸,10mMβ-glycerophosphate,100nMデキサメタゾンを加えると脱メチル化をした細胞の方がALP活性が強くなる傾向を示し、1mM 5-アザシチジンで1日間脱メチル化をした細胞に石灰化環境を与えた条件が石灰化環境を与えない条件との差が最も多く示した。これらのことから,5-アザシチジンによって脱メチル化がおこり,50μMアスコルビン酸,10mM β-glycerophosphate,100nMデキサメタゾンによって再プログラム化が起きていることが示唆された。歯髄細胞中には多くの未分化間葉細胞が存在し,種々の刺激によってこれらの細胞が硬組織形成を有する細胞に分化すると言われている。このことから歯髄組織は本来硬組織を形成する細胞に誘導される機能を有していることが認められる。本研究では,この分化転換と再プログラム化を応用し,硬組織形成能を有する細胞に分化するメカニズムとそれを誘導する因子の検索を行い,臨床に応用することを目的としている。日本大学松戸歯学部付属歯科病院に来院し,矯正学的理由で要抜去とされた下顎第三大臼歯を持ち,本研究に充分な理解を理解を示した患者の第三大臼歯から歯髄を取り出し,out growthさせ,69代培養したものを歯髄細胞とした。5-アザシチジンで脱メチル化を行った細胞と行っていない細胞に50μMアスコルピン酸,10mMβ-glycerophosphate,100nMデキサメタゾンを加えると脱メチル化をした細胞の方がALP活性が強くなる傾向を示し、1mM 5-アザシチジンで1日間脱メチル化をした細胞に石灰化環境を与えた条件が石灰化環境を与えない条件との差が最も多く示した。また、脱メチル化した細胞の再プログラム化の指標として、石灰化機構に関わる因子であるBMPおよぴIGFsのmRNA発現について、検討を行った。1mM 5-アザシチジンで1日間脱メチル化をした細胞に50μMアスコルピン酸,10mMβ-glycerophosphate,100nMデキサメタゾンを添加することによって、2時間後から48時間後にかけて、BMP-2,4,6のmRNA、48時間から72時間にかけてIGF-1およびIGF binding protein-5のmRNAの発現が上昇した。以上の結果から、5-アザシチジンによる脱メチル化によって、分化転換が起こり、その細胞に環境を整えることにより、再プログラム化が可能であることが示唆され、臨床応用への期待できる。
新規歯髄保護材料の開発に関する基礎的研究

象牙質の石灰化に重要なタンパクであるフォスフォフォリンをブタ抜去歯から抽出し、I型コラーゲンとの試作複合体を作製した。全身麻酔を施した8週齢ウィスターラットの上顎第1臼歯を用い、露出歯髄に直接試作複合体を移植後、24週で屠殺した。自動研磨機にて露髄面と修復象牙質が観察できるように実験歯を研削し、走査型電子顕微鏡にて修復象牙質の微細構造を観察した。その結果、一般的な治療薬である水酸化カルシウム製剤の場合に比べて、本複合体は細管構造を含む良質な修復象牙質を再生し、露髄面を封鎖していた。よって、本試作覆髄剤は水酸化カルシウム製剤に代わる材料としての可能性を持つことが示唆された。深いう蝕を治療する際、歯髄を保存するための覆髄剤して水酸化カルシウム製剤が広く使用されている。しかし、水酸化カルシウム製剤は安価である反面、組織刺激性が強く、治癒過程で必要とされる修復象牙質が形成されるまでに23ヶ月という長い治療期間を必要とする。しかも、歯髄を保護すべく形成される修復象牙質は多孔性で裂隙を含むことが多いため、そこが歯髄と外界を繋ぐ感染経路となってしまい、結果的に歯髄炎を惹起させてしまうという可能性がある。本研究の目的は、水酸化カルシウム製剤に取って替わる新規歯髄保護材料の開発を目指し、生体親和性を有するアルギン酸シートと象牙質石灰化に関わる重要なタンパクであるフォスフォフォリンを用いた新規覆髄剤開発のための基礎データを動物実験によって蓄積し、解析することである。本年度の研究では、歯の大部分を構成する象牙質に含まれ、硬組織誘導活性を有する非コラーゲン性リンタンパク質であるフォスフォフォリンをブタ抜去歯から抽出し、生体吸収性材料であるアルギン酸シートと結合させて複合体(試作覆髄剤)を作製した。深い虫歯のモデルとして、全身麻酔を施したラットの臼歯を滅菌スチールラウンドバーにて切削することで歯髄を露出させ、そこに硬組織誘導活性を有するフォスフォフォリン-アルギン酸シート複合体を移植した。術後2、4週目で屠殺し、病理組織学的観察のためにヘマトキシリン-エオジン染色標本を作製、また、走査型電子顕微鏡による観察を行い、修復象牙質と歯髄の詳細な分析を行った。その結果、水酸化カルシウム製剤による場合に比べて緻密で高品質な修復象牙質形成を確認し、歯髄の炎症の程度もきわめて軽度であった。深いう蝕を治療する際、歯髄を保存するための覆髄剤として水酸化カルシウム製剤が広く使用されている。しかし、水酸化カルシウム製剤は安価である反面、高アルカリ性のため組織刺激性が強く、治癒過程において必須とされる修復象牙質形成に23ヶ月という長い治療期間を必要とする。しかも、歯髄を保護するべく形成される修復象牙質は高頻度で多孔性であり、裂隙を含むことが多いため、そこが歯髄と外界を繋ぐ感染経路となってしまい、結果的に歯髄炎を惹起させてしまうことが懸念される。本年度の研究では、歯の大部分を構成する象牙質に含まれ、硬組織誘導活性を有する非コラーゲン性リンタンパク質であるフォスフォフォリンを新鮮なブタ抜去歯から抽出し、生体吸収性材料であるアルギン酸シートと結合させて複合体(試作覆髄剤)を作製した。深いう蝕のモデルとして、全身麻酔を施したラットの臼歯を滅菌スチールラウンドバーにて切削することで歯髄を露出させ、そこに硬組織誘導活性を有するフォスフォフォリン-アルギン酸シート複合体を移植した。その結果、水酸化カルシウム製剤による場合に比べて歯髄の炎症の程度は極めて軽度であり、誘導された修復象牙質は緻密で高品質なものであり、露髄面の封鎖性も良好であった。
計算の概念的理解に焦点をあてた教授介入の効果

本研究の目的は、児童が四則演算(加算、減算、乗算、除算)について持っている概念的知識の関連性を明らかにし、あわせて四則演算の意味を考えさせる教授介入の効果を検討することである。結果として次の5点が示された。1.小学校3年生から5年生126名を対象に調査した結果、減算、乗算、除算の検算方法の理解間には有意な相関が認められた。2.乗算問題については加算を使って、除算問題については減算を使って考えさせる、普通は行わない「計算の工夫」課題の解決は、検算の理解得点と有意な相関があった。3.分散分析の結果、学年の上昇につれて理解が進むのは、減算での「借りた数はどこへいくのか」と「掛算の工夫」に対する反応であった。4.減算における「上の位から借りる数はいくつか」「借りた数はどこへいくのか」「その数はいくつか」の理解は、各種の「検算方法」や「計算の工夫」と深く関わり、減算の意味的理解が、その後の乗算や除算に対する概念的理解の基礎をなしていることが示された。5.四則演算の意味を考えさせる教授介入の効果は、直後のテストにおいては非常に大きな効果をあげたが、約1年後の調査ではその効果が減少した。学校教育において、計算の意味について考えさせる経験を繰り返し与える必要性が示唆された。本年度は、「計算の概念的理解に焦点をあてた教授介入の効果」を検討するための準備段階として、次の2点の調査を実施した。1.小学校3・4年生を対象に、引き算・かけ算を解く際の手元をビデオカメラで拡大撮影し、幾つかの典型的な計算エラー(誤った計算過程)を得ることができた。これらは平成11年度の調査において、なぜ計算エラーが生じたか、その計算過程を考えさせる際の材料として用いる予定である。2.個別インタビューによって、引き算・かけ算の概念的理解の水準を調査した。質問は、一般的にはあまり行われない内容で、かつ子ども達が計算の概念的理解(意味)をどのように捉えているかについて判断できるように工夫したものであった。(例:引き算---400-217の計算で、百の位から借りた数はどこにいくのか。かけ算---132×54の計算をする場合に、132×50と132×4を計算してから両方の答えを足してもよいか。)平成11年度に行う教授介入後に、概念的理解の変化について検討する予定である。児童が四則演算(加算、減算、乗算、除算)について持っている概念的知識の関連性を明らかにし、あわせて四則演算の意味を考えさせる教授介入の効果を検討する目的で行われた調査から、下記の点が明らかになった。1.減算、乗算、除算の検算方法の理解間には有意な相関が認められた。5.計算エラーに基づいて計算の意味を考えさせる教授介入の効果は、直後のテストにおいては非常に大きな効果をあげたが、その効果は約1年後には減少した。
F型肝炎の解明

既知のウイルス肝炎とは異なる肝炎が存在し、F型とかX型とか非A非B非C非D非E型肝炎と呼ばれている。このF型肝炎は急性ウイルス肝炎の25%、慢性肝炎の5%を占めている。我々はこのF型肝炎に関し、研究期間中次の諸点を明らかにした。第1、F型肝炎の約80%が実に血清マーカー陰性(サイレント)のB型肝炎であることを血清中のウイルス遺伝子をPCR法で増幅することによって証明した。残りの約20%の症例は最近米国で同定されたG型肝炎である可能性がある。B型ウイルスに感染していながら急性肝炎ではHBs抗原と、HBc IgM抗体が、慢性肝炎ではHBs抗原が陽性にならないのである。これらのマーカーが陽性にならない理由はウイルス遺伝子の複製と発現が抑制されているためと考えられる。第2、4人の患者のサイレントB型ウイルスの全塩基配列を決定し、共通に認められ、しかも遺伝子複製が抑制されるような重要な変異を探した。その結果、X領域に8塩基の欠失とDR2の点変異を発見した。前者によりフレームが変わり本来154アミノ酸からなるX蛋白が134アミノ酸に短縮してしまう。欠失したアミノ酸部位にはX蛋白の活性ドメインが存在するため、この短縮X蛋白にはトランスアクチベータ-活性が喪失していると考えられる。またこの欠失する8塩基部位はプロモーターやエンハンサーの重要配列なので、これらの機能も阻害される可能性がある。DR2の点変異はウイルスの複製起点を阻害すると考えられる。これが血清マーカー陰性の原因であろう。第3、サイレントB型ウイルス全長遺伝子をクローニングしhead-to-tail dimerを作製した。第4、wild dimerをコントロールにしてin vitroでHuh7細胞とKiml細胞にトランスフェクションした。培養上清中のHBs抗原とHBe抗原を定量したところ、予想に反して両dimer間にはっきりした差異は認められなかった。B型ウイルスのin vitroでの複製と発現にはX蛋白が不要なのかもしれない。B型ウイルスに感染して発症した急性や慢性の肝炎でありながら、B型ウイルスの血清マーカーが陰性であり、B型肝炎とは診断出来ない症例がある。これは臨床的には非AE型肝炎と診断されている。この血清マーカー陰性(サイレント)B型肝炎ウイルス遺伝子の全塩基配列を決定した結果、X領域に共通したふたつの特徴的な変異-8塩基の欠失とDR2の点変異を発見した。このふたつの変異の結果、B型ウイルスDNAの複製と発現が抑制され、既存の血清診断法では抗原や抗体がチェックできないと考えられる。今年度はこのサイレントB型ウイルスの研究に関し次のことを行った。(1)サイレントB型ウイルスの全遺伝子をクローニングし、その全塩基配列を決定し、ダイマーを作製した。ダイマーはトランスフェクションに用いられる。(2)変異したX蛋白と野生株のX蛋白を大腸菌に発現し、蛋白質を精製した。この両発現蛋白及び5種類のX蛋白合成ペプチドをウサギに免疫し抗体を作製した。この抗体を陽性コントロールにして、サイレントB型肝炎の患者血清の変異X蛋白抗体ELISA測定系を開発した。これは現在進行中で、その検出感度と特異性の向上をおし進めているところである。(3)慢性サイレントB型肝炎患者5名の肝生検に変異X遺伝子のmRNAが発現しているかどうかをRT-PCR法によって検索した。その結果、特異的なmRNAが陽性になり、変異X蛋白が発現していることが裏づけられた。

このF型肝炎は急性ウイルス肝炎の25%、慢性肝炎の5%を占めている。我々はこのF型肝炎に関し、研究期間中次の諸点を明らかにした。第1、F型肝炎の約80%が実は血清マーカー陰性(サイレント)のB型肝炎であることを血清中のウイルス遺伝子をPCR法で増幅することによって証明した。残りの約20%の症例は最近米国で同定されたG型肝炎である可能性がある。B型ウイルスに感染していながら急性肝炎ではHBs抗原と、HBc IgM抗体が、慢性肝炎ではHBs抗原が陽性にならないのである。これらのマーカーが陽性にならない理由はウイルス遺伝子の複製と発現が抑制されているためと考えられる。第2、4人の患者のサイレントB型ウイルスの全塩基配列を決定し。共通に認められ、しかも遺伝子複製が抑制されるような重要な変異を探した。その結果、X領域に8塩基の欠失とDR2の点変異を発見した。前者によりフレームが変わり本来154アミノ酸からなるX蛋白が134アミノ酸に短縮してしまう。欠失したアミノ酸部位にはX蛋白の活性ドメインが存在するため、この短縮X蛋白にはトランスアクチベータ-活性が喪失していると考えられる。またこの欠失する8塩基部位はプロモーターやエンハンサーの重要配列なので、これらの機能も阻害される可能性がある。DR2の点変異はウイルスの複製起点を阻害すると考えられる。これが血清マーカー陰性の原因であろう。第3、サイレントB型ウイルス全長遺伝子をクローニングしhead-to-tail dimerを作製した。第4、wild dimerをコントロールにしてin vitroでHuh7細胞とKiml細胞にトランスフェクションした。培養上清中のHBs抗原とHBe抗原を定量したところ、予想に反して両dimer間にはっきりした差異は認められなかった。B型ウイルスのin vitroでの複製と発現にはX蛋白が不要なのかもしれない。
関数方程式の解析関数解の大域的研究

1.二重週期関数を係数にもつRiccati型方程式の有理関数解の週期性について調べた。周期解はすべて二重週期的であることを示し,その周期および解の表示式を求めた.2.単週期的有理型関数を係数をもつ線形常微分方程式の解の零点分布を調べた.解のStohes現象を考察することにより,Hill方程式Mathieu方程式を含むある線形方程式のクラスについて,解の零点の密度に関する評価式を与えた.3.Pain leve超越関数のうち(I),(II),(IV)については,その増大度の上からの評価式を与えた。また(III),(V)についてはuniversal covering上での増大度を上から評価した.さらに(I)の増大度につしては下からの評価式を与えることができた.さらにPain leve超越関数のsmall targetに関する値分布を調べた.4.PI-hierarclyい属する高階Pain leve方程式について,その有理型関数解の極の個数の下からの評価を得た.1.二重週期関数を係数にもつRiccati型方程式の有理関数解の週期性について調べた。また(III),(V)についてはuniversal covering上での増大度を上から評価した.さらに(I)の増大度につしては下からの評価式を与えることができた.さらにPain leve超越関数のsmall targetに関する値分布を調べた.4.PI-hierarclyい属する高階Pain leve方程式について,その有理型関数解の極の個数の下からの評価を得た.1.Painleve(I)方程式の2変数版であるところのある種の退化Garnier系についてそのすべての解は有理型であることがわかっていたが,ここでは,その解の極集合の形状について調べた。その結果、ある4階非線形微分方程式をみたす解析関数により表現される解析的集合であることが証明できた。2.Painleve超越関数(III),(V)について,それにある変換を施した結果得られる有理型超越関数について,その増大度を調べた。その結果Painleve超越関数(III),(V)の値分布についてのより精密な評価を得ることができた。3.Painleve超越関数(I)に対して,その増大度の下からの評価式を得た。それにより,増大度関数のふるまいをより明らかにすることができた。また,Painleve超越関数(II)についても,ある条件のもとでその位数の下からの評価を得ることができた。1.二重週期関数を係数にもつRiccati型方程式の有理関数解の周期性について調べた。週期解はすべて二重週期的であることを示し、その週期および解の表示式を求めた。2.単週期的有理型関数を係数にもつ線形常微分方程式の解の零点分布を調べた。解のStokes現象を考察することにより、Hill方程式、Mathieu方程式を含むある線形方程式のクラスについて、解の零点の密度に関する評価式を与えた。3.Painleve超越関数のうち(I),(II),(IV)については、その増大度の上からの評価式を与えた。また、(III),(V)については、universal covering上での増大度を上から評価した。さらに、(I)の増大度については下からの評価式を与えることができた。さらに、Painleve超越関数のsmall tangetに関する値分布を調べた。4.PI-hievarchyに属する高階Painleve方程式について、その有理型関数解の極の個数の下からの評価式を得た。これにより、PI-hierarchyにより定義される有理型関数の位数について一つの予想を与えた。
マイクロ加工による集積化トンネル電流測定器とその応用

本研究ではプローブ、対向面および静電マイクロアクチュエータを同一平面に形成して、一般的な表面マイクロマシニングだけでトンネルユニットを構成した。プローブは基板に対して水平に動くため、lateral tunnling unit : LTUと呼ぶ。まず小型化を最優先して設計したLTUについて、工学面での評価(ゼロ位法による変位測定とSTMのZ軸アクチュエータとしての利用)と、変位-トンネル電流特性に着目した物理面での評価を行った。工学面では、nmオーダの変位センサとして使用できることがわかった。AFM探針と集積したものは、そのバリエーションである。STM像は、かならずしも十分なものとはいえなかったが、試料の形状を反映した像が得られた。基準質量の動きを集積化したLTUで鋭敏に検出する加速度センサ、原子間力顕微鏡のカンチレバ-の動きを集積化したLTUで鋭敏に検出するプローブ、LTUのアレイで数十nmオーダーのビットを読み書きする超高密度ディスクなどの応用を提案し、一部を試作した。物理面から評価を加えた結果、空気中では積分制御でLTUを安定に制御できることがわかった。また強い斥力が観測された。一方極高真空では、積分制御ではリミットサイクルを発生し、制御不能になった。モデルに基づいて設計したPID制御を行うと、振動はするが、おとなしい振動で、波形は引力の存在を示唆した。のモデルが2種類可能である。また、引力の値を考えると、制御だけでは安定化はできないという結論に達した。このため、アクチュエータの剛性と発生力を共に2桁増大ししかも大型化をなるべく抑えた改良を行い、再び動作の評価をおこなった。結果として、改良型のLTUを安定に制御できる条件が見つかった。駆動電圧の振幅から斥力が観測され、空気中と真空中での違いから、現象のメカニズムを推定することができる。本研究は,半導体技術に基づくマイクロマシニングで,真空トンネル電流を制御する超小型デバイスを作り,それを超高感度の変位センサとして応用することを目的としている.多結晶シリコン薄膜をエッチングして,トンネル電流検出用の探針,それを0.1nm程度の精度で動かす静電アクチュエータ,トンネルギャップを形成する対向面を作り、可動部のみを基板から分離した.全体に金などの金属膜を付加し,トンネル電流の検出と制御を試みた.今年度の成果は、以下の通り。1.マイクロトンネルユニットの設計まず、トンネルユニットを超小型化するときに要求される諸特性を定量的に検討した。この要求仕様を満たすマイクロトンネルユニットの設計と製作法を検討し、トンネル電流検出用の探針を基板と平行な方向に動かす構造とすると、半導体マイクロマシ-ニング技術により、静電アクチュエータ、探針を含む可動構造、探針と対向する面などを一括で製作でき、十分な特性を確保しつつ大量生産が可能になることが分かった。これに基づいて、マイクロトンネルユニットを設計した。2.マイクロトンネルユニットの製作と動作実験上記の設計に基くデバイスの製作プロセスおよび使用素材を実験的に定め、デバイスを製作した。特に、このような複雑な構造を基板から分離して可動にする際に、歩留りを下げる主因である付着の問題を解決するプロセスを新たに考案した。大気中でデバイスを働かせ、トンネル電流を制御できることを確かめた。プローブは基板に対して水平に動くため、lateral tunnling unit:LTUと呼ぶ。まず小型化を最優先して設計したLTUについて、工学面での評価(ゼロ位法による変位測定とSTMのZ軸アクチュエータとしての利用)と、

変位-トンネル電流特性に着目した物理面での評価を行った。工学面では、nmオーダの変位センサとして使用できることがわかった。AFM深針と集積したものは、そのバリエーションである。STM像は、かならずしも十分なものとはいえなかったが、試料の形状を反映した像が得られた。基準質量の動きを集積化したLTUで鋭敏に検出する加速度センサ、原子間力顕微鏡のカンチレバ-の動きを集積化したLTUで鋭敏に検出するプローブ、LTUのアレイで数十nmオーダーのビットを読み書きする超高密度ディスクなどの応用を提案し、一部を試作した。物理面から評価を加えた結果、空気中では積分制御でLTUを安定に制御できることがわかった。また強い斥力が観測された。一方極高真空では、積分制御ではリミットサイクルを発生し、制御不能になった。モデル基づいて設計したPID制御を行うと、振動はするが、おとなしい振動で、波形は引力の存在を示唆した。このモデルが2種類可能である。また、引力の値を考えると、制御だけでは安定化はできないという結論に達した。このため、アクチュエータの剛性と発生力を共に2桁増大ししかも大型化をなるべく抑えた改良を行い、再び動作の評価をおこなった。結果として、改良型のLTUを安定に制御できる条件が見つかった。駆動電圧の振幅から斥力が観測され、空気中と真空中での違いから、現象のメカニズムを推定することができた。
リアノジン受容体を介した樹状細胞応答の解析

悪性高熱症(malignant hyperthermia; MH)は、全身麻酔時に使用する揮発性の吸入麻酔薬や脱分極性筋弛緩薬の使用により発症する筋疾患である。この疾患は常染色体優性遺伝を示すが、日常生活上は全く問題がなく、全身麻酔を受けた場合にのみ発症する。疾患の本態は骨格筋細胞内のカルシウムイオン動態異常に起因する代謝亢進である。現在のMHの確定診断は、局所麻酔下に筋生検を行い、骨格筋のCa^<2+>動態異常を直接観察することにより行われている。しかし、この方法は侵襲性が高いことが問題となっている。RyRには3つのアイソフォームが存在するが、我々は今回初めてヒト樹状細胞(dendritic cells; DC)に選択的にRyR1 mRNAが発現していることを明らかにした。RyRのアゴニストである4-クロロ-m-クレゾール(4-chloro-m-cresol;4-CmC)はDCからのCa^<2+>放出を誘発し、このCa^<2+>放出はRyR1阻害剤であるダントロレンによって阻害された。一方、IP_3受容体特異的阻害剤であるゼストスポンギンCによりCa^<2+>放出は抑制されなかった。また、RyR1の活性化はLPSによって誘導されるIL-10産生を減少させ、HLA-DRとCD86の発現上昇を誘導することで、アロナイーブT細胞刺激活性を亢進させた。本研究により、ヒトのDCは機能的なRyR1を発現し、これを介したCa^<2+>シグナルによってDC応答が制御されることが明らかとなった。したがってヒトDCは悪性高熱症素因者同定の為に有用なターゲット細胞である。健常人末梢血単核球よりCD14陽性モノサイトを磁気分離した。CD14陽性モノサイトにIL-4とGM-CSFを加え、5日間培養することでヒトモノサイト由来樹状細胞(Mo-DCs)を誘導した。この未成熟な状態の樹状細胞(iDc)に、Dcの成熟因子であるLPSあるいはプロスタグランジンE_2(PGE_2)+TNFαを添加し、48時間培養することで機能的に異なる2種類の成熟DCを誘導した。これらiDC、LPS-DC、PGE_2-DCにおけるリアノジン受容体(ryanodine receptors:RyRs)サブタイプ(1-3型)の遺伝子の発現をRT-PCR法にて評価した。その結果ヒトDCは、これら3つのサブタイプの中で1型リアノジン受容体(RyR1)遺伝子を選択的に発現し、特にiDCは成熟誘導された2種類のDCよりも遺伝子発現量が高いことが明らかとなった。また、Fura-2標識したDCを、RyRアゴニストである4-chloro-m-cresol(4-CmC)、またはATPを用いて刺激し、これにより誘導される細胞内Ca^<2+>上昇を蛍光レシオイメージング法にて評価した。その結果iDCは、4-CmCおよびATP刺激に対して、細胞内Ca^<2+>ストアに由来する一過性の細胞内Ca^<2+>上昇を示した。この現象は、RyR阻害薬であるダントロレンによって阻害されたが、IP_3受容体阻害薬であるゼストスポンギンCでは阻害効果が認められなかった。また、RyR1を介したCa^<2+>シグナルは、LPSによって誘導されるDCのIL-10産生を抑制し、HLA-DRとCD86分子の発現上昇を誘導することで、アロナイーブT細胞刺激活性を亢進させた。以上より、ヒトDCは機能的なRyR1を発現し、これを介したCa^<2+>

シグナルによってDC応答が制御されることが示唆された。現在、RyRアゴニスト刺激により特異的に誘導されるDC応答性を、これが産生する液性因子の観点から解析を進めている。昆虫細胞のRyRに特異的に結合することが最近明らかにされたfubendiamideは、ヒトMo-DCsに対して、細胞内Ca^<2+>上昇を誘導しなかった。
幼児や障害児・者の学習支援のための他覚的視見評価システムの開発

眼科で多く実施されている視野の評価法が,被験者がターゲットを発見できたかどうかを言語やキー押しで反応する自覚的評価法であるため,インストラクションを理解し,その指示に従うことが困難,すなわち言語的なコミュニケーションが困難な乳幼児や知的障害等のある障害児・者の視野は検査できていないことが多いという問題点がある.そこで,視野内へのターゲット提示によって,ほぼ自動的に生じると言われている,眼球運動の一種であるサッカードを利用し,乳幼児や障害児・者の学習支援に資するための,特別な能力がなくても評価可能な他覚的視野評価システムを開発することを本研究の目的とした.昨年度は,眼球運動,特にサッカードを指標とした視野評価を行うため,市販の装置を利用し,アプリケーションを自作することで他覚的視野評価システムを構築した.この他覚的視野評価システムを視野移動の生起のしやすさに違いがあることが分かった.そこで,本年度は,サッカードの生じにくい被験者に焦点を当て,「ターゲットへの視野移動」という厳密なインデックスに加えて,眼球運動のデータに基づいてターゲットを発見を判定できる数量化したインデックスを4種類考案し,その妥当性について検討した.また,視野検査が持つ単調さ,大きなストレスを軽減するために,ターゲットへの視野移動に伴ってフィードバックを与えるというシューティング・ゲームの要素を取り入れ,その効果を検討した.その結果,フィードバックにはストレス軽減の効果に加えて,眼球運動の生起頻度を高める可能性があることが分かった.検討したインデックスは,それぞれに特徴があり,視野測定において,「厳密さ」,「簡便さ」等どのような側面を重要視するかによって,適切なインデックスが決まることが明らかとなった.眼科で多く実施されている視野の評価法が、被験者がターゲットを発見できたかどうかを言語やキー押しで反応する自覚的評価法であるため、インストラクションを理解し、その指示に従うことが困難、すなわち言語的コミュニケーションが困難な乳幼児や知的障害等のある障害児・者の視野は検査できていないことが多いという問題点がある。そこで、視野内へのターゲット提示によって、ほぼ自動的に生じるといわれる、眼球運動の一種であるサッケードを利用して、乳幼児や障害児・者の学習支援に資するための、特別な能力がなくても評価可能な他覚的視野評価システムを開発することを本研究の目的とした。本年度は、眼球運動、特にサッケードを指標とした視野評価を行うために、市販の眼球運動測定装置(Eyetrackertoolbox)と視覚刺激作成装置(VSG2/5)を使用し、視覚刺激提示に伴って生じる視線位置の変化を厳密に測定するための装置、およびその装置を駆動するためのアプリケーションソフトを開発し、他覚的視野評価システムを構築した。この他覚的視野評価システムを使用し、サッケードが視野測定の指標として利用可能であるかどうかを検討するための実験的検討を、健常成人を被験者として実施した。その結果、単に視野内にターゲットを提示した場合に、そのターゲットに向かう視線移動が生じやすいタイプと、生じにくいタイプの2タイプの被験者が存在することが分かった。また、視線移動が生じやすいタイプの被験者では、ターゲットが発見できた場合に、ほぼ正確にターゲット位置まで視線が移動することも分かった。これらのことから、視線移動が生じやすい被験者の場合、サッケードによる視野評価の適応可能性が示唆される。また、ターゲット発見インデックスの工夫によって、視線移動の生じにくい被験者への適応可能性も示唆されるが、さらなる実験的検討が必要である。眼科で多く実施されている視野の評価法が,被験者がターゲットを発見できたかどうかを言語やキー押しで反応する自覚的評価法であるため,インストラクションを理解し,その指示に従うことが困難,すなわち言語的なコミュニケーションが困難な乳幼児や知的障害等のある障害児・者の視野は検査できていないことが多いという問題点がある.そこで,視野内へのターゲット提示によって,ほぼ自動的に生じると言われている,眼球運動の一種であるサッカードを利用し,乳幼児や障害児・者の学習支援に資するための,特別な能力がなくても評価可能な他覚的視野評価システムを開発することを本研究の目的とした.昨年度は,眼球運動,特にサッカードを指標とした視野評価を行うため,市販の装置を利用し,アプリケーションを自作することで他覚的視野評価システムを構築した.この他覚的視野評価システムを視野移動の生起のしやすさに違いがあることが分かった.そこで,本年度は,サッカードの生じにくい被験者に焦点を当て,「ターゲットへの視野移動」という厳密なインデックスに加えて,眼球運動のデータに基づいてターゲットを発見を判定できる数量化したインデックスを4種類考案し,その妥当性について検討した.また,視野検査が持つ単調さ,大きなストレスを軽減するために,ターゲットへの視野移動に伴ってフィードバックを与えるというシューティング・ゲームの要素を取り入れ,その効果を検討した.その結果,フィードバックにはストレス軽減の効果に加えて,眼球運動の生起頻度を高める可能性があることが分かった.検討したインデックスは,それぞれに特徴があり,視野測定において,「厳密さ」,「簡便さ」等どのような側面を重要視するかによって,適切なインデックスが決まることが明らかとなった.
食経験が世代を越えて摂食行動に変化を与えるかの行動生理学的解明

ヒトでは過食によって引き起こされる糖尿病、肥満などの病気が先進国で深刻な問題になっている。食習慣によって摂食行動や味覚感度が変化するかをショウジョウバエを用いて調べた。ハエに高濃度、低濃度の糖を6日間与えた後に、糖の摂食率を調べたところ、高濃度の糖を与えたハエでは摂食率が低下していた。両者で、味細胞の糖に対する感度には差がなかった。体液中の糖濃度、脂質量を定量比較したところ、高濃度の糖を与えたハエでは脂質量が増加していた。しかし、その次世代のハエでは、糖感度や摂食率の変化は認められなかった。一方、幼虫が成育する培地の糖濃度の違いによって、成虫の糖に対する味覚感度が変化することがわかった。食経験の違いよって生じる味覚、および摂食行動の変化が次世代にまで伝わるかをショウジョウバエを用いて行動生理レベルで明らかにする。高脂肪食のマウスの雄から生まれた次世代では、インシュリンやグルコース代謝に関わる遺伝子の発現レベルが変化していたという報告など食習慣やストレスが何らかの様式で遺伝する可能性が最近議論されている。しかし、食習慣の次世代への影響を実際に行動生理レベルで明確に証明した報告はない。本研究は、ショウジョウバエの野生集団に由来する遺伝的背景が異なる複数の系統を用いて、種々の飼育栄養条件が次世代のハエの味細胞の応答や摂食行動にどのような影響を与えるかを継代的に調べ食習慣が次世代に及ぼす行動変化を解明する。様々な遺伝的背景をもつDGRPの38系統を、糖、タンパク質の含量を数段階にコントロールした培地で生育させ、毎代のハエの糖、アミノ酸に対する摂食行動を調べる。さらに、幼虫の時は同じ培地で生育させ、羽化後に異なる栄養状態の培地で飼育したハエについても毎代のハエの糖、アミノ酸に対する摂食行動を調べる。野生集団の異なる系統の中で、行動変化が顕著に見られる系統を選んで、その系統について味覚感覚子の味細胞の応答を電気生理学的に調べるなど集中的に解析を行う。野生集団についてすでに得られているゲノム情報を解析し、味覚と摂食行動の遺伝に関わる遺伝子群を同定すると共に、体内のグルコース、アミノ酸などの定量を行うことにより体内の化学的環境の変化も解析する。食行動に影響を与える様々な環境あるいは遺伝的な要因を研究することが重要である。本研究では、食習慣によって摂食行動や味覚感度がどのように変化するかをモデル生物であるキイロショウジョウバエを用いて調べた。羽化後のハエに高濃度、低濃度の糖を6日間与えた後に、低濃度の糖の摂食率を調べたところ、高濃度の糖を与えたハエでは摂食率が低下していた。体内のヘモリンフ中の糖濃度、脂質量を定量比較したところ、高濃度の糖を与えたハエでは脂質量が増加していた。一方、幼虫が成育する培地の糖濃度の違いによって、成虫の糖に対する味覚感度が変化するという初歩データが得られた。このような食習慣による影響は、系統の遺伝的背景に依存する可能性がある。そこで、野生集団に由来する多数の近交系統について、アミノ酸の欠乏時にアミノ酸に対する嗜好がどれだけ高まるかを調べた結果、系統間仁栄養要求性に多様な遺伝的変異があることがわかり、今後はこれらの系統を用いて研究を進めたい。行動生理遺伝学野生集団由来の38系統について、味覚感度、アミノ酸欠乏によるアミノ酸嗜好性の上昇についての行動解析を完了し、どの系統を用いて本研究課題を行うかを決めることができた。さらに、羽化後のハエを高濃度と低濃度の糖培地において、食環境が摂食行動や味覚にどのような変化をもたらすのかを調べた。その結果、高濃度の糖培地においたハエは、グルコースの摂食率が低くなることがわかった。この原因を解明するために、体内の脂肪の蓄積量の変化、体液の糖レベルの変化、味覚感覚子の味覚感度の変化に着目し実験を行ない、高濃度の糖培地においたハエは体内の脂肪の蓄積が増え、絶食耐性が高まっていることがわかった。また、卵からグルコースなしの培地で育つと、グルコースの摂食率が高くなる傾向やグルコースに対する味覚感度が高まる結果が得られ、飼育培地の糖濃度によって摂食行動や味覚が変化する可能性が示された。これまで用いていたコーンミール、イーストなどを混合した培地では、培地の特定成分の濃度を変化させたり、特定の栄養分を除くことができない。

そこで、多数の化学物質を用いた完全合成培地を今年度から用いることとした。これによって、初年度に確認された現象を確かめる計画である。完全合成培地に用いる化学試薬の手配が遅れたため。完全合成培地に用いる化学試薬の購入に用いる。
民謡調査をもとに、郷土の文化の再認識と教材化を図るとともに山口県の民謡を著述する

昨年度、「山口県の民謡(童唄)楽譜、CDつき」を出版した。本年度になって、本を山口県内の全ての図書館と地元の小・中・高等学校などに寄付をした。本年度は山口県の仕事唄や盆踊りなどの本を出版するための調査と山口県の民謡の特性を理解するために愛媛県や広島県の調査を行い、失われていく唄の保存と伝承を試みた。方法としては、クジラなどの仕事唄や盆踊りを中心に下関市、長門市を始め、県内各地を調査した。また、広島県の呉市倉橋や大竹市や愛媛県の松山市で資料を収集したり、採録をしたりした。しかし、現実には昔の仕事唄や祝い唄や祭り唄等を歌ったり、その様子を話すことができたりする方が次々と亡くなられていく。早く録音しなければ失われる。多くの地域で、早く調査をしたい。成果としては、勤務校でのわらべ唄の指導の他、中学校の総合的な学習での指導、教職員研修での講演など、様々なところで、郷土の民謡のもつ生命力や伝えることの大切さを訴えることが出来た。また、中国新聞の山口県日曜版に、7月から、本年度の研究も含めた形ではあるが、「ふるさとのわらべ唄」を連載することが出来た。反応もあり、失われていく唄に関して興味関心をもってもらえたと感じる。
マウス胚幹細胞を用いた発生工学的手法による新しい実験動物の開発

ジーンターゲティングやジーントラップ(挿入突然変異)等発生工学的方法を用いて,遺伝子の機能解析や劣性遺伝性疾患の解明に有用な特定の遺伝子機能を欠損した実験用マウスの作成を目的とした研究を行っている.1)ジーンターゲッティングによるマイオジェニン遺伝子欠損マウスの作成本年度は,筋分化に関与する重要な遺伝子の一つであるマイオジェニン遺伝子を欠失したマウスの作成を試みた.ポジティブガティブ選択法によるターゲッティングベクターを作成し,胚幹細胞に導入した.この胚幹細胞を用いて作成したキメラマウスを交配し,胚幹細胞に由来する子孫を得た.サザンハイブリダイゼーションにより,これらのマウス個体においてマイオジェニン遺伝子が破壊されていることを確認した.現在,本遺伝子欠損に関するホモ接合体を作成し遺伝子機能の解析を行っている.すでに,プロモーターレス法によりN-myc遺伝子を欠損したマウス作成に成功したいるので,ジーンターゲッティングの代表的な二つの方法のいずれも確立したことになる.今後,この手法を用いてヒト劣性遺伝性疾患のモデル動物作成に応用する予定である.2)挿入突然変異による神経管癒合不全マウスの作成トランスジェニックマウス作成過程で,挿入突然によると思われる新たなミュータントマウスを得た.本ミュータントマウスは,受精12日胎児の段階で頭部神経管癒合不全をきたし,新生児では頭蓋冠および脳がが完全に欠失していた.これらの現象は,ヒト無脳症と酷似しているので詳しい解析を現在行っている.挿入突然変異によるミュータントマウス作成をさらに効率的に行うために,胚幹細胞を用いたジーントラップ法を確立し,神経・筋疾患のモデルマウス作成に応用する予定である.ジーンターゲティングやジーントラップ(挿入突然変異)等発生工学的方法を用いて,遺伝子の機能解析や劣性遺伝性疾患の解明に有用な特定の遺伝子機能を欠損した実験用マウスの作成を目的とした研究を行っている.1)ジーンターゲッティングによるマイオジェニン遺伝子欠損マウスの作成本年度は,筋分化に関与する重要な遺伝子の一つであるマイオジェニン遺伝子を欠失したマウスの作成を試みた.ポジティブガティブ選択法によるターゲッティングベクターを作成し,胚幹細胞に導入した.この胚幹細胞を用いて作成したキメラマウスを交配し,胚幹細胞に由来する子孫を得た.サザンハイブリダイゼーションにより,これらのマウス個体においてマイオジェニン遺伝子が破壊されていることを確認した.現在,本遺伝子欠損に関するホモ接合体を作成し遺伝子機能の解析を行っている.すでに,プロモーターレス法によりN-myc遺伝子を欠損したマウス作成に成功したいるので,ジーンターゲッティングの代表的な二つの方法のいずれも確立したことになる.今後,この手法を用いてヒト劣性遺伝性疾患のモデル動物作成に応用する予定である.2)挿入突然変異による神経管癒合不全マウスの作成トランスジェニックマウス作成過程で,挿入突然によると思われる新たなミュータントマウスを得た.本ミュータントマウスは,受精12日胎児の段階で頭部神経管癒合不全をきたし,新生児では頭蓋冠および脳がが完全に欠失していた.これらの現象は,ヒト無脳症と酷似しているので詳しい解析を現在行っている.挿入突然変異によるミュータントマウス作成をさらに効率的に行うために,胚幹細胞を用いたジーントラップ法を確立し,神経・筋疾患のモデルマウス作成に応用する予定である.
時間積分を行わない多体問題の高速汎用解析コードの開発

多体問題を解析するために通常の時間積分法を用いると、計算時間(CPU時間)は概ね粒子数の三乗に比例する。三乗のうち、二乗は粒子間力の計算に必要で、残りの一乗は時間積分にかかる時間である。この種の解析を高速化するために、これまでは粒子間力の計算を、精度をできるだけ落とさないアルゴリズム、あるいは専用ハードウエアが開発されている。本研究で提案している二体相互作用近似(Binary Interaction Approximation : BIA)では、粒子間相互作用を二体問題の重ねあわせで近似するため計算時間は原理的に粒子数の二乗でしか増えない。本年度は、典型的な核融合プラズマ中の二次元クーロン多体問題に本近似法を適用し、計算時間が粒子数の1.9乗に比例すること(S.Oikawa et al, Plasma Fusion Res.5, S1051 (2010))を示した。比較のために行った埋め込み型(精度保証つき)ルンゲクッタ法による解析では計算時間は粒子数の2.7乗に比例する結果となった。この場合、系全体の運動の恒量である運動量、角運動量および全エネルギは、倍精度計算(有効桁数15)での有効数字で12桁の精度で保存されていた。ただし、この解析ではBIAの原理確認が目的であったため、二体相互作用の解析には、前述の埋め込み型(精度保証つき)ルンゲクッタ法を用いて時間積分を行っており、二体問題の厳密解を利用していない。二体の厳密解を用いる(すなわち時間積分しない)手法への三次元コードへの変更および計算は終了し、その成果の一部は第19回国際土岐コンファレンス(S.Oikawa, et al., ITC-19, Toki, 2009)で発表した。この種の解析を高速化するために、これまでは粒子間力の計算のために、精度をできるだけ落とさないアルゴリズム、あるいは専用ハードウエアが開発されている。本研究で提案している二体相互作用近似(Binary Interaction Approximation:BIA)では、粒子間相互作用を二体問題の重ねあわせで近似するため計算時間は原理的に粒子数の二乗でしか増えない。前年度までに、二体の相対運動が双曲線(全エネルギが正)の場合と楕円(全エネルギが正)の場合のコード整備を行った。今年度は、未整備であった二体の相対運動が放物線(全エネルギが正確に零:非常に稀にしか起きない)のコードを整備した。この放物軌道コードについては、はじめに通常の逐次コード(CPU上で実行される)を開発し、その後GPU上で実行されるGPGPUコードも併せて開発した。その成果の一部は第20回国際土岐コンファレンス(たとえばR.Ueda,Y.Matsumoto,M.Itagaki,and S.Oikawa,ITC-20,Toki,2010)で発表し、Plasma Fusion Res.誌で公表した。多体問題を解析するために通常の時間積分法を用いると、計算時間(CPU時間)は概ね粒于数の三乗に比例する。また、本アルゴリズムは粒子ごとに完全並列化が可能であるため、究極的(利用できるCPUあるいはGPUのコア数に制限がなければ)には粒子数の一乗に比例した解析が可能である。前年度までに、二体の相対運動が双曲線(全エネルギが正)の場合と楕円(全エネルギが負)の場合のコードに加え、放物線の場合(全エネルギが零)のコード整備を行った。これらのコードは全てCPU上で走る逐次コードとGPU上で走る並列コードを選択できるようになっている。また、前年度までは、扱う粒子種は単一の「同種粒子」しか扱えなかったが、今年度は、粒子ごとに質量・電荷を設定できるように変更した。
仏教東流と大安寺文化圏ー祇園精舎・長安西明寺・大安寺創建説話の背景

《仏教東流》を象徴する大安寺創建説話《兜率天宮→祇園精舎→長安西明寺→大安寺》について国際シンポジウムを開催(2013年10月23日東西文化の融合「仏教東流と東西世界」、2014年3月16日水門の会「玄奘三蔵とシルクロード・敦煌・日本」)。「知的体系の継承関係論」では1百済弥勒寺「金製舎利奉安記」と『延暦僧録』の共通語彙から唐→百済・日本の仏教東流ルート、2敦煌文献「唐三蔵西天行記」から玄奘説話の生成を考証。「人的ネットワーク論」では1『翰林学士集』2『和名類聚抄』に引く白話体漢和辞書『弁色立成』『楊氏漢語抄』の俗語語彙から奈良・平安朝の律令官人の学問=律令学・仏教学・文学の具体相を解明した。《仏教東流》の東アジア文学史を象徴する大安寺創建説話の系譜《兜率天宮→天竺・祇園精舎→唐・長安西明寺→平城京大安寺》の背景を二つの観点から考察した。第一に「知的体系の継承関係論」として、奈良・平安朝の仏教文学の出典体系の展開の様相を溯り、1百済弥勒寺「金製舎利奉安記」と鑑真伝『延暦僧録』上宮皇太子菩薩伝に共通語彙を指摘、大安寺文化圏の表現類型の東アジアへの広がりを論じ、2百済と倭の弥勒信仰の異質性と『延暦僧録』の史料性を論じた。第二に、これを担う「人的ネットワーク論」として、3奈良朝の律令学・仏教学・文学の講説の場が交錯しつつ《律令官人の学問の場》として機能し、長安西明寺から大安寺文化圏、さらには平安朝にいたる出典体系の継承に大きな役割を果たしたことを論じた。具体例として、4吉備真備撰『私教類聚』の『顔氏家訓』引用が『広弘明集』による間接引用の可能性を指摘し、5『和名類聚抄』が《律令官人の学問》の痕跡をとどめることを指摘、『顔氏家訓』の引用手法を『遊仙窟』と比較して両書の享受の違いを考証した。91月の短期海外研修では、ノルウェー・オスロ大学でオースタッド安倍玲子教授と津島佑子『ナラ・レポート』の出典が阿部泰朗『湯屋の皇后』であることを考証した。スウェーデン・ヨーデボレ大学では、トウンマン武井典子教授・トーマス・エックホルム講師と本研究の前段階研究で継続中の『茶譜』、イタリア国立サレント大学ではマリア・キアラ・ミリオーレ教授と研究・シンポジウム2件、フランス高等研究院ではシャルロッテ・フォン・ヴェアシュア教授、フレデリック・ジラール教授、リン・クオ教授と《仏教東流》に関わる入唐僧・敦煌文書の研究と講演を行った。敦煌文書を新たに視野に入れ、大安寺文化圏に継承された《仏教東流》の枠組と理念の展開および《律令官人=在俗仏教徒の学問の場と質》研究の意義と有効性を確認しえた。大安寺創建説話の《兜率天宮→天竺・祇園精舎→唐・長安西明寺→平城京大安寺》の系譜は、《仏教東流》の東アジア文学史を象徴的に反映していた。第一に、弥勒菩薩の兜率天宮は、唐僧思託による鑑真伝『延暦僧録』天智天皇菩薩伝にみえ、その類型表現が天智天皇と同時代の新出史料、百済弥勒寺「金製舎利奉安記」にも確認された。これによって、唐と百済・日本の仏教文化の共通性と仏教東流の実態、さらに『延暦僧録』の史料性を裏付けた。第二に、祇園精舎は、仏伝とともに在俗仏教徒=居士スダッタ長者の伝説として在俗仏教徒の伝・説話に踏襲されていった。『延暦僧録』「居士伝」から、奈良・平安朝の仏教と学問を財政的にも支えた在俗仏教徒=律令官人=学徒・文人という基本構造が確認された。第三に、長安西明寺の道宣・道世が編纂した仏教類書は、奈良朝の学僧のみならず、在俗仏教徒=学者・文人=律令官人層を経て、平安中期『和名類聚抄』撰者源順らに享受され、奈良・平安朝の漢文世界を支える基本的な出典体系として機能していた。第四に、中国西北部の敦煌変文にも、仏典・歴史書を出典とする敦煌講史文学が存在する。敦煌の玄奘説話の生成は、玄奘伝を踏まえつつ、禅宗儀礼のなかで享受された。書承関係から、説話を生みだした担い手が、日本同様、『史記』『漢書』や高僧伝の文献的な基礎知識を有していることが確認された。これらは初唐の太宗・高宗の宮廷文化の問題として捉えることが可能である。『翰林学士集』『懐風藻』から、初唐の太宗・高宗の宮廷文化の一環に、仏教的・学問的な面では長安西明寺→大安寺文化圏があり、宮廷詩・釈奠などの文学や学制の面では奈良・平安初期の「皇子文化圏」とよばれる宮廷詩の構造があった。大安寺文化圏とは、初唐の太宗・高宗の宮廷文化の仏教的側面であり、これと同様の構造が、奈良・平安朝の仏教のみならず、文学・学問を支えていたことが確認された。

《仏教東流》を象徴する大安寺創建説話《兜率天宮→祇園精舎→長安西明寺→大安寺》について国際シンポジウムを開催(2013年10月23日東西文化の融合「仏教東流と東西世界」、2014年3月16日水門の会「玄奘三蔵とシルクロード・敦煌・日本」)。「知的体系の継承関係論」では1百済弥勒寺「金製舎利奉安記」と『延暦僧録』の共通語彙から唐→百済・日本の仏教東流ルート、2敦煌文献「唐三蔵西天行記」から玄奘説話の生成を考証。「人的ネットワーク論」では1『翰林学士集』2『和名類聚抄』に引く白話体漢和辞書『弁色立成』『楊氏漢語抄』の俗語語彙から奈良・平安朝の律令官人の学問=律令学・仏教学・文学の具体相を解明した。《仏教東流》の東アジア文学史を、大安寺創建説話の《兜率天宮→天竺・祇園精舎→唐・長安西明寺→平城京大安寺》の系譜を軸に、奈良平安朝文学の出典体系の継承の具体的な展開の様相を跡づけた。第一に、大安寺創建説話の歴史的・文献的背景を解明するために、「知的体系の継承関係論」として、隋唐代と奈良平安朝の文献にみえる《仏教東流》《祇園精舎》関係記事の本文研究・出典考証により、祗園精舎のスダッタ長者の伝記表現と藤原氏の伝との関係をあきらかにした。中国の浙江省・浙江工商大学での国際シンポジウムに参加、西安・西北大学での国際シンポジウムに参加、長安寺院の現地踏査と研究協議を行った。第二に、「人的ネットワーク論」として、新たに『和名類聚抄』所引の奈良時代の白話体漢和辞書『弁色立成』『漢語抄』『楊氏漢語抄』の俗語に注目、唐代俗語が古辞書に採録された理由として、律令学・仏教学・文学の講説の場を想定し、律令官人の学問の場が、奈良時代の長安西明寺から大安寺文化圏、さらには平安朝にいたる出典体系の継承に大きな役割を果たしていることを論じた。平成23年9月1日平成23年9月7日(7日間)中国・西安・西北大学において「和漢比較文学会西北大学特別例会」に参加、西北大学主催国際シンポジウム「長安と日中文化交流」で講演、唐と日本の文化交流を専門とする西北大学の王国維教授(考古学)、高兵兵准教授(日中比較文学)との研究協議により、《仏教東流》の要となる最新の長安の寺院の発掘調査報告をはじめ多大な教示を得た。玄奘関連文献、鑑真伝三部作に名前がみえる長安の寺院の実地踏査は有益であり、特に、興教寺の玄奘三蔵の墓塔を確認しえたのは、大きな成果である。「大安寺文化圏」の源流である長安の重要性、「仏教東流」の唐代の歴史観の解明の必要性を感じ、非常に有益な中国の人脈を形成することができた。「知的体系の継承関係論」として、大安寺創建説話の《仏教東流》の理念と枠組が、百済弥勒寺「金製舎利奉安記」によって六世紀の百済にまで伝播していたことが確認された点は大きな収穫であった。これは百済の入唐僧が、唐の仏教を百済に伝えたことを意味し、唐と日本の「人的ネットワーク論」を、東アジアという視点に拡大する必要性を示唆するものである。《律令官人の学問の場と質》については、俗語研究を推進するカナダ・ブリティッシュ・コロンビア大学のワークショップで、日本古代における俗語の機能として、欧米の研究者の関心を集めた。律令・仏教・文学の講筵の場で説かれた唐代俗語が、奈良時代初期の口語辞書『楊氏漢語抄』『弁色立成』『漢語抄』を経由して、『和名類聚抄』に採録されているという事実は、奈良時代初期の史料を補う意味でも貴重であり、そこから講説の場の関心のありよう=上代の学問の質と内容をある程度復元することが可能である。これは、奈良時代と平安時代を文学史的につなぐ重要な視点である。さらに、イタリア・国立サレント大学、フランス国立高等研究院での共同研究を通して、ヨーロッパの日本学・東洋学から大きな示唆を得、研究のネットワークが格段に広がった。特に、敦煌文書を所蔵するパリ国立図書館を擁するパリの敦煌学・歴史学・仏教学からは、《仏教東流》という理念と枠組が、従来、想定していた以上の広がりと深さをもつこと、玄奘伝を継承する奈良朝の高僧伝の分析手法について多くを学んだ。