hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Ti_3Al系金属間化合物の変形機構とその組成依存性

Ti3Al(α_2相)は軽量・耐熱構造用材料としてのみならず、TiAl化合物の強靭化相としても重要である。本研究ではTi3Al系金属間化合物の変形と破壊の機構のみならず、TiAlの力学特性に及ぼすα_2相の影響を明らかにする為の知見を得ることをも目的としている。そのため、Ti3Al化学量論組成の両側の5種類の組成(Ti-21.7Al、-24.0Al、-27.1Al、-33.5Al、-34.5Al;数値はmol%)の化合物単結晶を育成し、非化学量論組成の力学的性質に及ぼす影響を調べた。力学的性質は、負荷応力軸とc軸とのなす角(φ)が、φ=0゚(A)、φ=45゚(B)、φ=90゚(C)の試験片について-196°Cから1000°Cまでの温度範囲で圧縮試験することにより調べた。各試片の力学的性質を理解するために、表面観察による活動辷り系の決定、走査電顕による破面観察及び透過電顕による転位組織観察を行い、転位の性格及びAPB変位ベクトル等を決定し、巨視的現象を微視的な観点から考察した。非化学量論組成に起因する巨視的現象を以下に列挙する。1)A方位では全ての組成の試験片で錐面辷りが活動する。その降伏応力は-196°Cから室温までは減少し、以後、上昇して最大値に達した後急減し、いわゆる異常降伏応力現象を示す。2)この異常降伏応力現象において最大降伏応力に達する温度は、試料組成が化学量論組成のどちら側の組成であっても、常に低温側に変位する。3)C方位では柱面辷りのみが起こる。降伏応力はいずれの試片においても温度と共に単調に減少する。化学量論組成のどちら側の組成でも固溶体硬化を生じ、硬化量は化学量論組成より増加する元素の濃度(Ci)と化学量論組成におけるその元素の濃度(Cc)の差(Ci-Cc)に比例する。固溶体硬化に関するこの関係は錐面辷りについても成立する。4)B方位では、いずれの組成の試験片でも柱面辷りが先行し、ある程度の加工硬化の後に底面辷りが起こる。
オートラジオグラフィによる放射性金属元素の悪性腫瘍組織内分布の研究と臨床応用

^<67>Ga、^<111>Inは悪性腫瘍組織の周辺部の炎症部位に大量に集積するが、^<201>Tl、^<42>K、^<86>Rb、^<134>Csは悪性腫瘍組織内の腫瘍細胞の生育部へ集積し、壊死部および炎症部への集積はほとんどなかった。これとは逆に同じアルカリ金属でも^<22>Naは壊死部に集積し、腫瘍細胞の生育部には集積しなかった。一方、^<167>Tm、^<169>Ybは炎症部にかなり多量に集積したが、^<67>Ga、^<111>Inとはやや異なった集積を示した。一方、^<46>Sc、^<51>Cr、^<95>Zr、^<95>Nb、^<181>Hf、^<182>Taは悪性腫瘍組織の炎症部への集積が極めて高く、腫瘍細胞の生育部および壊死部への集積は非常に少なかった。^<65>Zn、^<103>Pdは腫瘍細胞の生育部に多く集積し、壊死部および炎症部への集積はほとんど認められなかった。悪性腫瘍組織への^<22>Na、^<86>Rb、^<134>Csおよび^<201>Tlの集積に関しては、イオン半径が0.133nmを超え、組織中でイオンとして存在する1価の陽イオンは、生体内でカリウムイオンと類似の挙動をする。カリウムとカリウム類似元素(Tl、Rb、Cs)はNa^+,K^+一ATPase活性が高い生きた腫瘍細胞へ大量に取り込まれる。ナトリウムイオンは主に細胞外液中に存在するために、腫瘍細胞の生育部には集積せず、壊死部に集積すると考えられた。^<67>Gaは炎症巣へも多量に集積するので、^<67>Gaの炎症巣への集積を調べたところ、^<67>Gaは炎症巣の辺縁部に密集しており、好中球およびマクロファージが混在して浸潤した皮下組織に^<67>Gaの強い集積を認めた。この皮下組織で^<67>Gaは主に細胞間隙に存在していた。また炎症巣では血管透過性が非常に大きいことがわかった。これらのことから、^<67>Gaは炎症巣で透過性の亢進した血管から膿瘍の外側の好中球およびマクロファージが混在して浸潤した皮下組織へ多量に漏洩し、そこで細胞間隙に存在する酸性ムコ多糖に結合していると推定された。

これとは逆に同じアルカリ金属でも^<22>Naは壊死部に集積し、腫瘍細胞の生育部には集積しなかった。一方、^<170>Tm、^<169>Ybは炎症部にかなり多量に集積したが、^<67>Ga、^<111>Inとはやや異なった集積を示した。一方、^<46>Sc、^<51>Cr、^<95>Zr、^<95>Nb、^<181>Hf、^<182>Taは悪性腫瘍組織の炎症部への集積が極めて高く、腫瘍細胞の生育部および壊死部への集積は非常に少なかった。^<65>Zn、^<103>Pdは腫瘍細胞の生育部に多く集積し、壊死部および炎症部への集積はほとんど認められなかった。これらのことから、次のことが判明した。1)悪性腫瘍組織への^<22>Na、^<86>Rb、^<134>Csおよび^<201>Tlの集積に関しては、イオン半径が0.133nmを超え、組織中でイオンとして存在する1価の陽イオンは、生体内でカリウムイオンと類似の挙動をする。カリウムとカリウム類似元素(Tl、Rb、Cs)はNa^+、K^+-ATPase活性が高い生きた腫瘍細胞へ大量に取り込まれる。ナトリウムイオンは主に細胞外液中に存在するために、腫瘍細胞の生育部には集積せず、壊死部に集積する。2)^<67>Ga、^<111>In、^<169>Yb、^<170>Tmは腫瘍組織中で分子量約10,000の酸性ムコ多糖に結合しており、^<46>Sc、^<51>Cr、^<181>Hf、^<95>Nb、^<182>Ta、^<103>Ruは腫瘍組織中で分子量が40,000を超える酸性ムコ多糖に結合していたが、詳しくは現在研究中である。^<67>Ga-citrateは悪性腫瘍および炎症巣の陽性描画に使用されている。しかしながら、^<67>Gaのこの病巣への集積機序は未だ不明な点が多い。本研究は炎症巣への^<67>Gaの集積状態を正確に把握し、さらに^<67>Gaのこの病巣への集積機序を解明するために行った。テレビン油を皮下に注入して炎症を惹起したラットを使用し、^<67>Ga-citrateを静注して24時間後の炎症巣への^<67>Gaの集積率を調べたところ、テレビン油注入57日後が最大であった。この値は他のどの臓器組繊の値よりも大きかった。同様のラットを使用して全身オートラジオグラフィにより、^<67>Gaの炎症巣への集積を調べたところ、^<67>Gaは炎症巣の辺縁部に密集しており、中央部付近にはわずかに認められるのみであった。ついで、マクロオートラジオグラフィにより炎症巣付近を詳細に観察したところ、膿瘍の辺縁部等に好中球の密集部があったが、この部位に^<67>Gaの密集は認められず、このことから好中球は^<67>Gaの炎症巣集積に重要な役割をしていないことが明白となった。この観察において、膿瘍の外側で好中球およびマクロファージが混在して浸潤した皮下組織に^<67>Gaの強い集積が認められた。ミクロオートラジオグラフィで観察の結果、この皮下組織で^<67>Gaは主に細胞間隙に存在していることが明らかとなった。また静注した^<67>Ga-citrateが炎症組織の血管から組織中へ多量に漏洩していることがわかった。これらの事実および文献等から、^<67>Gaは炎症巣で透過性の亢進した血管から、膿瘍の外側の好中球およびマクロファージが混在して浸潤した皮下組織へ多量に漏洩し、そこで細胞間隙に存在する酸性ムコ多糖に結合して存在すると推定された。
海洋天然物が標的にする生体膜環境の組織的解析と再構築

生理活性化合物の一次標的分子を同定することは、生命原理の理解においても創薬においても重要であり、タンパク質を対象にした方法論の進展が目覚ましい。しかし生体膜を標的にする場合、タンパク質にはない特殊な膜環境が化合物の標的同定を困難にしている。生体膜では数百から数千の非常に多くの分子種が相互作用しており、同じ脂質分子種であっても環境によって挙動が異なるため、外来分子による認識が大きく変わる。本研究では分裂酵母の脂質生合成変異株を用い、膜脂質を標的にする化合物に対する感受性試験、脂質成分の分析を行った。そこから化合物がどのような脂質を標的にするのか、人工膜や合成脂質誘導体を用いて検証した。生理活性化合物の一次標的分子を同定することは、生命原理の理解においても創薬においても必須な過程であり、特にタンパク質を対象にした方法論の進展が目覚ましい。すなわち、数百から数千の非常に多くの分子種が相互作用することで脂質膜の物性が制御されており、同じ脂質分子種であっても環境によって挙動が異なるため、外来分子による認識の程度が大きく変わる。本研究では酵母遺伝子変異株が示す一見矛盾した薬剤感受性パターンを、リピドミクス解析と疑似生体膜の構築により組織的に解析し、抗生物質が標的にする生体膜環境の解明を目指す。初年度には分裂酵母のステロールとスフィンゴ脂質の生合成と代謝に関連する遺伝子破壊株を用いて、膜脂質を標的にする化合物に対する薬剤感受性の測定と、それらの変異株が含有する脂質分子の成分分析を行った。薬剤感受性試験には申請者らが標的脂質を明らかにしてきた化合物だけでなく、臨床薬として使われているポリエン系抗真菌剤や、いくつかの天然物を用いた。すると同じ脂質を標的にするとされる化合物であっても、異なる薬剤感受性プロファイルを示すものがあることが明らかになった。一方で、複数の変異株についてLCMSを用いて膜脂質成分の分析を行い、特にステロールについてはNMRも用いて構造を解析し、分子種の特定を行った。初年度には分裂酵母のステロールとスフィンゴ脂質の生合成と代謝に関連する遺伝子破壊株を用いてまず、膜脂質を標的にする化合物に対する薬剤感受性の評価を行った。申請者らが標的脂質を明らかにしてきたセオネラミドやヘロナミド、臨床薬として用いられているポリエン系抗真菌剤、スフィンゴ脂質を標的にするとされる天然物、棘皮動物から精製したサポニンなどを用いて評価したところ、ステロールを標的にする化合物として知られるものであっても、感受性プロファイルが大きく異なる場合があることが明らかになった。複数の変異株についてLCMSおよびNMRを用いて膜脂質成分の分析を行った。さらにいくつかの脂質については細胞から抽出・精製し、化合物による溶血活性を指標にして化合物・脂質間相互作用を検討した。得られた知見は次年度の、脂質膜の再構築と化合物との親和性評価につながると期待できる。本研究では酵母遺伝子変異株が示す薬剤感受性パターンを足掛かりに、抗生物質が標的にする生体膜環境の解明を目指す。初年度には分裂酵母のステロールとスフィンゴ脂質の生合成と代謝に関連する遺伝子破壊株を用いて、膜脂質を標的にする化合物に対する薬剤感受性の測定と、それらの変異株が含有する脂質分子、特にステロールの成分分析を行った。本年度も感受性試験を継続し、膜脂質を標的とする化合物として新たに取得したものや合成化合物、共同研究先から供与された天然物について行った。脂質の解析としては、本年度はステロールエステルも対象にし、分裂酵母の主成分を合成標品との比較により明らかにした。化合物による脂質膜認識機構を明らかにするため、in vitroでの脂質親和性をSPRと溶血活性試験を用いて検討し、特にステロールについては天然型に加えて各種の合成誘導体を用いて親和性試験を行った。膜脂質の網羅的解析のためにはスフィンゴ脂質の解析が必要であるが、この分子種については各種変異株を用いて検討中であり、分子種の特定を含めて今後の課題である。本研究は平成28年度において複数の脂質生合成・代謝変異株を用いて薬剤感受性を組織的に解析し、一部の変異株については脂質成分の解析を行った。平成29年度には脂質成分の網羅的な解析と、そのデータに基づく、薬剤が標的にする脂質組成の解析を行う。

脂質成分の分析は、グリセロリン脂質、セラミドを骨格とするスフィンゴ脂質、ステロールを対象としてLC-MS-MSおよびGC-MS-MSにより行い、ピーク強度から定量解析を行う。薬剤感受性試験と脂質の成分分析の結果を統合的に解析し、薬剤感受性と相関の高い脂質分子種を探索する。次に、各種物理化学的測定と構造活性相関研究から標的膜脂質との結合様式が良く理解されている、海洋天然物セオネラミド、ヘロナミド、およびサポニンをモデル化合物として設定し、化合物・脂質膜間の相互作用を解析する。脂質二重膜と化合物の相互作用は、蛍光標識体を用いた評価、表面プラズモン共鳴による検出、溶血活性との競合実験などを用いて行う。脂質二重膜を用いてin vitroでの化合物・脂質膜相互作用に影響を与えることが確認された膜脂質について、in vivoでその効果を検証する。すなわち当該膜脂質の代謝に直接的に関与する遺伝子の変異株を作製し、薬剤感受性や脂質の細胞内局在を観察する。天然物化学
免疫抑制剤ミゾリビンに結合する腎蛋白質(特に分子シャペロン)に関する研究

1.ミゾリビンとHSP60について(J Biol Chem274:35147-35151,1999):ミゾリビンが分子シャペロンHSP60に強く結合すること、ミゾリビン分子内のNH_2グループの構造がHSP60との結合に関与することを示した。ミゾリビンがHSP60のシャペロン活性を抑制することを変性酵素の再修復能を測定する系を用いて示した。ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つにHSP60のシャペロン活性の抑制があるものと考えられた。2.ミゾリビンと14-3-3蛋白について(Biochem Biophys Res Commun 274:87-92,2000):ミゾリビンが分子シャペロン14-3-3蛋白と結合して構造を変化させることを示した。14-3-3蛋白は活性型グルココルチコイドレセプター(GR)に作用して転写能を増強させるので、ミゾリビンがこの系に及ぼす影響について検討した。その結果、ミゾリビンは14-3-3蛋白のGRへの結合能を高め、GRの転写活性能を増強させた。ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つとして、分子シャペロン14-3-3蛋白を介するGR転写活性増強作用があるものと考えられた。3.14-3-3蛋白のグルココルチコイドレセプター(GR)転写能活性化機構について(MolEndocrinl1 15:501-511,2001):ミゾリビンと結合する14-3-3蛋白の機能について、GR転写能活性化機構の系で検討を加えた。14-3-3蛋白はGRの負の調節因子であるRIP140と相互作用してその核内移行を抑え、結果としてGRの転写活性可能を高めることを示した。さらに、14-3-3蛋白はGR以外の核内レセプターやRIP140以外の転写調節因子にも結合することを明らかにし、ミゾリビンの細胞内標的である分子シャペロン14-3-3蛋白が多岐にわたる細胞内情報伝達系に関与することを示唆した。免疫抑制剤ミゾリビンに結合する蛋白質をブタ腎から精製し、このうち分子シャペロンであるHSP60と14-3-3蛋白についてさらに解析を行った。1.ミゾリビンとHSP60について(1)ミゾリビンがHSP60に強く結合することをアフィニィティーカラムクロマトグラフィーと表面プラズモン共鳴分析法により示した。(2)種々のミゾリビンアフィニィティーカラムを用いた分析により、ミゾリビン分子内のNH_2グループの構造がHSP60との結合に関与することを示した。(3)ミゾリビンがHSP60のシャペロン活性を抑制することを、変性酵素の再修復能を測定する系を用いて示した。以上、ミゾリビンの標的蛋白としてHSP60を初めて同定した。ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つにHSP60のシャペロン活性の抑制があるものと考えられ、米国生化学分子生物学会誌に発表した。2.ミゾリビンと14-3-3蛋白について(1)ミゾリビンが14-3-3蛋白と結合して構造を変化させることをアフィニィティーカラムクロマトグラフィーとCDスペクトラムにより示した。

(2)14-3-3蛋白は活性型グルココルチコイドレセプター(GR)に作用し、その転写能を増強させる(Wakui H,et al.,J Biol Chem 272:8153-6,1997)。そこで、ミゾリビンがこの系に及ぼす影響についてGST pull-down法とトランスフェクション法により検討した。その結果、ミゾリビンは14-3-3蛋白のGRへの結合性を高め、GRの転写活性能を増強させることを示した。以上、ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つとして、分子シャペロン14-3-3蛋白を介するGRの転写活性増強作用があるものと考えられた(投稿中)。1.ミゾリビンとHSP60について(1)ミゾリビンがHSP60に強く結合することをアフィニィティーカラムクロマトグラフィーと表面プラズモン共鳴分析法により示した。(2)種々のミゾリビンアフィニィティーカラムを用いた分析により、ミゾリビン分子内のNH_2グループの構造がHSP60との結合に関与することを示した。(3)ミゾリビンがHSP60のシャペロン活性を抑制することを変性酵素の再修復能を測定する系を用いて示した。以上、ミゾリビンの標的蛋白としてHSP60を初めて同定した。ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つにHSP60のシャペロン活性の抑制があるものと考え、米国生化学分子生物学会誌に発表した。2.ミゾリビンと14-3-3蛋白について(1)ミゾリビンが14-3-3蛋白と結合して構造を変化させることをアフィニィティーカラムクロマトグラフィーとCDスペクトラムにより示した。(2)14-3-3蛋白は活性型グルココルチコイドレセプター(GR)に作用し、その転写能を増強させる(Wakui H, et al., J Biol Chem 272:8153-6,1977)。そこで、ミゾリビンがこの系に及ぼす影響についてGTS pull-down法とトランスフェクション法により検討した。その結果、ミゾリビンは14-3-3蛋白のGRへの結合能を高め、GRの転写活性能を増強させた。以上、ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つとして、分子シャペロン14-3-3蛋白を介するGR転写活性増強作用があるものと考え、生化学生理学研究速報誌に発表した。3.17kDミゾリビン結合蛋白について更に17kDミゾリビン結合蛋白をHIT蛋白と同定した。この蛋白はある種の転写因子と相互作用することが最近報告されたので、この系にミゾリビンの及ぼす影響を検討する予定である。これまでの研究結果から、ミゾリビンの免疫抑制作用機序の一つとして、新規分子シャペロン14-3-3蛋白を介するグルココルチコイドレセプター(GR)転写活性増強作用があるものと考えられた。そこで、14-3-3蛋白を介するGR転写活性調節機構についてさらに検討した。1.核内レセプターの転写調節因子として報告されたRIP140が14-3-3蛋白結合蛋白群に共通のアミノ酸配列モチーフを有していることに着目し,RIP140の14-3-3蛋白結合性についてGST pull-down法で調べた。その結果、RIP140のN末端とC末端部位が14-3-3蛋白に結合することが明らかとなった。2.14-3-3蛋白はGRと相互作用してその転写能を増強させるので、トランスフェクション法によりRIP140がこの系に及ぼす作用を検討した。その結果、RIP140は14-3-3蛋白を介するGR転写活性増強作用を抑制することが明らかとなった。3.培養細胞に蛍光色素をラベルした蛋白質を発現させる実験系で、14-3-3蛋白がRIP140の細胞内局在を変化させ、その核内移行を抑制することが明らかとなった。4.14-3-3蛋白はGR以外の核内レセプターやRIP140以外の転写調節因子にも結合することも示した。
小腸傷害ラットにおけるペプチド栄養の栄養改善効果を反映する指標の網羅的探索

5-フルオロウラシル投与により実験的に小腸を傷害したラットにおいて、小腸オリゴペプチド吸収は比較的維持されることが知られている。これまでに、本傷害ラットに分離大豆たん白質、特に大豆オリゴペプチドを含有する食餌を与えると、血漿アルブミン値やアルブミン/グロブリン比が改善されることを明らかにした。本研究では、この栄養改善効果を反映するサイトカイン等の血漿指標を調べた。その結果、種々の指標が変動したが、カゼイン食を摂取させた傷害ラットにおいて上昇した炎症性インターロイキン-6および抗炎症性インターロイキン-10が大豆オリゴペプチド食摂取群で正常レベルに低下する傾向がみられた。以上より、ペプチド食摂取による腸管傷害の抑制とペプチドによる窒素源の効率的補給により、血漿アルブミン値等の上昇に反映される栄養状態の改善がみられたと考えられた。たん白質消化産物は、遊離アミノ酸としてだけでなく、ジおよびトリペプチドの形で速やかに吸収される。このペプチド吸収を担っているのが、小腸刷子縁膜微絨毛に局在するペプチド輸送担体PEPT1である。これまでに、5-Fluorouracil(5-FU)の消化管内投与により実験的に小腸粘膜を傷害したラットにおいて、アミノ酸や糖の吸収が低下するがジペプチド吸収はPEPT1の発現保持により維持されること、また、昨年度の本助成研究では、5-FU投与により小腸を傷害したのちに分離大豆たん白質食、特に大豆オリゴペプチド食を1週間摂取させると、カゼイン食や遊離アミノ酸食を摂取させた群に比べ、血漿アルブミンなど栄養状態を反映する血液生化学検査値に改善効果が現れることを明らかにした。そこで本年度は、これらの栄養改善効果を踏まえ、炎症および抗炎症に関わる各種サイトカインやたん白質の血漿濃度の変動を網羅的に解析することを目的とした。上述のように小腸傷害後に各種たん白質源を含む食餌を摂取させたラットの血漿を用いて定量抗体アレイ解析により比較した結果、特に大豆ペプチド食摂取群において、IL-6やIL-10といったサイトカインのほか、ある種の細胞膜たん白質やプロテアーゼインヒビターの血漿濃度が正常ラットのレベルに回復する傾向を示すことが明らかとなった。これらの知見は、炎症性腸疾患などの腸管粘膜傷害時や炎症時における早期回復促進を目的とした効果的な栄養補給法や食事療法を開発するうえで極めて重要な情報であり、今後上記指標分子群の栄養改善効果との関連性および調節機構について詳細に検討する必要があると考えられた。5-Fluorouracil(5-FU)投与により腸管粘膜を傷害したラットにおいて小腸のペプチド吸収が維持されることが明らかになっている。本研究では、5-FU投与Wistar系雄性ラットに、各種窒素源(カゼイン、分離大豆たん白質、大豆ペプチドあるいは遊離アミノ酸)を14%含む食餌を一週間摂取させ、栄養障害に対する各種血液生化学指標および炎症・組織傷害に関わるサイトカイン類の血漿濃度の変動との関連性を検討してきた。分離大豆たん白質食や大豆ペプチド食摂取によって糖質、たん白質、脂質代謝を反映する各種血漿指標に改善効果が現れたが、その中で特にたん白質栄養状態を反映する血漿アルブミン値およびアルブミン/グロブリン(A/G)比はカゼイン食摂取群で低下し、分離大豆たん白質食、特に大豆ペプチド食摂取群において上昇する現象に着目した。一般に血漿アルブミン値と炎症反応は逆相関関係があることが知られている。そこで炎症に関わるサイトカインの血漿濃度を調べた結果、腸管傷害後の大豆ペプチド食摂取群において他の食餌摂取群に比べて炎症性サイトカインIL-6および抗炎症性サイトカインIL-10の血漿濃度が正常ラットのレベルに回復する傾向がみられた。以上より、大豆ペプチド食摂取により腸管の組織傷害が抑えられたことと、ペプチドとして窒素源が効率よく吸収されたことにより、血漿アルブミン値が上昇し、その結果としてA/G比が上昇したと考えられた。また、大豆ペプチド食摂取により肝臓アルブミン合成が促進されているのではないかと考え、現在そのメカニズムを調べるため、肝臓組織を用いて肝アルブミン量、アルブミン遺伝子発現について検討している。今後詳細な調節機構についてサイトカインとの関連からさらに検討していく予定である。
聴覚障害児のきょうだい支援プログラムの開発

本研究では、聾学校(特別支援学校)におけるきょうだい支援調査を行い、きょうだい支援プログラムの開発のための検討を行った。そこで以下のような知見が得られた。1.聴覚障害児と聴覚障害児をもつきょうだいの間にみられた特徴これは双方に共有できるコミュニケーション手段を持つことの困難さであった。そこで手話などを使って歩みよる事例もあれば、一方では通じないことが原因で無視され、全く関わらないケースがみられた。2.家庭におけるきょうだいの存在聴覚障害児をもつきょうだいが家庭の中において保護者に関わってもらえず、悩んでいる事例がみられた。このことは、きょうだいが家庭の中に自分の居場所を見つけることができず、かつ自分の存在が理解できないことを意味している。3.聴覚障害児をもつきょうだいにおける聴覚障害の理解前述のようにきょうだいにおいては、聴覚障害が外観上わかりにくいことからくるコミュニケーションの困難さ、その対応の仕方を体験しない以上は、聴覚障害の理解は進められない。また、聴覚障害の専門家と会う機会が保護者と比べ少ないため、聴覚障害に関してかなりの情報不足に陥ってしまう。4.聴覚障害児をもつきょうだいへの教育的支援の在り方今後、聴覚障害児をもつきょうだいへの教育的支援の観点からのプログラム開発を目指すとするならば以下のことに留意する必要があるものと思われる。・聴覚障害児をもつきょうだいが聴覚障害のことを知る環境作り・聴覚障害児をもつきょうだいの考え、想いを受け留めること・他の聴覚障害児との交流を通して聴覚障害理解を深める本研究では、聾学校(特別支援学校)におけるきょうだい支援調査を行い、きょうだい支援プログラムの開発のための検討を行った。・聴覚障害児をもつきょうだいが聴覚障害のことを知る環境作り・聴覚障害児をもつきょうだいの考え、想いを受け留めること・他の聴覚障害児との交流を通して聴覚障害理解を深める聴覚障害児のきょうだいの多くは、自分自身の時間(例えば遊びなど)を犠牲にしてまでも聴覚障害のある本人の情報保障に専念しているのが現状である。そこで本研究はきょうだい支援プログラムの開発を行うことを目的とした。今年度は、聴覚障害児のきょうだいの現状ついて、聾学校、通級指導教室を訪問し、担当教員に対して聞き取り調査を行った。その結果、以下のような知見が得られた。○聴覚障害児のきょうだいは、コミュニケーションにおける情報保障のみではなく、家族以外の人の仲介役を任せられていることが多い。○聴覚障害児のきょうだいは、聴覚障害児の世話をすることで保護者から「良い子」と思われると考えている。○きょうだいにとって「きこえない(聴覚障害)」の理解は保護者から具体的に伝えられたものではなく、聴覚障害児との接し方で培われていることが多い。そのため、中には偏った見方になってしまう。○保護者の方としては、対等に扱っているつもりではいるが、きょうだい本人にとってはほとんど関わってもらえず、ストレスが高じている。○聾学校及び通級指導教室の担任教師としても保護者からそのような相談をうけることが多いが、それぞれの家庭状況などプライバシーに触れることもあるので、どこまで相談にのればよいのか手探りの状況である。これらの結果を受け、次年度は、聾学校、通級指導教室におけるきょうだいに関する相談の現状及び支援の現状を調査、また、きょうだい本人に対する面接調査を行い、その上できょうだい支援のニーズを分析、きょうだい支援のプログラムの構築の検討を行うことが課題とされた。聴覚障害児のきょうだいの多くは、自分自身の時間(例えば遊びなど)を犠牲にしてまでも聴覚障害のある本人の情報保障に専念しているのが現状である。今年度は、実際に聴覚障害児のきょうだい支援を行っている聾学校等を訪問し、その支援内容について調査した。その結果、聴覚障害児のきょうだい支援について主に以下のような内容で取り組んでいることがみられた。○何か課題が生じた場合、該当する聴覚障害児のきょうだいに対して聾学校の担当教員(主に該当する聴覚障害児の担任)がカウンセリングを行う。○そのカウンセリングの内容に従って聴覚障害教育の専門家の立場よりきょうだいに対して聴覚障害に関する情報を提供する。その内容は主に聴覚障害児の補聴器、コミュニケーション、きこえないこと及びきこえにくいことからくる心理的諸問題であった。

○実際に聴覚障害児とそのきょうだいとのコミュニケーションの状況をみて、情報保障、コミュニケーション支援を行う。それを受けて、聴覚障害児のきょうだいに対するカウンセリングの観点の整理、聴覚障害児のきょうだいに対する聴覚障害理解の教材作成、コミュニケーション支援の構築などを中心にきょうだい支援プログラムの検討を行った。次年度は、ここで検討されたプログラムについて、聴覚障害児のきょうだい及び保護者に意見聴取のための面接を行い、それらの意見を基に修正を行い、プログラムの開発を目指す予定である。今年度は、前年の聾学校(特別支援学校)におけるきょうだい支援調査を受けて、きょうだい支援プログラムの開発のための検討を行った。そこで以下のような知見が得られた。1.聴覚障害児と聴覚障害児をもつきょうだいの間にみられた特徴これは双方に共有できるコミュニケーション手段を持つことの困難さであった。そこで手語などを使って歩みよる事例もあれば、一方では通じないことが原因で無視され、全く関わらないケースがみられた。2.家庭におけるきょうだいの存在聴覚障害児をもつきょうだいが家庭の中において保護者に関わってもらえず、悩んでいる事例がみられた。このことは、きょうだいが家庭の中に自分の居場所を見つけることができず、かつ自分の存在が理解できないことを意味している。3.聴覚障害児をもつきょうだいにおける聴覚障害の理解前述のようにきょうだいにおいては、聴覚障害が外観上わかりにくいことからくるコミュニケーションの困難さ、その対応の仕方を体験しない以上は、聴覚障害の理解は進められない。また、聴覚障害の専門家と会う機会が保護者と比べ少ないため、聴覚障害に関してかなりの情報不足に陥ってしまう。4.聴覚障害児をもつきょうだいへの教育的支援の在り方今後、聴覚障害児をもつきょうだいへの教育的支援の観点からのプログラム開発を目指すとするならば以下のことに留意する必要があるものと思われる。・聴覚障害児をもつきょうだいが聴覚障害のことを知る環境作り・聴覚障害児をもつきょうだいの考え、想いを受け留めること・他の聴覚障害児との交流を通して聴覚障害理解を深める
熱帯熱マラリア治療の適正な評価に関する研究

熱帯熱マラリア治療後に顕微鏡法で原虫が検出されなくなった段階で、他の検出法を用いて、完全治癒したのかあるいは再燃するのかを予知できるかどうかの検討を行った。検出法としては顕微鏡法以外に我々のPCR法、抗原検出法としてhistidine-rich protein IIを検出するParaSight FおよびICT Malaria P.f、さらに原虫由来LDHを検出するOptiMALなどを用いた。ICT Malaria P.fとOptiMALについては導入が遅れたことから、症例数は少なかった。PCRを併用しての測定では、完全治癒の場合、顕微鏡法が陰性化してからPCRの陰性化までは4日以内であった。そこで、それ以上すなわち5日以上のPCR陽性が続く場合には再燃を意味する可能性を考えていたが、顕微鏡法陰性化後7日間PCR陽性が続き、結局再燃した症例を経験し、この基準が適切であると思われた。ParaSight Fを併用しての検討では、完全治癒例でも24週間も陽性が持続することが判明し、従来の判定方法を使う限り、治癒の判定、再燃の予知には不適切であると考えられた。OptiMALでの検討は少数例であるが、完全治癒の例でParaSight FやICT Malaria P.fよりも早く陰性化していることから、治癒の判定、再燃の予知に役立つ可能性が示唆された。この種の研究には、国内発症のマラリア症例が多くないこと、治療により解熱してからの患者の詳細な追跡が難しいことなどの困難な点があるが、さらに症例を重ねて検討を続けることが必要である。
半導体ナノシートのヘテロ接合に立脚した新たな触媒設計法の開拓

本研究では、半導体担体と半導体触媒のヘテロ接合界面での電子移動に基づく新たな担体効果の実証に挑戦し、高難度オレフィン変換反応に対する触媒活性の発現・向上を可能とする触媒設計法を開拓する。半導体ヘテロ接合理論をもとに、半導体担体から半導体触媒へと電子が移動する構造を創出する。触媒として原子層厚(1 nm)の半導体ナノシート触媒を用いれば、ヘテロ接合界面で半導体ナノシート触媒に移動してきた電子は、物質変換反応が起こる触媒表面に容易に到達し、ナノシートの触媒活性を向上させる。特に、電子逆供与モデルに基づく炭素-炭素二重結合の選択的切断が期待でき、高難度オレフィン変換反応を可能にする。
卵巣及び精巣凍結保存法の確立と野生マウス遺伝子の保存

本研究は、遺伝子資源保存の観点より、卵巣および精巣の凍結保存法を確立し、野生マウス遺伝子の効率適な保存システムを構築することを目的として計画された。野外から採集された野生マウスの遺伝子を保存するには、一般的には各々の配偶子、すなわち卵子や精子を凍結保存することが考えられる。しかし、その遺伝子を再利用する際には融解後生体外での配偶子の操作、人工受精、胚の移植など繁雑な操作を伴い、また、それらによる傷害も考慮しなくてはならない。そこで本研究では配偶子単独としてではなく、それらを支持する生殖巣、すなわち卵巣、精巣全体として凍結保存する方法を確立し、融解後は生体を再構成することにより、動物本来の自然な繁殖活動のなかで凍結配偶子由来の個体を得ることを目指した。この計画を実現させるためには次の3点、すなわち1.凍結臓器の発育ステージ、2.臓器の凍結保存法、3.生体への再構成法、を検討する必要がある。卵巣についてはこれまでの検討の結果、生体卵巣が利用できること、緩慢凍結プログラムが適していること、移植法は従来の方法が利用できることが明らかになった。一方、精巣の凍結保存については、生後数日以内の精巣では緩慢凍結法で凍結可能で融解後生体に移植することにより精子形成が確認された。しかし、凍結精巣由来精子の受精能については未確認である。移植精巣と宿主精管との連絡、宿主雄の繁殖活動については今後の重要課題であり、凍結ステージの拡大も含めて検討する予定である。本研究は、遺伝子資源保存の観点より、卵巣および精巣の凍結保存法を確立し、野生マウス遺伝子の効率的な保存システムを構築することを目的として計画された。しかし、その遺伝子を再利用する際には融解後生体外での配偶子の操作、人口授精、胚の移植など繁雑な操作を伴い、また、それらによる障害も考慮しなくてはならない。そこで本研究では配偶子単独としてではなく、それらを支持する生殖巣、すなわち卵巣、精巣全体として凍結保存する方法を確立し、融解後は生体に再構成することにより、動物本来の自然な繁殖活動のなかで凍結配偶子由来の個体を得ることを目指した。本年度は精巣の凍結保存法を確立するために、生後1-2日のマウス精巣を材料に様々な凍結プログラムで凍結を試み、融解後の組織学的検討と移植による精子産性を確認した。DMSO処理後0°C,-20°C,-30°C,-40°C,-50°Cへ冷却速度0.2°C/minで緩慢凍結後融解した場合には、生殖細胞の大部分が正常な形態を保持していた。一方、DMSO処理後0°Cより、また、-20°Cまで緩慢凍結後-180°Cへ急速凍結した場合は、生殖細胞はほとんど全て障害を受けていた。しかし、-40°C,-50°Cまで緩慢凍結後-180°Cへ急速凍結した場合は障害は比較的少なく正常な形態を持つ生殖細胞が多数観察された。次に、凍結融解後、精巣を生体に移植することにより精子産性が可能か検討したところ、-40°Cまで緩慢凍結後-180°Cへ急速凍結の条件下では、移植後14日で減数分裂に入る生殖細胞が、また、移植後約6.5週では発達した精細管が形成され精子形成が観察された。なお、この時点での凍結精巣の重量は未凍結移植精巣の約70%であった。

しかし、その遺伝子を再利用する際には融解後生体外での配偶子の操作、人工授精、胚の移植など繁雑な操作を伴い、また、それらによる障害も考慮しなくてはならない。そこで本研究では配偶子単独としてではなく、それらは支持する生殖巣、すなわち卵巣、精巣全体として凍結保存する方法を確立し、融解後は生体に再構成することにより、動物本来の自然な繁殖活動のなかで凍結配偶子由来の個体を得ることを目指した。この計画を実現させるためには次の3点、すなわち1.凍結臓器の発育ステージ、2.臓器の凍結保存法、3.生体への再構成法、を検討する必要がある。卵巣についてはこれまでの検討の結果、成体卵巣が利用できること、緩慢凍結プログラムが適していること、移植法は従来の方法が利用できることが明らかになった。一方、精巣の凍結保存については、生後数日以内の精巣では緩慢凍結法で凍結可能で、融解後生体に移植することにより精子形成が確認された。しかし、凍結精巣由来精子の受精能については未確認である。移植精巣と宿主精管との連絡、宿主雄の繁殖活動については今後の重要課題であり、凍結ステージの拡大も含めて検討する予定である。
豚レンサ球菌莢膜関連遺伝子群の網羅的解析及び遺伝学的血清型別法の開発

豚レンサ球菌は豚やヒトに重篤な疾病を引き起こす重要な人獣共通感染症起因菌であり、莢膜多糖の抗原性の違いにより30以上の多様な血清型に分類されている。本研究では現在、血清型別に使用されている全35血清型参照株の莢膜多糖合成に関わる遺伝子群[Capsular polysaccharide synthesis(cps)gene cluster]について比較・解析を行った。その結果、本菌の血清型は「cps gene clusterの交換による大規模な変異」及び「cps gene cluster内の少数の遺伝子の塩基配列置換や欠失・挿入などによる小規模な変異」の両方により多様性を創造していることが示唆された。さらに、解析により明らかとなった、複数血清型共通遺伝子及び血清型特異的遺伝子を利用し、2回のマルチプレックスPCRにより分離株の血清型を推定する型別法を開発した。豚レンサ球菌は豚やヒトに髄膜炎や心内膜炎等を引き起こしうる人獣共通感染症起因菌であり、莢膜多糖の抗原性の違いにより30以上の多様な血清型に分類されている。近年、血清型が変異した強毒株による事例が発生しており、本菌によるさらなる新興感染症を制御する上で、流行血清型の把握とその多様化メカニズムの解明は必要かつ重要な学術的知見である。しかし、型別用血清が高価なため検査現場での血清型別が難しく、血清型に関する遺伝的情報も限られている。そこで、本研究課題では、全血清型株の莢膜合成関連遺伝子群を網羅的に解析して、血清型が30型以上に多様・分化した遺伝的背景を明らかにする。同時に、その情報から検査現場で利用可能な遺伝学的血清型別法も開発する事を目的としている。平成23年度は現在、血清型別に使用されている全35血清型参照株の莢膜多糖合成に関わる遺伝子群[Capsular polysaccharide synthesis (cps) gene cluster]について比較・解析を行った。このうちの20血清型株については本研究により、塩基配列が明らかになった。比較・解析の結果、本菌の血清型は「cps gene clusterの交換による大規模な変異」及び「少数の関連遺伝子の塩基配列置換や欠失・挿入などの小規模な変異」の両方により多様性を創造していることが明らかとなった。平成24年度は上記解析結果より明らかとなった、複数血清型共通遺伝子及び血清型特異的遺伝子をそれぞれグループ分けPCR及び型別PCRとして利用し、2回のマルチプレックスPCRでにより分離株の血清型を推定する型別法を開発した。200株以上の分離株について本PCR法を実施した結果、実際の血清型と相違があった株は認められなかった。以上から、本PCR法は血清型別に資する有用な方法として今後の利用が期待される。豚レンサ球菌は豚やヒトに髄膜炎や敗血症、心内膜炎等を引き起こしうる人獣共通感染症起因菌であり、莢膜多糖の抗原性の違いにより30以上の多様な血清型に分類されている。平成23年度は現在、血清型参照株として使用されている全35株[1型-34型及び1/2型(1型と2型の両方の抗血清に反応)]の莢膜多糖合成に関わる遺伝子群[Capsular polysaccharide (CPS) locus]について比較・解析を行った。15血清型株のCPS locusについては他の研究グループが既に塩基配列を決定しており、残りの20血清型株について、CPS locusの塩基配列を決定した。既知の15のCPS locusは染色体上の特定位置に存在していたが、本研究で決定した20のCPS locusのうち、12については隣接する遺伝子が異なっていた。また、1型と14型及び2型と1/2型のCPS locusはほぼ一致しており、CPS locusによりこれらの4血清型株を識別するのは難しい事がこれまでに示唆されていたが、残りの31血清型株についてはそれぞれ特異的な遺伝子が存在しており、識別可能である事が明らかになった。さらに、複数の血清型株に共通する遺伝子も存在し、各血清型をグループ分けできる事も示唆された。

本研究の最終的な目標は「豚レンサ球菌の遺伝学的血清型別法の開発」と「血清型分化の遺伝学的背景の解明」であり、平成23年度の計画は「全血清型参照株のCPS locusの塩基配列の比較・解析」と「CPS locus周辺配列を含む交換や欠失、挿入等の変異点の検索」である。「全血清型参照株のCPS locusの塩基配列の決定及び比較・解析」については、平成23年度実施した解析により、全血清型参照株のCPS locusの塩基配列が明らかになった。さらに各配列に基づく遺伝子の機能の割当や各遺伝子の相同性によるグループ分けが可能となり、複数の血清型が保有する遺伝子や単一の血清型のみしか含まれない遺伝子がそれぞれ認められた。以上の成果は最終的な目標である「遺伝学的血清型別法の開発」への基盤的情報として重要である。「CPS locus周辺配列を含む交換や欠失、挿入等の変異点の検索」については、平成23年度実施した解析により、豚レンサ球菌におけるCPS locusのゲノム上の位置は、既報の15血清型で解析されたorfX遺伝子とaroA遺伝子に挟まれた領域だけでなく、少なくとも5種類ある事が明らかになった。また、CPS locusの下流側には交換や欠失、挿入等の変異が起こった痕跡が示唆される複数のtransposaseやその断片が固まって存在しており、この領域に関しては株間で多様性がある事も明らかになった。これらの結果は、系統的な関連性を調べる上で重要な手がかりとなり、目標の一つである「血清型分化の遺伝学的背景の解明」につながると考えられる。以上から、平成23年度はほぼ計画通りに進んでおり、本研究は順調に進展していると考えている。「豚レンサ球菌の遺伝学的血清型別法の開発」については、平成23年度の解析結果を基に、まず血清群に分類し、各群に共通する遺伝子を利用し、血清群別用PCR法を開発する。続いて、各血清型に特異的な遺伝子を利用し、血清群中のどの血清型であるかを最終的に決定する血清型同定用PCR法を開発し、2段階の工程で型別する手法を考案する。なお、1つのPCR結果から血清群や血清型を決定ができない場合は、別の領域を標的としたPCRを行い、複数のプロファイルを組み合わせて決定する。同時に、血清群別用PCR法及び血清型同定用PCR法の結果を各1回の反応で判定できるようにマルチプレックスPCR法への応用も試みる。考案したPCR法については、血清型参照株35株を用いて特異性を確認後、血清型が既に決定している国内外で分離された野外株を200株以上用いて、その信頼性及び実用性を試験する。また、本型別法については、その普及を目指す。「血清型分化の遺伝学的背景の解明」については、35血清型のCPS locus下流側のtransposase領域を中心にさらに解析し、血清型株間の相同性による分岐の推定や交換の起こりやすい領域の検索を行う。さらに、orfX遺伝子とaroA遺伝子に挟まれた領域にCPS locusが位置していない血清型株については、両遺伝子の有無やゲノム上での位置を全ゲノム配列での解析により明らかにし、これらの血清型がどのようにして出現したのかについても、他の菌種との比較・解析も考慮して推定し、本菌の「血清型分化の遺伝学的背景の解明」につなげる。
脊椎動物心臓形成時におけるヒアルロン酸依存的シグナル経路の解明

ヒアルロン酸経路上にあると予想され、心臓での発現が検出された新規遺伝子を6種類、心臓形成に関与しうる血管での発現が検出された新規遺伝子を6種類、肝臓での発現が検出された新規遺伝子を4種類、血球での発現が検出された新規遺伝子を12種類同定した。それらの中から、心臓形成に正の制御を行っていると予想されるMA107、MA135、MA140にまずは注目し、これらの遺伝子の心臓原基への過剰発現を行ったところ、心臓形成への影響が示唆された。「脊椎動物心臓形成時におけるヒアルロン酸依存的シグナル経路」を解明し、既存の方法よりも大きく優れた心筋誘導系を確立するために、ヒアルロン酸によって発現が維持誘導される遺伝子をツメガエルのin vitro心筋誘導系から単離した。具体的には、以下のin vitro実験系を行い、共通にクローズアップされた遺伝子をヒアルロン酸下流候補遺伝子として同定した。(1)「非心臓誘導条件の腹側帯域」と比べて「dkkl mRNAを過剰発現させた心臓誘導条件の腹側帯域」において発現量が上昇する遺伝子。(2)「dkkl mRNAを過剰発現させた心臓誘導条件の腹側帯域」と比べて「ヒアルロン酸合成酵素の翻訳阻害をした心臓誘導条件の腹側帯域」において発現量が減少する遺伝子。(3)「dkkl mRNAを過剰発現させた心臓誘導条件の腹側帯域」と比べて「ヒアルロン酸合成酵素の阻害剤で処理した心臓誘導条件の腹側帯域」において発現量が減少する遺伝子。一般的に単独の条件でディファレンシャルスクリーニングを行うと、擬陽性が多く狙い通りの遺伝子を単離しにくいが、複数の条件を重ね合わせることにより、より信頼性が高く効率の良いスクリーニングを行うよう工夫した。dkkl mRNAの濃度、ヒアルロン酸合成酵素Xhas2の翻訳阻害のためのAntisense MOの濃度、ヒアルロン酸合成酵素阻害剤の濃度を検討し「(1)の条件ではNkx2.5が発現するが、(2),(3)の条件では発現しない」ように最適化した。その条件でのスクリーニングの結果、332種の候補遺伝子を同定した。機能既知の遺伝子の約1/3は既に心臓形成過程において重要な遺伝子であることが判明しており、心臓形成に関わるヒアルロン酸依存的シグナル経路のファクターであることが示唆された。現在は、それらの遺伝子の発現領域を解析している。昨年度までの成果として、マイクロアレイによって、多くのヒアルロン酸依存的シグナル経路の候補遺伝子を同定した。これら同定された338種類の遺伝子の内、92種類は断片的な配列情報しかないESTであるため、これらの遺伝子については解析対象外とした。さらに、残りの246種類の遺伝子の内、すでにツメガエルの各器官形成に対する機能が分かっている遺伝子が163種類あり、これらの遺伝子においても解析対象外とした。その結果、83種類の遺伝子が残った。これらの遺伝子は(1)ツメガエル以外で心臓形成に関与が示されているもの、(2)全生物において機能未知なものである。よって、これらの遺伝子を今後の解析対象とし、MA69からMA155とナンバリングした。さらに、候補遺伝子の中でも心臓で発現している遺伝子および心臓形成との関与が示される血管・血球・肝臓で発現している遺伝子についてより絞込みを行うために、これらの遺伝子に対してWhole mount in situ hybridizationを行い、それぞれの発現領域を解析した。解析には、stage8、10、12、15、18、23、28、34、38、44のツメガエル胚を用いた。その結果、心臓での発現が検出された遺伝子は、MA4、MA115、MA121、MA128、MA135、MA140の6種類であった。また、心臓形成に関与していると思われる血管での発現が検出された遺伝子が6種類であった。さらに、Xhas2の翻訳が重要であると示唆された肝臓での発現が検出された遺伝子は4種類、血球での発現が検出されたのは12種類であった。この結果から、マイクロアレイによって同定した遺伝子の中でも、心臓形成においてヒアルロン酸の制御化にあり、かつ心循環系で発現している新規の遺伝子が明らかとなった。よって、今後はこれらの遺伝子の機能解析を行っていく予定である。

昨年度までの成果として、ヒアルロン酸経路上にあると予想され、心臓での発現が検出された遺伝子を7種類(MA65、MA74、MA115、MA121、MA128、MA135、MA140)、心臓形成に関与しうる血管での発現が検出された遺伝子を6種類(MA74、MA93、MA103、MA107、MA108、MA128)、肝臓での発現が検出された遺伝子を4種類(MA100、MA125、MA145、MA148)、血球での発現が検出された遺伝子を12種類(MA69、MA83、MA88、MA93、MA109、MA112、MA118、MA120、MA122、MA126、MA128、MA133 )同定した。それらの中から、心臓形成に正の制御を行っていると予想されるMA107、MA135、MA140にまずは注目し、これらの遺伝子の心臓原基への過剰発現を行った。MA107を過剰発現したところ、尾芽胚期にかけて心臓形成が抑制されることが分かった。よって、MA107は、心臓原基の細胞増殖や心臓形成の促進ではなく、心臓形成に対して負の制御を行い、結果としてその制御が正に働くことで、正常な心臓形成が行われるということが予想された。MA135の過剰発現実験では、心臓形成に影響は見られなかった。よって、MA135は、初期の心臓形成には重要ではない、あるいはMA135の発現量が心臓形成に必要な量を十分に満たしている場合、それ以上の発現があっても心臓形成には影響しないことが予想された。MA140を過剰発現した胚では、原腸形成に阻害が見られたことから、MA140は原腸陥入以前からの発生に強く関係していることが予想された。今後は、これら遺伝子の変異配列や機能欠失、過剰発現時期の検討を進める一方、それら以外の候補遺伝子においても同様に解析を進め、それらの相互関係や、既知のシグナル経路における作用機序を明らかにする。本研究課題では、殆ど理解が進んでいないヒアルロン酸支配下のシグナル経路を、両生類モデル生物の利点を駆使して明らかにするものである。今年度はその特性を生かした大規模スクリーニング及び網羅的な発現解析を行い、新規心臓形成関連遺伝子を多数同定した。よって上記の評価とした。24年度が最終年度であるため、記入しない。これからは、同様に両生類モデル生物の利点である、「胚へのマイクロインジェクションによる過剰発現系」を駆使して、網羅的に機能解析を推進する予定である。
問題解決学習を活用した英語派生接辞指導法の開発と評価

英語語彙力は英語能力の根幹を支えるものであるが,その語彙力を効果的に高めるための方略をどのように指導するかについては,より多くの研究が必要とされている。本研究の目的は,語彙方略指導の中でも特に派生接辞の指導を取り上げ,問題解決型学習と組み合わせることで,より効果的な指導を行う方法を開発することである。2018年度は,1)派生接辞知識のオフラインでの測定,2)派生接辞知識のオンラインでの測定,及び,3)問題解決型学習を援用した派生接辞指導の3点について本実験を行った。2019年度には,分析及び考察を行い,学会発表をするとともに,指導方法とその評価方法のさらなる改善を目指す。パイロット研究の結果を受け,本実験を終え,おおむね順調に進んでいる。一部,平成30年7月豪雨の影響で中断された時期もあったが,後期に遅れを取り戻した。すでに行った本実験の結果の分析及び考察を行い,結果を学会等で発表する予定である。また,学会等から得られた知見を活かして,指導方法とその評価方法のさらなる改善を目指す。平成29年度前半には,種々の文献や資料を収集し,これまでの研究から明らかになっていることをまとめた。このまとめは,外国語教育メディア学会(LET)第57回全国研究大会におけるセミナー「英語語彙指導で考えたいこと:語彙は増やして整理する」の中で取り上げ,問題解決型学習を援用した英語派生接辞の指導の可能性を示すことができた。パイロット研究の一部としては,日本の中学校で使用されている検定教科書を電子テキスト化し,教科書コーパスを作成した。このコーパスを用いて,派生接辞の種類や数,また,それぞれの派生接辞が付与された語幹についても調査を行い,日本英語学習者が身に付けているであろう派生接辞の知識の質と量について計量的に分析を行った。平成29年度後半には,パイロット研究を少人数の参加者に対して行い,1)派生接辞知識のオフラインでの測定,2)派生接辞知識のオンラインでの測定,及び,3)問題解決型学習を援用した派生接辞指導の3点について,その内容と手法を確認した。このパイロット研究の結果を基に,上記の3点について改善を行い,平成30度には本実験を行う予定である。文献・資料調査を基に,パイロット研究まで行い,おおむね計画通りに進んでいる。パイロット研究の結果から,さらに測定や指導について改良を行う必要があるものの,平成30年度には予定通り本実験を行うことができると考えられる。平成30年度前半にはパイロット研究を再度行い,改良版の測定と指導について確認をする。平成30年度後半には本実験を行う予定である。平成31年度には,本実験の分析・考察、研究のまとめを行う。当初予定していた統計解析用ソフトの購入を見合わせ,フリーソフトでの分析を行うこととした。また,学会参加に掛かる旅費等も節約が可能であった。平成30年度は成果発表を一部前倒して行う予定であるため,旅費等に使用する。平成30年度豪雨やその他災害の影響で参加予定であった学会等が中止,また,参加の取りやめがあったため,予定よりも使用金額が少なくなった。これらの学会を含め,幅広い学会への参加により,より知見を高める必要があると考える。関連学会の参加に係る費用として使用する予定である。