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フィリピンの対ムスリム文化政策における普遍的概念の構築に関する法人類学的研究

フィリピン・パラワン島における法人類学的なフィールドワークを継続実施し、村落や郡レベルの具体的な紛争事例の分析から、フィリピンのムスリム社会の慣習法、イスラーム法、国家法をめぐる多元的法体制の現状を把握し、ムスリム社会内部の法の多様性を明らかにした。また今回は、郡における市民登録制度についての調査をおこない、国家の枠組みの中で、「市民」としてのムスリムがどのように位置づけられているのかを具体的な現状から理解した。さらに、1970年代に編纂されたフィリピンムスリム身分法法典の翻訳および注釈作成、さらにキリスト教的な法伝統をもつフィリピン民法と当該法の比較検討を通じ、ムスリムの置かれている法的状況を分析した。一方、フィリピンのムスリムの国内移動、バランガイ正義法制度の適用の村落レベルまでの浸透、所轄件数の増大と内容の多様化、先住民権利法の適用によるパラワン島先住民、ムスリム、クリスチャンのエスニシティ状況の変化についての資料分析をおこなった。これらの変化は、地方のコミュニティ、国家・グローバルな状況の相互連関の結果生じており、そこには経済開発、先住民権利の法的承認、イスラームの政治的意味づけの複雑化といった要因が関係していることが明らかになった。以上の分析から、再度、国家における文化多元主義のあり方について検討する必要が認識された。2005年3月には、アメリカ合衆国バージニア州での国際政治学会第16研究会社会・文化多元主義部会の年次大会で、"Conflict Management at the Bottom : A Case Study of Political Pluralism in Philippine Society"という研究報告をおこなった。このような検討は、翻って日本という国家における文化的な多様性を社会的に実現可能なものにしていくための手がかりになるとも考えられる。研究の初年度にあたる今年度は、以下に示すように、資料収集など、来年度以降の基盤になる作業を中心に研究を実施した。1)法人類学関連の文献の収集、ムスリムを扱った映像や新聞・雑誌などのメディア資料など、ムスリムの表象についての資料を収集した。2)フィリピンにおけるフィールドワークでは、主にアテネオ・デ・マニラ大学の図書館で、アメリカ植民地期の裁判資料を中心に文献資料を収集した。具体的には、アメリカ期の官報や最高裁版所の判例の検討をおこなったが、これら資料は、フィリピンのムスリムが、植民地政策下において、どのような価値観に基づき司法的に位置づけられていたかを示すものである。また、政府関係者から、ムスリムをめぐる現在の政策的状況を聞き取り、9.11以降、彼らを取り巻く状況が非常に困難なものであることが明らかになった。さらに現地のフィールド関係者から、調査地の現況などを聴取し、来年度の調査について相談を実施した。またアテネオ・デ・マニラ大学のフィリピン文化研究所では、文献収集と研究打ち合わせを実施した。3)6月の日本アジア研究大会、7月のフィリピン研究会全国フォーラムでは、フィリピン人研究者と研究に関する意見交換をおこない、調査に関わる具体的助言を得た。4)上記調査研究を通じてデジタルカメラ撮影によって収集した史料などの分類・整理に着手した。現時点では、犯罪や裁判の発生件数や、判例の中で用いられている民族・宗教カテゴリーに関する語彙などにアメリカ植民地政府の対ムスリム文化政策の特徴を読み取ることができるのではないかと考えられる。5)日本の地域社会との比較検討という意味では、京都府丹後地方での、祭りにおける利害調整のフィールドワークを実施。また、京都府全体での地域づくりネットワークの実態把握に関わるようになり、様々な価値観の錯綜する地域社会の現状にふれた。研究の中間年度にあたる今年度は、以下に示すように、これまで収集した資料にもとづく中間報告、資料収集および現地調査の継続を中心に実施した。1)これまで収集した資料分析と視点にもとづいて、2003.7.7にイタリアで開催された第15回国際人類学・民族学会議の分科会III.6-82において、"Borders in Judiciary : Muslims in The Philippines"(単独)の学会報告を行った。フロアーからも非常に有益なコメントを得ることができ、多くの人類学者との議論により視野が広がった。また報告以外にも分科会に参加することで、本研究テーマの人類学動向の中での位置づけについて省察を深めることができた。2)2003年8月から9月にかけては、フィリピン・パラワン島での法人類学的なフィールドワークを実施し、とくに以下の3点が明らかになった(1)同時多発テロ以降の世界情勢の変化に伴い、フィリピン国内のムスリムの状況も変動し、国内移動が社会変化をもたらしていること。(2)バランガイ正義法制度の適用が、村落レベルまでにかなり浸透し、所轄件数が増大し、内容も多様化していること。(3)先住民権利法の適用が開始され、パラワン島先住民、ムスリム、クリスチャンのエスニシティ状況に変化が生じていること。3)1977年制定の「フィリピン・イスラーム身分法」の全文和訳および注釈作成をおこない、さらにその解説論文として「マイノリティの身分法-キリスト教的法伝統とフィリピン・ムスリム身分法」を執筆し、現在出版準備中である。4)日本の地域社会への実践的還元としては、人類学的なフィールドワークと地域づくりを結合させる方向性を探るために、論文「交換と交流のまちづくり」『京都文教大学人間学部紀要』(投稿中)を執筆した。

さらに、1970年代に編纂されたフィリピンムスリム身分法法典の翻訳および注釈作成、さらにキリスト教的な法伝統をもつフィリピン民法と当該法の比較検討を通じ、ムスリムの置かれている法的状況を分析した。一方、フィリピンのムスリムの国内移動、バランガイ正義法制度の適用の村落レベルまでの浸透、所轄件数の増大と内容の多様化、先住民権利法の適用によるパラワン島先住民、ムスリム、クリスチャンのエスニシティ状況の変化についての資料分析をおこなった。これらの変化は、地方のコミュニティ、国家・グローバルな状況の相互連関の結果生じており、そこには経済開発、先住民権利の法的承認、イスラームの政治的意味づけの複雑化といった要因が関係していることが明らかになった。以上の分析から、再度、国家における文化多元主義のあり方について検討する必要が認識された。2005年3月には、アメリカ合衆国バージニア州での国際政治学会第16研究会社会・文化多元主義部会の年次大会で、"Conflict Management at the Bottom : A Case Study of Political Pluralism in Philippine Society"という研究報告をおこなった。このような検討は、翻って日本という国家における文化的な多様性を社会的に実現可能なものにしていくための手がかりになるとも考えられる。
象牙質再生にTGFβとレチノイン酸の及ぼす効果

レチノイン酸やTGF-βは、象牙芽細胞の分化に影響を与える可能性がある。そこでラット歯髄細胞に、TGF-β1とその阻害剤およびレチノイン酸を用いた細胞実験を行い、象牙芽細胞への分化を検討した。その結果、これらの因子が細胞の分化を促進した。すなわち歯髄細胞は内在性のTGF-βにより分化が抑制されており、その作用を阻害することでレチノイン酸の分化誘導がより増強された可能性が示唆された。本研究の目的は、歯髄の分化に関与するTGFβの作用に着目し、歯髄細胞が持つTGFβ活性が硬組織誘導作用をもつ生理活性物質(本研究ではレチノイン酸を用いる)との間に起こす相互作用およびそのメカニズムを遺伝子発現及び硬組織誘導能について細胞培養の手技を用いて研究し解明することである。歯髄は様々な細胞の複合体である為性質の特定が難しい。そこで安定した性質を持つラット歯髄からクローニングしcell line化したRPC-C2A細胞を実験に使用した。TGF-β1阻害剤であるSB431542(SB)を添加して、内在性のTGF-β1活性を抑制したうえで、いくつかの生理活性物質の影響を分化の指標であるALP活性と遺伝子発現について調べた。RPC-C2Aに、SBを添加してTGF-β1活性を抑制し、レチノイン酸(ATRA)を添加すると、この細胞のALP活性が増加した。また、同条件下でRT-PCR法で遺伝子発現を調べると、象牙芽細胞分化の指標であるDentin sialophosphoprotein、osteocalcin等の遺伝子の発現が増強した。同様に長期培養を行うと石灰化物が形成され、Arizalin red染色像およびCalciumの濃度にレチノイン酸とSB添加群と非添加群で差が認められた。これらの結果よりRPC-C2Aでは、ATRAが象牙芽細胞分化に関与しているが、通常は内在性のTGF-β1により、その分化が抑制されている可能性が示唆された。歯髄中の未分化間葉細胞の象牙芽細胞への分化に、レチノイン酸(All-trans retinoic acid: ATRA)やTGF-βsuperfamilyが影響を与えることを示唆するいくつかの報告があるが、その詳細なメカニズムは明らかになっていない。本研究の目的は、歯髄の分化に関与するTGF βの作用に着目し、歯髄細胞が持つTGF β活性が硬組織誘導作用をもつ生理活性物質(本研究ではレチノイン酸を用いる)との間に起こす相互作用およびそのメカニズムを遺伝子発現及び硬組織誘導能について細胞培養の手技を用いて研究し解明することである。昨年度の実験に引き続き、RPC-C2A細胞を実験に用いた。RPC-C2Aは、SB存在下でのATRA添加群で、ALP活性が著しく増加した。同条件下でRT-PCR法により、象牙芽細胞分化の指標であるDSPP、OCの遺伝子の発現が増強した。さらに長期培養を行うと石灰化が誘導された。TGF-βのLuciferase reportergeneassayではRPC-C2A培養上清にLuciferase活性が認められ、RPC-C2A培養細胞にはTGF-βが存在することがわかった。また、RPC-C2AにおけるTGF-βの作用を調べるため、SBで内在性のTGF-β活性を抑制した状態でさらにTGF-β1をSBでの抑制以上に過剰に添加し、ALP活性を調べると、ATRAにより上昇したALP活性はTGF-β1の濃度依存性に抑制された。これらの結果よりRPC-C2Aでは、ATRAが象牙芽細胞分化に関与しているが、通常は大量の内在性のTGF-β1により、その分化が抑制されている可能性が示唆された。今回の研究の結果からもTGF-β1が歯髄の象牙質再生の重要な因子であることが明らかとなった。
感覚代行により心身に障害を持つ人の運動理解と学習を支援する水泳訓練手法の開発

本研究では,障害等により喪失・減弱した感覚様相を別の感覚様相で補う感覚代行(Sensory Substitution)というアプローチを用いて,従来の指導方法による水泳訓練が困難な学習者による複雑な運動の直感的な理解や,それに基づく運動学習を支援する手法の確立と実証を行う.ここでは,『心身に障害を持つ人の全身多自由度の運動の理解および学習を,人工的な感覚代行により補完・促進できるか?』という学術的問いに基づき,水中での着用者の全身運動の計測および実時間での感覚刺激提示を可能にする着用型機器の開発を目指す.本研究では,障害等により喪失・減弱した感覚様相を別の感覚様相で補う感覚代行(Sensory Substitution)というアプローチを用いて,従来の指導方法による水泳訓練が困難な学習者による複雑な運動の直感的な理解や,それに基づく運動学習を支援する手法の確立と実証を行う.ここでは,『心身に障害を持つ人の全身多自由度の運動の理解および学習を,人工的な感覚代行により補完・促進できるか?』という学術的問いに基づき,水中での着用者の全身運動の計測および実時間での感覚刺激提示を可能にする着用型機器の開発を目指す.
蘇州崑劇の演技・歌法・字音の基礎的調査及び研究

1、崑山の笛の名手・高慰伯氏の演奏を録音し、指法の口述を録畫した。その成果等を参考にしつつ崑曲の音階について探究し、論文を發表した。楊蔭瀏以來ほとんどの研究者が從って來た雅樂俗樂二大音階説を否定し、笛の吹奏の便宜によるいい加減な音階が唐代から崑曲まで續いてゐることを明らかにした。2、前年度までの録音の成果を參考にしつつ、曲韻についての論文を發表した。「中州全韻」の七聲體系を明らかにすることを主眼とした。3、北曲傳承史研究の副産物として、曇陽子と牡丹亭についての論文を發表した。4、長老俳優の演劇歴と自分の研究過程の概略とを纏め、臺灣の雑誌に發表した。5、今後の研究のため、臺灣にて資料を蒐集した。現有資金の範圍内で、王傳〓氏の下記演目のビデオ撮影及び録音を行なった。(1)自身の演技を撮影録畫したもの。胡蝶夢:嘆〓。琵琶記:剪髪賣髪、賞秋。爛柯山:前逼、悔嫁。尋親記:跌包。精忠記:刺字。荊叙記:繍房、投江撈救、見娘。連環記:小宴、大宴、梳妝、擲戟。金印記:不第、投井、歸第金圓。衣珠記:折梅、堕冰、園會、飢荒、放糧、衙敘、珠圓。鸞叙記:遣義、殺珍、拔眉、探監。水滸記:劉唐、捨巾、前誘、後誘、殺惜後半、放江、活捉。四絃秋:送客。翡翠園:預報、拜年、謀房、諫父、切脚、恩放、自投、副審、封房、殺舟、遊街。紅梨記:訪素、盤秋、醉隷、花婆、三錯。滿床笏:卸甲、封王。叙釧記:相約、討叙。醉菩提:伏虎、當酒、醒妓。千金記:追信、拜將。西廂記:鬧齋、惠明、長亭。(計約60幕)(2)後輩の演技に對する批評を撮影録畫したもの。寶劔記:夜奔。寶娥冤:斬娥(北方崑劇院新編)。紫折記:折柳、陽關。水滸記:活捉。艶雲亭:痴訴、點香。貨郎旦:女彈。鐵冠圖:刺虎。單刀會:刀會。風雲會:訪普。東窗事犯:掃秦。(計約12幕)(3)録音。会場戲:上壽、賜福、送子。一文錢:燒香、羅夢。(計5幕)これらの演目は、現在演じられることの無いものを多く含んでをり、それをビデオ等に殘したこと自體に大きな意義がある(その整理は今後數年かけて行ふ)。その中で使はれてゐる字音は、七つの聾調(陰平・陽平・陰上・陽去・陰入・陽入)を持つ蘇州式中州韻の體系であり、忍收(m, m,l等)の上聾は基本的に陰調に屬するといふことが明らかになった。またその歌法も字音に基くものであり、北曲の旋律と一致しないことが明らかになった。以上2點は本研究代表者がこれまでに研究して明らかにした結果と一致してをり、從前の研究精化を證明する基礎資料の一つとなるであらう。更には演目忠に間々現れる各地の方言のせりふの使用實態もある程度明らかになった。明らかになった内容についての整理は今後數年かけて行なふ。まづ崑曲の長老・王傳〓氏の録音録畫を繼續した。ついで王傳〓氏が死去し、轉じて下記3方面の録音録畫を行った。1、呉秀松作譜の元曲「〓娥冤」を復演した。蘇州の尹繼梅女史を主役とし、總勢數十人を動員して、九月末に、蘇州崑劇團にて上演して貰った。その模様は家庭用ビデオ機に收録した他、蘇州テレビ局からも撮影車が出て撮影が行ななはれた。2、蘇州のアマチュア崑曲の長老のうち姚之曽氏・蔡氷秋女史の唱ひを録音した。3、崑山の笛の名手・高慰伯氏の演奏を録音した。幕ごとの指法若干も口述して貰った。4、上記成果等を參考にしつつ、九宮大成譜などの崑曲浪淘沙の旋律の古さについて探究し、九州中國學會にて口頭發表した。

その成果等を参考にしつつ崑曲の音階について探究し、論文を發表した。楊蔭瀏以來ほとんどの研究者が從って來た雅樂俗樂二大音階説を否定し、笛の吹奏の便宜によるいい加減な音階が唐代から崑曲まで續いてゐることを明らかにした。2、前年度までの録音の成果を參考にしつつ、曲韻についての論文を發表した。「中州全韻」の七聲體系を明らかにすることを主眼とした。3、北曲傳承史研究の副産物として、曇陽子と牡丹亭についての論文を發表した。4、長老俳優の演劇歴と自分の研究過程の概略とを纏め、臺灣の雑誌に發表した。5、今後の研究のため、臺灣にて資料を蒐集した。
プラズモンイメージングとサブ細胞レベル磁気分離によるオートファジーの理解

磁性ープラズモンハイブリッドナノ粒子(Ag/FeCo/Agコア/シェル/シェル型ナノ粒子)を創製し、このナノ粒子を用いてオートファゴソームの磁気分離に挑戦した。ハイブリッドナノ粒子を哺乳細胞にリポフェクションし培養したところ、30分後にはナノ粒子がVps26と共局在し、その後LC3と共局在する様子が観察された。最適なタイミングで細胞膜を温和に破砕し磁気分離に供した。磁気分離分画にはLC3-II、トランスフェリン受容体、及びLAMP2が濃縮されていたが、LC3-Iは含有されていなかった。これらの結果はオートファゴソームが単離できたことを示している。平成26年度は、磁性とプラズモン散乱特性を併有する糖鎖修飾デュアル機能ナノ粒子の創製を行う計画であった。当初の予定通り、磁性とプラズモン特性を兼ね備えたFePt@Au@Agダブルシェル型ナノ粒子やAg@FeCo@Agダブルシェル型ナノ粒子を開発し、その表面をラクトースを導入したポリリジンで被覆した糖鎖修飾デュアル機能ナノ粒子を創製した。特に、Ag@FeCo@Agダブルシェル型ナノ粒子は、磁性およびプラズモン散乱特性の両面において優れており、この粒子を用いてリポソームの磁気泳動およびプラズモンイメージングを行った。この実験結果から、細胞内小胞のリアルタイムイメージングと磁気分離が原理的に可能であるということを確認した。さらに、A431細胞を用いてマクロピノサイトーシスによって細胞内へ、Ag@FeCo@Agダブルシェル型ナノ粒子を取り込ませることが可能であることも確認した。Ag@FeCo@Agダブルシェル型ナノ粒子に関する一連の研究成果は、Full PaperとしてLangmuir誌に掲載されたほか、アメリカ材料科学会(MRS)、欧州材料科学会(E-MRS)、国際材料学会連合アジア国際会議(IUMRS-ICA)など計6件の国際学会発表及び7件の国内学会発表として結実している。学会発表に関する特筆すべき事柄としては、2014年8月に福岡で開催されたIUMRS-ICA2014での研究奨励賞受賞、及び2014年11月にベトナムで開催されたIWAMSN2014でのベストポスター賞受賞が挙げられる。オートファジーの機序の全容解明のための一つの重要な方法論として、オートファゴソームをリソソームと融合する前に単離し、オートファゴソーム形成に関わるタンパク質の同定や内部組成を直接分析するという、シンプルかつ直接的な手段が考えられる。しかし、過渡的に出現するオートファゴソームを単離することは難しく、密度勾配遠心などによる検討がされてはいるが、今のところ確実な方法は無く、革新的な単離技術の確立が期待されている。そこで本研究では、磁性とプラズモン特性を併有したデュアル機能ナノ粒子(DFNPs)を創製し、オートファゴソームをリアルタイムでイメージングしながら磁場によってオートファゴソームを単離し、オートファゴソーム形成に関わるタンパクの同定や内容物の直接分析を可能にすることを目的としている。平成27年度の研究実施計画は、DFNPsを哺乳動物細胞の細胞質へ送達し、プラズモン散乱イメージングする技術を確立することであったが、研究代表者らは、当初計画を大幅に前倒しして研究を進めることができた。平成27年度の研究実績の具体的内容は次の通りである。銀(Ag)と鉄コバルト合金(FeCo)を複合化したAg/FeCo/Agコア/シェル/シェル型DFNPsを創製した。このDFNPsは、超常磁性とプラズモン散乱特性という二つの異なる物理特性を兼ね備えており、オートファゴソームのイメージングと磁気分離が可能であることを確認した。このDFNPsの表面を、ポリーLーリジン(PLL)骨格にラクトビオン酸(LA)とチオール基(SH)を導入したPLLーLAーSHポリマーで修飾し、リポフェクション法によって哺乳培養細胞の細胞質へ送達したところ、DFNPsが再現性良くオートファゴソームへ取り込まれることを確認した。当初の計画では、平成27年度はDFNPsをリポフェクション法によって哺乳動物細胞の細胞質へ送達しイメージングするというところまでが達成目標であったが、幸運なことに当初の目標は早期に達成できたため、次の段階(当初は平成28年度の計画にあった項目)、即ち、「実際にオートファジーを誘導し、オートファゴソーム内にDFNPsを取り込ませ、プラズモンイメージングによってオートファゴソーム内へのDFNPsの局在を確認する」というところまで到達したため。本研究の目的は、従来単離精製が困難であった細胞小器官を短時間に単離する新たな分離手法を提供することにある。細胞小器官の一般的な単離法には遠心分離があるが、長時間の超遠心工程が必要なためタンパク質の膜からの脱離や変性が問題となるほか、比重に差が無い異種の細胞小器官の分離は原理的に困難である。一方、磁気分離は、細胞やタンパク質の分離には従来から利用されている技術であるが、細胞小器官の磁気分離については報告例が極めて少ない。その主な原因の一つとして、従来の磁気ビーズは超常磁性酸化鉄からなるサブミクロンサイズの大きな粒子なので、ファゴサイトーシスのような特殊なエンドサイトーシス経路でしか細胞に取り込まれないため、細胞小器官の単離という観点からは汎用性がないことが挙げられる。

我々は、細胞小器官を高選択的に磁気分離する汎用的技術に必要な磁気ビーズの条件として、粒径30nm以下、長時間イメージングが可能、優れた磁気特性、高い表面機能化の自由度の4つを掲げ、これらの必要条件全てを満たす磁性ープラズモンハイブリッドナノ粒子を創製した。モデル小器官としてオートファゴソームを選択し、このハイブリッドナノ粒子を用いてオートファゴソームの磁気分離に挑戦した。ハイブリッドナノ粒子の表面をポリ-L-リジンで被覆し、cos-1細胞にトランスフェクションした後、ナノ粒子の細胞内分布の培養時間依存性を調べたところ、ナノ粒子の局在が、初期エンドソーム、オートファゴソーム、オートリソソームへと移行する様子の可視化に成功した。オートファゴソームにナノ粒子が取り込まれた時点でホモジナイザーを用いて細胞膜のみを破砕して磁気分離を行い、磁気分画成分をウェスタンブロッティングしたところ、LC3-II(オートファゴソームマーカー)の濃縮が観察されたため、オートファゴソームの磁気分離に成功したことが確認された。磁性ープラズモンハイブリッドナノ粒子(Ag/FeCo/Agコア/シェル/シェル型ナノ粒子)を創製し、このナノ粒子を用いてオートファゴソームの磁気分離に挑戦した。ハイブリッドナノ粒子を哺乳細胞にリポフェクションし培養したところ、30分後にはナノ粒子がVps26と共局在し、その後LC3と共局在する様子が観察された。最適なタイミングで細胞膜を温和に破砕し磁気分離に供した。磁気分離分画にはLC3-II、トランスフェリン受容体、及びLAMP2が濃縮されていたが、LC3-Iは含有されていなかった。これらの結果はオートファゴソームが単離できたことを示している。第一の理由は、当初磁性ープラズモンデュアル機能ナノ粒子としてFePt@Agコアシェル型ナノ粒子やFePt@Au@Agダブルシェル型ナノ粒子のみを予定していたが、それらに加え、さらに優れた性能を有するAg@FeCo@Agダブルシェル型ナノ粒子の創製に成功したことにある。第二の理由としては、細胞内小胞のモデルとしてリポソームを用い、磁気泳動実験やプラズモンイメージング実験を既に実施し、細胞内小胞のリアルタイムイメージングと磁気分離が原理的に可能であるということを当初予定より前倒しで確認したことが挙げられる。第三の理由は、当初の計画には含まれていなかったものの、A431細胞を用いてマクロピノサイトーシスによって細胞内への取り込みが可能であることを確認した点にある。平成28年度は、以下の3つの目標を達成する。(1)オートファゴソームの3次元構造解析:電子線トモグラフィー法により、DFNPsを取り込んだオートファゴソームの3次元精密構造解析を行う。(2)オートファゴソームの磁気分離:DFNPsを哺乳培養細胞の細胞質に送達し、プラズモン散乱によるライブイメージングを行いながら、オートファゴソームにDFNPsが取り込まれたことを確認後、細胞膜のみを温和に破砕し、オートファゴソームを磁気分離する。(3)プロテオーム解析:単離したオートファゴソームをプロテオーム解析に供し、タンパク質のプロファイリングを行う。ナノ材料化学平成27年度は、リポフェクション法による磁性ープラズモンデュアル機能ナノ粒子の哺乳培養細胞の細胞質への送達技術の確立に注力する。
ジーンターゲティングによるPEBP遺伝子ファミリーの機能の解析

ヘテロダイマーとして機能する転写因子であるPEBP2/CBFの機能を解析するため、2つのサブユニットをコードするAML1/PEBP2αB(αB)遺伝子、及びPEBP2β/CBFβ(β)遺伝子のノックアウトマウスを作成した。αB遺伝子はDNA結合能を担うruntドメインを標的とし、runtドメインの中央部をコードするエクソン4をネオマイシン耐性遺伝子(neo)に置換した。β遺伝子は転写開始点を含むエクソン1をneoに置換することにより、いわゆるnull変異を導入した。これらのベクターが導入されたES細胞をサザンブロッティング法によりスクリーニーングし、αBで17個、βで1個の相同組換え体のESクローンを得た。これらの細胞からブラストシスト注入法により作成したキメラマウスをライン化し、F2マウスを用いて、その表現型を解析した。αBヘテロ変異体では明らかな異常は認められなかったが、ホモ変異体では血球系の異常が顕著であった。組織学的には胎仔性肝造血が著しく障害されており、コロニーアッセイの結果から、血球細胞のほとんど全ての系列の発達に異常があると考えられた。また興味深いことに、βホモ変異体の表現型もαBホモ変異体とほぼ同一であった。この結果はPEBP2/CBFは胎仔性肝造血に必須な因子であり、その造血の場においてはαBとβがヘテロダイマーとして機能する必要があることが示唆された。今後更に両因子の機能について詳細な解析を行う予定である。我々はさらに、ヒト白血病で高頻度に検出されるAML1/MTG8キメラ遺伝子の機能を知るためにES細胞におけるノックインにより、このキメラ遺伝子を発現させるためのベクターを作成した。このベクターにはloxP配列が組み込まれており、Cre-loxPシステムを利用してマウス血液細胞で時期・系列特異的にキメラ遺伝子を発現させることが可能である。従って、このマウスが樹立されれば、急性白血病発症の分子機序の解明が可能となると思われる。
周産期に子どもの死を経験した母親の次子の妊娠・出産に至るまでの悲哀のプロセス

本年度は、昨年度に行った学会発表にて得られた示唆をもとにデータ収集方法及び概念の修正を行いながら、継続して縦断的・前向きなデータ収集を積み重ねた。しかしながら、自然死産・早期新生児死亡後の次子妊娠出産までの追跡には至らず、今後も継続してデータ収集を行う必要性が示唆された。自然死産・早期新生児死亡を経験した母親は、児の喪失後きわめて早期に次子の妊娠出産を痛切に願う時期が共通してみられていた。しかし、13か月が経過すると次子妊娠出産への希望は一度小さくなる傾向があった。その後、その母親なりに亡くなった児の存在や、亡くした体験を成長へのステップとして意味づけ、亡くなった児との時間を過ごすことに満足ができると、改めて次子の妊娠を現実的に考えるに至っていた。そのような考えの変化が起こる時期として、亡くなった児の出産予定日が過ぎた頃、100か日を終えた頃、お盆を過ぎた頃などがあった。児の喪失直後の次子妊娠出産への希望は、亡くした子どもの代償として、あるいはとにかく子どもが欲しいと、次子を望む傾向が見られていた。しかし、数か月が経過してからの次子妊娠出産への希望は、喪失直後と異なり、自分や夫、(亡くなった児以外の生存している)他の子どもにとって、次子の誕生がどのような意味を持つのか、ライフサイクルの中でいう次子を持つことが家族全員とってよいのかを考慮した上で、「いつ頃次の子どもが欲しい」と考えるように変化していた。また、このような現実的な希望を抱くようになると、母親は自分の健康を維持するようなセルフケア行動をより積極的にとるような変化も見られた。基礎体温を測定する、体重コントロールを心がけるなど、できる限り次子の妊娠をよりよい健康状態で迎えることができるような行動であった。本年度は、これまでにデータ収集を終了している周産期死亡から約34か月にわたる母親の悲哀に関するデータの分析と、文献検討を重ね、次子妊娠出産に至るまでの母親を追跡調査するための研究方法の再検討を行ってきた。34か月の母親の悲哀の特徴を分析することによって、母親が自分自身で悲嘆の解決に取り組むことの重要性が示唆され、この知見を元に、その後のデータ収集方法および、データ収集時の研究者の母親への対応の仕方を見直してきた。また、この悲哀のプロセスは新たな適応状態へ向かうプロセスであると定義しているが、この分析の結果から、適応という概念の見直しが必要であるとことが考えられた。これらの検討を重ねつつ、現在は、その後のデータ収集を始めるための具体的な準備を進めているところである。また、周産期の子どもの死を経験した母親の悲哀の特徴に関して、研究成果の一部を看護学領域の学会において発表し、今後の研究の方向性について有意義な示唆を得ることができた。
η’中間子と原子核の束縛状態の分光実験

本研究では、12C(p,d)反応の分光により、η′中間子と炭素原子核の束縛状態(η′中間子原子核)を探索する実験を行った。これまでに、この実験に必要な検出器やスペクトロメータのイオン光学系の開発を行っており、前年度には、ドイツ重イオン研究所のSIS加速器から供給されるエネルギー2.5GeVの陽子ビームを用いて、12C(p,d)反応を分光する測定を実施してきた。当該年度には、この実験で取得したデータの詳細な解析を行った。測定されたデータから重陽子を識別する解析を行い、FRSスペクトロメータの下流焦点面での粒子の軌道を解析することで、重陽子の運動量を求め、12C(p,d)反応での生成物のエネルギースペクトルをη′中間子生成閾値付近の広い領域で得ることができた。得られたエネルギースペクトルでは、実験の目標としていた約1%以下という非常に良い統計感度と、2.5MeV程度という十分なエネルギー分解能を達成した。得られたエネルギースペクトル中に、η′中間子と原子核の束縛状態に対応するピーク構造は観測されなかったことから、この束縛状態の生成断面積に対する上限値を初めて決定した。また、η′中間子ー原子核の光学ポテンシャルのパラメータごとに理論的に予想されていた生成断面積のスペクトルとの比較を行い、このポテンシャルのパラメータについての制限を議論した。これらの成果について、国内学会等で発表を行った。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は, η'中間子と炭素原子核の束縛状態(η'中間子原子核)を探索する分光実験を行うことを目的としている.この実験では, GSI研究所のSIS加速器から取り出される陽子ビームを炭素標的に入射して,陽子+炭素→重陽子+η'中間子原子核という反応により出てくる重陽子の運動量を,スペクトロメータを用いて測定する。そして,反応での欠損質量を求めることで, η'中間子原子核のエネルギースペクトルを調べることを計画している。2013年度は,この実験に向けた準備段階として,スペクトロメータ下流での粒子の飛跡測定を行うマルチワイヤードリフトチェンバー,シグナルの重陽子とバックグラウンドの陽子の識別を行うエアロジェル・チェレンコフ検出器の開発,データ収集システムの準備を行った。そして,これらを総合的にテストするために, FZJ研究所のCOSY加速器の陽子ビームを用いてテスト実験を実施し,各々が本実験に必要な性能を満たして動作することを確認した。また、スペクトロメータとして用いるフラグメントセパレーターのイオン光学系に関して,通常の光学系よりも広い運動量アクセプタンスを持つ光学系をシミュレーションにより設計した。以上のように,実験に必要な各要素の開発を行い, η'中間子原子核分光実験を実施するための準備がほぼ整った。2014年度には, GSI研究所のSIS加速器を利用して本実験を行える見込みであり,陽子ビームを用いてη'中間子原子核を探索する初めての分光実験データを取得できると期待できる。本研究は、η′中間子と原子核の束縛状態を探索する分光実験を、ドイツのGSI研究所において陽子ビームを用いて行なうという研究である.平成25年度までには、この実験のために必要な検出器、イオン光学系、データ収集システム等の開発や性能評価のテストを行なってきた.平成26年度には、GSI研究所において、加速器のビームを用いた実験を以下のように実施した.(1) Niビームを用いた光学系のテスト: Niイオンビームを用いて、スペクトロメータとして用いるFRSの新規開発したイオン光学系のテスト実験を行なった。その結果、新しい光学系がη′中間子原子核の分光実験に必要な性能を満たしていることを確認した。(2)陽子ビームを用いたバックグラウンドの測定:陽子ビームを用いて、本測定の環境におけるバックグラウンド粒子の測定を行った。そして、スペクトロメータ下流において測定する重陽子とバックグラウンドの陽子を識別する方法の最適化を行った.(3)陽子ビームを用いて、η′中間子と原子核の束縛状態を探索する分光実験を実施:陽子ビームを1週間利用して、η′中間子と原子核の束縛状態を探索する分光実験を実施した。2.5GeVの陽子ビームを炭素標的に入射して、“陽子+炭素原子核→重陽子+η′中間子原子核"という反応で出てくる重陽子の運動量を、FRSをスペクトロメータとして使って精密に測定した。重陽子の運動量を測定することで、η′中間子原子核のエネルギーをmissing-mass法により求めることができる。予定した通りの高統計のデータを取得することができ、現在その解析を進めている。

得られたエネルギースペクトルでは、実験の目標としていた約1%以下という非常に良い統計感度と、2.5MeV程度という十分なエネルギー分解能を達成した。得られたエネルギースペクトル中に、η′中間子と原子核の束縛状態に対応するピーク構造は観測されなかったことから、この束縛状態の生成断面積に対する上限値を初めて決定した。また、η′中間子ー原子核の光学ポテンシャルのパラメータごとに理論的に予想されていた生成断面積のスペクトルとの比較を行い、このポテンシャルのパラメータについての制限を議論した。これらの成果について、国内学会等で発表を行った。研究実績の概要で述べたように、η′中間子と原子核の束縛状態を探索する分光実験を実施することができ、研究は順調に進展している。また、実施状況としても、ほぼ申請書に書いた通りに(2年目である平成26年度までに、必要な検出器や光学系の開発、性能評価を行った上で、陽子ビームを用いてη′中間子と原子核の束縛状態を探索する分光実験の本測定を行うという計画通りに)進んでいる。このような理由から、おおむね順調にすすんでに進んでいる、と自己評価した。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年に実験を実施した後は、取得したデータの解析を進めている。具体的には、(1)測定対象である重陽子とバックグラウンドとして来ている陽子を、粒子の飛行時間を利用して識別する解析、(2)検出器(マルチワイヤードリフトチェンバー)のデータから粒子の軌道を求めるための解析(3)測定した粒子の軌道から粒子の運動量を求めるために必要な、スペクトロメータのイオン光学系の解析、(4)微分断面積を求めるために必要な入射ビームの強度の解析、などを行っている。今後はこのような解析を進めて、最終的な物理結果を導き、その結果を論文として発表するように研究を進めていく。2013年度に, η'中間子原子核分光実験のために必要な全ての検出器とデータ収集システムのテストを行い,本実験に必要な性能を満たして動作することを確認できた。このように,本実験に向けた準備は順調に進んでいる。また, GSI研究所にて加速器からの陽子ビームを用いて行うη'中間子原子核分光実験は, 2014年度に実施できる見込みであるため,当初の計画通りにおおむね順調に進展していると評価する。2014年度は,最初に,スベクトロメータとして用いるGSI研究所FRSのイオン光学系のテストを実施する。加速器からのイオンビームをFRSに入射して光学系の特性を実際に測定し, η'中間子原子核分光実験において使用する光学系を決定する。そして, 2014年度中に, GSI研究所のSIS加速器から供給される陽子ビームを用いて, η'中間子原子核分光実験を実施し,取得したデータの解析を行う。
ボツリヌス毒素の吸収に寄与する小腸上皮細胞の新規シグナル伝達機構の解明

ボツリヌス毒素複合体(TC)の腸管吸収機序を明らかにするため、TCにより惹起される細胞内シグナルと細胞層の透過性変化を調べた。トランスウェルにラット小腸上皮株化細胞IEC-6を培養して細胞層を形成させ、D型TCを添加すると、細胞層の透過性が増加した。TCはMAPキナーゼであるERKとp38を活性化させた。TCによる細胞層透過性の上昇は、p38阻害剤で抑制されたことから、TCはp38を活性化することで細胞間隙を拡張させると考えられた。TCは細胞内を透過することも確認しており、TCは細胞内のトランスサイトーシスと細胞間隙の透過の両者により腸管を通過して体内に侵入することが分かった。本研究は、ボツリヌス毒素によって惹起される小腸上皮細胞内のシグナルを同定することを大きな目的としている。本年度は、平成24年度までの研究で明らかになった、MAPキナーゼの関与についてさらに詳しく検討した。ウシ胎仔血清10%を含むDMEMでラット小腸上皮細胞(IEC-6)を培養して実験に用いた。ボツリヌスD型4947株を透析培養し、毒素複合体(LーTC)、神経毒素(BoNT)あるいはL-TCからBoNTを取り除いた無毒成分複合体(NTNHA/HAs)をカラムクロマトグラフィーにより精製した。トランスウェルにIED-6を播種し、蛍光デキストランの透過量によって細胞層の透過性を測定したところ、L-TCあるいはNTNHA/HAsによって透過性が上昇したが、BoNTの添加では透過性は変化しなかった。ウエスタンブロットによりMAPキナーゼのリン酸化を調べたところ、L-TCあるいはNTNHA/HAsによりERK、p38が活性化したが、JNKは殆ど活性化しなかった。BoNTはMAPキナーゼの活性に影響を与えなかった。L-TCよるIEC-6の透過性の上昇は、ERKの阻害剤では抑制されなかったが、p38の阻害剤により抑制された。以上の結果から、L-TCはp38の活性化を惹起することで小腸上皮細胞の透過性を上昇させること、この上昇にはL-TCの無毒成分が寄与しているがBoNTは寄与していないことが明らかとなった。このように、本年度の研究ではボツリヌス毒素によって活性化し細胞の透過性調節に寄与する細胞内の新規シグナル(p38)が明らかとなり、結果を英文誌に発表した。本研究ではボツリヌス毒素の小腸上皮の透過経路とその経路を制御する細胞内シグナルを明らかにすることを目的としている。H24年度は、D型ボツリヌス毒素が小腸上皮細胞層を通過する際、細胞内と細胞間隙の両者を利用しているか否かを主に検討した。ボツリヌス毒素を蛍光色素Cye3で標識し、トランスウェルに播種したラット小腸上皮細胞(IEC-6)に4°Cで毒素を添加し結合させた。37°Cでインキュベーションして経時的に共焦点顕微鏡で観察したところ、毒素が細胞内を透過していることが観察された。また、トランンスウェルに播種したIEC-6に毒素を添加し蛍光色素FITCで標識されたデキストランの透過量を測定したところ、経時的にデキストランの透過量が増加したことから、D型ボツリヌス毒素が細胞間隙を拡張させる機能を持つことが分かった。以上の結果から、D型ボツリヌス毒素は細胞内と細胞間隙の両方の経路を通って細胞層を透過することが示唆された。細胞内透過経路を検討した予備的な結果を学会発表した。次にボツリヌス毒素が細胞間隙を拡張させる細胞内機序を検討した。ボツリヌス毒素はIEC-6の2種類のMAPキナーゼ;ERKとp38を活性化させた。これらのMAPキナーゼが細胞間隙の拡張に寄与するか否かを阻害剤を用いて検討した。ボツリヌス毒素による細胞間隙の拡張すなわちFITCデキストランの透過量の増加は、ERK阻害剤であるPD98059により影響を受けなかったが、p38阻害剤であるSB203580によって抑制された。このことから、ボツリヌス毒素はp38を活性化することで細胞間隙を拡張させることが示唆された。これらの結果はD型ボツリヌス毒素の体内侵入機序を明らかにする上で重要な知見であり、英語論文として発表準備中である。本研究は、ボツリヌス毒素が腸管細胞に結合し取り込まれる際に惹起されるシグナルの同定とその分子機構の解明を目的としている。本年度は、毒素の細胞への取り込みに関与する細胞内分子を明らかにすることを試みた。

細胞への毒素の取り込みに関与する細胞内分子を調べるため、細胞を各種阻害剤で処理した。アクチンフィラメントの関与を調べるためにCytochalasin B、微小管の関与を調べるためにNocodazole、細胞膜に局在しているコレステロールの関与を調べるためにMβCDを用いた。またククラスリン依存性エンドサイトーシスの阻害剤としてChlorpromazine-HCl、カベオラ依存性エンドサイトーシスの阻害剤としてFilipin complexを用いた。ラット小腸上皮細胞(IEC-6)を、24穴の培養プレートにコンフルエントに培養し、細胞に各種阻害剤を30分作用させた。BoNTおよびL-TCのトランスサイトーシスに寄与する細胞内分子を検討するため、阻害剤を用いたBoNTおよびL-TCの細胞結合および取り込み試験を行った。L-TCの結合量は、いずれの阻害剤を用いた場合も対照群に比べ変化は認められなかった。L-TCの取り込み量は細胞膜局在コレステロールを除去するMβCDおよびクラスリン形成を阻害するクロルプロマジンによって抑制された。以上の結果から、D型L-TCは細胞コレステロールに富んだ部位からのクラスリン依存性エンドサイトーシスによって取り込まれることが示唆された細胞生理学、病態生理学平成25年度は、ボツリヌス毒素複合体が小腸上皮細胞のp38 MAPキナーゼを活性化することで細胞間の結合を緩め、透過性を上昇させることを実験で明らかにした。これを欧文の学術雑誌に投稿・受理された。また、焦点顕微鏡により細胞層の横断面を撮影し、毒素複合体が細胞層を透過する様子を共可視化することに成功した。この毒素の透過速度が阻害剤によりどう変化するかを観察したが、細胞層が薄いことからこの方法では阻害剤の影響を検討することが困難であることが分かった。これらの経過は前年度にたてた計画どおりであり、計画はほぼ順調に進んでいると考えられる。平成24年度は、ボツリヌス毒素が小腸上皮細胞層を透過する経路を明らかにするために、まず細胞内を毒素が透過する様子を可視化すること、および毒素を添加した際の細胞間隙の拡張の度合いを測定することが必要であった。毒素の精製法や細胞培養技術は既に確立されていたため、これらの検証はスムーズに進み、ボツリヌス毒素が細胞内、細胞間隙両者を通過することが証明できた。また、毒素が細胞間隙を拡張する際の細胞内分子機構は平成25年度に実施する予定であったが、本年度この検討を行ったところ、p38が調節分子であることを見出すことができた。しかし、本年度予定していた、細胞内の毒素透過に寄与する分子の同定は予備的実験に終わり、詳細な機序については予定通り解析できなかった。以上のことから、全体としては最初に計画していた速度で研究が進展していると判断した。前年度までに、毒素により惹起される新規のシグナル分子を同定することができたので、今後は毒素の細胞内輸送経路の解明に重点をおいて研究を進める。共焦点顕微鏡観を用いた実験により、細胞の横断面を観察することで毒素の運搬速度を調べることは困難であることが分かった。一方、細胞に毒素を結合させたときは細胞全体に毒素が付着しているが、30分程度時間が経過したときには核の周辺に毒素が移動していることが観察され、この前後の様子を比較することで毒素の移動を検討できると考えられた。そこで、毒素のエンドサイトーシスがカベオラに依存しているかクラスリンに依存しているかを、阻害剤を用いて検討する。またカベオリン、クラスリンと毒素の位置関係を免疫染色により可視化し、毒素の輸送経路を同定する平成24年度は、平成25年度に実施する予定であった細胞間隙の拡張に寄与する細胞内分子の同定について結果を得ることができた。
新規経口ワクチンを用いたC型慢性肝炎治療法の開発研究

現在、世界中で約1億7千万人のHCVキャリアーが存在し、インターフェロンや抗ウイルス薬によりC型慢性肝炎の治療成績は向上したが、その根治率は未だ満足のいくものではない。現在までに我々は、ビフィズス菌の表層にHCVのNS3タンパクをディスプレイした新しいC型慢性肝炎経口ワクチンを作製し、マウス実験モデルにて細胞性免疫の誘導を確認している。今回の研究では本ワクチンを用いた新規C型慢性肝炎治療法の開発研究として、NS3タンパク発現マウス腫瘍モデルを用いてインターフェロン併用療法との相乗効果を確認した。現在、世界中で約1億7千万人のHCVキャリアーが存在し、インターフェロンや抗ウイルス薬によりC型慢性肝炎の治療成績は向上したものの、その根治率は未だ満足のいくものではない。HCVウイルスの排除にはHCV非構造タンパクNS3に対する細胞性免疫が大きな役割を果たしていることが報告されており、現在までに我々は、プロバイオティクスであるビフィズス菌の表層にNS3をディスプレイした新しいC型慢性肝炎経口ワクチンを作製し、マウス実験モデルにてNS3特異的なIgG抗体およびTh1反応の誘導を確認している。今回の研究では本ワクチンを用いた新規C型慢性肝炎治療法の開発研究として、NS3タンパク発現マウス腫瘍モデルを用いて、本ワクチンによる治療効果やインターフェロン併用療法の相乗効果等を確認する。現在、C型肝炎のマウス実験モデルは存在しないが、本治療ワクチンの有効性の確認手法として、マウスリンパ腫細胞EL4にHCVのNS3/4A遺伝子を安定導入し、マウス皮下に移植し本ワクチン投与による腫瘍増殖抑制効果を検討することによりNS3特異的細胞性免疫誘導の効果を確認することを計画した。また本マウスモデルを用いてインターフェロン(INF)併用の相乗効果も確認し、臨床応用に向けた新規治療プロトコールのProof of Principleを確立する。本年度、我々はNS3/4A発現マウスEL4細胞株を樹立し、皮下腫瘍モデルを作成し、本ワクチンによる腫瘍増殖抑制効果とINFの併用による腫瘍増殖抑制効果を検討した。結果、ワクチン単独投与、INF単独投与いずれも無治療群に比較して有意な腫瘍増殖抑制効果を認め、両者を併用することによってさらに強力な効果を確認した。よってINF併用、単独いずれにおいても本ワクチンの臨床応用が期待される結果となった。H26年度にはNS3タンパク発現腫瘍モデルを確立し、本経口ワクチンおよびINFαの併用により、NS3特異的な細胞性免疫の誘導を確認した。H27年度は、実用化に伴うLMO(遺伝子組み換え生物)拡散防止の観点から、本ワクチンを加熱殺菌した際の有効性の確認を上述の動物実験等で実施した。ビフィズス菌は比較的加熱に弱い細菌であり、抗原、接着因子などの主要なタンパク構造を保持したまま加熱殺菌が可能性で、NS3タンパク等が加熱後も保持されていることをWestern Blotting等で確認した。また加熱殺菌後もワクチン効果、INFαとの併用効果が弱まらないことをNS3発現マウス皮下腫瘍モデルを用いて確認した。実用化に伴うLMO(遺伝子組み換え生物)拡散防止の観点から、本ワクチンを加熱殺菌した際の有効性の確認を上述の動物実験等で実施した。が想定通り加熱殺菌後もワクチンとして有効性が変わらないことを確認した。現在、世界中で約1億7千万人のHCV(C型肝炎ウイルス)キャリアーが存在し、インターフェロンや抗ウイルス薬によりC型慢性肝炎の治療成績は向上したものの、その根治率はいまだ満足のいくものではない。HCVウイルスの排除にはHCV非構造タンパクNS3に対する細胞性免疫が大きな役割を果たしていることが報告されており、現在までに我々は、プロバイオティクスであるビフィズス菌の表層にHCVのNS3タンパクをディスプレイした新しいC型慢性肝炎経口ワクチンを作製し、マウス実験モデルにてNS3特異的なIgG抗体およびTh1反応の誘導を確認した。また、C型慢性肝炎治療法の開発研究として、NS3タンパク発現マウス腫瘍モデルを用いて、本ワクチンによる治療効果やインターフェロン(INFα)併用療法の相乗効果等を確認した。NS3タンパク発現腫瘍モデルを作製し、本経口ワクチンおよびINFαの併用により、NS3特異的な細胞性免疫の誘導、およびNS3発現腫瘍に対する、経口ワクチン、IFNα、双方の抗腫瘍効果及び併用による相乗効果を確認した。また、実用化に伴うLMO(遺伝子組換え生物)拡散防止の観点から、本ワクチンを加熱殺菌した際の有効性の確認を上述の動物実験等で実施した。ビフィズス菌は比較的加熱に弱い細菌であり、抗原、接着因子などの主要なタンパク構造を保持したまま加熱殺菌が可能でNS3タンパク等が過熱後も保持されていることをWestern Blotting等で確認した。

以上の結果により、本経口ワクチンとIFNαの併用療法が、慢性C型肝炎の新たな治療法としての大きな可能性を有していることが示された。現在、世界中で約1億7千万人のHCVキャリアーが存在し、インターフェロンや抗ウイルス薬によりC型慢性肝炎の治療成績は向上したが、その根治率は未だ満足のいくものではない。現在までに我々は、ビフィズス菌の表層にHCVのNS3タンパクをディスプレイした新しいC型慢性肝炎経口ワクチンを作製し、マウス実験モデルにて細胞性免疫の誘導を確認している。今回の研究では本ワクチンを用いた新規C型慢性肝炎治療法の開発研究として、NS3タンパク発現マウス腫瘍モデルを用いてインターフェロン併用療法との相乗効果を確認した。計画通りにNS3/4A発現マウスEL4細胞株を樹立し、皮下腫瘍モデルにてワクチンの有効性とINF併用による相乗効果を確認した。実用化に向けて、大量生産法、品質安定性確保の研究を進めていく。遺伝子治療学生物多様性の確保、遺伝子組み換え生物拡散防止の観点から、加熱により不活化したワクチンでも同様の作用効果が得られるかを確認する。また臨床応用へ向けての大量生産法、品質安定性の確保の研究を進めていく。動物実験が年度をまたいだため費用計上が一部、H28年度に繰り越した。動物実験費用(飼育管理費)として計上予定。
フレーベルの家庭育児書『母の歌と愛撫の歌』の楽譜の比較研究

本研究は、フレーベルの晩年の主著でもあり、極めて独創性の強い家庭育児書でもある『母の歌と愛撫の歌』(1844年)の曲、つまり、ローベルト・コール(Robert Kohl,181381)作曲によるオリジナル(原曲)版「遊戯の歌」50曲の成立を考察し、それとの関係でa)フランス版(1861)b)イギリス版(1895)c)アメリカ版(1906)d)日本版(1934,1981)の比較考察をおこない、本書の特色を明らかにすることにある。その際、作曲者の略歴をみる必要がある。作曲者ローベルト・コールは当時カイルハウ学園の教師としてフレーベルの協力者であった。彼はアルテンブルクの聖歌隊指揮者の息子として生まれ、1834年神学を学ぶためライプチヒ大学に入学、そのかたわら熱心に音楽を研究した。その後1838年牧師となる試験に合格の後、1839年から45年までカイルハウ学園で宗教教授および音楽の教師として活動し、学園の生徒たちの人望をえた。この略歴からもうかがえるように、コールは専門の作曲家ではなく、『母の歌と愛撫の歌』を「きわめて道楽趣味的(dilettantische)に作曲した」ようである。(参照F・Seidel編『母の歌と愛撫の歌』1883年、5版、S.208)。絵画家のウンゲルと共に学園の教師達が共に協力して本書を作成した点は、高く評価されるが、「曲」そのものについての評価については問題なしとはしない。フレーベルの希望でもあったが、メロディーは子ども達が「歌うための歌」としての性格を堅持している。従って、本書が各国版として普及する際、自由に編曲され(むしろその国独自に、子供の活動をうながすものとして)、コールの原曲とは全く無関係に改編されることになった。換言すれば、コールが専門の作曲家でなかったが故に、本書は各国版において、とりわけ186080年代にかけて、各国の「子どものうた」(Kinderlied)の影響を受け、編曲されることになった。