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脳血栓症におけるシステイニルロイコトリエンの機能解析

システイニルロイコトリエンは、アラキドン酸から5-lipoxygenase pathwayにより合成される多彩な生理機能を有する脂質メディエーターである。我々は、ロイコトリエンC4(LTC4)による血小板活性化現象を明らかにし、その受容体下流の細胞内シグナルを解析し、インテグリンA2B3の活性化を引き起こす経路を明らかにした。また、生体内血栓形成モデルを作成し、ノックアウトマウスを用いて実験を施行し、生体内におけるシステイニルロイコトリエン受容体の意義を明らかにし、脳血栓症における役割を明らかにした。本研究の目的は、多彩な生理機能を有する脂質メディエーターであるシステイニルロイコトリエンについて、脳血栓症における役割を分子生物学的手法と実験動物を用いて明らかにする事である。H25年度は下記の研究を施行した。【具体的内容】a)前年度までの実験結果のつづきとして、ロイコトリエンC4(LTC4)による血小板活性化シグナルを解析し、細胞内cAMP等の下流シグナルを介して、インテグリンA2B3の活性化を引き起こす事を明らかにした。b)前年度までに確立した生体内血栓形成モデルを使用して、ノックアウトマウスを使用した実験を施行して、生体内におけるシステイニルロイコトリエン受容体の役割を明らかにした。c)ApoE欠損マウスを使用した実験的動脈硬化モデルにて、動脈硬化形成への関与を調べた。各種評価系による結果では、動脈硬化に関する明らかな影響につき、再現性をもった結果は認められなかった。【意義、重要性】LTC4刺激による血小板活性化、CysLT2下流の細胞内シグナル伝達経路を明らかにすることにより、LTC4による血栓症の病態が明らかとなるも、動脈硬化への影響について明らかな結果は認められなかった。実験的血栓モデルを確立したことにより、CysLT2ノックアウトマウスを使用した研究を進める事ができ、今後、生体内における病態生理学的意義が明らかとなることが期待され、脳梗塞をはじめとする血栓症の解明に大きな貢献をする可能性をもっていると考えられた。H24年度は下記の研究を施行した。【具体的内容】a)血小板にロイコトリエンC4(LTC4)刺激をして、システイニルロイコトリエン第2受容体(CysLT2)からG蛋白質を介し、血小板活性化にいたるまでのシグナルを解析した。具体的にはCAFによる細胞内カルシウム上昇の検出、ELISAによる細胞内cAMPの解析を施行し、シグナル伝達経路を明らかにした。b)生体内におけるLTC4の意義を調べる為、塩化鉄を頸動脈に塗布することにより、血栓形成を促す実験的血栓形成モデル等の血栓形成モデルを作成し、これらの実験的動物モデルの安定した評価系を確立した。c)ApoE欠損マウスにコール酸を負荷して作成し、実験的動脈硬化モデルを作成し、動脈硬化形成へのLTC4-CysLT2の関与を調べた。動脈硬化モデルを作成、Oil red染色によるその定量的評価をする方法を確立、ApoE(-/-)/Cyslt2(+/+)とApoE(-/-)/Cyslt2(-/-)動脈硬化巣の定量的比較解析をし、動脈硬化へのシステイニルロイコトリエンの効果を調べた。【意義、重要性】LTC4による血小板活性化、CysLT2下流の細胞内シグナル伝達経路を明らかにすることにより、LTC4による血栓症の病態が明らかとなった。また、実験的血栓モデルを確立したことにより、CysLT2ノックアウトマウスを使用した研究を進める事ができ、今後、生体内における病態生理学的意義が明らかとなることが期待され、脳梗塞をはじめとする血栓症の解明に大きな貢献をする可能性をもっていると考えられる。また、生体内における新規血栓形成モデルを作成し、また、拮抗薬の薬物投与が大きな問題となっていたが、その新しいモデルを作成した。また、動脈硬化モデルに関しては再現性のあるモデル、結果を出すことができなかった。しかしながら、血栓モデルに関するノックアウトマウスを用いて実験を施行し、生体内におけるシステイニルロイコトリエン受容体の意義を明らかにし、脳血栓症における役割を明らかにした。脳血管障害本研究は、脳梗塞における脂質メディエーターであるシステイニル

ロイコトリエンの役割について、分子生物学的手法と実験動物(マウス)を用いて明らかにする事を目的とした研究であり、現在までに、CysLT2受容体とGタンパク質との関連、下流シグナルを介したA2B3インテグリンの活性化等のメカニズムについて明らかとなった。また、実験的血栓形成モデルを使用したLTC4による血栓形成のメカニズム、血栓形成における脂質メディエーターについて、定量的質量分析にてLTC4の重要性が検証された。以上、大方の実験は終了されているが、前年度と同様、動物モデルの確立に時間を要したため、また、仮説の証明ができなかった動脈硬化等の研究もあり、研究計画は遅延したが、大方の実験は終了しており、今後は再現性の確認のための実験が主な実験となり、達成度としては、やや遅れている進捗状況とした。本研究は多彩な生理機能を有する脂質メディエーターであるシステイニルロイコトリエンについて、脳梗塞、脳血栓症における役割を分子生物学的手法と実験動物(マウス)を用いて明らかにする事を目的としており、一部の実験系において確立できないものもあるが、達成度としては、おおむね研究計画通りの進捗状況となっている。LTC4刺激による血小板活性化、細胞内シグナル伝達経路の評価について、引き続き、研究を続ける。LTC4などの脂質とヒト血小板活性化のメカニズム、血栓症の病態を明らかにし、今後、人の生体内における病態生理学的意義が明らかにし、脳梗塞をはじめとする血栓症の解明に大きな貢献をする可能性をもっていると考えられる。H25年度は、LTC4による血小板活性化における細胞内シグナル経路について、また、LTC4の生体内病態生理学的意義について、更なる研究を進める。H24年度に、CysLT2受容体とGタンパク質との関連が証明されたので、今後さらに下流におけるVASP(vasodilator-stimulated phosphoprotein),A2B3インテグリンの活性化等のメカニズムを検討する。また、H24年度までに確立した実験的血栓形成モデルを使用して、LTC4による血栓形成のメカニズムについて検証する。また、血栓形成における脂質メディエーターについて、定量的質量分析を施行し、LTC4の重要性を検証する。以上の研究により、LTC4による血小板活性化、脳血栓症における病態生理学的意義が明らかになることが期待される。本研究は脳梗塞、脳血栓症におけるシステイニルロイコトリエンについて、分子生物学的役割のみならず、生体における役割を明らかにする事を目的としており、現在までに、大方の実験は終了されている。しかしながら、前年度と同様、生体における役割を検証する動物モデルの確立に時間を要したため、また、動脈硬化研究において仮説の検証が困難であったため、研究計画はやや遅延した。このため、ノックアウトマウス等を使用した研究においては確実な結果が得られてきているものの、再現性の確認なども含めた実験は昨年度内には終了できなかったため、動物実験費用としての次年度使用額が生じた。前年度と同様に本年も、遅れの原因となっている、モデル動物における血栓形成実験、再現性確認のための実験、ノックアウトマウス等を使用した同様な実験を施行する。費用としては、申請時と同様、動物実験などの研究における費用、学会報告、論文発表等における費用として使用することとする。
熱ショック蛋白の神経系細胞死に対する保護機構の解明

I.ラット脳へのHSP70遺伝子の導入実験:ラットを固定し、海馬あるいは線条体にプローブを挿入した。このプローブよりpBK-CMV-HSP70D DNAを20μg、注入し、CUY21により通電した。2μsの通電と98μsの非通電を10回、計1秒間の設定で、電圧は50V-150Vとした。電極間隔は1mmまたは2mm設定した。導入から1,3,7日後に還流固定し、脳冠状段切片を作成した。遺伝子導入は、β-galactosidase染色にて確認した。以下項目を変更し遺伝子導入の効率を検討した。(1)electroporationの電圧(50V,100V,80V,150V)、(2)DNA注入速度(10秒,1,5,10分)、(3)注入後通電までの時間(注入直後,1分後,10分後)、(4)使用ラットの週齢(4,8,12週齢)。しかし、いずれの場合にも偶発的に数個の神経細胞に遺伝子が導入されるのみで,十分な遺伝子意の導入を確立するまでには至らなかった。II.培養ラットPC12細胞へのHSP70遺伝子の導入:培養PC12細胞に対しリボソーム法によりベクターのpBK-CMVとpBK-CMV-HSP70のtransfectionを行った。ベクター遺伝子導入の確認はβ-gal染色により行い、HSP70の確認は1抗体を用いたWestern blottingで行った。以上よりベクターであるpBK-CMVのみが発現している細胞系とHSP70蛋白が過剰発現している細胞系を確立することができた。そこで、wild群,ベクター発現細胞(pBK-CMV群),およびHSP70過剰発現細胞(HSP70群)の3種類のPC12細胞を用いてHSP70の細胞保護効果を検討した。付加刺激としては、過酸化水素水(H_2O_2)を用いた。培地内に50,100,150μMのH_2O_2を加えて培養を行い、MTTを用いて24時間の細胞生存率を測定したところ、いずれの濃度においてもHSP70群の生存率が有意に高く、HSP70がH_2O_2負荷に対する細胞保護効果を有することが示された。本年度はラットの熱ショック蛋白(hsp)70、hsp60、hsp10、hsp60+hsp10遺伝子を培養細胞およびラットの脳内に過剰発現させることを目的として研究を行った.pSVTKベクターに組み込まれているhsp70とhsp60およびpRSC550に組み込まれているhsp10を用いて培養細胞に導入した.培養細胞には神経系細胞としてPC12をグリア系細胞としてC6細胞を用いた.リポソーム法によるトランスフェクション後にgeneticinにてセレクションした.導入条件および方法を種々変更したが、遺伝子の導入が得られなかった.そこで、ベクターを、より強力なプロモーター領域を有するpBKCMVに変更した.hsp70およびhsp60は容易に挿入が可能であったが、hsp10においては制限酵素部位が適合せず、平滑末端にして現在ベクターに挿入しているところである.

現在、pBKCMV-HSP70とpBKCMV-HSP60を用いて、培養細胞とラット生体脳への導入を行っている.PC12の培養細胞へのトランスフェクション後geneticinによるセレクションを行っているところである.脳内へは、エレクトロポレーション法を用いて導入を行っている.導入条件、導入DNA量、通電時間、電圧、電極幅等条件を選定中である.RPMI1640(SIGMA)、10%FBS(Equitech-bio)、100μ/mlのkanamycin(GIBCO)により培養したPC12細胞に対し、FuGENE(Roche)kitを使用して、ベクターのpBK-CMVとpBK-CMV-HSP70DNAのtransfectionを行った。pBK-CMVにcodeされている抗生物質耐性を利用し、400μg/mlのgenticinを用いてselectionした。遺伝子導入の確認にはpBK-CMVにcodeされているβ-galactosidaseの発現を利用しβ-gal染色を行った。またHSP70に対するpolyclonal antibodyを用いて、Western blottingを行い、HSP70蛋白質の過剰発現を確認した。以上の操作によりベクターであるpBK-CMVのみが発現している細胞系とHSP70蛋白が過剰発現している細胞系を確立することができた。そこで、wild群,ベクター発現細胞(pBK-CMV群),およびHSP70過剰発現細胞(HSP70群)の3種類のPC12細胞を用いてHSP70の細胞保護効果を検討した。付加刺激としては、過酸化水素水(H_2O_2)を用いた。培地内に50、100、150μMのH_2O_2を加えて培養を行い、MTTを用いて24時間の細胞生存率を測定したところ、H_2O_2が50μMではwild群:74.3±3.2%、pBK-CMV群:64.0±3.5%、HSP70群:104.6±2.1%、100μMではwild群:33.3±4.4%、pBK-CMV群:30.5±4.7%、HSP70群:76.5±5.2%、150μMではwild群:14.8±3.7%、pBK-CMV群:11.4±2.7%、HSP70群:37.8±1O.2%と、何れの濃度においてもHSP70群の生存率が有意に高く、HSP70がH_2O_2負荷に対する細胞保護効果を有することが示された。
実証主義の立場からみたデータ解析的統計手法の可能性と限界について

ノンパラメトリック統計手法による計量分析の可能性とその有効性について、(1)方法論からの概念整理、(2)統計的特性(小標本特性)の2点から考察を行った。まず、(1)については192040年代の統計関係学術誌の論文を内容別に分類した結果、1930年代後半に実証研究のスタイルの大きな変化が窺えた。この現象と科学哲学との関係を引き続き調査している。(2)については、ノンパラメトリック回帰の残差分散推定に関する特性について、コンピュータシミュレーションによって考察した。分散の推定量については、回帰残差から構成する推定量と条件付き分散から構成する推定量の2つを取り上げ、小標本から中標本までの特性を検討した。その結果、回帰残差から構成する推定量が最小2乗推定量と比べて遜色のないパフォーマンスを持つことが示された。またデータ生成プロセスが非線型の場合にも、良いパフォーマンスを持つことが明らかとなった。さらに、誤差構造が独立同一分布に従う場合には、回帰残差から構成する推定量の方が、条件付き分散から構成する推定量よりも優れていることがわかった。さらに、推定量のバイアスが推定する(未知の)平均関数の形と、band-widthの大きさに依存することが明らかとなった。また小標本ではAMSEが最小となるband-widthの大きさが、理論的な値と異なっていることが、実験の結果明らかとなった。この結果の一部は、理論・計量経済学会1996年度大会において報告した。現在、これらの残差推定量を用いたときの、回帰係数の検定についての統計的性質を引き続き分析している。
イヨダゾ-ル誘導体による包接体結晶の生成とその利用

1.4.5-ビス(4-メトキシフェニル)-2-(4-ニトロファニル)-IH-イミダゾ-ル[1]は結晶化の条件の相違により橙・朱・真紅を呈する多形結晶3種を生ずることが明らかとなった。これらの結晶をホストとしてアルコ-ル,水,環状エ-テル,カルボン酸,アミン等を作用させるとそれぞれをゲストとする包接体結晶を生じた。これらの包接体結晶はゲストの種類により著しく色調を異にする。例えばトリクロル酢酸をゲストとる包接体は淡黄色,ジオキサン包接体は赤色,水包接体は黒色である。X線結晶解析により色と結晶構造との関係を調べた結果,結晶の色の相違には,水素結合の相違,分子内電荷移動効果,分子間電荷移動錯体の形成の三者が関与していることが明らかとなった。また[1]の3種の多形結晶は2-フェニルエタノ-ルと共に乳鉢中で磨砕を行なうと,モル比1:2の包接体結晶(黄色)を生ずる。この結晶は50°C以上約84°Cまでの温度上昇により色調変化を示し,温度を下げると再びもとの色にもどるサ-モクロミズム性を示すが高温時での色はホストとして用いた多形結晶の色である。2mmTorr84°Cでゲストを除いた結晶のIRは朱色の多形結晶の場合を除いて,ホストとして用いた結晶のIRと一致した。またこの包接体は色調変化に伴ってバラの芳香を発生する。元素分析・IR・DSC・溶液NMR・TLC等の手段により上記包接体のサ-モクロミズムの機構を明らかにした。2.10種のイミダゾ-ル誘導体をホストとし,トリフルオル酢酸・トリクロル酢酸・P-トルエンスルホン酸をゲストとする包接体を得てその物性を調べた結果,前2者の包接体は固体状態で強い蛍光性を示すことが見出された。得られた包接体46種のホスト・ゲストモル比,蛍光スペクトル,蛍光強度をホストのみの場合と比較した。さらに固体状態で強い蛍光を示すとして知られているタ-フェニルとその蛍光強度で較べた。
超高速拡散燃焼のための3次元渦生成保炎器を兼ねたマイクロノズルと混合制御システム

マイクロガスタービンでの燃焼器のコンパクト化や等温膨張燃焼過程を実現するために重要な問題の一つが、高速流中で実現するための保炎と高速混合技術の開発である。本研究では、燃料噴射ノズルと保炎器とを一体化させる方法を提案する。すなわち、圧縮後あるいは部分燃焼後の比較的高温の気流中に、断面がエンジェル・フィッシュ形の微小物体を挿入し、その最後尾から燃料を噴出させる。燃料噴出部を挟んで対面する逆回転の渦が強烈な剪断混合層を形成させる。このように3次元性が極めて強く、かつスケールも小さい効果により、従来の保炎器とは桁違いの混合性能が期待される。実験では、究極の目標よりは23倍大きい幅1mm長さ1.5mmのV字形およびU字型のマイクロフレームホルダーを用い、背面の多孔質部分からメタンを一様に噴出させた。吹出し速度と主流速度を種々に変化させて火炎の状態を観察・測定するとともに、火炎が安定に保持される可燃範囲を明らかにした。V字型の方がU字型よりも保炎領域が大きく、このことはエンゼルフィッシュ形保炎器の上流部形状の妥当性を裏付ける。一方、エンゼルフィッシュ形フレームホルダーの再循環領域の混合特性につき基礎的な知見を得るため、k-ε2方程式乱流モデルを用いた数値計算を行った。対象とする系は、ステップ下流に円形の窪みを設けたもので、再付着点側から眺めるとJ字型となるようなはく離.再循環流れである。通常のステップ流れと比較して、半円の窪みがある本研究の流れ場では再付着点が約10%上流側に移行すること、また半円の領域は主流速度の1%以下の大変遅い流れになることが明らかとなった。このような特性は保炎器として望ましいことであり、エンゼルフィッシュ形保炎器の下流部形状の妥当性を裏付けることができた。燃料噴出部を挟んで対面する逆回転・逆スワールの渦が強烈な剪断混合層を形成させる。このように3次元性が極めて強く、かつスケールも小さい効果により、従来の保炎器とは桁違いの混合性能が期待されるが、さらに、この複雑流れの固有渦周波数と人工外乱との共鳴現象等も応用して、究極の保炎・混合兼用ノズルを開発することが最終目的である。今年度は、本研究で提案する3次元渦保炎器の基礎特性確認の第一段階として、比較的低速でスケールアップした燃焼実験を行った。すなわち最終的には寸法1 3mm程度のマイクロノズルの開発が目標であるが、今年度は10mm径の半円筒にスプリッタープレート的に尾を接続したようなノズルを試作し、その保炎・混合特性について目視観察を行った。一方、次年度以降の本実験に備え、高温高速風洞を設計製作し、予熱温度800°Cでマッハ数も0.8近い条件を達成すべく予備運転を行った。現時点で測定部は10mm×60mmであるが、流速が当初狙った値に達していないため、測定部を若干小さくしてさらなる加速を行うような設計変更を行った。

本研究では、燃料噴射ノズルと保炎器とを一体化させる方法を提案する。すなわち、圧縮後あるいは部分燃焼後の比較的高温の気流中に、断面がエンジェル・フィッシュ形の微小物体を挿入し、その最後尾から燃料を噴出させる。燃料噴出部を挟んで対面する逆回転・逆スワールの渦が強烈な勇断混合層を形成させる。このように3次元性が極めて強く、かつスケールも小さい効果により、従来の保炎器とは桁違いの混合性能が期待されるが、さらに、この複雑流れの固有渦周波数と人工外乱との共鳴現象等も応用して、究極の保炎・混合兼用ノズルを開発することが最終目的である。最終的には寸法1mm程度のマイクロノズルの開発が目標であるが、今年度は5倍にスケールアップしたモデルを用いて、メタン、あるいはメタン・酸素の部分予混合気を用いて、可燃範囲の確認、温度場の測定等を中心に行った。レーザー流速計による流動場の測定も試みたが、保炎器背後の再循環領域へのシード粒子供給が困難であったため、測定領域が極めて限定されてしまった。並行して、高温高速風洞の改良も行った。まず、本研究だけでなく、半径流タービンの回転実験も行えるようにテストセクション結合部を設計変更するとともに、燃焼実験測定部45mm×30mmにおいて、最高温度550°C、最高速度105m/sを達成した。マイクロガスタービンでの燃焼器のコンパクト化や等温膨張燃焼過程を実現するために重要な問題の一つが、高速流中で実現するための保炎と高速混合技術の開発である。燃料噴出部を挟んで対面する逆回転の渦が強烈な剪断混合層を形成させる。このように3次元性が極めて強く、かつスケールも小さい効果により、従来の保炎器とは桁違いの混合性能が期待される。実験では、究極の目標よりは23倍大きい幅1mm長さ1.5mmのV字形およびU字型のマイクロフレームホルダーを用い、背面の多孔質部分からメタンを一様に噴出させた。吹出し速度と主流速度を種々に変化させて火炎の状態を観察・測定するとともに、火炎が安定に保持される可燃範囲を明らかにした。V字型の方がU字型よりも保炎領域が大きく、このことはエンゼルフィッシュ形保炎器の上流部形状の妥当性を裏付ける。一方、エンゼルフィッシュ形フレームホルダーの再循環領域の混合特性につき基礎的な知見を得るため、k-ε2方程式乱流モデルを用いた数値計算を行った。対象とする系は、ステップ下流に円形の窪みを設けたもので、再付着点側から眺めるとJ字型となるようなはく離・再循環流れである。通常のステップ流れと比較して、半円の窪みがある本研究の流れ場では再付着点が約10%上流側に移行すること、また半円の領域は主流速度の1%以下の大変遅い流れになることが明らかとなった。このような特性は保炎器として望ましいことであり、エンゼルフィッシュ形保炎器の下流部形状の妥当性を裏付けることができた。
iNKT細胞の胸腺内分化運命決定とネオ・セルフ抗原の役割

iNKT細胞は、糖脂質抗原を認識するT細胞抗原受容体を有する細胞集団である。最近の研究から、胸腺内で機能の異なる3つのサブセット(NKT1、NKT2、NKT17細胞)へと分化することが明らかとなった。各種iNKTサブセットは、感染症、抗腫瘍免疫、自己免疫疾患やアレルギーなどの免疫関連疾患に重要な働きをすることが知られているが、その分化機構、機能メカニズムは不明点が多い。またiNKT細胞は、遺伝背景の違いによって分化多様性を示すことが知られているが、その分子機構も不明である。当研究では、iNKT細胞サブセットの分化の分子機構を解析し、iNKT細胞が生体の免疫応答に果たす役割を明らかにする。
糖鎖および糖誘導体を認識する高感度細胞検出センサの開発

細胞表面に存在する糖鎖および細胞内外に存在するATPを高感度かつラベルフリーに検出することで,細胞検出センサの構築を目指した.そのために界効果トランジスタ(FET)を用いて,多様な構造の糖および糖誘導体を検出する実験を行った.最初にフェニルボロン酸自己組織化単分子膜をゲート電極近傍に形成させたサッカライドFETセンサによって,グルコースだけでなく他の単糖,二糖を検出感度数uMにおいて検出することに成功し,かつ糖の構造の差異による親和性の差異についてプロファイリングを行った.この成果は論文誌およびそのバックカバーにおいて掲載された(DOI: 10.1002/celc.201402305,DOI: 10.1002/celc.201402193).次にサッカライドFETセンサに糖基質特異性を付与するために,ゲート電極上にフェニルボロン酸分子を含む分子認識ゲルを配することで感度は維持しつつ,目的の糖のみを選択的に検出することに成功した.さらにATPを鋳型とする分子認識ゲルFETセンサを用いてグルコースやリボースには反応せず,AMPやATPにのみ電気的に検出することに成功したことから,細胞検出センサの開発への可能性が示唆された.また,糖の選択性を向上させるために,分子認識ゲルの組成を工夫することで最適化を行った.本検討は論文執筆中であり,2015年度に投稿予定である.最後に,サブuMオーダーの糖の検出を目指してFETゲート電極界面の構造を金ナノ粒子および構造を付与する検討を行った結果,ゲート表面における電荷密度の向上による数uMからの検出感度を達成することに成功した.以上の結果から,細胞表面に存在する細胞に特異的な糖鎖のみを高感度に検出できる可能性が示唆され,ガン細胞の微量検出など今後の実用展開が期待された.細胞表面に存在する糖鎖および細胞内外に存在するATPを高感度かつラベルフリーに検出することで,細胞検出センサの構築を目指した.そのために界効果トランジスタ(FET)を用いて,多様な構造の糖および糖誘導体を検出する実験を行った.最初にフェニルボロン酸自己組織化単分子膜をゲート電極近傍に形成させたサッカライドFETセンサによって,グルコースだけでなく他の単糖,二糖を検出感度数uMにおいて検出することに成功し,かつ糖の構造の差異による親和性の差異についてプロファイリングを行った.この成果は論文誌およびそのバックカバーにおいて掲載された(DOI: 10.1002/celc.201402305,DOI: 10.1002/celc.201402193).次にサッカライドFETセンサに糖基質特異性を付与するために,ゲート電極上にフェニルボロン酸分子を含む分子認識ゲルを配することで感度は維持しつつ,目的の糖のみを選択的に検出することに成功した.さらにATPを鋳型とする分子認識ゲルFETセンサを用いてグルコースやリボースには反応せず,AMPやATPにのみ電気的に検出することに成功したことから,細胞検出センサの開発への可能性が示唆された.また,糖の選択性を向上させるために,分子認識ゲルの組成を工夫することで最適化を行った.本検討は論文執筆中であり,2015年度に投稿予定である.最後に,サブuMオーダーの糖の検出を目指してFETゲート電極界面の構造を金ナノ粒子および構造を付与する検討を行った結果,ゲート表面における電荷密度の向上による数uMからの検出感度を達成することに成功した.以上の結果から,細胞表面に存在する細胞に特異的な糖鎖のみを高感度に検出できる可能性が示唆され,ガン細胞の微量検出など今後の実用展開が期待された.
商家文書からみた地域社会の変容に関する総合的研究

滋賀大学経済学部附属史料館が保管する「馬場武司家文書」を整理し、文書目録を本報告書別冊として刊行した。あわせて「畑家文書」「西川伝右衛門家文書」の整理調書の作成と仮目録を完成した。また、「伊藤忠兵衛家文書」の整理を継続させた。これにより馬場家文書・西川家文書は、公開利用が可能となった。他の文書群についても、文書目録の完成に目途がたった。共同研究を進める前提で、初年度にあたる本年は、以下の史料群の整理・史料調書の作成、原本照合の作業を進めた。今回の補助金助成を受けた事業では、第一に優先すべき作業として「馬場利左衛門家文書(馬場武司家文書)」の史料目録を完成させ、これを公刊することに目標を置いている。この方針のもと、以下のような実績を上げた。1,経済学部附属史料館寄託「馬場利左衛門家文書」(総点数11,920点)については、史料調書の作成を終え、原本照合の作業にとりかかった。本年度は整理箱101箱中の41箱の作業を終了した。2,同上「畑家文書」については、書状4箱を除く11,720点の仮目録作成・史料調書の採録を終えた。書状4箱のうち、2,588通の書状について仮目録の作成を終了した。3,同上所蔵「伊藤長兵衛家文書」については、史料全点について史料調書と原本照合の作業を進め、ほぼ終了した。これにともない、史料分類の項目立ての検討にとりかかった。4,蒲生郡日野町寄託「山中兵右衛門家文書」を用いた研究会を開催し、その成果の一部は学術論文として発表した。5,他府県所在近江商人関係史料の調査は、東京大学法学部法制史資料室で実施し、いくつかの注目すべき史料を発掘した。これらは次年度中に収集し史料館に保管することとした。6,「伊藤忠兵衛家文書」は、「伊藤忠兵衛研究会」の協力を得て、9月に集中的に整理する機会を設けた。しかし、大量の史料群であるため、全体的なデータベース化には至っていない。本年度も、共同研究の目的である商業・流通の実態と地域社会の変容を進めるための前提作業となる以下の史料群の整理・史料調書の作成、原本照合の作業を進め、あわせて、整理の進んだ史料を利用した研究会を開催し、以下の実績を上げた。1,「馬場利左衛門家文書」は、史料点数11,920点についての史料調書の作成と仮目録化を完了した。引き続き史料原本と照合しながらの校閲の作業にとりかかった。2,「畑家文書」は、書状箱の史料調書の作成を行い、17,694点分の調書を取った。3,「伊藤長兵衛家文書」は、調書の作成、原本との校閲作業を終え、今年度に目録を刊行する。4,「伊藤忠兵衛家文書」は、ほぼ8,000点の史料調書の作成を終えた。年度末に新規の史料群が発見され、これらについても原蔵者の許可を得て滋賀大学経済学部附属史料館に搬入することとした。5,「西川伝右衛門家文書」は、滋賀大学経済学部附属史料館保管分について、目録と原本の照合作業を進めた。6,共同研究は、「山中兵右衛門家研究会」と共同開催し、商業活動を通じた地域社会の変容についての知見を共有した。以上のように、所期の目標である「馬場利左衛門家文書」「畑家文書」の整理は順調に進んでいるが、史料目録化を優先するための作業に時間がとられ、研究会を開催して全体の内容を共有する機会を得ることが困難な状況にあった。この点、次年度に向けての仮題として残された。しかし、「伊藤忠兵衛家文書」の新規発見は、日本商業史研究に新たな知見をもたらすことになると考えている。本年度においては、昨年度に引き続き滋賀大学経済学部附属史料館が保管する「馬場武司家文書」「畑家文書」「西川伝右衛門家文書」「伊藤長兵衛家文書」「伊藤忠兵衛家文書」の整理調書の作成と目録化作業を実施した。また、作業と並行して「山中兵右衛門家研究会」との合同研究会を開催し、近江商人の営為について新しい知見を得た。これらの成果は以下の通りである。(1)「馬場武司家文書」は整理を終了し、10,657点の史料目録を実績報告書別冊として刊行した。(2)「畑家文書」「西川伝右衛門家文書」は整理調書の作成と仮目録の完成をみた。前者は19,955点、後者は5,814点であり、いずれ機会を得て文書目録を刊行する予定である。(3)「伊藤長兵衛家文書」は整理を終え、平成20年10月に8,000点余の文書目録を刊行した。(4)「伊藤忠兵衛家文書」は、8,500点を超える史料調書の作成と仮目録化を終えた。

以上の文書整理・目録化の作業によって、他国稼ぎの実態や近代期の滋賀県において行政・教育に果たした役割(馬場武司家文書)、繊維専門商社に至る歴史過程(両伊藤家文書)、鉄道敷設を含む交通網の整備過程(畑家文書)、蝦夷地交易の実態分析(西川家文書)など、これまでの研究を飛躍的に進めるための基礎的な環境を整えることができた。
原発性胆汁性肝硬変における胆管破壊機序の解明とその治療基盤の構築

原発生胆汁性肝硬変(PBC)は慢性非化膿性破壊性胆管炎を病理学的特徴とする臓器特異的自己免疫疾患である。今回胆管上皮細胞破壊におけるToll様受容体(TLR)リガンドとNK細胞の役割を明らかにした。TLR3リガンド刺激で単球から産生されるIFN-aの存在下で、TLR4リガンドで刺激されたNK細胞が、自己の胆管上皮細胞を破壊する事が明らかになった。実際に肝臓由来の単球からのIFN-a産生はPBCにおいてその他の疾患対照群と比較して亢進していた。また免疫染色の結果から破壊された胆管周囲にCD56陽性のNK細胞がPBCでより多く散在している事が明らかとなった。次にマウスモデルを用いて、病初期の免疫誘導にNK細胞のような自然免疫攻撃細胞の果たす役割を明らかにした。NK細胞を除去すると抗ミトコンドリア抗体の産生や自己抗原反応性T細胞からのサイトカイン産生が抑制された。しかし門脈域の炎症は対照群と比較して大きな差は認め得なかった。これらの結果は、PBCの病因病態は多段階あり、NK細胞は免疫寛容の破綻に関与している事が示唆された。我々は生体肝移植の際の摘出肝臓より胆管上皮細胞と肝臓浸潤単核球を分離採取した。TLR2リガンド(LTA)、3リガンド(poly I:C)、4リガンド(LPS)、5リガンド(Flagellin)、7/8リガンド(R848)、9Aリガンド(ODN2216)、9Bリガンド(ODN2006)といった様々なTLRリガンドを組み合わせた結果、TLR3リガンドとTLR4リガンドの組み合わせで肝臓浸潤単核球を刺激すると自己胆管上皮細胞が傷害されることが明らかとなった。TLR3リガンドとTLR4リガンド刺激肝臓浸潤単核球よりMiltenyiBiotec社のNK細胞アイソレーションキット、CD3+CD56+NKT細胞アイソレーションキット、単球アイソレーションキット、Pan T細胞アイソレーションキットを用いて、NK細胞、NKT細胞、単球、T細胞分画を各々分離後、自己胆管細胞傷害活性を確認した結果、胆管傷害はNK細胞が行っていることが明らかとなった。TLR4リガンドで刺激されたNK細胞がTLR3リガンドで刺激された肝臓浸潤単核球の存在下で自己胆管細胞を傷害していた。TLR3リガンドで刺激された肝臓浸潤単核球からNK細胞を刺激するIFN-aが大量に産生されることが明らかとなり、これは肝臓浸潤単核球の中の単球に由来するものであった。またこのNK細胞上のTRAILが胆管上皮細胞障害に関与していることが明らかとなった。研究代表者は昨年度、生体肝移植の摘出肝臓より胆管上皮細胞と肝臓浸潤単核球を分離採取し、TLR3リガンドで刺激された単球が産生するIFN-aの存在下においてTLR4リガンドで刺激されたNK細胞が自己胆管上皮細胞を傷害することを報告した。原発性胆汁性肝硬変(PBC)は慢性非化膿性破壊性胆管炎を病理学的特徴とする臓器特異的自己免疫疾患であるため、この所見はPBCの発症や病態形成に重要と考えた。そこで今年度は実際に14名のPBC症例ならびに対照として健常肝臓6名、PBC以外の肝疾患22名における胆管周囲でのNK細胞の浸潤を、NK細胞特異的細胞表面マーカーであるCD56を免疫染色することで確認した。その結果PBCでは対照と比較して有意に門脈内の小細胆管周囲にNK細胞の浸潤を認めることが明らかとなった。次にTLR3リガンドで刺激された肝臓浸潤単球の産生するIFN-aの産生量が、PBC症例8名と対照肝疾患14名で差を認めるかをELISAで確認した。その結果PBCでは対照と比較して有意に単球がIFN-aを産生することも明らかとなった。以上の結果よりPBCでは、自然免疫(TLR3リガンド、TLR4リガンド)の存在下で自然免疫担当細胞が活性化されており、NK細胞が自己胆管上皮細胞を傷害することが病態の発生や維持に大きく関与していることが明らかとなった。

PBCはこれまで臓器特異的自己免疫疾患として獲得免疫(T細胞、B細胞)の重要性に注目されがちであったが、今回の結果は、自然免疫の環境要因も疾患感受性を決定しており、恐らくは腸管から経門脈的に供給されるTLR3リガンド、TLR4リガンドをいかにコントロールするかが治療に直結することを示唆している。(目的)原発性胆汁性肝硬変(PBC)は抗ミトコンドリア抗体の出現と肝内胆管細胞の免疫学的な傷害が病変の首座と考えられている。我々はNK細胞が自己胆管細胞を破壊することを報告してきた。そこで実際の生体内でのNK細胞の役割をPBCモデルマウスで解析することとした。(方法)PBCモデルマウスとして、既報のとおり2OA-BSAをB6マウスに定期的に免疫し作成した。モデル作成時NK1.1抗体を継続的に投与してNK/NKT細胞を除去する群と、NK/NKT細胞を除去しない群で比較検討した。6週毎に血清と脾臓リンパ球を採取し、最終的には24週で胆管炎の有無を病理学的に検討した。ミトコンドリア抗体対応抗原の代表的なPDC-E2、OGDC-E2、BCOADC-E2タンパクを用いて、抗ミトコンドリア抗体の産生をELISAで(MIT3-ELISA)、PDC-E2の主要エピトープを網羅する形で計8種類の合成ペプチドを用いて脾臓T細胞の産生するIFN-gをELISPOTで検討した。(結果) 6週、12週というPBC誘導初期において、NK/NKT細胞を除去した群は除去しなかった群と比較して抗体産生は低下していた。18週、24週というPBC病態完成期では、両群の抗体、IFN-g産生に差を認めなくなっていた。24週での肝臓は両群ともに胆管炎は軽微であり差を認めなかった。また、6週と12週では両群とも門脈の炎症、実質の炎症、胆管傷害、肉芽腫、胆管炎ははっきりせず、病理学的な比較は困難であった。(考察)NK/NKT細胞はPBCの病初期に抗体産生とT細胞反応性といった獲得免疫系を亢進させ病態に積極的に関与している可能性が示唆された。その一方で獲得免疫が完成された後にはNK/NKT細胞は病態に関与していない可能性が示唆された。当院外科より安定した生体肝移植における摘出肝の検体供与を受けることができているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初の交付申請書に記載したとおりに今後も推進していく方策である。研究計画の変更や問題点は認めない。
弦理論における重力相互作用について

本年度での研究を予定していたAdS/CFT対応についての研究と3次元ヤン・ミルズ理論の研究は、いずれも研究成果を論文としてまとめることが出来た。タキオン凝縮については発表された成果は無かったが、量子論的な効果の影響について現在も研究を続けている。AdS/CFT対応については、川合教授との共同研究により、一部の主張については対称性に基づく「物理的証明」を与えることに成功した。AdS/CFT対応とは、ゲージ理論に基づいて量子重力理論を構成しようという試みである。これが正しいとすれば非常に驚くべきことであるが、10年近い研究によってその正しさを示唆する証拠が多く発見され、現在では多くの研究者がその正しさを信じている。しかし、そのような対応が存在するという理論的根拠はこれまで皆無であった。我々は、超弦理論においてある種の近似的対称性の存在を示し、その帰結としてAdS/CFT対応が任意の精度で成り立つことを示した。このような研究は、AdS/CFT対応及び量子重力理論についてのさらに深い理解を得るための重要なステップであると考えられる。ヤン・ミルズ理論は素粒子同士の相互作用を記述する重要な理論であり、その性質の理解の重要性は言うまでも無い。私は福間教授らとの共同研究で3次元版の理論の解析を行い、閉じ込めなどの非摂動論的効果を記述するための手法を開発した。これは理論の対称性を最大限に生かしたものであり、くりこみによって生じる困難を回避することを可能にするものである。3次元ヤン・ミルズ理論は、現実の世界を記述する4次元理論を解析する基礎とすることが出来るため、我々の研究は理論的のみならず現実的な現象の理解にも重要な寄与を与えると考えられる。(1)行列模型によるブラックホールの記述以前の研究において、2次元ブラックホール中の弦理論が行列模型で記述できることが分かっていたが、私はこれを拡張して超対称性を持つ弦理論(Type0A理論)でも同様の記述が可能であることを示した。この研究においては特に非摂動効果に焦点をあて、弦理論による計算と行列模型による計算が一致することを確認した。ここで議論した非摂動効果は、ブラックホールの地平面近傍の情報と関係していることが期待されるため、ブラックホールの性質を解析する上で重要な役割を担うことが予想される。この研究は韓国人研究者等との共同研究である。(2)タキオン凝縮弦理論の真空の中には、「虚数質量」を持つ粒子(タキオン)が存在することがある。そのような粒子は凝縮し、真空の相転移が生じると考えられている。閉弦の理論に現れるタキオンの凝縮はまだ充分に理解されていない。私は閉弦理論のタキオンの凝縮を記述する方法を提案し、その帰結としてどのような相転移が生じるかを議論した。一般にタキオン凝縮の結果として重力を含む相互作用が強くなることが予想されるため、更なる研究のためには弦理論の強結合極限の深い理解が必要であることが明らかになった。私の今年度の研究は、絃理論におけるタキオン凝縮と言う現象の理解に向けたものでした。閉絃理論におけるタキオン凝縮は、時空構造に対する大きな効果を生じるため、絃理論における重力相互作用をより深く理解するための良い研究対象だと考えられます。私はまず、タキオン凝縮を解析するための道具の開発を試みました。開絃理論におけるタキオン凝縮には絃の場の理論が用いられ、近年大きな成功を収めていますが。閉絃の場の理論は非常に複雑な構造をしているため、実際の解析には不適切です。私はgauged linear sigma model (GLSM)として知られる2次元ゲージ理論を用いたタキオン凝縮の解析を研究し、その適用範囲を広げることに成功しました。これにより、それまでは近似的にしか分かっていなかった時空構造の変化の様子が全てのα'補正を加えても正しいことが示されました。私はまた、タキオン凝縮によって引き起こされる時空の改変について、今までよりも一般的な状況での様子を調べました。このような一般的な解析を行うには、低エネルギー有効理論を仮定して議論することが避けられないのですが、このような議論が正当化できる場合があることは知られています。私は重力場の方程式の解を系統的に調べ、タキオン凝縮がどのような時空構造を実現する可能性があるのかを示しました。ごく最近になって、私はこの研究を更に詳しく解析し、タキオン凝縮の結果としてブラックホールが生成されることを示しました。このような研究は、絃理論における真空の構造と言う、物理理論にとって最も重要な情報についての知見を得る鍵になると考えられます。

我々は、超弦理論においてある種の近似的対称性の存在を示し、その帰結としてAdS/CFT対応が任意の精度で成り立つことを示した。このような研究は、AdS/CFT対応及び量子重力理論についてのさらに深い理解を得るための重要なステップであると考えられる。ヤン・ミルズ理論は素粒子同士の相互作用を記述する重要な理論であり、その性質の理解の重要性は言うまでも無い。私は福間教授らとの共同研究で3次元版の理論の解析を行い、閉じ込めなどの非摂動論的効果を記述するための手法を開発した。これは理論の対称性を最大限に生かしたものであり、くりこみによって生じる困難を回避することを可能にするものである。3次元ヤン・ミルズ理論は、現実の世界を記述する4次元理論を解析する基礎とすることが出来るため、我々の研究は理論的のみならず現実的な現象の理解にも重要な寄与を与えると考えられる。
市場構造がもたらす性質に関するオークション理論を用いた分析

1.(多数決)投票において、投票者が正の情報量を得るためには費用がかかるような場合、投票に参加する人数が増える(従って個々の投票者にとっては自分の得た情報が結果に反映される可能性はゼロに近付いて行く)につれて、投票の結果正しい選択肢が選ばれる確率がどのような値に収束して行くか、その値と費用関数の形状との関係を探った。受け取る可能性があるシグナル(費用をかけるほどシグナルの精度が上がる)が二つのみで、かつ、どの投票者も同一の費用関数を持つような場合については、他の研究者による先行研究が存在していた。本研究により、正規ノイズが入ったシグナル(従って実数のどの値も受け取る可能性がある)などのより豊かなシグナル構造の場合についても一般にシグナルが二つの場合に還元できること及びその還元の仕方、また、投票者によって費用関数が異なることを許した場合の費用関数の分布と確率の収束先との関係が、新たに明らかになった。以上の成果は、関口洋平氏(東京大学博士課程)との論文にまとめられ、英文査読誌に投稿中である。2.東京大田市場を初め、日本の主な花卉オークションでは、通常のオランダ式のものに「マリ中」という独自の手順が追加されている。この手順の追加がオークションのパフォーマンスをどのように変えるのか、計算可能なモデルを構築し、現実的と考えられる販売個数、買い手数の範囲で数値計算を行い、評価を試みた。理論からすぐに予測されるこの手順の問題点は、必ずしもより高い評価額の買い手に花が渡らなくなることである。しかし、数値計算の結果、そのことから生じる損失は僅かなものに過ぎず、一方でその僅かな損失と引換に、オークションにかかる時間が大幅に短縮される可能性があることが、明らかになった。以上の成果については、尾川僚氏(東京大学博士課程)との論文にまとめ、日本経済学会2006年度秋季大会で報告する予定でいる。
胃病変におけるIL-1によるEGF様増殖因子とEGF受容体の発現調節に関する研究

私共は本研究で胃粘膜におけるEGF様増殖因子を介した新たなIL-1βの作用を検討し、以下の結果を得た。(2)さらにこれらの胃癌細胞株の培養上清中に放出されたTGF-αをELISA法にて測定した.培養上清中のTGF-αはphorbol esterであるPMA存在下でのみ観察され、IL-1β刺激によって培養上清中のTGF-αの増加が認められた。このことはPMAによって活性化されたPKCを介して特異的メタロプロテアーゼ(ADAM)が活性化され、それによって膜アンカー型TGF-αが膜表面より切断され培養上清中に放出されたと考えられた。このTGF-α分泌はシクロオキシゲナーゼ-2選択的阻害剤では阻害されなかった。またIL-1β刺激によって胃線維芽細胞ではEGF受容体発現の増加が認められたが、胃癌細胞株では変化は認められなかった。(3)IL-1β刺激胃線維芽細胞の培養上清をMKN28細胞に加えたところTGF-α放出の亢進が認められた。このことはIL-1β刺激胃線維芽細胞より分泌された何らかの液性因子がMKN28細胞のTGF-α放出を亢進させることを示唆していた。以上のことから胃粘膜においてIL-1βが間葉-上皮細胞間の相互作用によってTGF-αなどの様々なEGF様増殖因子を介してその生理機能を果たす可能性を示唆していた。さらに内視鏡検査時に得られたbiopsy検体を用いて正常ヒト胃粘膜の器官培養を行ったところ胃炎の程度に相関して培養上清中にTGFαの放出が認められ、現在さらに検討中である。胃粘膜において炎症性サイトカインのひとつであるInterleukin(IL)-1βは、胃粘膜細胞の障害作用以外に、胃酸分泌抑制やprostaglandin産生などの胃粘膜保護作用も有している。2.各細胞の培養上清中のTGF-αをELISA法にて測定した。MKN28細胞ではPMA処理によってTGF-αの細胞外への放出が観察され、IL-1β刺激によってTGF-α分泌が亢進した。このTGF-α分泌はシクロオキシゲナーゼ-2選択的阻害剤であるNS398やCelecoxibでは阻害されなかった。一方、胃線維芽細胞ではTGF-α分泌は認められなかった。3.IL-1β刺激胃線維芽細胞の培養上清をMKN28細胞に加えたところTGF-α放出の亢進が認められた。さらに現在私共は患者胃生検検体中のIL-1βとEGF様増殖因子を測定して両者の関係を検討予定である。胃粘膜局所において単球、マクロファージより産生された炎症性サイトカインIL-1βは、胃粘膜細胞の障害作用以外に、胃酸分泌抑制やプロスタグランジン産生などの胃粘膜保護作用も有している。このように胃粘膜においてIL-1βは様々な生理作用を果たしていると考えられている。私共は本研究で胃粘膜におけるEGF様増殖因子を介した新たなIL-1βの作用を検討した。培養ヒト胃線維芽細胞と6種類のヒト胃癌

上皮細胞株(MKN-1、-28、-74、TMK-1、NUGC-3、AZ-521)を用いてIL-1β刺激を行いEGF様増殖因子(transforming growthfactor-α(TGF-α)、heparin-binding EGF-like growthfactor (HB-EGF)、amphireguli (AR))の発現をTaqMan probeを用いたreal time PCR法にて検討した。その結果、5種類の胃癌上皮細胞株においてIL-1β刺激後TGF-α、AR、HB-EGF発現の増加が認められた。一方、胃線維芽細胞ではTGF-α発現は認められず、IL-1β刺激後HB-EGF発現が著明に増加した。さらにこれらの胃癌細胞株の培養上清中に放出されたTGF-αをELISA法にて測定した。培養上清中のTGF-αはphorbol esterであるPMA存在下でのみ観察され、IL-1β刺激によって培養上清中のTGF-αの増加が認められた。このことはPMAによって活性化されたPKCを介して特異的メタロプロテアーゼ(ADAM)が活性化され、それによって膜アンカー型TGF-αが膜表面より切断され培養上清中に放出されたと考えられた。またIL-1β刺激によって胃線維芽細胞ではEGF受容体発現の増加が認められたが、胃癌細胞株では変化は認められなかった。以上のことから胃粘膜の間葉及び上皮細胞において炎症性サイトカインであるIL-1βがEGF様増殖因子であるTGF-α, HB-EGF, ARを介してその生理機能を果たす可能性を示唆していた。さらに内視鏡検査時に得られたbiopsy検体を用いて正常ヒト胃粘膜の器官培養を行ったところ胃炎の程度に相関して培養上清中にTGFαの放出が認められた。私共は2003年5月のアメリカ消化器病学会で以上の結果を発表予定である。
『呉語読本』音声データの作成と公開

1.『呉語読本』音声データ作成の準備研究代表者の石汝杰が、7-8月に中国へ渡航し、『呉語読本』の一部について録音を行った。しかし、音声の著作権の問題の解決、および音声データの整理に、さらに時間を要するため、公開には至らなかった。2.『呉語読本』増訂本作成の準備『呉語読本』初版本に未収録で、呉語文献として重要なものを選定し、校訂のうえ電子テキスト化し、注釈作成の準備を行った。この増訂本については、平成16年度の出版をめざして、科学研究費研究成果公開費を申請した。また、これ以外にも、呉語資料を発掘・収集すべく、関連する資料の調査を行った。3.研究会の定期的開催本科研費メンバーを中心に、九州大学の大学院生等を含めて、呉語の研究会を毎週水曜日午後に、定期的に継続して開催した。研究会において上記2の作業を行うとともに、『呉語読本』初版本の一部を日本語に翻訳した。常時参加者は、平田直子(学術振興会特別研究員・北九州大学非常勤講師)、朴春麗(九州大学大学院生)。この研究会は、本研究課題を推進する母体であるとともに、若手の呉語研究者を育成する格好のトレーニングの場ともなった。4.研究成果報告書の作成以上の研究活動の成果として、論文・翻訳編と資料編の2冊からなる研究成果報告書を作成し、呉語研究者・研究機関に送付した。第一冊に収録した論文は、《江蘇新字母》同音字表、川沙方言同音字表(以上、石)、古代漢語文法研究における時期区分の再設定(西山)、呉語小説における内面引用(中里見)、『古今韻表新編』における中古上声全濁音字について(平田)ほかの各編。翻訳は『九尾亀』第163回(一部)、『九美図』第28回除夕、『鉢中蓮』第8出の各編、さらに石による呉語文献書目札記を収めた。第二冊は「蘇州評弾記言記譜」で、蘇州評弾を歌詞と楽譜によって再現するものであり、音声データの書面版ともいえる貴重な記録である。1.『呉語読本』テキストの校訂1.1.初版本におけるテキストの誤りを正すとともに、改めて原本との校訂を進めた。1.2.文献調査により新たに検出した用例等をもとに、注釈の増補・改訂を進めた。1.3.テキスト解題を増補・改訂するとともに、本文に日本語試訳を付す準備を進めた。2.『呉語読本』音声データ作成の準備研究代表者の石汝杰が、3月に中国へ渡航し、録音協力者の選定、下読み等、録音に必要な準備作業を行った。またプロの文芸工作者に依頼して現代の表演記録を録音するために、事前の打ち合わせを行った。3.『呉語読本』の増補と、関連する資料調査初版本に増補すべきテキストとして、呉語方言を一部に含む明末の白話小説『型世言』の該当部分を、校訂のうえ電子テキスト化し、注釈作成の準備を行った。また、これ以外にも、呉語資料の発掘・収集すべく、関連する資料の調査を行った。4.研究会の定期的開催本科研費メンバーを中心に、九州大学の大学院生等を含めて、呉語の研究会を毎週火曜日午後に、定期的に継続して開催した。

研究会において上記1および3の作業を行うとともに、他の呉語資料である『山歌』の講読も行った。常時参加者は、平田直子(学術振興会特別研究員・北九州大学非常勤講師)、朴春麗、羅経立(ともに九州大学大学院生)。この研究会は、本研究課題を推進する母体であるとともに、若手の呉語研究者を育成する格好のトレーニングの場ともなっている。1.『呉語読本』音声データ作成の準備研究代表者の石汝杰が、7-8月に中国へ渡航し、『呉語読本』の一部について録音を行った。しかし、音声の著作権の問題の解決、および音声データの整理に、さらに時間を要するため、公開には至らなかった。2.『呉語読本』増訂本作成の準備『呉語読本』初版本に未収録で、呉語文献として重要なものを選定し、校訂のうえ電子テキスト化し、注釈作成の準備を行った。この増訂本については、平成16年度の出版をめざして、科学研究費研究成果公開費を申請した。また、これ以外にも、呉語資料を発掘・収集すべく、関連する資料の調査を行った。3.研究会の定期的開催本科研費メンバーを中心に、九州大学の大学院生等を含めて、呉語の研究会を毎週水曜日午後に、定期的に継続して開催した。研究会において上記2の作業を行うとともに、『呉語読本』初版本の一部を日本語に翻訳した。常時参加者は、平田直子(学術振興会特別研究員・北九州大学非常勤講師)、朴春麗(九州大学大学院生)。この研究会は、本研究課題を推進する母体であるとともに、若手の呉語研究者を育成する格好のトレーニングの場ともなった。4.研究成果報告書の作成以上の研究活動の成果として、論文・翻訳編と資料編の2冊からなる研究成果報告書を作成し、呉語研究者・研究機関に送付した。第一冊に収録した論文は、《江〓新字母》同音字表、川沙方言同音字表(以上、石)、古代漢語文法研究における時期区分の再設定(西山)、呉語小説における内面引用(中里見)、『古今韻表新編』における中古上声全濁音字について(平田)ほかの各編。翻訳は『九尾亀』第163回(一部)、『九美図』第28回除夕、『鉢中蓮』第8出の各編、さらに石による〓語文献〓目礼記を収めた。第二冊は「〓州評弾記言記譜」で、蘇州評弾を歌詞と楽譜によって再現するものであり、音声データの書面版ともいえる貴重な記録である。