hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Ku80ユビキチンリガーゼRNF126の機能および制御解析

Ku70/Ku80複合体はDNA二本鎖切断部位に直接結合し、修復複合体のリクルートに機能する非相同末端修復を促進する重要な因子であるが、DNA末端との結合様式より修復完了前にDNAから外れることが重要となる。その役割を担う因子として、研究代表者らはユビキチンリガーゼRNF126がKu80をユビキチン化することにより、DSB修復を促進する重要な役割を果たしていることを発見し報告した(Ishida N et al. Mol Cell Biol. 2017;37: e00347-16)。RNF126依存性タンパク質分解が果たす役割をマウス個体レベルで解析するために、RNF126ノックアウトマウスの解析を行った結果、RNF126タンパク質が高い発現量を示す胸腺と生殖器において、T細胞と精子の減少がそれぞれ観察された。現在、より詳細な解析を進行中である。また、RNF126ノックアウトマウスから胎仔線維芽細胞を作製し、RNF126欠損細胞を得た結果、これまでにヒト細胞株を用いて得られた表現型がノックアウトマウス初代細胞でも再現できることを確認した。更に、細胞タイプ特異的RNF126ノックアウトマウスを作製した結果、RNF126を欠損したセルトリ細胞は精子形成サポートできないことが明らかになりつつある。以上の結果は、RNF126欠損により損傷DNAの修復が不完全であることに起因すると考えられ、RNF126は胸腺におけるT細胞数の維持、精巣における生殖細胞の発生において重要な役割を果たしていることが予想される。マウス個体レベルにおけるRNF126依存性タンパク質分解が果たす役割を明らかにするために、RNF126のノックアウトマウス・コンディショナルノックアウトマウスを作製し、全身(各臓器)の表現型解析を行った結果、観察された胸腺と生殖器における表現型の詳細な解析が進行中である。以上については予想通り、あるいはそれ以上に進んでいる。しかし、RNF126を中心としたKu80ユビキチンリガーゼ遺伝子のヒト・ゲノム多型解析については、ノックアウトマウス・コンディショナルノックアウトマウスの解析を優先させたことにより、遅延している状況である。1 RNA126ノックアウトマウスの解析精細管において分化段階の特定の細胞に死細胞が確認されたため、マーカータンパク質に対する抗体で検出する。胎仔の発達段階における各マーカータンパク質の定量解析を行う。2 RNA126コンディショナルノックアウトマウスの解析セルトリ細胞特異的にCreリコンビナーゼを発現するTgマウス(Amh-Cre)と交配し、セルトリ細胞特異的RNF126 KOマウスを作製して、その表現型解析を行った。次年度は精原細胞で特異的にCreリコンビナーゼを発現するTgマウス(Stra8-Cre)と交配し、精原細胞特異的RNF126 KOマウスを作製してその表現型を解析・比較する。2 RNF126を中心としたKu80ユビキチンリガーゼ遺伝子のヒト・ゲノム多型の探索の続きを行う。3ヒト単核球由来株化細胞を用いた表現型解析:(1) CRISPR/Cas9によるレアバリアント変異導入、(2)リアルタイムPCRによるmRNA定量、(3)イムノブロットによるタンパク質(ユビキチンリガーゼ、およびKu70/Ku80)発現量・安定性解析、(4)表現型解析(IR照射後のタイムコースにおけるDNA損傷修復能の比較等)について行う。その役割を担う因子として、研究代表者らはユビキチンリガーゼRNF126がKu80をユビキチン化することにより、DSB修復を促進する重要な役割を果たしていることを発見し報告した。RNF126依存性タンパク質分解が果たす役割をマウス個体レベルで解析するために、RNF126ノックアウトマウスを作製し、最初に全身(各臓器)の表現型解析を行った結果、胸腺と生殖器において表現型が観察された。現在、これらの臓器にフォーカスして詳細な解析を進行中である。また、RNF126ノックアウトマウスから胎仔線維芽細胞を作製し、RNF126欠損細胞を得、これまでにヒト細胞株を用いて得られた表現型がノックアウトマウス初代細胞でも再現できるかを解析中である。更に、セルトリ細胞特異的RNF126ノックアウトマウスを作製し、RNF126ノックアウトマウスの精巣における表現型との比較を行っており、RNF126を中心としたKu80ユビキチンリガーゼ遺伝子のヒト・ゲノム多型については探索を進めている。ユビキチンリガーゼRNF126がKu80をユビキチン化することにより、DSB修復を促進する重要な役割を果たしていることを発見・報告できたこと[Ishida N, Nakagawa T, Iemura SI, Yasui A, Shima H, Katoh Y, Nagasawa Y, Natsume T, Igarashi K, Nakayama K. Ubiquitylation of Ku80 by RNF126 Promotes Completion of Nonhomologous End Joining-Mediated DNA Repair. Mol Cell Biol. 2017;37: e00347-16.]、

マウス個体レベルにおけるRNF126依存性タンパク質分解が果たす役割を明らかにするために、RNF126のノックアウトマウス・コンディショナルノックアウトマウスを作製し、全身(各臓器)の表現型解析を行った結果、観察された胸腺と生殖器における表現型の詳細な解析が進行中である。以上については予想通り、あるいはそれ以上に進んでいる。しかし、RNF126を中心としたKu80ユビキチンリガーゼ遺伝子のヒト・ゲノム多型解析については、倫理審査申請の遅れとノックアウトマウス・コンディショナルノックアウトマウスの解析を優先させたことにより、遅延している状況である。一方で、研究代表者の血液由来細胞よりリンパ芽球細胞(不死化B細胞)を作製し、RNF126タンパク質の発現を確認出来ているため、総合的には研究課題は概ね順調に進展していると考えられる。Ku70/Ku80複合体はDNA二本鎖切断部位に直接結合し、修復複合体のリクルートに機能する非相同末端修復を促進する重要な因子であるが、DNA末端との結合様式より修復完了前にDNAから外れることが重要となる。その役割を担う因子として、研究代表者らはユビキチンリガーゼRNF126がKu80をユビキチン化することにより、DSB修復を促進する重要な役割を果たしていることを発見し報告した(Ishida N et al. Mol Cell Biol. 2017;37: e00347-16)。RNF126依存性タンパク質分解が果たす役割をマウス個体レベルで解析するために、RNF126ノックアウトマウスの解析を行った結果、RNF126タンパク質が高い発現量を示す胸腺と生殖器において、T細胞と精子の減少がそれぞれ観察された。現在、より詳細な解析を進行中である。また、RNF126ノックアウトマウスから胎仔線維芽細胞を作製し、RNF126欠損細胞を得た結果、これまでにヒト細胞株を用いて得られた表現型がノックアウトマウス初代細胞でも再現できることを確認した。更に、細胞タイプ特異的RNF126ノックアウトマウスを作製した結果、RNF126を欠損したセルトリ細胞は精子形成サポートできないことが明らかになりつつある。以上の結果は、RNF126欠損により損傷DNAの修復が不完全であることに起因すると考えられ、RNF126は胸腺におけるT細胞数の維持、精巣における生殖細胞の発生において重要な役割を果たしていることが予想される。しかし、RNF126を中心としたKu80ユビキチンリガーゼ遺伝子のヒト・ゲノム多型解析については、ノックアウトマウス・コンディショナルノックアウトマウスの解析を優先させたことにより、遅延している状況である。1 RNA126ノックアウトマウス・コンディショナルノックアウトマウスの解析(1)胸腺の表現型解析:胸腺T細胞の分化、及び脾臓B細胞の分化(フローサイトメーターを用いた細胞分化解析)。
内因性ぶどう膜炎におけるヒト内在性レトロウイルスの発現

内因性ぶどう膜炎患者および健常人から採血し、リンパ球を分離した後、DNAを抽出した。制限酵素EcoRI、HindIIIで消化し、RIでラベルしたHRES-1、EVR3をプローブとしてhybridizationし、制限酵素断片長多形解析(RFLP)を行った。その結果、ぶどう膜炎患者と健常人とでは、一部に異なる部分がみられた。現在、DNA sequencingを行うために、DNAからライブラリーを作製し、上記プローブを用いて、スクリーニングを行い、クローニングしていく準備を行っている。次に、病変局所部位で内在性レトロウイルスが発現しているかどうかを検討した。内因性ぶどう膜炎患者のリンパ球だけでなく、ベーチェット病患者では口腔内アフタの粘膜組織を採取後、RNAを抽出し、HRES-1、IRF-1、IRF-2、SMT-1、25ASの各プライマーを用いて、RT-PCRを行った。一部のベーチェット病患者のリンパ球およびアフタ粘膜組織でHRES-1に陽性のバンドを示す患者がみられた。しかし、陰性の患者も多く、転写が行われていない患者もいることが分かった。また、2例の原因不明のぶどう膜炎患者の白内障手術時に得られた虹彩からRNAを抽出して、同様にRT-PCRを行ったが、ともに陰性であった。2例とも炎症が沈静化していたため、発現がみられなかった可能性がある。今後やはり活動性のあるぶどう膜炎患者から、同意が得られたなら前房水を採取し、RT-PCRを行いたい。
カルパインの構造機能相関解析による筋蛋白質ターンオーバー分子機構の研究

生体内の全ての蛋白質は、固有の寿命を持ちターンオーバー(代謝回転)している。その半減期は数週間から数分と、極めて多様性に富む。即ち、各蛋白質を特異的に分解系へ移行させる機構が存在する。また、多くの構造・機能蛋白質は、プロセシング・プロテアーゼによる部分分解でその構造、機能及び寿命を変化(活性化、脱抑制、特異性変化、短寿命化など)させる。この制御機構は全ての細胞系に存在し、生理的に極めて重要である。本研究ではこの蛋白質ターンオーバーの分子機構を明らかにし、最終的に食品工業的な応用を目指すことを目的とした。細胞内プロセシング・プロテアーゼの代表がCa^<2+>依存性システインプロテアーゼ「カルパイン」である。本研究では、カルパインに研究の焦点を当てて解析を行い、骨格筋をモデル系として、カルパインに焦点を絞って筋蛋白質ターンオーバーの分子機構を解析していき、その後食肉や微生物での応用を模索した。まず、前年度までに筋細胞をモデルとして解析したデータを基に既報の知見を総合し、選択的蛋白分解の根底にある分子機構を推定することを試みた。そして、そのモデルを筋細胞や他の組織由来の細胞において検証することを試みた。さらに、酵母、カビの系においても、PalBやCpllpなどのカルパインホモログが同様の機構で蛋白分解を制御している可能性を検討した。そして、選択的蛋白分解の一般則を明確にし、食品工業的に応用できるレベルに改良することを試みた。その結果、カルパインが筋蛋白質の分解と生合成系の重要なモジュレーションを行っていることを明らかとし、その不調が筋ジストロフィー発症の大きな原因となることが判明した。生体内の全ての蛋白質は、固有の寿命を持ちターンオーバーしている。その半減期は数週間から数分と、極めて多様性に富み、各蛋白質を特異的に分解系へ移行させる機構が存在する。そして、多くの構造・機能蛋白質は、プロセシング・プロテアーゼによる部分分解でその構造、機能及び寿命を変化させる。まず、自己消化活性が極めて強力なために寿命が10分以下という、骨格筋特異的カルパイン(p94)それ自身の寿命制御機構を解析した。p94がこのように短命であること、それ自身がプロテアーゼであること、多くの筋蛋白質は長寿命であることなどを考え合わせると、p94の分解制御機構を明確にすることで、多くの知見が得られることが予想される。我々は、1)p94のin vitroでの寿命は10分以下だが、in vivoではおそらくコネクチンとの相互作用によって分解が抑制されている、2)p94のドメイン構造の中でIS1、IS2領域が自己消化の制御に関与しており、これらの領域の一方を欠失すると分解が抑制される、3)筋肉には、alternative splicingによりIS1やIS2が欠失したp94も発現している、4)p94の自己消化は、分子内反応と分子間反応が同時に起こっている、ことを見出した。さらに、肢帯型筋ジストロフィー症の患者において100種類以上の病原性変異が同定されていることを利用して、(1)p94の分解をin vivoで抑制する機構の解析、(2)筋原繊維におけるコネクチンを中心とした様々な機能蛋白質の相互作用の同定を試みた。その結果、MURF-1やUBC9などの興味深い分子がp94-コネクチン系に相互作用することを見出した。

その半減期は数週間から数分と、極めて多様性に富む。即ち、各蛋白質を特異的に分解系へ移行させる機構が存在する。また、多くの構造・機能蛋白質は、プロセシング・プロテアーゼによる部分分解でその構造、機能及び寿命を変化(活性化、脱抑制、特異性変化、短寿命化など)させる。この制御機構は全ての細胞系に存在し、生理的に極めて重要である。本研究ではこの蛋白質ターンオーバーの分子機構を明らかにし、最終的に食品工業的な応用を目指すことを目的とした。細胞内プロセシング・プロテアーゼの代表がCa^<2+>依存性システインプロテアーゼ「カルパイン」である。本研究では、カルパインに研究の焦点を当てて解析を行い、骨格筋をモデル系として、カルパインに焦点を絞って筋蛋白質ターンオーバーの分子機構を解析していき、その後食肉や微生物での応用を模索した。まず、前年度までに筋細胞をモデルとして解析したデータを基に既報の知見を総合し、選択的蛋白分解の根底にある分子機構を推定することを試みた。そして、そのモデルを筋細胞や他の組織由来の細胞において検証することを試みた。さらに、酵母、カビの系においても、PalBやCp11pなどのカルパインホモログが同様の機構で蛋白分解を制御している可能性を検討した。そして、選択的蛋白分解の一般則を明確にし、食品工業的に応用できるレベルに改良することを試みた。その結果、カルパインが筋蛋白質の分解と生合成系の重要なモジュレーションを行っていることを明らかとし、その不調が筋ジストロフィー発症の大きな原因となることが判明した。
次世代ハイブリッドキャパシタに関する研究

電気二重層キャパシタ(EDLC)は10 Wh/L程度とエネルギー密度が小さく、小・中型用途に限られている。キャパシタのエネルギー密度が現行の23倍になると、再生可能エネルギーの蓄電用途に使用可能となる。本研究では、これまでにないカテゴリーのキャパシタ高性能化を目指し、ナノ酸化物/ナノ炭素材料複合体電極を創製し、EDLC級の高速化を達成した。さらに、創製した複合電極を活性炭や他の複合電極と組み合わせ、次世代ハイブリッドキャパシタを構築し、性能の検証を行った。実験室レベルのラミネートセルによる試験結果では、EDLC比較でエネルギー密度3倍以上(活物質重量当たり)を達成可能であることを確認した。平成25年度は次世代ハイブリッドキャパシタ用正・負極電極材料の作製に取り組んだ。負極材料としてスピネル型チタン酸リチウム(Li4Ti5O12;LTO)の理論容量175 mAh/gを超えるチタン酸水素(H2Ti12O25:HTO,理論容量300 mAh/g)及びブロンズ型二酸化チタン(TiO2(B),理論容量335 mAh/g)に注目し、当研究室独自の超遠心ナノハイブリッド技術(UC処理)を利用してカーボンナノファイバー(CNF)との複合体の作製方法確立を目的とした。HTO/CNF複合体はチタン酸カリウム/CNF前駆体からイオン交換による手法が有望であったがKTOの作製時に様々な不純物相が生じ、単相のHTO/CNF複合体を得ることが困難であったた。そこでTiO2(B)/CNF複合体の作製に注力した。検討の結果水溶性4核チタン錯体を利用してUC処理と水熱合成の組み合わせにより、ナノ粒子サイズのTiO2(B)をCNF上に高分散担持する手法を確立した。得られた複合体の電気化学特性は1C(=1時間放電)で243 mAh/g、300C(=12秒放電)の高レートにおいても151 mAh/gを発現し、LTO/CNF複合体を上回る性能を示した。また、正極材料ではオリビン型リン酸マンガン・鉄リチウム(LFMP)/CNF複合体及びオリビン型リン酸バナジウムリチウム(LVP)/SGCNT複合体の作製に着手した。LFMP/CNFについては鉄とマンガンが固溶化した単相の複合体の作製に成功し、10C以上のレートで既報の報告より高い容量を発現したが、キャパシタ正極として一般的な活性炭と同等の性能であり、今後更に高出力化を図る必要がある。LVP/SGCNT複合体については様々な検討の結果、UC処理により酸化バナジウム(V2O3)/SGCNT複合体を前駆体として合成し、この前駆体にリチウム源を添加して再度UC処理及び焼成過程を経る手法で複合体の合成手法を確立した。この複合体の電気化学特性はLMFP/CNFを超える発現容量を示すことがわかった。現在は実用的観点から担持炭素材料をCNFに変更した複合体の合成手法の確立を目指している。平成26年度は、まずナノハイブリッドキャパシタ負極材料としてこれまでに作製手法を確立したナノ結晶TiO2(B)/カーボンナノファイバー(CNF)複合体について、CNF上のTiO2(B)ナノ結晶粒子の分散度定量化を可能とし、分散度を指標としてナノ結晶を凝集することなく高分散担持する手法を確立した。これによりTiO2(B)の利用率を上げて発現容量を更に向上させることに成功した。また、担体ナノカーボンとしてより安価で汎用性のある高比表面積カーボンブラック(ケッチェンブラック;KB)を用いた複合体の作製を試みた。その結果、TiO2(B)とKBの重量比が60:40の複合体の作製に成功し、現状では嵩密度の高いKBに起因する単位面積あたりの複合体重量が少ない電極ではあるがCNFと同程度以上であることを確認している。正極材料については平成25年度に引き続き、担体ナノカーボンはCNFに絞り、活物質としてオリビン型リン酸鉄リチウム(LFP)とオリビン型リン酸バナジウムリチウム(LVP)を用いた複合体の作製及びそのエネルギー密度向上を検討した。LFP/CNF複合体についてはMgをドープすることで若干の出力特性向上が見られたがキャパシタ用途としては不十分であり、今後は担体ナノカーボンの選択や電極作製手法の点からの検討が必要であることがわかった。一方、LVP/CNF複合体については合成スキームを見直し、先にCNF上にバナジウム酸化物を担持させ、その後リン酸及びリチウム源を加えることでキャパシタ用途に十分な高出力特性を有するナノ結晶LVP/CNF複合体の作製に成功した。平成27年度は、26年度までに作製手法を確立したナノハイブリッドキャパシタ負極材料ナノ結晶TiO2(B)/ナノ炭素複合体の活物質利用率を向上するためにケッチェンブラック(KB)との複合体を空気下焼成した造粒体を作製した。焼成試料について物性解析を行った結果、ナノ結晶TiO2(B)粒子上に約1nmの非晶質炭素と考えられる被膜が生成していることを見出した。本試料の電気化学特性はKB複合体の場合と同等でありながらKBが減少した分、実質的な電極活物質量が増加し、さらに本被膜の生成によりナノ結晶の凝集を防いでいることを見出した。次に本試料を用いて正極活性炭と組み合わせた実験室レベルのハイブリッドキャパシタセルを作製し、その電気化学特性を評価した。解析の結果、セルのサイクル特性が初期エージング処理条件に大きく依存することが分かった。

その影響を及ぼす原因としては表面固体被膜の生成状態であることまでを解明している。正極材料については平成26年に引き続き担体ナノ炭素として多層カーボンナノチューブ(MWCNT)、活物質としてナシコン類似型リン酸バナジウムリチウム(LVP)を用いた複合体の出力特性向上とエネルギー密度向上を検討した。作製方法の再検討によりLVP/MWCNT複合体の出力として充放電7.5秒かつ活性炭の2倍に相当する充放電容量を達成し、キャパシタ用途に十分な高出力特性を有するナノ結晶LVP/CNF複合体の作製に成功した。一方で課題として長期サイクル試験において結晶中のバナジウム溶出に起因する容量減少が発生することが分かった。研究実施概要に示したとおり、負極材料として作製したTiO2(B)については複合炭素量を大幅に減少させることが可能となり実質的な電極当たりのエネルギー密度を向上させることが可能となった。さらに活性炭を正極としたキャパシタデバイスを実験室レベルで構築し、その電気化学特性の評価を行える状況に達した。その上で実用化レベルとして考えるべき課題点を見出し、現在はその対策を検討している。また、正極材料についてはLVP/MWCNT複合体で活性炭と同等以上の出力特性、且つエネルギー密度としては活性炭2倍の発現容量を達成しキャパシタ用途として十分な材料であることを確認した。したがって、正・負極のナノハイブリッドキャパシタ電極が作製可能となりつつあるため、おおむね順調に研究が展開されている。負極材料については、さらなる高エネルギー密度化・高電圧化を達成するため、バナジン酸リチウムLi3VO4(LVO)に着目し、ナノ炭素材料との複合体の作製およびキャパシタ負極特性の評価に取り組んだ。液相合成により、LVO粒子を多層カーボンナノチューブ(MWCNT)と複合化する事に成功した。高分解能透過電子顕微鏡(HRTEM)観察から、MWCNT中に2050nmのLVOナノ粒子が高分散担持されている事を確認した。本複合体を用いたハーフセルを作製し、充放電特性を評価した結果、下限電位0.1V vs. Li/Li+でLVO単位グラム当たり400mAhの容量を発現する事、さらに20A/gの高電流密度においても低電流密度時(0.1A/g)の50%以上の容量を維持する事を確認した。一方で本複合体は充放電時における電圧ヒステリシスが0.5V以上あるという問題点を有することが判明した。正極材料については、平成27年度に合成法を確立したモノクリニック型リン酸バナジウムリチウム(LVP)/MWCNT複合体を用い、負極にチタン酸リチウム(LTO)電極を使用したハイブリッドキャパシタを構築し、基礎電気化学特性を検討した。負極にリチウムメタルを用いたハーフセルではサイクル特性は安定していたが、LTO電極を用いたフルセルではサイクル特性が劣化することを確認した。この劣化原因は充放電過程におけるLVP結晶中のバナジウムが溶出し、負極界面で析出するためであることを充放電後のX線光電子分光法およびHRTEM観察から推察した。この課題に対し、AlPO4、MgOなどを用いた表面コーティングによりLVP/MWCNT複合体を用いたハイブリッドキャパシタのサイクル特性向上を検討した。その結果表面コーティングが充放電サイクルの劣化抑制に効果的であることを見出した。
擬似ブラインド電子透かしを用いた安全で使いやすいデジタルコンテンツ取引システム

近年、映像や書籍など、あらゆるマルチメディアコンテンツのデジタル化が進んでいる。その一方で、デジタルコンテンツの不正利用が後を絶たず、著作権を侵害した犯罪は増加の一途を辿っている。この問題を解決すべく、メッセージをコンテンツに秘匿する電子透かし技術があるが、その多くはコンテンツ提供者にのみ安全であるが、取得者の安全性は考慮されていない。本研究費により研究に必要な機材を購入し、プログラム作成補助により、研究のコアとなる検証結果を出すことが出来た。また、それらの機材や作成したプログラムを用いて研究成果を国際会議等で発表した。
主観的整合機構に基づくマルチモーダル発達メカニズムの構成と理解

本研究の目的は,構成的手法によりマルチモーダル発達メカニズムを理解することであり,そのメカニズとして,主観的整合機構に基づくマルチモーダル情報の統合メカニズムを提案している,本年度は,提案メカニズムの実世界での検証のためのロボットプラットフォームの開発(A)と,実ロボットの学習のための新たなメカニズムの構成に着手した(B).(A)昨年度までの取り組みにより,構造的には乳児と同様に発声可能なロボットを開発した.しかしながら,ロボットの発声は,機構的には不十分であり,実験プラットフォームとして用いるためには改良する必要があった.これに対し,本年度は,機構的な乳児様発声の実現を目指し,そのための機構として,乳児の声帯の骨格構造を参考にした声帯機構を構築した,一連の成果は,国内外の学会において報告し, IEEE ICDL-EpiRob 2013においては, Best Poster Alwardを受賞した.(B)これまでの取り組みでは,マルチモーダル情報を離散的な情報として扱い,それら離散的な情報間の対応学習メカニズムとして,マルチモーダル発達メカニズムを構成した.しかし,実ロボットにおいては,センサやアクチュエータなどの情報は連続であるため,連続情報を離散化できるメカニズムが望まれる.また,人においても,視覚,聴覚,調音運動の情報は,個別に予め概念化されているわけではなく,発達とともに相互促進的に各モダリティの情報を概念化していると考えられる.そこで本年度は,各モダリテイ内の情報の相互促進的な離散化とモダリテイ間の対応学習を同時に実現するメカニズムを構成し,実ロボットを用いた学習実験により,その有効性を確認した.この成果は,国内研究会において報告している.(抄録なし)我々人は,様々な感覚や運動を駆使し,状況に応じて適切に自身の行動を決定しているが,これがどのようなメカニズムによって学習発達可能かは定かではない.本研究では,構成的手法により,主観的整合機構に基づくマルチモーダル情報の統合メカニズムを構成し,この過程の理解を目的としている.これに対し,本年度は,基本的なメカニズムの構成とシミュレーションでの有効性検証(A),さらに,メカニズムの実世界での検証を可能にするロボットプラットフォームの開発に着手した(B).(A)外界からのマルチモーダルな感覚運動刺激を現状での自身の信念によって統合し,学習に利用する主観的整合機構を構成し,その有効性を乳児と同様の環境を想定した計算機シミュレーションにより確認した.シミュレーションでは,発達心理学の分野で報告されている乳児に応じる養育者の行動(模倣や教示の割合)を計算機上に再現して実験を行った.しかしながら,乳児が実際に観測するマルチモーダルな感覚運動刺激を計算機上で完全に再現することは困難であるので,構成したメカニズムの有効性を実世界で検証する必要がある.(B)そこで,実世界での検証を可能にするための実ロボットの開発に取り組んだ.想定しているマルチモーダルな感覚運動は,視覚,聴覚,調音運動であるので,それらを観測可能なロボットの実現を目指した.乳児の解剖生理学的な報告をもとに,それと同様の調音器官を構成し,乳児と同様の調音運動が可能なロボットを構築した.ロボットの発声性能を評価した実験により,ロボットが構造的には乳児と同様の発声が可能であることを確認した.本研究の目的は,構成的手法によりマルチモーダル発達メカニズムを理解することであり,そのメカニズとして,主観的整合機構に基づくマルチモーダル情報の統合メカニズムを提案している,本年度は,提案メカニズムの実世界での検証のためのロボットプラットフォームの開発(A)と,実ロボットの学習のための新たなメカニズムの構成に着手した(B).(A)昨年度までの取り組みにより,構造的には乳児と同様に発声可能なロボットを開発した.しかしながら,ロボットの発声は,機構的には不十分であり,実験プラットフォームとして用いるためには改良する必要があった.これに対し,本年度は,機構的な乳児様発声の実現を目指し,そのための機構として,乳児の声帯の骨格構造を参考にした声帯機構を構築した,一連の成果は,国内外の学会において報告し, IEEE ICDL-EpiRob 2013においては, Best Poster Alwardを受賞した.(B)これまでの取り組みでは,マルチモーダル情報を離散的な情報として扱い,それら離散的な情報間の対応学習メカニズムとして,マルチモーダル発達メカニズムを構成した.しかし,実ロボットにおいては,センサやアクチュエータなどの情報は連続であるため,連続情報を離散化できるメカニズムが望まれる.また,人においても,視覚,聴覚,調音運動の情報は,個別に予め概念化されているわけではなく,発達とともに相互促進的に各モダリティの情報を概念化していると考えられる.そこで本年度は,各モダリテイ内の情報の相互促進的な離散化とモダリテイ間の対応学習を同時に実現するメカニズムを構成し,実ロボットを用いた学習実験により,その有効性を確認した.この成果は,国内研究会において報告している.本研究では,マルチモーダル発達メカニズムの構成的理解を目指している.本年度は,そのメカニズムを構成し,計算機シミュレーションにより構成したメカニズムの有効性を確認した.その成果は,ロボット系の学術雑誌で報告しており,期待通りに研究が進展したと言える.今後は実世界での検証が必要であるが,その準備も進めており,検証で使用するためのロボットの開発にも着手している.その成果は,既に国内外の研究会で報告している.前年度は,基本的なメカニズムの構成とシミュレーションでの有効性検証,メカニズムの実世界での検証を可能にするロボットプラットフォームの開発に着手した.これを踏まえて,今後(次年度)は,開発途中であるロボットプラットフォームを改良し(I),さらに,それを用いて,構成したメカニズムの有効性を実世界で検証すること(II)が必要である.

具体的に(I)では,現状のロボットに,人の発声時と同様の機構(自由度構成やアクチュエーション)を実装し,運動制御的に乳児と同様の発声が可能となるよう改良する.(II)では,これまでの研究で構成したメカニズムをロボットに実装する.そして,マルチモーダルな感覚運動学習が必要であるタスクを想定した学習実験を実施することで,構成したメカニズムの有効性を実世界で検証する.(抄録なし)
胎児拍動流ECMOの効果:カテコーラミン及び一酸化窒素系への影響

週令120-130日の妊娠羊8頭に帝王切開を行い、その胎仔に無呼吸下に送脱血管を総頚動脈、内頚静脈に挿入後、各4頭にそれぞれ定常流(定常群)及び拍動流VA-ECMO(拍動群)を100ml/kg/min.の流量にて60分行った後、L-NMMA(1mg/kg)を静注し、更に約60分各種パラメータを計測した。尚、胎仔の心拍数が150/分以上となることが多いため、拍動流ECMOは心拍数2に対し拍動1の割合で行った。動脈血pHは開始後60分で定常群が低値を示し、L-NMMA投与後その低下は進行した。Base ExcessもpHと同様の傾向を示し、L-NMMA投与後、定常群での低下がみられた。心拍数は両群間に差はなかったが、最高血圧は拍動群が高値を示した。L-NMMA投与直後にはモニター上、最高血圧の上昇がみられたが、その30分後には上昇は明かでなかった。上行大動脈血流量は開始後60分で定常群がやや低値を示したが、L-NMMA投与後、定常群での低下は顕著となった。肺動脈血流量は開始後60分までは差がなく、L-NMMA投与後、定常群の低下が顕著となった。左腎動脈血流量は拍動群が高値を示し、L-NMMA投与後も同様であったが、L-NMMA投与前に比し低下傾向がみられた。腎組織血流量は開始60分後に拍動群が高値を示した。L-NMMA投与後も、60分後に拍動群が高値を示した。血漿ノルアドレナリンは両群間に差がなかったが、L-NMMA投与後は定常群が高値を示した。血漿アドレナリンは開始時に比し漸減傾向を示し、両群間に差はみられなかった。以上より胎児VA-ECMOにおける拍動流ECMO有用性が示され、無呼吸状態の胎児の呼吸循環状態の維持に十分な役割を果たすものと思われた。また胎児期の循環においても一酸化窒素(NO)系が生理的に重要な役割を果していることが示された。これまでに幼犬を用いたシュミレーション実験を重ね、本実験に着手してきた。当初、心拍出量の測定には気管チューブ先端に探索子を有する超音波流量計の使用を予定していたが、測定値の再発現性にやや難点があり、胸骨正中切開の上、直接大動脈に探索子を装着する方法に変更した。心拍出量の測定方法を変更することで、胸部切開を必要とすることになったが、当初心配された出血の影響も比較的少なく、正確に上行大動脈血流量を測定が可能となった。また肺動脈及び動脈管に探索子を装着することで、これらの血流量の測定も可能となった。本実験では週令120-130日の妊娠シバ山羊4頭に帝王切開を行い、その胎仔各2頭にそれぞれ定常流及び拍動流VA-ECMOを100ml/kg/min.の流量にて6時間行った。心拍数,動脈圧,中心静脈圧,心拍出量,腎血流量,腎組織血流量をモニターしながら,経時的に各部位で採血を行った。

振動流ECMO実験群では定常流ECMO実験群に比し動脈圧,心拍出量,腎血流量,腎組織血流量の増加を認めた。実験開始3時間後よりL-NMMAを投与したが,両群とも動脈圧の上昇,心拍出量の低下,腎血流量及び腎組織血流量の低下を認めた。ECMO終了後に動物を犠死せしめ,頭蓋内出血の有無を検索したところ、拍動流群では出血を認めなかった。またECMO施行中に採取した血液中のカテコラミン濃度を測定する予定であったが、震災により測定機器が破損し、現在まで結果が得られていない。週令120-130日の妊娠羊4頭に帝王切開を行い、その胎仔に無呼吸下に送脱血管を総頚動脈、内頚静脈に挿入後、各2頭にそれぞれ定常流及び拍動流VA-ECMOを100ml/kg/min.の流量にて6時間行った。尚、胎仔の心拍数が150/分以上となることが多いため、拍動流ECMOは心拍数2に対し拍動1の割合で行った。心拍数、動脈圧、中心静脈圧、心拍出量、腎血流量、腎組織血流量をモニターしながら、経時的に各部位に採血を行った。拍動流ECMO実験群では定常流ECMO実験群に比し動脈圧、心拍出量、腎血流量、腎組織血流量の増加を認めた。実験開始3時間後より一酸化窒素阻害剤であるL-NMMAを投与したが、両群とも一時的な動脈圧の上昇、心拍出量・腎血流量及び腎組織血流量の持続的低下を認めた。血漿中アドレナリン値には両群間に差を認めなかったが、ノルアドレナリン値は定常流ECMO実験群で高値を示した。またL-NMMA投与直後でカテコーラミン値に変動はみられなかったが、両群とも経時的にノルアドレナリン値は上昇を示した。ECMO終了後に動物を犠死せしめ、頭蓋内出血の有無を検索したところ、明らかな出血を認めなかった。以上の結果により、胎児VA-ECMOにおける拍動流ECMOの有用性が示され、無呼吸状態の胎児の呼吸循環状態の維持に十分な役割を果たすものと思われた。また胎児期の循環においても一酸化窒素(NO)系が生理的に重要な役割を果たしていることが示された。
細胞周期調節因子のユビキチン分解異常がもたらす癌化機構の解明

本研究では、癌で高頻度にみられる異常として知られる細胞周期制御機構の破綻に着目し、この異常の詳細の解明を目指す。特に細胞周期調節因子の多くがユビキチン化を介したプロテアソーム依存的なタンパク分解によって量的・質的コントロールを受け、細胞周期進行を厳密に制御することに着目し、その分解異常が癌化に寄与すると考え、研究を行っている。しかし、正常の制御機構を含め、未だ不明な点が多いのが現状であるため、本研究では癌での過剰発現が報告されている細胞周期調節因子のユビキチン分解制御機構の詳細解明を遂行し、その破綻による癌化への関与を探索する。本年度は、前年度に引き続き、細胞周期調節因子の多くを基質とする複合体型ユビキチンリガーゼAPC/Cの新規基質タンパクとして見出した細胞分裂期進行に必須の因子であるBorealinを中心に解析を行った。前年度までにBorealinはG1期でAPC/Cユビキチンリガーゼによりポリユビキチン化され、タンパク分解されることを見出していた。今年度はBorealinのタンパク配列上の新規のAPC/Cユビキチンリガーゼ認識配列の同定を試みた。結果、N末端側に重要なアミノ酸配列を明らかにすることができた。実際にそのアミノ酸の置換型変異体を作成すると、APC/Cユビキチンリガーゼとの結合が阻害されることで、ポリユビキチン化が阻害され、タンパク分解を免れることを見出した。これらのアミノ酸配列はAPC/Cユビキチンリガーゼの認識配列として報告されていない全く新規の配列であった。今後、今年度作成に成功したBorealinの非分解型変異体を用いて、BorealinがG1期にタンパク分解される意義を詳細に解析し、これまでの結果と併せ、国際誌に論文投稿する予定である。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、細胞周期調節因子の多くを基質とする複合体型ユビキチンリガーゼAPC/Cの新規基質タンパクとして見出した細胞分裂期進行に必須の因子であるBorealinを中心に解析を行った。Borealinは細胞分裂期進行に必須の役割を果たすCPC(Chrosome Passenger Complex)の構成因子として知られている。CPCはキナーゼであるAurora-B、細胞内局在に重要なSurvivin、本研究で着目するBorealin及びこれらのスキャホールドとして働くINCENPよりなっている。また、これらの因子はすべて癌での過剰発現が報告されており、癌化との関わりが示唆されている。培養細胞株を細胞分裂期に同調し、経時的にBorealinのタンパクレベルの発現動態を検討したところ、G1期に入ると分解されることを見出した。また、この分解はAPC/Cユビキチンリガーゼの重要な構成因子であるCdh1のノックダウンによって抑制されることからBorealinはAPC/Cユビキチンリガーゼにより分解されることが示唆された。さらには、In vivo ubiquitin assay法を確立し、Borealinが実際に細胞内でユビキチン化されることを確認した。

今後、今年度作成に成功したBorealinの非分解型変異体を用いて、BorealinがG1期にタンパク分解される意義を詳細に解析し、これまでの結果と併せ、国際誌に論文投稿する予定である。当該年度では、細胞周期調節因子のユビキチン分解異常がもたらす癌化機構の解明というテーマの中でも特に細胞分裂期進行に必須の因子であり、癌化との関わりが示唆されているBorealinのユビキチン分解機構の解明に焦点を絞り、詳細な検討を精力的に遂行した。結果、BorealinがAPC/Cユビキチンリガーゼにより分解されること、またその時期がG1期であることを見出した。さらには、Borealinが自身が構成する複合体の安定性を保つ因子である可能性を新たに見出し、癌で生じている複合体の過剰発現を説明しうる知見を得た。次年度以降、Borealinを中心とした癌化機構の解明に至ることを期待したい。当初の研究計画を順調に遂行していると評価できる。27年度が最終年度であるため、記入しない。次年度以降は、Borealin中の認識配列の同定を進めるとともに、その配列を変異させた非分解型変異体を用い、CPCの安定性や発癌に与える影響を様々な実験系を用いて検討する計画である。また、CPCの他の構成因子も同様にAPC/Cユビキチンリガーゼにより制御される可能性があると考えられるため、それらの解析も併せて行う予定である。
昭和60年6月山口県西部地区の豪雨災害の調査研究

昭和60年6月下旬から7月上旬にかけて、山口県西部地区を中心にして、計1000mm以上の降雨があり、急傾斜地の崩壊、道路、河川、提防、農業用ため池の決壊など計4200箇所に災害を生じた。今回の災害の特徴は、長雨によるものであって、急激な崩壊の発生でないため人命の損失は数名にとどまったが、時間の経過とともに災害が急速に累積されていった。本研究は、関連分解の研究者を組織し、長雨型の豪雨による災害の実態を調査分析し、災害の発生条件を解明し、その地域性を考えての対策について提言をまとめることを目的としてはじめられた。各項目について、その実績の概要をのべる。1.豪雨特性の調査:タルボット型の極値雨量強度曲線からその降雨の雨滴粒度分布を再現する方法を用いて、豪雨の予知の可能性を模索した。その結果、10分間雨量データベースでの過去1時間の雨量特性からの豪雨判定によって、豪雨の短時間予知が可能となり、崖くずれなどの災害を約1時間前に予知できることがわかった。2.洪水災害特性の調査:今回の長雨型の豪雨について、農業用ため池の決壊、市街地の浸水災害の発生と降雨との関係について考察を行った、前者については、決壊によって土石流が発生した状況などについて考察を加え、後者については、各市町村単位での考察を行った。3.地盤災害特性の調査:急傾斜地の崩壊と地すべりをとりあげ、長雨型降雨量、土質、斜面勾配などと災害の発生との関係を検討し、降雨による地盤内の飽和水位の上昇の測定が災害の予知に最も必要であることがわかった。4.農林災害の調査:ここでは農産物被害と県内に多数あるため池の被害について調査した結果がまとめられた。前者については被害をうけやすい作物の種類やその生育状況のちがいなどを明らかにした。
転写因子p53による細胞周期、アポトーシスの制御機構の解析

我々は、p53の標的遺伝子であり、アポトーシス制御に重要なBcl-2ファミリー分子Noxaを同定し、解析してきた。NoxaはBcl-2ファミリー分子のなかのアポトーシスを誘導するBH3-only因子である。本研究では、p53誘導性アポトーシスにおけるNoxaの役割を解析する目的でNoxa欠損マウスを作製し、解析を行った。その結果、癌遺伝子であるアデノウイルスE1Aを遺伝子導入したマウス胎児線維芽細胞(MEF)にアドリアマイシン等のDNA損傷刺激を加えるとp53依存性のアポトーシスが誘導されるが、Noxa欠損MEFではこのアポトーシス誘導が減弱していた。同時に、Noxa欠損MEFは癌遺伝子を遺伝子導入した際の細胞がトランスフォーメイションする感受性が増大していた。更には、マウス個体にX線照射した際の急性に起こる個体死の上昇が、p53欠損マウスと同様にNoxa欠損マウスで低下していること、急性に起こる腸上皮細胞のアポトーシスの誘導がp53,Noxa共に低下している事を見出した。これらの結果から、実際にp53によるアポトーシスの誘導をNoxaが(全てでは無いものの、その一部を)媒介していることを明らかにした。一方、我々の発表の後になってNoxaと同様にp53によって発現誘導されるBH3-only因子であるPUMAの欠損マウスが作製され、PUMAが胸腺細胞のアポトーシスを含めて様々なp53誘導性アポトーシスの制御に部分的に関わることが報告され、我々の解析と合わせてp53によるアポトーシスの誘導にはBH3-only因子の発現誘導が重要であることが明らかとなった。現在我々は、これらの結果をふまえてp53による誘導の分子機構の解明を目指して研究を続けている。我々が同定した、p53標的因子Noxaの解析を行なう過程で、p53によるアポトーシス誘導はBc1-2ファミリーのうちのBaxサブファミリーに属するBaxとBakを共に欠損させたマウスの細胞では全く起きないこと、Noxaによるアポトーシスも両欠損細胞では認められないことが最近報告された。しかしながら、解析の結果NoxaとBaxやBakとの結合は全く検出されず、NoxaによるBaxやBakの活性化は認められなかった。従って、Noxaによるアポトーシスの誘導は、Bc1-2, Bc1-XL等のアポトーシスの抑制に働くBc1-2サブファミリー因子と結合することで、あらかじめBakやBaxを抑制していた機能が解除されて、アポトーシスが誘導されるものと考えられるが、細胞周期の制御が破綻した特、Noxaによるアポトーシスの誘導は増強するもののNoxaとBc1-2サブファミリー因子との結合の上昇は認められなかった。従って、Noxa以外に細胞周期制御の破綻時に誘導される実行因子が存在し、それの働きを助けるためにNoxaが誘導されるのではないかと考えられた。実際、Noxa欠損マウスの胎児線維芽細胞(MEF)にE1Aを発現させて抗がん剤を投与したときのアポトーシスの誘導(p53に完全に依存している)はNoxa欠損MEFでは著明に減弱はするものの、誘導されるという結果を得ている。また、今年度になって新たに報告されたp53によって誘導されるNoxa類似因子であるPUMAに関しても、BaxやBakとの結合は認められず、これらのBH3-only因子はp53によるアポトーシス誘導の感受性を上昇させる為に誘導されるのではないかと想像された。同時に、Rb系の制御が破綻したMEFはp53を活性化すると細胞周期の停止のみではなくアポトーシスが誘導されるようになるが、このような細胞でもp53によるNoxaの誘導には変化は認められなかった。

従って、Rb系の制御が破綻したMEFではじめてp53によって誘導されるような標的遺伝子が存在し、その中に重要なアポトーシス誘導因子が存在することが考えられた。現在、それに合致する一群の候補遺伝子を同定している。p53によるアポトーシスの実行機構、特に癌遺伝子が活性化した細胞をどのようにしてp53が選択的に排除するのかの分子機構の解析を行った。その結果、p53によるアポトーシスの誘導には、Noxaをはじめとする3種のBH3-only因子の誘導とそれに伴うBaxとBakの活性化が重要であることを明らかにした。このBax・Bakの活性化機構を解明する目的でBax結合因子の同定をタンパクの精製により行ない、未刺激状態ではBaxと結合しており、p53やNoxaによってその結合が解離する分子(複数)を同定した。現在、この分子を質量分析法で同定している所である。しかしながら、これらの分子をもってしても「なぜ、癌遺伝子が活性化した細胞に対して、p53が選択的にアポトーシスを誘導するのか」という問題を解決するには至っていない。これらの研究と平行して、転写レベルでの変化、即ち癌遺伝子が活性化した細胞で誘導性が上昇するp53の標的遺伝子がこの選択的アポトーシスを(上記のBcl-2ファミリー分子の上位で)制御しているのではないかということを考え、その標的遺伝子の単離を進めるに至った。現在、マイクロアレイ法による解析は終了しており、RNAブロットによる確認作業も修了している。特に、癌遺伝子やE2F-1を導入したHEFやRbないしp21欠損MEFといったRb系の制御が破綻した細胞でp53による転写誘導が非常に上昇するとものとp53による誘導が全くかからなくなる遺伝子群を多数同定している。今後、これらの標的遺伝子の発現様式を詳細に解析し、がん抑制遺伝子産物による遺伝子発現制御ネットワークとがん化に伴う制御破綻を詳細に検討していこうと考えている。我々は、p53の標的遺伝子であり、アポトーシス制御に重要なBcl-2ファミリー分子Noxaを同定し、解析してきた。本年度は、Noxa欠損マウスを作製して解析を行った。Noxaの矢損は発生、成長、生殖に関しては全く影響を及ぼさなかった。p53欠損マウスでは、胸腺細胞のDNA損傷刺激に対するアポトーシスの誘導がみられなくなるという現象がよく知られているものの、Noxa欠損マウスの胸腺細胞は、野生型マウスと同様のアポトーシス誘導が観察された。一方、癌遺伝子であるアデノウイルスE1Aを遺伝子導入したマウス胎児線維芽細胞(MEF)にアドリアマイシン等のDNA損傷刺激を加えるとp53依存性のアポトーシスが誘導されるが、Noxa欠損MEFではこのアポトーシス誘導が減弱していた。このアポトーシス誘導の減弱は、ミトコンドリアでのBax及びBakの活性化レベルでの抑制によるものであり、実際にNoxaはBax/Bakの上流で働くことも明らかとなった。更には、マウス個体にX線照射した際の急性に起こる個体死の上昇が、p53欠損マウスと同様にNoxa欠損マウスで低下していること、急性に起こる腸上皮細胞(cryptの幹細胞、絨毛上皮の分化した細胞共に)のアポトーシスの誘導がp53,Noxa共に低下している事を見出した。これらの結果から、実際にp53によるアポトーシスの誘導をNoxaが(全てでは無いものの、その一部を)媒介していることを明らかにした。
ＢＤＮＦ遺伝子メチル化から評価した抑うつ状態と睡眠時ブラキシズムとの関連性

ストレスによる睡眠時ブラキシズムの誘発は以前より示唆されているが、睡眠時ブラキシズムの原因は未だ解明されておらず、治療法の確立には至っていない。また、ストレスがDNA損傷を引き起こすと報告がなされ、ストレスとDNA損傷の関係が明らかとなってきた。ストレスと睡眠時ブラキシズムの関係について比較検討した結果、質問紙により高ストレス群、低ストレス群に分類された2群において、高ストレス群の方が低ストレス群より、睡眠時ブラキシズムの程度が高い傾向が認められたが、有意な差は認めなかった。また睡眠時ブラキシズムの程度とDNA損傷においては、睡眠時ブラキシズムの程度とDNA損傷の程度の相関は認められなかった。睡眠時ブラキシズムに影響を及ぼすとされる因子として,遺伝的因子,形態的因子,社会心理学的因子,病態生理学的因子が検討されてきたが、根本的な原因は未だ解明されておらず,治療法の確立には至っていない.また,ストレスの分野においては近年,ストレスがDNA損傷を引き起こすと報告がなされ,ストレスとDNA損傷の関係が明らかとなってきた.そこで本研究においては.DNA損傷によりストレスの評価を行い,睡眠時ブラキシズムの関連について検討を行った.質問紙により,高ストレス群,低ストレス群に分けた2群において,高ストレス群の方が低ストレス群より睡眠時ブラキシズムの程度が高い傾向が認められたが,有意な差は認めなかった.また睡眠時ブラキシズムの程度とDNA損傷の比較においては,睡眠時ブラキシズムの程度とDNA損傷の程度との相関は認められなかった.これはストレスによりDNAが損傷が起こったとしても,DNAは損傷を受けたところから修復が始まるため,採血時にストレスによるDNA損傷のレベルが正確に採取できない可能がある.今後は睡眠時ブラキシズムの測定中,十数度の採血を行い,より時間軸でDNA損傷を評価することの必要性が示唆された.ストレスによる睡眠時ブラキシズムの誘発は以前より示唆されているが、睡眠時ブラキシズムの原因は未だ解明されておらず、治療法の確立には至っていない。平成24年度に実施予定であったことは、被験者の設定でした。平成25年度に抑うつのDNAを持つ被験者20名、その被験者に年齢、性別をマッチングさせた健康被験者20名を抽出するために、200名の抑うつ状態を治療したことのない者200名を被験者として設定しました。その被験者数の設定はWHOの推定では男女を合計した抑うつ状態の生涯発生率は17%と報告されており、次年度の抑うつ状態と診断される者を20名確保するために必要な被験者数と考えたからです。また20名を超える抑うつのDNAを持つ被験者を平成24年度のDNA解析の中に入れるということは本研究の目的から考えると非常に大切な部分です。しかしながら、DNAのMassARRAY(SEQENOM社)は非常に高価であり、本研究においても解析は一度のみであり、できるだけ多くの抑うつのDNAを持つ被験者を集めたいとの思いから、費用のかからない、従来の質問紙Beck Depression inventory(BDI),Center for Epidemilogic Stuies Depression Scale(CES-D),Zung Self-rating Depression Scale(Zung-SDS)により予備的に抑うつ状態であろう被験者を集めようとしましたが、質問紙で抽出される抑うつ状態の被験者は少なく、被験者数の確保に時間がかかっているのが現状です。質問紙にて抑うつ状態であろう可能性が高い被験者を含めて20名の採血とDNAの精製が終わっており、今後目標の被験者数まで質問紙を使わずに採血、DNAの精製を進めていく予定です。平成25年度予定している20名の抑うつのDNAを持つ被験者の確保ができるかどうかDNAのMassARRAY(SEQENOM社)を行ってみないとわかりません。抑うつ状態の生涯発生率は17%と報告されていますが、解析をしてBDNF遺伝子のメチル化がされている人がいなかったら、研究は行き詰まるため、メチル化がされている可能性が高い人を積極的に集めているところです。その方法は従来の質問紙によるものですが、質問紙で抑うつ状態であるのを判定することがなかなか難しいので、被験者集めに時間がかかっています。6月をめどに被験者集めは終了し、DNAの精製を行います。7月には解析を行い、8月から11月にかけて抑うつのDNAを持つ被験者20名とその20名と性別、年齢をマッチングさせた20名を、合計40名の睡眠時ブラキシズムの状態をポータブル睡眠時ブラキシズム自動解析装置(Grindcare 3.0, Medotech社)を用いて記録します。12月には統計処理を行い、1月から3月にかけて研究内容をまとめる予定です。DNAのMassARRAY(SEQENOM社)に126万円、またDNAの精製に使うピペット等の消耗品に4万円。学会の参加のための旅費、学会参加費、研究内容の発表のための旅費として77万円。研究のまとめ、論文作成の費用として67万円の使用予定です。