hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ティッシュエンジニアリングを応用した人工象牙質の開発

本研究は、歯髄幹細胞をクローン化し、ティッシュエンジニアリングの技術を応用して人工象牙質を作製する基盤技術を開発することを主眼としている。平成14年度はヒト歯胚から得られた培養歯髄細胞を免疫不全症(SCID)マウスの皮下に埋入し、硬組織の形成を検討したところ、硬組織の形成は見られなかった。この原因は、細胞採取時に歯根膜細胞、歯槽骨細胞等の歯胚周囲組織の細胞が混入したため、ヒト歯髄幹細胞の細胞分化に必要な微小環境が提供出来なかったことが考えられた。そこで15年度そよより分化程度の低い歯胚から細胞を採取し、象牙芽細胞への分化能を有する細胞を採取する方法の確立をめざすこととした。実験は、まずマウス歯乳頭由来細胞(Mouse Tooth Papillary Cell; MTFC)にレトロウィルス・ベクターを用いてヒト・パピローマウィルス遺伝子であるE6を導入することにより細胞の不死化による長期培養の可能を図った。次に不死化したMTPCをアスコルビン酸、デキサメサゾン、β-グリセロ燐酸を含むα-MEM培地で3週間培養した。対照として、ヒト由来間葉系細胞を用意した。それぞれの培養細胞からトータルRNAを回収後、RT-PCRを行ったところ、bone sialoprotein osteopontin、osteocalcinはいずれの細胞でも発現が認められた。しかしながら、ヒト間葉系細胞は象牙芽細胞の分化マーカーであるdentin sialophosphoprotein (DSPP)の発現を認めたのに対して、MTPCではDSPの発現を認めることはできなかった。本研究は、歯髄幹細胞をヒト歯髄組織よりクローン化し、ティッシュエンジニアリングの技術を応用して人工象牙質を作製する基盤技術を開発することを主眼としている。特に平成14年度はヒト歯髄より分離培養した歯髄細胞の培養を行い、次にこの細胞集団からヒト歯髄幹細胞(human pulp stem cell : HPSC)が存在するか否かを免疫不全症マウスへの皮下移植実験を用いて検索することを目的とした。神奈川歯科大学付属病院に来院した被験者よりヒト抜去智歯歯胚を採取した。なおヒト歯胚は文部科学省、厚生労働省、経済産業省の三省から共同で告示された「ヒトゲノム・遺伝子解析研究に関する倫理指針」を遵守し、神奈川歯科大学歯学部に設置された倫理委員会の承認を得て、インフォームドコンセントが得られた被験者より採取した。歯胚から歯髄組織を採取し、コラゲナーゼ処理により段階的に細胞を8分画採取し分離培養後、ascorbic acid、dexamethazone、β-glycerophosphateを含むα-MEM培地で培養した。さらに、得られた各分画の細胞をそれぞれ免疫不全症(SCID)マウスの皮下に埋入し、硬組織の形成を検討した。4週間移植後、移植片を採取し組織形態学的にHE染色で観察したところ、すべての分画の細胞群において、硬組織の形成は見られなかった。この原因は、細胞採取時に歯根膜細胞、歯槽骨細胞等の歯胚周囲組織の細胞が混入したため、HPSCの細胞分化に必要な微小環境が提供出来なかったことが考えられた。そこで、次年度は顕微鏡下で象牙芽細胞、前象牙芽細胞層および歯髄細胞の複合体を採取することにより、周囲組織由来の細胞の混入を防ぎ、再度HPSCの同定を行う予定である。今後は、in vitroにおける培養条件の設定を検索していく必要があると考えられる。
キリスト教と植民地主義に関する文化人類学的研究－東アジアの事例から

本年度は以下の調査を実施した。台湾(2012年4月20-22日、8月28日-9月3日、10月3-22日、2013年2月27日-3月18日)日本語リテラシーの高いキリスト教徒へのインタビューを実施した。これまでに引き続き日本語による礼拝を行う台湾基督長老教会国際日語教会と、日本語によるデイケアセンターである社団法人台北市松年福祉会玉蘭荘に集う人々を対象とした。それ以外にも(1)台湾基督長老教会済南教会、(2)双連安養中心、(3)台湾基督長老教会台湾公義行動教会、(4)台湾基督長老教会義光教会でも調査した。(1)は同じ建物の中に本省人と外省人の間に存在する省籍矛盾という対立がある。(2)はキリスト教系の老人ホームであるが、月に一度日本語による礼拝が行われ、また日本語リテラシーの高いキリスト教徒が多い。(3)は台湾独立志向の強い長老教会でも特にその政治性の強い教会である。(4)は1980年2月28日に発生した林家事件の現場を、長老教会が入手し教会にしたもので、多くの社会活動に参与している。韓国(2012年11月22日-1月21日)台湾での事例と比較対象とするために韓国での調査も実施した。主に全羅南道光州市に滞在し、現地で1980年に勃発した光州事件と現地のキリスト教徒の関わりについて文献調査を実施した。その他には光州事件と関わりの強いカトリックの南洞聖堂の他、台湾で調査中の真イエス教会の韓国教会、海外宣教に力を入れ外国人を多く集めている教会でも参与観察を実施した。長崎・篠栗(2012年6月13-18日)昨年度に引き続き長崎のカトリック信仰と反原発運動、平和運動とのかかわりについて調査をした。また、福岡県の篠栗霊場の巫女で以前はカトリックの信者であったという女性へのインタビューも実施した。実施内容本年度前期(4-9月)は研究の初年度として研究の新たな展開に向けたレビューを行った。具体的には在日中華系キリスト教会研究、台湾のキリスト教とポストコロニアリズム、中国のキリスト教の現状の分野である。いずれも学会や研究会での口頭発表へと展開し、他の研究者たちとの意見交換によって、その後の研究に向けた基礎を構築することができた。後期(9-3月)は韓国の全羅南道光州市において半年間のフィールドワークを実施した。(1)光州事件と関係するカトリック教会、(2)中国発祥で台湾にて成長し植民地期に日本経由で韓国に伝わったプロテスタント教会の2か所を中心に参与観察を行ったほか、光州事件に関係する場所が「巡礼地」となっているのだが、そうした場所を中心に実地調査を実施した。その他、関係者へのインタビュー、大学図書館などを利用した文献調査も行った。本研究の意義は以下の点である。従来の宗教人類学の研究によればキリスト教が非欧米地域に宣教する際に、近代化と植民地化と一体化して進められたとされている。確かに世界中の広い地域でそのような状況がみられるのだが、非キリスト教国である日本が植民地経営に関与した東アジアにはこの理論をそのまま利用できない。本研究によって、こうした他の地域の状況とは異なる東アジア的キリスト教と植民地主義の関係性を探る第一歩となった。韓国研究において政治と宗教の問題は注目されているテーマなのであるが、日本植民地期における植民地経営と宗教政策の問題が多い。しかし、コロニアル期とポストコロニアル期では連続している。そこで本研究では戦後発生した光州事件を取り上げ、キリスト教との関係を考察した。このことによりコロニアル・ポストコロニアルを超えた連続性が明らかになった。この点に本研究の重要性がある。本年は3年計画の2年目であるので、フィールドワークを通じた資料収集に重点を置いた。以下、フィールドワークの概要を記す。(なお、フィールドワークの日程は大阪7/29-7/31、長崎8/6-8/11、台湾9/7-9/20、10/30-11/8、2/21-3/17である。)台湾では日本語を話すキリスト教徒へのインタビューを実施した。台湾には戦前の教育のため日本語リテラシーの高い高齢者が多く、彼らを対象としたキリスト教関係のコミュニティが存在する。こうした集まりに参加する人の中には言語とアイデンティティの不一致を抱える人が大多数で、その日本語への欲求を満たすかのように集まっている。また、戦前戦後の混乱期に自らの意図とは関わりなく、台湾に滞在し続けなくてはならなかった日本人の女性もこうした集まりに参加している。彼らへのインタビューを通じて東アジアの戦前戦後史における植民地経験とキリスト教信仰の関係性に迫った。訪問先としては1台湾基督長老教会国際日語教会と2社團法人台北市松年福祉會玉蘭荘を中心とした。1は台北市内における日本語礼拝で2は台北市内に位置する日本語によるデイケアセンターである。こうした場において参与観察やインタビューを通じてライフヒストリーの収集を行った。台湾以外には大阪と長崎で調査を実施した。大阪では真イエス教会大阪教会で参与観察を実施した。真イエス教会は中国で成立し、台湾で発展したのだが、その教派が韓国に伝わる際に、植民地期の日本の大阪教会が介在した。当時日本で暮らしていた在日朝鮮人が当教会でキリスト教徒となり、戦後韓国に持ち帰ったのである。長崎では県内のキリスト教関連施設の調査を実施した。

長崎は重層的な植民地主義に関連した歴史的経験をもつ場であり、こうした場におけるキリスト教理解は東アジアのキリスト教と植民地主義を考える上で核となる地域である。本年度は以下の調査を実施した。台湾(2012年4月20-22日、8月28日-9月3日、10月3-22日、2013年2月27日-3月18日)日本語リテラシーの高いキリスト教徒へのインタビューを実施した。これまでに引き続き日本語による礼拝を行う台湾基督長老教会国際日語教会と、日本語によるデイケアセンターである社団法人台北市松年福祉会玉蘭荘に集う人々を対象とした。それ以外にも(1)台湾基督長老教会済南教会、(2)双連安養中心、(3)台湾基督長老教会台湾公義行動教会、(4)台湾基督長老教会義光教会でも調査した。(1)は同じ建物の中に本省人と外省人の間に存在する省籍矛盾という対立がある。(2)はキリスト教系の老人ホームであるが、月に一度日本語による礼拝が行われ、また日本語リテラシーの高いキリスト教徒が多い。(3)は台湾独立志向の強い長老教会でも特にその政治性の強い教会である。(4)は1980年2月28日に発生した林家事件の現場を、長老教会が入手し教会にしたもので、多くの社会活動に参与している。韓国(2012年11月22日-1月21日)台湾での事例と比較対象とするために韓国での調査も実施した。主に全羅南道光州市に滞在し、現地で1980年に勃発した光州事件と現地のキリスト教徒の関わりについて文献調査を実施した。その他には光州事件と関わりの強いカトリックの南洞聖堂の他、台湾で調査中の真イエス教会の韓国教会、海外宣教に力を入れ外国人を多く集めている教会でも参与観察を実施した。長崎・篠栗(2012年6月13-18日)昨年度に引き続き長崎のカトリック信仰と反原発運動、平和運動とのかかわりについて調査をした。また、福岡県の篠栗霊場の巫女で以前はカトリックの信者であったという女性へのインタビューも実施した。3年計画の研究で、初年度は理論研究と問題提起を中心に実施したが、2年目に当たる本年度はフィールドワークを中心とした資料収集を行った。最終年度の3年目以降に実施する口頭発表や論文、著書の発表にむけて十分な資料を入手することができた。また、フィールドワーク中には当初の予定よりも多岐にわたる情報を入手することができ、今後の研究にもつなぐことが期待できる。本研究では東アジアを対象としているがやや情報が台湾に偏りがちである。より広い視野から課題の推進が求められる本研究では、最終年度には韓国、日本の情報収集にも力を入れたい。研究計画当初には思いもよらなかったことであるが、東日本大震災と福島の原発事故によって、被爆地でありキリスト教徒の多い長崎の重要性が高まった。当初の研究計画に長崎を入れることは含まれていなかったが、本課題をより進展させるために本年度は長崎および北九州地域の調査も実施したい。また、来年度は最終年度であるので、口頭発表を通じて多くの研究者と意見交換を通じた後に、これまでの研究成果をふまえて活字化して発表したい。
高次脳機能障害患者に対する看護援助技術の神経生理学的研究

意識障害患者に対する意識レベルを改善する目的で行われている看護ケア技術の効果について,健常者を対象に神経生理学的な研究を行った。感覚刺激には聴覚刺激,温浴刺激およびその2つの併用刺激を用い,生理学的指標として脳波,覚醒レベル(BIS値),自律神経活動および心理学的指標を用いて検討を行った。今回の刺激条件では有意な効果は得られなかったことから,今後,刺激条件の検討が必要である。また,フランス共和国における看護ケアについての実態調査を行った。リヨン市内の神経病院では誘発脳波など神経生理学的な方法を用いていたが,リヨン郊外のリハビリテーション病院では痛覚や嗅覚などを刺激する看護ケアを行っていた。本研究は,意識障害患者に対して意識レベルを改善する目的で行われている種々の看護援助技術を国内および海外の施設において実態調査を行い,そのエビデンスを明らかにするとともに,そのエビデンスに基づいて健常者を対象に意識レベルを改善する看護援助技術を科学的に検討することで看護ケアの科学的根拠を解明することを目的としている。平成25年度は,臨床現場における意識レベルを高める看護援助技術の実態調査(国内)として,札幌麻生脳神経外科病院(北海道札幌市)を訪問し,生体の機能に対してどのような影響を及ぼすことを目的に,意識障害の患者に対して意識レベルを高める看護援助技術を実施しているのかについて看護部長より直接話を伺うとともに,実際の看護ケアを観察した。その結果,意識障害患者でもベッド上で行える生活に基づいた看護援助を行うことで,寝たきりにならないようにすることを伺った。このことを参考に今後の実験研究の指針を得ることができた。また,臨床から得られたエビデンスに基づいて,健常者を対象に意識レベルを改善するための看護ケアの科学的根拠を解明するための実験計画を作成した。具体的には,姿勢(背面開放座位)や種々の感覚刺激(痛覚刺激,聴覚刺激,芳香刺激,温浴刺激など)が意識レベルにどのように影響しているかを生理学的指標(脳波,覚醒レベル,自律神経活動,バイタルサイン,筋電図など)および心理学的指標から検討することである。生理学的指標である脳波,覚醒レベル,自律神経活動,バイタルサインは既存の機器で計測することができるが,筋電図に関しては申請した研究費によりポリグラフシステム(日本光電;RMT-1000)を購入し,実験システムのセットアップを行った。また,学内の倫理審査委員会に倫理審査申請書を提出し,承認を得た。本研究は,意識障害患者に対して意識レベルを改善する目的で行われている種々の看護援助技術のエビデンスを科学的に検討することで看護ケアの科学的根拠を解明することを目的としている。平成26年度は,健康な成人女性7名(22.14±0.35歳)を被験者として,聴覚刺激が覚醒レベルにどのような影響を及ぼしているかを生理学的指標(覚醒レベル(BIS値),自律神経活動,心拍数)および心理学的指標から検討を行った。聴覚刺激による基礎的なデータを収集するために,無音状態,ホワイトノイズ,リラックス音として「α波・1/fマインド・コントロールせせらぎと音楽」というCDの3条件で実験を行った。音楽の聴取時間は60分間とした。BIS値および心拍数はコントロール値を0として変化量,自律神経活動はコントロール値を1として変化率で算出した。BIS値は,ホワイトノイズでは音楽聴取後30分でー18.1,リラックス音は40分後でー13.2,無音は50分後でー10.2まで減少した。その後,60分の時点では,無音はー0.22,ホワイトノイズはー6.61,リラックス音はー4.30まで値が増加した。心拍数(beats/min)は,音楽聴取後30分の時点が最も減少し,無音はー4.67,ホワイトノイズはー6.12,リラックス音はー8.62であった。副交感神経活動は,音楽聴取後50分の時点で,リラックス音は4.05,無音は2.88,ホワイトノイズは2.18の増加を示した。交感神経活動では,リラックス音とホワイトノイズは同じような傾向を示したが3つの条件では差がみられなかった。以上のことから,ホワイトノイズおよびリラックス音による刺激,また,60分間の音楽聴取時間では覚醒レベルの指標であるBIS値に有意な影響が示されなかったことから,今後,聴覚刺激の種類および聴取時間についての検討が必要である。平成27年度は,健康な成人6名(男性1名,女性5名;平均年齢22.3±1.24歳)を対象に,足浴[A],音楽聴取[B],足浴と音楽聴取の併用[C]の3種類の刺激が生体に及ぼす影響について,生理学的指標(脳波,自律神経活動,心拍数)および心理学的指標から検討を行った。実験は,最初の5分間を安静時間とし,これを対照(コントロール)とした。その後,15分間の刺激を与え,刺激終了後は20分間の回復経過を観察した。足浴には足浴器「冷え取り君マイコンプレミアム」(高陽社;FB-C80)を用いた。湯温はリラックス効果の高いといわれる38°Cに設定した。また,音楽刺激には広橋真紀子監修「自律神経にやさしい音楽」(株式会社デラ)を使用した。

脳波では,δ波帯域(2Hz以上4Hz未満)において,足浴のみでは安静時(対照)と比較して有意な変化はみられなかったが,音楽聴取のみでは刺激開始10分後で有意な増加,足浴と音楽聴取の併用では刺激開始10分後,15分後,刺激終了後5分,10分,15分で有意な増加がみられた(p<0.05)。α波帯域(8Hz以上13Hz未満)において,3種類の刺激すべてにおいて有意な減少が認められた。心拍数では,安静時と比較して音楽聴取のみ,足浴と音楽聴取の併用で刺激5分後刺激終了後10分で減少し,有意差(p<0.05)または有意傾向(0.05≦p<0.1)がみられた。心理学的指標では,刺激前後の比較においてポジティブな項目(「幸福である」「うれしい」「心地よい」「楽しい/面白い」)の合計点では,足浴のみが9%増加,音楽聴取のみが9%増加,足浴と音楽聴取の併用で42%の増加がみられた。以上のことから,今回の3種類の刺激条件では脳活動を賦活化させる効果を示さなかったことから,今後,足浴の温度や聴覚刺激の条件についての検討が必要である。初年度(平成25年)9月から研究室のある建物が改修工事になり,その移転準備などを含めて約1年間,実験を行うことができなかった。また,平成26年10月から教室員の欠員などにより業務が多忙になり,研究が十分に行えず,また,予定していた海外出張も実施できなかったため。本研究の目的は,意識障害患者の意識レベルを改善するための看護ケア技術にはどのようなものがあるかについて国内および海外で実態調査を行うことと,健常者を対象に意識レベルを改善する看護ケア技術を科学的に検討することで看護ケアの科学的根拠を解明することの2つである。具体的には,姿勢(背面開放座位)や種々の感覚刺激(痛覚刺激,聴覚刺激,芳香刺激,温浴刺激など)が意識レベルにどのように影響しているかを生理学的指標(脳波,意識レベル,自律神経活動など)および心理学的指標から検討することである。平成26年度平成27年度では,健常者を対象に種々の感覚刺激を用いた生理学的な実験を行った。平成26年度は,健康な成人女性7名を対象に聴覚刺激による影響について,覚醒レベル(BIS値),自律神経活動,心拍数を指標に検討を行った。聴覚刺激にはホワイトノイズ,リラックス音として「α波・1/fマインド・コントロールせせらぎと音楽」というCDを用いたが,ホワイトノイズおよびリラックス音による刺激や60分間の音楽聴取時間では覚醒レベルの指標であるBIS値に有意な影響は示されなかった。平成27年度は,健康な成人6名(男性1名,女性5名)を対象に,足浴,音楽聴取,足浴と音楽聴取の併用の3種類の刺激による影響について,脳波,自律神経活動,心拍数を指標に検討を行ったが,3種類の刺激条件では脳活動の亢進はみられなかった。これらの生理学的な結果から,今後,刺激条件についての検討が必要である。平成28年度は,フランス共和国における意識障害患者に対する看護ケア技術についての実態調査を行った。リヨン市内の神経病院(集中治療病院(ICU)とリハビリテーション病院の中間施設)では誘発脳波などを用いた神経生理学的な方法を用いていたが,リヨン郊外のリハビリテーション病院では痛覚刺激や嗅覚刺激などを用いた援助を行っていた。意識障害患者に対する意識レベルを改善する目的で行われている看護ケア技術の効果について,健常者を対象に神経生理学的な研究を行った。感覚刺激には聴覚刺激,温浴刺激およびその2つの併用刺激を用い,生理学的指標として脳波,覚醒レベル(BIS値),自律神経活動および心理学的指標を用いて検討を行った。今回の刺激条件では有意な効果は得られなかったことから,今後,刺激条件の検討が必要である。
関節疾患における免疫セマファリンの骨ホメオスタシス調整作用の解明

セマフォリン4D(Sema4D)は骨形成抑制作用が報告されており、骨びらんや破壊が発生する関節リウマチにおいて病態形成に関与している可能性がある。今回の研究の結果、関節リウマチでは血中・関節液中に蛋白酵素ADAMTS-4の濃度が高く、これがCD3+、CD14+の単核球細胞表面からSema4Dを切離させているとみられた。動物実験ではSema4Dを阻害すると関節炎が抑制されたことから、遊離した可溶性Sema4Dが血中や関節液中で増えることで関節びらんや滑膜増殖を引き起こしていると考えられた。まず、関節リウマチ、変形性関節症の血清、関節液における可溶性セマフォリン4Dの測定を行なった。健康人の血清可溶性セマフォリン4Dに比べて関節リウマチ患者の血清可溶性セマフォリン4Dの濃度は有意に高値であった。変形性関節症、骨粗鬆症などの骨関節疾患、自己免疫疾患である全身性エリテマトーデスにおいては、可溶性セマフォリン4Dの有意な増加は認められなかった。関節液中においては変形性関節症においては可溶性セマフォリン4D濃度は感度以下であったのに対して関節リウマチにおいては有意に高値であった。関節リウマチにおいて、疾患活動性指標であるDAS28、CRP、リウマチ因子、尿中デオキシピリジノリンは血清可溶性セマフォリン4Dと相関を認めた。一方、性別、年齢、罹病期間や投薬されている薬剤の有無などの影響は認められなかった。次に関節滑膜組織におけるセマフォリン4Dの発現を免疫組織染色において検討した。関節リウマチの滑膜では滑膜表層だけでなく、深層にあるリンパ濾胞様の細胞浸潤部分に強く発現していた。一方で変形性関節症の滑膜では表層にやや染色が認められるが、滑膜深層には染色は認められなかった。FACS解析による細胞表面のセマフォリン4Dの発現を解析した。末梢血液中のリンパ球、単球において細胞表面にセマフォリン4Dの発現が見られるが、健康人に比べて、関節リウマチではセマフォリン4Dの発現がやや低下していた。関節液中の細胞でも同様な傾向が見られた。一方、血清可溶性セマフォリン3Aは関節リウマチにおいて有意な変動を認めなかった。前年度(平成25年)は、関節リウマチ患者におけるセマフォリン4D(Sema4D)の臨床的意義を解明した。可溶性Sema4Dは関節リウマチ患者において関節液、血清中において増加が認められ、疾患活動性との相関が見られた。関節滑膜においてSema4D発現細胞の増加は認められたが、細胞表面に発現するSema4Dはむしろ低下傾向であった。可溶性Sema4Dの産生は必ずしもSema4Dそのものの産生増加によらない可能性が示唆された。今年度(平成26年)は関節リウマチのモデル動物であるコラーゲン関節炎において抗Sema4D抗体による治療実験を行った。抗Sema4D抗体はコラーゲン関節炎を抑制することが示された。炎症性サイトカインの産生も同時に抑制されており、組織学的な関節破壊も抗Sema4D抗体によって抑制されていた。このことはSema4Dが関節リウマチの病態生理に重要であることを示すだけでなく、Sema4Dを抑制する介入が関節リウマチにおいて可能であるかもしれない可能性を示した。我々はマウスにおいて示されたSema4Dによる骨芽細胞の増殖抑制効果の検討を行ったがヒト骨芽細胞培養系においてこれを証明することはできなかった。直接的な骨芽細胞の抑制効果は今回証明できなかったが、炎症を抑制することによる間接的な関節破壊抑制効果は規定できると考えられた。関節リウマチ患者ではセマフォリン4D濃度が血清中で高く、その濃度は疾患活動性指標であるDAS28、CRP、RF、尿中デオキシピリジノリンのレベルに相関する一方で、末梢血細胞表面ではセマフォリン4Dの発現が低下していることを平成25年度に見いだした。また平成26年度はコラーゲン誘発関節炎モデル動物に対して抗セマフォリン4D抗体を投与する治療実験を行い、セマフォリン4Dの阻害によって関節炎の抑制が得られることを見出した。以上の結果よりセマフォリン4Dは関節リウマチの骨びらんなどに関与している可能性が考えられたが、セマフォリン4Dが細胞表面からの発現低下がある一方で血清中高値となる機序について検討を進めた。関節軟骨の構成成分であるアグリカンコアタンパクを分解する酵素であるADAMTS-4とSema4Dを発現している単球細胞株THP-1とを共培養した結果、他の蛋白分解酵素matrix metallo-proteinase 3 (MMP-3)、MMP-9との共培養の結果と異なり、膜上Sema4DがCD3+、CD14+細胞でsheddingされることが判明した。また、ADAMTS-4は関節リウマチ患者では健常者より血清中濃度が高く、変形性関節症患者より関節液中で高いことが判明した。関節リウマチ患者では細胞膜上Sema4Dが豊富なADAMTS-4によってsheddingされ、結果として滑液、血清で増加していると考えられた。

今回の研究の結果、関節リウマチでは血中・関節液中に蛋白酵素ADAMTS-4の濃度が高く、これがCD3+、CD14+の単核球細胞表面からSema4Dを切離させているとみられた。動物実験ではSema4Dを阻害すると関節炎が抑制されたことから、遊離した可溶性Sema4Dが血中や関節液中で増えることで関節びらんや滑膜増殖を引き起こしていると考えられた。初年度(平成25年度)において、我々は関節リウマチ患者における可溶性セマフォリン4D(Sema4D)の臨床的意義は臨床的に解明することができた。また本年度(平成26年度)はマウス実験関節炎において抗Sema4D抗体によるSema4D機能抑制により関節炎が改善することが示され、Sema4Dの重要性がさらに明らかにした。このことはSema4Dが関節リウマチの病態において重要な役割を果たしていることを示している。これは当初の研究計画の予定通りである。しかしながら、Sema4Dがどのように関節リウマチにおいて働きをしているかは、当初in vitroの報告より想定していたSema4Dによる直接的な骨芽細胞の抑制効果は証明できず、Sema4Dの関節リウマチの病態における意義は明らかにすることはできなかった。Sema4Dが関節リウマチにおいて果たしている役割を明らかにすることまで解明することができていない。従って、研究の達成度は概ね順調であるが、Sema4Dの病態的意義の解明がさらに必要であると考えている。臨床免疫学最終年度である平成27年度においては、Sema4Dの関節リウマチにおける病態的意義の解明を行う予定である。初年度における本研究においてSema4D発現細胞は関節滑膜などで増加しているが、細胞表面に発現するSema4Dは関節リウマチにおいてむしろ低下傾向であった。このことは可溶性Sema4Dの増加の原因がSema4Dの細胞における産生増加ではなく、細胞表面に存在する膜型Sema4Dのshedding outの増加による可能性を示唆していた。そこで、我々は炎症病態でしばしば増加するタンパク分解酵素プロテアーゼによる可溶性Sema4Dの産生の増加や、Sema4Dの骨代謝以外の炎症などへの影響を検討することにより、Sema4Dの産生機序や関節リウマチにおける病態的意義の解明を行いたいと考えている。血清や関節液中の可溶性セマフォリン4D濃度の測定および、関節滑膜や末梢や関節液中の細胞におけるセマフォリン4Dの発現の検討は予定通り遂行された。予想通り関節リウマチにおけるセマフォリン4Dの増加が証明されたが、予想に反し細胞表面におけるセマフォリン4Dの増加が確認できなかった。むしろ細胞表面のセマフォリン4D発現は低下しており、産生増加ではなく、shedding outの増加である可能性が示唆された。そこで予定外の産生機序の解析の実験を追加することとした。一方で血清可溶性セマフォリン3Aは関節リウマチで有意な変動を認めなかったため、その後の詳細解析を中止し、セマフォリン4Dに研究をしぼることとした。次年度はセマフォリン4Dの関節リウマチでの役割である機能解析は予定通り開始できる体制が整った。また予定がではあるが可溶性セマフォリンの産生メカニズムの詳細解析を行なうこととした。以上より研究計画はおおむね順調に伸展していると考えている。マウスの実験的関節炎に使用する抗Sema4D抗体の作成に手間取り、抗Sema4D抗体によるマウス治療実験を小規模にて施行せざるをえなかった。そのため資金を繰り越すこととなった。
第一原理計算に基づく有機半導体中の不純物欠陥の理論

本研究では、量子力学に基づく大型数値計算を用いて、有機分子半導体中に侵入した金属不純物原子の安定な形態と電子物性を調べた。その結果、不純物原子には半導体中に分散して分布するものとクラスターをつくるものの2種類があること、前者の不純物はイオン化していてキャリアの易動度を劣化させること、後者の不純物は電子を放出してトンネルリーク電流を発生させること等を明らかにした。これら成果は、有機半導体の不純物欠陥物理の進展をもたらし、将来のデバイス開発にも指針を与えるものである。本研究の目的は、第一原理計算を用いて、有機半導体の不純物欠陥の形態・形成機構や欠陥準位の特徴・電子物性を解明し、有機半導体の不純物物理を構築することである。本年度は、代表的な棒状・環状の分子固体半導体(ポリアセチレン・ペンタセン)を対象に、以下の成果を得た。1.不純物原子がつくる欠陥準位の解明:(1)陰性度の小さいAl等の金属原子は、ホスト分子のπ*軌道に電子を与えて正イオンになり、ホスト分子に強いイオン結合で吸着するが、陰性度の大きいAu金属原子等は、sd混成してホスト分子のπ軌道と共有結合して吸着する。これらは、π共役半導体系に共通の性質であることを解明した。(2)非金属原子(O,N等)は、価電子数の偶奇に応じて、ギャップ内準位を持たない場合とアクセプターになる場合に分類されるを明らかにした。2.吸着金属原子間の相互作用の解明:(1)いずれの系でも原子が近接すると、直接的金属結合により引力が働く。(2)ポリアセチレン系では、金属原子間に炭素が偶数個存在すると炭素ダイマーが形成され、ホスト分子が引き金となって金属原子間に引力が発生する。これはパイエルス転移類似の新しい機構であり、金属種に依らない一般的な性質であることを解明した。(3)ペンタセン系では、金属原子とホスト分子間に強い軌道混成が起き、金属原子は遠く離れていても引力を及ぼし合う。以上から、ホスト分子の次元性により相互作用の距離は大きく変化することが明らかになった。3.イオン化・伝導計算プログラムの開発:次年度以降の計画を考え、イオン化した不純物欠陥の電子状態計算および不純物による弾性散乱計算のプログラムを開発した。本研究の目的は、第一原理計算を用いて、有機半導体中の不純物欠陥の形態・形成機構や欠陥準位の特徴・電子物性を解明し、有機半導体の不純物物理を構築することである。本年度は、環状分子半導体(PTCDA等)及び乱れたドナー/アクセプター半導体界面を対象に、以下の成果を得た。1.金属原子の表面界面からの侵入・クラスター化特性の解明:(1)分子固体表面への金属電極蒸着の初期には、殆どの金属原子は固体中に侵入するが、電気陰性度の小さいAl、Ti等の金属原子は、PTCDA端のO原子と強くイオン結合し分子端に分散して複数個ずつ吸着する。一方、陰性度の大きいAu、Ag等は、分子との結合は弱く、O原子周辺で金属原子通しが結合して分子間金属クラスターを形成する。(2)金属原子の蒸着が進むと、Al等は表面に金属膜を形成すると共に固体中への侵入を継続するが、Au等は表面で安定な金属膜を形成して固体内部への侵入を止める。これら理論計算結果は多くの実験結果を始めて説明するものである。さらに電子構造を解析し、上記した金属原子の陰性度による侵入・クラスター化特性の相違は、金属-分子と金属原子間結合の競合によって起こることを明らかにした。2.金属不純物に起因する伝導特性の解明:ペンタセン中のAu、Ag原子の格子間欠陥による電子キャリア易動度を、第一原理計算により求めた。その結果、Auの散乱ポテンシャルはAlより局在するため、散乱強度が大きくなり易動度を減少させる等を明らかにした。3.乱れたドナー/アクセプター界面での励起子散乱の解明:乱れた有機半導体界面における励起子キャリアの散乱・解離過程を、第一原理計算に基づくモデルを用いて調べた。その結果、キャリア半径より大きな乱れは散乱強度を大きくして解離を増大させること、同時に多重散乱を通して界面に束縛された励起子を形成すること等を明らかにした。計画していた有機分子固体(PTCDA、ペンタセン等)への不純物金属原子の侵入・クラスター形成特性、中性不純物金属原子によるキャリア易動度の研究はほぼ終了した。また、分子スケールで乱れたドナー/アクセプター分子界面における電子・正孔・励起子の散乱過程をモデル計算を開発して検討した。これらの知見をもとに、欠陥のキャリア捕獲とイオン化、荷電欠陥によるキャリアの散乱等の次年度の研究計画を問題なく推進できるため。本研究の目的は、第一原理計算を用い、有機半導体の不純物欠陥の形態・形成機構や欠陥準位の特徴・電子物性を解明し、有機半導体の不純物物理を構築することである。特に最終年度は、以下の研究成果を得た。1.不純物欠陥の荷電化・キャリア散乱特性の解明:(1)有機半導体(PTCDA, pentacene)中で荷電化した様々な金属不純物欠陥の構造安定性を検討し、電気陰性度が小さく分子に分散吸着するAl等の金属原子は高々+1価にイオン化するが、陰性度が大きく固体内でクラスター化するAg等の金属原子は連続エネルギー準位を持つため容易に多価イオン化する。

(2)これら荷電特性を反映し、Al等の金属原子は正孔キャリアを捕獲しクーロン散乱でキャリア易動度を大きく低下させるが、Ag等の金属原子はキャリアを捕獲・放出し、高密度で金属的伝導、低密度でトンネル伝導を引き起こす。これら結果は、従来の実験結果を初めて説明する。2.有機半導体中の不純物欠陥研究の総括:(1)不純物原子が有機半導体中に作る欠陥準位は、電気陰性度と価電子数に依存して大きく4グループに分かれること、(2)金属原子不純物では、陰性度の小さいAl等は有機分子とイオン結合し原子間でクーロン斥力が働くため固体内で分散分布すること、(3)陰性度の大きいAg等は金属原子間で凝集するため固体内でクラスター形成すること、(4)形態を反映して、分散分布した不純物はクーロン散乱で易動度を低下させるが、クラスター化した不純物は金属伝導やトンネルリーク電流を生むこと等、不純物欠陥の形成過程や形態、欠陥が誘起するキャリア輸送特性の一般的な物理描像を解明した。これら成果は、有機半導体の不純物欠陥物理の進展をもたらし、将来のデバイス応用にも大きく寄与すると考えている。本研究では、量子力学に基づく大型数値計算を用いて、有機分子半導体中に侵入した金属不純物原子の安定な形態と電子物性を調べた。その結果、不純物原子には半導体中に分散して分布するものとクラスターをつくるものの2種類があること、前者の不純物はイオン化していてキャリアの易動度を劣化させること、後者の不純物は電子を放出してトンネルリーク電流を発生させること等を明らかにした。これら成果は、有機半導体の不純物欠陥物理の進展をもたらし、将来のデバイス開発にも指針を与えるものである。計画していた代表的な有機半導体分子(ペンタセン、ポリアセチレン等)への不純物金属原子の吸着形態、欠陥準位の特性、吸着金属原子間の相互作用の研究はほぼ終了した。また、単独不純物欠陥による弾性散乱強度とキャリア伝導度の計算法、荷電欠陥の電子状態計算法の開発・検討を行い、これら手法を用いた次年度以降の研究に対する基盤もできたため。次年度は、これまでの研究で得た知見をもとに以下の研究をおこない、研究を総括する。1.不純物欠陥の荷電化・キャリア散乱特性の解明:(1)有機半導体中で電荷を帯びた金属不純物欠陥の第一原理計算を行い、荷電欠陥の構造安定性、欠陥のキャリア捕獲とイオン化特性、電場下での欠陥の安定性を解明する。(2)中性・荷電・界面欠陥による散乱強度と易動度の検討、散乱におけるポーラロン効果の解明を行い、欠陥がもたらすキャリア輸送過程を明らかにする。2.有機半導体中の不純物欠陥研究の総括:(1)金属原子がつくる有機分子間の隙間空間に発生するクラスターの形状・安定性の化学的傾向を明らかにし、欠陥生成過程のモデル(物理描像)を構築する。また、(2)不純物欠陥が引き起こすキャリア輸送特性の物理描像を明らかにし、その化学的傾向(定性的指標)を提案する。これらの結果をまとめて、論文および有機半導体系の国際会議・学会で発表する。物性理論、表面界面物理、半導体物理、ナノサイエンス次年度以降、これまでの研究を以下のように拡張・発展させる。1.多様な有機分子固体・不純物への拡張:(1)5員環を持つThiophene等に対象を拡張し、分子のHOMO/LUMO軌道や固体内配列幾何の違いが引き起こす欠陥準位の変化を明らかにする。
放射性コロイドによる口腔癌の微小転移リンパ節検索法の確立に関する研究

[症例]口腔領域悪性腫瘍症例。[方法](PET)3.7MBq/KgのFDGを静注し、60分後と120分後に撮像する。(放射性コロイド)37MBqの放射性コロイドを頬粘膜下、耳介後部皮下に投与し、投与直後、3時間後に検査する。(免疫組織染色)原発腫瘍とリンパ節についてFDG輸送蛋白の染色を行なう。[評価](PET)視覚的な集積度(hot,warm1,warm2,cold)と半定量的集積度(初期SUV値と後期SUV値)を行なう。(放射性コロイド)視覚的集積パターンの評価とダイナミックカーブの評価を行う。(免疫組識染色)組織標本のHE染色、FDG輸送蛋白の染色度を視覚的に評価する(強度、中等度、軽度)。[結果](PET)原発巣の視覚的評価ではhot+warm1で65%、warm2を加えると約85%の検出率であった。リンパ節の視覚的評価では前年度と合わせて約75%の検出率であった。リンパ節では大きさの影響が大きく、小サイズリンパ節の検出は5%以下であった。SUV値では原発巣におけるSUV値は中等度以上のサイズのもので大部分の症例で10以上を示した。リンパ節では2から6が多かった。SUVの低かったリンパ節7例で後期SUV/初期SUVで平均26%の上昇を示した。(放射性コロイド)放射性コロイドでは欠損像、腫大像、数珠状像、縄状像などが異常像として示された。病理所見との比較ではほぼ病態を反映していた。(免疫組織染色)FDG輸送蛋白染色では原発巣とリンパ節のいずれもほとんどの症例で中等度以上の染色がみられた。(考察)PETにおける集積度と輸送蛋白染色は相関が伺えるが明らかな有意差はなかった。放射性コロイドの集積像はPETの集積度とほぼ相関を示した。また、SUVの低かった症例で後期SUVが上昇を示し、後期SUV値/初期SUV値を用いた小サイズのリンパ節検出の可能性が示された。[対象症例]口腔領域に発生した扁平上皮癌、腺癌、肉腫に対してシンチ検査(PET)を実施した。[方法]シンチ検査の6時間前より絶食し、食事性血糖値の亢進を抑制した。3.7MBq/KgのFDGを静注した。[評価]視覚的評価と半定量的評価(SUV値:病巣のFDG集積濃度比)を行った。さらに、SUV値は初期と後期について評価した。[結果](原発腫瘍群)視覚評価では約70%の検出率であったが、腫瘍サイズ、組織型によっては集積のみられないものがあった。(転移リンパ節群)視覚評価では約75%の検出率であったが、小サイズのリンパ節では集積がほとんど示されなかった。(SUV値)原発腫瘍におけるSUV値は平均11.5±9.4(52.83.4)であった。転移リンパ節におけるSUV値は平均6.1±4.3(20.51.6)であった。その他の炎症、術後性変化群のSUV値は平均5.4±4.7(19.11.9)であった。

平均値では原発腫瘍群と転移リンパ節群のSUV値がその他の炎症、術後性変化群に比較して大きな値を示した。しかし、いずれの群もSUV値は広い分布を示した。また、初期と後期の比較では悪性病変では上昇傾向が示された。(生理的、非特異的集積)唾液腺などの一部の臓器、また一部の良性腫瘍でも比較的強い集積が示され、転移リンパ節検出の障害となった。(他の検査法との比較)これまでに蓄積した、塩化タリウム、テクネMIBI、テクネレニウムコロイド、テクネ血清アルブミンによる腫瘍と転移リンパ節検出の結果と比較して、検出率は高く、とくにSUV値が有用であった。今後はこれらの臨床データをもとに、組織標本における細胞膜での輸送タンパク質発現を検討し、転移リンパ節検出を検討する。[症例]口腔領域悪性腫瘍症例。[方法](PET)検査の6時間前より絶食し、食事性血糖値の上昇を抑制する。3.7MBq/KgのFDGを静注し、60分後に撮像する。(放射性コロイド)37MBqの放射性コロイドを頬粘膜、耳介後部皮下に投与し、3時間後に検査する。(組織標本染色)原発巣と所属リンパ節の組織標本のFDG輸送蛋白の染色を行なう。[評価](PET)視覚的な集積度の評価と半定量的な集積度の評価(SUV値:病巣へのFDGの集積度)を行なう。(放射性コロイド)視覚的な集積パターンの評価とダイナミックカーブの評価を行う。(組織標本染色)組織標本のHE染色、FDG輸送蛋白の染色度を視覚的に評価する。[結果](PET)原発巣の視覚的評価では前年度の結果と合わせて、約70%の検出率であったが、大きさによる影響がかなりみられた。リンパ節の視覚的評価では前年度と合わせて約70%の検出率であった。リンパ節では大きさの影響が大きく、小サイズリンパ節の検出は5%以下であった。SUV値では原発巣におけるSUV値は中等度以上のサイズのものでは、ほとんどの症例で10以上を示した。リンパ節では平均5.6であった。原発巣とリンパ節のいずれもSUV値は広い分布を示した。(放射性コロイド)放射性コロイドでは欠損像、腫大像、数珠状像、縄状像などが異常像として示された。病理所見との比較ではほぼ病態を反映していた。(組織標本染色)原発巣とリンパ節のいずれもほとんどの症例で中等度以上の染色がみられた。(考察)PETにおける集積度と輸送蛋白染色度では原発巣とリンパ節のいずれもほぼ相関がみられた。放射性コロイドの集積像でもPETの集積度、組織標本所見とほぼ相関を示した。今後、これらのデータを詳細に解析して、微小転移リンパ節検出の可能性を探る。
低アディポネクチン血症における病態生理

アディポネクチンは炎症を抑制し糖尿病や動脈硬化などを防止する、脂肪細胞が血液中に放出するタンパク質である。糖尿病などの生活習慣病の人ではその血中濃度が低いことが分かっている。マクロファージ系細胞を高濃度と低濃度のアディポネクチンで48時間処理したところ、劇的な差は無いが免疫や炎症などに関わる多くの遺伝子の発現量が異なっていた。また、遺伝子操作により血中アディポネクチン濃度を低くしたマウスのマクロファージでは炎症を抑えるタンパク質IL-10が15分の1に減っていることや、脂肪組織が炎症を起こしやすいことが分かった。今後はこの状態の改善に既存の医薬品が使えないか検討していく予定である。本研究では、恒常的に種々の濃度のアディポネクチンにさらされた細胞がどのような状態にあるかを解明することを目的として検討を行っている。昨年度、処理するHMW濃度や前処理時間だけでなくモデルとして使用しているマクロファージ系細胞株RAW264.7細胞の処理時の細胞密度にも大きく影響されることが判明した。細胞密度が高い場合炎症性応答が促進されることより、HMW濃度以外の影響を避けるためHMW処理48時間後に細胞密度が7080%になるように系を調整し、10μg/mL HMW処理(+)と(-)のRAW264.7細胞から総RNAを調整し、GeneChip解析を実施した。HMW処理だけのため遺伝子発現が大きく変動することはなかったが、興味深い知見が得られてきており更にクラスター解析やパスウェイ解析の結果も参考に今後詳細に解析を進める予定である。上記の検討以外にin vivoでの状態を確認するために、当教室が所有する血中アディポネクチン濃度が低い(adiponectin anti-sense transgenic mouse, AsTg)マウスと野生型マウスのマクロファージでも検討を行っている。両群のマウスより常在性腹腔マクロファージ(無刺激、定常状態)を回収して解析したところ、何の処置もしていないAsTgマウスのマクロファージではIL-6、TNF-αの発現が亢進し、抑制性サイトカインであるIL-10が低値を示していた。また、このマクロファージを通常のFCS入りの培地で一晩培養したところこの表現型は消失し、野生型マウスと同様の表現型に回復した。これらの結果はアディポネクチン低値の環境下で炎症応答に傾いた表現型を獲得していることを示している。本研究は、低濃度のアディポネクチンにさらされている細胞がどのような状態にあるために易炎症になっているかを解明することを目的として検討を行った。HMW濃度以外の影響を避けるためHMW処理48時間後に細胞密度が7080%になるように系を調整し、10μg/mL HMW(+)と(-)処理、(-)ではFBS中の牛アディポネクチンを低濃度アディポネクチンとした、のRAW264.7細胞から総RNAを調整し、GeneChip解析を実施した。その結果、HMW処理だけのため遺伝子発現が大きく変動することはなかったが種々のタンパクの弱い発現誘導や抑制が、また、パスウェイ解析でも多くの因子の発現が変化していた。そこで、変動が認められた因子を中心にHMW前処理のLPS刺激への影響について解析を行ったところ、LPSによるTNF-αの誘導は阻害できないがIL-1βの誘導を阻害する機構としてGSK-3βの不活化抑制やNFkBの核移行を阻害する因子の発現の違いなどが確認できた。一方、in vivoでの状態を確認するために、当教室が所有する血中アディポネクチン濃度が低い(adiponectin anti-sense transgenic mouse, AsTg)マウスと野生型マウスを用い、今年は予備実験として脂肪組織、肝臓、腸での遺伝子発現解析を炎症性、抗炎症性サイトカインを中心に実施した。その結果、個体差が大きく基底状態では有意差がつかなかったが、炎症を誘導するとAsTgマウスの脂肪組織では炎症応答が有意に強く誘導されることより、今後、各組織のGeneChip解析を各々4匹以上で行い、AsTgの易炎症状態をもたらしている遺伝子発現変化について解析し、この状態の改善に既存の医薬品が使えないか検討していく予定である。アディポネクチンが炎症性の刺激を抑制すること、これは濃度依存的で、また、前処理時間の長さに依存すると報告されている。しかし、血中アディポネクチンが恒常的に受容体を介して細胞にどのように作用しているかを検討した報告はない。そこで本研究では、先ず、恒常的に種々の濃度にさらされた細胞がどのような状態にあるかを解明することを目的とした。ヒト血中高分子量アディポネクチン(high molecular weight adiponectin、HMW)は我々の検討では男性で約2μg/mL、女性で約4μg/mL程度であった。

また、マウス骨髄マクロファージのRANKL処理による破骨細胞への分化をHMWは1μg/mL程度でも抑制することから、易炎症惹起状態を呈する低アディポネクチン血症の病態をRAW264.7細胞で再現するための条件検討を行った。検討の過程で細胞密度が大きく影響することが再現性良く認められ、細胞密度が低い条件では1μg/mLでも抗炎症効果が認められるが密度が高い状態だとHMWの抗炎症効果が減弱した。一方、平行して行ったトランスジェニックマウスを用いた炎症モデルの検討では、全身でアディポネクチンの発現を抑えたアンチセンスマウスでは血中濃度が野生型の8割程度と若干の低下にもかかわらず炎症を起こしやすく、また、刺激によるCa流入が起こりやすい、すなわち炎症性応答を起こしやすい状態にマクロファージがなっており、その原因となる遺伝子変化が基底状態ですでに起こっていることが判明した。低アディポネクチン血症すなわち易炎症病態を再現するためには、単純に低濃度のHMWで長期間処理するだけでは十分ではなく、細胞密度がかなり重要なファクターとなることより、1μg/mLのHMW処理で抗炎症効果がかろうじて認められる細胞密度条件で1と10μg/mLのHMW処理を行い今後検討を進める予定である。研究実績の概要の項で記載したように、低アディポネクチン血症すなわち易炎症病態を再現するためには、単純に低濃度のHMWで長期間処理するだけでは十分ではなく、細胞密度がかなり重要なファクターとなることより当初の単純な1μg/mLと10μg/mL HMW濃度での処理による比較ではなく、先ずはアディポネクチンの及ぼす抗炎症性の変化をHMW 10μg/mL 48時間処理により解析することにした。その結果、HMW 10μg/mL 48時間処理では劇的な変動は認められないが、ケモカインレセプターや、IL-1などからのシグナル系やMAPカイネース、PLD4やAlox5など炎症性物質産生に関与する遺伝子の発現低下や、CHOPなどの転写を阻害する遺伝子、metallothionein 1や2、solute carrierfamily、IFNにより誘導される種々のタンパクの弱い発現誘導など興味深い変化が確認できている。これらの結果はON/OFFではなく量的にコントロールされていることを示しており、変動する遺伝子数はそれほど多くはないもののそれぞれの関係などまだ検討することは多い。また、アディポネクチンで報告されているAMPKの活性化やcAMP増加についてはHMW処理でもAMPKのリン酸化であれば5分、cAMP増加では20分をピークとした反応が起こることが確認できた。しかし、48時間処理といった慢性刺激下でこれらの状態を解析することはAMPKであれば培地交換なしでこの時間培養することだけでリン酸化がおこり、また、cAMPの測定のために基質を取り込ませる前処理で変化してしまい、検討したが結果は得られなかった。このように当初計画より処理法などを変更したり、断念せざるを得ない検討も存在したが概ね目的通り進行している。研究実績の概要の項で記載したように、単純にアディポネクチン濃度により細胞にエピジェネティックな違いが起こるのではないことを初年度は解明した。
在宅酸素療法対象者の酸素不飽和レベルに基づく管理指標の開発に関する縦断的研究

1.目的HOT患者の24時間の日常生活における酸素飽和度(以下:Sao_2)の脱飽和時間比率と低下度を同時に評価できる管理指標(DIHOT-F)の再現性、患者教育による変動性を示す。2.対象と方法1994年までにDIHOT-Fを評価したHOT対象者10例のうち、追跡し得た8例を対象とし、方法は再度訪問調査によりDIHOT-Fを評価し、再現性を管理区分、患者教育内容、日常生活等を加味して検討した。3.結果1)対象の背景:主疾患はCOPD5例(62.5%)、珪肺3例(37.5%)、酸素使用時間は平均10.2時間/日であった。2)DIHOT-Fの再現性:覚醒時DIHOT-Fは前回評価時平均156.9±117.5、今回評価時平均73.2±61.7で有意に低下し、教育によるDIHOT-F値の低下が示された(P<0.05)。一方,睡眠時DIHOT-Fは第1回評価時平均9.4±7.1、今回評価時平均91.2±99.9で平均値は上昇していたが、4例で再現性が高かった。3)教育内容及び日常生活からみたDIHOT-Fと管理区分の変化:管理区分別の変化は、第1回管理区分B3例、区分C2例、区分D1例、区分E2例であったが、今回評価で好転した者は5例(62.5%)であった。主な教育内容は外出・負荷動作時の酸素使用法、呼吸法、禁煙。酸素チューブの延長、社会制度の活用などであった。教育の結果、患者自信が日常生活に応じた酸素使用を受け入れ、呼吸法を修得でき、減煙が成功しまたは、DIHOT-Fにより酸素処方が修正された例などで管理区分が好転していた。4.考察在宅生活を同一条件にしてDIHOT-Fを評価し再現性を検討することは困難であったが、同一条件を得やすい睡眠時DIHOT-Fについては再現性があるものと考えられた。本指標はSao_2脱飽和を定量的にとたえ、かつ鋭敏性が高いため、特に覚醒時の日常活動下のSao_2低下を防ぐ教育に利用でき得ることが示唆された。