hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
気道過敏症の病態発現機構の解明に関する基礎的研究

Hisのエ-ロゾル吸入による気道収縮は硫酸アトロピンエ-ロゾル(005,0.4%)の前投与によって、一部の濃度、(002-0.04%)で有意に抑制された。これらの実験成績から、BHSおよびBHRは気道収縮の感受性(閾値、反応の強さ)の点で明らかに異なっており、喘息の基礎病態である気道過敏性を研究する上で有用なモデル動物であることが明らかになった。本研究は、喘息の原因となる気道過敏症の発現機構ならびに病態の解明を目的として行った。これまでの研究で、先天性の気道過敏症モデル動物であるBHS系およびBHR系のモルモットについて、アセチルコリンやヒスタミンなどの気道収縮薬に対する気道反応の相違を呼吸生理学的指標の解析によって詳細に検討してきた。その結果、両者には気道収縮の感受性ならびに気道収縮の大きさに明瞭な差の存在することが明らかとなった。本年度は、その機序の解明を目的として、摘出気管の収縮性に関して検討を加えるとともに、咳誘発物質による咳反射の実験も行った。摘出気管レベルにおいてもBHS系はBHR系に比べてアセチルコリンに対する収縮力が大きく、カルバコールによる実験結果との比較から、両系統においてアセチルコリンエステレースの働きに相違のあることが明らかとなった。一方、クエン酸エ-ロゾル吸入による咳反射の発現頻度や潜時にも差異が認められ、BHS系はBHR系に比べて発現頻度は有意に高く、潜時は有意に短かった。また、この差異には気道平滑筋の緊張度や迷走神経反射の強さが密接に関与していると考えられた。先天性に気道反応性が異なる2系統のモルモット、すなわちBHS(気道過敏)系およびBHR(気道非過敏)系について、ヒスタミンのエ-ロゾル吸入または静脈内投与、およびブラジキンの静脈内投与による気道収縮反応を調べるとともに、ヒスタミンについては、気道収縮反応における迷走神経反射の役割を明らかにする実験を行った。また、アセチルコリンおよびカルバコールに対する気道平滑筋の反応性をin vitroの実験系で行い、in vivoにおける成績と比較した。ヒスタミン(0.010.08%)エ-ロゾルの吸入によって、BHS系では0.01%または0.02%といった低濃度においても有意な気道収縮反応(1回換気量の減少、気道抵抗の増大)が出現したが、BHR系では最高濃度である0.08%においてのみ有意な気道収縮反応が認められた。しかしながら、ヒスタミンの静脈内投与(0.516mg/kg,i.v.)では、両系間で気道収縮反応の有意差は認められなかった。一方、アトロピンエ-ロゾル吸入後のヒスタミンエ-ロゾル(0.08%)に対する反応性は、1回換気量の低下が両系とも有意に抑制される一方、気道抵抗の増大はBHS系でのみ有意に抑制された。以上の成績から、両系間でヒスタミンに対する感受性が明瞭に異なっているが、感受性の相違は投与ルートによって影響を受けること、またエ-ロゾル吸入の場合では両系とも迷走神経反射の関与が明らかであるが、迷走神経反射への依存度は、BHS系がBHR系に比べ比較的高いことが示唆された。一方、ブラジキニンの静脈投与(0.1mg,1mg,10mg/kg)による気道収縮反応に関しては、BHSはBHRおよびHartley系モルモットに比べて有意に高い気道収縮を示すことが明らかになった。さらに、アセチルコリンに対する気道収縮にはM3受容体が関与していること、BHS系では、アセチルコリンエステラーゼ活性の低下が気道過敏性に影響を及ぼしていることが示唆きれた。
剛・柔の効果的組合せにより高靭性・応力集中低減を実現する革新的海洋構造技術の開発

本研究は、海洋構造物をはじめとする広範な工学的構造物に用いられる既存の構造材料、複合構造の概念を大きく覆す「剛・柔材料を効果的に組み合わせることにより高靭性・応力集中の低減を容易に実現可能な新しい発想に基づく構造システム」の研究開発を目的としたものである。本研究により合理的な積層構造、中詰剤充填パイプインパイプ、カーボンナノチューブを用いた次世代構造材料といった幅広い構造技術が提案され、その高い構造性能について主に解析的見地から新規な研究知見が得られた。本研究は、海洋構造物、社会基盤構造物等に広く用いられる既存の構造材料、複合構造の概念を大きく覆す、「剛・柔材料を効果的に組み合わせることにより高靭性・応力集中の低減を容易に実現可能な、ナノテクの知見を応用した新しい発想に基づく構造システム」の研究開発を目的とするものである。初年度である平成24年度に得られた研究成果を以下に列挙する。(1)剛・柔の簡易な二次元規則積層構造モデルを構築し、定式化を行った。その結果、柔層の存在しない構造に対して剛・柔の規則積層構造は亀裂進展に対する応力集中低減効果があることが解析的に確認された。(2)他媒体に埋め込んだカーボンナノチューブの機能を解析的に検証した。具体的には他媒体との相互作用による外圧印加時のカーボンナノチューブの力学的性質の変化を、分子動力学モデルおよび連続弾性体モデルを構築し、両モデルに対して座屈変形解析を実施した。その結果外圧印加の状態や多層化などによりいくつかの特異な幾何形状の変化がみられ、それによる導電性変化の可能性が見出された。分子動力学解析においては大変形の解析を正確に行うことができ、連続体モデルでは計算負荷の少ない解析を行えることから、双方の利点を活かした諸特性の検証が可能となった。(3)高靱性パイプとして期待されるパイプインパイプの曲げ挙動について、断面偏平の観点から検証し、塑性領域での高靱性化に提案する砂粒子コア材の有用性を確認した。平成25年度に得られた研究成果を以下に列挙する。(1)平成24年度に構築した構造解析モデルを用いて、カーボンナノチューブの静水圧荷重および純曲げ作用時に生じる特異な幾何形状について詳細な検討を行った。解析では連続体モデルに加え分子動力学解析も並行して行い、座屈後挙動の詳細評価を可能とするとことで、外圧印加による特異変形が引き起こす導電性等諸特性の変化について検討を実施する道筋を構築した。(2)高靱性パイプとして期待されるパイプインパイプの曲げ挙動について、解析的にその有用性を実証した。(3)ナノチューブ等線状構造物を他媒体に埋め込んだ際に生じうる螺旋座屈のメカニズムについて、構造力学的観点から検証を行い、単純なモデルではあるが挙動を記述する構造解析モデルを構築し、特異な座屈現象の基礎的理解を得た。本研究は海洋構造物をはじめとする広範な工学的構造物に用いられる既存の構造材料、複合構造の概念を大きく覆す「剛・柔材料を効果的に組み合わせることにより高靱性・応力集中の低減を容易に実現可能な新しい発想に基づく構造システム」の研究開発を目的としたものである。初年度、第2年度までに主に解析的観点から数理モデルの構築、解析コードの開発などを行ってきた。最終年度はそれを基に研究を推進し、以下の成果を得た。(1)単層および多層カーボンナノチューブの外圧作用時の大変形挙動について、分子動力学解析により再現した。この解析はこれまで用いてきた円筒シェル理論ベースの解析では再現できなかった欠陥を有する、いわゆる不完全系のカーボンナノチューブの解析を可能としたものである。これにより二層カーボンナノチューブにおいて欠陥部分が突出する特異な現象を見出し、かつ除荷後に完全系では見られない塑性変形が生じることを明らかにした。この結果はカーボンナノチューブの工学的利用、特に他媒体の内包などといった観点から有用な知見であり、さらに検証を進める予定である。(2)力学解析により得られるカーボンナノチューブの変形特性と導電性変化の関係についてバンドギャップ計算により検証を行った。これにより座屈直後の変形性状ではなく、変形進行後の原子同士が近づくことにより、導電性が大きく変化することが明らかとなった。26年度が最終年度であるため、記入しない。構造力学、応用力学26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は新たに新規な構造解析を実施するための研究協力体制を構築することができ、それにより当初の予定を超える内容の解析が可能となった。その他の項目についてもおおむね予定通りの進展をみており、かつ初年度でありながら研究成果に対する査読論文投稿も既に複数なされていることから、上記の自己評価とした。

初年度に引き続き着実に研究を推進し、複数の海外学術雑誌への掲載に至るなど、順調に進展したといえる。特に分子動力学解析については当初の予定以上の進展がみられたと考えている。また本年度は本研究に関連する英文単行本の出版、および二重管構造の国内特許登録などの成果も挙げることができた。これらの点から上記自己評価とした。26年度が最終年度であるため、記入しない。初年度から順調に研究を進展させているため、当初の計画定通り研究を推進する予定である。最終年度である平成26年度はこれまでの研究の集大成として、ナノチューブの幾何形状変化と電気的諸特性変化を評価することを主眼に研究を実施する。研究予算の効率化を進めた結果、予算を翌年度以降に繰り越すことができたため、今後特に研究成果発表や発展的な解析技術開発に重点的に繰越予算を充てていく予定である。研究の効率化により、予定額より少額で本年度の研究を遂行することができたため。最終年度にこれまでの研究成果を積極的に外部に公表するための費用として使用する。
膵β細胞におけるCK2βの役割

2型糖尿病において、膵β細胞ではインスリン合成の負荷により小胞体ストレスが強く、膵β細胞量は減少している。CK2は小胞体ストレスに対して保護作用を持つことが以前より報告されていたが、詳しい機序は不明である。今回の研究では、膵β細胞でCK2を活性化することにより小胞体ストレスに耐性となることを見出し、その機序について検討している。また、CK2活性化により膵β細胞量の維持、耐糖能の改善につながると考えられる。
抗生物質耐性遺伝子をもたない歯周病原細菌生菌ワクチンの開発

Porphyromonas gingivalisのリジンジンジパイン完全欠損株で薬剤耐性遺伝子を有しない変異株などのP.gingivalisのワクチン候補変異株の作製は成功しているが、変異株作製の親株としてATCC33277を使用した関係で動物実験においてワクチン接種の効果を判定する上で、困難を生じている。すなわち、33277株自体が弱病原性株であり、今回作製した変異株がどの程度弱毒株になっているかの判定が難しいということである。この問題を解決するため、従来、動物実験で用いていたBALB/cマウスからC57BL/6マウス系統のノックアウトマウスに変えて33277株の病原性を検討した。ノックアウトマウスとしてinnate immunityに欠損のあるTLR2ノックアウトマウスとMyD88ノックアウトマウスを使用した。P.gingivalis菌株は野生株である33277株(弱毒株)、W83株(強毒株)、および33277の線毛欠損変異株であるFimA欠損株、Mfa1欠損株、FimA Mfa1欠損株を使用した。マウスの背部にの皮下に10の9乗個および10の10乗個の生菌を接種し、経時的に膿瘍形成等のマウスに対する効果を観察した。その結果、弱毒株である33277株においてもTLR2ノックアウトマウスとMyD88ノックアウトマウスでは病原性が高いことがわかった。特にMyD88ノックアウトマウスでは顕著な結果が得られた。舎回の結果からP.gingivalisワクチン株の評価法としてinnate immnityに欠損のあるマウスを使用することが効果的であることが示唆された。KGPプロテアーゼ遺伝子の欠損株を構築した。KGP遺伝子欠失株はKGPプロテアーゼ活性が消失するとともに血液寒天平板上で野生型のP.gingivalisが示す黒色集落形成能が失われる。この性状は変異の導入の頻度を検定するうえで非常に効果的である。KGP遺伝子内に欠失領域をもつDNAをスーサイドプラスミドに組み込み、この組換えプラスミドをメチオニン分解酵素の欠損株(既に作製済み)にエレクトロポレーションで導入し、エリスロマイシン耐性株を分離した。エリスロマイシン含有平板に塗抹することで容易に得られた。エリスロマイシン耐性株の染色体DNAを抽出し、KGP遺伝子領域に環状プラスミドDNAが挿入されていることを確認した。メチオニン分解酵素の欠損株はトリフルオロメチオニンに抵抗性であるが、得られた株は野生型メチオニン分解酵素遺伝子DNAも同時に導入されているため、トリフルオロメチオニンに感受性になっていた。つぎに得られたトリフルオロメチオニン感受性株(組換えプラスミドDNAが染色体内に挿入された株)をトリフルオロメチオニン含有寒天平板に塗抹し、トリフルオロメチオニン抵抗性株を分離した。この操作で組換えプラスミドDNAが取り除かれた株(抗生物質耐性遺伝子DNAを欠落した株)が得られるが、この中に血液寒天平板上で非黒色集落を形成するクローンが存在した。DNA解析よりKGP遺伝子内に欠失が残るクローンであることが判明した。現在、このKGP欠損株からRGP遺伝子をさらに欠失した株を同様な方法での作製を進めている。
優れた授業実践技量の継承と発展を目指した国語科教師の授業研修プログラムの開発

本研究の目的は、国語科教師による、他の教師の優れた授業力を活用しながらの、授業改善に向けた研修のあり方を提示することである。研究の方法として、全国各地で優れた授業を実践している、高等学校国語科教師を対象とした聞き取り調査を行い、各教師のライフストーリーを解釈し、授業実践を通して培ってきた経験知の概念化を試みた。優れた国語科授業は、授業技術を豊富に持っていれば実現できるものではない。優れた国語科授業を実践する教師は、常に、教材・学習者・教師自身の個性と、それらの相互関係といった、授業という状況の全体を見極め、多種多様な授業技術を有機的に引き出しながら学習者の学びを高める働きかけを重ねていることが明らかになった。本研究は、国語科教師が自ら授業改善を図るための研修プログラムの開発を目的とする研究の一部に位置付けられるが、特に、「読むこと」の領域における、他の教師の優れた授業実践技量を生かした授業改善研修プログラムの開発を目指して研究を進めている。本年度は、高等学校の国語科の先生のうち、学習者の「読むこと」の学びを広げ深めるべく、優れた授業を実践しておられる数名の先生を対象に、授業作りに関する聞き取り調査を行った。調査では、授業実践技量を構成する諸要因のうち、教師が保有する実践的知識に焦点を絞って聞き取りを行った。研究の方法としては、現在の実践的知識の特質とその獲得過程、および過去の蹉跌経験における実践的知識が浮き彫りになるよう、ライフストーリー・インタビュー法を採用した。調査の結果、ある先生の場合、蹉跌経験時と現在とでは、実践的知識の構造も機能も、教師が学習者に知識を伝授する形態のものから学習者の学びを引き出す形態のものへと、全く異なるものに変容していることが判明した。この成果については、第113回全国大学国語教育学会岡山大会にて口頭発表を行った。なお、本研究は、優れた授業実践技量を普遍化・画一化し、その技量を多くの教師に一方向的に継承させることを目的としたものではない。優れた授業実践技量は、学校の特色や子どもの学習歴などの違いごとに分類し、具体化を図る。そして、研修に臨む教師が、勤務する学校・子どもの実態に合った授業実践技量を複数のモデルの中から選択・参照することによって、自己の授業の問題点を発見し授業改善を図ることができるような過程を、授業研修プログラムとして開発することを目的としている。本研究は、国語科教師が自身の授業を改善していくための研修モデルの提示を目的としているが、とりわけ、他の教師の経験知を生かした授業改善のあり方について考察した。研究の方法として、数名の現職高等学校国語科教師を対象に聞き取り調査を実施し、各教師の授業改善に向けた取り組みの軌跡を明らかにした。具体的な成果として、授業実践のつまずきとその克服過程を異にする複数の教師の自己研鑽の軌跡を事例研究としてまとめ、『和歌山大学教育学部紀要-人文科学-』(第59集、和歌山大学教育学部)、および『教育実践学研究』(第10巻第2号、日本教育実践学会)に発表した。さらに、研究授業における同僚教師の批評の取り入れ方の異なる3名の国語科教師の授業改善に向けた取り組みの違いを考察し、その成果を日本教科教育学会第34回全国大会(宮崎市)にて口頭発表した。その結果、1人ひとりの教師が自身の授業を改善する際には、現在直面している課題状況だけを見つめていたのでは不十分であることが明らかになった。過去から現在に至る、さまざまな授業実践経験を大局的に見通し相互に関連付けながら、課題解決の方向を探ることが必要である。つまり、授業改善という教師の学びは、外在する一般法則を参照すれば実現されるというものではなく、当該教師固有の履歴を背景としてふまえ、その教師だからこそできる個性的な取り組みによってこそ実現されるものであるという結論を得た。
キンカン属植物への細胞工学的手法によるカンキツゲノムの部分的な導入に関する研究

ブンタン半数体の雄性配偶子の稔性回復機構や雌性配偶子の形成過程を明らかにするために,半数体の雄性および雌性配偶子における減数分裂について詳細な細胞遺伝学的解析を行い,その形成過程を調査した.半数体における減数分裂過程を調査した結果,半数体は連続した2回の分裂を行っていた.しかしながら,一部の分裂細胞では減数分裂の異常が認められた.第一分裂後期においていくつかの一価染色体が両極に分配されず,赤道面付近に残るものや周りの細胞が第二減数分裂過程にもかかわらず,赤道面に9個の一価染色体が並列し,両極に分裂するものが観察された.さらに,花粉四分子期において,`晩白柚'では99.3%が四分子であったのに対し,半数体では、一分子から六分子の小胞子型が観察され,二分子が24.7%と,非常に高い頻度で出現していた.一方,雌性器官では,雌ずいの中心部で花柱溝同士が結合しでおり,花粉管の伸長が阻害されでいた.また,雌性配偶子形成では,胚のう母細胞が全く形成されないため,いずれの時期においても正常に発達した胚のうは全く観察されなかった.以上の結果より,ブンタン半数体の雄性および雌性配偶子形成において,雄性配偶子は第一減数分裂中に異常が起こり,すなわちFDRのような退行現象が起こり,半数体の稔性を回復しているものと推測された.また,半数体の雌性不稔の原因として,雌ずい中の花柱溝の異常と胚のう母細胞の無形成によることが明らかとなった.ブンタン半数体の雄性配偶子の稔性回復機構や雌性配偶子の形成過程を明らかにするために,半数体の雄性および雌性配偶子における減数分裂について詳細な細胞遺伝学的解析を行い,その形成過程を調査した.半数体における減数分裂過程を調査した結果,半数体は連続した2回の分裂を行っていた.しかしながら,一部の分裂細胞では減数分裂の異常が認められた.第一分裂後期においていくつかの一価染色体が両極に分配されず,赤道面付近に残るものや周りの細胞が第二減数分裂過程にもかかわらず,赤道面に9個の一価染色体が並列し,両極に分裂するものが観察された.さらに,花粉四分子期において,`晩白柚'では99.3%が四分子であったのに対し,半数体では、一分子から六分子の小胞子型が観察され,二分子が24.7%と,非常に高い頻度で出現していた.一方,雌性器官では,雌ずいの中心部で花柱溝同士が結合しでおり,花粉管の伸長が阻害されでいた.また,雌性配偶子形成では,胚のう母細胞が全く形成されないため,いずれの時期においても正常に発達した胚のうは全く観察されなかった.以上の結果より,ブンタン半数体の雄性および雌性配偶子形成において,雄性配偶子は第一減数分裂中に異常が起こり,すなわちFDRのような退行現象が起こり,半数体の稔性を回復しているものと推測された.また,半数体の雌性不稔の原因として,雌ずい中の花柱溝の異常と胚のう母細胞の無形成によることが明らかとなった.九州特産果樹である'晩白柚'の雌性配偶子由来半数体が発芽7年目にして開花した。そこで、この半数体の形態的特徴とその生殖機能について調査した。さらに、半数体新梢へのコルヒチン処理による二倍性半数体の育成について検討した。その結果、半数体の葉は,二倍体と比較して有意に小さく,細長くなる傾向が認められ,単位面積当たりの葉重が有意に軽く,葉が薄かった.気孔の大きさも縦径と横径ともに有意に小さかった.また,半数体の花は,二倍体と比較して有意に小さくなり,奇形が多く観察された.半数体の花粉は,乾燥花粉の縦径と横径ともに二倍体と比べ有意に小さく,やや丸くなる傾向が認められた.花粉の染色稔性と発芽稔性は,二倍体と比較して著しく低かったが,それぞれ1.6%と0.4%の稔性を示した.次に,半数体といくつかの二倍体とを交雑した結果,半数体を種子親とした場合には,全く着果しなかったが,二倍体品種を種子親にした場合には,'宮内'イヨカンなど4品種で着果が認められ,完全種子が得られた.それらの種子を播種したところ,ほとんどの種子が正常に発芽し,実生が得られた.これらの実生の倍数性を解析した結果,二倍体と三倍体であった.また,'宮内'イヨカンの実生は,RAPD分析の結果と'晩白柚'の葉の特徴である翼葉を有することから雑種であることが明らかとなった.さらに,二倍性半数体を獲得するために,新梢にコルヒチン処理を行った結果,0.05%と0.1%の処理区で二倍体と四倍体の混数体がそれぞれ1本ずつ得られた.そこで,それらの混数体を1芽ずつカラタチ台に接木し,新たに伸長した新梢をフローサイトメーターで解析した結果,二倍体と四倍体の混数体の系統から完全な二倍体と推定される個体が得られた.カンキツゲノムを部分的に導入するために,半数体'晩白柚'を材料としていくつかの単胚性品種と正逆交雑を行った.

材料には,半数体'晩白柚'や'清見'など9品種を供試した.完全種子は常法によりシャーレ上に播種し,不完全種子は培養を行い,実生を育成した.得られた実生は,フローサイトメーターと染色体観察により倍数性を解析した.また,それらの幼葉から全DNAを抽出し,RAPD分析により雑種性の解析を行った.さらに,'清見'と半数体'晩白柚'との交雑で得られた実生は,Befuら(2000)の方法に従いクロモマイシンA_3(CMA)染色による染色体識別を行った.半数体'晩白柚'といくつかの二倍体品種との正逆交雑を行ったところ,半数体'晩白柚'を種子親とした場合,全く着果が認められなかった.一方,花粉親とした場合には,全ての交雑組合せで着果が認められ,'清見'等の4品種では種子が得られたが,二倍体'晩白柚'では種子が得られなかった.得られた種子を播種したところ,完全種子は正常に発芽し,完全な植物体が得られた.それらの倍数性を調査した結果,'南風'との交雑で三倍体が1個体確認された以外はいずれも二倍体であった.なお,異数体については全く観察されなかった.次に,RAPD分析による雑種性の解析を行ったところ,それらの実生はそれぞれの両親の特異的なバンドパターンを有していた.さらに,'清見',半数体'晩白柚'およびその交雑から得られた実生についてCMA染色による染色体識別を行った結果,半数体'晩白柚'の染色体構成は1A+1B+1C+2D+4Eであり,ブンタン類特有のA型染色体を有していた.得られた実生の染色体にはA型染色体が確認された.'清見'ではBE型の染色体で構成されていたことから,得られた実生のA型染色体は半数体由来であると推察された.以上のように,得られた実生は雑種であることが確認され,本半数体に正常なn=9の花粉が生産されていることが明らかとなった.しかし,異数体は作出できず,部分的なカンキツゲノムの導入はできなかった.今後,半数体'晩白柚'における雌性および雄性配偶子の形成過程について詳細な細胞遺伝学的解析を行う必要があると考えられた.キンカン属植物への細胞融合による部分的なゲノム導入を行うために、まず、シトロプシスガブネンシス(Citropsis gabunensis Swing. & M.Kell)と`ショウグン'マンダリン(C.reticulata Blanco)との組み合わせで手法の開発を行った。次に、`森田ネーブル'オレンジ[C.sinensis (L.)Osbeck var.brasiliensis Tanaka]とマルキンカン(Fortunella japonica Swingle)との珠心カルスプロトプラスト同士の電気細胞融合によりゲノム導入を行った。シトロプシスガブネンシスと`ショウグン'マンダリンとの電気細胞融合により獲得された再生植物体は,旺盛に成育し,両親の中間である三出葉を形成した.また,そのゲノムサイズは`ショウグン'マンダリン(0.75pg/2C)とシトロプシス(0.97pg/2C)をほぼ合わせた大きさである1.75pg/4Cを示しており,染色体観察を行ったところ,四倍体(2n=4x=36)と確認された.さらに,核DNA解析の結果,再生植物体は,両融合親の核DNAをもつ体細胞雑種であることが証明され,オルガネラDNAの解析により,シトロプシスのcpDNAと`ショウグン'マンダリンのmtDNAを有することが明らかになった.以上のように、電気細胞融合法を確立した。次に、`森田ネーブル'オレンジとマルキンカンとの珠心カルスプロトプラスト同士の電気細胞融合による属間体細胞雑種の作出を試みた.その結果,獲得された再生植物体は,両親の中間的な形態を示し,フローサイトメーターと染色体観察により,四倍体(2n=4x=36)であることが確認された.また,RAPD法とCAPS法による核DNAの解析の結果,得られた再生植物体は,両融合親の核DNAを有する体細胞雑種であることが証明され,オルガネラDNAの解析により,cpDNAとmtDNAは共にマルキンカン由来であることが明らかとなった.以上のように、得られた体細胞雑種はすべて対称融合雑種であり、部分的にゲノム導入された個体は得られなかった。
脊椎動物のβ-ガラクトシド結合性レクチンの構造・機能・役割

β-ガラクトシド結合性レクチンは、脊椎動物に普遍的に見出され、殊に胚組織やある種のガン細胞等で顕著に発現されることから、未だ明らかになっていない基本的かつ重要な生体制御に関わっていると考えられる。このレクチンの生理機能の解明ならびに医学応用への道を開くことを目指して多面的な研究を行なった。まずヒト胎盤レクチンのアミノ酸配列をタンパク側から決定した。またcDNAクローンの単離と塩基配列の決定にも成功した。ニワトリ16K型についてもcDNAクローニングに成功し、タンパクをコードする領域の大部分の塩基配列を決定した。得られたこれらの一次構造を先に明らかにしたニワトリ14K型も含めて比較すると相互に顕著な類似性が見られ(例えばヒトとニワトリ14K型で50%)、これらが共通の祖先遺伝子に由来するものであることが明らかとなる一方、これまで知られている他種のタンパクにははっきりした類縁性を示すものはなく、これが独立したファミリーを形成するタンパクであると考えられた。細胞外マトリクスに局在するにも関らずN末端にシグナル配列を持たないとうい特徴もこれらレククチンに共通していた。前述のヒトレクチンcDNAを発現ベクターに組込むことにより、ヒトレクチンを生産する大腸菌株を樹立し、医学応用等への道を開く大量調達が可能となった。一方では、抗ニワトリ14K型抗体を用いた電子顕微鏡による組織観察から、表皮細胞のデスモソーム周辺への分布が示され、このレクチンの細胞間相互作用への関与が示唆された。またガン組織についての検討では、この種のレクチンが正常組織と異なり、遊離状態で存在していることが示され、ガン化などの細胞の基本的な性質の変化に伴なうレクチンの性質の変化に興味が持たれた。1.ヒト胎盤レクチン,ニワトリ16Kレクチンの一次構造決定.核酸レベルでの解析を目指し,それぞれに対するmRNA画分を調製し, CDNA合成後, λgt11に挿入してライブラリーを作製した.抗体によるスクリーニングで多数のポジティブクローンを得たので,現在確認作業中であり,順次配列を決定する予定である.またアミノ酸レベルでの解析も平行して行っており,特にヒト胎盤レクチンについては,各種特異的切断法による断片を分離しており,自動エドマン法を適用して配列決定中である.ニワトリ14Kレクチンとの類似性はかなり高い.2.分子レベルでのレクチンの機能解明.諸性質の研究にアフィニティークロアトグラフィーの利用がきわめて有効なことがわかっているので,更に高度化すべく,高性能アフィニティークロマトグラフィー用吸着体を各種作製し検討した.特にニワトリ14Kレクチンに対するモノクローン抗体を固定化した吸着体を用いると,糖結合特異性を含めた諸性質の分析が可能になるなど,有益な知見がえられた.3.生物学的役割.ニワトリ14Kレクチンについて,発生途上の皮膚における役割を調べるために,抗体標識し電子顕微鏡で観察した.表皮細胞においては,デスモソーム周辺に明らかに分布しており,細胞間相互作用に関与していることが強く示唆された.ヒトにおけるレクチンの役割を解明する目的で,各種組織,特にガン組織について,ラジオイムノアッセイ,ウエスタンブロッティング等の手法により分析し,肝臓,肺臓等においては,ガン化によりレクチン含量が増加すること,またこれに対するレセプターの性状も変化することが示唆された.1.ニワトリ16K型レクチンの一次構造について、核酸側とタンパク側の両方から解析を進めた。ニワトリcDNAライブラリーより単離したcDNAクローンの塩基配列を決定したところ、先にタンパク側から決定した部分配列に対応する塩基配列が含まれていることが示され、このクローンが求める16KレクチンcDNAであることが明らかとなった。

得られたクローンはC末端をコードする部分が一部欠けているため、これをプローブとしてさらに全長クローンを探索している。一方、タンパク側からは、HPLCによって新たなペプチドを分離して構造解析を進めており、近く核酸側、タンパク側の両方から独立に一次構造の決定ができる見込である。2.ヒト胎盤レクチンについては、タンパク側からの一次構造解析を完了した。またヒト肺のcDNAライブラリーより単離したcDNAクローンの塩基配列を決定し、これから推定されるアミノ酸配列が先に決定したタンパク側から得られた配列と完全に一致した。さらにこのcDNAを発現ベクターに組み込むことにより、ヒトレクチンを生産する大腸菌株の樹立に成功した。これにより、臨床医学的な応用を含む様々な研究に供給できる大量のレクチンの入手が可能となる。3.ラジオイムノアッセイ等の結果から、ヒトなどのガン組織には、正常組織とは異なり、糖に結合しない遊離の状態のレクチン様の物質の存在が示唆された。これについてのさらに詳しい生化学的な検討のため、マウス形質転換繊維芽細胞L929からのレクチンの単離精製を行なった。その結果、この細胞にハプテン糖を含まない抽出液が抽出でき、アシアロフェツイン固定化カラムに結合するレクチンが存在することが示され、ガン化とこのレクチンの機能の関連が注目される。
多元主義としての根本的経験論ージェイムズ＝西田連関を基軸とした比較系譜学的研究ー

最も大きな成果は、政治社会哲学にとっての多元主義的視座の重要性が、たとえば、明治期における中江兆民や、戦後日本の政治思想を代表する丸山眞男においても自覚的に主題化されていること、とりわけ、丸山眞男においては、ジェイムズやデューイに代表されるアメリカ・プラグマティズムの多元主義の意義の把握がその政治思想の中核に据えられていることを確認することができたことにある。また、こうした現実の多元主義的構成をめぐる政治社会哲学的問題は、広島から福島原発事故後にいたる、いわゆる核被害評価をめぐる問題にも関わるものであり、多元主義的視点の意義を具体的問題場面においても明らかにすることができた。初年度は、主として、「純粋経験の立場」を出発点とした西田哲学及び京都学派の、近代日本哲学・思想における総体的な位置づけと特質を再検討するため、明治維新初期における西欧思想の受容、とりわけ、中江兆民によるルソー思想の受容の在り方を考察した。その結果、兆民思想を基軸とすることによって、西田及び京都学派の歴史的・政治的軌跡を相対化・主題化しうる展望を得た。6月には、仏教思想と現代哲学の比較研究で知られるJin.Y.Park氏(American Univ., U.S.A.)を招いて、連続研究会を開いた。こうした研究会での議論などを通じて、仏教的哲学としての京都学派の主題及び論理の特質を浮き彫りにする思想史的視座を得ることができた。以上のような考察は、「田辺元『懺悔道としての哲学』における転回・理性批判の射程ーホルクハイマー/アドルノ『啓蒙の弁証法』との比較試論」に反映されている。また、12月の現象学・社会科学会において発表した「森瀧市郎『核絶対否定への歩み』(1994)再読ー「放射線リスク」理解の変容をめぐる思想史的・科学社会学的考察に向けて」は、西谷啓治などとほぼ同じ時期に京都帝大で学び、広島(文理)大で教えた哲学者としての森瀧における平和倫理の形成過程を、西田や田辺から受けた薫陶、専門とした英国倫理研究、被爆体験などとの関係において概観したものであるが、戦後の田辺や西谷による「核時代をめぐる思索」の射程を批判的に問う試みである。研究計画最終年度にあたる本年度は、多元主義の観点から特に日本近代哲学の特質を再検討するという本研究の所期の目的に沿いつつ、時代的には中世及び現代まで広げ、また具体的な社会的・政治的問題に焦点をあてて考察した。最も大きな成果は、戦後日本の政治思想を代表する丸山眞男において、ジェイムズやデューイに代表されるアメリカ・プラグマティズムの多元主義的ヴィジョンがきわめて高く評価されており、その政治哲学の中核に据えられていることが確認できたことである。丸山は、戦中より、三木清や務台理作を含む京都学派の「社会存在論」構築に強い批判的関心を向けていたこともあり、今後の研究の展開にとってきわめて大きな意義を有することが明らかとなった。さらに、「核と人類は共存できぬ」の言葉で知られる森瀧市郎(19011994)の思想と実践の意義を、京都学派の末裔のそれとして捉え直すことができた。京都帝大で、西田や田辺に学んだ森瀧は、広島(文理)大で教え、「英国倫理研究」(1953)で博士号を取得しているが、被爆体験を経て、「慈の文化」としての「平和倫理」を唱導するに至った。イギリスの公共的倫理の伝統を踏まえた森瀧の思想は、戦後同じように、「死の時代としての核時代」について語った師・田辺元の思想も及ばぬ切迫性・具体性をそなえており、こうした森瀧の思想の再評価は、哲学研究の枠も越えた、広い意義を認めることができよう。京都学派の最盛期は1920-30年代であり、「国家と戦争」の問題に関しては、関連社会科学の理論を考慮することなしには、単なる思想史的研究の域を抜け出ることが困難であると思われる。すでに提出されている批判も真正面から受け止め、かつ文学・社会学などの関連諸分野における最先端の知見とも照らし合わした上で、日本哲学の現代的意義・可能性を明らかにすることを目指して行きたい。哲学『善の研究』の国家論におけるルソー評価がはらむ問題性を出発点として、兆民によるルソー『社会契約論』の翻訳『民約譯訳』にまで溯ることにより、近代国家における「市民」をめぐる原理的問題がより明確なものとなり、「多元的国家論」の意義が問題の核心にあると考えるに至った。これは、ジェイムズと西田における「統一」「多元性」概念の違いをめぐる本研究課題の主たる問いに関わるものであり、大変大きな意義を有する。

また、『禅の研究』発刊とほぼ同時代の出来事である、平塚らいてうが関わった「母性保護論争」は、国家と国民の関係をめぐる問題について、あるいは、「自覚」と「矛盾」の多様性について、異なる角度から光をあてうるものであり、近代日本における西田哲学にとっても大きな意義を有するとの展望を確かなものとすることができた。また、ジェイムズに関しては、特に、Antonio DamasioのDescartes' Error(『デカルトの誤りー情動、理性、人間の脳』におけるジェイムズの「情動」理解が一面的なものであり、より正確な理解のためには、『宗教的経験の諸相』なども含めたジェイムズ哲学の全体における「情動」と「反省」の関係の総合的理解が必要であることが明らかとなった。「純粋経験の哲学」を出発点とする西田哲学及び京都学派に対する基本的視座を確かなものとすることができた。この成果は、2013年8月、ギリシャで開催されるWorld Philosophy of Congressにて、"Wakes of the Political in Modern Japanese Thought: Chomin, Rousseau, and theKyoto School Philosophers(近代日本思想における政治的なるものの軌跡ー兆民、ルソー、京都学派の哲学者たち)"として発表する予定である。また、英語圏やフランス語圏における根本的経験論の展開に関しても、ウィトゲンシュタインやジャン・ヴァールとの関係において基本的特徴を見定めることができた。Jin Y. Park(American Univ.)氏を招いての連続研究会は、仏教思想における多元的契機の意義について検討する機会となり、仏教思想を基幹とする西田・京都学派の哲学を新たな視点から考察する手がかりを得ることができた。この連続研究会における報告論文の一つは、すでに日本語に訳し、『愛知』(神戸大学哲学懇話会発行)に掲載し、もう一つの報告論文も現在、翻訳中である。また、戦中の京都学派の歴史哲学及び戦後の自己批判的「平和主義への転回」の意義・射程の検討に向けた一歩として、森瀧市郎と西谷・田辺の戦後思想を比較検討する視点を得たことは大きな成果であった。本年度は、まず、7月上旬に京都大学で開催される「アメリカ哲学フォーラム」第一回大会に合わせてカーリン・ロマーノ氏(Ursinus College)を招いて講演会を開催する予定である。ロマーノ氏は、近著America the Philosophicalなどで知られるアメリカ哲学研究者・文芸批評家であり、ジェイムズやデューイの現代的意義について意見交換を目指す。また、Russell GoodmanのWittgenstein and William Jamesに関心をもつ何人かの研究者たちと、本書の翻訳を最終的目標とした研究会を複数回開催し、特に、ジェイムズにおける多元主義の現代的意義について考察を進める。さらに、こうした研究成果は、特に、今年11月にヘルシンキで、また、来年2月に京都大学で開催されるアメリカ哲学関係の国際会議で発表する予定である。本年度は、すでに、気鋭の現象学研究者であるジュリア・ジャンセン氏(University College Cork, Ireland)を招いて、連続研究会、「カントとフッサールの"想像力"論ー多元主義の様々なる端緒ー」及び「現象学と学際的研究における“想像力"ー多元主義的アプローチー」において、カントやフッサールの超越論的哲学とジェイムズ根本的経験論の相違を検討する機会をもったが、さらに、アンドリュー・フィーンバーグなどの外国人研究者を招聘し、倫理学における技術論的転回と多元主義との関連をテーマとする研究会の開催を目指す。
結晶成長理論

1.結晶臨界核生成可逆仕事への界面応力の寄与は負,エッジ自由エネルギーの寄与も通常は負となることがわかった.また,臨界核に対する熱力学的定義と速度論的定義とは一致しないことを明かにした.(西岡)2.拡散場により結晶界面の不安定化がおきた後の界面形態の多様性を,結晶の異方性と原子レベルの雑音との競合の観点から明かにした.特に,先端不安定性の起こる雑音レベルの臨界値に対する近似解析とシミュレーション結果とは良い一致を示した.(斉藤)3.微斜面を構成するステップの揺らぎを調べ,個々のステップの揺らぎが中距離で増幅されるのに対し,ステップ間隔の揺らぎは抑制されることがわかった.また,ステップ列の安定性について解析し,3本以上の束縛状態,多数のバンチングなどを見いだした.(上羽)4.MBE成長条件下での2元系結晶成長のシミュレーションを行い,成長中の表面構造の平坦性は1示系で得た特徴的長さだけでは整理されないこと,成長後の原子種の整合性については,入射フラックスと結合エネルギーの関係で相転移的な振舞いをすることがわかった.(入沢)5.塩化カルシウム融体からの結晶成長のシミュレーションを行った結果,10psのオーダーで(001)成長面では成長が見られたが,(100)面では認められなかった.界面には数原子層にわたって中間の層が見られ,融体中でも隣接する結晶に影響されたオーダリングが見られた.(岡田)6.結晶(001)面の2x1再構成表面におけるステップ成長メカニズムを量子化学的手法により主としてダイヤモンドについて解析した結果,(001)表面上のS_вステップではキンクからの成長は起こらず,孤立したダイマー列が突出して成長することがわかった.(津田)7.Si(111)微斜面ステップ構造を表面再構成温度の上下の温度域で調べた.高温域では,直流通電方向反転に伴う等間隔・バンチング間の構造変化機構を拡張BCF理論により説明し,低温域での再構成に起因するバンチング機構をTSKモデルに基づいたシミュレーションで調べた.(名取)1.多成分気相中での臨界核以外の液相核に対する生成可逆仕事の公式を導いた。界面張力として、臨界核以外の核に対しても臨界核の組成とサイズに対する値を用いるべきことがわかった。結晶核については、生成可逆仕事に対する界面応力、エッジ及びコーナー自由エネルギーの寄与に関して考察を進め、エッジ自由エネルギーは常に負となることがわかった。(西岡)2.拡散場中で運場するステップのシミュレーションを進め、突出不安定性や多重ステップ列のバンチング不安定性を見いだした。不安定化が進行した後の樹枝状結晶形に対しても異方性と雑音の競合を微積分方程式の数値解法で調べ、規則一不規則な樹枝状形転移を見いだした。(斎藤)3.MBE成長条件下での表面拡散場をモンテカルロシミュレーションで詳しく解析した。ステップフローモードで成長中の拡散場は定常分布である2次関数で近似され、それから見積られる拡散係数はシミュレーションで与えた値よりも大きくなり、クラスター解離が無視できないことがわかった。また、クラスター密度の時間変化から1/100層成長時という早い時期に核生成が完了していることがわかり、分布から臨界核サイズも見積れる可能性がでた。(入沢)4.気相成長下では原子の入射強度によってステップの揺らぎが大きく変化し、入射強度が臨界値を越えると揺ぎが発散してステップが不安定になることを見いだした。また、不安定化後は非線形性のためカオス的な運動をし、ステップの形態には結晶の方位が反映されることがわかった。さらに、ステップ列の安定性やステップ集団の拡散場を介しての相互作用を調べ、ステップが斥力を及ぼし合っているときにも平衡から充分外れればステップ対が運動学的な束縛状態を作り、この対がさらに3体までの束縛状態を作ることを見いだした。(上羽)5.GaAs(001)面でトリメチルガリウム(TMG)によるALE素過程の量子化学計算を行った。TMGは表面のAs原子のローンペアに配位して物理吸着し、ついで隣接する表面のAs原子と結合して2個のメチル基を保持した形で安定化すること、この2つのGaはダイマーを形成してさらに安定化することなどがわかった。このダイマー構造はMBEで形成されるものとは異なることから、Ga成長表面の構造はMBEとMOCVDとでは異なることがわかった。(津田)6.NaClの固液界面及び結晶成長の分子動力学シミュレーションを行い、結晶界面の安定性は{111}<<{110}<{100}の順序であること、{110}面がピコ秒以内で{100}に転移することが見られた。また、{110}面からは成長し易いが{100}面からは困難であること、界面には34層の疑似融液層が存在することなどがわかった。(岡田)1.結晶臨界核生成可逆仕事への界面応力の寄与は負,エッジ自由エネルギーの寄与も通常は負となることがわかった.また,臨界核に対する熱力学的定義と速度論的定義とは一致しないことを明かにした.(西岡)2.拡散場により結晶界面の不安定化がおきた後の界面形態の多様性を,結晶の異方性と原子レベルの雑音との競合の観点から明かにした.特に,先端不安定性の起こる雑音レベルの臨界値に対する近似解析とシミュレーション結果とは良い一致を示した.(斉藤)

3.微斜面を構成するステップの揺らぎを調べ,個々のステップの揺らぎが中距離で増幅されるのに対し,ステップ間隔の揺らぎは抑制されることがわかった.また,ステップ列の安定性について解析し,3本以上の束縛状態,多数のバンチングなどを見いだした.(上羽)4.MBE成長条件下での2元系結晶成長のシミュレーションを行い,成長中の表面構造の平坦性は1示系で得た特徴的長さだけでは整理されないこと,成長後の原子種の整合性については,入射フラックスと結合エネルギーの関係で相転移的な振舞いをすることがわかった.(入沢)5.塩化カルシウム融体からの結晶成長のシミュレーションを行った結果,10psのオーダーで(001)成長面では成長が見られたが,(100)面では認められなかった.界面には数原子層にわたって中間の層が見られ,融体中でも隣接する結晶に影響されたオーダリングが見られた.(岡田)6.結晶(001)面の2x1再構成表面におけるステップ成長メカニズムを量子化学的手法により主としてダイヤモンドについて解析した結果,(001)表面上のS_вステップではキンクからの成長は起こらず,孤立したダイマー列が突出して成長することがわかった.(津田)7.Si(111)微斜面ステップ構造を表面再構成温度の上下の温度域で調べた.高温域では,直流通電方向反転に伴う等間隔・バンチング間の構造変化機構を拡張BCF理論により説明し,低温域での再構成に起因するバンチング機構をTSKモデルに基づいたシミュレーションで調べた.(名取)
ビリルビン抱合酵素遺伝子の変異とGilbert症候群の発症に関する研究

1.日本人におけるビリルビンUDPグルクロン酸転移酵素遺伝子(UGT1A1)の多型、変異健常日本人の白血球のUGT1A遺伝子検索を進めた。G71R変異のアレル頻度は13.8%、Y486D変異のアレル頻度は0%、プロモーター領域TATA boxへのTA挿入変異(TA7)のallele頻度は12.9%であった。欧米の報告ではコード領域の変異は健常者に全く存在せず、一方TA7変異はallele頻度16%と日本人よりもやや多い。2.UGT1A1遺伝子変異と血清ビリルビン値との関係健常人、Gilbert(G)症候群、II型Crigler-Najjar(CN)症候群の患者のUGT1A遺伝子変異と空腹時血清ビリルビン値とを検索し、両者の関係を更に検討した。健常者の変異(多型)の多くはheteroのプロモーター領域のTA7変異であり、一部heteroのG71Rの変異がみられた。G症候群患者の約90%にその他、コード領域の多種のhetero,homoの変異を認めた。新たにheteroのP364LとG71Rの合併したG症候群患者を発見して、検討中である。CN症候群では全例にコード領域のhomoの変異を認めた。3.UGT1A1遺伝子変異と絶食高ビリルビン血症の関係G症候群の診断に利用されている24時間低カロリー試験をUGT1A遺伝子を検索できた健常者、G症候群患者に行い、血清ビリルビン上昇と遺伝子変異の関係を検索した。遺伝子変異(+)の症例は、健常者でもG症候群患者でも血清ビリルビン上昇が0.6mg/dl以上となり、又変異と血清ビリルビン上昇との間に因果関係が認められた。一般人口及びGilbert症候群患者におけるビリルビンUDPグルクロン酸転移酵素(UGT1A1)遺伝子(UGT1A1)の変異の割合を調べ、さらにFasting HyperbilirubinemiaにおけるUGT1A1変異の意義について検討を加えた。1.同意を得られた59名の健常ボランティアと13名のGilbert症候群患者の白血球を用いて、UGT1A1遺伝子のコード領域及びプロモーター領域の核酸塩基を検索した。G71R変異を持つalleleは健常者で16%、Gilbert症候群患者で15%と両者とも高かったが、両者間の差を認めなかった。Gilbert症候群患者では、プロモーター領域のwild型のA(TA)TAAに対しA(TA)TAAのホモの症例が54%認められたが、健常者では1例のホモ症例と7例(12%)のへテロ症例のみであった。他の変異としては、Gilbert症候群患者のみでY486を3例認めた。2.低カロリー試験は400kcal/dayの食事にて1-2日間過ごし、血清ビリルビン値をその前後で測定する。Gilbert症候群の診断補助に用いられ、約2倍のビリルビン上昇を陽性と判定する。協力の同意を得られた48名の健常ボランティアと11名のGilbert症候群患者について試験を行ったところ、健常者の中でも陽性になる例があり、Gilbert症候群の診断には無力である事が判明した。しかし、健常者、Gilbert症候群患者のUGT1A1遺伝子変異と低カロリー試験結果(ビリルビン値上昇の程度)との関係を観察すると、遺伝子のいずれかの変異を持つ例もビリルビン上昇が有意に大きかった。従って、Fasting Hyperbilirubinemiaの主要な要因の一つとして、preliminaryではあるが、UGT1A1遺伝子の変異が存在する事が明らかとなった。従って、現在のGilbert症候群の診断規準が曖昧であり、発症の基礎にUGT1A1遺伝子変異の存在する事が明らかとなった。

1.日本人におけるビリルビンUDPグルクロン酸転移酵素遺伝子(UGT1A1)の多型、変異健常日本人の白血球のUGT1A1遺伝子を検索した。G71R変異はheteroが32.2%(allele頻度16.1%)、プロモーター領域TATA boxへのTA挿入変異はhetero13.6%、homo1.7%(allele頻度8.5%)が存在したが、その他の変異は認められなかった。欧米の報告ではコード領域の変異は健常者に存在せず、一方TATA boxへのTA挿入変異はallele頻度16%と多く、人種差の存在が明らかとなった。2.UGT1A1遺伝子変異と血清ビリルビン値との関係健常人、Gilbert(G)症候群、II型Crigler-Najjar(CN)症候群の患者のUGT1A1遺伝子変異と空腹時血清ビリルビン値とを検索し、両者の関係を調べた。健常者の変異(多型)の多くはプロモーター領域に偏っており、血清ビリルビン値は正常範囲であった。G症候群患者の約90%にその他、コード領域の多種のhetero,homoの変異を認めた。CN症候群では全例にコード領域のhomoの変異を認めた。一般にUGT1ファミリーに共通するexon4の変異で血清ビリルビンが高値となった。3.UGT1A1遺伝子変異と絶食高ビリルビン血症の関係G症候群の補助診断法の24時間低カロリー試験をUGT1A1遺伝子を検索できた健常者、G症候群患者に行い、血清ビリルビン上昇と遺伝子変異の関係を検索した。遺伝子変異(+)の症例は、健常者でもG症候群患者でも血清ビリルビン上昇が0.6mg/dl以上となり、本試験と遺伝子変異の関係が判明した。結果はG症候群の定義の再検討の必要性を示唆している。1.日本人におけるビリルビンUDPグルクロン酸転移酵素遺伝子(UGT1A1)の多型、変異健常日本人の白血球のUGT1A1遺伝子検索を進めた。G71R変異のアレル頻度は13.8%、Y486D変異のアレル頻度は0%、プロモーター領域TATA boxへのTA挿入変異(TA7)のallele頻度は12.9%であった。欧米の報告ではコード領域の変異は健常者に全く存在せず、一方TA7変異はallele頻度16%と日本人よりもやや多い。2.UGT1A1遺伝子変異と血清ビリルビン値との関係健常人、Gilbert(G)症候群、I型Crigler-Najjar(CN)症候群の患者のUGT1A1遺伝子変異と空腹時血清ビリルビン値とを検索し、両者の関係を更に検討した。健常者の変異(多型)の多くはheteroのプロモーター領域のTA7変異であり、一部heteroのG71Rの変異がみられた。G症候群患者の約90%にその他、コード領域の多種のhetero,homの変異を認めた。新たにheteroのP364LとG71Rの合併したG症候群患者を発見して、検討中である。3.UGT1A1遺伝子変異と絶食高ビリルビン血症の関係G症候群の診断に利用されている24時間低カロリー試験をUGT1A1遺伝子を検索できた健常者、G症候群患者に行い、血清ビリルビン上昇と遺伝子変異の関係を検索した。
ヒトES細胞を用いた水平性骨欠損に対する新規３次元骨再生医療技術の開発

本年度はヒトES細胞由来間葉系幹細胞を当研究室で用いるために倫理申請を行い承認を得ることができた。ヒトES細胞由来間葉系幹細胞を分化誘導することによって骨芽細胞を作成し、最終的には人工骨マトリックスを作成し、骨補填材に用いることを最終目標にしている。そのため、マウス骨芽細胞由来細胞株を用いてin vitroにおける分化誘導実験を行い分化条件の整備を行った。また人工骨マトリックス作成のための、免疫不全症マウスへの移植実験による分化誘導実験のため、マウス骨芽細胞由来細胞株を免疫不全症マウスの背部皮下に移植し、最終的な人工骨マトリックスのサイズを規定した。さらに家畜ブタを用いて水平性骨欠損モデルを作成するためのパイロット実験に着手した。ヒトES細胞を分化誘導してヒトES細胞由来間葉系幹細胞を作成する際の分化誘導確率の向上に努めている。次年度はin vitroで作成した人工骨マトリックスを免疫不全症マウスの背部皮下に移植を行い、in vivoでマトリックスの成長を観察する予定である。また水平性骨欠損モデルは、あらかじめ家畜ブタを用いて骨欠損の程度、広さ、創面の被覆に関して検討を行い、短期間での創傷治癒効果を観察する。その際の評価方法としてマイクロCTによる組織学的に評価を行う。その後長期間飼育が可能なマイクロミニブタの水平性骨欠損の長期間観察モデル構築のために動物実験を推進し、in vivoにおける水平性骨欠損における骨再生効果の確認を行う。