hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
音声言語の知覚・産出から探る母語と外国語のレキシコンの特性

本研究は,レキシコンの様々な特性が日本語や英語の音声言語理解にどのように影響を及ぼすのかについての基礎的事実をコーパス分析を通じて改めて検討すると共に,実験的手法で分野横断的かつ包括的な研究を試みた。研究は3つの課題に取り組んだ。課題1:母語と外国語のレキシコンの特性と産出・知覚;課題2:レキシコンの特性と音韻論的な検討;課題3:レキシコンにおける語彙表示について。本研究は3つの課題について取り組んでいる。それぞれの課題ごとの研究実績の概要は以下の通りである。課題1:母語と外国語のレキシコンの特性と産出・知覚(米山,Munson):3つのプロジェクトを進めている。一つ目は平成23年度に検討した実験手法を用いて,日本語話者の音声語彙認識過程を探るための日本語話者を対象とした知覚実験と統制群として英語話者について同一実験をミネソタ大学で実施した。二つ目は日本語と英語を獲得している子供たちの音声をどのように大人が知覚するかについての検討を行った。分析の一部は第164回アメリカ音響学会で発表した。最後に、レキシコンの特性である単語親密度が英語の子音の認識にどのような影響を与えているかについての検討も行った。研究の成果の一部は研究協力者である中村祐輔氏が大東文化大学大学院外国語学研究科英語学専攻修士号学位取得論文としてまとめられた。課題2:レキシコンの特性と音韻論的な検討(北原,米山):有声子音と無声子音の前に生起する母音の長さの言語普遍性と個別性について、日本語の2つのデータベース(NTT乳幼児音声データベース;日本語話し言葉コーパス)の分析と日本人大学生の英単語の発話実験を通して検討を行った。分析結果の一部はNINJAL International Conference on Phonetics and Phonology 2013で発表を行った。課題3:レキシコンにおける語彙表示について(田嶋,米山):英語では、"family"のように弱母音が脱落し音節数が変化して発音されることが、会話などでは多くみられる。このように、英語語彙において母音弱化による音節数の変化が会話音声でどの程度起きて、どのような要因に左右されるかをBuckeye Corpusを用いて分析を行った。分析結果の一部は第164回アメリカ音響学会で報告された。本研究では,話し言葉において,レキシコンの特性が音声産出や知覚にどのような影響を及ぼすのかを,母語である日本語と日本人の多くの第二言語である英語を主たる対象とした音声産出実験、知覚実験や,各言語のレキシコンの解析を行うなど,多角的な方法を用いて明らかにする。レキシコンの様々な特性が日本語や英語の音声言語理解にどのように影響を及ぼすのかについての基礎的事実を改めて検討するとともに,分野横断的な包括的な研究を試みた。本研究では次の3つの課題に取り組んだ:課題1「母語と外国語のレキシコンの特性と産出・知覚」,課題2「レキシコンの特性と音韻論的な検討」,課題3「レキシコンにおける語彙表示について」。また,各課題について,研究期間を,(1)研究材料の準備および予備実験の実施,(2)本実験の実施および結果の分析,(3)成果の公表という3つのステップに分けて研究を進める。研究代表者・分担者が各自の専門性に応じて課題を分担して研究に取り組む体制を取ることで,広範囲に渡る課題を効率的に実施することができた。また,研究代表者・分担者が定期的に研究会を開き,密に連携をとりながら相互に進捗状況をチェックする。これにより,不測の事態により研究が計画通りに実施できない場合も,各課題の相対的な優先順位を修正するなど,適切な対応を迅速にとることができた。研究計画3年目は,実験結果などを随時国内や,海外の学会にて発表し,学術誌に投稿を行った。本研究は3つの課題について取り組んでおり,課題ごとの研究実績の概要は以下の通りである。課題1:母語と外国語のレキシコンの特性と産出・知覚(米山,Munson):先行研究から日本語母国語話者が英語を理解する際に,レキシコンの特性が影響を及ぼす語彙認識過程だけではなく,英語の音素認識が重要な役割を果たしている可能性があることが明らかになってきた。平成23年度は,予備実験データを解析し,Benki (2003)で用いられた実験方法が第二言語学習者においても有効であるかを検討した。その結果,外国語における音声語彙認識過程についても有効である可能性があることが明らかになってきた。また,レキシコンの特性である単語親密度が英語の子音の認識にどのような影響を与えているかについての検討も行った。予備実験の成果はNakamura and Yoneyama (2011)として報告した。課題2:レキシコンの特性と音韻論的な検討(北原,米山):シミュレーション研究に利用する日本語と英語の音声データベースを分析することにより,レキシコンの特性について詳しく明らかにした。

具体的には語彙近傍密度,頻度,機能負担量などの指標の相互関係や種々の韻律単位についての数量的解析を日本語話者と英語話者のレキシコンとして想定されるデータベースに対して行った。課題3:レキシコンにおける語彙表示について(田嶋,米山):日本語話者による英語音声単語の知覚に関する従来の研究から,英単語の音節構造が正確な知覚を妨げる要因であることが示された。しかし,母語と外国語のレキシコンの語彙表示と音声知覚の関係については明らかになっていないのが現状である。平成23年度は,日本語の外来語が英語の単語を知覚するのにどのような影響があるかについて検討を行った。その成果はTajima (2011)で発表した。研究計画3年目は以下の課題に取り組むと同時に、国内の学会や海外の学会・国際会議などにて発表し、学術誌に投稿する予定である。課題1:母語と外国語のレキシコンの特性と産出・知覚(米山,Munson):平成24年度に実施した日本語話者の音声語彙認識過程を探るための日本語話者と英語話者を対象とした知覚実験について分析を進め、学術雑誌への投稿を目指す。また、これまで行ってきたレキシコンの特性である単語親密度が英語の子音の認識にどのような影響を与えているかについての研究成果を平成25年度は国際学会(Interspeech2013)で発表を行うと共に、学術雑誌への投稿を目指す。課題2:レキシコンの特性と音韻論的な検討(北原,米山):平成24年度は有声子音と無声子音の前に生起する母音の長さの言語普遍性と個別性について、日本語の2つのデータベース(NTT乳幼児音声データベース;日本語話し言葉コーパス)の分析と日本人大学生の英単語の発話実験を通して検討を行った。平成25年度はこの研究を国際学会(Interspeech2013)で発表を行うと共に、学術雑誌への投稿を目指す。課題3:レキシコンにおける語彙表示について(田嶋,米山):英語語彙のレキシコンの語彙表示において,モーラや音節といった日本語・英語を特徴付ける韻律単位が相対的にどの程度反映され,英語力がどのように関連しているのかについて検討する。研究計画2年目以降は,以下の課題に取り組むと同時に,実験結果などを随時国内の学会や,海外の学会・国際会議などにて発表し,学術誌に投稿する予定である。課題1:母語と外国語のレキシコンの特性と産出・知覚(米山,Munson):平成23年度に検討した実験手法を用いて,日本語話者の音声語彙認識過程を探るための日本語話者を対象とした知覚実験を実施する。安定したデータを得るため,個別実験は相当数の参加者を対象に実施する。また,統制群として英語話者についても同一実験をミネソタ大学で実施する。課題2:レキシコンの特性と音韻論的な検討(北原,米山):日英語におけるモーラや音節の機能負担量の計算や,その他のレキシコンの特性についての分析を引き続き行いつつ,これまでに得られた実験結果と音韻理論や学習モデルを実装したソフトウェアによるシミュレーションの比較検討を行う。また,同定課題や,対立する音同士の弁別課題などによって明らかにされる機能負担量の大小が,産出において当該音の調音上の揺らぎ(不正確さ)と相関するかどうかを検証する予定である。
ジェンダ-と進路形成過程 メリトクラシ-とセクシズムの交差の観点から

現代学校は、メリトクラシ-とセクシズムというふたつのイデオロギ-を内在した制度である。本研究は、この現代学校における性別進路形成過程を記述、説明することを目的とし、本年度は以下の作業を行った。1.ジェンダ-と教育研究に関する文献のレビュ-:欧米およびわが国における、(1)ジェンダ-に関する社会学的研究、(2)青少年の進路選択に関する教育社会学的研究を、収集し、レビュ-した。本年度はとくにわが国の戦後学校社会学における「女性と教育」「ジェンダ-と教育」をテ-マとする研究を重点的にレビュ-して実証研究の課題抽出につとめた。欧米における研究から、通常は社会階層(階級)の再生産を説明する際に用いられる「文化的再生産理論」が、ジェンダ-と教育的不平等問題をも説明する可能性が高いものと考えられた。わが国では「ジェンダ-と教育」に関する研究が最近あらわれているものの、いずれも欧米での研究の紹介にとどまるか、ないしは社会階層(階級)の観点を欠如しており、階層・階級とジェンダ-という双方の観点を含んだ実証的研究の必要性が導かれた。さらに解釈的アプロ-チによる学校内部過程研究も有効である可能性が強い。2.既存デ-タの分析と再解釈:青少年の進路形成過程に関する既存デ-タを、分析・再解釈した。利用したデ-タは、筆者が独自に行った質問紙調査から得られたデ-タである。これは学校階層上で異なる地位にある複数の高等学校に在学する生徒たちの進路意識を、入学時点から卒業時点まで追ったパネル調査であり、性別進路形成の観点から引続き再分析した。平成4年度は、高校生対象の実証的調査研究を企画、実施し、上記デ-タの再分析によって得られた仮説を検討する予定である(深層的面接および質問紙による)。
角膜血管新生に対する高分子ナノミセルを用いたドラッグデリバリーシステムの開発

目的:様々な刺激や侵襲により血管の進入した角膜は透明性が困難であり、その抑制退縮を可能にする新たな治療法の開発が望まれているのが現状である、本研究ではナノテクノロジーを応用した光感受性物質、デンドリマーポルフィリン(DP)及びDPをpolymericミセルに内包したもの(DPミセル)を開発し、角膜血管新生部位へのドラッグデリバリーとそれを用いた角膜血管新生に対する光力学療法の効果を判定した。方法:マウスの角膜に10-0ナイロン糸を通糸し角膜に血管新生を誘導したモデルに対し、DP単体及びDPミセノンを10mg/kgでそれぞれ静脈注射。投与後それぞれ1,4,24,168時間後に眼球を摘出し、角膜新生血管周囲のDP及びDPミセルの傾向を測定した。次に同様のマウスモデルに対しDP単体及びDPミセルを投与24時間後に波長438nmのダイオードレーザーを10または50J/cm2で照射。レーザー照射前および7日後に蛍光血管造影を行い角膜血管真性領域の定量化を行い、光力学療法の効果を判定した。結果:DP単体、DPミセルは共に投与後1時間から角膜血管真性領域に集積し始め、24時間まで蛍光強度は増強したが、いずれの時間でもDPミセルに比しDP単体では集積が悪かった。また、正常血管領域にはDP、DPミセルのいずれも認めなかった。光力学療法後の角膜新生血管の残存率は10J/cm2の照射ではDPミセルで10.1%、DP単体で21.6%と有意にDPミセル群で効果が高かったが(P<0.01)、50J/cm2の照射ではDPミセルで10.6%、DP単体で13.7%と2群で有意差は認められなかった(p>0.05)。いずれの群でもコントロール郡に比べて有意な血管の消退は認められたが、エネルギー量と血管の消退量の有意な相関はみられなかった。以上より、DP及びDPミセルは角膜血管新生の退縮に有用であると考えられた。初年度(平成17年度)はまずミセル化したデンドリマーポルフィリンの角膜血管新生へのドラッグデリバリーについて検討した。角膜血管新生は10-Onylon糸を角膜実質に通糸することにより誘導し術1週間後にミセル化したデンドリマーポルフィリン、コントロールとしてミセル化していないデンドリマーポルフィリンをそれぞれ尾静脈から静注した。薬剤濃度は10,50,150mg/mlで、また投与後1,6,12,24,168時間後に眼球を摘出した。血管領域の描出は摘出10分前にBS-1レクチンの静注で行った。角膜血管新生領域における薬剤の集積は蛍光実体顕微鏡下で観察した。まず50mg/mlの濃度で静注後1時間後にはミセル化したデンドリマーポルフィリン(ミセル群)、コントロールのデンドリマーポルフィリン(コントロール群)ともに強い蛍光の集積を新生血管領域に認めたが、ミセル群の方がより強い集積を示した。ミセル群、コントロール群ともに投与12時間後で角膜血管新生領域における蛍光は最も強かった。その後減弱したが、投与168時間後でも薬剤集積はある程度残存していた。薬剤濃度10,または150mg/mlにおいても同様の結果であった。なお血管新生を誘導していない、あるいは血管新生のない部分の角膜輪部血管ではミセル群、コントロール群ともに蛍光は全く認めなかった。投与した薬剤の体内動態を調べるために、薬剤の静注前、静注後1、4、12、24、72、168時間後にそれぞれ血液を取り出し、血清を分離し、得られた血清はフルオロフォトメトリーで測定すした。ミセル群、コントロール群ともに静注後24時間ですでに血清中に存在せず、患部に集積しない薬物はすみやかに排泄されることが確認された。今後実際にレーザー照射し、新生血管の退縮について検討する予定である。

光力学療法後の角膜新生血管の残存率は10J/cm2の照射ではDPミセルで10.1%、DP単体で21.6%と有意にDPミセル群で効果が高かったが(P<0.01)、50J/cm2の照射ではDPミセルで10.6%、DP単体で13.7%と2群で有意差は認められなかった(p>0.05)。いずれの群でもコントロール郡に比べて有意な血管の消退は認められたが、エネルギー量と血管の消退量の有意な相関はみられなかった。以上より、DP及びDPミセルは角膜血管新生の退縮に有用であると考えられた。
太平洋循環系の季節及び経年変動とENSO現象との関連

現実の海岸・海底地形及び風デ-タを取入れ、さらに現実的な表層熱流束も考慮して高解像度のOGCMを開発し、太平洋循環系の変動を調べた。その結果以下に述べるような成果を得ることができた。1.高解像度海域モデルの関する成果:海洋物理学的にも、生物学的にも重要なコスタ・リカド-ムの季節変動の平均的描像が明らかになった。ド-ムは春季にその萌芽が現れ、夏季にITCZに吹き込む南からの貿易風の強化と共に発達し、9月頃最盛期を迎える。冬季にはITCZに吹き込む北東季節風によって分断され弱まる。ド-ムの発達には夏季の南からの貿易風が重要な役割を果たしているが、それと共に冬から初春にかけて吹く北東季節風が作る比較的小規模の冷水域の存在がド-ムの形状を規定する重要な条件となることがわかった。2.太平洋全域モデルに関する成果:インド洋・太平洋域を含む高解像度のOGCMを季節変動を含む風の気候値で駆動した。その結果太平洋循環系については、赤道域の基本的な温度構造や流速分布、及びその季節変動が再現された。日本付近の黒潮も再現され、観測と合致する流量が得られた。特に、ENSO現象の発生源と目されている西太平洋赤道域については、その海洋循環がアジアモンス-ンと深く関連していることが明かになった。更にミンダナオ沖に再現された湧昇域、ミンダナオ・ド-ムの消長は、ENSO現象の予測問題に関して重要な要素であることがわかった。更にこのド-ムの季節変動は、日付変更線以西の風の場(アジア・モンス-ン領域)に支配されていることが、風の場を人為的に操作した「計算機実験」によりはじめて明らかになった。1.本年度は本研究計画の初年度であるが、GFDL/NOAAの海洋大循環モデルを基礎として九州大学海洋大循環モデルを完成し、高解像度(水平格子間隔0.25°×0.25°)で順調に数値積分することができた。海表面における熱フラックスも外力として導入するようにしたので、Levitusの海洋観測データに近い表層水温分布が得られるようになった。加えて、鉛直拡散、粘性係数をリチャドソン数に依在する係数としたので、現実的な水温の鉛直構造も得られた。このモデルはヘラーマン5の現実の風ストレスで駆動したので、水平解像度の粗いモデルでは再現できない興味深い幾つかの現象をとらえることができた。これらについて以下に報告する。2.中米沖で冬季に多数観測される暖水渦がある。本モデルを用いた解析により、この渦は地峡により絞られた季節風により、局所的に励起されるものでIG力学に支配されている可能性が非常に高くなって来た。次年度にはより明確な解答を得るべく、外力となる風系及び熱流束データの取得に努めている。3.本年度の研究では、更にコスタ・リカ・ドーム(CRD)の季節変動を明らかにすることができた。従来のモデルでは夏季及び秋季のCRDに対応する冷水域は再現できたが、冬季及び春季のものは再現できなかった。今回の高解像度モデルでは冬季及び春季にも比較的小さな水平スケールの冷水域が再現され、Levitusの海洋データと良い一致を示した。現在世界最高の水平分解能を持つ海洋大循環海域モデルを用い、昨年度に続き赤道域東太平洋コスタ・リカ沖の海洋変動を詳しく調べた。特に今年度は人為的に制御された風系を用いた、GFD的な数値実験を行うと共に、FSUの風デ-タを用いて経年変動のシミュレ-ションを行った。更に太平洋の全域モデルを用いて、予備的な実験を行った。

この全域モデルの水平分解能は九州大学大型計算機の能力との関係で、前述の海域モデルより粗くなっているが、東太平洋に於ける両者の一致は良い。更に西太平洋フィリピン沖のミンダナオ渦が再現される等、興味深い結果が得られている。1.高解像度海域モデルに関する成果(1)海洋物理だけでなく、生物学的にも、また漁業の面からも重要なコスタ・リカド-ムの季節変動の平均的描像が明らかになった。ド-ムは4ー5月にその形状を現し、ITCZに吹き込む夏季の南からの季節風の強化と共に発達し、9月頃に最盛期を迎える。その後やはりITCZに吹き込む北東季節風によって分断され弱まる。(2)ド-ムの発達には夏季の南からの季節風が重要な役割を果たしているが、それと共に冬から初春にかけて吹く北東季節風が作る比較的小規模の冷水域の存在がド-ムの形状を規定する重要な条件となっている。2.太平洋全域モデルに関する成果(1)赤道域の基本的な温度構造や流速分布、及びその季節変動が再現された。日本付近の黒潮も再現され、九州大学応用力学研究所の海洋観測と合致する流量が得られた。(2)その消長がエル・ニ-ニョの発生と深く関わっている西太平洋のミンダナオ・ド-ムが再現された。これにより、この海域の変動とENSO現象の関連を最終年度に調べる展望が開けた。1.西部熱帯太洋の海洋循環:暖かいENSO現象が発生する前に、西太平洋赤道域で正のOHCアノマリ-が現れるが、この海域には例年、冷水域が発達している。ENSO現象のプレコンディションの形成過程を明らかにする目的で、この冷水域、ミンダナオ・ド-ムの季節的発達過程をインド洋・太平洋赤道域を含む高解像度のOGCMを用いて調べた。モデルを季節変動を含む風の気候値で駆動した結果によれば、ド-ムは晩秋から発達し始め、2月頃に最盛期を迎える。ITCZの南下に伴い、冬のアジア・モンス-ンによる局所的エクマン涌昇が強まり、上層へ運ばれた冷水はNECCにより東に流されド-ムは発達する。冬場に強化された北東貿易風は潜熱放出を増加させ、この冷却効果もド-ムを発達させる。この強い貿易風は同時に、エクマン輸送により160°Eから日付変更線付近の赤道域北部に暖水を集積する。これは暖かいロスビ-波として西進し、春季にはこの波に伴う暖水の流入によりド-ムの東端は後退し冷水域は縮少する。NECCや前述の局所的湧昇の季節的弱体化もド-ムの衰退過程においては重要である。更にこうしたド-ムの季節変動は、日付変更線以西の風の場(アジア・モンス-ン領域)に支配されていることが、風の場を人為的に操作した「計算機実験」により明らかになった。2.太平洋循環系の経年変動:前項で述べたOGCMをFSUの風で駆動し、そのシミュレ-ション結果の経年変動の時系例デ-タを得た。結果は現在解析中であるが、エル・ニ-ニョに対応する現象が再現されており、今後観測ダ-タや季節変動のシミュレ-ション結果との比較等によりENSO現象の本質を更に理解すべく検討中である。
マウス初期発生におけるWntシグナルの受容機構の解析

脊椎動物には少なくとも18個のWntが存在し、その受容体としてはFrizzledが考えられているが。直接的な証明はまだない。本研究では、我々がクローニングした新規Frizzled遺伝子に着目し、その発現パターンの解析、Wntタンパク質に対する結合能の解析、ならびにノックアウトマウスの表現型の解析から、このFrizzled遺伝子がWntの受容体として機能しているかどうかについて検討した。マウス胚における発現パターンの解析の結果、この遺伝子の発現はWnt-3aを含む多くのWnt遺伝子の発現と良く対応していた。次に、Frizzled-10が実際にWntタンパク質と物理的に相互作用するかどうかを調べるため、HEK293細胞にFrizzled-10遺伝子の細胞外ドメインおよびWnt-3a遺伝子を強制発現し免疫沈降したところ、両者が共沈することが確認され、Frizzled-10はその細胞外ドメインを介してWnt-3aと結合する能力があることが示された。さらに、Frizzled-10ノックアウトマウスを作製しその表現型を解析したところ、ホモ変異体はほぼメンデルの法則に沿った比率で出生したが、ほとんど個体でWnt-3a変異体マウスの表現型である尾の屈曲が観察された。以上のことからFrizzled-10がマウスの形態形成過程においてWnt-3a受容体として働いている可能性が示唆された。しかしながら、ここで観察されたFrizzled-10ホモ変異体におけるWnt-3a変異体様の表現型は、その機能を完全に欠失させた変異体(null allele)のものに比べ軽微であり、実際の発生過程においてはFrizzled-10以外にもWnt-3a受容体として働いている分子があることが考えられた。
脊髄損傷に対する自己嗅粘膜由来多種細胞移植の検討

嗅粘膜由来は神経幹細胞および嗅神経鞘細胞を含んだ細胞である。この細胞腫はどちらも神経再生に有用であることが知られている。この嗅粘膜由来細胞を3次元軸索伸長評価系で評価すると有意に神経軸索の伸長を認めた。これら軸索伸長の原因として、嗅粘膜由来細胞がNT-3という神経栄養因子を分泌することを確認し、抗神経栄養因子抗体カクテルを投与すると、効果が減弱することを認めた。また、軸索の伸長は嗅神経鞘細胞神経鞘細胞表面を伸展することを突き止めた。また、これら嗅粘膜由来細胞に約14%の神経細胞を含有することからこの細胞による新たな神経軸索ネットワーク構築の可能性も示唆された。1、嗅神経鞘細胞と嗅粘膜由来神経前駆細胞(NPC)の単離と特性評価雌性8週齢ラットより嗅粘膜を採取し、酵素処理にて細胞を単離した。この細胞群を免疫染色し、構成細胞の種類を同定した。嗅神経鞘細胞(OEC)と神経細胞が主要な構成細胞であることを確認した。この分画を培養したのち、OECを,p75を付加した磁気ビーズを用いた方法を用いて単離した。一方、大脳由来神経幹細胞培養法と同様にニューロスフェア法を用いることにより、成体ラット由来嗅粘膜由来NPCを作成した。この細胞群は、分化誘導培地で培養すると神経細胞アストロサイト、オリゴデンドロサイトへの分化し,多分化能を有することが確認された。2、大脳皮質-マトリゲル(移植細胞)2種組織共培養系による、神経軸索伸長作用の評価In vitroの神経軸索伸長評価系として、大脳皮質-マトリゲル3次元共培養系を用いた神経軸索伸長評価系を確立した。細胞を混合しマトリゲルに生後3日齢ラット大脳皮質スライスを共培養し、ゲル内に伸長する軸索をニューロフィラメント抗体で染色し、伸長した軸索の本数と距離を測定するものである。まずコントロールとして、軸索促進効果の報告のあるシュワン細胞と軸索伸長阻害効果の報告を持つ線維芽細胞をゲル内に混合し、それぞれ軸索伸長促進および阻害効果を持つことを確認した。この評価系に、嗅粘膜由来NPCおよびOECを含有している初代嗅粘膜由来細胞を移植したところ、初代嗅粘膜由来細胞群において、有意に軸索伸長を認めた。大脳皮質由来神経軸索はOECの細胞表面を伸長することが観察された。また、初代嗅粘膜由来細胞群に成熟神経細胞が生存されることも確認された。大脳皮質由来神経軸索と、初代嗅粘膜由来細胞群由来神経細胞との間に神経ネットワークを形成する可能性が示唆された。今後、ラット脊髄損傷モデルにおいて、上記と同様の効果を有するか検証を進める予定である。脊髄損傷は障害者本人のQOLが大きく損なわれるのみならず、社会的負担も多大であり、毎年約5,000人の新規重症患者が発生することから、脊髄損傷後の有効な神経再生治療が求められている。近年、脊髄損傷に対してさまざまな細胞による神経再生が報告されているが、単種細胞移植療では効果が限定的である。一方、多種細胞移植の臨床応用に関しては、発ガン性や細胞採取における侵襲性をはじめとして、技術面・倫理面で克服すべき諸問題がある。そこで、多種細胞移植による相乗効果と自己由来による安全性を同時に満たす移植法として、自己嗅粘膜由来の嗅神経鞘細胞・神経前駆細胞など複数細胞種移植による神経機能改善の可能性を明らかにするため、下記の実験を行った。嗅粘膜は自己から低侵襲で採取できる組織で、神経前駆細胞や、軸索伸長を支持する嗅神経鞘細胞を含んでいる。本実験では成体ラット嗅粘膜よりこれら細胞を含んだ分画を単離し、マトリゲルに播種して、3次元培養系を作製した。コントロールとして、呼吸粘膜由来細胞を播種したマトリゲルを用いた。3日間培養したマトリゲルに、新生ラット由来の大脳皮質スライスを接触させ、共培養系とした。大脳皮質からマトリゲル中に伸長してくる軸索の長さと本数を計測した。また培養液中に遊離される神経栄養因子をELISA法により定量した。嗅粘膜由来細胞を含んだマトリゲル中に伸長してくる軸策は、呼吸粘膜由来細胞におけるそれより有意に長く、本数も増加していた。共培養中の上清には、神経栄養因子NT-3,HGF,GDNFが遊離された。一方BDNF,NT-4/5,NGF,CNTFはコントロールと有意差がなかった。NT-3は単独でも軸索伸長を促すことが認められた。一方、嗅神経鞘細胞はゲル内でシュワン細胞様形態をとり、軸策と接触して伸長していることが確認された。以上から、嗅粘膜由来細胞は可溶性の神経栄養因子と細胞接着の両面から軸索伸長を促進することが示唆された。
シャペロン依存的Ub化酵素と相互作用する新規プロテアソームサブユニットの機能解析

最近、シャペロン-プロテアソーム依存性の蛋白質代謝システムが細胞の恒常性維持に必須な役割を演じていることが明確になりつつある。プロテアソームは総数50種以上のサブユニット群から構成された巨大な多成分複合体であり、主としてユビキチン化された標的蛋白質を選択的に分解するATP依存性プロテアーゼである。これまで多くの変性蛋白質がユビキチン-プロテアソーム経路で認識・代謝されることが報告されてきたが、最近、26Sプロテアソームがシャペロン-ユビキチンシステムと能動的に相互作用しながら細胞内基質を選別するダイナミックな識別機構が明らかになりつつある。本研究で我々はプロテアソームの基質識別サブユニットのひとつが、2型ユビキチン様蛋白質Scytheを介してプロテアソーム本体とシャペロン依存性ユビキチンリガーゼXchipとを結びつけるアダプター的役割を果たしていることを突き止めた。Scytheは種々のシャペロンと相互作用することが知られている抗アポトーシス蛋白質であるが、ユビキチン-プロテアソーム系との相互作用を不能にしたScythe蛋白質の発現は、細胞死の調節経路に重大な影響を与えることを我々は見出しつつある。すなわち我々は、Rpn10cとの結合に関与するScytheのN末端領域を解析し、それがタンデムに並ぶ連結した4つのユビキチン様ドメインからなり、少なくとも2つのドメインの存在がRpn10cとの結合に必要であることを明らかにした。また、そのドメインがアポトーシス制御に必要であることを明らかにした。さらに、これらのドメインが多量体化におかかわること、ユビキチン依存的蛋白質分解系に直接関わる事などを初めて明らかにした。さらに本研究では、プロテアソームとシャペロン依存性ユビキチンリガーゼの協調機構の解明を目指すべく、線虫C.elegansを用いた逆遺伝学的機能解析を行ってた。我々は既に、RNA干渉法を用いてプロテアソーム基質識別サブユニットとシャペロン依存性ユビキチンリガーゼが協調して生殖細胞の形成に必須であることを見い出しており、論文出版の成果を挙げる事が出来た。現在、アポトーシス・発生など高等多細胞生物における高次機能に、シャペロン-プロテアソームシステムがどのように関与しているかについて研究を進めている。さらに本研究では、プロテアソームとシャペロン依存性ユビキチンリガーゼの協調機構の解明を目指すべく、線虫C.elegansを用いた逆遺伝学的機能解析を行っている。我々は既に、RNA干渉法を用いてプロテアソーム基質識別サブユニットとシャペロン依存性ユビキチンリガーゼが協調して生殖細胞の形成に必須であることを見い出しており、現在、その機構の詳細を検討している。

すなわち我々は、Rpn10cとの結合に関与するScytheのN末端領域を解析し、それがタンデムに並ぶ連結した4つのユビキチン様ドメインからなり、少なくとも2つのドメインの存在がRpn10cとの結合に必要であることを明らかにした。また、そのドメインがアポトーシス制御に必要であることを明らかにした。さらに、これらのドメインが多量体化におかかわること、ユビキチン依存的蛋白質分解系に直接関わる事などを初めて明らかにした。さらに本研究では、プロテアソームとシャペロン依存性ユビキチンリガーゼの協調機構の解明を目指すべく、線虫C.elegansを用いた逆遺伝学的機能解析を行ってた。我々は既に、RNA干渉法を用いてプロテアソーム基質識別サブユニットとシャペロン依存性ユビキチンリガーゼが協調して生殖細胞の形成に必須であることを見い出しており、論文出版の成果を挙げる事が出来た。
SDF-1の血管再構築能向上作用に基づく肝幹細胞からの効率のよい肝再生を目指して

SDF-1(stromal cell derived factor-1)は肝臓においては、胆管や肝幹前駆細胞にまた、人においては血管内皮にも発現が見られていた。SDF-1のレセプターであるCXCR4のconditional knock out (KO)マウスを用いて検討した結果、KOマウスでは肝障害がより強く現れ、偽胆管様構造を呈する胆管構造が多く出現するにも関わらず結果として適切な肝再生には結びついておらず、SDF-1/CXCR4の役割は肝再生を促進させる方向に働くことがわかった。肝臓は、既存の肝細胞の分裂による肝再生ばかりでなく肝幹前駆細胞が重要な働きをする。肝幹前駆細胞の存在するducfular reactions(DRs)はSDF-1(stromal derived factor-1)を産生することが知られており、SDF-1のレセプターとしてCXCR4が知られている.肝障害時SDF-1、CXCR4の発現は高まるが、CXCR4の発現する細胞を具体的に同定し、その細胞の肝再生における役割を解析することを目的としている。特に肝再生において血管新生などの重要な働きに関与しているのではないかと考えて実験を計画した。現在の研究の進展として、肝障害を与えたマウスではCXCR4を発現するもので特に強いものはCD11b陽性のmonocyte系の血球系細胞ではないかとフローサイトメトリーやPCR検索にて推定しており、これらの細胞は障害時実際に肝内で数倍増えることが観察されている。(継続解析中。)CD11b陽性細胞は他分野で血管新生や線維溶解などを促すなど多機能を持つことが知られており、この面から今後は、MxCre-CXCR4 flox/-マウス(生後にCXCR4をノックアウトできるマウス)を含めて解析も行う。現在MxCre-CXCR4 flox/-マウスを京都大学再生医科学研究所教授長澤丘司先生より譲りうけ現在実験に使用するためにmatingを行い増やしている段階である。順調に行けば7月以降解析結果が出てくると考えている。SDF-1 (stromal cell derived factor-1)は造血系、心臓などで発生、分化などに重要な働きをすることがわかっており、また肝臓では胆管や肝幹前駆細胞に発現することは知られていたがその役割に関して現在に至るまで解明されていなかった。今回我々は、SDF-1のレセプターであるCXCR4のconditional knock out (KO)マウスであるMxCre-CXCR4 f/-マウスを用い、生後にCXCR4遺伝子をKOしかつ慢性肝障害を起こした時に肝再生にどのような変化が起きるのかをコントロールマウスとしてMxCre-CXCR4f/+マウスを用いて解析を行いった。KO群(MxCre-CXCR4f/-マウス)では非KO群に比し、肝酵素であるALT値が有意に上昇し、障害ををより受けやすい状態であることが確認された。さらに、KO群では胆管や肝幹前駆細胞マーカーであるanti-cytokeratin抗体を用いた検索にて多くの胆管、肝幹前駆細胞を認めたにも関わらず、肝臓の機能改善や肝の大きさの維持等再生に結びつくよい結果は得られなかった。つまり、KO群では有効な再生が行われておらず、再生に対し負の方向に作用していた。我々の検索では、CXCR4陽性細胞は複数にわたり、何が最も肝再生に重要であるのかは判明していないが今後細胞ごとのCXCR4 KOマウス解析にて肝再生システムの解明につながることが予想される。マイクロアレイによる解析では、KO群ではFGF2やVEGFなど血管新生に必要な増殖因子の低下がみられており血管新生遅延による側面も一因と考えられる。今後、さらに実験を進めることにより、肝再生促進にSDF-1投与やもしくはSDF-1分解物質であるDPPIVの抑制薬の使用等により肝再生を促す等の新たな治療の開発につながる可能性がある。
視覚メディアにおけるジェンダー・ディスプレイのミクロ社会学的分析

本研究は「視覚経験の社会学」--視覚社会学--の理論的整備を目的とするものである。作業課題は2つある。第1に、視覚経験を扱った既存の社会学的研究を理節論に総括し視覚社会学の方向性を示すこと、第2に、この方向性にかなうべく映像/画像データベースをもとにした視覚的ジェンダー経験の分析を試行すること、である。既存の研究は、社会学的研究(とりわけ質的なそれ)における視覚データの活用と、映像の社会学的分析(とりわけ記号論援用のそれ)とにおいて、方法論的な困難を抱えつつも成果を重ねてきている。けれどもそれは,逆説的にも視覚データを二義的に扱い、視覚それ自体のあり方を自明視している。視覚社会学は、視覚経験が社会-文化的に構成されていること、視覚経験のそうしたあり方がまた社会-文化的世界の構成に与していること--つまり視覚は再帰的な位置にあること、そしてこの再帰性把握のために視覚経験を社会-文化的プラクティスとして捉えていくべきこと、の3つを焦点に進められねばならない。本研究はそうした提案とともに、それにかなう先駆的研究としてエスノメソドロジー的研究を検討した。他方、研究をいっそう具体化するために、TVコマーシャルとファッション雑誌を素材にして映像/画像データベースを作成し、視覚的ジェンダー表現/経験を考察した。本研究はこれらの視覚表象を何らか(社会構造やイデオロギーやステレオタイプ等)の反映論において促えることをしない。視覚表象はむしろ見る/見えるという営みを通して具現されるものであるとし,こうした発想をジェンダーを題材にして検討した。見る/見えることとジェンダー経験の生成とが不可分であること、そしてこれがさらに日常の社会過程の編成と不可分であることを示した。今後は、作成したデータベースを隅々まで活用した研究の実施と、その成果の効果的提示(視覚-言語的)方法の開発が課題である。作業課題は2つある。本研究は、日常的な視覚メディアのジェンダー・ディスプレイ様式とその受容のあり方を、相互行為論的枠組みのもとで実証的に分析することを目的とするものである。主要な作業課題は次の2つである。第1に、視覚経験、とりわけ視覚メディア経験に関る既存の社会学的研究を整理・検討し、「視覚の社会学」を理論的・方法論的に整備するとともに、そうした研究の射程と可能性を明らかにすること、そして第2に、視覚メディアのジェンダー・ディスプレイの様式を分析することを通して、日常的なメディア経験のあり方とその蓄積をふまえつつ既存のジェンダー・コミュニケーション研究を再構成することである。1年目の今年度は、2つの課題の遂行に向けての準備作業として、おもにテレビコマーシャルの映像データベース化を行った。在京キー局5局の計280時間分の放送録画テープから、コマーシャルのQuickTimeムービーを作成し、個々の基礎データとともにデータベース化した。これは、のちに分類等に関る記述を加え、それをもとに検索-分析できるよう設計されている。また、データベースから特定テーマ(化粧、身体ケア)に関るレコードを抽出し、雑誌広告を素材とした既存の分析手法を参照しつつ、内容分析的作業を試行した。他方、視覚メディア経験に関る既存の社会学的研究を相互行為論的見地から再検討した。記号論-構造論的、あるいはイデオロギー批判論的見地からなされることの多い先行研究の検討を通して、視覚メディア経験の日常的蓄積それ自体の社会学的意味を考察するという本研究の課題と意義が再確認された。検討過程で得られた「視覚的フォーマット」という概念を手がかりに、数少ない先行研究である科学社会学的研究やエスノメソドロジー的研究を参照しつつ、作成したデータベースを用いて相互行為論的分析を具体化するのが次年度の課題である。

本研究は、視覚メディアのジェンダー・ディスプレイを素材とした映像データベースを相互行為論的に分析しつつ、そのことを通して「視覚経験の社会学」を理論的方法論的に整備しようとする試みである。2年目の今年度の作業は昨年度の作業を継続・拡充した。映像データベースには、QuickTimeムービーによる延べ約11000のTVコマーシャル映像を蓄積した。作業は、既使用分とは別時期に収録した放送録画テープ(在京キー局5局の計280時間分)を素材にして現在も継続しており、最終的(次年度)には、1998年夏冬のTVコマーシャルをもとに、延べ20000レコード以上、総量200GB程度のデータベースとなる。並行して、人物を中心にした雑誌広告を素材とする画像データベースを試作し、これに800程度のレコード蓄積を済ませている。画像データベースの拡充、そして両データベースの比較検討を可能にする分析フォームの作成と分析が次年度の課題となった。映像データベースはまた、エスノグラフィ的手法によるTVオーディエンス研究を手掛かりに、映像蓄積のみならずそれ自体を分析ツール化することを目的に改編された。すなわち、個々のレコードに閲覧者の読解を入力できる不定型データ・フィールドを作成し、そこへの記述内容自体を容易に検索・分析できるようにした。これは次年度に実施予定の視聴実験において活用する。他方、視覚経験を扱う社会学的な先行研究は基本的に「映像の社会学」だった。それらは何らかの反映論(社会構造や社会的差違や社会的権力の)を前提にし、映像それ自体のあり方、さらには「見る/見える」ことそれ自体のあり方を等閑視・自明視することが多かった。視覚という営みのあり方自体を分析可能にする社会学的枠組み(視覚社会学)の必要性が明確になり、上記データベースの内容分析を踏まえてそうした枠組みを整備することが最終的な課題となった。本研究は、視覚メディアを素材とした映像データベースを作成し、そのジェンダー表現を焦点にした相互行為論的分析を行ないつつ、「視覚経験の社会学」を理論的方法論的に整備することを目的とするものである。最終年度である今年度は、総括に向けて主に既存研究の理論的・方法論的な総括検討作業を行ない、合わせてデータベース作成作業を継続するとともに、その分析を試行した。映像データベースには、1998年夏に収録した在京キー局5局の計280時間分の放送録画テープをもとに、最終的に、QuickTimeムービーによる延べ約11000本、計約100GBのTVコマーシャル映像を作成、蓄積し、データごとの指標作成を行った。このほか、1998年冬収録の同量録画テープによる作業を継続したが、年度内の作業完了を見込めなかったため中途で中断した(これに伴って、作業時間が確保できなかったため、当所予定のコマーシャル視聴実験研究は中止した)。また、2000年3月刊行のファッション雑誌89誌からファッション広告を859点選び出し、画像データベース化した。映像データベースの完成、ならびに両データベースの連結という課題が残った。本研究は「見る/見える」ことそれ自体のあり方を把握できる理論的方法論的枠組み作りを指向している。
電磁波反射・屈折法による地下電気伝導度時間変化検出シミュレーション

地表面に沿って置いた閉曲線を通電する閉曲線電流を数値的に表し、それが引き起こす鉛直磁気ダイポールのプログラムコード化を行っているが、コード化に成功していない。先行研究によるアメリカやドイツの研究者とも議論を行ったが、特許の問題でコードの核心部分が分からず、コード化が難航している。テクニカルな工夫として、時間刻み毎にコードをMPIで並列化することを考えているが、より高度な並列化と高速化を目指して、各スレッドに現れる大規模一次方程式を解く複雑なルーチン部分をMPIで並列化するためにNAGライブラリーコードを組み込むことを試みた。コード化が難航しているが、完成したコードで火山地帯の電気伝導度構造を組み込んで電磁波の時間領域レスポンスを求める計画に沿って、地磁気地電流法による火山体地下の電気伝導度構造の精緻化を並行して進めた。テストフィールドとして計画している蔵王山の他、別のシミュレーションとして福島の吾妻山を想定し、吾妻山から安達太良山に渡る地殻電気伝導度構造を精緻化した。その結果、1)吾妻山で噴気を上げている一切経山の大穴火孔直下に鉛直に続く細い火道をイメージさせる高伝導体のイメージ、2)干渉SAR解析で求められた、深さ1.2 km,長軸半径約12 km,短軸半径約6 kmの低粘性楕円体領域と高電気伝導体のイメージが非常によく一致、3) 2)の高伝導体から安達太良山の箕輪山に伸びる高伝導度の火道のイメージ、をそれぞれ明らかにした。昨年に引き続きコード化が成功していない。うまくいかない場合は周波数領域での解析を行う予定であったが、今年度も組織内施設設備の残務整理等で、十分にプログラムコード化に時間を割くことができず、大幅に研究が遅れている。最終年度ではプログラムとシミュレーションを終了し、実際の野外実験に応用する予定であったが、野外実験を一年間後ろに伸ばし、今年度もプログラムとシミュレーションを継続すると同時に、研究期間の延長を視野にして研究を推進する予定である。3次元不均質電気伝導度媒体の電磁場応答計算の定式化を終了し、FORTRAN90とMPIによるプログラミングを行った。定式化は各サブルーチンと途中受け渡しまでの、計算式・パラメータまでリスト化した。定式化中、本計画最大の課題である非平面波ソースの扱いは、地表の線電流の組み合わせで閉曲線電流を形成する方法を採用した。本計画では地下の電気伝導度変化に伴う電磁場応答の時間領域データを扱うことを最終目的とし、その目的の為に周波数領域で電磁場変動計算を行い、ラプラス逆変換で時間領域に変換する計画であったが、時間領域そのものを計算する、有限要素時間領域法(FETD法)による定式化に変更した。周波数領域の電磁場計算よりも時間領域の電磁場計算は、非平面波ソースの扱いがプログラム上容易であるメリットがある。プリプロセスの構造メッシュ作成ではTetGenプログラムを採用し、4面体要素を用いた有限要素パラメータを入力として採用した。プログラミングはTetGenプログラムの出力パラメータを読み込んで、電磁場計算を行う直前部分まで終了した。プログラム上の難点は、地表に対して鉛直の磁気ダイポールモーメントを地表に沿った線電流を組み合わせた閉曲線電流から作ることであるが、線電流の繋ぎ目は正負の電流湧き出し・吸い込みを作り、正と負の湧き出し・吸い込みを隣接する微小な有限要素に配置する必要がある。単純化した直線電流ソースの時間領域計算は2010年、周波数領域計算は2017年に論文化されているが、閉曲線電流ソースにする場合の問題点を情報収集する為、周波数領域の論文を発表したドイツ人研究者の学会発表を聞き情報を収集した。本計画の主目的である計算プログラム開発において、電気伝導度異常体から散乱された電磁波を周波数領域で計算し時間領域に変換する方針を、直接時間領域で計算するアルゴリズムへ変更を行った。変更した定式化自体は7月頃までに終了した。その後プリプロセスとしての媒体の有限要素メッシュジェネレータをTetGenに選定し、パラメーター読み込みまでのプログラミングは順調に推移した。しかし7月以降、計画時に想定していなかった組織内施設設備整備役や学内教育が入ったため、12月の学会時に情報収集を行った以外は、本研究に全く時間を割くことが出来ず、大幅に研究が遅れている。

その結果、1)吾妻山で噴気を上げている一切経山の大穴火孔直下に鉛直に続く細い火道をイメージさせる高伝導体のイメージ、2)干渉SAR解析で求められた、深さ1.2 km,長軸半径約12 km,短軸半径約6 kmの低粘性楕円体領域と高電気伝導体のイメージが非常によく一致、3) 2)の高伝導体から安達太良山の箕輪山に伸びる高伝導度の火道のイメージ、をそれぞれ明らかにした。昨年に引き続きコード化が成功していない。うまくいかない場合は周波数領域での解析を行う予定であったが、今年度も組織内施設設備の残務整理等で、十分にプログラムコード化に時間を割くことができず、大幅に研究が遅れている。今年度半ばまでにプログラムを完成させるとしていた当初の計画を、半年遅れの今年度中に実現することを目標とする。AMT法から求めている蔵王山の電気伝導度構造を用いて今年度中にシミュレーションを行う予定であったが、プログラム完成が前倒しできればシミュレーションも実行し、来年度(平成31年度)に計画している実際の野外実験に間に合わせる。最終年度ではプログラムとシミュレーションを終了し、実際の野外実験に応用する予定であったが、野外実験を一年間後ろに伸ばし、今年度もプログラムとシミュレーションを継続すると同時に、研究期間の延長を視野にして研究を推進する予定である。進捗が遅れているため、予想した結果が得られておらず、学会発表が想定よりも少ないのが原因である。今後の野外実験と学会での研究報告に次年度使用額を充当する。
乳癌骨転移モデル作成とデオキシピリジノリンの骨転移マーカーとしての有用性の研究

コラーゲンの架橋成分として主に骨・軟骨組織に由来する尿中pyridinoline/Cr(PYR),deoxypyridinoline/Creatinine(DPYR)(pmol/mumol)の乳癌骨転移診断における有用性を動物モデルおよび臨床例を用いて検討した.(1)実験的検討:SHRラットの左総頚動脈より胸部大動脈内に留置したカニューレよりc-SST-2細胞(ラット自然発生乳癌細胞)を両側腎動脈クランプ下に注射することにより骨転移を作製した。4週後屠殺し、組織学的に骨および他臓器転移を確認した。同様の方法で生理食塩水を注射し、コントロールとした。注射後2、4週目に骨関連マーカーの測定を施行した骨転移群、他臓器転移群、コントロール群について比較検討した。(2)臨床的検討:乳癌患者を画像診断にて無再発群、骨転移群(骨転移単独)、多臓器転移群(骨+他臓器転移)に分類し、それぞれの尿中PYR,DPYRを測定し、比較検討した。(結果)(1)実験的検討:注射後2週目では、60%に骨髄内の微小転移巣を認め、4週目では78%に骨破壊を伴う骨転移を認めた。2週目では、血清、尿中の骨関連マーカーのいずれも3群間に有意な差を認めなかったが、4週目では、PYR,DPYRは骨転移群で他臓器転移群、コントロール群に比し有意に高値を示した。他臓器転移群とコントロール群の間には差を認めなかった。(2)臨床的検討:3群間で、検体採取時の年齢、閉経状況、初発時のERに差を認められなかったが、PYRは多臓器転移群,骨転移群で、無再発群に比し有意に高値を示し、DPYRも同様に多臓器転移群、骨転移群で無再発群に比して高値を示した。多臓器転移群と骨転移群との間には差を認めなかった。(結論)尿中PYR,DPYRは他臓器転移との相関を認めず、骨転移に特異的なマーカーとして有用であることが示唆された。
Gn-RHレセプターを利用した子宮筋腫および子宮内膜症の治療に関する研究

正常子宮筋および子宮筋腫におけるgonadotropin releasing hormone(Gn-RH)receptorの存在の有無を調べるため子宮筋腫の診断にて手術によって得られた正常子宮筋および筋腫組織をautoradiographyの手法を用いて検討した.Gn-RH analogue(Gn-RHa)として^<125>I-Buserelinを用いた.なお,コントロールとしてはラット下垂体前葉および海馬を用いた.ラット下垂体前葉および海馬に^<125>I-Buserelinのspecific bindingを認めた.しかしながら,正常子宮筋および筋腫いずれにおいてもbinding activityは一定せず,^<125>I-Buserelinのspecific bindingの確証は得られなかった.さらにpreincubation time,incubation timeやincubation temperatureなどの条件をいくつか変えincubation assayを行ったが,specific bindingを見出せなかった.したがって,正常子宮筋および筋腫にGn-RHreceptorの存在を証明することはできなかった.次に子宮筋腫に対するGn-RHaの直接効果の有無を検討するため,子宮筋腫培養細胞を用いてGn-RHaの細胞増殖能に対する影響と筋腫細胞縮小効果または細胞毒性の有無について検討した.35mmシャーレで1x10^5個の筋腫細胞および正常子宮筋細胞を各種濃度のGn-RHaを添加した培養液で培養し,経日的に2週間,細胞数および蛋白量を測定した.細胞数および蛋白量は,GnRHaのどの濃度においてもGn-RHaを添加しない群と比べて有意な差は認めなかった.したがって,子宮筋腫および正常子宮筋の培養細胞の増殖能に対してGnRHaの直接効果はないものと推察された.さらに35mmシャーレで筋腫細胞および正常子宮筋細胞を培養し,約1週間後confluentになったものに各種濃度のGn-RHaを添加し,経日的に2週間,細胞数および蛋白量を測定した.細胞数,1シャーレあたりの蛋白量および蛋白量を細胞数で除した1細胞あたりの蛋白量は,GnRHa無添加群と比べて全く有意差は認めなかった.したがって,Gn-RHaの直接的な細胞縮小効果または細胞毒性は無いもの考えられた.以上の結果より子宮筋腫のGnRHaによる縮小効果は,GnRH receptorを介した作用ではなく,また,GnRHaの筋腫細胞への直接作用でもなく,estrogen低下などによる間接的作用によるものと推察された.正常子宮筋および子宮筋腫におけるgonadotropin releasing hormone(Gn-RH)receptorの存在の有無を調べるため子宮筋腫の診断にて手術によって得られた正常子宮筋および筋腫組織をautoradiographyの手法を用いて検討した.Gn-RH analogue(Gn-RHa)として^<125>I-Buserelinを用いた.なお,コントロールとしてはラット下垂体前葉および海馬を用いた.ラット下垂体前葉および海馬に^<125>I-Buserelinのspecific bindingを認めた.しかしながら,正常子宮筋および筋腫いずれにおいてもbinding activityは一定せず,^<125>I-Buserelinのspecific bindingの確証は得られなかった.さらにpreincubation time,incubation timeやincubation temperatureなどの条件をいくつか変えincubation assayを行ったが,specific bindingを見出せなかった.したがって,正常子宮筋および筋腫にGn-RHreceptorの存在を証明することはできなかった.次に子宮筋腫に対するGn-RHaの直接効果の有無を検討するため,子宮筋腫培養細胞を用いてGn-RHaの細胞増殖能に対する影響と筋腫細胞縮小効果または細胞毒性の有無について検討した.35mmシャーレで1x10^5個の筋腫細胞および正常子宮筋細胞を各種濃度のGn-RHaを添加した培養液で培養し,経日的に2週間,細胞数および蛋白量を測定した.細胞数および蛋白量は,GnRHaのどの濃度においてもGn-RHaを添加しない群と比べて有意な差は認めなかった.したがって,子宮筋腫および正常子宮筋の培養細胞の増殖能に対してGnRHaの直接効果はないものと推察された.さらに35mmシャーレで筋腫細胞および正常子宮筋細胞を培養し,約1週間後confluentになったものに各種濃度のGn-RHaを添加し,経日的に2週間,細胞数および蛋白量を測定した.細胞数,1シャーレあたりの蛋白量および蛋白量を細胞数で除した1細胞あたりの蛋白量は,GnRHa無添加群と比べて全く有意差は認めなかった.したがって,Gn-RHaの直接的な細胞縮小効果または細胞毒性は無いもの考えられた.以上の結果より子宮筋腫のGnRHaによる縮小効果は,GnRH receptorを介した作用ではなく,また,GnRHaの筋腫細胞への直接作用でもなく,estrogen低下などによる間接的作用によるものと推察された.手術によって得られた正常子宮筋および筋腫組織を-20°C下にて20mumの凍結切片をつくり,gelatin coating slide glass上にのせ風乾後,持続吸引陰圧デシケータ内で一晩乾燥し,その後15mM Tris-HClのbuffer中でpreincubationを行った後,170mM Tris-HCl,1%bovine serum albuminを含むbufferを用い,これに2X10^5cpm/mlになるよう^<125>I-Buserelinを加え,4°C,pH7.4の条件にて120分間incubationを行った。その後,bufferで洗浄後,室温乾燥を行い,得られた資料について,Bas 2000 Bio image analyzerを用いて放射活性を測定した。なお,コントロールとしてラット下垂体前葉および海馬を用いた。