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戦争・災害より見た近代東アジア民衆諸宗教に関する比較史的研究

本研究は、20世紀前半期に勃興した同善社・道院・カオダイ教など、中国・ベトナム・朝鮮等近代東アジアの民衆宗教運動の誕生と展開の背景を、災害と戦争の視点から検討を加えたものである。同時期に起こった旱魃・震災等の自然災害、さらには戦争によって引き起こされた社会的危機に対し、これらの民間諸宗教団体の展開した種々の慈善救済活動、遺体収集等の戦時救済活動の具体相、およびそれらの活動を支える民衆諸宗教の救済観を明らかにした。本年度は,以下の通りである。(1)海外資料調査:分担研究者の孫江は南京市檔案館・上海市図書館等で民衆宗教関係資料の調査を行ったほか,連携研究者の牧野元紀はフランスのパリ外国宣教会図書館において中国・ヴェトナム等の東アジア地域で各種救済活動を展開したカトリック慈善団体「聖嬰会」の刊行した雑誌資料の調査にあたった。また,研究協力者の張士陽は台湾中央研究院台湾史研究所において台湾民衆宗教に関して,同じく小武海櫻子は,中国・重慶市図書館において慈善活動を展開したことで知られる同善社関係資料について,倉田明子は香港大学・香港科技大学を中心にミッション関係資料に現れる中国民衆宗教関係資料の調査にあたった。(2)海外フィールド調査:2012年3月2日より8日まで,ホーチミン市やミト市,ヴィンロン市等ヴェトナム南部各地に点在し,各種慈善活動を展開している中国系民衆宗教団体に対するパイロット調査を実施した。この調査をつうじて,ヴェトナムにおいて2008年より政府の公認を受けた「明師道仏教会」が中国近代の民衆宗教「先天道」の流れを汲むものであることを確認するとともに,蔵霞洞をはじめとする「明師道」系民衆宗教の慈善活動についても多くの知見を得ることができた。さらに,2013年3月2日より8日まで,2012年度のパイロット調査を踏まえ,明師道系仏教施設「仏堂」に残されている宗教文献の調査にあたり,多くの経巻類の存在を確認するとともにその多くをデジタルカメラにて撮影・記録することができた。この調査にあたっては,ホーチミン市人類学・民族学協会の協力を得た。こうした民衆宗教の淵源をなす中国大陸においてはそのほとんどが失われており,今回の調査で得られた知見は極めて貴重なものといえる。本年度は、これまでの研究成果をふまえ、2014年6月22日(土)、学習院大学において「戦争・災害から見た近代東アジアの民衆宗教」と題する公開シンポジウムを開催し、以下の5氏より報告を得た。倉田明子(東京大学学術研究員)「日本占領期香港におけるカトリックの救済活動」、今井昭夫(東京外国語大学)「『ホーチミン教』に見られる戦争の記憶近年のベトナム北部の民衆宗教」、孫江(静岡文化芸術大学)「戦場の死体「上海事変」下紅卍字会の死体埋葬活動と大本教」、小武海櫻子(専修大学)「近代中国における民衆宗教の「大同世界」と災害観同善社の事例を中心に」、Vincent Goossaert(フランス国立高等実習院), "ModernDaoisteschatology: Spirit-writing and the rise of elite eschatology in late imperialChina".これらの報告に対して、それぞれ篠崎守利(流通経済大学)、宮沢千尋(南山大学)、宮田義矢(専修大学)、佐藤仁史(一橋大学)、森由利亜(早稲田大学)の各氏よりコメントをいただいたほか、フロアからも活発な発言が見られた。このシンポジウムをつうじて、キリスト教の救災活動などと比較しつつ、同善社や道院など、1920年代以降に勃興した近代東アジア民衆諸宗教の災害観や戦争観、その歴史的系譜、さらには戦時救済活動の実態等を明らかにすることができ、研究課題への理解を深めることができた。昨年実施したワークショップ報告論文、さらに時間的制約から報告できなかったプロジェクトメンバーの論考とをとりまとめ、武内房司編『戦争・災害と近代東アジアの民衆宗教』有志舎、2014年3月、として刊行することができた。本年度の活動の中心は,10月20日・21日の両日にわたって「災害と近代東アジアの民衆宗教」をテーマとして開催されたワークショップである。本ワークショップにおいては,台湾・中国より専門研究者を招聘し,以下の報告を得た。范純武(台湾・仏光大学人文学院歴史学系)「道義1940年代「中教道義会」与上海社会救済」,曹新宇(中国人民大学清史研究所)「中国歴史上的“災難信仰制度"与民間教門的“災難神話"」,王見川(台湾・南台科技大学通識教育中心)「晚清災難下扶乩團體的慈善活動兼談中國紅十字會的起源」,篠崎守利(流通経済大学)「民国初年の紅十字会標章問題」,武内房司「日本人は在理教をどう見たか中国近代の民衆宗教をめぐる一試論」。これらの5名の研究報告及び討論をつうじて,戦争・災害時において民衆宗教の果たした役割,民衆宗教の災害観,近代慈善事業の諸性格等をめぐって活発な議論が交わされた。

また,研究協力者を含むプロジェクトメンバーにより,関係者へのインタビューを含む以下の海外調査が実施された。(1)パリ外国宣教会図書館所蔵「聖嬰会」関係資料調査(牧野元紀,2012年12月13日12月22日),(2)台湾国家図書館・台湾大学図書館所蔵民衆宗教関係調査(宮田義矢,2013年3月3日3月9日),(3)カルヴィンカレッジ・ハクマン図書館所蔵デ・コーン文書調査(小武海櫻子,2013年3月24日31日),(4)上海図書館所蔵紅卍字会関係資料調査及び南京紅卍字会会長陶晋遺族へのインタビュー調査(孫江,2012年12月),(5)南京市図書館所蔵紅卍字会関係資料調査(孫江,2013年3月),(7)台湾中央研究院台湾史研究所所蔵関連資料調査(張士陽,2013年3月18日27日)。宗教社会史の研究には現地フィールド調査が重要であるが,ヴェトナムの仏教系宗教団体の一つ「明師道仏教会」は2008年に公認されたばかりなこともあって,外国研究者に対しても寛容であり,比較的円滑にその歴史や教義に対する聞き取り・資料調査を進めることができた。とくに,繰越予算を用いて実施された2013年の調査によって,多くの漢文で書かれた経巻類を撮影記録できたことは,今後の分析にとって頗る重要であり,大きな成果である。25年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の活動の中心にすえた上記のワークショップにおいては,当初5名の海外研究者の招聘を計画したが,予定した5名のうち中国近代の道教・仏教を中心とした宗教社会史を専門とするフランス・アメリカの2名の研究者が最終段階で日程の都合がつかず,参加できなかったのは残念である。しかし,中国・台湾において民衆宗教研究に従事する専門研究者3名を無事招請することが可能となり,そこでの討論をつうじて中国近代における民衆宗教の成立・発展過程に「災害」や「戦争」体験が深く関わっていたことを明らかにすることができた。したがって,基本的にほぼ予定どおりの成果を収めることが出来たと考える。このワークショップをつうじて,プロジェクトメンバーの研究課題もより一層明確となり,主として2012年12月から2013年3月の期間に実施された海外資料調査にも研究会での討論の成果や問題意識を生かすことができたと考える。また,今年度より朝鮮近代宗教社会史を専門とする趙景達教授が参加し,近代東アジアに勃興した民衆宗教を広域的かつ横断的に比較しその特質を検討することができるようになった点も指摘しておきたい。それぞれの研究分担に応じ,各自が研究テーマを持ちより,ワークショップを企画する予定である。このワークショップには,関連する研究分野の外国人研究者を招聘し,プロジェクトメンバーだけではカバーできない領域を補い,かつ相互の討論をつうじて問題意識を共有するとともに,最終年度内に論文集を刊行することを目指したい。昨年度のワークショップでカバーしきれなかった地域・時期・団体に着目し,6月22日(土)に第二次ワークショップの開催を準備している。このワークショップには,昨年来日できなかったフランスのグーセール教授(フランス高等研究院教授)も参加の予定である。
植物の低温馴化過程におけるＧＰＩアンカータンパク質の機能と凍結耐性との関連

低温馴化過程での細胞膜組成の変化は、低温環境下での植物の生存を左右すると考えられており、本研究では細胞膜脂質修飾型タンパク質の一種であるGPIアンカー型タンパク質(GPIAP)の低温馴化における機能特性を解析した。昨年度までは、GPIAP濃縮画分を初めとした様々な画分のショットガンプロテオーム解析により、163種類ものGPIAPの低温馴化応答性を明らかにすることができ、その中からAt3g04010を選出して発現パターンや凍結耐性への関連性を明らかにした。本年度はまず、TTC assayにより、At3g04010の凍結耐性への影響を組織的に評価した。その結果、At3g04010欠損変異体(at3g04010)は凍結融解後の回復過程で、茎頂の再生長の著しい遅延もしくは停止を引き起こしていることが分かった。さらに、このAt3g04010は、ドメイン構造などからβ-1,3-glucanaseの一つであると考えられるため、β-1,3-glucanaseの基質であり、細胞壁成分の一つでもあるカロースの観察と定量を行った。その結果、師部組織のカロース量は、野生型株では低温馴化7日目にかけて減少し、at3g04010においてはその減少が見られないことが分かった。さらに、蛍光タンパク質mCherryでAt3g04010を標識して顕微鏡観察したところ、師部組織の細胞間隙でパッチ状に分布することが明らかになった。このような組織内分布パターンはカロースの分布とも酷似するものである。さらに、これらの蛍光強度は低温馴化7日目にかけて2.7倍まで高くなっていくことが分かった。カロースは細胞間コミュニケーションや師部組織の通導性に影響を及ぼすことから、At3g04010は低温馴化過程でカロースの分解を通じて組織の師部輸送能を上げ、凍結融解後の茎頂の再生長を促す役割があるものと考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。GPIアンカー型タンパク質(GPIAP)は糖鎖と脂質を介して細胞膜上に係留されているタンパク質であり、私の修士課程での研究からライムギの低温馴化過程で特異的に増加している可能性が示唆された。そこで、Phospholipaseを用いてGPIAPを細胞膜上から遊離させて単離し、ショットガンプロテオーム解析を用いて細胞膜画分に含まれるGPIAPの網羅的な同定を試みた。その結果、カラスムギ、ライムギ、Arabidopsisにおいてそれぞれ30,81,90種類のGPIAPを同定することができた。Arabidopsisにおいてはこれまで40種程度のGPIAPしか同定されていなかったが、今回用いた方法により、より少量の細胞膜から2倍以上のGPIAPを一度に同定することができた。さらに、低温馴化前後では、凍結耐性の弱いカラスムギではほとんどのGPIAPが減少していたのに対し、凍結耐性の強いライムギやモデル植物のArabidopsisではいくつかのGPIAPが有意に増加していることが示された。以上のことから、GPIAPの一部は低温馴化機構の一端を担い、凍結耐性の上昇に寄与しているものと考えられる。さらに、本年度は、GPIAPが存在すると考えられるアポプラストを抽出し、GPIAPの同定や低温馴化における変動の解析も試みた。アポプラストに関してはBoudartら(2005)のArabidopsisにおける報告を参考に、一部プロトコルを改変することで、純度90%程度の画分を得ることができた。さらに、上記のプロテオーム解析の結果を元に、GPIAPが欠失した変異体を用いて低温馴化後に凍結試験を行った。その結果、At3g04010遺伝子のプロモーター領域にT-DNAが挿入されたラインにおいては、野生型に比べ凍結融解後の植物体損傷度が増加しており、光合成活性が43%低下していた。定量RT-PCRを用いて低温馴化過程でのAt3g04010遺伝子発現を見ると、低温未馴化の状態と比較して、低温馴化1日目で70倍に増加し、低温馴化日数を経るに従って低下していくことがわかった。以上の結果から、低温を感知した後にこのGPIAPタンパク質の発現が誘導され、凍結耐性上昇の一助となっていることが示唆された。低温馴化過程では、細胞膜のたんぱく質や脂質の組成変化が凍結耐性の上昇に重要な意味を持つことが示されており、その中でも細胞膜貫通型および表在型たんぱく質の変動は多数報告されているが、脂質修飾型タンパク質に関しては存在量が少ないため、知見がほとんどない。そこで、昨年度に立ち上げたGPIAP濃縮プロトコールの抽出フローを発展させ、より大規模なGPIAPの同定を実現した。また、GPIAPが存在すると考えられている細胞膜表面の中の微小領域(マイクロドメイン)やアポプラスト画分も抽出してショットガンプロテオーム解析を行うことにより、より広範囲なGPIAPの同定と定量を実現し、163種類のGPIAPの同定に成功した。細胞膜、マイクロドメイン、アポプラストではそれぞれ様々な機能を持つGPIAPが存在することを示し、低温馴化過程における変動パターンも異なっていた。このことから、GPIAPは未知の制御機構によって、低温馴化過程におけるそれぞれのGPIAPの局在性や各部位でのGPIAPの蓄積量の変化を制御させている可能性が示された。

また、昨年度から着目していた低温馴化誘導性GPIAPのAt3g04010に関しては、遺伝子発現が減少したノックダウン変異体を作出し、凍結融解後の再生長量を見ることで凍結耐性を評価した。その結果、野生型に比べ凍結融解後の再生長量が有意に低下しており、At3g04010の重要性が示された。さらに、低温馴化過程におけるAt3g04010の詳細な遺伝子発現パターンをqRT-PCRで測定したところ、低温馴化12時間後に発現のピークが見られた。GUSプロモーターアッセイにより器官特異的発現も解析したところ、根や葉柄などの、物質輸送に関するような器官で発現が見られ、特に維管束に発現が集中していた。このことから、At3g04010が維管束組織において低温により誘導され、凍結耐性上昇に寄与していることが示唆された。また、本年度はAt3g04010の蛍光たんぱく質mCherry融合変異体の作出も進行している。低温馴化過程での細胞膜組成の変化は、低温環境下での植物の生存を左右すると考えられており、本研究では細胞膜脂質修飾型タンパク質の一種であるGPIアンカー型タンパク質(GPIAP)の低温馴化における機能特性を解析した。昨年度までは、GPIAP濃縮画分を初めとした様々な画分のショットガンプロテオーム解析により、163種類ものGPIAPの低温馴化応答性を明らかにすることができ、その中からAt3g04010を選出して発現パターンや凍結耐性への関連性を明らかにした。本年度はまず、TTC assayにより、At3g04010の凍結耐性への影響を組織的に評価した。その結果、At3g04010欠損変異体(at3g04010)は凍結融解後の回復過程で、茎頂の再生長の著しい遅延もしくは停止を引き起こしていることが分かった。さらに、このAt3g04010は、ドメイン構造などからβ-1,3-glucanaseの一つであると考えられるため、β-1,3-glucanaseの基質であり、細胞壁成分の一つでもあるカロースの観察と定量を行った。その結果、師部組織のカロース量は、野生型株では低温馴化7日目にかけて減少し、at3g04010においてはその減少が見られないことが分かった。さらに、蛍光タンパク質mCherryでAt3g04010を標識して顕微鏡観察したところ、師部組織の細胞間隙でパッチ状に分布することが明らかになった。このような組織内分布パターンはカロースの分布とも酷似するものである。さらに、これらの蛍光強度は低温馴化7日目にかけて2.7倍まで高くなっていくことが分かった。カロースは細胞間コミュニケーションや師部組織の通導性に影響を及ぼすことから、At3g04010は低温馴化過程でカロースの分解を通じて組織の師部輸送能を上げ、凍結融解後の茎頂の再生長を促す役割があるものと考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。GPIAPのプロテオーム解析に関しては、当初の予定通り、カラスムギ、ライムギおよびArabidopsisにおいてそれぞれ網羅的な同定と低温馴化応答性を示すことができた。また、GPIAPの生理学的解析に関して、多数のGPIAP欠損変異体ラインを用いた実験から、低温馴化機構に関与すると考えられる遺伝子の候補を選び出し、さらに低温馴化過程における経時的な遺伝子発現変化を表すことができた。GPIAPのプロテオーム解析に関しては、昨年度からさらに検出数を増やすことができ、低温馴化過程におけるより網羅的な変動を解析することができた。
MRIおよびMDCTによる非侵襲的冠動脈検査の基礎的・臨床的研究

冠動脈病変に対する非侵襲的検査としてMR angiographyが平成4年に一般MRI装置で可能となり、我々は基礎的実験および健常者での試行を重ね、虚血性患者への臨床応用を試み、平成6年に本邦-では第一報の臨床応用報告を行った。平成9年から12年まで科学研究費補助金基盤研究(C)の給付を受け研究を続行し、以来その成果を内外の学会、論文で発表報告してきたが、本科研費給付により、継続してMRIによる非侵襲的冠動脈検査の基礎的・臨床的研究を行うことができた。また、冠動脈病変の結果である心筋梗塞巣の客感的検出において、MRI心筋遅延造影法が従来法に比べて有用性が高いと言う報告に着目し、本法にparallel imagingを併用することで三次元的に検査を行い検査時間短縮を目論んだ。いくつかの工夫を加えて十分な高精細画像を得ることができ、その成果を日本医学放射線学会誌に論文報告を行った。また呼吸同期下5分前後の撮像時間で、ほぼ全ての冠動脈血流の描出が可能なwhole coronary MRAの臨床応用をすすめ、その成果を複数の学会発表を行った。さらに頚動脈アテロームプラークの性状診断によって得た新知見、技術を、冠動脈壁の性状診断へ応用し一定の成果を得、平成17年の日本磁気共鳴学会で発表した。また平成12年から多列検出器高速CT(multidetector GT : MDCT)の心電図同期撮影が可能となり、時を移さずMDGTによる冠動脈血流の描出に応用を試みた。本科研費給付を得、MRIと併せて、CTによる非侵襲的冠動脈検査の基礎的・臨床的研究に取り組んだ。正常ボランティアに引き続き冠動脈病変を有する臨床例を対象にし、撮影条件の設定、造影剤の注入方法等の検討を行っている。本法では造影剤の静注と20秒前後の息止めで全冠動脈の描出が可能となる。これまでの症例で通常冠動脈撮影の所見と照合し、その正診率を算出し、撮影法、対象部位による差異などを検討し学会発表、論文発表を行ってきた。平成16年には関連病院に導入された40列のMD-CTを、冠動脈病変を有する臨床例に応用し,正常血管,狭窄病変の描出能について検討をかさねた。とくに臨床例を対象にして血管内超音波法との比較検討をおこない、CTによる冠動脈狭窄判定およびプラーク性状診断臨床応用の可能性が高いことを平成18年の日本循環器学会で報告した。なお、研究課題の成果を中心とした成書"心臓のMRIとCT"を研究代表者,分担者が中心となり上梓した。本書はこの分野での本邦初の成書であると自負しており、本書の中心となる研究内容は、科学研究費補助金に多くよるものである。ここに感謝の意を表する。

本書はこの分野での本邦初の成書であると自負しており、本書の中心となる研究内容は、科学研究費補助金に多くよるものである。ここに感謝の意を表する。モデルによる実験を元に、冠動脈病変を有する臨床例に多列検出器高速CT(MD-CT)を施行し,画像スライス厚1mmと2mmでの正常血管,狭窄病変の描出能について検討した.対象は臨床41例、235セグメント.通常血管撮影との比較でMD-CTのSensitivity, Specificity, Accuracyは2mmスライス厚群てそれぞれ56.0%, 78.9%, 75.6%であり1mmスライス厚群で71.4%, 86.4%, 83.8%であった。1mmスライス厚撮影群は2mmスライス厚撮影群より正常血管,狭窄病変ともに高い描出能を示し,より薄いスライス厚での診断能の向上が期待できた.以上の成果は高橋修司が日医放会誌に発表した。本年度に当付属病院に16列の多列検出器高速CT(MD-CT)が導入され、モデルによる実験から開始し、冠動脈病変を有する臨床例に応用し,画像スライス厚0.5mm,1mmでの正常血管,狭窄病変の描出能について検討を開始した。また本MD-CTではステント内部血流の有無診断が可能で、臨床例における描出能検討を行っている。当付属病院の16例の多列検出器高速CT(MD-CT)と、新たに導入された関連病院の40列CTを、冠動脈病変を有する臨床例に応用し,正常血管,狭窄病変の描出能について検討をかさね、さらに進むであろう多列化の意義を考察している。またステント内部血流の有無診断を臨床例を対象に2機種間での比較検討を行っている。なお、本年度は研究課題の成果を中心とした成書"心臓のMRIとCT"を研究代表者,分担者が中心となり上梓した。本書はこの分野での本邦初の成書であると自負している。心筋梗塞巣の客感的検出において、MRI心筋遅延造影法が従来法に比べて有用性が高いと言う報告は多いが、本法にparallel imagingを併用することで三次元的に検査を行い検査時間短縮を目論んだ。いくつかの工夫を加えて十分な高精細画像を得ることができ、その成果を日本医学放射線学会誌に論文報告を行った。また呼吸同期下5分前後の撮像時間で、ほぼ全ての冠動脈血流の描出が可能なwhole coronary MRAの臨床応用をすすめ、その成果を複数の学会発表を行った。さらに頚動脈アテロームプラークの性状診断によって得た新知見、技術を、冠動脈壁の性状診断へ応用し一定の成果を得たが、臨床上意義のある画質を得るには高磁場装置が必要であることを日本磁気共鳴学会で発表した。40列の多列検出器高速CT(MD-CT)を、冠動脈病変を有する臨床例に応用し,正常血管,狭窄病変の描出能について検討をかさねた。とくに臨床例を対象にして血管内超音波法との比較検討をおこない、CTによる冠動脈狭窄判定およびプラーク性状診断臨床応用の可能性が高いことを日本循環器学会で報告した。
賃金調整、金融市場、金融政策

前年度に引き続き、経済状態が名目賃金の調整タイミングに影響を及ぼすという「状態依存型賃金設定」の分析を進めた。具体的には、離散時間を仮定する動学ニューケインジアンモデルを用いて、賃金変更の頻度の異なる均衡が複数存在するのか、長期的な観点から分析を進めた。前年度までに得られていた均衡の唯一性という結果の頑健性を、賃金調整コスト、貨幣需要関数、パラメータを変更し確認した。また、より効率的に分析をするため、数値計算の手法を改良した。さらに別のプロジェクトでは、借入制約が労働時間や経済厚生に与える影響を分析するため、家計間の異質性を考慮したモデルの構築を進めた。状態依存型賃金設定のプロジェクトでは、結果を論文にまとめ、セミナーなどで報告をし、英文査読付き雑誌への投稿まで進めることができた。また、借入制約と労働時間の関係を分析するプロジェクトでも、モデルの構築はほぼ完了した。状態依存型賃金設定の論文については、英文査読付き雑誌への掲載を目指し、分析の精緻化を進める。また、状態依存型賃金設定が経済の短期的な変動に与える影響についても新しいプロジェクトとして進めていきたい。借入制約と労働時間の関係を分析するプロジェクトでは、モデルを完成させ、定量的な分析を進めていく予定である。本研究では、名目賃金改定のタイミングが経済状態に依存するという「状態依存型賃金設定」を仮定した離散時間ニューケインジアンモデルを構築し、賃金改定の頻度の異なる複数の定常均衡が存在するかどうか分析を行った。従来の多くのニューケインジアンモデルでは賃金改定のタイミングが外生的に与えられているため、そのような複数均衡の可能性は考慮されていなかった。具体的には、本研究ではTakahashi (2017)に倣い、Erceg, Henderson, and Levin(2000)に代表される標準的な離散時間ニューケインジアンモデルに名目賃金調整の固定費用を導入することで賃金改定のタイミングを内生化した。そして、価格設定の状態依存性に関するJohn and Wolman (2004, 2008)の研究を参考に、定常均衡の性質を解析的手法と数値計算により分析した。解析的な分析の結果、均衡の唯一性は割引因子の値に依存することが明らかになった。割引因子がゼロに近い状況では複数均衡が存在するための必要条件が満たされている。一方、割引因子が高いという現実的な設定の下ではそのような必要条件が満たされる可能性は低く、均衡が唯一である可能性が高い。これらの結果は、数値計算による分析によっても確認された。さらに、金融市場の不完全性を考慮したモデルについても数値計算による分析を行い、均衡の唯一性を確認した。また、デフレーションのケースも分析を行い、均衡の唯一性はインフレーションのケースよりも弱い条件で成立することを解析的に示した。初年度ではあるが、状態依存型賃金設定の下でも唯一の定常均衡が存在するという新しい結果を示すことができた。今年度得られた結果を論文にまとめワーキングペーパーとして公表するとともに、国内外の学会・研究会で報告を行う。得られたコメントを基に論文を改訂し、英文査読付き雑誌へ投稿、掲載を目指す。また、状態依存型賃金設定が経済の短期的な変動に与える影響について分析を行う。今年度参加予定だった国際学会を欠席することになったため、次年度に旅費として使用することにしたい。
難聴の遺伝子解析と臨床応用に関する研究

今回の研究で日本人難聴患者の遺伝子解析を行った結果、PDS遺伝子、コネキシン26遺伝子、ミトコンドリア遺伝子、EYA1遺伝子、KCNQ4遺伝子、COCH遺伝子、TECTA遺伝子などの難聴原因遺伝子が日本人難聴患者に深く関与していることが明らかになった。また高頻度で見出される難聴遺伝子として知られているコネキシン26遺伝子変異およびPDS遺伝子に関して、欧米の報告と比較検討したところ日本人難聴患者に見出される遺伝子変異の種類は全く異なることが明らかになった。これらの日本人家系を用いた遺伝子解析のデータベースは、今後、難聴患者の診断、治療、カウンセリングを行なっていく上で重要な基礎データとなると思われる。また今回、共同研究により内耳に特異的に高発現する遺伝子が明らかとなり、日本人難聴家系から新たな難聴の原因遺伝子としてCOL9A3,ATP1A2の各遺伝子が発見された。種々の難聴の原因遺伝子が難聴をおこすメカニズムに関しては、日本人難聴家系に見出されたコネキシン26遺伝子変異を細胞に導入し細胞内局在を観察し臨床型(難聴の程度)と比較検討した。その結果、細胞膜に蛋白が発現しない変異(235de1C)は発現する変異(V37I)に比較し難聴が一般的に高度であることが明らかとなった。したがって遺伝子検索によってある程度難聴の程度が推測できる可能性が示唆された。今後これらの成果を臨床にフィードバックするには簡便な簡便なスクリーニング法の開発が必要不可欠である。今回の研究では多数の遺伝子変異を同時に検出可能なインベーダー法を用いたスクリーニング法の開発を行った。遺伝子診断に伴う種々の倫理的問題に関しては信州大学附属病院遺伝子診療部と共同研究を行い、各難聴遺伝子ごとに遺伝カウンセリングの重要点をリストアップした。ここ数年間に報告された難聴の原因遺伝子が外来を受診する難聴患者に見い出されるか否かに関して検討した。その結果、新たにKCNQ4遺伝子、COCH遺伝子、TECTA遺伝子の変異家系が見出された。またPDS遺伝子、Cx26遺伝子、ミトコンドリア遺伝子1555A->G点変異が頻度が多い遺伝子変異として重要であることが確認された。今回の研究ではPendred症候群および「前庭水管拡大を伴った非症候性難聴」症例に対する遺伝子検索の結果、合計15種類のPDS遺伝子変異が同定された。また常染色体劣性遺伝形式をとる難聴家系の約1/3にCx26遺伝子の変異が見い出された。最近、同一遺伝子が異なる臨床型をとることが知られているが、今回の研究でPDS遺伝子が非症候群性難聴と症候群性難聴の両者を取りうることが明らかになった。また内耳奇形を伴う難聴にはPDS遺伝子やEYA1遺伝子など種々の遺伝子が関与していることが明らかになった。内耳奇形の中でも前庭水管を伴うものに関してはPDS遺伝子が、また耳瘻孔、頚部瘻孔を伴うものに関してはEYA1遺伝子が高率に見出されることが明らかになった。本研究では新しい変異解析装置「WAVE」を用いたPDS遺伝子変異解析を確立した。また新しいテクノロジーであるDNAチップを用いた変異解析の方法論が確立でき将来の臨床検査の基礎的データを構築することが出来た。今年度の研究で難聴患者には種々の原因遺伝子が関与していることが明らかとなった。今後さらに臨床応用に向け研究を継続する予定である。ここ数年の分子遺伝学のめざましい発展により、すでにいくつかの遺伝性難聴の原因遺伝子が特定され始めている。またこれらの難聴の原因遺伝子は日常診療で訪れる難聴患者にも深く関与していることが次第に明らかになってきた。

本研究にてPDS遺伝子、コネキシン(Cx)26遺伝子、ミトコンドリア遺伝子の変異(1555A->G点変異)が高頻度で見出されることが再確認された。PDS遺伝子は前庭水管拡大を伴う症例に高頻度で見出され、Pendred症候群から「前庭水管拡大を伴った非症候群性難聴」まで幅広い表現型をとることが明らかとなった。また日本人難聴患者に関しCx26の変異をスクリーニングした結果、劣性遺伝形式をとる家系の1/3に変異が確認された。従ってCx26遺伝子の変異が日本人の難聴にも深く関与していることが明らかとなった。また日本人に見いだされた遺伝子変異は欧米で報告されている変異と異なっており、日本人の難聴者の遺伝子解析にもとずくデータベースの重要性が明らかになった。今後の効率的なスクリーニング法の確立のためにDNAマイクロアレイ解析装置によるCx26遺伝子の変異検出を試み成功した。ミトコンドリア遺伝子の変異(1555A->G点変異)はアミノ配糖体抗生物質による難聴と関連が深いことが知られている。従ってこの遺伝子変異を持つ患者に関してはアミノ配糖体抗生物質を避けることによりある程度予防が可能であることから、家族や血縁者に対しては積極的に遺伝子検査を行い、予防の必要性を強調している。また頻度調査を行ったところこの1555A->G点変異は難聴患者の約3%、アミノ配糖体による難聴者の約30%に変異が見い出された。また一連の解析の結果、日本人家系で初めてKCNQ4遺伝子、COCH遺伝子、TECTA遺伝子による難聴家系が見出された。平成14年度は現在までに集められた約2000名の難聴患者のDNAを中心に日本人難聴患者に見出される遺伝子変異をまとめ欧米人に見出される変異と比較検討した。とくに難聴の原因遺伝子のうち現在頻度の高いGJB2遺伝子およびPDS遺伝子変異を中心に検討を行い日本人の遺伝子変異データベースを構築した(Ohtsuka et al.,2003,Tsukamoto et al.,submitted)。その結果、日本人難聴患者に見出される遺伝子変異は欧米での報告とは全く異なることが明らかになった。また日本人に高頻度で見出される235delC変異やH723R変異はfounder effectである可能性が示唆された。現在、このデータベースをもとにして難聴遺伝子スクリーニング法の開発を目指している。内耳に特異的あるいは高発現している遺伝子は難聴の原因遺伝子である可能性が高いが、今回新しい原因遺伝子の同定を目的として東京大学医科学研究所との共同研究を行い内耳に特異的に発現する遺伝子に関して変異スクリーニングを行った。その結果mu-crystallinを新たな難聴原因遺伝子として報告することが出来た(Abe et al.,2003)。本年度の研究で日本人難聴家系から新たな難聴の原因遺伝子としてCOL9A3,ATP1A2の各遺伝子が発見された。また新たに原因遺伝子として報告されたCOL9A3に関しては免疫組織化学的方法を用い蛋白の局在を検討するとともに、ノックアウトマウスを用いて電気生理学的、形態学的に検討を行った結果、コラーゲンの変化によって蓋膜の形態が変化し難聴が起きることが明らかになった。
タンデム式ハイブリッド型パイプラインによるプロセッサの超高電力効率化

平成30年度は以下の研究を行った:(1)低電力モードの研究:本研究ではBigユニットを停止する低電力モードについて,その制御方式をシミュレータを用いた解析と評価により研究し,消費電力のさらなる削減を実現する.平成28年度までに小性能差領域の解析を行い,低電力モードへの遷移を細粒度に行う場合のプロセッサやプログラムの振る舞いについて多くの知見を得た.ここで得られた知見に基づいて平成29年度からは実際の制御方式やアーキテクチャの提案を行いつつ論文投稿を続けており,平成30年度も引き続き研究成果に関する論文の投稿を行った.(2) LSI試作による有効性の実証:事実上唯一使用できる既存の電力シミュレータには問題があり,提案アーキテクチャの消費電力削減量を大幅に過小評価してしまう.このため,本研究では実際にLSIを試作し,提案アーキテクチャの有効性を実証する.平成30年度はそれまでに引き続きSystemVerilog言語を用いて,提案アーキテクチャのベースとなるプロセッサの設計・実装を行った.平成29年度までにRISC-V命令セットによるアウト・オブ・オーダ・スーパスカラ・プロセッサの基本的な実装と性能ボトルネックを解消するための実装を行ってきたが,平成30年度は特に,さまざまなベンチマークを実際に動かすためのシステムコール関連機能などの実装を進めた.この結果,組み込みOSのZepherによるアプリケーションを実際に起動することができるようになった.また,これらに加え,性能の検証などで使用するプロセッサ・シミュレータについても機能の拡張を行い,RISC-V命令セットのほぼ完全なサポートとSPECCPU 2017ベンチマークの完全動作を実現した.下記の理由により,研究はおおむね順調に進展していると考える:・「研究実績の概要」で述べたように,平成30年度までに行った研究の結果,新しい制御方式やアーキテクチャを提案し,論文投稿を行った.なお,これらの一部は既に著名な国際会議にて採録されている.・本研究において評価に用いるスーパスカラ・プロセッサについては研究開始時と比べて大幅に実装が進んでおり,大幅な性能向上の達成と,組み込みOSによるアプリケーションのブートを達成している.提案する制御方式については現在論文投稿を行っているところである.この方式では非常に良好な結果を得ており,トップ・カンファレンスへの採択を目指して引き続き研究・論文投稿を進める予定である.また,LSI試作についても,評価に用いるスーパスカラ・プロセッサの実装を継続し,本年度に実際の試作を行う予定である.また,この試作等を通じて得た知見を元に,プロセッサの電力評価に使用するメモリ・シミュレータを開発しており,これに関しても研究成果の投稿を行う予定である.平成28年度は以下の研究を行った:(1)低電力モードの研究:本研究ではBigユニットを停止する低電力モードについて,その制御方式をシミュレータを用いた解析と評価により研究し,消費電力のさらなる削減を実現する.平成28年度は小性能差領域の解析を行い,低電力モードへの遷移を細粒度に行う場合のプロセッサやプログラムの振る舞いについて多くの知見を得た.この際に得られた知見としては特に,既存の制御手法にある問題の根本的な原因について解明できた点が大きい.平成28年度は,ここで得られた知見に基づき実際の制御方式についても提案を行い,実際に予備評価では非常に良好な結果を得た.(2) LSI試作による有効性の実証:事実上唯一使用できる既存の電力シミュレータには問題があり,提案アーキテクチャの消費電力削減量を大幅に過小評価してしまう.このため,本研究では実際にLSIを試作し,提案アーキテクチャの有効性を実証する.平成28年度はSystemVerilog言語を用いて,提案アーキテクチャのベースとなるプロセッサの設計・実装を行った.このプロセッサは研究開始時点で既にある程度基本的な動作が行えるレベルまで開発が進んでいたものの,商用の命令セットを用いていたため,本年度は今後の研究成果の公開などの点から鑑みてオープンなRISC-V命令セットへの移行・開発を行った.この結果,現在はRISC-V命令セットによるアウト・オブ・オーダ・スーパスカラ・プロセッサの基本的な実装が完成,FPGA上での動作の確認を行った.下記の理由により,研究はおおむね順調に進展していると考える:・「研究実績の概要」で述べたように,平成28年度に行った研究の結果,新しい制御方式を考案し,予備評価では非常に良好な結果を得た点.・本研究において評価に用いるスーパスカラ・プロセッサについて,基本的な動作を確認できるまで実装が進んだ点.平成29年度は以下の研究を行った:(1)低電力モードの研究:本研究ではBigユニットを停止する低電力モードについて,その制御方式をシミュレータを用いた解析と評価により研究し,消費電力のさらなる削減を実現する.平成28年度までに小性能差領域の解析を行い,低電力モードへの遷移を細粒度に行う場合のプロセッサやプログラムの振る舞いについて多くの知見を得た.平成29年度は,ここで得られた知見に基づき実際の制御方式やアーキテクチャの提案を行い,それらをまとめた論文の投稿を行った.(2) LSI試作による有効性の実証:事実上唯一使用できる既存の電力シミュレータには問題があり,提案アーキテクチャの消費電力削減量を大幅に過小評価してしまう.このため,本研究では実際にLSIを試作し,提案アーキテクチャの有効性を実証する.平成29年度は前年度に引き続きSystemVerilog言語を用いて,提案アーキテクチャのベースとなるプロセッサの設計・実装を行った.平成28年度までにRISC-V命令セットによるアウト・オブ・オーダ・スーパスカラ・プロセッサの基本的な実装が完成していたが,平成29年度はRISC-V命令セットの詳細部への対応と,予備評価の際に判明した性能不足を解消するための様々な追加実装を行った.

また,LSI試作のための合成作業を開始したが,処理系の問題などにより,まだ合成が完了するには至っていない.下記の理由により,研究はおおむね順調に進展していると考える:・「研究実績の概要」で述べたように,平成29年度に行った研究の結果,新しい制御方式やアーキテクチャを提案し,論文投稿を行った.なお,これらの一部は既に国際会議にて採録されている.・本研究において評価に用いるスーパスカラ・プロセッサについては実装が大幅に進んでおり,前年度と比較して大幅に性能が向上している.平成30年度は以下の研究を行った:(1)低電力モードの研究:本研究ではBigユニットを停止する低電力モードについて,その制御方式をシミュレータを用いた解析と評価により研究し,消費電力のさらなる削減を実現する.平成28年度までに小性能差領域の解析を行い,低電力モードへの遷移を細粒度に行う場合のプロセッサやプログラムの振る舞いについて多くの知見を得た.ここで得られた知見に基づいて平成29年度からは実際の制御方式やアーキテクチャの提案を行いつつ論文投稿を続けており,平成30年度も引き続き研究成果に関する論文の投稿を行った.(2) LSI試作による有効性の実証:事実上唯一使用できる既存の電力シミュレータには問題があり,提案アーキテクチャの消費電力削減量を大幅に過小評価してしまう.このため,本研究では実際にLSIを試作し,提案アーキテクチャの有効性を実証する.平成30年度はそれまでに引き続きSystemVerilog言語を用いて,提案アーキテクチャのベースとなるプロセッサの設計・実装を行った.平成29年度までにRISC-V命令セットによるアウト・オブ・オーダ・スーパスカラ・プロセッサの基本的な実装と性能ボトルネックを解消するための実装を行ってきたが,平成30年度は特に,さまざまなベンチマークを実際に動かすためのシステムコール関連機能などの実装を進めた.この結果,組み込みOSのZepherによるアプリケーションを実際に起動することができるようになった.また,これらに加え,性能の検証などで使用するプロセッサ・シミュレータについても機能の拡張を行い,RISC-V命令セットのほぼ完全なサポートとSPECCPU 2017ベンチマークの完全動作を実現した.下記の理由により,研究はおおむね順調に進展していると考える:・「研究実績の概要」で述べたように,平成30年度までに行った研究の結果,新しい制御方式やアーキテクチャを提案し,論文投稿を行った.
器官再生における遺伝子発現のエピジェネティックな制御

コオロギ幼虫の脚を切断すると、切断された領域が再生芽細胞から再生される。分化細胞と異なり、増殖能が高く多分化能を持つ再生芽細胞ではヒストンH3の27番目のリジン残基のメチル化を制御するエピジェネティック因子の発現が上昇していた。RNAiによりヒストンのメチル化を阻害または亢進させると再生脚の形態が異常になり、パターン形成遺伝子の発現パターンが異常になった。ヒストンのメチル化を介したパターン形成遺伝子のエピジェネティックな発現制御が再生脚のパターン形成に重要である。コオロギなど不完全変態昆虫は高い再生能を持ち、幼虫の脚を切断すると数回の脱皮を経て未切断の脚と同様の大きさと形態に再生することができる。再生される領域は、切断後すぐに断端近くに形成される再生芽に由来する。再生芽細胞は分化細胞が脱分化した細胞で増殖能が高い。分化細胞と再生芽細胞で発現が変化する遺伝子を同定するため比較トランスクリプトーム解析を行ったところ、再生芽でJAK/STATシグナル関連因子の発現が上昇していた。そこでJAK/STATシグナル因子に対するRNAiを行ったところ、コオロギは再生不全の表現型を示したことから、比較トランスクリプトーム解析により再生に必須の因子が単離できることが分かった。再生芽で発現が上昇する因子としてエピジェネティクスに関連する因子も多数単離され、特にヒストンH3の27番目のリジン残基(H3K27)をメチル化するEnhancer of zeste(E(z))、脱メチル化するUtxの発現が顕著に上昇していた。E(z)やUtxに対するRNAiを行ったところ、再生脚の形態に異常が見られた。抗メチル化ヒストンH3K27抗体を用いた免疫染色から、E(z)(RNAi)個体ではヒストンH3K27のメチル化は著しく減少しており、Utx(RNAi)個体ではメチル化が亢進していた。これらRNAi個体の再生脚では、形態異常を示した領域において脚のパターン形成を制御する遺伝子群の異所的発現や発現の消失が観察され、脚再生過程においてパターン形成遺伝子群の再発現にヒストンH3K27のメチル化を介したエピジェネティックな発現制御機構が働いていることを明らかにした。これらエピジェネティック因子の遺伝子破壊やパターン形成遺伝子の発現の可視化のため、人工制限酵素ZFNやTALENを用いたゲノム編集の実験系を構築した。不完全変態昆虫の幼虫の付属肢を切断すると、数回の脱皮を経て失われた部分を付加的に再生することが出来る。フタホシコオロギでは触角や尾葉のような単純な構造だけでなく、脚のように関節から成り複雑な形態をしている構造も未切断の脚と同様の形態に完全に再生することが出来る。脚が切断されると、切断面が瘡蓋に覆われた後に傷上皮によって傷口が閉じる、次に傷上皮の直下に再生芽が形成される。再生芽は分化細胞が脱分化した細胞の集団と考えられており、高い増殖能と多分化能を持つ。パターン形成遺伝子の働きにより再生芽細胞の細胞運命が決定されると細胞は分化を起こし、失われた部分の構造を再生させる。分化細胞、脱分化した再生芽細胞、再分化した細胞のゲノムは変化しないため、脱分化過程や再分化過程はエピジェネティックな遺伝子発現制御により調節されていると考えられた。そこで我々はコオロギの切断直後の脚と切断後24時間の脚からRNAを抽出し、合成したcDNAを次世代シーケンサーを用いて解読し比較を行った。トランスクリプトーム解析の結果、14種類のヒストンメチル化/脱メチル化酵素、6種類のヒストンアセチル化/脱アセチル化酵素、5種類のクロマチンリモデリング因子、1種類のDNAメチル化酵素をコードする遺伝子の発現が再生脚で2倍以上に上昇していた。ヒストンH3K4、H3K9、H3K27のメチル化に関連する遺伝子の発現がよく変動していたことから、それら遺伝子に対するRNAiを行い脚の再生プロセスを調べた。H3K9やH3K27のメチル化状態を制御する遺伝子に対するRNAiを行うと再生脚の形態が異常になった。形態異常を示したRNAi個体の再生脚ではパターン形成遺伝子が異所的な発現をしていたことから、H3K9やH3K27のメチル化を介したパターン形成遺伝子の発現制御機構が再生芽細胞の再分化を制御すると考えられる。トランスクリプトーム解析から同定されたヒストン修飾酵素の情報を元に、多数のエピジェネティック遺伝子についてRNAiを用いた機能的スクリーニングを行った。RNAi個体の再生脚でのパターン形成遺伝子の発現についても解析を進め、エピジェネティック因子の機能低下により幾つかのパターン形成遺伝子の発現が変化していることが分かった。これらの再生脚でのヒストン修飾を抗体を用いて調べている。ヒストンH3K9およびH3K27を修飾する酵素の機能をより詳細に解析する。

既知のパターン形成遺伝子の発現を網羅的に解析し、エピジェネティック因子が再生過程でパターン形成遺伝子の発現を制御する機構を明らかにしたい。また再生脚のトランスクリプトーム解析から多数の転写因子が同定出来ているので、それらについてもRNAiを行い、エピジェネティック因子と共役する転写因子の同定を行いたい。ベクターの構築が予定通りに進まず繰越金が生じた。繰越金は、次年度に他のベクターを構築する目的に使用したい。
ヒト乳癌および乳腺組織におけるP73、P51/P63遺伝子の機能についての研究

ヒト乳癌手術材料を用いてp73遺伝子の機能を解析する為にp73遺伝子が発現している細胞を観察する必要がある。本研究では乳癌組織を用い免疫組織化学的に乳癌組織におけるp73遺伝子の局在を解析した。さらに乳癌細胞におけるp73遺伝子の発現と細胞増殖能、アポトーシスおよぴ臨床的な癌悪性度との関連を検討した。【方法】乳房切除術を施行した75症例を対象とし、TSA indirect systemを用いp73染色を行った。細胞核が明瞭に染色された腫瘍細胞が0.5%以上の症例をp73陽性と定義した。【結果】筋上皮細胞は75例(100%)においてp73陽性であった。筋上皮細胞と癌細胞を区別するため、抗smooth muscle actin抗体および抗cytokeratin-19抗体を用い二重染色を行った。p73陽性乳癌は15症例(20%)であった。年齢、腫瘍径、リンパ節転移陽性率、エストロゲンレセプター陽性率はp73陽性乳癌群、p73陰性乳癌群における有意差は認められなかった。AI(Apoptotic Indedx)はp73陽性群(中央値2.01%、幅1.146.56%)においてp73陰性群(0.48,0.064.9%)より有意に高値を示した(P<0.05)。また、MI(Mitotic Index)はp73陽性群(2.00,1.083.41%)において陰性群(0.37%,0.012.41%)より有意に高値を示したP<0.05)。p73陽性、高増殖能(MI≧1.0%)群のAI(n=15,中央値2.00%,幅1.083.41%)は、p73陰性群、高増殖群のAI(n=18,1.65%,0.242.41%)、より高い傾向を認めたが有意差は認められなった。1年以内に遠隔転移をみとめた4例はこのp73陰性、高増殖群にふくまれ、アポトーシスの頻度は低かった。p53免疫染色を行い、p53過剰発現は22例(29.3%)に認めた。p73(+)/p53(+)群のAIは2.17%(0.1-3.41%)でp73(-)/p53(+)群の1.12%(0.25-2.40%)より有意に高値を示した。【総括】筋上皮細胞にp73遺伝子の発現を認め、筋上皮の分化にp73遺伝子が関与する可能性が示唆された。2.高増殖を示す乳癌においてp73遺伝子のアポトーシス誘導への関与の可能性が示唆された。3.高増殖を示す乳癌においてp73遺伝子の発現低下と遠隔転移能の獲得との関連の可能性が示唆された。4.過剰発現したp53変異蛋白はp73蛋白の機能を抑制しなった。

p73(+)/p53(+)群のAIは2.17%(0.1-3.41%)でp73(-)/p53(+)群の1.12%(0.25-2.40%)より有意に高値を示した。【総括】筋上皮細胞にp73遺伝子の発現を認め、筋上皮の分化にp73遺伝子が関与する可能性が示唆された。2.高増殖を示す乳癌においてp73遺伝子のアポトーシス誘導への関与の可能性が示唆された。3.高増殖を示す乳癌においてp73遺伝子の発現低下と遠隔転移能の獲得との関連の可能性が示唆された。4.過剰発現したp53変異蛋白はp73蛋白の機能を抑制しなった。【目的】p73遺伝子が野生型として腫瘍で発現している現象に注目し、p73遺伝子およびp51/p63遺伝子の乳癌組織内での局在、増殖因子受容体の発現との関連を解析し、p73、p51/p63遺伝子の乳癌組織における機能を明らかにする。【対象】乳癌手術例57例(癌組織、非腫瘍部乳腺組織を採取)につき遺伝子解析を行ない、免疫組織化学には、遺伝子解析例を含む66例のホルマリン固定パラフィン包埋材料を用いた。【方法】【結果】p73mRNA発現は非腫瘍部乳腺組織26例(45.8%)、乳癌組織31例(54.4%)に認めた。p63mRNAの発現は癌部では13例(22.8%)で、非腫瘍部で6例(10.5%)に認めた。免疫染色では、全症例でp73遺伝子産物の筋上皮細胞の核での発現が確認された。乳癌66例中16例(24%)で散在性に癌細胞の核が染色された。【考察】乳癌組織においてはp73遺伝子がp63遺伝子に比べ高率に発現していたが免疫組織化学的には乳癌の24%でp73遺伝子の発現を認めたにすぎず、乳癌組織におけるp73遺伝子の発現の検討では癌組織内に遺残した筋上皮細胞の評価が重要と考えられた。現在、in situhybridizationによるp73mRNAの筋上皮細胞、乳癌細胞での発現の確認を行っている。今後細胞増殖能、細胞周期、アポトーシス、p53遺伝子変異の有無との関連から、p73遺伝子の機能の解析、とくに乳癌細胞における機能解析を行う。本研究では免疫組織化学的に乳癌組織内の癌細胞におけるp73遺伝子の発現を解析し、p73遺伝子の発現と細胞増殖能、アポトーシスおよび臨床的な癌悪性度との関連を検討した。【方法】乳房切除術を施行した75症例を対象とし、TSA indirect systemを用いp73染色を行った。細胞核が明瞭に染色された腫瘍細胞が0.5%以上の症例をp73陽性と定義した。【結果】15症例(20%)においてp73染色は陽性であった。年齢、腫瘍径、リンパ節転移陽性率、エストロゲンレセプター陽性率はp73陽性群、p73陰性群における有意差は認められなかった。AI(Apoptotic Indedx)はP73陽性群(中央値2.01%、幅1.146.56%)においてp73陰性群(0.48,0.064.9%)より有意に高値を示した(p<0.05)。また、MI(Mitotic Index)はp73陽性群(2.00,1.083.41%)において陰性群(0.37%,0.012.41%)より有意に高値を示したp<0.05)。P73陽性、高増殖能(MI≧1.0%)群のAI(n=15,中央値2.00%,幅1.083.41%)は、p73陰性群、高増殖群のAI(n=18,1.65%,0.242.41%)、より高い傾向を認めたが有意差は認められなった。1年以内に遠隔転移をみとめた4例はこのp73陰性、高増殖群にふくまれ、アポトーシスの頻度は低かった。P53免疫染色を行い、p53過剰発現は22例(29.3%)に認めた。P73(+)/p53(+)群のAIは2.17%(0.1-3.41%)でP73(-)/p53(+)群の1.12%(0.25-2.40%)より有意に高値を示した。過剰発現したp53変異蛋白はp73蛋白の機能を抑制しなった。【総括】1.高増殖を示す乳癌においてp73遺伝子のアポトーシス誘導への関与の可能性が示唆された。
米アレルギー症状を緩和するイネの新たな機能性の遺伝的解剖

米の持つ抗食物アレルギー能の品種間差異の遺伝様式を解明することを目的としている。そのために欠かせない、動物実験に代替できるin vitro評価系の開発とイネの実験系統群の作出に取り組んできた。in vitro評価系におけるマーカー遺伝子の選定のための基礎を築く目的で、ラットの大腸における網羅的な遺伝子発現解析をRNA-seq解析により行った。「ゆきひかり」と親品種「キタヒカリ」と「空育99号」の米の給餌4日後の大腸から抽出したtotal RNAを用いた。給餌した米の品種間で発現量に差異のある遺伝子をF検定(p<0.05)により395遺伝子を見出した。供試した9匹のラットの各遺伝子の発現量に基づく階層的クラスター解析によって、給餌した米の品種ごとにクラスターを形成した。このことは、給餌した米の品種ごとに大腸における遺伝子発現に影響したことを示し、大腸まで到達する何らかの成分の違いを反映しているものと考察した。これら給餌した品種間で発現量の異なった遺伝子のうち、「ゆきひかり」群で発現の高い9遺伝子、逆に低い105遺伝子を見出した。本成果は、ヒト大腸培養細胞でのin vitro評価系の発現遺伝子マーカーの選定の基礎となった。「ゆきひかり」を1回親とし、「きらら397」を反復親として用いた戻し交配の自殖後代について、イネゲノムを網羅的にカバーする99種のDNAマーカーの解析により、良食味品種「きらら397」を遺伝的背景とする26系統を作出した。「ゆきひかり」を1回親とし、「上育462号」を反復親として用いた戻し交配の自殖後代について、188種のDNAマーカーを解析することで、178系統から構成される染色体部分置換系統を作出した。in vitro評価系に必要なマーカー遺伝子の候補の選定に時間を要しており、当該評価系の開発が遅れている。イネ実験系統の開発は予定通り完了した。昨年度には、動物実験からマーカー遺伝子候補の選定を終えた。今後、ヒト大腸培養細胞での発現遺伝子マーカーの定量法を確立し、イネ実験系統のスクリーニングを実施し、当初、計画した研究を終える。「ゆきひかり」、「コシヒカリ」、「きらら397」の各品種の全ゲノムリシーケンス解析(Takanoe et al., 2014)に基づいて、InDelマーカーとCAPSあるいはdCAPSマーカーを作出した(未発表)。当該マーカーを用いて、「コシヒカリ」ならびに「きらら397」を遺伝的背景とした「ゆきひかり」の染色体部分置換系統の作出を進めた。昨年度までに、「ゆきひかり」を一回親として、「コシヒカリ」と「きらら397」をそれぞれ反復親とした連続戻し交配とDNAマーカー選抜を繰り返してきた。本年度は、「コシヒカリ」を戻し交配親に用いたBC3F2の3000個体あまりのDNAマーカー100種の解析を終えた。「きらら397」を戻し交配親に用いたBC3F4世代について1500個体あまりのDNAマーカー100種の解析を終えた。成果として、染色体置換系統予定数全50系統のうち、18系統の染色体部分置換系統を得た。昨年度までに、「ゆきひかり」と他のイネ品種の米を経口投与して4日目のラットの大腸を摘出し、mRNAを抽出してマイクロアレイ解析を行い、発現遺伝子の差異を解析してきた。「ゆきひかり」特異的に発現変動する遺伝子を選定し、当該遺伝子の発現量を指標としたハイスループットスクリーニング法の開発を進めた。新たに、「ゆきひかり」の給餌後4日のラットの大腸で発現の低下する遺伝子1種を選定し、マーカー遺伝子とした。当該遺伝子の発現量を定量するためのリアルタイムPCR法の条件設定を終えた。対象形質の遺伝的解剖に欠かせない植物材料の開発は計画通り順調に進んでいる.一方で、対象形質を評価するハイスループットスクリーニング法の開発のうちマーカー遺伝子の特定が1種にとどまっており、新たに、マーカー遺伝子の選定を必要とする。