hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
キリシタン集落形成の変遷に関する研究

16,17世紀、イエズス会書簡集を中心に見直し、日本資料と重ねることで、西海地方へのキリスト教布教が、集落や都市の形成に大きな影響を与えたことがわかった。その内容は、宣教師の動きに伴い、村や町において集落形成の盛衰の過程が見られ、少なくとも五段階の変遷過程をたどることができた。このことから、当時のキリシタン社会の形成が視覚化され、現地の史跡や習俗、歴史などの理解に役立つものと考える。26年度は、主に島原、平戸(市街地)、五島(福江島)、大村で絵地図史料調査と現地調査を行い、1618世紀の有馬藩、大村藩、五島藩、平戸藩でのキリシタン集落の把握可能性について探った。文献・現地調査における地域交流では、イエズス会施設の位置の推定について様々な仮説があったので、これまでの説についてまとめることにした。まず口之津地区において当時の教会位置について学会発表1編(投稿済)をまとめた。さらにキリシタン移住の本拠地であった外海の集落形成について学会発表2編をまとめた。後者は、これから移住先でのキリシタン集落形成を解明する基礎資料になる。1617世紀のイエズス会関連施設については、島原で、17世紀前期の島原半島絵図を見つけ、半島における同時代の各地区比較ができる段階とした。福江島の奥浦地区の聞き取り調査から、16世紀当時の教会位置の一つを推定することができた。大村では、16世紀前期の大村館図が見つかっていることから、市街地内での考察の基礎資料とする。平戸(市街地)では、17世紀前期の平戸図が見つかったので、考察の基礎資料とする。このように島原、平戸、大村において研究方法にかなう基本絵図を見つけて研究の見通しをつけたが、各藩の地域資料に疎密の差があるので、キリシタン集落として把握できるよう資料のまとめ方に工夫を入れて展開して行く。またキリシタン移住地関連については、幕末期の深堀領絵図を見つけ、長崎周辺の善長、大山、外海地区について詳しい集落図を得た。27年度は、主に天草・五島を対象地として史料収集、現地調査を行い、26年度調査地(島原・平戸・五島・大村)との関係づけを考察した。このことから、集落形成において戦国時代の大村氏、有馬氏、天草氏の強い連携がみられ、集落変遷においても相互関係があったものと思われる。(1)27年度は、天草の河内浦コレジョ、五島の福江・奥浦の各レジデンスにおいて、十六・十七世紀のキリシタン集落形成の具体像について論文2編にまとめた。26年度の加津佐と合わせ、計4ヵ所のキリシタン集落について報告した。(2)これら島原、天草、五島の主要地域の考察から、領主とイエズス会は、当初から港と居住地が一体的に宣教師により交渉され、集落が形成されたことがわかった。また集落形成は、その当時の形成要因により大きな影響を受けたらしいことが予想された。例えば、禁教令後の天草河内浦のキリシタン集落はかくれた形態を有していたし、また、五島のキリシタン集落は、領主が求めた経緯もあり、理想的な集落形態で配置されていたことがわかった。(3)天草の研究調査を通して、かくれキリシタン、天草市の世界遺産推進室の方々との交流ができた。このことで江戸期、明治期の地域動向と関連させて史料を見ることができるようになった。(4)研究を通して、司祭不在のキリシタン集落の定着、人々の流動化による長崎移動の現象が多々みられた。キリシタン集落の変遷は、江戸期の前後をつなぐ事象として位置づけられるのではないか。今後の研究の展開として、キリシタン施設の追求を中心として、近世以前の長崎都市の中心部と周辺部の形成との関連性から近世都市研究を進めることを計画している。(1)計画をした長崎周辺・大村・平戸・五島・島原・天草、さらに移住地の五島・平戸・深堀の計48地区のうち、現地調査については約半数を終えて整理中である。その半数の内訳は、現在まとめを完了したのが4集落、整理中が約10集落、それ以外は資料不足のため特定するのは困難な状況である。残りの半数については、移住地の離島や辺境地でこれからの調査地である。このように、現時点としては約三分の一弱がキリシタン集落として確定できそうな目処がついた状況であるが、さらに調べて増やしたいのと時間がかかる調査地を残しているので、進捗状況はやや遅れていると感じている。(2)資料調査の上で『イエズス会日本報告集』は、史実を確認する上で大事なものとなっている。これと日本側資料、さらに禁教後の日本側史料との整合を見極めながら、それぞれの集落について研究をすすめている。絵図調査を行っているが、全般的に正確な絵図史料が乏しい、史実の記述があいまい、史料が非公開等の困難な状況が生じている。史料非公開については、せっかくたどり着けたのに残念な結果であった。こうした状況からキリシタン集落位置を特定するのに、絵図史料以外に、地形、字図、墓地を手がかりにすることの有用性を確認しその資料を集めている。28年度は、主に西海地方のキリシタン中心地の島原・大村を対象に調査を行い、前回の26・27年度調査との関係から考察と整理をした。このことから、有馬における中心町の形成、および西海地方でキリシタン集落・町の序列化が存在していたことが、大学紀要1編・学会論文1編により明らかにできた。1.主要地である有馬キリシタン町の解明有馬のキリシタン町について、従来、所在は部分的な諸説にとどまっていたが、今回は、イエズス会資料と地図資料をもとにして、教会、セミナリオなどのキリスト教施設について、町全体の中の位置と配置構成を解析することができた。

具体的には、中世集落から城の形成、また教会を中心とした集落形成について、独自のキリシタン集落形成が有馬の町に認められた。このことで、これまで空白であった日本の中世末から近世に至る移り変わりの一端を明らかにできた。2.西海地方のキリシタン集落形成の特徴西海地方を対象に、当時のイエズス会キリスト教宗団による主要な集落・町についての形成過程を明らかにした。具体的には、大村、有馬、天草、五島、平戸の各藩を対象に、キリスト教の混在地域から純化地域へと地域形成が進んだ。これに伴い、西海地方各地のキリシタン地域において、最初に港町の形成、次に中心市の形成という都市形成が見られた。このように中世末の港町形成は、外国貿易に特化することで、外国船の都合の良い立地が港に求められ、そこに日本商人が集まり特化して、やがて長崎、平戸のように、江戸期の都市形成の素地となったことがわかった。1.イエズス会資料の収集・解読の困難性イエズス会資料にある表現があいまいで地域特定が難しく、キリシタン集落の全容特定に至るのが予想外に困難となった。主要な都市の解析にあたり、有馬は何とか進めたが、もう一つの大村は、資料不足に加え、市街地化が進み地形が判断しにくい。研究解析に大事な都市であるので、出来る限り分析してまとめる予定である。2.迫害・移住集落の調査の困難性西海地域のキリシタン集落48地区(うち移住地19地区)を対象地としたが、移住地の離島等については時間がかかることがあった。これまで当該地の現地調査や資料を見たところでは、墓地の年代が不明、あっても明治以降のもの、集落のどの部分が江戸期のものか追跡が難しく不明となった等があった。このような理由で、江戸期のものかどうか確定できる資料が少ないことにより、集落形成の変遷の解析が難しいケースがでてきた。29年度は、西海地方(長崎周辺、大村、平戸、五島、島原、天草)のうち大村・平戸を調査し、昨年度の有馬に続き、さらにルーツを探った。当初目的に含めた移住集落は、宣教師書簡集との関連付けが困難となり後の課題とし、書簡掲載で追跡可能な地のみを対象地にしぼった。論文2編を作成し、学会で講演し、平戸、横瀬浦については論文作成中である。1.大村のキリシタン期は、従来、歴史的空白期で説も十分でない。具体的には、宣教師書簡集から教会の位置等、町の構成を検討した。キリシタン大名としての町づくり過程について、初期形式、ヴァリニャーノによる修院形式、禁教令下の避難形式へと、中心町の形成の変遷が解明できたと考える。また横瀬浦は1年余りの新港町であったが、その教会位置、範囲の解析から、当時の集落形態について従来説にない形でとらえることができた。生月島について、従来は民俗学的な手法でキリシタン習俗が研究されてきた。キリスト教導入初期、とりわけヴィレラ布教の地が山田と特定でき、生月島の原初的なキリシタン集落形態について調査を行い、その教会立地、宗団組織、集落構成に特徴を見いだした。
顎関節円板の再生に関する実験的研究

〔目的〕顎関節内障においては、一旦顎関節円板に穿孔が生じると再生は起こらず、穿孔部を中心に退行性変化が生じて変形性関節症に移行すると報告されている。そこで今回、顎関節円板の組織再生を実験的に誘導することを試み、組織学的に評価した。〔方法〕体重2.53.0Kgの雄の日本白色ウサギを用いた。耳前部より切開を加えて顎関節包を露出し、関節円板の中央部にタービンを用いてΦ1.6mmの穿孔を形成した。その後の処理により実験群をA、Bの2群に分けた。A群においては穿孔部にコラーゲンスポンジのみを埋入し、B群においては自家骨髄を混合したコラーゲンスポンジを埋入した。反対側は、穿孔形成後何も埋入せず対照群とした。観察期間は、2,4,8週後とし、屠殺後、顎関節部を周囲組織と共に一塊に摘出して組織学的に評価した。〔結果〕A群では、第8週において穿孔部の縮小化が認められたが、連続性は認められなかった。B群では第2週において組織の再生が認められ、4周では移行的になっている所見が得られた。対照群では、8週においても再生所見は認められなかった。〔考察〕以上の結果より、コラーゲンスポンジのみでは、穿孔した関節円板の再生を誘導することは出来ないが、自家骨髄をコラーゲンスポンジに混合させることにより、関節円板の再生を誘導することが示唆された。そこで、採取した骨髄を培養することを試みるも、培養がうまくいかず、骨髄の採取部位や培地を調整してみたが、培養しても骨髄細胞が増殖せず、実験に応用することができなかった。耳前部より切開を加えて顎関節包を露出し、関節円板の中央部にタービンを用いてφ1.6mmの穿孔を形成した。反対側は穿孔形成後何も埋入せず対照群とした。そこで、今後同様の方法で実験を行い、新たに採取した骨髄を培養し、増殖させて実験に応用したいと考えている。
新発明・ジャイロモーメント・モータの研究

本研究は両端固定2次モード振動子の中央点に回転自由のバータイプ・ロータを付す構造で、高速回転モータを実現するのが第一の目的である。次に、ロータの回転位置に依って、振動子のインピーダンスの異なる特性を利用しての傾斜角センサであった。即ち、(1)動作原理の明確化、(2)ステータ振動子の幅、厚みの効果、特に回転位置との関係、(3)モータの基本特性としての回転数、トルクの要因の解明、(4)モータの縦置き構成への展開、(5)傾斜角センサとしての特性、特にロータの形状の検討、を行うものであった。その結果、次のような事が明らかとなった。1)高速モータとしてはロータ形状を34x6.0x3.0(mm3)と小型とし、ステータも初期の構成の1/4の縮小化に成功した。2)この時の共振周波数やアドミタンスの変化を明らかにした。3)自励振駆動モータを実現した。これにはロータ形状の工夫がキーポイントであった。4)縦置き型モータは、屈曲振動子への変位振幅を大きくする事が構成のポイントであった。これらはシニア・ジョイフル・トイとしての応用の面白いことが確認され、新しい応用を拓くものとして期待される。5)現在も更に小型化を進行中である。電子ファンやCDプレーヤの薄型モータへの適用がその目的である。6)傾斜角センサはその原理的検討を行い、十分目的の達せられることを確認した。7)ロータ位置と変位モードを有限要素解析し、どのような形状の時、良特性が得られるかを明らかにした。8)これら成果は英文の学術誌へ掲載される事こなった。9)ロータの水中での回転特性等も現在検討中である。この点は計画が遅れている。
視覚芸術における知覚的快経験の神経基盤の研究

本研究の目的は,美的知覚の心理・神経基盤を探求することであった.まず,前年度に引き続き,fMRIを用いて,絵画作品における発見の喜びに対応するヒト後頭葉から側頭葉に至る領域の応答を調べる実験を行った.これまでに,だまし絵として隠された内容が明らかになった時に側頭葉の海馬傍回場所領域(PPA)が特異的な反応を示すことを示した.昨年度より,統制条件として美的な喜びを伴わない発見においては目立った応答が得られないことを示してきたが,データをまとめて2014年8月の欧州視覚会議(ECVP)において,Stevanov研究員が口頭発表にて報告した.また,これまでの成果と合わせて2014年11月にSociety for Neuroscienceにてポスター発表を行った.現在,引き続きこれらの成果を論文としてまとめる作業を行っている.並行して,UNSW AustraliaのB. Spehar准教授と美的知覚を支える基礎画像要素に関する心理実験を行った.ノイズ画像の空間周波数スペクトルを操作し,参加者の評定と選好を調べた結果,特定の振幅スペクトル分布パタン(分布の傾き)と選好の関係が示された.結果は上記ECVPのサテライト会議(2nd VSAC)および2015年1月の日本視覚学会大会にてStevanov研究員が口頭発表を行った.これらの成果を総合して,空間周波数分布の違いが大脳関連領野においてどのように表現されるかを調べるfMRI実験研究を企画した.L. Talas博士(英国ブリストル大学在学),M. Furlan博士(英国ロイヤルホロウェイ博士研究員)の支援を得て予備的調査まで完了し,引き続き京都大学にて実験研究を行う予定である.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。知覚的な快経験に関連する脳領域を探求するため,オブジェクトの集合が全体として別のオブジェクトに見える視覚刺激を作成し,全体的知覚の判断に関する応答をfMRIを用いて測定する実験研究を行った.これまでに行ってきた,快経験が強い絵画芸術作品における知覚的な気づきの場合とは異なり,側頭葉の反応特異的応答は顕著に見られなかった.また,この判断は単なる局所・広域の知覚判断であり,快経験は伴わないあるいは弱いものであった.総合すると,海馬傍回など側頭葉における知覚的気づきが快経験を伴い,それは側頭葉を含む脳内報酬系の働きと関連していることが示唆された.多くの被験者から膨大なデータが得られているため,現在も結果の整理が続いている.実験研究と並行して,日本心理学会において実験美学に関するシンポジウムを開催し,国内の専門研究者との情報交換を行った.また,それはFrontiers in Psychology誌における特集号主催への布石となった.続いて, Stevanovは次年度にECVP(欧州視覚学会)サテライト会議(VSAC)における国際シンポジウムを, Branka Spehar博士(豪州South Wales大学)との共同で開催することが決まり,準備を進めている.さらに,視覚芸術作品に関する数理・心理学的実験を新たに進めるため, Johannes Zanker教授(英ロンドン大学)と協議を行った.本研究の目的は,美的知覚の心理・神経基盤を探求することであった.まず,前年度に引き続き,fMRIを用いて,絵画作品における発見の喜びに対応するヒト後頭葉から側頭葉に至る領域の応答を調べる実験を行った.これまでに,だまし絵として隠された内容が明らかになった時に側頭葉の海馬傍回場所領域(PPA)が特異的な反応を示すことを示した.昨年度より,統制条件として美的な喜びを伴わない発見においては目立った応答が得られないことを示してきたが,データをまとめて2014年8月の欧州視覚会議(ECVP)において,Stevanov研究員が口頭発表にて報告した.また,これまでの成果と合わせて2014年11月にSociety for Neuroscienceにてポスター発表を行った.現在,引き続きこれらの成果を論文としてまとめる作業を行っている.並行して,UNSW AustraliaのB. Spehar准教授と美的知覚を支える基礎画像要素に関する心理実験を行った.ノイズ画像の空間周波数スペクトルを操作し,参加者の評定と選好を調べた結果,特定の振幅スペクトル分布パタン(分布の傾き)と選好の関係が示された.結果は上記ECVPのサテライト会議(2nd VSAC)および2015年1月の日本視覚学会大会にてStevanov研究員が口頭発表を行った.これらの成果を総合して,空間周波数分布の違いが大脳関連領野においてどのように表現されるかを調べるfMRI実験研究を企画した.L. Talas博士(英国ブリストル大学在学),M. Furlan博士(英国ロイヤルホロウェイ博士研究員)の支援を得て予備的調査まで完了し,引き続き京都大学にて実験研究を行う予定である.26年度が最終年度であるため、記入しない。全体としては計画以上に進展しており,成果をもとに論文執筆が進んでいる.一方,系各調書に書いたfMRIデータの動的結合性分析(DCM)の導入については十分な進展が得られず,その手法の妥当性の再評価も含めて見直しを進めている,心理学的研究と共同研究の拡がりは当初計画を超えて進んでおり,研究全体の意義を損なうものではない.

引き続きfMRI実験と心理学実験を並行して進め,成果の論文化を進める. DCMの適用については慎重にならざるを得ない状況となったが,その代わりに解剖学的な結合性の分析(DTI)に関する技術習得が進んでおり,全体として美的経験に関係する脳領域とそのネットワークを解萌するという目標は変更しない.実績の概要欄に書いたVSACにおけるシンポジウムの企画は本研究の完成だけでなく今後の研究の推進のために重要であり,できるだけ注力していきたい,また,研究計画時には想定していなかったZanker教授との共同研究が進んでおり, 4月末には教授が京都を来訪して議論を進める,その結果,本年度においてすてに,当初目的の範囲内で実験研究に新たな展開存加身ることができるだろう.
６４列検出器ＣＴを用いた海綿骨骨梁構造解析による骨粗鬆症性脊椎骨折のリスク評価

多発性骨髄腫と対照間で骨梁幅、骨異方性度、フラクタル次元に有意差を検出した。胃切除後症例と対照間、および肝動脈塞栓療法除後症例と対照間で続発性骨粗鬆症有病率、骨梁パラメータおよび有限要素解析による破壊荷重、スティフネスに有意差を検出した。横断的検討では多発性骨髄腫骨折群と非骨折群間で、骨梁パラメータおよび機械特性に有意差を検出した。平成23年度よりcalibration phantomを用い、CTによる体積骨密度および組織骨密度で評価している。上述の各検討において組織骨密度に有意差を検出している。骨粗鬆症による脊椎圧迫骨折はADL、QOLの著しい低下をもたらすことから、脊椎骨折リスク患者の層別化と発症予知対策の具体化が必要である。本研究は、64検出器CT検査による骨粗鬆症性脊椎骨折のリスク評価を目的としており、具体的には、1続発性骨粗鬆症と対照例の骨梁パラメータの差の統計解析、2脊椎骨折を生じる骨梁パラメータの閾値の決定等である。平成24度に腰椎骨折を20人、その他各患者群を各40人追加、平成23年度に撮影・登録された患者の追跡撮影を、約半年1年で行った。多発性骨髄腫に関してはMGUS/無症候性/症候性骨髄腫非骨折群/症候性骨髄腫骨折群の多重比較を行った。症候性骨髄腫骨折群では、フラクタル次元が非骨折群に比し有意に低下していた。胃手術後患者については、対照/幽門側胃切除後/全摘後で多重比較を行った。続発性骨粗鬆症の頻度は対照、幽門側胃切除、胃全摘群の順に増加した。骨梁パラメータは骨梁幅が続発性骨粗鬆症群で有意に低値を示した。また、縦断的評価では、術後年数と続発性骨粗鬆症の有病率には相関を認めなかった。慢性腎障害患者については対照/慢性腎不全/透析患者にて多重比較を行った。骨梁パラメータでは、男性ではconnectivityが、女性では骨梁幅が、対照群に比し透析患者で有意に低下していた。脊椎への放射線照射後として、肝細胞癌におけるCT透視下肝動脈塞栓術後の患者を対象とした。続発性骨粗鬆症の頻度は、男性患者において有意に高値であり、骨質と骨脆弱性パラメータは有意に低下していた。当初研究計画及び研究成果等続発性骨粗鬆症と対照例の骨梁パラメータの差の統計解析:多発性骨髄腫と対照間で骨梁幅、骨異方性度、フラクタル次元に有意差を検出した。脊椎骨折を生じる骨梁パラメータの閾値の決定:骨折症例の蓄積中である。DXA骨密度と骨梁パラメータの脊椎骨折予測能を比較:DXAによる面積骨密度に対してCTによる体積骨密度の優位性を示すエビデンスが蓄積されており、申請者らは平成23年度よりcalibration phantomを用い、CTによる体積骨密度および組織骨密度で評価している。2同様、骨折症例の蓄積中である。本研究は、64検出器CT検査による骨粗鬆症性脊椎骨折のリスク評価を目的とした多施設・前向き共同研究である。具体的には、(1)続発性骨粗鬆症と対照例の骨梁パラメータの差の統計解析、(2)脊椎骨折を生じる骨梁パラメータの閾値の決定、(3) DXA骨密度と骨梁パラメータの脊椎骨折予測能を比較、(4)骨粗鬆症の骨折リスク患者における64検出器CTの適応基準やガイドライン作成の基礎となる本邦データベースの構築を目的としているI.対象は腰椎椎体骨折10人、胃全摘後60人、慢性腎不全20人、多発性骨髄腫(MGUS、無症候性骨髄腫、症候性骨髄腫)各20人、対照80人(60才79才、各年代40人ずつ)のCTデータを拾得した。症例収集(研究代表者、研究分担者:坂井晃、田中信弘担当)は当院より約70%を収集広島赤十字原爆病院より約30%(研究協力者:麻奥武毅臨床検査部部長)拾得した。II.画像の撮影は予定検査として行われるルーチンCT検査を利用して行った。

GE社製64列検出器CT(VCT)を用い再構成画像を解析用コンピュータWindows(64bit)へ転送、(H23設備備品)、3D骨梁構造計測ソフト3D-TRI/BON64(Ratocシステムエンジニアリング)(H23消耗品)により海綿骨骨梁解析を行った。各椎体中央で厚み1cm部分のデータから骨組織容積比、骨梁数、骨梁幅、骨梁間距離(Tb.Sp)、Structure Model Index(SMI)、Euler数、異方性度(DA)、フラクタル次元を算出し、海綿骨骨梁パラメータとした。本研究の成果は「疾患による脊椎の脆弱性を定量的に決定する可能性がある」「どのような骨梁パラメータが椎体の脆弱性と関連するのか」について方向性を与えるものである。続発性骨粗鬆症への治療介入のタイミング決定に貢献する可能性が示された。放射線診断学1続発性骨粗鬆症と対照例の骨梁パラメータの差の統計解析:多発性骨髄腫、胃手術後、慢性腎障害、放射線照射後の続発性骨粗鬆症と対照例の骨梁パラメータを比較した。2脊椎骨折を生じる骨梁パラメータの閾値の決定:骨折群の症例を収集中である。3DXA骨密度と骨梁パラメータの脊椎骨折予測能を比較:DXAによるarealBMDと比較して骨ミネラルファントムによるvolumetricBMDが骨量測定に有用との報告が多数見られ、平成24年度よりvolumetric BMDを測定し、続発性骨粗鬆症の基準に用いている。1.多列検出器CTを用いた多発性骨髄腫の海綿骨骨梁解析:preliminaryresults:第70回日本医学放射線学会学術発表会(2011,横浜)、2.画像による多発性骨髄腫の海綿骨骨梁構造解析:第29回日本骨代謝学会学術集会若手シンポジウム(2011、東京)、3.画像による多発性骨髄腫の海綿骨骨梁構造解析:第14回癌と骨病変研究会(2011、東京)、4.Transient Thickening of Trabecular Bone in Patients with Multiple Myeloma Detected by Microstructure Analysis of Lumbar Vertebrae Using Multidetector Computed Tomography:RSNA The 97th Scientific Assembly and AnnualMeeting (November. 2011, Chicago, USA)で成果を発表した。成果1では、64列検出器CTを用いて多発性骨髄腫患者29人、対照51人の腰椎微細構造を評価した。病的骨折のない骨髄腫と正常対照では脊椎微細構造に有意な差が見られた。男性患者では骨梁が太く、女性では異方性度が上昇する傾向が見られた。成果2では対照125人、MGUS+無症候性骨髄腫29人、症候性骨髄腫18人に同様の解析を行った。多重比較では、男性では骨梁幅、異方性度がMGUS+無症候性骨髄腫群で上昇し、症候性骨髄腫では低下していた。成果3では多発性骨髄腫患者の化学療法による骨梁変化を評価した。レナリドミド投与期間に対し、その他の化学療法期間では骨梁幅の変化率が高かった。成果4では多発性骨髄腫の骨梁微細構造の性、病期での違いが異なる画像所見に対応する可能性を示した。脊椎骨折を生じる骨梁パラメータの閾値の決定に関しては腰椎骨折症例を引き続き収集予定である。続発性骨粗鬆症の基準として骨ミネラルファントムとMDCTによるvolumetricBMDを用い、有病率を算出する。近年大腿骨や脊椎の骨折リスク評価として有限要素法を用いる報告が多数認められる。今後本研究にてもMDCTデータより機械特性を算出し、CT/FEMによる骨折リスクの評価を行う予定である。対照・患者と腰椎骨折群で有意差のある海綿骨骨梁パラメータを決定し、骨折予測因子と成りうる骨梁パラメータとする。
感桿型視細胞におけるロドプシンとGq型G蛋白質との相互作用ダイナミクスの解明

無脊椎動物の感桿型視細胞では、動物種によりlatencyが異り、光情報を変換するための分子間ダイナミクスに差異があると考えられる。ロドプシン・Gq間相互作用のダイナミクスを解明するために、相互作用の時間軸にそった検討と、動物種間により構造が大きく異なるβサブユニットの検討が必要であると考え以下の実験を行った。A)Gqを活性化するロドプシン光反応中間体の同定イカ感桿膜を可溶化し、GTP存在・非存在下で低温時間分解分光測定を行い、Gqと相互作用するロドプシンの反応中間体の同定を試みた。反応中間体は解明できていないが、光活性化型ロドプシンによるGqの活性化は時間と伴に低下することを見いだした。このメカニズムについては現在検討中である。最終産物であるメタロドプシン以外の中間体がGqを活性化していることも考えられる。B)ザリガニGqβの同定ザリガニは、動物種としてはハエに近いが、latencyはイカによくにている。ザリガニのG蛋白質βサブユニッとを同定するために、Gqαと結合しているβサブユニットとを架橋材を用いて架橋し、抗Gqα抗体で免疫沈降た。その結果、39kDa蛋白質が、GTP存在下では架橋されないが、GTP非存在下でGqαと架橋され沈降した。39kDa蛋白質の部分アミノ酸配列を調べたところ、ハエのGβeと高い相同性を示した。すなわち、ザリガニGqのβサブユニットはイカタイプではなくハエタイプであり、この特異なGβeタイプのβサブユニットと短いlatencyとの関連はないことが示唆された。また、本研究結果は節足動物と軟体動物ではβサブユニットが関連する光情報変換機構に差異がある可能性も示している無脊椎動物の感桿型視細胞では、動物種によりlatencyが異り、光情報を変換するための分子間ダイナミクスに差異があると考えられる。また、本研究結果は節足動物と軟体動物ではβサブユニットが関連する光情報変換機構に差異がある可能性も示している
実験動物(ラット)における睡眠・覚醒状態人工調節法の確立

本研究は実験動物の生理的睡眠・覚醒の人工調節法を確立し、新しい睡眠導入剤などの薬剤や独創的な睡眠・覚醒調節の医療技術の開発を可能にするための基礎データを提供しようとするものである。われわれの研究の最終目的は、「睡眠・覚醒」意味を解き明かすことであるが、本研究は、この大命題を解くための中間目標のひとつと位置付けられると共に、われわれの研究成果の実用化をめざすものである。PGD_2は吻側前脳基底部の腹側表層部のクモ膜下腔に持続注入することにより、平均30分程度の潜時でほぼ最大量の生理的睡眠を引き起こし得る。これに対し、PGD合成酵素の活性阻害物質、例えば4価の無機セレン化合物をこの近傍へマイクロダイアリシスプロープを用いて持続的に投与すると約2時間の潜時の後、睡眠がほぼ完全に抑制される。このような顕著な効果は、他のアラキドン酸代謝物や、古くから睡眠・覚醒状態との連関が指摘され多くの研究がなされてきたセロトニンおよびその関連物質では、少なくともラットにおいては得ることができなかった。このように、特定の物質を脳内の特定の部位へ作用させることにより、生理的睡眠・覚醒状態がほぼ完全に調節できることがわかってきた。PGD_2による睡眠促進の機構をさらに詳細に研究することにより、将来ヒトにおいても、その睡眠・覚醒状態を生理的に調節したり、睡眠の意義を明らかにするなどが可能となると期待される。また、アゴニスト・アンタゴニストのみならず、PGD合成酵素の活性阻害作用を示す化合物も生理的睡眠・覚醒の調節物質として開発できることも示唆された。1.PGE_2をラット脳内の諸部位に両側性に作用させつつ、その睡眠・覚醒、脳温などに及ぼす作用を検討していたところ、使用していたスリップリングに構造上の問題があり、精確かつ安定して両側投与することが難しいことがわかってきた。そこで、無拘束ラットに、マイクロダイアリシス法を用いて、両側性に物質投与が精確かつ安定して行なえる装置を新たに考案し、製作を試みたところ、非常にうまく機能することが明らかとなったので、本装置を用いて当該の実験に再挑戦しようと考えている。2.無拘束ラットの第三脳室内にprostaglandin(PG)D_2、Lipoxin(LX)A_4、LXB_4、Leukotriene C_4などの微量持続注入を行ない、その睡眠・覚醒その他に対する作用の比較検討を行なっている。その際、同じ第三脳室内でもPGD_2の注入部位が変化すると微妙に作用が異なることから、注入部位の検討を行なう必要がでてきた。現在までの成果では、PGD_2以外では、LXA_4のみに睡眠誘発作用が得られている。3.無機セレン化合物はPGD合成酵素の活性を抑制する。無機セレン化合物を脳室内に微量投与すると、睡眠が顕著に抑制される。これは脳内内因性のPGD_2が生理的睡眠を引き起こしているという、われわれの仮説を強く支持する結果である。無機セレン化合物は静注でも同様の覚醒作用が得られることがラットで確認できた。過眠症諸疾患への臨床応用は可能かもしれない。4.高コレステロ-ル血症の治療に既に臨床応用されている、HMG-CoA還元酵素阻害剤の中に、不眠を引き起こすものがあることが最近注目されている。これらの薬物をラットに持続的に静脈内注入して検討したところ、臨床での観察結果とよく一致する結果が得られた。すなわち、一部の薬物が睡眠を有意に抑制した。1.プロスタグランジン(PG)D_2およびE_2を脳内の種々の部位に両側性に投与し、睡眠・覚醒に対する最も有効な作用の得られる部位を、無麻酔、無拘束ラットにおいて検索中である。PGD_2を視束前野に投与した1例で顕著な睡眠誘発が得られ、1時間あたりの徐波睡眠量が55分に達した。

ただしこの時でも、その睡眠はエピソードを形成しており、数秒から数十秒の覚醒が適度の間隔で生じていた。この点が、例えばムシモールを後部視床下部に投与した場合と異なり、後者では、動物に体動が見られる時でも徐波が持続し、エピソードを形成していなかった。この点からもPGD_2により引き起こされている睡眠状態は生理的な睡眠状態と異ならないと考えられる。PGD_2の作用部位はおそらく視束前野近傍にあることが強く示唆されたが、最終的な作用部位は現在さらに細かく追究しているところである。PGE_2についてもかなりの検討を既に行なっているが、視床下部への投与で、逆説睡眠がかなり強く、場合によってはほぼ完全に抑制されている。この点もさらに追究しているところである。これらの実験が完成すれば。脳内での睡眠・覚醒の調節機構に関する多くの新しい情報が得られるばかりでなく、本研究がめざしている、睡眠・覚醒の人工的調節がより具体的になるだろうと期待している。2.内因性の睡眠促進因子であるPGD_2の合成に関与する酵素、PGD合成酵素の阻害剤、特に無機セレン化合物が、睡眠をほぼ完全に抑制し得ることは既に報告した。無機セレン化合物以外の化合物でPGD_2合成酵素の阻害活性を有するいくつかの化合物も検討中であるが、現在までの諸結果では、PGD合成酵素阻害活性が強く血液脳関門を通過しやすいと予想される化合物ほど、強く睡眠を抑制するように思われる。1.無拘束ラットにおいて、脳波、筋電活動、脳温などを記録しつつ、同時に脳内の数箇所の部位において、薬液の投与やマイクロダイアリシス法を用いたサンプリングが行なえる特殊な実験装置を用いることにより、プロスタグランジン(PG)D_2を種々の方法で無拘束ラットの脳内に投与し、その睡眠促進作用について検討した。PGD_2をマイクロダイアリシスプロープにより脳内の種々の部位に両側性に持続投与する場合、吻側前脳基底部への投与で、顕著に睡眠が促進されることが多いが、明確でないことも多い。ところが、PGD_2を同部位の脳底のクモ膜下腔に持続注入すると、より顕著な睡眠促進作用が再現性良く得られることが最近明らかになってきた。この結果により、本研究でめざしていた、実験動物の睡眠状態の人工的調節が可能である。2.PGD合成酵素の活性阻害剤である無機セレン化合物の第三脳室内持続投与により、睡眠がほぼ完全に抑制されることも既に明らかにしている。ラット脳内におけるPGD合成酵素の産生部位および存在部位が、脈絡叢、グリア細胞、軟膜であることが、in situ hybridization法と免疫組織化学法により最近明らかになった。上記のクモ膜下腔への無機セレン化合物の持続投与を現在検討中である。3.睡眠の変化は、リポキシンやロイコトリエンの投与でも見られるものの、その効果はさほど顕著でない。セロトニン合成阻害剤であるパラクロロフェニールアラニンのラット腹腔内投与でも不眠が引き起こされるが、上記セレンほど顕著でない。セロトニンそのものの脳室内持続注入は一過性に覚醒を引き起こすが、その作用も比較的弱い。
咬合の異常感覚症患者の診断法に関する基礎的研究

咬合に病的な問題がないにもかかわらず咬合の違和感を訴える患者において、咬合感覚異常に対する咬合感覚センサーの関与の可能性を検討することを目的として、上下顎歯間における厚さ弁別能試験を開発し、健常有歯顎者、高齢者、全部床義歯装着者、および咬合感覚異常患者を対象に、上下顎中切歯間、および上下顎小臼歯間における厚さ弁別能試験を行った。試験には厚さ2,5,10mmのスタンダードブロック(SB)とSBから±0.25mmずつ厚さの異なる12種類のテストブロック(TB)を用いた。測定は、被験者にSBを上下顎歯間で軽くかませて除去し、約2秒後、同様にTBをかませ、TBがSBよりも厚くまたは薄く感じるかを答えさせた。厚いTBを薄い、薄いTBを厚いと答えた場合を誤答とし、誤答数について解析した。上下顎中切歯間の厚さ弁別能について、20代の健常有歯顎者20名(男女各10名)対象とした実験では、以下のことが統計学的に証明された。1)2,5,10mmすべてのSBの厚さにおいて測定法の再現性がみられた。2)厚いTBは薄いTBよりも誤答しやすかった。3)SBの厚さが厚いほど、誤答しやすかった。4)厚さ弁別能に性差がみられた(2,5mmの薄いTBにおいて、女性の方が有意に多く誤答していた(P<0.05,リジット分析))。これらの研究成果の一部は、国内外の学術大会で報告し、現在、学術雑誌(英文誌)に投稿中である。また、咬合感覚異常者については、健常者と比較して誤答数が多い傾向がみられたが、決定的な閾値を設定するまでには至っていない。さらに、高齢者および全部床義歯装着者は、健常者と比較して誤答数が多い傾向がみられた。その他に、上下顎小臼歯間における厚さ弁別能は、中切歯間の結果と同様の傾向がみられるものの、誤答数が多い傾向がみられた。咬合に病的な問題が認められないにもかかわらず咬合の違和感を訴える患者において,咬合感覚異常に対する咬合感覚センサーの関与の可能性を検討することを目的として,上下顎中切歯間における厚さ弁別能を計測した.今年度はおもに対照となる基礎データの収集のために,健常有歯顎者を対象に実験を行った.まずは,被験者には20歳代の健常有歯顎者10名を選択した.厚さ弁別能試験には厚さ2,5,10mmのスタンダードブロック(SB)とSBから±0.25mmずつ厚さの異なる12種類のテストブロック(TB)を使用した.SBより「薄い」TBを「厚い」,「厚い」TBを「薄い」と答えた場合を誤答とし,誤答数を算出して弁別能を調べた.20代の健常有歯顎者の厚さ弁別能に関しては,2,5,10mmのSBの誤答数においては,2mmと10mmの間で統計学的な有意差が認められた(P<0.05,一元配置分散分析).また,全てのSBにおいて厚いブロック群の誤答数は薄いブロック群よりも有意に高い値を示した(P<0.05,対応のあるt検定).今回の実験で用いたブロックの厚さは過去の報告とはことなるが,結果は同様の傾向を示した.

この研究成果の一部は,平成14年度日本補綴歯科学会九州支部学術講演会,第7回日本頭蓋下顎障害学会学術大会,2002 Fall Meeting of the Korean Academy of Prosthodonticsで報告した.現在20代の健常有歯顎者の被験者数を増やしつつ実験を進めているが,同時に,今後咬合感覚異常者について実験を行うにあたって,対象となるであろう4050代の年齢層だけではなく,さらに高齢な被験者についても計測を行い,加齢による厚さ弁別能の変化の有無についても実験を行っている.咬合に病的な問題がないにもかかわらず咬合の遺和感を訴える患者において、咬合感覚異常に対する咬合感覚センサーの関与の可能性を検討することを目的として、上下顎歯間における厚さ弁別能試験を開発し、健常有歯顎者、高齢者、全部床義歯装着者、および咬合感覚異常患者を対象に、上下顎中切歯間、および上下顎小臼歯間における厚さ弁別能試験を行った。開発した厚さ弁別能試験は、次のとおりである。試験には厚さ2,5,10mmのスタンダードブロック(SB)とSBから±0.25mmずつ厚さの異なる12種類のテストブロック(TB)を用いた。測定は、被験者にSBを上下顎歯間で軽くかませて除去し、約2秒後、同様にTBをかませ、TBがSBよりも厚くまたは薄く感じるかを答えさせた。厚いTBを薄い、薄いTBを厚いと答えた場合を誤答とし、誤答数について解析した。上下顎中切歯間の厚さ弁別能について、20代の健常有歯顎者20名(男女各10名)対象とした実験では、以下のことが統計学的に証明された。・2,5,10mmすべてのSBの厚さにおいて測定法の再現性がみられた。・厚いTBは薄いTBよりも誤答しやすかった。・SBの厚さが厚いほど、誤答しやすかった。・厚さ弁別能に性差がみられた(2,5mmの薄いTBにおいて、女性の方が有意に多く誤答していた(P<0.05,リジット分析))。これらの研究成果の一部は、国内外の学術大会で報告し、現在、学術雑誌(英文誌)に投稿中である。また、咬合感覚異常者については、健常者と比較して誤答数が多い傾向がみられたが、決定的な閾値を設定するまでには至っていない。さらに、高齢者および全部床義歯装着者は、健常者と比較して誤答数が多い傾向がみられた。その他に、上下顎小臼歯間における厚さ弁別能は、中切歯間の結果と同様の傾向がみられるものの、誤答数が多い傾向がみられた。
電池やキャパシタへのイオン液体の電気化学的応用

イオン液体は電力貯蔵用の大型蓄電デバイスである二次電池やキャパシタの安全性の向上を目的として、安全性の高い電解質として期待されている。二次電池としてはリチウムイオン電池、ナトリウムイオン電池、アニオンシャトル型電池などへの適用が期待できる。昨年度は、サイズの小さなフッ化物アニオンにエチレングリコールEGを配位させ、錯アニオンとすることにより安定化したアニオン溶媒和型のイオン液体の合成に成功している。これらのイオン液体は四級アルキルアンモニウム臭化物、フッ化銀AgF、EGを定量比でメタノールに溶解、反応させることによりことにより、フッ化物アニオンと臭化物アニオンを交換し、同時にフッ化物アニオンを錯アニオンとして安定化させ、系から臭化銀AgBrを沈殿として分離した上で、メタノールを除去することにより得られる。本年度は四級カチオンとして1ーエチル-3-メチルイミダゾリウム、1ーブチル-3-メチルイミダゾリウムフルオライドとエチレングリコールとが1:1で安定なイオン液体を与えることをNMRやIRにより確認した。また、前者のイオン液体より2:1の錯塩([C2C1im]F)2・EGを結晶化させ、単結晶構造解析を行い、カチオンおよびエチレングリコールとフッ化物イオンの間の水素結合状態について詳細な解析を行った。これらの化合物は強いフルオロ塩基であり、フッ素化試薬としての応用が可能であることを示した。また、これらのイオン液体のイオン導電率と粘性率を種々の温度で測定し、モル導電率と粘性率の間にワルデン則が成立することを明らかにした。フッ化物アニオンの溶媒和イオン液体について、フッ化物イオンの安定化、液体構造をNMR、IR,X線単結晶構造解析により明らかにすることができた。このイオン液体中で起こっていることが明らかになったプロトン交換反応を重水素置換試薬などを用いた試料を合成してNMRで解析する。水素結合状態について計算科学的な手法による検討を加える。。二次電池用としてはリチウムイオン電池、ナトリウムイオン電池、アニオンシャトル型電池などへの適用が期待できる。イオン液体の一種としてこれまでに、金属カチオンにグライムなどのエーテルを配位させ、カチオンーアニオン間の静電相互作用を弱めて液体化を実現した例が報告されているが、サイズの小さな単原子アニオンであるフッ化物イオンに配位子を配位させ、錯アニオンとすることにより安定なイオン液体を合成した例は見られない。これはフッ化物イオンの塩基性が強いため、出発物質であるフッ化物自体が不安定であり、配位子と錯化後も、錯化能力が充分でないと徐々にカチオンを攻撃し、分解が起こるためである。出発物質として四級アルキルアンモニウムの臭化物を原料とし、配位子を兼ねた溶媒中でフッ化銀AgFと反応させることにより、フッ化物アニオンと臭化物アニオンを交換し、同時にフッ化物アニオンを錯アニオンとして安定化させ、系からAgBrを沈殿として分離することによりイオン液体を得ることに成功した。今年度はカチオンとしてはジアルキルイミダゾリウムカチオン、フッ化物イオンへの配位子としてはエチレングリコールを選択し、室温で液体状態を保ちかつアニオンに配位していないエチレングリコールがNMR等で観測されない、いわゆるゼロソルベント状態のイオン液体が生成していることを確認した。当初の目的である、フッ化物アニオンに配位子してエチレングリコールを配位させた、イミダゾリウムフッ化物のイオン液体の合成に成功している。生成したアニオン溶媒和型のイミダゾリウムフッ化物

イオン液体のフッ化物アニオンとカチオン、配位子の相互作用を1H-NMRや19F-NMRにより解明する。また粘性率やイオン伝導率や磁場勾配NMRによるイオンの拡散係数測定など、このイオン液体の諸物性を明らかにする。また、他のアンモニウムカチオンや配位子を用いたいイオン液体の合成を行う。このイオン液体中で起こっていることが明らかになったプロトン交換反応を重水素置換試薬などを用いた試料を合成してNMRで解析する。水素結合状態について計算科学的な手法による検討を加える。
乾癬患者の遺伝的マーカーおよび疾患感受性遺伝子の分子レベルでの解析

我々は既に日本人乾癬患者においてその発症にHLA-C分子の1ドメインの73番目のアラニンを規定する部位の塩基配列が疾患の発症に重要な関連性がある可能性を報告した。更に今まで報告されているHLA-C分子の塩基配列を詳細に検討したところ、9番目のアスパラギン酸を規定する塩基配列も乾癬患者に高率に見い出されるHLA-Cw6に存在することが判明した。そこで、約80名の乾癬患者においてこの部位の塩基配列をPCR法にて検討したところ、HLA-Cw6、Cw7およびCw7の亜型が9番目のアスパラギン酸を保有することがわかった。更に我々は同部位のDNA配列を検討することにより、我々のデータの裏付けをとることができた。73番目のアラニンと9番目のアスパラギン酸とどちらが疾患の発症に重要であるかを統計学的に解析したところ、アラニンの方が第一義的であるがアスパラギン酸も二義的に働き、疾患を発症させている可能性がうかがわれた。日本における我々の結果が正しいものであるか、結果に人種的差異があるかを検討する目的でノルウェーおよびイスラエルのグループと共同研究を開始したが、前段階のデータは、我々の結果か人種差に関係なく普遍的に言えるものである可能性が示されている。合成蛋白を用いた患者血清、リンパ球での検討はまた始まったばかりである。前段階の結果では合成蛋白に交叉反応する抗体が患者血清中に高い値で存在することが示された。日本人尋常性乾癬患者でその頻度が増加しているHLAーCw6,Cw7,Cw11と他のClocusの塩基配列を比較検討したところ,Cw6とCw7のみに特徴的な9番目と90番目のアスパラギン酸(Asp)と73番目のアラニン( ^<73>Ala)を見い出した。特に73番目のアミノ酸配列(exon2)領域はHLAーC分子のαーヘリックス上に位置し,抗原結合部位にあたることから,本年度はこの部位に焦点を絞り,解析を行った。即ち,75名の尋常性乾癬患者および50名の正常人の末梢血リンパ球より全DNAを抽出し,2種のHLAーC特徴的プライマ-を用い,polymerase chain reaction法により,73番目のアミノ酸部分を規定する部位の塩基配列を増幅後,73番目がAlaのオリゴヌクレチドプロ-ベと73番目がスレオニン(Thr)のプロ-ベ2種を用いてハイブリダイゼ-ションを行い,その結果を比較した。検索の結果,当然のことながら,HLAーCw6,Cw7を有する患者および正常人では^<73>Alaが陽性であったが,Cw6,Cw7を有しない場合でも^<73>Ala陽性が多数認められた。Cw6,Cw7(ー)& ^<73>Ala(+)の症例のHLAを検討するとその大多数がHLAーBw52を有していた。日本人集団ではBw52はDR2とCx52(これは現在血清学的同定ができない)と連鎖不平衡を示すことが多く,血清学的にはCーブランクでもCx52を有している可能性が示された。その他,Cw4や現在Cーブランクのものでも^<73>Ala陽性を示すことが判明した。^<73>Ala陽性度を患者群と正常人コントロ-ル群で比較すると81%対48%,階2乗値15.3,相対危険率4.72,P<0、0001で患者群で有意に^<73>Alaの存在が上昇していた。以上のことより, ^<73>Alaは乾癬の発症に重要な役割を果たしていると考えられるが,9番目のAspもβシ-ト上に位置し,抗原結合に関与している可能性があることから,この部位の検索も現在,行っているところである。既に我々はHLAーC分子α1ドメイン73番目のアラニンが乾癬発症に重要な役割を果たすことを報告しているが、更に乾癬患者で有意に上昇しているHLAーCw6では9番目のアミノ酸がアスパラギン酸で、他の配列が報告されているC locusと異なることがわかった。しかしながら日本人乾癬患者で有意に上昇しているHLAーCw6以外のCw7およびCw11、更にCブランク抗原においてこの部のアミノ酸が何であるかは不明であった。我々はPCRーSSO法およびDNAシ-クエンスを行うことにより、Cw7のみが9番目にアスパラギン酸を有することを見い出した。しかしながら73番目のアラニンと比較することのアミノ酸の存在は乾癬発症に対しては三義的役割を果たしていることが統計的解析にて判明した。73番目のアラニンとともに9番目のアスパラギン酸は抗原提示細胞のHLA分子上のペプチド結合部位に位置しており、これらのアミノ酸の存在が共に免疫反応に重要な鍵を握っていることが示唆された。その他、90番目のアスパラギン酸もHLAーCw6に特異的であるが、このアミノ酸はα_1とα_2ドメインを結合するβシ-ト上に位置しているため、抗原提示等に重要な役割を果たしているとは考え難く、今回検索は行えなかった。73番目のアラニンまたは9番目のアスパラギン酸を有する患者と有さない患者とで臨床症状に差があるかも統計解析を行ったが、現在のところ有意なデ-タは得られていない。更に検索をすすめたい。

更に今まで報告されているHLA-C分子の塩基配列を詳細に検討したところ、9番目のアスパラギン酸を規定する塩基配列も乾癬患者に高率に見い出されるHLA-Cw6に存在することが判明した。そこで、約80名の乾癬患者においてこの部位の塩基配列をPCR法にて検討したところ、HLA-Cw6、Cw7およびCw7の亜型が9番目のアスパラギン酸を保有することがわかった。更に我々は同部位のDNA配列を検討することにより、我々のデータの裏付けをとることができた。73番目のアラニンと9番目のアスパラギン酸とどちらが疾患の発症に重要であるかを統計学的に解析したところ、アラニンの方が第一義的であるがアスパラギン酸も二義的に働き、疾患を発症させている可能性がうかがわれた。日本における我々の結果が正しいものであるか、結果に人種的差異があるかを検討する目的でノルウェーおよびイスラエルのグループと共同研究を開始したが、前段階のデータは、我々の結果か人種差に関係なく普遍的に言えるものである可能性が示されている。合成蛋白を用いた患者血清、リンパ球での検討はまた始まったばかりである。前段階の結果では合成蛋白に交叉反応する抗体が患者血清中に高い値で存在することが示された。
腫瘍（自己）抗原に対する免疫不応答の解除に基づいた新規がん免疫療法の基盤研究

自らの免疫を賦活化させてがんを駆逐するがん免疫療法は近年目覚ましい効果を挙げている。しかし、この恩恵を享受できない症例も一定数存在する。がん免疫療法の効果を得られない原因に一つに多くのがん抗原が自己抗原であることが挙げられる。自己抗原に対しては生体の恒常性を保つために制御性T細胞によって自己免疫寛容が成立する。以前、制御性T細胞が抑制しているCD8陽性T細胞の特徴を報告した。制御性T細胞により抑制された不応答性細胞は細胞増殖やサイトカインの産性能を失っていた。本研究では、悪性黒色腫検体を用いて、不応答性細胞の頻度や機能・その他共発現している細胞表面マーカーを解析し臨床転機との相関を検討した。制御性T細胞(Regulatory T cell:Treg)が自己反応性CD8+ T細胞を安定した不応答(アネルギー)状態に陥らせることにより長期の免疫寛容を成立させていること、またこれらの不応答T細胞が特徴的なフェノタイプ(CCR7+CTLA-4+)を持つことを報告した。近年、Tregによる抗腫瘍免疫応答抑制により、がん免疫療法の効果が十分に発揮されていないことが指摘されている。がん抗原の多くが自己抗原由来であることを鑑みると、Tregによる抗腫瘍免疫応答抑制と不応答誘導の関連が示唆される。本研究では、悪性黒色腫検体(腫瘍局所浸潤リンパ球:TIL)を用いて、腫瘍微小環境でのTregによるエフェクターT細胞(特にCD8+ T細胞)への不応答状態の誘導とそのメカニズムを明らかにするとともに、CD8+ T細胞/Treg比や不応答状態のエフェクターT細胞の存在と予後と相関を検討し、新たな治療標的およびバイオマーカー同定に向けた基盤検討を行うことを目的としている。本研究において、悪性黒色腫局所に浸潤している腫瘍(自己)抗原特異的CD8+T細胞のフェノタイプ解析と機能解析を行うとともに、CD4、CD45RA、FoxP3の発現によりTregを同定する手法を用いたTregの解析、抗原提示細胞への影響を明らかにして抗原提示細胞を介したTreg抑制メカニズムの重要性にアドレスする。またこれらのTregにより抑制された不応答性CD8+T細胞の浸潤頻度が病態・予後と相関するのか検討予定である。悪性黒色腫局所検体の回収において、原発巣では病理診断が最優先されるべき事項である。よって、末梢血と組織を同時に回収可能な症例は限られている。その点を考慮し、初年度に引き続き次年度も解析と並行し検体のサンプリングを精力的に遂行する予定である。我々は以前、制御性T細胞(Regulatory T cell:Treg)が自己反応性CD8+ T細胞を安定した不応答(アネルギー)状態に陥らせることにより長期の免疫寛容を成立させていること、またこれらの不応答T細胞が特徴的なフェノタイプ(CCR7+CTLA-4+)を持つことを報告した。近年、Tregによる抗腫瘍免疫応答抑制によりがん免疫療法の効果が十分に発揮されていないことが指摘されている。また、我々はすでにTreg存在下で誘導された自己(腫瘍)抗原特異的CD8+T細胞は細胞分裂を1度で停止することを健康人末梢血単核球(PBMC)を用いて見出している。中でも特にTregにより抑制された自己(腫瘍)抗原特異的CD8+T細胞の網羅的な遺伝子発現解析から、Treg存在下で誘導された自己(腫瘍)抗原特異的CD8+T細胞は、ナイーブT細胞マーカーを維持しつつ、免疫抑制因子を共発現する特徴的なフェノタイプを示すことを明らかにしている。本研究では、悪性黒色腫検体局所検体・末梢血を用いてフローサイトメーターで解析した。免疫チェックポイント阻害剤投与前後の検体は、投与後の組織回収が非常に困難であるため末梢血を用いて解析を行った。予後との相関に関しては現在もモニタリング中であるため今後引き続き経過を観察する。フローサイトメトリーでの解析と並行し、初年度に引き続き検体の回収を進める。また、免疫チェックポイント阻害剤治療を受けた患者検体の投与前後から悪性黒色腫局所(生検検体)および患者末梢血より単核球を分離・保存を行う。

予備的検討で生検検体によりフローサイトメトリー解析が可能であることは明らかにしている。保存された検体を用いて腫瘍抗原特異的CD8+T細胞のフェノタイプを前検討し、不応答性フェノタイプを持ったCD8+T細胞頻度と治療効果との相関を解析する。加えて、疲弊T細胞マーカー(PD-1、Tim-3、LAG3、TIGIT等)の発現、Fr. II活性化Tregの頻度とCD8+T細胞(不応答性vs活性化)の浸潤頻度も治療効果との関連を検討し、バイオマーカー同定、ひいては新規の標的分子の同定につなげる。28年度が最終年度であるため、記入しない。腫瘍免疫28年度が最終年度であるため、記入しない。