hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
悪性腫瘍に伴う高カルシウム血症への血管新生阻害剤TNP-470の応用に関する研究

細胞株OCC-1をヌードマウスの皮下に移植し,高Ca血症動物モデルを作製し,腫瘍の生着を認めてからTNP-470を投与する群(予防的投与群),高Ca血症が出現してから投与する群(治療的投与群)の2群に分けて経時的に体重,腫瘍体積,血清中の遊離イオンCaの濃度を測定し評価した.いずれの投与方法でも高Ca血症は抑制された.組織学的にはTNP-470投与群では腫瘍内部が壊死を示し,腫瘍体積の抑制,生存率の延長を認めた.3.各種血管新生阻害剤の破骨細胞形成系への影響血管新生阻害剤angiostatin,Cyclo,IP-10,Platelet Factor4に関して検討行ったが,破骨細胞性の形成を抑制しなかった.血管新生阻害作用を有するMMPs阻害剤MMI-166も同様に影響を与えなかった.この結果は,少なくとも破骨細胞形成においてTNP-470の破骨細胞形成抑制効果は血管新生抑制剤に共通の現象ではなく特異的な作用である可能性が示唆された.しかし,血管新生作用を有する結合組織増殖因子(CTGF)のアンチセンスオリゴをこの形成系に加えた場合,破骨細胞形成が抑制されたことから,今後検討を要すると考えられた.悪性腫瘍に伴う高カルシウム血症は患者のQOLや生存率を著しく低下させる大きな負の要因である.申請者は血管新生阻害剤であるTNP-470が血管新生阻害作用のみならず破骨細胞性骨吸収阻害作用を有することを明らかにし,前年度の研究では,悪性腫瘍に伴う高カルシウム血症モデル,およびPTHrPとIL-1により誘発した非担癌高カルシウム血症モデルに対してもTNP-470が治療的に有用であり,その抑制効果は血管新生阻害を介した抗腫瘍効果のみならず,直接的破骨細胞性骨吸収阻害作用によることが示唆された.今年度の研究ではTNP-470の骨吸収抑制機構について分子レベルでの解析を行った.各種血管新生阻害因子に関して検討したが,少なくとも破骨細胞形成において,TNP-470の破骨細胞形成抑制効果は血管新生阻害剤に共通の現象ではなく,特異的な作用である可能性が示唆された.2.in vitroにおけるTNP-470の破骨細胞性骨吸収抑制機構の解析TNP-470はVitD3やPTHrP存在下における破骨細胞形成を抑制したが,破骨細胞の吸収活性には影響しないことが分かった.また,TNP-470はRANKL, M-CSF,およびOPGの発現にはm-RNAレベルにおいては影響しなかった.3.TNP-470の細胞障害性に関する検討TNP-470の各種細胞への直接的細胞増殖抑制効果・および細胞障害性を検討した結果,TNP-470は10^3ng/ml以上の濃度において細胞増殖抑制効果および細胞障害性を認めたが,この濃度は破骨細胞形成を抑制する濃度より高く,直接的細胞障害によるものではないことが示唆された.以上より,血管新生阻害作用のみならず破骨細胞性骨吸収抑制作用を有するTNP-470は癌治療のみならず骨代謝疾患に対しても有効であることが示唆された.
世界各国の国立公園制度に関する比較研究

1.熱帯諸国では、保護地域管理に際して自然資源に依存して生活する地域住民に起因する脅威が存在する。2.地域開発視点の必要性:熱帯諸国66カ国のデータを利用した多重回帰分析の結果、保護地域の面積を確保するためには、農山村地域の経済水準を向上させることが必要であることが示唆された。3.住民参加アプローチ:世界中で試みられてきた地域開発プロジェクトの教訓より、住民参加アプローチが地域開発の成否の鍵を握ることが示されている。4.保護地域管理上の諸問題:(1)バッファーゾーンが有効に機能している事例はほとんどない(2)効果的な保護地域管理のためには保護地域外部の資源管理が有効であるが、対象地の地形・生態・気候条件により、適用可能な技術は限定される。その場合、土着の技術を適用することが考えられるが、実際の活用例は殆ど見られない。(3)観光事業による収益が保護地域の管理に役立てられている事例はごく少ない。ましてや、地域住民に還元されているケースは殆どない。(4)保護地域の設定への補償として道路建設を望む人々は多いが道路建設の後、地域の物価が急騰した事例がみられる。また、道路によって外部からの入植者が増加し、或いは保護地域へのアクセスが良くなったため保護地域が侵犯される事例も見られる。(5)住民参加には5つの局面があるが、これら全ての局面にわたって住民の参加が保証されているケースはない。住民参加アプローチが取られている場合でも、結局の所地域住民は受動的な受益者と位置づけられているにすぎない。5.今後の課題:(1)住民参加アプローチの採られている事例のフィールドを主体とした調査の実施。(2)人類学的保護地域、及び飛び地の認められている保護地域管理に関する調査の実施。世界の保護地域は、国際自然保護連合(IUCN)によって次に示す類型化がなされている:(1)原生自然保護区、(2)国立公園、(3)天然記念物等、(4)管理自然保護区/野生動物サンクチュアリ、(5)保護景観等、(6)資源保護区、(7)人類学的保護区等、(8)多目的管理区等、(9)バイオスフェア保護区、(10)世界遺産区。このうち、(9)(10)は国際的な計画により設定され、他の類型と重複する場合がある。また、(1)(5)はIUCN等によりモニタリングがなされており、設定の箇所数や面積を知ることが出来る。1990年における(1)(5)類型までの設定箇所は6940、うち42%が(4)、24%が(5)、20%が(2)である。一方、設定総面積は約651万平方キロメートルで、うち47%が(2)、30%が(4)、12%が(5)となっている。これは、一カ所当たりの平均面積が、(2)の国立公園は2221平方キロメートルと飛び抜けて大きいからである。さて、本研究計画の中心的課題である土地の収用実態の把握は、全ての保護区の設定過程で避けて通れない重要な課題である。しかし、土地の収用に関する資料の収集は非常に困難であり、来年度も確実に入手できるという保証はない。そこで、もし資料入手が不可能な場合の次善の策を講ずる必要がある。(2)においてはAnthropological Zoneにおいて、また(7)においては全面的に、先住民の居住が認められていることに着目するのである。すなわち、この2類型の保護区が、それぞれの国で具体的にどのように実施されているのかを把握することにより、先住民と保護区との望ましい関係を考察することとしたい。本研究の結果は以下のようにまとめることができる。(1)地域開発視点の必要性:

熱帯諸国66カ国のデータを利用した多重回帰分析の結果、保護地域の面積を確保するためには、農山村地域の経済水準を向上させることが必要であることが示唆された。(2)住民参加アプローチ:世界中で試みられてきた地域開発プロジェクトの教訓より、住民参加アプローチが地域開発の成否の鍵を握ることが示されている。(3)保護地域管理上の諸問題:(1)バッファーゾーンが有効に機能している事例はほとんどない。(2)効果的な保護地域管理のためには保護地域外部の資源管理が有効であるが、対象地の地形・生態・機構条件により、適用可能な技術は限定される。その場合、土着の技術を適用することが考えられるが、実際の活用例は殆ど見られない。(3)観光事業による収益が保護地域の管理に役立てられている事例はごく少ない。ましてや、地域住民に還元されているケースは殆ど無い。(4)保護地域の設定への補償として道路建設を望む人々は多いが、道路建設の後、地域の物価が急騰した事例がみられる。また、道路によって外部からの入植者が増加し、或いは保護地域へのアクセスが良くなったため保護地域が侵犯される事例も見られる。(5)住民参加には5つの局面があるが、これら全ての局面にわたって住民の参加が保証されているケースは少ない。住民参加アプローチが取られている場合でも、結局のところ地域住民は受動的な受益者と位置づけられているにすぎない。(4)今後の課題:(1)住民参加アプローチの採られている事例のフィールドを主体とした調査の実施。(2)人類学的保護地域、及び飛び地の認められている保護地域管理に関する調査の実施。
結晶成長の可視化と教材化に関する研究

I結晶成長に関する実験の検討(1)人工雪実験におけるペットボトル(500ml)内部の温度分布の測定の結果,樹枝状結晶成長の最適温度-15°Cの等温線が上に凸の曲面となり,数学者の計算によるモデルと一致した.また,樹枝状結晶の約510mm上部にしばしば針状結晶の成長を確認できることを追試で確認された.(2)過冷却水の凍結実験については,甘味料入り炭酸飲料を使用すると約-4.0°Cで同時多発的な核形成による結晶成長が見られるが,無糖の炭酸水で行うと,約-1.0°Cの試料で同じく多発的な結晶成長の様子が観察できる.これは凝固点降下が有糖の場合よりも小さいためと考えられる.(3)市販の透明マニュキュア液,光硬化剤およびジクロロエタンで作成したレプリカ液を用いて雪結晶レプリカを作成して比較したところ,アクリル材をジクロロエタンで溶解したレプリカ液を使って,OHPシートに雪結晶を採取し固定した後,切断して観察シートを作る方法が簡単かつ安価で教材に適することが判明した.II可視化と教材化(1)氷薄片や過冷却水からの結晶成長の観察には,試料の2枚の偏光板で挟んで観察すると,成長とともに色彩(干渉色)が生まれるため,結晶成長の観察方法として効果的である.(2)1枚の偏光板の代わりにパソコンの液晶画面から出る偏光を利用すると,非常にインパクトのある演示実験となり,授業や科学館講座などのイベントの際に有効であることが実証できた.(3)水以外の化合物で過冷却からの固相への変化を観察する実験を行った結果,直径3cmのガラス瓶で酢酸ナトリウムの凝固を観察するものが,熱の発生を触感で体験できるので,教育的効果が高いことがわかった.雪氷実験を中心とした授業プランにおいて,併用すると非常に効果的である.(4)氷晶の観察では従来,梱包用エアキャップをつぶして断熱膨張を起こして核形成を促す方法が一般的であったが,本研究では,胡椒挽きにドライアイスの小片を入れて粉末を落とす工夫をした.これは人工雨(雪)形成の実際の方法と同じであり,安全性を考慮にいれた教室実験として最適であることがわかった.III今後に向けて過冷却水の凍結の際の結晶成長の研究を進める中で,海水の「泡」の研究者と研究協議を行った(新潟).今後,発泡などの核形成のきっかけについてさらに研究を進めたい.I結晶成長に関する実験の検討(1)人工雪実験におけるペットボトル(500ml)内部の温度分布の測定の結果,樹枝状結晶成長の最適温度-15°Cの等温線が上に凸の曲面となり,数学者の計算によるモデルと一致した.また,樹枝状結晶の約510mm上部にしばしば針状結晶の成長を確認できることを追試で確認された.(2)過冷却水の凍結実験については,甘味料入り炭酸飲料を使用すると約-4.0°Cで同時多発的な核形成による結晶成長が見られるが,無糖の炭酸水で行うと,約-1.0°Cの試料で同じく多発的な結晶成長の様子が観察できる.これは凝固点降下が有糖の場合よりも小さいためと考えられる.(3)市販の透明マニュキュア液,光硬化剤およびジクロロエタンで作成したレプリカ液を用いて雪結晶レプリカを作成して比較したところ,アクリル材をジクロロエタンで溶解したレプリカ液を使って,OHPシートに雪結晶を採取し固定した後,切断して観察シートを作る方法が簡単かつ安価で教材に適することが判明した.II可視化と教材化(1)氷薄片や過冷却水からの結晶成長の観察には,試料の2枚の偏光板で挟んで観察すると,成長とともに色彩(干渉色)が生まれるため,結晶成長の観察方法として効果的である.(2)1枚の偏光板の代わりにパソコンの液晶画面から出る偏光を利用すると,非常にインパクトのある演示実験となり,授業や科学館講座などのイベントの際に有効であることが実証できた.(3)水以外の化合物で過冷却からの固相への変化を観察する実験を行った結果,直径3cmのガラス瓶で酢酸ナトリウムの凝固を観察するものが,熱の発生を触感で体験できるので,教育的効果が高いことがわかった.雪氷実験を中心とした授業プランにおいて,併用すると非常に効果的である.(4)氷晶の観察では従来,梱包用エアキャップをつぶして断熱膨張を起こして核形成を促す方法が一般的であったが,本研究では,胡椒挽きにドライアイスの小片を入れて粉末を落とす工夫をした.これは人工雨(雪)形成の実際の方法と同じであり,安全性を考慮にいれた教室実験として最適であることがわかった.III今後に向けて過冷却水の凍結の際の結晶成長の研究を進める中で,海水の「泡」の研究者と研究協議を行った(新潟).今後,発泡などの核形成のきっかけについてさらに研究を進めたい.
文脈に即した表情知覚が笑顔の信頼性判断に及ぼす影響の検討：日英比較研究

欧米人と比べて日本人は情報を処理する際に文脈を極めて重視するという文化的特徴を持つことから,本研究では文化間研究の違いを生み出す理由として実験で用いられた笑顔の文脈情報に着目する。従来の実験で用いられてきた文脈情報のない笑顔は,文脈を重視する日本人観察者によって「不自然な笑顔」と解釈されたと考えられる。そこで本研究では,文脈の有無が笑顔の解釈に与える影響に関する文化差を示し,「自然な笑顔」と解釈された場合には日本人観察者も欧米研究と同様に笑顔に対して信頼行動を選択することを示す。本研究を通じて,文脈が引き起こす表情の解釈が観察者の行動に影響することを文化間の比較から明らかにする。
シロイヌナズナにおけるケミカルフェノームと新規表現型スクリーニング系の開発

化合物等を植物体に与えた場合に見られる表現型を多検体同時に探索するために、植物の初期の育成段階である種子の発芽からその後の幼苗育成に注目した。マルチ・タイター・プレート内で発芽育成させた様子を経時的にスキャナーで取り込んで観察することにより、ハイスループットな化合物応答検定試験を確立することができた。また、この手法を実際に遺伝子破壊型変異体リソースであるトランスポゾンタグラインに適用することで、植物ホルモンABAに高感受性を示す新規変異体を得ることができた。モデル植物シロイヌナズナは、遺伝子への挿入変異による変異体リソースが作成できるため、全ての遺伝子に関して一遺伝子破壊系統を作出することが可能である。このことはシロイヌナズナが多細胞生物のモデル生物系の中でSaturation Mutagenesisが可能な特異の系であると捉えることができる。一方、これまでに形態異常を指標とした網羅的な表現型観察が試みられた例はあるが、目視で見付けることが難しい表現型(Non-visible Phenotypes)まで包括的に探索した表現型解析の研究例はない。そこで本研究課題では、シロイヌナズナの遺伝子破壊型変異系統を用いたフェノーム解析の発展型として、目視により見付けることが難しい条件的表現型(Conditional Phenotypes)を効率的に調べる方法を確立することを目的とした。各遺伝子変異体の生育環境条件によって現れる表現型の探索と変異体ラインの化合物添加による新規表現型スクリーニング系の開発を目指している。モデル植物シロイヌナズナは変異体リソースが充実したことにより、全ての遺伝子に関して一遺伝子破壊系統を確立することが可能となりつつある。このことによりシロイヌナズナは変異体を用いて全遺伝子の機能を調べること(saturation mutagenesis)が実現可能な、多細胞生物では唯一のモデル生物種であると捉えることができる。これまでに数千の遺伝子の変異体について形態異常を指標とした網羅的な表現型観察は試みられているが、目視で見付けることが難しい表現型を包括的に探索している例はほとんどない。そこで本研究課題では、シロイヌナズナの遺伝子破壊型変異系統を用いたフェノーム解析の一端として、化合物等を用いた包括的な表現型解析を行うことを目的とした。これまでに、化合物等を植物体に与えた場合に見られる表現型を網羅的に探索するために、ハイスループットな化合物応答試験の構築に向けた検定実験を行った。対象としたのは植物の初期の育成段階である種子からの発芽とその後の幼苗育成に与える影響である。予備実験の結果、マルチタイタープレートを利用して、培地によらずに直接シロイヌナズナの種子の発芽と幼苗育成の時期における育成状態を観ることが可能であることが分かった。マルチタイタープレートでの生育の様子はスキャナーで取り込み、デジタル画像としてデータ化を行っている。遺伝子破壊型変異ラインを系統的に利用する試みとして、植物のストレス応答性に関わる植物ホルモンであるABAを用いて0.5μMから2.0μMまでの範囲を指標として生育状況の観察を、また植物へ与えるストレスとして代表的なNaClを用いて50mMから150mMの範囲を指標として生育状況の観容を始めている。モデル植物シロイヌナズナは変異体リソースが充実したことにより、全ての遺伝子に関して一遺伝子破壊系統を確立すること(saturation mutagenesis)が可能となりつつある。このことによりシロイヌナズナは変異体を用いて全遺伝子の機能解析が実現可能な、多細胞生物では非常に特異なモデル生物種であると捉えることができる。これまでに様々な変異体リソースにおいて形態異常を指標とした網羅的な表現型観察が試みられた例はあるが、目視で見付けることが難しい表現型(non-visible phe notypes)まで包括的に探索している研究例はない。そこで本研究課題では、シロイヌナズナの遺伝子破壊型変異系統を用いたフェノーム解析の一端として、化合物等を用いて目視で見付けることが難しい条件的表現型解析を行うことを目的とした。これまでに、化合物等を植物体に与えた場合に見られる表現型を網羅的に探索するために、ハイスループットな化合物応答試験の構築に向けた検定実験を行ってきた。マルチタイタープレートでの生育の様子はスキャナーで取り込み、デジタル画像として保存している。また、画像処理作業によってプレートの各ウェル画像を切り取り、植物が生長していることを示す緑の部分の割合を抽出することによって生育状態の定量的データ化を図っている。モデル植物シロイヌナズナは遺伝子への挿入変異による変異体リソースが作成できることから、全ての遺伝子に関して一遺伝子破壊系統を確立すること(saturation mutagenesis)が可能である。

このことはシロイヌナズナが、変異体を用いて全遺伝子の機能解析が実現可能な多細胞生物であり、ゲノム的な解析に非常に有利なモデル生物種であると捉えることができる。一方、これまでに形態異常を指標とした網羅的な表現型観察が試みられた例はあるが、目視で見付けることが難しい表現型(non-visible phenotypes)まで包括的に探索した表現型解析の研究例はない。そこで本研究課題では、シロイヌナズナの遺伝子破壊型変異系統を用いたフェノーム解析の一端として、化合物等を与えた条件で育成させることで、目視により見付けることが難しい条件的表現型(conditional phenotypes)を効率的に調べることを目的とした。各遺伝子変異体の生育環境条件によって現れる表現型の探索と変異体ラインの化合物添加による新規表現型スクリーニング系の開発を目指している。これまでに、化合物等を植物体に与えた場合に見られる表現型を多検体同時に探索するために、ハイスループットな化合物応答試験の構築に向けた予備的な検定実験を進めてきた。植物の初期の育成段階である種子の発芽からその後の幼苗育成に関して、マルチタイタープレートにおける生育の様子をスキャナーで取り込み、デジタル画像として保存する。その後、プレートの各ウェル画像を切り取り、画像処理作業によって生育状況の定量的データ化を可能にした。トランスポゾンタグラインを用いて、植物ホルモンABAや塩ストレス(NaCl)存在下での生育状況のデータ取得を行っている。モデル植物シロイヌナズナは遺伝子への挿入変異による変異体リソースが作成できることから、全ての遺伝子に関して遺伝子破壊系統を確立すること(saturation mutagenesis)が可能である。このことはシロイヌナズナが、変異体を用いることで全遺伝子の機能解析が実現可能な多細胞生物であり、ゲノム的な解析に非常に有利なモデル生物種であると捉えることができる。一方、変異体リソースを用いたこれまでの研究において形態異常を指標とした網羅的な表現型観察が試みられた例はあるが、目視で見付けることが難しい表現型(non-visible phenotypes)まで包括的に探索した表現型解析の研究例はない。そこで本研究課題では、シロイヌナズナの遺伝子破壊型変異系統を用いたフェノーム解析の新たな試みとして、化合物等を与えた条件で育成させることで環境条件依存的に観察され得る表現型(conditional phenotypes)を効率的に調べる方法を確立することを目的とした。各遺伝子変異体の生育環境条件によって現れる表現型の探索と、変異体ラインの化合物添加による新規表現型スクリーニング系の開発を目指した。化合物等を植物体に与えた場合に見られる表現型を多検体同時に探索するために、植物の初期の育成段階である種子の発芽からその後の幼苗育成に注目した。マルチタイタープレート内で発芽育成させた様子を経時的にスキャナーで取り込んで観察することにより、ハイスループットな化合物応答検定試験を確立することができた。
エキシマー蛍光誘導体化法の確立と、生体ポリアミン類のHPLC超高感度定量への適用

ポリアミン類は同一分子内に24個のアミノ基を有しており、これをPSEと1OO°Cで20分間加熱することにより、各ポリアミンに対応するジ-テトラピレン誘導体が生成する。これらは、分子内エキシマー蛍光(450-520nm)を発し、PSE自身やその加水分解物からモノマー蛍光あるいはモノアミン類のモノピレン誘導体からの蛍光(360-520nm)と明瞭に識別される。これにより、生体や環境中に多量存在するモノアミン類の妨害を受けることなく、ポリアミン類が高感度かつ高選択的に定量することが可能になった。ポリアミン類(プトレシン(Put)、カダベリン(Cad)、スペルミジン(Spd)、スペルミン(Spm)およびスペルミン)からのPSE誘導体は、直線グラジエント溶離-逆相ODSカラムで分離検出された。検出限度(S/N=3,fmol/oncolumn)は、1.0(Put)、1.0(Cad)、4.7(Spd)、7.7(Spm)であった。さらに、誘導体の構造がLC-MSにより確認され、またそのエキシマー蛍光の発光特性が蛍光分光光度計や時間分解蛍光法などにより調べられた。本法は、新規な誘導体化法で、複数個の他の官能基を有する生体成分にも適用できる。「目的」従来の蛍光誘導体化にエキシマー蛍光現象を導入することに基づく、エキシマー蛍光誘導体化法という新規方法論を確立した。本法を、従来法では測定困難とされている生体ポリアミン類のHPLC超微量定量法に適用し、エキシマー蛍光誘導体化法の有効性を立証した。ポリアミン類のエキシマー蛍光誘導体化試薬として1-ピレン酪酸スクシンイミジルエステル(PSE)を用いた。「実験」ポリアミン(カダベリン、プトレシン、スペルミジン、スペルミンなど)標準水溶液50μLに、PSEのジメチルスルホキシド溶液50μLを添加し、50°Cで60分間加熱する。この反応液を逆相系HPLCに注入(20μL)し、ポリアミン類を分離し、エキシマー蛍光(ex.350nm;em.470nm)検出する。「結果」本法の検出限度はすべてのポリアミン類について、10-50fmol/20μL(注入量)であり、従来法より高感度であった。また、検量線は注入量当たり、少なくとも10nmolまで良好な直線性(r>0.999)を示した。本法により、過剰に添加された試薬あるいは生体に多く存在するモノアミン類からの蛍光(モノマー蛍光)に妨害を受けることなく、選択的にポリアミン類の高感度HPLC定量が可能となった。現在、生体実試料(ヒト血液や尿)中のポリアミン定量に適用中である。また、生じた誘導体はポリアミンに2個のピレン環が導入されたものであることを、LC-MSにより確認した。本法は、エキシマー現象を蛍光誘導体化に適用した初めての方法論で、同一分子内に複数個の官能器を有する化合物の高選択・高感度分析に極めて有効である。平成10年度に設定した、ポリアミン類の基本的なHPLC・エキシマー蛍光検出法の有効性を実証するために次の実験を行った。(1)血液あるいは尿中ポリアミン類計測への適用:血液あるいは尿に、ピレン試薬(PSA)のDMSO溶液を添加し、50°C、60分間加温する。反応液をアセトニトリルで100倍希釈し、通常の蛍光分光光度計でエキシマー蛍光(Ex.370nm;Em.479nm)を観測する。また、反応液の一部を逆相HPLCに付し、ポリアミンを分離定量する。(2)癌診断への有用性の検討:癌患者の血液あるいは尿中ポリアミンを、上記操作法で計測した。血液、尿いずれの場合も、健常者に比べ、癌患者で有意に高値を示すことを確認した。本法は、操作が極めて簡便で、癌診断のマススクリーニングに適していた。(3)蛍光生成物の構造及びそのエキシマー蛍光特性:ポリアミンの数種を代表に、それらの反応生成物を単離し、NMR、MSなどで構造を決定した。

また、LC-MSにより、他のポリアミン類についてもそれらの構造を明かにした。また、反応生成物のエキシマー蛍光特性について、各種の溶媒中における蛍光波長、蛍光寿命などを測定した。(4)新規エキシマー蛍光誘導体化試薬の合成と応用:PSAのスペーサーの数やアミノ基に反応する官能基を変化させた種々の新規エキシマー蛍光誘導体化試薬を合成した。また、合成した試薬類を、分子内のアミノ基の位置との相関を調べることにより、試薬の特異性について調べた。(5)医薬品分析への適用:血液中トリエンチン(銅代謝異常症患者に対する医薬品)に本法を適用し、簡便かつ迅速な同定量法を確立した。
探偵物語・人類学・捜査科学

本年度は、研究代表者の所属研究機関が、代表者の海外出張をなかなか許可しようとしないという問題が勃発し、海外における文献蒐集などを必要とする学術研究を行うには大変厳しい環境になってきた。とはいうものの、日本国内でできることを中心にして、研究はそれなりにはかどることができた。本研究プロジェクト「探偵物語・人類学・捜査科学--『法と文学』の接点に関する一考察」において、本年度は、前年度の研究成果を踏まえつつ、それに一層磨きをかけることを第一の目的としてきた。前年度中に得た結論を論文として形にし、残る課題の解明に努めつつ、新たに出てきた文献や、残る課題の解明に役立つと思われる文献の収集・解読に努めてきた。とりわけロンブローゾの学説を中心に犯罪人類学を検証して、またシャーロック・ホームズに焦点を絞って、コナン・ドイルの小説が、指紋という一科学捜査技法の正当化に果たした役割を検討することをしてきたので、この研究をさらに磨くよう心がけた。第二は、研究成果そのもの、または今後の課題を明らかにしていくことを目指して、二つの研究論文の執筆に専念してきた。一つは、犯罪人類学の小説化の理論的再構成を論証するものであり、二つは、これまでの英米圏の研究成果を踏まえつつ、小説という言説空間における犯罪捜査技法の正当化について考察を加え、研究成果を公にするものである。査読にはそれなりの時間は必要であるが、いずれは出版される運びとなろう。19世紀の英米両国に、探偵物語という新種の文学ジャンルが誕生した。探偵物語という新しい言説空間では、同時代の犯罪人類学の洞察がしばしば駆使され、また同時代に発明されつつあった犯罪捜査技法という新しい科学的技法がたびたび用いられていた。従来、文学、人類学、そして犯罪学における動きがそれぞれ独立して発展してきたかのように看做されてきたが、本研究プロジェクトでは、それぞれが相互に作用してきたこと、そしてその相互作用の結果、犯罪人類学や近代的な犯罪捜査技法が、探偵物語によって、客観的で科学的な根拠に基づくものとして正当化されたことを明らかにすることを目的としている。本年度は、とりわけロンブローゾの犯罪人類学の検討に精魂を傾けてきた。ロンブローゾが活躍していた当時のイタリアでは、イタリアを南部と北部とに峻別して、この地理的区別とは人種的区分にも相当する、という議論が行われていた。南部という地域には、北部とは異なる南部人種が存在するという認識に立って、犯罪を説明しようとする傾向もあった。北部人種を優秀人種とし、南部人種を何かしらの意味で劣っている(文化的に劣っている、あるいは遺伝的に劣っている)ことが、犯罪の発生と深い関係がある、という。以上の認識に立って、ロンブローゾは、近代科学をもって、「犯罪」の類型化ではなく、むしろ「人間」の類型化に躍起になっていた。換言すれば、危険な「人種」を確認することにより、犯罪の取締に資するという考え方を打ち出していた。この犯罪人類学はやがて小説家の言説にも取り入れられるようになり、定着していった。小説家は同時に様々な科学捜査を考案している。近代日本の人類学にも影響を色濃く及ぼしてきたE・S・モースも注目していた指紋が好例であろう。したがって、以上のロンブローゾに関する考察に加え、探偵物語における科学捜査(嘘発見器や指紋など)の登場を確認する作業にも着手した。
神経ペプチド含有シナプス小胞の単離とペプチド遊離機構の解明

ペプチドの遊離機構はカテコルアミンの場合といくつかの点で異なっていることが観察されているのみでほとんど解明されてない。サブスタンスP(SP)は、侵害情報を伝達するペプチド性神経伝達物質であり、末梢の疼痛刺激により、脊髄後角において一次知覚神経終末部から遊離される。本研究では、SPの遊離機構解明の目的で、一次知覚神経に着目し成熟ラット脊髄後根神経節(DRG)細胞の初代培養を行い、次の成果を得た。1.培養DRG細胞は神経成長因子(NGF)非存在下において生存可能であったが、細胞内SP出現にはNGFが必要であった。SP前駆体プレプロタキキニン(PPT)mRNAの3つのアイソフォーム(α-、β-、γ-)の内、培養DRG細胞にはγ-PPTmRNAが一番多く、次いでβ-PPTmRNAが存在し、α-PPTmRNAは検出できないほど少量であった。NGFによりβ、γ-PPTmRNA量の増加が観察された。従って、NGFは転写を促進することによりSPの生合成を誘発していることがわかった。2.培養DRG細胞に炎症に関与するサイトカインであるインターロイキン-1β(IL-1β)を添加すると、SP遊離誘発が観察された。IL-1βのSP遊離作用はIL-1受容体を介し、Ca2+依存的であった。また、IL-1βの作用はシクロオキシゲナーゼ(COX)阻害剤、特に誘導性COX-2合成と活性を阻害する薬物(NS-398、dexamethasone)で有意に抑制された。さらにIL-1βによりCOX-1mRNAは変化せず、COX-2mRNAが誘導された。この結果はIL-1βによる炎症時痛覚伝達異常を説明しうる直接的作用と考えられ、現在投稿中である。今後、SP遊離制御機構と痛覚との関連性についてさらに詳細に検討する予定である。カテコルアミンの遊離調節機構は飛躍的に解明されつつあるが、ペプチドの遊離機構はカテコルアミンの遊離機構とはいくつかの点で異なっていることが観察されているのみでほとんど解明されてないといえる。本研究では、SPの遊離機構解明の目的で、一次知覚神経に着目し脊髄後根神経節(DRG)細胞の初代培養を行った。成熟ラットからDRGを単離し、酵素処理することにより分散させ、初代培養細胞を作成した。培養DRG細胞においてSPは、高濃度カリウム、カプサイシン刺激によって、カルシウム依存性に遊離した。このSP遊離は神経成長因子(NGF)非存在下では消失した。これは細胞内のSP含量が減少したためであった。すなわち、成熟ラットからの培養DRG細胞はNGF非存在下でも生存可能であったが、SP生合成はNGF依存的であった。NGF以外のニューロトロフィン(ニューロトロフィン3、脳由来神経栄養因子)はSPの生合成を誘発しなかった。培養DRG細胞からRNAを抽出し、SP前駆体(PPT)mRNAの解析を行った。その結果、培養DRG細胞にはPPTmRNAの3つのアイソフォーム(α-、β-、γ-)の内、γ-PPTmRNAが一番多く、次いでβ-PPTmRNAが存在し、α-PPTmRNAは検出できないほど少量であった。NGFによりPPTmRNA量の増加が観察された。

ペプチドはカテコルアミンと異なる種類のシナプス小胞に蓄えられており、異なる過程を経て遊離されると考えられる。本研究では、侵害情報を伝達するペプチド性神経伝達物質であり、末梢の疼痛刺激により脊髄後角において一次知覚神経終末部から遊離されるサブスタンスP(SP)と一次知覚神経に着目し、ペプチド遊離過程に携わる機構の解明を試みた。一次知覚神経細胞体の存在するラット脊髄後根神経節(DRG)細胞の初代培養を行い、前年度にSP生合成について培養DRG細胞の性質を明らかにし、生理的なペプチド遊離機構を有することを確認した。この標本を用いて平成10年度には次の成果を得た。1.培養DRG細胞に炎症に関与するサイトカインであるインターロイキン-1β(IL-1β)を添加すると、SP遊離誘発が観察された。この結果は炎症時痛覚伝達異常を説明しうるペプチド遊離調節機構への直接的作用と考えられそのメカニズムの検討を行った。2. IL-1βのSP遊離作用はIL-1受容体を介し、Ca^<2+>依存的であった。また、IL-1βの作用はシクロオキシゲナーゼ(COX)阻害剤(アスピリン、インドメタシン)、特に2つのCOXアイソフォームの内、誘導性COX-2合成と活性を阻害する薬物(NS-398、デキサメサゾン)で有意に抑制された。さらに培養DRG細胞においてIL-1βによりCOX-1mRNAは変化せず、COX-2mRNAが誘導された。従ってIL-1βの作用にはCOX-2を介したプロスタノイドシステムが関与していることがわかった。3.これらのIL-1βの直接的ペプチド遊離誘発作用ははじめての知見であり、現在投稿中である。今後、SP遊離制御機構と痛覚伝達異常との関連性についてさらに詳細に検討する予定である。
敦煌・四川地域の唐代千手千眼観世音菩薩像の研究

中国では唐代の7世紀以降に千手観音が信仰されるようになり、以降現代に至るまで信仰と造像が盛んに行われてきた。唐代の現存作例は特に敦煌と四川に集中しているが、その多くは観音の周囲を雲に乗った眷属衆が取り囲むという、『千手経』を主たる依拠経典とした群像形式を採る。本研究では、この群像形式が流行した背景を明らかにするために、四川と敦煌に残る唐代の現存作例、ならびに敦煌莫高窟から発見された敦煌文書中の千手観音の関連文献を分析した。その結果、この群像形式が、『千手経』の称揚する千手観音の陀羅尼、「大悲呪」への信仰を中心とした千手観音信仰と結びついて成立、普及、変遷していった様子が明らかになった。中国に現存する唐代(618907)の千手観音像は、その大半が観音を中心とした群像形式をとる。本研究は、四川と敦煌(敦煌将来画を含む)に集中する実作例、および敦煌文書の調査と分析を通して、群像形式が千手観音の関わる儀式との関連で発達した可能性、そしてこの形式が唐の領土内で広く普及するに至った理由をあきらかにすることを目的としている。平成27年度は、夏季に中国四川省内の摩崖造像、春季に英国ロンドンの大英博物館・大英図書館にて実作例と文書の調査を行った。四川の調査では実施計画の時点で、現時点でまだ現地調査を行っていなかった6作例の調査を予定していた。しかし、文献を精査した結果さらに5作例の所在を突き止め、また現地でも新たに1作例を発見したため、合わせて12件の調査を行うことができた。ロンドンでは、中国書道史を専門とする徳泉さち氏に協力をあおぎ、大英図書館にて文書17件、大英博物館にて敦煌将来絵画8件を調査した。絵画については写真撮影も行ったが、公表されている写真をもとに事前に描き起こし図を作成して不明点について現地で確認し、現地で描き込むという方法をとることで、図像の細部までを確認し得た。文書調査では、千手観音の陀羅尼である「大悲呪」を用いる儀式の手控えを実見することができた。現在、上記調査の結果をデータベースへ入力する作業を進行中である。また、平成二十八年度に調査結果を踏まえた、千手観音像と儀式の関連性に関する口頭発表を行うことが決定しており、そのための論文も執筆済みである。文書の調査結果についても別媒体にて論文を発表する予定である。四川の調査では、当初予定していた6件に加えて更に6件、唐代の作例が現存することが確認でき、計12件の作例について現地調査を行うことができた。また、四川の千手観音像としては最も早い部類に入る8世紀半ばに造られた大土+更子摩崖造像を現地で確認することができた。この作例は、隣接する龕に天宝5年(746)の銘文が残るが、これまで調査報告に記述されているのみで写真は公開されていなかったため、作例を実験することにより、その図像が群像形式に先立つ単体像であること、またこれまで知られていた8世紀初頭の作例とも共通点が多いことを確認できたことの意義は大きかった。また、大英図書館での調査で実見した、「大悲呪」を用いる儀式の手控えについては、帰国後この文書について調べた結果、ほぼ同内容の敦煌文書がフランス、北京、台湾などの国家図書館に所蔵されていることが分かり、ある程度の流行を見た儀式であるらしいことが確認できた。この文書について引き続き調べて、大体の流行年代を顕かにすることで、同時代の美術作例との比較分析が可能になると考えている。更に、文書について徳泉氏の所見を得たことで、文書の内容、および書体の両方から年代比定を行うことが可能となった。以上の通り、当初期待していた以上の成果を得ることができたため、当初の計画以上に研究が進展していると判断した。中国に現存する唐代の千手観音像は、その大半が観音を中心とした群像形式をとる。本研究は、四川と敦煌に集中する造形作品(絵画および石彫)、および敦煌文書の調査と分析を通して、群像形式が千手観音の関わる儀式との関連で発達した可能性、そしてこの形式が唐の領土内で広く普及するに至った理由を探ることを目的としている。平成28年度は、夏季に中国甘粛省の敦煌莫高窟、ならびに瓜州楡林窟で唐から五代にかけての千手観音の壁画を調査した。また春季にはフランス、パリの国立図書館、ならびにギメ東洋美術館にて文書と絵画作品の調査を行った。敦煌の調査では莫高窟にて唐代の作例が残る14、144、148、115、358、386、361窟計7窟を、楡林窟にて五代から西夏にかけての作例が残る3、35、26窟、合わせて9窟を調査し得た。パリの調査では、前年度に引き続き、中国書道史を専門とする徳泉さち氏に協力をあおぎ、国立図書館にて唐から宋代にかけての文書11件、ギメ東洋美術館にて唐代の敦煌将来絵画2件を調査した。文書調査は前年度に大英図書館で行った調査の成果を踏まえて行った。

また、6月には国際学会AAS in Asiaにて唐から宋にかけての千手観音像の図像と信仰の変遷について口頭発表(英語)を行った他、四川の作例については中国で出版された研究書へ論文(中国語)を寄稿し、前年度英国で行った敦煌文書の調査結果については国内の学術誌へ論文を投稿した。敦煌の調査では当初、申請が全て通らないことを予測していたが予想に反して希望した窟を全て実見することができた。特に、図録には掲載されていない莫高窟の115、386窟、ならびに楡林窟の35窟、そして群像を構成する尊像毎に尊名を記す銘文が付随するものの図版では詳細が確認できない楡林窟の36窟などを調査し得たことの意義は大きかった。ただし、これらの窟を調査するのは今回が初回となり各窟に十分な時間を割けなかったため、今回作成したノートをもとに、29年度も引き続き調査を行いたい。また、フランス国立図書館では前年度の大英図書館調査の結果を踏まえて調査を行った。その結果、唐代の敦煌文書に見る限り、千手観音の主要経典たる『千臂経』と『千手経』が共に重視されていたらしいこと、また文書の年代が下るにつれて陀羅尼のみを抜粋して他の陀羅尼と並記するなど、明らかに陀羅尼自体を重視する傾向が見られることを確認し得た。前者は群像形式の千手観音像の構成を考える上で重要な所見であり、また後者は後世に千手観音が様々な儀式の一部に取り込まれて行く過程と結びつく現象として注目に値する。更に、書道史を専門とする徳泉さち氏の所見を得たことで、文書の内容、および書体の両方から年代比定を行うことが可能となった。中国に現存する唐代の千手観音像は、その大半が観音を中心とした群像形式をとるが、その内容、形式は時代に応じて微妙に変化する。本研究は、四川と敦煌に集中する造形作品(絵画および石彫)、および敦煌文書の中に残る千手観音関連の経典や儀軌の調査と分析を通して、群像形式が千手観音の関わる儀式との関連で発達した可能性、そしてこの形式が唐の領土内で広く普及するに至った理由を探ることを目的としている。平成29年度は、11月に中国甘粛省の敦煌莫高窟、ならびに瓜州楡林窟で唐から五代にかけて描かれたとされる千手観音の壁画を実地に調査した。また3月にはインドのニューデリー国立博物館にて絵画作品の調査を行った。敦煌の調査では前年度(平成27年)の調査結果も踏まえながら、莫高窟にて唐代から北宋にかけての作例が残る14、115、141、176、292、335、358、380、470窟計9窟を、楡林窟にて五代から西夏にかけての作例が残る3、35、36窟、3窟計3窟を調査し、スケッチと文章によって、結果を記録した。ニューデリーの調査では、国立博物館にて唐代の敦煌将来絵画、Stein 292、363、392、476、502、536、計6件を調査し、同様に記録した。現在、上記調査の結果をデータベースへ入力する作業を進行中である。また、平成26年度に行った大英図書館における文書調査の結果を踏まえながら、27年度にフランス国立図書館にて行った文書調査の結果を論文にまとめて、国内の学術誌へ投稿した。中国では唐代の7世紀以降に千手観音が信仰されるようになり、以降現代に至るまで信仰と造像が盛んに行われてきた。唐代の現存作例は特に敦煌と四川に集中しているが、その多くは観音の周囲を雲に乗った眷属衆が取り囲むという、『千手経』を主たる依拠経典とした群像形式を採る。本研究では、この群像形式が流行した背景を明らかにするために、四川と敦煌に残る唐代の現存作例、ならびに敦煌莫高窟から発見された敦煌文書中の千手観音の関連文献を分析した。その結果、この群像形式が、『千手経』の称揚する千手観音の陀羅尼、「大悲呪」への信仰を中心とした千手観音信仰と結びついて成立、普及、変遷していった様子が明らかになった。平成28年度には、夏季に中国の敦煌莫高窟、春季にフランス、パリの国立ギメ
血管新生における力の機能についての研究

血管新生におけるミオシンII,αカテニン、MarcksIIファミリー分子の機能を解明することを目的として実験を行った。2年間の研究計画なので、まずはこれらの分子をゼブラフィッシュ生体で可視化することを目標にした。このために、トランスジェニック(Tg)ゼブラフィッシュをまず作製することに注力し、血管内皮細胞特異的に標的分子を発現させるラインとしてTg(Fli1ep:myl9b-EGFP)、Tg(6XUAS:cttna1-mCherry)、Tg(Fli1ep:cttna1-EGFP)、Tg(Fli1ep:marcksl1a-EGFP)を作成した。いずれのTgラインもライブイメージング可能な蛍光強度を有していた。MarcksIIには二つのアイソファームがあり(IIa, IIb)、いずれもEGFPのタグを付加することで可視化が可能となった。MarcksIIの強制発現系として、Gal4-UASシステムを用いて、血管内皮細胞特異的にMarcksIIを発現する系が構築できた。一方、MarcksIIの遺伝子破壊による機能喪失の表現型の解析のために、TALENを用いて同遺伝子の破壊を行った。現在遺伝子系の確認ができるところまで、成長してきている。二つのアイソフォーム特異的に遺伝子破壊を行う必要があり、それぞれのヘテロ同士の交配により、二つの遺伝子破壊個体の作製を開始している。ほかに血管内皮細胞の細胞骨格の可視化のための、Tg(fli1:alpha-tubulin), Tg(fli1:life-act mcherry) (それぞれ微小管とアクチン可視化フィッシュ)は揃えており、今年度に作製したTgと交配して観察していく準備が整った。進捗評価本研究計画のうちMarcksIIa IIbによる張力発生機構に関する研究項目は、まず血管新生における力発生の検討では、第一に手掛けるべき実験として開始した。強制発現のトランスジェニック、遺伝子破壊ノックアウトフィッシュの作製も順調と判断している。所属する研究室の機器が充実しているために、遺伝子型の解析も通常よりも短時間で可能なことも進捗状況が良い理由である。そのほか、力発生の可視化プローブの開発は産休のために、若干遅れているがこれも計画からするとプローブのデザインなどが進んでいることから実質的な遅れとは考えていない。血管新生と血管内皮細胞の細胞骨格を形態学的に観察可能なトランスジェニックフィッシュと遺伝子破壊、強制発現フィッシュとの交配も順調に進んでいる。Marcks IIa IIbの血管新生におけるアクチンの張力発生における意義についてさらなる検討を継続する。これまでに作製したMarcksIIa +/- MarcksIIb+/-個体を交配することによりMarcksIIa IIbのダブルノックアウトフィッシュを作製して、血管新生でのこれらの分子の必要性をまず確認する。Fli1:EGFPフィッシュとの交配により、血管形態を詳細に観察することにより、MarcksIIa IIbが血管新生過程で、内皮細胞の安定化あるいは出芽・分枝で機能するかを調べる。血管内腔面のapicalあるいはbasalでの張力発生にMarcksが必要であるかも、内腔を観察可能なトランスジェニックフィッシュと交配することによりその意義を明らかにしていく。最終的には、血管新生における張力発生がの実行分子としてのMarcksの機能を大血管から、微小な血管まで調べていくことによりshear stressまで含めた張力の発生機構を明らかにしていく。
蛍光キネティクスによる、転写因子複合体の細胞分化・がん化に相関した核内過程の研究

Sox2などの転写因子は、単独では作用せず、ゲノム上の隣接した箇所に結合する他の転写因子をパートナーとした複合体として作用する。本研究では、パートナー因子との相互作用を通じて、Sox2がどのような過程をへてゲノム上の標的部位に安定に滞在するのかを解析した。培養細胞内で生理的なレベルでSox2-EGFP融合タンパク質を発現して、そのFRAP kineticsを解析した。野生型のSox2ーEGFPのFRAPは、約4.5秒の時定数をもつが、パートナー転写因子との相互作用領域に変異を導入したSox2では、時定数が約半分に低下し、DNA結合領域の変異体では、時定数はさらに小さなものであった。Sox2はパートナー因子の相互作用によって、核内の移動性が大幅に低下するという結果である。しかし、2014年3月にChenたちが次の報告をした。核内で蛍光標識Sox2の滞在時間が比較的長時間である場所を選び、Sox2の滞在時間を1分子計測したところ、平均12秒で、この制御標的上の滞在時間が、パートナー因子との相互作用領域のアミノ酸置換によっては変化しないというものであった。この結論は、私たちの研究の結論とは全く異なっていた。本年度は、この食い違いがどのようなものに由来するのかを明らかにすることに力を注ぎ、核内のSox2結合領域をChIP-seq法で解析した。その結果、Sox2と特定のパートナー因子(Oct3/4など)との相互作用によって活性化されるエンハンサーには2つのタイプがあることがわかった。第1のタイプはSox2とパートナー因子のヘテロダイマーで活性化されるもので、多くのエンハンサーが対応する。第2のタイプは、多数のSox2ならびにパートナー因子結合配列が広範囲に散在するもので、おそらくSox2とパートナー因子はヘテロダイマーを形成することはない。私たちは、主として第1のタイプ、Chenたちは、主として第2のタイプのエンハンサーに結合したSox2を計測したものであると考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。SOX2をはじめとする多くの転写因子は、単独では作用せず、他の転写因子をパートナーとした複合体として作用する。これらの転写因子は、核内でどのような分子過程をへてクロマチン上の制御標的に到達して、制御機能を発展するのか?その分子過程は胚発生のプロセスでどのように変化するのか?これらの問いに答えるために、着床後胚由来の幹細胞で体細胞系列の直接の前駆体であるエピブラスト幹細胞をもちいて、エピブラスト幹細胞から体細胞への分化過程での、転写因子複合体と核内のクロマチンとの相互作用を研究している。(1)エピブラスト幹細胞における転写因子の機能に関わる核内相互作用を、転写因子変異体を活用して解析している。エピブラスト幹細胞と胚の繊維芽細胞を比較しながら、蛍光標識転写因子ならびにそれらの変異体のFRAPキネティクスの素データを多数蓄積した。パートナー因子との相互作用ができない変異体や、DNAに結合できない変異体転写因子を用いた。蓄積されたデータを分析して、異なった細胞状態での転写因子複合体とクロマチンとの相互作用の違いを明らかにする計画である。(2)転写因子の作用が細胞周期に依存している可能性があるために、蛍光標識したSOX2と、細胞周期に依存して蛍光を変化させるFUCCIを併用して、SOX2のFRAPの細胞周期依存性を解析した。試行実験のデータの範囲では、G1期とS/G2期の間で、FRAPキネティクスに大きな違いは認められていない。(3)ES細胞やエピブラスト幹細胞でSOX2と複合体をつくるPOU5f1のGFPとの融合タンパク質を作成し、それがSOX2との組み合わせで転写活性化能を持つことを確認した。(4)In vitroの実験で、SOX2とPAX6の複合体がDNAに結合すると、SOX2単独での結合よりも大きなDNA屈曲を引き起こすことを示した。

その結果、Sox2と特定のパートナー因子(Oct3/4など)との相互作用によって活性化されるエンハンサーには2つのタイプがあることがわかった。第1のタイプはSox2とパートナー因子のヘテロダイマーで活性化されるもので、多くのエンハンサーが対応する。第2のタイプは、多数のSox2ならびにパートナー因子結合配列が広範囲に散在するもので、おそらくSox2とパートナー因子はヘテロダイマーを形成することはない。私たちは、主として第1のタイプ、Chenたちは、主として第2のタイプのエンハンサーに結合したSox2を計測したものであると考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。SOX2については、研究の中核部分に関する素データは多数蓄積しており、これからその多数のデータをさまざまな観点から分析して、論理的な解析に向かう段階に達している。野生型転写因子と、変異体転写因子のFRAPキネティクスの比較、また細胞種によるFRAPキネティクスの比較によって、転写因子複合体の核内過程に関するモデルを作成し、data fittingによって、そのモデルを改善してゆく。
オリゴメタスタシスの予後予測としてのcell free DNAの有効性検証の研究

貴重な症例のサンプルを扱うため、高品質な解析が必要であると考え、まずは技術協力を得るために先進ゲノム支援に応募し、採択された。当院にて過去に原発巣が制御された肺、肝臓、リンパ節転移を有する病態(オリゴメタスタシス)で、転移病巣に対して陽子線治療を含めた放射線治療が施行された大腸・直腸癌患者を抽出した。照射前に採取された血漿サンプルが保存されている症例は20症例であることを確認した。当院のバイオバンクより該当する20症例の血漿サンプルを取り出した。DNA抽出については、理研ジェネシスに業務委託し実施した。DNA抽出の結果としては、おおむね全てのサンプルでcell free DNAが検出されていることが確認された。抽出されたDNAを東京大学に提出した。現在は東京大学にて先進ゲノム支援の元、ライブラリー作成から解析までを行っている。症例の選択、それら症例の血漿サンプルからのDNA抽出は完了している。DNAの解析は数ヶ月で完了すると見込まれ、進捗としては順調と考える。DNA解析結果と患者予後データとを合わせて統計学的解析を行う必要があるため、患者予後データのデータ収集を早急に実施する。DNA解析結果の解釈が困難な場合はバイオインフォマティシャンなど適切な専門家と協議を行うこととする。DNA抽出を外部委託したことで物品費が想定よりも低く抑えられた。次年度に繰り越したものについては、解析結果の専門家コンサルトや協議などのための旅費に使用することとする。
右心室と肺血管系,左心室と動脈系の両整合様式からみた麻酔中の至適循環管理法

心筋組織と血液の音響特性の差を利用して自動的、連続的に左心室腔内面積を測定するAcousticquantification(AQ)システムと非観血的連続動脈圧測定が可能なトノメトリーを用いると左心室駆出期圧-断面積関係が得られる.この駆出期圧-断面積関係から麻酔中の循環変化をリアルタイムで検討した.腹部大動脈瘤切除再建術症例において、大動脈遮断および大動脈遮断解除時の駆出期圧-断面積関係から収縮末期圧-断面積関係(ESPAR)の傾きを求め、心収縮性の指標とした.また、拡張末期断面積を前負荷の指標とし、遮断前、解除前の変化を検討した.左心室駆出期圧としてトノメトリー法による連続的動脈圧測定を、左心室断面積はTEEのAQによる左心室短軸像断面積を用い、左心室駆出期圧-断面積関係を1平面上にループとして描いた.大動脈遮断時および遮断解除時の駆出期圧-断面積関係、および、イソフルラン、PGE1の影響を検討した.大動脈遮断により後負荷および前負荷が増加し、駆出期圧-断面積ループは右上方へシフトした.一方、大動脈遮断解除によりループは左下方へシフトした.遮断解除時のESPARは遮断時のESPARより38%上昇した.また、拡張末期断面積は遮断時が8±1cm^2、遮断解除時が11±2cm^2と32%増加した.イソフルランIMACでは、ESPARの有意な変化は認められなかったが、前負荷、後負荷の低下が認められた.PGE1 40ng/kg/minでは前負荷の著明な低下、後負荷の低下が認められた.結論として、大動脈遮断解除時は遮断時にも比し、心収縮性が38%上昇しており、前負荷は32%増加していた.AQシステムとトノメトリーを用いて駆出期圧-断面積関係を求めることで術中の心室血管系相互関係を非観血的に推定することが可能であった.心筋組織と血液の音響特性の差を利用して自動的、連続的に左心室腔内面積を測定するAcousticquantification(AQ)システムと非観血的連続動脈圧測定が可能なトノメトリーを用いると左心室駆出期圧-断面積関係が得られる.この駆出期圧-断面積関係から麻酔中の循環変化をリアルタイムで検討した.腹部大動脈瘤切除再建術症例において、大動脈遮断および大動脈遮断解除時の駆出期圧-断面積関係から収縮末期圧-断面積関係(ESPAR)の傾きを求め、心収縮性の指標とした.また、拡張末期断面積を前負荷の指標とし、遮断前、解除前の変化を検討した.左心室駆出期圧としてトノメトリー法による連続的動脈圧測定を、左心室断面積はTEEのAQによる左心室短軸像断面積を用い、左心室駆出期圧-断面積関係を1平面上にループとして描いた.大動脈遮断時および遮断解除時の駆出期圧-断面積関係、および、イソフルラン、PGE1の影響を検討した.大動脈遮断により後負荷および前負荷が増加し、駆出期圧-断面積ループは右上方へシフトした.一方、大動脈遮断解除によりループは左下方へシフトした.遮断解除時のESPARは遮断時のESPARより38%上昇した.また、拡張末期断面積は遮断時が8±1cm^2、遮断解除時が11±2cm^2と32%増加した.イソフルランIMACでは、ESPARの有意な変化は認められなかったが、前負荷、後負荷の低下が認められた.PGE1 40ng/kg/minでは前負荷の著明な低下、後負荷の低下が認められた.結論として、大動脈遮断解除時は遮断時にも比し、心収縮性が38%上昇しており、前負荷は32%増加していた.AQシステムとトノメトリーを用いて駆出期圧-断面積関係を求めることで術中の心室血管系相互関係を非観血的に推定することが可能であった.