hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
EBウイルス制御因子によるB細胞不死化機構の解析

B95-8 EBVによりimmortalizeされてから培養期間が長いLCLでは、カチオン試薬を用いてhERR1のアンチセンスオリゴを細胞に導入してもコントロールに比べやや増殖が劣る程度で効果が見られなかつた。よってDMSOを溶剤にしたhERR1およびアロマターゼのアンタゴニストもしくはアゴニスト試薬を培養液に加え、LCLおよびEBV感染初期B細胞に対する増殖効果・不死化効率を比較した。使用したのはhERR1のアンタゴニストであるDES(10μM)、またアゴニストであるDaidzein (10μM)そしてアロマターゼのアンタゴニストである434Methoxycoumarin(100nM)の3種であり、結果DESを加えたLCLは増殖が遅れるばかりでなく生存率も低く、Daidzeinを加えたものは増殖も生存率もコントロールに比べ上昇した。またMethoxycoumarinを加えたものは増殖が緩やかになったが生存率は良く、最終的には細胞数は増加した。同様の結果が末梢B細胞にアンタゴニストあるいはアゴニストを加えて2時間後にEBVを感染させて樹立した間もないLCLでも得られ、特にDaidzeinとMethoxycoumarinを加えた細胞はコントロールより大きい細胞塊を形成する傾向があった。よってhERR1もしくはアロマターゼがLCL樹立時に感染細胞の生存率に影響を与える可能性が考えられた。hERR1と相互作用しないEBNA-LPを組み込んだ変異ウイルスの作成についてはloxP配列で挟んだ薬剤耐性遺伝子を変異LPに組み込む点でうまくいかず、他のアダプター使用を検討中である。まずhERR1のB細胞増殖に対する効果を調べるためにhERR1のアンチセンスS-オリゴを作製(Bonnelye et al.,J.Cell.Biol.153:971-983,2001)、LCLに導入した。hERR1の発現レベルをウェスタンブロッティング法で確認してみたが効果的に発現が押さえられていなかったため技術的および異種間の問題が考えられ、現在技術的なコントロールとしてB95-8を用いたLMP1に対するアンチセンス法を試している(Mattia et al.,Oncogene 15:489-493,1997)。また効果的にB細胞にアンチセンスオリゴを導入するために遺伝子導入試薬を用いることも検討中である。次にヒト末梢血B細胞にB95-8由来EBVを感染させてLCLを作製し、感染一週間後RT-PCRにてhERR1およびAromataseのmRNA発現レベルを未感染B細胞と比較したところ、EBV感染によりhERR1の発現は増加傾向がみられたがAromataseの発現は一週間では確認できなかった。
中性原子量子コンピュータにおける選択的量子ゲートの実装

2次元平面上にフレネル光で格子状にトラップされた中性原子系を考える。量子ビットの状態は、2個の超微細状態で張られるベクトル空間で定義される。この時、さらに1次元光格子を導入することにより、遠く離れた任意の原子対の間に2量子ビットゲートを作用させることができる。この方法では、フレネル光を作るシャッターの半径を可変にしなければならないが、2量子ビットゲートが作用する原子を隣り合う原子対に限れば、シャッターの半径を固定できることを示した。また、低精度の量子ゲートを組み合わせて、高精度の量子ゲートを実現する複合量子ゲートのと、外界のノイズの影響を避ける効率的な量子誤り訂正符号の研究も行った。本年度は昨年度に続き,中性原子量子コンピュータにおける選択的ゲートの実現の研究を行った。我々が昨年度に行った研究では,シリコン基板上に開けた光の波長程度の穴の直径を制御することにより量子ビットとして用いる原子と基盤の距離を制御して,これらの原資を1次元光格子にロードすることにより選択的なゲート操作を行うスキームを提案した。しかしこの方法では現在のコマーシャルベースの技術では幾分到達に時間がかかる技術を含んでいる。たとえばMEMSやLCOS-SLMなどの技術を使えば提案されているシャッターを実現することは現在でも可能であるが,要求されている動作時間が実現されるには若干時間がかかる。そこで,今年度の提案は昨年度の提案のいわば「ダウングレード」であるが,実験的には十分実現可能な提案を行った。それはトラップするためのレーザはオンかオフしかなく,したがってMEMSやLCOS-SLMなどの技術は必要としない。それにより,遠く離れた原子の間に1ステップでゲート操作をすることは不可能となったが,近接原子の間には簡単にゲート操作を行うことができる。沖縄科学技術大学院大学ので光・物質相互作用の研究を行っているSile Nic Chormaic准教授は,我々の提案の実現に興味を持っており,中原が沖縄を訪問し共同研究の打ち合わせを行った。量子ゲートの忠実度を上げる研究と量子ビットにノイズ耐性を持たせる研究も合わせて行った。精度の低いゲートを組み合わせて精度の高いゲートを実現することは可能であるが,我々は2種類のエラーが同時に存在するときに,それを克服する高精度のゲートをできるだけ少ない基本ゲートで実現する方法を研究した。また,すべての量子ビットが同じノイズを受ける状況で,ノイズから守りたい量子ビットの数が決まっているときに,最も少ないアンシラ量子ビットでこれを克服する方法を研究した。本研究の主目的は、中性原子系を用いて量子コンピュータを実現する上で必要となる選択的な2量子ビットゲートの実装を提案することであった。2011年度に発表した論文では、穴の半径が制御できるフレネル回折光と強度と位相が制御できる1次元光格子を用いてそれを実現する提案を行ったが、2013年度は技術的に最も困難であると思われる穴の半径の制御を必要としない提案を行った。ただし、これにより実現する2量子ビットゲートは、最近接原子対にしか作用できず、遠くの原子対にゲートを作用させるにはSWAPゲートを多用しなければならない。この新しい提案により、我々の2量子ビットゲートの実装がさらに現実的になった。また、量子コンピュータの実現に対し障害となるデコヒーレンスの克服に向けた研究として、量子誤り訂正、非断熱的量子ゲートなどについても研究を行った。量子誤り訂正の研究では、"高価な"純粋状態の補助量子ビット(アンシラ)ではなく、任意の混合状態にあるアンシラを用いる理論を開発した。また、すべての量子ビットに同一のノイズが作用するときに、情報をもつ量子ビットがノイズの影響を受けないような符号化を、任意の数の量子ビット、および量子ディット(d種類の状態を持つ量子系)に拡張した。量子制御を時間がかかる断熱制御の束縛から解放するために、Lewis-Risenfeld不変量を用いた非断熱制御を解析し、一般的なハミルトニアンを用いて1および2量子ビットゲートの幾何学非断熱ゲートの制御を発見した。中性原子系における2量子ビットゲートの実装を行う上で、時間的にボトルネックとなるのは光格子を用いて断熱的に原子を移動させるプロセスである。これを解決するために平成26年度採択の科研費では、リー代数を用いた非断熱制御の研究を行う。これにより、本科研費の研究にも有益なフィードバックが得られると確信する。

平成23年度は,中性原子の集団から選択的に2個の原子を選び,その間に量子ゲートを作用させる研究を主に行った.従来の方法ではすべての原子対に量子ゲートが作用するので,もっとも研究されている「サーキットモデル」に使うことはできなかったが,本研究により,それを可能とした.シリコン基盤に開けた光の波長程度の穴を通して漏れるフレネル光により中性原子を基盤の近くにトラップする.トラップされる高さは穴の半径を変えることにより制御される.ゲートを作用させたい2個の原子を2つの超微細状態の重ね合わせ状態にした後,これらの原子をトラップしている穴の半径を大きくすると,原子は基盤から離れた位置に留まる.そこでトラップ光の強度を減少させるとともに,この2個の原子を結ぶ軸に沿って,1次元の光格子の強度を増加させると,原子は光格子にトラップされる.この状態で光格子を作る対向レーザビームの偏光角を変えると,2つの超微細状態は逆方向に動き出す.力学的位相を導入したい超微細状態が光格子の同じポテンシャル内に指定された時間だけ留まると,この成分は他の成分に比べs波散乱長で決まる結合定数に比例した位相をもつ.これにより2量子ビットゲートが実装されることを示した.また,量子ビットに作用するノイズを克服する方法として,すべての量子ビットに同じノイズが作用する場合に誤り訂正を効率よく実現する方法を研究した.この状況は光格子にトラップされた原子系などに用いることができる.我々のスキームは再帰的で,容易に多量子ビット系に拡張することができる.フォールトトレラントな量子計算を行うには,忠実度が高いゲートが必須である.本研究では,NMRにおける複合パルスを一般化することにより,忠実度が低いゲートを組み合わせて忠実度が高い複合ゲートを設計した.特別な初期状態に対して,非断熱過程を用いて量子制御を行う方法を解析した.本年度は,中性原子量子コンピュータにおける選択的2量子ビットゲートの最初の提案の「ダウングレード」を図ることにより,実験家がその実現により興味を持ちそうな提案を行った。ダウングレードではあるが,これにより実際に実験が行われれば,さらに効率を上げる提案がなされるかもしれない。実際,すでに我々の提案の実現に興味を持つ実験家との共同研究が始まっている。我々はすでに数値計算を実行し,ダウングレードした提案でも,最初の提案により量子ゲートと同程度の実行時間で同じ忠実度が実現できるることを示した。結果は近々投稿予定である。量子誤り訂正符号が正しく動作するには,それを構成する量子ゲートが高い忠実度を持たなければならない。量子ゲートは本質的にアナログゲートであり,その精度を上げることは決して簡単ではない。しかし,我々は2種類のエラーを同時に抑制する複合パルスの発見など,最初の交付申請書で提案した以上の成果を上げたと自負する。また,量子誤り訂正符号では,全量子ビットが同じノイズを受ける状況下で,より効率の高い符号化を発見したが。我々の最初の提案では断熱変化を用いた量子制御を行うので,時間的に強い制約を受けるのであるが,別の科研費の研究テーマで,非断熱量子制御の研究を行った。これを本研究に応用すれば,量子ゲートの実装時間を飛躍的に短縮できることが期待される。この成果の本科研費への応用は来年度の目標の一つである。本研究の中心テーマである中性原子対に選択的に作用する
フェムト秒パルスの自己収束効果が誘起する蛋白質の結晶核の生成

タンパク質結晶化の光学系の構築と照射実験:照射系は昨年度内でほぽ完成し、今年度は勢力的に照射実験を行った。確かにリゾチーム、尿素の系ではフェムト秒レーザーにより結晶化の促進を観測することができた。結晶化の機構としてはフェムト秒パルスの自己収束度、有機分子がイオン化、従って、集光点において、イオンが生成していることは確実であると思われた。しかし、結果にばらつきがあり、レーザー照射条件を絞り込むことができていない。条件を絞り込む実験が必要である。イオン化の機構を明確にするため、関連実験として、気相、表面、液相におけるイオン化の実験もすすめた。これらに関した成果については一部を論文リストに載せた。リゾチームを昨年度に引き続き試料とし、特にレーザー照射パルスエネルギーをパラメーターとして実験を行った。ニワトリ卵白リゾチーム50mg/μLリザーバー塩化ナトリウム0.48M(一週間で結晶が出ないような閾塩濃度)pH4.8酢酸ナトリウム緩衝液0.10Mサンプルを作成して熟成3日後にレーザー照射、波長:800nm、パルス幅:45fs、照射パルス数:1000パルス、照射して3日後、6日後、10日後に顕微鏡で観察した。パルスエネルギーは0.8nJから552nJまで12段階に分けて行った。結晶化促進が観測された照射エネルギーは221、45nJの場合に明確であった。221nJの照射レーザーで、集光強度は1.6×10^<12>Wcm^<-2>と評価した。確かにこの条件では溶液中でイオン化が起きてもよい強度である。尿素の水溶液で結晶化の実験を試みた。尿素の濃度は12Mであった。この場合8.2μJの照射エネルギーが媒体のブレイクダウンの閾値であった。尿素結晶の生成は溶媒のブレイクダウンに起因する衝撃波、バブル生成であると思われた。1.高濃度溶液でイオンが生成することを確認レーザーパルスを集光照射することでイオン化が起きることを確認することを第一の目的とした。この目的に適した分子は1,3,5-トリメトキシベンゼンである.このイオンは630nm付近に蛍光を出す.従って,まず,レーザーでイオンを生成,そのイオンを励起できる光は同じ励起光(この場合は351nmエキシマーレーザーを用いた。)で励起できると考えた。実際、イオンが生成し、その蛍光スペクトルが観測された。蛍光強度は入射レーザー光強度の1.5乗に比例した。本来2光子でイオン化、更に1光子で蛍光、という3光子過程と予想される。ところで、レーザービームの集光体積がレーザー光の1.5乗になり、n次光子過程が見かけ上1.5次になる場合があることが知られている。従って、ここでは3光子過程が見かけ上レーザー光強度の1.5乗に比例したものとして解釈した。フェムト秒レーザーを集光することにより、TMPD(テトラメチルパラフェニレンジアミン)がイオン化されことを、照射後そのカチオンの吸収スペクトル現れることにより、確認することができた。2.タンパク質結晶化のレーザー照射条件結論として1.5μJ/パルスノ照射エネルギーの場合に結晶化の促進が見られた。100μJ/パルスではたんぱく質の変性が見られた。この場合、結晶生成は抑制された。なお、試料と照射条件は以下の通りである。ニワトリ卵白リゾチーム50mg/mLリザーバー塩化ナトリウム0.48M(一週間で結晶が出ないようなしきい塩濃度)pH4.8酢酸ナトリウム緩衝液0.10Mサンプルを作成して4日後にレーザー照射、波長:800nm、パルス幅:40fs、照射パルス数:100パルス、照射して3日後、6日後、10日後に顕微鏡で観察した。レーザーが理想的に集光できているとすれば、強度は1015Wcm-2に達する。当報告者らの研究により。これはフェムト秒パルスによる自己収束の強度、有機分子がイオン化する強度の20倍以上に相当する。(これに関し、次ページのリストの論文を報告した。)従って、集光点において、イオンが生成していることは確実である。ニワトリ卵白リゾチーム50mg/μLリザーバー塩化ナトリウム0.48M(一週間で結晶が出ないような閾塩濃度)pH4.8酢酸ナトリウム緩衝液0.10

Mサンプルを作成して熟成3日後にレーザー照射、波長:800nm、パルス幅:45fs、照射パルス数:1000パルス、照射して3日後、6日後、10日後に顕微鏡で観察した。パルスエネルギーは0.8nJから552nJまで12段階に分けて行った。結晶化促進が観測された照射エネルギーは221、45nJの場合に明確であった。221nJの照射レーザーで、集光強度は1.6×10^<12>Wcm^<-2>と評価した。確かにこの条件では溶液中でイオン化が起きてもよい強度である。尿素の水溶液で結晶化の実験を試みた。尿素の濃度は12Mであった。この場合8.2μJの照射エネルギーが媒体のブレイクダウンの閾値であった。尿素結晶の生成は溶媒のブレイクダウンに起因する衝撃波、バブル生成であると思われた。
昆虫の記憶形成とタンパク質合成との関係に関する組織化学的研究

本研究は、昆虫の記憶形成と脳内でのタンパク質合成との関係を明らかにすることを目指した。基礎実験に手間取り記憶形成とタンパク質合成との関係そのものを明らかにするまでには至らなかったが、主に3つの方法で脳と記憶形成との関係にせまるための実験を行い、今後この研究を推進するための基礎的データが得られた。1)行動を評価するために行動解析用プログラムを解発し、それと新たに導入した行動解析装置(校費で購入)とを用いて、ワモンゴキブリの湿度学習の結果を評価する基礎データを得るために、先ず湿度定位行動を分析した。その結果、摂水を制限されたワモンゴキブリは、低湿度環境と比較して高湿度環境に定位し、そこの長く留まることが明らかになった。その原因を明らかにするために、行動を詳しく解析した結果、低湿度環境での行動と比較した結果、(1)高湿度環境では歩行速度が低下すること、(2)高湿度環境では歩行距離あたりの方向変換角が増加するすることが原因であると示唆された。また、時間あたりの方向変換角は湿度環境に拠らずほぼ一定であった。2)ワモンゴキブリの学習能力を調べるために、餌と匂いの連合学習実験を行った。その結果、ワモンゴキブリでは比較的少ないトレーニングで学習が成立し、その記憶が長時間保持されることなどが確認された。3)昆虫の学習・記憶には脳の高次中枢の1つであるキノコ体が関与することが報告されてきているので、記憶とタンパク質合成との関係を調べる基礎として、キノコ体の構造とその入出力ニューロンについて調べた。その結果、キノコ体への情報入力部位であるキノコ体傘部には機能的な部域性があり、たとえば、匂い情報を前大脳に運ぶ嗅葉の出力ニューロンはキノコ体傘部の周縁部から中間部に終末することなどがわかった。さらにケニヨン細胞の軸索が走行するキノコ体の柄や同細胞の軸索が終末するα葉やβ葉では規則的な十数列の縞目模様が観察され、機能的な分化が示唆された。昆虫の記憶形成と脳内でのタンパク質合成との関係を明らかにすることを目的とする本研究では、まず記憶形成の成立の評価が重要であるので、その評価法の確立をめざした。できるだけ客観的に評価するために、コンピュータを利用して行動を正確に記録する方法を確立した。ワモンゴキブリの行動を観察するために直径50センチメートルの円形のアリ-ナを作り、中心線で分けた2つの半円部分で温度または湿度環境が異なるようにした。ゴキブリが夜行性であることを考慮して、ゴキブリの主観的夜間の決まった時間に、この中でゴキブリを自由行動させ、その行動を暗視カメラで撮影しビデオテープに記録した。この記録された行動を解析するために、コンピュータ・プログラムを開発し、ビデオ装置で記録した行動のビデオ画像から画像の1フレームごとに行動軌跡を昆虫の頭部・尾部・左右の触角の先端と基部など8点をコンピュータ画面のX・Y座標として記録できるようにした。出力データはエクセル(マイクロソフト社製)に入力できる様式にして、市販のエクセルで解析した。実験前1日以上摂食できないようにしたゴキブリを用いて調べた結果、暗黒下でアリ-ナ内の湿度環境を一様にした場合、アリ-ナの周縁にそって歩きまわる行動がしばらく続き、次第に周縁だけでなくアリ-ナ全体を歩くようになった。次にアリ-ナの半分を低湿度にもう一方の半分を高湿度にして調べた。

この場合には、実験開始直後は湿度環境を一様にした場合と同じであったが、実験開始から10分間の行動を比較すると、歩行速度・方向転換頻度・方向転換角度が低湿度側で大きく高湿度側で低くなることがわかった。さらに2つの湿度環境の境界付近では、方向転換頻度と方向転換角度が2つのどちらの湿度環境での平均値よりも大きくなっていた。このように、今回開発した行動解析装置を使えば、かなり細かい行動の違いも把握できるので、記憶が形成された場合とそうでない場合を客観的に評価出来る見通しがたった。本研究は、昆虫の記憶形成と脳内でのタンパク質合成との関係を明らかにすることを目指した。基礎実験に手間取り記憶形成とタンパク質合成との関係そのものを明らかにするまでには至らなかったが、主に3つの方法で脳と記憶形成との関係にせまるための実験を行い、この研究を推進するための基礎的なデータが多数得られた。1)昨年度の研究で行動を評価するための解発した行動解析用プログラムを用いて、ワモンゴキブリの湿度学習の結果を評価する基礎データを得るために、先ず湿度定位行動を分析した。その結果、摂水を制限されたワモンゴキブリは、低湿度環境と比較して高湿度環境に定位し、そこの長く留まることが明らかになった。その原因を明らかにするために、行動を詳しく解析した結果、低湿度環境での行動と比較して、(1)高湿度環境では歩行速度が低下すること、(2)高湿度環境では歩行距離あたりの方向変換角が増加するすることが原因であると示唆された。また、時間あたりの方向変換角は湿度環境に拠らずほぼ一定であった。2)ワモンゴキブリの学習能力を調べるために、餌と匂いの連合学習実験を行った。その結果、ワモンゴキブリでは比較的少ないトレーニングで学習が成立し、その記憶が長時間保持されることなどが確認された。3)昆虫の学習・記憶には脳の高次中枢の1つであるキノコ体が関与することが報告されてきているので、記憶とタンパク質合成との関係を調べる基礎として、キノコ体の構造とその入出力ニューロンについて調べた。その結果、キノコ体への情報入力部位であるキノコ体傘部には機能的な部域性があり、たとえば、匂い情報を前大脳に運ぶ嗅葉の出力ニューロンはキノコ体傘部の周縁部から中間部に終末ずるこどなどがわかった。さらにケニヨン細胞の軸索が走行するキノコ体の柄や同細胞の軸索が終末するα葉やβ葉では規則的な十数列の縞目模様が観察され、機能的な分化が示唆された。
生細胞内RNAの可視化と制御を実現する革新的技術の創出

本研究では、生細胞内においてテロメアRNA(telomere repeat-containing RNA: TERRA)の1分子可視化蛍光プローブを開発し、TERRAの機能解明を行なった。全反射蛍光顕微鏡を用いてTERRAとテロメアの生細胞内分布を解析し、テロメアから12μm離れた領域にTERRAが集積することを明らかにした。さらに、hnRNPA1とTERRA、テロメアの同時観察を行い、hnRNPA1とTERRAがこの領域内で共局在を示すことを発見した。以上より、テロメア上のhnRNPA1をTERRAが捕捉し、hnRNPA1のテロメア調節能を制御していることを見いだした。本研究では、申請者らのグループが開発した、新規プローブを用いた生細胞内RNA1分子イメージング法を用いて、現在注目されている非翻訳性RNAの生細胞内可視化解析を行うことを目的としている。平成25年度は非翻訳性RNAの1つであるテロメアリピート含有RNA(TERRA)を対象に、生細胞内1分子イメージングおよび分子動態解析を行った。まず、TERRAを特異的に認識し、結合することで蛍光を示すタンパク質ベースプローブを構築した。そのプローブをコードする遺伝子をU2OS細胞内に導入し、細胞内でプローブを発現させた。その細胞を全反射蛍光顕微鏡を用いて観察した結果、核内にプローブ由来の蛍光輝点の存在が観察された。この蛍光輝点の位置は、固定細胞内でTERRAを相補的拡散により標識したものと良い一致を示した。すなわち、開発したプローブは選択的にTERRAを検出し蛍光を発していることが確認できた。続いて生細胞内においてプローブ由来の蛍光輝点、すなわちTERRA分子のリアルタイム蛍光観察を行った。その結果、核内で多数の輝点が拡散運動を示している様子が観察された。観察された個々の輝点に対して、輝点追跡を行い軌跡を得た。その結果、拡散運動には自由拡散と閉じ込め拡散の2つのモードが存在することを発見した。さらに閉じ込め拡散は染色体DNAのテロメア領域上で起こることが多いこと、自由拡散運動の中で一過的に閉じ込め拡散を示すことがあることなどを発見した。以上の結果は、TERRAがテロメア上に形成される複合体と一過的に相互作用することで、何らかの生理機能を発現していることを示唆している。その生理機能の内容と機構について解明することが今後の課題となる。本研究では、申請者らのグループが開発した、新規プローブを用いた生細胞内RNA1分子イメージング方を用いて、現在注目されている非翻訳性RNAの生細胞内可視化解析を行いことを目的としている。平成26年度は、前年度に開発したテロメアリピート含有RNA(TERRA)を対象に、生細胞内1分子イメージングと詳細な動態解析を行った。TERRAプローブ遺伝子をU2OS細胞内に導入し、プローブを発現させた後、全反射蛍光顕微鏡を用いて観察を行った。同様の観察において、前年度に既に、本プローブが生細胞内のTERRAを選択的に標識し、TERRAの1分子動態を観察できること、TERRAの拡散運動には自由拡散運動と閉じ込め拡散運動の2つのモードが存在すること、閉じ込め拡散運動は染色体末端のテロメア領域上で一過的に生じることがある、などの事実を確認している。これらの結果を基に、本年度は、TERRAの拡散運動について拡散係数を求めるなどの定量的な評価を行い、TERRAとテロメアとの共局在について解析を行った。その結果、テロメア上で閉じ込め拡散運動を示しているTERRAの拡散係数は、テロメアと比較して1桁大きな値を示した。また、閉じ込め拡散運動の閉じ込め領域面積も、テロメアの拡散領域と比較して1桁大きな値を示した。この結果は、テロメアとTERRAは一過的な共局在を示すが、その間テロメアとTERRAは安定な複合体を形成しているわけではない、と言うことを示している。これは、従来提唱されていたモデルの一つである、TERRAがテロメア複合体に取り込まれて、複合体の安定化に寄与しているというモデルを否定しうる。むしろ、TERRAはテロメアに対してより動的な機能を有していることが示唆された。本研究では、申請者らのグループが開発した新規RNAプローブを用いた生細胞内1分子RNAイメージング法を用いて、現在注目されている非翻訳性RNAの生細胞内可視化解析を行なうことを目的としている。平成26年度中に目的RNAであるテロメア繰り返し配列含有RNA(telomere repeat containing RNA: TERRA)の生細胞内1分子可視化に成功していた。平成27年度は、前年に得られたTERRAの可視化結果を元にTERRAの動態解析を行なった。また、TERRAと協働して働くと言われているタンパク質hnRNPA1との同時1分子観察行い、動態の相関について解析した。U2OS細胞内のTERRAとテロメアを標識し、生細胞1分子観察を行なったところ、テロメアから12μmほど離れた領域にTERRAが集中していることが明らかとなった。また、その領域では、拡散係数が固定細胞内と同程度に小さなTERRAがより多く検出された。続いて、TERRA、テロメア、hnRNPA1の3色同時1分子観察を行なった。

その結果から、特にテロメアから12μmほど離れた領域でTERRAとhnRNPA1は共局在すること、共局在が生じるに当たって静的なTERRAにhnRNPA1が拡散運動でやってきて共局在すること、この領域でTERRAとhnRNPA1が共局在を形成している場合その中心にあるテロメア上ではhnRNPA1の存在量が減少していることを明らかにした。以上の結果から、TERRAはテロメアから離れた領域でhnRNPA1を捕捉することで、テロメア長調節におけるhnRNPA1の機能を制御しているというモデルを得た。本モデルは、TERRAはテロメア上で機能するという従来の既成概念を覆す、革新的なものである。本研究では、生細胞内においてテロメアRNA(telomere repeat-containing RNA: TERRA)の1分子可視化蛍光プローブを開発し、TERRAの機能解明を行なった。全反射蛍光顕微鏡を用いてTERRAとテロメアの生細胞内分布を解析し、テロメアから12μm離れた領域にTERRAが集積することを明らかにした。さらに、hnRNPA1とTERRA、テロメアの同時観察を行い、hnRNPA1とTERRAがこの領域内で共局在を示すことを発見した。以上より、テロメア上のhnRNPA1をTERRAが捕捉し、hnRNPA1のテロメア調節能を制御していることを見いだした。3カ年にわたる研究の2年目となる平成26年度は、前年度に構築したTERRA可視化プローブを用いて、生細胞内のTERRAの動態の定量的な評価を実現した。具体的には、個々のTERRA分子における拡散運動の軌跡を解析し、拡散係数の算出を行った。その結果から、TERRAとテロメアは共局在は示すものの、安定した複合体を形成しているわけではないという、従来考えられていなかった知見を得ることに成功した。この知見は生細胞内で1分子動態解析を実現したことで初めて得られたものであり、本研究の順調な進展を示している。27年度が最終年度であるため、記入しない。分析化学平成26年度は、TERRAの動態についての定量解析を行うことで、TERRAとテロメアとの間に複合体を形成しない共局在が存在していることを示した。平成27年度にはこの動態解析をさらに進め、TERRAの機能発現機構の解明に迫る。具体的には、テロメアとTERRAの分布についてサブマイクロメートルスケールで統計解析を行い、テロメア周辺におけるTERRAの閉じ込め拡散運動が生じる起源について解析と考察を行う。また、テロメア複合体タンパク質とテロメア、TERRAとの同時1分子観察を行い、その運動および分布について統計解析を行うことで、TERRAの生理機能についても解析を行う。以上の解析・考察を通じ、1分子動態から解明される、TERRAの運動を規定する因子とTERRAの生理機能についての解明を行う。初年度となる平成25年度では、TERRAの生細胞内1分子可視化に成功した。これは今後の研究を進める上で最も重要な基盤となる成果であり、本研究の今後の発展の元になるものである。さらに、1分子可視化したRNA動態について解析した結果、TERRAが染色体のテロメア領域と一過的な相互作用をするという現象を見いだした。このような現象はこれまで報告されていなかったものであり、世界初の発見である。これらの成果は、本研究の最終目的であるTERRAの機能発現機構解明を実現するに当たって重要な手がかりとなる技術構築および情報を与える。
日本産モグラの遺伝的分化とその内部寄生線虫の共進化に関する研究

日本産モグラ類のうちMogera属の種の扱いについては、研究者によって種の分類基準が異なるため、様々な学説がある。そこで、ミズラモグラ(Euroscaptor mizura)と日本産Mogera属のモグラについて、ミトコンドリアDNAにコードされている遺伝子の一つであるcytochrome coxidase subunit I遺伝子の一部(394bp)の塩基配列を決定し、それらの塩基配列から系統関係を推定した。その結果、これらの中ではミズラモグラがもっとも早く分かれ、遺伝的にもMogera属とは大きく離れていることが明らかとなった。研究者によって独立種として扱われているいくつかの個体群を含む日本産Mogera属数十個体を分析した結果では、これらはアズマモグラ(M.imaizumii)、コウベモグラ(Mogera wogura)、サドモグラ(M.tokudae)の3つのグループに大きく分かれ、「日本産Mogera属は3種」とする説を支持するものであった。しかしこれらの種内についてさらに詳しく検討してみると、アズマモグラは大きく4つのグループに、コウベモグラは3つのグループに分けられ、これらの分化はほぼ同時期に起こっていることが明らかとなった。CO1遺伝子から推定された系統関係をふまえた上で、種・亜種等についての再検討が必要と考えられた。モグラ類とその内部寄生線虫の共進化については、1)Mogera属3種すべてから寄生報告があること、2)分布域が広く寄生率が比較的高いこと、3)Mogera属のモグラとミズラモグラ以外から寄生報告がないことなどから、対象線虫をAscarops mogeraとし、現在標本の採集と塩基配列の決定を行っている。
肺癌幹細胞特異的増殖メカニズムの解明

我々が同定した肺組織幹細胞の増殖を抗癌作用物質Exiguolideが強力に抑制する.Exiguolideは特に幹細胞に対する効果が高いと考え,その作用機序を明らかにすることで,肺癌幹細胞特異的増殖メカニズムの解明を試みた.網羅的遺伝子発現解析の結果から,ExiguolideはProtein kinase C(PKC)/Erk/Aktの3つの経路から細胞増殖を抑制している可能性が示されたため,これらの経路に対するExiguolideの効果を肺癌細胞株を利用して検証した.ExiguolideはPKCαを活性化し,サイクリン依存性キナーゼ阻害蛋白であるp21の発現を介して細胞周期をG1で停止させることがわかった.ExiguolideがMekによるErkリン酸化を阻害すること,さらにAktリン酸化の調節を通じてGSK3βを抑制し,アポトーシスを誘導していることがわかった.我々が同定した肺組織幹細胞の増殖を抗癌作用物質Exiguolideが強力に抑制する.Exiguolideは特に幹細胞に対する効果が高いと考え,その作用機序を明らかにすることで,肺癌幹細胞特異的増殖メカニズムの解明を試みた.網羅的遺伝子発現解析の結果から,ExiguolideはProtein kinase C(PKC)/Erk/Aktの3つの経路から細胞増殖を抑制している可能性が示されたため,これらの経路に対するExiguolideの効果を肺癌細胞株を利用して検証した.ExiguolideはPKCαを活性化し,サイクリン依存性キナーゼ阻害蛋白であるp21の発現を介して細胞周期をG1で停止させることがわかった.ExiguolideがMekによるErkリン酸化を阻害すること,さらにAktリン酸化の調節を通じてGSK3βを抑制し,アポトーシスを誘導していることがわかった.これまでの研究により,今回使用した抗癌作用物質Exiguolideが肺癌細胞株に対して,他癌腫細胞株より強力に作用することが分かっていたが,そのメカニズムは不明であった.臨床検体に由来する成人肺組織幹細胞にExiguolideを作用させると,その増殖抑制効果は50%増殖阻止濃度(GI50)にして200nMと,肺癌細胞株A549のGI50(600nM)より3倍程度高い効果を示した.そこでExiguolideは特に幹細胞に対する効果が高いと考え,その作用機序を明らかにすることで,肺癌幹細胞特異的増殖メカニズムの解明を試みた.このためにまず網羅的遺伝子発現解析(cDNAマイクロアレイ)を行った.得られた結果をソフトウエア(GeneSpring, Ingenuity Pathway Analysis)により解析すると,ExiguolideがMAPキナーゼカスケードおよびAktシグナルを制御する可能性が示唆された.このシグナル経路はどちらも幹細胞の増殖・分化に非常に重要なシグナルであることがわかっている.またExiguolideを作用させた6時間後・24時間後の変動遺伝子群をリストアップし,類似化合物を関連付けるプロジェクト「Connectivity Map(Science.2006)」へ入力すると,ExiguolideがプロテインキナーゼC (PKC)抑制剤との関連が高いことが示された.以上の結果から,肺癌幹細胞の増殖には複数のシグナルが関わっていることが示唆され,またExiguolideがそれぞれのシグナルを同時に抑制する可能性が示された.平成23年度の研究により,海洋由来新規マクロリド化合物であるExiguolideが肺癌幹細胞の増殖を特異的に抑制している可能性が示された.これによりExiguolideの標的解明が肺癌幹細胞特異的増殖メカニズムの解明につながると考えた.網羅的遺伝子発現解析の結果から,ExiguolideはProtein kinase C(PKC)/Erk/Aktの3つの経路から細胞増殖を抑制している可能性が示されたため,これらの経路に対するExiguolideの効果を検証した.検証にはErkシグナル・Aktシグナルの上流に遺伝子変異をもつ細胞株A549/H460を用いた.まずExiguolideはPKCαを活性化し,サイクリン依存性キナーゼ阻害蛋白であるp21の発現を介して細胞周期をG1で停止させることがわかった.またウエスタンブロッティング・抗体アレイ解析により,ExiguolideがMekによるErkリン酸化を阻害すること,さらにAktリン酸化の調節を通じてGSK3βを抑制し,アポトーシスを誘導していることがわかった.PKCはこれまでも海洋由来マクロリド化合物の標的として知られていたが,幹細胞の増殖に関わる知見はなかった.肺癌との関わりについても明確な知見はない.分子標的薬を含む既存抗癌剤の耐性に複数の細胞内シグナル経路が関わっていることが先行研究により示唆されている.本研究により肺癌幹細胞の増殖にPKCαが関わっていることが示唆され,肺癌化学療法における耐性克服への重要な治験を得ることができた.肺癌幹細胞の増殖にはAktシグナル・MAPKカスケードなど複数のメカニズムが関わっている可能性が示された.またExiguolideがそれぞれのシグナルを同時に抑制する可能性が示された.24年度が最終年度であるため、記入しない。マイクロアレイ解析で明らかになった複数のシグナルが,蛋白レベルでどう変動しているか,ウエスタンブロッティング法を中心に解析していく.さらにこれらのシグナルに関わる遺伝子群にエピジェネティックな変化があるかどうか,解析していく.24年度が最終年度であるため、記入しない。
咬合に起因する微小動揺によるオッセオインテグレーション阻害メカニズムの解明

咬合に起因する微小動揺がオッセオインテグレーションに与える影響を明らかにすることを目的に、ラット上顎臼歯を抜歯後、チタンスクリューを即時埋入し、1週間後に咬合接触を付与し、咬合接触を与えないラットを対照群とし、組織化学的検索を行うとともに、マイクロアレイを用いて遺伝子発現の比較を行った。咬合接触を付与したラットにおいてはスクリュースレッド間の骨梁幅は有意に太くなり、スクレロスチン陽性骨細胞率は低下していた。遺伝子発現については、骨形成やBMP調整に関与する遺伝子が発現していた。これらの結果から、抜歯後即時埋入早期に与える適度の咬合負荷は、オッセオインテグレーションを早めることが示唆された。本年度は、昨年度までに構築したラット抜歯即時インプラントシステムにおけるオッセオインテグレーション阻害を起こす咬合負荷開始時期について詳細な検討を行うとともに、咬合を負荷した場合としない場合について、アルカリフォスファターゼ(ALP)、酒石酸耐性フォスファターゼ(TRAP)、オステオポンチン(OP)、オステオカルシン(OC)、スクレロスチン(Scl)、ペリオスチン(Per)染色を行い、免疫組織化学的に検討を行った。4週齢ラットの右側上顎臼歯を抜歯後インプラント(チタンスクリュー)を即時埋入し、チタンスクリュー上部に接着性レジンを築盛することにより咬合負荷を与える実験系において、5日後に咬合負荷を与えた場合はインプラントは脱落したが、7日後では、80%程度のインプラントが脱落しておらず、57日がラット上顎即時埋入におけるオッセオインテグレーション成立に必要な初期固定期間であることが示唆された。咬合負荷を与えた場合と与えない場合の免疫染色においてTRAPとALPは、インプラントと骨組織の境界においては発現しておらず、咬合負荷による差も認められなかった。Sclは、インプラント周囲での発現が観察されたが、咬合負荷群においては負荷しない群より、発現が強く認められた。これは、埋入初期に咬合を負荷した場合は、インプラント周囲での骨改造が抑制される可能性を示唆するものである。OCおよびOPには、発現の部位には咬合負荷による差異は認められなかったが、咬合負荷を与えていない群でインプラント周囲に強く観察され、骨改造が進んでいることが示唆された。Perには、咬合負荷による差異は観察されなかった。これらのことは、インプラント周囲の抜歯後の骨改造を咬合負荷が抑制している可能性が示唆された。本年度は、埋入後早期の咬合負荷がインプラント周囲骨組織に与える影響について組織化学的に検討するとともに、ラットにおけるオッセオインテグレーション成立に必要な初期固定期間である埋入1週後から咬合負荷をかけた際の遺伝子の発現解析のためのサンプル採取方法について検討した。チタン製のスクリューインプラントを上顎に埋入し、1週後に咬合負荷を与えたラットを実験群とし、咬合負荷を与えないものを対照群とした。実験群では対照群と比較し、インプラントのスレッド間に太い骨梁が形成される傾向が認められるとともに、アルカリフォスファターゼ陽性骨芽細胞系細胞および酒石酸耐性フォスファターゼ陽性破骨細胞の局在性が低下する傾向が認められた。また、骨梁におけるオステオポンチン陽性・オステオカルシン陽性を示すセメントラインは、対照群では太く複雑な鋸歯状を示すのに対して、実験群では細く、骨基質の密接な接着を示す傾向が認められた。これらの結果から埋入後早期の適度な咬合負荷は骨改造を緩やかにし、スレッド間の骨梁の太さを増加させる可能性が示唆された。インプラント埋入1週後に咬合負荷を一定期間与えた後に、インプラントを摘出し、インプラントに付着した組織および周囲組織を採取することにより、マイクロアレイ解析に必要なサンプルを得ることが可能となった。この方法を用いて、次年度にマイクロアレイによる遺伝子発現の解析を行う予定である。本年度はラットインプラントモデルの構築を行うとともにオッセオインテグレーションが阻害される荷重を与える時期について検討した.これまで当教室で行なってきた方法に準じてラット上顎左側臼歯を抜歯後,即時に抜歯窩にチタンスクリューを埋入し,初期固定が確実になされていることが確認することによりラットインプラントモデルを構築した.チタンスクリュー埋入後,2週間で骨内に位置するチタンスクリュー表面の5060%程度には,直接骨組織が接していた.さらに,インプラント周囲の骨には,多数の改造線と骨細胞が観察され,オッセオインテグレーションが成立されつつあることが示された.

この結果を基に,埋入5,7および10日後にチタンスクリューの上部に接着性レジンを添加し,下顎臼歯との咬合接触を与えることにより荷重を負荷し,1週後に周囲組織とともに摘出した.埋入5日後に荷重を負荷したラットにおいては,多くのチタンスクリューは脱落していた.埋入7および10日後では,チタンスクリューは脱落していなかった.組織学的検索では,スクリューの一部表面には骨組織が形成されている部分も認められたが,同時期の咬合接触を付与していないラットに比較して,多くの部分で肉芽組織や線維性結合組織が観察された.以上の結果から,ラット上顎のインプラントについては,埋入10日後以内に咬合を付与するとオッセオインテグレーションが阻害されることが示唆された.アルカリフォスファターゼやオステオポンチン等の骨関連タンパクの発現については,現在解析中である.本年度は、埋入早期の適度な咬合不可がインプラント周囲の骨組織に与える影響について、組織化学的、組織計量学的に検討を加えるとともに、埋入1週間後から咬合負荷の有無による遺伝子発現の差異をマイクロアレイを用いて解析した。チタン製スクリューインプラントをラット上顎に抜歯即時に埋入し、1週後に咬合負荷を与えた群と咬合負荷を与えない群を作成し、比較した。咬合負荷を与えた群においては、スクリュースレッド間に有意に太い骨梁が形成されていた。また、咬合負荷を2週間与えた群においては、インプラント周囲50μm範囲のスクレロスチン陽性の骨細胞率は有意に低下していた。以上から、抜歯即時埋入早期に与える適度な咬合負荷は、力学的負荷に対応した骨の高次構造を変え、骨梁の太さを増加させる可能性が示された。埋入1週後に咬合負荷を与えた群と与えない群について、負荷1週後にインプラント周囲組織を摘出し、totalRNAを精製し、精度、濃度の良好な2サンプルを選択して、cRNAの調整、ラベリング後、ハイブリダイズした。蛍光強度を測定し、得られた結果をGene Spring GX 13(Agilent Technologies)を用いて、特異的に発現する遺伝子について網羅的な遺伝子解析を行った。咬合負荷の有無による2モデル間の遺伝子の発現の差異を検索したところ、3万個あまりの遺伝子が発現しており、その中で咬合負荷しなかった群に比較し咬合負荷を行った群において、骨形成やBMP調整に関与する幾つかの遺伝子が特異的に発現していることが認められた。この結果は、埋入1週後の咬合負荷は骨形成を促進させることを示唆している。以上の2つの実験結果から、抜歯即時埋入早期に与える適度の咬合負荷は、インプラント周囲の骨形成を促進し、オッセオインテグレーションを早めることが示された。歯科補綴学本年度は、本実験系のオッセオインテグレーション成立を咬合負荷が阻害する期間を明確にし、様々なタンパクの発現について分析を行い、抜歯即時インプラントの埋入直後に与える咬合の影響について面英気組織化学的に検討することができたため。ラット上顎に埋入したインプラント周囲組織からマイクロアレイ用のサンプルが十分に採取できず、サンプル採取の方法の条件設定に時間を要したため。交付金の総額の決定が遅くなったことにより,最終的な研究計画の立案が遅れ,実際の研究開始が遅れたため.咬合が負荷群と非負荷群との骨接触率と骨密度を計測し、比較検討し、埋入どれくらいの期間が最も咬合負荷を与えるのに適切かを明らかにする。また、本年度は、マイクロアレイを用いて、埋入5日後と7日後におけるインプラント周囲の遺伝子の発現を解析する予定であったが、RNA量の問題から十分な検討が行えなかった。
数理科学の方程式の現代解析学研究

数理科学の微分方程式の解及び解空間の構造の研究が目的であった。(1)双曲型偏微分方程式に関して初期値問題の適切性のための実効的双曲型の特徴づけを進めて一般化するために、3重特性根のまわりでの陪特性曲線の構造や挙動と、その曲線に沿った解の特異性の伝播を調べた。(2)確率微分方程式の解に対としてのDonskerのデルタ関数のWiener chaosによる展開について研究した。特に熱核をガウス核から出発して構成するLevi-sumの方法を用いて、各階数のL^2-核の構成を行った。これは一般化されたLevi-sumが、Wiener chaosの枠組でのすべての階数への拡張である。(3)可解格子模型における状態空間すなわちハミルトニアンの固有グエクトルのなす空間を量子群の表現空間としてとらえ、相関関数や形状因子に具体的表示を与えるという新しい方向の研究を行った。殊に典型的な6頂点格子模型に対して頂点作用素を用いてある有理型関数の多重積分の形で表示できた。また現実の物理系のように境界のある場合には、あるスピンモデルに対して相関関数・形状因子がみたすのは、境界で反射のあるqKZ方程式であることを示した。(4)力学系の分岐問題、カオスの出現に関して研究し、退化したヴエクトル場からカオス的アトラクターの分岐が起ることを示した。即ち、3重の零固有値を持つ退化した特異性は、小さな摂動により、その特異性の近傍に、幾何的ローレンツ・アトラクターが出現することを示した。(5)偏微分方程式系の解空間の構造の研究は、分岐現象の解明を含まねばならないが、自明解からの最初のパラメーターに対して局所的な定常及びHopf分岐を除いて未解決である。パラメーターの動きに従った、線形化方程式のスペクトルの追跡は、常微分方程式系に帰着できる場合ではあるが、計算機支援証明法として、始めて定式化し、解析できるようになった。そのため区間演算のソフトウェアーも作製した。数理科学に現れる重要な常微分・偏微分方程式系の解の解析的研究も問題の設定から方法にわたって新しく変りつつある。この流れにそって以下の様な研究を行っている。(1)流体方程式について:斜面上を流れ下る粘性流体の表面に起る波は、身近な現象であるが、解析は困難な問題である。その初期境界値問題についてその定常解の安定性を適当な条件の下で証明した。(西田孝明)更に進んでReynolds数を増大させることによって起る波の解析が、現在の課題であるが、その解明のためには、計算機支援による証明法を用いたスペクトルの解析が必要であるため、この新しい方法を整備しつつある。(2)力学系について:ヴェクトル場のホモ・ヘテロクリニック軌道の余次元2の分岐の分類を行いホモクリニック倍分岐の条件を特定し、Shil'nipnov型カオスが起ることも示した。ある退化したヴェクトル場の摂動によってその平衡点の近傍に幾何学的Lorenzアトラクターが出現することを示した。(国府)(3)量子力学の方程式について:透過型ポテンシャルを持つSchodinger方程式のスペクトル理論を構成した。(池部)2個の重粘子を含む量子力学的3体系の全散乱断面積とcharge transfer modelの散乱における状態の遷移確率の関係を調べた。(2-cluster)→(2-cluster)の散乱に加えて(2-cluster)→(3-cluster)の場合の結果も得た。(伊藤宏)

(4)双曲型方程式について:Heisenberg群G上の高階双曲型作用素の初期値問題の適切性の考察を行い、ある十分条件をG上のユニタリー既約表現論の言葉で与えた。応用としてmaximally双曲性のクラスを導入し、弱双曲型作用素についてそのための十分条件を考察した。(大鍛治)Schnodinger型方程式の初期値問題の可解性の十分条件、Hamiltonianflowとの関連を考察した。(土居伸一)(5)無限次元リー群のホモトピー型の研究(河野明)。有限群の分類空間のモラバK理論の研究(西田吾郎)数理科学に現れる重要な常・偏・確率微分方程式系の解の解析的研究は、問題の定式化から方法,結果の評価に渡って新しく変りつつある。この流れに沿って以下の研究を行った。1.常微分方程式系の解空間の構造の研究:計算機支猿援の証明法を整備したことによって、周期解に関してパラメーターへの依存性,安定性が証明できるようになった。(西田・吉原)2.流体方程式系の分岐問題:パラメーターに依存した常微分方程式系の固有値問題に帰着される場合、固有値のパラメーター依存性を上記計算機支援証明を拡張・改良して解明できる方法を構成しつつある。(西田・寺本)3.抽象Wiener空間上に分数巾Sobolev空間を定義し、代表的な超Wiener汎関数であるDonskerのデルタ関数の属するSobolev空間を決定した。その結果を用いて条件付Wiener汎関数積分のHolder連続性を示し、伊藤汎関数数への応用も論じた。(渡辺)4.Heisenberg群G上の右不変ヴェクトル場から生成される狭義・双曲型作用素の初期値問題のC^∞-適切性の条件を研究した。(大鍛冶)5.力学系においてホモクリニック軌道から、その近傍をN周するホモクリニック軌道が出現する分岐現象の研究を行った。(国府)6.多体系のSchrodinger方程式の散乱問題(伊藤)本研究の最終年度に当り、研究のまとめを行うと共に今後に残された問題点・目標とすべき点を明かにした。(1)量子力学における多体問題の散乱理論の研究、3体系のSchrodinger作用素の散乱行列及び全散乱断面積の数学的解析を行い、2つの粒子が大きい場合には、charge traasfer modelにおける散乱振幅を用いて近似できることを示した。準古典極限問題も調べた。(2)Wiener空間上の超関数をSobdev空間の枠組で精密化し、確率微分方程式の解の数値解析のための、Donskerのデルタ関数を用いた近似スキームを与えた。(3)可解格子模型の状態空間の研究を行い、ハミルトニアンの固有ヴエクトルのなす空間を量子群の表現空間としてとらえ、相関関数や形状因子に具体的表示を与えた。物理系への応用として、頂点作用素を用いて転送行列を定式化し、ボゾン表示の言葉で、転送行列の最大固有ヴエクトルを具体的に与えた。(4)力学系の分岐・カオスについての研究を行い、ヴエクトル場のホモクリニック・ヘテロクリニック軌道の余次元2の分岐をMelnikov型積分の方法を用いてくわしく調べ、ホモクリニック・ダブリング分岐が無限個発生する分岐型を示した。(5)偏微分
19世紀「官話」の諸相-「周縁(ヨーロッパ・朝鮮・琉球・日本)」からのアプローチ

ものごとは、「中心」だけを見ていてはかえってその本質がつかみににくく、むしろ、「周縁」からこそ「中心」なるものの本質が見えてくるということがよくあることである。まさに「灯台もと暗し」(「傍観者清」)であるが、本研究は19世紀の諸相を、そのような「周縁からのアプローチ」という手法でもってとらえ直し、その実態に迫ろうとする試みである。この場合、「周縁」とは、地域を主眼としているが、研究領域・分野における「周縁」ということも当然含まれている。従って、本研究での地域としては、中国域外として、ヨーロッパ・朝鮮・琉球・日本を、研究領域・分野としては、語彙・文法・音韻・方言・中国個別言語学・一般言語学を含んだものとなっている。この2年間に各研究者はお互いにそれぞれの地域と分野を意識し合い、統合を目指して意欲的に研究に取り組み、業績一覧に示すような研究成果を世に問うてきたが、とりわけ欧米人の漢語研究、琉球官話の特徴、近代語彙の形成と発展、唐話の実態を明らかにした『19世紀中国語の諸相一周縁資料(欧米・日本・琉球・朝鮮)からのアプローチ』(2007年、雄松堂出版)は学界からも一定程度の評価を得ることができた。また、本研究においては、各人の研究成果のみならず、広く斯界の研究の便を計るべく、「近代漢語文献データベース」の構築を目指してきたが、これも現在までに約40種の近代漢語文献の全文検索、全語彙検索等が可能になっており、WEB上で公開中である。この中には、世界でおそらく初めてとなる『語言自遍集』の初版・第二版・第三版全ての版本の閲覧・検索が可能になるものも含まれており、今後、世界中の研究者の研究に寄与することが期待されるものである。なお、本データベースは今後も拡充させていく予定である。本研究における今年度の主要な目的は、(1)周縁各地における19世紀官話資料の調査と収集、(2)文献目録・解題の作成、(3)資料の電子テキスト化であったが、このうち、(1)と(2)については、8月未から9月初めにかけて、内田、小野、奥村がフランスおよびドイツに赴き、現地での資料収集に当たった。また、同時期に、ドイツのエアランゲン大学で開かれた「東西言語文化接触」の国際シンポジウムにおいて、内田・小野が「コルディエの文献目録」を中心に、それをどのように再構築して近代語文献資料目録あるいはコーパスを作成するかの研究発表を行った。なお、分担者の木津と奥村はそれぞれ沖縄と中国にも赴き、現地での資料収集につとめた。また、内田は平成19年3月にもイタリアに赴き、ローマ中央図書館において資料の収集を行った。今年度の最も大きな実績としては、「近代漢語文献コーパス」のプログラムをほぼ完成し、その具体的中身として第一期分として、「語言自邇集」(初版・第二版・第三版)「正音撮要」「官話類編」「聖諭広訓直解」「京話指南」「華英通語」などを電子テキスト化したことがあげられる。本プログラムは、原本の写真と電子テキストが連動して表示され、語彙検索、書名検索、異体字検索等々が可能になる、近代語コーパスとしてはおそらく世界で初めてのものである。平成19年度から正式運用を予定しているが、どのように公開するかについては、著作権の問題もあり、今後の検討課題である。なお、同プログラムに収録する電子テキストについては、平成19年度も引き続き作業を進めていくことになる。以上のほか、各メンバーはそれぞれの分担項目における研究活動を行い、著書1冊、論文11編を発表し、口頭発表(国際シンポジウムを含む)11回を行った。