hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
飲酒習慣ならびに他の食習慣因子による腸内細菌叢の影響に関する臨床栄養学研究

習慣的な多量飲酒は種々のがんリスク因子であり、その1つに大腸癌があげられる。国内でも、アルコール依存症患者の大腸の腺腫及び癌の発見率は、顕著に高いことが報告されているが、その機序については未解明な部分が多い。そこで本研究では、マウスへのエタノール(EtOH)継続投与により、がんの誘因となる結腸傷害と炎症反応、特に酸化ストレス誘導への影響について調査検討を行った。併せて腸内細菌叢に与える影響について評価を行った。SPFレベルマウス(オス)6週齢を2週間の環境適応期間を設けた後、8週齢マウスを本研究の対象とした。毎日1回シリコンゾンデを用い、1 mLの水を経口投与するコントロール群、毎日1回1 mLの1.5%(vol/vol; EtOH1.5%群; 0.5-0.6 g/kg/日)、5.0%(vol/vol; EtOH 5.0%群; 1.7-2.0g/kg/day)のEtOHを経口投与する群を2群設け、3群8匹ずつ10週間にわたり飼育を行った。併せて定期的に体重測定および摘便による糞便回収(RNA保存処理、-80°C保存処理)を行った。10週間の継続投与を終えた各群のマウス(18週齢)は採血、解剖後、肝重量ならびに肝臓内triglyceride(TG)量を測定、また肝組織標本より慢性アルコール性肝炎誘導と重症度に対する評価・観察を行った。結腸などの摘出臓器は-80°Cで冷凍保存した。血清alanine aminotransferase (ALT)活性、aspartate aminotransferase (AST)活性、TG濃度測定、評価を実施した。現在、マウス結腸組織を各種染色法を用い(ヘマトキシリン-エオシン染色、トルイジンブルー染色、Foxp3免疫染色、8OHdG染色)、結腸組織の観察・評価を実施している。飲酒習慣以外の背景因子を可能な限り統一するためにマウスを用いたモデル実験系を構築した。エタノール継続投与量を二段階に設定し、肝臓からのアルコール性慢性肝炎の観察では、結果的に投与量は、コントロール群、1.5%EtOH群、5.0%EtOH群、3群間それぞれ当初研究目的の適切な範囲内に収まり、かつ各群の違いが観察できており、本実験は概ね順調に推移していると考える。今後,10週間の投与実験を終えた各群のマウス(18週齢)の糞便からの腸内細菌叢ならびにその代謝物解析、結腸組織を用い、予定されている各種の解析(酸化ストレス、組織損傷評価と要因)を進めていく予定である.習慣的な多量飲酒は種々のがんリスク因子であり、その1つに大腸癌があげられる。今後,10週間の投与実験を終えた各群のマウス(18週齢)の糞便からの腸内細菌叢ならびにその代謝物解析、結腸組織を用い、予定されている各種の解析(酸化ストレス、組織損傷評価と要因)を進めていく予定である.今年度の実験については、既に保有していた試薬、ならびに各種消耗品で対応することができたため。
皆既日食に伴う重力音波共鳴を用いた固体地球-下層大気-超高層大気結合現象の解明

下層大気の気圧変動が重力音波モートで上空に伝搬し、電離層高度で反射され発生する約3分-4分周期の共鳴振動の存在が推測されている。当研究では、日食時の総合的観測から、重力音波共鳴の特性とそれが電離層や固体地球におよぼす効果を定量的に解明することを目的とした。微気圧観測システムをトカラ列島(諏訪瀬島、中之島)、桜島、および屋久島の京都大学防災研究所の関係施設4ケ所、沖縄・琉球大学瀬底実験所、および奄美大島北高等学校、上海近郊2ケ所の計8ケ所に皆既日食前に設置、観測を開始した。諏訪瀬島、中之島、および沖縄にはフラックスゲート磁力計、諏訪瀬島および中之島にはGPS受信機も設置した。また、沖縄および阿蘇火山研究センターにはHFドップラー観測用アンテナおよび受信装置を設置した。上海近郊で得られた微気圧観測データおよびHF-Doppler観測データには、明瞭な音波共鳴周期に対応するスヘクトルビークが検出された。また、上海近郊の地磁気観測所で得られた磁場観測データにも音波共鳴に対応する周期にピークが見られた。ただし、地上の微気圧データに見られたピークは基本共鳴周期(fundamental made=約265秒)であるのに対し、電離層高度の震動を見ていると考えられるHF-Doppler観測データや地磁気観測データには、第一高調波(first overtone=約225秒)にピークが現れた。これは、微気圧震動が、電離層高度での電磁気的震動と比較して、局在化しているためか、あるいは振幅の高度変化と電離周電気伝導度の高度変化との位置関係によるものではないかと推測される。トカラ諸島や沖縄、屋久島等で行った観測では、上記共鳴周期付近にスヘクトルピークが現れる傾向が見られたが、必ずしも明瞭ではなかった。また、広帯域地震計のデータには、皆既口食に対応すると考えられる振動は検出できなかった。
陸産巻具におけるアレロパシーと捕食による種間相互作用の実験的解析

オナジマイマイとウスカワマイマイの間で生じる成長阻害と捕食による種々干渉の効果を実験的に測定した。その結果、第一に、これらの干渉が2種間で対称的には生じないこと、すなわちオナジマイマイかウスカワマイマイに対して成長阻害および捕食のいずれによる種間競争においても、優位であることが統計的に検証された。第二に、優位の種による干渉は、これまでの劣位の種が被る負の効果により認識されてきた。ところが、本実験系では、その負の効果をもたらすことでオナジマイマイが相対的に優位であるだけではなく、ウスカワマイマイと共存することで正の効果(高成長率および低共食い率)を積極的に享受することが証明された。種内競争(密度効果)は、ウスカワマイマイでは統計的に有意ではないのに対し、オナジマイマイでは顕著に生じる。その結果、一定の固体密度においては、オナジマイマイは、全個体がオナジマイマイであるよりもウスカワマイマイがその中に含まれるほうが密度効果が低く、そのため成長率が促進されると考えられる。成長阻害による干渉については、個体の遺伝的成長率と阻害効果の高さに正の相関がある。自然の集団では生存しえない低成長率の個体については検出可能な阻害効果が生じない一方、遺伝的に高成長率の個体に対し統計的に有意な阻害効果が生じることが判明した。実験個体群の構成、特に2種個体の相対頻度は、捕食の頻度に対しては、検出可能な程度では影響しないことが統計的に判明した。また、成長阻害の程度も、優位種の劣位種に対する相対個体密度とは統計的に有意には相関しないこという結果が得られた。しかし、成長率の分散の大きさから判断するに限り、本実験規模では、実在する相関が検出されなかった可能性がある。ゆえに、成長率測定方法を改善・簡便化し、帰無仮説の肯定に必要な分析力のある測定資料を得ることが今後の課題である。オナジマイマイとウスカワマイマイの2種について、分泌物質による成長阻害および捕食による種間干渉の効果を実験的に測定した結果、第一に、これらの干渉が2種間で対称的には生じないこと、すなわちオナジマイマイがウスカワマイマイに対して成長阻害および捕食のいずれによる種間競争においても、優位であることが統計的に検証された。第二に、優位の種による干渉は、これまで劣位の種が破る負の効果により認識されてきた。その結果、一定の個体密度においては、オナジマイマイは、全個体がオナジマイマイであるよりもウスカワマイマイがその中に含まれるほうが密度効果が低く、そのため成長率が促進されると考えられる。成長阻害による干渉については、個体の遺伝的成長率と阻害効果の高さに正の相関があることが統計的に確認された。実験条件下では、成長率の個体変異が著しく、特に成長が遅い個体ではアレロパシーの効果はほとんど検出されない。つまり、自然の集団では生存しえない低成長率の個体については検出可能な阻害効果が生じないのに対し、高成長率の個体に対し統計的に有意な阻害効果が生じることが判明した。人工的に制御した同一の環境条件下で生育したきょうだい個体を比較した点で、問題の成長率変異の大部分は遺伝的であると考えられる。

したがって本研究結果は、成長率の遺伝子型と種間干渉効果との間に実験的に検出可能な相互作用が存在することを強く示唆している。オナジマイマイとウスカワマイマイの間で生じる成長阻害と捕食による種間干渉の効果を実験的に測定し。その結果、第一に、これらの干渉が2種間で対称的には生じないこと、すなわちオナジマイマイがウスカワマイマイに対して成長阻害および捕食のいずれによる種間競争においても、優位であることが統計的に検証された。第二に、優位の種による干渉は、これまで劣位の種が被る負の効果により認識されてきた。ところが、本実験系では、その負の効果をもたらすことでオナジマイマイが相対的に優位であるだけではなく、ウスカワマイマイと共存することで正の効果(高成長率および低共食い率)を積極的に享受することが証明された。種内競争(密度効果)は、ウスカワマイマイでは統計的に有意ではないのに対し、オナジマイマイでは顕著に生じる。その結果、一定の個体密度においては、オナジマイマイは、全個体がオナジマイマイであるよりもウスカワマイマイがその中に含まれるほうが密度効果が低く、そのため成長率が促進されると考えられる。成長阻害による干渉については、個体の遺伝的成長率と阻害効果の高さに正の相関がある。自然の集団では生存しえない低成長率の個体については検出可能な阻害効果が生じない一方、遺伝的に高成長率の個体に対し統計的に有意な阻害効果が生じることが判明した。実験個体群の構成、特に2種個体の相対頻度は、捕食の頻度に対しては、検出可能な程度では影響しないことが統計的に判明した。また、成長阻害の程度も、優位種の劣位種に対する相対個体密度とは統計的に有意には相関しないこという結果が得られた。しかし、成長率の分散の大きさから判断する限り、本実験規模では、実在する相関が検出されなかった可能性がある。ゆえに、成長率測定方法を改善・簡便化し、帰無仮説の肯定に必要な分析力のある測定資料を得ることが今後の課題である。
ミオシンのATP加水分解過程のストレイン依存性を一分子で見る

ある種のミオシンでは力発生が2ステップで起こるという知見を追試するとともに、2ステップ目がADPの解離にともなうものであるとの予想を検証するために、蛍光ATPの結合解離と力測定の同時計測を計画した。AOD(音響光学素子)を組み込んで二本の近赤外レーザーオプティカルトラップをつくった。直径1μmのマイクロビーズはEDCとビオチンを介してアビジン化し、オプティカルトラップで操作して、Gアクチンとビオチン化Gアクチンを混合しローダミンファロイジン存在下に重合させたアクチン線維の両端を顕微鏡下にビーズに結合させ伸展して保持した。この操作が困難で実験成功率は低く、Gアクチンとビオチン化Gアクチンの比率を5:115:1まで様々に変えて行ってみた。ビオチン化Gアクチンの比率が低ければ結合しにくく、高くするとビーズ同士の固まりができやすく、結果的に10:1を選択したもののこの条件でも実験操作は困難であった。一方のビーズはキセノンランプにより明視野照明して4分割フォトダイオードに投影し、トラップのスティフネスと移動距離から発生張力を計測すると同時に、フィードバックによって等尺条件に保ちそのときの電流から単位発生張力を測定することができる。1年目はNDフィルターの変更によりトラップ力を変えて力学条件依存性を調べる予定であったが、2年目はフィードバックの程度を可変とする回路により力学条件を変えるシステムにより実験を行うこととした。1nMCy3-EDA-ATPを基質として、緑レーザーの対物レンズ型エバネッセント顕微鏡で一分子観察を行った。ダブルビユーによりアクチンの位置と蛍光の点滅位置が一致していることを確認してVTRに録画した。しかし実際に周囲の蛍光、基盤からの蛍光に由来すると思われる多数の蛍光スポットが明滅しており、力発生と同期した蛍光の変化をとらえることはできなかった。材料としてニワトリ小腸上皮からミオシンIの精製を行い、37°Cでin vitro motility assayを行った結果0.14±0.05μm/sの滑り運動が確認できた。カバーグラスにはケミカルエッチングの手法でエバネッセント場を作るための台(横10μm縦1μm高さ1μm)を作成し、ニトロセルロースでコートして、低濃度のミオシン1(0.2μg/ml)を吸着させた。現状では得られた力発生の記録では2ステップが識別できず、この点からも計画していた2ステップ目がADPの解離にともなうものであるかどうかの検討及び、二つのステップの長さの力学条件依存性の検討は行うことができなかった。装置の未完成な部分、非常に困難な手技に対して習熟度が低い点から、さらに条件を検討してこの実験を遂行すべく努力を続けている。ある種のミオシンでは力発生が2ステップで起こるという知見を追試するとともに、2ステップめがADPの解離にともなうものであるとの予想を検証するために、蛍光ATPの結合解離と力測定の同時計測を試みた。材料としてニワトリ小腸上皮からミオシンIの精製を行い、37°Cでin vitoro mobility assayを行った結果0.14±0.05μm/sの滑り運動が確認できた。カバーグラスにはケミカルエッチングの手法でエバネッセント場を作るための台(横10μm縦1μm高さ1μm)を作成し、ニトロセルロースでコートして、低濃度のミオシンI(0.2μg/ml)を吸着させた。アクチン線維はGアクチンとビオチン化Gアクチンを7:1の割合で混合しローダミンファロイジン存在下に重合させた。アクチン線維はその両端をEDCとビオチンを介してアビジン化した直径1μmのマイクロビーズに結合させて二本の近赤外レーザーオプティカルトラップで補足して伸展させ、ミオシンと相互作用させた。一方のビーズはキセノンランプにより明視野照明して4分割フォトダイオードに投影し、発生張力を計測する。現状では基質濃度が低いため事象の発生確率が低く少数のデータしか得られていない。また得られた力発生の記録では2ステップが識別できていない。次年度にはよりステップの大きいミオシンサンプルでの実験を行いたい。また基質濃度と実験温度を上げて事象の確率を上げる予定である。

一方のビーズはキセノンランプにより明視野照明して4分割フォトダイオードに投影し、トラップのスティフネスと移動距離から発生張力を計測すると同時に、フィードバックによって等尺条件に保ちそのときの電流から単位発生張力を測定することができる。1年目はNDフィルターの変更によりトラップ力を変えて力学条件依存性を調べる予定であったが、2年目はフィードバックの程度を可変とする回路により力学条件を変えるシステムにより実験を行うこととした。1nMCy3-EDA-ATPを基質として、緑レーザーの対物レンズ型エバネッセント顕微鏡で一分子観察を行った。ダブルビユーによりアクチンの位置と蛍光の点滅位置が一致していることを確認してVTRに録画した。しかし実際に周囲の蛍光、基盤からの蛍光に由来すると思われる多数の蛍光スポットが明滅しており、力発生と同期した蛍光の変化をとらえることはできなかった。材料としてニワトリ小腸上皮からミオシンIの精製を行い、37°Cでin vitro motility assayを行った結果0.14±0.05μm/sの滑り運動が確認できた。カバーグラスにはケミカルエッチングの手法でエバネッセント場を作るための台(横10μm縦1μm高さ1μm)を作成し、ニトロセルロースでコートして、低濃度のミオシン1(0.2μg/ml)を吸着させた。現状では得られた力発生の記録では2ステップが識別できず、この点からも計画していた2ステップ目がADPの解離にともなうものであるかどうかの検討及び、二つのステップの長さの力学条件依存性の検討は行うことができなかった。装置の未完成な部分、非常に困難な手技に対して習熟度が低い点から、さらに条件を検討してこの実験を遂行すべく努力を続けている。
新規多機能性分子の開発を目指した多成分系自己集合型異種多核金属錯体の構築

金属イオンと有機配位子から構成される多孔性配位高分子は、高い空隙率、規則性を有するため、新たな多孔性材料として注目を浴びており、これまでに、吸着剤、分離剤、触媒材料とした研究が幅広くされてきた。本研究では、ゲスト吸脱着に応じてその構造変化が起こるソフトな多孔性配位高分子の結晶子サイズを小さくすることで、結晶一粒あたりの格子数の減少および結晶表面効果の増大に伴い、マイクロメートルサイズのバルク結晶と大きく異なる現象を示すことを見いだした。本研究では、柔軟な相互貫入型フレームワークの示す柔軟性のサイズ効果に着目し、一辺50ナノメートル以下のプレート状メゾサイズ結晶を得ることに成功した。このフレームワークはバルク結晶においては、ゲスト分子包接時に相互貫入した二つのフレームワークが開いた構造(open)をとり、ゲストを取り除くことで閉じた構造(close)に構造変化することが知られている。一方、本研究で得られたメゾサイズ結晶はゲストを取り除いてもopen構造を維持し、またこれを加熱することでclose構造が得られることが明らかとなった。さらにこれら、バルク結晶、メゾサイズ結晶(open)、メゾサイズ結晶(close)のメタノールの吸着挙動を追跡した。バルク結晶、メゾサイズ結晶(ciose)においては、ゲートオープン型の吸着等温線が、メゾサイズ結晶(open)においてはtype-1と呼ばれる飽和型の吸着等温線が得られた。上述した、メゾサイズ結晶の特異な相転移挙動を用いることで、メゾサイズ結晶(open)とメゾサイズ結晶(close)の吸着挙動を可逆的に制御することにも成功した。本成果は、「多孔性のソフトな結晶の構造変化に伴うメソサイズ効果」を初めて見いだしたという面で、基礎科学的な観点から大変興味深い結果と言える。複数種の金属イオンと配位子からなる多成分系の超分子金属錯体の構築法を確立することは、より高次な分子構造と機能を創出するストラテジーの一つとして、近年注目を浴びている。本研究では、これまでの比較的単純な系においてのみ制御可能であった金属配位結合を駆動力とした自己集合系を拡張し、独自に開拓したTi(IV)イオンを中心とする動的化学を基盤とした、多成分系自己集合型システムの構築を行った。これまでの研究で、新規[Ti(cat)_2(acac)]錯体(cat=catecholate,acac=acetylacetonate)を定量的に合成する手法を確立している(J.Am.Chem.Soc.2008,130,10058)。本年度の研究では、この新規[Ti(cat)_2(acac)]錯体のアセチルアセトナト部位がトロポロナト部位と位置選択的に配位子交換可能であることを見出した。さらに、HSAB則に基づき設計したビリジルカテコール配位子から形成したPd(II)Ti(IV)環状錯体をブレカーサーとし、ビストロポロン型架橋配位子と配位子交換反応を行うことで、従来のワンポットの合成法では形成困難な高次自己集合型錯体が効率的に構築できることを明らかとした。この成果はChemistry-A European Journal誌において掲載し、また発表論文と同じ巻号内において口絵としてハイライトされた。また、[Ti(cat)_2(acac)]錯体ユニットを二カ所に有するPd(II)Ti(IV)環状錯体の内部空間へのカチオンゲスト認識を検討した結果、錯体の内部にジカチオン型ゲスト分子が取り込まれることにより、Ti(IV)イオン周りの配位構造変化を伴い、かご型錯体へと構造変換するという特異な現象を見いだした。これは、環状錯体内部にカチオンが取り込まれることにより、安定化に寄与していたプロトンが放出され、[Ti(cat)_2(acac)]錯体部位が不安定化したためだと考えられる。この結果から[Ti(cat)_2(acac)]錯体の形成においてプロトネーションが重要であるという、新規Ti(IV)錯体の性質をより詳細に明らかにすることに成功した。この様に、自己集合型錯体の結合部となる金属イオン周りの配位構造の性質を理解することは、今後より精密に多成分系自己集合を制御する上で重要であると考えられる。

上述した、メゾサイズ結晶の特異な相転移挙動を用いることで、メゾサイズ結晶(open)とメゾサイズ結晶(close)の吸着挙動を可逆的に制御することにも成功した。本成果は、「多孔性のソフトな結晶の構造変化に伴うメソサイズ効果」を初めて見いだしたという面で、基礎科学的な観点から大変興味深い結果と言える。
ゲフィチニブの新規標的ＧＡＫ阻害による間質性肺炎誘導機序の解析

本研究では上皮成長因子受容体(EGFR)阻害剤ゲフィチニブのがん抑制効果と肺機能障害という副作用の分子機序の解明を目的とし、特にGAK阻害がどの様に癌細胞増殖抑制効果と副作用を引き起こすかを解析した。その結果、ゲフィチニブがGAK活性を阻害することや、GAK阻害が異常なEGF-EGFRシグナルを引き起こす機構を明らかにした。また、細胞周期制御におけるGAKとその作用因子の役割を詳細にした。さらに、様々な癌でGAKが高発現していることや、新規GAK阻害剤により癌細胞の増殖を抑制することを見出した。本研究成果は、今後、ゲフィニチブを改良したより安全で効果的な薬剤の開発に役立つと考えられる。ゲフィチニブのGAK阻害機構を調べるべく、本年度は、GAKが細胞増殖においてどの様なシグナル伝達を担っているのか解析した。これまでの解析より、GAKのキナーゼ活性阻害により、EGFRのリン酸化状態や下流のシグナル伝達の異常が見られたことから、GAKがEGF/EGFRシグナル制御に寄与すると考えられる。GAKのアミノ酸配列には、EGFRと相同なチロシンリン酸化モチーフが存在ため、これを標的とするキナーゼA, BがGAKをリン酸化する可能性がある。また、我々はこれまでにGAKが細胞周期のM期の進行に寄与することを明らかにしたことより、この細胞周期進行に関与するPLK、Aurora、Cdc2などのキナーゼについてもGAKを基質とするかについて調べた。この結果、キナーゼA、Bおよび複数の細胞周期進行関連キナーゼについてGAKを標的とすることが判明した。キナーゼ以外にも、GAKがどの様な因子と相互作用しているかについて調べた。質量分析により得られた、候補となる因子との相互作用についての詳細な解析は今後の課題である。また、GAKの臨床的特徴を調べるべく、ヒト前立腺全摘除術サンプルを用いて免疫染色を行ったところ、悪性度依存的にGAKが高発現していることが明らかとなった。また、前立腺癌以外にも様々な癌細胞株においてGAKが高発現していた。これらのことからも、GAK阻害が癌細胞の増殖抑制に寄与する可能性についても平行して解析を行ったところ、ゲフィチニブと異なる薬剤によるGAK阻害が、カスパーゼの上昇を介して癌細胞のアポトーシスを誘導する可能性が明らかになった。本研究では、ゲフィチニブによるGAK阻害の呼吸器副作用に寄与する可能性について、GAKがどの様なシグナル制御を担っているのかに注目して解析を行った。加えて、別の癌種おいてはGAK阻害による癌細胞抑制効果についても明らかにした。本研究は、上皮成長因子受容体(EGFR)に対する分子標的薬ゲフィチニブの間質性肺炎といった副作用が、ゲフィチニブ新規標的候補であるCyclin G-associated kinase(GAK)の阻害により生じる可能性を解明すべく行う。そのために肺機能不全による新生児致死といった興味深い表現型を示すGAKのキナーゼ欠損型ノックアウト(GAK-kd)マウスおよび胎性繊維芽細胞MEFで見られた表現型についてその分子機構の解析を行った。GAK-kd MEFではEGF刺激時のEGFRの細胞内取り込みが阻害された。そこでGAKがAP-2のリン酸化を介したエンドサイトーシスを制御するかについて、GAKのAP2M1リン酸化部位変異体をGAK-kd MEFに発現させてEGFRの細胞内取り込み異常が回復するか調べたが、顕著な結果は得られなかった。これは、AP2M1がGAK以外にもリン酸化される可能性や、GAKが全く別の機構でEGF-EGFRシグナルを制御することが考えられた。ゲフィチニブの副作用が少数の患者でのみ見られる原因としてGAK-SNPに着目した。ゲフィチニブ服用者で間質性肺炎を併発して死亡した患者の肺癌組織由来のゲノムDNAを用い、アミノ酸変異を伴う16個のSNPと副作用との連関を調べたが、特徴的なGAK-SNPは見付かっていない。また、我々はこれまでにGAKのリン酸化標的として脱リン酸化酵素PP2Aの調節サブユニットB'γを同定しそのリン酸化部位を決定した。申請者はこのGAKによるPP2AB'γのリン酸化の意義について解析を行った。細胞免疫染色によりリン酸化B'γは細胞分裂期の中心体やDNA損傷時の核内フォーカスに局在することを見出した。さらに生化学的解析などにより、このリン酸化がPP2Aホロ酵素の親和性の増加や細胞内分布、脱リン酸化活性の促進を制御することを見出した。24年度実施計画の内容を遂行できた。さらに実施内容の一部を、学術誌(査読あり)に発表することができた。以上より、おおむね順調に進展しているといえる。

初年度申請者は、in vitroキナーゼ活性測定によりゲフィチニブがGAKリン酸化活性を阻害することを明らかにした。今後はさらに、この阻害作用が生体内in vivoでも見られるかどうかについて調べる。これには、GAKの基質であるPP2A B'γのリン酸化抗体(作成済み)を用いて免疫染色等を行う予定である。また、ヒト細胞においてもゲフィチニブ処理やGAKノックダウンによって、GAK-kdで見られたようなEGFRの細胞内取り込み等の異常といった表現型が見られるかどうかを調べる。ヒト肺腺癌細胞ではゲフィチニブ処理によってSP-Aの発現量が低下することが知られる。他にもE-cadherinやEGFRリン酸化の発現量や細胞内分布が変化するかどうかについて調べる。また一方で、癌組織や癌細胞株で過剰発現しているキナーゼは分子標的薬の標的として有用である。別のゲフィチニブ標的であるEGFRについては広く研究が行われており言うまでもないが、GAKについても前立腺癌において過剰発現していることや、細胞増殖を亢進させる転写因子であるアンドロゲン受容体をGAKが活性化することが報告されており、申請者らも、GAKが多くの癌細胞株で正常細胞に比べて顕著に過剰発現していることを見出したことからも、GAK阻害による癌細胞増殖抑制効果についても併せて考えていく必要がある。これらの結果は副作用の無い新型ゲフィチニブの開発に役立つと考えられる。次年度の研究費は原則としてすべて消耗品に充てる予定である。
カルシウム結合蛋白質ALG-2を介するアポトーシス制御機構の研究

本研究は、細胞内Ca^<2+>センサーとしてのALG-2(apoptosis linked-gene 2)の作用点を明らかにすることで、アポトーシスの細胞内シグナル伝達機構を解明することを目的としている。研究計画に沿い、ALG-2をbaitとした酵母Two-Hybrid法を用いた結合因子の探索をおこない、エンドネキシン型Ca^<2+>結合蛋白質であるAnnexin XIのアミノ末端領域に、ALG-2が結合することを示し、昨年度、報告した。本年度はさらに、Annexin XIのアミノ末端領域のアミノ酸組成がAnnexin VIIのアミノ末端領域の組成と類似していることから、ALG-2とAnnexin VIIのアミノ末端領域の結合を検討し、報告した。ALG-2は、Annexin XIと同様に、Ca^<2+>依存的にAnnexin VIIのアミノ末端制御領域と直接、結合した。さらに、SPRバイオセンサーによりALG-2とAnnexin VII、XIの結合を速度論的に解析したところ、それぞれのアミノ末端領域にALG-2と親和性の高い領域と低い領域が存在することを示唆する結果を得た。これらAnnexinのALG-2結合に関与する領域と、すでに我々が同定しているALG-2のCa^<2+>依存的相互作用因子であるAlixのALG-2結合領域のアミノ酸組成は類似していることから、ALG-2は共通した結合モチーフを認識している可能性がある。一方で、Alixをbaitとした酵母Two-Hybrid法による結合因子の探索をおこない、細胞の増殖、生存シグナル伝達関連因子や小胞輸送関連因子などを侯補因子として得た。すでに、結合領域の同定を含めた詳細な解析をすすめており、ALG-2とAlixが協調して複数の細胞内シグナルの伝達バランスを調節している可能性を見出しており、今後の発展が期待される。本研究は、細胞内Ca^<2+>センサーとしてのALG-2(apoptosis linked-gene2)の作用点を明らかにすることで、Ca^<2+>濃度上昇を誘因とするアポトーシスの細胞内シグナル伝達機構を解明することを目的としている。研究計画に沿い、ALG-2をbaitとした酵母Two-Hybrid法を用いた結合因子の探索をおこない、報告されているpeflin、Alix/AIP1を含めた複数の候補因子を同定した。それらの中で、エンドネキシン型Ca^<2+>結合蛋白質であるAnnexin XIとALG-2がCa^<2+>依存的に結合することを示し、報告した。変異体を用いた解析から、Ca^<2+>要求性はALG-2が担っており、ALG-2はAnnexin XIのアミノ末端領域と結合することを見出した。peflinとALG-2は5つのEF-handを持つPEFファミリーCa^<2+>結合蛋白質であるが、我々はALG-2とpeflinがCa^<2+>非存在下で相互作用していることを報告している。本年度は、ALG-2とpeflinの相互作用はそれぞれの5番目のEF-handを必要とし、peflinの安定した発現にはALG-2が必要であることを示し、報告した。ALG-2の発現を抑制した細胞はアポトーシス刺激に耐性となることが示されているが、これらの細胞ではpeflinの発現も抑制されていることが予想され、peflinがアポトーシスのシグナル伝達に関与している可能性が考えられる。さらに、Alix/AIPIをbaitとした酵母Two-Hybrid法による結合因子の探索をすすめている。また、Alix/AIP1を認識する抗体を得ることに成功し、Alix/AIP1の細胞内局在について検討をすすめており、ALG-2とAlix/AIP1を介するシグナル伝達機構の解明の一助になるものと期待している。
ショウジョウバエのパターン形成遺伝子の網羅的探索

本研究は生物の体構造を作るメカニズムを明らかにすることを目的として、ショウジョウバエの翅形成をモデルに形態形成遺伝子の同定を試みた。翅はコンパートメントに分割され、その境界に発現するシグナル分子の濃度勾配によりパターニングされる。EMSを用いて、突然変異を誘発し、体細胞クローンを作成し、その表現型によりスクリーニングを行った。1.番染色体のスクリーニング当初計画により得られた約100系統の変異の中から相補性試験により既知の遺伝子を除いた。ショウジョウバエの詳細なSNPが発表されたことから現在これをもとにしたマッピングを行っている。2.細胞の親和性を制御するmtv遺伝子の機能解析スクリーニングにより周辺の細胞との親和性が低下して丸い形状を持つクローンを形成する変異が同定され本研究室で同定されたmtv遺伝子にマップされた。これは周囲の細胞と親和性が異なるために、接触面を最少にする力が働くためと考えられ乱前部と後部に生じたmtvクローンがたまたま境界で接する時には、しばしば境界がクローンに接する部分で屈折したように曲がることが観察される。おそらくmtvクローン間の親和性が強いために両者の接触面を最大にする力が働くものと思われる。しかしながらこの親和性は前後コンパートメント間においては差が無いために、コンパートメント間での移動は観察されない。また非常に大きなmtvクローンが境界で接している時にも境界は野生型と同様に直線を保っているので、ここでいう親和性はコンパートメント境界を維持するために働くそれとは独立のものである。mtvのクローン内ではカドヘリンのレベルの上昇が観察されるが、それが直接親和性を制御しているかどうかは今後の検証を待つ必要がある。
概均質ベクトル空間から弱球等質空間への発展

今年度の進展は一般腺形代数群をその既約部分群で割って得られる空間で弱球等質空間(既約弱球等質空間と仮称する)になるものの分類である。既に得られた単純代数群とスカラー倍たちで割って得られる弱球等質空間の分類の場合と異なる難しさは、ひとつの既約弱球等質空間を与えるとそれから裏返し交換という手続きで無限個の既約弱球等質空間が得られてしまうので、裏返し交換と弱球等質空間性を明らかにする必要があるところである。ここが解明されたので、正則概均質ベクトル空間に対応する既約弱球等質空間の分類は完成した。しかし非自明な概均質ベクトル空間の裏返し変換から得られる既約等質空間の分類は現在進行中である。既約正則概均質ベクトル空間(SL_5×GL_3,Λ_2【cross product】Λ_1)の相対不変式のフーリエ変換の計算は、無限軌道をもつために超局所解析が使えず、また普遍推移性ももたないので岩沢テイトの理論も使えず、長い間、未決定であった。このたび弱球等質空間へ移行して、計算をより次元の小さい三つの概均質ベクトル空間に帰着させて、それらを合成する、という形で計算することができた。実は、もっと詳しく(SL_5×P_<1.1.1>,Λ_2【cross product】Λ_1)の三つの相対不変式に関するフーリエ変換の計算が得られた。概均質ベクトル空間のフーリエ変換を弱球等質空間で考えて簡単なものに分解し、それぞれで計算してから、それらを合成して、もとの式の計算を得る、という考え方が大変有効であることを実証したことになる。また今回、I型の2単純概均質ベクトル空間の相対不変式をすべて具体的に構成することができた。いくつかの場合にコンピュータを用いた。第三に、半単純代数群の表現で有限個の軌道をもつものの分類に関して、An型の場合を完全に解決した。研究は全て概均質ベクトル空間や弱球等質空間に関連しているが、細かいところではいくつかに分かれる。〔1〕相対不変式の具体的な形を決定する問題で、既約または単純概均質ベクトル空間については決定されたので、I型の2単純概均質ベクトル空間の相対不変式の具体的な形の決定に小木曽氏らと取り組み、正則な場合と非正則な場合をそれぞれ解決した。〔2〕複素数体上の簡約可能代数群の有限次有理表現で有限個の軌道を持つものは概均質ベクトル空間の特別な場合に相当するが、スカラー倍が独立に十分沢山作用する場合は、木村-笠井-保倉により決定されている。スカラー倍が一般の場合に分類するという問題があるが、スカラー倍が全くない場合に基本的な型に対して分類ができた。その考えで一般の場合が出来そうなので、いまその部分をやっている。〔3〕弱球等質空間を概均質ベクトル空間の一般化としてとらえて、一般論を構成することは重要であるが、10次一般線型代数群Gを5次の特殊線型群の2次交代テンソル表現から得られる部分群Hで割った弱球等質空間H\Gの相対不変式の関数等式を佐藤文広、杉山和成、小木曽岳義氏らとともに計算し、その応用として今まで計算できていなかったある既約概均質ベクトル空間の相対不変式の複素冪のフーリエ変換を計算した。今年度の進展は一般線形代数群をその既約部分群で割って得られる空間で弱球等質空間(既約弱球等質空間と仮称する)になるものの分類である。既に得られた単純代数群とスカラー倍たちで割って得られる弱球等質空間の分類の場合と異なる難しさは、ひとつの既約弱球等質空間を与えるとそれから裏返し変換という手続きで無限個の既約弱球等質空間が得られてしまうので、裏返し変換と弱球等質性を明らかにする必要があるところである。
III型因子環の構造論と部分因子環の指数理論の研究

III型部分因子環の指数理論の第一目的は、指数有限の部分因子環の分類であるが、III型の場合は、その不変量として、II型部分因子環の指数理論に現われる不変量(パラ・グループ)と、エルゴード理論的な意味をもつ不変量をあわせて考えなければならない。指数が小さい場合は、これらの不変量が同時に現われることはないので既に知られているが、指数が大きくなると、一般に扱うことが極めて難しくなる。そこで、ある特別なクラス(例えば、群作用から作られる部分因子環、エルゴード理論的情報のみで記述できる部分環など)に制限して調べることが、これまでの研究方法であり、これからの方針のひとつであると思われる。これらのアプローチの中で、指数が小さい場合(すなわち、指数が2または3のとき)III型因子環・部分因子環がエルゴード理論的情報のみで記述できる必要十分条件が得られた。(エルゴード理論的情報のみで記述できる場合は、指数は整数でなければならない。)また、群作用から作られる部分因子環(正確には、有限アーベル群による接合積)に対して、自然に双対作用が存在するが、この作用の不変量をある仮定(応用上は十分な仮定)の下で計算することができた。これにより、この部分因子環とその双対な部分因子環の関係と、群作用、エルゴード理論的情報が少し明らかになった。今後の課題として群作用より広いクラスとして、Kac代数によるIII型因子環への作用を調べることが、今までの研究との関係で意味があると思われる。
プラズマフィルムを利用したFET湿度センサの開発に関する研究

本研究は感湿特性の優れた薄膜をプラズマ重合より合成し、この薄膜をFETに組み込み、実用に供することの出来るFET湿度センサー開発を目指して二年間にわたって行なわれたものである。初年度は、センサーの感湿特性が薄膜表面の親水性,疎水性サイトのバランスが重要であることに鑑み、親水性表面を与えるモノマー(A)と疎水性表面を与えるモノマー(B)との混合ガス、あるいは両性質を同一分子内に持つモノマー(C)を出発物質として、プラズマポリマーを合成した。それらのプラズマポリマーの表面特性の検討から、トリメチルシリルジメチルアミン、ビス(ジメチルアミノ)メチルビニルシラン等の同一分子内に親水基と疎水基サイトを持つモノマー(C)が出発物質として適していることを見出した。つづいて、感湿特性をさらに向上させるため、上記二種の化合物からのプラズマポリマーにメチルブロマイド蒸気を作用させ正電荷の導入をはかり、感湿特性の向上をはかった。61年度は、まず前年度開発した正電荷を持つプラズマフィルムの感湿材としての性能を検討した。感湿性は、表面抵抗および電気容量の変化より評価したが、それらの変化は電極間に与えた電界の周波数に強く依存した。結論として、120HZでの周波数が適当である。つづいて、MOS-FET湿度センサー素子作成に必須なプラズマフィルムのリソグラフィー特性を検討した。これらのフィルムは【CF_4】/【O_2】混合ガスのプラズマでエッチングが可能であること、またこのエッチング条件でホトレジストの不溶化、ゲル化も起こさず、約2μの解像度でパターンの焼きつけが可能である。以上、本研究で開発した湿度センサーは相対湿度2090%RHの範囲で計測が可能であり、ヒステリシス、応答速度も十分実用に耐える性能であることを確認した。
グループ学力の評価法開発

本研究の目的は,複数の人間により形成されるグループに対して「グループの学力」を定義し,その評価法を開発することにある.今後のネットワーク社会のさらなる進展を考えれば,社会の各分野においては個人的活動は限られ束面となり,ほとんどがプロジェクトなど複数の人間の協力する活動が多くを占めることになると思われる.そこでは,個人個人の能力の高さだけでなく,いかに複数のメンバーの協同によるグループとしての能力の高さが要求されるものと考えられる.その評価法の開発・実用は,特定の人材の集合からどのように効率的なプロジェクトメンバー構成をすればよいかという人材活用の方法論としての価値を持つものと考える.さてテストを科学的に、計量的に扱うもっとも根本的な主要概念は信頼性である.信頼性(の推定方法)は考え方により多くの定義があるが,理論的明快さや実用性など種々の利点から最も多く用いられるのはCronbachのα係数である.本研究においても信頼性といった場合,Cronbachのα係数をさすものとする.研究実績の成果は,これまでのテスト理論では扱われていなかった受検者側の内部一貫性の特性・概念を導入したことといえる.さて有力な応用目的として,たとえば,N人の受検者集団から構成員数2のグループを構成するとする.すなわち二人ずつのペアを組むとする.Guttmannスケールの項目群を仮定すれば,個別学力の大きい順に第1位から第N/2位までのN/2人を異なるグループに配すればよく,いささか自明解である.ここに受検者側に内部一貫性の特性を導入すれば,話は別で,グループ(ペア)内のθ値の大小だけでは決まらないのである.すなわちペアで考えれば,お互いがお互いの弱点を補い合うような組合せ,すなわちその2名の1,0得点パターンの排他的論理和が全体で最大化するような組合せを行うことで最大化が見込まれる.本研究の目的は,複数の人間により形成されるグループに対して「グループの学力」を定義し,その評価法を開発することにある.ここに言う「学力」は知識量だけでなく,「能力」や「コンピテンシー」という概念も含むものとする.近年,複数の学習者が互いにコミュニケーションをとりながら学ぶことを目指した協調学習など,新しい教育・学習方法が研究,実践されている.ネットワーク情報基盤環境の普及にともないCSCL(Computer Supported Collaborative Learning)あるいはPBL(Project Based Learning)など複数の学習者がグループを形成して,協調しながら学習する考え方である.大学などにおいてもCSCLやPBLの方式による協調学習を授業に取り入れ実施されている先進的事例もあるが,最終的な成績評価は,結局のところ多くの場合,各学習者個人についての出席率や普段点,提出レポートの得点で行われている.協調学習が本来育成しようとしている学力(能力)を妥当に評価できる手法開発が望まれる.H18年度は,グループ学力の概念化・定式化,測定データの整理・測定法開発,評価法のための分析法・数理モデル開発を研究目的とした.項目反応理論IRTを基本として,個別学力測定値から複数受験者への合成学力としてのグループ学力の定式化,また測定方法として複数の受験者が一つの問題を共同で解くというグループ受験の方法により実測データを収集した。この両者の差異を持ってグループ学力の個別学力に対する共同効果・コミュニケーション効果と見て,評価する考え方を提唱した.本研究の目的は,複数の人間により形成されるグループに対して「グループの学力」を定義し,その評価法を開発することにある.ここに言う「学力」は知識量だけでなく,「能力」や「コンピテンシー」という概念も含むものとする.近年,複数の学習者が互いにコミュニケーションをとりながら学ぶことを目指した協調学習など,新しい教育・学習方法が研究,実践されている.ネットワーク情報基盤環境の普及にともないCSCL(Computer Supported Collaborative Learning)あるいはPBL(Project Based Learning)など複数の学習者がグループを形成して,協調しながら学習する考え方である.大学などにおいてもCSCLやPBLの方式による協調学習を授業に取り入れ実施されている先進的事例もあるが,最終的な成績評価は,結局のところ多くの場合,各学習者個人についての出席率や普段点,提出レポートの得点で行われている.協調学習が本来育成しようとしている学力(能力)を妥当に評価できる手法開発が望まれる.グループ学力の概念化・定式化,測定データの整理・測定法開発,評価法のための分析法・数理モデル開発を研究目的として,グループ学力のモデルとして局所独立モデルとGuttmanスケールモデルとを提唱した.項目反応理論IRTを基本として,個別学力測定値から複数受験者への合成学力としてのグループ学力の定式化,また測定方法として複数の受験者が一つの問題を共同で解くというグループ受験の方法により実測データを収集した.この両者の差異を持ってグループ学力の個別学力に対する共同効果・コミュニケーション効果と見て,評価する考え方を提唱した.本研究の目的は,複数の人間により形成されるグループに対して「グループの学力」を定義し,その評価法を開発することにある.今後のネットワーク社会のさらなる進展を考えれば,社会の各分野においては個人的活動は限られ束面となり,ほとんどがプロジェクトなど複数の人間の協力する活動が多くを占めることになると思われる.そこでは,個人個人の能力の高さだけでなく,いかに複数のメンバーの協同によるグループとしての能力の高さが要求されるものと考えられる.その評価法の開発・実用は,特定の人材の集合からどのように効率的なプロジェクトメンバー構成をすればよいかという人材活用の方法論としての価値を持つものと考える.

さてテストを科学的に、計量的に扱うもっとも根本的な主要概念は信頼性である.信頼性(の推定方法)は考え方により多くの定義があるが,理論的明快さや実用性など種々の利点から最も多く用いられるのはCronbachのα係数である.本研究においても信頼性といった場合,Cronbachのα係数をさすものとする.研究実績の成果は,これまでのテスト理論では扱われていなかった受検者側の内部一貫性の特性・概念を導入したことといえる.さて有力な応用目的として,たとえば,N人の受検者集団から構成員数2のグループを構成するとする.すなわち二人ずつのペアを組むとする.Guttmannスケールの項目群を仮定すれば,個別学力の大きい順に第1位から第N/2位までのN/2人を異なるグループに配すればよく,いささか自明解である.ここに受検者側に内部一貫性の特性を導入すれば,話は別で,グループ(ペア)内のθ値の大小だけでは決まらないのである.すなわちペアで考えれば,お互いがお互いの弱点を補い合うような組合せ,すなわちその2名の1,0得点パターンの排他的論理和が全体で最大化するような組合せを行うことで最大化が見込まれる.
西洋と日本における国制史研究の方法的再定位-史料論・学問史の視角から

ポスト・ローマ期西洋史の認識枠組み、カールの皇帝戴冠、中世・近世移行期ドイツの都市統治、近世フランスの裁判関係文献史料、1800年ごろのドイツ諸大学における自然法学、オットー・ブルンナーのラント論、朝河貫一の学問史的位置づけ、などの論点の検討を通じて、史料の産出と受容の文脈をふまえた史料解釈と学問史的背景をふまえた学説の位置づけによって、国制史研究をより深化させうることが確認された。今年度は研究初年度であり、それぞれの分担者・研究班が、対象とする時代・地域について研究状況の把握につとめ、その過程で浮かび上がったいくつかの個別論点を持ち寄って、全体研究会で検討した。具体的には、800年のカールの皇帝戴冠をめぐる近時の研究が分析され、とりわけ「ケルンの覚書」と呼ばれる特異な-史料にもとづいて、ビザンツ側からカール側への提案と働きかけがあったと見る学説の当否が検討された。その過程で、「覚書」の史料価値について、史料論の見地から検討と議論がなされた。また、カールの皇帝戴冠に続く9世紀、10世紀における西欧とビザンツの関係について、使節の往来や皇帝称号問題などを中心に検討がなされ、政治史的考察にとどまらず、皇帝権の意義を終末論的観点から説明する研究動向が存在することに注意が喚起された。更に、帝国自由都市マインツの都市参事会統治を対象として、中世から近世への移行期のドイツにおける都市統治の構造と機能が分析された。いわゆる「平和法典」などを史料として、とりわけ刑事法制の面から、近世的な集権化に向かいつつある都市統治の姿が照射され、その過程での都市市民の「家」の析出と位置づけについて、比較史的検討がなされた。研究・教育活動の場としての大学とそこでの学問の自由についても、日本とドイツの法制度と議論状況を比較した検討が行われ、大学という部分的社会システムの機能と、そこにおける国家の役割について、単なる伝統への依拠とは違う法的議論を積み重ねてきたドイツの状況と日本の状況が対比された。研究計画2年目の今年度は、研究班毎に中心的な論点の絞り込みを試みつつ、研究を深化させた。論点のうちいくつかを持ち寄って全体研究会で検討した他、外国人ゲストとの間でも研究成果の提示と意見交換を活発に行った。具体的な論点としては、例えば18世紀から19世紀の転換期のドイツにおける自然法学について、その特徴と意義が分析され、特に19世紀に入つてからの自然法学と自由主義との結びつきが改めて確認された。またドイツの諸大学における自然法学の消長が、一般的政治状況および各国の大学人事政策と密接に関わっていたことが示され、政治史・大学史・学問史を組み合わせた研究方向が展望された。また、19世紀から現在までのドイツにおける地方史研究の学問史に関して、研究対象となる空間規定の仕方と、比較史の方法という二つの軸から分析がなされた。比較という要請が一貫して存在していたのに対して、空間規定の方は近年ますます多様化・多元化しつつあり、その中で主観的な空間把握により強く注意が向けられていることが確認された。更に、イェール大学所蔵朝河貫一関係文書の調査結果が報告され、そこに含まれた書簡や日記を手掛かりに、朝河と彼の研究の学問史的位置づけについて議論がなされ、ヨーロッパの学界との人的・学問的接点に関して評価が交わされた。外国人ゲストとの議論としては、11, 12世紀ドイツにおける紛争解決に関して、そこでの法的仕組みの意義を強調したカール・クレッシェル教授の講演を受けて、法以外の行動ルールを重視する近年のドイツ史学との関係や、紛争解決の際のコミュニケーションの意義など、多岐にわたる問題が議論された。また日本史研究の側から、武士の間でありえた武闘のルールや儀礼に関して事例が紹介され、同時にそれらが時代とともに変質していく経過と背景が描写されて、ドイツの状況との対比が試みられた。今年度は3年計画の最終年度であり、個別テーマについての研究を深めるとともに、テーマ横断的な広がりを持ったいくつかの個別テーマを取り上げて全員で議論し、新たな国制史研究の可能性を探った。例えば、ポスト・ローマ期ヨーロッパをとらえるための歴史的枠組をどのようにとるかという問題が、近時のヨーロッパ学界での試みを参照しつつ検討され、当該時期における国家組織と租税システムの再評価、プラクティカルな貴族概念の研究手法としての有効性、古典荘園等に関する従来の社会経済史の通説を根本的に見直す必要性、などが論じられた。また近世フランスの裁判関係史料として、いわゆるアレティスト文献の性格、法学との関係、時期的変化が分析され、特に商事裁判所関係史料との関連を切り口に、アンシャン・レジームの法と国家を考察する際にアレティスト文献がどのような意義を持ちうるかが論じられた。更に、オットー・ブルンナーのラント論について、戦間期オーストリアにおける政治と歴史研究、および第二次大戦後のヨーロッパ志向という、ブルンナーの学問史的背景を掘り下げた分析が行われ、家と支配を基軸とする彼のヨーロッパ史把握の意義と限界について活発な議論が交わされた。

またヴォルフガング・カイザー氏(フライブルク大学教授)をゲストに迎え、ローマ法史料の写本研究(個々の写本の構成・作成・修正・伝承の考察)が古代末期・中世初期の国制史と法史の研究にとって持ちうる可能性について、具体的な集合写本を例にとりあげつつ議論した。
^<99m>Tc標識病態画像診断薬開発のための基本配位子としてのヒドロキサムアミド

本研究では、一連のヒドロキサムアミド誘導体(Ham)と^<99m>Tcとの錯体の特性を検討し、ヒドロキサムアミドの^<99m>Tc標識放射性医薬品への展開の可能性を評価した。^<99m>Tc-ベンゾヒドロキサムアミド(BHam)錯体のHPLC分析を行った結果、生成比率の異なるA、B成分に分離された。また、^<99m>Tc-BHam錯体のA、B成分を分取し、その分画液を再分析した結果、A、B成分は変化がなく安定であることが示された。また、数種のヒドロキサムアミドを合成し、^<99m>Tcとの錯形成反応を行った結果、すべての配位子が^<99m>Tcと迅速かつ高収率に錯体を形成した。また、HPLC分析では、すべての^<99m>Tc錯体で^<99m>Tc-BHam錯体と同様にA、B二成分に分離され、A、B成分の生成比率は反応時間やpHによって変化するという共通の特徴を示した。さらに、各錯体をグラジエント法によってHPLC分析を行った結果、置換基の脂溶性の差に基づいて大きく保持時間が異なることから、2種のヒドロキサムアミド誘導体を用いる混合配位子錯体のHPLCによる確認を試みた。得られたクロマトグラムにおいて、1種類の混合配位子の生成を確認できたことは、ヒドロキサムアミド誘導体の^<99m>Tc錯体は、配位子と^<99m>Tcの比が2:1であることを強く示唆している。さらに^<99m>Tc錯体の体内分布挙動を比較検討した結果、排泄臓器では、各錯体の特性の違いに基づくと考えられる分布の差異が認められた。以上のように、^<99m>Tc-Ham錯体のHPL分析によって、Hamは二座配位子であにもかかわらず、極めて安定な^<99m>Tc錯体を生成する配位子であることが確認できた。