hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
専門家が用いるジェンダ-センシティブコミュニケーションに関する臨床心理学的研究

男性性が高い男子青年に対し、男性の専門家は会話内容を唱導方向に対し両面呈示し同意確認を少なくすることが効果的である傾向が示唆された。以上の結果より、専門家が用いるコミュニケーションはクライアントの性やジェンダーによって変化させることが有効であると考えられる。医療や心理臨床、教育場面において専門家が非専門家と会話を行う際、性差やジェンダーに配慮することが重要であり、より効果的な支援への一助となることに意義があるといえる。目標とする被験者数が確保でき、半構造化面接によるインタビューデータが得られ、分析することができたと捉えている。それによって専門家が遭遇するジェンダーの問題を明確にし、それに対する効果的なコミュニケーションのあり方について、システミックな視座から、会話、関係性、面接構造といったミクロからマクロなシステムの各水準で示唆が得られたと考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後はこれまでの質的検討をもとに量的検討を行う。専門家を対象に質問紙調査を行うことによって、専門家のコミュニケーションについてジェンダーの観点から尺度を作成する。さらに、専門家のコミュニケーションの効果を検討するために、患者やクライアントを対象に質問紙調査を実施し、専門家のコミュニケーションを評価してもらう予定である。しかし、患者やクライアントの性別や年齢によって異なる評価が得られることが推測されるため、ある程度対象年齢をしぼることを考えている。
デスレセプターの新規会合分子DAP3及びCLIPR59による細胞死制御機構解明

デスレセプターDR4,5のシグナル伝達に重要なDAP3の癌細胞における役割、および機能を解明する目的で、DAP3に会合する分子をyeast two-hybrid法によりスクリーニングした。その結果、会合分子として得られた分子の一つがLIP1分子であった。LIP1は癌抑制遺伝子LKB1分子の機能調節因子であることが示されている。人の培養細胞にこれらの遺伝子を導入してタンパクを発現させ、免疫沈降法によりDAP3はLIP1及びLKB1に会合することを確認した。さらに、これらの分子の機能を明らかにするため、TRAIL感受性の低い骨肉腫細胞を用いて解析を行った。骨肉腫細胞で野生型のLKB1分子を強制発現させると、TRAIL投与後の生存コロニー数が減少し、逆にドミナントネガティブ変異体であるLKB1(K78M)を導入すると生存コロニー数は増加した。したがってLKB1分子はTRAILによるアポトーシス誘導の程度を増強する機能をもつ可能性が示唆された。また、野生型のLKB1を遺伝子導入すると、TRAIL刺激によるcaspase-8,9,3の活性化が短時間で誘導された。以上の結果、骨肉腫細胞において、LKB1分子はTRAILによるアポトーシス誘導を促進し、その進行を時間的にも速める機能を有する可能性が示唆された。DAP3,LKB1の機能を制御することによってTRAIL低感受性の癌細胞にアポトーシスを誘導し、効果的な癌治療への応用が可能である。また、デスレセプターDR6に会合する分子として同様にCLIPR-59という分子をクローニングした。この分子を発現させるとDR6によるアポトーシスの誘導の程度が増強された。CLIPR-59に対するsiRNAを用いて発現を抑制するとDR6のアポトーシス誘導の程度が低下し、CLIPR-59がDR6のアポトーシス誘導に重要であることが示された。申請者らはマクロファージや樹状細胞等の生死と機能制御に関与するTRAILを介したアポトーシスのシグナル伝達に重要な分子としてDAP3を同定し、その機能解析を行った。ノックアウトマウスを作成したが、胎生致死であった(投稿中)ため、そのコンディショナルノックアウトマウス用ターゲッティングベクターの構築を行い、ES細胞への導入に成功した。現在、キメラマウスを作成している段階である。また、DAP3に会合する分子DAP3BP1(DAP3 binding protein 1)をクローニングした。この分子はTNF alphaによるアポトーシス誘導シグナルに関与しており、そのDAP3との会合部位およびアポトーシス誘導機能に関して解析を行い、免疫系細胞のアポトーシス誘導における重要性を検討している。また、アポトーシス誘導受容体であるDR6に直接会合するタンパク質としてCLIPR-59を見出した。DR6においては第373から第419アミノ酸、CLIPR-59においては第387から第547アミノ酸領域がその会合に必須であることが判明した。DR6におけるCLIPR-59会合領域欠損は、DR6の細胞死誘導能を顕著に抑制し、一方、NF-kB活性化能を促進したことから、DR6シグナルにおいてDR6とCLIPR-59の会合は細胞死に対しては促進的に働き、一方、NF-kB活性化に対しては抑制的に働きうる事が示唆された。DR6シグナルにおいて、CLIPR-59はNF-kB活性化を抑制する事により、細胞死を促進する事が考えられる(論文作成中)。これまでDR6は末梢免疫細胞の活性化制御に重要な役割を担う事が示唆されており、免疫細胞における内因性CLIPR-59の機能を解析するために、CLIPR-59発現を特異的に抑制するsiRNAの標的配列を解析し、レンチウイルスベクターを用いて検討を行っている。

デスレセプターDR4,5のシグナル伝達に重要なDAP3の癌細胞における役割、および機能を解明する目的で、DAP3に会合する分子をyeast two-hybrid法によりスクリーニングした。その結果、会合分子として得られた分子の一つがLIP1分子であった。LIP1は癌抑制遺伝子LKB1分子の機能調節因子であることが示されている。人の培養細胞にこれらの遺伝子を導入してタンパクを発現させ、免疫沈降法によりDAP3はLIP1及びLKB1に会合することを確認した。さらに、これらの分子の機能を明らかにするため、TRAIL感受性の低い骨肉腫細胞を用いて解析を行った。骨肉腫細胞で野生型のLKB1分子を強制発現させると、TRAIL投与後の生存コロニー数が減少し、逆にドミナントネガティブ変異体であるLKB1(K78M)を導入すると生存コロニー数は増加した。したがってLKB1分子はTRAILによるアポトーシス誘導の程度を増強する機能をもつ可能性が示唆された。また、野生型のLKB1を遺伝子導入すると、TRAIL刺激によるcaspase-8,9,3の活性化が短時間で誘導された。以上の結果、骨肉腫細胞において、LKB1分子はTRAILによるアポトーシス誘導を促進し、その進行を時間的にも速める機能を有する可能性が示唆された。DAP3,LKB1の機能を制御することによってTRAIL低感受性の癌細胞にアポトーシスを誘導し、効果的な癌治療への応用が可能である。また、デスレセプターDR6に会合する分子として同様にCHPR-59という分子をクローニングした。この分子を発現させるとDR6によるアポトーシスの誘導の程度が増強された。CLIPR-59に対するsiRNAを用いて発現を抑制するとDR6のアポトーシス誘導の程度が低下し、CLIPR-59がDR6のアポトーシス誘導に重要であることが示された。
ニーマンピック病マウスモデルの病因解明と胎児肝細胞移植による治療法開発

肝臓等の諸臓器にスフィンゴミエリンが蓄積する先天代謝異常症であるニーマンピック病(NPO)のモデルマウスとして、現在CSDとSPMマウスが知られている。CSDマウスは、1980年Pentcherにより紹介され、本症に外因性コレステロールのエステル化障害が存在し、さらにこの障害が本症の病因と密接に関係していることが見出された。一方SPMマウスは、1982年宮脇らにより紹介され、北川によりSMaseのアイソザイムの異常が報告された。近年、我々はSPMにおいても、CSD同様にコレステロールのエステル化障害が存在することを見出し、両マウスが非常に類似している事実より、両マウスの遺伝学的類似性を検討した。CSDとSPMの交配実験で約25%にSPMマウスと同様な脂質の蓄積が肝及び脳で認められさらに培養皮膚線維芽細胞を用いたコレステロールのエステル化に関しても同様な障害を認めた。このことは、CSDとSPMマウスの病因となる異常が、同一genome上に存在することを強く示唆するものである。さらに近年、大野によりヒトNPC染色体がSPMマウス皮膚線維芽細胞のコレステロールエステル化障害をコレクトしたことは、SPM、CSDマウスが、ヒトNPCのモデルマウスと考えられ、今後本症の病因の解明、治療法の開発の有用なモデルとなりうると考えられた。北川らにより紹介されたNiemannーPick病マウスは、スフィンゴミエリナ-ゼのアイソザイムの異常が示唆されているが、本症の病因は依然明らかでなく、その解明が待たれている。我々は、本症の病因解明のためコレステロ-ルの代謝を中心に検討し以下の興味ある結果をえた。1)遊離コレステロ-ルおよびLDL(Low Density Lipoprotein)の2種のコレステロ-ルを用い、NPDマウス培養皮膚線維芽細胞におけるコレステロ-ルのエステル化を検討し、本症における外因性コレステロ-ルのエステル化障害が存在し、ヒトのエステル化障害と酷似していることを見いだした。2)同様NPD培養皮膚線維芽細胞およびマウスに^3Hー酢酸を負荷することにより、内因性コレステロ-ルの著しい蓄積を見いだした。現在、コレステロ-ルのエステル化障害およびコレステロ-ルの合成障害の有無を検討中である。3)NPDマウスDRG(Dorzal Root Ganglion)を用いシュワン細胞においても培養皮膚線維芽細胞同様培積系において外因性コレステロ-ルの蓄積を組織化学的に証明した。4)CSD(PentchevによりNPDのモデルマウスとして紹介された。NPDタイプCにより近い。)とNPDマウス交叉実験を行い、ミュ-タント子マウスで臨床症状および生化学的異常の改善を認めず、両疾患マウスの病因に関係した遺伝子異常が同一遺伝子上に存在すると思われる結果を得た。以上これまでの研究により、NPDマウスでヒトNPDタイプCと同様、明らかに(1)外因性コレステロ-ルのエステル化障害と(2)内因性コレステロ-ルの著しい蓄積が見いだされ、さらに(3)CSDマウス(コレステロ-ル代謝異常がその病因と考えとられている)と本症マウスの交叉実験により、両疾患が遺伝学的に近似している事より、本症NPDマウスの病因は、コレステロ-ル代謝、特にその細胞内転送機構の障害によるものと考えられ、本症マウスはヒトNPDタイプCにより近いモデルと思われる。今後、本症培養皮膚線維芽細胞を用い細胞内転送機構を含めたコレステロ-ルの細胞内ホメオスタ-シスを検討する。さらに本症を含めた先天代謝異常症の遺伝子治療の基礎的研究として、胎児肝細胞の本症胎児への移植を検討し、最終的には胎児肝細胞に遺伝子を導入し、従来未解決のままになっている早期遺伝子発現消失の認めない新しい遺伝子治療法を開発する。肝臓等の諸臓器にフフィンゴミェリンが畜積する先天代謝異常症であるニーマンピック病(NPD)のモデルマウスとして、現在CSDとSPMマウスが知られている。

CSDマウスは、1980年pentchemにより紹介され、本症に外因性コレステロールのエステル化障害が存在し、さらにこの障害が本症の病因と密接に関係していることが見出された。一方、SPMマウスは、1982年宮脇らにより紹介され、北川により、SMaseのアイソザイムの異常が報告された。近年、我々はSPMにおいても、CSD同様にコレステロールのエステル化障害が存在することを見出し、両マウスが非常に類似している事実より、両マウスの遺伝学的類似性を検討した。CSDとSPMの交配実験で約25%にSPMマウスと同様な脂質の畜積が肝及び脳で認められ、さらに培養皮膚線維芽細胞を用いたコレステロールのエステル化に関しても同様な障害を認めた。このことは、CSDとSPMマウスの病因となる異常が、同一genome上に存在することを強く示唆するものである。さらに近年、大野によりヒトNPC染色体がSPMマウス皮膚線維芽細胞のコレステロールエステル化障害をコレクトしたことは、SPM、CSDマウスが、ヒトNPCのモデルマウスと考えられ、今後本症の病因の解明、治療法の開発の有用なモデルとなりうると考えられた。
急性肺障害に対する生体内高エネルギー燐酸化物のホスホエノールピルビン酸の投与効果

Phosphoenolpyruvate(PEP)は内因性のATPの前駆体であり、膜輸送蛋白を介して特定の細胞膜を透過できる。PEPの虚血再灌流障害肺に対する効果について検討した。兎摘出肺を換気・灌流を継続したコントロール群、虚血再灌流(IR)群、PEP処置虚血再灌流(PEP-IR)群に分けた(各群6匹)。IR群とPEP-IR群では、30分間の安定期の後、60分間ほど換気・灌流を停止し、その後に換気・灌流を再開した。PEP-IR群には安定期に灌流液にPEP(1mM)を前投与した。PEP投与は再灌流後の肺濾過係数と肺湿乾重量比の上昇を抑制し、ピルビン酸濃度を上昇させた。【目的】解糖系中間代謝産物であるPhosphoenolpyruvate(PEP)の虚血再灌流障害肺に対する保護効果について検討した。【方法】雄性ウサギ(日本白色種)をペントバルビタール耳静脈投与で麻酔し、肺動脈送血・左房脱血の摘出灌流肺標本を作成した。左房脱血管から血液成分を十分に廃棄した後に、physiological salt solution(PSS液)を30ml/kg/minの定流量で再灌流した。PSS液にはHES(5g/dl)、ブドウ糖(100mg/dl)、インスリン(20mU/dl)を加えた。呼吸条件はRR40/min、TV6ml/kgとした。主換気ガスに空気を用いたが、換気時のリザーバー内の灌流液のPCO2が3540mmHgになるように、主換気ガスに純CO2を混入した。標本を虚血再灌流(IR)群、PEP処置虚血再灌流(PEP-IR)群、換気・灌流を中断なく継続したコントロール(Cont)群に分けた(各群6匹)。摘出灌流肺標本は精度10mgの上皿天秤に乗せて、実験経過中、連続的に重量測定した。虚血直前、再灌流30分後、60分後の濾過係数をDrakeの方法に準じて算出した。また、実験終了後に肺を乾燥させて、肺の湿乾重量比を算出した、統計処理は分散分析で行い、P<0.05をもって有意とした。【結果】再灌流30分後と60分後の濾過係数は、IR群が他の2群に比べて有意に大きかった。肺の湿乾重量比は、IR群が他の2群に比べて有意に大きかった。【結論】PEPの肺虚血前投与は肺虚血再灌流障害を軽減する。【目的】解糖系中間代謝産物であるPhosphoenolpyruvate (PEP)の虚血再灌流障害肺に対する保護効果について検討した。左房脱血管から血液成分を十分に廃棄した後に、physiological salt solution (PSS液)を30ml/kg/minの定流量で再灌流した。主換気ガスに空気を用いたが、換気時のリバーザー内の灌流液のPCO2が3540mmHgになるように、主換気ガスに純CO2を混入した。また、実験終了後に肺を乾燥させて、肺の湿乾重量比を算出した。統計処理は分散分析で行い、P<0.05をもって有意とした。

【結果】再灌流30分後と60分後の濾過係数は、IR群が他の2群に比べて有意に大きかった。肺の湿乾重量比は、IR群が他の2群に比べて有意に大きかった。【結論】PEPの肺虚血前投与は肺虚血再灌流障害を軽減する。【目的】解糖系中間代謝産物であるPhosphoenolpyruvate(PEP)の虚血再灌流障害肺に対する保護効果について検討した。【方法】家兎をペントバルビタール耳静脈投与で麻酔し、肺動脈送血・左房脱血の摘出灌流肺標本を作成した。左房脱血管から血液成分を十分に廃棄した後に、physiological salt solution(PSS液)を30ml/kg/minの定流量で再灌流した。PSS液にはHES(5g/dl)、ブドウ糖(100mg/dl)、インスリン(20mU/dl)を加えた。呼吸条件はRR 40/min、TV 6ml/kgとした。主換気ガスに空気を用いたが、換気時のリザーバー内の灌流液のPCO2が40mmHg前後になるように、主換気ガスに純CO2を混入した。標本を虚血再灌流(IR)群、PEP処置虚血再灌流(PEP-IR)群、換気・灌流を中断なく継続したコントロール(Cont)群に分けた。PEP-IR群には安定期に灌流液にPEP(1mM)を前投与した。IR群とPEP-IR群では、30分間の安定期の後、60分間ほど換気・灌流を停止し、その後に換気・灌流を再開した。【結果】潅流液中のブドウ糖濃度は、3群ともに安定期に比べて再灌流60分時に減少したが、3群間で差はなかった。潅流液中のピルビン酸濃度は、3群ともに安定期に比べて再灌流60分時に増加し、PEP-IR群は、他の2群に比べて高値であったが、IR群とCont群の間で差はなかった。潅流液中の乳酸値は、3群ともに安定期に比べて再灌流60分時に増加したが、3群間で差はなかった。【結論】PEPはピルビン酸に代謝されて肺虚血再灌流障害を軽減したと考えられた。3群間で乳酸値に有意差がなかったのは、IR群でも虚血中に空気により肺に対してPEEP3cm水柱をかけたので、肺の環境がさほど嫌気的環境にならなかったためと考えられた。現在、摘出灌流肺において、虚血再灌流障害肺に対するPhosphoenolpyruvate (PEP)の効果を証明することがようやくできたところである。遅れた原因は摘出灌流肺において、(1)虚血再灌流障害を安定して発現させるのに時間がかかった。(2)肺血管の透過性の指標である濾過係数の測定法の確立に時間がかかったためである。In vivoでのPEPの検討にまだ至っていない。24年度が最終年度であるため、記入しない。摘出灌流肺において肺血管の透過性の指標である濾過係数の測定法が確立出来たので、今後はまず、同実験モデルにおいて、オレイン酸やLPSによる肺障害においてもPEPの効果を検討していく。その後にウサギin vivoにおいて、種々の障害肺に対するPEPの効果を検討していく。
特異点の幾何とホッジ・ラプラシアンの固有値の研究

本年度は,まず,昨年度の研究で得られた,Ricci曲率が正となる錘特異点付き空間のL^2調和形式の存在と錘特異点のリンクのトポロジーの関係を調べた結果を論文として発表した.特に,非完備多様体では一般にBochner型の消滅定理が成立しないことが分かった.次に,特異点集合の次元を0次元(孤立特異点)から1次元以上(非孤立特異点)に上げた場合の研究に取り組んだ.この典型的モデルはエッジ付き多様体と呼ばれ,ファイバーが錘特異点を持つようなファイバー束の全空間である.この研究ではファイバー束における微分形式の解析が不可欠であるが,一般の場合で解析するのは大変難しい.そこで,まず特異点の無い滑らかな場合,すなわち,通常のRiemannian submersion(沈め込み)の崩壊の族からなる場合について研究を行った.ここで,ファイバーがスケール変換以外の潰れ方も許す点が重要である.実際,滑らかな場合でも,ファイバーがスケール変換以外の潰れ方も許す場合の解析は複雑で難しく,不明な点が多いからである.まず,昨年度得られた研究成果を論文として発表できたことが最初の成果である.次に,特異点集合の次元を0次元から1次元以上に上げた場合の研究に取り組んだ.ここで,ファイバー束の微分形式の解析という,特異点から生じる難しさではなく,通常の滑らかな場合でも生じる難しさに直面した.これは一般的な状況では非常に困難な問題であるが,状況をRiemannian submersionの族の崩壊と限定することで,上手く多様体のBetti数の情報を引き出すことに成功した.できればもう少し仮定を弱めたり,特異点に関する問題を解決したかったが,通常の滑らかな場合でも新しい成果と知見が得られたので,「おおむね順調に進展している」と判断した.目標は,コンパクトRiemann多様体が特異点つき空間に収束するとき,対応する微分形式に作用するHodge-Laplacianの正の固有値と特異点の幾何・トポロジーの関係を明らかにすることである.本年度に引き続き,特異点集合の次元を0次元(孤立特異点)から1次元以上(非孤立特異点)に上げた場合,特に,その典型例であるエッジ付き多様体について考察したい.しかし,この研究ではファイバー束における微分形式の解析と幾何が大変複雑で,その様子を十分理解出来ている状況ではない.そこで,本年度後半から続けているRiemannian submersionでの微分形式の解析をより進展させること,さらに,今後の研究に使えるように解析的な道具や技術を整備することに努める.そして,Betti数よりも詳細なトポロジーや幾何学的な情報を引き出すことを目指す.また,我々が以前に行ったRiemann多様体の崩壊とHodge-Laplacianの固有値の収束に関する研究の手法が一部使えることが分かった.そこで,それらを効果的に用いること,さらに,以前の研究結果の拡張や深化についても同時に行いたい.その一つの方法として,以前行った研究の共同研究者であるCollete Ann'e氏(フランス,ナント大学)と連絡を取って議論し,共同で研究を進められないかと考えている.本研究の目標は,コンパクトRiemann多様体が特異点を持つ空間に収束した場合に,対応する微分形式に作用するHodge-Laplacianの固有値の極限と極限空間の特異点集合の位相的・幾何学的性質との関係を明らかにすることである.特に,極限が0となる小さい固有値の存在について重点的に調べる.そこで,この事実が一般の特異点集合に対しても成立するかどうかを調べた.我々はまずエッジ特異点の場合,すなわち,底空間が閉多様体で各ファイバーが錘であるようなファイバー束の全空間に現れる特異点の場合を考察した.特に,底空間が1点の場合が錘型特異点なので,エッジ特異点は自然な高次元化である.特異点付き空間で微分形式のスペクトル幾何学を展開するには,特異点を除いた正則集合上で解析を行えば良いのだが,この正則集合は一般にRiemann多様体として非完備のため,完備多様体の場合に有効な結果や手法が使えないという困難が生じる.特に,Hodge-Laplacianの閉拡張の一意性が崩れる.そこで,これらの問題の解決のため,特異空間上のde Rham-Hodge理論など関連する論文を読み新たな知識や技術を取り入れることに努めた.さらに,Laplacianの自己共役性の専門家である正宗淳氏(北海道大学)とMelchior Wirth氏(ドイツ,Jena大学)を招聘して,議論を行った.その結果,特別な場合には閉拡張の一意性が見えて来たが,完全な成果となるまでには至らなかった.「研究実績の概要」で述べた様に,我々の目標は小さい固有値の存在と特異点集合の位相的・幾何学的性質の関係を明らかにすることであるが,その際,特異間上のde Rham-Hodge理論が重要な位置を占めることが判明した.具体的には,特異点集合の次元を上げたエッジ特異点の場合,その複雑さから一般に解析を行うのが難しい.しかし,比較的易しい状況を仮定してしまうと,錘型特異点の場合と似た結果しか得られないので,新たな幾何学的現象を発見できない.そのため,ある程度特異点の状況を複雑にして解析を行わなくてはならないため,当初の予想よりも時間が掛かってしまった.それでも,特異点集合から生じる新しい現象を見つけるために,本年度から特異空間上のde Rham-Hodge理論を学び始めた.

特異空間上のde Rham-Hodge理論をよく理解することが,新しい現象の発見に向けた新しいアプローチになると考えている.そして,次年度以降にその成果が現れると期待している.本研究の目標は,コンパクト特異点つき空間の微分形式に作用するHodge-Laplacianの正固有値と特異点の幾何とトポロジーの関係を調べることである.本年度は,昨年度の研究を踏まえて,特異空間上のde Rham-Hodge理論の研究を行った.特異空間上のHodge-Laplacianの正の固有値を調べるためには,0固有値の重複度や対応する固有形式(すなわち,調和形式)の理解が不可欠だからである.しかし,通常の滑らかな多様体の場合とは異なり,特異空間上のde Rham-Hodge理論はその特異点の状況により非常に複雑かつ難解である.例えば,特異点の最も基本的なモデルである錘特異点の場合でも,錘の頂点のリンクの中間次元のコホモロジー群が消えていない場合には,外微分作用素の閉拡張の一意性が崩れるため(L^2 Stokes定理の不成立),考えるべきHodge-Laplacianが複数現れる等の問題が生じる.そこで本年度は,上述のような錘特異点のリンクの中間次元のコホモロジー群が消えていない場合に,調和形式の存在・非存在を調べる研究を行った.具体的には,n次元トーラスの懸垂を考え,その非特異集合上にRicci曲率が正となるような捩じれ積型のRiemann計量を入れる.このとき,非自明なL^2調和p-形式(p=1,2,,,n)を具体的に構成した.特に,非自明な調和1-形式が存在するので,非完備多様体ではBochner型の消滅定理が成立しないことが分かった.この例は,L^2 Stokes定理が成立しないことが鍵となっており,今後の研究を進めるにあたり重要な具体例になると思われる.以上の研究成果を論文にまとめて投稿した.本研究の目標は,コンパクト特異点つき空間の微分形式に作用するHodge-Laplacianの正固有値と特異点の幾何とトポロジーの関係を調べることである.そのためには,特異空間上のde Rham-Hodge理論やその具体例を詳しく知る必要があるが,未だ十分に解明されている状況ではない.特に,非特異集合のRiemann計量を変化させると,L^2コホモロジーやL^2調和形式が変化するなど,滑らかな多様体の場合とは異なり,大変複雑で難しい問題が生じる.この問題の解決のため,典型的な特異点のモデルである錘型特異点やその変種などの具体例において,L^2調和形式の存在・非存在を調べる研究から出発した.その結果,非特異集合のRiemann計量を変化させただけでも,特異点のリンクのトポロジーからの影響が変化するなど,L^2調和形式の存在に新たな障害が生じることが分かった.特に,Bochner型消滅定理も成立しないことも分かった.この障害の鍵はL^2 Stokes定理の不成立にあるため,さらにその成立条件についての研究を行ったが,完全な解決には至らなかった.当初の想定よりも問題が複雑で難しいことが判明したが,その中でも新たな方策において進展が見られたため,現在までの進捗状況は「おおむね順調に進展している」と判断した.本年度は,まず,昨年度の研究で得られた,Ricci曲率が正となる錘特異点付き空間のL^2調和形式の存在と錘特異点のリンクのトポロジーの関係を調べた結果を論文として発表した.
中途脊髄損傷者の受傷から現在までの自己の再構築過程に果たす運動・スポーツの役割

近年,障害と共に生きる人々が増加し,生き方への援助が重要な課題となっている.そこで本研究では,中途身体障害者を対象に,受障から現在までの自己変容過程に果たす運動・スポーツの役割を検討している.昨年度は,欧米を中心に作成された自己概念に関する多面的階層モデルについて,日本人サンプルへの適用および中途身体障害者への適用を検討した.また,中途脊髄損傷者1事例を対象に,自己概念に関する多面的階層モデルに準拠して,質的アプローチから自己変容過程を検討した.今年度は,あらたに事例に対してインタビュー調査を行い,質的アプローチを継続して実施した.検討に際しては,自己概念に関する多面的階層モデルを理論ベースに位置づけ行った.その結果,1.自己概念に関する多面的階層モデルに準拠し,中途脊髄損傷者3名の自己変容過程を検討した結果,中途脊髄損傷者は,受障により身体機能や身体部位の喪失を経験し,それまで存在してきた身体的側面(身体能力,体型,筋力など)に関する知覚の喪失や価値あるものの喪失を経験し,自己が揺らいでいた.2.一方,運動・スポーツを通して,失われた身体的側面に関する知覚が再定義されることで価値の転換が生じ,受障による喪失感からの脱却や生きる意味の再定義がなされていた.今後は,受障により失われるものとそこから回復するための実践的な介入方略を確立することを目指し,さらに,福祉や保健・医療機関,障害者スポーツの現場従事者を対象として,客観的な視点からの自己変容過程を検討していく予定である.従来の運動・スポーツ科学領域における身体障害者を対象とした研究では,理論モデルの不在と量的アプローチの限界が指摘されてきた.そこで本研究では,中途身体障害者を対象として,自己概念に関する多面的階層モデル(Fox & Colbin,1989)に準拠しながら,受傷から現在までの自己変容過程に及ぼす運動・スポーツの役割を量的・質的アプローチから解明することを目的とした.今年度行った研究の概要と知見を以下にまとめる.1.欧米を中心に作成された自己概念に関する多面的階層モデルの日本人サンプルへの適用を検討した結果,多面的階層モデルと使用する尺度の信頼性・妥当性が確認され,これに関して論文として公表した.2.中途身体障害者のみをサンプリングし,先行研究よりも精度の高い尺度を用いて,健常者を対象に作成された多面的階層モデルの中途身体障害者への適用を再検討した.その結果,中途身体障害者への多面的階層モデルの適用は妥当であり,自己変容過程を検討していく上での理論モデルとして有用であることが明らかになった3.中途脊髄損傷者1事例を対象に,自己概念に関する多面的階層モデルに準拠して,質的アプローチから自己変容過程を検討した.その結果,中途脊髄損傷者は,受傷により身体機能や身体部位の喪失を経験し,それまで存在してきた身体的側面(身体能力,体型,筋力など)に関する知覚が喪失することで,価値あるものの喪失も経験し,自己が揺らいでいた.一方,運動・スポーツを通して,失われた身体的側面に関する知覚が再定義されることで価値の転換が生じ,受傷による喪失感からの脱却や生きる意味の再定義がもたらされ,自己の可能性へ挑戦する機会が提供されていた.近年,障害と共に生きる人々が増加し,生き方への援助が重要な課題となっている.そこで本研究では,中途身体障害者を対象に,受障から現在までの自己変容過程に果たす運動・スポーツの役割を検討している.昨年度は,欧米を中心に作成された自己概念に関する多面的階層モデルについて,日本人サンプルへの適用および中途身体障害者への適用を検討した.また,中途脊髄損傷者1事例を対象に,自己概念に関する多面的階層モデルに準拠して,質的アプローチから自己変容過程を検討した.今年度は,あらたに事例に対してインタビュー調査を行い,質的アプローチを継続して実施した.検討に際しては,自己概念に関する多面的階層モデルを理論ベースに位置づけ行った.その結果,1.自己概念に関する多面的階層モデルに準拠し,中途脊髄損傷者3名の自己変容過程を検討した結果,中途脊髄損傷者は,受障により身体機能や身体部位の喪失を経験し,それまで存在してきた身体的側面(身体能力,体型,筋力など)に関する知覚の喪失や価値あるものの喪失を経験し,自己が揺らいでいた.2.一方,運動・スポーツを通して,失われた身体的側面に関する知覚が再定義されることで価値の転換が生じ,受障による喪失感からの脱却や生きる意味の再定義がなされていた.今後は,受障により失われるものとそこから回復するための実践的な介入方略を確立することを目指し,さらに,福祉や保健・医療機関,障害者スポーツの現場従事者を対象として,客観的な視点からの自己変容過程を検討していく予定である.
情報システムによるホワイトカラー生産性向上のための必要条件とその管理方式の実態

本研究では,まず生産性支配要因から近年の情報システムがホワイトカラーの生産性向上に有用であることを明らかにし,情報システムを使用してホワイトカラーの生産性を向上させる必要条件として,下記の4つの問題を検討することの意義を示した上で,これらの問題に関するわが国企業の近年の実態を各種の統計資料,報告書,文献等により研究した。それぞれの概略は以下の通りであるが,全体的に見ればわが国企業は一部の問題を除き,欧米等と比較した情報化の遅れを原因として,対応があまり進んでいないという現状を指摘できよう。1.適切な情報システムへの投資評価法...適切な投資評価法は理論的にまだ確立されておらず,投資の明確な目的の下,厳密な投資評価を実施している企業の数も少ない。今後は,情報化投資の測定と組織業績を結びつけるワイルのモデルの考え方等を参照しながら,この問題へのアプローチを続けてゆく必要性が高いと思われる。2.能力主義に基づく人事・賃金制度...わが国においてこれらの制度はかなり普及してきおり,その適用範囲も広がりを見せている。特に成果主義の賃金制度を実施する場合は,全体の目標との乖離を防ぐような評価項目の設定や,適切な評価者訓練の実施等が課題となろう。3.ハード及びソフトの保守・管理体制...現状では,情報システム部門や総務部門等で対処している企業が多い。しかし,EUCの進展やホワイトカラーの生産性向上を総合的に判断するなら,ファシリティ・マネジメントとして実施する必要性が高いと思われる。無論これには適切な予算管理を適用し,計画的な実施が望まれる。4.情報リテラシ...わが国では花王等の一部の企業を除き,コンピュータ・リテラシが中心であり,ビジネス・リテラシまで考慮されている場合は少ない。また,この問題にも適切な予算管理を適用することが望ましい。
高温ガスタービン翼の破壊制御と界面腐食の電気化学的解明

火力発電用タービンブレードの高温腐食の制御と長寿命化は燃料消費効率を向上させる上で極めて重要である。しかし耐熱性酸化物被膜(YSZ)を介してのボンドコートとの界面の酸化の制御が焦眉の急の課題である。この界面に形成される酸化物(thermally grown oxide,TGO)は、アルミナ層と複合酸化物層(NiO,CoO,Cr_2O_3)に大別される。このうち、構造材の剥離強度に悪影響を及ぼす複合酸化物の成長を抑制することが求められる。平成15年度は前年度製作した測定用の装置を用いての計測を実施すると共に、SEM,EDXにより酸化物相の断面観察および組成分析を行い、インピーダンス測定の結果と比較検討した。実験は1000°Cにおいて雰囲気中の酸素分圧を大気圧と減圧状態(Po_2=10^<-7>atm)で200時間時効し、YSZ-bond coat界面の酸化速度と酸化物組成と成長速度をインピーダンス法でその場観測を行った。減圧下で時効する事により、酸化物層の成長速度の減少と、緻密なアルミナ相のみを選択的に成長させることが期待された。緻密なアルミナ相により酸素の内部への進入を阻止し、複合酸化物の成長を抑制することが期待できる。その結果、以下の知見を得た。1.200h時効後の大気圧時効材と減圧時効材のインピーダンスを比較した結果、同じ大気環境下で減圧時効材の方が2倍程度大きかった。2.SEM像およびEDXマップより、生成したアルミナ層の厚さは、減圧時効材と大気圧時効材で同程度であった。しかし、インピーダンスは減圧時効材の方が二倍程度大きいことから、アルミナ層は減圧時効材の方がち密であると考えられる。3.200hの減圧時効においてアルミナ層以外の複合酸化物層は明らかに薄くなる傾向を示した。これは減圧時効により予めち密なアルミナ被膜が生成し、それ以降のNi,Co,Crの拡散を抑制したものと考えられる。タービンブレードの高温腐食の制御は航空機エンジンや発電機の効率を向上させる上できわめて重要である。しかし耐熱性酸化物被膜(YSZ)を介してのボンドコートとの界面の酸化が近年指摘されており、その制御が焦眉の急の課題である。この界面に形成される酸化物(thermally grown oxide, TGO)は、大きくアルミナ層と複合酸化物層(NiO, CoO, Cr2O3)に大別される。このうち構造材の剥離強度に悪影響を及ぼすのは複合酸化物層であるとされている。そのため、この複合酸化物の成長を抑制することが求められる。本研究では1000°Cにおいて雰囲気中の酸素分圧を制御し、YSZ-ボンドコート界面の酸化速度と酸化物組成の制御を試みた。本年度は測定用の雰囲気制御ができる測定装置を設計、製作し、減圧中での酸化挙動を明らかにした。減圧下で時効することにより、緻密なアルミナ層のみを選択的に成長させ、そのアルミナ層により酸素の内部への進入を阻止し、複合酸化物の成長を抑制することが期待できる。また時効中、酸化物層の成長を、交流インピーダンス法でインピーダンスを測定することにより酸化物の状態を評価した。その結果、インピーダンスの上昇は大気中での時効よりも緩やかであった。その後、高温大気中で時効後、SEM及びEDXで複合酸化物層の成長を評価した。その結果、真空下(PO2=10-7atm)で100時間時効した試験片はたとえその後大気を導入しても複合酸化物が形成されにくいことがわかった。

3.200hの減圧時効においてアルミナ層以外の複合酸化物層は明らかに薄くなる傾向を示した。これは減圧時効により予めち密なアルミナ被膜が生成し、それ以降のNi,Co,Crの拡散を抑制したものと考えられる。
三角格子反強磁性体における磁気特性と誘電特性の相関に関する研究

本研究は、三角格子反強磁性体におけるスピンカイラリティの電場による検出・制御を目指している。具体的には、螺旋スピン構造由来の強誘電性を示す三角格子反強磁性体CuCrO_2に着目し、単結晶を用いてその強誘電性と磁性の相関を調べている。本年度は、磁気構造と電気分極の相関を解明するために、(電場中)偏極中性子回折を行った。その結果、(1)基底磁気構造が非整合プロパースクリュー磁気構造であること、(2)スピンカイラリティを電場制御可能であること、を直接的に示した。これは、三角格子反強磁性体におけるスピンカイラリティの検出・制御に強誘電性の利用が有効であることを示す重要な結果である。この成果は、Journal of the Physical Society of JapanのEditor's Choiceに選ばれた。昨年度の研究により、CuCrO_2が電気分極の変化を伴う磁場誘起磁気転移を示すことを発見していたが、その詳細は明らかでなかった。そこで、磁気構造の変化を観察するために磁場中偏極中性子回折を行った。磁気転移により螺旋面方向が90度フロップすることを突き止めた。また、磁気対称性の考察から、磁気転移により電気分極方向が90度フロップすることを導き出し、これが電気分極の変化に対応していることを明らかにした。また、この磁気転移は、CuCrO_2と類似の性質を持つ三角格子反強磁性体において初めて発見された転移である点も興味深い。この成果は、Physical Review Bに掲載された。非整合性の起源について探るべく、磁場中歪みゲージ測定により格子歪みについて調べた。基底磁気構造相において三角格子面に歪みが生じることを発見し、格子歪と非整合性に密接な関係があることを示した。この成果は、Journal of the Physical Society of Japanに掲載された。本年度は、三角格子反強磁性体CuCrO_2の電気磁気相関解明に注力した。CuCrO_2は基底磁気構造として面直120度スピン構造を示す。最近、この120度構造相への磁気転移に伴う強誘電性発現が発見され電気磁気相関に興味が持たれているが、単結晶育成が困難なため詳細は不明である。本申請者はCuCrO_2単結晶育成に成功し、その電気磁気相関を詳細に調べた。その結果、120度構造相への転移に伴い三角格子面内方向に電気分極が発生することを突き止めた。更に、磁場印加により分極値が大きく変化することを発見し、この現象を磁場によるドメイン構造の整列というモデルで合理的に説明した。この研究成果はPhysical Review Bに掲載された。次に、120度構造に特徴的な磁気的パラメーター「カイラリティ」と電気分極との相関を偏極中性子回折により調べた。その結果、電場印加による分極反転に伴いカイラリティの符号が反転することを観察した。これは、面直120度構造におけるカイラリティの検出・制御に強誘電特性の利用が有効であることを示す重要な実験結果である。さらに、CuCrO_2の強誘電特性をPE履歴曲線測定から詳細に調べ、一般的な磁気秩序誘起型の強誘電体(TbMnO3など)に比べて極めて小さな抗電場を持つことを明らかにした。さらに、この抗電場が高い外部磁場敏感性を示すことを発見し、これを利用して電場磁場双方による分極反転制御に成功した。現在、この結果をまとめた論文を投稿中である。上記と平行して、CuCrO_2と同様に面直120度構造を示す三角格子反強磁性体CsNiCl_3の電気磁気相関について調べたがヽ相関は見られなかった。CuCrO_2では磁気構造が極性となるのに対しCsNiCl_3では非極性となることから、この結果は、磁気構造による反転対称性の破れが電気磁気相関発現に最も本質的であることを示す点で重要である。

非整合性の起源について探るべく、磁場中歪みゲージ測定により格子歪みについて調べた。基底磁気構造相において三角格子面に歪みが生じることを発見し、格子歪と非整合性に密接な関係があることを示した。この成果は、Journal of the Physical Society of Japanに掲載された。
同種の単為生殖系統と両性生殖系統が同所的に進化維持されるためのメカニズムの解明

本年度はハモグリミドリヒメコバチNeochrysocharis formosaの両性生殖系統と単為生殖系統のどちらのニッチが大きく、どちらの遺伝的多様性が大きいのかを明らかにすることを目的に、昨年度に引き続き、両性生殖系統と単為生殖系統を日本各地から採集した。続いて今まで採集した個体を用いて、両性生殖系統と単為生殖系統ではどちらの遺伝的多様性が大きいのか調べた。まず採集したハモグリミドリヒメコバチの両性生殖系統と単為生殖系統が分布している場所を日本地図上にプロットした結果、両性生殖系統は単為生殖系統と同程度の発生頻度で様々な地域に分布していることが分かった。続いて採集したハモグリミドリヒメコバチの両性生殖系統と単為生殖系統を材料にし、核遺伝子のDNAマーカーとミトコンドリア遺伝子のDNAマーカーを用いて、両性生殖系統と単為生殖系統のどちらの遺伝的多様性が大きいかを調べた結果、核遺伝子においては多様性に差が見られなかったが、ミトコンドリア遺伝子においては、両性生殖系統の方が単為生殖系統よりも多様性が大きいことが明らかとなった。なお、どちらの遺伝子領域においても両性生殖系統と単為生殖系統の間には遺伝的隔離が見られたことから、両性生殖系統と単為生殖系統との間には遺伝子交流が無いことが示された。以上から単為生殖系統よりも両性生殖系統の遺伝的多様性が大きいことによって、両性生殖系統と単為生殖系統が進化維持されている可能性が高いと考えられた。ハモグリミドリヒメコバチ(以下:ハモグリミドリ)の両性生殖系統(以下:両性系統)と単為生殖系統(以下:単為系統)のどちらのニッチが広く、遺伝的多様性はどちらが大きいのかを調べるために、本年度は「1.ハモグリミドリの採集」を行った。続いて遺伝的多様性に影響を与えると考えられる「2.両性系統と単為系統での交配」、「3.単為系統の2倍体維持機構」について遺伝子マーカーを用いて調べた。1.ハモグリミドリの両性系統と単為系統の採集関東地方・甲信越地方・東海地方・近畿地方・中国地方・九州地方からナモグリバエの寄生蜂を採集した。その多くの地域からハチを得た。採集した個体を未交尾で産卵させ、どちらの系統であるのかを明らかにすると共にRickettsia感染の有無を調べた。その結果、両性系統と単為系統は日本中に広く分布し、一部地域では同所的に発生していることが分かった。また、Rickettsia感染と単為系統は100%相関していた。2.ハモグリミドリの両性系統と単為系統の交配実験両性系統に特異的な遺伝子マーカーを作成し、両性系統のオスから単為系統のメスに遺伝子流動があるかを調べた。また単為生殖からも稀にオスが発生するため、そのオスから両性系統のメスに遺伝子流動があるかも調べた。その結果、双方向で遺伝子流動は生じないことが判明した。3.ハモグリミドリの単為系統の2倍体維持機構染色体観察とSSRマーカーの分離比を用いて、単為系統の2倍体維持機構について調べた。その結果、異型接合体で対立遺伝子をもつ遺伝子座を見つけ出し、遺伝的多様性は今まで単為生殖を行う種で知られてきたものよりも大きい可能性が示唆された。今後は採集した個体を用いて、2種ハモグリバエにおいて産卵実験を行い、どちらの系統の増殖率が高いのか、それは遺伝的多様性の違いに起因するものであるかを明らかにしたい。
抗がん活性を有するフシコクシン誘導体の細胞内標的たんぱく質の解明

植物病原菌の2次代謝物であるジテルペン配糖体フシコクシンとコチレニンは、化学構造が相似しているにも関わらず、フシコクシンは植物毒性を、一方コチレニンは白血病細胞に対する分化誘導活性と固形がんに対する増殖抑制活性を示すという異なる生理活性を示すことから、その作用機序の解明に興味が持たれている。本研究では、ISIR-042が14-3-3と特定のリン酸化たんぱく質と3者会合体を形成し、たんぱく質間相互作用を選択的に増強するという作業仮説のもと、細胞内作用たんぱく質の同定実験を実施し、ISIR-042の作用機序の解明を目的とした。昨年度、HEK293からFLAG-14-3-3zetaの安定発現細胞株を樹立し、60g程度の細胞を取得した。本年度はこの細胞から調製したライセートを用い、免疫沈降実験を行った。標的探索実験についてはまず実験条件の最適化を検討した。細胞ライセートを化合物含有緩衝液中ビーズで処理し、結合たんぱく質をFLAGペプチド溶液で溶出してたんぱく試料を得た。次にSDS-PAGEゲルを銀染色してバンドの検出を試みたが、大量のたんぱく質試料を担持すると分解能が顕著に低下した。次に、ISIR-042依存的にバンド強度が増大したバンドを複数切り出し、質量分析に供した。その結果、質量200kDa付近に、14-3-3結合パートナーとして報告されているたんぱく質Xが同定された。Xは、14-3-3結合サイトを複数持ち、その配列から、ISIR-042により14-3-3への結合が増強される可能性が示唆された。抗FLAG免疫沈降実験で得られたたんぱく質試料を用い、Xに対する抗体によるWestern blotを行ったところ、ISIR-042依存的なバンドの増強が確認された。このたんぱく質Xは、がん細胞の代謝調節関連信号伝達系の制御に関与していると考えられ、現在分子生物学的手法による検証作業を進めている。27年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、抗がん活性を有するフシコクシン誘導体ISIR-042が14-3-3と一緒に会合する標的タンパク質(リン酸化リガンド)を決定し、ISIR-042の特異な生物活性作用機序を解明することを目的とする。本年度は免疫沈降実験の実施に向け、HEK293細胞を用いてFLAG-14-3-3zeta安定発現株を樹立することを計画した。ヒト14-3-3zeta遺伝子をpFLAG-CMV-4ベクターへ導入したプラスミドをFuGENE試薬を用いてHEK293細胞に形質移入し、細胞抽出液をFLAG抗体とpan14-3-3抗体を用いてwestern blotで解析したところ、目的のFLAG-14-3-3zetaたんぱく質の一過性発現を確認することができた。この細胞を抗生物質G418で選択圧を掛けた条件で培養すると、1か月後に細胞コロニーの生育が認められた。95個の細胞コロニーを96 well plateに採取し、ほぼ2日おきに24, 12, 6 well plate, 6 cm培養皿に順次継代した。ここで38個のコロニーについて、western blot解析を行ったところ、D12番株に最も強いたんぱく質の発現が確認された。そこでD12株を大量培養に用いることとし、60g程度の細胞を取得した。今後はこの細胞の抽出液を用いた免疫沈降実験と質量分析によるたんぱく質同定を検討する予定である。

本年度は分子生物学実験と細胞実験に集中し、本研究の遂行に必須と考えられたタグ付き14-3-3たんぱく質の安定発現細胞の樹立を達成した。27年度が最終年度であるため、記入しない。昨年度構築した安定発現株を用いて14L程度の培地から細胞を取得し、ライセートを作成してFLAG抗体による免疫沈降を実施する。このときFLAGペプチドで結合たんぱく質の追い出しを行い、非特異吸着たんぱくによって生じるバックグラウンドの軽減を図る。化合物依存的に14-3-3への結合が増強されるたんぱく質を質量分析で同定し、候補たんぱく質を絞り込む。全ての候補たんぱく質について抗体を用いた生物学的検証を行い、化合物が制御する信号伝達系を明らかにし、作用機序を明らかにする。また、ISIR-042含有光親和性プローブを用いた標的たんぱく質の検証も試みる。
食道癌におけるプロモーター領域のメチル化とmicroRNA発現の網羅的解析

miRNAのプロモーターが癌細胞で高メチル化されることで癌の発育を抑制するmiRNAが抑制される。miRNAのarray解析を行い、食道扁平上皮癌においてメチル化により発現が変化するmiRNAの同定を行った。Arrayにより差を認めたmiR-146a、miR-142、miR-155の発現レベルを測定した。これらの発現レベルは臨床病理学的因子、疫学的因子、抗癌剤の使用有無、奏功率、予後と有意な関係性を認めなかった。以上より、食道癌においてDNAのメチル化の変化はmiRNAの発現レベルに影響を与えるが、癌の悪性度に寄与するmiRNAの同定には至らなかった。食道扁平上皮癌の細胞株であるTE-1とKYSE30に5AZA処理することでDNAのメチル化レベルを低下する。5AZA処理で上昇するmicroRNAの一つであるmiR-145に注目し実験を進めた。はじめにPyrosequencingを用いて、miR-145のプロモーターのメチル化を測定方法をデザインした。次に、所有する10個の食道扁平上皮癌細胞株を5AZA処理することでmiR-145はプロモーター領域のメチル化が低下し、発現が上昇することを確認した。臨床検体を用いて検討すると、癌組織において正常部と比較してmiR-145のプロモーター領域は高メチル化であり、発現は低下していた。癌細胞においてmiR-145はプロモーター領域のメチル化により発現が抑制されていることが示唆された。根治的切除がなされた食道扁平上皮癌105例においてmiR-145の発現量と検討を行った。高発現群と低発現群との間に全生存率(log rank p = 0.58)、無再発生存率(log rank p = 0.80)に有意な差は認められなかった。食道扁平上皮癌においてメチル化により制御されるmicroRNAの解明を目的に実験を進めている。食道扁平上皮癌でmiR-145がプロモーター領域のメチル化により発現が制御されていることを初めて報告した。食道扁平上皮癌の細胞株であるTE-1とKYSE30に5AZA処理することでDNAのメチル化レベルが低下する。5AZA処理を行うことでmiR-145のロモーター領域のメチル化レベルが低下し、その発現レベルが上昇することから、miR-145はプロモーター領域により発現が制御されていることを報告している。しかし、miR-145の発現レベルと臨床病理学的因子、予後と有意な関係性が認められず、miR-145の機能解析の為の基礎実験には進めることができなかった。miR-145以外に5AZA処理によりmiR-146aの発現レベルも有意に変化していたので、他のmiRに注目することし、食道扁平上皮癌におけるmiR-146aの発現レベルを測定した。食道扁平上皮癌の診断で根治的手術が施行された88例のホルマリン固定パラフィン包埋組織からマクロダイセクション法により癌組織を採取し、miRNeasy FFPE Kit(QIAGEN)を用いてmiRを含むTotal RNAを抽出した。miR-146aの発現レベルはqRT-PCR(Quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction)法を用いて測定した。しかしながら、miR-146aの発現レベルは臨床病理学的因子(TNM stage、静脈浸潤、リンパ管浸潤、家族歴、腫瘍部位など)、疫学的因子(喫煙歴、飲酒歴、BMI indexなど)、抗癌剤の使用有無、奏功率、予後と有意な関係性を認めなかった。今まで、miR-145、miR-146aの発現レベルを測定してきたが、臨床病理学的因子との関係を認めず、食道扁平上皮癌の悪性に関係があるmiRであるとは言い難い。細胞株を使った機能的解析に進むよりは新たなmiRの検索が必要と思われる。5AZA処理前後のRNAを用いてmiRNAのarray解析を行い、メチル化により発現が変化するmiRNAの同定を行った。miR-145のプロモーター領域のメチル化レベルが低下し、その発現レベルが上昇することから、miR-145はプロモーター領域により発現が制御されていることを以前に報告している。食道扁平上皮癌の診断で根治的手術が施行された88例のホルマリン固定パラフィン包埋組織からマクロダイセクション法により癌組織を採取し、miRNeasy FFPE Kit(QIAGEN)を用いてmiRを含むTotal RNAを抽出し、miRNAの発現レベルはqRT-PCR(Quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction)法を用いて測定した。次に、miR-146aの発現レベルも測定したが臨床病理学的因子との有意な関係は認めなかった。Arrayにて発現に差があったmiR-142とmiR-155-5pの発現レベルも測定したが、これらの発現レベルも臨床病理学的因子(TNM stage、静脈浸潤、リンパ管浸潤、家族歴、腫瘍部位など)、疫学的因子(喫煙歴、飲酒歴、BMI indexなど)、抗癌剤の使用有無、奏功率、予後と有意な関係性を認めなかった。