hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ホップ由来プロシアニジン及びその低分子化プロシアニジンの肥満予防機能の解明

以上の結果から、HPはインスリン分泌低下に起因した糖尿病の進行を抑えることが示されたが、その効果は肥満予防効果に比べて弱いことが明らかとなった。最後に、HPの抗糖尿病作用の一因を調べるため、腸管からの脂肪と糖質の吸収に与える影響を検証した。その結果、HPは脂質ミセル形成や脂肪と糖質の消化酵素の活性を濃度依存的に阻害することが明らかとなった。さらに、反転腸管法により、HPがグルコースの腸管通過を阻害することを確認した。以上の結果から、HPの肥満および糖尿病に対する予防効果は、腸管からの脂肪と糖質の吸収阻害が一因であると考えられる。また、HPの腸管での消化吸収に及ぼす影響は、糖質よりも脂肪に対する作用の方が強いことも明らかとなった。ラットの種別を変えて、ホップポリフェノールの抗肥満作用がほぼ明らかとなっている。低分子化にかんする部分について高額機器の調達が難しく進捗していないが、新たにホップに含まれる機能性成分も発見できている状況にある。24年度が最終年度であるため、記入しない。肥満に伴う糖尿病予防機能、ならびに新たに発見したホップの機能性成分の有効作用について追究していきたいと考えている。低分子化については、機器の購入が予算的に難しいので、試験管レベルでの確認にとどまると思われる。
鉄鋼連鋳プロセスに対する異形磁場印加効果

本年度は最終年度で、過去3年間を含め、研究成果の取りまとめを行った。鉄鋼の連続鋳造プロセスの鋳型部分に外部より磁場を印加し、安定的に融鉄の固化を行うプロセスについて、融液対流の非定常三次元数値解析を行った。モデル式は、連続の式、x-,y-,z-方向の連続の式、エネルギー式から成り、さらにオームの法則、電化保存則、磁場を与えるビオ・サバールの式から成る。対象とするけいは、上方から見てl×lの正方形断面で高さは2lとした。上方より0.5lの深さに0.1l×0.1lの四角形のノズルが液中にのび、その下端より左右に融鉄が噴出するものとした。直方体空間の四側面は等温冷却されるものとし、上下面は熱的絶縁とした。磁場が作用するコイルが上方より0.5lで直方体を囲む場合、x軸方向の端に2本あるいはy軸方向の端に2本ある場合を取り上げた。基礎方程式は差分近似し、HSMAC法で数値解析した。格子分割数は50^3で不等間隔スタッガードメッシュとした。計算条件はRe=10^4,Re_<in>=10^3,Gr=10^7,Pr=0.025とし、Ha=0,100,200,500の各場合を求めた。磁場を印加しない場合、ノズルからの噴流はほぼ真横の固化界面に衝突し、渦が上下、左右に形成された。1コイルの場合、Ha=100,200では、上下左右方向に大きな循環流が形成されたが、Ha=500ではこれが大きく減少した。x軸方向2コイルの場合、Ha=100,200ではHa=0の場合と大差ないが、Ha=500では、ノズル上部のみに流れが限定され、上面からみると、固化界面までは、噴流が達せず、安全性が向上することが確かめられた。y軸方向2コイルの場合、Ha=500では、ノズル上部の流れがかなり強く残り、上面からみると、固化界面まで、噴流が達していた。これらより、1コイルが最適で次にx軸方向2コイルが好ましいことが予測された。しかし、鉄鋼の連鋳過程は大変複雑で、これらの結果だけからは、高品質を保証できるところまでには至らず、今後のさらなる検討が必要とされる。磁場印加による液体金属流動制御は結晶成長や鉄鋼の連鋳において用いられるが我々は立方体容器内の自然対流について実験的、理論的に検討し、磁場印加による対流促進という定説に反することがあることを理論的に明快に説明した。(Tagawa & Ozoe,J.Heat Transfer,May,1997)これにより一部の人の間に知られていた不可思議な対流促進現象に対する疑問を氷解することができた。これは低プラントル数流体に対する非定常三次元自然対流の数学モデル式に電磁気学に基づくローレンツ力の一般項を導入してできるだけ厳密に解くことによってはじめてできたものである。

本研究においては、これらの結果を基に、鉄鋼の連鋳プロセスにおいて印加すべき磁場について、従来、鉄鋼各社で用いられてきている磁場とは異なる形態の電磁石配置における融鉄流動の数値解析を試み、従来の既存プロセスにおける効果との比較を示す。磁場の配置については、従来、タンディシュの下のモールド部分の長手から一様(新日鉄,住金)、移動磁界(NKK)などが加えられているが、ここでは幾つかの磁石を組み合わせた磁界を形成することによるより強力な流動制御法を提案する。上述の我々の三次元数値解析結果に基づけば、磁界印加の方向によって対流抑制効果が大きく異なるばかりか、方向によっては、対流を促進する副作用までもあることがわかっており、どのような磁界を印加すれば有効に対流抑制が可能かということが理論的に明確となってきたからである。本年度は初年度であり、まず解析法について、検討した。立方体容器内に液体金属を満たし、側壁より加熱、冷却し、自然対流の数値解析を行った。一方、ビオ・バザールの方程式より、まず2極コイルの場合のカスプ型磁界を取り上げ、カスプ磁界を上記、自然対流系に印加した。このようにして、カスプ磁場の効果を計算中である。また、4極コイルの場合について、磁場の分布を計算中であり、2極との場合の比較に資する。また、鉄鋼の連鋳プロセスにおいては、タンディシュよりの溶融鉄の流動を助けるためArガスが添加され、二相流となっている。そこで、ガス系、液系内の二重拡散対流についても併行して検討を進めている。ガス系の二重拡散対流においては、温度差浮力と濃度差浮力が、加熱・冷却面上で作用する場合を取り上げ、Ra=10^7,10^8の各場合において、ルイス数0.55の範囲で数値解析し、浮力比に依存して、温度、濃度成層が異なり、さらには振動対流も発生することを見い出した。また液相の二重拡散対流では、初期濃度分布が線形である場合を取り上げ、Ra=1.13×10^7の場合の過渡特性を計算した。その結果、多数のロールセルが最初発生し、時間の経過と共に、その個数が減少した。また物性値の温度依存性を考慮することによって、ロール界面が上方へ移動することを見い出した。さらには、液体金属の二重拡散自然対流で、特異な振動対流を生じることを数値解析した。即ち、Pr=0.01の流体について、温度浮力と濃度浮力が逆方向に作用する場合を取り上げ、低Pr数流体特有の円型ロールセルが回転し、ロールセル同志の衝突により振動対流が発生するメカニズム特性を求めた。鉄鋼連鋳プロセスへの新しい形の磁場印加効果を検討するため、我々はカスプ磁場を提案した。本年度は、この問題について、タンディッシュのモデル化を次のように行った。すなわち、細長いタンディッシュを上方からみて正方形にし、立方体型容器内に溶融金属が入っているものとした。容器鉛直側壁の四囲にコイルがおかれ、立方体空間内にカスプ磁場が生成されているものとした。また融鉄自身はここで周囲より水で冷却され、固化するので、立方体容器の鉛直四側壁を全て冷却面とし、上面には灰分がたまるので、断熱面と近似化し、立方体底面は本来は融鉄が下方にのびていくが、これを加熱面と見て、高温面と近似した。このような場合について、対流がない場合、水平一様磁場がある場合、さらにはカスプ磁場がある場合についてPr= 0.025、Ra=10^5と設定して数値解析した。その結果、まず磁場を印加しない場合、流れがなかなか収束せず、低Pr数独特の解と理解された。またHa=200をX-軸方向に印加した場合も持続的振動を呈している。それに対し、鉛直方向磁場、カスプ磁場共に良好な収束解を与え、磁場印加の有効性を示唆する結果が得られた。今後、さらに各面上の平均ヌセルト数とか熱流束分布、2極コイルの場合等々、多くのパラメータの効果について検討を重ねていく予定である。
代数幾何学、微分幾何学と多様体のトポロジー

1.ゲージ群などの無限次元リー群のホモトピー論的研究このテーマについては代表者と分担者佃修一氏が協力して研究した。有限複体を底空間とする主束の同伴随伴束のホモトピー型の研究を、fibrewise homotopy theoryを用いて研究し、その分類に成功した。特にfibrewiseな局所化の意味で、いつこの随伴束が自明かという問題も解決した。ゲージ群は、この随伴束の切断の空間と考えられるので、この成果を用いてゲージ群のホモトピー型を研究した。2.非安定K理論の研究このテーマについては代表者と分担者濱中裕明氏が共同して研究した。2n次元の有限複体からU(n)への写像のホモトピー類の作る群の構造を決定した。この問題と関連して、茨城大学理学部大嶋秀明教授と共同でコンパクト連結リー群の自己ホモトピー集合の作る群を研究し、この群が可換になる場合を決定した。3.ホモトピー代数の研究ホモロジー代数の非可換版であるホモトピー代数は、最近様々な分野で応用されることが多くなってきている。この方向での研究では、代表者と分担者森脇淳氏が共同で代数幾何学や数論幾何学との関連を研究した。さらに分担者深谷賢治氏との共同研究では、数理物理学や弦理論との関連も研究された。4.力学系理論についての研究この方向の研究は力学系理論について、ホモトピー論的な不変量を作ることを目的にして研究を実施した。代表者との討論で研究協力者浅岡正幸氏(京都大学大学院理学研究科講師)は射影的Anosovな2次元力学系に対する強力なホモトピー不変量を構成することに成功した。コンパクトLie群を構造群とする主束の自己同型群であるゲージ群は無限次元Lie群の典型的な例であり、自由ループ群をその特別の場合に含むものである。当研究課題ではこの群の分類空間のホモトピー型が郡の同型類をどのくらい決めることが可能かという問題を考えた。この問題については分担者佃修一氏との共同研究で底空間が単連結4次元閉多様体で構造群が2次元特殊Unitary群の場合に完全な解決に成功した。一方自由ループ群の研究には群のその基点付ループ空間への随伴作用の研究が不可欠である。この問題については分担者濱中裕明氏との共同研究で問う研究課題以前から研究してきたものですが、当研究課題ではこの問題をホモトピー結合的なHopf空間の場合に一般化してHoph空間のホモロジー群のねじれ現の存在と随伴作用がホモロジーに誘導する写像の間にLie群の場合と同様の関係があることををしめし、これを用いて例外型Lie群と同じ有理ホモトピー型を持つ結合的Hopf空間のコホモロジーがLie群の物とある場合には同型であることを示した。一方当研究課題では非可換代数幾何学で最近重要になってきているn-categoryを用いたstackの研究に着手した。この研究は分担者深谷賢治氏がmoduli空間の研究に用いている手法と多くの類似があり興味深い物である。ゲージ群などの無限次元リー群のホモトピー論的な研究このテーマについては代表者と分担者佃修一氏、濱中裕明氏が協力して研究した。今年度は特にfibrewise topologyの手法を用いて、有限次元複体をbasespaceとし、コンパクトリー群を構造群とする主束のゲージ群のfibrewise homotopy typeを研究し、充分大きな素数pについてfibrewise p局所化が自明であることを示した。非安定K理論の研究このテーマについては代表者と分担者濱中裕明氏が共同で研究しました。

今年度得られた成果は2n次元の有限複体Xに対して、その非安定K群[X, U(n)]の元の位数の上限の決定や2n次元の整係数コホモロジー群との関係を決定した。又Xを低空間とする複素ベクトル束のn次Chern数との関連も決定できた。代数幾何学との関連の研究このテーマでは主として分担者森脇淳氏の協力の下に数論的代数幾何学へのホモトピー論的手法、特にホモトピー代数の応用を研究した。微分幾何学との関連の研究このテーマでは主として分担者深谷賢治氏、中島啓氏の協力の下で高次ホモトピー結合的なHopf空間と高次のホモトピー結合性を持つ代数との関連を研究した。1.ゲージ群などの無限次元リー群のホモトピー論的研究このテーマについては代表者と分担者佃修一氏が協力して研究した。今年度は有限複体を底空間とする主束の同伴随伴束のホモトピー型の研究を、fibrewise homotopy theoryを用いて研究し、その分類に成功した。特にfibrewiseな局所化の意味で、いつこの随伴束が自明かという問題も解決した。ゲージ群は、この随伴束の切断の空間と考えられるので、この成果を用いてゲージ群のホモトピー型を研究した。この成果は平成14年7月に那覇市で開かれた全日本トポロジーシンポジュームで佃氏が講演した。さらに代表者は分担者神山靖彦氏と共同でSO(n)-instantonのモジュライ空間のコホモロジーを決定することに成功した。2.非安定K理論の研究このテーマについては代表者と分担者濱中裕明氏が共同して研究した。通常のK理論が無限次元ユニタリー群Uへの写像のホモトピー類の作る群であるのに対して非安定K理論は有限次元ユニタリー群への写像のホモトピー類の作る群である。今年度は2n次元の有限複体からU(n)への写像のホモトピー類の作る群の構造を決定した。この成果はJ. Math. Kyoto Univ.に掲載予定である。3.ホモトピー代数の研究ホモロジー代数の非可換版であるホモトピー代数は、最近様々な分野で応用されることが多くなってきている。この方向での研究では、代表者と分担者森脇淳氏が共同で代数幾何学や数論幾何学との関連を研究した。さらに分担者深谷賢治氏との共同研究では、数理物理学や弦理論との関連も研究された。
強酸性茶園土壌の放線菌群

強酸性茶園土壌に生息する微生物を計数した結果、pH4.5に調整したカゼイン・デンプン培地で得られた放線菌数はpH7.0で得られた菌数より顕著に多く、好酸性あるいは耐酸性放線菌の存在が示された。pH4.5培地上に生育した放線菌を単離、純化したのち、生育に対するpHの影響、単離株の化学分類及び生理的性質を検討した。1.全単離株はpH4及び7培地での生育の有無から好酸性菌と耐酸性菌とに分けられた。その割合は85:15で、好酸性放線菌の優占性が確認された。2.単離した各株のDAPとメナキノン組成を調べた結果、好酸性菌は全てmeso型のDAPとH9のメナキノンを有していた。これらはさらに、構成糖より2群に分けられた。第1群はA型(アラビノース/ガラクトース型)でミコール酸を有せず、気中菌糸に長い胞子鎖が観察された。また第2群はD型(アラビノース/キシロース型)でやはり気中菌糸を形成し、電子顕微鏡で長い胞子鎖が認められた。3.耐酸性株はすべてLL型のDAPであり、メナキノンはH9であった。気中菌糸はらせん状で、williamsらがかって森林土壌から単離したStreptomycesあるいはその近縁種であることが示唆された。4.これらの菌株が生成する細胞外酵素について若干の検討を行った。セルラーゼは耐酸性菌よりも好酸性菌で活性が高く、キチナーゼは全ての単離株で強い活性を示した。いずれの酵素とも、至適pHは通常報告されているものよりも低く、生息環境に適応していることが推察された。5.単離株にはアルミニウムで促進されるものと阻害されるものとがあった。アルミニウムは培養菌体の洗浄によって溶出される菌体表面にもっとも多く分布しており、表面に何らかの耐性機構のあることが示唆された。希釈平板法によって、強酸性茶園土壌に生息する微生物の検討を行った。計数に用いる培地のpHについて検討した結果、pH4.5に調整したカゼイン・デンプン培地で得られた放線菌数はpH7.0で得られた菌数より顕著に多く、好酸性あるいは耐酸性放線菌の存在が示唆された。そこでpH4.5培地上に生育した放線菌を単離、純化したのち、生育に対するpHの影響、及び単離株の化学分類学的検討を行った。1.全単離株はpH4及び7培地での生育の有無から好酸性菌、耐酸性菌、好中性菌の3群に分けられた。それぞれの割合は5.6:1:で、好酸性放線菌の優占性が確認された。

気中菌糸はらせん状で、Williamsらがかって森林土壌から単離したStreptomycesあるいはその近縁種であることが示唆された。4.これらの菌株が生成する細胞外酵素について若干の検討を行った。セルラーゼは耐酸性菌よりも好酸性菌で活性が高く、キチナーゼは全ての単離株で強い活性を示した。いずれの酵素とも、至適pHは通常報告されているものよりも低く、生息環境に適応していることが推察された。強酸性茶園土壌から単離した耐酸性及び好酸性放線菌の菌株について、菌体成分分析による化学分類と有機物分解に関わる細胞外酵素の性質の検討を行った。さらに放線菌のアルミニウム耐性の検討を行った。1.全単離株はpH4及び7培地での生育の有無から好酸性菌と耐酸性菌とに分けられた。その割合は85:15で、好酸性放線菌の優占性が確認された。2.単離した各株のDAPとメナキノン組成を調べた結果、好酸性菌は全てmeso型DAPとH9のメナキノンを有し、これらはさらに、構成糖よりA型とD型の2群に分けられた。第1群はミコール酸を有せず、気中菌糸に長い胞子鎖が観察された。第2群も長い胞子鎖を有していた。耐酸性株はすべてLL型のDAP、H9のメナキノンであった。気中菌糸はらせん状でStreptomycesあるいはその近縁種であることが示唆された。3.キチナーゼ活性の最適pHは耐酸性株で4.55.5に対し好酸性株では3.54.5と両者で異なり、好酸性株の最適pHは通常報告されている値よりやや低かった。耐熱性も両者間で差があった。好酸性放線菌のキチナーゼ活性はピルビン酸、バニリン、グルタミン酸によって抑制された。菌体の増殖と活性との関連を検討した結果、増殖にともなって急速に活性が高まることが認められた。4.セルラーゼ(CMCより還元糖を生成する酵素)活性は一般に用いられている誘導培地よりペプトンと酵母エキス濃度を減少させることによって増加した。β-グルコシダーゼの基質であるセロビオースを添加するとセルラーゼ活性は減少するのに対しβ-グルコシダーゼ活性は影響されなかった。セルラーゼ活性の最適pHは好酸性株で3.5、耐酸性株では4.55.5で、キチナーゼ同様好酸性株でより低い値を示した。5.単離株にはアルミニウムで促進されるものと阻害されるものとがあった。アルミニウムは培養菌体の洗浄によって溶出される菌体表面にもっとも多く分布しており、表面に何らかの耐性機構のあることが示唆された。
大腸鋸歯状腺腫を前癌病変とする新たな大腸発癌経路の同定と発癌メカニズムの解明

金沢大学と研究協力施設の倫理審査委員会の承認を得て既に採取され、保有している大腸鋸歯状病変のパラフィン包埋ホルマリン固定(FFPE)標本、計78検体を対象とし、解析を行った。従来、鋸歯状病変で変異が報告されている遺伝子であるAPC, TP53, KRAS, BRAF, RNF43などに加えて、大腸進行癌で変異が報告されているWntシグナル経路関連遺伝子であるCTNNB1, AXIN2, DKK1-4, FAM123B, ARID1A, TCF7L2, SOX9などを含む変異解析パネルを作成し、DNA抽出後、次世代シーケンサーを用いて変異解析を行った。また、CIMPマーカー(MINT1, MINT2, MINT12, MINT31, MLH1, CDKN2A)や他の癌関連遺伝子(SFRP1, SFRP2, IGFBP7, SOX5, GALNT14)のメチル化の定量的解析をパイロシーケンス法によって行った。さらに、一部の検体において、Wntシグナル経路の亢進を反映するとされるβカテニンの免疫組織化学を行った。その結果、無茎性鋸歯状腺腫(SSA)と比較し、鋸歯状腺腫(TSA)ではWntシグナル関連分子の遺伝子変異とSMOC1遺伝子メチル化が高頻度にみられ、SSAとは異なるTSA独自の発癌経路が存在すると考えられた。また、TSAにはBRAF変異陽性のものとKRAS変異陽性のものとが存在するが、RNF43変異はBRAF変異陽性TSAに、SMOC1遺伝子メチル化はKRAS変異陽性TSAに多く、TSAにおいても複数の発癌機構が存在することが示唆された。結果は2018年の日本癌学会学術総会、日本消化器関連学会週間(JDDW2018)、欧州消化器病週間(UEGW2018)で発表し、現在論文作成中である。臨床検体に関しては、金沢大学附属病院、研究協力施設である名古屋市立大学、福井県立病院、小松市民病院の倫理委員会の承認を得て、既に採取を行ったもの、今後採取を行うものを用いる予定であった。前向きに内視鏡下に採取する臨床検体に関しては、金沢大学附属病院、福井県立病院、小松市民病院の倫理審査委員会の承認を得て採取を開始したが、対象となる症例が少なく、現在集積が遅れている。検証に用いる多数の検体に関しては、従来切除され、ホルマリン固定パラフィン包埋(FFPE)されている組織を用いることとしたが、こちらは、名古屋市立大学、福井県立病院、小松市民病院の協力により、120ほどの検体の集積が終了した。集積したFFPE標本から、Qiagen社のQIAamp DNA FFPE Tissue Kitを用いて、DNAの抽出を行った。遺伝子変異の解析に関しては、従来鋸歯状腺腫(traditional serrated adenoma, TSA)、無茎性鋸歯状腺腫(sessile serrated adenoma, SSA)において変異が報告されている遺伝子に加え、鋸歯状病変において発癌への関与が疑われているWNT経路に関する遺伝子(DKK-1-4、APC、TCF7L2、FBXW7など)、RAS経路に関与する分子であるNRAS、HRAS遺伝子の変異の有無を調べるプライマーの設計を行った。現在、研究協力者に病理診断を依頼しており、病理診断が終了後、シークエンス解析を含む、次の解析に移る予定である。内視鏡検査、内視鏡治療を行う症例が少なく、生検検体の集積が遅れているため。臨床検体の集積に関しては、前向きに内視鏡下に採取するものに関しては対象となる症例が少なく、集積が遅れていたため、採取を断念した。そのため、従来切除され、ホルマリン固定、パラフィン包埋(FFPE)標本として保存されている組織を用いて解析を行うこととした。集積された約130検体から、DNA抽出を行った。その後、大腸進行癌で変異が高頻度に報告されているAPC, TP53, KRAS, BRAF, RNF43遺伝子などに加えて、大腸発癌において重要な経路である、Wnt経路関連遺伝子であるCTNNB1, AXIN2, DKK1-4, FAM123B, ARID1A, TCF7L2, SOX9などを含む、計39遺伝子のパネルを作成し、次世代シークエンサーを用いて変異解析を行った。DNAの質が悪い検体が多く、最終的に解析を終了したのは78病変となった。内訳は、大腸鋸歯状腺腫(TSA) 36病変、無茎性鋸歯状腺腫(SSA)18病変、microvesicular typeの過形成性ポリープ22病変、腺腫成分を伴った鋸歯状病変2病変であった。また、申請者らが従来から鋸歯状病変においてメチル化解析を行ってきた、癌関連遺伝子(SFRP1, SFRP2, IGFBP7, GALNT14, MLH1)と、ゲノムワイドなメチル化の指標となるCpG island methylator phenotype (CIMP)のマーカー遺伝子(MINT1, MINT2, MINT12, MINT31, CDKN2A)のメチル化の定量的解析をパイロシークエンス法によって行った。研究協力者に依頼していた病理診断も終了したため、現在、臨床病理学的特徴と遺伝子変異、メチル化の関連に関して解析を行っている。内視鏡下に採取する検体を使用せず、ホルマリン固定、パラフィン包埋(FFPE)標本を用いた遺伝子変異、コピー数変化、融合遺伝子、メチル化の解析と免疫組織化学を行うこととしたため。

今後は、免疫組織化学、融合遺伝子の発現解析を行うが、それを含めなくても学会発表や論文化が可能である。金沢大学と研究協力施設の倫理審査委員会の承認を得て既に採取され、保有している大腸鋸歯状病変のパラフィン包埋ホルマリン固定(FFPE)標本、計78検体を対象とし、解析を行った。従来、鋸歯状病変で変異が報告されている遺伝子であるAPC, TP53, KRAS, BRAF, RNF43などに加えて、大腸進行癌で変異が報告されているWntシグナル経路関連遺伝子であるCTNNB1, AXIN2, DKK1-4, FAM123B, ARID1A, TCF7L2, SOX9などを含む変異解析パネルを作成し、DNA抽出後、次世代シーケンサーを用いて変異解析を行った。また、CIMPマーカー(MINT1, MINT2, MINT12, MINT31, MLH1, CDKN2A)や他の癌関連遺伝子(SFRP1, SFRP2, IGFBP7, SOX5, GALNT14)のメチル化の定量的解析をパイロシーケンス法によって行った。さらに、一部の検体において、Wntシグナル経路の亢進を反映するとされるβカテニンの免疫組織化学を行った。その結果、無茎性鋸歯状腺腫(SSA)と比較し、鋸歯状腺腫(TSA)ではWntシグナル関連分子の遺伝子変異とSMOC1遺伝子メチル化が高頻度にみられ、SSAとは異なるTSA独自の発癌経路が存在すると考えられた。また、TSAにはBRAF変異陽性のものとKRAS変異陽性のものとが存在するが、RNF43変異はBRAF変異陽性TSAに、SMOC1遺伝子メチル化はKRAS変異陽性TSAに多く、TSAにおいても複数の発癌機構が存在することが示唆された。結果は2018年の日本癌学会学術総会、日本消化器関連学会週間(JDDW2018)、欧州消化器病週間(UEGW2018)で発表し、現在論文作成中である。病理診断が終了した後に、現在オーダーしているプライマーを用いて次世代シークエンサーで癌関連遺伝子の解析を行う。その後、残ったDNAを用いて癌関連遺伝子のメチル化解析を行う。内視鏡下に採取する検体が少なかった場合、DNAマイクロアレイを用いた網羅的遺伝子発現解析は行わず、FFPE標本を用いた遺伝子変異、メチル化解析のみ行うことも検討する。今後、鋸歯状病変において特異的に発現すると報告されているannexinA10 (ANXA10)、大腸鋸歯状腺腫(TSA)に特異的な遺伝子メチル化が報告されているSMOC1の免疫組織化学を行う。並行して、TSAに特異的に同定されている融合遺伝子の発現を探索する予定である。そして、遺伝子変化、メチル化、免疫組織化学の結果を統合的に解析し、TSAの発癌メカニズムの解明を行う。最終的には、遺伝子変化と内視鏡所見、免疫組織化学を含む病理組織所見とを比較することによって、より発癌可能性が高いTSAを拡大内視鏡を含む内視鏡所見から予測することが可能かどうかを検討する予定である。データの解析を終え、今年度中には学会発表や論文で結果を公表する予定である。症例の蓄積が遅れ、DNAマイクロアレイ解析を行わなかったため。当初予定していた、マイクロアレイ解析を行わなかったため。当初予定していなかった、免疫組織化学や融合遺伝子の解析に使用する計画である。次年度で使用する。もしくは、次世代シークエンス解析、遺伝子メチル化解析を行う費用に用いる。
薬剤誘導性免疫寛容系の異種移植への応用

我々はこれまでcyclophosphamideを用いたキメリズムに基づく免疫寛容の誘導系について1985年より実験を行い、50報以上の報告を行ってきた。マウスにおいて、MHC一致、マイナー抗原不一致の組み合わせにおいて、ドナー脾細胞1x108投与後cyclophosphamide200mg/kg投与するという簡単なプロトコールにて、永久的なキメリズムと皮膚移植片の永久生着が認められる。また、cyclophosphamide200mg/kg投与に加え、Busulfan25mg/kg投与後、ドナー骨髄細胞1x108個投与することにより、MHC不一致の組み合わせにおいても永久的なキメリズムと皮膚移植片のキメリズムが得られ、ドナー特異的免疫寛容が誘導できることを報告した。(J.Immunol.1999)。このプロトコールを用い、異種移植における免疫寛容を誘導する目的で実験を行い、プロトコールの改良を行っている。ドナーをF344ラット、レシピエントをB10マウスを用い、day-2にドナー脾細胞1x108投与、cyclophosphamide200mg/kg及びBusulfan30mg/kgをday0に投与し、day1にドナー骨髄細胞1x108個投与することによりマイクロキメリズム及び皮膚移植片の生着延長を認めている。今後更に皮膚移植片の永久生着ができるプロトコールを開発していく。また、抗α-Gal抗体はヒトブタ間での異種移植における超急性拒絶反応を引き起こす原因となる抗体として知られているが、この抗体を産生するB細胞における免疫寛容の誘導を目的としてα-Galノックアウトマウスを用いた実験を行っている。MHC不一致の組み合わせにおいて、α-GalK.O.マウスにWTマウスの脾細胞を投与すると抗α-Gal抗体の上昇を認め、心移植片は超急性拒絶反応により拒絶されるが、脾細胞を投与後にcyclophosphamide200mg/kg投与することにより抗α-Gal抗体は消失し、B細胞における免疫寛容が誘導された。更に心移植片における超急性拒絶反応は認めなかった。今後更に実験を行い、B細胞での免疫寛容の誘導におけるメカニズムを解析していく。今回我々は、慢性拒絶により拒絶されるAKR(H-2k)→C3H(H-2k)の組み合わせと共同研究者が開発したマウス頸部異所性心移植モデルをもちいて移植後の冠動脈閉塞性内膜肥厚の機序を解析している。その結果、150日程度移植心が生着するにもかかわらず移植後2週目にはすでにリンパ球の冠動脈周囲への浸潤及び内膜肥厚の開始が観測された。初期の免疫刺激によりその後の冠動脈閉塞性内膜肥厚が決定ずけられること、及び拒絶反応は冠動脈周囲より始まることが明らかとなった(Zhang etal,submitted for publication)。また、CP誘導性免疫寛容により寛容状態が誘導された心移植片にはキメラ状態の存在の有無にかかわらず閉塞性冠動脈病変は生じないことも明らかとなった(Zhang et al,submitted for publication)。我々がマウスにおいて開発したIn Vitroにおける免疫寛容系(Transplantation,1986)は豚リンパ球を用いても寛容誘導が可能であった(Gu et al.Manuscript in preparation)。

ミニ豚を用いたIn vivoの実験であるが、豚においてはCP200mg/kgは致死以上の線量であり、CP100mg/kg以下の投与が必要であることが明らかとなった。さらにマウスにおいてMHC抗原の壁を越えて皮膚移植片に対する免疫寛容実験系を確立することが出来、その最低薬剤量はCPが200mg/kg、BUが25mg/kgであることが明らかとなった(Y.Tomita etal,submitted for publication)また、SC+100mg/kgCPにて中等度の心臓移植片生着延長効果を得ている。我々はこれまでcyclophosphamideを用いたキメリズムに基づく免疫寛容の誘導系について1985年より実験を行い、50報以上の報告を行ってきた。マウスにおいて、MHC一致、マイナー抗原不一致の組み合わせにおいて、ドナー脾細胞1x108投与後cyclophosphamide200mg/kg投与するという簡単なプロトコールにて、永久的なキメリズムと皮膚移植片の永久生着が認められる。また、cyclophosphamide200mg/kg投与に加え、Busulfan25mg/kg投与後、ドナー骨髄細胞1x108個投与することにより、MHC不一致の組み合わせにおいても永久的なキメリズムと皮膚移植片のキメリズムが得られ、ドナー特異的免疫寛容が誘導できることを報告した。(J.Immunol.1999)。このプロトコールを用い、異種移植における免疫寛容を誘導する目的で実験を行い、プロトコールの改良を行っている。ドナーをF344ラット、レシピエントをB10マウスを用い、day-2にドナー脾細胞1x108投与、cyclophosphamide200mg/kg及びBusulfan30mg/kgをday0に投与し、day1にドナー骨髄細胞1x108個投与することによりマイクロキメリズム及び皮膚移植片の生着延長を認めている。今後更に皮膚移植片の永久生着ができるプロトコールを開発していく。また、抗α-Gal抗体はヒトブタ間での異種移植における超急性拒絶反応を引き起こす原因となる抗体として知られているが、この抗体を産生するB細胞における免疫寛容の誘導を目的としてα-Galノックアウトマウスを用いた実験を行っている。MHC不一致の組み合わせにおいて、α-GalK.O.マウスにWTマウスの脾細胞を投与すると抗α-Gal抗体の上昇を認め、心移植片は超急性拒絶反応により拒絶されるが、脾細胞を投与後にcyclophosphamide200mg/kg投与することにより抗α-Gal抗体は消失し、B細胞における免疫寛容が誘導された。更に心移植片における超急性拒絶反応は認めなかった。今後更に実験を行い、B細胞での免疫寛容の誘導におけるメカニズムを解析していく。
戦間期日本におけるアイルランド認識

研究員は、「戦間期日本におけるアイルランド認識」を研究テーマとし、日本における対外認識の形成過程を国際関係において問い直すことに取り組んできた。平成21年度は、アメリカ議会図書館での資料収集を通じ、当該期日本において朝鮮総督府官僚及び朝鮮統治に関心を持つ知識人の間で、アイルランドが注目された背景について調査した。1916年以降、アイルランド本国における独立運動の高まりとともに、アメリカにおいてもアイルランド独立運動が展開され、アイルランド系アメリカ人もこれを支持した。また、ウィルソンが民族自決主義を唱えたことから、アメリカでも民族自決運動に対する関心が高まり、アイルランド独立問題も新聞や議会で積極的に議論された。これに付随し、朝鮮独立運動もアメリカ世論や議員たちから関心を集め、また実際にアイルランド及び朝鮮の独立運動支持者が一堂に会することもあったことが議会図書館の資料からわかった。当然ながら、こうした動きは日本大使館やアメリカにおける新聞を目にした知識人ら、また朝鮮総督府からアメリカに派遣されたによって日本に伝えられ、アイルランド問題は朝鮮問題と関連付けられ注目されることになったのである。また、こうした日本側からの認識に対し、アイルランド側の認識を明らかにするため、アイルランドのコロンバン会アーカイブで資料収集を行った。その結果、朝鮮で宣教活動を行っていたアイルランド人宣教師は、嫌がらせを繰り返す日本人官憲に対しよいイメージはないものの、朝鮮とアイルランド人の間に共通点を見出す視点は見られないことが明らかになり、日本側とアイルランド側の認識の相違が浮き彫りになった。平成20年度は、日本とアイルランドの相互認識を比較することにより、日本の対アイルランド認識の特徴を明らかにすることを目的とし、アイルランドのナショナルアーカイブにおいて、アイルランドの日本認識に関する資料収集を行った。その結果、以下の内容が明らかになった。両国の関係は主に、1931年の満州事変、1942年の在ダブリン日本領事館開設の2つの時期に集中する。満州事変以前、アイルランド指導層の日本認識は、地理的疎遠さも手伝って、「列強」の一国程度のものであった。しかし、満州事変勃発により、紛争当事者の日本と、当時国際連盟で非常任理事国を務めていたアイルランドは対立することとなった。あくまで「大国」主導の国際関係観を持ち、アイルランドを「小国」と軽視していた日本に対し、アイルランドでは、連盟および、連盟における「小国」の役割促進を国益とするデ・ヴァレラ(Eamon de Valera)のイニシアティブの下、日本政府の理念を正面から否定する政策がとられた。第二次世界大戦開戦後は、アイルランドが「中立」を保ち、日本が領事館をダブリンに置いたことから、日本側はこれを友好的であったと見なしていた。しかし調査の結果、日本領事館員による「反政府組織」との接触という「好ましくない」活動が存在し、こうした一連の行動が時に「中立」国アイルランドを窮地に陥れるものであったことがわかった。このように、調査の結果、両国における認識のギャップが明らかになった。また、国際関係の理想と現実の狭間で揺れるアイルランドに対し、日本政府は常にアイルランドの現実を突きつけ、その理想主義実践を困難にさせる対象であったことが明らかになった。
新しい観測的宇宙論とその初期宇宙への応用についての研究

ブルース・バセット氏は、ひとつはKAOSプロジェクトと呼ばれる次世代の高赤方偏移銀河サーベイに関係する観測的宇宙論の仕事をおこなった。このサーベイの重要課題は、宇宙の物質構成、特に、近年注目されているダークエネルギーの時間発展を観測的に決める独立な手段を与えることであるが、氏の研究はこのプロジェクトの実現可能性を評価する重要なものである。このプロジェクトの特色は宇宙膨張を捉えるために光度距離ではなく角度距離を用い、その角度の標準長さ尺度を与えるものとして、バリオンと光子の系の音波振動に由来する密度揺らぎの振幅の振動を用いるという点である。しかし、この方法は宇宙のバリオン密度が低い場合にはうまくいかないという問題点があった。この点を改良するため、広島大学の山本一博氏らとの共同で進められた研究では、赤方偏移による銀河相関の視線方向と角度方向の違いを用いることによりダークエネルギーの時間発展を決める方法を応用することでバリオンの密度が低い場合にもダークエネルギーの時間発展をトレースできることを明らかにしたもので非常に重要である。更に、京都での共同研究の成果としては、インフレーション終了後のパラメータ共振によって作られる揺らぎを起源とするブラックホール形成の問題に対するシミュレーションがある。これまで、ブラックホール形成が比較的おこるのではないかという報告がなされていたが、密度揺らぎの発展に着目した新しいシミュレーションの結果によると、ブラックホール形成はかなり一般的に難しいということが明らかになった。研究は依然、途上であるので最終的な結論を得るには更に1年程度の研究の継続が必要とされるが、これまでと違った不定性の少ないブラックホール形成率の評価方法の基礎を与える仕事は既に確立され、論文の投稿段階に入っている。
コレシストキニン/ガストリン受容体を介するヒト癌細胞増殖の分子機構

ヒト癌細胞におけるコレシストキニン(CCK)-B/ガストリン受容体の生物学的意義を明らかにするため、当該受容体遺伝子をクローン化しその機能解析をおこなってきた。本年度、本受容体を介するシグナルが、細胞増殖のみならずアクチン細胞骨格の再構成を制御していることを見いだした。その細胞内情報伝達において、c-Srcなど種々のチロシンキナーゼが活性化され、増殖因子受容体の情報伝達系とクロストークしていることを明らかにした。さらに、ストレスファイバー形成とp125^<FAK>チロシンリン酸化におけるc-Srcの役割をあきらかにした。また、CCK-B/ガストリン受容体遺伝子発現とその生理的機能の解析を目的として同受容体遺伝子欠損マウスを作製した。肺小細胞癌マーカーとしてのCCK-B/ガストリン受容体遺伝子発現の有用性および新しい本受容体拮抗剤YM022のヒト癌細胞増殖抑制能についても報告した。本研究によって、CCK-B/ガストリン受容体は、細胞増殖促進作用のみならず、細胞骨格の再構築を介し腫瘍細胞の接着や運動性にも関与している可能性が示唆された。ヒト受容体遺伝子の解析より、2種の受容体アイソフォームが存在しうることを見いだし、いずれの受容体も細胞増殖促進作用を有することをあきらかにした。正常組織においては短型受容体が優位に発現している。今後、腫瘍組織における発現の違いや変異受容体の有無を明らかにしたい。また肺癌における本受容体遺伝子発現の病理組織(肺小細胞癌)特異性は今後、肺生検組織を用いた肺小細胞癌の新しい分子病理学的診断法の確立につながると考えられる。さらに、新しい受容体拮抗薬YM022はin vivoにおける抗ガストリン作用のみならず、種々のヒト癌に対する抗腫瘍作用が期待される。
新規高選択的ピナコール型カップリング反応の開発

脂肪族アルデヒドの高いジアステレオ選択性を示すクロスカップリング反応の開発と、ピナコール反応のメカニズムの解明を目的に研究を行なった。その結果、次の成果をあげることができた。(1)クロム(II)を用いるα,β-不飽和ケトンとアルデヒドとの反応による交差ピナコール型1,2-ジオール合成。(2)コバルト(B_<12>)触媒共存下、クロム(II)を用いるヘテロ置換1,3-ジエンとアルデヒドのカップリング反応。(3)マンガンとクロム(II)の共同利用による脂肪族アルデヒドのピナコールカップリング反応。(4)チタン(III)-TMEDA錯体の単離と、その錯体を用いる芳香族アルデヒドのピナコールカップリング反応。(5)ヒドロトリスピラゾリルボレートを配位子にもつTi(III)、V(III)-アルデヒド錯体の合成と構造。交差ピナコール型カップリング反応:無水DMF溶媒中で、クロム(II)をα,β-不飽和ケトンに作用させると1電子還元が速やかに進行し、エノラート陰イオンラジカルが生じる。クロロトリメチルシラン共存下に行なうと、Me_3Si基での捕捉によりγ-シロキシ置換アリルラジカルが生成し、続く1電子還元により、γ-シロキシ置換アリルクロム反応剤が調製できる。アルデヒドを共存させてこの一連の還元反応を行なうと、後処理ののちピナコール型1,2-ジオールが生成した。この手法は、クロスカップリング生成物である1,2-ジオールを高収率で与えるというだけでなく、反応における立体選択性(syn体とanti体のジアステレオマー比)が反応温度により大きく変化するという特徴をもっている。鎖状のα,β-不飽和ケトンでは、低温でanti体が、反応温度を上げるとsyn体が選択的に得られた。チタン(III)-TMEDA錯体の単離とそれを用いる反応:脂肪族アミンの配位した3価チタン錯体TiCl_3(tmeda)(thf)をTiCl_4(tmeda)の亜鉛還元により合成した。反応では微量の塩化鉛(II)とTMEDAの添加が重要であった。TiCl_3(tmeda)(thf)は単離し、その単結晶をX線結晶構造解析した。さらにこの3価チタン錯体が芳香族アルデヒドのdl選択的なピナコールカップリング反応に有効であることを見いだした。2通りのアプローチで選択的なピナコール型1,2-ジオール合成に取組んだ。1脂肪族アミンの配位した3価のチタン錯体TiCl_3(tmeda)(thf)を4価チタン錯体TiCl_4(tmeda)の亜鉛還元により合成する手法を確立した。このとき、微量の塩化鉛(II)とTMEDAの添加が重要であることを見いだした。また、TiCl_3(tmeda)(thf)を単離し、その単結晶をX線結晶構造解析した。さらにその3価チタン錯体が、芳香族アルデヒドのピナコールカップリング反応に有効であることを見いだした。そのピナコール反応では、dl体のジアステレオマーが高立体選択的に得られることがわかった。2 1電子還元剤であるクロム(II)をα,β-不飽和ケトンに作用させると、1電子移動により、クロム(III)エノラートラジカルが発生する。

無水条件下でこの反応を行ない、1電子移動を契機とする新しいパターンの炭素-炭素結合生成反応を検討した。本年はとくに、α,β-不飽和ケトンを無水DMF溶媒中で、アルデヒドとEt_3SiCl共存下にクロム(II)塩で処理し、両者の交差ピナコール型カップリング生成物を得る方法を開発した。また、この反応における立体選択性(ジアステレオマー比)が反応温度により大きく変化することを見いだした。鎖状のα,β-不飽和ケトンを用いた場合には、低温ではanti体が主生成物となり、反応温度を上げるとsyn体が選択的に得られた。これは、γ位にEt_3SiO基を有するアリルクロム化合物間の動的立体化学制御が達成できたことによる。脂肪族アルデヒドの高いジアステレオ選択性を爪すピナコール型クロスカップリング反応の開発を目指し研究を行なった。その結果、クロム(II)を用いる穏やかな条件下におけるα,β-不飽和ケトンとアルデヒドのピナコール型クロスカップリング反応を開発した。α,β-不飽和ケトンにクロム(II)を作用させると、1電子還元が進行する。この還元をクロロトリメチルシラントアルデヒドの共存下に行なうと、1電子還元により生じたエノラート陰イオンラジカルのMe_3Si基での捕捉と続く1電子還元により、γ-シロキシ置換アリルクロム反応剤が発生する。生じたアリルクロム種はアルデヒドと反応し、ピナコール型1,2-ジオールを与えることを見いだした。この手法は、クロスカップリング生成物を高収率で選択的に与えるというだけでなぐ2種類のジアステレオマー(syn体とanti体)の1,2-ジオールを反応温度を変えるだけで、それぞれ選択的に作りだすことができることなどの利点を有している。脂肪族アルデヒドの高いジアステレオ選択性を示すピナコール型クロスカップリング反応の開発を目指し研究を行なった。その結果、α,β-不飽和ケトンとアルデヒドのピナコール型クロスカップリング反応がMe_3SiCl共存下、低原子価金属を作用させると進行することを見いだした。低原子価金属としてクロム(II)を用いると、α,β-不飽和ケトンの1電子還元が速やかに進行した。この1電子還元によりエノラート陰イオンラジカルが生じるため、クロロトリメチルシラン共存下に行なうと、Me_3Si基での捕捉によりγ-シロキシ置換アリルラジカルが生じ、続く1電子還元により、γ-シロキシ置換アリルクロム反応剤が調製できる。アルデヒドを共存させて一連の還元反応を行なうと、後処理ののちピナコール型1,2-ジオールが生成した。この手法は、クロスカップリング生成物である1,2-ジオールを高収率で与えるというだけでなく、2種類のジアステレオマー(syn体とanti体)が反応温度を変えるだけで選択的に合成できるなどの利点をもっている。低原子価金属として、亜鉛を用いてもピナコール型1,2-ジオールが生成したが、そのジアステレーマー比は低かった。また、マンガンと触媒量の鉛を用いると、γ-シロキシ置換アリルラジカルが二量化した1,4-ジケトンが選択的に得られた。
痛覚情報伝達・制御および疼痛情動反応における扁桃体の役割に関する分子薬理学的研究

痛みに伴う不快な情動反応といった精神的な変容のメカニズムあるいはその物質的基盤を明らかにするために、扁桃体に着目した検討を行った。ホルマリンの後肢皮下注射による体性感覚侵害刺激によりラット扁桃体内におていは主に基底外側核(BLA)において、酢酸腹腔内投与による内臓感覚侵害刺激によっては中心核(CeA)においてc-fos mRNAの発現が誘導されることを示し、扁桃体亜核がそれぞれ異なる侵害刺激入力を受けていることを明らかにした。さらに、痛みによる不快な情動反応を定量的に測定するため条件付け場所嗜好性試験法を用いて検討したところ、体性感覚侵害刺激による条件付け場所嫌悪反応は興奮性神経毒によりBLAあるいはCeAをそれぞれ限局的に損傷しておくことにより消失し、一方、内臓感覚侵害刺激による条件付け場所嫌悪反応はCeAの限局的損傷によって消失することを明らかにした。また、BLA両側へモルヒネを微量投与することにより、μオピオイド受容体を介して圧刺激およびホルマリン刺激に対して抗侵害受容作用が惹起され、さらに、ホルマリン条件付け場所嫌悪反応をも抑制することを明らかにした。また、ホルマリン刺激により、BLAにおいてグルタミン酸の遊離が促進されること、各種グルタミン酸受容体拮抗薬はホルマリン誘発侵害受容行動には影響を与えず、NMDA受容体拮抗薬MK-801がホルマリン条件付け場所嫌悪反応を減弱させたことから、ホルマリン刺激によりBLAにおいて遊離されたグルタミン酸が、BLAのNMDA受容体を介して疼痛関連情動反応の惹起に関与していることを明らかにした。また、モルヒネはこのグルタミン酸の遊離促進を抑制することにより、疼痛関連嫌悪反応を抑制していることが明らかとなった。外部からの感覚刺激入力に対する情動発現に深く関与していることが知られている扁桃体の、痛覚情報伝達・制御および疼痛情動反応における役割を検討した。まず、扁桃体の亜核の中でもμオピオイド受容体や内因性オピオイドペプチドの強い発現が確認されているラット基底外側核(BLA)両側への薬物微量投与法を確立した。本手法を用いて、BLA両側へモルヒネを微量投与することにより、paw pressure testおよびホルマリンtestにおいで有意な抗侵害受容作用が見られたが、tail flick testおよびhot plate testにおいては変化は見られなかった。また、後肢足底へのホルマリン投与による体性感覚侵害刺激を与えたラットの扁桃体では主にBLAを含む基底外側核群で、神経活性化のマーカーとなるc-fos mRNAの発現誘導が見られた。一方、腹腔内への酢酸投与による内臓感覚侵害刺激を与えたラットの扁桃体では、中心核においてc-fos mRNAの強い発現誘導が見られた。また、in vivo microdialysis法により、これら体性および内臓感覚侵害刺激により、BLAにおいて細胞外グルタミン酸濃度が上昇することを明らかにした。さらに、グルタミン酸NMDA受容体アンタゴニストであるMK-801をBLA両側へ微量投与することにより、ホルマリン誘発疼痛関連行動に対しては有意な影響を与えなかったが、ホルマリン刺激の条件付けにより惹起される条件付け場所嫌忌行動(ホルマリン誘発疼痛情動反応)が有意に抑制されることを明らかにした。一方、CNQX(non-NMDA受容体アンタゴニスト)およびAP-3(代謝型グルタミン酸受容体アンタゴニスト)のBLAへの微量投与は、ホルマリン誘発疼痛関連行動および疼痛情動反応、いずれに対しても何ら影響を与えなかった。昨年度の研究において、ホルマリンの後肢皮下注射により、ラット扁桃体内におていは主に基底外側核(BLA)においてc-fos mRNAの発現が誘導されること、グルタミン酸の遊離が促進されることを明らかにしている。

このBLA内にモルヒネを微量投与することにより、ホルマリン誘発侵害受容行動は一部抑制され、さらに、条件付け場所嗜好性試験によって見られるホルマリン誘発場所嫌悪反応は完全に抑制された。また、これらの作用はナロキソンの同時投与により拮抗された。さらに、in vivoマイクロダイアリシス法によって、ホルマリン注射によって見られるBLA内のグルタミン酸の遊離促進は、灌流液中にモルヒネを添加しておくことにより有意に減弱された。また、NMDA受容体アンタゴニストMK-801のBLA内微量投与によって、ホルマリン誘発侵害受容行動に変化は見られなかったが、ホルマリン誘発場所嫌悪反応は完全に抑制された。これらの結果から、ホルマリン注射によりBLA内で遊離促進されたグルタミン酸が、NMDA受容体を介して疼痛関連嫌悪反応の惹起に関与していること、またモルヒネはこのグルタミン酸の遊離を抑制することにより、疼痛関連嫌悪反応を抑制していることが示唆される。一方、昨年度の研究で、酢酸を腹腔内投与することにより、扁桃体中心核(CeA)において顕著なc-fos mRNAの発現が誘導されることを見いだしているが、本年度、このCeAを興奮精神系毒により予め損傷させておくことにより、酢酸により惹起される場所嫌悪反応が消失することを見いだした。なお、これらの実験終了後、本年度購入した凍結ミクロトームを用いて扁桃体を含む脳切片を作製し、薬物のBLA内微量投与の成否、あるいは神経毒による組織の損傷の程度を確認した。
p53ノックアウトマウスを用いた神経膠腫発生機序の解析

1.p53(+/-)の雌雄の交配を延べ164回行い,推定妊娠14±2日目にENU25または75mg/kgを腹腔内投与した.78匹が出産した.経過を観察することの出来た仔のp53 genotypeは(+/+)73匹,(+/-)80匹,(-/-)10匹で,p53(+/-)の3匹(3%),p53(-/-)の1匹(10%)に脳腫瘍の発生を認める事が出来た.2.それぞれのgenotypeのマウスの脳について免疫組織化学を行い以下のような結果を得た.(1)いずれの腫瘍もPCNA標識率が高くGFAP陽性で,悪性神経膠腫と考えられた.腫瘍発生確認が生後約10週の二つの腫瘍(#370,p53[+/-]と#537,p53[-/-])は,生後約30週で発生した腫瘍(#400,p53[+/-]と#505,p53[+/-])と比べ,より低分化な神経膠腫の像であった.(2)#537の腫瘍部においてのみ,僅かにではあるがNestinの発現を認めた.また,神経細胞マーカーNeuNは腫瘍#400と#505には発現を認めなかったが,#370と#537にはまばらに発現を認めた.OligodendrocyteのマーカーCNPaseはいずれの腫瘍においても発現が見られなかった.(3)ApopTagによるapoptosis細胞は腫瘍においても非腫瘍部においても検出されなかった.BAX, Bcl-2,Fas陽性の細胞も検出されなかった.CyclinA陽性細胞も検出されなかった.Tsp-1は非腫瘍部の血管に発現が認められたが,その局在は内皮細胞あるいは血管内腔と考えられた.腫瘍内の血管には発現が認められず,発現はp53のgenotypeに依らなかった.p53(-/-)の個体に発生した腫瘍においてstem cellの形質が残っていたこと,発生時期の早い腫瘍において神経細胞マーカーの発現を認めたことは,p53ノックアウトマウスにおける神経膠腫発生の機序を考察するうえで興味深い所見と考えられるた.1.p53(+/-)の雌雄の交配を延べ164回行い,推定妊娠14±2日目にENU25または75mg/kgを腹腔内投与した.78匹が出産した.経過を観察することの出来た仔のp53 genotypeは(+/+)73匹,(+/-)80匹,(-/-)10匹で,p53(+/-)の3匹(3%),p53(-/-)の1匹(10%)に脳腫瘍の発生を認める事が出来た.2.それぞれのgenotypeのマウスの脳について免疫組織化学を行い以下のような結果を得た.(1)いずれの腫瘍もPCNA標識率が高くGFAP陽性で,悪性神経膠腫と考えられた.腫瘍発生確認が生後約10週の二つの腫瘍(#370,p53[+/-]と#537,p53[-/-])は,生後約30週で発生した腫瘍(#400,p53[+/-]と#505,p53[+/-])と比べ,より低分化な神経膠腫の像であった.(2)#537の腫瘍部においてのみ,僅かにではあるがNestinの発現を認めた.また,神経細胞マーカーNeuNは腫瘍#400と#505には発現を認めなかったが,#370と#537にはまばらに発現を認めた.OligodendrocyteのマーカーCNPaseはいずれの腫瘍においても発現が見られなかった.(3)ApopTagによるapoptosis細胞は腫瘍においても非腫瘍部においても検出されなかった.BAX, Bcl-2,Fas陽性の細胞も検出されなかった.CyclinA陽性細胞も検出されなかった.Tsp-1は非腫瘍部の血管に発現が認められたが,その局在は内皮細胞あるいは血管内腔と考えられた.腫瘍内の血管には発現が認められず,発現はp53のgenotypeに依らなかった.p53(-/-)の個体に発生した腫瘍においてstem cellの形質が残っていたこと,発生時期の早い腫瘍において神経細胞マーカーの発現を認めたことは,p53ノックアウトマウスにおける神経膠腫発生の機序を考察するうえで興味深い所見と考えられるた.1.現在までにB6/Jのp53(+/-)同士の交配を行い、妊娠を確認した雌に対して,妊娠14-19日目にエチルニトロソウレア25-75mg/kgを腹腔内に投与して出産させ,110匹の仔を得た。そのp53 genotypeは,p53(+/+)45匹,p53(+/-)55匹,p53(-/-)10匹であった。