hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
吸血コウモリ由来狂犬病の感染拡大阻止を目的とした進化疫学研究

材料に用いたRABVのRNAゲノムは、長期保存によって断片化が進んでいたので、本研究は、RABVの全長配列をカバーできる複数のプライマーセットを設計し、マルチプレックスRT-PCRを行い、増幅産物であるアンプリコンのライブラリ調整を行い、それらをNGSシーケンスに供した。吸血コウモリ由来RABV8検体をNGS解析で配列決定した。一部NGSで塩基配列決定ができなかった領域は、サンガー法によって塩基配列を決定した。その結果、RABVのほぼ全長領域にあたる11.8Kbの塩基配列を決定することができた。これら塩基配列を用いて分子系統樹を作製したところ、N遺伝子やG遺伝子など、従来の分子疫学研究で標的とされてきたRABVの各遺伝子で作製した分子系統樹よりも非常に信頼度が高い分子系統樹を作製することができた。本研究でNGS解析の材料とするRABVのウイルスゲノムRNA試料には、罹患動物の脳組織からウイルス核酸を回収する際に混入する宿主由来のRNA核酸が大量に含まれており、それらがウイルスゲノムのNGS解析の妨げとなっていた。また、当研究室で保管しているRABVのRNAは断片化が生じていて、長いゲノム領域を直接増幅することが困難であった。そこで上記2つの問題を解決するために、本研究ではRABVの全長配列をカバーする複数のプライマーセットを設計し、それらを用いたマルチプレックスRT-PCRによってほぼRABVゲノム全長に相当する領域を増幅できる手法を確立できた。上記の確立された手法を用いて、吸血コウモリ由来RABV 8検体を材料にしてマルチプレックスRT-PCRを行い、増幅されたアンプリコンの濃度調整を行ってライブラリー試料を調製した。NGS解析のために濃度を最適化したライブラリーの品質チェックを行った後、MiSeqによって8検体の吸血コウモリ由来RABVのほぼ全長をカバーする領域のゲノム配列を得た。一方でNGS解析で配列解読が困難な領域が一部存在した。特にRABVのGおよびL遺伝子領域の遺伝子間領域、また3'および5'末端領域は解読困難な領域が多く見られた。それら一部の領域については、従来法であるサンガーシーケンスによって別途配列解読を行った。以上のように、保管材料の吸血コウモリ由来RABVのゲノム試料からマルチプレックスRT-PCR、NGS解析、およびサンガーシーケンスを組み合わせることによって、ほぼ全長の吸血コウモリ由来RABVゲノム配列を解読する一連の方法論を確立することができた。南米では吸血コウモリが狂犬病ウイルス(RABV)を家畜やヒトに伝播している。しかし、分子進化学的な解析から、吸血コウモリは、食虫コウモリであるTadarida brasiliensisからRABVが伝播され、その後、南米に生息する吸血コウモリの集団間で感染が拡大した可能性が示唆されている。本研究は吸血コウモリ由来RABVの詳細な疫学に用いるRABVゲノムの全長塩基配列の決定を、次世代シーケンサー(NGS)を用いて進めている。
多次元的脳内表象の相互作用と機能の解明

人間は感覚器を通じて得た外界の情報を、脳内で再構築して、表現(表象)する。この過程で、情報は感覚器が伝える物理的・化学的情報から、カテゴリーや価値のような抽象的情報に変換され、意思決定や判断に用いられる。先行研究により、視覚刺激の情報は少なくとも三つの次元(刺激の物理的特徴、カテゴリー、主観的価値)で表象されていることが明らかにされているが、これらの表象間での相互作用や、これらの情報が認知過程においてどのように用いられているかは明らかにされていない。本研究では、情報の抽象化を伴う主要な認知過程の一つである記憶に焦点を絞り、記憶記銘・想起における三つの次元の脳内表象の相互作用およびこれらの文脈依存性の変化を調べることにより、多次元的な脳内表象の機能を明らかにする。本年度は14人の被験者を対象に、機能的MRI実験を行った。被験者は7テスラ超高磁場MRIスキャナ内で128枚の視覚刺激を提示され、それぞれに対して生物性(生物/非生物)および主観的価値(快/不快)の点数化を行った。さらに30分後、機能的MRIを用いて記憶想起に関連する脳活動の計測を行った。本研究では、記憶記銘時と想起時の脳内表象の対応と記憶課題成績の関係に着目し、解析を行った。その結果、記憶想起に成功した刺激においては、視覚野、側頭葉、前頭眼窩皮質を含む広範な領域で、記憶記銘時と想起時の脳内表象がより高い類似を示すのに対し、記憶想起に失敗した刺激においては、脳内表象が異なるという結果がえられた。この結果は、脳内表象の類似度と記憶の関連を示す証拠となる。初年度は14人の被験者を対象に、機能的MRI実験を行い、脳内表象の類似度と記憶の関連を示す結果をえた。MRIスキャナ内で行われた記憶記銘実験においては、被験者は生物性または価値のいずれかに対して点数を回答し、実験終了後にもう一方の点数を回答した。これにより、回答する点数(生物性/価値)によって情報の重要度の比重が変化し、それに伴い脳内表象の変化が観察されることを予想している。実験開始前はこの点数と脳活動パターンの類似度の関係を相互作用項を含んだ単純な回帰式によってモデル化することを計画していたが、多重共線性の問題があるため、単純な線形回帰は機能しないように思われた。そこで、機能的MRIデータに対してリッジ回帰によって正則化項を含んだモデル化を行うことにより、この問題を解決するという戦略を取ることにした。この手法は、異なる脳領域で表象される情報間相互作用を調べる上でも有効であると考えられる。現時点では、先行研究と同様に、視覚特徴が視覚野、カテゴリー情報が側頭葉、価値情報が前頭内腹側部で表象されるという結果がえられており、これらの領域を対象に、リッジ回帰を用いた解析を施行中である。また本研究においては、臨床利用される3テスラのMRIシステムと比べて静磁場が2倍以上強力な7テスラのMRIシステムが用いられている。これにより得られた高解像度画像における信号雑音比は1.5倍から2倍程度となることが知られているが、機能的MRI解析の結果においても、同様に統計値が1.5倍程度となることが示された。これにより、7テスラ超高磁場MRIシステムは、解剖学的構造を調べる上で有用であるのみでなく、機能的MRIを用いた心理実験においても同様に有用であることが示唆された。上記成果を得られたことで、計画はおおむね順調に進んでいると考えられる。記憶の二重過程仮説においては、具体的な経験を伴う記憶想起であるrecollectionと、具体的な経験の記憶を伴わない記憶想起であるfamiliarityのプロセスが区別されている。この仮説からは、記憶想起時と記銘時の脳内表象の類似度は、recollection > familiarity>forgetの順に低下することが予想され、実際にforgetと前二者の比較では、有意な結果が得られている。しかしながら、recollectionとfamiliarityの比較では、recollectionの類似度が高い傾向にあるものの、recollection反応自体が稀な被験者が多かったためにばらつきが高く、統計的有意差が得られていない。そこで、さらに16人の被験者を対象に実験を行い検出力を上げ、この傾向が擬陽性でないことを確認したうえで、この結果を論文にまとめて投稿することを計画している。Familiarityと比較して、Recollectionがより多元的な表象に支えられるという結果は、心理学から提唱された記憶の二重過程仮説に神経基盤的バックボーンを与えるもので、学術的な貢献は大きい。また、7テスラMRIシステムによりえられた高解像度画像の特徴を利用して、外側膝状体と初期視覚野において視覚刺激関連脳活動パターンの相似を示す。外側膝状体は小さな領域であるが、この領域内のretinotopyが高解像度MRIによって解析可能であると考えられる。特に視野内のsaliency map(Itti and Koch 2001)との関連が示唆されているので(Chikazoe et al., 2014)、各視覚刺激のもつsaliency mapを視野mapの代替に用いて、網膜から外側膝状体を介して初期視覚野に向かう視覚情報の流れを、パス解析により示すことを試みる。

先行研究により、視覚刺激の情報は少なくとも三つの次元(刺激の物理的特徴、カテゴリー、主観的価値)で表象されていることが明らかにされているが、これらの表象間での相互作用や、これらの情報が認知過程においてどのように用いられているかは明らかにされていない。本研究では、情報の抽象化を伴う主要な認知過程の一つである記憶に焦点を絞り、記憶記銘・想起における三つの次元の脳内表象の相互作用およびこれらの文脈依存性の変化を調べることにより、多次元的な脳内表象の機能を明らかにする。本年度は14人の被験者を対象に、機能的MRI実験を行った。被験者は7テスラ超高磁場MRIスキャナ内で128枚の視覚刺激を提示され、それぞれに対して生物性(生物/非生物)および主観的価値(快/不快)の点数化を行った。さらに30分後、機能的MRIを用いて記憶想起に関連する脳活動の計測を行った。本研究では、記憶記銘時と想起時の脳内表象の対応と記憶課題成績の関係に着目し、解析を行った。その結果、記憶想起に成功した刺激においては、視覚野、側頭葉、前頭眼窩皮質を含む広範な領域で、記憶記銘時と想起時の脳内表象がより高い類似を示すのに対し、記憶想起に失敗した刺激においては、脳内表象が異なるという結果がえられた。この結果は、脳内表象の類似度と記憶の関連を示す証拠となる。初年度は14人の被験者を対象に、機能的MRI実験を行い、脳内表象の類似度と記憶の関連を示す結果をえた。MRIスキャナ内で行われた記憶記銘実験においては、被験者は生物性または価値のいずれかに対して点数を回答し、実験終了後にもう一方の点数を回答した。これにより、回答する点数(生物性/価値)によって情報の重要度の比重が変化し、それに伴い脳内表象の変化が観察されることを予想している。実験開始前はこの点数と脳活動パターンの類似度の関係を相互作用項を含んだ単純な回帰式によってモデル化することを計画していたが、多重共線性の問題があるため、単純な線形回帰は機能しないように思われた。そこで、機能的MRIデータに対してリッジ回帰によって正則化項を含んだモデル化を行うことにより、この問題を解決するという戦略を取ることにした。この手法は、異なる脳領域で表象される情報間相互作用を調べる上でも有効であると考えられる。現時点では、先行研究と同様に、視覚特徴が視覚野、カテゴリー情報が側頭葉、価値情報が前頭内腹側部で表象されるという結果がえられており、これらの領域を対象に、リッジ回帰を用いた解析を施行中である。また本研究においては、臨床利用される3テスラのMRIシステムと比べて静磁場が2倍以上強力な7テスラのMRIシステムが用いられている。これにより得られた高解像度画像における信号雑音比は1.5倍から2倍程度となることが知られているが、機能的MRI解析の結果においても、同様に統計値が1.5倍程度となることが示された。これにより、7テスラ超高磁場MRIシステムは、解剖学的構造を調べる上で有用であるのみでなく、機能的MRIを用いた心理実験においても同様に有用であることが示唆された。上記成果を得られたことで、計画はおおむね順調に進んでいると考えられる。
がんの中心体制御異常の統合的理解による新たな中心体標的療法の開発

中心体は微小管形成中心として機能し、分裂期には紡錘体極として機能する。中心体の異常は染色体分配に異常を来たし発がんの原因になる。一方、中心体の異常は正常細胞にはない明らかながんの特徴で、がんの診断や治療の標的として有望である。本研究では遺伝性乳がん・卵巣がん症候群の原因遺伝子産物であるBRCA1と関連分子による中心体制御機構を解析し、その異常がなぜ、組織特異的な発がんを引き起こすのかを解明する。加えて、中心体のDNA損傷応答機構を解明し、中心体をがんとDNA損傷応答という観点から統合的に理解し、新たな中心体生物学の学問領域を創出し、中心体を標的としたがん治療法を開発する。
光反応によるランダムレーザーの発振モード制御の研究

ランダム媒質中で多重散乱された光の干渉によって起きる光記録効果と、ランダムレーザーを組み合わせ、ランダムレーザーの出力の波長・波面・偏光状態の制御を試みた。多重散乱光の干渉による光記録効果を、蛍光ではなく、試料からの散乱光によって検出すると、凸型のホールとなることから、書き込みを行ったものと同じ条件の光に対して、試料内での光の損失が減少していることが確認された。このことから、このような媒質を通してレーザー発振を起こさせれば、書き込みによって発振条件を制御されたランダムレーザーが実現される可能性が高いことが確かめられた。そのためには、制御用の光によって光反応を起こすが、レーザー発振時の強い光の影響は受けないような光反応材料が必要となる。しかし、現時点までに、多重散乱光の干渉による光記録効果が安定して観測される光反応材料は得られなかった。そこで、過渡的な光反応材料と見なすことのできる可飽和色素を混ぜ込んだランダムレーザーを用いて実験を行い、可飽和色素の効果が確かめられた。FDTD法によるコンピューターシミュレーションを行い、多重散乱光の干渉による光記録効果によるホールの形状(強度相関関数)を求めた。ホール形状の計算結果のうち、ホール幅については、理論や実験から予想される値とよく一致し、この計算が、光記録効果に対応する結果を与えており、ランダム媒質中の電磁場の計算に有効であることが確かめられた。レーザー色素を溶かしたMMA(メタクリル酸メチル)に散乱体として酸化チタン微粒子を分散し、MMAを重合によってPMMAとした固形ランダムレーザー媒質を作製した。これを、QスイッチNd : YAGレーザーの第2高調波でポンピングし、ランダムレーザーの発振特性を調べた。励起パルスのタイミングの制御に、遅延パルス発生器を用いた。レーザー色素の濃度、散乱体の濃度を変えた試料に対して、ポンピング強度を変えて試料からの発光の測定を行ない、ポンピング強度のしきい値を詳しく調べた。発光の測定は、分光器とCCDを用いて行ない、パルス1発ごとのスペクトルも測定した。その結果、酸化チタンを含む試料は、あるポンピング強度のしきい値を超えると発光スペクトルの幅が急激に狭くなるという、レーザー発振的な特徴を示した。しきい値の前後における幅の変化は、酸化チタン濃度が低すぎても高すぎてもゆるやかになり、レーザー動作を起こさせるための散乱強度には最適値があることが明らかになった。一方、酸化チタンを含まない試料では、酸化チタンを含む試料におけるしきい値よりも1桁程度高いポンピング強度においてスペクトルが少し狭くなるのみであり、散乱体の効果は明らかである。一方、発光の放出方向、偏光特性は、散乱体を含む試料でも、等方的であった。この試料にさらに過飽和色素を混ぜ込んだ場合の発振特性の測定、特に放出方向や偏光特性の測定を、継続して進めている。MMA(メタクリル酸メチル)にレーザー色素DCMと可飽和色素HITCを溶かしたものに散乱体として酸化チタン微粒子を分散し、固形ランダムレーザー媒質を作製した。これを、QスイッチNd:YAGレーザーの第2高調波でポンピングし、ランダムレーザーの発振特性を調べた。レーザー色素、可飽和色素、散乱体の濃度を変えた試料に対して、ポンピング強度を変えて試料からの発光の測定を行なった。その結果、可飽和色素を含む試料では、可飽和色素による吸収があるにもかかわらず、特定のポンピング強度の条件下で、可飽和色素を入れない場合よりも強度が急激に増加した。これは、発振光が試料内で多重散乱されて作る干渉縞の強い場所で、可飽和色素の吸収飽和が起こっているためと考えられる。一方、レーザー媒質中の電磁場の計算機シミュレーションを行った。誘電体微粒子をランダムに配置し、色素による増幅と可飽和色素の効果をモデル化した系における電磁場を、FD-TD法によって求めた。その結果、可飽和色素の効果によって、媒質内では特定の周波数、偏光を持つモードが優先的に成長するための条件が求められた。しかし、その光が外部に出てくる過程で偏光状態や進行方向が乱れてしまうため、外部においてこの効果を観測することは難しい。
「実世界における学び方」を学習棄却・再学習させるための計算論的学習方略研究

実世界に根ざした知識を得るためには,机上での学びにとどまらず,実世界の中で行動を通して学ぶ実世界学習が重要である.このとき,学習者が,自らの学習活動を省みて「学び方」を適切に自己調整できれば,知的生産性を高める行動をとれる.したがって,本研究では,このような「学び方」の内省を促すために,「実世界における学び方」を学習棄却・再学習させるための計算論的学習方略研究を実施する.実世界に根ざした知識を得るためには,机上での学びにとどまらず,実世界の中で行動を通して学ぶ実世界学習が重要である.このとき,学習者が,自らの学習活動を省みて「学び方」を適切に自己調整できれば,知的生産性を高める行動をとれる.したがって,本研究では,このような「学び方」の内省を促すために,「実世界における学び方」を学習棄却・再学習させるための計算論的学習方略研究を実施する.
小児起立性調節障害の新しいサブタイプの同定と、新治療法の効果に関する研究

ODは起立循環反応が異なる4つのサブタイプがこれまでに報告されている。我々は非侵襲的連続血圧・心拍反応と近赤外分光計による脳血流を評価し、さらに新しい2つのサブタイプ、すなわちHyper-response型、脳血流低下型の存在を見出した。OD症状を持つ疾患群478名における各サブタイプの頻度は、起立直後性低血圧22.8%、体位性頻脈症候群20.7%、遷延性起立性低血圧5.0%、神経調節性失神1.0%、Hyperresponse型9.4%、脳血流低下型5.6%であった。新しいサブタイプはODの15%を占めると考えられ、新しい診断・治療法の開発が必要である。MemCacによる自律神経機能解析では、POTSは立位で著しい低下を認め、迷走神経活動の異常減少が推測された。Head-uptilttrainingを実施したところ、POTSにおいて治療効果を認め、起立後の心拍増加の改善、起立時間の延長を認め、臨床的に有用と考えられた。【研究方法】新しいサブタイプを同定するために、OD症状を持つ小児に対して、Finometerにより連続血圧心拍、心拍出量、末梢血管抵抗、およびNIRSにより酸素化ヘモグロビン(Oxy-Hb)、脱酸素化ヘモグロビン(deoxy-Hb)を測定し、すでに申請者ら報告した健常児の基準値と比較し、その異常頻度を検討する。また、新規購入するのMemCalcを用いて連続血圧心拍の揺らぎをパワースペクトル解析し、ODの各サブタイプの自律神経機能を評価する。【結果】大阪医科大学附属病院にODの診断・治療を希望し、同意した患児。2006年8月から2010年12月まで受診した478名を対象とした。(1)起立性調節障害の新しいサブタイプ(Hyper Response Type、および脳血流低下型)の診断基準を決定した。(2) OD症状を訴える子どものサブタイプ分類の頻度(478名中、括弧内は%)日本小児心身医学会小児起立性調節障害診断・ガイドラインにしたがって、起立直後性低血圧、体位性頻脈症候群、遷延性起立性低血圧、神経調節性失神の分類を行い、さらにこれに該当しない症例をHyper Response Typeと脳血流低下型の基準に従って診断した。その結果、以下のような頻度となった。起立直後性低血圧109名(22.8%)、体位性頻脈症候群99名(20.7%)、遷延性起立性低血圧24名(5.0%)、Hyper response型45名(9.4%)、脳血流低下型27(5.6%)、正常反応174(36.4%)【結論】以上より、新しいサブタイプが起立性調節障害の15%を占めることが明らかになった。【研究方法】新しいサブタイプを同定するために、OD症状を持つ小児に対して、Finometerにより連続血圧心拍、心拍出量、末梢血管抵抗、およびNIRSにより酸素化ヘモグロビン(Oxy-Hb)、脱酸素化ヘモグロビン(deoxy-Hb)を測定し、すでに申請者ら報告した健常児の基準値と比較し、その出現頻度を検討した。【対象】大阪医科大学附属病院にODの診断・治療を希望し、同意した患児。2006年8月から2010年12月まで受診した478名、及び、新たに検査を行った健常群35名。【結果】日本小児心身医学会小児起立性調節障害診断・ガイドラインにしたがって、起立直後性低血圧、体位性頻脈症候群、遷延性起立性低血圧、神経調節性失神の分類を行い、さらにこれに該当しない症例をHyper Response Typeと脳血流低下型の基準に従って診断した。その結果、起立直後性低血圧109名(22.8%)、体位性頻脈症候群99名(20.7%)、遷延性起立性低血圧24名(5.0%)、Hyper response型45名(9.4%)、脳血流低下型27(5.6%)、正常反応174(36.4%)。起立後Oxy-Hbの低下は、健常群に比較して、正常反応群以外のすべての群で統計的有意差が認められた。とくに脳血流低下型では著しい低下を認めた(平均-8μMol/L)。【結論と考察】Hyper-response型の特徴は、起立直後の一過性高血圧、心拍増加は正常、脳血流の低下がある。

原因として、末梢血管抵抗が上昇や血管の過剰反応があると考えられた。また、脳血流低下型の特徴は、起立後の血圧不安定性、心拍増加は正常、起立直後から生ずる著しい脳血流の低下がある。原因として起立時脳血管収縮が亢進していると考えられた。【結論】両者は、循環動態、脳循環調節機能において、既報のサブタイプとは病態が異なり、新しいサブタイプと考えられる。【研究目的】非侵襲的連続血圧測定装置Finometer・近赤外分光計NIRSによって起立性調節障害ODの新しいサブタイプの同定、診断法の確立、本態解明、SNP、新治療法を開発する。【研究方法】OD症状の小児に、Finometerによる連続血圧心拍、心拍出量、末梢血管抵抗、およびNIRSによる酸素化ヘモグロビン(Oxy-Hb)、脱酸素化ヘモグロビン(deoxy-Hb)を測定し、すでに申請者ら報告した健常児の基準値と比較し、その異常頻度を検討する。新規購入するのMemCalcを用いて連続血圧心拍の揺らぎをパワースペクトル解析し、各サブタイプの自律神経機能を評価した。さらにHead-up tilt trainingによる治療効果を検討した。OD診断・治療を希望し同意した478名患児を対象。【結果】(1)新しいサブタイプ(HyperResponseType、および脳血流低下型)の診断基準を決定。(2)サブタイプ頻度(478名中、括弧内は%)は、起立直後性低血圧109名(22.8%),体位性頻脈症候群(POTS) 99名(20.7%),遷延性起立性低血圧24名(5.0%),Hyper response型45名(9.4%),脳血流低下型27 (5.6%),正常反応174 (36.4%)であった。(3)MemCacによる自律神経機能解析では、POTSは立位で著しい低下を認め、迷走神経活動の異常減少が推測された。(4)Head-up tilt trainingを実施し、POTSで起立後の心拍増加の改善、起立時間の延長を認め、臨床的に有用であった。【結論】新しいサブタイプのODが全体の15%を占めることから、OD診療ガイドラインの再評価が必要。Head-uptilttrainingは新しい治療法になる可能性も示唆された。23年度(平成24年3月31日)の研究実施計画は以下の通りであり、1は現在も実行中。2と3はほぼ完了し、今回の報告書に記載した。1.ODと一般小児について、新規購入したMemCalcを、研究装備に導入、連続血圧心拍の揺らぎをパワースペクトル解析し、自律神経機能を評価2.新しいサブタイプ、Hyper-response type、6.Orthostaticcerebral hypoperfusionの症例集積を行い、OD群においてどの程度の割合に存在するのか頻度調査3.OD群は500例、新しいサブタイプは10例ずつを解析目標にして、循環動態、脳血流との関係を明らかにする。24年度が最終年度であるため、記入しない。1. 24年度は、サブタイプ6種類の臨床的特徴を明らかにすること、非薬物療法、薬物療法の効果を検討することである。とくにhead-up tiltによる治療効果、薬物療法についての効果について研究し、自律神経機能に与える影響、臨床症状に与える影響を検討する。2.研究対象目標数は、30例である。3.上記の結果より、効果的な治療法を提唱する。4.最終年度であり、報告書の作成を行う。
HIVによるMHC class I発現抑制機序の解明と免疫応答の賦活化戦略

HIVに対するprotein therapyを考案し,その基礎的研究を進めている.(1)HIV tat蛋白質の11アミノ酸から成る細胞膜透過ドメインと,GFP蛋白質との融合蛋白質を作成し,細胞内への浸透性について解析した.Tat-GFPは細胞膜を透過しなかったが,Tat-Survivin-GFP蛋白質は透過した.Tat濃度依存性,温度感受性を確認した.ドミナントネガティブSurvivin蛋白質を腫瘍細胞に浸透させたところ,細胞にApoptosisを引き起こすことに成功した.(2)つぎに,Tat細胞膜透過ドメインを含む合成ペプチドが細胞膜を透過することを共焦点レーザー顕微鏡によって確認した.HIV nef蛋白質が発現を抑制するHLA-A分子の細胞質内ドメインから,HIV nef蛋白と会合すると予想される領域を推定し,この領域とTatドメインとの融合合成ペプチドを作成した.現在,Nef発現細胞を作成し,この合成ペプチドがNefの作用を抑制するかどうか実験を行っている.(3)細胞のapoptosisを促進するミトコンドリア蛋白質SmacのN末端機能ドメインとTatドメインとの融合合成ペプチドSmac7-Tatを作成した.このペプチドは細胞内に浸透し,細胞にapoptosisを引き起こすことを確認した.HIV proteaseが発現しているHIV感染細胞内で活性化するような,HIV protease認識配列を組み込んだTat-smac7ペプチドを設計した.これがHIV感染細胞に対して選択的にapoptosisを引き起こすことができるかどうか,今後,検証する.HIVに対するprotein therapyを考案し,その基礎的研究を進めている.(1)HIV tat蛋白質の11アミノ酸から成る細胞膜透過ドメインと,GFP蛋白質との融合蛋白質を作成し,細胞内への浸透性について解析した.Tat-GFPは細胞膜を透過しなかったが,Tat-Survivin-GFP蛋白質は透過した.Tat濃度依存性,温度感受性を確認した.ドミナントネガティブSurvivin蛋白質を腫瘍細胞に浸透させたところ,細胞にApoptosisを引き起こすことに成功した.(2)つぎに,Tat細胞膜透過ドメインを含む合成ペプチドが細胞膜を透過することを共焦点レーザー顕微鏡によって確認した.HIV nef蛋白質が発現を抑制するHLA-A分子の細胞質内ドメインから,HIV nef蛋白と会合すると予想される領域を推定し,この領域とTatドメインとの融合合成ペプチドを作成した.現在,Nef発現細胞を作成し,この合成ペプチドがNefの作用を抑制するかどうか実験を行っている.(3)細胞のapoptosisを促進するミトコンドリア蛋白質SmacのN末端機能ドメインとTatドメインとの融合合成ペプチドSmac7-Tatを作成した.このペプチドは細胞内に浸透し,細胞にapoptosisを引き起こすことを確認した.HIV proteaseが発現しているHIV感染細胞内で活性化するような,HIV protease認識配列を組み込んだTat-smac7ペプチドを設計した.これがHIV感染細胞に対して選択的にapoptosisを引き起こすことができるかどうか,今後,検証する.
メカニズムの理解にもとづく標的遺伝子組換えの改良

A.「相同相互作用による非相同組換え」の解析。A-1.マウスでの検出と構造解析。BPVベクターのコトランスフェクションで相同組換えを選択したときに検出される非相同組換え産物の構造解析を進め、BPV複製との関係を示唆する結果を得た。A-2.定量系の確立。「相同相互作用による非相同組換え」産物を特異的に定量できる実験系を作った。これは、大腸菌の優性の薬剤(ストレプトマイシン)感受性遺伝子を逆向きに二つ持つプラスミドを、マウス細胞に導入し、二つの遺伝子が共に失われたものを、大腸菌に導入して薬剤で選択するというものである。A-3.大腸菌での検出。大腸菌の核酸分解酵素欠損株で、ホモロジーの端での非相同組換えを検出した。これは、recA機能に依存していた。B.アデノウイルスペクターで導入した遺伝子による標的遺伝子組換えに伴う非相同組換え。ウシパピローマウイルスプラスミドを染色体外にもつ細胞にドナーの組換えアデノウイルスを感染させ、その間での相同組換えで再構成されたneo+遺伝子を含む細胞のクローンを選択する系で、アデノウイルス部分が組み込まれた産物の解析をシークエンスレベルで行い、非相同組換えを検出した。C.相同組換え効率のホモロジーの長さと程度への依存性の理論の一般化。「中間体の連結部分がホモロジーにそってDNAの塩基対をランダムウォークし、ときに相同組換え体などへとプロセスされる。ホモロジーの端へぶつかれば、ある確率で、中間体が破壊される。」という一般的な場合について、相同組換え体の完成頻度がホモロジーの長さにどう依存するかについて、検討した。得られる結果を、従来の遺伝子ターゲッティングなどのの実験結果と比較した。
Pentylenetetrazolキンドリングラットの神経生化学的検討

Pentylenetetrazol(PTZ)キンドリングにおける興奮性及び抑制性アミノ酸の役割を検討するため以下の実験を行った。7週齢Wistar系雄性ラットにPTZを40mg/kgで2週間投与した。最初は発作症状を認めなかったが、徐々に痙攣準備性を獲得し、最終的的には全身強直間代痙攣やミオクロニ-痙攣が頻発しキンドリングの完成を確認した。また、最終発作から4週間後にPTZを同量投与したところ痙攣発作が誘発され4週間後もキンドリングが保持されているのが確認された。PTZを2週間投与しキンドリングの最終発作後24時間及び4週間後に脳内8部位での興奮性及び抑制性アミノ酸を測定しWilcoxson検定にてコントロール群と比較検討した。24時間後では、脳幹でglutamate(Glu)とGABAが、線状体と側頭葉ではaspartate(Asp)が有意(P<0.05)に上昇していた。しかし、4週間後には変化は消失し有意差を認めなかった。電気刺激よるキンドリングでは、脳幹を刺激することで全般性痙攣が誘発されること、キンドリングの進展に伴い投射路である線状体や側頭葉の興奮性が高まっていくことが確認されている。今回の24時間後の結果から、PTZキンドリング形成過程では脳幹が痙攣源性となり興奮性アミノ酸であるGluが上昇し、代償性に抑制性のGABAも上昇していること、Aspの上昇から投射路としての線状体や側頭葉の興奮性が高まっていることが可能性として考えられた。4週間後にはこれらアミノ酸の変化が消失していたことから、キンドリングの保持にはアミノ酸の変化は関与していないと思われた。尚、更に予定していたPTZキンドリングにおけるNMDA受容体の役割の研究は、まだ予備実験の段階であり具体的な結果が出ていないため、今後も研究を継続していく予定である。
ヒト迷走神経内非コリン作動性神経線維の同定

迷走神経は副交感神経の本幹として知られているが、副交感神経成分の他に内臓知覚をつかさどる感覚性神経線維や咽頭喉頭部の筋を支配する運動神経線維、また部分的では有るがカテコラミン作動性神経線維が含まれているという報告がある。また神経線維の分布に関しても現在迄Horseradish peroxidase (HRP) retrograde labeling等により様々な動物種の迷走神経が研究されてきた。しかしヒトでは構成成分について包括的に調べられたものはほとんど無く、心臓や腹部に限定されたものが多い。本研究ではヒト迷走神経の全走行において含有されるカテコラミン作動性神経線維を同定する方法として免疫組織化学的手法を使用した。従来は長期間固定保存された後の標本においては染色性の問題等が有るとされてきたが、抗TH(Tyrosine Hydroxylase)抗体による染色は可能であった。また組織観察の結果、ヒト迷走神経においては延髄根部においても一部TH陽性神経が認められ、他の全ての走行中においてもTH陽性神経線維が認められた。特に頚部迷走神経においてはほぼ全ての神経線維束にTH陽性神経線維が認められた。また迷走神経下神経節においてはTH陽性神経細胞も認められた。他の抗体は長期間固定保存された標本では染色されなかった。この為、新鮮標本で分布を検討したが、TH陽性神経線維はS-100やCh-ATとダブルラベリングされず交感神経節後線維であると考えられた。迷走神経は副交感神経の本幹として知られている。しかし、迷走神経には副交感神経成分の他に内臓知覚をつかさどる感覚性神経線維や咽頭喉頭部の筋を支配する運動神経線維、また部分的では有るがカテコラミン作動性神経線維が含まれているという報告がある。また神経線維の分布に関しても現在迄Horseradish peroxidase(HRP)retrograde labeling等により様々な動物種の迷走神経が研究されてきた。しかしヒトでは構成成分についてはまだ分からないことが多く、また調べられてとしても心臓や腹部に限定される事が多く包括的に調べられたものはまだない。今後染色条件等の検討を行いながら他の抗体を使用し、また例数を増やしながらヒト迷走神経に含まれる神経線維の詳細な分布を検討する。
隋唐「仏教社会」の多元的構造の解明と東アジア文化論の構築

中国史上の頂点の一つに位置づけられる隋唐期は、仏教が深く広く社会に浸透し、「仏教社会」とも規定できる本質を備えた時代であった。本研究はその「仏教社会」の多面性や多元性の解明を通じて、隋唐国家の本質に迫り、さらに隋唐を中心に形成された東アジア世界の文化的な関係性や構造を明らかにすることを目指している。本年度は当科研費の最終年度として、研究班員各位に成果の取りまとめ、公開研究報告会(2019年1月12日)を実施し、次年度中に論文集「隋唐仏教社会と東アジア文化論(仮題)」を公刊する(出版社は内定)。各人の成果は次のようになる。1梶山智史「北朝隋代の碑形墓誌について」/2山口正晃「杏雨書屋および天津市芸術博物館所蔵『大乗無量寿経』写本札記ー羽684・羽752・津芸61Dー」/3榎本淳一「入唐僧外典将来考」/4松浦典弘「唐代の尼僧と尼寺をめぐる諸問題」/5肥田路美「宰相姚崇による洛陽・長安での造像活動について」/6妹尾達彦「武則天神都再析」/7氣賀澤保規「唐代前期の房山石経事業と幽州在地社会」。なお諸事情から当日報告できなかった分担研究者の3氏(片山章雄、松原朗、櫻井智美)も論文を用意し、論集刊行に加わる。このほか代表者は『新編唐代墓誌所在総合目録』の補充と点検を継続し(2020年公表予定)、並行して房山石経題記の集約に努め、「諸経題記」「大般若波羅蜜多経題記」の題記を一書にまとめた。また『明治大学寄託墓誌石刻史料集』の再整理、『明大所蔵洛陽墓誌資料集』、『東アジア石刻研究』10号を出した。前年度に実施した「隋唐洛陽学国際シンポ」の刊行準備が完了し(出版社確定、15名。2019年度前半期刊行)。他に海外研究会に積極的に参加し(6月西安とシンガポール、9月天津、11月深セン)、当科研成果の発信につなげた。成果の一定分は次年度公刊にまわったが、ほぼ目標が達成された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。中国史、東アジア史のいわば頂点に位置した隋唐王朝は如何なる国家であったのか。その問題に関わって本研究は、仏教が隋唐国家の根幹を構成し、社会や時代の感性に深く根差している現実を「仏教社会」と規定し、その具体的様態を多面的、多元的に解明することを通して、隋唐国家のみならず東アジア世界の文化的な本質や特質の解明を目指す。その解明のために、都市(長安・洛陽・揚州)領域、地方(敦煌吐魯番文書)領域、文化・精神領域、隋唐・東アジア国家論領域、石刻資料領域の5班に分け、メンバーが各班に重複関与する形を取って研究を開始した。初年度は個別研究を進める一方、年3回の全員参加による研究会(ワークショップ)を開き、研究報告と議論を重ね、それぞれの研究課題について理解を深めた。他方、当初全員で洛陽調査を実施する予定であったが、日程の都合がつかず断念した。代わって、中国・浙江大学宗教文化研究中心との共催による「唐代仏教社会の諸問題」国際シンポジウムを浙江大学(杭州)で開催し、当方から5名が参加(内1名は研究協力者)、大変充実した報告と討論および研究交流がなされた。またこのシンポの機会を使って茅山(道教)や揚州、南京を調査し、とくに揚州では隋唐仏教と考古に関わる資料を入手、あわせて近年出土の隋煬帝墓とその墓誌を詳しく調べた。この他、隋唐時代を理解する一次史料となる墓誌の集約と入力に力を入れ、『新修唐代墓誌所在総合目録』を完成させることができた。これによって1万2千点を越える唐代墓誌の名前と所在が検索できることになる。また洛陽研究に関わって、明治大学東アジア石刻文物研究所所蔵の唐代墓誌を拓本・録文を合わせた『洛陽出土唐代墓誌資料彙編』として刊行し、さらに以前に整理した「郭玉堂編『洛陽出土石刻時地記』」復刻版が品切れとなり入手を求められていたため、今次の洛陽研究にあわせて増刷し研究者に配布した。本研究は各分担者(連携研究者2名を含む)に主担当としてのテーマを設定し、その研究を進めつつ、定期的に研究会で報告をして互いの研究テーマを共有する手続きをとってきた。これによってややもすれば個別分散化する流れを抑え、共同研究の実を挙げることが期待でき、この試みは一定の意味があったと考える。ただし初年度でもあり、報告された中身からみて、科研費のテーマとそれぞれの役割を理解してもらう点で、なお一層の努力が必要と実感した。そうしたなか、浙江大学との国際シンポでは当方が考える隋唐「仏教社会」論に中国側からも一定の賛同が得られたことの意味は大きかった。次は日本で第2弾としての国際シンポを実現し、隋唐国家の本質に迫る成果につなげたい。初年度はまた当初予定した『新修唐代墓誌所在総合目録』を無事完成でき、今後各方面に献呈していく予定である。

問題は「隋唐洛陽学」の立場からこれら資料を総合的、系統的に押え直し、必要データを取り出すという困難の多い作業となる。初年度にはその作業に少しでも踏み込みたいと計画したが結局踏み込む入口で終わってしまった。遅れは研究二年次に取り戻す所存である。本研究では当初から、隋唐社会の多元的構造を明らかにしていくために、他の学会・研究会などと連携したシンポジウムや討論の機会が必要であると考えており、初年度は浙江大学と国際シンポを開催できたが、二年次、三年次に向けたシンポジウムの下地の準備がまだ詰め切れていない。二年次は中国中世研究者フォーラムとの連携シンポ、東アジア石刻研究会との国際石刻シンポの開催、洛陽で開かれる洛陽学国際シンポへの参加などが計画されており、その態勢作りのために早急に取りかかる必要がある。中国史上の頂点の一つに位置づけられる隋唐期は、仏教が深く広く社会に浸透し、「仏教社会」とも規定できる本質を備えた時代であった。本研究はその「仏教社会」の多面性や多元性の解明を通じて、隋唐国家の本質に迫り、さらに隋唐を中心に形成された東アジア世界の文化的な関係性や構造を明らかにすることを目指している。上記の課題を具体的に考察するために、都市(長安・洛陽・揚州)領域、地方(敦煌吐魯番)領域、文化・精神(美術・文学)領域、隋唐・東アジア国家論領域、石刻資料領域の5班に分け、メンバーが各班に重複関与する態勢を築いた。その上で全員が一堂に会して成果を報告しあう研究会(ワークショップ)を3回(5月、9月、12月)開き、認識の共有と深化をはかった。第二年度の研究上の主要な柱は、隋唐洛陽を共通項とする国際シンポの開催であったが、当初の計画からやや規模を膨らませて実施することができた。日時は2017年3月16日17日の両日、京都大学総合人間学部に会場を借り、報告者は19名、コメンテーター等が6名となり、うち海外からは中国が5名、韓国が3名が報告した。洛陽に焦点を当てたのは、隋唐国家の基軸でありながら総合的研究が不足しているとの反省と、そこに隋唐国家の仏教を含む特質が凝縮しているとの見通しに基づくが、2日間の集中した報告と論議を通じて洛陽のもつ意義がより深く認識できたと考える。シンポジウムの成果は当日「予稿集」として配布したが、第三年次中に正規の論文集の公刊を予定する。研究代表者として氣賀澤は、初年度に刊行した『唐代墓誌所在総合目録』を補う人名索引を作成、また中国洛陽や北京の国際シンポに出席し、隋唐「仏教社会」論の意義を報告、さらに主催した洛陽学シンポで基調報告もした。各研究分担者もそれぞれの立場から着実に成果を発表しており、次年度の最終年度にまとまった成果に結実することが期待される。本研究は各分担者(連携研究者2名を含む)に主担当としてのテーマを設定し、その研究を進めつつ、定期的に研究会(ワークショップ)で報告をして互いの研究テーマを共有する手続きをとってきた。ただ近年、大学運営等による忙しさが加わり、全員が一堂に会することはなかなか難しい現状にあるが、それでも共同研究の実を挙げる上で、この試みは一定の意味があると認識する。ただし研究分担者に科研費の趣旨とそれぞれの役割、期待される方向が十分理解されているかという点では、なお一層の努力が必要と実感している。第二年次の3月に実施した「隋唐洛陽国際シンポ」では、本科研費メンバー以外の中堅若手研究者から多くの協力が頂けたが、研究分担者は諸般の事情から主導的役割を果たすまでに至っていなかった。このことはまた、研究代表者の側が「隋唐洛陽論」の体系的、理論的な整理や意義づけがまだ十分できていなかったことも関係する。第三年次に「隋唐洛陽論集」を公刊するまでには、その研究の新たな理論的地平が提示できるように努める所存である。また隋唐洛陽の意義
誤り訂正符号に基づく効率の良い量子エンタングルメント純粋化プロトコルの開発

ShorとPreskillによる量子鍵配送プロトコルの安全性の証明の中で、彼らは量子CSS符号から一方向エンタングルメント純粋化プロトコルを構成する方法を示している。本研究ではShor-Preskillの構成法を拡張し、CSS符号の一般化である量子スタビライザー符号から一方向または双方向エンタングルメント純粋化プロトコルを構成する方法を提案した。エンタングルメント純粋化プロトコルの効率は一定の量の雑音に耐えられるときに1キュービットあたり取り出せる最大エンタングルド状態の数で評価されるが、本研究成果には以下のような意義がある:1、CSS符号からは構成することができない効率の良いエンタングルメント純粋化プロトコルを構成できるようになった。2、一方向プロトコルよりも双方向プロトコルのほうが効率が良いが、双方向プロトコルも量子誤り訂正符号から構成できるようになった。3、既存の双方向プロトコル、具体的にはBennettの再帰プロトコルとDeuteschらのQPAプロトコルを量子誤り訂正符号から構成するエンタングルメント純粋化プロトコルとして記述できることを示した。またスタビライザー符号から構成した一方向プロトコルの性能評価として、構成された一方向プロトコルの効率は元のスタビライザー符号の効率を下回らないことを示した。この結果により既存の一方向プロトコルの中で尤も効率が良いとされてきたハッシングプロトコルよりも効率の良いプロトコルをスタビライザー符号から構成できることが明らかになった。量子誤り訂正符号から一方向および双方向の量子エンタングルメント純粋化プロトコルを構成する方法を明らかにした。この方法には以下のような意義がある。(1)双方向プロトコルは一方向のプロトコルよりエンタングルメントを純粋化する能力が高いが、今までに知られていた双方向プロトコルはリカレンスプロトコルとQPAプロトコルしか無かった。誤り訂正符号を純粋化プロトコルに変換することにより、今まで知られていなかった双方向プロトコルを大量に構成する事ができる。我々は既に今まで知られていたどの双方向プロトコルよりも優れたプロトコルを誤り訂正符号から構成する事に成功し、提案方法の有効性の一端を明らかにしている。(2)従来から知られている双方向プロトコルであるリカレンスプロトコルとQPAプロトコルが符号長2の量子誤り訂正符号から得られることを明らかにした。既に一方向プロトコルは量子誤り訂正符号と等価であることが知られているが、今回双方向プロトコルも量子誤り訂正符号から得られることを明らかにすることにより、量子誤り訂正符号と量子エンタングルメント純粋化との関係をより深く明らかにした。今後の課題としてどのような量子誤り訂正符号を用いれば、性能の良いエンタングルメント純粋化プロトコルを構成できるのか明らかにすることが挙げられる。今後この研究課題を明らかにしていく予定である。
各種黒鉛材料の表面改質とその第一壁としての適元性の評価

核融合炉の第一壁としての低原子番号材料の表面特性を、シミュレーション研究と実機プラズマ研究との両面から系統的に検討し、次期装置で使用される第一壁候補材料の特性評価ならび適切な材料の選択のための基礎データーの構築を目標とした。本年度は昨年度までの研究成果の上に、高性能黒鉛材、複合強化材、表面改質材を研究対象として真空工学的特性、耐プラズマ安定性、熱、機械的特性について組織的な研究を行った。真空工学的特性・炭素材料からの気体放出量は、表面積、黒鉛化度、高純度および保存状態に依存する。特に800°C以上の高温領域で放出する気体は、作成温度と原材料に強く影響される。これらの観点にたって作成された高性能黒鉛材は1000°Cまでのグラム当たりの気体放出量は1×10^<17>個となり、従来の黒鉛に比べて1オーダー減少した。複合強化材もほぼ同様な放出量であるが、表面に熱分解炭素を被覆すると12オーダー減少した。レーザービーム照射による実験では様々の形のクラスターが放出していることがわかった。気体の透過率は高密度に依存し、0.3の密度変化に対して3桁も変化した。耐プラズマ安定性の評価・原子状水素のリテンションについて調べた結果、気体放出特性と同様に高密度の大きい黒鉛ほどリテンション量も多きかった。また原子状水素を照射すると表面に一定濃度の水素を含む改質層が生成していることが考えられる。炭素の化学スパッター収率に及ぼす金属不純物の折出の影響について、真空容器の構造元素とチタンについて調べた結果、チタンがもっともスパッタリング収率を低下させることが分かった。熱・機械的特性・熱分解炭素膜厚の厚いほど損耗量が大きい。複合強化材ではマトリックス炭素が損耗し、繊維が後に残ることが分かった。亀裂進展性を調べると複合強化材は黒鉛に比べて小さく優れた材料であることがわかった。
温度感受性SV40T抗原遺伝子導入動物を用いた血液脳関門培養細胞実験系の開発

本研究は、温度感受性SV40T抗原遺伝子導入動物(Tg動物)から脳毛細血管内皮細胞を単離し、不死化細胞株を樹立し、血液脳関門培養細胞実験系を開発することを目的とした。Tgマウスおよびラットから脳毛細血管を調整し、ペニシリンカップ法を用いて内皮細胞の不死化クローンを単離した。両細胞ともに、spindle-fiber状の形状を示し、Western blot法によってSV40T抗原の発現が確認された。この量は培養温度が33度に比べて37度、39度の方が少なく、増殖速度も33度に比べて37度、39度が遅いことが示された。Acetyl化LDL受容体、アルカリフォスファターゼなどの内皮細胞マーカーが検出された。さらに、GLUT-1,mdr1aのmRNAがRT-PCR法で検出された。また、Western blot法でもGLUT-1とP-糖蛋白の発現が示された。マウス細胞株の3-O-methyl-D-glucoseの取り込み速度を解析したところ、2.65.3μl/(min mg protein)となり、Michaelis定数は6.6mMとなり、輸送担体の親和性はin vivoの報告値にほぼ一致したが、輸送活性はin vivoの約8分の1と低いことが明らかになった。これらの細胞はconfluent状態で十分な電気抵抗が得られなかった。そこで、タイトジャンクションの形成に重要な働きをしていると推察されるclaudin-5,occludin,junctional adhesion moleculeについてRT-PCR法で解析したところそれぞれのmRNAが検出されたた。今後、さらにこれらのタイトジャンクション蛋白の発現を誘導することで、よりin vivoに近い特性を持った血液脳関門培養細胞実験系へ改良できると考えられる。温度感受性SV40T抗原遺伝子導入トランスジェニックマウスの大脳より脳毛細血管内皮細胞をcollagenase/dispase処理及び密度勾配法により採取し、10%FBS含有DMEM培地にて5%CO_2雰囲気下33度で培養した。増殖の速い細胞株について2回コロニー形成を行い、ペニシリンカップを用いて単一細胞由来の細胞株(TM-BBB)5株を単離した。これらTM-BBBは内皮細胞特有のspindle-fiber状の形状を示し、Western blot法によりSV40T抗原の発現が明らかとなった。TM-BBBは20から25時間のdoubling timeで増殖し、100代の継代においても細胞の形状に大きな変化はなかった。脳毛細血管内皮細胞での存在が報告されているGLUT-1及びP-糖蛋白が発現していることがWestem blot法により明らかとなった。さらに、Northern blot法によりin vivoに発現しているP-糖蛋白のmRNA、mdr 1aの発現が明らかとなり、単離した細胞株は脳毛細血管内皮細胞であることが示された。さらにGLUT-1の基質である[^3H]-3-O-methyl-D-glucose([^3H]-3-OMG)の細胞内取り込み量は少なくとも30秒は直線を示し、その初期取り込み速度は2.6から5.3 μl/(min・mg protein)であった。[^3H]-3-OMGのTM-BBBの取り込みは濃度依存性を示した。Michael is定数は6.6mM、最大取り込み速度は44nmol(min・mg protein)であった。従って、本法によって増殖可能で3-OMG(D-glucose)の輸送機能を有した脳毛細血管内皮細胞株が樹立できた。本研究は、温度感受性SV40T抗原遺伝子導入動物から脳毛細血管内皮細胞を単離し、条件的不死化細胞株を樹立し、血液脳関門培養細胞実験系を開発することを目的とした。今年度の重要な研究成果は、温度感受性SV40T

抗原遺伝子導入ラットから脳毛細血管内皮細胞について条件的不死化細胞株を樹立したことである。さらに、星状膠細胞、周皮細胞についても条件的不死化細胞株を樹立中である。樹立したラット脳毛細血管内皮細胞株は、acetyl化LDL受容体、アルカリフォスファターゼ、ガンマーグルタミルトランスペプチダーゼなどの内皮細胞マーカーが検出された。さらに、輸送系としてGLUT-1,mdrlaの発現がRT-PCRで検出された。特筆すべき成果として、この細胞株にはタイトジャンクションの形成に非常に重要な働きをしていると推定されているclaudin-5,occludin,junctional adhesion moleculeの発現がRT-PCR法で検出されたことである。本細胞株の特徴である温度感受性については、33度で優れた増殖性を示し、37度、39度では増殖速度が顕著に低下することが示された。また、Western blotの解析結果から、細胞内のT抗原量は33度に比べて37度で顕著に低下することが明らかになった。T-抗原は細胞内のp53,Rb蛋白などと結合してアポトーシスの制御や種々の遺伝子発現調節に関与していると推察されており、本細胞株を37度で培養したときにどの程度までin vivoに近い特性を発揮するかさらなる検討が必要である。以上、これまで得られた知見から、本研究によって優れた特性を有する細胞株が樹立できたと結論付けられる。