hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多疾患有病者の早期社会復帰に必要な回復期心臓リハビリテーションの介入方法の確立

生活習慣病患者はインスリン抵抗性を有し,骨格筋の代謝障害が生じている.本研究は,生活習慣病患者におけるインスリン抵抗性の増大が,嫌気性代謝閾値に与える影響を検討した.生活習慣病患者をHOMA-R高値群と低値群に分類し,心肺運動負荷試験で嫌気性代謝閾値(AT)までの運動時間とAT時の酸素摂取量(VO2 AT)を測定した.HOMA-R高値群は,低値群と比べてATまでの運動時間とVO2 ATが低下し(P<0.05, P<0.05),VO2 ATはHOMA-Rと負の相関を示した(r=-0.433,P<0.05).インスリン抵抗性が増大した生活習慣病患者は,身体活動量に関わらず嫌気性代謝閾値が低下した.平成24年度は、「多疾患有病者の早期社会復帰に必要な回復期心臓リハビリテーションの介入方法の確立」に対する研究として、虚血性心疾患患者と心不全を対象とした研究と対照群として健常者を用いた研究の両面から検討を進め、論文発表を含めて多くの成果が出た。目的:在院日数の短縮化や患者の高齢化に伴い、退院時に社会福祉サービスを受ける患者が増加している。そこで、退院時に社会福祉サービスを必要とする心血管病患者を入院早期に予測するための因子について検討した。方法:対象は、北里大学病院に入院した心血管病患者147例(70±13歳、男99例、女48例)であった。調査項目は、患者背景因子、心不全の既往、入院形態(予定入院または緊急入院)、介護者の有無、介護保険の申請、自己管理能力、移動能力、排泄能力、経済的不安の有無、認知機能、社会福祉サービスの利用とした。統計解析は、社会福祉サービスの利用を予測する因子を抽出するため、変数減少法によるロジスティック回帰分析でオッズ比(OR)と95%信頼区間(CI)を算出した。結果:退院時に社会福祉サービスを受けた症例は41例(27.9%)であった。ロジスティック回帰分析の結果、社会福祉サービスを利用する症例を予測する因子として、低い移動能力(OR=3.96, 95%CI:1.53-10.27, P<0.01)、緊急入院(OR=7.96, 95%CI:1.72-36.85, P<0.01)、介護者無し(OR=2.82, 95%CI:1.24-6.43, P<0.05)、心不全の既往(OR=2.14, 95%CI:0.94-4.89, P=0.07)が抽出された。結語:退院時に社会福祉サービスを必要とする心血管病患者を入院早期に把握するためには、患者の移動能力、入院形態、介護者の有無、および心不全の既往が重要な評価項目となる。平成25年度は、「多疾患有病者の早期社会復帰に必要な回復期心臓リハビリテーションの介入方法の確立」に対する研究として、虚血性心疾患患者と心不全を対象とした研究と対照群として健常者を用いた研究の両面から検討を進め、論文発表を含めて多くの成果が出た。臨床研究として、健常者に対する運動負荷方法による違いを検討し、同一運動負荷であっても、負荷様式が異なると心負荷に差が生じること、さらに初回運動と数回運動をした後では交感神経緊張に差が生じて心筋酸素消費量が変化することを明らかにした。即ち、高齢者においては充分な監視下での運動負荷が必要であることが判明した。この一連の臨床研究は、今年度は一部が学術雑誌に既に掲載され、英語論文もin printを含めて数編が掲載された。心臓リハビリテーション(心リハ)患者は多疾患有病者の割合が高く、個々の合併症によって心リハ進行に差がみられた。心リハの継続は患者の身体的・精神的満足度を高め抑うつ状態を改善するが、より効果的な心リハ運用方法の検討が必要と思われた。虚血性心疾患患者の下肢筋力は運動耐容能および生命予後を予測する因子であり、5 METs、7 METs、および10 METsを完遂するための下肢筋力目標値は、それぞれ46 %BW、51 %BW、および59 %BWであった。また、下肢筋力が32 %BW以下の患者は、生命予後が有意に不良であった。本研究で明らかとなった下肢筋力の目標値は、身体活動量が低下した高齢患者から復職や軽スポーツの再開を目標とする中高年患者まで、幅広い年齢層に適応可能な目標値であり、臨床的に有用な目標値になると考えられた。生活習慣病患者はインスリン抵抗性を有し,骨格筋の代謝障害が生じている.本研究は,生活習慣病患者におけるインスリン抵抗性の増大が,嫌気性代謝閾値に与える影響を検討した.生活習慣病患者をHOMA-R高値群と低値群に分類し,心肺運動負荷試験で嫌気性代謝閾値(AT)までの運動時間とAT時の酸素摂取量(VO2 AT)を測定した.HOMA-R高値群は,低値群と比べてATまでの運動時間とVO2 ATが低下し(P<0.05, P<0.05),VO2 ATはHOMA-Rと負の相関を示した(r=-0.433,P<0.05).インスリン抵抗性が増大した生活習慣病患者は,身体活動量に関わらず嫌気性代謝閾値が低下した.血管内皮機能をエンドポイントとし、生活習慣病患者における短期間の在宅による運動療法が、血管内皮機能に与える影響について検討した。

複数の冠危険因子を保有する生活習慣病患者35名を対象とした.炎症指標としてhs-CRP,IL-6,PTX3を測定した.酸化ストレスは,活性酸素代謝産物(dROMs)を測定した.血管内皮機能は,Endo-PAT2000を用いて指尖の反応性充血を評価するreactive hyperemia peripheral arterial tonometry(RH-PAT)を実施した.身体活動量は,加速度計付きの歩数計を用いて,歩数,運動量,中強度(3-6METs)の運動時間を測定した.運動療法として,「1日10,000歩を目標」と「中等度の運動強度である速歩」を指導した.運動療法前に比べて、運動療法4週間後の歩数と中強度の運動時間の両者が増加した28名を身体活動量増加群、残り7名を身体活動量非増加群として2群に分類した。身体活動量増加群では,介入前に比べて介入後のRH-PAT indexは有意に増加し,血中PTX3濃度は有意に低下した(それぞれP<0.05).一方,両群において,hs-CRPとIL-6は有意な変化を示さなかった.4週間の運動療法を行った本研究では,CRPとIL-6に変化は認められなかった.PTX3は,動脈硬化巣の血管内皮細胞やマクロファージから産生されることが明らかとなっている.PTX3は,CRPやIL-6に比べて運動療法による局所の血管炎症の低下を速やかに反映する指標であると推察された.生活習慣病患者に対する運動療法は,4週間という短期間であっても血管内皮機能を改善し,血中PTX3濃度を低下させた.PTX3は,CRPやIL-6に比べて,生活習慣病患者における短期間の運動療法の効果を反映する炎症バイオマーカーである.当初の予定通り順調に研究が進み、その結果の一部は学会発表や論文としての発表が出来るようになってきている。当初の予定通り順調に研究が進み、その結果の一部は学会発表出来るようになってきている。当初の予定通り研究を進めていく方針である。血液データの測定に研究費の多くを使用する予定。
ケイ素-ケイ素π共役系分子の創製

1.オクタシタキュバンの光分解によるヘキサシラベンゼン誘導体の創製を試みた。オクタテキシルオクタシタキュバン(1)およびオクタキス(tert-ブチルジメチルシリル)オクタシタキュバン(2)に,低温(77K)にて紫外光を照射すると,1では704nmに,2では685nmに強い吸収が出現した。ESRスペトルにおいてシグナルは全く観測されなかったことから,これらの吸収はラジカル中間体によるものではなく,ヘキサシラベンゼンのようなケイ素-ケイ素不飽和化学種に起因すると結論された。しかし,ジシレン(エテンのケイ素類縁体)と良く反応するアルコールや2,3-ジメチル-1,3-ブタジエンでは,ヘキサシラベンゼンに対応するトラップ反応生成物を得ることはできなかった。この結果は,ケイ素-ケイ素π共役化合物の反応性が孤立ケイ素-ケイ素二重結合化合物とは全く異なることを示唆する。なお,上記吸収を示す化学種は低温(-70°C付近)においても酸素とは爆発的に反応する。現在,この化学種を,クロムカルボニルや鉄カルボニルなどの遷移金属錯体との配列を利用して、安定化させることを試みている。2.関連研究として以下の知見を得た。(1)オクタシラキュバン1のジメチルスルホキシドを酸化剤とする光酸化によって、新規含酸素多面体ポリシランであるオキサオクタシラホモキュバンとジオキサオクタシラビスホモキュバンを得た。これらのホモキュバン誘導体の光分解によるケイ素-ケイ素π共役化学種の生成は今後の課題である。(2)ドデカイソプロピルトリシクロ[4.2.0.0^<2,5>]オクタシランのsyn体は200°C付近でanti体へ異性化するが,その異性化の活性化エネルギー(42.3kcal/mol)は炭素類縁体のそれ(31.4kcal/mol)よりも大きいことがわかった。なお,anti体は230°C付近で1,5-シクロオクタシラオクタジエンに異性化するとの予備的知見を得た。(3)9,10-ジ-tert-ブチル-9,10-ジヒドロ-9,10-ジシラアントラセンから誘導されるシリルラジカルはかなり安定であることがわかり,含ケイ素芳香族分子である9,10-ジシラアントラセン誘導体創製の可能性が強まった。
閉塞型睡眠時無呼吸リハビリテーションの有用性の確立

閉塞型睡眠時無呼吸(OSA)患者におけるオトガイ舌筋による舌前方突出筋力は睡眠時の上気道開存性に関与するため重要である.しかし,OSAのオトガイ舌筋において炎症,脱神経や筋代謝異常などの筋力低下に関与し得る病理学的所見が観察されている.そこで,本研究において,健常者20例及びOSA患者26例において舌前方突出筋力と閉OSAとの関連を検討した.その結果,舌前方突出筋力は閉塞型無呼吸時間,無呼吸指数,睡眠段階2の比率と手統計学的有意な相関系を認めた.今後どのようなOSA患者において,運動療法による舌前方突出筋力の改善を図るべき症例かどうか,適切な選択基準を検討する必要があると考えられた.オトガイ舌筋による上気道開存性の低下は閉塞型睡眠時無呼吸の成因のひとつであるが、オトガイ舌筋の筋力とポリソクノグラフィとの関連性は十分に明らかにされていなかった。そこで、オトガイ舌筋の筋力とポリソムノグラフィ検査結果との関連性を明らかにすることを本研究の目的とした。対象者は睡眠時無呼吸症候群疑いのためポリソムノグラフィを受けた26名である。オトガイ舌筋の筋力は舌の前方突出の最大等尺性収縮にて評価した。オトガイ舌筋筋力は統計学的有意に無呼吸指数及び閉塞型無呼吸時間と相関することが示された。加えて、オトガイ舌筋筋力と睡眠深度のステージ2との間に統計学有意な相関関係を認めた。以上の知見は覚醒時のオトガイ舌筋の筋力が睡眠時の上気道開存性に関与することが考えられた。閉塞型睡眠時無呼吸患者におけるオトガイ舌筋による舌前方突出筋力は睡眠時の上気道開存性に関与するため重要である.しかし,閉塞型睡眠時無呼吸患者のオトガイ舌筋において炎症,脱神経や筋代謝異常などの筋力低下に関与し得る病理学的所見が観察されている.そこで,本研究において,健常者20例および閉塞型睡眠時無呼吸患者26例において舌前方突出筋力と閉塞型睡眠時無呼吸との関連を検討した.その結果,閉塞型睡眠時無呼吸患者における平均年齢は54.6±13.8歳であった.無呼吸指数は15.5±17.1(events/hr),無呼吸低呼吸指数は29.4±20.1(events/hr)であった.また閉塞型無呼吸時間は31.9±45.6秒であった.最低経皮的動脈血酸素飽和度は85.9±6.5であった.舌前方突出筋力は閉塞型無呼吸時間,無呼吸指数,睡眠段階2の比率と統計学有意な相関関係を認めた(それぞれ, r=-0.61,p<0.0001, r=-0.41, p=0.03及びr=-0.39, p=0.04).一方,年齢,BMI,頸部及び腹部周径や低呼吸指数と舌前方突出筋力との間には統計学的有意な相関関係は見いだせなかった.また,閉塞型睡眠時無呼吸患者における舌前方突出筋力は健常者と比べて統計学的有意差を認めなかった.今後,どのような閉塞型睡眠時無呼吸患者において,運動療法による舌前方突出筋力の改善を図るべき症例かどうか,適切な選択基準を検討する必要があると考えられた.閉塞型睡眠時無呼吸(OSA)患者におけるオトガイ舌筋による舌前方突出筋力は睡眠時の上気道開存性に関与するため重要である.しかし,OSAのオトガイ舌筋において炎症,脱神経や筋代謝異常などの筋力低下に関与し得る病理学的所見が観察されている.そこで,本研究において,健常者20例及びOSA患者26例において舌前方突出筋力と閉OSAとの関連を検討した.その結果,舌前方突出筋力は閉塞型無呼吸時間,無呼吸指数,睡眠段階2の比率と手統計学的有意な相関系を認めた.今後どのようなOSA患者において,運動療法による舌前方突出筋力の改善を図るべき症例かどうか,適切な選択基準を検討する必要があると考えられた.舌の主要要素であるオトガイ舌筋の筋力が閉塞型睡眠時無呼吸と関連することを見出した。さらに睡眠深度とオトガイ舌筋との関連性を見出した。これらの知見により,閉塞型睡眠時無呼吸患者におけるオトガイ舌筋の新たな評価方法が確立されたと考えられる。呼吸リハビリテーション今後の方策として,オトガイ舌筋の筋機能を改善する新たな介入方法を確立する予定である。また,肥満合併例では継続的な運動療法が必要であるため,運動時の呼吸困難など征圧する方法を併用することが求められる。
デポジット・リファンド制度の導入における障害の緩和に関する経済学的研究

本研究では次の成果を得た。・デポジット制度における供給者サイドの負担緩和策のあり方・アメリカ・カリフォルニア州のデポジット制度における制度運営主体の負担の実態・デポジット制度の正負の影響の体系的整理・デポジット制度と拡大生産者責任の関係性・デポジット制度を活用した使用済み蛍光管の回収や、ペットボトルの再利用の詳細・世界のデポジット制度の導入状況。デポジット制度のバリエーションにおける特徴・弁当容器へのデポジット制度の特徴本研究では次の成果を得た。デポジット制度のバリエーションにおける特徴・弁当容器へのデポジット制度の特徴本研究は、デポジット制度を有効に活用する上での次の2つの障害の克服を目指すものである。第1に、生産者や卸・小売業などの供給側や制度の運営主体の負担が大きいこと、第2に、制度の具体的な姿が必ずしも明らかでないことである。平成19年度は、上記の第1の障害については、次の2つの観点から検討をおこなった。・デポジット制度における供給側の負担を緩和する政策を考慮に加えたデポジット制度の最適設計について、検討の枠組みを一般均衡に発展させて分析し、新しい知見の獲得を試みた。この分析は、2008年度においても必要な状況である。なお、部分均衡分析をおこなった論文の大幅な改訂もおこなった。・アメリカ・カリフォルニア州の環境省においてインタビュー調査、および制度に関わる主体の視察をおこない、カリフォルニア州のデポジット制度における制度運営の実態を詳細に把握した。上記の第2の障害については、次の3つの観点から検討をおこなった。・デポジット制度について経済学の観点から捉えた既存研究をもとに、デポジット制度のもたらす正の影響と負の影響を体系的に整理した論文を作成した。また、デポジット制度を拡大生産者責任の観点から捉えた論文を改訂した。・(独)国立環境研究所循環型社会・廃棄物研究センター主任研究員の田崎智宏先生と、「デポジット制度の調査・比較研究」と題する共同研究をおこない、海外における有害廃棄物に対するデポジット制度の適用状況の概略、および、重点的に見る必要があると思われる事例において想定されるシステムフローの情報を得た。・研究代表者が実施したアメリカにおける鉛バッテリーに対するデポジット制度を念頭に実施された大阪府豊中市における使用済み蛍光管の回収実験について、入手しているデータを詳細に分析し、デポジット制度が使用済み蛍光管の回収などに与える影響を検討した。2008年度は、デポジット制度を有効に活用する上での障害の克服について、引き続き検討した。1.デポジット制度における供給側や制度運営主体の負担緩和策を次のように検討した。(1)供給側の負担緩和策について部分均衡分析をおこなった論文を2本出版し、また、一般均衡分析をおこなう論文に目途をたてた。(2)デポジット制度の代表的な国外の導入事例であるアメリカ・カリフォルニア州の飲料容器デポジット制度について、制度運営主体の業務の実態を明らかにするワーキングペーパーを作成した。2.デポジット制度の具体的な姿や評価について次のように検討した。(1)デポジット制度に関する経済学的研究をサーベイし、デポジット制度がもたらす正負の影響について整理した論文を出版した。(2)大阪府豊中市における使用済み蛍光管の回収実験について詳細な分析をおこない、デポジット制度の対象財としての可能性を有する蛍光管にデポジット制度を適用した場合の影響を検討した論文を出版した。(3)ペットボトルの再利用の仕組みとしてデポジット制度を適用した環境省の社会実験を、消費者へのアンケートや現場見学等を駆使して詳細に分析し、日本で受け入れられるデポジット制度の必要条件を明らかにした。(4)海外のデポジット制度の適用状況の概略、および、重点的に見る必要があると思われる事例についての想定されるシステムフローの情報から、デポジット制度を分類し、その特徴を検討した。デポジット制度は多くの先行研究で有用性が指摘されている。本研究における以上の検討は、今後の環境政策におけるデポジット制度の有効活用につながり、環境政策の改善に寄与すると考えられる。
炎症を背景とする大腸発癌モデルにおける腸内細菌の影響

慢性炎症が発癌に深く関与していることが知られているが、潰瘍性大腸炎・クローン病に代表される慢性炎症性腸疾患(IBD)においても、炎症の慢性化に伴い発癌リスクが高まることが報告されている。炎症に由来する大腸発癌(Colitis-Associated Cancer; CAC)モデルマウスとしてp53・IL-10二重欠損マウスを用い、腸内菌の関与を検討した。p53・IL-10二重欠損マウスを無菌化し、SPF環境下のマウスと比較したところ、SPFマウスでは大腸炎、大腸腫瘍が形成されるのに対し、無菌マウスでは大腸での炎症、腫瘍が認められず、このモデルでは腸内細菌の関与が示唆された。慢性炎症を背景とする大腸癌に腸内細菌が深く関与していることが数多く報告されているが、いまだ不明な点が多い。本研究では、発癌に関わる細菌種を分離・同定し、腸内細菌による発癌メカニズムを明らかにすることを目的とする。平成26年度は炎症性発癌モデルマウスとして、C57BL背景のInterleukin 10(IL-10)およびp53二重欠損マウスを作出し、このマウスを無菌化した。無菌マウスの一部をSPF環境下にて飼育し、腸炎および大腸腫瘍の発症について、観察を開始した。無菌環境下とSPF環境下での病態を比較することで、このモデルマウスにおける腸内菌叢の影響を確認することが可能となると考えられる。腸内細菌叢が宿主の大腸発癌に影響を与えるメカニズムの一端として、腸内細菌による代謝産物の作用が示唆されている。特に一部の偏性嫌気性細菌によって腸内で変換された二次胆汁酸が細胞毒性や発癌促進作用を示すことが報告されているため、胆汁酸変換にかかわる7alpha-dehydroxylation活性を有する菌の探索を開始した。分離した菌のin vitroにおける7alpha-dehydroxylation活性を検討し、強い活性を示す菌を上記無菌IL-10・p53二重欠損マウスに投与することで、大腸発癌に及ぼす影響を評価したいと考えている。更に本年度は、これまで分離したヒト腸管由来の菌について、糖の資化性、短鎖脂肪酸の生成、宿主の健康、病態に影響を及ぼすと思われるさまざまな代謝活性などについて解析を行った。慢性炎症を背景とする大腸腫瘍に関与する腸内細菌種を分離・同定し、腸内細菌による発癌メカニズムを明らかにすることを目的とし、前年度に引き続き研究を行った。炎症性発癌モデルマウスとして平成26年度に作出した、C57BL背景のInterleukin10 (IL-10)およびp53二重欠損マウスを無菌化し、無菌マウスの一部をSPF環境下にて飼育し、腸炎および大腸腫瘍の発症について検討した結果、SPF環境下では盲腸および大腸に炎症が認められ、更に腫瘍が認められたのに対し、無菌の二重欠損マウス大腸には炎症も腫瘍も全く観察されなかった。一方で、いずれの環境下でも、一部のマウスに胸腺腫瘍が観察された。このことから、本マウスにおける大腸腫瘍発生には腸内細菌が関与していることが強く示唆された。次に、大腸癌患者の腫瘍粘膜部より菌を分離し、この中から炎症誘導性や大腸癌との関わりが示唆されているFusobacterium属菌と同定された株を、上記無菌二重欠損マウスに投与し、観察を開始した。更に、胆汁酸が腸内の偏性嫌気性菌によって細胞毒性や発癌促進作用を示す二次胆汁酸に変換されることから、胆汁酸変換に関わる菌の探索を開始した。in vitroにおいて胆汁酸の脱抱合、側鎖の脱水素反応、脱水酸反応に寄与する菌を分離し、強い活性を示す菌を上記無菌IL-10/p53二重欠損マウスに投与することで、大腸発癌に及ぼす影響を評価する予定である。その他、宿主の免疫に関わる菌、特に腸管ヘルパーT細胞誘導菌を分離し、それらの特徴についても解析を行った。申請した計画においては平成26年度中にC57BL背景の無菌p53・IL-10二重欠損マウスを作出し、無菌とコンベンショナル環境下での違いを明らかにする予定であった。しかしながら二重欠損マウスの繁殖が予想外に難しく、実験に必要なマウスの確保に時間がかかっている。その他の計画に関しては概ね予定通りに進んでいる。腸内細菌学二次胆汁酸の生成能などに着目して選出した腸内菌を無菌のp53・IL-10二重欠損マウスに投与する。作出したノトバイオートマウスにおける投与菌(群)の定着を確認するとともに、腸炎、大腸癌の発症についてマウスの全身状態、下痢、肛門の汚れについて経時的に観察し、更に肉眼的・組織学的な解析を行うことで評価する。一部のマウスについては腸管組織における免疫細胞の分布、役割についても解析を行い、炎症における菌の関与について検討する。

また、実験期間中は経時的に糞便を採取し、糞便内および腸内胆汁酸について詳細に解析する。胆汁酸以外にも、脂肪酸や腐敗産物などの腸内代謝産物に大きく寄与する菌を選択し、無菌のp53・IL-10二重欠損マウスに投与することでノトバイオートの作出を試みる。更に、特に腸管免疫細胞の中でも炎症の増悪に寄与する細胞(ヘルパー細胞)や、炎症の抑制に働きかける細胞(制御性T細胞)を誘導する腸内菌が、作出したp53・IL-10二重欠損マウスにおいて腫瘍の発生にどのような影響を与えるかについても検討したい。当該年度は当初、C57BL背景のp53・IL-10二重欠損マウスを無菌化し、繁殖を行って実験を開始することを予定していたが、マウスの無菌化、およびその繁殖に予定を上回る時間を要したため、具体的なノトバイオートの実験を開始することが困難であった。そのためマウスの維持及び解析に必要な予算が予定より少なくなり、次年度に繰り越すこととなった。次年度は今年度の遅れの分、当初の予定に比べマウスの使用が多くなり、費用が必要となる。来年度も引き続き行われるマウス実験のために、マウスgenotypingのためのDNA抽出キット、マウス組織からのRNA抽出キット、Real-time PCR用試薬などについて、次年度についても今年度と同様の費用が必要と考える。更に、細菌培養のための消耗品購入費用、細菌の生化学性状試験用キット、代謝能の試験用試薬などについても今年度と同様に必要となる。当初の計画より遅れている、無菌p53・IL-10二重欠損マウスにさまざまな菌を投与してノトバイオートマウスを作出するためにかかる費用を、今年度繰り越した予算で負担する。
移植された人工血管における治癒過程の免疫組織学的検討

人に移植された人工血管の免疫組織学的検索を再手術や剖検時に取り出されたDacronやPolytetrafluoroethyleneを用いて行った。H-E染色、elastica Van Gieson染色、アザン染色に加えて、細胞とマトリックスの同定のためにα-アクチン、マクロファージ、von Willebrand因子、フィブリン、エラスチン、コラーゲンI-V、プロコラーゲン、CD3、CD20に対する免疫染色を行った。また、増殖因子(PDGF,FGF,TGFβ)、サイトカイン(IFNγ)、プロテアーゼ(u-PA,MMP1,MMP2,MMP9)および細胞増殖マーカーであるKi-67に対する抗体を用いて免疫染色を行った。増殖因子等に対して陽性である細胞は二重染色により細胞の同定を行った。移植後5-24日の人工血管吻合部内面は血栓で覆われ、吻合部以外の内面は所々に血栓の付着を認めた。血栓にはマクロファージが進入し、PDGF、MMP、Ki-67に対して免疫染色陽性であった。移植後11-148カ月の人工血管吻合部はいわゆる内膜肥厚を呈しており、平滑筋細胞とコラーゲンが主たるものであった。吻合部内面は一層の内皮細胞が覆っているか、もしくはフィプリンの薄い層にて覆われていた。内膜肥厚の厚さは移植後11-36カ月のものと移植後94-148カ月もので差は認められなかった。吻合部位外の内面は血栓やコラーゲンと線維芽細胞に覆われているが、所々では人工血管の線維が露出していた。平滑筋細胞、線維芽細胞にはMMP陽性のものを認めたが、PDGF、Ki-67に対して陽性のものは認めなかった。コラーゲンは主としてIII型であり、また、吻合部にはエラスチンも認めた。人工血管周辺の組織にマクロファージやT cellを認めたがB cellは認めなかった。
寒冷・豪雪地域における在宅高齢者への介護サービスの効果に関する研究

在宅サービスの中で通所サービスの効果を明らかにする目的で調査を行った。調査対象者は,新潟県大和町在住で調査の参加に同意した要介護認定を受けた在宅高齢者205名である.調査項目は,基本属性,Barthel index,MMSE,GDS-15,日本版EuroQol,身長・体重,握力,筋量,血清アルブミン,血色素である.平成15年1-3月の調査で70%以上が外出せず,ADLの低下に伴って身体機能,精神機能,栄養状態が悪化する傾向があり,ADLの悪化要因は男性,握力低下,GDS-15高値,大腿筋量低下であった.通所サービス利用群で要介護度および脆弱性が高かった.平成15年8-9月の調査の結果,要介護度の軽い群では夏期間の外出頻度が高く,主観的な身体の動きも良くなっていたが,要介護度の重度な群では季節差はなかった.身体機能や栄養状態は要介護度の重度な人ほど低下しやすい傾向淋あった.要介護在宅高齢者の血中25-OH-Dは季簾差がなかった.通所サービスの外出時の紫外線暴露量は,血中25-OH-D濃度を上昇させるには不十分かもしれない.2年後の追跡調査が平成17年1-3月に118名の同意を受けて行われた.通所サービス利用者と非利用者の比較では通所サービスの効果は証明できなかったが,通所サービス利用頻度と血色素,血清アルブミンに有意差あるいは有意な傾向を認め,通所サービス利用頻度が栄養状態に影響を与えていることが明らかとなった.通所サービスで行われている内容を検討した結果,比較的年齢が若く認知機能が保持されている人に実施されていた歩行・移乗個別プログラムが要介護度と身体機能の維持に効果があった.在宅サービス提供施設では冬期間で利用者や収入が減少する施設があり,降雪と積雪によるストレス得点は半数以上の施設で90点を超えていた.地域特性にあった要介護在宅高齢者へのサービスに関するさらなる研究が必要である.在宅サービスの中で通所サービスの効果を明らかにする目的で調査を行った。調査対象者は,新潟県大和町在住で調査の参加に同意した要介護認定を受けた在宅高齢者205名である.調査項目は,基本属性,Barthel index,MMSE,GDS-15,日本版EuroQol,身長・体重,握力,筋量,血清アルブミン,血色素である.平成15年1-3月の調査で70%以上が外出せず,ADLの低下に伴って身体機能,精神機能,栄養状態が悪化する傾向があり,ADLの悪化要因は男性,握力低下,GDS-15高値,大腿筋量低下であった.通所サービス利用群で要介護度および脆弱性が高かった.平成15年8-9月の調査の結果,要介護度の軽い群では夏期間の外出頻度が高く,主観的な身体の動きも良くなっていたが,要介護度の重度な群では季節差はなかった.身体機能や栄養状態は要介護度の重度な人ほど低下しやすい傾向淋あった.要介護在宅高齢者の血中25-OH-Dは季簾差がなかった.通所サービスの外出時の紫外線暴露量は,血中25-OH-D濃度を上昇させるには不十分かもしれない.2年後の追跡調査が平成17年1-3月に118名の同意を受けて行われた.通所サービス利用者と非利用者の比較では通所サービスの効果は証明できなかったが,通所サービス利用頻度と血色素,血清アルブミンに有意差あるいは有意な傾向を認め,通所サービス利用頻度が栄養状態に影響を与えていることが明らかとなった.通所サービスで行われている内容を検討した結果,比較的年齢が若く認知機能が保持されている人に実施されていた歩行・移乗個別プログラムが要介護度と身体機能の維持に効果があった.在宅サービス提供施設では冬期間で利用者や収入が減少する施設があり,降雪と積雪によるストレス得点は半数以上の施設で90点を超えていた.地域特性にあった要介護在宅高齢者へのサービスに関するさらなる研究が必要である.1.調査枠組みの構築高齢者の加齢による身体的精神的特徴,健康障害による身体的特徴,高齢者の保健・医療・福祉に関する文献検討を行い,生活実態調査・健康実態調査の具体的調査枠組みを構築した.主な調査内容は,次の4項目とした.(2)血液検査(アルブミン・腎機能・VD・PTH・Hb)(3)筋量検査(4)身体計測2.調査協力体制確立研究趣旨と調査枠組みを大和町町長,国保町立ゆきぐに大和病院長,保健師,在宅介護支援事業者,在宅介護支援専門員へ説明し,調査の同意と協力を取り付けた.3.調査対象者へ協力の依頼対象者の選択を11月-12月に行った.約470名の対象者に対し在宅介護支援専門員が説明し,デイサービス利用者約190名,非利用者約60名の同意を得た.4.調査実施平成15年1月末-2月の5週間にデイサービス利用者の調査を実施し、3月の3週間で非利用者の訪問調査を実施した.1.寒冷・豪雪地域の在宅障害高齢者の夏期間における健康調査:寒冷・豪雪地域に暮らしている在宅障害高齢者の夏期間の身体的精神的特徴を調査した。平成15年1-3月に行った冬期間調査項目から夏期間と異なると思われる項目を(1)質問紙調査(基本属性・うつスケール・QOL)(2)血液検査(アルブミン・Hb・Ht・VD)(3)握力検査(4)体重計測に精選した。

2.対象者:前回の冬期間調査に参加した205名の内、死亡10名、入院中13名、その他11名を除いた170名が夏期調査に参加し、女性120名、男性50名であった。3.結果:平均年齢は83.3歳、85歳以上が51.8%であった。女性の平均年齢84.4歳、男性79.7歳で女性のほうが有意に高かった。75.9%が通所介護を利用していた。介護度は要支援と要介護1で44.1%であった。通所介護利用者ではこの割合は80.2%であった。前回の調査から半年間で介護度の改善は10名、悪化は23名であった。女性のほうが有意に悪化の割合が高かった。外出頻度は冬期間では73%の人がほとんど外出しなかったが、夏期間はその割合が50%と有意に減少した。歩き回るのに問題がない、洗面や着替えに問題ない、家事や余暇に問題ないと答えた人の割合も冬期間より有意に減少した(<0.000)。痛みがない、不安がない、と答えた人の割合は冬期間と比較し変化がなかった。主観的健康度とうつ傾向も冬期間とはほとんど変わらなかった体重の減少は有意ではなかったが、握力は14.7から13.9と有意な減少を認めた(0.006)。ヘマトクリット、血色素、総蛋白、血清アルブミン値もそれぞれ有意に減少していた。男女別にみてみると体重と握力の減少は女性で有意に減少し、男性では有意な減少は認めなかった。ヘマトクリットは女性で有意に減少したが、男性では有意ではなかった。アルブミンは男女とも減少したが総蛋白は女性では有意な減少はなく、男性で有意であった。1.寒冷・豪雪地域の在宅障害高齢者の健康状態の追跡調査:平成15年1-3月に行った寒冷・豪雪地域に暮らしている在宅障害高齢者の身体的精神的特徴を平成17年1-3月に追跡調査した。調査項目は前回と同じである.介護度と使用しているサービスは在宅支援専門員から情報を得た.(2)血液検査(アルブミン・ヘモグロビン・腎機能)(3)筋量検査(4)身体計測(5)握力2.調査対象者前回の冬期間調査に参加した205名の内、死亡42名、施設入所及び長期入院21名、入院8名、辞退6名転出その他8名を除いた120名が今回の調査に同意し調査対象者となった。デイサービス利用者93名、非利用者27名である。女性84名、男性36名、平均年齢は84.6(±8.3)である。死亡者は女性25名、男性17名、平均年齢86.6(±8.4)であった。3.調査実施平成17年1月-2月の7週間にデイサービス利用者の調査を実施し、3月の2週間で非利用者の訪問調査を実施した.1.寒冷・豪雪地域における在宅障害高齢者の通所介護利用の効果分析:平成15年1-3月に行った寒冷・豪雪地域に暮らしている在宅障害高齢者の身体的精神的特徴を平成17年1-3月に追跡調査した。主な調査項目は(1)質問紙調査(基本属性・ADL・うつスケール・MMSE・QOL)(2)血液検査(アルブミン・ヘモグロビン・腎機能)(3)筋量検査(4)身体計測(5)握力である。分析対象者は,前回の冬期間調査に参加した205名の内、死亡42名、施設入所及び長期入院21名、入院10名、辞退6名、転出その他8名を除いた118名が今回の調査に同意し対象者となった。デイサービス利用者93名、非利用者25名である。女性83名、男性35名、平均年齢は86.1(±7.4)、81.1(±9.6)で女性の年齢が高かった。
骨移植の成否に関与する要因から考察した造血幹細胞による骨組織再生療法に関する研究

口唇裂・口蓋裂における良好な矯正歯科治療の達成には、顎裂部に対して行われる骨移植術は必要不可欠かつ重要な治療である。本研究は、骨移植術に代わる治療法として、幹細胞を用いた再生医療の可能性について検討を行った。マウスを用いた実験では、間葉系幹細胞のみを移植した場合と比較し、間葉系幹細胞と造血系幹細胞を混和して移植した場合で多くの新生骨が誘導された。造血系幹細胞を併用することで成功率の高い骨組織再生が可能であることが示唆された。口唇裂・口蓋裂患者のより良好な矯正歯科治療の達成には顎裂部骨移植は必要不可欠かつ重要な治療である。そこで本研究では臨床的研究と基礎的研究の両側面から、現段階における顎裂部骨移植の評価ならびに顎裂部骨移植の今後の可能性について骨組織再生療法を用いて検討することを目的としている。今年度に行なった研究内容は以下の2点である。1.北海道大学病院にて顎裂部骨移植を行ない、MDCTを撮影している(術前および術後1年)片側性唇顎口蓋裂患者の抽出を行なった。また顎裂部骨欠損および同部に対する移植骨の評価として3D再構築画像解析ソフト(AZE Virtual Place Lexus 64)を用いるため、同ソフトによる評価法について検討中である。2.マウス(C57BL/6N)の大腿骨および脛骨骨髄より骨髄細胞をフラッシュアウトし、不純物を取り除いた後に骨髄細胞をdish並びにflaskに播種した。dishに播種した骨髄細胞を4週間通法に従い培養を行ないマウス由来間葉系幹細胞を得た。細胞の分化能をみるため、Oil red染色およびalizarin red染色をおこなった。flaskに播種した細胞はCFU-Fを行なった。今後はCTの評価と患者の生化学的所見を検討し、臨床的研究を行なう。基礎的研究としてはマウス骨髄由来の造血幹細胞をMACSにより分離し、各細胞とハイドロキシアパタイト、増殖因子を組み合わせたものをin vivoとin vitroで検討する。今年度に行なった研究内容は以下の通りである。また顎裂部骨欠損および同部に対する移植骨の評価として3D再構築画像解析ソフト(AZE Virtual Place Lexus 64)を用いるため、同ソフトによる評価法について検討中である2.マウス(C3H/He Slc)の大腿骨および脛骨骨髄より間葉系幹細胞を通法に従い、採取した。骨髄由来間葉系細胞は4週間通法に従い培養を行なった。細胞の顕微鏡による形態所見を確認するとともに、分化培地を用いて、骨芽細胞・脂肪細胞・軟骨細胞等への分化(多分化能)を確認した。また、flaskに細胞を播種し、CFU-Fを確認した。4.2と3で得た細胞を多孔性炭酸含有アパタイトと組み合わせてマウス(C3H/He Slc)の背部に移植し、8週間飼育し、移植周囲組織を摘出し、通法に従い、組織切片をHE染色し、新生骨の評価を行った。基礎的研究としてはN数をふやすとともに形成された骨組織の評価をさらに行う予定である。1. C3H/HeSlcマウスの大腿骨・脛骨骨髄より骨髄細胞を採取し、骨髄由来間葉系細胞(MSC)を通法に従い培養した。細胞の顕微鏡による形態所見を確認するとともに、多分化能を確認した。また、MACSにより骨髄由来造血幹細胞(CD105+Sca-1+LTR-HSCs)(HSC)を分離した。2. 1で得られたMSC、HSCを骨芽細胞分化培地にて培養した。染色による肉眼的な差は認められなかったが、Alizarin Red定量よりHSC濃度に依存して吸光度が大きくなっていた。

3. 1で得られたMSC、HSCを脂肪細胞分化培地にて培養した結果、MSCにHSCを加えた群はMSC単独の群よりも有意に脂肪細胞数が多く、HSCをMSCと同時に培養することにより脂肪細胞数が増加し細胞分化能が高まることが示唆された。4. 1で得た細胞を多孔性炭酸含有アパタイトと組み合わせてC3H/He Slcマウス背部に移植しin vivo条件における骨誘導を行った。8週間後移植周囲組織を摘出し組織切片をHE染色し、新生骨の評価を行った。HSC単体を移植した組織に新生骨は認められなかった。一方、MSCにHSCを加えて移植した組織とMSC単体を移植した組織に新生骨が認められ、さらにMSCにHSCを加えて移植した組織には新生血管が認められた。これらの新生血管および骨髄の形成は、移植したHSC由来のものと考察された。
「表現のうねり」を生みだす熟練ドラム奏者の全身協応―力学系理論による解明

ドラム演奏の熟練者は非熟練者と比べて何が違うのか?本研究は、実際の演奏でも用いられる8ビートを課題とした実験データを集録し、ドラム熟練者の巧さをあぶり出すことを目的とする。具体的には、得られた演奏の音声についてドラム教室講師に熟練度を定量的に評定させることで「熟練度評価データ」を取得し、それに基づいて実験参加者を熟練度別に3分類する。一方、演奏の正確さと表現性については打間の時間構造・打圧の変動・音響的特徴などの「演奏データ」を、それらを成立させている身体協応については頭部・体幹・両上下肢、床反力中心の変位を含めた「運動データ」を取得し、熟練度評価データとの関係を解明することで目的を達成する。
フレアホモロジーによる4次元多様体とknotの研究

昨年度の成果ではレンズ空間のcorrection termの公式を求めた。更にその公式を直接計算により変形することによってcorrection termがディラック作用素の指数や符号作用素の指数のある線形和と一致することがわかった。結局この不変量はFukumoto-Furuta不変量とも一致する。レンズ空間がいつ3次元球面の結び目のデーン手術で得られるかという問題に取り組んだ。その結果そのような結び目のアレクサンダー多項式の第2成分が必ず-1になるということを突き止めた。この制限は今まで得られていた事実を使うと簡単に証明できることであるが明確にはどの文献にも書かれていない。Yi NiによってHFK(K, g)とファイバー結び目の特徴付けが行われた。これをHFK(K, g-1)の特徴付けが得られれば上記の成果かとあわせてより詳しい結び目の性質が引き出せるのではないかと考えている。次にデーン手術の問題を一般のホモロジー球面に広げた考察をした。よってレ空間ホモロジー球面に対してデーン手術でレンズ空間が得られる揚合を求めることができた。Mapleによって計算をした結果、correction termが0と2以外には計算上そのようなホモロジー球面が現れてこないことがみてとれた。これはデーン手術によってレンズ空間が得るような結び目が存在しないようなホモロジー球面が存在することを意味する。このような結果は今まで得られていない。今後これらのことを接触幾何学や葉層構造を使った研究を進めていくつもりである。またcorrection termが2のときに現れるレンズ空間をいくつか分類することに成功した。その結果20種類のレンズ空間が存在することが分かった。またそれらのレンズ空間は全てボアンカレホモロジー球面の中の結び目のデーン手術から得られ、その結び目はボアンカレホモロジー球面の種数2のヘーガード曲面上に乗っていることを確かめることができた。これは3次元球面の場合にとてもよく似た現象である。Ozsvath Szabo理論のcorrection termを用いレンズ手術に関する以下の成果を挙げることができた。1.レンズ空間のcorrection termの一般的な形を決定した。今までは連分数展開に関係した公式しか得られていなかったが連分数展開を使わずに計算できる手法を開発した。OzsvathとSzaboはレンズ空間がデーン手術で得られる必要条件(A)を得たが、その条件を詳しく見ることでレンズ空間がホモロジー球面のデーン手術で得られるための必要十分条件をcorrection termの観点から得ることができた。またそのとき、(A)の中で条件から存在が認められている定数がある意味一意に存在することを示した。2.また条件(A)とcorrection termの一般形を用いることによって、あるレンズ空間がデーン手術で得られたとき、その結び目のアレクサンダー多項式の係数に関する公式を得ることができた。この公式は以前門上氏と山田氏によって得られていた公式と同値である。3.この公式とOzsvathとSzaboによる必要条件(B)を用いることで、doubly primitive結び目に対して斎藤氏によって得られていた公式(C)を一般の場合に使えるように拡張した。4.レンズ空間L(p,p-1),L(p,p-2),L(p,p-3)がデーン手術から得られるためのpの必要十分条件を与えた。また、L(p,p-1)に関しては既存の結果を用いることで、その結び目を全て決定することができた。またOzsvathとSzaboによる必要条件は十分ではないことを同じ手法により示すことができた。5.(C)をさらに応用することによって、qを固定して、L(p,q)がデーン手術で得られるようなpが無限個得られるならばqは平方数ではなければならなく、その係数は正整数pでなければならないということがわかった。
過栄養状態の肝臓が産生するタンパクと生活習慣病の関連

肝臓が産生する新規のタンパク(ヘパトカイン)と糖尿病を中心とする生活習慣病との関連を解析した。我々は、ヘパトカインとしてセレノプロテインPを同定したが(Cell Metabolism 2010)、このヘパトカインが脂肪組織および筋組織と関連してインスリン抵抗性を引き起こすこと(Pros one 2012, 2014)、このヘパトカインに対する薬剤のひとつがメトフォルミンであることを明らかにした(J Biol Chem 2014)。新規のヘパトカインとしてleukocyte cell-derived chemotaxin 2 (LECT2)を同定し(Diabetes 2014)研究を行った。本研究では、過剰に摂取される栄養による全身の影響、とくに、過栄養によって肝臓の機能が大きく障害されていることを、遺伝子・タンパク・脂質の系統的な解析から明らかにし、その病態を研究している。我々が明らかにした肝臓から産生される新規のタンパク(ヘパトカイン)であるセレノプロテインPの研究をすすめ、糖尿病の病態を悪化させる機序を解析している。インスリン抵抗性の機序のひとつに脂肪組織におけるマクロファージの動態が重要であるとされている。我々はマクロファージの動態に重要なケモカインとの関連を検討した。ケモカインCCR5の-/-マウスはインスリン抵抗性から保護されており、マクロファージの関与が少ないことを示した。さらにCCR-/-マウスの骨髄を移入することによっても耐糖能障害が回避されることを示した(Diabetes2012)。我々がヘパトカインと銘々したセレノプロテインPが及ぼすアディポネクチンとの関連を検討した。2型糖尿病患者においては、セレノプロテインP値はアディポネクチンと負に相関しており、年齢、体重、インスリン感受性と独立していた。セレノプロテインP-/-マウスにおいてはアディポネクチン値が上昇していた(Plos One2012)。このようにセレノプロテインPは脂肪組織に働いて、インスリン抵抗性、動脈硬化と関連するアディポネクチンの制御に関与する可能性が示唆された。脂肪肝の患者における脂肪組成を測定し、DNAチップを用いて測定した発現遺伝子との関連、インスリンクランプを含めた解析によるインスリン抵抗性との関連についてデータベースを作成し、肝臓の脂肪化が及ぼす、インスリン抵抗性への影響の解析を開始した。とりわけインスリン抵抗性を代表とする動脈硬化やがん化との関連を解析している。我々が明らかにした肝臓から産生される新規のタンパク(ヘパトカイン)であるセレノプロテインPの研究をすすめ(Cell Metabolism)、糖尿病の病態を悪化させる機序を解析している。セレノプロテインPの発現はメトフォルミン投与によって減弱した。この結果は、メトフォルミンの新しい作用機序を示すとともに、セレノプロテインPを標的とする治療法のひとつがメトフォルミン投与であることを示すものであった(J Biol Chem 289:335-45, 2014)。また、新規のヘパトカインとしてleukocyte cell-derived chemotaxin 2 (LECT2)を同定した。LECT2は肥満と筋肉におけるインスリン抵抗性と相関し、飢餓センサーであるAMPKと拮抗して発現しており、満腹センサーとして働いていることが考えられた。LECT2欠損マウスはインスリン感受性が亢進し、LECT2の投与はJNKのリン酸化によりインスリンシグナルを障害していた(Diabetes Jan 29. 2014 [Epub ahead of print])。脂肪肝が及ぼすインスリン抵抗性と、脂肪組織および筋肉の脂肪が及ぼすインスリン抵抗性との関連は不明であった。69例のヒトにおける臓器のインスリン抵抗性を解析したところ、脂肪組織および筋肉の脂肪化ではなく、肝臓の脂肪化が肝臓のインスリン抵抗性のみならず筋肉のインスリン抵抗性と相関していた(PLos One 9(3): e92170, 2014)。とりわけ糖代謝と脂質代謝、アミノ酸代謝、エネルギー代謝との関連を明らかにし、インスリン抵抗性を代表とする動脈硬化やがん化との関連を解析している。インスリン抵抗性の機序のひとつにERストレスとの関連を研究してきたが、そのERストレスを引き起こす機序についてさらに詳細に解析をすすめ、そこにはプロテアソームの機能異常があるという独創的な研究を行った(Diabetes 2013)。

また、慢性肝障害にいたるとアミノ酸代謝が撹乱していること、同時に耐糖能異常が認められることが臨床的に明らかになっていた。そこで我々は分岐鎖アミノ酸が慢性肝障害患者の耐糖能異常において重要な役割を果たしていることを明らかにした(Metabolism 2012)。我々がヘパトカインと命名したセレノプロテインPが肝臓のインスリン抵抗性を起こす機序を解明し(Cell Metabolism)、本研究により脂肪組織との関連を明らかにした(Pros one 2012)が、本年度は加えて筋組織に及ぼす影響を解析した。セレノプロテインPは肝臓から産生され、肝臓のインスリン抵抗性を引き起こすだけでなく、筋組織のインスリン抵抗性をきたすことを明らかにした。同時にセレノプロテインPと2型糖尿病患者における運動耐容能との関連を解析した。当初の計画どおりの研究を実行することができている。得られている成果も再現性が高く論文の発表もできている。25年度が最終年度であるため、記入しない。計画どおり、ヘパトカインであるセレノプロテインPの構造解析および機能解析をさらに進めたい。また、新規のヘパトカインの同定を行いたい。脂肪肝の意義について、動物モデル、臨床材料を進めていきたい。これらの研究計画に変更はない。
毛根チップによる、超非侵襲的ながんの監視・モニタリング

がんが発育・進展する過程において、原発巣が引き起こす全身的な撹乱刺激による間質細胞の活性化が見られることに着目し、非侵襲的に採取が可能な毛根細胞に備わっているであろう「がんセンサー機能」を利用したスクリーニング法を発案した。本研究課題では、大腸癌患者を対象に、毛根細胞の遺伝子発現を網羅解析し、癌患者特異的な発現変化の見られる遺伝子群を見いだした。このような発現プロファイルは革新的ながんスクリーニングの基盤情報となることが期待され、大規模な臨床研究への展開を行う必要がある。大腸がん患者と、年齢・性別をマッチさせた健常人10例より毛根を採取し、バルジ領域を含む毛根細胞からRNAを精製して、癌患者の毛根に特異的な遺伝子発現のパターンが見られるかを検証することを目的とした。初年度はまず、毛根からのRNA調製についての条件検討を行った。毛根部を含む毛髪20本程度を採取し、毛根部を清潔なハサミにて切断し直ちにRNA laterによるRNA安定化処理を4°Cにて一晩行った後に、安定化液を取り除き凍結処理した。これをRNeasy micro kit(Qiagen)を用いて精製したところ、RIN値が9以上、A260/A280が1.9以上の良質なRNAが100ng程度採取することができた。現在、大腸癌5名、健常人3名のサンプル精製を行い、Illumina Hi-seq platformによるRNA-sequenceによる発現解析を進めている。なお本研究は、患者の毛髪を解析試料とするため、サンプルの採取にあたっては外部機関の有識者を含んだ倫理委員会による承認を得た上で進めており、倫理指針の遵守という研究体制の整備のため、平成25年度に終了する予定であった予定患者数のサンプリングならびに遺伝子発現の網羅解析を平成26年度に持ち越すこととなった。大腸がん患者と、年齢・性別をマッチさせた健常人より毛根を採取し、バルジ領域を含む毛根細胞からRNAを精製して、癌患者の毛根に特異的な遺伝子発現のパターンが見られるかを検証した。毛根部を含む毛髪20本程度を採取し、毛根部を切断し直ちにRNA laterによるRNA安定化処理を4Cにて一晩行った後に、安定化液を取り除き凍結処理した。これをRNeasy micro kit(Qiagen)を用いて精製したが、直接RNA-sequenceによる発現解析を行うのは困難であった。このためSMARTer Ultra Low Input RNA Kit for Sequencing. v3を使用し、RNA 10ngを増幅後、IonTorrent PGMを用いてAmpliseqライブラリを作成し、RNA-sequenceを行った。これまでに大腸がん患者6人、健常人4人分のデータを得て、癌患者の毛根において特異的な遺伝子発現パターンが見られることを確認している。薬学臨床検体の採取にあたり、倫理委員会の承認を得るために当初の予定より時間を要した。平成25年度の未施行分は、平成26年度に行い、研究計画全体を年度内に終了する。予算は概ね予定通り執行したが、端数となった2,523円の執行が困難であったため、その分を繰越とした。平成26年度に請求した額と合わせて物品費に使用予定。