hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
雌雄異株植物の雌花(♀)を雄(♂)化する黒穂菌の潜伏動向と花芽器官形成メカニズム

雌雄異株植物ヒロハノマンテマ(Silene latifolia)における雄蕊促進メカニズムについて、Y染色体特異的STSマーカーの開発と新規黒穂菌感染花の花芽形成の2つの観点から解析を行った。ヒロハノマンテマはXY性染色体によって遺伝的に性決定する。雄花(♂、XY)では、Y染色体上の雄蕊促進機能因子により雄蕊(♂)が促進される。雌花(♀、XX)はY染色体をもたないため雄蕊は伸びない。本研究ではY染色体上の雄蕊促進機能因子の特定を目指し、マイクロサテライトを利用したY染色体特異的STSマーカーの開発を行った。得られたマーカー、SmicSy16(Fujita et al. 2012)のうちSmicSy6は雄蕊促進機能因子の近傍マーカーであることがわかった。雄蕊促進機能因子近傍マーカー、SmicSy6を用いてBACスクリーニングしたところ、SmicSy6を含むBACを単離することができた。今後このBACシークエンスを進めることで雄蕊促進機能因子の同定に近づくことができる。黒穂菌(Microbotryum violaceum)が雌花(♀)に感染するとY染色体をもたないにも関わらず、雄蕊が伸びる。黒穂菌は宿主植物ヒロハノマンテマの雄蕊促進機能に直接作用していると考えられる。本研究では、これら花芽形成への作用に変異を生じた新規黒穂菌変異体Mv537を単離し、感染花の花芽形成を解析した(Fujita et al. 2012)。Mv537に感染した花は花弁が完全抑制され、花弁完全抑制花「Petal-less flower」を咲かせる。Petal-less flowerには黒穂胞子をつけた雄蕊だけが発達し、その他の花芽器官は抑制されるためPetal-lessとなる。この新規黒穂菌変異体Mv537は、雌雄異株植物の雄蕊促進メカニズムの研究に有用なツールとなる。雄性決定機能領域を含む雌雄異株植物ヒロハノマンテマのY染色体と、Y染色体がなくとも雄性器官を形成させる黒穂菌の2つの研究アプローチから花の性的二形性メカニズムを探っている。巨大Y染色体(570Mb)の解析にはSTSマーカーの利用が有用である。マイクロサテライトを利用した新規Y染色体特異的STSマーカーの開発を試みた結果、6つのマーカーを得ることができた。このうちの1つは雄性決定機能のひとつ、SPF(Stamen Promoting Factor)近傍に位置する可能性が高いことがわかった。現在は共同研究者のもと、SPF近傍マーカー領域を含むBACの解析を進めており、雄性機能領域の解読に近づいている。黒穂菌からの研究アプローチにおいては、黒穂菌の寄生動態の「入口」を調べるために黒穂菌感染経路の検証を行った。最も高い感染率を示したのは茎頂メリステムに培養液を接種する方法だった。しかし同じ接種方法と接種条件下でも、宿主植物のエコタイプによって0100%の異なる感染率を示した。このことから黒穂菌の宿主特異性が高いことがわかる。野生型の黒穂菌は感染しないエコタイプの株の一つに花の奇形がみられた。黒穂菌感染した葯はつくものの、萼や花弁が抑制されたため「Petal-less flower」と名付けた。これは今までに報告されたことがない黒穂菌の感染症状である。菌類にとって過酷な状況にあるほど変異は起こりやすい。野生型黒穂菌が感染しないエコタイプでみられた今回の花の奇形は黒穂菌の変異による可能性が高かった。そこで奇形花から黒穂菌を単離し、再接種試験により花の奇形が黒穂菌の変異によるものであることを確認した。この変異体は宿主植物の花芽器官形成ステージに関係なく利己的に雄蕊を促進し、感染拡大のための胞子をつけているようである。この黒穂菌変異体は花芽器官形成メカニズム解明の新たなツールになる。

黒穂菌は宿主植物ヒロハノマンテマの雄蕊促進機能に直接作用していると考えられる。本研究では、これら花芽形成への作用に変異を生じた新規黒穂菌変異体Mv537を単離し、感染花の花芽形成を解析した(Fujita et al. 2012)。Mv537に感染した花は花弁が完全抑制され、花弁完全抑制花「Petal-less flower」を咲かせる。Petal-less flowerには黒穂胞子をつけた雄蕊だけが発達し、その他の花芽器官は抑制されるためPetal-lessとなる。この新規黒穂菌変異体Mv537は、雌雄異株植物の雄蕊促進メカニズムの研究に有用なツールとなる。
高塩環境下の葉へのNaとCl蓄積を支配するイネの遺伝子座の探索と原因遺伝子の同定

栽培イネの日本晴(Oryza sativa)と野生イネ(Oryza rufipogon)の戻し交雑自殖系統群(BRILs)、および栽培イネコシヒカリと耐塩性イネノナボクラの染色体断片置換系統群(CSSLs)を利用して、耐塩性に深く関与するNaやClの吸収や分配に深く関与する遺伝子座の絞り込みを実施した。前者に関しては、既にラフに得られていた、塩ストレス下の葉身のNa蓄積に関するQTL解析の精度を高めるために、水耕栽培において生理的な問題が疑われたものの再解析を進めた。解析は順調であり、2019年8月中に全てが終了し、正式なQTL解析結果が得られる見通しである。既知のNa輸送系やその制御系タンパク質をコードする遺伝子に加えて、野生イネ由来の未知の重要なNa恒常性制御因子の絞り込みにつながることを期待したい。後者に関しては、これまでにイネの組織サンプルを効率よく破砕し陰イオン分析する系の安定化に成功した。既に、CSSLsの親系統であるノナボクラとコシヒカリの間に、塩ストレス下で顕著なCl蓄積の差が、地上部および地下部で観察されることが判明しているため、CSSLsを利用した水耕栽培ベースでの原因遺伝子座の絞り込みを開始している。2019年度中に完了できる見込みである。Naに比べて知見が大きく欠如している塩ストレス下におけるCl恒常性を分子レベルで解き明かす足がかりとなる成果を期待したい。懸案事項であった、イネの水耕栽培上の晩秋ー冬季における生育不良を、一つづつ克服し、通年的にプロジェクトを進められるようになった。計画を妨げる予想を超える問題も、現時点で生じていない。BRILsに関しては、2019年盛夏の頃までに、塩ストレス下におけるNaを中心とする元素の葉身内の蓄積に関するデータを全159系統分取得する。その後、QTL解析を実施する。また候補QTLを含む複数の系統のゲノムDNAを抽出し、NGSを利用したバルクシークエンス解析により、さらにQTL領域の絞り込みを試みる。同時に、日本晴との戻し交雑を共同研究者と進め、最終的には原因遺伝子同定に向かって努力する。CSSLsに関しては、今年度中に全44系統の陰イオン分析を終える。その後、NGSの利用や、必要に応じてバッククロスを進めながら、原因遺伝子の同定へと向かう。限りある資金をできるだけ効率よく使用することに努めたため。次年度も相応の研究費が必要であるため、無理に使用する事を控えたため。次年度使用額は、2019年度請求額と合わせて、主として物品費および旅費に費やす予定である。
閉経期骨粗鬆症の神経系を介した新規発症メカニズムの解析

前年度に引き続き、ラットの片側腹腔交感神経切除モデル解析を行った。片側交感神経切除モデルにおいて左右の脛骨を用いTRAP染色による破骨細胞数の測定を行った。破骨細胞数は交感神経切除側でやや減少していたが、有意差は認めなかった。さらに片側交感神経切除モデルにおいて卵巣除去したモデルの脛骨より標本を作製し同様の解析を行った。交感切除の有無で破骨細胞の数に有意差は認められなかった。また、ラット星状神経節より交感神経幹細胞を採取し、初代培養を行った。マウスマクロファージの破骨細胞への分化することに対し、ラット交感神経が影響を与えるかどうかを調べた。マウスマクロファージにG-CSFを作用させることにより破骨細胞への分化が観察された。G-CSF非存在下では破骨細胞への分化は観察されなかった。マウスマクロファージにラット交感神経細胞を作用させる条件下で観察を行ったが、破骨細胞への分化は観察できなかった。さらに、ラット交感神経節の組織培養を行った。NGFの存在下で交感神経細胞が軸索を伸ばすことが観察できた。マウス脛骨と共培養し、マウス脛骨の破骨細胞数への影響を調べたが、交感神経節との共培養の有無にかかわらず脛骨の破骨細胞数は低下し、有意差は認めなかった。組織培養の条件設定の問題の可能性もあると考えた。今回の研究で、ラット交感神経節細胞にRANKLが発現していることは確認された。交感神経節細胞の骨芽細胞分化への直接作用の有無をRANKLに焦点を当てて明らかにすることを試みたが、交感神経切除モデル、組織培養、細胞培養のいずれにおいても交感神経の有無で明らかな骨組織に対する作用において有意差は認められなかった。交感神経節細胞に発現しているRANK-Lがどのような作用を持っているかは興味が持たれるところであり、今後はそれぞれの実験系をさらに確立させ、さらに研究を発展させる必要があると考える。エストロゲン減少が閉経期骨粗鬆症発症に重要であると考えられているが、それは骨へ対する直接作用であるのか、もしくは他の経路を介した経路が存在するのかはわかっていない。我々は、閉経期骨粗霧症の発症要因として交感神経による骨への直接作用があるのではないかとの仮説を立て、それを検証するために研究を行っている。まず交感神経から骨への作用が直接的に作用することを示すためにラットの交感神経切除を行い、片側下肢のみ交感神経の作用を失ったモデル動物の作成を試みた。開腹手術にて、メスラットの腹腔交感神経節片側を直視下に切除するモデル6匹を作成した。切除後2ヶ月でラットの大腿骨を採取し、マイクロCTにて両側の大腿骨の骨密度の比較を行った。両者の比較で有意差を認めなかった。また、メスラットにおいて片側交感神経外科的除去モデルで更に卵巣を除去したエストロゲン減少モデルを6匹作成し、マイクロCTでの骨量変化を左右の大腿骨について調べたが有意差を認めなかった。この際、交感神経節の外科的切除により交感神経の機能が本当に片側のみ阻害されているかどうかが問題と考えた。なお、交感神経にRankLが発現して骨への直接作用があるのではないかとの仮説を証明するために、ラット腹腔内交感神経節およびラット頸部交感神経節より採取した組織を用いてRankL発現をPCRで確認した。腹腔内交感神経節および頸部交感神経節ともmRNAレベルでRankLの発現を認めた。交感神経細胞にRankLが発現しており、機能している可能性を示唆し、これは今まで報告されていない知見と考えた。

交感神経節細胞に発現しているRANK-Lがどのような作用を持っているかは興味が持たれるところであり、今後はそれぞれの実験系をさらに確立させ、さらに研究を発展させる必要があると考える。
型理論の証明論ならびに計算論的研究

1.型理論の表現力を帰納的関数論の立場から考察する問題について以下の結果を得た.(1)はじめに,自由代数上の1階述語論理の項に対する関数に注目し,そのような関数のうち単純型理論で表現可能なものを,原始帰納法を制限する形で特徴付けることができた.(2)次にこの結果を用いて自由代数の(変数を含まない)項に対する関数に対する二つの表現定理を得た.なお,この研究の過程で, (2)の問題に対するこれまで正しいと思われていた結果の証明に重大な誤りがあることに気付き,そのことを反例をもって示した.2.上の結果と比較する意味で,型なしラムダ計算による関数の表現可能性を,語を対象とする関数の場合について帰納的関数論の立場から考察した.すなわち,通常の(自然数を対象とする)帰納的関数の概念を,語を対象とする関数の場合に拡張し,それが,自然数によるコード化を経由して素朴な意味で「計算できる」関数の全体と一致することを示し,更に,型なしラムダ計算で表現可能な(語に対する)関数の全体とも一致することを示した.なお,この考え方をいろいろな木構造に拡張することについても検討中であり,良い見通しを得ている.3.研究代表者は,1997年9月に"Theories of Types and Proofs"と題する国際研究集会を,日本数学会第2回リージョナルワークショップとして開催し,そこで行われたいくつかの連続講義の講義録を同名の図書として出版した.そしてその図書の最初の章として,型理論と証明論のエッセンスを,この分野の専門家でない数学者にも理解できるよう分かり易くまとめると共に,いくつかの新たな知見を加えて発表した.特に,高階論理体系と高階型理論の関係についてこれまで不自然な部分が残されていたが,従来とは異なる(自然な)高階理論体系を新たに導入することにより,両者の関係を明確にすることができた.1.型理論の表現力を帰納的関数論の立場から考察する問題について以下の結果を得た.(1)はじめに,自由代数上の1階述語論理の項に対する関数に注目し,そのような関数のうち単純型理論で表現可能なものを,原始帰納法を制限する形で特徴付けることができた.(2)次にこの結果を用いて自由代数の(変数を含まない)項に対する関数に対する二つの表現定理を得た.なお,この研究の過程で, (2)の問題に対するこれまで正しいと思われていた結果の証明に重大な誤りがあることに気付き,そのことを反例をもって示した.2.上の結果と比較する意味で,型なしラムダ計算による関数の表現可能性を,語を対象とする関数の場合について帰納的関数論の立場から考察した.すなわち,通常の(自然数を対象とする)帰納的関数の概念を,語を対象とする関数の場合に拡張し,それが,自然数によるコード化を経由して素朴な意味で「計算できる」関数の全体と一致することを示し,更に,型なしラムダ計算で表現可能な(語に対する)関数の全体とも一致することを示した.なお,この考え方をいろいろな木構造に拡張することについても検討中であり,良い見通しを得ている.3.研究代表者は,1997年9月に"Theories of Types and Proofs"と題する国際研究集会を,日本数学会第2回リージョナルワークショップとして開催し,そこで行われたいくつかの連続講義の講義録を同名の図書として出版した.そしてその図書の最初の章として,型理論と証明論のエッセンスを,この分野の専門家でない数学者にも理解できるよう分かり易くまとめると共に,いくつかの新たな知見を加えて発表した.特に,高階論理体系と高階型理論の関係についてこれまで不自然な部分が残されていたが,従来とは異なる(自然な)高階理論体系を新たに導入することにより,両者の関係を明確にすることができた.1.型理論における項の単一化問題については,その部分問題であるマッチング問題に焦点を当て,大学院学生と共に研究を行った.その結果,これまでに知られている,変数の型が4段以下のマッチング問題に対する結果を整理し,5段以上の高階のマッチング問題の特殊な場合について,解が存在するか否かと存在する場合はその解の一つを返すアルゴリズムを示すことが出来た.次年度以降は,この特殊な場合に対する我々の考え方を,より興味あるその他の場合に拡張することを目指したい.2.型理論の表現力を帰納的関数論の立場から考察する問題については以下の成果を得た.(1)まずはじめに,自由代数の元に限らず,それを拡張した自由代数上の1階述語論理の項に対する関数に注目し,そのような関数のうちで単純型理論で表現可能なものを,帰納的関数論における原始帰納法の考え方を用いて特徴付ける結果を得た.(2)次に,この結果を用いて,自由代数上の関数に対する二つの表現定理を得た.なお,今回の研究の過程で,自由代数上の関数に対する表現力についてこれまで知られているZaioncの定理の証明に重大な誤りがあることに気付き,そのことを反例をもって示した.Zaiocの定理は証明が非常に煩雑であり,そのことがこのような誤りの原因となっていると思われるが,それに対して我々の表現定理の証明は,論理的に明解で見通しが非常に良いことが特徴的である.その見通しの良さは,我々が自由代数上の関数に取り組む前に,前述のように,まず視野をより広い世界に拡張し,そこでの議論を踏まえて行ったために得られたものであると考えられる.本研究の成果は,本年4月に開かれる国際学会で発表の予定である.

図書“Theories of Types and Proofs"は,1997年9月に東京工業大学で行われた同名の国際研究集会(日本数学会第2回リージョナルワークショップ)におけるいくつかの連続講義の講義録と,この分野の専門家でない読者のために用意された入門的な章から成る単行本であり,全体として型理論と証明論の関係について基礎から最新の結果までを丁寧に解説している.研究論文′Aprimer on proofs andtypes′は,上記図書の最初の章として,型理論と証明論のエッセンスを,この分野の専門家でない数学者にも理解できるよう分かり易くまとめ,いくつかの新たな知見を加えて発表した論文である.はじめに, 19世紀後半に始まる数理論理学(数学の一分野としての論理学)の歩みを振り返り,「論理体系」の仕組みとその数学的な意味と重要性について論じ,次いで「計算体系」の仕組みとその性質,および前二者の拡張としての「型理論」の仕組みとその性質について述べ,三者の間の関係を明らかにしている.特に,高階論理体系と高階型理論の関係については,これまで不自然な部分が残されていたが,従来のものとは異なる(自然な)高階論理体系を新たに導入することにより,両者の関係を明瞭にすることができた.研究論文′Lambda-representablefunctions over free structuresrevisited′は,多くの型理論の中で最も基本的かつ重要な体系である「単純型理論」を取り上げ,その表現力を考察している.具体的には,この体系で表現可能な自由代数上の関数全体のクラスに対する二つの(帰納関数論的な)特徴付けを与えている.この種の研究はこれまでにも二三知られているが,本論文の特徴は,議論の対象をまず自由代数上の関数から項代数(open term algebra)上の関数に拡張し,後者に対する特徴付けを得た後,その結果をもとに,自由代数上の関数に関する上記の結果を得たことで,そのために全体の議論を見通しよく進めることができた.すなわち,通常の(自然数を対象とする)帰納的関数の概念を拡張して,語を対象とする帰納的関数の概念を定義し,それが,自然数によるコード化を経由することにより素朴な意味で「計算できる」関数の全体と丁度一致することを示した上で,更にそれが,型なしラムダ計算で表現可能な(語に対する)関数の全体とも一致することを示した.また,上の結果を得る過程で次のことが示された.語に対する関数の場合,最小化演算子μは,与えられた条件を満たす「最小の」語を返す演算子である.この最小性をどのように定めるかにより,異なる演算子が定義できる.本論文では,(1)語の集合上に全順序を導入し,その順序に関して最小な語を選ぶ方法と,(2)自然に順序づけられた語の部分集合(例えば,a,aa,aaa,...)のみを対象とし,その中で条件を満たす最小の語を選ぶ方法を取り上げ,この両者のいずれを用いても,定義される帰納的関数の概念は変らないことを示した.以上は,語を対象とする関数についての結果であるが,この考え方を2分木やその他の木構造に拡張する可能性についても検討し,特に,上の(2)の考え方に基づく最小化演算子が,2分木を対象とする帰納的関数の概念を簡潔に定義するのに有用であることを確認した.この結果について現在発表を準備中である.
制御性T細胞の特異的TCRシグナル制御と抑制機能の分子的基盤の解明

本研究では、T細胞受容体(T-cell receptor,以下TCRと略)シグナル分子について、制御性T細胞における特異的な分子制御の解明を目的とした。TCR刺激により誘導されるTCRシグナルは、通常のT細胞を活性化し増殖させるのに対し、制御性T細胞は増殖せず前者の活性・増殖を抑制することから、両者におけるTCRシグナル伝達の制御機構は異なると考えられる。また、TCRシグナル制御の違いは、両者の免疫学的機能を弁別するメカニズムとしても重要であると考えられる。平成30年度は、特に、通常のCD4+ T細胞、CD8+ T細胞、制御性T細胞に発現されるTCRシグナル分子について、転写発現レベルに加えタンパクレベルでの発現や分子修飾の差異を解析した。制御性T細胞は通常T細胞に比して、一部のTCRシグナル分子のリン酸化レベルが恒常的に低く、制御性T細胞に特異的なTCRシグナル分子抑制が示唆された。さらに、これら制御性T細胞で特異的な制御をうけるTCRシグナル分子は、制御性T細胞の維持あるいはその機能を選択的にコントロールする上で重要な標的になると考えられ、遺伝子改変や低分子阻害剤により試験管内および自己免疫病や腫瘍などの疾患モデルマウスにおける効果を検証した。制御性T細胞は、これらのTCRシグナル分子の操作に感受性が高く、他のナイーブ・活性化T細胞に比して選択的に影響されることを明らかにした。本研究では、制御性T細胞の特異的なT細胞受容体(TCR)シグナル制御について分子基盤の解明をめざしている。TCR刺激は、通常のT細胞を活性化・増殖させるのに対し、制御性T細胞は増殖せず他のT細胞の活性および増殖を抑制するといった免疫学的特性を示すことから、制御性T細胞におけるTCRシグナル分子の特異的な制御の重要性が考えられる。また、その理解は、免疫関連疾患において、制御性T細胞特異的TCRシグナル制御を標的とし、制御性T細胞を選択的にコントロールする新しい制御法の確立にも重要だと考えられる。平成29年度は、特に、制御性T細胞特異的に制御されるTCRシグナル分子を探索し、解析を進めた。また、制御性T細胞とCD4+ T細胞、CD8+ T細胞について、これらの細胞群から、次世代シーケンサーによる遺伝子発現の網羅的解析、および生理状態あるいはTCR刺激後に制御性T細胞特異的に制御されるTCRシグナル分子について解析を行った。制御性T細胞は、自己反応性の高いTCRレパトアを有するが、自己抗原による恒常的なTCRシグナルを制御し、自身を維持する制御機構についても検証を進めた。さらに、制御性T細胞の抑制機能における、制御性T細胞特異的シグナル制御の役割を、マウスモデルを用いて解析した。特に、制御性T細胞では、TCR刺激後にZAP-70分子の発現が低下し、一方、CD4+ T細胞では亢進を示すことから、ZAP-70発現量を操作できるTet-on ZAP-70マウスを用い、制御性T細胞特異的なシグナル分子制御の役割を解析した。本研究では、制御性T細胞の特異的シグナル制御と抑制機能を確立する原理を明らかにする目的で研究を遂行し、おおむね順調に進展している。今後の研究推進方策として、制御性T細胞(Treg)で特異的な制御を受けるシグナル分子について、タンパク修飾など、タンパクレベルでの制御機構を検証する。特に、Tregでは、TCRシグナル分子のリン酸化が抑制されており、タンパクレベルでのTreg特異的制御が示されている。したがって、TCR刺激による各シグナル経路の分子修飾等の動態を検証し、Treg特異的な制御メカニズムの解析を進める。また、自己免疫病や腫瘍などの疾患において、Treg特異的に制御されるシグナル分子を標的としたTregの量的増減および機能の増強減弱コントロールによる治療効果を疾患モデルで検証する。
生分解性高分子鎖の配列制御と酵素を用いたソフトマター表面の機能化

生分解性高分子とそのモデル化合物を高配向グラファイト上(HOPG)に集積化し、その表面形態と分子配列を走査型プローブ顕微鏡によって可視化した。HOPG上にはポリカプロラクトンのエッジオン結晶がエピタキシャル成長していることがわかった。モデル化合物については、アルキル鎖長の偶奇効果によって多様な二次元配列を形成することができた。また、高分子重合酵素の固定化とインビトロ重合により、ソフトマテリアル表面の機能化に成功した。基板へのナノマテリアル集積化に向けて、その土台となる自己組織化構造の制御法開拓に向けた研究を推進した。具体的には、アルキル基をエステル結合あるいはアミド結合で導入したモデル化合物を新規合成し、基板上に形成された二次元構造を走査型トンネル顕微鏡(STM)によって観察した。アルキル鎖の鎖長を変化させると、偶奇効果により二次元構造が多様化した。また、エステル結合でアルキル基を導入した化合物と、アミド結合で導入したものはそれぞれ全く異なる二次元構造であった。これは、分子内水素結合が変化するためであると考察した。また、両結合様式について、偶奇効果が発現する特異なアルキル鎖長が存在することを見出した。さらに、アミド化合物については、-CO-NH-Alkylと-NH-CO-Alkylの様に、結合方向を変化させた化合物についても二次元構造のSTM観察を行った。その結果、分子内水素結合の様式が変化して、-NH-CO-Alkylの場合には偶奇効果が発現せず、すべて同一のナノ構造を示すことが明らかとなった。次いで、機能性物質集積化に向けて、ポリヒドロキシブタン酸(PHB)重合酵素(PhaC)を基板上に集積化する方法の検討を行った。ニトリロ三酢酸(NTA)の自己組織化膜を調製し、His-tag化したPhaCをニッケル、銅、あるいはコバルトイオンで固定化を行い、ポリヒドロキシアルカン酸の重合能の比較を行った。その結果、銅イオンで固定化した場合が最も効率よくPHB合成できていることを見出した。有機・高分子物質の基板上への集積化に向け、グラファイト上での自己組織化に関する研究を実施した。特に生分解性物質や生体分子が持つエステル結合、アミド結合、カルバモイル結合を担持させたモデル化合物を合成した。そして、基板との相互作用部位であるアルキル鎖の鎖長と形成される二次元構造の関係について詳細に検討した。前年度までには、化合物単体での偶奇効果について検討したが、今年度は各化合物のブレンドが形成する二次元構造を走査型トンネル顕微鏡で解析した。その結果、特定の組み合わせのブレンドにおいて、単体では見られなかった上に、これまでに無い新しい二次元構造が発現することを見出した。さらに、単体では鎖長が短いほどアルキル鎖長の効果は希薄になるが、ブレンドの場合には鎖長が短いほど鎖長効果が顕著に表れることを発見した。このように、結合様式およびアルキル鎖長により二次元パターンを多様化させることに成功した。次いで、生体分子の機能的な集積化法の開発を目指し、生分解性高分子の一つであるポリヒドロキシブタン酸(PHB)の重合酵素(PhaC)を基板上に配置した。そして、ポリカプロラクトン(PCL)で全て被覆した後、PhaCをリパーゼによる酵素分解で露出させた。このとき、リパーゼはPhaCを分解せず、PCLのみを酵素分解するため、特定領域のPhaCを露出させることができた。PhaCが確かにPHBの重合機能を保持していることを確認するため、PHBのインビトロ重合を行った。その結果、PHBが合成された領域がPCLの被覆面より隆起した様子が原子間力顕微鏡観察により認められた。したがって、包埋した酵素を特定領域で露出させて機能を発現させる生体分子集積化法を開発できた。本年度は、生分解性高分子の偶奇効果に基づく規則的配置を目的に、側鎖にアルキル鎖を有するポリヒドロキシアルカン酸(PHA)の自己組織化条件について探索した。溶媒をクロロホルムあるいはトルエンとして、様々な濃度のPHA溶液を調製した。そしてスピンキャスト法により高配向グラファイト(HOPG)上に成膜して、形成された自己組織化膜の形態を原子間力顕微鏡(AFM)を用いて観察した。その結果、クロロホルムよりはトルエンから成膜した方が、HOPGの結晶格子に沿って分子集合体が観察できることを見出した。また、スピンキャストだけではなく、所定温度でアニーリングすることで、板状の結晶がきれいに配列した超薄膜を作製できることがわかった。形成された結晶内では分子鎖が基板面に配向していることが予想されるため、次年度以降に酵素の規則的配列に用いていく予定である。HOPG基板に対する分子固定化ユニットとしては、アルキル鎖が重要な役割を果たしている。そこで、二次元表面での偶奇効果を詳細に検討するため、アルキル鎖を有するモデル化合物を合成し、偶奇効果の発現機構について検討した。

フェニルオクタンとHOPGの固液界面に自己組織的に形成される自己組織化膜を走査型トンネル顕微鏡(STM)で分子レベルの観察を行った。その結果、ある一定のアルキル鎖長から偶奇効果が基板上で発現することがわかった。すなわち、炭素数が17以下では偶奇効果が発現しないが、18以上では異なる二種類の二次元構造が交互に観察され、偶奇効果が発現することがわかった。興味深いことに、溶媒の炭素数を変更してフェニルノナンで同一の観察を行っても、偶奇効果の発現する境界の炭素数は変化しないことがわかった。今後、PHAの規則的配列に役立てていく予定である。モデル化合物の結合様式の違いによる偶奇効果の発現・消滅について知見を得ることができた。また、機能性ナノマテリアルとしてPHB重合酵素の基盤への固定加法の最適化を行うことができたため。側鎖にアルキル鎖を有するポリヒドロキシアルカン酸(PHA)の単層膜の作製条件についてはある程度の知見が得られた。PHA自体の偶奇効果の発現には至っていないが、その他のモデル化合物について、偶奇効果が発現する特異なアルキル鎖長を明らかにすることができたため、次年度以降の酵素の規則的配列には順調に進んでいくことができるため。基板上に強固に自己組織化膜を作製するため、分子間水素結合についても評価を行う。また、パターン化した生分解性高分子表面上に酵素を配置していくため、効率的なパターニング方法および酵素の機能発現を検討する。そして、機能性物質を望みの場所に配置した新規ソフトマテリアルの創製に資する。偶奇効果について更に詳細に検討を進め、特定の高分子だけではなく様々な物質に適用できる法則を見出すことを目指す。生分解性高分子表面上に酵素を配置していくため、酵素と基質との相互作用を定量的に解析していく。そして、最適な酵素を探索する。最終的には、特定の領域に酵素等の機能物質を集積化してソフトマター表面の機能化に資する。該当なし研究計画に大きな変更は無いため、当初の予定通りに予算を使用していく予定である。
構成性を中間述語論理の観点から理解する

数理論理学の重要な主題の1つである構成性(constructivity)は、直観主義論理の基本的要請であり、構成的数学の研究における基本的概念である。これと関連の深い選言特性(disjunction property, DPと略記)と存在特性(existence property, EP)の2つの性質について、中間述語論理と直観主義的(構成的)数学の2つの分野でこれまで独立していた流れを融合的に進展させることが期待される。本研究では、構成性(特にDPとEP)について理解を深め、直観主義的(構成的)数学の知見を吸収して、中間述語論理の研究を大きく前進させることを目的としている。本年度は、構成的数学分野の連携研究者とともに、両分野からの多層的な考察を深めた。前年度の成果に基づき、構成的数学における技術や成果を中間述語論理のKripke意味論に持ち込むことを考察し、直観主義的算術(Heyting arithmetic)とその拡張の証明論的および意味論的議論の関係を議論した。特に算術的完全性定理(arithmetical completeness theorem)の役割が大きいことが解ってきた。この知見により、中間述語論理のKripke意味論の手法を一定の制限のもとで活用できる。当初の計画に従い、平成30年度でも連携研究者と膝づめで討論し、それを持ち帰って熟慮し、また討論することを繰り返した。国内出張を3回行った。(連携研究者と調整して議論と研究成果発表を一度の出張で行った場合もある)。また、インターネットも効果的に活用できた。藤原誠氏(早稲田大学)と横山啓太氏(北陸先端科学技術大学院大学)を議論の仲間に加えた布陣が強力に作用したこともあり、全員での共著論文を執筆中である。国内学会で3件の発表を行った。また、学術論文が1つ出版された。平成30年度は、中間述語論理での構成性の理解を進展させることを目標として研究を行った。中間述語論理と直観主義的(構成的)数学の2つの分野で独立に進展している諸概念のうち、本研究にかかわりの深い部分について理解する過程で、自然数論の証明論やモデル論(Kripke意味論)とのかかわりが重要であるが、連携研究者の石原哉氏・根元多佳子氏(北陸先端科学技術大学院大学)の他に、藤原誠氏(早稲田大学)と横山啓太氏(北陸先端科学技術大学院大学)の協力を得ることにより、より強力で柔軟な布陣を築くことができた。研究打ち合わせを行うことにより、特に、古典的自然数論の非標準モデルとKripke意味論の双方を扱う手法について、議論が進み、共同研究論文の執筆にとりかかっているところである。こうしたことから、大きく進捗していると判断する。前年度までの成果に基づき、構成的数学における技術や成果を中間述語論理(特にKripke型意味論の文脈)に持ち込むことにより、新しい展開をめざす。特に、古典的自然数論の非標準モデルとKripke意味論の融合モデル構築における具体例の集積が進んでいるので、これによって、連携研究者を含む共同研究論文の作成が進行中なので、連携研究者との議論をさらに進める予定である。また、数理論理学の国内研究集会での資料収集も行う。さらに、進捗状況に応じて、構成的数学関連で外国を含めて出張し、関係資料の収集とディスカッションを行う予定である。他には、関連するセミナーなどに出席するため、国内出張する。また、数理論理学の文献を資料を収集する。(資料の量が多くなることが予想されるので、謝金によって大学院生に資料の整理を手伝ってもらう予定である。)設備費によって、構成的数学関係の文献を購入する。構成性(constructivity)は、数理論理学の重要な主題の1つである。特に、直観主義論理が持つべき基本的要請であり、構成的数学の研究における基本的概念である。これを特徴的に表現するとされる選言特性(disjunction property, DPと略記)と存在特性(existence property, EP)の2つの性質がある。これらの研究が、中間述語論理と直観主義的(構成的)数学の2つの分野で独立に進展しつつ、重なり合う部分があることが解ってきていた。本研究では、構成性(特にDPとEP)について、多層的に理解を深める絶好のチャンスをつかみ、直観主義的(構成的)数学の知見を吸収して、中間述語論理の研究を大きく前進させることを目的としている。このため、構成的数学の研究者を連携研究者に迎え、本年度は、「分野を超えた基本概念の整理」を目標として研究をすすめた。異なる分野間での共同研究の際には、極めて基本的な事柄の共通理解の構築が必要である。特に、terminologyの違いが微妙なものから大きなものまで多岐にわたる場合が多く、この初動の時期の「すりあわせ」が大きく進んだ。平成28年度は連携研究者と膝づめで討論し、それを持ち帰って熟慮し、また討論することを繰り返した。これを実行するため、国内出張を5回行った。連携研究者の都合と調整することにより、連携研究者の在籍する北陸先端科学技術大学院大学への出張を東京出張で代替えできたので、出張旅費の節約ができた。また、連携研究者に藤原誠氏(早稲田大学)と横山啓太氏(北陸先端科学技術大学院大学)を加えて、より強力な布陣を築くことができた。平成28年度は、「分野を超えた基本概念の整理」を目標として研究を行った。中間述語論理と直観主義的(構成的)数学の2つの分野で独立に進展している諸概念のうち、本研究にかかわりの深い部分について相互理解がすすんだ。

その過程で、自然数論の証明論やモデル論とのかかわりが重要であることもわかってきたので、連携研究者に石原哉氏・根元多佳子氏(北陸先端科学技術大学院大学)の他に、藤原誠氏(早稲田大学)と横山啓太氏(北陸先端科学技術大学院大学)の協力を得ることができる運びとなった。これにより強力で柔軟な布陣を築くことができた。6回の研究打ち合わせを行い、構成的数学から中間述語論理への橋渡しとなる手法について理解が進んだ。特に、自然数論の非標準モデルとKripke意味論の双方を扱う必要があることが明らかになり、今後の進捗に期待すべき段階に至っている。構成性(constructivity)は、直観主義論理の基本的要請であり、構成的数学の研究における基本的概念であるとともに、数理論理学の重要な主題の1つである。これと関連の深い選言特性(disjunction property, DPと略記)と存在特性(existence property, EP)の2つの性質について、中間述語論理と直観主義的(構成的)数学の2つの分野でこれまで独立していた流れを融合的に進展させることが期待される。本研究では、構成性(特にDPとEP)について理解を深め、直観主義的(構成的)数学の知見を吸収して、中間述語論理の研究を大きく前進させることを目的としている。本年度は、構成的数学分野の連携研究者とともに、両分野からの多層的な考察を深め、理論構築を目指した。前年度の成果に基づき、構成的数学における技術や成果を中間述語論理のKripke意味論に持ち込むことを試み、直観主義的算術(Heyting arithmetic)とその拡張の証明論的および意味論的議論の関係を議論した。この知見により、中間述語論理のKripke意味論の手法が活用できることもわかった。当初の計画に従い、平成29年度でも連携研究者と膝づめで討論し、それを持ち帰って熟慮し、また討論することを繰り返した。これを実行するため、国内出張を5回行った。(連携研究者と調整して議論と研究成果発表を一度の出張で行った場合もあり、国内出張は計6回)また、藤原誠氏(早稲田大学)と横山啓太氏(北陸先端科学技術大学院大学)を議論の仲間に加えて、より強力な布陣にすることができた。平成29年度は、理論構築にめどをつけることを目標として研究を行った。中間述語論理と直観主義的(構成的)数学の2つの分野で独立に進展している諸概念のうち、本研究にかかわりの深い部分について理解がすすんだ。その過程で、自然数論の証明論やモデル論(Kripke意味論)とのかかわりが重要である。連携研究者の石原哉氏・根元多佳子氏(北陸先端科学技術大学院大学)の他に、藤原誠氏(早稲田大学)と横山啓太氏(北陸先端科学技術大学院大学)の協力を得ることにより、より強力で柔軟な布陣を築くことができた。5回の研究打ち合わせを行い、構成的数学(特に直観主義的算術)と中間述語論理について理解が進んだ。特に、古典的自然数論の非標準モデルとKripke意味論の双方を扱う手法について、議論が進んでおり、この点だけでも共同研究論文が完成する可能性が出ている。こうしたことから、今後の進捗に期待すべき段階に至っていると考える。
平安時代の天台宗関係儀軌訓点資料における漢文訓読語の研究

本研究を支える資料は、平安時代天台宗の儀軌訓点資料であるが、これは、京阪神を中心とする諸寺及び各地の文庫・図書館等に所蔵されるものである。従来、調査を完了したものに加えて、平安時代の漢文訓読語史の研究のために、調査が必須であった。天台宗関係の訓点資料は、天台宗寺院のみならず真言宗寺院にも多く現存しており、大津市石山寺、京都市東寺及び、国立国会図書館等の資料調査を行った。調査にあたっては、研究資料の確保のため、移点・写真撮影などの作業が必要であったが、訓点資料原本について手写、移点の作業を行った。同時に、仁和寺、随心院所蔵の資料について、写真紙焼を行った。以上の調査、写真紙焼につき、本研究課題に基づく研究に従事する以前に収集した資料をも含めて、データの入力を行い、調査資料を整理し、分析の為の基礎資料とした。以上の天台宗関係の儀軌の訓点資料を中心に行った調査、資料整理に基づき、その遺存点数の比較的多い「金剛界儀軌」の中心的資料であると認められた数点について、訓読文の作成を行い訓読語の比較の為の資料を作成し、その内、東寺観智院蔵本については、パーソナルコンピューターにテキスト入力を完了した。また、天台宗の儀軌訓読語を相対化するため関連の資料類の解読、分析を進行中であるが、南都系の律関係の院政期の訓点資料については、この訓読文を作成して、公表の予定である。また、調査資料を天台宗の二流派の資料群にわかち、訓読語がどのように継承・改変されたものかを実証的に明らかにし、訓読語の変化・変遷の実態を究明する為に、訓読文を作成した「金剛界儀軌」をはじめとする平安時代天台宗の儀軌訓点資料の訓読語の逐語的比較を行った。
「書籍」史料にもとづく中世ヨーロッパ社会史的大学史研究

本研究は,中世ヨーロッパの大学と当該期の社会を繋ぐ媒体として書物を設定し,書物を手掛かりとして、両者の関係を解明しようとする試みである。本研究では,パリ大学が書籍商の職業活動を規定すべく発した文書,書籍商が行った宣誓文書,フランス王フィリップ4世がパリの書籍商を対象に特権を付与すべく発した文書,合計8点の文書(年代的には1275年から1342年の文書)にもとづいて,書籍商に関する大学の規定,書籍商の行った宣誓内容とかれら享受した特権を検討した。その結果,大学が定めた規定,書籍商に要求した宣誓事項-教師と学生の研究と勉学に必要な書物の入手を困難にする不当な取引を禁じるとなど-がパリ大学での円滑な研究・勉学生活を可能とすることを目的としていたこと,さらに,大学の要求を受け入れることでその活動に協力することを誓った書籍商は,その代償として,大学の保護下に置かれ,タイユ税免除などの特権を取得したことを明らかにした。一方,1292年から1353年にかけてパリで活動した書籍商についてみると,その総数は120名程度であること,書籍商の間には,かなり濃厚な家族関係,ないし親族関係が認められること,かれらの店舗はサン・ジャック通りを中心とするセーヌ川左岸,およびシテ島のヌーヴ・ノートル・ダム通りに集中していたことを明らかにした。これらのことは,いずれも,パリ大学と書籍商が緊密な社会的関係を有するとともに,活動空間を共有していたことを示すものである。上記研究課題は,一つには「書籍商」と大学との関係を手がかりに,二つには「学寮」への書籍の寄贈者ないし遺贈者,さらには図書館利用者を手がかりに,中世パリ大学と当該期の杜会と関わりを明らかにすることであるが,平成13年度の研究は,「学寮」に関連する研究を中心に進められた。その成果は以下の通りである。1.平成13年11月,パリにおいて行ったソルボンヌ学寮蔵書関係史料調査から,年代的には,1402年から1536年をカヴァーするソルボンヌ学寮図書館の図書帯出簿(マザラン図書館所蔵・整理番号ms.3323,olim 576)は,正規寮生,元寮生,寮外者などおよそ350人の人物情報を提供し,書物を通した大学の社会史的研究にきわめて重要であることが確認された。2.当該図書帯出簿を対象とするプロソポグラフィックな手法を用いた詳細な分析は,今後の作業に拠らねばならないが,さし当たり,帯出者の出身地についてみれば,パリ周辺および北フランスの出身者が多数を占める。南フランスの出身者は皆無である。フランス以外についていえば,ベルギー,オランダの出身者が多く,イタリア出身者は少ない。これらの結果は,中世後期のパリ大学の構成員の出身地を対象としたこれまでの研究成果とほぼ一致している。帯出者の経歴については,教会の要職(枢機卿,司教,大修道院長)から参事会員,主任司祭,一介の修道士まで多様である。なお,修道士についていえば,托鉢修道会系修道士は含まれない。このように,当該図書帯出簿が提供する人物情報の分析は,従来の記念梼設定簿等にもとづく大学と社会の関係性の検証をより深化させることを可能にすると考えられる。上記研究課題にもとづくは平成14年度の研究実績は以下の通りである。上記研究課題は一つには「書籍商」(libraius, stationarius, librere)と中世パリ大学との関係を手がかりに,二つには「学寮」への書籍の寄贈者ないし遺贈者,さらには図書館利用者を手がかりに,中世パリ大学と当該期の社会と関わりを明らかにすることであるが,平成14年度の研究は,「書籍商」に関連する研究を中心に進められた。1.中世パリ大学と「書籍商」との関係は,1257年,1302年,1316年,1342年の文書などから明らかにされる。

これらの史料から,大学が教師・学生の研究と勉学に必要な書物の入手を妨げる不正な取引を行うこと,誤りのある範本一分冊(pecia)の流布を禁じ,適正料金による範本-分冊の賃貸の実施を,「書籍商」に宣誓をもって要求し,宣誓拒否者をボイコットすることによって,「書籍商」を大学の一定の「監督下」に置いたことが確認された。その一方で,「宣誓書籍商」は免税特権を享受した。すなわち,中世の大学が特権の一つに預かることができたのである。このように,大学という知的営為を活動の中心に置く組織は,その活動に不可欠な役割を有する「職業集団」を「監督下」に置き,その職業集団は大学特権の一部を享受するという社会的関係が成り立っていたことが確認された。2.1292年から1354年にかけてのタイユ税帳から,パリでは120ほどの書籍商が活動していたことが判明するが,彼らのうちごく少数(7名)は,筆耕,彩色絵師,製本師を兼ねるていたこと,また,12名の「書籍商」は「clericus」の肩書きを所持したことが確認された。
1910-1930〈日韓・韓日〉文学交流の歴史-〈移入〉という視座から-

191030年にかけては、韓国近代文学の草創期にあたる。その際に、明治末から大正にかけての日本の文学・思想の主たる潮流が紹介されている。本研究では、主として文化統治期の朝鮮語雑誌に焦点をあて、資料の紹介・考察を行った。それと同時に、日韓の研究者が、日韓関係の問題点について議論を行った。会議・研究会の大まかな状況について報告する。平成18年度には、全部で4回の会議をおこなった。そのうち、日韓・韓日合同でおこなったのは、平成18年8月、19年2月の2回である。次に研究の進捗状況について報告する。平成18年の夏期に、研究代表者である奥田が、ソウルの延世大学図書館において、ほぼ3週間の期間にわたって調査した。同時に、ソウルにおいて研究会を開催し、研究分担者、研究協力者それぞれの研究内容について発表し、討議した。研究会に参加したのは、韓国側からは金希貞、孫知延、柳利須の3名、日本側からは、奥田、團野光晴、寺田達也の3名である。研究発表、討議は多岐にわたるものであったが、問題点として浮かび上がったことは、日本に留学していた朝鮮の青年留学生をどのように捉えるのかということであった。その他、検討したことは、雑誌・機関誌のデータベースを作成するにあたって、著作権をどのように処理するのかということである。平成19年2月に日韓・韓日合同の研究会を再びおこなった。主として考察の対象となったのは、朝鮮基督教青年会の機関誌『現代』および吉野作造との関わりについてである。朝鮮基督教青年会に所属していた青年知識人たちは、吉野作造の主唱する「民本主義」に関心を示していた。研究会では、『現代』について討議し、さらには吉野の「民本主義」についても考察を加えた。最後に、具体的な研究成果について報告する。研究論文については、奥田浩司「研究ノート「文化政治」期の朝鮮語雑誌研究」(『金沢大学国語国文』32号2007年)團野光晴「「エグザイル」の可能性-(日韓・韓日)文学交流研究にむけて-」(『金沢大学国語国文』32号2007年)である。研究発表については、寺田達也「「二葉亭四迷と東アジア・ロシア」(第四回日韓合同日本近代文学研究会於福井大学教育地域科学部平成十八年十一月二十七日)である。平成19年6月9日に研究協力者である柳利須氏が、有島武郎研究会第41回大会において「韓国近代文学における有島武郎の『宣言』-新女性の自我覚醒を中心に-」と題して発表をした。金東仁、廉想渉など文化統治期の朝鮮語雑誌において活躍していた作家の作品と、有島武郎の『宣言』との関係について詳しく報告した。平成20年3月に、研究代表者である奥田が、延世大学図書館において機関誌『現代』の調査をおこなった。前年に引き続いての調査であったが、今回は、記事の内容にまで踏み込んでの調査であった。新たな発見として、記事の中で「民本主義」という言葉が使われていたことがあげられる。今後、この点について調査をする必要がある。3月に、韓国外国語大学において会議を開いた。まず、今後の研究の方向性について議論をし、『廃墟』を中心に研究を進めることが同意された。次に、今後の研究を進める上で参考となる研究書を取り上げ、議論を深めた。奥田浩司から、米谷匡史『アジア/日本』についての報告があった。全体の議論で、日本からの「アジア」ではなく、韓国からの「アジア」という点に視点を置く必要が確認された。最後に、團野光晴から朴祐河『和解のために』についての詳細な報告があった。内容は、日韓新時代を論じた同書の内容紹介と批評、文化交流原理に関するものである。全体の議論で、日韓・韓日の「和解」の難しさが確認されると同時に、「和解」することから派生する問題点のあることが確認された。平成20年8月4日から27日にかけて、研究代表者である奥田が延世大学図書館において機関誌『現代』の調査をおこなった。調査の中心となったのは、「卞熙〓」の「民本主義〓精神的意義」である。この調査が有意義であるのは、卞熙〓が吉野作造と関わりがあることによる。調査の結果については、「『現代』の「民本主義」-文化統治期の朝鮮語雑誌研究-」という題の論文にまとめて『金沢大学国語国文』に投稿し、掲載された。その他、奥田が『韓国雑誌概観〓号別目次集』(金根株)を基に、文化統治期の朝鮮語雑誌一覧表を作成した。研究分担者である團野光晴が、「過程としての和解-朴裕河『和解のために』の問題-」を『金沢大学国語国文』に投稿し、掲載された。本論文は、朴裕河『和解のために』についての書評論文である。

研究協力者である金希貞が『金沢大学国語国文』に論文「有島武郎と韓国文学(二)-1920年代初期の朝鮮における「小さき者へ」の受容-」を投稿し、掲載された。本論文は、1920年代の朝鮮文学における有島武郎の「小さき者へ」の受容について考察したものである。研究協力者である柳利須が『有島武郎研究』に「韓国近代文学における有島武郎の『宣言』-廉想渉『お前たちは何を得たのか』を中心に-」を投稿し、受理された。本論文は、廉想渉の『宣言』受容を明らかにし、植民統治下における受容の問題について考察したものである。柳利須が廉想渉の「闇夜」を日本語訳(部分訳)した。研究協力者である孫知延、柳利須が共同で文芸同人雑誌『廃墟』の解題を作成した。
In vitroとin vivoにおける皮膚の幹細胞システムの再構築に関する研究

本研究ではin vitroでケラチノサイトがシート状で遠心性に拡大増殖する様式に注目し、張力の関与を想定し、張力が釣り合うように増殖することを確認することができた。しかし物理的に拡大する余地があるにもかかわらず、ケラチノサイトは重層化すると遊走と増殖に抑制がかかることを見いだした。抑制物質の存在が示唆されたので、その同定が今後の課題となる。また毛包形成に重要な役割を果たしている毛乳頭細胞にも注目して、新しい培養法と新しい細胞表面マーカーを見つけた。すなわち塩基性線維芽細胞増殖因子(FGF2)を培地に添加すると毛乳頭細胞が長期に培養できるようになった。さらに幹細胞マーカーの一つであるCD133が毛乳頭細胞の表面マーカーになりうることを証明した。興味深い点はCD133の発現は毛が成長期の時のみにみられることである。ケラチノサイトと毛乳頭細胞による毛包誘導実験をin vivoで行い、培養により低下してしまう毛乳頭細胞の毛包誘導能を維持させる方法を検討した。毛乳頭細胞を強制的に凝集させてsphereを形成させるとケラチノサイトと相互作用をしやすくなり、毛包誘導能が維持できた。毛包が再構成されるときに脂腺も同時に形成されることを確認した。また移植された毛乳頭細胞はin vivoにおいて毛乳頭にのみ存在するのではなく、dermal sheath cellもなることを確認した。皮膚の幹細胞は多能性をもつのみならず、創傷時や毛周期に伴って、表皮と毛乳頭細胞が相互作用しながら、ダイナミックに変化をしている可能性が示唆された。In vitroのアッセイ系としてクローニングリングを用いて培養皿の中央にケラチノサイト(KC)をまき、あらかじめシート状にするという独自に考案した実験系を用いた。通常の無血清培地(SFM)では中央部の細胞は角化し、辺縁の細胞はバラバラに遊走するだけであったが、SFMに10%FBS加DMEMを混ぜた培養液にすると同心円状の協調したoutgrowthが見られた。2-3日後から1日で直径が4mm程度ずつ拡大し、outgrowthしている間は中央部の角化が抑制された。以上の結果よりKCのシート状増殖には張力の変化とCa濃度に依存する細胞間接着の強度も関係があると思われた。一方無血清下でもCa濃度を上昇させただけでシート状増殖をすることが判明したが、1週間以上経過すると拡大増殖が止まった。無血清下で増殖の止まった状態の上皮シートに血清を添加すると再び増殖を開始したことから、血清の影響を強くうけていることが示唆された。そこで増殖抑制のメカニズムを解明するために、増殖の止まった上皮シートの培養上清を拡大増殖中の上皮シートに添加すると血清存在下でも増殖の抑制が見られた。以上の結果からシート状増殖においては、角化細胞自身が"増殖抑制因子"を産生して増殖にブレーキをかけていることが示唆された。In vivoの幹細胞システムの再構築を解析するには、毛包誘導を行いバルジの再構築を検討した。シリコンチェンバーを用いてヌードマウスに細胞を移植して毛包誘導する実験系は使用する細胞数が1×10^7以上と多いことが難点であった。そこでStennらの報告した皮下注入法を試みたところ、10分の1以下の細胞数で毛包誘導が可能であった。次に毛乳頭細胞を種々の細胞成長因子を加えて培養したところbFGFの添加により、増殖能が保たれ、長期継代培養が可能になった。また10代以上のものでも毛包誘導能を示した。GFPマウスの毛乳頭細胞を使った移植実験では、形成された毛包の毛乳頭のみならず、dermal sheathにも蛍光が認められた。毛包誘導実験においてBrdUの標識実験も試みたが、バルジ領域のlabel retainingcellの検出には至っていない。従って今後の課題としては移植移植によって誘導された毛包が毛周期をもつことを証明する必要があると考えられる。