hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
戦略的環境下の自制行動の理論と応用

次に,自制ゲームを構成する利得関数が凹関数である場合の分析を行った.このクラスの自制ゲームでは,最適反応が自制行動かコミットメント行動のいずれかになる.このことを利用して均衡を簡単に計算する手法を提案し,応用として寡占市場における共謀ゲームを分析した.さらに,情報不完備下の自制ゲームとしてベイジアン自制ゲームを提案した.このゲームにおいてプレイヤーがコミットメント行動を選ぶと,後に得た情報を意思決定に活かすこができなくなる.これは情報の機会費用である.寡占市場における共謀ゲームをベイジアンゲームに拡張し,コミットメント費用,情報の機会費用,自制費用などが共謀の成否にどのような影響を及ぼすか分析した.その他,ベイジアン自制ゲームに関連する基礎研究として,1主観確率だけでなく不確実性の解消を表現する個人の情報構造(私的情報)も導出するSavageモデルの動学的拡張,2過去の行動履歴が主観的情報構造に影響を与える確率的割引モデル,3WARPを満たさない自制モデル,4過去の行動履歴に誘惑が依存する内生的選好形成を伴う自制モデル,5ベイジアンゲームにおける情報の社会的価値の特徴付け,などの分析を行った.ミクロ経済学・ゲーム理論自制ゲームの応用分析を行った.この意味で,平成25年度の目的を達成したと評価する.戦略的環境下の自制行動を研究するための基礎モデルを構築し,その有用性を明らかにした.この意味で,平成24年度の目的を達成したと評価する.凹自制ゲームの不完備情報ゲームへの拡張としてベイジアン凹自制ゲームの研究を行う.完備情報の場合,Gul-Pesendorferモデルによる利得関数をもつプレイヤーは,事後の誘惑が減少するように,ある行動へのコミットメントに対して強い選好を示すことが知られている.しかし,不完備情報の場合,事後の誘惑の程度がわからないため,事後に選択肢を確保しておく方が望ましい場合もあり得る.したがって,不完備情報ゲームへの拡張により,完備情報ゲームとは本質的に異なる戦略的行動を分析することが可能になる.とくに,分析しやすいクラスのゲームとして凹ベイジアン自制ゲームのうち利得関数が二次関数で情報構造が正規分布に従うようなLQG自制ゲームを導入し,これを用いてクールノーゲームにおける共謀とそのための生産調整の分析を不完備情報下に拡張する.不完備情報ゲームへの拡張とその応用を行う.完備情報の場合,Gul-Pesendorferモデルによる利得関数をもつプレイヤーは,事後の誘惑が減少するように,ある行動へのコミットメントに対して強い選好を示すことが知られている.しかし,不完備情報の場合,事後の誘惑の程度が分からないため,事後に選択肢を確保しておく方が望ましい場合もあり得る.したがって.不完備情報ゲームへの拡張により,完備情報ゲームとは本質的に異なる戦略的行動を分析することが可能になる.平成25年度中に行う予定であった海外出張が,平成26年度に延期されたため.海外研究者との共同研究および国際学会出席のための旅費に使用する計画.該当なし.
Keap1/Nrf2システムをモデルとした細胞内親電子シグナルの制御系の解明

親電子物質は、環境中から外因的に摂取されるだけでなく、炎症や酸化ストレス等により生体内でも内因的に産生される。これらの親電子物質は、タンパク質中の反応性システイン残基を容易に修飾して、被修飾タンパク質の活性を変化させる。親電子修飾による被修飾タンパク質の活性変化に伴うシグナル伝達に関する研究は多く存在するが、被修飾タンパク質の細胞内運命に関する研究は希有である。本研究は、親電子物質に対する感知・応答システムとして知られるKeap1/Nrf2システムに着目した。Keap1はNrf2を負に制御し、Keap1が親電子修飾を受けるとNrf2は活性化する。親電子物質であるtertr-ブチルベンゾキノン(TBQ)によるKeap1の修飾を介したNrf2の活性化は一過性であり、TBQと結合したKeap1 (Keap1-TBO)へのTBQの修飾が、グルタチオン(GSH)により5S-トランスアリール化反応を介して解除されることが示唆された。前年度は、S-トランスアリールレ化反応の生成物として予測されるTBQ-グルタヂオン結合体(TBQ-SG)を化学合成し、Keap1-TBQとGSHのSトランスアリール化反応の副生成物の同定に成功した。本年度の研究では、GSHのS-Lトランスアリール化反応によりKeap1-TBQからTBQが解除されていることをUPLC-MS^E解析を駆使して示した。また、GSH合成阻害剤であるBSOでHepG2細胞を前処理した後にTBQを曝露すると、TBQによるNrf2の活性化が持続したことから、本反応はKeap1/Nrf2システムを制御していることが示唆された。これらの研究成果から、親電子修飾によるシグナル伝達は、GSH依存的S-トランスアリール化反応を介した親電子修飾の解除により一部制御されていることが示唆された。(抄録なし)親電子物質は、酸化ストレスや炎症等により内因的にも生じる。これらの親電子物質はタンパク質中の反応性システイン残基を容易に修飾して被修飾タンパク質の活性を変化させる。それにもかかわらず、生体内恒常性を維持できることは、生体内には親電子物質に対する優れた制御系が存在することを示唆している。親電子修飾による被修飾タンパク質の活性変化に関する研究は多く存在するが、被修飾タンパク質の細胞内運命に関する報告は希有である。本研究は親電子物質に修飾されたタンパク質の細胞内運命を明らかにすることを目的とし、Keap1/Nrf2システムを被修飾タンパク質、tert-ブチルベンゾキノン(TBQ)を親電子物質のモデルとして研究を行った。Keap1はシステイン残基を豊富に有するセンサータンパク質であり、そのシステイン残基が修飾を受けるとNrf2は活性化する。TBQにRAW264.7細胞を曝露すると、TBQによるNrf2の活性化は一過性であったことから、TBQにより阻害されたKeap1の活性は何らかの機序により回復したことが示唆された。本研究では、被修飾タンパク質の細胞内運命として、1)オートファジーによるバルク分解、2)被修飾タンパク質の親電子修飾解除を想定し検討を進めている。本年度の研究によって、TBQと結合したKeap1へのTBQの修飾が、グルタチオン(GSH)によりS-トランスアリール化反応を介して解除されることが示唆された。このS-トランスアリール化反応の生成物として予測されるTBQ-グルタチオン結合体(TBQ-SG)を化学合成し、UPLC-MS^E解析およびMR解析により同定したところ、TBQ-5-SG、TBQ-6-SGおよびTBHQ-di-SGを得た。これらの合成標品を用いて、TBQと結合したKeap1とGSHのS-トランスアリール化反応の副生成物の同定に成功した。

これらの研究成果から、親電子修飾によるシグナル伝達は、GSH依存的S-トランスアリール化反応を介した親電子修飾の解除により一部制御されていることが示唆された。平成24年度は、当初予定していたTBQ-Keap1のオートファジーによる分解系に関する検討ではなく、時間がかかると予想した親電子修飾解除機構の検討を優先的に行った。平成24年度の成果を平成25年度に開催される国際学会で発表するために準備を行い、その要旨は採択された。平成24年度に行うべき研究等は充分に達成されたと考える。よって、"(2)おおむね順調に進展している"と自己点検により評価する。今後は、残された課題である"被修飾タンパク質のオートファジーによる分解系"に関する検討を行う。今年度は研究データを蓄積することに主力を尽くした。平成25年度は本研究助成の最終年度であるため、研究データの蓄積だけでなく、平成24年度以上に精力的に、得られた研究成果を学術学会で発信して、論文投稿を行い、特別研究員(DC2)としての職務を遂行する。(抄録なし)
糖尿病網膜症の初期病変は神経症か血管症か？

糖尿病患者での網膜機能を網膜電図(ERG)で評価し、網膜血管形態を光干渉断層計(OCT)血管撮影(OCTA)で捉えて、比較検討することが本研究課題の目的である。昨年度は、糖尿病患者の比較対象となる正常者からのデータ収集が中心となった。まず、様々な年齢の100名の正常眼(男性50、女性50名)からOCTAを記録した。Superficialとdeep capillaryplexus(それぞれSCPとDCP)を3x3と12x12 mm画角の画像で撮影し、vessel density(VD)を求めた。また、3x3 mmの画像に関しては、foveal avascular zone(FAZ)の大きさと脈絡膜毛細血管のVDも検討した。その結果、男女ともに年齢の上昇に伴ってSCP、DCPおよび脈絡膜毛細血管のVDが減少することがわかった。FAZのサイズは、年齢の上昇に伴って拡大した。興味あることに、これらの変化は男女ともにみられたが、血管の形態変化と年齢との関係を示すregression lineの傾きを男女で比較すると、女性に比較して男性でその傾斜が急峻であった。これらの結果は、将来の研究で糖尿病患者からOCTAを記録した際に、年齢をマッチさせた正常者のデータベースが必要であることを示している。糖尿病では黄斑部の血管変化が病初期から生じることから、正常者の黄斑局所ERGを評価した。様々な年齢の83名の正常者から黄斑局所ERGを記録し、その成分波の振幅と頂点潜時を計測した。各成分波(a、bおよびd波、OP波、PhNR)の振幅は年齢の影響を受けなかった。しかし、aおよびb波ならびにOP波の頂点潜時は年齢に伴って延長した。このことから、糖尿病患者から記録した黄斑局所ERGの頂点潜時を評価する際には、年齢を考慮して正常対象が必要であると思われた。さらに、加齢よって生じる網膜および脈絡膜血管疾患から黄斑局所ERGとOCTを記録した本研究課題において黄斑部の他覚的機能評価と血管構造の評価は必須事項である。したがって、黄斑局所ERGとOCTAを記録ならびに評価できる環境の構築は重要であった。昨年度中に環境整備は整った。さらに、糖尿病は全身疾患であることから、糖尿病に伴った眼底変化は両眼性である。したがって、糖尿病患者から記録したデータの比較対象は正常者となる。昨年度は、正常者からOCTAと黄斑局所ERGを記録し興味のあるデータを得た。つまり、OCTAのVDおよびFAZサイズ、黄斑局所ERGの各成分波の頂点潜時を評価する際には年齢を考慮する必要があることが明らかとなった。昨年度から、preliminaryであるが糖尿病患者から黄斑局所ERGとOCTAの記録を開始している。今後は、糖尿病網膜症の未発症の糖尿病患者と様々な病期の糖尿病網膜症の患者を対象としてデータ収集を続ける予定である。また、糖尿病は黄斑部だけではなく網膜全体を傷害する疾患なので、網膜全体の機能と血管形態を評価する必要がある。全視野刺激ERGを用いて網膜全体の機能を評価し、12x12 mmの広角撮影で得られたOCTAに基づいた網膜血管構造の解析を行う予定である。

さらに、糖尿病は全身疾患であることから、糖尿病に伴った眼底変化は両眼性である。したがって、糖尿病患者から記録したデータの比較対象は正常者となる。昨年度は、正常者からOCTAと黄斑局所ERGを記録し興味のあるデータを得た。つまり、OCTAのVDおよびFAZサイズ、黄斑局所ERGの各成分波の頂点潜時を評価する際には年齢を考慮する必要があることが明らかとなった。昨年度から、preliminaryであるが糖尿病患者から黄斑局所ERGとOCTAの記録を開始している。今後は、糖尿病網膜症の未発症の糖尿病患者と様々な病期の糖尿病網膜症の患者を対象としてデータ収集を続ける予定である。また、糖尿病は黄斑部だけではなく網膜全体を傷害する疾患なので、網膜全体の機能と血管形態を評価する必要がある。全視野刺激ERGを用いて網膜全体の機能を評価し、12x12 mmの広角撮影で得られたOCTAに基づいた網膜血管構造の解析を行う予定である。
ポティウイルスゲノム結合タンパク質と宿主タンパク質の相互作用プロファイリング

カブモザイクウイルス(TuMV)のゲノム結合蛋白質(VPg)のeIF4Eアイソフォームへの選択性を評価するために、mRNAのcap構造への結合の有無の状態でのヒト、線虫およびシロイヌナズナのeIF4EアイソフォームとTuMVのVPgの反応速度論的解析を表面プラズモン共鳴(SPR)法により測定した。その結果、capが結合したシロイヌナズナeIF(iso)4Eでは、VPgがC末端領域に結合し、capが結合しない状態では広く開いたcap結合ポケットとその周辺地域に結合することを明らかにした。本研究課題の目標は分子生物学および構造生物学的な面からのウイルス蛋白質VPgとポティウイルスの病原性との関係の解明である。分子生物学的研究により、植物RNAウイルスの感染増殖過程が近年急速に明らかになりつつある。しかし、植物RNAウイルスが宿主細胞に侵入して感染を成立させるという、感染の初期段階の分子生物学的機構については、ウイルス・宿主植物の双方から関与する分子は完全には明らかになっていない。一方、ポティウイルスに対する劣性抵抗遺伝子として、宿主植物の翻訳開始因子eIF4E遺伝子ファミリーが知られている。これまでに我々は、カブモザイクウイルス(TuMV)のVPgがシロイヌナズナのeIF (iso) 4Eと結合し、その結合を介してeIF (iso) 4Fとの三者複合体を形成することを明らかとし、VPgのウイルスゲノムRNAの翻訳開始への直接的な関与の可能性を指摘した(Miyoshi et al., Biochimie,2006) (Khan et al., J. Biol. Chem.,2006) (Khan et al., J. Biol. Chem.,2008)。さらに、VPgのeIF4Eアイソフォームへの選択性をmRNAキャップ構造への結合の有無の状態で、表面プラズモン共鳴(SPR)法により測定した。その結果、eIF4EアイソフォームのC末端が相互作用に重要であることが明らかとなった(Okade et al, J Biochem. (Tokyo),2009)。これまでに我々は、カブモザイクウイルス(TuMV)のVPgがシロイヌナズナのeIF(iso)4Eと結合し、その結合を介してeIF(iso)4Fとの三者複合体を形成することを明らかとし、VPgのウイルスゲノムRNAの翻訳開始への直接的な関与の可能性を指摘した(Miyoshi et al., Biochimie, 2006)(Khan et al., J.Biol.Chem., 2006)(Khan et al., J.Biol.Chem., 2008)。これらの現象は、このTuMVのVPgとシロイヌナズナのeIF(iso)4Eとの結合が植物RNAウイルスが宿主細胞に侵入して感染を成立させ、植物RNAウイルスの感染増殖過程に関与していることを示唆する。さらに、VPgによる宿主植物細胞の翻訳阻害の可能性について小麦胚芽無細胞翻訳系を用いて検討し、VPgの添加が翻訳効率を低下させることを見出した。この結果は、VPgによる宿主細胞mRNAの翻訳阻害はVPgの翻訳開始因子への結合阻害によるものであることを示している(Miyoshi et al., Biochimie, 2008)。今年度はVPgの結晶化の検討とウイルスゲノムRNAの翻訳へのVPgの直接的関与の検討に絞って検討を進めたが、残念ながら、芳しい結果を得ることは出来なかった。しかしながら、本研究課題の進行上から得られた技術および知見により学術論文を公開したので、併せて報告させていただきたい。VPgはピコルナウイルスのゲノムRNAの5'末端に共有結合している蛋白質で、通常のmRNAの5'末端に位置するcap構造とは異なり、ウイルスゲノムの翻訳開始に関与しているとは考えられていなかった。一方、eIF4EのisoformであるeIF(iso)4EはeIF4Eと同様に、宿主植物細胞由来のmRNAのcap構造を認識して、リボソームを誘導し翻訳開始の起点となる役割を担っていることが知られていた。翻訳開始におけるVPgとeIF(iso)4Eの相互作用の役割については、二つの可能性が考えられる。ウイルス1粒子の複製には約3000分子の外殻蛋白質と1分子のVPgが必要であり、ウイルスの複製には毎回約(3000-1)分子のVPgが余剰となる。つまり、第一の可能性としては、ウイルスの複製の際に余剰に生じたVPgがeIF(iso)4Eと結合することにより、宿主細胞内のmRNAのキャップ構造との結合を阻害して蛋白質の生合成を停止し、病原性を発揮することが第一の可能性として考えられる。また、第二の可能性としては、ウイルス感染初期段階でのウイルスゲノムRNAの翻訳開始機構へのVPgのcap構造mimicとして直接的な関与である。

これらの可能性について検証を行い、VPgがモデル植物であるシロイヌナズナのeIF(iso)4Eに結合し、さらに翻訳開始複合体の土台であるeIF(iso)4Gとの三者複合体を形成できること、またeIF(iso)4Eと宿主mRNAとの結合を阻害して、ウイルスの増殖を有利に導くことを発見した。さらに詳細な反応速度論の解析により、このVPgとeIF(iso)4Eとの結合が、ウイルスゲノムRNAのIRESと宿主の翻訳開始因子との結合を安定化させ、さらにウイルス粒子が細胞への感染後に脱殻した際には、VPgが付加した状態でウイルスRNAゲノムの直接的な翻訳に関与することも明らかにした。今年度はVPgの結晶化の検討とウイルスゲノムRNAの翻訳へのVPgの直接的関与の検討に絞って検討を進めたが、残念ながら、芳しい結果を得ることは出来なかった。しかしながら、本研究課題の進行上から得られた技術および知見により学会発表を行ったので併せて報告させていただきたい。
パラシュートのインフレーション過程における流体・構造物連成振動に関する研究

本研究において対象としているパラシュート傘体そのものは「布」で作成されているためかなりの柔軟性を有するので,主として傘体内外の圧力差により,瞬時にその形状が決定され,その「柔らかさ」故の「流体・構造物連成振動」は,取り扱いにかなりの困難がある.より簡単な解析を行うため,近似的に,例え,パラシュートを変形しない剛体物体と仮定したとしても,物体と後流との間に極度に強い非線形性が出現する.パラシュートと流れ場との連成問題の解明を目的とし,後流特に物体近傍での流れの変動に焦点を絞った数値シミュレーションおよび可視化実験を実施し,パラシュートの動的挙動の解明に焦点を絞っている.最初に,柔軟性の取り扱いにかなりの困難があるので,第一次近似として,パラシュートを変形しない凹状の物体と仮定した解析を行った.パラシュートは流れとの干渉により振り子のような振動運動を呈するが,これらの運動は加速度運動なので当然のことながら,「仮想質量」の効果を無視できないと思われるので,「仮想質量」の物体運動に対する効果を正確に見積もることを目的に振動物体の解析も行った.パラシュートの開傘過程の2次元数値シミュレーションを行い,パラシュート収納時から開傘までを高精度にシミュレートし,開傘時の衝撃力の発生等実験で大まかに指摘されていることを精度良く捉えることに成功している.次に,仮想質量効果,可撓壁モデルについて論じ,実計算に適用した.実験結果とともにその振動パターンの分類を行い,パラシュートまわりの流れ場構造の詳細を明らかにした.さらに,今後明らかにすべき課題を示し,この手法の他分野への適用性についても大いに期待できることを示した.本研究において対象としているパラシュート傘体そのものは「布」で作成されているためかなりの柔軟性を有するので,主として傘体内外の圧力差により,瞬時にその形状が決定され,その「柔らかさ」故の「流体・構造物連成振動」は,取り扱いにかなりの困難がある.より簡単な解析を行うため,近似的に,例え,パラシュートを変形しない剛体物体と仮定したとしても,物体と後流との間に極度に強い非線形性が出現する.パラシュートと流れ場との連成問題の解明を目的とし,後流特に物体近傍での流れの変動に焦点を絞った数値シミュレーションおよび可視化実験を実施し,パラシュートの動的挙動の解明に焦点を絞っている.最初に,柔軟性の取り扱いにかなりの困難があるので,第一次近似として,パラシュートを変形しない凹状の物体と仮定した解析を行った.パラシュートは流れとの干渉により振り子のような振動運動を呈するが,これらの運動は加速度運動なので当然のことながら,「仮想質量」の効果を無視できないと思われるので,「仮想質量」の物体運動に対する効果を正確に見積もることを目的に振動物体の解析も行った.パラシュートの開傘過程の2次元数値シミュレーションを行い,パラシュート収納時から開傘までを高精度にシミュレートし,開傘時の衝撃力の発生等実験で大まかに指摘されていることを精度良く捉えることに成功している.次に,仮想質量効果,可撓壁モデルについて論じ,実計算に適用した.実験結果とともにその振動パターンの分類を行い,パラシュートまわりの流れ場構造の詳細を明らかにした.さらに,今後明らかにすべき課題を示し,この手法の他分野への適用性についても大いに期待できることを示した.高速から低速までの広範囲の流速において飛行体の減速方法として最も有効な空力的減速法としてパラシュートが用いられている.これは,軽量且つ収納スペースが小さくて済み,確実で大きな抗力が得られるからである.現実的な問題として,確実な開傘性能が要求されているが,その詳細は未だ不明な点が多くある.その理由はひとえにその柔軟性及び軽量性にある.柔軟性は,その形状が周囲流体の影響により瞬時に変化することに関係し,軽量性は,その物体の仮想質量を無視し得ないことに関係している.今年度は,縦型水槽を用いた実験により,その振動特性を明らかにすると共に,数値シミュレーションにより,開傘初期の流体力学的干渉問題とその変形特性を明らかにした.また,その軽量性ゆえに考慮しなければならない仮想質量の計算手法についても吟味した.その結果,概ね次の結論を得た.1.実験による振動パターンの分類の結果,そのレイノルズ数により変化するが,直線状運動,円弧運動,周回運動の3種類の運動に分類できることが分かった.2.開傘過程においては,初期においてはかなり早く開傘するが,ある程度開傘すると開いたり閉じたりの挙動を示した後,完全に開傘し,その形状はほぼ一定で時間的に変化しないことがわかった.その際の抗力の時間的変化と開傘の様子は完全にリンクし,実験結果と良い一致を示した.3.軽量な物体が流体中で振動運動のような加速度運動をする場合,その運動を正確に記述するためにはその物体の仮想質量を考慮しなければならないが,一般的な形状の物体に対する仮想質量の計算方法を提案した.高速から低速までの広範囲の流連において飛行体の減速方法として最も有効な空力的減速法としてパラシュートが用いられている.これは,軽量且つ収納スペースが小さくて済み,確実で大きな抗力が得られるからである.現実的な問題として,確実な開傘性能が要求されているが,その詳細は未だ不明な点が多くある.その理由はひとえにその柔軟性及び軽量性にある.

柔軟性は,その形状が周囲流体の影響により瞬時に変化することに関係し,軽量性は,その物体の仮想質量を無視し得ないことに関係している.今年度は,前年度に指摘された,パラシュートの振動特性をさらに詳細に調べるために,主として縦型水槽を用いた実験を実施するとともに数値シミュレーションにより,その振動特性を明らかにすることを目的とした.その結果,概ね次の結論を得た.1.実験による振動パターンの分類の結果,そのレイノルズ数により変化するが,前年度指摘されたように,直線状運動,円弧運動,周回運動の3種類の運動に分類できることが分かったが,ウエーブレット解析によりその出現頻度と振動周波数に大きな特徴があることが明らかにされた.これは数値シミュレーションでもある程度確認された.(1)出現頻度:その支持点の可動性に大きく影響される.(2)振動周波数:直線状運動の場合その周波数は高くなるが,円弧状もしくは集会運動の場合その周波数は低くなる傾向が顕著である.2.パラシュートの支持点(ペイロード)の可動性の振動特性に対する影響を見るため,4種類の支持方法による振動特性の相違を調べた結果,従来から行われている実験方法(支持点固定)と支持点に自由度を持たせた実験方法とではその結果に大きな相違が見られ,実際のパラシュート降下を議論するうえで最重要点であることを指摘した.この点は今回初めて明らかにされたことであり,2007年5月にAIAA(アメリカ航空宇宙学会)で発表する予定である.今年度に指摘された事項を元に自由落下用縦型水槽を用いた詳細実験による検討が必要である.今年度は,前年度に指摘された,パラシュートの振動特性をさらに詳細に調べるために,主として縦型水槽を用いた実験を実施するとともに数値シミュレーションにより,その振動特性を明らかにすることを目的とした.その結果,概ね次の結論を得た.1.振動パターンの分類に当たり,その場合分けの根拠を明らかにし,振動パターンの分類を行った.その結果,直線状運動,円弧運動,周回運動の3種類の運動に分類できることが分かったが,ウエーブレット解析によりその出現頻度と振動周波数に大きな特徴があることが明らかにされた.特に出現頻度はその支持点の可動性に大きく影響されることが分かった.これは数値シミュレーションでもある程度確認されたが,数値シミュレーションでは主として円弧状運動が出現する頻度が高く,実験との相違が明らかになった.この理由は未だ不明であり今後の解析が期待される.2.パラシュートの支持点(ペイロード)の可動性の振動特性に対する影響を見るため、従来から行われている実験方法(支持点固定)と支持点に自由度を持たせた実験方法による結果を比較した.このときその結果に大きな相違が見られ,実際のパラシュート降下を議論するうえで最重要点であることを指摘した.この結果は,2007年5月にAIAA(アメリカ航空宇宙学会)で発表され,大いに興味をもたれた.今後,降下速度が変化する自由落下に関する解析が重要課題となる.
タペート崩壊での転写・活性酸素シグナルによる時空間的オートファジー制御機構の解明

葯の最内層に存在するタペート細胞は、自身の脂質やアミノ酸を含めた栄養を、プログラム細胞死(PCD)による自己分解により、花粉に供給する重要な機能を担っており、その制御機構の解明は、穀物における稔実制御に直結する。本研究は、花粉への栄養供給細胞である、タペート細胞のPCD過程におけるオートファジー誘導の重要性に着目し、遺伝子発現・活性酸素種(ROS)蓄積を介した時空間的オートファジー制御機構の解明を進め、PCD進行過程における、ROSシグナルとオートファジー機構の生理的意義・重要性を明らかにすることを目指すものである。本年度は、イネの転写ネットワークの根幹を担うと想定されるbHLH型転写因子、葯のROS産生に関与すると想定される酵素群に着目し、各変異体群を利用し、葯発達過程のタペート細胞内におけるROS動態とオートファジー誘導の検証を蛍光イメージングおよび比色定量解析により実施した。解析の結果、葯発達ステージ間のタペート細胞におけるROSおよびオートファジー動態の変化が観察された。併せて、各変異体群においては、コントロール株に比べて、タペート細胞における明らかなROSおよびオートファジー動態の変化が観察された。一方、各変異体群の花粉発達ステージ毎の葯における遺伝子発現プロファイリングを実施し、各変異体におけるネットワーク変化の相関性と時期特異性の検証を行うため、各変異体葯の花粉発達ステージ毎の圃場における葯のサンプリングおよびRNAサンプル調整まで完了した。イメージング解析を用いた、タペート細胞における転写ネットワークおよび活性酸素(ROS)生成を介したオートファジー制御機構の解明に関しては、順調な進展を見せている。一方、各種変異体群における、花粉発達ステージ毎の遺伝子発現プロファイリングに関しては、当初の計画に比べ解析が若干遅れている。サンプル調整は既に完了しており、次世代シークエンサーによる発現解析を行うことにより、次年度は計画通り研究が進むと想定している。次年度は、花粉発達ステージ毎の遺伝子発現プロファイリングを進めるとともに、共同研究機関との研究も開始する。具体的には、動物培養細胞を用いた、葯に発現するリン酸化酵素によるROS生成酵素の活性制御機構の解析をメインに、1ゲル内リン酸化/Mass解析によるリン酸化酵素によるROS生成酵素のリン酸化部位の同定を行う。併せて、ROS生成酵素変異体を含め、各変異体群の機能相補解析を進める。2019年1月の謝金経費が当初予定よりも少なかったため、次年度への繰越予算が生じた。本繰越予算(16,301円)と2019年度予算を併せ、次年度は、実験試薬の購入、旅費、謝金、英文校正費等への支出を計画している。
インターフエロン制御転写因子(IRF)の生物学的機能

平成17年度IRF-2と相互作用する宿主細胞の同定---インターフェロン系において負の制御機構を示す機能を持つことで知られるIRF-2が細胞増殖促進的に作用する遺伝子に対して正の制御機構を示す。このときIRF-2はヒストンアセチル化酵素PCAF/p300によりアセチル化を受けるとともにそれと結合し、さらにヌクレオリンという核小体のリン酸化タンパク質と相互作用して細胞増殖を調節していることを明らかにした。平成18年度IRF-2の血液細胞分化における役割---IRF-2cDNAをレトロウイルスベクターで構築し、マウスの骨髄細胞に導入した。IRF-2を高発現させた細胞をコロニーアッセイを行ったところ、IRF-2が造血幹細胞を巨核球に誘導促進する働きがあることが確認された。1)化学修飾(アセチル化)IRF-2と結合する細胞タンパク質の検索----IRF-2(flag-tag)をアセチル化酵素(PCAFおよびp300)とともに293T細胞に発現させた。293T細胞の細胞抽出液をM2-agaroseとともにインキュベートし、M2-agaroseに結合してきた細胞内因子を電気泳動し、泳動後ゲルを染色し、IRF-2とともにゲル上に見られるバンドを切り出してLC-MS/MSでタンパク質を同定したところ、核小体タンパク質であるnucleolinであることが判明した。2)IRF-2結合タンパク質の機能解析---IRF-2が結合する特定の遺伝子(H4)のプロモーターをルシフェラーゼレポーターにつなぎ、その遺伝子に対する機能的な細胞NIH3T3を選択しレポーターアッセイを行った。NucleolinをIRF-2とともにco-transfectionすると、IRF-2による転写活性をさらに増強させた。IRF-2とnucleolinの細胞内での局在を免疫2重染色を行って共焦点レーザー顕微鏡で観察したところ核小体の周辺において両者が局在していた。以上のことからアセチル化IRF-2にnucleolinが結合し、転写活性化に寄与していることが明らかとなった。これまでIRF-2の転写活性化には細胞増殖の系を用いて行ってきたので、今後は細胞分化等に及ぼす影響をアセチル化IRF-2、およびIRF-2結合タンパク質が如何に関わっているかを検討する必要がある。1)血液系培養細胞におけるIRF-2の高発現に対する影響---血液系細胞K562にIRF-2を高発現させ、細胞よりRNAを分取しRT-PCRを行い、種々の血液系因子の発現程度を検討したところ、CD41,mp1,GATA-2の発現の増加が見られた。このことから、IRF-2がこれらの因子を正に制御している可能性が示唆された。2)血液系転写因子とIRFの相互作用の検索---IRF-2が造血系のどの因子を制御しているかを検討するため、GATA-1,NF-E2等を表的にそのプロモーター領域からISRE様の配列を検索した。ISRE様の配列をもとにビーズ結合アッセイを用いてIRF-2との結合性を見ると、CD41のプロモーター領域にIRF-2の結合が認められた。CD41をルシフェラーゼのレポーターにつなぎIRF-2とともに細胞に遺伝し導入すると、CD41プロモーター活性はIRF-2により上昇する事が認められた。このことからIRF-2はCD41をそのプロモーターを介して増加させることが明らかとなった。3)IRF-2のレトロウイルスベクターの遺伝子導入---IRF-2cDNAをレトロウイルスベクターで構築した。マウスの骨髄細胞より、Lin-,c-kit+,Sca-1+細胞(KSL,stem cell)をセルソーターで分離培養し、レトロウイルスベクターIRF-2により、IRF-2を高発現させた。細胞はサイトカインとともに培養し、MegaCult-C mediumによりCFU-Mkアッセイを行ってコロニー数を調べたところ、。IRF-2高発現細胞においてコロニー数が増加していた。以上の結果からIRF-2はCD41の活性化を介して、造血幹細胞を巨核球に誘導促進する働きがあることが明らかとなった。
疼痛治療における新しいCT透視ガイド下神経ブロック法の開発と薬物療法の役割

疼痛治療で重要な役割を果たす神経ブロックをより安全かつ簡便に施行できるように新しいCT透視ガイドを応用した。腰部交感神経節ブロックにおいては、これまで施行した症例のCT画像を解析し、安全な穿刺のための解剖学的な検討をおこなった。三叉神経節ブロックにおいては、症例を重ね、安全かつ迅速におこなえるように工夫した。また硬膜外内視鏡を用いて、難治性腰下肢痛の症例に診断的ブロック治療を行い検討した。腰部交感神経節ブロックにおけるCT画像による解剖学的検討【目的】腰部交感神経節ブロックは、下肢の血流障害や交感神経が関与するある種の慢性痺痛疾患の治療手段として頻用されてきた。従来の方法ではX線透視下に施行されていたが、近年、リアルタイム・イメージを得られるCT透視下による神経ブロック法が開発され、これにより本ブロック手技をより安全かつ容易にしている。これまで本ブロックの穿刺ルートについてCT画像による詳細な解剖学的検討はなされていない。われわれはCT透視下に施行された本ブロックの症例から得られた画像を解析し、安全な穿刺ルートを検討した。【方法】2004年1月より2005年10月までの22ケ月間に施行されたのべ32回27症例のうち、同意を得た25症例を対象とした。それぞれL2・L3レベルの椎体の中央を含むCT画像で、腎・尿管・大血管・骨・腹腔内蔵を避けた穿刺可能な範囲を決め、正中からの距離・深さ・角度などを計測した。【結果】穿刺可能な正中からの距離は、L2レベルにおいて右は56.9±7.9mm88.0±23.0mm、左は55.3±8.9mm86.7±26.0mmであった。L3レベルでは、右は67.1±9.9mm114.6±27.6mm、左は64.1±9.0mm104.4±23.7mmであった。L2レベルで穿刺可能な正中からの距離が7cm以下の症例は7例であった。【結論】従来の記述で推奨されるランドマークでは穿刺に危険が伴う症例もあることが示唆された。CT画像により得られたこれらのデータは、腰部交感神経節ブロックを安全に施行する上で重要なものであると考えられた。神経ブロックは疼痛治療において重要な役割を担うが、近年の医療社会事情から手技に対する安全性の要求がきわめて高まっている。一方CTや内視鏡などの画像診断装置の飛躍的な進歩があり、特に新しいリアルタイムCT透視法は経皮的針穿刺のガイドに優れる。このCT透視法を超音波では描出できない深部の神経ブロックに応用することにより、安全性と簡便さが飛躍的に向上すると考えられた。(1)CTガイド腰部交感神経節ブロックにおけるCT画像による解剖学的検討CTガイド腰部交感神経節ブロックの施行により得られたCT画像からブロック針の安全な刺入経路を解剖学的に計測・解析した。穿刺のランドマークは、体格に関連し、また腰椎2番のレベルでの穿刺には腎臓穿刺の潜在的危険性が約20%あることが明らかとなった。(2)硬膜外内視鏡による難治性腰下肢痛患者治療難治性腰下肢痛患者に対する硬膜外内視鏡の有効性を検討した。難治性腰下肢痛患者に対して、硬膜外内視鏡は一定の除痛効果を得ることができたが、さらなる治療法の改良と適応病態の選別を進めることが重要と考えられた。(3)CT透視下三叉神経ブロック26例の検討CT透視下に三叉神経節ブロックおよび下顎神経ブロックを施行した計26症例について検討した。新しいCT透視装置は、上記ブロックを安全かつ迅速に施行することを可能にした。また新しいCT装置は3D-CT画像を迅速に構成でき、穿刺したブロック針の位置を確実には把握することができた。
感染症ゲノム遺伝子型迅速診断法の開発と臨床検体での評価

未だ深刻なレベルにある、デング熱、マラリア、HIV、エボラ出血熱等の感染症の脅威を軽減し、コントロールするためには、迅速な診断方法の開発・実装は必須である。この時、併せて薬剤耐性等、病原体の表現型を遺伝子型により推定することが可能になれば最適な治療方針の提供も可能となる。この時、従来の病原体特異的検出ではなく、網羅的、あるいは、半網羅的なシステムを確立することで、より少ない現場コストで、より多くの病原体をカバーできるようになる。一方、小型迅速、使い捨てを特徴とする次世代シーケンサーであるナノポアシーケンサーの評価を進めており、本プロジェクト開始時に70%であった塩基読み取り制度は、この4年間で90%を超えるようになり、十分実用に耐えるレベルに達した。我々は本プロジェクトにおいて、1)ナノポアシーケンサーが途上国において利用可能でること、2)当該シーケンサーがチクングニアウイルスの遺伝子型判定に利用可能であること、3)当該シーケンサーが16SrRNAを対象としたメタゲノム解析に利用可能であることを実証し、4)当該シーケンサーを用いたフラビウイルスの網羅的検出系、5)当該シーケンサーを用いたウイルス全般の網羅的検出系、5)当該シーケンサーを用いた真核生物病原体の非特異的検出系の概念実証に成功した。これらの成果を発展させる形で、細菌性病原性微生物は16SrRNAで、真核細胞性病原性微生物は脊椎動物特異的blockingプライマーを援用した18SrRNAで、ウイルス性病原体は(半)網羅的PCR増幅で鋳型調整を行い、速やかにナノポアシーケンサーで検出・診断を行うことをコンセプトとしたDiagnosis-by-Sequencingの提唱に至った。この刑を社会実装するために、JSPS拠点形成プログラムのサポート受け、ベトナム、インドネシア、タイの共同研究者とともに活動を継続している。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。各種感染症も対する最適な治療方針の提供や病原体拡散のモニタリングにおいて、遺伝子型の判別は重要であり、それを可能とする迅速な検査方法の確立が望まれている。我々は、小型迅速、使い捨てを特徴とする次世代シーケンサーであるMinIONの評価を進めている。また、デング熱、チクングニア熱、マラリア等、熱帯感染症の流行地であるインドネシア共和国マナド市のサムラトランギ大学医学部と研究協力関係を維持している。そこで本計画においては、LAMP法とナノポアの組み合わせによる迅速遺伝子型判別系の現地実証試験を、マナド市で取得した臨床検体で行うことを主題とする。初年度にあたる平成27年度は、マナド市においてデングウイルス感染と診断された患者の血清の収集を行いRT-LAMP法により増幅した後、MinIONに供試し、遺伝子型の判別を行うことを企図した。5月、8月、10月の3回にわたりマナド市へ渡航し、デング患者の血清の取得と、MinIONによる解析を行った。まず、インドネシアでもMinIONが機能することを確認した。次に、血清を鋳型にLAMPを行い増幅産物を得た。そこで、これを用いてライブラリーを作成、MinIONで配列解析を行い、デングウイルスの血清型を決定したが、スタンダードとされるRT-PCR法と比較して、必ずしも一致しないことが問題となった。取得配列を吟味した結果、プライマーダイマーが認められることも多く、既報のLAMPプライマーセットの改良が課題としてあがった。一方、multiplex解析の可能性を検証するために、マナド市で収集した熱帯熱マラリア患者抹消血から抽出したDNAを鋳型にK13-propeller遺伝子の増幅を行った。増幅に際して、プライマーに8塩基のindexを付与し、それに基づいて、最大8multiplexの同時解析が可能であることを確認した。上記の様に、途上国におけるMinIONの稼働試験、および、Multiplexの実証は達成した。後者については、マラリア原虫のアルテミシニン耐性に関与するとされるK13-propellerを対象とし、イントロンを含まない2.5 kbの遺伝子を前半部と後半部に分割して増幅するプライマーをデザインし増幅をおこなった。マラリア原虫を対象とした解析はH28年度に予定していたが、その一部を本年度に前倒ししたことになる。また、この1年でMinIONの出力する配列の精度が70%から90%以上に向上したことから、想定されていたコンセンサス配列取得に関する問題も払しょくされた。具体的には、低速ではあるが正確なSmith-Watermanアルゴリズムに代わるアライメントツールの利用・開発・最適化を想定したが、LASTを用いることで、十分な精度でSNPのコールが可能であることを確認した。一方、デングウイルスLAMPについては、スタンダードとされるRT-PCR法と比較して、必ずしも一致しないことが明らかとなり、プライマーの改良を含む遺伝子増幅系の最適化が課題として見えてきた。

2年目にあたる平成28年度は、マナド市において熱帯熱マラリア、あるいは四日熱マラリアと診断された患者の血清を収集し、18S rRNA遺伝子のマラリア共通配列を標的としたLAMP法により増幅した。当初予定していた次世代シーケンサーMiSeqに替え、小型で持ち運び可能な最新式のMinIONで増幅配列の解析を行うことで種の同定を行った。続いて、熱帯熱マラリア特異遺伝子(pfcrt)を標的としたPCRの結果と比較することで、正しく判定できていることを確認した。また、増幅したpfcrtは次世代シーケンサーMiSeqによるマルチプレックスシーケンシングにより配列を解析し、薬剤耐性の有無を確認した。一方、LAMP試薬の乾燥化について条件検討を進めた。特に、これまで手作業で行っていた乾燥化を、バイオインクジェットプリンターを用いることで、均質な乾燥化試薬を大量に準備することに成功した。これにより、今後想定される現地での実装に必要な条件の1つが達成された。上記のように、LAMP法により対象遺伝子を増幅し、MinIONで配列解析を行うことで、極めて迅速に種の同定が可能であることを実証した。具体的には、1)マラリア原虫18S rRNA保存配列を標的としたLAMP反応を行いその増幅産物をMinIONで解析することで種を判別すること、デングウイルスの血清型特異的配列を標的としたLAMP反応を行いその増幅産物をMinIONで解析することで血清型(に相関する遺伝子型)を判別すること、3)チクングニアウイルスE1配列をPCRで増幅しその増幅産物をMinIONで解析することで遺伝子型を判別することが可能なことを実証した。さらに、LAMP試薬の乾燥化についても条件検討を進め、当初計画に含まれていなかったインクジェットプリンターを用いた乾燥化の機械化による大量供給にも目途をつけた。一方、研究計画に記載したアルテミシニン耐性に関与するとされるK13-propellerの遺伝子型解析については遅れが生じている。ただし、迅速診断系の開発という本研究課題の実施については、上記の通り他の遺伝子を標的に着実に進展している。したがって、これらの総合的に判断し、本研究計画は順調に進捗していると判断する。未だ深刻なレベルにある、デング熱、マラリア、HIV、エボラ出血熱等の感染症の脅威を軽減し、コントロールするためには、迅速な診断方法の開発・実装は必須である。この時、併せて薬剤耐性等、病原体の表現型を遺伝子型により推定することが可能になれば最適な治療方針の提供も可能となる。この時、従来の病原体特異的検出ではなく、網羅的、あるいは、半網羅的なシステムを確立することで、より少ない現場コストで、より多くの病原体をカバーできるようになる。一方、小型迅速、使い捨てを特徴とする次世代シーケンサーであるナノポアシーケンサーの評価を進めており、本プロジェクト開始時に70%であった塩基読み取り制度は、この4年間で90%を超えるようになり、十分実用に耐えるレベルに達した。
極薄青銅器の製作技術解明　－中国金属工芸史を再構築するための基盤研究－

中国では春秋時代後期の前5世紀以降、器胎の厚みが1ミリに満たない「極薄青銅器」が普及していった。東京国立博物館、和泉市久保惣記念美術館などが所蔵する極薄青銅器を対象にして3次元計測機・蛍光X線分析機・CTスキャナーによる調査をおこない、表面に残るさまざまな製作痕を可視化するとともに、成分組成や内部構造を明らかにすることができた。また、これらのデータに基づいて推定した極薄青銅器の製作技法と工程を東京藝術大学における製作実験で検証した。その結果、極薄青銅器は、古代中国青銅器の伝統的な技術とは異なる、いくつもの新技術を複合させることで作られていたことが分かった。古代中国の青銅製容器には、厚さが1ミリに満たない一群(以下、極薄青銅器)があることに注意し、極薄の造りを可能にした技術について、おもに以下の項目に沿って研究を進めた。(1)表面の形態観察東京国立博物館が所蔵する極薄青銅器のうち、とくに2点を対象にして、表面に残された製作時の痕跡を肉眼・デジタルファイバースコープによって観察した。その結果、器体を槌で敲き延ばしながら成形した痕跡、複数の細さの鏨を使い分けて刻んだ文様の線など、個別の製作技術と関わる痕跡を捉えることができた。(2)器体の薄さの分析3次元計測を実施することで、極薄青銅器の薄さが全体にわたって均一なのではなく、相対的に厚めの部位とより薄い部位のあることがわかった。1ミリ未満の微妙な差ではあるが、この薄さの差がひとつの個体のなかでどのように分布するのかを精査することで、表面に残された製作痕の観察だけでは予測できない製作工程を推定することができた。(3)鋳造実験東京藝術大學で合計6回の鋳造実験を行い、約100点の鋳造サンプルを製作した。鋳造サンプルは長さ15センチ、厚さ2ミリの正方形の板を、銅・錫・鉛の配合比を変えながら製作した。2ミリの厚さはキメの細かな土の鋳型で安定的に鋳造し得る最小の数値である。結果、薄く鋳造するのに適した配合比のパターンと、そうでないものを大分することができた。また、配合比を変えることによって多様な地金の色のサンプルを得ることができ、実物資料の地金の色との比較をおこなう用意が整った。これは実験サンプルを敲き延ばしたり、刻んだり様々な加工を施していくに連れて、表面に検出される色や成分比率がどのように変化していくのかを探るうえでも、基準となる貴重なデータである。(1)表面の形態観察天理大学附属天理参考館、黒川古文化研究所、和泉市久保惣記念美術館、泉屋博古館が所蔵する極薄青銅器のうち、とくに10点を対象にして、表面に残された製作時の痕跡を調査した。和泉市久保惣記念美術館、泉屋博古館では蛍光X線分析、分光分析をあわせて実施し、表面で計測される成分組成および色の違いといった表面様態の違いを明らかにすることができた。また、極薄青銅器の参考資料として韓国出土青銅器及びユギの調査を、韓国中央国立博物館、国立古宮博物館、ソウル大学博物館、安城博物館、安城ユギ工房において実施し、極薄青銅器の製作技法を類推するための手掛かりを得ることができた。(2)器体の薄さの分析和泉市久保惣記念美術館、泉屋博古館が所蔵する極薄青銅器を対象に3次元計測を行ったほか、京都国立博物館においてCT撮影を実施した。その結果、全体的に薄造りの極薄青銅器のなかでも、相対的に厚い部位と薄い部位がどこに集中するのか、およその傾向を捉えることができた。(3)加工実験東京藝術大學では銅・錫・鉛の成分比率を変えながら鋳造したサンプルに対して「きさげ(削り)」「鎚ちょう(打ち出し)」などの方法によって1ミリ未満の薄さまで薄くする加工実験を行った。また、加工前後で表面の成分比率や色がどのように変化するのかを調べるため、サンプルに対して蛍光X線分析と分光計測も実施した。東京国立博物館および泉屋美術館・和泉市久保惣記念美術館が所蔵する中国考古の極薄青銅器について、前年度までに計測した蛍光X線分析データ・3次元計測データ・CTスキャンの画像をそれぞれ解析するとともに、新たな知見の整理を行った。蛍光X線分析器で得られたデータの定量分析を実施する際には、昨年度までに東京藝術大學で実験的に鋳造した銅・錫・鉛の比率が既知のサンプルをあらかじめ測定することで、誤差を最小限まで抑えることに成功した。成果の一部は日本考古学協会平成27年度大会において「古代中国の極薄青銅器にみる製作痕分析ー3次元計測、蛍光X線分析を踏まえてー」というタイトルで発表した。また、27年6月9日から13日にかけて、陝西歴史博物館、岐山県博物館、宝鶏青銅器博物館、陝西省考古研究院、西安市文物保護研究院、浙江省嘉興博物館において、28年1月21日には上海博物館において、極薄青銅器の熟覧調査を行った。28年2月17日から18日にかけて、西安市文物保護研究院と秦始皇帝陵博物院において、製作痕跡の熟覧調査を実施した。

中国における一連の調査の結果、日本国内の博物館が所蔵する極薄青銅器と現地所蔵の極薄青銅器とのあいだに、製作技法で大きな違いがないことを確認した。東京藝術大学鋳金研究室では、前年度までの極薄青銅器の調査によって推定した製作工程のうち、2つの工程について実験で検証した。その結果、仮定した工程により所期の形状と製作痕跡を再現することができた。同時に、施工の手順や工具について、製作実験を通してより詳細な情報を得ることもできた。中国では春秋時代後期の前5世紀以降、器胎の厚みが1ミリに満たない「極薄青銅器」が普及していった。東京国立博物館、和泉市久保惣記念美術館などが所蔵する極薄青銅器を対象にして3次元計測機・蛍光X線分析機・CTスキャナーによる調査をおこない、表面に残るさまざまな製作痕を可視化するとともに、成分組成や内部構造を明らかにすることができた。また、これらのデータに基づいて推定した極薄青銅器の製作技法と工程を東京藝術大学における製作実験で検証した。その結果、極薄青銅器は、古代中国青銅器の伝統的な技術とは異なる、いくつもの新技術を複合させることで作られていたことが分かった。和泉市久保惣記念美術館、泉屋博古館など関西の美術館が所蔵する極薄青銅器を調査することで、平成25年度に調査した東京国立博物館所蔵の極薄青銅器と比較できる良好なデータを得ることができた。とりわけ、3次元計測およびCT撮影によって、肉眼観察では捉えることの難しい製作痕を可視化できたことは、今後の研究を進展させる基盤となる。加工実験は、削ったり打ち出す技法のみで青銅鋳造サンプルを1ミリ未満まで薄くすることは予想以上に困難であったが、加工に適した銅・錫・鉛の配合比率におよその目処をつけることができた。27年度が最終年度であるため、記入しない。中国考古学(1)表面の形態観察国内外の博物館・美術館が所蔵する極薄青銅器を対象にして、表面に残された製作時の痕跡を熟覧し、適宜、蛍光X線分析と分光分析を行う。そこで得られる製作痕や表面様態のデータを、前年度以前までに蓄積された他の個体のものと比較する。(2)器体の薄さの分析平成26年度は京都国立博物館で関西の美術館が所蔵する極薄青銅器をCT撮影した。平成27年度は当該年度より本格運用の始まる東京国立博物館のCTスキャナーで同館が所蔵する極薄青銅器のCT撮影を行い、昨年度京都国立博物館で得た撮影データと比較する。(3)加工実験平成26年度は青銅鋳造サンプルを1ミリ未満まで薄くすることを目的とした加工実験を行った。平成27年度の加工実験は、これまで東京国立博物館および関西の美術館が所蔵する極薄青銅器の表面に観察された製作痕を手がかりに、推定される製作技法によって同様の製作痕がサンプル表面にも残るかどうか検証する。3カ年計画の初年度は、計測機器の予期せぬ不調のため、計画通りに進まない研究項目もあった。しかし、全体としては、開始して1年間で質・量ともに良好な基礎的データを得ることができたといえる。とりわけ、個別の製作痕の検出、3次元計測による薄さの違いの分布に対する精査、および100点近くに及ぶ鋳造サンプルの製作は、極薄青銅器と鋳造サンプルのあいだにおける観察・分析結果の相互比較を展開させていくうえで、重要な足掛かりとなるものである。次年度使用額として生じた129,208円は、和泉市久保惣記念美術館、泉屋博古館での極薄青銅器調査に参加するための旅費に充てていた。