hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
mGluR5特異的経口阻害剤RG7090による口腔癌の転移抑制療法の開発

われわれは血球系細胞に発現していないCXCR4の標的分子として、metabotropic glutamate receptor (mGluR) 5を同定し、mGluR5特異的阻害剤がCXCR4システム依存的な口腔癌細胞の転移を抑制することを明らかにした(PLoS One 8:e80773, 2013)。しかしながら、用いたmGluR5阻害剤は連日の腹腔内あるいは静脈内投与を必要とするため、実用的ではない。最近、新規mGluR5特異的経口阻害剤であるRG7090が開発され、大鬱病障害や脆弱性X症候群における有用性が報告された。RG7090は従来のmGluR5阻害剤に比べ半減期が長く、隔日経口投与が可能であるためmGluR5をより低侵襲かつ持続的に抑制することができる。そこで、本研究では、CXCR4システムを介した口腔癌の転移に対するmGluR5特異的阻害剤RG7090の効果を検討することを目的とした。まず、RG7090がmGluR5の機能抑制に及ぼす影響をCa flux assayにて検討した。mGluR5の特異的作動薬であるDHPG((S)-3,5-DHPG)でB88-SDF-1細胞を刺激すると、早期に細胞内Ca濃度の上昇を認めた。そこにRG7090 10nMを処理しassayを行い濃度上昇の抑制をやや認めたが、再度濃度を振り分けて有意差の有無を検討している。また、in vivoにおいては動物実験計画書を提出の上、野生型マウス(C3H/HeN)を購入し、RG7090投与下における有害事象の有無を検討している。RG7090のin vitroでの測定にて傾向はあるものの有意所見がでないため、濃度調整の再検討を継続している。また、細胞毒性についてはMTT assayにて検証している。in vivoにおいては野生型マウスを購入し薬剤投与中である。引き続き血球測定器を用いて有害事象を検討していく。われわれは、口腔癌細胞がケモカインレセプターCXCR4を利用し転移することを明らかにした。一方、CXCR4阻害剤は造血幹細胞の動員薬として米国で臨床応用されており、長期間投与した場合、血球系細胞への影響が危惧される。われわれは血球系細胞に発現していないCXCR4の標的分子として、metabotropicglutamate receptor (mGluR) 5を同定し、mGluR5特異的阻害剤がCXCR4システム依存的な口腔癌細胞の転移を抑制することを明らかにした(PLoS One8:e80773, 2013)。そこにRG7090 10nMを処理しassayを行い濃度上昇の抑制をやや認めた。また、in vivoにおいては動物実験計画書を提出の上、野生型マウス(C3H/HeN)の購入し、RG7090投与下における有害事象の有無を検討している。
マイクロ潅漑法における土壌面蒸発損失量の評価

本研究においては、初年度は土壌面蒸発量を測定する装置の試作に重点をおき、2年度は試作・購入した機器を用いて局部湿潤面からの土壌面蒸発量の定量化を進めた。その概要は次の通りである。1.土壌面接地層の水蒸気拡散:土壌面蒸発計および土壌面拡散抵抗計を圃場の土壌表面に設置し、湿潤面からの蒸発量を直接測定した。土壌面の蒸発環境は作物葉層の日射の遮断・透過・反射や、風速の乱れ・減衰等のため2次元的な様相を呈する。土壌面蒸発計は銅板製の厚さ3mmの薄い容器の底に石膏フィルタ-を敷き、これに土壌を入れ、マリオット装置により給水するものであるが、土壌面の場所による蒸発量の違いをよくとらえることができた。一方、土壌面拡散抵抗計によって測定した値および水蒸気圧の観測値を用いて土壌面蒸発量を計算した結果、土壌面蒸発計の値とよく一致した。さらに、土壌表面の粗度の特徴を写真撮影によって調査し、起伏状態の特性をスペクトル解析によって把握した。この起伏特性と拡散抵抗との相関関係を求めることにより、土壌面起伏量から拡散抵抗を推定することが可能であることを明かとした。2.土壌表層の水分拡散:土壌表面の水ポテンシャルは土壌表層内における水分移動の起動力である。この度購入した「水ポテンシャル測定装置」は、テンシオメ-タ等では測定できないー1バ-ル以下の土壌の水ポテンシャルの精密測定が可能である。土壌面表層の詳細な土壌サンプリングを行い、減率乾燥過程における土壌面近傍の水ポテンシャル分布の存在を明かとした。さらに土壌面表層における水分輸送に関するシミュレ-ションモデルを作成し、上記による実測値と比較した結果両者はよい一致を示した。本研究は初年度であり、土壌面蒸発量を測定する装置について重点をおいた。1.土壌面接地層の水蒸気拡散野外において直接、土壌面蒸発量を測定する装置を試作した。圃場の土壌表面に設置し、湿潤面からの蒸発量を直接測定する装置を作成した。銅板製の厚さ3mmの薄い容器の底に石膏フィルタ-を敷き、これに土壌を入れ、マリオット装置により給水する。土壌面は常時湿潤状態であるが、若干負圧をかけて過湿にならないよう工夫した。マイクロ潅漑時の湿潤面の負圧は約ー40cm以内である。この範囲の負圧の程度と蒸発量について実験検討した結果、日射の強い量大蒸発条件下でも、0cmー40cmの範囲では差が認められなかった。したがって、本装置を用いて湿潤土壌面からの蒸発量を正確に測定できることが明かとなった。2.土壌表層の水分拡散土壌表面の水ポテンシャルは土壌表層内における水分移動の起動力である。新規購入した「水ポテンシャル測定装置」により、テンシオメ-タ等では測定できないー1バ-ル以下の土壌の水ポテンシャルの精密測定が可能となった。本年度はまず無植栽ポット試験により蒸発量と水ポテンシャルの関係についてデ-タを集積した。本研究は昨年度に試作・購入した機器を用いて局部湿潤面からの土壌面蒸発量の定量化を行った。1.土壌面接地層の水蒸気拡散土壌面蒸発計および土壌面拡散抵抗計を圃場の土壌表面に設置し、湿潤面からの蒸発量を直接測定した。

一方、土壌面拡散抵抗計によって測定した値および水蒸気圧の観測値を用いて土壌面蒸発量を計算した結果、土壌面蒸発計の値とよく一致した。さらに、土壌表面の粗度の特徴を写真撮影によって調査し、起伏状態の特性をスペクトル解析によって把握した。この起伏特性と拡散抵抗との相関関係を求めることにより、土壌面起伏量から拡散抵抗を推定することが可能であることを明かとした。2.土壌表層の水分拡散土壌表面の水ポテンシャルは土壌表層内における水分移動の起動力である。昨年度購入した「水ポテンシャル測定装置」は、インシオメ-タ等では測定できないー1バ-ル以下の土壌の水ポテンシャルの精密測定が可能である。土壌面表層の詳細な土壌サンプリングを行い、減率乾燥過程における土壌面近傍の水ポテンシャル分布の存在を明かとした。さらに土壌面表層における水分輸送に関するシミュレ-ションモデルを作成し、上記による実測値と比較した結果両者はよい一致を示した。
胃粘膜上皮細胞に新たに見出された細胞保護関連蛋白質の構造と活性に関する研究

著者は抗潰瘍薬レミノプラゾール(LMP)が胃上皮細胞に4種の蛋白質を誘導合成させることにより、細胞を傷害耐性状態にすることを見出した。そこで、これらの蛋白質の単離を2次元電気泳動により試みたが、成功しなかった。一方、インドメタシンによる胃上皮細胞傷害の発生過程において、細胞内還元型グルタチオン(GSH)含量の低下がみられるが、LMPを前処理しておくとGSH含量の低下が抑制されることが判明した。近年、ヘムオキシゲナーゼは抗酸化物質の産生を触媒することなどから、炎症の終結因子のひとつとして注目されているが、誘導型のヘムオキシゲナーゼ(HO-1)は分子量32Kである。LMPにより誘導される蛋白質のひとつであるp35は誘導合成される点や分子量がHO-1に類似していることや、上述したようにLMP処理細胞では酸化抑制機構が働いた点を考慮すると、p35がHO-1である可能性が推察された。そこで、p35とHO-1との異同について検討した。胃上皮細胞のHO活性を測定したところ、通常は活性が非常に低値であったが、LMP前処理細胞では有意にHO活性が増加した。蛋白質合成阻害薬シクロへキシミドやmRNA合成阻害薬アクチノマイシンDはLMPによるp35の合成を阻害するが、同時にLMPによるGSH含量低下抑制に対して阻害効果を示した。さらにこれらの薬物はHO活性の発現を強く阻害した。そこでさらに抗HO抗体によるウエスタンブロットを行ったところ、無処理細胞ではHO-1は検出されなかったが、LMPによりHO-1の発現の誘導が認められた。一方、HO-2はLMPの処理に関係なく発現がみられたが、そのレベルに変化はなかった。以上の結果から、LMPは胃上皮細胞にHO-1の発現を誘導し、その抗酸化作用が細胞保護作用に奇与することが強く示唆された。著者は抗潰瘍薬レミノプラゾール(LMP)が胃上皮細胞に4種の蛋白質を誘導合成させることにより、細胞を障害耐性状態にすることを見出している。これらの蛋白質の単離を2次元電気泳動により試みたが、大量のサンプル作製が困難なことや発現量があまり多くないこともあり、今のところ成功に至っていない。蛋白質合成阻害薬シクロヘキシミドやmRNA合成阻害薬アクチノマイシンDはLMPによるp35の合成を阻害するが、同時にLMPによるGSH含量低下抑制に対して阻害効果を示した。以上の結果はLMPによりHOが誘導されることを示唆している。来年度では抗HO抗体によるウエスタンブロットを行い、HO-1が実際に誘導されるが否かについて、検討を加える予定である。

以上の結果から、LMPは胃上皮細胞にHO-1の発現を誘導し、その抗酸化作用が細胞保護作用に奇与することが強く示唆された。
完全空乏型SOI技術を用いたテラヘルツ帯高感度センサー用極低温LSIの開発

高感度遠赤外線半導体センサーの大フォーマット化技術である絶対温度2K前後で駆動するアナログ集積回路の研究に取り組んだ。本課題では極低温用途のプロセスとして完全空乏型SOI-CMOSプロセスに着目し、FET単体での評価において、2K冷却時も特性劣化が少なく雑音特性も許容範囲内であることを実験的に確認した。続いて同プロセスでOPアンプ、フリップフロップ等の基本回路を試作・評価し、期待通りの性能を有することを示した。即ち、完全空乏型SOI-CMOSプロセスを使うことで極低温で駆動可能な基本回路レベルの開発ができることが実証された。科学徳星搭載を目指した、遠赤外線波長帯の大規模イメージセンサー用極低温集積型読み出し回路の基礎検討を行うことが本研究の目的である。平成21年度には極低温集積回路の基礎コンポーネントである完全空乏型SOI-CMOS (FD-SOI-CMOS)の評価と基本回路ブロックの試作を行った。絶対温度2KにFD-SOI-CMOSを冷却しその特性評価を行った。結果として、標準的なボディフローティングタイプは低いドレインーソース間電圧(VDS)で生じる電流の急増現象のために静特性が大幅に劣化することが分かった。一方で、ソースタイ、ボディタイタイプのFD-SOI-CMOSは|VDS|=1V程度まで比較的良好な静特性を維持することが明らかになった。また、FD-SOI-CMOSの低周波での雑音特性は10μV/√Hz@1Hz程度であった。この雑音値を基に、シンプルな積分型プリアンプを構成した場合に期待される読み出し雑音を求め、観測時の背景光を起源とした場合に期待されるGe:Gaセンサーのショット雑音と比較すると、背景放射雑音限界に近い条件で観測ができるとの見通しが得られた(論文発表)詳細なトランジスタパラメータの冷却時の値を得ることは困難であるため、イメージセンサーに用いる各要素回路を試作しその性能を測定することで実用性を評価するアプローチを採用した。ソースタイ、ボディタイタイプのFD-SOI-CMOSの測定結果を基に、NAND, NOT等の基本回路、積分型のプリアンプ回路、スイッチトキャパシタ、シフトレジスタ、容量型DA変換器等のイメージセンサーを構成する要素回路の設計・試作を行った。現在は極低温での測定環境の整備を進めている。将来の宇宙観測用、産業用のテラヘルツ帯イメージセンサーへの応用を目指した、絶対温度2K前後で駆動するVLSI技術の研究開発が本研究の目的である。CMOSを2K前後まで冷却すると、多くの場合、静特性が大幅に劣化することが知られており、高精度のアナログ回路の開発は一般的に困難になる。これを解決するために、完全空乏型SOI-CMOSに着目し、FET単体での冷却時の特性評価を行い、極低温でも良好な特性を維持することを明らかにした。更に、その実用性を検証するために、同CMOSによる基本回路の設計・試作を行った(平成21年度)。今年度(平成22年度)は試作したOPアンプ回路、D-フリップフロップ等論理回路の性能評価を行った。これらの回路は極低温VLSIの基本回路となるものである。試作したOPアンプ回路については液体ヘリウム温度冷却時においても超過雑音等は見られず、トランジスタ単体の性能から期待されるものに近い性能が得られた。これにより、OPアンプを用いた様々なCMOSトポロジーを極低温環境下への導入する見通しが立った。また、ANDやNAND等の基本論理回路、フリップフロップ等の順序回路についても、2V系で期待通りの動作をすることを確認した。従って、これらの回路を組み合わせたカウンターやレジスター等の機能ブロックの導入が可能になると期待される。本研究に続き、AD変換器等のアナログ・デジタルを組み合わせた回路の極低温での動作検証及び、大規模イメージセンサーに対応するための回路規模拡大に向けた研究が今後の課題として挙げられる。
MBP-QP法を用いたJAK2、MPLおよびCALR遺伝子変異の検出に関する研究

【目的】今回、迅速で高感度に検出が可能であるMBP-QP法によるJAK2V617F変異の検出と、CALR変異(typel/type2)の同時検出法について、有用性を検討した。【対象および方法】2015年10月から2018年3月までに当院においてJAK2V617F変異の検査を行った90例のうち、臨床所見からMPNの疑いが高くJAK2V617F変異が検出無しであった18例について、QP法によるJAK2V617F変異・CALR変異同時検出とdirect sequence法によるCALR検出を行った。CALR変異またはJAK2V617F変異のみられた6例について今回新たに作成したプライマープローブによるMBP-QP法による検出を試みた。【結果】精製核酸を用いたQP法により、5例においてCALR1型の変異が、1例においてCALR2型の変異が検出された。いずれの症例も、全血を用いたMBP-QP法において同様の検出が可能であった。また、QP法でJAK2V617F変異の検出が無かった1例においてMBP-QP法では検出が確認された。【考察】全自動解析装置を用いたMBP-QP法によるJAK2V617FとCALR変異の同時検出法は、簡便に短時間で高感度な測定が可能であり、骨髄増殖性疾患の診断のため有用な検査法であると考えられた。
フィリピン語辞典編纂のためのコーパス構築と携帯端末用アプリの開発研究

日本人フィリピン語学習者用「フィリピン語辞典」編纂のための大きな規模のコーパスを構築した。この作業および辞書データベースの作成には、将来における正式版のアプリ開発も視野に入れ、かなりの時間を割いた。最後に上記辞書データベースのうち頻度の高い約300語の語根と1,800語の派生語を選定し、理系大学院生の協力を得て、アンドロイド系アプリの作成支援ツールを用いて当初の計画どおり上記辞典試作版アプリを試験的に開発した。本年度の研究計画・方法に沿って本研究を進め,具体的に以下のことを実施した。1.書き言葉コーパスの構築:主としてフィリピン語タブロイド新聞(社説,国内ニュースなど),大衆(若者向け小説,恋愛小説,などのジャンルからデータを収集した。収録語数はおおよそ800万語に及ぶ。書き言葉コーパスとしては十分なデータになったと考える。なお,雑誌については,各方面に当たってみたが,入手方法が簡単で,かつ内容がデータとして信頼できるものがほとんどないことが判明したため,今回のデータ収集の作業には含めなかった。2.話し言葉コーパスの収集の構築:平成26年度に行う予定の話し言葉コーパスの構築作業の一部を前倒しして,平成25年8月にフィリピン語の人気ラジオ番組(15時間分)およびフィリピン国立大学の学生(36名)による会話を収録し,その後数か月にわたりこれら音声データの文字おこしを行った。データの語数はおおよそ25万語である。上記文字おこしに際しては,同大学のスタッフ数名に協力を仰いだが,成果物に現れるさまざまの語彙の綴りが協力者によってそれぞれ異なっていたため,責任者を一人決め,編集・統一してもらった。綴りについては「自己流」がまかり通って,国民の間であまり統一が図られていないため,昨年年初に,フィリピン国立国語研究所が新たな「正書法」を発表したが,国民の間にはさほど浸透・定着しておらず,複数の研究協力者に文字おこしなどの作業を行ってもらう場合などには,今後とも十分な配慮を要する。1.話し言葉コーパスの構築:平成25年度に次年度の計画を一部前倒しして,フィリピン語の人気ラジオ番組およびフィリピン国立大学の学生による会話を収録して,これらの音声データの文字おこしを行ったが,本年度は上記データに加えてさらにYou Tube上に掲載された動画(1自然会話,2映画,3トークショー,4インタビューなど)を収集し,文字おこしを行った。また,市販の,あるいはインターネット上の大衆・若者向け恋愛小説のデータ収集を行い,会話部分のみを抽出し話し言葉コーパスの一部として使用できるよう整理(入力)した。最終的に,昨年度および本年度のコーパスをすべて統合し1つのコーパスとして完成させた。2.書き言葉コーパスの構築:書き言葉についての作業は本年度の計画には予定されていなかったが,昨年度に構築したコーパスのうち,タブロイド新聞(社説,国内ニュースなど)のデータ量が他のいくつかのジャンルのものと比較してあまりにも膨大で,バランスを欠くため,約半分くらいのデータ量になるように減らす作業を上記1.の作業と並行して行った。そして最終的な書き言葉コーパスとして使えるように改善・整備した。3.なお,実際に辞書アプリ(β版)を開発するにあたり,そのコンテンツを作成する上で参考にできるように,上記1.の話し言葉コーパスおよび2.の書き言葉コーパスのそれぞれのデータを頻度順あるいはアルファベット順に配列した語彙リストを作成した。1.日本人フィリピン語学習者のための携帯端末用「フィリピン語ー日本語(比日)辞典」アプリ開発のためにこれまでに構築した,フィリピン語としてはかなり大きな規模のコーパスに基づき辞書のデータベースの入力作業を,将来における正式版の開発も視野に入れながら,かなりの時間をかけて入念に行った。2.上記1.の作業と並行して辞書データベースのうち頻度の高い約300語の語根と1,800語の派生語を選定し,理系の大学院生の協力の下,アンドロイド系アプリの作成支援ツールを用いて,当初の計画どおり「フィリピン語ー日本語(比日)辞典」β版アプリ<試作版>を開発した。具体的な開発プロセスの概要は次のとおりである。1辞書のコンテンツ(語根<300語>,派生語<1,800語>,品詞,意味,フィリピン語用例,用例日本語訳より構成)をデータベース(=テキストファイル)として使えるように整備。2上記1のデータベースをアプリに読み込ませLIST(保存データベース一覧)に保存する機能作成。3ユーザーがLISTから1つのデータベースを選択するとそれがアルファベット順に並ぶ機能作成(スクロールすると目当ての検索語を探し,それを押せば意味,用例,および用例日本語訳が見られる)。4別途「検索語入力欄」を設け,そこに検索語を入力し,GO(ENTER)かRETURNを押せば意味にたどり着ける機能作成。5なお,検索語が派生語の場合,語根が何かであるかを知るために接辞を自動的に削除してくれる便利な機能を追加(語根が見つかるとユーザーはその下位にある目当ての検索語(派生語)とその意味を目で探せる)。自己点検により上記評価を下した理由は以下のとおりである。

昨年度の書き言葉コーパスの構築に加えて,本年度の主な目標であった話し言葉コーパスが構築できたことにより,次年度におけるコンテンツ(主見出し語,小見出し語,語義,用例とその日本語訳など)の作成とアプリ開発に向けての準備がおおむね整った。フィリピン語学平成26年度に実施した研究における課題と今後の推進方策は以下のとおりである。言語コーパスの構築に際しては,書き言葉と話し言葉が量的にバランスが取れていることが望ましいのは言うまでもない。ただ,話し言葉については,昨年度も同様に経験したことではあるが,新たな音声データの収録・文字おこしを行ったり,大衆・若者向け恋愛小説などのデータから会話部分を抽出し,整理(入力)する必要があるため,膨大な時間と労力を要し,書き言葉ほどの分量はどうしても構築できなかった。いずれにしても,話し言葉コーパスに収録されている日常的な表現は口語調の表現を駆使した用例を作成する上で極めて有益であり,十分に活用して行きたい。自己点検により上記評価を下した理由は以下のとおりである。1.書き言葉コーパスの構築:雑誌などからのデータ収集は行えなかったものの,それ以外は本年度の「研究計画・方法」で立てた計画の内容にほほ沿ってデータ収集を行うことができた。しかも,当初の予想をはるかに超えた量のデータを収集するに至ったのは大きな成果であった。2.話し言葉コーパスの構築:平成26年度の「研究計画・方法」に記載した話し言葉コーパスの構築にも一歩踏み込んで,現地のラジオ番組や学生の会話から音声データを収集・文字おこしできたことは,次年度の計画を遂行する上でのいわゆる地ならしとなり,一定の成果であった。人件費用として300,000円ほど前倒し請求したが,アルバイトに依頼する作業の量が予期したレベルより下回ったため,半分くらいの額が余った。平成25年度に実施した研究における課題と今後の推進方策は以下のとおりである。言語コーパスの構築に際しては,書き言葉と話し言葉のデータのバランスが取れていることが理想であるが,後者の場合には,新たな音声データを収録・文字おこしするのに予想以上に多くの時間と労力を要し,その割に成果が限られているため,文字化された既存の音声データはきわめて限られてはいるものの,各方面に広く接触を図り,可能な限りのデータ収集に努める所存である。余剰の144,887円は,次年度の人件費に使用する予定である。人件費が予定(見込み)より減ったため,10,450円ほど余った。余剰の10,450円は次年度の人件費として使用する予定である。
骨髄造血幹細胞ニッチの構造と機能の解明

我々は骨髄ニッチ細胞を基本から見直し、以前にTGF-betaシグナルが造血幹細胞のニッチ因子であることを同定した(Yamazaki et al.,2009. Blood)その研究成果により骨髄に存在する非髄鞘シュワン細胞がTGF-betaを活性化し造血幹細胞に受け渡していることで造血幹細胞の休眠状態と未分化性を維持しており、骨髄ニッチを構成する1つの細胞であることを報告した(Yamazaki et al.,2011. Cell)。またヒト骨髄環境においてもマウスと同様な機能が存在することも確認している(Kimura et al., Unpublished data)。1)骨髄中の造血幹細胞ニッチの構造解析申請者等は不活性化型TGF-betaが活性化できうるGFAP陽性細胞を中心としてヒト骨髄中における造血幹細胞ニッチの同定を行った。具体的には、ヒト造血生検から組織切片を作製し、造血に重要な因子であるSDF-1,SCF,TPO, Ang-1さらには、VE-cadherin, Osteopontinに対して反応する抗体を用い免疫染色を行った。結果、GFAP陽性細胞の周囲にはSDF-1,SCF,Ang-1陽性細胞が存在し、さらには血管の近傍にその構造が構築されていることが観察された。また、面白いことに、マウスとは異なる細胞がSDF-1やSCFを分泌していることが明らかとなった。これら結果は、GFAPを含むユニークな細胞集団がヒト造血幹細胞を維持する骨髄ニッチであるのではないかと示唆された。2)骨髄中の造血ニッチの関連機能分子の同定ES細胞やiPS細胞を免疫不全マウスに移植することによりテラトーマが形成されるが、そのテラトーマ内には造血幹細胞が浸潤し骨髄ニッチ様の構造があると考えられた。申請者は様々な遺伝子をiPS細胞に導入し、より効率的にテラトーマ内に造血幹細胞がホーミングする遺伝子のスクリーニングを行った。現在、遺伝子導入iPS細胞を作製し免疫不全マウスに移植しており、今後、造血幹細胞のホーミングや増殖などの表現系する予定である。3)造血幹細胞の細胞周期と冬眠を制御するTGF-bシグナリング機構の解明TGF-b受容体は1型と2型が存在するが、造血幹細胞においては1型が発現していない。しかし、造血幹細胞においてTGF-bシグナルは重要な役割を果たしている。現在、造血幹細胞のcDNAライブラリーを作製しウイルスベクター系に移行中である。さらに、shRNAライブラリーにおいてもTGF-bシグナルが抑制する分子のスクリーニングを同時に進行しており、今後の結果が期待される。1)骨髄中の造血幹細胞ニッチの構造解析申請者等は不活性化型TGF-betaが活性化できうるGFAP陽性細胞を中心として造血幹細胞ニッチの構造解析を行った。具体的には、造血に重要な因子であるSDF-1,SCF,TPO, Ang-1さらには、VE-cadherin, Osteopontinに対して反応する抗体を用いマウスの骨髄切片における免疫染色を行った。この結果から、GFAPを含む多様多彩な細胞集団が造血幹細胞を維持する骨髄ニッチであるのではないかと示唆された。申請者は接着因子から液性因子まで、様々な遺伝子欠損iPS細胞を作製した。現在、この細胞を免疫不全マウスに移植し造血幹細胞のホーミングや増殖などの表現系を解析中である。現在、造血幹細胞のcDNAライブラリーを作製している。さらに、shRNAライブラリーにおいてもTGF-bシグナルが抑制する分子をスクリーニング中であり、今後の結果が期待される。本申請課題である骨髄造血幹細胞ニッチの構造と機能の解明における研究実績を以下に記述する。我々は骨髄ニッチ細胞を基本から見直し、以前にTGF-betaシグナルが造血幹細胞のニッチ因子であることを同定した(Yamazaki et al.,2009. Blood)その研究成果により骨髄に存在する非髄鞘

シュワン細胞がTGF-betaを活性化し造血幹細胞に受け渡していることで造血幹細胞の休眠状態と未分化性を維持しており、骨髄ニッチを構成する1つの細胞であることを報告した(Yamazaki et al.,2011. Cell)。またヒト骨髄環境においてもマウスと同様な機能が存在することも確認している(Kimura et al., Unpublished data)。また造血幹細胞を制御している細胞が神経系細胞であるために概日時計に関する造血幹細胞の表現形を解析した。その結果、概日遺伝子であるBmal1を欠損したマウスにおいても造血幹細胞の表現形は見いだせなかったために概日時計と造血幹細胞における関係性がないということを詳細に示した(Ieyasu et al., 2013 JNR)。さらには、我々は骨髄ニッチと造血幹細胞の深い理解と技術を得たこともあり、iPS細胞からの造血幹細胞の分化誘導法にも成功している。通常は生体外においてiPS細胞からの造血幹細胞の誘導を目指すことが多い。しかし、我々はiPS細胞を生体内に投与しテラトーマを作製し生体内で造血幹細胞の発生を模倣することで、移植可能かつ機能的な造血幹細胞がマウス、ヒトともに誘導可能であることを証明した(Suzuki et al., 2013 Mol Ther)。26年度が最終年度であるため、記入しない。再生医療26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の目標は8割は達成しており、将来に続く研究成果となっている。当初の目標の3分の2は達成しており、結果は順調に出だしている為。現在に至るまでに、マウスだけではなく、ヒトにおける造血幹細胞ニッチを理解することに成功している。今後はより詳細なメカニズムを明らかにすると共に、疾患を対象としたニッチの特性を利用した治療方法にもアプローチしていきたい。現在までに、1)骨髄ニッチの構造を理解し、2)その機能解析系を確立した。さらに、3)その分子メカニズムの解析まで行っている。今後は、この3つの結果を融合させ更なる骨髄ニッチ研究の新しい研究報告をしていく。
複素多様体の研究-Calabi-Yau 3 foldsの素Mirror変換

3次元の3次超曲面と位相同型な3次元Moishezon多様体がC^3_1正のもとでの分類。特異点を持つ3次超曲面のなかにsmall resolution(すなわち余次元2の例外集合しか持たない特異点解消)を持つものがある。これらをまとめて3次の3次元多様体(cubic 3-fold)と呼ぶ。(1)cubic 3-foldと位相同型であるがcubic 3-foldでないものがあるが全て具体的に記述できる。cubic-3-folds(1^5理論)のb_2,b_3は次のようになる。
唾液を用いたp53変異遺伝子検出による口腔癌診断の臨床応用

口腔癌の診断を確定するためには生検が必要である。その外科的侵襲により癌細胞の播種、転移を促進する可能性が指摘され、早期発見、非侵襲的処置による診断が予後の向上に必要である。経時的に採取可能であること、非侵襲的に採取可能である唾液を特異的な腫瘍マーカーとして利用可能であるか基礎的研究を試みた。マウスに口腔癌由来細胞株HSC-3を同所性移植し顎下腺を摘出した。同時にHSC-3のp53遺伝子の変異部位を同定し、PCRに必要な特異的なプライマーを作製した。これを既知のβグロビン由来のプライマーとの検出感度の確認し同程度の感度を有することが確認できた。口腔癌は視認されやすい部位に存在するが、解剖学的に複雑であること、種々の粘膜疾患があり、専門家でなければ癌の診断に苦慮することも多い。また、確定診断を得るために病理組織診断を用いるが、癌に外科的侵襲を加えることは癌転移の促進につながる報告もあるため可能なかぎり非侵襲的診断にて確定診断ができることが望ましい。この非侵襲的検査を唾液中に存在する微量癌細胞を検出することにより有用な腫瘍マーカーであるか研究することを貝的としている。平成18年度は、基礎研究を主体に行い。目的の口腔扁平上皮癌由来細胞株であるHSC-2,3,4を培養し,ヌードマウス舌に口腔扁上皮癌樹立細胞株(HSC-2,3,4)を各50匹に同所性移植しマウス顎下腺を採取した。この顎下腺に含有されている唾液よりβグロビン遺伝子を用いたPCR法での癌細胞の検出を試みている。これまで、担癌マウスからの血液中からの癌細胞は検出が確認されているため。唾液からの遊離癌細胞を検出することは口腔癌診断において有用性が高いと考えられる。また、口腔癌の約半数はp53遺伝子に変異を有する報告もあり、癌特異的遺伝子としてマウスに移植したHSC-2,3,4においてもSSCP法を用いてhot spot部位の塩基配列の解読し、どのような遺伝子変異を有しているか確認中である。19年度はp53遺伝子変異を用いた特異的なプライマーを用いた癌細胞の検出を試みる。HSC-2,3,4の変異特異的プライマーを作製に関しては19年度に継続して取り組み、PCRを用いてβグロビン遺伝子、遺伝子変異部位の検出を試みる。この非侵襲的検査を唾液中に存在する微量癌細胞を検出することにより有用な腫瘍マーカーであるか研究することを目的としている。平成19年度は、基礎研究を主体に行い。目的の口腔扁平上皮癌由来細胞株であるHSC-2, 3, 4を培養し,ヌードマウス舌に口腔扁上皮癌樹立細胞株(HSC-2, 3, 4)を各50匹に同所性移植しマウス顎下腺を採取した。また、口腔癌の約半数はp53遺伝子に変異を有する報告もあり、癌特異的遺伝子としてマウスに移植したHSC-3においてexon8のcodon305とcodon306の間にTAAGの挿入変異を確認できた。20年度はp53遺伝子変異を用いた特異的なプライマーを用いた癌細胞の検出を試みた。HSC-3の変異特異的プライマーにて検出した結果、現在解析中であるが、βグロビン遺伝子と同程度の検出精度を確認できた。
体育教師の継続的な力量形成を保障する現職教育プログラムの開発

小学校の教師は、体育授業の指導「力量」や研修の必要度に多様性があることが分かった。こうした様々なニーズを持つ小学校の教師が体育授業に関する「力量」を形成するために、体育指導に積極的に関与する立場にある教師が中心となり、学校内において情報を伝達し共有していく校内研修を組織化する現職教育プログラムを開発した。また、体育を研究教科として担っている教師は、積極的に学校外に「力量」を形成する場を求めていた。そこで、校内研修の指導者を養成するために、体育指導に積極的に関与している教師を学校外の研修や研究会に参加させる現職教育プログラムを開発した。1年目の本年度は、研究代表者及び研究分担者の大学で開講される免許更新制講習等の現職教員研修に参加した現職教員を対象に、「体育授業に関する効果的な現職教育に関する調査」を実施した。小学校教員に対する調査紙調査は、2009年6月8月に行われた教員免許更新制講習等を受講した教員に実施し348名を分析の対象にした。中高等学校教員に対する調査は、2009年8月の教員免許更新制講習で約30名に実施された。小学校教員に対する質問紙調査の結果は以下のようになった。1.体育授業を行う上での悩み事では、主として体育授業の「基礎的条件」に関する課題が低い割合を示していた。これらの課題は子どもとの関係が深まっていくことで軽減されるものと推察された。2.一方、悩み事のうち、体育授業の「内容的条件」に関する課題は高い割合を示していた。そこから、一般的に全科を受け持つ小学校教師は、運動や教材に関する知識と、運動技能の指導法に力量不足を感じているものが少なくないと推察された。3.教職経験において体育指導に積極的に関与するような経験の違いでみると、研究教科が体育で体育主任の経験をもつ教員は全般的に悩み事が低く、研究教科は体育であるが体育主任の経験がない教員や、研究教科が体育以外で体育主任の経験がない教員と比べて有意に低い傾向が認められた。そこから、主に体育指導に積極的に関与する立場にない教員に対して、悩み事の解決方法を検討する必要が考えられた。調査の結果は日本体育学会第60回大会で発表し、その成果の一部が『学校教育実践学研究』第16巻に掲載された。現職教育での継続した職能成長を制度的に構築しつつある諸外国を比較の対象に、日本と諸外国の比較研究を実施した。本年度は、中国の上海市と楽山市の現地調査を木原が行った。またアメリカとシンガポールの現地調査を岩田が行った。本研究の目的は,義務教育段階における体育教師の継続的な「力量」形成を保障する効果的な現職教育のプログラムを開発することである。本年は、研究の目的に同意した教師の中から選ばれた,M市内の学区単位で組織された体育研究会を対象に,専門家の学習共同体で行われる現職研修への参加と半構造化インタビューを1年間通して,各学期で継続的に行った。対象とする事例は,(1)採用後1-5年程度の初任から中堅の教師から2名,(2)採用後10年以上から1名、(3)採用後20年以上を経た熟練教師から1名の計4名を抽出し,学校の背景等の条件を踏まえて、その成長の過程と成長を支えた援助体制を調査した。この調査は主に木原と松田が担当した。また、教育センター主催や学区単位で組織された体育授業に関する現職研修に自主的に参加した小学校授業に関する現職研修での質問誌調査を行った。この調査は主に徳永と林が担当した。中学校教員を対象とする事例研究を本年は行うことができなかった。さらに、現職教育での継続した職能成長を制度的に構築しつつあるイギリス,アメリカ,シンガポール、小・中学校の義務教育段階で体育教師の専科制をとっている中国を比較の対象に,日本と諸外国の比較研究を実施した。本年度は岩田がアメリカの現地調査を実施し、岩田と研究協力者の林楠が中国での現地調査を行った。本年は、教育センター主催や学区単位で組織された体育授業に関する現職研修に自主的に参加した小学校授業に関する現職研修での質問誌調査を行った。また、小学校学級担任教師の事例に対して,現職研修への参加と半構造化インタビューを1年間通して,各学期で継続的に行った。この事例研究は主に、木原と村井が担当した。また、中学校教員を対象とする調査研究を岩田が担当して行った。さらに、本年度は岩田がアメリカの現地調査を行った。3年間を通した研究の結果についてイギリスから招聘したDr.Len Almond氏に意見をいただき以下の成果にまとめた。

第1に、小学校の教師が体育授業の研修に求めている「力量」は、運動を教えることに関する「技術指導」と、一人ひとりの子どもに対して適切に指導や評価を行うことに関する「子ども把握」、そして子ども全体に対する「マネジメント」であった。第2に、すべての「力量」について、体育主任を経験している教員は相対的に必要度が低い傾向がみられ、反対に若い教員や女性の教員が多く含まれる集団は必要度が高い傾向がみられた。そこから、体育主任や研究教科で体育を担当している教員が若い教員や女性の教員に対して積極的に情報の伝達・共有化を行うことが、「力量」形成に有効な方法として示唆された。第3に、小学校の教師が体育授業に必要な「力量」の形成に関する情報を、主に職場の「同僚」から、次に「文献」や「HP」を通して入手している事実が明らかとなった。これらの事実から、様々な教師が体育授業に関する「力量」を形成するために、体育指導に積極的に関与する立場にある教師が中心となり、学校内において情報を伝達し共有していく校内研修を組織化する現職教育プログラムを開発した。また、体育を研究教科として担っている教師は、積極的に学校外に「力量」を形成する場を求めていた。そこで、校内研修の指導者を養成するために、体育指導に積極的に関与している教師を学校外の研修や研究会に参加させる現職教育プログラムを開発した。
ポリグルタミン病脳切片ベータシート構造の赤外顕微鏡解析

ポリグルタミン病は構造変化したたんぱくが神経変性を起こし、神経細胞が死に至る病気である。たんぱくが構造変化を起こした時には、そのたんぱく内の原子間結合が変化している。過去の研究で、ポリグルタミンペプチドではなく組織内ポリグルタミンの原子間結合は解明されていない。本研究では、ポリグルタミン病モデルマウスおよび剖検脳組織内のポリグルタミンアミロイドの原子間結合を赤外顕微鏡を使って解析する。
宿主植物とPotyvirusの宿主・病原関係成立機構の解明

1.シロイヌナズナ翻訳開始因子eIF (iso)4E及びカブモザイクウイルスゲノム結合蛋白質VPgの発現精製、結晶の調製2.VPgとeIF (iso)4Eとの相互作用の分析結合分析の結果、VPgが選択的にeIF (iso)4Eと直接結合し、更にeIF (iso)4Gとの三者複合体を形成する結果を得た。この結果は、ウイルスゲノムに共有結合したVPgが、宿主のeIF (iso)4F複合体に結合してリボソームをウイルスゲノムRNAへ誘導して、ウイルスゲノムの蛋白質への翻訳に直接関与している可能性やeIF (iso)4Gと微細管蛋白質との結合を介したウイルスゲノムRNAの細胞間移行への関与の可能性を示唆する。更に、直接キャップ構造を認識するTrp残基をほかのアミノ酸に置換したeIF (iso)4E変異体が、キャップ構造にもVPgに対しても同様に結合能を失った事から、結合領域の重複している事も示唆された。また、SPR法を用いた生化学的な速度論の検討により、このeIF (iso)4EとVPgとの相互作用が、eIF (iso)4Eと宿主の植物細胞のmRNAとの結合よりも高い親和性である結果を得た(Miyoshi. H. et al.,Biocimie,2006)。これはウイルス感染初期段階のウイルスゲノムの翻訳が宿主のmRNAよりも優先的に開始される理由を説明できるものである。また、VPgのeIF (iso)4Eへの結合領域を決定した(第26回日本分子生物学会年会で報告)。現在、その結合領域に変異を加えたVPg改変TuMVのcDNAクローンのシロイヌナズナへの感染性試験を行って、その病原性の変化を調査検討している(第20回国際生化学・分子生物学会議で報告予定)。更にeIF (iso)4EとVPgとの相互作用については、昨年度成果を報告(CSHL Meeting Translational Control 2004)した際に、共同研究を開始したニューヨーク市立大学ゴス教授と共同で、蛍光滴定法により詳細に速度論の検討を行っている(ASBMB Annual Meeting 2006で報告)。1.シロイヌナズナ翻訳開始因子eIF(iso)4E及びウイルスゲノム結合蛋白質VPgの発現と精製、結晶の調製eIF(iso)4EおよびVPgの大量発現系の構築および精製に成功し、研究分担者大阪薬科大学友尾幸司講師と共に結晶化条件の検討を行っている。2.VPgとeIF(iso)4Eとの相互作用の分析アフィニティーカラムを用いた結合分析を行なった結果、VPgが選択的にeIF(iso)4Eと直接結合し、更にeIF(iso)4Gとの三者複合体を形成する結果を得た。この結果は、ウイルスゲノムに共有結合したVPgが、宿主のeIF(iso)4F複合体に結合してリボソームをウイルスゲノムRNAへ誘導して、ウイルスゲノムの蛋白質への翻訳に直接関与している可能性やeIF(iso)4Gと微細管蛋白質との結合を介したウイルスゲノムRNAの細胞間移行への関与の可能性を示唆する。さらに、直接キャップ構造を認識するTrp残基をほかのアミノ酸に置換したeIF(iso)4E変異体が、キャップ構造にもVPgに対しても同様に結合能を失った事から、結合領域の重複している事も示唆された(Cold Spring Harbor Laboratory Meeting Translational Control 2004で報告)。

これはVPgが部分的にキャップ構造への分子擬態の様な形態をもっている可能性も示唆している。また、SPR法を用いた生化学的な速度論の解析により、このeIF(iso)4EとVPgとの相互作用が、eIF(iso)4Eと宿主の植物細胞のmRNAとの結合よりも極めて高い親和性である結果を得た(第26回日本分子生物学会年会で報告)。これはウイルス感染初期段階のウイルスゲノムの翻訳が宿主のmRNAよりも優先的に翻訳が開始され、病原性を発揮する理由を説明できるものである。1.シロイヌナズナ翻訳開始因子eIF(iso)4E及びカブモザイクウイルスゲノム結合蛋白質VPgの発現精製、結晶の調製2.VPgとeIF(iso)4Eとの相互作用の分析結合分析の結果、VPgが選択的にeIF(iso)4Eと直接結合し、更にeIF(iso)4Gとの三者複合体を形成する結果を得た。この結果は、ウイルスゲノムに共有結合したVPgが、宿主のeIF(iso)4F複合体に結合してリボソームをウイルスゲノムRNAへ誘導して、ウイルスゲノムの蛋白質への翻訳に直接関与している可能性やeIF(iso)4Gと微細管蛋白質との結合を介したウイルスゲノムRNAの細胞間移行への関与の可能性を示唆する。更に、直接キャップ構造を認識するTrp残基をほかのアミノ酸に置換したeIF(iso)4E変異体が、キャップ構造にもVPgに対しても同様に結合能を失った事から、結合領域の重複している事も示唆された。また、SPR法を用いた生化学的な速度論の検討により、このeIF(iso)4EとVPgとの相互作用が、eIF(iso)4Eと宿主の植物細胞のmRNAとの結合よりも高い親和性である結果を得た(Miyoshi, H. et al., Biochimie,印刷中)。これはウイルス感染初期段階のウイルスゲノムの翻訳が宿主のmRNAよりも優先的に開始される理由を説明できるものである。また、VPgのeIF(iso)4Eへの結合領域を決定した(第26回日本分子生物学会年会で報告)。現在、その結合領域に変異を加えたVPg改変TuMVのcDNAクローンのシロイヌナズナへの感染性試験を行って、その病原性の変化を調査検討している(第20回国際生化学・分子生物学会議で報告予定)。更にeIF(iso)4EとVPgとの相互作用については、昨年度成果を報告(CSHL Meeting Translational Control 2004)した際に、共同研究を開始したニューヨーク州立大学ゴス教授と共同で、蛍光滴定法により詳細に速度論の検討を行っている(ASBMB Annual Meeting 2006で報告予定)。
ヒ素固定化のためのスコロダイト生成の機構解明と制御

銅は重要な基盤材料であるが、資源の減少に伴い鉱石中の不純物濃度が増加しており、特にヒ素が問題となっている。分離したヒ素を安全かつ経済的に保管するために固定化技術が重要である。本研究ではヒ素の安定な化合物であるスコロダイトの生成機構解明を目的とした。条件によっては、水溶液中で種結晶上に一旦非晶質が形成されるが保持時間の経過とともに結晶化していくこと、非晶質は気相中でも結晶化することを明らかにした。本研究では、非鉄製錬で分離回収されたヒ素をスコロダイト形態で固定化するため、スコロダイトの生成機構を科学的に解明し、処理プロセスを構築する。平成20年度は、非晶質ヒ酸鉄の結晶化機構を解明することを目的とし、35°Cでの中和処理により非晶質ヒ酸鉄の作成をおこない性状を調査した。作成した非晶質ヒ酸鉄試料を用いて雰囲気、温度が結晶性および粒子の大きさに及ぼす影響について、95°Cの水蒸気飽和と乾燥雰囲気と160°Cの水蒸気飽和雰囲気で保持し、一定時間毎に試料を取り出し時間変化を調査した。95°Cの水蒸気飽和で円盤状に加圧成形した試料でも実験をおこなった。また蒸留水に硫酸を添加してpHを調整した水溶液に試料を添加し、24時間保持し、以下の知見を得た。1.作成した非晶質ヒ酸鉄のXRD分析ではピークが見られず、非晶質あるいは結晶性の低いものであった。SEM観察では、直径1μm程度の粒で構成されていた。2.水蒸気飽和雰囲気、95°Cの場合、12時間で結晶化し、10μmほどの粒ができる。3.乾燥雰囲気の場合、結晶化しない。粒の大きさは変化しない、結晶化には水分が必要である。4.160°Cの場合、1時間で結晶化する。1時間で10μm程の塊ができ、時間経過とともに大きな塊となる。5.成形した場合、9時間で結晶化する。表面では9時間で塊ができ、内部では24時間で塊ができる。6.気相雰囲気で保持した場合、時間の経過にともない結晶性は高くなり、大きな塊ができる。7.液相雰囲気で保持した場合、pHに依って結晶性や形状が異なったが、XRD分析でスコロダイトのピークが見られた。結晶化に必要な水分は気体でも液体でもよい。8.保持pHが高くなると1μm程度の粒が多く見られるようになり、板状の結晶ができる。平成21年度は非晶質ヒ酸鉄の結晶化機構を解明することを目的とし、非晶質ヒ酸鉄を35°C恒温槽で24h保持し作製した。種結晶は、160°Cオートクレーブで12,24h保持し作製した。初期の非晶質ヒ酸鉄は、12μmほどの粒が凝集していた。オートクレーブで作成した種結晶は、12、24hの両方とも1μm以下の粒で構成されていた。結晶化実験は、初期試料を0.5gとし、種結晶を含ませる場合は20%配合した。試料を水蒸気飽和条件下、95°Cで6、24h保持した後、減圧乾燥器内で室温乾燥させ、SEM、XRD、TG-DTAを用いて分析した。結晶化実験6h保持後の生成物の表面は、種結晶無し、配合とも10μm程の滑らかな球体に近い粒が部分的に見られた。24h保持後の種結晶無しの試料はほぼ全て40μm程の塊になっていたが、種結晶を含んだ試料は塊の大きさは20μm程であったが、表面は滑らかなものとなっていた。今回の実験では、種結晶を配合したものの粒の大きさは、種結晶無しより小さかった。これは種結晶の割合が大きかったために核が多くなり、1つ1つの粒が小さくなった可能性がある。XRDでは種結晶を配合したものは、6h保持でスコロダイトと一致するピークが見られ結晶化していたが、種結晶無しの試料は6h保持ではピークは見られず、24h保持でピークが見られた。種結晶が非晶質ヒ酸鉄の結晶化において、結晶性および粒の大きさへ及ぼす影響を調査し、以下の知見を得た。1.種結晶を20%配合した条件では、種結晶無しの条件と比較して粒の大きさは小さかった。2.水蒸気飽和条件下で種結晶を配合した場合、種結晶無しの条件より短時間で結晶化する。本研究では、非鉄製錬で分離回収されたヒ素をスコロダイト形態で固定化するため、スコロダイトの生成機構を科学的に解明し、処理プロセスを構築することを目的とした。今年度は、ナトリウムの影響を排除するためヒ素源をヒ酸水素二ナトリウムから60%

ヒ酸溶液に変更し、オートクレープを用いた種結晶の生成実験と、非晶質ヒ酸鉄の生成と結晶化実験をおこなった。種結晶の生成実験では、初期As濃度を0.01mol/L、Fe/As比を1.0、pHを1とし、オートクレープで160°C、24h保持して結晶成長させた。生成物はXRD分析でスコロダイトの強いピークが見られ、SEM観察では34μmの斜方状の結晶が凝集した3040μmの粒が確認された。これまでに作ったものに比べ粒径が大きく、結晶面が明確だった。非晶質ヒ酸鉄は、初期As濃度を0.3mol/L、Fe/As比を1.0、35°C、300rpm、24h撹拌しながら生成させた。生成物のXRDでは、ブロードなピークでありSEM観察では、1μm以下の粒が凝集し多少凹凸が見られた。種結晶無しと10%、20%添加の結晶化実験を水蒸気飽和雰囲気95°Cで6h、24hとおこなった。XRDでは、いずれの条件でも6hでスコロダイトの強いピークが見られ結晶化が確認された。SEM観察で、種結晶無しでは、初期0.5μmの粒が6hで1μmの粒に成長しており、24hで2μmに成長し、表面の凹凸が大きくなった。種結晶を添加した場合、6h、24hで全体が1μm程度の粒となっており、いずれも種結晶の粒は確認できなかった。添加率を変えても、粒の形状、粒径には大きな違いは見られなかった。種結晶上への結晶成長については確認できなかったものの、水蒸気飽和雰囲気において非晶質ヒ酸鉄が結晶化すること、また種結晶添加により生成物の大きさが影響されることが確認された。
わが国のヘリコバクター・ピロリの感染源の特定

小学生、幼稚園、保育園児を対象に便中抗原検査を行い、Helicobacterpyloriの陽性率を測定した。陽性は平成22年の0歳小学校3年生で688人中13人(陽性率1.9%)、平成23年の0歳小学校6年生で835人中15人(陽性率1.8%)で、成人より低かった。陽性児の家族の陽性率は、陰性児の家族の比べ高く、この違いは父母で特に明瞭だった。1年間隔で2回検査を受けた439人(うち8人が陽性)では感染状況の変化はなかった。尿もしくは血清で測定した中学生の抗体陽性は337人14人(陽性率4.2%)で、小学生以下より高かった。血清抗体陽性の中学生12人のうちpepsinogen値による萎縮の基準を満たす割合は2人(16.7%)で、成人より少なく、この時期の除菌は胃がん予防からは望ましいが、安全面の検討も必要である。目的胃癌の最も強力な発生促進要因であるヘリコバクター・ピロリ(以下Hp)の主な感染時期は小児期であり、持続感染が成立すると、治療や胃粘膜の強度の荒廃による除菌がない限り、終生感染が持続する。将来の胃癌発生を予測する目的で、小学校、幼稚園、保育園の児童、園児の便中抗原を測定して、小児におけるHpの陽性率(感染のprevalence)を測定した。方法兵庫県某市の小学校、幼稚園、保育園に児童、園児の便中抗原検査を依頼し、協力の得られた16施設(小学校7、幼稚園6、保育園・こども園3)の小学校3年生以下の全児童・園児に学校、園を通じて便の採取を依頼した。便は-80°Cで凍結保存後に融解し、テストメイトピロリ抗原EIA(わかもと製薬,東京)およびその改良キットを用いて測定した。両キットで能書記載の0.10以上の結果を示した例を陽性として、年齢(学年)別の陽性率を計算した。結果対象1299人のうち689人(53%)から協力が得られた。年齢別の陽性数/検体提出数(陽性率%)は、3歳以下の146人では0(0.0%)、4歳1/120(0.8%),5歳5/134(3.7%)、小学校1年生2/89(2.2%)、2年生2/110(1.8%)、3年生3/90(3.3%)で、全体の陽性率は13/689(1.9%)であった。考察今回の対象では3歳以下での感染者はなく、4歳小3で1.8-3.7%であった。奥田らによる和歌山県での陽性率約5%に比べて今回の結果は低いものとなっている。地域が異なるので比較性に問題が残るが、わが国の小児の陽性率はなお低下した。各施設の教職員、Hp陽性児と陰性児の家族にも便の提出を依頼して回収し、RAPD-fingerprintなどによる分析を行っている。昨年度に引き続き、兵庫県篠山市の小児の便中抗原陽性率を、対象を小学校6年生までに広げて測定し、昨年も検査を受けた小児については、1年間での感染状況の変化も検討した。【方法】協力の得られた16施設(7小学校、6幼稚園、3保育園・こども園:平成22年度と同じ)に研究への参加を依頼し便を収集した。便中抗原測定は昨年度と同様にテストメイトピロリ抗原EIA(わかもと製薬)を用いた。【結果】対象者1909名のうち835名(43.7%)が便を提出し、陽性率は0歳0/6、1歳0/26、2歳1/34、3歳1/44、4歳0/104、5歳1/115(0.9%)、小学校1年生4/120(3.3%)、2年生1/71(1.4%)、3年生1/100(1%)、4年生1/69(1.5%)、5年生4/82(4.9%)、6年生1/64(1.6%)で全体では15/835(1.8%)であった。平成22年度、23年度ともに便を提出したのは439名(2010年度陽性8名、陰性431名)であったが、感染状況が変化したものはなかった。【考察】H23年度の篠山市の小児におけるH.pylori感染率は、小学校6年生まで対象を広げても、昨年度と同様に低い陽性率であった。