hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
光合成生物での、糖由来活性カルボニル化合物の生成・毒性および解毒メカニズムの解明

活性カルボニル化合物(RCS)の解毒メカニズムとRCS毒性解明を行った。光合成に伴い活性酸素(ROS)が常に生成し、ROSによるチラコイド膜脂質酸化によりRCSが生成することを見出した。RCSは葉緑体で生成する。葉緑体局在RCS解毒酵素alkenal-one oxidoreductase (AOR)を欠損した植物では、RCSの蓄積とともに呼吸阻害が認められ、呼吸基質であるデンプンの分解系が酸化障害を受けることを見出した。このことが、植物の生育抑制の原因であることを明らかにした。つまり、AORは、光合成で生成するRCSを無毒化する機能をもつことを明らかにすることができた。(1)高等植物での葉緑体局在グリオキサラーゼの発見ジカルボニル解毒の全容を明らかにするために、アルドケトレダクターゼ(AKR)と比較し、メチルグリオキサール解毒に特化しているグリオキサラーゼ(GLO)の存在とその生理機能解明を試みた。その結果、シロイヌナズナゲノムに、GLO1とGLO2遺伝子を見出した。GLO1の細胞内局在解析を行ったところ、葉緑体に存在していた。さらに、その遺伝子産物の触媒能力は、これまで報告されているヒト型GLO1の触媒能力に匹敵した。現在、シロイヌナズナで、GLO1が欠損した変異株の生理解析を野生型と比較することにより行っている。(2)高等植物での葉緑体局在グリオキサラーゼの機能解析GLO1欠損シロイヌナズナ(delta-GLO1)と野生型の生育比較を行ったところ、delta-GLO1の生育が大気CO2/O2条件下、野生型よりも遅延することを見出した。それぞれの植物生葉から、タンパク質を抽出し、MGを代表とするカルボニル化合物による修飾をSDS-PAGEその後の修飾部位検出抗体を用いて調べた結果、野生型と比べてdelta-GLO1では修飾タンパク質の数、およびその修飾度の増加を認めることができた。さらに、光合成が盛んになる高CO2環境下で野生型およびdelta-GLO1を生育させたところ、delta-GLO1GLO1の生育は、大気条件よりもさらにその生育が抑制された。また、野生型と比べてdelta-GLO1GLO1では修飾タンパク質の数、およびその修飾度の増加も同様に認めることができた。これらの結果は、光合成の促進がジカルボニル生成を促し、生育抑制に至る障害をもたらしていることを示唆する。そして、野生型においてはGLO1によるジカルボニル解毒が行われていることが考えられた。糖アルデヒドであるジカルボニル化合物が生体膜脂質を修飾することにより生成する活性脂質カルボニル化合物(Reactive Carbonyls, RCS)の解毒メカニズムとRCS毒性解明を行った。酵素AORは、RCSであるalpha/beta-不飽和カルボニルを還元無毒化する。シロイヌナズナ植物を用いて、この酵素が、葉緑体局在であることを確認した。その後、AORの生理機能を明らかにするために、RNAi植物(delta-AOR)の作出を行った。野生型(WT)と比べて&#61508;AORのAOR活性は大きく低下した。WTとdelta-AORの生育比較を行ったところ、24時間明期の条件では両者に生育の違いが認められなかった。一方、16時間明期/ 8時間暗期の条件ではWTと比べてdelta-AORの生育は著しく抑制された。このことは、AOR欠損がもたらすRCS解毒能低下が呼吸代謝に影響を与えていることを示唆した。実際に、delta-AORの暗呼吸速度がWTと比べ大きく低下していた。この結果は、葉緑体でRCS解毒に関わる酵素の欠損が呼吸代謝に影響を与えるという、全く予想できない事実であった。さらなる解析で、暗期の終わり、delta-AORの葉緑体にはデンプンの蓄積が認められた。一方、WTでは明記に蓄積したデンプンはほぼすべて消費されていた。この結果もまた、呼吸速度の低下を支持するものであった。さらに、PEPカルボキシラーゼ酵素活性、遺伝子発現量の低下が認められ、RCSによる作用ターゲットが明らかになった。また、カルビン回路酵素活性の低下もdelta-AORで検出された。ルビスコの基質であるRuBP再生律速となる高CO2条件での光合成速度は、WTと比べdelta-AORで大きく低下していた。このことは、高CO2環境下での光合成維持にAORによるRCS解毒が重要であることを示す。活性カルボニル化合物の生成・解毒メカニズムおよびカルボニル代謝の全容把握を目的に、糖アルデヒドであるジカルボニル化合物が生体膜脂質を修飾することにより生成する活性脂質カルボニル化合物(Reactive Carbonyls, RCS)の解毒メカニズムとRCS毒性解明を行った。活性酸素代謝も含め、活性化合物解毒の生理解析では、解毒酵素の欠損株を作成後、様々なストレス負荷により野生型との表現型の比較解析をしなければ、その生理機能を推察できないという困難が散見される。これに対して、AORは、普段の植物の生活そのものに影響を与える酵素であることが判明し、その重要性が際立っている。一方で、呼吸代謝が光合成に匹敵するほど重要であることも明らかになった。葉緑体に局在する酵素であることを考慮すると、光合成の間に生成したRCSが消去されなければ、デンプン分解に影響を与えるという事実も新奇なものである。

これらの結果は、葉緑体での糖代謝と呼吸のリンクを担う位置に、AORが位置することを示す重要な成果である。さらに、AORの欠損がカルビン回路酵素にダメージを与え、それらの活性を低下させることを見出している。このことは、大気条件下での光合成および生育には影響を与えなかった。つまり、大気条件での光合成がルビスコにより律速されるという事実と符合する。そこで、高CO2下での光合成を解析したところ光合成速度が野生型よりも低下していた。この成果は、将来的に直面する高CO2環境下での生育阻害を予見させる重要な成果である。上述した重要な成果は、カルボニル代謝の全容把握の目的を概ね達成していると判断する。活性カルボニル化合物(RCS)の解毒メカニズムとRCS毒性解明を行った。光合成に伴い活性酸素(ROS)が常に生成し、ROSによるチラコイド膜脂質酸化によりRCSが生成することを見出した。RCSは葉緑体で生成する。葉緑体局在RCS解毒酵素alkenal-one oxidoreductase (AOR)を欠損した植物では、RCSの蓄積とともに呼吸阻害が認められ、呼吸基質であるデンプンの分解系が酸化障害を受けることを見出した。このことが、植物の生育抑制の原因であることを明らかにした。つまり、AORは、光合成で生成するRCSを無毒化する機能をもつことを明らかにすることができた。研究実績で述べた課題について、以下達成度を記す。(1)高等植物でのグリオキサラーゼ解毒機構の解明:本年度、グリオキサラーゼ・ファミリーの全容解明を行い、それぞれの酵素の特質を明らかにした。しかしながら、細胞レベルでの、局在性、発現制御など、解明すべき課題(生理学的)は残る。(2)高等植物でのグリオキサラーゼ機能解析:グリオキサラーゼ・ファミリーのそれぞれの酵素を欠失したシロイヌナズナ・タグラインを入手し、生理学的解析を開始した段階です。これらタグラインの詳細な解析が不可欠である。(3)高等植物イネでのグリオキサラーゼ欠損株の作出:本年度、作物であるイネでのグリオキサラーゼの機能を解明することを目的に、GLO1のRNAi植物の作出に着手した。その結果、GLO1活性が約20%、および30%へ低下した変異株の作出に成功した。次年度、生理・生化学解析を行っていく予定である。計画3年目に当たる平成28年度は、これまでと同様に以下の項目の課題遂行に取り組む。(1)高等植物での糖アルデヒド(メチルグリオキサールMG)解毒機構の解明MGおよび他の糖アルデヒド無毒化に関わるグリオキサラーゼ(GLOX)の発現を抑制させたRNAi植物(シロイヌナズナ)の解析を進めている。MGは脂質を修飾し、RCS生成をもたらす。光合成が促進する高CO2環境下で、野生型との生育比較を行い、GLOXの生育への影響、また細胞内糖アルデヒド量の比較検証を行う。さらに、高CO2環境に処理後の光合成速度解析など生理機能比較を行う。ターゲットとするGOXは葉緑体局在酵素であり、葉緑体内での活性が野生型の10分の1ほどに低下している。そして、生葉でのMGなどの糖アルデヒド蓄積が認められる。上記、生育および生理機能比較では、蓄積している糖アルデヒドの分子種の同定、またそれら量との相関付け解析で、GLOXの生理機能解明を目指す。
途上国における脆弱建物の耐震補強支援技術の開発

インフィルブロック壁を有するRCフレーム構造建物の地震によるパンケーキ状崩壊を防ぐために、連続繊維を束ねて壁板に縫い付けるように取付けて耐力壁化し、フレームと一体化する方法を提案した。さらに、補強繊維量に応じた荷重・変形関係をモデル化し、補強設計を行う方法を示した。僅かな補強量でも、大変形時まで耐力低下が徐々に起こるようになる効果を期待でき、インフィルブロック壁が構面内にある限り、最終的な崩壊を免れることが期待される。穴あきブロックで構築した壁体の挙動については情報も少なく、まず穴あきブロック壁体の力学的挙動を把握した。途上国における無補強レンガ造を対象とした実験を参考にして、柱・梁フレームを除いて穴あきブロック壁板要素を製作した。連続繊維ストランド束を壁板に縫い付けるように取り付けていく方法で補強して対角線上に圧縮し、ブロックの水平方向と鉛直方向に作用する力が同じになる実験を行った。水平目地モルタルの膠着力が発揮されているうちは補強繊維による補強効果は表れない。膠着力がなくなると水平目地モルタルの摩擦力が一定となり、補強繊維の剛性に応じた耐力増加が表れる。水平目地モルタルの摩擦力が失われ始めると耐力が減少するが、完全に摩擦力がなくなると補強繊維の引張力で耐力が維持されるようになる。補強繊維量が多くなると、目地モルタルの膠着力がなくなった後の補強繊維の剛性応じた耐力増加で、ブロックが鉛直方向に圧縮破壊して急激に耐力を失うことが分かった。ブロックの鉛直方向の圧縮破壊を起こさせず、水平目地の強度を維持して変形できる適切な補強量があるはずで、今後各種繊維を用いた実験試料を増やし、安価で効率的な補強量を算定するための解析モデルを開発する。穴あきブロック壁を有するフレームおよびそれを補強したフレームの実験結果は、上述のようなブロック壁体の挙動からほぼ完全に説明することができ、ブロック壁板要素のマクロモデルを作成して、穴あきブロック壁を有するフレームの解析的検討を行った。炭素繊維シートをブレース状に取り付ける耐震補強実験結果も、穴あきブロックで構築した壁体と炭素繊維シートブレースが、それぞれどのような役割をしているのかをほぼ推定することができた。連続繊維ストランド束を縫い付けるように取り付けていく方法で補強した穴あきブロック壁体の力学的挙動は、昨年度の要素実験から概ね推定できている。解析モデルの定式化を行う目的で要素実験を追加して行った。日本学術振興会の長期招へい研究者として来日した中東工科大学の研究者との共同研究として実施し、目地モルタル強度と補強繊維量によって補強効果を表わし、壁板のせん断力とせん断変形角の関係を定式化した。ブロック壁がインフィルであることから壁板周辺でのせん断力伝達はない。従って、本方法で補強したインフィルブロック壁を有するRCフレームのせん断力とせん断変形角の関係は、柱梁フレームおよびトラス材として機能する壁板のせん断力とせん断変形角の関係の足し合わせで表わせる。定式化した壁要素解析モデルを壁フレーム実験結果に適用した結果、適合性のよいことが分かった。要素実験によって多くの情報が得られることが分かったので、さらに補強材の壁板への取付け方法を簡略化する可能性とより安価な補強材を探すために、ガラス繊維とナイロン繊維の使用を検討した。データ量としては不十分であるが、ガラス繊維の使用が有力であった。今後、さらに繊維種類と取付け方法の簡略化をパラメータとした要素実験結果を蓄積して、"より簡単で、より安い"補強方法を目指す必要がある。本研究は、既存のインフィルブロック壁を耐力壁化して利用するものであるが、インフィルブロック壁さえその量が不足している建物があり、途上国の脆弱建物の耐震補強に利用できそうな方法として、地震エネルギー吸収デバイス型のPC板の取付けを含め、今後の中東工科大学との共同研究計画を検討した。穴あきブロックでインフィル壁を有するRCフレームを、連続繊維ストランド束を縫い付けるように取り付けていく方法で補強した時の力学的挙動については、インフィルブロック壁を取出した壁板の実験により、補強効果に関する基本的情報が得られることがわかっている。そこで、適用地域で調達できる繊維を考えて、剛性が小さいところまで範囲を拡大し、炭素繊維、アラミド繊維、ガラス繊維からビニロン繊維、ナイロン繊維、ポリエステル繊維まで種類を増やして実験データの蓄積を図った。繊維の剛性が小さくなると、繊維の剛性に見合った耐力増加しか得られないが、変形能力の向上は同じように期待でき、これまでに提案した解析モデルで表わせることが分かった。補強対象建物のインフィルブロック壁の量を把握するために、トルコにおけるRC造集合住宅のインフィル壁の量について検討行った結果、耐力増加を期待しなくても、変形能力を向上できれば、倒壊を防いで終局安全性を確保する補強ができそうなことを確認した。インフィルブロック壁でさえその量が不足している建物に対しては、地震エネルギー吸収デバイス型のPCa板を試作し、接着型のコッターを介して既存建物に取り付ける方法を検討した。効果の確認

実験の範囲に留まるが、PCa板と接着型コッターを安価に作れれば有力な方法であることを確認した。実用技術に近づけるため、トルコ中東工科大学で今後実施する耐震補強方法の実験の中に、本提案を取り入れるための実験計画についての検討も行った。
効果的な抗癌剤の開発を実現する低分子量G蛋白質Arf6シグナル伝達系の機能解析

本研究では、低分子量G蛋白質Arf6の腫瘍血管新生および癌細胞の転移・浸潤への関与ついて、これら両者の現象におけるArf6の分子機能メカニズムを解明し、Arf6シグナル伝達系を標的とした腫瘍血管新生および癌細胞の転移・浸潤の両者を阻害する新規の革新的抗癌剤の開発を目指す。B16メラノーマ細胞およびルイス肺癌細胞をマウス皮下に移植し、腫瘍の増大および腫瘍血管形成を解析したところ、血管内皮細胞特異的Arf6-KOマウスにおいて、腫瘍血管新生が抑制され、腫瘍の増大が阻害された。そこで、血管内皮細胞におけるArf6の機能を解析するために、ポリオーマmT抗原により初代血管内皮細胞を不死化し、コントロールおよびArf6-KO血管内皮細胞を用いてin vitro血管形成実験(チューブ形成実験および大動脈リングアッセイ)を行った。腫瘍血管形成は、VEGFやbFGF、HGFなどの様々な血管誘導因子によって制御されるが、Arf6-KO血管内皮細胞では、これらの血管誘導因子のうち、HGF依存的に誘導される血管形成が特異的に抑制されることを見出した。また、Arf6-KO血管内皮細胞では、コントロール細胞に比べてHGF依存的な細胞遊走が抑制されていた。さらに、血管内皮細胞において、HGF刺激によってArf6が活性化されること、およびArf6の活性化はHGF依存的な接着斑の形成に必要であることを明らかにした。ヒト腫瘍においても、HGF依存的な腫瘍血管形成は、腫瘍の増大に重要であることが示されており、腫瘍血管新生においてVEGFシグナル伝達経路を担保することが示唆されている。そのため、HGFシグナル伝達系を制御するArf6は、血管新生阻害剤の標的となり得ると考えられる。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
GBR法にBMPを応用した歯牙欠損部顎堤の保全及び再建に関する研究

これまで、抜歯窩に対するGBR法に関する研究についてはいくつかの報告があるが、抜歯窩あるいは歯牙欠損部顎堤に対するGBR法にBMPを応用した研究に関する報告はない。本研究は、抜歯窩及び歯牙欠損部顎堤に対するGBR法にBMPを応用することによる顎堤保全および再建の効果を明らかにしようとするものである。これまでの研究においては,以下のような動物実験により,抜歯窩に対して本術式を応用することによる顎堤保全の効果が確認された。1.実験方法(1)BMP(ウシ長管骨を脱灰し、4M Gdn-HCl溶液にて抽出後、Sephacryl S-200にてゲル濾過して得られた粗抽出物)に、アテロコラーゲンを加え成型し、BMP-Collagen複合体(BC複合体)を作製した。(2)ラットの腹部皮下にBC複合体を埋入し、BC複合体の骨誘導活性を確認した。(3)以下の3群の実験群について経時的に病理組織学的検索を行い、各群間の比較検討を行った。(2)イヌ抜歯窩に対してGBR法を応用し、さらに抜歯窩周囲骨とG-TAMの間の空隙および抜歯窩内をBC複合体で満たす。(3)イヌ抜歯窩をそのまま治癒させる。2.結果と考察BMPを用いたGBR法を応用した場合,GBR法単独の場合あるいはそのまま治癒させた場合に比較して抜歯窩内および抜歯窩周囲における骨形成が旺盛であり,本方法が顎堤の保全に関して効果的であることが示された。3.今後の実験計画(1)GBR法においてチタンスクリューを用いることによりG-TAMの固定をより確実なものとし、本術式の顎堤保全効果を更に高める。(2)歯牙欠損部顎堤に対してBMPを用いたGBR法を応用し、顎堤再建の効果について検討を加える。
免疫応答の質的制御に関わるサイトカイン受容体のタンパク質分解機構の解明

樹状細胞は、形態、表面マーカー、機能から形質細胞様樹状細胞(pDC)と骨髄型樹状細胞(mDC)の2つに大別される。mDCは抗原を捕捉しT細胞に提示することで、獲得免疫の始動に重要な役割を演じている。一方pDCは、TLR7/TLR9を介して核酸リガンドを認識し、大量のI型インターフェロンを産生すると言う点で、近年注目を集めている細胞であるが、その活性化機構の詳細が十分に解明されているとは言い難い。Atg5の欠損マウスではpDCの活性化が障害されることから、オートファジーがなんらかの形でこの活性化に関わる可能性がある。また、TLR7/9は未刺激の状態ではERに存在するが、ERを移出後TLR7/9は限定分解をうけることが最近報告された。それ故、このタンパク分解がTLR7/9の活性化に関わっている可能性も考えられる。このため、本年度はpDCの活性化におけるオートファジーとTLR9の限定分解につき解析を行った。このため、LC3トランスジェニックマウスの骨髄からpDCを分化させ、レトロウイルスベクターを用いてYFPを融合したTLR9を発現させた後、Cy5でラベルしたCpGを取り込ませたところ、TLRとCpGが刺激後6時間でLC3ポジティブのドットと共局在することを見出した。しかしながら、生化学および電顕を用いた解析からCpG刺激によるオートファジー亢進の所見は得られなかった。一方、TLR9の限定分解についてもレトロウイルスベクターを用いた強制発現系で解析したが、CpG刺激の如何に関わらずN端を欠失したTLR9が認められることから、この限定分解がTLR9の活性化と直接リンクしているという証拠は得られなかった。抗原刺激に伴い、ナイーブCD4+T細胞は異なるサイトカインを分泌する、機能的にも異なったT細胞サブセットに分化する。Th2細胞への分化にはIL-4受容体を介したシグナルが重要であるが、このプロセスは同時にTCRシグナルの強さに影響されることが知られている。このため、TCRを介したシグナルとIL-4受容体のシグナルとの間に何らかのクロストークが存在すると考えられていたが、その実体は謎であった。DOCK2は線虫のCED-5、ショウジョウバエのMyoblast Cityの哺乳類ホモログで、免疫系特異的に発現するRac活性化分子である。私達は、DOCK2欠損ナイーブCD4^+T細胞が抗原刺激に伴い大量のIL-4を分泌し、ある系統のマウスにおいてアレルギー疾患を自然発症することを見いだした。野生型のCD4+T細胞を抗TCR抗体で刺激すると、IL-4Rαの細胞表面での発現は一過性に上昇し、その後数時間で元のレベルに戻った。しかしながらDOCK2欠損CD4^+T細胞では,このダウンレギュレーションが障害されており、その結果受容体を介したシグナルが亢進・遷延化していた。このメカニズムを解明すべく詳細な解析を行い、DOCK2がRacの活性化を介して、IL-4Rαのリソソームへの輸送およびタンパク質分解を制御していることを突き止めた。阻害剤等を用いた実験より、この輸送には微小管とよばれる細胞骨格成分が関与していると考えられた。すなわち, TCRの下流でDOCK2-Racシグナルが作動すると、IL-4Rαの細胞内輸送を介してその発現をコントロールし、過剰なIL-4シグナルがT細胞に伝わるのを未然に防ぐという、極めて精緻な制御機構が存在することを明らかにした。
幽霊写像の研究

本研究により次の3つの成果を得た。1.単連結な有限複体Xのループ空間ΩXから、いくつかの奇数次元の球面といくつかの奇数次元の球面の直積空間への写像で有理ホモトピー同値を与えるものが存在することを証明した。この結果を幽霊写像の観点からまとめると次のようになる。単連結な有限複体Xのループ空間ΩXから、有限型の空間(各次元のホモトピー群が有限生成群であるような空間)への幽霊写像は自明なものしか存在しない。2.位相空間Xからでる普遍幽霊写像の安定懸垂位数が無限になるのものとして、次の3通りの空間が存在する。(1)基本群が有限で、十分大きな次元から先のホモトピー群がすべて消えている空問(2)自明でないリー群の分類空間(3)整係数ホモロジー群がねじれ元を持っているリー群のループ空間この3番目の結果に関連して、例外リー群E_6,E_7のループ空間が安定ホモトピー圏において分解不前能であるという結果も得られた。3.シンプレクティック群Sp(n)はnが2以上のとき、安定ホモトピー圏において分解不可能である。単連結な有限複体Xのループ空間ΩXに対して、いくつかの奇数次元の球面といくつかの奇数次元の球面のループ空間の直積からΩXへの、有理ホモトピー群の同型を誘導する写像の存在は古くから知られている。逆向きの有理ホモトピー群の同型を誘導する写像の存在は、等質空間を含む有理的楕円型空間については知られていたが、一般的には未解決な問題であった。この問題を、本年度の研究により肯定的に解決することができた。上に述べた結果は、幽霊写像の立場からは次のようにまとめることができる。単連結な有限複体Xのループ空間ΩXから、有限型の空間(各次元のホモトピー群が有限生成であるような空間)への幽霊写像は自明なものしか存在しない。また、普遍幽霊写像の安定懸垂位数が無限大になるものとして、次の3通りの場合に対して証明を与えることができた。1.基本群が有限で、十分大きな次元から先のホモトピー群がすべて消えている空間2.(整係数ホモロジー群が)自明でないリー群の分類空間3.整係数ホモロジー群がねじれ元を持っているようなリー群のループ空間この3番目の例に関連して、例外リー群E_6,E_7のループ空間が安定ホモトピー圏において分解不可能であることという結果も得られた。これは今まで、G_2,F_4のとき知られている結果の拡張になっている。整係数ホモロジー群がねじれ元を持っているようなリー群のループ空間からでる普遍幽霊写像の安定懸垂位数が無限大になることを、昨年度の研究で示した。また、これに関連して例外リー群でE_8以外のもののループ空間は、安定ホモトピー圏で分解不可能であることも示した。今年度は、整係数ホモロジー群がねじれ元を持っていないリー群のループ空間の安定ホモトピー圏での分解不可能について研究を行った。リー群がSU(n)の場合については、すでに分解可能であることがMitchell-Richterの研究により知られている。他方、Sp(n)に関しては、Hopkins,Hubbuckによってn=2,3の場合にそのループ空間は安定ホモトピー圏で分解不可能であることが知られているのみであった。今年度の我々の研究により、Sp(n)はnが2以上のとき、そのループ空間は安定ホモトピー圏で分解不可能であることが証明された。その証明においては、河野-小島により計算されたSp(n)のループ空間上のスティーロッド作用素の計算結果が大きな役割を果たした。つまり、Sp(n)のループ空間ΩSp(n)のmod2係数のホモロジー群を考え、その0でない元を頂点とし、スティーロッド作用素で結ばれる2元は道で結ばれていると考えてできるグラフG(ΩSp(n))が高々3つの連結成分しか持っていないことが河野-小島の計算結果を用いて示すことができた。これにより、ΩSp(n)の安定ホモトピー圏で分解不可能の問題がn=2の場合の問題に帰着され、Hopkins,Hubbuckの結果を用いることにより問題が解決された。CW複体Xから位相空間Yへの幽霊写像に対しては、Gray指数が以下のように定義される。

幽霊写像の定義から、幽霊写像f : X→YをCW複体Xのk切片X_kに制限すると、自明になるからf_k : X/X_k→Yでf=f_kπ_kとなるものが存在する。ここに、π_k : X→X/X_kは自然な射影とする。もちろん、このようなf_kはたくさんある可能性はあるが、このようなf_kのなかで幽霊写像に取れなくなるような最小のkを幽霊写像f:X→YのGray指数といい、G(f)で表される。このような自然数が存在しないとき、Gray指数は無限大であると定義する。このGray指数に関して、「CW複体Xと位相空間Yが有限型ならば、すべての幽霊写像f : X→Yに対して、そのGray指数は有限である。」という予想がある。本年度は、主としてこの予想に関して研究を行い。以下のような特別な場合に証明を行った。もちろん、これらの結果は先行研究に比して新しいものではないが、その証明方法は著しく簡単なものとなった。1.[X,ΩY^]=*の時。ただし、Y^はYのprofinite completionを表す。2.Yがいくつかの球面の1点和のとき。例外型リー群のループ空間から出る普遍幽霊写像が安定ホモトピー圏において、自明でないことを証明することができた。さらに、例外型リー群E_8のループ空間が安定ホモトピー圏において分解するかどうかの研究を行った。これまでの研究で、E_8以外の例外型リー群は安定ホモトピー圏で分解しないことがわかっているが、E_8についても同様に分解しないことが証明できた。ただし、残念ながら証明はコホモロジー群のSteenrod、作用素の計算およびK理論のAdams作用素を使うという旧来と同じ方法のため、膨大な計算を要し研究論文として発表できるものでない。今後、この証明方法の改良とより洗練された証明方法を開発することが必要である。スピノール群Spin(n)についても、nが7以上16以下の場合にも、そのループ空間が安定ホモトピー圏において分解しないことを示すことができた。この場合も、各nについて個別に計算した結果分かったもので、統一的な取り扱いを行うことができなかった。E_8の場合と同様、証明方法の改良とより洗練された証明方法を開発することが必要である。
神経から幹細胞へのフィードバックシグナル機構の解析

脳の発生において機能の異なる神経がどのようにその数を調整しながら産生されるのかそのメカニズムはほとんど分かっていない。本研究では、胎児期に初期の神経で発現する増殖因子FGF18が神経幹細胞を制御することによって、後期に産生される神経の数を制御する事を発見した。FGF18は脳の発生の中期から後期にかけて初期に産生された神経で発現しており、FGF18遺伝子欠損マウスは、後期の産生される神経の特異的な減少が見られた。この事は、初期に産生された神経細胞がFGF18を分泌することにより、つぎに産生される後期の神経の生産量を神経幹細胞の維持を介して制御すると言うフィードバック制御の可能性を示唆している。生物の発生において空間的に離れた場所にある増殖シグナルと幹細胞がどのようにコミュニケーションをとり制御されているのか?そのメカニズムは未だによく解明されていない。本研究では、脳の形成において神経細胞が発現する増殖因子FGF18が遠くはなれた神経幹細胞を制御していること発見し、具体的にどのように脳の形成に関わっているのかさらなる解析を行った。平成25年度は、1、FGF18コンディショナルノックアウトマウスを用いた生後の表現型の解析。2、FGF18の下流のシグナルによって制御される遺伝子の解析を行った。1、FGF18遺伝子の欠損による生後脳への影響FGF18遺伝子の単純な欠損は、生後すぐに死んでしまう為に、生後に脳がどのような異常を生じるかは解析が困難である。そのため、FGF18コンディショナルノックアウトマウスを作成し、生後の脳の形成にどのような異常があるか解析を行った。FGF18遺伝子は、Cre組み替え酵素の発現により欠損するようになっており、将来新皮質となる領域の神経幹細胞に特異的に発現するEmx1-Creのラインを用いて解析を行った。その結果、後期に産生される2/3層の神経層だけが特異的に減少している事が明らかとなった。2、FGF18の下流のシグナルによって制御される遺伝子の解析。下流の因子の同定を解明するために、FGF18ノックアウトマウスの胎生14.5日目の脳よりtotalRNAを回収して、次世代シークエンサーを用いたRNAシークエンス解析を行った。現在、その情報の解析を行っている。今後さらなる解析により、FGF18シグナルの下流で神経幹細胞の維持に関与する遺伝子を同定する予定である。生物の発生においては、様々なシグナルが時空間的に制御されている。とりわけ空間的に離れた場所からの増殖シグナルがいかに幹細胞を制御しているのか、そのメカニズムはほとんど解明されていない。私は、その一例としてマウスの脳の発生過程において、神経が発現する増殖因子FGF18が遠くはなれた神経幹細胞を制御している可能性を見出した。本研究では、新たに見出した神経細胞由来の増殖因子の解析を通じて、マウス脳発生をモデルとした幹細胞の空間的、時間的な制御のメカニズムの解明を目的としている。平成24年度は、1)FGF18の作用点について、2)下流のシグナル伝達の解明について解析を行った。また、次年度の解析に向けてFGF18コンディショナルノックアウトマウスの作成を行った。1)FGF18の作用点についてFGF18ノックアウトマウスと、FGF18の過剰発現の幹細胞における効果を調べたところ、一過的な増殖の制御には作用しないが、未分化状態の維持に重要な役割を果たしている事が分かった。2)下流経路の同定下流の因子の同定を解明するために、ERK MAPKの活性をノックアウトマウスやFGF18過剰発現で調べたところ、ERK MAPK経路が主要な下流の因子である事が分かった。さらにMAPKのシグナルを可視化することを試みて、FRETプローブの導入によりライブイメージングにより直接的にFGFシグナルの観察する事に成功した。平成24年度の解析により、FGF18の幹細胞への作用点が細胞の未分化維持に作用している事、さらに下流のキーとなる因子としてERK MAPK経路を同定した。またそのシグナルを直接観察する事のできるアッセイ系を構築する事ができた。生体サンプルを使って、FGFのシグナルを直接観察できるようなった事は世界でもほとんど例がなく、今後のFGFシグナルを時空間的にとらえるのに非常に有用であると考えれる。また、FGF18コンディショナルノックアウトマウスの作成も完了し、生後において脳特異的にFGF18ノックアウトをする事により、FGF18遺伝子の致死性を回避して表現型を解析するための道具も用意する事ができた。これらの事より、実験の計画はおおむね順調に進んでいると考える。今後は、開発したアッセイ系を用いて、FGF18のシグナルがどのように神経層から幹細胞まで伝えられているのか、ライブイメージングによって直接観察していく予定である。

また、作製したコンディショナルノックアウト使い、生後の脳の形成にどのような影響を与えるのかを解析する予定である。さらには、シグナルの伝達の分子メカニズムや脳発生における生理的、進化的な意義についてさらに迫りたい。該当なし
臍帯血リンパ球からのウイルス特異的キラーT細胞の誘導法の開発

【ヒト臍帯血・末梢血を用いた研究の成果】臍帯血中のサイトメガウイルス特異的キラーT細胞(CMV-CTL)は極めて低頻度であると考えられている。今回種々方法により、同CTL誘導に到る方法の開発を目的として研究を行った。まずは基礎的検討の為に成人末梢血を用いた検討を行った。1.Crude抗原添加単球由来樹状細胞(DC)を用いることによって、CMV抗体陽性・陰性成人いずれからもCTL誘導が可能であった。2.HLA-A2402又は0201テトラマーを用いた陽性細胞を分離し、隔週毎のペプチド刺激によって、CTL誘導することに成功した。1.2いずれのCTL共にウイルス感染細胞を特異的に殺傷する能力を有していた。3.臍帯血移植後のCMV感染は頻度・重症度共に大きな問題となっている。この為に移植後のCMV-CTLの変動を把握する目的にて、テトラマーアッセイを行った。成人の造血幹細胞移植の陽性細胞数は、CMVに対する細胞性免疫能を的確に評価する指標となり得ることが明らかとなった。【マウスを用いた研究の成果】臍帯血由来のサイトメガロウイルス特異的キラーT細胞(CMV-CTL)による養子免疫療法の基礎データを得る目的でBALB/cマウス(H-2d)にマウスサイトメガロウイル(MCMV)を感染させる系を用いて実験を行った。実験にあたり、微量のウイルスを定量できるリアルタイムPCR(検出感度:1コピー/1検体)の系を確立し、MCMV特異的キラーT細胞を検出するテトラマーを作成した。これらを用いた実験から以下の結果を得た。1.MCMV抗原が検出限界以下のマウスにおいてもMCMV特異的キラーT細胞は増殖・維持できることを観察しin vitroで増殖させたキラーT細胞が抗CMV抗体陰性の非感染宿主体内で維持出来る事を示した。2.ウイルス特異的キラーT細胞の維持・増殖には宿主の常在細菌叢が関与していることを示した。1.臍帯血移植後の免疫能これまでに東海大学等で実施した臍帯血移植症例における免疫能の回復を詳細に解析し、骨髄移植やCD34選択的移植の症例と比較した。臍帯血移植においてはリンパ球数の回復が早く、CD4は骨髄移植と同等であるが、CD8が骨髄移植よりも頻度が低いためCD4/CD8比が高い。CD8+CD11b-のCTLは低いことが判明した。IL-2に対する反応性は骨髄移植よりも低く、全体的に骨髄移植よりも免疫の回復が遅れている傾向が明らかになった。2.ウイルスのreal time PCR法による定量的測定法の確立ヘルペスウイルス(HSV-1、VZV、CMV、HHV-6、EBVなど)のreal time PCRアッセイ法を確立し、移植後の患者血液などのサンプルで経時的に測定を行っている。3.ウイルス特異的リンパ球幼若化反応(LPR)すでに確立しているVZVに対するLPRと同様のリンパ球幼若化反応の系を確立した。このアッセイにより、移植後の患者におけるウイルス特異的細胞性免疫の評価が可能となった。4.ウイルス特異的CTLの誘導EBVとCMVに対するCTLの誘導を試み、健康成人や骨髄移植後の患者からの末梢血リンパ球からCTLを誘導することに成功した。このように当初の目標どおりに研究は進行しており、今後臍帯血リンパ球からウイルス特異的CTLを誘導する方法の開発に着手する予定である。A.研究目的

臍帯血naiveT細胞から抗CMV-CTLを誘導するに際して、DCは不可欠である。本年度は臍帯血中のDC頻度について、4color flowcytometry法によって明らかにし、さらにより成熟度の高いDCを臍帯単球から誘導する方法について検討した。B.研究方法と結果1)臍帯全血から各種lineage marker (CD3,14,16,33,19,56)陰性かつDR陽牲分画をさらにCD11c陽性又はCD123陽性領域に分け、各々DC1, DC2と定義した。それぞれ頻度について測定し、成人末梢血のDC1, DC2と比較した。臍帯血中のDCの頻度は、DC1;0.15±0.03、DC2;0.05±0.05であり、いずれも成人末梢血コントロール(DC1;0.28±0.12, DC2;0.11±0.06と比べて有意に低値であった。C.考案臍帯血には本来DCが十分含まれていないことを考えると、抗原特異的CTL誘導にはその前駆細胞から誘導したDCの補助が必要である。ただし他の報告にもある如く、臍帯単球由来は機能的成熟が得られにくい。我々の検討でも、最も重要な表面抗原であるCD80発現の有意な上昇はTNFに加え、IL-1, IFNを添加することによって得られた。本研究においては臍帯血移植後の免疫能回復過程を明らかにし、ウイルス特異的なキラーT細胞を誘導する方法を確立することを目的としている。今年度は以下のような成果があり、その一部を論文として発表した。1.臍帯血移植後の免疫能の回復骨髄移植と比較し、移植後のリンパ球総数では大きな遅れはないが、リンパ球の構成において未熟な細胞群が多くを占めることと、その結果リンパ球の増殖能や特異的キラー活性が低下していることを明らかにした。2.ウイルス特異的キラーT細胞の同定造血幹細胞移植患者におけるCMV-tetramer(A0201,2402拘束性)を用いた解析を施行した。結果は、移植後CMV感染後に有意なtetramer陽性細胞頻度の上昇を認め、健常成人の平均値を遥かに越える値であった。今後は臍帯血移植における変動を追跡する必要がある。3.ウイルス特異的キラーT細胞の誘導と増殖A2402-Tetramerおよびbeadsを用いて健常成人末梢血100mlから陽性細胞を分離し、IL-2存在下で増殖培養に成功した。培養細胞はさらにpeptide pulse DCによる刺激によって増殖効率が高まり、培養後の細胞はpeptide pulse auto-DCのみならずCMV感染線維芽細胞(A24陽性)をも殺傷する能力をin vitroで発揮した。臍帯血はCMV-tetramer陽性細胞が存在しないために分離培養することは不可能である。しかし移植後にレシピエント体内で感作、誘導される可能性は高い。従って今後は移植患者から同様な方法(患者末梢血からtetramer陽性細胞を分離し、IL-2で培養する)で抗CMV-CTLが誘導し得るか否かを検討する。【ヒト末梢血・臍帯血を用いた研究実績】正常健常人末梢血からHLA-A0201または2402テトラマーとanti-PE immunobeadsを用いて陽性細胞を分離し、IL-2存在下にペプチドによる刺激を繰り返す培養方法を確立した。
脳機能計測と生体計測の情報統合による多視点裸眼３ＤＴＶのユーザ体感品質測定

画質評価で主に用いられるアンケートによる主観評価実験に代わる手法として,生体情報NIRSによって得られる脳血行動態に着目し,動画像を観察した被験者の脳血行動態と画質との関連性の検証を行った.結果,無圧縮動画像と高圧縮動画像には有意な差があり,動画像の品質の違いにより主観品質と脳血行動態には関連性があった.符号化劣化の知覚による表情筋の変化を測定する実験では,画質が変化した場合,目の周囲の筋活動の増加が観察され,その筋活動から画質の変化が推定可能なことを示した.印象の強い画像で行った結果,画質による表情筋の筋電図の変化は測定できなかったが,表情の左側優位の傾向や快・不快の感情は測定できた.2年目は,個人の嗜好の違いおよび印象の受け方の違いを個人特性と定義し,異なる内容の静止画像とその符号化によって生じる画質劣化に対する個人特性について,脳血流の変化から調べることを目的とし,NIRSを用いた計測実験により検証を行った.予備実験では,人の好みや印象が強く左右されるようなコンテンツを10種類選出した.本実験では,選出したコンテンツを用い,異なる内容の静止画像とそのJPEG符号化劣化画像を視覚刺激として被検者に呈示し,注視時の前頭葉脳血流がどのように変化するのか,また,計測した脳血流の変化量について,心理値や従来のアンケート評価方法とどのような関係があるか調査した.計測データの解析は,脳機能の解析で信頼性の高い脳機能画像解析ソフトウェアNIRSSPMを用いて行った.得られたt検定の結果を用いて,心理値(Pleasure,Arousal,Dominace)と品質の評価値の推定を行った.脳血流の変化量ΔHbは隣接するチャンネル同士で非常に相関が高いため,一部の計測チャンネル領域のみの変化だけで個人特性を表すことは適当ではないため,計測した全領域のΔHbの変化量に対して主成分分析を行った.主成分分析の結果の寄与率が高い第1主成分第4主成分について賦活パターンを可視化したところ,第1主成分と第2主成分では主に右脳領域において賦活がみとめられたため,画質評価中は主に前頭前野の右脳領域が支配的に賦活していた.5つの評価項目に対してステップワイズ法を用い推定式の構築を行ったところ,重相関係数Rが0.6前後か,それよりも低い値を示していた.したがって,個人特性や品質に対する評価値は,脳血流の変化を利用することで推定できるといえ,従来のアンケートを用いる主観評価法とは異なり,言葉や評価尺度などを用いることなく画質評価が行えることを示した.8視点裸眼レンチキュラレンズ方式における3DCG画像の主観評価実験を行い,結果を統計的に考察した.実験結果から,静止画像と動画像,8視点と2視点,動きが激しいか穏やかであるかによって結果が分かれた.また,3DCGの動画像ではパラメータを少し変化させるだけで,視聴するのに大きく影響が出た.クラスター分析での評定者の比較では「エキスパート」と「一般」の評定者により分類することができた.画質評価で主に用いられるアンケートによる主観評価実験に代わる手法として,生体情報NIRS(Near-infrared spectroscopy)によって得られる脳血行動態について着目し,動画像を観察した被験者の脳血行動態が,その呈示された動画像の画質と関連性が見受けられるかの検証を行った.その結果,無圧縮動画像とQP26動画像には,主観評価も脳血行動態もあまり差が見られなかった.一方,無圧縮動画像とQP44動画像には有意な差があり,主観評価においても点数が低かった.以上のことから,画質が劣化するとoxy-Hbは上昇を見せ,動画像の品質の違いが与える主観品質と脳血行動態には関連性があり,その活動には有意差が示された.表情筋の筋電図を用いた静止画像の画質評価に関する研究を行った.符号化劣化の知覚による表情筋の変化を測定する実験を行い,画像の画質が変化した場合,目の周囲の筋肉において筋活動の増加が観察され,筋活動から画質の変化を推定可能なことを示した.提示画像を印象の強いものとし実験を行った結果,画像から受ける印象による表情の変化が大きく,画質による表情筋の筋電図の変化を測定できなかったが,表情の左側優位の傾向や快・不快の感情は測定することが可能であった.画質評価で主に用いられるアンケートによる主観評価実験に代わる手法として,生体情報NIRSによって得られる脳血行動態に着目し,動画像を観察した被験者の脳血行動態と画質との関連性の検証を行った.結果,無圧縮動画像と高圧縮動画像には有意な差があり,動画像の品質の違いにより主観品質と脳血行動態には関連性があった.符号化劣化の知覚による表情筋の変化を測定する実験では,画質が変化した場合,目の周囲の筋活動の増加が観察され,その筋活動から画質の変化が推定可能なことを示した.印象の強い画像で行った結果,画質による表情筋の筋電図の変化は測定できなかったが,表情の左側優位の傾向や快・不快の感情は測定できた.初年度は、符号化劣化を伴う静止画像を主な対象として、脳機能計測(NIRS、脳波)と生体計測(表情筋筋電、サーモグラフィ、視線カメラなど)の同時計測実験を実施した。併せて、数値や評価語による官能評価も同時に行った。この主観評価実験により得られた各種計測データによる客観的画質評価の可能性と有用性を精査するために、各種計測データに適合したデータ処理方法を検討した。脳機能計測としてNIRSと脳波を用い、刺激素材としては人間の視覚の空間周波数特性を測定する場合に用いる縞模様の画像、また、感情誘発(快適、嫌悪など)が生じるとされる静止画像を用いた。

画像の空間周波数がNIRSでの前頭葉脳血流に与える影響、脳波に与える影響について調査した。計測した脳波からα波発生量を信号処理により求め、人間の視覚の空間周波数特性との比較を行った。その結果、視覚の空間周波数特性とα波反応が正の相関を示す被験者と負の相関を示す被験者が存在した。高感度の空間周波数の縞模様刺激が、見えすぎて不快を感じる被験者は負の相関を示していた。NIRSを用いた実験では、嫌悪感を誘発する感情誘発画像と風景画像を用いて脳血流の反応を調査した。その結果、被験者ごとに反応が異なることが示された。また、NIRSを用いた実験結果の安定性を確保するために、同一刺激の繰り返し提示を行って、その反応の変化を調査した結果、4回程度の繰り返し提示のデータを平均化することで安定した実験結果が得られることを確認した。次に、他の生体計測として表情筋筋電についての検討を行った。符号化劣化が大きい劣化画像と原画像を提示し、積分筋電図(IEMG)を用いて表情筋筋電図の解析を行った。その結果、被験者が低品質画像を評価している間、皺眉筋や眼輪筋、前頭筋などに大きな筋活動がみられた。よって、主観評価値と表情筋筋電図の割合には高い相関性あった。研究課題「脳機能計測と生体計測の情報統合による多視点裸眼3DTVのユーザ体感品質測定」を遂行するために設定した研究目的のうち、脳機能計測(NIRS、脳波も可)により得られた各種計測データによる客観的画質評価の可能性と有用性を精査するために、各種計測データのデータ処理方法を検討することが、着実に行われている。符号化劣化を伴う静止画像と動画像についての実験もおこなっており、その成果は学会等でも公表している。また、数値や評価語による官能評価も同時に実施しており、被験者数を増やすことで有用性や汎用性への検討の準備を進めていることより、本年度以降の実験がスムーズに行えるような準備が行えている。研究課題「脳機能計測と生体計測の情報統合による多視点裸眼3DTVのユーザ体感品質測定」を遂行するために設定した研究目的のうち、脳機能計測(NIRS、脳波も可)と生体計測(表情筋筋電、サーモグラフィ、視線カメラなど)により得られた各種計測データによる客観的画質評価の可能性と有用性を精査するために、各種計測データのデータ処理方法を検討することが、着実に行われている。符号化劣化を伴う静止画像を対象として、脳機能計測(NIRS、脳波)と生体計測(表情筋筋電、サーモグラフィ、視線カメラなど)を同時に行っており、主観評価実験は順調に行われている。また、数値や評価語による官能評価も同時に実施している。これらの得られた計測データの信頼性と安定性に関する検討も着実に行っていることより、本年度以降の実験がスムーズに行えるような準備が行えている。24年度の実施計画と同様に、符号化劣化を伴った2眼式3DTVを3Dメガネの装着により視聴し、その時の脳機能計測(NIRS、脳波)と生体計測(表情筋筋電、サーモグラフィなど)を同時に行う。この時、ユーザ体感品質(Quality of Experience)測定をアンケート形式での官能評価で同時に行う必要があるが、我々の先行研究では「ユーザ体感品質=ユーザの満足度」と定義することの妥当性が検証されたので、この成果を利用して実験を進める。
高分子の合成と物性技術の連携による分子量分布の物性に対する本質的役割の解明

本研究では、高分子材料において最も根幹のパラメータである分子量分布が力学物性に与える影響を解明する。高分子材料の力学物性が分子量分布に依存することは知られているが、特に固体物性に関して分子量分布と力学物性の関係は経験的な理解に留まっている。本研究では分子量分布が非常に狭い高分子材料を重合し、これらの単分散試料をさまざまな分率でブレンドすることで分子量分布を自在に制御した試料を調製する。このような試料を用いることで、分子量分布内の各分子量成分が力学物性に与える影響を独立に評価することが可能となる。
重力波天文学による初期宇宙現象論の観測可能性

私の研究では、初期宇宙で生成されたかもしれない原始ブラックホール(Primordial Black Hole: PBH)や重力波の研究を通じて、素粒子物理の情報を引き出すことを目指しています。温度が数百GeV以上の初期宇宙は、現代宇宙論の未解決問題(暗黒物質の生成や粒子反粒子の非対称性など)に関わる重要な研究対象です。近年進展した重力波天文学は直接の光学観測が不可能な初期宇宙への観測手段として期待されています。私の研究では、初期宇宙におけるPBH形成などの現象の理解を素粒子論的な立場から進めていきます。
免疫応答におけるT細胞レセプター・クロノタイプ検出システムの確立と免疫病への応用

ヒトおよびマウスのT細胞レセプター(TCR)beta鎖について、そのクロノタイプ検出システムの確立をすすめた。方法としては当初行っていたPCRの為のCbetaプライマーに直接ビオチンを標識して、最終的にSSCPにてシグナルを検出をする方法は、PCR反応でTCR以外のシグナルをも増幅してしまうことから特異性の点で問題となった。そこでSSCP泳動後これをナイロンメンブレンに転写し、さらに内側に近接したCbetaプローブでハイブリダイズする方法を確立し、特異性を高めた。さらにバンドとして検出されるTCRクロノタイプの塩基配列決定は、バンドからのDNAの抽出と二次PCR反応の後直接シークエンス法を試みたが、再現性の良い決定は難しいことが判明した。そこで二次PCR産物をプラスミドベクターに組換えクローニングした後、シークエンスを行う方法にを行い、良好な成績を得た。実際の解析の結果では、ヒト、マウスともに、試験管内での特異抗原刺激により、それに反応するクロノタイプがCD4、CD8別にダイナミックに変わっていく状態を検出することが可能となった。またヒト健常人末梢血中のリンパ球はTCRbeta領のクロナリティーからみて限りなくヘテロの集団であるが、その中にCD8陽性のクローンが10個前後安定して存在することも判明した。健常人が感冒に罹患するとその末梢血中に集積しているクローンもダイナミックに変化し、CD4陽性T細胞は反応しクローンを形成する時間及び半減期ともに短く、CD8陽性T細胞は反応も遅いが、血中からの消失にも時間がかかることが明らかとなった。これらの結果をもとに、種々の疾患患者検体及びマウスモデルでのTCRクロノタイプの動きを検討中である。
パーリ仏教の思想的展開-経典註釈書の文献学的文析と思想史的位置づけ-

本研究は、スリランカ及び東南アジアに広がる南方上座部仏教が伝えるパーリ註釈文献を文献学的に分析して、その思想史的位置を解明することを目的としている。今年度は、次の三つの成果を得た。(1)ブッダゴーサの編集作業:南方上座部の学匠、ブッダゴーサの思想を分析した。ブッダゴーサは、主著、『清浄道論』(Visuddhimagga)を執筆するに当たって、ウパティッサ作『解脱道論』を下敷きにしており、『解脱道論』と『清浄道論』を比較することによって、ブッダゴーサが「三種の完全知」という概念を新たに導入し、「三種の完全知」を核として全体の構成を組み立てたことを明らかにした。(2)パーリ文献における『清浄道論』の思想史的位置:ブッダゴーサが導入した「三種の完全知」は、クッダカニカーヤ所収『義釈』(Niddesa)にはじめて現れる思想であり、もともと四諦説とは関係がなかったが、ブッダゴーサは「苦諦の完全知」を「三種の完全知」によって解釈し、四諦説に結び付けて『清浄道論』に導入したことを解明した。(3)部派仏教における『清浄道論』の思想史的位置:ブッダゴーサの「三種の完全知」は、四諦観察を修習の基本に据えつつ、その観察内容を「無常・苦・無我」の方向へ発展させているため、他部派の文献(『舎利弗阿毘曇論』、『発智論』、『成実論』)と並行した思想的変化を示していることを指摘した。本研究は、スリランカ及び東南アジアに広がるパーリ仏教が伝える経典註釈書(アッタカター)の思想史的位置を解明することを目的とし、経典註釈書の、(1)パーリ文献内部における思想史的位置と、(2)部派仏教全体の中における思想史的位置との二つの観点から調査・研究した。(1)パーリ文献内部における思想史的位置:パーリ経典から経典註釈書に到る過程での思想的展開を分析するためには、思想的に重要な用語に着目し、文献の成立順序に沿って、その意味内容の変遷を調査する必要がある。この研究方法の基礎作業となるのは、「パーリ聖典の編纂順序」を明らかにすることである。本研究は、パーリ経典註釈書の分析を通して、パーリ文献の編纂順序を解明した(研究発表(1)(3)(4))。この結論によって、今後、パーリ文献内部における思想的変遷を一定程度の客観性を維持しながら解明することができるようになった。(2)部派仏教における思想史的位置:パーリ経典註釈書の思想史的位置を他部派の観点から検証するためには、パーリ文献とは別系統の伝承とパーリ経典註釈書とを比較する必要がある。パーリ経典と起源を共有しつつも、インドからスリランカに伝えられたパーリ経典とは異なり、インド本土で伝承され中国で漢訳された北伝阿含経は、パーリ文献との比較対象として資料的価値の高い文献である。本研究は、すでに、仏教思想史上、重要な概念である「二十二根」を説く経典を、北伝阿含の一つ、『雑阿含(相応アーガマ)』に同定し、北伝阿含とパーリ文献における「二十二根」説を比較することによって、両者の思想史的位置を明らかにした。今後、同様の方法によって、パーリ文献と漢訳阿含の関係をさらに明らかにし、最終的にインド仏教思想史におけるパーリ仏教の位置を解明することができると考えている。