hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
植物ホルモン応答シグナル伝達に関わるリン酸リレー二成分制御系

サイトカイニン受容体のタンパク質ヒスチジンキナーゼCRE1とサイトカイニン応答転写因子(タイプB)ARR1とが植物個体において実際に共通の細胞内シグナル伝達系を構築していることを、CRE1欠損がARR1の活性化により抑制されことで確認した。またin vitro系においてCRE1が自己リン酸化反応を行い、そのリン酸基をHPt介在因子(AHPs)を介してARR1へ転送し、原核生物と同様のHis-Aspリン酸リレーが起こることを示した。次いで、ARR1の直接の標的遺伝子を網羅的に探索し、10種全ての非転写因子型(タイプA)応答因子、転写因子群、サイトカイニン代謝酵素、病傷害応答性タンパク質など多種多様なタンパク質群をコードする遺伝子を同定し、その大部分がサイトカイニン初発応答遺伝子であることを明らかにした。また、各標的遺伝子に対するARR1の寄与にはばらつきがあり、タイプB応答因子群が機能的に重複しているものの、各標的遺伝子に対する優先度に差異があることも示した。これらの結果は、サイトカイニン初発応答遺伝子群のほとんど全てがタイプB応答因子群によって転写誘導され、このHis-Aspリン酸リレー制御系以外のサイトカイニンシグナル伝達系は、少なくともシロイヌナズナには存在しないことを示唆している。さらにCRE1欠損の抑制実験から、疑似HPt介在因子AHP6がサイトカイニンシグナル伝達を抑制することによって維管束形成に重要な役割をはたしていることを示した。このAHP6による抑制は介在HPt因子との拮抗作用によるものと考えられ、介在HPt因子がCRE1とARR1とを介在していることをさらに強く示唆している。(1)サイトカイニンによって活性化されるARR1(転写因子型応答因子)の直接標的遣伝子を網羅的に解析するたあ、ステロイドホルモンで人為的に活性化できる改変ARR1を利用して、これまでMicroarray法によって解析してきた。しかし転写量に少なくとも2倍以上の差異がないと有意な結果が得られにくいことが判明した。今回新たに、HiCEP法を利用して1.3倍程度の差異を検出することで標的遺伝子を探索する実験系を確立し、これまでに知られている非転写因子型応答因子遺伝子以外に、幾つかのMyb、bHLH、AP2、GATAタイプの転写因子やP450、感染防御関連タンパク質、代謝関連酵素をコードする遺伝子群が標的候補として得られた。これらのうちの一部は、タンパク質合成阻害条件下でのステロイドホルモン誘導実験からARR1の直接標的遺伝子であることを確認した。(2)シロイヌナズナにはARR1と類似の転写因子型応答因子が11種類存在するがそれぞれがサイトカイニン応答にどの程度寄与しているかを明らかにするために、ARR1の活性化あるいはARR1遺伝子の欠損によって各非転写因子型ARR遺伝子のサイトカイニン誘導がどのように影響されるかを解析した。その結果ARR1は全ての非転写因子型ARR遺伝子のサイトカイニン誘導を引き起こす潜在能力を有するが、植物固体内で実際にARR1が発現誘導に寄与する程度はそれぞれの非転写因子型応答因子遺伝子間で異なっていた。今後この差異がARR1とそれぞれのプロモーター領域との親和性の違いによるのか否かを明らかにする予定である。(3)サイトカイニン受容体からARR1へのシグナル伝達の実体がリン酸リレーであることを確認するためin vitro系を開発途中である。それぞれのタンパク質成分を大腸菌で過剰発現させることを試みたが膜結合ドメインを含むタンパク質については満足する結果が得られていない。さらに昆虫培養細胞の系で過剰発現する系を開発中である。(1)昨年度Microarray法およびHiCEP法を利用して、サイトカイニン応答転写因子ARR1の直接標的と同定された遺伝子についてその上流部分を解析したところ、in vitro実験でARR1がDNA結合する特異配列(G/A)GAT(T/Cが有意に高頻度で現れることを確認した。標的遺伝子の一つARR6のプロモーター領域のDNAフラグメントを利用してゲルシフト法で解析したところ、上記特異配列を含む断片がARR1によって認識されることを確認した。

現在、in vivoでもこれら配列がARR1を介したサイトカイニン誘導に必要か否かを解析中である。(2)サイトカイニン受容体CRE1の欠損株wolでは維管束細胞が極度に減少している。これは維管束細胞の生成に必要な平層前形成層での細胞分裂が起こらず(サイトカイニン応答の低下による)protoxylemへと分化して留まっていることによる。さらにwolの影響を抑制する変異株を分離したところAHP6遺伝子欠損を得た。wol ahp6二重変異株では維管束細胞が増加し、前形成層や篩部細胞が生じた。AHP6遺伝子の発現がサイトカイニンによって抑制されることから、AHP6はサイトカイニンシグナル伝達を抑制(AHP1-5との拮抗作用による)することによってprotoxylemへの分化を規定し、AHP6がサイトカイニンシグナル伝達の制御回路を形成し、維管束生成に重要な役割をはたしていることが明らかになった。(3)サイトカイニンシグナル伝達に関わる二成分制御系タンパク質それぞれを大腸菌あるいは昆虫細胞で過剰発現させることを試み、一部分は生化学反応が可能な程度まで過剰発現した。サイトカイニンによって活性化される応答因子型転写因子ARR1を植物個体内で人工的に活性化し、ARR1の標的遺伝子を、Microarray法、HiCEP法、およびNorthern解析により網羅的にスクリーニングした。その結果、ARR1は様々な制御機能を有するタンパク質群の遺伝子(23ヶ)の転写誘導にかかわることが明らかになった。これらのほとんどがサイトカイニンの初発応答遺伝子であり、また少なくとも17遺伝子に関しては、arr1-1変異株中でのサイトカイニン応答が低下した。この低下の程度は標的遺伝子によってばらつきがあった。以上の結果から、ARR1を含むタイプB-ARR応答因子(シロイヌナズナでは全部で11種存在)がサイトカイニン初発応答遺伝子のほとんど全ての転写誘導に関わっていることが明らかとなった。これまで植物のサイトカイニン応答生理反応が非常に多岐にわたっていることから、CRE1を含む3種の受容体ヒスチジンキナーゼからARR1を含む11種のタイプB-ARR応答因子へのシグナル伝達以外のサイトカイニンシグナル伝達経路の存在の可能性が云われてきたが、本研究によりそのような可能性は非常に低く、もし存在しても極めて限られた応答にのみ関わっていることが明瞭に示された。23ヶの標的遺伝子群は、これまでに報告されているタイプA応答因子群、サイトカイニン代謝酵素群、病傷害応答タンパク質群などをコードしている。また、サイトカイニンの代表的応答である細胞分裂に関わる遺伝子であるCDKAやCYCD3はARR1の標的遺伝子でないこともわかった。さらに、標的遺伝子の1ヶ、ARR6のプロモーター領域にARR1が結合し、その結合にはin vitroでARR1の結合配列として同定した配列(G/A) GAT (T/C)が含まれていることをゲルシフト法で示した。
新しい固体電子論に基づく種々の構造相転移の系統的基礎研究

この期間に行った研究は主として二つに分けられる.その各々について成果を以下にまとめる.第一の分野は低次元系の電子論の問題である.不整合電荷密度波(CDW)の電子状態,特にそのエネルギー・ギャップ構造を研究し,不整合状態に特有するギャップ構造を見出した.それとの関連で磁場下のCDWの振舞・数学的に上と同じ構造を持つスピン・パイエルス系の磁場下での不整合状態について解析を行った.更に準周期系の電子状態を数値計算をまじえて考察し,不整合相との関係を調べた.一次元準周期系に於ける局在の問題を固有値の分布の面から調べ,周期系とも異なる新たなべき則に従う分布則を見出した.第二の研究分野は重い電子系の超伝導である.通常のタイプとは異なる超伝導状態がこの系では観測されているが,その状態を解明すべく若干の考察を行った.特に重点を置いた点は反強磁性状態と超伝導との関連,並びに対称性の議論による超伝導状態の分類である.更に両者を組合わせることによってUPt_3で現れている超伝導状態の可能な型を絞り込むことである.重い電子系である上記UPt_3,又UBe3, URu2, Si2等について個々に同様の考察を行い可能な超伝導の型の予測を行った.予測の正否については今後の実験を待たねばならない.最近の高温酸化物超伝導体は重い電子系と電子相関の強い系という意味で共通性を有している.その面から高温超伝導の機構を提案した.この期間に行った研究は主として二つに分けられる.その各々について成果を以下にまとめる.第一の分野は低次元系の電子論の問題である.不整合電荷密度波(CDW)の電子状態,特にそのエネルギー・ギャップ構造を研究し,不整合状態に特有するギャップ構造を見出した.それとの関連で磁場下のCDWの振舞・数学的に上と同じ構造を持つスピン・パイエルス系の磁場下での不整合状態について解析を行った.更に準周期系の電子状態を数値計算をまじえて考察し,不整合相との関係を調べた.一次元準周期系に於ける局在の問題を固有値の分布の面から調べ,周期系とも異なる新たなべき則に従う分布則を見出した.第二の研究分野は重い電子系の超伝導である.通常のタイプとは異なる超伝導状態がこの系では観測されているが,その状態を解明すべく若干の考察を行った.特に重点を置いた点は反強磁性状態と超伝導との関連,並びに対称性の議論による超伝導状態の分類である.更に両者を組合わせることによってUPt_3で現れている超伝導状態の可能な型を絞り込むことである.重い電子系である上記UPt_3,又UBe3, URu2, Si2等について個々に同様の考察を行い可能な超伝導の型の予測を行った.予測の正否については今後の実験を待たねばならない.最近の高温酸化物超伝導体は重い電子系と電子相関の強い系という意味で共通性を有している.その面から高温超伝導の機構を提案した.1.不整合電荷密度波状態の研究:一次元電荷密度波の基底状態を電子数の関数として数値計算をまじえて調べた。特に電子数の充満度が無理数に近い有理数である場合ソリトン格子状態が安定になることを示した。又不整合性に特徴的なギャップ構造の存在を明らかにし、準一次元系の実験(【Ko_3】Mn【O_3】,Ta【S_3】)との対応を考察した。バンド構造を電子数の関数として見ると入れ子形の自己相似な様子をしていることを示した。2.準周期性及び不整合性と電子状態:上述の課題と関連して、準周期性を有する一次元系の電子状態を考察した。系はアモルファスでも完全結晶でもない。電子状態はそれに対応し局在でも非局在でもなく中間の臨界状態にあることを系の固有値分布の分岐則と準位間隔の分布則が巾則で与えられることから明らかにした。3.重い電子系の超伝導:電子質量の重い系(U【Be_(13)】等)に見られる特異な超伝導を深る目的でスピン軌道相互作用の弱い極限でのP-波超伝導状態の可能な型を群論的に求め分類した。逆の極限ではギャップのゼロ点が線状になる状態は存在しなかったがそれが有り得ることを示した。実験的に知られている線状ギャップ,ゼロの状態が我々の得たP-波状態か否かは現在のところまだ明らかになっていない。4.超伝導とスピン密度波(SDW)状態:重い電子系(【U_1】-xThx)Beisで観測された超伝導状態下の第二の相転移をSDWとして解釈できる可能性を指摘した。実際この系ではギャップが線状で消失しているので超伝導下でも正常状態にある電子が残存する。その電子が強いクーロンな力相互作用を利用してSDWへ転移することが可能であることを簡単なモデルを用いて示し、逆にそれを可能ならしむ超伝導の対状態の型についての推測を行った。
遺伝子発現プロファイルを用いた生薬のフィンガープリント作成とターゲット分子の同定

本研究では近年登場したDNAマイクロアレイ技術により、天然生薬構成成分のターゲット遺伝子を同定し、各成分の生物学的作用をプロファイリングすることにより、「whole drugとしての生薬とpurifyされた各成分の作用がどのように違うのか?」といった問題の解決をin silicostudyで行うことである。この8株に対し、生薬黄連と主成分berberineのターゲット遺伝子のスペクトルを検討した。すなわち、感受性(ID50)とその発現が相関する遺伝子の同定を行ったところ、一部の遺伝子は生薬黄連と主成分berberineの共通のターゲットであることが判明し、Int.J.Cancer 107:666-672,2003.にて報告した。2.黄連構成成分である(berberine, palmatin, groenlandicine, epiberberine, coptisine, berberrubine, columbamine, tetrahydroberberine)を用いて、その増殖抑制効果をMTT assayにて検討し、各ID50と発現量の相関する遺伝子をリストした。これらのID50に基づきクラスター解析を行ったところ、生薬黄連とberberineがひとつのクラスターを形成し、残りの7成分が別のクラスターを形成した。この結果により、一成分であるberberineのみで生薬黄連の薬効を説明できるものでであり、その結果を論文として発表した(Life Sciences in press)。3.その他、当該研究期間中にDNAマイクロアレイ研究として英文(17報:Impact Factor合計78.714)・和文(3報)を発表した。本研究では近年登場したDNAマイクロアレイ技術により、天然生薬構成成分のターゲット遺伝子を同定し、各成分の生物学的作用をプロファイリングすることにより、「whole drugとしての生薬とpurifyされた各成分の作用がどのように違うのか?」といった問題の解決をin silico studyで行うことである。本研究では近年登場したDNAマイクロアレイ技術により、天然生薬構成成分のターゲット遺伝子を同定し、の生物学的作用をプロファイリングすることにより、「whole drugとしての生薬とpurifyされた各成分の作用がどのように違うのか?」といった問題の解決をin silico studyで行うことである。1.我々は、まず、ヒト肝癌におけるDNAマイクロアレイ解析にて、アルゴリズムの開発・整備を行い多くの論文でその有用性を報告した(Lancet 2003, 0ncogene 2003, FEBS lett.2003, Int J Oncol 2004)。すなわち、感受性(ID50)とその発現が相関する遺伝子の同定を行ったところ、一部の遺伝子は生薬黄連と主成分berberineの共通のターゲットであることが判明し、Int J Cancer(2003)にて報告した。すなわち、感受性(ID50)とその発現が相関する遺伝子の同定を行ったところ、一部の遺伝子は生薬黄連と主成分berberineの共通のターゲットであることが判明し、Int.J.Cancer 107:666.672, 2003.にて報告した。
コラーゲン様構造をもつ動物レクチンの遺伝子発現の調節

ウシ血清中に存在し、N-アセチルグルコサミンに特異的なCa^<2+>依存性動物レクチンであり、分子内のコラーゲン様構造をもつコングルチニンの生物学的意義を遺伝子レベルで明らかにするために、本レクチンの遺伝子発現調節機構を解析した。1)コングルチニンゲノム遺伝子の5'-上流調節領域の塩基配列の決定。我々がすでに明らかにしているコングルチニンcDNAの構造に基づき合成したオリゴヌクレオチドプライマーを用い、PCR法によるジーンウォーキング法により、コングルチニン遺伝子の5'-上流域をクローニングし、その塩基配列を転写開始点より約700bp上流まで決定した。2)レポーター遺伝子を用いた転写制御配列の解析。コングルチニン遺伝子の5'-上流域全長(700bp)、その5'-末端側を段階的に欠失させた変異体、および部位特異的変異体を作成し、ルシフェラーゼレポータープラスミドに組み込んだ。これらのコンストラクトを培養肝細胞HepG2にトランスフェクトし、ルシフェラーゼ活性測定によりプロモーター活性を測定し、転写制御部位を解析した。その結果、転写開始点より200bp上流近辺に正の転写制御配列(シスエレメント)が存在し、これは転写開始点より158bp152bp上流に存在するAP-1配列と協調的に働いていることが明らかとなった。3)ゲルシフトアッセイおよびフットプリント法による転写制御部位の解析。HepG2細胞およびウシ肝細胞の核タンパク質抽出液を用いて、ゲルシフトアッセイを行い、制御部位を解析した。その結果、上記の-200bp近辺の正のシスエレメントおよびAP-1配列に結合する転写調節因子(トランス因子)が核タンパク質抽出液中に存在することを明らかにすることができた。次に、DNアーゼIフットプリント法により、核タンパク質中の正のトランス因子の結合部位が-180bp付近であることを確認することができた。コングルチニンはウシ血清中の、N-アセチルグルコサミンに特異的なC型動物レクチンである。本レクチンは分子内にコラーゲン様構造を含む特徴的なタンパク質であり、最近その生物活性が注目されている。本研究は、コングルチニン遺伝子の発現調節機構を解明することにより、その生物学的意義を明らかにしようとするものである。今回は、まず、コングルチニン遺伝子の5′-上流調節領域の構造を明らかにし、次に、レポーター遺伝子を用いて、この5′-上流域のプロモーター活性を測定し、転写調節部位の解析を行った。我々がすでに明らかにしたコングルチニンのcDNA塩基配列に基づいて合成した特異的オリゴヌクレオチドプライマーを用い、ベクターライゲーションPCR法によるジーンウォーキング法により、コングルチニン遺伝子の5′-上流域の塩基配列を転写開始点より約700bp上流まで決定した。次に、この領域の5′-末端側から段階的に欠失させた変異体をPCR法および制限酵素消化により作製し、これらをルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子とするプラスミドに組み込み、コンストラクトを作製した。これらのコンストラクトを培養肝細胞HepG2にトランスフェクトし、一過性に発現したルシフェラーゼの活性を測定することにより、コングルチニン5′-上流域断片のプロモーター活性を解析した。今回、全長を含め種々の長さ(-741bp-49bp)の13断片のプロモーター活性を測定したところ、転写開始点より約200bp上流近傍の近位プロモーター領域に転写を促進的に制御する配列が、また350bp200bp上流の間に転写を抑制的に制御している配列が存在することが明らかとなった。

コングルチニンはウシ血清中の、N-アセチルグルコサミンに特異的なC型動物レクチンであり、分子内にコラーゲン様構造を含む特徴的なタンパク質である。本研究は、コルグルチニン遺伝子の発現調節機構を解明することにより、その生物学的意義を明らかにしようとするものである。すでに平成7年度研究において、コルグルチニン遺伝子の5′-上流調節領域の塩基配列を転写開始点より約700bp上流まで決定し、ルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いて転写調節部位の解析を予備的に行った。平成8年度は、プロモーターアッセイ、ゲルシフト法、DNaseIフットプリント法により、転写調節部位を詳細に解析した。その結果、次の14を明らかにすることができた。1.コルグルチニン遺伝子の5′-上流域の5′-末端側から段階的に欠失させた変異体、および部位特異的変異体を作成し、これらのDNA断片をルシフェラーゼレポータープラスミドに組み込んで作成したコンストラクトを培養肝細胞HepG2にトランスフェクトした。一過性に発現したルシフェラーゼの活性測定により、プロモーター活性を解析した。その結果、転写開始点より約200bp上流近傍に転写を促進的に制御している配列が存在することがわかった。2.ゲルシフト法により、上記の正のシスエレメントに結合するトランス因子がHepG2細胞およびウシ肝細胞の核タンパク質抽出液中に存在することが確認できた。3.フットプリント法により、上記のトランス因子の結合部位は-181bp-174bpであった。4.-158bp-152bpに存在するAP-1配列も、正の転写制御配列として働いており、これは、-180bp近辺の正のエスエレメントと協調的に働いていることがわかった。さらに、核タンパク質がこのAP-1配列に結合すること、およびその結合部位をそれぞれゲルシフト法およびフットプリント法で確認した。以上のように、コングルチニン遺伝子の5′-上流域の近位プロモーター領域の転写制御部位の詳細を明らかにすることができた。
ウィリアム・ワーズワースの詩における古物研究

本研究の目的は(1)ウィリアム・ワーズワースの詩における古物研究の影響を調査すること(2)彼の生涯と作品における古物研究とワーズワースの旅行の関係を詳しく調べることです。研究ではワーズワースの詩には全体を通して古物研究の影響がみられるが、その価値については矛盾する表現があることが分かりました。また、彼の旅行と古物研究に対する態度の間に動的関係が存在すると結論付けました。今後の研究では、古物研究のみならず、スコラ哲学・自然哲学(近代科学)・「巨匠」の性格といった観点から、ルネッサンス18世紀にかけて興った知的文化でのワーズワースの詩の役割をより広く解明することが必要です。平成25年度の研究はすべて予定通り完了した。平成25年度の主な課題は出版社に提出するために書籍の二つの章を準備することであったが、この二つの章は予定通り平成26年10月に出版社に届けられる予定である。研究進捗状況の具体的な成果を実証するために、この二つの章は学術誌にも発表している。従って平成25年度の具体的な研究実績には招待講演が一つと雑誌論文が二つ、含まれることになる。具体的に言うと、修正した第5章の一部は国際基督教大学の「Humanities」という学術誌に掲載され、さらに新しい第6章の一部については「Wordsworth Summer Conference 2013」という国際学会で基調講演として発表し、論文集「Grasmere 2013」に採録されている。さらに、当初の予定どおりイタリアでワーズワースの大陸旅行に関する調査を実施したが、この研究には二つの目的があった:(1)平成24年度に刊行した「Oxford Handbook of William Wordsworth」の中の「Itinerant Wordsworth」というタイトルの章に関して、編集者の依頼により追加調査を実施すること。(2)研究代表者による関連書籍「Romantic Curiosities」の第7章(「ワーズワースの大陸旅行詩における古物研究」という章)に追記できる材料を提供すること。イタリアでの調査の後、前者は平成25年10月に編集が完了し、後者については(特にウンブリアの修道院とピサの古物とコモ湖の環境の新発見に基づいて)実質的研究成果が得られたところである。これらの新しい研究成果は調査を依頼してきたPalgrave UK出版社にすでに伝わっている。平成24年度の研究の主な課題は英国で出版予定の本の二つの章を出版社による審査のために改訂し、それを提出することだった。求められた改訂が多かったので、昨年の夏は英国の国際会議に出席せずに日本でこの二つの章に関して研究し、書き直して昨年の10月に書き終え、11月に提出した。5ヶ月後の今年4月に出版社からこの本を出版することに興味があるという返事をもらったが、最終決定の前に更に二つの章を見てみたいと言ってきた。一つは第5章「The Excursionにおける古物研究的表現と隠喩」で草案してあるが、かなりの手直しが必要と思われる。もう一つは第6章:「ワーズワースのソネットにおける古物研究」である。この章は「Wordsworth Summer Conference 2013」で発表するために予定通り完了させるつもりである。この修正した5章と新しく加えた6章は今年の10月に出版社に提出予定である。上記とは別に平成24年度には3つの具体的な研究成果があった。(1)研究計画で述べたように「Wordsworth Winter School」の国際会議に出席し、基調講演をした。この講義内容は平成25年2月に日本で出版される予定である。(2)ワーズワースの旅行についての一つの記事を日本の学術誌に発表した。この記事は研究本の第1、6、7章の研究を利用した。(3)第7章のワーズワースのイタリア旅行に関する章の研究は「Oxford Handbook of William Wordsworth」のために執筆している`Itinerant Wordsworth'という章に組み込まれた。この本はまだ出版していないが、今回の章はこの科研費実績に含めることができる。この章に関連して、Oxford University Pressから「旅行者と収集家としてのワーズワース」のテーマで執筆依頼が来る可能性がある。英国の「Palgrave Macmillan」という出版社はこの本を出版することに関心を示している。平成25年11月までにあと二つの章を出す予定であるが、その章の半分はすでに執筆済みで、残る半分も原稿はできている。本が実際に印刷されるまでにどの位かかるか予測することは難しいが、この2年プロジェクトのゴールは原稿を書き終え、出版社との契約を取ることである。私の研究はこのゴールに向かって予定通り進んでいるので、現在までの達成度は「おおむね順調に進展している」と言える。平成25年度には、本を予定通りに完了するために、多くの研究と執筆が必要であると予想される。従って平成25年度の具体的な研究実績には招待講演が一つと1、2の雑誌論文が含まれると思う。

その本の出版契約が確定することが25年度の研究推進の最大の結果となるはずである。次年度の主な研究費:(1)「Wordsworth Summer Conference 2013」という国際会議出席の為の旅費(2)出版社の依頼による本の第6、7章更なる研究の為、イタリアへの旅費。平成25年2月に別の研究の為に大英図書館訪問が必要になる可能性があるが、これは他の大学助成金によって賄われることになるかもしれない。「Wordsworth Summer Conference 2012」に出席できなかったので、平成24年研究費の未使用額がある。未使用額は平成25年度の海外出張旅費に加えて使用する。
バナメイシュリンプにおける抗菌剤の残留性と調理による影響

本研究は輸入食品の安全確保を目的として、代表的な輸入エビであるバナメイシュリンプ養殖における抗菌剤使用評価についての基礎研究である。バナメイシュリンプはタイ国産を用い、評価対象の抗菌剤としてオキシテトラサイクリン(OTC)及びオキソリン酸(OA)を使用した。本研究はタイ国農務省水産局との協働で行われた。供試エビに抗菌剤をサイナス(静脈)内及び経口投与し、体内動態及び残留性を調べた。OTCは殻に高濃度長期間残留し、OAでは投薬量を多くするとバイオアベイラビリティ(生体内利用率)の低下が明らかとなった。加熱調理では残留抗菌剤を完全に分解消失させることはできないと判断された。【目的】本研究ではバナメイシュリンプ(Litopenaeus vannamei)における抗菌剤のオキシテトラサイクリン(OTC)及びオキソリン酸の残留特性を明らかにし、これらの残留抗菌剤が加熱調理によって、どのような影響を受けるのかを調べることを目的とする。本年度はOTCの分析法の検討を行い、さらに、タイ国にて飼育されたバナメイシュリンプ(バナメイ)にOTCをサイナス内投与及び経口投与して、それらの体内動態を調べた。【方法】バナメイの飼育・投薬実験についてはタイ国立チャンタブリ水産研究所で行い、平均体重247gのバナメイを実験に用いた。分析法の検討:試料として血リンパ1ml、筋肉1g及び殻0.5gを実験に用いた。血リンパについてはハイセップカラム(スペルコ社製)を用い、蛍光法による直接注入法によって分析を行った。筋肉及び殻についてはSep-Pak C18による固相抽出法によって分析を行った。サイナス内投与:OTCを滅菌PBSに1%となるように溶解し、27G注射針を装着したマイクロシリンジにより腹部サイナス内に投与した。経口投与:OTCの投与量が10mg/kg(10mg投与区)及び50mg/kg(50mg投与区)となるように餌料に混ぜ、ディスパーサーでペーストにした後、カテーテルを用いて強制投与した。投薬後、所定時間ごとに5尾ずつ取り上げ、血リンパ、筋肉及び殻を採取し、分析に供した。データをWinNonlin ver1.1(Scientific Consulting, Inc., USA)により解析した。【結果】本分析法による回収率は血リンパ:99.4±0.5%、筋肉:85.5±3.6%、殻:85.1±3.3%であった。それらの定量限界は血リンパ:0.02ppm、筋肉:0.008ppm、殻:0.01ppmであった。サイナス内投与におけるOTCの体内動態はtwo-compartment open modelにより解析され、得られたモデル式は、Ct=29.2exp(-3.249t)+10.9exp(-0.0588t)であった。その分布容及びクリアランスはそれぞれ839mL/kg及び51.6mL/kg/hであり、分布・排泄はともに速かった。一方、経口投与における体内動態はNoncompartment法により解析した。最高濃度、最高濃度到達時間及び消失半減期は次のとおりであった。「10mg投与区」:3.37μg/mL、7h及び15.0h、「50mg投与区」:17.4μg/mL、10h及び11.5h。バイオアベイラビリティ(BA)は「10mg投与区」で48.2%、「50mg投与区」では43.6%と算出され、投与量が多くなるとBAはやや低下した。【目的】本研究ではバナメイシュリンプ(Litopenaeus vannamei)における抗菌剤のオキシテトラサイクリン(OTC)及びオキソリン酸(OA)の残留特性を明らかにし、これらの残留抗菌剤が加熱調理によって、どのような影響を受けるのかを調べることを目的とする。本年度は昨年度OTCを経口投与した筋肉及び殻の分析を行い、さらに、タイ国にて飼育された供試エビにOAをサイナス内投与及び経口投与して、血リンパを採取・分析した。得られた結果からバナメイシュリンプにおけるOTC及びOAの体内動態を解析した。【方法】筋肉及び殻におけるOTCの分析については、Sep-Pak C18による固相抽出法によりクリーンアップした後、蛍光HPLC法により行った。供試エビにおけるOAのサイナス内投与及び経口投与を次の通り行った。飼育・投薬実験:タイ国立チャンタブリ水産研究所で飼育及び投薬実験を行った。平均体重26.2gの試料エビを実験に用いた。サイナス内投与:1%オキソリン酸水溶液を調製し、27G注射針を装着したマイクロシリンジにより腹部サイナス内に投与した。

経口投与:オキソリン酸の投与量が10mg/kg(10mg投与区)及び50mg/kg(50mg投与区)となるように餌料に混ぜ、ペーストにした後、カテーテルを用いて強制投与した。投薬後、所定時間ごとに5尾ずつ取り上げ、血リンパ、筋肉及び殻を採取した。分析法:試料として血リンパ1mlを実験に用いた。血リンパについてはHisepカラム(スペルコ社製)を用い、蛍光検出による直接注入法で分析を行った。【結果】経口投与におけるOTCの動態をNoncompartment法により解析した。筋肉における0TCの最高濃度、最高濃度到達時間及び消失半減期は次のとおりであった。「10mg投与区」:0.96μg/mL、7h及び19.4h、「50mg投与区」:3.00μg/mL、10h及び15.4h。殻におけるOTCはサンプリング終了時(120h)まで高濃度残留した。OAのサイナス内投与における動態はtwo-compartment open modelにより解析された。その分布容及びクリアランスはそれぞれ1359mL/kg及び29.9mL/kg/hであった。【目的】本研究ではバナメイシュリンプ(Penaeus vannamei)における抗菌剤のオキシテトラサイクリン(OTC)及びオキソリン酸(OA)の体内動態及び残留特性を明らかにし、これらの残留抗菌剤が加熱調理によって、どのような影響を受けるのかを調べることを目的とする。本年度は昨年度OAを経口投与した筋肉及び殻の分析を行い、バナメイシュリンプにおけるOAのバイオアベイラビリティ、分布、排泄及び残留特性について検討した。さらに、残留する筋肉及び殻について「茹でる」、「焼く」、「揚げる」の加熱調理を行い、残留する抗菌剤の消長を調べた。エビ殻は酸・アルカリ処理されて、キチンに調製されている。それ故、酸・アルカリ処理によるエビ殻残留抗菌剤の消長についても検討した。【方法】供試エビにはタイ国産バナメイシュリンプを用いて、チャンタブリ水産研究所で飼育・投薬実験を行った。筋肉及び殻におけるOAの分析をBond Elut C18による固相抽出法によりクリーンアップした後、蛍光HPLC法により行った。得られたデータをWinNonlin (ver.1.1)により解析した。抗菌剤が残留する組織について加熱調理(茹でる、焼く、揚げる)を行い、調理後、それらをHPLC分析に供した。残留エビ殻をHCl及びNaOHで処理後、HPLC分析に供して残留濃度を求めた。【結果】筋肉におけるOAの最高濃度、最高濃度到達時間及び消失半減期は次のとおりであった。「10mg投与区」:0.31μg/g、4h及び23.8h、「50mg投与区」:2.02μg/g、4h及び22.5h。一方、殻における最高濃度、最高濃度到達時間及び消失半減期は「10mg投与区」:3.08μg/g、7h及び24.6h、「50mg投与区」:11.29μg/g、4h及び22.4hであった。残留OAは茹でることにより、4065%程度消失したが、焼く及び揚げるの加熱調理では、筋肉で10%、殻で2035%程度の消失であった。殻中の残留OAはアルカリ処理で70%程度の消失が認められ、酸処理でも60%の消失が認められた。
グローバル合理化段階における多国籍企業の国際的業際標準化と新市場形成の研究

本研究の成果の一端として、アジア新興国の多国籍企業による特許増加の要因には、先進国の外国人発明者を雇用し、その開発力を活用することによって、急速に先進国企業と同等の技術開発力を有しているのではないかという仮説のもと研究を行った。本研究からは、アジア新興国の多国籍企業が先進国にR&D拠点を置きながらも国内発明者に大きく依存していることが示された。これは、R&D拠点の役割として未だ発展初期段階であると想定されるが、アジアの日本企業においても国内発明者の割合が極めて高い傾向が見られることには、可能性として研究開発のコミュニケーションにおける問題が考えられるのではないか。本研究の2年目にあたる平成24年度は、新興国の研究開発(R&D)に注目して研究調査を行った。とりわけ、中国などの新興国の特許出願数が先進国のそれを追い抜くほどに急増しており、その要因を分析した。その成果報告の場として、2012年6月IABE学会(イタリア)、2012年7月多国籍企業学会(創価大学)、2012年7月国際ビジネス研究学会(早稲田大学)、2012年10月東アジア経営学会国際連合(中国)にて研究報告を行った。また、論文としては、荒井将志・楊陽(2013)「アジア新興国多国籍企業の技術開発力とR&D人材--特許分析による開発人材の国際比較研究--」『アジア経営研究』第19号、2013年6月、(査読有り)(掲載決定済み)およびなお、4年間の本研究の進捗状況としては、概ね計画通りに進んでいる。しかし、より研究における新発見やインパクトという面においては、残り2年間でさらなるチャレンジと研究の深化をしなければならないと考えている。本研究は、企業がグローバルに活動し、バリューチェーンが合理的に配置されてゆく段階において、多国籍企業の新しい活動を分析し、とりわけ先進国多国籍企業と新興国企業間における標準化がどのように戦略的に活用され、新しい市場が形成されるのかを考察するものである。本研究3年目となる平成25年度の計画は、(1)文献サーベイや学会に参加によって、さらなる理論研究の深化を図ること、(2)現地調査、(3)研究報告、(4)論文執筆、を予定していた。まず、文献サーベイはもちろんのこと、国内外の学会に参加し、意見交換などから多くの知見を得ることができた。次に、調査では、主に新興国を調査した。フィリピンやベトナム、ハンガリーやトルコといった国々の現地企業は、まだグローバル競争力に乏しく、先進国多国籍企業がこうした市場へ積極的に進出しつつある。一方で、このような国々の市場は、政治的、宗教的、あるいは経済的要因に強く影響を受けていた。研究の成果は、国内外の学会およびワークショップにおいて研究報告を行った(多国籍企業学会,関東部会5月例会、AJBS, 26th Annual Conferenceなど)。さらに、新興国調査に関する共同執筆論文1本をまとめることができた。本研究における今年度の目的は、「グローバリゼーション」の理解と再検討であった。すなわち、2000年頃からのICT革命は、一旦はITバブルの崩壊によってそのビジネス的なインパクトは予想よりも小さいのではないかという論調がみられたものの、それから約10年が経ち、現在確認される状況は、ICTがもたらすグローバル合理化と多様化である。本年は、本補助金の4年間の研究期間の1年目であり、重視したことは、先行研究のサーベイであった。特に国際経営論における「グローバリゼーション」に関する文献サーベイを中心に行った。グローバリゼーションを取り上げる文献は、国内外に数多くあるが、その中でも標準化という視点から先行研究を見てゆくことによって、問題の所在や位置を明確化するとともに、本研究の意義を再確認していった。交付申請書に記載したとおり、本研究が着目している点は、グローバリゼーションにおける従来型の現地子会社を通じた企業の内部プロセスの標準化のみならず、業際的なグローバルな他企業との協調を通じたグローバル合理化である。このような論点はこれまでの既存研究では見られない点である。なぜならば、従来では技術的にも制度的にも実現が困難なものであって、今日の新しい環境でこそ実現可能となり、近年の多国籍企業にとって極めて重要なグローバル戦略だからである。さらに、国内外の学会にも積極的に参加した。最新の研究報告を聞き、または本研究の断片を報告し、本研究テーマの新規性や正当性を問うた。本研究は、企業間の協調的な国際業界標準化活動の研究をさらに発展させ、多国籍企業の国際的業際標準化活動と競争優位構築について明らかにすることを目的としている。本研究4年目となる平成26年度は、研究成果の報告として、8月にベトナムで開催された国際学会東アジア経営学会連合と、9月に日本経営学会全国大会自由論題にて、報告を行った。

また、グローバルなサプライチェーン、すなわちグローバル・バリューチェーンにおける多国籍企業と現地企業の実態把握を目的として、台湾EMS企業の調査を行った。国際経営論本研究「グローバル合理化段階における多国籍企業の国際的業際標準化と新市場形成」は4年間の計画である。平成24年度で半分の2年間を終えた。予定通り、1年目の先行研究サーベイによる問題の所在の明確化と、2年目の研究の初歩段階を終えた。上述の通り、平成24年度は新興国の研究開発力の向上について、研究を行い、国内外の学会にて報告を行うことを通じて研究を深めることができた。そして、2本の論文として、まとめることができた。このようなプロセスから、平成25年度に行うべき研究課題は明確化されつつある。したがって、研究の進捗状況は、概ね順調であると考えている。上述のように、今年度予定していた(1)文献サーベイや学会に参加によって、さらなる理論研究の深化を図ること、(2)現地調査、(3)研究報告、(4)論文執筆について、おおよそ達成することができた。しかし、申請時の全体的計画と比較すると、3年目の現段階で論文の執筆本数が目標に達していないことが、課題である。本研究の最終年度となる来年度においては、本研究の成果を積極的に論文としてまとめてゆく。本研究は4年間の計画であり、その初年度は、問題の明確化と研究手法の具体的アイディアの検討に時間を費やした。研究デザインを初期段階でしっかりすることが研究上重要であると考えているので、その意味では、今年度の研究は問題点を十分に検討することができ、おおむね順調に進展しているといえるであろう。次年度では、より具体的な調査研究や実地研究に臨む。本研究「グローバル合理化段階における多国籍企業の国際的業際標準化と新市場形成」は4年間の計画である。残りの2年間残されている。平成25年度の研究計画は、ついにグローバル合理化と標準化という課題に取り組んでゆく。これまでの2年間で浮き彫りとなった仮説を実証的に検証し、体系的に理論化するためには、先進国+新興国の多国籍企業の本社と子会社を中心としたインタビュー調査と、データベースによる分析が必須が必要となる。こうしたデータ収集を平成25年に主に行い、平成26年にはそのデータ分析と論理的検証、まとめの論文の執筆を行う予定である。最終年である平成26年度は、これまでの研究の分析の集約を行うとともに、理論的に整理し、学会報告や論文としてまとめる。日本語のみならず英語での論文にまとめ、国際的に発表してゆく予定である。今後は、今年度明らかとなった問題点を仮説として、東南アジアをはじめとする企業へのヒアリング調査(定性分析)と、データーベースを活用した調査(定量調査)によって、論理的妥当性を見出しうる有効な分析手法を模索してゆく。とともに、国内外の学会報告と論文執筆を行いながら、定期的に有識な先生方からのアドバイスを得て、研究の見直しや軌道修正も考えながら行ってゆく。平成25年度は、現在までの研究報告を国際学会AJBS/AIBにて報告をするため、旅費として使用する。また、アジア新興国でのヒアリングを行うために、旅費として使用する。さらに、学術書を購入するための物品費として使用する。
子どもの喪失を経験した父親の悲嘆過程の様相に関する研究

子どもを喪失した父親にとって「語る」ことは、体験を振り返りや新たな気づきを得る機会となり、喪失体験に意味を見出していた。また多くの看護者は子どもを喪失した父親へのケアや支援に戸惑いや困難さを感じており看護者自身も傷ついていたことから、看護者の心を癒すケアの必要性も示唆された。2008年4月から研究協力者の選定・依頼準備、インタビューガイドの作成を行い、8月に福岡県立大学研究倫理委員会の承認を受け、8月から10月の期間、出生直後から1歳6ヶ月までの子どもを喪失した経験を持つ父親4名に半構成的インタビューを行い、事例ごとの逐語データを分析した。その結果、以下の点が明らかになった。(1)子どもを喪失した父親の体験は【子どもへの感情や思い】【自己と向き合うことで子どもの存在や命の捉え方は変容し、悲しみは落ち着く】【妻と新たな世界を作り出す】【自助グループの存在は大きく、今も絆で結ばれている】【仕事はやらねばならないものだが、周りの気遣いに支えられている】【振り返り、語ることで今の自分を確認する】【医療への感謝と不信感】の7つのカテゴリーに分類された。(2)父親の価値観は子どもの喪失の悲しみに向き合うことで変容を起こしていた。(3)父親は喪失体験と向き合い、自己や人生を振り返る中で子どもとの出会いや死、体験の中から学びを得ており、その過程の中で体験に「意味」を見出し、受け入れて生きてきた。(4)父親にとって喪失体験を「語る」ことは、体験を振り返り、改めて悲しみや怒りなど感情を表出できる機会となった。またその中で体験に新たな気づきを得て、体験に意味を考える動機となった。以上より、父親たちは子どもとの出会いから別れ、現在に至るまでの体験全てに意味づけを行っており、自己と向き合うことで子どもの死に肯定的な意味を見出し、今後の人生も喪失と共に生きていく過程を表している。この研究結果を論文とし、2009年3月福岡県立大学大学院修士課程において成果を発表した。本研究結果と平成21年度に研究実施予定である「子どもの喪失を経験した父親にかかわる助産師.看護師のケアの実態調査」による、医療者が子どもを喪失した父親に提供しているケアを比較し、今後の方向性を探る予定である。2009年4月から研究協力者の選定・依頼準備、質問紙作成を行い、8月に福岡県立大学研究倫理委員会の承認を受け、10月から12月の期間、A県内で研究への協力が得られた13施設(周産期母子センター、産科を持つ病院・診療所、助産所)に勤務する助産師・看護師100名を対象とし、76名から回答を得た。その結果、子どもを喪失した親への死別ケア経験者は81.6%であったが、父親へのケア経験者は61.8%であった。看護者が実践している死別ケアの頻度として高かった項目は「子どもと過ごせる環境を整える」「子どもを抱くように勧める」「感情を表出できるように関わる・質問しやすいように配慮する」などであった。しかし父親へケアを提供する際に難しいと感じた内容として「父親への声かけのタイミング」「父親が感情を表出できているのか不明」が多く挙げられた。また看護者自身「父親とのコミュニケーション不足」「父親への配慮不足」など自らの技術や配慮の不足がケアや支援の困難さを招き、さらに看護者の父親へのケアに対する意識の低さが実際の支援に影響していることが明らかになった。看護者が父親へ提供するケア・支援の改善策として、(1)直接ケア(父親と接する時間を作る、父親の言葉を傾聴する、コミュニケーションを図る)、(2)間接ケア(他職種や地域との連携)、(3)知識・技術の研鑽(グリーフケアに関する自己学習、父親の心理を知る、カンファレンスや学習会の実施)の3つが挙げられた。この研究結果より、子どもを喪失した父親に提供されている支援の実態と看護者の抱える問題点が明らかとなり、それを解決に導くことで新たな父親へのケアや支援へとつながることが示唆された。本研究結果と平成20年度に実施した「子どもを喪失した父親の体験」研究結果を元に、平成22年度は看護者が子どもを喪失した父親へ提供するケアモデルの構築を目標とする。2010年4月から研究協力者の選定・依頼、インタビューガイド作成等準備を行い、11月に福岡県立大学研究倫理委員会の承認を受け、1月から3月の期間、A県内で研究への協力が得られた子どもを喪失した夫婦へのケアに携わった経験を持つ助産師を対象に半構成的インタビューを行い、事例ごとの逐語データを分析した。その結果、看護者が子どもを喪失した夫婦にケアや支援を提供する際に感じる悩みや困難さとして【家族の反応に戸惑う】【家族への寄り添い】【病院の体制】【自己を内省する】の4つのカテゴリーに分類された。また看護者のグリーフケアへの学習ニーズとして(1)グリーフケア、悲嘆の受容過程(2)具体的なケア・支援方法(3)エンゼルケア(4)自助グループ(5)体験者の話を聴く(6)医療者のケア

(7)カウンセリング技術、心のケア方法(8)家族と看護者・医療者が互いに話せる場の8つが挙げられた。看護者の経験年数によって求める内容に相違がみられたが、多くの看護者は子どもを喪失した夫婦とのかかわりに困難さを感じていることが明らかとなった。以上より、看護者が死産や新生児死亡に遭遇するのは突然であり、経験する回数も多くない場面であるため看護者自身が戸惑いを感じていた。しかし看護者は混乱する気持ちを抱きながらも夫婦の思いに寄り添う努力をする一方で病院の体制や看護者間での葛藤も抱えており、気持ちの整理を行うことができず深く傷ついていた。そこで看護者の抱くグリーフケアへの困難感を軽減するためにニーズに合った学習会を開催するとともに看護者自身の気持ちを整理する機会や傷ついた心を癒すケアを提供することの重要性が示唆された。
新規脂肪酸受容体GPR40を介する疼痛抑制メカニズムの研究

G protein-coupled receptor 40 (GPR40)作動薬の髄腔内投与は、炎症性および末梢神経障害性疼痛モデルマウスにおける疼痛様行動を減弱させること、末梢炎症や神経障害時には、脊髄後角神経細胞および一次知覚神経細胞においてGPR40タンパク質発現レベルが上昇することを見出した。さらに、電気生理学的検討から、鎮痛作用の少なくとも一部は、脊髄後角第II層における炎症性あるいは末梢神経障害性疼痛伝達に関与するグルタミン酸作動性興奮性シナプス伝達を、シナプス前性に抑制することに起因することが示されたことから、GPR40は新規鎮痛薬開発ターゲットとして有望であると考えられた。本年度は、炎症性および神経障害性疼痛発症に遊離脂肪酸受容体GPR40が関与するか否か、脊髄疼痛伝達系に焦点を当てた検討を行い、現在原著論文にその成果をまとめている。以下その要旨を記載する。成熟マウス後肢に、カラゲニンあるいは完全アジュバントを投与することにより、それぞれ急性炎症(カラゲニンモデル)あるいは遷延性炎症(アジュバントモデル)を誘発させた。また、神経障害性疼痛モデルには第4・第5腰髄脊髄神経障害モデルを用いた。GPR40は、正常後根神経節および脊髄においてタンパク質発現が認められ、カラゲニン投与後6時間、アジュバント投与後3日、あるいは脊髄神経障害後14日の各時点において、発現レベルの有意な上昇が確認された。一方、各疼痛モデルマウスにGPR40作用薬(MEDICA16、GW9508)を髄腔内投与すると、濃度依存的に機械的アロディニア現象を抑制した。カラゲニンモデルにおいては、熱性痛覚過敏現象も濃度依存的に抑制した。また、これらの疼痛抑制効果はGPR40拮抗薬GW1100によって有意に拮抗され、またGW1100単独髄腔内投与により、アジュバントおよび神経障害性モデルにおいて、疼痛増強効果が認められた。次に、GPR40作動薬の疼痛制御メカニズムを検討するため、各モデルマウスより後根付き脊髄横断スライスを作製し、膠様質ニューロンにホールセル・パッチクランプ法を適用し、自発性興奮性シナプス後電流(sEPSC)および後根誘発単シナプス性EPSP(eEPSC)を記録した。各モデルにおいてMEDICA16の灌流適用は、sEPSCの発生頻度を有意に低下させ、またAδあるいはC線維誘発単シナプス性eEPSCの振幅も有意に抑制した。以上の結果は、GPR40が鎮痛薬開発の新規ターゲットとして有望であることを示唆する。本年度は、京都大学薬学部の平澤明博士よりGPR40/FFAR1遺伝子欠損マウス(GPR40/FFAR1 KOマウス)を供与頂き、各種疼痛行動試験の検討を開始した。KOマウスは正常時の機械的および熱的疼痛閾値に大きな異常は認められないが、末梢炎症や神経障害を加えた場合には、野生型に比べ、強い疼痛症状を示すことが見出された。また、興味深いことに、このような末梢炎症/神経障害性疼痛時、KOマウスは野生型に比べ落ち着きがない、機械および熱刺激に対し過剰な反応を示すなど、情動異常を示唆する行動を呈した。そこで、正常KOマウスに対して情動行動関連試験を行った結果、自発運動量の低下やうつ様行動の亢進を認めた。これらの情動行動関連の異常に関し、研究代表者らは脳内GPR40/FFAR1発現に関する予備的検討から、線条体・扁桃体・延髄領域におけるGPR40/FFAR1機能の重要性を考えた。そこで、KOマウス線条体からIn vivoマイクロダイアリシスを行い、細胞外ドパミン、ノルアドレナリン、セロトニン濃度を測定したところ、野生型に比べ、KOマウスにおいてはドパミン濃度が有意に上昇しおり、逆にノルアドレナリンとセロトニンの濃度は減少傾向にあった。さらに、ドパミントランスポーターを阻害して線条体ドパミン濃度を上昇させる依存性薬物コカイン(20 mg/kgを腹腔内投与)の効果を検討したところ、野生型と比較してKOマウスでは細胞外ドパミン濃度上昇度が大きいにも関わらず、コカインによる移所運動促進作用は減弱していた。以上の検討結果から、GPR40/FFAR1システムは、線条体ドパミンシステムを含む脳内モノアミン活性を制御することで、情動行動調節に関与するという新たな生理機能の存在が示唆された。医歯薬学当初計画の土台となる成果について、複数の学会発表および学会シンポジウムでの招待口演を行うことが出来た。また、これらの結果を原著論文にまとめ、投稿可能な段階に来ている。今後は、脊髄および知覚神経節における免疫組織化学的検討をより詳細に行う予定である。特に機械・温度感覚受容を担う一次知覚神経のマーカー分子、脊髄後角細胞層に着目した多重免疫組織染色を行う計画を立てている。