hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
"はがせる"新規歯科矯正用接着材の開発

今日矯正歯科治療において最も頻用されているマルチブラケット装置は、装着時には接着材にて歯に強固に接着し、撤去時には機械的な力により歯面より引きはがす。そのため、撤去時に患者は疼痛が伴い、さらには歯面に亀裂ができ、冷水痛等の症状が現れることも少なくない。そこで、解決法として必要な時に"はがせる"接着材が必要であると考えた。本研究では、温度変化により膨潤ー収縮変化を示す温度応答性ポリマーを用いて、必要な時"はがせる"新規歯科矯正用接着材を開発する。
「傷つき体験」からの回復・適応・自己成長を促す効果的な内省方略及び支援法の解明

本研究では,ネガティブな感情を伴う体験からの心理的回復や自己成長を促すうえで効果的な内省の仕方や個人差要因について検討した。その結果,1自己の視点よりも他者の視点を採るほうが,自己の振る舞いについて,感情的に落ち着いた状態で振り返ることができることが示された,2「心理的距離を置く力」や「内省志向」といった個人差要因は1の効果を左右しうることが分かった。本研究ではまた,ネガティブな感情を伴う体験を想起した後の思考の切り替えの早さをレジリエンスの指標として定義し,脳波計測を用いてそれを客観的に評価する方法を開発した。1.ネガティブな感情を伴う体験について内省するときの心理的距離の取り方がその後の心理的回復や自己成長に及ぼす影響を検討するために,大学生150名を対象とした実験的研究ならびに質問紙調査を実施した。視点を操作(「当事者視点」vs.「観察者視点」)した上で,記憶想起後に感情状態,体験に関する気づき,批判的コメントの受け入れ程度を測定した。1ヶ月程度経過した後に,追跡調査を実施した。その変化量も含め,現在,データ分析を進めている。2.上記調査において,心理的距離に関する個人差と,それが心理的回復や自己成長のプロセスに与える影響について検討するために,失敗やネガティブイベントに対する対処のタイプ,マインドフルネス傾向,ADOG,対人敏感性,認知・行動の回避傾向を測定した。現在,データ整理及び分析を進めている。3.心理的距離及び心理的回復を客観的に測定できる道具の開発のため,心電図計,脳波計を用い,心理的イメージや回想的記憶の意識的内容を敏感に捉えることができる指標を調整してきた。今後更に,皮膚インピーダンス等,別の指標についても検討し,心理的な状態を把握するうえでの確度を高めると共に,心理的に想起している内容を現象学的に測定するための質問紙を開発する予定である。1.平成25年度までにネガティブな感情を伴なう体験の内省における視点の置き方(「当事者視点」VS.「観察者視点」)により,体験の捉え方や自己成長にどのような違いが見られるかを検討する実験を実施していた。その分析の結果,全体として視点操作の効果は見られなかったものの,個人特性(普段から行っているネガティブな体験の処理の仕方のタイプ分け)と視点の置き方との交互作用が見出された。また,前回の実験では,自己成長という側面での測定方法及び操作が不十分であった。これらの結果を踏まえて,平成26年度には,実験計画を再構築して実験を実施した。2.心理的回復や心理的距離を客観的に測定できる道具の開発のために,脳波計,心電図計,皮膚インピーダンス計等を用いて,測定指標と手法を模索してきた。現時点において,α1波・α2波・SIL・SIRなどの指標の組み合わせにより,過去体験を想起しているときの思考の切り替え(例:ネガティブな体験を思すのをやめてニュートラルな体験を思い出す)の柔軟性を測定することを通じて,心理的回復の度合いや特定のイベントの記憶に対する耐性を測定しうる指標及び方法を見出している。3.過去の傷つき体験の捉え方の変化のプロセスを縦断的に解明するために,調査協力者3名を対象としてインタビューを実施し,過去のネガティブな体験に関する処理の仕方,主観的な心理的回復度やレジリエンスを詳細に捉えるとともに,上記2の測定を実施し,その関連性について考察を行った。対人コミュニケーション心理的距離や傷つき体験からの回復の状態を客観的に測定するためのツールづくりにおいて用いる予定の「生理学的指標」の探索に時間を要している。人が心の中で想起する記憶を敏感かつ正確に測定できる指標の開発は難しいが,当初は想定していなかった指標も含めて探索し,丁寧に道具作りを行いたいと考えている。H25年度に実施した分析結果をまとめて報告を行うとともに,次の3点に重点を置いて研究を進める。(1)心理的イメージや回想的記憶の意識的内容を敏感に捉えることができる「生理学的指標」と「心理的指標」を開発する。(2)(1)を用いて,研究対象者を縦断的に追跡し,「傷つき体験」からの心理的回復・適応・自己成長のプロセスを記述する。(3)(2)のプロセスにおいて,個人特性がどのように影響しているかを明らかにする。(1)脳波計等,生理学的指標として用いる機器と処理のためのパソコンを購入する予定であったが,指標として確度の高いものになるか,またどのような指標がより良いかを検討・試用しながら研究を進めており,購入に至っていない。(2)全体的に研究がやや遅れている状況であり,報告(学会発表等)に至らなかったため,旅費の未使用額が発生した。(1)H26年度の早期に生理学的指標を測定できる機器の購入(場合によってはレンタル)を行い,前年度の研究費も含めて研究を進めていく。(2)前年度発表できなかった研究報告を夏季に行い,当初予定していた研究発表を遂行する。
「場所取り」現象による細胞接着領域の確保と,その機序解明

単層で増殖する培養動物細胞を培養容器に播種すると,それらの細胞は,ほぼ均一に分散して培養容器に接着する。それらの細胞はやがて敷石状に成長し,その後,接触阻害により細胞の運動や増殖が停止する。この「接触阻害」という現象は,半世紀以上も前から知られている。本研究では,この「均一に分散する過程」において,「場所取り」という新たな現象が存在することを初めて見いだした。さらに,本現象の普遍性を検討した。足場依存性を有する多くの接着細胞を単層培養で生育させるためには,細胞を細胞培養容器へと接着させることが必須である。浮遊状態の接着細胞は,細胞接着に必要ないくつかの細胞外マトリックスを放出することが知られている。一方,汎用されるプラスチック製培養容器の素材の多くは,疎水性のポリスチレンであるため,浮遊状態の接着細胞から培養溶液中へと放出される親水性タンパク質の多くは,細胞培養容器に対して高い親和性を持たない。したがって,多くの培養容器は,細胞接着面を化学的に親水処理している。さらに,細胞接着を促進させるため,細胞培養容器表面をポリリジン,ポリエチレンイミン,ポリアリルアミン等の塩基性高分子で被覆するほか,コラーゲンやゼラチン,またはフィブロネクチやラミニンなどの細胞外マトリックスを人為的に塗布する場合が多い。これらが細胞表面に存在する接着因子受容体と相互作用することで,細胞の伸展や増殖,分化など生育に必要な情報が伝達される。本研究では,細胞が基質へと接着する過程よりも前に現れる生理現象に着目した。例えば,単層で増殖する動物細胞を培養容器に播種すると,ほぼ均一に分散し,やがて敷石状,線維状に成長後,接触阻害により細胞の運動や増殖が停止する。この現象は,半世紀以上も前から知られている。この「均一に分散する過程」において,細胞からの未同定化合物の放出を伴う「場所取り」の過程が存在することを初めて見いだした。この「場所取り」という表現は,ある細胞が接着,伸展する領域を確保するため,何らかの因子を放出し,他の細胞を寄せ付けないようにする現象を指すものである。本研究では,上記因子の抽出法の確立を目指し,さらにこの化合物の同定を試みた。現在,上記因子の抽出法の確立を目指し,さらに質量分析装置を用いてこの化合物の同定を試みている。平成23年度の研究計画の命題は,「場所取り」が細胞の世界では普遍的な現象であることを証明することである。当該研究期間において,培養した細胞から目的の「場所取り」因子を抽出し,質量分析法により同定するための条件を確立した。さらに,複数の細胞において,「場所取り」行為が観察された。したがって,研究計画に沿っておおむね順調に進展していると考えられる。研究計画に沿って研究を推進する。ただし,目的化合物の分析に関連する項目について,当初の研究計画に記載した,当該研究機関が所有する共通機器による解析だけでは不十分な可能性が生じた。そこで,更なる解析を実施するために,より高機能で最新の設備を有する外部研究機関による委託分析を新たに行う。平成23年度の研究において,個々の培養細胞から放出される「場所取り」因子の抽出法を確立することができた。ところで,本過程が当初の研究計画よりも順調に推移したため,同因子の抽出に関わる試薬や細胞培養器具の購入に必要と推測した予算に余剰が生じた。

一方で,同因子を質量分析法によって解析するためには,より精製度の高い,高品質の因子を調製し,最新の高機能機器を有する研究機関による外部委託分析を行う必要が生じた。平成24年度の研究計画について,大きな変更は生じないが,上記因子の精製と外部委託分析に平成23年度予算の残額を使用する。
オントロジーを用いた救急看護教育カリキュラムの開発

新人看護師の研修で使用する手順書から44項目をCHARM(樹木図)で現した。次にCHARMを閲覧できる端末タブレットを導入した研修を行い,アンケート調査と技術習得状況を評価した。CHARMの記述に慣れた看護師は,手順の流れだけでなく目的も一覧できる視認性を評価していた。研究協力病院では新人看護師にICUでの研修を行っている。平成24年度は,47名の看護師を1グループ45名の10グループに分けて3週間のサイクルで研修を行った。このICU研修に,昨年度から協力病院の看護ガイドラインをもとに開発した教材CHARM Padを導入した。このCHARM PadはにはCHARMの他に院内の看護手順のPDFファイルと新人看護師対象の集合研修の講義資料を載せてあり,看護師ひとりひとりで使用するものとした。研修の一週間前にCHARM Padを新人看護師に渡し,事前学習を行ってもらってICU研修に臨んだ。ICU研修中に行われる心肺蘇生の演習については,ミニ講義を受けた後にシミュレーターを用いて蘇生技術の取得と確認が行われた。演習は,3名一組で心肺停止の患者を発見したところからBLSに沿った内容で進めた。心肺蘇生の全体の流れとバックバルブマスクを使った換気は,新人看護師毎に動画での撮影を行い,各々のCHARM Padに転送し研修後に見られる環境とした。そのことで,心肺蘇生の演習を思い出して事後学習すのではなく,動画で実際に自分が取った行動を見ながらCHARMで知識の再確認が行われるシステムとなった。しかしながら,集合教育の講義資料や看護手順がすぐに見られることへの評価は高かったが,CHARM自体は,今回初めて見るもので,CHARM本来の目的指向性にそった看護行為の構造化の理解がすぐには得られなかった。CHARMを見慣れるのにある一定期間が必要であった。この点から,本研究は新人看護師の技術習得、到達度の比較により学習効果を測るものとしたが,これらの明らかな違いまでには至らなかった。研究協力病院において平成24年度に引き続き新人看護師47名に対して1グループ4名、11グループに分けて3週間のICU研修を行った。CHARMPadのハードウエアはAndroidからiosに変更した。Androidのハードウエアでは外部カメラから動画を撮影し、個人のPadに移し替える必要があり、新人看護師だけで,時間を選ばず撮影することができなかった。iosに変更することで新人看護師の救命蘇生シミュレーションを新人看護師の撮影が相互に簡単にできる。そして、その録画を見ながら、自らの技術を確認することができた。各グループとも研修終了後にアンケートと年度末に技術確認表での分析を行っている途中である。CHARMPadを使用した研修では、タブレット本来の携帯性、操作性による資料などを必要なときに見られるという意見の他、動画で撮影したもので確認が取れる、樹木図で目的を順に追って見ることができ整理ができるとの記述回答であった。CHARMPadの使用項目は、心肺蘇生法が、予習で40名、研修で46名、復習で40名が使用している。予習、復習で次いで多いのは気管・口腔内でそれぞれ35名、38名が使ったと回答している。研修効果としては、患者の意識レベルを正確に把握できる,心肺停止状態を査定できる,救急時の気道の確保ができるを8ヶ月後に人工呼吸法が正しく実施できる、閉鎖式心マッサージ法が実施できるの項目を11ヶ月後に評価を行っているが、2011年を対照群として2012、2013年を比較したが、有意差は見られなかった。本研究では人工知能手法の一つであるオントロジーを用いて看護手順書をデジタル化して記述し、参照を容易にして、看護手順書に迅速性と学習容易さをもたらす仕組みを開発する。1年目である平成23年度は、平成24年度の新人看護師に行う教育プログラムで使用する教材を開発と評価項目の確認を行った。研究協力病院の看護手順書から救急看護に関係する項目を選択し、人間行動モデルとなるCHARM(Convincing Human Action Rationalized Mode-l)による看護モデルの構築とCHARMを表示するアプリケーションをタブレット端末に実装しデジタル化を行った。看護手順の選択では新人研修で指導する看護技術を中心に確認したところ厚生労働省の示す新人看護師職員研修の到達目標と39項目が合致した。しかしCHARMは単に看護手順を整理し階層化するのではなく目的指向性にそった看護行為の構造化をはかり、各看護行為が何のために実行されるのかという根拠も示すものであるため、具体的な行動レベルの記述がなく指導項目としてあげられていた2項目は除外した。CHARMの構築には作成されたプロセス分解木を研究協力病院のエキスパートナース、新人看護師教育担当ナースに提示し内容の検証を行った。また、タブレット端末では画像や動画の再生が行える。シミュレータを用いた心肺蘇生法や輸液ポンプ・シリンジポンプの準備と異常アラームの確認についての動画撮影を行いCHARMに合わせた画像をリンクさせ再生機能を持たせた。24年度の新人看護師の技術習得、到達度の比較により学習効果の違いを測定し,その結果を受けて協力病院以外にCHARMPadを用いた教育カリキュラムを展開する予定であった。

しかし,インターフェイスに慣れないことが新人看護師の使用後アンケートで明らかとなったため,教材ソフトのインターフェイスの変更が必要となった。1年目である平成23年度は、平成24年度の新人看護師に行う教育プログラムで使用する教材を開発が目的であった。学内、病院内の倫理審査の開催日時の調整により、研究実施の日程は多少の遅れが生じた。研究協力病院の看護手順書のからのオントロジー構築(CHARM)作成、内容検証を1月3月にかけて行った。これらに平行してデジタルデータの作成としてシミュレータを使っての動画の撮影を行い、これらデジタルデータをタブレット端末に添付できるようにした。実際に使用するタブレットへの実装は4月以降であるが、バグ処理も問題なく行われている。なお、米国のハワイ大学医学教育センターで研修を予定していたが都合がつかなかった。しかし、当施設のインストラクターによる国内での研修が企画されており、それに参加した。24年度の結果を受けて,インターフェイスの変更を行い,25年度新人看護師教育でCHARMPadを用いた教育を再度行う。また,24年度では心肺蘇生の演習を研究者らが録画しCHARMPadへの移植を行っていたが,25年度からは,新人看護師ら自らが確認したいところで録画ができるように機能を向上させた。そして技術項目毎に録画できる場面を多く取った。これらのことで主体的に新人看護師が学んで振り返り,確認するということが個々のCHARMPadで可能となった。24年度は教育カリキュラムを実施する。研究計画書では入職した看護師をCHARMを実装したタブレット端末を使用した群と従来の紙ベースの資料を用いて教育を行う対照群に分けて行う予定であったが、同一の学習環境を提供したいとの協力病院の意向により23年度と24年度の新人看護師の技術習得、到達度の比較により学習効果の違いを測定する。救急蘇生については、シミュレーションを行う際に動画撮影を行い、新人看護師自身による振り返り学習の効果をねらう。25年度は,タブレットの追加購入と研究発表ならびに報告書など成果物の作成に研究費を使用する。協力病院の平成24年度に入職した新人看護師47名を1グループ4人とし3週間毎にタブレット端末を用いた新人看護師研修を行う。タブレットは研修の開始前に1週間、終了後にも復習を1週間続けてもらうため10台準備する。本研究をインフォメーション・エクスチェンジで発表し、多数の看護職者からの意見を求める予定にしている。24年度は、タブレット購入とインフォメーション・エクスチェンジや成果発表で学会に参加するために研究費を使用する予定である。
免疫調節分子OX40リガンドを標的とした炎症性疾患治療への試み

OX40Lはアレルギー性炎症環境において重要な役割を果たし、IL-33によるTh2細胞誘導機序においてもその効果が認められた。さらにOX40Lは制御性T細胞分化誘導時において、FOXP3とCTLA4の発現を抑制することを同定した。さらにこの樹状細胞に発現するOX40Lの抑制にスタチンが有効であることも同定し得た。現在、TNF-α、IL-6、CD20、CTLA4など炎症性サイトカインや分子が、生物学的製剤のターゲットとして難治性炎症性疾患の治療戦略に導入され、その有用性が認められている。それらと肩を並べる存在として、炎症誘導分子であるOX40リガンドに本申請では着目し、この分子の持つ炎症応答誘導能を、ヒト細胞(樹状細胞ならびにT細胞)を用いたin vitroの実験系と、モデルマウスを用いたin vivoにおける系で検討した。アレルギーにはTSLPやIL-33といった上皮細胞由来のサイトカインがそのトリガーとして重要であり、TSLPによってOX40リガンドが樹状細胞に誘導されることは既知であるが、まずは、初年度にはアレルギーにおける機能解析をIL-4±IL-33添加によるTh2誘導培養下におけるin vitro機能を検討した。IL-4やIL-33によって誘導されるTh2免疫応答がOX40リガンドにより増長されるを、ヒトOX40 ligand遺伝子導入fibroblast細胞と、純化したヒトナイーブCD4ヘルパーT細胞による培養実験で検討したところ、IL-33+OX40リガンドで、IL-5/IL-13産生T細胞誘導能が増強、IL-4+OX40リガンドで、IL-4/IL-5/IL-13産生T細胞誘導能が増強し、アレルギー性炎症に貢献する機能を持つことを明らかにした。さらに、TGF-βによるFOXP3陽性Treg誘導培養下においてOX40リガンドは細胞内CTLA4とFOXP3の発現を抑制することを同定した。いずれのin vitro培養においてもOX40リガンドはT細胞からのIL-10産生を抑制した。また、ヒトにおけるin vitro Th17誘導系をIL-1β+IL-6+IL-21+IL-23+TGF-βを用いたサイトカインコンビネーションで確立し、現在OX40リガンドによる培養実験を進行中である。一方、NC/Nga mouse(アトピー性皮膚炎)、NZBおよびMRL/lpr mouse(SLE)のモデルマウスに対し、血清のsOX40リガンドならびにサイトカインを測定中である。また、フロサイトメトリーにより、各マウスの脾細胞(cDC、pDC、CD4陽性T細胞)を同定し、経時的にOX40リガンドの発現を解析中である。この結果は現在も進行中であり、これらの結果によりin vivoにおけるOX40リガンドの炎症病態における関与が明らかとなると思われる。TNF-α、IL-6など炎症性サイトカインと肩を並べる存在として、炎症誘導分子であるOX40リガンドに本申請では着目し、この分子の持つ炎症応答誘導能を、ヒト細胞を用いたin vitroの実験系と、モデルマウスを用いたin vivoにおける系で検討した。また、近年自己免疫疾患では、IFN-αの関与が病態発症に重要視されている。上記にくわえ、本年度は、ヒト細胞(樹状細胞ならびにT細胞)を用いたin vitroの実験系によりIFN-αの産生能に対するOX40リガンドの影響を検証するとともに、2)モデルマウスを用いて、in vivoにおけるIFN-αとOX40リガンドの関係から炎症応答メカニズムの解明の検討も行った。初年度に行っていた検討の続きとして、ヒトにおけるin vitroTh17誘導系をIL-1β+IL-6+IL-21+IL-23+TGF-βを用いたサイトカインコンビネーションで確立し、ヒトOX40 ligand遺伝子導入fibroblast細胞によりそのTh17細胞誘導能がどのように変化するか検討したところ、Th17産生系においてはOX40リガンドはネガティブレギュレーターとして機能することが判明した。しかし一方で、OX40リガンドはTGF-βによって誘導される制御性T細胞に対して、そのFOXP3発現や、CTLA4発現を有意に抑制する能力も有していた。この結果はTGF-βによるTh17とTreg細胞の分化における関連性を考慮すると非常に興味深い結果といえる。一方、IFN-α産生細胞であるヒト樹状細胞亜群に対して、ヒトOX40 ligand遺伝子導入fibroblast細胞と共培養したところ、いずれの亜群も受容体であるOX40は発現するもののそのIFN-α産生にはいずれの亜群においても影響し得なかった。一方、NC/Nga mouse(アトピー性皮膚炎)、NZBおよびMRL/lpr mouse (SLE)のモデルマウスに対し、血清のsOX40リガンドならびにIFN-αを測定したところ、いずれにモデルマウスにおいても血清sOX40リガンドは上昇していたが、血清IFN-α産生とsOX40リガンドの間に有意な相関は認められなかった。これらのvitroならびにvivoにおける結果により炎症応答カスケードにおいてOX40リガンドは炎症機序に関与するもののとIFN-α産生には強い関連性はないものと考えられる。むしろ、OX40リガンドはTh17細胞や制御性T細胞との関与が強いと考えられた。

TNF-α、IL-6など炎症性サイトカインと肩を並べる存在として、炎症誘導分子であるOX40リガンドに本申請では着目し、この分子の持つ炎症応答誘導能を、ヒト細胞を用いたin vitroの実験系で最終年は検討した。具体的に、より実用的な試薬として、スタチンに注目し、シンバスタチンとピタバスタチンを用いて、炎症誘導分子OX40リガンドの発現を抑制できるか、純化したヒトミエロイド系樹状細胞サブセットをOX40リガンド誘導物質として胸腺間質リンパ球増殖因子(TSLP)存在下で24時間培養する条件下で検討した。TSLPは強力なOX40リガンドの誘導因子であり、TSLP単独での培養でヒトミエロイド系樹状細胞サブセットはOX40リガンドを発現する。しかしながら、シンバスタチンあるいはピタバスタチンの添加により、その発現は抑制されることが判明した。さらにスタチンによるメバロン酸合成阻害に関与するメバロン酸、GGPP(ゲラニルゲラニルピロリン酸)、Rho kinase阻害剤をそれぞれ用いたところ、メバロン酸とGGPPを添加することによりスタチンの持つOX40リガンド阻害能は解除され、Rho kinase阻害剤はスタチンと同等のOX40リガンド発現の抑制能を持つことが判明した。さらに、ミエロイド系樹状細胞におけるOX40リガンドの発現の分子機構として、NFkBp50が重要であることが報告されているが、スタチンはこのTSLPによってリン酸化されるNFkBp50を抑制することも今回の実験で判明した。この結果からスタチンは強力な炎症抑制効果を持ち、TSLP-OX40リガンドが関与するとされるアレルギー性炎症に有効な薬剤としてのポテンシャルを示唆できた。
ラマン分光法を用いた顎骨壊死の病態解明と診断技術への応用

現在でも、BRONJの発症メカニズムはBP剤が破骨細胞のアポトーシスを誘導し、骨代謝回転が過度に抑制さることによるものと考えられるが、明らかにされていない。これまでの破骨細胞の研究は、プラスティクプレート上で破骨細胞を培養し、TRAP染色やPCR等の固定や染色、プローブを用いた破壊的・侵襲的な解析がほとんどであった。しかしながら、これらは本来の破骨細胞のダイナミズムを解析することはできなかった。BRONJは超高齢化社会を迎える我が国において今後増加することが予想され、その病態を理解し、究明することが喫緊の課題となっている。我々は、非接触かつ非破壊に物質の種類や状態を分子レベルで調べることができるラマン分光法に注目した。試料にレーザーを照射し、発生したラマン散乱光から得られたラマンスペクトルは、分子の指紋も呼ばれており、細胞を生きたまま標識や固定を行わず、細胞特異的な分子の同定やその発現量を解析することができる。本研究では、ラマン分光法を用いBRONJの病態解明を行う。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、ラマン分光法を用いビスホスホネート系薬剤関連顎骨壊死(以下、BRONJ)の病態解明を行う。BRONJの病態は十分に解明されておらず、その診断方法を確立することは急務となっている。我々は、高感度に分子レベルの解析を行うことができるラマン分光法に着目した。ラマンスペクトルは分子の指紋と呼ばれており、細胞や組織を生きたまま標識や固定を行わず、非侵襲的に分子レベルの解析が可能である。そのため、医療分野や創薬分野での応用が期待されている。ラマン分光解析を行うことで、BRONJのバイオマーカーを同定し、その発症メカニズムを解析出来ると考えられる。本法は、レーザーラマン顕微鏡を用い、BRONJの発症に関与する破骨細胞より特有のラマンスペクトルを取得することで、BRONJの病態解明と診断法の確立を目指す。平成29年度は、ガラス基板上で培養した破骨細胞のラマンプロファイリングにより、破骨細胞特有のラマンスペクトルを取得することができた。これは当初の計画通りである。また、より生体に近い環境でラマンプロファイリングをする計画についても、現在進行中である。以上より、研究は全体としておおむね順調に進展していると考えられる。平成30年度は、象牙基板上で培養した破骨細胞(骨吸収している状態)のラマンスペクトルを取得し、ビスホスホネート系薬剤関連顎骨壊死の臨床診断に応用可能な新規バイオマーカーを探索する。これにより、プラスティクのプレート上ではできなかった、破骨細胞の骨代謝の分子イメージングが可能となる。また、ビスフォスフォネート系薬剤が破骨細胞の骨吸収に与える影響を調べる。マウス由来マクロファージ様細胞株RAW264.7またはプライマリーなラビット骨髄細胞を象牙上に播種し、ビスフォスフォネート系薬剤の存在下または非存存下で破骨細胞へ分化誘導し、レーザーラマン顕微鏡で破骨細胞特有のラマンスペクトル探索やビスフォスフォネート系薬剤が破骨細胞の骨吸収に及ぼす影響を明らかにする。
ラット線条体のヒドロキシルラジカルに関する神経薬理学的研究-ドーパミン神経細胞移植の効果-

本研究では,ラットを用いた黒質線条体系ドーパミン(DA)線維の限局した化学破壊の後,線条体への胎仔中脳細胞の移植を行い,その過程において種々の実験を施行した。これらの結果を比較・統合することにより,DA入力遮断後の線条体のヒドロキシルラジカルの発生環境とそれに対しての神経細胞移植やL-DOPAその他のDA作動薬の影響を多角的に検索でき,それらと行動や形態学的変化(転写修飾因子,アポトーシスなどの脳内発現)との相関が明かとなる。またDA神経の脱落・再生・分化の段階における可塑性,移植部の神経伝達物質の動態の特殊性も明かとなる。1)脳定位的に6-OHDAを一側の内側前脳束へ微量注入することにより,中脳カテコラミン細胞を化学破壊した6-OHDA動物(エミ・パーキンソン病モデルラット)を作製した。2)6-OHDA動物の中から移植群を選び,破壊側線条体に胎仔中脳DA細胞の移植,および行動評価を行った。3)6-OHDA動物の破壊側線条体,移植部線条体,非破壊・非移植側線条体を対照に,c-Fos蛋白などの転写因子を指標に,methamphetamineやL-DOPAに対する神経応答を観察し,行動との関連を明らかにした。また,黒質や移植部線条体における各種グルタミン酸受容体を形態学的に観察し,DA神経の脱落・再生に関与するグルタミン酸入力の役割を明らかにした。4)線条体で細胞外ヒドロキシルラジカル(OHラジカル)の定量を行った(継続中)。ヒドロキシルラジカルの定量には,サリチル酸を局所潅流することによって形成されるdihydroxybenzoic acid(DHBA)を電気化学検出器付き高速液体クロマトグラフィー(HPLC-ECD)により検出することによて行った。この際,DA神経系に対するフリーラジカル発生の起因物質として,L-DOPAの投与を行い,細胞外DA・5-HT,それらの代謝産物(DOPAC・HVA・5-HIAA)の推移とともに,DHBAの経時的変化を追った。L-DOPA腹腔内投与後,細胞外L-DOPA,DAの増加に引き続き,2,3-DHBA濃度の増加が確認された。この反応に関する各群の差異やそのメカニズムについて,引き続き研究を継続中である。1)脳定位的に6-OHDAを一側の内側前脳束へ微量注入することにより,中脳カテコラミン細胞を化学破壊した6-OHDA動物(ヘミ・パーキンソン病モデルラット)を作製した。2) 6-OHDA

動物の中から移植群を選び,破壊側線条体に胎仔中脳DA細胞の移植,および行動評価を行った。3) 6-OHDA動物の破壊側線条体,移植部線条体,非破壊・非移植側線条体を対照に,細胞外ヒドロキシルラジカル(OHラジカル)の定量を行った。ヒドロキシルラジカルの定量には,サリチル酸を局所潅流することによって形成されるdihydroxybenzoic acid(DHBA)を電気化学検出器付き高速液体クロマトグラフィー(HPLC-ECD)により検出することによって行った。この際,DA神経系に対するフリーラジカル発生の起因物質として,L-DOPAの投与を行い,細胞外DA・5-HT,それらの代謝産物(DOPAC・HVA・5-HIAA)の推移とともに,DHBAの経時的変化を追った。L-DOPA腹腔内投与後,細胞外L-DOPA,DAの増加に引き続き,2,3-DHBA濃度の増加が確認された。この反応に関する各群の差異やそのメカニズムについて,引き続き研究を継続中である。本研究では、ラットを用いた黒質線条体系ドーパミン(DA)線維の限局した化学破壊の後、線条体への胎仔中脳細胞の移植を行い、その過程において種々の実験を施行した。これらの結果を比較・統合することにより、DA入力遮断後の線条体のヒドロキシルラジカルの発生環境とそれに対しての神経細胞移植やL-DOPAその他のDA作動薬の影響を多角的に検索でき、それらと行動や形態学的変化(転写修飾因子、アポトーシスなどの脳内発現)との相関が明かとなる。またDA神経の脱落・再生・分化の段階における可塑性、移植部の神経伝達物質の動態の特殊性も明かとなる。1)脳定位的に6-OHDAを一側の内側前脳束へ微量注入することにより、中脳カテコラミン細胞を化学破壊した6-OHDA動物(ヘミ・パーキンソン病モデルラット)を作製した。2) 6-OHDA動物の中から移植群を選び、破壊側線条体に胎仔中脳DA細胞の移植、および行動評価を行った。3) 6-OHDA動物の破壊側線条体、移植部線条体、非破壊・非移植側線条体を対照に、c-Fos蛋白などの転写因子を指標に、methamphetamineやL-DOPAに対する神経応答を観察し、行動との関連を明らかにした。また、黒質や移植部線状体における各種グルタミン酸受容体を形態学的に観察し、DA神経の脱落・再生に関与するグルタミン酸入力の役割を明らかにした。4)線条体で細胞外ヒドロキシルラジカル(OHラジカル)の定量を行った(継続中)。ヒドロキシルラジカルの定量には、サリチル酸を局所潅流することによって形成されるdihydroxybenzoic acid (DHBA)を電気化学検出器付き高速液体クロマトグラフィー(HPLC-ECD)により検出することによって行った。この際、DA神経系に対するフリーラジカル発生の起因物質として、L-DOPAの投与を行い、細胞外DA・5-HT、それらの代謝産物(DOPAC・HVA・5-HIAA)の推移とともに、DHBAの経時的変化を追った。L-DOPA腹腔内投与後、細胞外L-DOPA,DAの増加に引き続き、2,3-DHBA濃度の増加が確認された。この反応に関する各群の差異やそのメカニズムについて、引き続き研究を継続中である。
江戸時代における地域文化リーダー析出ツールとしての「狂歌」の総合的研究

本研究は、江戸時代の地域文化を考察する際の有効史料である「狂歌」の多角的研究であり、研究成果を史料が好条件・未着手の状態で所蔵される欧州の機関と共有することを最終的な課題とする。「狂歌」の史料性を特筆するのは、119世紀に享受層を拡大させた「狂歌」が歌学関連書のみならず儒書や和漢の歴史書・地理書などの知見をフル活用できる幅広い教養の上に立って作成されており、2読書人である狂歌作者たちが全国的なネットワーク(連)を通じて地域に多用な人的・物的資源をもたらし、3その痕跡が諸種出版物の上に現れるからである。また4狂歌作者自身さらには末裔たちが江戸期の「知」的資源をもとに近代の地域文化の担い手となったと見られるからである。このような狂歌人の遺した多岐にわたる「狂歌」史料の文化的な意義の認知度は低いが、海外の所蔵先等と広く意義・活用法を共有するならば、日本文化研究の新局面が創出されると考える。研究の第3年度である平成30年度は、研究の今後の調査の指針を得ることが可能な地域を選択し調査に赴くとともに得られた史料の概括的な整理と必要な基本文献の整備に努めた。その主たる調査地は福島県いわき市・上越市直江津で行い、基本史料の確保は国文学研究資料館を中心に行い、研究報告を兼ねた講演を上越市で行った。また、研究の開示を前提とした海外での打合せ・報告会をセビリア(スペイン)・山東大学(中国)で行った。研究の展開を前提とした調査地域の再確認が順調に行われ、基本史料・重要史料の確保もでき、保存活動に関与できた(特に上越市資料の保存・調査)。また、研究成果を地域において公開し(上越市における講演)、海外での公開(セビリア大学・山東大学)も行うことができたため。研究初年度の課題設定・29・30年度の継続課題設定をうけ、調査地点の拡大と史料のさらなる確保に努める。また、公開性を高めるべく、地域におけるワークショップや講演会等の開催を行う。さらには、海外の研究機関との連携を図るべく、ワークショップなどを適宜設け、研究成果の報告・公開に努力する。(2019年11月、山東大学・グラナダ大学で公開講演を行う。)本研究は、江戸時代の地域文化を考察する際の有効史料である「狂歌」の多角的研究であり、研究成果を史料が好条件・未着手の状態で所蔵される欧州の機関と共有することを最終的な課題とする。研究の初年度である平成28年度は、研究の今後の調査の指針を得ることが可能な地域を選択し調査に赴くとともに得られた史料の概括的な整理と必要な基本文献の整備に努めた。その主たる調査地は新潟県上越市直江津地区・神田地区、基本史料の確保は国文学研究資料館を中心に行い、研究報告を兼ねた講演を上越市、宮城県塩竃市で行った。また、研究の開示を前提とした海外での打合せ・報告会をチューリッヒ・ヴェネチア・ブダペスト・マドリードで行った。研究の展開を前提とした調査地域の再確認が順調に行われ、基本史料・重要史料の確保もできた。また、研究成果を地域において公開し、海外での公開も行うことができたため。研究の第2年度である平成29年度は、研究の今後の調査の指針を得ることが可能な地域を選択し調査に赴くとともに得られた史料の概括的な整理と必要な基本文献の整備に努めた。その主たる調査地は福島県いわき市・上越市直江津で行い、基本史料の確保は国文学研究資料館を中心に行い、研究報告を兼ねた講演をいわき市で行った。

また、研究の開示を前提とした海外での打合せ・報告会をセビリア(スペイン)・ライデン(オランダ)で行った。研究の展開を前提とした調査地域の再確認が順調に行われ、基本史料・重要史料の確保もできた(特にいわき市の調査)。また、研究成果を地域において公開し、海外での公開(ライデン)も行うことができたため。本研究は、江戸時代の地域文化を考察する際の有効史料である「狂歌」の多角的研究であり、研究成果を史料が好条件・未着手の状態で所蔵される欧州の機関と共有することを最終的な課題とする。「狂歌」の史料性を特筆するのは、119世紀に享受層を拡大させた「狂歌」が歌学関連書のみならず儒書や和漢の歴史書・地理書などの知見をフル活用できる幅広い教養の上に立って作成されており、2読書人である狂歌作者たちが全国的なネットワーク(連)を通じて地域に多用な人的・物的資源をもたらし、3その痕跡が諸種出版物の上に現れるからである。また4狂歌作者自身さらには末裔たちが江戸期の「知」的資源をもとに近代の地域文化の担い手となったと見られるからである。このような狂歌人の遺した多岐にわたる「狂歌」史料の文化的な意義の認知度は低いが、海外の所蔵先等と広く意義・活用法を共有するならば、日本文化研究の新局面が創出されると考える。研究の第3年度である平成30年度は、研究の今後の調査の指針を得ることが可能な地域を選択し調査に赴くとともに得られた史料の概括的な整理と必要な基本文献の整備に努めた。その主たる調査地は福島県いわき市・上越市直江津で行い、基本史料の確保は国文学研究資料館を中心に行い、研究報告を兼ねた講演を上越市で行った。また、研究の開示を前提とした海外での打合せ・報告会をセビリア(スペイン)・山東大学(中国)で行った。研究の展開を前提とした調査地域の再確認が順調に行われ、基本史料・重要史料の確保もでき、保存活動に関与できた(特に上越市資料の保存・調査)。また、研究成果を地域において公開し(上越市における講演)、海外での公開(セビリア大学・山東大学)も行うことができたため。研究初年度の課題設定をうけ、調査地点の拡大と史料のさらなる確保に努める。また、公開性を高めるべく、地域におけるワークショップや講演会等の開催を行う。さらには、海外の研究機関との連携を図るべく、ワークショップなどを適宜設け、研究成果の報告・公開に努力する。研究初年度の課題設定・29年度の継続課題設定をうけ、調査地点の拡大と史料のさらなる確保に努める。研究初年度の課題設定・29・30年度の継続課題設定をうけ、調査地点の拡大と史料のさらなる確保に努める。(2019年11月、山東大学・グラナダ大学で公開講演を行う。)必要な史料の確保のために使用する予定であったが、金額が不足したため。(理由)必要な史料の確保のために使用する予定であったが、金額が不足したため。(使用計画)購入予定の史料があり、その一部として使用する。最終時期に購入を予定していた書籍の金額が予算残額を上回ったため。本年度前半に購入を予定する。購入予定の史料があり、その一部として使用する。
放射冷却に及ぼす都市面構造の影響に関する基礎的研究

都市の高温現象の成因は複雑なため,定量的な解明は不十分である.成因を定量的に解明するには,都市環境による熱エネルギーの改変像を捉えるしか方法はない.本研究では,エネルギー収支的解析の第一歩として,夜間の放射冷却量に直接関与している長波放射成分が複雑な都市面構造をもつ都市環境内で如何なる改変をうけているかについて,野外観測に基づき考察した.1.研究対象都市は筑波研究学園都市(つくば市)と土浦市である.前者は新計画都市でビルが散在し公園などのオープンスペースが調和よく配置され後者は典型的な地方都市で低中層建築物が密集しており,両都市の構造は対照的である.学園都市の119地点,土浦市の89地点において,建物等の都市構造物が天空に占める割合(遮蔽率)を魚眼レンズを用い撮映・計測し,両都市の遮蔽率の空間分布図を作成した.その結果,両都市の都市面構造の特性を定量的に明らかにすることができた.即ち,学園都市の遮蔽率は全般的に小さく,都市域の多くが5%程度で粗は都市構造をもつのに対して,土浦市街の遮蔽率は10%以上の地域が広く分布し,密な都市構造をもっている.2.両都市の3ケ所における長波放射・路面温度・壁面温度・気温の連続観測(計5夜間)と,両都市の各15地点における移動観測(計20回)を寒候期に実施した.その結果,従来, 1ビル空間内でしか確かめられていなかった長波放射に対する都市面構造による遮蔽効果の影響を,多地点における資料から実証できた.遮蔽率と各放射成分の間にはほぼ直線関係がみられるが,温度場も関与していることが示唆されており,その厳密な実験式化は今後の解析に待ちたい.なお,大都市での検証,異質な都市構造をもつ都市全域での長波放射の空間分布,そして遮蔽率以外の都市面構造の指標の抽出については,すでに計画を進めている.また,本研究の成果の一部は今年の春季の地理学会・気象学会にて発表する.都市の高温現象の成因は複雑なため,定量的な解明は不十分である.成因を定量的に解明するには,都市環境による熱エネルギーの改変像を捉えるしか方法はない.本研究では,エネルギー収支的解析の第一歩として,夜間の放射冷却量に直接関与している長波放射成分が複雑な都市面構造をもつ都市環境内で如何なる改変をうけているかについて,野外観測に基づき考察した.1.研究対象都市は筑波研究学園都市(つくば市)と土浦市である.前者は新計画都市でビルが散在し公園などのオープンスペースが調和よく配置され後者は典型的な地方都市で低中層建築物が密集しており,両都市の構造は対照的である.学園都市の119地点,土浦市の89地点において,建物等の都市構造物が天空に占める割合(遮蔽率)を魚眼レンズを用い撮映・計測し,両都市の遮蔽率の空間分布図を作成した.その結果,両都市の都市面構造の特性を定量的に明らかにすることができた.即ち,学園都市の遮蔽率は全般的に小さく,都市域の多くが5%程度で粗は都市構造をもつのに対して,土浦市街の遮蔽率は10%以上の地域が広く分布し,密な都市構造をもっている.2.両都市の3ケ所における長波放射・路面温度・壁面温度・気温の連続観測(計5夜間)と,両都市の各15地点における移動観測(計20回)を寒候期に実施した.その結果,従来, 1ビル空間内でしか確かめられていなかった長波放射に対する都市面構造による遮蔽効果の影響を,多地点における資料から実証できた.遮蔽率と各放射成分の間にはほぼ直線関係がみられるが,温度場も関与していることが示唆されており,その厳密な実験式化は今後の解析に待ちたい.なお,大都市での検証,異質な都市構造をもつ都市全域での長波放射の空間分布,そして遮蔽率以外の都市面構造の指標の抽出については,すでに計画を進めている.また,本研究の成果の一部は今年の春季の地理学会・気象学会にて発表する.
動脈硬化病変形成における細胞性免疫の関与とその制御による新規治療法の開発

主としてマウス心臓移植および大腿動脈ワイヤー障害のモデルを用いて、動脈硬化病変における細胞性免疫の関与とその制御による治療法の開発を行った。多様な介在治療を行った。MMP-9、ICAM-1、adiponectinに着目して、その役割を検討した。クラリスロマイシンによるMMP-9の抑制、siRNAによるICAMの抑制、adiponectin過剰マウスにおいて、動脈病変の抑制が可能であったことから、それぞれが動脈病変に関与していることが示された。また治療法としての発展が期待される。心臓移植後、移植心では血管内に平滑筋と細胞外マトリックスを中心とする細胞で構成された新生内膜が形成され血管が狭窄する。マクロライド系の抗生物質であるクラリスロマイシン(CAM)のMMP-9の発現を制御作用に着目して、急性拒絶反応および移植心血管内膜肥厚に対する効果を検討した。ドナーマウスBALB/cとレシピエントマウスC57BL/6の組み合わせ(MHC total allomismatch)は急性拒絶、C57BL/6 Bm12とC57BL/6との組み合わせ(MHC class II mismatch)は慢性拒絶の検討に用いた。異所性心移植を行い、レシピエントマウスにはCAM(100mg/kg)を1日2回、連日経口投与した。その結果、急性拒絶モデルにおいてCAM投与群では移植心の有意な生着の延長が見られた。CAM投与群では7日目の細胞浸潤、線維化面積は有意に減少していた。また慢性移植もでるにおいて血管狭窄の有意な減少が見られた。いずれのモデルでもCAMによる拒絶反応の軽減は炎症性サイトカインのmRNAの発現減少、MMP-9の発現抑制をともなっていた。J774.1細胞をIL-1βで刺激するとvehicle群では無刺激群と比べてMMP-9の強い発現が見られたがCAMの投与によってMMP-9のタンパク、mRNAレベルは減少していた。培養平滑筋細胞においてもCAM投与によりMMP-9発現が減少した。平滑筋細胞にPDGF-BB刺激を行うと細胞の顕著な増殖が見られるが、CAMを添加すると細胞の増殖は抑制され、細胞遊走評価分析でもCAMの投与により細胞の遊走が抑制された。これらの結果は慢性拒絶で起こる移植片血管病変の進展をCAMが抑制する事、その効果はMMP-9の発現制御に関係していることを示すものである。CAMは急性拒絶も同様に抑制する。以上より、CAMはMMP-9の活性を阻害する事により急性及び慢性拒絶を抑制する。クラリスロマイシンは免疫抑制作用を持たず、また一般臨床に安全に用いられている薬剤である。そのため移植後患者への適用が期待出来る。今年度はICAM-1分子の接着阻害とTregを中心に研究を進めた。ICAM-1のmRNA発現を抑制するsiRNAを作成した。ICAM-1siRNAの生物学的活性を確認するために混合リンパ球培養(MLR)を行った。ICAM-1siRNAは導入濃度依存性にMRLでの細胞増殖を抑制した。動物実験モデルはB6マウス大腿動脈のワイヤー障害による血管障害である。まずFITC-siRNAとGFP-siRNAを作成した。遺伝子の導入には超音波マイクロバブルを用いた。DOTAPとマイクロバブル(Optison)にsiRNA(ICAM-1またはGFP)を混和した。血管ワイヤー障害作成直後に、この混和物を血管内に注入した。さらに血管外から超音波を放射した(1MHz、0.5W/cm^2、20秒)。FITC-siRNAを注入したマウスは8時間後に、GFP-siRNAを注入したマウスは7日後に血管を採取した。いずれもsiRNA、マイクロバブル、超音波の存在下で血管壁に色素の顕著な集積を認め、遺伝子が導入されていることが証明された。いずれかの要素が含まれていないコントロールでの色素の発現は認められなかった。このことから、超音波とマイクロバブルを用いた非ウイルスでの血管壁への遺伝子導入が可能であることが示された。同じ方法を用いてsiRNA ICAM-1を血管障害後の大腿動脈に導入した。28日目に血管を採取してその効果を確認したところ、コントロール群に比して内膜肥厚が有意に抑制されていた。免疫組織学的にはT細胞、マクロファージ、ICAM-1陽性細胞、VCAM-1陽性細胞などの炎症細胞の浸潤がsiRNAICAM-1導入群の障害血管で抑制されていた。以上の結果からウイルスを用いない接着分子阻害の遺伝子導入により血管障害後の内膜肥厚を抑制することが示された。他臓器、他疾患の炎症抑制にも応用可能な技術として今後の発展が期待される。アディポネクチンは脂肪組織から特異的に分泌されるタンパクであり、抗炎症作用、および抗動脈硬化作用を持つことが知られている。今年度は我々はアディポネクチンの心移植モデルにおける役割を検討した。

方法:アディポネクチントランスジェニックマウス(APN-SE)を用い、急性及び慢性拒絶反応についての検討を行った。慢性拒絶に関してはclass II mismatchの組み合わせ(ドナー:B6.C-H-2^<bm12>KhEg、レシピエント:APN-SE)で移植を行い、8週間後にサクリファイスを行って検討した。結果:まず、APNレセプター(APN R1, R2)についての検討を行ったところ、心筋の定量PCR及び免疫染色でAPN-SEをレシピエントとした群でAPNR1, R2共にmRNAの発現、レセプター数が増加していることが示された。移植心の内膜肥厚に関して検討したところ、APN-SEをレシピエントとした群(luminal occlusion, 8.88±2.21%)では、wild typeを道いた群(49.37±10.50%)と比較して有意に血管内膜の増殖を抑制できた。次に、定量PCRを用いてサイトカイン、ケモカインのmRNA発現量を検討した。interferon-Y (IFNγ)、tumor necrosis factor-α(TNF-α)、interleukin 2 (IL-2), IL-6、monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1)に関してはAPN-SEを用いた群でmRNAの発現が有意に抑制された。MCP-1、IFNγに関しは、ウエスタンブロットでタンパク量を検討し、同様の結果が得られた。また、平滑筋細胞増殖アッセイを行ったところ、APNによって平滑筋細胞の増殖を抑制できることが確認され、さらに、その効果はAdenosine monophosphate-activated protein kinase (AMPK)インヒビターにより抑制されることがわかった。結論:アディポネクチンは炎症性のサイトカインを抑制すること、および、アディポネクチンレセプターの発現を増加させることによって、心移植の慢性拒絶の抑制に大きな役割を果たしていると考えられる。また、その経路として、AMPKを介した経路が大きく関わっていると考えられる。
新しい抗マラリア薬の開発と抗マラリア薬耐性機構の解析に関する研究

本研究は新しい抗マラリア薬のリード化合物の決定・最適化を行い、コンピュータドラッグデザイン、ゲノム創薬、及びハイスループット法を駆使して新規抗マラリア薬を開発し、マラリアの流行地にそれを供給する事を最終目的とする。また、本研究は薬剤耐性マラリアの耐性機構の解明とそれに基づく分子設計により、薬剤耐性を克服できる抗マラリア薬の創製を目指し、且つ寄生原虫感染症学の分子基盤を確立しマラリア制圧に寄与するものである。1.新規抗マラリア薬の候補を選抜する研究で、分子内ペルオキシドを有する環状過酸化物を選抜し、in vitro, in vivoの両アッセイシステム系で優れた抗マラリア作用を示す事を明らかにした。今年度はこの化合物の最適化を行い、溶解性が向上したいくつかの誘導体を選抜した。これら化合物の特性を生かし、マラリア原虫の各々画分(細胞質・核・ミトコンドリア・食胞等)と結合するタンパク質を単離・精製するための実験を計画している。2.ロダシアニン系色素化合物、及び天然資源・常山由来の化合物の最適化を行った。新規抗マラリア薬の候補を選抜するためのスクリーニング系で選抜された2つの化合物の基本骨格をもとに種々の誘導体を作成し、抗マラリア活性と細胞毒性の試験を行った結果、高い抗マラリア活性と低毒性を有する化合物を選抜した。3.メフロキン耐性のメカニズムを解明するために、報告されているchromosome5番目のアミノ酸変異は我々の株では見られ無かった。そこで、OFAGEにより熱帯熱マラリア原虫のchromosome14個の長さを感受性株と比較した結果、Chromosome37番目で差異が見られた。しかしメフロキンに対する薬剤感受性が一桁高く、逆にクロロキンに対しては感受性が増加する結果から、メフロキンとクロロキンの間には同じ遺伝子が薬剤感受性/耐性を決定する可能性が示唆された。今後、この遺伝子を同定するための実験を計画している。
3次元タギングMRIを用いた心不全の予後予測

心不全症例に対して、3D tagging MRIを施行し、左心室全体の壁運動の定量解析を行った。技術的にはスイスにある研究所の助力を得た。今回は、心不全に加えて、とくに心肥大を合併した症例(高血圧性心筋症、心アミロイドーシス等)に焦点を当てた。その結果、本方法では3回の呼吸停止で、左心室全体を観察でき、疾患によって異なる局所異常があることが示された。また他のMRI撮像法で描出される心筋瘢痕を認めない場合でも、局所のstrainの低下が認められた。今回の研究により、心不全と心肥大を合併した症例では、機能的な異常や力学的な要素などが、心筋障害が重症化する前に生じていることが示された。科研費の採択を受けて、2014年5月に国際MRI学会(ISMRM)の直前にチューリッヒ工科大学で、および学会中に3Dtagging MRIの撮像法や解析のソフトウエアについて、本研究をサポートするGyroTools社のGerard Crelier PhDと会合をもった。動作確認をしながらの検討を行った。共同研究者とは症例数の打ち合わせを行い、研究補助者一名を得て、2014年6月下旬より研究を開始した。2015年4月の段階で31心不全症例が撮像され、内訳は主課題の高血圧性心不全3例、対照となる肥大型心筋症6例およびその他が22例であった。本検討の初期の知見として、高血圧性心不全と肥大型心筋症では遅延造影MRIで瘢痕を見ることの多い基部下壁や下壁中隔でcircumferential strainが低下することが観察された。この所見は心筋瘢痕を認めない症例でも観察され、心筋障害が重症化する以前の機能的な異常が把握されたものと考えられる。7月の講演でこの知見を述べる予定である。科研費の採択を受けて、2015年6月にトロントで行われた国際MRI学会(ISMRM)に参加し、3D tagging MRI解析のソフトウエアをサポートするGyroTools社のGerard Crelier PhDと会合をもった。この撮像自体は当初より順調に動作し40症例強の経験を得た。しかし引き続き解析ソフトウエアの開発が進まず、症例数の大幅な増加は難しかった。上記の開発元にはさらなるversion upを求めた。以上の経過から共同研究者と再び協議し、心肥大を示した心不全症例にひとまず焦点をあてることとした。高血圧症例3、肥大型心筋症5および心アミロイドーシス2症例を、研究補助者とともに解析した。初期の知見と同様に、高血圧性心不全と肥大型心筋症では遅延造影MRIで瘢痕を見ることの多い基部下壁や下壁中隔でcircumferential strainが低下することが観察された。しかし今回の症例群では、心筋瘢痕を認めない場合でも上記の部位にstrainの低下が認められた。機能的な異常や力学的な要素などが、心筋障害が重症化する前に生じていることが示唆された。そののち、北米放射線学会(RSNA)では関連演題の情報収集を行い、これを参照して心肥大と心不全の両方を有する症例群にしぼった検討を論文化したところ、年度末になりBioMed Research Internationalに採択となった。症例の内容が心不全全体におよんでいないこと、および解析ソフトウエアの改良がなされていない点は不満足な進捗であるが、心肥大合併症例に焦点を絞ったことで、有益な結果が得られ論文が採択されたので、おおむね順調であると評価している。研究代表者の異動に伴い、新たなPCを購入して3次元(3D)tagging MRI解析データを移動した。対象者の匿名化の作業やソフトウエアをサポートするGyroTools社のGerard Crelier PhDとの調整に時間を要した。昨年度から引き続き、心肥大と心不全をともに示した症例に焦点を絞り解析を進めた。前年度の結果と同様に、心筋瘢痕を認めない場合でも、心室後壁などに機能的な異常や力学的な異常が示唆された。今回の研究により、3D tagging MRIは3回の息止めのみで心臓全体の動きやstrainを解析できる、高速かつ技術的に有用な方法であることが確認された。解析手法も比較的官位であった。また心不全症例、とくに心肥大を伴う疾患では、特異的な局所の異常所見を明示することが結論付けられた。2015年4月の段階で31心不全症例が撮像され、内訳は主課題の高血圧性心不全3例、対照となる肥大型心筋症6例およびその他が22例である。総例数は十分であるが、高血圧性心不全が診断を検査前に下すことが困難であることから達成度は若干遅れている。