hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
作物の成長促進と耐病性増強をもたらす二次代謝産物の探索と作用メカニズムの解析

その結果、サフランの雌しべから生産されるサフラナール、サンショウの種子やモクレンの花蕾およびヤクチの果実から生産されるβ-ミルセン、ウイキョウやセイヨウウイキョウの種子から生産されるアネトール、ミドリハッカの葉部やイノンドの種子やタラゴンの葉部から生産されるリモネン、ヤクチの果実から生産されるバレンセン、ウイキョウゼリの葉部から生産されるメチルオイゲノール、ハナハッカの葉部と花穂およびヤクチの果実から生産されるp-シメン等にもレタス幼根に対する伸長促進作用があることが明らかとなった。H28年度からH30年度までの報告者らによる探索研究によって見出された植物生長促進物質の中から、さらに候補化合物を選抜し、作用特性や植物種間差異、そして植物成長促進作用のメカニズム等を検討した。その中で、特にγ-テルピネンによる植物伸長促進作用のメカニズムの検討では、γ-テルピネンを処理したレタスの根部で、IAA(オーキシン)のアミノ酸抱合体を加水分解して活性型のIAAを遊離させる働きのあるIAA-amino acid hydrolaseや、細胞壁の弛緩や細胞伸長に関与しているxyloglucan endotransglucosylase/hydrolaseのタンパク質の発現量が増加すること、そしてγ-テルピネン処理後にIAA-amino acid hydrolase遺伝子のうちの1つの発現量が有意に増大したこと、さらにIAAにより生合成が促進されることが知られているエチレンの発生量もγ-テルピネン処理後に増大したこと等から、γ-テルピネンによるレタスでの生育促進作用には、IAA-amino acid hydrolaseの発現増大による活性型IAA量の増加が関与している可能性があることが示された。β-カリオフィレンとγ-テルピネンによる植物生育促進効果は、成長の比較的早い植物種において高い効果が現れる傾向が認められたため、より効果が高く、かつ今後の実験に利用しやすい植物種の再検討を行う。その後、その植物種を供試植物として、植物生育促進メカニズムの解析を行う。さらに、植物成長促進作用と耐病性を併せ持つβ-カリオフィレンとγ-テルピネン以外の天然由来物質の探索も継続して実施し、新規の植物成長調整剤開発に応用できる可能性のより高い物質を選抜し、その作物への作用の特徴や作用メカニズムについても解析していく予定である。これまでの研究で同定した植物成長促進活性を持つ植物由来物質については、平成29年度にタンパク質の網羅的な変動解析(プロテオミクス解析)を実施し、影響を受ける酵素を推定できたため、今後は、作用メカニズムにおけるそれらの役割について詳細に検討していく予定である。また、これまで同定した植物成長促進活性を持つ植物由来物質は、比較的活性が低いものが多かったため、今後は、さらに活性の高い植物由来物質を見出すために、探索研究も継続して実施する予定である。
制御不能の出血性ショックに対する低血圧蘇生の有用性に関する実験的検討

制御不能の出血性ショックモデル(ビーグル犬、体重1316kg)を作成し、止血確保までの45分間における正常血圧維持(平均動脈圧100mmHg)群(A群)、低血圧維持(平均動脈圧60mmHg)群(B群)、低血圧(平均動脈圧60mmHg)かつ動脈酸素分圧を約600Torrに維持した群(C群)の3群について、全身酸素代謝、重要臓器の潅流障害、破綻血管部の凝固状態、腹腔内出血量の比較、止血後の臓器障害、生存率を比較した結果、1.A群において正常血圧に可及的に戻すためには、大量の晶質液と短時間の大量輸血投与が必要であった。A群の腹腔内出血量は有意に多く、その原因として、不十分な血栓形成、凝固因子の希釈化、血液粘性の低下による血栓形成部の血流抵抗の減弱、正常血圧による血栓の破綻が考えられた。2.輸液投与量を制限する低血圧蘇生は、45分間の短時間であれば、生体は良く耐え、組織酸素代謝障害による臓器障害も72時間まで発現しなかった。しかし、100%酸素下、動脈血酸素分圧を500600Torrに増加させたC群では、組織酸素代謝障害の悪化とアシドーシスを防止できた。3.72時間生存率は、有意にB・C群が良好であった。A群の死因は、急性肺不全と考えられた。以上より、制御不能の出血性ショツクモデルにおいて、大量輸液による正常血圧蘇生は生存率の向上に貢献しない可能性が示された。以上の方針が治療の標準として採用されるためには、臨床においてさらなる検討が必要である。目的制御不能の出血性ショックモデル(ビーグル犬、体重1316kg)を用い、止血確保までの2時間における低血圧維持(平均動脈圧60mmHg)群、正常血圧維持(平均動脈圧100mmHg)群の2群について、全身酸素代謝、重要臓器の潅流障害、破綻血管部の凝固状態、出血量の比較、止血後の再潅流障害、臓器障害、生存率を比較した。結果1.制御不能の出血性ショックモデルの作成大腿動脈から15分間で(体重値×7%×1/2)量の脱血後、平均動脈圧(MAP)は40mmHgに下降し、次に、腹部大動脈に4mmの損傷(Tear)を加えた結果、A群(無処置群n=3)では、1時間以内に死亡した。2.B群(低血圧蘇生群n=5)、C群(正常血圧維持群n=5)のMAPは、脱血後20分でそれぞれ、48.0±5.3、50.3±16.2mmHg、腹部大動脈損傷後、修復までの60分間、輸血および輸液により、それぞれ59.3±36.1、109.0±19.0mmHg(P<0.05)で維持された。損傷を修復後、輸液による蘇生を開始し、蘇生開始15分後それぞれ、96.3±38.8、100.7±21.0mmHg、30分後、111.0±11.0、99.3±31.1mmHg、60分後、100.3±8.3、91.3±39.5mmHgであった。以上より、大量出血時における1時間20分の血圧維持を低血圧および正常血圧の2群に差別することができた。3.全身酸素代謝、腸管の潅流障害(胃粘膜Pco2)は、2群間に有意差を認めなかった。4.C群は、B群に比較し、Hb、Ht、血糖値、pH値の低下および血清Naの高値をを認めた。これは、C群における大量輸液の影響が考えられる。

破綻血管部の凝固状態(血栓の形成)は、B群において良好であり、全例、再開腹時には止血されていた。腹腔内出血量は、B群128±45、C群240±80ml(P<0.05)であった。5.72時間生存率は、B群100%(5/5)、C群20%(1/5)(P<0.05)であった。生存例6例の臓器標本および血液検査で臓器障害を認めなかった。死亡例については、検索中である。以上より、大量出血に対して、大量輸液による正常血圧蘇生は生存率の向上に貢献しない可能性が示された。次年度は、実験動物数を増やし、原因追及をさらに進める。制御不能の出血性ショックモデル(ビーグル犬、体重1316kg)を作成し、止血確保までの45分間における正常血圧維持(平均動脈圧100mmHg)群(A群)、低血圧維持(平均動脈圧60mmHg)群(B群)、低血圧(平均動脈圧60mmHg)かつ動脈酸素分圧を約600Torrに維持した群(C群)の3群について、全身酸素代謝、重要臓器の潅流障害、破綻血管部の凝固状態、腹腔内出血量に比較、止血後の臓器障害、生存率を比較した結果、1.A群において正常血圧に可及的に戻すためには、大量の晶質液と短時間の大量輸血投与が必要であった。A群の腹腔内出血量は有意に多く、その原因として、不十分な血栓形成、凝固因子の希釈化、血液粘性の低下による血栓形成部の血流抵抗の減弱、正常血圧による血栓の破綻が考えられた。2.輸液投与量を制限する低血圧蘇生は、45分間の短時間であれば、生体は良く耐え、組織酸素代謝障害による臓器障害も72時間まで発現しなかった。しかし、100%酸素下、動脈血酸素分圧を500600Torrに増加させたC群では、組織酸素代謝障害の悪化とアシドーシスを防止できた。3.72時間生存率は、有意にB・C群が良好であった。A群の死因は、急性胚不全と考えられた。以上より、制御不能の出血性ショックモデルにおいて、大量輸液による正常血圧蘇生は生存率の向上に貢献しない可能性が示された。異常の方針が治療の標準として採用されるためには、臨床においてさらなる検討が必要である。
高精度１分子観察による基本ユニットラフト仮説の検証

本研究では、生細胞膜上でラフト親和性の糖脂質やGPIアンカー型受容体(GPI-anchored receptor = GAR)が特異的ホモダイマーを形成し、ラフトの基本ユニットとなり、シグナル変換のプラットフォームとなるという仮説を検証した。様々な糖脂質やGARが短寿命のホモダイマーを形成することを発見し、一般性があることを発見した。また、形成されたホモダイマーはすべて、脂質相互作用で安定化されていることを見出した。さらにこれらのホモダイマーは、下流のシグナル伝達を誘起する、あるいは膜受容体活性を制御するための基本ユニットとしてはたらくことが示唆された。最近我々は、1分子観察法を駆使してGPIアンカー型受容体(GPI-anchored receptor = GAR)と糖脂質を細胞膜上で1分子観察し、以下の仮説を得た:ラフト親和性のGARと糖脂質は、特異的ホモダイマーを形成し、ラフトの基本ユニットとなる。糖脂質ラフトの基本ユニットは、受容体の活性制御を行ない、また、GAR基本ユニットは、刺激後に脂質の協同的相互作用によって、安定なGAR会合体ラフトを形成し、シグナル変換のプラットフォームとなる。本研究では、この仮説に基づき、特に、1)GARと糖脂質のラフト基本ユニットの動態解明、2)刺激後、安定なGAR会合体が形成され、シグナル変換を誘起する機構、3)糖脂質の基本ユニットが受容体を制御する機構、を解明することを目的としている。このため、まず、GARや糖脂質が基本ユニットであるホモダイマーを形成することに一般性があるかどうかを調べた。その結果、新たに3種のGARと4種の糖脂質につき、0.2秒の寿命を持つホモダイマーを形成することを見出した。次に、糖脂質ラフトの基本ユニットを形成するために必須の糖鎖部分を決定するために、様々な官能基を欠損したGM3アナログ体のホモダイマー寿命を測定した。その結果、糖鎖中の特定の官能基がホモダイマー形成に重要な役割を担っていることが判明した。さらに多くの種類のGPIアンカー型受容体(GAR)と糖脂質を1分子イメージングすることにより、これらの分子の短寿命ホモダイマー形成に一般性があることを見出した。さらに様々な官能基を欠損したGM3アナログ体のホモダイマー形成を調べ、どの部位が重要な役割を担うのかを同定しつつある。これらの結果は、まず初めに糖鎖やタンパク質の相互作用で、GARや糖脂質のホモダイマーが誘導され、引き続きコレステロールなどのラフト脂質がリクルートされるという我々が提案してきた仮説を支持している。今後のさらなる研究により、ラフトの理解が急速に進むかもしれない。最近、我々は生細胞膜上でラフト親和性の糖脂質やGPIアンカー型受容体(GPI-anchored receptor = GAR)とを高精度1分子観察し、以下の新ラフト仮説を提案した。GARと糖脂質は、特異的ホモダイマーを形成し、ラフトの基本ユニットとなる。本研究では、当該年度、様々なGARが短寿命のホモダイマーを形成することを発見し、GARのホモダイマー形成に一般性があることを見出した。また、糖脂質ガングリオシドについても、すべてのガングリオ系ガングリオシドが短寿命のホモダイマーを形成することを見出し、ガングリオシドのホモダイマー形成にも一般性があることを発見した。また、形成されたホモダイマーは、すべて、コレステロールにより安定化されており、さらに他のラフト脂質であるスフィンゴミエリンなどを短期間リクルートすることを見出した。さらに、ガングリオシドのホモダイマー形成に必須の糖鎖構造を決定すべく、全化学合成によって、様々な官能基を欠損させたGM3のアナログ体のホモダイマー形成を観察し、一部の官能基が重要であることを発見した。また、ガングリオシドプローブのうちGM3が最も長い期間、EGF受容体と相互作用することを見出した。さらにGM3のシアル酸のないアシアロ体は、EGF受容体とほとんど相互作用しないので、GM3のシアル酸がEGF受容体との相互作用には重要であることを発見した。GARや糖脂質のホモダイマーの一般性を検証するのが、本研究の最初の目標であったが、多種類の分子についてホモダイマー形成を確認でき、これを達成できた。また、糖脂質の糖鎖のどの官能基がホモダイマー形成に重要であるかの同定も、全化学合成法によるアナログ体を用いた研究で進んでおり、順調である。EGF受容体とガングリオシドの相互作用の詳細の解明も進んでいる。生細胞膜上におけるラフト親和性の糖脂質やGPIアンカー型受容体(GPI-anchored receptor = GAR)の高精度1分子観察の結果、我々は以下のラフト仮説を提案している。GAR基本ユニットは、刺激後に脂質の協同的相互作用によって、安定なGAR会合体ラフトを形成し、シグナル変換のプラットフォームとなる。糖脂質の基本ユニットは、受容体の活性制御を行なう。前年度までに、様々なGARや糖脂質ガングリオシドが、コレステロールにより安定化された短寿命のホモダイマーを形成することを発見し、GARやガングリオシドのホモダイマー形成に一般性があることを見出した。

また、EGF受容体と相互作用するガングリオシドはGM3であり、しかもそのホモダイマーの糖鎖がEGF受容体の糖鎖と相互作用することを見出した。特にGM3のシアル酸がないラクトシルセラミドは、EGF受容体と相互作用しないので、シアル酸が重要であることを見出した。当該年度は、EGF受容体とGM3ホモダイマーの糖鎖相互作用をさらに検討した。結果、GM3ホモダイマーの糖鎖とEGF受容体の2か所のN型糖鎖とが相互作用していることが示唆された。また、リガンド刺激後EGF受容体への下流の信号分子のリクルートが、つまりEGF受容体の活性化が、GM3との糖鎖相互作用により抑制されることを明らかにした。本研究では、生細胞膜上でラフト親和性の糖脂質やGPIアンカー型受容体(GPI-anchored receptor = GAR)が特異的ホモダイマーを形成し、ラフトの基本ユニットとなり、シグナル変換のプラットフォームとなるという仮説を検証した。様々な糖脂質やGARが短寿命のホモダイマーを形成することを発見し、一般性があることを発見した。また、形成されたホモダイマーはすべて、脂質相互作用で安定化されていることを見出した。さらにこれらのホモダイマーは、下流のシグナル伝達を誘起する、あるいは膜受容体活性を制御するための基本ユニットとしてはたらくことが示唆された。官能基を欠損させたGM3アナログ体のホモダイマー形成を観察することにより、どの官能基が重要であるかを同定しつつあるが、同時に分子動力学シミュレーション(MD)により、予測された箇所と一致するかどうかを検討する。糖鎖内の各粗子化粒子のすべてのペアについて、お互いが存在しやすい距離を調べ、相互作用部位を推定していく。また、糖脂質のホモダイマー形成に一般性が見られたので、次に糖脂質ホモダイマーが膜受容体の活性制御にどのように関わっているのか明らかにしていく。これまでに、GM3はモノマーではなく、そのホモダイマーがEGF受容体(EGFR)のアスパラギン結合型糖鎖と糖鎖間相互作用し、EGFRのダイマー化を抑制することを見出している。今後は、GM3ホモダイマーは、EGFRのダイマー化だけでなく、活性化も抑制するのか?という問いを解決していく。GARのホモダイマー形成にも一般性が見られたので、次に、GARのひとつであるCD59のリガンド添加時に安定な4量体ができて、シグナル分子をリクルートする機構を解明していく。そのために、CD59の4量体の元にリクルートされる貫通型タンパク質と、下流のシグナル分子の3色同時での1分子観察を行う。また、その貫通型タンパク質がない細胞でのシグナル分子のリクルートと比較する。今後は、さらにGARや糖脂質のホモダイマー形成機構やホモダイマーによる受容体活性制御機構を解明していく。そのため、まず、分子動力学シミュレーション(MD)でガングリオシドダイマー形成に重要な糖鎖部位を予測する。今まで行ってきたGM3の官能基が欠損したアナログ体のダイマー形成能の結果と突き合わせて、ホモダイマー形成に必須な官能基を決定していく。次に、GM3ホモダイマーによるEGF受容体活性制御の詳細をさらに解明していく。
小腸絨毛形成における毛細血管網の変化とその役割 -螢光標識ゼラチン法を用いた三次元的解析

マウス胎仔小腸近位部における絨毛形成過程とそれに伴う毛細血管網の変化及びDNA合成阻害薬の影響について検索した。絨毛形成は妊娠13日目(膣栓=0日)から始まった。13日目、楕円形の上皮を取り巻く間葉内に疎な血管叢が分布していた。14日目には、上皮下基底膜に凹凸が生じ、BrdUの取り込みでDNA合成を調べると、2時間で全体の半数程度の細胞が散在性に標識されたが、上皮が間葉側に陥入しつつある部位で上皮・間葉細胞ともに標識頻度が高かった。間葉内の血管叢は太い血管の疎な層とその枝の細い血管より成る内側の密な層に分かれ、一部の血管ループは上皮の陥入部間で間葉が凸な上皮下基底膜直下に位置した。15日目に上皮の陥入が進むと、BrdU標識細胞は陥入部上皮に多く見られた。上皮陥入部間の指状の間葉突出部は初期絨毛を形成し、その伸長に合わせて血管ループも伸長した。発生が進んで絨毛が長くなっても血管ループ先端部は常に絨毛の先端部に位置して、ループの途中には斜めのバイパス等も形成された。メトトレキサート投与の13日後の変化を見ると、13日目投与では、まばらにヒダ状の絨毛様の構造物が形成されるのみであり、14日目投与では、一横断面に数個の絨毛が形成されたが、大きさがまばらであった。しかし、15日目投与では、成長が遅延するが絨毛の密度はあまり変化なかった。以上の結果より、上皮は血管ループが存在しない部位で間葉内に陥入して取り残された間葉とそれを被う上皮が絨毛を形成するが、血管ループは当初より絨毛内に存在し、絨毛の伸長に合わせて血管ループの脚が伸長してループの先端部は常に絨毛の先端部に保定されていることが明らかとなった。絨毛形成の臨界期は妊娠14日目で、この時期に細胞の分裂・増殖が阻害されると上皮の陥入が傷害され、結果的に絨毛形成が妨げられることが明らかとなった。正常ICR系マウス胎仔小腸近位部を材料として、絨毛の形成過程における毛細血管網並びに細胞外基質の三次元的分布の変化を解析した。なお、膣栓の確認された日を妊娠0日とした。絨毛形成に関わる変化は妊娠1315日目に認められた。この間、横断像の面積は約4倍となり、上皮の割合が20%から40%に増加した。間葉組織は約30%でほとんど変化せず、筋層が減少した。13日目、それまで滑らかであった上皮下基底膜に凹凸が生じ、次第に太い指状の凸部が顕著になったが、断面積や内腔の拡大により、管の中心から見た場合、凸部先端の基底膜の位置は元の滑らかな時の位置とほとんど変化がなかった。血管網は、13日目では間葉組織内に層状の疎な血管叢が見られ、漿膜下よりそこに向かう太い血管が認められた。14日目に、この血管叢は太めの血管の疎な層とその枝の細い血管より成る内側の密な層に分かれた。

絨毛の形成につれ、絨毛内に向かうループ状の血管が太い血管層から出るのが観察され、内側の層は消失した。血管ループには斜めバイパス等も認められたが、太い血管層には乱れがなく、横断面における相対的位置も変化なかった。以上の結果より、絨毛は上皮組織が間葉組織内に陥入する際に取り残された部分より形成されると考えられた。このとき、血管叢は外に向かって押し広げられるが、内側の密な層が絨毛内に取り込まれて血管ループとなり、その脚が伸張して絨毛内の位置を保つと考えられ、絨毛先端部では血管を保定する仕組みの存在が推察された。ラミニン、コラーゲン、テネイシン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、コンドロイチン硫酸等の細胞外基質やIL-1α、ILー6等のサイトカインの免疫組織化学を施し、絨毛先端の血管ループとの関連性を検索すると、テネイシンが血管ループ周囲のみに弱く認められたが、他の物質には顕著な関連性が見られなかった。正常ICR系マウス胎仔小腸近位部を材料として、絨毛形成の始まる妊娠13日目より15日目にDNA合成を阻害するためにメトトレキサートを投与し、絨毛形成に及ぼす影響について検索した。まず、BrdUを投与してDNA合成細胞を検索すると、14日目では上皮・間葉組織共に半数程度の細胞が散在して標識され、管腔が伸び出している先端部付近の上皮細胞で標識頻度が僅かに高かった。絨毛の形成が始まると、標識細胞は、陥入部上皮に多く、絨毛の側壁でも散在性に認められた。間葉組織内では、散在性に観察された。この時期にメトトレキサートを投与すると、胎仔の成長は遅延し、皮膚は菲薄化し皮下に浮腫を生じた。この変化は投与した胎仔の胎齢が若いほど、また投与からの時間が長くなるほど顕著であった。心臓の拍動は弱く、拍動数も減少していたため、臍静脈からの螢光標識ゼラチンの全身還流は困難であった。腸管は正常胎仔に比較して短く、直径も細かった。13日目投与では、ヒダのような絨毛様の構造物が形成されるのみで、上皮が死滅している部位も見られ、間葉細胞も疎であったが、筋層はほぼ正常であった。14日目投与では、一横断面に数個の絨毛が形成されつつあったが、部位によっては大きさがまばらで、中心を越えた長い絨毛が見られることもあった。投与3日後では、内腔が拡大し、壁から数個の短い絨毛が突出している像も見られた。15日目投与では、正常に比較して遅延するものの絨毛の形成状況に顕著な異常は認められなかった。これらのことから、マウス小腸の絨毛形成の臨界期は妊娠14日目で、この時期にDNA合成が阻害されると、絨毛D発育に多大な影響が生じることが明らかになった。現在、このような変化にさいして血管系の分布がどのように変わるかを解明するために、螢光標識ゼラチン溶液に強心剤を配合し、全身還流を試みている。
性ステロイドの細胞増殖および分化誘導にかかわる核内調節機構と受容体制禦との関連性

Steroid hormones(SH)関連腫瘍は核内調節機構の作動によって増殖分裂や分化誘導をもたらす。したがってsteroid receptor(SR)と核内機能とくにDNA量の変動との関連性は核内acceptor site(AS)における遺伝子活性化機構を解明する上で重要である。SH依存性の顕著なヒト乳癌培養細胞(MCF-7)を用いて、細胞増殖によるER量の変動と、低濃度抗癌剤(Adriamycin(ADR),Methotrexate(MTX))添加によるER量の変動について検討した。細胞増殖によるER量の変動はERcおよびERnともに対数増殖期初期に最高値となり以後減少し定常期初期に最低値となり以後漸増した。殺細胞境界濃度の抗癌剤(MTX10^<-7>M,ADR10^<-8>M)でERcは著減した。殺細胞効果を示さない濃度の抗癌剤(MTX10^<-10>M,ADR10^<-10>M)でERcは著減したが、ERnの減少はMTXでより顕著であった。また、細胞増殖抑制硬化とER減少量に抗癌剤間の差異を認めた。すなわちER量の減少はMTXで、一方、細胞増殖の抑制はADRでより顕著であった。子宮内膜癌の発生母地である正常子宮内膜にたいするSHの遺伝子調節機構を探求するため、30例の成熟期夫人の性周期におけるSRの動態を生化学的に追跡しFCMによる細胞周期との関連性を比較検討した。性周期とSR量の関連性では、ERnおよびERc量は血中E_2レベルの変動に依存した。さらに、S期細胞数の割合は増殖期中期に最大となり、その後、分泌期にかけて減少したが分泌期中期に再び軽度増加した。これらのSH濃度の変動によるSR量およびS期細胞数との相互関係を検討すると、E_2濃度が58.9pg/ml以上でERn量が、また77.0pg/ml以下になるとS期細胞数が減少した。ERc量は、E_2濃度が88.0pg/mlに達するまでは増加し、それ以上の濃度では非結合型ERcの増加あるいはERcの核内転位のため減少した。Progesterone濃度とPR量およびS期細胞数との関連性はなかった。以上の結果、SRとくにERによるDNA regulation mechanismsの存在が明らかとなった。この継続研究の第1段階では、SRの標的となる核内acceptor site(AS)における遺伝子活性化機構の解明のため、SHーSRー複合体とDNAの相関について、次の如く検討した。1.分化型子宮内膜癌培養細胞(Ishikawa,1980)の細胞質ER(ERc)および核ER(ERn)は、それぞれ2.52fmal/μg・DNAと陰性、PgRは陰性と0.26fmal/μg・DNAであることを確かめ、^3HーE_2および^3HーMPAを添加し、電顕ーオートラジオグラフィーによって核内ASへの転位を追跡した。^3HーE_2の銀粒子は、核内に広く散在分布したが、^3HーMPAは、小数の不均一、集積性の転位を示した。MPA10^<-5>M添加し、前後のE.R,PgRの変動をみると、両者のmonoclonal抗体による免疫組織標本では、ER陽性細胞、PgR陽性細胞はいずれも1/3に減少した。DNA polymerase陽性細胞は著減した。BrdU monoclonal抗体によるS期細胞の標識率をみると、対照群を100%として、MPA添加群では、5060%まで減少した。臨床的に子宮体癌36例にも、MPA600mg/日×7日間投与して、同様の検討を行った。組織学的有効例は、細胞質ER350fmol/mg proteinから103.0(fmol/mg protein)、核ER281fmol/mg proteinから108.4と減少し、PgRは、同様に2690.1から、0.155と著減したが、核では47.2から33.3と有意な変化を認めなかった。2.人乳癌培養細胞(MCFー7)の増殖相におけるER量の変化と、低濃度抗癌剤(MTX,Adriamycin)添加によるER量を検討した。ERc、ERnは、いずれも対数増殖初期に、それぞれ100,000および140,000bindingsites/cellと上昇し、定常期初期に22,500、82,100bindingsites/cellと減少した。細胞障害境界濃度群では、MTX^<-7>M添加でERcは、4,300、ERnは8,600まで減少した。ERnはADR添加群でも、対照群に近似していた。MTX^<-10>M添加群ではERcは、40%まで著減したが、ERnは60%にとどまった。

細胞増殖によるER量の変動はERcおよびERnともに対数増殖期初期に最高値となり以後減少し定常期初期に最低値となり以後漸増した。殺細胞境界濃度の抗癌剤(MTX10^<-7>M,ADR10^<-8>M)でERcは著減した。殺細胞効果を示さない濃度の抗癌剤(MTX10^<-10>M,ADR10^<-10>M)でERcは著減したが、ERnの減少はMTXでより顕著であった。また、細胞増殖抑制硬化とER減少量に抗癌剤間の差異を認めた。すなわちER量の減少はMTXで、一方、細胞増殖の抑制はADRでより顕著であった。子宮内膜癌の発生母地である正常子宮内膜にたいするSHの遺伝子調節機構を探求するため、30例の成熟期夫人の性周期におけるSRの動態を生化学的に追跡しFCMによる細胞周期との関連性を比較検討した。性周期とSR量の関連性では、ERnおよびERc量は血中E_2レベルの変動に依存した。さらに、S期細胞数の割合は増殖期中期に最大となり、その後、分泌期にかけて減少したが分泌期中期に再び軽度増加した。これらのSH濃度の変動によるSR量およびS期細胞数との相互関係を検討すると、E_2濃度が58.9pg/ml以上でERn量が、また77.0pg/ml以下になるとS期細胞数が減少した。ERc量は、E_2濃度が88.0pg/mlに達するまでは増加し、それ以上の濃度では非結合型ERcの増加あるいはERcの核内転位のため減少した。Progesterone濃度とPR量およびS期細胞数との関連性はなかった。以上の結果、SRとくにERによるDNA regulation mechanismsの存在が明らかとなった。
中東欧諸国の日本語教育機関における教育コンテンツの実態調査と共同開発

本研究は,中東欧諸国及びその周辺国の日本語教育機関を研究対象とし,日本語コンテンツの実態と教師・学習者の日本語コンテンツ活用能力の実態を明らかにし,日本語コンテンツを開発した。具体的には,研究代表者と連携研究者が中東欧諸国の日本語教育機関を訪問し,日本語コンテンツの実態と教師・学習者の日本語コンテンツ活用能力について聞き取り調査を行った。コンテンツ開発については,これまで開催されてきた「日本語教育連絡会議」の内容を電子化し,インターネットで公開した。本研究は,中東欧諸国及びその周辺国の日本語教育機関を研究対象とし,「(1)日本語コンテンツの実態(需要・供給・開発状況とIT環境等)」と「(2)教師・学習者の日本語コンテンツ活用能力の実態」を調査によって明らかにし,そして「(3)実態に即した日本語コンテンツを開発」することである。特に中東欧諸国を対象とする理由は,教師・教材不足と地理的不便性をITの活用によって克服であると考えられ,かつ,「日本語教育連絡会議」に参加している日本語研究者・教師が本研究に積極的に協力していただけるということが主な理由である。今年度は,本研究の初年度であるため,調査対象国の「日本語コンテンツの実態」と「教師・学習者の活用能力の実態」を把握するための調査内容及び調査方法を国内で検討した。調査内容については,次年度以降に,質問紙調査と訪問調査によってこれらの実態を明らかにする予定である。中東欧諸国の日本語教育関係者との研究協力のために,2006年8月スロベニアで開催された「日本語教育連絡会議」に,研究代表者と研究分担者2名が参加した。そして2007年2月には,研究代表者と研究分担者2名が,在ボスニア・ヘルツゴヴィナ大使館とセルビア共和国ベオグラード大学の日本語教育を訪問した。このとき,日本語教師,日本語学習者そして日本語教育関係者から中東欧の日本語コンテンツとIT環境について,聞き取り調査によって現状の実態を調査した。また,研究代表者が本研究の海外共同研究者(カリフオルニア大学サンディェゴ校,メルボルン大学,ベネチア大学の日本語研究者)と会って,今後の研究の進め方について研究打合せを行った。本研究の目的は,中東欧諸国及びその周辺国の日本語教育機関を研究対象とし,日本語コンテンツの実態と教師・学習者の日本語コンテンツ活用能力の実態を調査によって明らかにし,実態に即した日本語コンテンツを開発することである。本研究は3年計画で今年度は2年目である。昨年度に引き続き,研究代表者と研究分担者が中東欧諸国の日本語教育機関を訪問し,日本語コンテンツの実態と教師・学習者の日本語コンテンツ活用能力の実態を調査した。訪問した国は,オーストリア・ウィーン市,ポーランド・クラクフ市,ハンガリー・ブダペスト市である。また,米国ハワイ州ホノルル市で開催された「第4回日本語教育とコンピュータ国際会議」と,ハンガリー・マルトンヴァーシャル市で開催された「第20回日本語教育連絡会議」に参加し,研究成果を発表した。コンテンツ開発については,本研究で共同開発することがふさわしく,中東欧諸国のニーズに即している日本語教育用コンテンツについて検討を重ねた。その結果,これまで20年間に渡って開催されてきた「日本語教育連絡会議」の内容をインターネットで公開することにした。今後,多くの中東欧諸国の教育機関に対して開発したコンテンツの利用に関する技術支援を行うこと,コンテンツの利用普及を図ること,そして継続的にコンテンツ開発を行うことが重要で,これらのことについては次年度の課題とした。本研究は3年計画で今年度が最終年度である。昨年度に引き続き,研究代表者と連携研究者が中東欧諸国の日本語教育機関を訪問し,日本語コンテンツの実態と教師・学習者の日本語コンテンツ活用能力の実態を調査した。訪問した国・機関は,リトアニア・ヴィリニュス大学,ラトヴィア・ラトヴィア大学,エストニア・タリン大学とタリン市立ヤルヴェオッツァ高校である。また,セルビア・ベオグラード大学で開催された「第20回日本語教育連絡会議」に参加し,研究成果を発表した。コンテンツ開発については,これまで21年間に渡って開催されてきた「日本語教育連絡会議」の内容を電子化し,インターネットで公開した。主な収録コンテンツは,中東欧を中心とする関連論文・資料等で,合計556件である。このコンテンツの中には、今から約20年前の1988年の民主化以前の中東欧(ユーゴスラビア、他)の日本語教育について知ることのできる貴重な資料も含まれている。
ラジウムのミュオン原子の固体水素薄膜中での生成と観測

この研究は、ラジウム同位体イオンを固体水素薄膜に照射し、不安定核のミュオン原子を作ることを提案するものである。初年度においては、ラジウム同位体のイオンをつくるための新しいイオン源の設計と開発を進めた。二つの異なった手法について調査を行った。(1)表面イオン化型イオン源、放射性物質が熱せられると、イオン化され真空中に放出される、(2)α崩壊反跳生成物型イオン源、α崩壊で反跳した核をガス捕獲/イオンガイド装置に導く。同種のイオン源を製作した研究者と連絡をとり、それぞれの型の利点・欠点を評価した。一番目の型では、イオン源の放射線強度は、放射性同位体の寿命に依存し、寿命が長いほど、放射線強度は少なくてすむ。一方、二番目の型では、イオン源の放射線強度は植え込みに必要なイオンビーム強度に主に依存する。これを考慮すると、表面イオン化型の方がイオン源の放射線強度を少なくできることから、われわれの目的によりあったものとなる。研究の二年目の課題は、主にラジウム同位体のイオンをつくるための新しいイオン源の設置である。この目的のために、アルカリ・アルカリ土類元素に対し高いイオン化効率を持つ表面電離型イオン源が選択された。現在既に、表面電離型イオン源及びイオンを抽出して加速させるための新収速電極ユニットが製作されており、また、この新システムを高真空にするためのターボ分子ポンプ排気系も新たに整備された。三年目には、イオン源として表面電離型イオン源が採用された新しいシステムでの実験に向けて、まず、そのイオン源やビーム光学系などシステムの最適化が図られた。最適化は、京都大学原子炉実験所において、バリウムの安定同位体により行われた。バリウムはラジウムと同族であり、同程度のイオン化エネルギーを持つため、ラジウムでの実験に向けた調整等には最適であり、また、不安定核であるラジウムに対する実験を行う際にも、イオン源のアイオナイザー内部に、安定同位体バリウムをマーカーとして混入しておけば、このマーカーで調整や最適化を行った後、そのまま、不安定核イオンへの切り替えができるので、効率的な実験が可能となる。その結果、想定される焦点位置において、数ミリメートルのビーム・スポットサイズで、約1マイクロアンペアのバリウムイオンビームの生成が観測されるとともに、数時間にわたり安定したビーム強度が得られ、実験上必要とされる条件を十分に満たしていることが確認された。そして、平成18年1月、英国・ラザフォードアップルトン研究所(RAL)のRIKEN-RALミュオン施設の装置に、この新システムが設置された。今後、ラジウムを用いた実験に向け、まず、バリウム同位体イオンを固体水素薄膜に照射し、バリウムミューオン原子の生成実験などを行う予定である。

初年度においては、ラジウム同位体のイオンをつくるための新しいイオン源の設計と開発を進めた。2つの異なった手法について調査を行った。(1)表面イオン化型イオン源、放射性物質が熱せられると、イオン化され真空中に政出される、(2)α崩壊反跳生成物型イオン源、α崩壊で反跳した核をガス捕獲/イオンガイド装置に導く。同種のイオン源を製作した研究者と連絡をとり、それぞれの型の利点・欠点を評価した。1番目の型では、イオン源の放射線強度は、放射性同位体の寿命に依存し、寿命が長いほど、放射線強度は少なくてすむ。一方、2番目の型では、イオン源の放射線強度は植え込みに必要なイオンビーム強度に主に依存する。これを考慮すると、表面イオン化型の方がイオン源の放射線強度を少なくできることから、われわれの目的によりあったものとなる。さらに、不安定核イオン源を製作する上で重要なのは、まず安定同位体のビームを用いて、装置の調整とビームの最適適化ができることである。その後に、フィラメントを取り替えるだけで、不安定イオンに切り替えて実験を行うことができる。ラジウムの場合には、ラジウム自身の安定同位体がないので、最適の候補はバリウムである。バリウムはラジウムと周期律表中で同じ類にあり、近いイオン化エネルギーを持つ。イオン源の仕様はほとんど決りつつあり、次年度にはイオン源の製作を行う予定である。一方、既存の実験設備を用いて、理研RALミュオン施設の第4実験ポートで実験が進展した。固体水素/重水素薄膜に打ち込んだわずか数ppmの安定同位体アルゴンで、ミュオンのアルゴンへの移行によって生じるミュオンアルゴン原子の2P→1s遷移X線(644keV)がきれいに観測されるという、非常に有望な結果が得られた。この研究は、ラジウム同位体イオンを固体水素薄膜に照射し、不安定核のミュオン原子を作ることを提案するものである。研究の2年目の課題は、主にラジウム同位体のイオンをつくるための新しいイオン源の設置である。この目的のために、アルカリ・アルカリ土類元素に対し高いイオン化効率を持つ表面電離型イオン源が選択された。現在既に、表面電離型イオン源及びイオンを抽出して加速させるための新収速電極ユニットが製作されており、また、この新システムを高真空にするためのターボ分子ポンプ排気系も新たに整備された。今後、新イオン源システムによるラジウムの実験に向けて、バリウムの安定同位体によるイオン源の最適化やビーム光学系の調整等を行う予定である。バリウムはラジウムと同族であり、同程度のイオン化エネルギーを持つので調整等には最適である。また、不安定核であるラジウムに対する実験を行う際にも、イオン源のアイオナイザー(Ionizer)内部に、安定同位体バリウムをマーカーとして混入しておけば、このマーカーで調整や最適化を行った後、そのまま、不安定核イオンへの切り替えができるので、効率的な実験が可能となる。今年度、イオン源として表面電離型イオン源が採用された新しいシステムでの実験に向けて、まず、そのイオン源やビーム光学系などシステムの最適化が図られた。
運動効果が、独立した器官の成体幹細胞の維持と環境制御に与える影響

運動による効果が現れる成体幹細胞として、運動効果が直接的に現れやすい骨格筋内の成体幹細胞である筋衛生細胞(サテライト細胞)と、間接的に運動効果の効力が発揮される脳中枢神経系海馬の神経幹細胞とを扱った。運動効果による成体幹細胞機能を左右する生体因子として、神経領域と骨格筋でWnt3/Wnt3aを観測した。Wnt3因子の発現上昇は、老化した個体の脳海馬の成体神経幹細胞の増殖や、新たな神経新生を促す効果を保持する事を確認した。また、運動効果によるWnt3/Wnt3a発現応答の影響、サテライト細胞機能への影響について、骨格筋組織の抽出サンプルで解析を行った。併せて、走運動を施した実験動物マウスの脳海馬と骨格筋から、成体幹細胞をそれぞれ樹立し、in vitroの細胞培養系での評価が行える実験系を構築した。運動効果の免疫組織染色法による影響の解析では、増殖・分裂細胞をトレースするためのBrdUを10日間腹腔投与を動物群に設定した(健常体vs運動施術群)。抽出した組織から、(i)成体幹細胞(未分化幹細胞、NSC)の増職能を、神経系ではSox2(+)BrdU(+) NSC数, Nestin(+)BrdU(+) NSC数のコントロール群との定量比較により評価した。(ii)神経新生機能は、NeuroD1(+)BrdU(+)神経前駆細胞数, Dcx(+)BrdU(+) NP数、(iii)神経(neuron)分化機能はNeuN(+)BrdU(+) neuron数、Prox1(+)BrdU(+) neuron数、さらに(iv)新生Wnt3産出細胞Wnt3(+)BrdU(+)数の検出・統計解析により測定した。骨格筋では、増殖マーカー遺伝子、BrdU(+)細胞とPax7未分化性マーカー遺伝子群、活性化のマーカーであるMyoD(+)Pax7(+)陽性細胞種について同様の定量統計解析を行った。脳神経系の成体神経幹細胞と、骨格筋内のサテライト細胞に同時にスポットをあて、運動効果が与える影響を解析するために必要なそれぞれの実験系と抽出サンプルの確保を行えた。独立した器官である脳神経と骨格筋の成体幹細胞に、運動がどのような効果を果たすかについてパラレルに比較解析するため、それぞれの成体幹細胞培養系(in vitro評価系)と組織抽出サンプル(in vivo評価系)の集積を効率よく進めることが出来ている。今後は、新しい制御機構解明のデータ集積を行い、研究論文発表に役立つ諸実験を展開していく予定である。今後の研究の推進方策としては、サテライト細胞および神経幹細胞の機能を左右し得るWnt3/Wnt3a因子の挙動(発現誘導、発現領域の特定)に焦点を当てながら、成体幹細胞(サテライト細胞と神経幹細胞)の潜在的な活性、それを牽引するのはニッチ細胞で構成される環境制御の、複数の組織(骨格筋と脳神経系)での相似性や違いについて、新規な学術的知見の探索を進める。また、脳中枢神経系や骨格筋は、老化で非常に大きな影響を受ける共通組織であることに着目する。若齢組織、老齢組織からの比較実験系の構築についても、上述したこれまでの研究概要に沿いつつ、進行させていきたいと考えている。老化によるサルコペニア(骨格筋)や認知・精神疾患などの脳神経疾患の予防、治療、創薬開発にも幅広く役立つ基礎研究の展開を推進する。

脳神経系の成体神経幹細胞と、骨格筋内のサテライト細胞に同時にスポットをあて、運動効果が与える影響を解析するために必要なそれぞれの実験系と抽出サンプルの確保を行えた。独立した器官である脳神経と骨格筋の成体幹細胞に、運動がどのような効果を果たすかについてパラレルに比較解析するため、それぞれの成体幹細胞培養系(in vitro評価系)と組織抽出サンプル(in vivo評価系)の集積を効率よく進めることが出来ている。今後は、新しい制御機構解明のデータ集積を行い、研究論文発表に役立つ諸実験を展開していく予定である。今後の研究の推進方策としては、サテライト細胞および神経幹細胞の機能を左右し得るWnt3/Wnt3a因子の挙動(発現誘導、発現領域の特定)に焦点を当てながら、成体幹細胞(サテライト細胞と神経幹細胞)の潜在的な活性、それを牽引するのはニッチ細胞で構成される環境制御の、複数の組織(骨格筋と脳神経系)での相似性や違いについて、新規な学術的知見の探索を進める。また、脳中枢神経系や骨格筋は、老化で非常に大きな影響を受ける共通組織であることに着目する。若齢組織、老齢組織からの比較実験系の構築についても、上述したこれまでの研究概要に沿いつつ、進行させていきたいと考えている。老化によるサルコペニア(骨格筋)や認知・精神疾患などの脳神経疾患の予防、治療、創薬開発にも幅広く役立つ基礎研究の展開を推進する。標的遺伝子の発現制御について、精密な分子応答機構を正しく理解するため、データの集積と解析の繰り返しにこれまで尽力してきた。これらの実験に用いる試料は微量分析が可能であったため、分子生物学的な実験に用いる試料採取に必要な消耗品(遺伝子発現解析キット類)の購入が当初予定より低くなった。また、標的遺伝子の同定をある程度行った後に、高額な抗体類を購入して実験を進める事が効率的な研究費使用に繋がるため、次年度使用額が生じる事になった。今後、これまで得られた実験データをもとに、(より高額な)抗体類の購入などを伴う組織解析実験を有効に進め、当研究の推進に努める。
NotchシグナルによるTリンパ球活性化制御機構の解明

Tリンパ球分化・活性化は、様々な分子群あるいは細胞間の相互作用によって精巧に制御されている。我々はこれまでの研究で、Tリンパ球に発現するNotch分子を介したシグナル伝達が、Tリンパ球分化・活性化を精巧に制御していることを明らかにしてきた。本研究では、糖鎖修飾によるNotchシグナルの制御がどのようにTリンパ球の分化・活性化に影響を与え、免疫システムの中で役割を担っているかについて解明することを目的とした。Notchに糖鎖を付加するlunatic fringeがNotch1に作用して、Tリンパ球の初期分化を担うNotchシグナルを正に制御していることを明らかにした。CD8陽性Tリンパ球の細胞傷害性Tリンパ球(CTL)への分化促進にNotchシグナルが関与することを解明した。CTLの活性化にはNotchシグナルとCREBとのクロストークがあり、その分子メカニズムについて解明した。今年度の結果から、lunatic fringeはTリンパ球分化をcell autonomousにもnon-cell autonomousにも制御していることが明らかになった。また、CTL分化にもNotchシグナルが関与することを解明し、4種類あるNotchの中でもNotch2シグナルがCTL分化に関与していることが明らかになった。さらに、CTLにもlunatic fringeが発現しておりlunatic fringeのCTL分化における役割について解析したが、その関与については否定的であった。以上の結果から、Notchの糖鎖付加はTリンパ球分化には非常に重要な役割を担っているが、成熟したTリンパ球においては糖鎖付加の如何に関わらずNotchシグナルは伝達されると考えられた。[目的]Tリンパ球分化・活性化は、様々な分子群あるいは細胞間の相互作用によって精巧に制御されている。本研究では、糖鎖修飾によるNotchシグナルの制御がどのようにTリンパ球の分化・活性化に影響を与え、免疫システムの中で役割を担っているかについて解明することを目的とする。[結果](1)Notchに糖鎖を付加するlunatic fringeがNotch1に作用して、Tリンパ球の初期分化を担うNotchシグナルを正に制御していることを明らかにした(論文投稿中)。更に、lunatic fringeの発現が高いT前駆細胞では、周りに存在するlunatic fringeの発現が相対的に低い前駆細胞とNotchリガンドを競合していることを解明した。その結果、lunatic fringeの発現が低い細胞では充分な量のNotch1シグナルが入らないことを明らかにした。
糖尿病患者の療養法から導かれた外来における看護モデル(coaching)の開発

本研究の目的は、1.糖尿病患者の病気の軌跡をライフヒストリー研究法を用いて明らかにし、2.「熟練看護婦の糖尿病患者の看護の経験の意味」を現象学的な解釈により明らかにし、3.外来における看護モデル(コーチング)を開発するたもの示唆を得ることである。1では平成10年12月からの3ヶ月の間に入院中の糖尿病患者13人を対象とし、インタビューを行った。その結果得られた糖尿病患者が語るライフヒストリーは、その人が生きてきた時代や生きてきた身体を現在という次元で解釈した患者の体験を表していた。2では糖尿病患者の看護を実践している熟練看護婦6名を対象に平成11年9月からの5ヶ月間にインタビューを行った。その結果4つの要素(1)自分自身で癒していくのを助ける、(2)身体の変化を体験できるようにする(3)主体的に糖尿病を生きる人に仕立てる、(4)患者と一緒に時の流れにのる、が明らかになった。(1)の要素のサブカテゴリーには「患者の気持ちを分かる」「患者のしたいことからする」「自分の口で言う」「もともとの自分を出せる」があり、(2)の要素のサブカテゴリーには「見たり触れたりする」「身体の変化を聞き出す」「身体の変化を聞き出す」「目に見えるもので自分を測る」「身体をイメージする」「身体が楽になる」があり、(3)の要素のサブカテゴリーには「みること、聴くこと」「向き合う体勢になる」「力を引き出す」があり、(4)の要素のサブカテゴリーには「患者と一緒に山あり谷ありの終着駅がない道のり」「看護婦は信号機みたいなもの」があることが明らかになった。上記の4つの要素を中心にして糖尿病患者の看護モデル(コーチング)開発への示唆が得られた。「糖尿病患者の療養法から導かれた外来における看護モデル(coaching)の開発」のうち、本年度は、糖尿病患者がどのように生活を調整し、病気とつきあっているかを含めた病気の軌跡(illness trajectory)を糖尿病と共に生きる患者のライフヒストリーより明らかにすることをねらいとした。データ収集期間は平成10年11月から平成11年3月までの3ケ月間とした。対象は、2カ所の病院に入院中の糖尿病患者のうち、約1時間のインタビューが可能と判断され、患者の同意が得られた15名とした。患者が語り終えれるように、一人の患者に2回から3回のインタビューを実施した。研究方法は、ライフヒストリー研究の考え方に立って、インタビュー内容を分析・構成・編集し、本人の語ったものを大事にして、作品化した。一例をあげると、Aさんは昭和40年代に糖尿病を発症しているが、糖尿病を認識したのはごく最近、心筋梗塞になってからであった。しかし、それ以前の体験として、糖尿病の症状としてあげられる`しびれ'や`尿の色'などからだの感覚をとてもよく覚えていた。またAさんの糖尿病とともに生きてきた人生は、その時代の流通産業の創生期と重なり、歴史的な時間でAさんのライフヒストリーをみる必要があった。Aさんの語りの中で、何度も出てくるのは、糖尿病は口養生であり、そのためには支えてくれる家族の存在が必要であるというものであった。今後は、一人一人のライフヒストリーを大事に作品化し、まとめたものを学会等で公表する予定である。本年度は、「熟練看護婦の糖尿病患者の看護の経験の意味」を現象学的な解釈により明らかにすることを目的とした。糖尿病患者の看護を実践している熟練看護婦6名を対象に平成11年9月からの5ヶ月の間にインタビューを行った。インタビューは1回につき1時間程度を2回行い、糖尿病患者の臨床看護実践の経験を具体的に語ってもらい、テープレコーダーで記録した。

データ分析には現象学的研究アプローチを用いた。つまり看護婦の語りを遂語的に書き起こし、その全データから看護実践の現象が現れているものを記述し、共通のテーマを探索し、特定の現象によって共有された関係のパターンをうち立て、糖尿病患者の看護の経験の要素を抽出した。そして抽出した要素についてその現象を明らかにした。抽出した要素は以下の4つの要素(1)自分自身で癒していくのを助ける、(2)身体の変化を体験できるようにする、(3)主体的に糖尿病を生きる人に仕立てる、(4)患者と一緒に時の流れにのる、であった。(1)の要素のサブカテゴリーには「患者の気持ちを分かる」「患者のしたいことからする」「自分の口で言う」「もともとの自分を出せる」があり、(2)の要素のサブカテゴリーには「見たり触れたりする」「身体の変化を聞き出す」「目に見えるもので自分を測る」「身体をイメージする」「身体が楽になる」があり、(3)の要素のサブカテゴリーには「みること、聴くこと」「向き合う体勢になる」「力を引き出す」があり、(4)の要素のサブカテゴリーには「患者と一緒に、山あり谷ありの終着駅がない道のり」「看護婦は信号機みたいなもの」があることが明らかになった。上記4つの要素を中心にして糖尿病患者の看護モデル(コーチング)開発への示唆が得られた。今後はこれらの結果を学会などで公表する予定である。
軽度発達障害児のための絵記号コミュニケーション学習モデルと学習支援システムの開発

前年度,被験者A(小学5年生男子,高機能自閉症)にJIS絵記号313枚を見せて,それらの意味を問い,JIS絵記号すべてについて被験者が理解できる意味データを収集した.今年度は,このデータを用いて,絵記号を使った2種類約30問のコミュニケーション課題を作成し,Aと健常児2名(小学6年生女子,小学4年生男子)に対してこれらの課題を与え,その答え方の違いに着目して,Aのための絵記号コミュニケーション学習支援システムのプロトタイプを,CTAT(Cognitive Tutors Authoring Tool)を用いて試作した.コミュニケーション課題の結果から,AはJIS絵記号を個別の絵として解釈してしまい,絵記号を抽象化したシンボルとして捉えること,それらを関連付けることが,健常児に比べて困難であることがわかった.そこで,Aが絵(具体)として捉えていた絵記号を,より言語(抽象)に近いものとして抽象化して理解し,それらを関連付けて解釈できるようになることを目的として,絵記号コミュニケーション学習支援システムのプロトタイプを,CTATを用いて試作した.問題は14問あり,与えられた絵記号34枚の組み合わせを見て,34の選択肢から適切な語句を選んで,正しい意味の文を作成するもので,答え方に応じてヒントを示しながら間違いに気付かせ,正解に導くように作られている.ただし,ヒントに絵記号が入っていないこと,選択肢が別々に正誤を判定されることが,今後の課題としてあげられる.まず,絵記号コミュニケーション学習支援システムを開発するためには,Cognitive Tutorに適用するプロダクション・ルールの形式とインタフェースを決める必要がある.そのために,軽度発達障害児に対するコミュニケーション支援の内容と方法について,研究分担者及び研究協力者と具体的に議論し,軽度発達障害児(高機能自閉症児)1名(10歳)を被験者として,この被験者から絵記号文法の抽出を行い,この被験者のコミュニケーション支援を目的として,絵記号コミュニケーション学習支援システムを試作することにした.次に,これらの方針を踏まえた上で,Cognitive Tutor開発ツールであるCTAT(Cognitive Tutors Authering Tool)を本研究用にカスタマイズした.さらに,軽度発達障害児にとって利用可能なJIS絵記号を選別することと,それを用いて可能なコミュニケーションを知ることが必要であったので,JIS絵記号をパソコンで1枚ずつモニタに表示するWebベースのスライドを作り,被験者に1枚ずつ見せて,それらの意味を問い,JIS絵記号すべてについて被験者が理解できる意味データを得た.また,学会,研究会などにおいて情報収集を行い,本システム開発における課題を考察した.今後はこれらのデータを用いて,プロダクション・ルールの形式とインタフェースを詳細に設計し,研究協力者によって開発されたCTAT(Cognitive Tutors Authering Tool)を用いて,絵記号コミュニケーション学習支援システムを開発する.前年度,被験者A(小学5年生男子,高機能自閉症)にJIS絵記号313枚を見せて,それらの意味を問い,JIS絵記号すべてについて被験者が理解できる意味データを収集した.今年度は,このデータを用いて,絵記号を使った2種類約30問のコミュニケーション課題を作成し,Aと健常児2名(小学6年生女子,小学4年生男子)に対してこれらの課題を与え,その答え方の違いに着目して,Aのための絵記号コミュニケーション学習支援システムのプロトタイプを,CTAT(Cognitive Tutors Authoring Tool)を用いて試作した.コミュニケーション課題の結果から,AはJIS絵記号を個別の絵として解釈してしまい,絵記号を抽象化したシンボルとして捉えること,それらを関連付けることが,健常児に比べて困難であることがわかった.そこで,Aが絵(具体)として捉えていた絵記号を,より言語(抽象)に近いものとして抽象化して理解し,それらを関連付けて解釈できるようになることを目的として,絵記号コミュニケーション学習支援システムのプロトタイプを,CTATを用いて試作した.問題は14問あり,与えられた絵記号34枚の組み合わせを見て,34の選択肢から適切な語句を選んで,正しい意味の文を作成するもので,答え方に応じてヒントを示しながら間違いに気付かせ,正解に導くように作られている.ただし,ヒントに絵記号が入っていないこと,選択肢が別々に正誤を判定されることが,今後の課題としてあげられる.