hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
スギ心材ノルリグナンのポスト生合成化学－心材の成熟という新規概念－

核磁気共鳴スペクトル(NMR)構造解析に十分な量の化合物が得られなかったため、当初予定に達することができていない。(4)ノルリグナンオリゴマーと細胞壁多糖との結合に関するモデル実験:ノルリグナンをグルコースの存在下にて重合した。重合物の各種分析(可視光スペクトル、蛍光スペクトル、NMR測定)の結果、重合物中にグルコースが取り込まれていることが確認された。これら実験は当初、研究期間2年目(平成29年度)に計画されたものであり、当初の予定を大きく超えているといえる。(1) 29年度、本科研費により導入された分取高速液体クロマトグラフ装置の使用により、化合物分離の効率が極めて改善された。すなわち、スギ心材から6種類のノルリグナン二量体が単離された。現在もこれらの構造解析を進めつつある。そのうち5種類の二量体については仮の化学構造の提出まで到達している。加えて、数種類の3量体の単離を進めている。(2)ノルリグナン単量体(アガサレジノール)を炭水化物(グルコース)の存在下にてモデル的に酵素重合させた(市販ペルオキシダーゼによる)。生成物について、親和ゲルクロマトグラフィーにより残留炭水化物を除去した(ノルリグナン炭水化物結合体の調製)のち、TOCSY(Total correlation spectroscopy)-水素核磁気共鳴スペクトルによる選択的ピーク検出を試みた。その結果、僅かではあるがグルコース由来の水素NMRピークが抽出・確認され、したがって「結合体」の形成が示唆された。(3)スギ材粗酵素液中のフェノール酸化酵素の検出手順において、非酵素的な酸化も同時に起こっていることが判明した。本問題に対応するため、酵素反応時間・pH等、様々な条件を再度検討した。その結果、酵素抽出・酵素アッセイにおいて、緩衝液のpHを6.5程度(これまでは7.5)とすることにより、問題を解決できることが分かった。(4)スギ組織切片中のフェノール酸化酵素の活性染色の手順が確立された。まず、市販の活性検出キット(基質:ジアミノベンジジン)を用いた場合、活性は特定の細胞(放射柔細胞)に検出された。基質をスギ心材成分であるノルリグナンに代替した場合、放射柔細胞中に褐色の沈殿物が観察され、この沈殿の性状はノルリグナン標品を試験管内で酵素重合させた際に得られるものと酷似した。したがって、心材形成におけるノルリグナン生合成後の挙動(二次変化:放射柔細胞内での酵素重合・堆積)が組織化学的に示された。(1)新規導入された分取高速液体クロマトグラフ装置の使用により、化合物分離の効率が極めて改善された。スギ心材から6種類のノルリグナン二量体が単離され、構造解析を進めつつある。これは、当初の予定どおりである。(2)ノルリグナン単量体(アガサレジノール)を炭水化物(グルコース)の存在下にてモデル的に酵素重合させた。生成物について、親和ゲルクロマトグラフィーにより残留炭水化物を除去したもの(ノルリグナン炭水化物結合体)のTOCSY-NMRにより、僅かではあるが「結合体」の形成を示唆することができた。TOCSY-NMRによる検出は当初の想定より困難であった。(3)スギ材粗酵素液中のフェノール酸化酵素の検出手順において、非酵素的な酸化も同時に起こることが判明した。本件について、酵素抽出・酵素アッセイにおいて緩衝液のpHを6.5程度(これまでは7.5)とすることにより、問題を解決できることが分かった。(4)スギ組織切片中のフェノール酸化酵素の活性染色の手順を確立することができた。これにより、心材形成におけるノルリグナン生合成後の挙動(二次変化:放射柔細胞内での酵素重合)を組織化学的に示すことができた。
超高次元複雑ヘテロデータ解析に基づく柔軟かつ頑健な非線形統計的モデリングの研究

多様な形式で与えられる高次元観測データから、有効に情報を抽出するための頑健でかつ柔軟な統計的データ解析手法の開発を行った。その結果、事前に定義された特徴量集合が与えられた際に、その特徴量集合が大規模観測データに対して有意に異なる分布をしているか否かを判定する一連の統計解析手法を開発した。また、大規模遺伝子ネットワークを推定するための頑健な推定方法を提案し、がんの多様性解析に応用した。平成20年度においては,次の3つの成果を得た:(1)シミュレーションモデルと観測データを融合し,シミュレーションモデルの自動構築を可能とするデータ同化技術について,ペトリネットモデルによって記述されたシミュレーションモデルを線形,共線形方程式として表し,そのパラメータ推定を事後確率最大化法(Maximum a posteriori)として定式化することで行う方法を開発した(Yoshida et al. (2008)Bioinformatics).また,複数のネットワーク仮説があった場合に,シミュレーション結果のロバストネスから最適仮説を選択する情報量規準を導出し,実際のサーカディアンリズムパスウェイに対して適用した.(2)転写因子の結合するシス制御配列モチーフ, ChIP-chip(ChIP-seq)データ,遺伝子のDNA上の位置情報とマイクロアレイによるトランスクリプトームデータを統合し,機能的に有意な遺伝子モジュールを抽出するEEM法を提案した(Niida et al. (2009)BMC Bioinformatics).この方法により,多種多様なゲノム情報を統合し,遺伝子モジュールとしての単位で原料を理解することが可能となった.提案したEEM法は乳がんのマイクロアレイデータに適用し,これまで知られていたいくつかの乳がんバイオマーカー,および原因遺伝子の関連を予測した.(3)薬剤応答時系列マイクロアレイデータとタンパク質間相互作用データを融合し,薬剤が転写レベルで細胞に与える影響の時間変化を推定し,その影響を伝えるシグナル伝達経路を予測する方法をダイナミックベイジアンネットワークと統計的メタアナリシスを用いて開発した.提案した方法は,ヒト血管内皮細胞における高脂血症薬Fenofibrateの薬剤作用機序を明らかにするための解析に適用し,それまで仮説であった薬剤のオートクライン的2次作用を検証した.その結果,オートクライン的2次作用に関わっていると考えられる統計的に有意なシグナル伝達経路とそのターゲット遺伝子を同定した.平成21年度においては,次の3つの成果を得た:[1]現在、Genome Expression Omnibusなどの公共データベースには様々ながん細胞の遺伝子発現データが大量に蓄積されている。本研究において、機能的遺伝子発現モジュールを網羅的に同定し、それらに対してメタアナリシスを行うことにより、さまざまながんにおいてドライバー的役割を果たす機能モジュールの同定を行うための方法を開発した。開発した手法を、122個のがんに関する研究において公開されたマイクロアレイデータセットに対して適用し、実際の機能モジュールを同定し、それらの生物学的ながんとの関係を検証した。その結果、発見した多くの機能モジュールはすでにがんとの関係が既知のものであったが、レアな機能モジュールに関しては、がんとの関連が未知なものも多く含まれていた。[2]遺伝子発現データからベイジアンネットワークを用いて遺伝子ネットワークを推定する手法は、マイクロアレイが安価になり大量のデータが利用可能になったこともあり、ゲノムデータ解析の標準的な手法になりつつある。しかしながら、ベイジアンネットワークの構造学習の計算量が膨大なこともあり、事後確率最大化法に基づく方法では、最適なネットワークは探索できず、局所解として得られるネットワーク構造では、精度はそれほど高くないというのが現状である。本研究の成果により、ネットワークの事前情報としてラフなネットワーク(無向グラフでよい)が得られたとき、そのネットワークをクラスタリングして、各クラスタ上で最適学習を行い、クラスタ同士を結んでもサイクルのできないための必要十分条件を数学的に求めたアルゴリズムを用いることにより、これまでは50程度の遺伝子でしか達成できなかった条件付き最適学習が、約10倍の規模(500遺伝子)で行えるようになった。[3]実験条件の異なる複数の時系列データを統合し、遺伝子ネットワークを推定する問題は、時系列マイクロアレイデータの時点数の少なさから、遺伝子ネットワーク推定の精度を上げるための方法として近年注目を集めている。しかしながら、これまでは単純にデータを重ねるという方法をとっており、かえってノイズを増幅される原因となっていた。本研究の成果により、ネットワークの似ている部分では積極的に情報を統合し、似ていない部分ではデータを独立に取り扱うことが自動的に可能な数学的な枠組みを構築し、実データに対して適用し、従来法を大きく超える性能を示すことができた。平成22年度は以下の2点の研究成果を得た。[1]遺伝子発現データと遺伝子機能、共通の転写因子からの制御、共通のパスウェイ、染色体上の位置情報、共通の疾患における関連などさまざまな情報から定義される遺伝子セットを合わせた解析として、遺伝子発現データの解釈を行い、機能的な遺伝子セットを探索するGene Set Analysisは、近年着目を集めている。しかしながら、従来の方法は、サンプルラベルを利用する教師有り学習で定式化されたものが大部分を占め、また、教師なし学習においては特定のモデルを仮定したものであった。サンプルラベルに依らない複雑な遺伝子発現の協調性を捉えるため、

(1)BEEMと名付けたBiclusteringに基づく部分サンプル共発現遺伝子探索手法を開発した。これにより、大規模かつヘテロなデータにおいてサンプルラベルの信頼性を問題にすることなくサンプルサブタイプにおける機能的遺伝子セットの自動抽出が可能となった。また、(2)BEEMは正規分布のような楕円分布を発現データに仮定するモデルと同値な計算プロセスにより解析を行うが、特異値分解を利用したモデルを仮定しない機能的遺伝子セット探索手法MIEAを開発した。これにより、より複雑な相関構造をモデルの仮定無く探索することが可能となった。[2]細胞内システムのシミュレーションモデルの構築は、システム生物学における重要な研究課題の一つであるが、現在は、文献により裏付けられた、堅いネットワークにおいて反応パラメータを遺伝子発現データやタンパク質発現データを利用し推定することに研究の力点は置かれている。しかしながら、文献から構成されるネットワークは完全ではない場合がほとんどである。そこで、あらかじめ生物学的な知識を用いて、プロトタイプである文献ネットワークから可能性のあるネットワーク構造を自動的に生成し、それぞれのネットワークにおいてパラメータ推定を行いプロトタイプモデルよりも良いモデルを探索する手法を開発した。
クロスプレゼンテーションにおけるHsp90α研究

クロスプレゼンテーションにおけるHsp90α研究がん抗原やウイルス抗原をキラーT細胞が認識するためには、樹状細胞がウイルス感染細胞などの抗原を貪食し、エンドソーム内の抗原が細胞質へ引き出され、プロテアソームで分解されて抗原ペプチドになることが重要である。しかし、抗原が細胞質へ移動する機構は不明である。我々は、Hsp90α欠損マウスを作製し、熱ショックタンパク質Hsp90がエンドソーム中の抗原を細胞質へ移動させるのに必須であることを明らかにした。本研究では、Hsp90αKOマウスを用いて、腫瘍免疫に於けるHsp90αの役割、とりわけ樹状細胞によるクロスプレゼンテーションにおけるHsp90αの機能を解析する。2010年度は次の事を明らかにした。HSF-1は多くの熱ショック蛋白の主要な転写因子の一つである。HSF-1KOマウスの骨髄よりGM-CSFにて樹状細胞を樹立(BMDC)して各種Hspの発現レベルを調べたところ、Hsp90αの減少が特に顕著である場合が多い。Hsp90β、Hsc70、Hsp40のレベルは正常マウス由来の樹状細胞と同様である。HSF-1KO樹状細胞におけるクロスプレゼンテーション機能を調べたところ、明らかに効率が低下していた。Hsp90α-/+どうしの掛け合わせで意外にもHsp90α-/-が生まれ、成長速度も異常ない事が判明した。Hsp90α-/-マウス由来のBMDCと正常BMDCとの比較から、クロスプレゼンテーション能はHsp90α-/-において優位に低下している事が明らかになった。なお、上記1,2の解析は可溶性OVAと細胞性OVAの両者の抗原で観察された。3,in vivo実験系でも同様にHsp90αKOマウスではクロスプレゼンテーション効率が低下していることが観察された。以上の結果より、in vitroとin vivo双方のクロスプレゼンテーションにHsp90αが必須の分子である事が明らかにされた。引き続きその分子メカニズムにつき解析を進めて行く。本研究では我々が作成したHsp90αnullマウス及びconditional Hsp90αKOマウスを用いて、腫瘍免疫に於けるHsp90αの役割、とりわけ樹状細胞によるクロスプレゼンテーション(XP)におけるHsp90αの機能を解析することを目的とした。さらに、エンドゾームに取り込まれた外来性蛋白抗原が細胞質へ出てくる際にHsp90αが必須である事を証明することを目指した。この目的のうち主要な部分は達成されたと考える。まず、Hsp90αnullマウス及びconditional Hsp90αKOマウスの作成、樹立は予定通りに進み、同マウスを用いてin vitro,in vivoにおけるXPにおけるHsp90αの必要性を証明する事ができた。即ち、Hsp90αnull樹状細胞では可溶性抗原及び細胞関連抗原の両方のXP機能が低下していた。またシトクロームc投与マウスではXPに関係するCDllc+CD8+樹状細胞がアポトーシスにより死滅するが、Hsp90αnullマウスにおいては死滅が回避される事を証明した。即ち、投与したシトクロームcがHsp90αnullのCDllc+CD8+樹状細胞においては細胞質へ届かないことを示唆している。さらに貪食された可溶性抗原が細胞質へ移行する過程をImageStream解析及び蛍光顕微鏡解析により明らかにできた。即ち、Hsp90αnull樹状細胞においては貪食されてエンドゾーム内に入った抗原が細胞質へ移行しにくい事、またHsp90阻害剤で予め樹状細胞を処理しておくと、細胞質への移行がさらに抑制されることがわかった。生化学的に抗原貪食ファゴゾームを精製し、これにHsp90を添加するだけで抗原がファゴゾームの外に遊離されることが判明した。まず、Hsp90αnullマウス及びconditional Hsp90αKOマウスの作成、樹立は予定通りに進み、同マウスを用いてin vitro, in vivoにおけるXPにおけるHsp90αの必要性を証明する事ができた。またシトクロームc投与マウスではXPに関係するCD11c+CD8+樹状細胞がアポトーシスにより死滅するが、Hsp90αnullマウスにおいては死滅が回避される事を証明した。

即ち、投与したシトクロームcがHsp90αnullのCD11c+CD8+樹状細胞においては細胞質へ届かないことを示唆している。さらに貪食された可溶性抗原が細胞質へ移行する過程をImageStream解析及び蛍光顕微鏡解析により明らかにできた。即ち、Hsp90αnull樹状細胞においては貪食されてエンドゾーム内に入った抗原が細胞質へ移行しにくい事、またHsp90阻害剤で予め樹状細胞を処理しておくと、細胞質への移行がさらに抑制されることがわかった。生化学的に抗原貪食ファゴゾームを精製し、これにHsp90を添加するだけで抗原がファゴゾームの外に遊離されることが判明した。研究実績の概要のところで述べたように、当初の目的であるところのクロスプレゼンテーション(XP)におけるHsp90αの機能解析を遺伝子改変マウスの作成を通して、細胞生物学的、生化学的、イメージング解析において十分に証明されたと考えられる。24年度が最終年度であるため、記入しない。クロスプレゼンテーションにおいては一旦取り込まれた外来性抗原がエンドゾームの孔を通過して細胞質へ移行する訳だが、その孔の分子構造については全く何もわかっていない。従って、本研究課題の今後の推進方向については、この孔の分子構造について明らかにしていきたい。これはまた世界中で競い合って研究している分野でもあり、極めて注目度が高い24年度が最終年度であるため、記入しない。
フィンガープリント法を用いたトラフグ性特異的ゲノム領域の決定

トラフグ稚魚の性分化可塑期に、女性ホルモン合成酵素(アロマターゼ)の阻害剤を加えた食餌法を行い全雄化に成功した。一方他魚種でよく用いられる高温処理による性転換はトラフグには適応できなかった。トラフグ稚魚期の生殖腺器官培養系を構築し、アロマターゼの発現を指標に性転換機構を解析した。その結果、稚魚期生殖腺でのアロマターゼ合成が濾胞刺激ホルモンの添加により制御可能であることを初めて示した。〈意義、実験方法と研究成果およびその重要性〉最近の研究報告から、トラフグ染色体に性特異的ゲノム領域(scaffold)が見つかり、その領域のDNA配列を用いたPCRによる多型解析法によりトラフグの個体レベルでの性判別が可能になってきている。申請者もこの方法を取り入れ、個体レベルでの性判別は現在可能になった。しかしこの識別法では種苗現揚ではコストと手間の面から実用性が低いのが現実である。魚類では生殖線の性分化時はステロイドホルモンや環境因子(温度など)に対して感受性が高いことが知られている。しかし、トラフグでは性的可塑性に関する研究報告はない。したがって、性特異的ゲノム領域を用いた性判別法を利用し、トラフグ稚魚期での性分化機構を詳細に調べることにより、全オス化の簡易性操作法の開発が期待できる。そこで本年度はトラフグ稚魚の飼育実験により性分化機構を解析した。具体的には生殖腺の性分化時期に女性ホルモン(エストロゲン:E2)合成酵素阻害剤等を暴露し、個体の性に偏りが生ずるかを調査した。トラフグ稚魚期にE2合成を司る酵素であるアロマターゼ阻害剤を混合した飼料を与え、その後の血中ホルモンのレベルを測定し、生殖線の性分化過程を追跡した。その結果、アロマターゼによるE2の合成阻害により遺伝的メスの生殖腺が精巣化し、最終的に全てのトラフグが完全な精巣をもち、オス化することが明らかになった。生殖腺の性分化は非可逆的であり、通常の飼料に戻しても精巣が卵巣に転換することはなかった。一方E2の高濃度での暴露は部分的に精巣の卵巣化を促進するが大きな効果はなかった。これらの結果は、重要資源魚種であるトラブグではアロマターゼ活性の制御が性分化に重要であり、性の統御が可能であることを世界で初めて示した。意義海産魚のトラフグはゲノム解析が完了しており、遺伝的性決定を支配する染色体領域も明らかになってきた。しかし、魚類の性決定、性分化機構は曖昧さを含んでおり、我々の研究からトラフグもその例外ではないことが明らかになった。トラフグは遺伝的に雌雄が決定される魚種で、孵化後6週目に生殖腺の性分化が起きるが、女性ホルモン(エストロゲン)の合成酵素(アロマターゼ)阻害剤を含んだ食餌法により卵巣への分化が阻害され、機能的な精巣へと性転換が起きる。このため、阻害剤等を用いずアロマターゼ活性を安全に制御できれば、全オス化した白子を持つトラフグが食卓に並ぶことになる。しかし、トラフグではアロマターゼ発現までの機構は全く不明である。そこで本年度は、(1)トラフグ稚魚期の生殖腺の器官培養系を開発し、アロマターゼ発現機構をin vitroで解析した。(2)魚類のアロマターゼは脳型と卵巣型の2種類あるが、その役割分担は不明である。そこでそれぞれのmRNAの発現パターンを調査した。実験方法と研究成果(1)性分化前後のトラフグ稚魚から取り出した生殖腺の付着した筋肉塊を、脳下垂体放出ホルモンの一つである濾胞刺激ホルモン(FSH)存在下で培養をおこなった。その結果、FSHがアロマターゼの発現を活性化し、卵巣への分化、発達を促す研究成果を得た。これは裏返せば、性的未分化の稚魚期の脳下垂体からのFSH放出抑制またはその下流経路を遮断すれば、トラフグは全オス化することを示唆する。(2)RT-PCR法により、脳型アロマターゼは、脳だけでなく精巣でも発達とともに発現量が増加した。In situ hybridization法を用い、発現産物を解析した結果、その多くはスプライシング異常によるものであった。また、脳でも異常産物は確認できた。これは脳型アロマターゼの発現が魚類特有のスプライシング機構により調節される可能性を初めて示すものである。意義トラフグは遺伝的に雌雄が決定される魚種で、孵化後6週目に生殖腺の性分化が起きるが、女性ホルモンの合成酵素(アロマターゼ)の阻害剤を含んだ食餌により卵巣への分化が阻害され、機能的な精巣へと性転換が起きる。このため、阻害剤等を用いずアロマターゼ活性を安全に制御することが可能になれば全オス化した白子を持つトラフグが食卓に並ぶことになる。魚類から哺乳動物まで、アロマターゼの活性は脳下垂体から放出される生殖腺刺激ホルモンのうち、FSH(濾胞刺激ホルモン)の制御を受ける事が知られる。

そこで本研究ではトラフグ初期生殖腺の器官培養系を利用し、FSH受容体下流のシグナル伝達機構の中でも特にアロマターゼ発現の解析を行った。実験方法と研究成果6週齢前後の性分化前後のトラフグ生殖腺を、ブタ精製FSH、またカイコ血清中に分泌させた組換えトラフグFSHを加え培養を行い、生殖腺でのアロマターゼの発現を免疫組織化学法により解析した。使用した個体の遺伝的性は性決定領域から設計したプライマーを用いSTR法により決定した。コントロール区において卵巣ではすでにアロマターゼの発現が確認できたが、FSHの添加によりアロマターゼは消失した。一方、精巣ではコントロール区においてはアロマターゼの発現は見られなかったが、FSH添加により発現の上昇が確認できた。性分化期の脳下垂体ではFSHの発現は検出不可能なほど低いため、FSHが発現しないことが正常な性分化に重要と考えられた。またFSH受容体下流のシグナル伝達系もこの時期にすでに完成しておりFSHを添加することにより、未分化生殖腺でのアロマターゼの発現パターンが逆転する事が明らかになった。この結果は、FSH添加により試験管内でアロマターゼ発現を指標とする性転換が起きたことを意味する。
小腸粘膜における初回通過効果の解析とその薬物経口吸収挙動の予測への応用

経口投与後の薬物に対する初回通過効果におけるP-gp及びCYP3Aの寄与について、quinidineをモデル薬物として検討した結果、P-gp、CYP3A活性の強さに関わらず、quinidineの小腸からの吸収クリアランスはほぼ一定であること、一方で、肝抽出率、小腸抽出率は、testosteroneの肝、小腸代謝固有クリアランスとそれぞれ良好に相関することが明らかとなった。難溶解性薬物griseofulvinの経口吸収挙動の大きな個体差は、小腸内移行速度の個体差に依存したin vivo溶解挙動の個体差によるものと考えられた。更に、輸送担体を介して吸収される薬物の吸収挙動の予測を目的とし、オリゴペプチドの輸送系であるPEPT1を対象とし、その代表的な基質であるcephalexinの吸収について検討し、cephalexinの吸収挙動を良好に描写することに成功したほか、cephalexinの吸収に対するPEPT1、受動拡散の寄与を定量的に評価することに成功した。(1)Quinidineの初回通過効果に対するP-gp及びCYP3Aの寄与の定量的評価:Dexamethasoneを25,50,100mg/kg/dayの投与量で2日間経口投与したラットの小腸を用い、in vitro膜透過実験によりrhodamine123の分泌方向の透過性を評価したところ、dexamethasoneの投与量に依存したrhodamine123の透過性の増大が認められた。また、同様の処置を行ったラット小腸から調製したmicrosome画分を用いてtestosteroneの代謝を評価したところ、CYP3Aによる主代謝産物である6β-OH体の生成速度が、dexamethasone依存的に変化していることが明らかとなった。これらのことから、dexamethasoneを上記条件により投与することにより、P-gp及びCYP3Aを異なったレベルで発現するラットを作製できることを確認した。(2)難水溶性固形製剤のin vivo溶解挙動の解析と吸収動態予測への応用:Griseofulvinをモデル薬物として用い、難水溶性薬物に見られる吸収挙動の大きな個体内、個体間変動について焦点を絞り検討を加えた。Griseofulvinのような難水溶性、易吸収性の薬物の場合、その吸収挙動を律速するは、その溶解挙動、あるいは胃排出挙動となると考えられたため、胃排出のマーカーとしてtheophyllineを、また胃排出後の小腸内移行性のマーカーとしてsulfasalazineを同時に経口投与し、胃排出、小腸内移行性とgriseofulvinの吸収挙動との関連性を分析した。その結果、胃排出はいずれの個体においても比較的速やかであり、その個体差も、griseofulvinの吸収挙動において観察された個体差と比較して小さなものであり、胃排出と吸収挙動の変動との間には有意な相関は認められなかった。一方、deconvolution法により評価したgriseofulvinのin vivo溶解挙動は、griseofulvinの吸収挙動を良く反映したものであり、in vivo溶解挙動の個体差がgriseofulvinの吸収挙動の個体差の原因であることが明らかとなった。また、このin vivo溶解挙動は胃排出挙動との間には相関性は認められず、小腸内移行性の変動との間に有意な相関関係が認められ、小腸内移行性の変化がgriseofulvinの溶解挙動に影響していることが示唆された。(1)Quinidineの初回通過効果に対するP-gp及びCYP3Aの寄与の定量的評価:対照ラットを含めて、異なる4つのレベルでP-gp、CYP3Aを発現するラット群を用い、quinidineの初回通過効果に対する小腸及び肝臓の寄与を定量的に評価した。その結果、P-gp、CYP3Aの発現レベルに関わらず、quinidineの小腸からの吸収クリアランスは、ほぼ一定であることが示された。一方、肝抽出率は、in vitroで評価したtestosteroneの肝代謝固有クリアランスと良好な相関性を示した。また、小腸抽出率も同様に評価したtestosteroneの小腸固有クリアランス、またrhodamine123の透過より算出したin vitro P-gp活性との間に有意な相関性が見出された。得られた結果を重回帰分析したところ、qunidineの初回通過効果における肝臓、小腸の寄与は、ほぼ2対1であることが、また、小腸における初回通過効果におけるP-gpとCYP3Aの寄与については、CYP3Aの寄与が大きいものと推定された、(2)難水溶性固形製剤のin vivo溶解挙動の解析と吸収動態予測への応用:Griseofulvinと同時に経口投与したtheophyllineの吸収動態より評価した胃排出、およびsulfasalazineを利用して算出した盲腸到達時間、さらにはガラスビーズを利用して求めた固形製剤の消化

管内移行速度定数を利用し、gastrointestinal-transit-absorption model (GITA model)を用いて、griseofulvinのin vivo溶解速度定数の算出、さらには得られた結果を利用することにより、各ラットにおける経口投与後のgriseofulvin血漿中濃度推移の描写を試みた.その結果、大きな個体差を示すgriseofulvinの吸収挙動を良好に描写することに成功した。(3)輪送担体を介して吸収される薬物の吸収挙動の予測:輸送担体を介して吸収される薬物の吸収挙動の解析と予測をGITA modelを用いてすすめるために、オリゴペプチドの輸送系であるPEPT1を対象とし、PEPT1の代表的な基質であるcophalexinの吸収について検討を行ったところ、cephalexinの吸収挙動を良好に描写することに成功したほか、cephalexinの吸収に対するPEPT1、受動拡散の寄与を定量的に評価することに成功した。
サブミリ波偏光観測による原始星星周円盤の磁場構造の研究

本年度(H6年度)は、サブミリ波用偏光器の設計、プロトタイプ偏光器のための光学系製作、およびプロトタイプ偏光器を用いたサブミリ波偏光観測を行った。当初予定していた、サブミリ波アレイ検出器を用いた観測は、アレイカメラの製作が遅れたため、今年度に行うことができなかったが、プロトタイプ偏光器によって、限られた感度ではあるが、貴重なデータを得ることができた。本年度の観測では、従来の波長1.1ミリでの観測に加え、波長0.8ミリでの偏光観測を主に行い、やはり多くの若い星が偏光していることを確認した。さらに、昨年度までの観測結果とあわせることにより、若い星の星周環境の磁場構造について、他の観測手法では得難い貴重な情報を得た。まず、若い星の進化を考える上で最も重要な、低質量原始星からTタウリ型星に至るまでの若い星のサンプルについて観測し、有意な結果を得た。それによると、若い星の周辺環境の空間構造と磁場構造との間には一定の関係がある。原始星では、観測された偏光は、この原始星を取り囲む大規模で扁平な構造(エンベロープ)の磁場構造を表し、その磁場の方向はエンベロープの長軸の方向に垂直で、かつ、周りの暗黒星雲の磁場方向に平行である。これに対して、古典的なTタウリ型星では大きな偏光は観測されなかった。これは、Tタウリ型星の周りの小さな円盤構造(ディスク)では、磁場が弱いか、あるいは、ダストが磁場の整列を受けにくい環境であるかを表している。今後は、サブミリ波アレイ検出器を利用した観測を行い、観測の感度と効率を著しく改善し、上記の観測対象のサンプルを大幅に増すことによって、もっと統計的な議論を行いたい。さらに、アレイの2次元を生かして、磁場の空間構造をマッピング観測から直接描くことを目指したい。
長鎖ノンコーディングＲＮＡによる自然免疫応答制御機構の解明

細胞内寄生細菌のサルモネラに感染した宿主ヒト細胞では、核内RNA分解経路が抑制され、その結果、普段は不安定な核内長鎖ノンコーディングRNAが安定化されて発現増加することを本研究の遂行で申請者は発見した。サルモネラ感染で発現増加する核内長鎖ノンコーディングRNAは、インターフェロン遺伝子などの免疫関連遺伝子の発現制御分子として働くことも示した。さらに、核内RNA分解経路が抑制されるメカニズムとして、核内RNA分解経路の就寝分子であるMTR4がタンパク質分解されることを発見した。これらの結果から、核内RNA分解経路は自然免疫応答を制御する上で重要な機構を形成していることが世界で初めて判明した。本研究では、まず、病原体感染によってヒト細胞で誘導されるメッセンジャーRNAと長鎖ノンコーディングRNAを網羅的に解析した。具体的には、細胞内寄生細菌のサルモネラをHeLa細胞に感染させ、その後、経時的に細胞試料を回収してtotal RNAを精製した。このtotal RNAを次世代シーケンサー解析ならびにバイオインフォマティックス解析し、サルモネラ感染依存的に発現変動する遺伝子を網羅的に調べた。ノンコーディングRNAの同定では、報告者が独自に構築したノンコーディングRNAデータベースを活用した。その結果、すでにサルモネラ感染で誘導されることがしられているmRNAとしてサイトカイン類をコードする遺伝子が多数同定された。この結果は、この実験アプローチで病原体感染応答に於いて重要な遺伝子を同定できることを示す結果である。さらに、サルモネラ感染で誘導される長鎖ノンコーディングRNAを検索した結果、数百種類の候補を得た。引き続く解析の結果、同定した長鎖ノンコーディングRNAの多くが核局在型RNAであった。申請者を含む複数の先行研究から、核内長鎖ノンコーディングRNAの多くが遺伝子発現の制御に働くことが分かっている。そこで、サルモネラ感染で誘導される長鎖ノンコーディングRNAが転写制御に関わる可能性について検討することにし、現在も引き続き検討中である。さらに、宿主細胞に長鎖ノンコーディングRNAを誘導させるサルモネラ側遺伝子の同定を試みた。具体的には、サルモネラ遺伝子変異株を構築し、感染後の長鎖ノンコーディングRNA誘導を調べた。その結果、複数のサルモネラ遺伝子が長鎖ノンコーディングRNAの誘導に関わっていることが判明した。当初予定のとおり、サルモネラ感染によって誘導される新規長鎖ノンコーディングRNAを同定できたため。また、当初予定のとおり、長鎖ノンコーディングRNAを誘導するために必要なサルモネラ遺伝子も複数同定できたため、研究は順調に進展していると判断した。自然免疫システムは多細胞生物の感染防御系として極めて重要な位置を占める。また、自然免疫システムの異常は各種疾患原因ともなるため、生物系薬学分野において重要な研究対象である。申請者は、細胞内寄生細菌であるサルモネラの細胞感染をモデルシステムとして、細胞レベルの自然免疫応答における核内長鎖ノンコーディングRNAの機能の解明を目指した。この研究を通じて、細胞レベルの自然免疫応答並びに哺乳動物の遺伝子発現制御に関する新しいモデルを提案することを目指す。この研究は新しい創薬の標的を発見するのみならず、核酸医薬などのシーズ開発にも貢献すると考えている。まず、これまでの研究でサルモネラ感染で発現増加する核内長鎖ノンコーディングRNAを多数同定していたが、このうち、短寿命の核内長鎖ノンコーディングRNAが転写誘導ではなく、核内RNA分解抑制によって発現誘導することを発見した。さらに、サルモネラ感染で核内RNA分解因子がタンパク質分解されることも発見した。これらの結果を総合すると、サルモネラ感染によって核内RNA分解因子がタンパク質分解され、その結果、核内RNA分解経路が抑制されて一群の核内長鎖ノンコーディングRNAが安定化し、核内に蓄積するというモデルを提案した。さらに、核内RNA分解因子をタンパク質分解する責任プロテアーゼの同定を目指し、siRNAノックダウンライブラリースクリーニングを開始した、さらに、siRNAノックダウンライブラリースクリーニングに問題が生じた場合の解決策としての別アプローチも準備した。サルモネラ感染によるホスト側遺伝子発現制御機構として新しいモデル(すなわち、サルモネラ感染が核内RNA分解因子をタンパク質分解し、その結果、一群の核内長鎖ノンコーディングRNAが安定化して核内蓄積するというモデルを提案した。核内長鎖ノンコーディングRNAの発現制御、あるは、病原体に対するホスト側応答してもこのようなモデルはこれまでに無く、本提案は全く新しいモデルである)を提案できたことは特筆に値する研究成果と考えている。また、このモデルを分子レベルで検証する作業を進め、本年度は次年度の発展を見据えた研究基盤を整備することができたため。すなわち、核内RNA分解因子をタンパク質分解するプロテアーゼを同定するためのsiRNAノックダウンライブラリースクリーニング系を確立した。また、siRNAノックダウンライブラリースクリーニングに困難が生じた場合のバックアップ実験としてBioID法の検討も開始し、生じうる問題についても先回りして対策を用意したことから、研究は順調に進展し、最終的な目標に到達できると判断した。平成28年度までの本研究課題の遂行によって、申請者は、細胞内寄生細菌のサルモネラに感染したヒト細胞株(HeLa細胞、A549細胞、HT116細胞など)の核内RNA分解因子であるMTR4とRRP6が消失する現象を見いだした。さらに、マウスでも同様の現象が起きることを確認した。本年度は、これらの核内RNA分解酵素がタンパク質分解されるメカニズムの解明を目指した。まず、既存のプロテアーゼ阻害剤でサルモネラ感染後のMTR4とRRP6のタンパク質分解が阻害されるか否かを検討した。

MG132などのプロテアソーム阻害剤でMTR4とRRP6のタンパク質分解は阻害されなかった。また、細胞透過性セリンプロテアーゼ阻害剤、カスパーゼ阻害剤、カルパイン阻害剤など入手可能な複数のタンパク質阻害剤を検討したがいずれもサルモネラ感染後のMTR4とRRP6のタンパク質分解を阻害しなかった。これらの結果から、サルモネラ感染後に働くタンパク質分解系は特殊なタンパク質分解系であることが示唆された。あるいは、複数のプロテアーゼが働くため、プロテアーゼ阻害剤単剤では阻害作用を観察できなかった可能性も考えられる。次に、サルモネラ感染後にMTR4とRRP6がタンパク質分解阻害されるに至る経路についても検討した。入手可能な複数のシグナル経路阻害剤を検討した結果、p38MAPK阻害剤がMTR4とRRP6のタンパク質分解を部分的に阻害した。この結果は、サルモネラ感染後にp38MAPK経路を通じてMTR4とRRP6の分解が指令されていることを示唆する結果である。最後に、サルモネラ側の因子について検討した。すなわち、様々なサルモネラ変異株を使って感染実験を行い、MTR4とRRP6のタンパク質分解が起きなくなるかを検討した。その結果、SPI2エフェクターがMTR4とRRP6の分解に関与するとの知見を得た。細胞内寄生細菌のサルモネラに感染した宿主ヒト細胞では、核内RNA分解経路が抑制され、その結果、普段は不安定な核内長鎖ノンコーディングRNAが安定化されて発現増加することを本研究の遂行で申請者は発見した。サルモネラ感染で発現増加する核内長鎖ノンコーディングRNAは、インターフェロン遺伝子などの免疫関連遺伝子の発現制御分子として働くことも示した。さらに、核内RNA分解経路が抑制されるメカニズムとして、核内RNA分解経路の就寝分子であるMTR4がタンパク質分解されることを発見した。これらの結果から、核内RNA分解経路は自然免疫応答を制御する上で重要な機構を形成していることが世界で初めて判明した。サルモネラ感染で誘導される長鎖ノンコーディングRNAをノックダウンあるいはノックアウトした細胞をサルモネラ感染させたときに細胞の致死性に変化が認められるかを調べる。この実験により、同定した長鎖ノンコーディングRNAがサルモネラ感染に対するホスト細胞の抵抗性に役立っている分子であるかを検証する。さらに、長鎖ノンコーディングRNAをノックダウンあるいはノックアウトした細胞をサルモネラ感染させたのち、細胞内の遺伝子発現プロファイルを調べ、対象とする長鎖ノンコーディングRNAが遺伝子発現に関与するかを調べる。サルモネラ感染が核内RNA分解因子をタンパク質分解する責任プロテアーゼを同定するためのsiRNAノックダウンライブラリースクリーニングを実施する。ヒトゲノム中には数百種類のプロテアーゼがコードされていると考えられている。
有限要素解析を用いた接地シミュレーションによる足部内部で生じる力学現象の解明

本研究では,医用画像から抽出した3次元形状データを用い,着地および走行動作における接地中の足部内部で生じる力学現象を再現できる有限要素モデルを構築する.妥当性を検証した有限要素モデルを用いて,腱の牽引,腱などの材料特性を変化させて着地および走行動作における接地のシミュレーションを行うことにより,これらの要因が足部の骨の挙動とそこで生じる力学現象に及ぼす影響を明らかにする.本研究では,医用画像から抽出した3次元形状データを用い,着地および走行動作における接地中の足部内部で生じる力学現象を再現できる有限要素モデルを構築する.妥当性を検証した有限要素モデルを用いて,腱の牽引,腱などの材料特性を変化させて着地および走行動作における接地のシミュレーションを行うことにより,これらの要因が足部の骨の挙動とそこで生じる力学現象に及ぼす影響を明らかにする.
高温超伝導体の渦糸状態における熱伝導率と輸送エントロピー

我々は、高配向Bi-2223高温超伝導体に対する磁場中での熱伝導率の研究を行った。なお、磁束の輸送エントロピーの評価に必要な熱磁気効果の測定は現在準備を進めている。1)零磁場での熱伝導率はT_cまで温度の下降とともにわずかに減少するが、T_c以下で増大する。超伝導状態での熱伝導率の異常は、Y系やBi(2212)においても報告されている。T_c以下での熱伝導率の異常は印加磁場の増加とともに減少するが、常伝導状態における熱伝導率は印加磁場によらず一定である。熱伝導率の減少は、フォノンが常伝導芯に存在している準粒子によって散乱されるためであると考えられる。2)高配向Bi-2223高温超伝導体の熱伝導率の磁場依存性は単調に減少する。しかし、磁場の増加による熱伝導率の減少の割合は、高磁場では弱くなってくる。これは、フォノンが磁束内部の準粒子によって散乱されることと熱流を担う準粒子数が磁場の増加とともに増大することによって生じたものと考えられる。3)緩和時間近似を用いて、フォノンの準粒子による散乱を取り入れた解析を行った。また、磁場中の電気抵抗の測定結果から、W.H.H理論を用いてH_<c2>を算出すると44.3Tとなり、超伝導エネルギー・ギャップの磁場依存性を取り入れた解析も行った。この補正によって、熱伝導率の磁場依存性の実験結果を高磁場領域まで再現できることがわかった。
短寿命代替フロン物質の地球温暖化ポテンシャル新指標の開発

有力なフロン代替物質であるヒドロフルオロエーテル(HFE)とヒドロフルオロオレフィン(HFO)などについて、実験的にラジカルとの反応速度を推定し、大気中寿命をスケーリングにより求め、地球温暖化暖化ポテンシャル(GWP)の値を再評価した。一方、大気大循環モデルを基礎にした物質輸送モデルを改良し、これらの物質の大気中濃度分布と放射強制力を計算した。その結果を元に、全球で定常濃度になった状態で、地域ごとの放射強制力を積算した値を、短寿命物質についてのより適切なGWP指標とすることを提案した。オゾン層破壊や地球温暖化の原因物質となるフロン類やその代替物質の全廃や削減が進められる中、大気中寿命の短い代替物質の開発が進められ、それらの物質の地球温暖化ポテンシャル(GWP)の評価結果がIPCCの報告書などに掲載されてきた。しかし、GWPは元々長寿命物質に対してあてはまる指標であり、その計算方式をそのまま短寿命物質には適用できない。そこで、本研究では、大気中寿命の短いフロン代替物質などに適用できる新たな地球温暖化影響評価指標を開発することを目的とする。特に、IPCCの第4次報告書に記載された短寿命物質については、物性値等の再測定なども含め、温暖化影響予測値をより信頼度の高いものにすることを目指す。本年度、以下の項目を実施した。大気中寿命評価:OHラジカルとの反応係数の測定が必要なHFE等のリストアップと、サンプルが入手可能な物質の特定を行った。本研究用いる相対法について機器準備を行った。現時点で、新たなサンプルの入手が困難な物が多いことが判明したが、引き続き入手ルートの調査を進める。赤外分光データの測定:赤外吸収スペクトルデータ(分光データ)の測定が必要なHFE等のリストアップを行った。これまでに測定された赤外分光データのデータベース化と公開について検討し、研究部門のデータベースによる公開が最も現実的という結論に至った。3次元物質輸送モデル開発、濃度計算:大気大循環モデルNICAMを基礎にした二酸化炭素輸送モデル(NICAM-CO2)をベースに、HFE輸送計算に必要なコンポーネントの洗い出しを行い、改良指針の決定をした。必要なデータベース(大気中のOHラジカルデータベース、CFC等既存物質の使用量データベース)の整備を行った。研究室計算機へのプログラムの移植作業を完了した。赤外分光データについては、実験室データと衛星観測結果との整合性を確認し、絶対値の補正値を決めた。オゾン層破壊や地球温暖化の原因物質となるフロン類やその代替物質の全廃や削減が進められる中、代替物質の開発が進められ、それらの物質の地球温暖化ポテンシャル(GWP)の評価結果がIPCCの報告書などに掲載されてきた。本研究は、大気中寿命の短いフロン代替物質などに適用できる新たな地球温暖化影響評価指標を開発することを目的とする。特に、IPCCの第4次報告書に記載された短寿命物質については、物性値等の再測定なども含め、温暖化影響予測値をより信頼度の高いものにすることを目指している。大気中寿命評価:評価対象物質であるHFE等について、OHラジカルとの反応係数の測定を継続して実施した。実測値はHOMOエネルギーを元に理論計算されたこれまでの値と比較して、数倍程度の違いがあるものもあった。これらの測定された反応係数を用いて、スケーリング法により評価対象物質の大気中寿命を計算し、工業界で一般的に用いられている簡便法に基づいてGWP計算値を求めた。赤外分光データの測定:赤外分光データの測定を継続して実施した。特に評価対象物質の全面的な見直しを行い、今後使用の増大が見込まれるハイドロフロオロオレフィン(HFO)17種類、パーフルオロオレフィン(PFO)5種類を新たに評価対象とすることとした。また、背景放射計算に影響するバックグラウンド大気の成分、特に水蒸気の吸収線については、HITRAN2008よりaer_ v3.1へのアップデートが望ましいことが判明し、これへの移行を行った。3次元物質輸送モデル開発、濃度計算:3次元輸送モデルの開発に着手し、輸送プロセスの評価指標となるラドンとSF6の輸送計算を実施できるよう改良を行った。放射計算コードについては、水蒸気の連続吸収帯データの取り扱いに優れているMT-CDK2.5に移行する改良を実施した。

本年度、以下の項目を実施した。・大気中寿命評価:OHラジカルとの反応係数の測定を継続した。特に、今後、既存の代替物に替わり使用が予想されるHFO類について評価を実施し、GWP値として、20120という結果を得た。・赤外分光データの測定:GWP計算に必要な赤外分光データの測定を継続して実施した。これらの結果を含め、分光データベースへのサンプルデータのアーカイブを開始した。このデータを利用し、国外の研究者が既に論文発表に至る成果を出している(例えば、Hodnebrog et al., 2013)。・3次元物質輸送モデル開発、濃度計算:3次元輸送モデルを用いてHFEの濃度分布計算を行うためのモデル開発を継続して実施した。いくつかのHFEについて、雲を含む厳密計算により放射強制力を求めた。その結果、特に大気中寿命の短い物質の放射強制力は、雲の高度や光学的厚さに大きく依存するため、物質の濃度分布を規定するOHラジカルの値の適正化が必要であることが分かった。・新指標の考案:空間濃度変動を考慮して求められた放射強制力について、地域影響も考慮した温暖化影響の強さを表す新指標を考案した。特に、単純に放射強制力を全球平均する方法、地域ごとに積算する方法、地域ごとに積算し重み付けして全球平均する方法などについて考察した。オゾン層破壊や地球温暖化の原因物質となるフロン類やその代替物質の全廃や削減が進められる中、代替物質の開発が進められ、それらの物質の地球温暖化ポテンシャル(GWP)の評価結果がIPCCの報告書などに掲載されてきた。本研究は、大気中寿命の短いフロン代替物質などに適用できる新たな地球温暖化影響評価指標を開発することを目的とする。特に、IPCCの第4次報告書に記載された短寿命物質については、物性値等の再測定なども含め、温暖化影響予測値をより信頼度の高いものにすることを目指している。・大気中寿命評価:PFC系物質を中心に、OHラジカルとの反応係数の測定し、大気中寿命をスケーリング法によって推定した。・赤外分光データの測定:赤外分光データの測定を継続し、簡便法によるGWP値の計算を実施した。分光データベースの公開に適したフォーマットや公開方法を検討した。その結果、一部物質については、測定時の濃度が不正確のため、公開には再測定が必要であることが判明。資料の再入手が可能か調査することとなった。・3次元物質輸送モデル開発、濃度計算:OHとの分解反応プロセス、および、成層圏での励起酸素原子との反応プロセスを組み込んだ。その精度評価を行うためにメチルクロロフォルム(MCF)の輸送実験を行い、MCFの大気中平均寿命を評価した結果、観測値と整合性のある結果となった。オフラインにて放射強制力を計算するプロセスのコード化に着手した。この時使用する雲情報は、物質輸送計算に用いる大気大循環モデルの出力とした。
太閤記物戯曲群が人形浄瑠璃史において果たした役割と他の近世文芸への影響

義太夫節人形浄瑠璃文楽という演劇において太閤記物の戯曲群は、人形浄瑠璃の古典化に大いに寄与した重要なジャンルであり、現在でも多くの現行曲がある。しかし、本研究代表者原田真澄による一連の研究以前では、十分な研究がなされているとは言い難かった。本研究によって、基本的な太閤記物関連の研究資料の整理といくつかの重要作品の作品研究が行われた。これにより人形浄瑠璃における太閤記物研究の基礎が築かれた。しかし、未だ十分な研究が為されているとは言い難いため、作品論および上演史的側面からの考察により、太閤記物戯曲が浄瑠璃史において果たした役割と、戯曲ジャンルとしての特性を明らかにすることが本研究の目的である。今年度は、研究計画に記載した通り「全人形浄瑠璃の太閤記物戯曲諸本およびその上演に関連する刊行物(番付・絵尽しなど)の調査検討。」を実施した。具体的には、図書館などが発行している目録類からの調査に加え、都内および大阪へ資料調査に赴き、太閤記物戯曲の諸本および番付・絵尽などの資料調査を行った。その中で、現行曲が少ないために今まではあまり省みられることのなかった賎ヶ岳物の太閤記物の浄瑠璃作品の重要性を発見した。そこで、賎ヶ岳物戯曲の作品研究をも平行して行い、成果を「太閤記物人形浄瑠璃における小野お通一賎ヶ岳物と「三日太平記」を中心に一」という論文にまとめ、演劇博物館グローバルCOE紀要「演劇映像学2010」に投稿したところ、査読の上で掲載された。また、2011年2月にはフランスのストラスブールで行われた国際シンポジウム「Colloque international Pourquoi letheatre?」に招聘されて「人形浄瑠璃文楽の太閤記物流行と「木下蔭狭間合戦」」という発表を行った。これは、太閤記物の中でも主要な作品の一つである「木下蔭狭間合戦」の意義と達成についての私見をまとめたものである。2010年度の研究成果は、一本の査読付き論文と一回の海外招聘講演の中に十全に表わされており、研究が円滑に遂行されているのみならず、その成果は大いに社会に還元されていると言える。平成23年度は、研究計画に記載した「主要作品の上演年表」のうち、太閤記物戯曲の金字塔といわれる「絵本太功記」の上演年表を作成し、作品研究を行った。その成果の一部を研究発表「太閤記物人形浄瑠璃作品に表われた謀叛-「絵本太功記」を中心に」(2011年度日本演劇学会・秋の研究集会、2011年12月)で発表した。また、他ジャンルとの比較作品研究では、人形浄瑠璃の主要作者の一人である並木千柳(宗輔)の手がけた太閤記物作品「傾城枕軍談」を取り上げ、類似した登場人物が登場する浮世草子などとのジャンル横断的な作品研究を行った。そしてその考察の結果を査読付論文「「傾城枕軍談」試論-七草四郎と嶋勘左衛門の人物造形をめぐって-」にまとめた。この他にも、近現代の人形浄瑠璃研究に重要な示唆を与える新出資料の資料紹介「鴻池幸武宛て豊竹古靱太夫書簡二十三通-鴻池幸武武智鉄二関係資料から-」(早稲田大学演劇博物館紀要『演劇研究』第三十五巻、2012年3月)にも関わり、人形浄瑠璃研究の基礎資料の整備に努めた。また、太閤記物についてのこれまでの研究成果を元に、独立行政法人日本芸術文化振興会が公開しているwebの作品解説「文化デジタルライブラリー舞台芸術教材・文楽編作品解説「絵本太功記」(川口節子執筆・監修、原田真澄執筆、2012年3月公開)の制作に携わった。研究の社会還元にも大いに寄与しているといえよう。未だ十分に検討されてきていない太閤記物の主要作品も存在するため、今後も主要作品の上演史研究および他ジャンルの文芸作品との比較作品研究などを行っていきたい。
GnRHの生殖最上位中枢キスペプチンニューロンに対する新規フィードバック機構

本研究は、哺乳類の生殖中枢として注目されるキスペプチン(Kiss)ニューロンに対するGnRHニューロンからのフィードバック機構を解明することを目的とする。このフィードバックは、本来は下位にある性腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)から上位のKissニューロンに対する制御であり、これまでに解明されていない新規な機構である。申請者はこれまでに、GnRH部分ペプチド受容体GPR101が弓状核Kissニューロンに発現し、GnRH部分ペプチドの脳内投与がLH分泌を促進することを明らかにした。本研究の当初計画ではこの機構生理的意義を解明するため、GPR101をKissニューロン特異的にKOしたラットを作出し、生殖機能への影響を明らかにすることを目指していた。本メカニズムを解明することには、Kissニューロンへの制御系を明らかにする点で学術的意義があり、家畜の繁殖率向上する応用面でも意義深い。これまでに、Kissニューロン特異的Gpr101-KOラットの作出の前段階として、詳細なGPR101局在を調べることを目的としてGタンパク質共役型受容体のin situ hybridization法の確立を試みてきた。その結果、GPR101がKissニューロン以外のニューロンにも発現することが明らかとなりつつある。本研究の結果、GPR101がキスペプチンニューロン以外のニューロンにも発現することが明らかとなりつつある。現在申請者はGPR101が主に間接的にキスペプチンニューロンの活動を制御する可能性があると考えている。キスペプチンニューロン特異的なGPR101ノックアウトラットの作出に着手する前に、Gpr101発現細胞の局在と機能をより詳細に明らかにする必要があったため、Gタンパク質共役型受容体のin situ hybridization法の確立を行ってきた。そのため、キスペプチンニューロン特異的GPR101ノックアウトラットの作出の計画はやや遅れている。今後はGpr101発現細胞の局在と機能をより詳細に明らかにしたのちに、キスペプチンニューロン特異的GPR101ノックアウトラットの作出に着手する予定である。また、キスペプチンニューロン以外の細胞に発現するGPR101がGnRHまたは性腺刺激ホルモンの分泌制御に重要な役割を果たすことが明らかになった場合には、生理学的あるいは組織学的実験によりGnRH部分ペプチドによるGnRHニューロンからのフィードバック機構を明らかにする予定である。次年度には研究が進捗し、論文として成果を発表する予定であることから、投稿料として使用する予定である。遺伝子改変ラット作出のための試薬および器具購入のため、また学会での成果発表のため約140,000円を計上していたが、今年度は研究にやや遅れが生じたため次年度へ繰り越した。
日本・東アジア諸国間における為替レート・ボラティリティと貿易

時系列分析本研究の目的は東アジア諸国の対日・対米輸出に及ぼす為替レート・ボラティリティ(volatility:変動性)の影響の考察である。データ上の制約及び日本との貿易量の重要性に鑑み、東アジア諸国から香港・韓国・シンガポール・タイを選んで研究を行った。特に、本研究では東アジア諸国の対日・対米輸出が対日・対米為替レートのボラティリティによって負の影響を受けているか否かを検討した。1990年から2001年までのデータをcointegration推定式とerror-correction modelを利用し分析すると、香港の対日輸出を例外にすれば、対日為替レートのボラティリティは対日輸出に、対米為替レートのボラティリティは対米輸出に負の影響を及ぼすことが発見された。パネルデータ分析本研究の目的は日本と東アジア諸国(インドネシア・韓国・マレーシア・フィリピン・シンガポール・タイ)を含むアジア太平洋地域内の貿易に及ぼす為替レート・ボラティリティの影響の考察である。重力モデル(gravity model)で1980年から2002年までのパネルデータ(panel data)を分析した結果、為替レート・ボラティリティの負の影響が示された。特に、アジア通貨危機が起きた1997年を境に、為替レート・ボラティリティの負の影響力が前より大きくなったことが発見された。一方、データをOECD加入国とOECD非加入国と分けると、その負の影響力はOECD非加入国の場合より大きい、為替レート・ボラティリティの負の影響力は金融市場の発達と関係があると考えられる。