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第三センタ-の研究

本報書は4章からなる。第1章「公企業形態論の論点」では、公企業形態論は市場メカニズムと関連した政府の政策における性質の違いを基礎として組立てられるべきこと,しかも第三セクタ-,ことに混合企業は「産業政策」の手段であって,ここでは企業原理が優先されるべきことが主張されている。第2章「第三セクタ-の歴史的展開」では,「第三セクタ-とはなにか?」をみたあとで、わが国における混合企業の歴史的発達とその諸特徴を概観し,ついで第二次大戦後における第三セクタ-の推移及び現段階の第三セクタ-を(1)開発型(a.産業基盤型,b.都市経営型,c.民活型),(2)管理型(a.減量経営型,b.行政ソフト化型)に分類している。さらに1.一定の収益条件の必要性,2.寄り合い所帯的性格,3.官僚の天下り,マンネリ化あるいは汚職の温床になりうる危険性を指摘しつつ,第三セクタ-の今後のあり方として1.守備範囲の適正化,2.責任体制確立のための諸方策,3.規制は政策的コントロ-ルに限定し,経営のコントロ-ルは排除されるべきことを提言している。第3章「第三セクタ-の原型」では,(1)開発型については民間賃金の活用,管理型については減量経営がわが国の場合第三セクタ-の主要な動機であることが例示されている。また,(2)政府の公共事業や財政負担,地方自治体の直営工事によって第三セクタ-がささえられているケ-スが多い。第三セクタ-にするだけでは経営は改善されないのでなかろうか。好結果をあげている「都市経営型」の場合立地条件のよさが好影響している。第4章「現段階の第三セクタ-」では,1986年の民活法と第三セクタ-の関連がとりあげられており,ここでは「開発型」について特徴と問題点が例示されている。ただしリゾ-ト開発,産業振興及び福祉等については触れることができなかった。他日を期したい。他日を期したい。1.研究計画の実施状況(1)設備備品費はすべて洋書購入に充当したが、価格上昇により計画額をかなり上回って、支出せざるをかなかった。(2)研究出張計画はおおむね達成できた。(3)資料整理(切抜き作業、カード作業など)は非常に進歩した。2.研究の進展状況(1)ドイツ文献を中心に歴史的研究および諸外国における最近の民営化に伴う政府の資本参加政策など公企業問題に関する外国文献の研究が進歩した。(2)経済企画庁総合計画局資本班「第三セクターに関するアンケート調査結果報告」昭53・3月、財団法人自治総合センター「大都市におけるまちづくりと地方公社の役割」昭58・3月、地方行政システム研究所「自治体の出資法人の定住構想の推進に果す役割とその組織・運営の実態に関する調査報告書」昭58・3月、さらに昭63年版『地方公社総覧』(地方政策研究会編)昭63・3月について、第三セクターの全国的動向と事例研究の一部における特徴点を把握できた。3.新たにえられた知見(1)第三セクターの現代的

形態は(ア)地域開発型(イ)都市経営型(つまり収益部門の黒字で非収益的な公共事業の赤字を企業内部において内部補助するもの)、(ウ)管理委託型(とりわけコスト節約的および補助金行政的な類型が主要なもの)に大別される。(2)地域開発型から管理委託型に重点が移ってきている。都市経営型に第三セクターの本領がある。(3)複合企業化が必要になってきている。組織目的の見直しが必要なケースがある。(4)助成は鉄道部門については今後の調査にまつことにして、あまりみられない。(5)規制についてはさまざまな問題が考えられるが、原則的に政策的コントロールは甘受すべきであるが、経営的コントロールは避けるべきであり、とくに議会による規制はある程度は必要であるが、経営権の侵害にならないしかたが望まれる。1研究の進展状況(1)本年度は民営化及び公共経済と市場経済のいわゆるディマケ-ション問題を中心に、内外文献について第三セクタ-の研究の前提となるべき側面をかなり明らかにすることができた。(2)各地の第三セクタ-鉄道についてかなり実態に触れることができた。また、大阪・神戸などに従来から展開している第三セレクタ-、東京・千葉・横浜方面の民活型第三セクタ-など表日本に立地するものを調査し、これらとの対比において金沢、富山などの北陸方面の類似のものを調査することができた。2.新たにえられた知見(1)第三セクタ-鉄道では、国鉄からの転換にあたり施設・設備の無償譲渡または無償貸与の上に、初期投資及び転換基金設置のための転換交付金(いわば支度金)、5カ年間の欠損の2分の1補助など国の財政措置や自治体・企業等からの運用・協力基金、住民の協力会設置などの支援体制にささえられており、旧国鉄の借金は国の負担となっており、多くの会社は無償貸与され固定資産税の負担をまぬがれている。(2)民活法の特定施設にされることによってNTT株売却益無利子貸付、開銀の低利融資、補助金がついてくるといったしくみ、さらに東京一極集中の緩和が叫ばれるなかで民活法推定はかなり東京やその近郊にかたよっており、大阪方面を加えると、この傾向は無視できないこと、これは第三セクタ-形態と無関係ではないのではないかといった点が注目される。(3)行政ソフト化型とでも言うべき住民の新しいニ-ズに結びついた第三センタ-が注目されつつあり、今後の課題である。3.第三セクタ-鉄道調査のため福島方面に出張する計画であったところ、岐阜などの調査結果から判断しこの計画を中止した。主として苫小牧地区を対象とする北海道方面調査は、日程の関係から平成2年度に計画を延期した。1.実施状況本年度の研究実施計画では(1)近畿の第三セクタ-による主要プロジェクト及び民活事業,苫小牧東部開発(株)の実態調査,さらに政府各省等でのヒアリングの継続,(2)文献調査,(3)一応のまとめが主目標であった。これにしたがって実態調査としては(a)近畿関連では関西高速鉄道(株),大阪市都市開発公社,(株)マ-チャンダイズ・マ-ト,リゾ-ト開発に関係して三重県,紀伊長島レクリエ-ション都市開発(株)等,さらに(b)苫小牧東部開発(株)等の調査を実施した。文献調査としては兵庫県福祉情報センタ-,全国社会福祉協議会,国立国会図書館において老人福祉関係の諸文献を調査,これらを手がかりとして厚生省,横浜市,(財)横浜市ホ-ム・ヘルプ協会,(財)世田谷ふれあい公社,(財)金沢市福祉サ-ビス公社,(財)崎玉県シルバ-サ-ビス公社といった在宅老人福祉サ-ビス関連の官庁や組織の調査を実施した。2.新たにえられた知見(1)開発型と管理型に第三セクタ-の類型化がほぼ固まった。
大腸がんの遺伝的多様性が促進する集団的悪性化機構の研究

大腸がん悪性化に関与するドライバー遺伝子がゲノム研究により明らかにされた。一方で、がん組織で認められる遺伝的多様性が悪性化促進に関与する可能性が指摘されているがそのメカニズムは依然として不明である。本研究では、5種類のドライバー遺伝子、Apc、Kras、Tgfbr2、Trp53、Fbxw7(以下、A、K、T、P、F)に異なる組み合わせで変異を導入したマウスモデルの腸管腫瘍由来オルガノイド、およびヒト大腸がん患者由来オルガノイドを用いて、遺伝子変異と微小環境に依存した悪性化機構、そしてがん組織を構成する多様性の役割について解明する。平成30年度は以下の研究結果を得た。(1)各遺伝子型オルガノイド細胞の悪性度検証:最初に単一の遺伝子型細胞による個体レベルでの悪性化形質を検証した。A、AKは粘膜内にとどまる腺腫を発生し、AP、ATは粘膜下浸潤する腺がんを発生することを確認した。AKP、AKTは粘膜下で腺管構造の消失と棘突起構造を呈した。また、AKTP、AKTPFの高い転移能を確認した。(2)腺管構造の変化を伴う遺伝的背景:AKPやAKTオルガノイドが間葉細胞様に組織構造を変化させる現象は、浸潤転移に重要と考えられる。これまでの研究からTGF-betaが上皮間葉転換(EMT)を誘導することが知られているため、TGF-betaと細胞内シグナルを共有するactivinで各遺伝型オルガノイドを刺激した。その結果、顕著な棘突起構造の形成誘導を認める遺伝子型のグループが認められ、細胞外シグナルと遺伝子変異の組み合わせが、浸潤性に関与すると考えられた。(3)ヒト大腸がん組織50検体からオルガノイド培養株を樹立し、その中からTGF-beta刺激により上記と同様の棘突起構造変化を認める2系統を選択した。今後、(2)で推進される研究結果を、これらのヒト大腸がんオルガノイドで検証する。大腸がん促進における遺伝的多様性を解析するために、均一な遺伝子変異の組み合わせによる悪性度の検証を実施した結果、特定の遺伝子型で、腫瘍細胞が粘膜下浸潤した時に腺管構造を消失させて棘突起構造を呈することを確認した。このような組織構造変化はヒトの大腸がん組織では病理学的にも知られているが、遺伝子変異との相関については明らかにされておらず、新規性の高い知見である。また、粘膜下浸潤領域では強い線維化が見られるため、線維化誘導に関与するTGF-betaファミリーのシグナルに着目してオルガノイド刺激を実施した結果、特定の遺伝子変異グループで同様の棘突起構造変化を示すことを明らかにすることが出来た。以上の研究成果は、特定の遺伝子変異の組み合わせが導入された腫瘍細胞と線維化を主とする細胞外環境との相互作用が、腫瘍組織の浸潤性獲得に関与する可能性を示す知見であり、今後の検証が重要である。本研究目的である、多様性による悪性化促進機構を理解する目的の達成のためにも、それぞれの遺伝子型と微小環境の相互作用による悪性化形質の獲得機構の理解は重要となる。さらに、ヒト大腸がんオルガノイドも計画通りに樹立され、その中から、TGF-beta刺激によりマウスオルガノイドと同様の構造変化を示すオルガノイドを得ることに成功しており、ヒト大腸がんを用いた検証用の研究ツールの開発も行った。以上の研究成果から、本課題研究は当初の計画以上に進展していると判断する。これまでの研究により、それぞれの遺伝子型オルガノイドに特異的な発現誘導遺伝子群が特定し、データベース化されている。一方で、平成30年度の結果を基盤に粘膜下浸潤能や、棘突起形成により浸潤転移能を獲得など、遺伝子変異型と悪性化形質の相関が明らかになって来た。そこで、特徴的な組織構造変化や転移再発などの悪性化形質を示すオルガノイドに共通して発現誘導される遺伝子群をデータベースから抽出し、機能スクリーニングにより悪性化誘導シグナル経路を特定する。この研究項目では、shRNAやCRISPR/Cas9を用いて特定遺伝子の発現を抑制したオルガノイドを作製し、in vitroおよび移植による個体レベルにおける形質変化を観察して、遺伝子の特定を目指す。一方で、平成30年度の解析で新たに発見したactivinによる腫瘍組織の構造変化の分子機構の解明は、本課題の研究推進に重要に関わることが予想される。そのため、オルガノイド培養実験を中心に、腫瘍組織周囲の線維化構造およびそれに関与するTGF-betaやactivinなどの刺激に依存した、腫瘍組織構造変化と浸潤性獲得機構について研究を展開する。以上の研究結果は、ヒト大腸がんから樹立したオルガノイドを用いた解析によって検証し、ヒト大腸がんの悪性化進展機構を、がん細胞と間質細胞の多様な細胞集団が形成するネットワークの相互作用による悪性化機構を、遺伝子変異と細胞集団の多様性の観点から明らかにする。

(1)各遺伝子型オルガノイド細胞の悪性度検証:最初に単一の遺伝子型細胞による個体レベルでの悪性化形質を検証した。A、AKは粘膜内にとどまる腺腫を発生し、AP、ATは粘膜下浸潤する腺がんを発生することを確認した。AKP、AKTは粘膜下で腺管構造の消失と棘突起構造を呈した。また、AKTP、AKTPFの高い転移能を確認した。(2)腺管構造の変化を伴う遺伝的背景:AKPやAKTオルガノイドが間葉細胞様に組織構造を変化させる現象は、浸潤転移に重要と考えられる。これまでの研究からTGF-betaが上皮間葉転換(EMT)を誘導することが知られているため、TGF-betaと細胞内シグナルを共有するactivinで各遺伝型オルガノイドを刺激した。その結果、顕著な棘突起構造の形成誘導を認める遺伝子型のグループが認められ、細胞外シグナルと遺伝子変異の組み合わせが、浸潤性に関与すると考えられた。(3)ヒト大腸がん組織50検体からオルガノイド培養株を樹立し、その中からTGF-beta刺激により上記と同様の棘突起構造変化を認める2系統を選択した。今後、(2)で推進される研究結果を、これらのヒト大腸がんオルガノイドで検証する。大腸がん促進における遺伝的多様性を解析するために、均一な遺伝子変異の組み合わせによる悪性度の検証を実施した結果、特定の遺伝子型で、腫瘍細胞が粘膜下浸潤した時に腺管構造を消失させて棘突起構造を呈することを確認した。このような組織構造変化はヒトの大腸がん組織では病理学的にも知られているが、遺伝子変異との相関については明らかにされておらず、新規性の高い知見である。また、粘膜下浸潤領域では強い線維化が見られるため、線維化誘導に関与するTGF-betaファミリーのシグナルに着目してオルガノイド刺激を実施した結果、特定の遺伝子変異グループで同様の棘突起構造変化を示すことを明らかにすることが出来た。以上の研究成果は、特定の遺伝子変異の組み合わせが導入された腫瘍細胞と線維化を主とする細胞外環境との相互作用が、腫瘍組織の浸潤性獲得に関与する可能性を示す知見であり、今後の検証が重要である。本研究目的である、多様性による悪性化促進機構を理解する目的の達成のためにも、それぞれの遺伝子型と微小環境の相互作用による悪性化形質の獲得機構の理解は重要となる。さらに、ヒト大腸がんオルガノイドも計画通りに樹立され、その中から、TGF-beta刺激によりマウスオルガノイドと同様の構造変化を示すオルガノイドを得ることに成功しており、ヒト大腸がんを用いた検証用の研究ツールの開発も行った。以上の研究成果から、本課題研究は当初の計画以上に進展していると判断する。これまでの研究により、それぞれの遺伝子型オルガノイドに特異的な発現誘導遺伝子群が特定し、データベース化されている。一方で、平成30年度の結果を基盤に粘膜下浸潤能や、棘突起形成により浸潤転移能を獲得など、遺伝子変異型と悪性化形質の相関が明らかになって来た。そこで、特徴的な組織構造変化や転移再発などの悪性化形質を示すオルガノイドに共通して発現誘導される遺伝子群をデータベースから抽出し、機能スクリーニングにより悪性化誘導シグナル経路を特定する。
有機塩素化合物分解能を担う新規トランスポソンの同定と利用

微生物による有機塩素化合物の分解を、酵素及び遺伝子の面より研究する過程で、ハロ酢酸脱ハロゲン化酵素をコードするプラスミドpUO1を見出した。サザン解析の結果、デハロゲナーゼ遺伝子dehH2の両側に相同配列があり、またこの領域の頻繁な欠失を認めた。本研究ではこのトランスポソン様因子の全塩基配列を決定し、構造と機能を明らかにした。1.ハロ酢酸デハロゲナーゼ遺伝子のコード領域2.5kbを挟んで3.2kbの同方向繰り返し配列があった。この繰り返し配列はすでにAlcaligenessp.BR60のクロロ安息香酸分解トランスポソンに見出された挿入配列IS1071と同じものであった。2.このISの両端には110bpのinverted repeatsがあり、その間にトランスポゼ-ス遺伝子と思われる2913bpのオープンリーディングフレームがあった。レゾルベース遺伝子は見当たらなかった。3.デハロゲナーゼ遺伝子dehH2はクラスIIのISに挟まれたクラスIの複合トランスポソンであることが判明した。このトランスポソンをTn dehH2と仮称する。4.プラスミドpUO1を持つE.coliC600およびMoraxella sp.Bを継代培養し、染色体DNAへのTn dehH2の転移の有無をサザン解析により調べたが、転移の痕跡は認められなかった。5.E.coliC600に2つのプラスミドpUO1とRP4を同居させ、両プラスミドの融合プラスミドや種々の組み換えプラスミドを得た。この融合や組み換えがTn dehH2の転移能や組み換え能に依っているのかどうかは現在解析中である。組み換え体の中にTn dehH2の2重、3重タンデムコピーを認めた。微生物による有機塩素化合物の分解について、酵素及び遺伝子の面より研究する過程で、ハロ酢酸を脱ハロゲン化する酵素「ハロ酢酸デハロゲナーゼ」を支配するプラスミドpUO1を見出した。その遺伝子コード領域の部分解析から、デハロゲナーゼ遺伝子は2つの相同配列に挟まれ、トランスポソン様構造をしていることが明らかになった。本研究ではこの相同配列の全塩基配列を決定し、この構造の全容を明らかにした。1.ハロ酢酸デハロゲナーゼ遺伝子コード領域2.5kbを挟んで3.2kbの同方向繰り返し配列があった。2.この3.2kb繰り返し配列はすでにAlcaligenes sp.BR60のクロロ安息香酸分解トランスポソンに見出された挿入配列IS1071と同じものであった。3.このISの両端には110bpのinverted repeatsがあり、その間にトランスポゼ-スをコードしていると思われる2913bpのオープンリーディングフレーム(ORF)があった。4.従って、このデハロゲナーゼ遺伝子はクラスIIのISに挟まれたクラスIの複合トランスポソンであることが判明した。5.トランスポソンの転移についてはまだ認めていない。ハロ酢酸分解プラスミドpUOl上に見出した新規脱ハロゲン能トランスポソンTn dehH2(8.9kb)は、脱ハロゲン酵素遺伝子dehH2を2つの挿入配列IS 1071(3.2kb)が挟んだ形をしている。transposase遺伝子と思われるORFはIS 1071中に存在しているが、resolvase遺伝子らしきものは認められない。本研究ではこのトランスポソンの転移能を調べた。

1.プラスミドpUOlを保持するE.coliC600およびMoraxella sp.Bを継代培養し、染色体DNAへのTn dehH2の転移の有無をサザンハイブリダイゼーションにより調べたが、転移の痕跡は認められなかった。2.2つのプラスミドpUOlとRP4を同居させたE.coliC600を、数回培養を繰り返した後、Rif^rE.coliC600と接合伝達を行い、Rif^r, Amp^r(RP4の形質)およびモノヨ-ト酢酸耐性(Tn dehH2の形質)のtransconjugantを約90株得た。これらの株にはRP4とpUOlの融合プラスミドや組み換えプラスミドを認めたが、この融合や組み換えがTn dehH2の転移や組み換え能に依っているのかどうかは現在解析中である。
ドナー抗原の経口投与による移植心に対する特異的免疫寛容誘導に関する実験的研究

経口的に投与された蛋白質に対する免疫寛容が生じることは広く知られている。そこで、ドナー抗原の経口投与が移植片に対して特異的免疫寛容を誘導するかを調べ、またその効果を増強するために、抗CD4抗体を併用した。抗CD4抗体とドナー抗原(ドナーの脾細胞またはK^b分子)の経口投与は移植心を100日以上生着させた。その上、K^b分子だけを発現している細胞の経口投与で、すべての主要組織適合性抗原が異なる移植心が完全生着した。誘導された免疫寛容は、CD4陽性T細胞の移入で無処置マウスへ移すことができた。よって、今回のプロトコールではindirectantigen recognitionにより免疫制御性のCD4陽性T細胞が誘導され、linked suppressionを通じて移植片の永久生着を誘導したと推論される。臨床応用時の問題点としては、併存する蛋白に対して免疫寛容となるため、ウイルスや細菌などが偶然に併存した場合には、そのものに対しても免疫寛容となるので、感染症誘発の危険性をはらんでいる。免疫誘導の至適量が、通常の生体内でのウイルスや細菌などの抗原提示量よりもはるかに多ければその問題も回避される可能性があるが、更なる検討を要する。まとめ今回の一連のマウス心臓移植モデルを用いた研究から以下の重要な知見が得られた。(1)ドナー抗原の経口投与にて移植心の生着が延長した。(2)抗CD4抗体はドナー抗原の経口投与による効果を著明に増強し、移植心の永久生着を誘導した。(3)Indirect recognitionがdirect recognitionによる拒絶反応を抑制した。(4)抗CD4抗体の存在下にドナーMHC抗原のひとつが経口投与されれば、他の移植抗原を発現している移植心に対しても免疫寛容が成立した。(5)抗CD4抗体の存在下に消化管粘膜を通過して併存する蛋白が、移植時にも存在すれば、移植心に対する免疫寛容が成立した。抗CD4抗体がドナー抗原の経口投与により特異的免疫寛容の誘導を増強することが確認できた。ドナー抗原の投与後,長期に移植心を受け入れているレシピエントのT細胞,CD4T細胞及びCD8T細胞を無処置のマウスに移入し,その後,前回のドナーと同種の心臓を移植して,生着期間を観察した結果、CD4T細胞の移入でグラフトの生着期間は延長した。よって免疫寛容誘導の機序が,免疫抑制CD4T細胞の存在によることが判明した。経口的に投与されたドナー脾細胞上のMHCがIndirect presentationにてT細胞に提示されることを確認するために,Direct presentationにてC57BL/10のMHC(H2b)を認識するT細胞を使用した。そのT細胞(2x10^6)を経口色素(CFSE)にてマークしたのちCBAマウスに移入した。CFSEは分裂後,娘細胞に均等に移動するため,蛍光強度の減衰が分裂状況を反映する.このモデルを用いることによりDirect presentationは関与していないことが観察できた。

よって、今回のプロトコールではindirectantigen recognitionにより免疫制御性のCD4陽性T細胞が誘導され、linked suppressionを通じて移植片の永久生着を誘導したと推論される。臨床応用時の問題点としては、併存する蛋白に対して免疫寛容となるため、ウイルスや細菌などが偶然に併存した場合には、そのものに対しても免疫寛容となるので、感染症誘発の危険性をはらんでいる。免疫誘導の至適量が、通常の生体内でのウイルスや細菌などの抗原提示量よりもはるかに多ければその問題も回避される可能性があるが、更なる検討を要する。まとめ今回の一連のマウス心臓移植モデルを用いた研究から以下の重要な知見が得られた。(1)ドナー抗原の経口投与にて移植心の生着が延長した。(2)抗CD4抗体はドナー抗原の経口投与による効果を著明に増強し、移植心の永久生着を誘導した。(3)Indirect recognitionがdirect recognitionによる拒絶反応を抑制した。(4)抗CD4抗体の存在下にドナーMHC抗原のひとつが経口投与されれば、他の移植抗原を発現している移植心に対しても免疫寛容が成立した。(5)抗CD4抗体の存在下に消化管粘膜を通過して併存する蛋白が、移植時にも存在すれば、移植心に対する免疫寛容が成立した。
古英語詩編行間注釈に現われる方言的特性

本研究は古英語詩編行間注釈13写本を比較し、基本となるMercian方言のVespasian Psalterとそれに属するAタイプ写本と、West Saxon方言のRegius Psalterとそれに属するDタイプ写本の間の相違点を明らかにすると共に、Dタイプに属する写本間の関係を明らかにする試みであった。成果の最も大きなものは、AとDの比較において名詞・形容詞・副詞等の語彙のみならず、動詞の前綴り、変化語尾、機能語、語順等の違いも詳細に比較することにより、何が相違点として重視されるべきかを明らかにしたことにある。この基本資料は報告書の後半部分であり、これを活用して他写本での異形を見ることにより、同一タイプでのA, Dからの距離、各写本の独自性を知ることができる。結果としてPeter Kitson(2003)のstemmaを大きく変えるような事実はないものの、AタイプのJunius PsalterとCambridge PsalterについてはWest Saxonによる書き直しであるため更なる調査が必要なこと、DタイプのLambeth Psalterの独自性、12世紀のEadwine's Canterbury Psalterの過渡期写本としての重要性が再確認されたことも付け加えたい。この研究の遂行にあたり、国内においては東京大学、京都大学、東京外国語大学、名古屋大学、中部大学、大阪大学、九州大学、福岡大学、信州大学、筑波大学、関西外国語大学において学会発表や研究会の開催に合わせて資料収集と類似分野の研究者との打ち合わせを行い、国外においては2002年も含めLondonのBritish Library, OcxfordのBodleian Library, CambridgeのParker Library, University Libraryでの写本調査と、Glasgow, Vienna, Munich, Poznanの各大学図書館においての資料収集、また国際学会・研究会において発表・講演を行い、成果の一部を公表した。初年度は国内で出来る調査はすべて行なうことを目標とした。5月の近代英語協会特別シンポジウム参加(東京外国語大学)、日本英文学会発表(成蹊大学)、11月の日本英語学会シンポジウム企画・参加(静岡県立大学)、12月の日本中世英語英文学会シンポジウム企画・参加(東京外国語大学)を予定していたこともあり、資料の得られそうな大学の知人には前もって連絡の上出張し、あるいは学会開催中に会って情報を得た。また、同じテーマで研究している友人の訪問も受け、情報交換を行なうことが出来た。11月のシンポジウムはポーランドの文部大臣経験者であり現在はアダム・ミッケビッチ大学学長のヤチェック・フィシャック教授を招いて私が企画したもので、このpaperが今回のテーマの基礎となる研究である。Editionの段階での調査は終了し、方言的差異を示すlexemeの種類と機能による分類を提示した。これによって、従来取り上げられることがほとんどなかった機能語や接頭辞・接尾辞の変異、語順の相違などを重視することによって、Aタイプ(Mercian方言)とDタイプ(West Saxon方言)という簡単な対立の図式ではなく、Aタイプ内のB, Cの相違、Dタイプ内ではG, H, Jの類似性と、I, Kそして過渡期にかかるEの独自性がはっきりと認められた。しかしさらに言うなら、各々の写本の独自性も考えなければならぬことと、一写本内での統一性と不規則性も見られることが分かった。詳細な資料は最終報告にまとめる。今回資料収集に協力して下さった天野政千代(名古屋大学)、大門正幸(中部大学)、尾崎久男(大阪大学)、中尾佳行(広島大学)、縄田裕幸(島根大学)、馬場彰(東京外国語大学)、樋口昌幸(広島大学)、保坂道雄(日本大学)、松本博之(豊田工業大学)、渡辺秀樹(大阪大学)の諸氏に感謝申し上げる。理論の資料については、残念ながら十分活用できたとは言い難い。今年度は2年目ではあるが、海外の所属学会の開催が重複する年であるため、結果ないし途中経過の発表を前倒しして行い、反応を見ることに重点を置いた。

まず6月の韓国英語学会イエスペルセン記念大会では、非人称構文の発達に関する有名な例文The king liked pearsを取り上げて論ずる中で、行間注釈に現われる稀な例を提示した。8月のカナダ、バンクーバーでの国際英語正教授学会ではBoethiusのDe Consolatione Philosophiaeの古フランス語・古英語・中英語・近代英語訳を比較、同一のラテン語に対する訳語が作品により同時代でも異なることを指摘、その結果文脈解釈の違いや抽象概念の意味の違いが後の時代に引き継がれることを例証した。同月末にウィーンで開かれた国際歴史英語学会では、古英語詩編行間注釈13写本における語彙の相違を、方言差(Mercian vs. West Saxon)、時代差(early West Saxon vs. late West Saxon)、語の種類の差(実語vs.機能語)等を中心に網羅的に調査した結果を報告、かなりの反響を呼んだ。11月にはポーランドの中世英語学シンポジウムでの基調講演として、行間注釈に現われる否定語・否定辞・否定構文の異形を、ラテン語の訳出の仕方の相違として提示、構文の場合はラテンのなぞりと英語式の通常の表現とに分かれる様子を実例によって明らかにした。国内では日本学術振興会の外国人招聘事業(短期)で招いた友人に同行しながら、東京大学・慶応大学・名古屋大学・大阪大学・広島大学等で資料を収集、また日本中世英語英文学会20周年記念大会の特別ゲストの司会として訪れた武庫川女子大学では同学会員との研究課題についての意見交換を行った。最終年度となる今回は、3つのことを重視した。すなわち5月に近代英語協会の全国大会を千葉大学で開催するため、その際同じ分野の研究に携わる者同士で情報交換を行なうこと、加えて9月にやはり千葉大学で開催する英語史学会(The Society of Historical English Language and Linguistics)を宣伝し、学会の趣旨(言語理論と文献学の融合)に賛同する出席者を募ること、さらにドイツ、ミュンヘン大学大学院において2つの講演を行なって本研究の成果を発表すること、そして英語史学会を成功させることであった。近代英語協会大会では、翌日に日本英文学会の大会を控えていることもあり、午前と午後の間の休憩時間を用いての短時間での意見交換ではあったが、理論面は類似テーマで研究している中部大学の大門正幸氏の成果に待つこととし、私はデータの収集と整理に重点を置いてまとめることとした。
肺末梢構造の解析とX線診断への応用(気管支娘枝と肺癌を中心として)

1.肺末梢構造の解析気管支分岐には同大分岐を繰り返し胸膜直下に至る主軸枝系と、その間の空間を埋めるように主軸枝に対し細い分枝を不同大分岐する娘枝とからなる。このことを肺門周囲領域と肺野末梢領域とで小葉254個、終末細気管支610個を検討し、葉枝から終末細気管支に至る次数は9ないし20次であり、肺門周囲の娘枝で最少で肺底区で最大であった。小葉については小葉間隔壁は必ずしも明瞭ではなく、小葉内に終末細気管支が平均3ないし5個含まれる。小葉支配細気管支から終末細気管支までの平均分岐次数は2ないし3であった。2.肺内領域別の血流状態SPECT(single photon emission CT)を使用する健常人の肺血流は背臥位で、上肺野から下肺野に移るにつれて増加する傾向が認められた。このことは従来、背臥位では健常人の肺血流が均等になるとされていた報告とは異なる新しい知見である。肺気腫例では、軽症例から重症例となるほど胸壁直下の主軸枝が障害され、肺門周囲の娘枝領域が最後まで残り、肺門周囲領域が呼吸機能の予備能であるであることが推察された。3.伸展固定肺の新しい作成法切除肺を病理組織と対比検討する方法に、本研究でも利用するいわゆるHeitzman法がある。これには標本のX線写真が撮影でき、合成樹脂を使用せず肺既存構造の解析ができ、しかも病理組織標本が得られるという長所がある反面、病理組織標本が劣悪さということが挙げられる。しかしHeitzman法に先だってホルマリン伸展固定を加えることで著しい改善を認めた。1.肺末梢構造の解析気管支の分岐様式について、数年来伸展固定肺を使用し分析を続けている。即ち、同大分岐を繰り返し胸膜直下に至る主軸枝系と、その間の空間を埋めるように主軸枝に対し細い分枝を不同大分岐する娘枝とからなる。これら娘枝が、通常の気管支像影では常に認められること、あるいは症例によっては日常臨床において使用されるCT.特に高分解能CTで認められることがあることを、昭和63年の気管支学会のシンポジウムで発表した。現在は、高分解能CTではどの程度娘枝が認められるかについて検討中である。2.娘枝領域の疾患先に述べたシンポジウムでは、画像上認められる娘枝とそれに関連する疾患の例を挙げ、さらにその検討を発展させ平成元年度、肺癌学会雑誌の肺癌に、この領域に特徴的に生じた疾患について発表した。例えば肺門周囲に依存する腺癌の多くは中枢発生肺癌ではなく、亜区域支、亜々区域支から分岐する娘枝に支配される末梢領域から発生している。良性の腫瘍は気管支、血管と直接の関係を持たず、それらの間の娘枝領域に存在していた。また、サルコイド-シスやパラコ-トによる肺線維症も肺門周囲しかも肺門よりも前方に認められるなど、通常の肺線維症とは異なっていた。その後の実際の臨床上、これらの知識はX線学的診断において有用であった。3.肺内領域別の血流状態従来肺全体として評価していた血流について、正常者に対し、Single photon emission CTを使用し、領域別、特に肺門周囲の娘枝領域を含め検討を開始している。平成2年度,3年度は解剖学的と並び、機能的なアプロ-チを考慮している。1.肺末梢構造の解析気管支分岐には同大分岐を繰り返し胸膜直下に至る主軸枝系と、その間の空間を埋めるように、主軸枝に対し細い分枝を不同大分岐する娘枝とからなる。このことを肺門周囲領域の小葉87個、終末細気管支354個、ならびに肺野末梢領域の小葉167個、終末細気管支256個につき検討した。

葉支から終末細気管支に至る次数は9ないし20次であり、肺門の娘枝領域で最も少なく、肺底区S^<10>cで最も大きかった。小葉については小葉間隔壁は必ずしも明瞭ではなく、小葉内に終末細気管支が平均3ないし5個含まれる。小葉内での、小葉支配細気管支から終末細気管支までの平均分岐次数は2ないし3であった。娘枝領域では、必ずしも肺動脈が気管支に伴走するとは限らず、他の領域から支配されることもあった。2.肺内領域別の血流状態従来肺全体を一つとして評価していた血流について^<99m>TcーMAAを使用し、健常人に対してsingle photon emission CTによる領域別、特に肺門周囲の娘枝領域を含めてて検討した。従来の成書では、健常人の肺血流は背臥位ではすべての領域で均等になるとされていた。しかしながら我々の検討では上、中、下肺野に移るにつれ血流は増加する傾向があり、肺門周囲の娘枝領域は中、下肺野と同様の値を有する傾向が認められ、健常人の背臥位における肺内血流は決して均等ではないことが判明した。今後は種々の疾患、特に肺気腫による病期、重症度の把握や評価について検討したい。1.肺末梢構造の解析気管支分岐には同大分岐を繰り返し胸膜直下に至る主軸枝系と、その間の空間を埋めるように主軸枝に対し細い分枝を不同大分岐する娘枝とからなる。このことを肺門周囲領域と肺野末梢領域とで小葉254個、終末細気管支610個を検討し、葉枝から終末細気管支に至る次数は9ないし20次であり、肺門周囲の娘枝で最少で肺底区で最大であった。小葉支配細気管支から終末細気管支までの平均分岐次数は2ないし3であった。2.肺内領域別の血流状態SPECT(single photon emission CT)を使用する健常人の肺血流は背臥位で、上肺野から下肺野に移るにつれて増加する傾向が認められた。このことは従来、背臥位では健常人の肺血流が均等になるとされていた報告とは異なる新しい知見である。肺気腫例では、軽症例から重症例となるほど胸壁直下の主軸枝が障害され、肺門周囲の娘枝領域が最後まで残り、肺門周囲領域が呼吸機能の予備能の予備能であることが推察された。3.伸展固定肺の新しい作成法切除肺を病理組織と対比検討する方法に、本研究でも利用するいわゆるHeitzman法がある。これには標本のX線写真が撮影でき、合成樹脂を使用せず肺既存構造の解析ができ、しかも病理組織標本が得られるという長所がある反面、病理組織標本が劣悪さということが挙げられる。しかしHeitzman法に先だってホルマリン伸展固定を加えることで著しい改善を認めた。
ベニバナ収穫ロボットの開発

本研究は地域特産農産物であるベニバナの生産を活性化するため、栽培管理ロボットで利用するAIによるベニバナの検出と収穫用ロボットアームの開発を行った。試作したAI(学習データ数:434枚、2495枚、深層学習フレームワーク:YOLOv3)によるベニバナ花弁の検出は、静止画の場合で花弁検出率が学習回数を増やすにつれて一次関数的に高くなり、10000回以上の学習で80%程度となった。動画での花弁検出率は学習回数を増やすにつれて一次関数的に増加し、10000回から50000回の学習で花弁の検出率が80%程度で安定した。動画では学習データ数との間に5%水準で有意差が生じた。ベニバナ花弁収穫に用いる走行台車はインホイールモータ付きの車輪と制御用コントローラで構成し、走行速度範囲が0.21m/sから0.47m/s、重心Gxが216.9mm、Gyが403.47mm、Gzが339.1mmであった。花弁を収穫するロボットアームはパラレルリンク機構とし、3つのサーボモーターで駆動する。また、Hand Frame(「手先」)には花弁摘み取り部を装着し、Base Frameには花弁を撮影するためのWebカメラを取り付けた。収穫用ロボットアームシステムはROSがインストールされたPCで駆動され、Pythonで制御プログラムを作成した。開発したロボットアームシステムは目標位置とWebカメラで算出した位置の最大誤差がx軸方向で約4mm、y軸方向で約9mm、z軸方向で約18mmであった。また、目標位置と実際の手先位置との最大誤差はx軸方向で約5mm、y軸方向で約10mm、z軸方向で約10mmであり、Webカメラ画像で算出された座標からパラレルリンクマニピュレータの手先位置を的確に制御できた。ベニバナ収穫ロボットの開発では、人工知能を用いた花弁の検出、パラレルリンクアームの開発と制御アルゴリズムの開発、花弁回収部の開発、移動台車部の開発をそれぞれ行い、各要素技術を年度中に完成することができた。各要素技術は、それぞれ作業精度を調査しており、おおむねほ場での実証試験に供するレベルを確保できた。1.本年度開発した要素技術を移動台車に組み込み、開花前までに動作試験とアルゴリズのデバックを行う。2.開発した収穫ロボットは、山形大学農学部農場で栽培しているベニバナほ場で収穫試験を行い、花弁の回収量、作業精度、作業能率について調査を行う。3.花弁検出の人工知能の精度を向上するため、収穫時の画像データを収集して教師データを作成し、強化学習による検出率改善を行う。
慢性そう痒性皮膚疾患の難治化機序の解明と新規治療薬の開発

アトピー性皮膚炎(AD)患者ではペリオスチン(PO)の発現が皮膚で亢進しており、血清値と重症度との間に相関がみられる。本研究ではADを中心としたそう痒性皮膚疾患におけるPOの発現異常とセマフォリン3A(Sema3A)、神経成長因子(NGF)といった神経関連因子および各種炎症性サイトカイン異常との関係について明らかにし、そう痒性疾患の新規治療薬の開発を目指した。さらにADにおける新規バイオマーカーを探索した。1)培養ヒト線維芽細胞およびケラチノサイトをリコンナントPOで刺激し、Sema3A、NGFの産生をみたところ、いずれの細胞も一定の傾向はあったものの有意な変化をみなかった。また末梢血にPOとLPCとの共刺激を加え培養したところ、AD患者では健常人と比べてIL-18とTNF-αのmRNAの発現が上昇した。PO受容体であるインテグリンαの発現増加率はAD患者の末梢血で高かった。以上よりADにおけるPOの炎症増強作用が推察されたがかゆみ神経との関係は明らかにされなかった。3)ケラチンサイトが産生するSCCA2はADの重症度や慢性化および治療効果予測のバイオマーカーとして使用可能であることを示した(Allergol Internatioal 2018)。我々はこれまでアトピー性皮膚炎(AD)や乾癬患者ではperiostin(PO)の発現が皮膚で亢進しており、血清PO値と疾患重症度との相関がみられること、これらの疾患ではかゆみの皮膚の神経軸索ガイダンス分子(セマフォリン3A:Sema3A、神経成長因子:NGF)の発現異常が見られることを報告してきた。本研究ではそう痒性皮膚疾患におけるPOの発現異常と神経軸索ガイダンス分子および各種サイトカインの産生異常との関係について明らかにすることを目指す。さらに、これまでマウスの乾燥皮膚のかゆみに有効であることを報告してきたコラーゲントリペプチド(CTP)を用いて、かゆみおよびADの新規治療薬の開発をめざす。また、ADの新規バイオマーカーとして、表皮ケラチノサイトが産生するSCCA2の意義を報告した(BJD 2017年)が、さらにその臨床的意義を詳細に確認する。初年度は下記の計画をたて、予定通り遂行した。すなわち、1)培養細胞や末梢血細胞を用いてPOが神経軸索ガイダンス分子や種々のサイトカイン産生に及ぼす影響についてmRNAレベルおよびタンパクレベルで明らかにする。2)培養ケラチノサイトや線維芽細胞、末梢血細胞を用いてCTPによるケラチノサイトの神経軸索ガイダンス分子やサイトカイン産生促進効果を明らかにし、その機序を解明する。さらにAD患者に12週間投与し、その効果をみる。3)ADおよびその他のそう痒性皮膚疾患患者の各種臨床データーと血清SCCA2との関連をみることにより慢性化のバイオマーカーとしてSCCA2の有用性を明らかにする。これらの研究は順調に進行しており再現性も含めてさらに検討を重ねている。1)POの慢性そう痒性皮膚疾患への関与について.1.培養ヒト線維芽細胞およびケラチノサイトをリコンビナントPO単独またはPOとTEN-αで共刺激し、Sema3A、NGF、各種サイトカインの発現の変化をタンパクレベルやmRNAレベルで確認した。また、培養液中のこれらのタンパク量をELISA法で測定した。結果はいずれの細胞もPO添加でPO無添加のコントロール群と比較していくつかのサイトカインの発現亢進がみられた。ただし、PO単独刺激とTEN-αとの共刺激とで結果が異なるため、現在実験を追加してその意義を検討中である。2.POが末梢血単核細胞に直接作用して炎症性サイトカイン産生に影響を与えるかをAD患者と健常人の末梢血にPO単独またはPOとLPCとの共刺激を加えmRNAレベルおよびタンパクレベルで確認した。その結果、AD患者において発症に関与しているといわれている各種サイトカインの発現の上昇がみられた。2)CTPの効果の検証:培養ケラチノサイトと線維芽細胞にCTPとサイトカインを添加し、Sema3A、NGF、各種サイトカインの産生の変化をタンパクおよびmRNAレベルでみた。その結果、TSLP、TARC/CCL17、MDS/CCL22などのサイトカインの産生が亢進した。Sema3AとNGFについては一定の傾向はみられたが有意な変化ではなく、再度実験を行っている。末梢血単核細胞を用いた上記ケラチノサイト培養上清による遊走試験では、CTP添加培養上清において遊走能の亢進がみられた。さらにAD患者に二重盲検法で濃縮CTP製剤と通常のCTP製剤を12週間経口投与し、前者で痒みや炎症所見に有意な変化をみた。3)血清SCCA2の臨床的意義について:ADの慢性化の指標やかゆみの難治化、薬剤の効果の予測に使用可能かを、患者データーを用いて検証中である。本研究ではアトピー性皮膚炎(AD)を中心としたそう痒性皮膚疾患におけるperiostin(PO)の発現異常と神経軸索ガイダンス分子および各種サイトカインの産生異常との関係についてヒトおよび動物で明らかにすることを目指している。さらに、コラーゲントリペプチド(CTP)を用いて、かゆみおよびADの新規治療薬の開発をめざす。また、ADにおいて、表皮ケラチノサイトが産生するSCCA2の上昇を報告したが、さらにADにおける臨床的意義を詳細に確認する。28年度は、以下の研究を行った:1)培養細胞やAD患者末梢血細胞を用いてPOが神経軸索ガイダンス分子や種々のサイトカイン産生に及ぼす影響についてmRNAレベルおよびタンパクレベルで明らかにする。

2)培養ケラチノサイトや線維芽細胞、末梢血細胞を用いてCTPによるケラチノサイトの神経軸索ガイダンス分子やサイトカイン産生促進効果を明らかにし、その機序を解明する。さらにAD患者に12週間投与し、その効果をみる。3)ADおよびその他のそう痒性皮膚疾患患者の各種臨床データーと血清SCCA2との関連をみることにより慢性化のバイオマーカーとしてSCCA2の有用性を明らかにする。29年度は上記実験を引きつづき行うとともに、新たに以下の実験を行った:1)CTPの効果の発現機序を解明するため、培養ケラチノサイトを用いてCTPがレセプターに結合した後の細胞内シグナル伝達について検討する。さらにCTPを投与された患者の血液データーと効果発現の関係について解析する。2)Flag-SEP-Sema3Aノックインマウスを用いて皮膚の炎症との関係を明らかにする。3)PO高発現細胞とPO発現抑制細胞を用いてPOのTGF-βシグナルに与える影響をみる。28年度から引き続き行った研究の一部は既に論文化され、29年度に開始した実験は、現在進行中である。1)POのADへの関与の検討.1.培養ヒト線維芽細胞およびケラチノサイトをリコンビナントPO単独またはPOとTEN-αで共刺激し、Sema3A、NGF、各種サイトカインの発現の変化をタンパクレベルやmRNAレベルで確認した。また、培養液中のこれらのタンパク量をELISA法で測定した。結果はいずれの細胞もPO添加でPO無添加のコントロール群と比較してIL-1α、IL-6などのサイトカインの発現亢進がみられた。2.末梢血にPOとLPCとの共刺激を加え培養したところ、AD患者では健常人と比べてIL-1α、IL-6、IL-8のmRNAの発現の上昇がみられた。PO受容体であるインテグリンαの発現増加率はAD患者の末梢血で高かった。2)CTPのADへの効果の検証と作用機序の解明:培養ケラチノサイトと線維芽細胞にCTPとTNF-α、IFN-γ、IL-3を添加し培養した結果、TSLP、TARC/CCL17、MDS/CCL22の産生が亢進したがSema3AとNGFについては有意な変化はみられなかった。CTPがレセプターに結合した後の細胞内シグナル伝達についてはSTAT-1の関与を明らかにした。AD患者に二重盲検法で濃縮CTP製剤と通常のCTP製剤を12週間経口投与し、前者で痒みや炎症所見、好酸球数に有意な低下をみた(J Dermatol Sci 2017)。3)血清SCCA2の臨床的意義について:皮膚免疫組織学的検討と合わせて行い、ADの慢性化の指標やかゆみの難治化、薬剤の効果の予測に使用可能であることを確認した(Allergol Internatioal 2018)。4)Sema3Aの生体内動態を可視化することが可能なFlag-SEP-Sema3Aノックインマウスを用いて皮膚の炎症との関係をみているが、皮膚に生じさせた炎症の減弱効果については有意な結果が得られていない。アトピー性皮膚炎(AD)患者ではペリオスチン(PO)の発現が皮膚で亢進しており、血清値と重症度との間に相関がみられる。
マウスの授乳・成長期における多価不飽和脂肪酸の役割に関する研究

多価不飽和脂肪酸(PUFA)を調節した特殊飼料や人工乳で脂質代謝酵素である-6不飽和化酵素欠損マウスを飼育し,体重変化や組織内脂肪酸組成を測定した.体重変化において,成熟齢ではPUFAの違いによる差異は観察されなかったが,乳仔期,若齢期では,PUFAの体重増加に対する影響は明らかであった.脂肪酸組成では全ての個体において,アラキドン酸やドコサヘキサエン酸の低下が認められ,その機能性について検討する必要があると考えられた.多価不飽和脂肪酸(PUFA)を調節した特殊飼料や人工乳で脂質代謝酵素である-6不飽和化酵素欠損マウスを飼育し,体重変化や組織内脂肪酸組成を測定した.体重変化において,成熟齢ではPUFAの違いによる差異は観察されなかったが,乳仔期,若齢期では,PUFAの体重増加に対する影響は明らかであった.脂肪酸組成では全ての個体において,アラキドン酸やドコサヘキサエン酸の低下が認められ,その機能性について検討する必要があると考えられた.本研究は,各種多価不飽和脂肪酸を調節した人工乳を用いて△6不飽和化酵素欠損マウスを人工飼育した後に脳機能を評価し,脳内脂肪酸組成との相関性を検証し,脳機能における真に必須の脂肪酸を明確に証明するものである.平成22年度では,以下に示す事由により,予定していた項目を完全に達成できていない.(1)Δ6不飽和化酵素欠損マウスの輸入が遅延したこと.(2)Δ6不飽和化酵素欠損マウス交配後の妊娠出産時の母獣死亡により繁殖が停滞したこと.(3)外国人招へい研究者として日本学術振興会から採択された本研究の協力者(Nahed M Hussein (エジプト国立アインシャムス大学))の来日後に発生した母国の騒乱,東北大地震とそれに伴う余震,原子力発電所の事故等により,滞在期間を短縮して帰国したこと.本年度,得られた成果としては,以下の4項目である.(1)交配により実験可能なΔ6不飽和化酵素欠損マウスが確保出来るまでの状態になった.(2)基礎運動能力(自発運動量),記憶学習能(水迷路試験),うつ・不安(新奇環境による摂食抑制試験もしくは高架式十字迷路試験),運動協調性試験(ロータロッド)等の一連の行動試験測定条件を確立した.(3)人工乳を作製方法の確立した.(4)本研究に用いる対照動物であるC57BL/6Jマウスの人工飼育を完成させた.次年度は,これらの予備検討を基にΔ6不飽和化酵素欠損マウスの授乳・成長期の多価不飽和脂肪酸,特に,リノール酸,α-リノレン酸,アラキドン酸,ドコサヘキサエン酸の役割について検証できるものと考えている.本研究は,各種多価不飽和脂肪酸を調節した人工乳を用いて・6不飽和化酵素欠損マウスを人工飼育した後に脳機能を評価し,脳内脂肪酸組成との相関性を検証し,脳機能における真に必須の脂肪酸を明確に証明するものである.平成23年度は,以下に示す項目について実施を行ない成果が得られた.(1)∠6不飽和化酵素欠損マウスの繁殖によりコロニー数が拡大した.→本研究では,同一日に出産,人工飼育の開始が望ましいが,そのためには多数のコロニーが必要となってくる.(2)∠6不飽和化酵素欠損マウスの対照動物となるC57BL/6Jの人工飼育法の高離乳率を達成した.→これまで,多産系のマウス新生仔を用いて人工飼育法を行ない高離乳率が維持できていたが,本研究に用いるマウス系等は,多産系ではないため,離乳率は低値であった.しかし,人工乳,哺乳方法の精度を高めることにより,高い離乳率が得られるようになった.(3)一連の行動試験(自発運動量,水迷路試験,新奇環境摂食抑制試験,高架式十字迷路試験,ロータロッド試験)において陽性対照動物による効果を検出した.→行動試験の条件設定は,陽性対照の確認により,安定した方法となる,上記項目において,環境,個々の動物の状態に対応した予備検討を重ねたことにより,至適な条件を設定できるようになった.(4)新生仔マウスの遺伝子タにイプをPCR法により24時間以内に判定できるようになった.→本研究では,新生仔誕生後48時間以内に人工飼育を開始することになっているが,大量の検体を短期間で判定おできるようになった.(5)∠6不飽和化酵素欠損マウスの若齢,成熟個体における飼料中の脂肪酸組成変化による影響を調査している(検討中).→繁殖中に得られた,ホモタイプを用いて,若齢(4週齢),成熟(24週齢)個体の飼料中脂肪酸の影響を確認し,本実験に備えようとしている.本研究は,各種多価不飽和脂肪酸を調節した人工乳を用いて⊿6不飽和化酵素欠損マウスを人工飼育した後に脳機能等を評価し,脳内脂肪酸組成との相関性を検証して脳機能における真に必須の脂肪酸を明確に証明するものである.平成24年度は,以下に示す項目について実施を行なった.1⊿6不飽和化酵素欠損マウスの繁殖中に得られた雄性マウス(ホモ型)の若齢,成熟個体を用いて,飼料中の脂肪による各組織中の酸組成変化を検討した.→⊿6不飽和化

酵素欠損マウスの繁殖中に得られた雄性マウス(ホモ型)の若齢(4週齢),成熟個体(24週齢)に多価不飽和脂肪酸としてリノール酸とαリノレン酸のみを含有する飼料をそれぞれ10週間与え,体重変化を調査した.また,各個体から23組織部位を採取して脂肪酸組成を解析中である.各群の体重変化において,若齢群では,⊿6不飽和化酵素欠損により,体重増加の明らかな抑制が観察されたが,成熟個体では,その影響は認められなかった.しかし,両群ともに,脳組織などの各種多価不飽和脂肪酸の顕著な低下が観察された.2⊿6不飽和化酵素欠損マウスの人工飼育による各組織中の脂肪酸組織変化の検討.→ホモ型雄性マウスの誕生後,48時間以内に母獣から引き離し,リノール酸とαリノレン酸含有人工乳(基礎乳)で飼育し,その成長過程を9週齢まで正常動物と比較した.また,基礎乳にアラキドン酸を加えてその作用についても検討した.正常動物と比較して,基礎乳で飼育した⊿6不飽和化酵素欠損マウスは,明らかな低体重を示したのに対してアラキドン酸を加えた人工乳で飼育した⊿6不飽和化酵素欠損マウスは,正常動物とほぼ同程度の体重を示し,授乳期におけるアラキドン酸の重要性が確認された.今後,ドコサヘキサエン酸等の脂肪酸を添加した人工乳を用いて,同様の検討を行い,各脂肪酸の必須性に関する検討を継続する予定である.以下に示す事由により,予定していた項目に遅れが生じている.(1)昨年度(開始年度)の∠6不飽和化酵素欠損マウスの輸入の遅延.(2)∠6不飽和化酵素欠損マウス繁殖時の母獣死亡.(3)東日本大地震による共同研究者(日本学術振興会の外国人招へい研究者)の滞在期間の短縮これらにより,研究推進の遅延は避けられなかった.24年度が最終年度であるため、記入しない。前日のように,現在,本研究に関係する環境はほぼ修復,整備されたことから,本年度中には,∠6不飽和化酵素欠損マウスを用いた人工飼育が開始されるものと考えている.24年度が最終年度であるため、記入しない。