hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しいＲＦＩＤを利用した病院業務定量化の確立

新しいRFIDは、約2.5m四方の範囲で認識可能であり、病棟の医療機器やペースメーカーなどの生命に重要なデバイスの作動に影響を与えることはなかった。RFIDにより看護管理者が定性的に捉えていた看護実施状況を定量的に捉えることが可能になり、看護配置や看護必要度を定量的に評価することができた。当然ながら、RFIDで得られる情報は、業務内容や目的などの業務特性は含まれないが、電子カルテやオーダーエントリシステムを導入している施設ならば、指示情報や看護記録などと照合が可能であり、より詳細な分析が可能となる。病院の看護業務マネジメントにRFIDを有効活用できる可能性が示された。実験は群馬大学附属病院の設備機械室で行った。実際の現場を想定し、四方のうち二方を壁面とした鉄筋コンクリート構造の大空間で試験を行った。主な試験項目は、距離と反射の影響、RFタグとアンテナの向きの影響、RFタグを貼り付ける材質の影響、RFタグの重なりの影響であり、いずれも病院内での適用を考えた評価を行った。使用したのは2005年4月から国内で使用が認められたUHF周波数帯(952954MHz)を使用する無線IDタグシステムである。今回使用したシステムでは、床面から90センチ以下のエリアでRFタグの反応場所にばらつきが生じ、床面から50センチ以下のエリアでは殆ど反応しなった。次に、RFタグを貼り付ける場所が水分を多く含むものや金属だと反応しなかった。そして最後に、アンテナに対するタグの向きによって、同じ場所でも反応しなくなる場合があった。カードホルダにタグを入れ、首からぶらさげた状態でゲートを通過した。R/Wのアンテナは、1枚の場合と2枚でアンテナの間隔を0cm、100cm、150cmの場合で評価した。読み取り率:100%であった。機器類、備品類へタグ装着時の評価では、R/Wのアンテナ2枚でアンテナの間隔を150cmの場合で評価した。読み取り率:80100%であった。RFIDの病院への応用は、医療機器管理や患者の追跡に有用と考えられてきた。しかしながら、RFID技術の潜在的可能性はより高く、病院スタッフに適用することで、病院マネジメントに有効なデータを収集、活用できると考えられる。本研究では、看護師を中心とした病棟スタッフ及び病棟の機器(心電計等)に、RFIDによる位置追跡確認機能を持たせて、業務時の位置と時刻のデータを収集して、病棟業務状況の分析、病棟運営に有用な情報の抽出の実証を行った。各病室の看護師訪問頻度・滞在時間の結果を得た。さらに、病室の訪問回数、訪問時間の合計、平均訪問時間を算出して、病室毎の訪問状況を可視化したナース・ステーションから最も遠い病室(軽症患者を配置)では、訪問回数・訪問時間合計はより重症患者がいる部屋より少ない。しかし一訪問あたりの滞在時間は長かった。重症患者用病室(ナース・ステーションから最も近い)の業務頻度、業務時間が最も高かった。病棟には3台の心電計があり、1台が新しい(使いやすい)機器だった。その新しい機器だけが利用頻度が高く、他の機器はナース・ステーションのそばにずっとおいたままであった。医療機器に対してRFIDを活用する場合、どこで利用中か、管理台帳として用いるニーズがあり、その利用実態まで明らかにできた。看護実施状況を定量的に捉えることが可能になり、看護配置や看護必要度を定量的に評価する可能性が開けた。インシデントが発生した場合に、その時間帯の看護師の配置を表して、「他病室に業務が集中か」、「巡回間隔が不足したか」、などの要因絞り込みが可能になる。看護師の業務負荷、医療安全への活用などが期待される。群馬大学医学部附属病院循環器内科病棟で、医師・看護師を中心とする複数の病棟スタッフに同意を取得した後、無線タグを取り付け、実験期間中24時間の位置・時刻のデータ収集を行った。利用箇所を固定できない機器類(心電計、車いす、処置用カート等)にも無線タグを取り付けて、同様に実験を行った。アンテナは、病室とナースステーションなど、患者と関わる業務に従事する場所に取り付た。予備実験を実施した状態では、測定対象病室に一つずつアンテナを設置した。病棟全体での設置箇所を下図に示す。誤差の少ない電波強度を得る設定の結果、各装置が移動する都度、誤差10%未満でその位置を捉えることができた。病室の訪問回数、訪問時間の合計、平均訪問時間を算出して、病室毎の訪問状況を可視化することができた。特に、準夜帯や深夜帯など看護管理上で捉えにくかった時間帯など部屋別もしくは全部屋の巡回状況なども把握できた。時刻順の看護師所在位置の解析では、特定の病室への看護師の訪問状況を示す図なども作ることが可能であった。

機器については各時刻の所在を示しており、利用状況と利用場所を特定することができた。看護管理者が定性的に捉えていた看護実施状況を図示でき、看護配置や看護必要度を定量的に評価する可能性が開けた。想定される活用方法には、夜間の看護師の巡回密度が低下する時間帯の転倒患者への対応遅れの原因の分別など、様々なものが考えられる。その時間帯のスナップショットにより、他病室で業務中か、巡回間隔不足か、などの絞り込みが可能になる。今後、看護師の業務負荷、医療安全への活用などが期待される。RFタグを貼る場所の材質が金属であれば金属対策品のRFタグが必要である。また、薬剤は水分を含むもの(輸液容器など)が多く、水分対策品のRFタグが必要となる。医療スタッフや患者にRFタグを装着した場合、医療スタッフの姿勢や患者がベッドに寝ている姿勢、身長の低い子供ではRFタグが反応せず、不在と判断される可能性がある。RFタグの性能改良に伴い、医療現場における安全や経営コスト最適化が大きく進展する可能性はある。そのためには、医療安全や経営コスト最適に寄与するアプリケーションの開発とタグの機能向上が重要である。看護師を中心に業務量を定量する手ごたえが得られ、研究はおおむね予定通りに進行していると考えられる。実験の際に、新たな課題も見つかってきた。まず、RFIDから得られる情報は、業務内容や目的を含まない。それらの情報の不足により詳しい業務分析ができないことも少なくない。今回の追跡実験は詳細な看護業務分析が目的でないので、付加情報の取得は行わなかった。しかし今後の追跡実験は、付加情報の取得も研究方法の中に含めなければならないと考える。次に、機器への追跡を行った結果、よく使われる機器、使われない機器の差があることが判明した。実験対象病棟には3台の心電計があり、1台が新しい(使いやすい)機器であり、その機器のみ利用頻度が高く、複数の病室で利用されていた。RFIDによる機器の所在管理は、機器の新旧などの属性を併せて稼働管理して、機器の更新など一歩進んだ管理が可能と考えられる。以上より、本システムは、個々のスタッフの行動を詳細に把握できる。スタッフのプライバシーの侵害や労働強化などの悪影響も懸念される。今回の実験では業務に活用しないこと、情報取得の合意を得ているなど問題は無かったが、今後は個人情報保護などを参考にして倫理指針を設けて、その指針の下で必要な手続きを行い、適切なプロセスで利用しなければならないと考えられる。アンテナとRFタグの位置関係がRFタグの応答に影響を与えることがわかった。リーダのアンテナとRFタグのアンテナが平行になるように配置したときに最も感度が良くなる。RFタグを医療スタッフや患者に装着する場合、タグの向きを一定方向に固定することはできない。体の動きによって逐次RFタグの位置や角度が変化するからである。UHF帯RFIDは2005年4月から国内で使用が認められたUHF周波数帯(952954MHz)を使用する無線IDタグシステムである。UHF帯RFIDの特徴は、従来のRFIDに比較してタグの反応距離が長いことである。
積層構造によって集積化した光計測システムの開発

小型ながら信号強度と質が劣らない、集積化光計測システムの研究を素子開発と実装の方向から並列して進めた。レーザ干渉計:Si膜厚が光の波長程度に薄い薄膜フォトダイオードを利用して定在波検出型レーザ干渉計を、指先ほどの大きさ(2.5cm)で実現した。偏光板とλ/4板を組み合わせたアイソレータと、薄膜フォトダイオードを積層してレーザダイオードとコリメーションレンズ用ハウジング中に埋め込んだ構成である。干渉信号を検出し9cm/sで移動するステージの変位を1μA程度の光電流信号として検出した。実用的な用途に近いものである。対象物が粗面でも適応できるスペックル中の定在波を検出する干渉計も提案した。現在は、内挿分割に対応すべく、光信号の強度と質を改善する、ファブリ・ペロー共振構造の薄膜フォトダイオードを研究している。効果は既に確認しているが、完全な共振条件でのデータを示すべく実験を進めている。光学式エンコーダ:マイクロマシニング技術を利用してSi基板上にグレーティングとフォトダイオードをプリアライメントし製作できる。いくつかの光学式エンコーダを開発した。投影型エンコーダの場合には、グレーティング枚数の増加に伴い光学系が複雑化する問題を無くすと共に、無調整で像のコントラストが高い配置にできる。フォトダイオードで製作した検出側グレーティングの周期を変調して信号に含まれる高次ノイズを減らすこともできる。ベアチップ状の発光ダイオードとファウンダリサービスで用意した増幅回路ICチップを組み合せて、エンコーダ信号が得られることも確認した。ベアチップLEDからの出射光が空間的に広がらないために、平均化効果が少なく、信号波形は歪を含んでいた。更なる改良を進める。いずれの光計測システムも、実際に積層化して特性を得るまでに至った。細かな改良は今後も進めるが、有効なセンサの構成であることを確認した。当初の計画通り、集積化光計測システムを実現すべく研究を進めた。1.積層化用フォトダイオードの製作・改良:薄膜フォトダイオードに関しては、櫛型構造を微細化することで感度の向上を図った。従来の約10倍の感度を得た。格子型フォトダイオードについても格子の微細化を進める。2.光学系の設計と必要な素子の調達:λ/4板と偏光板を市販品で入手し、積層化してアイソレータを構成した。缶タイプのレーザ、コリメータレンズのハウジング、アイソレータ、薄膜フォトダイオードを積み重ねることで、レーザ干渉計型の距離センサを構成した。指先程の大きさを実現した。干渉信号を確認し、積層構造が有効であることを確認した。全ての素子を、ウェーハ状で用意して集積化するよう計画している。更に、新しいタイプの干渉計を提案した。測定対象にミラーを置けず粗面である場合でも有効な方式である。すなわち、反射光のスペックル中の微弱な定在波を検出し、干渉信号を得ることができた。距離計測も可能であった。また、輝度はまだ低いものの発光ダイオードの製作に成功した。コヒーレント光の必要無いエンコーダ用光源として発展性がある。3.積層プロセス技術の確立:直接接合装置を設計した。真空部品の手配を進めている。機械技術研究所の常温接合装置を参考にした。予算の関係上、アライメントは大気中で行い、接合は真空中で行う方式にした。以上の結果の一部を学会や雑誌に発表した。更なる改良を進める。集積化光計測システムを実現すべく研究を進めた。

1.干渉計用薄膜フォトダイオードの改良:これまで定在波よりも薄い感光層を持つ薄膜フォトダイオードを開発してきた。集積化に適したものであったが得られる信号の波形歪みが実用化の妨げとなっていた。干渉信号を詳しく解析した結果、歪みの原因は薄膜フォトダイオードに存在する各界面で生じる反射が多重反射を引き起こすためであることが分かった。対策としてフォトダイオードを無反射構造にする必要があることも明らかとなった。これを解決するために、光学的な反射防止構造中に電子構造である薄膜フォロダイオードを製作した。これはファブリ・ペロー干渉フィルタにおいて、薄厚がλ/2に合う条件で共振し、等価的に反射が無くなる特性を利用したものである。Siのエピタキシャル成長装置を立ち上げ、技術を組み合わせて光学的な無反射条件と、定在波よりも薄い感光層を同時に満たす薄膜フォトダイオードを開発した。今まで30%程度とあった信号歪み成分が、1%まで減少することを確認した。これによって、定在波検出型干渉計の精度が向上した。2.エンコーダの集積化:Si基板上に透過型回折格子とフォトダイオードとを組み合わせて集積化エンコーダを実現する研究を進めた。フォトダイオードで検出した信号を作動増幅する信号を、マルチチップサービスを利用して製作した。光源には発光ダイオードベアチップ上に独自の電極パターンを形成して利用した。以上を積層化し、光源、回折格子、フォトダイオード、信号処理回路が一体となったセンサを実現した。信号量、S/N比はまだ十分ではないものの、位相差が90度の正弦波状2信号が得られた。集積化光計測システムの更なる改良を進めた。1.干渉計用薄膜フォトダイオードの改良:フォトダイオードのSi膜厚をmλ/2(m:整数)にすることで、信号の波形歪みを減少できることを昨年度報告した。Si膜厚をファブリ・ペロー共振条件にすることで光透過率を上げ、界面反射による波形歪みを減少する。理論的には、波形歪みと同時に、ファブリ・ペロー共振器内部の光強度が増強されるために信号強度も増加するはずであった。昨年度は、これが確認できなかった。薄膜フォトダイオードをエピタキシャル成長によって用意したからである。界面特性が良くなくリーク電流が多かった。そこで、バルク結晶Siを薄くしてmλ/2の共振条件に合わせ、従来通りドーパントのイオン注入によってフォトダイオードを製作した。結果、信号歪みの減少と信号強度の増加が同時に得られた。感度は以前の30倍になった。歪み成分もより定量的に評価できるようになった。実験結果は計算値とよい一致を示した。レーザ波長を変化させて2次歪み成分が4%まで下がることを実測で確認した。Si膜厚を完全にλ/2に合わせることができれば、2次歪み成分は1%まで減少すると予想される。2.エピタキシャル膜の改良:Siエピタキシャル成長の条件出しを改良した。フォトダイオードのpnジャンクションの位置をSi膜中の定在波ができる腹の位置に配置することができると、信号のコントラストを更に改善できると予想される。
アンチザイムの翻訳フレームシフトの分子機構

1.アンチザイムmRNAのフレームシフト部位下流のシュードノット構造および上流のGCに富む領域が促進信号であることを、試験管内翻訳系と哺乳動物培養細胞発現系の両方で確認した。上流の促進配列は伸長中のリボソームと相互作用することが示唆された。これらのシス配列は、ウィルスのフレームシフト部位と組み合わせても促進効果を示した。しかし変異解析の結果、ポリアミンのフレームシフト促進効果は、これらのシス配列との相互作用を介するものではないことが判明した。大腸菌翻訳終結因子2(RF2)の+1フレームシフトやウィルス由来のリードスルーなど、終結コドンの位置で起きるいくつかのリコーディング現象もポリアミンの促進を受けた。一方、翻訳終結そのものがポリアミンで抑制される可能性に対しては否定的な結果が得られ、ポリアミンと直接相互作用する部位の決定は今後の課題として残された。2.指示遺伝子安定発現細胞における検討より、細胞内でフレームシフトを促進するのは細胞成分と結合していない遊離ポリアミン画分であることが示された。3.アンチザイムフレームシフトに促進的または抑制的にはたらく化合物を数種ずつ見出した。促進物質のひとつアグマチンは細胞内ポリアミンの減少による抗増殖効果を示した。またポリアミンと競合してフレームシフトを抑制するジアミン誘導体はポリアミン相互作用部位の検索に有用と考えられた。4.鳥類や魚類のアンチザイムcDNAを単離すると共に、新たなアンチザイムのアイソフォームの機能解析を行い、アンチザイムとそのフレームシフトが分子進化的にかなりの広がりを持つことを明らかにした。5.アンチザイムフレームシフトに関与するトランス因子の遺伝学的スクリーニングには分裂酵母Schizosaccharomyces pombeが適していることを明らかにし、ポリアミン依存性のフレームシフト測定系の構築を開始した。1試験管内翻訳系と哺乳動物培養細胞発現系において、アンチザイムのフレームシフトを促進するmRNA上のシス配列を解析した。先に欠失変異実験から示唆されていた約2倍のシフト促進効果を持つ上流のシス配列を置換変異体を用いて検討したところ、シフト部位の14塩基上流を中心とする約9塩基からなるGCに富む配列に主な活性があり、RNAの二次構造をとって作用するのではないこと、シフト部位との距離が重要であることが判明した。また、アンチザイムのシフト部位と他のフレームシフト配列を入れ替えたキメラ体の解析より、アンチザイムmRNA上のシス促進配列(下流のシュードノット構造および上流の促進配列)はマウス乳癌ウィルスgal-pro遺伝子の-1フレームシフトおよび大腸菌翻訳終結因子2(RF2)の+1フレームシフトにも促進効果を示し、特にRF2のシフト部位はアンチザイムシフト部位のコンテクストに埋め込まれると哺乳動物翻訳系においても20%を越える効率でフレームシフトを引き起こした。2融合シストロンを利用したフレームシフト検出ベクターにチミジンキナーゼプロモーター+ブラストサイジンデアミナーゼ遺伝子を組み込み、一過性発現系から安定トランスフェクション系に変更した。今後tetOを利用した誘導可能な安定トランスフェクション系に発展させ、応用範囲の拡大をはかりたい。発芽酵母発現系においてラットアンチザイムmRNAが引き起こすフレームシフトは、動物におけるものと異なる-2フレームシフトであることを報告したが、分裂酵母Schizosaccharomyces pombeを用いて検討したところ動物と同じ+1フレームシフトが主であることが判明し、ポリアミン依存性のフレームシフト検出系の構築は分裂酵母で作成した方が有利と考えられた。1アンチザイムの変異体mRNAのフレームシフトに対するポリアミンの促進効果を、培養哺乳動物細胞発現系において測定した。その結果、mRNAのシス促進配列(下流のシュード

ノット構造および上流のGCに富む配列)を欠く変異体もポリアミンの促進を受けること、シフト部位の変異ではシフト効率の高い変異体ほど強い促進を受けることが明らかになった。また、アンチザイムmRNAのシフト部位を他のリコーディング信号に置換したキメラ体の中では、大腸菌翻訳終結因子2(RF2)の+1フレームシフト部位と、マウス白血病ウィルスのgag-pol間のUAGリ-ドスルー部位に対してポリアミンが促進効果を示した。一方、マウス乳癌ウィルスのgag-pro間の-1フレームシフト部位にはポリアミンの効果を認めなかった。2鳥類(ニワトリ)と魚類(ゼブラフィッシュ)のアンチザイムcDNAをクローニングした。ゼブラフィッシュでは発現パターンの異なる2種のアイソフォームが存在し、いずれのmRNAもポリアミン依存性のフレームシフトによって翻訳されることを試験管内で確認した。これらと、すでに明らかにした哺乳類、両生類のアンチザイムcDNAの配列データより、シス促進配列を含むシフト部位近傍の塩基配列が脊椎動物を通じて顕著に保存されていることが判明した。3種々のポリアミン誘導体のアンチザイムフレームシフトに対する効果を試験管内で検討し、シフトを促進または抑制する誘導体をそれぞれ見出した。シフトを促進する一部の誘導体は、ポリアミンの細胞増殖支持効果を有さずにアンチザイムを誘導して細胞のポリアミン含量を低下させることがわかっており、抗増殖薬としての応用が期待される。現在、融合シストロンを利用した安定発現系において誘導体の効果を確認中である。1.終結コドンの位置で起きる種々のリコーディング効率におよぼすポリアミンの効果を、試験管内および培養動物細胞内において測定した。アンチザイムと大腸菌翻訳終結因子RF2の+1フレームシフトおよび、ウィルス由来の終結コドン(UAG,UGA)リードスルーはポリアミンにより促進効果された一方、-1フレームシフトや非プログラムリードスルーは影響を受けなかった。2.ウサギ翻訳終結因子eRF1をクローニングし、試験管内翻訳系において添加効果を調べたところ、ウィルス由来のリードスルーを抑制するが、アンチザイムのフレームシフトにはほとんど影響がなく、フレームシフトと翻訳終結過程は単純な競合関係にはないことが示唆された。3.アンチザイムフレームシフト検定用プラスミドを、CHO細胞およびそのポリアミン合成変異株(オルニチン脱炭酸酵素ODCの欠損株と過剰発現株)に導入した安定発現細胞において、培地へのポリアミンやODC阻害剤などの添加に伴う細胞内ポリアミン濃度とフレームシフト効率の変化を調べ、細胞内では遊離ポリアミン画分がフレームシフト促進活性を担うことが示唆された。4.アンチザイムのフレームシフト効率を変化させる物質の検索を進め、アルギニン誘導体であるアグマチンに促進活性を見出した。
GPCRのアロステリックリガンド：細胞応答測定による親和性解析法とリガンド探索

医薬品の約半数はGタンパク質共役受容体(GPCR)を標的としている。GPCRのアロステリックリガンドは、内在性の神経伝達物質やホルモンなどの生理的作用を促進する、オルソステリック薬(これまでの治療薬)の特異性を高める等、副作用が少ない治療法として期待されている。しかし、アロステリックリガンドの検出は難しい。本研究では、細胞応答の種類やオルソステリック薬の種類に影響されない、細胞応答測定のみでできる(リガンド結合実験が不要な)アロステリックリガンドの親和性解析法の開発を行った。(A)細胞応答測定によるG蛋白質共役受容体(GPCR)のアロステリックリガンドの解析法:GPCRへのアロステリックリガンド結合に関する全ての媒介変数を推定する理論と解析法を開発することを試みている。この解析法を実証するために必要なデータを、培養細胞にGPCRを発現させて、リガンドで刺激し、細胞応答を測定することにより、収集している。この解析法が、匂いの分子(気体)をリガンドとするGPCRにも適用可能かどうか調べるため、気相液相界面培養した培養角膜細胞にGPCRを発現させ、蛍光顕微鏡を用いて細胞内カルシウム濃度上昇を測定する方法を確立した。嗅覚GPCRは、細胞内には発現するが、細胞膜にはほとんど発現せず、細胞応答が観察できなかったため、GPCRの細胞膜での発現を促進する蛋白質(receptor-transporting protein 1)を共発現させるなどして、細胞膜に発現させた。意義:この解析法が開発されると、標識リガンドや比活性の高い標識リガンドが無い等の理由で、リガンド結合実験ができない場合でも、細胞応答測定のみで、アロステリックリガンドの親和性解析が可能になる。また、様々なシグナル系に対する作動薬の選択性(リガンドバイアス)の定量が可能になる。(B)ムスカリンM1受容体の正及び負のアロステリックリガンド探索:私は2010年にそれまでは困難であった負のアロステリックリガンドの検出法をM1受容体を用いて開発し、報告した。本研究では、この検出法を用いて、パーキンソン病等治療のリード化合物としてM1受容体のアロステリックリガンド探索を試みた。しかし、既にメガファーマ等が先行研究していることを知ったため、別の受容体を使うことにした。意義:本研究は、副作用や薬物耐性が軽減されたアロステリック薬による治療法開発に役立つ。この解析法を実証するために、M2ムスカリン性アセチルコリン受容体、または、恒常的に活性化させた変異M2受容体を培養細胞に発現させて、作動薬で刺激し、細胞応答を測定することにより、必要なデータを収集している。また、この解析法が様々な細胞内シグナル系に対する作動薬の選択性(リガンドバイアス)の定量に適用可能か調べるため、リガンドバイアスの定量に適した細胞応答測定法としてTGFα切断アッセイの確立を行っている。また、リガンドバイアスの定量が可能になる。(B)パーキンソン病治療のリード化合物探索:パーキンソン病等治療のリードとしてM1受容体のアロステリックリガンドを探索することを計画していたが、メガファーマ等により先行研究されていることを知ったため、別の方法を用いることにした。即ち、パーキンソン病の原因遺伝子産物Parkin及びPINK1を共発現させた酵母細胞の増殖を阻害する化合物の探索を行った。化合物19200種のスクリーニングを行い、候補化合物を1種得た。この化合物のParkin単独発現細胞におけるlogEC50(50%効果濃度)は、Parkin/PINK1共発現細胞におけるlogEC50と比べて、約0.4高かった。このことから、この化合物はPINK1に作用すると思われた。現在、この化合物の作用機構を調べている。意義:本研究は、パーキンソン病の治療法開発に役立つ。平成26年度にやや遅れたため。現在、TGFα切断アッセイの確立を行なっているが、このことにより研究が大きく進展すると思われ、遅れが解消されると思われる。1,細胞応答測定によるG蛋白質共役受容体(GPCR)のアロステリックリガンドの解析法:GPCRへのアロステリックリガンド結合に関する全ての媒介変数を推定する理論と解析法を開発することを試みている。今年度は、この解析法が様々な細胞内シグナル系に対する作動薬の選択性(リガンドバイアス)の定量に適用可能か調べるため、リガンドバイアスの定量に適した細胞応答測定法と考えられる、TGFα切断アッセイの確立を行い、この方法が本研究の目的に適していることを示した。意義:この解析法が開発されると、標識リガンドや比活性の高い標識リガンドが無いなどの理由で、リガンド結合実験ができない場合でも、細胞応答測定のみで、アロステリックリガンドの親和性解析や、リガンドバイアスの定量が可能になる。2,パーキンソン病治療のリード

化合物探索:パーキンソン病の原因遺伝子産物Parkin及びPINK1を共発現させた酵母細胞の増殖阻害を指標として、Parkin/PINK1の機能促進/阻害剤の探索を行った。(1)今年度は、化合物ライブラリ38227種から、増殖阻害剤を2種得た。このうち1種は、Parkin/PINK1共発現細胞とParkin単独発現細胞のlogEC50の差が0.7程度あり、EC50が1 microM程度と低かったので、創薬のリードとなる可能性が考えられた。(2)昨年度得られた増殖阻害剤の機能解析を行った結果、この化合物がPINK1に作用していること、PINK1のリン酸化には関与していないことが示唆された。意義:本研究は、パーキンソン病の治療法開発に役立つ。平成26年度前半は、ERATOプロジェクトの研究推進主任の業務を行っていたため。平成27年6-8月は、通勤中の事故で歩行困難になったため。平成28年度は、所属していた基礎研究医養成プログラムの最終年度と重なり、業務が多忙であったため。リガンド探索の計画が、メガファーマ等により先行研究されていたため、計画の見直しを行ったため。研究代表者が、応募時は筑波大学に勤務していたが、その後、東京大学、京都産業大学、順天堂大学、昭和女子大学と移動したため。医薬品の約半数はGタンパク質共役受容体(GPCR)を標的としている。GPCRのアロステリックリガンドは、内在性の神経伝達物質やホルモンなどの生理的作用を促進する、オルソステリック薬(これまでの治療薬)の特異性を高める等、副作用が少ない治療法として期待されている。しかし、アロステリックリガンドの検出は難しい。検出にはリガンド結合実験と細胞応答測定が用いられるが、前者は、比活性の高い標識リガンドが無い場合、行うことはできない。後者は、測定する細胞応答の種類や、使用するオルソステリック薬の種類によって、用量効果と最大応答が複雑に大きくばらつく。本研究では、細胞応答の種類やオルソステリック薬の種類に影響されない、細胞応答測定のみでできる(リガンド結合実験が不要な)アロステリックリガンドの親和性解析法を開発することを目的とした。まず、GPCRへのアロステリックリガンド結合に関する全ての媒介変数を推定する理論と条件を確立することを試みた。この解析法を実証するために、野生型M2ムスカリン性アセチルコリン受容体(M2受容体)または恒常的に活性化させた変異型M2受容体を培養細胞に発現させて、各種作動薬で刺激し、細胞応答を測定することにより、必要なデータを収集した。また、この解析法が様々な細胞内シグナル系に対する作動薬の選択性(リガンドバイアス)の定量に可能か調べるため、リガンドバイアスの定量に適した細胞応答測定法として、TGFα切断アッセイの確立を行った。本年度は、この解析法で得られる値が、リガンド結合実験から得られる値と同様であることを実証するために、リガンド結合実験を行った。また、親和性が低いリガンド結合を測定するため、測定法を最適化した。この解析法を用いることにより、リガンド結合実験ができない場合でも、細胞応答測定のみでアロステリックリガンドの親和性解析が可能になると思われる。
癌特異的プロモーターと磁性ナノ粒子を応用した婦人科癌における末梢血中腫瘍細胞解析

末梢血中腫瘍細胞(circulating tumor cells: CTC)は癌の新規バイオマーカーとして、またliquid biopsyの手段として注目を集めているが、その検出方法や応用法はいまだに発展途上である。現在主流の細胞膜表面抗原に頼った検出方法では様々に姿を変える癌細胞を捉えきれていないのが現状である。我々は癌の不死化能に着目し、不死化関連酵素であるテロメラーゼの活性化を指標として癌細胞を捕捉分離するシステムの構築に携わってきた。これまではGFP発現テロメラーゼ依存的増殖型アデノウイルスを血液検体に感染させることでCTCを検出していた。本研究ではウイルス非依存的な検出システムを構築し、さらに磁性ナノ粒子を応用して従来は不可能であった生細胞の回収・解析を可能とする方法の確立を第一の目的としている。またCTCのマウスモデルを作成し癌転移に関わる因子を解明することを第二の目的としている。ウイルス非依存的CTC検出システム構築のためにhTERTプロモーター下流にβ-integrin膜貫通ドメインと人工タグタンパク質であるHalotagの融合タンパクを発現するようにデザインしたプラスミドを作成し、対象細胞にエレクトロポレーション法で導入した。これによってhTERTプロモーターが活性化されている細胞では細胞膜上にタグ蛋白が発現される(Surface Tag-protein expressed in tumorcells: STET)。正常血液に培養癌細胞を一定数混入させたCTCモデル検体において、癌細胞検出実験を行った。癌検出感度は約50%であった。実用にはやや低い検出率であると考えられたため有核白血球分画の分離方法、検出方法などを検討中である。1. STETベクターの構築と導入方法の検討hTERTプロモーター下流にβ-integrin膜貫通ドメインと人工タグタンパク質であるHalotagの融合タンパクを発現するようにデザインしたプラスミドを作成した。これを細胞に導入するとhTERTプロモーターが活性化されている細胞では細胞膜上にタグ蛋白が発現される(SurfaceTag-protein expressed in tumorcells: STET)。このタグ蛋白Halotagの特異的リガンドと蛍光物質の結合体を用いると細胞を蛍光標識でき、また磁性体-リガンド結合体を用いることで細胞回収が可能となる。STETの導入方法は安価かつ細胞毒性の少ないマルチパルス式エレクトロポレーション法を採用した。本法による癌培養細胞におけるSTETの導入効率(Halotagリガンド-GFPによる蛍光標識での陽性率)は8095%、細胞の生存率は75100%であり、十分実用に耐えうるものと考えられた。2.正常血液を用いたコントロール実験昨年度までに開発・検討したSTETベクターのマルチパルス式エレクトロポレーション法による導入を、正常血液に培養癌細胞を一定数混入させたCTCモデル検体において、癌細胞検出実験を行った。STET発現細胞は蛍光標識リガンドを用いてFACSによる検出と回収を試みた。混入させた癌細胞の検出感度は約50%であった。1.コントロール実験検出感度がやや低かったため、改良を施す予定である。具体的には標識蛍光物質の変更や、ナノ粒子磁性体による回収を試みる。2.臨床検体での検討CTCモデルサンプルを用いたコントロール実験で良好な検出感度が得られた場合は、さらに臨床検体でのCTC検出ならびに回収を試みる。我々の過去の検討ではCTCの多くは上皮マーカーの発現を欠いていた。これが癌の浸潤転移に関与している可能性を踏まえて、上皮間葉転換(EMT)に関わる因子の発現、原発巣に追加して起こる変異の有無などを解析することを目標とする。3. CTCモデルマウスの作成臨床検体で得られたCTCにおける遺伝子発現のデータと癌の浸潤転移の関連を調べるためには動物実験モデルが重要となる。免疫不全マウスでは癌の血管内移行が容易に起こることが知られており、この目的には適していない。正常免疫マウスの胎生期にヒト癌細胞を接種することでヒト細胞に対する免疫寛容を惹起し、出生後、ヒト癌細胞接種モデルを作成する系が近年報告された。我々はこれを応用してマウス血中のCTCを回収検討する系を作成することを目指す。ウイルス非依存的CTC検出システム構築のためにhTERTプロモーター下流にβ-integrin膜貫通ドメインと人工タグタンパク質であるHalotagの融合タンパクを発現するようにデザインしたプラスミドを作成し、癌培養細胞にエレクトロポレーション法で導入した。

またhTERT転写活性がない癌に対応するためにやはり癌特異的に高い転写活性を示すプロモーターとしてsurvivinプロモーターをSTET上流に配したsurvivin-STETを作成し、両者の併用を試みた。培養細胞においてSTETならびにsurvivin-STETは高い陽性率を示した。1. hTERTプロモーター下流にβ-integrin膜貫通ドメインと人工タグタンパク質であるHalotagの融合タンパクを発現するようにデザインしたプラスミドを作成した。これを細胞に導入するとhTERTプロモーターが活性化されている細胞では細胞膜上にタグ蛋白が発現される(SurfaceTag-protein expressed in tumorcells: STET)。このタグ蛋白Halotagの特異的リガンドと蛍光物質の結合体を用いると細胞を蛍光標識でき、また磁性体-リガンド結合体を用いることで細胞回収が可能となる。2. STETベクターの導入方法の検討安価かつ細胞毒性の少ない導入方法として、マルチパルス式エレクトロポレーション法を採用した。本法による癌培養細胞におけるSTETの導入効率(Halotagリガンド-GFPによる蛍光標識での陽性率)は8095%、細胞の生存率は75100%であり、十分実用に耐えうるものと考えられた。3.テロメラーゼ陰性細胞への対応hTERT転写活性がない癌に対応するためにやはり癌特異的に高い転写活性を示すプロモーターとしてsurvivinプロモーターをSTET上流に配したsurvivin-STETを作成し、STETと同様の実験を行った。survivin-STETによる陽性率は7085%とSTETよりやや低かったが、両者を併用することで5%程度の陽性率の上積みが可能であることが明らかになった。末梢血中腫瘍細胞(circulating tumor cells: CTC)は癌の新規バイオマーカーとして、またliquid biopsyの手段として注目を集めているが、その検出方法や応用法はいまだに発展途上である。現在主流の細胞膜表面抗原に頼った検出方法では様々に姿を変える癌細胞を捉えきれていないのが現状である。我々は癌の不死化能に着目し、不死化関連酵素であるテロメラーゼの活性化を指標として癌細胞を捕捉分離するシステムの構築に携わってきた。これまではGFP発現テロメラーゼ依存的増殖型アデノウイルスを血液検体に感染させることでCTCを検出していた。本研究ではウイルス非依存的な検出システムを構築し、さらに磁性ナノ粒子を応用して従来は不可能であった生細胞の回収・解析を可能とする方法の確立を第一の目的としている。
高分解能液体カラムクロマトグラフィー用新規充填剤

液体カラムクロマトグラフィー用充填剤の研究は、近年、発展期にあるが、充填剤の構造から派生する欠点(カラム内の流れが乱流となり、ピークのブロード化を引き起こす)を解決していない。これを解決する一法として、キャピラリー様のマクロチャンネルを有する充填剤のカラム内直接調製が注目され検討されつつある。本研究の本年度計画は、上記充填剤をカラム内で直接調製する為の構造制御法の検討であった。重合は、緩衝液中でレドックス開始剤系《開始剤,ペルオキソ二硫酸アンモニウム(APS)一促進剤,N,N,N′,N-テトラメチルエチレンジアミン(TEMED)》を用い、減圧下で脱気後、所定温度にて行った。モノマーとして、メタクリルアミドを、橋かけ剤としてピペラジンジアクリルアミドを用いた。モノマーの濃度をT 15%,C 55.9%一定とし、開始剤濃度、促進剤濃度、pHとバッファー濃度、重合温度、凝集促進剤の硫酸アンモニウム濃度を夫々変えて種々のゲルを調製した。ゲルのマクロチャンネルの状態を推定する為、種々の流速で、試料溶出ピークの理論段数を比較した。試料は、カタラーゼ、ヘモグロビン、シトクロムc、a-キモトリプシノーゲンA、クロム酸ナトリウムを用いた。理論段数と耐圧性から判定すると、以下が最適な調製条件であった。緩衝液のpHと濃度は7.0,50mMリン酸カリウム緩衝液、重合温度は34°C、硫酸アンモニウム量は0.6g/10mlモノマー水溶液、APS濃度は1mg/10mlモノマー水溶液、そしてTEMED濃度は1.92mg/10mlモノマー水溶液であった。実際、耐圧性の指標として用いているゲル自体から生じる圧力は、流速10ml/minで1.0kgf/cm^2/cmであり、又、流速2.0ml/minでのヘモグロビンの1m当たりの理論段数は19000であった。これらの特性値は、カラムクロマトグラフィー充填剤として、市販されているものより数段優れていた。特に、耐圧性の向上は、極限値に近い。
知的障害者の生活の質に及ぼす運動の効果―心臓自律神経活動の夜間ウルトラディアンリズムによる検討―

本研究の目的は,1)知的障害者における生活リズムやQOLと心臓自律神経活動の夜間ウルトラディアンリズムとの関連を検討すること,及び2)運動が心臓自律神経活動の夜間ウルトラディアンリズムに及ぼす効果を検討することである.1.健常者(10名)において,トレーニング前後(水中運動:週2回,8週間)における心臓自律神経活動(心拍変動解析:Mem-Calc)の夜間ウルトラディアンリズムとQOL(記名自記式質問法:WHO/QOL-短縮版)の変化を検討した.トレーニング後にQOL尺度は有意に増加した.夜間副交感神経活動(心拍変動の高周波成分)と心拍数に明確なウルトラディアンリズムが認められた者の割合は,トレーニング後に有意に増加した.しかし,今回の対象者では,QOLと夜間自律神経活動のウルトラディアンリズムの間に,一定の関係はみとめられなかった.2.知的障害を持つ人の夜間心拍数変動に関する調査は,これまで,自閉症患児を対象とした数編の研究はあるものの,運動との相関を観点とした研究は未だ行われていない.千葉県の知的障害者授産施設在籍者(8名)を対象に,運動が睡眠時心拍に与える影響を調査した.通常週2回の運動時間を設けている被験者に対し,2週間の運動なしの期間を設け,その後に測定した睡眠時心拍数と,通常の運動時間の設定されている生活サイクルにおいて測定した睡眠時心拍数を比較検討したところ,全員に有意に心拍数の低下が認められた.また,最高・最低心拍数の低下,15拍以上の急上昇の訪れ,入眠時間の到来と思われる心拍数定常状態時間の早期出現などの変化が認められた.今回の検討では,知的障害者における夜間自律神経活動のウルトラディアンリズムを検討するまでには至らなかった.今後の課題として,知的障害者における検討を充実することに加えて,健常者の検討数を増やすことも必要である.本研究の目的は,知的障害者における生活リズム(仕事等に関連した活動リズム,食事・睡眠リズム等)とQOL(自覚的幸福感,POMS:気分の状態,自覚的睡眠状態等),及び心臓自律神経活動の夜間ウルトラディアンリズムとの関連を検討し,さらに運動がこれらに及ぼす効果を検討することである.本年度は,まず中高年の健常者において,身体活動状況(運動習慣,身体活動量),自覚的幸福感・自覚的睡眠状態,及び夜間心拍数の変動を調査し,これらの相互関連,さらに運動トレーニングがこれらに及ぼす影響について検討を進めている.現在までに得られている結果は,中高年者において習慣的な運動頻度が高いほど自覚的睡眠状態が良好であること,及び自覚的幸福感が低い傾向にある人ほど運動トレーニングにより自覚的幸福感が高くなるということである.夜間心拍数の変動については,解析中である.若年者については,運動関連施設の従業員を対象に,身体活動状況とQOL,及び夜間心拍数の変動の関連について調査を開始している.知的障害者については,知的障害者就労施設において,運動教室への参加と夜間心拍数変動や家族から見た睡眠状態や一般的状態の印象などの関連について検討する準備をしている段階である.本研究の目的は,1)知的障害者における生活リズムやQOLと心臓自律神経活動の夜間ウルトラディアンリズムとの関連を検討すること,及び2)運動が心臓自律神経活動の夜間ウルトラディアンリズムに及ぼす効果を検討することである.1.健常者(10名)において,トレーニング前後(水中運動:週2回,8週間)における心臓自律神経活動(心拍変動解析:Mem-Calc)の夜間ウルトラディアンリズムとQOL(記名自記式質問法:WHO/QOL-短縮版)の変化を検討した.トレーニング後にQOL尺度は有意に増加した.夜間副交感神経活動(心拍変動の高周波成分)と心拍数に明確なウルトラディアンリズムが認められた者の割合は,トレーニング後に有意に増加した.しかし,今回の対象者では,QOLと夜間自律神経活動のウルトラディアンリズムの間に,一定の関係はみとめられなかった.2.知的障害を持つ人の夜間心拍数変動に関する調査は,これまで,自閉症患児を対象とした数編の研究はあるものの,運動との相関を観点とした研究は未だ行われていない.千葉県の知的障害者授産施設在籍者(8名)を対象に,運動が睡眠時心拍に与える影響を調査した.通常週2回の運動時間を設けている被験者に対し,2週間の運動なしの期間を設け,その後に測定した睡眠時心拍数と,通常の運動時間の設定されている生活サイクルにおいて測定した睡眠時心拍数を比較検討したところ,全員に有意に心拍数の低下が認められた.また,最高・最低心拍数の低下,15拍以上の急上昇の訪れ,入眠時間の到来と思われる心拍数定常状態時間の早期出現などの変化が認められた.今回の検討では,知的障害者における夜間自律神経活動のウルトラディアンリズムを検討するまでには至らなかった.今後の課題として,知的障害者における検討を充実することに加えて,健常者の検討数を増やすことも必要である.
骨髄由来幹細胞移植による心筋梗塞・心不全の新たな治療法開発に関する研究-心臓特異的幹細胞の純化と生体マイクロデバイス移植による心筋再生の試み-

本研究では、臨床応用を前提に治療効果が得られる細胞数の確保を考え、ヒト由来"CD34陽性"或いは"CD34陰性細胞"を出発点とし、心筋再生のための骨髄由来細胞の効率的な導入システム開発、すなわち、心臓特異的幹細胞の純化とその評価システムの確立を目的とした。多くの前臨床試験により心筋再生のための細胞移植が心筋梗塞や心不全に対する終局的治療法として注目を浴びていると同時に催不整脈性などの問題を提起している。そこで、本研究では第一に骨髄由来CD34陽性細胞移植による心機能改善効果を検討し、同時に薬物療法ことにACE阻害薬と受容体拮抗薬併用療法との比較を試みた。効率的な細胞導入システムを構築するためには十分な数の骨髄由来CD34陽性細胞が必要となるが、その際自家細胞だけでまかなうことができない。細胞移植にはGVHD対策が重要と考えられる。そこで、心血管リモデリング過程における細胞免疫性サイトカインosteopontinの意義を明らかにすること、CTLA4IgあるいはICOSIgを組み込んだアデノウイルスベクターを用い、T細胞活性化に必要な第二シグナル遮断による抗原特異的細胞性免疫抑制システムを開発した。第3に細胞移植の機序を検討するため遺伝子発現の変化をDNAマイクロアレイ法により解析した。第4に臨床的応用として、動脈硬化性閉塞症患者で下肢で局所的に壊死病変を有する症例でG-CSF治療をした際の治療効果とCD34陽性細胞数の変化を検討した。従来の我々を含めた心筋リモデリングに関する研究結果からも、長期的に安定した組織構築維持を計るためには心筋細胞、保持細胞、微小血管いずれの要素も必須であることが示されている。中でも、オステオポンチンは、コラーゲン遺伝子を活性化し、一方では線維化を促進し、他方では、微小血管構築に関与すること、オステオポンチンKOマウスでは、線維化が完全に抑制されることを明らかにした。同様の現象はアンジオテンシンIIの2型受容体欠損マウスでも観察され、心筋梗塞モデルを作成した際に、心筋リモデリング過程、ことに、オステオポンチンの転写調節因子ets-1の過剰発現を引き起こし、MMP-2の活生化を介し、コラーゲン分解を促進し、脆弱な組織構築となることを確認した。したがって、単純に心筋細胞や血管内皮前駆細胞による心筋リモデリング抑制では不十分でオステオポンチン発現抑制やアンジオテンシンII2型受容体発現亢進を同時に進めなければ心筋再生の適正化は困難であることが明らかにされた。平成14年度、幹細胞の純化と心筋局所での発現解析を行うため、GEPレポーターシステム、LacZによるマーキングとin situハイブリダイゼーション法の確立により導入細胞の評価システムを構築した。

また、通常の実験系はヌード・マウスを使用する事で、免疫学的拒絶は解除できるが、幹細胞導入の臨床応用を考える上でGVHDが問題となると考えられた。そこで、T細胞活性化補助シグナルの遮断によるブタ心筋ミオシンを7週齢のルイスラットに皮下注射して作成した実験的自己免疫性心筋炎の治療効果を検討した。その結果、T細胞活性化に必要な第二シグナルであるCTLA4IgおよびICOSによって、抗原特異的な細胞性免疫を抑制することを明らかにした。さらに、従来の我々を含めた心筋リモデリングに関する研究結果から、長期的に安定した組織構築維持を計るためには心筋細胞、保持細胞、微小血管いずれの要素も必須であるが、"CD34陽性細胞"投与により、血管新生分子を産生する前駆細胞と心筋収縮を引き起こす心筋細胞前駆細胞とを同時に得ることができることを示した。今後、.移植した細胞が生着したかどうかを、ギャップ結合やマーカー分子としてのミオシン、Csx/Nkx2.5、MEF2、GATA4の有用性、分化した細胞がホスト細胞とシンクロして機能が改善するかどうか評価システムを確立し、確認する必要があり、平成15年度の検討課題とした。本研究では、臨床応用を前提に治療効果が得られる細胞数の確保を考え、ヒト由来"CD34陽性"或いは"CD34陰性細胞"を出発点とし、心筋再生のための骨髄由来細胞の効率的な導入システム開発、すなわち、心臓特異的幹細胞の純化とその評価システムの確立を目的とした。平成14年度、幹細胞の純化と心筋局所での発現解析を行うため、GEPレポーターシステム、LacZによるマーキングとin situハイブリダイゼーション法の確立により導入細胞の評価システムを構築した。従来の我々を含めた心筋リモデリングに関する研究結果から、長期的に安定した組織構築維持を計るためには心筋細胞、保持細胞、微小血管いずれの要素も必須であることが示されている。平成15年度の検討では、さらに、接着分子であるオステオポンチンがなければ保持細胞や微小血管構築による心筋リモデリングの過程が不完全になることを示した。すなわち、アンジオテンシンIIや引き続くアルドステロンによる線維化過程では、接着分子であり、かつ、炎症性サイトカインの一種オステオポンチンが活性化されること、オステオポンチンは、コラーゲン遺伝子を活性化し、一方では線維化を促し、他方では、微小血管構築に関与すること、オステオポンチンKOマウスでは、線維化が抑制されることを明らかにした。同様の現象はアンジオテンシンIIの2型受容体欠損マウスでも観察され、心筋梗塞モデルを作成した際に、心筋リモデリング過程、ことに、オステオポンチンの転写調節因子ets-1の過剰発現を引き起こし、MMP-2の活性化を介し、コラーゲン分解を促進し、脆弱な組織構築となることを確認した。
会話分析の発想と技法に関する系統的基礎研究

本研究は、社会学を中心に様々な研究領域に影響を与えているエスノメソドロジーに基づく会話分析(Ethnomethodologically oriented Conversation Analysis)に関して、H.Sacksの発想をプラグマティズムの原点にさかのぼり、言語哲学や言語学(特に語用論や機能言語学)との接点を見出しながら理論的に探化させるとともに、C.Goodwinらが始めたフィールドにおけるビデオデータを用いた「会話分析」の技法を方法論的・系統的に洗練させることが目的としている。そのため本年度は、まず(E.A.Schegloffを中心とした)会話分析の社会理論としての基礎付けについて考察し、日本社会学会大会において「社会理論としての会話分析:実践の中の社会と時間」というタイトルで発表を行った。この中で会話を扱う他の社会・言語理論と比較して時間の取り扱い、特に現在性を強調する点で特徴があり、TCUを「要素」とする要素還元主義的な方向性を持っていることを指摘した。これは、会話分析の理論的基礎を解明する上で重要な転換点になると考える。また、会話分析の技法に関しても実際のデータを用いながら研究を進めていった。特に今年度は高次脳機能障害(特に脳外傷)者の作業所におけるミーティングのビデオを、会話分析の手法を用いながら、身体動作を含めた相互行為(interaction)をいかに分析するかということに関して考察を行った。この成果の一部は、マンチェスター大学で行われたエスノメソドロジー・会話分析国際学会や日本心理学会で発表を行い、同時に論文となった。これに加え、エスノメソドロジー・会話分析関係の未刊行論文アーカイブのデジタル化を行った。このアーカイブはマンチェスター大学のW.Sharrock教授との共同研究でより包括的な資料へと改訂していく予定である。本研究は、エスノメソドロジーに基づく会話分析の発想を、H.SacksやH.Garfinkelらにさかのぼり言語哲学など隣接領域との接点を見いだし、理論的に深化させるとともに、C.Goodwinらが押し進めた具体的フィールドにおけるビデオデータの詳細な分析の技法を方法論的・系統的に洗練させることを目的としている。本年度は、理論研究の一端として日本社会学会大会において「会話分析の社会言語学的展開と社会秩序のカテゴリー:E.A.SchegloffとH.Sacks」というタイトルで発表を行った。この発表では近年の会話分析(CA)の展開を3つの流れにまとめ、その中でも中心的なE.A.Schegloffらの影響を受けた方法論(いわゆるpure CA/純粋会話分析)を検討した。本研究ではE.A.Schegloffの方法論を、TCU(Turn Construction Unit)という語用論上の単位に基づく「もう一つの文法」を解明する研究と位置づけることにより、機能言語学と社会学における会話分析の意義の差異を明確化できることを指摘した。また、これにより、pure CAを、TCUを分析装置として相互行為のシークエンスを記述する一つの「科学」と位置づけることが可能になった。同時に、TCUが発見可能になる相互行為を秩序あるものとして見ていくために、pure CAとH.Sacksのカテゴリー化やMCDに関する議論との関係を明らかにするという課題も生まれてきた。これらは、コペンハーゲンで行われた国際会話分析学会(International Institute for Conversation Analysis, Conference)に参加し、言語学・語用論研究者と情報交換を行うことで生まれてきた知見でもある。また、理論研究を支えるものとしてマンチェスター大学のW.Scharrock教授から譲り受けたH.Sacks、H.Garfinkelの未刊行資料をデジタル・アーカイブ(電子資料)として再編集する作業を行っている。このことで日本国内および国外のエスノメソドロジー・会話分析研究者へ基礎資料提供が可能になる。さらに、これらの基礎研究と並行して具体的な場面の会話分析を行うビデオデータの収集および分析も継続している。今年度はこれまで行ってきた身体障害者の介助・介助教育場面に加えて、交通事故で脳外傷を受けた人などが通所する高次脳機能障害者作業所をフィールドとしてビデオデータの収集を行った。これらのフィールドワーク、データ収集により今後の応用研究の展開が可能となると考えられる。

これに加え、エスノメソドロジー・会話分析関係の未刊行論文アーカイブのデジタル化を行った。このアーカイブはマンチェスター大学のW.Sharrock教授との共同研究でより包括的な資料へと改訂していく予定である。