hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
階層構造化法による自己支持性超分子フィルムの作製とその成形加工

本年度は,(1)柔軟な超分子フィルムの作成条件と成形加工,および,(2)分子を機能原子団で修飾した分子の合成と利用に向けたフィルム物性の検討の2項目を重点的に検討した。これらのうち,(1)では,力学的に加圧することで,柔軟な超分子フィルムが得られることから,加圧前後での偏光顕微鏡観察を行い,分子配向性を調べた。その結果,加圧によって作成された柔軟なフィルムが強い複屈折性を有するのに対し,キャスト法で作成した脆いフィルムは複屈折性を持たないことがわかった。このことは,加圧によって分子配向が整ったことを意味する。(2)については,すでに合成済みのパーフルオロアルキル鎖を有するトリロイシン型分子を用い,気水界面単分子膜を様々な表面圧でマイカ基板上にすくい取り,このLBフィルムのAFM観察を行った。用いた分子のπ-A曲線は,固体凝縮膜を形成する直前で一時的圧力増加を示した。この現象は前年度にロイシンファスナー形成と対応したものであることを明らかにしたものである。AFMを用いた表面形態観察の結果,表面圧の上昇に伴って,表面形態は欠陥の少ないものに変化していくことが明らかになった。このことも,加圧によって分子配向が整うことを示している。本研究では,ロイシン(Leu)36個が連鎖したペプチド誘導体を用い,β-シートとロイシン側鎖部分での噛み合い(以後ロイシンファスナーと呼ぶ)を階層化させた超分子フィルムについて(1)分子構造と超分子フィルムの力学物性の関係,(2)柔軟な超分子フィルムの精密構造解析,(3)柔軟な超分子フィルムの作成条件と成形加工,(4)分子を機能原子団で修飾した分子の合成と利用に向けたフィルム物性の検討の4項目を具体的な目的として研究を進めてきた。これまでに(2)(4)については検討を終えたので,本年度は,(1)分子構造と超分子フィルムの力学物性の関係を重点的に検討した。力学物性はについては特に引っ張り強度に着目した。油圧プレスして作製したフィルムの引っ張り強度は,新たに導入した島津小型卓上試験機を用いて測定した。フィルム作製時の油圧とフィルムの単位面積あたりの引っ張り強度をグラフ化したところ,フィルム作製時の圧力が高いほど,引っ張り強度に優れたフィルムになることがわかった。このことは,ロイシンを連鎖させたペプチド誘導体の場合,加圧するほどロイシン側鎖部分が噛み合いの程度を増すためと考えられる。一方,気水界面単分子膜には,ロイシンファスナー形成に起因する一時的圧力増が観察されることをすでに述べた。この一時的圧力増加前後でフィルムの表面形態が劇的に整うこともAFM観察の結果からすでに明らかにしているが,本年度は,再現性も含めてこの現象を詳細に検討し,表面圧の上昇によって分子配列が稠密化する様子を段階的な画像データーとしてとらえることにも成功した。
多系統萎縮症に合併する睡眠呼吸障害の多様性―呼吸管理から生命予後改善をめざす―

多系統萎縮症(MSA)は進行性細胞変性脱落をきたす難治性疾患であり神経内科領域では稀な疾患ではなく、また時に原因不明の突然死をきたすことからMSAの突然死防止は臨床上重要な課題である。一方睡眠時無呼吸症候群(SAS)はMSAに高頻度に合併するにもかかわらず両疾患の関連と治療戦略は不明な点が多く、我々はMSAの突然死にSASの合併が関与している可能性を探究している。対象は奈良県立医科大学附属病院神経内科診療中のMSAおよびMSA疑い症例であり、MSAの評価あるいは加療目的で入院した際に終夜睡眠ポリグラフ(PSG)を施行しSASの合併有無とその症型を評価している。前回報告時以降さらに10症例の蓄積があり、現時点で合計で24人のMSA患者(MSA疑い症例を含む)に対してPSGを行っている。MSAサブタイプの内訳は、MSA-P(パーキンソン症状優位型)7例、MSA-C(小脳症状優位型)13例、その他4例である。昨年度までと同様、声帯開大障害に起因する高調性いびきはMSA-CとMSA-Pの両サブタイプで観察されている。一方、SASの症型においては、MSA-Pに比してMSA-Cでは、チェーン・ストークス呼吸や中枢性無呼吸を呈する頻度が多く、また覚醒中のみならず睡眠中も不規則呼吸を呈することが多いとの結果を得ている。さらに長期経過観察期間において、SASの治療介入としてのCPAP(Continuous Positive Airway Pressure)あるいはASV(Adaptive-servo Ventilator)のアドヒアランスが良好な症例では長期生存が得られる傾向を示している。当院神経内科と連携してMSA症例が入院した際にはPSGを施行できている。外来通院中のMSA症例において睡眠呼吸障害の評価目的のみの入院は患者の負担(入院費用など)を鑑みて行っていないため、睡眠呼吸障害未評価の症例はないとは言えないものの、ほぼ順調に症例は蓄積できていると考えている。MSAにSAS治療が必要と判断した症例には、CPAPやASVなどのPAP機器を治療導入している。その治療効果をPAP機器装着下PSGを行い評価しているが、長期治療効果に関してはPSGを複数回行うことは現実的に困難でありPAP機器からのメモリデータを用いて評価していることが多い。またアドヒアランスが良好な症例では、PAP機器を装着しないでPSGを行うことのリスクが高いと判断されることがしばしばあり、MSAに伴うSASの症型の変遷についての検討が全例ではできていない。また、死亡例も存在するが、剖検症例を得ることが現時点ではできていない。したがってさらなる症例の蓄積が必要と考えており、引き続き、症例数の上積みを行っていきたいと考えている。現時点では14症例の集積があり、全例にPSGを施行した。MSAサブタイプの内訳は、MSA-P(パーキンソン症状優位型)4例、MSA-C(小脳症状優位型)10例である。14症例の解析では、声帯開大障害に起因する高調性いびきの存在は両者のサブタイプで観察されている。現在、継続して症例を集積しており、またMSAの進行に伴うSASの症型の変遷について検討を進めている。

昨年度までと同様、声帯開大障害に起因する高調性いびきはMSA-CとMSA-Pの両サブタイプで観察されている。一方、SASの症型においては、MSA-Pに比してMSA-Cでは、チェーン・ストークス呼吸や中枢性無呼吸を呈する頻度が多く、また覚醒中のみならず睡眠中も不規則呼吸を呈することが多いとの結果を得ている。さらに長期経過観察期間において、SASの治療介入としてのCPAP(Continuous Positive Airway Pressure)あるいはASV(Adaptive-servo Ventilator)のアドヒアランスが良好な症例では長期生存が得られる傾向を示している。当院神経内科と連携してMSA症例が入院した際にはPSGを施行できている。外来通院中のMSA症例において睡眠呼吸障害の評価目的のみの入院は患者の負担(入院費用など)を鑑みて行っていないため、睡眠呼吸障害未評価の症例はないとは言えないものの、ほぼ順調に症例は蓄積できていると考えている。MSAにSAS治療が必要と判断された症例には、SASの治療介入、おもに持続陽圧呼吸療法を行っているが、その治療効果の評価を経時的に行っているところである。さらに神経内科医がMSAの病状や症状に変化が見られたと判断された場合は、MSAの再評価目的の入院を行っているが、その際に同様にPSG検査を施行して、MSAの進行に伴うSASの症型の変遷の検討を行う予定である。現時点では、すでに2例において複数回PSGを施行している。MSAにSAS治療が必要と判断した症例には、CPAPやASVなどのPAP機器を治療導入している。その治療効果をPAP機器装着下PSGを行い評価しているが、長期治療効果に関してはPSGを複数回行うことは現実的に困難でありPAP機器からのメモリデータを用いて評価していることが多い。またアドヒアランスが良好な症例では、PAP機器を装着しないでPSGを行うことのリスクが高いと判断されることがしばしばあり、MSAに伴うSASの症型の変遷についての検討が全例ではできていない。また、死亡例も存在するが、剖検症例を得ることが現時点ではできていない。したがってさらなる症例の蓄積が必要と考えており、引き続き、症例数の上積みを行っていきたいと考えている。(理由)終夜睡眠ポリグラフ検査および呼吸波形解析に必要な実験助手の確保に難渋したために、計上していた人件費を使用しなかったため。(使用計画)次年度はさらに症例が集積されるので、呼吸解析に携わる実験助手は必要になると思われ、鋭意募集しているところである。そのため平成29年度から繰り越した研究費を必要な人件費にも使用する予定である。次年度使用額は、小額の16,384円であり、ほぼ計画通りに予算研究費を執行できたと考えている。
レーザーアブレーションによる有機プローブ搭載シリコン量子ドットの1ステップ合成

有機EL素子やレーザーに代表される光エレクトロニクスからバイオモニタリング・トレース研究に至るまで、発光材料は実に幅広い分野で活用されている。現状、もっとも多用されている材料群は、有機系蛍光色素である。蛍光効率が高く、また、デバイス組み込み時において形成される異種結合界面で生ずる界面エネルギーを緩和するための有機分子修飾が容易、といった有意性から、非常に幅広い分野で汎用されている。しかしながら、有機色素に固有の励起時間に伴う著しい退色性は、上記したアプリケーション化に極めて不都合である。本研究では、まず、有機色素の蛍光クリップとしての機能性を評価するために、アミノ基終端の自己組織化単分子膜マイクロパターンのイメージングに挑戦した。蛍光イメージングを行うために、アミノ基と特異的に結合することで蛍光性を発するフルオレスカミンを利用した結果、アミノパターンを蛍光イメージングすることには成功したものの、退色は極めて早く20秒後にはパターンを観察できなくなった。このような研究事実を背景に、蛍光性半導体材料の中でも特に「環境に調和した素材」であるシリコンナノ結晶粒子に着目し、さらに「循環社会型有機プローブ搭載シリコンナノ結晶粒子合成手法」を確立するために、レーザーを用いた作製法の開発をすすめた。その結果、液相法では困難とされた粒度分布の極めて狭い(2.5±0.5nm)結晶性粒子を再現性よく作製できる条件を明らかにした。この粒子の光物性を検討したところ、吸収は、290nm前後に、また、発光スペクトルからは、ブルーシフトが観察され、400nm前後に発光ピークトップを有することが明らかとなった。現在、シリコン表面における有機分子反応の詳細に関して鋭意研究を行っている。
沈み込み帯鉱物の単結晶高温高圧構造の研究

地球のマントル中に主として存在すると考えられている無水相のマグネシウム珪酸塩鉱物中に微量の水が,沈み込み帯の含水マグネシウム珪酸塩相を通じて高温高圧下で取り込まれるメカニズムを,単結晶法によるX線回折や赤外吸収スペクトルの解析により検討し,水素原子に置換される原子のイオン半径と電気的中性則の観点から明らかにした.地球のマントル中に主として存在すると考えられている無水相のマグネシウム珪酸塩鉱物中に微量の水が,沈み込み帯の含水マグネシウム珪酸塩相を通じて高温高圧下で取り込まれるメカニズムを,単結晶法によるX線回折や赤外吸収スペクトルの解析により検討し,水素原子に置換される原子のイオン半径と電気的中性則の観点から明らかにした.13.5GPa,1300°Cで合成され,0.38wt%のH_2Oを含有する含水オリビンhydrous forsterite,Mg_<1.985>Si_<0.993>H_<0.06>O_4の結晶構造を単結晶X線回折と赤外吸収スペクトルの測定で解析し,vacancyがMg1-siteとSi-siteに存在すること,無水のforsteriteの構造に較べ,Mg-O2とMg-O3の結合のうち最も短い結合の距離が有意に伸びていることからHがO2とO3に配位していることを見出した.この結果は,これまで含水オリビンについて報告されている多くの結果を矛盾なく説明する.また,Hが結晶構造中に導入されたとき最も短いMg-O結合の距離が有意に伸びる現象は,地球の上部マントル下部に安定領域をもつ含水変形スピネルhydrous wadsleyite,Mg_<1.75>SiH_<0.5>O_4でも起こっていることを見出した.極少量のH原子が結晶構造中のどこに位置するのかをX線回折データから解析するのは一般に困難であるが,本研究の結果はその新たな手法を提供する.地球の上部マントル下部から下部マントルにかけての圧力領域に安定領域をもつphase G,Mg_<1.24>Si_<1.76>H_<2.48>O_6の,22GPa,1050°Cで合成された単結晶について放射光と単結晶X線用ダイヤモンドアンビル(DAC)を用いて高圧下で単結晶X線回折強度を測定し,その体積弾性率と線圧縮率を測定した.地球の上部マントル下部に安定領域をもつringwoodite,Mg_2SiO_4について放射光と単結晶X線用ダイヤモンドアンビル(DAC)を用いて17.9GPaまでの高圧下で単結晶X線回折強度を測定し結晶構造を解析した.その結果,酸素原子の位置が圧力の増加とともに細密充填に近かづく傾向が見出された.平成19年度は高温高圧合成実験によって発見され報告されている含水高圧マグネシウム珪酸塩相(DHMS)と天然に見出される鉱物相との構造的関連に的を絞った研究を行った.13.5GPa,1400°Cで合成され,Feを含む含水オリビン,Mg_<1.85>Fe_<0.14>Si_<0.993>H_<0.06>O_4の結晶構造を新たに単結晶X線回折で解析し、赤外吸収スペクトルのデータとの対応を解析した.その結果、Feを含まない含水オリビンの結果(平成18年度の研究)とvacancyに関して異なる結果を得た.Feを含まない場合、vacancyは主としてMg1-siteに見出されたが、Feを含むときvacancyは主としてMg2-siteに見出された.Feとvacancyとの関係を結晶構造の観点から説明することを試みた.この結果は、沈み込み帯に関係する主要鉱物であるオリビンに水が取り込まれる機構を解明する手掛かりとなるものである.前年度までの研究で,オリビン族の鉱物であるFeを含まない含水フォルステライトとFeを含む含水フォルステライトで, Feを含まない場合、vacancyは主としてMgl-siteに, Feを含むときvacancyは主としてMg2-siteに見出され、結晶構造中に水を取り込む機構が異なることがわかった.これを手掛かりとして、温度圧力化学組成によるオリビンの格子定数変化の異方性を,結晶構造中の配位多面体の大きさの変化の自由度についての対称性からの制約の観点から定性的に説明することができた.地球の上部マントル上部の主要構成鉱物であるオリビンの物性の異方性の原因を結晶構造の観点から明らかにした.ヒユーマイト族鉱物の一つ,ノルベルジャイトについて8.2GPaまでの高圧下単結晶X線回折法で結晶構造を調べ,含水鉱物の構造におよぼす圧力の影響を調べた.ゼオライト族の鉱物の一つ,ヒューランダイトの結晶構造を300°Cまでの高温下単結晶X線回折法で解析し,部分的に脱水した構造の解析を行い,含水鉱物の構造におよぼす温度の影響を調べた.
肥満による慢性炎症性病変の新規制御機構の解析

肥満は、代謝症候群と密接な関係を有し、脂肪組織の慢性炎症を誘導することによって耐糖能の低下などを引き起こすと考えられている。p38alpha遺伝子を血球系で特異的に欠くコンディショナルノックアウトマウスを作成し解析したところ、肥満による脂肪組織の慢性炎症の軽減と耐糖能の改善を認めたことから、血球系細胞のp38alpha経路が肥満による慢性炎症と病態の制御に関わることが示された。近年慢性炎症は、成人病を含むさまざまな疾患の原因や増悪因子と考えられるようになっている。代謝症候群で重視される肥満は、脂肪組織の慢性炎症を誘導するが、そこにp38alpha MAPキナーゼ(MAPK)経路がどう係るかは明らかでない。そこでp38alpha遺伝子をTie2-Creトランスジェニックマウスで血球特異的に変異(機能喪失)させたコンディショナルノックアウトマウスを作成・解析してきた。既に肥満時の脂肪組織へのM1様マクロファージ(F4/80+, CD11c+)浸潤と脂肪組織の炎症性サイトカインの遺伝子発現が大きく低下することを見出しているが、今年度は、肥満時に脂肪組織に浸潤したM1様マクロファージをフローサイトメーターで分取し、各種遺伝子発現を検討した。MCP-1, IL-6, IL-1betaなどの炎症性サイトカイン遺伝子発現は大きな変化は見出さなかったが、CCR2やCCR5などのケモカイン受容体遺伝子発現が大きく低下していた。よってp38 alphaMAPK経路は、M1様マクロファージにおいて、主に脂肪組織への集積を介して脂肪組織の慢性炎症を制御していると考えられた。また、p38alphaコンディショナルノックアウトマウスでは、肥満による脂肪肝が軽減されることを見出し、血球系細胞と肝細胞の相互作用も今後さらに検討する。CD11c陽性細胞の機能解析のためCD11c-Creトランスジェニックマウスを用いたノックアウトマウスを作成し解析を開始した。このマウスに高脂肪食を与えたところ、体重増加が抑制されるという予備的結果を得、今後慢性炎症等に対する影響を検討する。慢性炎症は、成人病を含むさまざまな疾患の原因や増悪因子となる。p38alphaMAPキナーゼ(MAPK)経路が炎症制御に関わることが知られているが、肥満による慢性炎症における役割は明らかでない。Tie2-Creトランスジェニックマウスを用いてp38alpha遺伝子を血球系で特異的に欠くコンディショナルノックアウトマウスを作成し解析してきた。これまでの解析で、肥満時の脂肪組織へのM1様マクロファージ(F4/80+, CD11c+)の浸潤が低下すること、炎症性サイトカインであるMCP-1やIL-6, IL-1betaなどの遺伝子発現には大きな変化はないが、CCR2やCCR5など、細胞遊走に関わるケモカイン受容体の遺伝子発現が大きく低下していることを見出した。よってp38 alphaMAPK経路は、M1様マクロファージにおいては、ケモカイン受容体発現制御を介して脂肪組織への集積を制御していると考えられた。この解析では血球系細胞全般でp38alpha経路が働かないため、この結果をもってM1様マクロファージにおけるp38alpha経路の直接的効果と断定するには限界がある。そこで、CD11c-Creトランスジェニックマウスを用いたノックアウトマウスを作成し解析した。このマウスに高脂肪食を与えたところ、体重増加が抑制され、また、高脂肪食投与時の耐糖能の改善も認めた。従って、CD11c陽性細胞のp38alpha経路が、その下流で慢性炎症が関わる耐糖能に影響する一方、代謝が関わる体重にも影響することが明らかになった。CD11c陽性細胞による代謝制御機構には不明な点も多く、今後も本モデル系で検討を加えて行きたい。慢性炎症の誘引は様々であるが、特に成人病との関連では肥満が注目されている。肥満による慢性炎症にp38alpha MAPキナーゼ(MAPK)経路がどう係るかは明らかでない。我々は、肥満による慢性炎症と代謝症候群の進行がp38alphaの血球特異的なコンディショナルノックアウトマウスで抑制されることを見出した。この知見を基に、p38 MAPK経路による肥満と慢性炎症性病変の新規制御機構について、以下の研究を行った。Tie2-Creトランスジェニックマウスを利用した血球特異的なp38alphaコンディショナルノックアウトマウスに高脂肪食を投与し、脂肪組織に浸潤した炎症細胞をフローサイトメーターで解析した。p38alphaコンディショナルノックアウトマウスでは、炎症促進作用のあるM1様マクロファージ(F4/80+, CD11c+)が大きく減少していた。また、脂肪組織における炎症性サイトカインの遺伝子発現をRT-PCRで検討したところ、MCP-1, IL-6, TNF-alpha, IL-1betaなどの遺伝子発現も低下していた。今後ソーティングによって純化したM1様マクロファージのサイトカイン遺伝子発現についても検討する予定である。

興味深いことに、p38alphaコンディショナルノックアウトマウスの脂肪組織でアディポネクチンの発現が亢進することを見出した。アディポネクチンは血球系細胞以外で産生されることから、血球でp38alphaが機能しなくなったことによる間接的影響と考えられ、血球細胞と脂肪細胞の相互作用の存在を示唆するものであり、この点については今後さらに検討する。慢性炎症制御で主役となる血球細胞をより詳しく同定するため、CD11c-Creマウスを用いたコンディショナルノックアウトマウスを作成した。このマウスに高脂肪食を与え、次年度以降に解析する。Tie2-Creトランスジェニックマウスを利用して作成した血球系特異的なp38alphaコンディショナルノックアウトマウスに高脂肪食を投与した際、脂肪組織に浸潤したM1様マクロファージ(F4/80+, CD11c+)と炎症性サイトカイン遺伝子発現がともに減少することは既に見出していた。即ち、肥満による脂肪組織の慢性炎症の促進にp38alpha MAPキナーゼ経路が関わることは明らかにできたが、その分子機構は明らかではなかった。今回、M1様マクロファージでケモカイン受容体の遺伝子発現が低下していることを明らかにでき、それがM1様マクロファージの浸潤低下とそれに引き続く炎症の低減につながる可能性を示すことができた。また、新たに脂肪肝の低減を見出した。この結果は、血球系細胞のp38alpha MAPキナーゼ経路が肝細胞の脂質代謝に影響を及ぼすことを示すものであり、血球系細胞と肝細胞の間に新たな相互作用が存在する可能性を示すことができた。Tie2-Creトランスジェニックマウスを利用して作成した血球特異的なp38alphaコンディショナルノックアウトマウスに高脂肪食を投与した際の脂肪組織における浸潤細胞の変化、および、脂肪組織における炎症性サイトカイン遺伝子発現の変化を明らかにできた。また、血球細胞以外に由来すると考えられるアディポネクチンの発現亢進を見出し、肥満時に血球細胞が非血球系細胞に及ぼす相互作用の糸口を見出すことができた。さらに次年度以降の準備として、CD11c-Creマウスを用いたコンディショナルノックアウトマウスを作成し得た。Tie2-Creトランスジェニックマウスを利用して作成した血球特異的なp38alphaコンディショナルノックアウトマウスに高脂肪食を投与した際の浸潤細胞の性質について、ソーティングなどを行い引き続き解析するとともに、CD11c陽性細胞の機能解析のためCD11c-Creトランスジェニックマウスを用いて作成したノックアウトマウスに高脂肪食を与えた際の慢性炎症状態や耐糖能の変化などをを検討する。Tie2-Creマウスでは広汎な血球系細胞と血管内皮において遺伝子変異を生じるが、CD11c-Creマウスの場合は遺伝子変異がCD11c陽性細胞に限定されるため、両者を比較することで代謝症候群に関わる細胞集団の機能的差異などをより詳細に解析可能となる。
東南アジアにおけるデング出血熱の新興・拡大の原因調査

東南アジアにおけるデング出血熱の出現・拡大の原因を明らかにする為に東南アジア各国でデングウイルスを分離し、患者のウイルス感染細胞の解析さらに媒介蚊のネッタイシマカの調査を実施して1)病原体、2)宿主、3)ベクターの3つの要因について検討した。この結果、タイ国においてはデングウイルス拡大に関連すると考えられる重症型デング2型ウイルスと媒介蚊の感受性の組み合わせが明らかになった。またフィリピンでは国全体でデング2型ウイルスの遺伝子型のシフトが観察された。さらにベトナムにおいては新たなデング4型ウイルスの遺伝子型の出現が確認された。ベトナムとフィリピンで実施した患者末梢血球のフローサイトメトリー解析では、デングウイルス感染細胞は患者によって感染する細胞の種類に差のあることが明らかになった。デング出血熱の発症要因についてはウイルス側要因(強毒ウイルス説)と宿主要因(2次感染説)とが提唱され対立的に論じられてきた。しかし本研究の結果からはデングウイルス感染の重症化は先の2説のどちらか1つが正しいと言うような単純な物ではなく、宿主とウイルス双方の要因が関連すると考えるのが妥当であると思われた。デング出血熱の生理学的な実態は微細血管からの迅速な体液の漏出であり、ウイルスのどの蛋白質により、あるいは宿主のどのサイトカインによりこの急激な体液漏出が惹起されるかを突き止める事が今後必須である。さらに本研究において、地理的に異なるところで採取されたネッタイシマカがデングウイルスに対して異なる感受性を示すことが明らかになった。フィリピンで観察されたウイルスの入れ替わり(遺伝子型のシフト)は現地の蚊へ、より適合したウイルスが外部から導入された為に発生した可能性が高い。これらの結果から1950年代に発生したデング出血熱の拡大にはウイルスの変異が関与した可能性があり今後さらなる分子レベルでの解析が必要である。アジアを含む熱帯地域における公衆衛生的に最重要の蚊媒介性ウイルス感染症であるデング熱・デング出血熱の出現・拡大要因をさぐるためにアジア主要国においてウイルス、媒体蚊、出血熱患者の病態を2年間の予定で総合的に調査している。本調査の初年度である平成13年度はベトナム、フィリピン、シンガポール、インドネシア、マレーシアの各国においてデング患者の末梢血からウイルスを分離するとともに、媒介蚊である熱帯シマカの卵を採取し熱帯医学研究所に保存した。これらの一部のウイルス株についてはすでにその遺伝子解析を開始した。いままでに得られたデータからはベトナム南部で分離されたデング4型ウイルスについては過去のウイルス株また他の国の株を比較した結果、ベトナム特有の株が土着して流行している事実を示す結果がえられた。このことはベトナムにおいて患者の重症度が他の国と比較して軽症であることとの相関が考えられるが、ウイルス病原性に対する最終的な評価は平成14年度の調査結果を待たねばならない。媒介蚊の調査においてはアジアから持ち帰った熱帯シマカの卵から孵化させた蚊において重症の患者から分離されたデングウイルス2型は軽症の患者から分離された株とはことなる感受性をしめしデングの重傷型が拡大した要因の一つとしてウイルスが変異したことにより蚊への感染性が変化した事の影響があるのではないかと推測された。この蚊とウイルスの感受性については次年度さらに多くの国の蚊とウイルスの組み合わせについて詳細に解析する予定である。デング出血熱患者の病態についてはベトナムとフィリピンにおいて末梢血中に出現するウイルス抗原陽性単価細胞の解析をフローサイトメトリーを用いて行った。その結果一部の患者においてはB細胞マーカーを持った細胞群にウイルス抗原の陽性所見を認めたが,必ずしも全ての患者でこの現象を認めなかった。

従って依然としてデングウイルスの人における標的細胞は不明でるが今後はデングウイルスの血清型により標的細胞が異なる可能性も視野に入れて次年度に再度詳細な検討を試みる予定である。アジアを含む熱帯地域で公衆衛生的に最重要の蚊媒介性ウイルス感染症であるデング熱・デング出血熱の出現・拡大要因をさぐるためにアジア主要国においてウイルス、媒介蚊、出血熱患者の病態を2年間総合的に調査した。本調査においてベトナム、フィリピン、シンガポール、インドネシア・マレーシア・バングラデシュの各国からデング患者血清と媒介蚊である熱帯シマカの卵を採取し熱帯医学研究所に保存するとともにウイルス分離と媒介蚊のウイルス感受性試験を実施した。また熱帯現地においは患者末梢血をデング特異的単クローン抗体を用いてフローサイトメトリ解析を行うと供にデング感受性のサルについても血清疫学調査を実施した。ウイルスと媒介蚊の分子レベルでの解析は現在も進行中であるが、現時点で以下の事が明らかとなった。1)媒介蚊であるネッタイシマカのウイルス感受性には地域によってまた、感染させるウイルスの株によって明らかな差異がある、2)重症度の異なる患者から分離されるウイルスには遺伝子上の変異が認められる。3)ウイルスPrM蛋白の1アミノ酸が変異しただけでデングウイルスのヒトでの標的細胞の1つと考えられるヒト樹状細胞への感染性に10倍以上の差が生じ、その結果として樹状細胞から分泌されるIL12、TNF-αなどのサイトカインの分泌量に100倍以上の差が発生すること、4)感染早期の患者末梢血中のB細胞分核にデングウイルス抗原の存在を今回、世界ではじめて証明し、デングウイルスヒトでの標的細胞が実は広いスペクトラムを持つのではないかと思われること5)サルにおいてもデングウイルスの感染が証明されサルでのウイルス感染環とヒトの流行との関与を今後調査する必要があることなどである。これらの結果から、現段階ではデング出血熱の出現拡大に関してはウイルス側の変化により、蚊における感受性とヒトにおける病原性が増した可能性を今後さらに詳細に解析する必要がある。
タンパク質性食品の調理中に起こる物性と組織の変化に関する研究

牛肉を加熱する際に調味料のうち砂糖を先に加えておくと肉が軟らかいといわれ、タンパク質性食品を調味料によって一層軟らかくする方法を探ろうとした。試料の牛もも肉を筋繊維に直角に0.5cm厚さに切断した薄切り肉を、75,80,85°Cの水と20%砂糖溶液の中で、5,10,15,20分間加熱し、重量、水分、タンパク質(コラーゲン)の溶出率を測定し、テクスチュロメーターにより硬さを測定した。また、光学顕微鏡により加熱時間・加熱温度による組織の変化を観察し、写真撮影を行い比較検討を行った。加熱中の重量は、水中加熱では時間を長くするにつれて、また温度を高くするにつれて減少率が上昇した。水分も同様の傾向を示した。しかし、20%砂糖液中で加熱すると、加熱条件が同じでも、水中加熱肉よりは肉の重量が大きく、水分はかなり少ないことが示された。これは加熱によって肉タンパク質の保水性が減少して肉から水分が浸出して、そこに砂糖液が侵入していることを示している。肉の硬さの値は、75°Cの場合に520分間の加熱で、水中加熱よりも砂糖液加熱の方が値が低い。80°Cでは、5、10分間では砂糖液中の方が値は低いが、15、20分間と加熱時間を長くすると、水中加熱よりも値が高くなった。85°Cでは、砂糖液中で加熱した方が水中加熱よりも硬くなっていた。水中加熱よりも砂糖液中加熱の方が軟らかいのは75°C加熱、80°Cの5,10分間加熱で低温、短時間のものであった。このような変化を組織学的に見ると、75°Cと85°Cの加熱の変化は小さく、80°Cに温度を設定しておくと、筋線維に大きな亀裂が生じ、しかもそれは固まって起こっており、80°C以下では筋線維タンパク質が変性をしても結合組織の一部は変性せずに残り、80°Cにしたときに収縮するので筋線維が大きく裂けるのであろうと推定した。砂糖を加えて軟らかいのは加熱温度が低いときであるといえる。本年度は、機器を購入し、運転を開始して、魚の骨を脱灰しないで観察する方法を検討した。1.魚骨の切片作成と観察マアジから骨だけを取り出した。(1)生骨、(2)酢酸溶液に4時間浸漬、(3)水中で5時間加熱、(4)酢酸溶液中で2時間加熱、の4方法で骨を処理した。骨は生では硬さが硬いが、それと比較して酢漬け、長時間加熱の骨は、はるかに軟化していることは前の報告と一致した。その骨を固定して凍結し、クリオスタットで凍結切片を作成した。これをバンギーソン法で染色し、顕微鏡観察を行った。生の骨では、骨全体が赤く染色され、結合組織が多く存在することが確認された。4時間食酢に浸漬した骨では結合組織は存在したが、染色性が低下していた。5時問水中加熱骨では、コラーゲン特有の染色はされず、コラーゲンがかなり減少している可能性があることが考えられた。2.牛肉の加熱時に砂糖を用いることの効果牛肉を加熱するときに、砂糖を加えると軟らかいということがいわれており、これを確かめることとその原因を調べようとした。

牛もも肉を用いて実験を行った。加熱時間では、0.5cm厚さの肉で5分加熱が最も軟らかく、煮汁に調味料の醤油と砂糖を加えて加熱しても硬さに差は見られなかった。しかし、砂糖を加えたものは、重量が増加し、水分が減少したがその硬さはほとんど変化がなかった。すなわち、砂糖を加えると水分が減少しても硬くならないといえる。砂糖が浸透して水分に置き換わったと見られる。砂糖溶液加熱では結合組織の収縮が顕微鏡下で観察された。調理的加熱におけるたんばく質の変性とそれに及ぼす砂糖による影響は、さらに今後検討する必要がある。本年度は、牛肉を砂糖液で加熱したとき、硬さが低下するという説を確かめ、また、その硬さの変化の現象を捉えて原因を探るための研究を行った。試料の牛肉は、市販のもので、と殺後7日から15日間のものを実験のつど購入し、シチュー肉のモデルとして2cm角、厚さ2.5cmの角切り肉、すき焼きのモデルとして筋線維に直角に厚さ0.5cmに切断した薄切り肉の2種を使用した。1.角切り肉は、水中加熱、砂糖を肉重量の10%まぶして30分間保存後に水中加熱したもので、加熱時間は30,60,90分間とした。重量はいずれも砂糖をまぶした方が大きく、水分は少なかった。砂糖の浸透で、脱水されると考えられる。硬さは、テクスチュロメーターの測定値で加熱時間が長くなるにつれていずれも低下しており、また砂糖をまぶしておいた方が60分までの加熱では値が低く、やわらかいるといえるが、90分ではむしろ硬くなっていた。2.薄切り肉は、水中加熱と20%砂糖液中の加熱とを行い、加熱温度を、75°C、80°C、85°Cにし、加熱時間を5,10,15,20分間とした。1.と同様に重量、水分、硬さの測定を行った。その結果、それぞれの処理を行った12種の試料間の比較で、いずれも重量は砂糖液中で加熱した肉の方が大きく、水分は砂糖液加熱の方が少なかった。しかし、硬さは加熱温度による違いがみられ、75°Cにおける加熱では、20%砂糖液で加熱した方が水中よりも低く軟らかかった。80°Cでは、5分と10分では同様に砂糖液中加熱の方が軟らかいが、15分、20分では逆に硬くなっている。そして85°Cにおける加熱ではいずれも砂糖液加熱が硬いことが示された。すなわち、加熱の程度が低いときは砂糖液加熱が軟らかく、このことは砂糖液中で加熱すると肉たんぱく質の変性が抑制されると考えられた。従って、短時間加熱では砂糖があると肉は軟らかいといえる。
RECQ5ヘリカーゼによるゲノム安定性維持のメカニズム

ブルーム症候群、ワーナー症候群、ロスムント・トムソン症候群といった遺伝性疾患の原因遺伝子は、それぞれRecQファミリーに属する。これらの疾患は共通して、ガンになりやすΨ傾向を示すとともに、その細胞では、ゲノムの不安定化がみられる。RecQDNAヘリカーゼファミリーのメンバーの多くがDNA損害に応答し、また、細胞周期により制御されていることが報告されている。しかし、これらの点について、RecQファミリーのメンバーの1つ、RecQ5についてはあまりよくわかっていない。そこで、RecQ5であるショウジョウバエRECQ5/QEヘリカーゼについて、細胞周期進行およびDNA損傷との関連を解析した。ショウジョウバエ培養細胞をDNAに損傷を与える薬剤MMS(methyl-methanesulfonate)で処理すると、RECQ5/QEタンパク質のレベルは劇的に増加した。次に、ショウジョウバエ個体で、複眼原基特異的にRECQ5/QEを過剰発現させたトランスジェニックショウジョウハエを作製したところ、このショウジョウバエは穏やかなrougheye表現型を示した。この複眼原基特異的RECQ5/QE過剰発現に加えて、DNAに傷害を与えること、あるいは、mei-41変異を導入することは、RECQ5/QE過剰発現に起因するこのrougheye表現型を促進した。さらに、ショウジョウバエ複眼原基の分裂期細胞を解析することにより、RECQ5/QE過剰発現が、DNA損害に応答し、細胞周期の進行をかき乱していることがわかった。以上の結果は、RECQ5/QEがDNA損傷に呼応し、細胞周期制御経路と相互作用することを示唆する。1.(1)RECQ5の働きを失わせたとき、MMS、シスプラチン、ヒドロキシ尿素などに個体は感受性を示したが、マイトマイシンC(MMC)やブレオマイシンには影響がみられなかった。これらの影響を示した薬剤から、直接的にDNA傷害を与える場合と複製停止によるDNA(クロマチン)構造の異常などの要因が考えられ、これらのDNA傷害や異常なDNA(クロマチン)構造がRECQ5/QEの働く経路の引き金となることがわかった。今後、どのようなDNA修復経路なのか?ということが課題である。これらのことは、ブルーム症候群、ウェルナー症候群、ロスムント-トムソン症候群にみられるRECQ機能喪失によるゲノム不安定性がガン多発傾向とつながる機構や今まで不明であった普遍的に存在するタイプのRECQ5/QEの機能の解明につながるばかりでなく、薬剤の方から見れば、制ガン剤として投与されるシスプラチンの作用機構や投与すべき条件の一層の理解にっながる。(2)成虫への発生率が薬剤により減少するのはどういう機構かを知るために一つの遺伝子に変異(+/-)を持っている状態にしておき、薬剤を処理したときに対立遺伝子の変異が起こる頻度(-/-)を調べた。これは体細胞変異率を測定することになり、またガン化にみられるヘテロ接合性喪失(LOH, Loss of Heterozygosity)を反映するものでもある。ショウジョウバエmwh(multiple wing hair)遺伝子変異を使ってMMSの濃度との依存性と成虫発生率との関係を調べた。これからRECQ5の働きを失わせたときにゲノム不安定化が起きていることが明らかになった。2.RECQ5の働きを異所的に発揮させたとき生じるRough eye表現型は、複眼原基を調べた結果から、細胞周期チェックポイントに応答したアポトーシスの誘導である可能性を示した。これらの疾患は共通して、ガンになりやすい傾向を示すとともに、その細胞では、ゲノムの不安定化がみられる。RecQ DNAヘリカーゼファミリーのメンバーの多くが、DNA損害に応答し、また、細胞周期により制御されていることが報告されている。

ショウジョウバエ培養細胞をDNAに損傷を与える薬剤MMS(methyl-methanesulfonate)で処理すると、RECQ5/QEタンパク質のレベルは劇的に増加した。次に、ショウジョウバエ個体で、複眼原基特異的にRECQ5/QEを過剰発現させたトランスジェニックショウジョウバエを作製したところ、このショウジョウバエは穏やかなrough eye表現型を示した。この複眼原基特異的RECQ5/QE過剰発現に加えて、DNAに傷害を与えること、あるいは、mei-41変異を導入することは、RECQ5/QE過剰発現に起因するこのrough eye表現型を促進した。さらに、ショウジョウバエ複眼原基の分裂期細胞を解析することにより、RECQ5/QE過剰発現が、DNA損害に応答し、細胞周期の進行をかき乱していることがわかった。以上の結果は、RECQ5/QEがDNA損傷に呼応し、細胞周期制御経路と相互作用することを示唆する。
超原子価ヨウ素化合物の化学的研究

1.PIEAを用いるピロール類の2量化反応で、置換基や用いるルイス酸をうまく選択することで、染料やポルフィリン、有機材料の基本骨格に見られるビピロール類の種々位置異性体の作りわけに成功した。また、PIEAによる芳香族化合物の一電子酸化の起こり易さが酸化電位に支配されないことに注目し、メシチレンを求核剤とする効果的な芳香族化合物の酸化的直接クロスカップリング法を開発した。本法は、官能基化や遷移金属触媒による活性化を一切必要としない、類例のない直接的ビアリール合成法である。2.溶媒効果を利用した、材料科学の領域で有用なジアリールヨードニウム塩型化合物の緩和な条件下、水のみを副産物とする環境調和型新規直接合成法の開発に成功した。3.超原子価ヨウ素反応剤の活性化剤を種々検討している際に、KBrを用いると芳香環の酸化は起こらず、代わりに飽和C-H結合の酸化が起こる興味深い現象を見出した。本結果を応用し、飽和C-H結合の活性化を含む官能基化を必要としない直接的アリ「ルラクトン類の合成法を開発した。4.超原子価ヨウ素反応剤の触媒的利用法の概念をさらに展開し、世界で初めてとなる触媒的C-N、およびC-C結合形成反応へと発展させた。また、不斉反応に有望な新規キラル化合物を設計し、フェノール類の高選択的な不斉酸化の実現に成功した。5.上記の研究に独自に開発した多点型リサイクル反応剤を組み込み、環境対応型の合成反応へと改良を行った。本年度は重金属酸化剤と類似の反応性を示す緩和で毒性の少ない超原子価ヨウ素化合物を利用する新規反応やグリーンケミストリーを志向した有機合成の開発、および新規化合物の設計などの広範な化学的利用についての研究を行った。1.Phenyliodine bis(trifluoroacetate)(PIFA)の新たな反応性として、電子豊富なヘテロ芳香族化合物の一電子酸化を鍵とする、官能基化を経ない直接的な新規炭素求核種導入反応を開発した。活性化剤であるルイス酸の選択によりBF_3存在下においてはヘテロ芳香族シアニド類を、TMSBrやTMSOTf存在下では染料やポルフィリン、有機材料に見られるヘテロ芳香族2量化体を直接合成することができた。また、BrΦnsted酸を用いた際にヘテロ芳香族-芳香族ヨードニウム塩が効果的に生成することを見出した。2.有機溶媒を用いず、生成物の単離が容易な水中での反応はクリーンかつ実用的な反応の一つである。水中-無機塩での活性化法を利用したベンジル位などの比較的不活性な炭素-水素結合の直接的官能基化法を開発した。3.超原子価ヨウ素反応剤の有効活用法として、前年度に見出した触媒的利用法をさらに改良し、強酸を用いる必要のない緩和な条件下での触媒系の構築に成功した。本法を応用し、生物活性天然物の有用前駆体である含窒素スピロ化合物の実用的合成法を達成した。4.上記1-3の研究に独自に開発した多点型リサイクル反応剤を組み込み、環境対応型の合成反応へと改良を行った。また、多点型リサイクル反応剤の合成の際に以前に開発した方法を応用し、不斉酸化反応に有望な新規キラル化合物の合成に成功した。
In-Cell NMRを用いた生細胞内蛋白質の物性・動態解析法の開発

生きた細胞における蛋白質分子の物性や動態を調べるために,原核生物(バクテリア)を試料としたin-cell NMR法を用いる,新しい解析手法の開発と応用に関する研究を行うことを目的とする,In-cell NMRには,生細胞内の生体高分子の高次構造や,比較的遅いタイムスケールの分子動態をアミノ酸原子分解能で解析できるほぼ唯一の手法としての潜在的な有用性がある.一方で様々な生体高分子に普遍的に使用できるツールとなるためには手法として未成熟な点が多く,方法論的研究が希求されている.H21年度は,昨年に引き続き,大腸菌のin-cell NMRを用いて,生きた大腸菌の中の蛋白質の立体構造解析を行った.試料としては連鎖球菌のプロテインGB1ドメインを用いた.これまでの解析から,生細胞試料から得たNOE情報を用いることで,グローバル・フォールドを決定することに成功した.現在進めている構造の精密化が完了すれば,2009年に報告した高度好熱菌TTHA1718に続く,世界で2番目の高次構造決定例となる.また,生きた大腸菌の中の蛋白質の動的性質の解析も継続して行った,具体的には,in-cell NMRを用いて,大腸菌の中の高度好熱菌TTHA1718蛋白質の主鎖^<15>N核のT_1およびT_2緩和時間の測定を行い,蛋白質主鎖のダイナミクスの解析を行った.解析の結果,細胞内の粘度(水溶液の約3倍)に対応する回転相関時間の増大が観測されたが,これに加えて,何らかの原因による^<15>N核のT^2緩和時間の著しい短縮が観測された.生きた細胞における蛋白質分子の物性や動態を調べるために,原核生物(バクテリア)を試料としたin-cell NMR法を用いる,新しい解析手法の開発と応用に関する研究を行うことを目的とする. In-cell NMRには,生細胞内の生体高分子の高次構造や,比較的遅いタイムスケールの分子動態をアミノ酸原子分解能で解析できるほぼ唯一の手法としての潜在的な有用性がある.一方で様々な生体高分子に普遍的に使用できるツールとなるためには手法として未成熟な点が多く,方法論的研究が希求されている.H20年度は, in-cell NMRを用いて,生きた大腸菌の中の蛋白質の立体構造を決定する手法の開発を行った.具体的には,試料の分子量や細胞内の発現量などの個々の条件に併せて,安定同位体標識法,NMR測定法,高次構造解析法などの様々な視点か照,開発研究および最適化を行った.また, in-cell NMRを用いて,蛋白質主鎖15N核の緩和時間の測定を行い,細胞内蛋白質のダイナミクスの解析を行った.蛋白質中の15N核等の緩和解析には,長時間の測定と高感度が要求されるが,この2つのポイントはin-cell NMRのまさに「弱点」であるため,方法論的な開発も行う.解析の結果,細胞内の粘度に対応する回転相関時間の増大に加えて,何らかの原因による^<15>N核のT^2緩和時間の著しい短縮が観測された.この知見は,細胞内環境における蛋白質の安定性と関係している可能性があり非常に興味深いが,今後さ照に詳細な解析を行っていく必要がある.生きた細胞における蛋白質分子の物性や動態を調べるために,原核生物(バクテリア)を試料としたin-cell NMR法を用いる,新しい解析手法の開発と応用に関する研究を行うことを目的とする,In-cell NMRには,生細胞内の生体高分子の高次構造や,比較的遅いタイムスケールの分子動態をアミノ酸原子分解能で解析できるほぼ唯一の手法としての潜在的な有用性がある.一方で様々な生体高分子に普遍的に使用できるツールとなるためには手法として未成熟な点が多く,方法論的研究が希求されている.H21年度は,昨年に引き続き,大腸菌のin-cell NMRを用いて,生きた大腸菌の中の蛋白質の立体構造解析を行った.試料としては連鎖球菌のプロテインGB1ドメインを用いた.これまでの解析から,生細胞試料から得たNOE情報を用いることで,グローバル・フォールドを決定することに成功した.現在進めている構造の精密化が完了すれば,2009年に報告した高度好熱菌TTHA1718に続く,世界で2番目の高次構造決定例となる.また,生きた大腸菌の中の蛋白質の動的性質の解析も継続して行った,具体的には,in-cell NMRを用いて,大腸菌の中の高度好熱菌TTHA1718蛋白質の主鎖^<15>N核のT_1およびT_2緩和時間の測定を行い,蛋白質主鎖のダイナミクスの解析を行った.解析の結果,細胞内の粘度(水溶液の約3倍)に対応する回転相関時間の増大が観測されたが,これに加えて,何らかの原因による^<15>N核のT^2緩和時間の著しい短縮が観測された.
ハラスメント問題に対応するソーシャルワーカー養成のための集学的研究

2018年度は、文献調査およびインタビュー調査を実施した。文献調査の成果としては、ハラスメントに関連する分野の書籍を幅広くレビューすることができた。具体的には、暴力に関する内容や性的個性に関する書籍、ソーシャルワークの基本的文献などを分析した。また、本研究は様々な分野の専門家が参画している特質があることから、共通する文献を調査しても、解釈や理解が多層である。これらの知見を統合し、ハラスメント問題に適切に対応できるソーシャルワーカー養成に関するカリキュラム提案に繋げていきたい。また、インタビュー調査は、セクシュアル・ハラスメントや性的搾取に関する支援を実施しているソーシャルワーカーに半構造化面接を実施した。インタビューの具体的内容としては、本研究の目的であるソーシャルワーカー養成について、インタビュイー自身の実践経験や学習経験を通し、インタビュイーの考えを聴取した。インタビューを実施した意義としては、ハラスメント・ソーシャルワークが実践できるソーシャルワーカーに必要とされる機敏性や社会問題の把握スキル、支援ネットワークの構築スキルなど多岐に渡る能力を携えていることの示唆を得ることができた。特に、性に関するハラスメントの被害者を支援するソーシャルワークの専門性を整理することは現在の日本において非常に重要なファクターであり、このインタビューを実施したことにより最前線で活動するソーシャルワーカーより質の高いデータを収集することができた。以下2点が生じ当初計画より、やや遅れていると判断した。第一点目の理由として、研究代表者に所属機関の変更が生じたことがあがる。この転属に関連して、日常のソーシャルワーク業務や他の研究の整理に早急に着手する必要に迫られた。第2点目の理由として、ハラスメントという言葉を取り巻く社会状況の隆盛があがる。これにより古典的文献のみならず、新書などの関連書籍およびマスコミ報道の分析対象が大幅に増加した。しかし、当初計画の大部分を占めている文献調査については、共同研究者らが各自の専門分野のハラスメントに関連すると思われる文献を収集およびレビューすることができている。ただし初年度であり、共同研究者がそれぞれにハラスメントの概念に関する理解を行い、各自の専門性よりハラスメントを考察する試みを行ったことにより、各研究者のハラスメント概念の基礎は形成されたといえる。これは、次年度の調査研究に向けた基礎の確保となる。以上を総合し、可視化できた成果は少ないことを加味し、やや遅れている区分とした。本研究課題の今後の推進方策は、当初の計画通り2019年度は海外視察調査を実施する。研究方法の変更としては、量的調査を先行させず、海外視察調査を優先させる。その理由として、現在日本において、ILOのハラスメントに関連する条約批准など国際的な注目が集まっているためである。海外調査で得られた知見をもとに量的調査を実施したい。渡航先は、デンマークを予定している。デンマークでの調査経験が豊富な共同研究者とともに、大学や研究機関を訪ね、視察及びインタビュー調査を実施する。特に、本研究の目的であるソーシャルワーカー養成とハラスメントに関連するカリキュラムについては、資料収集および養成者にヒアリングを行う。その後、現地での調査結果を共同研究者らに共有・討議し、量的調査に結び付ける方策である。

その理由として、現在日本において、ILOのハラスメントに関連する条約批准など国際的な注目が集まっているためである。海外調査で得られた知見をもとに量的調査を実施したい。渡航先は、デンマークを予定している。デンマークでの調査経験が豊富な共同研究者とともに、大学や研究機関を訪ね、視察及びインタビュー調査を実施する。特に、本研究の目的であるソーシャルワーカー養成とハラスメントに関連するカリキュラムについては、資料収集および養成者にヒアリングを行う。その後、現地での調査結果を共同研究者らに共有・討議し、量的調査に結び付ける方策である。研究計画がやや遅れているのと同様、次年度使用額が生じた理由には以下の2点がある。第一点目の理由として、研究代表者の転属がある。これに伴い、研究計画自体が遅れ購入品の減少が生じた。第2点目の理由として、ハラスメントを取り巻く社会情勢の変化があったためである。国際労働機関の示す職場の暴力根絶に関する条約批准を巡り、多方面から情報収集を行う必要が生じた。このため、研究会や研修会等に参加し情報収集に努め、考察をするに留まった。従って、量的調査に係る経費の消費に変更が生じた。次年度は、遅れを取り戻すべく計画的な支出を目指したい。
女性ホルモンによる胃発癌抑制機構の解析

ヘリコバクター・ピロリ菌感染胃発癌マウスモデルを用いて女性ホルモン(エストロゲン)による胃炎および胃発癌抑制機序の検討を行った。胃組織におけるサイトカイン発現とピロリ菌に対する血清抗体価の検討からはこれらの免疫学的因子が関与している結果は得られなかった。しかし、ピロリ菌に感染した胃組織においてエストロゲンレセプターの発現低下が示唆され、エストロゲンレセプターの発現が胃発癌機序に影響を与えている可能性が考えられた。【研究の目的】胃癌の罹患率は男性の方が高く、女性の約2倍とされている。疫学的研究では閉経の遅延や更年期障害に対する女性ホルモン補充療法が胃癌のリスクを下げることが報告されており、女性ホルモンが胃発癌に対して抑制的に働く可能性が示唆される。ガストリントランスジェニック(INS-GAS)マウスはヘリコバクター・ピロリ感染により感染7ヶ月後に胃癌を発症し、その発癌はヒトと同じく雄マウスが有意に高い。我々はこれまでにヘリコバクター・ピロリ感染INS-GASマウスによる胃発癌は卵巣摘出により促進され、また女性ホルモンの17β-エストラジオール投与により抑制されることを報告した。本研究ではその抑制機構の一端を明らかにするために、エストロゲン・レセプターのα、β2種類のサブタイプに注目し、ヘリコバクター・ピロリ感染INS-GASマウスに各種エストロゲン・レセプター作動薬を投与する動物実験を計画した。【研究実施計画と成果】平成19年の研究計画はマウスコロニーのセットアップと動物実験の開始・遂行である。(1)本研究の開始のために、海外研究協力者のマサチューセッツエ科大学Fox教授よりINS-GASマウスを譲受し、マウスの飼育を開始し、INS-GASマウス繁殖コロニーを樹立した。(2)予備実験として17β-エストラジオールがヘリコバクター・ピロリ増殖に影響を及ぼすか液体培養を用いて検討を行ったが、17β-エストラジオールの濃度上昇に伴う有意なヘリコバクター・ピロリ増殖抑制効果は認めなかった。(3)繁殖コロニー樹立後、INS-GASマウスにヘリコバクター・ピロリ感染とエストロゲン・レセプターα、βのそれぞれの作動薬の投与を開始した。動物実験の解析は平成20年度の予定。疫学的研究では女性ホルモンが胃発癌に対して抑制的に働く可能性が示唆されているものの一定の見解は得られてはいない。ガストリントランスジェニック(INS-GAS)マウスはH. pylori(HP)感染により感染7ヶ月後に胃癌を発症し、その発癌はヒトと同様に雄マウスで有意に高い。我々はこれまでにHP感染INS-GASマウスによる胃炎と発癌は卵巣摘出により促進され、また女性ホルモンの17β-estradio1投与により抑制されることを報告した。本研究ではその炎症抑制機構の一端を明らかにするために、estrogen receptor(ER)α、βのサブタイプに注目し、HP感染INS-GASマウスにそれぞれER agonistを投与する動物実験を計画した。【研究実施計画】雌INS-GASマウス下記の5群に分類して、5ヵ月のHP感染実験を行い、HPに対する免疫血清学的検討、胃組織におけるサイトカイン発現等を用いて評価した。(1)非感染群(2)HP感染群(3)HP感染卵巣摘出群(4)HP感染卵巣摘出+ER αagonist投与群(5)HP感染卵巣摘出+ER βagonist投与群【成果】(1)血清を用いたTH1/TH2バランスの検討ではHP感染群間で差は認めなかった。胃炎の発症においてERは血清学的なTH1/TH2バランスに影響を与えなかったが、胃粘膜においてサイトカイン発現調節に関与している可能性が示唆された。この様な視点からの研究は報告されておらず、更なる検討により胃発癌機構調節に関する新しい知見を得られる可能性がある。