hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マウス始原生殖細胞における遺伝子発現の解析

我々は生殖系列分岐の鍵となる始原生殖細胞(PGC)に着目し,この細胞に発現する遺伝子の体系だった解析を行うことを目的とし研究を開始した.PGCは初期胚にごく少数、それも体細胞にかこまれたかたちで存在するため、研究材科として直接取り扱うことが困難であった.そこで、PGCのマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子をlacZ遺伝子で置換したTNAP(組織非特異型アルカリフォスファターゼ)ノックアウトマウスを用い、lacZレポーター発現を指標としてPGCを分離、純化するFACS-gal法を確立した.10.5日-14.5日胚がらPGCを実際にソーティングし、各種マーカーを用いた検索によりほぼ100%に近い純度のPGCが得られたことを確かめた.さらに,より初期のPGC単離のために,Oct3/4プロモーターにGFPをつないだコンストラクトを用いて,トランスジェニックマウスを作製し,これらのトランスジェニック系統の胚体から,より効率良くPGCを単離してくることが可能になった.この純化PGCを用い、テロメレース活性測定やゲノムDNAメチル化様式などの解析が可能になった.また,これを材料に、ローンリンカー法(Mamma1ian Genome2;252-259、1992)によりcDNAライブラリー作製を行った.この純化PGCからのcDNAは既知遺伝子のPGCでの発現解析のみならず、PGCにおける遺伝子発現プロファイルを解析、記述するために有用である.その解析の一端としてこれまで13.5日胚の雌難のPGCそれぞれのライブラリーから4000クローンをピックアップし、2800クローンの配列決定を行なった.このうち有効な配列情報の得られた1555クローンに関してホモロジー検索を行った.その多くはESTクローンを含め既知の遺伝子と相同性を示した.また雌雄で出現頻度に差異のあるクローンも複数認められた.将来的には,PGC各発生段階からライブラリーを作製,解析することにより興味深い配列モチーフを持つクローンやステージ特異的発現を示すクローンを単離し,機能解析につなげていきたいと考えている.また,始原生殖細胞の属性を遺伝子発現レベルで理解していくために,cDNA microarrayを用いた網羅的発現解析を計画している.我々は生殖系列分岐の鍵となる始原生殖細胞(PGC)に着目し,この細胞に発現する遺伝子の体系だった解析を行うことを目的とし研究を開始した.PGCは初期胚にごく少数、それも体細胞にかこまれたかたちで存在するため、研究材科として直接取り扱うことが困難であった.そこで、PGCのマーカーであるアルカリフォスファターゼ遺伝子をlacZ遺伝子で置換したTNAP(組織非特異型アルカリフォスファターゼ)ノックアウトマウスを用い、lacZレポーター発現を指標としてPGCを分離、純化するFACS-gal法を確立した.10.5日-14.5日胚がらPGCを実際にソーティングし、各種マーカーを用いた検索によりほぼ100%に近い純度のPGCが得られたことを確かめた.さらに,より初期のPGC単離のために,Oct3/4プロモーターにGFPをつないだコンストラクトを用いて,トランスジェニックマウスを作製し,これらのトランスジェニック系統の胚体から,より効率良くPGCを単離してくることが可能になった.この純化PGCを用い、テロメレース活性測定やゲノムDNAメチル化様式などの解析が可能になった.また,これを材料に、ローンリンカー法(Mamma1ian Genome2;252-259、1992)によりcDNAライブラリー作製を行った.この純化PGCからのcDNAは既知遺伝子のPGCでの発現解析のみならず、PGCにおける遺伝子発現プロファイルを解析、記述するために有用である.その解析の一端としてこれまで13.5日胚の雌難のPGCそれぞれのライブラリーから4000クローンをピックアップし、2800クローンの配列決定を行なった.このうち有効な配列情報の得られた1555クローンに関してホモロジー検索を行った.その多くはESTクローンを含め既知の遺伝子と相同性を示した.また雌雄で出現頻度に差異のあるクローンも複数認められた.将来的には,PGC各発生段階からライブラリーを作製,解析することにより興味深い配列モチーフを持つクローンやステージ特異的発現を示すクローンを単離し,機能解析につなげていきたいと考えている.また,始原生殖細胞の属性を遺伝子発現レベルで理解していくために,cDNA microarrayを用いた網羅的発現解析を計画している.
相対的または抽象的な表現での運動強度呈示下における力覚変化と運動制御機構の解明

本研究では、学校体育やスポーツ活動の指導現場で見受けられる、「50%」、や「全力より少し弱く」といった、相対的(数値使用)あるいは抽象的(数値不使用)な種々の表現方法での運動強度呈示下における、運動実施者の主観と客観の差異を明らかにするとともに、その際の運動制御機構を解明することを目的とした。数値使用/不使用状況下での力覚測定およびその際の筋活動動態を計測した結果、運動強度の段階付けにおいて、上肢運動では、強度が高い場合には数値使用、より低い場合には数値不使用による運動強度呈示下で精度良く目標とする運動強度を実現できる可能性が示唆された。今年度は、抽象的あるいは相対的な運動強度呈示下における主観と客観との誤差の定量化と、筋活動様相の解明を目的とした。対象者は、整形外科的および神経学的な既往がない成人男性とし、力覚測定および筋電図測定を実施した。運動強度の呈示は、相対的な呈示として、最大努力の10%から90%までの10%刻みで9段階(数値使用条件)、抽象的な呈示として、「全力より少し弱く」「半分より強く」「半分より少し強く」「半分より弱く」「弱く」等の11段階(数値不使用条件)、合計20段階とした。力覚測定として、対象者が発揮した力を測定し、呈示された運動強度下で行った力発揮が実際はどの程度の強度であったかを定量化した。その結果、数値使用条件では、20%maxから60%maxの間で隣り合う運動強度との間に有意差が認められなかった(p>0.05)。数値不使用条件では、「半分より少し弱く」と「半分より弱く」との間に有意差が認められなかった。それら以外に関しては、すべて有意差を認めた。数値使用条件および数値不使用条件ともに、およそ約5割より低い運動強度においてグレーディングが困難となる傾向が伺えた。低強度下での力発揮においては、目標力に対してovershootすることから、微細な運動調節が困難であることを示していると考えられた。また、数値不使用条件の結果は、基準より低い(弱い)運動強度を指定する際、「少し」の表現が曖昧さを助長する可能性を示していることが考えられた。さらに、数値使用条件と不使用条件との間で、同程度の運動強度が実現される運動強度呈示の対応関係が明らかとなった。本研究では、学校体育やスポーツ活動の指導現場で見受けられる、「50%」、「7割」や「全力より少し弱く」といった、相対的あるいは抽象的な種々の表現方法での運動強度呈示下における、運動実施者の主観と客観の差異を明らかにするとともに、その際の運動制御機構を解明することを目的とした。運動強度の呈示は、相対的な呈示として、最大努力(max)の10%から90%までの10%刻みで9段階(数値使用条件)、抽象的な呈示として、「全力より少し弱く」「半分より強く」「半分より少し強く」「半分より弱く」「弱く」等の11段階(数値不使用条件)、合計20段階とした。なお、「半分より少し強く」と指定した場合には、約60%maxの運動強度を実現していることが示された。筋電図測定を実施した結果、同程度の正確性であった異なる条件間で、主働/拮抗の関係にある筋の同時収縮値が異なることが明らかとなった。また、同程度の正確性となる数種類の運動強度呈示下における運動誘発電位を測定した結果、数値不使用条件下では皮質内抑制効果が増大している傾向が観察された。これらのことから、運動強度のグレーディングにおいて、強度の感覚が大きい場合には数値使用、より詳細な場合には数値不使用による運動強度呈示を行うことが有効であることが示唆された。これまでに、運動強度の呈示方法(数値使用の有無)による、力覚変化の相違について明らかにすることができた。また、呈示方法が異なりながらも、同程度の力発揮がなされる段階を同定することができた。さらに、筋活動様相に関しても、おおむね計画通りに測定しつつ、解析途中である。スポーツ科学今後は、同程度の運動強度が実現されていた各呈示方法下において、皮質脊髄路興奮性の相違を明らかにする。経頭蓋磁気刺激を用い、運動誘発電位を計測する。単発刺激のみならず、二連発刺激も行い、促通性および抑制性の効果についても検討する。

加えて、末梢神経電気刺激によりH波を記録し、脊髄運動ニューロンプールの興奮性も記録する。これらの結果から、本研究にて実施する運動課題および運動強度条件における上位中枢の運動制御機構を解明する。当初計画で予定していた、下肢用の筋力測定装置の改修を次年度に延期したため。次年度使用額は、H27年度請求額とあわせ、主に下肢用筋力測定装置を含めた実験セッティングの改修に使用する。
腺癌診断、治療への多面的なアプローチ

平成10年3月25日27日旧東ドイツ・イエナにおいて本邦から7名(研究分担者7名)とドイツから12名(研究分担者5名,他7名)が参加して、平成9年度腺癌診断・治療への多面的なアプローチの研究成果の報告と情報交換を行った。自動細胞聴診装置について試用されている4システムのうち2つがquality Controlの面においてアメリカ承認をうけつつあることが報告された(Schwartmann)。PAPsmearの通常のスクリーニングへの導入には完全な承認を持つ必要がある。腺癌診断のための細胞診における日独間の人的・時間的量的な相異は平成8年度も話題になったが60,000例をこす田嶋の子宮体癌スクリーニングのデータは1998年のCytopathology誌に掲載されることが決定しているように、正確でスクリーナーの負担という面を除けばドイツ側からも受け容られるものとなった。平成8年度にWitteが報告したultravisletmicroscopy(特に胆膵細胞診)については日本側からの追試がなく、次年次以後共同研究課題となった。矢谷らの前立腺癌、あるいは洗剤腺癌に関する継続的な仕事で、p53のtrap sersionとtransitionの比率が、前立腺癌の多い欧米人と少ない日本人で逆転するというデータ(1997Carcinogenesis)も報告され、大原の日本の表面型大腸癌の報告とともに人種間の発がんに関与する要因の差異や見逃しの可能性が討議され、大腸がんについては内視鏡医の交流などを予定することになった。3月15日に来日、名古屋で講演したGazmanのbronchoulveslarlarageの仕事ではalneolar mecrophageの予想以上の(移植例での)寿命の長さも話題になった。肺癌のmacrophageの研究はFrendenbergやGuZmanらFreiburg大学グループの継続的な研究テーマで、macrophageのSwbtypeのうち27E10陽性のmacrophageが肺癌における抗腫瘍効果を担っている(Frendenberg)ことも報告された。全体として彼我の腺癌診断治療についても相違の認識と、標準化均一化がかられた。今回のミーティングに日程の合わなかった越川は3月15日22日に訪独し、Sohenk,越川、中村らの共同研究の発表の詳細と今後の進め方を検討した。平成8年度の研究成果をもとに,平成8年9月29日10月4日高知市において,本邦から15名)研究代表者ならびに研究分担者8名,追加研究分担者1名,他6名)と,ドイツから6名(研究分担者5名,他1名)が参加して,情報の交換,ディスカッションを行った。通信システムと癌の診断について,自動細胞診診断装置の有用性が報告された(Schwartmann)。さらにtelepathologyの実際についてSchwartmann,山岸から発表があり,今後の課題としてネットワーク作成のために標準化の試みを検討していくことになった。また診断に関する機器の導入については,蛍光顕微鏡(Witte)やUltravioletmicroscopy(Witte)からその有用性が推賞された。細胞診の精度についてはSchenckと田嶋から5件の報告が行われ,日独の細胞診システムの相違(人的,時間的,量的)が明らかになり,お互いの手技を適宜導入した検討を行うこととなった。中村からはガン細胞と良性細胞の経時的な変性の違いが報告され,細胞診,組織診断の上で留意されるべきであることが確認された。免疫組織学的研究{Surfactant protein A(Guzman),p53&Cyclin D1(越川),CD34(Kohler,Freudenbergの教室員),C-erbB-2(松田),S-100α&S-100β(市原,越川),MIB-1&C-erbB-2(森木&原)}や,FISHanalysis(白石&矢谷,山岸)の有用性についても有意義な議論が行われ,平成9年度には腺癌診断と治療に向けてより臨床的な応用を行った上で,平成10年3月の旧東ドイツでの国際会議で情報の交換を行うこととなった。

矢谷らの前立腺癌、あるいは洗剤腺癌に関する継続的な仕事で、p53のtrap sersionとtransitionの比率が、前立腺癌の多い欧米人と少ない日本人で逆転するというデータ(1997Carcinogenesis)も報告され、大原の日本の表面型大腸癌の報告とともに人種間の発がんに関与する要因の差異や見逃しの可能性が討議され、大腸がんについては内視鏡医の交流などを予定することになった。3月15日に来日、名古屋で講演したGazmanのbronchoulveslarlarageの仕事ではalneolar mecrophageの予想以上の(移植例での)寿命の長さも話題になった。肺癌のmacrophageの研究はFrendenbergやGuZmanらFreiburg大学グループの継続的な研究テーマで、macrophageのSwbtypeのうち27E10陽性のmacrophageが肺癌における抗腫瘍効果を担っている(Frendenberg)ことも報告された。全体として彼我の腺癌診断治療についても相違の認識と、標準化均一化がかられた。今回のミーティングに日程の合わなかった越川は3月15日22日に訪独し、Sohenk,越川、中村らの共同研究の発表の詳細と今後の進め方を検討した。
20世紀ロシア文学における空間と人間(ロシア・外国文化をコンテクストに)

今年度は,課題研究の成果を,アンドレイ・ベールイの長編小説『モスクワ』論(東京大学大学院人文社会系研究科,博士論文)としてまとめた(論文構成:序論,第1部「『モスクワ』の世界--都市のイメージ」,第2部「『モスクワ』の人間--カロープキンの神秘劇」,結論)。第1部では,19世紀ロシア文学の伝統ならびに同時代のロシア文学との比較を行いつつ,『モスクワ』における世界,トポスの問題,都市のイメージ(滅び行く都市,監視都市,「仮面」都市)を考察した。『モスクワ』において,これらの都市のイメージの多くは,同時に登場人物達の特性でもあり,それは世界と人間のコレスポンダンスを重視するベールイの思想に基づいていることを論じた。また,この作品で描きだされるモスクワという場所は,革命前のロシアであると同時にソ連的な時空間の要素も持ち合わせるといった一種アナクロニズム的な特徴をもっており,モスクワの終末性,監視都市というイメージはベールイのソ連観を表したものでもあることを指摘した。第2部では,主人公の精神的変容と再生を,20世紀ロシア文学全般においても主要な主題である「見ること/見られること」という視点,聖書のコンテクスト,人智学との関連などから多面的に考察した。研究の成果の一部を,単著論文「科学とオカルト,アンドレイ・ベールイ『モスクワ』の《世界を甦らせる目》」(ロシア語),単著論文「科学の視線/秘儀者の眼□□アンドレイ・ベールイ『モスクワ』」で発表したほか,2005年10月には,モスクワのプーシキン博物館で行われた国際アンドレイ・ベールイ学会で,口頭発表(「ベールイ『モスクワ』における眼」)を行い,討議に参加した。1)平成15年8月1日9月29日までロシア人文大学歴史人文学部D.マゴメドワ教授と共に、20世紀ロシア文学、とりわけベールイとブロークの著作における「空間と人間」の表象の共同研究を行った他、世界文学研究所の研究者と意見交換し、同資料館で文献収集・草稿研究を行った。平成16年度も引き続き共同研究を行い、近日中に、最初の成果として「アンドレイ・ベールイのモスクワ論」を発表する予定である。2)また、この研究の重要な特徴は、文学という枠組みを超えて同時代の文化・芸術との比較を行うことにより、広範な視点から20世紀文学を考察することである。今年度は、文学と芸術の関連がとりわけ高かった2つの時期に焦点を絞り、第一に、192030年代の絵本について、論文を『幻のロシア絵本』に発表した。この論文は、最新の学術研究を踏まえた上で、テキストとイメージの両方からロシアアヴァンギャルドの絵本研究を行い、主に「森」というイメージが各作家の作品においてどのように展開されたかを論じたもので、「空間と人間」というこの研究の課題に沿ったものとなっている。第二に、1960年代に始まったモスクワ・コンセプチュアリズムとソッツアート(どちらも文学と美術にまたがる芸術運動だった)の研究として、論文を『コマルとメラミッドの傑作を探して』に発表した。ロシア、ソ連という空間が、アメリカに亡命したロシア系ユダヤ人アーティストの作品においてどのように変容し、どのようなメタファーを担っているかを論じたもので、この論文を発展させて、日本ロシア文学会で「ロシア系ユダヤ人アーティストの現在」という報告も行った(11月)。現在はアンドレイ・ベールイの三部作『モスクワ』(『モスクワの奇人』、『打撃を受けるモスクワ』、『仮面』)を中心に研究を進めているが、この研究の成果は平成17年度中に発表する予定である。平成16年度の研究成果は、平成15年度の研究(ベールイの『ペテルブルク』における空間のイメージ、20世紀ロシア児童文学における人間)をまとめたものである。世界文学会で口頭発表し、論文にまとめた「絵本とプロパガンダ-1920-30年代ソ連の戦争絵本試論」では、20世紀前半のロシアの絵本のテクストという文学における兵士と子供の表象を研究した。研究に際して、絵本というジャンルだけでなく、同時代の美術、社会、政治に目配りし、絵本がメディアとして持っていた役割についても考察を行った。「都市の生・人の生、アンドレイ・ベールイ『ペテルブルク』における《夏の園》」(ロシア語論文)では、ベールイの代表作において、都市と庭園がどのように機能しているかという空間の詩学と、空間描写の中で重要な個々のモチーフ(葉、石)を考察した。「ペテルブルクの地霊-アンドレイ・ベールイ『ペテルブルク』」は、都市の神話と小説の展開のかかわりをまとめた論文である。「チェーホフと太宰治日本の『桜の園』論」では、チェーホフの戯曲『桜の園』と太宰治の『斜陽』を比較し、日本とロシアにおける邸宅のトポロジーを考察し、両作品のトポスと小説の構造を比較研究した。両作品を比較した先行研究は多いが、この論文の特徴は、太宰の小説における重要なモチーフである葉(創作や人生のメタファーとしての葉)を、チェーホフとの関わりにおいて論じたことにある。

『モスクワ』において,これらの都市のイメージの多くは,同時に登場人物達の特性でもあり,それは世界と人間のコレスポンダンスを重視するベールイの思想に基づいていることを論じた。また,この作品で描きだされるモスクワという場所は,革命前のロシアであると同時にソ連的な時空間の要素も持ち合わせるといった一種アナクロニズム的な特徴をもっており,モスクワの終末性,監視都市というイメージはベールイのソ連観を表したものでもあることを指摘した。第2部では,主人公の精神的変容と再生を,20世紀ロシア文学全般においても主要な主題である「見ること/見られること」という視点,聖書のコンテクスト,人智学との関連などから多面的に考察した。研究の成果の一部を,単著論文「科学とオカルト,アンドレイ・ベールイ『モスクワ』の《世界を甦らせる目》」(ロシア語),単著論文「科学の視線/秘儀者の眼□□アンドレイ・ベールイ『モスクワ』」で発表したほか,2005年10月には,モスクワのプーシキン博物館で行われた国際アンドレイ・ベールイ学会で,口頭発表(「ベールイ『モスクワ』における眼」)を行い,討議に参加した。
流動電位係数の状態・溶存イオン種依存性の決定と三宅島地電位観測データへの適用

本研究では,三宅島2000年噴火活動時に観測された自然電位変動から,水の流動に関する定量的な見積もりを行うため,三宅島の岩石を用いて,流動電位を決定するゼータ電位の性質を実験的に明らかにした.初年度に実験装置の整備改良を行い,三宅島にて各噴出年代の火山岩試料の採取を行った.試料を採取する際に立ち寄った神津島において自然電位マッピングを実施した結果,神津島での地形効果が約10mV/m(高度1m上昇につき10mV電位が下降する)と三宅島に比べて約10倍であることが判明したため,この違いが,両島で採取した岩石のゼータ電位の違いによって説明可能であるかを実験的に検証することも目標の一つに加えた.まず,HCl-KCl-KOH系における,ゼータ電位のpH依存性に関する実験を行った.その結果,各年代の三宅島玄武岩,神津島流紋岩共に,pH3-10の範囲ではゼータ電位が-10-20mVに決定され,さらに塩基性が強くなると共にゼータ電位は大きくなった.また,三宅島玄武岩がpH2付近でゼータ電位がゼロから(さらに酸性の強いところで)正に転ずるのに対し,神津島流紋岩ではゼータ電位はマイナスに留まった.従って,三宅島と神津島の地形効果の相違は,地下水のpHの相違か,比抵抗など他のパラメタの相違によるものと考えられる.Ishido&Mizutani(1981)の実験では,花崗岩,安山岩,斑レイ岩ともに,ゼータ電位がpH6以上で-80-100mVに決定され,今回の結果は約1桁小さい値を得た.岩右試料の表面状態の差異が,このような実験結果の相違を生む要因として考えられたため,岩石の破砕粒度を変えた実験を行った.その結果,新鮮な表面の割合が多いと考えられる,より粒径の小さな試料ほど絶対値として高いゼータ電位になっているという実験結果を得,ゼータ電位を考える上で新たな要因を考える必要性が明らかとなった.本研究では,三宅島2000年噴火活動時に観測された自然電位変動から,水の流動に関する定量的な見積もりを行うため,三宅島の岩石を用いて,流動電位を決定するゼータ電位の性質を実験的に明らかにした.初年度に実験装置の整備改良を行い,三宅島にて各噴出年代の火山岩試料の採取を行った.試料を採取する際に立ち寄った神津島において自然電位マッピングを実施した結果,神津島での地形効果が約10mV/m(高度1m上昇につき10mV電位が下降する)と三宅島に比べて約10倍であることが判明したため,この違いが,両島で採取した岩石のゼータ電位の違いによって説明可能であるかを実験的に検証することも目標の一つに加えた.まず,HCl-KCl-KOH系における,ゼータ電位のpH依存性に関する実験を行った.その結果,各年代の三宅島玄武岩,神津島流紋岩共に,pH3-10の範囲ではゼータ電位が-10-20mVに決定され,さらに塩基性が強くなると共にゼータ電位は大きくなった.また,三宅島玄武岩がpH2付近でゼータ電位がゼロから(さらに酸性の強いところで)正に転ずるのに対し,神津島流紋岩ではゼータ電位はマイナスに留まった.従って,三宅島と神津島の地形効果の相違は,地下水のpHの相違か,比抵抗など他のパラメタの相違によるものと考えられる.Ishido&Mizutani(1981)の実験では,花崗岩,安山岩,斑レイ岩ともに,ゼータ電位がpH6以上で-80-100mVに決定され,今回の結果は約1桁小さい値を得た.岩右試料の表面状態の差異が,このような実験結果の相違を生む要因として考えられたため,岩石の破砕粒度を変えた実験を行った.その結果,新鮮な表面の割合が多いと考えられる,より粒径の小さな試料ほど絶対値として高いゼータ電位になっているという実験結果を得,ゼータ電位を考える上で新たな要因を考える必要性が明らかとなった.当初計画では,本年度に三宅島の火山体を形成している代表的な数種の玄武岩を採取し試料を作成,その試料に対して現状で実験が可能な100°Cまでについて流動電位係数決定実験を行い,係数のpH,塩濃度,イオン価数,温度依存性を決定する予定であった.しかし,追加交付であったこと,既存の実験装置の問題点(圧力容器,センサーの材質の問題から火山流体による流動電位現象を明らかにする上で重要となる低いpHでの実験ができない)が判明したことから,測定装置を組みなおす必要が生じた.そこで,測定装置の改良を図り,ガラスセルを用い,圧力センサーとして腐食に強いインコネルメタルを使用することにした.予察的な実験から,当計画が目指している条件下での測定が可能であることが確かめられた,岩石試料の採取は,三宅島,神津島で行った,この際,神津島においては,自然電位の地形効果を明らかにするための自然電位マッピングも実施した.地形効果は,地下水が斜面を流れ下ることによる流動電位現象によって起こると考えられており,山側で負,海側で正となる電位分布が生じる.三宅島の地形効果が約1mV/m(高度1m上昇につき1mV電位が下降する)であったのに対し,神津島では約10mV/mと約10倍であった.三宅島は,塩基的なゲンブ岩であるのに対し,神津島は酸性的な流紋岩から成り立っている.

このため,上記の地形効果の差が,両島で採取してきた岩石の流動電位係数の差によって説明できるのかどうかを実験的に明らかにすることも目標の一つに加えることにした.三宅島では,過去,繰り返し熔岩を噴出しており,岩石採取の折には,その各年代の岩石を採取するように努めた.本年度は以上のように,実験装置の改良と,岩石試料の採取を行い,来年度の実験に備えた.本研究では,三宅島2000年噴火活動時に観測された自然電位変動から,水の流動に関する定量的な見積もりを行うため,三宅島において各年代に噴出した玄武岩を取得し,流動電位を決定するゼータ電位の性質を実験的に明らかにした.また,三宅島で試料を採取するために立ち寄った神津島において,自然電位マッピングを実施した結果,神津島では約10mV/m(高度1m上昇につき10mV電位が下降する)と三宅島に比べて約10倍であったため,この地形効果の差が,両島で採取した岩石の流動電位係数の差によって説明可能であるかを実験的に検証することも目標の一つに加えた.まず,HCl-KCl-KOH系における,ゼータ電位のpH依存性に関する実験を行った.岩石試料は,細かく破砕し,試料が均質になるようにした.また,条件を変えるごとに,試料と流動させる溶液とが平衡状態に達するように数時間から1日間溶液に浸し,実験結果が変化しなくなる時点のデータを採用した.その結果,各種年代の三宅島玄武岩,神津島流紋岩共に,pH3-10の範囲ではゼータ電位は-10-20mVに決定され,さらに塩基性が強くなると共にゼータ電位は大きくなった.また,三宅島玄武岩がpH2付近でゼータ電位がゼロから(さらに酸性の強いところで)正に転ずるのに対し,神津島流紋岩ではゼータ電位はマイナスに留まった.従って,三宅島と神津島の地形効果の相違は,地下水のpHの相違か,比抵抗など他のパラメタの相違によるものと考えられる.Ishido & Mizutani(1981)の実験では,花崗岩,安山岩,斑レイ岩ともに,ゼータ電位がpH6以上で-80-100mVに決定され,今回の結果は約1桁小さい値を得た.これまで,Ishido & Mizutaniの結果を用いてゼータ電位を-100mVとして見積もりを行い,例えば,2000年7月14日の傾斜ステップ変動に伴って,総量83m^3の水が岩石に相対的に流動したと見積もってきたが,今回の結果に従うと,約830m^3の水が流動したことになる.一方,Perrier & Froidefond,2003の砂岩や玄武岩の実験結果は,今回我々が得た結果と整合的であった.岩石試料の表面状態の差異が,このような実験結果の相違を生む要因として考えられたため,破砕粒度を変えた実験を行った.その結果,新鮮な表面の割合が多い試料ほど高いゼータ電位を与えるという実験結果を得,ゼータ電位を考える上で新たな要因を考える必要性が明らかとなった.
銅蛋白質が関与する亜硝酸還元系における電子伝達機構の解明

脱窒に関連する酵素タンパク質・遺伝子を明らかにし、その全貌を明らかにすることを計画した。この過程における電子伝達体としてチトクロームcが使われることが多いことから、ヘム染色に反応するタンパク質をAlcaligenes faccalis S-6より部分精製し、そのN末端アミノ酸配列を決定した。その結果、説窒における亜硝酸還元の次のステップである一酸化窒素還元を触媒する酵素一酸化窒素還元酵素(NOR)のスモールサブユニットNorCとの間でアミノ酸配列の高い相同性が見いだされた。予想されるオリゴヌクレオチドを合成し、それをプローブとしたサザンハイブリダイゼーションおよびコロニーハイブリダイゼーションを行い、同タンパク質をコードする遺伝子をクローン化した。クローン化した断片中には9つの読み取り枠が存在し、他の細菌で既にクローン化されている遺伝子との塩基配列および推定アミノ酸配列の相同性から、dnr(fnr), orf1,orf2,norO,norP,norC,norB,norQ,norDと呼ぶこととした。nirO、norC、およびnorQのすぐ上流に、FNRの認識配列であるTTGATxxxxATCAAと類似した配列が見い出された。FNR〓白は、嫌気条件で働く蛋白の遺伝子の転写活性化因子であることから、これらの遺伝子が嫌気条件で効率よく発現するように、転写レベルで制御されていることが示唆されるとともに、これらが少なくとも3つの転写単位で構成されることが示唆された。次に、nor遺伝子の大腸菌での発現について、検討を行った。Pseudomonas stuzueriにおいては、norQ遺伝子がNORの活性化に必要であることが報告されていることから、norCBより下流のこの領域を用い、様々なconstructを構築して大腸菌JM105に導入し、lac promoterの制御のもとに発現を行った。IPTG添加後、30度で15時間培養した後の各形質転換体の細胞膜両分のSDS-PAGEを行い、CBB染色、ヘム染色を行ったところ、CBB染色では顕著なNORの蓄積は認められないが、ヘムに対する染色では約17kDaおよび38kDaにNORを構成する2つのサブユニットであるNorCおよびNorB蛋白の生産が認められた。また、界面活性剤を用いて可溶化した膜画分のスペクトルを測定した結果、各形質転換体においてシトクロムbの生産が上昇していることが示唆されました。しかしながら、NOR活性を測定したところ、いずれの形質転換体においても顕著な活性は検出されなかったことから、何らかのNOR活性化機構の存在が示唆された。現在、norCB近傍に存在する遺伝子の役割について解析を行っている。

本研究では亜硝酸還元酵素及びシュードアズリンについて、正確な立体構造情報に基づいた改変を通して申請者がこれまでに蓄積してきた両銅蛋白質の構造と機能に関する多くの知見に上に立って、硝酸呼吸系に関わる電子伝達蛋白質の全てを単離精製し、それらの蛋白質と亜硝酸還元酵素-シュードアズリン系との蛋白質間相互作用、電子伝達の様式を解析することにより、これまでに明らかになっていない銅蛋白質を有する亜硝酸還元系における電子伝達機構の全貌を明らかにすることを目的として研究を行った。亜硝酸還元酵素は還元型シュードアズリンから電子を受けとって活性型となり機能を発揮する。申請者は、シュードアズリンをアスコルビン酸を用いて還元することにより反応を開始する系を用いているが、アスコルビン酸が硝酸呼吸における生理的な電子伝達物質とは考えにくい。そこでA.faecalis S-6株中にNADHの還元力をシュードアズリンに伝達する活性があるかどうかを調べたところ、A.faecalis S-6株の細胞破砕液にその活性が見いだされた。そこで、硫安沈殿、ゲルろ過等を用いて部分精製を行ったところ、分子量15K,30KのチトクロームCが活性画分に含まれていることが明かとなった。そこで、は当該チトクロームCを含めた電子伝達活性を有する蛋白質の精製を進めた。部分精製品のN末端アミノ酸配列を決定したところ、30Kのものに関しては明瞭な配列の相同姓を示すものが見つからなかったが、15Kのものは硝酸還元系において亜硝酸還元酵素の次のステップである一酸化窒素還元酵素NORの小サブユニットNorCと高い相同性が見いだされた。その部分アミノ酸配列を基に予想される塩基配列からオリゴヌクレオチドプローブを合成して、同蛋白質をコードする遺伝子をクローン化した。塩基配列を決定した結果、この領域にはNORのもう一方のサブユニットNorBを含めて、NORに関与すると思われるnorBCQD遺伝子がクラスターをなして存在することが明らかになっている。脱窒に関連する酵素タンパク質・遺伝子を明らかにし、その全貌を明らかにすることを計画した。この過程における電子伝達体としてチトクロームcが使われることが多いことから、ヘム染色に反応するタンパク質をAlcaligenes faecalis S-6より部分精製し、そのN末端アミノ酸配列を決定した。その結果、脱窒における亜硝酸還元の次のステップである一酸化窒素還元を触媒する酵素一酸化窒素還元酵素(NOR)のスモールサブユニットNorCとの間でアミノ酸配列の高い相同性が見いだされた。予想されるオリゴヌクレオチドを合成し、それをプローブとしたサザンハイブリダイゼーションおよびコロニーハイブリダイゼーションを行い、同タンパク質をコードする遺伝子をクローン化した。クローン化した断片中には9つの読み取り枠が存在し、他の細菌で既にクローン化されている遺伝子との塩基配列および推定アミノ酸配列の相同性から、dnr(fnr),orf1,orf2,norO,norP,norC,norB,norQ,norDと呼ぶこととした。nirO、norC、およびnorQのすぐ上流に、FNRの認識配列であるTTGATxxxxATCAAと類似した配列が見い出された。
共鳴法による100KHz〜2MHz域での超音波吸収の精密測定

前年度の研究報告では100KHz2MHzの低周波域で、精度よく液体及び溶液中の超音波吸収量を測定すべく、90mmφの大口径水晶振動子を用いた超音波共鳴器を設計・試作しその基本的な性能について報告した。今年度は試作した超音波共鳴器の性能とその低周波限界をベンゼンおよび水で、さらに詳細に調べ、超音波吸収量、既知の液体を基準に用いる相対測定法を取れば、200KHz域まで、±0.1×【10^(-17)】【S^2】【cm^(-1)】の精度で、液体および溶液の超音波吸収量が測定できることが明らかとなった。本年度はこの超音波共鳴器を用いて、低周波域の測定が特に重要である界面活性剤-臭化ドデシルトリメチルアンモニウム(DTAB)-水溶液の超音波吸収を200KHz10MHz域で、精密に測定し、CMC(臨界ミセル濃度)に充分近い濃度域を含む、広い濃度範囲で超音波緩和スペクトロスコピーの全貌を高い精度で明らかにした。この超音波緩和スペクトルは単一緩和の理論式で完全に表わすことができた。この超音波緩和の緩和時間と緩和強度の両面からの矛盾のないデータ解析に基づき既応のTeubnerの緩和理論の検証を行った。その結果、Teubnerの理論に含まれる問題点を実験的に明らかにすることが出来た。また本実験で得たミセル系の緩和時間は、従来、P-jump法と超音波緩和法で得られる緩和時間の谷間に込り、測定不可能な領域であったが、本実験で始めて、この空白の時間領域を、高精度の実測値でうめることができた。さらに本年度は測定の迅速化・高精度化をはかるために、本超音波共鳴法の測定システムをマイクロコンピューターPC9801-M3で駆動する様、システムの開発し、自動測定によるデーターの取込み、ソフトウェアーによる共鳴点の中心周波数、半値幅などの、計算処理が出来るように整備した。
自然保護地域の持続的管理に寄与するバーチャルハンティングプログラム開発

熱帯雨林の野生動物の生態や季節性などは謎が多く、長期間にわたる詳細なモニタリングが必要である。しかし、持続可能な利用を実現するためには野生生物モニタリングが重要だが、保護地域管理者や行政が行うには人的・財源的に厳しく、観光のような外部の力を活用することが不可欠である。熱帯雨林を保全するための手段の一つとして観光に注目が集まっているが、その魅力を伝えることが課題となっている。観光客の多くは野生生物観察に対する関心や期待は大きいものの、通常、熱帯雨林では野生生物は密度が低く、夜行性のものが多いため、観察するのは簡単ではない。そのため、野生生物と観光客との接点は小さく、野生生物観光としての満足度はあまり高くない。そこで、東南アジア熱帯雨林を有する半島マレーシア、ジョホール州、エンダウロンピン国立公園において、野生生物の生態学的研究手法を活用した観光アトラクションプログラム(バーチャルハンティングプログラム:VH)の開発を進めている。2018年度はエンダウロンピン国立公園の自然散策路及び林道において撮影した野生生物映像データを用いて、野生生物の撮影の空間的、時間的特性を分析した。2018年度の調査では、林道において3種の絶滅危惧種を含む7種の野生哺乳類が撮影された。野生哺乳類の総撮影頻度は0.41(回/日)で、特にホエジカ,ヒゲイノシシ、イノシシが高頻度で撮影された。撮影頻度は種によって異なるものの、傾斜角、林冠被覆率、河川からの距離に有意な影響を受けることが明らかになった。ビデオカメラトラップによる中大型哺乳類相の評価を継続しつつ、ジョホール州政府と調整を進め、定期的にジョホール州政府および管理組織と打ち合わせを進めている。野生生物調査は順調に進んでいるが、観光客に対する調査については、現場スタッフとの信頼関係と密な協力体制が必要であるため、現場スタッフに過度な負担がかからないように慎重にすすめていきたい。カメラトラップを観光アトラクションとして具体化するためには、ビデオカメラトラップを用いたプロモーショナルツアーを実施し、野生生物撮影数、満足度やロイヤルティ等の体験の質、そして生態教育的効果を評価し、コスト計算とともに実現可能な事業の形にすることが必要である。そのため、2019年度中に、関係者とともに、実施プロセスにおける課題を抽出しながら、効果測定を進めていく予定である。学内業務の関係で、予定していた調査出張が難しくなった。代わりに2019年度に調査を行うこととした。
MGL1による腸内共生細菌の認識を通した免疫・炎症応答の軽減機構の解明

Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS)により大腸炎を誘導したマウスの腸管膜リンパ節から単離した腸内共生細菌の一つであるStreptococcusから、5Mグアニジン塩酸で処理することにより、MGL1結合性の分子を含む抽出物を得ることに成功した。さらに、この抽出物から、インゲン豆レクチンであるPHA-L4-アガロースビーズを用いて免疫沈降させた結果、MGL1結合性の分子を吸着させることが可能になった。現在、MGL1結合性の分子をSDS-PAGEにて展開し、ゲルの切り出しを行って質量分析法により解析している。野生型マウスの腸管におけるMGL1を発現している固有層マグロファージと大腸に浸潤した腸内共生細菌のStreptococcusとが直接認識することにより、抗炎症サイトカインであるInterieukin 10(IL-10)の遺伝子発現誘導が認められ、hemITAMの下流に存在すると知られているCARD9を経由することを明らかとした。そこで、私は、菌体によるMGL1を介するシグナルがhemITAMと会合するSpleen tyrosine kinase(Syk)を活性化するか否か、IL-10の発現誘導におけるSykの役割を検討した。さらに、転写因子であるNF-κB経路やMAPKs経路のp38には影響を及ぼさず、MAPKs経路のERKのみを活性化することを明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。これまで、私は炎症を誘導したマウスの腸管から単離した腸内共生細菌に着目してIL-10の発現解析を行ってきたが、プロバイオティクスとして知られている乳酸菌においてもMGL1に対する結合性とIL-10の発現誘導活性に相関があるか否かを検討した。MGL1に結合を示したL.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricusは、大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかとした。このIL-10の発現誘導はMgl1-KOマウス由来の大腸マクロファージではこれらの発現誘導は観察されなかった。以上のことから、マウス腸管から単離したMGL1結合性の共生細菌だけでなく、MGL1の結合性を有するプロバイオティクスが大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導する活性があることを明らかとした。明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。MGL1に結合する成分の同定には至らなかったものの、共生細菌であるStreptococcus sp.が大腸マクロファージのMGL1に認識されることによって抗炎症性サイトカインであるIL-10の発現を誘導すること、およびそのシグナル伝達経路の一端を解明するに至った。さらに、MGLIに結合する乳酸菌には大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかにした。私はDextran Sulfate Sodium Salt(DSS)により大腸炎を誘導したマウスの腸管膜リンパ節から単離した腸内共生細菌の一つであるStreptococcusをヒツジ血液寒天培地にて培養し、培養した菌体を5Mグアニジン塩酸で処理することにより、MGL1結合成分を抽出する方法を確立した。この菌体および抽出物はVVA-B4、PHA-L4、PNAにも結合性を示し、これらの結合成分の分子量と同等であることから、MGL1結合成分はこれらのレクチンにも結合を有する可能性が高いことを明らかとした。野生型マウスの腸管の固有層マクロファージとStreptococcusとの共培養により、抗炎症サイトカインであるInterleukin 10(IL-10)の遺伝子発現誘導が認められ、一方で、Mgl1遺伝子欠損マウスではその発現誘導が見られないことが報告されている。私はMGL1に対する抗体(LOM-8.7)を用いて野生型マウスのMGL1の機能を阻害した場合、腸内共生細菌によるIL-10の発現講導が起こらないことを証明した。このことは、この腸内共生細菌が固有層マクロファージのMGL1を介して作用した結果、IL-10の発現誘導を起こしているという事象を裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。この腸内共生細菌とCARD9遺伝子欠損マウスの固有層マクロファージとを共培養した結果、IL-10の発現誘導は認められず、腸内共生細菌とMGL1との相互作用によるIL-10の発現誘導におけるシグナル伝達経路にCARD9が関与している事が示唆された。DSSの投与により誘導した大腸炎においてMgl1遺伝子欠損マウスは野生型マウスより重篤な炎症を示し、免疫応答の抑制に寄与していることが報告されてきた。

私は、人のMGLに相当するMgl2遺伝子欠損マウスにおいてもDSSにより炎症を誘導して免疫応答への寄与について検討した。その結果、Mgl2遺伝子欠損マウスは、炎症の評価法であるDisease ActivityIndexの値が野生型マウスに比べて有意に高値を示しており、腸管のクリプトの脱離がみられる等、重症な病態を呈していることが判明した。つまり、Mgl2遺伝子欠損マウスにおいても野生型マウスよりも重篤な炎症を起こすことが分かった。Dextran Sulfate Sodium Salt(DSS)により大腸炎を誘導したマウスの腸管膜リンパ節から単離した腸内共生細菌の一つであるStreptococcusから、5Mグアニジン塩酸で処理することにより、MGL1結合性の分子を含む抽出物を得ることに成功した。さらに、この抽出物から、インゲン豆レクチンであるPHA-L4-アガロースビーズを用いて免疫沈降させた結果、MGL1結合性の分子を吸着させることが可能になった。現在、MGL1結合性の分子をSDS-PAGEにて展開し、ゲルの切り出しを行って質量分析法により解析している。野生型マウスの腸管におけるMGL1を発現している固有層マグロファージと大腸に浸潤した腸内共生細菌のStreptococcusとが直接認識することにより、抗炎症サイトカインであるInterieukin 10(IL-10)の遺伝子発現誘導が認められ、hemITAMの下流に存在すると知られているCARD9を経由することを明らかとした。そこで、私は、菌体によるMGL1を介するシグナルがhemITAMと会合するSpleen tyrosine kinase(Syk)を活性化するか否か、IL-10の発現誘導におけるSykの役割を検討した。さらに、転写因子であるNF-κB経路やMAPKs経路のp38には影響を及ぼさず、MAPKs経路のERKのみを活性化することを明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。これまで、私は炎症を誘導したマウスの腸管から単離した腸内共生細菌に着目してIL-10の発現解析を行ってきたが、プロバイオティクスとして知られている乳酸菌においてもMGL1に対する結合性とIL-10の発現誘導活性に相関があるか否かを検討した。MGL1に結合を示したL.casei, L.gasseri, L.delbrueckii brugaricusは、大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導することを明らかとした。このIL-10の発現誘導はMgl1-KOマウス由来の大腸マクロファージではこれらの発現誘導は観察されなかった。以上のことから、マウス腸管から単離したMGL1結合性の共生細菌だけでなく、MGL1の結合性を有するプロバイオティクスが大腸マクロファージにおけるIL-10の発現を誘導する活性があることを明らかとした。明らかとし、MGL1が初めてシグナルを伝えたことを裏付けになる結果であり、大変意義のある成果を得た。
消化器癌に対する化学療法の効果増強に関する研究

1、自家骨髄移植を併用した消化器癌に対する大量化学療法の確立:抗癌剤のdose limitingfactorである骨髄抑制を乗り越えるために、11例の進行胃癌患者に通常量の4-5倍の投与量であるetoposide1,200mg/m^2,adriamycin(ADR) 80mg/m^2,cisplatin(CDDP) 120mg/m^2を投与し、自家骨髄移植を併用したところ、骨髄は全例生着し、治療を安全に施行し得た。治療成績は評価可能病変を有する9例中8例89%にpartial responseを得た。各因子別では原発巣1/1(100%)、リンパ節転移5/5(100%)、臓器転移2/2(100%)、他臓器浸潤2/2(100%)、腹膜播種2/3(67%)であった。これらの奏功率は、胃癌化学療法の報告例のなかでは、最も高いものである。しかし、生存期間は満足すべきものではなかった。これは、化学療法のみの治療の限界と思われた。3、本研究の結果から、高度進行胃癌に対して、生検材料からの感受性試験を行い有効抗癌剤を選択し、術前大量化学療法によってdown stagingを図り根治手術を施行する治療が試みられるべきであると思われた。CAM plateを用いたATCCSは培養液中の種々の増殖因子と相俟って線維芽細胞の増殖を防ぎ、癌細胞を特異的に増殖させる。本培養系を抗癌剤感受性試験に応用する利点は(1)癌細胞の実際の増殖を抑制するシステムである為、試験結果と臨床効果が一致する可能性が高いこと、(2) plating efficiencyが高いことから必要癌細胞数が少数で済むため、生検材料を用いた感受性試験の可能性があること、と考えられた。初年度は(2)に関する検討を行った。切除標本から10例、術前内視鏡検査時の生検材料から5例の計15例の進行胃癌症例に対して、感受性試験が施行された。抗癌剤はADM, CDDP, 5-FU, MMCの4剤を使用し、抗癌剤は4段階の濃度で試験を行い、90%の増殖抑制を示す濃度であるIC90を求めた。15検体のうち11検体(73%)で感受性試験を遂行し得た。とりわけ、生検5検体中4検体(80%)で感受性試験に成功しており、手術前に、あるいは切除不能症例においても感受性のある抗癌剤の選択が可能であった。2、自家骨髄移植を併用した消化器癌に対する大量化学療法の確立:10例の再発、進行胃癌患者に対して自家骨髄を採取、凍結保存した後、エトポシド1,200mg/m^2、ADM 80mg/m^2、CDDP 120mg/m^2投与し、解凍した自家骨髄を輸注したところ、全例生着し治療を安全に施行し得た。治療成績は89%という高い奏効率を得たが、最長生存は13カ月と、十分満足のゆく結果ではなかった。そこで、抗癌剤感受性試験の結果をふまえて、増量する抗癌剤を選択する、あるいは、根治手術と組み合わせた補助療法としての応用を次年度の課題としたい。ATCCSの利点は(1)癌細胞の実際の増殖を抑制するシステムである為、試験結果と臨床効果が一致する可能性が高いこと、(2)plating efficiencyが高いことから必要癌細胞数が少数で済むため、生検材料を用いた感受性試験の可能性があること、と考えられた。初年度は(2)に関する検討を行ない、生検材料における検索が可能であることを確かめたため、当該年度では、(1)に関する検討を行った。術前に抗癌剤を投与し、生検材料による感受性結果と、手術時摘出標本における病理組織学的効果を対比した。未だ少数例であるが、5-FUに感受性のある3症例に、術前に5-FUを経口投与したところ組織学的効果がみられた。現在症例を増やして検討している。2、自家骨髄移植併用

大量化学療法の補助療法としての可能性:再発、進行胃癌患者に対して自家骨髄を採取、凍結保存した後、エトポシド1,200mg/m^2、ADM80mg/m^2、CDDP120mg/m^2投与し、解凍した自家骨髄を輸注したところ、全例生着し治療を安全に施行し得た。治療成績は89%という高い奏効率を得たが、必ずしも生存率の向上には結びつく結果は得られなかった。そこで、根治手術を施行し得た進行胃癌症例(Stage IV a,b)に対して、術後に大量化学寮法を施行することで、生存率の向上を図ることとした。この場合の問題点としては、治療の安全性であるが、投与量の工夫で安全に施行し得た。経過観察により、効果判定をする予定である。1、自家骨髄移植を併用した消化器癌に対する大量化学療法の確立:抗癌剤のdose liniting factorである骨髄抑制を乗り越えるために、11例の進行胃癌患者に通常量の4-5倍の投与量であるetoposide 1,2000mg/m^2,adriamycin(ADR)80mg/m^2,cisplatin(CDDP)120mg/m^2を投与し、自家骨髄移植を併用したところ、骨髄は全例生着し、治療を安全に施行し得た。治療成績は評価可能病変を有する9例中8例89%にpartial responseを得た。各因子別では原発巣1/1(100%)、リンパ節転移5/5(100%)、臓器移転2/2(100%)、他臓器浸潤2/2(100%)、腹膜播種2/3(67%)であった。これらの奏功率は、胃癌化学療法の報告例のなかでは、最も高いものである。しかし、生存期間は満足すべきものではなかった。これは、化学療法のみの治療の限界と思われた。2、adhesive tumor cell culturesystem(ATCCS)による抗癌剤感受性試験:cell adhesive matrix plateを用いたATCCSの結果は以下のようである。(1)胃癌新鮮切除標本より癌組織を11例において採取し、8例(73%)に感受性試験を遂行し得た。2例(18%)ではlow growth、1例(9%)はcontaminationで結果を得なかった。生検標本を用いた結果では、15例に施行して、10例(67%)で感受性結果を得たが、4例でlow growth、1例でcontamination計5例(33%)で結果を得なかった。(2)low growthとなった症例の組織型に特徴はなかった。(3)90%の増殖抑制を示すIC90値のpercentileが30%以下を感受性有りとすると感受性陽性率はADR 17%,CDDP 50%,5-FU 28%,mitomycin C(MMC)40%であり、CDDP,MMCの感受性がすぐれていた。(4)ATCCS結果と、5-FUの臨床効果に相関を認めた。3、本研究の結果から、高度進行胃癌に対して、生検材料からの感受性試験を行い有効抗癌剤を選択し、術前大量化学療法によってdown stagingを図り根治手術を施行する治療が試みられるべきであると思われた。
概日リズム制御におけるCRYタンパクの役割

概日時計は、外部刺激入力系(光受容器)、振動体(時計発振)、出力機構(リズム発現系)から構成されている。時計発振とは、約24時間周期の遺伝子発現の振動であり、正の転写制御因子と負の転写制御因子とにより作り出される。クリプトクローム(Cryptochrome ; CRY)は、この振動体の負の転写制御因子として機能している。マウスは2種のCry遺伝子(mCry1,mCry2)を持っている。2つの遺伝子をノックアウトするとマウスは全くリズムを示さなくなることから、Cry遺伝子が概日リズムの本質的な構成要因であることが解る。興味深いことに、mCry1,mCry2各々のノックアウトマウスは、24時間周期からそれぞれ約1時間周期が短く、又は長くなる。各々の遺伝子の作用の違いを明らかにする事により、何故この様な逆の作用を示すようになるのかを解明する事を一つの目標としている。クリプトクロームは、光回復酵素・青色光受容体タンパクファミリーの一員である。このタンパクファミリーの多くが光受容能を持っていることから、クリプトクロームも概日リズムの光受容体としても機能しているのではないかと考えられている。実際に光受容体として機能していることを示すのを第2の目標としている。アデノウイルスベクターを用い、ノックアウトマウスに遺伝子を導入する事により、リズムを回復させる試みを現在続けている。クリプトクロームによる時計遺伝子の転写抑制は、転写因子であるCLOCK/BMAL及びその認識配列を含むDNAとの複合体に直接作用することにより行われていることを明らかにした。さらにCLOCK/BMALヘテロダイマーと相互作用するクリプトクロームの領域を決定した。光回復酵素の作用メカニズムを解明するとともに、光回復酵素・青色光受容体タンパクファミリーの全体像を明らかにすることを目指している。CRYタンパクについては、マウス、ゼブラフィッシュ、ショウジョウバエを用い、その機能解析を行っている。CRYタンパクは光回復酵素に由来する事から、当初概日リズムの光受容体であろうと考えられた。ショウジョウバエでは概日リズムの光受容ステップに働いている事が分かった。ところが、マウスにおいては意外な結果となった。マウスには2種の青色光受容体遺伝子が存在するが、各々の遺伝子のノックアウトマウスを作成し、その表現型を観察した。mCry1,mCry2各々の遺伝子をノックアウトしたマウスは、行動リズムの周期が、それぞれ短くまたは長くなっていた。これらからダブルノックアウトマウスを作成し、その行動リズムを観察したところ、恒暗条件では、全くリズムを失った。この事は、この遺伝子が概日リズムの時計本体として機能していることを示している。しかしながら、CRYタンパクが光受容体として機能している事を否定するものではない。更に、この事を確かめるために、ゼブラフィッシュからCRY遺伝子をクローニングしin vivo、in vitroでの解析系を確立し、これらのタンパクの作用メカニズムの解明を目指している。