hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
神経変性疾患メディエイターの作用機序解明

我々は、15デオキシ-デルタ12,14-プロスタグランジンJ2 (15d-PGJ2)を含むシクロペンテノン型プロスタグランジンを神経変性疾患メディエイターとして報告してきた。15d-PGJ2の神経細胞毒性に既知受容体は関与しておらず、神経細胞膜上に受容体とは異なる15d-PGJ2膜標的タンパク質の網羅的同定に成功した。今回、膜標的の一つ神経細胞特異的エノラーゼ(NSE)の機能解析を行った。ラット大脳皮質神経細胞において、NSEは細胞質ばかりでなく神経細胞膜表面にも局在していた。抗NSE抗体によりH2O2が産生され、神経細胞死が誘導された。H2O2には神経細胞毒性が知られており、その下流にはMAPKが位置している。抗NSE抗体による神経細胞死において、MAPKのうちJun amino-terminal kinases (JNK)の関与が示唆された。また、その神経細胞死はカスパーゼ3の不活性化を伴っていたので、アポトーシスではないと考えられた。さらに、抗NSE抗体はユビキチン化蛋白質の蓄積を抑制することを見出し、ユビキチンープロテアソーム系の亢進が示唆された。ユビキチン化蛋白質の蓄積増大が神経細胞変性に関与していることは知られているが、蓄積減少が神経細胞死にどのように関わっているのか不明である。我々は、昨年度別の15d-PGJ2標的タンパク質である膜14-3-3ξに関する解析結果を報告しており、本年度と同様の結果を得ている。さらに、両標的に対する抗体による細胞死が、カスパーゼ3の不活性化ばかりでなくカスパーゼ1の活性化も伴うことを新たに見出した。カスパーゼ3抑制とカスパーゼ1およびユビキチンープロテアソーム亢進を伴う抗NSE抗体による神経細胞死が、既知の神経細胞死に分類されうるのか、今後検討する予定である。神経細胞特異的エノラーゼ(NSE)は神経細胞の細胞質に発現し、解糖系酵素の一つとして知られている。NSE自体の形質膜への局在機構については良く分かっていないが、中枢神経系において膜NSEは連鎖球菌感染後自己免疫疾患の自己抗原の一つとして報告されている。本自己免疫疾患では、運動および精神に障害をきたすが、その発症機序は不明である。今回、細胞質NSEではなく膜NSEの機能を特異的に解析するために抗NSE抗体が用いられた。抗NSE抗体刺激により神経細胞死が惹起され、神経毒性が報告されている過酸化水素水産生を介している事が判明した。膜NSEは15d-PGJ2膜標的タンパク質の一つとして見出されたが、興味深いことにその細胞死惹起機構は15d-PGJ2の機構とは異なっていた。15d-PGJ2は、カスパーゼ3を活性化し、ユビキチンープロテアソーム系を抑制することが知られている。さらに、15d-PGJ2はカスパーゼ1も活性化し、同様に抗NSE抗体もカスパーゼ1を活性化することを見出さした。しかしながら、抗NSE抗体は、カスパーゼ3を抑制し、ユビキチンープロテアソーム系を亢進していた。グルタチオン等のチオール系抗酸化剤は15d-PGJ2神経細胞毒性に対し保護効果を示すが、抗NSE抗体神経細胞毒性に対しては示さなかった。一方、過酸化水素水を還元するカタラーゼは抗NSE抗体神経細胞毒性に対し保護効果を示すが、15d-PGJ2神経細胞毒性に対しては示さなかった。15d-PGJ2によるアポトーシスが膜NSEを介している直接的証拠は得ることが出来なかった。むしろ、膜NSE刺激による神経細胞死は既知の細胞死とは異なるのではないかと示唆される興味深い結果となった。1)我々の知る限り、中枢神経系において7つの細胞死が報告されている。プログラム細胞死としてアポトーシス、ピロプトーシス、フェロプトーシス、オートファジー様細胞死とネクロプトーシス、事故的細胞死としてネクローシスとオンコーシスが知られている。抗NSE抗体による神経細胞死が新規か否かを調べるために、ATPの細胞内含量、ユビキチン-プロテアソーム系以外のタンパク質分解酵素(カルパイン・カテプシン等)、PI取り込み、クロマチン凝集、DNA断片化、形態変化等を指標に今後評価する予定である。2)HSPA8は癌細胞表面に発現していることが知られている。我々は15d-PGJ2膜標的タンパク質の一つとしてHSPA8を既に報告している。脳卒中等で増加するHSPA8には神経細胞保護効果が知られているが、同様に増加する抗HSPA8抗体が神経細胞にどのような影響を与えうるのかは不明である。HSPA8が神経細胞の表面にも局在していることを見出しているので、15d-PGJ2によるアポトーシスが膜HSPA8を介しているのか否かを抗HSPA8抗体を用いて今後解析する。我々は、世界に先駆けて15デオキシ-デルタ12,14-プロスタグランジンJ2 (15d-PGJ2)を含むシクロペンテノン型プロスタグランジンを神経変性疾患メディエイターとして報告してきた。15d-PGJ2の神経細胞毒性に既知受容体は関与していなかった。我々は、神経細胞膜上に受容体とは異なる特異的結合部位を見出し、質量分析により15d-PGJ2膜標的タンパク質の網羅的同定に成功した。

今回、15d-PGJ2膜標的タンパク質として同定した14-3-3ξの機能解析を行ったので報告する。ラット大脳皮質神経細胞において、14-3-3ξは細胞質ばかりでなく神経細胞膜表面にも局在していた。抗14-3-3ξ抗体によりH2O2が産生され、神経細胞死が誘導された。H2O2には神経細胞毒性が知られており、その下流にはMAPKが位置している。Jun amino-terminal kinases (JNK)阻害剤により抗14-3-3δ/ξ抗体の神経細胞毒性が有意に軽減された。一方、ERKおよびp38-MAPKの阻害剤では抑制効果は検出されなかったので、抗14-3-3ξ抗体による神経細胞死にJNKの関与が示唆された。また、その神経細胞死はカスパーゼ3の不活性化を伴っていたので、アポトーシスではないと考えられた。さらに、抗14-3-3ξ抗体はユビキチン化蛋白質の蓄積を抑制することを見出し、ユビキチンープロテアソーム系の亢進が示唆された。ユビキチン化蛋白質の蓄積増大が神経細胞変性に関与していることは知られているが、蓄積減少が神経細胞死にどのように関わっているのか不明である。カスパーゼ系抑制およびユビキチンープロテアソーム系亢進を伴う抗14-3-3ξ抗体による神経細胞死が、既知の神経細胞死に分類されうるのか、今後検討する予定である。アダプター蛋白質14-3-3は神経系組織に豊富に発現している。14-3-3ξは、他因子の分泌に関与していることは知られているが、14-3-3ξ自体の分泌機構については良く分かっていない。アミロイド斑と神経原線維変化はアルツハイマー病の2大所見として知られている。14-3-3ξは、アルツハイマー病において増加し、神経原線維濃縮体と共局在している。細胞質で14-3-3ξはタウタンパク質の過リン酸化を促進しているが、膜14-3-3ξは我々により最近見出されたばかりでその生理的および病理的役割は解明されていない。今回、細胞質14-3-3ξではなく膜14-3-3ξの機能を特異的に解析するために抗14-3-3ξ抗体が用いられた。抗14-3-3ξ抗体刺激により神経細胞死が惹起され、神経毒性が報告されている過酸化水素水産生を介している事が判明した。膜14-3-3ξは15d-PGJ2膜標的タンパク質の一つとして見出されたが、興味深いことにその細胞死惹起機構は15d-PGJ2の機構とは異なっていた。15d-PGJ2は、カスパーゼ3を活性化し、ユビキチンープロテアソーム系を抑制することが知られている。一方、抗14-3-3ξ抗体は、カスパーゼ3を抑制し、ユビキチンープロテアソーム系が活性化されていた。グルタチオン等のチオール系抗酸化剤は15d-PGJ2神経細胞毒性に対し保護効果を示すが、抗14-3-3ξ抗体神経細胞毒性に対しては示さなかった。一方、過酸化水素水を減らすカタラーゼは抗14-3-3ξ抗体神経細胞毒性に対し保護効果を示すが、15d-PGJ2神経細胞毒性に対しては示さなかった。15d-PGJ2によるアポトーシスが膜14-3-3ξを介している直接的証拠は得ることが出来なかったが、膜14-3-3ξ刺激による神経細胞死は既知の細胞死とは異なるのではないかと示唆される興味深い結果となった。我々は、15デオキシ-デルタ12,14-プロスタグランジンJ2 (15d-PGJ2)を含むシクロペンテノン型プロスタグランジンを神経変性疾患メディエイターとして報告してきた。
生体システムの力学的適応利御機能に関する研究

ウサギの膝蓋骨にステンレス鋼製のピンあるいは高剛性の高分子繊維を取り付け,これを油圧サーボアクチュエータに接続し,麻酔下で1日に1回,2週間,所定の繰り返し負荷を体外から強制的に膝蓋腱に作用させた.最大荷重は100N,150N,200N,最小荷重は10N,繰り返し周波数は4Hz,繰り返し数は3000である.所定の繰り返し負荷を作用させた後,ウサギを屠殺し,膝関節から膝蓋骨-膝蓋腱-脛骨複合体を取り出し,膝蓋骨と脛骨をアルミニウム製のカップの中にレジンで固定し,引張試験機に取り付けた.試験では37°Cの生理食塩水中で,引張速度20mm/minで行った.ひずみは膝蓋腱の表面に染料(ニグロシン)で描いたマーカー間の距離をVideo dimension analyzerで計測することにより求めた.最大負荷100N,150Nの繰り返し負荷により,膝蓋腱の引張強度は減少したが,断面積が増大したので,腱全体の強度(最大荷重)に有意な変化は現れなかった.一方,最大荷重200Nの繰り返し負荷でも,引張強度は減少し、断面積は増大したが,引張強度の減少が著しいため,最大荷重は有意に減少した.通常の運動中に膝蓋腱に生体内で作用する張力のピーク値は約83Nである.このことから,膝蓋腱は通常作用する負荷の2倍以下の過負荷に対しては正常に適応できることが明らかになった.ウサギの膝蓋骨にステンレス鋼製のピンあるいは高剛性の高分子繊維を取り付け,これを油圧サーボアクチュエータに接続し,麻酔下で1日に1回,2週間,所定の繰り返し負荷を体外から強制的に膝蓋腱に作用させた.最大荷重は100N,150N,200N,最小荷重は10N,繰り返し周波数は4Hz,繰り返し数は3000である.所定の繰り返し負荷を作用させた後,ウサギを屠殺し,膝関節から膝蓋骨-膝蓋腱-脛骨複合体を取り出し,膝蓋骨と脛骨をアルミニウム製のカップの中にレジンで固定し,引張試験機に取り付けた.試験では37°Cの生理食塩水中で,引張速度20mm/minで行った.ひずみは膝蓋腱の表面に染料(ニグロシン)で描いたマーカー間の距離をVideo dimension analyzerで計測することにより求めた.最大負荷100N,150Nの繰り返し負荷により,膝蓋腱の引張強度は減少したが,断面積が増大したので,腱全体の強度(最大荷重)に有意な変化は現れなかった.一方,最大荷重200Nの繰り返し負荷でも,引張強度は減少し、断面積は増大したが,引張強度の減少が著しいため,最大荷重は有意に減少した.通常の運動中に膝蓋腱に生体内で作用する張力のピーク値は約83Nである.このことから,膝蓋腱は通常作用する負荷の2倍以下の過負荷に対しては正常に適応できることが明らかになった.
体幹筋を基盤にしたサルコペニアの定義の提唱と腰痛等の臨床症状との相関に関する研究

骨粗鬆症,筋減少症,サルコペニアが社会的問題となっているが,病態,定義,治療介入に関してのエビデンスに乏しい.特に体幹筋,付随する後弯や腰痛は多くの患者が罹患しているが確立した治療がない.本研究では,本邦における多施設研究(千葉県,神奈川県,大阪府,富山県,静岡県)で1万人ベースのBIA法(生体電気インピーダンス法)を用いた体幹筋量を測定し,体幹筋量をベースとした日本人のサルコペニアの定義を作成する事である.また,体幹筋量と脊柱アライメント,付随する腰痛との関連を明らかにする.骨粗鬆症,筋減少症,サルコペニアが社会的問題となっているが,病態,定義,治療介入に関してのエビデンスに乏しい.特に体幹筋,付随する後弯や腰痛は多くの患者が罹患しているが確立した治療がない.本研究では,本邦における多施設研究(千葉県,神奈川県,大阪府,富山県,静岡県)で1万人ベースのBIA法(生体電気インピーダンス法)を用いた体幹筋量を測定し,体幹筋量をベースとした日本人のサルコペニアの定義を作成する事である.また,体幹筋量と脊柱アライメント,付随する腰痛との関連を明らかにする.
モデル生物を利用した染色体異常を発生する変異遺伝子群の解析

細胞のがん化と深く関わるゲノムの不安定性を引き起こす遺伝子変異について、モデル生物の一つである線虫を用いて解明することを研究目的とした。なかでも主にゲノムの安定性に関わるチェックポイント制御やDNA損傷の修復機構、ユビキチンシステムなどについて着目し、それらの制御機構が破綻した際に生じるゲノムの不安定化についての研究を行った。チェックポイント制御機構の鍵となるヒトATRの同祖遺伝子Ce-atl-1を単離した。RNAiによる逆遺伝学的な機能解析を行った結果、本遺伝子はDNA損傷時のアポトーシスならびに細胞周期の停止に必須であり、発現抑制個体では、高頻度に染色体の分離分配の異常ならびに異数化が生じること、電離放射線と紫外線のいずれにも感受性となることを明らかにした。さらに、酵母二成分系により相互作用する因子を探索した結果、N末側領域はPCNAと、C末側領域は小胞輸送やエンドサイトシスに関わる蛋白質群、線虫の初期発生に必須な転写因子、単鎖DNA結合蛋白質など複数の遺伝子産物と相互作用することが示唆された。またユビキチン系のSCF複合体ならびにvon Hippel Lindau (VHL)癌抑制遺伝子複合体に共通に含まれるRINGフィンガー蛋白質の線虫同祖遺伝子Ce-rbx-1のRNAiを行った。その結果、M期染色体の凝縮・分離分配が不全となり繊維状の染色体やブリッジ、断片化などが生じること、分裂時間の遅延などが観察され、本遺伝子はM期の染色体凝縮・分離分配に必須であることが確認された。また、これら染色体異常は、CUL2、Elongin BならびにCの発現抑制においても同様に観察され、RBX1/CUL2/ELC1/ELB1からなるユビキチンE3複合体が、M期染色体の凝縮・分離分配に重要な役割を担うことを見出した。本研究では、モデル生物の線虫を用いた細胞周期のチェックポイント制御とDNA修復の欠損に起因する染色体異常の研究を通して、発がん機構の分子基盤の解明を目指している。今回、チェックポイニント制御に関わるATMファミリーの線虫遺伝子Ce-atl-1発現を抑制した結果、放射線や紫外線などのgenotoxinに対して感受性となること、またrad51様遺伝子Ce-rdh-1は放射線や重イオン線によるDNA二本鎖切断の修復に関与し、その発現抑制により高頻度に染色体の断片化や異常が検出されることがわかった。また酵母two hybrid法により、これらCe-atl-1やCe-rdh-1(rad-51)と相互作用する候補因子が数種類単離されてきた。またVHLがん抑制遺伝子とも複合体を形成するRbx1遺伝子の線虫オルソログCe-rbx-1の発現抑制が、M期特異的なhistone H3のリン酸化を阻害し、染色体の凝縮・分離分配に異常が生じることを明らかにした。遺伝子DNAが紫外線や放射線、変異原物質などで傷つけられたとき、細菌からヒトに至るまで全ての生物は、細胞周期を一時的に停止させ、それらDNA損傷を修復する機構(チェックポイント制御)を保持していることが知られている。DNA損傷を修復することなしに細胞分裂を続けると、娘細胞に染色体異常や突然変異が蓄積し、がん化や細胞死へとつながる。本研究ではモデル生物、線虫を用いて、チェックポイント制御やDNA損傷の修復機構、ならびにこれら関連する遺伝子の欠損による染色体異常の発生機構について調べてきた。なかでもATMファミリー、RAD51、CHK2の線虫ホモログCe-atl-1、Ce-rdh-1/rad-51、Ce-chk-2遺伝子を単離同定し、RNA干渉法による機能解析を行った。その結果、Ce-atl-1の抑制個体は電離放射線と紫外線のいずれにも感受性、Ce-rdh-1/rad-51

抑制個体は電離放射線のみに感受性、Ce-chk-2はいずれにも非感受性を示すことを見出した。さらに酵母のツーハイブリッド法を用いて、これら遺伝子と相互作用する因子を探索したところ、Ce-atl-1のN末端側断片がPCNAとC末端側のキナーゼドメインを含む領域が小胞輸送やエンドサイトシスに関わる蛋白質群、転写因子、単鎖DNA結合蛋白質、翻訳因子など複数の遺伝子産物と、Ce-rdh-1/rad-51ではRAD54様因子などとの相互作用を確認した。またVHL癌抑制遺伝子と相互作用することが知られているRBX1の線虫ホモログについても機能解析し、Ce-rbx-1は染色体の凝縮・分離分配に必須であることを見出した。ヒトの発がんとその防御機構に密接な関連性が知られているDNA損傷の修復機構、チェックポイント制御機構ならびにユビキチン系分解機構などに、それぞれ関連する遺伝子群について、それら制御機構が破綻した際に生じるゲノムの不安定化やアポトーシスへの影響について、モデル生物線虫のオルソログを用いて解析を行っている。昨年度までの研究でataxisa telangiectasia(AT)関連遺伝子の線虫オルソログCe-atl-1と相互作用する遺伝子を数種類同定し、今回それらの機能解析を行ったところ、少なくとも内2種類の遺伝子は、Ce-atl-1と同様に、DNA損傷時に生じるアポトーシスの過程に必須であることを見出した。一方で、この2種類はCe-atl-1と異なり、DNA損傷の修復には関与しないことも確認された。また、VHL癌抑制遺伝子と相互作用することが知られているRBX1の線虫オルソログCe-rbx-1についても機能解析を行った。Ce-rbx-1のRNAi法による発現抑制は、M期の染色体凝縮・分離分配が異常になり、高頻度に娘細胞に染色体異常が蓄積すること、ならびにM期特異的なピストンH3セリン10のリン酸化が抑制されることを明らかにした。細胞のがん化と深く関わるゲノムの不安定性を引き起こす遺伝子変異について、モデル生物の一つである線虫を用いて解明することを研究目的とした。なかでも主にゲノムの安定性に関わるチェックポイント制御やDNA損傷の修復機構、ユビキチンシステムなどについて着目し、それらの制御機構が破綻した際に生じるゲノムの不安定化についての研究を行った。チェックポイント制御機構の鍵となるヒトATRの同祖遺伝子Ce-atl-1を単離した。RNAiによる逆遺伝学的な機能解析を行った結果、本遺伝子はDNA損傷時のアポトーシスならびに細胞周期の停止に必須であり、発現抑制個体では、高頻度に染色体の分離分配の異常ならびに異数化が生じること、電離放射線と紫外線のいずれにも感受性となることを明らかにした。さらに、酵母二成分系により相互作用する因子を探索した結果、N末側領域はPCNAと、C末側領域は小胞輸送やエンドサイトシスに関わる蛋白質群、線虫の初期発生に必須な転写因子、単鎖DNA結合蛋白質など複数の遺伝子産物と相互作用することが示唆された。またユビキチン系のSCF複合体ならびにvon Hippel Lindau (VHL)癌抑制遺伝子複合体に共通に含まれるRINGフィンガー蛋白質の線虫同祖遺伝子Ce-rbx-1のRNAiを行った。
精子活性化の細胞内メカニズムの解明への直接的なアプローチ

前年度に引き続き、主としてハムスター精子に対し先体反応誘発物質として卵透明帯を可溶化したものを投与した際の細胞内Ca反応について、Ca上昇と先体胞開口分泌の時間的関係および電位依存性L型Caチャネルの関与について解析を進めた。またサイクリックヌクレオチド(cAMP、cGMP)の効果についても検討した。[Ca上昇と先体胞開口分泌の時間的関係]可溶化卵透明帝の投与に対し、精子細胞内Ca濃度は頭部内赤道部付近から上昇が始まり約0.6秒以内に先体胞を除く頭部全体に伝播した後、2分以上にわたり高いレベルに保たれた。その間に、先体胞の蛍光強度が急激に減少する現象が観察された。これは開口分泌により先体胞内部の蛍光色素が細胞外に流出したためと考えられる。Ca上昇の開始から先体胞開口分泌開始までの平均時間は22秒であった。[電位依存性L型Caチャネルの関与の検討]L型Caチャネル阻害剤の存在下では、透明帯によるCa反応の増加相のパターンや速度、およびピークの大きさは影響されなかったが、Ca上昇の持続時間が有意に短くなった。また、先体胞開口分泌も阻害されたことから、L型QCaチャネルによって細胞内Caが長時間高濃度に維持されることが開口分泌に必要であることが示唆された。[サイクリックヌクレオチドの効果]予備的な実験において、細胞膜透過性のサイクリックヌクレオチドのアナログ、8-br-cGMPや8-br-cAMPの投与により精子内Ca上昇が観察された例があったが、ケイジドcGMP(膜透過性)をロードした精子のどの部分に紫外線照射しても、Ca上昇は誘発されなかった。サイクリックヌクレオチドと精子内Caの関係については、さらに検討が必要である。本年度は、主としてハムスター精子に対し先体反応誘発物質として卵透明帯を可溶化したものを投与した際の細胞内Ca反応について、その時間的空間的パターンの解析を行った。[高解像度Ca画像解析法の確立]Ca感受性蛍光色素Ca Green-1とFura RedをAM型を用いて精子にロードし、共焦点レーザー顕微鏡により同時に取得したそれぞれの蛍光像の比を細胞内Ca濃度の指標とした。諸条件を検討し、1μm以下、0.2秒程度の分解能でCa画像の時系列が得られるまでに改良された。[卵透明帯によって誘発される反応様式の解析]可溶化卵透明帯の投与に対し、精子頭部からCa上昇が始まり尾部には若干の遅延をもって伝播すること、また頭部内ではまず赤道部付近ら上昇が始まり約0.3秒で頭部全体に伝播するが先体内はほとんど上昇しないこと、などを確認した。この結果は透明帯に対する受容体あるいはそれに続く信号伝達系が頭部の赤道部付近に局在することを示唆している。[電位依存性チャネルの関与の検討]高K外液により脱分極刺激をしても細胞内Ca上昇は見られなかった。また、透明帯に体する反応はL型Caチャネル阻害剤によって影響を受けなかった。従って、電位依存性CaチャネルからのCa流入はCa上昇に寄与していないと考えられる。[膜不透過性試薬の導入法の検討]膜不透過性の信号伝達系の各種特異的阻害剤や様々なケイジド化合物を用いた実験を行うため、加工したガラスピペットを用いて細胞膜の一部を吸引・破壊することでピペット内の化合物を直接導入する方法を検討した。具体的には精子尾部先端からピペットに吸い込み、ピペットと尾部細胞膜が十分接着した後に電圧パルスをかけることによって膜を破壊する方法を試みた。しかし未だ十分な効率で導入できるに至らず、今後さらに改良していく予定である。
体毛構造を応用した触覚拡張インタフェース

本研究では体毛-毛胞受容器構造を模した触覚拡張インタフェースの実現を目的とする。本年度実施した研究の概要は以下である。・身体部位による水面知覚の知覚機序の違い本研究の着想である水面知覚について基礎研究を行い、身体部位による知覚機序の違いを明らかにした。液体に身体を浸した際、水面を線のように触知するという現象は1859年にMeissnerが報告したものである。本研究員らはこの現象について体毛が水面付近で駆動されることでこの触知覚が発生していることを明らかにし、体毛が他の触覚受容器では閾値下である微小な刺激をテコの原理によって知覚を発生させる事例として発表した。この結果は体毛による触覚拡張機構の着想となり、本研究の「体毛-毛胞受容器構造を模した触覚拡張インタフェース」へと発展した。しかしながら前述の水面知覚は体毛の存在しない無毛部皮膚上でも知覚されることも確認されており、無毛部における水面知覚は体毛の寄与では説明できない。今年度はこれについて基礎実験を行い、無毛部においては体毛とは異なる受容器が知覚に寄与していることを明らかにした。・皮膚の弾性体モデルシミュレーション本年の課題は無毛部における水面知覚発生の機序、ひいてはその知覚を生ずる触覚受容器を同定することである。知覚に寄与する触覚受容器を推定する方法は外力により生じる皮膚のひずみエネルギー分布のシミュレーションが知られており、本研究でも水圧、表面張力による皮下のひずみエネルギー分布のシミュレーションを行った。結果として表面張力が水圧よりもはるかに大きなひずみエネルギーを皮膚に与えていることが確認され、無毛部における表面張力の寄与が示唆された。(抄録なし)本研究では体毛-毛胞受容器構造を模した触覚拡張インタフェースの実現を目的とする。本年度は研究計画において示した液体の触知覚増大機構について実装・検証した。本研究で提案する機構では、平面に並べられた人工毛が外界からの微細な刺激により駆動され、皮膚表面への刺激を増強する。Kikuuweら(2005)の開発した触覚コンタクトレンズは、外的刺激の力は十分に強いが変位量が小さすぎて知覚困難な状況に対して力を変位量に変換して知覚を可能にしていた。一方で本機構は十分な変位のポテンシャルを持ちながら力が小さすぎて知覚困難である刺激を閾値以上の刺激強度に変換する。両者は力と変位に着目すると双対な関係を持つ。実装に際して様々な素材を用いて試作を行い、挺子の支点となる部分にシリコンシート、受動駆動毛として光ファイバを採用した。これらを用いて体毛-毛包受容器構造を模倣した装置を製作した.触覚増強機構を用いることで、実際に皮膚で知覚される力が増強する事を確かめるため、Sato(報告者,2010)らによって報告された、有毛部で水面をリング状に知覚する水面知覚の現象を用いて検証を行った。本機構を用いることで様々な刺激の増大が期待できるが、微風や流体は環境のコントロールが難しく、実験環境の統制とその信頼性を担保することが困難である。その点、水面は環境条件の統制が非常に簡易に行える。また、水面の鮮明さという尺度で容易に評価を行うことができる。よって検証では実装パラメータを水面知覚に適応させ、受動駆動毛を剛体と仮定したときの外力増幅率が最大24倍となる装置を製作して検証し、本機構の有用性を示した。提案する機構について実際に装置を製作し、有効性が確認された。これは当初の計画通りといえる。同時に、試作の課程で設計パラメータ決定の困難さも確認され、機構の適用対象に応じた慎重な設計が次年度の課題である。提案機構を音響領域で実用化するため、パラメータの決定を行う。
多様な神経個性を分子コード化する嗅覚シグナル機構の解明

マウス嗅覚系において、嗅細胞で発生する神経活動は発現する嗅覚受容体の種類に応じた回路構築を制御する。同一の受容体を発現している嗅細胞の軸索を収斂させるためには、神経活動が何らかの形で受容体の種類という情報を表現する必要があるが、この過程がシナプス後細胞に依存せず起こる細胞自律的なものであることから、嗅覚受容体の情報はヘブ則に依らない新規の機構により表現されていると推測された。そこで我々は、高速カルシウムイメージング法を用いて嗅細胞で生じる神経活動の多細胞同時計測を行い、その活動記録を用いた統計学的解析を行うことで、従来のヘブ則に当てはまらない新規の活動依存的回路形成モデルの構築を目指した。マウス嗅覚系では、同一の嗅覚受容体(OR)を発現する嗅細胞は、互いにその軸索を収斂させ嗅球の特定の糸球体へと投射する。ORは神経活動を介して軸索選別分子の発現レベルを調節することで軸索の収斂を制御している。本研究課題では、さらに一次嗅細胞において軸索選別分子がOR依存的、かつ神経活動依存的に制御されるメカニズムを明らかにする。申請者は、ORの種類依存的かつ神経活動依存的に制御される軸索収斂分子群を複数同定してきた。Kirrel2、Semaphorin7A (Sema7A)、OL-protocadherin (OLpc)、protocadherin-17(pcdh17)はいずれも嗅細胞の軸索投射先である嗅球においては、糸球特異的かつモザイクな発現パターンを示す。本年度はこれらOR特異的かつ神経活動依存的に制御される軸索収斂分子群の遺伝子改変動物を用いた機能解析および発現解析を行った。前者については、嗅細胞の一部の集団でのみ機能分子Kirrel2がノックアウトされたマウスを解析した。同じORを発現していても、Kirrel2発現細胞とノックアウトされた細胞とは別個の糸球体を形成したことから、この分子が嗅細胞の軸索末端の収斂に機能するという仮説が支持された。また、Kirrel2、Sema7A、OLpc、pcdh17に関して、嗅球一個分に相当する糸球体における発現量を定量し、主成分分析やクラスタリングの手法による解析を行った。この結果、神経活動に対して正に発現が制御されている分子の多様な発現パターンにより、糸球体は複数のクラスターへと分離された。この発現パターンの多様性は一次元の軸だけでは説明することが出来ないため、神経活動の中に組み込まれたパターンといった活動量以外の情報が嗅細胞によって読み取られ軸索選別分子の発現が調節されていると推察された。当初の研究計画においては、嗅細胞の軸索投射に関わると予測される分子について、遺伝子改変動物を用いた機能解析を年度計画としていた。実際に、分子の機能解析についてはコンディショナルノックアウトマウスの解析により『軸索末端に提示される分子が嗅覚受容体に特異的な糸球体の分離を規定する』という予測していた結果を得ることができている。これに加えて、当初の研究計画には含まれていなかったものの、嗅細胞の軸索末端に提示される分子群の発現量を糸球体ごとに定量し、得られた大規模データを主成分分析、クラスタリングの手法を用いて解析することで分子の発現量の関係性を初めて明らかにすることができた。このデータにより、本申請課題における『嗅細胞の軸索末端における分子コードが軸索配線の特異性を規定する』という仮説にデータの実証を与えることができている。本年度は、遺伝的カルシウムインディケーターであるGCaMP6fを嗅細胞に発現させた遺伝子改変マウスを用い、カルシウムイメージングにより神経活動と発現する嗅覚受容体の種類との対応関係を検証することを目的として実験を行なった。この結果、神経回路構築が生じる出生直後の自発的活動を観察することに成功しており、さらに、この観察結果より『一次嗅覚系の回路形成時期においてはこれまで視覚系を始めとした他の脳領域で知られているような神経発火の同期性は寄与せず、むしろ神経活動のパターンが重要である』という示唆を得た。同時に、嗅覚系の回路構築に影響を与える神経活動のパターンを解明するためには、当初の研究計画よりも長期にわたって嗅細胞の神経活動の記録を行なう必要があると推測された。このため、長期観察可能とするイメージングシステムの最適化を行なった。延長期間においてはこの最適化されたシステムを用いて複数種類の嗅覚受容体と神経活動パターンの相関関係を明らかにする。さらに、嗅細胞において、神経活動に駆動されるシグナル伝達分子の発現を組織学的手法を用いて検証した。嗅細胞での発現が確認されたシグナル伝達分子については、当研究グループで開発したex vivoの嗅細胞培養系を用いて回路構築に与える影響を薬理学的手法を用いて検討し、いくつかの候補分子を同定することに成功している。これらの候補分子の機能解析は延長された期間内に遺伝子改変動物を購入して行なう予定である。本年度は、カルシウムイメージングにより神経活動と発現する嗅覚受容体の種類との対応関係を検証することを目的として実験を行なった。カルシウムイメージングによる神経活動の解析から、当初の予定よりもより長期にわたって神経活動の記録を行なう必要があるという示唆をえた。このため、長期観察可能とする実験システムの最適化を行なった。前年度までに、遺伝的カルシウムインディケーターであるGCaMP6fを嗅細胞に発現させた遺伝子改変マウスを用い、カルシウムイメージング法を用いて神経回路構築が生じる出生直後の自発的活動を観察する実験系を構築した。

本年度は、この実験系を利用し、特定の嗅覚受容体を発現する嗅神経に着目して実験を行なった。特定の嗅覚受容体を発現する嗅神経について、カルシウム流入イベントの観察される頻度、イベント間隔など複数のパラメータに関して定量データを抽出し多変量解析を行なった結果、発現する嗅覚受容体の種類ごとに神経活動(カルシウム流入)のパターンが異なっていた。加えて、この神経活動パターンの変化は、上流のプロモーターは同一の条件下で、発現する嗅覚受容体の種類のみを変化させた2種類の嗅神経においても観察された。これらの観察結果は、『嗅神経においては発現嗅覚受容体の種類にしたがって固有の神経活動パターンが規定される』という仮説を支持している。さらに、嗅神経において、神経活動下流で回路構築に関わる細胞接着遺伝子群(Kirrel2、OLPC、Sema7A)に関しては、前年度までにex vivoの嗅神経培養系を利用し、神経活動・カルシウム依存的に活性化するシグナル分子がその転写制御に関わるという示唆を得ている。本年度は、これら一連の候補分子の機能解析を、各遺伝子のノックアウトマウスを用いて行なった結果、Kirrel2の発現に影響を与えるシグナル伝達分子を同定することに成功した。このノックアウトマウスでは、Kirrel2の発現が大幅に減少する一方で、OLPCおよびSema7Aの発現は減少しなかった。神経活動パターンの解析と併せて考えると、『神経活動パターンは特定のシグナル分子の活性化を誘起し、嗅覚受容体特異的な細胞接着分子の発現パターンへと変換される』と考えられる。マウス嗅覚系において、嗅細胞で発生する神経活動は発現する嗅覚受容体の種類に応じた回路構築を制御する。同一の受容体を発現している嗅細胞の軸索を収斂させるためには、神経活動が何らかの形で受容体の種類という情報を表現する必要があるが、この過程がシナプス後細胞に依存せず起こる細胞自律的なものであることから、嗅覚受容体の情報はヘブ則に依らない新規の機構により表現されていると推測された。そこで我々は、高速カルシウムイメージング法を用いて嗅細胞で生じる神経活動の多細胞同時計測を行い、その活動記録を用いた統計学的解析を行うことで、従来のヘブ則に当てはまらない新規の活動依存的回路形成モデルの構築を目指した。今後の実験(1)神経活動に駆動されるカルシウム動態の解析神経細胞の電気的興奮は、細胞内における一過的なカルシウム濃度の上昇をもたらす。従って、このカルシウム濃度変化をモニターすることによって細胞の神経活動を間接的,視覚的に検出することができる。そこで本研究では、近年開発された反応速度の速いカルシウム応答性蛍光タンパク質(GCaMP6f)を嗅細胞特異的に発現させたマウスを用いてイメージングを行い、嗅細胞でのカルシウム動態を観察する。このシステムを利用し、特定のORを発現する嗅細胞におけるカルシウム動態の記録を行う。具体的には、MOR23プロモーター下流から特定のORとCre組み替え酵素を同時に発現させるトランスジェニックマウスを作成し、組み換え酵素の発現依存的にGCaMP6fを発現するマウスと掛け合わせる。特に、カルシウム動態のパターンと発現するORの種類・軸索収斂分子の発現量との比較を重点的に行い、ORに応じた特異的パターン、及び収斂分子の発現誘導に必要なパターンを抽出する。
植物・昆虫インターフェイスで繰り広げられる分子間相互作用

本研究において、イネ-植食性昆虫間の相互作用解析を行う上で、有用な研究基盤を構築した。イネの防御応答において、OsJAR1を介して植物ホルモンであるジャスモン酸イソロイシン(JA-Ile)が蓄積すること、またJAやJA-Ileの蓄積は、主要な生合成経路であるリノレン酸量により制御されることを示した。一方で傷害応答との比較解析より、咀嚼性植食性昆虫の吐き戻し液に含まれるエリシターに特異的に応答して蓄積する、新規なフェノールアミド化合物を同定した。さらに、フェノールアミド化合物やROS蓄積を指標に、クサシロキヨトウの吐き戻し液に含まれる、新規と推定されるエリシターの部分精製を行った。イネにおける植食性昆虫の認識機構を解析する上で、植食性昆虫由来エリシター活性成分の簡便な評価系を確立した。エリシター活性評価の指標としてCPとFPを用いて解析を行ったところ、本評価系では500-1000倍希釈したMythimna loreyi口腔分泌物のエリシター活性を測定可能であった。現在、Mythimna loreyi口腔分泌物由来エリシターの精製を進めている。イネのジャスモン酸シグナル伝達に重要なOsJAR1の欠損イネを用いて、防御応答シグナル解析に加え、ジャスモン酸シグナルの種子形成への影響を、OsJAR1欠損イネを用いて解析した。その結果、ジャスモン酸シグナルは防御応答だけでなく、イネの種子形成の制御にも関与していることが明らかになった。イネにおける植食性昆虫の認識および誘導される防御応答の解析を行うために、複数の咀嚼性昆虫(Mythimna loreyi, Spodoptera mauritia, Parnara gutata)や吸汁性昆虫(Nilaparvata lugens)を採取し、実験室内での飼育条件を確立した。さらにイネの昆虫認識に関わる物質の解析を行うために、それぞれの植食性昆虫の唾液成分(Oral secretions, OS)を回収しエリシター活性の評価を行った。評価系として、イネ葉に対してOSを処理する方法を確立した。次いでESI-LC-MS/MS、ESI-LC-TOF/MS解析により、一部の植食性昆虫のOS処理によりイネのジャスモン酸の蓄積およびフェノール化合物を含む複数の代謝物の蓄積が認められた。植食性昆虫による食害時の代謝物蓄積変化を測定し、OS処理による代謝物蓄積と比較したところ似た変化パターンを示したことから、OSを添加による本実験系が植食性昆虫による食害応答の一部を反映していると考えられた。一方でLC-MSを用いてOSに含まれる成分の解析を行った。その結果、典型的な昆虫由来エリシターであるFAClinolenoyl-glutamineがM. loreyi、S. mauritiaのOSに含まることが明らかになった。また植物の防御応答解析シグナルの解析を行う上で、ジャスモン酸シグナルに重要な遺伝子であるOsJAR1欠損イネを得た。OsJAR1欠損イネはジャスモン酸シグナルに重要なジャスモン酸イソロイシンの蓄積が認められなかった。現在、OsJAR1欠損イネを用いて、植食性昆虫由来OSに対するイネの応答および防御シグナル制御機構の解析を進めている。生物学H25年度は、イネの植食性昆虫に対する防御応答解析として、2種の低分子化合物を同定した。さらにそれら応答を指標とした口腔分泌物のエリシター活性測定系の構築を行った。以上のように本研究課題は研究計画に沿っておおむね順調に進展している。初年度は、本研究課題で重要な実験材料となる植食性昆虫の飼育法を確立した。さらに飼育した昆虫より得られた唾液成分(OS)を用いて、イネの防御応答解析を行った。H26年度は、Mythimna loreyi口腔分泌物に含まれるエリシターの同定に向けて引き続き精製を行う。植食性昆虫食害により誘導されたフェノール性アミド化合物の、イネ防御応答における機能解析を試みる。またフェノール性アミド化合物以外の植食性昆虫により誘導される代謝物の同定を行う。ジャスモン酸はイネの防御応答および種子形成に対して機能を有するが、そのシグナル制御機構の解析を行う。エリシター活性の認められた唾液成分(OS)よりエリシター活性成分の単離を試みる。また既知の昆虫由来エリシターであるFAClinolenoyl-glutamineに対する応答解析を行う。もしFAClinolenoyl-glutamineがエリシター活性を示す場合は、受容体解析に向けたビオチン標識したFACの調製を試みる。イネにおけるOS誘導性の防御応答機構の解析として引き続きマイクロアレイを用いた応答遺伝子の発現解析を行う。

課題の一部を次年度に行うこととなったが、研究課題全体としておおむね順調に進展しており、次年度も使用計画に従い研究を推進する。研究課題全体としておおむね順調に進展しており、次年度も実施計画に従い、エリシター精製および植食性昆虫誘導性代謝物の解析を中心に、試薬・分子生物学試薬および消耗品の購入、研究支援者へ人件費として使用する。研究成果の発表および情報収集のため国際会議への参加するため旅費を手当てする。課題の一部を次年度に行うこととなったが、研究課題全体としておおむね順調に進展しており、次年度も実施計画に従い、試薬・分子生物学試薬および消耗品の購入、研究支援者へ人件費として使用する。研究成果の発表および情報収集のため国際会議(International Chemical Ecology Conference, Melbourne, Australia)への参加するため旅費を手当てする。
海洋複合産業の国際的地域間技術交流の可能性

環東海・黄海に位置する4ヶ国・地域(中華人民共和国、韓国、台湾、日本)の海洋複合産業の国際的地域間技術交流の可能性を探るため、今年は(1)台湾における中小企業の国際的展開を含んだ実態調査、(2)共同研究の相手校である華橋大学との意見交換、今後の研究方向についての討論を行なった。従来、我国の中華人民共和国、韓国、台湾に対する立場、意識は支援する側とされる側ということを前提に4ヶ国間の関係が構築されてきたが、昨年の韓国光州市調査、今年の台湾台中市調査から得られた一つの結論は対等、もしくは部分的には相手側が優れていることを前提とした対応が必要であることを痛感させられた。特に繊維、皮革など軽工業においては技術面においても資金面においても三ヶ国の方が我国よりもバイタリティーに豊んでいるようであり、企業間の相互交流など活発化することは4ヶ国、地域いづれにとっても有意義であり、今後その具体化を計る必要性のあることを本年度の調査は明らかにしてくれた。華端大学とは、今後「地域経済」をテーマに更に共同研究を進めていくことを確認した。「地域の歴史と自然」に根ざした長崎・福建間の海洋関連技術開発の可能性に関する調査研究を韓国西海岸をも研究対象に拡大して検討した。この一年間に交流した研究機関は、韓国では全南大学及び湖南大学、福建省では福建社会科学院、福川師範大学、華僑大学である。本年度は日本側から韓国、中国を訪問したので、ペ-パ-として「冷戦後の地域開発と地方大学の役割」を提出,意見交換を行なった。そこでの柱は、(1)ポスト冷戦期、ポストフォーディズム期の並存、(2)多様性に対応する中小企業の潜在的重要性、(3)地域の歴史と自然を生かした産業おこしと国民のニズ、(4)以上のような質好転換期における地方大学の役割の重要性である。以上の問題提出に対する両口の研究機関の対応は以下のようなものであった。韓国では従来国家間でなされてきた外交案件のうち、地域の懸案事項については関連する地方の公共団体の交流、その中でも方向と指針を策定するうえでは地方大学の役割が特に重要であるとの認識が示された。中国・福建省では、特に福建省が海拝開発を21世紀へ向かっての省の重要施策として確定、その具体化へ向けて省をあげて取り組んでいる状況についての説明があり、特に次の二冊の本について招介が行なわれた。
立体高速動画像解析による心筋細胞内の空間的時間的Ca^<2+>動態と収縮の関連性研究

培養心室筋細胞における収縮性の変化要因について検討した。ニワトリ胚より得た培養心室筋細胞の収縮における細胞短縮曲線を、細胞像のvideo信号をwidth analyzer C3160で解析することによって求めた(時間分解能20msec、空間分解能0.2μm)。12日卵胚から得た培養心室筋細胞(12日卵細胞)の細胞外刺激による細胞短縮量はryanodine(25μM)によって30%抑制され、その効果は濃度依存性であった(10^<-7>10^<-5>M)。さらに、弛緩相の延長がみられた。同じく19日卵細胞は70%抑制された。これに対して、5日卵細胞では自発収縮の場合を除いては抑制効果が無かった。また、fura 2-AMを用いた蛍光法によって検出したCa-transientにおいては12日卵の場合ryanodineによる下降相の延長が生じたが、5日卵細胞ではみられなかった。加えて、培養時に一定方向に伸展負荷を与えた場合(6.3%,0.5Hz,24時間)、伸展方向に沿って紡錘形となる形態変化が認められた。以上のデータによって、ニワトリ胚を材料とする培養心室筋細胞のryanodineに対する感受性は発生の進行に伴って亢進しているという結果が得られ、ニワトリ胚心室筋は、発生の進行に伴ってSRが発達し、SRからのCa^<2+>の放出、再取り込みが増大すると結論づけた。培養心室筋細胞の収縮における筋小胞体(SR)の占める役割について、培養材料であるニワトリ胚の日齢による違い及び、自動能発現の影響から比較検討した。培養心室筋細胞の収縮における細胞短縮曲線を、細胞像のvideo信号をwidthanalyzerC3160で解析することによって求めた(時間分解能20msec、空間分解能0.2μm)。12日卵胚から得た培養心室筋細胞(12日卵細胞)の細胞外刺激による細胞短縮量はryanodine(25μM)によって30%抑制され、弛緩相が延長した。また、その効果は濃度依存性であった(10^<-7>10^<-5>M)。ryanodineは心筋SRのCa releasechannelを開固定してSR内のCa^<2+>を枯渇させる試薬である。これに対して、5日卵細胞では自発収縮の場合を除いては抑制効果がなかった。また、収縮に先立つCa-transientをfura2-AMを用いた蛍光法によって検出した。Ca-transientにおいては12日卵の場合ryanodineによる下降相の延長が生じたが、5日卵細胞ではみられなかった。以上のデータによって、ニワトリ胚を材料とする培養心室筋細胞のryanodineに対する感受性は発生の進行に伴って亢進しているという結果が得られ、ニワトリ胚は、発生の進行に伴ってSRが発達し、SRからのCa^<2+>の放出、再取り込みが増大すると結論づけた。さらに、Oregon Green 488 BAPTA-5N,AMによる細胞内Ca^<2+>濃度変化の検出を試みているが、短時間(3時間程度)ではloadingができないため、長時間のloadingができる条件を検討しているところである。
古代日本の儀礼における音楽・芸能奏上の意義

当時の正史・儀式書・記録類の記述から、古代日本の儀礼では「いつ」「どこで」「誰が」「何を」「どのように」演じ、またそれを視て聴いていたのかを明らかにし、更にそれらは「なぜ」だったのかを政治的背景から考察した。具体的に扱ったのは、葬送儀礼、行幸、大嘗祭、正月の大饗、旬儀、五月五日および相撲節の芸能である。その結果、日本では古来在地の芸能は土地の霊力の象徴とされ、それを視て聴くことが支配者たる必須要件であったこと、律令制と同時に中国から支配者の徳を流布するための芸能とその概念が導入された可能性が高いこと、そして前者の概念は近衛府の、後者のそれは雅楽寮の芸能が其々表象していたことを指摘した。以下の2点について資料収集・事例分析を行い、先行研究を批判的に継承して結果をまとめ、学会発表と2.に関しては更に和文と英文の論文投稿を行った。1.行幸と在地芸能(大化前代8世紀)の研究・・・『日本書紀』および『続日本紀』から史実を記すと思われる行幸での芸能の記事16件を分析すると、行幸では「訪れた場所に伝えられる芸能」が「天皇を迎えた側の、在地の人々」によって行われる、という原則がある。先行研究によれば、行幸とは単なる天皇やオオキミの物見遊山ではなく、在地有力者が持つ政治的特権を新たな支配者に譲渡・確認する極めて政治性の高い機会であること、そこでは「その土地で収穫されたものを、支配者の身体に取り込むこと」が土地の霊力を身に着けるために必須の儀礼的行為とされていたことが指摘されている。したがって、行幸で天皇が在地の芸能を「視て聴く」という行為は、土地の霊力を身体に取り込み、新たな支配者としての資格を得る社会的な意義があると考えられ、本来は娯楽的なものではなかったことが指摘できる。2.葬送儀礼の芸能研究(大化前代8世紀)・・・中国の正史の記述から、日本にはいわゆる複次葬の習慣があり、第1次葬の段階で芸能が行われていた可能性が指摘できる。『日本書紀』に見える天皇の葬送儀礼にもそれが窺われるが、允恭天皇の葬送儀礼には、調として新羅から派遣された楽人が歩きながら演奏する、といった当時の外交関係と大陸独特の風習が見うけられる。また、7世紀末に天武天皇の葬送儀礼で行われた様々な芸能には、「殯庭」といった政治的な場で、大和朝廷が氏族ごとに支配を進め、更には大陸から律令政治を取り入れた過程を反映していること、また日本古来の慣習と中国から導入された制度との整合が試みられていたことが指摘でき、この記事を最後に一次葬における芸能が見られなくなるのも、中国の礼制にしたがった結果と判断できる。1.「元日節会」「二宮大饗」「大臣大饗」「御斎会(みさいえ)」「定考(こうじょう)・列見(れけん)」と雅楽寮の奏楽に関する研究前三者は、天皇、中宮・東宮、左右大臣、といった朝廷の頂点にある人物がそれぞれ年頭に主催する饗宴儀礼、また御斎会は朝廷が関与する仏事として最も大規模かつ公的な法会、定考・列見は太政官に勤務する官人の昇進手続きとしての政務儀礼である。これらは全て律令的秩序に基づく儀礼であり、雅楽寮のみが奏楽を行う、といった2つの共通点を持つ。一方、左右大臣の私邸で開催される大臣大饗以外は全て内裏で行われているが、そこには天皇も臨席しないため、この場合は、雅楽寮が「派遣」されたことを意味する。左右大臣がそれぞれの私邸で年頭に行っていた「臨時客」という饗宴儀礼、および「御斎会に准ず」との決定を天皇から受け、雅楽寮が派遣された大内裏以外の場所で行われた儀礼と、上記の儀礼とを比較し、「律令的秩序に基づく儀礼を司る律令的機関としての雅楽寮の奏楽」が、さらに天皇の徳を垂らしめるため、移動と設置・解除が可能な装置として積極的に機能していた可能性を指摘。25年7月、雑誌『音楽学』へ投稿予定。2.旬儀における近衛府の奏楽と中国の定期入朝制の比較旬儀とは、毎月1・11・16・21の各日に、天皇が紫宸殿に出御して政務を視、参集した臣下たちとその後饗宴を行う宮廷行事を指す。そこでは近衛府が奏楽を行う習わしである一方、その淵源とされた中国の所謂定期入朝制では、饗宴や奏楽は行われない。

何故中国の定期入朝制には存在しなかった奏楽が日本の旬儀では行われたのか、更に何故旬儀では近衛府が奏楽を担当しなければならなかったのかを考察し、近衛府による奏楽が当時の日本・中国それぞれの宮廷における君臣関係の差異を反映している可能性について検証。第10回日中比較音楽国際研究学術会議(3月、東京)にて研究発表。1.大嘗祭の芸能に関する研究平安初期の儀式書『儀式』には、大嘗祭で様々な芸能が行われていたことが記されている。18世紀初頭に復元された久米舞は、元来山野での狩猟・採取生活を歌っていたことが国文学の先行研究によって既に指摘されている。また、久米舞と対になって奏される吉志舞は、水軍・外交を司る一族によって伝承・奏上されているため、久米舞=山の民、吉志舞=海の民による一対の歌舞が想定される。この概念は国栖奏と隼人舞の組み合わせにも合致する上、山・海の民から貢献を受けることは支配者として必須の条件であるとの指摘も文献史学からなされている。一方、大嘗祭で天皇が食する米を貢献する悠基国と主基国もそれぞれ在地芸能を行っていることから、収穫祭でもあるが故生物を口にすることができない天皇が、王権就任儀礼に臨む支配者として必須とされる山海の収獲物を取り込む手段として、久米舞と吉志舞が奏上された可能性が指摘できる。2.中国の百戯とその日本への影響百戯とは古代中国において行われていた音楽を伴う相撲、軽業、幻術、仮装などの見世物である。渡辺信一郎の研究成果および後漢期の墓壁画を参考に、正史などの記事を分析すると、中国は制した異民族の芸能を吸収し、国家的に伝承していたことが指摘できる。『隋書』礼楽志に見える大業6年正月の洛陽において行われた大規模な百戯の記事からは、それらを異民族にひけらかし国力を誇示せんとする煬帝の意図が窺える。一方、日本でも百戯が行われていたことは、吉田早苗が検証した9世紀の相撲節会の記事や「古楽図」(所謂信西古楽図)に明らかである。発足間もない7世紀末の踏歌節会にも既に百戯を窺わせる記事が見られること、相撲節会では多数の楽人も奉仕していたことから、日本では大業6年洛陽の百戯に影響を受け、同時期の踏歌節会と、一年両分性の原理で7月の相撲節会の双方が成立した可能性が指摘できる。日本音楽史当初予定していた「奉献的儀礼と左右近衛府の奏楽に関する研究」の事例収集と分析に時間がかかり、論文投稿にまで結び付けられなかった。一方、「1.行幸・宴と在地芸能(大化前代8世紀)の研究」および「2.葬送儀礼の芸能研究(大化前代8世紀)」に係る国際学会発表はそれぞれ2度行うことができた。前者に関しては、初めて日本学の分野での学会に参加し、今までの研究領域を超えた幅広い分野から意見交換ができた。この経験は、成果を論文として纏める際に大変有効であると思われる。また、後者に関しては当初予定していなかった英文での論文出版が決定し、より効果的な成果発表ができた。25年9月開催予定であった第10回日中比較音楽国際研究学術会議が3月に繰り上げて東京で開催されたため、25年度分の研究として計画していた「2.旬儀における近衛府の奏楽と中国の定期入朝制の比較」の検証を前倒しで進め、発表することができた。会議では、他の参加者との意見交換を行い、儀礼のあり方や記録の性格、とりわけ儀礼の実態の時間的な変遷と近衛府・雅楽寮の位置づけなどに関し、論文として投稿する際に極めて有用なヒントを得ることができた。その一方、前述の会議の繰り上がり開催とそこで発表する研究への時間を捻出するためICTM東アジア音楽研究シンポジウムへの参加を見送った。加えて、1年ほど前から発表が決定していた東アジア比較文化国際研究会議の開催が無期延期となり、その結果「1.『元日節会』『二宮大饗(にぐうのだいきょう)』『大臣大饗』『御斎会(みさいえ)』『定考(こうじょう)・列見(れけん)』と雅楽寮の奏楽に関する研究」に関しての検証と考察が思うように進まず、論文投稿の時期が25年度にずれ込んでしまった。