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熱可塑性樹脂をベースとした接着剤の新しい接着耐久性評価法に関する研究

熱可塑性樹脂をベースとした水性高分子イソシアネート(API)、架橋型ポリ酢酸ビニル樹脂(MPVAc)などは加熱、高温下では架橋の構造の大小により、接着性能やクリープ性能が懸念される。そこでまず架橋型接着剤の動的粘弾性と促進劣化処理後の接着強さを検討した。API接着剤は常温に放置しておくと架橋が緩やかに進行し、その傾向は架橋剤の多い系ほど顕著に現れた。実際の接着性能試験によると常温硬化1日目のような短期間の養生では、煮沸試験処理を行うと煮沸の際の温度の影響を受けて接着強さが逆に増加することが明かになった。しかし7日以上の養生日数をとれば上記のようなことは生じなく、促進処理によって接着性能評価ができることが解った。一方、ブロックせん断試験片を用いる米国のASTM D4680-92法を採用して上記の接着剤の耐クリープ性の評価法について検討した。常態のブロックせん断接着強度の5080%の荷重レベルの応力を一定の温湿度条件下で掛けることによって、耐クリープ性能が評価でき、しかも比較的短期間(1ケ月)でできることが解った。架橋型の接着剤とくに接着性能が高いAPI接着剤(架橋剤15部以上添加)はレゾルシノール樹脂と同等の性能があることが明らかとなった。この結果、この小型の接着したブロック型試験片を用いる耐クリープ試験法が種々の木材接着剤に応用できることを見いだした。熱可塑性樹脂はその名称のとおり加熱、高温下に存在すると可塑性を帯び、樹脂接着剤は軟らかくなる。これらの樹脂をベースとしたポリ酢酸ビニル(PVAc)樹脂、変性ポリ酢酸ビニル(MPVAc)樹脂、水性高分子イソシアネート(API)樹脂などがある。これらは接着耐久性試験などを行なう際に、温水、煮沸繰り返し処理などが行なわれる。しかし、熱可塑性樹脂をベースとしているため、従来の試験方法では十分ではないことが指摘されてきた。本研究ではこれらの樹脂の硬化条件と接着剤フィルムの物性との関係を粘弾性測定、熱分析により検討した。その結果、とくにMPVAcの中で架橋型PVAcでは硬化温度が低い場合、硬化架橋が不十分なことがあり、その場合に荷重をかけた接着試験片のクリープ特性に明らかに影響することが認められた。一方、APIはその架橋剤添加量によって物性が大きく異なり、架橋剤量が主剤に対し10部以上添加されれば、荷重レベルが破壊荷重の80%にしても720時間(1カ月)経過しても破壊に至らない。また、架橋剤量が少なければ(35部)荷重レベルによっては早期に接着破壊する。また、PVAcは荷重レベルが30%で同時間では破壊に至ることが明らかとなった。次年度はさらに接着性能との関係を明確にする予定である。熱可塑性樹脂はその名称のとおり、加熱、高温下に存在すると可塑性を帯び、樹脂接着剤は軟らかくなり、接着性能やクリープ性が懸念される。水性高分子イソシアネート(API)、架橋型ポリ酢酸ビニル樹脂(MPVAc)など熱可塑性樹脂をベースとした架橋型接着剤の動的粘弾性と促進劣化処理後の接着強さを検討した。しかし7日以上の養生日数をとれば上記のようなことは現れなく、接着性能評価ができることが解った。一方、米国のASTM D4680-92を採用して上記の接着剤の耐クリープ性の評価法について検討した。常態のブロックせん断接着強度の5080%の荷重レベルの応力を一定の温湿度条件下で掛けることによって、耐クリープ性能が評価できることが解った。架橋型の接着剤とくに接着性能が高いAPI接着剤(架橋剤15部以上添加)はレゾルシノール樹脂と同等の性能があることが明かとなった。
新たに同定した血管新生関連遺伝子群の解析とシグナル抑制による癌冬眠化治療の開発

癌進展には血管新生が必要不可欠であることが従来より指摘されてきたが、その成立には様々な分子が関与していることが知られている。我々は多血管性肝癌臨床検体から、その高発現遺伝子としてTie2リガンドAngiopoietin-2をクローニングし、動物モデルを用いてその血管新生への関与を証明した(Tanaka et al. J Clin Invest 1999)。本研究では、まず肝細胞癌の臨床組織を用いた解析により、肝細胞癌の新生動脈血管において特異的にTie2が発現していることを証明した。次に、Tie2を発現している血管内皮細胞にAngiopoietin-2を作用させると、Tie2とp85 PI3K, Grb7との結合が増強し、survivin発現が亢進することを確認した。血管内皮細胞はAngiopoietin-2により細胞増殖能には変化を示さなかったが、アポトーシス抵抗性を獲得した。soluble Tie2遺伝子導入によりAngiopoietin-2シグナル伝達系は抑制され、マウス腫瘍モデルにおいて肝細胞癌のtumor dormancyを誘導することを見い出した(Tanaka et al. Hepatology 2002)。現在、Angiopoietin-2/Tie2シグナル伝達系を分子標的とした遺伝子治療の開発を始めている。即ち、レセプター結合ドメインを欠損させた細菌外毒素遺伝子とAngiopoietin-2のキメラ遺伝子を作製し、血管内皮細胞培養系とマウス肝細胞癌モデルを用いた解析により、殺細胞効果や抗腫瘍効果について研究を進めている。概要
学生実験指導における効果的な動画教材作成と評価の研究

eラーニングは世界中で使われており、そのeラーニングを学生実験に適用できないか検討を行った。通常eラーニングは絵コンテなどを作る必要があるが、本研究では、撮影されている動画から必要な部分を自動で切り取る方法を検討した。自動で切り取る方法には、パターンマッチングと輝度差を利用した。その結果、輝度差を用いた方が制度がよいことを得た。工業高等専門学校の実験は、実践的技術者の育成を目標として単位数が多く割り当てられている。一方で実験に関した改善が行なわれた事例は少ない。改善要素の1つに、実験機材の扱い方が挙げられる。実験の時に実験機材の扱い方が判らず時間を費やす場合などがある。そこで本研究の目的は、工業高等専門学校の実験を改善する目的として、実験・実習において機器の取り扱いが上手な学生のコツを明らかにすることにある。そのコツとは、注視点の場所と時間だと推測する。事実、過去の研究で実験機材になれている学生の手の移動軌跡は至ってシンプルであることがわかっている。言い換えれば、必要な箇所以外操作しない→必要な場所を見ない→必要な操作方法を知っている→コツと考える。このコツを動画抽出し、WEBを用いたe-Learningとして公開することで実験機材の扱い方が不慣れという問題を解消できると考える。平成21年度では、プログラムの完成を目標とした。Windowsプログラムはあまり得意でないので外部から講師を招いて勉強会を行なった。撮影した動画から必要な箇所(静止)を抽出することは難しい。人間は自然と頭が動いている為、本人は静止していると思っている箇所でも数ピクセルは移動している。単純な背景差分では抽出できない。このため、時間単位で移動ピクセル量を計算して積分を行ない、時間単位の移動量を計算する。移動量がある一定の量を超えた場合、その区間を「動画」とし、それ以外を「静止」とした。現時点では、プログラムは完全に完成していないが目処はついたので来年度完成・試験運用とする。動画像から必要な動画部分を切り取ることに成功した。方法は、撮影した動画ファイルを読み込み,1フレーム毎の静止画を得る.動くシーンの検出は,現在のフレームと過去のフレームとのパターンマッチングかまたは輝度差を用いる.人間の頭は静止していると思っていても実際には多少動いている.単純にパターンマッチングまたは輝度差を算出をしただけでは,全てのフレームが移動していることになるので一定の閾値を設ける.またこのままでは移動量がトゲ状となり,精度が安定しない.そのため15フレームの移動平均を算出し,さらにLPF(Low Pass Filter)をかける.LPFを適用することで高周波成分のノイズが取れていることが判る.LPF適用後の値に対して閾値を設けて,移動量が大きい(動いているシーン)と移動量が少ない(静止しているシーン)の判別を行ない,移動量が少ない箇所のみ動画ファイルで書き出す.これら一連の作業が自動的に行えるようになった。
ロリクリン欠損が末梢免疫に与える影響

角層の主要な蛋白質であるロリクリンを欠損するマウスでは、透過性亢進によって化学物質塗布による皮膚炎の悪化が予想された。予想通り、アレルギーの表現型を呈しやすいBALB/c背景では、アトピー性皮膚炎様あるいは尋常性乾癬といった代表的な皮膚炎の悪化に関連する所見が得られた一方で、c57BL/6あるいはFvB背景では、一次刺激性皮膚炎、ハプテン誘発性の皮膚炎といった代表的な皮膚炎モデルでは炎症が反対に抑制され、その抑制は表皮ランゲルハンス細胞の欠損によって一部解除された。本研究は、表皮組織状態に依存して免疫反応(エフェクター機能)が制御されていることを示す、画期的な結果である。ロリクリン欠損(LKO)マウスではイミキモド誘発皮膚炎モデルにおいて、有意に皮膚炎が強くみられた。特に皮膚の腫脹と角化が強く見られた。耳介皮膚に機械的刺激を与え、炎症関連因子の遺伝子発現をリアルタイム定量PCRで解析した。LKOマウスでは、機械的刺激に応じて、野生型と比較して、インターロイキン1bやTNFα、インターフェロン1αの発現が有意に増加していた。さらに定常状態においては、ランゲルハンス細胞のマーカーであるランゲリンと、形質細胞様樹状細胞のマーカーであるBST2も野生型と比較して発現増強していた。BST2で定常状態の耳介皮膚を免疫染色すると、LKOマウスにおいて真皮内に樹状の形態の細胞がより多くみられた。さらに、マウスの表皮バリアが完成する胎生17.5日において、同様の変化が見られるかを、背部より採取した皮膚の遺伝子発現により検討した。しかし、ランゲリン、BST2ともに差はなかった。一方で、出生後24時間と96時間の背部皮膚で検討したところ、後者において、LKOマウスにおけるインターロイキン1bとインターフェロン1αの発現増強がより目立つようになっていた。マウスにおける樹状細胞のネットワークが、胎生7日程度で急速に完成することを考えると、ロリクリンの欠損は、出生後の自然免疫機構の発達そのものに影響を与えている可能性を示唆し、樹状細胞の増加はバリア不全に適応した出生後反応である可能性を示唆した。今回の結果からは、ロリクリンの欠損が、外来抗原に対する反応のみならず、骨髄細胞分化そのものにも影響している可能性が示唆された。LKOマウスにおける樹状細胞の増加は、当初予想していたものではなかったが、機械的刺激に応じたサイトカイン産生の増加や、高分子抗原に対する経皮感作の亢進や紫外線感受性の増加等を説明することのできる所見である。ロリクリンの欠損が末梢免疫に与える影響を、主として皮膚炎モデルを用いて検討した。皮膚炎、アレルギーをきたしやすいBALB/c背景では、予想通りアトピー性皮膚炎モデルや尋常性乾癬モデルの炎症増悪が見られた。これは、人の1番染色体に存在し、ロリクリンを含め多くの角化関連の遺伝子座が存在するEpidermal Differentiation Complexに見られる一塩基多型と一致するものと考えられた。一方で、細胞性免疫反応を来たしやすいc57BL/6背景では皮膚炎は増悪せず、ハプテン誘発性の接触過敏症において、興味深いことに反応はむしろ抑制されていた。また、表皮ランゲルハンス細胞を欠くロリクリン欠損マウスでは、炎症反応の抑制が解除された。今回の検討が示唆するものとして、以下の二点を挙げた。一つ目として、ロリクリンの欠損が単なる表皮の構造的脆弱性から、自然免疫の活性化を来たしやすいこと。二つ目として、表皮においては角化細胞と骨髄系細胞との相互作用を介する内因性炎症制御機構が存在すること。特に二つ目の機構を検討することによって、表皮細胞間の相互作用の分子機序が明らかになる可能性がある。今回の検討で得られた知見を足がかりとして、最終的には皮膚を場とする末梢免疫制御機構の解明と、アトピー性皮膚炎や尋常性乾癬、あるいは皮膚炎を始まりとするアレルギー疾患のの新規治療薬の創出に繋げることを目標とする。表皮特異的にランゲルハンス細胞を欠くランゲリンDTAマウス、胸腺外分化/表皮在住リンパ球であるγδT細胞を欠くTCRDマウスをLKOマウスと交配することによって、機械的刺激に対する反応などから、角化細胞と骨髄系細胞との相互作用を生体内で明らかにしていく。29年度が最終年度であるため、記入しない。皮膚バリア、アレルギー29年度が最終年度であるため、記入しない。
安定三重項カルベンの創製とその安定高スピン分子への展開

三重項カルベンは高スピン分子の構成単位として有用であることが示されているにもかかわらず、まだ安定に単離されていない。我々はこれまでの研究によって、立体保護による速度論的安定化が三重項カルベンの安定化に対して有効であることをみいだし、室温溶液中で数分の寿命を持つものの発生に成功している。そこで本研究ではこの手法をさらに展開し、室温溶液中で時間単位の寿命、望ましくは完全に安定な三重項カルベンを創製することを第一の目的とする。そしてこのようにして合成した安定カルベンを構成単位として持つ高スピン分子を創製し、その特性化を行うことを第二の目的とした。(1)三重項カルベンは非常に反応性が高いので、通常の保護基とは反応してしまう。そこで三重項カルベンに特異な保護基の開発が必要とされる。本研究ではこのような観点からトリプチシル、ビシクロオクチル等の三次元アルキル基、ブロモ、トリフルオロメチル等ヘテロアトム置換基などを開発した。そして現在のところ室温溶液中で寿命20分、完全に消失するまでに1時間以上を要する長寿命カルベンの合成までこぎつけることができた。(2)このような研究の最中に、安定カルベンの前駆体ジアゾ化合物もまた安定であることをみいだし、種々の化学操作に耐えうることを示した。これによって、ジアゾ化合物を構成単位として望む位置に望む個数連結できることを明らかにした。このような手法によって種々ポリジアゾ化合物を合成し、そこから発生するポリカルベンの基底状態多重度を特性化した。その結果、現在のところ基底13重項のヘキサカルベンの合成にまで成功している。(1)三重項カルベンはH引き抜きにより失活するため、通常のアルキル基は保護基としては有用ではない。ビシクロアルキル基は、その橋頭位C-H結合のH供与能が低く、さらにアルキル鎖は外部試薬の接近を防ぐので、三重項カルベンの保護基として有用である。そこで本年度はビシクロ[2.2.2]オクチル基を保護基として持つ三重項ジフェニルカルベンを発生させその寿命測定を行ったところ、全炭素化水素カルベンとしては初めて1秒をこえる寿命のカルベンであることを明らかにした。(2)CF結合はカルベンと反応しない唯一の結合と考えられる。そこでオルト位にCF_3基を持つ一連の三重項ジフェニルカルベンを発生させ寿命測定を行った。その結果、オルト位に2個のCF_3基と2個のBr基を持つものが寿命20分近い非常に長寿命のカルベンであることを明らかにした。(3)このようにして合成した安定カルベンの前駆体ジアゾ化合物もまた安定であり、化学操作に耐性があることをみいだしたので、ジアゾ化合物を強磁性的に連結する手法について検討した。その結果、エチニル基を導入し、ポリ(ヨード)ベンゼンとカップリングさせていく方法が非常に有用であることを見出し、現在この手法を展開しポリジアゾ化合物の合成を行っている。

我々はこれまでの研究によって、立体保護による速度論的安定化が三重項カルベンの安定化に対して有効であることをみいだし、室温溶液中で数分の寿命を持つものの発生に成功している。そこで本研究ではこの手法をさらに展開し、室温溶液中で時間単位の寿命、望ましくは完全に安定な三重項カルベンを創製することを第一の目的とする。そしてこのようにして合成した安定カルベンを構成単位として持つ高スピン分子を創製し、その特性化を行うことを第二の目的とした。(1)三重項カルベンは反応性が高く、通常の保護基とは反応してしまうので、特異な保護基の開発が必要である。前年度に引き続いて、この保護基の開発を行った。そしてジ(トリプチシル)カルベンや2,2',6-トリス(トリフルオロメチル)ジフェニルカルベンの発生に成功した。しかし、寿命は前年度に発生した20分には及ばなかった。2,2',6,6'-テトラキス(トリフルオロメチル)ジフェニルカルベンが最も安定と予想されるので、このものの合成に全力を注いでいる。(2)前年度に引き続いて、安定カルベンの前駆体ジアゾ化合物も安定であることを利用して、ポリジアゾ化合物の合成と、そこから発生するポリカルベンのスピン多重度の特性化を行った。現在のところジアゾ単位を6個まで連結することに成功しており、そこから発生するヘキサ(カルベン)が基底13重項であることを明らかにした。この手法を展開すればさらに高次ポリジアゾ化合物の合成にまで応用できることを示唆した。
癌化抑制に関与する転写制御機構の解析

癌抑制遺伝子産物RBの標的である転写因子E2Fが、細胞増殖を促進する遺伝子と抑制する遺伝子を制御仕分ける機構の解析を行っている。これまでの研究でRBの機能不全によって生じた「制御を外れたE2F」は、RBの制御下で活性化された「生理的なE2F」が活性化しない癌抑制遺伝子を特異的に活性化することが分かっている。本研究では癌化抑制に重要なE2F1に注目して機能の異なるE2F1の生化学的違いを調べており、制御を外れたE2F1は生理的なE2F1よりも低リン酸化型である可能性が示唆された。本年度は、生理的なE2F1と制御を外れたE2F1で異なるリン酸化部位の同定を試みた。リン酸化を受け得る70か所のアミノ酸を各々リン酸化を受けないアミノ酸に置換したE2F1変異体を作成し、ウエスタンブロットにおける移動度で全てのE2F1変異体のリン酸化の程度を、レポーターアッセイで標的プロモーターの活性化能を、野生型E2F1と比較した。その結果、E2F1の転写活性化領域に存在するセリン375と403のリン酸化が、高リン酸化型のE2F1が生じるために必要であることが明らかになった。これは生理的なE2F1と制御を外れたE2F1の質的違いを示唆する初めての知見である。更にE2F1のリン酸化を行うものとしてCyc/CDKを予測し、CycD1/CDK4が生理的および制御を外れたE2F1活性に及ぼす影響を検討した。E2F1とCycD1/CDK4を共に過剰発現させると、E2F1単独で過剰発現させた時と比較して、制御を外れたE2Fで特異的に活性化されるARFプロモーターの活性化が抑制された。逆に、生理的なE2Fで活性化される増殖関連遺伝子Cdc6プロモーターの活性化は増強された。以上から、増殖刺激によって活性化されるCycDl/CDK4が生理的な高リン酸型E2F1を生み出すのに関与する可能性が示唆された。E2F1のリン酸化を受け得るアミノ酸70か所の各々または24か所の組み合わせで置換した変異体を全て作成し、これらの変異体による標的プロモーターの活性化能およびウエスタンブロットにおける移動度の違いを検討し終えた。その結果、セリンの375番と403番の変異体は、標的プロモーターの活性化能が増強し、かつ最も移動度の遅い高リン酸化型のバンドが検出されなくなることを明らかにした。RBの制御を外れたE2F1と生理的なE2F1を区別するリン酸化部位が絞れたので、E2F1のセリンの375番と403番に対するリン酸化部位特異抗体を作成する。その抗体を用いてウエスタンブロットを行い、E2F1を過剰発現させたサンプルや、アデノウイルスE1aによって内在性のE2Fを制御を外れて活性化させたサンプルにおいて、E2F1のセリン375番と403番のリン酸化が検出されなくなるか否かを検討する。癌化の原因となるRBの制御を外れたE2Fは癌細胞特異的に存在し、癌細胞を正常細胞から識別する指標として応用できる可能性がある。この制御を外れたE2Fが生理的なE2Fと質的にどのように異なるのかを明らかにするために、E2Fファミリー分子の中でも最も癌化抑制に重要と考えられるE2F1の修飾の違いを調べた。ウエスタンブロット法においてE2F1のバンドは複数本検出でき、脱リン酸化処理をすると全てのバンドは泳動度のより速い1本のバンドに収束した。従って、E2F1はリン酸化を受けていることが明らかとなった。E2F1の過剰発現又はアデノウイルスE1aによるRBの強制的な不活性化によってRBの制御を外れたE2F1活性を生じさせると、泳動度の速いバンドが増加した。これより、RBの制御を外れたE2F1は生理的なE2F1に比べて低リン酸化型であると考えられる。そこで、質量解析を用いてE2F1のリン酸化部位を同定するために、E2F1を発現誘導可能な細胞株を作成している。また、E2F1のN末端領域を欠損させるとRBの制御を外れたE2Fで特異的に活性化される癌抑制遺伝子ARFプロモーターの活性化が減少した。このE2F1欠失変異体はDNA結合領域と転写活性化領域を保持しているため、RBの制御を外れたE2F1のN末端領域が癌抑制遺伝子の活性化に寄与している可能性が示唆された。また、RBの制御を外れたE2Fが癌抑制遺伝子p73を特異的に活性化することを見出し、E2F反応性エレメントを同定した。更に、癌細胞株には、p73遺伝子を活性化するRBの制御を外れたE2F活性が特異的に存在することを明らかにした。癌抑制遺伝子産物RBの標的である転写因子E2Fは、増殖関連遺伝子だけでなく、細胞増殖を抑制する癌抑制遺伝子も発現誘導する。従来E2Fの標的遺伝子は、増殖刺激で活性化されると考えられていたが、癌抑制遺伝子ARF、p27^<Kip1>、TAp73は、癌性変化の代表であるRB機能欠損によって、RBの制御を外れて活性化されたE2Fで特異的に活性化されることを報告してきた。E2Fによる癌化抑制に関わる転写制御機構を解明するために、E2FによるRBの機能欠損の特異的な感知機構を解析し、以下の結果を得た。

RBの制御を外れたE2F1は、増殖刺激で生理的に活性化されたE2F1に比べて低リン酸化型である知見を得たので、両者のリン酸化の異なる部位を探索した。E2F1のリン酸化され得るアミノ酸17ヶ所をリン酸化されないアミノ酸に置換し、リン酸化の程度と標的遺伝子の活性化の度合いを野生型E2F1と比較した。S337A(337番目セリンをアラニンに置換)変異体で、全体的に低リン酸化型へシフトし、TAp73、ARFプロモーターを野生型より強く活性化したので、S337がリン酸化の異なるアミノ酸の1つである可能性が示唆された。更に18ヶ所のアミノ酸を検討している。また、RBの制御を外れたE2Fが、生理的なE2Fとは異なる因子と相互作用する可能性を検討した。E2F1のN末端欠失変異体は、ARFプロモーターの活性化能が低下した。増殖関連のE2F標的遺伝子CDC6のプロモーター活性化能は低下しなかったので、E2F1が癌抑制遺伝子を活性化する際に、そのN末端と特異的に相互作用する因子の存在が示唆された。免疫沈降法を用いてRBの制御を外れたE2F1と特異的に共沈する因子を検索したところ、p53による標的遺伝子の活性化を増強するDDX5が同定された。E2F1による癌抑制遺伝子活性化におけるDDX5の関与を検討している。癌抑制遺伝子産物RBの標的である転写因子E2Fが、細胞増殖を促進する遺伝子と抑制する遺伝子を制御仕分ける機構の解析を行っている。これまでの研究でRBの機能不全によって生じた「制御を外れたE2F」は、RBの制御下で活性化された「生理的なE2F」が活性化しない癌抑制遺伝子を特異的に活性化することが分かっている。本研究では癌化抑制に重要なE2F1に注目して機能の異なるE2F1の生化学的違いを調べており、制御を外れたE2F1は生理的なE2F1よりも低リン酸化型である可能性が示唆された。本年度は、生理的なE2F1と制御を外れたE2F1で異なるリン酸化部位の同定を試みた。リン酸化を受け得る70か所のアミノ酸を各々リン酸化を受けないアミノ酸に置換したE2F1変異体を作成し、ウエスタンブロットにおける移動度で全てのE2F1変異体のリン酸化の程度を、レポーターアッセイで標的プロモーターの活性化能を、野生型E2F1と比較した。その結果、E2F1の転写活性化領域に存在するセリン375と403のリン酸化が、高リン酸化型のE2F1が生じるために必要であることが明らかになった。これは生理的なE2F1と制御を外れたE2F1の質的違いを示唆する初めての知見である。更にE2F1のリン酸化を行うものとしてCyc/CDKを予測し、CycD1/CDK4が生理的および制御を外れたE2F1活性に及ぼす影響を検討した。E2F1とCycD1/CDK4を共に過剰発現させると、E2F1単独で過剰発現させた時と比較して、制御を外れたE2Fで特異的に活性化されるARFプロモーターの活性化が抑制された。逆に、生理的なE2Fで活性化される増殖関連遺伝子Cdc6プロモーターの活性化は増強された。以上から、増殖刺激によって活性化されるCycDl/CDK4が生理的な高リン酸型E2F1を生み出すのに関与する可能性が示唆された。RBの制御を外れたE2Fと生理的に活性化されたE2Fの作用の違いは、一般的には遊離E2Fの「量」の違いによると考えられている。両者の間に「質的」な違い(リン酸化の程度の違い)があることを初めて見出し、RBの制御を外れたE2F1と生理的に活性化されたE2F1とでリン酸化の異なるアミノ酸部位が、一部ではあるが同定されつつある。また、RBの制御を外れたE2F1が、癌抑制遺伝子を活性化する際にそのN末端領域が重要である知見が得られ、RBの制御を外れたE2Fが特異的に相互作用する因子の存在が示唆された。
ビタミンE転移蛋白遺伝子に点変異を有する脊髄小脳変性症網膜色素変性症の発症機序

α-tocopherol transfer protein(α-TTP)遺伝子の点変異を有する家系より得られた世界初の剖検例の形態的所見と生化学的所見を解析した。二次性ビタミンE欠乏症にみられるように網膜変性とspheroidの出現を伴う脊髄後索dying-back typeの変性に加え軽度の小脳皮質の変性を認め、臨床症状と対応していた。α-TTP遺伝子knock out miceでは上記の脊髄病変に加え、脊髄前角細胞のリポフスチンの沈着と変性が目立った。これらの病変はビタミンE欠乏状態で増悪、過剰投与で軽減したため、α-TTP遺伝子knock outの影響の少なくとも一部は生体内でビタミンE欠乏状態を介して発揮されていると考えられる。長期にわたりビタミンE投与を受けた上記剖検例で測定したビタミンE組織内濃度は小脳以外では正常化していた。小脳には他の部位と異なるビタミンEの代謝経路があり、α-TTPの点変異がそれに影響を及ぼして小脳病変を来した可能性があるが、Knock out miceでは類似の病変はみられず、今後その病態についてはさらに検討を要する。その他の遺伝性小脳失調症についても、核内封入体の形成機序とそれに関与する蛋白についての研究を進めた。特にSCA2,SCA3の原因蛋白であるataxin-2,ataxin-3の局在を剖検脳で検討し、これらrepeat病のみでなくNeuronal Intranuclear hyaline inclusion disease(NIHID)の封入体形成にも関与していることを見いだした。この過程で分子の共存を組織標本上で観察する、蛍光二重染色法を改良し、二種のシグナルの両者を増幅する手法を世界で初めて開発した。今後ビタミンE関連疾患ばかりでなく、組織学的に広く応用可能な方法と考えられる。αTTP遺伝子の点変異を有する家系より世界初の剖検例が得られ、病態を多角的に解析中である。二次的ビタミンE欠乏症で報告された脊髄後索と網膜の病変に加えて、小脳プルキンエ細胞の脱落が軽度ながら見られた点に注目して検索を進めている。実験的に作られたビタミンE欠乏ラットの予備的な観察では、Purkinje細胞に軽微ながら変化が認められた。また東京大学薬学部で樹立されたαTTP knock out mouseの形態変化を観察する準備を始め、ビタミンE欠乏と遺伝子異常によりおこる中枢神経病変にどのような差があるのか、剖検例を含めて比較検討を始める段階にある。またαTTPの生理的役割を同定するため、αTTPに対する抗体を複数作製し、その局在を中枢神経系を中心に解析中であるが、抗体の種類により所見が一定せずさらに検討を要する。剖検例の解析と実験動物での所見を比較しαTTPの役割を照らし合わせて研究を進めていくことで、本疾患の理解がより意義深いものとなる。臨床病理所見に立脚し、治療法の開発に結びつく所見を提供できるものと思われる。α-TTP遺伝子の点変異を有する家系より得られた、世界初の剖検例の形態的所見と生化学的所見をまとめた論文を発表した(J Neurol Neurosurg Psychiartry 2000:68:521-525)。上記遺伝子のノックアウトマウスを樹立、これらにみられる神経症状と病理所見を解析した。ノックアウトマウスの病理所見は脊髄後索に変性を認める点で上記剖検例と一致したが、前角細胞の変化が目立ち、ヒト剖検脳でみられた小脳の変性が観察されなかった点で異なる。α-TTPビタミンEめ低下とα-TTP欠損のどちらがどの病変に対応するかさらに検討を要する。全身のふるえ、後ろ足の引きずり等のノックアウトマウスの症状は生後1年程度から出現し、次第に増悪した。いずれの所見もビタミンE欠乏食で増悪、ビタミンE過剰食で軽減することを認めた。

その他の遺伝性小脳失調症についても核内封入体の形成機序とそれに関与する蛋白についての研究を進めた。とくにSCA3の原因蛋白であるataxin-3が遺伝子異常を伴わないで形成される核内封入体にも存在することを見出し、それが遺伝子異常と関連しない核内封入体であるMarinesco小体にも局在することをみいだしている。また核内封入体が存在すると神経細胞の変性は軽度に留まることをNeuronal Intranuclear Hyaline Inclusion Disease(NIHID)でも見出した。分子の共存を観察する蛍光二重染色法を改善し、両方のシグナルを増幅する手法を世界で初めて開発した。小脳変性症のみならず、広く組織学的に応用可能な方法と考えられる。
システムインパッケージにおける超高バンド幅LSI間通信回路技術の研究

本研究では、次世代のLSI間インターフェース回路に要求される1I/Oあたり10Gbpsを超える転送速度を実現するために、アナログ波形変調技術の導入による高帯域信号伝送技術の研究開発を行っている。具体的には、従来のハイレベルとローレベルの2値による伝送(デジタル伝送)から、電圧方向に信号レベルの多値化を行うことで、一本の信号線で送れる情報量を等価的に増やす。これにより信号線1本あたりのデータレートを高め、伝送路の持つ帯域を越える伝送速度を実現するものである。これらの技術は、モデムやADSL、イーサネット等、Mbpsクラスで比較的長距離の伝送路では、既に一般的な技術となっているが、LSI間通信のような、Gbpsを超えるような超高速で、かつ数十cmという短距離の伝送にも、ついに導入する必要性が高まってきたと考えられる。H16年度に開発を行った多値伝送の基本回路方式に基づいて、VDEC 0.35umCMOSでの試作を目指して、4値I/O回路の回路シミュレーションを進めた。回路方式としては、高速シリアル通信技術をべ一スとし、ある程度のばらつきやタイミングずれを許容できる回路構成とした。LSI内部には、高速な内部動作の成否を確認するための、測定補助回路を設けた。VDECO.35umCMOS設計ルールを用いて、LSI回路を設計した。送信回路、受信回路、テスト用回路の3種類のチップを回路設計し、レイアウト設計を行った。設計検討結果の状況を、電子情報通信学会ソサエティ大会へ投稿・発表した。さらに、VDECにより試作したチップを測定するための治具を開発し、試作チップの実測定により、4値I/O回路の動作を実際に確認することができた。また、コーディング技術の応用による、多値1/0回路の低電力化について検討した。その結果、中間値出力コード数を削減する符号化を行うことで、約37%の消費電流の低減を達成できることが分かった。H16年度は、まず、多値伝送の基本回路方式を検討した。基本回路の検討にあたっては、VDEC0.35umCMOSでの試作を前提として、回路シミュレーションを行った。回路方式としては、高速シリアル通信技術をベースとし、ある程度のばらつきやタイミングずれを許容できる回路構成となるように多値I/O回路を設計した。また、LSI内部には、高速な内部動作の成否を確認するための、測定補助回路が必要になる。その方式についても検討を行った。その基本回路方式の検討結果に基づき、VDEC0.35umCMOS設計ルールを用いて、LSI回路を設計した。今後、寄生容量等の再抽出を行い、実際のチップの性能予測を行う。

設計検討結果の状況を、電子情報通信学会ソサエティ大会へ投稿・発表した。本研究では、次世代のLSI間インターフェース回路に要求される1I/Oあたり10Gbpsを超える転送速度を実現するために、アナログ波形変調技術の導入による高帯域信号伝送技術の研究開発を行っている。具体的には、従来のハイレベルとローレベルの2値による伝送(デジタル伝送)から、電圧方向に信号レベルの多値化を行うことで、一本の信号線で送れる情報量を等価的に増やす。これにより信号線1本あたりのデータレートを高め、伝送路の持つ帯域を越える伝送速度を実現するものである。これらの技術は、モデムやADSL、イーサネット等、Mbpsクラスで比較的長距離の伝送路では、既に一般的な技術となっているが、LSI間通信のような、Gbpsを超えるような超高速で、かつ数十cmという短距離の伝送にも、ついに導入する必要性が高まってきたと考えられる。H16年度に開発を行った多値伝送の基本回路方式に基づいて、VDEC 0.35umCMOSでの試作を目指して、4値I/O回路の回路シミュレーションを進めた。回路方式としては、高速シリアル通信技術をベースとし、ある程度のばらつきやタイミングずれを許容できる回路構成とした。LSI内部には、高速な内部動作の成否を確認するための、測定補助回路を設けた。VDEC 0.35umCMOS設計ルールを用いて、LSI回路を設計した。送信回路、受信回路、テスト用回路の3種類のチップを回路設計し、レイアウト設計を行った。さらに、VDECにより試作したチップを測定するための治具を開発し、試作チップの実測定により、4値I/O回路の動作を実際に確認することができた。また、コーディング技術の応用による、多値I/O回路の低電力化について検討した。その結果、中間値出力コード数を削減する符号化を行うことで、約37%の消費電流の低減を達成できることが分かった。
マイクロチャンネルにおける分子交換流を用いた気体分離法の開発

数十°Cの温度差を唯一のエネルギー源として動作する,混合気体の新しい分離システムが考案された.多孔膜の表裏の圧力差と温度差を調整すれば,二成分混合気体の各成分が互いに逆方向に膜を通過する「分子交換流」が実現できることを実験によって示した.この現象を忠実に再現する数値シミュレーション法を用いて,二成分混合気体から各成分の純粋気体を生産するシステムが実現可能であることを示した.この気体分離法では,濃度がほぼ0の希少ガスの回収や,高純度気体への精製が容易に実現できる.1.気体分離装置の試作:前年度の研究成果に基づいて,分子交換流による気体分離の実証試験装置を試作した.3cm四方のMCE濾紙片を用いた小さな装置であるが,数十度の温度差により,大気圧下で100cc/分以上の速さで分子気体流(熱遷移流)を誘起する.この装置を用いて,ヘリウムーネオン,ヘリウムーアルゴン混合気体に対して大気圧下で混合気体の分離実験を行い,それぞれ約6%,15%程度までの濃度変化が得られることを確かめた.試作機で得られる濃度変化の大きさは,材料気体の流速に依存し,その最適値は濾紙上で約50cm/秒であった.2.分離装置の数値シミュレーション:前年度構築した,気体分離装置内部の解析モデルを用い,試作機の性能の数値シミュレーションを行った.このモデルは,解析が困難な分子気体流を取り扱うために非常に大胆な近似を用いているが,その結果は,実験結果と定性的に一致するだけではなく,得られる濃度差や,濾紙に沿って流れる流速の最適値を,数倍程度の範囲内で正確に予想できた.気体種に対する依存性などの細部では実験結果とのずれが見られることも分かった.3.数値解析ソフトウェアの改良:マイクロチャンネルにおいて,流路の3次元性が高いことに留意して,現有の混合希薄気体DSMC解析ソフトウェアの改良を進め,3次元問題の解析に対応させた.既存の機能(任意の気体成分数,任意の気体領域形状に対応,MPI並列計算)を保ちつつ,OPENMP並列化・オブジェクト指向の導入等を進めた結果,計算速度が2倍程度に向上した.4.大気圧コロナ放電による気体流の調査:近年,電気工学分野を中心に,表記の気体流が研究されている.精密な理論は確立されていないようであるが,分子間の衝突に依存する流れであるため,混合気体分離にも応用でき,良いエネルギー効率が得られる可能性がある.その基礎的な調査実験に着手した.1.分離気体生産装置の設計:前年度までの解析・実験では,貫通孔を有する多孔膜(MCE製の市販の濾紙)を用い,その表裏の間に僅かな温度差を与えることによって,大気圧下のマイクロチャンネル内で分子交換流を誘起することに成功した.さらに,膜に沿って適切な気体流を供給することで,分子交換流が生み出す気体分離効果を集積し,膜に沿った大きな濃度変化を得ることができた.本年度は,この濃度変化を用いた,混合気体の完全分離システムを実現するため,解析的研究を進めた.研究の結果,前年に開発した装置を複数台組み合わせるだけで,混合気体を連続精製するシステムが実現できることが示された.具体的には,複数の装置を連結し,一方の端の装置で温度差を大きめ(90°C程度)に,その他の装置は従来通りの温度差(60°C程度)で運転すればよい.この条件下では,装置内の膜に沿って周回する循環気流が発生し,システム全体では,その両端で大きな成分濃度差が生じる.場合によっては,両端で各成分気体の一級試薬レベルの純度が実現できる.このシステムは,上述の温度差以外のエネルギーを全く必要としない新しい気体分離システムであり,大きな応用可能性を持つだろう.2.表面粗さと気体論的境界条件の関係:多孔膜のように,表面粗さを持つ物体に沿って気体が流れる場合,物体表面における気体分子の反射に流速の影響が表れ,分子が流れに逆らう方向に反射しやすいことを明らかにした.表面粗さにより希薄気体の流路抵抗が増加することは以前から知られていたが,本研究の成果は,その現象の発生原因を説明できる.また,この現象は表面粗さを小さくしても消えずに残ることも示された.これは,従来の気体論的境界条件を用いた解析では,壁面に沿った流速成分が系統的な誤りを生み出してしまうことを意味している.3.上記の他,気体論的境界条件と熱遷移流の関係についての研究にも着手した.数十°Cの温度差を唯一のエネルギー源として動作する,混合気体の新しい分離システムが考案された.多孔膜の表裏の圧力差と温度差を調整すれば,二成分混合気体の各成分が互いに逆方向に膜を通過する「分子交換流」が実現できることを実験によって示した.この現象を忠実に再現する数値シミュレーション法を用いて,二成分混合気体から各成分の純粋気体を生産するシステムが実現可能であることを示した.この気体分離法では,濃度がほぼ0の希少ガスの回収や,高純度気体への精製が容易に実現できる.1.大気圧下における熱遷移流の誘起試験:本研究で開発する気体分離装置の特徴は,マイクロチャンネル内部において,希薄気体の効果による熱遷移流を発生させることである.熱遷移流を大気圧下で発生させる方法には多くの提案があるが,その中でもセルロース混合エステル(MCE)膜を用いる方法が有効であると考え,MCE膜を用いた熱遷移流発生装置の試作研究を行った.

この装置は,申請者が以前に提案した多層膜を用いた方法を組み合わせることにより,気体分離装置として発展させることができると思われる.また,次年度以降に行う,大気圧下における気体分離実験に向けて,四重極質量分析計を用いた計測システムを構築した.2.気体分離装置の概要設計:上記1.で実現した熱遷移流発生方法を考慮して,混合気体分離の試験装置の概要設計を行った.設計においては,分離装置内部の混合気体の濃度を模擬するモデルを構築して利用した.このモデルは,チャンネル内部の混合希薄気体の質量流量データベースを質量保存則に応用し,装置内部の混合気体の濃度分布を高速に得ることができるものである.このモデルの正当性を評価するために,混合希薄気体のボルツマン方程式に基づくDSMC法による数値シミュレーションも行い,計算時間が1万倍ほど違うにもかかわらず,定量的にかなり近い結果が得られることを確認した.これらの研究では,マイクロチャンネル内部の流れを,当初計画に記載してある分子交換流に制約せず,様々な状況について分離シミュレーションを行い,本研究で開発する気体分離方法の特徴を明らかにした.この結果は,2012年の国際希薄気体力学会において発表する予定である.多孔質内部のマイクロチャンネルに発生する分子交換流を応用すれば,大気圧下で,僅かな温度差をエネルギー源として,混合気体の濃度を大きく変更できるということは,今年度までの研究で十分に示されたといえる.これと同時に,この方法で実現できる濃度変化量を短い計算時間で推定する解析モデルも構築することができた.これらは申請時の研究計画の軸となるものであり,内容・時期ともに予定通りである.このことから,研究の進展は「(2)おおむね順調」と評価できる.申請時に予定した多原子分子の流れへの応用については,実験・解析共に未着手であるが,申請時に無かった研究(流れの駆動力として大気圧コロナ放電を用いる研究)も進めており,総合的には妥当な進展状況であると考えられる.大気圧下における熱遷移流の誘起については,予想以上に進展し,既に希薄気体分離試験装置はほぼ完成したといえる.次年度に予定していた実証試験も既に開始している.気体分離装置内部の気体挙動のシミュレーションは,モデルの構築には成功したという点では,計画通りである.しかし,実験装置内部の流れを予想し,設計に応用するという点には,次の問題が残されている.(1)非線形系となるために,結果の系統的な整理が困難である.(2)マイクロチャンネル内部の希薄気流のデータベースが2次元チャンネルのままであり,定量的には実際と大きく異なる可能性が高い.これらの問題点を考慮して,「(2)おおむね順調」と評価する.1.工業化可能性の検討:工業的応用を考慮に入れて、新しい気体分離法としての応用可能性について研究を進める.今年度に開発した手法を応用すれば,分離効率を高め,混合気体を完全分離する,すなわち,分離生成物がどちらも純物質となる分離が実現できる可能性がある.完全な分離は,気体膜分離などの手法では実現困難な工程であるため,工業的に価値が高い.この点に注目し,今年度までに得られた成果を利用して解析・実験を進める.2.エネルギー効率の検討:今回提案する気体分離法は,外部から与えられる数十度の温度差だけで動作する.従って,様々な形態のエネルギー源が利用できる.しかし,温度差を電力で賄う場合,エネルギー効率は良いとは言えない.この課題について,現在のところ,(1)装置を積層構造とし,同一の熱流を複数回にわたって気体分離に利用する
マクロファージの代謝リプログラミングを標的とした腎疾患新規治療の開発

マクロファージの炎症・代謝には低酸素状態やそれにより活性化される低酸素誘導因子(HIF)が関与する.昨年度,マクロファージでHIFを活性化し,炎症に関与すると報告されているMint3について,Mint3ノックアウトマウスでは野生型のコントロールに比して,虚血再灌流傷害そのものは同程度であるにも関わらず,その後の線維化が増悪することを見出した.そこで今年度はその現象についての解析を中心に研究を進めた.この現象がマクロファージのMint3によるものであることを示すため,マクロファージ特異的ノックアウトマウスを用いて同様の実験を行ったが,予想に反し線維化に差は見られなかった.そこで腎臓におけるMint3の発現を免疫染色で確認したところ,尿細管細胞で主に発現していることを見出した.実際,Mint3全身ノックアウトマウスの虚血再灌流傷害後には尿細管細胞のアポトーシスが増加していた.MCT細胞というマウス近位尿細管細胞の株化培養細胞を用いて機能解析を行ったところ,siRNAによるMint3ノックダウンにより,低酸素によるアポトーシスは増加し,vivoと同様の結果が得られた.Mint3はHIFを抑制するFIHと結合してその機能を抑制することでHIFを活性化すると報告されており,この現象とFIH/HIFの関連を検討したがそれは否定的であった.そこで抗アポトーシス作用のあるNF-κBという転写因子群との関連を検討したところ,Mint3ノックダウンにより1NF-κBの一つであるp50が転写レベルから増加し,核内のタンパクも増加,2NF-κBは抗アポトーシス分子の発現を増加させるが,p50は抑制性の作用を持つため,抗アポトーシス分子の発現を減少させることを見出した.上記の結果は国際的な学術誌に投稿しmajor revisionとなり,現在そのための実験を進めているところである.解糖系阻害による代謝リプログラミングが腎の尿細管間質傷害・炎症に与える影響を探究するため,マウス両側虚血再灌流傷害モデルを作成し,2デオキシグルコース(2DG)投与群についてvehicle投与群をコントロールとして解析した.本モデルで最も重要な評価項目である腎機能障害が2DG群で抑制され,組織学的にも尿細管傷害が軽減することが示された.またqRT-PRによる遺伝子発現解析では,尿細管傷害を示すKim1の増加が2DG群で抑制されていた.しかし2DGがマクロファージの代謝リプログラミングを介して作用するという予想に反して,マクロファージ,好中球といった炎症細胞数に有意な差を認めず,qRT-PCRでもTNF-α, IL-1などの炎症性サイトカイン・ケモカインについても差を認めなかった.そこで,2DGが影響を及ぼすのは,当初想定されてマクロファージではなく,最も著明な傷害を受ける尿細管細胞そのものである可能性を考え,同細胞の代謝リプログラミングに着目した.in vivo,in vitroの両者で解析を行い,尿細管細胞の定常状態におけるATP産生で中心的な役割と果たす脂肪酸のβ酸化経路や,解糖系遮断時に迂回経路となるペントースリン酸経路に関与する分子の発現が2DGで変化しており,それに伴い,ATPなどのエネルギー状態や酸化還元状態にも影響を与えていることが判明し,これらを介して2DGが腎傷害を抑制すると考えられた.またMint3ノックアウトマウスの交配も進み,それを用いた腎疾患モデルを作成し,予備的なデータが得られて来ている.2-デオキシグルコース(2DG)投与により尿細管間質傷害が軽減されることを示すことができたが,その機序は2DGがマクロファージで代謝リプログラミングを起こすという当初の仮説とは異なり,尿細管細胞の代謝リプログラミングであると考えられる所見が得られた.元の仮説とは異なるものの,腎尿細管間質傷害について新たな興味深い知見が得られている.またMint3ノックアウトマウスの実験が予定より早く進んでいる.これらを総合して,「おおむね順調に進展している」と自己評価した.昨年度結果を得られた,2-デオキシグルコース投与による解糖系阻害が急性腎障害モデルのマウス両側虚血再灌流傷害を軽減させる現象についてin vivo, in vitroでその機序の解析を進めた.2-デオキシグルコースが血中の遊離脂肪酸濃度を上昇させ,さらに2-デオキシグルコースが直接的に尿細管細胞の脂肪酸酸化を亢進させてATPを増加させることを示した.また,2-デオキシグルコースは尿細管細胞のペントースリン酸回路を亢進させて,抗酸化的分子を増加させることを示した.これらの機序によって,2-デオキシグルコースが尿細管細胞に保護的に作用すると考えられた.これらの結果は,現在投稿準備中である.また,低酸素誘導因子を活性化し,炎症に関与すると報告されているMint3についての研究では,Mint3ノックアウトマウスを用い,複数の腎無菌性炎症モデルを作成した.その中で,片側虚血再灌流モデル(急性の腎障害が起こった後,腎線維化・炎症が起こる)では,Mint3ノックアウトマウスは野生型のコントロール群に比して,虚血再灌流傷害そのものは同程度であるにも関わらず,その後の線維化が増悪することを見出した.現在,その機序について探索を進めているところであるが,低酸素誘導因子や炎症に関与する分子を介して,細胞死に影響を及ぼしている可能性を示唆する結果が得られており,引き続きその詳細を探求していく予定である.2-デオキシグルコースのプロジェクトについては,研究が完遂し,投稿準備中の段階に至っている.Mint3のプロジェクトについても,既に動物モデルでpositive dataが得られており,さらにその機序の解明も順調に進んでいる.

これらを総合し,上記のように自己判断した.マクロファージの炎症・代謝には低酸素状態やそれにより活性化される低酸素誘導因子(HIF)が関与する.昨年度,マクロファージでHIFを活性化し,炎症に関与すると報告されているMint3について,Mint3ノックアウトマウスでは野生型のコントロールに比して,虚血再灌流傷害そのものは同程度であるにも関わらず,その後の線維化が増悪することを見出した.そこで今年度はその現象についての解析を中心に研究を進めた.この現象がマクロファージのMint3によるものであることを示すため,マクロファージ特異的ノックアウトマウスを用いて同様の実験を行ったが,予想に反し線維化に差は見られなかった.そこで腎臓におけるMint3の発現を免疫染色で確認したところ,尿細管細胞で主に発現していることを見出した.実際,Mint3全身ノックアウトマウスの虚血再灌流傷害後には尿細管細胞のアポトーシスが増加していた.MCT細胞というマウス近位尿細管細胞の株化培養細胞を用いて機能解析を行ったところ,siRNAによるMint3ノックダウンにより,低酸素によるアポトーシスは増加し,vivoと同様の結果が得られた.Mint3はHIFを抑制するFIHと結合してその機能を抑制することでHIFを活性化すると報告されており,この現象とFIH/HIFの関連を検討したがそれは否定的であった.そこで抗アポトーシス作用のあるNF-κBという転写因子群との関連を検討したところ,Mint3ノックダウンにより1NF-κBの一つであるp50が転写レベルから増加し,核内のタンパクも増加,2NF-κBは抗アポトーシス分子の発現を増加させるが,p50は抑制性の作用を持つため,抗アポトーシス分子の発現を減少させることを見出した.上記の結果は国際的な学術誌に投稿しmajor revisionとなり,現在そのための実験を進めているところである.2-デオキシグルコース(2DG)による代謝リプログラミングについては,2DGが尿細管細胞に及ぼす代謝状態の変化について精査するとともに,それが細胞傷害・細胞死に及ぼす影響の解析を進めていく.Mint3ノックアウトマウスについては,それを用いて種々の腎疾患モデルを作成し,アウトカムに差が出るモデルを探索する.2-デオキシグルコースのプロジェクトについては,論文を作成し,投稿,出版に向けて進めていく.Mint3のプロジェクトについては,動物モデルで得られた結果の機序について,詳細を探求していく予定である.
国際紛争の初期段階における言葉の力：相手国非難と自己正当化をめぐる内容分析と実験

国際紛争の初期段階における政府発表とメディア報道の実証研究を通して、必ずしも十分な研究が蓄積されてこなかった「言葉によるエスカレーション」の理論を構築するのが本科研の狙いである。2018年度は、1戦闘機のスクランブル、艦船による領海侵犯といった国際紛争の初期段階をとりあげ、そこにおける政府発表と国際メディア報道の情報を継続して収集した。例えば、2019年のインドとパキスタンの国境線で起こった衝突のような陸での危機も当該地域が政府の報道管制下にあるような時など場合によっては見えないものとなることが確認できた。また、2複数のサーベイ実験を行った。例えば、トランプ大統領の発話効果を見るトランプ実験を継続して実施したほか、日本と韓国の間で実際に起こったレーダー照射事件にあわせて見えない危機をめぐる実験を行った。2018年度も、関西および東京で実施した合宿形式の研究協働が功を奏し、意味ある実験が複数実施できた。なお、国際学会においてEffects of announcement shift in diplomatic communicationやThe Trump Effect on American Soft Power: Survey Experiments on Transnational CommunicationといったタイトルでPacific International Politics ConferenceやEuropean Political Science Associationといった学会で報告を行った。両ワーキングペーパーは国際的な学術雑誌への投稿を行っている段階である。予定した通りで複数のワーキングペーパーができており、順調に研究は進んでいる。見えない危機の現象が今までよりも頻繁に起こっていることを踏まえ(例、インド・パキスタン、中国・台湾)、それらの事例の精査を行うほか、関係した実験の計画を行う。特に、2018年12月に起こった日本と韓国の間におけるレーダー照射事件は本研究のターゲットにしている見えない危機として示唆に富む事案である。ゆえに、これをモチーフにした実験を計画し、そのデータ処理を進める。また、2017年に本研究チームで公刊したPolitical Communication誌掲載の実験をリーダーの名前を伴って拡張する実験については国際会議での発表を行った上でその追加実験について検討する。リーダーがどのように情報を伝えることがその言葉の信ぴょう性を高め、見えない危機をめぐる国民の態度決定に影響するのかを見極めることが重要な課題である。このほか、2018年度中の会合でメディアの媒介機能を計測する課題が重要であるとの結論に達したが、そのためにメディア接触についてのデータを得る調査を実施する必要があると考えており、それを2019年度中に進める。2019年6月にはオスロの国際平和研究所やスウェーデンのウプサラ大学、台湾の中央政治院などでの口頭発表を予定しており、そこでの評価を踏まえ、さらに研究の拡張・修正の方向性を探り、評価の高い国際学術誌での論文刊行を狙っていく。1戦闘機のスクランブル、艦船による領海侵犯といった国際紛争の初期段階をとりあげ、そこにおける政府発表と国際メディア報道の比較研究を内容分析(量的テキスト分析:QTA)で実施した。データセット化するための基礎資料の収集に2017年度は時間をかけ、内容分析の結果として「典型的な政府発表」の情報内容がわかってきたといえる。その上で、そのような典型的な政府発表を用いた各種の実験(実験室、サーベイ)を計画し、一部は2017年度から先行して実施した。いつ、どういったプロセスで危機が顕在化し、そこで何が政府から発信され、それを受けて相手国政府がどういった情報を発信するのか、そしてそれが原因で現実の軍事的な緊張の度合いが高まる場合とそうでなく沈静化する場合の類型化を試みる研究として2017年度は着実にスタートを切ることができたと考える。その際、関西および北海道で実施した合宿形式の研究協働が功を奏し、意味ある実験計画を複数立て、具体的には順番のあるシークエンス実験、またトランプ大統領の発話効果を見るトランプ実験といった研究を行い、面白い知見を得たのでこれをペーパー化する段階に移行しつつある。研究成果を欧州政治学会などで報告するための登録を行った。順調に研究を進めており、現時点で懸念すべき事項はない。2018年度は2年目として複数のペーパーの完成と学会報告(欧州政治学会、日本国際政治学会、環太平洋国際関係学会等)