hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
膵癌、肝癌のアポトーシスと血管新生の増殖・転移、及び予後への関与の解明

化学染色において、これらの結果は細胞膜の染色性と一致した。これをin vitroにおいて実証するべく膵癌細胞株であるpanc-1を用いてsense及びantisense transfectantを作成し細胞機能解析を行った。細胞増殖能においてはこれらのtransfectantとparent cellの間に有意差は認められなかったが、細胞外基質への細胞接着能はantisense transfectantで、また細胞凝集能はsense transfectantで有意に亢進していた。マトリゲルを用いた細胞浸潤能ではantisense transfectantで有意に亢進しておりいづれの結果においもMRP-1及びKAI-1の発現減弱が癌の進行を増強する可能性があることが示された。現在、作成したtransfectantを用いて動物実験を施行中である。今後、MRP-1及びKAI-1は予後の指標となるターゲット遺伝子になりうると同時にMRP-1及びKAI-1を遺伝子治療に応用することで膵臓がんにたいする効果的な治療が得られると考えられる。
東南アジアにおける小児ウイルス感染症の分子疫学的解析

急性脳炎は脳の実質での炎症を主体とする疾患である。小児、成人に関係なく罹患するが、特に小児ウイルス脳炎は致死性が高い。しかしその原因は多様であり、診断に困難を来すことが少なくない。我々はコンタミネーションを避けるために1本のチューブで10種類のウイルスを同時に検出することの可能なmultiplex PCR法を開発した。本法では10種類のウイルスすなわちヘルペスウイルス6型、A型インフルエンザウイルス、ヒトパレコウイルス、単純ヘルペスウイルス1型、2型、日本脳炎ウイルス、A群ロタウイルス、エンテロウイルス、アデノウイルス、デングウイルスで、アジア時域における小児ウイルス性脳炎と脳症の主な原因と考えられるウイルスを網羅する。合計57検体(便検体、咽頭ぬぐい液、後鼻腔ぬぐい液、血清、脳脊髄液(CSF))を18症例の脳炎/脳症疑いの日本の入院小児から得た。これらの検体を新規multiplex PCR法および比較のためmonoplex PCR法で検出した。その結果、新しいmultiplex PCR法は10コピー以下のウイルスゲノムを検出でき、単独PCR法に劣らず、臨床検体特に便検体中の脳炎/脳症関連ウイルスのスクリーニングに使用できることを明らかにした。併せて糞便検体ではカンピロバクターの検出を行い、Campylobacter jejuni (C. jejuni)とC. coliの頻度分布と抗菌薬耐性を検索した。カンピロバクター腸炎の約10%に下痢症ウイルスの存在を認め、ウイルスと細菌性下痢症の合併が予想以上に多いことを明らかにした。この結果は細菌性下痢症として治療される一部にウイルス性下痢症が存在し、ウイルス脳炎の潜在的なリスクとなり得ることを示唆するものである。27年度が最終年度であるため、記入しない。小児におけるウイルス感染症は,成人に比較して死亡率の高さと後遺障害の重篤性よりmedical emergencyとして重要である.全身管理と抗ウイルス薬の選択,非ウイルス性疾患との鑑別のためには,迅速かつ鋭敏な検査法の確立が希求される.Pham Thi Kim Nganは1996年にホーチミン大学を卒業,感染症科臨床に従事し,2005年から東京大学に留学し2013年9月からは学振特別研究員に選定された.1年目の学問的業績としては,ベトナムやタイなど東南アジア諸国と日本における小児感染症の診断法の開発と分子疫学的手法を用いた臨床ウイルス学的解析を挙げることができる.その結果,血液,髄液,腸管粘液などの臨床サンプルを用いて,日本脳炎ウイルス,HSV-1,2,HHV6, A型インフルエンザ、エンテロウイルス,パレコウイルス,デングウイルス,アデノウイルスなど10種類以上のウイルスを同時に検出できる方法を開発した.本法は特に医療インフラの整備されない途上国において有用な簡易検査法として期待できる.細菌感染症に対しては臨床的に抗菌薬が適応となるが,ウイルス感染にはインフルエンザやHIV, HSVのような一部の例外を除き有効な抗ウイルス薬は少なく,不適切な抗菌薬使用は耐性誘導につながる.キャンピロバクターによる胃腸炎はウイルス性胃腸炎と臨床的には鑑別が困難である.Phamは、我が国と東南アジアの検体を用いて, LAMP法によるキャンピロバクター検出法を開発し,本法がPCRや培養と同等の感度と特異性があること, LAMP法陽性のタイの小児151例成人310例の検体で大部分がC. jejuniであって, C. coli症例は少ないこと,前者はタイ,日本ともにフルオロキノロン耐性が多く(特に日本では90%以上)成人ではマクロライド耐性も少なくないことを明らかにした.急性脳炎は脳の実質での炎症を主体とする疾患である。

臨床的検体を用いてウイルス学的な解析と,分子系統樹の作成、宿主の免疫応答を解析する基礎技術を取得し,タイやベトナムからの臨床検体の移入と解析もルチーンに行える体制を確立した。特にLAMP法によるキャンピロバクター検出システムを確立し,本法がPCRや培養法と同等以上の感度と特異性があること,ノロウイルスやロタウイルスの混合感染少なくないことを明らかにした学問的価値は大きい.27年度が最終年度であるため、記入しない。26年度に確立した方法論をもとに,東南アジア諸国と日本の医療施設から収集した検体を用いてより多数の症例で検討を行う.下痢症ウイルスとキャンピロバクター,サルモネラなどの細菌感染合併例についてはどちらが臨床的に主なのか,またウイルス性下痢症の増悪因子としての腸内細菌叢を検討し,併せて培養膣上皮,腸管上皮細胞と常在菌の相互作用をin vitroで検討する.27年度が最終年度であるため、記入しない。
心肺同時移植に関する基礎的研究

初年度は犬を用いて体外循環下に心肺同時移植を行なった。20回以上の急性実験を行ない、さらに、犬を用いて心保存、心肺保存の実験も100回行なうことにより、以下の諸点を確立またはあきらかにすることができた。1)移植心は単純浸漬保存法によっても46時間の安全な保存が行ないうる。2)移植用心肺の保存、とくに肺組織の保存にあたっては、潅流液は生理食塩水,hactated Ringer液よりもEuro-Collins液の方が良好な結果が得られる。3)移植用心肺の浸漬保存液も生理食塩水よりもEwro-Collins液の方が良好な結果が得られた。4)犬を用いた心肺同時移植は、出血などの合併症がなくとも、全例が心不全または肺水腫にて死亡し、生存時間は24時間未満であった。とくに肺水腫が死因の多数例を占めた。4)心肺同時移植における肺水腫の発生は、donor心肺剥離中または、心肺保存中におこる変化ではなく、心肺移植再潅流後におこる変化である。そしてその変化は再潅流後1時間以内々発生する。5)1015kgの犬では輸血をなしに体外循環下に心肺同時移植が可能であった。6)実験的心肺同時移植の手技ならびに補助手段を確立した。以上の結果をふまえて、60年度はニホンザルを用いて心肺同時移植を行なった。B回の実験を行ない最長生存期間は12日であった。死因は拒絶反応2例,心不全5例,技管後のhypoxia2例,肺水腫1例他3例であった。Cyclospirin Aの投与により生存期間の延長を認めたが拒耐反応の診断と治療には未だ充分な経験が得られず、長期間の生存には至らなかった。この点が今後の問題点と考えられた。
低酸素細胞の分子生物学的特徴と治療への応用への可能性

ヒトの舌癌由来の細胞をヌードマウスに移植し実験に用いた.2種類の細胞株であり,両者はがん抑制遺伝子であるp53遺伝子の状態のみ異なる(野生型;SAS/neoと変異型;SAS/mp).腫瘍の最大径が1cmの時点で,67Cuでラベルした低酸素細胞のマーカーであるATSM(diacetl-bis(N^4-methy1thiosemicarbazone))を,静脈内投与した.静脈注射後1時間および24時間で腫瘍および血液・脳・肺・肝・腎を摘出し,摘出標本の放射能をガンマカウンターで測定した.投与1時間後と24時間後で腫瘍および各臓器のATSMの分布に相違は認められなかった.また,両腫瘍へのATSMの集積を比較するため,腫瘍の放射能を血液・脳・肺・肝・腎と比較したところSAS/neoの集積が高いことが示唆された.次に治療実験として,ベータ線放出核種である64CuでATSMをラベルし,腫瘍の最大径が1cmの時点で投与した.腫瘍に対する増殖抑制効果を検討したところ,SAS/neoではSAS/mpに比較して増殖抑制効果が大きい傾向が認められた.これは前述したようにSAS/neoではATSMの集積が強いため治療効果が高かった可能性と,両者の分子生物学的な背景が異なる可能性が考えられた.ヒトの舌癌由来の細胞株2種類をヌードマウスに移植し実験に用いた.両者はがん抑制遺伝子であるp53遺伝子の状態のみ異なる(野生型;SAS/neoと変異型;SAS/mp)細胞株である.腫瘍の最大径が1cmを超えたところで,低酸素細胞のマーカーであるdiacetl-bis (N^4-methylthiosemicarbazone)(ATSM)を67Cuでラベルし,静脈内投与した.静脈注射後1時間および24時間で腫瘍および血液・脳・肺・肝・腎を摘出し,摘出標本の放射能をガンマカウンターで測定した.投与1時間後と24時間後で腫瘍および各臓器のATSMの分布に相違は認められなかった.また,両腫瘍へのATSMの集積を比較するため,腫瘍の放射能を血液・脳・肺・肝・腎と比較したところSAS/neoの集積が高いことが示唆された.また,64CuでラベルしたATSMを腫瘍径が1cmに達したところで投与し,腫瘍に対する増殖抑制効果を検討したところ,SAS/neoではSAS/mpに比較して増殖抑制効果が大きい傾向が認められた.これは前述したようにSAS/neoではATSMの集積が強いため治療効果が高かった可能性と,両者の分子生物学的な背景が異なる可能性が考えられる.今後は摘出標本を用いて,腫瘍の酸素化との関連が想定される各種分子マーカー(VEGF, CD34,COX-2,p53,p21,Ki67,HIF-1など)による免疫組織染色を行い,両腫瘍のATsM集積の差異の分子生物学的背景について検討する予定である.ヒトの舌癌由来の細胞をヌードマウスに移植し実験に用いた.2種類の細胞株であり,両者はがん抑制遺伝子であるp53遺伝子の状態のみ異なる(野生型;SAS/neoと変異型;SAS/mp).腫瘍の最大径が1cmの時点で,67Cuでラベルした低酸素細胞のマーカーであるATSM(diacetl-bis(N^4-methy1thiosemicarbazone))を,静脈内投与した.静脈注射後1時間および24時間で腫瘍および血液・脳・肺・肝・腎を摘出し,摘出標本の放射能をガンマカウンターで測定した.投与1時間後と24時間後で腫瘍および各臓器のATSMの分布に相違は認められなかった.また,両腫瘍へのATSMの集積を比較するため,腫瘍の放射能を血液・脳・肺・肝・腎と比較したところSAS/neoの集積が高いことが示唆された.次に治療実験として,ベータ線放出核種である64CuでATSMをラベルし,腫瘍の最大径が1cmの時点で投与した.腫瘍に対する増殖抑制効果を検討したところ,SAS/neoではSAS/mpに比較して増殖抑制効果が大きい傾向が認められた.これは前述したようにSAS/neoではATSMの集積が強いため治療効果が高かった可能性と,両者の分子生物学的な背景が異なる可能性が考えられた.
直腸肛門奇形発生過程におけるShhおよび特異的レセプターの動態学的解析

Retinoic acid(RA)は,体節決定に極めて重大な役割を果たすHox遺伝子の発現に影響を及ぼすと考えられており,retinoic acidのシグナル伝達系の転写制御により,各部域において特異的でより複雑な形態形成を作り上げている.一方,Hox遺伝子の発現は後腸の管腔形成や後腸の上皮や間葉における細胞分化の時期よりかなり早期に認める.今回の研究では,消化管のパターン形成や各器官の分化に関わっているSonic hedgehog(Shh)およびBone morphogenetic protein(BMP)4に着目し,RAを投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおける発現の変化を調べた.その結果,RA投与群の胎仔では95%以上において直腸肛門奇形を認めた.直腸肛門領域において,対照群では上皮においてShhの発現を認め,間質ではBMP4の発現を認めた.一方,Retinoic acid投与群では上皮におけるShhや,間質におけるBMP4の発現を認めなかった.消化管の正常発生では上皮において発現するShhが,後に固有筋層や粘膜下層に分化する間質に発現するBMP4の発現調節を行うことで消化管の分化を制御していた.一方,直腸肛門奇形マウスでは上皮でShhの発現を認めないだけでなく,間質でもBMP4の発現を認めないため,消化管の分化を制御することができず,正常な発生が生じないことが示唆された.これら臨床的に極めて重要な意義を有する病態の解明を目的として更に詳細な研究を次年度以降に進展させた.RAと同様に核内受容体を有するsteroidの中でも特にglucocorticoidであるDexamethasone(Dex)に着目し,retinoicacid(RA)を投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおけるDexとの相互作用の変化を調べ,rescue programとして互いに構造と機能が酷似した核内受容体の拮抗作用を利用してRA及びDexの投与による直腸肛門領域の形態学的変化を検索することで、直腸肛門奇形、特に後腸や周囲の括約筋群・泌尿生殖器系の発生異常についても形態学的かつ分子生物学的に観察し、これらもrescueされうるか検討した.Retinoic acid(RA)は,体節決定に極めて重大な役割を果たすHox遺伝子の発現に影響を及ぼすと考えられており,retinoic acidのシグナル伝達系の転写制御により,各部域において特異的でより複雑な形態形成を作り上げている.一方,Hox遺伝子の発現は後腸の管腔形成や後腸の上皮や間葉における細胞分化の時期よりかなり早期に認める.今回の研究では,消化管のパターン形成や各器官の分化に関わっているSonic hedgehog(Shh)およびBone morphogenetic protein(BMP)4に着目し,RAを投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおける発現の変化を調べた.その結果,RA投与群の胎仔では95%以上において直腸肛門奇形を認めた.直腸肛門領域において,対照群では上皮においてShhの発現を認め,間質ではBMP4の発現を認めた.一方,Retinoic acid投与群では上皮におけるShhや,間質におけるBMP4の発現を認めなかった.消化管の正常発生では上皮において発現するShhが,後に固有筋層や粘膜下層に分化する間質に発現するBMP4の発現調節を行うことで消化管の分化を制御していた.一方,直腸肛門奇形マウスでは上皮でShhの発現を認めないだけでなく,間質でもBMP4の発現を認めないため,消化管の分化を制御することができず,正常な発生が生じないことが示唆された.これら臨床的に極めて重要な意義を有する病態の解明を目的として更に詳細な研究を次年度以降に進展させた.RAと同様に核内受容体を有するsteroidの中でも特にglucocorticoidであるDexamethasone(Dex)に着目し,retinoicacid(RA)を投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおけるDexとの相互作用の変化を調べ,rescue programとして互いに構造と機能が酷似した核内受容体の拮抗作用を利用してRA及びDexの投与による直腸肛門領域の形態学的変化を検索することで、直腸肛門奇形、特に後腸や周囲の括約筋群・泌尿生殖器系の発生異常についても形態学的かつ分子生物学的に観察し、これらもrescueされうるか検討した.Retinoic acid (all-trans-retinoic acid)は、retinoic acidに結合した核内受容体(RAR)がレチノイドX受容体(RXR)と呼ばれる9-cis retinoic acidが結合する受容体とヘテロダイマーを形成し、様々な細胞分化、形態形成、細胞死に必要な遺伝子の発現を調節すると考えられている。また、Hox遺伝子は胎生期における後腸の管腔形成や、後腸の上皮や間葉における細胞分化の時期よりかなり早期に発現を認め、Hox遺伝子の下流でSonic hedge hog (Shh)が内胚葉やその分化した器官で発現し、器官分化と共に尾側から直腸肛門領域にかけて発現していく。今回の研究においては、消化管のパターン形成や各器官の分化に深く関わっている遺伝子蛋白ShhおよびBMP4に着目し、retinoic acidを投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおける発現の変化を調べることにした。本年度は、4年度にわたる一連の研究課題に供するための再現性ある実験モデルの確立を行った。

すなわち、'生後6週目のICRマウスを交配せしめvaginal plugをもって発生の開始を確認、妊娠9日目にRetinoic acid10mgをsesame oil 1mlの割合にて加注し十分に振盪させ、100mg/kgのretinoic acidを経口ゾンデ針を用いて妊娠マウスに投与する。その後、妊娠マウスを各胎齢にて頚椎脱臼により犠牲死させ、実体顕微鏡下に胎仔を摘出した。その結果、本実験系において高い再現性をもってモデルマウスの発生を確認し、上皮におけるShhや、粘膜固有層から粘膜下層におけるBMP4の発現に関する仮説を実証するための発現蛋白レベルの解析に関して一部結果を得た。免疫組織化学的研究手法による実験系において、直腸肛門奇形の発生のメカニズムに関する一部positive dataが得られたため、これらを確証するためのさらに詳細な研究を次年度以降に進展させることとし、結果の一部をpublicationした。Retinoic acid (all-trans-retinoic acid)は、retinoic acidに結合した核内受容体(RAR)がレチノイドX受容体(RXR)と呼ばれる9-cis retinoic acidが結合する受容体とヘテロダイマーを形成し、様々な細胞分化、形態形成、細胞死に必要な遺伝子の発現を調節すると考えられている。一方Hox遺伝子は、胎生期における後腸の管腔形成や、後腸の上皮や間葉における細胞分化の時期よりかなり早期に発現を認め、Hox遺伝子の下流でSonic hedge hog (Shh)が内胚葉やその分化した器官で発現し、器官分化と共に尾側から直腸肛門領域にかけて発現していく。本研究課題では、これらの遠位消化管のパターン形成や各器官の分化に深く関わっている遺伝子蛋白ShhおよびBMP4に着目し、retinoic acidを投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおける発現の変化を調べた。本年度は、一連の研究課題に供するための再現性ある実験モデルを既に確立しており、特に臨床例における所見との相関について検討を行った。すなわち、妊娠9日目のICRマウスにRetinoic acid10mgを過剰投与し、妊娠マウスを各胎齢にて頚椎脱臼により犠牲死させ実体顕微鏡下に胎仔を摘出、胎生標本を経時的に得て形態学的変化をとらえた。その結果、高い再現性をもって発生が確認された直腸肛門奇形モデルマウスにおいて、骨盤底筋群及び脊髄の発生異常(tethered cord syndrome)としての病態発生のメカニズムが、本シグナル伝達系の発生学的変異と密接に相関することが明らかになった。これら臨床的に極めて重要な意義を有する病態の解明を目的としてさらに詳細な研究を次年度以降に進展させることとし、これまでの結果をpublicationした。Retinoic acid(RA)は、体節決定に極めて重大な役割を果たすHox遺伝子の発現に影響を及ぼすと考えており、retinoic acidのシグナル伝達系の転写制御により、各部域において特異的でより複雑な形態形成を作り上げている。一方、Hox遺伝子は後腸の管腔形成や後腸の上皮や間葉における細胞分化の時期よりかなり早期に認める。今回の研究では、消化管のパターン形成や各器官の分化に関わっている遺伝子蛋白Sonic hedgehog(Shh)およびBone morphogenetic protein(BMP)4に着目し、RAを投与して作成された直腸肛門奇形マウスにおける発現の変化を調べた。
遺伝子改変メダカを用いた悪性黒色腫モデル系の構築

本研究はメダカを悪性黒色腫モデル動物として利用し、安定的に腫瘍を生じる遺伝子改変メダカ系統を樹立し、個体ベースの新規抗癌化合物スクリーニングシステムを確立することを主たる目的としている。ヒトがん遺伝子HRAS^<G12V>導入メダカ系統とメダカ熱ショックタンパク遺伝子プロモーター下でCreを発現する遺伝子導入メダカ系統を交配することにより、温度処理を施すことでヒトHRAS^<G12V>が発現するメダカを作製することができた。この二重遺伝子導入系統は、生後6か月の段階ですべての個体に黒色素胞の異常増殖もしくは悪性黒色腫が確認できた。薬剤投与試験の予備実験として悪性黒色腫が確認できた二重遺伝子導入メダカにソラフェニブ投与を試みたところ、ソラフェニブ投与群では有意に腫瘍増殖が抑制され、生存曲線においても有意な生存の延長がみられた。癌モデル動物として安定的に腫瘍を生じるメダカ系統を樹立するため、色素細胞特異的遺伝子チロシナーゼのプロモーター下流に癌遺伝子を結合したDNAをメダカ1細胞期胚に導入することで悪性黒色腫形成の惹起を試みた。癌遺伝子としてはヒトc-MycとヒトBRAF^<V600E>を選択した。野生型メダカH1bRHiおよびCab系統で各々50-100の胚にマイクロインジェクションを行い、成魚まで生育したG0個体と野生型との交配により得られたF1でゲノム内への導入を確認し、F1同士を交配した。その結果トランスジェニック系統としてc-Myc導入個体からは1系統、BRAF^<V600E>導入個体からは3系統が得られ、解析に用いた。全てのBRAF^<V600E>導入系統で筋肉組織内に腫瘍が形成されている個体が得られた。体表に変異のないc-MycとBRAF^<V600E>個体も、組織切片のHE染色・免疫染色により、肝臓、腎臓、脾臓、腸上皮などの細胞に腫瘍形成が見られた事から、c-Myc、BRAF^<V600E>の導入単独で腫瘍を形成するメダカを作製できたと考えている。p53変異系統にBRAF^<V600E>を導入した系統では、筋肉組織や臓器に高頻度に腫瘍形成が見られ、生育能は著しく低く、産卵数、受精率、孵化率、成魚個体寿命の全てにおいて低下しており、実験系に用いるのは困難であった。また、c-MycもしくはBRAF^<V600E>のホモ接合体も生育可能であったが、系統維持が著しく困難であったため、現在、Cre-loxシステムによる条件発現系を用いて、生育能が比較的高く実験に使用しうるヒトc-Myc^+系統およびヒトBRAF^<V600E>系統の作製を試みている。本研究では解剖することなく確認できる腫瘍を安定的に生じるメダカ系統を樹立することを目的としている。確認が容易な悪性黒色腫を形成させるため、色素細胞特異的遺伝子チロシナーゼのプロモーター下流にヒト癌遺伝子hRAS^<G12V>を結合した組換えDNAを作製し、メダカ胚に導入した。昨年度の実験ではhRAS^<G12V>をプロモーター直下に結合した場合はRAS導入メダカが成魚になる前に致死となったため、今年度はCre-loxシステムによる条件発現系を用いて、温度処理をすることによりhRAS^<G12V>が発現するTg-メダカを作製した。得られたRAS導入メダカでは多くの場合、黒色素胞が本来存在する眼球および腹膜とその周囲に腫瘍がみられ、孵化以前から黒色素胞が過形成する個体もあり、受精後3ヵ月では80%以上の成魚が悪性黒色腫を生じた。受精後5ヵ月になると腫瘍死を迎える個体も出現する。チロシナーゼが本来発現している眼球、腹膜での過形成が腫瘍化の起源となっていると考えられるが、個体を固定後、組織切片を作製し、HE染色を行うと、表皮、眼球だけでなく、腎臓、肝臓、脾臓、心臓、消化管、筋肉内、骨周囲、上顎周囲など、多くの組織で腫瘍が見られた。本研究で得られたRAS導入メダカでは、成魚だけでなく稚魚および胚の段階から黒色腫を発症するので、各々の段階で薬剤スクリーニングに使用できる可能性があるが、幼体で可能であれば使用薬剤は少量ですむとことになり、低コストでのスクリーニングが可能である。来年度はRAS導入メダカを薬剤スクリーニングに用いる際の条件検討を行う予定である。

本研究はメダカを癌モデル動物として利用し、安定的に腫瘍を生じるヒトHRAS^<G12V>トランスジェニックメダカ系統を樹立した後、個体ベースの新規抗癌化合物スクリーニングシステムを確立することを主たる目的としている。メダカ熱ショックタンパク(medakaHSP)プロモーター下でCreを発現させることのできるトランスジェニックメダカ系統Tg(hsp:cre)と、loxP配列を両端に持つEGFP遺伝子をヒトHRAS^<G12V>遺伝子の上流に挿入したヒトHRAS^<G12V>トランスジェニックメダカ系統Tg(tyr:HRAS^<G12V>)を交配することにより、温度処理を施した時にのみ、ヒトHRAS^<G12V>が発現するメダカを作製することができた。7g(tyr:HRAS^<G12V>)/Tg(hsp:cre)二重遺伝子導入系統は、生後6か月の段階で生存していたすべての個体(16/16個体)に黒色素胞の異常増殖もしくは悪性黒色腫が外観から確認できた。また艀化前の温度処理が早期の致死性を高めること、生後4か月以降に腫瘍死と思われる死亡個体が増加し、最長寿命は10か月であることなどがわかった。薬剤投与の予備実験としてRasシグナル下流に位置するRafキナーゼ受容体の阻害剤ソラフェニブの投与を行った。1回につき24時間の薬浴を週2回、2週間で計4回行い、投与前と投与後の個体写真の比較を行った。ソラフェニブ投与群と対照実験とした溶剤のDMSO投与群とで画像解析により担癌個体の黒色領域増加面積を比較したところ、ソラフェニブ投与群では統計的有意差で黒色領域の増加が抑制された。また、生存曲線においてもソラフェニブ投与群は対照群と比較し有意な生存の延長がみられた。以上より、本研究で樹立されたヒトHRAS^<G12V>トランスジェニックメダカ系統は癌治療モデルとして有用な系であることが確認された。
ナノ粒子表面と準安定結晶構造に起因する赤外スペクトルの探求

天体のスペクトルに多数の未同定バンドが残っている一因はナノ領域に現れる特異現象にあると考え、ナノ粒子の赤外スペクトルを実験室で得ることを目的に研究を立ち上げた。赤外スペクトルその場観測装置を新たに作製し、気相中をフリーに漂うナノ粒子の赤外スペクトルを測定できるようになった。実際に測定した結果、従来のバルクやKBr錠剤法に比べ、ピーク位置のシフトと半値幅の大幅な減少が確認でき、未同定バンドの解明に向けた突破口が拓けた。物質進化の初期段階を明らかにするために、ナノ粒子の亦外スペクトルを実験室で得ることが目的である。天体のスペクトルに多数の未同定バンドが残っている一因はナノ領域に現れる特異現象にあると考えている。ナノ粒子では準安定結晶構造の出現や表面原子の再配列が赤外スペクトルを変化させ得るため、nmサイズの星周ダストの生成過程を実験室で再現し、気相中をフリーに漂うナノ粒子の核形成前から成長後までの赤外スペクトルを分離して得る。得られた、成長途中のnmサイズのシリケイトや酸化物、炭素質粒子の赤外スペクトルをすばる望遠鏡や、あかり衛星のデータと比較し、星周ダストの成長過程の理解につなげる。まず、輻射場の強い大質量星形成領域をすばる望遠鏡で観測し、実験結果と比較することで中間赤外領域に見られる9μmの未同定赤外バンドの起源を明らかにする試みを行った。このバンドは炭素質物質起源であると推測されているが、その起源や生成メカニズムは不明である。すばる望遠鏡による観測の結果発見した、9μmをピークとする半値幅1μmの非常にブロードな対称バンドは、一連の未同定赤外バンドとは分布が異なり、赤外コア近傍にのみ存在していた。観測結果に対して、実験室で生成した粒子の透過型電子顕微鏡観察、およびその場測定に先立ち、生成後の粒子に対して赤外スペクトル測定を行った結果、炭素を不純物として格子間に含むSiCが9μmバンドを再現することを明らかにした。その強度e^<-18>W cm^<-2>mm^<-1>も観測と一致していた。炭素リッチなSiCはSiを含む非晶質炭素薄膜への放射光照射により生成することが分かっている。この結果から、晩期星で作られた非晶質ダストが強輻射場環境下で変成した結果、9μmバンドが現れたと考えられる。物質進化の初期段階を明らかにするために、ナノ粒子の赤外スペクトルを実験室で得ることが目的である。震災により損傷した赤外スペクトルその場観測装置を復旧し、気相中をフリーに漂うナノ粒子の赤外スペクトルを測定できるようにした。昨年度、輻射場の強い大質量星形成領域をすばる望遠鏡で観測し、実験結果と比較することで中間赤外領域に見られる9μmの未同定赤外バンドの起源を明らかにする試みを行った。すばる望遠鏡による観測の結果発見した、9μmをピークとする半値幅1μmの非常にプロードな対称バンドは、炭素を不純物として格子間に含むSiCがよく再現することを明らかにした。その強度e^<18>W cm^<-2>mm^<-1>も観測と一致しており、現在論文としてまとめている。また、バルクや、KBr錠剤に微粒子を埋め込んだ際には20μm付近に非常にブロードなフィーチャーを持つ酸化マグネシウムに関して、気相を漂うナノ粒子の中間赤外スペクトルを測定した。その結果、17.3μmに比較的シャープなフィーチャーを示すことが明らかになった。
金属ーSiC界面のシリサイド及びカ-バイド生成と電極としての評価

Ni/SiCオ-ミック接触形成時に熱処理後のNiアロイ中生じる遊離カ-ボンの起源を明らかにする事を目的として険討を行った。当初Acheson法による6HーSiC結晶を用いて検討を行う予定であったが、この結晶では結晶中にカ-ボン析出物が存在することが明らかになり実験に用いるには不適当と判断されたため、本検討ではCVD法による3CーSiC結晶のみを対象として検討を行うことにした。CVD成長によるSi基板上の3CーSiC成長層では基板との格子不整合による転位や〈111〉基板上では双晶によるグレイン境界が存在する。これら結晶欠陥は不純物の蓄積の生じやすい箇所であることはよく知られており、これら部分に成長中に蓄積したカ-ボンがアロイ中に観察される遊離カ-ボンの原因になる可能性がある。そこで本検討では3CーSiCの低転位高品質結晶を用いて検討を行うため、3CーSiCの低温域での成長機構を解明すると共に高品質層エピタキシャル成長条件を検討した。その結果C_2H_2とSiH_4を原料として用いた場合成長温度1150°CではSiH_4供給量を制御することによりSiC成長速度と結晶性を制御可能であること。また成長層の組成は原料ガスの供給比率によらず常にストイキオメトリ(Si/C比)の保たれた状態でSiCの成長が生じること等を明らかにした。またその成長機構は基板表面を覆う1ML程度のC層上へSiが付着しSiCを形成した後、そのSiC分子が表面をマイグレ-トする事により成長が生じることも明らかにした。これらの結果は電通学会研究会(1990,10,東京)で発表すると共に、気相成長エピタキシ-国際会議(1991,7,名古屋)で報告する予定である。また今後のこの成果を基礎として高品質3CーSiC層を用いてNiアロイ中の遊離カ-ボンの起源を解明する予定である。
膵癌進展におけるＴＧＦβ－Ｈｉｐｐｏシグナルのクロストークに関する研究

2016年4月の熊本地震による実験施設および多くの試薬が被害を被ったため、予定していた実験の再スケジューリングを要した。当初予定していた、in vitroにおけるTGF-β-Hippo pathwayのクロストークに関する検討がまだ終了しておらずやや遅れていると判断する。YAP低発現株を用いてプラスミドによるYAP強制発現系とYAP高発現株を用いたsiRNAによる発現抑制系を作成する→細胞内Smadシグナルの変化や細胞増殖能や浸潤能へ与える影響をMTT assayやinvasion assayを用いてcontrolと比較検討する。TAZに関しても同様に検討を行う。具多的な方法としては、・YAP/TAZの膵癌細胞株への強制発現の方法は、YAP/TAZのcDNAをサブクローニングした後に、GATEWAYシステム(invitrogen)を用いて発現ベクターを作成する。申請者らはこれまでの研究においてすでにベクターを作成し保有しており、作成したプラスミドは、大腸菌へ導入し、増幅させる。プラスミドを抽出・精製を行った後に、Lipofectamineを用いて、細胞へ導入する。発現抑制系では、YAP/TAZ高発現株へYAP/TAZのsiRNA(invitrogen)を行い、細胞内Smadシグナルの低下を確認する。細胞増殖能の変化や浸潤能の変化などの表現型が得られた場合には、YAP/TAZならびにSmadの標的遺伝子を同定するために、cell-cycle-related genesやEMT-related genesの発現変化をcontrol群と比較検討する。試薬、消耗品の購入費、及び、研究データの管理、資料整理を行ってもらうための事務補佐員の雇用経費に充てたい。
農山村における循環型地域社会形成の条件に関する研究―地域自立の環境社会学の試み―

本研究は、投機的な外部資本による開発ではなく、環境保全的な農林業を基軸にした持続性のある自立した循環型地域杜会形成の条件の考察を目的とするものである。そのために、本研究では、有機農業を柱に、地域資源を生かした地場産業やエコ・ツーリズムなどを組み合わせて地域の再建・活性化を図っている5地域(島根県奥出雲地域、愛媛県明浜町、宮崎県綾町、鹿児島県屋久島、山形県長井市)を選定し、主として現地におけるインテンシブな聞き取り調査と資料収集によって実態を把握する方法をとった。なかでも、有機農業運動が地域的広がりをみせている島根県奥出雲地域における木次乳業(酪農農家が設立した会社)を拠点とする運動と、愛媛県明浜町における柑橘農家集団「無茶々園」の運動の展開を中心に分析を行った。その結果、有機農業を基軸とする地域づくりの運動によって、それぞれ地域において生業と自治の担い手が形成され、さらには「親密圏」ともいうべき新しい質をもった関係性にもとづく「地域共同社会」と、都市とのネットワークが形成されつつあった。それぞれの運動の展開過程は、循環型地域社会形成に向けて、社会経済システムの変革の方向性が都市と農山村との連携の方途を示唆していた。本研究の目的は、第1に、農業の近代化や集約化、あるいは大規模なリゾート・観光開発による環境や地域経済、地域生活への影響を明らかにし、第2には、投機的な外部資本による開発ではなく、環境保全的な農林業を基軸にした持続性のある自立的な循環型地域社会形成の条件を考察することにある。そのために、有機農業・環境保全型農業を柱に、地域資源を生かした地場産業やエコ・ツーリズムなどを組み合わせて地域の再建・活性化を図っている地域を対象とし、これまで点的存在であった有機農業・環境保全型農業が面的広がりを獲得するなかで、地域においてどのような社会経済システムや文化を形成し、都市とのネットワークや意味空間(「公共圏」)をどのように広げつつあるのか、主として現地における聞き取り調査によって把握する。本年度は以下の作業を行った。1.研究枠組みの精緻化のための文献・資料収集と専門家・研究者へのヒヤリングを実施した。2.本年度は都市住民との連携・ネットワークを形成しつつ有機農業・環境保全型農業が地域的広がりをみせている山形県高畠町、愛媛県明浜町、島根県木次町において予備的な現地調査を行った。事例調査地における有機農業・環境保全型農業の展開過程、農林業の現状、行政や農協などの関係部局の関わりなどについて聞き取り調査、および資料収集を行った。また、山形県長井市における有機物の地域循環システムづくり(「レインボープラン」)についても、現地で住民と行政への聞き取り調査を行った。3.現地で収集した資料やデータの整理作業を行った。そのために、有機農業・環境保全型農業を柱に、地域資源を生かした地場産業やエコ・ツーリズムなどを組み合わせて地域の再建・活性化を図っている地域を対象とし、主として現地における聞き取り調査によって把握する方法をとった。そして、これまで点的存在であった有機農業・環境保全型農業が面的広がりを獲得するなかで、地域においてどのような社会・経済システムや生活文化を形成し、都市とのネットワークや意味空間(「公共圏」)をどのように広げつつあるのか、といった点に焦点をあてて調査を行った。1.研究テーマにかかわる理論的枠組みの精緻化や情報収集のため、文献・資料の収集を行った。2.本年度は都市住民との連携・ネットワークを形成しつつ有機農業・環境保全型農業が地域的広がりをみせている木次乳業を中核とする島根県奥出雲地域の現地調査を引き続き行うとともに、環境保全を視野に入れた観光開発や有機農業によって持続的な地域づくりをめざしている熊本県屋久島と宮崎県綾町において現地調査を行った。

このほか、各地の有機農業生産者や農山村住民との交流・提携とともに、地元藤沢市の農業についても消費者として深く関わりをもって活動している藤沢市の食生活研究会の活動についても聞き取り調査を行った。3.現地で収集した資料やデータの整理作業を行った。本研究の目的は、第1に、農業の近代化や集約化、あるいは大規模なリゾート・観光開発による環境や地域経済、地域生活への影響を明らかにし、第2には、投機的な外部資本による開発ではなく、環境保全的な農林業を基軸にした持続性のある自立的な循環型地域社会形成の条件を考察することにある。そのために、有機農業・環境保全型農業を柱に、地域資源を生かした地場産業やエコ・ツーリズムなどを組み合わせて地域の再建・活性化を図っている地域を対象とし、主として現地における聞き取り調査によって把握する方法をとった。そして、これまで点的存在であった有機農業・環境保全型農業が面的広がりを獲得するなかで、地域においてどのような社会・経済システムや生活文化を形成し、都市とのネットワークや意味空間(「公共圏」)をどのように広げつつあるのか、といった点に焦点をあてて調査を行った。本年度は以下の作業を行った。1.研究テーマにかかわる理論的枠組みの検討を行った。2.本年度は都市住民との連携・ネットワークを形成しつつ有機農業・環境保全型農業が地域的広がりをみせている愛媛県明浜町の補足調査を行うとともに、環境保全を視野に入れた伝統的建造物群(宿場)保存による観光開発を行い持続的な地域づくりをめざしている福島県下郷町において聞き取りと資料収集を行った。3.平成10年度から本年度にかけて現地で収集した資料やデータの整理作業を行い、成果の一部を論文としてまとめた。
不均一系触媒反応における熱揺らぎと溶媒効果の検討

本課題では、不均一系触媒反応における熱揺らぎと溶媒の効果に着目し、それらが触媒活性に及ぼす影響を具体的な例を基に検討している。特に、酸化セリウム触媒の触媒作用を第一原理分子動力学計算によって解析した。本年度は、レアサンプリング手法であるTASS-MDを用いて、固体酸化物触媒と水またはメタノール界面における溶媒分子の構造とダイナミクスに関して、構造変化を促進する反応座標を多数取り入れる第一原理分子動力学計算を行い、界面の微視的な状態を解析した。固体酸化物触媒(酸化セリウム、酸化ジルコニウム)を用いた二酸化炭素とメタノールによる炭酸ジメチル合成反応について、この手法を取り入れることにより、多次元自由エネルギー曲面に基づいた議論を行った。これまでは、blue-moonアンサンブル法により一次元の反応座標のみを用いた計算を行ってきたが、この座標に直交する新たな座標を加えることで、局所的な構造に陥る不十分なサンプリングの問題を回避し、反応機構をより詳細に議論することができた。具体的には、Blue-moonアンサンブル法で用いた反応座標に対してUmbrellaポテンシャルを課し、その反応に伴うプロトン移動を促進するために、プロトンの配位数を新たな反応座標とした加え、その反応座標にはmetadynamics法を適用した。また、酸化物表面のすべてのメタノール分子のプロトン移動を促進するために、すべてのプロトンの配位数に対してTemperature accelerated法を導入した。結果、一次元のblue-moonアンサンブル法では見えていなかった中間体の存在を確認し、反応機構をより正確に理解することが可能となった。同様の計算を酸化ジルコニウム表面の反応へも適用し、酸化セリウムとは異なった機構で反応が進行することも明らかにした。本課題では、不均一系触媒反応における熱揺らぎと溶媒の効果に着目し、それらが触媒活性に及ぼす影響を具体的な例を基に検討し、触媒反応の新しい観点からの原理抽出を目指している。第一原理分子動力学法を用いて、本年度は酸化セリウム触媒の酸・塩基特性に関する研究を行った。酸化セリウムは特異な酸・塩基特性や酸化還元特性を示すために、幅広い分野で利用されている。最近では、低温条件下での液相有機合成反応に有効であることが示されており、触媒としての活用範囲がますます広がってきている。しかし、未だ表面の活性点(酸・塩基点)の役割については不明瞭な部分が多い。本研究では、水中における有機合成反応をターゲットとし、水/酸化セリウム界面における水分子の構造やダイナミクスと酸・塩基の協働作用に着目した酸化セリウム触媒の機能について、第一原理シミュレーションを用いて検討した。まず、第一原理分子動力学シミュレーションにより、水/酸化セリウム界面の状態を解析した。トラジェクトリの解析により、吸着している水の半数程度が解離していること、また、プロトン移動が起こりやすくなっていることがわかり、界面付近で水分子が活性化されていることが観測された。次に、2-cyanopyridineの吸着状態とアミドへの水和反応を検討した。最近、この水和反応が低温(30°C)でも高活性で起こることが報告されている。この反応メカニズムと基質選択性を議論するために、2-cyanopyridineの水中での吸着状態を調べたところ、pyridine環のN原子はCe原子と強く結合し、CN基のN原子も表面のCe原子と結合することで、二点により吸着状態を保っていることがわかった。また、CN基のN原子のみでの結合では弱いため、水中に解離してしまうこともわかった。不均一系触媒の熱揺らぎと溶媒効果に関しての研究に取り組んでおり、具体的な系として酸化セリウム触媒による水中有機合成反応をターゲットとしている。反応メカニズムの解析を通じて触媒機能に関する知見を得ており、当該研究目的に沿って一定の成果が得られている。本年度は昨年度に引き続き、酸化セリウム触媒を対象とした第一原理シミュレーションを行った。しかし、未だ界面の酸・塩基点の役割や活性点については不明瞭な部分が多い。そこで、昨年度に引き続き、水/酸化セリウム界面における水分子の構造やダイナミクスを調べた。トラジェクトリの解析により、吸着している水の半数以上が解離していること、またセリウム原子上に高密度で規則的に水分子、または水酸基が配位することで、界面でプロトン移動が起こりやすくなっており、水分子が活性化されていることが分かった。次に、2-シアノピリジンのアミドへの水和反応を検討した。最近、この水和反応が低温でも高活性で起こることが報告され、さらに構造異性体間で反応性が異なる基質特異性が見出されている。この反応メカニズムと基質選択性を議論するために、2-シアノピリジンの水中での吸着状態を調べたところ、ピリジン環のN原子とCN基のN原子が表面のCe原子と二点で相互作用し、さらに表面酸素原子とCN基のC原子が結合している特異な吸着状態が見つかった。この特異な吸着構造を経由して水和反応が進行すると予測された。また、二酸化炭素とメタノールからのジメチルカーボネート合成に関しても同時に研究を進め、反応メカニズムを調べた。酸化セリウムの表面酸素原子と二酸化炭素が結合した表面カーボネート種を経由する反応経路が有利であることが分かった。

不均一系触媒の熱揺らぎと溶媒効果に関しての研究に取り組んでおり、具体的な系として酸化セリウム触媒による液相有機合成反応をターゲットとしている。反応メカニズムの解析を通じて触媒機能に関する知見を得ており、当該研究目的に沿って一定の成果が得られている。本課題では、不均一系触媒反応における熱揺らぎと溶媒の効果に着目し、それらが触媒活性に及ぼす影響を具体的な例を基に検討している。本年度は昨年度に引き続き、酸化セリウム触媒を対象とした第一原理シミュレーションを行った。特に、酸化セリウム触媒による2-シアノピリジンの水和反応に関して、第一原理計算を用いて、その反応メカニズムの理論的解明を行った。この反応は酸化セリウム触媒のみが低温で高い活性を示し、他の金属酸化物触媒では活性がほとんどないことが分かっており、さらに構造異性体間で活性が大きく異なる基質特異性が見出されている。本研究では、酸化セリウム触媒上での2-シアノピリジンの吸着状態と反応メカニズムを解明し、基質特異性の発現メカニズムについて議論した。まず、酸化セリウム上での2-シアノピリジンの吸着構造を決定した。その結果、酸化セリウムの表面酸素と2-シアノピリジンのCN基のC原子とが結合する特異な吸着構造を見出した。ほとんど反応が進行しない4-シアノピリジンでは、ピリジン環の水素原子と表面との立体障害のため、この吸着構造は不安定となる。次に、この吸着構造に溶媒である水を系に加え、第一原理分子動力学シミュレーションにより水和反応のメカニズムを調べた。自由エネルギー計算にはメタダイナミクス法を用いた。反応解析の結果、この水和反応は酸化セリウムの格子酸素が抜けることで触媒反応が進行することを予測した。室温のような低温で格子酸素が反応に関与する例は極めて例外的であり、溶媒も含めた熱統計力学的第一原理シミュレーションにより、酸化セリウム触媒の特異性について説明することができた。特に、酸化セリウム触媒の触媒作用を第一原理分子動力学計算によって解析した。本年度は、レアサンプリング手法であるTASS-MDを用いて、固体酸化物触媒と水またはメタノール界面における溶媒分子の構造とダイナミクスに関して、構造変化を促進する反応座標を多数取り入れる第一原理分子動力学計算を行い、界面の微視的な状態を解析した。固体酸化物触媒(酸化セリウム、酸化ジルコニウム)を用いた二酸化炭素とメタノールによる炭酸ジメチル合成反応について、この手法を取り入れることにより、多次元自由エネルギー曲面に基づいた議論を行った。
和歌・仮名散文を中心とする散佚写本の復元的研究

本研究は、和歌及び中古仮名散文に関する散佚写本の復元を目指したものである。うち(1)万治四年禁裏焼失本については、その復元に資する現存古典籍の指摘や、周辺の蔵書の性格・伝来の一端を明らかにし得た。(2)散佚文学作品については、歌苑抄や足利義教日次家集といった散佚歌集の研究を行った。(3)その他の重要散佚写本については、特に伊勢物語や二十巻本類聚歌合の伝本・本文研究の徹底的な再検討の端緒を開いた。本年度においてはまず、宮内庁書陵部御所本を活用した、万治四年(1661)禁裏焼失本の復元に関する研究がさらに進展したので、論文として公表した。また古今集の散佚写本に関しても、本文データベースの問題と絡めながら論文化した。と同時に、天理大学附属天理図書館・神宮文庫・神戸市文書館・神戸市立中央図書館・蓬左文庫・ノートルダム清心女子大学図書館・住吉大社などにおいて、古今集のいわゆる藤原基俊本、源氏物語の紀州徳川家旧蔵本、尭孝法印集をはじめとする中古中世私家集、栄花物語・大鏡・今鏡・水鏡といった歴史物語、その他諸作品の散佚写本と、中古中世散佚歌集・散佚物語に関わる原本調査を実施した。結果、とりわけ源氏物語の紀州徳川家旧蔵本について、伝来と行方に関する明確な結論を得ることができた。また尭孝法印集の伝本調査の過程において、足利義教日次家集のツレの存在をも明らかにし得たので、ともに本研究の成果として来年度、学界に報告する予定である。なお学界未紹介の新撰髄脳付載未詳歌学書(天理図書館蔵)などを見いだすこともできたので、今後詳細な内容調査を行っていくこととしたい。さらに新出の、犬山城白帝文庫蔵手鑑の存在を突き止めることができたのも、収穫であった。ほか宮内庁書陵部御所本・天理図書館本・尊経閣文庫本・北岡文庫本などについて、本研究の遂行のために必要な電子複写をも作成した。それらの分析・活用は、来年度以降、順次進めていく所存である。本年度、特に集中的に行ったのは、本朝書籍目録の伝本の調査・収集・研究である。散佚写本・散佚文献の研究に際して、書籍目録類は根幹資料のひとつとなるが、うち本朝書籍目録は従来最も有名であるにも関わらず、必ずしも十分な研究がなされてはこなかった。本年度における当該課題の成果により、本朝書籍目録の伝本・成立・性格について、無注本と有注本に大別できる、編纂に中原氏が関与していた可能性がある、当時実在の天皇家もしくは朝廷ゆかりの蔵書が対象とされていた可能性がある、といった新たな知見を得られたので、2011年度中に発表する予定である。一方、万治四年禁裏焼失本の研究から派生して、本年度においては、宮内庁書陵部御所本を活用した冷泉家旧蔵本の復元的研究も実施することができた。中には学界未知の新出資料も2点ほど含まれている。本年度のうちに口頭発表(和歌文学会2010年12月関西例会)は終えたので、2011年度中に論文発表する予定である。また散佚歌集に関しては、堯孝筆未詳歌集断簡の調査・研究を実施した。結果、『堯孝法印集』と本文が一致するもの以外については、足利義教の散佚日次家集の断簡である可能性が高いと認められたので、論文発表を行った。そのほか、大和物語・栄花物語・今鏡などの散佚写本や、陽明文庫本・金沢文庫本などに関する調査研究も継続中である。なお当該課題に関連する調査のため、京都大学文学研究科図書館・天理大学付属天理図書館への、また学会・関連シンポジウムへの参加のため、大阪府立大学・県立広島大学・立命館大学への出張を行った。本年度も、天理大学附属天理図書館をはじめとする各所蔵機関において、当該研究に関わる古典籍・古筆切類の書誌・内容調査を実施した。結果、犬山城白帝文庫において完全新出の古筆手鑑1帖を発見し、中に伝宗尊親王筆『如意宝集』断簡など、資料的価値の高い古筆切が豊富に含まれていることを確認した。また宝島寺蔵古筆切及び手鑑、鍋島報效会蔵手鑑(の写真版)なども調査し、伝後伏見院筆桂切『風葉集』断簡などを見出した。加えて石水博物館蔵手鑑の中に、『伊勢物語』散佚写本のひとつ、小式部内侍本の断簡とおぼしき1葉を確認し、さらに四天王寺大学図書館恩頼堂文庫蔵古典籍類の中に、俊恵撰の平安時代散佚私撰集『歌苑抄』の断簡2種をも確認したので、本年度はうち『歌苑抄』について論文化した。その他についても順次報告していく予定である。

こうした中で、特に本年度重点的に取り組んだのが、『伊勢物語』散佚写本の研究、及び二十巻本類聚歌合の研究である。『伊勢物語』の方は従来の伝本研究に、二十巻本類聚歌合の方は従来の成立論に、それぞれ相当の問題があり、徹底的な再検証が必要であることが明らかとなった。そこで研究の皮切りとして、『伊勢物語』に関しては天理図書館蔵伝為家筆本を、また二十巻本類聚歌合に関しては永延二年七月藤原実資後度歌合を取り上げながら、その問題点の一端について論じた。なお、昨年度のうちに口頭発表した、本朝書籍目録、及び禁裏文庫本と冷泉家本についての研究についても、本年度のうちに論文化を済ませた。その他、古筆切所収情報データベースの更新データの一部と、『散佚歌集切集成』増訂用の本文データの一部を作成した。本年度は、静嘉堂文庫・東海大学附属図書館桃園文庫・金沢市立玉川図書館・富山市立図書館山田孝雄文庫・西尾市岩瀬文庫・京都文化博物館・天理大学附属天理図書館・湯木美術館などに赴き、中古中世和歌文学及び中古仮名散文に関する古典籍・古筆切・古筆手鑑、及び書籍目録といった関連資料類の調査・撮影を実施した。その結果、中古中世散佚歌集に関する新出断簡(模写を含む)や、中古和歌説話に関する未紹介とおぼしき伝本、関東大震災で焼失したと思われていた古典籍の焼失以前の転写本といった、散佚写本に関する重要資料を多数見出すことができた。またかつて紹介されたきり、存在を忘れられていた、古今集や伊勢物語、土左日記などの重要伝本の再発掘・再評価にも努めた。うち桃園文庫現蔵の土左日記・伝冷泉為相筆本(の転写本)については、翻刻作業を開始している。以上の成果に基づきながら、本年度は、『伊勢物語』国立歴史民俗博物館本(いわゆる大島本)の長大・難解な奥書を解読し、その資料的価値を明らかにする論文を執筆した。また継続的に行っている禁裏文庫本・冷泉家本研究の一環として、『三十六人歌合』の定家真筆本(散佚)を極めて忠実に模写した宮内庁書陵部御所本に関する論文も発表した。ほか、かつて2008年度に作成・配布した『散佚歌集切集成増訂第一版』をさらに増補改訂した『散佚歌集切集成増訂第二版』を作成し、研究成果報告用HP(http://ccs.tsurumi-u.ac.jp/kuboki_lab/top.htm)からそのPDFファイルを無償ダウンロードできるようにした。さらに、国文学研究資料館HPで公開している「古筆切所収情報データベース」の追加データも作成した。平成25年度中にはデータ更新できるよう、調整を進める所存である。当初計画の(1)万治四年禁裏焼失本については、まとめに至るまでの見通しをほぼ付けることができている。また(2)散佚作品、(3)その他の重要散佚写本についても、順調に新出資料・関連資料を発掘・研究し得ている。これに加えて、当該研究計画段階には視野に全く入っていなかった『伊勢物語』、及び二十巻本類聚歌合に関する先行研究の問題点と、解明に向けての方向性を見出せたのは、極めて大きな収穫だったと判断している。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初計画のうち(1)万治四年禁裏焼失本については、既発表分と未発表分とを取りまとめ、数年のうちに単行本化することを目指したい。(2)散佚作品については、引き続き新出資料の発掘・紹介に努めていく。(3)その他の重要散佚伝本については、特に『伊勢物語』及び二十巻本類聚歌合に関する従来説の徹底的な批判と、書誌学・文献学に基づく実証的な研究方法に基づく再検証とに重点を置きながら推進していく予定である。