hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
いきいきとした介護のオノマトペ使用のための学習映像教材の開発に関する研究

【トイレ介助】【食事介助】に、「使用使途依存」は、【痛みの伝達】【利用者の様子や状態の確認】【状況の伝達】【利用者からの訴え】【作業の指示】に下位分類された。「場面・動作依存」は、特定の場面での被介護者の機能回復を促す動作性への動機付けが示された。「使用用途依存」は、特に被介護者から介護者に向けられる「利用者からの訴え」で[痛みのオノマトペ]が顕著に見られ、その重要性が窺われた。しかし、外国人介護人材からは、この「利用者からの訴え」の[痛みのオノマトペ]が特に分からないと示されたところから、[痛みのオノマトペ]の不理解が浮き彫りとなった。また、経験豊富な介護職員は、専門的な知識に裏付けられた経験知をもって、介護のオノマトペを柔軟に操作していることが分かった。2).3).においては、EPA候補者64名分の既存データから正用・誤用を検証し、その結果を丁美貞氏の協力のもとにエクセルデータ化した。平成29年度の取り組みから、外国人介護人材の利用者からの訴えによる[痛みのオノマトペ]の不理解が浮き彫りとなった。また、経験豊富な介護士は、専門的な知識に裏付けられた経験知をもって、介護のオノマトペを操作していることが分かった。一方、急きょ2017年9月、モンゴル国において技能実習生への介護のオノマトペ支援を視野に入れ、[痛みのオノマトペ]における実態調査を行うこととした。また同時に技能実習生送り出し機関での見学とヒアリング調査を行うこととした。これは2017年11月1日の技能実習制度「介護」枠の施行に伴い、モンゴル国が覚書書を締結する(2017年12月締結結実)との状況に基づき、モンゴル人介護人材の来日を見越したことによる。上述した得られた知見を、技能実習生の介護人材への支援に活用するために素早い対応を図ったものである。モンゴル国での[痛みのオノマトペ]の習得状況調査から、1体の症状を表す「ごろごろ」「ずーん」は、モンゴル人超級日本語学習者による高い類推力をもってしても認識には浅い理解や揺れが見られる。それは、2既習事項の功罪、3体調を表すオノマトペは未習事項、4モンゴル語で介護の言葉は僅少によるものであり、これらの影響から意味把握には限界があるということが分かった。また、技能実習生送り出し機関での授業見学及びヒアリングから、事前日本語研修の概要の把握が叶い、介護のオノマトペについての学習は皆無に等しいことが分かった。ここから、モンゴル人技能実習生介護枠者の来日後研修において、いち早く「介護のオノマトペ語彙」を、1既習事項の功罪、2モンゴル語で介護の言葉は僅少という背景を踏まえながら指導する必要性が窺われた。上述の【研究実績の概要】で記した研究成果、および急きょ行ったモンゴル国での調査結果は各種の研究会で研究発表を行うとともに、日本語教師研修において広く公開した。H30年度は、H29年度の「基礎データ」と「データベース」から、学習アプリ「おのまとコ」の開発に至り、パイロット的なフィードバックも加えた。H29年度の「基礎データ」では、「利用者からの訴え」で「痛みのオノマトペ」が顕著に見られるとともに、これら「痛みのオノマトペ」が外国人介護従事者には最も分からないと示されたところから「痛みのオノマトペ」で「基礎データ」を確定した。
新生ポリペプチド鎖依存の翻訳アレストにおけるRACK1の機能解明

新生ポリペプチド鎖依存の翻訳アレストに必須な因子として、RACK1を同定し、RACK1の40Sリボソームへの結合が翻訳アレストに重要性であることを示した。RACK1は、60Sリボソーマルサブユニットと結合するE3ユビキチンライゲースLtn1依存の新生ポリペプチド鎖の分解にもRACK1が必須である事を明らかにした。申請者は、ノンストップmRNAの翻訳阻害機構を解析し、連続した塩基性アミノ酸残基による翻訳伸長阻害(アレスト)を明らかにした。これは、合成途中の新生ポリペプチド鎖とリボソームトンネルとの相互作用による翻訳制御が、真核生物に広く存在することを強く示唆する。最近出芽酵母を用いて、新生ポリペプチド鎖に依存した翻訳アレストに必須な因子としてRACK1を同定した。RACK1は真核生物に広く保存され、様々なシグナル伝達に関与する。また、40Sリボソームサブユニットに結合し翻訳制御に関与する事が示唆されている。申請者は、新生ポリペプチド鎖の配列に依存した翻訳アレストの分子機構と、RACK1依存の翻訳アレストの生理的意義の解明を本研究課題の目的とする。具体的な研究項目は以下の3点である。【1】新生ポリペプチド鎖依存の翻訳アレストの分子機構【2】減数分裂における翻訳アレストの機能【3】翻訳アレストに共役したタンパク質とmRNA安定性制御の分子機構とその生理的意義。平成22年度には、新生ポリペプチド鎖に依存した翻訳アレストに必須な因子としてのRACK1の同定と、RACK1が40Sリボソームサブユニットに結合することが翻訳アレストに必須であることを発表した(EMBO Rep,2010)。震災によって、計画していた実験が実施不可能になった。7月以降は通常の実験環境になったため、予定していた実験(RACK1変異体の作製、2重変異株の作製等)を完了した。これをもって研究開始は遅れたが平成22年度分の予定していた実験は完了した。研究代表者は、ノンストップmRNAの翻訳阻害機構を解析し、連続した塩基性アミノ酸残基による翻訳伸長阻害(アレスト)を明らかにした。研究代表者は、新生ポリペプチド鎖の配列に依存した翻訳アレストの分子機構と、RACK1依存の翻訳アレストの生理的意義の解明を本研究課題の目的とする。平成22年度には、新生ポリペプチド鎖に依存した翻訳アレストに必須な因子としてのRACK1の同定と、RACK1が40Sリボソームサブユニットに結合することが翻訳アレストに必須であることを発表した。平成23年度は、【1】新生ポリペプチド鎖依存の翻訳アレストの分子機構:連続した塩基性アミノ酸配列に加え連続したレアコドンによる翻訳アレストにもRACK1が必要であることを明らかにした。【2】減数分裂における翻訳アレストの機能:条件検討が困難であり、現在のところ、減数分裂におけるRACK1の機能について翻訳アレストに関係する機能は明らかになっていない。【3】翻訳アレストに共役したタンパク質とmRNA安定性制御の分子機構とその生理的意義:翻訳アレストに共役したタンパク質の分解において2つのE3ユビキチンライゲースの基質特異性が解明できた。Ltn1は翻訳アレストに共役したタンパク質分解に普遍的に機能するのに対し、Not4はmRNA内での翻訳アレストの場合にのみに機能することを明らかにした。研究代表者は、新生ポリペプチド鎖の配列に依存した翻訳アレストの分子機構と、RACK1依存の翻訳アレストの生理的意義の解明を本研究課題の目的とした。

平成22年度には、新生ポリペプチド鎖に依存した翻訳アレストに必須な因子としてのRACK1の同定と、RACK1が40Sリボソームサブユニットに結合することが翻訳アレストに必須であることを発表した。平成23年度は、連続した塩基性アミノ酸配列に加え連続したレアコドンによる翻訳アレストにもRACK1が必要であることを明らかにした。また翻訳アレストに共役したタンパク質の分解において、2つのE3ユビキチンライゲースの基質特異性を解析し、Ltn1は翻訳アレストに共役したタンパク質分解に普遍的に機能するのに対し、Not4はmRNA内での翻訳アレストの場合にのみに機能することを明らかにした。平成24年度には翻訳アレストに必要な新規因子を同定し、RACK1とは独立の経路で翻訳制御を行うことが明らかとなった。震災の影響もあり、年度当初は遅れていた。しかしながら8月以降は予定した実験は、ほぼ予定とおりに実施できた。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は最終年度であるので、これまでの研究結果を論文として作製する作業を行う。現在時点では、特に問題なく順調に研究は遂行されている。複数の原著論文を発表するために必要なデータは、ほぼ得られている。
一般化岩澤主予想とp-進局所Langlands対応

前年度に引き続き、階数2の普遍ガロア変形に対するゼータ元の構成に関する研究を行なった。前年度までは、pの外で極小分岐という強い条件の付いた普遍ガロア変形に対してのみゼータ元の構成ができていたが、今年度はこれを極小でない一般の普遍ガロア変形の場合に拡張することに成功した。極小でない場合はp以外の分岐する素点lでのGL_2(Q_l)作用が完備コホモロジーに現れるが、ここに現れるGL_2(Q_l)の表現に対してエマートン・ヘルムの局所ラングランズ対応のp進族版のある主定理を用いることで、極小分岐の場合と同様の結果が得られることがわかった。結果として、階数2の普遍ガロア変形に対するゼータ元の構成のためには、GL_2のp進ラングランズ対応における主要な定理のほぼ全て(コルメツの理論、エマートンによるp進ラングランズ対応の幾何的実現、パスクナスによるGL_2(Q_p)の(p進の意味で)許容的表現の普遍変形の理論、エマートン・ヘルムによる局所ラングランズ対応のp進族版の理論)が本質的に必要であり、研究着手時に思い描いていたよりもはるかに緊密な仕方で一般化岩澤主予想とp進ラングランズ対応が関係していることがわかった。また、普遍変形に対するゼータ元の構成と、申請者の以前の局所イプシロン予想の研究を組み合わせることで、我々の構成したゼータ元が加藤和也氏のイプシロン予想において予想されている``関数等式"を満たすことも証明できた。岩澤主予想の局所版である局所イプシロン予想について研究した.後者の予想はBloch-加藤exponentialと局所イプシロン因子のp進補完性に関する予想である.Bloch-加藤exponentialと局所イプシロン因子はドラーム表現に対して定まる数論的に重要な対象であるが,これらを適切に組み合わせることでドラーム表現のガロアコホモロジーに標準的な基底を定義することができる.局所イプシロン予想とは,ドラーム表現のみに定義されるこの基底を補間する「局所イプシロン同型」と呼ばれる基底が全てのp進ガロア表現の族に対して存在することを主張する予想である.申請者は以前の研究で, Colmezの乗法的合成積を用いた局所イプシロン同型の構成に関する予想を立てていたが,この予想を多くの場合に証明することができた.具体的には,ガロア表現の変形理論によって得られる普遍的なガロア表現に関してクリスタリン表現が稠密であるという仮定の下で,普遍的なガロア表現のガロアコホモロジーの基底をColmezの乗法的合成積を用いて構成することができた.さらに,この基底がクリスタリン表現に対してBloch-加藤exponentialなどを用いて定義される標準的な基底を補間するものであることも証明できた.クリスタリン表現はガロア表現の変形空間の中で稠密であると期待されており,この期待を信じれば,我々の構成した基底の存在とクリスタリン表現での補間性により,存在が予想される局所イプシロン同型は我々が構成したもの以外にはあり得ないという結論が得られる.また, Colmezの乗法的合成積という関手的に振る舞いのよい演算を用いて局所イプシロン同型を構成したことの副産物として, 2つのガロア表現のテンソル積の局所イプシロン同型をそれぞれの局所イプシロン同型の積を用いて記述する積公式を得た.Colmezの乗法的合成積というp進局所ラングランズ対応の研究で現れた演算が,局所イプシロン予想という一見異なる問題においても本質的に重要な演算であることが明らかにされた.また,この副産物として得られた局所イプシロン同型の積公式は,通常の局所因子に対しては一般には成り立たないものであり,局所イプシロン同型に関して従来知られていなかった興味深い公式であると思われる.階数2の普遍ガロア変形に対するオイラー系の構成に関する研究を行った.そのためにまず,深谷-加藤氏による肥田族に対するオイラー系の構成のアイデアを基礎として,モジュラー曲線の完備コホモロジー(これには有理数体の絶対ガロア群とGL_2(Q_p)が自然に作用している)から完備コホモロジーの岩澤コホモロジーへのGL_2(Q_p)同変となる自然な写像を構成した.エマートンの理論によれば,モジュラー曲線の完備コホモロジー(をHecke環の極大イデアルで局所化したもの)は,普遍ガロア変形とp進局所ラングランズ対応によって普遍ガロア変形に対応するGL_2(Q_p)の普遍的な表現とのテンソル積などによって記述できることが知られているので,我々が構成した写像から普遍ガロア変形のオイラー系を得るためには,完備コホモロジーおよびその岩澤コホモロジーから,普遍ガロア変形の部分のみを取り出さなければならない.そのために, GL_2(Q_p)の普遍的な表現に関するPaskunasの理論を用いればよいということがわかった.また,ここで構成したオイラー系は,加藤和也氏の一般化岩澤主予想で存在が予想されているゼータ元(ゼータ同型)であると予想される.この予想と関連して,我々が構成したオイラー系を普遍ガロア変形でパラメトライズされている(pの外で極小分岐な)保型的なガロア表現に特殊化すれば,加藤氏が構成した標準的なゼータ同型と一致することが証明できた.モジュラー曲線の完備コホモロジーとp進局所

ラングランズ対応との関係に関するエマートンの理論及びそれと関連する様々な重要な定理が,普遍ガロア変形のオイラー系の構成という岩澤理論的な問題においても本質的に重要な役割を果たすということがわかってきた.前年度に引き続き、階数2の普遍ガロア変形に対するゼータ元の構成に関する研究を行なった。前年度までは、pの外で極小分岐という強い条件の付いた普遍ガロア変形に対してのみゼータ元の構成ができていたが、今年度はこれを極小でない一般の普遍ガロア変形の場合に拡張することに成功した。極小でない場合はp以外の分岐する素点lでのGL_2(Q_l)作用が完備コホモロジーに現れるが、ここに現れるGL_2(Q_l)の表現に対してエマートン・ヘルムの局所ラングランズ対応のp進族版のある主定理を用いることで、極小分岐の場合と同様の結果が得られることがわかった。結果として、階数2の普遍ガロア変形に対するゼータ元の構成のためには、GL_2のp進ラングランズ対応における主要な定理のほぼ全て(コルメツの理論、エマートンによるp進ラングランズ対応の幾何的実現、パスクナスによるGL_2(Q_p)の(p進の意味で)許容的表現の普遍変形の理論、エマートン・ヘルムによる局所ラングランズ対応のp進族版の理論)が本質的に必要であり、研究着手時に思い描いていたよりもはるかに緊密な仕方で一般化岩澤主予想とp進ラングランズ対応が関係していることがわかった。また、普遍変形に対するゼータ元の構成と、申請者の以前の局所イプシロン予想の研究を組み合わせることで、我々の構成したゼータ元が加藤和也氏のイプシロン予想において予想されている``関数等式"を満たすことも証明できた。研究集会やセミナーでさらに情報収集を進めるとともに.専門家との研究打ち合わせを行う.研究集会等でさらに情報収集を進めるとともに,専門家との研究打ち合わせを行う.学内業務および学内行事のため,当初参加予定であったいくつかの学会,セミナーへの参加を取りやめたことが次年度使用額が生じた主な理由と考えられる.年度末に国内の研究者との研究打ち合わせの旅費などに使用する予定であったが、年度末に他機関支出の出張の予定がいくつか入り研究打ち合わせの予定をキャンセルしたため。研究打ち合わせの出張旅費として使用する予定である。研究集会への参加や専門家との研究打ち合わせのために使用する.
アザフェナレン骨格を含む特異な含窒素多環状共役化合物の合成と機能開拓

ナノグラフェン骨格に窒素原子を導入することで高い電子特性(半導体特性や酸化還元能など)が期待される。しかし、これまで窒素原子を含む化合物はあまり研究されていなかった。申請者は、高いジラジカル性や酸化還元能をもつ分子としてアザフェナレニル構造をもつ共役系化合物やその関連化合物を合成の標的化合物として研究を行うことを着想した。申請者は先にアセナフチレン-5,6-ジカルボキシイミドを出発原料にπ拡張フルオランテンイミド類を合成し、その性質を報告しているが、それをさらに発展させ、新規骨格をもつジイミドやデカシクレンモノイミドを合成している。さらにパラジウム触媒を用いた新規酸化的三量化反応を開発することでデカシクレントリイミドも合成した。これらの化合物は、特異な発光特性や分子会合などの興味深い性質を示す化合物である。ナフタレンイミド骨格はヒドリド還元によってアザフェナレニルへ変換可能であることが知られている。2-置換-2-アザフェナレニルは反応性の高いアゾメチンイリドユニットをもつ化合物であり、反応中間体としてその存在が確認されているのみであった。そこで、適当な立体保護によって安定な化学種として単離することを目的に、5,8位にt-ブチル基と2位に2,6-ジイソプロピルフェニル基を導入することで、2-アザフェナレニル誘導体を熱的には安定な緑色の結晶性化合物として単離することに成功した。この化合物は極めて酸素に敏感な化学種であったが、グローブボックス中で生成・単離操作を行なうことができた。アゾメチンイリド誘導体として初めて単離された化合物である。X線結晶構造解析により構造を決定し、各種スペクトルによって電子状態の解明を行なった。これらの研究をさらに発展させることで、アザフェナレニル骨格を持つ多様な含窒素共役系化合物の合成が可能になるものと期待される。適当な立体保護によって安定な化学種として単離することを目的に、5,8位にt-ブチル基と2位に2,6-ジイソプロピルフェニル基を導入することで、2-アザフェナレニル誘導体を熱的には安定な緑色の結晶性化合物として単離することに成功した。この化合物は、これまで反応中間体としてのみ、その存在が確認されていたアゾメチンイリド構造をもつ化合物であり、世界で初めて分子構造や各種スペクトルによりその電子的性質を明らかにすることができた。X線結晶構造解析によりアゾメチン部位の結合角や結合距離は相当するピリジニウムイオンの相当部位と大きな違いはないことが示されたが、電気化学的測定によって、非常に高い電子供与性を示し、非常に高いHOMOをもつことが、高い反応性を示す理由になることが明らかとなった。このけんきゅうによって、アゾメチンイリド構造をもつ含窒素芳香族化合物の構築方法や安定化の方法が明らかとなり、今後さらなる発展が促されるものと期待される。2-アザフェナレニル誘導体の合成方法や性質を応用することで、さらに多様な含窒素共役系化合物の合成が可能になるものと期待される。

アゾメチンイリド誘導体として初めて単離された化合物である。X線結晶構造解析により構造を決定し、各種スペクトルによって電子状態の解明を行なった。これらの研究をさらに発展させることで、アザフェナレニル骨格を持つ多様な含窒素共役系化合物の合成が可能になるものと期待される。適当な立体保護によって安定な化学種として単離することを目的に、5,8位にt-ブチル基と2位に2,6-ジイソプロピルフェニル基を導入することで、2-アザフェナレニル誘導体を熱的には安定な緑色の結晶性化合物として単離することに成功した。この化合物は、これまで反応中間体としてのみ、その存在が確認されていたアゾメチンイリド構造をもつ化合物であり、世界で初めて分子構造や各種スペクトルによりその電子的性質を明らかにすることができた。この化合物は極めて酸素に敏感な化学種であったが、グローブボックス中で生成・単離操作を行なうことができた。X線結晶構造解析によりアゾメチン部位の結合角や結合距離は相当するピリジニウムイオンの相当部位と大きな違いはないことが示されたが、電気化学的測定によって、非常に高い電子供与性を示し、非常に高いHOMOをもつことが、高い反応性を示す理由になることが明らかとなった。このけんきゅうによって、アゾメチンイリド構造をもつ含窒素芳香族化合物の構築方法や安定化の方法が明らかとなり、今後さらなる発展が促されるものと期待される。申請者は先にアセナフチレン-5,6-ジカルボキシイミドを出発原料にπ拡張フルオランテンイミド類を合成し、その性質を報告しているが、それをさらに発展させ、新規骨格をもつジイミドやデカシクレンモノイミドを合成している。さらにパラジウム触媒を用いた新規酸化的三量化反応を開発することでデカシクレントリイミドも合成した。これらの化合物は、特異な発光特性や分子会合などの興味深い性質を示す化合物である。ナフタレンイミド骨格はヒドリド還元によってアザフェナレニルへ変換可能であることが知られている。2-アザフェナレニル誘導体の合成方法や性質を応用することで、さらに多様な含窒素共役系化合物の合成が可能になるものと期待される。高精度分析天秤の購入を計画していた機種が値上がりのため、購入することができず、それに準ずる性能を持つ機種に変更して購入したため、その分の費用が約40万残額として残った。研究が進展し、論文を投稿受理された。現在別刷購入代金の支払いが残っているため、約10万ほど使用する予定である。また、現在、論文を作成中であり、原稿校正・別刷購入のため、その他経費の残りとともに30万は使用する予定である。旅費の使用が少ないのは、当該学会が日帰りで参加できる場所で開催されたため、10万ほど残った。来年度はまた、宿泊が必要な学会や国際学会に参加する予定のため、全額使用する予定である。
多発性内分泌腫瘍症における変異ret遺伝子の機能解析

MEN2A・2B型変異を導入したret遺伝子をNIH3T3細胞に発現させると、変異Ret蛋白は活性化され細胞のトランスフォームを引き起こす。我々はレセプター型チロシンキナーゼのシングル伝達に重要な役割を担っていることが知られている、Ras-MAPキナーゼ系のアダプター蛋白であるShcがMEN2A・2B型変異Ret蛋白と結合することを示した。Shcはリン酸化チロシン残基を認識するPTB、SH2の2つのドメインを有するが、どちらのドメインが変異Ret蛋白と結合するかを、GST融合蛋白を作製し、これを用いてin vitro binding assayで解析した。その結果、Shcは主にPTBドメインで変異Ret蛋白と結合することが判明した。次にHA tagを付加したShc PTB及びSH2ドメインのみをcodeするDNAをそれぞれ作製し、これを変異Ret蛋白を発現する細胞系に導入。in vivoでの結合も確認した。また同時にMEN2A型変異を持ったret遺伝子と上記のHA tagを付加したShc PTB及びSH2遺伝子をNIH3T3細胞にco-transfectしたところ、Shc PTB遺伝子を導入した細胞においてトランスフォーミング活性の低下を認めた。これらの結果からShcアダプター蛋白はMEN2A・2B型Ret蛋白からのシグナル伝達に関与し、PTBドメインがその結合に関わっていることが示唆された。またRet ligandのGDNF刺激によって活性化したRet蛋白のShc-Ras-MAPキナーゼを介したシグナル伝達経路の関与の可能性をTGW-I-nu細胞で検討した。●変異Ret蛋白細胞内シグナル伝達に関与する下流因子の同定MEN2A・2B型の変異を導入したret遺伝子をNIH3T3細胞に発現されると、変異Ret蛋白は活性化され細胞のトランスフォームを引き起こす。我々はレセプター型チロシンキナーゼのシグナル伝達に重要な役割を担っていることが知られている、Ras-MAPキナーゼ系のアダプター蛋白であるShcが、変異Ret蛋白と結合していることを示した。さらにShcはリン酸化チロシン残基を認識するPTB,SH2の2つのドメインを有するが、どちらのドメインが変異Ret蛋白と結合するのかを、GST融合蛋白を用い、in vitro binding assayを行うことによって解析を行った。その結果、ShcはPTBドメインがMEN2A・2B型Ret蛋白と結合しうるが、SHドメインは結合しないことが判明した。またN末から1062番目のチロシン残基を含む領域がShcPTBドメインとの主たる結合領域と考えられているが、Shcはこの1062番目のチロシンに変異を持ったRet蛋白とは結合しなかった。同時にHA tagを付加したShc PTB及びSH2ペプチドを作製し、これをMEN2A型変異を持ったret遺伝子と、NIH3T3 cellにco-transfectしたところ、Shc PTBにおいてトランスフォーミング活性の低下を確認した。これらの結果からShc PTBドメインはMEN2A・2B型Ret蛋白からのシグナル伝達に関与していることが示唆された。今後HA tagを付加したShc PTB及びSH2ペプチドをMEN2A・2B型Ret蛋白を発現している細胞系に導入してvivoでの結合も確認する予定である。MEN2A型、及び2B型変異Ret蛋白の細胞内シグナル伝達に関与する下流因子の同定MEN2A・2B型変異を導入したret遺伝子をNIH3T3細胞に発現させると、変異Ret蛋白は活性化され細胞のトランスフォームを引き起こす。我々はレセプター型チロシンキナーゼのシグナル伝達に重要な役割を担っていることが知られている、Ras-MAPキナーゼ系のアダプター蛋白であるShcがMEN2A・2B型変異Ret蛋白と結合することを示した。

次にHA tagを付加したShc PTB及びSH2ドメインのみをcodeするDNAをそれぞれ作製し、これを変異Ret蛋白を発現する細胞系に導入。in vivoでの結合も確認した。また同時にMEN2A型変異を持ったret遺伝子と上記のHA tagを付加したShc PTB及びSH2遺伝子をNIH3T3細胞にco-transfectしたところ、Shc PTB遺伝子を導入した細胞においてトランスフォーミング活性の低下を認めた。これらの結果からShcアダプター蛋白はMEN2A・2B型Ret蛋白からのシグナル伝達に関与し、PTBドメインがその結合に関わっていることが示唆された。またRet ligandのGDNF刺激によって活性化したRet蛋白のShc-Ras-MAPキナーゼを介したシグナル伝達経路の関与の可能性をTGW-I-nu細胞で検討した。
時間遅れフィーバック法を用いた確率システムにおける拡散現象の制御

現実の物理現象は多かれ少なかれ環境などからノイズの影響を受けていることが一般的である。そして、物理現象を工学的に応用し何らかのデバイスを作成する場合にはそのノイズの影響によりそのパフォーマンスが悪くなることがある。そのため、考えている物理現象においてノイズの影響を制御するための理論を構築し、それを実際の物理現象に適用することは重要である。本研究課題は、確率過程における拡散現象を制御するための理論に関して二つの側面から研究することである。一つ目は、制御スキームを構築し、その数学的構造を明らかにすることである。二つ目は、構築された制御理論を具体的な物理現象に応用するための方法を考えることである。2018年度は、主に前者に関して研究を行なった。制御スキームの構築に関しては既に2017年に我々の研究グループが構築しているのでそれを本研究課題では用いる。我々の制御スキームは遅れ時間フィードバック制御系であり、その後の研究でその制御スキームを様々な系に適用しその有用性は確認済みである。そして、その制御スキームの数学的構造の理解に関しては、確率過程の拡散現象を力学系の立場で解析する方法と、確率論の立場から解析する方法の二つの観点から解析することに成功した。力学系の立場での解析は、確率過程の平均量を考え確率的要素を排除することで論理を展開した。確率論の立場での解析では、なぜ制御が成功するかをより直感的に解釈することが可能となった。以上をもって概ね我々の制御理論の数学的構造を明らかにするという課題は達成できたと考えている。現在これらの結果を海外論文雑誌に投稿するための準備を行なっている。本研究課題は、確率過程の拡散現象を制御するための理論に関して、制御スキームを構築し、その数学的構造を明らかにすることと、構築された制御理論を具体的な問題に応用するための方法を考えることである。本研究課題の申請時において1年目の研究計画は「白色ガウスノイズの加わる線形システムにおける制御の妥当性の数学的証明」であった。これに関しては「研究実績の概要」欄でも述べた通りほぼ数学的証明は完了している。しかしながら本結果の国際雑誌への掲載に関しては現在論文準備中である。今後早急に国際雑誌への論文掲載を実現する。今後は、構築された制御理論を具体的な問題に応用するための方法の研究を中心に行っていく。2年目は「一般的なノイズへの拡張」と「非線型システムへの拡張」を中心に行う。また1年目の研究活動において、ここで挙げた2つの研究課題に加えて「強制外力が加わった確率システム系への拡張」も重要であることが認識されたので、これに関しても2年目に研究を行う。そして最終年度である3年目には2年目までに構築した理論に対して「実験へ適用するための修正」を行う。これらは概ね申請時の研究計画通りであり、現段階では計画の変更はない。

そして最終年度である3年目には2年目までに構築した理論に対して「実験へ適用するための修正」を行う。これらは概ね申請時の研究計画通りであり、現段階では計画の変更はない。昨年度参加を予定していた国際会議に校務のため参加することが出来なかった分と、都内で行われる予定であった研究打ち合わせが延期された分の予算執行が行われなかった。その分は今年度の旅費に充てる予定である。
日周期大気海洋熱・水交換を介した海洋混合層・積雲フィードバックの数値的研究

本年度は現実の系における海洋混合層・大気フィードバックと西風バースト(WWB)・積雲発生発達の基本過程の解明を目標に、ラニーニャからエルニーニョへの遷移期を対象に、超高分解能雲分解大気・海洋混合層広域モデルの開発・改良を行い、海面フラックスの変動とWWBの発生・持続および海洋混合層の初期状態との関係を明確にすることを目指した。まず、現実系での短周期大気海洋相互作用の実態解明を深化すべく、最新の衛星データ群を駆使して短周期大気変動に対する海洋表層の流れや水温の変化過程を把握できる最先端の解析手法の開発に成功し、米国の国際誌に投稿、直ちに受理された。その結果、大気場の日変動に伴い想定以上の海洋内部波が発生し、表層の流れと海水混合に有意な影響を与える可能性が示唆されたため、その効果をモデルに取り込むこと必要が分かった。そこで、気象研究所との連携による雲分解大気海洋結合モデルの広域化に加えて、内部波の混合効果を加味できるようモデルを改良して実験を行い、エルニーニョ発生の鍵を握る西部--中央熱帯太平洋表層のバリアーレイヤー(以後BL)に着目した熱塩エネルギー収支解析を行ったところ、夜間の冷却時に雨が弱いとBLの塩分成層を破壊して混合層は深まり躍層下部に蓄えられた貯熱が海面近傍へ輸送されるため、夜間の海面の低温化が和らぎ、結果的に昼間の加熱の積分効果が長期化してWWBの維持に好適な環境が維持される。風による内部波起源の下層との熱交換はこの積分効果を助長するよう作用すること等が明らかとなった。一方、降水がある閾値(実験では5mm/hour)を超えると、海面近傍に強い塩分成層構造を持つBLが形成されて混合層は浅くなり、WWBは持続しにくくなる。以上により、エルニーニョ発生のキーであるWWBの発生・維持過程の理解が可能となったが、理事就任のため研究を中止せざるを得なくなった。研究メンバーによる発展を期待している。エルニーニョ現象の引き金として世界が注視している西部熱帯太平洋における西風バースト(以下、WWB)の連続発生に関わる積雲・海洋混合層フィードバックとそれによる日周期大気海洋熱・水交換過程の効果をシミュレートできる雲分解大気海洋結合モデル実験により、平年よりも海洋混合層の深い正の蓄熱アノマリー状態を再現するとともに、バリアーレイヤー(以下、Bl)の形成ならびにWWBの発生・発達に関し、以下のような知見を明らかにすることができた。(1)積雲対流により概ね5mm/時間以上の日スケールの降水があると、海面近傍は強い塩分成層により海面付近にBLが形成され、潜熱放出による高塩分化と低水温化による密度不安定対流は発生できず、直下の季節混合層へ相対的に高温な日スケールの混合層水の補給はおこらず、WWBの連続発生の重要条件である季節混合層の正の蓄熱は起こらない。(2)一方、海面水温が29°Cを超え、強い降水が間欠的に発生する場合には、弱降水時の夜間冷却による対流によって、日スケールの混合層内の低塩分水が下層に運ばれ、弱いBLが季節混合層に発生する。その後に発生する強い降水に伴って同様な過程が繰り返されることにより、季節混合層の蓄熱が進行するとともに、観測される強度のもったBLが季節混合層に形成され、以深の冷たい水との熱交換が遮断され、正の蓄熱状態が保持される。以上の知見を踏まえたWWBの連続発生とエルニーニョ・シミュレーション実験を次年度行い、本年度に整理したシノプティックデータと比較検討するとともに、気象庁気象研究所グループとセミナーを行い、で去るだけ早い時期に国際誌に投稿する。

以上により、エルニーニョ発生のキーであるWWBの発生・維持過程の理解が可能となったが、理事就任のため研究を中止せざるを得なくなった。研究メンバーによる発展を期待している。
泌尿器科領域における形状記憶合金の応用

形状記憶合金と呼ばれるTi-Ni合金は温度サイクルに対して可逆的に形状を変化する性質をもち、既に多くの分野に応用されている。泌尿器科領域におけるこの形状記憶合金の応用として、本研究では体外より電気制御可能な陰茎プロスセーシスと埋没式の人工尿道括約筋装置の開発を検討した。体外電気制御に関しては、高周波トランス結合を利用した皮下野没コイル電極と体外励起コイル電極を用いた経皮的電気エネルギーの誘導に関する基礎的検討を行い、直径4cm大の体外励起コイル電極と皮下埋没コイル電極を作製し、100V交流電源では、厚さ3mmのゴム板を介して1層の皮下埋没コイル電極では1.4Wの、2層のコイル電極では2.5Wの電気エネルギーの誘導が得られた。形状記憶合金の材質は35-45°Cの温度域で迅速かつ大きな変態特性をもつ形状記憶合金が望まれるが、独自の開発には、多額の費用を要し、今回の研究には、既存の52°Cの変態温度特性を有する幅6mm、厚さ0.5mmの板ばね状の形状記憶合金を用いた。温度制御には、形状記憶合金にニクロム線ヒーターをまいてシリコンで被覆し、経皮的電気制御に関する実験を行った。陰茎プロスセーシスには一方向の、人工尿道括約筋には全方位形状記憶合金を用いた結果、体外電気制御により形状記憶合金は可逆的に形状を変化させうることを観察した。陰茎プロスセーシスプロトタイプ【II】および人工尿道括約筋プロトタイプ【II】を2層の皮下埋没コイル電極と接続し、100Vの交流電源を用いた電気制御装置と体外励気コイル電極を用いて、厚さ3mmのゴム板を介して非接触の電気エネルギーの誘導を検討した結果、いずれも温度サイクルにたいして可逆的に形状変化したが、作動状態になるまでに若干時間を要し、接続電気コードやニクロム線電気ヒーターの加熱がみられた。さらに改善すべき課題は多々あるが、体外電気制御を利用した形状記憶合金は、医学分野で広く応用できる可能性があると考える。
日本語の語順の原理と文の談話機能に関する基礎研究

日本語の文の構造を談話における機能という観点から研究し、言語類型論的な比較を行うことを目的に、分裂文・存在文などに関する語順と談話機能の関わりについて研究を進めてきた。文の構造と談話機能の対応は一対一の関係で結びつくといった単純なものではないために母語話者や言語学者の内省に頼った研究では限界がある。そこで、本研究では、数量的な調査・実験・コンテクストを伴った文の許容度判断の調査など、多角的なデータを分析することを通じて、実証的に検証すること試みた。具体的には次のような活動を行った。1.書き言葉のデータベースの作成・・・随想、説明文などの書き言葉から存在文・分裂文など、語順研究の対象となる用例を、前後数段落にわたる文脈とともに抜き出してデータベースを作成した。2.話し言葉のデータベースの作成・・・データベースを作成するにあたって、話し言葉を録音し、書き起こした。そこから、存在文・分裂文・倒置文など語順研究の対象となる用例を検索し、前後の文脈とともに抜き出してデータベース化した。3.語順の変化が後続談話の構造に及ぼす影響を調査するために、文章完成テスト実験を行った。4.語順の変化が後続談話の主題連鎖に及ぼす影響を調査するために、文章要約テスト、タイトル作成テストを行った。5.以上二つの実験について、現在論文を執筆中である。6.分裂文の分析結果を論文「日本語コピュラ文の談話機能と語順の原理-『AがBだ』と『AのがBだ』構文をめぐって-」にまとめ、筑波大学文芸・言語学系紀要に発表した。7. 6の成果をリュブリアナ大学言語学サークルとオーストラリア日本研究学会で発表した。8.日本語の語順研究の成果を言語類型論的な説点がら考察するために、言語類型論的な語順研究の検索を行い、語順研究についての考察を行った。9. 8の成果は語順研究の展望に関する論文と参考文献一覧としてまとめ、科研費報告書として出版した。特定の構造を持った文が、談話のなかである特定の動機に基づいて用いられる可能性があることを実証的に研究することを目的に、本年度は主としてコピュラ文の研究に重点を置いた。まずこれまで同定文、あるいは指定文と呼ばれてきている「がだ」というタイプの文がさらに2種の下位分類を為すものであることを明らかにし、これらの談話内での用いられ方を調査した結果、主語名詞句を特立させるために用いられるものと、述語名詞句を特立させるために用いるものであることが明らかになった。また、後者のタイプの場合は、述語名詞句の指示対象物が後続談話に持続的に語り継がれていく可能性が高いということも数量的に明らかになった。この傾向は、分裂文の「のがだ」という形式の場合、さらに顕著になり、90パーセント以上の文で、述語名詞句が後続の談話で語り継がれていくという結果を得た。語順の最も基本的な形は、発話時に聞き手の意識に登っている事柄をず述べて、次にそれに関連した事項をつけ加えるという形、つまり「旧情報から新情報へ」という流れであると言われている。コピュラ文を調査した結果、ほとんどの場合で、この流れに沿っていることが観察されたが、主語名詞句を特立するタイプのものに関しては、必ずしもそうではなく、話し手が緊急に伝達する必要があると考える情報がまず述べられて、次に聞き手の意識にすでに登っていると考える情報が続く「新情報から旧情報へ」という流れが見られることが明らかになった。

これは、文頭という重要な位置が、ある場合は前提を共有するために、またある場合は緊急の情報をいち早く伝達するために利用されるためであると考えられる。これらの成果に関しては、本年3月にスロベニアのリトルュブリアナ大学言語学サークルで研究発表を行う予定である。ある特定の統語構造を持つ文が談話の中で果たす機能を明らかにすることが本研究の目的である。なかでも特に文の構成要素の配列に焦点を当て、配列の順番(語順)がどのような話し手の動機に基づいて決定されるのかという点を数量的調査、および実験を手掛りとして実証的に記述することを目指している。昨年は書き言葉を資料として2種のコピュラ文「のがだ」と「のはだ」の数量的調査を行い、先行文脈からの引き継ぎと後続談話への持続という点で、両者が異なった特性を見せることを明らかにした。今年度はこの点をさらに厳密に記述するため、大学生285名を対象に文章完成テストを実施した。これは、上記2種のコピュラ文を含む文と含まない文から成る物語の冒頭部4種を提示してその先を書き継がせるテストである。この結果については現在集計中であるが、これまで一部を集計した段階では予想通り特定の登場人物を後続談話に持続させる談話にコピュラ文が使用される割合が高いという結果を得ている。今後はこの集計に基づいてコピュラ文と非コピュラ文の使い分け、および2種のコピュラ文「のがだ」と「のはだ」の使い分けを観察し、ある特定の統語構造が特定の語順を選択するために利用されているありさまを明らかにする予定である。文の構造と談話における機能との関連を研究することを目的に、本年度は主として類型論的な語順研究に力を注いだ。まず、類型論的な語順研究の理論と個別言語の記述研究にかかわる問題の整理につとめ、研究史として概観した。この成果は報告書に論文として発表する。また、機能主義的な語順研究を進める上での基礎概念である「新情報・旧情報」「主題連鎖」「主題の構造」「談話主題」等に関するこれまでの研究を概観し、用語の概念規定のデータベースの作成を試みた。これは現在作成途上にある。また、言語形式と談話の構造を明らかにする研究の一環として、日本語の説明文の主題連鎖と談話構造についての研究を進めている。語彙の反復連鎖と談話における主題展開の関連、反復語彙の分布と談話主題との関わり、特定の構文の主題提示機能、要約文とタイトルにみられる談話主題の残存率などに関する研究などを、要約文の作成調査、未完成文の完成テストなどの調査を用いて進めている。その調査結果は現在集計を進めており、近く論文として発表する予定である。さらに、語順や談話の構造に関する機能主義的な研究の文献を収集し、参考文献のデータベースを作成した。この成果は文献一覧として報告書に発表する。
サケ科魚類の成長を司るインスリン様成長因子結合蛋白の組換え蛋白の作製

本研究では、魚類の成長に重要なインスリン様成長因子-I(IGF-I)の活性を調節しているIGF結合蛋白(IGFBP)の組換え蛋白を作製し、脳下垂体における作用を解析した。まずサクラマス未成熟魚の脳下垂体培養系を確立した。次に、大腸菌発現系により機能的な組換えIGFBPを発現させた。そして、組換えIGFBPをIGF-Iとともに脳下垂体培養系に添加した。結果、IGF-I活性の阻害型と考えられていたIGFBP-1は、脳下垂体においては促進型として働くことを初めて示唆した。今回作製した組換え蛋白を用いることにより、さらに詳細な魚類の成長調節メカニズムの解析が期待できる。魚類の成長にはインスリン様成長因子(IGF)-Iが重要である。IGF-Iは成長を促進するだけでなく、脳下垂体において成長ホルモン(GH)の合成と分泌を抑制する。一方で、IGF-Iの活性は複数存在するIGF結合蛋白により調節されている。本研究は、サクラマスの脳下垂体におけるIGF-IのGHに対する抑制作用が、IGF結合蛋白によりどのように調節されているのか解析することを全体の目標としている。本年度は、初代脳下垂体細胞培養系の最適化を行うとともに、GHの蛋白およびmRNAレベルの定量法を確立した。そしてIGF-Iの作用を解析した。連携研究者と共に、サクラマス1年魚の脳下垂体の初代細胞培養を行った。まず、摘出した脳下垂体を細断後、コラゲナーゼで処理して培養プレートに播いたところ、4日間は良好に培養できることを確認した。次に、GHのリアルタイム定量PCR法と時間分解免疫測定法(TR-FIA)の確立を行った。リアルタイム定量PCRは、連携研究者が設計したプライマーを用いて確立した。GHのTR-FIAは、組換えGHをビオチン標識し、ウサギ抗サケGH抗体を用いた競合法を試みた。結果、スタンダードカーブが得られ、サクラマスの脳下垂体培養液とも交差性を示したことから、培養液中のGHの定量が可能になった。この実験系を用いて、IGF-Iの作用を解析した。サクラマス1年魚を雌と雄に分け、それぞれから脳下垂体を摘出し、上述の方法により培養を行った。サケIGF-Iを培養液に添加したところ、gh mRNA量は、雌雄共に添加3日後では対照群と添加群の間に有意差は認められなかった。一方、GH分泌量は雌において添加1日後および2日後に添加群で有意に低い値となった。これらのことから、処理期間は2日程度までが適切であると考えられた。また、雌雄間ではベースラインに多少の違いはあるものの、概ね同様の反応であった。魚類の成長にはインスリン様成長因子ーI(IGF-I)が重要であるが、その活性はIGF結合蛋白(IGFBP)により促進または阻害されると考えられる。サケ科魚類の血中には3種類の主要なIGFBPが存在し、申請者らはこれらがIGFBP-1a、-1bおよび-2bであることを明らかにした。本研究は、これらIGFBPの組換え蛋白を作製し、機能を解析することを目的としている。本年度は、IGFBP-1aと-1bについて大腸菌にて組換え蛋白を作製した。サクラマスの肝臓からIGFBP-1aと-1bの翻訳領域cDNAをクローニングした。そして、蛋白の可溶性を高めるチオレドキシン(trx)を融合パートナーとして発現するpET32aに組み込み、発現ベクターを構築した。これを蛋白質の正しい立体構造の再生が効率的に行われる大腸菌Rosettagamiに形質転換した。培養後、IPTG(isopropyl-b-thiogalactoside)により組換え蛋白の発現を誘導した。結果、電気泳動において予想されるサイズに組換え融合蛋白バンドが観察され、それらがリガンドブロッティングにおいてIGF-I結合能を持つことが確認された。さらに大量培養においても可溶性画分に発現が見られた。組換え融合IGFBP-1b(trx.IGFBP-1b)に関しては、さらに可溶性画分をニッケルアフィニティークロマトグラフィーにより精製した。そして、融合パートナー(trx)をエンテロキナーゼにより切断した。制限消化後のIGFBP-1bは、標識IGF-Iを用いたリガンドブロッティングにおいて血清IGFBP-1bと同一の位置に検出され、活性だけでなく構造的にも正常な組換え蛋白であると考えられた。これらのことから、本発現系により機能的な組換えIGFBPが作製できることが示された。IGF-Iは骨や筋肉といった標的器官に作用して成長を促進するだけでなく、脳下垂体において成長ホルモン(GH)の合成と分泌を抑制する。

一方で、このようなIGF-Iの活性は複数存在するIGF結合蛋白(IGFBP)により調節されている。本研究は、組換えIGFBPを作製し、サクラマスの脳下垂体におけるIGF-Iの作用が、IGFBPによりどのように調節されているのかを解析することを目的としている。本年度は、組換えIGFBPを大量発現させ、機能的なIGFBP-1aと-1bを調製し、初代脳下垂体細胞培養系に添加して作用を調べた。これまで確立した大腸菌を用いた組換え蛋白発現系でIGFBP-1aと-1bを発現させた。大量発現させると、可溶性画分で検出されていた組換え蛋白が不溶性画分に移った。そのため、不溶性画分を尿素で可溶化した後に蛋白の巻き戻しを行った。次にニッケルアフィニティークロマトグラフィーにより精製し、mgオーダーの組換え蛋白を得た。これらはIGF-I結合能を持つことが確認された。さらに、融合蛋白を酵素にて切断した。結果、目的のサイズにバンドが検出され、血中のものとほぼ同様の組換え蛋白が調製できた。次に、融合組換えIGFBP-1aと-1bを、サクラマス初代脳下垂体細胞培養系にIGF-Iと共に添加した。まず、IGF-Iは添加量(1, 10もしくは100 nM)依存的にGHの分泌を抑制した。そして、組換えIGFBP-1aと-1bは共にIGF-Iの抑制作用を増強させた。これまでIGFBP-1はIGF-I作用の阻害型と考えられていたが、本研究の結果から状況によっては促進型にもなりうることが示唆された。以上、本研究により組換えIGFBPが大量に作製され、魚類の脳下垂体において初めてIGFBPの作用の解析が行われた。魚類生理学本事業の研究計画として、1年目はインスリン様成長因子結合蛋白のクローニングと組換え蛋白の作製、2年目は細胞培養系の最適化と成長ホルモン定量法の確立があったが、これまでほぼ計画に沿った成果が得られた。3年目には1年目と2年目の実験系を組み合わせた研究を予定しており、当初の目標を概ね達成することが見込まれるため、上の評価とした。計画にほぼ沿った研究結果が得られたため。今後は、サクラマス組換えIGFBP-1aと-1bの大量発現を行い、融合蛋白質を酵素切断して機能的な蛋白を精製する。そして、サクラマス未成熟魚の脳下垂体培養系にIGF-Iとともに添加して、IGF-IのGH抑制作用に対する調節機能を解析する予定である。今後は、サクラマスの脳下垂体細胞培養系の確立を研究協力者と共に試みる。また、脳下垂体におけるIGF-IとIGFBPの作用の標的となる成長ホルモン(GH)を定量するため、時間分解蛍光免疫測定法およびリアルタイム定量PCR法を確立する。こららを用いて、IGFBPのIGF-I調節機能を解析する予定である。本年度では試料の抽出に必要な試薬の購入を計画していたが、来年度により多くの試料の処理が必要であることが予想されたため、消耗品費を節約した。次年度使用額(2,944円)は上述の試料抽出に必要な試薬の購入に充足する予定である。次年度の研究費は、脳下垂体培養系、時間分解蛍光免疫測定法およびリアルタイム定量PCRに必要な試薬や器具類に主に使用する。また、研究協力者と共同実験を行うための旅費および成果発表旅費も計上する予定である。
椎間板変性に対する新規治療法の開発

本研究は1)髄核の組織恒常性維持におけるFlt-1の機能解明、2)繊維輪における変性とヒアルロン酸代謝の関係の二つに大別され、方法はそれぞれ以下の通りである。1)無血管性組織におけるFlt-1の役割を解明するために、soluble Flt-1 knockoutマウスの椎間板における表現型を解析する。2)椎間板変性におけるヒアルロン酸代謝を検討するため、ラット繊維輪細胞を用いてin vitroでHYBIDの発現制御メカニズム及びその機能を解析し、更にHYBID knockoutマウスの提供を用いて、in vivoにおける機能解析を行う。
hypoxiaをtriggerとする上皮間葉転換におけるCD133の役割の解明

癌の浸潤や転移の過程において上皮間葉転換(EMT)の関与が近年注目されている。固形癌の中心部は酸素分圧が低い低酸素状態(hypoxia)にあることが知られるが、我々は特に大腸癌細胞に着目し、このhypoxiaが大腸癌細胞のEMT形質獲得の1つのtriggerとなることをこれまで見いだし報告してきた。一方CD133は大腸癌における癌幹細胞マーカーの1つの候補とされるがその意義については未だ不明な点が多い。低酸素状態においてCD133(+)細胞がEMT様の形態変化を来すのに対しCD133(-)細胞では変化を認めなかったことから、CD133がhypoxiaにおける癌のEMTに関与し、その結果癌の浸潤や転移に促進的に働いているのではないかという仮説に至った。本研究はhypoxiaをtriggerとするEMTにおけるCD133の役割の解明を目的とする。本年度においてはIn vitroでの検討を行った。ヒト大腸癌細胞株を磁器細胞分離法(MACS)を用いてCD133(+)及び(-)細胞に分離した。これを低酸素環境下で培養し細胞増殖能、およびEMT関連蛋白の発現をFlow-cytometryを用いて評価した。またE-cadherinやVimentin等のEMT関連蛋白を定量することにより、低酸素環境下にてCD133(+)細胞で特に強いEMTが誘導されること、また正常酸素環境に戻した際に、急速に間葉系の形質から上皮系の形質へと戻ることが確認された。さらに癌の転移形成に大きな役割を果たすIntegrin蛋白についてもCD133(+)細胞と(-)細胞で大きくその発現が異なることが分かった。またこれに伴い低酸素下ではCD133(+)細胞では(-)細胞と比べ遊走能が大きく亢進していることも確認された。大腸癌細胞株を用いたIn vitroの検討ではほぼ仮説通りの結果が得られ、終了している。本年度は主に遠隔転移を有する大腸癌の臨床検体を用いて、転移の形式とCD133の発現に相関があるかどうかを検討し、In vitroの結果の実臨床における妥当性を評価する予定である。低酸素環境下では細胞増殖は抑制され、CD133(-)細胞でapoptosisをきたしやすいことが確認された。またE-cadherinやVimentin等のEMT関連蛋白を定量することにより、低酸素環境下にてCD133(+)細胞でEMTか&#12441;より誘導されることも確認された。MACSを用いたCD133(+)及び(-)細胞の分離も高い純度で可能であった。その分離細胞を用いて、低酸素状態でEMTが誘導されることも確認することができた。

さらに癌の転移形成に大きな役割を果たすIntegrin蛋白についてもCD133(+)細胞と(-)細胞で大きくその発現が異なることが分かった。またこれに伴い低酸素下ではCD133(+)細胞では(-)細胞と比べ遊走能が大きく亢進していることも確認された。大腸癌細胞株を用いたIn vitroの検討ではほぼ仮説通りの結果が得られ、終了している。上記、低酸素状態における細胞増殖能やEMT誘導の検証に加え、Cell cycleや細胞の接着能・遊走能においてもCD133が関与するかどうかを検討する。本年度は主に遠隔転移を有する大腸癌の臨床検体を用いて、転移の形式とCD133の発現に相関があるかどうかを検討し、In vitroの結果の実臨床における妥当性を評価する予定である。2019年度に臨床の大腸癌切除検体及び大腸癌転移巣切除検体を用いた検討を行う予定である。2018年度から一部開始予定であったが、症例の蓄積に若干の遅れがあり、2019年度からの開始となった。このため2019年度の予算88,000円を次年度に繰り越し使用することとした。