hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
腸管出血性大腸菌感染症に対する再生医療を応用した治療法とワクチンの開発

このインビトロの系でLPSとStx2によってアストロサイトの活性化を再現できたことは大きい。このインビトロ系で活性化したアストロサイトとMuse細胞を共培養することで、Muse細胞の有する免疫抑制作用因子をマイクロアレイで調べることができる。1腸管出血性大腸菌(EHEC) O157またはO111をNOD-SCIDマウス経口感染させることで、急性脳症を発症させ、Muse細胞を感染後2日目に5万個静注(iv)することで、救命することに成功した。どちらのマウスモデルでも、脳内のアストロサイト(AST)の活性が認められ、Muse細胞はASTの活性を抑制することで、急性脳症に効果があることが判明した。Muse細胞が有するASTに対して強い免疫抑制作用を確かめるために、GFPを発現させたMuse細胞とマウスのAST初代培養細胞をベロ毒素存在下で共培養した。Muse細胞はコントロールの骨髄間葉系幹細胞(non-Muse細胞)に比べて、有意に遊走能を有し、ASTに接着・結合していた。また、Muse細胞の足を伸ばしてASTの活性を有意に抑制していた。2018年から、Muse細胞は、我が国において心筋梗塞の治療として最初の臨床試験が始まったことから、2018年5月にイタリアで開催されるEHECの国際学会で口頭発表に選ばれた。2結核の再燃に関係するMDP1とEHECが産生するベロ毒素2型のBサブユニット(Stx2B)を抗原として、DNAアジュバントCpG-DNAを付与したタンパク融合ワクチンを完成させた。マウスに皮下注した結果、MDP-1とStx2の抗体価の上昇をELISAで確認できた。EHECチャレンジテストにおいてもワクチン群は有意に生き残った。3九州大学と共同研究で、線虫の腸管にベロ毒素レセプターを発現させることに成功し、その毒素機序をマイクロアレイで解析した。4漢方薬で汎用される大黄から特別な抽出方法で高極性成分エキスの抽出に成功した。このエキスをEHEC経口感染マウスに経口投与すると、全て生存した。この知見からこのエキスは、ベロ毒素結合性解毒物質であることが判明した。腸管出血性大腸菌(EHEC)感染症は、急性脳症を引き起こす。本研究費で、世界で初めて、再生医療に用いられているMuse細胞を静注することで、EHEC O111経口感染マウスモデルを救命することができた。そのメカニズムを解析するため、マウスアストロサイト初代培養を用いて、培養上清にベロ毒素2型(Stx2)とLPSを添加することで、アストロサイト(AST)が活性するin vitro系を確立した。AST培養後に、Stx2 (10ng/mg)とLPS(1 microg/ml)を加え、GFPでラベルしたMuse細胞とnon-Muse細胞を加えた。その結果Muse細胞は活性化されたASTを有意に抑制した。今後は、6週齢NOD-SCIDに、マイトマシンを腹腔内投与し、同時にEHEC O111を10の10乗CFU感染させ、その病態を免疫染色で詳しく調べるとともに、Muse細胞を静注して、その効果を生存率などで調べる。大黄のエタノール抽出エキスのカラムクロマトグラフィー(Sephadex LH-20)による分画を行う。分画したフラクションの活性を、B2F1マウスモデルを使って調べる。活性が確認されたフラクションについては、さらに逆相クロマト(Cosmosil 75C18)による分画を行い、各フラクションの活性を測定する。
細胞分化誘導時のシグナル伝達における糖脂質とスフィンゴ脂質の相互関係の解析II

今回は、糖脂質の直接的な細胞機能への生理作用のよいモデルであるガングリオシド、GM3添加によるHL-60細胞分化誘導機構の細胞内シグナル伝達を解明するために以下の研究を試みた。(1)ガングリオシド添加によるHL-60細胞分化誘導時のセラミドの量的、質的、そして時間的変化について検討する。(2)ガングリオシドまたはサラミド添加によるHL-60細胞分化誘導時に、分化に密接に関係すると報告されているfos、jun、mycなどの癌遺伝子シグナルの変化を検討する。「結果」まず(1)のプロジェクトについて、ガングリオシドGM3添加によるHL-60細胞の分化誘導を試みたところ、添加数日後に分化誘導作用を示したがその作用は極めて弱く、セラミドの細胞内変化は特定できないようであった。時間的経過、および量的変化を考慮して再検討の余地はあるものの、ガングリオシド->セラミドへのシグナルの流は著明ではなくむしろ逆のシグナルの流であるセラミド->ガングリオシド、又はセラミドシグナルのガングリオシドによる調節の可能性の検討が必要と思われた。従って、(2)の研究計画によりセラミドによるシグナルの下流について検討し、その後にそれらのシグナルがスフィンゴ脂質およびスフィンゴ糖脂質の代謝とどのように関係しているのかについて検討を試みた。AP-1蛋白の構成因子であるfos、junについて、mRNAレベル、蛋白レベルおよびAP-1のTREへのバインティング量の変化を検討したところ、セラミドにより全ての段階にて増加が認められmRNAについては処理後30分より増加を開始していた。セラミドによるDNA断片化は処理後3時間に認められた。セラミドによりHL-60細胞の分化が誘導され、AP-1は細胞分化誘導の過程においても変化することが認められている。これらの結果は、AP-1などの核内転写因子に対するガングリオシドなどのスフィンゴ糖脂質のmodulationの可能性を示唆している。
準限界集落に居住する高齢者のライフスタイルの解明、及び心理社会的支援モデルの構築

準限界集落(愛媛県西宇和郡A町)に居住する高齢者に対してライフスタイルに関する調査を行い、社会環境的に厳しい地域に居住する高齢者のライフスタイルタイプとその特徴を明らかにする。また研究の最終年度には、生きがいや世代性(ジェネラティビティ)の追究を含めた高齢者一人ひとりのwell-beingの実現に向け、高齢者のライフスタイルタイプを踏まえた心理社会的支援モデルを構築する。
クロストリジウム属細菌のセルロース系バイオマス分解酵素生産の調節機構

地球上に膨大に存在し未利用な資源であるセルロース系バイオマスからの原油代替化合物生産(バイオリファイナリー)を実現するために、セルロース系バイオマスの効率的分解を達成する必要がある。バイオリファイナリーの候補細菌であるClostridium thermocellumはセルロース系バイオマスの構造や構成成分を認識し、遺伝子発現調節因子(σ因子)を介して、その分解に適した多種の分解酵素を分泌する。本研究では、σ因子の機能を明らかにすることでC. thermocellumのバイオマス分解酵素生産の調節メカニズムを解明する。これまでにC. thermocellumのσ因子遺伝子構成的発現株の作製に成功している。σ因子タンパク質が細胞内に存在していることを、ウエスタンブロッティングにより確認した。トランスクリプトーム解析によって、この株の糖質関連酵素遺伝子のうち47つの発現が促進、10つの発現が抑制されていることがわかった。この株の培養液のセルロース系バイオマス分解活性は、野生株のものより小さかった。セルラーゼ活性には変化がなかったが、キシラナーゼ活性が低下していることがわかった。以上の通り、本研究ではσ因子遺伝子構成的に発現するC. thermocellum株を作製することによって、σ因子の機能をin vivoで解析することができた。今後はσ因子遺伝子構成的発現株と野生株の生産酵素プロファイルを比較することによって、セルロース系バイオマス分解に重要な役割を果たす分解酵素を明らかにする。今年度までで当初の研究計画どおり、σ因子遺伝子発現株の作製とそのトランスクリプトーム解析を進められており、順調に進展していると認識している。σ因子が直接調節する分解酵素遺伝子を、σ因子遺伝子構成的発現株のChIP-seq解析によって明らかにする。σ因子遺伝子構成的発現株と野生株の生産酵素プロファイルを、活性染色法によって明らかにする。ここまでで得られた結果からセルロース系バイオマス分解に重要だと推定される酵素を調製し、その特徴を明らかにする。初年度にChIP-seq解析費用を計上していた。サンプル調製は済んでおり、今年度の早い時期に解析できる見込みである。次年度分として請求した助成金と合わせて、基盤的な備品の購入、ChIP-seq解析、セルロース分解酵素のリコンビナント調製と酵素活性評価を行う。
染色体分配に関与する新規ヒトキナーゼAikの機能解析

ショウジョウバエのAuroraおよび酵母のIPL1の変異遺伝子は、染色体分配の異常により不妊や倍数性(ploidy)の異常を来すことが知られている。我々がクローニングした新規遺伝子AIK1(旧名Aik)がコードする蛋白質は、これらとキナーゼ領域で高い相同性を有し、細胞周期に依存して中心体に局在することから染色体分配に重要な役割を果たすと考えられる。また、AIK1遺伝子がマップされたヒト染色体20q13の領域は、ある種の癌で遺伝子増幅の認められる領域であることが知られており、最近AIK1が新しい癌遺伝子であることが報告された。そこで本研究では、乳癌症例33例の病理標本を用いてAIK1の発現を検討した。病理組織型には関係なく、高頻度に癌部のみが陽性に染色され、良性腫瘍では部分的に弱く染色されるにすぎなかった。(投稿中)データベースの検索により高等動物では、AIK1がファミリーを形成していることが明らかとなり、我々は第2、第3のファミリーであるAIK2およびAIK3をクローニングした。AIK2cDNAは343アミノ酸からなる蛋白質をコードし、AIK2蛋白質は細胞周期に依存してM期に強く発現した。また、AIK2遺伝子(STK12)はヒト染色体17p13.1にマップされ、近くにp53があることやある種の癌で欠失していることが報告されている。(Cytogenet.Cell Genet.1998)一方、AIK3cDNAは309アミノ酸からなる蛋白質をコードし、AIK3蛋白質は細胞周期の後期から細胞質分裂にかけて中心体に強く発現し、ある種の培養癌細胞株で過剰発現を認めた。また、AIK3遺伝子はヒト染色体19q13.43にマップされ、ある種の癌で欠失していることが報告されており、いずれのAIKファミリーも癌との関連が示唆された。(J.Biol.Chem.1999)ショウジョウバエのAuroraおよび酵母のIPL1の変異遺伝子は、染色体分配の異常により不妊や倍数性(ploidy)の異常を来すことが知られている。(J.Biol.Chem.1999)染色体分配は、細胞の基本的な機能であり分裂酵母や出芽酵母の突然変異株が数多く単離されている。変異の原因遺伝子がコードする蛋白質は、キナーゼを始めとしてホスファターゼ、Ca結合蛋白質、ユビキチン/プロテアソーム系の酵素などが含まれるが、それらの相互関係は全く解明されていない。ショウジョウバエ由来のAuroraおよび酵素由来のIPL1は、互いに相同性が高く、Aキナーゼとも約30%のホモロジーを有する。これらの変異遺伝子は、染色体分配の異常により不妊や倍数性(ploidy)の異常を来すことが知られているが、その詳細な分子機構については解明されていない。申請者らがクローニングした新規遺伝子aikは、これらとキナーゼ領域で高い相同性を有し、ヒトホモログの可能性が高い。申請者はこれまでに以下のことを明らかにしてきた。1.aikがコードする43kDa蛋白質は、N末側に調節領域、C末側にキナーゼ領域をもつ。2.aik mRNAは、精巣に強く、腸管・骨格筋に弱く発現する。3.大腸菌で発現させたGST-Aik融合蛋白質を抗原として特異抗体を作製した。4.NorthernおよびWestern法により、Aikは細胞周期に依存してM期に強く発現する。5.蛍光抗体法により、AikはM期特異的に中心体に局在する。6.aik遺伝子はヒト染色体20q13にマップされる。これらの研究成果をJ.Biol.Chem.に発表した。

AikはショウジョウバエAuroraや酵母IPL1と同様に染色体分配に関与し、これらのヒトホモログである可能性が高く示唆された。さらに本研究では、aikのアンチセンスオリゴヌクレオチドをエレクロポレーション法によって細胞内に導入し、細胞の形態変化とくに細胞分裂に関与する蛋白質の局在を調べた。1.アンチセンスオリゴヌクレオチドを導入したHeLa細胞のα-tubulinを染色すると、正常な二極性の紡錘体形成が認められず、一極性あるいは不均等な二極性の像が観察された。2.抗γ-tubulin抗体で染色すると、中心体は複製されているが、分離が不十分で互いに接近していた。3.分子モーターのEg5やdyneinは、微小管に沿って局在した。ショウジョウバエのAuroraおよび酵母のIPL1の変異遺伝子は、染色体分配の異常により不妊や倍数性(ploidy)の異常を来すことが知られている。我々がクローニングした新規遺伝子AIKがコードする蛋白質は、これらとキナーゼ領域で高い相同性を有し、細胞周期に依存して中心体に局在することから染色体分配に重要な役割を果たすと考えられる。また、AIK遺伝子がマップされたヒト染色体20q13の領域は、ある種の癌で遺伝子増幅の認められる領域であることが知られており、最近AIKが新しい癌遺伝子であることが報告された。そこで本研究では、乳癌症例33例の病理標本を用いてAIKの発現を検討した。病理組織型には関係なく、高頻度に癌部のみが陽性に染色され、良性腫瘍では部分的に弱く染色されるにすぎなかった。(投稿中)データベースの検索により高等動物では、.AIKがファミリーを形成していることが明らかとなり、我々は第2、第3のファミリーであるAIK2およびAIK3をクローニングした。AIK2cDNAは343アミノ酸からなる蛋白質をコードし、AIK2蛋白質は細胞周期に依存してM期に強く発現した。また、AIK2遺伝子(STK12)はヒト染色体17p13.1にマップされ、近くにp53があることやある種の癌で欠失していることが報告されている。(Cytogenet.Cell Genet.1998)一方、AIK3cDNAは309アミノ酸からなる蛋白質をコードし、AIK3蛋白質は細胞周期の後期から細胞質分裂にかけて中心体に強く発現し、ある種の培養癌細胞株で過剰発現を認めた。また、AI3遺伝子はヒト染色体19q13.43にマップされ、ある種の癌で欠失していることが報告されており、いずれのAIKファミリーも癌との関連が示唆された。(J.Biol.Chem.1999)
固体分散体による難水溶性薬物の溶解性改善メカニズムの解明及び処方最適化

アセチル基及びサクシノイル基の割合が異なる二種のHPMC-AS (AS-LF及びAS-HF)溶液中における薬物(Carbamazepine: CBZ)及びHPMC-AS間の分子間相互作用をNMRにより評価した。CBZ/AS-HF溶液中におけるNOESYスペクトルにおいて薬物及びAS-HF間に相関ピークが認められ、溶液中においてCBZ及びAS-HFは分子間相互作用を形成していることが示唆された。一方、AS-LF溶液中では薬物及びHPMC-AS間にNOESY相関ピークが認められず、AS-LFとCBZ間の分子間相互作用はAS-HFと比較して弱いと考察した。更なる詳細な分子間相互作用の解明を目的として、CBZ/AS-HF溶液中でCBZピークを選択励起し、Saturation transfer difference (STD)-NMR測定を行った。その結果、HPMC-AS中のアセチル基プロトンにおいて最も強いSTDピークが認められ、HPMC-AS中のサクシノイル基のSTDピーク強度は極めて小さくなった。STDピーク強度は励起したCBZピークとの相互作用の強さに比例して増加することから、溶液中においてCBZはHPMC-AS中のアセチル基と特に強く相互作用を形成していると推察した。AS-LFと比較してアセチル基の割合が多くサクシノイル基の割合が少ないAS-HFは、より強い薬物結晶化抑制能を有することが確認されており、NMR測定により認められた各種置換基ごとの薬物との分子間相互作用の強度差が、HPMC-ASの薬物結晶化抑制能に影響を及ぼしていることが示された。NMR測定を用いて固体分散体による難水溶性薬物の溶解性改善メカニズムを薬物/ポリマー間の分子間相互作用の観点から解析することにより、難水溶性薬物の溶解性をより有効に改善する最適なポリマーの選択が可能となることが示された。26年度が最終年度であるため、記入しない。
高効率物質生産植物体の開発

2018年度は、前年度までに獲得した遺伝子サイレンシング関連遺伝子であるRNA-dependent RNA polymerase 6(RDR6)遺伝子がノックアウトされたNicotianabenthamiana植物体(ΔRDR6植物体)の性状解析を実施した。形質転換第2世代(T2)の植物体を用いて、アグロインフィルトレーション法による緑色蛍光タンパク質(GFP)の一過性発現試験を実施した。その結果、GFP遺伝子に由来するmRNA量及びGFP発現量が、野生型植物体を用いた場合に比べて約2.5倍へと増加することが明らかとなった。また、small RNAシーケンス解析の結果、ΔRDR6植物体では野生型植物体に比べてGFP遺伝子に対するsmall interfering RNA量が、大幅に減少していることが明らかとなった。このことから、ΔRDR6植物体では、RDR6遺伝子のノックアウトによりRNAサイレンシング系が機能不全になることで、外来遺伝子に由来するmRNAの安定性が増し、結果として組換えタンパク質の生産が増加することが明らかとなった。本成果は論文投稿し、アクセプト済みである(Planta, 2019)。一方で、RDR6とは別種の遺伝子サイレンシング関連遺伝子に対するノックアウト植物体の作出も行った。形質転換の結果得られた再分化個体葉試料よりゲノムDNAを抽出後、標的周辺DNA配列をPCRにより増幅した。増幅した標的配列のシーケンス解析を実施した結果、複数の再分化個体中の標的配列において塩基の挿入もしくは欠失が認められた。現在、本植物体に関して性状解析を実施中である。2018年度はこれまでの研究成果をまとめ論文発表を行うことができた。また、新規に目的とする植物体の獲得に成功したことから、研究計画はおおむね順調に進めることができたと考える。RDR6遺伝子がノックアウトされたNicotiana benthamiana植物体(ΔRDR6植物体)に加え、新規に獲得した遺伝子サイレンシング関連遺伝子ノックアウト植物体について性状解析を進める。2016年度は、まず遺伝子ノックアウトのためのコンストラクトの設計を行った。本研究のモデル植物体であるNicotiana benthamiana由来する遺伝子サイレンシング関連遺伝子について、各種ソフトウェアによりCRISPR/Cas9システムにおける標的配列を検索し、ガイドRNA発現のためのコンストラクトを複数設計した。次に、Cas9遺伝子発現のためのベクターの構築を行った。Cas9遺伝子を、植物遺伝子組換えのためのバイナリーベクターであるpBE2113へと組み込んだ。本ベクターを用いて更にAgrobacterium tumefaciens LBA4404株の形質転換を行った。本アグロバクテリウムを用いて、N.benthamianaにおける一過性発現試験をアグロインフィルトレーション法により行った。ウエスタンブロット解析の結果、植物体内でのCas9タンパク質の発現が確認された。更に、Cas9タンパク質発現用ベクターの一部を制限酵素により切断後、切断個所にガイドRNA発現カセットをクローニングした。本ベクターによりA.tumefaciens LBA4404株の形質転換を行い、N.benthamianaにおける一過性発現試験をアグロインフィルトレーション法により行った。植物体内でのCas9タンパク質の発現が、先ほどと同様にウエスタンブロット解析により確認された。今後は標的DNAへの変異導入に関し検討を加える予定である。研究室移転があったため、移転前後において研究活動が滞った。2018年度は、遺伝子サイレンシング関連遺伝子に対するノックアウト植物体を得るため、タバコの一種であり本研究のモデル植物である、Nicotiana benthamianaの形質転換をアグロバクテリウム法により実施した。N. benthamianaにおいてゲノム編集を実施するため、Cas9タンパク質発現カセットと遺伝子サイレンシング関連遺伝子中の標的配列に対するガイドRNAを発現するカセットを、植物形質転換用バイナリーベクター上にそれぞれ構築した。本ベクターをAgrobacterium tumefacienceへと導入し、植物ゲノム編集用のアグロバクテリウムを得た。本アグロバクテリウムを用いて、N. benthamianaの形質転換を実施した。形質転換の結果得られた再分化個体葉試料よりゲノムDNAを抽出後、標的周辺DNA配列をポリメラーゼ連鎖反応(PCR)により増幅した。このことから、再分化個体中においてCas9タンパク質とガイドRNAが機能し、標的配列に対するゲノム編集が行われていることが明らかとなった。ただし、塩基の挿入もしくは欠失されたゲノムDNAを有する細胞と有さない細胞とが、再分化個体中にモザイク状に存在していると推定されたため、再分化個体より種を採取し、次世代(T1世代)における変異導入状況を解析した。その結果、標的とした遺伝子サイレンシング関連遺伝子に変異が導入されたT1植物体が獲得されたことが明らかとなった。N. benthamianaは複2倍体植物であることから、1種類のタンパク質に対してDNA配列が異なる2種類の遺伝子配列を有する。従って、1種類のタンパク質遺伝子をゲノム編集する場合でも、実質的に2種類の遺伝子配列を標的とする必要がある。これまでに1つの遺伝子サイレンシング関連遺伝子をコードする2種類の遺伝子配列それぞれに同時に変異が導入された植物体の獲得に成功しており、本植物を物質生産への応用研究へと利用することが可能となった。

形質転換第2世代(T2)の植物体を用いて、アグロインフィルトレーション法による緑色蛍光タンパク質(GFP)の一過性発現試験を実施した。その結果、GFP遺伝子に由来するmRNA量及びGFP発現量が、野生型植物体を用いた場合に比べて約2.5倍へと増加することが明らかとなった。また、small RNAシーケンス解析の結果、ΔRDR6植物体では野生型植物体に比べてGFP遺伝子に対するsmall interfering RNA量が、大幅に減少していることが明らかとなった。このことから、ΔRDR6植物体では、RDR6遺伝子のノックアウトによりRNAサイレンシング系が機能不全になることで、外来遺伝子に由来するmRNAの安定性が増し、結果として組換えタンパク質の生産が増加することが明らかとなった。本成果は論文投稿し、アクセプト済みである(Planta, 2019)。一方で、RDR6とは別種の遺伝子サイレンシング関連遺伝子に対するノックアウト植物体の作出も行った。形質転換の結果得られた再分化個体葉試料よりゲノムDNAを抽出後、標的周辺DNA配列をPCRにより増幅した。増幅した標的配列のシーケンス解析を実施した結果、複数の再分化個体中の標的配列において塩基の挿入もしくは欠失が認められた。現在、本植物体に関して性状解析を実施中である。2018年度はこれまでの研究成果をまとめ論文発表を行うことができた。また、新規に目的とする植物体の獲得に成功したことから、研究計画はおおむね順調に進めることができたと考える。今後は作成したベクターを用いて、順次N. benthamianaの形質転換を実施し、得られた再分化個体について遺伝子改変状況を解析する予定である。遺伝子サイレンシング関連遺伝子に変異が導入されたT1植物体が獲得可能であることが明らかとなった。今後は本植物体を用いた性状解析や物質生産試験を実施し、野生型植物体との比較検討を行う予定である。RDR6遺伝子がノックアウトされたNicotiana benthamiana植物体(ΔRDR6植物体)に加え、新規に獲得した遺伝子サイレンシング関連遺伝子ノックアウト植物体について性状解析を進める。研究室の移転により研究活動が移転前後で滞り、当初の研究計画よりやや遅れているため。少額ではあるが、無理に物品などを購入せず効率的な予算執行をするために翌年度に繰り越すこととした。翌年度分予算と合わせ、消耗品等の購入に充当する予定である。2018年度に新規に遺伝子組換え植物体の獲得に成功し、現在その性状解析を実施中である。
ハイブリッド固体ゲート絶縁膜を用いた新奇なモットトランジスタの開発

研究は非常に順調に進んでおり、平成26年度は当初に予定していた通り、チタン酸ストロンチウム(STO)単結晶上に、高誘電率酸化物であるHfO2とKumar氏が考案した2層パリレンとの積層ゲート絶縁膜を用いて、電界効果トランジスタ(FET)を作製することに成功しました。HfO2層とゲート電極層を作製するプロセスも、静電容量やリーク電流の変化を解析することで最適化させました。この素子についても透過型トンネル顕微鏡(TEM)で断面の詳細な分析を行い、パリレンがあるおかげでSTOの表面がきれいに保たれていることが確認されました。STOは最終的なモットFET製作の前段階の実験に最適な物質で、Kumar氏が提案する「電子相関の遮蔽長に与える影響」という物性物理の深遠な問題の探索に最適だと考えられる物質です。得られた試料を用いて、ゲート電圧の連続的可逆的制御でSTOにキャリアをドープすることにも成功し、FET動作することを確認しました。このFETはサブスレショルド・スィングが170mV/decade、易動度が10cm2/Vs、ゲート絶縁膜はSiO2に換算して(EOT) 0.21nmという驚くべき値を示しました。さらに界面のキャリアが負の静電容量を示すこともわかりました。現在論文を執筆しているところで近日中に投稿します。HfO2とパリレンとの積層ゲート絶縁膜は非常に良い特性を示します。パリレンの膜厚を2層合わせて6nmにまで薄くすることに成功しましたが、これは予想しなかった成果です。さらにサブスレショルド・スィングが170mV/decade、易動度が10cm2/Vs、EOTが0.21nmという値は遷移金属酸化物のFETとしてはどれも驚くべき値です。さらに界面のキャリアが負の静電容量を示すということに至っては想像すらしていませんでした。クマール氏自身が秋の米国物質科学会(MRS)で発表する予定でしたが、ビザの発給が遅れてしまい残念ながらキャンセルせざるを得ませんでした。ホスト研究者の井上が国際会議の招待講演で紹介したところ大きな反響を呼び、Kumar氏には世界中の多くの著名な研究者からオファーが届いており、嬉しい悩みです。この現象を限られた時間でさらに詳しく調べるために、極低温での実験の予定はキャンセルしましたが、予想をはるかに超える素晴らしい成果を上げることができました。負の静電容量という非常に興味深い発見は、今後さらに時間をかけて検証していかなければならないテーマです。これはモット絶縁体ではないSrTiO3という通常の絶縁体で観測されましたがSrTiO3の表面では空間対称性の破れからスピン軌道相互作用が増大し(ラシュバ効果)それによってモット転移と同じような現象が引き起こされている可能性があります。その場合、キャリアドープによってバンドギャップが閉じる(つまり化学ポテンシャルが小さくなる)という現象が起こって、負の静電容量が実現するのかもしれません。モットFETを作製する前段階として利用したSrTiO3で、まさにモットFETのような(あるいはそれ以上の)振る舞いが観測されてしまったのです。強相関デバイスの開発にとうとうブレークスルーがもたらされるかもしれません。しかし残された時間が短いため、Neeraj氏のデバイス作製のノウハウをまず検証して彼がいなくなっても研究が継続できるようにすることこそが本研究の成果を最大限に高めるためには必要だと考えました。そこで後任のポスドクの候補者(JSPSのPostdoctral fellowshipに応募中)に来てもらって、試料作製を学んでもらいます。負の静電容量の検証のために新しいデザインのフォトリソグラフィーのマスクを作製し、短期間で集中してデバイス作製と物性測定を行います。平成25年度は、我々が現有する半導体プロセス仕様の一連のフォトリソグラフィー装置で、ハイブリッド絶縁膜を用いた電界効果トランジスタ(FET)用のゲート絶縁膜の作製を行った。平成25年度の研究では、「パリレン層の作製プロセスを下部電極の作製前後の2回に分けることで、下部電極のバリとそれに起因するリーク電流の問題などを克服できるのではないか」というクマール氏の提案を検証することを目標としていたが、これは確かに効果的であることが判明し、検証に成功できた。我々は、パリレン1層の厚さを4nmにまで薄くすることにも成功した。これほどの薄いパリレン薄膜の報告例は世界初である。論文発表と特許申請を準備中である。さらにこのパリレン薄膜上に、高誘電率酸化物であるHfO2とAI203の薄膜を、原子層堆積装置を用いてわずか10nmの厚さで均質に積層ざせることにも成功した。この2層膜を収束イオンビーム加工装置(FIB)を用いて切断し、断面を透過型電子顕微鏡(TEM)や、走査型透過電子顕微鏡(STEM)とX線発光分光(XES)の複合装置により詳細に検討した結果、パリレンと酸化膜(さらに基板に用いたチタン酸ストロンチウム(SrTiO3)と上部の金属電極)が互いに元素を混成することなく、きれいな2層膜が作製できていることが確認できた。研究実施計画ではそこまで想定していなかった。予想を上回る極薄で良質のハイブリッド絶縁膜が得られたというのは非常に意義のある結果である。ALD、FIB、TEM、およびSTEM+XESについては、物質材料研究機構のナノプラットフォームを活用して行った。

ざらには翌年度の計画の前倒しで、SrTiO3単結晶上に作製したこのFETの伝導特性の極低温での評価を行7たが、これは装置の不具合でうまくいかなかった。しかしこれは次年度に予定通りの研究を行うための非常に良い準備実験となった。研究は非常に順調に進んでおり、平成26年度は当初に予定していた通り、チタン酸ストロンチウム(STO)単結晶上に、高誘電率酸化物であるHfO2とKumar氏が考案した2層パリレンとの積層ゲート絶縁膜を用いて、電界効果トランジスタ(FET)を作製することに成功しました。HfO2層とゲート電極層を作製するプロセスも、静電容量やリーク電流の変化を解析することで最適化させました。この素子についても透過型トンネル顕微鏡(TEM)で断面の詳細な分析を行い、パリレンがあるおかげでSTOの表面がきれいに保たれていることが確認されました。STOは最終的なモットFET製作の前段階の実験に最適な物質で、Kumar氏が提案する「電子相関の遮蔽長に与える影響」という物性物理の深遠な問題の探索に最適だと考えられる物質です。得られた試料を用いて、ゲート電圧の連続的可逆的制御でSTOにキャリアをドープすることにも成功し、FET動作することを確認しました。このFETはサブスレショルド・スィングが170mV/decade、易動度が10cm2/Vs、ゲート絶縁膜はSiO2に換算して(EOT) 0.21nmという驚くべき値を示しました。さらに界面のキャリアが負の静電容量を示すこともわかりました。現在論文を執筆しているところで近日中に投稿します。HfO2とパリレンとの積層ゲート絶縁膜は非常に良い特性を示します。パリレンの膜厚を2層合わせて6nmにまで薄くすることに成功しましたが、これは予想しなかった成果です。さらにサブスレショルド・スィングが170mV/decade、易動度が10cm2/Vs、EOTが0.21nmという値は遷移金属酸化物のFETとしてはどれも驚くべき値です。さらに界面のキャリアが負の静電容量を示すということに至っては想像すらしていませんでした。クマール氏自身が秋の米国物質科学会(MRS)で発表する予定でしたが、ビザの発給が遅れてしまい残念ながらキャンセルせざるを得ませんでした。ホスト研究者の井上が国際会議の招待講演で紹介したところ大きな反響を呼び、Kumar氏には世界中の多くの著名な研究者からオファーが届いており、嬉しい悩みです。この現象を限られた時間でさらに詳しく調べるために、極低温での実験の予定はキャンセルしましたが、予想をはるかに超える素晴らしい成果を上げることができました。負の静電容量という非常に興味深い発見は、今後さらに時間をかけて検証していかなければならないテーマです。これはモット絶縁体ではないSrTiO3という通常の絶縁体で観測されましたがSrTiO3の表面では空間対称性の破れからスピン軌道相互作用が増大し(ラシュバ効果)それによってモット転移と同じような現象が引き起こされている可能性があります。その場合、キャリアドープによってバンドギャップが閉じる(つまり化学ポテンシャルが小さくなる)という現象が起こって、負の静電容量が実現するのかもしれません。モットFETを作製する前段階として利用したSrTiO3で、まさにモットFETのような(あるいはそれ以上の)振る舞いが観測されてしまったのです。強相関デバイスの開発にとうとうブレークスルーがもたらされるかもしれません。
核移植直後の第一卵割における中心体の役割の解明

体細胞核移植における個体形成のメカニズムには未だに解明されていない点が多い。我々がメダカで成功した体細胞核移植ではマウスと異なる独自の方法をとるため、個体形成につながる初期卵割、特に第一卵割の成立メカニズムには注目すべき現象が含まれていると考えられる。すなわち、魚類の体細胞核移植胚は、雌性発生胚と同様に、第一卵割の紡錘体形成を担う中心体は体細胞あるいは、不活化精子などにより外部から供給されるため、中心体と雌性前核が正しく配置されることが第一卵割の成立に重要な要素になる可能性がある。本研究の目的は、いまだ謎の多く残る核移植クローンの個体形成のメカニズム解明に向けて、雌性発生胚および核移植胚が初期卵割する仕組みを明らかにする事である。我々は、まず初めに核移植個体の遺伝子型を詳細に調べた。メダカの24本の染色体それぞれにつき4つの多型マーカーで、成体にまで発生した3個体の核移植個体を解析したところ、すべての個体のゲノムはドナー細胞由来であることが判明した。我々は、メダカ特有の核移植法がなぜ正常な二倍体クローンを生み出すのかを解明するために、核移植個体の初期卵割におけるレシピエント核、ドナー核、および中心体の動態を観察した。しかし、そもそもの移植胚の発生率が極端に悪く、クローンを形成する正常発生胚をコンスタントに得ることが難しかった。核移植個体を用いたクローン形成メカニズムを解明するためには、体細胞核移植胚の初期卵割の成立頻度を大幅に改善する必要があった。そこで、核移植に適した未分化細胞を簡単に判別、分取出来るトランスジェニックメダカTg(oct3/4:egfp)を作製した。申請者らは、メダカを用いた独自の核移植法によって、世界で初めて魚類細胞核移植個体の作製に成功した。本研究の目的は、いまだに謎が多く残る核移植クローンの個体形成のメカニズム解明に向けて、雌性発生胚および核移植胚が初期卵割する仕組み、特に中心体の挙動と細胞周期およびその相互関係に着目し、第一卵割に至るまでの間に中心体が果たす役割を明らかにする。平成22年度の研究では、核移植個体の遺伝子型を詳細に調べた。メダカの24本の染色体それぞれにつき4つの多型マーカーとミトコンドリアについて2つの多型マーカーで、成体にまで発生した核移植個体を解析したところ、ゲノムおよびミドコンドリア両方の遺伝子型がドナー細胞由来であることが判明した。これまでに報告されているほ乳類の核移植においては、ミトコンドリアの遺伝子型はレシピエントのみから由来するタイプとレシピエントおよびドナーの両方から由来するタイプが知られており、ドナーのみから由来する結果は報告されていない。本研究の結果から、魚類において核移植個体が形成されるためには、ドナー由来のミトコンドリアDNAの存在が必須である可能性が考えられた。そこで、メダカの核移植個体の成り立ちについてミトコンドリアの由来に注目した視点を加え、上記の事項に関して詳細な解析を試みている。しかし今のところ、核移植における個体形成確率が極端に低く、解析対象となるドナー核由来の移植個体が得られていない。現在、核移植に適した未分化細胞を簡単に判別・分取できるトランスジェニックメダカTg(oct3/4:egfp)を作製し、核移植の個体形成率の改善に取り組んでいる。メダカにおける体細胞核移植ではマウスとは異なる独自の方法を取るため、個体形成につながる初期卵割、特に第一卵割の成立メカニズムには注目すべき現象が含まれていると考えられる。

魚類の体細胞核移植胚は、雌性発生胚と同様に第一卵割の紡錘体形成を担う中心体は体細胞あるいは不活化精子などにより外部から供給されるため、中心体と前核が正しく配置される事が第一卵割の成立に重要な要素になる可能性がある。本研究の目的は、いまだに謎が多く残る核移植クローンの個体形成のメカニズム解明に向けて、雌性発生胚および核移植胚が初期卵割する仕組み、特に中心体の挙動と細胞周期およびその相互関係に着目し、第一卵割に至るまでの間に中心体が果たす役割を明らかにすることである。しかしながら、体細胞核移植胚の個体形成率が極端に低く、解析対象となるドナー核由来の移植個体を得る事が困難であった。そのため、体細胞核移植胚の初期卵割の成立頻度を大幅に改善する必要があった。これまでの結果から、体細胞核移植胚の個体形成率は移植するドナー体細胞の性質に依存する事がわかっている。つまり、多能性をもつ体細胞を使った時ほど個体形成率が上がる。したがって、本研究では、多能性細胞を客観的に選ぶ事ができるメダカTg(oct3/4:egfp)を作製した。このトランスジェニックメダカを解析したところ、メダカ尾ひれを切断すると一週間で元の形に再生するが、この過程で蛍光陽性の細胞が切断面に現れる事がわかった。またこの現象は、初代培養でも再現できた。さらに腎臓の再生においても蛍光陽性細胞が観察される事から、Tg(oct3/4:egfp)は、幅広い体性幹細胞がラベルされており、様々な研究に応用できる事が示唆された。24年度が最終年度であるため、記入しない。
青少年を対象とする社会教育従事者(ユースワーカー)のための養成プログラムの開発2

本研究の目的は、青少年を対象とする社会教育施設の職員(ユースワーカー)の力量形成を中心的課題に据え、職員に必要とされる力量を特定し、その力量形成に有効な養成プログラムのモデルを構築することである。先駆的な事例として、国家が定める職業資格を必要とするイギリスのユースワーカー養成制度に注目し、昨年度の奨励研究「青少年を対象とする社会教育従事者(ユースワーカー)のための養成プログラムの研究(課題番号:22907033)」の研究成果を礎に、本研究では、とりわけ学位レベル以上の養成プログラムに焦点を当てて調査研究を行った。研究方法は、ユースワーカーの養成プログラムを持つ総合大学を訪問し、カリキュラム開発の責任者である教授を対象に聞き取り調査および実際に使われている教材等の資料収集を行うと共に、ユースワーカーの現場と養成機関である大学と政策決定者である政府の三者をつなぐ役割を持つ、中間支援組織も訪問し、ユースワーカーの資格強化に関する近年の動向を聞き取り調査した。具体的な視察先は、デュ・モントフォート大学ならびにハダーズフィールド大学のユース・アンド・コミュニティ学科、全国青少年協会および全国民間ユースサービス協議会である。調査の結果、イギリスではユースワーカー養成の方法論として現場実習に重きが置かれており、効果的な実習を保障する教授法として、スーパーバイズを伴う現場実習の制度が確立していることが分かった。なお、本研究成果の情報提供を通じて、日本の社会教育研究者らと共同で、日本版ユースワーカー養成制度の確立を目的とする「子ども若者支援専門職養成研究会(仮称)」を発足する運びになったことも研究成果の一部として追記しておく。
災害時に備えた高齢者への知識と体力を身につけるための教育プログラムに関する研究

[研究の目的]災害時に高齢者が自らの命を自分で守り避難することができるように、災害時に向けた知識と体力を身につけられるようなモデル的教育プログラムを策定することである。[FIMを用いた日常生活自立度評価]FIMは、運動系の13項目と認知系の5項目で構成されるADL評価法である。完全自立から全介助までの7点法で算出され、得点が高いほど自立度が高いと評価される。[研究内容]平成19年度から21年度に実施したFIMの評価分析(合計5地区244名)の結果から災害時に向けたモデル的教育プログラム(平成21年度中に策定できず)の策定[訪問調査]行政と民生委員の協力を得て、地区在住の高齢者(65歳以上)を対象に調査目的と内容を口頭と文章にて十分に説明を行い調査協力の承諾を得られた方を選定した。調査目的と内容の説明を受け訪問面接について熟知した調査員7名(看護学生と地域看護領域の教員)が各戸訪問し、FIMの評価を実施した。[倫理的配慮]調査時に身体的な配慮に努め、調査は強制でなく拒否や中断することが可能であること、調査で得た情報は研究以外には使用しないことなどを伝えた。分析後、調査対象者のデータは全て破棄した。[結果]地区各々で分析結果は異なったが、「階段移動」が共通して評価の低い項目であった。次に移乗や移動など主に下肢筋力を使用する動作の評価が低いことが明らかとなった。[本研究の意義・重要性]過去に発生した多くの震災では、災害直後の逃げ遅れや避難時の転倒・怪我により多くの高齢者の犠牲者が発生した。本研究における結果から主に下肢筋力を使用する動作において比較的評価が低いことが明らかとなり、実際の災害時にも逃げ遅れによる犠牲者が多く出ることが予測される。よって災害時に多くの高齢者が自らの命を自分で守り避難することができるためには、主に下肢筋力に重視した健康教育を策定することが必要である。
卵巣癌の女子発家系に関する臨床的・分子生物学的研究

133例の卵巣癌患者に家族歴調査を行い、教室における家族性卵巣癌の実態を明らかにすることを目的とした.また、家族性卵巣癌家系に関しては、BRCA1のgerm-line mutationを検索した.家族性卵巣癌は5例(2例は同一家系)であり、すべて表層上皮性・間質性腫瘍に属していた.家族性卵巣癌は、卵巣癌全体の3.8%(5/133)、表層上皮性・間質性腫瘍の4.4%(5/114)に認められた.家族性卵巣癌はすべて漿液性腺癌であり、漿液性腺癌と漿液性以外の表層上皮性・間質性腫瘍とを比較すると、家族性卵巣癌は漿液性腺癌で有意(p<0.005)に多かった.分化度については、家族性卵巣癌はG3に有意(p<0.05)に多く認められた.進行期に関しては、家族性卵巣癌ではIII期が4例と最も多く、散発性ではI期が63例と6割近くを占めており、両者の間で有意差(p<0.05)を認めた.重複癌は、家族性では5例中3例に、散発性では109例中11例にみられ、両群間で有意差(p<0.05)を認めた.特に、乳癌は家族性では5例中2例に重複しており、散発性と較べて有意(p<0.01)に多い重複癌であった.診断時年齢と予後については、家族性と散発性卵巣癌の両群間に有意差はなかった.4家系が家族性卵巣癌家系と診断されたが、その内訳は第1度・第2度近親者に2人以上の卵巣癌がみられた家系が2家系、乳癌・卵巣癌症候群が1家系、HNPCCが1家系であった.BRCA1のgerm-line mutationは2家系で検出された.1家系ではフレームシフト変異が発端者を含めた3例で見つかり、別の1家系ではナンセンス変異が発端者を含む5例で検出された.今後は、他施設との共同研究により症例数を増やして、我が国の家族性卵巣癌の実態をさらに明確にすることが必要と考えられた.133例の卵巣癌患者に家族歴調査を行い、教室における家族性卵巣癌の実態を明らかにすることを目的とした.また、家族性卵巣癌家系に関しては、BRCA1のgerm-line mutationを検索した.家族性卵巣癌は5例(2例は同一家系)であり、すべて表層上皮性・間質性腫瘍に属していた.家族性卵巣癌は、卵巣癌全体の3.8%(5/133)、表層上皮性・間質性腫瘍の4.4%(5/114)に認められた.家族性卵巣癌はすべて漿液性腺癌であり、漿液性腺癌と漿液性以外の表層上皮性・間質性腫瘍とを比較すると、家族性卵巣癌は漿液性腺癌で有意(p<0.005)に多かった.分化度については、家族性卵巣癌はG3に有意(p<0.05)に多く認められた.進行期に関しては、家族性卵巣癌ではIII期が4例と最も多く、散発性ではI期が63例と6割近くを占めており、両者の間で有意差(p<0.05)を認めた.重複癌は、家族性では5例中3例に、散発性では109例中11例にみられ、両群間で有意差(p<0.05)を認めた.特に、乳癌は家族性では5例中2例に重複しており、散発性と較べて有意(p<0.01)に多い重複癌であった.診断時年齢と予後については、家族性と散発性卵巣癌の両群間に有意差はなかった.4家系が家族性卵巣癌家系と診断されたが、その内訳は第1度・第2度近親者に2人以上の卵巣癌がみられた家系が2家系、乳癌・卵巣癌症候群が1家系、HNPCCが1家系であった.BRCA1のgerm-line mutationは2家系で検出された.1家系ではフレームシフト変異が発端者を含めた3例で見つかり、別の1家系ではナンセンス変異が発端者を含む5例で検出された.今後は、他施設との共同研究により症例数を増やして、我が国の家族性卵巣癌の実態をさらに明確にすることが必要と考えられた.
非接触ＩＣ技術を活用したスマートデバイスによるデジタル教材の提示と評価

近年,急速に普及してきたスマートデバイスを活用した学習システムは,まだ教育分野において活用しきれていない。スマートデバイスによる学習システムでは,音声の再生,動画,インターネットの活用など,様々な活用が期待できる。本研究では,「非接触ICチップとQRコードを活用したデジタル教材提示システム」を構築した。本システムは,非接触ICチップやQRコードを読み取り,URLを入力する必要なく目的のデジタル教材を表示させることができる。また,デジタル教材の表示履歴を記録することで教師が評価に役立てることができる。このシステムをスマートデバイスで活用できるようにした。平成24年度に開発した「NFC(Near Field Communication:近距離無線通信)とQRコードを活用した教材提示システム」に対して,平成25年度は,学習履歴を記録する機能と,管理機能を追加開発した。学習履歴を記録するために,さらに学習者を特定するための学習者ログイン,学習履歴の(クライアントへの)保存,学習履歴の(サーバへの)送信,の各機能を開発した。学習者ログインでは,NFCとQRコードの両者で行えるようにした。また,後述する(教師が使用する)管理機能において,サーバ上の学習履歴ファイルを表示,保存できるようにした。学習に使用するデジタル教材は,平成23年度に制作した「教育の情報化支援サイト」で公開しているものを想定しており,インターネットに接続して学習することが前提となるため,学習履歴をサーバ上で集約,管理することとした。管理機能では,学習者ログイン用のNFCカード及びQRコードの発行,デジタル教材表示用のNFCカード及びQRコードの発行,前述の学習履歴ファイルの表示・保存機能を開発した。NFCカードとQRコードの利便性等の違いについて検討する予定であった。しかし,QRコードの認識機能の精度を上げることができず,QRコードを読み込むことに一定の時間(スレートPCを持って静止する必要がある)や,慣れが必要となってしまった。このため,本システムにおいては,NFCカードが優位であることが明らかである。学会における報告では,単なるリンク集を利用した場合と本システムを利用した場合の違いについて,検討するべきとの指摘を受けた。また,学習者ではなく,教師の教材準備の負担軽減に資するのではないかとの意見もあった。これらについては,今後の課題である。平成24年度は「RFID技術を活用したデジタル教材提示システム」の開発を行った.当初「スマートデバイス」としていわゆるスマートフォンを対象としたシステムを検討していたが,適当なデバイスが開発,販売されなかったため,スレート型PCを使うこととした.スマートフォンでは,限られた画面空間を有効に活用するために,そのインタフェースが重要な役割を果たすと考えていたが,スレート型PCにおいても,児童・生徒の操作負荷を軽減するため,インタフェースには十分配慮して設計した.本システムは,2011年度に制作した「教育の情報化支援サイト」におけるデジタル教材,約17万件の表示を可能とするための,スレート型PC用アプリケーションである.このアプリケーションでは,非接触ICチップ及びQRコードによりデジタル教材を表示する機能を開発した.当初は非接触ICチップによるデジタル教材の表示のみ開発の予定であったが,すでに研究が行われているQRコードによる教材の提示と,その手法における学習行動の調査,教材表示にかかる児童・生徒の操作負荷の優位性等について検証することとした.そのため,当初計画にはなかったQRコードによるデジタル教材表示機能を追加開発した.次年度には,これに学習履歴を記録する機能を追加する.当初は今年度に開発する予定であったが,前述のQRコードによるデジタル教材の表示機能を開発したため,当該機能は次年度の開発に変更した.これにより,被験者の学習行動を追跡することを可能とし,非接触ICチップとQRコードの学習時の優位性について検証することができる.また,これらの検証を行う計画である.スマートデバイスの利用が本研究の特色であったが,市場環境が整わなかったため,スレート型PCの利用に内容を修正した.それに伴い,当初予定の非接触ICチップによるデジタル教材の表示機能に加え,QRコードによる表示機能も搭載した.両者の表示方法の違いに伴う児童・生徒の操作負荷などについて検証することとした.一方,学習履歴を記録する機能を開発することとしていたが,これを次年度開発に変更した.開発予算の都合及び開発設計をシンプルにするための措置である.総合的に判断して,おおむね順調に進展していると判断した.平成25年度は,学習履歴の記録機能を開発する.これにより,児童・生徒の学習行動を追跡することができるようになる.また,実証実験及びシステム評価を行う.これにより,本システムの有効性を実証する.また,非接触ICとQRコードの違いによる児童・生徒の操作負荷の違いなどについて検証する.平成25年度は,本年度開発したシステムに,学習履歴の記録機能を付加する.そのためのシステム開発費用として利用する.また,実証実験を行うために,機器類のレンタル・リース費用等に使用することを考えている.
日韓語の談話モダリティ形式の機能類型論的研究:日韓語と英独語との対照を中心に

1.日韓語のモダリティ・談話モダリティがどのように当該言語の構造にコード化されているか、という点に関して、両言語に顕著な違いが見られた。具体的には、日本語のほうが談話モダリテイを終助詞という形式で集中的にコード化しているのに対して、韓国語では命題により近いモダリティ形式の文法化が顕著に見られた。この観察は、Horie and Taira(2002)などに発表した。2.英独語の対照に見られるような、形式と意味の対応関係に関する「多機能性志向」と、単一機能志向という対比が、日韓語の補文構造や動名詞構造、否定構文においても観察されることを明らかにした。この観察は、堀江(2002,東大出版会)、Horie and Moriya(2002)などに発表した。3.日韓語の上述のような対照を説明するためには、両言語社会の文化価値の違いなども考慮に入れる必要があることから、言語と社会的・文化的認知を統合して説明する「認知類型論」的考察の重要性を主張した。この主張は、堀江(2002,大修館書店)や堀江(2002,ひつじ書房)において展開した。4.さらに、3に述べた認知類型論の観点から、日本語と韓国語の言語借用現象に関して対照言語学的な考察を行なった.具体的には、日本語の方が韓国語より、外国語の借用に関して積極的な受容傾向を見せることが明らかとなった(Horie 2002)。本年度は、日本語の終助詞と韓国語の文末接辞の談話における用法の対照分析を通じて、日韓語はいずれも「命題」「モダリティ」「談話モダリティ」という3つの階層構造を有しているが、特に、聞き手に対する待遇、主観性等の表現である「談話モダリティ」に関して、以下の体系的な相違点が存在することが明らかになった。(1)日本語は、「談話モダリティ」を具現化する文法形式として終助詞が高度の体系性を持って存在し、特に話者の情報領域への帰属を表す「よ」と話者・聞き手の情報の共有を表す「ね」が会話進行に重要な役割を果たしている。(2)これに対して韓国語は「談話モダリティ」を具現化する文法形式が存在するものの、日本語に見られるような高度の体系性は見られない。然し、韓国語においては、日本語以上に「命題」により近い「モダリティ」を具現化する形式が高度に発達しており、特に「証拠性(Evidentiality)」を表す接辞の中には日本語に対応する形式が存在しないものもある。(3)上記の相違は日韓語の文法構造の相違にとどまらず、文法構造と談話(情報)構造の相関に関する両言語の相違を反映していると考えられる。本年度は、言語処理学会年次大会、社会言語学会秋季大会、日本認知言語学会年次大会、International Cognitive Linguistics Association,太平洋・アジア言語・情報・計算学会(PACLIC)等において上記を中心とする研究成果を発表した。具体的には、日本語のほうが談話モダリティを終助詞という形式で集中的にコード化しているのに対して、韓国語では命題により近いモダリティ形式の文法化が顕著に見られた。2.英独語の対照に見られるような、形式と意味の対応関係に関する「多機能性志向と、単一機能志向」という対比が、日韓語の補文構造や動名詞構造、否定構文においても観察されることを明らかにした。この観察は、堀江(2002,東大出版会)、Horie(2002),Horie and Moriya(2002)などに発表した。