hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
初期キャリア形成期看護師におけるピア・コーチングの関連要因の探索

本研究は、基礎的な知識や技術を土台にし、高度な看護ケアに発展させていく重要な時期である初期キャリア形成期(卒後2・3年目)の看護師におけるピア・コーチングに関する研究である。ピア・コーチングとは、同僚間でなされる実践の振り返りや能力の洗練、広がり、新しいスキルの構築、アイディアの共有、問題解決、教え合うなどの協同作業を通じた教育的支援方法である。ピア・コーチングを用いた支援や活用性への示唆を得るために、ピア・コーチングとその他の概念との関係性を探索することが本研究の目的である。初期キャリア形成期看護師におけるピア・コーチングと専門職的自律性、職業的アイデンティティの関係性について、全国を対象とした無記名自記式質問紙調査を実施した。ピア・コーチング測定尺度は研究者自身が作成し、信頼性と妥当性を確認したのちに使用した。専門職的自律性と職業的アイデンティティについては、既存の尺度を開発者の承諾を得て使用した。有効回答の328名のデータをもとに分析を行った。年齢が平均23.3歳(SD=±1.14)、女性309名(94.2%)、男性19名(5.8%)で、看護師経験年数は、2年目が141名(43%)、3年目が187名(57%)であった。個人背景である性別(男性・女性)、看護師経験年数(卒後2年目・3年目)、基礎教育課程(大学・3年課程の専門学校)毎に、ピア・コーチングを比較したが、有意な差はみられなかった。ピア・コーチング、専門職的自律性、職業的アイデンティティを潜在変数として、それぞれの下位尺度を顕在変数として、共分散構造分析を行った結果、ピア・コーチングから専門職的自律性への関係が示唆された。2018年度中に全国調査を終了することができ、分析が行えた。2019年度には、その結果を関係学会で発表する予定であり、当初の計画通りに進んでおり、おおむね順調に進展していると考える。本研究にご協力いただいた施設に研究の成果を報告する。さらに、初期キャリア形成期看護師のピア・コーチングにおいて、教育的支援方法としての可能性を広く知ってもらうために、得られた知見を関連学会において発表する。2018年度では、統計学的分析における適切な標本数が得られるまで、全国調査の実施を予定していたが、予想よりも回収が順調に進んだため、次年度使用額が生じることとなった。2019年度では、成果の発表が主になる。そのため、学会発表のための旅費、英文校正費などを賄うために、翌年度分として請求した助成金と合わせて使用を計画している。
細菌叢遺伝子情報を利用した新規鑑定解析技術の開発

次世代シークエンサーによる遺伝子解析技術の急速な進歩により、世界各地で膨大な細菌叢の遺伝子配列情報が蓄積され続けている。法科学の分野において、細菌叢遺伝子情報を用いた鑑定手法はヒトDNA型鑑定に次ぐ新たなDNA情報を用いた鑑定技術として期待されており、土砂等の鑑定資料の異同識別、或いは、犯罪で利用された道具と犯行現場との関連付けに活用できると目される。本研究では、既存の論文で公開されている世界各地の細菌叢16S rRNAデータセットを有効活用し、物証に付着した微細な資料中に含まれる細菌叢の遺伝子情報をもとに犯行現場の特定や被疑者関与の証明を目標とした新たな統計的解析手法の開発を目指す。
両棲類胚初期分化過程に現われる神経特異的mRNAに対するcDNAのクローン化

両棲類嚢胚の外胚葉細胞は,自律的には表皮型分化を規定する遺伝子を発現するが,中軸中胚葉細胞に接した場合,その誘導作用によりこれら表皮型分化遺伝子は抑制され,かわりに神経型分化を規定する遺伝子が発現される.本研究の目的はこの細胞間作用による神経誘導の初期過程を遺伝子レベルで解明する事にあり,その第一段階として,神経或は表皮特異的な遺伝子発現(転写)の直接の指標となる転写mRNAを同定するため,これに相捕的なcDNAをクローン化する事を目指した.既にアフリカツメガエル胚の神経或は表皮細胞に特異的に発現される抗原分子を認識する単クローン抗体が数種得られているので,これら抗原分子をコードするmRNAに対するcDNAをクローン化する事を当面の目標とした.種々の発生段階の胚からRNAを抽出し,oligo(dT)セルロースによりmRNAを精製した後,これをツメガエル卵母細胞に微量注入し,蛋白質に翻訳させた.神経或は表皮特異的抗原が翻訳されたか否か,注入された卵母細胞を一定時間培養後,その凍結切片を各種単クローン抗体による間接蛍光抗体法で検定した所,尾芽期以降から得られたmRNAにより,表皮特異的E2抗原,又神経,筋特異的なNMI抗原が全例ではないが検出された.そこで蔗糖密度勾配遠心法によりmRNAを大きさに従って分画し,各分画の活性を同様に検定した所,約1Kbの大きさのmRNA分画,又約3Kbの分画に,それぞれ, E2, NMI抗原をコードする活性が再現性よく見出された.逆転写酵素によりこれら分画のmRNAからcDNAを調製し,現在このcDNAのクローン化を試みている.両棲類嚢胚の外胚葉細胞は,自律的には表皮型分化を規定する遺伝子を発現するが,中軸中胚葉細胞に接した場合,その誘導作用によりこれら表皮型分化遺伝子は抑制され,かわりに神経型分化を規定する遺伝子が発現される.本研究の目的はこの細胞間作用による神経誘導の初期過程を遺伝子レベルで解明する事にあり,その第一段階として,神経或は表皮特異的な遺伝子発現(転写)の直接の指標となる転写mRNAを同定するため,これに相捕的なcDNAをクローン化する事を目指した.既にアフリカツメガエル胚の神経或は表皮細胞に特異的に発現される抗原分子を認識する単クローン抗体が数種得られているので,これら抗原分子をコードするmRNAに対するcDNAをクローン化する事を当面の目標とした.種々の発生段階の胚からRNAを抽出し,oligo(dT)セルロースによりmRNAを精製した後,これをツメガエル卵母細胞に微量注入し,蛋白質に翻訳させた.神経或は表皮特異的抗原が翻訳されたか否か,注入された卵母細胞を一定時間培養後,その凍結切片を各種単クローン抗体による間接蛍光抗体法で検定した所,尾芽期以降から得られたmRNAにより,表皮特異的E2抗原,又神経,筋特異的なNMI抗原が全例ではないが検出された.そこで蔗糖密度勾配遠心法によりmRNAを大きさに従って分画し,各分画の活性を同様に検定した所,約1Kbの大きさのmRNA分画,又約3Kbの分画に,それぞれ, E2, NMI抗原をコードする活性が再現性よく見出された.逆転写酵素によりこれら分画のmRNAからcDNAを調製し,現在このcDNAのクローン化を試みている.
唾液腺腺様嚢胞癌細胞におけるヘパラン硫酸プロテオグリカン代謝の分子病理学的特性

前年度は、ヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)のドメイン3を認識するDIG標識RNAプローブを作製し、in-situハイブリダイゼーション法により唾液腺腺様嚢胞癌由来培養細胞ACC3および腺様嚢胞癌組織におけるHSPGのmRNA発現パターンを検索した。今年度は、HSPGのヘパラン硫酸鎖結合部位であるドメイン1の発現および機能を検索するため、RT-PCRによりドメイン1のcDNAを合成した。1.ドメイン1の全長より10塩基対を両末端に多く含むプライマーを設計し、正常唾液腺cDNAおよびACC3細胞cDNAをもちいてPCRをおこなった。2.PCRの結果、正常唾液腺cDNAをもちいたものでは予想される塩基数(530bp)のバンドが得られた。この産物で2nd-PCRをおこなった後、新たに設計した、BamHIおよびHindIIIサイトを末端に含むプライマーでnested-PCRをおこなった。3.nested-PCRでは、予想されたサイズのバンドが得られたので、これを切り出し精製した。この精製物を、制限酵素切断により目的のcDNAであるかどうか確認した。制限酵素は、切断箇所が一カ所のみと推定されるPvuIIをもちいた。その結果、予想されるサイズの2本のバンド(282bpおよび235bp)が得られた。以上の結果から、正常唾液腺cDNAをもちいたHSPGドメイン1のcDNAの合成が確認された。このcDNAをもちいることにより、ドメイン1蛋白質の合成、ドメイン1認識プローブを作製する準備が完了した。現在、プローブを作製中で、今後、HSPG機能解析実験に有用な手段となることが期待される。本年度は以下のようにin-situハイブリダイゼーション(ISH)実験をおこない、唾液腺腺様嚢胞癌由来培養細胞ACC3および腺様嚢胞癌組織におけるヘパラン硫酸プロテオグリカン〈HSPG)のmRNA発現を検索した。HSPGのcDNA断片をもちいたDlG標識RNAプローブを作製し、ACC3細胞および腺様嚢胞癌の外科材料をもちいてISHをおこなった。外科材料はパラフィンブロックからDEPC処理水中で切片を作製、ACC3細胞は播種後2、4、6、8日目にPFA固定し、それぞれプロテイネースK処理をおこなった。1.ACC3細胞のlSHでは4日目に最も強い信号がえられ、既報のノーザンブロットの結果と一致したことから、対数増殖期である4日目に遺伝子発現が最大となることが判明した。2.組織切片ではHSPGmRNAはすべての胞巣で発現していたが、つぎのような特徴があった。(1)多くの篩状構造の胞巣では、形成初期の小型偽嚢胞をとりかこむ細胞には信号強度が高く、大型偽嚢胞周囲には検出されない。(2)索状構造の胞巣においては、とくに小型の偽嚢胞を形成する細胞に強信号が検出された。(3)二層性導管状構造では筋上皮細胞と考えられる外側の細胞層に強い信号が観察されたが、内側の導管上皮細胞では低信号であった。(4)浸潤性の小型胞巣では、その形状をとわず強信号がみとめられた。2.末梢神経に浸潤し、神経組織をとりかこむ腫瘍胞巣にも強信号がみられた。3.正常唾液腺では、腺房あるいは介在部導管の筋上皮細胞に発現し、導管上皮には低信号であった。以上の結果から、腺様嚢胞癌の組織構築、とくに偽嚢胞形成初期においてHSPGmRNAの発現が重要であることが判明した。また、ACC3の細胞増殖と同調した遺伝子発現から、HSPGがこの細胞増殖に必須であり、さらに、組織レベルでは浸潤部位の高信号から、腫瘍細胞の増殖浸潤へのHSPGの関与が示唆された。
加齢に伴う一酸化窒素産生・遊離機能低下の機序解明

【目的】冠血管障害に基づく心血管疾患は加齢と共に増加する.血管内皮細胞が血管トーヌスの制御および心血管機能の維持に重要な役割を担っていることが明らかになりつつある.我々は、エンドセリン(ET-1)やアンジオテンシンII(AngII)のような強力な血管収縮物質に曝されたとき、血管内皮細胞から拡張因子が産生遊離され防御的に働くが、加齢に伴いこの機能が低下すること、その結果強力な冠血管収縮作用が惹起され、これが心疾患の発症や進展につながるのではないかと推測し、主として血管内皮細胞から遊離される防御因子を検索してきた.その結果、NOの産生遊離機能が特異的に低下していること、一方PGI_2の産生遊離機能は加齢によってむしろ増加していること、このPGI_2産生遊離機能の増加は、NOの産生遊離機能低下の代償機構である可能性を示唆した.本課題では、NOの産生遊離機能低下の機序に加えて、PGI_2の産生遊離機能増加の機序および意義を明らかにする目的で研究に着手した.【方法】3(若齢)と27カ月齢(老齢)のFisher344rat(♂)の摘出心臓および胸部大動脈を用いた.心臓はLangendorff式に定圧灌流し、冠血流量変化を記録した.冠流出液を分取し、PGI_2を6-keto-PGF1αに対する酵素免疫法により測定した.また、大動脈よりRNAを抽出しリアルタイムPCRを行うことにより、PGI_2受容体、NOおよびPGI_2合成酵素とCOX-1の老化による変動を定量した.【結果および考察】灌流心臓をET-1、AngIIによって刺激し、冠血管を収縮させた場合、老齢ラット冠灌流液中への6-keto-PGF1α遊離量は、若齢ラットよりも増加した.PGI_2合成酵素の発現は、老齢ラット大動脈において有意に増加した.COX-1も同様に老齢ラットにおいて増加した.一方、PGI_2受容体発現には、有意な加齢変化は認められなかった.以上の結果から、老化に伴うPGI_2合成酵素およびCOX-1発現の増加が、老齢ラットでのPGI_2産生増加に関与することが示唆された.なお、NO合成酵素およびアルギニン取り込み機能の加齢変化およびPGI_2の役割について現在検討中である.【目的】冠血管障害に基づく心血管疾患は加齢と共に増加する.血管内皮細胞が血管トーヌスの制御および心血管機能の維持に重要な役割を担っていることが明らかになりつつある.我々は、エンドセリン(ET-1)やアンジオテンシンII(AngII)のような強力な血管収縮物質に曝されたとき、血管内皮細胞から拡張因子が産生遊離され防御的に働くが、加齢に伴いこの機能が低下すること、その結果強力な冠血管収縮作用が惹起され、これが心疾患の発症や進展につながるのではないかと推測し、主として血管内皮細胞から遊離される防御因子を検索してきた.その結果、NOの産生遊離機能が特異的に低下していること、一方PGI_2の産生遊離機能は加齢によってむしろ増加していること、このPGI_2産生遊離機能の増加は、NOの産生遊離機能低下の代償機構である可能性を示唆した.本課題では、NOの産生遊離機能低下の機序に加えて、PGI_2の産生遊離機能増加の機序および意義を明らかにする目的で研究に着手した.【方法】3(若齢)と27カ月齢(老齢)のFisher344rat(♂)の摘出心臓および胸部大動脈を用いた.心臓はLangendorff式に定圧灌流し、冠血流量変化を記録した.冠流出液を分取し、PGI_2を6-keto-PGF1αに対する酵素免疫法により測定した.また、大動脈よりRNAを抽出しリアルタイムPCRを行うことにより、PGI_2受容体、NOおよびPGI_2合成酵素とCOX-1の老化による変動を定量した.【結果および考察】灌流心臓をET-1、AngIIによって刺激し、冠血管を収縮させた場合、老齢ラット冠灌流液中への6-keto-PGF1α遊離量は、若齢ラットよりも増加した.PGI_2合成酵素の発現は、老齢ラット大動脈において有意に増加した.COX-1も同様に老齢ラットにおいて増加した.一方、PGI_2受容体発現には、有意な加齢変化は認められなかった.以上の結果から、老化に伴うPGI_2合成酵素およびCOX-1発現の増加が、老齢ラットでのPGI_2産生増加に関与することが示唆された.なお、NO合成酵素およびアルギニン取り込み機能の加齢変化およびPGI_2の役割について現在検討中である.【目的】冠血管がエンドセリン(ET-1)やアンジオテンシンII(Ang II)のような強力な血管収縮物質に曝されたとき,主として血管内皮細胞から血管拡張因子が産生・遊離され防御的に働くが,加齢に伴いこの機能が低下すること、その結果強力な冠血管収縮作用が惹起され、これが心疾患の発症や進展につながるのではないかと推測し,主として血管内皮細胞から遊離される防御因子を検索してきた.その結果,NOの産生・遊離機能が特異的に低下していること、一方プロスタサイクリンや心房性利尿ペプチドの産生・遊離機能は加齢によってむしろ増加していることが明らかにしてきた.

そこで本年度は、NOの産生・遊離機能が加齢によって低下する機序、および産生・遊離機能が増加しているプロスタサイクリンの役割について検討した.【方法】3(若齢)と27カ月齢(老齢)のFisher 344 rat(♂)から摘出した心臓をLangendorff式に定圧灌流し、左心室内圧とその一次微分、心拍数、coronary fllowを測定した.冠流出液を定時的に採取し、NO,Prostacyclinを定量した.【結果】1)ET-1やAng IIが惹起する冠血管収縮作用は、L-arginineの持続注入により、若齢ラットに比べ弱いながらも老齢ラットにおいても改善された.この結果は、L-アルギニンの細胞内への供給を制御しているトランスポーター(cationic amino acid transpoter)は老齢ラットでもまだ機能が保持されていることを示唆している.現在より詳細に、トランスポーターの加齢変化について検討中である.2)老齢ラットで遊離量が増加しているProstacyclinは血管拡張作用には関与していないことが明らかになった.老齢ラットにおいてProstacyclin遊離が増加する機序および意義についても検討中である.【目的】冠血管がエンドセリン(ET-1)やアンジオテンシンII(AngII)のような強力な血管収縮物質に曝されたとき、主として血管内皮細胞から血管拡張因子が産生・遊離され防御的に働くが、加齢に伴いこの機能が低下すること、その結果強力な冠血管収縮作用が惹起され、これが心疾患の発症や進展につながるのではないかと推測し、主として血管内皮細胞から遊離される防御因子を検索してきた.その結果、NOの産生遊離機能が特異的に低下していること、一方プロスタサイクリン(PGI2)の産生遊離機能は加齢によってむしろ増加していることを明らかにした.そこで本年度は、特にPGI2の産生遊離機能増加の機序および意義に注目し、PGI2産生に関わる合成酵素および受容体発現と加齢変化の面から検討した.【方法】3(若齢)と27カ月齢(老齢)のFisher 344 rat(♂)の摘出心臓および胸部大動脈を用いた.心臓はLangendorff式に定圧灌流し、ET-1、AngII投与前後の冠血流量変化を記録した.冠流出液を分取し、PGI2を6-keto-PGF1 αに対する酵素免疫法により測定した.また、大動脈よりRNAを抽出しリアルタイムPCRを行うことにより、PGI2受容体、PGI2合成酵素およびCOX-1の老化による変動を定量した.【結果および考察】灌流心臓をET-1、AngIIによって刺激し、冠血管を収縮させた場合、老齢ラット冠灌流液中への6-keto-PGF1 α遊離量は、若齢ラットよりも増加した.PGI2合成酵素の発現は、老齢ラット大動脈において有意に増加した.COX-1も同様に老齢ラットにおいて増加した.一方、PGI2受容体発現には、老化によりやや減少する傾向があったものの有意差は認められなかった.以上の結果から、老化に伴うPGI2合成酵素およびCOX-1発現の増加が、老齢ラットでのPGI2産生増加に関与することが示唆された.NO産生遊離機能低下の代償としてPGI2産生が増加するものと考えられる.
確率微分方程式の離散近似理論とその応用

平成25年度はいくつかの確率微分方程式の近似理論問題について並列に取り組んだ。以下で順に説明する。主たる研究として、非線形フィルタリングの離散近似問題に興味を持ち、理論的な解析に取り組んだ。この問題は直接観測不能なシグナル過程と観測可能な観測過程が共に確率微分方程式で与えられた時の条件付き平均を離散近似することを目標とし、SPDE(確率偏微分方程式)の近似問題と深い関わりを持つ。この問題を解決するために、前年度までにSPDEやBSDE(後退確率微分方程式)の近似誤差解析の道具として研究を進めていた双対アプローチと呼ばれる手法を活用した。双対アプローチは、確率微分方程式の離散近似の分野において、マルコフ性をうまく使えない場面で有力な解析手法とされるものである。前年度までの研究で、どのような場合に双対アプローチが機能するかの理解が深まったため、双対アプローチで用いられる評価手法が非線形フィルタリングの近似誤差評価問題と関係が深いことに気付くことができた。最終的には、Jean Picard氏が1984年に証明した離散近似誤差評価に関する結果の双対アプローチによる別証明を与えることに成功し、さらに深い解析によってその結果を拡張することができた。本研究成果は論文としてまとめ、現在投稿準備中である。次に、前年度に取り組んでいたSDEの離散時間・空間近似について得られた結果について、投稿中であった論文が大きく修正を加えた後に受理された。また、同様に前年度まで課題として取り組んでいた小さなパラメータを持つ確率微分方程式の効率的な近似計算法についての結果が論文誌に修正の後に受理された。研究開始当初に目標としていたBSDEあるいはSPDEの近似法に対する誤差評価手法の確立は未だに成されていない。しかしながら、その解析を進める課程で導入した数学的技法によりSPDEの近似問題のひとつである非線形フィルタリングに対しての結果を得ることができた。以上を総括して、おおむね順調に進展していると評価する。非線形フィルタリングの離散近似に関して本研究課題で得られた結果が、より一般的な仮定の下でどの程度修正が必要なのかが未解決な問題として残っており、引き続き研究を進める。特にシグナル過程が観測過程のフィードバックを受ける場合に、離散近似誤差についてどのような結論を得られるかが興味深い問題であると考える。確率微分方程式(SDE)に対する離散時間近似理論周辺について、いくつかの結果を得て、発表済みもしくは論文執筆中である。具体的には以下に述べる三つのテーマについて取り組んだ。1.SPDE,BSDEの数値計算:偏微分方程式にノイズを加えたモデルは、無限次元の確率微分方程式(SPDE)とみなすことができる。SPDEの数値解析では、時間離散化・空間離散化・射影などの近似の誤差解析が必要とされる。しかしながら、有限次元の通常のSDEとは異なり、係数に非有界作用素がいるため誤差解析が非常に複雑となることが知られている。本研究では、ある特殊な線形SPDEに対しての双対公式を与えることで、ある程度一般のSPDEの近似に対して誤差評価を与えることを可能にした。双対公式は、誤差項の評価で見通しの良い式変形を可能にし、具体的な収束速度の導出をする役割を果たした。この双対公式による誤差解析法は、後退確率微分方程式(BSDE)の枠組みでも利用できることが議論されている。2.SDEの期待値計算の格子上での実装法:SDEの数値計算ではモンテカルロ法が扱いやすく実装も容易であるためよく使用されている。一方でモンテカルロ法は計算負荷が高く、一部の応用対象(アメリカンオプション)では適用することが難しい。本テーマでは、特殊な格子上での計算により、モンテカルロを用いずに実装する方法を提案した。現在、研究成果は論文として投稿中であり、出版を目指して適宜修正を加えている。3.小さなパラメータを持つSDEの近似法:ファイナンス等で現れる係数に小さなパラメータを持つ特殊なSDEに対して、離散時間近似法と漸近展開を複合させた手法を提案した。研究成果の一部は論文誌に投稿中である。また、理論のさらなる拡張についても議論を続けている。以下で順に説明する。

研究計画立案時の目標であった確率微分方程式、特に後退確率微分方程式についていくつか数学的な結果を得ている。しかしながら、研究論文にまとめられる水準にまで議論は進んでいない。一方で、ある特殊な確率微分方程式の数値計算方法について、当初は想定していなかった理論的・実務的な進展があり、論文を執筆した。この点については、元々の計画を上回った成果を得ている。研究開始当初に目標としていたBSDEあるいはSPDEの近似法に対する誤差評価手法の確立は未だに成されていない。しかしながら、その解析を進める課程で導入した数学的技法によりSPDEの近似問題のひとつである非線形フィルタリングに対しての結果を得ることができた。以上を総括して、おおむね順調に進展していると評価する。次年度では、現在執筆途中の論文を完成させることを目指し、より深い研究を進めていきたい。具体的には、1.SPDEについての数値計算の研究成果をまとめること、2.小さいパラメータを持つSDEに対する数値計算法の高度化の2点について研究論文を完成させ、論文誌に掲載されることを目指す。また同時に、学会等での研究成果の発表も積極的におこなっていきたいと考えている。非線形フィルタリングの離散近似に関して本研究課題で得られた結果が、より一般的な仮定の下でどの程度修正が必要なのかが未解決な問題として残っており、引き続き研究を進める。特にシグナル過程が観測過程のフィードバックを受ける場合に、離散近似誤差についてどのような結論を得られるかが興味深い問題であると考える。
婦人科系腫瘍由来エクソソームの特異的かつ高感度検出法の開発研究

EphA2は肺癌、卵巣癌、前立腺癌などの癌で高発現する糖蛋白質で、酵素切断によりsEphA2として遊離した状態でも存在している。本研究では各種癌患者血清中のsEphA2検出を目的に、感度と特異性の高いsEphA2測定ELISA系の樹立に成功した。その系を用いて各種癌患者血清中を測定した結果、肺癌、前立腺癌および卵巣癌の患者血清中に、健常人血清と比較して有意に高いsEphA2値を検出した。肺癌バイオマーカーであるCYFRAおよびCEAとは正の相関性を示したが、前立腺癌マーカーPSAおよび卵巣癌マーカーCA125との相関性は低く、sEphA2が新規のバイオマーカーとしての可能性が示唆された。【フローサイトメトリーを用いた腫瘍特異的エクソソームの同定解析】細胞から分泌産生されるエクソソームは平均直径数100nmの微粒子で有り、一般的なフローサイトメトリー機器の検出限界サイズと考えられている。当研究室で保持しているフローサイトメトリー(FACSCalibur)を用いて同定することができるかを検討した。まず最初に腫瘍細胞の培養上清中に産生されているエクソソームをExoQuick(SBI社)試薬を用いて濃縮単離し各蛍光色素で標識された抗体を用いて染色し、フローサイトメトリーで解析を行った。その結果、エクソソーム膜上に発現していると報告されているCD9, CD63, CD81が陽性のエクソソームを検出することに成功した。さらに腫瘍細胞で高発現しているEpCAM, CD147に対する抗体を用いてフローサイトメトリーで解析した結果、エクソソーム上にも腫瘍細胞と同様にEpCAM, CD147が発現していることを同定した。今後この結果をもとにFITC-CD63/PE-CD147/PerCP-Cy5-EpCAMの多重染色で腫瘍細胞由来エクソソーム(テクソソーム)を解析する条件を決定している。【新規腫瘍マーカーX検出サンドウィッチELISAの樹立】ヒト腺癌で高発現している腫瘍関連膜貫通型抗原Xは分子標的薬のターゲットとなっている分子である。この膜型分子は分泌型としても存在することが示唆されており、可溶化体Xの検出システムを構築することを目的とした。研究代表者が作成した抗X抗体と市販の抗X抗体を組み合わせることにより可溶化Xの検出系(サンドウィッチELISA)を樹立した。標準タンパクを用いて検出限界を解析した結果160pg/mLと高感度でXの検出が可能であった。卵巣癌細胞培養上清にこれら可溶化体が検出されることを確認しており、現在卵巣癌患者血清中の可溶化体Xの測定を計画中である。平成26年度の研究目標は昨年度までの実験によって蓄積されたノウハウに基づき、特に有望な標的抗原および抗体を用いて、婦人科系癌から産生されるエクソソーム(テクソソーム)の性状解析を中心に研究を実施した。その結果フローサイトメトリーと多重蛍光標識抗体によって、テクソソーム(腫瘍由来のエクソソーム)を癌細胞培養上清から検出することに成功した。検出抗体はエクソソームマーカーであるCD9またはCD63と腫瘍由来抗原であるCD147とEpCAMに対する抗体を用いて検出した。現在ナノマテリアルを用いてテクソソームを濃縮する技術を開発中である。今後は患者血清中に同様のテクソソームが検出されるかを検討する予定である。また新たな腫瘍マーカーの同定に成功した。可溶化EphA2をpgオーダーで計測できる測定系を開発し、卵巣癌患者、肺癌患者および前立腺がん患者で有意に高値を示すことを確認した。この研究成果は日本癌学会およびアメリカ癌学会で発表し、現在論文を投稿中である。また可溶化B7-H3を測定するシステムを構築しがん患者血清で検討した結果、卵巣癌患者で高値を示すことが判明した。今後は子宮体癌患者の血清等で検討する予定である。この研究成果をもとにEphA2およびB7-H3がテクソソームの検出に有用であるかを検討した結果、弱いながらもテクソソーム表面に発現していることが明らかとなった。これら新規分子をより高感度で検出するための蛍光色素およびナノデバイスを現在検討中である。乳がんおよび卵巣がんはそれぞれ乳腺および卵巣にできる婦人科系に特徴的な悪性腫瘍である。乳がんは女性の12人に1人の割合で発症するとても罹患率の高いがんである。一方、卵巣がんは乳がんに次いで罹患率の高いがんであり、初期症状がほとんどないため、発見時にはステージが後期に差し掛かっていることも多い。そこで早期治療を行うため、早期発見の重要性が増している。本研究では、多くの種類のがんで高発現しているEphA2をバイオマーカー候補として検討した。EphA2はチロシンキナーゼ受容体のファミリーに属し、腫瘍の増殖や浸潤、遊走等のシグナル伝達に関与しており、可溶化EphA2としても遊離した状態で血液中に存在していることが知られている。本研究ではまず、乳がんおよび卵巣がん細胞の細胞表面上のEphA2を表面分子解析法で解析し、各細胞上清および各がん患者の血清中のEphA2濃度をサンドウィッチELISAで測定した。その結果、各種がん細胞の細胞表面上にEphA2発現が認められ、本研究課題の成果である高感度で可溶化EphA2を測定できるサンドウィッチELISAを用いて培養上清中に検出することが出来た。次にEphA2が乳がんおよび卵巣がんに対する新規のバイオマーカーとしての有用性を検討した。

その結果、乳がん患者(10例)の血清中におけるEphA2値は、健常人の平均値より高い値とはならなかった。一方、卵巣がん患者(26例)の血清ではEphA2の平均値が健常人より有意に高い値であった。卵巣がんのバイオマーカーとして実用化されているCA125とEphA2との相関を解析した。その結果、両者に相関性は低く、EphA2が新規のバイオマーカーとしての可能性が示唆された。EphA2は肺癌、卵巣癌、前立腺癌などの癌で高発現する糖蛋白質で、酵素切断によりsEphA2として遊離した状態でも存在している。本研究では各種癌患者血清中のsEphA2検出を目的に、感度と特異性の高いsEphA2測定ELISA系の樹立に成功した。その系を用いて各種癌患者血清中を測定した結果、肺癌、前立腺癌および卵巣癌の患者血清中に、健常人血清と比較して有意に高いsEphA2値を検出した。肺癌バイオマーカーであるCYFRAおよびCEAとは正の相関性を示したが、前立腺癌マーカーPSAおよび卵巣癌マーカーCA125との相関性は低く、sEphA2が新規のバイオマーカーとしての可能性が示唆された。研究はおおむね順調に推移している。研究計画にあるように既にいくつかの新規腫瘍マーカー(EphA2, B7-H3)の同定と高感度測定系の樹立に成功しており、婦人科系がん患者血清を用いて、その有用性を解析している。また本研究は東洋大学生命科学部・食環境科学部・総合情報学部・理工学部のヒト及びヒト由来物質を対象とした研究に関する倫理審査委員会の承認を受けており、倫理面でも計画通りである。今後は計画にあるようにナノファイバーを用いた濃縮・検出感度の向上を目指す予定で、既にEpCAM抗体結合ナノファイバーの作成は終了している。研究成果は国内外の学会で発表済みであるが、学術論文の発表が若干遅れている。27年度が最終年度であるため、記入しない。血清診断学腫瘍免疫学最終年度はこれまでの研究成果をまとめるだけではなく、実用化に向けてさらに加速していきたい。そのためには産学連携の研究が不可欠で、現在診断薬およびバイオ関係企業数社と交渉中である。またより新規性・進歩性のある成果は特許出願を目指す予定である。また婦人科系がん患者血清の入手に関しては次年度から九州大学の加藤聖子教授を分担研究者から削除したが、既に倫理委員会で承認済みのメーカーから患者情報ともに管理されている血清を購入し検討する予定である。初年度の研究はほぼ計画通り順調に進んでいる。特にエクソソームをフローサイトメトリーで解析することに成功し、多重染色解析が可能となった。今後は多くの試料からエクソソームを単離しデータを蓄積する予定である。また新規腫瘍マーカーXの測定ELISAを樹立することに成功したので、次年度は患者由来体液を用いた測定を行い、その有用性について検討を行う予定である。26年度まではテクソソームおよび血清バイオマーカーの測定システムの構築などの基礎研究に集約していたために機器購入および臨床血清の購入がされていなかった。今後の研究推進も計画に準じて行う予定である。
脂肪細胞を用いた腎再生医療の新展開

本研究の目的は「脂肪由来幹細胞を用いた新たな腎再生医療を開発すること」である.低血清培養脂肪由来MSCは高血清で培養したMSCと比較して、再生促進サイトカイン(VEGF, HGF)を多く分泌することを介して、血管内皮細胞の増殖を促進し、アポトーシスを抑制することを見出した.また低血清培養脂肪由来MSCをラットの下肢虚血モデルに投与すると高血清培養MSCと比較してより強い再生促進効果が得られた.さらに、急性腎不全を惹起したラットの腎被膜下に低血清培養MSCもしくは培養を介さない脂肪由来細胞を投与することで腎障害が軽減されることを見出した.本研究の目的は「脂肪由来幹細胞を用いた新たな腎再生医療を開発すること」である.低血清培養脂肪由来MSCは高血清で培養したMSCと比較して、再生促進サイトカイン(VEGF, HGF)を多く分泌することを介して、血管内皮細胞の増殖を促進し、アポトーシスを抑制することを見出した.また低血清培養脂肪由来MSCをラットの下肢虚血モデルに投与すると高血清培養MSCと比較してより強い再生促進効果が得られた.さらに、急性腎不全を惹起したラットの腎被膜下に低血清培養MSCもしくは培養を介さない脂肪由来細胞を投与することで腎障害が軽減されることを見出した.慢性腎疾患は末期腎不全のみならず心血管疾患に対する大きな危険因子である。従来の治療では一旦悪化した腎機能を回復させることは困難であり、腎疾患治療に対する再生医療の応用が期待される。再生医療に用いる細胞ソースとして、我々は採取が容易で骨髄に比べ幹細胞/前駆細胞が豊富な脂肪組織に着目した。特に、脂肪組織をコラゲナーゼ処理して得られるSVF (Stromal Vascular Fraction)および脂肪由来間葉系幹細胞(ASC: adipose derived stem cell)に関して解析を進めている。これまで十分な説明の上に同意を頂いた20例以上の患者から皮下脂肪を採取している。得られた脂肪組織からSVFおよびASCを分離後、一部は解析に用い、残りは凍結保存した。表面マーカーを調べたところ、SVFにはCD34陽性細胞が平均37%と高率に含まれていることがわかった。我々はこれまでに名古屋大学農学部との共同研究にてヒト脂肪組織から効率よく間葉系幹細胞を分離培養する「低血清培養法」を確立しているが、この方法で末期腎不全患者3例含む全例の皮下脂肪から間葉系幹細胞を分離・培養することに成功している。さらにSVFおよびASCともに凍結・融解しても細胞は問題なく培養・増幅できることを確認した。低血清培養と従来の高血清培養で得られる細胞を比較検討したところ、前者でVEGFおよびHGFを有意に多く分泌していることが確認された。治療実験として、ラットにシスプラチンを投与して作成した急性腎不全モデルに対し、SVFを腎被膜下に注入した。培養液を投与した対照群と比較してSVF投与群では腎障害の悪化は有意に抑制された。一旦凍結・融解したSVFを投与した群でも同程度に腎障害の悪化が抑制された。以上の結果から、脂肪由来幹/前駆細胞はヒトでの腎臓再生医療の実用化にあたり非常に有望である。脂肪組織には多くの幹細胞が存在することが明らかとなり、再生医療における細胞ソースとして注目されている。名古屋大学の故北川は世界に先駆けて低血清培養法を用いてヒト皮下脂肪から分化能力と増殖能力の高い間葉系幹細胞(MSC=mesenchymal stem cell)の選択的分離培養に成功していた。本研究の目的は「脂肪組織内に存在する幹細胞を用いた新たな腎再生医療を開発すること」である。主たる成果は以下の3点である。(1)低血清培養法に関するin vitroでの検討低血清培養脂肪由来MSCは高血清で培養したMSCと比較して、再生促進サイトカイン(VEGF, HGF)を多く分泌すること、血管内皮細胞の増殖を促進し、アポトーシスを抑制すること、そしてその効果が抗サイトカイン中和抗体で抑制されることを見出した。また低血清培養脂肪由来MSCは高血清培養MSCよりも小型で培養を重ねても安定した形態を保っていた。(2)ラット下肢虚血に対する治療効果:低血清培養脂肪由来MSCをラットの下肢虚血モデルに投与すると高血清培養MSCと比較してより強い再生促進効果が得られた。(3)ラット急性腎不全モデルに対する治療効果:葉酸腎症を惹起したラットの腎被膜下に低血清培養MSCを投与すると、腎障害が軽減されることを見出した。またシスプラチン腎症を惹起したラットの腎被膜下に培養を介さない脂肪由来細胞(SVF)を投与することで腎障害が軽減されることを見出した。以上の知見は新たな腎再生医療の開発に大きな意義を持つ。臨床応用を考えた際、少量の自己血清で培養が可能な低血清培養は有利である。さらに培養を重ねても安定していることは、臨床応用には必須条件である。また、動物モデルで腎疾患治療に対する有効性を示すことができた。
慢性胃潰瘍の治癒におけるCOXアイソザイムおよびEP受容体サブタイプの役割

前年度研究において、慢性胃潰瘍の治癒過程においてはCOX-2由来のPGが重要な役割を果たしていることが判明した。本年度はPGE受容体であるEP14の胃潰瘍治癒における役割について検討した。非選択的COX阻害薬の投与は胃潰瘍の治癒を有意に遅延させた。このCOX阻害薬による胃潰瘍治癒遅延に対する、各EP受容体作用薬の影響を検討したところ、EP4受容体作用薬は胃潰瘍治癒遅延に有意に拮抗したが、EP1、EP2、EP3の受容体作用薬は何ら影響を示さなかった。さらに、胃潰瘍の自然治癒に対して、EP4受容体拮抗薬およびCOX-2阻害薬の投与は同等の治癒遅延作用を示した。胃潰瘍辺縁部において血管内皮増殖因子(VEGF)の発現は有意に増大したが、EP4受容体拮抗薬およびCOX-2阻害薬の投与はこのVEGF発現を著明に抑制した。また、胃潰瘍部における新生血管数はEP4受容体拮抗薬およびCOX-2阻害薬の投与により有意に抑制された。さらに、ラット潰瘍底部由来の繊維芽細胞を用いin vitroにおいて増殖因子発現を検討したところ、PGE2の培地への添加は繊維芽細胞中のVEGF発現を増強したが、この作用はEP4受容体拮抗薬の併用により阻害された。以上、慢性胃潰瘍の治癒過程においてCOX-2由来のPGは、EP4受容体を介して、増殖因子発現や血管新生を調節することで治癒に貢献するものと考えられる。COX-1/COX-2選択的阻害薬の慢性胃潰瘍治癒に対する影響およびCOX-1/COX-2遺伝子欠損マウスにおける慢性胃潰瘍の治癒反応について検討し、以下の知見を得た。慢性胃潰瘍の治癒はCOX-1選択的阻害薬の投与により何ら影響を受けなかったが、COX-2選択的阻害薬は非選択的阻害薬と同様に治癒を遅延させた。胃潰瘍辺縁部におけるPGE_2産生量は正常粘膜と比較して著明に増大したが、このPGE_2産生の増大はCOX-2選択的阻害薬により有意に抑制されたものの、COX-1選択的阻害薬によっては抑制されなかった。胃潰瘍辺縁部において血管内皮増殖因子(VEGF)の発現は有意に増大した。COX-1選択的阻害薬によりこのVEGF発現増大は何ら影響を受けなかったが、COX-2選択的阻害薬の投与はVEGF発現を著明に抑制した。また胃潰瘍部における新生血管数はCOX-2選択的阻害薬の投与により有意に抑制されたが、COX-1阻害薬は血管数に影響を与えなかった。COX-1もしくはCOX-2遺伝子欠損マウスにおいて焼灼胃潰瘍の発生は野生型マウスと同等であった。COX-1遺伝子欠損マウスにおける胃潰瘍の自然治癒は野生型マウスと同様であったが、COX-2遺伝子欠損マウスの胃潰瘍治癒は野生型マウスと比較して著しく遅延していた。以上、慢性胃潰瘍の治癒過程においてはCOX-2由来のPG類が重要な役割を果たしていることが判明した。COX-2由来のPGは増殖因子発現や血管新生を調節することで治癒に貢献するものと考えられる。
脂質二重膜界面におけるピレンエキシマーの生成機構

ジパルミトイルホスファチジルコリン(DPPC)中に、Nー(1ーピレンスルホニル)ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン(PyrーDPPE)を、1000:1,30:1,10:1のモル比の割合で標識した脂質二重膜を3種類調製した。これらの試料の吸収スペクトル、蛍光スペクトルおよび蛍光寿命を15°Cから55°Cの種々の温室で測定した。DyrーDPPEの濃度の高い30:1と10:1のモル比の脂脂二重膜では、ピレンスルホニル基の基底状態ダイマーが生成した。また、蛍光測定ではドレンスルホニル基が励起状態でエキシマーを生成し、エキシマーの蛍光強度のモノマーの蛍光強度に対する比の値が温度と共に減少し、特にDPPCの相転移温度(42°C)以下で大きく減少することが判明した。ピレンスルホニル基の蛍光寿命を解析したところ、モル比が1000:1の試料では単一の寿命成分を示したが他の試料ではモノマー,エキシマーの蛍光バンド共に2寿命成分をもつ。エキシマーの短寿命成分が負の値を示すことから、エキシマーはモノマーが励起された後、他の基底状態にあるモノマーと会合してエキシマーを生成することが判明した。一方、吸収バンドがモノマーと同じ波長領域であることから、モノマーとダイマーの両方を励起することになり、励起ダイマーからエキシマーが生成する過程も存在する。以上の結果から、DPPC中のピレンスルホニル基は脂質二重膜の界面でエキシマーが2つの過程で生成し、相転移温度以下では、その生成が著るしく阻害されることがわかった。また、脂質多重膜でも同様の研究を行い、エキシマーの生成量が二重膜に比べて多く、その理由について、現在膜構造の相異と関連させて検討中である。また、エキシマーの生成機構がヘビ毒であるカルジオトキシンの作用でどのように変化するかについても研究中である。
食物アレルゲンの架橋活性に及ぼす環境中マイクロプラスチックの影響

近年、海洋等に廃棄されるプラスチックが細片化されマイクロプラスチックとなり、海洋生物の体内に取り込まれることが問題になっている。プラスチックの中には、種々の物質を吸着させる性質を持つものがあり、環境汚染物質等を吸着したマイクロプラスチックを摂取した生物をヒトが食することに対する不安が増している。一方、アレルギー反応は、多価のエピトープを持つアレルゲンにより複数分子のIgE抗体が架橋されることが引き金となっている。そこで本研究では、食物アレルゲンが環境中のマイクロプラスチックに結合することにより、単量体で存在する場合に比較してどのような架橋活性の変化が起こるかを解析することを主な目的にしている。昨年度は、溶液中に単量体で存在する際には架橋活性を持たないアレルゲン分子が、ポリスチレン製のマイクロプラスチックビーズに結合することで、十分に強い架橋活性を誘導できるようになる例を、培養細胞のルシフェラーゼアッセイを用いた独自の評価系を用いて示した。今年度は、ポリスチレン製のプラスチックプレートに抗原を吸着させても同様の結果が得られるかどうかを確認した。その結果、抗原を溶液(培地)中に溶かした場合と、プラスチックプレートに固相化した場合とでは、後者の方がより強く応答することが分かった。抗原の対数濃度(0.110000 ng/mL)とルシフェラーゼ活性のfold increaseとの相関係数は、前者が-0.50であったのに対し、後者は0.99であった。これは、前者の応答性が至適濃度を持ついわゆるbell-shape型であったのに対して、後者は濃度依存的に応答性が増加し続けたことによる。この結果は、抗原がプラスチック等の固相に吸着されると、溶液中に単量体で存在する場合とは異なり、IgEと抗原との反応が高濃度でも減弱しなくなる可能性を示唆していると思われる。本研究では、架橋刺激に関与するIgEのみを検出できる唯一のin vitro試験法であるEXiLE法を用いている。本法では、マスト細胞(RS-ATL8細胞)にIgE抗体の感作を行うが、この際に魚アレルギーなどの食物アレルギー患者血清が必須となる。昨年度に引き続き魚アレルギー患者血清を収集したが、いずれも抗体価が低く(CAP値:class12)、EXiLE法に供しても応答性が低かった。日本人の魚アレルギー患者数が、卵アレルギーなどに比べ少ないことも血清入手を困難にしている。そのため、当初の予定どおりに検討が進まなかった。今年度は、魚に限らず他の食物アレルギー等の患者血清を用いて検討を行う。マイクロプラスチックの粒子径及び材質により、各種食物アレルゲンの架橋活性に変化が見られるかを評価する。粒子径数μm1mmのポリスチレン材質のマイクロビーズに、魚類をはじめとした各種食物より抽出したタンパク抽出液を吸着させ、その架橋活性をEXiLE応答性により評価する。また、プラスチックプレートへの固相化法も行い、応答の変化を検討する。アレルギー反応はIgE抗体とアレルゲンとの結合により引き起こされるが、より詳細には、多価のアレルゲンが複数のIgE分子を架橋することが直接の引き金となっている。本研究では、食物アレルゲンが環境中のマイクロプラスチックに結合することにより、単量体で存在する場合と比較してどのような架橋活性の変化が起こるかを解析することを主目的にしている。平成29年度は、溶液中に単量体で存在する際には架橋活性を持たないアレルゲン分子が、マイクロプラスチックビーズに結合した場合にどの程度架橋活性が変化するかについて、直径0.5 μmの蛍光性ポリスチレンビーズ(Polysciences社)を用いて検討した。ここに、精製食物アレルゲンXまたは陽性対照としての抗ヒトIgE抗体を結合させた。陰性対照には、BSAを結合させた。ビーズへのタンパク質結合量は250300 μg/mLであった。分担研究者の過去の検討から、ある患者Aの血清は、アレルゲンXに対する血清中IgE抗体価が陽性(クラス3)であるにも関わらず、ルシフェラーゼアッセイによりIgEの架橋を調べるEXiLE法では応答性が認められない(最大で未刺激時の1.2倍)ことが分かっていた。一方、ビーズに結合させたアレルゲンXは、最大3.3倍のEXiLE応答を誘導できた。陽性対照では8.8倍、陰性対照では0.8倍であった。これにより、単量体では十分なIgE架橋活性を持たないアレルゲンであっても、マイクロプラスチックと結合することにより架橋能とマスト細胞活性化能を獲得することが明らかになった。また、抗ヒトIgE抗体を同様に結合させたマイクロプラスチックは陽性対照として十分に機能した。なお、BSAを結合させた陰性対照ビーズは、高濃度で細胞の非特異的な応答抑制がやや認められたため、他のタンパク質やFBS等を検討する。本法ではまず、マスト細胞(RS-ATL8細胞)にIgE抗体の感作を行うが、この際に魚アレルギーなどの食物アレルギー患者血清が必須となる。平成29年度は、想定していた患者血清の収集が難しく検体数、収量共に乏しかったことから、検討開始が遅れた。平成30年度は一部患者血清を購入する(PlasmaLab社)ことも視野に入れ、研究課題を遂行していく。

プラスチックの中には、種々の物質を吸着させる性質を持つものがあり、環境汚染物質等を吸着したマイクロプラスチックを摂取した生物をヒトが食することに対する不安が増している。一方、アレルギー反応は、多価のエピトープを持つアレルゲンにより複数分子のIgE抗体が架橋されることが引き金となっている。そこで本研究では、食物アレルゲンが環境中のマイクロプラスチックに結合することにより、単量体で存在する場合に比較してどのような架橋活性の変化が起こるかを解析することを主な目的にしている。昨年度は、溶液中に単量体で存在する際には架橋活性を持たないアレルゲン分子が、ポリスチレン製のマイクロプラスチックビーズに結合することで、十分に強い架橋活性を誘導できるようになる例を、培養細胞のルシフェラーゼアッセイを用いた独自の評価系を用いて示した。今年度は、ポリスチレン製のプラスチックプレートに抗原を吸着させても同様の結果が得られるかどうかを確認した。その結果、抗原を溶液(培地)中に溶かした場合と、プラスチックプレートに固相化した場合とでは、後者の方がより強く応答することが分かった。抗原の対数濃度(0.110000 ng/mL)とルシフェラーゼ活性のfold increaseとの相関係数は、前者が-0.50であったのに対し、後者は0.99であった。これは、前者の応答性が至適濃度を持ついわゆるbell-shape型であったのに対して、後者は濃度依存的に応答性が増加し続けたことによる。この結果は、抗原がプラスチック等の固相に吸着されると、溶液中に単量体で存在する場合とは異なり、IgEと抗原との反応が高濃度でも減弱しなくなる可能性を示唆していると思われる。本研究では、架橋刺激に関与するIgEのみを検出できる唯一のin vitro試験法であるEXiLE法を用いている。本法では、マスト細胞(RS-ATL8細胞)にIgE抗体の感作を行うが、この際に魚アレルギーなどの食物アレルギー患者血清が必須となる。昨年度に引き続き魚アレルギー患者血清を収集したが、いずれも抗体価が低く(CAP値:class12)、EXiLE法に供しても応答性が低かった。日本人の魚アレルギー患者数が、卵アレルギーなどに比べ少ないことも血清入手を困難にしている。そのため、当初の予定どおりに検討が進まなかった。当初の予定どおり、EXiLE法を実施し、マイクロプラスチックの粒子径及び材質を検討することで、マイクロプラスチックによる各種食物アレルゲンの架橋活性を評価する。前期は、数μm1mmの粒子径でポリスチレン材質のマイクロビーズに、魚類をはじめとした各種食物より抽出したタンパク抽出液を吸着させ、その架橋活性をEXiLE応答性により評価する。さらに後期には魚類の加熱・加圧調理を行い、実際の食生活の中でマイクロプラスチックが魚関連アレルゲンの抗原性に影響を及ぼすかどうかを評価する。今年度は、魚に限らず他の食物アレルギー等の患者血清を用いて検討を行う。マイクロプラスチックの粒子径及び材質により、各種食物アレルゲンの架橋活性に変化が見られるかを評価する。粒子径数μm1mmのポリスチレン材質のマイクロビーズに、魚類をはじめとした各種食物より抽出したタンパク抽出液を吸着させ、その架橋活性をEXiLE応答性により評価する。
末梢血幹細胞における院内調製工程の標準化に関する研究

院内血液製剤は、調整操作工程に関連した細菌汚染や品質劣化(保存傷害)の危惧が指摘される一方、品質保証をするための統一した基準が設定されていない。そこで、幹細胞の院内調製に関する遵守基準(標準化)作成に寄与する事を目的に、本院で調整された凍結保管幹細胞のうち、廃棄対象である2005年2008年の末梢血幹細胞18名分(2005年5名、2006年5名、2007年4名、2008年4名)の品質状態を明らかにした。廃棄ロットを37°C恒温槽で急速に解凍し、混和して血液を汚染の無いように安全キャビネット内でFlow Cytometry測定用および無菌試験用にサンプリングし、それぞれ、CD34陽性細胞絶対数測定(CD34陽性細胞をCD45陽性細胞集団について比率を算出し、7AADによる死細胞を差し引く方法)による生幹細胞総数と採血直後(コントロール)に行った同様の方法との比率(保管期間における生存率)およびエンドトキシン測定、TGC培地による培養を行った。保管期間における生存率は、2005、2006、2007、2008年に対し、それぞれ21.8±21.8、36.9±7.8、41.4±12,5、38.9±7.3(平均±2SD)%であり、2005年に保管された幹細胞は、2006年以降のものと比較して減少傾向を認めたが、有意な動向とは言えなかった。一方、無菌試験の評価では、すべて感度以下および培養12週間まで菌の発育は認められなかった。今回の検討では凍結保管期間5年における無菌性は保たれていた。一方、生存率は年次経過に伴い減少傾向を認め、また保管期間2年における生存率が40%前後であったことから、凍結保管1年以内の生存率がすでに半減した可能性が示唆された。しかし保管期間1年以上経過したものを対象としたため、1年以内の生存率を検証する事は出来なかった。その原因として、-80°C超低温フリーザーの開閉による庫内温度の変化が凍結保管幹細胞に及ぼす影響、凍結にかける時間による細胞への影響、用いている細胞凍害保護液の性能などが考えられる。
難燃性繊維混用製品の高熱環境における安全性について

繊維成品の安全性を高めるための加工の一つとして、火災や火傷を防ぐ難燃化がある。最近では種々の難燃性繊維や加工方法が開発されてきた。ここでは、難燃性繊維試料としてポリクラール(略PC),PBI(略PB),難燃強化モダクリル(略PT)、および易燃性繊維として木綿をとりあげ、各100%及びこれらの繊維の混紡率を変化させて構成した編物について実験を行い、繊維の種類と混紡率が難燃性に及ぼす効果を検討した。まず難燃性の指標とされる酸素指数(OI)を酸素指数測定装置により測定した結果、OIはPBが36.0と最も高く、PCが30.7、PTが29.8であった。混紡試料については、難燃性繊維同士の場合は50%混紡率で最高のOIを示した。難燃性繊維と易燃性繊維の混用では易燃性の木綿を25%混紡するとOIはやや高くなるが、さらに木綿の比率が増加するとOIは著しく低下した。OI濃度気流内における各試料の燃焼速度を、ハイスピードビデオカメラで継時的に撮影した映像から求めた。その結果、OI値の高い試料ほど燃焼速度が遅いことを確認した。またOI濃度気流内における燃焼生成ガスについてガスクロマトグラフによる定量分析を行った。1m^3の空気中で1gの試料が燃焼した時に発生するCO濃度は、PBが51.4ppmと最も高く、PCが32.2ppm, PTが25.6ppmであった。混紡試料では、各難燃性繊維に易燃性の木綿を25%混紡するとCO濃度は増加するが、これより木綿の混率が高くなるとCO濃度は徐々に低下した。難燃性繊維の混紡では混率50%において高いCO濃度を示した。HCNはPBおよびPTの燃焼ガスにおいて検出され、両者の混紡試料ではその濃度が顕著に高くなった。これら燃焼ガスの生成濃度に及ぼす試料構成繊維の種類やその混紡率に影響は、分散分析によりいずれも有意であることが認められた。繊維製品の安全性を高めるための加工の一つとして、火災や火傷を防ぐ難燃化がある。1m^3の空気中で1gの試料が燃焼した時に発生するCO濃度は、PBが51.4ppmと最も高く、PCが32.2ppm,PTが25.6ppmであった。これら燃焼ガスの生成濃度に及ぼす試料構成繊維の種類やその混紡率の影響は、分散分析によりいずれも有意であることが認められた。

1m^3の空気中で1gの試料が燃焼した時に発生するCO濃度は、PBが51.4ppmと最も高く、PCが32.2ppm, PTが25.6ppmであった。混紡試料では、各難燃性繊維に易燃性の木綿を25%混紡するとCO濃度は増加するが、これより木綿の混率が高くなるとCO濃度は徐々に低下した。難燃性繊維の混紡では混率50%において高いCO濃度を示した。HCNはPBおよびPTの燃焼ガスにおいて検出され、両者の混紡試料ではその濃度が顕著に高くなった。これら燃焼ガスの生成濃度に及ぼす試料構成繊維の種類やその混紡率に影響は、分散分析によりいずれも有意であることが認められた。