hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
シロイヌナズナ発生におけるRab5の機能

これらのことからRAB5がSHORTROOT、SCARECROWだけでなくPIN3、PIN4といった発生における重要な複数の遺伝子の発現領域の調節に関与することが明らかになった。細胞内膜交通と遺伝子発現領域の関係性を示唆する興味深い結果である。RAB5はエンドソームに局在するのに対し、RAB7は液胞膜に局在して液胞輸送を制御すると考えられている。発生におけるRAB7の機能を解析するため、酵母において複合体の状態でRAB7の活性化因子として働くSAND1/MON1とCCZ1のシロイヌナズナにおけるホモログの変異体系統を確立した。vps9a-2変異体と類似する表現型を示すと同時に異なる異常も示した。RAB5、RAB7特異的な機能、共通する機能を明らかにすべく、解析を進めている。ccz1変異体の生育に対するRAB5の過剰発現の影響がメンバーによって真逆になるという興味深いデータも得られつつある。RAB5の活性化因子であるVPS9aの変異体の表現型解析を進めた。計画通りにオーキシン輸送体の局在解析を行い、PIN2の液胞への輸送にRAB5が必要であることを明らかにした。さらに、PIN3やPIN4の局在ではなく発現領域の調節にRAB5が関与するという興味深い結果が得られた。研究対象を、酵母においてRAB7の活性化因子であることが報告されているSAND1/CCZ1複合体にも拡大した。クローニング、GFP融合形質転換体の作出、変異体系統の確立に成功した。RAB5の活性化因子であるVPS9aの変異体の表現型解析をさらに進め、地上部の解析も行った。また、RAB7の活性化因子だとされるSAND1およびCCZ1のGFP融合タンパク質を発現する植物体の作成および細胞内局在解析に成功した。また、大腸菌発現によるタンパク質の精製にも成功した。さらに、変異体の表現型解析を進めることができ、その過程でccz1変異体の生育に対するRAB5過剰発現の影響が保存型と植物特異型で真逆になるという大変興味深いデータも得られつつある。RAB5の機能解析を引き続き行うとともに、当初の研究計画にはなかったRAB7の機能解析を重点的に進める。植物におけるRAB7の機能については細胞・分子レベルにおいてもまだ明らかにされていないことが多いため、解析対象を器官・個体レベルから細胞・分子レベルにまで拡大する。今後、SAND1とCCZ1が植物においても複合体を形成し、RAB7の活性化因子として機能することを生化学的に示す。また、sand1変異体、ccz1変異体の解析をさらに進めて、細胞レベル・器官レベルでのvpsga2変異体との対比を行い、RAB5経路とRAB7経路の協調性と独立性を検証する。
微小電極と合成モレキュラー・プローブによる生物膜・グラニュール汚泥の菌叢動態解析

本研究では、集塊化増殖体内でのin situな物質代謝特性把握するために,先端径が1020μm程度のガラス製チップで構成される種々の微小電極(Microelectrodes)センサーを開発製作し,嫌気性微生物アグリゲート(UASB反応器で培養されたグラニュール汚泥)および好気性微生物アグリゲート(固定担体上に形成された生物膜)に適用して,アグリゲート体内の任意の現位置での目的物質濃度を検出した。種々のバルク液条件下で平衡化させたフロー・セル反応器に嫌気性グラニュールもしくは好気性生物膜を固定し,マイクロセンサーを深部方向に30100μmピッチで貫入させて、種々の濃度勾配を測定した。作成したセンサー種は(1)嫌気性グラニュール汚泥に対して:pHセンサー/グルコース・センサー/硫化イオンセンサー(2)好気性生物膜に対して;pHセンサー/グルコース・センサー/DOセンサー/アンモニア性窒素イオンセンサー/硝酸性窒素イオンセンサー、である。さらにアグレゲート内の微生物生態学的構造を直接的に定量評価するために、種レベル、属レベルで16S rRNAをターゲットとした合成DNAプローブを設計し、In situ hybridizationして蛍光顕微鏡で目的菌を判別し、画像解析から存在量を定量化した。FISH対象菌グループとしては、(1)嫌気性グラニュールに対しては、古細菌、水素資化性メタン生成細菌、酢酸資化性メタン生成細菌、水素生産性酢酸生成菌、硫酸還元菌等について、(2)好気性生物膜試料についてはEubacteria、硝化細菌(アンモニア酸化細菌、亜硝酸酸化細菌)を定量把握した。また、ウルトラ・ミクロトームを用いて嫌気性グラニュール及び好気性生物膜を深部方向に層別切片試料を得て、FISHを適用し、アグリゲート内の深度方向菌叢分布を計測した。グラニュール等の微生物集塊の生態学的構造を把握するために,16SrRNAを標的とする蛍光標識モレキュラー・プローブのIn-situ Hybridizationを適用した.1.各種UASB反応槽より採取したグラニュール(5種)と,通常の中温消化汚泥について,Archaea検出のためARC915,Methanothrix属の特異的検出のためMT757プローブを用いて,全菌数中のArchaea及びMethanothrix属の存在率を定量化した.その結果,各試料中のArchaeaに属する菌群は全菌数の3865%に及び、またMethanothrix属は,全菌数の1538%であった.2.グラニュール汚泥内に占めるMethanothrlx属の存在率と,それら汚泥の酢酸基質からのメタン生成活性には,明確な正の相関性が認められ,in-situ hybridizationによるグループ特異的な菌数の測定により,汚泥中の各種活性を簡便に測定することができる可能性が示された.3.同一の糖系人工廃水により培養した高温,及び中温グラニュールの表面付近の層(外層),及び内部(内層)についてARC915,MT757,MB318プローブを用いたin-situ hybridizationを適用した結果,それぞれの層内に占めるArchaeaに属する菌群は,中温,高温グラニュールどちらも外層に比べ内層にArchaeaに属する菌群が多く存在することが明らかとなった.4.中温グラニュールではMethanothrix属が多く存在しているのに対し,高温グラニュールでは水素資化性メタン菌であるMethanobacter groupが比較的多く存在していることが判明し,高温グラニュールにおける酢酸酸化共生系による酢酸の消費が,菌数レベルでも示唆された.本研究では、集塊化増殖体内でのin situな物質代謝特性把握するために,先端径が1020μm程度のガラス製チップで構成される種々の微小電極(Microelectrodes)センサーを開発製作し,嫌気性微生物アグリゲート(UASB反応器で培養されたグラニュール汚泥)および好気性微生物アグリゲート(固定担体上に形成された生物膜)に適用して,アグリゲート体内の任意の現位置での目的物質濃度を検出した。
新規日周変動性キナーゼPFKを介するサーカディアンクロック制御機構の解析

サーカディアンクロックの中枢・視交叉上核SCNから申請者が発見した日周変動性キナーゼp45^<PFK>の構造決定を行い、作製した抗体などを用いて時計機構における役割を解析した。SCNの核/細胞質フラクションについて免疫沈降法でp45^<PFK>の活性を測定したところ、BMAL1リン酸化活性は細胞質では朝夕において2峰性の顕著な活性化を示し、核には活性がほとんど認められなかった。また、p45^<PFK>は、BMAL1の核移行シグナル付近を強くリン酸化することが判った(投稿準備中)。一方、リン酸化標的候補であるBMAL1に対する抗体を用いて、SCNにおける発現パターンを解析したところ、BMAL1蛋白質量は夜間に多く、p45^<PFK>の細胞質でのBMAL1リン酸化活性の上昇と対応する朝夕に核移行し、夜間の大半は細胞質に局在していた(投稿準備中)。また、時計の位相後退を引き起こす暗期前半の光照射により、SCNにおいて速やかなBMAL1の減少が誘導された(J.Neurosci.<20>___- 2000,7525-7530)。これらのことから、p45^<PFK>はBMAL1をリン酸化することにより、朝夕の時間にBMAL1の核/細胞質間移行や安定性を調節することで、サーカディアンクロック中枢の明暗サイクルへの同調に重要な役割を果たしている可能性が示唆された。サーカデイアンクロックの中枢・視交叉上核SCNから申請者が発見した日周変動性キナーゼp45^<PFK>を同定するため、ラット全脳から精製したp45^<PFK>蛋白質を、2次元電気泳動で分離したスポットについてマススペクトル解析を行い、遺伝情報解析結果などを経て構造決定を行ったところ、プロテインキナーゼである可能性が強く示唆された。SCNの核/細胞質フラクションについて免疫沈降法でp45^<PFK>の活性を測定したところ、CLOCK,BMAL1リン酸化活性を示した。また、そのリン酸化活性に核/細胞質で逆位相の顕著な日周変動を示した。このユニークな活性変動は、時計機構の制御にとって重要な働きをしていることが期待される。一方、BMAL1などのリン酸化標的候補に対する抗体を用いて、時計機構における蛋白質レベルでの制御の役割を明らかにする為、SCNにおける発現パターンを解析した。BMAL1蛋白質量はSCNにおいて顕著な概日変動を示した。時計の位相変化を引き起こす暗期の光照射により、SCNにおいて速やかなBMAL1の減少が誘導された。光による位相変化を媒介するグルタミン酸、NMDAをSCN培養片に添加しても同様な変化が起こった。これらのことから、時計の位相変化において、未知の細胞内シグナル伝達系を介した時計関連蛋白質の分解等の蛋白質レベルでの制御が重要な役割を果たしていると考えられた。p45^<PFK>などのプロテインキナーゼはそのシグナル伝達を担っている可能性があるので今後解析を進めたい。
高サイトカイン血症における意識障害のメカニズムと麻酔作用への影響

サイトカインと眠気の関係について研究を行った。ラットの腹腔内にLipopolysaccharideを投与して高サイトカインモデルを作成した。Microdialysisのプローブを大脳皮質に留置し、サンプルを採取した。高速液体クロマトグラフィーにより細胞外アセチルコリン量を計測し、その変動を観察することによりアセチルコリンニューロンの活動性を評価した。結果としては有意な変動は得られなかったがさらなる検討が必要である。感染症に罹患すると、ヒトは周囲への関心が低下し、疲れやすく、睡眠が断続的となり、活動性が低下する。これら精神状態の変容には炎症性サイトカイン産生が関与するといわれているが、その機序は不明である。本研究の目的は、高サイトカイン血症を来たす全身性炎症反応が中枢神経活動に及ぼす影響を明らかにすることである。本年度は、グラム陰性菌の細胞壁を構成するリポポリサッカライドを投与して敗血症を誘発したラットにおいて、中枢神経系の主な興奮性神経伝達物質であるアセチルコリンの大脳皮質における放出量の変化をマイクロダイアリーシス・高速液体クロマトトグラフィーを用いて検討した。雄性Wistarラットを用い、ペントバルビタール麻酔下にマイクロダイリーシス用のガイドカニューラを脳定位的にラット大脳皮質に挿入、固定した。12時間の回復期間の後、透析プローべを挿入し、アセチルコリン放出量を15分毎に測定した。90分間無処置で基準値を測定した後、イソフルラン麻酔下にリポポリサッカライド静脈内投与し、その後2時間アセチルコリン放出量を測定した。その結果、リポポリサッカライド投与時にアセチルコリン放出量を減少させることが知られているイソフルラン麻酔の影響によると思われる一過性のアセチルコリン放出量の減少を認めたが、その後のアセチルコリン放出量は回復し、基準値と有意差を認めなくなった。リポポリサッカライド投与後、ラットの活動性は一定せず、アセチルコリン放出量と活動性には関連性が認められた。今後は個体数を増やしてリポポリサッカライド投与後の活動性とアセチルコリン放出量の相関を検討するとともに、体温や全身性炎症反応の血中マーカーの測定、脳波測定などを行い、炎症反応と中枢神経活動の相関を明らかにしたい。サイトカインは様々な生体現象に関わることが近年明らかになってきており、治療のターゲットとしても注目されている。その作用には催眠作用があることが知られている。感冒症状に伴った眠気はサイトカインが原因と考えられている。IL-1β、TNFαがノンレム睡眠を促進し、中枢神経活動に対して中心的な役割を果たすが、他のサイトカインも何らかの睡眠への影響を有している。アセチルコリンは大脳皮質において睡眠-覚醒レベルの変化に主要な役割を担う神経伝達物質である。申請者はこれまでラットの大脳皮質におけるアセチルコリンニューロンの活動変化を様々な麻酔薬について調べてきた。この方法を応用し、サイトカインによる催眠作用がアセチルコリンニューロンの活動に関係するのかどうか調べた。Wistar Ratに頭蓋骨にドリルで穴をあけ、そこにダミーカニューラを挿入して一晩おき、次の日に実験を行った。カニューラを抜いてMicrodialysisのプローブを留置し持続還流を行った。大脳皮質から回収した還流液を高速液体クロマトグラフィーで解析した.1時間のコントロールデータを取ったあと、Lipopolysaccharide(LPS)を腹腔内に5mg/kg投与し、その後のアセチルコリンレベルの変動を見た。ラットは明らかに行動が鈍くなり、活動性は低下した。しかしながらアセチルコリンの変動に有意な差は見られなかった。睡眠覚醒を制御する神経伝達物質はノルアドレナリン、ヒスタミンなど他にも存在する。今回の結果からはサイトカインによる催眠作用はアセチルコリン以外の伝達物質を介していることが示唆された。重症感染症に伴う意識レベルの低下などにも関連すると思われ、全貌を明らかにするにはさらなる追求が必要である。
フランス共和国の小学校「プロジェ」とコレージュ「学級生活の時間」に関する調査研究

三ヵ年にわたる合計三度の現地調査(小学校、コレージュ、リセにおける授業観察を含む)や大学区に対するアンケート調査および収集した文献調査により、フランスにおける市民性教育の構造とその取り組みの特色を明らかにすることができた。フランスにおける市民性教育は、欧州統合をきっかけとした国家や地域の意識の自覚化や文化・言語の独自性強調に限られるものではなく、多くの先進国が直面している社会秩序の崩壊や治安の劣悪化に対応するべく学校と地域が連携している様々な取り組みであることが理解された。具体的には、小学校、コレージュ、リセにおける教科横断学習、公民科、学級活動、地域との連携を含んだ学校全体のプロジェクトなどであり、それらの実態を文献研究のみならず、実際の授業観察や担当者へのインタビューにより把握し、かつ問題点を描きだした。これらの調査結果の詳細を、二つの学校調査報告書にまとめて刊行した。また日本比較教育学会第38回大会(武藤孝典・新井浅浩「スクール・ガイダンスおよび価値教育の国際比較のために-日本・アメリカ・イギリス・フランス・ドイツ-」平成14年6月29日:九州大学)、日本カリキュラム学会第14回大会(武藤孝典・新井浅浩「フランスにおける市民性教育のためのカリキュラム開発」平成15年7月6日:上越教育大学)、日仏教育学会2004年度研究大会(山田真紀・鈴木規子・武藤孝典「フランスの学校における市民性教育-学校と地域の連携に注目して-」平成16年10月9日:上越教育大学)において発表した。さらに、以下の六つのテーマ、すなわち、1)市民性教育の総論、2)「学級生活の時間」と教師の役割、3)市民性教育における生徒指導専門員の役割、4)健康と市民性教育のための協議会の活動、5)優先教育地域における市民性教育、6)フランスの特別活動についてメンバーが論文を執筆し報告書にとりまとめた。本研究は、フランスで取り組まれている「市民性への教育」の具体的な展開としての、小学校の「プロジェ」とコレージュにおける「学級生活の時間」の実施状況について、また関連して特別教育活動(学級活動、児童生徒自治、学校行事、クラブ活動を含む)の実施状況について調査するものである。本年度の活動実績は、以下のとおりである。海外調査として、新井が平成14年3月1日より同年3月14日までフランス共和国に出張した。リヨン市(コレージュ1校および小学校1校)、パリ市(コレージュ1校、小学校1校)、イル・ド・フランス州(コレージュ1校)で調査を行った。さらに、国立教育研究所部長ピエール・カスパール氏を訪問し、研究計画等についての指導や情報提供を受けた。この調査では、フランスに帰省中であった分担者のアッシュが、研究協力者の鈴木規子(パリ在住:慶応義塾大学大学院博士課程)とともに、新井に同行した。海外調査における、各学校の校長をはじめとした実践者とインタビュー調査や意見交換、さらには授業観察を通して、フランスにおいては、「市民性への教育」の取り組みが、年毎に急速に進み変化していることが見い出され、またこれらに関し法律等によっで定められているものの、学校現場に展開の実態について、また抱えている問題点について詳細に理解することができた。これらの調査をもとに、「中間資料:フランス学校訪問調査記録(仮題)」として、目下そのまとめの作業に入っている。高橋および山田は、国内にて、文献やインターネットによる情報収集につとめた。なお、上記の鈴木に加え、既にこの分野で先駆的な研究をすすめている武藤孝典(信州大学名誉教授)および林尚示(山梨大学教育人間学部附属実践総合センター講師)が研究協力者として加わった。

本研究は、フランスで取り組まれている「市民性への教育」の具体的な展開としての、小学校の「プロジェ」とコレージュにおける「学級生活の時間」の実施状況について、また関連して特別教育活動(学級活動、児童生徒自治、学校行事、クラブ活動を含む)の実施状況について調査するものである。本年度の活動実績は、以下のとおりである。海外調査として、高橋が平成15年3月1日より同年3月10日までフランス共和国に出張した。イル・ド・フランス州(コレージュ2校)、およびストラスブール(小学校1校、コレージュ2校、リセ2校)で調査を行った。また、ストラスブール学区教育庁を訪問し、視学官と意見交換をした。この調査では、フランスに帰省中であった分担者のアッシュが、研究協力者の鈴木規子(パリ在住:慶応義塾大学大学院博士課程)とともに、高橋に同行した。渡仏中であった研究協力者の武藤(信州大学名誉教授)も調査の一部に加わった。昨年度に引き続く海外調査により、各学校の校長をはじめとした実践者とインタビュー調査や意見交換、さらには授業のビデオ記録を通して、フランスにおいての「市民性への教育」の取り組みの具体性が一層明らかにされた。昨年度の調査をもとに、中間資料として新井、アッシュ、鈴木により『フランスの市民性教育に関する学校訪問調査報告書』を取りまとめた。また、鈴木の翻訳により国民教育・研究・技術省の優先教育の強化に関する通達(1999年1月20日)邦文資料を作成し、同報告書に入れた。研究協力者の武藤(信州大学名誉教授)および新井は、これまでの成果の一部を用いて、日本比較教育学会第38回大会(平成14年6月29日)において、「スクール・ガイダンスおよび価値教育の国際比較のために-日本・アメリカ・イギリス・フランス・ドイツ-」の標題のもと研究発表をした。山田および研究協力者の林尚示(山梨大学教育人間学部附属実践総合センター講師)は、国内にて、文献やインターネットによる情報収集につとめた。平成15年度は、(1)第3回のフランス調査を実施すること、(2)第2回と第3回の調査データをまとめた「調査報告書」を公刊すること、(3)3年間の調査で収集したデータをもとに、研究に携わったものがそれぞれ論文を執筆し、研究会として最終的な「研究成果報告書」を公刊する準備をすること、の3つの作業を行った。第3回のフランス調査は、研究分担者の山田と研究協力者の鈴木規子(日本学術振興会特別研究員)が渡仏し、パリとナンシー市にて、2003年11月24日から同月28日の日程で実施した。訪問先は、小学校、中学校、高校、大学区視学局であった。今回は、これまでの調査で調べきれなかった項目や、新たに浮かび上がってきた課題に焦点をしぼって調査を行った。調査によりフランスの教育関係者が、多くの先進国が直面している社会秩序の崩壊や治安の劣悪化に対応するために、学校と社会が連携して青少年の健全育成を図っていくシステムを作り、地道な努力を続けている様子が明らかにされた。
猿実験緑内障におけるストレス蛋白発現の検討

実験1.目的:猿実験緑内障眼の網膜におけるHSPの発現について検討した。結果:神経保護に関するHSPであるHSP-90、60、27は緑内障網膜で発現が高度に亢進した。実験2.目的:猿実験視神経乳頭におけるHSPの発現について次に検討した。結果:視神経乳頭では網膜とは逆に実験緑内障猿眼では神経保護に関するHSPは全て発現が減少した.一方、細胞外マトリックスの修復に関係するHSP-47は逆に発現が亢進した。また、免疫染色で確認したこれらの結果は同様にZeissのソフトを用いた画像解析を行い、有意差検定を行い、確認した。次にHSP-70とHSP-47についてはmRNAの発現をみる目的でin situ hybridizationを行った。免疫染色の結果と同様にHSP-70は発現が低下し、一方HSP-47は亢進していた。この結果は2003年のアメリカの学会での講演発表に採用され、現在投稿準備中である。以上の結果より実験緑内障の発症進行にHSPが関与しており、網膜と視神経乳頭ではその拳動が異なっていることが分かった。今後これらのHSPの発現をコントロールする薬剤が緑内障の研究さらには治療へと結ぶつく可能性を検討する予定である。内容1実験猿緑内障網膜における種々のHSPの発現につい免疫組織学的に検討し、定量的な解析を免疫染色用の定量ソフトにより解析し、統計学的に分析し、6月にJpn J Ophthalmolに採用された。内容2神経乳頭におけるHSPの発現の解析について猿2頭を購入し隅角レーザー光凝固を行い、緑内障眼を作成した。組織はパラフィンに包埋し、切片を作成した。近日中にHSPの免疫染色を行い、内容1と同様に解析し、論文を作成する予定である。内容3現在、遺伝子の発現のマーカーであるmRNAを解析するためにISH法を行っている。これにより免疫染色による蛋白の発現がどの細胞由来であるかを確認する事ができると考える。また、ECMについても実験緑内障で解析を行う予定である。結果:視神経乳頭では網膜とは逆に実験緑内障猿眼では神経保護に関するHSPは全て発現が減少した。一方、細胞外マトリックスの修復に関係するHSP-47は逆に発現が亢進した。また免疫染色で確認したこれらの結果は同様にZeissのソフトを用いた画像解析を行い、有意差検定を行い、確認した。以上の結果より実験緑内障の発症進行にHSPが関与しており、網膜と視神経乳頭ではその挙動が異なっていることが分かった。
カンボジアにおけるタイ肝吸虫症の実態解明および住民主体型予防モデルの開発

本研究で35か村を調査、31か村にてタイ肝吸虫感染者を確認し、特にコンポンチャム県南部に流行地が集中していた。虫卵陽性率70%を超える村も確認され、タイ肝吸虫症流行が重要な健康課題であることが証明された。流行地住民の多くは淡水魚生食を好んでいた。周辺で感染幼虫に感染した第一中間宿主と第二中間宿主が発見され、感染サイクル成立要因もそろっていた。住民、地方保健行政官ともに今回の調査で初めて「タイ肝吸虫症」を知り、淡水魚生食のリスクを知ったと回答した。調査プロセスから地方のキーインフォーマントに参加してもらい、結果や健康教育などの具体的な情報提供を行うことは予防対策として重要であることを確認した。平成23年度は中間宿主調査、超音波検査による患者調査を中心に実施した。1.中間宿主調査ではコンポンチャムの流行地周辺の漁場でマメタニシ類・コイ科淡水魚の分布調査、また新たな流行地域を見出すため、周辺の水場・漁場でも中間宿主を捕獲した。これらのセルカリア・メタセルカリアの感染状況を確認した(PCR等の実施)。また淡水魚については種類の同定を行なった。2.虫卵感染率が高かった村で感染者約200人を対象に超音波検査を実施した。村人の関心を喚起するため、全て対象村に出向いて実施した。若干の胆管肥厚を認めた症例はみられたが、肝臓がんを疑う所見は今回の検査対象者にはみられなかった。平成24年度へ繰り越した予算では、中間宿主調査の結果や他の情報を元に新たな流行地発見のため検便調査(Kato-Katz法)をコンポントム県、コンポンチャム県、プレイベン県の3県の7か村、945名に対して実施した。コンポントム県では新たに2か村で虫卵陽性率が10%を超えた。コンポンチャム県でも新たに3か村での流行が確認され、このうち1か村は60%以上の虫卵陽性率を示し、これまで確認された流行地域の中で最も感染率が高かった。また、新規に流行が確認された5村(2県)にて、虫卵陽性率が特に高かった感染者の便63件を別途採取し、日本にてPCRにより同定を行った。60件がタイ肝吸虫の虫卵であると同定された。タイ肝吸虫感染がメコン河本流周辺以外の地域で、複数県にわたって流行していることが確認された。【調査実施内容および結果】検便調査:事前調査で流行の可能性が高いと推測されたコンポンチャム県11か村、コンポントム県1か村、計12か村で調査を実施⇒約3000検体を検査。全ての村でタイ肝吸虫卵陽性者が確認され、内コンポンチャム県の9か村は30.071.7%という高陽性率を示した。中間宿主調査:流行地住民が漁場とする水場を対象に第一・第二中間宿主を採集、各学術名の同定とセルカリアおよびメタセルカリアの感染を確認した⇒9種のコイ科淡水魚からタイ肝吸虫のメタセルカリアを検出、全水場で感染魚数種が確認された。第一中間宿主となる2種のBithynia属貝が確認され、全水場に2種または1種が生息していた。双方からタイ肝吸虫のセルカリアを検出。カンボジア地方保健行政官の研修会:流行地を多数抱えるコンポンチャム県と流行の可能性が高い環境要因に合致する9県の保健行政官を対象にタイ肝吸虫症に関する研修と本調査の結果報告会を行った⇒コンポンチャム県:約35名が参加。その他の地域:トンレサップ湖周辺、タイ・ラオス国境付近の県を対象に実施。約30名が参加。本感染症について初めて聞くという保健行政官が多かった。本症について理解ができた、是非調査をしてほしい、治療はどうすれば良いのか、等の多くの意見や質問が出された。各機関毎にハイリスク要因該当地域リストを作成。流行地住民会議の開催:コンポンチャムで今年度新たに発見された高濃度流行地(虫卵陽性率30%以上)3郡9か村にて住民会議(結果報告、本症の基礎知識の健康教育、予防方法の討議)を実施⇒住民討議:寄生虫が魚にいて生食で人に感染すると初めて知った;寄生虫には感染したくない、薬もずっと飲み続けるのはいやだ;生魚はおいしい、みんな大好きだ、しかし病気には罹りたくない、生魚を止めるべきだが難しい;集会で出されたら食べないのは難しい、等の意見が出た。

1.流行地調査の実施とその結果:2012年12月2013年2月に3県(コンポンチャム・カンダール・ラタナキリ)の16か村、1,206名を対象に便検査を実施。しかし全ての村で虫卵検出率は1%以下であり、新たな流行地は発見されなかった。雨期に雨が少なく、米が不作だった地域では出稼ぎも多く便提出者に偏りがあった。2.中間宿主調査:24年度は少雨の影響で地域によって干ばつがあり、中間宿主の捕獲を予定通りに行うことができなかった。しかし既存の流行地周辺で捕獲できた中間宿主の一部からタイ肝吸虫のセルカリア・メタセルカリアを確認することができた。新たにタイ国立シルパコーン大学生物学教室に研究協力機関をお願いすることができた。同学部は中間宿主貝・淡水魚の研究に実績があり、カンボジアにおけるフィールド調査に高い関心を示している。8月と12月に捕獲した中間宿主検体の分析をお願いし、2月には共同フィールド調査を実施した。また3月にはカンボジア保健省国立マラリアセンターの本調査担当スタッフ2名に対し、中間宿主検体の処理方法やセルカリア・メタセルカリアの検出、肉眼的同定方法等のトレーニングを受け入れていただいた。3.住民会議の実施:24年度までに新たに発見された流行地6か村(内5か村は23年度予算繰り越し分にて実施した調査により発見された)において住民会議を開催した。約600名が参加した(多いでは約150人の村人が参加)。タイ肝吸虫症を知っているという村人は0人であった。淡水魚の生食により感染する病気があることを知っている村人も参加者の中にはみられなかった。生食は「おいしい」と感じており止めるのは難しい、寄生虫にかかる危険性があると家族や友人に伝えたい、痛いなどの症状がでないと感染しても危ないと思いにくい、招待や何かのお祝いで集まった席で生魚料理が出されたら断るのは難しい、などの感想が出された。23年度は洪水等の自然災害の影響で24年度に一部調査を繰り越した。24年度前半までで23年度に実施していた調査:新たな流行地発見のための便検査の実施、各流行地周辺での中間宿主調査、感染者の肝臓がん罹患状況調査(超音波検査による)はおおむね遂行することができた。新たな流行地域を新たな県でも発見でき、PCRによる同定も行うことができた。ただし、中間宿主中の感染幼虫:セルカリア・メタセルカリアの検出は日本で主な実験を行うため、中間宿主であるマメタニシ類およびコイ科淡水魚の腐敗、それに伴う感染幼虫の死滅や衰弱により、捕獲した検体を生かしきることができず、十分な効果が挙げられない面もみられた。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成23年度、24年度ともに天候不順の影響を受け、調査時期をずらす必要が生じたり、予定通りに検便検体を集めることができなかったり、または計画通りに中間宿主検体を捕獲できなかったりという問題がみられた。そのため流行地調査は予定より若干の遅れがみられ、中間宿主による感染サイクルの確認も計画通りには進まなかった。便検査による罹患調査は特に、24年度は住民が出稼ぎに行っている村が多かったことから、調査対象から外した村もあった。また実施した村でも通常の村の状況と異なる住民人口分布であったことから、検査結果に影響を与えていることも否定できない。中間宿主調査については23年度調査時に生じた中間宿主検体処理のタイムラグによる検体劣化の問題は、タイ・バンコク近郊の大学の協力を得られたため24年度には改善したが、前述のように天候の影響で十分な検体が捕獲できないという問題によりやはり計画より遅れが生じている。結果を学会や学術雑誌にて報告する予定であるが、現在修正中であり、24年度中には雑誌掲載ができなかった。
バングラデシュ天然薬物資源調査

平成20年から23年にかけて研究代表者は毎年バングラデシュを訪問し,熱帯植物を中心にバングラデシュ天然薬用資源の調査を行った.その結果,現地特有の植物種や現地で栽培された薬用植物を中心に約200種以上の植物種を収集した.得られた植物エキスに対して種々のシグナル伝達経路(ウィント,ヘッジホッグ,トレイルシグナル等)に対するスクリーニング試験を行い,選別された植物エキスより数多くの新規生物活性天然物を単離した.(抄録なし)平成20年から23年にかけて研究代表者は毎年バングラデシュを訪問し,熱帯植物を中心にバングラデシュ天然薬用資源の調査を行った.その結果,現地特有の植物種や現地で栽培された薬用植物を中心に約200種以上の植物種を収集した.得られた植物エキスに対して種々のシグナル伝達経路(ウィント,ヘッジホッグ,トレイルシグナル等)に対するスクリーニング試験を行い,選別された植物エキスより数多くの新規生物活性天然物を単離した.1)薬用資源調査(未利用植物の現地調査):平成20年11月16日から24日,研究代表者・石橋は,バングラデシュ国クルナ(Khulna)大学薬学部S. K. Sadhu准教授の研究室を訪問し,Sadhu准教授および現地の薬用植物の専門家の指導・協力のもと,バングラデシュ・シュンドルボン地区を中心に,系統な熱帯薬用植物資源調査を行った.こくにこれまでに未採取・未利用の植物種を中心に陸棲の草木類のみならず,マングローブ類を始めとする水棲植物について幅広く調査・採取を行った.採取した薬用植物等は46種に上ったが,採取量は予備的スクリーニングに最低限必要な量にとどめた.クルナ大学において,乾燥粉末化処理を行った後,千葉大学へ空輸した.2)ライブラリー構築・スクリーニング:上記の調査に基づき,空輸された薬用資源植物の乾燥粉末を千葉大学および東京医科歯科大学(研究分担者・大崎の研究室)において,有機溶媒による抽出を行い,抽出エキスライブラリーを構築した.得られた抽出エキスを用いて,i)腫瘍細胞(AGS胃癌細胞他)に対する細胞毒性試験,ii)癌関連シグナル伝達分子(Wnt,ヘッジホッグシグナル伝達経路)阻害活性試験,iii)デス受容体増強作用を介するアポトーシス誘導活性試験およびデスリガンド耐性克服活性試験等のスクリーニング試験を開始した.1.薬用資源調査(天然物探索材料としての植物現地調査):平成21年11月16日から23日,研究代表者・石橋は,バングラデシュ国を訪問し,クルナ(Khulna)大学薬学部S.K.Sadhu教授の指導のもと,Sadhu教授および現地の薬用植物の専門家の協力を得て,バングラデシュ・チッタゴン地区およびコックスバザール地区を中心に,熱帯薬用植物資源調査を行った.とくにこれまでに未採取・未利用の植物種を中心に陸棲の草木類を中心に幅広く調査・採取を行った.採取した薬用植物等は約40種に上ったが,一つの種当たり採取量は予備的スクリーニングに最低限必要な量にとどめた.2.ライブラリー構築とスクリーニング:上記の調査によって採取した植物サンプルについて,有機溶媒による抽出を行い,抽出エキスライブラリーを構築した.得られた抽出エキスを用いて,i)腫瘍細胞(AGS胃癌細胞他)に対する細胞毒性試験,ii)癌関連シグナル伝達経路(Wnt,ヘッジホッグ,トレイルシグナル伝達経路等)に対する活性試験等のスクリーニング試験を行った.3.活性成分探索:キョウチクトウ科植物Vallaris solanaceaeから新規カルデノリド配糖体vallarisosideおよび一種の新規配糖体を単離しそれらの化学構造を決定した.このうちvallarisosideは10μMの濃度でトレイル耐性AGS細胞に対して単独処理時と比較してトレイル併用処理時に細胞生存率を37%低下させることが判明し,顕著なトレイル耐性克服作用を示すことが明らかとなった.1.薬用資源調査(天然物探索材料としての植物現地調査):平成22年11月28日から12月4日,研究代表者・石橋は,バングラデシュ国を訪問し,ジャガンナス(Jagannath)大学薬学部准教授Firoj Ahmed博士およびクルナ(Khulna)大学薬学部S.K.Sadhu教授の指導のもと,現地の薬用植物の専門家の協力を得て,バングラデシュ西部のラジシャヒ地区を中心に,熱帯薬用植物資源調査を行った.とくにバングラデシュ西部地区特有の植物種や現地で栽培される薬用植物を中心に幅広く調査・採取を行った.採取した薬用植物等は約100種に上ったが,一つの種当たり採取量は予備的スクリーニングに最低限必要な量にとどめた.2.ライブラリー構築とスクリーニング:上記の調査によって採取した植物サンプルについて,有機溶媒による抽出を行い,抽出エキスライブラリーを構築した.得られた抽出エキスを用いて種々のシグナル伝達経路(ウィント,ヘッジホッグ,トレイルシグナル等)に対する阻害作用等に関するスクリーニング試験を行った.3.活性成分探索:上記スクリーニングで陽性を示したサンプルのうち,トウダイグサ科Excoecaria agallochaからヘッジホッグシグナル阻害作用をもつ新規フラボノイド配糖体2種を単離した.また,別のトウダイグサ科Excoecariaindicaからはウィントシグナル活性化作用をもつフォルボール型ジテルペン3種を単離した.さらにセンダンセンダン科Amoora cucullataからは,トレイル耐性克服作用に関するスクリーニングにより4種の新規化合物を含む11種の化合物を単離した.本研究では,創薬を目指した天然物の探索研究を強力に展開するために,「バングラデシュ天然薬用資源調査」を行う.

バングラデシュは暑熱な気候と肥沃な土壌に恵まれ,熱帯植物を中心として多様な天然薬用資源に富んでいる.しかしながら,天然薬物探索材料としては未だ対象とされているものは少なく,その多くが未開発である本研究では,バングラデシュ・国立クルナ大学薬学部・教授Samir K.Sadhu博士および公立ジャガナス大学薬学部・准教授FirojAhmed博士,および両博士が所属する両大学研究チームとの密接な共同研究により,熱帯植物を中心にバングラデシュ天然薬用資源の調査ならびにそのバングラデシュ天然薬用資源からの有用天然物の発見およびその有効利用を目指す
法的推論における解釈のシステム化

法律エキスパートシステムの開発のためには種々の基礎的研究が不可欠であるが、就中入力データと法知識とを照応して結論たる法的判断を導き出す推論システムと、それを可能にするメタ推論システムとがいかに構成されるべきかということが重要な問題となる。特に、入力される事例がシステムの予定している典型的な場合ではなく、事例が法知識に当てはまるか否か自体についてまず解釈を要し、そのために特別のメタ推論を必要とするような所謂ハードケースは、法律家の微妙な勘や経験に基づいた独特の判断を求めるものであり、エキスパートシステムはこのような場合をも適切に処理することができなければならない。それ故、理論的に重要な問題は、単純なケースにおいては勿論、特にハードケースにおいてこそ決定的な役割を果たしている解釈という人間の知的営為の在り方を根底的に分析し、その成果をエキスパートシステムの内に盛り込む可能性について探究することである。本研究は、以上の問題関心から、一方で解釈という問題について近年極めて影響力のある視点を提供している哲学的解釈学の理論を手掛かりに、解釈における先行了解、循環、理論負荷性などの特徴的な現象の分析によって法解釈の在り方を明確にすると共に、他方で、エキスパートシステムのコマンドを構築するコンピュータ言語の構成を、特に規範的様相に関わる現代の論理学の成果を通じて再検討することで、それ自体としては異質と見られる両研究領域を有機的に結合させ、解釈の論理とでも言うべきものをエキスパートシステムの内に組み込む可能性を探ろうとした。特に平成6年度においては、哲学的解釈学やそれと関連するその他の解釈の一般理論、および法解釈の理論の整理検討と、その論理的構造の分析がなされた。そこでは幾つかの判例を素材としながら、それらの研究を改めて検証すると共に、特に法解釈における法律家の独特の推論様式を分析し、その深層論理とでも言うべきものの把握に努めた。しかしながら、一定のルールとその背景に存する種々の価値的考慮との間の複雑なフィードバックの内でなされる法律家の推論の要が一定の支点言明の固定とそれに収斂する判断の目的論的整序に存することは明らかであるが、その論理的機序についてはまだ十分に明確ではない。今後さらにこの問題を一定の論理学的道具立てにより形式的に表現する方法の開拓が必要となろう。
アンモニア・水2成分媒体の沸騰熱伝達と限界熱流束

アンモニア・水2成分媒体のプール沸騰熱伝達率を高質量濃度C=1.0-0.5域については,系圧P=0.7-1.5MPaの範囲で、また低質量濃度C=0-0.3域については、系圧P=0.1-0.7MPaの範囲で測定した。その熱伝達の特性は、熱流束の増加につれて低熱流束域、高熱流束域、さらに第二遷移域と変化することが分かった。本研究では、主に高熱流束域と第二遷移域の熱伝達について検討した。熱伝達率の測定値は、C=0.9-0.1の範囲では、それぞれの純媒体と比較して熱伝達率が大きく劣化していたが、C=0.97近傍の熱伝達率は、逆に改善されるという従来の結果と大きく異なる傾向が現れることが明らかになった。また、測定された熱伝達率と2成分系媒体の沸騰熱伝達に対し広く推奨されている予測式と比較検討した結果、その特性がかなり異なっていることが明らかになった。そこで、測定結果を基に従来の予測式の特性と比較検討した結果、Stephan-Kornerの予測式と似た傾向を示すことが分かった。Stephan-Kornerの予測式を手がかりに、高熱流束域と第二遷移域の熱伝達に対する新しい予測式を提案した。B=1+A_0|y_1-(1-C)|(0.88+0.12P)なお、y1は2成分蒸気中の水蒸気の質量濃度を示す。また、それぞれの純媒体に対する熱伝達率は、西川・藤田の式を用いた。i=1;水、i=2;アンモニアを示す。測定値を最もよく推定するように各係数を決定すると以下のようになった。提案された整理式は、低質量濃度域の熱伝達については、異なる傾向を示すことが分かった。アンモニア・水2成分媒体のプール沸騰熱伝達率を質量濃度C=1.0-0.5,系圧P=0.7-1.5MPaの範囲で測定した。熱伝達率の測定値は、C=0.9-0.5の範囲では、それぞれの純媒体と比較して熱伝達率が大きく劣化していたが、C=0.97近傍の熱伝達率は、逆に改善されるという従来の結果と大きく異なる傾向が現れることが明らかになった。h=1/B((1-C)/h_1+C/h_2)ここで、Cはアンモニアの質量濃度で、h_1,h_2は、それぞれの純媒体の沸騰熱伝達率、Bは補正係数である。B=1+A_0|y_1-(1-C)|(0.88+0.12P)なお、y_1は2成分蒸気中の水蒸気の質量濃度を示す。アンモニア・水

2成分媒体のプール沸騰熱伝達率を高質量濃度C=1.0-0.5域については,系圧P=0.7-1.5MPaの範囲で、また低質量濃度C=0-0.3域については、系圧P=0.1-0.7MPaの範囲で測定した。その熱伝達の特性は、熱流束の増加につれて低熱流束域、高熱流束域、さらに第二遷移域と変化することが分かった。本研究では、主に高熱流束域と第二遷移域の熱伝達について検討した。熱伝達率の測定値は、C=0.9-0.1の範囲では、それぞれの純媒体と比較して熱伝達率が大きく劣化していたが、C=0.97近傍の熱伝達率は、逆に改善されるという従来の結果と大きく異なる傾向が現れることが明らかになった。また、測定された熱伝達率と2成分系媒体の沸騰熱伝達に対し広く推奨されている予測式と比較検討した結果、その特性がかなり異なっていることが明らかになった。そこで、測定結果を基に従来の予測式の特性と比較検討した結果、Stephan-Kornerの予測式と似た傾向を示すことが分かった。Stephan-Kornerの予測式を手がかりに、高熱流束域と第二遷移域の熱伝達に対する新しい予測式を提案した。なお、y1は2成分蒸気中の水蒸気の質量濃度を示す。また、それぞれの純媒体に対する熱伝達率は、西川・藤田の式を用いた。i=1;水、i=2;アンモニアを示す。測定値を最もよく推定するように各係数を決定すると以下のようになった。提案された整理式は、低質量濃度域の熱伝達については、異なる傾向を示すことが分かった。
神経難病における神経細胞死の機序と修復・防御

神経細胞死には内因・外因によるものがある。内因性のものは遺伝に深く関与しており、以下の5編の成果をあげた。(いずれもnature geneticsに掲載)。1)Machado-Joseph病は、小脳、錐体路、錐体外路が障害される常染色体優先遺伝を示すが、この原因遺伝子座が14染色体長腕にあることをつきとめた。2)歯状核・赤核・淡蒼球・ルイ体萎縮は、進行性ミオクローヌス、てんかん、失調、不随意運動、痴呆などを示す疾患で、病名にある脳の部位が障害される。この原因遺伝子が染色体12番でのCAGリピート(B37)の不安定延長であることが判明した(辻班員らと、近藤(郁)、金澤班員らが各々独立に発表。)3)福山型先天性筋ジストロフィー症は、常染色体劣性を示し、高度の筋萎縮と精神薄弱をきたす。その原因遺伝子座が染色体9q31-33に存在することを明らかにした。4)遺伝性進行性ジストニアは、瀬川らにより報告された疾患で、L-dopaが著効を示し、パーキンソン病との関係が注目される疾患である。チロシン水酸化酵素の補酵素としてテトラハイドロビオプテリン(BH4)があるが、BH4が作られるGTP cyclohydrolaseがある。本疾患の4家系において、本酵素で夫々異なる遺伝子の変異を明らかにした。つぎに外因も強く関与していると考えられるパーキンソン病に関連して、神経毒であるMPTPが、黒質ドーパミンニューロンを障害する機序として、ミトコンドリアのエネル-ギ-破綻を明らかにした。その他にミトコンドリア遺伝子変異の蓄積が細胞死をもたらしている可能性も指摘した。以上の代表的成果を「神経細胞死Up to Date」((株)クバプロ、B5版152ページ、編集者吉田充男、金澤一郎、高坂新一、黒田洋一郎)として出版予定である。第一班:I.パーキンソン病発症の内因性・外因性物質と治療薬開発:1)すでにTIQ(テトラハイドロイソキノリン)の長期投与がサルでパーキンソニズムを発症させ、また生化学上の変化をもたらすことを報告した。そのほかに、N-Me-TIQ、N-Me-TIQ^+、N-Me-Norsalsolinol、1,3-DiMe-TIQ、1-Benzyl-TIQなどを投与して、行動、生化学、形態的検討を行っている。2)1-Me-TIQがパーキンソン病患者脳で低下していることが明らかとなった。そこで本物質を前投与しておいて、パーキンソニズムを発症させるMPTP、TIQを投与すると、パーキンソニズムの発症を抑制する事を見いだしたので、1-Me-TIQの治療薬としての開発に道を開いた。II.パーキンソン病における黒質神経細胞死の分子機構:1)ミトコンドリア電子伝達系の複合体Iに異常のあることがあきらかとなった。さらに免疫組織化学的検討により、染色性の高いものと低いものが混在し、黒質細胞に、energy mosaicismが存在することが明らかとなった。2)4977塩基対の欠失のあるミトコンドリアDNAが、パーキンソン病患者で増加している事が明らかとなった。3)対照例に比して、パーキンソン病患者脳線条体により高頻度でみられる点変異が合計9ヶ所発見できた。第二班:遺伝性神経変性疾患の異常遺伝子に関して、1)ハンチントン病の候補遺伝子の3つのクローニングに成功した。本病の遺伝子座が、第4染色体短腕先端に存在し、世界中で6ヶの候補遺伝子がクローニングされているが、その半数は本研究班で行った。2)本邦に多い脊髄小脳変性症の一つであるジョセフ病の遺伝子座を世界ではじめて本班で決定した。上記の成果を得るために、平成4年7月67日にワークショップを、また同4年12月1718日に班会議、公開シンポジウムを開催した。Machado Joseph病は、小脳を中心として、錐体外路系、錐体路系の障害される常染色体優性遺伝の疾患である。本疾患の異常遺伝子座が、染色体14qに存在することをつきとめた(nature genetics Vol.14,p300,1993)。本研究には、本班員6名が含まれている。また、DRPLA(歯状核・赤核・淡蒼球・ルイ体萎縮)が、染色体12の短腕に異常があり、CAGの三塩基リピートである事もつきとめた(辻班員)。ハンチントン病をはじめ、多くの脳神経の遺伝性疾患が三塩基リピートである事が判明し、そのメカニズムに関して、本研究班でも必死の研究が行われている。パーキンソン病に関しては、そのモデル動物がMPTPで作り得るため、パーキンソン病の発症機構が大きく前進した。つまり、MPTPがMPP^+に変換され、ドーパミンニューロンに能動的に取り込まれ、そこで、ミトコンドリアの呼吸障害を引き起こし、エネルギークライシスで神経細胞死が引き起こされる(以上、水野班員ら)。さらに、ミトコンドリアの点変異や欠失もヒト剖検脳で明らかにされた(田中、水野班員ら)。これらの研究は国際的に高く評価され、国際的最優秀賞を2度にわたり授賞した(水野班員ら)。外国・内因鋭に関しては、わが国での本研究班の成果が世界を大きくリードしており、TIQ,beta-カーボリンをはじめ、多数の物質が、パーキンソン病発症に大きく関与している可能性を示した。

神経細胞死には内因・外因によるものがある。内因性のものは遺伝に深く関与しており、以下の5編の成果をあげた。(いずれもnature geneticsに掲載)。1)Machado-Joseph病は、小脳、錐体路、錐体外路が障害される常染色体優先遺伝を示すが、この原因遺伝子座が14染色体長腕にあることをつきとめた。2)歯状核・赤核・淡蒼球・ルイ体萎縮は、進行性ミオクローヌス、てんかん、失調、不随意運動、痴呆などを示す疾患で、病名にある脳の部位が障害される。この原因遺伝子が染色体12番でのCAGリピート(B37)の不安定延長であることが判明した(辻班員らと、近藤(郁)、金澤班員らが各々独立に発表。)3)福山型先天性筋ジストロフィー症は、常染色体劣性を示し、高度の筋萎縮と精神薄弱をきたす。その原因遺伝子座が染色体9q31-33に存在することを明らかにした。4)遺伝性進行性ジストニアは、瀬川らにより報告された疾患で、L-dopaが著効を示し、パーキンソン病との関係が注目される疾患である。チロシン水酸化酵素の補酵素としてテトラハイドロビオプテリン(BH4)があるが、BH4が作られるGTP cyclohydrolaseがある。本疾患の4家系において、本酵素で夫々異なる遺伝子の変異を明らかにした。つぎに外因も強く関与していると考えられるパーキンソン病に関連して、神経毒であるMPTPが、黒質ドーパミンニューロンを障害する機序として、ミトコンドリアのエネル-ギ-破綻を明らかにした。その他にミトコンドリア遺伝子変異の蓄積が細胞死をもたらしている可能性も指摘した。以上の代表的成果を「神経細胞死Up to Date」((株)クバプロ、B5版152ページ、編集者吉田充男、金澤一郎、高坂新一、黒田洋一郎)として出版予定である。
北海道における精神障害者共同作業所の活動実態とスタッフのジレンマ

精神保健医療福祉施策が「入院医療中心から地域生活中心へ」と推し進められ、入院患者約33万人から条件が整えば退院可能な患者7万人が、地域で暮らすことが決定した。退院者を受け入れ、働く場,就労訓練の場,生活を支える場として,精神障害者共同作業所(以下作業所と呼称)が地域生活支援の担い手の中心として期待される。そこで、本研究では、北海道内の137ヶ所の作業所、作業所スタッフ約500700名を対象に質問紙調査法によって、作業所機能を検討し、また精神障害者自身が主体的存在として活動できる場作りを目指すスタッフ役割を検討する。平成17年度は、質問項目を以下のように検討し,アンケート用紙を作成した。1.作業所については、1)運営状況:設置運営母体,設立年,利用対象者および利用基準,スタッフ体制,運営費および補助金率、運営上の課題,他の社会資源,人員の確保,運営方針の食い違い等、2)活動内容:平均工賃,開所回数,自主製品作り、内職作業の内容、販売,行事内容等、3)援助内容:生活支援(買い物,掃除,食事作り、)ナイトケア,医療相談,生活相談,就労相談、電話相談,時間外の対応,ピアカウンセリング、SST,就労支援プログラム,他施設との連携等2.作業所スタッフについては、1)属性:職種,年齢,就業年数,年収、スタッフ選択の動機等、2)スタッフジレンマ:やりがい,離職の検討,研修の機会、リフレッシュ,心身の疲労,ストレスの有無,職員間のチームワーク、生活程度、職業意識,職場環境等、3)援助に対する意識:利用者自己決定への関与,利用者との対等性、所外活動の導入、疾病管理への関与等精神保健医療福祉施策が「入院医療中心から地域生活中心へ」と推し進められ、入院患者約33万人から条件が整えば退院可能な患者7万人が、地域で暮らすことが決定した。1.作業所については、1)運営状況:設置運営母体,設立年,利用対象者および利用基準,スタッフ体制,運営費および補助金率、運営上の課題,他の社会資源,人員の確保,運営方針の食い違い等、2)活動内容:平均工賃,開所回数,自主製品作り、内職作業の内容、販売,行事内容等、3)援助内容:生活支援(買い物,掃除,食事作り、)ナイトケア,医療相談,生活相談,就労相談、電話相談,時間外の対応,ピアカウンセリング、SST,就労支援プログラム,他施設との連携等2.作業所スタッフについては、1)属性:職種,年齢,就業年数,年収、スタッフ選択の動機等、2)スタッフジレンマ:やりがい,離職の検討,研修の機会、リフレッシュ,心身の疲労,ストレスの有無,職員間のチームワーク、生活程度、職業意識,職場環境等、3)援助に対する意識:利用者自己決定への関与,利用者との対等性、所外活動の導入、疾病管理への関与等
ロコモーション発達過程におけるグリシン作動性シナプスの形成

ヒトでグリシン受容体の変異がビックリ病と呼ばれる運動障害を起こすことが知られており、グリシン作動性伝達はロコモーション制御に重要である。しかし、グリシン作動性シナプスの形成機構やその役割の分子基盤には不明の点が多かった。研究代表者はゼブラフィッシュの逃避運動、グリシン作動性シナプスの染色を指標にし、グリシン作動性シナプスの形成・維持機構、また運動における役割を研究した。ゼブラフィッシュ胚をグリシン受容体阻害剤であるストリキニーネの存在下で発生させると、見た目には正常に発生するが、グリシン作動性シナプス伝達が恒常的に阻害されているため、運動異常をしめす。抗グリシン受容体抗体でグリシン作動性シナプスを免疫染色すると、正常個体ではグリシン受容体はシナプスにクラスター上に染まるが、ストリキニーネ処理した個体ではクラスター状の染色が見られる、細胞膜に一様に分布するように観察される。これはグリシン受容体のシナプス局在にグリシン作動性シナプス伝達が必要であることを示唆するものであり、グリシン作動性シナプスは活動依存的に形成されると言える。研究代表者はその分子メカニズムの解明を目指し、さまざまな阻害剤を用いてグリシン受容体のクラスター形成の阻害を試みたが、受容体クラスターの形成にエル型カルシウムチャネル、カルモジュリン依存的キナーゼが必要であることが分かった。さらにGAL4-UASシステムを用いてカルモジュリン依存的キナーゼの阻害ペプチドをシナプス後細胞だけで発現させると同様にグリシン受容体クラスターの形成が阻害されたことから、カルモジュリン依存的キナーゼはシナプス後細胞で活性化されることが必要であることが明らかになった。これらの結果から、グリシン作動性シナプス伝達が後細胞でカルシウム上昇、カルモジュリン依存的キナーゼ活性化を介してグリシン作動性シナプス形成を制御することが明らかになった。24年度が最終年度であるため、記入しない。ヒトでグリシン受容体の変異がstartle reflexと呼ばれる運動異常を起こすことが知られており、ロコモーション制御においてグリシン作動性の抑制性伝達はたいへん重要であるといえる。神経科学研究でシナプスといえば、グルタミン酸作動性シナプスに代表される興奮性シナプスがよく研究され、その形成機構や可塑性の分子基盤が解明されてきた。しかし、それに比べると抑制性のグリシン作動性シナプスの形成機構やその役割の分子基盤には不明の点も多かった。研究代表者はゼブラフィッシュの逃避運動、グリシン作動性シナプスの染色を指標にし、グリシン作動性シナプスの形成・維持機構また運動における役割を研究した。グリシン作動性シナプスの形成・維持の分子基盤を明らかにする目的で、グリシン作動性シナプス伝達により影響を受ける分子をスクリーニングした。そのために、グリシン受容体のプロモーターでGFPを発現するトランスジェニック系統、つまり、グリシン作動性入力を受けるポストシナプスの細胞がGFP陽性になるトランスジェニックゼブラフィッシュ系統を作製した。具体的にはグリシン受容体のαサブユニットの遺伝子を含むBACにBAC recombination法でGAL4転写因子遺伝子を組み込み、このBACをゼブラフィッシュ受精卵にインジェクションすることでトランスジェニックゼブラフィッシュを作製した。国立遺伝学研究所の川上浩一教授から分与いただいたUAS:GFP系統と交配することで、GFPの発現パターンがグリシン作動性シナプスのポストのニューロンに見られるかの確認を現在進めている。また、正常胚とグリシン作動性シナプス伝達を阻害した胚と比較して発現レベルの異なる遺伝子の探索を進めている。平成23年度は研究計画調書に記した研究計画の通りに研究が進行した。