hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
国際的なコンテンツ産業クラスター間の協働と境界連結リーダーシップの日米欧比較研究

社,Mokko社,Klon社,Fiction Science社の主要スタッフにヒアリングを実施して,コミュニケーションデータを収集し,ハリウッドとカナダの協働の課題は何か,それがいかに克服されているか,ハリウッドとカナダの空間的に離れたクラスターを効果的につなぐ「しくみ」がいかに構築され運営されているかを検討した.
現生人類集団の拡大と多様化におけるクローン病原因ゲノム領域の進化プロセス解明

クローン病は腸の粘膜において慢性的な炎症が生じる炎症性腸疾患である。ヨーロッパ人における発症率が顕著に高いため、これまでヨーロッパ人の患者と健常者を用いた全ゲノム相関解析により30以上のクローン病原因候補遺伝子座が同定されている。しかし、それら疾患アレルは日本人を含む東アジア人ではクローン病に関係しないことが示されている。このことから、これまで同定されてきた遺伝子座ではクローン病アレルがヨーロッパ人でのみ維持されてきた可能性がある。そこで本研究では、ヨーロッパ人においてクローン病に関係することが示されている8遺伝子座(NOD2,IL23R,TNFSF15,ATG16L1,SLC22A4,SLC22A5,IRGM,10q21)に着目し、アフリカ人、ヨーロッパ人、東アジア人の各地域集団における多型データを基に進化学的解析を行った。その結果、NOD2遺伝子座ではクローン病アレルがヨーロッパ人集団に特異的に拡がっていることが示された。さらに、その多くがヨーロッパ人集団でのみ高い頻度で存在するハプロタイプ(H1)に連鎖していることも示された。そこでH1が自然選択と遺伝的浮動のどちらによって拡がったのかを検証するために、人類集団の移動及び拡散の歴史をシミュレーションにより再現し、ハプロタイプパターンを調べた。それにより、ヨーロッパ人におけるH1の頻度は中立条件下で期待される頻度よりも有意に高いことが示された。このことから、H1は自然選択によりヨーロッパ人に拡がり、それに伴ってクローン病アレルも維持されてきたとのではないかと考えられる。そして、クローン病の発症率がヨーロッパ人において顕著に高いことを考えると、本研究における結果は人類集団における適応進化の1つの副産物として、現代ではクローン病の発症リスクがもたらされたことを示唆している。ヨーロッパ人における発症率が顕著に高いため、これまでヨーロッパ人の患者と健常者を用いて30以上のクローン病原因候補遺伝子座が同定されている。また、近年日本人でも急速にクローン病の発症率が増加している。しかし、ヨーロッパ人において同定された疾患アレルは本州地方の日本人集団ではクローン病に関係しないことが示されている。このことから、クローン病に関係する遺伝子は日本人とヨーロッパ人の間で異なる可能性がある。そこで本研究では、北部九州地方の日本人集団を用いて、ヨーロッパ人において同定された疾患アレルがクローン病あるいは炎症性腸疾患の1つである潰瘍性大腸炎に関係するかを調べた。本研究では異なる研究グループによって十分な再現性が得られている8つのクローン病原因候補遺伝子座(NOD2、IL23R、TNFSF15、ATG16L1、SLC22A4、SLC22A5、IRGM、10q21)に着目し、9個のSNPsに関して疾患との関連性を調べた。その結果、TNFSF15に位置するSNPが北部九州地方の日本人集団ではクローン病・潰瘍性大腸炎の両疾患に関係することが示された。この疾患アレルは本州地方の日本人集団では潰瘍性大腸炎に関係しないことから、日本人とヨーロッパ人の間だけでなく、日本人集団内でも炎症性腸疾患原因候補遺伝子が異なるかもしれない。さらに、TNFSF15の疾患アレルはクローン病においてはdominant、潰瘍性大腸炎においてはrecessiveとして作用することも示された。つまりTNFSF15疾患アレルのdominant/recessive効果は、それぞれの疾患に関係するその他の遺伝要因や環境要因の影響を受け、それらの総合的な効果により決定されている可能性がある。よって本研究における成果は、クローン病の遺伝学的背景と人類集団の進化プロセスは密接に関係しており、日本人集団に特異的な炎症性腸疾患の原因候補遺伝子あるいは環境要因を同定する必要性を示している。
自己炎症性疾患ＴＲＡＰＳモデルマウス作製と新規治療法の開発

全身性自己炎症性疾患の1つであるTRAPS (TNF receptor associated periodic syndrome)はその原因がTNF受容体遺伝子の変異であるが、その病態の全貌はまだ解明されておらず、変異をもったモデルマウスを作製した。1匹は胎内で死亡し、1匹は死亡時期が不明で死亡、1匹は生後6週で死亡した。生後6週で死亡したマウスは体重が22.5gと同週令のマウスの体重25gと比較して軽かった。皮膚組織を検討すると毛器官が成長期にあり、同週令のマウスが休止期であることと比較し、毛周期に異常があり、TNF受容体遺伝子の変異が正常な発達に重要であることが示された。TRAPS(TNF receptor associated periodic syndrome)は周期的な発熱、関節痛、皮疹を特徴とする遺伝性自己炎症性疾患であり、近年、その原因遺伝子がTNF受容体(TNFRSF1A)遺伝子であることが判明した。しかしながら、その遺伝子変異が病態にどう寄与するかについては不明な点が多く、治療も標準化されたものが依然存在しない。そこで、変異TNF受容体遺伝子を高発現するトランスジェニックマウスを作製し、TRAPSモデルマウスになるかどうか検討し、さらに新規治療法の開発をめざすために、マウス受精卵にインジェクションするDNA作成、精製した。平成23年度に製作したヒトの重症TRAPS患者での変異p.T50Kと相同なp.T79KマウスTnfrsf1acDNA変異を導入したプラスミドDNAを精製し、このプラスミドを制限酵素BlnIとPvuIで切断し、断片を精製した。このDNA断片をサイズマーカーとともに、アガロースゲルで電気泳動を行い、長さを確認した。さらに吸光度計を用いて濃度を測定し、マウス受精卵にインジェクションした。生まれてきた胎仔の尾からプロテアーゼやカラムを用いてDNAを採取した。このDNAにプラスミドDNAが挿入されているかどうかをプラスミドDNA特異的なプライマーを用いて増幅したところ、一部のマウス胎仔の尾にプラスミドDNAの挿入が確認された。全身性自己炎症性疾患の1つであるTRAPS (TNF receptor associated periodic syndrome)はその原因がTNF受容体遺伝子の変異であることが、明らかにされたが、その病態の全貌はまだ解明されていない。TRAPSのマウスモデルが完成すれば、脾臓、心臓など人では直接解析が難しい全身の多臓器の組織学的、分子生物学的検討が容易となるほか、免疫不全マウスへの移植実験などを通じて、より詳細な免疫学的解析が可能となる。また、種々の新規治療法を開発するにあたり、希少疾患であるこの病気にも大規模な検討を行うことができる。TRAPSのマウスモデルはさらに、これまであまりよく分かっていなかったTNF受容体を介した自然免疫の制御についての新しい知見をもたらすのではないかと考え、TRAPSのマウスモデルの作製ならびにその解析を行う。重症TRAPS患者において変異のあるTNF受容体遺伝子と相同なマウスTNF受容体遺伝子(Tnfrsf1a)変異を含んだプラスミドpcDNA3.1mTnfrsf1aを作製し、プラスミドpcDNA3.1mTnfrsf1aを制限酵素BlnIとPvuIで切断し、切断断片をC57BL6/Jマウス受精卵に注射する。マウスの胎盤、尻尾のDNAを精製し、プラスミドが挿入されているかどうかを尻尾から精製したDNAを用いて検討する。解析した99検体のうち3検体がプラスミドDNAを含んでいた。皮膚組織を検討すると毛器官が成長期にあり、同週令のマウスが休止期であることと比較し、毛周期に異常があることが明らかとなった。これらの結果から、マウスで変異TNF受容体遺伝子を全身に強制発現させると、死亡につながる障害が起こる可能性が示唆された。また、毛周期のコントロールにTNF受容体が関与していることが推察された。しかしながら、その遺伝子変異が病態にどう寄与するかについては不明な点が多い。そこで、変異TNF受容体遺伝子を高発現するトランスジェニックマウスを作製し、TRAPSモデルマウスになるかどうか検討するために、マウス受精卵にインジェクションするDNA作成、精製した。まずC57BL6/Jマウス

脾臓からmRNAを抽出し、逆転写酵素を用いてcDNAを産生する。このcDNAを基質としてPolymerase Chain Reaction (PCR)法でTNF受容体(Tnfrsf1a)遺伝子cDNAを増幅させた。この増幅させたcDNA断片をプラスミドベクターにつないだ。続いて変異導入キットを用いて、ヒトの重症TRAPS患者での変異p.T50Kと相同なp.T79KマウスTnfrsf1acDNA変異を導入した。さらに、DNAシークエンス法により変異が的確に導入されたことを確認した後、p.T79K変異マウスTnfrsf1acDNAをpcDNA3.1CMVプロモーター下流に挿入したプラスミドDNAを精製した。このプラスミドを制限酵素BlnIとPvuIで切断し、断片を精製し、アガロースゲル電気泳動法により、長さを確認した後、吸光度計を用いて濃度を測定した。上記DNA断片を平成24年度にマウス受精卵にインジェクションし、TRAPSモデルマウスを作製し、人のTRAPSの病態解明と新規治療法の開発を目指す。前年度完成したプラスミドをマウスの卵に注射し、生まれてきた胎仔の尾からDNAを採取し、プラスミド由来の遺伝子の挿入が確認されたため。平成24年度にマウス受精卵にインジェクションするDNAの精製が完了し、TRAPSモデルマウスを作製する準備が整ったため。変異TNF受容体トランスジェニックマウスを用いて、皮膚や他の臓器などの組織学的、臨床学的検討を行う。これらの知見を踏まえ、人のTNF受容体に異常のある自己炎症性疾患TRAPSの新規治療法について考察する。今後平成23年度に精製したDNAをマウス受精卵にインジェクションし、TRAPSモデルマウスを作製し、人のTRAPSの病態解明と新規治療法の開発を目指す。変異TNF受容体トランスジェニックマウスの解析のための抗体などの試薬を購入する。さらに情報収集のためイギリスのエディンバラで開催される研究皮膚科学会に参加する。平成24年度には平成23年度に精製したDNAをマウス受精卵にインジェクションし、TRAPSモデルマウスを作製し、組織学的、病理学的検討を行う。
日常的配置換え行為を通した他者の意図理解に関する生態学的研究

ヒトの子どもが他者との共同活動へと参加していく過程において、他者の行動にはそれを導くための具体的な目的や目標があり意図的なものであると理解する過程の重要性が指摘されてきた。本研究では、子どもが実際に他者の意図に出会う過程を明らかにするために、一組の母子による積木遊び場面の縦断的観察が行われた。その結果、共同活動の発達を支えるものとして、既に参加しているイベントへの気づきと、それを調整しようとする調製の重要性が示唆された。以上の分析を通して、理論的枠組みに「エンカウンター」の概念を導入することを提案した。本研究課題は、日常的環境における遊離物の配置に見られる固有のダイナミクスが、他者の意図理解を支える基盤であることを検証しながら、共同活動発達の生態学的基盤の理解へと発展させることを目的とするものである。本年度は、以下の成果を上げた。関連する先行研究や資料のリサーチを行った。その成果の一部として、発達心理学会第26回大会シンポジウム「システムの発達」において理論的検討を行うとともに、ラウンドテーブル「動きと構造がであう」において隣接分野における関係の深い研究者を交えた議論の場を企画した。本研究課題と関連の深いJ.J.ギブソンのテキストの翻訳と解説を行い、学会誌生態心理学研究第8号において「エンカウンターに関する覚書」、「“エンカウンター"を読むー不可避な未来の知覚,その制御としての行動」として発表された。本研究課題は、ヒトの生活の日常的環境である家における「物」の配置換えに見られる規則性が、ヒトの共同活動を支える「他者の意図の理解」が発達するための生態学的基盤となっていることを検証するものである。本年度は、当初の計画通り、既に取得済みのデータを用いて、母子による遊び場面に注目し分析を行い、「遊び」という特定のタスクのない共同行為においても、母子の行為が配置換えを可能にする遊離物の性質を軸にしたシステムとして発達していることを記述した。この結果は、The 18th International Conference on Perception and Action(知覚と行為の国際会議)にて「Observing development of the play system through block play」というタイトルで報告された。また、上記の分析を補強するために、新たに1組の家庭において縦断的ライフログデータの収集を開始し、現在までにおよそ約300時間(約20h/m)の蓄積があり、コーディング及び分析を行っている。この結果は、平成28年度に31th International Congress of Psychology(国際心理学会)にて報告される予定である。最後に、心理学における生態学的アプローチの創始者の一人であるJ.J.ギブソンのテキスト「エンカウンターに関する覚書」の翻訳および解説「“エンカウンター"を読むー不可避な未来の知覚、その制御としての行動」を学会誌生態心理学研究第8号に発表した。本年度は、ほぼ当初に計画していたとおりに研究を進めることができた。特に、すでに取得済みのデータを用いた分析においては、初年度内に学会報告を行ったことは、当初の予定以上の成果であったといえる。理論的検討という側面においても、二つの企画を通して大いに深めることができた。次年度に予定されている実証的研究に向けた準備も、機材を含む環境の整備も順調に進んでおり、ほぼ当初に計画されていた通りである。そのうえで一部は実験協力者を得ることができたため、データの収集の準備ができている状態となっている。以上の結果より、ほぼ予定通りの進行であるとした。27年度が最終年度であるため、記入しない。発達心理学平成26年度はほぼ予定通りの進展となっている。したがって、平成27年度も申請書の計画に従った進行をおこなうことを目標としたい。第一に、すでに採択が決定しているThe 18th International Conference on Perception and Action(知覚と行為の国際会議)において、報告を行う。本国際会議は、本研究課題にもっとも関係の深い国際学会である。報告を行い議論を深めるだけではなく、国際水準での研究の動向への見聞を深める機会とする。第二に平成27年度に計画されている実験の実施に向けた準備を進める。すでにデータ収集の開始の準備ができているものに関しては、できるだけ早い時期にデータの収集を開始する。データが一定量集まり次第、スムースに分析を開始するために、機材と環境を整える。
標的の呼吸性移動を考慮した回転型強度変調放射線治療を用いた体幹部定位放射線治療

本研究では,体幹部放射線治療中の呼吸による標的の移動量を明らかにした上で,標的の呼吸性移動を考慮した回転型強度変調放射線治療を用いて体幹部定位放射線治療を実現した.また,治療中の対象内のCT画像を得ることが可能である本手技を用いて,放射線治療中の標的の位置検出と移動量の評価を行った.本研究の達成により放射線治療中の標的や臓器の位置が同定可能となり,治療中の投与線量や分布を再評価することが可能となった.本研究では,体幹部放射線治療中の呼吸による標的の移動量を明らかにした上で,標的の呼吸性移動を考慮した回転型強度変調放射線治療を用いて体幹部定位放射線治療を実現した.また,治療中の対象内のCT画像を得ることが可能である本手技を用いて,放射線治療中の標的の位置検出と移動量の評価を行った.本研究の達成により放射線治療中の標的や臓器の位置が同定可能となり,治療中の投与線量や分布を再評価することが可能となった.本研究は,320列CTを用いて体幹部放射線治療中の呼吸による標的の移動量を明らかにした上で,標的の呼吸性移動を考慮した回転型強度変調放射線治療(volumetric modulated arc therapy : VMAT)を用いて体幹部定位放射線治療を実現することを目的とした.平成22年度は,肺定位放射線治療における標的の軌跡解析法を提案し,数値ファントムおよび臨床例において標的の軌跡解析を行った.標的の位置検出にはフーリエ位相相関法を用い,独自に作成した軌跡解析法を数値ファントムおよび320列X線CT装置により得られた臨床画像に適用し,標的の軌跡解析を行った.数値ファントムおよび臨床例において,軌跡解析は可能であった.臨床例では,標的の軌跡が呼吸によって変化すること,軌跡がヒステリシスを描くことが再現された.フーリエ位相相関法を用いた標的の検出は3次元かつ自動で実行され,標的の呼吸性移動を考慮した治療計画に有用であった.また,VMATは回転治療中にコーンビームCT(cone beam CT : CBCT)を撮影可能であり,治療中の臓器の位置情報から正確な投与線量を再評価することが期待されている.VMAT法を肺定位放射線治療に応用し,治療中における標的の軌跡解析を行った.対象とした3症例において,320列CT画像およびCBCTを用いた4次元画像の軌跡解析は可能であった.320列CTによって得られた標的の軌跡とCBCTの4次元画像から得られた標的の軌跡は呼吸位相に対して同じ傾向が見られた.本研究により,放射線治療の投与線量および分布が再評価可能となり,Adaptive therapyにつながるといえた.回転型強度変調放射線治療(volumetric modulated arc therapy:VMAT)は,治療中の診断用kvX線および治療用MV-X線の投影画像からコーンビームCT(cone beam CT:CBCT)画像を再構成することが可能であり,治療中の臓器の位置を同定することが期待されている.これまで我々はVMATを肺定位放射線治療(stereotactic body radiotherapy:SBRT)に適用し,診断用kV-X線を用いて標的の位置検出と呼吸性移動量の評価を行った.本年度は治療用MV-X線を用いて治療中の標的の位置検出と移動量を評価することを目標とした.動体ファントムおよび臨床例(照射は4日間)を対象として,計画用CTの撮影とVMATによる治療計画および放射線量と線量分布の検証作業を行った.照射中に診断用kvX線および治療用MV-X線による投影画像を収集し,kV-CBCT画像およびMV-CBCT画像の再構成を行った.再構成画像から動体ファントムと臨床例の標的の位置検出および移動量を評価した.標的の位置検出ではkV-CBCTとMV-CBCT画像内の標的の位置の差は動体ファントムでは2mm以下,臨床例では3mm以下だった.これは螂CBCT画像の画質が低く,MV-CBCTの再構成画像内の標的の形状がやや変形していたためと考えられた.また,臨床例では治療中のkV-CBCTおよびMV-CBCT画像を用いることによって,同一患者でも標的の移動量の日々の変化があることが確認できた.MV-CBCT画像は治療用MV-X線のみで画像が再構成されるため,MV-CBCT画像のみで標的位置の検出が可能となれば,治療中の画像収集には過分な被曝を避けることできる.本研究の方法を用いて治療中の標的や臓器の位置を把握可能となれば,SBRTにおいて治療中の投与線量や分布を再評価することが可能となる.
共役構造を有する安定ラジカルイオンの長周期秩序構造構築と電荷・スピン輸送機能開拓

本研究「共役構造を有する安定ラジカルイオンの長周期秩序構造構築と電荷・スピン輸送機能開拓」では、平面上の電子共役系を有するピレンやヘキサアザトリフェニレン等の骨格をもとに、これらの安定内ラジカルイオンを合成し、凝縮相中におけるこれら分子の電荷輸送特性評価を行うことを基本的な研究指針としている。電荷を流す材料がそもそも電荷をもっている・イオン対を形成している、という従来の伝導性材料の設計指針を根本的に変革し、高い熱安定性と効率的な電荷・スピン角運動量の輸送媒体としての評価に結実させる。
線溶活性の修飾による新規脊髄損傷治療の開発

プラスミノーゲンKOマウスは脊髄損傷後3日から7日の急性期に有意に良好な機能回復を示したが、その後は野生型との差が縮まり、有意差がなくなった。プラスミノーゲンの阻害剤であるトラネキサム酸(TXA)を損傷直後1回静注(グループ1)、損傷直後1回静注+3日間飲料水で経口投与(グループ2)、損傷直後1回静注+28日間経口投与(グループ3)の3種の方法で投与し、損傷直後生食1回静注の対照群と比較した。その結果、グループ2だけが対照群に比較して有意に良好な機能回復を示した。本研究の結果から、脊髄損傷後の急性期にTXAを投与することが脊髄損傷の新しい治療法となる可能性が示唆された。脊髄損傷後の機能回復における線溶系の作用を明らかにする目的で、まずプラスミノーゲンノックアウトマウス(Plg KO)と野生型マウス(WT)において定量的な脊髄圧挫損傷モデルを作成した。両群の機能回復を後肢の運動機能スコア(BMS score)とロータロッドテストによって比較した。その結果、Plg KOはWTに比較して損傷後3日目の運動機能が有意に優れていたが、損傷後1週目にはWTとの差が縮小し、2週目以降は有意差がなくなった。このことからプラスミノーゲンは損傷後3日以内の急性期には抑制的に作用し、それ以降の時期は神経再生を促進する可能性が示唆された。そこで脊髄損傷急性期のプラスミノーゲンの作用を明らかにするために、損傷後1日目の脊髄における血管透過性、出血量、炎症細胞浸潤について検討を行った。血管透過性については頚静脈より静脈注射したルシフェラーゼの漏出を定量化することで測定し、Plg KOではWTに比較して血管透過性が有意に抑制されていることが明らかとなった。出血量は脊髄中のヘモグロビン量をルミノメーターで計測し、Plg KOでは出血量もWTに比較して有意に少なかった。炎症細胞の浸潤はGr-1を好中球の指標として、CD11bをマイクログリアの指標としてフローサイトメトリーで計測した。その結果、Plg KOでは好中球とマイクログリアの浸潤が少ない傾向にあったが、両群間に有意差はなかった。以上の結果から、脊髄損傷急性期のプラスミノーゲンは血管透過性を亢進させるとともに、出血量を増加させて二次損傷を増加させている可能性が示唆された。プラスミノーゲンノックアウトマウスを用いた脊髄損傷モデルの機能回復の解析によって、プラスミノーゲンは損傷後数日の急性期には血管透過性亢進などによって損傷を促進するが、損傷後1週以降にはむしろ機能回復を促進する可能性が示唆された。プラスミノーゲン阻害剤による治療効果の検討:この結果をもとにプラスミノーゲンの阻害剤であるトランサミンを以下の4グループに分けて投与した。グループ1:損傷直後に1回静注のみ、グループ2:静注後に内服投与を3日、グループ3:静注後に内服を4週間、グループ4:生食静注のみで内服投与なしのコントロール群。損傷後4週まで経時的に4群間で機能回復を比較した所、グループ1だけがコントロール群に比較して有意に良好な機能回復を示した。プラスミノーゲン阻害剤による機能回復のメカニズムの検討。1.血管透過性:コントロール群とグループ1(損傷直後静注+3日間内服)において、損傷後1日目のマウスにルシフェラーゼを静注し、1時間後に採取した脊髄のルシフェラーゼ活性を血管透過性の指標とした。グループ1ではコントロール群に比較して血管透過性が有意に抑制されていた。2.マイクロアレイによる炎症性サイトカインの測定:同様の組み合わせで損傷後1日目のマウスより脊髄を採取し、RNAを抽出して炎症性サイトカイン発現の相違を比較した。グループ1ではコントロール群に比較して、炎症性サイトカインの発現が抑制されており、特にCCL3, IL1b, CD68, Stat4などの発現が有意に減少していた。3.組織学的検討:上記4群において、損傷後4週の脊髄で連続切片を作成し、フィブロネクチンとGFAPの2重染色を行って炎症性瘢痕組織のサイズを比較した。グループ1はコントロール群に比較して有意に瘢痕のサイズが小さいことを確認した。整形外科線溶系ノックアウトマウスの脊髄損傷後の機能回復を野生型マウスと比較し、その特徴とメカニズムの一端を明らかにできたため、現時点での達成度としてはおおむね順調と考えられる。これまでの結果から、プラスミノーゲンの脊髄損傷後の機能回復に対する作用は受傷後の時期によって異なり、急性期には抑制的に作用し、それ以降は促進的に作用する可能性が示唆された。
人体カラースライドのデジタル保存と解剖学実習への活用について

1.カラースライド枠に番号・所見・性別・左右などを記載し、これまでに撮影した約6,000枚のスライド目録を完成させた。その中から、解剖学実習に必要な1,302枚(頚部55、頭部200、体幹99、上肢149、胸部186、病と胎児25、腹部233、下肢196、骨盤159)を選別した。スライドは、人体の部位ごとに解剖学実習行程に沿って、正常構造と変異例、解剖手技などを適宜配置した。2.スライド1枚を300dpiの画素数でPCに取り込み、2L判のカラー写真に印刷した。カラー写真に部位別の番号を付け、剖出状態、所見(キーワード)を収録した目録を作成した。また写真の解説を試み、写真947葉の草稿を完成させた。3.写真に傷・ゴミが写るため、最良のカラースライドを選別し、1枚あたり500dpi(2.5MB)で入力し直した。1ファイルにスライド約40枚を収録し、全体ではCD7枚に35ファイルにまとめ、その容量は3.4GBに達した。A4判1ページに2枚のデジタル画像を配置して、カラー写真集全2巻の雛形を作成した。第1巻は、頚部、頭部、体幹、上肢、胸部の各写真と目録を収録して380頁に、第2巻は病理・胎児、腹部、下肢、骨盤の各写真と目録を収して334頁に達した。写真集2巻とPCによるデジタル画像は、第16回国際解剖学会で供覧し、概要は日本解剖学会関東支部第92回学術集会で口演した。本学の解剖学実習でも本書2巻を利用し、学生の感想を聴取した。4.平成1416年度の解剖実習体から外頚動脈の変異、頚腕筋、肋軟骨滑車上筋、肋間動脈の走行、胆石、重複尿管、左門脈、回腸の腸重積症、乳房、女性生殖器などのカラースライド所見を補充した。5.今後は、本研究の成果を踏まえ、カラー写真集全3巻(写真集2巻と解説書1巻)の刊行を計画している。1.以前、解剖学雑誌(71:354,1996)で展示・発表した人体実習カラースライドから、頭部200枚、頚部45枚、胸部(含内蔵)180枚、腹部(含内臓)220枚、骨盤(含内臓)140枚、体幹(含脊髄)80枚、、上肢150枚、下肢180枚、さらし骨45枚、胎児19枚、病理学標本9枚の、合計1,270枚を選ぴ、それらの画像をスキャナを利用してコンピュータに取り込み、CDあるいはMOディスク、外付けHDDに記録・保存した。スライドは、部位ごとに人体の正常構造を最初に配置し、次に解剖術式、最後に変異例などを収めた。2.デジタルカメラあるいは一眼レフカメラを用いて、平成13・14年度の解剖学実習体から頭頚部の皮神経分布、外頚動脈の走行変異、頚神経叢の構成、肋間神経の走行、骨盤内の血管と神経、胆石、重複尿管例などのカラースライドを追加・補充した。3.平成7年平成14年に撮影したカラースライドについては、スライド枠に解剖所見と通し(分類)番号を記載し、その内容は、キーワード(解剖学用語)を用いて目録(一覧表)に整理した。

平成7年以降のカテースライドは、頭部(含脳・脊髄)63枚、頚部92枚、胸部(含内臓)189枚、腹部(含内臓)491枚、骨盤(含内臓)180枚、体幹(含脊髄)31枚、上肢56枚、下肢134枚、骨127枚、その他(内耳復興モデル)17枚の、合計約1,380枚に達した。4.平成7年以降のカラースライドの中から、前回との重複を避けて、最終的に必要な枚数(当初は500枚を予定)を決定し、それらをCDあるいはMOディスクに記録し、プリントする予定である。5.カラー写真は、2L版の写真専用紙を用い、コンピュータに設置したプリンターで予備的な印刷を実施した。1.これまで撮影した多数のカラースライドの中から、解剖学ことに人体解剖学実習に必要な、総数1,302枚を選別した。その内訳は頚部55枚、頭部200枚、体幹(含脊髄)99枚、上肢149枚、胸部186枚、胎児と新鮮標本25枚、腹部233枚、下肢196枚、骨盤159枚から構成される。2.カラースライドは、スキャナを利用して1枚300dpiの画素数(約0.5MBの記憶量)でコンピュータに取り込み、全部で629MBの記憶容量に達した。その内容はCDとMO、HDDにも記録・保存した。コンピュータに設置したプリンターを利用して、画像全てを、2L版の写真専用紙にカラー印刷した。3.カラー印刷写真は、人体の部位ごとに解剖学実習行程に沿って、剥皮と皮神経・皮静脈の剖出に始まり深部の関節に至るように、肉眼解剖学的な人体の正常構造、器官内区域(肺・肝・腎など)、変異例(内臓逆位、馬蹄鉄腎、双角子宮、浅足背動脈など)と若干の疾病(腸重積症など)を、適宜おりまぜて配置した。そこには脳の摘出、開胸・開腹、脊柱管の開放、頭部・上肢・骨盤の離断、骨盤壁の除去などの一連の作業も収める。4.カラー印刷写真は、部位ごとに通し番号を付け、解剖の実習行程や内容、個々の解剖所見の概要(キーワード)を示す目録(一覧表)を作成した。頚部・頭部・体幹では、カラー印刷写真の各葉に、表題(部位と番号、左右の別、撮影方向、概要を示すキーワード)をつけた後、剖出の経過と解剖所見の解説を試みた。5.デジタルカメラあるいは一眼レフカメラを用いて、平成15年度の解剖学実習体から、肋軟骨滑車上筋、左門脈、回腸の腸重積症、脊柱側弯症などを新たに撮影した。これまでに撮影したカラースライドは、スライド枠に、通し番号と解剖所見を記載し、またスライド目録(一覧)の追加・更新を行なう。1.人体解剖学に必要な1,302枚のカラースライドは、人体の部位ごとに解剖学実習行程に沿って、正常構造と変異例、器官内区域や横断像、解剖手技を適宜織り交ぜて配置し、PCへの入力に備えた。2.カラースライドは、1枚あたり500dpiの画素数(JPEG形式で2.5MBの記録容量)で入力した。1ファイルにスライド約40枚を収録し、全体ではCD7枚に35ファイル(頚部2、頭部5、体幹3、上肢4、胸部5、病理・胎児1、腹部6、下肢5、骨盤4)を入力し、その容量は3.4GBに達した。3.CDから、A4判1ページに2枚のデジタル画像を配置し、表題を付記して、カラー写真集全2巻の雛形を作成した。写真集の第1巻は、頚部、頭部、体幹、上肢、胸部の各写真と目録(部位番号と表題)を収録して380頁に、第2巻は病理・胎児、腹部、下肢、骨盤の各写真と目録を収録して334頁に達した。4.写真集2巻の展示とPCによるCD画像の供覧は、平成16年8月の第16回国際解剖学会(京都)で行い、その概要は11月の日本解剖学会関東支部第92回学術集会で口演した。1012月の新潟大学医学部の解剖学実習でも本書2巻を利用し、感想・改善点などを聴取した。5.収録写真の解説に着手し、表題のほか、剖出部位や状況、解剖手法と解剖所見などを記述した。草稿は、写真947葉(頚部55、頭部200、体幹99、上肢149、胸部186、病理・胎児25、腹部233)で完成した。
ミトコンドリア蛋白輸送機構の心筋リモデリングにおける意義の解明と治療への応用

左冠動脈結紮による心不全マウスモデルを作成し4週後に非梗塞部におけるTom蛋白の発現を解析した。Tom70、Tom40、Tom22、Tom20などTo複合体関連蛋白の発現に変化は認めなかった。次にTom蛋白とともに、ミトコンドリア蛋白輸送に重要なTim蛋白およびPAM蛋白の解析を行ったところ、Tim23、Tim22、ミトコンドリアHSP70に変化はなかったが、Tim44のみが有意に減少していた。Tim44はミトコンドリア分画においても減少を認めた。Tim44低下によるTim複合体形成をBlue Native法にて評価したところ、Tim44複合体の形成低下を認めた。一方で、Tom複合体形成は保たれていた。非梗塞部心筋のミトコンドリア分画においてミトコンドリア抗酸化酵素であるMn-SODの蛋白量が低下していた。Mn-SODのmRNA発現には変化がなかったことから、ミトコンドリアにおけるMn-SODの蛋白量は翻訳後修飾による制御を受けていると考えられた。Tim44の機能を評価するために、培養心筋細胞においてTim44をノックダウンしたところ、ミトコンドリアにおけるMn-SOD蛋白量が低下しした。また、Tim44ノックダウンでは過酸化水投与により、酸化ストレスのマーカーであるprotein carbonyl化、cleavaed-caspase3およびTNEUL染色によるアポトーシスが増加した。心筋リモデリングによる心ル全モデルを確立し、不全心筋におけるTom複合体蛋白の発現のみならずTim蛋白について評価も行い、in vivo、in vitroにおいてTim44の変化および機能解析を行った。Tim44のノックアウトを用いて、in vivoにおける機能解析およびMn-SOD低下の分子メカニズムについて解析を進める。野生型マウスの左冠動脈を永久結紮し心筋梗塞を作成し、4週後までに生存率が約60%の心不全モデルを確立した。これらのマウスにおける非梗塞部心筋のミトコンドリア取込蛋白の発現をウェスタンブロット法にて偽手術マウスと比較した。translocase of the outer membrane(Tom)複合体の構成蛋白であるTom70、Tom40、Tom22、Tom20のwhole lysateでの発現量には差がなかった。一方、非梗塞部心筋のミトコンドリア分画においてTom22、Tom20、Tom6は増加していた。Tom複合体の形成をBlue-Native Page法にて評価したところ、非梗塞部心筋におけるTom複合体形成は偽手術群と心筋梗塞群で有意差はなかった。次にミトコンドリアマトリックス蛋白の評価を行った。Whole lysateにおいてTFAMは低下していたが、Aconitase2、ATPB、OPA1、HSP60、COXは変化しなかった。ミトコンドリア分画においてもTFAMは低下していたが、Aconitase2、ATPB、OPA1、HSP60、COXは変化しなかった。梗塞後リモデリングを生じた非梗塞部心筋においてTom構成蛋白の発現とTFAM蛋白量に変化が認められた。心筋リモデリングによる心ル全モデルを確立し、不全心筋におけるTom複合体蛋白の発現のみならず複合体形成について評価も行い研究は順調に進展している。Tom複合体の構成因子には変化があったがTom複合体形成に変化がなかったため、translocase of the inner membrane(Tim)複合体構成因子の評価を行う。また、不全心においてミトコンドリアマトリックスの多くの蛋白の量には変化が見られなかったが、TFAMのみ低下していた。ミトコンドリアマトリックス蛋白の制御においてTom/Tim複合体がどのように関与するかを培養心筋細胞におけるノックダウンシステムを用いて検討する。さらに、Tom/Tim複合体の変化に伴うミトコンドリア呼吸能を評価する。
普遍結合切断の高度制御と新規機能性分子創製への応用

本研究の目的は、有機分子に普遍的に存在する炭素-水素ならびに炭素-炭素結合の切断、すなわち普遍結合活性化の化学を、高性能遷移金属触媒系の開発を基盤としてその効率、選択性、経済性といった様々な側面から発展させ、精密有機合成化学に新しい有用な反応手法をもたらすことにある。また、開発した手法をパイ共役化合物の合成へと積極的に応用することにより高機能有機電子材料の創製法も併せて検討し、材料化学等の周辺領域の進展も図ろうとするものである。交付申請書に記したように、まず炭素-水素結合切断を伴う酸化的カップリングのための触媒系の高効率化を目指し、第二周期遷移金属触媒の検討を行った。その結果、シクロオクタジエン系配位子を有するロジウム錯体が適当な官能基をもつジフェニルメタン誘導体の環化カップリングの触媒として有効であり、高分子機能性材料の中心骨格として有用なフルオレン化合物が高効率に形成されることを見出した。溶媒としては、キシレンのような芳香族炭化水素が適しており、100-130°C程度の温度で効率よく反応が進行した。カルボキシル基を有する基質では炭素-炭素結合切断(脱炭酸)伴った反応も生起した。一方、安価な第一周期遷移金属触媒を用いる反応として、液晶材料などの創成に利用可能なポリフルオロアレーンの直接的置換反応の検討に着手した。ここでは、リン酸アリルを求電子的アリル化剤とすることで、銅-フェナントロリン錯体触媒を用いたカップリングがエーテル系溶媒中で室温でも速やかに進行し、対応するポリフルオロフェニルアレンが選択的に生成することが分かった。
ピロリ菌除菌後のハイルマニイ菌感染の新興再興感染症としての意義

1)臨床検体による検討2019年3月末の時点で、全国の施設から、Hp陰性症例を主に283例の内視鏡による生検組織をお送りいただき、まずHelicobacter heilmannii-like organism (non-Helicobacter pylori Helicobacter)の有無をPCR法により検討し、陽性の症例については、さらに二段目の検討としてHelicobacter suis, heilmanniiの有無について検索した。その結果、HHLO陽性例は50例(17.3%)認めた。また、Hp陽性例は35例で、混合感染例は3例のみだった。PCRによるHp陽性例を除外した、純粋のHHLO単独陽性例は、47例だった。そのうち、H. suisは、17例(36%), H.heilmanniiは9例(19%)の症例で同定された。ペットに関しては4例犬の飼育歴があったが、猫、その他の家畜については明確でなかった。また、犬飼育歴陽性者のうち、2例はH.suis陽性で、残り二名は同定できなかった。地域別には、北海道15例、関東14例、中部10例、近畿3例、東北2例、中国2例、九州2例、四国1例の陽性者を認めた。陽性率としては、北海道23% (15/64),東北50% (2/4),関東22% (14/63),中部62.5% (10/16),近畿42.8% (3/7),中国12.5% (2/16),四国50% (1/2),九州50% (2/4)だった。2) in vitroの検討培養されたハイルマニイ菌についてpHによる影響菌の形態については実体顕微鏡、免疫組織化学、電子顕微鏡(ruthenium red en bloc染色)を用いた。菌の運動性はpH3に比し、pH5以上で著明に低下し、coccoid formの割合が有意に増加した。全国の共同研究者のご協力により、順調に症例があつまっている。抗体作成も順調に進展しているので、将来的には一段目に血清抗体によるスクリーニングを行い、その症例についてのPCRと比較検討することにより臨床的に用いることができるかについて検討する予定である。培養細菌による検討も、予備的検討ではあるが、pHによる差異が明らかとなりつつある。以前より共同研究を行っているミャンマー、ネパール、バングラデシュの症例についてPCR, ELISA法による検討を行い、本邦との比較からハイルマニイ菌の胃疾患形成に対する差異からその意義を解析する。また、従来の検討から示唆されている肝臓、肺、唾液腺、涙腺組織の未固定cryostat切片を用い、NHPHの有無について開発中のNHPHに対する特異抗体, CD70抗体などを用いた検討を行い、その病因との関連性を検討する。内視鏡による生検採取および血清について、全国の協力施設からの検体を用いて検討した。ピロリ菌陰性の慢性胃炎、鳥肌胃炎、マルトリンパ腫胃疾患および早期胃癌症例におけるNHPHの感染率を胃粘膜生検組織を用いたRT-PCR法、新たに開発した抗体とRT-PCR法によりNHPHあるいはHp陽性と判定された症例の血清を用いたELISA法により検討し、両者の相関関係について検討した。さらに、病理組織化学および免疫学的な検討を施行した。その結果、Hp陰性の鳥肌胃炎、慢性胃炎においては、全国的に約40%の症例でNHPHが陽性であり、特に東北、北海道地方で高い傾向があったが、検討したどの地域でも陽性例が認められた。MALTリンパ腫においてもほぼ同率の陽性例を認めたが、転座例では検討した範囲では陰性であった。ELISA法との関連性については、少数例の検討ではあるがRT-PCR法の結果と有意の関連例を認めた。免疫組織化学による検討では、菌体は粘液層内だけでなく、胃底腺体部の壁細胞近傍に認められ、一部の細胞はapoptosisに陥っており、これは感染マウスによる検討と同様の結果であった。in vivoの検討として、ベルギーGhent大学B. Flahouらとの共同研究により、培養が可能であることを確認した。そこで、培養液のpHの変化に対するNHPHの生存曲線を検討した。その結果、運動性、生存率ともにpH4.5で最も高いことが明らかとなった。また、vonoprazan投与マウスによる検討では、さらにapoptosisを示した壁細胞の割合がproton pump inhibitor, H2 blocker投与時よりも有意に増加していた。全国調査に関しては、全国の諸施設のご協力により順調に症例が増えており、100症例を超えている。また、血清による検討についてもRT-PCR法との相関関係が明らかになりつつあり、血清による調査が今後可能になると考えられる。培養による検討は、まだ動物由来の菌のみであるのが問題であるが、今後ヒト由来の菌についても検討する予定である。PCRによるHp陽性例を除外した、純粋のHHLO

単独陽性例は、47例だった。そのうち、H. suisは、17例(36%), H.heilmanniiは9例(19%)の症例で同定された。ペットに関しては4例犬の飼育歴があったが、猫、その他の家畜については明確でなかった。また、犬飼育歴陽性者のうち、2例はH.suis陽性で、残り二名は同定できなかった。地域別には、北海道15例、関東14例、中部10例、近畿3例、東北2例、中国2例、九州2例、四国1例の陽性者を認めた。陽性率としては、北海道23% (15/64),東北50% (2/4),関東22% (14/63),中部62.5% (10/16),近畿42.8% (3/7),中国12.5% (2/16),四国50% (1/2),九州50% (2/4)だった。2) in vitroの検討培養されたハイルマニイ菌についてpHによる影響菌の形態については実体顕微鏡、免疫組織化学、電子顕微鏡(ruthenium red en bloc染色)を用いた。菌の運動性はpH3に比し、pH5以上で著明に低下し、coccoid formの割合が有意に増加した。全国の共同研究者のご協力により、順調に症例があつまっている。抗体作成も順調に進展しているので、将来的には一段目に血清抗体によるスクリーニングを行い、その症例についてのPCRと比較検討することにより臨床的に用いることができるかについて検討する予定である。培養細菌による検討も、予備的検討ではあるが、pHによる差異が明らかとなりつつある。内視鏡による生検組織を用いた検討については、今後さらにハイルマニイ菌の有無について検討し、その結果を統計学的に解析するレベルまで増やす予定である。さらに、地域、年齢、性、職種、伴侶動物の有無について検討する。さらに、アジア諸国における結果と比較検討する予定である。さらにハイルマニイ菌感染マウスによる検討従来の検討から示唆されている肝臓、肺、唾液腺、涙腺組織の未固定Cryostat切片を用い、NHPHの有無についてHelicobacterに対する抗体, CD70抗体などを比較検討し、その病因との関連性を検討する。以前より共同研究を行っているミャンマー、ネパール、バングラデシュの症例についてPCR, ELISA法による検討を行い、本邦との比較からハイルマニイ菌の胃疾患形成に対する差異からその意義を解析する。また、従来の検討から示唆されている肝臓、肺、唾液腺、涙腺組織の未固定cryostat切片を用い、NHPHの有無について開発中のNHPHに対する特異抗体, CD70抗体などを用いた検討を行い、その病因との関連性を検討する。使用予定の抗体の入手に時間がかかるため、次年度使用に繰り越しとした。
肺癌に対する成熟樹状細胞を用いた特異的免疫療法の臨床研究

進行肺癌患者を中心に成熟樹状細胞を用いた特異的免疫療法の臨床第I相試験を開始した。本臨床試験では、樹状細胞の成熟化因子としてOK432(ピシバニール)を使用していること、これまでに報告の少ない肺癌患者を中心とした固形癌を対象としていることに特長がある。癌抗原ペプチドとしてMAGE-3ペプチドを使用し、HLA-A*2402患者を対象とした。本臨床試験は、一回の樹状細胞投与数によりグループ1(1x10^7個)、グループ2(3x10^7個)、グループ3(1x10^8個)に分けた容量増加試験である。治療における有害事象は、grade2までの発熱と、grade1までの注射局所の皮膚反応(発赤、硬結)であり、重篤な有害事象は認められず、一回1x10^8個の樹状細胞数においても安全に投与可能であった。遅延型皮膚反応(DTH)の結果、グループ1では4回のワクチン終了後にMAGE-3ペプチドに対するDTHが陽転したのは3例中1例であったが、グループ2、3では全例でMAGE-3のDTHが陽転化した。さらに、高容量のワクチン投与によりDTHが早期に陽転化することが明らかとなった。臨床効果はグループ2の1例でSDを認めたが、他の症例はPDであった。一方、患者のスクリーニング段階でMAGE-3の陽性率の問題からエントリー患者を確保することが非常に困難であった。そのためMAGE-3にかわる肺癌患者で使用可能な癌抗原について検討し、新規肺癌抗原としてHM1.24抗原を同定した。同時に癌ワクチンとして使用可能なHM1.24抗原ペプチドの同定を行い、HLA-24陽性患者に対する抗原ペプチドとしてHM1.24の165番目からのAPQLLIVLLが高率に細胞障害性T細胞(CTL)を誘導することを確認した(Blood 2005:106:3538)。今後本癌抗原ペプチドを用いた臨床試験へと展開したい。樹状細胞の成熟化因子として以下の2点からOK432(ピシバニール^<【○!R】>)を使用した。効果的に樹状細胞の成熟化を誘導し、高い細胞障害性T細胞(CTL)の誘導能が報告されたこと、さらに既に治療薬として臨床で使用されておりより安全性が高いと考えられたことの2点である。我々も、OK432を用いて効率よくヒト樹状細胞の成熟化が誘導可能な点を確認した。また癌抗原ペプチドとしてMAGE-3ペプチドを使用した。HLA-A*2402患者を対象とした一回1x10^7個の樹状細胞を投与するグループ1に肺癌2例、メラノーマ1例をエントリーした。治療における有害事象は、grade2までの発熱と、grade1までの注射局所の皮膚反応(発赤、硬結)であり、重篤な有害事象は認められず、一回1x10^7個の樹状細胞は安全に投与可能であった。一方、4回のワクチン終了後にこのグループでMAGE-3ペプチドに対する遅延型皮膚反応(DTH)が陽転したのは3例中1例であった。さらに、コントロール抗原として用いたKLHに対しても、4回の投与終了後に始めてDTHが陽転した。

このグループの3例においては、肺癌症例の1例で腫瘍マーカーの減少が認められたが、臨床効果は3例ともPDであった。そこで、一回3x10^7個の樹状細胞を投与するグループ2のエントリーを開始した。現在までに肺癌症例1例と膀胱癌症例1例を治療した。このグループにおける2例では、2例ともMAGE-3ペプチドに対するDTHが陽転化し、KLHに対するDTHは樹状細胞を2回投与後に陽転化し、明らかに免疫誘導効果が高いことが確認された。膀胱癌症例では、臨床的にSDであった(4ヶ月間)。次年度には、グループ2の1例と一回1x10^8個を投与するグループ3の治療を進める予定である。進行肺癌患者を中心に成熟樹状細胞を用いた特異的免疫療法の臨床第I相試験を開始した。本臨床試験では、樹状細胞の成熟化因子としてOK432(ピシバニール)を使用していること、これまでに報告の少ない肺癌患者を中心とした固形癌を対象としていることに特長がある。また癌抗原ペプチドとしてMAGE-3ペプチドを使用し、HLA-A^*2402患者を対象とした。本臨床試験は、一回の樹状細胞投与数によりグループ1(1x10^7個)、グループ2(3x10^7個)、グループ3(1x10^8個)に分けた容量増加試験である。これまでに、グループ1の3例、グループ2の3例を終了した。治療における有害事象は、grade2までの発熱と、grade1までの注射局所の皮膚反応(発赤、硬結)であり、重篤な有害事象は認められず、一回3x10^7個の樹状細胞数までは安全に投与可能であることが明らかとなった。一方、免疫誘導効果を見るために施工した遅延型皮膚反応(DTH)の結果、グループ1では4回のワクチン終了後にMAGE-3ペプチドに対するDTHが陽転したのは3例中1例であった。コントロール抗原として用いたKLHは全例で陽転化したが、3例とも4回のワクチン投与後であった。グループ2では全例でKLH、MAGE-3ともにDTHが陽転化した。さらに、ワクチンを2回投与後の時点でみても、KLHは全例で、MAGE-3は1例でDTHが陽転化しており明らかに免疫誘導効果の増強を認めた。臨床効果はグループ2の1例でSDを認めたが、他の症例はPDであった。次年度には、グループ3(一回1x10^8個)の試験を進め安全性と臨床効果を検討する予定である。一方、OK-432の樹状細胞活性化に関する基礎的検討から、Toll-like receptor(TLR)4の重要性を見出し報告した。本年度は、グループ3の実施に向けて引き続き患者のスクリーニングを行った。グループ3では、投与する樹状細胞の数が多いことからエントリー後にアフェレーシス継続が困難になる患者もみられた。ワクチン療法を施行した8例の患者の中で1例の肺癌患者に腫瘍マーカーの低下が見られ、膀胱癌の1例でSDが確認された。
ノダてんかんラット(NER)の発作型同定と発作モニタリング法の確立

1.NERおよびWistar ratに対する長時間ビデオ脳波同時記録広島大学動物実験施設内で繁殖飼育されたNERおよび、対照とするWistar ratを用いて、長時間ビデオ脳波同時期録を行った。2.自発発作の発作頻度一週間の連続モニタリングにて、平均2から3回の自発発作を記録した。これは、NERの発作頻度は3日に1回程度と報告されてきたこれまでの報告を裏付ける結果であった。3.自発発作の発作様式これまでの研究から、NERは脳の多部位にわたっててんかん原性・易興奮性を有する部位が存在すると考えられる。現在までに観察し得た発作型としては、局在関連性てんかんを示唆する所見はなく、いずれも全身強直間代性痙攣の発作形式を示している。3.発育・加齢に伴う変化本年度は生後1年未満のラットを主体として検討してきた。今後、生後1年以上経過したラットを用いて、NERの発作および発作様式が加齢とともに変化するか否かについて検討を加えたい。4.発作間歇期脳波の検討1年未満のラットについて、深部電極を留置して発作間歇期脳波を検討する。NERでは、発作間歇期に海馬からの異常棘波の散発が認められた。しかし、これに直接起因すると思われる発作症状は観察されなかった。5.NER脳細胞の組織学的検討発作間歇期脳波において、海馬からの異常脳波が記録されたために、主に生後1年未満のラットについて、H.E染色およびTimm染色を用いて、海馬硬化、発芽現象について検討を行った。海馬硬化や細胞配列異常など、組織学的に海馬のてんかん原性を示唆する所見は認められなかった。