hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
相互関心調整を基盤とする共感的インタラクションのモデル化と合意形成支援

本研究の目的は,相互関心調整の概念を基盤として人間同士の会話を通じた共感的インタラクション過程の計算モデルを構築し,合意形成支援基盤技術を開発することである.本年度は,相互関心調整に基づく共感的インタラクション分析に関しては,医療,ビジネス,教育,共同体コミュニケーションなどの各種フィールドにおいて収集された会話データに対して,共感的インタラクションの構造分析を進めた.相互関心調整談話行為アノテーションに基づいて信頼構築・維持につながる談話行為系列の分析に基づいて関心レベルの交換と提案レベルとの交換の協同探索の概念を提案し,国内外の学会において招待講演を含む学会発表を行った.また,医療コミュニケーションにおける信頼性と患者満足度に関する分析研究を実施し学術論文発表を行った.相互関心調整に基づく共感的インタラクションモデルに関しては,相互関心調整と行為意図理論との比較を行い,国内外の学会において招待講演を含む学会発表を行った.共感的インタラクションモデルに基づく合意形成支援基盤技術については,共感的インタラクションが重要な役割を果たすロボットコミュニケーション・チュータリングの分野を想定してコミュニケーション支援技術の検討を行い、学術論文発表を行うとともに,国内外の学会において招待講演を含む学会発表を行った.また,他分野における共感的インタラクション研究との交流を意図して,哲学・倫理学分野の信頼研究者を招待してシンポジウム「インタラクションと信頼」を開催し,討論を通じた研究の進化を図るとともに研究成果の公開を行った.共感的インタラクションが重要な役割を果たす合意形成会話の実例として,医療コミュニケーション,ビジネスコミュニケーション,共同体コミュニケーションの各フィールドにおいて会話データの集積と相互信頼感共関心モデルを中心とした分析を実施し,それと並行して共関心と意図理論との対比を通じて共同探索の概念を提示することができた.さらにチュータリングを対象とした共感的インタラクション支援技術についても検討を始めており,おおむね順調に進展していると判断できる.2019年度は研究課題の二年目であり,これまでの成果を踏まえて,(1)会話における共感的インタラクションの実証的分析として,共関心談話行為アノテーションの安定性確認,非言語情報交換と共関心談話行為との相関分析,(2)関心・提案空間共同探索としての共関心モデルの開発,(3)ライフログ・体験共有技術への共感インタラクション支援導入を進める.本研究の目的は,相互関心調整の概念を基盤として人間同士の会話を通じた共感的インタラクション過程の計算モデルを構築し,合意形成支援基盤技術を開発することである.本年度は,相互関心調整に基づく共感的インタラクション分析に関しては,医療,ビジネス,教育,共同体コミュニケーションなどの各種フィールドにおいて収集された会話データに対して,共感的インタラクションの構造分析を進めた.相互関心調整談話行為アノテーションに基づいて信頼構築・維持につながる談話行為系列の分析に基づいて関心レベルの交換と提案レベルとの交換の協同探索の概念を提案し,国内外の学会において招待講演を含む学会発表を行った.また,医療コミュニケーションにおける信頼性と患者満足度に関する分析研究を実施し学術論文発表を行った.相互関心調整に基づく共感的インタラクションモデルに関しては,相互関心調整と行為意図理論との比較を行い,国内外の学会において招待講演を含む学会発表を行った.共感的インタラクションモデルに基づく合意形成支援基盤技術については,共感的インタラクションが重要な役割を果たすロボットコミュニケーション・チュータリングの分野を想定してコミュニケーション支援技術の検討を行い、学術論文発表を行うとともに,国内外の学会において招待講演を含む学会発表を行った.また,他分野における共感的インタラクション研究との交流を意図して,哲学・倫理学分野の信頼研究者を招待してシンポジウム「インタラクションと信頼」を開催し,討論を通じた研究の進化を図るとともに研究成果の公開を行った.共感的インタラクションが重要な役割を果たす合意形成会話の実例として,医療コミュニケーション,ビジネスコミュニケーション,共同体コミュニケーションの各フィールドにおいて会話データの集積と相互信頼感共関心モデルを中心とした分析を実施し,それと並行して共関心と意図理論との対比を通じて共同探索の概念を提示することができた.さらにチュータリングを対象とした共感的インタラクション支援技術についても検討を始めており,おおむね順調に進展していると判断できる.2019年度は研究課題の二年目であり,これまでの成果を踏まえて,(1)会話における共感的インタラクションの実証的分析として,共関心談話行為アノテーションの安定性確認,非言語情報交換と共関心談話行為との相関分析,(2)関心・提案空間共同探索としての共関心モデルの開発,(3)ライフログ・体験共有技術への共感インタラクション支援導入を進める.
圏論等の概念的手法に基づく、数理論理学の、諸分科間の有機的関連による研究

昨年度に引き続き、双模倣の概念を用いての非常に弱い集合論の分析を継続した。非常に弱い集合論において無限集合の存在を保証する無限公理を採用しないものに関する論文は、昨年度の初めに学術誌に投稿してあったが、一年半の査読期間を経て本年度の最後に出版されるに至った(研究発表の雑誌論文の項目に記載)。無限公理を採用した場合の分析は、一昨年度に既に出版された論文で行っており、両者の比較により、様々な数学的命題の論理的な強さのなす数学的構造に対する無限公理の与える影響を明確に見て取ることができるようになった。尚、この二論文の合計は、モノグラフとしても決して短くなく、媒体の学術誌はモノグラフの発表の場をも標榜しており、特別研究員の採用中にモノグラフを一つ発表したといえるかも知れない。発表に至る前段階の研究活動として本年度は、上記の無限公理の影響の研究に引き続き、より大きな無限集合の存在を保証した公理(巨大基数公理)の影響の研究を行った。技術的には、この研究は二階集合論或いは類理論の研究と密接に結びついており、二階集合論の研究を行っているスイス連邦のベルン大学の研究グループに二度に亙って長期に滞在し、共同研究を行った。こうした研究では、単なる無限公理の影響の研究に結びつく二階算術の研究との類推が成り立ち、それを参考に研究を進めることになるが、二階算術との類推が大きく壊れる例が、重要なものの中にもあることが分かってきた。これらの結果は、平成23年に開催される幾つかの学会・研究集会等で発表する予定であり、また学術誌への投稿も準備している段階である。更にその過程で、可述主義に関する数理哲学の問題に大きく関わる数学的結果も発見されるなど、研究課題の採択時点では予想もできなかった程に、様々な研究テーマとの関連が見出されている。欧州及び北来へのそれそれ一度すつの訪問の際の学会出度及ひ研究打合せや、来日外国人研究者の出席する国内の会合への積極的な出席により、海外の数多くの研究者と交流し、彼及び彼女らに報告者の研究を知ってもらうと共に本研究に非常に有益となる情報交換を行うことが出来た。特に欧州及び北米への訪問では、数理論理学の諸分科の著名な研究者の許に数日から一週間程度滞在し、報告者の研究のセミナー発表の外、ホスト研究者やその許に集まる若手研究者と、学会などの会合では不可能な深い学術的議論を交わすことが出来た。本年度九月には、国内での開催ではあるが国際学会である10^<th>Asian Logic Conferenceに於いて、報告者の並行して行っている研究の内、代数と部分構造論理との間の関連に関する研究発表が行われか。更に、昨年度に学術誌に投稿していた報告者の原著論文について、当該学術誌への掲載決定後の校正等を入念に行い、その甲斐あってか本年度二月に掲載に至った後も、現在まで重要な誤植は見つかっていない。また昨年度より取り組んできた非常に弱い集合論と計算量理論の関係に関する研究では、当初目標としてきた成果がほぼ得られ、論文の草稿として纏めることが出来た。今後、当該分野の専門家の意見を聞き、それを反映させるなどの手直しをした上で雑誌に投稿する形で発表したい。この成果ほ、本研究の目指す有機的関連の中に、昨年度までの報告者の研究で含められていた諸分科の外に、又新たに分科である計算量理論を含めることが出来たという点でも、意義深いものである。双模倣及び集合のグラフ表現の両概念に拠り,数理論理学の複数の分科で研究される諸体系を,弱い集合論を用いて統一及び比較する研究に重点的に取り組んだ.特にこの目標に向けて,計算量理論の分科で研究される二種限定算術(two-sorted bounded arithmetic)についての研究を,既に成熟した分科として確立している二階算術(second order arithmetic)の研究を参考に推し進め,幾つかの結果を得た上で,上述の弱い集合論を用いて二階算術の研究と統一,比較した結果,論理体系における有限と無限の構造の違いを明瞭に示すことに成功した.この違いは,二種限定算術の研究は二階算術の研究を参考に進めることは出来るものの,全く同様には出来ず,かなりの部分で類似性が崩れるということも意味している.この結果は,論文として纏め投稿した外,国内外で口頭発表した.更に,同様の方法による研究の有望な適用先として,類理論(class theory)の(二階算術を参考とした)研究を見出し,まだ論文として纏めてはいないが,幾つかの結果を得た.この結果も,類理論の研究が確立された二階算術(及び二種限定算術)の研究を参考にできるものの,全く同様という訳には行かず,重要な定理の一部では類似性が大きく崩れていることを意味する.この意味で,類理論の研究が自明ではなく,非常に興味深い研究対象であることが明らかになった.昨年度に引き続き、双模倣の概念を用いての非常に弱い集合論の分析を継続した。

無限公理を採用した場合の分析は、一昨年度に既に出版された論文で行っており、両者の比較により、様々な数学的命題の論理的な強さのなす数学的構造に対する無限公理の与える影響を明確に見て取ることができるようになった。尚、この二論文の合計は、モノグラフとしても決して短くなく、媒体の学術誌はモノグラフの発表の場をも標榜しており、特別研究員の採用中にモノグラフを一つ発表したといえるかも知れない。発表に至る前段階の研究活動として本年度は、上記の無限公理の影響の研究に引き続き、より大きな無限集合の存在を保証した公理(巨大基数公理)の影響の研究を行った。技術的には、この研究は二階集合論或いは類理論の研究と密接に結びついており、二階集合論の研究を行っているスイス連邦のベルン大学の研究グループに二度に亙って長期に滞在し、共同研究を行った。こうした研究では、単なる無限公理の影響の研究に結びつく二階算術の研究との類推が成り立ち、それを参考に研究を進めることになるが、二階算術との類推が大きく壊れる例が、重要なものの中にもあることが分かってきた。これらの結果は、平成23年に開催される幾つかの学会・研究集会等で発表する予定であり、また学術誌への投稿も準備している段階である。更にその過程で、可述主義に関する数理哲学の問題に大きく関わる数学的結果も発見されるなど、研究課題の採択時点では予想もできなかった程に、様々な研究テーマとの関連が見出されている。
氷包埋低温電子顕微鏡によるカルシウムATPaseの三次元構造解析

本研究では,筋小胞体のカルシウムポンプである,カルシウムATPaseの三次元構造を,自然な脂質二重膜に埋まったままの状態で,氷包埋低温電子顕微鏡法を用いて,14Å分解能で求めた。(現在は,結晶化条件の検討によって,11Å分解能の顕微鏡像も得られている。)三次元像は,チュ-ブ状結晶のらせん対称性を利用し,本研究で改良したプログラムを用いて得た。らせんのパラメ-タはチュ-ブごとに異っていたが,私が開発した手法により,系統的指数付けを行い,3種の独立した平均デ-タを得た。得られた構造は,分解能の違いによる差はあるが,基本的に同一であった。これは,高等動物の膜蛋白質の3次元構造としては,現在得られている最も詳細なものである。最大の成果は,この分子の膜内の構造が初めて明らかになり,一次構造との対応もある程度つけられたことである。上記の分解能では個々のαらせんは解像できないが,膜内は,細胞質側とつながった主要部の他に,2つの細い(12本の膜貫通らせんから成ると考えられる)部分から成っていた。そのうちの一つは膜に対して著しく傾斜しており,主要部と小胞体内側で結びつけられていた。アミノ酸配列からは一本だけ異常に長い膜貫通らせんの存在が予想されており,このらせんと主要部との間にのみ,比較的長いペプチド鎖の存在が予想されていた。従って,得られた三次元構造は,構造予測のモデルと非常に良く一致するものであった。この長い傾いたらせんと機能の関係は現在のところ解っていない。一方,プログラムの開発も続けられており,格子の歪みを補正する新しいプログラムの開発を行った。
炎症性Th17細胞においてRORγtが認識するリポクオリティ分子機構の解明

本研究は、Th17細胞のマスター転写因子であるRORγtの脂質リガンドを同定し、Th17細胞分化における脂質代謝の役割を正確に理解することで、脂質・RORγtを標的とした新たな創薬ターゲット・診断ツールの構築を目的とする。平成29年度の一連の研究で、以下に示す3つの新知見を見出した。1.RORγt脂質リガンドによるマウス病態モデル解析:ACC1の選択的阻害剤TOFAをマウスに投与することにより、Th17細胞依存的な自己免疫疾患マウスモデルEAE及びTh17誘導性の喘息病態が抑制されるか検討したところ、予想どおりEAE病態の劇的な改善が認められた。また、TOFAによるEAE病態の改善は肥満病態状況下においても同様に認められた。2.RORγtの内在性リガンドとなる脂質代謝物の同定:これまでの研究実績により、RORγtの内在性リガンドとなりうる候補脂質代謝物は絞り込まれた。脂質代謝酵素の発現を基に、ACC1よりもさらに下流の酵素をゲノム編集技術により遺伝子欠損スクリーニングを行い、RORγtの機能を低下させる経路および、脂質代謝物を選別した。このスクリーニング手法を用いて酵素Xを欠損させたところ、RORγtの転写活性能および、Th17細胞分化能が著しく低下することが示された。3.脂質代謝酵素X欠損マウスの解析:2の結果を基に、脂質代謝酵素X欠損マウスについて解析を行った。Cas9システムを用いた酵素Xの結果と同様に、酵素X欠損マウス由来のCD4 T細胞をTh17細胞分化条件下で培養したところ、Th17細胞分化能の低下が認められた。29年度が最終年度であるため、記入しない。平成28年度の一連の研究で、以下に示す3つの新知見を見出した。1. RORγtの転写活性化能への脂肪酸合成律速酵素ACC1の作用解明:RORγtは転写因子として作用するため、その転写活性化能についてレポーターアッセイで評価することが可能である。CRISPR/Cas9システムによるゲノム編集技術を用いてACC1を欠損させ、RORγtの転写活性化能への影響について解析したところ、その活性化能が1/10以下に低下することを見出した。2. RORγtのリガンド候補の絞り込み:1の結果に加え、ACC1欠損細胞に脂肪酸代謝物を添加することで、ACC1による脂質合成とRORγt活性化能との関連についての解析を行った。種々の脂質を用いて検討を行ったところ、一価の不飽和脂肪酸がACC1欠損によるRORγtの機能低下を回復させる傾向が認められた。また、これらの細胞についてリピドミクス解析を行ったところ、一価の不飽和脂肪酸から代謝されたリン脂質がACC1欠損細胞で顕著に低下していることを見出した。3. Th17細胞におけるRORγtの脂質リガンド探索: 1、2の成果を基に、ACC1欠損Th17細胞に一価の不飽和脂肪酸を添加し、その効果について検討したところ予想通り、Th17細胞分化能の回復が認められた。これらの細胞のリピドミクス解析を行ったところ、一価不飽和脂肪酸を含むリン脂質の顕著な低下がACC1欠損群で認められた。これらの一連の成果はACC1によって合成された一価不飽和脂肪酸を含むリン脂質がTh17細胞におけるRORγtのリガンドとして作用していることを示唆している。研究実績の概要1において、ACC1によるRORγtの転写活性化能への作用について直接的な関与について解明している。また、概要2、3では、リピドミクス解析や代謝物の添加による機能解析を用いて、T細胞株だけでなくTh17細胞においてRORγtの内在性リガンドとなる候補脂質代謝物について絞り込みを行うことができた。実績の概要に示した内容以外においても、これらの候補となる脂質代謝物により、RORγtのターゲットDNAへの結合能・ターゲット遺伝子の誘導能が回復することも示している。これらの成果により、平成28年度の目標であった、RORγtの内在性リガンドとなる脂質代謝物絞り込み・およびこれら脂質代謝物のTh17細胞分化における生理的作用について明らかにすることができ、予定通りの進展状況である。

脂質代謝酵素の発現を基に、ACC1よりもさらに下流の酵素をゲノム編集技術により遺伝子欠損スクリーニングを行い、RORγtの機能を低下させる経路および、脂質代謝物を選別した。このスクリーニング手法を用いて酵素Xを欠損させたところ、RORγtの転写活性能および、Th17細胞分化能が著しく低下することが示された。3.脂質代謝酵素X欠損マウスの解析:2の結果を基に、脂質代謝酵素X欠損マウスについて解析を行った。Cas9システムを用いた酵素Xの結果と同様に、酵素X欠損マウス由来のCD4 T細胞をTh17細胞分化条件下で培養したところ、Th17細胞分化能の低下が認められた。平成29年度は、昨年度で得られた内容を進展させ、Th17細胞において、(1) RORγtの内在性リガンドとなる脂質代謝物の同定、(2) RORγt脂質リガンドによるマウス病態モデル解析、(3)ヒトTh17細胞におけるRORγtリガンドの同定を行う。具体的には以下に示す推進方策の基、研究を進めていく予定である。(1)RORγtの内在性リガンドとなる脂質代謝物の同定:平成28年度の研究実績により、RORγtの内在性リガンドとなりうる候補脂質代謝物は絞り込まれた。ここからさらに限定するために、ACC1よりもさらに下流の酵素をゲノム編集技術により欠損させ、RORγtの機能を低下させる経路および、脂質代謝物を選別する。選別された脂質代謝物については、RORγtのリガンド結合ドメインとの結合を直接的に評価するため三次元結晶構造解析を用いて、RORγtの内在性脂質代謝物リガンドを同定する。(2)RORγt脂質リガンドによるマウス病態モデル解析;はじめに、ACC1の選択的阻害剤TOFAをマウスに投与することにより、Th17細胞依存的な自己免疫疾患マウスモデルEAE及びTh17誘導性の喘息病態が抑制されるか検討する。また、(1)によりRORγtのリガンドとして機能する脂質代謝物が同定されたのち、この代謝物を多く含む食餌をオーダーメイドで外注し、この食餌を10週以上餌与することで、生体内でのTh17細胞誘導能・RORγtの活性能・EAE病態に対する影響について検討を行う。マウス病態モデルについては当研究室で実験系を確立済みである。(3)ヒトTh17細胞におけるRORγtリガンドの同定:(1)で得られる結果を基に、該当脂質代謝物がヒトTh17細胞分化におけるRORγtの内在性リガンドとして作用するかを、Th17細胞分化能・RORγtの転写活性化能・リピドミクス解析を用いて評価を進めていく。29年度が最終年度であるため、記入しない。
リプログラミング過程における遺伝子発現変化を担う転写因子の同定と解析

本研究では、まずマイクロアレイ解析を行い、MEF(マウス胚性線維芽細胞)からiPS細胞へのリプログラミングにおける遺伝子発現変化を網羅的に調べた。マイクロアレイ解析の結果よりリプログラミング過程で発現が上昇する遺伝子に注目し、リプログラミング過程で起こる遺伝子発現変化を引き起こす転写因子の予測を行った。それら候補転写因子についてshRNAによる発現抑制を行った結果、Foxd1の発現抑制によりリプログラミング効率が減少したことから、Foxd1がリプログラミングに寄与している転写因子であることがわかった。また、Foxd1の発現量の減少に応じてDax1などのFoxd1下流遺伝子の発現量が減少しており、Dax1の発現抑制ではリプログラミング効率が減少していた。すなわち、Foxd1がリプログラミング過程においてDax1らの下流遺伝子の発現を制御することによりリプログラミングに寄与しているという可能性が示唆された。さらに、Foxd1レポーター細胞を用いた解析から、Foxd1の発現上昇は一部の限定された細胞集団において起こっているということがわかった。次に、セルソーターを用いてFoxd1発現細胞とFoxd1未発現細胞を分取し性質を比較した結果、Foxd1はリプログラミングが進行した細胞において発現が上昇しているということがわかった。興味深いことに、Foxd1はMEFやiPS細胞では発現しておらず、リプログラミング過程では一過的な発現上昇を示していた。さらに、Cre-loxPシステムを用いたFoxd1発現細胞の運命追跡実験を行った結果、iPS細胞の95%以上がリプログラミング過程でFoxdlを発現していることがわかった。以上、新規リプログラミング制御因子であるFoxd1は、リプログラミングが進んだ細胞において発現が上昇する時期特異的なマーカー遺伝子であることがわかった。本年度は、細胞運命追跡実験によりリプログラミングされる細胞の多くにおいてFoxd1の発現上昇が起こっていること、またテラトーマ作製・キメラマウス作製などの実験より、ワイルドタイプiPS細胞とFoxd1ノックアウトiPS細胞の品質の確認を行い、いずれのiPS細胞も樹立されていることを示すことができた。これらの実験は本研究において非常に重要な実験であり、当初予定されていた通りの実験である。またNature Communications誌に"Foxd1 isa mediatorand indicator of thecell reprogrammingprocess"として当研究を発表することができた。本研究で見出した新規リプログラミング制御因子であるFoxd1の発現の有無により、後にできるiPS細胞の性質が異なるかという点については、これまでの研究で明らかにできていない。この点についてさらなる解析が期待される。
外地引揚者の文芸的実践とその社会的記憶編成をめぐる交渉的研究

本研究では、朝鮮や満州から帰還した外地引揚者による小説や詩歌回想記などを対象に、同時代のメディア報道やその文化表象といった社会的記憶と比較しながら、彼らの文芸的実践を検証している。また、特に朝鮮からの引揚者に焦点をあて、植民地時代の日本語創作との比較を通じて、引揚者の文芸的実践の特徴を考察した。これらの検証によって、戦後日本における外地引揚者の社会的記憶が悲劇的なイメージをもって語られるようになる一方、外地引揚者の文芸的実践とその評価は、多様な広がりを持っていることなどを明らかにしている。本研究は、1945年から1950年代における朝鮮・旧満洲地域から帰還した外地引揚者による文芸的実践の軌跡を検証するものであり、外地引揚者にかんするメディア報道の推移との比較から、それらの交渉的関係の位相を解明することを目的としている。平成24年度は、前年度に実施した朝鮮・旧満洲地域の引揚者による文芸的実践関係資料と引揚者にかんする新聞雑誌関係記事の調査収集の結果を受けて、朝鮮半島における1945年以前の在朝鮮日本人の地域コミュニティ活動にかんする資料調査を入念に行い、1945年以降の引揚事業関連資料との比較分析を進めた。平成24年度の研究成果については、「宗主国文芸の転回ー朴魯植と日韓俳句人脈」(『社会文学』37号、2013.2)と「村上杏史と外地引揚げ体験記の文脈ー『手記三千里』を読む」(『歴史の資料を読む』創風社出版、2013.3)を公表している。前者は、朝鮮俳人朴魯植の影響を受けた在朝鮮日本人の戦後と韓国俳人との関係性を考察した論考であり、後者はその中の一人である村上杏史の外地引揚げを検証した論考である。平成25年度は、前年度までの研究の総括、特に朝鮮半島からの引揚者の諸活動を精査しながら研究に取り組んだ。資料分析では、新たな研究への接続を意識しながら敗戦後の伝統詩歌領域での引揚者のその後を検証した。朝鮮半島および旧満洲において俳句や短歌に携わった人々の戦後は、1950年代以降に回想録などが現れ、事例は少ないが1965年の日韓基本条約以降に人的交流が多くなるという特徴も認められる。その際に敗戦後の文芸的実践と人的交流が密接な関係にあり、特に朝鮮半島における俳句や短歌の人的ネットワークは重要なものとなっている。これについての成果は、朝鮮半島における俳句作家と敗戦後の人的ネットワークを考察した「朝鮮詠と郷土ー異郷を詠む俳句の素性」(愛媛大学、平成25年12月21日)と題する学術講演でその一端を報告した。また、敗戦後の外地引揚げにかんする社会的記憶編成という点では、朝鮮引揚者を対象にした事例を平成26年度中に公表予定である。本研究は、1945年から1950年代における朝鮮・旧満洲地域から帰還した外地引揚者による文芸的実践の軌跡を検証し、外地引揚者にかんするメディア報道の推移との比較から、それらの交渉的関係の位相を解明することを目的としている。本研究の初年度となる平成23年度は、(1)朝鮮・旧満洲地域の引揚者による文芸的実践関係資料の調査収集、(2)引揚者にかんする新聞雑誌関係記事の調査収集、(3)1960年代後半から1970年代における外地引揚関連文献の整理、を中心に実施した。(1)については文芸創作とともに、地方サークル誌・文芸雑誌に掲載された手記・回想記を含めており、(2)とともに書誌として整理している。(3)については外地引揚文学ブームのあった1960年代後半から1970年代前半を中心に資料を収集し文献リストとしてまとめている。その他には、朝鮮半島における戦前の在朝鮮日本人の地域コミュニティ活動にかんする資料調査を実施し、敗戦時の引揚事業関連資料との比較分析を進めた。これについては、1960年代後半以降、外地引揚文学のブームなどから形成された引揚体験の再物語化には必ずしも反映されない領域であることから、平成24年度以降も継続的に調査するものとしたい。平成23年度における資料調査の成果については、(1)の朝鮮・旧満洲地域の引揚者による文芸的実践に関する論考を執筆中であり、平成24年度中に公表の予定である。また、その他のものについても準備している。平成26年度は、これまでの研究の総括を意識しながら研究に取り組んだ。外地引揚者の文芸関連資料の調査・収集では、1950年代から60年代における資料を中心に実施し、植民地期の朝鮮半島および旧満洲地域の日本語文芸資料と照らし合わせながら検討を行った。

それとともに、1960年代後半から70年代にかけて登場する外地引揚者の文芸および回想録に関する資料調査も進め、大連出身の清岡卓行による小説『アカシヤの大連』(1970年)や『海の瞳ー原口統三を求めて』(1971年)を経由して、原口統三の創作文芸に関する分析を『二十歳のエチュード』(1947年)を中心に行った。原口統三は、第一高等学校在学中に自殺した夭折詩人として知られるが、厳密には外地引揚者ではないものの、幼少期から少年期を朝鮮や大連で育った学歴エリートであることから、『二十歳のエチュード』から主に戦中期における外地・内地表象の問題を検証した。この研究成果の公表としては、〈東アジアと同時代日本文学〉フォーラム第二回国際シンポジウム「大衆化社会と日本語文学」(北京師範大学、2014年10月26日)における口頭発表「原口統三『二十歳のエチュード』をめぐる座標系ー夭折詩人と大衆化」、また第54回愛媛県高等学校教育研究大会国語部会(松山市にぎたつ会館、2014年12月22日)における学術講演「つむがれた措辞/素地ー原口統三『二十歳のエチュード』より」がある。学術論文としては平成27年度中に公表予定である。日本近代文学・文化誌研究実績の概要において述べたとおり、平成24年度は前年度における資料調査の結果を受けて、研究成果を学術論文として公表することができた。また、これらの成果の内容についても、外地引揚げ後の文芸実践としてのみならず、在朝鮮日本人の朝鮮半島での活動と比較考察することによって、新資料も含めた外地引揚げの事例を検証することに成功した。ただし、これらは村上杏史や井上兎径子ら個人にかんするものであり、さらに朝鮮引揚げ者の文芸実践とその社会表象について検討を重ねている。外地引揚者の文芸的実践については、朝鮮半島における伝統詩歌に関連した敗戦後の人的ネットワークの調査は徐々に進展しているものの、朝鮮刊行の資料や敗戦後の状況などの追跡調査が資料散逸や所蔵先不明のため遅延している。このために敗戦後における外地引揚者の社会的表象についても、その成果を公表する段階まで至っていないのが現状である。研究実績の概要で記したとおり、平成23年度は本研究計画の基盤として各研究項目の資料調査を中心に実施し、初年度の達成度としてはおおむね順調に進展している。ただし調査した資料が多岐にわたったため、初年度中に研究成果の一部を公表できなかった点は残念である。これについては平成24年度中に公表できるよう執筆を進めている。本研究の推進については、これまでに調査収集した資料の分析・整理とともに、追跡調査を適宜実施しつつ、完成度を高めることをめざしている。また内容としては、外地引揚者による文芸的実践のありようを、主に在朝鮮日本人による俳誌等の文芸活動と比較考察することよって進める予定である。現在の状況から、平成26年度にかけて期間を延長し、特に敗戦後における外地引揚者の社会的表象にかんする成果を発表する予定である。また、成果発表後には、報告書作成に入り、本研究の成果を新たな研究に繋げられるよう尽力する。平成24年度以降の本研究の推進については、平成23年度に調査収集した資料を適宜分析し、追跡調査を実施しつつ、書誌的な完成度を高めることをめざしている。特にこれまで見逃されていた外地引揚者による文芸的実践の発掘に努め、在朝鮮旧満洲日本人の地域コミュニティ活動についての調査も継続したいと考えている。研究費の使用計画については、関連資料調査を中心にさらなる資料調査と分析に努めるため、国内外での資料調査や関連書籍の購入等に使用するよう計画している。資料調査が新たに必要な問題があるため、次年度に繰越使用額を申請した。
近接場光学による液相の励起状態ダイナミックス観測の可能性

今年度の計画は,ATR方の原理を用いたナノ秒オーダーでの溶液中の励起分子の拡散の観測を試みることであった。以下に述べるように,これを試みるためにの装置を作成したが,現時点までの段階では,装置的な理由によって,まだ十分と思われる感度に達していない。本研究で考案した原理は,プリズムと溶液の界面に向かって励起用のピコ秒パルスレーザーと検出用連続点灯レーザーを全反射条件で入射し,検出レーザーの強度の時間的な変化をモニターすると言うものである。このための溶液循環測定セルを製作し,また検出用には単一縦モード半導体励起レーザーを購入し,その強度をディジタルオシロスコープでモニターする測定系を組んだ。検出用のレーザー光の強度は極めて安定で、恐らく適切に実験を設計すれば、界面付近に生成した過渡種の吸収の時間変化を追跡することは可能と思われる。しかし、ここに試料励起光を入射しようとしてパルスレーザーを点灯すると,レーザーのポッケルスセル,およびその駆動電源系から強い電磁ノイズが放出され,信号検出系に強いノイズを発生してしまうことが,実験の結果明らかとなった。このノイズの振幅が極めて大きいため,検出レーザーの強度変化があったとしても,それを検出することが現在できないでいる。これを改善して過渡種の吸収を検出するには,電磁ノイズを避けなければならないが,その方策として現在,(1)測定系をポッケルスセルの電源系からなるべく遠ざけ,また電磁シールドを試みる,(2)試料用の励起パルスレーザー光を長い距離引き回して測定セルに到着するまでの時間を稼ぎ,電源系からのノイズが十分おさまった後で検出光がモニターされるようにする,という二つの方法を試しつつある。これらの対策によって,将来的には当初計画に沿った溶液中の励起状態の拡散の計測が可能になると期待している。
内湾生態系における生体分子の動態モデリングと漁業生産環境の変動予測への適用

内湾漁業環境の持続性(環境の健全性と漁業生産性の両立可能性)評価のための脂肪酸動態を軸とする新たな生態系モデルを構築する.はじめに,基課題で知見が蓄積された宮城県志津川湾を対象に海外共同研究者とともにモデル構築を進める.同時に,同共同研究者が研究対象とするカナダ東部の湾を対象に,脂肪酸動態や代表生物種による脂肪酸代謝に関する調査・実験を行い,上記モデルを広い環境条件を有する内湾へ適用するための検証と改良に取り組む.その後,粒状有機物の脂肪酸分析による起源推定を軸とした内湾における簡便な物質動態モニタリングと上述の生態系モデルを活用した合理的な漁業環境評価の方法を提案する.内定年度:2018内湾漁業環境の持続性(環境の健全性と漁業生産性の両立可能性)評価のための脂肪酸動態を軸とする新たな生態系モデルを構築する.はじめに,基課題で知見が蓄積された宮城県志津川湾を対象に海外共同研究者とともにモデル構築を進める.同時に,同共同研究者が研究対象とするカナダ東部の湾を対象に,脂肪酸動態や代表生物種による脂肪酸代謝に関する調査・実験を行い,上記モデルを広い環境条件を有する内湾へ適用するための検証と改良に取り組む.その後,粒状有機物の脂肪酸分析による起源推定を軸とした内湾における簡便な物質動態モニタリングと上述の生態系モデルを活用した合理的な漁業環境評価の方法を提案する.
未固定遺体の皮弁穿通枝にMicrofil造影剤を注入し微細な血管網を明らかにする

本研究の主目的である身体各所の皮膚に至る血行動態を解析するために、本年は予備実験を行った。まず、未固定遺体を用いて大腿の前外側大腿皮弁を挙上し、皮弁の主栄養血管である外側大腿回旋動脈の下行枝から大腿の筋肉および筋膜を貫いて皮膚に至る穿通枝が剥離できるかどうか検討した。その結果として、遺体の保存状態や体格によっては、穿通枝の同定が困難であることや、途中で血管と筋肉内の運動神経の区別がつきづらいことがわかった。そこで、最初に血管径が大きい外側大腿回旋動脈の下行枝を同定し、これの枝から血管造影剤であるMicrofilを注入したところ、Microfilが着色されているために末梢の血管径が小さい血管についても同定が容易になることが確認できた。しかし、血管が脂肪組織内に至るレベルでは、組織の保存状態にも影響されるのか、血管の走行は肉眼的には不明瞭になった。次に、背部の胸背動脈穿通枝皮弁を挙上し、皮弁の主栄養血管である胸背動脈から広背筋を貫いて皮膚に至る穿通枝が剥離できるかどうか検討した。結果は大腿部と同様に遺体の保存状態や体格によっては、穿通枝の同定が困難であることがわかった。特に背部は遺体の保存による変形の影響を強く受けており、皮下脂肪組織内の血管剥離が困難であることがわかった。これらのことから以下の点が確認できた。1)未固定遺体を使用して穿通枝の剥離は可能である2)遺体の保存状態によっては、剥離の前にMicrofilを用いて血管を染色するなどの工夫が必要である未固定遺体は1体つき複数の研究に使用されているため、希望の部位の解剖ができない場合がある。したがって、施設内で解剖順番の調整が必要であることから、こちらの希望日と一致しないことがあり、進行がやや遅れている。今回の検討では、大腿部は身体の中でも比較的脂肪が薄い部位であるため、遺体が痩せている場合は脂肪内の穿通枝血管の同定が困難であった。できるだけ体格のよい遺体を選択することで、上記の問題を解決できると思われた。また、未固定遺体の保存状態によってはこちらの意図した解剖ができないことから、できるだけこちらの希望する状態に合った遺体を申請する。日程についても早めに申請してできるだけ希望日に研究ができるように対応する。本年は予備実験の意味が大きくなったため、研究中に使用した血管造影剤の量が当初予定より少なくなったことから予算に余りが生じた。また、当初はカメラを購入する予定であったが、タブレットのカメラを使用することで経費が削減できた。次年度には当初予定どおりに血管造影剤や未固定遺体の使用料、および解剖器具の購入や解析用のパソコン購入などに使用することが見込まれる。
メリステム形成を制御するオーキシン信号伝達ネットワークの総体と核内分子挙動の解明

陸上植物は、幹細胞領域(メリステム)を基点として三次元的な体制を築きつつ成長する。本研究では、陸上植物進化の基部に位置する苔類ゼニゴケをモデルとして、メリステム形成機構を遺伝子発現制御の観点から解明することを目的とする。平成30年度は、1植物ホルモン『オーキシン』による遺伝子発現制御について解析を進めるとともに、2無性繁殖体(無性芽)形成においてもオーキシン信号伝達が重要となることを見出した。また、研究成果を国内外の学会において発表した。研究内容について以下に詳述する。1オーキシンは、受容体タンパク質TIR1/AFBに結合すると転写抑制因子AUX/IAAの分解を促し、転写因子ARFによる遺伝子発現制御を亢進する。これまでの研究で、ゼニゴケに唯一のオーキシン受容体ホモログMpTIR1の機能欠損植物を作出し、適切なメリステムが形成されず細胞塊状となることを見出していた。30年度は、Mptir1機能欠損株と正常なゼニゴケ組織のトランスクリプトームデータを比較し、Mptir1機能欠損株の遺伝子発現プロファイルが発生初期の胞子発芽体と成熟した組織の中間的状態にあることを解明した。2ゼニゴケの無性繁殖体(無性芽)形成過程で細胞系譜を可視化する手法を確立し、無性芽形成パターンとメリステムの細胞系譜を解明した。同様の手法を、MpTIR1を誘導的にノックアウトできる植物に応用し、MpTIR1を介したオーキシン信号伝達は発生初期だけでなく無性芽形成過程でのパターン確立やメリステム獲得をも制御していることを解明した。予定していたトランスクリプトームデータの解析はやや遅れているものの、着実に進行している。一方、当初予定になかった無性芽の細胞系譜可視化系を確立できたことで、メリステム形成に関する新たな知見を得られている。よって、今後の研究方策に若干の修正を要するものの、おおむね順調に進展しているといえる。以下の二点について研究を進める。1トランスクリプトームデータ解析によりメリステム形成の鍵因子を探索し、生理機能を実験的に検証する。現在、Mptir1機能欠損株を含め、正常なメリステム形成が損なわれた複数の細胞塊状変異体のトランスクリプトームデータを取得している。これらの変異体で共通して発現異常を示す遺伝子からメリステム形成の鍵因子を推定する。推定された候補遺伝子について、機能欠損植物・過剰発現植物等を作出して表現型解析し、メリステム形成における機能を明らかにする。2無性芽形成過程をモデルとして、発生パターン確立とメリステム獲得におけるオーキシン信号伝達の役割を検証する。オーキシン処理やオーキシン信号伝達の実行因子(MpARF1)を機能欠損させた状態で無性芽細胞系譜可視化実験を行い、表現型解析を行う。なお、当該システムでのMparf1機能欠損株は既に作出されている。

オーキシン処理やオーキシン信号伝達の実行因子(MpARF1)を機能欠損させた状態で無性芽細胞系譜可視化実験を行い、表現型解析を行う。なお、当該システムでのMparf1機能欠損株は既に作出されている。
外来血液透析患者の合併症予防とQOL向上を指向した栄養アセスメント

外来血液透析患者の感染症などの合併症予防を目的に栄養アセスメントを行った。外来血液透析患者78名(男性49名、女性29名)と健常者46名(男性10名、女性36名)を対象に安静時エネルギー消費量(REE)測定を行い男女とも患者のほうが健常者より有意に低いことを認めた。患者群では女性において除脂肪体重との間に関連性が認められた。また多くの患者は標準体重当たり30kcalの指示エネルギー量が妥当であると推測されたが、有職者の多い40、50歳代の男性では3545kcal、60歳以上の女性では30kcalでも過剰である可能性が示唆された。以上の内容を論文にまとめ日本透析医学会誌に投稿中である。次に60歳以上の患者の血清亜鉛濃度平均値は、男性64.9μg/dL(18名)、女性63.2μg/dL(13名)であり基準値(64-1119μg/dL)を下回る者が男性78%、女性69%であった。女性においては、年齢と負の相関関係があり、REEと正の相関関係が認められた。血清銅濃度については興味深い結果は得られなかった。以上、高齢の血液透析患者は低亜鉛栄養状態にあることが示された。亜鉛不足は貧血、免疫機能低下、皮膚炎などを招くことから、亜鉛の補給と血液透析による損失防止など十分な管理が必要と思われた。また、血清亜鉛濃度とREEとの関連からエネルギー代謝と亜鉛の栄養状態との関連が示唆された。亜鉛の動態をより明確にするためELISA法で血清メタロチオネイン(MT)測定を試みたが、MTは61個のアミノ酸(分子量約6000)のうちシステインを20個も含むため抗体作成が困難な蛋白であり申請者が既製した抗体では感度が低く患者の血清MTは十分に検出できなかった。現在抗体を再度作成中である。上記の成果を下記の通り口頭発表した。第54回大阪透析研究会(平成12年3月12日)大阪「血液透析患者における安静時代謝量測定」第45回日本透析医学会学術集会総会(平成12年6月16-18日)福岡「外来透析患者における安静時エネルギー消費量測定の試み」現在、血液透析患者の指示エネルギー量は3040kcal/kg/dayを基本としている。しかし、年齢や合併症による個人差に加え、外来患者の場合は入院患者に比し生活活動量に個人差が生じるため、患者のQOL向上を考えると個人個人に適した設定をする必要がある。そこで本年度は外来血液透析患者の適正な摂取エネルギー量を見いだすための基礎研究として、安静時エネルギー消費量(REE)測定およびREEと関連する因子の解析を行った。対象者は外来血液透析患者78名(男性49名、女性29名)と健常者46名(男性10名、女性36名)とした。REE測定は携帯用簡易熱量計METAVINE-S(ヴァイン社製)を用いた。本機器で血液透析患者のREEを測定した報告はほとんどない。さらにタイムスタディの聞き取り調査結果を加え、1日の消費工ネルギー量(EE)を求めた。REEは男女とも患者のほうが健常者より統計的に有意に低かった。また患者において男女ともREEと年齢との間に負の相関があり、男性では透析前体重、透析後体重との間に正の相関が認められた。EEにおいては男女とも患者の方が健常者より低値を示した。また、患者、健常者いずれも女性の方が男性より低値を示した。次に、患者のEEをもとに現行の指示エネルギー量の妥当性について検討した結果、多くの患者は標準体重当たリ30kcalの指示エネルギー量が妥当であると推測されたが、有職者の多い40、50歳代の男性では3545kcal、60歳以上の女性では30kcalでも過剰である可能性が示唆された。上記の成果を下記の通り口頭発表する。第54回大阪透析研究会(平成12年3月12日)大阪「血液透折患者における安静時代謝量測定」第45回日本透析医学会学術集会総会(平成12年6月16-18日)福岡「外来透析患者における安静時エネルギー消費量測定の試み」外来血液透析患者の感染症などの合併症予防を目的に栄養アセスメントを行った。

以上、高齢の血液透析患者は低亜鉛栄養状態にあることが示された。亜鉛不足は貧血、免疫機能低下、皮膚炎などを招くことから、亜鉛の補給と血液透析による損失防止など十分な管理が必要と思われた。また、血清亜鉛濃度とREEとの関連からエネルギー代謝と亜鉛の栄養状態との関連が示唆された。亜鉛の動態をより明確にするためELISA法で血清メタロチオネイン(MT)測定を試みたが、MTは61個のアミノ酸(分子量約6000)のうちシステインを20個も含むため抗体作成が困難な蛋白であり申請者が既製した抗体では感度が低く患者の血清MTは十分に検出できなかった。現在抗体を再度作成中である。上記の成果を下記の通り口頭発表した。第54回大阪透析研究会(平成12年3月12日)大阪「血液透析患者における安静時代謝量測定」第45回日本透析医学会学術集会総会(平成12年6月16-18日)福岡「外来透析患者における安静時エネルギー消費量測定の試み」
ヒラメ・カレイ類の体色の左右差形成と体色異常の発生メカニズムの分子生物学的研究

本年度の研究では、RAの刺激で無眼側の色素前駆細胞から色素芽細胞への分化を誘導する、上流にある制御因子を解明することが重要であると考えられ、RA暴露してから24時間の時の仔魚からTotal RNAを抽出し、HiSeq2000で、100 bpのpaired-end法で配列を解析し、配列の生データをMaserのパイプラインを使って、次世代シーケンサーデータ解析を行った。ヒラメのようなターゲットのゲノム配列が未知であり、de novoトランスクリプトームアセンブルで配列を決定するところから解析を始まり、次に、リードをコンティグにマッピングし、発現量(FPKM)を算出した。さらに、二群間比較を行い、いずれかの二群間で有意に発現量が変動しているコンティグを抽出し、クラスタリングを行った。また、各コンティグの遺伝子アノテーションを付与し、最後に各クラスターで有意に出現頻度が上昇したGOの一覧を抽出した。結果では正常と比較して、RA暴露により発現量が10倍以上増加した遺伝子として、RA分解酵素cyp26bを含む14遺伝子が得られた。また、発現量が1/10以下に減少した遺伝子として、骨基質であるostcを含む11遺伝子が得られた。これらのうち、RA分解酵素cyp26b遺伝子が色素細胞分化に関連するかを調べるために、正常ヒラメの左右皮膚でのCyp26b1の発現差をqPCR法により調べた結果、変態期のG,H期では左右差が確認され、I期から左右差が無くなる傾向が確認された。以上から、ヒラメの変態期に起こる体色の左右差形成が、有眼側ではレチノイン酸により色素胞の分化が誘導されるのに対し、無眼側ではレチノイン酸分解酵素の高発現することにより、レチノイン酸が分解され、さらに、色素胞の分化を抑制されると考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。ヒラメ仔魚のステージングでは、研究室内でのヒラメ仔魚の飼育システムを構築し、ヒラメ変態の発生ステージを詳細に写真撮影するとともに軟骨と硬骨の骨格の発生段階を観察し、色素分化マーカーと幾つかの組織分化マーカー遺伝子の発現をin situハイブリダイゼーション法(ISH)で解析した。特に、非対称性形成と関係する眼の位置、頭部の非対称性、色素の形成、既存の仔魚型色素胞と新しく分化する成体型色素胞との位置的関係を組織学的に調べた。そして、ヒラメの発生ステージングをさらに充実できると考え、ステージングの再構成を進めている状況を水産学会で発表した。体色の左右差では、メダカdouble anal fin(背鰭と背中側の体色が腹側化する突然変異体)の原因遺伝子zic1が背と腹の形質の差を制御していることが報告されている。本研究では、トラフグで背中側皮膚と筋肉で発現し、ヒラメ変態期の左右皮膚での発現量の差が確認された。さらにISH法で解析した結果、H期仔魚において有眼側皮膚組織でzic1の発現が観察された。また同時期に、無眼側皮膚の表皮がアセチル化チューブリン抗体に陽性となることが観察された。このような左右差は両者ともにG期には検出されず、1期には一部個体のみで検出された。この結果を水産学会で発表した。それとともに、変態後期のヒラメ仔魚の左右組織からRNA抽出し、理研オミックス基盤領域の支援のもと、Illumina社の次世代シーケンサーHiseq2000により、100bpペアエンドのRNAseq解析を行って、現在、次世代シーケンス解析スフトウェアCLC Genomics Workbenchを用いて、アッセンブルと解析を進めている。体色異常の発生機序を解明するための実験では、これまでの報告により、レチノイン酸とのインキュベートは高頻度で色素異常を発症することが分かっているので、レチノイン酸の色素形成に及ぼす影響を解析する途中で、レチノイン酸により脊椎骨異常の誘導メカニズムについても解析して、結果を水産学会で発表した。体色左右差の解析では、これまでのトラフグを用いた実験により、魚類体色(ヒラメ・カレイ類以外では背腹の色素差)のパターニングに関連する候補遺伝子として、メラノコルチン受容体、dio2、zic1、tbx15、ASIPがピックアップされている。これらのヒラメ・オルソログ遺伝子をクローニングし、塩基配列を決定し、これら遺伝子の左右皮膚での発現量をqPCRで解析を行なった結果、gch1、gch2とmc1rはH期(成魚型色素胞形成の前の段階、色素芽細胞の有眼側でのみ分化する時期)から無眼側の発現量の減少が観察され、左右差が現れることが確認された。体色異常の発生機序を解明するための実験では、レチノイン酸暴露による無眼側黒化を実験的に誘導し、正常発生で発現の左右差が確認された遺伝子を用いて、qPCR解析とISH解析を行なった。qPCR解析によると、正常発生ではgch1、gch2とmc1rの発現量がH期から左右差が現れるが、G、H期のRA処理により無眼側の発現量の増加が観察され、左右差が無くなり、無眼側黒化が観察された。一方、I期のRA処理ではgch1、gch2とmc1rの無眼側の発現量の変動が見られず、正常に体色の左右差が形成された。

ISH解析によると、正常発生ではH期の無眼側皮膚にgch2陽性色素芽細胞が存在しないことに対し、H期の無眼側皮膚をRA存在下で培養すると、無眼側皮膚にもgch2陽性色素芽細胞が出現したことが確認された。この結果から、ヒラメの正常発生では、背鰭基部に分布する色素前駆細胞がG期に左右対称に両側の皮膚へ遊走し、H期に有眼側でのみ色素芽細胞へ分化し、無眼側の分化が抑制され、I期に有眼側でのみ成魚型色素胞が形成され、体色の左右差が形成される。この色素前駆細胞から色素芽細胞に分化する時期にRAで刺激すると、無眼側にも色素前駆細胞から色素芽細胞への分化が活性化され、両側とも成魚型色素胞が形成され、無眼側黒化を引き起こすことと考えられる。本年度の研究では、RAの刺激で無眼側の色素前駆細胞から色素芽細胞への分化を誘導する、上流にある制御因子を解明することが重要であると考えられ、RA暴露してから24時間の時の仔魚からTotal RNAを抽出し、HiSeq2000で、100 bpのpaired-end法で配列を解析し、配列の生データをMaserのパイプラインを使って、次世代シーケンサーデータ解析を行った。ヒラメのようなターゲットのゲノム配列が未知であり、de novoトランスクリプトームアセンブルで配列を決定するところから解析を始まり、次に、リードをコンティグにマッピングし、発現量(FPKM)を算出した。さらに、二群間比較を行い、いずれかの二群間で有意に発現量が変動しているコンティグを抽出し、クラスタリングを行った。また、各コンティグの遺伝子アノテーションを付与し、最後に各クラスターで有意に出現頻度が上昇したGOの一覧を抽出した。結果では正常と比較して、RA暴露により発現量が10倍以上増加した遺伝子として、RA分解酵素cyp26bを含む14遺伝子が得られた。また、発現量が1/10以下に減少した遺伝子として、骨基質であるostcを含む11遺伝子が得られた。これらのうち、RA分解酵素cyp26b遺伝子が色素細胞分化に関連するかを調べるために、正常ヒラメの左右皮膚でのCyp26b1の発現差をqPCR法により調べた結果、変態期のG,H期では左右差が確認され、I期から左右差が無くなる傾向が確認された。以上から、ヒラメの変態期に起こる体色の左右差形成が、有眼側ではレチノイン酸により色素胞の分化が誘導されるのに対し、無眼側ではレチノイン酸分解酵素の高発現することにより、レチノイン酸が分解され、さらに、色素胞の分化を抑制されると考えられる。26年度が最終年度であるため、記入しない。メダカでzic1遺伝子が体の背側に発現し、体色の背腹の違いを制御しているという最近の報告に着目して、ヒラメでは変態期にzic1遺伝子が有眼側に一過的に発現することを発見するなど、目的に向かって着実に成果をあげているものと考えている。またレチノイン酸の色素形成に対する影響を解析する中で、レチノイン酸による骨格異常の誘導メカニズムについても解析するなど副次的な成果をあげている.意欲的に研究を進んでいると思っている。左右の体色パターン形成の上流にある左右皮膚で発現差がある遺伝子を探索することに着目し、qPCR解析によりgch1、gch2とmc1rはH期から無眼側の発現量の減少が観察され、左右差が現れることが確認された。体色異常の解析では、G、H期ヒラメ仔魚のRA処理により無眼側のgch1、gch2とmc1r発現量の増加とgch2陽性色素芽細胞の出現が観察されたことで、目的に向かって研究が進んでいると思っている。