hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口腔扁平上皮癌の発生・浸潤・転移に関与する遺伝子異常の解析とその診断への応用

本研究の目的は,口腔扁平上皮癌(SCC)の発生・浸潤・転移に関与する遺伝子異常を解析し,その結果をSCCの診断に応用し,SCCの治療成績の向上を意図するものである.まず,SCCにおけるヘテロ接合性の消失(LOH)やマイクロサテライト不安定性(MSI)について検討した.その結果,XPA, XPB, XPC, XPD, XPE, XPF, XPG, CSB, p53,FHIT, APC, BRCA1,BRCA2,DCC等のローカスや3p14.1-12,3p21.1-14.2,3p21.2-14.2,3p24.1,3p25,8p21.1-11.2,9p22,9q32-33等の領域にLOHやMSIの様々な発現パターンが認められた.さらに,SCCの治療成績に関与する新しい三つの分子についても検討した.その一つは,最近シスプラチン耐性に関与していることが報告されているATP7Bである.SCCにおいて検討した70症例中39症例(56%)においてATP7Bの発現を認め,ATP7B陽性例のシスプラチンを用いた癌化学療法の奏効率は,陰性例に比較し有意に低下し,しかも,患者の治療成績もATP7B陽性例が,陰性例に比較し有意に不良であることが明らかとなった.もう一つの分子は,UPaseである.UPase発現陽性症例は72症例中56症例(77.8%)に認められ,陽性例の所属リンパ節への転移率は,陰性例に比較し有意に高く,Upase陽性例の治療成績も陰性例に比較し有意に不良であった.三つ目はPin1であるが,我々は,SCCの細胞株でのPin1のmRNAの発現を確認し,さらに,SCCの組織切片上でのPin1の発現がcyclin D1を相関することを確認した.本研究の目的は,口腔扁平上皮癌(SCC)の発生・浸潤・転移に関与する遺伝子異常を解析し,その結果をSCCの診断に応用し,SCCの治療成績の向上を意図するものである.まず,SCCにおけるヘテロ接合性の消失(LOH)やマイクロサテライト不安定性(MSI)について検討した.その結果,XPA, XPB, XPC, XPD, XPE, XPF, XPG, CSB, p53,FHIT, APC, BRCA1,BRCA2,DCC等のローカスや3p14.1-12,3p21.1-14.2,3p21.2-14.2,3p24.1,3p25,8p21.1-11.2,9p22,9q32-33等の領域にLOHやMSIの様々な発現パターンが認められた.さらに,SCCの治療成績に関与する新しい三つの分子についても検討した.その一つは,最近シスプラチン耐性に関与していることが報告されているATP7Bである.SCCにおいて検討した70症例中39症例(56%)においてATP7Bの発現を認め,ATP7B陽性例のシスプラチンを用いた癌化学療法の奏効率は,陰性例に比較し有意に低下し,しかも,患者の治療成績もATP7B陽性例が,陰性例に比較し有意に不良であることが明らかとなった.もう一つの分子は,UPaseである.UPase発現陽性症例は72症例中56症例(77.8%)に認められ,陽性例の所属リンパ節への転移率は,陰性例に比較し有意に高く,Upase陽性例の治療成績も陰性例に比較し有意に不良であった.三つ目はPin1であるが,我々は,SCCの細胞株でのPin1のmRNAの発現を確認し,さらに,SCCの組織切片上でのPin1の発現がcyclin D1を相関することを確認した.本研究の目的は,口腔扁平上皮癌(SCC)の発生・浸潤・転移に関与する遺伝子異常を解析し,その結果をSCCの診断に応用し,SCCの治療成績の向上を意図するものである.本研究は,患者の組織の遺伝子を対象とした研究であることから,研究対象となる患者のインフォームド・コンセントを得ることが研究の遂行の前提である.そこで我々は,平成12年4月28日に厚生科学審議会先端医療技術評価部会より提出された「遺伝子解析研究に付随する倫理問題等に対応するための指針」に基づき,「口腔癌の遺伝子解析におけるインフォームド・コンセント試案」を作成し,その内容の審査のため,我々の共同研究施設である国立仙台病院の倫理委員会に提出しその承認を得るとともに,その内容を第45回日本口腔外科学会総会で公開した.平成12年度においては,当初,ヘテロ接合性の消失(LOH)をゲノム全体を対象としてスクリーニングすることを試みたが,レーザーキャプチャーマイクロダイセクションによるDNAの抽出や全ゲノムを網羅する解析には多大な時間と労力を要し,研究遂行の遅延が重大な問題として浮上してきたため,まずはじめに,これまで報告されている癌抑制遺伝子の遺伝子座におけるLOHやマイクロサテライト不安定性(MSI)をSCC以外の癌についても解析し,SCCの遺伝子異常の特徴を把握することにした.

平成12年度においては,SCCの他,卵巣癌,大腸癌,肺癌等のXPA,XPB,XPC,XPD,XPE,XPF,XPG,CSB,p53,FHIT,APC,BRCA1,BRCA2,DCC等のローカスに関して,LOHやMSI解析を行なったが,検討したいずれのタイプの癌においても,上記ローカスのLOHやMSIの様々な発現パターンが認められた.現在,症例数を増やし,これらの遺伝子異常と臨床・病理所見との関連について検討中である.
う蝕を誘発するCandida albicansの歯質への付着機構の解明

平成11年度は、コラーゲンおよびゼラチンアフィニティーカラムを作製し、コラーゲンおよびゼラチン結合Candida由来膜蛋白の同定を試みた。はじめにアフィニティーカラムにCandida由来膜蛋白を展開し、溶出液をSDSポリアクリルアミド電気泳動後、銀染色を行った。その結果、ゼラチン結合Candida由来膜蛋白の候補として分子量30kDのバンドが検出された。本年度は、そのバンドの大量精製およびN末端アミノ酸配列の決定を試みた。【平成12年度前半】Candida albicansをzymolaseで処理した後、detergentにより膜蛋白を大量抽出した。抽出した大量の膜蛋白を高速液体クロマトグラフィーを用いてゼラチンアフィニティーカラムに展開後、さらに凍結乾燥により、濃縮精製した。【平成12年度後半】濃縮精製したゼラチン結合Candida由来膜蛋白の同定を目的として、メンブレンに転写後、N末端アミノ酸配列の決定を試みた。しかしながら、メンブレンへの転写効率が悪く、自動アミノ酸シークエンサーを用いた解析でも、目的のバンドのN末端アミノ酸配列の決定までは至らなかった。しかしながら、Candida膜上にゼラチン認識蛋白の存在が強く示唆された。1.C.albicansのコラーゲン、ゼラチンへの付着に及ぼす環境因子(温度、pHなど)の影響を検討した結果、さまざまな環境因子が関与していることが示唆された。2.培養時に、EDTAや2価金属イオンなどを添加した実験を行った結果、C.albicansのコラーゲン、ゼラチンへの付着には、インテグリンの関与が示唆された。また、RGDペプチドを用いた実験よりコラーゲン、ゼラチンへの付着には、C.albicansの異なるインテグリンの関与が示唆された。本年度後期は、以上の結果より、これらの付着に関与するインテグリンの同定実験を行った。1.コラーゲンおよびゼラチンアフィニティーカラムの作製3.抽出膜タンパクのコラーゲンおよびゼラチンアフィニティーカラムの展開4.SDS電気泳動および銀染色による結合タンパクの確認以上の方法にて、コラーゲンおよびゼラチンへの結合膜タンパクをそれぞれ数種類得ている。現在、これらのタンパクの精製を行っている。次年度は、引き続き精製を行い、N末端アミノ酸配列決定の実験を行う予定である。
仏伊独における移住家事・介護労働者-就労実態、制度、地位をめぐる交渉

本研究では、フランス、イタリア、ドイツ3ヵ国における移住家事・介護労働者の就労実態、制度上の位置づけ、ならびに地位改善に向けた取り組みの現状について、現地調査を実施し、基礎データを収集した。とりわけ2000年代半ばに「対人サービス」政策を打ち出したフランスの事例を重点的に調査し、同政策が個人家庭に雇用される移住家事・介護労働者の雇用上、ならびに移民法上の地位に与えたインパクトを明らかにした。フランスについては、(1)「対人サービス」の制度的特徴、仕組み、そして運用を知るため、パリを中心に政策担当者、関連企業とアソシエーションに対して合同聞き取り調査、また、(2)移住家事・介護労働者の就労実態と地位の正規化について、とくにフィリピン人のケースを中心に労働組合に対して聞き取り調査、及び参与観察を行った。イタリアに関しては、ローマで移住家事労働者の労働協定の制度、移住家事・介護労働者受け入れに関する資料収集、ならびにフィリピン人女性移住者団体に対する聞き取りを行った。さらにドイツに関しては、(1)移住家事・介護労働の現状把握のため、職業団体に対する聞き取り調査、また(2)送り出し側として、ポーランドの社会政策省、及び自治体労働局、移住労働仲介業者に対する聞き取り調査を行った。上記調査の結果、(1)一部の過疎地域で需要がないわけではないものの、全般的に各国の移住家事・介護労働者が概ね都市部に集中する傾向にあること、(2)ドイツでは導入が成功しなかったサービス雇用小切手に基づく「対人サービス」の産業化が、フランスでは一定程度の成果を上げていること、またイタリアにおいても一部でその試験的導入がなされていて、ヨーロッパ・レベルでの「対人サービス」の普及に関する動きも一部にあること、(3)移住家事・介護労働者の増加は、EU域内外からの移民の「女性化」と並行して進んでいるが、各国で家事・育児・介護を担う移住労働者の出身国別セグメント化が起きていて、その地位が多様であること、などがわかった。ドイツに働くポーランド人家事・介護労働者が主としてポーランド南部地域を中心とすることも確認できた。今後は、仏独伊の家事・介護労働の労働規約の現状、その移民政策との関係、フランスにおける「対人サービス」の運用実態、また、各国におけるフィリピン人家事労働者の位置づけとその背景の比較などが課題である。フランスに関しては、高齢者介護施設(EHPAD)における移住労働者の就労状況を把握するため、パリ地域の施設5ヵ所、ならびにピレネー・アトランティック県(以下P-At県)で1ヵ所を訪問した。その結果、(1)パリ地域では介護職員の多くが移民出自、あるいは海外県・領土出身の女性であるのに対して、P-At県ではこうした現象がごく例外的であること、(2)パリ地域では施設介護と在宅介護の問題が分断され、労働市場も分岐する傾向にあるのに対して、P-At県では高齢化が著しく地域における入所待機者数も多いため、施設介護と在宅介護(対人サービスを含む)が連動し、介護労働者は両セクターを循環する傾向にある、といった諸点が明らかになった。平成22年度の調査では、このように限定的ではあるものの、地方での状況を捉えることで、大都市圏に集中する移住家事・介護労働者の位置づけをよりいっそう明確に捉えることができた。このほか、パリで在宅介護員/生活補助員として就労する移住家事・介護労働者の資格、研修機会、労働協約等について関係団体・機関への聞き取りを進め、制度とその実態についての認識を深めることができた。次に、ドイツで働くポーランド人移住家事労働者に関しては、ポーランド現地調査によってポーランドの派遣会社が雇用する場合と移住労働者が個人雇用事業主として就労する場合の2つの回路があることが把握できた。また、ローマとパリでは、平成21年度に引き続きフィリピン人家事労働者の就労状況についてのインタビューを進めた。このほか、日本社会学会第83回大会(11月)で「フランスにおける『対人サービス(SAP)』と移民女性」と題したパネルを組織し、4本の報告を行うとともに、3月には、国際シンポジウム「ケア、国際移民、ジェンダー-日仏対話」(於日仏会館)を東北大学GCOE等との共催で開き、フランス側研究協力者との研究交流を行うことができた。最終年度を迎え、補充調査を実施するとともに、成果を暫定的にまとめ、その全容を捉えるため、外部の専門家も招いて、ワークショップを開催した。主な知見として、以下を挙げることができる。フランスでは2005年以降、「社会的結束」の名のもと、「対人サービス」振興政策が進められてきた。パリ市における調査では、同政策のもとで、個人家庭での無申告労働から申告労働への転換や、「職業経験認定制度(VAE)」などを通した就労条件改善への試みもみられた。だが、雇用の質は依然として劣悪である。他方で、申告労働に基づく労働契約、個人家庭賃金労働者の労働協約、労働組合、労働裁判所の存在は、移住家事・介護労働者の地位改善において重要な役割を果たしていることが明らかとなった。ドイツには、新規EU加盟国に限定したものだが、移住家事労働者受け入れプログラムがある。しかし、非正規滞在者も少なくない。支援は開始されたばかりで、非正規滞在者の地位正規化の条件は相対的に厳しい。

イタリアは割当制度による家族援助者を受け入れており、2002年以降、非正規滞在の移住家事・介護労働者を優先的に正規化してきた。ドイツと同様、新規EU加盟国からの移住女性の流入が拡大しているが、介護労働の職業化に向けた志向性は希薄といえる。また、フィリピン人家事・介護労働者の横断的調査では、ローマに比べ、パリでは非正規滞在者が極端に多いこと、ローマではフィリピンの海外雇用政策に先駆けて移住者のネットワークが形成されてきたこと、パリではフィリピン人家事・介護労働者がアフリカ出身労働者よりも賃金が一般に高く、移住家事・介護労働市場の階層化が進んでいることなどがわかった。ヨーロッパにおけるケアのグローバル化を、非正規滞在の移住家事・介護労働者の実態に一定程度踏み込んで調査を行い、その地位の改善に資する諸条件の一端を解明できたところに、本研究の意義がある。
星状神経節への神経ブロックと光線療法が遠隔部位である脳神経活動に及ぼす影響

神経ブロックは速波の相対的増加とSMF値、SEF90値の増加現象をブロック後15分くらいまでは非ブロック側で、ブロック側では徐々に2030分で認め、脳細胞が賦活化されることが示唆された。一方、90180J/cm^2放射束の照射量では速波の相対的増加とSMF値、SEF90値の増加現象を両側において認め、脳細胞の賦活化現象が示唆され、しかもより、θ波の相対的パワーの増加現象については神経ブロックよりも90J/cm^2放射束の照射量はより大きいことが示唆された。一方、360J/cm^2放射束の照射量ではむしろSMF値、SEF90値の減少を認め、脳細胞が鎮静化されるという、相反的作用を認めた。以上の結果より、星状神経節近傍への90180J/cm^2放射束の直線偏光近赤外線照射は星状神経節ブロックと同様な脳細胞賦活作用があることがわかり、星状神経節ブロックに代り、合併症無しに非侵襲的に脳細胞を賦活化できる物理療法として今後応用できる可能性が高いと考えられる。また、逆に星状神経節近傍への360J/cm^2放射束の直線偏光近赤外線の照射は異常興奮している脳細胞を抑制し、正常化させる治療法として応用できる可能性が示唆された。本年度の研究実績星状神経節への神経ブロック(SGB)および直線偏光近赤外線照射(SGR)を行い、脳波をフーリエ変換し、power spectral analysisによりその影響を検討した。1.SGB群SEF90およびSMFともにその値が上昇する傾向を認めた。(2)各周波数帯脳波の相対的パワーの変動θ波、α波やβ波の割合が増加し、δ波は減少する傾向を認めた。2.182J/cm2放射束でのSGR群(1)SEF90およびSMFの変動SEF90およびSMFともにその値が上昇する傾向を認めた。3.364J/cm2放射束でのSGR群(1)SEF90およびSMFの変動SEF90およびSMFともにその値が最初上昇し、その後下降する傾向を認めた。(2)各周波数帯脳波の相対的パワーの変動SGRから15分間はθ波、α波およびβ波が増加したが、その後はδ波の方が増加する傾向を認めた。以上より、SGB群と182J/cm2放射束でのSGR群は脳の覚醒現象を観察できたが、364J/cm2放射束でのSGR群では脳の覚醒現象の後に睡眠のようなδ波優位の状態が起きる2相性の変化を起こすことが示唆された。1.SGB群SEF90およびSMFともにその値が有意に上昇した。(2)各周波数帯脳波の相対的パワーの変動θ波、α波やβ波の割合が増加し、δ波は減少した。(1)SEF90およびSMFの変動SEF90およびSMFともにその値が上昇した。(1)SEF90およびSMFの変動SEF90およびSMFともにその値が下降した。(2)各周波数帯脳波の相対的パワーの変動δ波が増加した。以上より、SGB群では脳の覚醒・刺激現象を観察できたが、直線偏光近赤外線の星状神経節近傍への照射は脳の鎮静現象を起こし、神経ブロックと光線照射は脳神経に対して明らかに違う影響を及ぼしていることが示唆された。
マイクロ波プロセス・トモグラフィー法による血流内微小血栓モニタリング法の確立

3-2微小血栓混相流シミュレーション3-1に対して,流体・構造・電磁気連成シミュレーションを行い,微小血栓の流動特性を明らかにした.3-3実験とシミュレーションの比較:フェーズ2の実験結果と3-2のシミュレーション結果とを比較検討し「いつ」「どこで」「どれだけ」について討論を行った.また,流路の形状による血栓の成長の特性についても検討を行った.さらに,血栓計測における電磁気学シミュレーションも合わせて行った.血栓の大きさ・形や電極の形を変えてシミュレーションを行い,本計測手法の特性を明らかにした.電磁気学シミュレーションでは,静止場の実験結果とも比較し,血液の性質と電気特性について理論的な考察を行った.これらのシミュレーションから,本計測手法の改善策について討論を行った.3-4・ハードウェアの作り込み:経皮的心肺補助装置(PCPS)や体外設置型人工心臓に実際に設置することを想定しハードウェアの作り込みを行い、その体外血液循環流路に人工的に血栓を作り,各フェーズの結果の定量的な検討を行った.血液の温度やヘマトクリット値が変わる中で,安定的に血栓を検出できるよう,検討を行った.また,電気特性とACT値の相関にも着目し,本計測手法のさらなる可能性について検討を行った.3-5総合討論:(1)本計測手法の「いつ」「どこで」「どれだけ」の精度,(2)従来の光散乱法と比較検討による本手法の限界,(3)シミュレーションによる微小血栓の流動特性と再凝集巨大化メカニズムの解明,(4)本モニタリング法の実用化への道筋について総合討論を行った.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の実施内容は以下の通りである.フェーズ1「微小血栓3Dモニタリング法の構築」実施項目1-1ユニットのアセンブル,実施項目1-2センサ開発非接触タイプの8電極のキャパシタンストモグラフィーセンサを設計・製作した.センサと各ハードウェアのアセンブルを行い.リアルタイム血栓モニタリングのためのPST法を用いたシステムを構築した.実施項目1-3画像再構成アルゴリズム精度の向上PST法を用いた実験に先駆け,接触タイプのセンサを用いて緩和周波数の変化とフィブリノーゲン量の関係を調査した.実施項目1-4静的条件における実験静止状態の動物新鮮血を用いて、1-1,1-2で開発したモニタリング・システムの精度の検証実験を行った.具体的には,血栓形成過程の血液キャパシタンスの時間変化と,ヘマトクリット値の変化に対するキャパシタンス変化を計測した.フェーズ1「微小血栓3Dモニタリング法の構築」において,非接触で,高速スイッチングが可能なシステムを構築できた.3-2微小血栓混相流シミュレーション3-1に対して,流体・構造・電磁気連成シミュレーションを行い,微小血栓の流動特性を明らかにした.3-3実験とシミュレーションの比較:フェーズ2の実験結果と3-2のシミュレーション結果とを比較検討し「いつ」「どこで」「どれだけ」について討論を行った.また,流路の形状による血栓の成長の特性についても検討を行った.さらに,血栓計測における電磁気学シミュレーションも合わせて行った.血栓の大きさ・形や電極の形を変えてシミュレーションを行い,本計測手法の特性を明らかにした.電磁気学シミュレーションでは,静止場の実験結果とも比較し,血液の性質と電気特性について理論的な考察を行った.これらのシミュレーションから,本計測手法の改善策について討論を行った.3-4・ハードウェアの作り込み:経皮的心肺補助装置(PCPS)や体外設置型人工心臓に実際に設置することを想定しハードウェアの作り込みを行い、その体外血液循環流路に人工的に血栓を作り,各フェーズの結果の定量的な検討を行った.血液の温度やヘマトクリット値が変わる中で,安定的に血栓を検出できるよう,検討を行った.また,電気特性とACT値の相関にも着目し,本計測手法のさらなる可能性について検討を行った.3-5総合討論:(1)本計測手法の「いつ」「どこで」「どれだけ」の精度,(2)従来の光散乱法と比較検討による本手法の限界,(3)シミュレーションによる微小血栓の流動特性と再凝集巨大化メカニズムの解明,(4)本モニタリング法の実用化への道筋について総合討論を行った.本年度の実施内容は以下の通りである.フェーズ2「微小血栓モニタリング実験・検証」:2-1血栓生成ユニットの製作と血栓生成実験微小血栓の大きさ・量をトロンビン量と誘電泳動力により制御可能な血栓生成ユニットを製作し,ACT値,ヘマトクリット値,および凝固因子濃度などを変えて微小血栓を生成した.その微小血栓は顕微鏡にて定量化を行った.2-2高速アルゴリズムの開発緩和周波数の周辺のいくつかの印加周波数を用いて,高速で最適周波数を探索するアルゴリズムの開発を行った.2-3血液循環流路における血流場実験血液ポンプを有する血液循環流路を構築し,フェーズ1で開発したモニタリング・システムと,2-1の血栓生成ユニットを実装した.流量や供給量を変化させて,微小血栓の量をモニタリングし,微小血栓の時間,および,量をデータベース化した.2-4光干渉法による実験と比較当初の計画では光散乱法を用いる予定であったが、関係論文を精査し十分検討した結果、光干渉法を用いたほうが学術的であるとの結論至り、光干渉法を用いて、2-3の条件において実験を行い,データベース化した.

この光干渉法で得られた結果と,本研究の手法であるPST(プロセス・スペクトロ・スコピー)法で得られた結果とを比較検討し,PST法の精度を検証した.フェーズ3「シミュレーション解析」:3-1微小血栓混相流シミュレーションのモデリング特に壁近傍における電磁気場と流体力学場を考慮してシミュレーション・モデルを構築した. 3-2微小血栓混相流シミュレーション3-1に対して,流体・構造・電磁気連成シミュレーションを予備的に行い,微小血栓の流動特性について予備的に検討した.理由:フェーズ2「微小血栓モニタリング実験・検証」において,動物血を用いた循環流路中における血栓の検出実験を行い,流量を変化させて微小血栓をモニタリングできた.フェーズ3「シミュレーション解析」において,シミュレーション・モデルを構築できた.H29年度はフェーズ2「微小血栓モニタリング実験・検証」,フェーズ3「シミュレーション解析と急性動物実験」について研究を進める.具体的な計画は以下の通りである.2-1血栓生成ユニットの製作と血栓生成実験微小血栓の大きさ・量をトロンビン量と誘電泳動力により制御可能な血栓生成ユニットを製作し,ACT値,ヘマトクリット値,および凝固因子濃度などを変えて微小血栓を生成する.その微小血栓は顕微鏡にて定量化する.2-2高速アルゴリズムの開発緩和周波数は,いくつか検体により,バンドをもつ可能性がある.そこで、緩和周波数の周辺のいくつかの印加周波数を用いて,高速で最適周波数を探索するアルゴリズムの開発を行う.2-3血液循環流路における血流場実験血液ポンプを有する血液循環流路(を構築し,フェーズ1で開発したモニタリング・システムと,2-1の血栓生成ユニットを実装する.流量や供給量を変化させて,微小血栓の大きさや分布を3Dモニタリングし,微小血栓の通過時間(横軸),大きさ(奥行き軸)、および、量(個数)(縦軸)をデータベース化する.2-4光散乱法による実験と比較光散乱法により,2-3の条件において実験を行い,データベース化する.この光散乱法で得られた結果と,2-3のPST法で得られた結果とを比較検討し,PST法の精度を検証する.3-1微小血栓混相流シミュレーションのモデリング特に壁近傍と力学的平衡断面位置付近の固液界面における細胞構造力学,界面流体力学,界面生化学,細胞配向特性,および空間的移動特性を考慮してシミュレーション・モデルを構築する.3-2微小血栓混相流シミュレーション3-1に対して,流体・構造連成シミュレーションを行い,微小血栓の流動特性(大きさ,位置,速度,および,擾乱の関係)を明らかにする.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。H30年度はフェーズ3「シミュレーション解析」について研究を進める.具体的な計画は以下の通りである.・実験とシミュレーションの比較:フェーズ2の実験結果と3-2のシミュレーション結果とを比較検討し「いつ」「どこで」「どれだけ」について討論を行う.・ハードウェアの作り込み:経皮的心肺補助装置(PCPS)や体外設置型人工心臓に実際に設置することを想定しハードウェアを作り込みと実用化を検討する。
染色体高次構造解析によるiPS細胞の選別

本研究ではiPS細胞の誘導・維持におけるポリコーム複合体の影響について解析を行った.まずポリコーム複合体の構成要素であるRing1Bを欠損してiPS細胞を誘導したところ,初期過程では促進的に,後期過程では抑制的に機能することが明らかとなった.次にiPS細胞樹立後に欠損させたところ,ES細胞に比べて未分化性および細胞増殖率がより早期に低下した.そこで体細胞においてポリコーム群の標的遺伝子であり細胞老化の制御に重要な働きをしているInk4a/Arf (Cdkn2a)に着目して染色体高次構造の解析を試みたところ,元の体細胞ともES細胞ともは異なる状態になっていることが示唆された.我々はリンパ球(B細胞,T細胞,NKT細胞など)をiPS細胞技術により再生し抗体産生や抗腫瘍治療へ応用するための基礎研究を進めている過程で,樹立したリンパ球由来のiPS細胞を解析したところ,多能性幹細胞の状態では多能性マーカーの発現,網羅的遺伝子発現パターン,分化多能性やキメラマスへの寄与などにおいてクローン間で明確な違いが観察されなかった.一方でそれらを分化誘導した時にクローン間の不均一性が観察された.そのような現象が,近年着目されるようになってきたDNA領域の相互作用(染色体高次構造)による遺伝子発現調節機構に由来するのではないかという仮説を立てた.そこでまず体細胞においてポリコーム群の標的遺伝子であり細胞老化の制御に重要な働きをしているInk4a/Arf (Cdkn2a)に着目して次世代シークエンサーを用いてDNA-DNA相互作用を解析する手法のひとつであるenhanced 4C(Circular chromosome conformation capture)-seq法(Schoenfelder S., et al. 2010Nature genetics, 42:53-61)により体細胞,iPS細胞,ES細胞でのDNA相互作用状態を解析し,iPS細胞でのDNA-DNA相互作用がES細胞とは異なっていることが示唆された.またFISH(Fluorescence in situ hybridization)法により顕微鏡下でもDNA-DNA相互作用を確認する手法も確立した.またポリコーム欠損状態で初期化された場合に染色体高次構造の初期化が改善されるか否かを解析するための準備としてRing1A/BコンディショナルノックアウトマウスからもiPS細胞を誘導しB細胞由来のiPS細胞を樹立することに成功した.ホルムアルデヒドによりクロスリンクしたB細胞、ES細胞またはB-iPS細胞由来のDNAを制限酵素消化後にT4 DNAライゲースにより近接したDNA領域を結合させた後リバースクロスリンクすることで3Cライブラリーを作製した.プロモーター領域内に設定したベイトプライマーを用いてVent (exo-)DNAポリメラーゼにより伸長後,4塩基認識制限酵素NlaIIIにより300-500bp程度のDNA断片に調製した.そしてアダプター付加後にベイトとアダプター配列特異的なプライマーを用いてPCR反応を行って4Cライブラリーをそれぞれ調製した.次世代シークエンサーを用いてペアエンドシークエンスを行ってInk4a/Arf領域と相互作用している領域の解析を行ったところ,B-iPS細胞ではES細胞と異なる領域にピークが観察された.しかしB細胞とも一致しないピークも観察されたことから,ES型でもなくB細胞型でもない状態になっていることが示唆された.他のクローンを用いて再現性を含めて検証している.再現性が確認できていなかったので,FISH (Fluorescence in situ hybridization)法により顕微鏡下でそれらの領域が共局在していることを解析するまでにはいたっていない.しかしその準備として別のBACクローンを用いてニックトランスレーション法によりDIGもしくはビオチン標識したプローブDNAを調製して固定した細胞にハイブリダイゼーションさせることで異なる二つの領域が共局在しているかを解析する予備実験を行って方法的には問題ないことを確認した.我々はリンパ球(B細胞,T細胞,NKT細胞など)をiPS細胞技術により再生し抗体産生や抗腫瘍治療へ応用するための基礎研究を進めている過程で,樹立したリンパ球由来のiPS細胞を解析したところ,多能性幹細胞の状態では多能性マーカーの発現,網羅的遺伝子発現パターン,分化多能性やキメラマスへの寄与などにおいてクローン間で明確な違いが観察されなかった.一方でそれらを分化誘導した時にクローン間の不均一性が観察された.そのような現象が,近年着目されるようになってきたDNA領域の相互作用(染色体高次構造)による遺伝子発現調節機構に由来するのではないかという仮説を立てた.そこでまず体細胞においてポリコーム群の標的遺伝子であり細胞老化の制御に重要な働きをしているInk4a/Arf (Cdkn2a)に着目して次世代シークエンサーを用いてDNA-DNA相互作用を解析する手法のひとつであるenhanced 4C(Circular chromosome conformation capture)-seq法(Schoenfelder S., et al. 2010Nature genetics, 42:53-61)により体細胞,iPS細胞,ES細胞でのDNA相互作用状態を解析し,iPS細胞でのDNA-DNA相互作用がES細胞とは異なっているように見えたが、再現性の高い結果を得られなかったため、実験条件の再検討を行っている.またポリコーム欠損状態で初期化された場合に染色体高次構造の初期化が改善されるか否かを解析するための準備としてRing1A/BコンディショナルノックアウトマウスからもiPS細胞を誘導しB細胞由来のiPS(B-iPS)細胞を樹立することに成功した.さらにヒト細胞でも検証するための準備としてヒト末梢血およびさい帯血由来のT細胞、NKT細胞からもiPS細胞を誘導し樹立に成功した.

ホルムアルデヒドによりクロスリンクしたB細胞、ES細胞またはB-iPS細胞由来のDNAを制限酵素消化後にT4 DNAライゲースにより近接したDNA領域を結合させた後リバースクロスリンクすることで3Cライブラリーを作製した.プロモーター領域内に設定したベイトプライマーを用いてVent (exo-)DNAポリメラーゼにより伸長後,4塩基認識制限酵素NlaIIIにより300-500bp程度のDNA断片に調製した.そしてアダプター付加後にベイトとアダプター配列特異的なプライマーを用いてPCR反応を行って4Cライブラリーをそれぞれ調製した.次世代シークエンサーを用いてペアエンドシークエンスを行ってInk4a/Arf領域と相互作用している領域の解析を行ったところ,B-iPS細胞ではES細胞と異なる領域にピークが観察された.しかしB細胞とも一致しないピークも観察されたことから,ES型でもなくB細胞型でもない状態になっていることが示唆された.他のクローンを用いて再現性の検証を行ったが、S/N比を高める必要があると考えられた.そこでライブラリー調製におけるPCR酵素を高正確性の酵素の検討や最終産物を磁気ビーズにより精製するなどの詳細な条件を検討した.我々はリンパ球(B細胞,T細胞,NKT細胞など)をiPS細胞技術により再生し抗体産生や抗腫瘍治療へ応用するための基礎研究を進めている過程で,樹立したリンパ球由来のiPS細胞を解析したところ,多能性幹細胞の状態では多能性マーカーの発現,網羅的遺伝子発現パターン,分化多能性やキメラマスへの寄与などにおいてクローン間で明確な違いが観察されなかった.一方でそれらを分化誘導した時にクローン間の不均一性が観察された.そのような現象が,近年報告(Kondo T., et al. 2014Dev Cell, 28:94-101)されたポリコーム群複合体が関与するDNA領域の相互作用(染色体高次構造)による遺伝子発現調節機構に由来するのではないかという仮説を立てた.本年度はポリコームタンパク質、特にPCR1複合体の構成タンパク質のひとつであるRing1Bの作用について解析を行った.まずRing1BをノックアウトしたB細胞からiPS細胞を誘導すると,野生型に比べて2倍以上のアルカリフォスファターゼ陽性のコロニーが観察され,免疫染色でも多能性マーカー陽性のコロニー数が3倍以上観察された.一方で,iPS細胞樹立アッセイを行った結果,Ring1BノックアウトB細胞では継代を経る毎にES細胞様コロニーが減少し,5継代目での樹立効率は野生型に比べて1/3程度であった.したがって,ポリコーム群はiPS細胞技術による体細胞初期化過程において抑制的に働き,一方で,多能性幹細胞様に初期化されたあとでは,その多能性維持を支持することが示唆された.本研究ではiPS細胞の誘導・維持におけるポリコーム複合体の影響について解析を行った.
ABC星型モデルグラフト共重合体によるハニカム超構造および強制相溶超構造の構築

今までにさまざまな多相系高分子が合成され、それらのモルフォロジーが詳細に研究されてきた。例えば線状ブロック共重合体(AB型、ABA型、ABC型、ABACA型など)あるいはブロック共重合体を枝鎖とする星型共重合体である。これらの共重合体の幾何学的形状はさまざまであるが、ブロック鎖の結合様式の点では、隣接する2本の異種高分子鎖が1点で結合しているという共通の特徴を有している。そのため、多元ブロック共重合体や星型ブロック共重合体など一見複雑な共重合体のモルフォロジーも、その素構造であるジブロック共重合体のモルフォロジーをもとにして理解できる。しかし逆に言えば、2種高分子鎖1点拘束の原理を保存する限り、ジブロック共重合体のモルフォロジーの枠を越えることはできないわけである。新しい高分子系超構造を構築するためには新しい素構造、新しい原理が必要である。そこでまったく新しい素構造として3成分3分岐星型共重合体(ABC星型グラフト共重合体)を考えた。この共重合体では3種の高分子鎖が1点で結合している。したがって3成分が互いに非相溶であれば、3種の高分子ドメインが1次元的に並ばざるを得ない。A、B、Cが等体積の場合、結合点は直線上に、しかも細密充填して並ばざるを得ない。その結果、ハニカム超構造が得られることになる。また、成分鎖長が非対称ならば、通常のブロック共重合体では不可能な強制相溶超構造が得られるはずである。このような考え方のもとに、ポリスチレン、ポリイソプレン、ポリ(4-ビニルピリジン)からなるABC星型グラフト共重合体をアニオン重合法により精密合成し、予想通り、ハニカム超構造および強制相溶超構造が得られることを実証した。
カルコゲン超原子価化合物の合成と構造

(NH_4)_2[Mo_3S(S_2)_6]とトリエチルホスフィンの反応により生成する錯体、[Mo_6S_<12>(PEt_3)_6]1の構造解析に適した単結晶が得られ単結晶X線構造解析をおこなった結果、6個のモリブデン原子がRaft状に結合した平面骨格を有するクラスタ-錯体であることが明らかになった。面配位硫黄は融合三角面の上下に交互に配位する。各モリブデンーモリブデン稜は硫黄による架橋される。トリエチルホスフィンが各モリブデン原子に1個ずつ配位しており、配位環境が異なるので^<31>P NMRスペクトルは3種の吸収を示す。モリブデンスルフィドクラスタ-において2個以上の三角面が水平方向に融合した構造を持つものとして最初の例であり、昨年の研究報告において提出した推定構造と異なるものである。1とトリメチルホスフィンの反応では[Mo_3S_5(PMe_3)_6]2が生成した。単結晶X線構造解析により、2は3個のモリブデン原子から成る正三角形クラスタ-骨格の上下に硫黄が面配位、各モリブデンーモリブデン稜に硫黄が架橋、各モリブデン原子に2個のトリメチルホスフィンが配位した構造が明らかになった。モリブデンの酸化数は平械3.3価であるが、Mo^<IV>Mo^<III>_2という混合原子価状態ともみなせる。サイクリックボルタノメトリ-は1電子酸化および1電子還元波を示す。同様な反応をブチルアミン共存下におこなう4個のモリブデン原子が菱形をなした平面状Raft構造を持つ錯体[Mo_4S_6(SH)_2(PMe_3)_6]3が生成した。菱形を構成する外縁のモリブデンーモリブデン結合距離は等しく(2.825A^^゚)モリブデン10電子系に対する構造である。1、2は同じパタ-ンの縮合反応で生成するものと推定されるので、超原子価状態の硫黄を有する更に重合度の大きい平面状クラスタ-クラスタ-の合成の可能性が示された。
破骨細胞の分化誘導過程における接着因子発現の役割の解明

前年度の本研究で骨芽細胞と骨髄細胞の混培養上清を添加して骨髄細胞を培養したところ、Mac-1,LFA-1抗原強陽性細胞はマクロファージに分化すると考えられるが、破骨細胞の前駆細胞はMac-1,LFA-1抗原弱陽性細胞に含まれることが示され、混培養上清にはこの破骨細胞の前駆細胞を増加させる因子の在存が示唆された。平成4年度は骨髄細胞を用いてin vitroにおけるMac-1,LFA-1以外の接着因子(CD44,Mel14)の発現と破骨細胞形成との関係をFACSを用いて詳細に検討した。また、in vivoの歯周組織における破骨細胞およびその前駆細胞におけるそれらの因子の発現、さらに、矯正学的に歯を移動させることにより起こる骨吸収時の接着因子の発現の変化を免疫組織化学的に検討し、以下の結果を得た。1.骨髄細胞に混培養上清を添加して培養し、付着性細胞、非付着性細胞に分けた場合に付着性細胞は非付着性細胞に比べてMac-1,LAF-1,CD44陽性細胞の割合が高く、かつその発現強度も高かった。2.付着性細胞ではLFA-1の発現強度が低く、CD44の発現強度が強い集団から、非付着性細胞では、Mac-1,LFA-1,Mel14抗原を有し、LFA-1とMel14の発現強度の低い細胞集団からTRACP陽性多核細胞が多く形成された。3.歯周組織におけるMac-1,LFA-1,ICAM-1の発現について検討したところ、Mac-1,LFA-1陽性細胞は、歯根膜や骨髄中にみられ、ICAM-1陽性細胞は根尖部歯根膜、血管壁、骨髄に発現していた。4.歯牙を矯正学的に移動させると、移動初期にこれら接着因子の陽性細胞が増加した。この時圧迫側では骨吸収が見られ、それに伴い破骨細胞が増加していた。以上の結果より、破骨細胞の誘導過程において接着因子が深く関与していることが明かとなった。骨芽細胞と骨髄細胞をフィルタ-を介してcoーcultureすると、骨芽細胞が産生する液性因子により、マクロファ-ジ/単球系細胞が特異的に増殖し、その分化抗原として細胞接着因子であるMacー1,LFAー1抗原を有する細胞が増加し、その細胞群の中に多数の破骨細胞の前駆細胞が含まれ、それより破骨細胞が形成されて骨を吸収することを明らかにした。このように骨吸収には骨芽細胞と造血幹細胞の相互作用が必要であり、それは液性因子により制御されている。マウス骨髄、脾臓、および末梢血のリンパ球/単球培養系を用いて骨芽細胞と骨髄細胞の混培養上清を添加培養し、培養1、3、5日後にflowcytometryで分析を行ない、破骨細胞形成過程における各種接着因子の発現について経時的解析を試み以下のような結果を得た。1.混培養上清による破骨細胞の形成は末梢血リンパ球/単球、脾細胞、骨髄細胞の順に誘導され、それぞれに含まれる破骨細胞の前駆細胞に分化段階が異なることが示された。2.骨髄細胞、脾細胞、および末梢血のリンパ球/単球からの破骨細胞の出現に相関してMecー1,LFAー1抗原陽性細胞に類似性が認められた。3.骨髄培養系では培養するに従い、Macー1,LFAー1抗原に関して強陽性細胞が減少し、弱陽性細胞が増加していた。

4.破骨細胞は培養後期から多く形成され、この時のMacー1,LFAー1抗原の発現状況は弱陽性で、強陽性細胞が多い集団からはあまり形成されなかった。以上のことからMacー1,LFAー1抗原強陽性細胞はマクロファ-ジに分化すると考えられるが、破骨細胞の前駆細胞はMacー1,LFAー1抗原弱陽性細胞に含まれることが示され、混培養上清にはこの破骨細胞の前駆細胞を増加させる因子の存在が示唆された。平成4年度は骨髄細胞を用いてin vitroにおけるMac-1,LFA-1以外の接着因子であるCD44,Mel 14の発現と破骨細胞形成との関係をFACSを用いて詳細に検討した.また,invivoの歯周組織における破骨細胞およびその前駆細胞におけるそれらの因子の発現,さらに,矯正学的に歯を移動させることにより起こる骨吸収時の接着因子の発現の変化を免疫組織化学的に検討し,以下の結果を得た.1.骨髄細胞に混培養上清を添加して培養し,付着性細胞,非付着性細胞に分けた場合,破骨細胞は非付着性細胞から多く形成された.この時の細胞の接着因子の発現を見ると,付着性細胞は非付着性細胞に比べてMac-1,LFA-1,CD44陽性細胞の割合が高く,かつその発現強度も高かった.2.付着性細胞ではLFA-1の発現強度が低く,CD44の発現強度が強い集団から,非付着性細胞では、Mac-1,LFA-1,Mel14抗原を有し,LFA-1とMel14の発現強度の低い細胞集団からTRACP陽性多核細胞が多く形成された.3.歯周組織におけるMac-1,LFA-1,ICAM-1の発現について検討したところ,Mac-1,LFA-1陽性細胞は,歯根膜や骨髄中にみられ,ICAM-1陽性細胞は根尖部歯根膜,血管壁,骨髄に発現していた.4.歯牙を矯正学的に移動させると,移動初期にこれら接着因子の陽性細胞が増加した.この時圧迫側では骨吸収が見られ,それに伴い,破骨細胞が増加していた.以上の結果より,破骨細胞の誘導過程において接着因子が深く関与していることが明らかとなった.
希土類化合物における価数揺らぎを媒介とした新規超伝導と 異常電子状態の研究

本研究では価数などの揺らぎを媒介とした新奇の超伝導や状態の探索とその起源の解明のため,圧力や元素置換によってこれらが実現する可能性がある化合物を探索し,その物性を測定を行った。以下に主な結果を示す。(1)圧力誘起超伝導体CePtSi2単結晶試料を用いた測定から詳細な圧力相図を作成した。(2) CePtGe2多結晶および単結晶試料を作成し3.8 Kで反強磁性転移をすることを明らかにした。(3) SmPtSi2多結晶および多結晶および単結晶試料を作成し,2段階の秩序を示すことを明らかにした。CeやSm, Yb等, 2つの価数状態を取り得る希土類元素を含むf電子系-重い電子系化合物において「価数揺らぎ」を媒介とした新しい型の超伝導の発現が提唱されており,申請者らが2009年に発見したCePtSi2の圧力誘起超伝導がその候補であるが,価数揺らぎ超伝導の報告例は少ない。本研究ではCePtSi2の圧力誘起超伝導の詳細の解明と,「価数揺らぎ」超伝導を発現する可能性のある化合物を探索し,価数揺らぎによる新規超伝導および新規電子状態の探索,そしてその発現機構の詳細と普遍性を明らかにすることを目的とする。今年度の成果を以下に要約する。(1)圧力誘起超伝導体CePtSi2に対して,フラックス法による単結晶に加え,チョクラルスキー法による大型の単結晶試料を作成した。得られた試料に対して,常圧および圧力下においてゼーベック係数測定を行った。CePtSi2のゼーベック係数は異方性を示し,また圧力印加にともなってゼーベック係数が増大した。4 Kのゼーベック係数は超伝導相が出現する1 GPa以上で負から正へと変わり,この領域での電子状態の変化を示唆した。(2)CePt2Si多結晶試料を作成し,圧力下における電気抵抗測定を行い,相転移温度が抑制されることを明らかにした。(3)RPt2Si(R = Sm, Tm)の多結晶試料育成を試みた。作成したSmPt2Siは不純物が含まれているが,CePtSi2と同じ結晶構造の試料が得られた。また,Smは3価に近い状態であることが分かった。一方,TmPt2Si多結晶試料の作成に成功し,Tmが3価に近い状態であることを明らかにした。(4)Yb2Ni12P7に対して圧力下磁場中での電気抵抗測定を行った。これによりYb2Ni12P7が磁場に鈍感な非フェルミ液体状態であることを明らかにした。本研究では,価数揺らぎを媒介とする超伝導や新奇現象の探索とその発現機構の詳細と普遍性を明らかにすることを目的として,純良試料を用いた圧力下精密測定を行う。主に(1) CePtSi2とその関連物質, (2) CePtSi2と同じ構造を持ち希土類を置換したRPtSi2 (RPt2Si), (3)新規Yb化合物における圧力誘起価数揺らぎに着目している。今年度は(1)既存のCePtSi2の大型試料および元素置換系試料の作成, (2) CePtSi2と同じ結晶構造を持ち,他の希土類における価数揺らぎ超伝導の探索のためRPtSi2および,PtとSiのサイトが入れ替わった系RPt2Si (R: Sm, Eu, Tm, Yb)を作成(3) Yb化合物の探索を計画していた。難航し次年度への課題となる部分もあるが,概ね順調に進展していると言える。以下に要約する。(1)CePtSi2の大型試料作成に成功し,これまで行えなかったゼーベック係数測定などを行うことに成功した。(2)CePtSi2と同じ結晶構造を持つCePt2SiやSmPt2Siを作成した。CePt2Siに関しては圧力下電気抵抗測定を行った。一方,TmPt2Siの結晶作成には成功したもの,結晶構造が変化していることが明らかになった。(3)Yb2T12P7(T=遷移金属)の物質探索を行い,T=Ruの単結晶育成に成功した。Ce, SmやYbなどの希土類を含む化合物や遷移金属化合物において『価数揺らぎ』を媒介とした新しい型の超伝導や非フェルミ液体状態の実現が提唱されている。申請者らは2009年に価数の揺らぎを媒介している可能性がある圧力誘起超伝導をCePtSi2において発見した。他にもCeCu2Si2等がこの超伝導の候補であるが,実例が少なく普遍的な考察はされていない。本研究では価数揺らぎによる新奇超伝導や状態,現象の探索を目的として,圧力や元素置換によってこれらが実現する可能性がある化合物を探索し,その物性を測定することにより,価数揺らぎに関する諸物性の普遍性を明らかにすることを目的としている。今年度の主な成果を以下に要約する。(1)CePtSi2に対して負の圧力効果を導入したCePt(Si, Ge)に対してゼーベック係数Sを測定した。その結果電子比熱係数に比例すると考えられるS/Tの大きさが格子定数増大にともなって減少し,量子臨界点から遠ざかっていることを示唆した。また,ゼーベック係数がこの系の電子状態の解明に有効であることが明らかになった。(2)CePtGe2に関して低温でフェリ磁性を示すという報告と,強磁性を示すという報告があった。

多結晶および単結晶試料を作成しこの物質がフェリ磁性(反強磁性)であるということを明らかにした。また,圧力降下を期待したSi置換を試みたが僅かしか置換されないことが明らかになった。しかし,この際,転移温度が上昇することも明らかになった。(3)遷移金属α-Mn,遷移金属硫化物TaS2に対して圧力下ゼーベック係数測定などを行った。価数の変化に関する情報は得られなかったが,秩序温度の制御に成功した。本研究は価数揺らぎによる新奇超伝導や状態,現象の探索を目的として,その可能性のある希土類化合物を探索,作成しその諸物性を測定することにより,価数揺らぎを媒介とする現象の普遍性を明らかにすることを目的としている。本年度は新たにCe化合物を作成に成功した。また,これらの系に対してゼーベック係数測定が有効であることが明らかになり次年度に向けた指針ができた。一方,Yb化合物にかんしては難航している。また,本年度は遷移金属化合物にも着目した。本研究では価数などの揺らぎを媒介とした新奇の超伝導や状態の探索とその起源の解明のため,圧力や元素置換によってこれらが実現する可能性がある化合物を探索し,その物性を測定を行った。以下に主な結果を示す。(1)圧力誘起超伝導体CePtSi2単結晶試料を用いた測定から詳細な圧力相図を作成した。(2) CePtGe2多結晶および単結晶試料を作成し3.8 Kで反強磁性転移をすることを明らかにした。(3) SmPtSi2多結晶および多結晶および単結晶試料を作成し,2段階の秩序を示すことを明らかにした。非BCS超伝導においてクーパー対の引力の起源として『スピン揺らぎ』が知られている。一方,Ce, SmやYbなどの希土類を含む化合物や遷移金属化合物において『価数揺らぎ』を媒介とした新しい型の超伝導や非フェルミ液体状態の実現が提唱されており,CeCu2Si2における高圧力側の超伝導や申請者らが発見したCePtSi2における圧力誘起超伝導もその候補である。しかしがながら,これらの実例は少なく普遍的な考察が不足している。本研究では価数揺らぎによる新奇超伝導や状態,現象の探索を目的として,圧力や元素置換によってこれらが実現する可能性がある化合物を探索し,その物性を測定することにより,価数揺らぎに関する諸物性の普遍性を明らかにすることを目的としている。今年度の主な成果を以下に要約する。(1)2つのCeの結晶学的サイトを持つCePtGe2は低温でフェリ磁性を示すという報告と,強磁性を示すという報告があったが,純良単結晶試料を作成し,基礎物性測定を行い,反強磁性体であることを明らかにした。また,ゼーベック効果等の実験結果から通常の反強磁性状態はは異なっており,2サイトCeの存在が影響していることを明らかにした。(2)SmPtSi2は昨年度までの研究によって低温で二段階の相転移を示すことがわかっていたが,その詳細は明らかになっていなかった。多結晶試料に対するゼーベック係数および,単結晶試料に対する磁化,比熱,電気抵抗測定から,密度波および反強磁性に近い状態であることを明らかにした。28年度は27年度に引き続き,価数揺らぎを示す可能性のある物質探索および作成した多結晶試料の純良化,そして単結晶化を行う。得られた結晶に対する基礎物性測定の結果をフィードバックし,要点を絞った試料育成を行う。純良化のため,主にフラックス法による育成を行うが,ブリッジマン法,チョクラルスキー法,気相反応法等を駆使する。
麝香水抽出画分の抗-HIV作用の解析

HIVがAIDSの原因ウイルスとして発見されて以来、AIDSワクチン開発・抗-HIV薬開発に莫大な努力が注ぎ込まれてきた。しかし、AIDSワクチンは現在のところ全く目処が立たず、抗-HIV薬として使用されてきたAZT等RT阻害剤にも、臨床効果・延命効果に限界が指摘されている。従って、新しい抗-HIV物質の探索は急務の課題となっている。本研究では、検索の網から漏れている動物由来漢方薬に着目して抗-HIV活性を調査した結果、麝香水抽出画分に強い抗-HIV作用を見出した。即ち、麝香をH_2Oに懸濁して4°C、24時間抽出した水溶性画分(MWE;musk water extract)を乾燥重量にして200μg/mlの細胞毒性を示さない濃度で添加すると、HIV-1高感受性MT-4感染細胞のHIV-1抗原発現、巨細胞形成、感染による細胞死がほぼ完全に抑制された。このようなMWEの抗-HIV効果は、細胞を前以てMWEで処理しても認められず、感染前のHIV-1をMWEで処理した場合に認められたことから、HIV-1に対するMWEの直接阻害作用が示唆された。一方、MT-4細胞が感染後48時間以内に100%HIV-1抗原陽性になり、56日後には細胞が死滅してしまう感染価(moi=0.0001)でHIV-1を感染させ、60時間目にMWEを添加したところ、細胞死の進行が停止したのみならず、速やかに細胞は増殖を再開した。生存細胞がほとんど見出されない状態で添加した場合にも、ここから細胞は速やかに増殖してきた。復活してきたMT-4細胞を蛍光抗体法、ウエスタンブロット法で解析した結果、100%HIV-1抗原陽性であった。しかし、Env及びGag蛋白の発現には異常が生じていた。なお、AZTにはこのような効果は全く認められなかった。以上の結果は、MWEがHIVに感染してしまったCD4Tリンパ球の死滅・減少を阻止することのできる全く新しい抗-HIV作用を持つことを示している。しかし、麝香を分泌する麝香ジカは国際保護条令対象動物であり、研究の進展のためには原料の入手という大きな難問を解決しなければならない。