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ポケット上皮細胞骨格およびポケット上皮内浸潤細胞に関する免疫電顕的研究

辺縁性歯周炎の発症に先立って歯周組織の微細な破壊が起こり、やがては進行した歯周炎として臨床的にとらえられるようになることは想像に難くない。そして歯周炎の最大の原因がプラ-クないしプラ-ク由来の因子であるという現在の見解からすれば、最初に破壊が生じるのはプラ-クに最も近接して存在する上皮組織であろう。そこで本研究では、上皮組織の破壊、とくにその細胞外基質の破壊を臨床症状と対比して免疫組織学的に追及した。そして今回は細胞外基質のなかでもとくに、基底膜を構成するタイプIVコラ-ゲン、ラミニン、フィブロネクチンについての検索を行った。材料は歯周外科処置時に採取した歯周炎罹患歯肉と臨床的健康歯肉を用いた。通法にしたがって凍結切片を作製し、ウサギ抗タイプIVコラ-ゲン、抗ラミニン、抗フィブロネクチンを一次抗体二次抗体にFITC標識ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンを用いた蛍光顕微鏡観察を行った。さらに、後述する基底膜の断裂の存在する部位とそうでない部位について、単位面積あたりの浸潤細胞数を測定した。その結果、タイプIVコラ-ゲンおよびラミニンともに臨床的健康歯肉の基底膜に連続して観察され、フィブロネクチンも基底膜から上皮下結合組織に広く観察された。しかし上皮下結合組織への炎症性細胞浸潤が強くなるにつれて、フィブロネクチンが消失し、ついで基底膜のタイプIVコラ-ゲンとラミニンの連続性が失われた。この基底膜の断裂のある部位とない部位において、上皮下結合組織ならびに上皮組織内へ浸潤した炎症性細胞数に相違があるか否かを検定してみると、好中球が最も有意差を示しており、とくに上皮内に浸潤した好中球の数にその傾向が強かった。以上の結果は、基底膜の断裂という歯周組織の微細な破壊に、好中球がなんらかの関連を有することを強く示唆していると考えられた。本年度は、まず外科処置時に採取した歯周炎罹患歯肉および正常歯肉をドライアイスにて凍結し、OCT compoundに包埋した。次に6μmの連続した凍結切片を作成し、1枚にHE染色を行い、細胞浸潤程度により(-)・(+)・(++)の3段階にわけた。残りの切片には間接蛍光抗体法を用いた免疫組織染色を施した。検索に使用した1次抗体はウサギ抗ヒトIV型コラ-ゲン(C IV)、ラミニン(LM)、フィブロネクチン(FN)である。通法に従って1次抗体と反応させた後、FITCで標識したヤギ抗ウサギ全血清と反応させ、蛍光顕微鏡で観察した。得られた結果は以下の如くである。1)臨床的健康歯肉:プロ-ビングによる歯肉溝の深さが12mmの正常な歯肉溝上皮は45層の上皮細胞からなり、上皮脚の発達はなかった。上皮下の結合組織中の細胞浸潤の程度は(-)であった。蛍光抗体法によりLMとC IVは、上皮基底膜中で連続した線状の染色性を示した。FNは、結合織線維の走行に沿って認められ、結合組織深部まで一様に強陽性であった。2)歯肉炎・歯周炎罹患歯肉:ポケット上皮は上皮脚が発達し、一部で増殖や潰瘍もみられた。上皮下の細胞浸潤(-)のものでは、LM・C IV・FNとも健康歯肉のそれと同様に染色された。

(+)のものではLM・C IVは特にポケット底部で薄くかつ分断像を呈し、上皮脚基底膜では部分的あるいは全体的に欠如したり、一部では肥厚像もみられた。(++)のものではその程度が増し、特に上皮内への細胞浸潤が激しいところでは欠如していることが多かった。FNは浸潤細胞の分布や量に一致して染色の強さが減弱し、結合織線維の破壊も明瞭であった。以上の結果は、歯周炎罹患歯肉においてC IVやLM、FNの破壊が生じることを示唆するものと考えられた。今後さらに、その程度が辺縁性歯周炎の病態の目安としえるものが追求する方針である。辺縁性歯周炎の発症に先立って歯周組織の微細な破壊が起こり、やがては進行した歯周炎として臨床的にとらえられるようになることは想像に難くない。そして歯周炎の最大の原因がプラ-クないしプラ-ク由来の因子であるという現在の見解からすれば、最初に破壊が生じるのは接合上皮部であり、歯周炎の進行時にはポケット上皮部であろう。そこで本研究では、ポケット上皮の破壊、とくにその細胞外物質の破壊を臨床症状と対比して免疫組織学的に追及した。そして今回は細胞外物質のなかでもとくに、基底膜を構成するタイプIVコラ-ゲン、ラミニン、フィブロネクチンについての検索を行った。材料は歯周外科処置時に採取した歯周炎罹患歯肉と臨床的健康歯肉を用いた。通法にしたがって凍結切片を作製し、ウサギ抗タイプIVコラ-ゲン、抗ラミニン、抗フィブロネクチンを一次抗体、二次抗体にFITC標識ヤギ抗ウサギ免疫グロブリンを用いた蛍光顕微鏡観察を行った。さらに、後述する基底膜の断裂の存在する部位とそうでない部位について、単位面積あたりの浸潤細胞数を測定した。その結果、タイプIVコラ-ゲンおよびラミニンともに臨床的健康歯肉のポケット上皮細胞基底膜に連度して観察され、フィブロネクチンも基底膜から上皮下結合組織に広く観察された。しかし上皮下結合組織への炎症性細胞浸潤が強くなるとフィブロネクチンは消失し、ついで基底膜のタイプIVコラ-ゲンとラミニンの連続性が失われた。この基底膜の断裂のある部位とない部位において、上皮下結合組織ならびに上皮組織内へ浸潤した炎症性細胞数に相違があるか否かを検定してみると、好中球が最も有意差を示しており、とくに上皮内に浸潤した好中球の数にその傾向が強かった。以上の結果は、基底膜の断裂という歯周組織の微細な破壊に、好中球がなんらかの関連を有することを強く示唆していると考えられた。
骨異常と片眼性異常が認められたアスパラギン酸グルタミン酸輸送体欠損マウス

アスパラギン酸グルタミン酸輸送体欠損マウス(citrin^<-/->, aralar^<+/->マウス)の体重増加は、citrin^<-/->マウスと比較すると、緩やかであり、成長障害が認められた。また、骨密度はcitrin^<-/->, aralar^<+/->マウスで低かった。Citrin^<-/->, aralar^<+/->マウスに糖質を負荷したが、成人発症II型シトルリン血症モデルマウスであるcitrin^<-/->, mGPDH^<-/->マウスと異なり、血中アンモニア濃度に変化はなかった。Citrin^<-/->, aralar^<+/->マウスにおいて片眼性の異常が観察された個体について、約一年間観察を続けたが両眼性の異常が出現した個体は観察されなかった。本年度は、骨異常と片眼性異常(右目)を検討するためのアスパラギン酸・グルタミン酸輸送体欠損マウス、citrin^<-/->, aralar^<+/->マウスコロニーの確立を第一におこなった。しかしながら、動物飼育施設の改修工事に伴う飼育制限のため、当初予定の交配数を確保できなかった。そのため、コロニーの確立が遅れているが、得られたノックアウトマウスを用いて以下の結果を得た。1)Citrin遺伝子の破壊に用いた挿入遺伝子断片により、ノックアウトマウス(citrin^<-/->)ではcitrinと同一パターンでβ-galactosidaseが発現するようになっている。肝臓でのβ-galactosidase活性は、遺伝子破壊の程度に相関しており、ノックアウトマウスで最も高く、ヘテロマウスでその半分程度であった。また、ノックアウトマウスの肝小葉において、中心静脈周囲と中間部に存在する肝細胞内にミミズ状の酵素活性の陽性反応物が、数多く観察された。2)Citrin^<-/->, aralar^<+/->マウスは17匹得られたが、15匹が離乳前に死亡した。3)Citrin^<-/->, aralar^<+/->マウスの体重は、citrin^<-/->, aralar^<+/+>マウスと比べ有意に低かった。4)片眼性異常(右目)を示したcitrin^<-/->, aralar^<+/->マウスの網膜の神経節細胞層に細胞の欠損部位があり、左側の視索が右側に比べて萎縮していた。本年度は、骨異常と片眼性異常(右目)を検討するためのアスパラギン酸・グルタミン酸輸送体欠損マウス、citrin^<-/->,aralar^<+/->マウスコロニーの充実を計画した、しかしながら、マウス飼育施設内での感染事故により交配が制限されたため、当初予定の交配数を確保できなかった。得られたノックアウトマウスを用いて以下の結果を得た。1Citrinノックアウトマウス(citrin^<-/->)より、線維芽細胞株を樹立した。野生型のマウス線維芽細膿株とともに、線維芽細胞の増殖に対するグルコース濃度やピルビン酸の影響を検討している。2Citrin^<-/->,aralar^<+/->マウスは15匹得られたが、3匹が離乳前に死亡した。3Citrin^<-/->,aralar^<+/->マウスの3匹で片眼性異常が認められた。そのうち、一匹では左目の異常であった。今までに得られたcitrin^<-/->,aralar^<+/->マウスのうち、片眼性異常を示したマウスを一年以上観察しているが、両眼性の異常に発展したものは、観察されなかった。アスパラギン酸グルタミン酸輸送体は肝型のcitrinと脳型のaralarが知られている。Citrinの欠損は高アンモニア血症である成人発症II型シトルリン血症の原因となる。一方、aralarの欠損は、マウスで中枢神経系の脱ミエリン化と三週間程度の寿命を特徴とする表現形を示す。マウスモデルにおいて、citrin^<+/->あるいはaralar^<+/->は、野生型と同様の表現形を示す。最近になってaralarの変異を持つ、痙攣を伴った低ミエリン症の患者が報告されているが、発症機序など不明な点が多く残されている。Aralar^<-/->マウスは生後短期間で死亡するため、成長後の表現形検索ができない。

そこで、aralar欠損による表現形変化がマイルドに発現することを期待し、citrin^<-/->,aralar^<+/->マウスを作製した後、成長後の表現形検索を行い、新たなモデル動物の基盤を確立することを目的とし、以下の結果を得た。1.アスパラギン酸グルタミン酸輸送体欠損マウス(citrin-/-,aralar^<+/->マウス)の体重増加は、citrin^<-/->マウスと比較すると、緩やかであり、成長障害が認められた。また、骨密度はcitrin^<-/->,aralar^<+/->マウスで低かった。2. Citrin^<-/->,aralar^<+/->マウスに糖質を負荷したが、成人発症II型シトルリン血症モデルマウスであるcitrin^<-/->,mGPDH^<-/->マウスと異なり、血中アンモニア濃度に変化はなかった。3. Citrin^<-/->,aralar^<+/->マウスにおいて片眼性の異常が観察された個体について、約一年間観察を続けたが両眼性の異常が出現した個体は観察されなかった。
タンパク質工学によるアミノ酸脱水素酵素の基質特異性の変換

アミノ酸脱水素酵素は、アミノ酸代謝と有機酸代謝の転換点に位置し生理的に重要な役割を果たしている。本研究では、Bacillus stearothermophilusのロイシン脱水素酵素(LeuDH)、Thermoactinomyces intermediusのフェニルアラニン脱水素酵素(PheDH)を対象に、その構造比較に基づき、基質結合ポケット内に存在して基質認識に重要な役割を果たすと考えられるアミノ酸残基を部位特異的に置換し、基質特異性の変換を試みた。まず、LeuDHの基質結合ポケットに存在すると考えられるAla-113をPheDHの対応するGlyに置換してポケット体積を拡大し、Pheに作用できるように改変を試みた。また、同じくポケット内に存在すると予想される、Val-291をPheDHの対応するLeuに置換したダブルミュータントも同時に作製した。両変異型酵素とも脱アミノ反応の反応速度は野性型LeuDHの5%以下にまで低下したが、予想通りPheに対してAla-113/Glyで30%、Ala-113/Gly・Val-291/Leuでは4%の相対活性で反応できるようになった。従ってLeuDHはAla-113のメチル基の立体障害によりPheDHよりポケットが狭く、Pheに作用できないことが明らかになった。次に、LeuDHのポケットの底に存在すると考えられる2つの疎水性残基、Leu-40、Val-294に変異を導入し基質特異性の変換を試みた。それぞれをAspおよびSerに置換し、イオン結合および水素結合により塩基性アミノ酸を結合できるように改変することを試みると、反応速度は野生型酵素の1.6%と低い値だが、野性型LeuDHの基質とならない塩基性アミノ酸のLysに作用できるようになった。またこれらLeu-40、Val-294を、それぞれLys、Serに置換したところ、反応速度はさらに低下したが、逆に酸性アミノ酸であるGluに作用するようになった。従ってLeuDHはそのポケットの疎水性により、疎水性アミノ酸に特異的であることが明らかになった。
酢酸耐性機構の分子生物学的研究

酢酸菌はエタノールを酸化して酢酸を高濃度に培地中に蓄積する。そのため、他の細菌にみられない高い酢酸耐性能を有している。この酢酸耐性能は、ヨーロッパで酢酸発酵に用いられる高度酢酸耐性菌(15%もの蓄積)と日本国内で用いられる中度酢酸耐性菌(5-6%の蓄積)で大きく異なっている。本研究では、この高度酢酸耐性菌と中度酢酸耐性菌の酢酸耐性機構を比較研究し、酢酸菌の酢酸耐性機構と関与する遺伝子を明らかにするとともに、この酢酸耐性と酢酸生成に関与するアルコール脱水素酵素(ADH)との関係を明らかにすることを目的として行われた。1.高度酢酸耐性菌と中度酢酸性菌のADHの比較:前年度、3種類の高度酢酸耐性菌の細胞膜からADHを分離精製し機能解析を行った結果、これらの酵素は中度酢酸耐性菌の酵素とその性質に大きな違いは見られなかったが、酢酸に対して高い安定性を示すこと、その発現量が大幅に高くなっていることが明らかとなった。そこで、今回これらの発現量をRT-PCRにより解析したが、その発現に大きな上昇は見られなれなかったため、高度耐性菌のADHはmRNAの安定性が中度耐性菌のそれと比べて高いものと判断された。2.高度酢酸耐性菌にみられる95KDaタンパク質:前年度に、高度酢酸耐性菌の酢酸発酵条件下で酢酸濃度の上昇とともに増加していることが明らかとなった95kDaタンパク質のさらなる解析を行った。膜画分をショ糖密度勾配遠心で解析したところ、このタンパク質は細胞質膜に局在することが明らかとなった。また、そのタンパク質を特定するため、N末端アミノ酸配列およびCnBr分解ペプチドのアミノ酸配列分析を行った。その結果、一部のペプチドに多剤耐性因子に相同性を示すものが見つかった。今後このタンパク質の機能解析をさらにすすめる予定である。本研究では、この高度酢酸耐性菌と中度酢酸耐性菌の酢酸耐性機構を比較研究し、酢酸菌の酢酸耐性機構と関与する遺伝子を明らかにするとともに、この酢酸耐性と酢酸生成に関与するアルコール脱水素酵素(ADH)との関係を明らかにすることを目的として行われている。1.3種類の高度酢酸耐性菌の細胞膜からADHを分離精製し、それらの機能を解析した。その結果、これらの酵素は、中度酢酸耐性菌の酵素と比べ、その性質に大きな違いは見られないが、酢酸に対して非常に高い安定性を示すことが明らかとなった。2.高度酢酸耐性菌は中度耐性菌に比べ非常に高いADH活性を有することが明らかとなったが、精製酵素の比活性においては違いが見られず、高度耐性菌ではADHの発現量が大幅に高くなっていることが明らかとなった。3.高度酢酸耐性菌の酢酸耐性に関与するADH以外の遺伝子を特定するため、トランスポゾン変異法の検討を行い、pCM639を用いると、トランスポゾンが比較的高い頻度で高度耐性菌の染色体に挿入されることが明らかとなった。今後、この手法を用いて、高度酢酸耐性菌より酢酸感受性株を分離し、変異の入った遺伝子を検索する予定である。4.高度酢酸耐性菌の酢酸発酵条件下で、それらの細胞質膜タンパク質の解析を行ったところ、95kDaタンパク質が酢酸濃度の上昇とともに増加していることが明らかとなった。このタンパク質のN末端アミノ酸解析からは既知のタンパク質は見つからなかったが、今後このタンパク質の機能解析を行って行く予定である。
フランス革命期のバンジャマン・コンスタンの政治理論

平成20年度は、19世紀の政治家・思想家バンジャマン・コンスタンの思想において政治論と宗教諭がどのような関係にあるのかを検討した。これを解明することは、現在、コンスタン研究の最大の課題の一つであり、また18世紀啓蒙とフランス革命との関係という大問題を考える上でも、非常に大切なものである。筆者は年度途中で一定の見通しを得たため、博士論文の執筆作業に入った(継続中)。政治論については、平成19年度以来、フランス革命による内戦を克服するためにナポレオンがすすめた強権政治にコンスタンがどのように対抗したのかを検討してきた。当初は、軍事法廷の活用、陪審制・請願権の制限といったナポレオン政権の政策に対するコンスタンの批判を検討していたが、研究を進めていく中でコンスタンがこれらの問題を、地方分権を基礎とする司法システムの確立、市民の政治参加による代議制の欠陥の矯正といった、より広い文脈の中で論じていることが分かった。そこで究極的に問題にされているのは、権力からの自由を求める市民が、同時に、自由な体制の維持に不可欠の市民の義務(選挙、陪審員、兵役など)を誠実に果たすためには、いかなるモラルを持つ必要があるのかということである。宗教論については、平成19年度以来、功利主義に基づいて宗教の不用論を唱えたり、宗教を秩序維持のための道具とみなしたりする議論に対して、コンスタンが批判を加え、人間には宗教感情が本性的に備わっていると主張した点を検討してきた。この主張がコンスタンの政治論とどのように連関するのか、容易に掴めなかったが、年度の途中で、彼が最終的には宗教感情とモラルの結合の必要を説いていること、そして、それがいかなる条件(宗教形式、文明、商業、政治体制)の下で可能になるのかを問題にしていることが分かった。その結果、政治論と宗教論をモラルという概念によって統一的に理解する目処がたった。19世紀初頭、フランス革命による内戦を克服するためにナポレオンがすすめた強権政治に対して、当時の代表的政治家バンジャマン・コンスタンがどのように対抗したかを検討した。まず、軍事法廷の活用、陪審員制・請願権の制限といったナポレオン政権の政策に対するコンスタンの批判を検討した。次に、共和政から帝政への移行に対する彼の批判を検討した。いずれの作業も、コンスタンがナポレオン政権期に執筆した草稿類の分析および同時代の資料の検討を必要とするが、日本では入手不可能であった。それゆえ、フランスおよびスイスに渡航し、現地の図書館で文献の収集・読解に研究時間の大半を費やした。またスイスでは、現地の多くのコンスタン研究者と交流し、助言を得た(他方、予定していたイタリアでの文献収集は、時間の不足ゆえに断念した)。以上の作業は彼の政治論に焦点を当てたものであるが、そこから、彼の政治論と宗教論の統一的理解、という今後のコンスタン研究の中心課題について見通しを得た。具体的には、自分がこれまで検討してきた、人民主権論と「権力の人格化」(端的にはナポレオン)の関係についての問題が、彼の宗教論における人格神(端的にはキリスト教)に対する両義的な態度とリンクしているということである。その結果、当初の計画を少し修正し、宗教論と政治論の関係について検討した。先行研究において十分に検討されてこなかったこの問題を掘り下げることにより、コンスタンのリベラリズムをより包括的に検討することが可能になる。
高エネルギー分解能ナノスケール軟X線発光分光系の試作研究

1.測定エネルギー領域400-1200eVにおいて、従来の回折格子を用いた分光系の2倍の分散能を持つ分光系をデザインした。この分光系を実現させるため、オリジナルの不当間隔ラミナー回折格子の製作を行った。この回折格子と従来の回折格子の併用を可能とするため、検出器の移動機構を組み込んだ分光器チャンバーの設計・製作を行った。2.軟X線発光分光法の問題点は発光効率の低さである。この欠点を少しでも補い、X線検出効率を向上させるため、全反射を利用したX線用の集光ミラーの設計・製作を行った。集光率を向上させるため、楕円柱面の曲率を持ったミラーをデザインした。デザインした曲率を有する金属製の下地にWスパッタ膜をつけたマイカ薄膜を固定する方法を採用した。この結果、ミラーなしに比べて約4倍のX線強度を得られるようになった。3.ミラーを組み込んだ新しい分光器で新しい回折格子を用い、CuのL発光スペクトル(900eV)の測定を行った。通常の電子顕微鏡用のX線分析器ではエネルギー分解能が100eV程度以上と悪いために1つのL発光ピークしか観測できないが、本研究で作製した分光器では、4つのL発光ピーク(Lα、Lβ、L1、Lη)の観測に成功した。これにより、開発した分光器が十分なエネルギー分解能とS/Nを有していることが実証された。4.開発した分光器を用い、ボロンナノベルト一本からのボロンK発光スペクトルの測定を初めて行い、βボロンのボロンK発光スペクトルとの比較を行った。その結果、価電子帯の高結合エネルギー領域に新たな状態密度の構造が存在することを明らかにした。1.エネルギー分解能向上には検出立体角の向上が必要不可欠であることから、全反射を利用したX線集光鏡の設計・製作をおこなった。設計上は検出立体角が2倍弱まで向上する予定であり、来年度装着テストを行う。2.エネルギー分解能向上には、回折格子の分散量だけでなく回折効率も向上させる必要がある。そこで、従来の機械的な回折格子作製法よりも精度よい、レーザー干渉と半導体デバイス作製技術を組み合わせた手法で回折格子を作製した。その新しい回折格子が装着できるように分光器の改造を行った。3.新しい高精度回折格子と従来の回折格子との比較を行った結果、新しい高精度回折格子は250eV以上の高エネルギー領域で従来の5倍以上の回折効率を持つことを実験的に明らかにした。このことから、本研究の目的達成には、この新しい高精度な手法を用いて作製した回折格子を用いる必要性が明確になった。「ナノスケール分光法」の有効性を先端機能材料等の局所電磁状態解析法へと展開させることを目的とし、本年度は以下の研究を行った。1.13年度に作製した回折格子I(250eV以上の高エネルギー領域で、従来の5倍以上の回折効率を有する)の分解能テストを行い、従来の市販品との比較を行った。その結果、本研究課題で制作した回折格子は、従来品よりもノイズが少ないことがわかり、測定のS/Nの向上がはかれ、研究目的の達成のために、この高精度の回折格子を用いる必要性が明確となった。2.市販の試料ホルダーでは異方性測定がおこなえないため、専用の試料ホルダーを設計し、附属の工場で作製した。このホルダーを用い、異方性物質である六法晶BN、グラファイトのスペクトルの角度依存性測定に成功した。3.分光可能なエネルギー領域が400-1200eV

程度の斜入射平面結像型回折格子II型の設計を専門家との強力の下に行った。回折格子から検出器までの距離を約2倍ととることで、従来の市販品よりも約2倍の高いエネルギー分解能が実現できる。デザインを完成させた。そして、このデザインに基づき、回折格子を製作した。4.本年度製作した回折格子IIと前年度作製した回折格子Iを併用するためには、新たに分光器本体の設計・製作する必要があるため、新たに分光器の開発も行った。製作した分光器に、回折格子Iと回折格子IIを装着し、テスト実験を行った結果、設計どおりのエネルギー範囲がカバーできることを確認した。1.14年度に作製した400-1200eVの測定範囲をもつ不当間隔ラミナー回折格子を組み込むための新しい分光器チャンバーの設計・製作を附属工場にて行った.従来の回折格子と併用を可能とするため、検出器の移動機構を新規に設計・製作して組み込んだ.排気系の排気速度も向上させる改造を行った結果、これまでよりも一桁真空度を向上させることが出来た.2.検出効率を向上させるため、全反射を利用したX線用の集光ミラーを新たに設計・製作を行った.集光率を向上させるため、楕円柱面の曲率を持ったミラーをデザインした.希望の曲率を有した金属製の下地の上にWスパッタ膜をつけたマイカ薄膜を固定する方法を採用した.この結果、ミラーなしに比べて約4倍のX線強度を得られるようになった.3.ミラーを組み込んだ新しい分光器で新しい回折格子を用い、CuのL発光スペクトル(900eV)の測定を行った.通常の電子顕微鏡用のX線分析器ではエネルギー分解能が100eV程度以上と悪いために1つのL発光ピークしか観測できないが、本研究で作製した分光器では、4つのL発光ピーク(Lα、Lβ、L1、Lη)の観測に成功した.これにより、開発した分光器が十分なエネルギー分解能とS/Nを有していることが実証された.4.開発した分光器を用いボロンナノワイヤー一本からのボロンK発光スペクトルの測定を初めて行い、βボロンのボロンK発光スペクトルとの比較を行った.その結果、価電子帯の高結合エネルギー領域に新たな状態密度の構造が存在することを明らかにした.
触媒的不斉炭素-炭素結合生成反応を基盤とした有用生物活性物質の合成研究

先に我々は、ヘック反応を触媒的不斉合成に初めて適用し、シス-デカリン誘導体を40%50%eeで合成することに成功した。今回、本反応系の改良を徹底的に行い、下記に記す結果を得た。さらに、不斉ヘック反応がポリシクロペンタノイドの触媒的不斉合成にも極めて有効であることが分り、カプネレノール5及び6の触媒的不斉全合成にも成功した。一方、pi-アリルパラジウム錯体を活用する触媒的不斉合成では、デカリン誘導体7を83%eeで得る方法を確立した。又、Zr(o-t-Bu)_4が有効な塩基として機能する事実を見い出し、光学活性前周期遷移金属アルコシドや希土類アルコシドを活用する触媒的不斉合成法開発の糸口を得た。触媒的不斉炭素一炭素結合生成反応を基盤とした有用生物活性物質の合成を検討した。基本反応としては、不斉ヘック反応の開発、πーアリルパラジウムの化学に集中的検討を加えた。標的生理活性物質としては、海洋天然物であるカプネランアルコ-ル、強力な昆虫摂食阻害能を有するアザディラクチンを選択した。不斉ヘック反応の開発には多大の時間を要したが、以下に記すごとく1__→2__の基本反応の開発、3__→4__でのカプネランアルコ-ルの触媒的不斉全合成に成功した。又、下記の5__→6__は、不斉πーアリルパラジウムの化学を駆使したアザディラクチン合成中間体の触媒的不斉合成を示している。6__からアザディラクチンへの変換は、現在鎖意検討中である。さらに、不斉ヘック反応がポリシクロペンタノイドの触媒的不斉合成にも極めて有効であることが分り、カプネレノ-ル5__及び6__の触媒的不斉全合成にも成功した。一方、πーアリルパラジウム錯体を活用する触媒的不斉合成では、デカリン誘導体7__を83%eeで得る方法を確立した。又、Zr(oーtーBu)_4が有効な塩基として機能する事実を見い出し、光学活性前周期遷移金属アルコシドや希土類アルコシドを活用する触媒的不斉合成法開発の糸口を得た。
ジャポニスムとモダニズム―展覧会とエスニック・マイノリティ作家たちの挑戦

2018年度は、大英帝国博物館の学芸員であった詩人のローレンス・ビニヨンが野口米次郎の日本美術論にどのように影響を与えたかについての調査を中心に研究を進めた。野口の「日本美術」への関心が生まれた最初のきっかけとして、1902年1903年のロンドン滞在があげられる。ビニヨンはここで大きな役割を果たしたと考えらている。また野口の1913年1914年の英国講演時にも交流があった。しかし野口は1915年以降に出版する美術論のいずれもビニヨンには捧げていないばかりか1929年のビニヨン来日時に交流があったかどうかも記録が見つからないほどで、彼等の関係の深さには少々疑問が残る。浮世絵論や光琳論については、むしろビニヨン以上にチャールズ・リケッツとシャノンからの影響がありそうである。また野口の美術論には岡倉天心からの影響は顕著である。ただし野口の比較文化的な論にはビニヨンの論調との類似性がある。また詩的な影響も否めない。この調査の過程でビニヨンが交流した日本人美術史研究者や画家、またビニヨンと同時期にイギリスで浮世絵論を著したエドワード・ストレンジ、アメリカのアーネスト・フェノロサ他、アメリカ人日本美術愛好家アーサー・デヴィソン・フィッケなどの文献を調査し、さらに永井荷風など他の日本人文士の文献調査も行った。野口とビニヨンの関係についてはハワイの国際学会で口頭発表を行った。また野口の英詩については『現代詩手帖』の特集号に記事を書き、またアメリカで野口とエズラ・パウンドについて研究をする伯谷嘉信氏の論文の翻訳を行った。国際文学美術館学会でも発表し、海外での東洋美術受容の調査他、日本の仏教美術や琳派、浮世絵、柳宗悦の民藝運動との関連を中心とした調査も国内外で行った。文献調査は順調に進んでいるが、19世紀の英国の雑誌や新聞記事の調査には思ったよりも時間がかかっている。またプリミティヴィズム関係の調査は初年度は着手できなかったが、今後はさらにアフリカ美術受容の観点ともあわせながら、文学者による美術論の問題を考えていきたいと思っている。今後さらに国内および海外の美術館、博物館での調査を進める。国内では、東京都立図書館や国会図書館、大阪府立図書館などで資料を検索しているが、永井荷風や白樺派の文学者など同時代の作家たちへの目配りも今後さらに行っていくつもりである。また野口はタゴールや魯迅などとも交流があったが、インドや中国、東南アジアとの関係や仏教美術の関係も非常に重要であることがわかってきたので、寺院や仏教遺跡での現地調査もさらに進め、野口や岡倉天心がどのように世界の中での日本人を位置づけようとしたのか考えていきたい。トランスナショナルな作家たちの活躍を現代の世界文学理論、グローバル文学理論との対応および多和田葉子のような世界で活躍する現代アジア系作家の視点も視野に入れて分析を行っていきたい。

また野口はタゴールや魯迅などとも交流があったが、インドや中国、東南アジアとの関係や仏教美術の関係も非常に重要であることがわかってきたので、寺院や仏教遺跡での現地調査もさらに進め、野口や岡倉天心がどのように世界の中での日本人を位置づけようとしたのか考えていきたい。トランスナショナルな作家たちの活躍を現代の世界文学理論、グローバル文学理論との対応および多和田葉子のような世界で活躍する現代アジア系作家の視点も視野に入れて分析を行っていきたい。
マイクロ波プロセスを応用した機能性ガラス多孔材の創製

本研究では、水熱反応を用いて作製した貴金属添加含水ガラスに、マイクロ波照射を行うことで、急速加熱発泡を促し、貴金属微粒子担持多孔質ガラスの作製を企図した。そこで、貴金属無添加の含水ガラスのマイクロ波加熱発泡挙動を調査するとともに、銀添加含水ガラスを作製した後にマイクロ波加熱を施すことで、銀微粒子を分散担持したガラス多孔材の作製を試みた。(1)1015mass%の水を含有したSiO2-Na2O-B2O3ガラスを作製し、2.45GHz、0.5kWのマイクロ波加熱装置を用いて、マイクロ波照射を行った。120150°Cにて各試料は膨張しはじめ、速やかな発泡を示した。水含有量が大きいほど急速に昇温するとともに、大きく膨張する傾向にあった。ガラス中の気孔径は10100μmであり、マイクロ波照射前の含水量により制御可能であった。(2)SiO2-Na2O-B2O3ガラスに酸化銀粉末を混合した後に水熱反応を施すことで、銀添加含水ガラスを作製した。このガラスに2.45GHz、0.5kWのマイクロ波加熱装置を用いて、マイクロ波照射を行ったところ、(1)の際と同様に急速な加熱発泡を示した。得られたガラスは黄色に着色しており、UV測定により350-500nmにて吸収を示した。またFE-SEMによる観察により、50nm以下の銀微粒子の生成を確認しており、マイクロ波加熱中にガラス中にて銀微粒子の還元生成が得られていることを確認している。この黄色に着色した多孔質ガラスは、p-ニトロフェノールの還元作用を与えた。以上より、本研究により水熱反応-マイクロ波プロセスを用いて、銀微粒子を分散担持した多孔質ガラスの作製に成功した。今後、本手法を発展させ、貴金属ナノ粒子担持多孔質ガラスの新規作製手法を確立する。平成21年度は、マイクロ波照射下で加熱発泡する含水ガラスの作製と含水挙動の解明と含水ガラス中の水の溶存形態の調査、ならびに含水ガラスの誘電特性の調査を実施した。先ず、試料部と純水部の2温度帯を設けて相対湿度を制御可能なオートクレーブを新規に製作して、不飽和水蒸気中でのガラスの水熱反応を可能にした。ガラスのネットワーク修飾成分のNa_2O濃度を変えたソーダシリカガラスの水熱処理を行った結果、Na_2O濃度の低下に伴い含水量は増加した。さらにIR測定により、ガラス中の水の溶存形態は分子状H_2OとシラノールSiOHによるものであり、Na_20濃度の低下による含水量の増加はガラスネットワークと水の反応によりシラノールが多く形成されることによることが分かった。また含水ガラスの誘電率は、相対的に分子状H_2Oの多い高Na_2Oガラスがより大きい傾向にあり、含水ガラス中にて分子状H_2Oがマイクロ波と強く相互作用することを見出した。以上により、ガラスのネットワーク構造とH_2Oの相互作用の観点から、含水ガラス中の含水量ならびに誘電特性の制御指針が明らかになり、マイクロ波非加熱特性に優れた含水ガラスの作製が可能となった。この指針に基づき15mass%の水を含有した含水ガラスを作製して、2.45GHz、500Wにてマイクロ波照射に供したところ、ガラスは10倍以上の体積膨張を示し、多孔質ガラスが得られた。よってマイクロ波照射により加熱発泡する含水ガラスの作製を達成した。
創傷治癒機構の分子生物学的解析

1)ラットの人工剥皮創局所組織では,プロコラ-ゲンα(1)mRNAの発現量が特異的に上昇し,創傷治癒過程の細胞増殖にはプロコラ-ゲンの産生が重要な役割をもつ.2)正常な創傷部位およびケロイドを形成した肉芽組織から培養した線維芽細胞では,TGFーβの添加によってプロコラ-ゲンmRNAの発現が誘導されたが,両者の細胞とも同程度の発現であった.3)新鮮なケロイドの中央部薄片への^<14>Cーロイシンの取り込みは正常な真皮組織に対して35倍に達し,ケロイドにおける異常に高いコラ-ゲンの発現はおもに翻訳段階で起こっているものと考えられた.4)全身性の重症ケロイド患者の血清は正常人血清や牛胎児血清に比べて著しく強い細胞増殖刺激作用を示し,ケロイド等の異常な創傷修復反応では,翻訳段階における強いコラ-ゲンの発現と相まって,創傷局所に作用する細胞増殖因子の高い濃度がその病因の一つとなっているものと考えられた.5)患者血清中の細胞増殖刺激活性と患者皮膚細胞のTGFーβによるコラ-ゲン産生性を検査することによって,ケロイド体質を術前に診断する方法の一つとなり得る可能性が示唆された.6)ラットにおける人工皮弁形成実験から,創傷治癒過程では,細径の新生血管よりも,むしろ既存の中小血管の拡張が主役となって創傷修復のための種々の因子を産生する血球成分を供給しているものと考えられた.7)創傷治癒過程における異常な創修復反応のモデル実験系として培養細胞の不死化のメカニズムを遺伝子レベルで解析し,不死化細胞ではコラゲナ-ゼの発現が特異的に失われており,コラ-ゲンの形成と分解の過程が細胞増殖調節の破綻に本質的な関連をもつことを明らかにした.1)ラットの人工剥皮創局所組織では,プロコラ-ゲンα(1)mRNAの発現量が特異的に上昇し,創傷治癒過程の細胞増殖にはプロコラ-ゲンの産生が重要な役割をもつ.2)正常な創傷部位およびケロイドを形成した肉芽組織から培養した線維芽細胞では,TGFーβの添加によってプロコラ-ゲンmRNAの発現が誘導されたが,両者の細胞とも同程度の発現であった.3)新鮮なケロイドの中央部薄片への^<14>Cーロイシンの取り込みは正常な真皮組織に対して35倍に達し,ケロイドにおける異常に高いコラ-ゲンの発現はおもに翻訳段階で起こっているものと考えられた.4)全身性の重症ケロイド患者の血清は正常人血清や牛胎児血清に比べて著しく強い細胞増殖刺激作用を示し,ケロイド等の異常な創傷修復反応では,翻訳段階における強いコラ-ゲンの発現と相まって,創傷局所に作用する細胞増殖因子の高い濃度がその病因の一つとなっているものと考えられた.5)患者血清中の細胞増殖刺激活性と患者皮膚細胞のTGFーβによるコラ-ゲン産生性を検査することによって,ケロイド体質を術前に診断する方法の一つとなり得る可能性が示唆された.6)ラットにおける人工皮弁形成実験から,創傷治癒過程では,細径の新生血管よりも,むしろ既存の中小血管の拡張が主役となって創傷修復のための種々の因子を産生する血球成分を供給しているものと考えられた.7)創傷治癒過程における異常な創修復反応のモデル実験系として培養細胞の不死化のメカニズムを遺伝子レベルで解析し,不死化細胞ではコラゲナ-ゼの発現が特異的に失われており,コラ-ゲンの形成と分解の過程が細胞増殖調節の破綻に本質的な関連をもつことを明らかにした.創傷治癒における分子生物学的機構を解明するために、まず正常の皮膚修復機構におけるプロコラ-ゲンmRNAの発現量の変化を、ラットを用いたin vivoの実験において検索した。また、病理組織学的解析も行なった。さらに、ケロシド組織および正常皮膚由来の線維芽細胞を培養し、TGFーβを培地に添加し、両者の反応についての比較的実験を行なうべく準備している。1.ラット正常皮膚の創傷治癒におけるプロコラ-ゲンα1(I)mRNAの動態ラット背部に5mm×5mmのマス目状の切創またはデルマト-ムによる剥皮創を作成、創治癒過程におけるプロコラ-ゲンα1(I)mRNAの発現量の変化をNorthen blotおよびDot blotにて検索した。受傷13日目まではプロコラ-ゲンα1(I)mRNAの発現量は低下し、5日目ごろより増加しはじめ、7日目以後に正常レベルより上昇することが明らかとなった。この所見は、病理組織標本によるコラ-ゲン網再生の過程と一致していた。コントロ-ルとしてのβーactin mRNAの変化は創治癒過程ではみられず、プロコラ-ゲンα1(I)mRNAの変化は特異的と考えられた。2.培養したケロイド由来、正常皮膚由来の線維芽細胞のTGFーβに反応するプロコラ-ゲンα1(I)mRNA発現量の変化線維芽細胞を培養し、コンフルエントとなった後血清を除去、さらに24時間培養した上でTGFーβを添加、プロコラ-ゲンα1(I)mRNAの発現量を経時的(添加後048時間)に検索中である。創傷治癒における細胞の異常な増殖反応のin vitroモデル実験系として、ヒトニ倍体細胞MRCー5を用いた。本細胞に、まずSV40のlargeT抗原遺伝子を導入して、46クロ-ンのトランスフォ-ム細胞クロ-ンが得られた。得られたトランスフォ-

ム細胞クロ-ンの軟寒天中で増殖速度は、その細胞クロ-ンにおけるSV40largeT抗原の発現量と相関した。しかし、トランスフォ-ム細胞の増殖は、いずれも、継代数55前後でcrisisに入り、そのlife spanは正常に保たれていた。さらに、上記トランスフォ-ム細胞クロ-ンのうち、一つのクロ-ンでlife spanの異常をきたした不死化細胞が出現し、その不死化細胞クロ-ンでは第5染色体長腕先端部の欠失と第10染色体の脱落が認められ、単クロ-ン性に不死化細胞が出現したことを示した。不死化細胞クロ-ン分離の再現実験を行なったところ、やはり上記の染色体異常が認められたので、細胞不死化現象は、第5あるいは第10染色体上の未知な遺伝子の機能の欠損によって生じる可能性が示唆された。以上の結果について創傷治癒における細胞の異常な増殖との関係を考察したところ、創傷治癒における細胞の異常は、上記モデル実験における細胞のトランスフォ-メ-ションに相当する機序以外にも、染色体異常に起因するような体細胞変異による機序も考えられた。すなわち、創傷治癒の機転となる各種細胞増殖因子による正常な範囲の細胞増殖を越えた、ケロイドなどの難治性の増殖反応では、その病的細胞に遺伝子レベルの変化が起こって起因する可能性が示唆された。本研究では創傷治癒機構について分子生物学的に追求してきた。本年はその最終年度に当たり創傷治癒機構について分子レベルおよび細胞レベルの知見を総括するとともに、この機構を支える血行の変化についても検討を加えた。1.創傷治癒における細胞の異常増殖反応の分子生物学的な解析:SV40のT抗原遺伝子を導入したヒト2倍体線維芽細胞から独立に8クロ-ンの不死化細胞を得た。これらの細胞クロ-ンの解析から、細胞の異常増殖をもたらす不死化と、細胞の悪性転換(トランスフォ-メ-ション)とは異なる機構であり、細胞のクライシスの時期に遺伝子上の変化が起こって不死化が生じること、その遺伝的な変化の一つとしてコラゲナ-ゼ遺伝子の発現が消失していたことが認められた。以上の結果は線維芽細胞の異常増殖とコラ-ゲンの過剰産生にコラゲナ-ゼ遺伝子の発現消失が主に関与していることを示唆していた。2.創傷治癒過程における過形成反応を支える血行の変化:従来、創傷治癒過程では血管の新生が起こることが報告されているが、深腸骨回旋動脈のみを血管茎とするラット側背部人工皮作製実験では、皮弁外周に多数の細径吻合動脈の著しい拡大を認めた。創傷治癒機構では、新生血管ばかりでなく、既存の血管の拡張がむしろ重要な役割を果たしていることを示す知見が得られた。
成人低酸素症に対する100％酸素蘇生による臓器障害発生機序とその治療戦略の確立

成人の低酸素症時の100%酸素による再酸素化後の肝機能に及ぼす影響を検討した。実験には生後8週例雄のマウスを使用し、自家製の低酸素ボックスでマウスを8%酸素30分曝露後、30分間の100%酸素(HP100群)及び空気(HP21群)に分けて蘇生を行った。対象は8%酸素の代わりに空気で暴露した(CT群)。2.24時間後のヘマトキシン・エチレン染色による肝組織病理的検討では、3群間で有意な病理変化は認められなかった。本結果は、新生児低酸素蘇生時での空気蘇生が推奨されているのと同様に、成人でも空気による蘇生が肝障害の軽減には有効である可能性を示唆している。さらに、今後、成人での100%酸素蘇生による臓器障害機序の解明とその治療法の解明に役立つものと考えられる。成人の低酸素症時の100%酸素による再酸素化後の脳機能に及ぼす影響をした。実験には生後8週例雄のマウスを使用し、マウスに8%酸素30分曝露後、30分間の100%酸素及び空気で蘇生を行い、9時間後の脳炎症性サイトカイン、アポトーシス、脳エリスロポイチン、脳由来神経栄養因子などのmRNAレベルで検討した。さらに24時間後のヘマトキシン・エチレン染色による脳組織病理的に検討した。実験方法は、自家製の低酸素ボックスで空気(CT群)または8%酸素30分曝露後を行い、8%酸素暴露群にはさらに、その後100%酸素30分間曝露群(HP100群)と空気30分間曝露群(HP21群)に分けた。1.9時間後のHP100群ではHP21群およびCT群に比べて、有意に、caspase-3 mRNA発現が上昇したが、BDNF mRNAはCT群に比べてHP21群ともに、低下していた。一方、低酸素刺激で誘導されるEPO mRNAは、HP21群はCTに比べて産生が誘導されていたが、HP100群は誘導が抑制されていた。2.24時間後の脳組織病理的検討では、3群ともに有意な脳神経変性などは、認められなかった。以上より、8%低酸素後の空気による再酸素化は、低酸素時に誘導される低酸素誘導転写因子(HIF-1)によるエリスロポイチン産生誘導により、障害を受けた脳神経細胞は修復されたが、100%酸素による再酸素化では、内因性エリスロポイエチンの産生増加を抑制し、脳アポトーシスによる脳障害を修復できなかったと推測された。本結果は、新生児低酸素蘇生時での空気蘇生が推奨されているのと同様に、成人でも空気蘇生が有効である可能性を示唆している。さらに、今後、成人での100%酸素蘇生による脳神経発達障害機序の解明とその治療法の解明に役立つものと考えられる。成人での低酸素後の再酸素化時に、100%酸素による脳障害が起こっていることが判明し、その機序に、脳神経発達障害機序に、脳内の炎症性サイトカイン産生増加、エリスロポイチン産生誘導低下、アポトーシスなどが関与していることが判明したことから、おおむね順調に研究は進展している。成人の低酸素症時の100%酸素による再酸素化後の腎機能に及ぼす影響を検討した。1.9時間後の炎症サイトカインのtumornecrotic factor (TNF)αmRNA発現はHP100群とHP21群では、CT群に比べて、増加するが、両群間で差はなかった。また、interleukin (IL)-1βmRNA発現はHP100群でCT群に比べて、有意に増加していたが、HP21群とは差がなかった。さらに腎caspase-3 mRNA発現は、HP100群とHP21群では、CT群に比べて、増加し、さらにHP100群はHP21群比べて、有意に増加していた。DNA損総修復に関与するNeil3 mRNA発現は、HP100群でHP21群に比べて優位に低下していた。血清BUN、Cr値はHP100群とHP21群では、CT群に比べて、増加し、さらにHP100群はHP21群に比べて、有意に増加し、腎機能障害を呈していた。2.24時間後のヘマトキシン・エチレン染色による腎組織病理的検討では、3群間で有意な病理変化は認められなかった。本結果は、新生児低酸素蘇生時での空気蘇生が推奨されているのと同様に、成人でも空気による蘇生が脳、腎障害の軽減には有効である可能性を示唆している。成人での100%酸素蘇生による臓器障害発症機序に、脳では炎症性サイトカイン産生増加、エリスロポイチン産生誘導低下、アポトーシスなどが関与していたが、今回の腎臓でも、アポトーシスが腎機能障害への進展につながっていたが、予想していた炎症性サイトカインの関与の可能性は低いと考えられる。

今年度は、低酸素後の100%酸素による再酸素化の腎組織への影響をヘマトキシン・エチレン染色以外に、タネル染色でアポトーシスを確認する予定であったが、抗アポトーシス交代の染色性が低く、最適な抗体の決定ができていないので、次年度には抗体を決定して、タネル染色を行う予定である。成人の低酸素症時の100%酸素による再酸素化後の肝機能に及ぼす影響を検討した。実験には生後8週例雄のマウスを使用し、自家製の低酸素ボックスでマウスを8%酸素30分曝露後、30分間の100%酸素(HP100群)及び空気(HP21群)に分けて蘇生を行った。対象は8%酸素の代わりに空気で暴露した(CT群)。2.24時間後のヘマトキシン・エチレン染色による肝組織病理的検討では、3群間で有意な病理変化は認められなかった。本結果は、新生児低酸素蘇生時での空気蘇生が推奨されているのと同様に、成人でも空気による蘇生が肝障害の軽減には有効である可能性を示唆している。さらに、今後、成人での100%酸素蘇生による臓器障害機序の解明とその治療法の解明に役立つものと考えられる。成人での100%酸素蘇生による脳神経発達障害機序に、脳内の炎症性サイトカイン産生増加、エリスロポイチン産生誘導低下、アポトーシスなどが関与していることが判明した。今後その治療法には、これらの機序に関係していると思われる、炎症性サイトカイン抑制、エリスロポイエチンの外的投与、抗アポトーシス薬剤の投与などの、治療法の可能性が示唆されたので、次年度以降に、その治療法の検討とともに、腎臓、肝臓での100%酸素による影響を検討していく。最終的には、成人での心肺蘇生ガイドラインでの酸素投与についての有益なエビデンスとなるよう、研究成果を出していきたい。今回の実験結果から、今後の治療法への進展には直接つながらなかったが、100%酸素化による低酸素応答転写因子であるHIF-1の分解抑制剤の有効である可能性が考えられるので、治療法の確立に向けて、研究をさらに進めていく。
抗ガングリオシド抗体の受け身移入による軸索変性モデルの作成と治療効果の検討

われわれは免疫性ニューロパチーにおける抗ガングリオシド抗体の病因的役割を解明するための動物モデルとして、一次感覚ニューロンに局在するガングリオシドGD1bの感作による失調性ニューロパチーの開発にはじめて成功した。さらに発症し高力価の抗GD1b抗体の上昇したウサギ血清を受け身移入することにより、病理学的に脊髄後索に軽度ではあるが溌症したウサギと同様の所見が得られたことから、抗GD1b抗体の発症機序における重要な役割が示された。一方抗GD1b IgG抗体単独陽性のGuillain-Barre症候群(GBS)患者は、電気生理学的には軸索型はなく脱髄型が多く、また全例で感覚障害がみられとくに深部感覚障害との有意の関連が認められた。ヒトではGD1bは一次感覚ニューロン(とくに大径のもの)とRanvier絞輪周囲のミエリンに局在する。GBSの抗GD1b抗体はこれらのGD1b局在部位に結合して深部感覚障害や脱髄をきたすと考えられた。ガラクトセレブロシド(Gal-C)はミエリンに局在する糖脂質だが、マイコプラズマ肺炎後のGBSでは抗Gal-C抗体が上昇する。患者血中の抗Gal-C抗体は肺炎マイコプラズマ菌体により特異的に吸収されることを見出した。GBSにおける抗糖脂質抗体上昇の機序として菌体のもつ糖鎖に対する反応によるとする「分子相同性仮説」があるが、抗Gal-C抗体についてもこの機序が重要な役割を果たすことが示された。GalNAc-GD1aはわれわれが見出したGBS血中抗体の標的分子のひとつだが、ヒト末梢神経における局在は不明であったため、ウサギ抗GaINAc-GD1a抗体を用いた免疫組織染色を行った。その結果運動神経の軸索膜あるいは軸索に接するミエリン(A)および感覚神経の小径線維軸索膜(B)における局在が明らかになった。(A)は純粋運動型に関連するIgG抗体の、(B)はGM2にも交差反応し感覚障害を伴うことの多いIgM抗体の標的である可能性が示唆された。われわれは自己免疫性ニューロパチーにおける抗ガングリオシド抗体の病因的役割を解明するための動物モデルとして、一次感覚ニューロンに局在するガングリオシドGD1bの感作によるウサギ失調性ニューロパチーの開発にはじめて成功した。発症し高力価(1:6400)の抗GD1b抗体の上昇したウサギ血清(血清A)を、あらかじめ完全フロイントアジュバントを投与したウサギに10mlずつ繰り返し(計14回)静脈内投与し、病理学的所見を観察した。受け身移入されたウサギ血中の抗GD1b抗体価は1:800までしか上昇せず、明らかな症状もみられなかったが、病理学的には脊髄後索に軽度の軸索変性を認めた。これは軽度ではあるが発症したウサギと同様の所見であった。同様の条件で正常ウサギ血清を投与したウサギにはそのような所見はみられなかった。以上よりこの動物モデルは抗体により受け身移入できることがわかった。次に血清Aから、既報告の方法により抗GD1b抗体を精製した。現在この抗体を用いて検討をすすめている。一方抗GD1bIgG抗体単独陽性で他の抗ガングリオシド抗体はもたないギラン・バレー症候群(GBS)患者の臨床的特徴を検討したところ、大部分が呼吸器感染後の発症であり、電気生理学的には軸索型を呈するものはなく脱髄型が多かった。

また全例で感覚障害が認められた。ヒトではGD1bは一次感覚ニューロンに加えてRanvier絞輪周囲のミエリンにも局在する。患者血中の抗GD1b抗体はGD1b局在部位に結合して感覚障害や脱髄をきたす可能性が考えられた。一方抗GalNAc-GD1a IgG抗体は純粋運動型および軸索型GBSに関連するが、GalNAc-GD1aの局在を免疫組織化学的に検討し、運動神経の軸索膜あるいは軸索に接するミエリンに局在することがわかった。抗GalNAc-GD1a抗体は同部位に結合していわゆる軸索型GBSの発症に関わっている可能性が考えられた。われわれはガングリオシドGD1bの感作による失調性ニューロパチーの開発にはじめて成功し、大径一次感覚ニユーロンの特異的な障害における抗GD1b抗体の重要な役割を示した。そこで次に抗GD1b IgG抗体単独陽性のGuillain-Barre症候群(GBS)患者の特徴を検討すると、電気生理学的には軸索型はなく脱髄型が多く、また全例で感覚障害がみられとくに深部感覚障害が有意に多いことがわかった。ヒトではGD1bは一次感覚ニューロン(とくに大径のもの)とRanrier絞輪周囲のミエリンに局在する。GBSの抗GD1b抗体はこれらのGDlb局在部位'に結合して深部感覚障害や脱髄をきたすと考えられた。ガラクトセレブロシド(Gal-C)はミエリンに局在する糖脂質だが、マイコプラズマ肺炎後のGBSでは抗Gal-C抗体が上昇する。患者血中の抗Gal-C抗体は肺炎マイコプラズマ菌体により特異的に吸収されることを見出した。GBSにおける抗糖脂質抗体上昇の機序として菌体のもつ糖鎖に対する反応によるとする「分子相同性仮説」があるが、抗Gal-C抗体についてもこの機序が重要な役割を果たすことが示された。GalNAc-GD1aはわれわれが見出したGBS血中抗体の標的分子のひとつが、ヒト末梢神経における局在は不明であったため、ウサギ抗GalNAc-GD1a抗体を用いた免疫組織染色を行った、その結果運動神経の軸索膜あるいは軸索に接するミエリン(A)および感覚神経の小径線維軸索膜(B)における局在が明らかになった。(A)は純粋運動型に関連するIgG抗体の、(B)はGM2にも交差反応し感覚障害を伴うことの多いIgM抗体の標的である可能性が示唆された。IgMパラプロテイン血症を伴うニューロパチーでは、19MM蛋白がしばしば糖脂質SGPGを認識するが、PO糖蛋白に対する交差反応の有無によりcompact myelinに対する結合性が異なり、治療反応性のみられる症例は交差反応のない例であることがわかった。