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継親子関係の法的規制のあり方

アメリカでは21世紀の伝統的家族は継親家族(stepfamily)であると言われ、3人に1人の子が18歳になるまでに継子になるであろうとの予測のもとに、すでに継親家族が直面するであろう家族法上の諸問題に対し検討を始め、あるいはすでに継親家族を射程に入れた立法化が進行していることを、本研究において明らかにした.しかし現在のところ、本研究が対象とした、扶養、監護権,訪問権、相続権の4つの法領域においては,依然,血縁至上主義を基本的に支配的な法原理としていることも,同時に指摘した.そしてこのような法状況は,近年、未成年子をかかえる夫婦の離婚件数の増加と再婚件数の漸増により継親家族が増加しており,今後、継親家族をめぐる法規制のあり方が問われるであろう、わが国においてもまったく同様であること,本研究で言及したとおりである.すなわち、日米両国における継親子関係をめぐる現行法規制のあり方は,継親子は非血縁であるがゆえに、実親子類似の実質的親子関係は形成されない、との前提に立つものである.しかし、このような法規制のあり方が望ましいとはいえまい.家族が多様化しその中でも継親家族が増加している現況があること、そして何よりも、継親子関係をめぐる経験的・実証的知見は、本研究で論究したように、継親子関係と実親子関係の性質上の差異はわずかであること、継親子関係の性質が継子の人格形成・精神発達にきわめて重大な影響を及ぼすこと、継親家族が破綻し易いのは法における継親の親役割が不明確で曖昧であること、を示しているからである.そうであれば,継子に対する愛情と献身への願望がある継親にも、子の健全な発育に必要な限りで一定の権利義務を明確にすることが子の利益に適うものと考えられる.カリフォルニア州検認法6454条が継親子関係の実質性を問う1つの審査基準となりうるものであるが,経験的・実証的研究のさらなる裏付けが必要となろう.アメリカでは21世紀の伝統的家族は継親家族(stepfamily)であると言われ、3人に1人の子が18歳になるまでに継子になるであろうとの予測のもとに、すでに継親家族が直面するであろう家族法上の諸問題に対し検討を始め、あるいはすでに継親家族を射程に入れた立法化が進行していることを、本研究において明らかにした.しかし現在のところ、本研究が対象とした、扶養、監護権,訪問権、相続権の4つの法領域においては,依然,血縁至上主義を基本的に支配的な法原理としていることも,同時に指摘した.そしてこのような法状況は,近年、未成年子をかかえる夫婦の離婚件数の増加と再婚件数の漸増により継親家族が増加しており,今後、継親家族をめぐる法規制のあり方が問われるであろう、わが国においてもまったく同様であること,本研究で言及したとおりである.すなわち、日米両国における継親子関係をめぐる現行法規制のあり方は,継親子は非血縁であるがゆえに、実親子類似の実質的親子関係は形成されない、との前提に立つものである.しかし、このような法規制のあり方が望ましいとはいえまい.家族が多様化しその中でも継親家族が増加している現況があること、そして何よりも、継親子関係をめぐる経験的・実証的知見は、本研究で論究したように、継親子関係と実親子関係の性質上の差異はわずかであること、継親子関係の性質が継子の人格形成・精神発達にきわめて重大な影響を及ぼすこと、継親家族が破綻し易いのは法における継親の親役割が不明確で曖昧であること、を示しているからである.そうであれば,継子に対する愛情と献身への願望がある継親にも、子の健全な発育に必要な限りで一定の権利義務を明確にすることが子の利益に適うものと考えられる.カリフォルニア州検認法6454条が継親子関係の実質性を問う1つの審査基準となりうるものであるが,経験的・実証的研究のさらなる裏付けが必要となろう.扶養、監護権、訪問権に焦点をあててアメリカにおける継親子関係をめぐる法状況を分析・検討した前稿(「アメリカにおける継親子関係をめぐる法状況」アルテス・リベラレス[岩手大学人文社会科学部紀要]第57号135-153頁[1995年])に続いて、そこで積み残した問題、すなわち、アメリカ無遺言相続法上の継子の地位について考察を加えた。アメリカ無遺言相続法は、基本的に、血縁と被相続人の意思の推定を根拠に相続人の範囲を確定しているが、非血縁を配偶者および養子にとどめ、あくまで血縁主義にこだわる、安定性重視の法規制を維持している。その中にあって、カリフォルニア州は特異な存在である。というのは、同州検認法6454条によれば、(1)継親子関係が存在していること、(2)当該関係が継子の未成年の間に開始したこと、(3)当該関係が当事者の共同の生涯にわたり継続したこと、(4)明白かつ確信を抱くに足る証拠により、継親が継子を養子収養したであろうことを立証すること、(5)明白かつ確信を抱くに足る証拠により、法的障碍がなければ当該養子収養がなされたことを立証すること、の5つの要件を充足するとき、継親子関係を法的親子関係を擬制し、継子は継親を相続できるものと規定しているからである。ここには、無遺言相続法が依拠してきた準拠枠が、安定性から公正性へと転換されるべきこと、伝統的家族だけでなく、アメリカに多数存在する継親家族を含めた非伝統的家族をも射程に入れた一つの立法のあり方が示唆されている。

そしてさらに、この規定には、継親子関係の実質を審査するための一つの基準が見い出されるのであり、継親子関係の法的規制のあり方を構想するうえで、今後、法的権利を付与するに値する継親子関係とは果たして何か、ということを検討するための一つの素材を提供するものである。継親子関係の社会的実態につき、経験的・実証的研究が次に求められる所以である。アメリカでは21世紀の伝統的家族は継親家族であると言われ、3人に1人の子が18歳になるまでに継子になろうとの予測のもとに、すでに継親家族が直面するであろう家族法上の諸問題に対し検討を始め、あるいはすでに継親家族を射程に入れた立法化が進行していることを、前々稿(「アメリカにおける継親子関係をめぐる法状況」アルテス・リベラレス[岩手大学人文社会科学部紀要]第57号135-153頁[1995年])および前稿(「アメリカ無遺言相続法における継子の地位」白鴎法学第8号339-367頁[1997年])において明らかにした。わが国においても、アメリカ同様、近年、未成年子をかかえる夫婦の離婚数の増加と再婚件数の漸増により継親家族が増加しており、今後、継親家族をめぐる法規制のあり方が問われることになろう。その足掛かりとして、今回、継親子の法的関係について、従来あまり言及されることのなかった、監護権、面接交渉権、扶養、相続権に焦点をあてて、わが国の継親子関係の現段階を明らかにし、現行法の問題点を指摘した。わが国の継親家族に対する現行法規制は、離婚を容認し継親家族を含めた再婚家族の存在を予想しながら、さながら離婚後の単親家族同様、継親家族においては親権者でありかつ監護者であるのは実親一人であり、また将来親権者・監護者に代わりうる地位を継親家族以外のもう一人の実親に保障し、継親家族の内外を問わず、あくまで第一次的養育責任者である実親の責任を強調し、その権利を保障していこうとするものであり、学説も基本的にこの方向にある。今後予想される継親家族の増加と社会的実態としての扶養・監護養育関係を前提とする限り、継親子関係の社会的実態につき経験的・実証的研究が求められるとともに、早期に法整備をする必要がある。
新規アンドロゲン応答遺伝子同定による前立腺癌の細胞シグナル解析

男性ホルモンとWntを含む信号系が、下流因子を介して前立腺癌と胎児生殖器の性質を制御する機構についてbZipファミリー遺伝子(MafBやATFを含む)を同定した(Nature Review、他の成果参照)。男性ホルモン応答性のエンハンサーにおける制御について前立腺癌細胞等の応答を解明した。MafB遺伝子の3'UTRエンハンサーに前立腺癌細胞株LNCapを用いて、ARとB-Catenineの相互作用は検出されなかったが、基本転写因子とARの相互作用が見出された。その転写因子群は前立腺癌におけるアンドロゲン依存性の転写制御に関与する(執筆中、Endocrinology 2016等)。男性ホルモンの標的遺伝子である転写因子MafBを核として前立腺癌細胞並びに胎児組織における細胞シグナル応答を解析した。男性ホルモンレセプターがMafB遺伝子近傍のプロモーター、エンハンサーにおいて結合するパターンを示す細胞株を検索した。前立腺癌細胞株LnCapにおいて、MafB上流及び3'UTR領域を含むコンストラクトが外来のDHTに応答する事が判明した(Endocrinology,2016)。更に3'UTR領域のコンストラクト及びプロモーター領域解析の結果を総合し、3'UTR領域がアンドロゲン依存性エンハンサーである事がわかった。ヒトの男性ホルモンシグナルに関連した発生異常である尿道下裂症の原因として他のMafBファミリー遺伝子においてもUTR遺伝子変異が報告されている。このように男性ホルモン依存性疾患の関わりが示唆されつつある。次に、男性ホルモン依存性のLnCap細胞株においてMafB遺伝子の発現を確認した。SiRNAによる抑制により同細胞株の形態が細胞突起を失ったラウンドシェイプになる事が明らかになりつつある。MafB遺伝子を介した男性ホルモン依存性の細胞骨格系への制御の可能性が示唆された。同細胞並びに男性ホルモン依存性の胎児間葉から採取した下流遺伝子の網羅的解析を行い、細胞骨格系遺伝子を含む下流遺伝子を探索している。又、MafBは強力なアンドロゲンであるDHT(ジヒドロテステステロン)の標的である可能性も想定されていた。DHTは、SRD(5αリダクターゼ)によって転換され産生される。興味ある事にSRD発現に性差がある事も示唆された。雄化の性質を示す間葉組織と癌細胞においてDHTが如何に局所的に標的遺伝子を制御するか、Bmp,Wntを含めた他の因子シグナルが作用するか、さらに解析を行う。また、ヨーロッパの国際性分化ミーティングシンポジスト講演(DSD 2015)等複数行っており、順調な研究進行状況を反映している。アンドロゲンとWntを含むシグナルが、下流制御因子を介して前立腺癌と胎児生殖器の性質を制御するか統合的に解析した。男性ホルモン応答性遺伝子のエンハンサーにおけるクロストークについて解析し、前立腺癌細胞等の応答に如何に集約されるか解明した。これまでに男性ホルモン応答性の新規標的遺伝子MafBの3'UTR領域に二箇所のアンドロゲンレセプター(AR)結合部位AREが存在することが判明した。また、同じbZipファミリーに属するATF遺伝子においてはその変異が尿道下裂を呈する事が判明しつつある。近年、前立腺癌近傍の間葉細胞(CAF)と外生殖器におけるMafB陽性間葉において一種の類似性がある事が判明しつつある。癌繊維芽細胞(CAF)においてはATFが主要なアンドロゲン標的因子であることも最近示された。間葉細胞としての類似性が、胎児外生殖器及び、前立腺癌近傍の間葉細胞(CAF)において、bZipファミリーの発現を介するという意味で、今後興味深いと思われる。ATF3は、MafBと異なり、尿道近傍間葉に特異的な発現は検出されなかった。しかし、他のbZipファミリー遺伝子群においてMafBと重なり発現する因子が見出されつつある(未発表)。MafBを含むbZipファミリー遺伝子は相互作用する事によりダイマーを形成し、その相互作用が種々のシグナル伝達系の制御下にある事が細胞株を用いた実験系で示唆されてきた。しかしながら、生殖器官形成を含む個体レベルでの知見は極めて乏しい状況であった。MafB遺伝子の同定に続き複数のbZip遺伝子の関与が推察される。更にbZipファミリーは上流の信号添付によりリン酸化を含めた修飾が必要であることが知られている。このような知見を受けてアンドロゲンシグナルの添付によりMafB及び他の因子におけるリン酸化等の修飾について検討の必要性がクローズアップされた。アンドロゲン(男性ホルモン)とWntを含むシグナル系が、下流制御因子を介して前立腺癌と胎児生殖器の性質を制御する機構について解析し、それらの制御を受けるbZipファミリー遺伝子を同定した。bZipファミリー遺伝子群はMafBやATF遺伝子を含んでいる。これらの遺伝子群が胎児生殖器間葉細胞や癌関連線維芽細胞(CAF)の発生制御に関わる事が見出され、成果を出版し、さらに執筆中である(Nature Review in Press、他文献参照)。男性ホルモン応答性のエンハンサーにおける制御メカニズムについて解析し、前立腺癌細胞等の応答に如何に集約されるか解明した。これまでに男性ホルモン応答性のMafB遺伝子の3'UTR領域に二箇所のアンドロゲンレセプター(AR)結合部位AREの存在が判明した。男性ホルモン依存性の前立腺癌細胞株LNCap細胞を用いて、MafB遺伝子の3'UTRを含む発現制御領域のレポーターコストラクトを構築した。ARとB-Cateninの相互作用はエンハンサー上で検出されなかったが複数の基本転写因子とARの相互作用がAREに関して見出された。

それらの転写因子群は前立腺癌におけるアンドロゲン依存性の転写制御に関わる事からも興味ある知見である(現在執筆中、Endocrinology 2016等)。我々が発表したソノポレーション法を用いて胎児由来の男性ホルモン依存性の間葉組織も用いて同様のコンストラクトを遺伝子導入し、エンハンサー活性を胎児組織においても同定した。これら解析を通じて、MafB遺伝子を制御し得る新規の転写因子群を同定した。それらの胎児組織並びに前立腺癌細胞における細胞増殖や分化に対する機能を今後解析する予定である。男性ホルモンとWntを含む信号系が、下流因子を介して前立腺癌と胎児生殖器の性質を制御する機構についてbZipファミリー遺伝子(MafBやATFを含む)を同定した(Nature Review、他の成果参照)。男性ホルモン応答性のエンハンサーにおける制御について前立腺癌細胞等の応答を解明した。MafB遺伝子の3'UTRエンハンサーに前立腺癌細胞株LNCapを用いて、ARとB-Catenineの相互作用は検出されなかったが、基本転写因子とARの相互作用が見出された。その転写因子群は前立腺癌におけるアンドロゲン依存性の転写制御に関与する(執筆中、Endocrinology 2016等)。アンドロゲンシグナル及びBmpやWntを含む細胞増殖因子シグナルによる男性ホルモン標的遺伝子に対する協調的な発現制御機構を更に解明する。続いてそのような協調的な発現制御が如何に細胞増殖の変化や細胞レベルでの特質の変化に繋がるかミュータントマウス及び前立腺癌細胞の生物学的な解析を更に進める。Bmp、Wnt信号系が細胞骨格系蛋白やECM(細胞外マトリックス)蛋白系、更にMMP等の発現制御をする例等が知られている。そのような候補分子に対してDHT、アンドロゲンがその発現をどのように協調しつつ調節するか、統合的に解明する。アンドロゲンとWntを含むシグナルが、下流制御因子を介して前立腺癌と胎児生殖器の性質を制御するか統合的に解析する。男性ホルモン応答性遺伝子のエンハンサーにおけるクロストークについて解析し、前立腺癌細胞等の応答に如何に集約されるか解明する。MaB遺伝子アンドロゲン応答性の発現制御について、我々が見出しつつある遠位エンハンサー及び3'UTRとの協調した発現制御メカニズムについて解明する。その為に外生殖器由来のオルガンカルチャー系を立ち上げる。レポーターDNAを我々が開発したソノポレーション法によって遺伝子導入し、その発現制御を解明する。この実験系は、我々独自の系である。このような転写因子の制御下に間葉細胞の形態をコントロールするMMP、プロテアーゼ群が存在するかについて解析する。前立腺癌及び胎児外生殖器において重要であるDHT(ジヒドロテステステロン)について質量分析MSを含めた局所組織における正確なレベルの測定、そのリガンドの可視化についても試みる。29年度が最終年度であるため、記入しない。
二段燃料噴射によるデュアルモード・ラムジェットの燃焼制御に関する研究

現実のデュアルモード・ラムジェットの燃焼器に近い,拡大部を有する矩形断面流路内の,加熱・燃焼を含む超音速流れについて研究を行った。研究は実験と数値シミュレーションを並行して行った。また,大きな剥離領域が形成される流れ場を乱さずに測定するために,レーザを利用した速度および濃度の非接触計測法を適用することも試みた。実験では,水素/窒素混合気を作動気体とするプラズマトーチを1又は2個取り付け,放電およびプラズマトーチ作動気体中の水素の燃焼による加熱を行い,擬似衝撃波形成と燃焼モード遷移について調べた。流路拡大によって擬似衝撃波形成と燃焼モード遷移は著しく抑えられる。流路拡大角を変化させた実験により,一定断面積流路と拡大流路で擬似衝撃波を形成するために必要な加熱量の差は,準1次元理論で見積もられることが分かった。また,一定断面積部でプラズマトーチにより擬似衝撃波を形成した後,拡大流路で他のプラズマトーチにより加熱する場合,その影響が上流に及ぶまでに相当の加熱が必要であることが分かった。これより,一定断面積部と拡大部で燃料を2段噴射すれば,一定断面積部のみの燃料噴射よりも推力を増大できることが示された。数値シミュレーションでは,擬似衝撃波の前縁が矩形流路角部の厚い境界層を剥離させて上流に進むこと,拡大流路では剥離領域に著しい非対称性が見られることなど,流れ場の詳細情報が得られた。また,実験で見出された,流路拡大効果と加熱効果の大きさを準1次元理論で見積もることの妥当性について,数値シミュレーションにおいても支持する結果が得られた。レーザ計測では,550m/s程度の主流に対して,粒子画像速度計で衝撃波や渦を含む3次元流れ場の平均速度分布を計測できた。また,アセトン平面レーザ誘起蛍光法によって,アセトンを混入した噴射気体の定性的な分布と,噴射器直近のマッハ数分布を測定できた。実験では矩形断面の片側のみ2°で拡大するダクトを作成し,入り口マッハ数1.8および1.5で,単一の窒素あるいは水素/窒素プラズマトーチを用いて実験を行った。プラズマトーチは拡大ダクトの入り口付近あるいは中央部のどちらかに取り付けた。入り口マッハ数が1.5および1.8のいずれでも,プラズマトーチ噴射孔より上流まで遡る擬似衝撃波は形成されなかった。しかし,入り口マッハ数1.5で全投入パワーが大きい場合には,噴射孔の下流で気流の平均的マッハ数が1以下になったと思われる挙動を示した。2つのプラズマトーチを作動させて空間的に加熱分布を与えるための予備実験を行った。今後,断面拡大角度の変更,拡大ダクト前後への一定断面抱くとの取り付けなど,形状を変化させ燃焼モード遷移についてさらにデータを得る。数値シミュレーションにおいては,非反応流れに対する3次元ナビエ・ストークス方程式によるシミュレーションコードが完成し,等断面積ダクトに高温噴流を噴射した際に形成される流れ場のシミュレーションを行った。気流への投入エネルギーがあまり大きくない場合には,実験結果とよく一致する圧力分布が得られた。投入エネルギーが大きい場合には,プラズマジェットを模擬する噴射流の総温が高くなりすぎることと,噴射孔形状を正方形としていることから,計算が発散し結果を得るにいたっていない。また,等断面および拡大流路について,背圧をかけることによって生じる擬似衝撃波の計算を行いその特徴を調べた。実験では,一定断面積ダクトの下流に片側のみ拡大角2°のダクトを取り付け,それぞれのダクトに取り付けたプラズマトーチを作動させ燃焼モードの変化を観察した.

一定断面積部でプラズマトーチによる擬似衝撃波が形成された場合でも,拡大部のプラズマトーチによる加熱の影響範囲は極めて限定的であり,拡大ダクト内に明確な擬似衝撃波は形成されなかった.この結果から,燃料噴射位置を複数段に分けることは,熱的チョークによるエンジン不始動を避けるには非常に有効であることがわかった.また,開き角を0.4°,0.7°および1.0°とした拡大ダクトを製作し,その中央部に取り付けたプラズマトーチを作動させて気流を加熱した結果,開き角0.4°の場合には擬似衝撃波を形成できた.0.7°の場合には,擬似衝撃波形成の前段階まで至った.これらの際に必要とした加熱量は,いずれも同じマッハ数の一定断面積ダクトで擬似衝撃波を形成するために必要な加熱量より大きかった.また,水素/窒素混合気をプラズマトーチ作動ガスとした場合,作動ガス中の水素が空気と混合して燃える割合は,一定断面積ダクトの場合に比べて低いと推定される結果が得られた.さらに,一定断面積ダクトで背圧加圧により形成される擬似衝撃波の先頭部の流速分布を粒子画像速度計により測定し,コーナー部で非対称な剥離が生じるという数値シミュレーションと定性的に一致する結果を得た.数値シミュレーションにおいては,開き角2°の拡大ダクトで高温流噴射した場合の計算を行い,実験結果との比較を行っている.実験では,矩形断面流路の下側壁の拡大角を変えられる試験部を製作し,下側壁面に1個のプラズマトーチを取り付けて,擬似衝撃波形成および燃焼モード遷移を達成するために必要なプラズマトーチへの投入エネルギーと,流路拡大角の関係を調べた.本実験で用いた窒素又は水素-窒素混合ガスを作動気体とするプラズマトーチで投入可能な,水素の燃焼熱も含む全投入エネルギーの範囲では,拡大角0.7°まで擬似衝撃波を形成することができた.各拡大角において擬似衝撃波が形成される限界の投入エネルギーは,準1次元理論において投入されたエネルギーによる加熱効果と拡大角による試験部における断面積増加の効果が釣り合う条件を満足することが見出された.数値シミュレーションにおいても,同様な形態の流れ場の3次元計算を行い,拡大流路においてもプラズマジェットを模擬した高温気体の噴射によって擬似衝撃波が形成される結果を得た.また,異なる流路拡大角に対して,上記の準1次元理論で断面積増加効果と釣り合うエネルギーを投入することによって,ほぼ同一の強さの擬似衝撃波を形成できることを示した.この場合,噴射点より上流側の流れ場はほぼ同一であったが,下流側は拡大角により変化した.また,背圧加圧により形成した擬似衝撃波による混合促進効果についても調べた.これらの結果から,断面積が拡大するデュアルモード・ラムジェット燃焼器において,擬似衝撃波形成及び燃焼モード遷移に対する流路拡大率と加熱量の効果が,準1次元理論に基づいて見積もることができることが明らかになった.
糖ペプチドをターゲットとしたCA125の弱点を補う卵巣癌新規バイオマーカーの開発

卵巣癌は早期発見が困難な予後不良の疾患であり、分子標的薬などの開発応用が進んでいるものの予後改善はいまだ不十分である。卵巣癌診断に汎用されるCA125にいくつかの弱点があるがその発見以来、技術革新にもかかわらず早期診断に有効な新たな血清マーカーの発見はない。我々は、従来の単一分子への抗原抗体反応を基本としたアッセイ系での腫瘍マーカーの測定という概念を打ち破り、患者と健常人血清を用いた血清網羅的糖ペプチドプロファイル解析により、未だその感度・特異度の優るマーカーが発見されていないCA125よりも有意に早期卵巣癌(特に本邦で頻度の高いCCC)を診断しうる糖ペプチドマーカーを発見同定した。1現在卵巣癌の腫瘍マーカーとして最も頻用されているCA-125は、糖蛋白のコア蛋白をターゲットしたマーカーであるが、良性卵巣腫瘍・子宮内膜症・月経中・妊娠中・炎症などにおいても上昇するため、卵巣癌の診断おいての特異度が低い。特に、生殖期の女性にしばしばみられる良性卵巣腫瘍である内膜症性嚢胞は、手術や保存的療法によって管理される疾患であるが、最近の研究において、本疾患が卵巣明細胞癌に発展する(de novo)ことが明らかとなり、内膜症性嚢胞の経過観察中は、きわめて注意深いモニタリングが必要であることが示されている。そこでわれわれは、卵巣癌の早期発見のために、あるいは内膜症性嚢胞などの良性疾患と鑑別するために、CA125を補完する新たなバイオマーカーを探索することとした。血清中の糖蛋白を蛋白分解酵素にて糖ペプチドに分解後、LC/MSを用いて網羅的に分析し、100,000を超える候補の中から、新たな卵巣癌のバイオマーカーとしてA2160を同定した。A2160は、内膜症性嚢胞に比較して、いずれの臨床進行期の卵巣癌においても有意に上昇した。特に注目すべきは、内膜症性嚢胞と卵巣癌を鑑別するA2160の診断精度は、早期卵巣癌においてCA-125よりもさらに有効な点である。A2160は、内膜症性嚢胞からのde novo発生の卵巣癌の鑑別にも使用可能な卵巣癌の有用な新規診断バイオマーカーとなりうる可能性がある。2癌細胞膜糖脂質糖鎖と抗がん剤耐性との関係を示唆する以下の知見が得られた。(1)疎水性抗がん剤(パクリタキセル等)耐性細胞においてトランスポータータンパク質P-糖タンパク質が発現し、糖脂質が増加しラフトにおけるトランスポーターの活性を支えている。(2)親水性塩基性抗がん剤(シスプラチン等)耐性細胞において、シアル酸を含む酸性糖脂質が欠損し、塩基性抗がん剤の結合と細胞内への流入が停止している。1生殖期女性にみられる内膜症性嚢胞が卵巣明細胞癌に発展する(de novo)ことが明らかとなり、内膜症性嚢胞の注意深い経過が必要であるが、卵巣癌マーカーCA-125は、子宮内膜症(内膜症性嚢胞など)・月経中・妊娠中・炎症などにおいても上昇するため、卵巣癌の診断おいての特異度が低い。われわれは、卵巣癌の早期発見のため、特に内膜症性嚢胞との鑑別のための、CA125を補完する新たなバイオマーカーをグライコプロテオミクスの観点より探索した。血清中の糖蛋白を糖ペプチドに分解後、LC/MSを用いて網羅的に分析し、100,000を超える候補の中から新たな卵巣癌のバイオマーカーA2160を同定した。A2160は、CA125と比較して特にI-II期の初期臨床進行期の卵巣癌において有意に上昇した。注目すべきは、内膜症性嚢胞と卵巣癌を鑑別するA2160の診断精度は、早期卵巣癌においてCA-125よりもさらに有効な点である。構造解析にてフルシアル化されたα鎖を持つcomplement-4 binding proteinであること、さらにマーカーとしての有用性は「フルシアル化」の程度に左右されることを明らかにした。2GM2はヒト頸癌組織(扁平上皮癌、腺癌、小細胞癌)17例中6例に検出できるに過ぎない糖脂質であるが、頸癌由来細胞7例では全例に高濃度に発現し、さらに非還元末端にGM2糖鎖を持つユニークな糖鎖GalNAc-GM1b, GalNAc-GD1aは4例に見られた。GalNAc-GD1aは自己免疫性末梢神経炎の抗原として注目されている糖鎖であり、神経系以外の細胞に含まれていることを示す初めての報告である。GalNAc-GD1aはBoku、OMC-1、HCA-1細胞の全ガングリオシドのそれぞれ19.1%、5.6%、14.8%を占めていた。1すでに有効な糖タンパクマーカーをそのユニークな構造を含めて同定しており、多数例でのvalidationに進む予定である。2今まで糖脂質は腫瘍マーカーとして癌の検出や悪性度の指標に用いられてきたが、今回は非還元末端にGM2糖鎖を持つユニークな糖鎖GalNAc-GM1b, GalNAc-GD1aが頸癌組織で発現していることが明らかになった。腫瘍マーカーとしての糖脂質の利用の方向がさらに拡大すると思われる。

1.昨年度に我々は、血清糖蛋白を糖ペプチドに分解後、LC/MSを用いて網羅的に分析する方法(網羅的血清糖ペプチドプロファイル解析)にて、子宮内膜症性嚢胞(EM)の経過観察に用いることで明細胞腺癌(CCC)早期診断に有用な可能性のある新規卵巣癌の糖ペプチドバイオマーカーA2160を同定した。A2160はcomplement-4 binding protein(C4BP)のα鎖のフルシアル化された糖ペプチドであった。A2160測定系の簡便化のためのA2160糖ペプチドのフルシアル化の割合をみる測定系の開発(FS-C4BP Index)、及び血清フルC4BPとA2160とのCombination Assay(COMB)によるマーカーとしての感度特異度の向上を目指した。FS-C4BP IndexはEMとCCCの鑑別においてA2160と同等の感度特異度を示し測定系の簡便化が可能であった。またCOMBではA2160単独よりも高い特異度を示した。今後さらなる感度・特異度向上のために、健常人群、良性群と卵巣癌群の網羅的血清糖ペプチドプロファイル解析にて得られた各群で有意差のある糖ペプチド全ピークを用いたEMとCCCの鑑別を行う診断システム、健常人と卵巣癌例の鑑別を行う診断システムの開発を目指す。2.我々はすでにsulfatideが黄体期正常子宮内膜及び低分化型と比べて高分化型子宮類内膜腺癌で発現増強することを報告している。今回移植腫瘍にて低分化形態を示す類内膜癌培養細胞株に硫酸基転移酵素遺伝子を導入し移植腫瘍を作成したところ高分化の形態を示すことが判明した。つまり子宮類内膜腺癌の分化度にはsulfatide発現が関与していることが明らかになった。今後はsulfatideに関しての子宮体癌の分化機構の解明を分化誘導療法の解明につなげていきたい。卵巣癌は早期発見が困難な予後不良の疾患であり、分子標的薬などの開発応用が進んでいるものの予後改善はいまだ不十分である。卵巣癌診断に汎用されるCA125にいくつかの弱点があるがその発見以来、技術革新にもかかわらず早期診断に有効な新たな血清マーカーの発見はない。我々は、従来の単一分子への抗原抗体反応を基本としたアッセイ系での腫瘍マーカーの測定という概念を打ち破り、患者と健常人血清を用いた血清網羅的糖ペプチドプロファイル解析により、未だその感度・特異度の優るマーカーが発見されていないCA125よりも有意に早期卵巣癌(特に本邦で頻度の高いCCC)を診断しうる糖ペプチドマーカーを発見同定した。1すでに有効な糖タンパクマーカーを同定しており、今後、構造解析および多数例でのvalidationに進む予定である。2細胞膜糖脂質は水素結合の供与基を多く含み、細胞膜表面に水の層を形成し、トランスポーター等がその機能を発揮するための反応の場を提供している。今まで糖脂質は腫瘍マーカーとして癌の検出や悪性度の指標に用いられてきたが、抗がん剤感受性にも関わっていることが明らかになりつつある。実際、単なる水素結合のみならず、陰性荷電があれば、細胞膜の性質のみならず、膜タンパク質との相互作用や細胞外からの物質の作用にも大きな影響を与えることが示唆される。今回の実験では、陰性荷電の中でもシアル酸と硫酸で抗がん剤に対する作用が異なっていることが示された。塩基性抗がん剤との結合のみならず、トランスポーターの作用による細胞内への流入と排出にも陰性荷電の種類が影響を与えることが新たに示唆された。腫瘍マーカーとしての糖脂質の利用の方向がさらに拡大すると思われる。1症例数を増加させてvalidationを行う。同時に簡便な測定法の開発を行うと同時に、LS/MSの糖ペプチドピークデータ+人工知能を用いたcombination Assayにより血清を用いたより効果的で高度な卵巣がん早期診断法を開発する。
日常検査で抗菌薬耐性機構が明らかとならない細菌の耐性表現型と遺伝子型の解析

抗菌薬耐性菌の、院内分子疫学解析を行った。同一時期に同一病棟において、多数のカルバペネム耐性遺伝子保有の腸内細菌科細菌株が分離された。これら分離株には通常の感受性検査においてカルバペネム耐性と感受性の表現型の株が混在していたが、パルスフィールド電気泳動で同一ゲノム型を示し、同一株の水平伝播と判断された。また、ゲノム型と耐性遺伝子解析により同一起源のメタロβラクタマーゼ遺伝子保有の多剤耐性緑膿菌の、2年以上の院内定着が明らかとなった。カルバペネム耐性アシネトバクター分離株の解析では、MLSTにより世界流行のCC92であること、耐性遺伝子として、OXA23βラクタマーゼ遺伝子保有が明らかとなった。臨床分離の抗菌薬耐性株を収集し、表現型と耐性遺伝子の解析を行った。第三世代セファロスポリン耐性のE.coliは、表現型がESBL産生を示唆するデータであったものは矛盾なくCTX-M typeの遺伝子を検出した。なかでも、表現型ではmetallo βlactamase(MBL)産生が示唆されたP. aeruginosaでは、我が国で高頻度に責任遺伝子として検出されるIMP型、VIM型遺伝子が検出されないものが複数分離された。また、カルバペネム耐性A. baumanniiの耐性表現型の解析では、MBL産生が示唆されるものと、それ以外の機構でカルバペネム耐性獲得をしている株がほぼ半数ずつ存在することが明らかとなった。これらの耐性遺伝子を解析したところ、カルバペネム耐性P.aeruginosaでの現象と同様に、IMP型あるいはVIM型遺伝子は検出されなかった。また、MBL以外の機構では、数株にOXA23遺伝子が検出された。A.baumanniiにおけるOXA23は地球規模で蔓延している多剤耐性A.baumanniiの耐性機構であり、その検出は臨床疫学的に重要な情報となった。2013年度中に、MBL陽性の表現型を持つP.aeruginosaとA.baumanniiの耐性責任遺伝子のクローニングを開始した。臨床分離細菌の抗菌薬耐性化が進行しているなか、耐性菌の検出とその分子疫学解析のうえで2つの課題がある。1.耐性遺伝子を保有しながら、表現型では感受性を示す株は、容易に耐性誘導が起きるため、監視が必要となる。2.表現型が耐性で、耐性機構が明らかとならない株がある。カルバペネム感受性であるが、メルカプト酢酸抑制試験が陽性でメタロβラクタマーゼ保有が示唆されたE.cloacaeが保有するplasmidをcloningし構造を報告した。メタロβラクタマーゼ遺伝子は同定されなかったが、菌のgrowth advantageを誘導する可能性のある遺伝子を同定した。K. pneumoniae:表現型ではカルバペネムに感受性と判定されたが、最小発育阻止濃度がわずかに上昇した分離株の耐性遺伝子解析を行ったところ、メタロβラクタマーゼ遺伝子の保有をPCRで認め、塩基配列決定を行ったところ、IMP型βラクタマーゼであった。本邦で多剤耐性緑膿菌から高頻度に検出されるメタロβラクタマーゼであり、この遺伝子が、K.pneumoniaeへも侵淫していることが明らかとなった。A. baumannii:カルバペネム、アミノグリコシド、ニューキノロンのいずれかに耐性の株の検出が増加した。カルバペネム耐性A. baumanniiは耐性獲得が多様であると報告されている。これまでのところ、メタロβラクタマーゼ遺伝子は検出されなかった。一方、世界的カルバペネム耐性株が保有することの多いOXA23遺伝子の検出が顕著となった。P. aeruginosa:カルバペネム耐性株が継続的に分離されている。メルカプト酢酸抑制試験で、表現型からはメタロβラクタマーゼ陽性と判定されるが、IMP型あるいはVIM型メタロβラクタマーゼ遺伝子が検出されない株が増加している。メタロβラクタマーゼ遺伝子の解析を継続している。本年度は、第3世代セファロスポリン耐性のEnterobacter cloacaeとKlebsiella pneumoniaeの耐性機構の解析を行った。平成26年10月には、カルバペネム耐性腸内細菌科細菌による感染症が5類感染症に規定されたことから、対象菌種の詳細な薬剤耐性化の解析が求められるようになった。特に、E.cloacaeは本来セファロスポリナーゼを保有するため、基質拡張型βラクタマーゼ産生やメタロβラクタマーゼ(MBL)産生の判定は煩雑となる。今回、同一病棟で平成26年1月から平成27年3月の期間に連続して検出された菌株を対象として、メルカプト酢酸ナトリウム(SMA)抑制試験、パルスフィールド電気泳動(PFGE)パターン解析、およびメタロβラクタマーゼ遺伝子解析を行った。1.第3世代セファロスポリン耐性、かつイミペネムのMICが2μg/ml以上の株にSMA抑制試験を行ったところ、多くは陽性であり、MBL産生を示唆した。2. PFGE解析の結果、同一病棟内で、同一PFGE型を示す株が伝播していることが明らかとなった。3.同一PFGE型を示した株であっても、イミペネムのMIC値が0.5 4 μg/mlとまちまちであったため、低MIC値の分離株でのMBL遺伝子(IMP)保有を確認したところ、保有株の存在が明らかとなった。4.イミペネムのMIC値が2μg/ml以上の株であってもSMA陰性で、IMP遺伝子保有なしの株も存在した。

MBL遺伝子は菌種を超えて伝達する可能性があるため、セフタジジムやセフォタキシムなどの第3世代セファロスポリン耐性でイミペネム感受性株におけるMBL保有の検討の必要性が強く示唆された。1.カルバペネム耐性腸内細菌科細菌の分子疫学解析平成26から27年の期間、カルバペネム耐性腸内細菌科細菌(CRE)の同一病棟内での伝播が確認された。これらは保菌状態であったが、ひとたび感染症を引き起こせば治療困難となること、および水平伝播自体が重大問題であることから、分離株の薬剤感受性、耐性遺伝子解析、およびゲノム型の解析を行った。水平伝播したCREは、Enterobacter cloacae、Klebsiella pneumoniae、およびKlebsiella oxytocaであった。解析対象は、カルバペネム耐性株に限定することなく、第三世代セファロスポリン耐性株のすべてとし、カルバペネム耐性を与えるメタロβラクタマーゼ(MBL)保有の表現型であるメルカプト酢酸抑制(SMA)試験を施行した。多くの第三世代セファロスポリン耐性カルバペネム感受性株菌株でSMA陽性であり、そのほとんどからIMP型MBL遺伝子を検出した。パルスフィールド電気泳動解析の結果、E. cloacaeでは複数系統の流行株が明らかとなった。K.pneumoniaeとK.oxytocaではそれぞれ一系統であった。同一系統株のなかに、表現型ではカルバペネム感受性株も多数存在したことから、蔓延防止のための分子解析の必要性が示された。今回の同一病棟内複数発生事例は、本解析結果を活用し対策し、1年9か月目に終息した。2. MBL遺伝子の解析当院で本研究以前に検出されたMBLはIMP1と、その近縁遺伝子であった。平成26年に分離されたカルバペネム耐性緑膿菌のうち、SMA陽性株でIMP1型遺伝子陰性の株から、IMP7とアミノグリコシドアセチル化酵素をコードするインテグロンを検出した。これに基づき、IMP7の検索を行ったところ、CREにおいてもIMP7保有が明らかとなった。IMP1のみ、IMP7のみ、あるいはその両方を保有していても、日常検査ではカルバペネム系薬感受性と判定されるものも多い。今後これらの遺伝的耐性株の効率的な検出法の検討を行う。今回の研究テーマ遂行中の平成26年9月にカルバペネム耐性腸内細菌科細菌(CRE)による感染症が感染症法第5類全数把握疾患となった。感染症法においては、抗菌薬耐性を実際の薬物をもちいた表現型検査での結果を求めているが、現実的には、今回の研究テーマ「日常検査で抗菌薬耐性機構が明らかとならない細菌の耐性表現型と遺伝子型の解析」で取り組んでいる通り、表現型のみでは耐性菌を見逃す危険性がある。加えて、多くの耐性遺伝子は、菌種を超えてプラスミドやファージにより伝播する可能性があるため、遺伝的に耐性菌と判断される株の検出と拡大防止が必須である。本研究テーマのもと、当院分離株から新たに検出した耐性遺伝子は、メタロβラクタマーゼではIMP7,基質拡張型βラクタマーゼではCTX-M10がある。また、平成27年には、当院で始めてメタロβラクタマーゼ保有大腸菌が検出された。きわめて広範にβラクタマーゼ遺伝子の伝播がおきていることが明らかとなった。
動画像解析による仮想化都市環境構築に関する研究

この研究では,移動体から観測される動画像を時空間画像解析することにより,都市空間の形状・テクスチャ情報を自動的に獲得することを目標としており,そのための都市空間の3次元モデル生成のための基本的処理方式に関する研究を行った.この手法は,従来の手作業による局所的かつ高精細なモデル化と互いに補い合うものであり,両者を融合することにより,用途に応じた柔軟な都市空間モデルが実現できる.平成8年度においては,以下の各項目に関し研究を進めてきた.・時空間画像解析手法の基礎的検討画像解析により物体の幾何学的形状や表面の物性モデルを得ることは,年長にわたりコンピュータビジョン分野で研究されてきた.しかし現実的には,複雑な屋外情景を対象にした場合,安定した結果を得るのはいまだに困難な問題である.この手法では,道路を移動する車両から得られた動画像を時空間画像解析手法により処理することで,車両移動軌跡からの奥行きと物体表面の模様(テクスチャ)を同時に獲得できる.得られるモデルデータは3次元(画像平面の2次元と時間軸)である動画像から,2次元画像へとデータ量が飛躍的に減少しており,広域に渡るモデルを蓄積するのに極めて有効である.・都市モデルからの効率的な画像合成手法の検討上記解析手法によって得られた都市空間モデルは,何らかの手段により画像へと再構成されるが,その際には設定された経路や視点に自由度を許す必要がある.視点が対象に近付くにつれ,蓄積された都市空間モデルのテクスチャ解像度が不足する.したがって画像生成を行う場合にはテクスチャの補間処理を行うことが必要である.ここでは奥行き値を考慮した効率的な補間画像生成手法に対する検討を加えた.この研究では,移動体から観測される動画像を時空間画像解析することにより,都市空間の形状・テクスチャ情報を自動的に獲得することを目標としており,そのための都市空間の3次元モデル生成のための基本的処理方式に関する研究を行った.この手法は,従来の手作業による局所的かつ高精細なモデル化と互いに補い合うものであり,両者を融合することにより,用途に応じた柔軟な都市空間モデルが実現できる.平成8年度においては,以下の各項目に関し研究を進めてきた.・時空間画像解析手法の基礎的検討画像解析により物体の幾何学的形状や表面の物性モデルを得ることは,年長にわたりコンピュータビジョン分野で研究されてきた.しかし現実的には,複雑な屋外情景を対象にした場合,安定した結果を得るのはいまだに困難な問題である.この手法では,道路を移動する車両から得られた動画像を時空間画像解析手法により処理することで,車両移動軌跡からの奥行きと物体表面の模様(テクスチャ)を同時に獲得できる.得られるモデルデータは3次元(画像平面の2次元と時間軸)である動画像から,2次元画像へとデータ量が飛躍的に減少しており,広域に渡るモデルを蓄積するのに極めて有効である.・都市モデルからの効率的な画像合成手法の検討上記解析手法によって得られた都市空間モデルは,何らかの手段により画像へと再構成されるが,その際には設定された経路や視点に自由度を許す必要がある.視点が対象に近付くにつれ,蓄積された都市空間モデルのテクスチャ解像度が不足する.したがって画像生成を行う場合にはテクスチャの補間処理を行うことが必要である.ここでは奥行き値を考慮した効率的な補間画像生成手法に対する検討を加えた.
高精度CRT測定装置による標準測定手法の開発

まず,本研究の準備段階として,CRTの文献調査を完了し,検証すべき問題点の整理をした.CRT測定における問題点として,目視での測定による精度の低下や精確な値をはかるための条件(圧迫時間/圧迫力)が確立されていない事や年齢,環境温度による影響も指摘されている.これらを克服するため,各種センサ(感圧センサ・温度センサ・カラーセンサ)を搭載し,関連パラメータ(圧迫時間・圧迫力)を調整可能なCRT基礎実験装置の設計をした.次に,健常成人を対象とした測定を行い,適切な爪床の圧迫時間・圧迫力の規定を目的とした測定実験を行うための,圧迫力や圧迫時間を複数条件で正確に測定可能な基礎実験装置の開発を行った.基礎実験装置の開発にあたっては,測定実験の圧迫力や圧迫時間をどのような範囲で行うかを検討するため,そもそも,従来の人によるCRT測定における圧迫力や圧迫時間で行っているのかの調査を文献的な調査だけでなく,複数の医療スタッフによるCRT測定再現も併せて行っている.また機械による安定した測定を行うためには,どのような爪床の形でも安定した測定ができるような装置開発改良も要した.基礎実験装置の開発を行った後は,健常成人協力者を対象とした複数条件でのCRT測定実験を行った.対象者の年齢・性別・体温・指先温度・指先の厚さも同時に記録を行っている.基礎実験装置を用いた測定結果を解析し,CRTの至適測定方法(爪床の圧迫力・圧迫時間)と考えられる条件を導出している.CRT測定の至適測定方法(爪床の圧迫力・圧迫時間)を求める事が,今後の健常者および患者を対象とした測定実験を行う前提として精確であると考え,慎重な実験計画および測定実験を行う事となり時間を要した.従来の人の手によるCRT測定が例え救急科専門医同士であっても,ある程度の乖離があった事から,多様な条件下における測定実験を必要とした.さらに,指尖部や爪床の形によらず安定した機械での測定を行うためにも装置自体の開発・調整にも時間をかけて,安定した測定が可能となるようにつとめた.今後は,基礎実験装置での実験で導き出されたCRT測定の至適条件を組みこんで,救急外来患者や集中治療室患者における測定実験を行い,健常成人だけでなく,患者を対象とした測定においても,安定したCRT測定が行える事の確認,および各種病態に陥っている患者におけるCRT変化がどれの程度のものなるかの確認を行う予定である.さらに,CRT測定の手順である,爪床の圧迫・解除・色調変化までの時間測定,を全自動化したCRT測定装置のプロトタイプを設計・開発する.測定対象者の指先に装着して測定可能な小型の測定装置を開発し,ディスプレイも搭載して即座の結果確認ができるような装置の開発を計画している.この事で携行可能かつ簡便な測定が可能となり,より多くの対象者における測定が可能となる.このCRT測定装置を用いて,CRT延長のcut-off値を求めるため,健常成人および救急外来受診患者(ショック患者を含む)のCRT測定を行う.健常者の測定結果からCRTの健常者正常範囲を求める.さらに救急外来受診患者,ショック患者の測定結果の統計学的解析を行う事で,ショック診断のためのcut-off値を求める事が可能となる.患者測定を行う際には,臨床現場での通常診療で測定されている項目も記録する.このことで,他の生理学的指標や臨床指標(血圧・心拍数・乳酸値・輸液量・28日生存)との間の関連性を探索し,また,CRT測定を加える事でのショックの診断精度も検討可能となる.この結果から,CRT測定の意義自体も改めて示せることになると考える.まず,本研究の準備段階として,CRTの文献調査を完了し,検証すべき問題点の整理をした.CRT測定における問題点として,目視での測定による精度の低下や精確な値をはかるための条件(圧迫時間/圧迫力)が確立されていない事や年齢,環境温度による影響も指摘されている.これらを克服するため,各種センサ(感圧センサ・温度センサ・カラーセンサ)を搭載し,関連パラメータ(圧迫時間・圧迫力)を調整可能なCRT基礎実験装置の設計をした.次に,健常成人を対象とした測定を行い,適切な爪床の圧迫時間・圧迫力の規定を目的とした測定実験を行うための,圧迫力や圧迫時間を複数条件で正確に測定可能な基礎実験装置の開発を行った.基礎実験装置の開発にあたっては,測定実験の圧迫力や圧迫時間をどのような範囲で行うかを検討するため,そもそも,従来の人によるCRT測定における圧迫力や圧迫時間で行っているのかの調査を文献的な調査だけでなく,複数の医療スタッフによるCRT測定再現も併せて行っている.また機械による安定した測定を行うためには,どのような爪床の形でも安定した測定ができるような装置開発改良も要した.基礎実験装置の開発を行った後は,健常成人協力者を対象とした複数条件でのCRT測定実験を行った.対象者の年齢・性別・体温・指先温度・指先の厚さも同時に記録を行っている.基礎実験装置を用いた測定結果を解析し,CRTの至適測定方法(爪床の圧迫力・圧迫時間)と考えられる条件を導出している.CRT測定の至適測定方法(爪床の圧迫力・圧迫時間)を求める事が,今後の健常者および患者を対象とした測定実験を行う前提として精確であると考え,慎重な実験計画および測定実験を行う事となり時間を要した.

従来の人の手によるCRT測定が例え救急科専門医同士であっても,ある程度の乖離があった事から,多様な条件下における測定実験を必要とした.さらに,指尖部や爪床の形によらず安定した機械での測定を行うためにも装置自体の開発・調整にも時間をかけて,安定した測定が可能となるようにつとめた.今後は,基礎実験装置での実験で導き出されたCRT測定の至適条件を組みこんで,救急外来患者や集中治療室患者における測定実験を行い,健常成人だけでなく,患者を対象とした測定においても,安定したCRT測定が行える事の確認,および各種病態に陥っている患者におけるCRT変化がどれの程度のものなるかの確認を行う予定である.さらに,CRT測定の手順である,爪床の圧迫・解除・色調変化までの時間測定,を全自動化したCRT測定装置のプロトタイプを設計・開発する.測定対象者の指先に装着して測定可能な小型の測定装置を開発し,ディスプレイも搭載して即座の結果確認ができるような装置の開発を計画している.この事で携行可能かつ簡便な測定が可能となり,より多くの対象者における測定が可能となる.このCRT測定装置を用いて,CRT延長のcut-off値を求めるため,健常成人および救急外来受診患者(ショック患者を含む)のCRT測定を行う.健常者の測定結果からCRTの健常者正常範囲を求める.さらに救急外来受診患者,ショック患者の測定結果の統計学的解析を行う事で,ショック診断のためのcut-off値を求める事が可能となる.患者測定を行う際には,臨床現場での通常診療で測定されている項目も記録する.このことで,他の生理学的指標や臨床指標(血圧・心拍数・乳酸値・輸液量・28日生存)との間の関連性を探索し,また,CRT測定を加える事でのショックの診断精度も検討可能となる.この結果から,CRT測定の意義自体も改めて示せることになると考える.本年度は,本研究における前提条件となる基礎実験装置の開発・調整および至適測定条件の設定に重点を置いて研究を行ったため,多くの装置のための材料購入をせずとも実験を行えた.今後は,救急外来や集中治療室等における患者も対象に広く簡便な測定実験を行えるように,本年度の実験から得られた測定条件をもとに,爪床の圧迫・解除・色調変化までの時間測定,を全自動化したCRT測定装置のプロトタイプを設計・開発する計画をしている.測定対象者の指先に装着して測定可能な小型の測定装置を開発し,ディスプレイも搭載して即座の結果確認ができるような装置の開発を計画しており,装置の開発・作成にあたり使用する予定である.
ヒト組織感染モデルによるヒト免疫不全ウイルス間の相互作用からみた病態の解析

1.HIV-1感染症を引き起こすウイルスのサブタイプである、R5指向性HIV-1(R5 HIV-1)、X4指向性HIV-1(X4 HIV-1)およびR5X4両指向性HIV-1(R5X4 HIV-1)の3種の相互作用を検討するためのモデルについて検討した。医学的理由で摘出された健常扁桃組織を小片に切り分けて作成したヒトリンパ組織モデルにおいて、それぞれのプロトタイプとして、増殖曲線が同様で、均一なウイルスストックが得られやすいものとして、SF162(R5 HIV-1)、LAV.04(X4 HIV-1)および89.6(R5X4 HIV-1)を選択した。さらに、これらの組み合わせにおいて、それぞれのウイルスを他の2つのウイルス存在下で、正確に定量できるようなプライマーの設定を試みた。gp120遺伝子内の部位に設定したプライマーにより、こうしたことが可能なリアルタイム定量PCRアッセイを確立した。上記3種のウイルスを共感染させた場合は、R5 HIV-1の増殖は抑制され、X4 HIVとRSX4 HIV-1の増殖は競合阻害を示した。2.HIV-1およびHIV-2の相互作用については、SF162(R5 HIV-1)と7924A(HIV-2)の組み合わせ、およびLAV.04(X4 HIV-1)と7924A(HIV-2)の組み合わせにおいて共感染モデルおよびリアルタイム定量PCRアッセイを確立した。この場合のプライマーは、HIV-1についてはvpu遺伝子(HIV-2にはない)領域に設定し、HIV-2についてはvpr遺伝子(HIV-1とHIV-2で相同性が低い)領域に設定した。上記2組の共感染実験の結果、HIV-2はR5 HIV-1に対して、X4 HIV-1はHIV-2に対して増殖を抑制した。この現象を説明できる因子について解析をすすめている。1.HIV-1感染症を引き起こすウイルスのサブタイプである、R5指向性HIV-1 (R5 HIV-1)、X4指向性HIV-1 (X4 HIV-1)およびR5X4両指向性HIV-1 (R5X4 HIV-1)の3種の相互作用を検討するためのモデルについて検討した。医学的理由で摘出された健常扁桃組織を小片に切り分けて作成したヒトリンパ組織モデルにおいて、それぞれのプロトタイプとして、増殖曲線が同様で、均一なウイルスストックが得られやすいものとして、SF162 (R5 HIV-1)、LAV.04 (X4 HIV-1)および89.6 (R5X4 HIV-1)を選択した。2.HIV-1およびHIV-2の相互作用については、SF162 (R5 HIV-1)と7924A (HIV-2)の組み合わせ、およびLAV.04(X4 HIV-1)と7924A (HIV-2)の組み合わせにおいて共感染モデルおよびリアルタイム定量PCRアッセイを確立した。