hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
緊急災害時のエコノミークラス症候群に対する血栓症専門チームの確立と予防法の開発

平成29年4月22日に本研究チーム主体での熊本地震シンポジウムを開催、医療機関、行政、学会、マスメディアの各方面からのエコノミークラス症候群予防に関する取り組みを議論、その後も定期的な班会議を継続する中で、慢性期の検診活動の有用性と意義を明らかにすべきとの議論になり、2018年3月、2018年11月まで慢性期の検診活動を継続して行った。また2018年6月に開催された第5回日本心血管脳卒中学会学術集会でのシンポジウム(災害と心血管病)において至適検診時期(検診を継続すべき期間)に関する検討結果も含めた報告をおこなった。急性期の検診結果の詳細に関する医学論文をCirculation Journal誌に投稿し、2019年2月26日にアクセプトされている。検診結果の解析を経て、国際学会(American Heart Association Scientific Sessions 2018)での発表を含む結果報告を順調に行い、目的である血栓予防チームの確立、予防検診のありかたたに関する知見の収集と結果の解析を継続している。今後は2018年11月まで継続した慢性期検診の結果を踏まえて、慢性期検診の結果の解析とともに結果の論文化を進め、災害後のエコノミークラス症候群発生予防に関する予防法の確立の提案に基づいたマニュアル作成へと繋げる予定。平成29年4月22日に本研究チーム主体での熊本地震シンポジウムを開催、医療機関、行政、学会、マスメディアの各方面からのエコノミークラス症候群予防に関する取り組みを議論する中で、特に震災後急性期における検診活動の有用性と、その効率的なシステム化、予防法の確立に関してアイデアを詰める事ができた。また2017年7月に開催された日本心血管インターベンション治療学会(CVIT)総会でのパネルディスカッション、9月に開催された日本心臓病学会学術集会の一般演題、11月に行われた日本職業災害医学学会学術集会のシンポジウムにおいて検診の結果を発表、2018年3月に開催された日本循環器学会総会では性差に関するサブ解析結果を報告、2018年4月22日に開催された第二回熊本地震シンポジウム2018では、至適検診時期(検診を継続すべき期間)に関する検討結果も含めた報告をおこなった。検診結果の解析を経て、国際学会(American Heart Association Scientific Sessions 2017)での発表を含む結果報告を順調に行い、目的である血栓予防チームの確立、予防検診のありかたたに関する知見の収集と結果の解析を継続している。今後さらに詳細な結果の解析とともに結果の論文化を進め、災害後のエコノミークラス症候群発生予防に関するチームの確立法と予防法の確立の提案に基づいたマニュアル作成へと繋げる予定。統計・解析のためのパソコンおよびそのソフトを購入予定であったが、希望の機器の発売が遅れたため購入ができなかった。来年度は購入の上統計解析を進める予定である。現在慢性期検診結果に関する論文を作成中であり、英文校正や投稿料に使用予定であったが、最終の検診を2018年11月に行ったため解析に遅れが生じた。次年度予算として上記に使用予定。
BRONJモデルラットを用いたテリパラチド製剤の検討

in vitroの成果:TLRにLPS刺激を行うと、MyD88が誘導され炎症性サイトカインを産生する。科研費申請書に報告したようにBP製剤投与下にて、マクロファージ様細胞株における炎症性サイトカインの産生増加を認めている。今回、マクロファージ様細胞株と骨芽細胞様細胞株を使用し、BP製剤投与下にてTLRシグナルの変化を検索した。TLRの発現量に変化は認めなかったが、LPS刺激時のMyD88の誘導増加を認め、それ以降のシグナル伝達量の増加を確認した。また、マウスマクロファージから破骨細胞への分化に対するBP製剤の影響として、破骨細胞への多核化阻害を認めた。さらに、破骨細胞前駆細胞におけるTLRシグナル変化を検索している途中であった、in vivoでは、BP製剤投与ラットを用いて、頭頂骨にLPS刺激を行い、骨吸収の評価を行っていたが実施期間が短かったため、十分なデータを得ることができなかった。
生理機能分析のための皮膚色素分布計測装置の試作研究

本研究の目的は、ヒト皮膚生理機能情報分析のために簡易な光学システムおよび、短時間の分光画像計測が特徴である拡散反射分光画像計測システムを試作・開発し、メラニン色素、血液、及び酸素飽和度の空間分布計測を実現することにある。本年度の研究では、人工皮膚ファントムを作成し、前年度の研究で構築した分光画像計測システムの基礎特性の評価を行なった。また、モンテカルロ光伝搬解析シミュレーションにより、開発した方法の誤差について数値的に検討した。さらに、構築した計測システムによりヒト皮下静脈の3次元情報の可視化に成功し、同時に計測した超音波画像計測装置との比較から本方式及びシステムの有効性を確認した。以上の研究成果を国際誌Journal of Biomedical opticsにおいて研究論文として発表した。さらに、RGBカラー画像から色彩三刺激値X,Y,Z値を介して皮膚のメラニン色素濃度、血液濃度、および酸素飽和度を可視化する方式を検討し、皮膚ファントムによるシステムの定量性について確認した。また、圧力負荷による上肢血流遮断・再開時、および過酸化水素水の塗布等に対する血管収縮・拡張時におけるヒト皮膚血行動態のダイナミクスを可視化することに成功した。以上の研究結果により、従来法に比べより簡易な光学システムによりヒト皮膚生理機能情報をより詳細に評価できる可能性が得られた。本研究の目的は、ヒト皮膚生理機能情報分析のために簡易な光学システムおよび、短時間の分光画像計測が特徴である拡散反射分光画像計測システムを試作・開発し、メラニン色素濃度、血液濃度、組織酸素供給量の3次元計測を実現することにある。本年度の研究では、はじめに光学除振台、カメラレンズ、単色波長フィルター、回転フィルターホイール、汎用CCDカメラ、光学部品固定装置から成る画像取得装置を作成した。画像取得はフィルターホイールの回転と同期をとり、単色フィルターの中心波長としては420,585,600,760,800nmを選択することで、可視から近赤外領域にわたる広帯域の分光反射率画像の連続取得を可能にした。カメラレンズの焦点距離とCCD面から皮膚までの距離の配置を決定し、拡散反射標準板を用いて照明、検出の幾何条件とCCD素子の分光応答感度補正を行った。次に、拡散分光反射画像から色素濃度の3次元分布を求める方式について検討を行った。可視光と近赤外光の皮膚組織に対する進達度の違いを利用して皮膚組織内に局在する吸収体の表面からの深さ・厚み位置を推定する方式で得られる色素分布範囲を先見情報として与えた光伝搬モンテカルロ法により色素分布範囲内の吸収係数を算出し、ランバート・ベール則を適用することで酸化ヘモグロビン・還元ヘモグロビン量の皮膚深さ方向における分布の推定が可能であることを数値シミュレーションにより確認した。また本方式により治癒過程におけるヒト皮下内出血深さ位置の変化をモニターできる可能性を実験的に明らかにした。さらに、内部血液領域周辺組織のメラニン濃度、血液濃度、酸素飽和度の空間分布を推定するためにRGBカラー画像を利用する方式について新たに検討し、ヒト皮膚血流動態を可視化できる可能性が得られた。
動物細胞での相同組換之頻度をあげる分子の細胞内導入と導入法の開発

1.重物細胞での相同組換え頻度に及ぼすRecAの効果毒素耐性型ペプチド鎖伸長因子2(EF-2)のジフテリア毒素耐性を利用した遺伝子ターゲティングシステムを浮遊培養系ではなく、プレート培養で定量的に検出できる系を確立した。この系を利用し、CHO-K1細胞でRecAを安定に発現している株を用いて、ターゲティングに及ぼすRecAの効果を調べたところ、E13細胞で野生型細胞に比べターゲティング頻度が約3倍上昇していることがわかった。上昇の効果が少ないため。細胞株間の差だけによるものかどうかを現在検討中である。また細胞に導入、発現させた核移行型RecAが細胞内に導入したプラスミド-プラスミド間の相同組換えを促進するかどうかを、大腸菌由来のneo遺伝子を用いて検討した、直鎖状の二重鎖neo遺伝子間での組換え頻度が、RecA発現細胞において有意に上昇しているという果結は現在までのところ残念ながら得られていない。今後単鎖と二重鎖同士の相同組換え頻度をあげられるかどうかについて検討する予定である。2.蛋白質と遺伝子両者を同時に臓器細胞内に導入する系の開発核蛋白質とプラスミド両者を混ぜ合わせ、されをリポソームに包み込み、その後リポソームと不活化HVJ(センダイウィルス)を混合することにより、HVJ-リポソームを作成する。このHVJ-リポソームをラット肝臓に直接注入すると、導入した遺伝子が効率よく核に運ばれ、その形質を発現することが明かとなった。また、同様の方法で肝炎ウィルスの表面抗原を一過的にラットの肝臓で発現させると、宿主の抗原抗体反応により肝炎の症状を引き起こすことが明かとなった(病理学的所見)。今後は安定に発現させる系の開発を行なう予定である。
20世紀アメリカ文学におけるトラウマとしての奴隷制度の表象

Cane(1923)は多様なジャンル混交的な特徴を持つ作品である。詩や散文体の文章の混在、さらに登場人物の不規則的な提示のされ方、さらには各挿入された詩自体が多分に曖昧性性を有している。このように本作品において反復的に再演される内容、形式の両面の曖昧性はToomer自身の白人/黒人の混血という伝記的側面のみならず、ToomerがHarlem Renaissanceの“New Negro"として持ち上げられていたことに対する葛藤、さらには登場人物Kabnisのidentityの曖昧さに対峙した際の葛藤を具現化したものである。このような曖昧性はトラウマとしての奴隷制度の問題が内在しており、特にKabnisのidentityにはその点が色濃く反映されている点を指摘した。本研究では20世紀アメリカ文学のテキストを対象として奴隷制度の歴史と表象、その記憶の問題を「トラウマ理論」を用いて探究するものであった。米文学において「トラウマとしての奴隷制度」という枠組みを導入する斬新なテーマと言える。主な目的は以下のとおりであった。1奴隷制度の表象、その歴史化のプロセスを「トラウマ」理論の下で捉えなおす。では、本作品における精神分析の用語でもある“Tranceference" (「転移」)の果たす役割をmodernismの文脈から先行研究を踏まえて検証した。作品中にはこの転移のプロセスの表象に必ず付随して、過去や歴史への言及がなされるが、その際にアメリカの奴隷制度についてのさまざまな言及がなされている点は重要である。最新の理論分野の一つであるAffectiveTheory(Jonathan Flatley, Sanja Bahun)に基づいて分析した。この転移の「失敗」(とそれの表象)はmodernism文学の特徴の一つである「断片」性を表すだけではない。「メランコリック」な精神状態に落ち込む主人公Dickの表象と治療としてのTranceferenceの「失敗」の表象は、そのことから逆にNicoleの回復に見られるようなMourningに抗う、創造的な営みになりうる可能性を内包する点を指摘した。また、これらの分析から導き出される結論として、Dickのメランコリーの背後にはアメリカ帝国を支えてきた人種、階級、ジェンダーの各イデオロギーの瓦解が見出せ、それらは「奴隷制度」のメタファーで作品中に歴史的に回帰してくる「亡霊的」表象がなされていることを指摘した。F. S. Fitzgeraldの作品Tender Is the Nightの分析に際しての理論的な枠組みの確立や先行研究の精査という点ではおおむね順調と言える。ただし、この理論に基づいた作品自体の分析は今後の課題となっており、今回出版した論文の「続き」という形で次回の論文にてまとめ上げる予定でいる。平成28年の研究に基づき、発展させた研究である。先の研究ではF. Scott Fitzgeraldの作品Tender Is the Nightにおける複数の登場人物たちに見られる"mourning"の振る舞いが創造的な可能性を内包していることを検証したが、本論文ではその延長上において、作品中に見られる「奴隷制度」の影をトラウマ理論に基づき、その歴史的意義を検証した。本作品中には南北戦争期に活躍したUlysses S. GrantやAbraham Lincolnへの言及があり、南北戦争を読者に喚起させる。また当時の読者層にもよく知られていた“Topsy"(Harriet Beecher StoweのUncle Tom's Cabin中の黒人人物)という名をNicoleが自分の娘に付けるというテキスト中の奴隷制度への言及は極めて重要である。これまでの先行研究ではDickのトラウマが第一次世界大戦に起因するものとして限定する議論が散見するが、本論では、それは第一次世界大戦に限られたものではなく、主人公Dickのトラウマの表象やその他のレトリックを通してアメリカ国家のトラウマとして、第一次世界大戦のトラウマが南北戦争とそれに付随する奴隷制度のトラウマをも連関的に絶えず想起させていることを指摘した。それにより本作品にはアメリカが帝国として国家のアイデンティティを形成していく際に抑圧し周縁化していた声が、トラウマとしての「奴隷制度」のレトリックの中に絶え間なく回帰している点が確認できる。また、既に先に述べた論文で仮説として取り上げていた「Dickのメランコリーの背後にはアメリカ帝国を支えてきた人種、階級、ジェンダーの各イデオロギーの瓦解と綻びが見出せ」る点が検証された。さらにそれらは「奴隷制度」のメタファーで作品中に歴史的に回帰してくる「亡霊的」表象がなされていることを指摘した。F. S. Fitzgeraldの作品Tender Is the Nightの分析に際しての理論的な枠組みの確立や先行研究の精査という点を先の研究で行ったが、本研究ではこの理論に基づいた作品自体の分析を行った。ただ、Jean ToomerのCaneの研究の完成には至っていないので上のような評価を行った。本年度は昨年度より準備中のTender Is the Nightにおける「奴隷制度」と「トラウマ」の問題について論文を投稿予定である。

さらに、平成27年度の研究の際に立脚した「文学とトラウマ」という準拠枠に基づいて、Jean ToomerのCane (1923)を取り上げ「奴隷制度」を消費するという心性に着目していく。白人からの差別的視線、黒人が内面化した優生学的劣等意識という二重の意識、それに加えて奴隷制度という超時間的トラウマの影に苦しむ主人公のアイデンティティの構築性を検証していく予定である。「作者」としてのToomerの発言にも注目していき、先行研究の調査段階で資料が見つからない場合には、その点を度外視しながらToomerの人種意識を構築してきた批評史それ自体のイデオロギー性を問題視したい。今後の研究の推進方策として、上記の進捗状況を踏まえて以下の2点に集中する。一つめとして、上の研究論文の完成、具体的にはF. S. Fitzgeraldの作品Tender Is the Nightの作品分析を仕上げること。二つめに、本来の研究予定にあったJean ToomerのCaneの分析および論文作成を行うことである。Jean ToomerのCaneの分析を論文化する作業を行っている過程である。また、同じくハーレム・ルネサンス期の作家Nella LarsenのPassing (1926), Quicksand(1929)を取り上げる。BlackFeminism研究の成果として、黒人女性にとっては、アメリカ社会は黒人蔑視・偏見による人種差別と家父長制による性差別の「二重抑圧」の社会システムによる抑圧を経験してきたことが明らかになった。本研究では、その二重の抑圧のみが両作品の黒人主体への抑圧するものではなく、奴隷制というもう一つの抑圧が主体性の構築に大きく寄与している点を、トラウマ理論を援用して明らかにする。Larsen研究において、トラウマに着目するものはあるが、「奴隷制度」をトラウマとして扱う研究はまだ十分とは言えず、この点を中心に研究を進めていきたい。準備中の論文の仕上げに時間がかかっており、校閲および投稿サポート代が未支出なため。研究費使用計画に記載したPCの購入にあたり、新しいモデルの発売を待っていたため。次年度使用額が生じた理由として、予定していた書籍代が安価になったこと。USBなどの備品が同じく安価になったことなどが主な理由としてあげられる。次年度使用額は4,000円弱ということで概ね予定通りに使用できたと考え、この額は2018年度に書籍代として利用したいと考えている。作成論文の英文校閲、および、投稿支援代として支出の予定。本年度中に、出張に持参できるモバイルPCを購入する予定。
医療技術の選択とジェンダー――妊娠と出生前検査の経験に関する調査

女性の妊娠と出生前検査をめぐる知識と経験を把握するために、妊娠と出生前検査の経験について自由記述を含めて詳細に尋ねた首都圏でのアンケート調査(2013年実施、有効回答数378票、有効回収率39.5%)と、全国の妊娠経験のある女性を対象に妊娠と出生前検査の経験に焦点をあてたインターネット調査(2015年1月2月実施、有効回答数2,357、有効回収率26.9%)を実施し、結果を分析した。さらに出生前検査を受検した女性、医師、遺伝カウンセラー、助産師、当事者団体等にインタビュー調査を行い、出生前検査をめぐる情報提供、夫婦の意思決定の過程と要因、医師の検査を提供することの考えなどを分析した。世界各国において出生前検査が実施されており、その検査技術は急速に進歩している。2013年4月より、新型出生前検査とよばれる従来の検査よりも危険性が低く、一定の条件下では精度が高いとされる技術の臨床検査が日本でも開始された。本プロジェクトでは、現状と経緯を文献資料によって把握したうえで、近年に妊娠を経験した女性を対象として、その妊娠経験と出生前検査の経験を尋ねる詳細な質問紙調査を実施した。質問紙は、妊娠経験と出生前検査の経験、意識、フェースシートなどの質問からなり、2003年に実施した調査と同じ質問を含む(A4版11頁)。2013年7月に都内の保育園12か所にて891票、子育て支援施設2か所にて67票の合計958票を配布し、無記名で郵送回収した。397(353+44)票が回収され、回収率は41.4(39.6+65.7)%、有効回収率は39.5(37.9+59.7)%だった。超音波検査は99%以上の人が受けていたが出生前検査という意識が弱かった。それ以外の出生前検査を受けた人はのべ人数で、NT検査31人、母体血清マーカー検査35人、羊水検査24人(うちNT検査と羊水検査の両方6人、母体血清マーカーと羊水検査の両方6人)、絨毛検査、着床前検査、新型出生前検査(NIPD)が各1人、その他の検査が3人だった。現在、妊娠経験、検査を受けた理由と受けなかった理由や意見感想などの集計結果を中間報告書としてまとめ、質問紙の配布協力施設に送付する準備をしている。さらに、出生前診断の世界的な動向と日本の動向の情報提供と関心の喚起のために2013年11月2日にニューヨーク大学のRayna Rapp教授と国立成育医療センターの左合治彦医師を招き、本プロジェクトの中間報告も含めた公開講演会を開催した。なお、本調査の実施は、明治学院大学社会学部社会学科調査・研究倫理審査委員会の承認を得ている。本プロジェクトのH26年度の成果は、以下のとおりである。1)H25年度に、首都圏(おもに東京都と神奈川県)において保育園・子育て支援施設を通して958票を配布して有効回答数378票を得たデータを集計・分析した。その結果を『妊娠と出生前検査の経験に関するアンケート調査2013集計結果報告書』としてまとめ、発行した。この報告書は、調査協力機関・個人に送付し、インターネット(http://www.meijigakuin.ac.jp/atsuge/ demo/pdf/2014_10_all.pdf)に公表した。さらにこの結果を、H15年(2003年)に実施したアンケート調査の結果とも比較して考察中である。調査結果の概要としては、H25(2013)年から開始された「新型出生前検査」の受検者からの回答はほとんどなく、その他の出生前検査の受検者は10年前とほぼ同じ人数であったこと、ただし検査についての情報入手経路が医療者の他では「本・雑誌」から「インターネット」が最多に変化したことなどが指摘できた。さらに、自由記述を含めて分析中である。2)アンケート調査結果に基づいて、第87回日本社会学会大会(2014年11月22日)において4本の演題として報告した。3)妊娠と出生前検査の経験について、全国規模でのインターネット調査を実施した、全体配信403,031、回答条件適格者8,766(出現率2.2%)(=本調査配信対象)※回答条件は、2044歳までの女性で、妊娠経験があると回答し、妊娠経験および出生前検査経験等の回答に許諾した人、回収数2,378、回収率27.1%(うち、出生前検査の受検経験あり441、なし1,937)であった。現在、有効回収数を精査中である。4)医療者と当事者団体へのインタビュー調査を実施し、現在も継続中である。まず2013年度に実施したアンケート調査の自由記述項目の分析を進めた。また2014年度末に実施したインターネット調査の結果のデータクリーニング、集計を実施した。そして、2014年に引きつづいて医療者と検査を受けた人等へのインタビュー調査を実施した。インターネット調査結果は、事前調査で40万人に配信し、この調査の用件に適う20歳44歳の女性で、出生前検査を受けているか、出生前検査を受けていない女性、計8,766名に配信して、2,378人(受検者441人、未受験・非受検者1,937人)から回答を得た。データクリーニング後に結果を分析した。

出生前検査の受検率は超音波検査は9割以上だが、それ以外の母体血清マーカー、羊水検査、NIPT、NTなどはいずれも1割以下だった。NIPTと着床前検査を受けたと答えた人の割合が高く、別の検査との混同の可能性があるため、さらに検討を行っている。2016年3月に拡大研究会(研究者向け)を開催した。「調査の概要」(柘植あづみ)、「アンケート調査結果-数量分析から」(菅野摂子)、「アンケート調査結果ー自由記述分析から」(白井千晶、石黒真里、柘植あづみ)、「インターネット調査結果」などを報告し、時間をかけて議論した。非常に有意義であった。また2016年3月には公開シンポジウム(一般、医療者、研究者向け)も開催した。山中美智子氏(産婦人科医師)による出生前検査の説明、井原千琴氏(遺伝カウンセラー)による遺伝カウンセリング等の説明、本プロジェクトの結果を3名の演者が報告した。その後、韓国と日本、イスラエルと日本の出生前検査の比較調査を行っている研究者(洪賢秀氏とIvry Tippy氏)が発表したのちに、全体の質疑応答をした。多くの質問が寄せられ、講師からの丁寧な返答がなされたため、参加者からのアンケート評価は高かった。妊娠と出生前検査に関するアンケート調査では、回収率が予想よりも高く、自由記述欄の記入率が高くて文字数も多く十分な成果が得られた。ただし、自由記述の量が大すぎたため、分析に時間がかかっている。インターネット調査は予定通りに実査を終えた。ただし、NIPTと着床前検査を受けたと答えた人の割合が予測よりもかなり高く、別の検査との混同の可能性があるため、さらに検討を行っており、もう少し時間が必要である。インタビュー調査については予定していた医療者へのインタビューは終えたが、検査を受けた女性およびそのパートナーのインタビュー協力の件数が少なかったため、基金分での調査継続をすることにした。インタビュー協力のちらし配布やホームページでの掲示によって2016年3月末から5月にかけてインタビュー件数が漸次増えており、2016年度中には本研究課題全体の成果を達成することができると考えている。『「妊娠と出生前検査の経験に関するインターネット調査2015」集計結果報告』を公表した。有効回答数は2357、回収率27.1%だった。平均年齢35.5歳、直近の妊娠の平均年齢は30.9歳だった。出生前検査について受検経験などを尋ねた。超音波検査:検査を希望した人が4割、「医療者が検査をすると決めた」と答えた人が4割いた。「受けた」は9割を超えた。母体血清マーカー検査:約半数は「そういう検査があることを知らなかった」、3割は希望しなかった(断った)とした。「受けた」は7.3%で、他の研究の推計値よりもやや高い。羊水検査:「自分で検査を受けることを希望しなかった(断った)」83.7%、「受けた」3.7%だった。NIPT:「そういう検査があることを知らなかった」が約半数、「自分で検査を受けることを希望しなかった(断った)」39.4%だった。「受けた」1.7%だった。NT検査:「そういう検査があることを知らかった」61.6%、「自分で検査を受けることを希望しなかった(断った)」26.4%だった。「受けた」6.7%だった。妊婦健診中に偶然NTの厚みを指摘された人も「受けた」と回答したと推測される。着床前診断:「そういう検査があることを知らかった」が約半数、「自分で検査を受けることを希望しなかった(断った)」41.0%、「受けた」1.2%だった。別の検査と誤解した回答が含まれると思われる。
法的政治的原理としての補完制原理に関する総合的研究

本研究の対象である「補完性原理」は、研究の期間中も、EUのリスボン条約でローカルな基礎自治体レベルまでその適用を拡げることが謳われ、またわが国の道州制をめぐる議論でも頻繁に引用されるようになった(例:道州制ビジョン懇談会中間報告など)。そこで本研究では、この原理がさしあたりは定着したものとみなし、研究目的のうち、その重心をヨーロッパの各国における同原理の具体的な適用のあり方におくこことした。その成果として、ヨーロッパの八カ国(ドイツ、イギリス、スペイン、フランス、イタリア、スイス、ベルギー、スウェーデン)を分析の対象とする、「ヨーロッパ分権改革-地域主義と補完性原理」という表題の著作を、本年7月に中央大学出版部から公刊する予定である。結論として、(1)補完性原理は現段階では、特に国と地域(国の下の最大の領域団体-連邦制国家での州やカントン、単一制国家でのリージョンやレーン)の関係において、後者の地位を拡大するための最も重要な概念となっており、地域主義興隆の支柱となっていること、(2)この原理はさらに基礎自治体の権限拡大のための教導概念とすることが求められているが、法的概念のあり方に多くの議論があり、この問題はなお模索の段階にあること、(3)翻って、わが国の道州制をめぐる議論では、その分権化目的を徹底するために、この原理についての一層の啓蒙活動が必要であること、を得た。補完性原理の問題については、原理の一層の彫琢、わが国を含めた原理適用のあり方の今後の展開に関し、研究を継続する予定である。(1)1-2ヶ月毎に主として東京都内および北海道(1回)で研究会を開催し、連邦制の理論一般(後藤、山田)、ドイツの地域産業政策(佐藤)、ドイツの第2院(広田)、フランスの市制(西村)、イタリアの地方分権化(高橋)、ベルギーの連邦制(津田)、スコットランドのデヴォルーション(山崎)、スペイン・カタローニャの自治州憲章(若松)、ドイツの基本法改正(山田)、イギリスにおけるヨーロッパ地方自治憲章の受容(広田)をテーマとする報告と意見交換を行った。(2)これらの研究と並行して、2006年8月に北海道道庁を訪問し、「道州制特区推進法」施行後の北海道における道州制構想推進、道内分権化の現状につき、道の担当者へのインタヴューと資料収集を行った(山田、出口、西村、白藤、若松、広田、山崎、高橋)。また海外調査としては、2007年2月(高橋)と3月(山田、若松)にイタリアのフィレンツェ大学を訪問し、イタリアの憲法改正と地方分権化の動きおよびヨーロッパ各国の分権化の動向につき、同大学のC.Fusaro教授と意見交換を行った。その後、ボローニャ市の市憲章とそれをめぐる市政の状況につき、市の担当者へのヒアリングと資料収集を行った。(3)以上の活動に基づいて、各人が別掲11にある研究発表を行った。また、これとは別に従来からの研究活動をふまえて、本年度中に『補完性原理と欧州リージョナリズムの展開』(仮題)と題する研究書を、中央大学出版部から出版する予定であり、現在各研究分担者がこれに意を注いでいる。(1)本年度の研究会としては、東京都内で補完性原理一般(白藤)につき報告と意見交換を行い、また神奈川県で神奈川大学の共同研究会「リージョナリズムの比較研究」と共催して、韓国産業大学の朴教授「韓国の産業クラスター戦略」、国民行革会議の並河信乃氏「日本の道州制問題」につき、講演と意見交換を行った。(2)これらの研究と並行して、2007年7月に高橋がイタリアのフィレンツェ大学で講演と調査を行い、同年10月に広田が韓国・済州島での都市・地方政府世界連盟に参加して、各国の研究者と意見交換を行った。2008年3月に山田、広田、穴見がスペイン、フランス、ドイツの研究機関(バルセロナ大学、欧州評議会、マールブルク大学)を訪問し、研究者との意見交換、資料収集にあたった。

(3)本年度の後半では、本研究を総括するものとして、2008年7月に中央大学出版部から『現代ヨーロッパにおける地域改革の新潮流』と題する研究書を出版するために、各研究分担者が執筆に意を注いだ。各人の国別の執筆分担は、山崎-イギリス、西村-フランス、山田-ドイツ、高橋-イタリア、若松-スペイン、田口-スイス、津田-ベルギー、穴見-スウェーデンである。また、出版打ち合わせのために、2007年12月に神奈川大学箱根保養所で会合をもった。
赤血球自己散乱情報に基づく血管内脈動血流動場の定量的可視化

本年度は視野拡大Laser DopplerVelocimetry (LDV)の多点化について検討し、レーザー交差領域の拡大化を図った。本研究は一点計測LDVの計測原理に基づいて血流計測できる装置の開発を目的とする。生体内における血液の流れ方や血流量は病理を診断する上での重要な情報である。言い換えれば、血流を計測することは病理診断の根拠を得る指標になる。本研究はレーザーによる完全非侵襲計測が可能なLDVを構築し、かつ多点計測することで血流速の空間分布情報を得る流速計測システムの開発を目的とする。多点計測は計測領域の拡大技術によって実現される。今年度は一点計測LDVの光学系をベースに、各光学素子を配置を変更することで計測領域の拡大を達成できたことが成果であった。また、血流計測においては血流速の情報と合わせて血液の流れる方向も合わせて判別する必要がある。次年度の課題として、血流速のベクトルを計測結果として表示するためのAcoustic Optical Module (AOM)を組み込んだLDVを開発していく。AOMを取り入れたLDVはすでに開発され、製品化もなされているが、我々独自に開発した多点LDVにAOMを導入した計測系は血流計測装置として魅力的なツールとなる。LDVの計測系は昨年度より構築が進んでおり、データ処理系や光信号のアンプ回路までも構築指針は得られている。また実験室レベルでの動作確認のために幅・高さともに1.4mmの細流路も用意した。すなわち、多点化に向けた取り組みのベースはこれまでの2年間で進んだことで来年度にかけて、アンプ回路を増やし、イメージング画像の取得を行う。昨年度の終わりには、本年度の課題として、レーザー計測領域の拡大を挙げていたが、光学要素の位置関係のみで送光系におけるレーザー光さ領域の広さに制約されないLDVを構築する知見を得たため、おおむね順調に進展していると評価した。次年度の課題はLDVの血流計測を行うことである。送光系における計測領域の拡大はおおむね達成できたことから次なる課題はLDVの血流速計測を行い、その結果の出力までを行うことである。赤血球からの光散乱信号をいかに取得しながら血流速情報のアウトプットまでを達成するかが次年度の課題である。本年度は視野拡大Laser DopplerVelocimetry (LDV)の構築、ならびに生体計測分野への適用を行った。そもそも、一点計測という特徴を持つLDVを多点化することで同時性のある流速の空間分布を得ることができる。また、LDVは流速の絶対値計測が可能であることから生体計測に応用することで完全非侵襲計測が可能となる。今年度は一点計測LDVを基盤技術として光学系の改良による多点計測方法の開発に取り組んだ。ロッドレンズやシリンドリカルレンズを組み合わせることで計測領域の拡大を達成できた。末梢部を対象にした血流計測実験の結果を用いて、微細血管の3次元空間におけるイメージング画像を構築することができた。生体を傷つけることなく血流の様相を観察できる方法であることが示された。糖尿病患者などでは末梢部血管の閉塞が血管組織周囲の神経系の機能不全を引き起こし、小さな傷が生じた場合に自覚症状のないままに重大な損傷に至るケースもある。そのような場合に末梢部血管の血流動態を完全非侵襲で検出できることは閉塞状態を明らかにできる。代表者が開発しているLDV血流計は血流に追従する個体成分の移動速度が散乱光の信号として取得し、その周波数成分から血流速を推定する方法である。今年度は散乱光のパワーに着目し、その散乱光パワーが血液に含まれる成分に影響を受けることが明らかにされた。具体的には、血液に含まれる成分や血管周りの組織に対するレーザーの波長に対する吸収特性の違いから、水よりもヘモグロビンの方が吸収係数が大きなレーザー波長を用いることで、光吸収により血管部の散乱光パワーが低下することを示した。この結果、レーザーの照射のみで血管の位置特定に関する指標を示した。視野拡大LDVを構築したこと、LDVの計測原理が血流計として応用できることが確認されたために、おおむね順調に進展していると評価した。今年度の取り組みとして光学系の設計、部品の手配を行い、広視野LDVが予定通り構築された。現在、その視野の広さを評価する手法について取り組んでいる。レンズの配置に対して、拡大されたレーザー光のどこから計測位置として機能するかを客観的指標で定量的に明らかにすることを次の課題としている。

次年度の課題として、血流速のベクトルを計測結果として表示するためのAcoustic Optical Module (AOM)を組み込んだLDVを開発していく。AOMを取り入れたLDVはすでに開発され、製品化もなされているが、我々独自に開発した多点LDVにAOMを導入した計測系は血流計測装置として魅力的なツールとなる。LDVの計測系は昨年度より構築が進んでおり、データ処理系や光信号のアンプ回路までも構築指針は得られている。また実験室レベルでの動作確認のために幅・高さともに1.4mmの細流路も用意した。すなわち、多点化に向けた取り組みのベースはこれまでの2年間で進んだことで来年度にかけて、アンプ回路を増やし、イメージング画像の取得を行う。昨年度の終わりには、本年度の課題として、レーザー計測領域の拡大を挙げていたが、光学要素の位置関係のみで送光系におけるレーザー光さ領域の広さに制約されないLDVを構築する知見を得たため、おおむね順調に進展していると評価した。次年度の課題はLDVの血流計測を行うことである。広視野LDVの構築に対し、その視野の広さを明確にすること、ならびに視野の広さをコントロールし、任意の広さを実現することが今後の研究の推進方策としている。血流計に応用する場合に限定された空間での使用が考えられ、また計測対象に応じた計測視野が求められる。光学系の設計段階から、LDVでの計測領域を自在に制御できるような知見を得る取り組みを目指す。送光系における計測領域の拡大はおおむね達成できたことから次なる課題はLDVの血流速計測を行い、その結果の出力までを行うことである。赤血球からの光散乱信号をいかに取得しながら血流速情報のアウトプットまでを達成するかが次年度の課題である。LDVの視野を拡大する方法としてレンズ種類や組み合わせを幾つかのパターンを用意するために物品費を計上していたが、既存のレンズの組み合わせで比較的簡易的に計測領域の拡大に成功したことことから物品費の節約ができた。視野拡大に向けて取り組んだ知見は次年度の学会発表で使用する予定である。今年度はレーザー送光系からの観点から計測領域の拡大を図ることが研究推進の位置付けであった。スネルの法則をベースとした光路計算によって拡大指針を検討したところ、これまでに用意したレンズ系統で十分な広さでレーザー光の重ね合わせ領域を得ることができた。すなわち、レンズ素子を購入して検討するような物品費を抑制できたことが次年度への使用額が生じる結果となった。一方で光信号を取得してからPCに取り込むまでの必要な機器(ADボードなど)の増設が次年度での課題となる。また、今年度は受光系での重要な要素となる光ファイバーアレイについても実験室で製作するノウハウを得ることもできた。以上、今年度までに解決した送光系の受光部からさらに受光部、データ処理系の一連の機器の増設を次年度の執行予算として計画している。
リーマン幾何学の部分多様体論への応用

リーマン幾何学が生み出した手法のうち、ハウスドルフ近似はアレクサンドロフ空間をその極限として生じ、極めて重要な手法である。それを部分多様体論に応用し新しい問題を開拓する事も本研究によって手がけられた。まずアレクサンドロフ空間Xの構造に関し、大津幸男-塩谷隆はX^a上の特異集合のハウスドルフ測定を評価し、X^n上殆ど至る所にC^1-微分構造とC^0-リーマン計量が自然に定義され、その計量から導入した距離はX^aの距離と一致することを証明した。大津は更にX^n上殆ど至る所にC^2-構造が定義され、ヤコビ場のノルム等が得られることを示し、塩谷は非コンパクトなX^n上の半直線の測度とX^nの理想境界のTits距離との関連を解明した。菅原はアレクサンドロフ曲面X^2上の極の大きさを精密に評価した。町頭はX^2上の測地三角形の超過量の極限から自然に定まる測定を導入し,Vitaliの被覆定理を用いて,X^2上殆ど至る所でガウス曲率が定まる事を証明した。かくしてRadon-Nikodymの定理から得られる絶対連続関数がガウス曲率である事が解明され、幾何学と測度論との融合が得られた。塩浜-田中実はX^2上のコンパクト集合に対する切断跡は、その内点集合が可算個の求長可能なジョルダン弧の和であってその端点集合はフラクタル集合となり得る事を示した。更に距離円は殆ど全ての半径に対して有限の長さをもつ有限個のサークルとなる事を証明した。切断跡の端点集合がフラクタル集合となる具体例は伊藤仁-によって得られた。田上広行(九大・大学院)は上に有界な曲率を持つアレクサンドロフ空間の構造について、特異点集合のハウスドルフ測定及びリーマン計量の存在について調べた。山口孝男は殆ど非負曲率のリーマン多様体に関する崩壊理論を完成させ、アレクサンドロフ空間への拡張を試みた。
台風等に対する航空機搭載フェーズドアレイ気象レーダによる観測システムの構築

日本に大きな災害をもたらす台風や線状降水帯などの降水システムの立体構造の観測を可能にする航空機搭載フェーズドアレイ気象レーダの開発を目指した、基礎研究を目的としている。台風の研究においては、その急発達のメカニズムの解明が喫緊の課題であるが、その1つのアプローチとして台風内部の立体的な構造の正確な把握が挙げられる。本研究では、フェーズドアレイ気象レーダを航空機に搭載するための基礎的な研究を行い、実現性を高める。また、効率的な航空機観測を目指して人工衛星等を用いた台風の発達フェーズに対応した降水構造についての解析も併せて実施する。実施にあたっては、レーダメーカや航空機運行会社の協力のもと実施する。
質量分析イメージングを用いたヒト加齢黄斑変性症のバイオマーカー探索

本研究では質量分析イメージングを用いたヒト加齢黄斑変性症バイオマーカーの探索を目的とした。組織切片上から生体分子を直接イオン化するためのマトリクス塗布方法の最適化や金属ナノ粒子を用いたイオン化法を見出し、各種脂質および脂肪酸の検出・可視化に成功した。これらをヒト加齢黄斑変性症由来の組織切片へ適用することにより、健常者との比較を行い、疾患特異的に発現するバイオマーカー候補分子を明らかにした。本研究はヒト加齢黄斑変性症の発症メカニズムの解明を目的としたバイオマーカーの探索を目指している。解析手法として採用する質量分析イメージングは、組織切片上に予めマトリックスと呼ばれるイオン化促進の働きを持つ有機試薬を均一に塗布し、レーザー照射によるラスタースキャンを行う。これによって得られた各点のスペクトルから任意のシグナルを抽出し、各点でのシグナル強度に応じた二次元分布として生体分子を可視化する手法である。この手法では、様々な分子が混在して構成される組織切片に対して直接質量分析を行うことから、検出可能な分子が制限されてきた。本年度は、動物およびヒト由来の組織切片を用意し、切片上へのマトリックス塗布方法の最適化を行うことによって多くのシグナルを検出し、各分子の分布を可視化することに成功した。さらに組織切片上において多段階質量分析を行うことによって、これまで質量分析イメージングで報告されてきたホスファチジルホリンやスフィンゴミエリンだけでなく、そのリゾ体とトリアシルグリセロールの分子同定を脂肪酸組成を含めて解明することに成功した。以上の成果をLipids (2009)およびPlacenta (in press)に報告した。リン脂質のリゾ体は様々な疾患に影響を及ぼすことが報告されている。来年度に計画しているヒト加齢黄斑変性症の試料を解析し、バイオマーカーを探索する上でリン脂質のリゾ体は非常に重要な解析対象となる可能性がある。これまでに既存のマトリックスを塗布し、生体分子を検出するための条件を最適化した。今年度はさらに多くの生体分子を検出することを目的として、銀を核としたナノ粒子をマトリックスとして代用することによるイオン化を試みた。その結果、これまでの手法では検出することができなかった各種脂肪酸の検出および視覚化に成功した(J Am Soc Mass Spectrom, 2010)。既存のマトリックスでは生体分子との巨大な共結晶を形成することから、質量分析イメージングの解像度を低下させる要因となっていた。ナノ粒子は微小な結晶を形成することから、微小な構造領域を有する網膜へも有用であることが明らかになった。質量分析イメージングによって取得されるデータセットは膨大であり、その解析には長時間を有し、特異的な分布を有する生体分子の探索を遅らせる要因になっていた。そこでデータセットから自動的に有意義な生体分子のシグナルを検索するソフトウェアを開発した(Anal Bioanal Chem, in press)。そのソフトウェアをマウス網膜から取得されたデータセットへ適用したところ、網膜の各構造別に発現する脂質種を自動的に抽出するに成功した。これらの手法をヒト加齢黄斑変性組織へ応用し、様々な種類のシグナルを検出している。この解析により、病理特異的に発現する分子種を特定することが期待される。
ＣＤＩＳＣ標準による臨床・疫学研究症例データリポジトリ―の試験開発

本研究で採用したXMLデータベースシステムは導入したデータに対し通常のデータベースに実施するのと同様にフロントエンドWebアプリケーションを操作して検索可能なことが確かめられた。これは厳格な統一を強要せず簡便な取り決めだけでデータ収集が可能なことを意味する。今後、異なる分野や異なる研究のデータを収集しメタアナリシスや統計解析を実施するなどの場合において従来型データベースシステムを用いる場合に比較して本研究で採用したXMLデータベースシステムの場合は期間的及び費用的な面から大変有利であると考えられた。過去の臨床・疫学研究の個別症例生データは、少数の共同研究者のみに共有され、1)個別症例生データを活用したメタアナリシス、2)第三者による再統計解析の検証は不可能であった。近年、臨床研究電子化の国際規格CDISC(Clinical Data Interchange Standard Consortium)標準の完成度向上によって、これらが「理論上は可能」となってきた。しかし、匿名化した個別症例生データを医学研究者で共有するリポジトリーの実用性の検討はまだ行われていない。本研究の目的は、各分野の異なった研究グループの異なった臨床・疫学研究の個別症例生データをデータベースとして集積して、逐次データ抽出、メタアナリシス、統計解析に利用可能な臨床・疫学研究症例リポジトリーの試験開発・試験運用を行うことにある。データベースシステム(以下DB)では対象データ形式を構造情報として設定しデータは厳格に合致させ導入する。異なる分野の異なる研究のデータ収集時においてデータ構造統一作業負担は計り知れない。統一出来ずDB構築不能になる場合もある。本研究で採用したBaseXはDB側に定義不要で導入データ側XMLに構造定義でデータ導入が可能であった。そして導入したデータに対し従来DB同様にフロントエンドWebアプリケーション(以下本アプリ)を操作し検索可能なことを確かめた。これは異なる分野や異なる研究のデータを収集しメタアナリシスや統計解析を実施する場合において従来に比較し期間的及び費用的な面から大変有利である。検索を実施すると結果もXML形式で得られるので結果を別途DBに取り込める。これらにより形式や記述がバラバラな分野ごとに異なる臨床・疫学研究の個別症例生データに対してメタアナリシス、統計解析への利用可能性が開け、かつその検索には一般利用者が簡単に利用可能な本アプリが有用と考えられた。本年度は、1.研究に利用する環境の構築(Red Hat Enterprise Linux Server release 6.1でのXMLデータベースソフトウエアBaseX7.5-1.1の構築)、2.CDISC ODMによる臨床研究症例サンプルデータの作成(CDISC ODM(Operational Data Model)仕様にもとづいて、4種類の臨床試験のサンプルXMLデータを作成)、3.臨床研究症例サンプルデータのXMLデータベースへの導入とXPath、XQueryを用いた試験検索、4.フロントエンドWebアプリケーションの設計(XPath、XQueryを用いた試験検索の結果に基づいた一般利用者向けのフロントエンドWebアプリケーションのシステム仕様の原案の策定(臨床研究の個別症例データ(CDISC ODM)を、研究分野や患者背景情報に基づいて、検索結果を表示し、ダウンロード可能な小規模なソフトウエア)を実施した。本研究で採用したBaseXはデータベースシステム側に予めスキーマ定義が不要で導入するべきデータ側のXMLに構造を単純に定義しておくだけでデータを導入することが可能であった。そしてそのようにして導入したデータに対し通常のデータベースに実施するのと同様に検索可能なことが確かめられた。今後、異なる分野や異なる研究のデータを収集しメタアナリシスや統計解析を実施するなどの場合において従来型データベースシステムを用いる場合に比較して大変有利であると考えられた。研究計画が適切であり、実際に計画を実施した上でも情報システムの構築に伴い発生しがちな予測困難な問題の発生(OSや関連ライブラリー等の環境要因との相性が悪いことによるインストールや動作不良の問題等)がなかったために順調に予定とおり研究は進捗している。平成24年度に構築したBaseX上のシステムでに検証を継続するとともに、平成24年度の成果をもとに一般利用者向けのWebフロントエンドシステムの構築及び検証を行う。消耗品、旅費等を最低限度にして、システム開発委託経費に可能な限り支出して、研究目標の達成に努める。
エストリオールの骨芽細胞に対する直接作用に関する分子生物学的解析

エストロゲン、特にエストリオールの骨芽細胞に対する直接作用の詳細については明らかではない。前年度の研究により、エストラジオール(E2)ならびにエストリオール(E3)が、骨芽肉腫細胞株(HOS)の細胞増殖能を増加させ、細胞内IGF-I蛋白レベルを増加させ、さらにHOS細胞IGF-I mRNAレベルを増加させることを認めた。そこで本年度はさらにE2ならびにE3がHOS細胞IGF-Iレセプター(IGF-I R)の発現に与える影響についてIGF-I Rに対するプライマーを用いた定量的RT-PCR法を用いて、mRNAレベルで検討を行った。その結果、HOS細胞にIGF-I RmRNAの発現を認めたが、その発現レベルに差を認めないことが確認された。このことから、E2ならびにE3がHOS細胞増殖能を促進する経路として、IGF-IならびにIGF-I Rを介して発現する可能性が示唆され、E2ならびにE3の骨芽細胞に対する直接作用の機序解明につながるものと考えられた。さらに、前年度E2ならびにE3がVitamin D3(Vit D3)との同時添加によりHOS細胞増殖能を相乗的に増加させたことから、本年度はE2ならびにE3とVit D3の同時添加がHOS細胞Vit Dレセプター(Vit DR)発現に与える影響について検討を行った。HOS細胞の無血清培地培養系にE2、E3とVit D3の同時添加を行い、添加48、72時間後におけるHOS細胞Vit DR mRNAの発現を、定量的BT-PCR法を用いて検討した。その結果、HOS細胞にVit DR mRNAが発現しており、添加48時間後では、E2、E3、Vit D3単独添加群に比較し同時添加群においてはHOS細胞のVit DR mRNAの発現がコントロール群に比較し増加することを認めた。さらに添加72時間後ではE2とVit D3同時添加群では認められなかったVit D RmRNA発現の増加が、E3とVit D3の同時添加群のみで観察された。E2ならびにE3とvit D3製剤の併用が骨粗鬆症の骨量増加に臨床上有効であることを認めているが、以上のin vitroにおける成績は、その作用機序解明における基礎的な裏付けとなるものと考えられる。エストリオール(E3)の骨量に及ぼす影響は臨床的によく知られているが、その作用機序の詳細は明らかではない。そこで骨芽細胞に対するE3の直接作用を検討する目的で、骨芽肉腫細胞(HOS)のin vitro培養系を用いて、E3のHOS細胞増殖能に与える影響を調べ、同時ににエストラジオール(E2)の作用と比較した。HOS細胞を、E2(10ng/ml)あるいはE3(1,10,100、l000ng/ml)添加下、非添加下に無血清培地で培養し、E2ならびにE3の細胞増殖能に与える影響を細胞数ならびにBromodeoxy uridine(BrdU)uptakeの免疫細胞化学的陽性率より検討した。またE2あるいはE3添加72時間後のHOS細胞から蛋白を抽出し、Westen blot法によりPCNA蛋白発現を調べた。また、IGF-Iが,骨芽細胞の重要な局所増殖因子であることに注目し、E3のHOS細胞におけるIGF-I産生能に与える影響を調べ、E3によるHOS細胞増殖促進へのIGF-Iの関わりを明らかにしようとした。また臨床的にE3とVitD製剤の併用効果が有効であったことから、同系においてE3とVitDの添加実験を行い、両剤によるHOS細胞増殖能に与える影響について検討を加えた。E2(10ng/ml)ならびにE3(10100ng/ml)添加群では細胞数と蛋白量が添加72時間後に有意に増加したが、E3添加濃度が1ng/mlならびに1000ng/mlでは細胞増殖促進効果は観察されなかった。またE2添加とE3添加の間では増殖促進効果に差はなかった。一方、E2(10g/ml)ならびにE3(10100ng/ml)添加によってHOS細胞のBrdU陽性率は有意に増加したが、その効果発現にはE3では24時問を要したのに対し、E2では48時間を要した。Western blot法による検討では、E2ならびにE3添加によリHOS細胞のPCNA蛋白の発現増強を認めた。また、E2(10ng/ml)あるいはE3(100ng/ml)添加群ではコントロール群に比較しHOS細胞内IGF-Iレベルが増加傾向を示した。またHOS細胞にはIGF-IcDNAprobeとハイブリダイズするmRNAの発現を認め、E2(10ng/ml)あるいはE3(1100ng/ml)添加によリHOS細胞でのIGF-ImRNA発現が増強することを認めた。E2ならびにE3添加群間でその発現の増強効果に差はなかった。またエストロゲンとVit DのHOS細胞増殖能に与える影響についてMTTassayにより検討した成績では、エストロゲンとVit D(10^<-9>M)の同時添加により、添加24、48時間後においてHOS細胞増殖能が増加する傾向が認められた。以上より、E3は至適濃度(10100ng/ml)でHOS細胞の増殖活性を高め、その促進効果はE2(10ng/ml)と同等であった。またHOS細胞でのE3の作用発現に要する時間はE2に比較して短いことが推察された。

E2あるいはE3添加によりHOS細胞内IGF-Iレベルが増加すること、HOS細胞内にIGF-ImRNAの発現が観察され、その発現レベルが、E2ならびにE3添加により増強したことから、E2あるいはE3のHOS細胞増殖促進効果はIGF-Iとその受客体を介して発揮される可能性が示唆された。さらにE2、E3とVitD3の同時投与が、E2、E3単独群、VitD単独群に比し、HOS細胞増殖能を高める可能性が示唆された。エストロゲン、特にエストリオールの骨芽細胞に対する直接作用の詳細については明らかではない。前年度の研究により、エストラジオール(E2)ならびにエストリオール(E3)が、骨芽肉腫細胞株(HOS)の細胞増殖能を増加させ、細胞内IGF-I蛋白レベルを増加させ、さらにHOS細胞IGF-I mRNAレベルを増加させることを認めた。そこで本年度はさらにE2ならびにE3がHOS細胞IGF-Iレセプター(IGF-I R)の発現に与える影響についてIGF-I Rに対するプライマーを用いた定量的RT-PCR法を用いて、mRNAレベルで検討を行った。その結果、HOS細胞にIGF-I RmRNAの発現を認めたが、その発現レベルに差を認めないことが確認された。このことから、E2ならびにE3がHOS細胞増殖能を促進する経路として、IGF-IならびにIGF-I Rを介して発現する可能性が示唆され、E2ならびにE3の骨芽細胞に対する直接作用の機序解明につながるものと考えられた。さらに、前年度E2ならびにE3がVitamin D3(Vit D3)との同時添加によりHOS細胞増殖能を相乗的に増加させたことから、本年度はE2ならびにE3とVit D3の同時添加がHOS細胞Vit Dレセプター(Vit DR)発現に与える影響について検討を行った。HOS細胞の無血清培地培養系にE2、E3とVit D3の同時添加を行い、添加48、72時間後におけるHOS細胞Vit DR mRNAの発現を、定量的BT-PCR法を用いて検討した。その結果、HOS細胞にVit DR mRNAが発現しており、添加48時間後では、E2、E3、Vit D3単独添加群に比較し同時添加群においてはHOS細胞のVit DR mRNAの発現がコントロール群に比較し増加することを認めた。さらに添加72時間後ではE2とVit D3同時添加群では認められなかったVit D RmRNA発現の増加が、E3とVit D3の同時添加群のみで観察された。E2ならびにE3とvit D3製剤の併用が骨粗鬆症の骨量増加に臨床上有効であることを認めているが、以上のin vitroにおける成績は、その作用機序解明における基礎的な裏付けとなるものと考えられる。