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近世薩摩藩における奥向構造の復元的基礎研究

本研究では、薩摩藩における同時代の、異なる人物の手元で作成された複数の奥日記を分析対象とすることで、奥向構造の人的・組織的・史料的な全体像を把握・復元することを目的とした。12人の手による38冊の日記を分析し、儀礼・贈答から血縁者の交流関係をあきらかにすることができた。また、藩政に関わる史料が書き写されていたことから、奥向自体が独立した組織ではなく、表向と相互に補完し合う「政治機構」として機能していたことがあきらかとなった。本研究は、1)薩摩藩の奥向構造の人的・組織的・史料的な全体像の把握と復元すること、2)復元した奥向をそれ自体が独立した組織ではなく、表向(政治の場)と相互に補完し合う「政治機構」として、藩政に果たした役割を大名・藩研究のなかにしっかり位置づけることを目的とする。したがって、同時代の、異なる人物の手元で作成された複数の奥日記を分析対象とすることで、奥向構造の人的・組織的・史料的な全体像を把握・復元するという研究方法を採った。2013年度は、すでに翻刻・分析作業に着手していた文久4年、慶応2年の「蔦印(島津斉興の側室・久光の母)日記」各1冊に加え、文久4年の「弓印(島津斉彬3女・島津忠義正室)日記」1冊、「槇印(斉彬5女・島津忠義継室寧姫」日記」2冊、慶応2年の「表方右筆間日記」1冊、「弓印日記」1冊、「槇印日記」4冊をデジタルカメラで撮影し、翻刻・分析作業を行った。特に奥日記の記述の中心である贈答行為や御機嫌伺いなどの儀礼・交際面に着目し、人物構成・職制・人物交流の範囲などを比較しながら全体像を把握することができた。また、人物比定や用語集など今後研究をスピーディーに進めていくための基礎データを集めることができた。2014度は、上記の基礎データをもとに安政4,5年の11冊の奥日記を分析対象とし、デジタルカメラによる撮影を行う。薩摩藩にとって、この時期は藩主島津斉彬が一橋慶喜と初対面を実現したり、集成館事業を完成させたりと藩内外で活躍するが、その斉彬が安政5年7月に急逝し、跡を茂久(忠義)が継ぐという「御家」存続の危機に直面した時期でもあり、その「御家」の存続戦略を解明する。本研究では、1)薩摩藩における奥向構造を人的・組織的・史料的に把握・復元すること、2)復元した奥向をそれ自体が独立した組織ではなく、表向(政治の場)と相互に補完し合う「政治機構」として、藩政に果たした役割を大名・藩研究のなかに位置づけることを目的とする。前年度(2013年度)に行った人物否定や用語集などの基礎データをもとに、以下の作業を行った。1)藩主島津斉彬が一橋慶喜と初対面を実現したり、集成館事業を完成させたりと藩内外で活躍するが、その斉彬が安政5年7月に急逝し、跡を茂久(忠義)が継ぐ時期である安政4,5年の「磯湯茶屋御滞在日記」1冊、「哲丸様日記」2冊、「典姫様日記」2冊、「槇印日記」3冊、「指宿二月田御茶屋日記」1冊、「槇印日記」2冊(全11冊)と、2)薩摩藩の尊王派などを鎮撫した寺田屋事件、島津久光の行列に乱入した騎馬のイギリス人を供回りの藩士が殺傷した生麦事件、そのもつれから起こった薩英戦争などの時期である文久2,3年の「弓印道中日記」1冊、「典姫様日記」1冊、「槇印日記」8冊、「玉里詰所日記」2冊、「詰所日記」2冊、「表方祐筆間日記」1冊、「弓印日記」1冊(全16冊)を、デジタルカメラにて撮影し、その翻刻・分析作業を行った。2014年度に今年度分の史料をデジタルカメラにて撮影し終えていたため、2013年度に行った人物比定や用語集などの基礎データをもとに以下の作業を行った。文久2年、3年は、薩摩藩にとって、尊王派などを鎮撫した寺田屋事件、島津久光の行列に乱入した騎馬のイギリス人を供回りの藩士が殺傷した生麦事件、そのもつれから起こった薩英戦争など、藩内外のみならず、外国との関係においても「御家」存続の危機に直面した時期であった。

そこで、文久2年:「弓印道中日記」1冊、「典姫様日記」1冊、「槇印日記」4冊、「玉里詰所日記」1冊、「詰所日記」1冊、文久3年:「表方祐筆間日記」1冊、「弓印日記」1冊、「槇印日記」4冊、「玉里詰所日記」1冊、「詰所日記」1冊の史料の翻刻・分析作業を行った。複数の奥日記のなかに、小松帯刀の書状など表向の動向を示す史料が書き写されており、それらに関心が寄せられていたことがわかった。どのような情報が書写され、あるいは書写されなかったのか、今後の検討課題としたい。本研究では、薩摩藩における同時代の、異なる人物の手元で作成された複数の奥日記を分析対象とすることで、奥向構造の人的・組織的・史料的な全体像を把握・復元することを目的とした。12人の手による38冊の日記を分析し、儀礼・贈答から血縁者の交流関係をあきらかにすることができた。また、藩政に関わる史料が書き写されていたことから、奥向自体が独立した組織ではなく、表向と相互に補完し合う「政治機構」として機能していたことがあきらかとなった。本年度、次年度分を含め、当初の研究計画で予定していた奥日記27冊をすべてデジタルカメラで撮影することができた。1冊1冊の分量が非常に多く、それらをすべて翻刻するには、まだ時間がかかりそうである。したがって、「御家」存続の危機に直面した時期に絞り込んで分析することとし、本年度は特に島津斉彬が急逝する安政5年7月前後について、4種の日記より、状況を把握することができたと考える。本研究の成果を中央公論新社より刊行すべく、現在準備を進めているところである。これまでの島津斉彬・島津久光・西郷隆盛・大久保利通・小松帯刀といった、いわゆる「英雄」を中心に描かれてきた幕末薩摩藩の歴史に対して、奥向の視点を加えた歴史叙述を行い、より豊かな歴史像を描き出したいと考えている。日本近世史2015年度は、すでに奥日記の写真データがそろっているのでその翻刻・分析作業に邁進したいと考える。ただし、1冊1冊の分量が非常に多いため、島津斉彬が集成館事業を完成させた時期、寺田屋事件や生麦事件、薩英戦争など、藩内外で「御家」存続の危機に直面した時期に絞り込んで、分析することにしたい。また、人物の相関関係など、基礎データが集まりつつあるので、それらを用いて人物構成、職制、人物交流の範囲などを比較しながら奥向構造の全体像を把握することにしたい。さらに、2014年度は、史料の収集、翻刻・分析に時間がかかり、それをまとめて研究報告をしたり、研究論文としてまとめることができなかった。2015年度は積極的に研究報告、研究論文にて研究成果を発信していくつもりである。奥日記中に現れる人物比定に思いのほか時間を要したため、人物構成・職制・人物交流の範囲など基礎となるデータや見取り図の作成に終始してしまったことが理由である。ただし、このデータや見取り図は今後の研究を円滑に進めていくうえで基礎となるデータであることから時間を掛けて作成した。史料の複写をすべてデジタルカメラで行ったことが原因である。2014年度は、2013年度に作成した基礎データをもとに、安政4,5年の奥日記11冊の翻刻・分析をスピーディーに行い、儀礼・交際を分析する研究から政治文化構造や秩序維持システム、「御家」の存続戦略を解明する研究動向との接合を図る。また、これらの研究成果を学会・研究会で発表するとともに、研究論文としてまとめることを目的とする。2014年度に史料の複写がすべて終了したため、2015年度も史料の複写費用があまりかからないことが予測される。前年度分とあわせて、翻刻作業を効率よく行うために、当初の計画では予定していなかったアルバイトを雇用し、それに充当する計画である。
会社従属法の設立準拠法主義とその展開～適用範囲をめぐる議論を中心に～

本研究は、「会社従属法の設立準拠法の適用範囲」の問題について、アメリカとEUの議論から示唆を得て、利害関係者の予測可能性を向上させるという観点から、わが国の設立準拠法の適用範囲をめぐる議論を中心に解釈論と立法論を展開する。一般的には、設立準拠法主義において、会社の内部関係と外部関係の分類が妥当すると考えられる。どこまでが内部事項の範囲かは解釈に委ねられる場合もあるが、会社の内部関係には、原則として、設立準拠法が適用される。本研究では、会社従属法の設立準拠法主義をめぐる明文化の問題に関し、具体的な適用事項を列挙する形式での規定のあり方について、立法論的に検討する。
前立腺癌の再燃と悪液質におけるIL6とIL8の病態生理学的意義の解明とその克服

In vitroにおいて前立腺癌培養細胞株であるPC3,DU145,JCA1はIL-6を産生した。PC3細胞を各種濃度のIL-6存在下に培養したときの細胞増殖が刺激された。JCA1細胞を抗ヒトIL-6受容体抗体とともに培養したとき細胞増殖活性が抑制された。以上の結果より、IL-6が前立腺癌細胞により産生されることが示され、また、IL-6が前立腺癌細胞の増殖に関与している可能性が示唆された。未治療前立腺癌患者の血清IL-6は臨床病期の進行とともに増加したが、組織学的所見との間に関連性を認めなかった。血清IL-6が高値(≧7pg/ml)を示す群における血清PSA, LDH, ALP値はIL-6低値群(<7pg/ml)に比べて有意に高い値を示した。EODが増加するに従い血清IL-6値も上昇した。血清IL-6値が7pg/ml以上を示す患者ではそれ未満の患者に比べて有意に生存率が不良であり、EODとIL-6値が予後に及ぼす有意な独立因子であることが示された。以上の結果より、前立腺癌患者において血清IL-6はdisease aggressivenessと関連し、有意な予後因子であることが示された。血清tumor necrosis factor(TNF)活性は未治療前立腺癌症例や寛解例に比べ再燃例において明らかに高値を示した。血清TNF活性陽性例におけるpetformance statusは陰性例に比して有,意に悪く,body mass index、血清総蛋白、アルブミン、ならびにヘモグロビン値は陰性例に比べて有意に低い値を示した。一方、PS1以上、BMI21kg/m2以下,アルブミン3.5g/dl以下、あるいはヘモグロビン11g/dl以下を示す症例はそうでない症例と比較してそれぞれ有意に高い血清TNF活性を示した。血清TNF活性陽性例は陰性例に比べ有意に生存率が低下していた。癌悪液質を伴う前立腺癌患者において血清TNF活性が増加しており、癌悪液質におけるTNFの関与が示唆された。前立腺癌細胞の増殖におよぼすIL-6などのサイトカインの役割ならびにそれらサイトカインの活性を抑制することによる増殖活性の変化につき検討した。まず、前立腺癌培養細胞株であるPC3,DU145,JCA1ならびにLNCapによるIL-6の産生能を調べるため、in vitroにおけるそれらの培養土清中の活性をenzymelinkedimmunosorbent assayにより測定したところ、PC3,DU145,JCA1の培養上清中のIL-6の活性は23.3pg/ml,9.5pg/ml,5533pg/mlであり産生が認められたが、LNCapでは<0.16pg/mlと活性が認められなかった。次に、それらサイトカインの細胞増殖に及ぼす影響を調べるため、各細胞を無血清培地で96micoplateに播種し、蛍光色素を用いて蛍光光度計により細胞数を測定した。PC3細胞を0.08ng/ml,0.4ng/ml,2ng/ml,10ng/ml,50ng/mlのIL-6存在下に培養したときの増殖刺激活性を測定したところ、それぞれ0.4%、25.5%、34.3%、29.9%、25.9%の細胞増殖が認められた。

また、JCA1細胞を0.4μg/ml、2μg/ml、10μg/ml,50μg/ml,250μg/mlの抗ヒトIL-6受容体抗体とともに培養したとき細胞増殖活性はそれぞれ18.3%、18.7%、18.7%、20、6%、19.6%抑制された。また、同様にDU145細胞を0.4μg/ml、2μg/ml、10μg/ml,50μg/ml,250μg/mlの抗ヒトIL-6受容体抗体とともに培養したとき細胞増殖活性はそれぞれ13.7%、17.5%、26.1%、27.0%、23.1%抑制された。以上の結果より、IL-6が前立腺癌細胞により産生されることが示され、また、IL-6が前立腺癌細胞の増殖を刺激することならびにIL-6の作用を抑制することにより細胞増殖が抑制されることが示唆された。前立腺癌培養細胞がin vitroにおいてIL-6を産生していることをすでに我々は見いだいしており、PC3細胞をIL-6存在下に培養したとき細胞増殖が認められた。また、JCA1細胞を抗ヒトIL-6受容体抗体とともに培養したとき細胞増殖は抑制され、in vitroにおいてIL-6が前立腺晩細胞の増殖に関与していることが考えられた。ヌードマウスを用いた動物実験においてPC3細胞に対するIL-6の増殖刺激活性ならびに抗ヒトIL-6受容体抗体による増殖抑制作用を検討した。ヌードマウス皮下に移植された1x10(7)のPC3細胞は腫瘍を形成した。ヌードマウスを2群に分け抗ヒトIL-6受容体抗体を100mcg/マウスを投与し、コントロール群と比較した。投与前のコントロール群ならびに抗ヒトIL-6受容体抗体投与群の腫瘍容積はそれぞれ0.45cm(3)ならびに0.4cm(3)であった。投与1週間では腫瘍容積はそれぞれ1.1cm(3)ならびに1.1cm(3)、4週間ではそれぞれ3.2cm(3)ならびに3.3cm(3)であり、有意な差は認められなかった。今後in vivoの実験系において抗ヒトIL-6受容体抗体の投与量、投与間隔、投与経路を検討し、さらにDU145細胞やJCA1細胞に対する作用に関しても検討が必要であると考えられた。一方、前立腺癌患者における血清IL-6活性を測定したところ、臨床病期A,B,C,DにおけるIL-6活性はそれぞれ1.2pg/ml,2.6pg/ml,2.5pg/ml,11.8pg/mlであり、転移を有する臨床病期Dにおいて有意に上昇していることが示され、IL-6が前立腺癌の進展や転移浸潤と関連性があることが示唆され、転移や浸潤におけるIL-6の作用ならびにその機序の解明が必要であると考えられた。臨床的にIL-6と前立腺癌の浸潤、転移との関連性を明らかにするために、未治療前立腺癌患者77例を対象として、血清IL-6をELISA法により測定し、臨床病期、組織学的分化度、PSAとの関連性を検討した。臨床病期A,B,C,Dにおける血清IL-6値はそれぞれ1.2±0.2pg/ml,2.6±0.4pg/ml,2.5±0.5pg/ml,11.8±4.2pg/mlであり、臨床病期の進行とともに増加した。一方、高分化腺癌、中分化腺癌、低分化腺癌におけるIL-6値はそれぞれ4.6±1.7pg/ml,6.4±2.5pg/ml,14.2±10.8pg/mlであり血清IL-6と組織学的所見との間に関連性を認めなかった。
セイヨウナシの成熟に伴う細胞壁の変化に関する生理学的研究

1、セイヨウナシや和ナシは果肉内に石細胞を含んでいることが特徴の一つである。石細胞は果肉組織の一部の細胞にリグニンが集積した異形厚膜細胞の一種とされている。石細胞の主成分とされるリグニンは、フェノール性物質の高重合体であることから、本研究では、セイヨウナシ'La France'の果肉の結合型フェノール性物質の性質と果実発育に伴う変化について、酸やアルカリ、臭化アセチルなどに対する溶解性の面から検討した。2、果実の縦断面のphloroglucinolによる組織染色によって、果実の発育初期にはすでに石細胞が形成されていることが観察された。3、6月17日から10月14日まで1週間間隔で収穫した果実の不溶性固形物中のフェノール性物質含量について、果実の発育段階を追って見ると、臭化アセチル可溶性画分は発育初期に高く、発育が進むにつれて減少した。しかし、72%硫酸処理後3%硫酸分解画分では、臭化アセチルと同様の傾向を示したが、値は著しく低かった。4、硫酸及び塩酸可溶性画分は、発育が進むにつれて増加し、発育全期を通じてエタノール可溶性が高く、エタノール可溶性と水可溶性との差は発育が進むにつれて増大した。5、過塩素酸可溶性画分は、発育が進むにつれて減少し、発育全期を通じてエタノール可溶性が明らかに高く、発育初期ではエタノール可溶性と水可溶性の差が大きかったが、発育が進むにつれてその差が減少した。水酸化ナトリウム可溶性画分は発育が進むにつれて減少し、発育中期では水可溶性がエタノール可溶性より高い値を示したが、発育初期と後期ではエタノール可溶性と水可溶性との間に差異は認められなかった。6、以上の結果から、セイヨウナシの果肉の結合型フェノール性物質は、発育が進むにつれて質的に変化することが明らかにされた。1、セイヨウナシ'ラ・フランス'の成熟開始期から収穫期の果肉中の細胞壁成分として、ポリウロナイドの年による量的変動を3年間にわたって定量したところ、収穫期の果実を貯蔵した時最も果肉の軟化が早かった年には、満開後107日から139日までの含量が低かった。その後は減少し、165日前後には年による変動はほとんど見られなかった。2、満開後107日から177日までの間約2週間間隔で果実と葉が着生している枝を採取し、葉に^<14>CO_2を施与して光合成させたところ、施与後24時間では107日目と119日目の施与ではアルコール不溶性画分に^<14>Cが検出されたが、それ以後の施与では検出されなかったことから、満開後119日目ころまでは果肉内でポリウロナイドなどの高分子化合物の合成が行われているが、それ以降は合成活性が低下することが明らかにされた。これらの結果から満開後110120日ころのポリウロナイド含量は、収穫後の果実の軟化を予測するための指標の一つとして利用できる可能性が示された。3、セイヨウナシの果肉の石細胞は果肉組織の一部の細胞壁にリグニン物質が集積して肥厚したものとされている。果実の成熟や貯蔵中の石細胞の変化については報告が見当たらない。

本研究では果肉のリグニンを定量することによって、石細胞の変化を追跡したところ、追熟に伴って石細胞がもろくなること、及びアルコール不溶性画分のリグニン含量が減少することから、リグニンの分解が起こることが示唆された。4、リンゴ及びブドウの生鮮貯蔵における果肉の細胞壁部分の変化の品種間差異を見たところ、貯蔵性の高い品種では貯蔵性の低い品種に比べて、細胞壁のポリウロナイドばかりでなく糖鎖の可溶性が少ないことが明らかにされた。この結果は果実の軟化にはペクチンのウロン酸重合体の分解ばかりでなく糖鎖の分解が関わっていることを示している。1、セイヨウナシや和ナシは果肉内に石細胞を含んでいることが特徴の一つである。石細胞は果肉組織の一部の細胞にリグニンが集積した異形厚膜細胞の一種とされている。石細胞の主成分とされるリグニンは、フェノール性物質の高重合体であることから、本研究では、セイヨウナシ'La France'の果肉の結合型フェノール性物質の性質と果実発育に伴う変化について、酸やアルカリ、臭化アセチルなどに対する溶解性の面から検討した。2、果実の縦断面のphlorglucinolによる組織染色によって、果実の発育初期にはすでに石細胞が形成されていることが観察された。3、6月17日から10月14日まで1週間間隔で収穫した果実の不溶性固形物中のフェノール性物質含量について、果実の発育段階を追って見ると、臭化アセチル可溶性画分は発育初期に高く、発育が進むにつれて減少した。しかし、72%硫酸処理後3%硫酸分解画分では、臭化アセチルと同様の傾向を示したが、値は著しく低かった。4.硫酸及び塩酸可溶性画分は、発育が進むにつれて増加し、発育全期を通じてエタノール可溶性が高く、エタノール可溶性と水可溶性との差は発育が進むにつれて増大した。5.過塩素酸可溶性画分は、発育が進につれて減少し、発育全期を通じてエタノール可溶性が明らかに高く、発育初期ではエタノール可溶性と水可溶性の差が大きかったが、発育が進むにつれてその差が減少した。水酸化ナトリウム可溶性画分は発育が進むにつれて減少し、発育中期では水可溶性がエタノール可溶性より高い値を示したが、発育初期と後期ではエタノール可溶性と水可溶性との間に差異は認められなかった。6.以上の結果から、セイヨウナシの果肉の結合型フェノール性物質は、発育が進むにつれて質的に変化することが明らかにされた。
ユダヤ人のアイデンティティ問題から見た近代国民国家の理念と現実

本研究は、3つの目的、(1)近代ユダヤ人のアイデンティティの危機のあリ方、(2)ホスト社会の近代化の特徴、(3)イスラエル国家の問題点の整理をめぐって、ディシピリンを異にする13名の研究者による総合的研究を志したものである。国家理論が19世紀から20世紀にかけて、根本的に変化したことに鑑みて、研究成果を地域・時代別にまとめることによって、主題を鮮明なものにすることができた。方法論については、(a)宗教学・社会哲学・知識社会学からのアプローチ、(b)文学・言語的表象からのアプローチ、(c)国家体制を軸にした歴史学、社会学、政治学のアプローチによった。報告書は、以下の通り、地域別の3部構成とした。これらの成果は、近現代の文化のあり方に対する理解をなお一層深く推進するための基礎として資することができよう。第1部19世紀の西ヨーロッパとユダヤ人:啓蒙・近代・ユダヤ人解放国家と宗教の枠組みから見た近代ユダヤ問題の射程、近代ユダヤ社会理論とユダヤ哲学の淵源、19世紀ヨーロッパの「ユダヤ教科学」とアイデンティティ問題、近代ユダヤ社会思想とユダヤ教的表象の意義について。第2部20世紀のドイツ・東欧・ソ連邦とユダヤ人ヨーロッパ近代、特にドイツのユダヤ人問題の背景史、多民族国家におけるユダヤ人問題、東欧文学とユダヤ・アイデンティティ、共産主義社会とユダヤ・アイデンティティ、全体主義国家の国制と人種理論のジレンマについて。第3部20世紀の中東地域とシオニズムアラブ・イスラム国家におけるユダヤ人の地位、ユダヤ人国家の特異性と生存のための安全保障、現代イスラエルのユダヤ・アイデンティティの複合性と葛藤、イスラエル文学とアイデンティティについて本研究は、3つの目的、(1)近代ユダヤ人のアイデンティティの危機のあリ方、(2)ホスト社会の近代化の特徴、(3)イスラエル国家の問題点の整理をめぐって、ディシピリンを異にする13名の研究者による総合的研究を志したものである。第3部20世紀の中東地域とシオニズムアラブ・イスラム国家におけるユダヤ人の地位、ユダヤ人国家の特異性と生存のための安全保障、現代イスラエルのユダヤ・アイデンティティの複合性と葛藤、イスラエル文学とアイデンティティについて科研費研究の初年度は、各自の問題意識を明確にし研究を深めることを主たる課題としつつ、平成14年2月に、本年度の締めくくりの研究会合を実施した。これにはほとんどのメンバーが出席し、異なる分野の分担者4名による、思想史、歴史学、国際政治の分野からの研究報告と討論を行った。担当者の発表内容は、(1)『人間モーセと一神教』をめぐるフロイトの意図と戦間期のコスモポリタニズムの問題、(2)アーリア系配偶者によるユダヤ人迫害への抗議の今日的再評価のもつ意味合い、(3)ナチスの絶滅政策の「恩恵」にたいする東欧諸国の屈折した評価、そして、(4)現代イスラエル問題で、パレスティナの民主的自己統治能力への不信と、いかにしてイスラエルが民族国家としての性格を維持するかという課題が、和平交渉の基底に伏在することの指摘が為された。この結果、20世紀前半の戦間期以降今日までの国際的な紛争状況において、ユダヤ人というエスニック集団が示した自己理解と、外集団の自己理解との力動的関係が重要であるという論点が確認された。討論によって得られた視座は、近代社会が、一方でnation-stateという主権国家を建設する上でなんらかの民族的自己像を選択していること、それに伴って、その時点での自己像を過去に遡らせて、一貫していたかのような国家・民族史を作成すること他方で、コスモポリタン社会を志向する運動も無視できないこと、そしてこの両方にユダヤ人が関っており、しかもユダヤ人のidentityをめぐるユダヤ人同士の多様性と葛藤とが重なってくることである。それゆえ、民族的アイデンティティをめぐる今後の共同研究は、主権国家の政治的権威と民族的自己像との関わりあい、恣意的な歴史記述が選好されるメカニズムの解明とその恣意性を浮き彫りにすることに向けられる。本研究における重要な視点として確認されたのは、国家と宗教の枠組みから見たユダヤ問題を考察することであった。即ち、近代以前、ユダヤ教は基本的年民族集団と宗教の総合体であったが、近代においては、西欧・東欧・イスラム的オリエントの3つの地域において、近代的社会関係の形成の違いが、そのままユダヤ人のアイデンティティ形成にも甚大な影響を及ぼさざるを得なかったということである。西欧近代において、Judaismは二つの選択を迫られたが、実際には、歴史の勢いに従って、選択の余地なく、一つを選び取ることになった。

それが、Judaismとは「民族」ではなく「宗教」であるという主張である。宗教とは、個人の信仰によって決定され、内面を強制することはできない。信仰を共有する個人の共同体が宗教集団となるという基本理解である。しかし、東欧においては逆に、Judaismは,「民族」として受容された。そうした東西欧州における理解の違いはくユダヤ教だけの問題ではなく、西欧と東欧の「国家・宗教関係」の歴史の相違によるものでもあり、そうした観点の導入は本研究に不可欠である。東西の違いを決定づけたのは、20世紀における民族主義、全体主義の隆盛という予期せぬ事態であり、近代ユダヤ問題に関わる重大な歴史的要因ともなった。即ち、20世紀に風靡する民族主義の思想は、19世紀西欧の著名な思想家の殆ど誰からも注目されなかったという事実である。西欧においても、19世紀の楽観的な啓蒙主義全盛期から、20世紀の悲観的歴史観とロマン主義的・有機体的国家観の結合への変遷として捉えられている。現代イスラエルはこの問題を「欧州ユダヤ人はユダヤ人解放によって真に解放されたか」として提起し、ホロコーストに至る反ユダヤ主義の歴史が、近代国民国家の民族主義思想と結びついてユダヤ人の物理的排除をもたらしたとして、シオニズムを正当化する。ユダヤ人のアイデンティティ問題には大きな地域差があり、西欧と東欧、そしてイスラム的オリエントの3つの地域において、近代的社会関係の形成の違いが、そのままユダヤ人のアイデンティティ形成にも甚大な影響を及ぼさざるを得なかった。従来のユダヤ研究においては、ドイツ啓蒙主義の恩恵に与ったドイツ系ユダヤ人の思想や社会理論、歴史が関心の中心になってきたが、それでは全体像を捉えることは困難である。とりわけ、東欧とイスラム圏のユダヤ研究と国家・宗教問題の研究が不可欠である。そこで、本年度の研究は、以下の3点を重点的に考察し、そのテーマに合わせて、北海道大学スラヴ研究所との共同研究会・シンポジウムを6月に開催した。1.市民的価値を優先する国家観と民族の栄光・繁栄を優先する国家観の狭間にあって、ユダヤ人が直面したアイデンティティの危機を、文学作品やユダヤ人イメージの中に探って、当該国家の主たる国民の意識との相関を考察する。2.東欧と一口に言っても、そこには複雑な民族構成に加えて、周辺の大国による征服、侵略、移住などによって、時代や地域の社会結合のあり方に大きな変化が起こっている。そうしたなかにユダヤ人社会とそのアイデンティティの問題を位置付けることが必要となる。3.イスラム社会の近代化の過程で、ユダヤ人とアラブ・ムスリムの多数派との政治的軋轢が起こらなかった原因としてのユダヤ人のイスラエル移民問題の研究が、他の地域との比較のために重要である。
自給本能発現における海馬歯状回の神経幹細胞増殖とカンナビノイド受容体の役割

マウスの自給本能発現には三叉神経中脳路核(Me5)が離乳のシグナルを受容することが必要であり、また、成熟型の探索行動の獲得とその維持にもMe5が機能している。Me5破壊マウスや離乳を遅延させたミルク食マウス(ミルクマウス)は、海馬歯状回(DG)におけるカンナビノイド受容体(CB1)の発現量が増加し、DGでの神経幹細胞新生率の顕著な増加と、新生した幹細胞の多くが神経細胞に分化することが分かった。CB1作動薬であるanandamideを投与したマウスは、Me5破壊やミルクマウスと同様、DGの神経細胞新生率が増加することで、以前に学習した古い情報に固執し、新たな空間情報を学習・獲得する能力が低下した。また、Me5破壊で生じた固執行動はCB1受容体の特異的阻害薬であるAVE1625により完全に消失した。これらの結果から、DGのCB1活性化は、DGの神経細胞新生率を増加させ、固執を誘導することが分かった。海馬は学習により得られた情報を一時的に保存し、暫くはその情報を想起して利用することが可能である。そこで、ミルクマウスや自然離乳前後のマウスを用いて、急性海馬スライス標本を作製し、記憶の形成に関与する長期増幅(LTP)と記憶の消去に関与する長期抑制(LTD)の誘導を海馬CA1領域で調べた。その結果、離乳前マウスやミルクマウスはLTDを誘導できないが、自然離乳後のマウスではLTDが誘導した。一方、LTPはすべての群において誘導した。次に、ミルクマウスのDGで新生した神経細胞の種類を調べた結果、GABA合成酵素であるGAD陽性率が対照群と比べて有意に高かった。このことから、ミルクマウスは、CB1の刺激によりDGからCA3に投射するmossy fiberにふくまれる抑制性のGABA神経が増加し、CA3-schaffer側枝-CA1間における神経伝導・伝達やシナプスの興奮性に何らかの変化が生じた可能性が示唆された。そのため、離乳前マウスやミルクマウスではLTDが誘導出来ず、海馬の古い空間情報を消去する機能が低下したと考えられる。その結果、古い情報に対する固執が高まり、新たな情報を獲得・保存する海馬の機能に障害が生じた可能性が考えられる。研究代表者・石井は、マウスの自給本能発現には三叉神経中脳路核(Me5)が離乳のシグナルを受容し活性化されることが必要不可欠であり、また、成熟型の探索行動の獲得とその維持にもMe5が機能していることを報告している。さらに最近、Me5破壊や遅延離乳は海馬歯状回の神経幹細胞新生率に影響を与えることを見出した。そこで本年度は、Me5破壊や遅延離乳の手段を用いて海馬歯状回の神経幹細胞新生率を人為的に操作することで新生後分化成熟する細胞種を特定し、それらの量的比率がどのように変化するのかを調べた。BrdU法により神経幹細胞新生率を解析した結果、Me5破壊や遅延離乳により神経幹細胞の新生率が顕著に増加した。その際、BrdU(新生細胞の指標)とNeuN(神経細胞の指標)の共染色性を示した細胞数が有意に増加し、それとは逆にBrdUとGFAP(グリア細胞の指標)の共染色性を示した細胞数が有意に減少した。これらの結果から、Me5破壊や遅延離乳により神経幹細胞の新生率が増加するが、新生した神経幹細胞の多くが神経細胞に分化していることが分かった。新生後分化成熟した神経細胞の種類(グルタミン作動性神経、GABA作動性神経、あるいはそれら以外の神経なのか、等)の決定には未だ至っていない。次に、海馬歯状回に発現するカンナビノイド受容体(CB)の発現について調べた。その結果、Me5破壊したマウス海馬歯状回におけるCB1のmRNAならびにタンパク質の発現量がコントロールと比べて有意に増加した。次に、Me5から海馬歯状回への神経経路を調べる日的で逆行性WGA-HRP法を用いて神経回路を解析した。その結果、Me5から大脳基底核淡蒼球(LGP)を介して海馬歯状回に神経が投射していることが分かり、Me5-LGP-海馬歯状回の新たな神経回路の存在を見つけた。今後、離乳遅延させたマウスのMe5-LGP-海馬歯状回の神経回路形成についても調べる必要がある。以上の結果から、離乳のシグナルはMe5-LGP-海馬歯状回の神経回路を経由して伝達され、歯状回の神経細胞新生率とCB1発現を増加させ、自給本能の発現に寄与していることが示唆された。H20年度には、Me5破壊や離乳を遅延させると神経幹細胞の新生率が顕著に増加し、新生した幹細胞の多くが神経細胞に分化することや、海馬歯状回領域のカンナビノイド受容体(CB1)発現量がコントロールと比べて有意に増加することがわかった。さらにMe5破壊や離乳を遅延させたミルク食マウスの空間記憶・学習能力を水迷路法で評価すると、以前に学習した古い情報に固執し、新たな空間情報を学習・獲得する能力が低下していることがわかった。そこでH21年度は、海馬歯状回の神経細胞新生や空間記憶・学習に対するCB1の役割を調べることにした。

CB1特異的阻害薬であるAVE1625を投与したマウスでは有意な効果が認められなかったが、CB1作動薬であるanandamideを投与したマウスは固執が現れ、海馬歯状回の神経細胞新生数が有意に増加した。海馬は長期記憶が形成されるまでの間、学習により得られた情報を短期間、一時的ではあるが想起のために保存する。海馬歯状回のCB1活性化に伴う神経細胞新生数の増加は、古い空間情報を消去する海馬機能を低下させた結果、古い情報に対する固執が高まり、新たな情報を獲得・保存する海馬の機能にも障害が生じた可能性が考えられる。次に、自然離乳前後のマウスで海馬標本を作製し、CA1領域の長期増幅(LTP)と長期抑制(LTD)を調べた結果、自然離乳期には一過性にLTDが消失することや離乳を遅延させたミルク食マウスではLTDが起こらないことがわかった。今後、これらの離乳マウスにおいて、CB1が神経細胞新生、LTD誘導や記憶・学習能力に果たす役割について調べる。さらにMe5破壊マウスにおいてもLTPとLTDを解析する。マウスの自給本能発現には三叉神経中脳路核(Me5)が離乳のシグナルを受容することが必要であり、また、成熟型の探索行動の獲得とその維持にもMe5が機能している。Me5破壊マウスや離乳を遅延させたミルク食マウス(ミルクマウス)は、海馬歯状回(DG)におけるカンナビノイド受容体(CB1)の発現量が増加し、DGでの神経幹細胞新生率の顕著な増加と、新生した幹細胞の多くが神経細胞に分化することが分かった。CB1作動薬であるanandamideを投与したマウスは、Me5破壊やミルクマウスと同様、DGの神経細胞新生率が増加することで、以前に学習した古い情報に固執し、新たな空間情報を学習・獲得する能力が低下した。また、Me5破壊で生じた固執行動はCB1受容体の特異的阻害薬であるAVE1625により完全に消失した。これらの結果から、DGのCB1活性化は、DGの神経細胞新生率を増加させ、固執を誘導することが分かった。海馬は学習により得られた情報を一時的に保存し、暫くはその情報を想起して利用することが可能である。そこで、ミルクマウスや自然離乳前後のマウスを用いて、急性海馬スライス標本を作製し、記憶の形成に関与する長期増幅(LTP)と記憶の消去に関与する長期抑制(LTD)の誘導を海馬CA1領域で調べた。その結果、離乳前マウスやミルクマウスはLTDを誘導できないが、自然離乳後のマウスではLTDが誘導した。一方、LTPはすべての群において誘導した。次に、ミルクマウスのDGで新生した神経細胞の種類を調べた結果、GABA合成酵素であるGAD陽性率が対照群と比べて有意に高かった。このことから、ミルクマウスは、CB1の刺激によりDGからCA3に投射するmossy fiberにふくまれる抑制性のGABA神経が増加し、CA3-schaffer側枝-CA1間における神経伝導・伝達やシナプスの興奮性に何らかの変化が生じた可能性が示唆された。そのため、離乳前マウスやミルクマウスではLTDが誘導出来ず、海馬の古い空間情報を消去する機能が低下したと考えられる。その結果、古い情報に対する固執が高まり、新たな情報を獲得・保存する海馬の機能に障害が生じた可能性が考えられる。
鶏胚肢芽においてレチノイン酸によって誘導される形態形成分子の探索・解析

本年度は、計画に従ってレチノイン酸によって肢芽内に誘導される遺伝子の探索と解析を行った。肢芽を起源としてディファレンシャルディスプレー法によりレチノイン酸によって特異的に誘導される遺伝子断片の候補を多数単離した。それらの遺伝子断片をクローニングし、塩基配列の決定をしたが、既知の遺伝子との相同性は確認されなかった。さらに、RT-PCR法やin situ hybridization法を用いて得られた遺伝子断片の発現の特異性について解析した。これに関しては、現在実行中である。また、レチノイン酸の作用の一つである、肢芽中胚葉細胞の接着性の変更という作用を分子生物学的に解析するために、肢芽を起源として細胞接着分子の一つであるカドヘリン群の遺伝子の断片のスクリーニングを行い、多数のDNA断片を得た。これらもin situ hybridization法により発現の部域特異性の解析を行ったところ、興味深い発見様式を持つものが幾つか見られた。これらの遺伝子の発現状態がレチノイン酸によってどのように変化するかを、現在詳細に解析している。さらに、生体内に存在するレチノイン酸の作用を調べるために、レチノイン酸合成阻害剤を用いた実験を行い、解析結果をまとめ発表した。
共生細菌が駆動する宿主害虫イモゾウムシの繁殖形質の進化の解明と防除技術への展開

昆虫体内の共生細菌には,宿主昆虫の生存で重要な機能を受け持つものが存在し,ゾウムシの一部は硬い外骨格や交尾器(トゲや挿入器)の形成を共生細菌の働きに依存している.こうした事実は,共生細菌が宿主の配偶者選択やオス間競争といった繁殖に直接関与していることを示している.特に,オス交尾器の硬いトゲは雌雄の性的対立を生み出す繁殖形質として知られるが,共生細菌はこの形質を操作し対立を激化させるよう機能している可能性が高い.本研究では,サツマイモの難防除害虫イモゾウムシとそのクチクラ質形成に関与する共生細菌ナルドネラの系を利用し,ナルドネラ機能の操作により,共生細菌が宿主昆虫の性的対立と適応度成分に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした.ナルドネラは一般的に寄主であるイモゾウムシに比べて高温に弱い.そこで今年度は(1)イモゾウムシの共生細菌であるナルドネラの定量PCRを用いた定量法の確立,(2)高温耐性の解明,(3)沖縄県久米島での温度ロガーを設置しての気温の測定と定期的なサンプリングを行った.本研究の一番の課題であった共生細菌の定量化が問題なく行えることが確認できた.その技術を利用して得られたサンプルの共生細菌の定量化も進んでいる.また野外でのサンプリングも問題なく進んでいるため.次年度はすでに得られたサンプル(イモゾウムシ)共生細菌の定量化(定量PCR)を進める.また,久米島では夏の野外の気象条件が最も過酷な時期のサンプルが得られる予定であるので,共生細菌の季節変動が明らかになる予定である.昆虫体内の共生細菌には,宿主昆虫の生存で重要な機能を受け持つものが存在し,ゾウムシの一部は硬い外骨格や交尾器(トゲや挿入器)の形成を共生細菌の働きに依存している.こうした事実は,共生細菌が宿主の配偶者選択やオス間競争といった繁殖に直接関与していることを示している.特に,オス交尾器の硬いトゲは雌雄の性的対立を生み出す繁殖形質として知られるが,共生細菌はこの形質を操作し対立を激化させるよう機能している可能性が高い.本研究では,サツマイモの難防除害虫イモゾウムシとそのクチクラ質形成に関与する共生細菌ナルドネラの系を利用し,ナルドネラ機能の操作により,共生細菌が宿主昆虫の性的対立と適応度成分に及ぼす影響を明らかにすることを目的とした.ナルドネラは一般的に寄主であるイモゾウムシに比べて高温に弱い.そこで今年度は(1)イモゾウムシの共生細菌であるナルドネラの定量PCRを用いた定量法の確立,(2)高温耐性の解明,(3)沖縄県久米島での温度ロガーを設置しての気温の測定と定期的なサンプリングを行った.本研究の一番の課題であった共生細菌の定量化が問題なく行えることが確認できた.その技術を利用して得られたサンプルの共生細菌の定量化も進んでいる.また野外でのサンプリングも問題なく進んでいるため.次年度はすでに得られたサンプル(イモゾウムシ)共生細菌の定量化(定量PCR)を進める.また,久米島では夏の野外の気象条件が最も過酷な時期のサンプルが得られる予定であるので,共生細菌の季節変動が明らかになる予定である.イモゾウムシの飼料であるサツマイモが安価で治ったため.
一次元汎用圧密試験の開発研究

せん断試験や透水試験などの要素試験と異なり、圧密試験は模型実験として企画され、解析理論と一対で存在する。標準圧密試験はTerzaghi理論のための試験であって、より高度な理論による解析には適用できない。換言すれば、個々の解析理論に固有の圧密試験が必要である。そのため、一つの解析対象に複数の解析理論の適用は実質的に困難であり、これが圧密解析の高度化の重大な障害であると考える。この問題を解決するためには、圧密試験を模型実験としてではなく、透水特性や変形特性を求めるための一連の要素試験として行う必要がある。そして、それらの試験結果の取捨と解釈によって、目的に応じた複数の圧密解析が可能になれば、理想的である。この研究では、圧密解析に関連した試験法の中から幾つかを拾い出し、弾性、弾粘塑性および弾粘性圧密解析に共通的または段階的に必要な一連の試験法を提唱することが目的である。そのためにつぎの2つの問題を検討した。第1の問題は、CRS(定ひずみ速度)圧密試験と標準圧密試験の圧縮曲線の関係を明らかにすることである。前者の圧縮曲線は基本的に時間依存性なので、これを弾性の圧密解析に適用するにはクリープまたは有効応力緩和特性をパラメータにした調整が必要である。その調製方法の理論的検討と、実験的確認を行った。第2の問題は、粘土の時間依存性、つまり粘性挙動の把握にクリープ試験と応力緩和試験いずれが適切かの確認することであり、CRS圧密試験の中に有効応力緩和試験とクリープ試験を組み込んだ試験を行った。そして、両者の内のいずれを採用するのが適切であるか、あるいは両者ともに行う必要があるかを検討した。この研究では、圧密解析に関連した試験法の中から幾つかを拾い出し、弾性、弾粘塑性および弾粘性解析に共通的または段階的に必要な一連の試験法を提案することが目的である。そのためにつぎの3つの問題を検討した。前者の圧縮曲線は基本的に時間依存性なので、これを弾性圧密解析に適用するにはクリープまたは有効応力緩和特性をパラメータにした調整が必要である。その調整方法理論的に検討し、実験的に確かめる作業を行った。第3の問題は粘土の透水試験の問題である。現在では、CRS圧密試験で圧縮曲線と同時に透水特性がもとめられ、きわめて便利である。しかし、CRS圧密試験で求めたものは透水係数なのか一抹の疑念もある。

CRS圧密試験で求めた透水係数とひずみ速度の関係を理論的および実験的に検討した。これら3つの問題についての結論は次年度に先送りしたい。せん断試験や透水試験などの要素試験と異なり、圧密試験は模型実験として企画され、解析理論と一対で存在する。標準圧密試験はTerzaghi理論のための試験であって、より高度な理論による解析には適用できない。換言すれば、個々の解析理論に固有の圧密試験が必要である。そのため、一つの解析対象に複数の解析理論の適用は実質的に困難であり、これが圧密解析の高度化の重大な障害であると考える。この問題を解決するためには、圧密試験を模型実験としてではなく、透水特性や変形特性を求めるための一連の要素試験として行う必要がある。そして、それらの試験結果の取捨と解釈によって、目的に応じた複数の圧密解析が可能になれば、理想的である。この研究では、圧密解析に関連した試験法の中から幾つかを拾い出し、弾性、弾粘塑性および弾粘性圧密解析に共通的または段階的に必要な一連の試験法を提唱することが目的である。そのためにつぎの2つの問題を検討した。第1の問題は、CRS(定ひずみ速度)圧密試験と標準圧密試験の圧縮曲線の関係を明らかにすることである。前者の圧縮曲線は基本楔に時間依存性なので、これを弾性の圧密解析に適用するにはクリープまたは有効応力緩和特性をパラメータにした調整が必要である。その調整方法の理論的検討と、実験的確認を行った。第1の問題は、粘土の時間依存性、つまり粘性挙動の把握にクリープ試験と応力緩和試験いずれが適切かの確認することであり、CRS圧密試験の仲に有効応力緩和試験とクリープ試験を組み込んだ試験を行った。そして、両者の内のいずれを採用するのが適切であるか、あるいは両者ともに行う必要があるかを検討した。
XFEL時分割構造解析によるチトクロム酸化酵素の反応機構の解明

チトクロム酸化酵素(CcO)はミトコンドリア内膜に存在する呼吸鎖末端酸化酵素で、酸素を水にまで還元して得られる自由エネルギーを利用して、プロトンをミトコンドリアマトリクスから内膜外へとポンプする。生命活動に利用されるATPの大部分はCcOとCcOへ電子供与するプロトンポンプ複合体とによって形成されたプロトン駆動力を利用して合成されており、本酵素はエネルギー変換の中枢を担うタンパク質である。本酵素の発見以来、その反応機構解明は生命科学における最重要課題であり続けている。CcOによる反応の詳細な理解のために、その反応中間体の原子構造をX線結晶構造解析によって得る試みがなされてきた。しかし、CcOの反応サイクルは非常に早く、酸素を水へと完全還元するのに数マイクロ秒程度しかかからない。従来のX線では高分解能の3次元構造を得るために数秒間X線を照射することが必要なため、短寿命の反応中間体構造を撮影することが非常に困難であった。そこで、本研究課題では、従来のX線よりも10億倍の強度と約1000分の1のパルス幅を持つX線自由電子レーザー(XFEL)を利用することで、これまで不可能であったCcOの非凍結結晶を用いた時分割構造解析を行い、短寿命中間体構造の解明を目指す。今年度は、XFEL照射施設であるSACLAを利用して、CcOへ基質となる酸素が結合した構造を捉えることに挑戦した。まず、先行論文を参照して、光照射によって酸素を放出するケージド酸素化合物の合成および、CcOの結晶調製を行った。ケージド酸素化合物と、SACLAで実験に利用できるCcO結晶の調製に成功したので、実際にXFELを用いて測定を行い、3.5オングストローム分解能のデータ収集に成功した。ケージド酸素化合物を使った時分割構造解析の報告はほとんどなく、データ収集を行ったことも非常に大きな進歩である。CcOの生理的な反応中間体構造を明らかにするため、生理学的な基質である酸素を使用する必要がある。結晶中の大量のCcO分子全てにタイミングよく同時に酸素を結合させてその還元過程をX線によって捉えるためには、酸素の発生をコントロールできる化合物が必要である。そこで、先行論文(Ludovici C., et al., (2002) Eur. J. Biochem., 269, 2630-2637)で報告されている光照射により酸素を発生させるケージド酸素化合物の合成を行った。合成したケージド酸素化合物の可視光吸収スペクトルから、目的の化合物の合成に成功していることを確認した。次に、CcO結晶の調製を行った。XFELを用いた時分割構造解析では、長辺が100マイクロメートルほどの微結晶を連続してX線照射位置へと送液しながらランダムな配向の回折像を大量に集める。そのため、CcOの微結晶を再現性良く調製する必要がある。これまで、大型のCcO結晶を調製してきた技術を活かして、まずは大型結晶を調製し、これを粉々に粉砕してシードとして利用することで、安定に目的のサイズの微結晶を調製することに成功した。この微結晶から得られた回折像の分解能は3.5オングストローム程度であった。ケージド酸素化合物を浸透させた状態のCcO微結晶を用い、ケージド酸素化合物から酸素を放出させるための光照射t秒後にXFELを照射することで、酸素結合t秒後のCcO構造を決定することができる。まだ誰も観察したことのない、酸素分子結合状態CcOの構造を捉えるため、まずは光照射何秒後にXFELを照射すれば良いか検討を行っている。研究計画は若干の修正があるものの順調に推移しているので、このまま計画通りSACLAを利用して時分割構造データの収集、解析を行う予定である。すでにケージド酸素化合物については準備ができている。CcOの詳細な反応機構を議論するには分解能は高ければ高いほど良いので、3.5オングストロームの分解能を超えるさらに良質な微結晶の調製も引き続き行う。また、CcOの微結晶サンプルをXFELでの測定に供するまで安定に準備するための装置類(低温嫌気チャンバー)もさらに改良を加える予定である。CcOの生理学的な基質である酸素を利用した中間体構造の解明は非常に難易度が高くチャレンジングな研究である。そこで、SACLAを用いた時分割構造解析と並行して、安定な(擬似)中間体構造の決定も行予定である。また、CcOの酸素還元反応には、CcO中の金属原子からの酸素への電子の供給が非常に重要な役割を担っている。そこで、CcO中の金属原子の電荷も同時に調べる予定である。

従来のX線では高分解能の3次元構造を得るために数秒間X線を照射することが必要なため、短寿命の反応中間体構造を撮影することが非常に困難であった。そこで、本研究課題では、従来のX線よりも10億倍の強度と約1000分の1のパルス幅を持つX線自由電子レーザー(XFEL)を利用することで、これまで不可能であったCcOの非凍結結晶を用いた時分割構造解析を行い、短寿命中間体構造の解明を目指す。今年度は、XFEL照射施設であるSACLAを利用して、CcOへ基質となる酸素が結合した構造を捉えることに挑戦した。まず、先行論文を参照して、光照射によって酸素を放出するケージド酸素化合物の合成および、CcOの結晶調製を行った。ケージド酸素化合物と、SACLAで実験に利用できるCcO結晶の調製に成功したので、実際にXFELを用いて測定を行い、3.5オングストローム分解能のデータ収集に成功した。ケージド酸素化合物を使った時分割構造解析の報告はほとんどなく、データ収集を行ったことも非常に大きな進歩である。CcOの生理的な反応中間体構造を明らかにするため、生理学的な基質である酸素を使用する必要がある。結晶中の大量のCcO分子全てにタイミングよく同時に酸素を結合させてその還元過程をX線によって捉えるためには、酸素の発生をコントロールできる化合物が必要である。そこで、先行論文(Ludovici C., et al., (2002) Eur. J. Biochem., 269, 2630-2637)で報告されている光照射により酸素を発生させるケージド酸素化合物の合成を行った。合成したケージド酸素化合物の可視光吸収スペクトルから、目的の化合物の合成に成功していることを確認した。次に、CcO結晶の調製を行った。XFELを用いた時分割構造解析では、長辺が100マイクロメートルほどの微結晶を連続してX線照射位置へと送液しながらランダムな配向の回折像を大量に集める。そのため、CcOの微結晶を再現性良く調製する必要がある。これまで、大型のCcO結晶を調製してきた技術を活かして、まずは大型結晶を調製し、これを粉々に粉砕してシードとして利用することで、安定に目的のサイズの微結晶を調製することに成功した。この微結晶から得られた回折像の分解能は3.5オングストローム程度であった。ケージド酸素化合物を浸透させた状態のCcO微結晶を用い、ケージド酸素化合物から酸素を放出させるための光照射t秒後にXFELを照射することで、酸素結合t秒後のCcO構造を決定することができる。まだ誰も観察したことのない、酸素分子結合状態CcOの構造を捉えるため、まずは光照射何秒後にXFELを照射すれば良いか検討を行っている。研究計画は若干の修正があるものの順調に推移しているので、このまま計画通りSACLAを利用して時分割構造データの収集、解析を行う予定である。すでにケージド酸素化合物については準備ができている。CcOの詳細な反応機構を議論するには分解能は高ければ高いほど良いので、3.5オングストロームの分解能を超えるさらに良質な微結晶の調製も引き続き行う。また、CcOの微結晶サンプルをXFELでの測定に供するまで安定に準備するための装置類(低温嫌気チャンバー)もさらに改良を加える予定である。CcOの生理学的な基質である酸素を利用した中間体構造の解明は非常に難易度が高くチャレンジングな研究である。