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ゲルセミウムアルカロイドを利用した新規抗腫瘍薬の発見と開発の為の基礎研究

ゲルセミウムアルカロイドは、複雑でひずみのかかったユニークな構造を有するインドール・オキシインドール類であり、その化学構造から6タイプに分類できる。我々は、このうちの数種のアルカロイドに強力な腫瘍細胞殺傷作用を見いだしたことから、これらアルカロイドをシード化合物とした植物成分由来の新規抗腫瘍薬の発見と開発の為の基礎的研究を行った。1.G.elegans、G.sempervirensの詳細な成分探索を行い、G.elegansより新規Gelsedine型アルカロイド8種、G.sempervirensより新規Sarpagine型4種、新規Yohimbane型アルカロイド1種を単離した。G.elegansからは、ゲルセミウムアルカロイドに通常認められるC18-C19位炭素が欠如したdinor型構造を有するGelsedilamや、通常のゲルセミウムアルカロイドにもう1分子のイリドイドあるいはフラン誘導体が結合したGelseiridoneやGelsefuranidineのような特異な構造のアルカロイド類が得られた。2.ゲルセミウムアルカロイドは、Sarpagine型、Humantenine型、Gelsedine型、Gelsemine型、Koumine型、Yohimbane型に分類される。各タイプの代表的な化合物並びに新規化合物4種の計14種のアルカロイドについてヒト扁平上皮癌細胞A431、ラット肝癌細胞H4-II-E-C3に対する腫瘍細胞殺傷活性を評価した。その結果、14,15-Dihydroxygelsenicine[EC_<50>,0.25μM(A431)]をはじめとした5種のGdsedine型化合物に、抗腫瘍薬シスプラチン[EC5,3.5μM(A431)]と比較して強力な活性が認められた。現在、これらアルカロイドについて、他のヒト腫瘍細胞に対する活性評価を進めている。マチン科ゲルセミウム属植物は、有毒植物として知られ、複雑で歪みのかかったインドール・オキシインドールアルカロイド類を多数含有している。これらゲルセミウムアルカロイドをシード化合物とした新規抗腫瘍薬の発見と開発のための基礎的研究として以下の研究を行った。1.G.elegans、G.Sempervirensの詳細な成分探索を行い、G.elegansよりGelsedine型新規アルカロイド4種を単離した。また、G.sempervirensからは、サルパギン型アルカロイド6種、ヨヒンバン型アルカロイド2種を単離した。新規サルパギン型化合物GS-6、GS-7、GS-8、GS-9はスペクトルの解析によりN_bにメチル基を有する2-アシルインドール誘導体と推定した。これら化合物のUV、NMR測定においては特異な現象が観測され、溶解する溶媒によって2種の構造、すなわち、非プロトン性溶媒中ではサルパギン骨格のC/D環が開環し、プロトン性溶媒中では閉環した構造を取ることが推定された。GS-8については既知アルカロイド16-Epi-Voacarpineより化学変換することによりその構造を決定した。新規ヨヒンバン型アルカロイドGS-5は、トリプタミンより全合成しその構造を確認した。さらに、G.elegansより通常のGelsemiumアルカロイドにもう一分子のモノテルペンが結合したと予想される化合物を単離し、構造解析を進めている。2.新規化合物を含む13種のアルカロイドについて、ヒト表皮がん細胞A431を用いた細胞毒性の評価を行った。その結果、Gelsedine型のGelsenicine、新規化合物14-Acetoxygelsenicine、14,15-DihydroxygelsenicineとGelsemine型のGelsemineに皮膚がんの治療薬アドリアマイシンと比較して顕著な活性が認められた。3.上記の評価により活性が認められたGelsedine型アルカロイドの全合成研究を開始した。

ゲルセミウムアルカロイドは、複雑でひずみのかかったユニークな構造を有するインドール・オキシインドール類であり、最近我々は、数種のゲルセミウムアルカロイドに強力な腫瘍細胞殺傷作用を見いだした。そこで、これらアルカロイドをシード化合物とした植物成分由来の新規抗腫瘍薬の発見と開発の為の基礎的研究を行い、以下の結果を得た。1.Gelsemium elegansの詳細な成分探索の結果、新規Gelsedine型アルカロイド並びに新規イリドイドを単離した。Gelsedilamはゲルセミウムアルカロイドに通常認められるC18-C19位炭素が欠如したdinor型の構造を有する。また、Gelseiridoneはフラン側鎖を有する初めてのモノテルペノイドインドールアルカロイドである。これら新規アルカロイドは、スペクトル解析とともに既知アルカロイドからの化学変換によりその構造を決定した。さらに通常のゲルセミウムアルカロイドにイリドイドが結合した特異な構造を有するアルカロイド類を単離し、構造の解析を行っている。2.ゲルセミウムアルカロイドは、その化学構造からSarpagine型、Humantenine型、Gelsedine型、Gelsemine型、Koumine型、その他に分類される。各タイプの代表的な化合物並びに新規化合物2種の計14種のアルカロイドについてヒト扁平上皮癌細胞に対する腫瘍細胞殺傷活性を評価し、EC_<50>値を求めた。その結果、Gelsedine型化合物の新規アルカロイド14-Acetoxygelsenicine(EC_<50> 0,25μM)並びに既知化合物Gelsedine(EC_<50> 0,35μM)において抗腫瘍薬シスプラチン(EC_<50> 3,5μM)と比較して強力な活性が認められた。3.強力な腫瘍細胞殺傷作用を有するGelsedine型アルカロイドの不斉全合成研究を行った。ゲルセミウムアルカロイドは、複雑でひずみのかかったユニークな構造を有するインドール・オキシインドール類であり、その構造から6タイプに分類できる。我々は、数種のゲルセミウムアルカロイドに強力な腫瘍細胞殺傷作用を見いだしたことから、これらアルカロイドをシード化合物とした植物成分由来の新規抗腫瘍薬の発見と開発の為の基礎的研究を行い、以下の結果を得た。1.G.elegans、G.sempervirens詳細な成分探索を引き続き行い、G.elegansより新規Gelsenicine関連オキシインドールアルカロイドを単離した。GelseiridoneはN_b-C20位間が開環し、α,β-不飽和ケトン基を有するGelsenicine誘導体とイリドイドが窒素.炭素結合で結合した新しいタイプのアルカロイドである。Gelsefuranidineは、2位に置換基を有するフラン残基並びにプロペニル基を有する14-Hydroxygelsenicineの誘導体であり、フラン側鎖を有する初めてのモノテルペノイドインドールアルカロイドである。さらに、Gelsenicine類の19位に他の置換基が導入されたと推定される化合物を数種得ており、その構造を解析中である。
インナー・シティにおける高齢者処遇過程の研究

本研究は、インナー・シティで生活している高齢者が如何に処遇されるかの過程をラベリングの視点から究明することであった。この研究のために、福岡県北九州市八幡東区の尾倉地区を選んだ。八幡区は、日本を代表する鉄鋼の町である。八幡の中心地に位置する尾倉地域の高齢化率は、1995年に22.6%である。八幡地区のインナーシティの状態と高齢者の生活実態を解き明かすことのよって、地域社会が高齢者を如何に処遇するかを見つけようとした。この研究では、質的ならびに量的な研究・資料によって分析したが、老人意識類型と近隣交流類型(地縁、血縁、友縁)に関して興味深い結果を見いだした。老人意識類型は、(「あなたは老人になったか?」、「あなたは老人と呼ばれて、気になりますか?」)という2つの設問から構成した4つの類型からなる。そのうち老人否定型(老人になったと思わない、また老人と呼ばれて気になるタイプ)が、生活満足度や生きがいなどに関して積極的な自己像をもっていること、そして地縁、血縁、友縁の関係に関しても一番よい関係を維持していることがわかった。さらに、この地域は、産業都市であり、他地域からの流動者が多いにも関わらず、インフォーマルな人間関係は、血縁関係が予想以上に高かった。特に、こうしたインフォーマルなネットワークが、近くに住む娘に介護を期待するということと密接な関係を持っていた。つまり、尾倉地区では、都市にもかかわらず多く修正拡大家族が存在した。平成6年度は、北九州市八幡東区(旧八幡市)における都市発展と八幡製鉄所の関連からインナーシティの性格を考察した。それと、政令指定都市中で一番高い高齢化率を数えるといわれる八幡東区(平成5年19.2%)の高齢者の現状を聞き取り調査した。(1)八幡市の都市発展は、明治30年に創業した官立の八幡製鉄所の発展と共に推移してきたといえる。製鉄所が大量の労働力を必要とした大正期に都市(大正6年:八幡市市制制定)になり、戦後の高度成長期まで日本を代表する八幡製鉄所の本社の所在地として発展した。最盛期には八幡市単独で35万の人口を要する都市であった。戦後、製鉄業の合理化を幾度か繰り返されるなかで、工場移転(北九州から君津や企業合併が進められる。工場移転は、そのまま八幡の労働者の人口移動を伴い、八幡市の人口の減少を意味していた。旧八幡市は、5市合併による北九州市誕生、40年の富士製鉄との合併による新日本製鐵の誕生は、製鉄の町八幡から行政機能も、経済機能も共に小倉や東京へと求心力が移ること意味した。(2)八幡市の住民の生活基盤の一つである住宅は、都市発展と共に工場の隣接地から次第に八幡市以西の地域へと拡がっていった。そして、初期にできた市街地は、次第に老朽化し、特に、戦前の住宅や戦後の20年代の老朽の住宅地は、今日では老人だけが居住する家屋が多くなっている。調査地(春の町、尾倉町、帆柱町、西本町)でも平成5年の高齢化率が25%を超える町内もみられ、都市高齢化の一パターンを示している。(3)八幡の場合、高齢者のうち「まるS」組といってよい八幡製鉄所の正社員の退職者、下下請け会社の退職者、さらにその下の会社の退職者、そして公務員や他の業種の会社の退職で、老後の過ごし方が違っている。今回の研究は、鉄鋼の町として栄え、現在では全国の政令指定都市の区部で最高の高齢化率を示す、北九州市八幡東区を「インナーシティにおける高齢者処遇過程の研究」という題目で研究した。二年間に亘る質的・量的な調査や資料分析から、産業都市の成長、安定、衰退、復興の様子をみることができた。まず、今回の調査では八幡東区の尾倉校区に限定して分析した。ほぼ1万3千人の人口をもつこの地域でみても、人口高齢化は、均質ではなく、まばらな形で高齢化が進んでいた。

天神町(35.5%)、神山町(26.7%)のような高い地域と西本町1丁目(13.6%)のように低い地域が存在した。概して、高齢化の地域は、老朽家屋や急な斜面に建てられた家屋群か有料老人ホームのある地域であった。次に、アンケート調査では6579歳を調査したが、対象者の内、6割が高齢者は県外か県内の出身者が占めており、40年以上の居住者が、6割強を占めていた。「住みやすさ」、「生活満足度」、「生きがい感」といった意識状況でみると、回答からは肯定的回答が予想以上に多く、深刻な事態を生むまでの状態ではないことがわかった。この地域は、かって公民館活動などが極めて盛んになされた地域で、それが高齢者の町内会(64%)、老人クラブ(都市部でありながら約40%の加入率)、サークル活動(36%)の参加率等を生んでおり、インナーシティ化のなかで進みやすい不安や生活問題をこうしたフォーマルな集団参加やインフォーマルな人間関係が安全弁を与えていることがわかった。特に、予想した以上に別居した子どもの近接別居型のパターンがみられ、子どもの未婚者の割合の高いことも、意外な知見であった。今の社会に「老人排除の仕組み」があると認知する人は、4人に1人の割でみられ、「老人扱いされていやな経験をした」、「家族に誇りを持てない」人ほど、この老人排除の認知意識が強まる傾向がみられた。
分泌性ホスホリパーゼA2の神経系における発現と生物学的意義の研究

リン脂質代謝酵素の一群である分泌性ホスホリパーゼA_2(sPLA_2)には約10種の分子種が属しており、各分子種はそれぞれ異なる組織・細胞分布を示すことから、それぞれが固有の生体内機能を担っている可能性が予想される。私は最近、これら分子種のうちX型sPLA_2(sPLA_2-X)がヒトの様々な組織中の末梢神経線維に特有の発現分布を示すこと、また培養神経細胞株PC12においてsPLA_2-Xがリゾホスファチジルコリンの産生を介して神経突起伸長を誘導することを報告した。本年度はsPLA_2-Xの機能を個体レベルで検討するために、sPLA_2-X過剰発現マウスおよび欠損マウスを作成し、解析を行った。マウス脊髄後根神経節(DRGニューロン)にはsPLA_2-Xの内在的な発現がmRNAおよび蛋白レベルで検出された。摘出DRGニューロンのexo vivoにおけるNGF依存的な突起伸張を検討した結果、sPLA_2-X過剰発現マウス由来DRGニューロンでは野生型と比較して約1.5倍に亢進し、逆にsPLA_2-X欠損マウス由来DRGニューロンでは野生型の8割程度まで抑制された。DRGニューロンは痛みに関与することから、次に上記マウスに対して痛みモデルの一つである酢酸ライジング反応を施行した。その結果、30分間の計測の後半部分において、sPLA_2-X過剰発現マウスでは総ライジング回数が野生型マウスと比較して増加し、sPLA_2-X欠損マウスでは逆に減少した。一方sPLA_2-VおよびsPLA_2-III遺伝子改変マウスの酢酸ライジング反応は、野生型マウスと比べて差は認められなかった。これらの結果は、sPLA_2-Xが末梢神経疼痛の持続性に関与する可能性を強く示唆している。現在この作用機構について、sPLA_2-XがDRGニューロンの分化成熟に関わる可能性、脂質メディエーターの産生に関わる可能性の両側面から検討中である。
マイクロダイセクション法による肝内胆管の分取とその部位的機能分化に関する研究

肝臓の小葉構造を中心とした微細構造と機能分化に関する研究は行われているが,胆道系すなわち肝内・肝外胆管の生理機能に関する研究は少ない.ラットの肝臓を門脈よりcollagenaseで潅流し,その後総胆管と門脈より各々ICG,エオジンを注入してそれらの脈管系を標識した後,肝を摘出し,実体顕微鏡下に胆管を系統的に剥離分離するマイクロディセクション法を確立した.さらに胆管の分岐様式とその口径により胆管を部位別に採取し,各部位の構造を光学顕微鏡と電子顕微鏡で観察するとともにその構成蛋白をcapillary tubeによるcontinuous gradient polyacrylamidemicrogel methodを用いて比較検討した.ラットの肝内胆管の分岐様式は各葉で全体的には太いものより細いものまで門脈に沿って木の枝のような分岐様式をとっていたが,肝門部では肝実質より出た細い胆管は直接太い肝門部の胆管に吻合していた.またラットの胆管では部位によりその構成蛋白に差異が認められ,太い胆管に高分子および低分子の蛋白のバンドが認められた.肝内および肝外胆管の部位別の生理機能についての研究は少なく,また腎蔵で用いられたマイクロディセクション法を応用して胆管を系統的に取りだし部位別に検討したのは初めてである.部位により胆管の構成蛋白に差異があることは機能が異なることが示唆されたため,肝内胆管の生理機能を研究する上で,マイクロディセクション法による肝内胆管系の分取方法は有用であると考えられた.肝臓の小葉構造を中心とした微細構造と機能分化に関する研究は行われているが,胆道系すなわち肝内・肝外胆管の生理機能に関する研究は少ない.ラットの肝臓を門脈よりcollagenaseで潅流し,その後総胆管と門脈より各々ICG,エオジンを注入してそれらの脈管系を標識した後,肝を摘出し,実体顕微鏡下に胆管を系統的に剥離分離するマイクロディセクション法を確立した.さらに胆管の分岐様式とその口径により胆管を部位別に採取し,各部位の構造を光学顕微鏡と電子顕微鏡で観察するとともにその構成蛋白をcapillary tubeによるcontinuous gradient polyacrylamidemicrogel methodを用いて比較検討した.ラットの肝内胆管の分岐様式は各葉で全体的には太いものより細いものまで門脈に沿って木の枝のような分岐様式をとっていたが,肝門部では肝実質より出た細い胆管は直接太い肝門部の胆管に吻合していた.またラットの胆管では部位によりその構成蛋白に差異が認められ,太い胆管に高分子および低分子の蛋白のバンドが認められた.肝内および肝外胆管の部位別の生理機能についての研究は少なく,また腎蔵で用いられたマイクロディセクション法を応用して胆管を系統的に取りだし部位別に検討したのは初めてである.部位により胆管の構成蛋白に差異があることは機能が異なることが示唆されたため,肝内胆管の生理機能を研究する上で,マイクロディセクション法による肝内胆管系の分取方法は有用であると考えられた.
明治期における技芸(工芸)技術活用による産業創生に関する研究-京都七宝を中心に

本年度は明治期の京都で興隆し急激な発展を遂げるも地場産業としての継続が困難となり衰退した京都七宝に着目して、技芸(工芸)技術の近代化の過程を明らかにする事を目的に、地域の地場産業として創造されていく過程について、これまでの調査の整理と検証及び補足的な調査を行い、調査・研究資料の総合的な整理・報告とする。これまで断片的であった京都七宝に関わる研究を編年的かつ総合性のあるものにと目指し、以下の5項目を実施した。(1)古記録等を翻刻と、資料や七宝制作に関わる遺構の調査の継続。(2)近代技芸技術に関する研究会を開催。(3)書誌資料及等をもとに七宝資料の所在に関するデータベース化。(4)京都七宝に関わる資料の総合的なデータベース化。(5)複合的で総合性のある資料となるように編年的に整理する。これまでの研究活動及び新たに得た知見の客観的かつ多角的な検証と考察、収集した資料のより充実した活用を試みるため、各専門家の参加の協力を得て近代技芸技術研究会を開催した。研究会にて、書付や古記録等の翻刻作業と、技芸(工芸)技術の近代化をより具体的に検証することが今後の研究においての重要であるとの認識が確認され、新たな調査を研究計画に加え、並河靖之七宝記念館と東京学芸大学の協力を得て明治期の七宝釉薬の科学分析調査を行った。(1)は『日誌並河店』書付資料他の翻刻が進められた。(2)の近代技芸技術研究では、歴史、工芸史、古文書、文化財保存科学、文化財修復、美術史等の専門家による日本の七宝研究における近代工芸産業史としての新たな視座を開くための研究活動を試みた。(1)(3)(4)に関わる資料整理や検証と考察、科学分析調査等を含めおよそ9回開催し、研究会は今後も継続し(5)を行う体制が整えられた。研究活動及び研究会による成果は、従来の七宝研究に新たな知見を加えるものであり、産業技術史学会(6月)、文化財保存修復学会(6月)等での発表を予定している。・明治期の七宝制作の場の遺構について、各調査対象ごとに専門研究者の協力を得て実地での調査活動を行なった。いずれも聞き取りと作品や資料等は写真及びデジタル機器で記録した。研究代表者が所属する京都七宝研究会で考察を重ね今年度は、錦雲軒稲葉七宝(京都府)、徳光院(兵庫県)を調査の対象とした。錦雲軒稲葉七宝は稲葉七穂により明治22年に創業し近年まで七宝の製造販売を行なってきた窯元で現在の当主から聞き取りを行った。徳光院は川崎造船の創業者川崎正蔵が名古屋出身の七宝工・梶佐太郎に宝玉七宝の工房を営ませた跡地で、後に川崎家の菩提寺となった寺院である。その経緯から徳光院には川崎家から伝来した宝玉七宝が残されており、ご住職から聞き取りを行なった。さらに、無量寺応挙・芦雪美術館(和歌山県)から有線七宝を所有する情報と調査の機会を得て、研究会にて考察を行い同館の館蔵品が川崎家から伝来した宝玉七宝であることが明らかにされた。・研究代表者は所属する近代国際陶磁研究会が6月に開催した第7回総会(講演会)にて、事例報告『並河靖之一その人と京都七宝一』の研究報告の執筆と発表を行なった。その際に各専門研究者から京都七宝を明治期の技芸技術としてより深く追求するためにも近代窯業に関わる研究の視座の重要性を改めて示唆され再認識し、これを契機に領域をこえた研究者からの協力を得て10月には加瀬家(千葉県)にて七宝家・濤川惣介に関わる調査を行なった。千葉県海上町に所在する加瀬家は、同地が濤川惣介の出生地であることから惣介に関わる作品や資料を収集し、郷土の資料として護り伝えており、当主から聞き取りを行なった。本年度は、京都七宝成立に関る資料を網羅的に収集し、収集した書籍、資料を系統的に整理・分類して、京都七宝及び近代七宝の諸相の整理、七宝粕薬に関わる資料、技術改良、伝播に関する人物について抽出しデータベース化の準備を行なった。・これまでに収集してきた京都七宝に関する古記録等(21件)の翻刻を進めるため、近代美術に関する先行研究者や近世文書や近代史の各専門家(東京学芸大学ほか)の協力を得て整理、調査のすすめ方についての検討及び教示を受け、翻刻作業に着手をするための体制を整えた。・近代技芸に関する研究会にて、収集資料の整理を継続する一方で翻刻された古記録についても随時検討をした。また、各種の研究会や学会等にも参加し研究活動の公表を行い先行研究者や異分野からの専門家の教示を積極的に受け入れた。・七宝資料の所在の全容を明らかにすることを目的として、書誌資料を整理しデータベース化を進めた。その際、美術工芸に関わる書誌資料だけではなく、建築や霊廟装飾等にも七宝資料の所在を求め抽出の対象とした。収集した資料から明治期の京都七宝の生業を解明する手がかりとなる資料を抽出して記述内容のデータベース化を進めた。・七宝資料の所在の確認と発掘的な調査を目的として、七宝作品のみならず建築の錺金具や等についても視野に入れ、各地に調査をした。

本年度は山口県(毛利博物館ほか)、愛知県(名古屋市立博物館、七宝町アートビレッジほか)、香川県(金刀比羅宮宝物館ほか)等である。・明治期の七宝制作の場について考察する際の手がかりとして、七宝町アートビレッジの協力を得て尾張七宝の現代の七宝制作の場についての視察を行なった。・更なる書誌及び七宝資料の発掘的な調査を行うとともに、産業創生を考察する上で近世末から近代の七宝以外の諸技芸についても情報収集を行なった。本年度は明治期の京都で興隆し急激な発展を遂げるも地場産業としての継続が困難となり衰退した京都七宝に着目して、技芸(工芸)技術の近代化の過程を明らかにする事を目的に、地域の地場産業として創造されていく過程について、これまでの調査の整理と検証及び補足的な調査を行い、調査・研究資料の総合的な整理・報告とする。これまで断片的であった京都七宝に関わる研究を編年的かつ総合性のあるものにと目指し、以下の5項目を実施した。(1)古記録等を翻刻と、資料や七宝制作に関わる遺構の調査の継続。(2)近代技芸技術に関する研究会を開催。(3)書誌資料及等をもとに七宝資料の所在に関するデータベース化。(4)京都七宝に関わる資料の総合的なデータベース化。(5)複合的で総合性のある資料となるように編年的に整理する。これまでの研究活動及び新たに得た知見の客観的かつ多角的な検証と考察、収集した資料のより充実した活用を試みるため、各専門家の参加の協力を得て近代技芸技術研究会を開催した。研究会にて、書付や古記録等の翻刻作業と、技芸(工芸)技術の近代化をより具体的に検証することが今後の研究においての重要であるとの認識が確認され、新たな調査を研究計画に加え、並河靖之七宝記念館と東京学芸大学の協力を得て明治期の七宝釉薬の科学分析調査を行った。(1)は『日誌並河店』書付資料他の翻刻が進められた。(2)の近代技芸技術研究では、歴史、工芸史、古文書、文化財保存科学、文化財修復、美術史等の専門家による日本の七宝研究における近代工芸産業史としての新たな視座を開くための研究活動を試みた。(1)(3)(4)に関わる資料整理や検証と考察、科学分析調査等を含めおよそ9回開催し、研究会は今後も継続し(5)を行う体制が整えられた。研究活動及び研究会による成果は、従来の七宝研究に新たな知見を加えるものであり、産業技術史学会(6月)、文化財保存修復学会(6月)等での発表を予定している。
イヌ骨折モデル動物を用いた骨折治癒過程の力学的,X線学的および組織学的変化の検討

長菅骨においてインパルス衝撃応答法によって測定される共鳴振動数を指標として、これを健側と比較することで、骨折の骨癒合強度が推定できる。今回、動物の骨折モデルにおいて共鳴振動数の推移から骨癒合強度を評価できるか否かをイヌの脛骨を用いて検討した。イヌの脛骨内果を加振し、脛骨上端内顆で応答波形を加速度センサで記録した。周波数応答関数を求めこれを共鳴振動数とした、実験にはビ-グル成犬10頭を用いた。IRMの測定は健側および手術側を週1回の間隔で行った。健側脛骨の前額面における共鳴振動数は800-1100Hzであった。手術は脛骨中央で横切し、プレートで内固定した。スクリュー固定時のギャップは2mmから0mmであった。術後、共鳴振動数、レントゲン撮影、DXA、血液生化学検査を週1回経時的に実施した。術後5頭は8週で、4頭は18週で、1頭は25週で屠殺し、骨折部の組織学的検査を行った。8週例ではギャップの大小にかかわらず患側の共鳴振動数は健側のそれに達した例はなかった。一方、18週例および25週例ではすべて18週までに患側の共鳴振動数は健側の値に達した。術後1週目の共鳴振動数は全例において術直後よりも低下した。骨折治癒経過中のレントゲン像で、ギャップが仮骨で埋まる1-2週前に急激な共鳴振動の上昇がみられた。レントゲン像で皮質骨の連続性が完成し、随腔の仮骨像が消失してはじめて健側値に達した。この時期は術後18週前後であった。術後の血中Ca値は術後1週目で上昇し3週目で元の値に戻った。血中AIP値は術後1週目に上昇し以後低下した。骨折部BMDは急激な上昇が8週目までみられた。骨接合部の組織学的検査では、8週例ではいずれも皮質骨では癒合が完成していたが、随腔には内軟骨性骨化巣を含む結合組織が認められた。一方、18および25週例では組織学的にも完全な癒合所見を呈し、内軟骨性骨化巣は消失していた。(1)実験方法1.5から2歳の雌ビ-グル犬13頭を用い1側の脛骨中央部で手術的にbone sawで骨折モデルを作成した。11頭ではSMOプレート(長さ6mm、スクリュー16mm2本、14mm2本)で、2頭は創外固定(Orthofix mini-model1頭、Aesculap mini-model1頭)で固定した。その際いずれも骨片間に2mmのギャップを開けて固定した。実験犬を3グループに分け、A群:プレート固定、短期観察群(8週屠殺)、B群:プレート固定、長期観察群(18週屠殺、1頭は25週で屠殺)C群:創外固定群、とした。屠殺は麻酔後放血により行った。術後1週ごとに、インパルス衝撃応答法による共鳴振動数の測定(脛骨内果加振、脛骨上端内顆で記録)、レントゲン検査、骨折部のDXA法(DCS-600,ALOKA)による骨塩量(BMD)測定、血液生化学検査を経時的に行った。

屠殺後、骨折部を摘出し組織学検査を行った。(2)実験結果1)共鳴振動数の測定では、健常側と骨折側とも振動に2つのモードが認められた。即ち、プレートと平行な面の振動と、垂直な面の振動であった。前者は術後よりわずかずつ上昇したが、後者は術後増減を繰り返しながらも順調に増加していった。これはプレート固定の影響を余り受けない骨自身の変化を強く反映した振動であると言える。2)プレート固定ではおよそ15週を過ぎると骨折側の振動数が健側の値に等しくなった。一方、創外固定群では25週過ぎても健側に達しなかった。3)BMDは術後2週目に一度下降するしその後順調に増加した。12-14週目でピークに達し、以後軽度下降した。4)アルカリフォスファターゼ(ALP)は術後急激に上昇し、1-2週目にピークに達した後下降し4週目前後からはほぼ一定になった。(3)考察組織学的検討を現在行っている。これまでの結果から、インパルス衝撃応答法による共鳴振動数の測定によって長管骨骨折の治癒過程を経時的に観察できる手段であることがわかった。その際、内固定材の面に垂直の振動モードを測定することで骨自身の骨癒合の変化をより鋭敏に観察できることもわかった。創外固定はプレート固定に比べ癒合に時間を要した。長管骨においてインパルス衝撃応答法によって測定される共鳴振動数を指標として、これを健側と比較することで、骨折の骨癒合強度が推定できる。今回、動物の骨折モデルにおいて共鳴振動数の推移から骨癒合強度を評価できるか否かをイヌの脛骨を用いて検討した。イヌの脛骨内果を加振し、脛骨上端内顆で応答波形を加速度センサで記録した。周波数応答関数を求めこれを共鳴振動数とした。実験にはビ-グル成犬10頭を用いた。IRMの測定は健側および手術側を週1回の間隔で行った。健側脛骨の前額面における共鳴振動数は800-1100Hzであった。手術は脛骨中央で横切し、プレートで内固定した。スクリュー固定時のギャップは2mmから0mmであった。術後、共鳴振動数、レントゲン撮影、DXA、血液生化学検査を週1回経時的に実施した。術後5頭は8週で、4頭は18週で、1頭は25週で屠殺し、骨折部の組織学的検査を行った。8週例ではギャップの大小にかかわらず患側の共鳴振動数は健側のそれに達した例はなかった。一方、18週例および25週例ではすべて18週までに患側の共鳴振動数は健側の値に達した。術後1週目の共鳴振動数は全例において術直後おりも低下した。骨折治癒経過中のレントゲン像で、ギャップが仮骨で埋まる1-2週前に急激な共鳴振動の上昇がみられた。レントゲン像で皮質骨の連続性が完成し、随腔の仮骨像が消失してはじめて健側値に達した。この時期は術後18週前後であった。術後の血中Ca値は術後1週目で上昇し3週目で元の値に戻った。血中AIP値は術後1週目に上昇し以後低下した。骨折部BMDは急激な上昇が8週目までみられた。骨接合部の組織学的検査では、8週例ではいずれも皮質骨では癒合が完成していたが、随腔には内軟骨性骨化巣を含む結合組織が認められた。一方、18および25週例では組織学的にも完全な癒合所見を呈し、内軟骨性骨化巣は消失していた。
筋ジス治療薬としてのエピガロカテキンガレートの適格性と分子作用機序の研究

Duchenne型筋ジストロフィー(DMD)はジストロフィン欠損を原因とするヒトの重篤な遺伝病である。私共は、ジストロフィン欠損骨格筋において酸化ストレスが健常筋に比べて亢進していることを以前に報告した。エピガロカテキンガレート(EGCG)は緑茶に含まれる主要カテキンであり、抗酸化能を有する。EGCGを筋ジストロフィーモデルであるmdxマウスへ出生翌日より8週間皮下投与すると、その発病を遅らせ、症状を軽減させることを私共は最近発見した(2006)。EGCGのDMD患者への臨床試験(治験)の認可を目標に、本年度はEGCGの最も有効な投与ルートを見出すために1-4の実験を行った。1.3週齢のmdxマウスと健常マウスにEGCG又は生理食塩水を5週間皮下注射した。2.8週齢のmdxマウスと健常マウスにEGCG又は生理食塩水を5週間皮下注射した。3.投与期間中にマウスの自発的運動量及び筋損傷の指標となる血清クレアチンキナーゼ活性を測定した。4.投与完了後、種々の骨格筋及び血液をマウスより採取した。これらのサンプルの分析については継続の予定。1-3の解析により、EGCGの投与開始時期、3週齢又は5週齢はEGCGの筋ジス改善効果を期待するには遅いことが判明した。確実な結果を得るためには、上記4の検査結果や、さらにマウスの症例数を増やして再実験することが望まれるが、mdxマウスの筋ジスの抑制には、発症時期(2-3週齢)以前の生後直後よりEGCGを投与する必要があることが示唆された。このような基礎実験の結果は、臨床試験の成功に導く布石となるため重要である。
形式記述による暗号プロトコルの自動検証の研究

研究計画の第1段階として挙げた新規プリミティブに対するより強い攻撃者のTask-PIOAフレームワークを用いた定式化を達成した.新規プリミティブとして「電子署名」,より強い攻撃者として「能動的攻撃者」の定式化を試みた.具体的には,適応的選択文書攻撃者に対するFDH署名の存在的偽造不可能性をTask-PIOAフレームワークを用いて証明することに成功した.上記の攻撃者モデルは電子署名における最も強力な能動的攻撃者とされているものであり,今回の成果によってTask-PIOAフレームワークでも実用的な安全性検証が可能であることが明らかになった.また,その過程において,落とし戸付き関数の計算量的一方向性のTask-PIOAでの表現法を提案した.Task-PIOAフレームワークは,有望な安全性自動検証技術であるとされているものの,具体的検証例が少ないため記述能力に不明な点が多かったが,今回の結果により,その記述能力の一端が解明されたといえる.また,落とし戸付き関数の計算量的一方向性は電子署名以外のプリミティブ(OAEP暗号など)の安全性証明にも用いられるため,今回Task-PIOAでの定義を与えたことにより,今後具体的検証例のさらなる拡充を目指す場合にも,再利用可能であるという利点がある.また,Task-PIOAフレームワークに基づく自動検証ツールを開発する際には動作チェックのための検証例としての活用も見込まれる.研究計画の第1段階として挙げた新規プリミティブに対するより強い攻撃者のTask-PIOAフレームワークを用いた定式化を達成した.新規プリミティブとして「電子署名」,より強い攻撃者として「能動的攻撃者」の定式化を試みた.具体的には,適応的選択文書攻撃者に対するFDH署名の存在的偽造不可能性をTask-PIOAフレームワークを用いて証明することに成功した.上記の攻撃者モデルは電子署名における最も強力な能動的攻撃者とされているものであり,今回の成果によってTask-PIOAフレームワークでも実用的な安全性検証が可能であることが明らかになった.また,その過程において,落とし戸付き関数の計算量的一方向性のTask-PIOAでの表現法を提案した.Task-PIOAフレームワークは,有望な安全性自動検証技術であるとされているものの,具体的検証例が少ないため記述能力に不明な点が多かったが,今回の結果により,その記述能力の一端が解明されたといえる.また,落とし戸付き関数の計算量的一方向性は電子署名以外のプリミティブ(OAEP暗号など)の安全性証明にも用いられるため,今回Task-PIOAでの定義を与えたことにより,今後具体的検証例のさらなる拡充を目指す場合にも,再利用可能であるという利点がある.また,Task-PIOAフレームワークに基づく自動検証ツールを開発する際には動作チェックのための検証例としての活用も見込まれる.
肺癌におけるHLA-A24/A26関連抗原の解析

【目的】肺癌患者生体内の肺癌特異的細胞障害性Tリンパ球(CTL)を誘導し、認識する腫瘍抗原等を解析し、肺癌に対する特異的免疫療法の基礎とする。【実験1】CTLの誘導(方法)原発性肺癌の新鮮切除標本より腫瘍組織を摘出し酸素法・密度勾配重層円心法にて腫瘍内浸潤リンパ球(TIL)を分離、また郭清リンパ節よりLNLを分離。固層化抗CD3抗体にて48時間刺激後、IL-2(50IU/ml)にて10-14日培養し、腫瘍細胞株にて1回/週・2-3回刺激した。刺激にはPC-9(HLA-A2/A24、腺癌)、Sq-1(HLA-A24、扁平上皮癌)、QG56(HLA-A26、扁平上皮癌)、A549(HLA-26、腺癌)のうちHLA-Alocusの適合した株を用い、CTL活性は^<51>Cr-放出試験にて検索した。(結果)(1))固層化抗CD3抗体・IL-2による初期培養によりTIL・LNLは20-50倍に増殖した。(2)HLA-Alocusおよび組織型が伴に適合した肺癌細胞株にて刺激した15例中6例にCTLが誘導された。これらはすべてPC-9刺激を受けたHLA-A24陽性線癌症例であった。(結論)HLA-A2/A24は伴に日本人で頻度の高いhaplotypeであるが、このHLA-A2/A24に提示される肺癌共通抗原の存在が示唆された。【実験2】腫瘍抗原の同定(方法)上記(実験1)で明かにされた、共通の腫瘍抗原を有するPC-9より、pH3.3のクエン酸緩衝液にて細胞表面のHLA分子に結合した抗原ペプタイドを溶出し、更に逆層クロマトグラフィーにて展開して得られた各fractionについて、抗原提示細胞に反応させ、PC-9特異的CTLの反応を誘導するfractionを選定し、更にmass-spectrometerによりアミノ酸配列を決定する。
テラヘルツ帯における人体皮膚ファントムの開発

テラヘルツ帯における人体皮膚のファントムの作成を目的として、表皮の複素比誘電率データの蓄積・計測方法の改良・ファントム素材となり得る各種材料の物性値測定データの蓄積を行った。人体のような柔らかい試料に対しては、これまでの計測技術では再現性の高い測定が難しい場合があり、このためエリプソメトリーと呼ばれる手法にプリズムを導入し、柔らかく不定形の素材に対しても精度良く複素比誘電率を測定できる系を開発した。これらの蓄積をもとにテラヘルツ帯において人体表皮の複素比誘電率を模擬するファントムを作成した。昨年度に引き続き、ファントム素材となりうる試料の複素比誘電率計測を行ってデータの蓄積を行った。人体表皮の形状をある程度再現することを念頭に、柔らかいゴムなどの素材に対するデータ蓄積を中心として進め、また素材の組み合わせについても検討を行った。こうして蓄積したファントム素材に関するデータを基準として、人体表皮の複素比誘電率を再現するファントムを作成した。これまでの研究で、人体表皮は水分を多く含み、特に研究で使用しているFバンド、90GHzから140GHz付近の電磁波に対しては表皮に存在する水分が大きな影響を与えることがわかってきた。そのため、ファントム作成に関して水分を吸収できるような素材を用い、含水量をある程度コントロールできるようにした。これにより、水分が人体表皮の複素比誘電率に与える影響を見積もることができるようになり、外的要因との関連性を調べることが可能になった。同時に、複素比誘電率の計測技術に関する検討を進めた。測定範囲を数ミリ四方程度まで絞っても計測が可能となる測定系を昨年度開発したが、これにさらに改良を加え、人体のような柔らかく不定形の素材に対する計測技術として、プリズムを用いた測定法を開発した。この測定系では、試料をアクリルで作成したプリズムに密着させ、これに電磁波を入射し、反射波から試料の複素比誘電率を計測できる。これを用いることにより、水のような液体の試料や柔らかい生体試料に対し、精度のよい計測を行うことが可能となった。1測定系の調整を行い、より狭い領域に対しても物性値を計測できるよう系の構成を組み直した。これまでの測定系を改良し、狭い領域に対しても複素比誘電率が測定できるような測定系を構築した。人体皮膚の複素比誘電率は皮膚の持つ水分に強く影響されるが、皮膚の含水率はその部位によっても異なるため、それらを識別できることが必要になる。しかしこれまでの測定系では、ある程度広い領域に電磁波を照射していたため、その照射領域の複素比誘電率の平均を計測していた。皮膚の各部位に対しより正確な値を導くためには、電磁波照射領域を狭め、物性値の分布が計測できるような測定系を構築することが望ましい。また実験を進めていった際に、新たに干渉の影響が大きいことがわかり、この影響を排除する必要が生じた。このため系の構成や新たな手法を導入することにより、これまでより狭い領域に対して干渉の影響を受けることなく複素比誘電率が計測できるような測定系を構築した。2ファントム素材となり得る各種材料の物性値を測定し、データを蓄積した。ファントムの素材として使用可能な素材を探索し、それぞれの物性値を測定、データベース化した。部材としてある程度の大きさのものを用意することによりこれまでの実験系で測定を進めることができ、また1で述べた干渉の影響も最小限にとどめることができた。素材としては汎用的な使用を想定し、できるだけ市販の材料で人体表皮の物性値を再現できる素材の選定を進めた。狭い領域に対する測定系の構築にあたり、いくつかの新たな部材を発注していたが、それらの到着が遅れたこと、また到着した部材が所定の性能を発揮しなかったため当該の会社とのやりとりが発生したため、系の構築が遅れ、予定していたいくつかの測定が実施できなかったことが主な原因である。1人体皮膚に関する物性値のデータを収集すると共に、外的要因に対する応答を調べることで、被験者の生理反応と物性値との関連性を見いだす。人体皮膚に対するデータの蓄積をはかると同時に、これまでに作成したファントムを用い、外的要因がどのように各物性値に影響を与えているかなどの、より詳細な物性値の変化を明らかにする。ファントムを用いることにより気温・湿度等の外的要因による違いと被験者の状態による物性値変化を区別し、被験者の状態と各物性値との関連性の精度を向上させ、より本質的な傾向を明らかにする。人体の特定の部位において、このような関連性が得にくい場合は、測定部位を変更し、物性値の変化がより起こりやすくかつ被験者に負担のかからない部位の特定を図る。部位ごとに最適な測定方法が異なる場合には測定方法の改良も検討する。2皮膚表皮の物性値をシミュレートできる素材・構造を確定し、ファントムを作成する。過去のデータに基づき、テラヘルツ帯で測定された物性値が同等の値になるような素材を確定し、それらを組み合わせた構造を持つファントムを作成する。

テラヘルツ帯の電磁波はマイクロ波に比べて透過性が異なり、一般に市販されている電磁波用のファントムならびにその素材では皮膚を正しくシミュレートすることができない。従って、前年度の検討結果を基にテラヘルツ帯での物性値をより精度良く再現できる素材を確定し、物性値の測定における基準となるファントムを作成する。また、組織内部の水分量をコントロールできる構造を導入し、皮膚表皮に対する外部刺激(温度や湿度の影響)や皮膚そのものの保水能力による影響などをシミュレートできるようにする。さらに、ゲル状の物質を用いたファントムを作成できるよう素材の確定を行い、測定物の形状による違いも再現できるファントムを開発する。次年度において、ファントムとして使用可能な素材をさらに調査・検討すると共にファントムを作成するための各種素材を購入する。できるだけ市販の材料を利用して開発を行う予定であるが、検討する試料の種類が多く相応の費用を計画している。また、各年度ごとに研究成果を学会に発表するとともに論文として投稿する予定であり、そのための学会参加費、旅費、論文投稿費用などを計画している。
視床下部弓状核尾側のヒスタミンH1受容体を介する摂食調節機構

条件給餌ラットの給餌中止に伴うnose pokingに対して抗ヒスタミン薬の前処置は顕著な効果を示さなかった。一方我々は、弓状核尾側のc-Fos発現におけるPKCδの関与を示唆するデータを得た。以前、視床下部のPKCδを介する肝臓のglucose産生抑制が報告されていることから、我々は条件給餌ラットにおけるヒスタミン神経系を介する肝臓のglycogen代謝調節について検討した。条件給餌ラットにおいて給餌中止直後に対する、給餌中止4時間後の肝臓におけるグリコーゲン量を測定ところ、リン酸緩衝液を投与した対照群においてはあまり変化が見られなかったのに対し、抗ヒスタミン薬投与群においてはグリコーゲン量の有意な減少が見られた。このことから、ヒスタミンH1受容体(HIR)を介する肝臓のグリコーゲン分解抑制が示唆された。肝臓におけるHIRの発現は弱く、この変化は中枢のヒスタミン神経機能を反映していると考えられた。これまでに中枢ヒスタミン神経系による末梢エネルギー代謝調節機構はほとんど研究されておらず、本研究により弓状核尾側部位を介する中枢-末梢シグナル連関が初めて明らかとなることが期待される。さらに我々は、給餌中止により興奮するヒスタミン神経細胞群の同定を行った。ヒスタミン神経の細胞体が局在する結節乳頭核(TM)におけるc-Fosとヒスタミン合成酵素であるヒスチジンデカルボキシレース(HDC)との共発現について検討したところE3 subgroupのヒスタミン神経のみに顕著な興奮が見られた。本研究から、TMには各部位へと投射しその部位を介する特異な機能に関与する機能的にヘテロなヒスタミン神経細胞群が存在することが示唆された。ラットを1日1回(2時間)の条件給餌で2週間飼育することにより、体重は一定のレベルを維持するようになった。この条件給餌ラットの2週間後の給餌を中止し、中止2時間後、及び、4時間後の視床下部のc-Fos発現を調べた。その結果、視床下部弓状核尾側にのみ強いc-Fos発現を見いだした。そして、中止後2時間後より、4時間後の方に、より強いc-Fos発現が見いだされた。それに対して、吻側のc-Fos発現細胞は非常に少なかった。また、条件給餌を昼間(10:0012:00)に行うよりも、夜間(22:000:00)に行う方が強いc-Fos発現が引き起こされた。視床下部の他の部位(腹内側核、外側野、及び、室傍核)にはc-Fos発現が見いだせなかった。弓状核尾側のヒスタミンH1受容体発現を抗ヒスタミンH1受容体抗体による免疫組織化学で調べたところ、c-Fos発現細胞は全てヒスタミンH1受容体陽性細胞であった。次いで、条件給餌で飼育したラットの給餌中止時刻の2時間前に抗ヒスタミン薬(10mg/kgジフェンヒドラミン、及び、20mg/kgメピラミン)を投与したところc-Fos発現細胞は顕著に減少した。一方、条件給餌ラットの給餌中止の2時間後、及び、4時間後の結節乳頭核におけるc-Fos発現を調べた。その結果、2時間後に結節乳頭核のc-Fos発現が顕著に増加した。以上の結果より、1日1回の条件給餌により条件づけされたラットは給餌の中止によりヒスタミン神経細胞、及び、弓状核尾側のヒスタミン神経の投射細胞が活性化され、c-Fos発現が増加するこ考えられた。
偏光フィルムを用いた両眼開放下の新たな弱視訓練の試み

近年、弱視治療には両眼開放下で弱視眼のみに視標を呈示する方法が開発され、その有効性が明らかとなっているが、それらの装置は特殊な電子機器であるため、患者一人ひとりに貸出することは困難である。そこで本研究において、より安価で手軽に行うことのできる、偏光フィルムを用いた両眼開放下の弱視治療法を考案し、その有効性を検証する。
ケトン体代謝異常症の分子病態-蛋白3次構造変化とスプライシング異常を中心に-

ケトン体代謝異常症の分子病態について,蛋白3次構造変化とスプライシング異常を中心に解析を行った.フィンランドのオウル大学との共同研究によりヒトのミトコンドリアアセトアセチル-CoAチオラーゼ(T2)の結晶構造を初めて明らかにし,T2がカリウムイオンで活性化されるメカニズムを明らかにし,詳細なKineticsについて明らかにできた.遺伝子変異によるアミノ酸置換がT2蛋白およびSCOT蛋白に与える影響の解明については患者において同定されたミスセンス変異についてはTransient expression analysisを行い、残存活性のある変異については、変異蛋白の酵素安定性を検討した。T2欠損症において新規7変異についての解析とその変異の上記3次構造における変異の与える影響について解析し、E252del変異がKm変異で、それはE252が属するループ構造がこのアミノ酸の欠失によりその方向性が変化することによる基質トラップへの影響によることが疑われた。またSCOT欠損症においてエクソン6最後の塩基における1塩基置換がエクソン6、エクソン6、7のスキップを来す原因について核内、細胞質のRNA(トランスクリプト)を解析して、その病態にnonsense mediated mRNA decayが関わっていることを示唆できた。スプライス異常と考えられた症例の解析ではAlu配列による遺伝子の再構成が同定され,T2遺伝子においてもAlu配列を介した遺伝子再構成がこれで複数同定され,稀な病因ではないことが明らかとなった.T2欠損症でスプライシング異常をきたしたGK43においてはエクソン内の1塩基置換により,すぐその上流のcryptic splice donor部位が活性化されることをmini geneを用いたスプライシング実験で明らかにした.ケトン体代謝異常症の分子病態について,蛋白3次構造変化とスプライシング異常を中心に解析を行った.フィンランドのオウル大学との共同研究によりヒトのミトコンドリアアセトアセチル-CoAチオラーゼ(T2)の結晶構造を初めて明らかにし,T2がカリウムイオンで活性化されるメカニズムを明らかにし,詳細なKineticsについて明らかにできた.遺伝子変異によるアミノ酸置換がT2蛋白およびSCOT蛋白に与える影響の解明については患者において同定されたミスセンス変異についてはTransient expression analysisを行い、残存活性のある変異については、変異蛋白の酵素安定性を検討した。スプライス異常と考えられた症例の解析ではAlu配列による遺伝子の再構成が同定され,T2遺伝子においてもAlu配列を介した遺伝子再構成がこれで複数同定され,稀な病因ではないことが明らかとなった.T2欠損症でスプライシング異常をきたしたGK43においてはエクソン内の1塩基置換により,すぐその上流のcryptic splice donor部位が活性化されることをmini geneを用いたスプライシング実験で明らかにした.平成18年度においては日本においても新たなT2欠損症、SCOT欠損症の症例が1例ずつ酵素診断でき、その臨床情報を得た。世界各国からの確定T2欠損症が64例、SCOT欠損症が21例となった。フィンランドOulu大学のWierrenga博士との共同研究で、世界で初めて正常T2蛋白(ホモ4量体)の3次構造を決定し、そのカリウムイオンによる活性化のメカニズム解明についてBiochemistryに最近受理された。遺伝子変異によるアミノ酸置換がT2蛋白およびSCOT蛋白に与える影響の解明については患者において同定されたミスセンス変異についてはTransient expression analysisを行い、残存活性のある変異については、変異蛋白の酵素安定性を検討した。HMG-CoA synthase欠損症の解析(遺伝子診断)本症疑い患者数例についてサンプル集めHMG-CoAsynthase遺伝子の各エクソンを増幅し、塩基配列を決定したがまだ患者は認められていない。平成19年度においては,ケトン体代謝異常症の分子病態について,蛋白3次構造変化とスプライシング異常を中心に解析を行った.フィンランドのオウル大学との共同研究によりヒトのミトコンドリアアセトアセチル-CoAチオラーゼ(T2)の結晶構造を初めて明らかにし,T2がカリウムイオンで活性化されるメカニズムを明らかにし,詳細なKineticsについて明らかにできた.T2欠損症患者において同定された7つの変異について,その変異の蛋白に与える影響について詳細に検討し,E252delが温度感受性をもつKm変異であることを明らかにした.またSCOT欠損症においてはR268H変異がやはり温度感受性の残存活性をもつ変異であることを明らかにし,ヒトSCOT3次構造モデルを作成して,その蛋白に与える影響について検討した.

スプライス異常と考えられた症例の解析ではAlu配列による遺伝子の再構成が同定され,T2遺伝子においてもAlu配列を介した遺伝子再構成がこれで複数同定され,稀な病因ではないことが明らかとなった.T2欠損症でスプライシング異常をきたしたGK43においてはエクソン内の1塩基置換により,すぐその上流のcryptic splice donor部位が活性化されることをmini geneを用いたスプライシング実験で明らかにした.