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戦時・戦後の日本における農村協同組合組織と農村支配構造の変容に関する実証研究-産業組合・農業会から農業協同組合への道

1.本研究の課題は、戦時体制期から戦後の1950年代に至る時期の日本農村社会の変貌過程を、農村の協同組合組織に焦点を合わせて明らかにすることにあったが、3年間の調査研究の結果、以下の点が明らかになった。2.東北地方・山形県庄内地方(鶴岡市周辺)では、戦時下から戦後直後にかけて展開した東亜連盟の史料(東田川群黒川村)と農業協同組合組織の変遷過程を知る史料を発掘することができた。両者の史料を組み合わせると、東亜連盟は農村部でかなり活発に活動し、とくに肥料欠乏のもとで酵素肥料という独自の肥料を通じて農民の支持を集めていたことがわかる。黒川村の東亜連盟は、太平洋戦争期から敗戦後の1946年頃まで、農業会にも大きな影響力をあたえていたが、農業協同組合の発足とともに役員から排除され、農協は東亜連盟との関係を断ってスタートした。以上のことは、同地方の戦時から戦後社会への転回を理解するうえで、戦時体制・右翼的社会運動と農業協同組合組織との関係を分析することがことのほか重要な意味をもっていることを示している。これに対し、養蚕地域に属する山梨県中巨摩群落合村は、戦前・戦後に農民運動が展開した地域として有名であり、戦前には農民組合の影響下にある組合製糸が、戦時期以降に本格的な農協組織に再編された。ここでは、協同組合組織を基盤にして農民が経済的実力をつけ、それを背景に農民運動が展開していた。以上3年間の調査の結果、戦前から戦後の農協組織の変遷は、戦後農村社会の形成に大きな影響をあたえていたことが実証的に確認できた。これらのなかで、山梨県中巨摩群落合村についての研究成果は、1994年2月に発刊した著作『近代日本と農村社会』に発表した。山形県庄内地方についての研究成果は、平成7年度の文部省科学研究費補助金(研究成果公開促進費)を申請し、出版する予定である。1.本研究は、戦時体制期から戦後の1950年代に至る時期の日本農村社会の変猊過程を、農村の協同組合組織に焦点を合わせて明らかにすることにあったが、調査研究の結果、以下の点が明らかになった。2.今年度の調査研究の最大の収穫は、東北地方の山形県庄内地方(鶴岡市周辺)で戦時下から戦後直後にかけて展開した東亜連盟運動の資料(東田川郡黒川村地域)が発堀されたことである。石原莞爾率いる右翼的な東亜連盟の農村部の活動実態が判明する史料が発見されたことは大変珍しい。この史料によれば、太平洋戦争末期にあっても東亜連盟は農村部でかなり活発に活動し、とくに肥料欠乏のもとで、酵素肥料という独自の肥料を通じて農民の支持を集めていたことがよくわかる。黒川村の東亜連盟は農業会にも大きな影響力をもち、農業会役員の多くは東亜連盟の会員であった。また東亜連盟は敗戦後も1946年頃までは影響力を失わず、戦後社会の出発にあたっても少なからぬ影響をあたえた。同地方は戦時体制・右翼的社会運動との関連で協同組合組織のあり方、さらには戦後社会の形成のされ方を検討するのに格好の地域といえよう。3.これに対し、養蚕地域に属する山梨県中臣摩郡落合村は、戦前・戦後に農民運動が展開した地域として有名であり、戦前には農民組合の影響下にある組合製糸が、戦時期以降は本格的な農協組織が形成された。ここでは、協同組合組織を基盤にして農民が経済的実力をつけ、それを背景に農民運動が展開していることに大きな特徴があったが、農協史料の発堀がまだじゅうぶんではなく、来年度の課題として残されている。4.以上からすると、戦前から戦後に形成された農協組織のあり方を検討することが、農村社会の歴史的性格を考えるうえでも重要な意味をもっていたことがよくわかる。今後この点をさらに検討したい。1.本研究の課題は、戦時体制期から戦後の1950年代に至る時期の日本農村社会の変貎過程を、農村の協同組合組織に焦点を合わせて明らかにすることにあったが、2年目の調査研究の結果、以下の点が明らかになった。2.今年度の調査では、東北地方・山形県庄内地方(鶴岡市周辺)における農業協同組合組織の変遷過程を知る史料を発掘することができた。この史料と、昨年度発見した東亜連盟運動の史料(山形県東田川郡黒川村地域)を組み合わせると、興味深い事実を見つけることができた。それは、大平洋戦争期から敗戦後の1946年頃まで、農業会にも大きな影響力をあたえていた黒川村の東亜連盟は、農業協同組合の発足とともに役員から排除され、黒川村の農協は東亜連盟との関係を断ってスタートしたことである。このことは同地方の戦時から戦後社会への転回を理解するうえで、戦時体制・右翼的社会運動と農業協同組合組織との関係を分析することがことのほか重要な意味をもっていることを示している。3.これに対し、養蚕地域に属する山梨県中巨摩郡落合村は、戦前・戦後に農民運動が展開した地域として有名であり、戦前には農民組合の影響下にある組合製糸が、戦時期以降は本格的な農協組織が形成された。ここでは、協同組合組織を基盤にして農民が経済的実力をつけ、それを背景に農民運動が展開していることに大きな特徴がある。今年度は数回の調査によって組合製糸の史料をある程度発掘することができた。4.以上のように、戦前から戦後の農協組織の変遷は、戦後農村社会の形成に大きな影響をあたえており、来年度もう1年をかけて継続して調査研究をすすめたい。

1.本研究の課題は、戦時体制期から戦後の1950年代に至る時期の日本農村社会の変貌過程を、農村の協同組合組織に焦点を合わせて明らかにすることにあったが、3年間の調査研究の結果、以下の点が明らかになった。2.東北地方・山形県庄内地方(鶴岡市周辺)では、戦時下から戦後直後にかけて展開した東亜連盟の史料(東田川群黒川村)と農業協同組合組織の変遷過程を知る史料を発掘することができた。両者の史料を組み合わせると、東亜連盟は農村部でかなり活発に活動し、とくに肥料欠乏のもとで酵素肥料という独自の肥料を通じて農民の支持を集めていたことがわかる。黒川村の東亜連盟は、太平洋戦争期から敗戦後の1946年頃まで、農業会にも大きな影響力をあたえていたが、農業協同組合の発足とともに役員から排除され、農協は東亜連盟との関係を断ってスタートした。以上のことは、同地方の戦時から戦後社会への転回を理解するうえで、戦時体制・右翼的社会運動と農業協同組合組織との関係を分析することがことのほか重要な意味をもっていることを示している。これに対し、養蚕地域に属する山梨県中巨摩群落合村は、戦前・戦後に農民運動が展開した地域として有名であり、戦前には農民組合の影響下にある組合製糸が、戦時期以降に本格的な農協組織に再編された。ここでは、協同組合組織を基盤にして農民が経済的実力をつけ、それを背景に農民運動が展開していた。以上3年間の調査の結果、戦前から戦後の農協組織の変遷は、戦後農村社会の形成に大きな影響をあたえていたことが実証的に確認できた。これらのなかで、山梨県中巨摩群落合村についての研究成果は、1994年2月に発刊した著作『近代日本と農村社会』に発表した。山形県庄内地方についての研究成果は、平成7年度の文部省科学研究費補助金(研究成果公開促進費)を申請し、出版する予定である。
好熱性シアノバクテリアの従属栄養株開発による光化学系II複合体の機能解析

研究代表者Thermosynechococcus elongatus BP-1を材料に野生株、変異株からのPSII複合体の単離、解析を行ってきた。これまでに、His-TagによるNi affinityカラムクロマトグラフィーを用いた簡便な方法で、活性を持つPSIIを得た。蛋白質組成を確認したところ、従来の2段階クロマトグラフィーを用いた単離法と遜色ない結果が得られたため、PSII複合体の小サブユニットPSII-Zの破壊株についてもこの方法を用いて解析を行った。その結果、PSII-Z蛋白質はPSII-K蛋白質、Ycf12蛋白質のPSIIへの結合に寄与していることが明らかとなった。Ycf12蛋白質は2007年に存在が明らかになった新規PSII小サブユニット蛋白質である。PSII-Y破壊株についても同様の方法を用いて解析を行ったが、PSII-Y蛋白質はPSII-Z蛋白質とは異なり、他蛋白質のPSI1への結合には影響を与えていなかった。PSII-Y破壊株から別の方法で得たPSII複合体をX線結晶構造解析に用いた結果、世界に先駆けてPSII複合体内でのPSII-Y蛋白質の場所を特定することができた。また、光合成の詳しい解析には、機能的に重要なアミノ酸残基の改変が不可欠であるが、絶対光独立栄養であるThermosynechococcusでは活性に必須な部位の改変はできない。これまでの知見から、従属栄養的に生育できない理由は、糖を効率的に取り込めないためであると考えられる。そこで、グルコース輸送遺伝子として従属栄養での生育が可能なシアノバクテリアのSynechocystis sp. PCC 6803のglcP遺伝子を用い、従属栄養的に増殖できるThermosynechococcusの作製をおこなった結果、形質転換体が得られた。しかし、現在までのところ、従属栄養的増殖は確認できていない。研究代表者はこれまでにThermosynechococcus elongatus BP-1を材料に野生株、変異株からのPSII複合体の単離、解析を行ってきた。しかし、これまでの単離法では、ガラスビーズ処理によりチラコイド膜を回収した後に、2段階のカラムクロマトグラフィーが必要で手間がかかる上に、精製したPSIIの活性は高くはなかった。そこでHis-TagによるNi affinityカラムクロマトグラフィーを用いた簡便な方法へ変更し、活性を持つPSIIを得た。蛋白質組成を確認したところ、従来の単離法と遜色ない結果が得られた。今後はPSII複合体の小サブユニットPSII-Y,PSII-Zの破壊株についてもこの方法を用いて解析を進めていきたい。そこで、グルコース輸送遺伝子として従属栄養での生育が可能なシアノバクテリアのSynechocystis sp.PCC 6803のglcP遺伝子を用い、従属栄養的に増殖できるThermosynechococcusの作製をおこなった結果、形質転換体が得られた。今後はglcP遺伝子の発現をノーザン法などで確認するとともに、培養条件も検討し、従属栄養的増殖を目指す。これまでの、ガラスビーズ処理によりチラコイド膜を回収した後に、2段階のカラムクロマトグラフィーを行う単離法では、手間がかかる上に、精製したPSIIの活性は高くはなかった。蛋白質組成を確認したところ、従来の単離法と遜色ない結果が得られたため、PSII複合体の小サブユニットPSII-Zの破壊株についてもこの方法を用いて解析を行った。その結果、PSII-Zタンパク質はPSII-Kタンパク質のPSIIへの結合に寄与していることが明らかとなった。今後はPSII-Y破壊株についてもこの方法を用いて解析を行いたい。今後は培養条件も検討し、従属栄養的増殖を目指す。

その結果、PSII-Z蛋白質はPSII-K蛋白質、Ycf12蛋白質のPSIIへの結合に寄与していることが明らかとなった。Ycf12蛋白質は2007年に存在が明らかになった新規PSII小サブユニット蛋白質である。PSII-Y破壊株についても同様の方法を用いて解析を行ったが、PSII-Y蛋白質はPSII-Z蛋白質とは異なり、他蛋白質のPSI1への結合には影響を与えていなかった。PSII-Y破壊株から別の方法で得たPSII複合体をX線結晶構造解析に用いた結果、世界に先駆けてPSII複合体内でのPSII-Y蛋白質の場所を特定することができた。また、光合成の詳しい解析には、機能的に重要なアミノ酸残基の改変が不可欠であるが、絶対光独立栄養であるThermosynechococcusでは活性に必須な部位の改変はできない。これまでの知見から、従属栄養的に生育できない理由は、糖を効率的に取り込めないためであると考えられる。そこで、グルコース輸送遺伝子として従属栄養での生育が可能なシアノバクテリアのSynechocystis sp. PCC 6803のglcP遺伝子を用い、従属栄養的に増殖できるThermosynechococcusの作製をおこなった結果、形質転換体が得られた。しかし、現在までのところ、従属栄養的増殖は確認できていない。
微分方程式の大域構造とWKB解析

昨年度に引続き、Painleve方程式(P_J)(J=I,...,VI)に対する完全WKB解析を考察した。昨年度の研究により明らかになったように、(P_J)(J=III,V,VI)については単純確定特異点を起点とする新しい種類のStokes曲線が存在する。本年度はまず、モノドロミー保存変形を通じて(P_J)に付随している線型方程式を解析することにより、この新種のStokes曲線における接続公式の主要項を決定した。既に得られていた(P_I)を標準形とする単純変わり点から出るStokes曲線における接続公式と合わせ、(P_J)に対する完全WKB解析の枠組はこれでほぼ完成したと考えられる。そこで次に、この完全WKB解析をPainleve方程式の具体的な大域的問題に応用することを試みた。具体的な問題として(P_<ii>)のある接続問題を取り上げたところ、従来Ablowitz-Segur.の結果として知られていたものと完全に一致する.結果が得られることが確かめられた。即ち、(P_<II>)の接続問題が(P_I)の接続公式を繰り返し使うことで解けるのである。これはPainleve方程式の大域的な問題に対する完全WKB解析の有効性を端的に示す結果であると言えよう。しかし、例えばモノドロミー群やStokes係数の具体的計算を実行する為には、我々の用いている形式解の解析的な意味づけを明らかにし、更に現時点ではある代数函数のRiemann面の上でのみ定義されているstokes曲線とそこでの接続公式を、何らかの意味で底空間に“射影"しなければならない。こうした問題への解答のヒントを得る為に、Painleve方程式より簡単と考えられる3階の線型方程式に対応する2階非線型方程式の完全WKB解析の解明に、河合隆裕氏や青木貴史氏と共同で現在取り組んでいる。いくつかの具体例について大域的な構造が明らかになりつつある段階である。完全WKB解析の基礎理論では、「変わり点とStokes曲線の幾何」、及び「Stokes曲線を越えた時に形式解が満たす接続公式」が基本的な役割を演じる。大域的な問題への応用を図るべく、本年度はまずPainleve方程式(P_J)(J=I,...,VI)に対するこうした基礎理論の改良に取り組み、次の成果を得た。(フランスのニ-ス大学で行われた研究集会でこれらの結果を発表した。)(1)単純変わり点での標準形を与える(P_I)について、その接続公式をガンマ函数を用いて完全に書き下すことに成功した。(2)Painleve方程式のHamilton系としての構造を利用した、2つの自由パラメータを含む(P_J)の形式解の新しい構成法を発見した。特に(2)の形式解の新しい構成法は、Hamilton系に対するBirkhoffの標準形ともに密接に関連し、多重スケール解析を用いた従来の方法と比べ代数解析的である。実際、この方法により、2つの自由パラメータを含む形式解の(通常の)確定特異点における挙動が明らかになった。以上の改良を踏まえ、現在「変わり点とStokes曲線の幾何」の解析を重点的に行っており、(P_J)(J=III,V,VI)には通常より退化した確定特異点が必然的に現れること、またその退化した確定特異点から新しい種類のStokes曲線が流れ出すこと、さらにこの新しいStokes曲線の上では、モノドロミ-保存変形を通じて(P_J)に付随している線型方程式のStokes曲線についても新しいパターンの退化が起こっていること、等の興味深い現象が見い出されつつある。Painleve方程式の大域的な構造を記述する際にこれらの現象が持つ意味を明らかにすることが当面の課題であろう。
カント批判哲学における「ミスティシズム」概念の形成をめぐる哲学史的・人間学的研究

神秘主義的思考に批判的に対峙することは、現代において依然、重要な課題である。18世紀啓蒙期に展開されたカントの批判哲学を、その先駆的な営みとして読むことができる。通常「神秘主義」と邦訳されるドイツ語の語形にはヴァリエーションがあり、それをカントは批判哲学の根本洞察に通底する仕方で周到に使い分けている。その消息と、それに纏わる幾つかの問題を、カントの「人間学講義」筆記録や同時代ヨーロッパの状況をも参照しながら考察した。本研究は、哲学史的関心に基づく部分と、(特殊カント的意味での)人間学的関心に基づく部分とからなる。平成19年度は、哲学史的関心に基づく部分に関しては、次年度以後に本格的に研究を遂行するための基盤整備に向けて、2回にわたりドイツ連邦共合国に渡航し、所要の研究活動を行った。平成19年10月7日より14日までの渡独では、メクレンブルク・フォアポンメルン州グライフスヴァルトにて行われた国際専門学会「カントとヨーロッパ啓蒙の未来」(10月-13日)に出席し、研究者と意見交換を行った。この会議への参加途上、ベルリン国立図書館にて資料調査を試みたが、時間不足のため、再度の渡独時に持ち越さざるを得なかった。平成20年2月19日より29日までの渡独では、同図書館にて、国内図書館に所蔵のない歴史的文献を中心に、集中的な資料収集を行った。また、ヴッバータール大学哲学科(当時)のハイナー・クレンメ教授と研究上の意見交換を行った。次に、人間学的関心に基づく部分に関しては、アカデミー版カント全集所収「人間学」関係テキストの分析を進め、その成果の一端を、論文「平和の形而上学-『永遠平和のために』の批判哲学的基底」(坂部惠・佐藤康邦編『カント哲学のアクチュアリティー哲学の原点を求めて』ナカニシヤ出版、所収)の主として第5節の論述や、同時代の少壮哲学者トマス・アプトの思想に対するカントの態度をめぐる注記の記述などに、反映させた。ミスティシズムを乗り越えたリアリスティックなカントの平和構想のもつ基本性格の一側面を具体的に示し得たと考える。年度の前半には、前年度に収集した資料の読解を中心に研究を進めた。具体的には、ミスティシズムとミスティクとの語法上の差異化を、カントはその最晩年に弟子ヤッハマンの著書『カント宗教哲学の吟味』のために書き下ろした短文において試みているように思われるのだが、このことを、前年度に入手した『カント宗教哲学の吟味』の本文の検討を通じて確証した。また、「狂信」を批判するカントの念頭には教会史家モスハイムの著作における近世神秘主義運動の描写があったと考えられるが、それに関する知見を媒介したとも考えられるシュパルディングの著作における「感情」概念に注目し、神学に軸足を置くシュパルディングの議論の帰趨を見届け、それがカントによる批判的な「根源的獲得」論の形成に反作用した可能性を指摘した。以上に関しては、日本カント協会第33回学会(於九州大学箱崎キャンパス、2008年11月15日)において口頭報告した。年度の後半には、海外図書館において調査研究を行った。具体的には、2月後半にドイツ連邦共和国ゲッティンゲン市に所在するニーダーザクセン国立図書館・ゲッティンゲン大学図書館とその周辺、3月後半にオーストリア共和国ヴィーン特別市に所在するオーストリア国立図書館を、それぞれ訪問し、集中的に文献資料の収集と調査を行った。上記の口頭報告は哲学・思想史の観点からするものであったが、そこでの論点のひとつを、教会史の観点からも根拠付け得る文献を確認することができた。年度の前半には次の二点に留意して研究を遂行した。第一に、前年度に収集した資料の読解成果を研究に反映させ、その充実を図るよう努めた。具体的には、従来、典型的なドイツ啓蒙主義の神学者として紹介されてきたシュパルディングに関する神学思想史の観点からする知見を前年度までの研究に組み入れ、前年度に行った研究報告を補完する形で、三田哲学会の依頼講演「カントと神秘主義をめぐって」(於慶應義塾大学三田キャンパス、2009年10月31日)において、カントの「ミスティシズム」概念の批判的意義を主題として発表することができた。また、論点の幾つかを再構成した独文論文を第11回国際力ント学会に投稿したところ、当該分野の第一線の研究者による査読を経て、2010年1月13日付で受理された。第二に、カントが批判的見地から「ミスティシズム」概念を育んだケーニヒスベルクというトポスは、やはり神秘主義思想の一類型(ユダヤ教の)とされるハシディズムが興隆しつつあったポーランドを後背地としていたが、ハシディズムとの関わりを問う以前に、そもそもカント哲学におけるポーランド・モーメントを検証する試み自体が、従来、等閑視されてきた。

こうした研究状況に鑑み、カントがその教師生活を通じて終始ポーランド情勢に関心を向け続けたこと、この関心が1790年代の社会哲学の展開をも駆動したと解釈し得ることを、カントによる「人間学講義」の筆記録群の分析を通じて明らかにした。本件は、「「もうひとつの革命」への視線」と題して日本カント協会第34回学会(於立正大学大崎校舎、2009年11月21日)にて口頭発表した。年度末には、ベルリン市及びその周辺の図書館を訪問し所要の資料調査を行った。2010年は神学者モスハイムの在職したヘルムシュテット大学の閉学200周年にあたり、彼に関係する各種資料を入手することができた。
夜間就寝前に望ましいトワイライト光環境制御のデザイン

光(可視光)には覚醒方向の生理的作用があるため、就寝前は睡眠に悪影響を及ぼす過剰な光曝露を避ける必要性がある。しかし、生活行動には一定程度の明るさが必要であり、就寝前まで適度な覚醒状態を維持する方がより自然な睡眠につながる可能性もあるため、日常生活空間で就寝前の光環境をどのように制御すれば自然な睡眠に入るために望ましいかについて、学術的最適解は得られていない。本研究は、就寝前光環境のトワイライト状態をデザインすることを目的とし、日常的な生活空間を模した実験環境において就寝前の光環境を制御し、終夜の睡眠状態や起床時睡眠感を計測評価することによって、睡眠にとって望ましい光環境制御仕様を明確化する。
極微弱発光の検出による分子の電子緩和過程の研究

1.極微弱光の検出に対する各種の妨害光を除くため、光電子増倍管の印加電圧を制御する方式をとり入れた時間分解発光スペクトルの新しい測定法を確立した。2.高出力のエキシマーレーザー励起の色素レーザーを励起光源とし上記の時間分解スペクトル測定法を検出系に採用した超高感度の発光測定システムを開発した。3.このシステムを用いてピリジンとそのメチル置換体の気体のりん光特性を定量的に測定することができた。りん光量子収率は【10^(-7)】【10^(-6)】であった。これらの特性を解析した結果、ピリジンにおいて【T_1】→【S_0】の無輻射過程がとくに速いのは、【T_1】と【T_2】の間のpseudo-Jahn-Teller効果によって、【T_1】のポテンシャル面にゆがみが生じているためであると推定された。4.ハロゲン化ベンゼン類の二重りん光を発すると考えられている三重項状態【^3(π,π^*)】,【^3(π,σ^*)】の関係する光化学反応を実験的に調べた結果、両状態の反応性がたがいに異なることが明らかになった。とくにクロロベンゼンの三重項状態について大型の非経験的分子萄道計算を実行したところ、【^3(π,σ^*)】状態での平衡核配置において、C-Cl結合の距離が異常に大きくなっているという注目すべき結果を得た。5.気相ピリミジン,ピラジンの低位三重項状態内における失活過程を実験的に調べ、動力学的解析を行った結果、失活はステップラダーモデルによって合理的に説明できることが明らかとなった。6.アザベンゼン類のけい光が気相において偏りを示すことをはじめて見いだし、偏光特性を詳しく調べるとともに、理論的解析を行った。7.アセトアルデヒド気体の弱い発光を定量的に測定し、光分解の起こる波長で、発光特性が急激に変るという新しい知見を得た。8.フェナントレンの超音速分子線について、けい光励起スペクトルを測定し、吸収のバンド幅から【S_2】→【S_1】の内部転換の速度定数を2×【10^(12)】【s^(-1)】と決定することができた。
明治の税制と政府の財政・殖産興業政策,その比較史的分析

本研究は明治政府の租税史を再検討することを試みて、平成20年度の4月から平成21年度の3月まで次の二つの研究課題を達成した。第一に、軍事財政国家論の観点から初期明治政府の強兵(軍備)政策に関わる財政構築と税収確保の進展の過程を精査した。ここで「明治財政史」「明治大正財政史」「明治大正財政詳覧」「明治前期財政経済史料集成」と共に、「長期経済統計資料」の分析を行って、中央政府と地方政府の間の租税負担及び移転のコンテキストの把握に主力した。現在のところ、中央と地方の間で創出・移転・廃止を繰り返しながら国家歳入の増大に独特のパターンが生成したことを理解出来た。それは中央政府で試行した租税が非効率である場合には廃止或いは一旦地方に移転させ、地方税として育成させながらその中で効率的な例を選択的に中央に戻す制度的動向である。当然ながら地方税の段階で消滅したケースも多い。この進化のパターンは明治初期の経済活動の軸がまだ地方と農業及び関連商業に存在したことを示すとともに、多くの試行錯誤を通して税制の一応の完成をみたことを示している。尚、大久保と大隈財政期は明治の積極財政の頂点を成した時期であり、政策基調の再検討は富国・強兵を国家課題として達成するための歳入源として近代化された税制について当時の政府レベルの理解と税収の強化のため制度的試行錯誤からみえてくる明治財政の特性を把握することが可能になった。第二の研究課題の達成は、この第一の結果を平成20年5月の研究会及びセミナーで二回にわたって発表したことと、12月の一橋大学経済研究所でのセミナー及び同月に東京大学社会科学研究所にて行われた数量経済史研究会(QEH)発表を通して経済発展と統計・数量経済学部門の専門研究者より方法論についての指摘と助言を収集したことである。本研究は明治政府の租税・財政史を再検討することを試みており、平成19年度の10月から平成20年度の3月までは次の二つの研究課題の達成を目的としていた。第一に、比較分析の参照枠組として、英国で議論が進んでいるFISCAL-MILITARY STATE(軍事財政国家)論の観点から初期明治政府による戊申戦争と西南戦争を含む内戦、及び1870年代以降続く強兵(軍備)政策に関わる財政構築と税収確保の進展の過程を検討することである。軍事財政国家論に関連する英米圏の研究所の精査・精読作業は完了している。そして、これまでの明治財政史・租税史とそれらと関連した政治史研究が依拠してきた基本資料の再検討が進行中である。「明治財政史」「明治大正財政史」「明治大正財政詳覧」「明治前期財政経済史料集成」「大久保文書」「大隈文書」等々の基本資料である。現在のところ、前者の三つの統計資料から核心的な財政関連の内容を提供する部分の検索と再検討作業を行っている。「大久保文書」や「大隈文書」などの非数量的文書史料から財政政策の決定と施行における政治的プロセスの分析作業になるが、こちらも進行中である。大久保と大隈の財政期は明治の積極財政の頂点を成した時期であり、政策基調の再検討は富国・強兵を国家課題として達成するための歳入源として近代化された税制についての当時の政府レベルの理解と税収の強化のための多様な政策の議論と施行からみえてくる明治財政の特性を把握することが可能になると考えられる。第二は、この第一の結果を研究会及びセミナーで発表することにより、経済発展と統計・数量経済学部門の研究者からの方法論についての指摘とフィードバックを収集することである。この課題は平成20年度の5月に二回行う予定されており、さらに9月にも行う計画が決定されている。
犬の血小板膜糖蛋白GPIIb/IIIaに関する研究

東京大学農学部附属ベテリナリーメディカルセンターに来院した各種症例犬から採取した血小板について、ADPおよびコラーゲンに対する凝集能を比濁透過法を用いて測定した。副腎皮質機能亢進症のイヌ(5例)ではADPに対する凝集能の低下(4例)とコラーゲンに対する最大凝集率の低下(5例)ならびにラグタイムの延長(5例)が認められた。また皮下に出血が見られた悪性リンパ腫の症例では治療前ADP、コレ-ゲンに対する凝集能がともに低下しており、さらにADPに対する凝集パターンは凝集した血小板が早期(35分後)に解離するのが観察された。この症例に対し化学療法を行い臨床症状の改善が見られた時期に血小板凝集能を測定すると、健常犬と同様な凝集パターンを示した。いっぽうヒトで血小板の凝集能が低下することが知られている多発性骨髄腫の症例について凝集能の測定を行った。この症例はIgAの2量体および3量体を分泌する多発性骨髄腫と診断されたもので、眼底検査で血管の蛇行ならびに眼底出血が見られた症例である。この症例では血小板のADPに対する凝集能の低下は認められなかった。また特発性血小板減少性紫斑病(ITP)の症例2例ではステロイド治療により血小板数の増加した時期に凝集能の測定を行うと、ADP、コラーゲンともに殆ど凝集が認められず、血小板無力症と同様な所見が得られた。このうち1例では皮下出血が認められた。さらにこれらの症例では抗血小板抗体が陽性を示したことから、ヒトのITPと同様に血小板の膜糖蛋白CPIIb/IIIaに対する抗体が存在し、この抗体によって続発性の血小板無力症を引き起こす可能性があることが示唆された。
血管内皮細胞を標的とする新規抗がんリード化合物の創製

ヒト齊帯静脈内皮細胞(HUVEC)とヒト咽頭上皮がん細胞(KB)やヒト慢性骨髄性白血病細胞(K562)など数種の由来の異なるがん細胞を用いて増殖抑制試験を行い、HUVECに対して選択的に増殖抑制効果を示す化合物の探索法を用いて、海綿からブロモチロシン誘導体bastadin類を活性物質として単離した。Bastadin類は、由来の異なる他の細胞と比較してHUVECに対して20100倍強い選択的増殖抑制効果を示し、血管内皮増殖因子(VEGF)や繊維芽細胞増殖因子(b-FGF)によって誘導されるHUVECの遊走や管腔形成を阻害することも明らかになった。さらに、bastadin類は、マウス角膜を用いたin vivo血管新生モデルにおいて腹腔内投与で顕著な血管新生抑制効果を示し、human carcinoma A431を皮内移植したヌードマウスにおいても腹腔内投与で明らかな抗腫瘍効果を示した。一方、天然から単離した種々のbastadin類縁体や合成した各種誘導体の活性を比較しbastadin類の構造活性相関を検討した結果、大環状構造は活性に必須であり、エーテル架橋構造の様式も活性発現に重要であることが明らかになった。また、分子内のオキシム基は活性発現に必須であること、臭素原子置換様式も活性発現に重要であることが明らかになった。さらに、計算ソフトを用いてbastadin類のコンフォメーションを解析した結果、エーテル架橋構造の様式や分子内の臭素原子置換様式がコンフォメーションの安定化に大きく寄与していることが明らかとなり、種々の類縁体の活性と計算結果を比較検討した結果、このコンフォメーションの安定化が活性発現に重要であることが示唆された。1)ヒト齊帯静脈内皮細胞(HUVEC)とヒト咽頭上皮がん細胞(KB)やヒト慢性骨髄性白血病細胞(K562)など数種の由来の異なるがん細胞を用いて増殖抑制試験を行い、HUVECに対して選択的に増殖抑制効果を示す化合物の探索法を用いて、海綿を中心とする海洋生物の抽出エキスライブラリーから新規血管新生阻害物質を探索し、活性物質としてブロモチロシン誘導体bastadin類を単離した。HUVECと由来の異なる数種のがん細胞や正常線維芽細胞を用いてbastadin類の作用を検討した結果、bastadin類は他の細胞と比較してHUVECに対して20100倍強い選択的増殖抑制効果を示した。一方、天然から単離した種々のbastadin類縁体や合成した各種誘導体をの活性を比較しbastadin類の構造活性相関を検討した結果、血管新生阻害活性をの大環状構造は活性に必須であり、エーテル架橋構造の様式も活性発現に重要であることが明らかになった。また、分子内の臭素原子置換様式も活性発現に重要であることが明らかになった。さらに、bastadin類のin vitroでの血管新生阻害活性を検討した結果、bastadin類は、血管内皮増殖因子(VEGF)や繊維芽細胞増殖因子(b-FGF)によって誘導されるHUVECの遊走や管腔形成を阻害することが明らかになった。2)上記のHUVECに対して選択的に増殖抑制効果を示す化合物の探索法や血管新生阻害活性の評価法であるケモタキシスチャンバーを用いたHUVECの遊走阻害実験系を用いて、海洋生物の抽出エキスライブラリーからさらに活性物質のスクリーニングを行い、HUVECに対して選択的に増殖抑制効果を示す新たな化合物を単離することができた。1)ヒト齊帯静脈内皮細胞(HUVEC)に対して選択的に増殖抑制効果を示す化合物の探索法を用いて活性物質として海綿から単離したブロモチロシン誘導体bastadin類について、そのin vivoでの作用及び構造活性相関について検討した。Bastadin類は、マウス角膜を用いたin vivo血管新生モデルにおいて100mg/kg/day×3daysの腹腔内投与で顕著な血管新生抑制効果を示した。

さらに、human carcinoma A431を皮内移植したヌードマウスを用いて抗腫瘍効果を検討した結果、100mg/kg/day×7daysの腹腔内投与で明らかな抗腫瘍効果を示し、急性毒性はまったく示さなかった。一方、これまでの構造活性相関研究の結果から、bastadin類の血管新生阻害活性には大環状構造が必須であり、エーテル架橋構造の様式も活性発現に重要であることを明らかにしている。今回、計算ソフトを用いてbastadin類のコンフォメーションを解析した結果、エーテル架橋構造の様式や分子内の臭素原子置換様式がコンフォメーションの安定化に大きく寄与していることが明らかとなり、種々の類縁体の活性と計算結果を比較検討した結果、このコンフォメーションの安定化が活性発現に重要であることが示唆された。さらに、分子内のオキシム基は活性発現に必須であることが明らかになった。2)上記のHUVECに対して選択的に増殖抑制効果を示す化合物の探索法や血管新生阻害活性の評価法であるケモタキシスチャンバーを用いたHUVECの遊走阻害実験系を用いて、海洋生物の抽出エキスライブラリーからさらに活性物質のスクリーニングを行い、HUVECに対して選択的に増殖抑制効果を示す新規ステロイドアルカロイドcortistatin類やイソマラバリカン型トリテルペンglobostellaric acid類を単離し、その化学構造を明らかにした。
末梢血破骨前駆細胞を介した糖尿病の骨脆弱化機序の解明

近年2型糖尿病では骨折率が高いことが明かとなったが、その機序はまだ明らかでない。本研究では、糖尿病患者の血液中の破骨前駆細胞の変化が関与していると仮説し検証を行った。方法は、2型糖尿病患者の橈骨遠位端の皮質骨厚と血液中の単球サブセットを計測し、単球サブセットと皮質骨厚との関連を検証した。その結果、CD16陽性単球が破骨前駆細胞の性質を示し、皮質骨厚の低値な群でCD16陽性単球の比率が高いことが明らかになった。さらにCD16陽性単球の割合は皮質骨厚と逆相関し、皮質骨厚に対する独立した負の危険因子であった。これにより糖尿病患者では、血液中の単球の質が変化して骨脆弱性に関与している可能性が示された。糖尿病の骨の脆弱性に、血液中の破骨細胞の前段階である破骨前駆細胞(osteoclast precursor:OCP)の機能的・質的・量的変化が関わっている可能性が示唆されており、本研究は、糖尿病患者の血液中のOPC異常を介した骨脆弱性機序を明らかにすることを目的としている。当該年度は、試験計画に基づいて糖尿病患者において破骨細胞へと分化する単球サブセットの探索を行った。単球サブセットの解析にはフローサイトメトリーの機器が必要であり、当施設に従来設置していたフローサイトメトリー機器FACSCantoのソフトウェアとワークステーションをアップデートした。これにより測定感度が改善され解析を開始することができた。当院入院中の糖尿病患者の末梢血から単球単離して、OPCのマーカーとしては蛍光RANK抗体と蛍光DCSTAMP抗体を用いて単球を染色しフローサイトメトリーで解析を行っている。2型糖尿病患者20例程度を解析した段階で、新しい知見として、糖尿病患者では健常者と違ってCD16陽性単球に強くDCSTAMPが発現、弱いながらもRANKもCD16陽性単球とCD16陰性単球によって発現が異なることが見出された。糖尿病においてCD16単球が増加していることがこれまで報告されており、本研究でCD16単球がOPCの性質を呈することは、炎症性単球であるCD16単球がOPCの候補となりえる可能性を示している。1年目のこの研究成果を骨粗鬆症学会と欧州糖尿病学会で報告する予定であり、広く知見を得て次年度の研究成果につなげる予定である。27年度の予定であった糖尿病患者の血液中の破骨前駆細胞の解析は、機器のセットアップ測定系の確立が予定通り行えた。27年度研究開始3ヶ月より症例の集積を解析し、平成28年度までにおおよそ80例程度患者登録を行っており、おおむね年間100例の目標を達成している。反面、一部ヒト単球の破骨細胞分化誘導系の立ち上げは困難を呈している。破骨細胞マーカーの単球における発現については、前述のように新しい知見が得られているので、これを足掛かりにして臨床の層別解析が28年度予定通りに行える予定である。糖尿病の骨の脆弱性に、血液中の破骨細胞の前段階である破骨前駆細胞(osteoclast precursor:OCP)の機能的・質的・量的変化が関わっている可能性が示唆されており、本研究は、糖尿病患者の血液中のOCP異常を介した骨脆弱性機序を明らかにすることを目的としている。平成28年度は試験計画に基づいて糖尿病患者においてOCPへと分化する単球サブセットの解析を行い約120例の糖尿病患者の単球サブセットを患者登録した。平成27年度の20症例の解析において、糖尿病男性において単球サブセットの中でCD16陽性の単球サブセットは、破骨前駆細胞マーカーであるDCSTAMP発現が増加しておりOCPの性質をもつ可能性を見出した。これを平成28年の骨粗鬆症学会にて「男性2型糖尿病患者7例の単球における破骨細胞マーカー発現の検討」の演題名で発表を行った。平成28年度にさらなる解析において、HbA1c高値の症例ほどCD16陽性単球のDCSTAMP発現が強いことを見出し、糖尿病では血糖コントロール状況が破骨前駆細胞マーカーの発現に影響する可能性が現段階で示唆されてる。糖尿病患者の破骨細胞の影響を最も受ける臨床的骨指標の一つとして皮質骨が挙げられる。当研究では、試験計画に基づいて皮質骨厚を2波検出型超音波骨密度計にて橈骨遠位端の皮質骨厚を測定した。今年度登録患者の中で、CD16の蛍光信号が強い症例において皮質骨厚が低下している症例があり、「CD16陽性単球は、破骨前駆細胞の性質を持っており、皮質骨吸収と関連がある可能性」が示唆されいてる。また、皮質骨厚に関わる因子として筋力が関係しており、単球サブセットマーカーと破骨細胞マーカーとの間に筋力が関わっている可能性が見だされた。平成27年度の予定であった糖尿病患者の血液中の破骨前駆細胞の解析は予定通りセットアップを行い、患者登録を開始し得た。これらの症例において超音波法による皮質骨厚測定やDXA法における骨密度の評価は行えている。平成28年度、29年度で年間100例、本研究期間に200例の症例登録を目標としているが、対象患者の登録は現時点で120例程度と、やや登録が遅れているのが試験進捗の遅れの原因となっている。

ヒト単球培養における破骨前駆細胞分化における裏付けの基礎実験においては、RANKによる刺激で単球が破骨細胞様変化に分化することは確認できているが、刺激因子の材料が高額で条件設定において材料の使用量に慎重さを要していることが進捗遅れの原因となっている。2型糖尿病の骨脆弱性に、血液中の破骨細胞の前段階である破骨前駆細胞(osteoclast precursor:OCP)の機能的・質的・量的変化が関与している可能性が示唆されており、本研究は糖尿病患者の血液中のOCP異常を介した骨脆弱性機序をあきらかにすることを目的としている。平成29年から平成30年度の最終年度は、研究計画書に基づいて、昨年の120例に加えてさらに101例の糖尿病患者の解析を追加し221例の症例データを集積した。これらの症例の血液中のCD16陽性単球サブセット比率を測定し、2波検出型超音波骨密度計により計測した橈骨遠位端の海綿骨骨密度(TrBMD)および皮質骨厚(CoTh)との関係を解析した。昨年度に、CD16の陽性単球はOCPのマーカーであるDC-STAMPが高発現している傾向があることが見出されたが、追加症例の解析にて、統計学的に有意にDC-STAMP発現が上昇していることが確認された。これにより2型糖尿病患者では、CD16単球はOCPとして働くか、もしくは間接的にOCPを誘導する性質を持つことが示唆された。さらに、この単球をMEMα培養下、GM-CSFとRANKLにて誘導をかけたところ、TRAP染色陽性の多核細胞へと分化成熟し、破骨細胞へと分化する能力がある可能性を検証できた。この性質をもつCD16単球の比率は、興味深いことにTrBMDの高い群と低い群では差が認められない一方で、CoThの高い群と低い群では、低値な群でCD16単球の比率が上昇していた。このことは、骨密度とは独立して骨折をきたしやすい糖尿病の骨脆弱性の特性を説明する上で重要な知見となると考えられる。本研究結果を、2018年6月の骨形態計測学会で発表し、今後論文投稿を行う予定である。また解析の中で、握力もCoThと関連があることが見出された。握力も有意な関連因子であり、この発見結果関しても論文投稿中である。近年2型糖尿病では骨折率が高いことが明かとなったが、その機序はまだ明らかでない。本研究では、糖尿病患者の血液中の破骨前駆細胞の変化が関与していると仮説し検証を行った。方法は、2型糖尿病患者の橈骨遠位端の皮質骨厚と血液中の単球サブセットを計測し、単球サブセットと皮質骨厚との関連を検証した。その結果、CD16陽性単球が破骨前駆細胞の性質を示し、皮質骨厚の低値な群でCD16陽性単球の比率が高いことが明らかになった。さらにCD16陽性単球の割合は皮質骨厚と逆相関し、皮質骨厚に対する独立した負の危険因子であった。これにより糖尿病患者では、血液中の単球の質が変化して骨脆弱性に関与している可能性が示された。次年度の研究実施計画として、平成27年で得られた情報を基に糖尿病患者の単球サブセットとOPCマーカー発現と、腰椎と大腿骨頸部のBMD、および橈骨の皮質骨厚、橈骨BMDとの関連を明らかする方針である。解析のために年間100例、3年で300例を目標としており、平成28年度開始の時点で約100例を登録しており、いずれもDXAおよび超音波骨計測装置で腰椎と大腿骨頸部のBMD、および橈骨の皮質骨厚、橈骨BMDの測定がなされており、今後も症例の集積を行い、200例の段階でCD16陽性単球OPC高発現細胞が骨粗鬆症におよぼす影響の多変量解析を行う予定である。TRAP5bなどの骨吸収マーカーも測定しており、破骨細胞との関連の裏付け解析を行う予定である。
脳内レニン・アンジオテンシン系保護軸活性化による脳保護作用の解明

従来のレニン・アンジオテンシン(RA)系の活性化は高血圧や糖尿病などの生活習慣病の発症・進展に関わっていることが知られており、RA系をコントロールすることにより脳卒中や認知症など脳血管障害の発症を軽減すること期待されている。一方、RA系のアンジオテンシン(Ang)IIの受容体の一つである2型(AT2)受容体は従来のRA系の受容体である1型(AT1)受容体に拮抗する作用、つまりAT2受容体の刺激は臓器保護効果を持つことが示唆されている。我々は最近開発されたAT2受容体直接刺激薬であるCompound21(C21)を脳傷害後のマウスに投与することで脳梗塞巣が減少することを報告してきた。さらに、以前我々はこの様なAT2受容体の多機能な作用を説明するのに、AT2受容体の細胞内C-末端に特異的に結合する新規シグナル伝達機能調節物質ATIPをクローニングしてきた。このATIPが核内転写調節因子として作用することで、血管リモデリングの改善だけでなく、神経保護作用にも重要な役割を担っていることを明らかにし、AT2受容体の刺激による脳障害抑制効果に重要であることを示唆してきた。そこでATIPの作用を明らかにするために、ATIP過剰発現マウス(ATIP-Tg)を用いて脳梗塞モデルを用いて検討した。野生型マウス(WT)とATIP-Tgの比較では脳傷害に大きな差は認められなかったが、C21の投与により脳梗塞巣の減少が認められ、この減少はWTに比べてATIP-Tgで強く、AT2受容体刺激がATIPにより増強されることが示唆された。脳梗塞前後での脳表層血流量の変化を検討したところ、WTではC21投与により24時間後の血流量が増加していた。一方ATIP-Tgは脳虚血直後から脳血流量の減少が軽減傾向にあり、C21の投与によりWT-C21に比べて有意に増加していた。ATIP過剰発現マウス(ATIP-Tg)と同腹子(WT)に中大脳動脈閉塞術(MCAO)を施行し、脳梗塞モデルを作成、MCAOの24時間後の脳梗塞サイズを測定した。WTに比べてATIP-Tgで減少傾向があったが有意差はなかった。これらのマウスにMCAOの2週間前からAT2受容体刺激薬(C21;10μg/kg/day)を投与するとWTおよびATIP-Tgともに脳梗塞巣の減少が認められた。特にWTに比べてATIP-Tgで軽減効果が強く認められ、C21による保護作用が増強していることが示唆された。MCAO後の脳表層血流量の変化をレーザードップラー血流計にて測定した。MCAO後の脳血流量の減少は、中大脳動脈中心部では全ての群で有意差は認められなかった。梗塞周辺部ではWT-C21でMCAO直後の血流減少にWT-vehicleと比べて変化はなかったが、24時間後の血流量が増加していた。一方、ATIP-Tg-vehicleではWT-vehicleと比較し、MCAO直後の脳血流量の減少が軽減傾向にあり、その軽減傾向は24時間後まで続いていた。さらにATIP-Tg-C21ではWT-C21に比べ虚血直後の血流量減少が有意に軽減していた。24時間後の血流はWT-C21に比べて増加傾向にあった。この虚血直後の血流量改善に着目し、Collateral circulationの発達について検討した。ACAとMCAおよびPCAとMCAのコラテラルの数を測定すると、WT-vehicleとATIP-Tg-vehicleで変化はなかったが、ともにC21の投与により増加傾向があり、さらにATIP-Tg-C21で増加する傾向があった。また、虚血直後の血管拡張作用についてeNOSのリン酸化について、Western blotで検討した結果、ATIP-Tg-C21で増加する傾向があった。AT2受容体/ATIPに脳保護効果があることが明らかとなり、この脳保護効果について、脳虚血後の血流改善が関与していることが示唆されたことから、現在Collateral circulationに着目して検討しているが、現在のところAT2受容体刺激薬の投与によりCollateralが増加する傾向があるという結果を得ているが、有意差はないため、サンプル数を増やし検討している。また、AT2受容体刺激のNOによる血管拡張作用について、eNOSのリン酸化についてWestern Blot法を用いて検討しているが、ATIP-TgにC21を投与することで増加する傾向があるという結果を得ている。この作用についてもサンプル数を増やして検討する予定である。細胞内でのシグナル伝達についてさらに詳細なメカニズムを検討するため、現在脳の血管平滑筋細胞をこれらのマウスから単離・培養し検討する。最近AT2受容体刺激がペルオキシソーム増殖剤応答性受容体(PPAR)-γの活性化にも影響しており、それにもATIPが関与していることが示唆されている。脳保護効果にAT2受容体-PPAR-γ活性の作用も影響していることが考えられるため、この作用についても、PPAR-γのアンタゴニストGW9662を用いて検討する予定である。培養細胞については、ATIPの発現調節機構、ATIPの機能が特異的なリガンド、リン酸化、脱リン酸化などにより調節されている可能性に関する研究が遅れているので、細胞レベルで、ATIPに結合するシグナル伝達物質、転写調節因子のスクリーニングも合わせて進行していき、ATIPの標的遺伝子の転写調節因子としてのATIP結合部位を同定することを計画している。

古典的レニン・アンジオテンシン(RA)系の活性化は高血圧や糖尿病などの生活習慣病を誘導することが知られており、アンジオテンシンIIの受容体である1型(AT1)受容体の制御により臨床的に脳卒中や認知症など脳血管障害の発症を軽減することが報告されている。一方、アンジオテンシンIIの受容体の一つであるタイプ2(AT2)受容体はAT1受容体に拮抗する、つまり臓器保護効果を持ち、最近開発されたAT2受容体刺激薬であるCompound21(C21)を脳傷害後のマウスに投与すると脳梗塞巣を減少することを報告してきた。さらに、以前我々はこの様なAT2受容体の作用を説明するのに、AT2受容体のC-末端に特異的に結合する新規シグナル伝達機能調節物質ATIPをクローニングし、ATIPが核内転写調節因子としても作用し、血管リモデリングの改善だけでなく、神経保護作用に重要な役割を担っていることを報告し、脳障害時に保護効果があることが示唆された。そこでATIP過剰発現マウス(ATIP-Tg)を用いて脳障害の進展について脳梗塞モデルマウスを用いて検討した。野生型マウス(WT)とATIP-Tgの比較では脳傷害に大きな差は認められなかったが、これらのマウスにC21を投与することで脳傷害の軽減が認められた。また、この軽減作用はWTに比べてATIP-Tgで強く、AT2受容体刺激がATIPにより増強されることが示唆された。このメカニズムを明らかにするために、脳傷害前後での脳表層の血流量を検討したところ、WTではC21投与により24時間後の血流量が増加していた。一方ATIP-Tgは脳虚血直後から脳血流量の減少が軽減していることから脳循環系にAT2受容体/ATIPが影響していることが示唆された。現在、この脳血流量の軽減効果について、Collateral circulationを中心に検討している。10週齢雄性ATIP過剰発現マウス(ATIP-Tg)と同腹子(WT)に中大脳動脈閉塞術(MCAO)を施行、脳梗塞モデルを作成し、24時間後の神経学的症状および脳梗塞サイズを測定したが、有意な差は認められなかった。これらのマウスにMCAOの2週間前からAT2受容体刺激薬(C21;10μg/kg/day)を投与することでWTおよびATIP-Tgともに軽減効果が認められた。特にATIP-Tgで軽減効果が強く認められ、C21による保護作用が増強していることが示唆された。そのメカニズムを検討するため、MCAO前後の脳表層血流量の変化を測定した。MCAO後の脳血流量の減少は、中大脳動脈中心部では全ての群で有意差は認められなかった。周辺部ではWT-C21群でMCAO直後の血流減少に変化はなかったが、24時間後の血流量が増加していた。一方、ATIP-Tg-C21群ではMCAO直後の脳血流量の減少が軽減しており、24時間後ではWT-C21群と有意差はなかった。この直後の血流量改善に着目し、Collateral circulationの発達について検討した。MCAO前のマウスにゼラチンを溶かした墨汁を灌流し、ACAとMCAおよびPCAとMCAのコラテラルの数を測定すると、WTとATIP-Tgで変化はなかったが、ともにC21の投与により増加傾向があり、さらにATIP-Tg-C21で増加する傾向があった。AT2受容体刺激による抗炎症作用についてreal-time RT-PCR法にて検討した。
唾液のタンパク質プロファイルによる新規口腔癌腫瘍マーカーの同定

口腔癌の治療において、早期発見は非常に重要な問題である。集団検診や腫瘍マーカーによる再発スクリーニングなど、口腔癌、担癌状態を判別する早期診断法の確立が期待される。そこで、今回、我々は、同一口腔癌患者の治療前後の唾液タンパク質の変化を網羅的に解析し、腫瘍マーカー候補因子群を同定することができないかと考え、検索を行った。対象は、口腔癌16症例(T1:13例,T2:3例)であり、各症例の治療前と治療後の唾液を採取し、Protein Chip Systemによりタンパク質プロファイル解析を行った。口腔扁平上皮癌症例の治療前・後での唾液蛋白のピーク強度を比較し、Paired-U検定により有意差を示したピークを探索した結果、治療前より治療後に発現が減少する17種類の蛋白質と発現が増加する9種類の蛋白質が検出できた。また、マーカー候補の組み合わせによる階層的クラスタリング解析を実施したところ、いくつかの条件で担癌状態と非担癌状態を分けることが可能であった。ことより、有効な複数のマーカーを組み合わることで、簡便な口腔領域の扁平上皮癌の診断アッセイシステムが確立できる可能性が示唆された。さらに、担癌状態で発現の高いピークの蛋白を逆相HPLCにて精製し、精製標品はPMFおよびMS/MS解析を行ない、PMF及びMS/MS解析の結果をもとに、データベース検索を行なった結果、腫瘍マーカー候補蛋白が、Cystatin SN precursor(Salivary Cystatin SA-1)であることが極めて高いことがわかった。なお、精製標品の分子量(13930.8)はCystatin SN(14316.07)の分子量より小さいので、バイオマーカー候補はN末端からさらに3残基プロセシングされていると示唆された。口腔癌の集団検診や、早期診断あるいは治療後の再発の唾液を用いたスクリーニングのために、担癌患者と非担癌患者の唾液を網羅的に蛋白発現解析し、新規癌関連因子、腫瘍マーカーの候補を探索した。対象は昭和大学歯学部口腔外科において加療した口腔扁平上皮癌患者16症例であり、各症例の担癌状態である治療前と非担癌状態と考えられる治療後の唾液を採取した。唾液は遠心後、上清をProtein Chip System(Ciphargen Biosystems)により、蛋白質プロファイル解析を行った。その解析結果において、治療前後における蛋白発現を比較検討し、有意差をもって発現が変化しているピークを検索した。その結果、Paired-U検定により有意差をもって変化する26種類のピークを同定した。このうち、治療前より治療後に出現が減少する17種類で、逆に発現が増加する9種類の蛋白質が、検出できた。これらの蛋白のうち3種類の蛋白質では、全く独立した2回の実験で再現性を持って検出された。また、これらのマーカー候補の組み合わせによる階層的クラスタリング解析により、いくつかの条件で治療前・後のパターンが分かれる傾向も認められた。唾液を用いたProtein Chip Systemによる網羅的蛋白解析によっていくらかの新規腫瘍マーカー候補と思われるピークが同定された。これらの発現ピークの蛋白に関して現在、同定しているところである。この蛋白の機能解析に関しては、次年度行う予定である。また、階層的クラスタリング解析にて、担癌状態と非担癌状態を分けることが可能であったことより、有効な複数のマーカーを組み合わることで、簡便な口腔領域の扁平上皮癌の診断アッセイシステムを確立させていく予定である。