hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
前十字靱帯損傷に対する内側ハムストリングス集中的トレーニングの予防効果

前十字靭帯(ACL)損傷の予防方法を開発することを目的として、筋活動とACL損傷リスクとの関連性を検討した。接地直前50msにおいてつま先接地(FFS)は踵接地(RFS)に比べて腓腹筋(GL)、半腱様筋(ST)、大腿二頭筋(BF)の筋活動量が有意に大きかった。また、接地直後50msではFFSはRFSに比べてBFとGLの筋活動量が大きく、前脛骨筋の活動量が小さかった。このことからFFSによる動作では、接地前後のハムストリングスの筋活動が高く働くことが示唆され、FFSによるカッティング動作はRFSによるカッティング動作に比べ、ACL損傷リスクの低いカッティング動作であることが明らかとなった。女性アスリートにおいて好発する膝前十字靭帯(ACL)損傷は,競技レベルの低下や競技の断念につながる重大な疾患であり,ACL損傷の発生予防策の策定が急務である.大腿後面の筋(ハムストリングス)の内側と外側の活動比がACL損傷の発生につながる可能性があることから,本研究の目的はハムストリングスの内側外側の活動比を改善するトレーニングがACL損傷の発生予防における効果を明らかにすることである.本研究で実施する予防プログラムは内容が容易であり,ジュニア層からトップ選手まで幅広い層に導入が可能である.スポーツ科学における基礎的研究とスポーツ現場を橋渡しする研究となり,特色あるものになると考える.平成25年度はスポーツ活動時に多く行われるジャンプ着地動作とカッティング動作時における下肢筋活動と膝外反角度の関連性について検討するため,関東学生ハンドボール1部リーグに所属する女子ハンドボール選手を対象として,課題動作(ジャンプ動作,カッティング動作)実施時の下肢筋活動を測定した.結果として,ハムストリングスの内側外側の活動比よりもハムストリングス/大腿四頭筋の筋活動比と腓腹筋の活動が着地動作時の膝外反角度に影響を与えることが明らかとなった.このことから膝関節だけでなく,着地時の足関節の動態も関連することが予想されるため,今後は課題動作の種類を多くし,ハムストリングスの内側外側の活動比を含め、ハムストリングスと大腿四頭筋の活動比,腓腹筋の活動量,足関節角度が膝外反角度に与える影響の有無を検討していきたいと考えている.アスリートにとって前十字靭帯(ACL)損傷は、競技レベルの低下や選手生命につながる重大な疾患であり、予防対策の検討が急務と考えられている。特に女性では、解剖学的なアライメントや筋力などが原因で男性よりも多く発生する疾患であることから、女性を対象とした検討が必要とされている。大腿後面の筋肉(ハムストリングス)の内側と外側の活動比がACL損傷に関わる可能性があると考えていたが、大腿前面の筋に対するハムストリングスの活動比が着地時の膝外反角度に関係するとの結果が得られた。このことから、平成26年度は、ジャンプ着地時のハムストリングスの筋活動がACL損傷に対してどのように関連するかを検討するために、認知課題を併せて行った場合の着地動作を課題動作として、課題動作時の筋活動について検討した。その結果、ACL損傷既往を有する者において、片脚着地時の接地前50msから接地までの大腿直筋と外側広筋の筋活動が認知課題を付加することで上昇する結果を得た。ジャンプ着地時における接地前の大腿前面の筋活動増加はACL損傷のリスクとして挙げられていることから、認知課題の付加によるこの筋活動変化はACL損傷のリスクとなると考えられた。今後は、接地前の筋活動と膝の外反角度を検証するとともに、スポーツパフォーマンス時のACL損傷が発生しやすい動作であるカッティング動作時における筋活動について検討を進めたいと考えている。また、ハムストリングスのトレーニングによりこれらの筋活動と膝外反角度の変化について検討を進める予定である。本年度はスポーツパフォーマンス時のACL損傷が発生しやすい動作であるカッティング動作時における筋活動について検討を進めた。特にカッティング動作時における接地方法の違いが膝関節角度と下肢筋活動に与える影響を検討した。後足部接地(RFS)と前足部接地(FFS)の2種類のカッティング動作を行わせ、この時の筋活動を表面筋電図により記録した。また、この時の膝関節角度の変化を3次元動作解析により算出し、筋活動と膝関節角度の関連性を検討した。フォースプレートを筋電図と同期させ、接地直前・直後の筋活動量を算出し、比較検討した。その結果、膝関節最大外反角度においてFFSはRFSに比べて最大外反角度が小さい傾向を認めた。また、接地直前50msにおいてFFSはRFSに比べて腓腹筋(GL)、半腱様筋(ST)、大腿二頭筋(BF)の筋活動量が有意に大きかった。接地直後50msではFFSはRFSに比べてBFとGLの筋活動量が大きく、前脛骨筋(TA)の活動量が小さかった。このことから、FFSによるカッティング動作では、接地前後のハムストリングスの筋活動が高く働くことから、FFSによるカッティング動作はRFSによるカッティング動作に比べ、ACL損傷リスクの低いカッティング動作であることが明らかとなった。本研究では進行方向が60度変化するカッティング動作であったが、今後は様々な方向へのカッティング動作においてもFFSで実施することで、ハムストリングスの活動が高く、ACL損傷のリスクを低減した状況で行われるかを検討していきたいと考える。

また、接地直後50msではFFSはRFSに比べてBFとGLの筋活動量が大きく、前脛骨筋の活動量が小さかった。このことからFFSによる動作では、接地前後のハムストリングスの筋活動が高く働くことが示唆され、FFSによるカッティング動作はRFSによるカッティング動作に比べ、ACL損傷リスクの低いカッティング動作であることが明らかとなった。関節角度算出のための3次元動作解析のためのデータ取り込み過程において問題が発生した。またトレーニング介入前のデータ分析の結果、想定されていたものと異なる結果を得た。これらのことにより当初予定していた測定項目に加え、新たな検討項目を追加して、検討をすることとしたため、補助事業期間の延長を申請するに至った。スポーツ医学現在は、3次元動作解析のためのデータ記録が、赤外線カメラにて記録することが可能となり、分析の推進も補助事業期間延長申請時の予定で進んでいる。今後トレーニング介入を行った後に再度のデータ測定を実施し、トレーニング介入前後での比較検討も含めて、最終的な研究結果の分析に望めると考えている。また、研究結果をスポーツ現場へフィードバックすることも視野にいれ、課題動作を増やして検討を加える予定である。現在のところ被験者への依頼、動作課題実施中のデジタルカメラによる映像の記録を行い順調に進んでいる。しかし、デジタルカメラによる記録映像から各身体部位を3次元座標化するためのデジタイジング作業に想定以上の時間を取られてしまい、動作解析の段階に至るまでの時間がかかり研究計画が遅れる可能性がある。トレーニング介入後にも同様の測定・分析が必要になるため今後の計画を速やかに実施するためにはデジタイジング作業を効率的に進めていく必要があると考える。関節角度算出のための3次元動作解析を行うにあたり、動作映像の取り込みに問題が発生し、想定以上の時間がかかってしまった事とともに、介入前の測定結果が想定されていたものと異なる結果であったことから補助事業期間の延長申請を行ったため。今後、トレーニング介入による筋活動動態の変化による課題動作時の筋活動や膝関節外反角度への影響を検討する予定であるが、デジタルカメラによる映像記録からの解析を実施するためにはさらなる時間が必要となってしまい、実験期間の延長も含めた実験計画の変更を余儀なくなってしまう可能性が出ている。そこで、動作課題の映像記録から3次元座標への変換を自動化できる赤外線カメラと分析ソフトの購入し、可及的速やかに課題動作実施時の関節角度や関節トルクなど実験結果の解析に移りたいと考えている。平成26年度において、できる限り早期に平成25年度と同様の測定を実施したうえで、実験映像からデジタイジングにより算出する3次元座標と赤外線カメラによる自動算出の3次元座標の相関や信頼性の検討する.その上で、下肢筋活動と着地動作の関連性を明らかにし、トレーニング介入による筋活動動態の変化や膝関節外反角度の変化を検討したいと考えている。介入後の測定を実施したのち、論文の作成とともに翻訳作業を行う必要があるため、実験消耗品、謝金、翻訳料金などに使用する予定である。
児童虐待予防を目的とした保健師による家庭訪問事業に関する保健師と母親の意識の差異

18年度の研究目的は、「家庭訪問事業において母親に拒否された経験を持つ保健師」及び「保健師の訪問を拒否した経験を持つ母親」に対する「家庭訪問支援の拒否」をテーマとした面接調査の枠組みを構築することであった。児童虐待予防を目的とした保健師による家庭訪問事業に関する先行文献を検討し、子育て支援事業に携わる保健師が参加する研修会において家庭訪問事業の実態に関する情報収集を行った。文献検討および保健師研修会における情報収集の結果、児童虐待の早期発見を目的とした取り組みとして、乳幼児健診未受診児への訪問指導の取り組み、児童虐待チェックリストや問診項目の活用および評価、被虐待児への援助に関する事例などが報告されていた。地域保健に携わる専門識者が、児童虐待を予防する観点からも母親のメンタルヘルス上の課題を支援する必要性に着目しており、育児支援の各種施策に母親のメンタルヘルスをアセスメントするツールを活用する模索が行われていることが示唆された。しかし、家庭訪問事業を受ける母親に焦点を当てた報告は乏しく、家庭訪問事業をより有効に活用するためには、訪問事業を受けた母親の認識やニーズについて調査する必要性があると考えられた。以上の結果かち、今後は、「実際に家庭訪問事業において母親に拒否された経験を持つ保健師」及び「保健師の訪問を拒否した経験を持つ母親」に対する面接調査を実施し、(1)母親が保健師の訪問を拒否した理由、(2)母親はどのような援助を必要としていたか、(3)保健師は母親の訪問拒否をどのように捉えていたか、(4)保健師は母親の訪問拒否にどのように対応したか、(5)訪問を拒否された場合の保健師の対応において普遍化できるケア技術はあるか、などの観点から内容分析を行い、家庭訪問支援に関する保健師の意識と母親の意識を比較検討する予定である。
ワタアブラムシの殺虫剤抵抗性遺伝子が適応度形質に及ぼす影響の解明

ワタアブラムシでは合成ピレスロイド剤の標的部位であるナトリウムチャンネルの構造遺伝子上に突然変異が存在することが明らかとなっているが、室内飼育系統、野外個体群のいずれにおいても突然変異を含む対立遺伝子(super-kdr遺伝子)はヘテロ接合体でのみ検出されている。そこで抵抗性遺伝子の遺伝様式ならびに適応度形質との関係を明らかにするため、昨年度までの交雑試験で得られた遺伝子型の異なる系統を用い、危険の察知能力の指標として、合成警報フェロモン((E)-β-farnesene)に対する反応性を遺伝子型間で比較した。また、遺伝子型と合成ピレスロイド剤に対する抵抗性程度の関係も検証した。その結果、合成警報フェロモンへの反応性は抵抗性ホモ(RR)クローンよりもむしろ、感受性ホモ(SS)クローンで低くなる傾向が見られ、危険の察知能力という点で適応度が劣ることはなかった。一方、フェンプロパトリンを用いて抵抗性ホモ個体の感受性ホモに対する抵抗性比をヘテロ接合型(RS)との間で比較した結果、ともに抵抗性比1,000倍以上となり、測定可能な範囲において同等であった。これまでに、標準的な条件(20°C、16L8D)および高温条件(30°C、16L8D)で飼育したとき、RSクローンの羽化率が最も高く、RRで最も低くなるという傾向が観察されている。その差は顕著ではないが、とりわけ殺虫剤による淘汰圧が低下した条件下では、長期的な対立遺伝子頻度の変動に影響を与え、野外個体群における著しい遺伝子型頻度の偏りを生じさせる可能性はあると考えられた。ワタアブラムシでは合成ピレスロイド剤の標的部位であるナトリウムチャンネルの構造遺伝子上に突然変異が存在することが明らかとなっているが、その遺伝様式は明らかになっていない。また、突然変異を含む対立遺伝子(kdr遺伝子)はヘテロ接合体でのみ検出されている。そこで抵抗性遺伝子の遺伝様式ならびに適応度形質との関係を明らかにするため、交雑試験を行い、遺伝子型の分離比を調査した。合成ピレンスロイド剤に対し高度に抵抗性を発達させている完全生活環型4クローンおよび感受性1クローンを室内飼育系統より選定し、正逆交雑を行った。産下卵は4°Cで40日間低温処理し、孵化幼虫はソラマメ芽出しで個体飼育した。孵化に失敗した個体、発達段階で死亡した個体、および羽化成虫からDNAを抽出し、突然変異部位を含むナトリウムチャンネル遺伝子の一部領域を特異的プライマーを用いてPCR増幅した。得られた増幅産物は制限酵素SspIまたはBsrIを用いて消化し、遺伝子型を判定した。その結果、抵抗性ヘテロ接合型同士の交雑では、羽化した幹母の遺伝子型は大半がヘテロ接合型(RS)になるケースと、RS型と抵抗性ホモ(RR)との分離比が2:1になるケースとがあった。しかし、いずれの場合においても感受性ホモ(SS)は全く羽化しなかった。一方、RS型とSS型との交雑ではSS型は出現した。RS型同士の交雑において、孵化に失敗した個体の遺伝子型を調べたところ、SSの割合が高く、SSの個体は全て孵化・発育の段階で死滅していることが明らかとなった。これらのことから、少なくとも室内においてはRR型の個体は羽化に至ること、また、SS型には著しく適応度が低くなるケースが存在することが明らかとなった。また、室内飼育系統、野外個体群のいずれにおいても突然変異を含む対立遺伝子(kdr遺伝子)はヘテロ接合体でのみ検出されており、ホモ接合体クローンは見つかっていない。そこで抵抗性遺伝子の遺伝様式ならびに適応度形質との関係を明らかにするため、昨年度に引き続き交雑試験を行い、遺伝子型の分離比を調査するとともに低温、高温に対する耐性を遺伝子型間で比較した。その結果、前年同様、ヘテロ接合型(SR)同士の交雑からは抵抗性ホモ(RR)およびRSの羽化個体は得られたが、感受性ホモ(SS)個体は全く羽化しなかった。産卵後の卵、孵化に失敗した幼虫、および発育段階で死亡した幼虫を回収し、遺伝子型を調査した結果、SSの卵は高頻度で得られたが、いずれも孵化時あるいは発育段階で死滅しており、他の遺伝子型に比べ適応度が劣ることが示唆された。羽化した幹母から確立したRR、RS、SSの各系統を用い、遺伝子型と適応度との関係を調査した。標準的な条件(20°C、16L8D)および高温条件(30°C、16L8D)で飼育したとき、RSクローンの羽化率が最も高く、癌で最も低くなる傾向が見られたが、いずれも統計的には有意ではなかった。また、低温・短日条件(4°C、8L16D)下における30日後、40日後の生存率および産仔数を各遺伝子型間で比較した結果、生存率には遺伝子型間で差が認められなかったが、SSクローンの産仔数が他に比べて多くなる傾向が認められた。これらの結果から、RRクローンが高温、低温耐性において著しく劣るということは考えられなかった。したがって、餌条件の悪化、あるいは警報フェロモンに対する反応性の違いなど、他のアブラムシ類で報告のあるような適応度に関わる形質を遺伝子型間で比較する必要があると考えられた。

ワタアブラムシでは合成ピレスロイド剤の標的部位であるナトリウムチャンネルの構造遺伝子上に突然変異が存在することが明らかとなっているが、室内飼育系統、野外個体群のいずれにおいても突然変異を含む対立遺伝子(super-kdr遺伝子)はヘテロ接合体でのみ検出されている。そこで抵抗性遺伝子の遺伝様式ならびに適応度形質との関係を明らかにするため、昨年度までの交雑試験で得られた遺伝子型の異なる系統を用い、危険の察知能力の指標として、合成警報フェロモン((E)-β-farnesene)に対する反応性を遺伝子型間で比較した。また、遺伝子型と合成ピレスロイド剤に対する抵抗性程度の関係も検証した。その結果、合成警報フェロモンへの反応性は抵抗性ホモ(RR)クローンよりもむしろ、感受性ホモ(SS)クローンで低くなる傾向が見られ、危険の察知能力という点で適応度が劣ることはなかった。一方、フェンプロパトリンを用いて抵抗性ホモ個体の感受性ホモに対する抵抗性比をヘテロ接合型(RS)との間で比較した結果、ともに抵抗性比1,000倍以上となり、測定可能な範囲において同等であった。これまでに、標準的な条件(20°C、16L8D)および高温条件(30°C、16L8D)で飼育したとき、RSクローンの羽化率が最も高く、RRで最も低くなるという傾向が観察されている。その差は顕著ではないが、とりわけ殺虫剤による淘汰圧が低下した条件下では、長期的な対立遺伝子頻度の変動に影響を与え、野外個体群における著しい遺伝子型頻度の偏りを生じさせる可能性はあると考えられた。
生殖補助医療により生まれた児の運動・言語・社会性の発達の軌跡

生殖補助医療によって出生をした児を対象に、出生後の神経発達、社会性の発達との関連について調査を行った。結果、生殖補助医療のうち、IVFによって出生をした児において、出生後18・24ヶ月齢における粗大運動への影響が認められた。一方、14ヵ月齢の身振りに対してARTが与える影響について、IVFは影響を示さなかったが、ICSIは負の影響を与える傾向が示された。生殖補助医療(以下,ART)の技術の進歩に伴い,本邦においてもARTの結果として出生する児(以下ART児)は増加傾向にある。近年,ART児における身体的・神経学的発達予後に関する研究が広がりをみせており,小児がんなどの疾患のほか,自閉スペクトラム症(以下,ASD)や注意欠如・多動症(以下,ADHD)との関連が報告されている。しかし,ARTと,乳幼児期における運動や言語などの詳細な発達の様態との関連についても知見は限られている。したがって,ART児の乳幼児期における詳細な神経発達を定量的に明らかにすることは,重要な課題である。本研究では,24ヶ月齢におけるART児および非ART児の各神経発達領域の関連性のプロファイルを検討した。浜松母と子の出生コホート(HBC-Study)に参加している月齢24ヵ月の子ども(男児497名、女児488名)を対象とした。神経発達をMullen Scales of Early Learning(Mullen,1995)を用いて評価した。MSELは,粗大運動,視覚受容,微細運動,受容言語,表出言語の5領域から構成されている。ART児(N=81)と非ART児(N=904)ごとに,24ヶ月時のMSELの各領域における合計得点を算出し、5領域のすべての組み合わせについて相関係数を算出したところ、非ART児ではいずれも中等度の正の相関(0.350.65)がみられたのに対して,ART児では,5領域間の関連が均一でなく、特に粗大運動と微細運動,粗大運動と受容言語,微細運動と受容言語の相関が低く,相関係数は有意でなかった。すなわち、ART児と非ART児の神経発達のプロファイルは大きく異なっていることが分かった。とくに、ART児のプロファイルは発達性協調運動症児の発達プロファイルと一致していることが分かった。1.研究目的本研究は生殖補助医療(以下、ARTと略)によって生まれた子どもの神経発達の予後に懸念が寄せられていることから、この問題の究明を目指し、本邦の出生コホートで4歳までの詳細な前方視的追跡を行い、子どもの運動・言語・社会性発達に影響を与えるか否かを検討した。2.実施内容26年度に引き続き、浜松母と子の出生コホート(HBC-Study)の運営を継続しつつ、ART児の神経発達の軌跡を収集した。神経発達の測定には、Mullen Scales of Early Learning(Mullen,1995)を用いて評価した。分析の手順として、ART児(N=81)と非ART児(N=904)ごとに、生後1,4,6,10,14,18,24,32,40,50ケ月齢におけるMSELの各領域における合計得点を算出し、5領域のすべての組み合わせについて統計学的分析を実施した。3.結果及び成果5領域のすべての組み合わせについて相関関係を算出したところ、非ART児ではいずれも中程度の正の相関(0.350.65)がみられたのに対して、ART児では、5領域の関係が均一でなく、相関係数は有意でなかった。この成果を第34回日本心理臨床学会にて発表した。26年度に引き続き、浜松母と子の出生コホート(HBC-Study)の運営を継続しつつ、ART児の神経発達の軌跡を収集した。分析の手順として、ART児(N=81)と非ART児(N=904)ごとに、生後1,4,6,10,14,18,24,32,40,50ケ月齢におけるMSELの各領域における合計得点を算出し、5領域のすべての組み合わせについて統計学的分析を実施し、成果を第34回日本心理臨床学会にて発表した。平成27年度の被験者募集及び解析に遅れが生じている。本研究の目的は、生殖補助医療(以下、ARTと略)によって生まれた子どもの神経発達の予後に懸念が寄せられていることから、この問題の究明を目指し、本邦の出生コホートで4歳までの詳細な前方視的追跡を行い、子どもの運動・言語・社会性の発達に影響を与えるか否かを検討することにある。平成26年度-27年度は、浜松母と子の出生コホート(HBC-Study)の運営を継続しつつ、ARTの神経発達の軌跡を収集した。神経発達の測定には、Mullen Scales of Early Learning(Mullen,1995)を用いて評価をした。分析の手順として、ART児(N=81)と非ART児(N=904)ごとに、生後1,4,6,10,14,18,24,32,40,50ヵ月齢におけるMSELの各領域における合計得点を算出し、5領域のすべての組み合わせについて統計的分析を実施した。結果、5領域のすべての組み合わせについて相関関係を算出したところ、非ART児ではいずれも中程度の相関(0.350.65)がみられたのに対し、ART児では、5領域の関係が均一ではなく、相関係数は有意でなかった。

平成28年度は、より細分化した結果を得ることを目的として、ART児を体外受精胚移植(以下、IVF)と卵細胞質内精子注入法(以下、ICSI)に分けて解析を行った。その結果、IVFにより出生をした児においては、18・24ヵ月齢における粗大運動の得点に正の影響を与えていたが、ICSIにより出生をした児においては正の影響が認められなかった。加えて、32ヶ月齢における粗大運動の得点に対しては、IVFにおける正の影響が確認されなかった。今後も追跡を継続し、ART児が児の発達に与える影響について検討をしていく。生殖補助医療によって出生をした児を対象に、出生後の神経発達、社会性の発達との関連について調査を行った。結果、生殖補助医療のうち、IVFによって出生をした児において、出生後18・24ヶ月齢における粗大運動への影響が認められた。一方、14ヵ月齢の身振りに対してARTが与える影響について、IVFは影響を示さなかったが、ICSIは負の影響を与える傾向が示された。1000例近い新生児を24ヶ月にわたって追跡することができた。また、欧米で広く使われている小児Composite scaleによって、全ての児を直接評価できた点で、価値あるデータを蓄積できたといえる。仮説の検証も順調に進んでいる。このほか社会性の評価に基づいたARTの影響を検討することが計画調書に記されている。これについては、すでに18ヶ月までの追跡において「共同注視への反応」「呼名への反応」などによってデータを収集したが、入力が完了していない。しかし、平成27年度早々に完了することが見込まれており、懸念はない。平成27年度に募集予定であった被験者の募集及び解析を行い、当初の計画を遂行する。発達臨床心理学平成27年度は、追跡期間を32ヶ月(2歳8ヶ月)まで延ばし、ART児の運動発達・言語発達の予後をnon-ART児を対照にして検討を続ける。すでに平成26年度より2歳以降の児の追跡と評価に着手しており、順調にデータが集積している。さらに、社会性の評価についてもあらたな評価尺度を用いて、社会適応や社交性という観点から評価を進めることをもくろんでいる。平成27年度の被検者募集及び解析に若干の遅れが生じ、28年度にずれ込むことが確定したため。次年度使用額が生じた理由とし、謝金にて支払う予定であったデータ入力を担う人員が不足していたことがあげられる。また、購入予定であった統計ソフトが27年度にバージョンが新しくなるため、27年度に購入することとした。平成28年度に、募集及び解析を行い、当初の計画を完了する。27年度においては、人員を担保し、収集しているデータの入力を完了させる予定であるため、それらに使用する。加えて、上述した統計ソフトに関しても購入する予定である。
現代日本における猟区制度展開の可能性

猟区の更新時に土地所有者より承認を得るプロセスとしては、大半の市町村では、前回の猟区のままの猟区案、あるいは土地所有者やハンターからのここ数年の間に出された要望を参考にして町の判断により作成した猟区案を、基本的には各集落ごとに説明してから承諾を得るようにしている。その際、問題が出てきた集落では再度説明会を行い、区域設定について調整をはかっている。猟区であった地域で猟区が更新できなかった、あるいはしなかった理由としては、宅地、工場、ゴルフ場などの開発により猟区として適切でなくなった、土地所有者の同意が得られなかった、承諾書を取って計画書を作る作業が間に合わず申請ができなかった、などの例があげられた。また、猟区の更新を拒否した土地所有者の一例より、猟区制度の内容以前に「鳥獣保護及狩猟ニ関スル法律」の枠組みに問題があることが明らかになった。狩猟権が土地所有権に優先するのかどうかという問題で、猟期にハンターが土地所有者の承諾なしに狩猟できることに不満を抱いていた。また、ハンターに対する信頼は、地元、地元外の別なくマナーが悪いと認識しており、同じように信頼していなかった。そのため、地元ハンターが案内者としてつくという猟区の条項にもまったく魅力を感じていない。以上のような結果を基に、70項目を越える質問項目をあげ、それらをもとに、市町村の野生動物行政担当課用、一般市民用、ハンター用、猟友会用のアンケートを作成した。猟区変更の影響を知ることができるように、猟期が終了した3月にそれらのアンケートを配布した。アンケートの回収はまだ部分的であるが、猟区や狩猟に対する関心は高くない。
重症筋無力症の骨格筋細胞内反応と病態に関する研究

重症筋無力症(MG)患者の骨格筋において筋細胞内反応が機能していることを明らかにした。MGの病態解明と治療においてこの反応が重要であることを示した。MGでは、骨格筋内において小胞体ストレス応答が働いており、骨格筋における免疫反応の調整および筋保護作用、また、筋再生のための情報伝達が行われている可能性を示した。さらに、MGの骨格筋において筋修復過程で見られる蛋白の発現亢進や骨格筋の再生に欠かせない筋芽細胞の活性化が、MG患者の骨格筋において機能していた。つまり、MGでは障害された骨格筋の修復過程に筋細胞内反応が深く関わっており、MGの病態解明のためにさらなる研究が必要であると考えられた。重症筋無力症(MG)の骨格筋細胞内反応およびこの反応が関与する免疫機能の解析を行い、MGの病態に筋細胞内反応が深く関わっていることを解明していく。筋細胞内反応を解明する研究では骨格筋へのダメージに関する作用や筋および神経筋接合部の再生に関する作用、また、骨格筋が免疫機能を調整する作用についてMG患者の骨格筋検体を用いた病理学的検討、蛋白および遺伝子発現による検討で明らかにする。対象となるMG患者の骨格筋検体については、金沢大学医学部倫理審査委員会の了承をえて対象者より同意を取得した12症例の検体を用いた。コントロールとして、筋疾患以外の5症例の検体を使用した。MGにおける神経筋接合部の免疫反応により、ダメージを受けた骨格筋に生じる反応を確認するため小胞体ストレス応答に注目、熱ショック蛋白の一つであるglucose-regulated protein(GRP)78の発現を免疫組織染色およびmRNAの発現量を半定量化することで確認した。この結果、MG患者の骨格筋ではGRP78の発現亢進が認められることが免疫組織染色およびmRNAの定量から確認された。蛋白の発現量とmRNAにおける発現亢進は相関を示しており、MGの骨格筋における免疫反応が、骨格筋細胞内に影響を及ぼし、小胞体ストレス応答を誘導したと推定された。骨格筋における小胞体ストレス応答は、筋力低下にも関連していると考えられ、MGの病態を理解する上で重要かつ新たな知見となった。さらに、GRP78の発現亢進は年齢に関連し、高齢になるほどその発現量は亢進していることが明らかになった。本研究の結果は、2014年7月5-10日にFrance(Nice)で開催される第13回神経筋疾患国際会議にて発表する予定である。また、研究成果を論文として投稿中である。この研究は、金沢大学医学部倫理審査委員会の承認をえて、2015年3月末時点で15例のMG患者より同意を得て研究を行っている。MGにおける神経筋接合部の自己免疫反応により、ダメージを受けた骨格筋に生じる反応を確認するため小胞体ストレス応答に注目、熱ショック蛋白の一つであるglucose-regulated protein(GRP)78の発現を免疫組織染色およびmRNAの発現量を半定量化することで確認し、MG患者の骨格筋ではGRP78の発現亢進が認められることが免疫組織染色およびmRNAの定量から確認された。蛋白の発現量とmRNAにおける発現亢進は相関を示しており、MGの骨格筋における免疫反応が骨格筋細胞内に影響を及ぼし、小胞体ストレス応答を誘導したと推定された。本研究の結果は、2014年7月5-10日にNice (France)で開催された第13回神経筋疾患国際会議にて発表し、J Neuroimmunol 273:72-76,2014に掲載された。また、MG骨格筋では、骨格筋細胞膜蛋白の発現や機能に関わるcaveolin-3蛋白の発現が亢進していることを新たに見いだし、自己免疫反応による骨格筋細胞の修復再生過程における機能の一部が明らかにされた。この結果の一部は、2014年9月4-6日に開催された第26回日本神経免疫学会で発表した。MGにおける神経筋接合部の自己免疫反応により、ダメージを受けた骨格筋に生じる反応を確認するため小胞体ストレス応答に注目、熱ショック蛋白の一つであるglucose-regulated protein(GRP)78の発現がMG患者の骨格筋で亢進していることが確認された。MGの骨格筋における免疫反応が骨格筋細胞内に影響を及ぼし、小胞体ストレス応答を誘導したと推定された。

小胞体ストレス応答に関連し、MG骨格筋では骨格筋の修復機構が亢進している可能性が見いだされた。MG骨格筋において、骨格筋細胞膜蛋白の発現や修復に関わるcaveolin-3蛋白の発現が亢進していることを新たに見いだした。これにより、自己免疫反応による骨格筋細胞の修復再生過程における機能の一部が明らかにされた。この結果の一部は、2016年3月14-19日に開催された第5回国際菌学会で発表し、論文投稿中である。最終年度には、重症筋無力症の骨格筋において、骨格筋の再生時に筋芽細胞にて認められる蛋白の発現が異常に亢進してことを明らかにした。このことは、重症筋無力症の病態改善の過程において筋芽細胞の活性化による骨格筋の再生機能が重要な役割を担っている可能性を示すのもであった。重症筋無力症(MG)患者の骨格筋において筋細胞内反応が機能していることを明らかにした。MGの病態解明と治療においてこの反応が重要であることを示した。MGでは、骨格筋内において小胞体ストレス応答が働いており、骨格筋における免疫反応の調整および筋保護作用、また、筋再生のための情報伝達が行われている可能性を示した。さらに、MGの骨格筋において筋修復過程で見られる蛋白の発現亢進や骨格筋の再生に欠かせない筋芽細胞の活性化が、MG患者の骨格筋において機能していた。つまり、MGでは障害された骨格筋の修復過程に筋細胞内反応が深く関わっており、MGの病態解明のためにさらなる研究が必要であると考えられた。本研究における神経筋接合部の自己免疫反応が、骨格筋に与える影響について、小胞体ストレス応答が関与していることを明らかにし、国際学会および論文での報告を行った。その後の研究で、MGの骨格筋では細胞膜蛋白の発現や機能、骨格筋の修復再生に関与するcavelin-3蛋白の発現が亢進していることを明らかにした。この蛋白の発現亢進に関連し、MG患者の骨格筋細胞における障害と修復再生過程に関わる新たなデータが得られおり、研究は順調に進捗している。神経内科MGの骨格筋細胞において小胞体ストレス応答を認めることが明らかになった。この反応におけるトリガーが、MGの骨格筋細胞内におけるCaイオン動態の異常、ミトコンドリアの形態や集簇異常、骨格筋細胞の修復再生に関連していることについて研究を進める。(1)骨格筋内反応の解明1.細胞内Caイオンの動態を評価する。2.筋細胞内のミトコンドリアの異常:ミトコンドリア形態や機能をみる蛋白(LC3、FoxO3等)を特異的に染色し、ミトコンドリア異常の質を評価する。3.骨格筋再生の確認:アポトーシスに関わるTUNEL染色やカスパーゼ3、9の状況を免疫染色にて評価する。筋再生に関連し出現する蛋白(Pax7、MyoD、myogenin)の発現を調べる。(2)骨格筋が担う免疫機能1.抗原提示機能:MGの骨格筋においてMHCクラスIIの発現、抗原提示共刺激分子であるCD40、CD80、CD86の発現、IL-12やTNFαといったサイトカインの発現について、免疫染色やウェスタンブロット、mRNA定量にて調べる。2.補体制御因子の発現:補体介在性の障害を調整する補体制御因子であるDAF,MCP,CD59の発現を免疫染色、mRNAの発現量定量にて調べる。
看護師の働きがいと動機づけ要因に関する研究

本研究は,看護師の働きがいと動機づけ・衛生要因との関連を調査し,働きがいを高める影響要因を明らかにすることを目的とする。これまでに,平成28年度基盤研究(C)において,『看護師の働きがい尺度』を開発した。しかし,基準関連妥当性の検証と看護師の熟達段階ごとの働きがいを明らかにすることはできなかった。そこで,『看護師の働きがい尺度』の基準関連妥当性の検証をし,『看護師の働きがい尺度』を用いて,ベナーの熟達段階とハーズバーグの動機づけ・衛生要因が看護師の働きがいに及ぼす影響を明らかにする。本研究の成果を学会等で発表することにより,今後の看護師の労働環境改善に向けた一助となることが予測される。
加齢ならびに高血圧による腎硬化症の分子診断法の開発

現在、アルブミン尿・血尿などの検尿検査でなんら異常をしめさずに、腎機能自体が潜在的に低下していく患者が大変増加している。加齢および高血圧によって発症する腎硬化症の増加が原因である。腎硬化症の病態は、細動脈の壁肥厚による循環障害であるため、糸球体障害を反映するタンパク尿・血尿には異常を認めにくい。そこで、細動脈が硬化に至る過程で、この部位に特異的に発現する分子群を同定した。ヒト尿サンプルに対して、前年度に選定した、腎の細動脈小動脈での発現に変化のみられる分子を探索することで、数個の分子群をバイオマーカー候補として得た。腎生検にて得られた病理組織学的な病期、重症度、活動性との相関も確認できた。尿タンパクの顕在化に対して、先行して増加するマーカーと、血清Crの上昇・GFR低下時に先行して発現量の変化するマーカーが得られた。また、腎硬化症患者の長期的な予後の改善をめざした患者個々に最適な治療法選択の指針を提供するツールになるかどうかを検討するため、尿中バイオマーカーの子帆分子群を用いて既存治療の効果判定を行った。臨床情報をもとに、ACE阻害薬、ARB、Ca拮抗薬などの降圧薬やスタチンなどの脂質異常症治療薬、抗凝固薬、減塩食などの現行の治療法による、各分子マーカー候補の変化を検討した。短期的には、尿タンパクの顕在化や変動に並行して発現量が変化するマーカーは得られなかったが、血清Crの上昇・GFR低下時に先行して発現量が増加していたマーカーは、Ca拮抗薬およびACE阻害薬の一部、抗凝固役の一部により、発現量が抑制されていた。これらは、腎硬化症の発症の予防・抑制効果を判定する尿中バイオマーカーとしての可能性が強く示唆された。
創造的表現と鑑賞における身体性ダイナミクス：脳活動計測と動作計測による検討

本研究は3次元動作計測を含む心理学実験,脳刺激実験,fMRIを含む脳機能画像法を用いて,創造的表現と観賞に関する脳内過程と心理過程およびそれらに及ぼす身体性や感覚性の影響について明らかにした。心理学実験による研究では,美的評価や魅力認知,身体感覚を含めた多感覚情報処理などについて検討し,特に絵画表現と観賞評価に関する基礎的知見を得ることができた。脳変容実験による研究では,tDCSによる脳刺激によって美的評価が変化することやその変容効果が翌日にも持ち越されることが明らかになった。さらにfMRIによる安静時脳活動計測で脳領域間の機能結合と美的センスや表現活動,観賞行動等との関係を検討した。本研究は,創造的表現と鑑賞に関する身体性ダイナミクスについて,実験心理学的手法,機能的磁気共鳴画像,モーションキャプチャを用いた身体運動計測によって明らかにすることが目的である。平成24年度は,文字学習の習熟に伴って変化する脳の活動部位と解剖学的脳構造の可塑性に関する実験的研究,芸術鑑賞時の脳活動部位計測に関する実験的研究,およびモーションキャプチャによる鑑賞行動の3次元計測,さらには発話の流暢性についての実験心理学的検討,選好や社会的意思決定に関する潜在的心理過程に関する検討などについて行った。特に3次元計測研究では,モーションキャプチャ装置を本研究費により導入し,絵画鑑賞時の身体性反応を解析するシステムを構築することができ,今後,鑑賞時に感じられる印象によって身体反応がどのように異なるかを計測することができるようになった。また,同じ習熟度合いであっても異なる学習のストラテジー(身体運動を伴う学習か,伴わないか)によって主に活性化される脳部位が異なってくることが明らかになった。またそれに伴う脳の解剖学的構造にも変化がみられることが明らかになりつつある。さらに,鑑賞のより基礎的側面については社会的意思決定に伴う選好や経済活動を実験心理学的に検討し,相手に対するコミットメントが選好を形成する上で非常に重要であることが明らかになり,今後,芸術作品などを対象として表現や鑑賞行動におけるコミットメントの役割を明らかにするための基礎付けとなった。これらの成果は基本基礎心理学会などの学会やPLoSONEなどの論文誌に成果が発表されたとともに,現在論文の作成中である。平成25年度に展開し,得られた大きな知見は大きく2つの部分に分けることができる。1つは美的経験や魅力の認知過程に関するものであり,美的経験や魅力の認知,さらには景観や動作の観察が注意過程を大きく変化させることを示したということである。また選好の形成が,観察者の「選択」という自発的行為に基づいて容易に変化しやすいことについても明らかにした。さらに,景観認知や手品の認知過程における注意過程や顔認知の役割についても明らかにした。これらの研究は,平成25年度において既に2篇の査読付き英語論文として発表することができ,さらに5篇の論文を英語論文として投稿中である。さらには学会抄録論文として7篇の論文として発表した。2つ目は,tDCSという脳に微弱な電流を流すことで,特定の脳部位の活動レベルを変容させ,それによって認知過程がどのように変化するかを検討したもので,絵画画像を用いて美しい・醜いという評価系が前頭葉の活性化によってより高くなること,一方で運動野という身体性と関連する刺激部位への活動変容では美しい・醜いという評価系には影響が低いことも明らかになった。この知見は,本研究の本来の目的である美醜の評価系に身体性のダイナミクスが大きく関わるという仮説を一見否定するようでもあるが,これまでの研究では醜いという評価によって運動野の活動変化が大きくなることが示されており,そのことは「醜さ」から「運動野の活性化」へという因果関係を明らかにするものとなったことを表している。本知見は平成26年度に学会発表を行い,さらに英語論文による投稿を準備している。平成26年度の研究実績は大きく3つに分けることができる。1)美的経験や魅力,景観の認知過程に関する研究:実験心理学的方法を用いて,絵画画像や顔画像の評価に関する研究を行い,他者の選択の観察を通して自分自身の好みが形成される過程を明らかにした。この結果は平成25年度から行っていた研究の継続研究であり,既に,電子情報通信学会HIP研究会で発表するとともに,平成26年度に技術報告も発表されたものである。現在,英語論文として投稿中である。また,芸術表現のカテゴリーとしての風景をどのように認知するかという観点から景観認知に関する研究も行い,平成27年4月現在,英語による論文がJapanese Psychonomic Researchに採択され印刷中となっている。その他,24,25年度に行った研究についても26年度に英語論文もしくは英語論文として掲載されたものは多い。

2)tDCSを用いた芸術認知研究:tDCSという脳に微弱な電流を流すことで特定の脳部位の活動部位のレベルを変容させ,それによって認知過程がどのように変化するかを検討しており,一部は25年度からの継続研究であり,既に学会発表を行ったものであるが,現在英語論文として投稿中である。また,新たに,tDCSによる芸術作品への美的選好の変化の時間的持ち越しに関する研究も行い,それについては26年度に学会発表し,さらに現在論文を執筆している。3)脳機能研究をもとにした美的経験に関する研究:機能的磁気共鳴画像法を用いて安静時脳活動を測定し,美的センスに関する尺度や美術史的知識等との尺度値に関連する脳部位の構造や働きについて機能結合を明らかにする研究を行った。その成果は今後論文等で公表していく予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。認知神経科学26年度が最終年度であるため、記入しない。文字を書く,絵を描くなどの様々な創造的行為に関する検討についてはまだ十分に展開ができていない。その理由の1つは研究員の雇用が遅くなってしまったこと,さらに研究員の産休と育休によって研究が中断したことが挙げられる。しかし,鑑賞面については心理実験,脳機能実験ともに順調であり,さらに3次元計測についてもシステムが構築できたので今後の研究が展開しやすくなってきた。fMRIによる脳機能計測については過去のデータの分析というレベルでしか進展はないものの,認知実験レベルで多くの研究業績が得られる見込みが立ち,さらにはtDCSという電流刺激法による脳活動変容のパラダイムを用いることによって,脳の活動と美醜という感じ方の因果関係を明らかにすることができてきている。英語による査読付き論文発表2件,日本語の査読無し論文発表(学会報告論文)7件,英語による査読付き論文誌への投稿中5件があり,業績としては平成25年度で大きく飛躍することができたと自己評価できる。さらに,国内の学会・シンポジウムにおいて招待講演を5件行うことができ,アウトリーチとしても多くの知見を研究関係者や一般市民にたいしてフィードバックすることができている。創造的行為に焦点を当てた研究は,習熟者と非習熟者との比較を行うというよりも,習熟に伴う変化を脳計測や心理実験,3次元計測を行うことで今後の研究がより推進しやすくなる。また習熟を阻害する要因についても検討する。平成27年度は,26年度に得ることができたtDCS研究を英語論文として発表すること,さらには,自分の選択によって選好が形成されるとした25年度に発表した研究をさらに進展させ,他者の選択をみることでも選好が変化することを示した研究を英語論文として発表する。他者の選択の観察が自らの選好を変化させることはモデリングとも関係し,身体表象との関連性も十分に示すことができると考えられる。さらに,これまでに行った,漢字の学習において繰り返し学習の効果が脳の活動変化をどのように生み出すのかに関する研究についても,身体性と技能学習との関連で早く研究論文としてまとめる必要があると考えている。さらに,実験的研究としては,これまでに行った美や魅力の認知の心理学実験を細かに行う。特に,美や魅力の認知が空間的注意へと与える影響についても検討していく。
ヒト及びカニクイザル多能性幹細胞を用いた腎尿路再生の研究

昨年度、報告したようにカニクイザルのES細胞はヒトiPS細胞とは全く異なる挙動を示し、腎分化の誘導が困難であったため、分化条件の調整を行ったが、やはりある程度細胞増殖が進むと、分化誘導がうまくいかず、また目的の分化の前の細胞増殖のスピードが上回り、モザイクな分化を示してしまった。その後の実験で、腎分化においてはWnt pathwayを誘導するため人GSK inhibitorを使用するが、カニクイザルES細胞はその分化能を維持するため、維持培養系において、Wnt pathwayを阻害して培養するため、ヒトiPS,と同じ強度の誘導では弱いことがわかったが、Wntの阻害をやめたしと同時に細胞の多能性が低下し、目的外の分化が誘導されることがわかった。そこで、分化誘導前に、多能性を維持した高品質なカニクイザルES細胞を樹立し、そこから分化誘導実験を行う方針とし、多能性に重要なOCT3/4に,tdTomatoとzeocin耐性遺伝子をヘテロノックインし、多能性を維持した細胞の可視化と選抜が可能なCell linesの作成をした。新たに樹立した細胞が多能性を維持していることを確認するため、奇形腫形成能の確認とqPCRを行った。昨年作成したCell lineには一部で染色体異常を認めたため、染色体解析を行い、Resourceとして問題ない細胞であることを確認した。このCell lineについては学術誌Stem cell researchにその成果を報告した。当初はカニクイザルES細胞を用いた腎分化の研究を行い、移植実験まで持ち込む予定であったが、カニクイザル多能性幹細胞の挙動が、報告されているヒトやマウスのES細胞とあまりに異なるため、カニクイザル多能性幹細胞の性質と特徴を確認するのに時間を要した。また、培養条件から、多能性の維持、分化能の維持が困難であることがわかり、分化実験に耐えうるCell lineの樹立を余儀なくされ、その研究に多くの時間を必要と認め、当初の目的を達成することはできなかった、今回樹立した細胞を用いて、腎分化の実験を行い、移植に耐えうるオルガノイドの形成を目的とする。また、免疫寛容が成立する細胞での同様のcell lineの樹立、オルガノイドの形成を目指し、実際に移植実験が可能な環境を整備する。まずはカニクイザルES細胞での下記実験をおこなった。ES細胞の腎臓への分化過程を細胞が生存した状態で確認し、集積するためにはレポーターが必要である。我々はまず、カニクイザルES細胞に対する遺伝子改変システム、つまりターゲット遺伝子にレポーターをノックインする手法の確立を行った。まず、腎臓の分化において比較的長期間高発現するOSR1遺伝子をターゲットにレポーター遺伝子(GFP)のノックインを行った。293FTにTaget遺伝子を挿入したpCAG-EGxxFPプラスミドを用いてCRISPR/Cas9システムのシュミレーションを行いFACSにて十分な蛍光を発することを確認した。遺伝子改変したノックインES細胞はGENOTYPING_PCR、SOUTHERN_BLOTTINGにて適切なのノックインができていることを確認した。つぎに分化に実験を開始した。カニクイザルES細胞はヒトのiPS細胞と同様にPrime型であったため、ヒトの研究結果そのまま適応されるかと思われたが、その性質が我々が想定したものから大きく異なっていることが本年の研究でわかった。分化誘導にかける時間、各因子の濃度の調整を行い、よりヒトに近い形での分化条件の設定に成功した。来年度はカニクイザルES細胞のみならず、iPSでも同様の分化条件の確認を行い、免疫寛容が成立する多能性幹細胞を個体移植するプトロコールの作成を行う予定である。カニクイザルES細胞はヒトのiPS細胞と同様にPrime型であったため、ヒトの研究結果そのまま適応されるかと思われたが、Publish Dataにそって同様のプロトコルで行うと、まったく異なる強度を示していた。よって、分化の条件そのものを、カニクイザル多能性幹細胞で設定しなければならなくなり、分化条件の検討に想定外の時間を要している。昨年度、報告したようにカニクイザルのES細胞はヒトiPS細胞とは全く異なる挙動を示し、腎分化の誘導が困難であったため、まず分化条件の調整を行った。腎分化においてはWnt pathwayを誘導するため人GSK inhibitorを使用するが、カニクイザルES細胞はその分化能を維持するため、維持培養系において、Wnt pathwayを阻害して培養するため、ヒトiPS,と同じ強度の誘導では弱いことがわかった。さらに昨年作成した、OSR1にGFPをノックインした細胞でOSR1をホモでKOした細胞とヘテロの細胞、野生型細胞を使用し分化に応じたGFPの発言を比較し、ヘテロ細胞でGFPが高発言を示すことを確認した。GFPをノックインしたES細胞が多能性を維持していることを確認するため、奇形腫形成能の確認を行った。生体への移植を目指し、同じ遺伝子改変を免疫寛容が成立するカニクイザルのiPS細胞でも行った。また腎分化において、未分化細胞の残存は腫瘍化のリスクとなり得るため、未分化細胞の消失を確認するため、多能性マーカのOCT4にtdTomatoをノックインしたカニクイザルのES細胞、iPS細胞を作成した。腎分化のプロトコルがある程度確認されたが、作成の過程で、細胞の染色体異常がみつかり、細胞の作り直しを行い、3ヶ月の遅れが生じた。また、当初想定したより、カニクイザル多能性幹細胞の分化効率がよくなく、未分化細胞の残存という新たな懸念が生じたため、NegativeSelectionのための新たな細胞の樹立が必要となったため、生体への移植実験に到達できていない。

昨年度、報告したようにカニクイザルのES細胞はヒトiPS細胞とは全く異なる挙動を示し、腎分化の誘導が困難であったため、分化条件の調整を行ったが、やはりある程度細胞増殖が進むと、分化誘導がうまくいかず、また目的の分化の前の細胞増殖のスピードが上回り、モザイクな分化を示してしまった。その後の実験で、腎分化においてはWnt pathwayを誘導するため人GSK inhibitorを使用するが、カニクイザルES細胞はその分化能を維持するため、維持培養系において、Wnt pathwayを阻害して培養するため、ヒトiPS,と同じ強度の誘導では弱いことがわかったが、Wntの阻害をやめたしと同時に細胞の多能性が低下し、目的外の分化が誘導されることがわかった。そこで、分化誘導前に、多能性を維持した高品質なカニクイザルES細胞を樹立し、そこから分化誘導実験を行う方針とし、多能性に重要なOCT3/4に,tdTomatoとzeocin耐性遺伝子をヘテロノックインし、多能性を維持した細胞の可視化と選抜が可能なCell linesの作成をした。新たに樹立した細胞が多能性を維持していることを確認するため、奇形腫形成能の確認とqPCRを行った。昨年作成したCell lineには一部で染色体異常を認めたため、染色体解析を行い、Resourceとして問題ない細胞であることを確認した。このCell lineについては学術誌Stem cell researchにその成果を報告した。当初はカニクイザルES細胞を用いた腎分化の研究を行い、移植実験まで持ち込む予定であったが、カニクイザル多能性幹細胞の挙動が、報告されているヒトやマウスのES細胞とあまりに異なるため、カニクイザル多能性幹細胞の性質と特徴を確認するのに時間を要した。また、培養条件から、多能性の維持、分化能の維持が困難であることがわかり、分化実験に耐えうるCell lineの樹立を余儀なくされ、その研究に多くの時間を必要と認め、当初の目的を達成することはできなかった、年度終盤に、カニクイザルES細胞での分化条件がある程度かたまったため、今後は設定条件での分化度の定量化を行い予定である。また、移植実験に向けて免疫寛容が成立する多能性幹細胞を用いて、分化実験を行い、条件の確認と、移植実験の準備を進める本研究計画が通った後、Virtoでの腎臓オルガノイド作成手法が、報告された。カニクイザルの細胞の分化効率はあまりよくないため、Vivoで行う前に、より3次元的なオルガノイドでの分化の状態を確認し、生体移植実験への準備を整える。今回樹立した細胞を用いて、腎分化の実験を行い、移植に耐えうるオルガノイドの形成を目的とする。また、免疫寛容が成立する細胞での同様のcell lineの樹立、オルガノイドの形成を目指し、実際に移植実験が可能な環境を整備する。前述の理由で実験計画が遅れ、使用予定物品の購入が遅延していることにより使用額に差が出他理由である。特に、移植実験用のカイニクイザルの購入と、分化誘導後の免疫染色用の抗体の購入がなかったことが、額が大きくなった要因である。
p型、n型特性を制御した導電性高分子と電極とする反応場の設計と反応制御

p型電導性高分子となるポリチオフェン(PTh)、ポリオクチルチオフェン(P3OcTh)、n型電導性高分子となるポリピリジン(Ppy)、ポリヘキシルピリジン(PHxpy)、ポリビピリジン(PBpy)、等を有機金属化学的手法により合成し、これらを金属電極上に被覆して電導性高分子電極を作製した。作製した導電性高分子電極の化学的・電気化学的p型、n型ド-ピング特性を測定し、電極材料としての基本的酸化還元特性を明らかにした。酸性水溶液中における水の電気分解のカソードとしてPBpy、Ppy、PHxpy、P3OcThを用いたときの電流-電圧曲線、Tafel Plotより、電極近傍での水素発生機構について調べた。その結果、ピリジン環のみから構成されるポリマーとアルキル側鎖を有するポリマーとの間にアルキル基の疎水性効果による大きな変化が見られた。また、アルカリ性水溶液中での水の電気分解のアノードとして上述の電導性高分子電極を用い、電極近傍での酸素発生反応における、触媒作用を調べたところ、PBpy、Ppy、P3OcThにおいて電流密度の小さな範囲で、早い電流-電圧曲線の立ち上がりが観測された。これらの気体発生反応は下地電極/ポリマー界面で起こっているものと推察された。