hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
女性医師支援の多面的効果の評価:キャリア支援から地域へ

我々は、岡山大学で取り組んだ女性医師のキャリア支援が女性医師自身のキャリアと職場に及ぼした影響について調べ、有効な支援のあり方、波及効果について考察した。柔軟な勤務体制は女性医師のみならず、職場からも必要とされる重要な方策であること、病児保育室の導入はキャリアと家庭の両立のために重要な役割を果たすことが示された。職場における連携とサポートを強化する試みは他施設においても有効である可能性が示唆された。岡山大学では平成19年度より女性医師支援制度を導入し、50名以上の女性医師が復職した。女性医師支援が医療現場にもたらしたアウトカムの評価を行い、さらに女性医療人支援の地域医療貢献に果たす役割について明らかにする。(1)本学の女性医師支援制度のアウトカム評価1)フォローアップ調査対象:平成20-22年度に復職し、現在岡山大学病院に在職している女性医師26名。方法:面談と質問紙による意識調査を施行。結果:回収率は100%。所属科は内科5名、眼科4名、小児科3名、その他の科は1-2名であった。主な業務内容は外来16名、入院担当3名、外来助手3名などであった。今後の利用については、子育て・妊娠中の利用者のうち14名(63.6%)があと数年利用したいとの希望を持っていた。岡山大学病院での復帰支援制度は多くの診療分野で利用され、今後の拡充を期待されていることが示唆された。2)新規導入した病児保育施設の実効性評価対象:岡山大学病院ますかっと病児保育ルームの事前利用登録者110名。方法:自記式の質問紙を用いた調査を施行。結果:回収率は70.0%(77名)。事前登録者看護師40名(57.1%)が最多で、医師13名(18.6%)がそれに続いた。また、59名(77%)が事前に病児保育ルームの見学をしていた。また、事前登録者のうち院内保育園在籍者は24名(31%)であった。また、利用者の意見では、「スタッフの対応に満足、やや満足」とする人が57名(95%)であった。また、病児保育ルームの存在によって「安心して働けるようになった」と考える人は60名(77.9%)であった。病児保育ルームの設置によって、職員の働きやすさが改善したことが示唆された。(2)本学の女性医師支援制度の他施設への適用と汎用性評価地域拠点病院における女性医師支援制度の導入準備として事前評価(職員に対する意識調査)、啓蒙活動を行った。岡山大学では平成19年度より女性医師支援制度を導入し、平成23年度末で67名の女性医師が復職した。女性医師支援が医療現場にもたらしたアウトカムの評価及び女性医療人支援の地域医療貢献に果たす役割について明らかにする。(1)本学の女性医師支援制度のアウトカム評価1)復帰支援制度の利用に関する調査対象:復帰支援制度を利用した女性医師の受け入れを行った診療科の上司・同僚201名。方法:質問紙による意識調査を施行。結果:回収率は64.1%。回答者の属性は男性153人(76.1%)、女性46人(22.9%)、30-39歳が113人(56.2%)と過半数を占め、上司110名(54.7%)同僚90名(44.7%)であった。「復帰支援制度を知っている」と回答したのは174人(86.6%)であった。本制度の有用度について、「復帰医師にとって有用である」と回答したのは175人(87.1%)であった。また、「職場にとって有用である」と回答したのは153人(75.6%)であった。「復帰医師のキャリア形成に役立つ」と回答したのは141人(70.6%)であった。一方で、「制度に甘えている復帰医師が目立つ」と回答したのは23人(11.5%)であった。また、「復帰医師は自らの職務遂行のみならず職場への貢献ができている」と回答したのは99人(49.2%)であった。岡山大学病院の復帰支援制度は制度利用者のみならず、職場の上司、同僚からも高い評価を得ていると考えられた。一方で、真に復帰医師のキャリア形成を促すために更なる工夫が必要であることも示唆された。2)新規導入した病棟保育士制度に関する実効性評価平成23年度より小児科病棟に導入した病棟保育士制度に関する実効性評価を行った。(2)本学の女性医師支援制度の他施設への適用と汎用性評価地域拠点病院における女性医師支援制度の導入準備として事前評価、啓蒙活動を行った。
基盤産業における情報技術を利用した経営革新に関する研究

本研究の目的は、金型産業における3次元CADシステムの利用方法の差異がどのように経営革新に結び付くのかを解明することである。そこで、本研究では金型製造企業の3次元CADシステムの利用方法を概念化することを試みた。3次元CADシステムの利用方法を整理するための概念では、「金型製造企業」と「完成品製造企業」の2つの立場を区別した。さらに、それぞれの立場が「情報技術導入の理由」、「情報技術の利用方法」、及び「情報技術導入の効果」の3つに分類できることを提示した。私は平成20年度の科学研究費補助金の成果として、1件の図書(分担執筆)と1件の学会発表を行った。それらは、基盤産業における競争条件と既存の中小企業の情報化を論じた先行研究の限界を提示し、研究課題の理論的背景を強化したと考えている。詳細は以下の通りである。2008年12月に実教出版から出版された『現代企業論』所収「企業の成長とイノベーション」では、量産品製造企業が製品開発の成果として、開発期間の短縮、開発生産性の向上、総合商品力の向上の3つを志向していることを示した。換言すれば、このことは量産品製造企業の製品開発過程と密接に関わる基盤産業が上記3つの条件を満たすことにより、競争優位を獲得できることを明らかにした。また、2009年1月に日本中小企業学会西部部会で報告した「中小企業における情報化の意義」では、既存研究において3次元CADを含めた情報技術が基盤産業の大半を占める中小企業の企業内部と企業間関係に如何なる影響を及ぼしたのかを整理した。このことから、先行研究では、対象となった産業、情報機器、企業規模の差異が厳密に精査されることなく論じられてきたことを明らかにした。以上を踏まえ、今後は企業訪問を中心に、具体的な基盤産業における情報技術の利用方法を分析していく予定である。最終年度は、主に本研究で得られた基盤産業の経営革新に関する研究が既存研究においてどのように位置付けられるのかを検討した。その成果として、本年度は1本の雑誌論文の執筆と1回の学会報告を行った。雑誌論文である2010年3月に刊行された『同志社商学』同志社大学商学部創立60周年記念論文集に執筆した「中小企業の情報化の意義」では、情報技術が基盤産業にビジネスモデルの変革をもたらす可能性があることと、製造に関する技能を取引先企業に漏洩してしまう恐れがあるという正と負両面の影響を及ぼすことを述べ、それらの相容れない見解を統合する分析視点の提示を試みている。そこで得られた分析視点は、広く中小企業論で論じられている情報化に関する既存研究を整理するためにも有益であると考えている。また、学会報告である2009年に熊本学園大学で開かれた日本中小企業学会全国大会で行った「中小企業の情報化に関する研究の成果と課題」では、従来の中小企業論の中で捉えられてきた情報技術の役割とその限界を指摘し、新たな分析視点の必要性を提議した。発表の場であった日本中小企業学会は、多くの基盤産業を対象とする研究者が参加する学会である。そこで報告することにより、本研究の成果報告だけに留まらず、基盤産業の多様性や異なる情報技術の捉え方などの今後取り組まなければならない新たな研究課題が導出された。今後は上記で得られた課題を踏まえ、関連する研究成果を継続的に発表していく予定である。
分子複合体システム内における信号伝達系としての興奮収縮連関の研究

骨格筋興奮収縮連関におけるT管と筋小胞体(SR)との間での信号伝達機構やSRからのCa^<2+>放出機構を明らかにするため、本研究ではこの信号伝達機構を内在性因子間のチェインリアクションとして捉えるために、因子の同定とその役割の解析を行った。SRCa^<2+>チヤネルはスチルベン誘導体のDIDSにより活性化され、その結合因子はSRの30kDaタンパク質(30k)であった。30k周辺での分子構築を生化学的に調べた結果、30kはカルセケストリン(CSQ)、ジヤンクチンといったチヤネル制御因子と複合体を成してSRCa^<2+>チャネルを制御していることが分かった。30kの部分アミノ酸配列はミトコンドリアのADP/ATP交換輸送体(AAT)とほぼ同一であった。マーカー酵素アッセイと抗体反応より、この30kはミトコンドリアの混在ではなく、確かにSRに存在することがわかった。また、AATの抗体や阻害剤のアトラクチロシドやCu-フェナンスロリンがSRCa^<2+>チヤネル活性に影響を及ぼすことから、このタンパク質の興奮収縮連関における重要性が確認できた。また、ウサギ骨格筋AATのcDNAのクローン化に成功し、発現させたAATはCSQと結合した。以上のことから、30kはAATと同一であることが確認された。これとは別に、興奮収縮連関における内在性因子の役割を調べるための系として、骨格筋からT管とSRが結合した膜複合体(トライアド)を用いてT管に脱分極刺激を与えたときのSRからのCa^<2+>放出(DICR)を測定する系を確立した。この系を用いて、他の組織でCa^<2+>動員を引き起こす細胞内メッセンジャーであるcyclicADP-ribose(cADPR)とIP3が、脱分極刺激下でCa^<2+>放出量を増大させたがカフェインによるCa^<2+>放出はcADPRのみが増強を起こした。つまりcADPRと1P3はどちらもチヤネルをより開きやすくさせるが、その作用点は異なると考えられた。更に、cADPRはカルモジュリンとの協同的な制御であることが分かった。SRCa^<2+>チヤネルはスチルベン誘導体のDlDSにより活性化され、その結合因子はSRの30kDaタンパク質(30k)であった。30k周辺での分子構築を生化学的に調べた結果、30kはカルセケストリン(CSQ)、ジャンクチンといったチヤネル制御因子と複合体を成してSRCa^<2+>チャネルを制御していることが分かった。マーカー酵素アッセイと抗体反応より、この30kはミトコンドリアの混在でなく、確力にSRに存在することがわかった。また、AATの抗体や阻害剤のアトラクチロシドがSRCa^<2+>チヤネル活性に影響を及ぼすことから、このタンパク質の興奮収縮連関における重要性が確認できた。以上のことから、30kはAATとおそらく同一であろと考えられた。これとは別に、興奮収縮連関における内在性因子の役割を調べるための系として、骨格筋からT管とSRが結合した膜複合体(トライアド)を用いてT管に脱分極刺激を与えたときのSRからのCa^<2+>放出(DlCR)を測定する系を確立した。これを用いて、他の組織でCa^<2+>動員を引き起こす細胞内メッセンジャーであるcyclicADP-ribose(cADPR)とIP3が、脱分極刺激下でCa^<2+>放出量を増大させたがカフェインにおよるCa^<2+>放出はcADPRのみが増強を起こした。つまりcADPRとlP3はどちらもチヤネルをより開きやすくさせるが、その作用点は異なると考えられた。更に、cADPRカルモジュリンとの協同的な制御であることが分かった。

マーカー酵素アッセイと抗体反応より、この30kはミトコンドリアの混在ではなく、確かにSRに存在することがわかった。また、AATの抗体や阻害剤のアトラクチロシドやCu-フェナンスロリンがSRCa^<2+>チヤネル活性に影響を及ぼすことから、このタンパク質の興奮収縮連関における重要性が確認できた。また、ウサギ骨格筋AATのcDNAのクローン化に成功し、発現させたAATはCSQと結合した。以上のことから、30kはAATと同一であることが確認された。これとは別に、興奮収縮連関における内在性因子の役割を調べるための系として、骨格筋からT管とSRが結合した膜複合体(トライアド)を用いてT管に脱分極刺激を与えたときのSRからのCa^<2+>放出(DICR)を測定する系を確立した。この系を用いて、他の組織でCa^<2+>動員を引き起こす細胞内メッセンジャーであるcyclicADP-ribose(cADPR)とIP3が、脱分極刺激下でCa^<2+>放出量を増大させたがカフェインによるCa^<2+>放出はcADPRのみが増強を起こした。つまりcADPRと1P3はどちらもチヤネルをより開きやすくさせるが、その作用点は異なると考えられた。更に、cADPRはカルモジュリンとの協同的な制御であることが分かった。骨格筋興奮収縮連関におけるT管と筋小胞体(SR)との間での信号伝達機構やSRからのCa^<2+>放出機構を明らかにするため、本研究ではこの信号伝達機構を内在性因子間のチェインリアクションとして捉えるために、因子の同定とその役割の解析を行った。SRCa^<2+>チヤネルはスチルベン誘導体のDIDSにより活性化され、その結合因子はSRの30kDaタンパク質(30k)であった。30k周辺での分子構築を生化学的に調べた結果、30kはカルセケストリン(CSQ)、ジャンクチンといったチヤネル制御因子と複合体を成してSRCa^<2+>チャネルを制御していることが分かった。30kの部分アミノ酸配列はミトコンドリアのADP/ATP交換輸送体(AAT)とほぼ同一であった。これとは別に、骨格筋からT管とSRが結合した膜複合体(トライアド)を用いてT管に脱分極刺激を与えたときのSRからのCa^<2+>放出(D1CR)を測定する系を用いて、他の組織でCa^<2+>動員を引き起こす細胞内メッセンジャーであるcyclicADP-ribose(cADPR)とIP3が、脱分極刺激下でCa^<2+>放出量を増大させたがカフェインによるCa^<2+>放出はcADPRのみが増強を起こした。
自己結膜組織幹細胞を利用した再生角膜の移植の開発

我々はドナーヒト眼球ならびに白色家兎眼球より角膜上皮と結膜上皮を採取し、培養することに成功した。また、角膜上皮および結膜上皮よりスフェアー法と呼ばれる浮遊培養法により、未分可な組織幹細胞を採取することに成功した。これらの細胞塊は神経幹細胞マーカーネスティンに陽性で、細胞増殖マーカーのBrDUの取り込みが盛んであり、通常の細胞よりも増殖能および未分化能を有していることを証明した。結膜上皮細胞を羊膜上で培養することにより、重層化した細胞シートを作成することに成功した。また、この再生結膜上皮シートを、角膜上皮除去後に混濁した白色家兎の角膜に移植を行うことにより、角膜透明性を維持させることに成功した。この結果により結膜上皮シートの角膜再生治療に有用であることが示唆された。本邦における提供角膜数は欧米と比較して、約20分の1と圧倒的に不足しており、角膜不足の解決策として全世界的に人工角膜の開発に期待がかかっている。角膜の部分的再生として、培養ヒト角膜上皮シートが我々のグループを含めて国内外のいくつかの施設で臨床的に移植されている。また角膜以外の組織である結膜や口腔粘膜上皮を用いた自己培養組織を用いた移植も行っているが、移植後には細胞が徐々に疲弊するため、あらたな細胞を供給する必要がある。幹細胞は、移植後の細胞供給源となりうるため、角膜以外の自己幹細胞を用いた角膜再生に期待がかかっているが、現時点では検討されていない。本研究では、角膜に最も近い組織である結膜由来の自己幹細胞を選択的に採取し、角膜上皮の再生に利用することを目的としている。本邦では、ドナー由来の角膜ならびに眼組織を研究に用いることは倫理的に困難であることから、まず動物眼由来の組織を用いて研究を行った。眼球が比較的大きい、家兎の角膜上皮ならびに結膜上皮を採取し、培養することに成功した。角膜上皮と結膜上皮ではムチンの産生など、その働きがことなるが、両者とも通常の上皮細胞用培養液で培養ならびに凍結が可能であることを証明した。本邦における提供角膜数は欧米と比較して、圧倒的に不足しており、角膜不足の解決策として人工角膜の開発に期待がかかっている。更に本年度は、細胞シートを作成するために、まず通常の培養結膜細胞を用いてシートを作成した。羊膜上で結膜細胞をair lifting法で培養することにより、重層化した細胞シートを作成することに成功した。慢性的な提供角膜不足を解消するために、角膜の部分的再生として、培養ヒト角膜上皮シートが我々のグループを含めて国内外のいくつかの施設で臨床的に移植されている。また角膜以外の組織である結膜や口腔粘膜

上皮を用いた自己培養組織を用いた移植も我々は行っているが、移植後の細胞の疲弊のため、再混濁に至ることがあり、あらたな細胞を供給する必要がある。幹細胞は、移植後の細胞供給源となりうるため、角膜以外の自己幹細胞を用いた角膜再生に期待がかかっているが、現時点では検討されていない。本研究では、角膜に最も近い組織である結膜由来の自己幹細胞を選択的に採取し、角膜上皮の再生に利用することを目的としている。我々はドナーヒト眼球ならびに白色家兎眼球より角膜上皮と結膜上皮を採取し、培養することに成功した。角膜上皮と結膜上皮ではムチンの産生など、その働きがことなるが、両者とも通常の上皮細胞用培養液で培養ならびに凍結が可能であることを証明した。また、角膜上皮および結膜上皮よりスフェアー法と呼ばれる浮遊培養法により、未分可な組織幹細胞を採取することに成功した。これらの細胞塊は神経幹細胞マーカーネスティンに陽性で、細胞増殖マーカーのBrDUの取り込みが盛んであり、通常の細胞よりも増殖能および未分化能を有しでいることを証明した。更に本年度は結膜上皮細胞をair lifting法で羊膜上で培養することにより、重層化した細胞シートを作成することに成功した。また、この再生結膜上皮シートを、角膜上皮除去後に混濁した白色家兎の角膜に移植を行った。方法としては混濁した角膜上皮を摘出をして、その上から結膜上皮再生シートを広げて10-0ナイロン糸にて縫合し移植を行った。術後1か月の間、角膜は透明性を維持し、上皮欠損は認められなかった。現在、結膜幹細胞を用いた再生上皮シートを移植する研究も進行中である。
前癌状態である扁平苔癬の発現とHCVによるインスリン抵抗性獲得との関連

わが国における肝臓癌の95%以上は、B型肝炎ウイルスやC型肝炎ウイルスの持続感染が原因です。これらの肝炎ウイルスは、肝臓の病気だけではなく、さまざまな肝臓病以外の病気も起こしてくることがわかっています。皮膚や粘膜に現れる扁平苔癬もその一つです。本研究を通じて、C型肝炎ウイルスに感染している扁平苔癬患者はインスリン抵抗性が高いこと、インスリン抵抗性の高いC型肝炎ウイルス関連の口腔癌は重複癌を発症しやすいことがわかりました。インスリン抵抗性とは、インスリン濃度に見合った作用が得られない状態を指します。C型肝炎ウイルス感染者は、肝臓病だけでなく、扁平苔癬や口腔癌、そして重複癌について注意深く経過観察する必要があります。【背景と目的】C型肝炎ウイルス(HCV)感染は,慢性肝障害や肝細胞癌の発生に密接に関与する一方で様々な肝疾患以外の重篤な疾患の発症にも関与している(いわゆる肝外病変)。皮膚や粘膜に発現する慢性の炎症性角化病変である扁平苔癬も,HCVの肝外病変の一つである。近年,C型慢性肝炎では,他の肝疾患患者に比べてインスリン抵抗性が強く,HCV持続感染者が糖尿病を発症するリスクが高いことを報告した(3.6倍)。本年度の研究では,C型慢性肝疾患患者における肝外病変発現率とインスリン抵抗性との関連を検討することを目的とした。【対象】1988年4月2005年8月までに久留米大学消化器病センターを初めて受診した慢性肝疾患患者105,984名のうち2006年4月までに定期通院している生存患者で,肝外病変の精査が行えた87名。【方法】1.扁平苔癬の検索,2.肝疾患の検索(問診聴取後,血液生化学検査並びに肝炎ウイルスマーカー検索後に肝疾患の病態把握を実施),3.糖尿病の検索(食事や運動量の問診聴取後,身長・体重測定,BMI,空腹時血糖,HbAlc,血清インスリン値,Homeostasis modelassessment(HOMA)-IR算出),4.その他の肝外病変の検索(シェーグレン症候群,甲状腺機能異常,関節リウマチ,肝外悪性腫瘍の有無)。【結果】肝外病変の有病率は以下の通りである:扁平苔癬19.5%,糖尿病21.8%,高血圧症28.8%,甲状腺機能異常20.7%,肝外悪性腫瘍9.2%、また,対象患者87名のインスリン値は23.3±42.0μU/L,HOMA-IR値は7.1±18.8と高値を示した。扁平苔癬を有した17名の病変発現部位は,口腔粘膜(頬粘膜)が最も多く,膣粘膜,咽頭粘膜に及んでいた。扁平苔癬を合併するHCV感染者と扁平苔癬を合併しないHCV感染者においてインスリン抵抗性に差異が認められるのかどうかを次年度検討する。研究1【目的】C型肝炎ウイルス(HCV)は,扁平苔癬を引き起こすことが知られている。本研究では,C型慢性肝疾患患者における扁平苔癬発現率とインスリン抵抗性との関連を検討。【対象】1988年4月-2005年8月までに久留米大学病院を初めて受診した慢性肝疾患患者105,984名のうち2006年4月までに定期通院している生存患者で,肝外病変の精査が行えた87名。【方法】扁平苔癬の検索,肝疾患の検索,糖尿病の検索,その他の肝外病変の検索。【結果】肝外病変の有病率は以下の通り:扁平苔癬19.5%,糖尿病21.8%,高血圧症28.8%,甲状腺機能異常20.7%,肝外悪性腫瘍9.2%。対象患者87名のインスリン値は23.3±42.0μU/L,HOMA-IR値は7.1±18.8と高値を示した。対象者のうち,扁平苔癬の合併を認めた17名(グループA)と合併のない70名(グループB)について検討すると,グループAはグループBに比べて,喫煙歴,高血圧,肝外悪性腫瘍罹患率,インスリン値,HOMA-IRが有意に高かった。扁平苔癬の発現部位は,口腔(頬粘膜76.5%,下唇35,3%,上唇11.8%,歯肉5.9%,舌5.9%)が最も多く,下肢皮膚23.5%,上腕皮膚5.9%,体幹皮膚11.8%,咽頭粘膜5.9%,膣粘膜5.9%。研究2【目的】歯科治療上の感染予防では,肝炎ウイルスへの対策が重要である。本研究では,歯科医療従事者の肝炎ウイルス感染を調査。【方法と対象】歯科医療従事者141名に問診を行なった後,HBs抗原,HBs抗体,HBc抗体,H)

CV抗体,HBe抗原,HBe抗体,HBV DNA量,IgM-HBc抗体,HCV RNA定性を測定。【結果】HBs抗原陽性,HCV抗体陽性者はいなかったが,HBs抗体陽性率,HBc抗体陽性率は,各々51.8%,12.1%。HBc抗体陽性率は加齢に伴い増加し,医療従事年数が長くなるほど増加。B型肝炎ワクチンの接種経験者68名中,HBs抗体陽性者は51名(75.0%)。ワクチン未経験者63名中HBs抗体陽性者は17名(27%)で,17名のうち15名はHBc抗体が陽性。【結論】B型肝炎ワクチン接種者は,HBV感染に対する高い防御率を示した。研究1【目的】C型肝炎ウイルス(HCV)は、扁平苔癬をはじめとした肝外病変を引き起こす。本研究では、HCV感染に関連する重複癌とインスリン抵抗性との関連を検討した。【対象】1992年1994年に久留米大学を初めて受診加療した口腔扁平上皮癌60例。【方法】(1)多重複癌の検索方法:上部消化管、腹部エコー、生化学検査等の検査。重複癌発生有無は、カルテ調査と全診療科から提出された病理組織診断の確認。(2)多重複癌発症の観察期間:初診日から最終再来日(2008年10月17日直近日)。【結果】対象60例における重複癌発生率は35%(21/60)、HCV抗体陽性率は26.7%(16/60)。HCV抗体陽性者における重複癌発生率(62.5%)は、HCV抗体陰性者(25%)よりも有意に高率であった。HCV感染者の重複癌として最も多く認められた臓器は肝臓であった。対象者60例をグループ1(重複癌あり、HCV感染あり)、グループ2(重複癌あり、HCV感染なし)、グループ3(重複癌なし、HCV感染あり)、グループ4(重複癌なし、HCV感染なし)に分けると、グループ1はグループ4に比べ有意にインスリン抵抗性が高率であった。HCV感染者には、インスリン抵抗性の測定を実施すると共に、肝外病変のチェックが必要である。研究2【目的】肝炎ウイルス感染患者が、歯科医療機関で肝疾患の病歴を申告しているかどうかを調査。【対象と方法】対象は、当大学病院消化器病センターを受診中のウイルス性肝疾患患者209名。医師と患者が無記名でアンケートに回答。【結果】感染者であることをいつも申告する患者の割合は59.8%、申告しない患者は28.2%。肝臓専門医は肝疾患患者に歯科治療への対処方法について助言を行うべきである。さらに、歯科医療従事者がスタンダードプレコーションを実施する一方で、院内感染対策を推奨し、援助するための国による適切な措置が望まれる。
非線形現象の逆問題

本研究課題の目的は、非線形問題に対し、逆問題の視点により観測データから非線形性や支配方程式を決定するスキームの開発と応用にあった。この目的に沿った研究テーマの1つとして、平成15年度より平成17年度まで、移流拡散方程式の移流項をトレーサーの観測データから定める逆問題を研究し、2次元定常移流拡散方程式に対しては、その移流項は方程式の解の深さ一定のところでの値とフラックスから一意的に定まることを証明し、かつ移流項を再構成する方法を確立した。この再構成のステップは(1)観測データを実軸上の関数とみなし、これを解析接続して虚軸上のデータを得る(2) (1)で得られたデータからMarchenko型積分方程式を作り、その解から、明示的な形で移流項を定めるの2段階からなっていた。上のステップの(2)に伴って発見した形はJaulentとJeanが1970年代前半に研究したエネルギー依存Schrodinger方程式の逆散乱問題(散乱データからポテンシャルの組を定める問題)に対しても有効であることがわかり、同方程式に対する散乱データを実現するポテンシャルの明示式が得られた。この結果、Jaulentによるポテンシャルの再構成法は著しく単純化され、逆散乱公式が確立された。また、さらにMarchenk型積分方程式の解の精密な解析を行うことにより、与えられた実軸上の関数がエネルギー依存Schrodinger方程式の散乱データであるための必要十分条件を得ることに成功した。以上の研究により、Marchenko逆散乱理論が、ある種の逆周題に対する汎用性をもった1つのスキームとして一般化されることが明らかになった。本研究の目的は非線形問題に対し,逆問題の視点により観測データから非線形性や支配方程式を決定するスキームの開発と応用にある.研究初年度にあたり次の問題を考察し,記載の結果を得た.1.生物個体数モデルの非線形の動力学を定める問題生物個体数モデルの非一様な増殖率が与えられたとき,パッチの中心個体数とパッチの大きさの関係を観測することにより,その生物の増殖の非線形の動力学を定める問題を考察し,次の結果を得た:(1)任意に与えられたパッチの中心個体数とパッチの大きさの関係を実現する動力学が存在する.(2)そのような動力学の自由度は有限偶数の任意性(自由度)を持ち,その次元は増殖率の非一様性によって定まる.(3)特に増殖率がパッチに関し一様である場合には動力学は一意に定まる.2.温度分布から海洋循環を推定する問題海洋循環による熱量の輸送の定常の状態を記述するモデル方程式を導くために境界条件について考察し,海洋循環が熱の輸送に及ぼす影響の基礎研究を行った.興味深い数理構造が観察され次年度以降の課題が得られた.3.個体数抑制モデルのカオス差分方程式の非線形性の生ずるカオスと非線形性の関係を調べるために,捕食による個体数抑制のモデルがどのよう年カオスを引き起こすのかについて研究し次の結果を得た:(1)捕食による個体数抑制モデルのカオスは大小2つのカオスが絡み合った形で実現される.(2)捕食の効果が大きくなると大きいカオスが消滅する現象が明確に説明できる.この研究も次年度以降の発展が期待される.本研究の目的は非線形問題に対し,逆問題の視点により観測データから非線形性や支配方程式を決定するスキームの開発と応用にある.今年度は次の問題を考察し,記載の結果を得た.1.温度の測定から流れを決定する問題海洋循環による熱量の輸送の定常の状態を記述するモデル方程式(流速を含む)を考察し,海洋循環が熱の輸送に及ぼす影響の定性的研究を行った.数学的には,この問題は1階の係数に流速に相当する項を持つ楕円型偏微分方程式をRobin境界条件のもとで解く問題であり,もとの問題に適応した適切な遠方での減少度のもとでFourier変換を用いて解くことができる.このことを踏まえて,次の問題が提唱される:

大気の温度と海水温の観測データから流速(海流の速度)を定めよ.数学的には,この問題は偏微分方程式の解の情報から方程式の1階の係数を定める問題として定式化される.本年度の研究によるこの問題に対する成果は次のようである:(1)偏微分方程式からFourier変換によって得られる実パラメータを1つ持つ常微分方程式の解のPovzner表現が得られた.(2)得られたPovzner表現の積分核と観測データは積分方程式の形で関連付けられる.この積分方程式は逆散乱問題におけるMarchenkoの方程式の複素共役線形になる.(3)上の積分方程式はRieszの理論の複素共役線形版を作る事により,Wiener-Hopfの技巧を駆使して解くことができる.2.個体数抑制モデルのカオス捕食による個体数抑制のモデルのカオスと周期軌道について研究し次の結果を得た:(1)捕食による個体数抑制モデルは大小2つのレベルの移行現象を引き起こす.(2)このモデルを記述する非線形項の停留点の個数が3ならばこのモデルの吸引周期軌道は3個以下である.次の2つの逆問題を研究し,記載の結果を得た.1.移流拡散方程式の移流項をトレーサーの観測データから定める逆問題2次元定常移流拡散方程式の解の深さ一定の場所における値とフラックス(以下,観測データという)から,方程式の(深さ方向にのみ依存する)移流項を定める逆問題を考察し,移流項は観測データから一意的に定まることを証明し,かつ,移流項を再構成する方法を確立した.再構成法は次のステップからなる.(1)観測データを実数軸上の関数とみなし,これを解析接続して虚数軸上のデータ(以下,散乱データという)を得る.(2)散乱データから複素形マルチェンコ方程式(積分方程式)を作り,その解を求める.(3)ステップ(2)で得られた解をタウ関数とみてハミルトニアンを求めると,これが移流項を与える.このステップのうち(2)および(3)は逆散乱問題の解法と深くかかわる.2.エネルギー依存ポテンシャルを持つシュレディンガー方程式の逆散乱公式相対論的量子力学の方程式であるクラインー・ゴードン方程式と古典的(非相対論的)量子力学の方程式であるシュレディンガー方程式を包括的に扱う方程式のポテンシャル(2つの関数の組)を散乱データから再構成する問題(逆散乱問題)を考察し,簡潔で直接的な再構成公式を発見した.この公式は,変換核を従来のものの積分形に取り直し,キーとなる積分方程式の解が単位となる積分方程式の解の既知関数倍となることを洞察することにより得られた.この操作においてはポテンシャルの微分可能性を仮定する必要がなく,得られた公式は従来得られていた間接的な再構成法を著しく改良するものである.本研究課題の目的は、非線形問題に対し、逆問題の視点により観測データから非線形性や支配方程式を決定するスキームの開発と応用にあった。この目的に沿った研究テーマの1つとして、前年度までの研究で、2次元定常移流拡散方程式に対しては、その移流項は、方程式の解の深さ一定のところでの値とフラックスから一意的に定まることを証明し、かつ移流項の明示式を導出した。
ダークマターの測定とその構造の解明

青木は、E. D'Hoker, D.P. Phongとともに、非対称オービフォルド真空で超弦理論の2次までの摂動論の結果を具体的に求め、宇宙項がゼロで無いことを示し、さらにその物理的な性質を調べた.また,初期宇宙ではどのような状況で局所平衡が成り立つかが重要になるが, D. Kusnezovとともに、どのような状況で局所平衡が成り立つのかを第一原理よりΦ4乗理論で調べた.岩崎は、アクシオン星と中性子星の衝突が、観測されているガンマー線バーストや、超高エネルギー宇宙線の発生源でありうることを指摘した。その中性子星コアー内部の状態は、核子ではなくカラー強磁性と呼ばれるクォーク物質状態で、SU(3)ゲージ対称性が破れたものになっている。カラー強磁性状態では、カラー磁場は自然発生し、それに巻きつくグルーオンは量子ホール状態を作ることで安定化していることも明らかにした。肥川は、モヤル積を使った可積分系について、非可換ゼロ曲率方程式からソリトンを導き、系列のソリトンが無限個存在することを示した。また、モヤル量子化法での基本になる真空状態を明確化し、拘束がある場合の量子化の問題点も明らかにした。さらに、5次元重力の厳密解に関して逆散乱法を用いて、ワイル解が無限個の解を持つこと、および電場が存在する場合の定常解の場合に関しても無限個の解を持つことを示し、その具体的な標識を求めた。表は、吉田と中村とともに、多重重力レンズ効果が連続極限で幾何光学の方程式に帰着すること、また亀淵とともに、量子化された相対論的な場の理論における場を対角化する表示を求めた。宇宙に存在するダークマターの起源を調べるには、初期宇宙における素粒子反応についての考察が必要となるが、そのためには有限温度での非平衡現象を取り扱うことになる。その理論的準備として、本研究では古典的(非量子論的)φ^4理論とEPU模型の非平衡現象を第一原理から取扱い、それらの比熱・音速・熱伝導度等を求め、さらに局所平衡の破れ・線形応答の破れ等について定量的に議論した。また、2次元4体フェルミ理論をモデルにとって束縛状態(メソン)の質量差を定量的に求め、その構造の理解のためにmeson mass susceptibilityという新しい物理量を導入した。ダークマターの候補と考えられているアクシオン観測問題として、アクシオンが作るボソン星と中性子星の衝突によるガンマー線放出を議論し、これがガンマー線バーストの起源の候補となりうることを示し、ガンマー線バーストの構造を詳しく分析することによってアクシオン存在の可否を調べられる可能性があることを明らかにした。重力量子化の問題を新しい観点から考察するために、モヤル量子化法について調べた。その結果、調和振動子系をモヤル量子化した場合2種類の真空が存在する可能性を発見した。また戸田格子系をモヤル量子化したときには、固有値方程式の虚数部分がこの系の保存量を与えることを示した。宇宙に存在するダークマターの量を測定するために、銀河等の天体が背景銀河からの光に及ぼす重力レンズ効果の影響を、モデル宇宙を用いて定量的に調べた。この研究によって宇宙における重力レンズ効果の影響の様子が解明され、実際の宇宙に存在するダークマター量を観測データから求められることが期待される。これは次年度に向けて研究が継続中である。モヤル量子化のワイル対応では、関数と演算子の対応を考えることができるが、演算子はワイル順序に並んだものに対応する。量子論で用いられる、演算子の正規順のものとの比較を行い、無限大の定数倍を除き両者が等しいことを示した(論文1)。拘束系のモヤル量子化を議論し、スター積に拘束系の影響がどう現れるかを示した(論文2)。多くのソリトン方程式が非可換ゼロ曲率方程式から導けることを示した(論文3)。

非平衡系では平衡状態の場合とは物理量の振る舞いが異なる。そこで古典的格子系の非平衡な状態の振る舞いを調べ、その輸送に関する物理量、ミクロ的視点からの位相空間の次元の消失、などの物理量の振る舞いを明らかにした(論文4、5)。超対称性のない場合の弦理論の宇宙項の節動論的計算を行った。特にオービフォルド型真空での2ループ次の宇宙項への寄与を求め、現在論文を作成中である。中性子と陽子の数が同じで質量数が2の倍数の原子核では、その励起状態として核の中でヘリウムの核を作り、それらの集まりとみなせる状態がある。そのクラスターのボーズ凝縮の可能性を場の理論を用いて解析した。凝縮状態の上に渦糸敵な励起状態の存在を探し、その質量・変形等を調べた。2層量子ホール状態におけるアイゼンシュタインの実験結果を、その状態にあらわれるスキルミオンの効果を考慮して解析し、ゼロ電圧でのトンネル伝導率が有限になること、および実験で示された横磁場に対するトンネル伝導率の振る舞いをよく説明できることを明らかにした(論文6)。非一様宇宙における光の伝播を調べ、多数の銀河による多重重力レンズ効果の増光効果を表す係数が満たす微分方程式を求め、その連続極限を解析的に調べた。また同様の効果を数値シュミレーションで検証し、解析的な結果を数値的に検証し、現在論文を作成中である。初期宇宙の物理をはじめとして、様々な物理現象の解析において通常局所平衡が成り立つことは仮定されている。しかし、非平衡状況ではこの仮定が成り立つ保証はない。局所平衡が成り立たなければ温度の概念さえ曖昧となり、解析には注意を要する。具体的な物理系を用いて第一原理より、局所平衡が破れることを示し、どのように破れるのかを定量的に求めた。また、それとともに線形応答も破れることを示し、これについても定量的に破れ方を求めた。さらに、それが位相空間に物理的自由度の数の減少という微視的な視点からどのように理解できるかを明らかにした。(青木)ガンマー線バーストや超高エネルギー宇宙線の発生メカニズムとして、宇宙暗黒物質の候補であるアクシオンが星を作り、それが中性子星と衝突することで発生するというモデルを提案し解析した。その解析で、中性子星の構造である核物質、あるいはクォーク物質の状態が重要な役割を果たすことを示した。それゆえ、クォーク物質の状態を調べ、そこにあらたにカラー強磁性相の存在の可能性を指摘した。そこでは、グルオンが量子ホール状態を作り強磁性相が安定的に存在していることを明らかにした。(岩崎)Moyal量子化における様々な問題を調べ、ヒルベルト空間の存在を仮定しなくてもよいこと、演算子量子化の場合の順序づけの問題との関連、真空の存在の問題等について調べた。またMoyal量子化を戸田方程式や非可換ゼロ曲率方程式に適用した。(肥川)非一様宇宙における観測データの解析に当たって、その宇宙における物質分布の非一様性が光の伝播に及ぼす影響を、多重重力レンズ効果法を用いて調べ、通常の幾何光学の方法との関連を調べた。幾何光学の方法では宇宙方程式を解く必要があるが非一様宇宙に対応する方程式の解は得られていない。一方多重重力レンズ法では宇宙方程式を解くことなく、非一様性が光の伝播に与える影響を解析することが可能となる利点があることを示し、得られた結果と幾何
機能不全リボソームを選択的に分解する新たな品質管理機〓

昨年報告したように、出芽酵母において活性の弱い変異型リボソームタンパク質Rp128(K110A)が分解される際、K110A変異体自身がユビキチン化を受けて単体として分解される可能性が高くなった。リボソーム全体が品質管理を受けていることを示すことが難しいため、このRp128変異体の研究は中断することとした。リボソームの分解に関わる結合パートナーはPaf1複合体の影に隠れている可能性があるため、Paf1欠損株において、MMS1-Flag,CRT10-HAの二段階で免疫沈降し、質量分析を行った。その結果、rvb1,rvb2(chromatin remodeling complex)などのタンパク質が同定された。CRT10はDNA損傷時にリボヌクレオチド還元酵素の発現を制御している。CRT10pはストレス時の損傷リボソームの分解とdNTP量の調節という2つの役割を使い分けており、それぞれ異なる基質を認識していると考えられる。本研究においてCRT10との結合が明らかになったPaf1複合体やRvb1-Rvb2複合体もDNA修復に関与することが知られている。放射線や活性酸素など、リボソームを破壊するストレスはDNAも傷つける可能性が高く、このMMS1-CRT10複合体は、ストレス時に複数の品質管理経路を司っていると考えられる。機能不全リボソームの異常が認識される仕組みを解明することはできず、研究期間内の論文作成に至らなかった。しかし、リボソームの品質管理に重要なタンパク質のひとつを発見し、その複合体の構成を詳細にまとめて報告する予定である。それにより、将来的にDNA/RNAを包含した総合的なストレス応答反応の解明につながる可能性がある。一年目は、出芽酵母ノックアウトライブラリーを用いて、K110A-GFPを蓄積する株をGFP蛍光を指標に探索した。しかし非必須遺伝子約6000株を解析したが、明確にK110A-GFPを安定化する変異体は得られなかった。そのため蛋白質分解の下流から解析することに方針を変更した。主な蛋白質分解経路には、オートファジーとユビキチン・プロテアソーム系がある。オートファジー必須遺伝子欠損株ではK110A変異体は分解されたが、プロテアソーム温度感受性株ではK110A-GFPが安定化した。このことからK110A変異体はユビキチン・プロテアソーム系によって分解されていると考えられるが、K110A変異体自身がユビキチン化されている様子はみられなかった。そこでRp128-FlagをFlag抗体で免疫沈降し、共沈降する蛋白質のユビキチン化をウェスタンブロットにより調べた。その結果、野生型Rp128-Flagで免疫沈降した際には見られないユビキチン化バンドが、K110A-Flagで免疫沈降した場合には強く現れていた。このユビキチン化蛋白質は、K110A変異体自身ではなかった。K110A変異体が分解されるに先立って、まず同一複合体内の別の蛋白質がユビキチン化され、それがシグナルとなって全体が分解されている可能性がある。申請書を提出した時点では、翻訳伸長阻害剤シクロヘキシミドによってK110A変異体が安定化するという結果があったが、その後この結果は再現性が低いことがわかった。しかし、K110A変異体を含むリボソームがユビキチン化を受けていることから、やはりリボソーム複合体として認識、分解されていると考えられる。今後、このユビキチン化蛋白質を精製、質量分析によって同定し、分解の過程を明らかにする予定である。昨年報告したように、出芽酵母において活性の弱い変異型リボソームタンパク質Rpl28(K110A)が分解される際、K110A変異体を含むリボソームの一部がユビキチン化されるという結果を得ており、これはリボソーム全体が以上を認識、分解されると考えていた。しかし変性状態で免疫沈降してユビキチン化を検出したところ、K110A変異体自身がユビキチン化を受けている可能性が高くなった。リボソーム全体が品質管理を受けていることを示すことが難しいため、このRpl28変異体の研究はここで中断することとした。25S rRNA,18SrRNAは選択的に分解されることが知られている(Nonfunctional rRNA decay:NRD)。当研究室では、E3ユビキチンライゲース複合体の構成因子である、MMS1pとRtt101pが25S rRNAのNRDに必要であること、機能不全リボソームが分解に先立ってユビキチン化されることを明らかにしているが、機能不全リボソームがどのように認識されるのかという重要な点が不明だった。研究目標である機能不全リボソーム分解機構の解明のため、この基質認識メカニズムの研究に取り組んだ。まず、MMS1pとの結合が報告されているたんぱく質の中から探索したところ、CRT10遺伝子欠損株では25S rRNAのNRDが阻害されていることがわかった。MMS1遺伝子欠損株と同様に、CRT10遺伝子欠損株では機能不全リボソームのユビキチン化が減少していたことから、このCRT10pが基質認識サブユニットであると考えられる。しかしCRT10pとリボソームとの直接の結合はほとんどみられず、何らかの因子が介在していると考えられたことから、CRT10pと特異的に結合するたんぱく質を探索した。

CRT1OpやMMS1p、Rtt101pは発現量が非常に低いことから、MMS1-Flag,CRT10-HAの二段階で免疫沈降し、質量分析を行った。その結果、いくつか興味深いたんぱく質が同定されており、CRT10pとリボソームをつなぐ仕組みが解明されるものと期待される。昨年報告したように、出芽酵母において活性の弱い変異型リボソームタンパク質Rp128(K110A)が分解される際、K110A変異体自身がユビキチン化を受けて単体として分解される可能性が高くなった。リボソーム全体が品質管理を受けていることを示すことが難しいため、このRp128変異体の研究は中断することとした。リボソームの分解に関わる結合パートナーはPaf1複合体の影に隠れている可能性があるため、Paf1欠損株において、MMS1-Flag,CRT10-HAの二段階で免疫沈降し、質量分析を行った。その結果、rvb1,rvb2(chromatin remodeling complex)などのタンパク質が同定された。CRT10はDNA損傷時にリボヌクレオチド還元酵素の発現を制御している。CRT10pはストレス時の損傷リボソームの分解とdNTP量の調節という2つの役割を使い分けており、それぞれ異なる基質を認識していると考えられる。本研究においてCRT10との結合が明らかになったPaf1複合体やRvb1-Rvb2複合体もDNA修復に関与することが知られている。放射線や活性酸素など、リボソームを破壊するストレスはDNAも傷つける可能性が高く、このMMS1-CRT10複合体は、ストレス時に複数の品質管理経路を司っていると考えられる。機能不全リボソームの異常が認識される仕組みを解明することはできず、研究期間内の論文作成に至らなかった。しかし、リボソームの品質管理に重要なタンパク質のひとつを発見し、その複合体の構成を詳細にまとめて報告する予定である。それにより、将来的にDNA/RNAを包含した総合的なストレス応答反応の解明につながる可能性がある。
高純度ヒトNK細胞の大量増殖法の開発

活性化NK細胞によるRosenbergらのLAK療法は一世を風靡したが単純な適用には限界があった.一方,VujanovicらはIL2単独刺激による粘着性NKの増殖法を開発した.このA-NKはPBMCの1-4%程度しか回収できないが,LAKより活性が一桁高く,1000倍に増殖できる.最近,彼らは末梢血幹細胞移植と併用している.NKはFcRを介する刺激で活性化と同時に顕著な細胞死を起こす.我々はPBLを固相化IgG(iIgG)で刺激してNKを活性化し,細胞死を克服すると同時に高回収率で分離精製する簡便な方法を開発した.細胞の操作は3つの過程よりなり,各過程で刺激培養条件を比較検討した.1.PBLの調整とiIgG刺激:刺激により,活性化と共に細胞死が起こったが後者は混在するMoおよび血清類に依存した.2.NKの粘着性獲得による精製:さらに,T細胞の共存によって抑制されるような細胞死があった.iIgG刺激で大部分のNKが粘着したため,T細胞を十分な時間共存させた後,分離除去することが出来た.3.活性化NKの回収:粘着NKは刺激開始6-8hで自然剥離し,1dcには残存Moの周囲でclusterを形成したが,このときさらに細胞死が起こった.自然剥離細胞を残存する粘着Moから分離回収して培養すると,細胞死は免れたが活性化率が著しく低下した.このMoの促進的効果はIL12で代替えできた.以上はFCSを用いたが,非働化新鮮自己血清で代替えできた.以上の検討より,PBMC中の大部分のNKを回収し,培養18日で1000倍程度に増殖する高純度高活性のNK増殖法が確立された.腫瘍免疫に於けるNKの役割は一意的には決められないようであるが,virus感染のfirst defense mechanismとして依然重要な細胞である.本法の治療的応用が期待される.活性化NK細胞によるRosenbergらのLAK療法は一世を風靡したが単純な適用には限界があった.一方,VujanovicらはIL2単独刺激による粘着性NKの増殖法を開発した.このA-NKはPBMCの1-4%程度しか回収できないが,LAKより活性が一桁高く,1000倍に増殖できる.最近,彼らは末梢血幹細胞移植と併用している.NKはFcRを介する刺激で活性化と同時に顕著な細胞死を起こす.我々はPBLを固相化IgG(iIgG)で刺激してNKを活性化し,細胞死を克服すると同時に高回収率で分離精製する簡便な方法を開発した.細胞の操作は3つの過程よりなり,各過程で刺激培養条件を比較検討した.1.PBLの調整とiIgG刺激:刺激により,活性化と共に細胞死が起こったが後者は混在するMoおよび血清類に依存した.2.NKの粘着性獲得による精製:さらに,T細胞の共存によって抑制されるような細胞死があった.iIgG刺激で大部分のNKが粘着したため,T細胞を十分な時間共存させた後,分離除去することが出来た.3.活性化NKの回収:粘着NKは刺激開始6-8hで自然剥離し,1dcには残存Moの周囲でclusterを形成したが,このときさらに細胞死が起こった.自然剥離細胞を残存する粘着Moから分離回収して培養すると,細胞死は免れたが活性化率が著しく低下した.このMoの促進的効果はIL12で代替えできた.以上はFCSを用いたが,非働化新鮮自己血清で代替えできた.以上の検討より,PBMC中の大部分のNKを回収し,培養18日で1000倍程度に増殖する高純度高活性のNK増殖法が確立された.腫瘍免疫に於けるNKの役割は一意的には決められないようであるが,virus感染のfirst defense mechanismとして依然重要な細胞である.本法の治療的応用が期待される.高純度NKの増殖法は計画書に示した以外に基礎的研究の材料としても有用である。固相化CD3刺激による大量培養でしばしばNKが増殖した。機序について検討した。健常人PBLを固相化OKT3(マウスIgG2a)上で培養すると大量のNKが粘着した。FCSを用いると全く活性化(CD25発現)が起こらず,AB血清(フィルター濾過)では過半が活性化した。FCSにヒトIgG製剤(7s成分96%)を血清相当に添加すると同様の活性化が起こったことから,血清中のIgGを介したCD16の架橋による活性化であることが示唆された。IgG単独であらかじめ固相化するばあい極めて微量で同等の効果が得られた。この方法について検討した。【1】固相化IgG(iIgG)へのNKの粘着:iIgG密度/刺激時間依存性で,2.5hで最強であり,3hから自然剥離が始まり6hで大部分が剥離した。2.5h以内の非粘着細胞の除去によりNKのpositive selectionができた(ここまでを初期刺激と呼ぶ)。【2】NKの細胞萎縮:初期刺激時のMo依存性に細胞萎縮が大量に起こった。FCS/Albumin/ABsの比較では後2者で強力であった。可溶性因子の不足やallo抗体によるADCCなどに注目する必要がある。以下FCSを用いた。CD16架橋による活性化では,増殖とactivation induced deathの経路が知られている。初期刺激時間に反比例する細胞萎縮が起こった。2.5hのT細胞の共存が必要と考えられた。

【3】活性化:iIgG密度/初期刺激時間依存性にCD16喪失が起こり活性化の必要条件であった。活性化には,さらに,濃度依存性にIL2が必要であった。【4】Cluster形成:活性化NKは刺激開始20h前後から残存Moの周囲にclusterを形成し,その中でblast化が起こった。T細胞の共存はcluster形成を促進したがNKの活性化は促進しなかった。暫定的にはT細胞の共存は2.5hが必要十分と考えられた。【5】活性化NKとMoの強い相互作用を認めた。IFN-γを介するIL12/NO産生の両面がありえ,Mo共存の意義について検討中である。活性化NK細胞によるRosenbergらのLAK療法は一世を風靡したが単純な適用には限界があった.一方,VujanovicらはIL2単独刺激による粘着性NKの増殖法を開発した.このA-NKはPBMCの1-4%程度しか回収できないが,LAKより活性が一桁高く,1000倍に増殖できる.最近,彼らは末梢血幹細胞移植と併用している.NKはFcRを介する刺激で活性化と同時に顕著な細胞死を起こす.我々はPBLを固相化IgGで刺激してNKを活性化し,細胞死を克服すると同時に高回収率で分離精製する簡便な方法を,次のような検討により開発した.1.PBMC/PBLのIL2単独刺激で得られるA-NKは少数だが,同時に固相化IgGで刺激すると大部分のNKが粘着した.2.刺激開始時に混在するMOおよび血清類に依存して1dcにNKの細胞死が起こった.MO3%程度,FCSが適切であった.3.刺激により一過性にCD16を喪失したNKがCD25を発現し,活性化の指標となった.4.刺激時にT細胞が共存すると1dcの細胞死が抑制され,2.5hの共存が必要十分であり,この時点で非粘着細胞を除去して高純度の粘着NKが得られた.5,粘着NKは刺激開始6-8hで自然剥離し,1dcには残存Moの周囲でclusterを形成したが,このときさらに細胞死が起こった.6.自然剥離細胞を残存する粘着Moから分離回収して培養すると,細胞死は免れたが活性化率が著しく低下した.このMoの促進的効果はIL12で代替えできた.7.以上はFCSを用いたが,非働化新鮮自己血清で代替えできた.以上の検討より,PBMC中の大部分のNKを回収し,培養18日で1000倍程度に増殖する高純度高活性のNK増殖法が確立された.腫瘍免疫に於けるNKの役割はー意的には決められないようであるが,virus感染のfirst defense mechanismとして依然重要な細胞である.本法の治療的応用が期待される.