hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
TrkBのリン酸化;側坐核における薬物依存習慣化の分子スイッチの機序解明と治療法

このパターンは側坐核での後期LTPを阻害し、側坐核が司る「目的指向性行動」の獲得を抑制する「分子スイッチ」として働く。その結果、側坐核と背外側線条体間のバランスが崩れ、「習慣」出力が優位になる(=依存を促進)。(2)NACは、この異常なTrkBリン酸化を是正することで側坐核の可塑性を正常化する。すると背外側線条体と側坐核間のバランスが修正され、結果として習慣化した薬物要求行動の出力を抑制する。これまでの成果として、TrkB各リン酸化部位に対するTATペプチドの作成に成功し、現在行動薬理学実験に取りかかっている。本研究グループはこれまでに、慢性コカイン投与歴のあるラットに急性にコカインを投与した際、側坐核TrkBにおいて、Shcが結合するチロシン残基516(以下、Y516)でのリン酸化が対照群に比べ有意に抑制されている一方、phospholipase C γ(PLCγ)が結合するチロシン残基817(同、Y817)のリン酸化は、対照群では殆ど誘導されないのに対し、慢性コカイン群では、急性コカイン投与以前から2倍以上の亢進を示すことを確認した。Y817のリン酸化は記憶の獲得に、Y516のリン酸化は記憶の統合に重要と推測されている。本研究グループのこれまでに、慢性コカイン投与後の側坐核では、急性コカイン誘導性のLTP早期相は亢進する一方、後期相は障害されていることを確認しており(Toda et al. J. Neurosci, 2009)、今回確認されたTrkBリン酸化のパターンとよく符号する。そこでTrkB各リン酸化部位に対するリン酸化TATペプチドを合成し、各部位の脱リン酸化を特異的に競合阻害することで、側坐核TrkBが関与すると予想される依存症行動の操作を試みた。残念ながら同ペプチドは期待された競合的阻害効果を示さなかった。また、コカイン依存行動を正常化するNーacetylcysteine(NAC)は、この異常なTrkBリン酸化を是正することで側坐核可塑性を正常化し、依存行動を正常化すると仮定したが、検討の結果NACは直接TrkB下流のシグナル伝達系には影響しなかった。両TrkBリン酸化部位に対する特異的な阻害剤はなく、またトランスジェニック動物では依存行動の検討は技術的に難しいため、上記仮説の薬理学的検証は現段階では困難となった。一方、TrkBシグナル伝達系は、NACに影響を受けるシグナル伝達系とは異なることから、新たな依存症治療の分子ターゲットとなりうる可能性が示唆された。当初の予定通り、依存症の治療候補薬であるN-acetylcysteine(NAC)に関し、TrkBリン酸化への影響を検討したが、NACの効果は同リン酸化を介したものではないことを確認した。一方、TATペプチドの微小注入実験では、microsurgeryの手技に問題があったことが判明し、実験手技の最適化を行った。そのため、行動実験は予定より遅延した。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は、昨年度施行できなかったY516とY817を標的としたTATペプチドの、コカイン誘導性行動への影響について、改めてTATペプチドの微小注入実験を行って、コカイン誘発性行動へのTrkBリン酸化の関与を検討する予定である。動物の購入飼育、実験の消耗品費用に計50万、国際学会出張費に計30万、人件費、謝金に計10万、その他(印刷費など)に計10万、総計100万を直接経費として計上する。
超分子ポリロタキサンを用いた成長因子活性亢進型骨補填剤の創製と骨再生療法の確立

1.ポリロタキサンの分子可動性調節と成長因子導入による血管ネットワーク形成の促進骨再生のみならず組織再生においては血管新生が重要である。そこで本研究では分子可動性の異なる硫酸化PRX基板にVEGFを表面導入し、分子可動性調節と成長因子の表面導入がヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVEC)のネットワーク化に与える影響について検討した。低分子可動性表面を持つPRXはHUVECの細胞増殖を促進し、高分子可動性表面を持つPRXはその増殖を抑制した。この低分子可動性PRX基材にVEGFを表面導入したところ、血管内皮細胞接着分子や血小板由来増殖因子の遺伝子発現量が増加し、HUVECが長く連なったネットワーク構造の形成が促進された。これらの結果はPRX表面の低分子可動性とVEGFの表面導入により血管内皮細胞のネットワーク化を効果的に促進したことを示唆している。2. β-シクロデキストリン誘導体を用いたmelatoninとの包接錯体形成による細胞内取り込み量と骨分化誘導能の評価melatonin (MLT)は主に松果体から分泌されるホルモンであり、近年では骨芽細胞分化誘導能を持つことが見出され、新たな骨再生法の手段として期待されている。しかし、MLTは難水溶性分子であるため水への溶解度の向上が骨再生応用への課題の一つとなっている。そこでPRXの構成成分であるβ-CDに着目した。β-CDは環状分子内面が脂溶性、外面は親水性という特異的構造を有している。高水溶性であるhydroxypropyl-β-CD (HP-β-CD)の添加によりMLT溶解量は濃度依存的に増加した。MC3T3-E1に対するHP-β-CD/MLT添加群はMLT添加群よりもMLT細胞内取り込み量が多く、ALP産生量や石灰化量が増加することが明らかとなった。今年度はポリロタキサンとVEGFによる血管ネットワーク形成に関する研究で成果を挙げることができ、論文発表および学会発表に至った。また、これまで研究を行なってきたBMP2に加え、新たな骨形成促進因子メラトニンをポリロタキサン構成成分であるβーシクロデキストリンと結合させることにより臨床応用できる可能性が開け、論文発表および学会発表に至った。平成29,30年度にはポリロタキサンとBMP2、siRNA、VEGF、メラトニン等を用いて、主に細胞生物学的手法により、これらが骨再生に有用であることを示してきた。しかし、in vivoでの骨再生に必要とされるポリロタキサンゲルの作製実験は行なっているが、実用には至っていない。平成31年度にはポリロタキサンゲルを作製し、それにこれまでの研究成果(BMP2、siRNA、VEGF、メラトニン等)を融合させin vivoでの骨再生実験を行いたいと考えている。超分子ポリロタキサン(PRX)の骨再生医療への応用を目指し以下の研究を行った。1.カチオン性ポリロタキサン/siRNA複合体による遺伝子サイレンシングを介した骨形成分化の促進BMP-2は骨形成を促進するが、BMP-2の作用により発現するnogginがBMP-2自身を不活性化することによる負の制御機構が知られている。そこでRNA干渉によるnogginの発現を阻害し骨形成能を上昇させることを考えた。siRNAを細胞内へ導入するためのキャリアとしてカチオン性の官能基を導入た分解性PRX (DMAE-SS-PRX)を開発した。MC3T3細胞を用いた実験ではリポフェクション法(リポフェクタミン)に比べ効率良くnogginほ発現を抑え、骨芽細胞への分化を促進した。分解性PRX (DMAE-SS-PRX)は内因性遺伝子の発現抑制に有効なsiRNAキャリアになり得ることが判明し、BMP-2との併用による骨再生治療への応用が期待される。2.硫酸化ポリロタキサン基材を用いた血管内皮細胞増殖因子の表面導入骨再生においても組織への新生血管侵入が重要になる。そこで硫酸化PRXを基盤とした血管内皮細胞の成熟化およびネットワーク化の促進を目的として新たな培養表面を設計した。具体的にはRhoファミリーを活性化し得る分子可動性の低い硫酸化PRXを用いてVEGF導入表面を作製し、分子可動性と表面導入したVEGFがヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVECs)のネットワーク化に与える影響について評価した。低い分子可動性を有したVEGF導入硫酸化PRX表面では細胞が長く連なったネットワーク構造を確認することができた。これらの結果は低い分子可動性とVEGFの表面導入による相乗的なRhoファミリーの活性が血管内皮細胞のネットワーク化を促進したことを示唆している。平成29年度は【研究実績の概要】で述べたポリロタキサン(PRX)による遺伝子サイレンシングおよび血管内皮細胞増殖因子(VEGF)表面導入の実験において成果を挙げる事ができ、その成果が骨再生医療に応用できる可能性が拡がった。また、PRXを基本骨格とした骨再生用担体の開発を行ってきたが、その成果発表には至っていない。この低分子可動性PRX

基材にVEGFを表面導入したところ、血管内皮細胞接着分子や血小板由来増殖因子の遺伝子発現量が増加し、HUVECが長く連なったネットワーク構造の形成が促進された。これらの結果はPRX表面の低分子可動性とVEGFの表面導入により血管内皮細胞のネットワーク化を効果的に促進したことを示唆している。2. β-シクロデキストリン誘導体を用いたmelatoninとの包接錯体形成による細胞内取り込み量と骨分化誘導能の評価melatonin (MLT)は主に松果体から分泌されるホルモンであり、近年では骨芽細胞分化誘導能を持つことが見出され、新たな骨再生法の手段として期待されている。しかし、MLTは難水溶性分子であるため水への溶解度の向上が骨再生応用への課題の一つとなっている。そこでPRXの構成成分であるβ-CDに着目した。β-CDは環状分子内面が脂溶性、外面は親水性という特異的構造を有している。高水溶性であるhydroxypropyl-β-CD (HP-β-CD)の添加によりMLT溶解量は濃度依存的に増加した。MC3T3-E1に対するHP-β-CD/MLT添加群はMLT添加群よりもMLT細胞内取り込み量が多く、ALP産生量や石灰化量が増加することが明らかとなった。今年度はポリロタキサンとVEGFによる血管ネットワーク形成に関する研究で成果を挙げることができ、論文発表および学会発表に至った。また、これまで研究を行なってきたBMP2に加え、新たな骨形成促進因子メラトニンをポリロタキサン構成成分であるβーシクロデキストリンと結合させることにより臨床応用できる可能性が開け、論文発表および学会発表に至った。ポリロタキサン(PRX)を基本骨格とした骨再生用担体の開発を引き続き行う。シクロデキストリン部に導入する荷電性官能基を硫酸基以外にも検討する予定である。また、BMP2以外の骨形成促進剤(シンバスタチン、メラトニンなど)とPRXとの複合体も検討、開発し、その骨再生への効果を検討する。平成29年に成果を挙げたVEGF表面導入の骨形成に及ぼす影響も検討する予定である。平成29,30年度にはポリロタキサンとBMP2、siRNA、VEGF、メラトニン等を用いて、主に細胞生物学的手法により、これらが骨再生に有用であることを示してきた。しかし、in vivoでの骨再生に必要とされるポリロタキサンゲルの作製実験は行なっているが、実用には至っていない。平成31年度にはポリロタキサンゲルを作製し、それにこれまでの研究成果(BMP2、siRNA、VEGF、メラトニン等)を融合させin vivoでの骨再生実験を行いたいと考えている。ポリロタキサンを基本骨格とした骨再生用移植担体の開発が遅れたために当該助成金が生じた。平成30年度は引き続き移植用担体の開発を行うため、当該助成金と平成30年度助成金をその研究開発に使用する予定である。平成29年度令和元年度の3年計画において当初の計画では平成30年度より動物実験を行う予定であったが、ポリロタキサンゲル作製が遅れており動物実験に至らなかった。次年度使用額は引き続きのポリロタキサンゲル作製および動物実験に使用する予定である。
正常老人健常老人133名の14年間脳画像追跡第5次調査研究・脳老化と痴呆発症過程

地域で健康な生活を送っている133名の老人の協力を得て第1次(1982年)、2次(1986年)、3次(1989年)、4次(1992年)、5次(1996年)の脳画像を用いた追跡を行った。10年後の成績について死亡群と生存群、痴呆群と非痴呆群、アルツハイマー型痴呆と脳血管性痴呆に分類し、初回調査時の所見について比較した。死亡群と有意な相関を示した所見を列挙すると次の通りであった。年齢、ベントン視覚記銘テスト(BVRT)正確数、BVRT誤数、CT所見、小梗塞、PVL、シリビウス裂の拡大、cell media index、maximal width of third ventricule、BVRT card6、card9、BVRTの省略、歪み、大きさであった。死亡群は生存群に比し健康であっても多くの所見を有することが示された。次に痴呆群と非痴呆群の比較では痴呆群は年齢、シリビウス裂の拡大、MWTV、BVRTの省略、置き違い、大きさであった。この間に133名の被検者のうち死亡した34名(25.6%)と痴呆に罹患した19名(14.3%)の初回に行った年齢、CT所見、ベントン・テストの結果を用いて生存と死亡、痴呆と非痴呆を予測する指標とならないか検討したところ、生存と死亡の可能性については79.%、痴呆と非痴呆の可能性については74.%が判別可能であることが示された。具体的な臨床の指標として、判別分析の結果、痴呆は、年齢、性、ベントンテスト誤数、MWTVが得られた。また、本研究からみた死亡の臨床的指標としては、年齢、ベントンテスト正確数、無症候性梗塞、皮質の萎縮が得られた。ライフスタイルとの相関をみると、喫煙者でCMIとMWTVが有意な相関を示し、飲酒者とCMIとMWTVが有意な相関を示し、酒量が1合以上のものにおいてCMIとMWTVが有意な相関を示した。一方、服薬者のうち、糖尿病の治療薬を飲んでいるものはFHIと有意な相関を示した。
ストレス防衛反応の神経機構の伝達物質

【目的】ストレス防衛反応の表出に関与する神経伝達物質に関して検討した。【方法】オレキシンプロモーターに細胞死を誘発する遺伝子を接続したDNAを導入することによってオレキシン含有神経細胞を特異的に破壊したトランスジェニックマウス(ORX-Tg)を用い、各種の刺激によって防衛反応を惹起させた時の循環・呼吸等のパラメーターを、正常対照マウスならびに以前に得たオレキシンノックアウトマウス(ORX-KO)での結果と比較した。【結果】ORX-Tgの安静時の血圧は野生型マウスに比べ約20mmHg低値を示し、薬理学的検討から血管収縮性交感神経活動の低下の為であろうと結論された。視床下部脳弓周囲領域(いわゆる防衛領域)の刺激による血圧・心拍数・呼吸数の増加反応はORX-Tgでは野生型マウスよりも有意に減弱していた。防衛反応時の内臓領域と骨格筋の血流量を測定し内臓領域から骨格筋への血流配分のシフトを評価したところ、野生型マウスに見られた骨格筋血管弛緩反応がORX-Tgでは殆ど観察されなかった。野生型マウスでは防衛反応時に動脈圧受容器反射が抑制されるが、これもORX-Tgでは殆ど観察されなかった。無麻酔動物を用いた実験においても防衛反応時の血圧・心拍数の反応がORX-Tgでは有意に減弱していたが、安静時の動脈圧受容器反射に異常はなかった。脳弓周囲領域の刺激効果を野生型マウス、ORX-Tg、ORX-KOの3者で比較したところ、後2者間に差はなく、いずれのパラメーターでも野生型マウスに比べて4080%の減弱であった。【考察】基礎血圧の決定と防衛反応の表出にはオレキシンこそが重要であり、オレキシン含有神経細胞に共存する神経伝達物質候補が果たす役割は低いものと結論された。本研究の目的は、防衛反応の表出に関与するオレキシンおよびそれ以外の神経伝達物質の役割を明らかにする事であった。オレキシン以外の神経伝達物質には2つの候補がある。すなわち、1)オレキシシ含有神経細胞に共存するオレキシン以外の神経伝達物質、2)オレキシンを含有しない神経細胞の伝達物質、の2つである。本研究では1)の可能性に関して検討した。具体的には、オレキシンプロモーターに細胞死を誘発する遺伝子を接続したDNAを導入することによってオレキシン含有神経細胞を特異的に破壊したトランスジェニックマウスを用い、各種の刺激によって防衛反応を惹起させた時の循環・呼吸等のパラメーターを、正常対照マウスならびに以前に得たオレキシンノックアウトマウスでの結果と比較した。視床下部脳弓周囲領域(いわゆる防衛領域)の刺激による血圧・心拍数・呼吸数の増加反応がオレキシン含有神経細胞特異的破壊マウスでは野生型マウスよりも有意に減弱していたが、その減弱の程度はオレキシンノックアウトマウスの場合とほぼ同程度であった。また、安静時の血圧低下の程度もオレキシン含有神経細胞特異的破壊マウスとオレキシンノックアウトマウスで同程度であった。これらの結果から、オレキシン含有神経細胞に共存する神経伝達物質は、調べた限りの防衛反応の表出および基礎血圧の決定に果たす役割は低いものと結論された。そこで、防衛反応を上述のパラメーターとは別の視点からも観察する事にし、現在も研究が進行中である。進行中の研究内容を以下に列挙する。1)防衛反応時の内臓領域と骨格筋の血流量を測定し内臓領域から骨格筋への血流配分のシフトを評価する。2)ストレス誘発鎮痛反応の程度を3種のマウスで比較する。

3)防衛反応時の動脈圧受容器反射抑制・化学受容器反射亢進の程度を比較する。4)ストレス誘発攻撃行動を比較する。【目的】ストレス防衛反応の表出に関与する神経伝達物質に関して検討した。【方法】オレキシンプロモーターに細胞死を誘発する遺伝子を接続したDNAを導入することによってオレキシン含有神経細胞を特異的に破壊したトランスジェニックマウス(ORX-Tg)を用い、各種の刺激によって防衛反応を惹起させた時の循環・呼吸等のパラメーターを、正常対照マウスならびに以前に得たオレキシンノックアウトマウス(ORX-KO)での結果と比較した。【結果】ORX-Tgの安静時の血圧は野生型マウスに比べ約20mmHg低値を示し、薬理学的検討から血管収縮性交感神経活動の低下の為であろうと結論された。視床下部脳弓周囲領域(いわゆる防衛領域)の刺激による血圧・心拍数・呼吸数の増加反応はORX-Tgでは野生型マウスよりも有意に減弱していた。防衛反応時の内臓領域と骨格筋の血流量を測定し内臓領域から骨格筋への血流配分のシフトを評価したところ、野生型マウスに見られた骨格筋血管弛緩反応がORX-Tgでは殆ど観察されなかった。野生型マウスでは防衛反応時に動脈圧受容器反射が抑制されるが、これもORX-Tgでは殆ど観察されなかった。無麻酔動物を用いた実験においても防衛反応時の血圧・心拍数の反応がORX-Tgでは有意に減弱していたが、安静時の動脈圧受容器反射に異常はなかった。脳弓周囲領域の刺激効果を野生型マウス、ORX-Tg、ORX-KOの3者で比較したところ、後2者間に差はなく、いずれのパラメーターでも野生型マウスに比べて4080%の減弱であった。【考察】基礎血圧の決定と防衛反応の表出にはオレキシンこそが重要であり、オレキシン含有神経細胞に共存する神経伝達物質候補が果たす役割は低いものと結論された。
高強度光キャビティと高エネルギー負イオンの光中性化セルの開発

初年度である2018年度は,本研究課題の最大の課題である高強度レーザーを複数回反射可能な光キャビティの光学設計に関する検討を開始した.ここでは放物面鏡を対向させたキャビティの検討を行い,次年度以降の光中性化セルに関する実験を進めるために必要な研究基盤を構築した.また,PICシミュレーションによりガス中性化セルと光中性化セルを組み合わせたビーム解析を実施し,ガス中性化セルを通過後に光中性化を行うことで,ほぼすべてのビームを中性化することが可能であることを見出した.また今後光中性化セルを評価するためには,収束負イオンビーム源の高性能化と安定動作を実現する必要がある.そこでこれまでに開発を進めてきた大型の高周波イオン源を用いて負イオンビーム引き出しを行い,ビーム収束性の向上や必要とされる電流値を得るためセシウムを添加し,フィルター磁場を変化させた際の動作特性について実験を行った.また高周波水素負イオン源に関して,ITER-NBIとの共通課題として,ビームの収束性が向上しないという問題点がある.そこで高周波電位振動によるビーム発散の可能性が検討されつつあり,フィラメント水素プラズマ源を製作し,高周波電位を重畳することで,ビーム発散への高周波電位振動の効果を実験的に調べた.この実験はまず正イオンビームで行ったが,高周波電位振動によってビーム周辺に振動が誘起されることが観測され,ビーム引き出し部近傍の電位構造(メニスカス)の形状が振動しているためと考えられる.今後負イオンビームへの高周波電位振動の効果を明らかにすることで,高周波イオン源の高性能化と光中性化セル開発に大きく寄与する可能性を示した.当初計画していた光中性化セルの光学設計およびPICシミュレーションによるビーム解析を行い,おおむね順調に進展しているといえる.また高周波イオン源の高性能化に関する実験や,高周波電位振動の影響に関する基礎実験も並行して進めており,おおむね順調であるといえる.2019年度は,光中性化セルの光キャビティのアライメント調整や反射回数の同定を進め,最終年度に高周波負イオン源下流へ設置し,動作実証実験を行う準備を進める.また,高周波負イオン源開発と高周波の影響に関しては,引き続き工学的開発と基礎実験を両立して進める.初年度である2018年度は,本研究課題の最大の課題である高強度レーザーを複数回反射可能な光キャビティの光学設計に関する検討を開始した.ここでは放物面鏡を対向させたキャビティの検討を行い,次年度以降の光中性化セルに関する実験を進めるために必要な研究基盤を構築した.また,PICシミュレーションによりガス中性化セルと光中性化セルを組み合わせたビーム解析を実施し,ガス中性化セルを通過後に光中性化を行うことで,ほぼすべてのビームを中性化することが可能であることを見出した.また今後光中性化セルを評価するためには,収束負イオンビーム源の高性能化と安定動作を実現する必要がある.そこでこれまでに開発を進めてきた大型の高周波イオン源を用いて負イオンビーム引き出しを行い,ビーム収束性の向上や必要とされる電流値を得るためセシウムを添加し,フィルター磁場を変化させた際の動作特性について実験を行った.また高周波水素負イオン源に関して,ITER-NBIとの共通課題として,ビームの収束性が向上しないという問題点がある.そこで高周波電位振動によるビーム発散の可能性が検討されつつあり,フィラメント水素プラズマ源を製作し,高周波電位を重畳することで,ビーム発散への高周波電位振動の効果を実験的に調べた.この実験はまず正イオンビームで行ったが,高周波電位振動によってビーム周辺に振動が誘起されることが観測され,ビーム引き出し部近傍の電位構造(メニスカス)の形状が振動しているためと考えられる.今後負イオンビームへの高周波電位振動の効果を明らかにすることで,高周波イオン源の高性能化と光中性化セル開発に大きく寄与する可能性を示した.当初計画していた光中性化セルの光学設計およびPICシミュレーションによるビーム解析を行い,おおむね順調に進展しているといえる.また高周波イオン源の高性能化に関する実験や,高周波電位振動の影響に関する基礎実験も並行して進めており,おおむね順調であるといえる.2019年度は,光中性化セルの光キャビティのアライメント調整や反射回数の同定を進め,最終年度に高周波負イオン源下流へ設置し,動作実証実験を行う準備を進める.また,高周波負イオン源開発と高周波の影響に関しては,引き続き工学的開発と基礎実験を両立して進める.
航空宇宙産業の発展における中小企業の役割に関する国際比較研究

航空機産業と宇宙産業は、大企業や国の支援を受けた機関が中心となって発展を続けてきた。また、航空機産業と宇宙産業のそれぞれの産業発展に関する研究についても、技術や人材の相互活用が行われている近接した分野であるにもかかわらず、それぞれを隔てて論ずることが多かった。本研究では、航空機産業と宇宙産業の発展における中小企業の役割に着目し、航空宇宙産業においては後発国である日本、カナダ、ブラジル、中国、インドのグローバルイノベーションに関する国際比較研究を実施する。両者の産業を研究し、中小企業の役割についての国際比較を行うことで、先発国の同産業と比較しつつ、後発国における成長メカニズムの解明を進める。
細胞熱力学の創成：細胞内熱物性の測定とサーマルシグナルの理解

本研究の最終目標は、「単一細胞は局所的な温度変化をいかに生み出し、感じ、有効利用しているか」を明らかにする新学問領域「細胞熱力学」を創成することである。本研究では、(1)細胞内熱伝導解析、(2)単一細胞の局所的な温度センシング機構の解明(温度勾配下における極性ブレブ形成、局所加熱による神経突起伸長の誘発など)、という各テーマを遂行し、熱・温度を介した細胞内外シグナル伝達(サーマルシグナル)の理解に役立つ重要な知見を得ることができた。本研究は局所的な加熱法と温度測定法を駆使することによって、単一細胞内の熱物性を測定し、生命活動における発熱と局所的な温度変化をつなぐ物理学的基盤を構築することを目指すものである。さらに局所的な温度変化を単一細胞がいかに感じているかを観測し、細胞内の熱の流れの生理的意義を解明することを目的としている。2013年度では細胞に赤外光レーザーを照射することで形成される温度分布から、細胞内部の不均一な熱伝導率をマッピングする手法を構築した。具体的には細胞内部に温度感受性の蛍光色素を導入し、蛍光イメージングから温度変化の分布を測定した。水に吸収される波長の赤外光レーザーによって細胞内部を温めた際に形成される温度分布は、熱伝導率の不均一性を反映したものとなる。今回の熱伝導率の解析により、細胞内部で高い熱遮断性をもつ物質の存在を示唆する結果が得られた。また、単一細胞スケールの温度勾配によって引き起こされる癌細胞のブレブ形成を発見し、ブレブ形成に関わるタンパク質の特定と、温度勾配による細胞内での濃度分布の変化を明らかにした。この現象の発見と機構解明により、細胞の温度勾配感受性に対する新たな知見を得ることができた。さらには、心筋細胞のCa2+上昇を伴わない加熱収縮現象の分子メカニズムに迫る実験系を構築し、筋収縮を担う4種類のタンパク質のみで加熱収縮を再現することに成功した。これらは細胞の熱物性・温度感受性を明らかにするうえで、大きな発展となった。成果の一部は国内外の学会で発表した。2014年度は、昨年度に引き続き、細胞内熱伝導のイメージング技術の開発とその解析を行った。細胞内に1455 nmの赤外光レーザーを照射し、その時に形成される温度分布を温度感受性蛍光色素による蛍光イメージングから可視化することで、細胞内部の熱伝導率を非侵襲マッピングする手法を構築した。この手法によって、細胞内の不均一な熱伝導を可視化・定量解析することに成功した。また、赤外光レーザーによって形成される単一細胞スケールの温度勾配によって、癌細胞(HeLa細胞)の形状変化(ブレブ形成)が引き起こされることを発見した。このブレブ形成は細胞内の温度勾配がわずか1.3度でも引き起こされること、ブレブ形成にはアクトミオシンによる力発生が関与していることを明らかにした。さらにはWI-38細胞やラット海馬神経細胞、ラット心筋細胞の温度感受性を単一細胞で評価する系を構築し、素早い温度変化(熱パルス)によってCa2+上昇やサルコメア振動が誘発される現象など、新たな温度感受性を捉えることにも成功している。これらは細胞の熱物性・温度感受性を明らかにする上で、大きな進展となり、成果の一部は論文・学会発表を行った。本研究は赤外光レーザーによる局所的な加熱法と蛍光温度測定法を駆使することによって、単一細胞が局所的な温度変化をいかに感じているかを観測し、細胞内の熱の流れの生理的意義を解明することを目的としている。最終年度となる2015年度では、2014年度から引き続き、温度勾配によって引き起こされる癌細胞(HeLa細胞)の極性ブレブ(熱源方向への細胞膜の伸長)の形成メカニズムの解明を進め、温度勾配による非対称なアクトミオシンの力発生が極性ブレブを引き起こすという新たなモデルを提唱する論文発表を行った(Oyama et al., Biophys. J., 2015)。また、赤外光レーザーによる局所加熱によって、ラット海馬神経細胞の細胞内カルシウム上昇や神経突起を伸長させることに成功し、これらの温度感受性の機構解明を進め、細胞骨格(微小管やアクチンフィラメント)や分子モーターが加熱中の神経突起伸長に関与していることを明らかにし、論文発表を行った(Oyama et al., Sci. Rep., 2015)。これらの現象の発見と機構解明により、「単一細胞は局所的な温度勾配をいかに感じ、応答するか」という問いに対する新たな知見を得ることができた。この他、単一細胞スケールにおける蛍光温度測定法を紹介する書籍の出版や、細胞内の熱の流れを解明する重要性に関するコメントをNature Methods誌に掲載することで、今後の「細胞熱力学」の方向性を明確にした。

各テーマごとに計画通りに進んでおり、いくつかの成果は論文・学会発表を行った。27年度が最終年度であるため、記入しない。生物物理研究計画通り推進し、最終年度内にそれぞれの成果を論文掲載に至ることを目指す。各テーマごとに計画通り進み、国内外での学会で発表することができた。しかしながら年度内の論文発表までには至らなかった。したがって「(2)おおむね順調に進展している」と判断した。高価な物品の購入を次年度にまわしたことが主な理由です。研究計画通り推進し、各テーマを論文発表としてまとめる。研究をより推進させるための物品・消耗品の購入に割り当てる計画です。機械器具を安価で購入したこと、消耗品の節約、論文未発表のため論文掲載に関わる費用が不要であったことが主な理由です。
超百寿者由来iPS細胞を用いたストレス耐性機構の解明と疫学的検証

本研究は、超百寿者由来のiPS細胞を血管内皮細胞に分化させ、酸化ストレスや低酸素ストレス耐性の分子機構を解明し、得られた分子生化学的、遺伝学的成果を、多年代高齢者コホートを用いて疫学的検証を行うことを目的とした異分野連携プロジェクトである。症例数の不足のため、iPS細胞実験から、ターゲット分子を同定するには至らなかったため、心血管防御因子であるExtracellular superoxide dismutaseを目的変数としたQTL解析を行い、候補遺伝子(rs1799895)を同定した。その結果をSONIC研究対象者1890名で解析し、頸動脈硬化などの老化形質を関連することを見出した。プロジェクト1では湯浅、新井が超百寿者由来iPS細胞株とコントロールiPS細胞3株から血管内皮細胞に分化し、様々なストレス状況下で、マトリゲル上でtube formationの形成能を指標とした実験系を確立した。過酸化水素添加や高血糖不可では超百寿者、コントロール細胞では有意な差は認められなかったが、低酸素刺激下ではtube formationの形成は抑制されたが、コントロール細胞に比べ、超百寿者由来血管内皮細胞でtube formationの抑制の度合いが少なかった。さらに、中岡との共同により低酸素不可前後のRNA seq解析を行い、超百寿者とコントロールでRNA発現を比較した。非負値行列因子分解にてクラスター分類したところ、低酸素負荷前後の差よりも個人間の発現パターンの影響が強いことが分かった。現在、個人間の補正を加味した解析を検討している。プロジェクト2では大阪大学、東京都健康長寿医療センター、および慶應義塾大学が共同で東京、大阪(それぞれ都心部と農村地区)の地域コホートであるSONIC(Septagenarian, octogenarian, nonagenarian, investigation with centenarian)研究を推進した。今年度は70歳、80歳の遺伝子抽出、および90歳の追跡調査をおこなった。本研究によるiPS細胞実験からの候補遺伝子は未同定であるが、動物モデルから長寿との関連が報告されているFOXO3A遺伝子多型を解析し、血圧との関連を報告した。第一に本研究課題の重要な段階であるiPS細胞からの血管内皮細胞への分化、およびストレス抵抗実験に携わる人的資源(経験のある研究補助員)のリクルートに予想以上に時間がかかった点。第二に血管内皮細胞でのストレス抵抗性実験に使用していたiPS細胞に染色体異常を起こしていたものが見つかり、新しいiPS細胞の樹立がひつようとなったため。しかし、現時点では新しい研究補助員によるiPS細胞管理体制が確立し、実験も順調に進んでいる。プロジェクト1ではスーパーセンチナリアン由来のiPS細胞4株から血管内皮細胞に分化し、様々なストレス耐性を検討した結果、コントロールのiPS由来血管内皮細胞と比較し、過酸化水素負荷、高血糖負荷に対する応答には差が見られなかったが、低酸素刺激下でtube formationに有意な差があることを確認した。現在、共同研究者の中岡が低酸素ストレス刺激でのRNA seq解析を行っている。さらに、スーパーセンチナリアンの個体において、低酸素刺激応答や酸化ストレス応答が健康長寿の達成に重要であるか、血液サンプルを用いて検討した。すなわち、低酸素応答のキー分子であるHIF-1により発現が制御されているエリスロポイエチン(EPO)濃度、血管内皮に分布し、血液中の酸化ストレス消去にはたらくextracellular superoxide dismutase (EC-SOD)の濃度を測定した。その結果、EPO, ES-SOD濃度ともスーパーセンチナリアンでは若年対照群に比較し、高くなっており、低酸素応答が更新していることが明らかとなった(論文準備中)。プロジェクト2では石崎、権藤、神出との協力により、SONIC研究の3年後の追跡調査を完了した。これにより、プロジェクト1で明らかになる健康長寿達成のカギとなる遺伝子が、一般の高齢者の老化形質(動脈硬化、認知症、フレイル)とも関連するか、疫学的な検証が可能なデータベースが確立した。SONIC研究から得られた、高齢者の動脈硬化に関する知見について、2017年7月のInternational Association of Gerontlogy and Geriatricsで発表する予定である(演題採択済)。プロジェクト1については、iPS細胞の実験に精通する研究補助員を確保することができ、ストレス刺激下における網羅的RNA発現解析の実験まで完了した。一方で、膨大なRNA seqのデータ解析にはまだ時間がかかっており、結果が得られるのは平成29年度となる見込みである。プロジェクト2のSONIC研究はとうその予定通り、H29年度内には総計2,500名以上の高齢者を対象とした3年後の追跡調査が完了する見込みである。プロジェクト1ではスーパーセンチナリアンから樹立したiPS細胞を血管内皮細胞に分化させ、血管内皮細胞機能の指標の一つであるtube formationを測定した。その結果、スーパーセンチナリアン群で低酸素下のtube形成能が高い傾向が認められた。スーパーセンチナリアンの低酸素応答メカニズムを解明する目的でトランスクリプトーム解析を試みたが、解析例が少なく、候補遺伝子を絞り込むには至らなかった。そこで、候補遺伝子を絞り込む方法として、スーパーセンチナリアンの全ゲノム配列解析(別課題によって解析)を活用し、血管内皮の防御因子であるextra cellular superoxide dismutase (EC-SOD、SOD3)およびアディポネクチンの血中濃度を目的変数としたQTL解析を行い、EC-SOD濃度と有意に相関するSOD3のSNP (rs1799895)およびアディポネクチン濃度に相関するrs7648325を同定した。この結果をプロジェクト2のソニック研究対象者で検討した。

プロジェクト2では今年度は関東地区では70歳代42名、80歳代211名、関西地区では70歳代35名、80歳代277名の追跡調査を行い、両地区合わせて約3,000名の多年代高齢者コホートを確立した。そのうち70歳代、80歳代の1890名を対象に、プロジェクト1で同定されたSOD3遺伝子のSNP(rs1799895)の多型を測定し、老化形質である頸動脈エコー、歩行速度、認知機能との関連を検証した。その結果、女性においてGアレルを有することが頸動脈効果と有意に関連し、特に80歳代女性にいてその傾向が顕著であった。さらに70歳代男性においてはGアレルを有することが歩行速度と関連した。これらはいずれも交絡因子調整後の結果であり、SOD3 rs1799895多型が老年症候群関連遺伝子であることが示唆された。本研究は、超百寿者由来のiPS細胞を血管内皮細胞に分化させ、酸化ストレスや低酸素ストレス耐性の分子機構を解明し、得られた分子生化学的、遺伝学的成果を、多年代高齢者コホートを用いて疫学的検証を行うことを目的とした異分野連携プロジェクトである。症例数の不足のため、iPS細胞実験から、ターゲット分子を同定するには至らなかったため、心血管防御因子であるExtracellular superoxide dismutaseを目的変数としたQTL解析を行い、候補遺伝子(rs1799895)を同定した。その結果をSONIC研究対象者1890名で解析し、頸動脈硬化などの老化形質を関連することを見出した。本年度はプロジェクト1については、iPS細胞の株数を増やし、最終的にRNA seqで候補遺伝子を絞る過程まで研究を進める。昨年度の実験から、ストレス負荷前後のRNA発現は個人のもともとのRNA発現プロファイルにより、かなり規定されることが分かったので、これを補正するべく混合栓系モデルによる解析を進める。SONIC研究について追跡調査は順調に進んでおり、90歳の遺伝子抽出、および認知機能、動脈硬化、サルコペニアなど老化形質のデータクリーニングを行い、候補遺伝子が同定されればQTL解析を行えるデータベースを確立する。iPS細胞からの候補遺伝子の絞り込みについては、現時点では単一の分子でスーパーセンチナリアンのストレス耐性を説明できるほど強い相関は同定されていない。今後はパスウェイ解析を行って、ストレス耐性を制御するシグナルを同定する方向でデータ解析を進める。候補遺伝子を絞り込むことができれば、SONIC研究の多年代高齢者コホートを使って、健康長寿と候補遺伝子の関連を検証する疫学的データベースは研究期間中に確立される見通しである。
様相性・数量性の観点から行う古代日本語における副助詞の研究

本年度は研究期間の最終年度3年目に当たる。昨年度までに行った研究を受けて、以下の3つを計画し、実施した。1昨年度から始めた,第1種副助詞「ばかり・まで」の程度用法の研究を完成し、論文として刊行する。2接尾語「ら」と副助詞「など」を比較した昨年度の研究(口頭発表)を完成し、論文として刊行する。3様相性・数量性の観点から副助詞を研究することの有効性と、見通しを提示する。実施結果は次の通りである。1について。「第1種副助詞と程度修飾句-程度の構文とその形成-」(青木博史編『日本語の構造変化と文法化』ひつじ書房、2007年7月)として刊行した。2について。口頭発表以後の成果を取り入れ、「複数と例示-接尾語ラ追考-」(『国語語彙史の研究』27、2008年刊行予定)として刊行した。3について。日本語文法学会第8回大会(2007年10月、筑波大学)のシンポジウム「とりたて研究の可能性」のシンポジストとして登壇し、「副助詞研究の可能性」という口頭発表を行った。以上の成果は、副助詞を「副詞性の助詞」と捉えて研究していくことの基盤になるものであり、当研究課題は十分に実施されたと考える。本年度は研究期間の初年度に当たり,古代語の複数を表す名詞性接尾語の研究と,近世の副助詞研究に関する研究の2つを計画し,実施した。研究業績は以下の通りである。(1)口頭発表「複数について-接尾語「ら」を中心に-」萬葉学会第58回大会(2005年10月,同志社大学)(2)口頭発表「『あゆひ抄』の副助詞研究」東アジア日本語教育・日本文化研究学会2005年度国際学術大会(2005年11月,別府大学)(1)は、上代語の複数を表す接尾語「ら」を中心に,同じく接尾語である「ども・たち」と,重複形(「人々」など)・無標形(「人」など)を対象とした考察で,古代語の名詞性の複数表現全体を扱ったものである。まず,「ら」の表す用法を細かく観察し,大きく複数と多量に分けられることを述べ,それを踏まえて,「ら」は数ではなく量を表す形式と見られることを指摘した。次に,「ら」と比較することによって,「ども・たち」・重複形・無標形の特徴を詳しく考究し,従来"複数表現"として概括されていた諸形式の差異を明らかにした。そして最後に,この研究が,高度に発達した中古の副助詞を研究するための基礎となることを確認した。(2)は,近世の富士谷成章の著作『あゆひ抄』が,現代「副助詞」と称されている語群をどのように把握し記述しているかを読解したものである。従来も個々の副助詞に関する『あゆひ抄』の記述は参照されてきたが,この研究では,まず副助詞の分類・配列の仕方に着目し,次に個々の記述を精読し,『あゆひ抄』が副助詞相互の関係を捉える体系的な視点を有していたことを指摘した。副助詞は現在でも体系的な研究が十分に行われていないが,『あゆひ抄』は先駆的な研究を提示している。また,副助詞に数量的性格を見出しており,この点でも注目されることを述べた。本年度は研究期間の2年目に当たる。昨年度行った研究を受けて,以下の3つを計画し実施した。1上代の複数表現に関する昨年度の研究(口頭発表)を完成し,論文にする。2『あゆひ抄』に関する昨年度の研究(口頭発表)の基礎固めとして,『あゆひ抄』の訳し方に関する研究を行う。3様相性・数量性と副助詞の程度用法について研究を行う。1について。昨年度行った研究をさらに厳密にし,論文「上代の複数-接尾語ラを中心に-」(『萬葉』196,2006年12月)として公刊した。3について。バカリとマデの程度用法を数量性と様相性の観点から分析し,共時的・体系的な記述を行い,また,通時的・史的な展開を明らかにした。その結果は未公刊である(来年度公刊予定)。以上に加え,計画にはなかったが,上記1に関する研究を新たに行った。4口頭発表「複数と例示-接尾語ラ追考-」国語語彙史研究会第83回(2006年9月,大阪成蹊短期大学)本年度は研究期間の最終年度3年目に当たる。1について。2について。

口頭発表以後の成果を取り入れ、「複数と例示-接尾語ラ追考-」(『国語語彙史の研究』27、2008年刊行予定)として刊行した。3について。日本語文法学会第8回大会(2007年10月、筑波大学)のシンポジウム「とりたて研究の可能性」のシンポジストとして登壇し、「副助詞研究の可能性」という口頭発表を行った。以上の成果は、副助詞を「副詞性の助詞」と捉えて研究していくことの基盤になるものであり、当研究課題は十分に実施されたと考える。
心筋組織内でのサイトカインによる局所急性期反応の解析

心筋細胞内での炎症性サイトカインによる遺伝子発現調節,即ち局所急性期反応の病態生理学的意義を明らかとするためアンギオテンシノーゲンならびにヘモペキシン遺伝子の発現動態を検討した.1.アンギオテンシノーゲンならびに組織レニン・アンギオテンシン系の解析慢性心筋傷害によるサイトカインの関与を明らかとするため,アドリアマイシン心筋症ラットを作製した.アンギオテンシノーゲンは肝細胞では炎症性サイトカインにより発現調節を受ける急性期反応蛋白質であるが,アドリアマイシン心筋症ラットではアンギオテンシノーゲン発現の減少,レニン発現の増加が認められた.本モデルは組織像とも対比したがアドリアマイシン毒性による組織傷害が著明であるにも関わらず,免疫細胞が乏しくサイトカインの関与の少ないモデルであることが示唆された.さらに本モデルは心不全としての血行動態による影響が大きいものと考えられた.2.ヘモペキシン遺伝子の発現調節心筋初代培養細胞ではヘモペキシン遺伝子はサイトカインによりmRNA発現が約4倍に増加するのに対し,直接的な細胞傷害性物質であるヘム,アルコールには応答しなかった.一方,慢性心筋障害モデルとして作製したアドリアマイシン心筋症ラットではヘモペキシン遺伝子発現に変化は認められなかった.次に,この遺伝子発現誘導が肝細胞と同様の機序,即ちInterleukin-6応答領域を介した転写調節かを検討するため,ヘモペキシン遺伝子のプロモーター領域を用いてCATアッセイを行った.心筋細胞内でのプロモーター活性は認められたが,内因性のInterleukin-6を誘導すると報告されている低酸素刺激では転写促進が認められず,外因性のInterleukin-6の関与が必要であることが示唆された.心筋細胞内での炎症性サイトカインによる遺伝子発現調節,即ち局所急性期反応の病態生理学的意義を明らかとするためアンギオテンシノーゲンならびにヘモペキシン遺伝子の発現動態を検討した.1.アンギオテンシノーゲンならびに組織レニン・アンギオテンシン系の解析慢性心筋傷害によるサイトカインの関与を明らかとするため,アドリアマイシン心筋症ラットを作製した.アンギオテンシノーゲンは肝細胞では炎症性サイトカインにより発現調節を受ける急性期反応蛋白質であるが,アドリアマイシン心筋症ラットではアンギオテンシノーゲン発現の減少,レニン発現の増加が認められた.本モデルは組織像とも対比したがアドリアマイシン毒性による組織傷害が著明であるにも関わらず,免疫細胞が乏しくサイトカインの関与の少ないモデルであることが示唆された.さらに本モデルは心不全としての血行動態による影響が大きいものと考えられた.2.ヘモペキシン遺伝子の発現調節心筋初代培養細胞ではヘモペキシン遺伝子はサイトカインによりmRNA発現が約4倍に増加するのに対し,直接的な細胞傷害性物質であるヘム,アルコールには応答しなかった.一方,慢性心筋障害モデルとして作製したアドリアマイシン心筋症ラットではヘモペキシン遺伝子発現に変化は認められなかった.次に,この遺伝子発現誘導が肝細胞と同様の機序,即ちInterleukin-6応答領域を介した転写調節かを検討するため,ヘモペキシン遺伝子のプロモーター領域を用いてCATアッセイを行った.心筋細胞内でのプロモーター活性は認められたが,内因性のInterleukin-6を誘導すると報告されている低酸素刺激では転写促進が認められず,外因性のInterleukin-6の関与が必要であることが示唆された.1)ヘモペキシン遺伝子心筋内ヘモペキシンは直接的な細胞傷害性物質であるヘム,アルコールには発現応答しなかったが,サイトカインにより約4倍の発現誘導を受けた.(第92回日本内科学会講演会,1995年4月名古屋において発表).これらの知見は,ヘモペキシンが心筋内で局所急性期反応を形成し,生理的なantioxidantとして作用している可能性を示唆している.この遺伝子発現誘導が肝細胞と同様の機序,即ちInterleukin-6応答領域を介した転写調節か,また組織特異的か否かはさらに検討を要する.また,研究代表者が共同研究をしているCornell Univ.Medical CollegeのMuller-Eberhard研究室からは,肝細胞でのラット・ヘモペキシン遺伝子のインターロイキン6応答領域が同定され,動物種を超えて保存されている事を報告した(Immenschuh,S.,Nagae,Y.et al.(1994)J.Biol.Chem.269:12654-12661.).2)組織レニン・アンギオテンシン系Adriamycin心筋症ラットでは,予想に反しアンギオテンシノーゲン発現の減少,レニン発現の増加が認められた.本モデルは組織像とも対比したがadriamycin毒性による組織傷害が著明であるにも関わらず免疫細胞浸潤が乏しく,サイトカインの関与が少ないモデルである可能性が示唆された.さらに本モデルは心不全となるため,サイトカインなどの内分泌因子よりも血行動態による影響が大きいものと考えられた(第59回日本循環器学会,1995年において発表).現在までに心筋内ヘモペキシンが直接刺激ではなくサイトカインにより発現誘導されることを明らかにした.心筋内におけるヘモペキシンのInterleukin-6応答性に注目し,現在は転写調節機構解析のための予備実験を行っている.同遺伝子のプロモータ領域を有する様々なCAT construct作製し,また心筋細胞に対する効率の良い遺伝子導入法を検討中である.1)心筋初代培養細胞への遺伝子導入法の検討

リン酸カルシウム法,DEAEデキストラン法,リポフェクチン法,electroporation法などから最も効率の良い方法を選択し以下のCAT assayを行う.プロモーターとしてIL-6 responsive elementを有するヘモペキシン遺伝子を用いる.同遺伝子の5′flamking region,さらにすでに肝細胞において同定したIL-6 responsive elementの機能解析を行い,組織特異性に関しても検討する.最近,cardiotrophin Iというサイトカインが発見され,極めて強力な心筋細胞肥大作用を示すことが明らかとされた.本サイトカインの受容体はinterleukin-6受容体と一部構造を共有しており遺伝子ファミリーを構成している.こうした事実はinterleukin-6を含んだ一群のサイトカイン・ファミリーが心筋細胞に対し重要な役割を果たしていることを示唆しており,本研究の重要性がさらに増すものと考えられる.ヘモベキシン遺伝子は直接刺激ではなくサイトカインにより発現誘導され,心筋組織局所における急性期反応蛋白質として生体防御反応を形成している可能性を明らかとした.本年度は心筋内におけるヘモベキシンのInterleukin-6応答性に注目し,転写調節機構解析を行った.同遺伝子のプロモーター領域を有する様々なCAT construct作製し,心筋初代培養細胞へ導入しCAT assayを行った.また低酸素負荷刺激により心筋細胞内では内因性のインターロイキン6が誘導されることが明らかとされているが,この内因性インターロイキン6に対するプロモーターの反応を検討した.1)心筋細胞内でもヘモベキシン遺伝子のプロモーター活性が認められた.2)ヘモベキシン遺伝子は低酸素刺激負荷,非負荷ともに同程度の転写活性を示した.即ち,心筋細胞内におけるヘモベキシン遺伝子の発現調節には内因性インターロイキン6に加え外因性インターロイキン6が必要と考えられた.近年,cardiotrophin Iというサイトカインが発見され,極めて強力な心筋細胞肥大作用を示すことが明らかとされた.本サイトカインの受容体はinterleukin-6受容体と一部構造を共有しており遺伝子ファミリーを構成している.この事実はinterleukin-6を含んだ一群のサイトカイン・ファミリーが生体防御反応だけでなく心筋細胞の成長・分化にも深く関わっている事を示唆しており,本研究をさらに発展させる必要がある.
日本語話者好みの＜主観的（主客合一的）事態把握＞の研究

日本語を「<ナル>的な言語」として特徴づけようとする筆者の試み(出発点は、池上(1981)『「する」と「なる」の言語学:言語と文化のタイポロジーへの試論』)では、「<ナル>的な言語」という概念を「<スル>的な言語」と対比させ、もっぱら<脱/非動作主化>(de-agentivization)を志向する事態把握が話者によって好まれる言語として特徴づけるという認識であった。このいわば'negative'な「<ナル>的言語」の認識に対し、今回の科研費に基づく研究では、「<ナル>的言語」と呼べるもののいわば'positive'な特徴、側面に焦点を当て、それによっていかなる新しい認識が得られるかという方向に転換し、研究を進めてみることにした。具体的には、日本語における「ナル」という動詞、および他の言語におけるそれと近似する語、ないし語句について、それぞれの言語における<生態>を調査、確認するということである。その点で、守屋三千代教授の科研費による研究とも密接な連携をとることとなり、ユーラシア大陸のかなりな数の言語についても、その方面の専門家、信頼できるインフォーマントを介しての調査、自発的な協力を経て、各言語における興味深い<ナル>の生態が明らかになってきている。この点で、筆者自身による上古の『万葉集』に始まる三大和歌集における「なる」についての調査と比べてみると、日本語の「なる」の場合、初発の基本義であった<誕生>/<出現>と<推移>/<変化>のうち、後者が中心となって語義の展開が進んでいくのに対し、ユーラシア大陸のアジアの諸言語では、(すぐ隣接する韓国語をも含めて)前者の語義に沿っての展開が顕著である(例えば、日本語では「春ニナル」と言うところを、他の言語では圧倒的に「春ガナル」と言う)ことが目立つ。この特異性が何を意味するのか、極めて興味深い。初年度のチェコ語、ルーマニア語に続き、本年度はブラジル・ポルトガル語とリトアニア語についてバイリンガルのレベルで日本語のできるインフォーマントを対象にそれぞれの言語における「ナル」に相当、ないしは近似する動詞、あるいは動詞表現の生態に関して集中的に調査をすることができた。その結果、日本語の「なる」に見られる著しい<推移>/<変化>への意味的傾斜は十分に注目すべき事項であるとの認識はますます確実と判断してよいと思えるようになった。一方、印欧語系統の言語では、「ナル」相当の動詞表現は、かつて印欧語に存在していたとされる<中動態>(middle voice)の語法と深い関係を有することにも十分な認識を得ることができた。古代ギリシャ語では「なる」相当の意味合いは中動態で表されていたという程度のことなら、ごく一般的な古代ギリシャ語文法書の記述からも読みとれるが、なぜ中動態が「ナル」という意味合いを生むのかという説明はなされていない。しかし、中動態を後に引き継いだ文法形式の一つが再帰動詞表現であったことからすると、そこには<Xガ自ラヲYニナス>→<XガYニナル>という受けとめ方が関係していたという確認が得られた。(折から、小林秀雄賞を受けたという国分功一郎『中動態の世界ー失われた「態」を求めて』(医学書院、2017)に眼を通す機会を得たことも、よい刺激となった。)信頼できる(可能なら、日本語の「なる」についてもかなりな程度の語感を有する)インフォーマントを対象に、「ナル」的表現の集中的な生態調査はさらにいくつかの言語について進めたい。差し当たっては、特にハンガリー語、フィンランド語のように早い時期にアジア側からヨーロッパへ移住、定着した民族の言語、印欧語族の中でもいくらか変種とされるアイルランド語(「ナル」表現は非人称構文になるとのこと)、系統不明のバスク語、など。(このうち、ハンガリー語についてはインフォーマントとして信頼できそうな人物からの承諾がほぼ得られている。さらに進めば、アボリジニーの言語なども関心はあるが、このあたりはまだ見当もつかない。)上古日本語については、自分で調べてみるより他はない。(助動詞と呼べる域に達しなかったという認識のためか、国語学の分野での本動詞「なる」に関する研究は、殆ど見当たらないようである。)現代日本語の語彙についてのある使用頻度調査によると、動詞「ナル」の使用頻度は全体の5位(「アル」、よりも上位)とのことである。(例えば英語の語彙の使用頻度の調査で'become'がそれ程上位に位置するとはとても想像できない。)日本語話者の<ナル>的な事態把握への好みとさらに一歩奥にあるものを追求していけば、(そしてそのさい、日本語話者の強い<推移/変化>に対する感覚が関わっていることにも注目するならば、)日本語話者では、(<空間>についての感覚と対比される意味での)<時間>感覚への拘りが事態把握の営みに際して強く関わっているのではないかと想像できるし、この点に関しては、究極的には、神戸大学定延利之代表科研費研究(「空間的分布を表す時間的語彙」など)、それから文化レベルに関しては、加藤周一『日本文化における時間』の中の「イマ・ココ」に生きる日本人といった提言)とも有益な接点を見出すことができるはずである。日本語を「<ナル>的な言語」として特徴づけるという筆者の試みは、これまでは「<ナル>的な言語」という概念を「<スル>的な言語」と対比し、<脱/非動作主化>を指向する事態把握が話者によって好まれる言語として特徴づけるという認識であった。