hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
骨髄細胞の肝臓への定着、分化を促進する血清因子の解析

我々は、自己骨髄細胞を用いた肝臓再生療法の臨床応用を進める基盤モデルとして骨髄細胞から肝細胞への分化評価モデル(GFP/CCl4モデル)を開発し、骨髄細胞が持続的肝障害の肝硬変時に肝臓に遊走され肝細胞へ分化・増殖することを明らかにした(JB 2003)。さらにこのモデルの解析を通じ、骨髄細胞移植により生存率の回復、また肝線維化の改善を発見した(Hepatology 2004)。これらの基礎成果を基盤にし、平成14年より世界に先駆け肝硬変症に対する自己骨髄細胞投与療法を開始しその最初の臨床研究の成果を発表した(Stem Cells 2006)。さらに骨髄細胞の肝臓への定着、分化を促進する血清因子の解析のため、マウスの血清を用いてプロテオミクス解析を行った。その結果、Apolipoprotein等の発現が血清中に有意に上昇していることが明らかになった(Proteomics 2006)。さらに増殖因子の解析の結果、FGFが増殖因子の中でも特に骨髄細胞の肝臓への定着に関与することが明らかになり、さらにrFGF2と骨髄細胞の同時投与は肝硬変症の線維化改善効果もあることが明らかになった(Cell Tissue Res 2005,2006)。その他本研究期間の基礎研究として、網羅的なサイトカインの解析として、Bio-Rad社のBioplexを用いて解析を行った。さらに、肝幹細胞の分化制御機構を検討するため、我々が以前より解析を行っていたHuman Homologue of Maid(HHM)遺伝子について詳細に検討するため、Maid KOマウスの作成も行った。これらの知見についても今後報告していく予定である。
六甲山地における防災林機能を高めるエリアマネジメント

六甲山における防災・減災の担い手としての森林ボランティアに注目し、環境保全と防災を融合したエリアマネジメントを学際的アプローチから模索するために次の2課題を遂行した。六甲山における斜面崩壊履歴をマッピングし、植生・傾斜勾配・表層地質、及び所有形態等に関する特徴を把握した。そして、これらの環境情報を説明変数にした多変量解析を用いて、地震・豪雨のによる斜面崩壊の危険性を定量的に評価した。また、神戸市在住の20歳以上対象に森林ボランティアや資源活用に関するアンケート調査を実施し、その結果をもとに森林ボランティアや間伐材、及び林地残材などの森林資源を活用した関連産業の活性化への住民意識分析を行った。今年度は、神戸市周辺における所有形態ごとの樹種占有面積を比較するとともに、六甲山地を中心として竹林や人工林の分布を調査した。その結果、竹林分布面積の85%が私有地内に分布していること、緩斜地と耕作地や住宅地との境界域やその周縁に沿って分布していることがわかった。このような竹林が放置竹林とならないように整備することで、どの程度山地の傾斜部と耕作地/住宅地の緩衝帯として効果的な防災林として高めることが可能かを定量的に検討した。これを実施するため、無人航空機(UAV)を活用して竹林の林分構造を広範囲に把握した。UAVは、近年の技術革新によって災害被害調査などの様々な分野への応用が期待されており、本研究でもUAV画像解析を活用した竹林の林分構造の把握や地上部現存量推定方法を模索している。竹は地上植物の中でも成長力の早い循環性の高い材資源でもあり、この資源を有効活用できる仕組み作りを含めたエリアマネジメントを考えることは、地域社会との新たな共生の在り方を模索する上でも重要である。また、六甲山地の間伐林や竹をエネルギー資源として利用することによる防災効果の向上策についても検討するため、間伐林や竹のエネルギーとしての利用量を推計した結果、年間で約69,500GJのエネルギー賦存量があることが試算された。続いて、森林ボランティアのもつエンパワーメントに注目し、神戸市において新たに森林ボランティアになった方を対象にアンケート・インタビュー調査を実施した。その結果を先行研究(ランダム抽出のアンケート結果)と比較することで、森林ボランティア活動を決定したプロセスに関して分析した。その結果、森林ボランティ活動の参加を決めた背景には、地域への愛着や地域コミュニティとの関係性よりも、森林整備に対する技能や知識が森林ボランティア活動への参加を促すきっかけになる可能性が高いことが明らかになった。申請段階では六甲山地におけるフィールド調査を予定していたが、実際にフィールド調査を行ったところ、私有林では所有者が不明であったり県外在住であったりする場合も多く、管理放棄された状態になっており、所有者に直接、私有地内で調査をする許可を得ることが難しかった。次善策として、六甲山で森林ボランティアを実施している様々な団体の森林整備活動に参加するとともに、六甲山の植生や資源利用、地元の森林整備方針に関して聞き取り調査を実施し、所有者の方に調査協力の依頼をおこなった。その結果、所有者からも私有地内で調査を行う許可を頂き、地元のボランティアの方々からも調査に対してもご協力を頂ける事となり、当初の予定よりも適切な方法で研究を推進できる見込みとなった。また、申請段階では、国・公有林と私有林の各調査区画内における表層浸食土砂量を比較することを検討していたが、上述の理由から測量計の設置が極めて困難であった。そのため、UAVや空間情報データ等を用いて間伐材・竹の分布と防災機能との関係を検討することで、上述の検討内容を補完することとした。六甲山(神戸市域)における昭和42年の豪雨被害における崩落地(268箇所)と平成24年の豪雨の崩落地(178箇所)、及び平成7年の阪神・淡路大震災の崩落地(596箇所)から、植生履歴、表層土壌/地盤、傾斜等の素因において比較し、その特徴を抽出した。その結果、台風などの豪雨に伴う崩壊地と地震などによる崩壊箇所の特徴が異なっていた。これらの結果から、斜面崩壊の特徴を適切に把握できるスケールを検討し、10m×10mメッシュ単位ごとの斜面崩壊生確率モデルを作成し、六甲山における斜面の崩壊しやすさを定量的に評価した。そして環境素因だけでなく、六甲山における崩壊地履歴とその所有形態に注目して分析した結果、公有林(市町有林)エリアにおける斜面崩壊発生割合が減少する一方で、民有林(特に法人・会社有林)の植林地での発生割合が増加していることが明らかになった。また、本研究は森林管理の新たな担い手として市民ボランティアの活動に注目してきた。六甲山における環境保全や森林整備を行うボランティア数は増加傾向を示し、その活動内容も育苗・植樹・間伐だけでなく、環境教育及び非木材林産物などの森林資源活用まで多様化している。そこで、神戸市在住の20歳以上対象(522名)を対象に六甲山の森林整備や資源活用に関するアンケート調査を実施した。その結果をもとに森林ボランティア活動や間伐材や林地残材などの六甲山における森林資源を活用した関連産業の活性化への住民意識分析を行った。さらに、現場にアクセスが難しかった崩落地の林分調査や資源材積推定を行える手法確立のためにUVAの活用を模索してきた。空撮データから作成したオルソ画像は高い解像度を持ち、林分構造の把握に有効であった。そして3次元点群データは、林分の樹高測定や材積推定への応用できる可能性がある。

六甲山における防災・減災の担い手としての森林ボランティアに注目し、環境保全と防災を融合したエリアマネジメントを学際的アプローチから模索するために次の2課題を遂行した。六甲山における斜面崩壊履歴をマッピングし、植生・傾斜勾配・表層地質、及び所有形態等に関する特徴を把握した。そして、これらの環境情報を説明変数にした多変量解析を用いて、地震・豪雨のによる斜面崩壊の危険性を定量的に評価した。また、神戸市在住の20歳以上対象に森林ボランティアや資源活用に関するアンケート調査を実施し、その結果をもとに森林ボランティアや間伐材、及び林地残材などの森林資源を活用した関連産業の活性化への住民意識分析を行った。所有者や地域の人々の意思決定の影響が大きい私有林における竹林に注目することは、調査遂行が難しい反面、現代社会の課題を浮き彫りにしているともいえる。竹林を通して地域の自然の特性を理解するとともに、森林整備が自然のもつ防災林機能にどのように影響を与えているのかを定量データとして提示することを目指す。そして、防災林としての機能の維持・向上を目指した管理を行うために、森林ボランティアや企業のCSR活動のエンパワーメントをどのように森林整備に巻き込んでいけるのかを検討する。将来展望としては、生態・工学・社会科学の学際的アプローチによって六甲山地における環境保全と防災を融合させたエリアマネジメントを模索する。エリアマネジメントとは、住民が主体的に地域をつくり、育てることである。六甲山地では、すでに多く個人、団体によって森林ボランティア活動が行われている。防災・減災の担い手として森林ボランティアのもつエンパワーメントに注目し、六甲山の自然がもつ防災機能を高めるマネジメントを地域の人々との協働の中で見出していきたい。地域研究申請段階では六甲山地におけるフィールド調査を予定していたが、実際にフィールド調査を行ったところ、私有林では所有者が不明であったり県外在住であったりする場合も多く、管理放棄された状態になっており、所有者に直接、私有地内で調査をする許可を得ることが難しかった。そのため、当初の予定していた国・公有林と私有林の各調査区画内における表層浸食土砂量を比較の検討が、上述の理由から測量計の設置が極めて困難になった。次善策として今年度、六甲山で森林ボランティアを実施している様々な団体の森林整備活動に参加するとともに、六甲山の植生や資源利用、地元の森林整備方針に関して聞き取り調査を実施し、所有者の方に調査協力の依頼をおこなった。その結果、所有者からも私有地内で調査を行う許可を頂き、地元のボランティアの方々からも調査に対してもご協力を頂ける事となった。そこで、次年度では国・公有林と私有林の各調査区画内における測量計を用いた表層浸食土砂量を比較の代わりに、無人航空機(UAV)や空間情報データ等を用いて間伐材・竹の分布と防災機能との関係を検討することで、上述の検討内容を補完することとする。
近世漢字文化圏における女訓の特色とその影響

本年度は(1)女訓の考察、(2)他の文化圏における女訓との比較思想、(3)女訓を生かした展示行為の分析、を行った。(1)では前年度に引き続き中村正直に関する考察を深めた。明六社同人の中で他の論者が海外からどのように見られるのかを意識した外在的な理由に止まる女性論を展開するのに対して、中村正直が儒学の理念を踏まえ、女性の地位向上に積極的な関心を持っていたことを明らかにし、梁啓超への影響を考察した。この成果の一端を日本教育学会大会で報告し、近日中に論文として発表する予定である。(2)では修験道やイスラム圏における女性規範と、儒学の女性規範の比較思想に基づく分析を行った。この中で欧米の特殊な近代化過程で形成されていったジェンダー観のジェンダーバイアスが他の文化圏のジェンダー現象の正確な観察を妨げる可能性があることを指摘した。この成果は日本科学者会議総合学術研究集会で発表し、『日本の科学者』に論文が掲載予定である。(3)では女訓に示された雛人形の歴史的起源を踏まえ、単に人形を置いて女性の祭りを再生産するだけではなく、例えば雛人形が女性に限定されたものではなかったことを示す展示が要請されることを指摘した。また雛人形を如何に展示すべきかについて、地域の郷土資料館や行事での展示方法を実際に観察した結果を踏まえ、レイアウト等の展示方法の改善について日本展示学会大会で報告し、近日中に論文として発表する予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は(1)女訓の考察、(2)女訓的内容を持った説話を活用した授業報告、(3)女訓分析に有用な理論分析を行った。(1)では吉田松陰、中村正直、若江薫子の女訓について調査を行った。吉田松陰の女訓については儒学のみならず、伝統兵学や洋学の影響が看取される。中村正直については儒学をベースとしつつも、洋学の基礎の上に立った女性観が看取される。若江薫子について当人の伝記的資料が少なく、今後も現地調査を続けて継続するが、女四書注釈の比較によって、少なくとも他の女四書の注釈には見られない独自性を有することが確認できた。これらの成果については近日中に発表予定である。(2)では蒙求『郭巨』説話が東アジアでどのような変遷を遂げ、近代人にどのように受容されたのかを追跡している。この説話についてゲストスピーカーとして大学生に伝える機会があり、その実践を全国漢文教育学会で報告し、『新しい漢文教育』に掲載予定である。(3)では広く東洋の女訓イメージがいびつな形で反映されているエコフェミニズムについてその科学観や社会観、女性と自然の結びつきに関する言説資源としての東洋の女訓の活用について検討した。その成果の一端は日本女性学会で報告している。当初予定していた女訓に加え、関連する説話文学に研究対象を広げる必要が生じてきているためである。また、伝統兵学や洋学関連資料についても当初の予定通りに精読ができているとは言い難い。この2つの課題をクリアすることによって、当初想定した比較軸について、儒学に限定されないより広い文脈で位置づけることが可能になり、当初の想定以上の研究成果が得られると考えている。上記のように、近世の女訓そのものに加えて、近世の女訓の周辺資料の文脈、更にはその女訓が近代にどのように解釈されていったのかを解明することを通じて、女訓の内在的理解と近代の視点からの外在的理解の乖離を浮き彫りにすることができると考えている。また、女訓の表象を現実と突き合わせることで、女訓が現実の形成にどのように寄与してきたのかを明らかにすることができると考えている。こうした視点から女訓が研究対象になってきたとは言い難く、そのためにより精緻な関連資料の調査・精読が必要となると考えている。
予防と早期治癒をめざしたスポーツ傷害者の為の心身調律プログラム

ジャイロキネシスは腹式による意識的呼吸法を基盤として椅子座位姿勢で行うエクササイズであり、下半身のスポーツ傷害に対して心身調律に効果的なリハビリテーションであると予測した。手順として、スポーツ傷害に関する実態調査を実施し、次に足首単純骨折と診断された女子学生を対象にジャイロキネシスのエクササイズを3ヶ月間実施し、その効果について生理指標(体成分分析、重心動揺、皮膚温など)と心理指標(Mental Health Pattern)から検討した結果、優位な高上がみられた。本研究は,受傷することによって生じる情動的反応であるストレスとストレス負荷の定量的評価となるメンタルヘルスパターン(橋本・徳永,2000)に着目したアプローチから,競技生活から一時的離脱を余儀なくされた選手の心理的・社会的側面を明らかにし,精神的ストレスの軽減と早期回復を図る心理的治癒対応の基礎資料を作成することを目的とした.結果,(1)スポーツ傷害・障害別,受傷環境別,競技種目別の比較では,いずれも明らかな心理的・属性的要因に関する差は見られなかった.(2)受傷直後の自己意識では,悲観的感情と楽観的感情が混在する回答がみられた.また,ハビリテーション期間中の精神状態に関する回答では,傷害の影響によって後悔や焦燥感,罪悪感,不安,自己否定などの忌避的対応がみられ,様々な精神的ストレスを生起させていることが判明した.逆の回答では,自分自身を静観し,復帰に向けてリハビリテーションを行っている様子が伺えた.(3)精神的健康度の傾向について検討した結果,傷害未経験者は傷害経験者と障害経験者よりも心理・社会的ストレスが有意に高い傾向を示し,へとへと型が多くみられた.全体の結果では,「へとへと型」と診断された該当数は3割弱となり,「ふうふう型」も含めると半数近くの選手はメンタルヘルスが低い傾向を示していた.以上から,本研究は,受傷時の心理的・社会的傾向について明らかしたが,傷害時の心理的対応策はリハビリテーション等の事後策だけに止まらず,選手の競技生活で発生する心理的問題をサポートすることが傷害発生の予防策としても必要であると考えられる.この予防策の一環として,認知的評価の個人差に着目し,ストレス負荷の低減を目的としたストレス・コーピング(ヨガの呼吸法)をおこない,結果,心身の調律を促進する効果が認められた.昨年度の報告では女子大学のアスリートを対象として,スポーツ傷害による心理面への影響について分析した.結果,外傷・障害経験者は受傷によって重篤なストレス負荷を齎す事が示唆された.これは,リハビリテーションにも影響を与え,競技続行に大きな支障をきたす恐れがあると考えられる.今回の研究は,性差に着目した観点から更にストレス負荷の傾向を明らかにし,早期治癒を図るための基礎資料を構築する事を目的とした.結果,受傷に対する男女の情動的反応の差異が明らかとなった.女子学生の受傷直後の精神状態では,外傷経験者は悲観的感情が誘因となってマイナス思考に陥り易い事が判明したが,反面,プラス思考や自分自身を静観視する傾向が認められた.また,リハビリテーション中は外傷・障害経験者ともに女性特有の身体的な愁訴に顕著な特徴が認められたが,精神面の愁訴が比較的少ない事が特徴として挙げられた.そこで,外傷経験者に対しては受傷時の心理的対応策と,治癒過程での身体的対応策が,障害経験者には治癒過程での身体的対応策を講じる必要性が示唆された.次に,男子学生の受傷直後の精神状態では,外傷・障害経験者ともに女子学生と同様の悲観的感情に囚われ,更に不甲斐なさをも併せ持つ心理状態を示していた.また,リハビリテーション中では外傷経験者は精神面や身体面,生活面ともにストレスの疲はい期を示し,障害経験者は身体面での愁訴が認められた.そこで,外傷経験者に対しては受傷時の心理的対応策と治癒過程における心理的・身体的対応策が,障害経験者には受傷時の心理的対応策と治癒過程での身体的対応策を講じる必要性が示唆された.本研究は、スポーツ傷害によるストレス負荷の低減を目的として、生体に及ぼすストレス負荷の定量的評価と、ジャイロキネシス・メソッド(ヨガの呼吸法を基盤とする)による心身調律プログラムの効果を検討した。研究対象者は医師から右足首単純骨折と診断されたスポーツ傷害者とし、心身調律プログラムを治癒するまで3ヶ月間実施させ、その効果は生理・心理指標を用いて比較した。結果では、(1)精神的健康度はQOL因子の生活に対する満足感が高上し、メンタルヘルスパターンは「ゆうゆう型」から「はつらつ型(ストレス適応型)」と変化した。(2)脳波の含有率ではα1・α2波が減少し、θ波とδ波が増加した。これはリラックスしたと言うよりもトレーニングによって身体疲労の回復の兆候を示したと考えられる。(3)皮膚温の測定では、末梢部位の手足に低下が見られたが、患部の右足は変化が少なかった。これは発汗の影響によるものと推測されるが、患部には血流促進がみられたと考えられる。

(4)重心動揺計の測定では、総軌跡長が右足で20cm以上、左足は10cm減少し、足裏感覚が好転したことを示したといえる。(5)インボデイの計測では総合評価で上・下半身と左・右半身のバランスが虚弱で不均衡を示していたが、トレーニング後は左・右半身のバランスが均衡となり、さらに下半身では虚弱→標準へと移行した。以上の結果から、心身調律プログラムはストレス軽減と運動パフォーマンス(体軸の安定)に有効である事が判明した。しかし、傷害の治癒過程における自然治癒力の影響については検討をしていないため、今後の課題が残ったと考える。
仮想テクスチャを表すオノマトペの分析による日常言語の創造性の研究

本研究は、未経験の質感をもつ仮想テクスチャを言語で表現する実験を通じ、新しい言葉が創り出されるしくみについての理論を認知言語学の観点から構築することを目指す。言葉の中でも、オノマトペ(擬音語・擬態語)に着目し、慣習的なオノマトペに対し、発話の場で新しく創られるオノマトペである「臨時オノマトペ」の実態について、計量的手法を取り入れることによって明らかにすることである。特にコミュニケーションの有無が、臨時オノマトペ生成にどのような影響を与えるのかに注目する。初年度は、視覚的に触感覚を表現するアプリケーションを用い実験を行なった。実験参加者は、タブレット上の仮想テクスチャに触り、オノマトペでその質感を表現した。一人で表現する場合と二人で表現する場合の二つの条件で行なった。集まったオノマトペデータの分類まですすめた。特に二人の場合について、表現を決定するまでのプロセスの表情や行動に着目した観察も行い、コミュニケーションの映像分析の可能性も探った。また、新造語の研究の観点から、臨時オノマトペが持つ言葉の創造性についての理論を構築をすすめた。特に話者による言語の質感の探索に焦点をあてた。この成果はいくつかの学会で発表した。実験については、予定通りにすすみ、分析に必要なデータを揃えることができた。また、理論構築については、言語の創造性につながる「質感探索」という観点から予定よりも多くの研究分野に関わる議論を展開することとなり、順調である。実験データを元に、以下の3つの観点から分析を進めていく。(1)新奇テクスチャの予測不可能性・自律性の影響、(2)他者とのコミュニケーションの有無の影響、そして(3)内的プロセスである。これら実験の結果に基づき、新造語の研究の観点から、臨時オノマトペが持つ言葉の創造性についての理論を構築する。予定していた国際学会発表が他のスケジュールとの都合上一つ次年度に持ち越しとなった。そのため、翌年度に同じ目的のために使用する。
毒素原性大腸菌のLTの構造と粘膜アジュバントおよび免疫賦活抑制作用の解析

毒素原性大腸菌の産生する易熱性下痢毒素(LT)は種々の抗原と同時に経鼻投与すると粘膜アジュバント活性を示す。我々は毒性が低く、水痘ウイルス(VZV)、インフルエンザワクチン、ボツリヌス毒素に優れた粘膜アジュバント効果を持つ変異毒素を報告した。まずVZVに関して、液性免疫よりは細胞性免疫誘導に強力なアジュバント効果があるとを明らかにし、水痘ワクチンウイルス(Oka株)の構成糖蛋白質にも細胞性免疫を優位に誘導することを明らかにした。一般に水痘ウイルス感染予防には液性免疫の誘導よりは、むしろ細胞性免疫の強弱が非常に関連しているといわれている。従って、今回我々の作成した変異毒素は水痘ウイルスワクチンの経鼻投与を可能にし、有効な感染予防効果を誘導できる可能性を示唆している。さらに、この細胞性免疫を優位に誘導することを用いて、I型アレルギーを抑制する試みを、オーストラリアJarniki, A. G.博士と行った。これはダニ抗原(Dep 1抗原)を用いて検索した結果、ダニ抗原特異的αβT細胞のTh1系T細胞を優位に誘導することが明らかにした。これはダニ抗原特異的αβT細胞のTh2系T細胞が優位に発現されることにより発症するI型アレルギーを抑制できる可能性が示唆された。また、変異LTの粘膜アジュバント効果は、他のアジュバント効果のもつ物質(例えばアルミニウム系物質)とは異なる機構でアジュバント効果が発現している事が明らかにした。一方LTをマウスに筋肉内投与すると全身の免疫組織、腹腔内投与するとB1細胞に細胞死が起こり、腹腔内投与でγδT細胞が誘導されることを証明した。これは免疫組織の違いにより毒素は異なる作用を持つことを示す。特にLT-Bの腹腔内投与では、胸腺に依存し胸腺由来のγδT細胞が腹腔内に誘導されること明らかにした。誘導されたγδT細胞はTh2系サイトカインを産生していた。これはLT-B自体の強い抗原性により誘導されるLT-B特異的αβT細胞のTh2系T細胞を活性化しているか。それともLT-Bと同時に経鼻投与した抗原に対して誘導される抗原特異的αβT細胞のTh2系T細胞を活性化しているかが考えられる。今後、このLT-BによるγδT細胞の賦活化がどのような機構で活性化されるか、LT-Bのアジュバント効果にどのように関与するか研究を進めたい。LTは種々の抗原と同時に経鼻投与すると粘膜アジュバント活性を示す。我々は既に毒性が低く、水痘ウイルス(VZV)、インフルエンザワクチンに優れた粘膜アジュバント効果を持つ変異毒素を報告してきた。一方LTをマウスに筋肉内投与すると全身の免疫組織、腹腔内投与するとB1細胞に細胞死が起こり、腹腔内γδT細胞が誘導されることを証明している。そこで、本研究では各作用と毒素構造の関連を解析し、粘膜アジュバント活性への各細胞の関与の解明と有効アジュバントの開発を目的としている。

今回の研究費公布期間内には以下の実験を行い各項目を明らかにする。(a)アジュバント活性の高い変異毒素の作成と実用化への基礎実験を行う。既に毒素活性部位以外の構造がアジュバント活性に関与することを証明している。同部位の変異毒素による解析と、VZV、インフルエンザワクチンで実用化実験を試みているH44A等、無毒なアジュバントを作成する。(b)マウス腹腔内γδT細胞がLTの腹腔内投与で増加した。IL-10産生性、γ1,3,4,6型、δ1,4-6型のγδT細胞が誘導され、GM1受容体に依存性と非依存性が存在していた。今後変異毒素により構造との関連性を解析し、粘膜アジュバント活性へのγδT細胞の関与を明らかにする。(c)LTはマウス腹腔内投与でB1細胞の細胞死を起こす。変異毒素により受容体依存性などB1細胞死とLTの構造との関連性を明らかにし、粘膜アジュバント活性へのB1細胞の関与を明らかにする。(d)毒素の筋肉内注射は、胸腺、脾臓、骨髄などに細胞死を起こす。これはTNFα抗体で阻害される。抗体で阻害される。現在変異毒素により粘膜アジュバント活性との関連性を検索している。LTは種々の抗原と同時に経鼻投与すると粘膜アジュバント活性を示す。我々は既に毒性が低く、水痘ウイルス(VZV)、インフルエンザワクチンに優れた粘膜アジュバント効果を持つ変異毒素を報告してきた。一方LTをマウスに筋肉内投与すると全身の免疫組織、腹腔内投与するとB1細胞に細胞死が起こり、腹腔内γδT細胞が誘導されることを証明している。これは免疫組織の違いにより毒素は異なる作用を持つことを示す。そこで、本研究では各作用と毒素構造の関連を解析し、粘膜アジュバント活性への各細胞の関与の解明と有効アジュバントの開発を目的としている。抗体で阻害される。
プロテオミクス研究からのチャネル安定化による心房細動のテーラーメード治療の開発

Na channel阻害剤であるlidocaineならびにpilsicainideはプロテアソームにより分解されるKv1.5蛋白を安定化しユビキチン化フォームを増やした。さらに本剤は小胞体ならびにゴルジ体でのKv1.5の局在を増やし、細胞膜でのKv1.5でコードされるI_<Kur>を増やした。さらにNa channel阻害剤はクラス効果として20Sプロテアソーム活性を阻害したが、一方でCa拮抗剤やKチャンネル阻害剤は20Sプロテアソーム阻害効果を認めなかった。Na channel阻害剤は半減期の短いp53ならびにIKK2の蛋白を安定化しそのユビキチン化フォームを増加させた。さらにNa channel阻害剤のp53蛋白安定化作用はp53のE3リガーゼのdominant negativeを共発現させることで消失した。以上の結果はNa channel阻害剤が20Sプロテアソーム活性を阻害することで半減期の短い蛋白を共通して安定化し、その機能性蛋白を増加させることが明らかとなった。心房細動時にその心臓型ATP感受性Kチャンネルの活性が現弱することが知られている。ATP感受性KチャンネルはKir6.2とスルフォニール受容体(SUR2A)の4量体で形成される。Kir6.2の半減期は短くプロテアソーム阻害剤にて蛋白が安定化しユビキチン化フォームが増加すること、さらにプロテアソームの阻害によりKir6.2とSUR2Aの共発現系ならびにラット胎児心筋の初代培養系において心臓型ATP感受性Kチャンネル活性を有意に増加できた。以上の結果はKir6.2蛋白はユビキチン・プロテアソーム系で分解しプロテアソーム阻害剤により機能性の心臓型ATP感受性Kチャンネルを増加させることを明らかにした。Na channel阻害剤であるaprindineはKir6.2蛋白の半減期を延長し、Kir6.2蛋白を安定化し同時にユビキチン化フォームを増加した。またSUR2AとKir6.2との共発現による心臓型ATP感受性Kチャンネル活性をaprindineは増加することが出来た。一方、患者のKir6.2のSNPs解析によりユビキチン・プロテアソームの標的リジンのSNPsが存在することが判明した。これらの結果からNaチャンネル阻害剤によるプロテアソーム系の制御により心房細動時に減少するチャンネルを増加できること、さらにその薬剤反応性にはSNPsで規定される多形性が存在することが明らかとなった。心房細動の持続によりイオンチャンネルが減少し薬剤抵抗性となる事が知られている。本研究ではKv1.5 channelのprocessingにおけるHSP70の作用を検討しそのチャンネル蛋白安定化作用の分子機構を明らかにし、これを利用してイオンチャンネルを増加させる方法を探査する事を目的とするが本年はHSP70のKv1.5チャンネル蛋白への作用について検討した。1) HSP70によるKV1.5チャンネル蛋白の安定化作用培養COS7細胞にflagのtagがついたKv1.5チャンネルcDNAとHAのtagのついたHSP70を遺伝子導入しKv1.5チャンネル〓蛋白発現をウェスタンブロットにて検討した。HSP70はKv1.5チャンネル蛋白の発現を有意に増加させた。この時HSP70の発現は〓いた。

2) HSP70のKv1.5チャンネルユビキチン化への作用培養COS7細胞にflagのtagがついたKv1.5チャンネルcDNAとHAのtagのついたHSP70を遺伝子導入し抗flag抗体〓降後に抗ユビキチン抗体でimmunoblotするとユビキチン化はHSP70作用前後で差を認めなかった。3) HSP70のKv1.5イオンチャンネル蛋白の細胞内局在への作用培養COS7細胞にflagのtagがついたKv1.5チャンネルcDNAとHAのtagのついたHSP70を遺伝子導入し細胞内でのチャンネルの局在を共焦点レーザー顕微鏡にて検討した。Kv1.5チャンネルはER及びGolgi体に局在するがHSP70の共発現により有〓及びGolgi体でのKv1.5チャンネルの発現が増加した。4)HSP70の細胞膜Kv1.5チャンネル電流増加作用培養COS7細胞にflagのtagがついたKv1.5チャンネルcDNAとHAのtagのついたHSP70を遺伝子導入し細胞膜でのチャンネル電流をpatch-clamp法で測定した結果、HSP70はKv1.5チャンネル電流を有意に増加できた。次年度はHSP70のチャンネル安定化作用がイオンチャンネルのprocessingのどの段階で発現しているのかについてさらに詳細に検討してゆく予定である。Na channel阻害剤であるlidocaineならびにpilsicainideはプロテアソームにより分解されるKv1.5蛋白を安定化しユビキチン化フォームを増やした。さらに本剤は小胞体ならびにゴルジ体でのKv1.5の局在を増やし、細胞膜でのKv1.5でコードされるI_<Kur>を増やした。さらにNa channel阻害剤はクラス効果として20Sプロテアソーム活性を阻害したが、一方でCa拮抗剤やKチャンネル阻害剤は20Sプロテアソーム阻害効果を認めなかった。Na channel阻害剤は半減期の短いp53ならびにIKK2の蛋白を安定化しそのユビキチン化フォームを増加させた。さらにNa channel阻害剤のp53蛋白安定化作用はp53のE3リガーゼのdominant negativeを共発現させることで消失した。以上の結果はNa channel阻害剤が20Sプロテアソーム活性を阻害することで半減期の短い蛋白を共通して安定化し、その機能性蛋白を増加させることが明らかとなった。心房細動時にその心臓型ATP感受性Kチャンネルの活性が現弱することが知られている。ATP感受性KチャンネルはKir6.2とスルフォニール受容体(SUR2A)の4量体で形成される。Kir6.2の半滅期は短くプロテアソーム阻害剤にて蛋白が安定化しユビキチン化フォームが増加すること、さらにプロテアソームの阻害によりKir6.2とSUR2Aの共発現系ならびにラット胎児心筋の初代培養系において心臓型ATP感受性Kチャンネル活性を有意に増加できた。
実次元超顕微解析に基づく異方性ＮｄＦｅＢ系磁石材料の配向組織制御

高い保磁力を保ちつつ磁化を高めた結晶粒配向組織への制御指針を得るために、3つの製法で作製した異方性Nd-Fe-B系磁石材料について実次元超顕微解析を行い、1. HDDR磁石の微結晶配向組織に及ぼす構造的要因の制御、2.熱間加工磁石の微結晶配向組織に及ぼす構造的要因の制御、3. PLD厚膜磁石のナノコンポジット組織の解析、の3つの課題に取り組んだ。特筆すべき成果は、サブミクロンレベルのNd2Fe14B微細粒の配向組織についてプリセッション電子回折法による結晶方位解析を実現し、Nd2Fe14B微細粒のc軸配向度に影響する因子を解明して磁化を向上させる制御指針を得たことである。高い保磁力を保ちつつ磁化を高める結晶粒配向組織への制御技術を確立するために、水素処理(HDDR)法および熱間加工法で作製した異方性Nd-Fe-B系磁石材料について、プリセッション電子回折や高効率EDS組成分析など最新顕微法を統合した実次元超顕微解析を行った。配向したサブミクロン微細粒組織が得られるHDDR法については、処理過程後半の脱水素過程における再結合Nd2Fe14B微細粒の結晶配向度をプリセッション電子回折法により評価した。定圧脱水素処理後はα-FeとNdH2分解相がわずかに残存しているものの、200-300nm程の微細な再結合Nd2Fe14B粒にほぼ再結合していた。これらの再結合微細粒のc軸方向は約30°以内に揃っており、さらに2μm程の領域毎に配向度が高いことがわかった。これに完全脱水素処理を施すと、各々のNd2Fe14B微細粒の周囲に数nm程の薄いNd-rich粒界相が生成し、各微細粒のc軸配向度は定圧脱水素後よりもやや低下することが判明した。この結果はHDDR処理においてはNd2Fe14B微細粒が成長と共に配向していくのではなく、再結合初期よりc軸配向した微細粒が生成してくることを示唆しており、配向機構を解明する上で極めて有益な情報である。熱間加工法についてはNd組成の異なる2種類の磁石についてNd2Fe14B微細粒の結晶配向度をプリセッション電子回折により調査した。Nd組成の高い試料の方がNd-rich粒界相が多くなり、熱間加工時の粒界滑りが促進されて配向度が高くなることが明らかとなった。ただし、Nd組成が高くなると異常粒成長が起きやすくなることもわかった。今後、異常粒成長の原因を解明することで、高い保磁力を維持したまま異方性を高める処理条件を検討していく必要がある。本研究では、水素処理(HDDR)法、熱間加工法、パルスレーザー蒸着(PLD)法で作製した異方性Nd-Fe-B系磁石材料について最新顕微法を統合した「実次元超顕微解析」を行って、高い保磁力を保ちつつ磁化を高める組織制御技術の確立をめざす。本年度はまず、HDDR法における異方化機構についての知見を得るために、HDDR処理におけるHD過程の1初期と2終了時、およびDR過程の3定圧脱水素終了時と4完全脱水素終了時の4つの試料を準備し、走査電子顕微鏡(SEM)の電子線後方散乱回折(EBSD)法および透過電子顕微鏡(TEM)のプリセッション電子回折(PED)法を用いて広範囲の結晶方位解析を行った。その結果、試料3の時点でNd2Fe14B微細粒への再結合がほぼ完了しており、各微細粒のc軸もこの段階でほぼ配向していることがわかった。一方、試料1では分解相同士や未分解相との間に明確な結晶方位関係は認められず、試料2では未分解相の残存はまったく観察されなかった。以上のように、SEMレベルの広範囲の方位解析においてもNdH2, α-Fe, Fe2Bの3つの分解相に特別な方位関係などは認められず、再結合Nd2Fe14B粒の方位を決める新たな分解相の存在が示唆する結果が得られた。次に、高配向と低配向のNd2Fe14B微細粒組織が得られる2種類の熱間加工用液体急冷(MQ)フレーク原料の微細組織を高分解能SEMおよびTEMにより調査した。高配向磁石が得られるNd組成の高い試料の方が、粗大なNd酸化物相を多量に含んでおり、これが熱間加工時の異常粒成長を誘起することが判明した。したがって、熱間加工時に粒界滑りを促進するNdを粒界部に多く含んだMQ原料を、できるだけ酸化させず熱間加工に供することで、結晶配向度と保磁力の両方を改善できるものと推察できる。

本研究では,高い保磁力を保ちつつ磁化を高める組織制御技術の確立するために,水素処理(HDDR)法,熱間加工法,パルスレーザー蒸着(PLD)法で作製した異方性Nd-Fe-B系磁石材料について最新顕微法を統合した実次元超顕微解析を行った.本年度はまずHDDR磁石の水素減圧時間について検討を行った.水素減圧速度を落とすと,Nd-rich粒界相はほとんど変化しないが,再結合Nd2Fe14B粒の平均粒径がやや増大して保磁力が低下する.しかし,水素減圧速度を落とすと,再結合Nd2Fe14B粒の方位分散が小さくなって,残留磁化が向上することがわかった.そこで,出発原料のNdをDi(Nd+Pr)に替え,これに水素減圧処理を施したところ,結晶粒径や方位などの微細組織を変えることなく,再結合Nd2Fe14B粒のNdがDiで置換されて異方性磁界の高いPrが導入され,保磁力を保ちつつ磁化を向上できることが明らかとなった.一方,単相ターゲットを用いてPLD成膜したものにパルス熱処理を施すだけで,比較的高い磁化が発現する厚膜磁石が得られることを見出した.実次元超顕微解析を行った結果,粒径15 nmほどの非常に微細なα-FeとNd2Fe14B粒が等間隔で交互に配列した理想的なナノコンポジット組織となっており,α-Fe粒は堆積方向にほぼ[111]配向していることもわかった.ただし,Nd2Fe14B微細粒はランダム方位で生成しており,今後Nd2Fe14B粒を配向できれば高性能な厚膜磁石が得られるものと期待できる.以上の結果を前年度までの結果と併せて処理条件などを検討し,高い保磁力と磁化を両立させたNd-Fe-B系磁石材料の微細組織制御に関する知見を総括した.26年度が最終年度であるため、記入しない。工学26年度が最終年度であるため、記入しない。サブミクロン微細粒の方位解析はプリセッション電子回折法の適用によりデータ取得が可能となり、Nd2Fe14B微細粒の配向度に関しては学術的にも工学的にも充分価値ある成果が得られつつある。ただし、プリセッション電子回折法では一度に解析できる領域が数ミクロンオーダーと狭いため、繰り返し実験を行ってデータ量を増やす必要がある。これまでのところは当初計画していたデータはほぼ取得できており、申請書に記載した研究の目的はおおむね達成することができている。HDDR磁石については、結晶構造が複雑なNd2Fe14B微細粒組織についてはSEM-EBSD法の適用は困難であるが、プロセス途中の相分解組織についてはSEM-EBSD法で解析できるようになり、PED法に比べて広範囲を簡便に解析できるため、この解析法が当初の計画以上に威力を発揮しつつある。一方、熱間加工磁石については、予想以上に時間のかかる解析となったが、全体的には申請書に記載した研究の目的はおおむね達成できている。26年度が最終年度であるため、記入しない。HDDR法については更にデータ量を増やすと共に、処理過程前半の水素化・相分解組織についても方位解析を行って、再結合時の結晶配向度を左右する原因を解明していく。また、熱間加工法については異常粒成長の原因を調査すると共に、主相粒界〓傍を高効率EDS組成分析を駆使した実次元超顕微解析を行って、配向度に及ぼす結晶粒界近傍の微細構造について知見を得て行う予定である。HDDR法については処理過程前半のHDプロセスにおける組織変化に注目し、SEM-EBSD法によるさらに詳細な方位解析を行うと共に、特徴的な箇所を集束イオンビーム(FIB)加工で抜出して最新鋭のTEMによる元素(特にボロン)の挙動などの解析を行って、方位配向を左右する原因を解明する。また、PLD厚膜磁石についても解析に着手し、配向組織に及ぼすTa基板の役割やPLD蒸着条件などについての知見を得る。
酸化ストレスによる塩基配列特異的DNA損傷の解析と発がんおよび老化の予防

本研究において環境因子、特に環境化学物質や食品成分およびその代謝物、食品添加物、紫外線(UVA)等と生体内物質(微量金属や還元物質、光増感物質)の共存下において生成される各種活性酸素種による塩基配列特異的DNA損傷について単離DNAや培養細胞等を用いて総合的に解析を行い、遺伝子上のどの配列部位に損傷が生じやすいのかを詳細に解明した。また、化学予防物質の有効性と安全性の評価も行った。我々は本研究において以下の諸点を明らかにした。(1)発がんにおける塩基配列特異的DNA損傷の役割発がん性大気汚染物質ベンゾ[a]ピレンの代謝物が、p53がん抑制遺伝子のホットスポットcodon 273の相補的配列5'-ACG-3'のCとGの2塩基を連続して強く損傷するという非常に興味深い知見を得た。また、DMA付加体の形成で説明されてきた多環芳香族アミノ化合物の発がん性に酸化的DNA損傷も重要な役割を果たしうる新たな可能性を示した。その他、環境化学物質や有機溶剤、殺虫剤、医薬品、食品成分等が活性酸素を生成し塩基配列特異的にDNAを損傷することを認めた。さらに、UVAが光増感物質(葉酸や医薬品等)の存在下で、連続したG配列を酸化することを認めた。(2)老化における塩基配列特異的DNA損傷の役割我々は、UVA照射や酸化ストレスにより、テロメア繰り返し配列中の5'-GGG-3'配列に特異的に8-oxodGが生成することを初めて報告した。さらに、UVA照射量に依存して、テロメア繰り返し配列の短縮促進を認めた。(3)化学予防物質の有効性と安全性の評価ポリフェノール類やフフボノイド類等の安全性についてDNA損傷性を指標に検討を行った結果、酸化促進作用を有する安全性に問題のある物質が存在することが認められた。一方、フィチン酸等は、酸化促進作用を示さないことから安全で有効ながん化学予防物質になりうると考えられる。本研究は、環境因子、特に環境化学物質や食品成分、食品添加物およびその代謝物、紫外線(特にUVA)等と生体内物質(微量金属や還元物質、光増感物質)の共存下において生成される各種活性酸素種による塩基配列特異的DNA損傷について単離DNA、培養細胞、実験動物を用いて総合的に解析を行い、遺伝子上のどの配列部位に損傷が生じやすいのかを詳細に解明することを目的としている。本年度は、殺虫剤や染料に使われている発がん物質アゾベンゼンやディーゼルの排気ガスに含まれている大気汚染物質で発がん性のあるニトロピレン、産業化学物質のジメチルホルムアミド、発がん物質のジメチルアミノアゾベンゼン、またはそれらの代謝物が2価の銅の存在下で活性酸素を生成し塩基配列特異的にDNA損傷することを認めた。また、生体内増感物質や医薬品(キノロン系抗菌剤ナリジクス酸等)の存在下で、UVAが連続したグアニンに特異的に8-オキソグアニンを生成することを認めた。8-オキソグアニンの生成は遺伝子に突然変異を導入することが報告されている。さらに、UVAはヒト繊維芽細胞のゲノムDNAにおいて老化に関与しているテロメア領域の短縮を促進した。これらの結果を基に、発がんや老化の予防の安全性を評価するため、がん化学予防物質に使われているが使われる可能性のある、β-カロチン、イソシアネイト類、フラボノイド類の安全性についてDNA損傷性から検討を行った。

その結果、ビタミンA、アリルイソシアネイト、ケルセチンは生体内物質の存在下でDNAを損傷した。従って、がん化学予防物質には、抗酸化作用と酸化促進作用を有する安全性に問題のある物質があることを認められた。今後、さらに酸化ストレスによる塩基配列特異的DNA損傷の解析を行い、発がんおよび老化の予防を目指す。本研究は、環境因子、特に環境化学物質や食品成分、食品添加物およびその代謝物、紫外線(特にUVA)等と生体内物質(微量金属や還元物質、光増感物質)の共存下において生成される各種活性酸素種による塩基配列特異的DNA損傷を単離したがん関連遺伝子断片を用いて検討した。さらに、培養細胞、実験動物を用いてDNA損傷と活性酸素種生成についても解析を行った。本年度は、たばこの煙に含まれている発がん物質4-アミノビフェニルや自動車の排気ガスに含まれる大気汚染物質で発がん性のあるベンゾ[a]ピレンおよびベンゼン、2-ニトロプロパン、ニトロピレンの代謝物、産業化学物質のアクリロニトリル、アニリン、アニシジン、発酵食品に含まれるウレタン、医薬品に用いられているヒドロキシウアやダントロン等の発がん物質またはその代謝物が銅イオンの存在下で活性酸素を生成し塩基配列特異的にDNAを損傷することを認めた。また、培養細胞や実験動物においても活性酸素生成とDNA損傷を認めている。以上の結果から単環芳香族や低分子の化合物の発がん性には活性酸素が関与していることを初めて明らかにし、さらに今までDNA付加対の形成で説明されてきた多環芳香族化合物の発がん性に酸化的DNA損傷も重要な役割を果たしうる可能性を本研究で示した。UVAが老化に関与しているテロメアのGGG配列を特異的に切断することにより、ヒト繊維芽細胞のテロメア領域の短縮促進に関与することが示唆された。発がんや老化の予防を有効に進めるため化学予防物質の安全性についてDNA損傷を指標に検討した。その結果、ルテオニンやフィチン酸はDNA損傷性が認められ無かったことから安全で有効ながん化学予防物質になりうると考えられる。本研究は、環境因子、特に環境化学物質や食品成分、食品添加物とその代謝物および紫外線(特にUVA)が生体内物質(微量金属や還元物質、光増感物質)との共存下において生成される各種活性酸素種による塩基配列特異的DNA損傷を培養細胞や単離したがん関連遺伝子断片を用いて検討した。本年度は、調理過程で生じる発がん物質ヘテロサイクリックアミン(PhIP)が、銅イオンの存在下で活性酸素を生成しDNAを損傷することを明らかにし、今までDNA付加対の形成で説明されてきた多環芳香族化合物の発がん性に酸化的DNA損傷も重要な役割を果たしうる可能性を示した。さらに、たばこの煙に含まれている2-ナフチルアミン、ディーゼルの排気ガスに含まれる大気汚染物質ニトロフルオレンおよび産業化学物質のカテコールやトリニトロトルエン等の発がん物質またはその代謝物が金属イオンの存在下で活性酸素を生成し塩基配列特異的にDNAを損傷することを解明した。以上の結果から、これらの環境化学物質の発がん性には活性酸素が重要な役割を果たしていることを明らかにした。
野生有害哺乳動物に対する食物嫌悪条件づけの応用研究

野生有害獣対策としての野外における食物嫌悪条件づけの効果を検討した。近年人間生活圏への侵入が問題化しているキタキツネを対象とし、恵庭市郊外のキタキツネの定期的採食が観察される地域を調査地に選択した。標的食物としてはキツネが調査地において日常的に摂取しているニジマスを用い、魚切片に相当量の粉末塩化リチウム(安全性の高い催吐剤)を混入してキツネの餌場に設置し、摂取後の採食行動の変化を自動車内から観察した。実験スケジュールは第一段階(塩化リチウム未処理餌呈示:7日間)、第二段階(塩化リチウム処理餌呈示:7日間)、第三段階(再度未処理餌呈示:7日間)を設定し、餌の消費数・餌場への侵入回数を記録した。個体識別されたキツネは5頭であり、うち3頭が複数回確認され2頭が塩化リチウムで処理された標的食物を摂取した(1頭は1回、もう1頭は2回)。第二段階での塩化リチウム処理餌摂取後、直ちに餌消費数・餌場侵入回数は激減し、特に第二段階後半ではともに0となり、キツネの姿も確認されなかった。だが、第三段階にはいるとすぐにキツネがあらわれ、その後餌消費数・餌場侵入回数ともに増加回復を示した。一般に食物嫌悪条件づけは少ない試行数で長期的効果が得られることが特徴とされてきたが、今回は標的食物回避の兆候は直ちにあらわれたものの、効果は短期的なものであった。その原因としては、キツネが塩化リチウム処理餌と未処理餌を味覚・嗅覚的に識別してしまった可能性があること、および今回のように標的食物が日常的に摂取されている場合、先行する安全学習の効果が強く影響を与えていることが予想され、標的食物投与の方法・投与間隔の問題など、厳密な実験下での効果的条件づけスケジュールの検討が今後の課題であろう。
主要組織適合抗原系の遺伝子構造解析:その分子進化と遺伝的多型の機構

主要組織適合抗原系(MHC)は臓器移植の際に極めて重要な遺伝子群である。これは従来から移植の臨床で免疫学的方法によって,ドナーとレシピエントのタイピングを行い,そのMHC型(ヒトではHLA型)が合うか否かを判定する事でよく知られている。さらにMHCは免疫担当細胞が自己と非自己の識別をする際に,自己マーカーの役割を担っていることが判明している。一方,MHCは一つの遺伝子座あたり30個以上もの遺伝的多型が存在し,ヒト集団内での遺伝的多様性が異常に高い。この多型は従来は免疫血清学的に同定され,通称HLA型(白血球抗原型)とされたもので,同定するための血清は輸血経験者,妊婦の血清から分離されており,良質の血清を得ることは極めて困難な作業であった。この数年間のこのMHC型が遺伝子DNAの塩基一次配列の相違として報告され,この遺伝子内に多数の点突然変異が存在する事が判明した。研究代表者らはこのMHC遺伝子のDNA上の配列差違をPCR法を応用することにより移植患者(レシピエント)と臓器提供者(ドナー)のHLA型が合致するか否かの判定法を開発した。PCRで増巾したHLA-クラスII型遺伝子DPおよびDOについてSinale Strand Conformation Polymorphismをゲル電気泳動によって検出するものである。その結果を従来の血清学的手法と比較し,充分DNA分析によってドナーとレシピエントのマッチングの判定が可能であることを示した。またこの方法はヒト集団中のHLA多型を判定する強力な方法であり,従来血清学的方法で判定不能であった新しい型の同定にも利用できることが判明した。主要組織適合抗原系は臓器移植の際に極めて運要な遺伝子群である。これは従来から移植の臨床で血清学的方法よってドナ-とレシピエントのタイピングを行い,そのHLA型が合うか否かを判定する事でよく知られている。一方この抗原系遺伝子は一つの遺伝子座あたり30個以上もの遺伝的多型が存在し,莫大なHLA型が存在する。この多型は異常に高い。この多型機構を解析する目的で,まず従来のDNAの情報を整理しこれをデ-タベ-ス化した。このデ-タベ-スにもとづき配列相互の比較から変異の様相を解析し,点突然変異の方向性,同義置換と非同義置換数の比較を行いその多型機構としてもっとも可能性の高い超優性機構の可能性が高いことは見い出した。その結果は1990年1月のヒュ-マン・ゲノムプロジェクト・シンポジウム,国際人類生物学会シンポジウム,日本人類遺伝学会,ゲノム情報の班会議で発表した。さらにHLA遺伝子群内のDRB1,DOB1遺伝子群についてPCR法によるDNA部分領域の増巾およびYのDNAのゲル泳動による泳動パタ-ンの差異によるタイピングの開発を行い,雑誌TRANSPLANTAIONに投稿中である。文献的に収集したHLAーDNA情報の整理とアライメント作りは軌道にのっており,多目的に利用可能なデ-タベ-スとして公開できる。これは従来から移植の臨床で免疫学的方法によって、ドナーとレシピエントのタイピングを行い、そのMHC型(ヒトではHLA型)が合うか否かを判定する事でよく知られている。さらにMHCは免疫担当細胞が自己と非自己の識別をする際に、自己マーカーの役割を担っていることが判明している。一方、MHCは一つの遺伝子座あたり30個以上もの遺伝的多型が存在し、ヒト集団内での遺伝的多様性が異常に高い。

この多型は従来は免疫血清学的に同定され、通称HLA型(白血球抗原型)とされたもので、同定するための血清は輸血経験者、妊娠の血清から分離されており、良質の血清を得ることは極めて困難な作業であった。この数年間はこのMHC型が遺伝子DNAの塩基一次配列の相違として報告され、この遺伝子内に多様の点突然変異が存在する事が判明した。研究代表者らはこのMHC遺伝子のDNA上の配列差違をPCR法を応用することにより移植患者(レシピエント)と臓器提供者(ドナー)のHLA型が合致するか否かの判定法を開発した。PCRで増巾したHLA-クラス2型遺伝子DPおよびDOについてSingle str and Conformation Polymorphismをゲル電気泳動によって検出するものである。その結果を従来の血清学的手法と比較し、充分DNA分析によってドナーとレシピエントのマッチングの判定が可能であることを示した。またこの方法はヒト集団中のHLA多型を判定する強力な方法であり、従来血清学的方法で判定不能であった新しい型の同定にも利用できることが判明した。