hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
自然老化、アルツハイマー病における細胞骨格変化とその脳内情報伝達系への影響

健常人(18-89歳)、アルツハイマー病者の死後脳を用いて、脳各部位における受容体-G蛋白質-効果器系の変化を検索した。tubulinn機能の検索については、人脳からの精製が出来ずラットのものを使用した。I)生理的加齢【加齢に伴う各G蛋白質[Gs(GsH,GsL),Gi,Go,Gq,Gb]量の変化】GsHは全ての領域において有意な変化は認められなかった。GsLは尾状核で有意な減少を示したが、他の領域では有意な変化はみられなかった。Giは大脳皮質側頭葉領域を除く全ての領域で有意な減少を認めた。また側頭葉領域においても減少傾向を示した。Goは尾状核で有意な減少が認められたが、他の領域では有意な変化はみられなかった。Gqは大脳皮質頭頂葉及び扁桃体領域において有意に減少しており、他の大脳皮質領域においても減少傾向を示した。Gbは大脳皮質側頭葉及び後頭葉領域で有意な減少が認められた。一方、脳内部位別に比較すると、尾状核領域では大脳皮質領域で認められたGiの減少に加え、GsL,Goの有意な減少が認められた。【加齢に伴う各G蛋白質[Gs,Gi/o(Gi及びGo)]機能の変化】各G蛋白質に対するAAGTP結合量はいずれの領域においても加齢との有意な相関は認められず、またGsとGi/oのAAGTP結合量の比はほぼ一定であった。【加齢に伴うAC活性の変化】基礎及び刺激薬(MnC12,NaF,forskolin)AC活性値は、加齢との有意な相関は認められなかった。しかしながら、ラットでは加齢に伴い、チューブリンとGiとの相互作用が減少しており、今後この点を更に検討する必要がある。II)アルツハイマー型痴呆(DAT)におけるGTP結合蛋白質の量と機能の変化について【G蛋白質量の変化】大脳皮質頭頂葉,側頭葉領域ともに、いずれのG蛋白質subtypeにおいても、DAT群と対照群間に有意な差は認められなかった。【G蛋白質機能の変化】GsaのAAGTP結合量は、DAT群で対照群に比し、側頭葉領域で約30%、頭頂葉領域で約40%の有意な減少が認められた。GioalphaのAAGTP結合量は、両領域ともに有意な変化は認められなかった。GsalphaとGi/oalphaのAAGTP結合量の比は、DAT群で対照群に比し二領域とも約40%の有意な低下を示した。以上より、本研究にみられたヒト死後脳の生理的加齢におけるAc系と共役するG蛋白質の量的変化は、直接機能的変化に結びついておらず、何らかの代償性調節が働いていることが示唆された。但し動物実験では、チューブリン機能の変化が示唆され、今後の検討が必要と思われた。一方、加齢に関連した疾患の代表例であるDATにおいては、G蛋白質の量に関して、対照群との間に有意な差は認められなかった。しかしながらAAGTP結合実験においては、DAT群でGsに対するAAGTP結合量の減少が認められ、Gsの機能的低下が示唆された。またGsとGi/oのAAGTP結合量の比もDAT群において低下しており、G蛋白質の機能的バランスの障害が示唆された。この障害の発症メカニズムが疾病解明の重要な鍵になると思われた。II)アルツハイマー型痴呆(DAT)におけるGTP結合蛋白質の量と機能の変化について【G蛋白質量の変化】

大脳皮質頭頂葉,側頭葉領域ともに、いずれのG蛋白質subtypeにおいても、DAT群と対照群間に有意な差は認められなかった。【G蛋白質機能の変化】GsaのAAGTP結合量は、DAT群で対照群に比し、側頭葉領域で約30%、頭頂葉領域で約40%の有意な減少が認められた。GioalphaのAAGTP結合量は、両領域ともに有意な変化は認められなかった。GsalphaとGi/oalphaのAAGTP結合量の比は、DAT群で対照群に比し二領域とも約40%の有意な低下を示した。以上より、本研究にみられたヒト死後脳の生理的加齢におけるAc系と共役するG蛋白質の量的変化は、直接機能的変化に結びついておらず、何らかの代償性調節が働いていることが示唆された。但し動物実験では、チューブリン機能の変化が示唆され、今後の検討が必要と思われた。一方、加齢に関連した疾患の代表例であるDATにおいては、G蛋白質の量に関して、対照群との間に有意な差は認められなかった。しかしながらAAGTP結合実験においては、DAT群でGsに対するAAGTP結合量の減少が認められ、Gsの機能的低下が示唆された。またGsとGi/oのAAGTP結合量の比もDAT群において低下しており、G蛋白質の機能的バランスの障害が示唆された。この障害の発症メカニズムが疾病解明の重要な鍵になると思われた。
運動は筋の萎縮やそれに伴う機能低下を軽減させるか?

ギプス固定よる筋萎縮ならびに筋機能低下を軽減させることを目的にギプス固定前に異なる様式の運動を負荷し、機能的、組織化学的指標から運動の効果を調べた。実験にはICR系雄マウスを用いた。運動は持久的走運動(分速20m,角度5度),水泳(水温35度Cで遊泳),アイソメトリック運動(体重の10%の重りをつけた状態で金網の垂直面を維持、1セット5分×12セット)でいずれも1日60分週5日、10週間行った。トレーニング終了時、足底筋、ヒラメ筋とも体重あたりの相対重量は対照に比べ高く、疲労耐性に優れていた。その後のギプス固定により筋重量、最大筋力及び疲労耐性の低下が観察されたが、その低下率は固定前に運動を負荷していないギプス固定群に比べ低く、絶対値でも固定前に運動を負荷したギプス固定群の方が高値を示した。ギプス固定によりヒラメ筋では単収縮の時間経過の延長が、足底筋では短縮が見られ、遅筋と速筋で異なる変化が見られた。これらの収縮速度に関する機能の変化はギプス固定前に運動を負荷することにより小さくなった。組織化学的には両筋において相対的に速筋化が見られた。筋損傷の程度はギプス固定前に運動を負荷したことにより若干の軽減が認められた。したがってヒラメ筋に筋損傷が顕著であったことはギプス固定によるヒラメ筋の単収縮の遅延と速筋化という相反する変化の部分的な説明として考えられた。運動様式の違いから運動の効果を比較すると水泳運動に比べ走運動やアイソメトリック運動の方がギプス固定に伴う筋萎縮や筋機能の変化ならびに筋損傷の出現を少なくさせた。以上の結果から、運動はギプス固定による筋の萎縮や機能変化を軽減させることが示唆された。このことは脱ギプス固定後の生理的な筋の重量並びに機能の回復を早めることと推察される。
中高齢者を対象とした日常生活における身体各部位の筋活動量に関する研究

これまでの我々の研究により,加齢に伴い筋量及び筋機能の低下が生じ,それは,身体の部位差が見られることが明らかになってきた.この要因として,日常生活における各筋群における筋活動水準が異なることが推察される.そこで本研究では日常生活における身体各部位の筋の活動状態を定量することにより,加齢による筋量や筋機能低下と筋の活動水準の関係を明らかにすることを目的とした.本年度においては,加齢に伴い筋量低下が生じる筋群を対象とした筋力トレーニングの重要性を背景とし,筋力トレーニングを実施するうえで各筋の活動水準を考慮する必要性があることから,加齢による筋量低下が顕著である腹直筋,大腿前部及び下腿後部筋群を対象とした筋力トレーニングを実施した.被検者は,66歳から73歳の男性2名及び女性8名であった.被検者には,腹直筋,大腿前部および下腿後部を対象とした自重を用いた筋力トレーニング動作を行わせ,そのときの腹直筋,脊柱起立筋,内側広筋,大腿直筋,外側広筋,大腿二頭筋,前脛骨筋,腓腹筋内側頭の計8筋の表面筋電図を導出した.そして,トレーニング動作時における筋活動水準を定量した.本研究の結果よりトレーニングを対象とした筋の活動水準は高く,40%MVCレベル以上であったことから,加齢の影響を受けやすいとされる腹部,大腿前部の筋に対し,有効なトレーニング刺激となることが推察された.特に,腹筋動作,椅子座り立ち動作,膝持ち上げ動作は,日常生活における仰臥位から起き上がり動作,椅子からの立ち上がり動作及び階段の昇り降り動作に類似したものであり,これらのトレーニング動作を用いたトレーニングによって,日常生活動作を比較的簡単に行うことができるようになることが推察された.これまでの我々の研究により,加齢に伴い筋量及び筋機能の低下が生じ,それは,身体の部位差が見られることが明らかになってきた.この要因として,日常生活における各筋群における筋活動水準が異なることが推察される.そこで本研究では日常生活における身体各部位の筋の活動状態を定量することにより,加齢による筋量や筋機能低下と筋の活動水準の関係を明らかにすることを目的とした.本年度においては,加齢に伴い筋量低下が生じる筋群を対象とした筋力トレーニングの重要性を背景とし,筋力トレーニングを実施するうえで各筋の活動水準を考慮する必要性があることから,加齢による筋量低下が顕著である腹直筋,大腿前部及び下腿後部筋群を対象とした筋力トレーニングを実施した.被検者は,66歳から73歳の男性2名及び女性8名であった.被検者には,腹直筋,大腿前部および下腿後部を対象とした自重を用いた筋力トレーニング動作を行わせ,そのときの腹直筋,脊柱起立筋,内側広筋,大腿直筋,外側広筋,大腿二頭筋,前脛骨筋,腓腹筋内側頭の計8筋の表面筋電図を導出した.そして,トレーニング動作時における筋活動水準を定量した.本研究の結果よりトレーニングを対象とした筋の活動水準は高く,40%MVCレベル以上であったことから,加齢の影響を受けやすいとされる腹部,大腿前部の筋に対し,有効なトレーニング刺激となることが推察された.特に,腹筋動作,椅子座り立ち動作,膝持ち上げ動作は,日常生活における仰臥位から起き上がり動作,椅子からの立ち上がり動作及び階段の昇り降り動作に類似したものであり,これらのトレーニング動作を用いたトレーニングによって,日常生活動作を比較的簡単に行うことができるようになることが推察された.本研究では日常生活における身体各部位の筋の活動状態を定量し,生活環境と筋の活動水準との関係を明らかにする事から,健康で活動的な生活を保障できる筋肉つくり運動を考案するための基礎的資料を提供しようとするものである。平成15年度は身体各部位の筋の活動状態を評価するシステム(筋活動評価システム)を完成させる為の研究を行った。具体的には以下の測定方法で測定を実施した。すなわち,日常生活における身体各部位の筋活動状態を定量するためにポータブル型の表面筋電図法を用いて,下肢,上肢及び体幹部の8箇所の筋電図を12時間にわたり連続的に記録する方法を確立した。筋放電量は筋力発揮水準と線形の関係を示すことから、日常生活中の筋放電量を計測することから各筋群の筋力発揮水準を推測することが可能であった。健康な成人男女を対象に日常生活活動の筋放電パターンを計測した。その結果、身体各部位の筋によりその活動水準が異なることが明らかになった。日常生活において最も活動水準が高い筋は下腿3頭筋であり、活動水準が低い筋として大腿4頭筋が示された。筋は加齢と共に萎縮しその傾向は特に大腿四頭筋に著い事が明らかにされているが、その原因として自営生活における大腿四頭筋の活動水準が低いことが考えられた。一方、超音波断層法を用いて、身体各筋群の弾性特性を計測した結果、弾性特性は筋群により又個人により大きな差が見られ、その個人差は歩行、走行などの身体運動のパフォーマンスに大きな影響を与えることが示された。これまでの我々の研究により,加齢に伴い筋量及び筋機能の低下が生じ,それは,身体の部位差が見られることが明らかになってきた.この要因として,日常生活における各筋群における筋活動水準が異なることが推察される.

そこで本研究では日常生活における身体各部位の筋の活動状態を定量することにより,加齢による筋量や筋機能低下と筋の活動水準の関係を明らかにすることを目的とした.本年度においては,加齢に伴い筋量低下が生じる筋群を対象とした筋力トレーニングの重要性を背景とし,筋力トレーニングを実施するうえで各筋の活動水準を考慮する必要性があることから,加齢による筋量低下が顕著である腹直筋,大腿前部及び下腿後部筋群を対象とした筋力トレーニングを実施した.被験者は,66歳から73歳の男性2名及び女性8名であった.被検者には,腹直筋,大腿前部および下腿後部を対象とした自重を用いた筋力トレーニング動作を行わせ,そのときの腹直筋,脊柱起立筋,内側広筋,大腿直筋,外側広筋,大腿二頭筋,前脛骨筋,腓腹筋内側頭の計8筋の表面筋電図を導出した.そして,トレーニング動作時における筋活動水準を定量した.本研究の結果よりトレーニングを対象とした筋の活動水準は高く,40%MVCレベル以上であったことから,加齢の影響を受けやすいとされる腹部,大腿前部の筋に対し,有効なトレーニング刺激となることが推察された.特に,腹筋動作,椅子座り立ち動作,膝持ち上げ動作は,日常生活における仰臥位から起き上がり動作,椅子からの立ち上がり動作及び階段の昇り降り動作に類似したものであり,これらのトレーニング動作を用いたトレーニングによって,日常生活動作を比較的簡単に行うことができるようになることが推察された.
脂質キナーゼ欠損によるがん抑制メカニズムの解明

がん抑制遺伝子PTENの欠損により種々のがんが発症する。我々は哺乳細胞におけるホスファチジルイノシトール3リン酸(PI3P)を産生する遺伝子産物Pik3c3と、PtenのT細胞種特異的二重欠損マウスを樹立し、Pten単独欠損マウスにおいて発症するがんが、このPten/Pik3c3二重欠損マウスにおいては抑制され、延命するという知見を得た。Pten欠損マウスと二重欠損マウスとの比較解析により、Pten欠損マウスT細胞においては原がん遺伝子産物Aktが異常活性化状態にあるのに対し、二重欠損マウスT細胞においてはAktの異常活性化が抑制されることを見出した。がん抑制遺伝子PTENの変異や欠損により種々のがんが発症する。申請者は、哺乳細胞におけるホスファチジルイノシトール3リン酸(PI3P)産生酵素をコードする遺伝子Pik3c3とPtenのT細胞種特異的二重欠損マウスを樹立し、Pten単独欠損マウス(以下、Pten欠損マウスとする)において発症するがんが、このPten/Pik3c3二重欠損マウス(以下、二重欠損マウスとする)においては抑制されるという知見を得た。本研究の目的は、Pten欠損に起因する発がんが、Pik3c3をも欠損することにより抑制されるメカニズムを明らかにし、新たながん治療へとつながる知見を得る事である。昨年度、Pten欠損マウスにおいて亢進するAktのリン酸化が、二重欠損マウスにおいては抑制されていることを見出した。Aktのリン酸化が抑制されていたことから、二重欠損マウスにおいては、Pten欠損に起因するPI(3,4,5)P3の蓄積から回復している事が考えられた。しかしながら、in vivoにおけるPIPs定量解析を行ったところ、予想に反して二重欠損マウス胸腺細胞においても、Pten欠損マウスと同様にPI(3,4,5)P3の蓄積が認められた。今日までPten欠損によるがんは、PI(3,4,5)P3の蓄積により惹起されるAktのリン酸化亢進に帰結されてきたが、本知見によりAktのリン酸化亢進にはPI(3,4,5)P3の蓄積のみならずPik3c3も必要である可能性が示唆された。申請者は哺乳細胞におけるホスファチジルイノシトール3リン酸(PI3P)を産生する遺伝子産物Pik3c3と、PtenのT細胞種特異的二重欠損マウスを樹立し、Pten単独欠損マウス(以下、Pten欠損マウス)において発症するがんが、このPten/Pik3c3二重欠損マウス(以下、二重欠損マウス)においては抑制され、延命するという知見を得た。本研究の目的は、Pten欠損に起因する発がんが、Pik3c3をも欠損することにより抑制されるメカニズムを明らかにし、新たながん治療へと繋がる知見を得ることである。更に、二重欠損マウスT細胞においては、Aktの下流に位置するS6の活性化が、ほぼ野生型マウスと同等にまで抑制されていることを新たに見出した。興味深いことに、Pten欠損に起因するPI(3,4,5)P3の蓄積は二重欠損マウスにおいても確認された。今日までPten欠損による発がんは、PI(3,4,5)P3の蓄積により惹起されるAktの活性化に帰結されてきたが、本知見によりAktの活性化にはPI(3,4,5)P3の蓄積のみならずPik3c3も必要である可能性が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。分子生物学26年度が最終年度であるため、記入しない。Pten欠損による発がんメカニズムにPik3c3が正に関与していることが遺伝学的に示された。更に、Pik3c3欠損による発がん抑制効果は、既知のPI(3,4,5)P3-Akt経路ではない新たな発がん機序を抑制することによってもたらされる効果であることが示唆された。Pik3c3欠損が生体内PI(3,4,5)P3レベルに影響することなく、いかにAktのリン酸化を負に制御するのかを明らかにする。Pik3c3がin vitroにおいてAktに対するリン酸化酵素活性を有するか検討する。また、recombinant proteinを用いてPik3c3とAktが結合しうるかなどの解析を行う。
国内外来魚における遺伝的撹乱を介した侵略性獲得メカニズムの検証

【背景】遺伝的撹乱によって獲得された新規の遺伝的多様性が外来種の侵略性invasibilityや迅速な適応進化の可能性evolvabilityを増長する可能性が指摘されている。しかし、遺伝的撹乱と侵略性を結び付ける至近的メカニズムについては明らかにされていない。日本を含む東アジアを原産とする小型コイ科魚類モツゴは、国際的な侵略的外来種であり、日本でも国内外に由来するモツゴが各地に移植されている。一方、モツゴと交雑するほど近縁な在来種シナイモツゴ(以下シナイ)は、絶滅危惧IA類に指定されており、遺伝的多様性の喪失が懸念されている。【目的】遺伝的撹乱がモツゴ属魚類のスニーキング行動を増進させ、遺伝的多様性の獲得、ならびに分布拡大に寄与するという「モツゴの侵略性獲得モデル」を検証するために、(1)外来種モツゴと絶滅危惧種シナイの生活史戦略、(2)マイクロサテライト解析によるモツゴの遺伝的撹乱の実態、および(3)遺伝的多様度(血縁度)とスニーキング率の関係を明らかにすることを目的とした。【成果】生活史戦略の種間比較のために、モツゴとシナイのcommon-garden実験を行った。モツゴはシナイよりも成長速度が早く、繁殖期は早くに始まり遅くに終わる傾向が明らかとなった。水槽実験および野外に設置した人工産卵基質より、受精卵(328卵塊)を得た。今後、稚魚の遺伝子型解析からスニーキング成功率を求める。(2)およそ50のマイクロサテライト座のスクリーニングにより種判別、個体識別、親子判別に適当な座の選別を実施した。(3)近親交配に由来する3代目の近交系個体を作出した。2つの異なる産地に由来する個体間の雑種を作出した。【計画】本年度は(1)飼育実験を継続すると共に、(2)マイクロサテライト解析を行う。また、(3)血縁関係の明らかな個体を用いた交配実験を行う。姉妹種間の種の置き換わりメカニズムの解明を目指し、2年以上にわたる水槽飼育実験、個体識別を施した成長や繁殖行動の追跡、という他者に追随を許さない実験計画を遂行している。残すはこれまでに蓄積してきた稚魚サンプルや日本各地のモツゴのマイクロサテライト解析となっているが、それについてもマルチプレックスPCRを用いた簡便なルーチンプロトコルを確立しており、多数のサンプルから効率的に適切な情報(親子関係と種判別)が得られる予定となっている。進捗は順調に進んでいるといえる。最終年度は、交配実験とマイクロサテライト解析を行い、これまでに得られた成果を総合的に考察し、「モツゴの侵略性獲得モデル」を検証する。国内外の学会で成果を発表するとともに論文執筆を行う。【背景】

遺伝的撹乱によって獲得された新規の遺伝的多様性が外来種の侵略性invasibilityや迅速な適応進化の可能性evolvabilityを増長する可能性が指摘されている。しかし、遺伝的撹乱と侵略性を結び付ける至近的メカニズムについては明らかにされていない。日本を含む東アジアを原産とする小型コイ科魚類モツゴは、国際的な侵略的外来種であり、日本でも国内外に由来するモツゴが各地に移植されている。一方、モツゴと交雑するほど近縁な在来種シナイモツゴ(以下シナイ)は、絶滅危惧IA類に指定されており、遺伝的多様性の喪失が懸念されている。【目的】遺伝的撹乱がモツゴ属魚類のスニーキング行動を増進させ、遺伝的多様性の獲得、ならびに分布拡大に寄与するという「モツゴの侵略性獲得モデル」を検証するために、(1)外来種モツゴと絶滅危惧種シナイの生活史戦略、(2)マイクロサテライト解析によるモツゴの遺伝的撹乱の実態、および(3)遺伝的多様度(血縁度)とスニーキング率の関係を明らかにすることを目的とした。【成果】(1)受精卵より同一環境で飼育するcommon-gaeden実験を行った。その結果、モツゴはシナイと比較して成長速度が早いこと、モツゴ雄はシナイよりも早い時期に婚姻色および攻撃性を発現し、なわばりを形成すること、さらにモツゴの成長速度は単独飼育<<混合飼育となり、シナイの成長速度は単独飼育>>混合飼育となる傾向が観察された。いずれの結果もシナイを駆逐しながら分布を拡大するモツゴの侵略性を支持した。次に野外から採集した個体を用いて生殖腺投資量および精子活性の測定を行った。その結果、モツゴの精子はシナイよりも有意に高い濃度を示し、モツゴの小型雄において生殖腺指数が中大型雄よりも高く、スニーカーと推測される個体が見つかった。(3)シナイの異系間雑種およびモツゴの近交系の作出・飼育を実施した。研究者の不測の病気により、対象生物であるモツゴ属魚類の採卵・調査・実験を完了することができず、サンプルを十分に収集することができなかったため、前述【研究実績の概要】の項にある目的(2)マイクロサテライト解析に遅れが生じた。次年度の計画(生活史の種間比較、特に野生集団に由来する個体の生殖腺投資量)を一部繰り上げ、3年間の研究計画を遂行できるよう調整した。その他の実験は概ね順調に進行している。最終年度は、交配実験とマイクロサテライト解析を行い、これまでに得られた成果を総合的に考察し、「モツゴの侵略性獲得モデル」を検証する。国内外の学会で成果を発表するとともに論文執筆を行う。(1)飼育実験を継続し、スニーキング成功率を調べるために、室内外から受精卵を収集する。(2)モツゴ属魚類を対象とするマイクロサテライト解析(種判別、個体判別、親子判別)のルーチン用プロトコルを確立する。(3)血縁とスニーキング頻度の関係を明らかにするための行動実験にむけて、シナイの異系交配個体、ならびに、モツゴの近交系の作出を行う。
慢性心不全に対するアポトーシス抑制因子可溶性Fas遺伝子治療-新たに開発されたガットレスadenovirus vectorを用いた検討-

1)血中可溶性Fasは、コントロールと比較し、可溶性Fas遺伝子治療群で4週目に500ng/ml以上と著明に上昇した。なお、今回の遺伝子治療により産生される可溶性Fasは、マウス可溶性Fasにhuman IgGのFc portionを付加したものであり、血中可溶性Fasの測定は、human IgGのFc portion部を測定することにより行った。2)遺伝子治療群とコントロール群の生存率はそれぞれ、25週令で71%と72%、30週令で50%と48%で、有意な差はなかった。3)25週令および30週令で行われた心エコー検査で、心室拡張末期径、駆出率に両群では差はなかった。30週令で行われた、圧トランスデューサーによる左室内圧の検査で、左室拡張末期圧、収縮期圧に両群で有意な差はなかった。また、30週令でsacrificeした後得られた心重量、心筋線維化、心筋細胞サイズ、アポトーシスのマーカーであるTUNEL陽性の心筋細胞数など、両群の差はなかった。以上より、sFas遺伝子治療は血中および心筋組織内のsFasの著しい上昇にもかかわらず、UM-X7.1ハムスターの心不全の進行を予防しないことが明らかになった。sFasは血中Fas ligandと細胞膜のFas receptorとの結合をブロックする作用を持つ、アポトーシスブロッカーである。したがって、我々の成績はUM-X7.1ハムスターの心不全進行にFas-Fas ligand系は関与しないことを示している。遺伝子治療1週、2週、10週後にハムスターをsacrificeし、血中可溶性Fasならびに心筋組織の変化を検討した。非可溶性Fas遺伝子治療群15匹をコントロールとした。その結果、血中可溶性Fasは、コントロールと比較し、可溶性Fas遺伝子治療群で4週目に500ng/ml以上と著明に上昇した。また、可溶性Fas遺伝子治療群では、コントロールと比較し、左室内腔の拡大が減少し、心不全の進行に対する予防効果が得られた。次年度はさらに例数を増やし、心不全の予防効果の確認と、そのメカニズムを検討する予定である。昨年度、20週令心筋症・心不全UM-X7.1ハムスターにadenovirus vectorを用いて、可溶性Fas(sFas)遺伝子治療をハムスターの下腿筋肉注射で行い、血中sFasおよび心筋内sFasが著明に上昇することを確認した。本年度は、上記モデルを用いて長期予後・心機能の改善効果について検討した。15週令および20週令UM-X7.1ハムスター40匹(各群20匹)を対象に、sFas遺伝子治療を上記と同様に行い、30週令まで観察した。コントロールとして生食を筋注した40匹のUM-X7.1ハムスターを用いた。遺伝子治療群とコントロール群の生存率はそれぞれ、25週令で71%と72%、30週令で50%と48%で、有意な差はなかった。25週令および30週令で行われた心エコー検査で、心室拡張末期径、駆出率に両群では差はなかった。

sFasは血中Fas ligandと細胞膜のFas receptorとの結合をブロックする作用を持つ、アポトーシスブロッカーである。したがって、我々の成績はUM-X7.1ハムスターの心不全進行にFas-Fas ligand系は関与しないことを示している。
老化関連Ｔ細胞の機能解析

当研究グループは加齢とともに増加する老化関連T細胞(SA-T)を発見・同定してきた。本研究では、老齢マウス、種々の疾患モデルマウスにおけるSA-Tの機能を解析した。老齢マウスにおいてSA-Tの増加および胚中心反応の増加を確認し、一部の個体で自己抗体の上昇を認めた。同様に自己免疫疾患モデルマウスであるNZB/W-F1マウスでは、野生型マウスと比較して非常に若い時期からのSA-Tの増加、胚中心反応の増加と自己抗体産生を認めた。興味深いことに、B細胞を欠損するマウスの解析では、老齢個体であるにも関わらずSA-Tがほとんど存在しないことが明らかとなった。免疫老化は様々な疾患を引き起こす原因となっていることが知られているが、その実体は分かっていない。当研究グループは加齢とともに増加する老化関連T細胞(SA-T)を発見・同定した。本研究では、老齢マウス、種々の疾患モデルマウスにおけるSA-Tの機能を解析する。SA-Tが高発現する因子のKOマウス、Tgマウスを作製することで、SA-Tの特徴を個体レベル・細胞レベル・分子レベルで明らかにし、免疫老化への関与を明確にすることを目的とし、平成26年度は以下の検討を行い新たな事実を明らかにした。老齢マウス、自己免疫疾患および糖尿病のモデルマウスにおけるSA-Tの増加と自己反応性胚中心の形成、および病態の変化の解析:老齢マウスの解析を行った結果、SA-Tの増加および胚中心反応の増加を確認し、一部の個体で自己抗体の上昇を認めた。同様に自己免疫疾患モデルマウスであるNZB/W-F1マウスの解析を行ったところ、野生型マウスと比較して非常に若い時期からのSA-Tの増加、胚中心反応の増加が認められ、若齢個体での自己抗体産生を認めた。これに対し、糖尿病モデルマウスであるNODマウスでは、病態の発症とSA-Tの増加に相関は認められなかった。SA-Tが発現・産生する転写因子や向炎症性因子の遺伝子破壊マウスおよびトランスジェニックマウスの作製と解析、およびTfhの分化・増殖に必須の因子を欠損したマウスでの解析:SA-Tに発現するCebpa遺伝子を破壊したマウスを解析したところ、老化によるSA-Tの増加には影響がないことが明らかとなった。また、Tfhの分化・増殖に重要なB細胞を欠損するマウスの解析では、老齢個体であるにも関わらずSA-Tがほとんど存在しないことが明らかとなった。我々研究グループは加齢とともに増加する老化関連T細胞(SA-T)を発見・同定し、報告してきた。本研究では、平成26年度に引き続き、SA-Tが高発現する因子のKOマウス、Tgマウスを作製することで、SA-Tの特徴を個体レベル・細胞レベル・分子レベルで明らかにし、免疫老化への関与を明確にすることを目的とする。平成27年度は以下の検討を行い新たな事実を明らかにした。【老齢マウス、自己免疫疾患や糖尿病、がんのモデルマウスにおけるSA-Tの増加と自己反応性胚中心の形成、および病態の変化の解析】平成26年度の研究では、老齢マウス、自己免疫疾患モデルマウスならびに糖尿病モデルマウスを用いて解析を行ってきた。平成27年度は、メチルコラントレンを用いたがんモデルマウスの解析を進めたところ、2次リンパ組織におけるSA-Tの増加は、メチルコラントレンを投与しない対象群と比較し、大きな変化は認められなかった。またがん局所における解析からも、SA-Tの増加は認められなかった。しかし大変興味深いことに、がん局所における解析からSA-Tとは異なる分子を発現するTfh様細胞の増加が認められ、今後この細胞の解析も進めていきたいと考えている。【SA-Tが発現・産生する転写因子や向炎症性因子の遺伝子破壊マウスおよびトランスジェニックマウスの作製と解析、およびTfhの分化・増殖に必須の因子を欠損したマウスでの解析】SA-Tに特徴的な遺伝子を改変したマウスの作製を進めた。また、SA-TとTfhに共通する遺伝子を改変したマウスの作製と解析を進める中で、平成26年度に、B細胞を欠損するマウスでは老齢個体であるにも関わらずSA-Tがほとんど存在しないことを明らかとしており、その詳細なメカニズムについて解析を進めた。交付申請書に記載した「研究の目的」は、計画していた各項目において、おおむね順調に結果を得ている。モデルマウスを用いた実験で順調に解析が進み、また遺伝改変マウスの作製も順調に進んでおり、今後は遺伝改変マウスの解析に注力して研究を進めていく予定である。本研究では、平成27年度に引き続き、SA-Tが高発現する因子のKOマウス、Tgマウスを作製することで、SA-Tの特徴を個体レベル・細胞レベル・分子レベルで明らかにし、免疫老化への関与を明確にすることを目的とする。平成28年度は以下の検討を行い新たな事実を明らかにした。SA-Tが発現・産生する転写因子や向炎症性因子の遺伝子破壊マウスおよびトランスジェニックマウスの作製と解析、およびTfhの分化・増殖に必須の因子を欠損したマウスでの解析:SA-Tに特徴的な遺伝子を改変したマウスの作製を進めた。

これらのマウスにおいて、SA-Tの分化および誘導に大きな変化は認められなかった。また、SA-TとTfhに共通する遺伝子を改変したマウスの作製と解析を進める中で、平成26年度および27年度に、B細胞を欠損するマウスの解析から、老齢個体であるにも関わらずSA-Tがほとんど存在しないことを明らかとした。そこでTfhの分化・増殖に関与する転写因子の一つであるBcl-6に注目しそのトランスジェニックマウスの解析を進めている。交付申請書に記載した「研究の目的」は、おおむね順調に結果を得ている。モデルマウスを用いた実験で順調に解析が進み、また遺伝改変マウスの作製も順調に進んでおり、一部の遺伝子改変マウスにおいては詳細な解析が進んでいる。今後は遺伝改変マウスの解析に注力して研究を進めていく予定である。免疫老化は様々な疾患を引き起こす原因となっていることが知られているが、その実体は分かっていない。当研究グループは加齢とともに増加する老化関連T細胞(SA-T)を発見・同定した。SA-Tは、2次リンパ組織の濾胞に局在し、加齢および自己免疫疾患モデルマウス等でその増加が認められ、向炎症性因子を高発現している。すなわちSA-Tは自己反応性の免疫応答に関与し、免疫老化による種々の疾患の一因となっている可能性が高い。そこで本研究では、老齢マウス、種々の疾患モデルマウスにおけるSA-Tの機能を解析した。老齢マウスの解析を行った結果、SA-Tの増加および胚中心反応の増加を確認し、一部の個体で自己抗体の上昇を認めた。同様に自己免疫疾患モデルマウスであるNZB/W-F1マウスの解析を行ったところ、野生型マウスと比較して非常に若い時期からのSA-Tの増加、胚中心反応の増加が認められ、若齢個体での自己抗体産生を認めた。これに対し、糖尿病モデルマウスであるNODマウスでは、病態の発症とSA-Tの増加に相関は認められなかった。また、メチルコラントレンを用いたがんモデルマウスのリンパ組織の解析においても大きな変化は認められず、がん局所における解析からも、SA-Tの増加は認められなかった。これらの結果から、SA-Tは老齢およびNZB/W-F1マウスで特に増加することが明らかとなった。興味深いことに、B細胞を欠損するマウスの解析では、老齢個体であるにも関わらずSA-Tがほとんど存在しないことが明らかとなった。次にTfhの分化・増殖・維持に関連する遺伝子を改変したマウスの解析を行ったが、これまでにSA-Tの誘導に大きな変化は認められていない。以上の結果から、SA-Tの誘導には特にB細胞が重要な役割を果たしていることが明らかとなり、今後はSA-Tを誘導するB細胞を特定していきたいと考えている。当研究グループは加齢とともに増加する老化関連T細胞(SA-T)を発見・同定してきた。本研究では、老齢マウス、種々の疾患モデルマウスにおけるSA-Tの機能を解析した。老齢マウスにおいてSA-Tの増加および胚中心反応の増加を確認し、一部の個体で自己抗体の上昇を認めた。同様に自己免疫疾患モデルマウスであるNZB/W-F1マウスでは、野生型マウスと比較して非常に若い時期からのSA-Tの増加、胚中心反応の増加と自己抗体産生を認めた。
ポアッソン確率解析(無限マルコフ粒子系とその応用)

現在、移入を伴う独立は無限マルコフ粒子系に対し、研究しているが、前に半空間における吸収壁ブラウン運動を元にして考えていた問題を本年度は、もう少し一般化して「吸収壁安定運動」と呼ばれるものを導入し、それに対応する移入を伴う独立な無限マルコフ粒子系について研究し、前に得ていた結果の拡張を導くことに成功した。(もちろん、基本的な枠組みはそれほど変わらないのだが、前に用いた方法そのままでは解析がうまく行かない部分が多く、そこをどう乗り越えるかが問題であった。)この結果は(半空間における吸収壁安定運動に対する到達率の漸近挙動)というタイトルで論文にまとめ、現在、Osaka Journal of Mathematicsに投稿中である。また今回はそういう数学的な結果の他に、新しく購入したパソコンを用いて、インターネットを用いた情報をやり取りの整備にも着手し、自分のホームページは言うまでもなく、確率論セミナー事務局という確率論の情報交換の為のホームページも作成し、運営している。その中で国内での研究会やセミナーの案内、た主要大学の各研究室のホームページとのリンク、さらに海外の確率論関係のホームページもリンクさせて、世界中の確率関係の情報を簡単に得られるように出来たのは今後の研究の上で大変、役立つと思う。
肝癌の抗癌剤耐性獲得における新規ABC膜輸送蛋白質の解析

2.抗癌剤によって肝癌細胞に誘導されるARAとMRP6遺伝子の選択性ヒト肝癌細胞HepG2、Huh7、PLC/PRF/5をepirubicin(10ng/ml)とともに7日間培養した。培養開始後7日まで経時的にARA・MRP6遺伝子の発現量を測定したが、両遺伝子の発現は有意には誘導されなかった。3.抗癌剤耐性肝癌細胞におけるARAとMRP6遺伝子の増幅抗癌剤耐性肝癌細胞を樹立するため、上記ヒト肝癌細胞をepirubicin添加培地で培養し、epirubicin(100ng/ml)耐性Huh7細胞樹立した。サザンブロット法を用いるとこの耐性細胞のARA・MRP6遺伝子は増幅していた。4.MRPによって肝細胞から胆汁中に排泄される薬剤の抗癌剤耐性におよぼす影響上記ヒト肝癌細胞を、MRP2によって肝細胞から胆汁中に排泄されることの知られているglycyrrhizinをepirubicinとともに培養したところ、glycyrrhizinがepirubicinの抗癌作用を増強した。1.肝癌細胞におけるARAとMRP6遺伝子の発現パターンと発現量2.抗癌剤耐性肝癌細胞におけるARAとMRP6遺伝子の増幅抗癌剤耐性肝癌細胞を樹立するため、上記ヒト肝癌細胞を抗癌剤添加培地で培養中である。1.肝癌細胞におけるARAとMRP6遺伝子の発現パターンと発現量平成11年度に、ヒト肝癌細胞HepG2、Huh7、PLC/PRF/5、HCC-T、HCC-MからmRNAを精製し、RT-PCRを行い、これら全ての肝癌細胞にARA・MRP6遺伝子が発現していることを確認した。平成12年度はARA・MRP6遺伝子の発現量をノーザンブロット法にて測定したところ、上記の培養細胞ではARA・MRP6遺伝子は同量の発現を認めた。
白血病に対するデコイペプチドを用いた新規分子標的療法の開発に関する研究

RUNX1/EVI1は、進行期の骨髄異形成症候群や慢性骨髄性白血病の急性転化期に出現するキメラ遺伝子である。RUNX1/EVI1はマウス骨髄細胞の造血コロニー形成能を亢進する機能を有するが、ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤が、その表現型を特異的に抑制することがわかった。【背景】白血病関連キメラ遺伝子RUNX1/EVI1は種々の造腫瘍活性を有するが、これらの機能の多くはヒストン脱アセチル化酵素(HDAC)を介するものであることが明らかになっている。【方法】レトロウイルスを用いて、RUNX1/EVI1遺伝子を導入したマウス骨髄細胞を作製。この細胞を用いて、RUNX1/EVI1の有する造腫瘍活性に対するHDAC阻害薬(HDACi)の影響を解析した。【結果】(1)造血コロニーアッセイにおいて、RUNX1/EVI1導入マウス骨髄細胞は、Mock細胞と比しより大きなコロニーを形成した。コロニーの継代培養にて、Mock細胞は早期にコロニー形成能を失うのに対し、RUNX1/EVI1発現細胞は長期に渡ってコロニー形成能を維持していた。またIL-3, IL-6, SCF添加の液体培養を行い、day7における細胞形態を比較した。その結果、Mock細胞は環状核をを有する成熟好中球に終末分化を示すのに対し、RUNXl/EVI1発現細胞では成熟傾向の乏しい比較的幼弱な細胞が多く認められた。(2)HDACiとしてTrichostatin A (TSA)およびバルプロン酸(VPA)を用いて、上記のRUNX1/EVI1導入マウス骨髄細胞の表現型に対するHDACiの影響を検討した。培養液へのTSAおよびVPAいずれの添加においても、Mock細胞ではコロニー形成にはほとんど影響が認められなかったが、RUNX1/EVI1発現細胞ではコロニー形成の著しい障害が認められた。また、液体培養においてもHDACi処理によりRUNX1/EVI1発現細胞の骨髄球系分化の回復が認められた。【考察】HDACiはRUNX1/EVI1の造腫瘍活性をin vivoで抑制することが示された。またIL-3,IL-6,SCF添加の液体培養を行い、day7における細胞形態を比較した。その結果、Mock細胞は環状核をを有する成熟好中球に終末分化を示すのに対し、RUNX1/EVI1発現細胞では成熟傾向の乏しい比較的幼弱な細胞が多く認められた。(2)HDACiとしてTrichostatin A(TSA)およびバルプロン酸(VPA)を用いて、上記のRUNX1/EVI1導入マウス骨髄細胞の表現型に対するHDACiの影響を検討した。培養液へのTSAおよびVPAいずれの添加においても、Mock細胞ではコロニー形成にはほとんど影響が認められなかったが、RUNXI/EVI1発現細胞ではコロニー形成の著しい障害が認められた。FDAで認可されたHDACiであるSAHAでも同様の所見が得られた。この細胞を用いて、RUNX1/EVI1の有する造腫瘍活性に対するHDAc阻害薬(HDAci)およびメチル化阻害剤の影響を解析した。(2)HDACiとしてTrichostatinA(TSA)およびバルプロン酸(VPA)を、またメチル化阻害剤としてアザシチジンおよびデシタビンを用いて、上記のRUNX1/EVI1導入マウス骨髄細胞の表現型に対するHDACiの影響を検討した。

培養液へのTSAおよびVPAいずれの添加においても、Mock細胞ではコロニー形成にはほとんど影響が認められなかったが、RUNX1/EVI1発現細胞ではコロニー形成の著しい障害が認められた。一方、メチル化阻害剤については,アザシチジンおよびデシタビンともRUNX1/EVI1発現細胞に特異的な効果を認めなかった。【考察】HDACiはRUNX1/EVI1の浩腫瘍活性をin vivoで抑制することが示された.また、DNAメチル化はRUNX1/EVI1の造腫瘍活性には関与していない可能性が示唆された。
透明化と単一細胞RNA-seq による骨髄血管の分類と造血幹細胞ニッチ機能の解明

本研究では全身の全骨・骨髄の真の透明化技術を確立し、当該技術を用いた定常状態の造血幹細胞と血管性ニッチの分類と、敗血症モデルやアレルギーモデルマウスなどのストレス負荷時の変容を解明することを目的として解析を進めている。まず本研究では、骨髄の造血幹細胞と造血幹細胞ニッチの局在を解明するために、骨・骨髄の透明化を行なった。透明化試薬を左心室から還流することで骨髄血管から試薬を浸透させ、さらに脱灰液を変更して完全な骨・骨髄透明化を行なった。透明化したサンプルはLightsheet顕微鏡により観察を行い解析ソフトIMARISにより立体構築を行なうことができた。現在のところ骨・骨髄全体を立体構築するだけの十分な透明度を得られておらず、さらなる検討が必要である。また、血管と造血幹細胞を標識できるEvi1-CreERT2-GFPマウスを用いて血管と造血幹細胞の時空間的解析を行なった。さらに、感染症モデルマウスを作成し、骨髄血管を分離し、1細胞RNAシーケンスによる遺伝子発現の解析を行なうことで感染による血管性ニッチの変容を解析した。全身性炎症モデルにおけるストレス負荷時造血幹細胞と血管内皮細胞の動態と相互作用の変容を同定する。また、感染症モデルマウス、およびOVA投与によるアレルギーモデルマウスを作成し、血液学的解析と細胞の空間配置と相互作用の解析を行なった。本研究では全身の全骨/骨髄の真の透明化技術を確立し、当該技術を用いた定常状態の造血幹細胞と血管性ニッチの分類と、感染症モデルマウスやアレルギーモデルマウスなど、ストレスを負荷時のモデルマウスを用いてその変容を解明することを目的として解析を進めている。透明化試薬を左心室から還流することで骨髄血管から試薬を浸透させ、さらに脱灰液をより強力なものに変更して完全な骨・骨髄透明化を行なった。本研究では、定常状態の造血幹細胞と血管性ニッチの分類と、感染症モデルやアレルギーモデルマウスなどのストレス負荷時の変容とその分子機序を解明することを目的として解析を進めている。今後は感染症モデルマウスにおける造血幹細胞、造血幹細胞ニッチの変容について、形態学的解析を継続して行う。その際、透明化試薬を左心室から還流することで骨髄血管から試薬を浸透させ、さらに脱灰液をより強力なものに変更して完全な骨・骨髄透明を行ったが、血管や造血幹細胞ニッチの観察・立体構築には至っていない。全骨・骨髄の透明化技術を再検討し、また透明化試薬に適した抗体の選択も行う必要がある。透明化したサンプルはLightsheet顕微鏡により観察を行い解析ソフトIMARISにより立体構築を行なう。またモデルマウスの骨髄血管を分離して1細胞RNAシーケンスを行うことでモデルマウスにおける血管の変容を同定し、形態学的解析結果を突き合わせることに成功したが、mRNAレベルでの網羅的遺伝子データを更に詳細に解析することで、感染症モデルマウスにおける血管の変化や造血幹細胞の変化の責任遺伝子、およびパスウェイを同定する。更に、モデルマウスに対し血液学的解析も行ない、上記で観察した血管の変化がニッチとして造血に及ぼす影響について、またその詳細な機序について詳細に検討する。これにより、造血幹細胞が炎症ストレスによりどのように変化するか、またその際のニッチの役割と制御因子を、分子生物学的、形態学的に総合的に解明することができると考える。

また、感染症モデルマウス、およびOVA投与によるアレルギーモデルマウスを作成し、血液学的解析と細胞の空間配置と相互作用の解析を行なった。本研究では全身の全骨/骨髄の真の透明化技術を確立し、当該技術を用いた定常状態の造血幹細胞と血管性ニッチの分類と、感染症モデルマウスやアレルギーモデルマウスなど、ストレスを負荷時のモデルマウスを用いてその変容を解明することを目的として解析を進めている。まず本研究では、骨髄の造血幹細胞と造血幹細胞ニッチの局在を解明するために、骨・骨髄の透明化を行なった。透明化試薬を左心室から還流することで骨髄血管から試薬を浸透させ、さらに脱灰液をより強力なものに変更して完全な骨・骨髄透明化を行なった。透明化したサンプルはLightsheet顕微鏡により観察を行い解析ソフトIMARISにより立体構築を行なうことができた。現在のところ骨・骨髄全体を立体構築するだけの十分な透明度を得られておらず、さらなる検討が必要である。また、血管と造血幹細胞を標識できるEvi1-CreERT2-GFPマウスを用いて血管と造血幹細胞の時空間的解析を行なった。さらに、感染症モデルマウスを作成し、骨髄血管を分離し、1細胞RNAシーケンスによる遺伝子発現の解析を行なうことで感染による血管性ニッチの変容を解析した。全身性炎症モデルにおけるストレス負荷時造血幹細胞と血管内皮細胞の動態と相互作用の変容を同定する。本研究では、定常状態の造血幹細胞と血管性ニッチの分類と、感染症モデルやアレルギーモデルマウスなどのストレス負荷時の変容とその分子機序を解明することを目的として解析を進めている。今後は感染症モデルマウスにおける造血幹細胞、造血幹細胞ニッチの変容について、形態学的解析を継続して行う。その際、透明化試薬を左心室から還流することで骨髄血管から試薬を浸透させ、さらに脱灰液をより強力なものに変更して完全な骨・骨髄透明を行ったが、血管や造血幹細胞ニッチの観察・立体構築には至っていない。全骨・骨髄の透明化技術を再検討し、また透明化試薬に適した抗体の選択も行う必要がある。透明化したサンプルはLightsheet顕微鏡により観察を行い解析ソフトIMARISにより立体構築を行なう。またモデルマウスの骨髄血管を分離して1細胞RNAシーケンスを行うことでモデルマウスにおける血管の変容を同定し、形態学的解析結果を突き合わせることに成功したが、mRNAレベルでの網羅的遺伝子データを更に詳細に解析することで、感染症モデルマウスにおける血管の変化や造血幹細胞の変化の責任遺伝子、およびパスウェイを同定する。更に、モデルマウスに対し血液学的解析も行ない、上記で観察した血管の変化がニッチとして造血に及ぼす影響について、またその詳細な機序について詳細に検討する。これにより、造血幹細胞が炎症ストレスによりどのように変化するか、またその際のニッチの役割と制御因子を、分子生物学的、形態学的に総合的に解明することができると考える。
高齢化時代の別荘型超郊外住宅地における居住者特性と居住環境に関する研究

本研究は,千葉県の外房地域の臨海型リゾート地及び栃木県の温泉付別荘型住宅地の合計4か所を事例に,定住化と高齢化の実態及びシニアタウン化が抱える諸問題について明らかにしたものである。これらの別荘型住宅地は,定年を機に豊かな自然の中で快適な第二の人生を送るために首都圏からアメニティ移動してきた高齢者が多く,彼らの定住化により超高齢化が進行している。また,公共交通手段が脆弱な超郊外住宅地では,住民の加齢に伴い,買い物や通院が不便になるなどの諸問題が顕在化している。本研究の目的は,大都市圏の超郊外住宅地における別荘型超郊外住宅地の開発とその立地特性を把握し,その住宅地における居住者特性を分析することによって,定住化とシニアタウン化の実態と居住環境に関する諸問題を明らかにすると同時に,居住空間としての質的価値を形成する住宅地景観やその維持管理の在り方を検討することにある。本研究は,採択時の諸事情により,本来平成22年夏に予定していた千葉県内の超郊外地域の別荘型住宅地でのアンケート調査を含む現地調査の実施が不可能であったため,22年度は千葉県内において調査対象住宅地の候補地の選定作業を中心に研究を行なった。その結果,極度に高齢化が進展している千葉県外房地域に別荘地として開発された勝浦市の「ミレーニア勝浦」などが調査対象地域として適切であることがわかった。また,東日本大震災とその後の社会的混乱で当初3月に実施予定であった,イギリスのロンドンとリバプール郊外の住宅地の比較調査を半年遅れの9月に実施した。その結果,ロンドン郊外のキャノンズパークとリバプール郊外のバーケンヘッドにおいて現地調査を実施し,関連資料を入手した。キャノンズパークは,ロンドン西郊で比較的社会階層の高いユダヤ系の富裕層を中心とする郊外住宅地で,特にその住宅地内の緑地景観に特徴があること,リバプール郊外のバーケンヘッド公園は,1847年にイギリスで市民のための公園として初めて整備・開放されたもので,後にニューヨークのセントラルパークのモデルとなったことが知られているが,バーケンヘッド公園は,アメリカにおける初期の田園郊外の1つであるシカゴのリバーサイド住宅地の計画にも影響を与えた可能性があると考えられること,などが明らかとなった。2012年度は,首都圏の超郊外地域にあたる千葉県の勝浦市と御宿町において1980年後半以降,外房臨海部に大手不動産により開発された別荘型住宅地(M勝浦と御宿GT)を事例に,居住者へのアンケート調査を通して,定住化・高齢化の実態とシニアタウン化による諸問題の一端を明らかにした。M勝浦(104ha,1992年分譲開始)は,南カリフォルニアをイメージした別荘地で,2011年末現在,分譲・建築戸数が658戸,うち定住が243戸(定住率37%)で,老年人口比43.3%(勝浦市32.8%)と高齢化が進展している。「夷隅レクリエーション開発(B地区)」に開発されたGT御宿(167ha,1988年分譲開始,1990年に地区内に有料老人ホーム開設)は,2011年度末現在,分譲・建築戸数が932戸,定住508戸(定住率54.5%)の住宅地で,有料老人ホーム入居者を除く老年人口比は,48.8%(御宿町39.7%)にも達している。両住宅地とも「房総リゾート開発」の一環として,臨海部に民間資本により開発された「バブルの遺産」ともいうべきリゾート型別荘住宅地で,首都圏から購入・転入した富裕層を中心とする住民で構成されている。しかし,定住化とそれに伴う超高齢化の進展が日常生活を送る上で様々な問題を惹起している。定住者は,海に近く,暖かい気候と豊かな自然環境を好むという共通した価値観を有するリタイア族が中心で,地域に歴史のない郊外住宅地と同様,顕示的に管理された庭や建物,そして住民やその生活スタイルも「商品」としての住宅地を演出し,その価値を保持している。リタイア族の転入は,彼らの価値観や生活スタイルにおいて,第二の人生を楽しむための「アメニティ移動」であったと考えられる。彼らはいわば「趣味縁」でゆるく結ばれたコミュニティを形成しているが,終の棲として選択されたが故に,快適なスローライフを満喫できる環境に満足しながらも,交通や買い物の不便さや,将来への不安などリゾート型の超郊外シニアタウンの危うさも指摘できる。本研究の目的は,東京大都市圏外縁部の栃木県さくら市の丘陵地帯に開発された「フィオーレ喜連川」(以下フィオーレ)と「びゅうフォレスト喜連川」(以下びゅうF)の2か所の温泉付住宅地を事例に,定住化と高齢化の実態及び諸問題を明らかにし,千葉県の事例と比較することにある。フィオーレは,1992年にJR東日本と弘済建物によって開発・分譲された規模82haの林間・温泉付住宅地で,現在683戸が建築されており,うち定住は320戸である。

びゅうFは,JR東日本が1999年から分譲を開始した計画規模39haの温泉付分譲住宅地で,現在,147戸の建物のうち70戸が定住である。2010年国勢調査結果によると,フィオーレの老年人口比は35%,びゅうFは同33%で,さくら市全体の老年人口比21%と比べて超高齢シニアタウン化が進んでいる。定住率はいずれも1/2以下で,未建築宅地も少なくない。2012年8月のアンケート調査では,フィオーレで129世帯,びゅうFで39世帯から回答を得た。その結果,世帯主は「無職」が最も多く,フィオーレでは72%(平均71歳),びゅうFでは76%(同69歳)で,いわゆるリタイアメント・コミュニティを形成している。高齢定住者の多くは,主に1都3県と栃木県内から定年退職を機に,田舎暮らしを満喫することを目的に「アメニティ移動」をした住民達で,豊かな自然環境の中でゴルフやガーデニングなどの余暇が楽しめる温泉付住宅地であることが彼らの購入・転入の最大の理由であった。両住宅地ともに,住宅地では雑草・空き地管理などに,環境面では,駅への距離,列車の本数などに不満を抱いている。定住者の67割がここを「終の住処」と考えているが,公共交通の便に恵まれず,買物や通院なども不便で,老後の不安も感じていることなど,千葉県の事例と同様,超郊外の別荘型シニアタウン特有の課題が明らかになった。採択時の諸事情により平成22年度の夏に本格的な調査ができなかったことに加え,東日本大震災とその後の社会の混乱などで,22年度分の調査を23年度に持ち越すことになったことが「やや遅れている」とした最大の理由である。23年度からは1年遅れながら,当初予定していた千葉県内の超郊外住宅地の事例調査を2か所において居住者へのアンケート調査を実施することがきたので,24年度には当初の目標を達成できると考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は最終年度に当たるため,当初研究目的であげた3つの目的のうちの1つ,「居住空間の質的価値を形成する緑地景観やその維持管理の実態分析」については,新たに超郊外地域における持続可能なリタイアメントコミュニティとは何かという視点も加えて明らかにしたい。平成24年度は23年度に行った2か所の別荘型住宅地の住民に対して,さらに詳しい聞き取り調査を実施すると同時に,アメリカにおける郊外住宅地の比較も加えながら,静岡県内で定住化と高齢化が同時に進行している別荘型住宅地を事例にアンケート調査を含めた研究を進める予定である。