hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
非斉次ポテンシャルで相互作用する3体問題周期解の数値計算による研究

前年度までの研究によって計算が可能になった,斉次ポテンシャル-1/r^aおよびレナード=ジョーンズポテンシャル1/r^12-1/r^6で相互作用する等質量3体問題の8の字解のモースインデックスを用いて,8の字解から分岐する周期解を数値計算によって多数発見した。そして,この数値的発見から,逆に,周期解が分岐する点はモースインデックスが変化すること(分岐の必要条件),どのような解が分岐するかは,モースインデックスを変化させる第二変分を0にする変分関数によって決まる事を数学的に証明した。数値的に発見した解は以下の通り。斉次ポテンシャル系については,aをパラメタとして8の字解のモースインデックスの変化する点は,既に昨年報告した通り,a=0.9966とa=1.3424である。a=0.9966では,軌道がx方向にもy方向にも対称でコレオグラフィーではないDxy型の周期解が分岐する。a=1.3424では,軌道が原点対称でコレオグラフィーでないD_2型の周期解と,x方向だけ対称でコレオグラフィーではないDx型の周期解が分岐する。レナード=ジョーンズポテンシャル系については,周期Tをパラメタとして,T→∞でs斉次系の8の字解に漸近する8の字解について計算を行った。モースインデックスの変化する点は7点あり,そのうち2点は斉次系で見出されたのと同じDxy型を分岐し,2点はD2型とDx型を分岐する。残る3点は,軌道がx方向にだけ対称,x方向にだけ対称,原点についてのみ対称なコレオグラフィーを分岐する。これらは,8の字解より対称性の低いコレオグラフィーで,A. Chencinerが2002年の国際会議(ICM 2002)で提出された疑問「対称性の低い8の字解は存在するだろうか」に答えるものである。研究実績の概要で述べた通り,8の字解のモースインデックスが分岐現象に深く関係していることを見出し,8の字解から分岐する周期解を多数発見した。これは当初の想定を上回る成果である。まず,分岐点ではモースインデックスが変化する事が明らかにされたが,逆にモースインデックスが変化する点は全て分岐点だろうかという問題を考ることで,一般にラグランジュ力学系の分岐の必要十分条件を明らかにしたい。一方,ヤコビ座標を使って重心運動を分離することで,対称性の低い周期解のモースインデックスの高精度な計算を可能する。これによって8の字解から分岐した周期解からさらに分岐する周期解を追跡することができる。こうして,可能な限り分岐解またはその分岐解を追跡して分岐解の構造を明らかにしたい。特に,負の指数aを持つ斉次ポテンシャル8の字解の追跡を行うことで,a=-2で8の字解は直線に潰れてしまうことから,斉次8の字解の発生のメカニズムに迫ることができるかも知れない。次に,8の字解と分岐解の線形安定性を計算し,モースインデックスとの関係を明らかにしたい。斉次ポテンシャル-1/r^aおよびレナード=ジョーンズ・ポテンシャル1/r^12-1/r^6で相互作用する等質量3体問題の8の字解のモースインデックスを計算した。モースインデックスとは作用の第二変分を負にする独立な変分関数の個数である。モースインデックスの計算は,変分関数を周期Tの周期関数とした場合,コレオグラフィーに限った場合,8の字コレオグラフィーに限った場合の3通り行った。それぞれのモースインデックスを順にN,Nc,Neとする。斉次ポテンシャル系については,ポテンシャルの指数aに応じて,N=4 (0≦a≦0.9966), 2(0.9966≦a≦1.3424), 0(1.3424≦a),そしてNc=Ne=0 (0≦a)であった。レナード=ジョーンズ・ポテンシャル系については,スケール不変性がないために様々な形と大きさの8の字解が存在するが,標準型8の字解とその大きさを変化させて得られるひょうたん型の解について計算をおこなった。周期Tの大きい標準型の8の字解はa=6の斉次ポテンシャル系の8の字解と同じインデックスをもち,周期を連続的に変化させていくとNは0から12,Ncは0から4,Neは0から1に単調に増加してひょうたん型の解に至ることがわかった。この計算結果は9月に応用数理学会2017年度年会で発表した。その発表でのディスカッションをヒントに,2000年にSimoの発見したコレオグラフィーではないが8の字解に非常に近い周期解,H解とモースインデックスとの関係が明らかになった。また,作用多様体のオイラー標数とモースインデックスの関係を検討し,レナード=ジョーンズ系で周期Tが小さい時では8の字コレオグラフィーの関数空間で定義される作用多様体のオイラー標数が0で保存している事を見出した。予定通りモースインデックスの高精度計算ができた。高精度な計算結果から,予想外の発見があり,それによって今後の研究に大きな展望が得られた。発見とは,研究実績の概要で述べた,「2000年にSimoの発見したコレオグラフィーではないが8の字解に非常に近いH解とモースインデックスとの関係が明らかになった。」ことである。前年度までの研究によって計算が可能になった,斉次ポテンシャル-1/r^aおよびレナード=ジョーンズポテンシャル1/r^12-1/r^6で相互作用する等質量

3体問題の8の字解のモースインデックスを用いて,8の字解から分岐する周期解を数値計算によって多数発見した。そして,この数値的発見から,逆に,周期解が分岐する点はモースインデックスが変化すること(分岐の必要条件),どのような解が分岐するかは,モースインデックスを変化させる第二変分を0にする変分関数によって決まる事を数学的に証明した。数値的に発見した解は以下の通り。斉次ポテンシャル系については,aをパラメタとして8の字解のモースインデックスの変化する点は,既に昨年報告した通り,a=0.9966とa=1.3424である。a=0.9966では,軌道がx方向にもy方向にも対称でコレオグラフィーではないDxy型の周期解が分岐する。a=1.3424では,軌道が原点対称でコレオグラフィーでないD_2型の周期解と,x方向だけ対称でコレオグラフィーではないDx型の周期解が分岐する。レナード=ジョーンズポテンシャル系については,周期Tをパラメタとして,T→∞でs斉次系の8の字解に漸近する8の字解について計算を行った。モースインデックスの変化する点は7点あり,そのうち2点は斉次系で見出されたのと同じDxy型を分岐し,2点はD2型とDx型を分岐する。残る3点は,軌道がx方向にだけ対称,x方向にだけ対称,原点についてのみ対称なコレオグラフィーを分岐する。これらは,8の字解より対称性の低いコレオグラフィーで,A. Chencinerが2002年の国際会議(ICM 2002)で提出された疑問「対称性の低い8の字解は存在するだろうか」に答えるものである。研究実績の概要で述べた通り,8の字解のモースインデックスが分岐現象に深く関係していることを見出し,8の字解から分岐する周期解を多数発見した。これは当初の想定を上回る成果である。今年度見出した,モースインデックスと8の字解に近い周期解の関係を利用して,レナード=ジョーンズ・ポテンシャルで相互作用する等質量3体問題の8の字解の近くに存在する周期解を以下の手順で数値計算によって探索する。1)周期Tの関数としてモースインデックスN(T)を高精度に計算する。2)N(T)が変化する周期Tの近くで,モースインデックスを計算するために用いた作用の第二変分の固有関数から予想される対称性をもった周期解を探索する。3)対称性が高い場合は,8の字コレオグラフィーを探索したのと類似の,二等辺三角形配置とオイラー配置を利用した方法で探索が行えると予想される。4)Doedelらによって開発された力学系分岐探索システムAUTOを利用する事も検討する。5)オイラー標数とモースインデックスの関係を計算し,解の出現に矛盾がないことを検討する。計算はT無限大の極限で斉次ポテンシャルの8の字解に一致する8の字解の系列についておこなう。このような研究は完全に新規であるので,国際学会での発表,論文投稿を行い,今年度のように,発表・投稿によるディスカッションによって研究を進展させたい。まず,分岐点ではモースインデックスが変化する事が明らかにされたが,逆にモースインデックスが変化する点は全て分岐点だろうかという問題を考ることで,一般にラグランジュ力学系の分岐の必要十分条件を明らかにしたい。一方,ヤコビ座標を使って重心運動を分離することで,対称性の低い周期解のモースインデックスの高精度な計算を可能する。これによって8の字解から分岐した周期解からさらに分岐する周期解を追跡することができる。
朱子『資治通鑑綱目』と綱目学の展開

重要性が指摘されておりながら、これまで等閑視されたきたところの、朱子学の歴史哲学としての側面を、朱子本来の思想と後世の朱子学という二方面から解明することが本研究の目的である。具体的には、南宋の朱子が記した歴史書である『綱目』と後世に『綱目』を尊んで著された「綱目学」の書物(『綱目』の注釈や『綱目』の体裁を模倣した歴史書)の思想分析を主たる作業とする。その際に、春秋学や朱熹の修養論・心性論といった、申請者が多くの成果を挙げてきた分野での業績を縦横に駆使しして、朱熹自身の問題意識に即して正面から『綱目』の思想を分析したいと考えている。
サルを用いた心肺合併移植に関する実験的研究

昭和61年度は日本猿の入手に難渋し9月に入って初めて実験に着手することができた.初めは,猿や人工肺の使用を倹約するため,血液ドナーとしての猿を使用せず,また一つの人工肺を数回の実験に使用した事や手技的な問題から移植手術後の出血をコントロールし得ず,人工心肺からの離脱ができなかった.しかし,これらの問題点を解決し得てからは,人工心肺からの離脱は容易となった.人工心肺からの離脱が可能となった次には,移植臓器の保護の問題が発生した.心臓に関しては,現在臨床で用いているGIK液を使用し良好な結果を得た.すなわちPaO_2が良好に保たれているかぎり,心機能も良く保たれた.肺に関しては,初期に行った単純な冷却法では術後早期に無気肺,実質内出血,肺水腫を呈し,呼吸機能検査ではレスピレーターの回路内圧の上昇,呼気終末CO_2の上昇, PaO_2の低下を示した.このため手術手技的に,心肺摘出,移植手術中の肺の保護と,東北大学から報告されている肺保護液(Ep3液)を使用するようになって移植術後の肺の状態が著明に改善された.これらの心臓及び肺を組織学的に検討した結果でも明らかな改善が認められた.本実験での最長生存時間は44時間であり30時間台が2例,他は24時間以内に失った.長時間生存例での検討のため,一側肺同所性移植と心臓異所性移植とを同時に行った.神経切断が行われた.心臓及び肺に分布する神経繊維を酵素組織化学的に観察した結果,末梢神経繊維は移植後57日目でも酵素活性を保って正常例とほとんど差を認めることなく存在することが判明した.また,移植心の拒絶反応の早期診断法の研究として,異所性移植心の酵素組織化学的検討を行うと共に,予備的研究としてモノクローナル抗体の二重染色法を用いて末梢血リンパ球サブセットの変化をも検討した.昭和61年度は日本猿の入手に難渋し9月に入って初めて実験に着手することができた.初めは,猿や人工肺の使用を倹約するため,血液ドナーとしての猿を使用せず,また一つの人工肺を数回の実験に使用した事や手技的な問題から移植手術後の出血をコントロールし得ず,人工心肺からの離脱ができなかった.しかし,これらの問題点を解決し得てからは,人工心肺からの離脱は容易となった.人工心肺からの離脱が可能となった次には,移植臓器の保護の問題が発生した.心臓に関しては,現在臨床で用いているGIK液を使用し良好な結果を得た.すなわちPaO_2が良好に保たれているかぎり,心機能も良く保たれた.肺に関しては,初期に行った単純な冷却法では術後早期に無気肺,実質内出血,肺水腫を呈し,呼吸機能検査ではレスピレーターの回路内圧の上昇,呼気終末CO_2の上昇, PaO_2の低下を示した.このため手術手技的に,心肺摘出,移植手術中の肺の保護と,東北大学から報告されている肺保護液(Ep3液)を使用するようになって移植術後の肺の状態が著明に改善された.これらの心臓及び肺を組織学的に検討した結果でも明らかな改善が認められた.本実験での最長生存時間は44時間であり30時間台が2例,他は24時間以内に失った.長時間生存例での検討のため,一側肺同所性移植と心臓異所性移植とを同時に行った.神経切断が行われた.心臓及び肺に分布する神経繊維を酵素組織化学的に観察した結果,末梢神経繊維は移植後57日目でも酵素活性を保って正常例とほとんど差を認めることなく存在することが判明した.また,移植心の拒絶反応の早期診断法の研究として,異所性移植心の酵素組織化学的検討を行うと共に,予備的研究としてモノクローナル抗体の二重染色法を用いて末梢血リンパ球サブセットの変化をも検討した.体重7Kgから12Kgの日本猿を用いて心肺同時移植実験を行った。術中術後の計測として、中心静脈圧,左房圧,肺動脈圧,動脈圧,動脈血ガス分析等を行い心肺機能の標価を行ったところ、移植心肺のうち心機能に関しては良好に保たれていることがわかった。しかし移植後時間の経過とともに肺動脈圧の上昇,Pa【CO_2】の低下、肺のコンプライアンスの低下をきたし、低肺機能のため死亡する例が多かった。このような例での肺組織所見は無気肺,間質浮腫,出血が主な所見であった。このため移植時の肺潅流液を東北大学から報告されているEp3液に変更し、これまで肺を膨張させた状態で移植を行っていたものを、圧を抜いた状態で行うよう変更した。このような変更により移植後の肺の状態が良く改善された。移植心の神経切断の様態を知る一方法として刺激伝導系、特に房室結節に多量に分布する神経線維を酵素組織化学法でCh-Eを染色し検討した。移植後5日目までの検討で、神経線維は著るしく減少することなく、Ch-E活性もよく保たれていることがわかった。今後さらに長期にわたる生存例での追跡を行ってゆく。気管支の神経支配の様態を知る目的で、気管支における神経分布を同様にCh-E染色で検索し、気管支腺組織、筋組織に多数のCh-E活性を有する神経線維の分布を認めた。現在移植肺におけるこれらの神経線維の変化を検索している。

拒絶反応早期発見の示標とすべく、末梢血リンパ球に関して、モノクロナール抗体を用いて検討を行なっている。まず正常猿の血液で、抗ヒトモノクロナール抗体とのcross reactivityの検討を行い、さらに異所性心臓移植を行った猿で、抗免疫療法を行わず、拒絶反応に至るまでの変化をsingle colorおよびtwocolor analysisを用いて求めたリンパ球のサブセットやLeu3a/2a比,Leu3【a^+】【18^-】/2【a^+】【15^+】比の変動を経時的に測定し拒絶反応を早期に判断する示標を作りつつあり、心肺移植に応用する。
西南日本横断地殻変動プロファイリング

本研究の根幹は,四国地方の太平洋岸から中央構造線を横断し中国地方に至るGPS(全地球測位システム)稠密観測網である.すでに平成1012年度科研費によって四国東部に観測網が整備されており,本研究ではこれを継続利用した.さらに,四国西部に第2の観測網を整備し,フィリピン海プレートの沈み込む方向だけでなく,島弧の走行に沿った方向でも,地殻変動の空間変化を詳細に決定する体制を整えた.毎年10月に総勢1520名が参加し,計36点で観測を行った.解析では,周辺の国土地理院連続観測点のデータも合わせて,定常的な地殻変動速度ベクトルを決定した.初年度は観測網の整備を重点的に行った.第2,第3年度は観測を継続するとともに,地殻変動場の精密決定と地殻変動モデルの構築を平行して進めた.観測された変動場にはプレートの沈み込みに伴う弾性圧縮変形と,沈み込みの方向が島弧に垂直でないことに起因する前弧の横ずれブロック運動の両方が含まれている.これらを分離するため,プレートの沈み込みを陽にモデル化して弾性圧縮変形を計算した.南海トラフにおけるプレート間固着は深さ25kmまで非常に強く,そこから固着は弱まり,35km以深でほぼ固着なしとなる.また,ブロック運動の境界となる中央構造線では,北へ傾斜した断層面の深さ15kmより深部で5mm/年の速さの定常すべりが進行し,上部は強く固着してひずみの蓄積が進行している.インバージョン解析でも,ほぼ同様の結果を得た.地殻水平速度だけでなく,上下速度も利用することで,深部のカップリング推定精度が向上し,地殻の弾性圧縮変形と横ずれブロック運動の分離がより明確になった.以上の成果を日本地震学会,日本測地学会,地球惑星科学関連学会合同大会,米国地球物理学連合秋季大会などで発表し,Earth, Planets and Space誌等に論文を発表した.本研究の根幹は,四国地方の太平洋岸から中央構造線を横断し中国地方に至るGPS(全地球測位システム)稠密観測網である.すでに平成1012年度科研費によって四国東部に観測網が整備されており,本研究ではこれを継続利用した.さらに,四国西部に第2の観測網を整備し,フィリピン海プレートの沈み込む方向だけでなく,島弧の走行に沿った方向でも,地殻変動の空間変化を詳細に決定する体制を整えた.毎年10月に総勢1520名が参加し,計36点で観測を行った.解析では,周辺の国土地理院連続観測点のデータも合わせて,定常的な地殻変動速度ベクトルを決定した.初年度は観測網の整備を重点的に行った.第2,第3年度は観測を継続するとともに,地殻変動場の精密決定と地殻変動モデルの構築を平行して進めた.観測された変動場にはプレートの沈み込みに伴う弾性圧縮変形と,沈み込みの方向が島弧に垂直でないことに起因する前弧の横ずれブロック運動の両方が含まれている.これらを分離するため,プレートの沈み込みを陽にモデル化して弾性圧縮変形を計算した.南海トラフにおけるプレート間固着は深さ25kmまで非常に強く,そこから固着は弱まり,35km以深でほぼ固着なしとなる.また,ブロック運動の境界となる中央構造線では,北へ傾斜した断層面の深さ15kmより深部で5mm/年の速さの定常すべりが進行し,上部は強く固着してひずみの蓄積が進行している.インバージョン解析でも,ほぼ同様の結果を得た.地殻水平速度だけでなく,上下速度も利用することで,深部のカップリング推定精度が向上し,地殻の弾性圧縮変形と横ずれブロック運動の分離がより明確になった.以上の成果を日本地震学会,日本測地学会,地球惑星科学関連学会合同大会,米国地球物理学連合秋季大会などで発表し,Earth, Planets and Space誌等に論文を発表した.本研究の根幹をなすものは,平成1012年度科学研究費補助金によって整備された,室戸岬から中央構造線を横断し瀬戸内海を経て中国山地へ至るGPS(全地球測位システム)稠密観測線である.測線はフィリピン海プレートの進行方向にほぼ平行し,測線上に24観測点が配置されている.本研究では,これまでの観測結果を最大限利用する.平成14年10月,総勢20名が参加し,24時間連続観測を5日間実施した.解析には周辺の42の国土地理院GPS連続観測点のデータを加え,計66観測点の変動速度を算出した.国士地理院連続観測成果と比較して1-2mm/yrの誤差で一致しており,解の信頼性は非常に高い.フィリピン海プレートの沈み込みをモデル化し,得られた地殻変動場を,プレート沈み込みに伴う弾性圧縮変形と,中央構造線に起因する変動とに分離した.後者を用い,中央構造線断層面の傾斜角,上部固着層の深さ,深部すべり速度,等を推定した.プレートの進行方向と直交する方向への地殻変動パターンの空間変化を検出するため,松山市を中心として,これまでの観測線とほぼ平行に2本目の観測線を整備した.新設の観測点は12点で,平成14年9月に総勢10名で第1回目の観測を実施した.今年度は初期データを得たのみで,観測点変位の決定は次年度以降となる.電源の確保とアクセスが困難な山岳地域での観測を可能とする目的で,軽量コンパクト,極低消費電力の1周波型GPSセンサーを購入し試験観測を行った.

ただし,従来の解析方法では距離の増大とともに解の精度が大幅に低下する.これを克服するため,仮想基準点方式による基線解析法を試みた.その結果,既存の2周波観測網データを併用することで,45倍の精度向上を確認した.今後の観測に順次導入する予定である.成果を2編の論文として公表した.これまで同様,四国東部の室戸岬から中央構造線を横断し瀬戸内海を経て中国山地へ至るGPS(全地球測位システム)稠密観測網において,約1週間の観測を行った.この観測は平成10年度から継続して実施されている.ただし,観測開始予定の10日前に十勝沖地震が発生し,一部の器材と人員を急遽北海道へ派遣せざるを得なかったため,約1/3の観測点で今年度の観測を断念あるいは縮小した.これとは別に,松山市を中心とする四国西部の観測網が昨年度新設されている.こちらの観測は十勝沖地震の前であったため,無事観測を実施できた.観測には5大学から約20名が参加した.解析においては周辺の国土地理院GPS連続観測点を合わせ,四国東部で計66点,西部では計40点の変動速度ベクトルを算出した.変動の大部分はフィリピン海プレートの沈み込みに伴う上盤側プレート縁辺部の弾性圧縮変形である.プレート沈み込みの影響をモデル化し,得られた地殻変動場から弾性圧縮変形を引き去ることで,中央構造線を境とする前弧の横すべりブロック運動を抽出した.プレート沈み込みのモデル化は全く異なる2つの手法を用いたが,両者ともほぼ同様の結果を与えることを確認した.ただし,四国西部では観測期間が短いため解の決定精度が低く,また,直下でスロースリップイベントの発生が報告されていることもあり,東部ほど前弧のブロック運動は顕著ではない.来年度の主要課題としたい.得られた成果を国際測地学・地球物理学連合総会(2003年7月,札幌市)で発表するとともに,論文1編として公表した.今年度は研究の最終年度であり,従来の観測を継続して地殻変動場を精密決定するとともに,地殻変動モデルの構築を目指した.太平洋岸から中央構造線を横断し中国地方に至る稠密GPS観測網は,四国の東部と西部に2測線存在する.観測点数は東部が23点,西部が12点で,東部では平成10年から,西部では14年から観測が行われている.本年度も,9月から10月にかけて観測を実施した.観測には5大学と1機関から約20名が参加した.解析では,国土地理院GPS連続観測点を合わせ,四国東部で66点,西部で40点の変動速度ベクトルを算出した.変動の大部分はフィリピン海プレートの沈み込みに伴う上盤側プレートの弾性圧縮変形である.プレート沈み込みの影響をモデル化し,このフォワードモデルから計算される弾性圧縮変形を観測された地殻変動場から引き去ることで,中央構造線を境界とする前弧の横ずれブロック運動を抽出した.さらに,インバージョン解析を行い,プレート境界の小セグメントにおけるプレート間カップリング,前弧の横ずれ運動速度,および中央構造線浅部のすべり欠損速度を推定した.インバージョン解析はフォワード解析と同様の結論に至り,南海トラフにでの現在のカップリングは深さ2530kmまでほぼ100%,前弧の横ずれ運動速度は約7mm/年,中央構造線のすべり欠損は36mm/年と推定された.すなわち,地震間の強固なカップリングが上盤側プレートの短縮と中央構造線を境界とする前弧の横ずれ運動を引き起こしているが,定常的すべりが起きているのは中央構造線の深部のみで,浅部にはひずみが蓄積されていることが明らかとなった.前弧の横ずれ運動速度は,中央構造線の地質学的な平均すべり速度に良く一致する.研究成果を日本測地学会第102回講演会(10月,小平市)及びアメリカ地球物理学連合2004年秋季大会(12月,サンフランシスコ)で発表した.
アストロサイトによる部位特異的神経機能調節機構

本研究課題では、アストロサイトの部位特異性を担う機能分子(アストロサイトの膜表面のレセプター、トランスポーター、チャネル、細胞接着因子類、あるいはアストロサイト産生性の神経栄養因子)の同定を行い、その発現量の差異が神経機能の調節にどのように関わっているか解明することを目的に研究を進めている。これまでに細胞培養法を用いて異なる脳内部位より培養したアストロサイト間で発現量に差異のある遺伝子を見いだしていたが、さらにvivoに近い系を用いるため、昨年度より迅速免疫組織染色法とlaser microdissection (LMD)法を用いて凍結切片から脳内部位別にアストロサイトを採取し、遺伝子発現をDNA microarrayにて比較することを開始した。8週齢の雄Wistar ratより脳全体を取り出し、ブレインマトリックスでスライスした後OCTコンパウンドで包埋し、6μmの凍結切片を作製した。一次抗体に抗GFAPを用い、ニチレイ、シンプルステインキットにて染色した。染色後、LMDにて大脳皮質と線条体から1000個ずつアストロサイトの細胞体部分を切除し、RNAを抽出、DNA microarrayにて比較を試みた。この方法で、これまでに、大脳皮質と線条体間で、数十の遺伝子に2倍以上の発現の違いが見いだされ、現在、in situ hybridization等による確認を行っている。[目的]アストロサイトの脳内部位による遺伝子発現の差異を検討するため、Laser Capture Microdissection(LCM)法によるアストロサイトの採取法を検討した。[方法]8週齢の雄Wistar ratより脱血後に脳全体を取り出し、ブレインマトリックスでスライスした後OCTコンパウンドで包埋し、6μmの凍結切片を作製した。一次抗体に抗GFAPまたは抗S100抗体(どちらもDAKO)、検出はDAKO、ENVISON+またはニチレイ、シンプルステインキットを用いた。染色後、組織からRNAを抽出、Agilent社2100Bioanalyserで解析し、18S,28Sのピークを指標にRNAの分解の程度を評価した。[結果および考察]抗GFAP抗体、シンプルステインキットを組み合わせた場合、凍結切片作製後、約1時間30分で染色を終了することが出来、RNAの分解も少ないことが判明した。また、染色後室温放置で1時間以内であれば、RNAの分解は少なく、LCMによる細胞の採取に使用できることを確認した。現在、凍結切片作製後2時間30分以内に約100個の細胞を採取しており、今後DNA microarrayで解析する予定である。
ボルツマン方程式の数値解析と漸近解析-その工学的および数学的側面-

1.日本側は,仏側の協力のもとで,有限マッハ数の弱希薄気流を一般的に記述する漸近理論(流体力学的方程式とその境界条件,および境界近傍におけるクヌーセン層補正)をボルツマン方程式の系統的漸近解析によって構築する研究を完成させた.この理論は,その一部として,流体力学における粘性境界層方程式の,ボルツマン方程式からの系統的導出を含んでいる,この成果は,仏側の境界層方程式に対する数学的研究に反映された.2.日仏が協力して,多体粒子系(リュービル方程式)から流体力学方程式(オイラー方程式系)を直接導出する研究を行った.日仏側でそれぞれ異なる方法でこの問題に取り組み,形式的導出には既に成功している.また,日本側は,多体粒子系からのボルツマン方程式の形式的導出を再考察し,これを系統的かつ明解な形に整理して仏側に提供した.これにより,ボルツマン方程式の導出に対する新しい数学的証明の可能性が開かれた.3.日本側は,仏側と協力して境界温度の不連続によって生じる希薄気体の流れを数値解析によって調べ,その挙動を広範囲の希薄度に対して明らかにした.この流れでは,気体分子の速度分布関数の不連続が境界から気体中へ伝播する.その数学的研究の第一歩として,日仏が協力し,不連続の伝播に関してボルツマン方程式と類似の性質を持つが構造がはるかに簡単な線形輸送方程式をもとに,媒質中への不連続の伝播を厳密に解析した.4.日本側は,流体力学方程式を含む一般の保存方程式の運動論的解法に関する系統的理論を構築し,仏側に提供した.また,日本側は仏側の協力により,数値解析・形式的漸近解析によって既に得ていた蒸発・凝縮を伴う界面における流体力学的方程式の境界条件を,数学的に厳密に評価することに成功した.5.日本側は,多成分混合気体における「幽霊効果」を表す方程式系を仏側に提供し,その数学的性質を検討した.1.日本側は,仏側の協力のもとで,有限マッハ数の弱希薄気流を一般的に記述する漸近理論(流体力学的方程式とその境界条件,および境界近傍におけるクヌーセン層補正)をボルツマン方程式の系統的漸近解析によって構築する研究を完成させた.この理論は,その一部として,流体力学における粘性境界層方程式の,ボルツマン方程式からの系統的導出を含んでいる,この成果は,仏側の境界層方程式に対する数学的研究に反映された.2.日仏が協力して,多体粒子系(リュービル方程式)から流体力学方程式(オイラー方程式系)を直接導出する研究を行った.日仏側でそれぞれ異なる方法でこの問題に取り組み,形式的導出には既に成功している.また,日本側は,多体粒子系からのボルツマン方程式の形式的導出を再考察し,これを系統的かつ明解な形に整理して仏側に提供した.これにより,ボルツマン方程式の導出に対する新しい数学的証明の可能性が開かれた.3.日本側は,仏側と協力して境界温度の不連続によって生じる希薄気体の流れを数値解析によって調べ,その挙動を広範囲の希薄度に対して明らかにした.この流れでは,気体分子の速度分布関数の不連続が境界から気体中へ伝播する.その数学的研究の第一歩として,日仏が協力し,不連続の伝播に関してボルツマン方程式と類似の性質を持つが構造がはるかに簡単な線形輸送方程式をもとに,媒質中への不連続の伝播を厳密に解析した.4.日本側は,流体力学方程式を含む一般の保存方程式の運動論的解法に関する系統的理論を構築し,仏側に提供した.また,日本側は仏側の協力により,数値解析・形式的漸近解析によって既に得ていた蒸発・凝縮を伴う界面における流体力学的方程式の境界条件を,数学的に厳密に評価することに成功した.5.日本側は,多成分混合気体における「幽霊効果」を表す方程式系を仏側に提供し,その数学的性質を検討した.1.青木はBardos,Golseとともに,かつて曾根・高田により明らかにされた気体分子の速度分布関数の不連続の伝播を,より広い範囲の関数に対して数学的に厳密に記述する研究を行った.その第一歩として,ボルッマン方程式の特徴を備えたより簡単な線形輸送方程式の2次元境界値問題を取り上げ,境界条件が,ある点で不連続であれば,それが領域内に伝播することを数学的に証明することを試みた.この研究はほぼ完成している.2.曾根は,Bardos,Golseの協力を得て,ボルツマン方程式の系統的漸近解析を行い,弱希薄気体の有限マッハ数流れを一般的に記述する流体力学的方程式系(オイラー方程式と境界付近における圧縮性境界層方程式およびその希薄化効果による高次補正,さらにそれらに対する適切な境界条件)とそれに対する境界のごく近傍におけるクヌーセン層補正を導出した.さらにこれにより,境界層方程式の粘性効果による高次補正項は,一般に考えられているような古典流体力学の枠組みでは,正しく求められないことを指摘した.また,青木も加わり,マッハ数が小さい流れに対して,ボルツマン方程式から非圧縮性境界層方程式を導出する研究にも着手した.3.曾根は,温度場によって誘起される希薄気体特有の流れの存在を,弱希薄気体に対して数学的に証明する研究をパリ第7大学側に提案し,その助言のもとに仏側がこれに着手した.4.高田は,多成分混合気体における(幽霊効果を含む)流体力学的方程式およびクヌーセン層方程式の構造について得た結果をBardos,Golseに提供し,その適切性や解の存在の証明の可能性について仏側と議論した.5.大和田は,ボルツマン方程式の時間2次精度数値

解法について,浅野は,境界層方程式の数学的構造について,それぞれBardosと議論・研究情報の交換を行った.1.日本側は,仏側の協力のもとで,有限マッハ数の弱希薄流を一般的に記述する漸近理論(流体力学的方程式とその境界条件,および境界近傍におけるクヌーセン層補正)をボルツマン方程式の系統的漸近解析によって構築する研究を完成させた.この理論は,その一部として,流体力学における境界層方程式の,ボルツマン方程式からの系統的導出を含んでいる.仏側は,これを参考に,形式的漸近展開(ヒルベルト展開)を用いないモーメント法によって,境界層方程式を形式的に導出した.さらにそれに厳密な数学的裏付けを与える研究に着手した.2.多体粒子系から,ボルツマン方程式を経由して流体力学方程式を導出する研究は,これまでに様々な角度から行われており,日仏両グループにおいても大きな成果を上げている.本研究では,日仏が協力して,多体粒子系(リュービル方程式)から流体力学方程式(オイラー方程式系)を直接導出する研究を行った.日仏側でそれぞれ異なる方法でこの問題に取り組み,形式的導出にほぼ成功している.3.日本側は,先に単一成分気体に対してボルツマン方程式から導出した「幽霊効果」を表す方程式系(連続流極限における静止気体中の温度場を正しく記述する偏微分方程式と境界条件)を,多成分混合気体に対して拡張した.一方,仏側は,この方程式(単一成分気体の場合)の数学的性質(境界値問題の適切性など)を検討した.4.日本側は,低圧気流の安定性(テイラー・クェット問題など),周期的壁面温度分布によるポンプ効果を持つ低圧気体の一方向流れ,半無限空間における定常蒸発流・凝縮流の存在領域,などに関する数値解析,物理的考察による成果を仏側に提供し,仏側はこれらに関連して生じる数学的問題(解の存在や安定性,数値解法の高精度化,数値解の実際の解への収束性,など)について検討した.1.日本側は,ボルツマン方程式の多体粒子系(リューヴィル方程式)からの形式的導出を再考察し,系統的かつ明解な形に整理して仏側に提供した.これにより,ボルツマン方程式の導出に対する新しい数学的証明の可能性が開かれた.これと平行して,多体粒子系から流体力学方程式(オイラー方程式系)を直接導出する研究が,前年度に引き続き,日仏協力のもとで行われた.2.日本側は,仏側と協力して境界温度の不連続によって生じる希薄気体の流れを数値解析によって調べ,その挙動を広範囲の希薄度に対して明らかにした.この流れでは,気体分子の速度分布関数の不連続が境界から気体中へ伝播するが,これを厳密に数学的に記述する研究に日仏が協力して着手した.その第一歩として,ボルツマン方程式と類似の性質を持つがはるかに構造が簡単な線形輸送方程式を取り上げ,媒質中への不連続の伝播を厳密に記述した.3.日本側は,流体力学方程式(オイラー方程式,ナヴィエーストークス方程式)を含む一般の保存方程式の運動論的解法に関する明解かつ系統的な理論を構築し,仏側に提供した.仏側は,このスキームの数学的研究(厳密な収束証明,誤差評価など)を行うことになった.4.日本側は,蒸発・凝縮を伴う界面における流体力学的方程式の境界条件を,数値解析・形式的漸近解析によって既に得ていたが,仏側の協力のもとに,これに対する数学的に厳密な評価に成功した.
「自然」をめぐるイギリス文学と文化

イギリスにおいて「自然」に関心が寄せられ始めたのは18世紀であった。グランド・ツアーや海外への拡張政策によって異質な「自然」に接した結果、国内の「自然」を発見してその改良に着手した時代である。しかし、当時の人々が「自然」とみなしたものは、「ピクチャレスク」という美意識によって切り取られた「風景」であり、17世紀のイタリアの風景画に描かれた景観を理想として「自然」を作り上げようとしたのである。それが実践に移されたものがイギリス式風景庭園や風景詩、ピクチャレスク・ツアーであった。そして、19世紀に入るとJ.M.W.ターナーやジョン・カンスタブルに代表される風景画の全盛期を迎え、20世紀になって徐々に衰退してゆく。この過程において関連するさまざまの問題点を、博物学や帝国主義イデオロギーの観点から明らかにした。また、アフリカや日本の「自然」を主題とした著作の書評を通して、イギリスの「自然」観の独自性をピクチャレスク美学に求め、18世紀の美学理論と旅行文学の関係に着目した。ガイドブックを片手に馬で運ばれるピクチャレスク・ツアーに対して、世紀の終わりになって若者たちのあいだで流行し始めた徒歩による旅が孕んでいた文化的・政治的イデオロギーを考察・研究しながら、歩くことによってピクチャレスク美学からいかにして脱却し、あるがままの「自然」を発見することになったのかを明らかにした。そのため、イギリス・ロマン派を代表する詩人ウィリアム・ワーズワスを取り上げて、彼が一時は熱狂していたピクチャレスク美学をどのようにして乗り越えていったのかを作品に則して考察した。18世紀のイギリスは理性と啓蒙の時代であるとともに「改良」(Improvement)の時代でもあった。農業生産力向上のための「囲い込み」、湿地帯の排水や森林の開墾による耕地の拡大と改良が国家的規模で進行していた。しかし「改良」はイギリス国内にとどまらず、海外の植民地の土地や栽培植物に対しても行われていた。このような背景において「自然」がどのように発見されたのかを明らかにし、風景の見方を修得していく過程を庭園文化(イギリス式風景庭園)の成立とそれを担った新興ブルジョワ階層の進取の気性や政治姿勢と関連させながらたどった。さらに、「自然」との関係において博物学という領域を考察しながら、それが「物を視線と言説の双方に結びつける新たな仕方」であり、この方法が動植物園や標本陳列館の展示を「表」(tableau)形式に置きかえるものであったことを論じた。そして、この博物学的空間においては視覚に特権的な作用が与えられたこと、この「まなざし」は大航海時代から数世紀にわたって編成されてヨーロッパ中のあらゆる階層の人々を巻き込んだファッションと化したこと、ヨーロッパを主体とするその「まなざし」は世界をまるで博物学の標本のように分類したということなどから、博物学と帝国主義が関連しあっていることに論究した。また、風景の見方を修得して風景画というジャンルが成立した要因と背景が博物学の誕生と同質のものであったことを論じ、イギリス・ロマン派の文学や風景画における「自然」概念が帝国主義思想と複雑かつ密接に絡み合っていると結論づけた。以上の研究によって得られた知見を学術論文にまとめた。「自然」はいかにして発見されたのかという問題提起のもとで、文学テクストに描かれた「自然」について考察するなら、イギリスにおける「自然」の発見は、18世紀のロマン派の登場をまたねばならなかった。それではなぜ、ロマン派には「自然」の発見が可能であったのか。ひとつには、ニュートンの『光学』によって光が七色に分化されることが明らかになることによって「視る」という行為に大きな変容が生じ、色彩が細分化された時代が始まっていたことがあげられるが、こうした視覚文化への傾斜だけに根拠を求めるだけでは不十分である。最大の要因は、人間が移動するということ----歩行や旅---に求められることを考察した。

前ロマン派のJames ThomsonやWilliam Wordsworthが歩き続けることによって「自然」や「風景」を発見し、うたったように。ポストコロニアルの作家ですぐれた紀行文を書き続けているV.S.ナイポールの場合、旅することによってヨーロッパ中心主義に異議申し立てをするばかりでなく、その土地の「自然」と「風景」を発見する。しかし、彼によって発見された「風景」は、訪れた土地がどこであれ、彼を拒絶するものであることに論究した。インドはもとより、彼が訪れたフランスのかつての植民地コートジボワールの「風景」が、歴史の流れのなかでキリスト教やイスラム教を表層では取り入れてはいても、基層には伝統的な呪術が支配する世界が広がっており、そこでは自然界のあらゆるものに霊性が与えられて呪術性と神秘性が潜んでいる。灼熱の太陽が沈んだ闇の中から人間と森羅万象の息づかいが響き合いながら渾然一体となっている、西欧文明とは無縁の人間と「自然」のありようについて論究した。人間を寄せつけない北海道の「自然」を描いた著作、岩井洋著『国木田独歩空知川の岸辺で』を学会誌で書評することによって、イギリスの「自然」観の独自性がピクチャレスク美学に基づいていることに気づき、18世紀イギリスの美学理論と旅行文学の関係に注目した。この時代の「ピクチャレスク」と「崇高」という美学理論を検証しながら、前者がピクチャレスク・ツアーやイギリス式風景庭園、そして風景詩などに深く関わっていたことを明らかにした。ピクチャレスク・ツアーを大流行させるきっかけを作った、国教会の牧師であり学校教師であったウィリアム・ギルピンの著作から、「ピクチャレスク」美学とは理想としての風景を呈示するものであって、現実の風景を指すものではないことを論証し、この旅行ブームが18世紀終わりに衰退した要因を探った。それまでの旅は、上流・中流階級の者だけに許された馬や馬車を使ったものであり、徒歩による旅は浮浪者や追い剥ぎなどに特有のもので、不法性を喚起するものであった。しかし、1780-90年代に若者たちのあいだに広まった徒歩旅行は、ピクチャレスク美学の理想の風景とは異なる現実の風景を呈示させるものであり、ピクチャレスク・ツアーを衰退させることになったのである。それではなぜ、若者たちは「歩く」という不法性を喚起させる旅をあえて行ったのか。また、「歩く」という行為はいかなる文化的・政治的イデオロギーを包含していたのか。「徒歩による」という意味をもつ`pedestrian'という英語の変遷に着目して、健脚だったことでも名高いイギリス・ロマン派の詩人ウィリアム・ワーズワスの作品を取り上げ、「歩く」ことと文学表現の関係や「歩く」ことと「自然」の発見との関係について研究した。
RNA 分子を介したポリコーム複合体作用機構の解明

本研究課題において、我々はRNA分子がポリコームタンパク質複合体(PRC1)を介して標的遺伝子の転写を抑制するメカニズムの解明に取り組んだ。PRC1構成因子のRing1Bタンパク質に対する抗体を用いた免疫沈降解析を行い、(1) PRC1はXist RNA及びPRC1構成因子をコードするmRNAと強く結合する、(2) PRC1とRNAの結合はRing1BやCbxタンパク質を介したものではなく分子量120 kDaの未知のタンパク質を介する、ことを明らかにした。ポリコーム複合体(PRC1/2)はヒストン修飾を介して標的遺伝子の転写を抑制するエピジェネティックな転写制御装置である。この機能にRNA分子が重要な役割を果たしていることが、我々のこれまでの研究成果などから強く示唆されている。本研究課題ではこれらの機能性RNA分子を同定するためにPRC1の構成因子であるRing1Bに対する抗体を用いたRNA免疫沈降(RIP)を行い、さらにはそれらのRNA分子群の機能解析を行うことを目標とする。条件検討の簡便さから、RIPは架橋形成を含まないnative RIPの方法で行い、材料にはマウス胚性幹細胞を用い、マウス正常IgGを使ったRIPを行って比較対照とした。昨年度(平成24年度)から今年度(平成25年度)にかけて、次世代シークエンサーを用いて(RIP-seq)、PRC1 (Ring1B)と共に沈降してくるRNA分子群を同定した。その結果、Mga、Tet2、Pcgf1、Pcgf2、Pcgf6、Phc1、Rnf2 (Ring1B)などのmRNAが、Ring1B結合RNA分画に濃縮されていることが明らかとなった。興味深いことに、上記のうち後ろから5つのタンパク質はいずれもポリコーム複合体の構成因子である。このことは、PRC1がこれらのポリコーム複合体構成因子のmRNAに結合して、それらの転写や翻訳のステップを調節し、その結果としてポリコーム複合体タンパク質の量を一定に保っているような可能性が考えられる。今後はこの仮説を検証するための実験を行う予定である。Native RIPでは抗Ring1B抗体によってPRC1のタンパク質複合体全体が沈降することから、他のPRC1構成タンパク質を介したような間接的結合RNAを沈降している可能性が排除できない。より直接的な結合を検出できるCLIP法を用いた実験を行って、上記の結果を検証することを検討している。ポリコーム複合体(PRC1/2)はクロマチンを構成するヒストンタンパク質への化学修飾を触媒し、その近傍の標的遺伝子の転写を抑制するエピジェネティックな転写制御装置である。我々のこれまでの研究から、ポリコーム複合体のこの機能にRNA分子が関わっていることが示されている。本研究課題ではPRC1とRNA分子の機能的関連を明らかにすることを目標とする。昨年度までに行ったnative RIP実験の結果として、PRC1に結合するRNA分子群を同定した。この結果を確かめるために、本年度は紫外線照射によりタンパク質とRNAの間を架橋させた後に標的タンパク質に対する抗体を使って結合RNAを沈降させるPAR-CLIP法を用いた実験を行った。PAR-CLIP法を用いることでPRC1に直接結合するRNA分子群を同定できると期待された。抗体はPRC1の構成タンパク質であるRing1Bに対する抗体を用いた。PRC1は複数のタンパク質から構成される巨大なタンパク質複合体であるが、RNA分子がそれらのどのタンパク質に結合するのかをまず明らかにするために、抗Ring1B抗体を用いたPAR-CLIPで沈降されるRNAをRIラベルした後にSDS-PAGEで解析した。その結果、RI標識したRNAを含むタンパク質のバンドが、Ring1Bの40 kDaには検出されずに、120 kDa付近にのみ検出された。この分子量を持つタンパク質はこれまでにPRC1の構成因子としては報告が無く、現在このタンパク質を同定を目指した解析を行っている。ポリコーム複合体(PRC1/2)はクロマチンを構成するヒストンタンパク質への化学修飾を触媒し、その近傍に存在する標的遺伝子の転写を抑制するエピジェネティックな転写制御装置である。この結果を確かめるために、昨年度は紫外線照射によりタンパク質とRNAの分子間を架橋させた後に標的タンパク質に対する抗体を使って結合RNA分子を沈降させるPAR-CLIP法を用いた実験を行った。PRC1は複数のタンパク質から構成される巨大なタンパク質複合体であるが、RNA分子がそれらのどのタンパク質に結合するのかをまず明らかにするために、抗Ring1B抗体によるPAR-CLIPで沈降されるPRC1複合体中のRNA分子を放射性同位体でラベルした後にSDS-PAGEで解析した。その結果、放射性同位体でラベルしたRNAを含むタンパク質のバンドが、Ring1Bタンパク質(40 kDa)付近には検出されずに、120 kDa付近に存在することが分かった。このことはRNAと結合するPRC1内のタンパク質がRing1Bでは無く、120 kDaの分子量を持つ未知のタンパク質であることを強く示唆した。現在、大規模な細胞培養から生化学実験を行い、このタンパク質を同定するための解析を続けている。

本研究課題において、我々はRNA分子がポリコームタンパク質複合体(PRC1)を介して標的遺伝子の転写を抑制するメカニズムの解明に取り組んだ。PRC1構成因子のRing1Bタンパク質に対する抗体を用いた免疫沈降解析を行い、(1) PRC1はXist RNA及びPRC1構成因子をコードするmRNAと強く結合する、(2) PRC1とRNAの結合はRing1BやCbxタンパク質を介したものではなく分子量120 kDaの未知のタンパク質を介する、ことを明らかにした。当初予定していたnative RIP実験の結果を検証するためにPAR-CLIPを行ったが、予想とは異なり、これまでに報告されていないPRC1構成タンパク質が存在し、その分子がRNAと結合していることが示唆された。現在、このタンパク質の正体を明らかにする方向に実験計画を変更しているため、当初の研究の目的からは若干の遅れが生じている。エピジェネティクスPRC1に結合してその機能を調節しているであろうと考えられるRNA分子の単離同定を試みたが、その過程で新規のPRC1構成タンパク質の存在が示唆される結果を得た。PRC1はここ数年の研究から多種類の複合体が存在しておりそれぞれが異なる機能を持っていることが明らかになりつつある。今回我々が見いだした新規タンパク質候補は当初の研究計画では想定していなかったことではあるが、その重要性を考慮して、この蛋白質の正体を突き止めることも行っていく予定である。また、当初の目的であるPRC1結合RNA種の同定についてもPAR-CLIPで沈降したRNA種を同定する解析を続けて行く。平成25年度はRIP-seqを行い、それにより得られたデータの解析を行った。その結果、PRC1(Ring1B)に結合するRNA分子の候補をいくつか同定した。公開されているヒストン修飾のChIp-seqデータベースとの比較から、これらの結合RNAのゲノム上の遺伝子部位にH2AK119ub1が蓄積している物を複数見いだした。現在までのところ、ほぼ当初の計画どおりに研究は進行している。実施する予定であった次世代シークエンサー解析(RNA-seq)を次年度に繰り越したため。CLIP法は、紫外線を照射することにより核酸ータンパク質間に架橋を形成させる方法である。さらに4-thiouridineなどの核酸アナログをRNAに予め取り込ませておくことにより、効率良く架橋を形成させることが可能となる。紫外線による架橋は、直接に結合しているような近距離に存在する分子間でのみ形成されることから、この方法を用いることでRing1Bに直接結合しているRNA分子を単離同定できる。今後はCLIPと次世代シークエンサーを組み合わせたCLIP-seqを行い、Ring1Bに直接結合するRNA分子を同定した後に、RNA側とRing1B側のそれぞれの結合部位を解析し、これらのRing1Bータンパク質の結合様式を明らかにすることを目指す。
セレン結合性タンパク質欠損マウスを用いたダイオキシン毒性発現機構の解明

ダイオキシン類誘導性セレン結合性タンパク質(SeBP)の生理的機能を解明し、ダイオキシン毒性との関連性を明らかにするためSeBP欠損マウスを作成した。SeBPの欠損は、マウスの外観や成長速度に影響を及ぼさなかった。しかし、20週令目において、欠損マウスの卵巣重量が、野生型に比べ有意に増加した。以上の結果から、SeBPは加齢に伴う卵巣がんの発症における抑制因子として働いている可能性が示唆された。セレン結合性タンパク質(SeBP)は、細胞の可溶性画分に存在するタンパク質である。その生理的機能については不明であるが、ダイオキシン類により顕著に誘導されることから、ダイオキイシンによる毒性の発現に関与している可能性は極めて高い。従って、その生理的意義を明らかにすることは、ダイオキシンによる毒性発現機構の解明に新たな知見を与えることができると予想される。本年度は、申請課題の目的を達成する手段として、ユニーテック株式会社の協力のもとノックアウトマウスの構築を試みた。マウスのゲノムデータベースより検索したSeBPの配列を基に、Exon 3からExon12までをNeoカセットで置換したtargeting vectorを構築した。エレクトロポレーションにて、targeting vectorをES細胞(C57BL/6系統)内にインジェクションし、Neo耐性、並びにgenotypingの結果を指標に、positive cloneを選別した。得られたpositive cloneを、仮親マウスにインジェクションし、出生児の毛色、並びにgenotypingの結果を指標にキメラマウスを選別した。さらに、キメラマウスと野生型のC57BL/6系マウスを交配させ、得られた児マウスからgenotypingを指標としてヘテロ体(F1ヘテロマウス)を選別した。そののち、得られたF1ヘテロマウス同士を交配させ、7匹のF2マウスの入手に成功している。F2マウスについては、成長後にgenotypingを行い、野生型、ヘテロ体、およびホモ体の選別を行う予定ある。また、F1ヘテロマウス同士の交配も継続して行い、ホモ体の個体数の拡充を図ったのち、ダイオキシン毒性試験に用いる予定である。細胞の可溶性画分に存在するセレン結合性タンパク質(SeBP)は、ヒトやげっ歯類などの哺乳動物のみならず植物や線虫など種をこえて発現が確認されているタンパク質である。本タンパク質は、ダイオキシン類の曝露によりマウスやラットの肝臓で顕著に誘導されることが明らかとなっている。しかし、その生理作用が明らかになっていないため、その誘導がもたらす意義については不明な点が多い。本研究では、SeBPの生理的意義を明らかにし、ダイオキシン類による毒性との関連性を明らかにするため、ノックアウトマウスの構築を試みた。本年度は、前年度構築に成功したF1ヘテロマウス(ヘテロ型SeBP欠損マウス)同士の交配を行い、ホモ型SeBP欠損マウスの入手を試みた。F1ヘテロマウスの雄と雌、それぞれ1匹ずつをケージ内でmatchingし、交配が確認されたものから個別飼育に切り替えた。出産ののち、3週令の時点で児を離乳させ、genotypingによる遺伝子型の確認を行った。その結果、野生型、ヘテロ型、およびホモ型のSeBP欠損マウスの入手に成功した。それぞれの型のマウスにおける成長を観察したところ、加齢に伴う体重増加に差は認められなかった。また、成熟後の性行動、および出産胎児数も各型における顕著な差は認められなかった。成長後の臓器重量を観察した結果、雌のホモ型SeBP欠損マウスにおける卵巣の重量が、野生型に比べ有意に増加することが明らかとなった。これに対し、雄のマウスでは、各型間で有意な差は認められなかった。以上の結果から、SeBPは、特定臓器におけるガン抑制因子として機能している可能性が示唆された。