hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
GC/MS/MSによる違法ドラッグ類異性体識別法の構築

塩素基を有する合成カンナビノイド以外は、1シングルスキャンモードによるEI-マススペクトルの取得を行った後、2フラグメンテーション解析を実施し、各フラグメントイオンのうち、異性部位に相当するイオンを決定した。異性部位に相当するイオンを決定した後、3異性部位のMS/MS条件の最適化を行い、対象成分とした合成カンナビノイド類の異性体識別法を構築した。しかし、塩素基を有する合成カンナビノイド(JWH-398)においては、上記の分析法での異性体識別は困難だということが判明したので、引き続き今後の課題である。これらの研究成果の一部については、国際学会で発表を行い、さらに論文投稿も行い2015年3月に公表された。また、次年度の主たる目的である合成カンナビノイドの水酸化代謝物の水酸基の位置決定法の検討についても、すでに予備実験を開始しており、シングルスキャンモードおよびMS/MS分析で目標達成が可能であると予想される。27年度が最終年度であるため、記入しない。分析化学本年度の主たる目標である合成カンナビノイドの水酸化代謝物の水酸基の位置決定法を検討する。対象成分としては、すでに標準品が市販されているJWH-018のナフタレン環水酸化代謝物及びインドール水酸化代謝物を用いる。初年度同様に、EI-マススペクトルを取得し、フラグメンテーション解析を実施した後、異性部位に相当するイオンをプリカーサーイオンとして、MS/MSの最適化を行う。異なるCE及びプリカーサーイオンで得られたプロダクトイオンスペクトルから、水酸基の位置が決定できる条件を見出し、水酸基位置決定法を構築する。なお、水酸化代謝物の場合は、TMS誘導体化あるいはTFA誘導体化を用いることで、フラグメンテーションのパターンを変えることが可能であることから、誘導体化法を組み合わせた分析手法についても検討する。水酸化位置決定法を構築した後、合成カンナビノイド(JWH-073、MAM-2201など)をラットに腹腔内投与し、24時間蓄尿した尿試料を用いて、水酸化代謝物の水酸基の位置決定を行う。さらに初年度からの検討課題として異性部位に塩素基を有する危険ドラッグの異性体識別についても見当を行う。特にEI-MS/MSで識別が困難だった塩素紀を有する合成カンナビノイド類について、化学イオン化法(CI)または負イオン化学イオン化法(NCI)を用いたMS/MSによる識別を試みる。
小脳の分子構築にかかわる新規遺伝子群のポストゲノム的解析

本研究では、マウス小脳の分子構築を解明するため、ゲノムワイドなアプローチによりマウス小脳形成に特異的な遺伝子の体系化を行い、小脳形成にかかわる新規遺伝子の探索とその構造・機能の解析を行った。本年度は、蛍光ディファレンシャル・ディスプレイ法(FDD法)やcDNAマクロアレイ法などによって、マウス小脳形成期に特異的に発現する遺伝子群の探索を行った。現在までにFDD反応物を約12,000個解析して(理研ゲノム・服部先生との共同研究)、発達ステージ特異的な遺伝子を約2,000個クローニングした。さらにAffymetrix社製GeneChipを用いて、小脳形成に特異的な遺伝子を約800抽出することにも成功した。単離した小脳形成に特異的な遺伝子群の発現プロファイルをRT-PCR法によりさらに解析し、遺伝子発現タイムテーブルの作製を行った。今後はin situ hybridization(ISH)法による遺伝子発現ブレインマップの作製をめざす。また、オリゴキャップ法で作製した小脳発達期特異的な完全長cDNAライブラリー(東大医科研・菅野先生との共同研究)を用いて、新規遺伝子のクローニングとその構造、機能、発現の解析を行う。これらの遺伝子産物に対する特異抗体を作製して、たんぱく質機能を解析する。さらに、小脳形成遺伝子(約2,400)を用いて、脳形成遺伝子マイクロアレイの作製とその応用を行う。
HCVトランジスジェニックマウスを用いた免疫寛容解除のメカニズム

本年度はカセットセオリーを利用したCTLの協力な誘導実験までは検討できなかったが、多施設が誘導に失敗しているmouseのHCV core specific CTLの誘導に可能性を見出したため、今後のこのlineを用いた次のステップの実験へ進みうると考えている。
海洋生態系の栄養基盤を制御する微生物による有機物変質作用の解明

長崎県沿岸域より細菌を単離培養し、細菌細胞のアミノ酸分析を行い、酵素分解性アミノ酸(栄養価の指標)の割合を算出したところ、16-72%と細菌間で大きく異なり、種レベルでその割合は異なっていた。植物プランクトンの酵素分解性アミノ酸の割合は30-35%であるとの報告値から、植物プランクトンの生産した有機物が細菌群集の付着によりその栄養価が変化することが示唆された。また、細菌種によって酵素分解性アミノ酸の割合が植物プランクトンのそれよりも大きい種と小さい種が存在することから、付着する細菌種によって、植物プランクトンの生産した有機物の栄養価が上がる方向にも下がる方向にも変化することが考えられた。本研究は、海洋食物連鎖系の栄養的基盤である懸濁態有機物の栄養価が、微生物群集による分解・変質を受けることで変化し、懸濁態有機物の餌資源としての有用性(栄養価)が大きく変化するという「細菌による栄養価変換仮説」を検証することを目的としている。本年度は、まず高速液体クロマトグラフィー(HPLC)によるアミノ酸分析の立ち上げを行った。一般に、海水のアミノ酸分析の蛍光誘導体化には、高感度なOPA(o-フタルアルデヒド)法が用いられるが、この方法では二級アミンのプロリンなどは誘導体化されないため、検出できないという問題点があった。そのため、本研究では二級アミンも誘導体化可能なAQC(6-アミノキノリル-N-ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート)を用いた誘導体化の海水試料への適用を試みた。AQC誘導体化とHPLCを組み合わせた分析法による分析条件を検討した結果、19種類のアミノ酸を定量することができた。AQC法はOPA法と比較すると、検出感度が劣るため、海水中有機物の分析例は極めて少ない。本方法を用いて、大村湾から採水した溶存態画分の分析に適用した結果、数種のアミノ酸は検出限界以下であったものの、検出されたアミノ酸に関しては繰り返し測定による変動係数が数%以内に収まり、良好な結果が得られた。また、当初の予定にはなかったが、2016年11月に日本海洋開発機構の新青丸KS-16-18次航海、2017年3月にKS-17-1次航海に乗船することができたため、大槌湾、釜石湾、女川湾内および、それぞれの湾の東方沖の観測点にて、酵素分解性アミノ酸分析に供試する懸濁有機物試料の採取を行うことができた。AQC誘導体化を用いた海水中アミノ酸の分析方法の検討は、年度内に概ね完了した。しかし、当初は2015年7月を目処に分析方法の立ち上げ完了を想定していたが、実際は条件検討に時間を要したため、2016年3月まで分析方法の検討を続けることとなった。その大きな理由としては、クロマトグラム上に、誘導体化試薬由来の妨害ピークが大きく出てしまい、アラニンのピークと重なってしまい、分離の検討に相当時間を費やすことになったことが挙げられる。実際は、業者より購入した誘導体化試薬が劣化していたことが原因とわかり、現状ではこの問題は解消されたが、このことが原因で条件検討に大幅な時間を取られ、当初の予定にあった酵素分解処理を施した有機物のアミノ酸分析の立ち上げや添加培養実験までは行き着かなかった。しかし、当初の予定にはなかったが、2016年11月に日本海洋開発機構の新青丸KS-16-18次航海、2017年3月にKS-17-1次航海に乗船することができたため、大槌湾、釜石湾、女川湾内および、それぞれの湾の東方沖の観測点にて、酵素分解性アミノ酸分析に供試する懸濁有機物試料の採取を行うことができた。これは、当初は2017年度に行う予定であったため、試料採取に関しては、予定よりも順調に進んでいる。本研究は、海洋食物連鎖系の栄養的基盤である懸濁態有機物の栄養価が、微生物(主に細菌)群集による分解・変質を受けることで変化し、懸濁態有機物の餌資源としての有用性(栄養価)が大きく変化するという「細菌による栄養価変換仮説」を検証する目的で実施した。当初の計画では、天然細菌群集を捕集して全アミノ酸に対する酵素分解性アミノ酸の割合(栄養価の指標)を明らかにする予定であった。しかし、沿岸域には細菌と同サイズの非生物体粒子が無数に存在しており、細菌のみを選択的に捕集することが困難であった。そのため、本研究では計画を変更し、沿岸域から海洋細菌を単離培養し、それらの株について栄養価の評価を行った。また、最も良く使用されるアミノ酸測定法(OPA法)では検出できない第1級アミノ酸も検出できる分析方法(AQC法)の検討も行った。長崎県沿岸域より細菌を単離培養し、7株について種同定を行った。その結果、単離された株はいずれも粒子付着画分に多いPseudoalteromonas属あるいはVibrio属であった。これらの細菌株についてアミノ酸分析を行い、酵素分解性アミノ酸の割合を算出したところ、16-72%と細菌間で大きく異なり、種レベルでその割合は異なっていた。一方で、アミノ酸の組成に関しては細菌による違いは見られなかった。植物プランクトンの酵素分解性アミノ酸の割合は30-35%であるとの報告値から(Dauwe et al. 1999)、植物プランクトンの生産した有機物は細菌群集の付着によりその栄養価が変化することが示唆された。

また、細菌種によって酵素分解性アミノ酸の割合が植物プランクトンのそれよりも大きい種と小さい種が存在することから、付着する細菌種によって、植物プランクトンの生産した有機物の栄養価が上がる方向にも下がる方向にも変化することが考えられた。長崎県沿岸域より細菌を単離培養し、細菌細胞のアミノ酸分析を行い、酵素分解性アミノ酸(栄養価の指標)の割合を算出したところ、16-72%と細菌間で大きく異なり、種レベルでその割合は異なっていた。植物プランクトンの酵素分解性アミノ酸の割合は30-35%であるとの報告値から、植物プランクトンの生産した有機物が細菌群集の付着によりその栄養価が変化することが示唆された。当初2016年度に実施予定であった酵素分解処理を施した有機物のアミノ酸分析の立ち上げや添加培養実験を2017年度の4月9月にかけて実施する。また、実際の現場試料の分析に関しては、すでに新青丸KS-16-18、KS-17-1次航海で採取したものがあるため、酵素分解性アミノ酸分析が立ち上り次第、分析に取り掛かることで、計画の遅れは十分取り戻すことが可能である。2017年12月までにすべての分析を終え、データの解析、数理モデルの開発に取り掛かる。2018年3月までにすべての結果をまとめ、日本生態学会において研究成果を発表する。また、論文執筆に着手する。生物地球化学、海洋環境生物学残額が38円と極めて少額であり、購入できる物品等がなかったため。38円と極めて少額であるため、次年度使用計画の一部として使用する予定である。
機能性食品成分-GPR30システムによる腸管免疫を介した血管機能改善機構の解明

肥満症・代謝性疾患の予防・改善の新たな標的として腸内環境が注目され、特に、食品成分由来の腸内細菌代謝物の重要性が明らかになりつつある。近年、大豆イソフラボン(Daidzein:DZ)の新たな生体調節機能として、心血管病(CVD)の改善効果が臨床研究にて指摘されている。その分子実体の一つに大豆イソフラボン由来の腸内細菌代謝物・エクオール(Equol:EQ)の存在が示唆されているが、その詳細な作用機序は未解明である。植物性エストロゲンアナログであるDZには、エストロゲンと同様、心筋梗塞や脳梗塞等のリスク軽減効果が報告されている。その作用機序として、エストロゲン受容体(ER)を介したLDLの減少とVLDL/HDLの増加による脂質異常改善作用や血圧降下作用等が示唆されている。また、エストロゲンの機能発現に関して、従来のERを介した作用に加え、近年、新規エストロゲン受容体である細胞膜受容体・GPR30による新たな作用機序が指摘されている。そこで本研究では、DZやEQによるCVDリスク改善効果の新規な分子基盤を解明することを目的に、特に腸管におけるエストロゲン受容体GPR30に着目し、『GPR30が食事由来エストロゲンアナログであるDZ及びEQの感知を司る栄養素センサーとして機能し、腸管を起点とした臓器連関による血管組織のVascular remodelingに関与することで、CVDリスク改善効果に寄与するのではないか』との作業仮説を検証した。今年度は、細胞試験にて植物性エストロゲンであるDZやEQなどが細胞膜上エストロゲン受容体GPR30の新規リガンドとなるのか、さらには、動脈硬化改善作用におけるGPR30の機能的意義の解明を動物試験にて試みた。エストロゲン受容体GPR30に対する大豆成分由来新規リガンドの同定、さらにはGPR30による自然免疫細胞(単球/腸管マクロファージ)の機能制御を介して血管組織のVascular remodelingに関与するのかについて検討する一環として、最初にGPR30リガンドスクリーニング系の構築を試みた。今年度、Flp-In T-Rex HEK293細胞によるGPR30強制発現系の構築が完了しており、大豆成分由来新規リガンドの結合能の評価を進めている。ポジティブコントロールとして、内因性エストロゲン(17β-estradiol; E2)及び合成リガンドG-1(GPR30 agonist)を用い、大豆イソフラボン(Daidzein:DZ)とその腸内細菌代謝物・エクオール(Equol:EQ)のGPR30への親和性に関して、細胞内セカンドメッセンジャーを評価指標として検討している。GPR30下流シグナルについては、評価系あるいは発現組織の違いやcAMP産生機序および細胞内Ca2+濃度に応じて、共役するGタンパク質(Gi, Gq, Gs )に関する統一的な見解が得られていない。従って、我々はDZおよびEQの結合に伴う下流シグナルに関して多面的な解析を進めている。次に、腸管免疫ー血管機能を基軸に臓器連関を介した動脈硬化症改善におけるGPR30の機能的意義についてモデルマウスを用いて検討する一環として、Gpr30遺伝子欠損マウスの作製を試みた。今年度、ゲノム編集(CRISPR/Cas9)によるGpr30遺伝子欠損を導入したファウンダーマウスより、現在、ホモ欠損型系統の樹立が完了している。大豆イソフラボン(Daidzein:DZ)とその腸内細菌代謝物・エクオール(Equol:EQ)の作用によるGPR30を介した腸管粘膜免疫の制御機構や腸内細菌叢の菌組成と機能特性(EQ産生能等)を検討し、腸管免疫ー血管機能を基軸とした臓器連関によるVascular remodelingの作用機序を解明することで、動脈硬化発症・進展における新規の分子基盤を明らかにする。今年度に作出したGpr30遺伝子欠損マウスやGPR30リガンドスクリーニング系を駆使して、腸管の自然免疫細胞(マクロファージ)におけるGPR30の機能解析(細胞分化、遊走能等)に加えて、血管内皮細胞におけるGPR30の機能解析(炎症/抗炎症指標・eNOS活性化・接着分子発現等)を実施し、動脈硬化進展に関する新規の作用機序を見出す予定である。

そこで本研究では、DZやEQによるCVDリスク改善効果の新規な分子基盤を解明することを目的に、特に腸管におけるエストロゲン受容体GPR30に着目し、『GPR30が食事由来エストロゲンアナログであるDZ及びEQの感知を司る栄養素センサーとして機能し、腸管を起点とした臓器連関による血管組織のVascular remodelingに関与することで、CVDリスク改善効果に寄与するのではないか』との作業仮説を検証した。今年度は、細胞試験にて植物性エストロゲンであるDZやEQなどが細胞膜上エストロゲン受容体GPR30の新規リガンドとなるのか、さらには、動脈硬化改善作用におけるGPR30の機能的意義の解明を動物試験にて試みた。エストロゲン受容体GPR30に対する大豆成分由来新規リガンドの同定、さらにはGPR30による自然免疫細胞(単球/腸管マクロファージ)の機能制御を介して血管組織のVascular remodelingに関与するのかについて検討する一環として、最初にGPR30リガンドスクリーニング系の構築を試みた。今年度、Flp-In T-Rex HEK293細胞によるGPR30強制発現系の構築が完了しており、大豆成分由来新規リガンドの結合能の評価を進めている。ポジティブコントロールとして、内因性エストロゲン(17β-estradiol; E2)及び合成リガンドG-1(GPR30 agonist)を用い、大豆イソフラボン(Daidzein:DZ)とその腸内細菌代謝物・エクオール(Equol:EQ)のGPR30への親和性に関して、細胞内セカンドメッセンジャーを評価指標として検討している。GPR30下流シグナルについては、評価系あるいは発現組織の違いやcAMP産生機序および細胞内Ca2+濃度に応じて、共役するGタンパク質(Gi, Gq, Gs )に関する統一的な見解が得られていない。従って、我々はDZおよびEQの結合に伴う下流シグナルに関して多面的な解析を進めている。次に、腸管免疫ー血管機能を基軸に臓器連関を介した動脈硬化症改善におけるGPR30の機能的意義についてモデルマウスを用いて検討する一環として、Gpr30遺伝子欠損マウスの作製を試みた。今年度、ゲノム編集(CRISPR/Cas9)によるGpr30遺伝子欠損を導入したファウンダーマウスより、現在、ホモ欠損型系統の樹立が完了している。大豆イソフラボン(Daidzein:DZ)とその腸内細菌代謝物・エクオール(Equol:EQ)の作用によるGPR30を介した腸管粘膜免疫の制御機構や腸内細菌叢の菌組成と機能特性(EQ産生能等)を検討し、腸管免疫ー血管機能を基軸とした臓器連関によるVascular remodelingの作用機序を解明することで、動脈硬化発症・進展における新規の分子基盤を明らかにする。今年度に作出したGpr30遺伝子欠損マウスやGPR30リガンドスクリーニング系を駆使して、腸管の自然免疫細胞(マクロファージ)におけるGPR30の機能解析(細胞分化、遊走能等)に加えて、血管内皮細胞におけるGPR30の機能解析(炎症/抗炎症指標・eNOS活性化・接着分子発現等)を実施し、動脈硬化進展に関する新規の作用機序を見出す予定である。
網羅的SNP解析による双極性障害関連遺伝子の探索と臨床応用

平成19年度は、対象者(双極性障害患者)のうち24名(約14.5%)にSCID-IVによる構造化面接を行い、臨床診断(DSM-IV)を確定した。操作的診断が確定した症例は、2年間で約半数にとどまった。種々の臨床背景を調査し、気分安定薬や抗うつ薬、その他の治療薬に対する治療反応性も評価した。本研究の対象者は、昨年度と同様に(1)双極2型障害および特定不能の双極性障害の割合が高く、(2)気分安定薬の治療反応性が不良であり、(3)標準的な薬物療法以外にドパミン受容体アゴニストの使用率が高いことが示された。また、ドパミン受容体へ作用する薬剤が、抗うつ薬に比べて難治性症例に対しても比較的有効である可能性が示唆された。双極性障害の病態生理におけるドパミン神経系の関与を想定し、昨年度に続いて、ドパミン関連遺伝子の遺伝子多型(SNPおよびVNTR)と診断および治療反応性の相関を検討した。治療薬の作用機序を考慮してドパミンD2受容体遺伝子(DRD2)およびドパミントランスポーター遺伝子(DAT1)、ドパミンD2受容体との関連が報告されているPAR-4遺伝子(PAWR)を候補遺伝子とした。今年度はサンプル数を増やして再検討したところ、同様にPAWRで双極性障害との有意な相関(p<0.005)を認めた。治療反応性については、サンプル数の問題から十分な検討を行えていないが、ドパミン受容体アゴニストの治療反応性とDRD2に相関傾向を認めている。現時点で網羅的SNP解析を診断や治療反応性など臨床に応用することは困難と思われるが、今後の発展は十分に期待される。現在、有力な疾患関連遺伝子としてPAWRに着目し、未報告の機能的SNPの探索を行っている。平成18年度は、対象者(双極性障害患者)のうち55名(約33%)にSCID-IVによる構造化面接を行い、臨床診断(DSM-IV)を確定した。さらに、種々の臨床背景を調査し、気分安定薬や抗うつ薬、その他の治療薬に対する治療反応性も評価した。この結果、本研究の対象者は、(1)一般の報告に比べて双極II型障害および特定不能の双極性障害の割合が高い(約2.1倍)こと、(2)気分安定薬の治療反応性が不良(難治性)である割合が高い(約85%)こと、(3)標準的な薬物療法以外にドパミン受容体アゴニストの使用率が高いこと、が判明した。さらに、ドパミン受容体へ作用する薬剤(ドパミン受容体アゴニストや抗精神病薬)が、抗うつ薬に比べて難治性症例に対しても比較的有効である可能性が示唆された。以上の結果から、双極性障害の病態生理においてドパミン神経系の関与が推定された。そこで、ドパミン関連遺伝子の遺伝子多型(SNPおよびVNTR)と診断および治療反応性の相関を検討した。対象とした候補遺伝子は、治療薬の作用機序を考慮してドパミンD2受容体遺伝子(DRD2)およびドパミントランスポーター遺伝子(DAT1)、近年ドパミンD2受容体との関連が報告されているPAR-4遺伝子(PAWR)である。なお、PAWRは、気分安定薬(リチウム・バルプロ酸)で発現が増加することも報告されている。このうち、PAWRで双極性障害との有意な相関(p=0.0056)を認めた。治療反応性については、現時点ではサンプル数が少ないものの、ドパミン受容体アゴニストの治療反応性とDRD2に相関傾向(p=0.09)を認めた。
クラミジア感染におけるアポトーシス因子Apaf-1とCaspase-9の機能解析

クラミジアの感染や増殖に大きな影響を与えるアポトーシス促進因子であるApaf-1とCaspase-9と物理的相互作用するクラミジア因子を明らかにするため、酵母2-hybrid法に用いる肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーを構築した。まず、肺炎クラミジアが有する全1072遺伝子のDNA配列をPCRにより個別に増幅した。そのDNA断片と線状化した酵母2-hybrid法ベクターを混合し、酵母に導入することにより酵母内で相同組換えによって遺伝子クローニングした。現在のところ、30遺伝子が単独で酵母2-hybrid法において陽性を示したため、それを除く1042遺伝子を保有する個別の酵母ラインを肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーとした。まず、このライブラリーを用いて、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子の探索を実施した。結果として、機能未知な2遺伝子,グリコーゲンの下合成に係わる2遺伝子、外膜タンパク質遺伝子の合計5遺伝子が分離された。これまでCaspase-9は封入体内に局在し、さらにCaspase-9はクラミジア菌体に結合し共沈殿することを実験で示してきた。外膜タンパク質はクラミジア菌体と封入体内を区分するタンパク質であり、その外膜タンパク質とCaspase-9の相互作用は極めて興味深い。今後、Caspase-9によるクラミジア感染の促進効果との関連を詳細に検討する必要がある。また、クラミジアは封入体にグリコーゲンを蓄積することが古くから知られており、Caspase-9とグリコーゲン合成の関連も興味深い。最後に機能未知な遺伝子産物にいて、そのタンパク質を大腸菌において合成し精製した上で、プルダウン実験を行ったところ、Caspase-9と共沈殿することが明らかとなった。これら機能未知な遺伝子についても詳細な検討を進めたい。さらに、Apaf-1についても同様の実験を進める。酵母2-hybrid法に試用するための肺炎クラミジアの全1072遺伝子を個別にクローニングした酵母ライン(肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリー)を構築した。その肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーから酵母2-hybrid法によって、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子を合計5遺伝子分離した。また、部分的ではあるが、プルダウン実験などによりその相互作用を確認した。その結果はすでに国際誌に発表した。さらに、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子として外膜タンパク質遺伝子が分離されことに触発されて、肺炎クラミジアが有する外膜タンパク質遺伝子30について、ヒトのcDNA発現ライブラリーを用いて酵母2-hybrid法によって相互作用する遺伝子の分離行った。また、Caspase-9と相互作用する遺伝子として分離されたグリコーゲン合成遺伝子について、その遺伝子を大腸菌で発現させタンパク質を調製し、抗体を作成した。この抗体を用いて、クラミジア感染とグリコーゲン合成の関係を調べているところである。また、この抗体によるクラミジア感染の中和実験も進めている。Apaf-1については最終年度の課題となっている。肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーとして酵母2-hybrid法によって、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子の探索を実施し結果、機能未知な2遺伝子,グリコーゲンの下合成に係わる2遺伝子、外膜タンパク質遺伝子の合計5遺伝子が分離された。それぞれの遺伝子産物の抗体を作成して、タンパク質蓄積のプロファイルを理解し、感染への関与を明らかにする。それらの抗体を用いて、感染を中和できるか詳細に検討する。一方で、前駆体のCaspase-9は、宿主クラミジアによって活性化されることを実験で示してきた。しかし、その活性化機構と活性化されたCaspase-9がいずれかのタンパク質を分解するか不明である。それらの点について詳細な検討を実施する。また、Caspase-9とグリコーゲン合成の関連も詳細に検討する。さらに、Apaf-1について、Caspase-9と同様に酵母2-hybrid法を用いて相互作用するクラミジア遺伝子の探索する。得られた結果に従い、Apaf-1と相互作用するクラミジア遺伝子の詳細な解析を実施する。これら機能

未知な遺伝子についても詳細な検討を進めたい。さらに、Apaf-1についても同様の実験を進める。酵母2-hybrid法に試用するための肺炎クラミジアの全1072遺伝子を個別にクローニングした酵母ライン(肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリー)を構築した。その肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーから酵母2-hybrid法によって、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子を合計5遺伝子分離した。また、部分的ではあるが、プルダウン実験などによりその相互作用を確認した。その結果はすでに国際誌に投稿し受理されている。以上の点は計画通りである。また、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子として外膜タンパク質遺伝子が分離されことに触発されて、肺炎クラミジアが有する外膜タンパク質遺伝子30について、ヒトのcDNA発現ライブラリーを用いて酵母2-hybrid法によって相互作用する遺伝子の分離行った。データは未発表であるが、興味深い点が多い。一方、Apaf-1については今後の課題となっている。クラミジアの感染や増殖に大きな影響を与えるアポトーシス促進因子であるApaf-1とCaspase-9と物理的相互作用するクラミジア因子を明らかにするため、酵母2-hybrid法に用いる肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーを構築した。まず、肺炎クラミジアが有する全1072遺伝子のDNA配列をPCRにより個別に増幅した。そのDNA断片と線状化した酵母2-hybrid法ベクターを混合し、酵母に導入することにより酵母内で相同組換えによって遺伝子クローニングした。現在のところ、30遺伝子が単独で酵母2-hybrid法において陽性を示したため、それを除く1042遺伝子を保有する個別の酵母ラインを肺炎クラミジア全遺伝子ライブラリーとした。まず、このライブラリーを用いて、Caspase-9と相互作用するクラミジア遺伝子の探索を実施した。結果として、機能未知な2遺伝子,グリコーゲンの下合成に係わる2遺伝子、外膜タンパク質遺伝子の合計5遺伝子が分離された。これまでCaspase-9は封入体内に局在し、さらにCaspase-9はクラミジア菌体に結合し共沈殿することを実験で示してきた。外膜タンパク質はクラミジア菌体と封入体内を区分するタンパク質であり、その外膜タンパク質とCaspase-9の相互作用は極めて興味深い。今後、Caspase-9によるクラミジア感染の促進効果との関連を詳細に検討する必要がある。
量子散乱問題で探る重力理論

Einstein重力理論に代わる、量子重力理論の詳細を理解することは、長年にわたる基礎物理学研究の目標の一つである。近年、量子重力理論の散乱問題の物理が繰り込み可能性と密接にかかわっていることが指摘され始めた。本研究では、高階微分重力理論を扱い、高エネルギー領域での散乱振幅評価を行う。この解析の特色は、摂動的量子補正(ループ)計算とは別のアプローチである散乱振幅の理論計算により、量子重力の性質を探る点である。さらに、宇宙インフレーションの解析を行い、観測可能な物理量と宇宙精密測定データとを比較する。これにより、理論的検証だけでなく、実験からも高エネルギー領域での重力理論の情報を検証できる。
薬物動態関連遺伝子の量的多様性発現への肝転写因子HNF3およびHNF6の関与

本研究では、HNF3およびHNF6遺伝子の全翻訳領域および5'-上流領域における遺伝的多型を探索し、各転写因子の機能におよぼす質的あるいは量的な影響を考察することを目的とした。当該遺伝子を含む領域におけるtag-SNPsをHapMapより抽出し、抗癌剤であるドキソルビシン投与による消化器毒性の発現を指標とした関連性解析を行った。その結果、HNF3γ遺伝子5'-上流領域において2箇所、HNF6β遺伝子3'-非翻訳領域において1箇所の、ドキソルビシンによる消化器毒性発現と関連性が認められるSNPsを同定した。医薬品の代謝における個体差の原因の一つとして、薬物代謝酵素遺伝子の調節に関わる転写因子の遺伝子多型が知られている。本研究では、cytochrome P450(CYP)およびUDP-glucuronyltransferase(UGT)各分子種の肝における構成的発現に関わる転写因子であるhepatocyte nuclear factor(IINF)1α、HNF4αおよびHNF4γに認められる協調的な量的差異の分子機構を明らかにするため、これらの転写因子の上位調節因子であるHNF3およびHNF6遺伝子の全翻訳領域および5'-上流領域における遺伝的多型を探索し、各転写因子の機能におよぼす質的あるいは量的な影響を考察することを目的とした。1.ヒトHNF3およびHNF6遺伝子の遺伝的多型の探索HNF3およびHNF6遺伝子の全翻訳領域および5'-上流領域における遺伝的多型を探索し、各転写因子の機能に及ぼす質的あるいは量的な影響を考察するために、HNFα、HNF3β、HNF6αおよびHNF6β遺伝子を含む各領域におけるtag-SNPsをHapMapより抽出し、抗癌剤であるドキソルビシン投与による消化器毒性の発現を指標とした関連性解析を行った。その結果、HNF3γ遺伝子5'-上流領域において2箇所(P=8.1×10^<-3>、Odds ratio(OR)=3.8およびP=6.5×10^<-3>、OR=4.9)、HNF6β遺伝子3'-非翻訳領域において1箇所(P=2.6×10^<-2>、OR=8.3)の、ドキソルビシンによる消化器毒性発現と関連性が認められるSNPsを同定した。本研究では、HNF3およびHNF6遺伝子の全翻訳領域および5`-上流領域における遺伝的多型を探索し、各転写因子の機能におよぼす質的あるいは量的な影響を考察することを目的とした。1.HNF3およびHNF6遺伝子に認められた遺伝的多型の下流遺伝子の発現制御への影響の検討HNF3およびHNF6遺伝子の全翻訳領域および5`-上流領域における遺伝的多型を探索し、各転写因子の機能に及ぼす質的あるいは量的な影響を考察するために、HNF3α、HNF3β、HNF3γ、HNF6αおよびHNF6β遺伝子を含む各領域におけるtag-SNPsをHapMapより抽出し、抗癌剤であるドキソルビシン投与による消化器毒性の発現を指標とした関連性解析を行った。その結果、HNF3γ遺伝子5`-上流領域において2箇所(P=8.1×10^<-3>、Odds ratio (OR)=3.8およびP=6.5×10^<-3>、OR=4.9)、HNF6β遺伝子3`-非翻訳領域において1箇所(P=2.6×10^<-2>、OR=8.3)の、ドキソルビシンによる消化器毒性発現と関連性が認められるSNPsを同定した。そこでこれらの各SNPをそれぞれminimal promoterの上流に連結したルシフェラーゼレポータープラスミドを作成し、ヒト肝癌由来HepG2細胞にてルシフェラーゼアッセイを行い、各SNPが転写活性に与える影響を検討した。各SNPを含む領域は、minimal promoterに対して正もしくは負の調節能を示したが、SNP間での調節能の違いは認められなかった。したがって、これらのSNPsは、連鎖不平衡にある別のSNPを介して間接的にHNF3γおよびHNF6βの機能に影響をおよぼしている可能性が示された。
ヒトGM-CSF,IL-3,IL-5レセプターで共有されるβ鎖の解析

GM-CSFは骨髄系細胞だけでなく多くの細胞に作用し,IL-3,IL-5レセプターとβ鎖を共有し,特有のα鎖でGM-CSFの応答に関与する.本研究はGM-CSFレセプターα鎖とβ鎖の生体内での発現状態を,抗体により蛋白レベルで明らかにすることを目的として始められた.ヒトGM-CSFレセプターα鎖の細胞外ドメインに対応する15アミノ酸よりなる合成ペプチドを抗原としてBalb/cマウスに免疫した後,脾細胞とミエローマ細胞株でハイブリドーマを作成した.培養上清中の合成ペプチドに対する抗体価の上昇を確認したハイブリドーマをBalb/cマウスの腹腔内に投与し得られた腹水よりIgM分画を精製した.精製抗体を用いてGM-CSFレセプターα鎖の存在が確認されているU937,HL-60の膜蛋白成分に対してウエスタンブロットを行いMW85kDaの1bandが検出された.フローサイトメトリーでGM-CSFレセプターα鎖を発現しているTF-1,U937,好中球,単球にて存在を確認したが,α鎖を発現していないRajiおよびJarkatでは確認できなかった.TF-1,U937いずれの細胞でも抗体の結合はGM-CSFで阻害されblocking antibodyである可能性が考えられた.得られた抗体を用いて解析した結果α鎖はTNFαやIL-1ではβ鎖で認められた様な強い増強は確認されず,産生調節が異なっていることが明らかとなった.本研究はGM-CSFβ鎖の解析のための抗体作成が目標であったが,α鎖でのみ抗体が得らた.β鎖に関しては今後も機会があれば良い抗体作成に努めることは必要であると考えられる.GM-CSFは骨髄系細胞だけでなく多くの細胞に作用し,IL-3,IL-5レセプターとβ鎖を共有し,特有のα鎖でGM-CSFの応答に関与する.本研究はGM-CSFレセプターα鎖とβ鎖の生体内での発現状態を,抗体により蛋白レベルで明らかにすることを目的として始められた.ヒトGM-CSFレセプターα鎖の細胞外ドメインに対応する15アミノ酸よりなる合成ペプチドを抗原としてBalb/cマウスに免疫した後,脾細胞とミエローマ細胞株でハイブリドーマを作成した.培養上清中の合成ペプチドに対する抗体価の上昇を確認したハイブリドーマをBalb/cマウスの腹腔内に投与し得られた腹水よりIgM分画を精製した.精製抗体を用いてGM-CSFレセプターα鎖の存在が確認されているU937,HL-60の膜蛋白成分に対してウエスタンブロットを行いMW85kDaの1bandが検出された.フローサイトメトリーでGM-CSFレセプターα鎖を発現しているTF-1,U937,好中球,単球にて存在を確認したが,α鎖を発現していないRajiおよびJarkatでは確認できなかった.TF-1,U937いずれの細胞でも抗体の結合はGM-CSFで阻害されblocking antibodyである可能性が考えられた.得られた抗体を用いて解析した結果α鎖はTNFαやIL-1ではβ鎖で認められた様な強い増強は確認されず,産生調節が異なっていることが明らかとなった.本研究はGM-CSFβ鎖の解析のための抗体作成が目標であったが,α鎖でのみ抗体が得らた.β鎖に関しては今後も機会があれば良い抗体作成に努めることは必要であると考えられる.ヒトGM-CSFレセプターalpha鎖またはbeta鎖をコードする塩基配列から想定されるアミノ酸配列を参考に合成ペプタイドを作成してマウスに免疫した.免疫後の脾臓B細胞とミエローマ細胞を融合させクローンをスクリーニングした結果,beta鎖からは良い抗体が得られなかったが,alpha鎖の151165番目のアミノ酸を認識する5クローンが得られ,その内1クローンがサブクラスはmu鎖であったが,alpha鎖に対して親和性の高い抗体であった.本抗体はGM-CSFレセプターalpha鎖を発現する細胞と結合し,FACSで調べた結果では,GM-CSFレセプターalpha鎖を多量に発現させたCOS7細胞だけでなく,TF-1,U937,好中球の様にalpha鎖を多く発現している細胞でも検出された.本抗体作用前に4°Cで細胞とGM-CSFをpreincubationすると本抗体の結合は阻止され,本抗体はGM-CSFレセプターalpha鎖のGM-CSF結合ドメインの近傍に結合していることが考えられた.本抗体と結合する蛋白はWestern Blottingで調べた結果分子量8.5万の蛋白であった.以上から本抗体はGM-CSFalpha鎖を認識するものと判明した.また,KATO3,HL60,UT7でもWestern Blotting,FACS共に認識が可能で実用的な抗体であった.得られた抗体を用いて,GM-CSF刺激後の細胞から得た抗燐酸化チロシン抗体での免疫沈降物を調べた結果では本抗体では認識されなかった.従ってGM-CSF刺激後のalpha鎖の燐酸化は現在の段階では認められていない.現在GM-CSF刺激後の細胞にクロスリンカーを作用させた後に本抗体での免疫沈降物を調べ,alpha鎖とbeta鎖の結合や,JAK-2のような分子がalpha鎖にも会合するか否か検討中である.GM-CSFは骨髄系細胞だけでなく多くの細胞に作用し,IL-3,IL-5レセプターとβ鎖を共有し,特有のα鎖でGM-CSFの応答に関与する.

本研究ではGM-CSFレセプターα鎖とβ鎖の生体内での発現状態を,抗体により蛋白レベルで明らかにすることを目的として始められた.ヒトGM-CSFレセプターα鎖の細胞外ドメインに対応する15アミノ酸よりなる合成ペプチドを抗原としてBalb/cマウスに免疫した後,脾細胞とミエローマ細胞株でハイブリドーマを作成した.培養上清中の合成ペプチドに対する抗体価の上昇を確認したハイブリドーマをBalb/cマウスの腹腔内に投与し得られた腹水よりIgM分画を精製した.精製抗体を用いてGM-CSFレセプターα鎖の存在が確認されているU937,HL-60の膜蛋白成分に対してウエスタンブロットを行いMW85kDaの1bandが検出された.フローサイトメトリーでGM-CSFレセプターα鎖を発現しているTF-1,U937,好中球,単球にて存在を確認したが,α鎖を発現していないRajiおよびJarkatでは確認できなかった.TF-1,U937いずれの細胞でも抗体の結合はGM-CSFで阻害されblocking antibodyである可能性が考えられた.得られた抗体を用いて解析した結果α鎖はTNFαやIL-1ではβ鎖で認められた様な強い増強は確認されず,産生調節が異なっていることが明らかとなった.本研究はGM-CSFβ鎖の解析のための抗体作成が目標であったが,α鎖でのみ抗体が得らた.β鎖に関しては今後も機会があれば良い抗体作成に努めることは必要であると考えられる.
太古代・古原生代地球磁場強度進化史の解明

長周期の地球磁場変動は地球深部ダイナミクスと深い関わりがあると考えられている。地球史を通した磁場強度変動を明らかにするためには、花崗岩から分離した鉱物単結晶を試料として使用するのが適している。花崗岩は様々な固化年代をもつ岩体が存在し、冷却時間が長く地球磁場の短周期の変動を平均化して記録していることが期待される。また、風化・変質の影響や粗粒な磁性鉱物の存在による測定の困難さを回避できる場合があることから、鉱物単結晶を用いた古地磁気研究が行われている(e.g. Tarduno et al., 2007; Usui et al., 2015;Sato et al., 2015)。しかし、花崗岩から分離した鉱物単結晶の古地磁気強度をその母岩と比較した研究はなく、従来のバルク試料を用いた測定と同様に扱うことが可能かどうかは検証されていなかった。本研究では、鉱物単結晶を用いた古地磁気強度測定の信頼性を評価するため、全岩の古地磁気・岩石磁気情報が既知である花崗岩試料(福島県入遠野、100 Ma)から分離したジルコン、石英、斜長石に対し岩石磁気及び古地磁気強度測定を行った。前年度までの研究で斜長石がもっとも古地磁気強度測定に適していることが分かったため、今年度は斜長石単結晶17粒の古地磁気強度測定を行い、うち9試料から古地磁気強度を得た。平均値は全岩の値と整合的であったが、試料ごとのばらつきはやや大きかった。これは磁気異方性によるものと推定される。そこで、非履歴性残留磁化を用いた異方性テンソルの推定を行い、古地磁気強度への影響を見積もった。その結果、本研究の条件では9試料の結果を平均することによって異方性の影響はキャンセルされることがわかった。以上のことから、ひとつの花崗岩試料から分離した10数粒の斜長石単結晶の測定を行うことで、全岩試料と同等の古地磁気強度情報を得られることがわかった。29年度が最終年度であるため、記入しない。古原生代以前の古地球磁場強度はより新しい時代と比較してわずかしか報告されておらず、地球史を通した変遷を議論することはできないのが現状である。その理由の一つは、時代が古くなるにつれ岩石が変成・変質を受けている割合が高くなり、古地磁気測定に適した試料の入手が困難になるためである。そこで本研究では古原生代以前の古地磁気強度データを増やすため、花崗岩中のジルコンを用いた古地磁気強度復元を行う。ジルコンは磁性鉱物を包有物として含む場合があり、近年古地磁気研究に用いられている。ジルコン一粒の微弱な残留磁化の測定には超電導量子干渉計(SQUID)が用いられる。本研究では、特性の異なる2種類のSQUID装置を使用し、大量のジルコンの古地磁気強度測定を効率よく行うことを目指す。カリフォルニア工科大学設置のSQUID顕微鏡は試料とセンサーの距離が近く、検出限界が低い。一方、高知コアセンター設置のSQUID磁力計では、ジルコンの磁化を迅速に測定する手法が確立されている。本年度は主に花崗岩試料の準備・予察的な磁気測定を行った。試料は、全岩の保持する古地磁気・岩石磁気情報が既知である花崗岩(福島県阿武隈山地、1億年前)を用いた。まず、花崗岩試料を砕いて非磁気的にジルコン単結晶の分離を行った。2015年11月にマサチューセッツ工科大学にてSQUID顕微鏡用の試料ホルダーを作成し、2016年1月にカリフォルニア工科大学にてSQUID顕微鏡を用いた自然残留磁化測定を行った。しかし、測定できたサンプル数が少なく、消磁による古地磁気強度測定が可能なサンプルはなかった。2016年2月に高知コアセンターにてSQUID磁力計を用いた測定を行い、ノイズレベルよりも有意に強い自然残留磁化をもつサンプルを選別した。2016年度にこれらのサンプルの古地磁気強度測定及び種々の岩石磁気測定を行う予定である。花崗岩試料からのジルコンの分離や試料ホルダーの作成など、古地磁気強度・岩石磁気学測定にむけた準備が整い、予察的な測定を行うことができた。またDC1採用時に投稿準備中であった高圧下におけるFeO-SiO2系の融解実験に関する研究を論文にまとめ、国際学術論文誌に投稿、採録されたため、順調に進展していると判断した。100万年スケールの地球磁場変動は地球深部ダイナミクスと深い関わりがある。しかし、磁場強度の変動は、逆転頻度の変化などの古地磁気方位に関する情報と比較してよくわかっていない。花崗岩は、冷却時間が長く地球磁場の短周期の変動を平均化して記録していることから、地球史を通した古地磁気強度の変化を明らかにするための試料として適していると考えられる。また近年、全岩を用いた測定の際にしばしば問題となる風化・変質の影響や粗粒な磁性鉱物の存在による測定の困難さを回避できる場合があることから、石英や長石、ジルコンといった鉱物単結晶を用いた古地磁気研究が行われている。これらの試料を用いることは特に太古代などの古い時代の古地磁気強度を研究する上で重要であるが、いまだ研究例は多くない。

本研究では、鉱物単結晶を用いた古地磁気強度の信頼性を評価するため、全岩の古地磁気・岩石磁気情報が既知である花崗岩試料(福島県阿武隈山地、100 Ma)から分離したジルコン、石英、斜長石に対し種々の磁気測定及び古地磁気強度測定を行っている。本年度は、鉱物単結晶を用いた古地磁気強度測定のための手法開発及び各鉱物の基本的な古地磁気測定を行った。測定の結果から、ジルコンに含まれる磁性鉱物はピロタイトが主体であると推定され、この試料のジルコンは古地磁気強度測定に適さないことがわかった。石英はジルコンと同様、有意な磁化を持つ試料は非常に少ないものの、全岩と類似したブロッキング温度分布を示し、初生磁化成分を持つ試料もあった。斜長石には単磁区ー擬単磁区サイズの微細なマグネタイトが含まれることがわかった。これは、斜長石中から離溶によって生成したマグネタイトであると考えられる。斜長石を用いて低温消磁・真空2回加熱Shaw法(Yamamoto et al., 2003)による古地磁気強度測定を行い、全岩と調和的な結果が得られた。鉱物単結晶で古地磁気強度測定を行うための技術開発を行った。また、各鉱物に対して系統的に古地磁気・岩石磁気的な測定を行った。その結果、当初計画していたジルコンは古地磁気強度測定に適さないことが判明した。斜長石を用いて古地磁気強度測定を行ったところ、バルク試料と整合的な結果が得られた。よって、単結晶を用いた古地磁気強度測定に向けた準備はほぼ完了しているといえる。これらの内容をまとめ国内学会及び国際研究集会で発表を行った。以上のことから、着実に研究は進展していると判断できる。長周期の地球磁場変動は地球深部ダイナミクスと深い関わりがあると考えられている。地球史を通した磁場強度変動を明らかにするためには、花崗岩から分離した鉱物単結晶を試料として使用するのが適している。花崗岩は様々な固化年代をもつ岩体が存在し、冷却時間が長く地球磁場の短周期の変動を平均化して記録していることが期待される。また、風化・変質の影響や粗粒な磁性鉱物の存在による測定の困難さを回避できる場合があることから、鉱物単結晶を用いた古地磁気研究が行われている(e.g. Tarduno et al., 2007; Usui et al., 2015;Sato et al., 2015)。しかし、花崗岩から分離した鉱物単結晶の古地磁気強度をその母岩と比較した研究はなく、従来のバルク試料を用いた測定と同様に扱うことが可能かどうかは検証されていなかった。本研究では、鉱物単結晶を用いた古地磁気強度測定の信頼性を評価するため、全岩の古地磁気・岩石磁気情報が既知である花崗岩試料(福島県入遠野、100 Ma)から分離したジルコン、石英、斜長石に対し岩石磁気及び古地磁気強度測定を行った。前年度までの研究で斜長石がもっとも古地磁気強度測定に適していることが分かったため、今年度は斜長石単結晶17粒の古地磁気強度測定を行い、うち9試料から古地磁気強度を得た。平均値は全岩の値と整合的であったが、試料ごとのばらつきはやや大きかった。これは磁気異方性によるものと推定される。そこで、非履歴性残留磁化を用いた異方性テンソルの推定を行い、古地磁気強度への影響を見積もった。その結果、本研究の条件では9試料の結果を平均することによって異方性の影響はキャンセルされることがわかった。以上のことから、ひとつの花崗岩試料から分離した10数粒の斜長石単結晶の測定を行うことで、全岩試料と同等の古地磁気強度情報を得られることがわかった。阿武隈花崗岩のジルコンの古地磁気・岩石磁気学測定の準備が整ったので、測定を行う。
I.F.アルノルト作品のゴシック小説的特徴とドイツ・ロマン主義への影響

十八世紀末にエアフルトのオルガニストで著述家としても活躍したイグナーツ・フェルディナント・アルノルト(1774-1812)は、音楽的著作の他に夥しい数の〈恐怖小説〉を書いた。〈恐怖小説〉とは、ドイツにおけるゴシック小説と言うべき当時の流行ジャンルであり、アルノルトはその人気作家のひとりとなっていた。そこには、合理と非合理がせめぎ合う十八世紀の特質が端的に表出している。本研究では、彼の小説の中から超自然や盗賊などを題材にした幾つかの代表的作品を採り上げ、ロマン主義への影響も含めて考察した。その成果は、英米のゴシック小説に比べて研究が遅れているドイツのゴシック小説の解明に寄与するものと信じる。すでにゲッティンゲン大学図書館から入手してあったアルノルトの小説『血の染みのある肖像画』Das Bildnis mit den Blutflecken (1800)の日本語への翻訳は、平成26年度中にほぼ終えて草稿を作成した。同じ1800年に出版のアルノルト作品『分身のいるウルスラ会修道女』Die doppelteUrsulinernonneのテクストもハレ大学図書館から入手し、ひと通り読み終えた。そしてその上で、啓蒙主義時代の末期という時代背景、ゴシック小説的特徴、探偵小説との構造比較などの観点からこれら二作品を分析して論文に纏め、その原稿を平成27年3月に中央大学人文科学研究所に提出した。また、1801年のアルノルト作品『吸血鬼』Der Vampyrとの関連において〈恐怖小説〉の主要な題材のひとつである〈吸血鬼〉のモティーフが、十八世紀から十九世紀にかけてドイツ文学でどのように展開したを調査した。ただし、その調査過程で、アルノルトの『吸血鬼』のテクストは,残念ながら現存が確認できない状況であることが判明した(テクストが散逸したと推測される)。そこで、今回の研究でアルノルトとの比較考察を計画していたドイツ・ロマン主義の作家E. T. A.ホフマンの短篇「ヴァンピリスムス」Vanpirismus(1821)を『吸血鬼』に代わる考察対象として採り上げることにした。これは、アルノルトの『吸血鬼』と共に、ドイツの吸血鬼小説ジャンルの最初期の重要作品であり、アルノルト作品とも密接に連関しているからである。これら調査と考察の成果として「阿魏(アサフェティダ)の匙加減ーE・T・A・ホフマンの吸血鬼譚「ヴァンピリスムス」(1821)」と題する論文を作成し、岩波書店の隔月発行の学術雑誌『文学』平成26年7/8月号「特集怪談の領分」)に寄稿した。ここでは、上記アルノルト作品にも言及しつつ、ポストモダン哲学における「踏み越え」の概念を援用して吸血鬼のモティーフを分析した。平成27年7月には、二松学舎大学で開催の日本比較文学会東京支部例会で、本研究の対象作家であるイグナーツ・フェルディナント・アルノルトの二つの小説『モール伯爵家』(1802)と『黒いヨーナス』(1805)を対象にした研究発表を行った。十八世紀末のドイツ語圏では,盗賊を主人公にした〈盗賊小説〉が数多く出版され人気を博していたが、上記のアルノルト作品もこの流行に乗って書かれた。前者は、フリードリヒ・シラーの高名な戯曲『群盗』を脚色して通俗小説化した作品であり、後者は、当時実在した盗賊の告白という形式による「犯罪実録もの」である。語りのタイプこそ違え、この二作はどちらも、極端な思想を主張したり、余りにも異常な犯罪を行う盗賊が登場する点において、同ジャンルの中でも際立って特徴的である。特に『黒いヨーナス』の残酷描写は常軌を逸している。発表では、こうした特異な性格について、十八世紀末ドイツにおけるサド侯爵作品の受容との関係などによって論じた。また、読者の卑俗な嗜好の過激化がジャンル作品の質の低落を容易く招来するという問題が,すでにマスメディア時代の初期であるこの時代から露骨に現れている点についても考察した。アルノルトが1800年に上梓した二つの〈恐怖小説〉『血の染みのある肖像画』と『分身のいるウルスラ会修道女』についての論考は、昨年中に原稿を作成し、中央大学人文科学研究所に提出してあったが、これは「1800年の幻想ミステリ」の題名で、平成27年10月発行の上記研究所紀要「人文研紀要」第82号に掲載された。ここでは、啓蒙主義時代の末期という時代背景、ゴシック小説的特徴、探偵小説との比較などの観点から上記二作品を分析した。平成27年度も昨年度に引き続き、研究に必要な資料(一次文献として、アルノルト作品のテクストや彼と同時代の各種テクスト、および、二次文献として、十八世紀末ドイツの文学や社会に関する新しい研究論文)を多数入手できた。そしてそれらを用い、「研究実績の概要」に記した通り、日本比較文学会東京支部例会での研究発表と、中央大学人文科学研究所の「人文研紀要」への論文掲載を行うことができた。また、上記論文で考察の対象にしたアルノルトの二作品、すなわち『血の染みのある肖像画』と『分身のいるウルスラ会修道女』の翻訳は、前者の全訳をほぼ終え、後者に取りかかったところである。十八世紀末ドイツの著作家イグナーツ・フェルディナント・アルノルトIgnaz Ferdinand Arnold(1774-1812)は、ドイツにおける〈ゴシック小説〉というべき当時の人気ジャンル〈恐怖小説〉の人気作家として夥しい作品を書いた。彼の諸作には、合理と非合理がせめぎ合う時代の特質が端的に表出している。