hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Rhizoctonia solani菌糸融合群第2群の分子分類に関する研究

配列に基づき系統関係を検討したところ、AG-2-1、AG-2-2、AG-2-3、AG-8およびAG-BIは、それぞれ独立したクラスターを形成し、明らかに系統的に異なることが示された。6.AG-2-2のIIIB、IVおよびLPのグループは一つのクラスターを形成し、これらはAG-2-2のサブグループに属することが確められた。7.ITS領域において特異的PCRプライマーを設計することにより、これらのAGを簡便、かつ確実に識別することが可能となった。1.AG-2-1,AG-2-2IIIB,AG-2-2IV,AG-2-2LP,AG-2-3,AG-8およびAG-BIからなるBGに属する計7菌株と,その他のAG(AG-1,-3,-4,-5,-6,-7,-9,-10,-11,-12)に属する計11菌株において,rDNA-18S(ほぼ全領域に相当する1,760bp)と28S(5'側から620bp)の塩基配列を解読した。2.18Sと28Sを結合した塩基配列データに基づき最大節約法(PAUP)により,分子系統樹を作成した。外群としてはThanatephorus orchidicola,T.pennatusおよびCeratobasidium属菌の菌糸融合群AG-Aを用いた。3.分子系統樹から,AG-1,AG-4,AG-6,AG-7およびAG-12の各菌群は系統的に明らかに異なることが示された。4.BGは,その他のAGと共に一つのクラスターを形成した(Bootstrap95%以上)。5.AG-2-2の培養型であるIIIB,IVおよびLPは互いに系統的に非常に近縁な関係にあることが分かった。6.AG-2のサブグループであるAG-2-1,AG-2-2およびAG-2-3,またAG-8とAG-BIは必ずしも系統的に近縁な関係にはないことが示された。7. AG-2-1はBGに属する菌群よりも,むしろ相互に菌糸融合を行わないAG-9とより近縁な関係にあることが示された。8.以上のことから,R.solaniの菌糸融合による類別は必ずしも系統関係を反映するものではないことが示唆された。Rhizoctonia solaniは菌糸融合の有無より種内群類別がなされている。現在のところ13の菌糸融合群(AG)が存在する。本菌のAGは,最も基本的な進化の単位であるのかを明らかにするため,互いに菌糸融合行動を行うBridging group(BG)とよばれるAG-2とAG-BIの菌株間において,ポリペプチド伸長因子1α遺伝子(EF1α)の塩基配列の比較を行い,遺伝的類縁関係を検討した。研究結果は次のとおりである。1.AG-2-1,AG-2-2IIIB, AG-2-2IV, AG-2-2LP, AG-2-3およびAG-2BIに属する7菌株と外群菌群としてAG-4の1菌株を用いて,EF1α遺伝子の部分塩基配列(691bp)の解読を行った。2.解読した部分は,4つのエクソン(exon)と3つのイントロン(intron)からなっている。エクソン3,4,5および6の長さは,それぞれ72bp(一部分),216bp,137bpおよび106bp(一部分)であった。またイントロン3,4および5の長さは,それぞれ54bp,55bpおよび51bpであった。3.エクソン部分の塩基配列比較では,同義変異が多く認められたが,ミスセンス変異は5カ所のみでよく保存されていることが分かった。
超音波医療技術における気泡間液膜破断のダイナミクス

定在超音波場における2気泡間液膜の排液過程を高速度撮影および画像処理法により定量的に評価した.得られた実験結果と既存の理論解析モデルと比較した.その結果,液膜半径および液膜内圧力が排液過程において一定とする準静的な力学モデルは,排液時間を過小評価し,また2気泡接近速度の影響を考慮に入れた運動学的モデルは,排液時間を過大に見積もることを明らかにした.また,2気泡半径がどちらも共振径より大きい場合に,2気泡は振動的な並進運動を示すことを実験的に明らかにした定在超音波場における2気泡間液膜の排液過程を高速度撮影および画像処理法により定量的に評価した.得られた実験結果と既存の理論解析モデルと比較した.その結果,液膜半径および液膜内圧力が排液過程において一定とする準静的な力学モデルは,排液時間を過小評価し,また2気泡接近速度の影響を考慮に入れた運動学的モデルは,排液時間を過大に見積もることを明らかにした.また,2気泡半径がどちらも共振径より大きい場合に,2気泡は振動的な並進運動を示すことを実験的に明らかにした今年度は,実験装置を開発し試測定を行った.得られた高速度撮影画像を用いて,画像処理法を構築した.開発した装置は,音響場発生装置と気泡発生装置である.音響場発生装置は,丸底フラスコ側面に円環型圧電セラミックスを接着することにより作成した.気泡発生装置には,T字マイクロチャネル(幅・深さともに0.1mm)を用いた.供給気体の圧力を能動的に変化させ,マイクロチャネルT字交差部への気体の流入を調整し,発生気泡の径と気泡間隔,発生個数を制御した.気体圧力制御には,低粘度液体(15mPa・s)ではオーディオスピーカーを,高粘度液体(50100mPa・s)ではソレノイドバルブによるチューブの圧縮による圧力上昇を利用した.音響場発生装置のフラスコ底部をくり抜き,さらにガラス管を溶接することにより,音響場発生装置の底部から気泡を導入することができる.気泡発生装置と音響場発生装置の接続には,内径0.5mmのPFAチューブを用いた.音響場発生装置の加振周波数は,フラスコ内に定在音場が形成される19.5kHzとした.この加振周波数と固有振動数が近い半径0.15mm前後の気泡を2個だけ生成し,音響場発生装置内へと導入することに成功した.振動2気泡の接近および合体挙動を高速度カメラによって撮影した.ここで,本実験では加振周波数が20kHz程度であるのに対して,撮影速度は2kHz程度と遅い,そこで,撮影速度を加振周波数の1/10からわずかにずらし,さらに露光時間を2μsとすることにより,比較的低撮影速度のビデオカメラを用いても気泡半径方向の運動を解像できる撮影手法・条件を確立した.また,画像処理によって気泡直径,重心座標,移動速度,接触時間等を定量的に評価した.画像処理では,通常の2値化法に加え,接触している(合体はしていない)2気泡を分離して処理するよう改良した.昨年度製作した実験装置を用いて,加振周波数20kHz程度の超音波場中における振動2気泡の合体・反発運動を高速度撮影および画像処理によって定量的に評価した.実験では,加振周波数20kHzにて共振する半径0.1mm程度の気泡を,代表流路幅0.1mmのT字マイクロチャネルを用いて生成した.本気泡発生装置を使用すると,動粘度50mm2/s程度の高粘度シリコーンオイル中においても,半径0.1mm程度の気泡を再現性良く発生可能である.また,振動気泡の合体・反発モデルとして,表面張力によるラプラス圧によって2気泡間の液膜が排液されるとするモデル(静的力学モデル),対向する気泡表面が変形する際の速度にて液膜が排液されるとするモデル(運動学的モデル),及び気泡の膨張収縮運動に伴う液膜内の圧力変動を考慮に入れたモデル(動的力学モデル)の3種類のモデルの妥当性を,液膜の排液速度に関して実験結果と比較することにより評価した.その結果,以下の結論を得た:(1)静的力学モデルは,排液速度を過大評価し,接触時間を小さく見積もる.(2)運動学的モデルは排液速度を過小評価し,接触時間を大きく見積もる.(3)動的力学モデルによる接触時間は,気泡半径方向運動(体積振動)の振幅に依存する.すなわち当モデルは,気泡振動振幅を初期気泡径で除した無次元振幅が0.1程度の場合は接触後数周期で合体するのに対して,無次元振幅が0.01程度の場合は数10周期を合体までに必要とすることを予測する.このことは,実験観察結果と一致する.このような振動気泡の合体運動に加えて,本研究では超音波場中における2気泡の公転運動を観察した.研究背景にある超音波診断・治療においても,条件が揃えば気泡は公転することが推察される.高速度撮影に基づく解析結果,公転気泡に関する以下の知見を得た:(1)公転運動する2気泡の体積振動の位相差は常に180度である.(2)公転一周期の間に,気泡の平均径が変化する(界面を介した質量輸送が生じる).(3)入力電圧の増加に伴い,公転軌道半径は減少し,公転角速度は増加する.
高校家庭科における消費者教育の視点に立った「遺伝子」教材導入と有効性に関する研究

高校家庭科教員への食の安全に関する意識調査を行い、その結果をもとに「食の安全」や「食品の遺伝子」に関する科学的な実習教材を開発した。開発した教材を使用した食の安全・安心への理解を深め、今後の食生活の向上を図ることを目的とする消費者教育の視点に立った学習プログラムを作成した。「家庭基礎」科目で実践を行った結果、食品のDNA抽出実験教材を取り入れた授業では、食品と生物との関係が理解しやすく、遺伝子組換え食品を学ぶ学習への応用が可能であることからその有効性が認められた。「食の安全」を脅かす様々な問題は、消費者にとって大きな関心事となっている。そのため、遺伝子やバイオに関する項目を含む食の安全に関する消費者教育を、社会人だけでなく若年層にも深めていくことは重要である。改訂学習指導要領では消費者教育に関する内容が重視されることとなり、「食生活」領域でもより一層の指導の充実が求められている。そこで高校教員と連携して「食の安全・安心」への関心や理解を深める新たな学習プログラムの開発を目的とした。本年度はまず、市販されている家庭科及び理科教科書を資料として、「食の安全」「食品と遺伝子」「消費者教育」等に関連する項目を抽出し、家庭科で補充すべき項目を分析・検討した。次に、T県全高等学校家庭科担当教員100名に対し、属性(経験年数、担当科目)、食の安全への関心・消費行動、食の安全授業の実施状況、授業実践の課題・必要な援助の種類・必要な教材等の調査を行った。質問紙による自記式あるいは他記式により実施し、郵送で回収を行った。アンケートの解析には統計用ソフトSPSS、Exelを用い、単純集計を行った。さらにクロス集計χ二乗検定等の高度な分析を進行中である。回収率は73.1%であった。教員自身の食品の購入行動では鮮度、価格、産地、季節感、期限表示を重視していた。食の安全に関する授業実践は、教科書や公的なパンフレットやインターネット情報を教材として、表示、食中毒予防、保存、添加物等を中心に実施していた。遺伝子組換えに関する授業は62%の教員が実施していたが表示が中心であった。人体への影響や安全性などに関する、意欲関心を高める効果的な教材を必要としていることが明らかとなった。授業実践に即役立つ教材の要望が高く、食材や器具の衛生的な取扱いを含む基礎的な内容の学習に効果的な教材開発を検討した。今後の日本の食糧事情を考慮すると、遺伝子やバイオに関する項目を含めた食の安全に関する消費者教育を社会人だけでなく若年層にも深めていくことは重要である。本研究では、高校教員と連携して「食の安全・安心」への関心や理解を深める家庭科の新たな学習プログラムの開発を目的とするが、本年度は、T県全高等学校家庭科担当教員約100名に対し、属性、食の安全への関心・消費行動、食の安全授業の実施状況、授業実践の課題・必要な援助の種類・必要な教材等の調査を行った。アンケートの解析には統計用ソフトSPSS、Excelを用い、単純集計を行った。さらにクロス集計χ二乗検定等の分析を行った。9割以上の教員が食料問題、食中毒、食品添加物、遺伝子組換え食品等の「食の安全」に関する項目の指導経験を有していたが、特に「遺伝子組換え食品」に関する指導は、教員自身の関心と不安の強さがその授業の実施状況や内容に反映されていた。全体の38%の教員は高い関心を持って複数の資料を活用した中立的な立場での「遺伝子組換え食品」の授業を実践していた。遺伝子組換えの内容を含む「食の安全」に関する授業を充実させるために、教員は安全性に関する情報を重要視しており、最新研究動向を含め分かり易い情報を求めていた。また生徒の理解を効果的に高めるための授業として、新しく実験教材を取り入れようという意欲を持っていた。そのため、これらの項目に関する高校教員の研修や、効果的な教材の開発等の授業支援が必要であることが明らかとなった。調査結果をまとめ、論文投稿準備中である食の安全は消費者にとって大きな関心事であり、これまでにも加工食品の牛肉偽装事件や中国産冷凍食品からの農薬検出事件などが、消費者の不安を掻き立てる事件が次々に起きている。日本の食料事情を考えると、輸入食品や遺伝子組換え作物等の摂取は避けて通れない問題であるが、それらの実態や社会的影響などについて学校教育の場でどの程度正確に指導されているかは不明であった。そのため「食の安全や遺伝子組換え作物・食品を家庭科の授業で指導すること」に関して、食の問題を直接指導する立場にある高校家庭科教員に意識調査を行い、その結果をもとに分析し、成果を日本家政学会誌で公表した。多忙な家庭科教員は授業実践に即役立つわかり易い情報やそれを基にした教材を求めており、合わせて遺伝子リテラシ研修の必要性も感じていた。「食の安全」の授業実施のための有効な教材が求められていたことから、まずは食品の衛生と関連した簡易キットを用いた微生物検出実験授業の提案をし、専門教科「家庭」の科目で実践した。生徒は調理における細菌汚染の実態を理解することができ、衛生対策を考えるうえで、この簡易キットを用いた実験教材は有効であることが確認できた。次に「食品からのDNA抽出実験」を高校「家庭基礎」の食の安全授業の導入教材として、モニター授業を計画し実施した。

授業前後に生徒へのアンケート調査を行い分析した。また実際に指導した教員にもアンケートを行い、実験教材の有効性を確認した。これらの成果を元に、指導用資料を含む学習プログラムとして完成させる予定である。高校家庭科教員への食の安全に関する意識調査を行い、その結果をもとに「食の安全」や「食品の遺伝子」に関する科学的な実習教材を開発した。開発した教材を使用した食の安全・安心への理解を深め、今後の食生活の向上を図ることを目的とする消費者教育の視点に立った学習プログラムを作成した。「家庭基礎」科目で実践を行った結果、食品のDNA抽出実験教材を取り入れた授業では、食品と生物との関係が理解しやすく、遺伝子組換え食品を学ぶ学習への応用が可能であることからその有効性が認められた。教員対象の調査計画を立てる際、長期的な活動を見通して調査項目の再検討を行ったため、計画の作成に当初の予定より時間がかかった。調査項目や設問数を増やしたため、調査の実施及び分析の進行がやや遅れているものの、教材の開発はほぼ予定通りに進行できている。高校家庭科教員への調査結果より、遺伝子組換えの内容を含む「食の安全」に関する新たな授業実践のためには、まずは遺伝子リテラシーを含むわかり易く説明した資料、安全性や最新動向に関する正確で詳細な情報、授業で取り入れやすい教材等の提示が求められていることが明らかとなった。必要とされる支援は教員自身の食の安全への関心や不安の程度により異なるが、これらの提示により教員自身の関心が高まれば、授業に取り入れる割合も高くなる可能性が考えられた。そこで多くの教員が希望した食品衛生の内容を含む食の安全に関する新たな実験教材の開発を行い、それらを使った授業を実施して教材の価値を明らかにしていく。現在の食生活における「食の安全」を生徒に理解させるための教材研究、実践授業を高校家庭科教員と連携して行う。調理時における衛生及び食品の遺伝子に関する実験教材を用意できたので、高校家庭科教員の研究協力者を募り、その勤務校にてのモニター授業を依頼し、教材の有効性、またその授業の効果について、教員用調査項目及び生徒用調査項目を用意し検証を行う。評価は自己記入式質問調査票への記入にて行う。調査票の解析には統計用ソフトSPSS、Excelを用いて単純集計、さらにクロス集計χ二乗検定等の分析を行う予定である。現在までに、授業実施済み2校、実施予定は4校であるが、各教材に関して幅広く評価を得るため引き続き協力を得る予定である。家政教育50分単位の授業でも実施可能な実習教材の開発を引き続き行う。実習教材の候補として、1)調理器具等の衛生的な取扱い(微生物検査)2)食品のDNA抽出3)食品表示判定遺伝子検査(食肉、コメ等)などを題材として考えている。検査用キットも市販されているが、高価で複雑な手順を含む実験もあるため、低予算かつプロセスの単純化を進め教育用の実習教材として開発する。開発した実習教材を使用して、家庭科教員から希望者を募り、モニター授業を依頼して教材の有効性、授業の評価についての検証を行う。教員用と生徒それぞれにアンケートを実施し、教材教具の有効性、授業への効果の有無、授業目標に関する生徒の変容等を評価する。本年度の研究を効果的に遂行するためには特に高校家庭科教員との連携が重要である。
クロイツフェルト・ヤコブ病プリオン蛋白の濾胞樹状細胞への蓄積機序の解明

クロイツフェルト・ヤコブ病(以下CJDと略す)の感染因子として、プリオンが提唱されている。プリオンを構成する主な蛋白としてプリオン蛋白の存在が知られ、single copy geneによりコードされた蛋白であることが報告されている。プリオン蛋白遺伝子のノックアウトにてスクレピーに感染しなくなるという事実より異常プリオン蛋白そのものが感染因子である可能性が高くなった。我々は、この異常プリオン蛋白が感染初期から、マウスの脾臓やリンパ操置の濾胞樹状細胞(FDC)に沈着することを世界で初めて証明し、このFDCへの蓄積機序を検討した。まず感染因子の投与ルートによるるリンパ操置のFDCへの蓄積を検討すると、腹腔内または脳内投与とも、投与後100%FDCに異常プリオン蛋白が沈着し脳内にプリオン蛋白が蓄積する以前から検出可能であり、発症前にCJDが診断可能であることを明らかとした。また、ヒトからマウスへの初代接種実験ではFDCへの沈着がおこらず、また腹腔内投与のみではいまだ発症したマウスがなく、中枢神経組織外での種間バリヤー形成の一役をFDCがになっている可能性を指摘した。初年度でのSCIDマウスの結果と考えあわせると、末梢ルートによるCJDの感染には、まずFDCに異常プリオン蛋白が蓄積することが必要条件であり、もしFDCへの蓄積がみられないなら、CJDの発症もみられないという結論となった。一方、直接中枢神経系へ投与を行なうと、FDCに沈着がみられてもみられなくてもCJDは発症することが明らかとなった。クロイツフェルト・ヤコブ病(以下CJDと略)感染マウスにおいて、中枢神経系以外の臓器のうちリンパ系臓器において、濾胞中心に存在する濾胞樹状細胞(以下FDCと略)に異常プリオンが蓄積することを証明した。本年度は、まずFDCへの異常プリオン蛋白の蓄積がどのような時期から検出されるのかを検討した。この結果、感染因子の脳内投与、腹腔内投与に関係なく、リンパ節や脾臓のFDCは1ヶ月以内に陽性所見を呈して、中枢神経系より早期に異常プリオン蛋白を検出できることを明らかとした。一方、胸線のFDC染色は、リンパ節や脾臓とことなり、病末期に濾胞が出現し、FDC染色陽性となることを示した。次に、免疲不全マウスの1つとしてSCIDマウスが、脳内投与でも、腹腔内投与でも、異常プリオン蛋白の蓄積がFDCにみられず、腹腔内投与では発症もしないという報告をしたが、今年度はSCIDマウスを用いてプリオン蛋白のmRNAの検出を行った。SCIDマウスとNZWマウスの肝、腎、脾、睾丸、リンパ節、胸腺、心臓、脳を用いてRNAを抽出し、RT-PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction)法にてプリオン蛋白mRNAを増幅後、サザンブロット法にて確認した。SCIDマウス、NZWマウスとも検索した全ての臓器で、プリオン蛋白のmRNAの検出が可能であった。これにより、SCIDマウスでのFDCに異常プリオン蛋白が蓄積されない理由としてmRNA発現の有無は否定された。最後に、ヒト異常プリオン蛋白を脳内に接種したNZWマウスとマウス異常プリオン蛋白を脳内接種したNZWマウスにて、FDCへの蓄積を検討した。ヒト異常プリオン蛋白脳内接種では、マウスの脳にマウス異常プリオン蛋白を沈着させることができるが、FDCには沈着させない。一方マウス異常プリオン蛋白では、脳内とFDC両者に沈着した。FDCは種間バリヤーを規制する因子である。今年度は、ヒトからマウスへの初代感染実験を中心に検討した。17例のクロイツフェルト・ヤコブ病(以下CJDと略す)の剖検脳から、各群10匹程度のマウスの脳内に初代接種を行ない、脳内に異常プリオン蛋白の蓄積を認めた55匹のマウスの脾臓をプリオン蛋白抗体による免疫染色にて検索した。

結果は55匹のマウスのうち陽性反応が得られたものは一匹もなく全て陰性であった。この結果は、継代実験によるマウスからマウスへの接種実験と全く異なる結果であった。次に、2代目の継代実験を行なったところ、2代目の接種マウスの脾臓では、約2ケ月後には、ほぼ100%に濾胞樹状細胞(FDC)へのプリオン蛋白の沈着を認め、初代接種マウスでの結果だけが、特異的なものであると考えられた。次に、ヒトの感染材料をマウスの腹腔内に投与すると、脾臓のFDCへの蓄積も、またCJDの発症も認められなかった。以上の結果は、初年度に報告したSCIDマウスへの接種実験と類似したものとなった。つまり、脳内接種ではSCIDマウスは発症するが、腹腔内接種では600日を経過しても発症せず、SCIDマウスのFDCへは、投与ルートに関係なしに異常プリオン蛋白の沈着は認められないのである。以上の結果をまとめると、直接中枢神経系に投与する脳内接種を別にすると、末梢ルートでのCJDでの感染には、まずFDCに異常プリオン蛋白が沈着することが必要であり、ヒトからマウスへの初代接種実験の結果から、末梢ルートにおいては、FDCは種間バリヤーの一役をになうことが示唆された。
C型肝炎ウイルスによるインスリン抵抗性発症の分子機構解明

慢性肝疾患患者では高頻度にインスリン抵抗性の合併を認めるが、インスリン抵抗性発症の分子機構は明らかでない。我々は、様々な肝疾患患者の糖質代謝を詳細に検討することで以下の四つの事実を明らかにした。1)C型慢性肝炎患者は他の慢性肝疾患群に比べにHOMA-IRが有意に高値であった。2)インターフェロン治療によりC型肝炎ウイルスが駆除されたものではインスリン抵抗性の改善を認めた。3)C型肝炎ウイルスコア抗原が末梢血より検出される患者は検出されない患者に比べ有意に空腹時インスリン値が高値であった。4)ケース・コホート研究にてC型肝炎ウイルスコア抗原量が高値の住民はH : CV抗体陰性の住民に比べ、糖尿病の発症危険率は5.6倍高かった。以上の臨床的研究結果より、C型肝炎ウイルスコア抗原のインスリン抵抗性発現への関与が示唆された。C型肝炎ウイルスコア蛋白のインスリン抵抗性発症における分子機序解明のため、HepG2細胞にC型肝炎ウイルスコア蛋白遺伝子導入を行った。遺伝子導入後の細胞は、インスリン刺激によるPI3Kのリン酸化、Aktのリン酸化および糖の取り込みの障害が認められた。このことより、C型肝炎ウイルスコア蛋白遺伝子を導入することでHepG2細胞がインスリン抵抗性を示すことが証明された。細胞内インスリンシグナルの中心分子であるIRS1/2の発現を検討したところ、発現量の低下を認めた。IRS1/2の発現低下はHCVコア抗原トランスジェニックマウス肝組織およびヒトの肝組織においても同様に認められた。本研究によりC型慢性肝炎患者は、他の慢性肝疾患患者に比ベインスリン抵抗性が強いことが明らかとなった。また、インスリン抵抗性発現機序として、HCVコア抗原による細胞内インスリンシグナル伝達分子(IRS1/2)の発現低下が示唆された。肝臓は糖質代謝を担う中心臓器の一つであり、肝細胞障害は糖質代謝異常を引き起こす。本年度我々は、耐糖能異常を高率に合併する肝臓病の原疾患同定を目的に、当科にて経過観察中の肝疾患患者の空腹時血糖および血清インスリン値を測定、さらにインスリン抵抗性の指標であるHOMA-IRを算出し、各肝疾患群間における耐糖能異常の合併率・インスリン抵抗性について統計学的検討を行った。C型慢性肝炎患者は他の慢性肝疾患群に比べにインスリン抵抗性が優位に高かった。また、C型慢性肝炎患者血清よりC型肝炎ウイルスコア抗原量を測定し、インスリン抵抗性との関連を検討したところ、C型肝炎ウイルスコア抗原量が末梢血より検出される患者は検出されない患者に比べ優位にインスリン値が高く、C型肝炎ウイルスコア抗原のインスリン抵抗性発現への関与が示唆された。肝細胞内でのインスリンシグナル分子の変化を検討するため、C型慢性肝炎患者肝組織を用い、免疫染色によりsuppressor of cytokine signaling-3(SOCS3),insulin receptor substrate(IRS)-1およびIRS-2の発現量を検討した。SOCS3はその発現量が少なく詳細な検討が不可能であったが、インスリンシグナル伝達の中心的役割を演ずるIRS-1およびIRS-2はC型慢性肝炎患者肝組織において正常肝組織のそれと比べ発現量の低下が認められた。C型肝炎ウイルスコア蛋白遺伝子導入を行ったHepG2細胞はインスリン刺激後も培養上清中のグルコースが優位に高く、in vitroの実験系においてもC型肝炎ウイルスコア蛋白のインスリン抵抗性発現への関与が示唆された。

昨年度、我々はin vitroの実験系においてC型肝炎ウイルスコア蛋白が細胞内インスリンシグナル伝達の中心的分子であるinsulin receptorsubstrate (IRS)-1およびIRS-2の発現量を低下させ、インスリン抵抗性発現に関与することを明らかにした。本年度の研究目標は一般住民におけるC型慢性肝炎と2型糖尿病両者の因果関係について明らかにすることである。糖尿病の発症には環境要因が大きく関与するため一地域での検討が必要である。そこで、我々が1990年より検診を行っているC型肝炎ウイルス高感染地区において、C型肝炎ウイルス感染と2型糖尿病の因果関係をケース・コホート研究にて検討した。7年間の経過観察において(1995年-2002年)、anti-HCV陽性者(29名)の糖尿病発症率は無作為に抽出したanti-HCV陰性者(42名)の糖尿病の発症率に比べ約3倍高値を示した。しかしながら、統計学的には優位差を認めなかった(Relative Risk 3.62,P=0.08,C.I. 0.83-20.89)。しかし、anti-HCV陽性者をHCV core抗原量にて層別化したところ、HCV core high titer群(15名)ではanti-HCV陰性者に比べ、5.6倍糖尿病の発症率が高く、統計学的にも優位な差として認められた(Relative Risk 5.60,P=0.02,C.I. 1.41-37.42)。本研究により、一般住民においても、C型肝炎ウイルス感染者は非感染者に比べ糖尿病を高率に発症することが明らかとなった。昨年度までに我々は、以下の3点を明らかにした。1)C型慢性肝炎患者は他の慢性肝疾患群に比べにインスリン抵抗性が強い。2)C型肝炎ウイルスコア抗原が末梢血より検出される患者は検出されない患者に比べ有意に空腹時インスリン値が高値である。3)ケース・コホート研究にてC型肝炎ウイルスコア抗原量が高値の住民はHCV抗体陰性の住民に比べ、糖尿病の発症危険率は5.6倍高い。今年度、我々は、C型肝炎ウイルスによるインスリン抵抗性発症の分子機序をC型肝炎ウイルスコア蛋白トランスジェニックマウスを用いて解析した。肝細胞内でのインスリンシグナル分子の変化を検討するため、肝組織を用い、免疫染色によりsuppressor of cytokine signaling-3(SOCS3), insulin receptor substrate(IRS)-1およびIRS-2の発現量を検討した。SOCS3は発現量が少なく検討を行えなかったが、インスリンシグナル伝達の中心的役割を演ずるIRS-1およびIRS-2はwild typeのそれと比べ発現量の低下が認められた。また、ヒトを対象とし、インターフェロン治療によるC型肝炎ウイルス駆除のインスリン抵抗性に及ぼす影響についても併せて検討した。ウイルス駆除に成功した群ではインターフェロン治療前に比ベインスリン抵抗性が改善していた(n=29,P<0.01)。
非近似的アプローチによるリアクティブシステム仕様の効率的な実現可能性判定法

リアクティブシステム仕様の実現可能性に関する検証は,仕様記述において見過ごされがちな危険な状況に陥る可能性を検出することができるが,一般に煩雑で計算コストの高い処理を伴う.本研究ではリアクティブシステム仕様の実現可能性検証の効率化を目的とし,本年度は以下について取り組んだ.<実現可能性判定器の実装>:実現可能性判定やモデル検査など,オートマトンや状態遷移系を扱う検証手続きの実装においてはしばしばシンボリック技法が用いられる.シンボリック技法では,オートマトンや状態遷移系の遷移関係を一つの論理式としてとらえる.そして,論理式を高速に処理することができるBDDやSATソルバを用いて効率的に判定を行う.本研究では,新たな実装技法:「部分シンボリック技法」について検討した.この部分シンボリック技法では,オートマトンの各状態ごとの遷移集合(その状態を起点とする遷移の集合)をひとつのBDD(Multi-terminal BDDという種類のBDDを用いる)で表現する.各状態は明示的に扱う.この技法は,シンボリック技法と同様,BDDを利用して効率的にオートマトンの遷移を処理できるというメリットを持つ.さらに,他の効率化技法と併用させやすいというメリットも持つ(通常のシンボリック技法においては,不必要な状態の除去などの他の効率化技法を併用させると,遷移関係の論理式表現が複雑になるため,逆にパフォーマンスが落ちることがある).本年度は,このような部分シンボリック技法を用いて実現可能性判定を実装し,その効率を実験により確かめた.リアクティブシステム仕様の実現可能性に関する検証は,仕様記述において見過ごされがちな危険な状況に陥る可能性を検出することができるが,一般に煩雑で計算コストの高い処理を伴う.本研究では,リアクティブシステム仕様の実現可能性検証の高速化を目的とする.平成27年度は以下に取り組んだ.<セミ・シンボリック手法を用いた決定性ωオートマトン構成の効率化>:リアクティブシステム仕様の実現可能性検証においては,仕様から決定性ωオートマトン(無限長の語を扱うオートマトン)を構成する必要がある.近似を行わない場合,その手続きは煩雑である.それが原因で,他の検証手続きの効率化においてしばしば用いられるシンボリック手法の適用は難しい.そこで本研究では,我々が過去に提案したセミ・シンボリック手法を適用する.この手法では,部分的にBDD(Binary Decision Diagram)を利用する.具体的には,各状態からの遷移の集合をひとつのBDDで表現する(シンボリック手法では,オートマトン全体の遷移関係をひとつのBDDで表現する).本年度は,この手法を用いた決定性ωオートマトン構成手続きの実装を行った.そして,その実装が多くの場合,他の決定性ωオートマトン構成ツールよりも高速であることを確認した.<有界実現可能性の新たな検査法>:近似を行う実現可能性の有界検査法についても取り組んだ.有界実現可能性判定が他の問題(到達可能性判定問題)に帰着できることを明らかにした上で,それを利用した既存手法よりも高速なSATベースの検査法を提案した.当初の計画通り,セミ・シンボリック手法を用いた決定性ωオートマトン構成手続きの実装を行い,一定の成果を得た.それゆえ,現在までの達成度はおおむね順調であると判断した.リアクティブシステム仕様の実現可能性に関する検証は,仕様記述において見過ごされがちな危険な状況に陥る可能性を検出することができるが,一般に煩雑で計算コストの高い処理を伴う.本研究ではリアクティブシステム仕様の実現可能性検証の効率化を目的とし,本年度は以下について取り組んだ.<on-the-fly簡約手法>:リアクティブシステム仕様の実現可能性検証においては,仕様から決定性ωオートマトンを構成する必要がある.近似を行わない場合,その手続は煩雑でコストが高い.模倣関係や強連結成分情報を利用し,ωオートマトンを簡約する手法について多く研究されている.それらの多くは,構成後のオートマトンに対して適用されるものである.本研究では,構成途中に簡約を適用することで扱う状態やエッジを減らし,構成自体のコストも低減させるon-the-fly簡約について検討する.本年度は,決定性ωオートマトン構成時に状態にラベルされる情報を利用して簡約を行う手法の開発を進めた.<分割検証法>:分割検証とは,次のようなものである.i)分割されたそれぞれの部分仕様において決定性ωオートマトンを構成する.ii)各部分オートマトンにおいて局所的な情報を捨象する.iii)各部分オートマトンを統合し,解析する.このような検証では,ii)において局所的な情報を捨象できるため,一括検証に比べて高速に判定を行える.本年度においては,効率的な分割検証を行うための仕様の分割方法を提案した.on-the-fly簡約手法や分割検証法について検討し,一定の成果が得られた.それゆえ,現在までの進捗状況はおおむね順調であると判断した.リアクティブシステム仕様の実現可能性に関する検証は,仕様記述において見過ごされがちな危険な状況に陥る可能性を検出することができるが,一般に煩雑で計算コストの高い処理を伴う.本研究ではリアクティブシステム仕様の実現可能性検証の効率化を目的とし,本年度は以下について取り組んだ.<効率的な実現可能性判定器の実装>:これまでに与えた効率的な決定性ωオートマトン構成法を基に実現可能性判定器の実装を進めた.また,平成27年度に与えた実現可能性のSATソルバーを用いる有界検査法のさらなる効率化にも取り組んだ.<実現可能性の必要条件判定

>:強充足可能性と呼ばれる実現可能性の必要条件の判定についても検討した.過去の研究で我々は,強充足可能性判定の計算量理論的コストが実現可能性のそれよりも低いことを明らかにしている.ここでは,実際的なコストについて調査した.具体的には,強充足可能性判定器を実装し,ベンチマークによって,強充足可能性が実現可能性よりも高速に判定できることを確認した.強充足可能性は実現可能性の必要条件であるため,その判定で仕様に欠陥がないことを保障することはできないが,ある種の欠陥を効率的に検出できることが確認できた.実現可能性判定器や強充足可能性(必要条件)判定器の実装を進め,一定の成果が得られた.それゆえ,現在までの進捗状況はおおむね順調であると判断した.リアクティブシステム仕様の実現可能性に関する検証は,仕様記述において見過ごされがちな危険な状況に陥る可能性を検出することができるが,一般に煩雑で計算コストの高い処理を伴う.本研究ではリアクティブシステム仕様の実現可能性検証の効率化を目的とし,本年度は以下について取り組んだ.<実現可能性判定器の実装>:実現可能性判定やモデル検査など,オートマトンや状態遷移系を扱う検証手続きの実装においてはしばしばシンボリック技法が用いられる.シンボリック技法では,オートマトンや状態遷移系の遷移関係を一つの論理式としてとらえる.そして,論理式を高速に処理することができるBDDやSATソルバを用いて効率的に判定を行う.本研究では,新たな実装技法:「部分シンボリック技法」について検討した.この部分シンボリック技法では,オートマトンの各状態ごとの遷移集合(その状態を起点とする遷移の集合)をひとつのBDD(Multi-terminal BDDという種類のBDDを用いる)で表現する.各状態は明示的に扱う.この技法は,シンボリック技法と同様,BDDを利用して効率的にオートマトンの遷移を処理できるというメリットを持つ.さらに,他の効率化技法と併用させやすいというメリットも持つ(通常のシンボリック技法においては,不必要な状態の除去などの他の効率化技法を併用させると,遷移関係の論理式表現が複雑になるため,逆にパフォーマンスが落ちることがある).本年度は,このような部分シンボリック技法を用いて実現可能性判定を実装し,その効率を実験により確かめた.当初の予定通り,リアクティブシステム仕様の実現可能性検証の効率化について以下に取り組む予定である.<on-the-fly簡約手法>:模倣関係や強連結成分情報を利用し,ωオートマトンを簡約する手法について多く研究されている.それらの多くは,構成後のオートマトンに対して適用されるものである.本研究では,構成途中に簡約を適用することで扱う状態やエッジを減らし,構成自体のコストも低減させるon-the-fly簡約手法について検討する.我々は,他の検証分野で,セミ・シンボリック手法を用いるアプローチにおいて同様の簡約が有効であることを既に示している.
膜蛋白質局在化機構を利用した結晶化法の開発

PSD-Zip45はシナプスでの足場となる蛋白質で、神経伝達物質受容体や他の足場蛋白質と相互作用し、それらをシナプス後膜肥厚に局在化させている。そのPSD-Zip45の膜蛋白質局在化機構を解明し、膜蛋白質の二次元結晶化に応用することを目的に実験を行った。G蛋白質共役受容体(GPCR)の一つである代謝型グルタミン酸受容体(mGluR)はPSD-Zip45によりクラスターを作っていることが知られている。そこで、mGluRとPSD-Zip45との相互作用を分子レベルで詳細に理解するため、GPCRの一つであるエンドセリン受容体とPSD-Zip45と相互作用するmGluRのC末部分とのキメラ蛋白質を用いて、クラスター化に必要十分な領域を検討した。その結果、PSD-Zip45と直接相互作用するプロリンを多く含む10残基のみでなく、そのN末側に10残基のばした20残基が、効率的な局在化に必要であることがわかった。この知見は、PSD-Zip45を用いた膜蛋白質局在化を応用するのに非常に重要である。PSD-Zip45は受容体と結合するEVH1(Ena/VASP homology 1)ドメインをそのN末側に、局在化に重要な二つのロイシンジッパードメインをそのC末側に持つ。その間に、そのファミリーで配列が保存されているにもかかわらず機能がわかっていない部分(CRH1ドメイン)を持つ。そこで、EVH1ドメインとCRH1ドメインを含むフラグメントを大腸菌を用いて発現し、その三次元結晶からX線結晶解析により原子モデルを決定した。その結果結晶中で、CRH1ドメイン中のプロリンを多く含む部分が、EVH1ドメインの受容体結合部位に一部重なる形で相互作用していることが明らかになった。このことはCRH1ドメインが局在化に寄与していることを示唆しており、より一層の研究が必要である。まず、局在化蛋白質として用いるPSD-Zip45のリガンド特異性の解析を目的に、その三次元結晶の作製を試みた。動的光散乱実験から、その全長の結晶化は難しいと考えられたので、PSD-Zip45が属するHomeraファミリーで保存されている配列部分を大腸菌で発現した。分析超遠心やX線小角散乱から、その保存配列部分は水溶液中で単量体の状態で存在することがわかったので、その領域を用いて三次元結晶化を行った。そのようにして作製できた結晶を用いて、X線結晶解析を行った。HomeraのPDZドメインは既に構造が解けているので、その原子モデルを用いて分子置換法により分解能2.0Åで構造を決定した。この結果については、現在投稿準備中である。次に、PSD-Zip45による膜蛋白質の局在が、リガンドと考えられているグルタミン酸受容体(mGluR)のC末側のペプチド部分のみで実現できるか確認することを目的に、COS細胞にPSD-Zip45とそのリガンドを持つ膜蛋白質を共発現させた。膜蛋白質は、エンドセリン受容体(ET_BR)を用いて、mGluRのC末領域とのキメラを作製した。その共発現系を用いて、PSD-Zip45とET_BRが共局在していることを共焦点顕微鏡観察により確認した。最後に、現在知られている二次元結晶での分子のパッキングに関する知見を得るため、膜蛋白質型のグルタチオン異性化酵素(MGST1)の電子線結晶解析を行った。その結果6Å分解能の三次元構造がわかり、MGST1の1分子は4本の膜貫通へリックスから構成され、三量体として存在していることが明らかになった。その4本の膜貫通へリックスは水溶性の蛋白質でも知られている左巻きのバンドルを作っていた。これが、MGST1が含まれるMAPEGファミリーの共通トポロジーと考えられた。

そこで、EVH1ドメインとCRH1ドメインを含むフラグメントを大腸菌を用いて発現し、その三次元結晶からX線結晶解析により原子モデルを決定した。その結果結晶中で、CRH1ドメイン中のプロリンを多く含む部分が、EVH1ドメインの受容体結合部位に一部重なる形で相互作用していることが明らかになった。このことはCRH1ドメインが局在化に寄与していることを示唆しており、より一層の研究が必要である。
カルニチン投与は何を起こしているのか？全身の代謝と中枢神経系におよぼす持続的効果

カルニチン投与は何を起こしているのか?先天的にカルニチンを欠損するモデル動物、juvenile visceral steatosis(JVS)マウスを用いて、自発行動におよぼすカルニチンの持続的投与効果を全身の代謝、および中枢神経系より検討した。JVSマウスは、絶食(餌を抜くこと)により自発行動量が著しく低下することを見出した。自発行動量の低下したJVSマウスに、カルニチンを1回投与すると自発行動量は増加し、投与したカルニチンが体内から消失した後も、その効果は持続的に少なくとも2日間続いた。全身の代謝からみると、投与したカルニチンが体内から消失した後も、長鎖脂肪酸酸化レベルは亢進を示した。血中ケトン体レベルは、自発行動量を決定する因子ではなく、長鎖脂肪酸酸化は、遊離脂肪酸、肝臓トリグリセリドのレベルに規定されてもいなかった。カルニチンの律速酵素であるcarnitine palmitoyltransferase(CPT)1、およびその上流に位置するAMP-activatedproteinkinase(AMPK)のレベルと活性については検討を要する。カルニチン欠損JVSマウスの絶食による自発行動量低下については、中枢神経系におけるオレキシン神経活動の低下が関与することも明らかにしている。視床下部外側野におけるオレキシン産生細胞は、グルタミン酸作動性神経活動により刺激を受ける。それ故、JVSマウスの自発行動量に対するカルニチンの持続的投与効果について、神経伝達作用のあるグルタミン酸を含むアミノ酸全体の変化について検討を行った。JVSマウスの血液についてはLC-MSを用いて分析を行い、グルタミン酸など多数の血中アミノ酸は、絶食により有意な低下を示す結果を得た。一方、カルニチン投与により、分岐鎖アミノ酸を中心とする数種の血中アミノ酸が有意に増加することを認めた。カルニチン投与は何を起こしているのか、マウスの自発行動におよぼす影響について、全身の代謝および中枢神経系の双方から検討を行った。先天的にカルニチンを欠損するモデル動物、juvenile visceral steatosis(JVS)マウスを用いて、カルニチンの投与効果をより明確に示すことを目的とした。絶食(餌を抜く)により、JVSマウスの自発行動量は著しく低下する。自発行動量の低下したJVSマウスに、カルニチンを1回投与すると自発行動量は増加し、投与したカルニチンが体内から消失した後も、投与効果は持続的に認められた。全身の代謝からみると、投与したカルニチンが体内から消失した後も、脂肪の消費量、長鎖脂肪酸酸化レベルは亢進を示した。一方、血中ケトン体レベルは、自発行動量を決定する因子ではなかった。長鎖脂肪酸酸化は、遊離脂肪酸、肝臓トリグリセリドのレベルに規定されてもいなかった。その他の因子については、カルニチンの律速酵素であるcarnitine palmitoyltransferase(CPT)1のレベルについて検討を行ったが、その差をみるには至らなかった。JVSマウスの絶食時の自発行動量は、ドーパミン作動性神経を介して自発行動の賦活剤となるモダフィニルを経口投与することにより増加を示した。一方、モダフィニル投与は、オレキシン神経活動を活性化することが知られている。それ故、JVSマウスの自発行動には、オレキシン神経活動が関与している可能性が考えられる。JVSマウスの自発行動量低下について、中枢神経系におけるオレキシン神経活動との関係を検討したところ、視床下部外側野におけるc-Fos陽性のオレキシン神経細胞の割合の低下を認めた。また、脳脊髄液中に分泌されたオレキシンAのレベルについて検討したところ、絶食JVSマウスでは、野生型マウスと比較して有意な低下を認めた。カルニチン欠損JVSマウスの絶食による自発行動量低下には、オレキシン神経活動の低下が関与すると考える。JVSマウスの自発行動に対するカルニチン投与の持続的効果について、全身の代謝に関する実験に若干の遅延は生じているが、中枢神経系の実験を含めて、おおむね順調に進展していると考える。カルニチン投与は何を起こしているのか?先天的にカルニチンを欠損するモデル動物、juvenile visceral steatosis(JVS)マウスを用いて、自発行動におよぼす影響を、全身の代謝、および中枢神経系より検討を行った。絶食(餌を抜く)により、JVSマウスの自発行動量は著しく低下を示す。自発行動量の低下したJVSマウスに、カルニチンを1回投与すると自発行動量は増加し、投与したカルニチンが体内から消失した後も、投与効果は持続的に少なくとも2日間は続いた。その他の因子については、カルニチンの律速酵素であるcarnitine palmitoyltransferase(CPT)1、およびその上流に位置するAMP-activatedproteinkinase(AMPK)のレベルと活性について検討を行った。

また、脳脊髄液中に分泌されたオレキシンAのレベルについて検討したところ、絶食JVSマウスでは、野生型マウスと比較して有意な低下を認めた。これらの低下は、カルニチンの1回投与により正常なレベルにまで回復したことから、カルニチン欠損JVSマウスの絶食による自発行動量低下には、オレキシン神経活動の低下が関与すると考える。また、視床下部外側野におけるオレキシン産生細胞は,グルタミン酸作動性神経活動により刺激されることから、グルタミン酸とオレキシン神経系を介した神経伝達機構について、長鎖脂肪酸酸化に障害のあるJVSマウスを用いて検討を進めた。JVSマウスの自発行動に対するカルニチン投与の持続的効果について、全身の代謝に関する実験、および中枢神経系の実験を含めて、おおむね順調に進展していると考える。脂肪酸代謝のコファクターとして機能するカルニチンを先天的に欠損するモデル動物、juvenile visceral steatosis(JVS)マウスを用いて、カルニチン投与がJVSマウスの自発行動におよぼす効果を、エネルギー代謝および中枢神経系への作用の観点から検討した。JVSマウスの自発行動量は、餌を抜くこと(絶食)により、著しい低下を示した。自発行動量の低下したJVSマウスに、カルニチンを1回投与すると、自発行動量は増加し、投与したカルニチンが体内から消失した後も、投与効果は少なくとも2日間続いた。エネルギー代謝からみると、投与したカルニチンが体内から消失した後も、長鎖脂肪酸酸化レベルは亢進を示した。血中ケトン体レベルは、自発行動量を決定する因子ではなく、長鎖脂肪酸酸化は、遊離脂肪酸、肝臓トリグリセリドのレベルに規定されてもいなかった。カルニチンの律速因子であるcarnitine palmitoyltransferase(CPT)1については、検討中である。絶食によるJVSマウスの自発行動量低下について、中枢神経系におけるオレキシン神経活動との関係を検討したところ、視床下部外側野におけるc-Fos陽性のオレキシン神経細胞の割合の低下を認めた。脳脊髄液中に分泌されたオレキシンについて、自発行動量の低下したJVSマウスでは、野生型マウスと比較して有意な低下を認めた。これらの低下は、カルニチンの1回投与により正常なレベルにまで回復したことから、JVSマウスの絶食による自発行動量低下は、オレキシン神経活動の低下が関与すると考える。また、視床下部外側野におけるオレキシン産生細胞は、グルタミン酸作動性神経活動により賦活化されることから、自発行動量の低下したJVSマウスにおける脳内グルタミン酸レベルを検討したところ、その変化を認めた。JVSマウスの自発行動に関するカルニチン投与の持続的効果について、エネルギー代謝に関する実験、および中枢神経系に関する実験ともに、おおむね計画のとおりに進展している。カルニチン投与は何を起こしているのか?先天的にカルニチンを欠損するモデル動物、juvenile visceral steatosis(JVS)マウスを用いて、自発行動におよぼすカルニチンの持続的投与効果を全身の代謝、および中枢神経系より検討した。JVSマウスは、絶食(餌を抜くこと)により自発行動量が著しく低下することを見出した。
数秘学的および空間論的視座からの近代初期英国の詩学に関する研究

近代初期英国における表象文化のマトリックスである詩学(poetics)を数秘学(numerology)の視座から分析し、さらに当時の詩論および文芸作品を対象にして、数秘学を基軸に据えた空間論的分析を行った。具体的な研究成果は以下のとおりである。1.シェイクスピア(Shakespeare)の『ロミオとジュリエット』(Romeo and Juliet)において、妖精の女王マブについての台詞から析出される重層的な文化的コンテクストが、W・サイファー(W.Sypher)が論じているような、ルネサンス期イタリア絵画を連想させる、二項対立と幾何学的解法に基づく劇のプロット・アクションの構造を解体させる様態を解明した。2.『ロミオとジュリエット』はコーラス(Chorus)が語るソネット形式のプロローグ(Prologue)や、舞踏会の場で恋人たちが交わすソネット形式の台詞が明確に示すように、14という数が基調となった劇である。そして近代初期英国において思春期への入り口と考えられてきた14歳の誕生日を目前にしたジュリエットの年齢13こそが、本劇における理想的・調和的数14に満たないという点で彼女の悲劇性を暗示していることを、当時のチャイルド・マリッジ(child-marriages)の慣行に照らして解明した。2.近代初期の文化・思想を特徴づける「楕円幻想」(the cult of ellipse)を払拭するために考案された線遠近法(the linear perspective)の理念が、シェイクスピアの『テンペスト』(The Tempest)において宮廷仮面劇の中枢概念として援用されたとき、その理念自体が解体され「楕円幻想」が再現・再演されることを明らかにした。本年度の実績は、古代ギリシア・ローマ以来の数秘術の伝統とナンバー・シンボリズムを近代初期英国の詩学がいかに受容したかについて分析したことと、それによって得られた研究成果を援用して、近代初期英国の悲劇、祝婚歌・祝婚劇を空間論的視座から分析したことである。本年度の研究実績は、数秘学的・空間論的視座から以下の諸点を解明したことである。1.Shakespeareの物語詩The Rape of Lucreceにおいては、Earl of Southamptonにあてた献辞で表明されている、始めも終わりもないパトロネージ(patronage)の「開かれた構造」が、この詩自体の構造として選択されていること。2.Hamlet五幕一場の墓地でのHamletの瞑想は、St.IgnatiusのSpiritual Exercisesにおける第一週の第一霊操から第五霊操にいたる、「序」(preludes)と「要点」(points)をその構成要素とする、霊操のパラダイムに基づいて実践されていること。古典的記憶術のヴァリエーションと言うべき霊操は、五幕一場以降の場面では用いられず、主人公の復讐という行動と彼に関する記憶へと焦点が移されていること。本年度の研究実績は、古代ギリシア・ローマ以来のナンバー・シンボリズムの伝統を踏まえながら、数秘学的・空間論的から以下の諸点を解明したことである。1.二つの焦点を、王座という一つの中心点に収斂させる数秘学的ダイナミクスを備えた、近代初期英国の芸術的・政治的・魔術的舞台空間を基軸に据えた宮廷仮面劇(the court masque)が、MacbethやThe TempestといったShakespeareの演劇に取り込まれると、線遠近法(the linear perspective)によって構成される理想的な仮面劇の構造が脱構築され、劇そのものの構造およびテーマが、一つの中心に収斂することのない、二つの焦点を備えた楕円構造に帰着すること。3.シェイクスピアのThe Merry Wives of Mindsorにおいては、劇中で揶揄の対象となるラテン語の語形変化(パラダイム)に似た、プロットおよびテーマ展開のパラダイムが用いられていること、そしてEnglishnessの表象を目的とする本劇が、全てのテーマを収斂させるはずの森の儀礼的場面において、Englishnessを解体させるモメントをはらませていること。