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山間村落における交流の総合的研究-景観・文献・信仰・石造物からの歴史的復元-

この調査・研究では、閉鎖的な地域と理解されている山間村落が、実は周辺村落や周辺地域と活発な交流関係にあることを明らかにすることを目的とした。主な対象地域は、滋賀県大津市葛川であり、滋賀県西部に位置し、建築用材や薪炭等の燃料用材の生産を主要産業とする地域である。歴史的な環境も残され、延暦寺支配下の明王院が中心に位置し、膨大な文献史料群として「明王院文書」や鎌倉時代に成立した絵図が残される。中・近世の文献史料につては、明王院文書及び、明王院がある坊村の村有文書について行った。明王院文書については主に、帳簿類について調査した。その結果、中世から近世初頭のものとみられる現地地名がいくつか採取された。また村有文書については、山の生活や利用についての文書が調査でき、坊村と周辺村落の山利用をめぐる交流の姿を明らかにすることができた。採取された山名の一部をもとに、聞き取り及び絵図の調査を行い、その結果中世に遡る集落址とみられる集落址が発見された。それとともに、明王院を中心とする葛川地域の信仰について検討した。また、比良山を挟んで葛川の反対側にある、琵琶湖西岸の村々や、葛川の北部の朽木・船木についても調査を広げた。その結果、琵琶湖西岸の村々が葛川で燃料用材の採取を行っているとともに、山林の共同利用のためのいくつかのシステムが形成されていることが明らかになった。葛川で採取される燃料用材は、琵琶湖の湖上交通を利用して、琵琶湖東岸の村々まで流通していたのである。朽木や船木についても、安曇川いくつかの街道をめぐっての対立や、交流が存在したことが明らかになった。本年度の調査・研究は、滋賀県大津市葛川について行った。葛川は、滋賀県西部の山林地帯に位置し、材木や炭の生産を主たる産業とする地域である。歴史的な環境もよく残され、延暦寺支配下の葛川明王院が中核に位置し、膨大な中世文書として「葛川明王院文書」が残され、鎌倉時代に成立した絵図も存在する。本年度の調査・研究は、(1)中近世文書、(2)中近世近代絵図、(3)石造物、(4)民俗信仰生活についての聞き取り、という内容で行った。中近世文書については、葛川明王院文書及び、明王院がある坊村の区有文書について行った。明王院文書については主に、坊村周辺の地名が記載される帳面類についての調査をした。その結果中世から近世初頭のものとみられる地名がいくつか採取された。聞き取りによって場所の確定ができたものもある。また区有文書については、山の利用関係文書がかなりの分量で調査でき、今後の研究の重要な素材となると考えられる。絵図については、多くの調査・研究成果があった。従来は中世の葛川絵図についてのみ研究が進んでいるが、区有文書中にいくつかの絵図が存在し、そこには近世初頭のものとみられる明王院霊場の絵図があった。これは従来ほとんど紹介されておらず、明王院を中心とする霊場復元の基礎資料となるものと考えられる。さらに近代初頭の地籍図の調査を行ったが、そこでは、中世に遡る集落跡とみられる、今は廃絶した集落跡が発見された。石造物については、葛川内の石造物の分布調査及び、坊村の埋墓である「サンマイ」の調査を行った。また、聞き取りについても、いくつかの成果があり、木地師の家や、山の利用についての聞き取りから、葛川と湖東・湖西の村々が薪の採取・利用などで密接な交流関係を持っていたことが知られた。

これは、中世以来のものとみられ、今後文書や絵図などの研究を進めていくことにより、その具体的な姿がより明らかになると思われる。本年度の調査・研究は、主に滋賀県の大津市葛川と志賀町木戸・荒川、及び朽木村について行った。葛川では、石造物の調査を中心に行った。所在・分布調査を行い、中世石造物や主要なものについては、データをとり調査カードに記載した。また、昨年の調査で発見された近世前期の霊場絵図や山論絵図については、写真撮影及びトレース図の作成を行った。その他木地師集落であった貫井を中心に、山の民俗に関わる調査も行った。また、比良山を挟んで葛川の東にあたる志賀町木戸・荒川についても、区有文書を中心に調査を行った。志賀町史編纂室の協力を得て、山の生活や争論に関する近世・近代文書についても閲覧・複写を行った。先年度調査を行った明王院文書や坊村区有文書と併せて検討することにより、近隣村落の山をめぐる共同利用や生活について考える上で重要な素材となるとみられる。特に、薪柴の入会慣行を示すものは、この地域の山をめぐる交流の広がりを考える上で、特に重要な史料群であると思われる。朽木村については、葛川から高島郡に抜ける山越えのルート(コメカイ道)についての聞き取り調査及び実地踏査を行った。このルートは、戦国期の板商売をめぐる葛川と朽木の争論で、若狭街道が封鎖されたために使われたルートであり、若狭街道の抜け道として、中世以来の生活道路としても使われていた道である。また、安曇川の筏流しについても若干の聞き取り調査を行った。現地調査後、中世の比良山の山利用をめぐる葛川と木戸・比良庄の争論について、葛川明王院文書を中心として論文を作成した。さらに、比良山周辺村落と比較研究する予定の丹波国和知庄については、予備的な現地調査及び研究を行った。区有文書の所在調査や、刊行されている中世の読解作業が中心である。来年度に本調査を行うことで、より研究を深めていく予定である。本年度は、昨年度までの滋賀県葛川と比較研究をすることを目的として、京都府和知町の調査を行った。和知は丹波国の山間村落であり、中世には和知荘が立荘されていた。山の中ではあるが、丹波街道や水運等で日常的な交流・流通は盛んに行なわれていた。中世では、和知荘地頭の片山氏が存在し、戦国時代に至るまで大きな勢力を持ち、家文書として、中世以来の片山家文書を伝えている。これは貴重な武家文書でもあり、武家領主による山野支配を示す重要な文書群である。そこで、片山家文書の調査を行ない、写真撮影をするとともに、原文書の古文書学的なデータをとった。その結果、片山家文書中に、和知荘域の山野支配や、畠作物等に関わる戦国期の帳簿が残されていることが判明した。これは、中世の山間村落における生産と、それにもとづく交流の問題を考える上で、重要な資料であると考えられ、現在分析を進めている。さらに、山野・信仰関係の近世・近代文書についても、町史編纂室作成の目録から抜粋を行った。今後は、それらについて原文書調査・写真撮影を行った上で、翻刻・分析を行う予定である。さらに現地調査として、和知町域の村堂の分布調査を行った。和知町域は、村ごとの信仰施設である村堂が、濃密に分布する地域としての特徴を持ち、今後は聞き取り調査なども含めて、和知町域における信仰を通じての、村落間交流について検討を進めていくことを目指したい。また、前年度までの調査・研究対象であった滋賀県葛川については、研究成果報告書作成を目指して、研究のまとめを行った。
デジタル電波分光計の開発とそれを用いた銀河の分子ガスの大規模2次元サーベイ

本研究で開発した自己相関型デジタル分光計(512MHz帯域、1024チャネル、2ビットサンプル)を45m電波望遠鏡のマルチビーム受信機に接続して、近傍銀河の大規模2次元サーベイを行った。銀河の特徴的な構造には渦状腕と棒構造があるが、可視光で見た渦状腕には典型的な2本腕のものから4,5本の多渦状腕を持つもの、さらには多数の切れ切れの渦状腕がきつく巻いたもの(flocculent galaxies)まで多様であるが、星形成の母体となる分子ガスの分布との対応はわかっていないのが現状である。それを統計的に調べるため昨年度は特に観測例が少ないflocculent銀河を中心に観測したが、その積み残した銀河を本年度の最初に行った。その後、主目的である棒状銀河と非棒状銀河の銀河全体の一酸化炭素COのマッピングサーベイ観測を行った。観測した銀河は距離約10Mpc以内にある近傍銀河で傾き角の少ないものを選択した。得られた観測データは昨年までのものと一緒に統計的に処理し、銀河の大局的な構造と合わせて以下のような普遍的な描像が得られた。棒状構造の長半径をRbとして、1.銀河円盤における分子ガスの面密度の半径分布と銀河回転速度には良い相関があり、渦状腕構造が存在する半径のところ(棒状銀河ならばR>Rbの領域)では回転速度が一定であるとともに銀河の外に行くほど指数関数的に面密度が減少する。これは銀河の分子ガス密度の半径分布がガスの粘性によって決まっていることを初めて示したものである。2.棒状銀河のR<Rbの領域では、ガス密度は銀河中心部とR=Rbのところでピークを持つ。これは我々の銀河系と同じガス分布であり、これは銀河系が棒渦巻銀河であることを強く示唆している。これらの成果は公開されるとともに、観測データは銀河の分子ガスのデータベースとして広く世界中に公開される予定である。本研究の目的は、25入力信号に対応した自己相関型デジタル電波分光計(周波数帯域幅512MHz,1024チャンネル、2ビットサンプリング)を開発・製作し、野辺山45m電波望遠鏡の既存の25マルチビーム受信機と組み合わせて、天空上の25点を同時に観測できる世界最高速マッピングシステムを構築し、銀河の分子ガスの大規模なサーベイを行うものである。初年度である今年は分光計1系統を開発・製作し、各部の試験および測定を実施し、当初の計画どおりの機能・性能が達成されたことを確認した。これにより次年度に目的とする分光計を完成させる見込みがついた。本分光計は主として、中間周波数帯変換部、サンプリング部、自己相関部、データ取得およびシステム制御部の4つの部分に分かれる:受信機からの出力信号(2.0-2.5GHz)を低い周波数に変換してサンプリング部に入力する中間周波数帯変換部を製作し、ALC回路により信号レベルが常に所定の値に維持されていること、各種フィルタからなるエイリアジング防止機構が目的を達していることを確認した。サンプリング部は既存のものを使用したが、25.6MHz信号発生器を用いて、本分光計の使用に十分耐えることを確認した。既存の自己相関用LSIを組込んだ自己相関部を独自に設計・製作し、詳細な測定・試験評価を行って、目的とする周波数帯域・周波数分解能を達成していることを確認した。その自己相関部からの出力をFFTし、既存観測システムに取り込むデータ取得部および分光計全体を制御する部分のソフトウエアーを製作し、動作を確認した。

最後にこれら全部を組み上げて総合的な試験を行った結果、本分光計の目的とする性能と機能を十分満たしていることを確認し、次年度の複数系統の製作の見込みを得た。25ビームマルチビーム受信観測システムの分光計として用いる自己相関型デジタル分光計は,昨年度1系統分を製作し試験及び性能評価を行い,初期に目的とした分光計としての性能(512MHz帯域および32MHz帯域、分光点数1024ch,高速スイッチング観測可能)を満たしていることを確認した。今年度は,自己相関型デジタル分光計24台分を開発・製作する事で,25ビームマルチビーム受信観測システムを完成させることを目的とした。1.まず,自己相関専用LSIをマザーボード上に実装し24台の分光計を製作した。各24台に対し既知の信号を入力することで,それぞれが単体として理論的に予測される結果を与えるかという点を検査し,問題なく動作していることを確認した。2.次に,25ビームマルチビーム受信観測システムおよび野辺山宇宙電波観測所45m電波望遠鏡観測システムに組み込み,観測の全体制御中で他の装置と連動して動作できるようにした。天体の信号を実際に受信することで,システム制御全体の動作をチェックし,分光計の各機能が有効的に動作していることを確認した。また,実際に得られたデータを音響光学型分光計で取得した同じ天体からの同じ信号と比較し,一致することを検証し,システムとして完成できたことを確認した。3.最後に,システム全体の能力を評価試験するため,豊富に観測データが存在し,それらと結果を比較することで容易にシステムのチェックが可能となるオリオン巨大分子雲の試験観測を行った。総観測時間がたった25時間の短い時間にも関わらず,10'x45'という広大な範囲を20′′グリッド、rms 70mKで観測出来ることを示せた。これは従来の観測システムでは250時間もかかる観測に相当するもので,期待されるパフォーマンスを実際に検証できた。これらの点に関しては,日本天文学会春季年会にて公表予定である。昨年度までに周波数帯域幅512MHz、1024チャンネル、2ビットサンプリング、25ビーム対応の自己相関型デジタル分光計の開発・製作をほぼ終了し、本年度はそれを45m電波望遠鏡に搭載して25マルチビーム受信機に接続し、性能試験を行うとともに、銀河の分子ガスの2次元サーベイを開始した。1.45m鏡、受信機、および分光計を完全に組み合わせた25マルチビーム観測システムとして実際に天体に向けて性能試験をした。各ビームとも115GHzでビーム半値幅15秒角、開口能率40%、主ビーム能率47%、冬期晴天時のシステム雑音温度役300Kとほぼそろった性能が確認された。また周波数帯域幅、周波数分解能、分光計雑音とも初期の性能どおりであった。受信機側に一部不具合のビームが見出されたが、部品の一部を交換して観測が可能になるようにした。2.観測計画を立案した。観測対象として、距離が25Mpc以内にある渦巻銀河で、早期型から晩期型まで、また棒状構造の有無など、サンプルが可能な限り均一になるようにし、また銀河固有の性質を調べるため、できる限り他の銀河と相互作用していない孤立銀河を優先して、63銀河を選んだ。3.本年度はそのうち約20銀河を選んで、当該25マルチビーム観測システムにより、各銀河全面の分子ガスの観測を開始した。分子ガスのトレーサーとしては最も強度の強い一酸化炭素CO(115GHz)を選んだ。現在観測とデータ処理が進行中である。
口腔ケアによる高齢期に衰える脳認知機能回路の賦活化と再生の解明

主要なオーラルケアの一つである「ブラッシング」による前頭前野の賦活と再生及び認知機能の向上を解明することを目的として、高齢者を対象に、認知機能検査(MMSE、KHT)及び非侵襲的脳機能計測技術(fMRI、光トポグラフィ)を用いて検討した。その結果、ブラッシングにより認知機能の向上および前頭前野の賦活化の増強が見られた。これは、歯ブラシを高齢者に積極的に行わせると脳への五感情報入力が増加し、覚醒度の増強による認知機能の向上が惹起されることを示しており、寝たきりの高齢者を含め高齢者に歯磨きや舌苔除去等の口腔ケアを推奨することは認知症予防や認知能力の減退を防ぐ上で極めて重要であると示唆している。本研究では、一般健常高齢者と寝たきりの高齢者を含む老人保健施設に収容されている高齢者において、2種類の認知機能検査(mini-mental status examination; MMSE、かな拾いテスト)および2種類の非侵襲的脳機能計測技術(磁気共鳴機能画像法(fMRI)と光トポグラフィ)を用い、ブラッシングによる前頭前野の賦活と再生及び認知機能の向上を世界に先駆けて解明することをゴールとする。本年度は、老人保健施設に収容されている高齢者の認知機能に及ぼすブラッシング(歯ブラシ)の効果を調べた。そして、神経認知機能に及ぼす歯ブラシの効果が健常者と寝たきり高齢者で違いが生じるかどうかを検討した。その結果、以下の成果が得られた。(1)一般健常高齢者と老人保健施設に収容されている健常高齢者において、MMSEとかな拾いテストを行い、歯ブラシを行う前と歯ブラシを行った後で両テストの成績を比較したところ、歯ブラシを行った後の正答率が有意に高かった。(2)さらに、寝たきり高齢者と健常高齢者において、歯ブラシ前後のMMSEとかな拾いテストのスコアの変化を比較したとき、寝たきり高齢者の方が健常高齢者より成績の向上が著しかった。これらの結果は、歯ブラシを高齢者に積極的に行わせると脳への五感情報(特に体性感覚、味覚、嗅覚)入力が増加し、覚醒度の増強による認知機能の向上が惹起されることを示している。従って、寝たきりの高齢者を含め高齢者に歯磨きや舌苔除去などの口腔ケアを推奨することは認知症予防、あるいは認知能力の減退を防ぐ上できわめて重要であることが示唆された。次年度では、歯ブラシによる認知能力の向上の脳内メカニズムを上述の2種類の非侵襲的脳機能計測技術を用いて検索する予定である。本研究では、ブラッシングによる前頭前野の賦活と再生及び認知機能の向上を世界に先駆けて解明することを目的として、一般健常高齢者と寝たきりの高齢者を含む老人保健施設に収容されている高齢者において、2種類の認知機能検査(mini-mental status examination; MMSE、かな拾いテスト)および2種類の非侵襲的脳機能計測技術(磁気共鳴機能画像法(fMRI)と光トポグラフィ)を用いて検討した。昨年度は、神経認知機能に及ぼす歯ブラシの効果をMMSEとかな拾いテストを行って検討した結果、(1)一般健常高齢者と老人保健施設に収容されている健常高齢者において、歯ブラシを行った後の正答率が有意に高かった。(2)さらに、寝たきり高齢者と健常高齢者を比較したところ、寝たきり高齢者の方が健常高齢者より成績の向上が著しかった。本年度は、上述の2種類の非侵襲的脳機能計測技術を用いて、歯ブラシによる認知能力の向上の脳内メカニズムを検討した結果、(1)脳NIRSを健常高齢者に適用し、かな拾いテスト時の前頭前野のoxy-Hb濃度変化を計測したところ、oxy-Hb濃度は歯ブラシを行った後の方が僅かに高かった。(2)fMRIを健常者に適用し、かな拾いテスト時の前頭前野のBOLDシグナル強度を計測したところ、シグナル強度は歯ブラシを行った後の方が有意に高値を示した。老年学ほぼ、予定していた通りに遂行されている。平成26年度は、2種類の非侵襲的脳機能計測、すなわち簡易型光トポグラフィによる前頭前野におけるヘモグロビン濃度、およびfMRIを用いた実験による脳機能画像の解析を行い、昨年度に得られた認知機能検査の結果(ブラッシングによるMMSEとかな拾いテスト認知評価)と比較し相関が見られるか評価し、高齢者の認知機能におけるブラッシング(口腔ケア)の神経科学的意義を解明することを目的とする。

(1)運搬・移動が容易にできる簡易型光トポグラフィを購入し、前頭前野におけるヘモグロビン濃度に対するブラッシング効果を測定する。データの処理など基本的にはSasaguri et alの方法に従って結果の評価を行う。2種類の認知評価検査におけるブラッシング効果との間に相関が見られるか評価する。(2) fMRI法を用いて、ブラッシング時の前頭前野のfMRIシグナルを計測する。装置は揖斐厚生病院に設置されているものを用い、撮像はT2強調画像を用い、一方の脳機能画像に対してはgrandient echo EPIを使って行う。次に、ブラッシングによって賦活される脳部位を同定する。一方、脳機能画像の解析にはMATLAB上で作動するSPM5を用いる。さらに、BOLDシグナル変化を評価するために画素毎のt値(T)を求め、これを標準化してZ値に変換、この値の空間分布をマッピングする。また、多重比較はGaussian randomfieldtheoryを用いて補正する(Friston et al)。これらの結果と2種類の認知評価検査との間に相関が見られるか評価する。最終的な達成目標は、高齢者の認知機能におけるブラッシング(口腔ケア)の神経科学的意義を解明し、「口腔ケア」のガイドラインの策定に貢献できることである。
微生物酵素触媒および生物資源に立脚する有用物質合成

長期的視点に立てば、希少な触媒資源を散逸的に消費し、また石油などの化石燃料を基盤とするような化学合成は、生命活動そのものに伴う触媒作用や生産物によって代替してゆくことが、人類に課せられた大きな命題である。本課題期間では、生体内で重要な情報伝達を担っている複合糖質関連化合物、および生理活性天然有機化合物を標的物質とし、これらの化合物やその合成中間体の大量供給を可能とする実用的な合成経路、特に、鍵段階となる微生物・酵素触媒反応の新しい機能を開発することを試みた。さらに、出発原料は、天然界から、動植物の生物生産によって容易かつ大量に得られる原料や発酵生産産物などに求めた。具体的には、1)酵母還元を利用する光学活性物質の合成-逆プレローグ則酵素の利用;2)酵母還元を利用する光学活性物質の合成-速度論的光学分割と非対称化;3)リパーゼを用いる加水分解反応・エステル化-速度論的光学分割の利用;4)糖鎖関連物質への酵素-化学的アプローチ:N-アセチルグルコサミニル-cbz-アスパラギンの合成;5)生物蝕媒反応-化学合成法の相補的、相乗的活用、について検討し、所定の成果を得た。上記の例は、いずれも「生物資源と生物資源触媒との相補的・相乗的利用による有機合成」を達成したものである。本研究を通じて、選択性、反応性の高い酵素反応の探索、それが最大限に活かされるような反応経路の設計、中間体合成のための新反応の開発に関する重要な多くの知見を得ることができた。酵素法によるシアル酸合成の原料として有用であるN-アセチルマンノサミン、および天然には希少なN-アセチルタロサミンの誘導体をそれぞれ合成した。天然より豊富に得ることができるN-アセチルグルコサミンを出発原料として、そのアセトニド誘導体を経由して2位の異性体混合物へと変換した。得られた混合物をRhodococcus rhodochrous IF015564の選択的代謝反応を利用することにより、目的とするN-アセチルマンノサミンを純粋な形で得ることができた。引き続き、酸化・還元反応によりN-アセチルマンノサミンの4位の立体反転を試みた。2位の置換基の立体障害を利用する、立体選択的な還元を行うことによってN-アセチルタロサミンの誘導体を主生成物として得た。一方、N-結合型糖タンパク質を合成する際に重要な糖アミノ酸構成成分であるGlcNAc-Asnを、ペプチドの化学的伸長反応に対し直接利用可能な形で合成した。まず、糖供与体であるグルコシルアミンは、天然より豊富に得ることができるN-アセチルグルコサミンから一段階で調製した。アンモニウム塩を脱塩装置により除去し、純度を確実にした後に、無水反応へ応用した。アミノ酸ユニットは、Cbz-アスパラギン酸を酸フルオリドとしてβ位を選択的に活性化することによって合成した。グルコシルアミンと活性化アスパラギン酸のカップリング反応は高収率で進行し、得られたカップリング生成物のα-エステル部位はプロテアーゼの一種であるpapainによって、他の官能基に影響を与えることなく脱保護することができた。光学活性2-ナフチル酢酸(2NMA)は、絶対立体配置決定法の一つ、改良Mosher法において従来用いられてきたMTPA等と比較して優れた能力を有し、近年、天然物の立体配置決定に盛んに利用されている。今回、合成経路中に生物触媒を利用した反応を用い、効率よく合成する方法を開発した。まず、安価な2-ナフトアルデヒドを原料に、ラセミ体シアノヒドリンアセタートを合成した。ヒドロシアン化、アセチル化の二段階の反応は、二価スズのルイス酸存在下、同一容器内にて高収率で進行した。このものに対しBurkholderia cepacia由来のリパーゼを用いると、加水分解は鏡像体比1:564と高選択的に進行し、未反応回収物として、99.9%e.e.を超える(R)体を得ることができた。

同時に得られる(S)体のシアノヒドリンはナフトアルデヒドに自発的に戻り、リサイクル可能である。ついで、細菌の一種、Rhodococcus rhodochrousが有するニトリルヒドラターゼの作用を利用し、アミドへと光学純度を損なうことなく変換した。ここからは化学法を相補的に用い、まず、硫酸ニトロシルを用いたニトロソ化加水分解によりカルボン酸とした。さらにシリカゲルで活性化したジアゾメタンを用いて水酸基のメチル化を行い、(R)-エステルへと導いた。最終段階である、メチルエステルの加水分解には、Klebsiella oxytoca由来のエステラーゼを用い、目的物であるカルボン酸、光学活性(R)-2BNMAを高い光学純度(99.9%e.e.以上)にて、効率よく得る方法を確立した。
マイクロRNAを介した消化器癌転移カスケードの解明

われわれは消化器癌の転移・再発のマーカーを明らかするには循環血液あるいは骨髄液中に癌細胞を検出することを目的とするのではなく、癌細胞側因子と宿主側の環境因子とにおいて転移再発と明確な関連を有する遺伝子を明らかにしたい。両面からの俯瞰的研究により転移再発機構を解明し、真の予測マーカーを求める。特に多くの遺伝子を一度に抑制しうるファインチューナーとしての役割を担うmicroRNAは、その発現の臨床的意義が注目されており、microRNA-遺伝子pathwayの同定と機能解析が急がれる。われわれは多施設共同研究を組み、各施設毎に倫理委員会を通過した後、消化器癌患者の骨髄と末梢血液の集積を開始した。骨髄は4つの分画(癌細胞分画、マクロファージ分画、血管内皮細胞豊富分画、全血)に分けて、microRNAマイクロアレイを施行する。転移陽性症例特異的miRについてはマーカーとしての意義を明らかにすることはもちろんのこと、標的遺伝子pathwayを決め、機能解析をすすめさらに絞り込めるマーカーを求める。<大腸癌症例>これまでに29例の症例に対して骨髄穿刺、末梢血採取を行った。Trainingセット:LMDによる原発巣癌細胞のmiRアレイ20症例,遺伝子アレイ20例。転移巣癌細胞のmiRアレイ7例遺伝子アレイ7例。骨髄をsortingして解析した結果、ITC分画miRアレイ20例、遺伝子アレイ20例。CD14分画のmiRアレイ7例、CD45分画7例、全骨髄液7例Validationセット:miRアレイ骨髄癌細胞15例、CD14分画15例、CD45分画15例の集積を終えている。<胃癌症例>すべてmiRアレイのみ実施している。LMDおよびマイクロアレイ解析により原発巣癌細胞6例、転移巣癌細胞10例、骨髄癌細胞分画10例、CD14分画10例、CD45分画10例、全骨髄液10例)。<肝臓癌症例>15例の肝臓癌症例について骨髄を4分画に分けてそれぞれのmicroRNA profileを有する。このうち10例については原発巣癌細胞のmiRアレイprofileを有している。以上の発現profileを用いて、GSEA解析等を実施し結果を求める。その成果は臨床的バイオマーカーとしての意義、あるいは転移再発機構研究の端緒となることが期待される。われわれは消化器癌の転移・再発のマーカーを明らかするには循環血液あるいは骨髄液中に癌細胞を検出することを目的とするのではなく、癌細胞側因子と宿主側の環境因子とにおいて転移再発と明確な関連を有する遺伝子を求めるのが重要である。特に多くの遺伝子を一度に抑制しうるファインチユーナーとしての役割を担うmicroRNAは、その発現の臨床的意義が注目されており、microRNA-遺伝子pathwayの同定と機能解析が急がれる。<大腸癌症例>これまでに15例の症例に対して骨髄穿刺、末梢血採取を行った。Preliminaryに実施したDukes B,C8例のアレイを実施しいくつかの有力なmicroRNAを同定した。現在データの集計中である。<胃癌症例>胃癌転移陰性5例に比べ陽性5例で骨髄中過剰発現する遺伝子群およびmiR群を求めた。その結果、癌細胞側因子:MMP1,MT1MMPの陽性例は有意に再発例が高かった(p<0.01)。宿主側因子:GO期(癌幹細胞)へ誘導するFBXW7遺伝子発現低下症例は転移陽性例が高頻度に認め6れた(p<0.01)。転移陽性例特異的miR群についてはPCRで転移との有意相関を確認した。miRは総数700弱で標的遺伝子を制御しており、本研究では癌幹細胞関連因子など転移関連蛋白を一度に制御しうるmiRを今後も同定していく。Training

セット:LMDによる原発巣癌細胞のmiRアレイ20症例,遺伝子アレイ20例。転移巣癌細胞のmiRアレイ7例遺伝子アレイ7例。骨髄をsortingして解析した結果、ITC分画miRアレイ20例、遺伝子アレイ20例。CD14分画のmiRアレイ7例、CD45分画7例、全骨髄液7例Validationセット:miRアレイ骨髄癌細胞15例、CD14分画15例、CD45分画15例の集積を終えている。<胃癌症例>すべてmiRアレイのみ実施している。LMDおよびマイクロアレイ解析により原発巣癌細胞6例、転移巣癌細胞10例、骨髄癌細胞分画10例、CD14分画10例、CD45分画10例、全骨髄液10例)。<肝臓癌症例>15例の肝臓癌症例について骨髄を4分画に分けてそれぞれのmicroRNA profileを有する。このうち10例については原発巣癌細胞のmiRアレイprofileを有している。以上の発現profileを用いて、GSEA解析等を実施し結果を求める。その成果は臨床的バイオマーカーとしての意義、あるいは転移再発機構研究の端緒となることが期待される。
中空糸膜利用による衣服内気流の性状解明に関する研究

衣服内の微小空間の換気を測る場合,衣服内のトレーサガス濃度を瞬時一様拡散させることは困難である.そこで,人体を単純な円筒で模擬し,衣服の通気性のために開口部から離れるほどトレーサガス濃度が減衰していくことを踏まえ,ガス発生量と濃度分布の計測から換気量と衣服内の気流を推定するモデルを提案した.このモデルの妥当性を検証するため,トレーサガス発生装置としてチューブ側面から微量・均一にトレーサガスを発生する装置を,シリコンチューブと多孔チューブを用いて作成した.発熱円筒5mmの衣服内空間をとって布地を巻き、気流が一様な風洞内に設置,衣服内空間の下側においてこのガス発生装置によりトレーサガスを発生させ,衣服内の多点でエアをサンプリング,その結果から換気量と衣服内空間の上昇気流を推定した.発熱が多い場合に衣服内空間の上昇気流が早くなり,また、風洞の風速が早いほど衣服内空間の換気が大きくなった.風洞内の風速が35cm/sの微風速条件では,風洞内の風が強くなり衣服内空間が冷えやすい場合に衣服内空間の上昇気流が遅くなる妥当な結果が得られたが,風洞内の風速が35cm/sより大きくなると,冷えやすい条件にも拘わらず衣服内空間の上昇気流が早くなり,温度差による熱対流では説明の出来ない結果となった.衣服内空間における空気の乱れの影響と考えられる.この乱れを踏まえて,換気量と衣服内の気流を推定するモデルの適用範囲を明らかにすることが課題として残った.衣服内の微空間の換気を測る場合、衣服内空間の体積の小ささゆえに、トレーサガスの散布、吸引を通常のチューブで行うことが衣服内の気流を大きく乱してしまうと予測される。衣服内の気流を乱さない、微流量のトレーサガス散布、ガス吸引装置の開発が必要である。この装置を作成するため、自由な形状変化が可能な中空糸膜を利用し、糸膜に沿って糸膜全体で微量均一発生、微量均一吸引する装置を開発している。本年度は、空気中で十分な強度を持つ市販の中空糸膜として、ポアフロンチューブ(内径1mm、外径2mm)のCO2散布特性を検討した。検討に先立ち、吸引式の簡易風洞を作成し、高さ10cm、20cm、30cm、35cm、壁面内側10cmの範囲で、風洞内の流れ0.21.0m/sがほぼ均一となっていることを確認した。簡易風洞の上流に、長さ40cmのポアフロンチューブを設置し、トレーサガスとしてCO2(100ml/min)を供給、ポアフロンチューブのガス散布特性を調べた。ガスの発生は上流で大きく、下流で小さい結果となって、期待した微量均一発生を実現できなかった。ポアフロンチューブの中空糸膜の中空部分を圧力バッファとするには、チューブ側面の孔径が大き過ぎたことを反映した結果である。現在、側面の孔径がよりポアフロンチューブと比較して小さく、空気中で十分な強度を有する中空糸膜の入手を進めている。この研究の目的は,トレーサガス濃度分布を伴う衣服内微空間を対象に,多孔膜のチューブをガス発生,吸引部分に用い,チューブ側面全体からガスを微風速かつ均一に発生・吸引させ,計測自体の影響を最小限に抑えつつ,さらに,トレーサガス濃度の分布を微分方程式に基づき考慮した換気測定法を導入することにある.今年度は、ボアフロンチューブ(内径1mm,外径2mm,長さ40cm)および中空糸膜(孔径20nm,内径と外径の公表値なし,長さ40cm)を発生部分とし,両チューブからのガス発生分布を検討した.1)実験で得たCO2発生の分布は,発生総量が小さい場合にチューブ先端で発生する割合が小さくなる傾向があり,発生総量によって分布が変化した.他方,多孔チューブの使用はガス発生自体が周囲の流れにおよぼす影響を緩和する上で有効であった.2)油性塗料を塗布した中空糸膜をガス発生部分として実験を行い,ガス発生分布の調整に塗料の塗布が有効であることを確認した.これらの結果から,1本の長い多孔チューブのみをガス部分とするのではなく,適宜塗料を塗布した複数本の短い多孔チューブを組合せてることが,微量,均一ガス発生装置の作成にあたり適切と考えられる.今後はこの知見に基づいてガス発生部分を作成,今年度作成した発熱円筒に布地を巻いて作成した衣服内微空間に対してトレーサガス濃度の分布を微分方程式に基づき考慮した換気測定法を適用していく.衣服内の微小空間の換気を測る場合,衣服内のトレーサガス濃度を瞬時一様拡散させることは困難である.そこで,人体を単純な円筒で模擬し,衣服の通気性のために開口部から離れるほどトレーサガス濃度が減衰していくことを踏まえ,ガス発生量と濃度分布の計測から換気量と衣服内の気流を推定するモデルを提案した.このモデルの妥当性を検証するため,トレーサガス発生装置としてチューブ側面から微量・均一にトレーサガスを発生する装置を,シリコンチューブと多孔チューブを用いて作成した.発熱円筒5mmの衣服内空間をとって布地を巻き、気流が一様な風洞内に設置,衣服内空間の下側においてこのガス発生装置によりトレーサガスを発生させ,衣服内の多点でエアをサンプリング,その結果から換気量と衣服内空間の上昇気流を推定した.発熱が多い場合に衣服内空間の上昇気流が早くなり,また、風洞の風速が早いほど衣服内空間の換気が大きくなった.

風洞内の風速が35cm/sの微風速条件では,風洞内の風が強くなり衣服内空間が冷えやすい場合に衣服内空間の上昇気流が遅くなる妥当な結果が得られたが,風洞内の風速が35cm/sより大きくなると,冷えやすい条件にも拘わらず衣服内空間の上昇気流が早くなり,温度差による熱対流では説明の出来ない結果となった.衣服内空間における空気の乱れの影響と考えられる.この乱れを踏まえて,換気量と衣服内の気流を推定するモデルの適用範囲を明らかにすることが課題として残った.
災害・危機へのレジリエンスをジェンダー化する―日独の対比に焦点を当てて

本研究は日本に視座を置き、ドイツとの対比に焦点を当てて、危機・災害とレジリエンスの比較ジェンダー分析をおこなうものである。生活保障システムにおいて類似点が多い日独両国が、金融経済危機を契機に、異なる軌道をたどるようになったという仮説を設けており、社会的投資戦略を軸とすることによって、両国の分岐を定量的に明らかにすることができた。そうした成果を、国際学会での招待報告や国際会議での基調講演、日本学術会議第177回総会特別講演等を通じて発信し、有益なコメントを得て研究を深めた。国際学会・会議での報告は、1韓日経済政策研究フォーラムにおける招待報告「“誰もが活躍する"ための課題」(9月);2世界社会科学フォーラムのパラレル分科会CS7-01における“Poverty Reduction isa Vital Way of `Investment in Society'"(9月);3ドイツ日本研究所ワークショップにおける招待報告“Issues for `Society5.0', Poverty Reduction isa Vital Way of `Investment in Society'";4千葉大学「未来型公正社会研究」第5回国際シンポジウム「グローバルな福祉社会の構想力ー東アジアの介護・ジェンダー・移民ー」における基調講演「社会政策の逆機能とジェンダー:少子高齢化は「国難」か」(12月)など。本研究ではまた、2018年2月に都道府県・市区町村を対象として「2017年度女性・地域住民から見た防災・災害リスク削減策に関するアンケート調査」を実施した。2018年度はその結果の分析を進め、2019年2月1日に第30回東京大学社会科学研究所シンポジウムとして結果等の報告を行った。同シンポの要旨とアンケート調査結果を編集し、社会科学研究所研究シリーズ66号として刊行した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。自治体アンケート調査のパイロット調査を、研究協力者とともに、釜石市、流山市、掛川市、四日市市などでおこなった。とくに釜石市では、ひと・まち・しごと総合戦略である「釜石オープンシティ戦略」につき、担当部署と関連部署にヒアリングをおこない、市民参加のワークショップも実施して、災害・危機に強い地域づくりのヒントを得ることができた。研究協力者の堂本暁子氏とともに調査票の設計を進めている。国際政治学会大会(トルコのイスタンブール市からポーランドのポズナニ市に開催地が変更)への参加は安全上の懸念から見送ったが、日中韓3国の社会保障国際論壇第13回大会(大分市)にて基調講演をおこない、東アジア日本研究者協議会の第1回国際学術大会(韓国の仁川市)では指定討論者を務めるなど、国際的な発信と研究グループ外からのフィードバック確保は、期待以上におこなうことができた。社会政策学会、ジェンダー法学会にて、それぞれ共通論題の報告とワークショップ招待報告をおこなうなど、全国学会での成果発信も、計画以上におこなうことができた。2016年7月下旬に国際政治学会大会で分科会を設定して研究成果の中間的報告をおこなう予定だった。当初トルコのイスタンブール市で開催予定のものが、安全上の懸念からポーランドのポズナニ市に変更されたものの、なお安全上の懸念を払しょくできず、研究協力者との相談により、参加をとりやめた。他方で、日中韓3国が参加する社会保障国際論壇(大分市)で基調講演の機会を与えられ、また国際研究集会を主催し、東アジア日本研究者協議会の第1回国際学術大会にて指定討論者を依頼されるなど、国際発信とフィードバックの機会は、計画以上に確保することができた。国内学会の学会誌に論文が掲載され、単行本にも章を寄稿するなど、研究の中間的成果を発信した。中国で創刊された『社会保障評論』から招待を受けて論文が翻訳掲載され、日本の社会政策に関する中国での関心を高めることに貢献した。2018年2月に「2017年度女性・地域住民から見た防災・災害リスク削減策に関する調査」を実施した。内閣府男女共同参画局長および全国知事会長の協力を得ることができ、都道府県は100%、市区町村でも65%の回収率を達成した。先行の調査は2008年に実施されており、東日本大震災等の災害をへた現状を把握することは重要である。本研究の協力者の1人である金英教授(釜山大学)の研究成果である著書『主婦パートタイマーの処遇格差はなぜ再生産されるのか』(ミネルヴァ書房)につき、書評会を開催する計画だったが、金教授の急病のため、2018年度に送ることとなった。それ以外には順調以上に進展している。国際学会・会議での報告は、1韓日経済政策研究フォーラムにおける招待報告「“誰もが活躍する"ための課題」(9月);2世界社会科学フォーラムのパラレル分科会CS7-01における“Poverty Reduction isa Vital Way of `Investment in Society'"(9月);3

ドイツ日本研究所ワークショップにおける招待報告“Issues for `Society5.0', Poverty Reduction isa Vital Way of `Investment in Society'";4千葉大学「未来型公正社会研究」第5回国際シンポジウム「グローバルな福祉社会の構想力ー東アジアの介護・ジェンダー・移民ー」における基調講演「社会政策の逆機能とジェンダー:少子高齢化は「国難」か」(12月)など。本研究ではまた、2018年2月に都道府県・市区町村を対象として「2017年度女性・地域住民から見た防災・災害リスク削減策に関するアンケート調査」を実施した。2018年度はその結果の分析を進め、2019年2月1日に第30回東京大学社会科学研究所シンポジウムとして結果等の報告を行った。同シンポの要旨とアンケート調査結果を編集し、社会科学研究所研究シリーズ66号として刊行した。ヒアリング調査結果にもとづいて自治体アンケートの調査票を設計し、実施する。生活困窮者自立支援事業が福祉事務所をつうじて施行されているため、福祉事務所が設置されている1200あまりの自治体(都道府県を含む)が、アンケート調査の対象となる。堂本暁子前千葉県知事の協力を得て全国知事会との協働をさぐるが、それができない場合にも実施する。堂本氏とは、平成27ー29年度基盤研究(B)「災害・復興政策の比較ジェンダー研究ー多様性に通ずるレジリエンス構築に向けて」(研究代表者:原ひろ子)において、研究分担者(大沢)と協力者(堂本)として、緊密に協働しているところである。11月上旬に東京大学にて第2回全体会合。グループ外のメンバーを含むコロキアムも開催(ウェイン州立大学のハイディ・ゴットフリート教授の招聘を計画)。2018年2月に行った「2017年度女性・地域住民から見た防災・災害リスク削減策に関する調査」の結果を分析し、2008年の調査結果とも比較する。2018年3月に共著として刊行した『社会への投資ー<個人>を支える<つながり>を築く』(岩波書店)につき、共著者外からコメントを受け、研究を深める機会とするため、書評会を開催する。9月以降に、本研究の協力者の1人である金英教授(釜山大学)の研究成果である著書『主婦パートタイマーの処遇格差はなぜ再生産されるのか』(ミネルヴァ書房)につき、書評会を開催し、研究をさらに深める。9月下旬に福岡で開催される世界社会科学フォーラムにおける「ジェンダー平等と保障」分科会において本研究の成果の一部を報告する。11月以降に東京で、日独のワーク・ライフ・バランスをめぐる制度と実態に関する比較研究ワークショップを、ベルリン日独センター等と共催する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
歯肉歯槽骨リモデリングにおけるペリオスチン発現制御による歯肉退縮回避の追求

ペリオスチンは、歯周組織・骨組織では歯根膜と骨膜に特異的に発現する細胞外マトリックスタンパク質で、メカニカルストレスに応答する。咬合刺激低下歯の周囲歯肉では組織成分が変化し、矯正治療により歯肉退縮が生じる。実験的歯肉退縮モデルの確立を目的に、12週齢SD系雄性ラットを用いて、、臼歯部の咬合刺激を排除し、咬合刺激低下状態にした。2週間後にワイヤーにて上顎第一臼歯に舌側方向に矯正力をかけ、移動開始7日後、14日後に歯の移動量および移動様相の観察をμCTによる歯槽骨構造解析、硬組織時刻描記法による歯槽骨形態計測を行った。その結果、実験条件が歯槽骨リモデリングに影響を与えていることが判明した。ペリオスチンは、歯周組織・骨組織では歯根膜と骨膜に特異的に発現する細胞外マトリックスタンパク質で、メカニカルストレスに応答するといわれているが、これまで歯肉における報告はない。咬合刺激低下歯の周囲歯肉では組織成分が変化し、例えば、開咬の前歯歯肉では発赤・腫脹が認められ、低位唇側転位した犬歯では矯正治療により歯肉退縮を起こしやすい。そこで我々は、このような歯肉組織の変化に歯槽骨骨膜を通してペリオスチンが関与しているのではないかと考え、「実験的歯肉退縮モデルの確立およびペリオスチンの局在の観察」という実験目的のもと、実験を行った。まずは、実験的歯肉退縮モデルの確立を目的に、12週齢SD系雄性ラットを用いて、Suhr et al. (2002)の方法に準じ、上顎切歯にバイトプレートを、下顎切歯にメタルキャップを装着し、臼歯部の咬合刺激を排除し、咬合刺激低下状態にした。2週間後にワイヤーにて上顎第一臼歯に舌側方向に矯正力をかけ、移動開始7日後、14日後に屠殺を行った。次に、歯周組織の形態学的観察を行うべく、歯の移動量および移動様相の観察をμCTによる歯槽骨構造解析、硬組織時刻描記法による歯槽骨形態計測を行った。その結果、実験モデルが歯槽骨レベルにおいて、リモデリングに影響を与えていることが判明した。矯正治療後に、患者が健全な歯周組織を獲得し、機能的、審美的満足度を上げるためには、歯肉退縮を起こさないようにすることが重要である。従って、歯肉歯槽骨リモデリングにおけるペリオスチンの関与を明らかにし、その発現制御により歯肉・歯槽骨再生を行う基盤を確立することは、歯科矯正学に寄与するところ甚大であると考える。これまで動物モデルを用いて、咬合刺激低下にともなう歯根膜の萎縮や骨性癒着、歯槽骨量の減少、さらに、咬合刺激低下歯の矯正移動に着目し、メカニカルストレス喪失による歯周組織の恒常性の破綻について報告してきた。臨床的には、咬合刺激低下歯の周囲歯肉では組織成分が変化し、例えば、開咬の前歯歯肉では発赤・腫脹が認められ、低位唇側転位した犬歯では矯正治療により歯肉退縮が認められることがしばしばある。ところで、ペリオスチンは、歯周組織・骨組織では歯根膜と骨膜に特異的に発現する細胞外マトリックスタンパク質で、メカニカルストレスに応答するといわれているが、これまで歯肉における報告はない。そこで我々は、このような歯肉組織の変化に歯槽骨骨膜を通してペリオスチンが関与しているのではないかと考え、「実験的歯肉退縮モデルの確立およびペリオスチンの局在の観察」という実験目的のもと、12週齢SD系雄性ラットを用いて実験を行った。

そこで我々は、このような歯肉組織の変化に歯槽骨骨膜を通してペリオスチンが関与しているのではないかと考え、「実験的歯肉退縮モデルの確立およびペリオスチンの局在の観察」という実験目的のもと、実験を行った。まずは、実験的歯肉退縮モデルの確立を目的に、12週齢SD系雄性ラットを用いて、Suhr et al. (2002)の方法に準じ、上顎切歯にバイトプレートを、下顎切歯にメタルキャップを装着し、臼歯部の咬合刺激を排除し、咬合刺激低下状態にした。2週間後にワイヤーにて上顎第一臼歯に舌側方向に矯正力をかけ、移動開始7日後、14日後に屠殺を行った。次に、歯周組織の形態学的観察を行うべく、歯の移動量および移動様相の観察をμCTによる歯槽骨構造解析、硬組織時刻描記法による歯槽骨形態計測を行った。その結果、実験モデルが歯槽骨レベルにおいて、リモデリングに影響を与えていることが判明した。矯正治療後に、患者が健全な歯周組織を獲得し、機能的、審美的満足度を上げるためには、歯肉退縮を起こさないようにすることが重要である。従って、歯肉歯槽骨リモデリングにおけるペリオスチンの関与を明らかにし、その発現制御により歯肉・歯槽骨再生を行う基盤を確立することは、歯科矯正学に寄与するところ甚大であると考える。不正咬合や歯の欠損により咬合喪失した歯を矯正移動させることは、歯科臨床上、移動歯周囲の歯槽骨低下や歯肉退縮、歯根吸収を生じさせることが問題とされてきた。これまで、咬合刺激低下歯のラットモデルを用いて、咬合刺激の低下にともなう歯根膜の萎縮や骨性癒着、歯槽骨の減少が明らかにされている。歯肉粘膜、歯根膜および歯槽骨から構成される歯周組織は、各種の細胞外マトリックスタンパク質により構造が維持され、さらに、矯正力による組織のリモデリングが制御される。歯周組織に特有の細胞外マトッリクスタンパク質として、ぺリオスチンがあり、メカニカルストレスに応答する歯周組織のリモデリングへの関与が言われている。前年度までに、われわれは、12週齢のSD系雄性ラットを用いた咬合刺激低下歯モデルにおける臼歯の矯正移動を実験的に行い、歯槽骨の粗鬆化や移動様式の変化を報告してきた。今年度は、そのような機能低下した歯の円滑なリモデリングを促進する基盤的な技術の開発を目的に、低出力超音波(LIPUS)照射による歯周組織の回復と矯正移動の効率化を仮説に、動物モデルを用いた実験を計画した。実験として、SD系雄性ラットの正常歯および咬合機能低下歯の歯周組織に対するLIPUSの効果の同定を行うため、歯根膜の厚み及び骨量、骨密度等の変化を、小動物実験用CT(マイクロCT)を用いて検討した。さらに、オステオポンチン、オステオカルシン、RANKL等の骨形成制御因を免疫染色およびPCR法により同定している。今後は、実験的移動歯へのLIPUS照射を実施し、矯正学的歯の移動時におけるLIPUSの効果の同定を行う予定であり、歯科矯正学における新たな歯周組織の再生技術の基盤を確立する。歯科矯正学歯根膜の代謝は酸素状態に大きく影響され、継続した低酸素状態が歯根膜細胞の細胞死を誘導することが報告されている。低酸素-再酸素化を繰り返す間歇的低酸素状態では、歯根膜細胞から骨吸収性因子の産生が誘導されたことが報告されている。間歇的な低酸素状態が組織および細胞障害を惹き起こす機序として、再酸素化により活性酸素が遊離し、酸化ストレスによる反応が現れてくると考えられる。したがって、歯周組織の代謝や再生に低酸素状態がどのように影響するのか検討する必要がある。そこで、酸素状態の変化により惹き起こされる歯根膜細胞の分化や増殖、細胞死等へ及ぼす影響について、実験モデルを確立し、組織学的解析を開始した。実験モデルを確立し、組織学的解析を行った。実験モデルを確立し、組織学的解析を開始した。
破骨細胞内で発現する分化誘導のシグナル分子の分子生物学的検索及び解析

造血系の種々の細胞においては、Stem cell factor(SCF)あるいはM-CSF等のチロシンキナーゼ型レセプターが細胞の分化において重要な働きを持つことが明らがにされている。破骨細胞においても同様なレセプターが発現し分化のシグナル因子として働いている可能性がある。(1)我々はラット骨髄細胞から単核の破骨細胞の前駆細胞(POCs)を誘導する培養系を用いて、細胞からRNAを抽出しチロシンキナーゼの活性部位をもとにデザインしたプライマーを用いて、POCsで発現すると考えられるレセプター型チロシンキナーゼの活性部位を含む約200bpのフラグメントをPCRを用いて増幅した。(2)さらにコントロールとしてPOCを誘導しない条件(骨髄細胞を活性型ビタミンD3のみで処理)からも同様にRNAを抽出し、同フラグメントをPCRを用いて増幅した。(1)のフラグメントをpT17-Blueベクターに挿入し、計1800クローンについては(1)と(2)のフラグメントをプローブとして用いdifferential hybridizationを行い、(1)のプローブでのみ検出されるクローンについてその塩基配列を解折した。その結果、新たなレセプターを単離することは出来なかったが、マウスのepitherial cell kinase(ECK)とアミノ酸レベルで100%一致するクローンが破骨細胞の分化誘導時に見い出されることがわかった。ラットECKの発現の特異性を確かめるために、ラット骨髄細胞を種々の条件で培養しRNAを抽出しRT-PCRによりECKの発現を検討したところ、破骨細胞の分化誘導時により高い発現がみられた。今後マウスの破骨細胞分化系を用いて破骨細胞の分化におけるECKの発現を確認するとともに、in vivoの破骨細胞におけるECKの発現及び既に明らかにされているECKのリガンドの破骨細胞の分化の関与についても調べる予定である。本研究においては、破骨細胞の分化に伴って発現するシグナル分子を単離し解析することを目的とした。まず、骨髄細胞からストローマ細胞を除き、この細胞をラット骨芽細胞様細胞ROS17/2.8の培養上清を熱処理したもの(htROSCM)と活性型ビタミンD3の存在下あるいは非存在下で4日間培養しPOCsを誘導した。さらに、POCの分化誘導の効率を上げる条件を検討した。即ち、上記の培養系にIL-15,IL2,IL7,M-CSFやTNFαを添加した。その結果、IL-15,M-CSFやTNFαがPOCの分化誘導を促進したが、TNFαを添加した場合がその効率が最も高い(全細胞の80%位まで分化誘導した)ことが判明した。そこで、htROSCMとTNFαあるいはTNFαのみ(この条件下ではPOCは形成されない)の条件下で分化誘導した細胞からRNAを抽出した。これらのRNAからチロシンキナーゼの活性部位をもとにデザインされたprimerを用いてcDNA合成を行った。このcDNAを用いてチロシンキナーゼの活性部位をもとにデザインされた2つのprimersを用いてPCRを行った結果、2つのバンドが検出され、PCRでの解析の結果、一つは、レセプター型チロシンキナーゼ(TKR)で、一つは細胞内のチロシンキナーゼであると考えられた。そこで、TKRについてPCRのバンドをpT7-Blueベクターにクローニングし、その塩基配列の解析を行っている。これらの配列のなかから分化誘導した時にのみ発現するものの選択を行い、さらにgene bankとのホモロジーサーチを行い、破骨細胞系列に特異的なTKRを現在解析中である。