hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脊髄におけるGABAの放出及びその抑制性応答と胎児期の運動機能発達との関連

子宮内で手足を活発に動かす胎児の動きを母親は“胎動"として感じる。胎児期の運動機能の発達において、鍵となる分子が、抑制性神経伝達物質GABAである。なぜならば、グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD)やGABAをシナプス小胞に充填する小胞性GABAトランスポーター(VGAT)の欠損マウスは、いずれも四肢の筋硬直による運動失調を呈し、生直後に死亡するからである。GABAが抑制性に働くためには、細胞内Cl-濃度([Cl-]i)を低く保つことが必須であり、細胞外へCl-を排出するK+-Cl-共輸送体(KCC2)が重要な役割を担っている。KCC2欠損マウスもGAD、VGAT欠損マウスと同様、運動失調を呈し生直後に死亡する。これらのことから、胎児期の運動機能の発達には、「GABAの放出」と「抑制性応答」の両方が、重要であると考えられる。しかし、GABAの放出とその抑制性応答が、発達に伴いどう変化し、胎児期の運動機能の発達とどのように関連しているのか不明な点が多い。そこで、運動情報の出力を担う脊髄前角に着目し、GABAの放出及びその抑制性応答の発達変化を明らかにし、胎児期の運動機能の発達との関連を解明することを本研究の目的とし、以下の1から4について検討する。1脊髄前角におけるGABA放出の発達変化、2脊髄運動神経細胞のGABAに対する応答性が、いつ興奮性から抑制性に変化するか、3上記の1及び2により、運動神経細胞から前肢への出力が、どう変化し、運動機能の発達と関連するか4GAD、VGAT、KCC2の欠損マウスが呈する運動失調の原因を解明し、その回復に挑戦する。研究代表者である清水(琉球大学)は、脊髄急性スライスからホールセルパッチクランプの実験系を立ち上げ、順調に実験を進めている。国際学会も含め、複数回の学会発表を行った。分担者である荒田(兵庫医科大学)は、脊髄摘出標本を用いた研究について国際学会も含め、学会発表を行った。さらに、本研究で使用している脊髄摘出標本についての総説などを発表した。清水と荒田は、研究打ち合わせを兵庫医科大学にて行い、互いの研究の進捗状況などについて話し合っており、順調に研究を進めていく環境を整えた。以上のことから、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。現在、脊髄急性スライスを用いたホールセルパッチクランプ法を用いたGABA放出の変化について、運動神経細胞がとらえやすく、パッチクランプ法を適用しやすい出産に近い日齢を主に使用し行った。今後は、急性脳スライスの作成が難しく、さらに日齢の若いスライスについて、ホールセルパッチクランプ法等を適用し、研究を推進したいと考えている。脊髄摘出標本については、今後例数を重ね、ノックアウトマウスなどに対応できるように準備を整えていく予定である。

脊髄摘出標本については、今後例数を重ね、ノックアウトマウスなどに対応できるように準備を整えていく予定である。北米神経科学会などの国際学会や他の国内学会に参加する予定であったが、授業などのスケジュールの都合が合わず、参加が叶わなかったことから、旅費などの支出が減少したため。マウス飼育費用(動物施設使用料)が予定していた額よりも少なくできたことなどの理由より次年度使用額が生じた。
視細胞変性疾患の原因となるRPE特異的蛋白質の機能および相互作用解析

Mfrp遺伝子の転写産物であるMFRP蛋白質と、Clqtnf5遺伝子の転写産物であるCTRP5蛋白質の相互作用を解析するために、それぞれの蛋白質に特異的な抗体を作成している。MFRP蛋白質についてはすでに2種類の抗体を作成していたが、蛋白質同士の結合実験に必要と考えられるため、昨年度に認識部位の異なる抗体をもう1種類作成し、さらにCTRP5蛋白質に対する抗体を作成した。MFRPとCTRP5の蛋白質合成、精製のためにMFRPとCTRP5遺伝子のcDNAをクローニングした。これはfidelityの高いDNA合成酵素を用いたPCRにてcDNAを増幅し1ベクターにクローニングした。クローニングしたcDNAはシークエンシングにて塩基変異のないことを確認した。rd6マウスでは塩基変異のためにtruncated MFRP蛋白質の発現が予想されているが、今年度はこのtruncatedMFRP蛋白質をコードする、rd6マウス由来のcDNAをクローニングに成功した。クローニングしたCDNAはpET-17bベクター(Novagen)にサブクローニングした。蛋白質合成には転写・翻訳因子再構成in vitro蛋白質合成システムであるPURESYSTEM classicmini(POST GENOME INSTITUTECO.,LTD)を使用しているが、技術的な問題が生じ、蛋白質の発現が現在のところうまく機能していない。このためtruncated MFRP蛋白質とCTRP5蛋白質との結合能の測定実験は未だ行えていない。Mfrp遺伝子の転写産物であるMFRP蛋白質と、C1qtnf5遺伝子の転写産物であるCTRP5蛋白質の相互作用を解析するために、それぞれの蛋白質に特異的な抗体を作成した。MFRP蛋白質についてはすでに2種類の抗体を作成していたが、蛋白質同士の結合実験に必要と考えられるため、認識部位の異なる抗体をもう1種類作成した。新たにCTRP5蛋白質に対する抗体を作成した。これはfidelityの高いDNA合成酵素を用いたPCRにてcDNAを増幅しベクターにクローニングした。rd6マウスでは塩基変異のためにtruncated MFRP蛋白質の発現が予想されているが、現在このtruncated MFRP蛋白質をコードする、rd6マウス由来のcDNAをクローニング中である。クローニングしたCDNAはpET-17bベクター(Novagen)にサブクローニングしている。蛋白質合成には転写・翻訳因子再構成in vitro蛋白質合成システムであるPURESYSTEM classicmini(POST GENOME INSTITUTE CO., LTD)を使用する。このtruncated MFRP蛋白質とCTRP5蛋白質との結合をBIACOREを用いて測定し、rd6マウスにおける視細胞変性がMFRPとCTRP5の結合能力の低下または過剰に関与しているかを検討する。Mfrp遺伝子の転写産物であるMFRP蛋白質と、C1qtnf5遺伝子の転写産物であるCTRP5蛋白質の相互作用を解析するために、それぞれの蛋白質に特異的な抗体を作成している。蛋白質合成には転写・翻訳因子再構成in vitro蛋白質合成システムであるPURESYSTEM classicmini (POST GENOME INSTITUTE CO.,LTD)を使用しているが、技術的な問題が生じ、蛋白質の発現が現在のところうまく機能していない。
慢性閉塞性肺疾患におけるTGF-βによるオートファジー制御と老化

オートファジーが、タバコ煙抽出液による気道上皮細胞老化誘導に対して抑制的に働いていることが示された。さらにp62を介したユビキチン化蛋白の選択的な分解がその機序として重要である可能性が示唆された。喫煙による慢性閉塞性肺疾患(COPD)の病態に、オートファジーによる細胞内蛋白質分解系が細胞老化制御の点から関与する可能性を明らかにするため、気道上皮細胞培養系を用いた検討を行った。cigarette smoke extract(CSE)は気道上皮細胞においてオートファジーの亢進(LC3-EGFを安定高発現させた細胞でのdot形成及びLC3-II蛋白発現)と細胞老化を誘導した(老化関連β-gal発現量及びp21発現)。またオートファジーの阻害剤(3MA)やLC3に対するsiRNAを用いた機能抑制が喫煙刺激による細胞老化をさらに亢進させ、一方オートファジーの機能促進作用のある薬剤(Torin1)は細胞老化を抑制した。オートファジー機能と細胞老化との関連を明らかにする目的で4-HNE、ニトロチロシン残基、及びユビキチン化たんぱく質など傷害または分解処理されるべきたんぱく質の細胞内蓄積の検討を行った。その結果オートファジー機能を抑制することが、喫煙によるユビキチン化たんぱく質の細胞内蓄積を亢進させることが明らかとなった。さらにp21に対するsiRNAを用いた検討では喫煙及びオートファジーを介する細胞老化亢進にp21の発現が重要である事が示された。またTGF-β刺激がオートファジー機能亢進と細胞老化を誘導することも明らかとなり、CSEの作用がTGF-β活性化を介しているかに関しても検討中である。本検討により喫煙刺激による気道上皮細胞の老化亢進に、オートファジー機能低下によるユビキチン化たんぱく質蓄積が関与する可能性が示唆された。細胞老化の亢進はSenescence associatedsecretory phenotypeとして知られるサイトカインの過剰分泌によりCOPDの病態に関与する可能性があり、今回の検討結果はその機序解明の手がかりの一つと考えている。オートファジーによる細胞内蛋白質分解系が、細胞老化制御によりCOPDの病態に関与する可能性を明らかにするため、気道上皮細胞培養系及び肺組織を用いた検討を行った。昨年度はcigarette smoke extract (CSE)による気道上皮細胞老化亢進に対しオートファジーが抑制的に働いていることを見出した。今年度は、ユビキチン-プロテアソーム系とオートファジーを結びつけるp62の関与の点から、さらに検討を行った。CSEによって細胞老化が誘導される際にユビキチン化蛋白とp62が蓄積し、LC3に対するsiRNAや、bafilomycin Aでオートファジーを抑制することによりこれらの蓄積はさらに増加した。逆にTorinlにより亢進させることにより、蓄積は低下した。ユビキチン化蛋白とp62の細胞内蓄積は免疫蛍光染色により確認した。Mitotracker及びTOM20による蛍光染色から、CSEがミトコンドリアの傷害と蓄積を誘導していた。つまりオートファジーによるp62とユビキチンを介した傷害ミトコンドリアの処理機構が、COPD病態で重要である可能性が示唆された。臨床的な重要性を明らかにする目的で、COPD患者由来の気道上皮細胞及び肺組織を用いて検討した。COPD患者由来の気道上皮細胞はベースラインでのオートファジーが亢進しており、一方CSE刺激によるオートファジーの誘導が、非COPD患者由来の気道上皮細胞と比べて著明に低下していた。COPD患者由来の肺組織から抽出した蛋白質の検討では、p62の蓄積が明らかとなった。本検討により喫煙刺激による気道上皮細胞の老化亢進に、オートファジー機能低下によるp62を介したユビキチン化蛋白質の分解低下が関与する可能性が示された。オートファジーの理解が、これら傷害蛋白の分解制御の点から、有効なCOPD治療法の開発の上で重要な手がかりの一つとなると考えられた。
新規RORgt関連因子によるTh17細胞制御機構

Th17細胞は、細胞外微生物の排除や自己免疫疾患の発症において重要な役割を担っている細胞の一つである。Th17細胞の分化・機能制御において必須の転写因子としてRORgtが知られている。しかし、RORgtのみではTh17の機能発現全てを説明するには不十分であり、他の転写因子やシグナル伝達因子と協調していることが示唆されているが、その全容は不明である。そこで本研究ではRORgtと協調して機能する新規Th17細胞特異的制御因子の同定し、Th17細胞関連疾患の発症機構を解明することを目的とした。本年度の計画はTh17細胞特異的制御因子の同定であった。(1)候補因子の絞り込み:ヒトTh17細胞でRORgt依存的に発現が制御されていると考えられる因子を全RNAシークエンスのデータベースより抽出した。更に、実際にTh17細胞での発現を確認し、候補遺伝子を絞り込むことに成功した。(2)ヒトTh17細胞における機能評価:上記1で抽出した遺伝子のヒトTh17細胞での機能をshRNAによってノックダウンすることで評価した。その結果、18遺伝子がヒトTh17細胞の機能を制御している可能性が示唆された。更にTh17特異的であることを確認すべく、ヒト臍帯血より採取したnaiveT細胞からTh1, Th2, Treg,s Th0細胞を誘導する条件の確立を試みた。この条件とshRNAによるノックダウンを組み合わせ、更に候補遺伝子の機能解析を続ける予定である。
関節軟骨維持におけるヘパラン脱硫酸酵素(Sulf)の役割

変形性膝関節症において、過度の荷重負荷領域は、軟骨変性とその周囲に軟骨先駆細胞マーカーであるSTRO-1陽性細胞や細胞塊(cluster)が見られた。一方、荷重が少なく正常軟骨に近い状態に見える外側では、生物活性は低いことがわかった。本研究で適度な荷重負荷は膝関節内の軟骨恒常性維持に不可欠であり、細胞数変化にはSulfやErk活性に関与していることが示唆された。研究題目:「関節軟骨維持におけるヘパラン脱硫酸酵素(Sulf)の役割」軟骨変性とSulf(臨床的アプローチ)および、荷重負荷とSulf(幼若、成熟牛軟骨を用いた基礎的アプローチ)の関係について予定通り研究を進めている。ヒトの大腿骨より軟骨を採取し、連続切片を荷重部非荷重部ともに採取し、サフラニンOやMSCマーカーの一つであるSTRO-1の免疫染色を行った。その結果、正常荷重軟骨では、両者とも発現が表層に限局しているのに対し、変性軟骨組織では軟骨細胞の凝集したcluster formationで発現が見られた。今後、荷重費荷重の領域から細胞を採取し、Flowcytemetryなどを用いて、細胞の性格を明らかにし、関節軟骨の変性や恒常性に対する役割を明らかにしていく予定である。荷重負荷を行った、牛軟骨組織でサフラニンO染色を行い、FGF receptorをターゲットに免疫染色をおこなっていく。組織にメカニカストレスをかけるだけでなく、細胞にストレッチをかけて、in vitroでの精査も検討に加えている。また、今年に入り、Sulfが軟骨において恒常性維持に重要な役割を果たすBMP7とFGF2の細胞シグナルを同時に調整している事を、Sulf knockout mouseを用いて検討し報告した(Proc Natl Acad Sci USA, 2010)。また、Sulfの阻害剤が合成されそちらも報告されているので,今後,この阻害剤を用いてSulfが軟骨変性に及ぼす影響を検討していく予定である。ヒト軟骨におけるSulfの発現と膝関節OAとの関係を明らかにするため、変形性膝関節症手術患者から大腿骨内、外側顆の軟骨を部位別に採取し、細胞の形状や性質を観察した。免疫染色は、Sulfと軟骨前駆細胞のマーカーの一つであるSTRO-1染色を行い、陽性細胞の発現を調べた。結果、過度の荷重負荷領域では、軟骨変性とその周囲にSulf,STRO-1陽性細胞やclusterが見られ、変性軟骨の周辺で修復機転が生じている可能性が示唆された。また、荷重負荷の減少した外側では、軟骨性状は正常に近かったが、軟骨細胞は生物活性の低い単細胞型であり、SulfやSTRO-1の発現は少なかった。以上より、SulfはMSCマーカーと同様に荷重負荷により発現を変化させる事から、適度な荷重負荷は膝関節には重要で、その過程でSulfは軟骨細胞数調節に関与して軟骨恒常性維持に働いている事が示唆された。ヘパラン硫酸プロテオグリカンの1つであるパールカンが荷重負荷により過剰発現する事はすでに報告されており、FGF2はパールカンから細胞外へ分泌される。このメカニズムにSulfが果たす役割を明らかにするため、正常ウシ軟骨を用いて検討する。ウシ軟骨にさまざまな荷重負荷を加えて、その後組織を採取し、Sulfの発現を検討する。予備実験の結果ではあるが、Sulfは全層で過剰発現が見られた。今後、荷重負荷によってSulfが過剰発現しその結果、FGF2/Erk1/2シグナル調節することを蛋白、遺伝子の両面から明らかにしていく予定である。
コーポレート・ガバナンス構築における財務諸表監査の機能に関する実証研究

本研究は,コーポレート・ガバナンスを構築する上で,財務諸表監査がどういう位置づけにあるかを検証することにある。本研究は,まず日本市場において財務諸表監査が機能しているかを検証する。たとえば監査人のレピュテーションの喪失によって,クライアントの株価が有意に下落するかどうかを調査する。この検証の結果,監査人のレピュテーションの存在を確認することができた。さらに監査人のレピュテーションの要因をさぐった。その結果,監査人の専門性や監査報酬の比較により,その要因のいくつかを抽出することができた。本研究の目的は,コーポレート・ガバナンスを構築する上で,財務諸表監査がどういう位置づけにあるかを検証することにある。あわせて,昨今の財務諸表監査制度の改正についても踏み込んだ考察を行う。本年度は,まず日本市場において財務諸表監査が機能しているかを検証した。とりわけ監査人のレピュテーションの喪失によって,クライアントの株価が有意に下落するかどうかを調査した。また本年度は,主要な先行研究の精読を行うとともに,随時,最新の研究にも接し,文献収集に努めた。とくに本年度は,主に先行研究で用いられたモデルを用い,日本市場でどういった結果となるか追試するとともに,マーケットに対しネガティブな情報が流出した日本独自のイベント日を特定した。これらの準備をした後,株価データを用い,調査対象監査法人のクライアント(東証一部上場)の累積異常リターン(CAR)を日次で算出している。その結果,先行研究と同様に,監査人の不祥事によって,そのクライアントのCARは有意に低下することとなった。その影響は,不祥事を起こした監査人のクライアントのみにとどまらず,監査人の属する監査法人,さらには監査市場全体にまで有意に低下する結果となった。したがって,こういった結果から監査人のレピュテーション,ひいては監査法人,監査市場のレピュテーションについて,市場が認識していると解釈することができる点を明らかにした。以上の調査結果を,ヨーロッパ会計学会やアメリカ会計学会において報告した。本年度は,前年度までの成果(監査人のレピュテーションの喪失によって,クライアントの株価が有意に下落するかどうかを調査)をふまえ,監査人のレピュテーションを形成する要因について検証をおこなった。あわせて本年度は,主要な先行研究の精読を行うとともに,随時,最新の研究にも接し,文献収集に努めた。本年度おこなった研究は,監査法人のレピュテーション,監査法人の専門分野,そして監査報酬との関係を,主に先行研究(Craswell et.al.[1995]など)で用いられたモデルを用い,それぞれの関係を分析した。サンプルは,東京証券取引所一部上場企業を対象として行っている。その結果,先行研究と同様に,監査報酬と監査法人の専門性の高さの関係が見いだされるとともに,それぞれとレピュテーションとの関係についても有意な結果をえた。したがって,こういった結果から監査人のレピュテーションを構築する要因として,監査報酬や監査法人の専門性が影響している点を明らかにした。以上の調査結果を,アメリカ会計学会において報告した。
酸化ケイ素材ビスマス(BSO)光屈折結晶の電気的評価に対する研究

本研究は、酸化ケイ素ビスマス(BSO)の光屈折性と電気的特性との相互関係を明らかにすることを目的とする。得られた主要な成果は、以下の通りである。1.光屈折性の評価;(1)光位相共役波強度の干渉縞間隔依存性、コントラスト依存性、光量依存性の測定から、BSOの光屈折性は、基本的に、禁制帯中にアクセプタとドナ-の2準位を含む伝導帯伝導モデルで説明できることを示した。(2)最大回折効率を与える干渉縞間隔から、光屈折に関与するアクセプタ密度を決定する方法を提案した。(3)旋光性を考慮した位相共役波の理論計算より、最大回折効率は、空間静電界が〈001〉方向となる結晶配置で得られることを示した。(4)ランニングホログラムによる2光波混合の増幅率の測定から、(ドナ-密度)・(光イオン化断面積)の値を決定した。(5)ドリフト領域と拡散領域では、応答速度のアクセプタ密度依存性が異なることを示した。2.電気的特性の評価;(1)定常光電流、過渡光電流の測定から、キャリアの移動度・拡散距離、アクセプタ密度等の基本物性を求め、これらが、光屈折性の測定結果とよく一致することを示した。(2)熱刺激電流(TSC)の測定により、6個の比較的浅い不純物準位を検出するとともに、それらの光屈折性に与える影響を実験的に示した。(3)外部電界印加時に発生する空間電荷量の測定法として、光誘起緩和電流を測定する方法を新たに提案した。また、以上の結果から、(4)簡単な電気的特性の測定のみで、光屈折性の評価が可能となることを示した。3.光情報記憶材料としての評価;多重画像記録の解像角度、クロスト-クに関する理論的、実験的検討から、最小解像角度、最大記憶容量等、BSO結晶の光情報記憶材料としての性能を明らかにした。1.準静的状態における光屈折性の評価(1)位相共役波強度の干渉縞間隔依存性、コントラスト依存性、光量依存性など、BSOの基本的な光学的特性は、禁制帯中にアクセプタとドナーの2準位を含む伝導帯伝導モデルで定量的によく説明できることを示した。(2)最大回折効率を与える干渉縞間隔から光屈折性に関与するアクセプタ密度を決定する方法を提案し、これから、アンドープ結晶では、約1-3×10^<15>cm^<-3>のアクセプタ準位が存在することを明らかにした。(3)旋光性を考慮した位相共役波強度の計算機シミュレーション法を開発し、位相共役波発生効率のBSO厚さ依存性は結晶方位により全く異なり、空間静電界が<001>方向となる配置が最良であることを示した。2.空間静電界形成のダイナミクスの解明(1)書き込み時・消却時の位相共役波の過渡応答においても、伝導帯伝導モデルが成立することを示すとともに、ドリフト領域では、結晶による応答速度の差異は小さいが、拡散領域においてはアクセプタ密度が大きい程、応答速度が速くなり得ることを明らかにした。(2)ランニングホログラムによる2光波混合の光増幅率の測定から、(ドナー密度)・(光イオン化断面積)が決定された。3.電気的特性の評価(1)定常光電流、過渡光電流等の電気的特性測定から、BSO結晶の基本的物性定数を決定した。

この方法により求めたアンドープ結晶の移動度・拡散距離は、それぞれ、0.015-0.04cm^2/V・S、2.3-2.7μmの範囲にあり、光学的特性とよく一致することを明らかにした。(2)光電流、光刺激電流のスペクトル特性から、ドナーのエネルギーの準位、光イオン化断面積に関する新たな知見を得た。(3)干渉縞形成時の定常光電流からアクセプタ密度を決定する方法を提案し、簡単な電気的特性の測定のみで、回折効率・応答速度等の光学的特性が評価可能となることを示した。本研究は、酸化ケイ素ビスマス(BSO)の光屈折性と電気的特性との関係を明らかにし、光学的特性の優れた高品質なBSOを成長するための基礎デ-タを得ることを目的とする。昨年度は、準静的状態における光屈折性の評価および空間静電界形成のダイナミクスに関する理論的・実験的検討を行い、光学的特性と電気的特性の相互関係を明らかにした。本年度は、これらの成果を基礎として、以下の研究成果を得た。1.不純物準位の検出とその光屈折性に及ぼす影響の解明;熱刺激電流(TSC)の測定により、新たに6個の深い不純物準位(E_1E_6)を検出し、それらの活性化エネルギ-、捕獲断面積等の動的パラメ-タ値を決定した。これらの値ら、トラップE_4E_6の室温における放出時定数は、3.1x10^<-1>3.8x10^3sにも達し、コントラストの低下、熱的消去速度の増大など、結晶の光屈折性に大きな影響を与えていることが判明した。2.外部静電界による空間電荷密度分布の決定;電界印加時に発生する空間電荷量の測定法として、均一光照射下における光誘起緩和電流を測定する方法を提案し、電極近傍には、厚さ0.10.2mmの空間電荷層が形成されること、また、結晶内部の静電界は、平均印加電界の8570%までに減少することを明らかにした。3.材料物性定数の評価;(1)光キャリア密度、移動度、再結合時定数の温度依存性が見かけ上、ある温度で不連続となることを示すとともに、これは、2段階過程によるキャリアの捕獲により説明可能となることを示した。(2)光電流の測定から拡散長を決定し、これと光位相共約波の発生効率・応答速度との関係を明らかにした。4.画像記録材料としての評価;多重画像記録時のクロスト-クに関する理論的・実験的検討から、解像角度は約0.5mradとなることを示した。
児童の関係性攻撃観についての研究－攻撃行動の形成・生起・維持メカニズムの検討－

関係性攻撃の生起と心理社会的適応に対する児童の関係性攻撃の捉え方の関連を検討するため,児童46年生を対象に複数の質問紙調査を実施し,主に以下の点を明らかにした。(1)関係性攻撃の生起にかかわる児童の情報処理過程を解明するため,加害者の意図が曖昧な被害を受ける架空のエピソードを提示し,各場面について,相手への反応行動の選択肢を自由記述させる調査や,提示された反応行動を評価させる調査を実施した。そして,児童の関係性攻撃の捉え方である関係性攻撃観が,情報処理過程を歪め,反応行動を攻撃的なものに偏らせるかどうか検証された。その結果,関係性攻撃観の中でも,報復的な関係性攻撃を許容する「正当化」が,被害を受けた際の反応行動として攻撃行動を肯定的に評価するように情報処理過程を歪めさせ,結果として攻撃行動の表出に関連することが示唆された。(2)関係性攻撃観と攻撃行動,心理社会的適応の関連を検討するため,関係性攻撃観尺度,攻撃行動(外顕的攻撃と関係性攻撃),仲間からの承認と被侵害,抑うつ,不安,関係性攻撃経験が測定された。その結果,関係性攻撃の加害経験のある児童は,攻撃行動の実行の有無にかかわらず,仲間からの承認が低く,被侵害が高いことが明らかになった。一方で,関係性攻撃の傍観者や未経験の児童,被害経験のみ児童においては,関係性攻撃観の中でも関係性攻撃を高頻度に生じるものと捉える「身近さ」が高いと,実際に関係性攻撃に従事し,その結果,仲間からの承認を低め,被侵害を高める可能性が示唆された。また,不安・抑うつなどの心理的不適応に関しては,加害や被害などの経験によらず,攻撃行動に従事することが心理的不適応に関連することが示された。以上の結果から,関係性攻撃行動の促進や抑制に関連する関係性攻撃観は,児童の心理社会的適応にかかわる重要な要因であることが明らかになった。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では,無視,仲間外れ,陰口などの関係性攻撃に対する認識と,実際の攻撃行動の生起過程との関連について検討した。具体的には,加害者の意図が曖昧な関係性攻撃被害を経験するという架空のエピソードを提示し,各場面について,加害者の意図判断などの社会的情報処理,加害者に対する応答的行動が質問紙調査によって測定された。なお,関係性攻撃への認識を測定する関係性攻撃観尺度(28項目)は,「否定的認識」,「身近さ」,「正当化」,「利便性」の4下位尺度から構成された(α=. 68. 80)。まず,小学生200名程度を対象に関係性攻撃観と加害者の意図を敵意的に捉える傾向である敵意帰属バイアスの関連が検討された。その結果,関係性攻撃観尺度の4下位尺度得点のいずれとも敵意帰属バイアスの関連はみられなかった。次に,小学生200名程度を対象に関係性攻撃観と,関係性攻撃被害を受けてからの目標の明確化の情報処理過程,応答的行動の関連を共分散構造分析によって検討した。目標の明確化では,自分の不快感を率直に伝えることや加害者の行動についての説明を求めることを重視する「主張的目標」と,加害者との関係を継続することを重視する「関係維持目標」が測定された。その結果,関係性攻撃観の「正当化」が,「関係維持目標」との負の関連を介し,「関係性攻撃」と正の関連を示すことが明らかになった。さらに,「正当化」と「関係維持目標」の負の関連を介し,「主張的行動」と負の関連を示すことも明らかになった。つまり,関係性攻撃について報復を許容する認識を持っていることが,実際の攻撃行動の生起に至るプロセスには,相手との関係の継続を重視する傾向の低さが関わっている可能性が示唆された。本研究の実施によって,小学生が関係性攻撃について元々抱いていた認識が,実際の社会的相互作用場面での認知処理過程を歪め,攻撃行動や社会的に有能でない行動を表出させる可能性が示唆された。

一方で,関係性攻撃の傍観者や未経験の児童,被害経験のみ児童においては,関係性攻撃観の中でも関係性攻撃を高頻度に生じるものと捉える「身近さ」が高いと,実際に関係性攻撃に従事し,その結果,仲間からの承認を低め,被侵害を高める可能性が示唆された。また,不安・抑うつなどの心理的不適応に関しては,加害や被害などの経験によらず,攻撃行動に従事することが心理的不適応に関連することが示された。以上の結果から,関係性攻撃行動の促進や抑制に関連する関係性攻撃観は,児童の心理社会的適応にかかわる重要な要因であることが明らかになった。26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の当初の目標では,関係性攻撃の形成要因として,両親の関係性攻撃に対する認識を検討する予定であった。しかし,両親を対象に含めた質問紙調査の実施を,小学校を通して依頼することが,非常に困難であった。そのため,研究計画はやや遅れていると評価される。やや遅れている両親を対象にした研究の実施については,小学生からみた両親の行動という観点から捉えることに変更する。実際の両親を対象にする訳ではなく,小学生の認知した両親の行動という限定はつくが,これによって,小学校への調査依頼が実現可能な研究計画になると期待できる。また,社会的情報処理モデルに則った本年度の研究成果を整理し,関係性攻撃の低減に寄与できる知見についての提言を行う。
ジェイムズ・ステュアートの信用制度論

本研究は、重商主義的貨幣信用論を体系的に総括したジェイムズ・ステュアートの信用制度論を検討し、その理論的核をなす土地担保発券銀行論の特質について、国際的な資金の流通を重視する今日的な問題関心から考察したものである。従来のステュアート研究においては、ステュアートの土地担保発券銀行論は、貨幣と土地とを同一視する重金主義的な見地に立つ理論として低く評価されてきた。けれどもステュアートが担保としての土地を重視したのは、土地が長期的な資金の運用手段として役立つことを認識しつつ、それが国際的な資金の流通において重要な役割を果たすことを理解していたからだと考えられる。たとえば、国内で貨幣が過剰に発行された場合に、土地が過剰な貨幣の長期的な投資対象として役立てば、過剰な貨幣は国内で吸収されることになる。かりに国内にそのような投資対象がなければ、過剰な貨幣は投資対象を求め鋳貨として国外に流出し、国内流通の規模が収縮して国内産業に打撃を与えることにもなろう。また、貿易赤字によって対外支払いが増大する時に、国内の土地を担保にして外国から長期資金を調達することができれば、対外支払いによる国内流通の収縮を避けることが可能である。このようにステュアートは、資金が急激に国外に流出するととによって国内流通にもたらされる破壊的作用を重視しつつ、国内からも国外からも長期的な資金をひきつけうる国内的機構が存在することによって初めて、国内流通の相対的な独立性が確保されうるという点を明らかにしているわけである。本研究は、以上のようなステュアート土地担保発券銀行論の今日的意義を解明したものである。本研究は、信用制度の歴史的多様性を重視する観点から、ステュアートの信用制度論の学説史的および理論的特質を解明しようとするものである。初年度にあたる今年度は、ステュアート信用制度論の基本的骨格を明らかにすることに力を注いだ。その手掛かりとして、ステュアートが、発展した市場社会では商業的信用がうまく機能するのに対してこれから発展すべき社会ではそうではないとみなしたのはなぜか、という問題に焦点を当てつつ考究を行った。今年度の研究を通じて明らかになったのは、次の点である。ポイントは、ステュアートの目指したものが、現金として機能する紙幣の創造であったという点にある。紙幣が現金として流通するためには、それに対する公衆の信用がなければならないが、この信用は返済期限の規定されていない信用、すなわち事実上それは長期の信用である。ステュアートにおいてその信用を支えるのが、担保の土地であった。つまりステュアートは、紙幣が現金として授受されるためには、それが富によって基礎づけられていなければならないと捉えていたわけである。それに対してイングランドのような発展した市場社会では、すでに現金としての貨幣は、金ストックとして豊富に存在する。現金が豊富に存在するのであれば、それに基づいて商業的信用のような短期の信用が授受されることに支障はない。こうしてステュアートの信用制度論は、長期の信用に基づくことによってはじめて成立する貨幣制度と、安定した貨幣制度に基づくことによってはじめて機能しうる金融制度とを区分しつつ、貨幣制度を支える長期の信用をどう構築するかという点について立ち入って考察したものだったのである。以上の研究成果をふまえ、次年度は、貨幣制度と金融制度との多様な関連をステュアートがどのように理解していたかという点についてさらに考察を進めていきたい。
条件付き遺伝子欠損マウスを用いた赤血球分化におけるアナモルシンの役割の解析

前年は適時にAMを欠損させ赤血球造血への影響を調べるコンディショナルノックアウトマウスモデルを確立し、AMの欠損により、赤血球分化が阻害されアポトーシスが亢進し貧血を呈することを見出した。本年は主にAMの細胞内での作用機序について分子生物学的な検討を行った。細胞内鉄制御においてIRP1は、鉄硫黄クラスターを保持しアコニターゼ活性を持ち、鉄欠乏時はIREへの結合能が増強しTf受容体の発現を誘導する。AMが鉄硫黄クラスターの生合成や細胞内鉄代謝、自由鉄の制御への関与を検討をするため、AMKOマウスとWTのそれぞれの胎仔肝から培養細胞を作製した。その結果、AM欠損株ではアコニターゼ活性が低下し、IRP1のIREへの結合能の増強が認められず、Tf受容体の誘導も認められなかった。また、細胞内の自由鉄はAM欠損細胞では増加し、ROSの増加やアポトーシスの増加も見出した。これらのメカニズムに関与する因子を同定するためさらなる検討を行った。AMに結合する因子として以前当科ではPICOTを見出していた。培養細胞にAMとPICOTを共発現する系では、酸化ストレスによる細胞内鉄過剰状態では結合が増強、逆に鉄欠乏状態にすると結合の減弱を見出した。昨年度作製したレトロウイルスベクターを用いて、AMとPICOTの結合に対し上記モチーフ配列の関与について検討を行ない、metyl-transferaseモチーフ配列欠失によりPICOTとの結合が消失することを見出した。以上から、AMが細胞内における鉄制御に深く関与し、アポトーシスなどへ関与しているメカニズムを解明することができた。Mx-Cre Tg-AM Flox・FloxマウスにpIpCを投与することでAMを欠損させた骨髄細胞の野生型マウスへの移植モデルについても現在検討中であり、本年得られた知見を検討する準備をしている。本研究の中間の年であるが、前年コンディショナルノックアウトマウスで得られた知見を、細胞内での作用機序についてフォーカスし解析を進めることができた。これについては当初予想していたよりも大きく進展していると考えられる。一方、Mx-Cre Tg-AM Flox・FloxマウスにpIpCを投与することでAMを欠損させた骨髄細胞の野生型マウスへの移植モデルについても現在検討を行っており、研究計画はおおむね順調に進展していると考えられる。該当年度の研究により、細胞におけるAMの鉄硫黄クラスター生合成など鉄制御への重要性は示すことができたが、従来の抗アポトーシス分子と類似の構造を持たないためAMがどのような分子機序で作用しているかは依然不明である。本年示したPICOT以外の直接結合する因子やカスケードの因子などについて引き続き網羅的な遺伝子発現の変化などを追っていく予定である。また、AMを欠損させた骨髄細胞の移植モデルについても検討を進め、これらのモデルでの造血再構築などの表現型の詳細な解析や、その際に今まで明らかにしてきた因子の変化などを確認していく。これらのモデルにおいて明らかとなった因子について、当科で保存されている貧血を呈する臨床検体での検討を行い、ヒト貧血疾患におけるAMの関与についても明らかにし、新たな診断や治療への可能性を探るものである。申請者らが抗アポトーシス分子として単離したアナモルシン(Anamorsin,AM)は既知の抗アポトーシスと類似の構造を持たない分子である。AM欠損マウスは胎仔肝における二次造血不全により著しい貧血から胎生後期に致死となる。申請者らは赤芽球系細胞の中で、特に前赤芽球にAMが強く発現していることを見出し、急性の貧血など赤血球産生が亢進する状況下ではAMの発現が亢進することを見出してきた。本研究では条件付きAM欠損マウスを用いてAMを適時に欠損させることで、成体の赤血球分化におけるAMの役割の解明を目的とした。また、AM分子が有するmetyl-transferaseモチーフ配列及び鉄硫黄クラスターと結合するCXXCモチーフ配列の生物学的意義の解明も目指している。申請者らはAM Flox/FloxマウスとMX-Creトランスジェニックマウスを交配させ成体マウスでpIpC投与後にAMを欠損できるマウスを作製し、従来のAM KOマウスでは不可能であった成体赤血球分化におけるAMの役割解明を行った。pIpC処理により骨髄・脾臓の赤血球系細胞のAMの発現の低下を確認した。処理後3週程度でAMを欠損させたマウスは致死となり、重度の貧血を呈することを見出した。AM欠損処理によりコントロール群に比べ、骨髄や脾臓の細胞数は低下し前赤芽球分画の割合増加を認めた。また、AM欠損処理をした骨髄細胞や赤芽球系細胞ではアポトーシスの亢進を認めた。上記のように申請者らは、AMの欠損は成体マウスの赤血球造血において前赤芽球以降の赤血球分化を阻害し、アポトーシスの亢進をきたすことで最終的に重度の貧血から致死となることを見出し、AMが成体赤血球造血においても重要な役割を占めていることを明らかにした。本研究課題最初の年であるが、当初予定していた条件付きAM欠損マウスの解析については十分な表現型の観察のみならず、AM欠損によるアポトーシスの亢進など機序に至る地検まで見出すことができた。また、AMの細胞内での機能を解析するために、AMに見られるmetyl-transferaseモチーフ配列及び鉄硫黄クラスターと結合するCXXCモチーフ配列を欠損するAM変異体を組み込んだレトロウイルスベクターについても作製を予定していたが、これについては完了している。

以上の状況から、現在までの進捗上はおおむね良好であると考える。前年は適時にAMを欠損させ赤血球造血への影響を調べるコンディショナルノックアウトマウスモデルを確立し、AMの欠損により、赤血球分化が阻害されアポトーシスが亢進し貧血を呈することを見出した。本年は主にAMの細胞内での作用機序について分子生物学的な検討を行った。細胞内鉄制御においてIRP1は、鉄硫黄クラスターを保持しアコニターゼ活性を持ち、鉄欠乏時はIREへの結合能が増強しTf受容体の発現を誘導する。AMが鉄硫黄クラスターの生合成や細胞内鉄代謝、自由鉄の制御への関与を検討をするため、AMKOマウスとWTのそれぞれの胎仔肝から培養細胞を作製した。その結果、AM欠損株ではアコニターゼ活性が低下し、IRP1のIREへの結合能の増強が認められず、Tf受容体の誘導も認められなかった。また、細胞内の自由鉄はAM欠損細胞では増加し、ROSの増加やアポトーシスの増加も見出した。これらのメカニズムに関与する因子を同定するためさらなる検討を行った。AMに結合する因子として以前当科ではPICOTを見出していた。培養細胞にAMとPICOTを共発現する系では、酸化ストレスによる細胞内鉄過剰状態では結合が増強、逆に鉄欠乏状態にすると結合の減弱を見出した。昨年度作製したレトロウイルスベクターを用いて、AMとPICOTの結合に対し上記モチーフ配列の関与について検討を行ない、metyl-transferaseモチーフ配列欠失によりPICOTとの結合が消失することを見出した。以上から、AMが細胞内における鉄制御に深く関与し、アポトーシスなどへ関与しているメカニズムを解明することができた。Mx-Cre Tg-AM Flox・FloxマウスにpIpCを投与することでAMを欠損させた骨髄細胞の野生型マウスへの移植モデルについても現在検討中であり、本年得られた知見を検討する準備をしている。本研究の中間の年であるが、前年コンディショナルノックアウトマウスで得られた知見を、細胞内での作用機序についてフォーカスし解析を進めることができた。これについては当初予想していたよりも大きく進展していると考えられる。一方、Mx-Cre Tg-AM Flox・FloxマウスにpIpCを投与することでAMを欠損させた骨髄細胞の野生型マウスへの移植モデルについても現在検討を行っており、研究計画はおおむね順調に進展していると考えられる。該当年度の研究により、AMの成体赤血球造血における関与を明らかにすることができたが、従来の抗アポトーシス分子と類似の構造を持たないためAMがどのような分子機序で作用しているかは依然不明である。また、AMの分子生物学的な作用点として重要な部位となると考えられるmetyl-transferaseモチーフ配列及び鉄硫黄クラスターと結合するCXXCモチーフ配列についても、同配列を欠損したレトロウイルスベクターをAM KOマウス胎仔肝から調整した細胞へ遺伝子導入した後にコロニーアッセイなどを行い同配列の有無による細胞増殖や分化への影響を検討していく予定としている。申請者らは血液内科診療をするにあたり様々に貧血を呈する臨床検体を有している。
細胞キメラ利用による栄養繁殖性ネギ類の育種

本研究の目的は,細胞キメラ利用によるワケギの育種の可能性を検討することである.ワケギ及びネギの細胞キメラ(4-2-2,2-4-4)及び倍数体(2倍体,4倍体)を植物材料とし,以下の事項について検討した.1)細胞当たりの仁の数による倍数性検定法,2)細胞キメラ体の増殖とキメラ性の安定性,3)気孔特性,4)生育特性,5)光合成特性.1.ネギの細胞キメラ体及び倍数体では,ネギのL1及びL2の倍数性は,それぞれ孔辺細胞及び葉肉細胞当たりの仁の最大数で検定できた.ワケギのL1及びL2の倍数性も,それぞれ孔辺細胞及び葉肉細胞当たりの仁の最大数または最頻値によって決定できた.2.コルヒチン処理当代のキメラ性は,圃場条件下での増殖時に激しく変化した.しかし,育成後3年を経過した4-2-2及び2-4-4のキメラ体は安定的であった.0.11.0ppm BA+0.5ppm NAA添加の寒天培地で,キメラ性は大きく変化した.しかし,00.125ppm BA添加培地で,キメラ性の変化はなかった.3.4-2-2及び4倍体は,2倍体及び2-4-4より有意に低い気孔密度と大きい気孔を有していた.4倍体及び4-2-2の単位葉面積当たりの気孔面積は,2倍体及び2-4-4より大きかった.4.秋季には2-4-4の収量が高く,冬季には4-2-2の収量が増加した.5.圃場条件下で,4倍体及び4-2-2の気孔伝導度,蒸散速度及び光合成速度は,2倍体及び2-4-4より高くな高くなった.以上の結果より,秋季における2-4-4の多収性は,高い耐乾性によるものであり,また冬季における4-2-2の多収性は,高い光合成能力によってもたらされたものと推察される.したがって,ワケギの育種は,細胞キメラを利用することによって促進するであろう.本研究の目的は,細胞キメラ利用によるワケギの育種の可能性を検討することである.ワケギ及びネギの細胞キメラ(4-2-2,2-4-4)及び倍数体(2倍体,4倍体)を植物材料とし,以下の事項について検討した.1)細胞当たりの仁の数による倍数性検定法,2)細胞キメラ体の増殖とキメラ性の安定性,3)気孔特性,4)生育特性,5)光合成特性.1.ネギの細胞キメラ体及び倍数体では,ネギのL1及びL2の倍数性は,それぞれ孔辺細胞及び葉肉細胞当たりの仁の最大数で検定できた.ワケギのL1及びL2の倍数性も,それぞれ孔辺細胞及び葉肉細胞当たりの仁の最大数または最頻値によって決定できた.2.コルヒチン処理当代のキメラ性は,圃場条件下での増殖時に激しく変化した.しかし,育成後3年を経過した4-2-2及び2-4-4のキメラ体は安定的であった.0.11.0ppm BA+0.5ppm NAA添加の寒天培地で,キメラ性は大きく変化した.しかし,00.125ppm BA添加培地で,キメラ性の変化はなかった.3.4-2-2及び4倍体は,2倍体及び2-4-4より有意に低い気孔密度と大きい気孔を有していた.4倍体及び4-2-2の単位葉面積当たりの気孔面積は,2倍体及び2-4-4より大きかった.4.秋季には2-4-4の収量が高く,冬季には4-2-2の収量が増加した.5.圃場条件下で,4倍体及び4-2-2の気孔伝導度,蒸散速度及び光合成速度は,2倍体及び2-4-4より高くな高くなった.以上の結果より,秋季における2-4-4の多収性は,高い耐乾性によるものであり,また冬季における4-2-2の多収性は,高い光合成能力によってもたらされたものと推察される.したがって,ワケギの育種は,細胞キメラを利用することによって促進するであろう.植物の各起源層(L_1:表皮、L_2:葉肉細胞、花粉、L_3:根)における倍数性は、それぞれ気孔サイズ(L_1)、花粉サイズ(L_2)および根端細胞の染色体数(L_3)によって同定されている。これらの起源層のうち、L_2の倍数性は花粉サイズよって検定されているため、難開花性または不稔性作物では分析が不可能である。そのため、ネギおよびワケギのL_2の倍般性を葉肉細胞の仁の頻度分析によって同定することを検討した。1)2倍性の葉肉細胞において、仁1個を有する細胞の割合は約99%であり、4倍性ワケギでは、仁1個および2個の割合は、それぞれ約30%および70%であった。2)2倍性ネギの葉肉細胞で、仁1および2個の細胞の割合は、それぞれ約40%および約60%であった。4倍性ネギの葉肉細胞で、1ー4個の仁の割合は、それぞれ約4、30、40および20%であった。3)ネギの葉肉細胞における仁の頻度によるL_2の倍数性分類は、花粉サイズによる分類と完全に一致した。したがって、葉肉細胞の仁の数によるLの倍数性分類法は有効であった。

仁の頻度によるL_2の倍数性分類法によって検出したワケギの細胞キメラ、4ー2ー2Xおよび2ー4ー4Xの生育特性を2倍体および4倍体と比較した。1)4ー2ー2Xは、2倍体と比較し、草丈高く、葉数は多く、収量は有意に増加した。2)4ー2ー2Xの結球は、2倍体より早まった。キメラ植物の乾物生産および光合成特性を調査した。1)22°Cおよび32°C条件下で、4ー2ー2Xの生育初期から中期にかけての全乾物重、相対成長率および純同化率は、2倍体より高かった。2)25°C条件下で、光合成速度、蒸散速度および気孔伝導度は、2倍体および2ー4ー4Xより4ー2ー2Xおよび4倍体において有意に高かった。以上のことから、4ー2ー2Xにおける収量の増加は、、4ー2ー2Xにおける個葉の光合成能の増大に起因することがわかった。本研究は,細胞キメラ利用による栄養繁殖性ネギ類,特にワケギの育種の可能性について検討したものである.1.仁の数による第2起源層(L_2)の倍数性検定法.葉肉細胞の仁の数によるワケギのL_2の倍数性検定法を検討した.2倍体の孔辺細胞,1cm部の根部細胞及び葉肉細胞は,ほとんどが仁1個のみを有していた.一方,4倍体の孔辺細胞,根部細胞及び葉肉細胞では,仁2個を有する細胞の割合が,それぞれ約80%,44%及び66%であった.さらに,仁の数のよって検定したネギの細胞キメラ(4-2-2,2-4-4)のL_2の倍数性は,花粉粒サイズで判定したL_2の倍数性と完全に一致した.2.細胞キメラワケギの生育特性.2倍体,4倍体,4-2-2及び2-4-4を,自然短日,13時間,14時間日長下で栽培し,生育特性を比較した.4-2-2の分げつ数及び葉数は最も多く,草丈は4倍体及び2-4-4に次いで高かった.さらに,4-2-2の球肥大は2倍体より早まった.3.細胞キメラワケギの増殖とキメラ性の安定性.In vivo条件下で増殖したコルヒチン処理当代のキメラ植物のキメラ性は変化した.しかし,3年生の4-2-2,2-4-4のキメラ性は変化しなかった.In vitroで3年生の4-2-2,2-4-4を増殖すると,0.125ppm BA以下でキメラ性の変化はなかった.しかし,0.25ppm BA以上のキメラ性は変化した.さらに0.5ppm BA+0.11ppm NAAで,キメラ性は著しく変化した.4.乾物生産特性.2倍体,4倍体,4-2-2,2-4-4の乾物生産特性を調査した.全乾物量は4-2-2で最も高かった.N AR,R GR,CGRは調査日によって変動したが,2月22日2月27日間に4-2-2において最も高い値を示した.L AI,L AR,LWRも4-2-2において,いずれの調査日でも高い値を示した.したがって,4-2-2は冬・春季において,最も高い乾物生産性を示した.キメラ植物の光合成特性については,調査中である.
ストレスの皮膚免疫系に及ぼす遺伝学的変化の解析

ストレスは炎症性疾患を増悪させるといわれているが、そのメカニズムはよくわかっていない。そこで、慢性的精神的ストレスとして長期にわたる単独隔離をBALB/c雄マウスに施し、接触皮膚炎(CS)、ランゲルハンス細胞(LC)やケラチノサイト(KC)の機能や細胞表面分子発現に及ぼす影響を解析した。その結果、慢性ストレスによってCS発現やLCの抗原提示能は顕著に増幅される一方、KCの抗原提示能、IL-1α及びTNF-α(炎症性サイトカイン)の産生能、増殖能は顕著に抑制されることが判明した。そこで、ストレス負荷マウスのKCのRNAを抽出し、RT-PCR法でMrna発現解析を行った。予備テストとして一次刺激物質フェノールと接触感作原トリニトロクロルベンゼン(TNCB)塗布によるMrna発現を調べた所、前者では接着分子ICAM-1のMrnaの発現のみが誘導されたが、後者では、ICAM-1、E-cadherin(接着分子)、トランスグルタミネース(分子マーカー)、c-fosおよびc-myc(癌原遺伝子)、コーチゾン刺激ホルモン放出ホルモンおよびサブスタンスPのレセプター(神経伝達物質関連)、IL-1αおよびTNF-α関連のMrna発現が顕著に増大した。慢性ストレスによってこれらの遺伝子発現は一過性に増大した。さらに慢性ストレス負荷マウスにTNCBを塗布し、Mrnaの発現を解析した所、トランスグルタミネースおよびサブスタンスPのレセプターのMrna発現のみが増強され、その他の遺伝子の発現は対照よりも低下していた。これらの結果は、慢性ストレスによってLCの機能が活性化される一方、KCの分化異常が亢進し、サイトカイン産生能などの諸機能を失うこと、そして、これらの諸変化が皮膚局所へのサブスタンスPの放出によって引き起こされている可能性を示唆している。ストレスは炎症性疾患を増悪させるといわれている。そこで慢性的精神的ストレスがランゲルハンス細胞(LC)やケラチノサイト(KC)の機能や細胞表面分子発現に及ぼす影響を検討した。BALB/c雄マウスに単独隔離ストレスを負荷し、経時的にハプテンをでアレルギ一性接触皮膚炎(CS)を誘導した結果、隔離開始直後には抑制されたが、その後隔離30日目がピークとなる顕著な増強がみられた。FITC塗布後のリンパ節へLCの流入をFITC量やIa発現でみた場合、正常マウスにトランスファーしCS誘導能(抗原提示能)を調べた場合ともに、CSの発現とパラレルなパターンになった。一方、KCは全く逆のパターンを示した。すなわちハプテン塗布後に活性化されるKCの抗原提示能は、隔離初期には増大し、隔離期間の延長とともに顕著に低下した。隔離期間の延長に伴ってハプテン塗布後のmRNAおよびサイト力インレベルでのIL-1αおよびTNF-αの産生が低下した。ハプテン塗布後のICAM-1およびE-selectinなとの接着分子やCD40,Fas、TNFRp55などの発現は、隔離期間の延長とともに顕著に増大した。しかし、LCの皮膚局所への補充に主要な役割をはたすKC上のE-カドヘリン発現が時間経過とともに減少していた。隔離によってKCの増殖性が顕著に低下し、分化が高進している可能性が示された。以上の結果は、単独隔離ストレスによってCS発現が増強され、LCは活性化される一方、KCはむしろ分化が促進され、正常な機能を失うことが判明した。このことはストレス負荷によるLCの機能高進が、KCの接着分子発現やサイトカイン産生高進によるのではなく、神経ペプチドなど他のメディエイターの関与による可能性を示している。

平成10年度は慢性的精神的ストレスである単独隔離ストレスをBALB/c雄マウスに負荷し、接触皮膚炎(CS)、ランゲルハンス細胞(LC)やケラチノサイト(KC)の機能や細胞表面分子発現に及ぼす影響を解析した。平成11年度は、KCの遺伝子発現に及ぼす慢性ストレスの影響を、RT-PCR法で解析した。予備テストとして一次刺激物質フェノールと接触感作原トリニトロクロルベンゼン(TNCB)塗布によるmRNA発現変化を調べた所、前者では接着分子ICAM-1のmRNAの発現のみが誘導されたが、後者では、ICAM-1、E-cadherin(接着分子)、トランスグルタミネース(分化マーカー)、c-fosおよびc-myc(癌原遺伝子)、コーチゾン刺激ホルモン放出ホルモンおよびサブスタンスPのレセプター(神経伝達物質関連)、IL-1αおよびTNF-α(炎症性サイトカイン)関連のmRNA発現が顕著に増大した。単独隔離によってこれらの遺伝子発現は一過性に増大した。さらに単独隔離マウスにTNCBを塗布し、各遺伝子のmRNA発現のピーク時にRNAを抽出し、発現解析した所、慢性期にはトランスグルタミネースおよびサブスタンスPのレセプターのmRNA発現のみが増強され、その他の遺伝子の発現は対照よりも低下していた。これらの結果は、慢性的なストレスによってKCの分化が亢進し、サイトカイン産生能などの機能を失うことを示唆している。また、これらの諸変化は、単独隔離ストレスによって皮膚局所ヘサブスタンスPが放出されることによって引き起こされている可能性を示している。