hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
玉虫厨子透彫り文様にいたる東アジア動植物モティーフ融合文様形成過程の研究

墓誌・墓誌蓋は、特に六朝時代のものを中心としてモティーフ系統分類は容易ではない。次の研究段階としては、墓誌文様のモティーフ系統分類とともに、各作例に対する造形的分析[装飾空間分析(空間分割構成法・文様配置法)および個別文様分析(文様要素・単位文様・複合文様)]を行い、本研究課題である動植物モティーフ文様の造形的な融合プロセスを解明していく。本年度は<西安碑林博物館>所蔵碑誌および石彫の彫飾文様作例のなかに動植物系モティーフの融合プロセスを見いだすことを第一の課題とした。昨年度3回の実地調査に続き、今年度は2007.8.98.19と2008.2.172.24の2度、碑林博物館での実地調査を行った。8月調査では、碑側文様のある碑石30石の画像データを収集し、その空間分割法と文様構造の分析をおこなった結果、造形的モティーフ系統として、(1)動物モティーフ系統3石、(2)抽象化モティーフ系統((1)が抽象化されたもの)4石、(3)過渡的植物モティーフ系統((2)から(4)への過渡的なもの)2石、(4)植物モティーフ系統21石に弁別することができた。また文様の構造分析により単位文様の構造展開を跡づけると、(2)から(3)への作例展開は李愍碑(649)→道因法師碑(658)→智該法師碑(639)→道徳寺碑(658)となり、7世紀半ばが抽象化モティーフ系統から植物モティーフ系文様への転換期であったことが明らかになった。これについては2007.10.24に碑林博物館で開催された国際学術研討会議において発表した。また石刻芸術陳列室に展示される<唐李寿墓(630)>の調査において、<墓門>の左右柱側面と地覆石に抽象化モティーフ系統、左右柱正面に過渡的植物モティーフ系統の文様を見いだすことができたが、これらはこれまで日本には紹介されていないものである。2月の調査では、碑石の実測図を作成し、同時に〓首の画像データを収集した。これまで碑石の実測は実施されたことなく、〓首の形式も未編年であるが、文様研究としては?首に彫られた龍の体表装飾が重要な意味を持つ。龍文様から雲気文が形成される過程は、従来の研究でいまだ十分に明らかにされていないが、龍の体飾文様は龍にからまる雲を文様化したものと考えてよく、これら体飾文様を分析することで、雲気文の形成および動物モティーフ系文様が抽象化される過程を明らかにすることができる。この点については報告書に記載する。
サルコペニア（老化に伴う筋萎縮）の機構解明ならびにその治療戦略の確立

サルコペニアの骨髄幹細胞ならびに運動への効果を検証する為、老化促進マウス(SAMP10)8週齢に野生型マウスの骨髄を移植し、対照(非移植)と運動介入(25週齢より)、非介入の2群を作成し、運動耐用能、40週齢で筋肉重量、組織生化学的解析を実施した。本研究により、骨髄由来幹細胞の一部は骨格筋に分化することが明らかとなった。SAMP10におけるサルコペニアの一部は骨髄を野生型に置換することにより、改善させることができ、サルコペニアの原因の一部は骨髄細胞の老化が関連している可能性が示唆された。運動介入は筋タンパク分解系を抑制し、ミトコンドリアを活性化し、サルコペニアを予防できる可能性が示唆された。Atrogin-1、MuRF1、Fox01およびFox03のいずれもHMBを添加していないものに比べHMBを添加したものではその遺伝子発現(real time RT-PCR法)が有意に減少したが、LY294002で処理したものではいずれも有意な差が認められなかった。マウス・サルコペニアのモデル構築のため後肢懸垂モデルを使用し、HMB0.25g/kgを連日投与摂食させることで2週間の後肢懸垂により誘導される下肢の萎縮への効果を検討した。このモデルでは確かに下肢の筋肉萎縮は誘導されるが、それ以上に体重自体が著しく減少し、さらにHMB投与の効果も認められなかった。後肢懸垂マウスによるサルコペニアモデルの確立を断念し、Senescence-Accelerated Mouse(SAM)P10を使用したモデルの構築を目指した。SAMP1012月齢での下腿の筋肉量を検討したところ、SAMR1(老化抵抗系)と比較し、明らかに下肢筋肉量の低下ならびに組織的に筋肉繊維の萎縮を認めたためにそれ以降SAMP10を実験に使用した。SAMP10ならびにSAMR1を両マウス2群に分割し、運動介入群と対象を作り比較検討した。運動群は5月齢(21週齢)に運動を開始、5月間運動を継続し10月齢(42週齢)で筋肉を取り出し評価する。運動:週に3回(月、水、金)一回15m/min,45min(開始時さらに終了時5minは8m/minでウォームアップ・クールダウン時間を取り入れる)(合計で45min)Endurancestresstest(持久力テスト):運動開始時から一か月おきに実施。マウスをトレッドミルのラインにのせ、初めの5minはウォームアップとして8m/minで走らせ、その後2分ごとに1m/minづつスピードを上げ、マウスが最終的にトレッドミルの端っこにへたり込むまでの時間(分きざみ)を測定する。現在4か月間の介入が終了しているが、明らかにSAMP10ではR1に比較し運動持久力が低下し、SAMP10の運動介入群では持久力が回復している。来月下肢筋肉を採取し質的な評価を実施する。またサルコペニアへの骨髄細胞の影響を明らかにするため、9月歳のSAMP10マウスへの3月齢のC57BL/6の骨髄移植を実施した。全身投与ではなくSAMP10の脛骨内腔への移植を実施したところ、100%生存し、現在経過観察し、12月齢で組織評価を計画している。またこのモデルでは研究協力者の事前検討ではこの骨髄由来細胞はSAMP10マウスの骨格筋形成に少なからず関与することも明らかにされた。老化促進マウス(senescence-accelerated-prone mouse: SAMP10)8週齢に野生型(C57BL/6)の骨髄を移植し、対照(非移植)と運動介入(25週齢より)、非介入の2群を作成し、運動耐用能、40週齢で筋肉重量、組織生化学的解析を実施した。GFPマウスを使用した移植実験では骨髄移植群では骨髄由来細胞は下肢骨格筋細胞の20%前後を占め、特に運動介入群で有意にその割合が多かったが、移植群では対照群に比較し低体重であった。運動介入群では有意に持久力を認め、移植群ではより早期に運動介入の効果を認めた。移植群では運動介入群で有意に握力が強く、体重で補正した筋肉重量は腓腹筋、足底筋で移植群で高値であった。運動介入により骨格筋のタンパク分解に係るユビキチンリガーゼであるAtrogen, MuRFの発現が低下していた。また運動介入により下肢骨格筋におけるミトコンドリア量が著しく増加していた。

運動介入した群では非介入群に比較し、下肢骨格筋でAkt, ERK-1/2、mTOR、FoxO-1、FoxO-3のリン酸化、insulin receptor subtrate-1の発現、抗アポトーシスタンパク質であるBcl-2、Bcl-XLの発現が亢進していたが、逆にアポトーシス誘導に関連するcaspase-8, caspase-9の発現は低下していた。結論:骨髄由来幹細胞の一部は骨格筋に分化することが明らかとなった。SAMP10におけるサルコペニアの一部は骨髄を野生型に置換することにより、改善させることができ、サルコペニアの原因の一部は骨髄細胞の老化が関連している可能性が示唆された。また、運動介入は筋タンパク分解系を抑制し、ミトコンドリアを活性化し、サルコペニアを予防できる可能性が示唆された。Senescence-Accelerated Mouse (SAM)-SAMP10 8週齢へのGreen fluorescent protein (GFP)トランスジェニック・マウス(由来系統:C57BL6)の骨髄移植の実験より、末梢血のフローサイトメトリーの結果からはほぼ97%骨髄が入れ替わり、100%生存する系を確立した。非移植群、移植群とも25週齢40週齢までの運動介入群(週3日間の45分間のトレッドミル運動)、非運動介入群との比較、を実施した。40週齢における下腿筋肉組織ではGFPマウスの骨髄を移植した群では運動介入群で40-50%、非運動介入群で10-20%GFP陽性筋肉細胞を認めた。また、明らかに運動介入群において、非介入群と比較しトレッドミル試験における運動持久力は増強していた。さらに、移植、非移植群での比較は、移植群+運動介入群において運動持久力はもっとも顕著であった、これより、筋肉の再生には骨髄由来前駆細胞の役割が重要であることが明らかにされ、さらに老化過程において骨髄由来の筋芽細胞の数、活性が低下することがサルコペアニの一因である可能性が示唆された。なお、老化したSAMP10にGFPマウスの骨髄を移植する系も検討したが、放射線照射g@委嘱したとしても生存するマウスが極端に少なく、老化した後の移植が困難であることが判明した。当初老齢マウス(18月齢)を使用する計画であったが、外部からの入所が困難であり、当施設で長期飼育していたマウスが死滅したりして、計画が十分遂行できなかったが、老化促進マウス(SAMP10)の使用に切り替え、運動介入、骨髄移植の実施まで完了することができ、当初の予定に追いつけるものと思われる。25年度が最終年度であるため、記入しない。当初予定した実験計画は遂行できたが、今後の研究推進方策でも記載したが、当初の予定よりn数が若干少ない。これは骨髄移植は成功したものの実験途中で死亡したマウスが出現したためである。現在、既に追加実験を実施し、当初計画したn数以上のマウスを実験に使用中である。今後骨髄移植の下肢サルコペニアへの影響を、栄養(beta-Hydroxy-beta-Methylbutyrate)ならびに運動のコンビネーション効果を明らかにして行く。現在若年マウスの骨髄を老年SAMP10へ移植しているが、逆に老年SAMP10骨髄を若年野生型マウスに移植した時にサルコペニアを誘導するか否かも追加研究としたい。現在、それぞれのn数を増やすこと、さらに筋肉の組織・生化学的解析によりタンパク質、遺伝子解析を計画している。まず、現在GFPマウスの骨髄移植後、全てのプロトコールを終了したSAMP-10が合計8匹(運動介入群:n=5,非運動群:n=3)、非移植SAMP-10が合計10匹(運動介入群:n=5,非運動群:n=5)である。また現在野生型C57
マイクロ波照射による2相セラミックスの加熱

(1)アナターゼ型TiO_2またはγ-Al_2O_3を通常の電気炉で190分間各種温度に加熱して温度-相転移量の関係のグラフを作成した。アナターゼ型TiO_2は9301180°Cの範囲でルチル型TiO_2に相転移し、γ-Al_2O_3は10501400°Cでα-Al_2O_3に相転移した。(2)単一相(アナターゼ型TiO_2またはγ-Al_2O_3)のみの錠剤成形体をマイクロ波加熱し、セクショニング法により内部の相転移量を求めルチル型TiO_2またはα-Al_2O_3の分布図を作成した。さらに、(1)で作成したグラフから温度分布を推定した。アナターゼ型TiO_2についてはマイクロ波入射面から約1mm内側で一番ルチル量が多く、高温であり、その場所でマイクロ波の吸収も高かったことが判明した。一方、γ-Al_2O_3については、錠剤の中心で一番α-Al_2O_3が多く、高温となった。しかも、マイクロ波照射時間が590minの間、この温度分布の形はほぼ一定であった。これらの結果からアナターゼ型TiO_2とγ-Al_2O_3のマイクロ波加熱特性の違いが明らかとなった。この後、SiO_2とアナターゼ型TiO_2の混合物のマイクロ波加熱を行ったところ、TiO_2よりもSiO_2が多い組成(約80%SiO_2+約20%TiO_2)で、温度が非常に高く(16001800°C)なった。しかし、アナターゼ型TiO_2量が少なくてX線回折のピークが小さいこと、及び温度が高すぎて(1)の転移温度を完全に越えてしまったことなどのため、セクショニング法による温度推定実験ができなかった。(3)本研究の過程で、同一会社のアナターゼ型TiO_2でもロットによってマイクロ波に対する応答が違うことが分かった。したがって、今後不純物とマイクロ波加熱の関係についても検討しなければならない。
生体膜機能性複合糖脂質の合成

生体膜を構成するスフィンゴ糖脂質、グリセロ糖脂質、およびグリセロリン脂質は,いずれも天然から微量にしか得られないこと、および、通常それらの構成脂肪酸組成は単一でなく、かつそれらの分離が極めて困難なため、任意の種類と長さの脂肪酸残基を導入し得る一般性の高い合成法の開発は、複合糖脂質の生理的機能解明研究に重要である。本研究は、共通の光学活性合成素子を経由して、脂肪酸組成の単一なスフィンゴ糖脂質およびグリセロ糖脂質の一般性の高い合成法の開発を基盤とし、われわれが独自に考案した人工膜やヒト赤血球膜を用いたイオノフォア活性試験法により、本合成研究で得られる種々の複合糖脂質関連化合物および天然複合糖脂質の化学構造とイオン輸送に関わる生体膜機能活性との相関性を明らかにすることを目的としている。平成3年度に以下に示す研究成果を得た。(1)2ーブテンー1、4ージオ-ルを原料として、複合糖脂質合成の重要な素子である光学活性C4ーエポキシドを大量合成した。(2)光学活性C4ーエポキシドを出発物質とした、われわれのスフィンゴ糖脂質およびグリセロ糖脂質合成法を改良し確立した。(3)北海道産大豆から、2種のスフィンゴ糖脂質ソヤセレブロシドIおよびIIを分離し、それらの脂肪酸組成を含めた全化学構造を明らかにした。(4)ソヤセレブロシドIおよびIIの生体膜機能との関係を調べる目的で、人工透析膜を用いた液膜型の“イオン捕捉能・イオン輸送能"測定装置(Wー08)およびヒト赤血球膜を用いた“生体膜イオン透過能"測定法により、それらのナトリウム、カリウム、カルシウムイオンに対するイオノフォア活性を調べたところ、スフィンゴシン部の8位二重結合がZ型のソヤセレブロンドIIがカルシウムイオン捕捉能およびヒト赤血球膜内カルシウムイオン濃度上昇作用を示すことが明らかになった。
ガロアの逆問題とその数論への応用

1.研究代表者は本研究初年度の1999年に2回のワーク・ショップを開催,また翌年度に2回の研究集会に参画,それらの準備のもとで最終年度に国際研究集会「Galois Theory and Automorphic Forms」を開催した.現在その「報告集」を編纂しており,Kluwer Acad.Publ.から出版される.目的とするところは,古典的で,しかも多岐に展開された関連諸分野から本研究計画に密接にかかわるものを厳選し,その手法を含む情報を収集するとともに,我々の側の研究成果を発信することであった.本研究期間中にこれらの研究集会での招待講演者を含め,総勢14名の研究者を海外から招聘し,研究の実をあげた.2.特に研究代表者は,(1)二面体群に関するガロアの逆問題について奇数nを位数とする巡回群に対して1次分数変換を利用してただ1個のパラメータを持つ「生成的な多項式族」を簡明な形で提示し,さらに橋本喜一朗とともにこの方法を発展させて位数2n(nは奇数)の二面体群に対しても同様に簡明な生成的多項式族を与えた.(2)またn=3の場合の前項の多項式族を数論へ応用し,類数が3で割れる2次体およびその上の3次不分岐巡回拡大のすべてをパラメトライズする3次多項式の族を与えた.(3)数論における代数的方法と解析的方法の相互関連について,歴史的なアイデアの展開を中心にした総合報告を最終年度にまとめた.森田康夫の指導生椎名建仁はPSL_2(P^2)をガロア群に持つ有理数体上の1変数函数体のガロア拡大体の構成に成功した.また橋本喜一朗は正5角形上の二面体群に関して5有理数体上の2-パラメータの生成的多項式族を構成した.3.研究分担者総勢で研究期間中に73編の研究論文をまとめた.最新のもの10点(総計209ペイジ)を選ぴ,研究報告書に付録IIとして添付する.1.研究代表者は本研究初年度の1999年に2回のワーク・ショップを開催,また翌年度に2回の研究集会に参画,それらの準備のもとで最終年度に国際研究集会「Galois Theory and Automorphic Forms」を開催した.現在その「報告集」を編纂しており,Kluwer Acad.Publ.から出版される.目的とするところは,古典的で,しかも多岐に展開された関連諸分野から本研究計画に密接にかかわるものを厳選し,その手法を含む情報を収集するとともに,我々の側の研究成果を発信することであった.本研究期間中にこれらの研究集会での招待講演者を含め,総勢14名の研究者を海外から招聘し,研究の実をあげた.2.特に研究代表者は,(1)二面体群に関するガロアの逆問題について奇数nを位数とする巡回群に対して1次分数変換を利用してただ1個のパラメータを持つ「生成的な多項式族」を簡明な形で提示し,さらに橋本喜一朗とともにこの方法を発展させて位数2n(nは奇数)の二面体群に対しても同様に簡明な生成的多項式族を与えた.(2)またn=3の場合の前項の多項式族を数論へ応用し,類数が3で割れる2次体およびその上の3次不分岐巡回拡大のすべてをパラメトライズする3次多項式の族を与えた.(3)数論における代数的方法と解析的方法の相互関連について,歴史的なアイデアの展開を中心にした総合報告を最終年度にまとめた.森田康夫の指導生椎名建仁はPSL_2(P^2)をガロア群に持つ有理数体上の1変数函数体のガロア拡大体の構成に成功した.また橋本喜一朗は正5角形上の二面体群に関して5有理数体上の2-パラメータの生成的多項式族を構成した.3.研究分担者総勢で研究期間中に73編の研究論文をまとめた.最新のもの10点(総計209ペイジ)を選ぴ,研究報告書に付録IIとして添付する.1.本研究の初年度でもあり,2回のワーク・ショップを開催して,群論,ガロア理論,代数的教諭に関する情報を収集,整理した.特にカナダから招聘したA.Ledet博士(Queen's Univ.)により,Chr.Jensenによる「近藤予想」の簡明な解決手法が得られた.2.研究代表者は研究分担者の橋本喜一朗と共同して位数2n(nは奇数)の二面体群に対し,n分体の最大実部分体上で簡明な「生成的な」多項式の族を与えた.3.また,n=3の場合に,研究協力者の岸康弘と共同し,この多項式族を用いて2次体で類数が3で割れるものとその不分岐巡回3次拡大体のすべてをパラメトライズすることに成功した.さらに岸は2次体上の高々3のみが分岐する3次の類体のS_<3->多項式による構成法を開発して「鏡像現象」に新たな光を当てた.

4.研究分担者の中村博昭は組紐群や曲面の写像類群をめぐるガロア群の作用を研究し,射像直線マイナス3点の基本群における作用原子ブロックとして,これらを他の場合の記述に組み上げていく機構を調べた.また楕円曲線の族から生じる組み紐基本群との比較から,絶対ガロア群がグロタンディーク・タイヒミュラー群の中で満たすべき新しい型の関係式を見出した.5.研究分担者の八牧は研究協力者と共同し,偶数位数の群では非可換なシロー部分群は常に位数2の元と可換になる自明でない元を含むことを証明した.6.更に代数体の単数群に関する研究が進展し,研究分担者の北岡による解析的な手法による分布の考察,並びに,コンピュータを積極的に利用すべく中村憲によって開発された研究手法が成果を上げている.7.また,本年5月にはH.Cohen教授(Bordeaux大)を招聘し,研究分担者の中村憲が中心となってAlgorithmic Number Theoryのワーク・ショップを開催する.1.本年度は2回のワーク・ショップの開催に参画した.5月には研究分担者の中村憲が中心となってAlgorithmic Number Theoryに関するものを,また3月には研究分担者の橋本喜一朗(早稲田大)が中心の一人となった数論研究集会を開催した.2.これらにおける招待講演者として,またいくつかのテーマに関する情報と指導を得るために海外からの8名の優秀な研究者を招聘して研究の進捗を果たした.3.招聘したA.Ledetは研究協力者として位数8の巡回群に対する有理数体上の生成多項式は少なくとも2個のパラメータを必要とすることを示した;これは位数16の二面体群に対しても正しいものと思われる.また研究代表者と研究分担者の橋本は一般に位数nの二面体群についてのn分体の最大実部分体上の生成多項式を明示的に構成し,その判別式を決定した.4.研究分担者の中村博昭は代数曲線のモジュライ空間上に代数幾何的な接基点を具体的に構成し,対応するガロア表現を調べ,l進多重対数函数について明示公式を確立した.5.研究分担者の蔵野はネーター局所環上の自由複体で複体の長さが環のクルル次元と一致するとき,その複体のサポートが一点からなる場合にのDutta重複度が正になることを環が標数0の体を含む場合にも示した.6.八牧は有限群の素数グラフと有限単純群分類定理を応用して有限群の普遍的な性質を明らかにすることに力を注ぎ,特にモンスター単純群の中で71:35またはL_2(71)が極大部分群となることを証明した.7.中村憲は加法鎖の非スターステップの幾つかの性質を与え,それを用いてある種の新たな無限個の場合に対してScholz予想を証明した.1.本最終年度は過去2年間の準備に基づいて国際研究集会「Galois Theory and Modular Forms」を開催し,そのため海外からエクスパートと新進気鋭の若手の研究者5名を招聘した.報告集はKluwer Acad. PublishersのシリーズDEVMから出版される運びである.2.これら5名の招待講演者以外にも,情報と指導を得るために海外から3名の研究者を招聘して研究の進捗を果たした.例えばA. Ledetは「ネター問題」に対して古典的な不変式論を復活させたアプローチを提示し,研究分担者の徳永はS_4とA_4に対して,その代数幾何学的なモデルを提示した.3.また,A. Brumerは,ガロアの逆問題と保型形式に関連する広範な情報を提供して研究分担者の橋本とともに研究計画の進展に貢献した.特に,橋本は位数10の二面体群に対する研究代表者との昨年度の成果を発展させ,有理数体上の「生成的5次多項式族」を明示的に与えた.4.さらに橋本は,正定値4元数環に関連するテータ函数を体系的に検討した.5.中村博昭は代数曲線のモデュライ空間における標準的な無限遠基点を代数幾何的に構成してガロア群の基本群への作用を決定し,昨年度の成果を発展させた.6.蔵野は有限生成アーベル群による次数付き環のChow群が斉次素イデアルと斉次元によって決まることを示した.7.小池は算術的三角群に関する保型形式,符号理論,超幾何函数の関連を見た.8.数論面の成果としては,栗原はR. Greenbergとの研究討議を重ねてGreenberg予想についてのp=3の場合の小松等の結果を一般の奇素数に対する枠組みに広げ,著しい実験結果をp=3,5の場合に与えている.
分散系二相流の流動と熱伝達、特に、非球形粒子群を含む流れに注目した基礎研究

粒子群を含む分散系二相流では、多くの場合、球状の粒子を対象に行われている。しかし、実際の流動場では球状から少しずれた非球状の形状をした粒子がほとんどである。このような粒子では球状の場合に比べ不規則な反発などを生じ、より複雑な現象を呈している。このような流動場を解析するためには飛行中の粒子の形状とその速度を計測システムを開発する必要がある。本研究では差動型のレ-ザ流速系の光学系を用いて、粒子の局所的な曲率を検出する方法を検討する。その第一段階として、本年度は空間的に静止した粒子を対象にその散乱信号の特性を実験的に明らかにした。散乱光の干渉パタ-ンはCCDテレビカメラで直接撮影され、画像処理装置を用いてマイクロコンピュ-タに転送される。また、反射光に対して幾何光学近似を用いたシミュレ-ションを行い、その結果を球状粒子に参照パタ-ンとした。流速の検出は干渉パタ-ンの動きを一点で観測する事により行われる。これは現在用いられているレ-ザ流速系の基本原理と変わる事はない。さらに、空間的な干渉パタ-ンを測定すれば、フリンジの位置と位相の情報からシミュレ-ションより得られた参照パタ-ンと照合する事によって局所的な曲率を求める事ができる粒子の全領域の曲率を測定する事は不可能であるので、本研究では、粒子の形状を回転楕円体と仮定し、関数では近似する事で全体の形状を決定した。装置の検定のため球状粒子としてマイクロベアリングの500から1000μm粒子を用いた結果、得られた曲率半径は真球のものと良い一致を見た。さらにナイロンの非球状粒子を用いた結果、顕微鏡写真で評価した粒子形状に対し、ほぼ数パ-セントの精度で予測可能である事が検証できた。今後、実流動場に適用すべく改良を加える予定である。
消化管平滑筋の抑制性伝達と一酸化窒素の役割

前年度までにラット結腸近位部では一酸化窒素が弛緩反応をメディエイトしていること。遠位部では一酸化窒素が関与しないこと。平滑筋細胞では、近位、遠位部とも腸神経を経壁電気刺激することにより、細胞内サイクリックGMP量は顕著に増加するにもかかわらず、遠位部では弛緩につながらないこと、を明らかにした。本年度は近位部での一酸化窒素の作用と、細胞内サイクリックGMPと弛緩の関係を調べ、両年度の成果から以下のことが明らかとなった。近位部では腸神経の興奮-一酸化窒素産生-平滑筋弛緩の経路が存在する。しかし、刺激によりアトロピン存在、非存在にかかわらず弛緩が起るが、抑制性電位のi、j、psはアトロピン存在下でのみ生じた。一酸化窒素合成阻害薬のニトロアルギニン処置により、弛緩は消失したが、i、j、psは無影響だった。K^+チャネル阻害薬アパミン処置は逆に弛緩に影響せず、i、j、psを完全に消失させた。外部より適用した一酸化窒素は低濃度で弛緩を起したが、極めて高濃度で膜電位に僅かな効果を生じるのみであった。これらの結果から近位部では一酸化窒素は膜電位とは無関係に弛緩を起していることが分った。また、経壁電気刺激により、近位部とほぼ同様に遠位部でもサイクリックGMPの増量が生じているにもかかわらず、弛緩に繋がらないことが分った。スキンド標本を用いて、さらにこの点を検討した。近位部では直接細胞内にサイクリックGMPを適用することにより、その濃度に依存して著しい弛緩が得られた。一方、遠位部では極めて反応性が鈍く、遠位部のサイクリックGMP感受性が低いことが分った。また遠位部の弛緩のメディエイタ-はVIPが部分的に働いていることが分った。その反応はサイクリックAMPと関連することも示唆された。他方、ラット回腸においても一酸化窒素が弛緩のメディエイタ-であることを認め、腸神経叢での弛緩発生に至る神経々路も検索した。消化管とくに腸の神経叢には多くの種類の神経が多数存在し、機能的にも形態的にも複雑なネットワークを形成し、末梢臓器の神経性調節を調べる上で極めて興味深い。我々は現在までに消化管の抑制性伝達について調べてきた。本年度の研究ではラット回腸,結腸で一酸化窒素が平滑筋への抑制性伝達物質として働いていることを確認し、その作用機序の詳細に迫った。ラットの近位,中部,遠位結腸条片に電気刺激を加えることにより弛緩反応を得て、この反応の伝達物質の検索を行ない、近位部では一酸化窒素であることを薬理学的に証明した。中部結腸では、一酸化窒素が部分的に関与しているが、必ずしも中心的な役割を演じていないこと、サブスタンスPが収縮性の伝達物質として、常に収縮性に働らき逆に作用していることを認めた。一方遠位部では一酸化窒素の関与は認められず、VIPの部分的関与が認められた。次に一酸化窒素の細胞内2次伝達物質について調べた。

一酸化窒素や腸神経叢の興奮により平滑筋細胞内にサイクリックGMPが産生されることを確認した。ところが、近位部ではこのサイクリックGMPの増量により弛緩が惹起されるのに、遠位部では同程度のサイクリックGMP量は弛緩を生じないことから、両部位の平滑筋の収縮機構のサイクリックGMPに対する感受性の差異が存在することを見い出した。前年度までにラット結腸近位部では一酸化窒素が弛緩反応をメディエイトしていること。遠位部では一酸化窒素が関与しないこと。平滑筋細胞では近位、遠位両部位とも神経を経壁電気刺激することにより、細胞内cyclic GMP量は顕著に増加するにもかかわらず遠位部では弛緩に繋がらないことを明らにした。本年度は近位部での一酸化窒素の作用と、細胞内cyclic GMPと弛緩の関係を調べ以下のような成績を得た。近位部では刺激によりアトロピン不在下でも弛緩反応が得られるが、i.J.Psはアトロピン存在下でしか得られなかった。ニトロアルギニン処置により、弛緩は消失するが、i.j.psは無影響だった。アパミン処置は逆に弛緩に無影響だが、i.j.psを完全に抑制した。外から適用した一酸化窒素は低濃度で弛緩を惹起したが、膜電位にはこの濃度では効果がなく、極めて高濃度で僅かな過分極を生じるのみだった。これらの結果から、ラット近位結腸では一酸化窒素は膜電位に影響せず弛緩を惹起していることが示された。一方、経壁電気刺激による一酸化窒素の増量は遠位部では、平滑筋収縮機構のcyclic GMPに対する感受性が近位部に比べて著しく低いひとが、スキンドフェイバー標本で示された。しかし、cyclic GMPに対して全く反応しない訳ではなかったので、刺激によるNO産生やcyclic GMP増加が比較的弱いひとと両者が併さって遠位部でのNOに対する無反応性が生じている。
アメリカにおける日本建築の影響に関する研究

交付申請の年度計画に準じて、本年度(11年度)はまず、昨・今本年度助成金にて収集できた文献資料を縦覧して、日本出展館を巡る評注と建築作品を分析する研究課程を補遺した。研究成果の一部を、日本建築学会大会(9月、広島)にて発表した。なお、本年度助成交付金で入手した資料は、和古書1点である。また、これまで入手不可能だった原資料のうち、NACSIS等の文献データベース検索サービスを通じて、新たに一部の所在が判明できたので、所蔵先(国際日本文化研究センター、京都市、ほか)へ国内出張し、史料の閲覧および当該研究計画の方向性についてのレビューを行った。さらに、初年度と次年度に収集できた原資料の複製(マイクロフィルム)がクロス検索そして図版データの解像度の点できわめて不自由を来していたので、より自在な利用を目指して、電子文書化の作業に着手した。以上の資料捕集、検証、データ化作業を踏まえて、研究成果の集約を進めた。交付申請の年度計画に準じて、初年度(9年度)は一次史料の所在確認と閲覧に専ら努め、入手できた史料の解読を進めた。まず、既往研究書中で言及された参考文献を基に関連資料リストを集成し、大学図書館所蔵目録やNACSIS webcat(学術情報センタ・総合目録データベース)を通じて、諸図書館など国内の所蔵状況を把握した。その結果、国内には閲覧可能な文献がごく一部しかないことが判明した。次いで、米国国会図書館、および公的と民間のアメリカ側文献データ検索システムを介して、一次史料と刊行図書の総覧を作成した。本研究の目的に該当する資料は、英語文献だけで360件を超える冊数の存在を確認できた。ただし、オリジナル本の入手は極めて難しいと知れたため、原文献の収集事業を遂行中のスミソニアン協会に打診して、マイクロフィルムによる複製頒布を依頼した。以上で得た文献情報と検索作業に基づき、平成9年度度助成交付金の範囲内で、本年度は下記の資料を入手しえた。洋古書...........................1点(4巻)洋書(復刻版を含む)......30点マイクロフィルム............14リ-ル和書..............................10点交付申請の年度計画に準じて、本年度(10年度)はまず、昨・今本年度助成金にて収集できた公刊図書と原資料の複製(マイクロフィルム)を解読して、日本出展館を巡る評注と建築作品を分祈する研究第一段階はほぼ完遂できた。研究成果の一部を、日本建築学会大会(9月、九州)にて発表した。日本建築への理解が深化していく敬意を検証する第二段階に入り、入手済みまた国内諸機関所蔵の文献だけでは基礎事実が十分に解明できないため、博覧会研究で実績のあるアメリカ側先学者四氏から欠落情報の補完説明を求めるとともに、当該研究計画の方向性についてのレビューを受ける目的で、外国出張を行った。シカゴ大学社会科学系歴史学科ニール・ハリス教授から、地元開催のシカゴ万国博覧会(1893年と1933年)における日本館の評価を含め、メリーランド大学芸術人文学部歴史学科ジェームズ・ギルバート教授から、アメリカ芸術文化史における日本文化の位置づけなど、またカリフォルニア大学大学院建築都市計画学科トーマス・ハインズ教授より、公式記録の復刻を通じた1893年シカゴ博研究の進捗状況、および3次にわたり開催された地元博まで、世紀末今世紀前半の博覧会研究の方向性について教示いただいた。さらにモンタナ州立大学歴史哲学学科ロバート・ライデル教授からは、アメリカにおける博覧会全体の研究動向について示唆を得た。以上の教唆を踏まえて、次年度に向けた研究成果の集約を進めている。なお、本年度助成交付金で入手した資料は、以下である。洋古書...................4点(30冊)マイクロフィルム..........20リール交付申請の年度計画に準じて、本年度(11年度)はまず、昨・今本年度助成金にて収集できた文献資料を縦覧して、日本出展館を巡る評注と建築作品を分析する研究課程を補遺した。
乳がんセンチネルナビゲーション手術支援のための術中迅速画像診断技術の開発

肉眼的発見が困難な微少転移乳がん症例を対象とした新たな術中迅速画像診断技術を確立するため、高精度検出技術と医用画像処理技術を研究し、術中迅速病理診断用イメージスキャンニング技術の開発を行った。研究の結果、蛍光イメージング以上の高感度測定技術として新たに化学発光による免疫組織化学染色技術と同染色標本の測光に対応したイメージスキャンニング技術を確立した。また臨床評価において同システムは微小がんの検出において極めて有用性が高いことが明らかとなった。乳がんにおける腋窩リンパ節転移の有無は外科切除範囲の決定や予後因子として極めて重要であり,外科的摘出時においてはリンパ流が最初に流入するセンチネルリンパ節(SN)に対するがん細胞転移の検索が必要不可欠となる。乳がんセンチネルナビゲーション手術(SNNS)は,SNの分布や転移の有無を指標として,切除範囲を最小限とする手術であるが,肉眼的検出が困難な微少転移乳がんの存在が再発上の問題となっており,高精度かつ短時間で実施可能な術中迅速診断技術の開発が求められていることから,本研究では,有機液晶波長可変蛍光フィルター技術を用いたマルチレイヤー蛍光バーチャルスライドシステムならびに多焦点蛍光画像可視化のための画像処理技術の確立と本システムでの迅速乳がん転移細胞蛍光検査技術の研究を行った。平成25年度研究においては乳がんイメージスキャンニングシステムと蛍光画像での多焦点合成技術の研究を実施し、蛍光画像に最適化した多焦点合成技術を確立するとともに、マルチカラー検出技術についても確立した。乳がんイメージスキャンニングシステムについてはハードウェアシステムの開発が遅れているが、既に撮像に必要となる基盤技術は確立していることから、平成26年度において完成の見込みである。またセンチネルリンパ節凍結標本を用いた蛍光画像分析においては、プロトタイプシステムを用いた検討の結果、対物20倍レンズ以下での検出も可能であるとの検証結果が得られたことから、診断までの撮像枚数の低減化と短縮化が期待できる。有機液晶波長可変フィルター技術を用いたマルチレイヤー蛍光バーチャルスライドシステムの研究と多焦点蛍光画像可視化のための画像処理技術の研究では、マルチレイヤー技術では撮像後画像からの検出感度が影響し、適切な画像取得が行えない症例が発生していたことから、撮像技術として新たに蛍光撮像画像の重ね合わせ技術を導入し、複数の蛍光撮像画像を基にシグナルを増感させることで検出精度向上を達成した。また、転移性乳がん細胞自動解析用アルゴリズムの研究では、転移乳がん細胞においては乳がん原発巣での組織型に対応した蛍光染色性を示すため、リンパ節の主要細胞であるリンパ球とは異なる蛍光染色強度や染色パターンを示す異型細胞群を乳がん系バイオマーカーであるCK18,19,20など上皮系腫瘍バイオマーカーをマルチミックス化させた標識ミックス抗体を開発し、特異度を向上させるとともに、核DNA量を測光するアルゴリズムを加えることによって検出アルゴリズムを開発した。上記2種の研究成果について従来の検出方法である、病理組織学的検出方法と分子生物学的検出方法との比較を行い、検出精度を検証した。その結果、これまで肉眼的診断において見逃していた症例を本システムによって検出することに至ったものの、分子生物学的検出法であるqRT-PCR法には検出感度が及ばなかった。一方で、本法は検出感度は分子生物学的方法に及ばなかったものの、検査時間においては本法が優れていた。このことから、不一致症例についての再検証を行い、本法による問題点を明らかにするとともに、さらなる高感度化と高精度化をはかる予定である。本年度は迅速乳がん転移細胞蛍光検査技術の研究を行うとともに術中迅速病理細胞診断における臨床的技術評価を行った。迅速乳がん転移細胞蛍光検査技術の研究では、術中迅速診断においては開腹中の診断となることから、30分程度で外科執刀医への診断報告が必要であるものの、免疫組織化学染色法では30分以上の染色時間を要することから、蛍光染色による高感度化とともに染色短縮化技術の研究を行った。高感度化においては蛍光標識ミックス抗体と抗原抗体反応促進緩衝剤の応用化により単独抗原検出に比較して2倍以上の感度向上を検出した。一方、染色時間の短縮化においては超音波および荷電処理による抗原抗体反応の短縮化を図ったものの、大幅な短縮効果は得られなかったことから、さらなる検討が必要との結果に至った。術中迅速病理細胞診断における臨床的技術評価においては平成25年度から27年度までに研究開発した技術について総合評価を実施した。比較にはサイトケラチンmRNAの発現によるリアルタイムPCR解析と従来のHE染色標本を用いた。その結果、従来のHE染色のみでの観察に比較して有意に検出が確認された。一方、遺伝子解析による検出感度には及ばなかったものの、遺伝子解析では同時に形態観察を行うことは困難であるのに対し、本法では高感度検出と形態観察の併用が可能であることから、外科摘出後臓器の病理学的再検証を行う上で、本法は優れていると考えられた。以上のことから、本研究開発技術は従来法に比較して高感度かつ外科手術後の再検証が行える上で、有用な検出システムであるといえるものの、臨床応用化においてはさらなる時間短縮技術の検討を行う必要がある。術中迅速病理細胞診断における臨床的技術評価において検証に充分な症例数を確保できておらず、サンプル数を追加した上で最終評価を行う必要があり、やや遅れている状況にある。本年度研究においては迅速乳がん転移細胞検査の高感度化に関する研究開発を実施した。昨年度までの研究開発においては蛍光観察とマルチミックス抗体による高感度化を行っていたが、遺伝子検査法に比較して充分な感度が得られていなかった。そこで検出感度向上のため、マルチミックス抗体に対して新たに化学発光による高感度技術の導入を図った。

化学発光においては励起光が不要となる一方、フォトンの測定が必要となることから、新たに検出系としてPMTを導入し第3世代プロトタイプを開発すると同時に、病理組織用化学発光染色技術について検討を行った。蛍光測定との相違として化学発光においてはその発光最終過程においてアルカリフォスファターゼ又はペルオキシダーゼによって酵素反応を生じさせ、化学発光物質からフォトンを発生させることが必須となる。その場合、ターゲットとなるリンパ組織に前述の酵素が含まれる場合、バックグラウンドノイズとして偽陽性を生じる原因となる。そのため実染色組織を用いてS/N比向上のための前処理方法について検討を行った。酵素不活化処理の結果、バックグラウンドノイズの低減に成功するとともに、化学発光による新たな病理組織標本を用いた抗原検出技術の確立に成功した。また検出感度においては遺伝子増幅法には及ばないものの、蛍光技術に比較して10倍以上の高感度化を達成した。以上のことから、本研究開発技術は従来法に比較して高感度かつ簡易に測定可能な技術として有用な検出システムであり、癌転移測定技術として応用可能性が高いことが明らかとなった。肉眼的発見が困難な微少転移乳がん症例を対象とした新たな術中迅速画像診断技術を確立するため、高精度検出技術と医用画像処理技術を研究し、術中迅速病理診断用イメージスキャンニング技術の開発を行った。研究の結果、蛍光イメージング以上の高感度測定技術として新たに化学発光による免疫組織化学染色技術と同染色標本の測光に対応したイメージスキャンニング技術を確立した。また臨床評価において同システムは微小がんの検出において極めて有用性が高いことが明らかとなった。ハードウェア開発において遅れが生じていたものの、既存ハードウェアシステムへの改造と改良によって当初目的としていた検出感度を有するハードウェアに至っていること、また検出試薬の改良によって転移性乳がん細胞自動解析用アルゴリズムの研究については当初の目標を達成している。一方、病理組織学的検出方法と分子生物学的検出方法との比較を行い、検出精度を検証した結果、qRT-PCR法を用いた高感度検出系に比較し、検査時間の短縮化ははかれたものの、感度面においては劣っており、さらなる高感度化と高精度化をはかることが必要となっていることから、一部課題は残っているものの、おおむね順調に進展していると判断した。術中迅速病理細胞診断における臨床的技術評価において追加症例の確保を行い、最終評価を行う。また染色時間の短縮化において技術的課題が残されており、現在2ステップ法で検出を行っている作業工程を化学発光による1ステップ化を検討し技術的解決を図る。28年度が最終年度であるため、記入しない。医療情報学検出感度の向上においては高感度カメラシステムへの変更による高感度化、あるいはこれまで使用していた蛍光試薬の切り替えによる高感度化により、システムの検出率向上が図れるものと考えられる。
糖尿病・肥満予防に対する有効な運動タイミングの探索

運動を行う際に、1回にまとめて運動を行う方法と、それとも小分けに運動時間を分けて行う方法のどちらが健康指標に有効かは、多くの方の疑問である。そこで本研究では、隙間時間に運動を行うことを想定し、運動時間を小分けにした時の肥満や食後の血糖コントロールに有効であるかを検証した。その結果、小分けに運動した場合でも肥満改善や血糖コントロールに有効であることが示唆された。近年、座位行動を細切れに中断することが健康評価項目に有益な影響を及ぼすことが報告されている。さらには細切れに短時間の運動することによって、食後の血糖上昇を抑制するこも明らかとなっている。食後の急な血糖上昇は、酸化ストレスを増大させ血管内皮障害を引き起こし、その積み重ねが動脈硬化の進展および大血管障害(心筋梗塞、脳梗塞など)の発症に寄与すると考えられている。運動強度と骨格筋への糖取り込みは、乳酸閾値(LT)強度以上の運動強度であれば、GLUT4のトランスロケーションによる糖取り込みが促進される可能性があることから、LT強度以上の細切れ運動であれば1日の血糖動態を良好にすることが期待される。肥満は、エネルギー収支バランスの崩れが長年にわたって積み重なることで形成される。運動は、エネルギー消費量を増大させるため肥満の改善に有効であるだろう。LT強度以上の運動後には、しばらくエネルギー消費が亢進する現象(EPOC)が知られている。しかし、LT強度以上の細切れ運動によって1日のエネルギー消費が亢進するかは不明である。細切れ運動は、まとまった運動時間を必要とせず、多忙な現代社会にとって有効な運動方法のなり得るかもしれない。そこで、本研究ではLT強度を境とした運動強度の異なる細切れ運動が、1日の血糖コントロールおよびエネルギー消費量に与える影響について比較検を開始した。本研究では、肥満と糖尿病の予防・改善を目的としているため、BMI25以上の男性を対象に研究を進めている。初年度の研究計画が遅れている主な理由として、実験環境の整備により初年度と次年度の実験計画を急きょ入れ替える必要性が生じたためである。さらに本研究は、対象者の募集条件が限定されているため、被験者の募集に当初予定していたよりも多くの時間を要している。初年度は5名の対象者の測定が完了した。本年度は、昨年度の研究を引き続き継続しながら、本年度の研究を進める。また昨年度の研究結果が平成29年度の前半には終了する見込みであり、結果をまとめ次第、学会発表や論文発表を進めていく。運動生理学初年度の研究開始が遅れてたため、使用予定の金額に至らなかった。初年度の研究および本年度の研究を並行し実施する。
分子生物学的手法を用いた胆道閉鎖症術後の肝内胆管再生機構の解明

胆道閉鎖症術中に採取し余剰となった肝組織を用いて、マイクロアレイで日齢別および黄疸消失の有無を比較し、術後黄疸消失を得るための因子を検討した。日齢30,60,90での1.0倍以上差があるTanscript Clusterはともに48226、2.0倍以上差があるTanscript Clusterはそれぞれ866、1220、523を検索しえた。また、黄疸消失の有無だけでは、Tanscript Clusterは48226、2.0倍以上差があるTanscript Clusterは325を検索しえた。本研究の目的は、胆管上皮細胞が障害を受けた際に、どのように肝芽細胞から胆管上皮細胞へ分化・増殖制御されているかということに着目し、そのメカニズムを明らかにすることで、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明することである。一方、転写因子C/EBPαによる胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムは不明である。そこで、C/EBPαの下流にある因子を特定し、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明すれば、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明できると考えている。23年度は、まず第一に肝芽細胞の分離精製を行った。これは、肝芽細胞を用いた転写活性化因子C/EBPα標的下流遺伝子候補の検索するためであった。マウス胎児肝を用いて、肝芽細胞特異的表面タンパク質モノクローナル抗体を用いてFACSで分離精製する予定であったが、FACSによる肝芽細胞を十分な細胞数を確保することに難渋した。肝芽細胞を用いた次のステップとして、ノックダウン実験を行う予定であったが、当該年度には行うことができなかった。24年度も継続して行ったが、系の確立にいたっていない。これらは、肝内胆管の再生メカニズムを解明するうえでは絶対的に必要であり、かつ重要な過程であることから、次年度も継続していく。また、同方法での計画が進まない場合には、細胞株などを用いたほかの方法も検討する予定である。本研究では、胆管上皮細胞が障害を受けた際に、どのように肝芽細胞から胆管上皮細胞へ分化・増殖制御されているかということに着目している。さらに、そのメカニズムを明らかにすることで、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明することを目的としている。一方、転写因子C/EBPαによる胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムは、いまだ不明である。本研究では、C/EBPαの下流にある因子を特定し、胆管上皮細胞への分化抑制、および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明することにより、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明できると考えている。まず、初年度から継続して肝芽細胞の分離精製を行っている。これは、肝芽細胞を用いた転写活性化因子C/EBPα標的下流遺伝子候補の検索をするためである。さらに、肝芽細胞にC/EBPαの発現を調整し、その後の細胞を回収し、マイクロアレイによって遺伝子の変化のあったものをピックアップすることにより、候補遺伝子を検索することを目的としている。現在まで、マウスの胎児肝を用いて、肝芽細胞特異的表面タンパク質モノクローナル抗体を用いてFACSで分離精製しようとしたが、FACSによる肝芽細胞の分離が不成功であった。現在、継続して肝芽細胞の分離精製の条件検討を行っている。そこで、転写因子C/EBPαに注目した。C/EBPαによる胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムは不明である。胆道閉鎖症は肝外胆管の閉塞が主なる原因である。一方、葛西手術時の病理組織学検査所見より肝内の胆管も同時に障害を受け、減少し、再生していると我々は考えている。葛西手術術後に胆汁排泄を得られるのは、肝内胆管が再生し、その胆管同士のネットワークができると肝内からの胆汁排泄を得られると我々は考えている。

よって、本研究の目的は、胆管上皮細胞が障害を受けたの肝芽細胞から胆管上皮細胞へ分化・増殖制御に着目し、そのメカニズムを明らかにすることで、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明することである。転写因子C/EBPαは胆管上皮細胞の分化への関連を指摘されているが、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムは不明である。そこで、C/EBPαの下流にある因子を特定し、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明すれば、胆道閉鎖症術後の肝内胆管の再生メカニズムを解明できると考えている。いままで、肝芽細胞を用いた転写活性化因子C/EBPα標的下流遺伝子候補の検索するため肝芽細胞の分離精製を行った。マウス胎児肝を用いて、肝芽細胞特異的表面タンパク質モノクローナル抗体を用いてFACSで分離精製する予定であった。FACSによる肝芽細胞を十分な細胞数を確保することに難渋した。肝芽細胞を用いた次のステップとして、ノックダウン実験を行う予定であったが、実験系がいまだ確立できていない。胆道閉鎖症は肝外胆管の閉塞が主たる原因である。しかし、葛西手術時の肝臓組織を病理組織学的に検索すると、肝内胆管も障害を受けている。胆道閉鎖症術後、黄疸消失する場合としない場合があるのは、肝内胆管の障害が原因と考えている。つまり、胆道閉鎖症になると肝内胆管も障害を受けたのち、肝内胆管の再生、さらには胆管のネットワークの再構築が図られる。胆道閉鎖症の術後に黄疸消失するか否かは、その再生過程で障害が生じてしまうか否かなのではないかと仮説を立てている。つまり、そのメカニズムを明らかにすることで術後黄疸消失を確実に得ることが可能となる。本研究の目的は、胆管上皮細胞の障害が受けたあと、肝芽細胞から胆管上皮細胞への分化・増殖制御に着目し、そのメカニズムを明らかにすることを目的とした。転写因子C/EBPαは発現量の差で胆管上皮細胞もしくは肝細胞への分化の関連を示唆されている。胆管上皮細胞または肝細胞への分化制御のメカニズムは不明であるので、そこでC/EBP αの下流因子を特定し、胆管上皮細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明すれば、胆道閉鎖症術後の肝内胆管再生メカニズムを解明できると考えて実験計画をたてた。いままでは肝芽細胞を用いた転写因子C/EBPα標的遺伝子候補の検索するため肝芽細胞の精製を行ったが、必要な細胞数の確保が困難であった。そこで、胆道閉鎖症術後患者の肝組織を用いてマイクロアレイを行い、各日齢別で黄疸消失の有無を規定する因子を検討した。胆道閉鎖症術中に採取し余剰となった肝組織を用いて、マイクロアレイで日齢別および黄疸消失の有無を比較し、術後黄疸消失を得るための因子を検討した。日齢30,60,90での1.0倍以上差があるTanscript Clusterはともに48226、2.0倍以上差があるTanscript Clusterはそれぞれ866、1220、523を検索しえた。また、黄疸消失の有無だけでは、Tanscript Clusterは48226、2.0倍以上差があるTanscript Clusterは325を検索しえた。本研究は、転写因子C/EBPαに着目し、胆管上皮細胞への分化抑制および肝細胞への分化誘導する詳細なメカニズムを解明することである。そこで、ファーストステップとしてC/EBPαの下流にある因子を特定することである。
TGF-βによる血管壁細胞の増殖調節機構の分子レベルでの解明

(1)新規ショウジョウバエSmadであるdSmad2を同定し、無脊椎動物においてもTGF-β/アクチビン系のシグナル伝達が存在することを明らかにした。また、ショウジョウバエにおいてTGF-βスーパーファミリーのシグナルの下流にあるShnとMadが、レセプター刺激に応じて結合することを見出した。(2)BMPの下流にあるSmad1はLIFの下流にあるSTAT3とp300を介して複合体を形成し、協調的に標的遺伝子の発現を誘導することを示した。(3)Smadと転写コアクチベーターであるp300との相互作用について検討し、p300内のSmad結合部位を同定した。E1AがSmadに結合することを見出し、Smadとp300の相互作用を阻害することによりTGF-βのシグナルを抑制することを示した。(4)two-hybrid法を用いてSmad2に結合する蛋白としてc-Skiを同定した。Smadはc-Skiを介してhistone deacetylaseであるHDACと複合体を形成し、c-SkiはTGF-βによる転写活性化を抑制した。以上より、Smadはその結合する蛋白に依存して、転写の活性化、抑制の両者の作用を持ち得ることが示された。(5)Smadは転写因子PEBP2αと結合することを見出した。immunoglobulin Cαプロモーターの系を用いて、Smad3とPEBP2αCとが同プロモーターにそれぞれ結合すること、またその転写活性化には両者の協調作用が必要であることを示した。SmadはPEBP2αBとも結合する。PEBP2αBは血球形成および血管新生に関与しており、TGF-βがSmad-PEBP2の結合を介して血管新生を調節している可能性が示された。