hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
子宮体癌におけるセンチネルリンパ節生検を併用したリンパ節郭清個別化に関する研究

平成30年度は研究の大きな進展を認める一年となった。平成29年1月に前方視的臨床研究としてスタートして以来、1年目は患者のリクルートに苦労したため、在籍中の医師および新加入の医師に向けた当該臨床研究の周知および教育、学会への参加を推進した。その結果、患者のリクルートに大きな改善が認められた。臨床試験開始後の初年度はリクルート率が40%台前半であったものが、本年度第一四半期で80%台後半と目標値に達している。ただし初年度のリクルート率が予想以上に低かったため、研究期間を1年程度延長する必要があると考えている。本研究はリンパ節転移スコアの最低リスク群および低リスク群にセンチネルリンパ節の術中診断を行い転移陰性の場合に系統的リンパ節郭清を省略するスタディであるが、primary endpointは合併症発生率、Secondary endpointはセンチネルリンパ節の同定率、リンパ節転移診断率、5年再発/生存率である。再発/生存率の評価は時間を要するため現時点で言及できないが、他項目はリアルタイムで現状評価が可能であり、期待通りの成果が集積されつつある。目標症例数に達した際には子宮体癌におけるセンチネルナビゲーション手術の実施妥当性を証明できると考えている。研究は現在概ね予定通りに進行中であるが、実施していくうえで若干の問題が浮上している。センチネルリンパ節の術中迅速診断に用いているTRLBC法についてである。本法の転移陽性を診断するための特異度が96%すなわち4%の疑陽性があるという問題である。疑陽性を更に低下させるための手段として、現在別途スタディを計画中である。2017年1月に臨床試験をスタートしてからの子宮体部悪性腫瘍患者数、および試験参加資格者数、および試験参加者数は2017年が88例、54例、23例、2018年が85例、43例、33例、2019年第一四半期が31例、21例、18例である。試験参加者数を試験参加資格者数で除したものが患者リクルート率で、これを2017年、2018年、2019年第一四半期の順に並べると43%、77%、86%であり、当初と比べてリクルート率が倍増している。試験登録者数は現在まで74例と目標の半数程度だが、現在までに輸血や再手術を要した症例はなく、リンパ浮腫、リンパ嚢胞、血栓症、創部離開、他臓器損傷の発生例はない。またセンチネルリンパ節の同定率は両側同定82% (61/74)、片側同定14% (10/74)、失敗4% (3/74)と過去の大規模研究のいずれよりも優れた成績をあげている。更にリンパ節転移診断率については最低リスク群で0% (0/47)、低リスク群で15% (4/27)、とプレリミナリーな研究における期待値(最低リスク群で3%、低リスク群で12%)を再現している。これまでに4例のセンチネルリンパ節転移症例が確認されているが、術中診断に用いているTRLBC法の感度は100%(4/4),特異度96%(67/70)つまり疑陽性率4%とこちらも期待以上の成績をあげている。生存率は現時点で評価できないものの、2例の再発例はリンパ節再発を起こしておらず、また追加治療が奏功して生存(完全寛解1例、部分寛解1例)しており、研究継続に支障をきたすような問題とはなっていない。臨床研究の実施期間を当初は3年程度と考えていた。開始初年度の患者リクルート率が低かったため試験登録者数が目標の半数程度だが、現状では9割近いリクルート率を維持できている。従って試験期間の延長は1年程度で済むと試算している。本年度中に試験実施期間の延長を申請する予定である。センチネルリンパ節の術中診断に用いているTRLBC法は転移陽性を診断するための感度は100%であるが、疑陽性が4%程度ある。これは許容できる値かもしれないが、改善の余地があると考えている。研究では真の転移陽性をmacrometastasis/micrometastasis、真の転移陰性をisolated tumor cells/nomalignantcellと定義している。本研究における疑陽性例は術中診断が陽性であったものの、永久標本ではisolated tumor cellsと診断されたケースである。Isolated tumorcellsは乳癌領域では系統的リンパ節郭清は不要と結論されており、郭清を実施した後に合併症を引き起こした際にはそれが過剰診療と見做される。本研究の2例に対しても実際に系統的リンパ節郭清が実施されている。我々はこの2年間においてTRLBCの細胞診標本上に出現する異型細胞のサイズと数によって微小転移(micrometastasis)と孤立性腫瘍細胞(isolated tumor cells)を区別できる可能性が高いと考えるようになった。これを証明するスタディを並行して推進することにより、疑陽性の問題は更に最小化できる可能性があるため、別途スタディを計画する予定がある。子宮体癌における日常診療において高頻度に実施されているリンパ節郭清手術は術後合併症、特に下肢リンパ浮腫の発生を招来するとして問題点が指摘されている。術後合併症の低減策として、センチネルリンパ節生検を利用することにより系統的リンパ節郭清を省略する方法が考えられているが、計画性のないリンパ節郭清省略は母集団全体の予後を悪化させる。そこで系統的郭清の省略にあたっては予後の良い集団を選択して実施することが要件になる。

我々はリンパ節郭清を省略するためのdecision-makingにリンパ節転移スコア(LNMS)を利用する。LNMSは子宮体癌全症例を最低リスク群、低リスク群、中リスク群、高リスク群の4群に分類するが、全体に占める割合はそれぞれ54%、24%、17%、5%である。我々は最低リスク群と低リスク群、つまり全子宮体癌の78%をリンパ節郭清省略の対象と考えている。本研究は人を対象とした術前および術中検査、外科治療の介入を有する臨床研究で、第2相試験として北海道がんセンターにて実施を行う。研究計画概要は1)データセンターの設置、目標症例数、試験期間の決定、2)プロトコールの作成、3)同意取得文書、説明書、症例報告書(CRF)の作成、4)倫理委員会審議、5)症例エントリー、5)中間解析、6)最終結果解析である。現在まで1)3)がおおむね終了し、4)に関しては平成28年6月に北海道がんセンターの施設倫理委員会で審議が予定されている。LNMSの最低リスク群に対して行う臨床試験は実施許可が下りる可能性が高いと思われるが、低リスク群に対しては異議が出る可能性がある。全面的か部分的かは現時点で不明であるが本年度秋までには症例エントリーが開始できるものと考えている。本研究の計画にあたり、系統的リンパ節郭清の省略を想定している対象、つまりリンパ節転移スコア(LNMS)の最低リスク群と低リスク群においてリンパ節郭清が行われた場合の予後と下肢リンパ浮腫の発生頻度を明らかにしておく必要があった。また系統的リンパ節郭清を受けた集団に生じる下肢リンパ浮腫の発生頻度を調査した。北海道がんセンターで過去22年間においてリンパ節郭清が実施された子宮体癌535例の検討の結果、26%に下肢リンパ浮腫が発生していることが判明し、下肢リンパ浮腫発生のリスク因子が抽出された。本結果は平成27年6月に脱稿、平成27年10月に英文雑誌において掲載受理(Todo et al. Gynecol Oncol 2015)された。子宮体癌における日常診療において高頻度に実施されているリンパ節郭清手術は術後合併症、特に下肢リンパ浮腫の発生を招来するとして問題点が指摘されている。術後合併症の低減策として、センチネルリンパ節生検を利用することにより系統的リンパ節郭清を省略する方法が考えられているが、計画性のないリンパ節郭清省略は母集団全体の予後を悪化させる。そこで系統的郭清の省略にあたっては予後の良い集団を選択して実施することが要件になる。研究計画概要は1)データセンターの設置、目標症例数、試験期間の決定、
過酸化脂質継続摂取が腸管粘膜の発癌性に与える影響:抗酸化物の発癌抑制効果を中心に

目的過酸化脂質を継続摂取し継続的に傷害された粘膜に対して細胞増殖因子がアポトーシス,細胞増殖に与える影響を小腸,大腸にて比較検討する.グルタチオンは過酸化物を解毒する作用を有するとされているが食餌性にグルタチオンを与えることにより過酸化された腸管粘膜の細胞増殖が正常化するかを検討する.方法ラットに食餌性過酸化物としてfish oilを4%含む飼料を24時間常温大気中に放置したものを4週間与えた.対照群には通常のラット用飼料が与えられた.小腸粘膜中の過酸化脂質量をthiobarbituric acid assayを用い測定した.ラットを24時間絶食後に腸管粘膜のアポトーシスの定量を破砕DNAの正常DNAに対する比率で行った.fishoil摂取群のラットに飲水として1%濃度のグルタチオンを与え,小腸粘膜内の過酸化脂質量,アポトーシスの発現率,ODC活性を,対照群.および過酸化脂質摂取群と比較した.また,腸管粘膜細胞の増殖の指標としてオルニチン脱炭酸酵素(ODC)活性の測定を行った.MitogenとしてEGFを40・g/kg,腹腔内投与し4時間後に腸管粘膜内のODC活性を測定した。結果,考察過酸化脂質の継続摂取により抑制された小腸粘膜細胞のturn everが抗酸化物質であるグルタチオン摂取により正常化した.また,過酸化された腸管粘膜においてはmitogen(EGF)において大腸粘膜の細胞増殖性が特異的に増加することを証明した.過酸化された大腸粘膜はmitogenに対する細胞増殖作用が小腸粘膜に比較し増強されることから過酸化脂質の継続摂取は大腸粘膜の腫瘍発現性を増強させる可能性があるものと考えられた.目的過酸化脂質を継続摂取し継続的に傷害された粘膜に対して細胞増殖因子がアポトーシス,細胞増殖に与える影響を小腸,大腸にて比較検討する.グルタチオンは過酸化物を解毒する作用を有するとされているが食餌性にグルタチオンを与えることにより過酸化された腸管粘膜の細胞増殖が正常化するかを検討する.方法ラットに食餌性過酸化物としてfish oilを4%含む飼料を24時間常温大気中に放置したものを4週間与えた.対照群には通常のラット用飼料が与えられた.小腸粘膜中の過酸化脂質量をthiobarbituric acid assayを用い測定した.ラットを24時間絶食後に腸管粘膜のアポトーシスの定量を破砕DNAの正常DNAに対する比率で行った.fishoil摂取群のラットに飲水として1%濃度のグルタチオンを与え,小腸粘膜内の過酸化脂質量,アポトーシスの発現率,ODC活性を,対照群.および過酸化脂質摂取群と比較した.また,腸管粘膜細胞の増殖の指標としてオルニチン脱炭酸酵素(ODC)活性の測定を行った.MitogenとしてEGFを40・g/kg,腹腔内投与し4時間後に腸管粘膜内のODC活性を測定した。結果,考察過酸化脂質の継続摂取により抑制された小腸粘膜細胞のturn everが抗酸化物質であるグルタチオン摂取により正常化した.また,過酸化された腸管粘膜においてはmitogen(EGF)において大腸粘膜の細胞増殖性が特異的に増加することを証明した.過酸化された大腸粘膜はmitogenに対する細胞増殖作用が小腸粘膜に比較し増強されることから過酸化脂質の継続摂取は大腸粘膜の腫瘍発現性を増強させる可能性があるものと考えられた.過酸化脂質がフリーラジカルとして生体に障害を惹き起こすことが様々な実験モデルで明らかにされつつあるが経口的に摂取された過酸化脂質が消化管に及ぼす影響に触れた実験系は少ない.我々はω6の過酸化物として4%の魚脂を24時間放置した飼料を継続的に与え腸管粘膜の過酸化が腸管粘膜のアポトーシスと腸管粘膜の増殖に与える影響を検討し粘膜の過酸化により小腸粘膜のアポトーシスが抑制され小腸粘膜の増殖の指標であるオルニチン脱炭酸酵素活性(ODC活性)が抑制されることを明らかにしてきた.さまざまな細胞の酸化によるストレス状態においてグルタチオンは保護的な役割を果たすが消化管における過酸化脂質の解毒においてもグルタチオンにおける還元系が重要な働きになっているものと考えられている.今回の実験ではグルタチオンを飲水に添加することにより過酸化脂質継続投与により傷害された小腸粘膜のアポトーシス,細胞増殖が回復しうるかを検討した.過酸化脂質継続摂取群のラットの飲水に還元型グルタチオンを1%添加した.通常飼料摂取群をコントロール群とし,過酸化脂質摂取群,過酸化脂質摂取およびグルタチオン摂取群でアポトーシスの発現,ODC活性を比較検討した.過酸化脂質摂取群にて有意に抑制された小腸粘膜におけるアポトーシスおよび粘膜増殖はグルタチオン摂取による粘膜過酸化の正常化によりコントロール群レベルに回復した.今回の研究結果から腸管粘膜の還元系が腸管粘膜の細胞増殖に重要な働きを担っていることが明らかになった.今後は腸管粘膜の過酸化と発癌との関係を明らかにする為に,mitogenおよびCarcinogenを投与し,過酸化された腸管粘膜の細胞増殖に与える影響について検討する予定である.目的過酸化脂質を継続摂取し継続的に傷害された粘膜に対して細胞増殖因子がアポトーシス,細胞増殖に与える影響を小腸,大腸にて比較検討する.グルタチオンは過酸化物を解毒する作用を有するとされているが食餌性にグルタチオンを与えることにより過酸化された腸管粘膜の細胞増殖が正常化するかを検討する.方法ラットに食餌性過酸化物としてfish oilを4%含む飼料を24時間常温大気中に放置したものを4週間与えた.対照群には通常のラット用飼料が与えられた.

小腸粘膜中の過酸化脂質量をthiobarbituric acid assayを用い測定した.ラットを24時間絶食後に腸管粘膜のアポトーシスの定量を破砕DNAの正常DNAに対する比率で行った.fishoil摂取群のラットに飲水として1%濃度のグルタチオンを与え,小腸粘膜内の過酸化脂質量,アポトーシスの発現率,ODC活性を,対照群,および過酸化脂質摂取群と比較した.また,腸管粘膜細胞の増殖の指標としてオルニチン脱炭酸酵素(ODC)活性の測定を行った.MitogenとしてEGFを40μg/kg,腹腔内投与し4時間後に腸管粘膜内のODC活性を測定した。結果,考察過酸化脂質の継続摂取により抑制された小腸粘膜細胞のturn overが抗酸化物質であるグルタチオン摂取により正常化した.また,過酸化された腸管粘膜においてはmitogen(EGF)において大腸粘膜の細胞増殖性が特異的に増加することを証明した.過酸化された大腸粘膜はmitogenに対する細胞増殖作用が小腸粘膜に比較し増強されることから過酸化脂質の継続摂取は大腸粘膜の腫瘍発現性を増強させる可能性があるものと考えられた.
腫瘍部到達後にサイズと表面性状を自発的にリモデルするナノ粒子製剤キャリアの作製

薬物や造影剤を運搬するキャリアとして注目されているナノ粒子に、腫瘍環境に応答するしくみをもたせた。腫瘍環境で特に多く発現している酵素が基質ペプチドを切断する活性を利用し、その酵素があるとはじめて細胞に侵入することができるようになるナノ粒子を作製した。ナノ粒子には、炭素とタンパク質という、素材・サイズ・性質の異なる2種類のナノ粒子を用いた。ナノ粒子薬剤キャリアの作製として、腫瘍部への受動的なターゲティングが期待できる直径約100nmのカーボンナノ粒子を素材として利用し、分散性と血中滞留性の向上が期待できるポリエチレングリコールによる修飾と、細胞による粒子の取り込みを促進する効果がある細胞膜透過性ペプチドの修飾を行い、その効果を検討した。ポリエチレングリコールの修飾は、非共有結合による修飾と、共有結合による修飾の検討を行った。非共有結合による修飾では、カーボンナノ粒子に結合するペプチドとポリエチレングリコールの複合体を合成し、カーボンナノ粒子と混合することで、水溶液中で分散させることができた。さらにマウスの尾静脈に投与し、肺への蓄積がほぼなくなることを明らかにした。一方、共有結合による修飾は、カーボンナノ粒子表面のカルボキシル基とポリエチレングリコール修飾カーボンナノ粒子と反応させた。修飾カーボンナノ粒子の挙動を調べるために、蛍光色素フルオレセインも導入した。作製したカーボンナノ粒子が細胞に取り込まれるかについて、カーボンナノ粒子を細胞培養倍地中に添加し、その後細胞を洗浄してから共焦点レーザー蛍光顕微鏡で観察した。ポリエチレングリコールで修飾したカーボンナノ粒子はほとんど細胞内に取り込まれなかったが、細胞膜透過性ペプチドを導入したものでは、細胞内にカーボンナノ粒子が取り込まれており、細胞膜透過性ペプチドによってカーボンナノ粒子が細胞に取り込まれやすくなったことがわかった。腫瘍部に到達後、腫瘍部への集積やがん細胞との親和性が向上するような性状に変化する薬剤キャリアを作製するため、直径約100nmのカーボンナノ粒子に着目し、種々の表面修飾を行った。昨年度は、カーボンナノ粒子に水溶液中での分散性と血中滞留性を賦与することが期待できるポリエチレングリコールと、細胞による取り込みを促進させることが期待できる細胞膜透過性ペプチドを共有結合で化学修飾したカーボンナノ粒子の作製を行った。本年度はカーボンナノ粒子の水中分散性を改善するため、ポリエチレングリコールによるカーボンナノ粒子の化学修飾のさらなる検討を行った。直鎖ポリエチレングリコールを用いた場合、分子量1000程度のポリエチレングリコールのほうが、長鎖ポリエチレングリコールを用いた場合に比べ、分散性のよいカーボンナノ粒子を得られることがわかった。また、共有結合修飾と非共有結合修飾を組み合わせることを試みた。非共有結合修飾を行うためのカーボンナノ粒子との結合部位として、カーボン結合ペプチドあるいは抗がん剤ドキソルビシンを用い、ポリエチレングリコールと複合化した。これらを化学修飾カーボンナノ粒子に添加すると、さらに分散性が向上した。このことから、化学修飾したカーボンナノ粒子に対しても、カーボン結合ペプチドやドキソルビシンをもつ分子が結合できることがわかった。そこで、共有結合と非共有結合による修飾を併用することで、腫瘍部で表面性状を変化させるカーボンナノ粒子の分子設計の見直しを行った。腫瘍部位でカーボンナノ粒子の分散性と細胞との親和性を変化させるため、鎖長の異なるポリエチレングリコールを腫瘍部位で高発現している酵素の基質ペプチドで連結した分子によるカーボンナノ粒子の化学修飾に着手した。また、ドキソルビシンと細胞膜透過性ペプチドの複合化を行った。体内に投与された薬剤キャリアが腫瘍部に到達後に、腫瘍部への集積やがん細胞との親和性が向上するような性状に変化することは、薬剤の腫瘍部への集積性を高めるために必要である。昨年度までは、直径約100mmのカーボンナノ粒子に着目し、種々の表面修飾を行ってきたが、本年度は、よりサイズの小さいナノ粒子として、直径約13nmの球状タンパク質であるフェリチンを用いて検討を行った。フェリチン表面に、細胞膜透過性ペプチド・プロッカー分子・酵素基質ペプチドを修飾し、マトリックスメタロプロテアーゼー2の活性により細胞膜透過性をon/offできるスイッチ機能をもたせたフェリチンの作製を試みた。マトリックスメタロプロテアーゼー2は腫瘍部で高発現している酵素の一つである。ブロッカー分子とペプチドの複合体に蛍光ラベルしたものを化学合成し、フェリチン表面にリンカーを介して化学修飾した。この修飾フェリチンの粒経は約22nmであった。修飾フェリチン溶液にマトリックスメタロプロテアーゼー2を添加すると、ブロッカー分子が切断されることをSDS-PAGE等により確認した。がん細胞を培養する培地に修飾フェリチンを添加し、蛍光顕微鏡観察を行ったところ、マトリックスメタロプロテアーゼー2とインキュベートしたフェリチンはがん細胞に取り込まれた。マトリックスメタロプロテアーゼー2によりプロッカー分子が切断され、細胞膜透過性ペプチドの機能によりフェリチンががん細胞に侵入したと考えられ、がん環境因子のひとつである酵素に応答してナノ粒子の細胞透過性をon/offできる可能性が示唆された。
口腔レンサ球菌との共生を目指して：自然免疫の増強

口腔に常在するレンサ球菌には、プロバイオテイクス機能が期待できる。本研究では、これら細菌と共生することで、自然免疫が増強される可能性を探った。その結果、1)活性型ビタミンD類(VD)で口腔上皮細胞を刺激すると様々な抗菌因子、特にLL-37産生が亢進した。2) VDと菌体成分を組み合わせると、更に有効であった。3)LL-37は歯周病原性で様々な全身疾患にも係るPorphyromonas gingivalisの増殖を抑制した。今後は、口腔レンサ球菌とVDとを組み合わせて、抗菌作用の増強を図り、口腔ならびに全身の健康増進の可能性を模索したい。口腔常在菌叢の主体を成すレンサ球菌は各種糖類を発酵して乳酸等の有機酸を産生する。乳酸菌類を経口摂取して腸内細菌叢を改善して健康増進を目指すプロバイオテイクスが広く受け入れられている。近年、菌体成分をパターン認識する自然免疫系の解明が進み、腸内の「善玉菌」は自然免疫レセプター、即ちToll-loke rceptor(TLR)類やNOD-like receptor(NLR)類を介して自然免疫系を賦活して、健康を維持・増進しているとの説がある。そこで、口腔レンサ球菌の自然免疫増強作用を実証して、天然のプロバイオテイクス機能が期待されるこれらの菌との共生の概念を確立したいと考えた。1.研究の着手に先立って、申請者がこの方面で実施してきた多くの実験成績を整理して、今後供試する菌種・菌株を絞り込むことにした:合成ムラミルジペプチド(MDP)を予め静脈注射したC3H/HeNマウスに各種口腔レンサ球菌の全菌体を尾静脈注射すると、血清中に明確なTNF-aならびにIL-6活性が誘導された。総計13菌種131株の口腔レンサ球菌全菌体はいずれも有効であったが、S. salivarius, S. sanguinis等には強い活性が認められた(以上の成績は申請者が指導に当たった磯部豊博士の学位論文として公表されている)。3.当初の実験計画に沿って、S. salivarius, S. sanguinisを含む代表的な口腔レンサ球菌について、菌体を物理的に破砕して細胞壁画分、細胞質画分を調製した。4.別途、各種菌体成分をヒト口腔上皮細胞培養系に添加して、各種抗菌因子誘導能を検討する実験を進めている。その過程で活性型ビタミンD3との組み合わせで、各種菌体成分に明確な誘導作用を見出した。口腔常在菌叢の主体を成すレンサ球菌は各種糖類を代謝(発酵)して乳酸等の有機酸を産生する広義の乳酸菌類に属している。乳酸菌類はプロバイオテイクスとして利用されており、「善玉菌」として「悪玉菌」を駆逐して腸内細菌叢を改善すると言われている。近年、菌体成分をパターン認識する自然免疫系の解明が進み、プロバイオテイクスの自然免疫増強作用が注目されている。そこで、口腔レンサ球菌の自然免疫増強作用を実証して、これらの菌との共生の概念を確立したいと考えて本研究を企画した。初年度の25年度には、各種菌体成分をヒト口腔上皮細胞培養系に添加して、各種抗菌因子誘導能を検討した。その過程で、活性型ビタミンD3と菌体成分を組み合わせると、明確な誘導作用が認められることを見出した。そこで、本研究プロジェクトを進める基盤として、ビタミンD類の抗菌因子産生誘導能を改めて詳細に検討した。その結果、次のような知見を得た。1)ヒト口腔上皮系細胞としてCa9-22, HSC-2, HSC-3とHSC-4を供試したところ、いずれもビタミンD類に応答して抗菌因子を産生した。2)抗菌因子としてデイフェンシン類のHBD-2とHBD-3、カテリシジンのLL-37産生誘導を検討した。その結果、LL-37誘導が最も顕著であった。3)活性型ビタミンD3アナログのOCT(中外製薬より分与)でCa9-22を刺激するとLL-37遺伝子発現を誘導するばかりでなく、ELISA分析で6日目までLL-37の産生誘導が経日的に増強した。今後は、初年度で絞り込んだ口腔レンサ球菌種ならびに関連標品とビタミンD類を組み合わせてCa9-22細胞を刺激してLL-37を始めとする抗菌因子産生誘導能を詳細に検討して、口腔レンサ球菌の口腔粘膜恒常性維持機構の一端を証明したいと考えている。口腔微生物学・免疫学平成25年度に申請者が属する研究室の建物が改修作業に入って、現在に至るまで、研究は仮移転した臨時の研究室で実施している状況にある。共通実験室等も利用して上述の成果を得ることはできたが、当初の計画に対比すると、研究が遅れていると認識している。

今秋には改修なる研究室に戻って存分に実験が可能になる。特に、殆ど着手できなかったin vitro培養系の実験を集中的に実施して当初の計画に沿った研究を進めて、充分な成果を得たいと考えている。特に下記の実験に力を注ぎたい。1.上述のヒト口腔上皮系細胞培養系で、活性型VD3と口腔レンサ球菌関連標品を組み合わせて、抗菌因子産生誘導能を多面的に検討する。即ち、活性型VD3前処理→レンサ球菌標品、その逆、同時刺激を様々に試行して至適な条件を探る。ちなみにDV3アナログで単球系細胞に対しては強い分化誘導能を示した(研究業績欄参照)OCT(中外製薬より分与)も供試して検討する。なお、上記実験では4種の口腔上皮系細胞株といくつかの正常歯肉上皮細胞(primary culture)を供試しているので、口腔レンサ球菌標品に高い応答性を示す細胞を選んで、以降の実験を進める。抗菌因子としては市販のELISAキットが入手できるHBD2を主体に実験を進めるが、遺伝子発現に関してはHBD3やLL-37についても検討する。2.上記の成績を踏まえて、腸管上皮細胞でも同様の実験を実施する。3.至適な条件下で、抗菌因子誘導の機序解明を目指す。特に、想定されるレセプター系として、TLR2, TLR4, NOD2の関与の可能性をsiRNA法を駆使して探求する。上述の次第で、研究室の改修工事にため研究は当初計画よりも遅延傾向にある。特にin vitro培養系実験が遅れているので、研究費の残が生じた。改修後の研究室で、集中的に実験、特にin vitro実験を実施する予定である。昨年度の残金は今年度の予算と合わせて、その経費に充当する計画である。
オルガネラ核間に存在する細胞周期制御機構の解析

植物細胞ではオルガネラDNA複製(ODR)と核DNA複製(NDR)が協調している。NDRの開始には葉緑体からのテトラピロールシグナルが必要である。しかし、ODR開始の機構は不明である。本研究ではODR開始機構の一端を明らかにするために研究を行った。ODR開始にMAPKが関与することをすでに明らかにしており、このMAPKを特定した。このMAPKは光刺激により活性化された。また、ODR開始にはNDRと同様にテトラピロールシグナルが関与しており、ヘムがODRを誘導することを明らかにした。このことから、光環境変化をMAPKが、ミトコンドリアの状態をヘム蓄積がモニターしODRを開始させる事が示唆された。葉緑体とミトコンドリアは進化の過程で、細胞内共生によって誕生し、独自のゲノムと、複製、転写、翻訳機構を持っている。申請者らの単細胞紅藻シゾンを用いた解析から、核のDNA複製(NDR)はオルガネラDNA複製(ODR)によって制御されており、葉緑体で合成されるテトラピロール分子の一種が、シグナルとして働いていることを明らかにした。しかし、ODRの開始を制御する機構については明らかではない。そこで本研究では、ODRの開始機構を明らかにする事を目的とした。ODRの開始はMAPK阻害剤、CDK阻害剤及びプロテアソーム阻害剤によって阻害されることからMAPKカスケード、CDKとユビキチンリガーゼが関係することがすでにわかっていたので、これらの特定を目指した。ODR開始時にMAPK3特異的に活性化することから、ODR開始にMAPK3が働いていることを特定した。またCDKBがODR開始時期に特異的に活性化されることを明らかにした。ODR開始にはHemeが必要であるため、Hemeに特異的に結合するタンパク質を探索した結果、Hemeに結合するFーboxタンパク質を同定した。CDKの活性は結合するサイクリンによって制御されている。相互作用解析の結果からCDKBにはサイクリンAが結合している可能性が示唆された。MAPK3、サイクリンA、F-boxタンパク質の3種で相互作用を検討したが、明確な相互作用は確認できなかった。このことから、これら3種を結ぶ新たな因子が存在している可能性が示唆された。植物ホルモンであるアブシジン酸(ABA)がODR開始に関わっている可能性が示唆された。そこで、ODR開始とABAの関係についても解析を行い、ABAによりHeme合成が制御されることが明らかになった。このことからODR開始における、Hemeの上流制御領域にABAが関わっている可能性が示唆された。申請者らの単細胞紅藻シゾンを用いた解析から、核のDNA複製(NDR)はオルガネラDNA複製(ODR)によって制御されており、葉緑体で合成されるテトラピロール分子の一種が、シグナルとして働いていることが明らかになった。しかし、ODRの開始を制御する機構については不明であった。本研究では、ODRの開始機構を明らかにする事を目的とした。ODRにはMAPKカスケード、CDKとユビキチンリガーゼが関係することが示唆されていたので、これらの特定をおこなった。ODR開始にはMAPK3、CDKBーサイクリンA複合体(CDKB)、Fbx1が関与することを明らかにした。これら3種で相互作用を検討したが、明確な相互作用は確認できなかった。前年度の研究の過程で植物ホルモン・アブシジン酸(ABA)がODR開始を阻害することが明らかになったためMAPK、CDKB、Fbx1を結ぶ因子として、ABAに着目した。当初、恒常的にODR開始に関与する因子であると期待してABAの解析を行ったが、ストレス応答時にODRを介して細胞周期を停止させる機構であった。具体的にはABAは細胞内Heme量を変化させる事によって、ODRの開始を阻害していた。高等植物以外の真核生物にも、ABAが存在することが知られているが、その機能は不明であった。このように、陸上植物以外でABAの機能と作用の分子機構を明らかになった例は初めてである。本申請研究によって、ODRの開始機構の解明を大きく進めることができた。その過程でテトラピロールによる細部周期の制御と植物ホルモンが密接な関係にあることが示され、よりグローバルな研究分野へと発展することができた。植物生理本研究ではODR開始の分子機構を、断片的に得られている情報を元に仮説を立て検証する手法をとっている。仮説を証明する上で必要な解析は、1. ODR開始に関わるMAPキナーゼ経路の特定、2.未同定なサイクリンCDKの同定、3. ODR開始に関わるHeme機能の同定、4. ODR開始機構の活性化機序の解明の4つである。これらの内1-3を本年度は明らかにした。

当初は1-3のそれぞれの機構が直接的な相互作用をしていると考えていたが、本年度の研究の結果、直接的な相互作用は認められなかったため、新たな因子が介在している可能性が考えられた。新たな因子の候補として植物ホルモン・アブシジン酸を検証した。申請者は過去の研究の過程で、アブシジン酸の添加によってODRが停止することを明らかにしている。高等植物は植物ホルモンが細胞周期を制御している例は数多く存在している。このことからODR開始にアブシジン酸が関わっている可能性が考えられた。解析を進めた結果、アブシジン酸によって細胞内Heme量が制御されていることが明らかになった。このことからODR開始がアブシジン酸の制御を受けている可能性が示唆された。今後はMAPキナーゼ、CDK、Hemeに加えアブシジン酸の4因子に関わる相互作用を検証しODR開始の分子機構を明らかにしていく。上記の理由から目的の達成度は6割以上と考えられ、研究目的に対する本年度の進捗状況は概ね順調に進展している。本年度の成果によりODR開始に関わるMAPキナーゼ経路、CDK、ユビキチンリガーゼ・F-boxタンパク質が明らかになった。さらに、細胞内Heme量がアブシジン酸によって制御されていることも明らかになった。本年度特定したF-boxタンパク質はHemeと結合性を持っていた。近年、リガンドが結合することでユビキチンリガーゼのターゲット認識が変化する知見が多く報告されている。このことから、Hemeと結合することでユビキチン化ターゲットとの結合性が変化すると考えられる。本年度特定したF-boxタンパク質のターゲットがODR開始のキーファクターであると考えられる、次年度はユビキチンリガーゼのターゲットを明らかにし、MAPキナーゼ経路、CDK、との分子的な関わりを明らかにすることで、本研究の目的を達成する予定である。当初の研究計画では2ハイブリット解析やリコンビナントを用いた相互作用解析で各因子の関わりを明らかにする予定であった。しかし、全く未知の因子が新たに関わっている可能性が示唆されたため、より簡便かつ確度の高い方法として生化学的にタンパク質複合体を精製し、質量分析を用いて同定する方法に計画を変更することとした。申請者の所属機関にて共同機器として質量分析装置が導入されたため、安価に解析を進めることが可能になった。質量分析を用いることによってin vivoでのタンパク質複合体を網羅的に同定することが可能であり、2ハイブリット解析の様に擬陽性を疑うことが無い利点がある。
X線・可視光の同時観測による変動X線天体の研究

1天体観測用CCDカメラシステムの改良宇宙科学研究所鹿児島宇宙空間観測所(KSC)の60センチ望遠鏡用として開発を進めているCCDカメラ装置の改良を行った。ハード面では、装置の制御・データ処理に用いるマイクロコンピュータをレベルアップし、ハードディスク及びカラープリンタを追加するとともに、ソフト面では撮像データからの雑音の補正方法の改善、データ取込み速度の向上、グラフィック描画速度のスピードアップを実現した。これらの改良はKSCでの多くの試験観測に基づいて、CCDカメラとマイクロコンピュータとのインターフェイス回路及び制御プログラムの最適化を行うことにより実現したものである。2活動的銀河中心核の測光及びSS433のモニター測光活動的銀河中心核であるMCG8-11-11,NGC4051の中心核光度の測光をCCDカメラ及び三色光電測光装置を用いて行なった。CCDカメラによるデータと光電測光によるデータを比較することにより、銀河中心核のような広がった天体中の光源に対するCCD撮像データの最適な測光解析方法を見つけ、また最適な露光時間を決定すべく現在解析を進めている。本年度の観測は来年度に予定されているアストロCによるX線と光の同時観測のための予備観測として行なったものである。また数年来続けている特異変動天体SS433の測光もCCDカメラ及び光電測光により行なった。さらに本年度初めには、CCDカメラの特微を生かしてハレー彗星の中心核の撮像を連続して行い中心核近傍の形状変化の追跡を行うためのデータを得ることができた。このデータは岡山の東京天文台のデータと合わせて解析が東京天文台のグループにより進められている。
Leigh脳症の新たな病因解明とその治療法の確立

Leigh脳症は乳幼児期に発症し中枢神経系の特異的な画像所見および高乳酸血症・高ピルビン酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙攣などの神経症状を伴う小児難病である。本症の病因としてはピルビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)の異常や電子伝達系酵素異常やミトコンドリアDNA異常などが報告されている。またLeigh脳症をきたすミトコンドリア病の治療法は未だ確立されていないが、本症にはビタミンB1大量投与により臨床症状の改善、乳酸値の低下がみられるビタミンB1反応例が存在する。しかしビタミンB1反応性の機構については不明な点が多いため、これらの解明および治療法の確立が急務である。本研究ではまず全国から酵素診断を依頼された52例のLeigh脳症患児から得た培養細胞を検索して26例の病因を明らかにした。その内訳はPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例、ミトコンドリアDNA異常症13例(T8993G変異10例、T8993C変異2例、A8344G変異1例)であり、ビタミンB1反応性PDHC異常症が4例みられたことより、本症の頻度が高いこととビタミンB1大量療法の有用性が判明した。最近、欧米人の複合体IV欠損症のLeigh脳症患児においてSURF-1遺伝子の変異が見出されたので、日本人患児のSURF-1遺伝子解析を行った。検討しえた3例中2例においてSURF-1蛋白を大きく変化させる新たな遺伝子変異を見出した。この結果により日本人のLeigh脳症の病因としてSURF-1遺伝子が重要であることが判明し、Leigh脳症をきたす新たな遺伝子変異が明らかになった。Leigh脳症は中枢神経系における特異的な画像所見および高乳酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙彎などの神経症状を伴う小児難病である。本症の病因としてはピルビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)や電子伝達系酵素の異常およびミトコンドリアDNA変異などが報告されている。またLeigh脳症の治療法は未だ確立されていないが、本症にはビタミンB_1大量投与により臨床症状の改善、乳酸値の低下がみられるビタミンB1反応例が存在する。しかし、これらのビタミンB_1反応性の機構には不明な点が多いため、これらの解明および治療法の確立が本研究の目的である。本研究ではまず全国から当科に酵素診断を依頼された44例のLeigh脳症患児から得た培養細胞を用いて、ビタミンB_1酵素であるPDHCを中心に検討して、22例の病因を明らかにした。すなわちPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例,ミトコンドリアDNA変異9例(T8993G7例、T8993C1例、A8344G1例)であった。Leigh脳症患児の50%で病因が判明したが、半数の症例では病因は不明であった。さらにビタミンB_1反応性高乳酸血症患者13例中5例がLeigh脳症患児であった。これらの病因検索では2例がPDHC異常症であったが、他の3例の病因は不明であった。病因不明のLeigh脳症患児において、新たなLeigh脳症をきたす病因を見いだすために、これまでLeigh脳症患児で高率に変異が見いだされているATPase6領域のミトコンドリアDNA変異の有無をSSCPを用いて検討した。これらにより、正常とは異なるsscpパターンを示す2例を見いだした。今後はこれらの遺伝子解析を行い病因を明らかにする。

Leigh脳症は中枢神経系における特異的な画像所見および高乳酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙攣などの神経症状を伴う小児難病である。本症の病因としてはピルビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)や電子伝達系酵素の異常およびミトコンドリアDNA変異などが報告されている。またLeigh脳症の治療法は未だ確立されていないが、本症にはビタミンB_1大量投与により臨床症状の改善、乳酸値の低下がみられるビタミンB_1反応例が存在する。しかし、これらのビタミンB_1反応性の機構には不明な点が多いため、これらの解明および治療法の確立が本研究の目的である。本研究ではまず全国から当科に酵素診断を依頼された44例のLeigh脳症患児から得た培養細胞を用いて、ビタミンB_1酵素であるPDHCを中心に検討して、22例の病因を明らかにした。すなわちPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例.ミトコンドリアDNA変異9例(T8993G7例、T8993C1例、A8344G1例)であった。Leigh脳症患児の50%で病因が判明したが、半数の症例では病因は不明であった。さらにビタミンB_1反応性高乳酸血症患者13例中5例がLeigh脳症患児であった。複合体IV欠損症患者のSURF-1遺伝子に変異が見出されたので、この遺伝子について解析した。検討しえた3名の患児のうち2名においSURF-1蛋白を大きく変化させる変異を見出した。この結果Leigh脳症をきたす新たな遺伝子変異が明らかになった。Leigh脳症は乳幼児期に発症し中枢神経系の特異的な画像所見および高乳酸血症・高ピルビン酸血症を呈し、精神運動発達遅延、痙攣などの神経症状を伴う小児難病である。本症の病因としてはピルビン酸脱水素酵素複合体(PDHC)の異常や電子伝達系酵素異常やミトコンドリアDNA異常などが報告されている。またLeigh脳症をきたすミトコンドリア病の治療法は未だ確立されていないが、本症にはビタミンB1大量投与により臨床症状の改善、乳酸値の低下がみられるビタミンB1反応例が存在する。しかしビタミンB1反応性の機構については不明な点が多いため、これらの解明および治療法の確立が急務である。本研究ではまず全国から酵素診断を依頼された52例のLeigh脳症患児から得た培養細胞を検索して26例の病因を明らかにした。その内訳はPDHC異常症5例、複合体I欠損症4例、複合体IV欠損症4例、ミトコンドリアDNA異常症13例(T8993G変異10例、T8993C変異2例、A8344G変異1例)であり、ビタミンB1反応性PDHC異常症が4例みられたことより、本症の頻度が高いこととビタミンB1大量療法の有用性が判明した。最近、欧米人の複合体IV欠損症のLeigh脳症患児においてSURF-1遺伝子の変異が見出されたので、日本人患児のSURF-1遺伝子解析を行った。2名においてSURF-1蛋白を大きく変化させる新たな遺伝子変異を見出し、日本人のLeigh脳症の病因としてSURF-1遺伝子が重要であることが判明し、新たな遺伝子変異が明らかになった。
EGFリガンドによる肺損傷・線維化に対する新たな治療法開発

(1).特発性間質性肺炎におけるEGFRリガンドの発現ヒト間質性肺疾患における血清中EGFRリガンド、amphiregulin濃度は対象群と比較して上昇していた。特に特癸性肺線維症患者では有意に上昇していた。肺病変がより進行した群で血清中amphiregulin濃度は高い傾向を示していた。(2).マウス・ブレオマイシン肺線維症モデルのおけるEGFRリガンドの発現肺損傷・繊維化の動物モデルであるマウス・ブレオマイシン肺臓炎において肺組織中のEGFRリガンド、amphiregulinは発現増強していた。(3).EGFRリガンド投与時の細胞内シグナル伝達マウス・ブレオマイシン肺臓炎モデルでの検討の結果、EGFRリガンド、amphiregulin投与によって、肺上皮細胞におけるAktとErkのリン酸化が増強されたことから、これらのシグナル経路により細胞生存に働くことが示唆された。(4).肺損傷・肺線維化に素するEGFRリガンド投与効果マウス・ブレオマイシン肺臓炎モデルでの検討の結果、EGFRリガンド、amphiregulin投与は、マウスの死亡率、肺組織病変の程度、肺組織中アポトーシス細胞数いずれも有意に抑制した。(5).肺損傷・肺腺維化におけるEGFRリガンドの役割肺損傷・線維化の急性期ではamphiregulinは肺上皮細胞に保護的に作用し、病変進行抑制の役割をはたすが、一方、慢性期ではおそらく線維芽細胞に作用して線維芽細胞増殖を促し、肺線維化進行に関わっているのではないかとの仮説が成り立つ。本年度の研究実績1.マウス・ブレオマイシン肺損傷・肺線維症モデルにおけるamphiregulinの検討ブレオマシン肺臓炎モデルを用いて、肺損傷と肺線維化の過程におけるEGFRとリガンドであるamphiregulinの発現をWestern blot法によって検討した結果、ブレオマイシン投与によって内因性のamphiregulinの発現は増強した。2.マウス・ブレオマイシン肺損傷・肺線維症モデルにおけるamhireulinの投与効果ブレオマシン肺臓炎モデルを用いて、肺損傷と肺線維化の過程に対するamphiregulinの投与効果を検討した。Amphiregulinは、上皮細胞のアポトーシス、組織学的肺損傷と線維化の程度、肺組織中のコラーゲン含量をいずれも有意に抑制し、マウスの生存率も延長した。3.amphiregulinのアポトーシス抑制効果の機序肺線維症患者におけるamphiregulinの発現の検討前年度、動物モデルの検討で、EGDRリガンドであるamphiregulinが肺線維化に対して抑制的に働くことを見いだした。そこでまず、ヒト肺線維症患者におけるamphiregulinの発現検討を行った。免疫組織染色法をおこなったところヒト肺線維症患者の肺組織では気管支上皮細胞、肺胞上皮細胞さらには間質の線維芽細胞に強い発現を認めた。また患者血清中のamphiregulin濃度をELISA法で測定したところ、疾患群では平均値87.3pg/mlと健康対照群平均値5.0pg/mlに比べて有意に高い結果となった。さらに呼吸機能障害の程度を示す%VCとの関連を検討したところ、%VC70%未満群では70%以上群と比べて血清amphiregulin濃度が高い傾向にあった。以上の結果から、肺線維症患者においては内因性amphiregulinは動物モデルとは異なり、むしろ疾患に進行に関与している可能性が示唆された。したがって、肺線維症に対してamphiregulinを投与した場合は、動物モデルの結果とは逆に病態を悪化させてしまうと予想される。
ポスト石油化学産業体系としてのLactate Industryのための新発酵技術

Lactococcus lactis IO-1によるサゴデンプンからのL-乳酸発酵を行った。クロスフローろ過システムとレーザー濁度計による菌体濃度コントロール装置を組み合わせたシステムを用い、pHを指標としたpH-dependent substratefeeding法により基質供給を行った。このシステムにより、高い生菌数を維持したまま、高希釈率と高菌体濃度を実現することができ、サゴデンプン酵素加水分解物からの連続的L-乳酸発酵を行うことができた。pH-dependent substratefeeding法によるLactococcus lactis IO-1のL-乳酸生産と生産性は、濁度コントローラにより維持される菌体濃度や希釈率、フィード液中のグルコース濃度に依存していた。菌体濃度を15g/lに制御した場合、希釈率が0.21、0.50、1.1h^<-1>の時、容積当たりのL-乳酸生産性はそれぞれ8.2、19.3、33.1g/l・h、また、その時の残存グルコース濃度は、それぞれ1.90、0.24、3.80g/lであった。高菌体濃度の時は、高希釈率により培養液中の乳酸濃度を低く抑えることが可能となり、高L-乳酸生産性を実現できた。菌体濃度を増加させると容積当たりのL-乳酸生産性は比例的に増加した。このシステムにより、培養液中の菌体濃度を高くコントロールすることにより、L-乳酸生産性を高くすることができた。また、本培養システムを用いることにより、高菌体濃度における高希釈率を実現し、培養液中の乳酸濃度を低く保ち、さらに培養液中の生菌数レベルを高く保つことにより、高いL-乳酸生産性を有する高効率的L-乳酸発酵生産システムの構築に成功した。
効果的教材開発を目指した多様な英語の理解度に関する研究

国際語としての英語の多様性、及び国際共通語としての英語教育の必要性に鑑み、本研究では日本人英語学習者と多様な母語の英語話者間の音声英語理解度に関する基礎研究を行った。言語学的、心理学的、教育学的観点から、相互理解を阻む要因を複合的に分析、教材開発に必要な要件について分析した。具体的には、英語訛り、理解度、学習者の英語力との相関、日本語訛りに対する受容態度と英語訛りに対する受容態度との関連性、多様な母語話者に対する日本人英語の理解度などに焦点を当てて調査した。25年度は、主として中級レベル以下の日本人学習者の英語によくみられるカタカナ英語の理解度を、多様な母語の聞き手を対象として調査した。聞き手は、英語を母語とするグループ(Inner Circle)の代表としてアメリカ人大学生、英語を公用語として使用するグループ(Outer Circle)のフィリピン人大学生、英語を外国語として学習するグループ(Expanding Circle)の韓国人大学生である。各グループの被験者は、それぞれの母国の大学に在籍し、日本語を履修したことはない。これらの被験者はカタカナ英語の語彙を含む英文40個を聞かせ、2つのタスクを課した。一つ目はカタカナ英語的発音から意図された正しい英単語を復活させるタスク、二つ目は、いわゆる和製英語から意図された正しい英語の意味を推測させるタスクである。調査項目の難易度ランキングを被験者グループ間で比較したところ、アメリカ人グループとフィリピン人グループは似通ったランキング傾向を示したが、韓国人グループのランキングはこれら2グループとかけ離れた特異なものであった。韓国語にはカタカナ英語に近い発音の単語がある一方で、音声学的にかけ離れたものも多いこと、また和製英語と同形態・同意味の語彙表現があることが大きく影響しているものと考えられる。英語指導者や教材開発者は、アメリカ人やフィリピン人のようなInner Circle, Outer Circleの聞き手を念頭にカタカナ英語を扱うべきであるが、韓国人聞き手のような特異なケースを社会言語学的事例として紹介することも可能であろう。以上の成果については、アメリカ応用言語学会(AAAL2014)にて口頭発表した。日本人英語の国際的理解度を阻害する要因を音声学的見地から分析した。具体的には、複数の日本人大学生が音読した音声データを、母語を異にする4つの大学生被験者グループ(英語を母語とするアメリカ人、英語を公用語とするフィリピン人、英語を外国語として学ぶ韓国人、英語を外国語として学び音声提供者と同じ母語を持つ日本人、各グループ約50名)に聞かせ、ネイティブ・スピーカーの規範的発音とは異なる逸脱箇所(wrong word substitution, lack of sentence stress, shifted word stress, problems with vowels, and problems with consonants)を中心にディクテーションさせたところ、ディクテーション得点に差はあるものの、理解度を損ねる音声学的ポイントについてグループ間に共通性があることがわかった。国際語共通語としての英語教育を目指す教育現場や教材作成過程において、注目すべき結果であると考えられる。また、一般的日本人英語学習者になじみのない訛りを持つ英語(インド、スリランカ、ガーナなどの英語)を大学生被験者に聞いてもらい、被験者の母語における方言や訛り使用状況が、なじみのない訛りの英語評価にどう影響するのかを調査した。さらに、被験者の英語発音に対する自己評価が、訛りのある英語評価にどう影響するのかについても調査した。結果から、日本語の訛りや方言に対する見方・考え方が、さらには自身の英語発音に対する評価がL2の音声評価に影響を与えていることが示唆された。26年度は、(1)インドネシア人聞き手に対するカタカナ英語・和製英語の理解度調査、(2)多様な英語発音に対する日本人学習者の理解度のモデル化という2つの研究課題に重点的に取り組んだ。以下に概要を説明する。(1)高等教育機関に在籍するインドネシア人学生集団に対して、カタカナ英語的発音から話者の意図した英単語を復活させること、和製英語から意図した意味内容を推測することの2つのタスクを与えたところ、調査項目の難易度ランキングにおいてアメリカ人英語母語話者とは明らかに異なる傾向が見られた。また、インドネシア人被験者の英語力と日本人英語の理解度との相関関係について調べたところ、リーディング力の高い被験者ほどカタカナ英語・和製英語の意味をよく推測できるという結果が得られた。カタカナ英語・和製英語が理解度低下の主要因である一方で、文化や英語力などの聞き手側要因も理解度に寄与しうることを教員や学習者は考慮すべきだろう。(2)英語を第二言語として使用するアジア及びアフリカの人々の英語を日本人英語学習者に聞かせ、被験者の英語力、理解度評価、訛り評価、実際の理解度の4つを変数として相互の関連性について調べた。結果から、理解度評価及び訛り評価は実際の理解度の指標にはなりにくい一方で、英語力は実際の理解度の説明変数となりうること、訛り評価は英語力に影響されないことが明らかになった。

さらに、重回帰分析の結果、英語力下位グループのリーディング力が実理解度に影響することが示唆されたが、上位・中位グループについては同様の結果が得られなかった。英語教育当該研究は、国際共通語としての英語理解度向上のための効果的教材開発に資する情報を得ることを目的とする基礎研究である。25年度は日本語のいわゆるカタカナ英語に焦点を当て、どのようなカタカナ英語が多様な母語の聞き手の理解度を損なうのか、またそれは聞き手の母語にかかわらず世界共通であるのか否かについて調査・分析した。結果をアメリカ応用言語学会大会にて発表するなどして、研究はおおむね順調に進展している。本研究は、国際コミュニケーションの場における日本人英語の理解度を阻害する要因の解析を目標の1つに掲げている。24年度は音声学的見地から日本人英語を分析した結果を論文にまとめ、公刊した。目標に照らして一定の成果を上げることができたといえる。カタカナ英語の理解度に関する研究については、聞き手にインドネシア人大学生グループを加え、アジアの文脈でさらに調査の幅を広げる予定である。これについては、すでにインドネシア人大学教員から研究協力の了承を得ている。日本人を聞き手とする多様な英語の理解度に基づく英語カテゴリー作成については、当該年度中に十分な種類の音声サンプルが得られなかったため、当初予定していたノンネイティブ英語を含む変種カテゴリーの構築からネイティブ英語に限定したカテゴリーへと計画変更の予定である。これについては、音声編集等の作業が整い次第、データ収集を開始する。日本人大学生を対象として多様な英語の理解度を調査し、変種間の相対的理解度に基づく英語カテゴリーを構築する。具体的方法は次の通り。アメリカ、イギリス、オーストラリアなどの英語ネイティブ・スピーカー(Inner Circle English speakers)、及びアジアやアフリカ地域において公用語として英語を使用するノンネイティブ・スピーカー(Outer Circle English speakers)から音声サンプルを集め、日本人英語学習者に呈示する。音声の理解度をディクテーションにより、意味・内容の理解度をアンケートにより調査し、相対的理解度を調べる。その結果を図式化して変種カテゴリーを作成する。なお、サンプルは、標準的な英語で書かれたスクリプトをそれぞれのアクセントで読んでもらうものと、自己紹介や同じ変種話者間の対話など、事前の準備なしに自由に話してもらうものの2種類を予定している。また、日本人英語の国際的理解度を阻害する要因を形態論、及び語用論的見地から分析する研究にも着手する予定である。当初予定していたアメリカ出張滞在日数が9日間から5日間に減じたため。次年度インドネシアで開催される国際学会にて、インドネシア人聞き手を対象としたカタカナ英語の理解度について発表予定。このための旅費の一部として支出する。多様な英語の音声収録のため、研究代表者が多民族・多言語国家であるオーストラリアへ渡航する(海外渡航旅費)。