hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
急冷凝固およびメカニカルグラインディングによるMg_2Ni水素吸蔵合金の組織制御

活性化前の状態ではMg_2Ni_<0.9>Fe_<0.1>合金MG材が最も低い温度でプロチウムを吸蔵し始め、また、活性化後には各試料とも室温付近で吸蔵し始めた。これは、MGあるいは活性化による新規表面の生成および反応面積の増大に起因すると考えられる。P-C-T曲線の測定結果から、各試料のMg_2Ni相のプラトー圧力は、吸脱蔵時ともにほぼ一定値を示した。最大吸蔵量はMg_2Ni_<0.9>Fe_<0.1>合金急冷凝固材が最も多く、また各処理材毎にNi-rich Mg_2Ni合金と比較すると、Mg_2Ni_<0.9>Fe_<0.1>合金の方が吸蔵量が多くなった。Mg_2Ni_<0.9>Fe_<0.1>合金急冷凝固材はプロチウム吸蔵速度も最も速い。これは、Feによる置換効果と、急冷凝固による組織の微細化効果が現れたものと考えられる。以上の結果から、急冷凝固あるいはMGとFeの置換は、プロチウム吸蔵特性の改善に有効であると考えられる。本研究ではMg_2Ni合金の吸・脱蔵温度の低下および吸蔵速度の向上を目的として、第三元素による置換を試みた。第三元素としては、Mg_2NiH_4化合物の生成エンタルピーの絶対値を減少させると予想されるMn,Fe,Co,Cu,Al,ZnおよびAgを選択した。溶製した合金の組織の均質化を図るため、急冷凝固およびメカニカルグラインディング(MG)を施した。得られた試料のミクロ組織観察を行い、プロチウム吸・脱蔵特性を評価した。プロチウム吸蔵特性としては、水素雰囲気中において室温から300°Cまでの昇温中に吸蔵されるプロチウム量および吸蔵開始温度、250°Cにおけるプロチウム吸蔵速度曲線を求めた。プロチウム放出特性は、TG/DTA装置を用いて、アルゴン雰囲気中において室温から400°Cまでの昇温中に放出されるプロチウム量、放出開始温度および活性化エネルギーを求めた。得られた結果を要約すると以下のようになる。1.活性化後の各試料は、プロチウム吸蔵時の格子ひずみの増大に伴った亀裂の進展による新規表面の生成およびそれに伴う反応面積の増大により室温付近からプロチウムを吸蔵し始め、その吸蔵量も増加する。2.プロチウム吸蔵速度は急冷凝固材が最も速い。特に、Mg_2Ni_<0.9>Fe_<0.1>合金およびMg_2Ni_<0.9>Co_<0.1>合金が最も速い吸蔵速度を示す。これは、FeおよびCo置換効果と急冷凝固による組織の微細化のためと考えられる。3.水素化後のアルゴン雰囲気中での放置時間の増加に伴い、水素化物が高温相から低温相へと構造変態し、放出温度は低下し、放出量は増加する。同様な現象は、水素化後の試料を破砕した場合にも見られる。4. 3d遷移金属の置換により脱水素化反応の活性化エネルギーおよび水素化物の生成エンタルピーが減少する。以上の結果から、3d遷移金属の置換と急冷凝固およびMGは、プロチウム吸・脱蔵特性の改善に有効であると考えられる。
広帯域海底地動水圧同時観測システムの構築

本研究課題では、世界的に実績のある広帯域海底地震観測システムに独自に開発した差圧式水圧計を装備し、地動と水圧を同時に測定するシステムを開発するというものであった。特に、海洋潮汐エネルギーの散逸問題に興味があり、それを狙うためには、10^4秒の帯域で100Paの感度が必要である。独自に設計した差圧式水圧計はこのような長周期側にも高感度である。最終年度であった今年度は、昨年度フィリピン海に設置した観測システム4機を回収した。データは期待通りのスペックを満たすものであり、1年間という長期連続データを取得することに成功した。観測期間1年の内には、千島列島で発生した津波を伴った地震や、ロタ島で発生した海底火山噴火などをとらえている。最も興味のある海洋潮汐に関連した波のひとつとして、地動と水圧にコヒーレントな重力波の存在を確認した。また、この波は100km程度離れた複数の観測点においてもコヒーレントであり、アレイ解析を行うなどして波の起源について議論できるデータを得たことになる。これまでに、海洋中にユビキタスに存在する水中音波を地震計で検出することにより、内部潮汐波の水平方向の励起量を見積もる手法を見いだしている。一方で、独自に開発した差圧式水圧計を用いることにより、その地点での内部潮汐波の励起量を見積もることができ、地動水圧同時観測することにより、空間的な内部潮汐波の励起量を見積もることができることが期待される。今回の観測結果から、100km程度の地動水圧同時アレイ観測を行うことにより、海洋潮汐エネルギーの散逸問題に対し、地震学的観測手法から攻めることができることを確認したことは意義深い。ところで、装備した差圧式水圧計は温度変化に伴う評価が難しい。実際の海底低温下におけるデータを解析することにより、この温度特性を評価することにも絶好の記録を得ることができたと考えている。最近開発設計した、温度校正機器を用いることにより、温度特性について評価し、それをもとに実用的な地動水圧同時観測システムとして確立していきたい。平成15-16年度にわたり独自に開発した差圧式水圧計(科研費若手(B)課題番号15740281)と世界的に実績のある広帯域海底地震計とを1つにまとめ、海底での地動と水圧を同時に測定する新しいシステムを設計し、実際に4機ほど作成した。試験的な要素もあるため、時定数の異なる2種類のものとした。それらを平成17年10月に伊豆小笠原マリアナ海域に設置し、1年後の回収まで観測を継続する。比較観測のため、時定数の異なるものを2機、同深度に設置した。4機の内、ひとつは、鳥島近傍に設置しており、今年1月1日の火山性であると推測されるメカニズムをもつ地震(マグニチュード6.0)および3月28日に起きた深発地震(震源413km)を捉えているものと期待される。また、観測開始直後に、ロタ島(グアム島北方の火山島)海底下で火山活動の様子をROVに設置されたビデオで捉えた映像を既に入手しており、これとの比較を行う予定である。また、観測開始後には大型の台風発生、長期停滞もあり、それによる気圧変動と観測されたであろう水圧変動を比較することで、水圧計そのものの感度を測定できるはずである。このように、固体地球物理的にも海洋物理的にみてもアクティブな場所による観測により、自然界の様々なインプット-アウトプットを記録していることが期待される。また、この機器開発のきっかけともなった、内部潮汐波の励起に伴う海中音波速度の半日周期変動について論文をまとめ、Geophysical Research Lettersに掲載された。エディターに評価されハイライト論文と位置づけらた。

ところで、装備した差圧式水圧計は温度変化に伴う評価が難しい。実際の海底低温下におけるデータを解析することにより、この温度特性を評価することにも絶好の記録を得ることができたと考えている。最近開発設計した、温度校正機器を用いることにより、温度特性について評価し、それをもとに実用的な地動水圧同時観測システムとして確立していきたい。
リソグラフィー技術と合金の相分離現象を融合した超高アスペクト比微細加工法の創成

合金の相分離現象には高アスペクト比のナノ構造を自発的に形成するものが多い。本研究では、大気中での超微細塑性加工を活用し相分離の起点を一定間隔に制御する新しい加工技術を開発している。層状組織を形成するTi-Al合金に注目し、超微細塑性加工によるγ-TiAl相析出サイトの制御を試みた。超微細塑性加工後のTEM観察の結果、変形部の下にのみ(0001)面に沿う高密度な転位帯の形成が認められた。1173 Kにて二相化焼鈍を施すと変形部にのみγ相が析出した。すなわち超微細加工により析出物の位置の制御に成功した。昨年度構築したフォトリソグラフィーと相分離現象の組合せによる新規な超高アスペクト比微細加工法の基礎に基づき、hcp基D019型規則構造を有すα2-Ti3Al母相の(0001)面上にfcc基L10型規則構造を有すγ-TiAlが整合析出するTi-Al合金単結晶を用いて実験を行った。単結晶は、アーク溶解法と浮遊帯域溶融法により製造した。α2単相となる1200°Cにて溶体化後、板面が(0001)面に垂直な、10×10×1 mm程度の板状溶体化材を得た。γ相の核生成サイトとしての微小圧痕を一定間隔で導入するため昨年度フォトリソグラフィーにより作製したモールドを用いて、ナノインプリント実験を行った。ナノインプリントにより層状組織をにはα2-Ti3Al母相の(0001)面に平行に幅1μm間隔1μmの圧痕の列を形成することに成功した。圧痕を繋ぐように底面すべりのすべり線を導入することができた。しかしながら、導入された転位の量が期待していたよりも少ないことが、FIBマイクロサンプリングを用いた断面TEMにより確認された。またモールドの損傷も大きいため、本手法による実験は中段した。予定を変更して、ダイヤモンドナイフと超微細加工装置を用いて底面に平行な溝を形成する「ナノ塑性加工」により局所的に塑性ひずみを導入後に二相化熱処理でを行った。これにより、底面に沿って高密度な転位を導入することに成功し、その後の熱処理により、幅100nm以下、間隔500nmに制御されたγ相を析出させることに成功した。すなわち、目標としていた「局所ひずみを一定間隔で導入することで、一つ一つのγ相の析出相を制御することに成功した。さらに、その後選択溶解により分布が制御されたスリット構造を作製している。昨年度に報告したとおり、リソグラフィーで作製したモールドのインプリントによる、Ti-Al合金中のγ相析出サイトの制御は困難であった。しかしながら、インプリントされた表面には、圧痕を繋ぐように底面すべりの痕跡が連なっていたことから、局所塑性加工による底面すべりの導入自体は可能であることが示唆された。その為、ダイヤモンドナイフを用いた超微細塑性加工により相分離の起点を一定間隔に制御する新しい加工技術の開発に挑戦した。この研究では、アーク溶解によりγ相とα2相が交互に積層した層状組織をもつTi-39at%Al母合金を作製し、光学式浮遊帯域溶融法による単結晶育成後、板状結晶を切り出した。板面はγ-TiAl相が析出する(0001)面と垂直な{7 -2 -5 0}面とした.溶体化処理、真空封入後、α単相となる1473 Kにて溶体化した後に氷水中に焼き入れることでAl過飽和α2単結晶を得た。その結晶表面に、ダイヤモンドナイフを(0001)底面そって押し当て、先端角度60°刃渡り0.6 mmあるいは1.5 mmのV字状超微細塑性加工装置を用い、2μmから40μmの一定間隔で、25Nの荷重を加え、局所的に塑性変形を加えた。加工溝周辺の内部組織を、集束イオンビーム(FIB)加工により作製した薄膜の透過電子顕微鏡(TEM)観察し、変形部の下にのみ(0001)底面に沿って高密度な転位の帯が形成されることを見出した。これに800°Cでの二相化焼鈍を施すと、試料全体にγ-TiAl相が生じてしまった。この理由として、800°Cでは未加工部でも相分離の駆動力が大きく、加工による駆動力上昇の効果が小さい為と考え、未加工部での駆動力が下がるように時効温度を900°Cに挙げて実験したところ、加工部のみγ相が析出し、γ相の分布を制御することができた。フォトリソグラフィーと相分離現象の組合せによる新規な超高アスペクト比微細加工法の基礎を構築した。

プロトタイプ材料として、hcp基D019型規則構造を有すα2-Ti3Al母相の(0001)面上にfcc基L10型規則構造を有すγ-TiAlが整合析出するTi-Al合金単結晶を選択した。単結晶は、アーク溶解法と浮遊帯域溶融法により製造した。α2単相となる1200°Cにて溶体化後、板面が(0001)面に垂直な、10×10×1 mm程度の板状溶体化材を得た。γ相の核生成サイトとしての微小圧痕を一定間隔で導入するためのモールドを、SiC基板から、WSi-CVD膜とSU-8レジスト膜からなるマスクをフォトリソグラフィーにより作製した後に、プラズマエッチングを施して製造した。二相化熱処理後に選択溶解を施し構造を観察した。二相化熱処理のみで形成された層状組織をにはα2-Ti3Al母相の(0001)面に平行にγ相が整合析出しており、界面はnmオーダーで平滑であることが確認された。熱処理のみで形成されたγ相の間隔及び厚さは10nm10μm程度の範囲で分布している。溶体化材にマイクロインデンテーションで局所的に塑性ひずみを導入後に二相化熱処理で形成された層状組織の断面像、表面像及び層状組織の選択溶解により形成された超高アスペクト微細構造の断面像から、γ相が圧痕の近傍でのみ形成されていることが確認された。選択溶解により幅が1μm以下(光波長程度)深さ20μm以上の超高アスペクト比微細スリットが形成された。これらにより、(i)溶体化後の局ひずみの導入によりγ相形成サイトを制御でき、(ii)その後選択溶解により分布が制御されたスリット構造が作製できる事が確認され、局所ひずみを一定間隔で導入して同様のプロセスを行えば、間隔を制御したスリット構造の形成が可能なことが示された。ナノインプリントによるひずみ導入が期待していたほど効果的ではなかったため、ダイヤモンドナイフと超微細加工装置によるひずみ導入へと、ひずみ導入方法を変更した。このひずみの導入方法の変更のたため、全体的に計画が少し遅れた。東日本大震災の影響で、研究室の安全対策改装工事が未だ完了しておらず、初年度に予定していたクリーンブースの設置ができておらず、ナノインプリント実験は北海道大学でのみ行っていたため。ひずみ導入方法の変更により、析出相位置の制御には成功したので、今後は超微細加工装置によりひずみを導入した結晶を用いて選択溶解によるスリット構造作製を実施する。すでに実験の準備はできているので、後は実施するのみである。耐震改装工事が5月中には完了する予定であるので、その後当初予定していたクリーンブースの設置を行い、東北大学でもナノインプリントの実験を行うことで、遅れを取り戻すべく研究を推進していく。実験に必要な物品は、昨年度に揃えている。次年度の研究費は、消耗品と国際会議での研究成果発表の費用として用いる。(a)ナノインプリント:(A)で得た結晶表面に、リソグラフィーで作製したSiC製ナノピラーアレイを用いて、一定間隔で圧痕を形成する。; (b)二相化焼鈍:圧痕を核生成サイトとしてγ相を析出させる。;(c)透過電子顕微鏡(TEM):集束イオンビーム(FIB)装置により圧痕断面観察用TEM試料を作製し、焼鈍前の転位組織と焼鈍後の層状組織を観察する。;(d)選択溶解と)構造の観察:電解腐食によりγ相を選択的に溶解し形成されるフィン構造を観察する。リソグラフィーによるAl高過飽和領域配列の形成:(e)リソグラフィー装置によるAlナノワイヤーアレイの形成:溶体化したTi-Al板状単結晶表面に、リソグラフィーによりレジストパターンを形成しスパッタすることで一定間隔でAlナノワイヤーを形成する。
核内受容体の相互作用による標的遺伝子発現ネットワークの調節とその病態における意義

ステロイドなどの脂溶性低分子シグナル物質はリガンド依存性の転写因子である核内受容体を介してその組織特異的生理作用や各種病態における役割を発揮する。本研究は核内受容体の相互作用による遺伝子発現制御とその標的遺伝子を明らかにし、組織特異的作用や各種病態に密接に関わる核内受容体の遺伝情報制御を統合的に解明することを目的として行った。本研究において我々は先にエストロゲン応答遺伝子として報告したCOX7RP遺伝子の発現制御機構について解析を進めた結果、COX7RP遺伝子のエストロゲン応答配列(ERE)はエストロゲン受容体(ER)に加え、Estrogen-related receptor(ERR)によっても制御されることを明らかにした。また、COX7RPタンパクはミトコンドリアに局在し、エネルギー代謝に関与することを明らかにした。さらに、子宮内膜癌由来のIshikawa細胞においてCOX7RPはエストロゲン誘導性の発現を示し、COX7RPは細胞増殖に関わることを明らかにした。ERRはミトコンドリアの生合成や脂肪酸酸化に関わる核内受容体として注目されている。本研究によって、ミトコンドリアの機能に関わるCOX7RPがERとERRの双方によって発現調節されていることを見出したことは、これまで未解明の問題であったエストロゲンの作用とエネルギー代謝、肥満、糖尿病などとの関連を核内受容体の相互作用のレベルで解き明かすものであり、新たな治療、予防、創薬における分子標的としての応用が期待された。
イスラームの「学び」に関する人類学的研究：マレー世界のスーフィズムを事例として

本研究の目的は、マレー世界におけるスーフィズム的知の学習の事例に即して学習の理論を検討し、イスラームの「学び」の性質を説明する鍵概念と枠組みを見出すことである。具体的な目標は(1)マレー世界において人々がスーフィズムに関する知を習得している様々な場面、特に学校などとは異なる場に着目し、そこでの知の習得のあり方について民族誌的データを蓄積すること、(2)人類学、認知科学等における学習論とイスラームにおける知識・学習に関わる思想、および(1)の具体的学びの様相に関わるデータを総合し、既存の理論をイスラームの学びに適用する際の問題点と、それを克服する手段を見出すこと、の二つである。平成26年度は、1人類学、認知科学、教育学と、イスラーム諸学(特にスーフィズムに関わるもの)のそれぞれにおける、学習・知識に関する理論を整理すること、2それらの理論を用いてこれまでの調査で得た民族誌的データを分析することによって、イスラームの学びを説明する暫定的枠組みを見出すこと、の二つを目標として研究を行った。1については、4月から6月にかけて学習論に関する文献収集を行い、認知学習論を中心として「学ぶ」という概念の多様性を検討した。また、イスラームにおける学習の概念については、東南アジアで広く読まれている学習者の心得についての文献等を検討し、学習概念の整理をした。2については、7月から8月にかけてマレーシアでこれまでに調査を行った場を対象として、本研究計画において必要となる分析に適したデータを補足するための発展的調査を行った。特に注目した事例は、イエメンのハドラマウト等の地域からマレーシア・インドネシアに移民した人々が最近クアラルンプール等の都市部で行っている集会である。これらの集会への参与観察を通じ、人々がイスラームの「学び」の体験をどのように解釈しているのかを調査した。26年度が最終年度であるため、記入しない。
角層をターゲットとした皮膚アンチエイジング剤としての漢方薬の作用解明

当帰飲子(To)という漢方薬の皮膚抗老化作用について、皮膚角層にターゲットを絞り、形態学的および生化学的に調べた。結果、Toは皮膚老化による皮膚角層水分量の減少や角層細胞面積および角層多重剥離度の増加を抑制した。またToは、表皮成長因子の一つであるepiregulinや、皮膚バリア機能に関連するfilaggrinのmRNA発現を増加させた。以上より、Toは老齢マウス皮膚において、表皮成長因子産生を亢進させることにより、皮膚老化による表皮ターンオーバーの低下を回復させることで、皮膚抗老化作用を発揮する可能性があることが判明した。本研究の目的は、皮膚アンチエイジング剤としての漢方薬の作用を、皮膚角層にターゲットを絞り明らかにすることである。具体的には、古来より皮膚の抗老化作用を持つとされている当帰飲子と言う漢方薬を、老齢マウス(40週齢、ヘアレスマウス、雄)に与え、皮膚角層水分量や経表皮水分蒸散量などの皮膚機能パラメータ、コルネオサイトメトリー法による角層細胞の形態、角層酸化ストレス度、表皮細胞における成長因子発現について、その変化を調べた。前年度において、当帰飲子は、老化に伴う、皮膚角層水分量の減少や角層細胞面積および角層多重剥離度の増加を抑制し、それは、老化に伴う表皮ターンオーバーの低下の抑制効果に起因する可能性があることを明らかとした。最終年度では、さらに、当帰飲子の作用機序解明を探るため、角層酸化ストレス度および表皮成長因子、表皮分化マーカーの遺伝子発現変化につき検討を行った。結果:1)角層酸化ストレス;0,2,10%濃度の当帰飲子含有餌にて、4週間(36-40週まで)飼育後、テープストリッピングにて得た皮膚角層のカタラーゼ活性、カルボニル蛋白の定量を行った。しかしながら、各群で、角層酸化ストレス度に明らかな有意差を認めなかった。2)表皮成長因子および表皮分化マーカーのmRNA遺伝子発現;1)と同様の方法で飼育したマウス表皮において、10%当帰飲子投与マウスでは、表皮成長因子の一つであるepiregulinおよび皮膚バリア機能維持に関連するfilaggrinのmRNA発現が増加した。以上の結果より、当帰飲子は老齢マウス皮膚において、表皮成長因子産生亢進により、表皮基底細胞増殖を促し、表皮ターンオーバー低下を回復させることで、皮膚アンチエイジング効果を発揮する可能性があることが明らかになった。本研究は、皮膚角層をターゲットとした皮膚アンチエイジング剤としての漢方薬の作用を解明することを目的としている。具体的には、当帰飲子という漢方薬が、老齢マウス皮膚(40週齢、HR-1 hairless mouse, male)にアンチエイジング効果をもたらすのかということを明らかにするための研究を行っている。当該年度は、主に実験手技の確立、データの再現性をみる予備実験を行った。結果:1)皮膚機能計測;0,2,10%濃度当帰飲子含有餌にて4週間飼育後(3640週齢まで)、各群において角質水分量(water containg of strat um corneum:WCSC)および皮膚バリア機能の変化について追試実験を行った。その結果、当帰飲子は用量依存的に、再現性を持って角質水分量を増加させたが、皮膚バリア機能には影響しないことが明らかになった。2)皮膚角層形態観察;各濃度当帰飲子含有餌飼育後、各群における角層形態変化をコルネオサイトメトリー法にて調べたところ、当帰飲子により用量依存的に、角層細胞面積は減少し、多重剥離度も減少した。3)組織学的評価;各濃度当帰飲子含有餌飼育後、各群において背部皮膚のHE染色およびPCNA免疫染色を行ったところ、老化に伴う表皮非博化、PCNA陽性基底細胞数減少は、当帰飲子により用量依存的に抑制された。以上のことにより、当帰飲子は老化により低下した角層ターンオーバーを回復させ、皮膚保湿能を高めることを再現性をもって明らかにした。当該年度の計画目標として、当帰飲子による角層酸化ストレス度に変化について評価を行う予定であった。しかしデータのとりまとめ、評価の確認に予想以上に時間を有したので、角層酸化ストレス度計測に取りかかる事ができなかった。当帰飲子の皮膚アンチエイジング効果の作用機序解明のため、まず角層酸化ストレス度の変化を角層カタラーゼ活性を指標に調べる。また、当帰飲子が角層および表皮のターンオーバーを改善させた実験データを踏まえ、各種成長因子、表皮幹細胞マーカー、フィラグリンについて、RT-PCR法によるmRNAの遺伝子発現の変化、免疫組織染色によるそれらのタンパク発現変化について調べる。当該年度執行予定の物品については、残試薬などで対応可能であったため、未使用金が生じた。しかし研究計画には変更無く、平成24年度の研究費も含め、当初通り下記の通り執行する。実験動物、試薬購入に約80万円、学会参加旅費に約20万円の直接経費を見込んでいる。

内訳は、実験動物:HR-1へアレスマウス雄2千円×計100匹(SLC)=20万円、実験飼料:実験試料当帰飲子含有試料(ツムラ)20万円、実験試薬:epidermal growthfactorリアルタイムPCRプライマーセット10万円、各種免疫染色用抗体30万円、学会参加費:計20万円日本皮膚科学会総会(2013年横浜)、日本抗加齢医学学会総会(2013年横浜)
糖鎖表出を指標とした肝癌治療戦略

α1-6フコース転移酵素(FUT8)は、肝癌の生物学的悪性度の指標とされるフコシル化AFP産生に関与しているが、その分子機構は解明されていない。肝癌細胞のFUT8遺伝子発現を抑制し、細胞増殖や細胞浸潤能および糖鎖構造の変化に対する基礎的検討を行なった。SiRNAの手法では、FUT8遺伝子発現抑制を認めたが、細胞増殖や浸潤能の有意な変化は確認できず、糖鎖プロファイリング解析では、細胞内のフコシル化蛋白質の低下を確認できなかった。肝細胞特異的に完全な遺伝子発現抑制を行い、発癌発癌過程におけるFUT8蛋白機能を解析する手法として、新たにFUT8コンディショナルノックアウトマウスを作製した。現在、同マウスの肝組織でのFUT8のメッセージが低下している結果を得,蛋白機能を解析中で、引き続き同マウスの肝発癌実験を準備中である。α1-6フコース転移酵素(FUT8)は、肝癌の生物学的悪性度の指標とされるフコシル化AFP産生に関与しているが、その機序の分子機構は解明されていない。肝癌細胞を用いてRNAiの手法によりFUT8遺伝子発現を抑制し基礎的検討を行なうことを目的とする。α1-6フコース転移酵素(FUT8)は、肝癌の生物学的悪性度の指標として臨床応用されているフコシル化AFPに関与しているが、悪性度とフコシル化AFPの詳細な分子機構の解明はなされていない。肝癌細胞を用いてRNAiの手法によりFUT8発現を抑制し、細胞増殖や細胞浸潤能の変化に対する基礎的検討を行なった。【結果】肝癌細胞株であるKYN2細胞、HepG2細胞、PLC/PRF/5細胞と膵癌細胞株であるASPC1細胞にTransientにFUT8 siRNAを48時間導入しFUT8 mRNA発現量をリアルタイムPCRで確認した。Control SiRNA導入における発現量を100%として算出した結果、KYN2細胞、HepG2細胞、PLC/PRF/5細胞、ASPC1細胞でそれぞれ5.9±0.9%、23.7±6.6%、30.2±2.9%、5.3±0.1%にFUT8 mRNA発現が抑制された。更に、KYN2細胞のFUT8 siRNA導入細胞培養上清のフコシル化AFP分画の有意な低下(p=0.0072)を認めた。FUT8遺伝子発現抑制による細胞増殖能への影響について、Control SiRNA導入細胞と比較した結果、4種の細胞株いずれも有意な細胞数の変化を認めなかった。また、細胞浸潤および遊走能をマトリゲルアッセイ、スクラッチアッセイで検討したが、いずれもControl SiRNA導入細胞との有意な差は認めなかった。【考察】今回用いたRNAiの手法で、明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、各種細胞株で細胞増殖能や浸潤遊走能の有意な変化は確認できなかった。今後、FUT8遺伝子発現抑制による網羅的な遺伝子発現の変化と糖鎖構造の変化を引き続き確認する予定である。肝癌細胞を用いてRNAiの手法によりFUT8遺伝子発現を抑制し、細胞増殖や細胞浸潤能および糖鎖構造の変化に対する基礎的検討を行なった。【結果】肝癌細胞株にTransientにFUT8 siRNAを48時間導入しFUT8 mRNA発現量をリアルタイムPCRで確認した。Control SiRNA導入における発現量を100%として算出した結果、最大5.3±0.1%にFUT8 mRNA発現が抑制された。更に、細胞培養液上清のフコシル化AFP分画の有意な低下(p=0.0072)を認めた。2種の抗FUT8抗体を用いウエスタンブロットを行い細胞蛋白抽出液中FUT8蛋白の確認を試みたが、FUT8およびControl SiRNA導入細胞いずれにおいてもFUT8蛋白は確認できなかった。次にα1-6フコースに特異性の高いLCAレクチンを用いてレクチンブロットを行ったが、FUT SiRNA導入細胞でのLCA結合性糖蛋白の有意な低下は確認できなかった。更に、FUTおよびControl SiRNA導入細胞を細胞質画分と細胞膜・オルガネラ画分とに分け、LeeChip ^<TM>Ver1.0を用いて糖鎖プロファイリング解析を行った。

結果、フコース認識レクチンであるLTL、PSA、LCA、AOL、TJA-IIにて両画分ともに、Control SiRNA導入細胞に比し、FUT SiRNA導入細胞でコアフコースの発現率が僅かに増加していることが確認された.【考察】RNAiの手法で、明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。今後は、HPLCでFUT8の酵素活性を測定し、RNAiによるmRNA発現抑制と実際の蛋白酵素活性の変化を確認する予定である。α1-6フコース転移酵素(FUT8)は、肝癌の生物学的悪性度の指標とされるフコシル化AFP産生に関与しているが、その機序の分子機構は解明されていない。肝癌細胞を用いてRNAiの手法によりFUT8遺伝子発現を抑制し基礎的検討を行なった。【結果】肝癌細胞株にTransientにFUT8 siRNAを48時間導入しFUT8 mRNA発現量をリアルタイムPCRで確認したところ、Control SiRNA導入細胞株に比較し、KYN2細胞株で最大5.9±0.9%にFUT8 mRNA発現が抑制された。しかし、FUT8蛋白機能評価として、LeeChip^<TM>Ver1.0を用いた細胞質の糖鎖プロファイリング解析を行った結果、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。SiRNAによる明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、それに伴う蛋白レベルの発現低下や実際のFUT8酵素活性低下による遺伝子発現・関連蛋白質の解析には更なる遺伝子発現の抑制が必要であると考え、FUT8のCre-loxP系を用いたコンディショナルノックアウトマウスの作製に着手した。現在、FUT8遺伝子にLox配列をもつC57BL/6N-FUT8^<lox(neo)/lox(neo)>マウスを作製済みであり、B6.Cg-Tg (Alb-cre)マウスと交配中である。【考察】RNAiの手法で、明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、細胞内フコシル化蛋白の低下は確認できなかった。今後、FUT8のCre-loxP系を用いたコンディショチルノックアウトマウスの肝発癌実験を行い、FUT8発現抑制による遺伝子発現および生物学的悪性度の変化を検討し、肝癌悪性度を規定する責任遺伝子群を同定する予定である。SiRNAによる明瞭なFUT8遺伝子発現抑制を認めたが、それに伴う蛋白レベルの発現低下や実際のFUT8酵素活性低下による遺伝子発現・関連蛋白質の解析には更なる遺伝子発現の抑制が必要であると考え、FUT8のCre-loxP系を用いたコンディショナルノックアウトマウス(FUT8^<loxP/loxP>-AlbCre^<+/->マウス)を作製した。現在、同マウスの肝臓におけるFUT8蛋白機能を確認中である。【考察】
脳下垂体腺腫の分泌小胞形成における基礎的研究-細胞内輸送を規定する諸因子の免疫組織化学的検討-

ぺプチドホルモンや、血漿蛋白質などの蛋白質は、リボゾームで合成されて小胞体に移動し、ゴルジ装置を経て分泌顆粒となりその成熟を経て最終的には細胞形質膜に運搬され融合により細胞外に分泌される。この調節性分泌(regulatory pathway)では内分泌細胞が生成するホルモンの大半はこの過程を経るなかで翻訳及び各種翻訳後修飾を受け生理的活性を得る。これは細胞内小胞輸送の一つでもあるのだが、一つの膜系から他の膜系に移動し、結合し、融合する、という過程として理解されている。今回は内分泌細胞とその腫瘍における開口分泌機構に焦点をあわせ、下垂体及び下垂体腺腫における産生ホルモンとシナプトタグミン/シンタキシンの機能的相関とその腫瘍化に伴う病態、開口分泌の調節機構の一部明らかにすることを目的とすべく本研究を行った。ヒト正常下垂体剖検症例及び下垂体腺腫組織を対象に、in situ hybridization,免疫組織化学,免疫電顕法を用いて核内レセプター遺伝子発現を検討した。シナプトタグミン/シンタキシンを識別する抗体及びプローブを作成し、免疫組織化学的手法を用いて下垂体組織における蛋白/mRNAの局在を証明した。更に蛋白レベルでは高感度免疫組織化学Catalyzed signal amplification法によりシナプトタグミン/シンタキシン蛋白を検出すると、シナプトタグミン/シンタキシンは全種類の下垂体腺腫に発現していた。今年度の結果を踏まえ、開口分泌の調節機構にシナプトタグミン/シンタキシンの相互作用が示唆された。1.)対象症例当施設で1997年度に70例の下垂体腺腫症例に対して手術を施行し、内分泌データを中心とした臨床情報を元に、免疫組織化学/in situ hybridizationにより各種腺腫を分類した。2.)抗体作成に先立ち、97年8月に新たに市販されたシナプトタグミン/シンタキシンの抗ラット抗体を入手しラット脳下垂体における免疫組織化学を行い、その至適条件を決定した。更にこの抗体を正常ヒト下垂体剖検症例に用い、至適条件/相同性の観点からヒト正常脳下垂体および下垂体腺腫における正当性を現在検討中である。
結核菌オートファゴソーム形成におけるPE_PGRS62の役割

エピソーマルなpUV15由来プラスミドを使用したTetRにコントロールされたPE_PGRS62タンパク質を誘導発現する結核菌を作りました。容易に十分な蛍光発光を与えるために、エピトープ-タグ(5×Myc)を付加しました。赤い蛍光タンパク質(3×mCherry)は結核菌ΔPE_PGRS62で互換性を持つpMV306由来プラスミドによって同時発現されました。3×mCherryを発現した結核菌の表面にPE_PGRS62-5×Mycの局在を観察しました。結核菌PE_PGRS62が菌体外へ存在しており、エフェクタータンパク質として機能することを示唆します。機能未知な結核菌PE_PGRS62を病原因子として同定した。PE_PGRS62をノックアウトした結核菌(deltaPE_PGRS62)はマウスへ感染させると病原性が低下していた。また、deltaPE_PGRS62へ相補的にPE_PGRS62を発現させたコンプリ株は、マウスにおける病原性が回復傾向にあった。以上の結果から、PE_PGRS62が新たな結核菌病原性タンパク質であることが示唆された。結核菌PE_PGRS62タンパク質が局在するヒト培養細胞内の膜構造物には脂質滴が含まれることがわかってきた。これまでの解析から、オートフォゴソームの主要なマーカータンパク質であるLC3が、PE_PGRS62の存在している膜には存在しないことがわかった。しかしながら、1)PE_PGRS62により誘導される膜構造物には、電子顕微鏡解析すると2重膜構造が観察される、2)形成された膜が脂質滴を含む、以上のことがわかったので、脂質滴と関係するオートファジー関連タンパク質との関係を解析を計画している。マクロファージ内ではPE_PGRS62の局在を観察できなかったが、293T細胞、HeLa細胞、A549細胞でその局在が観察され、HeLa細胞やA549細胞内ではPE_PGRS62が脂質滴を含む膜に存在することもわかった。結核菌のエフェクタータンパク質であると考えられているRv3812/PE_PGRS62は、宿主細胞内でファゴソームとリソソームの融合を阻害すると考えられていた。本研究では、PE_PGRS62と宿主細胞内でオートファゴソームとリソソームの融合に抑制的に働くかどうか調べることを目的とした。PE_PGRS62が有している推定のトランスメンブレン領域(TM)が、実際に宿主細胞内で働いていることが分かった。TMを持たないPE_PGRS62△TMを発現した場合に巨大なベシクル内にGFP-PE_PGRS62△TMが発現しておりmCherry-LC3BやmCherry-CD63が共局在した。全長のPE_PGRS62が発現した宿主細胞内ではベシクルの淵にGFP-PE_PGRS62が発現しており、そのベシクルへのmCherry-LC3BやmCherry-CD63の共局在が抑制されていた。細菌学安定的な結核菌培養の確立が必要になった。液体培地による震盪培養で調製した結核菌はマウスにおける病原性が低下した。我々の研究グループで実績のある液体培地による静置培養で結核菌が再現性良く病原性を示した。感受性マウスは約90日で死亡し、抵抗性マウスは約200日で死亡した。現在は、結核菌、PE_PGRS62をノックアウトした結核菌、PE_PGRS62をノックアウトした菌にPE_PGRS62を相補した結核菌の3種類の菌株を使用し、PE_PGRS62遺伝子が病原因子であることを証明するための追試実験を行っているところである。結核感受性のマウスであるBALB/c系統を使用して評価すると、一回の実験に180日程度かかる。今回の研究の実施により、研究難度が非常に高い、結核菌の新しい病原因子の同定ができそうである。病原性が高く、生育速度の遅い結核菌の培養、さらにマウスでの病原性解析には時間がかかった。結核菌PE_PGRS62タンパク質はヒト培養細胞内で膜輸送に関係することがわかってきたので、今後は細胞生物学的な手法やPE_PGRS62を発現した結核菌を用いた培養細胞レベルでの解析を駆使した実験を実施し、研究期間が短く、効率が良い研究も推進する。今回の研究で得られた結核菌の病原性評価・結核菌の培養のノウハウを生かして、結核菌と宿主応答の研究を継続・推進する。
タイの基礎教育改革における「学校を基盤としたカリキュラム開発」に関する実証的研究

本研究の目的は、タイの基礎教育改革において重要な柱となっている「学校を基盤とするカリキュラム改革(School Based Curriculum Development : SBCD)」について、その理念と方法が学校レベルでどのように実施されているかを実証的に解明することである。1.SBCDの理念と研究方法SBCDの理念とは、地方分権政策によって権限委譲を受けた学校が、カリキュラム編成の基準としての「仏暦2544(2001)年基礎教育カリキュラム」に準拠して、学習者・コミュニティーの状況やニーズに対応した「教育機関カリキュラム」を自主的・自律的に編成することである。その実態解明のため、本研究では、(1)学校訪問調査(10校)および(2)アンケート調査(対象は全国の1,350人の教員、回収率47%)を行った。2.調査結果訪問調査の結果、改革前からある学校間格差を背景として、SBCDが順調に展開している学校とそうでない学校が存在していることが確認された。その内容を検討して、十分なSBCDが可能となる要因として、(1)校長などのリーダーシップが発揮されること、(2)コミュニティー参加が盛んであること、(3)地方行政組織による支援が効果的に行われること、(4)SBCDを促す学校文化があること、(5)SBCDを促す教育方法が導入されていることの5点を抽出した。これに基づきアンケート質問項目を設定して、全国175の教育地区中の90地区、450校(各校3名の教員)を対象としてアンケート調査を実施した。その結果、全国的にはSBCDが十分でなく、一方で教育地区など地方行政組織による支援は進展しているが、他方でリーダーシップが発揮されていない状況が明らかとなった。報告書ではこの他に、研究協力者による2編の論文を掲載した。第一に、SBCDに不可欠の教員研修において「校内研修」が積極的に導入されていることなどを明らかにした。第二に、タイにおける教育の地方分権の歴史的展開を整理した上で、SBCDを中心とした将来の展望について総論的に論じた。(1)資料・文献の収集・整理・分析研究テーマに関連のある資料を収集した上で、本年度までに研究代表者・分担者それぞれが所蔵するタイ語文献を整理するため、研究補助者を雇いあげてデータベース構築を行った。また、カリキュラム開発関係図書を購入した。(2)研究会の開催第1回研究会を7月28-29日に東京海洋大学で開催し、全体研究計画の確認、本年度の具体的研究計画を行った。第2回研究会を11月2-4日に名古屋大学で開催し、海外共同研究者のChantana Chanbanchong氏を招聘して研究テーマに関する講演を実施し、さらに現地調査計画を立案した。第3回研究会を3月26日にナレスワン大学で開催し、本年度の研究成果を確認するとともに、次年度の研究計画を立案した。(3)タイにおける調査の実施研究代表者・研究分担者・海外共同研究者による合同調査を3月21-31日に実施した。調査対象は、パヤオ県第1教育地区委員会事務局、パヤオ県内初等学校2校・中等学校1校、ウッタラディット県内初等学校1校、ピサヌローク県内初等学校3校・中等学校1校、ピチット県内初等学校1校・中等学校1校、ナレスワン大学教育学部、ラーチャパット大学ピブンソンクラーム校教育学部である。これにより、「学校を基盤とするカリキュラム開発」の実態を調査した。(4)成果発表

11月26-27日に開催された九州教育学会第57回大会において、森下稔「タイにおける基礎教育カリキュラム改革の理念と実施体制」の研究発表を行った。(1)資料・文献の収集・整理・分析研究テーマに関連のある資料を収集し、研究代表者・分担者それぞれが所蔵するタイ語文献を整理するため、研究補助者を雇いあげてデータベース構築を行った。(2)研究会の開催8月1112日および8月2122日に、東京海洋大学において研究会を実施し、下記アンケート調査の内容を構築する作業を行った。また、12月23日に研究協力者であるDr.Gerald W. Fry氏(ミネソタ大学教授・名古屋大学高等教育開発センター客員教授)を東京海洋大学に招き、講演会を実施した。(3)タイにおける調査の実施8月27日9月4日に、研究代表者の森下がタイでの調査を実施した。現地の学校における調査に加え、研究協力者のDr.Chantana Chanbanchong氏とともに研究打ち合わせを行い、アンケート調査の準備を完了させ、アンケートの印刷・発送・回収・集計を現地業者に委託した。この調査は、前年度に実施した基礎教育機関10校における事例調査の結果を踏まえ、調査対象をタイ全土の教員に拡大して実施した。1,350部を発送し629部を回収した。この調査結果は、平成19年6-7月に日本比較教育学会第43回大会で公表する予定である。(4)成果発表6月に開催された日本比較教育学会第42回大会において、森下稔、チャンタナー・チャンバンチョン、鈴木康郎、カンピラパーブ・スネート「タイにおける「学校を基盤とするカリキュラム開発」の実践事例-北部4県におけるフィールド調査から-」の自由研究発表を行った。(5)研究成果報告書以上の成果をふまえ、研究成果報告書を刊行した。
胎児肝の保存法に関する研究

実験は68週令のWistar系雄性ラット28匹を用いて行った。実験動物は肝摘出前24時間の間絶食としその後6時間の4°C単純冷却浸漬保存を行ったもの、および肝摘出前に自由摂食としておき同様の保存を行ったものに分け、それぞれに対して2種類の保存液(Krebs-Henseleit液、20mM果糖添加Krebs-Henseleit液)を用い、絶食-非添加群、絶食-果糖添加群、摂食-非添加群、摂食-果糖添加群の4群(各々n=7)とした。保存開始時に肝組織を一部採取し、同時に脱酸素化した各々の保存液を用いて肝のマイクロダイアリシスを行った。以後は潅流液を30分毎に分割採取し、保存終了時に肝組織を一部採取した。【結果】1)マイクロダイアリシス潅流液の乳酸濃度と実際に測定した肝組織の乳酸濃度との間にはr=0.88の正の相関が得られ、またブドウ糖濃度においてもr=0.83の正の相関が得られた。2)潅流液の乳酸濃度の推移:絶食-非添加群においては、低値のまま推移し有意な変動を認めなかった。摂食-非添加群においては、持続的な上昇を認めた。絶食-果糖添加群においては、保存前期にのみ上昇を認めた。摂食-果糖添加群においては保存前期にのみ上昇を認め、保存終了時には摂食-非添加群との有意差を認めなかった。潅流液のブドウ糖濃度の推移:絶食の2群においては、低値のまま推移した。摂食-果糖添加群では持続的上昇を認めたが、非添加群に比し低値で経過した。肝グリコーゲン量:摂食-非添加群で保存後に減少を認めたが、絶食の2群および摂食-果糖添加群で保存後に有意な変動を認めなかった。保存後には摂食-果糖添加群は摂食-非添加群に比し高値であった。3)保存後のATP量は絶食の2群では摂食の2群に比し低い傾向があったが、有意な差ではなかった。絶食の2群のLDH活性は摂食の2群に比し高値を示し、またそれぞれの群に対する果糖添加群は非添加群に比し低値を示した。本研究の目的は胎児肝を単純冷却保存する場合の至適条件をエネルギ-代謝の面より検討することにある。本年度はまず,保存中のエネルギ-代謝を推測する手段としてのマイクロダイアリシスの有用性をラット肝を用いて検討した。生理食塩水,ユ-ロコリンズ液及びUW液の3種の冷却保存液にて20時間の単純冷却保存を行ない,マイクロダイアリシスにて経時的に乳酸及びブドウ糖排出量を測定した。また保存前のグリコ-ゲン量の違いがどの様な差を及ぼすか,食餌摂取の影響についても検討した。ユ-ロコリンズ液ではブドウ糖を含有するためブドウ糖排出量は高値を示し,乳酸排出量も獲の2液に比しやや高値を示した。生理食塩水とUW液にはブドウ糖及び乳酸排出量に差を認めなかった。摂食ラットを用いUW液で冷却保存を行った場合,ブドウ糖及び乳酸排出量は絶食ラットに比し45倍と著しい増加を認めた。保存前のグリコ-ゲン量は摂食ラットでは著しく多く,保存前後では明かな差がみられなかったが,絶食ラットでは低下を認めた。以上の結果より,胎児肝ではグリコ-ゲン含量が多いことから,ブドウ糖及び乳酸排出量を測定することは重要であること,また保存液の差異により両者の排出量に差がみられることが示唆された。保存液の違いがこの両者に影響を及ぼす因子として、保存液中に含有されるエネルギ-基質の位いが想定される。そこで次年度ではエネルギ-基質としてブドウ糖,果糖,庶糖,乳酸を各々添加した場合の影響を検討し,胎児肝での検討を行う予定である。

摂食-果糖添加群においては保存前期にのみ上昇を認め、保存終了時には摂食-非添加群との有意差を認めなかった。潅流液のブドウ糖濃度の推移:絶食の2群においては、低値のまま推移した。摂食-非添加群においては、持続的な上昇を認めた。摂食-果糖添加群では持続的上昇を認めたが、非添加群に比し低値で経過した。肝グリコーゲン量:摂食-非添加群で保存後に減少を認めたが、絶食の2群および摂食-果糖添加群で保存後に有意な変動を認めなかった。保存後には摂食-果糖添加群は摂食-非添加群に比し高値であった。3)保存後のATP量は絶食の2群では摂食の2群に比し低い傾向があったが、有意な差ではなかった。絶食の2群のLDH活性は摂食の2群に比し高値を示し、またそれぞれの群に対する果糖添加群は非添加群に比し低値を示した。
「第3回 日本-カナダ合同複合材料ワークショップ」開催準備のための総合研究

本研究においては、国際レベルの複合材料の基礎研究を見渡せ、日本とカナダ両国の科学技術交流の一環となることを目的とした国際会議を開催し、日加両国の材料工学技術の向上に資するとともに、高分子系複合材料の最大の課題と言われる廃棄物処理問題に関する意見交換を行い、さらに、現在カナダで行われている研究成果およびその基盤となる教育・研究システムの現状を調査することにより、日本の今後あるべき教育・研究システム構築を目指し、複合材料研究分野における産学官の協力体制についての提言をも目的として以下に示すような企画調査研究を行った。・過去5年間の複合材料の基礎技術に関する研究論文調査を行った結果、リサイクルに代表される廃棄物処理問題が複合材料の開発動向に対して大きな影響を与えていることが得られ、本会議においても重要テーマの一つとして、オーガナイズドセッションにリサイクルを加えることとなった。・カナダの代表的な複合材料に関する研究者に対してアンケートを行い、現在の研究システムおよび、今後の研究動向についての調査を行った結果、複合材料に対する基礎研究の充実が課題であることが明らかとなり、本ワークショップの開催趣旨の一つとして掲げることになった・インターネット上に本調査研究の掲示板を載せ、幅広いカナダ側の研究者からの意見を収集した結果、カナダおよび日本の複合材料に関する研究者の情報交換を目的とした恒常的な組織を作ることが必要である事が判り、本ワークショップを核にして、インターネット上に日本-カナダ複合材料研究交流会(仮称)のホームページを常設し、常に情報交換が出来る場を作ることになった。
完全自動ハイスループット滴定を目的としたflow ratiometryの研究

滴定法は現在でも広く用いられている化学的分析法であるが,伝統的な手操作による滴定は煩雑で時間を要する上,多数あるいは微量の試料を取り扱うことは困難である。本研究では,研究代表者らが提案したflow ratiometryをフロー滴定へと応用した。平成17年度では,装置の制御から計測・解析に至るまで,測定を完全自動化するためのプログラムを自作した。これによる可変三角波制御(当量点位置を判定するために用いる)および固定三角波制御(当量点を含むごく狭い領域で被滴定液/滴定液の流量比を連続走査するために用いる)に基づき,目的とする情報(当量点)の取得に必要のない無駄な領域での走査を避け,ハイスループット化を実現した。これを酸・塩基の電位差滴定および光度滴定(要,指示薬)に応用し,1分あたり最大34滴定という前例の見られない高い滴定効率を実現した。この成果を基盤に平成18年度はキレート滴定への応用について検討した。光度検出器あるいは電位差検出器(カルシウムイオンセンサー)単独で用いたシステムでは,酸・塩基滴定と同様,優れた分析性能を発揮することができた。オンライン希釈により,試料濃度を自動的に変化させるシステムも構築した。また,データのオーバーフローを避け長時間の測定にも対応できるようプログラムをより進歩させた。終盤では,光度検出器と電位差検出器を直列に接続し,試料中のカルシウムイオンおよびマグネシウムイオンの同時測定について検討した。しかし,この同時測定に関しては,残念ながら真度および精度の両面において実用に耐えうる信頼性を得るには至っていない。さらに検討を加えたのち,論文公表を行いたいと考えている。Flow ratiometryとは別々に送液される2液をさまざまな流量比で合流し,下流で検出を行い,流量比と検出シグナルとの関係から目的とする情報を得る方法である。まず,装置の制御から計測・解析に至るまで,測定を完全自動化するためのプログラムを自作した。本法は原理的には検量線を必要としない絶対分析法である。また,電位差滴定による当量点の判定法を応用し,当量点から半当量点の位置を推定し,そこにおけるpHの測定から酸・塩基の電離定数を簡便かつ迅速に求める方法を提案した。さらに,光度検出器および電位差検出器(金属イオンセンサー)を直列接続することにより,試料中のカルシウムイオンおよびマグネシウムイオンを同時定量する方法を開発した。

平成17年度では完全自動分析のためのプログラムの作成と,酸・塩基の電位差滴定および光度滴定への応用について検討し,1分あたり最大34滴定という前例の見られない高い滴定効率を実現した。この成果を基盤に平成18年度はキレート滴定への応用について検討した。光度検出器あるいは電位差検出器(カルシウムイオンセンサー)単独で用いたシステムでは,酸・塩基滴定と同様,優れた分析性能を発揮することができた。オンライン希釈により,試料濃度を自動的に変化させるシステムも構築した。また,データのオーバーフローを避け長時間の測定にも対応できるようプログラムをより進歩させた。終盤では,光度検出器と電位差検出器を直列に接続し,試料中のカルシウムイオンおよびマグネシウムイオンの同時測定について検討した。しかし,この同時測定に関しては,残念ながら真度および精度の両面において実用に耐えうる信頼性を得るには至っていない。さらに検討を加えたのち,論文公表を行いたいと考えている。