hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アクチン結合タンパク質lasp-2の神経細胞における機能解析

ニワトリ脳より申請者が同定したアクチン結合タンパク質lasp-2に東化活性があることを明らかにし、ニワトリ初代神経細胞の成長円錐やスパインに局在することを示した。また、アクチン結合領域を欠損したlasp-2の導入によって神経細胞の成長円錐の運動が異常になることも明らかにした。関連した論文を2本、総説1本を発表した。アクチン結合タンパク質lasp-2は,類似したドメイン構造をもつlasp-1が様々な組織に分布するのに対して,脳で多く発現している(Terasaki, et. al.,2004)。本研究ではニワトリのDRG(=dorsal root ganglia;脊髄後根神経節)を材料にして,lasp-2の成長円錐内における局在や動きを,免疫染色およびGFP融合タンパク質の導入により詳細に観察した。免疫染色ではフィロポディアやラメリポディアへの局在が見られ,特にP-domainではフィロポディアに沿ってドットが連なって局在していた。また,エンドサイトーシスに関与するdynamin-1や接着斑の構成成分であるzyxinなどと結合することが知られている(Li e tal.,2004)が,lasp-2とこれらタンパク質が共に局在する領域も見られた。GFP-lase-2は免疫染色に類似したフィロポディアやラメリポディアへの局在に加えてドット状の蛍光が見られた。ドットの挙動は成長円錐内の領域に関連しており,[1]ドットがその場で動かない(C-domainおよびフィロボディアの付け根)[2]ドットが現れその場で移動することなく10秒弱で消失(C-domainT-zone)[3]ドットが短い距離(2 ̄3μm)を移動した後に消失(T-zone ̄P-domain)[4]リング状の構造(直径1 ̄2μm)を形成したのちに消失(C-domain ̄T zone)[5]フィロポディア上を移動して消失(P-domain),などが挙げられる。また免疫染色によりアストロサイトの突起先端にもlasp-2が多く局在することが示されたことから,グリア細胞(アストロサイト、オリゴデンドロサイト、ミクログリア)まで広げてlasp-2の機能を探っていく必要があると思われる。アクチン結合タンパク質lasp-2は脳で多く発現している(Terasaki et al., 2004)ことから、本研究ではニワトリのDRG(=dorsal root ganglia;脊髄後根神経節)を材料にして、lasp-2の成長円錐内における局在や動きを免疫染色およびGFP融合タンパク質の導入により詳細に観察した。どちらの手法でもlasp-2は神経細胞のフィロポディアやラメリポディナへの局在が見られ、特にP-domainではフィロポディアに沿ってドットが局在していた。Lasp-2が細胞接着に関与している可能性を考え、zyxinやvinculinとの局在を免疫染色で比較したところ、basal adhesionではzyxinと共局在する部分があったが、Shaft adhesionではzyxinやvinculinと交互に見られることが多く、tip adhesionでもzyxinと同程度の頻度で局在し七いた。また、deletion constructを用いて神経細胞内での局在に関与するドメインを同定した
4'-thioRNAによるRNA干渉の基礎研究とがん遺伝子への展開

既に申請者は4'-チオリボヌクレオシドユニットを用いてpGL2ルシフェラーゼ遺伝子をターゲットとした各種修飾RNA(4'-thioRNA)を化学的に合成し,この化学修飾siRNAがRNAi効果を示すことを見い出している.本研究ではさらに詳細なmodification-activity相関を検討した.まず2本鎖のそれぞれを5'側,中央部,3'側の3つのパーツに分け,それぞれを4'-チオリボヌクレオシドで修飾したsiRNAについてRNAi効果を調べた.その結果センス側の修飾についてはいずれの場合も天然型siRNAとほぼ同程度のRNAi効果が観察され,化学修飾に対して許容であることが明かとなった.一方,アンチセンス側の修飾では中央部の修飾でRNAi効果の大きな減少が見られた.これにより4'-チオリボヌクレオシドによる化学修飾の部位は標的RNAの切断位置付近を避けることが望ましいことが示唆された.また中央部を修飾しない場合でも,アンチセンス分子のgapmerにならって,5'側ならびに3'側の6残基ずつを修飾した場合ではRNAi効果はほぼ消失する結果となり,RNAi効果は修飾数ならびに導入様式に大きく依存することが明かとなった.さらに申請者は4'-チオリボヌクレオシドによる化学修飾の有効性を検討する目的で2'-O-メチルヌクレオシドによる修飾siRNAとの活性比較を行った.2'-O-メチルヌクレオシドはsiRNAの化学修飾の有望なヌクレオシドユニットの一つである.上述した修飾様式と同様のsiRNAを合成し,そのRNAi効果を比較した結果,センス鎖の修飾では4'-チオリボヌクレオシドによる修飾の場合と同様,化学修飾に対して許容であったのに対して,アンチセンス鎖の修飾ではそのRNAi効果は4'-チオリボヌクレオシドによるものよりも大きく低下する結果となった.これにより4'-チオリボヌクレオシドによる化学修飾が有用であることが確認できた.既に申請者は4'-チオリボヌクレオシドユニットを用いてpGL2ルシフェラーゼ遺伝子をターゲットとした各種修飾RNA(4'-thioRNA)を化学的に合成し,この化学修飾siRNAがRNAi効果を示すことを見い出している.本研究ではさらに詳細なmodification-activity相関を検討した.まず2本鎖のそれぞれを5'側,中央部,3'側の3つのパーツに分け,それぞれを4'-チオリボヌクレオシドで修飾したsiRNAについてRNAi効果を調べた.その結果センス側の修飾についてはいずれの場合も天然型siRNAとほぼ同程度のRNAi効果が観察され,化学修飾に対して許容であることが明かとなった.一方,アンチセンス側の修飾では中央部の修飾でRNAi効果の大きな減少が見られた.これにより4'-チオリボヌクレオシドによる化学修飾の部位は標的RNAの切断位置付近を避けることが望ましいことが示唆された.また中央部を修飾しない場合でも,アンチセンス分子のgapmerにならって,5'側ならびに3'側の6残基ずつを修飾した場合ではRNAi効果はほぼ消失する結果となり,RNAi効果は修飾数ならびに導入様式に大きく依存することが明かとなった.さらに申請者は4'-チオリボヌクレオシドによる化学修飾の有効性を検討する目的で2'-O-メチルヌクレオシドによる修飾siRNAとの活性比較を行った.2'-O-メチルヌクレオシドはsiRNAの化学修飾の有望なヌクレオシドユニットの一つである.上述した修飾様式と同様のsiRNAを合成し,そのRNAi効果を比較した結果,センス鎖の修飾では4'-チオリボヌクレオシドによる修飾の場合と同様,化学修飾に対して許容であったのに対して,アンチセンス鎖の修飾ではそのRNAi効果は4'-チオリボヌクレオシドによるものよりも大きく低下する結果となった.これにより4'-チオリボヌクレオシドによる化学修飾が有用であることが確認できた.
人工透析を対象とした災害対応型地域連携医療情報システムの実証研究

本研究の目的は透析の患者情報や施設情報を、地域の人的・金銭的負担をかけずに共有する災害対応型地域連携医療情報システムを設計し、実証システムを構築・検証することにある。平成30年度は平成29年度に構築した検証システムを元に試験運用を実施中であり、匿名化された透析記録が日々自動的にサーバーに蓄積されている。また、研究者の所属病院では、昨年度に大規模なシステムリプレースが行われ、病院情報システムが変更されたため、新システムとの連携のための開発を行った。システム連携はSS-MIX2を介しているため、開発は最小限で実装された。研究者自身により開発した検証システムは、試験運用を行いつつ改良を重ねている。また、検証システムの試験運用は昨年度研究者が所属した病院内に構築したシステムの他に、クラウド環境での検証のため、クラウド上に構築し研究協力病院およびクリニックからアクセスして利用するシステムの2つのシステムによって行われている。また、地域連携透析情報システムの基本設計のための情報収集を元に基本設計理念及びプロトタイプの概要、透析関連情報の標準化・正規化、検証システムの概要について、日本透析医学会にて発表を行った。システム開発の一部を業者に委託する予定であったが、速度の確保や高いセキュリティの担保のため開発費が高額となり、当初より規模を縮小し研究者自身で開発を行う方針に変更したため。また、研究代表者が大学病院から一般病院への異動により、研究環境が変化したため。研究者自身により構築した検証システムを試験運用を行いつつ引き続き改良を重ね、クラウド環境下でのシステム運用により問題点の抽出および課題解決を行う方針である。平成28年度はシステムの基本設計および検証システムの開発と検証の段階である。まずは、地域連携透析情報システムの基本設計のための情報収集として、医師・看護師・臨床工学技士よりヒアリングの実施、医療情報関連学会への参加、学会誌や学会等のホームページの閲覧を実施した。これにより、基本設計理念を「平時と災害時に透析医療現場で真に必要な機能に限定する。」「クリニックでの導入を念頭に、低コストで実現可能である。」とし、これを基に、要件定義を行い、システムの基本設計を実施した。ここまでの実績は、学会の一般口演で発表した。インフラストラクチャーの構築として、研究者の所属する病院内にサーバー、ホストコンピュータ、クライアントの設置およびネットワークの構築を行った。現在、研究者自身により検証用システムをFilemakerにて開発中であり、一部動作試験を行っている。平成28年度はシステムの基本設計および検証システムの開発と検証を目標として、情報収集、システムの基本設計、検証用システムの開発、模擬患者によるシステム検証の4つを掲げている。現在は、検証用システムの開発中であり、開発は完了していないが一部機能は動作しており、システム検証を並行して行っている。また、次のステップとしてグラウドや研究協力透析施設でのシステム運用について、インフラストラクチャーの構築を行っている。今後、他施設でのシステム運用を進める予定である。平成29年度は平成28年度に行ったシステムの基本設計を元に、検証システムの構築および試験運用を開始した。検証システムの構築では、研究者自身によりFilemakerにてシステムを開発し試験運用を行いつつ、改良を重ねている。データベース設計において、院内ホストにレジストリDB、外部サーバーにリポジトリDBをそれぞれ配置し、物理的に外部からレジストリDBを参照不可能とすることで、外部サーバーの医療情報は対応表がない連結匿名化されたデータのみとなり、セキュリティの確保と改正個人情報保護法への対応を容易とすることができた。インフラストラクチャーとして、昨年度に研究者の所属する病院内に構築したネットワークとは別に、本年度はクラウド上の実証環境の構築を行った。すなわち、サーバを商用クラウド上に構築し、研究協力病院およびクリニックにホストコンピュータおよびクライアントを設置、ネットワークの構築とクラウドへの接続を行った。今後クラウド上での試験運用を開始する予定である。また、昨年度に実施した地域連携透析情報システムの基本設計のための情報収集を元に基本設計理念及びプロトタイプの概要、透析関連情報の標準化・正規化等について、日本透析医学会にて発表を行った。システム開発の一部を業者に委託する予定であったが、速度の確保や高いセキュリティの担保のため開発費がが掛かりすぎることが判明し、規模を縮小し研究者自身で開発を行うことにした。また、上記のため、逆に研究費が余る見通しである。

また、検証システムの試験運用は昨年度研究者が所属した病院内に構築したシステムの他に、クラウド環境での検証のため、クラウド上に構築し研究協力病院およびクリニックからアクセスして利用するシステムの2つのシステムによって行われている。また、地域連携透析情報システムの基本設計のための情報収集を元に基本設計理念及びプロトタイプの概要、透析関連情報の標準化・正規化、検証システムの概要について、日本透析医学会にて発表を行った。システム開発の一部を業者に委託する予定であったが、速度の確保や高いセキュリティの担保のため開発費が高額となり、当初より規模を縮小し研究者自身で開発を行う方針に変更したため。また、研究代表者が大学病院から一般病院への異動により、研究環境が変化したため。検証システム開発の後に実証システムを新たに開発する予定であるが、システムの基本設計および検証システムの開発から、実証システムの開発は当初の予定より時間と費用の増加が予測された。本研究の計画期間と予算では実証システムの開発は困難であり、代替として現在開発中の検証用システムを機能の拡充と、セキュリティの強化等にて他施設で展開運用する方針に変更する予定である。検証システム開発の後に業者に委託し実証システムを新たに開発する予定であったが、システムの基本設計および検証システムの開発から、実証システムの開発は当初の予定より時間と費用が増加すると予測された。本研究の計画期間と予算では実証システムの開発は困難であり、代替として既に構築した検証用システムの改良と、クラウド環境下でのシステム運用により問題点の抽出および課題解決を行う方針である。研究者自身により構築した検証システムを試験運用を行いつつ引き続き改良を重ね、クラウド環境下でのシステム運用により問題点の抽出および課題解決を行う方針である。平成28年度の使用実績は該当年度の所要額を大きく下回った。その原因としては、基本設計理念を「クリニックでの導入を念頭に、低コストで実現可能である。」こととし、そのため実際のシステム構築において、サーバー、パソコン、ネットワーク等の機材を予定より安価な製品としたため、予定の半額程度となったことが挙げられる。また、本年度は学会発表を行ったが、そのための旅費は、申請のタイミングのため研究費からの支出とすることができなかった。(理由)平成29年度の使用実績は該当年度の所要額を下回った。(使用計画)今後の計画では、実証システムは構築せず検証システムの拡充にて代替する予定である。また、システム開発業者へ委託を行わない方針としたため、さらに予算が余る可能性も十分考えられる。(理由)平成30年度の使用実績は該当年度の所要額を下回った。
黒潮周辺域における鉛直混合が植物プランクトン変動に与える影響評価

黒潮域での鉛直混合が植物プランクトンの変動に与える影響を調べるために、東シナ海での現場観測による植物プランクトンの群集構造の把握と、衛星海色データによる表層のクロロフィルaの変動の把握を行った。2018年7月に、長崎大学練習船長崎丸による長崎から奄美大島西側の黒潮フロント域でのクロロフィルaのサイズ分画の観測では、基本的にはクロロフィルaの増加は大型のプランクトンの増加に酔っていた。黒潮表層域では窒素固定を行う大型藍藻Trichodesmiumが多く、フロント渦による栄養塩供給によってクロロフィルaが増加したとは考えにくかった。静止衛星ひまわり8号によるクロロフィルaデータによると、長崎丸観測前にはフロント域にフロント渦または沿岸から流入したと考えらえる比較的高いクロロフィルa濃度の筋状の構造が存在したが、長崎丸観測時には比較的濃度は低かった。衛星しきさいのクロロフィルaデータによると、黒潮が浅瀬に入り島や海山にぶつかるトカラ海峡域では、特に夏のクロロフィルa濃度の低い時期に、屋久島や種子島の島回りおよび小さな島などの影響と考えられる、比較的クロロフィルa濃度の高いパッチが多く観測された。これらのパッチでは、海表面水温が周辺よりも約1度低く、鉛直混合によって亜表層から冷たい水が供給され、そこに存在する栄養塩で植物プランクトンが増加していることが示唆された。屋久島や種子島の島影のやや高いクロロフィルの水塊は島から離れないが、小さな島によると考えられる比較的小さなパッチは移動しており、また日によっては20個程度存在していた。さらに対馬暖流域で観測した中規模渦による春季大増殖の発生時期の違いをモデル的に解析し、高気圧性と低気圧性渦によってその発生メカニズムが異なることを指摘した。長崎丸でのクロロフィルaのサイズ分画の観測、ひまわり8号での黒潮フロント域でのクロロフィルaの変動観測、衛星しきさいでのトカラ海峡のクロロフィルaの変動、さらに生態系モデルによる春季大増殖のメカニズムの解析などを行い、初年度として想定していた内容は実行することができた。今後、植物プランクトン群集構造に関して、HPLC分析の結果で同時に取得した多波長励起蛍光光度計のデータを校正することで、愛媛大の吉江直樹博士とともに東シナ海からトカラ海峡にかけての群集構造の変動を把握する。また、衛星観測に関しては、さらにルソン海峡から黒潮続流域までの広い海域や過去のデータの解析を行うとともに、黒潮の鉛直混合によるクロロフィルaの変動に関して定量的評価を試みる予定である。
運動・作業における中大脳動脈血流波形の計測と解析

本研究では、超音波ドップラ法を用いて、運動負荷、姿勢変換・作業の条件下で中大脳動脈血流波形の連続測定および血圧の測定を行った。血流波形について血行力学な解析、血流ー血圧の相関解析を行い脳血管内血流の特性を調べた。その結果、強い運動負荷においては、血流は運動負荷が増加してもほとんど増加しないこと、血圧は増加しても血流は増加しないことが明らかとなった。流速変動度は最高血流速と似た変化を示した。抵抗指数は、運動中よりクーリングダウン時において大きいことが明らかになった。立位→しゃがみ→立位の体位変換中に、98Nの荷物を負荷する場合、負荷なしに比較して血流速度、心拍数ともに増加することが分かった。昨年度購入した超音波ドップラ血流計、指先での連続血圧測定装置、および今年度補助金によって購入した携帯型心電計のデータを同時に測定できるパソコンシステムを構築した。この測定システムを用いて次の測定を行った。(1)自転車エルゴメータにより、運動を負荷した場合について、中大脳動脈血流波形の計測を行った。得られた血流波形について、血行力学的解析(流速変動度、抵抗指数、瞬時心拍数の変動)を行った。また運動時の血圧と血流の相関、心拍数と血流の相関について解析を行った。運動負荷は漸増負荷であり、0ワットから220ワット(W)までの負荷、さらにその後のクーリングダウン時に測定を行った。測定開始から、最高、最低および平均血流速度はともに増加傾向を示した。しかし強い運動負荷(>125W)では、負荷が増加してもこれらの量はほぼ一定の値となることが分かった。クーリングダウンに入ると、それぞれの血流速度は減少していくが、減少率は、最高、最低、平均血流速度において、それぞれ異なる傾向を示した。流速変動度は、安静時から運動4分(約125W)まで増加し、その後は大きな変化はなかった。クーリングダウンに入ると、クーリングダウン3分まで変化はなく一定の値を保ち、その後減少した。抵抗指数は運動開始直後に急激に増加し、クーリングダウンが終了するまでゆるやかに増加した。抵抗指数がクーリングダウン時も増加した理由として、最高血流速度が減少していくと同時に最低血流速度も減少し、その減少率が大きいことが考えられた。この現象は今回初めて明らかになった。(2)作業負荷(荷重負荷)時の連続血圧測定:立位で荷物(15kg重)を両手で前に支える場合と、同じ荷物を背中に背負う場合について、指先で連続的に血圧を測定した。その結果、血圧の変動のしかたが中大脳動脈血流の変化と同じ傾向を示すことが分かった。超音波ドップラ血流計を科学研究費により購入した。血流計からのシグナルをパソコンにより高速フーリエ変換することにより、これまで測定ができなかった血管断面内平均血流速度を測定できるようにした。さらに、血圧の連続測定と加速度センサによる動作の同時計測を行う測定システムを改良した。これらの測定システムを用いて、(1)姿勢変換時、(2)荷重負荷の場合について中大脳動脈血流波形の計測を行った。得られた血流波形について、フーリエ解析による周波数分析、血行力学的解析(流速変動度、抵抗指数、瞬時心拍数の変動)を行った。(1)姿勢変換時の測定:これまでに測定を続けてきた仰臥位→立位の姿勢変換に加えて、仰臥位→椅座位、椅座位→立位の変換時、およびこれらの逆過程において中大脳動脈血流波形の計測を行った(被験者10名)。その結果、血流の変動は仰臥位→立位変換において最も大きく、それに伴い流速変動度、抵抗指数、瞬時心拍数も顕著な変動を示すことが分かった。この逆過程、立位→仰臥位変換では、かなりの流速変動が見られたが、仰臥位→立位の場合に比較して流速変動度、抵抗指数、瞬時心拍数の変化は小さかった。椅座位ー立位変換の場合にも血流波形の変動が見られたが、仰臥位ー立位変換に比較すると変化は小さかった。これは、各姿勢における脳、心臓、下肢の位置関係に起因すると考えられた。(2)作業負荷(荷重負荷)の実験:立位で荷物(15kg重)を両手で前に支える場合と、同じ荷物を背中に背負う場合について中大脳動脈血流波形を測定した。その結果、背負った場合の方が、血流波形の変動が小さく、流速変動度、抵抗指数、瞬時心拍数の変化は小さいことが分かった。本科研費によって購入した超音波ドップラ血流計、指先での連続血圧測定センサ、携帯型心電計を用いて次の測定を行った。

(1)自転車エルゴメータ運転時の中大脳動脈血流波形と連続血圧波形の測定:自転車エルゴメータ運転時に経時的に中大脳動脈血流波形の測定を行った。これに加えて、同じ運動条件で指先で連続血圧測定を行った。その結果、低い運動負荷の場合は血圧上昇と脳血流の上昇は比例関係を示すが、強い運動強度では血圧は上昇するが、脳血流は一定に保たれるか僅かに減少することが明らかとなった。血流と血圧の同時測定を行ったが、同期させてデータをとることが難しく、信頼できるデータとするため実験回数を増やしていく予定である。(2)荷重負荷時の中大脳動脈血流波形の連続測定:負荷荷重(15kg重、5kg重)を背負った場合と、胸前面で保持した場合において、指先における連続血圧測定を行った。その結果を前年度に測定した中大脳動脈血波形と比較した。血圧波形は、同じ重さの負荷の場合、胸前面で保持した場合の方が背負った場合と比較して血圧が有意に高くなり、瞬時心拍数や血圧変動度も大きくなることが分かった。これは保持するときの力のモーメントの大きさに違いがあり、筋肉に対する負荷が異なるためと考えられた。血流波形と血圧波形はおおむね同様の傾向を示すが、時間的なずれが生じる場合のあることが明らかになった。そのため、血圧、血流の同時測定を行ったが、正確なデータを得ることが難しかった。これらは今後の課題である。人間医工学本研究では、超音波ドップラ法を用いて、姿勢変換、運動負荷、作業負荷の条件下で中大脳動脈血流波形および指先血圧の連続測定を行う。得られた血流波形について血行力学的な解析、血流ー血圧間の相関解析を行い、能動的活動時の脳血管内血流特性を明らかにすることが本研究の目的である。この目的のために、ヒトの動作時も安定して中大脳動脈での血流を測れるように、測定装置の改良を行ない、一連の姿勢変換において血流波形の測定を行った。さらに測定結果を血行力学的に解析した。また、作業負荷(荷重負荷)の実験として、荷物の持ち方による脳血流への影響を調べた。同じ荷重でも、荷重の保持しかた(背負うか手で前に持つか)により、脳血流への影響が異なることを明らかにした。血流波形については、当初の予定通りの成果が得られている。血圧測定については、連続血圧測定法を整備し、測定結果が出始めた。しかし、中大脳動脈血流と連続血圧の同時測定は未だ成功していない。本研究では、超音波ドップラ法を用いて、姿勢変換、運動負荷、作業負荷の条件下で中大脳動脈血流波形および指先血圧の連続測定を行う。この目的のために、動作時も安定して中大脳動脈での血流を測れるように、測定装置の改良を行った。さらに、一連の姿勢変換において血流波形の測定を行い、その結果を血行力学的に解析した。椅座位ー立位変換、仰臥位ー椅座位の場合のデータはこれまでほとんど報告がない。仰臥位ー立位の変換も能動的なデータはきわめて少なく、貴重なデータになると考えられる。作業負荷(荷重負荷)の実験として、荷物の持ち方による脳血流への影響を調べた。血流波形については、当初の予定通りの成果が得られたが、血圧の測定については、現在の所、間歇的な測定に留まっている。連続血圧測定装置の準備はできており、今後実験を積み重ねる予定である。
単純ヘルペスウイルス誘導プロテインキナーゼの特性と役割について

単純ヘルペスウイルス(HSV)のUS3プロテインキナーゼ(PK)はこれまで細胞質に存在する酵素であると考えられていたが、ウイルス感染中期にはむしろ核に存在することを間接蛍光抗体法により明らかにした。US3PKを単独発現させた場合でも核と細胞質の両方に分布した。これらの結果はUS3産物が単独でも核に移行することを示唆している。また新規ヌクレオシドアナログで抗ヘルペス効果のあるグアノシン誘導体(A-5021)の作用機序を解明した。この物質はHSVのチミジンキナーゼで1リン酸化されその後宿主のリン酸化酵素で3リン酸化されてウイルスDNAポリメラーゼを阻害した。既存の抗ヘルペス剤と比較では、アシクロビルより3リン酸型が安定で、ペンシクロビルよりDNAポリメラーゼに対する阻害作用が強いことがわかった。HSVのUL16、UL51遺伝子産物は未だ機能の明らかになっていない非必須(アクセサリー)遺伝子である。まず特異抗体を作製し、基本的性状解析をおこなった。感染細胞においてその発現をウエスタンブロッティングで確認したところ各産物の分子量はそれぞれ40K12730KDaであった。UL51産物は感染細胞内でリン酸化による修飾を受けるため分子量が増大することがわかった。さらに蛍光抗体法で各産物の細胞内局在を検討した。UL16産物は核では小さな顆粒状に、細胞質では全体的に拡散して存在することが確認された。またUL16産物にはDNA結合活性があることが示された。UL51は細胞質、とくに核周囲に多く局在した。単純ヘルペスウイルス(HSV)のコードするUL13プロテインキナーゼ(PK)はカゼインのような酸性蛋白質を良くリン酸化し、細胞質よりも核に多く局在することがわかった。また、HSV-2の方がHSV-1に比べ10倍程度PK活性の誘導が高いため、HSV-2感染Vero細胞の核画分からUL13PKを精製した。精製したUL13PKについて至適反応条件、阻害物質、基質特異性について検討した。HSV-1 UL13を制限酵素サイトをもつprimerを用いてPCRを行い、pET-28発現ベクターでUL13の発現系を作製した。大腸菌で発現させたUL13産物を精製し、ウサギに免疫して抗体を作製した。この抗体を用いて精製UL13プロテインキナーゼをWestern blottingで確認した。またHSV-2 UL13の全塩基配列を決定した。精製HSV-2 UL13PKは銀染色で57Kの単一バンドで、Western blottingでも反応性を確認した。このPKはHSV-1 UL13 PKと異なり塩濃度に感受性で、ヘパリンに対する感受性は宿主のカゼインキナーゼI、IIに比べてより抵抗性であった。基質特異性、並びにカゼインキナーゼに対する阻害物質の結果から、HSV-2 UL13PKはカゼインキナーゼIIよりもむしろカゼインキナーゼIに類似した性状を示したが、宿主のカゼインキナーゼとは異なる独白のプロテインキナーゼであることがわかった。
歩行様運動中の機能的磁気共鳴画像（fMRI）取得方法の開発

下肢屈伸運動中のfMRIを取得するための体幹固定方法と撮像条件に取り組んだ。頭部の速度計測においては体幹固定を施すと有意に速度が減少した。また実際のfMRIの撮像では,脳賦活map上でモーションアーチファクトに起因して描出される負の賦活領域を減らすことができ,すべてのケースにおいて運動野の描出に貢献できた。しかしながら十分な効果を示さなかったケースもあり,改善が必要である。また頭部の動きの影響が少ない撮像条件の改良においては,理論的にはデータ収集タイミングと頭部の動きの少ないタイミングを合致させることができたが被験者撮影において実現することはできなかったためさらなる検討の余地が必要であった。初年度において予備研究の試作をもとに,ハーネスを用いた固定方法を改良し,健常ボランティアを用いたモーションキャプチャでの頭部の動きの測定とfMRIにおける画質の変化を検証した(研究目的の1,2,4,5に該当)。固定の改良およびモーションキャプチャでの測定が予定よりも順調に進んだため,次年度の計画に盛り込まれていたボランティア撮影を繰り上げて初年度に実施した。早い段階で本固定方法の効果をアウトプットするために,繰り上げることが妥当だと判断したためである。その結果の中で,頭部の動きがfMRI解析結果に与える影響を検出するための新しい解析手法を見いだした。この結果について現在論文投稿中である。一方,今回改良を加えたハーネスを用いた固定方法が完全ではないことも明らかになり,今回の結果をフィードバックさせた第二改良版にて次年度にも上記同様な健常ボランティア実験を行う準備をしている。また初年度に予定していた撮像条件の改良については次年度で取り組む課題とした。結果的に研究全体の進捗状況は順調であると判断している。初年度に得ることができた研究成果について,本研究分野に関連する国内学会および国際学会(査読付)に演題を登録した結果,採択され発表を行った(1つは本年度5月)。研究費の配分も予定通りである。初年度は実験に必要な備品やソフトウェア等の調達とボランティア撮影に必要だった謝金等に大半を費やした。次年度はボランティア撮影に対する謝金および成果を積極的に発表および論文化していくために予算を費やす予定である。本年度行ったことは,脚部のタイミングに合わせた撮像条件の作成と得られた成果を積極的に発表および論文化していくことに注力した。残念ながら脚部のタイミングに合わせた撮像条件は完成させることができなかった。その原因として以下の2点を挙げる;1下肢運動中に頭部が静止している時間が予想よりも短く,その時間内に必要データ量を収集しきることが不可能であったため,2頭部が静止している時間内にデータを断続的に取得するとそれに伴い撮像音も断続的になる。この断続的でリズミカルな撮像音に被験者の注意が吊られてしまい,モニター上で視覚的に指示していた本来行うべきタイミングで下肢運動を行うことが難しくなってしまった。以上2点は,解析結果の信憑性と再現性を下げることに繋がってしまい,それらの解決策を期間内に講じられる見込みがなかったため断念した。成果の発信として以下の3点を行った;1国際学会(ISMRM@Milano)2国内学会(日本磁気共鳴医学会大会@京都)3論文執筆(Magnetic Resonance in Medical Sciences). 3は平成27年2月に投稿し,4月にreviceされ現在再編中であり4月中に再投稿できる見込みがたっている。本研究の主な結果は,fMRI下肢運動中における頭部の動きの定量的評価と開発した固定方法の有効性評価である。これらを発信するための学会参加費(旅費を含む)と論文作成における英文校正費用に予定通り予算を多く充てさせていただいた。今後の活動はまず優先順位として,I)本研究成果の可及的速やかな論文化,II)固定方法のさらなる改良,III)ロボットスーツHALを用いた治療前後において下肢屈伸運動をタスクとしたfMRIを実施して治療効果判定に用いる,ことである。磁気共鳴画像初年度に掲げた研究目的は概ね完了した。またもっとも時間と手間を要するボランティア実験の1回目を初年度に繰り上げて行うことができた点は研究を大いに促進させることができた。また次年度の実験にフィードバックする課題も挙げることができた点や研究発表および論文作成にも初年度で取り組めた点からも,おおむね順調に進展していると判断した。初年度で得ることができた課題を元に,本固定方法に改良を加えること,第二回ボランティア実験を行うことと同時に初年度から繰り下げた撮像条件の改良を行っていく。頭部の動きを完全に抑制することは当初の予想通り非常に難しい。そのため解析手法と撮像方法の工夫を併せて実施していくことで本研究の目指す「下肢屈伸運動中のfMRI」を実現していく。
口唇裂・口蓋裂児におけるインプリンティング遺伝子の発現変化を探るプロジェクト

今年度(20年度)で自分の研究期間は最後の年である。今年度は、まず倫理委員会で承認を得た実験計画に沿って患者さんより採血を行った。対象は唇顎口蓋裂患者20名と比較対照用健常者4名である。採血後、RNAを抽出した後にマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行った。その結果、発現のプロファイルとして唇顎口蓋裂患者と健常者の抹消血液中では大きな傾向の違いは認められそうに無かったが検索した遺伝子24000の内、20個程度の遺伝子(0.08%)に正常群と比較して8倍以上の発現変化が認められた。この8倍以上の発現変化を起こしている遺伝子群のうち20人で共通している遺伝子がいくつあるかについて現在解析を進めているところである。特に今回の科研費での申請項目であるインプリンティング遺伝子については念入りに調査しているところである。今回の実験結果で優位な差が認めれればその成果を学術雑誌に公表し、さらにその項目についての発現解析をタンパクレベルでも追加実験を行えればと考えている。平成18年度においては申請した実験計画に基づき、その内容を再度煮詰めた上で遂行した。具体的にはカスタムマイクロアレイの設計、検体採取からRNA抽出までの設備、器材、運搬の準備・手配を行った。インプリンティング遺伝子は現在までに87の遺伝子が同定されており、そのすべてをカスタムマイクロアレイに搭載し研究対象とすることとした。その情報源としてはhttp://www.geneimprint.com/site/genes-by-speciesを参考とした。なお、今後新たなインプリンティング遺伝子が同定されれば可能な限り研究対象に追加する予定である。RNA抽出に関しては抽出したRNAの精度・安定性を考慮し、QIAGEN社のRNA抽出キットを準備した。これにより、採血時のテクニカルエラーおよび術者間の誤差は最小限に抑えられるものと期待する。また対象疾患は口唇裂単独、口蓋裂単独、唇顎裂、唇顎口蓋裂など様々な裂型があるためにそのすべてを均等に研究対象とすると解析不能になることも考えられるために口蓋裂単独患者をメインターゲットと考えた。口蓋裂単独患者からの資料採取は一次手術のときのみに限定してしまうとその採取は非常に困難になってしまうために咽頭弁移植術などの二次手術もその対象とすることとした。平成19年度においては患者からの資料採取、インプリンティング遺伝子の発現解析を進め、その成果を学術機関に公表する予定である。平成19年度においては申請した実験計画に基づき、準備を進めた。カスタムマイクロアレイは製造委託担当業者がジーンフロンティアからロシュ・ダイアグノスティックスに変更となりその内容を再度検討・確認し、その作製準備は終了している。インプリンティング遺伝子は昨年までは87の遺伝子が同定されていたが、現時点までに3個が追加同定され、全部で90個となっており、そのすべてをカスタムマイクロアレイに搭載し研究対象とすることとした。新たなインプリンティング遺伝子が同定されれば可能な限り研究対象に追加する予定である。また、発現機構に関連しているDNAのメチル化とヒストン修飾に関しても研究対象に加えることができれば一層、発現解析が進むものと考えている。現在、検体採取に際しては、対象がヒト遺伝子であるためにその取り扱いは厳重な管理のもとに行われなければならない。また対象疾患が口唇裂・口蓋裂という遺伝性のある先天性の外表奇形であるために患者さん、特に患児のご両親に精神的ショックを与えないように慎重を期さなければならない。そのため学内の倫理委員会に申請し結果を待っている状態である。倫理委員会の許可が下り次第、検体採取を始められる準備はすでにできている。平成20年度においては患者さんからのサンプル採取、RNA抽出、マイクロアレイ解析を行い、インプリンティング遺伝子の発現解析を進め、その成果を学術機関に公表する予定である。
軟骨疾患由来誘導軟骨細胞を用いたII型コラーゲン病の病態解明と創薬

II型コラーゲン病患者細胞からiPS細胞を作製し軟骨分化を行った。健常者細胞由来のiPS細胞から軟骨分化を行った場合と比較して、顕著な軟骨の低形成を示した。軟骨マーカーの染色も低下しており病態しが効率よく再現された。またII型コラーゲン病モデルマウス細胞からダイレクトリプログラミング技術を用いて誘導軟骨細胞を作製し、創薬スクリーニングの実験系を構築した。
光活性化を利用した[NiFe]ヒドロゲナーゼの触媒反応機構の分光学的研究

標準型[NiFe]ヒドロゲナーゼは酸化型で安定であり、酸塩基平衡により活性準備状態Ni-SIrが触媒サイクルの1つの状態であるNi-SIaに変換され、触媒反応(H2の分解/合成)が可能となる。したがって、本酵素の触媒反応機構の理解には、Ni-SIrからNi-SIaへの変換機構の理解が不可欠であるが、その変換機構の詳細は不明であった。本年度は、103ー238 Kでレーザー光(514.5 nm)照射下のFT-IRスペクトルを測定することで、Ni-SIrとNi-SIa間の酸塩基平衡の反応機構を明らかにした。まず、好気的に精製した酵素を37°CでH2と5.5時間反応させることでH2還元型酵素を調製した。次に、H2還元型酵素を5当量のフェノサフラニン(Em = ー252 mV)を用いて部分的に酸化させ、主にNi-SIrとNi-SIaを含むフェノサフラニン酸化型酵素を調製した。フェノサフラニン酸化型酵素の(光照射時)ー(光照射前)のFT-IR差スペクトルには、Ni-SIaのCO伸縮振動(νCO:1943 cmー1)とCNー伸縮振動(νCN:2077と2089 cmー1)に由来する正のピークおよびNi-SIrのνCO(1924 cmー1)とνCN(2056と2071 cmー1)に由来する負のピークが観測された。差スペクトルにおける正のピークは生成物、負のピークは反応物に由来し、Ni-SIrがNi-SIaに光活性化されることが明らかとなった。さらに、溶液のpHを8.0から9.6に上げるとNi-SIrの光活性化が著しく抑制されたことから、この光活性化反応ではNiとFe間の架橋配位子OHーがプロトン化され、H2O分子として解離すると解釈した。また、酵素反応を追跡するためのストップトフロー共鳴ラマン装置を開発した。これらの研究成果は[NiFe]ヒドロゲナーゼの反応機構の理解に役立つものである。28年度が最終年度であるため、記入しない。標準型[NiFe]ヒドロゲナーゼの触媒サイクルの1つの状態であるNi-Cへの光照射で生じるNi-Lには、Niの配位環境が僅かに異なる3つの状態(Ni-L1、Ni-L2、Ni-L3)が存在することはEPRを用いた研究により報告されているが、それらの違いは不明であった。本年度は、水素活性化で得られたNi-Cへのレーザー光照射により、Ni-Lの異なる2状態を同時にFT-IRにより観測することに成功した。弱塩基性条件下では、Ni-Cへの光照射により1911 cmー1にCO伸縮振動(νCO)、2047 cmー1と2061 cmー1にCNー伸縮振動(νCN)を示すNi-L2の生成が観測されたが、塩基性条件下での光照射では、1890 cmー1にνCO、2034 cmー1と2047 cmー1にνCNを示す新たな状態が検出された。Ni-L3のEPRシグナルは塩基性条件下で観測されることから、塩基性条件下で観測された1890 cmー1のバンドをNi-L3のνCOに帰属した。標準型[NiFe]ヒドロゲナーゼの水素分解過程で生じるヒドリド(Hー)はNi-Fe間に架橋してからH+として放出されると考えられている。Ni-Cへの光照射で生じるNi-L2では、放出されたH+はNiに末端配位しているシステイン(Cys546)配位子の硫黄に結合することが報告されていることから、Ni-L3はCys546の脱プロトン化状態であることが示唆された。Ni-L3のνCOバンドは、Ni-L2に比べて20 cmー1低波数シフトし、標準型[NiFe]ヒドロゲナーゼの各種状態のνCOバンドの中で最も低波数に観測された。Ni-L3では、Ni配位している硫黄の脱プロトン化のため、Niの電子密度が上昇し、νCOの振動数が減少したと推測される。Ni-L2とNi-L3のνCOバンドの強度比を温度の逆数に対してプロットし、Ni-L2のプロトン解離に伴うエンタルピー変化およびエントロピー変化を求めたところ、それぞれ6.4±0.8 kJ molー1および25.5±10.3 J molー1 Kー1と非常に小さい値が得られ、[NiFe]ヒドロゲナーゼの活性部位ではプロトン移動が効率よく行われることが示された。本年度は、塩基性条件下で[NiFe]ヒドロゲナーゼのNi-L3をFT-IRにより検出することに初めて成功し、Ni-L2からNi-L3への遷移にCys546の硫黄の脱プロトン化が関与し、プロトン移動が効率よく行われることを示した。これらの研究成果は[NiFe]ヒドロゲナーゼの反応機構に関する新しい知見である。

したがって、本酵素の触媒反応機構の理解には、Ni-SIrからNi-SIaへの変換機構の理解が不可欠であるが、その変換機構の詳細は不明であった。本年度は、103ー238 Kでレーザー光(514.5 nm)照射下のFT-IRスペクトルを測定することで、Ni-SIrとNi-SIa間の酸塩基平衡の反応機構を明らかにした。まず、好気的に精製した酵素を37°CでH2と5.5時間反応させることでH2還元型酵素を調製した。次に、H2還元型酵素を5当量のフェノサフラニン(Em = ー252 mV)を用いて部分的に酸化させ、主にNi-SIrとNi-SIaを含むフェノサフラニン酸化型酵素を調製した。フェノサフラニン酸化型酵素の(光照射時)ー(光照射前)のFT-IR差スペクトルには、Ni-SIaのCO伸縮振動(νCO:1943 cmー1)とCNー伸縮振動(νCN:2077と2089 cmー1)に由来する正のピークおよびNi-SIrのνCO(1924 cmー1)とνCN(2056と2071 cmー1)に由来する負のピークが観測された。差スペクトルにおける正のピークは生成物、負のピークは反応物に由来し、Ni-SIrがNi-SIaに光活性化されることが明らかとなった。さらに、溶液のpHを8.0から9.6に上げるとNi-SIrの光活性化が著しく抑制されたことから、この光活性化反応ではNiとFe間の架橋配位子OHーがプロトン化され、H2O分子として解離すると解釈した。また、酵素反応を追跡するためのストップトフロー共鳴ラマン装置を開発した。これらの研究成果は[NiFe]ヒドロゲナーゼの反応機構の理解に役立つものである。[NiFe]ヒドロゲナーゼによる水素分子のヘテロリティックな分解過程で生じるヒドリドはNiとFe間に架橋するのに対し、プロトンはNiに末端配位しているシステインの側鎖硫黄に結合することが提唱されている。嫌気性細菌の持つほとんどの[NiFe]ヒドロゲナーゼで、Niに末端配位しているシステインは酸素存在下で酸化修飾され、システインスルフェン酸になった状態を取り、ヒドロゲナーゼは活性化に時間を要する。これは、ヒドロゲナーゼを燃料電池や光合成システムと組み合わせるには決定的な障害であるが、酸化型[NiFe]ヒドロゲナーゼが活性化されると、修飾システインは未修飾システインに変換される。そこで、今後は光照射による不活性状態から活性状態への変換をFT-IRスペクトルを用いて調べ、本酵素の活性化機構を明らかにする予定である。28年度が最終年度であるため、記入しない。
複数の惑星を持つ系外惑星系の形成と遠方領域への軌道進化

太陽系外で数多く発見されている惑星は,星のごく近くにあったり,逆に離れていたり,あるいは軌道が傾いていたりと,太陽系の惑星とはかなり異なっている.こうした系外惑星がどのように作られるかを,惑星の重力軌道計算を行うことで調べた.複数の木星型惑星がある程度近くに形成された場合,惑星同士は重力散乱を起こす.その過程で,惑星が太陽系とは異なるような場所に移動したり,軌道が傾いたりすることが判明した.太陽系外で数多く発見されている惑星は,星のごく近くにあったり,逆に離れていたり,あるいは軌道が傾いていたりと,太陽系の惑星とはかなり異なっている.こうした系外惑星がどのように作られるかを,惑星の重力軌道計算を行うことで調べた.複数の木星型惑星がある程度近くに形成された場合,惑星同士は重力散乱を起こす.その過程で,惑星が太陽系とは異なるような場所に移動したり,軌道が傾いたりすることが判明した.これまで太陽系外では,主に観測に視線速度法が用いられていることによる限界もあって,太陽系に似た木星型惑星系を持つ系はあまり見つかっておらず,10AUを超える範囲の系外惑星の分布は知られていない.その中で,近年10AU以遠の領域で惑星の直接撮像の観測の試みが盛んに行なわれている.直接撮像しやすい領域に存在する巨大ガス惑星は,惑星間散乱を受けた可能性が高い.そこで現在観測が難しい領域において,観測が可能な領域の惑星分布から推論ができるように,惑星散乱によって惑星の軌道が進化する様子をシミュレーションした.本年度は,3つの木星型惑星が形成された場合について,惑星散乱の計算を行い,どのような惑星の分布が作られるかの数値計算を開始した.実際に観測されている内側領域の惑星分布と比較するために,中心星によるダイナミカルタイドや相対論効果など,内側領域の惑星に強く働く効果を含めたコード開発を行い,どのような短周期惑星と遠方惑星が形成されるかのテスト計算を始めた.木星型惑星の質量,半径をそれぞれ3種類,惑星の初期位置を3種類変え,短周期化率の変化を求められるようにした.また,中心星によって,どのような潮汐進化を受けるのかを調べるために,ダイナミカルタイドのファンダメンタルモードとイナーシャルモードを変化させた半解析的数値計算を行い,実際に観測されている系外の惑星の軌道要素の比較を行った.潮汐力の強さは,短周期化率にあまり大きく寄与しないが,最終的に離心率を残す惑星の分布を変化させる傾向が出ている.また,暫定的な結果として,短周期惑星を持つ系と持たない系では,遠方惑星の分布に違いが見られる.これまで太陽系外では,主に観測に視線速度法やトランジット法が用いられていることによる限界もあって,太陽系に似た惑星系はあまり見つかっておらず,10AUを超える範囲の系外惑星の分布はよく知られていない.発見されている惑星の多くは中心星のごく近くを公転している.その外側にどのような惑星系が広がっているかを調べることは,太陽系外の惑星との比較を通じて太陽系の成り立ちを理解するための貴重な手段である.本研究では,惑星が軌道不安定を起こして散乱が生じた場合に,中心星の近くと遠方とに,それぞれどのような惑星が作られるかを調べ,計算で得られた短周期の惑星を観測結果と比較したときに分布が一致するモデルを用いて,観測のできない領域に広がっている惑星の分布を推定することを目的としている.本年度は,発見されている短周期の惑星の進化に対する制約を研究した.それぞれの惑星の質量,半径,公転位置,中心星の質量に対して,働く潮汐力を計算し,軌道の変化する時間スケールを求めた.その結果,中心星と惑星との最接近距離が0.05AU程度であって,かつ離心率が大きい惑星は,惑星系が不安定になった後に散乱され,力学的潮汐力を受けて進化したモデルでその軌道がよく説明できることがわかった.このような惑星は,惑星の激しい散乱過程が終了してから中心星近くに移動しやすい.そして数値計算では,こうして作られた惑星の外側には,10AU程度から50AU程度の間にもうひとつ惑星が存在することが多くなっている.一方で,中心星のごく近くに惑星を持たない惑星系では,外側の惑星は,中心星との再接近距離は30AU程度であっても,彗星のように極めて離心率が大きいものが多くなる.惑星散乱によって,円軌道に近い遠方惑星を形成するためには,散乱後に軌道を円軌道化するような抵抗力が働く環境が必要である.発見されている太陽系外の木星型惑星は,観測のバイヤスによって離心率が大きく軌道長半径が短いものが多い.

これまでの研究でこのような木星型惑星の形成過程には,惑星同士の散乱現象が大きな寄与を果たしていることがわかってきた.昨年度までの研究に引き続き,太陽系外で複数の木星型惑星が形成され,軌道不安定を起こす状態における惑星の軌道進化を数値計算した.今年度は観測が難しく惑星の発見されていない領域に散乱される惑星の軌道傾斜の分布を求めた.軌道不安定によって生じる散乱によって惑星は,視線速度法によって観測可能な内側領域と,直接撮像法によって観測可能な遠方領域,そして観測のできない中間領域とに分布をする.この中間領域と遠方領域は,外側に散乱された惑星で作られるひと続きの分布となる.数値計算の結果によって得られる内側領域の惑星分布は観測と矛盾しない.中間領域の惑星は,外側に行くほど,離心率が大きく軌道傾斜角が小さくなる傾向を持っている.しかし,100AUを超えるような遠方領域の惑星は,散乱によって離心率が極めて高くなり,この結果は必ずしも観測とは合致しない,このため直接撮像のターゲットとなるような遠方領域では惑星形成時に何らかの抵抗が働いて軌道が円軌道化する可能性も考えられる.今年度はまた,惑星の質量比を固定せずに,2つの木星型惑星が軌道不安定を起こした場合に想定される軌道分布の計算も行った.この計算からは,質量比が大きくなると軽い惑星は系外に飛ばされやすいこと,質量比が1対3程度になると離心率は0.5以下のものが大半を占めるようになり,質量が1対10程度になると系に残る離心率はほぼ0.2以下となることが確認された。これまで太陽系外の惑星は,主に視線速度法やトランジット法による観測によって発見されているために,中心星のごく近傍に存在するものがほとんどである.また,太陽系外で太陽系の地球型惑星の領域に対応する領域で数多く観測されている巨大ガス惑星には,惑星間散乱を経験している可能性を示すような離心率も大きい惑星も多く含まれている.昨年度までの研究で,観測の難しい数十AU程度に散乱過程を通じて作られる惑星の離心率と軌道傾斜角の分布がどのようなものとなるか,こうした分布がどのような物理過程を反映して形成されるかにの基本的なことは判明した.そこで今年度は,これまでの年度の数値計算結果をもとに,こうした複数惑星系の軌道進化過程の数値計算と,観測されている実際の系の安定性を数値計算との比較を行なった.特に,複数の惑星が互いに接近するような惑星系で,実際の観測からは求められないパラメーターを数多く振ることによって,どのような軌道が可能となるか,どのような質量の惑星であり得るかについて考察を行った.またいくつか特定の複数系外惑星系において軌道の傾きがどの程度の時間で変化するか数値計算結果から求め,視線速度観測やトランジット観測でどのように観測されるかについて考察を行った.複数惑星系の軌道進化についての基本的な数値計算と解析の多くが順調に終了しているため.24年度が最終年度であるため、記入しない。中心星の自転軸と惑星の自転軸に傾きがある場合の短周期惑星の潮汐進化についての考察が完了していないため,今後これを行う必要がある.24年度が最終年度であるため、記入しない。