hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
神経細胞における調節因子としてのスフィンゴ脂質

マウス神経芽腫細胞を血清を除いた培地中で培養したときに起こる神経突起の伸展に対するスフィンゴシンの抑制効果が、カルモジュリンに依存する経路による可能性が示唆されたので、さらに各種のプロテインキナーゼ阻害剤、カルモジュリン阻害剤、対照化合物を用いて、細胞の増殖や神経突起の伸展に及ぼす効果を検討した。その結果、神経突起の伸展は明らかにカルモジュリンを介した機構により調節されているが、Ca^<2+>/カルモジュリン依存性プロテインキナーゼIIは関与していないことが確認された。細胞増殖に対する阻害作用では用いたカルモジュリン阻害剤間に差がみられ、神経突起伸展に対する阻害濃度の1.53倍であった。糖脂質合成酵素の阻害剤や、スフィンゴシンの添加によって神経芽腫細胞の神経突起の伸展抑制や退縮がおこる機構にもカルモジュリンに依存する経路が関与してことが強く示唆された。セラミドの合成を阻害しジヒドロスフィンゴシンの蓄積をもたらすことが知られているフモニシンB1について神経突起伸展に及ぼす効果を調べたところ抑制効果がみられず、その理由について現在検討している。また、各種スフィンゴシン誘導体の効果を比較検討するために、スフィンゴシルホスホコリンよりスフィンゴシン1ーリン酸を、また水素添加スフィンゴミエリンよりd-erythro-ジヒドロスフィンゴシンを調製して、その効果について現在検討中である。一方,^<15>N-塩基を用いたリン脂質およびスフィンゴ脂質の代謝の解析は、培養神経芽腫細胞とマウス各種臓器における各種脂質の動態を解析する上で有効であることが示され、特に^<15>N-グリシンを培養細胞に添加するとリン脂質、スフィンゴ脂質が標識されることが明らかにされた。培養マウス神経芽腫細胞NS-20Yの細胞周期に対して、グルコシルセラミド合成酵素阻害剤PDMP(1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol)および種々のスフィンゴ脂質が及ぼす効果をフローサイトメトリーにより検討した。PDMPは細胞のスフィンゴ糖脂質含量を著しく減少させるとともに、細胞の増殖を抑制することはすでに報告している。NS-20Y細胞へのPDMP(50μM,24h)の添加によりS期細胞の減少とG0/G1期細胞の増加が明らかに認められた。G2/M期の細胞には有意な変化を認めなかった。一方、スフィンゴシン、スフィンガニン、スフィンゴシン-1ーリン酸では、細胞周期に変化はみられず、短鎖セラミド(N-acetyl-D-sphingosine,N-hexanoyl-D-sphingosine)、スフィンゴシルホスホコリンも細胞周期に影響を与えなかった。これらの結果から、PDMPによる増殖の抑制はG0/G1期での細胞周期の停止によるものであると考えられるが、これはセラミド、スフィンゴシンなどの増加によって起こるとは考えにくく、スフィンゴ糖脂質の減少が重要である可能性が示唆された。また、セラミドやスフィンゴシンには細胞の種類によってアポトーシスを誘導する作用があることが知られているが、NS-20Y細胞ではDNA含量の解析パターン上ではアポトーシスは認められなかった。細胞の形態については、無血清条件下での神経突起伸展(5060%)と比べてわずかであったが、PDMPの添加により神経突起の有意な伸展(510%)がみられた。
UVB照射で生成する長寿命ラジカルと突然変異・ガン化との関係

哺乳動物細胞への紫外線影響はDNA中のピリミジンダイマー生成などが知られているが、UVB領域においてはそれらの生成と突然変異頻度との関係は明確ではない。我々はUVB照射によって動物細胞内に長寿命ラジカル(LLR)が生成されることを発見した。放射線で同様に生成するLLRは、点突然変異を誘発する。本年度はUVB照射によるヒト細胞の細胞死・突然変異誘発の影響と照射後のビタミンCによる突然変異抑制について検討した。電離放射線誘発LLRsと同様に、UVB誘発LLRsも細胞死に関与しないことが明らかになった。一方、突然変異生成に関しては、UVB照射後にビタミンCを添加すると、添加しない場合と比較して20%ほど発生頻度が下がるが、電離放射線の場合に97%も抑制されたことと比較すると、UVB誘発LLRの突然変異誘発への関与は小さい結果となった。昨年度の研究で、UVB、UVC照射によって細胞中に生成するLLRの1種類は、放射線照射時に生成して突然変異を誘発するLLRと同一のスルフィニルラジカルであり、UVB照射によって生成したLLRとビタミンCとの反応速度定数は、γ線照射によって生成したLLRとの速度定数の約10倍になることがわかっている。これらのことと併せて考えると、UVB照射によってLLRの生成したタンパク部位は、UVBとγ線では異なることが示唆される。UVBとX or γ線では透過率が大きく異なるため、UVBではLLRが細胞膜表面の膜蛋白質に多く生成するのに対し、γ線では細胞の部位を問わず細胞中の蛋白質中に生成すると考えられる。本研究では紫外線照射によって生成するLLRの量子収率の波長依存性及び、LLRの生成箇所について考察した。SHEにおいてはUVBとUVC照射のLLRの量子収率はほぼ等しく、UVAのそれはUVB、UVCの場合の10%以下となった。ALB水溶液に照射した場合の量子収率もSHEの場合とほぼ同様になったが、DNA水溶液中ではどの波長領域でもLLRの生成が認められなかった。これらの結果からUVB、UVC照射によってSHE中に生成したLLRは、DNA上ではなくタンパク質上に生成したラジカルであることが示唆される。SHE、ALB共にUVB、UVC照射によって生成するLLRの1種類は放射線照射時に生成して突然変異を誘発するLLRと同一のスルフィニルラジカルであり、UVB照射による突然変異誘発は、LLR生成が原因になっているものと推察される。UVB照射によって生成したLLRとビタミンCとの反応速度定数は、γ線照射によって生成したLLRとの速度定数の約10倍になることがわかった。従って、UVB照射によってLLRの生成したタンパク部位は、UVBとγ線では異なることが示唆される。
疫学情報と遺伝情報を組み合わせた自然界の微生物保持機構の理論的解明

まず1年度目からの継続課題として、南北差を含むフライウェイでのリザーバの特定に取り組んだ。これまでに理論疫学的手法によってリザーバの定義を可能にしてきた。ただし、これまでは動物種別のみを見たものであり、例えば、インフルエンザであればマガモがmaintenance hostであることを実証する程度しかできていない。そこで、渡り鳥のアジアフライウェイに対応した観察データの系統的レビューに基づくデータ収集を実施し、また、数理モデル構築において必要とされるパラメータ(例.気温に応じた水環境でのインフルエンザウイルスの失活度に関する生存曲線)について定量化を行った。その結果、北極のマガモのほうが熱帯地域よりもインフルエンザウイルスの維持には大きな役割を果たすという空間上の異質性を特定することができた。引き続き、伝播能力が変化する宿主間の(進化)連携パスウェイの定義と分析手法の開発に取り組んだ。上記のような疫学的なリザーバの特定は系統樹を利用したウイルス学的・進化生物学的なリザーバの議論とかみ合ってこなかった。感染頻度と系統遺伝学的情報の両方が与えられた場合のリザーバの特定に関する研究の理論的実装に取り組み、疫学情報あるいは遺伝学情報の一方のみに頼った場合のリザーバ特定の精度・信頼性等について統計学的推定を通じて評価を行った。同時に、進化生物学的に意味のある組み換えについてその情報を加味した(リザーバとは異なる)宿主のグループ化に取り組んだ。H5N1型インフルエンザの分析に取り組み、現在原著論文執筆中である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。実際には、マガモの中でも長距離移動の有無があることが知られているし、北極圏の水環境で伝播が起こりやすい一方で熱帯地域に近づくと感染頻度が下がることが知られている。申請者は過去にエラスムス研究所のインフルエンザウイルス研究者らと、ヨーロッパのフライウェイについて分析をしてきた。他方、アジアフライウェイについては十分な分析がない。そこで、渡り鳥のアジアフライウェイに対応した観察データの系統的レビューに基づくデータ収集を実施し、また、数理モデル構築において必要とされるパラメータ(例.気温に応じた水環境でのインフルエンザウイルスの失活度に関する生存曲線)について十分に定量化を行った。1)北極および温帯地域のマガモが保有宿主の条件を満たすことを数理モデルによる疫学データ分析に基づいて客観的に証明することができた。また、オセアニア地域におけるマガモはインフルエンザウイルスの維持ができないことを実証した。2)疫学的には伝播の「維持」を検討してリザーバを見ているが、系統樹ではゲノム情報から特定のウイルスのOrigin(の組み合わせ)を検討している。両方の知識が与えられたときのリザーバの定義はより精密で正確なものになると期待される。これまでに定義の定式化とデータ収集に取り組んだ。南北差を含むフライウェイでのインフルエンザのリザーバの特定の研究を予定通り公表することができた。研究成果は領域内の連携として共進化班中川草先生らと、第6回生命医薬情報学連合大会において感染症のバイオインフォマティクスに関するネオウイルス学研究成果のセッションを共同開催して発表した。初年度に提出した研究論文の出版が完了した。1)初年度に提出した研究論文の出版に向けて改訂作業に取り組む。2)具体的研究対象として計算が成立することを根拠に中東呼吸器症候群(MERS)の検討を実施したが、今後より対象を広げて検討をする予定である。
農業機械の稼働状況の把握と異常・危険診断システムの構築

本研究は,農作業における機械作業の効率化と農業機械作業の安全性の向上を目指して,農業機械の稼働状況の把握が可能な小型で安価なセンサ群を用いた稼働状況計測システムの構築を行うとともに,本計測システムより得られたデータ群より機械学習,統計処理や時系列解析等の手法を用いて,作業状態の特徴抽出や変化点分析を行い,機械作業の状態把握および危険予知,異常・故障の有無を評価し得る総合的なシステムの構築を行った。24年度においては、振動時系列データの変化点検出が行ってきた.しかしながら,上記の研究では,一時系列のみを対象にした解析であり複数時系列の相互関係には着目していない.また,変化点解析では,時系列の特性が変化した点は分かるもののその前後でどのような特性の変化が行ったかまでの情報を得られない.そこで,本年度では,複数時系列データから農業機械の異常検知を目指し,3軸加速度センサおよび角速度センサを用いて,異なる条件下での農業機械の機体振動の計測を行いった.さらに,得られた並進3軸加速度と回転3軸角速度の6つの振動時系列データから,データ間に存在する相関関係に着目した異常度の算出法を用いて機体の異常検出を試みた.本年度では、農業機械の並進3軸加速度と回転3軸角速度の6つの振動時系列データから各時系列間の非類似度に基づく異常値および相関関係をもつ多次元(多変量)空間の距離であるマハラノビス距離(MD)による異常値検出を併用した機体の異常検出手法を確立した。平成24年度では,農業機械の稼働状況の把握を目的として,機体振動計測のために,安価で小型な複数の並進加速度計を用いた並進3自由度と回転3自由度の6自由度加速度計測システムの構築を行った。近年開発普及が目覚ましい小型で安価なMEMS加速度センサーおよび角速度センサーを用いた6自由度計測システムを構築した。さらに,両センサーを併用することで,機体の傾斜角の測定についても可能とした。次に,開発した計測システムを用いて,様々な条件下で比較的稼働部位が多く多様な振動源を有するな自脱コンバインの実作業時の計測実験を行った。得られた測定データを用いて,周波数解析を行った結果,各稼働状態での特徴的な周波数を検出することが可能であり,本計測システムの有用性が示された。また,農業機械の稼働状態の常時把握を行うためには,各時刻で振動データの時系列解析や周波数解析を行うのは計算コストの面で得策でなく,状態の変化が発生した時刻の前後の時系列データの特徴量を比較することがより実用的である。そこで,特異値解析による時系列データの変化点検出法を試みた。一般的に,大マトリックスの特異値分解は非常に計算コストがかかるためリアルタイムでの解析が困難である。本研究で目指すリアルタイムでの農業機械の稼働状態の把握のためには,解析時間の高速化が不可欠である。そのため,解析対象となる時系列データから作られるハンケル行列の特異値分解について行列圧縮による計算時間の高速化を図ることで,時系列データの変化点に検出手法を確立した。本年度においては,農業機械の稼働状況の把握が可能な小型で安価なセンサ群を用いた稼働状況計測システムの構築するとともに稼働状況の把握に重要な計測時系列データの変化点検出法を確立しており,おおむね順調に研究計画通りの成果が得られている。平成24年度において開発した計測システムを用いて、正常時および異常時における様々な条件下での農業機械の振動加速度の計測実験を行う。計測対象には、代表的な農業機械であり、事故・故障頻度が高いトラクタと自脱コンバインおよび田植機を用いる。同機械は、非常に多様な事故・故障のケースが存在するが、比較的発生頻度が高い条件に絞って振動加速度の計測を行う。得られたデータを用いて、周波数解析や時間周波数解析が可能なウェーブレット解析等の時系列解析および昨年度確立した変化点解析手法を援用し、時系列データの異常・変化点検知を行うとともに、各異常発生時における振動波形の特徴抽出を行う。さらに、計測精度や解析精度を検討し、誤差補正を行い、最終的に、農業機械作業状態の把握および危険予知,異常値検出・故障診断システムの構築を目指す。平成25年度においては,実際の圃場での作業中において正常時および異常時における様々な条件下での農業機械の振動加速度の計測実験を行う予定である。また,平成24年度および平成25年度おいて結果が得られた研究成果について内外の学会等で発表を行う予定である。そのため,平成25年度では,主に実験に伴う旅費や実験補助に関する謝金および研究成果発表のための学会参加や論文投稿に関連する経費とその他の雑費に研究費を支出する予定である。
シアル酸、KDO、及びKDNアナログとそれらのケトシド誘導体の合成

研究成果の概要は以下の通りである。1.アミノ酸合成に多用されるアミノ型Homer-Witting試薬を用いた反応においてケトカルボン酸が副生することに着目し、その生成条件を積極的に改良すれば、糖ウロソン酸類の新規な合成法が確立出来ると考え、検討を行った。その結果、糖鎖末端に存在する3-デオキシ-_D-マンノ-2-オクツロソン酸(KDO)、3-デオキシ-_D-グリセロ-_D-ガラクト-2-ノヌロソン酸(KDN)、及び5-アセトアミド-3,5-ジデオキシ-D-デオキシ-_D-グリセロ-_D-ガラクト-2-ノヌロソン酸(N-アセチルノイラミン酸、NANA)誘導体を初め、それらのアナログである3-デオキシ-_D-アラビノ-2-ヘプツロソン酸、及び3-デオキシ-_D-グルコ-2-オクツロソン酸などの系統的な合成を達成し、本手法の有用性を明らかにした。またその際、上記試薬のアミノ基の保護基(ベンジルオキシカルボニル又はt-ブトキシカルボニル)を必要に応じて換えることが出来ることから、幅広い適用範囲を持つ一般性の高い方法であることをも明らかにした。2.上記知見を応用し、KDNアナログである5位のみ遊離な5-epi-KDNの新規合成について検討を行い、目的物の誘導体を得るとともに、その5位のSN2反応により5位アナログ、とりわけ糖鎖間相互作用の分子レベルでの微視的解明を行う上で有用な研究道具になると考えられる、安定同位体標識シアル酸合成への道筋を付けることが出来た。下記の目的13にそって研究を行った。1.KDO(1)、KDN(2)、シアル酸(3)をはじめ、それらのアナログが簡便かつ大量合成できることを明らかにする。2.上記化合物のケトシド化について検討し、反応性の差を明らかにする。3.生物的に重要な機能を果たしているポリシアル酸の合成が困難な理由の一つにアセタミド基の存在が考えられる。それを証明するために、アセタミド基をヒドロキシル基で置換したポリKDNの合成を検討する。4.上記目的を遂行するための基礎的な知見として、筆者らは、Z保護したHorner-Wittig試薬を用いる1、2の新規大量合成法を確立するとともに、同試薬をBoc保護したものに換えることにより、3さらにはアラビノースより誘導されるアナログ(4)も効率良く合成できたことを報告している(Chem.Lett.,1994,129)。そこで本年度は、この手法の実用性をさらに高めるため、Boc保護試薬を用いた1、2の収率向上について検討した。その結果、2の全収率を約17%向上させることに成功した。現在、1についても同様の検討を行っている(目的1に関連)。また上記手法とは別に、13をはじめ、それらのアナログやポリシアル酸合成にも適用可能と考えられる、5位に脱離基を持つ中間体(5)のS_N2反応による手法についても検討し、5の前駆体の合成を完了した。現在、先の反応を検討中である(目的13に関連)。本年度の研究実績は、以下の通りである。1.3-デオキシ-D-グリセロ-D-ガラクト-2-ノヌロソン酸(KDN)の簡便かつ大量合成可能な新規方法を確立する過程で、N-Boc型Horner-witting試薬を用いた増炭法による手法がN-Cbz型試薬を用いる手法に比較してKDN誘導体の全収率が約17%向上することを既に明らかにしている。そこで3-デオキシ-D-マンノ-2-オクツロソン酸(KDO)の合成においても収率の向上が可能と考え、検討した結果、N-Boc型試薬を用いた手法ではN-Cbz型試薬を用いた手法よりもKDO誘導体の全収率は低下した。

従って、KDOの合成には、N-Cbz型試薬を用いる手法の方が有用であることが判明した。今後、上記ウロソン酸類のケトシド化について検討する予定である。2.上記知見及びS_N2反応に関する当研究室の豊富な知見を基に、KDNやシアル酸ならびにそれらのアナログを同一中間体よりスマートにかつ簡便に合成する上で有用と考えられる5-epi-KDNの新規合成について検討した。原料としてD-グルコノ-1,5-ラクトンを用い、立体選択的に7炭糖アルデヒドに変換後、上記N-Boc型wittig試薬で増炭を行い、重要9炭糖中間体を得た。それを脱保護、環化させることにより5-epi-KDNの合成が達成される。今後、この化合物の5位S_N2反応による安定同位体標識シアル酸の合成についても検討する予定である。3.上記手法とは別に、D-ガラクトース(Gal)とオキサロ酢酸との縮合による5,7-epi-KDNの新規合成について検討した。副反応を抑えるためGalの2,4位をMOM基で保護した化合物を新規に合成し、それに対しオキサロ酢酸の縮合反応を行い、生成物を得た。現在、その構造確認を行うとともに反応条件についてさらに検討を行っている。
培養メサンジウム細胞の糖輸送と糖輸送担体発現におけるIGF-1の役割

1.糖取り込みに対する影響(2)IGF-1は正常糖濃度および高糖濃度培養液で培養したmesangial cellの糖取り込みを促進したが、insulinは何ら影響を与えなかった。(1)高糖濃度ではGLUT1蛋白は不変、mRNAは軽度減少した。高浸透圧下では、GLUT1蛋白、mRNA発現共に増加した。(2)IGF-1は正常糖濃度、高糖濃度のいずれの条件下でもGLUT1蛋白およびmRNA発現を増強した。しかしinsulinは影響を与えなかった。3.上記1.,2.より以下のことが明かとなった。(1)高糖濃度、高浸透圧は共にmesangial cellの糖輸送に影響するが、その機序は異なる。(2)mesangial cellの糖輸送はIGF-1により調節されており、insulinの影響は受けない。
マイクロデジタルファブリケーション技術を用いた色素増感型太陽電池の開発

マイクロデジタルファブリケーション技術であるマイクロ3Dプリンタを利用して、色素増感型太陽電池のチタニア層の作製を行い、特性の評価を行った。本技術は、精密なパターニングの他に、チタニア層内に、ナノサイズのポアを発生させることが可能であり、これをコントロールすることによって、従来の製造方法であるドクターブレード法による色素増感型太陽電池の製造よりも、高効率な色素増感型太陽電池を作製可能なことを実証した。申請者らは、高粘性なチタニアペーストを高画質にパターニング可能なPELID法を独自に開発中であり、試作機を用いて一種類のチタニアを最適な膜厚条件でパターニングすることで、色素増感型太陽電池の変換効率7.5%を達成している。また、このチタニア層の上に比較的大きな粒子径のチタニアをパターニングすることで、光閉じ込め効果によって効率が上昇することを実証している。本研究では、高効率な色素増感型太陽電池の作製と製造方式の実用化を目指している。そこで、光閉じ込め効果が最大になる膜厚条件にチタニアをパターニングすることでさらなる高効率化を図る。さらにマルチノズル化することで、高速パターニングが可能な装置の開発を行う。本年度は、チタニア粒子をPELID法の装置の改良と、膜厚条件の探索を行った。ノズル先端と対象物の距離が近い場合、着弾までの乾燥があまり行われないため、ペースト濃度が低い状態で着弾してしまう。これによって、形成されている膜が崩れてしまうことがあった。膜厚の微細な調整は、最適膜厚条件を探索する際に非常に重要になる。ノズルと対象物の間にリング電極を挿入した。ノズルとリング電極の位置関係によって発生する電界が決まるので、ノズル先端から吐出される液滴は決定される。一方で、リング電極と対象物の距離を大きくすることによって、乾燥しやすくなる。これらによって、安定した液滴の吐出を実現しつつ、着弾時に発生する問題の解決を行った。本年度は、高速印刷を目的に、新型のゾルの開発を行った。高電圧を印加する際に発生する強い静電力を利用して微小な液滴の吐出、パターニングを行っているが、隣接するノズルとの間に、電界のクロストークが発生してしまう。そこで、各ノズルヘッドに絶縁材料をセットすることによって、隣接するノズルによる電界のクロストークを解消するユニットの開発を行った。さらに、本手法によって作製できるポーラスリッチなチタニア層内部のポアのサイズの評価をXRRによって、行った。P25という通常のチタニアをドクターブレードによって作製した場合はサブnmオーダーのポアしか存在しないが、申請者らの製造方法の場合、数nmオーダーのポアを多く含むチタニア層の形成が可能なことをSEM写真以外の方法で確認した。近年太陽光発電が注目されている.現在は変換効率の高いシリコン型太陽電池が主流であるが,柔軟性,意匠性,低コストというメリットを有する色素増感型太陽電池も注目されている.しかし,現在の色素増感型太陽電池の変換効率は低い.そのため,高効率化への研究が行われている.先行研究では,変換効率に影響を及ぼす光電極に使用するチタニア粒子の形状変更や色素開発など化学的観点からのものは多いが,どれも大きな成果は得られていない.また,チタニア薄膜の形成方法によって変換効率を向上させる報告はあまり行われていなかった.そこで,光電極となるチタニア薄膜の形成方法に着目した.我々は静電インクジェット法を用いてチタニア薄膜の形成をしている.この静電インクジェット法で形成された多孔質構造のチタニア薄膜は,従来法であるドクターブレード法より変換効率が優れていることを明らかにした.この点から,我々は,チタニア薄膜の構造を最適化することで変換効率の向上が可能と考えた.そこで,静電インクジェット法のエバポレーションを利用した拡散プロセスに着目し,吐出距離を変更することでチタニア薄膜の構造制御を検討し実験を行った。しかし,静電インクジェット法はノズルとFTO電極間に発生する静電力を利用して吐出を行うため,距離を遠く設定すると静電力が弱まり,吐出状態が安定せず多孔質膜の形成が難しくなるという問題があった.穴あき平板電極を挿入することで,距離に依存せず,安定した吐出を行うことに成功した.この改良した静電インクジェット装置を用いて,ノズルとFTO電極の距離を変化させ吐出実験をした.その結果,チタニア薄膜の構造の変化が見られ,構造により変換効率は変化し,膜厚の最適値が異なることがわかった.マイクロデジタルファブリケーション技術であるマイクロ3Dプリンタを利用して、色素増感型太陽電池のチタニア層の作製を行い、特性の評価を行った。

本技術は、精密なパターニングの他に、チタニア層内に、ナノサイズのポアを発生させることが可能であり、これをコントロールすることによって、従来の製造方法であるドクターブレード法による色素増感型太陽電池の製造よりも、高効率な色素増感型太陽電池を作製可能なことを実証した。26年度、27年度で達成しようとしていた高速プリントヘッドの開発が概ね終わっているため。機械工学27年度は、着弾した液滴の乾燥プロセスを明らかにする。これを、高速プリントヘッドによる着弾の高速化と組み合わせることによって、さらなる高速化を図る。申請書では、最適なチタニア膜厚の特定とさらなる高効率化を目的とし、これらを達成した。さらに、チタニアだけでなく、色素のプリントも行えることを実証した。通常数時間のディップコートによって、色素の吸着が行われているが、申請者らの研究の場合数分のプリントで同程度の効率になることを実証した。この研究は、申請書には記載していない研究ではあり、予定している以上の研究成果と考えた理由である。想定していたよりも安く製品を手に入れることができたため、目的の研究を少ない予算で遂行することができた。装置をマルチノズル化し、高速プリントを行うこと、および数値解析することで、最適な条件を事前に把握する研究を推進する。思っているよりも研究がスムーズに進んでおり、関連の新しいテーマに本予算を充てたいと考えている。購入予定の物品のわずかなディスカウントなどの問題により、該当年度予算の0.1%程度の残金が発生した。発生した残金(昨年度予算の0.1%)も無駄なく、次年度の研究に回し、良い成果が出るように一生懸命取り組む。
特異的阻害剤によるプロテインキナーゼの立体構造の推定方法の開発

プロテインキナーゼは蛋白質分子に燐酸基を導入する反応を触媒する酵素だが、この反応がダイナミックに、また時には繊細に、細胞機能調節に関与していることが明かになってきた。今やプロテインキナーゼの種類は100種類以上にも昇り、これら個々のプロテインキナーゼの生理機能解明にはその構造的・機能的研究が必須である。本研究では独自の阻害剤データベースを駆使して、プロテインキナーゼの機能ドメインの三次構造の推定、新しい特異的阻害剤の開発、そしてこれらから各プロテインキナーゼの生理機能に迫ることを目的とした。その結果、カルモデュリンキナーゼII(キナーゼII)が平滑収縮、中枢性血圧調節、インスリン・エンドセリンの分泌現象をはじめとする様々な細胞応答に関与することをキナーゼIIの特異的阻害剤、KN-62を用いることによって明かにした。また、cAMP依存性蛋白質燐酸化酵素(Aキナーゼ)がc-fos mRNAの増加、或いはimmedeiate early geneのインダクションに関与することをAキナーゼの特異的阻害剤、H-89を用いて明かにした。新たな特異的阻害剤の開発として、キナーゼII、及び現在最も注目を集めている、Mitogen Activated Proteinキナーゼ(MAPキナーゼ)の下流に位置する新しいキナーゼの特異的阻害剤を阻害剤データベースのデータを基にして夫々開発した。キナーゼIIの特異的阻害剤、KN-62が、我々が新しく発見したカルモデュリンキナーゼVをもカルモデュリン拮抗的に阻害することを発見し、一部のカルモデュリン依存性キナーゼでは、カルモデュリン結合部位が極めてよく保存されていることが間接的にではあるが証明された。この様に、各プロテインキナーゼの生理機能を明かにし、また阻害剤データベースを基にした新しいいプロテインキナーゼ特異的阻害剤開発の成功、そして特異的阻害剤を用いたプロテインキナーゼの分子構造解明を成しえたことで当初の目的はほぼ達成されたと考える。近年、種々の細胞機能の調節に深くかかわっているとされる蛋白質リン酸化反応を触媒するプロテインキナ-ゼにますます注目が集まっているが、本研究では、独自の阻害剤デ-タベ-スを駆使して、プロテインキナ-ゼの機能ドメインの三次構造の推定や更に新しい特異的阻害剤を検索し、創製するための一般理論化を行なうことを目的とした。初年度は、研究対象として現時点で研究者の関心がもっとも高いカルモデュリンキナ-ゼIIに重点を置き、世界の研究の趨勢に沿うようにした。すなわち、オリジナルデ-タベ-スよりカルモデュリンキナ-ゼIIの特異的阻害剤KNー62を見いだすことに成功し、しかも、コンピュ-タ-グラティクスにより三次元分子構造を推定し、コントロ-ル化合物との立体構造上の差異も明らかにすることができた。KNー62は細胞レベルでもカルモデュリンキナ-ゼIIによるリン酸化反応を阻害することが判明し、細胞膜透過性を有することも実証された。また、KNー62に関する情報をデ-タベ-スにフィ-ドバックすることにより、更に新しい有用なカルモデュリンキナ-ゼII阻害剤の候補を特定しつつある。この発見により阻害剤がプロテインキナ-ゼと直接結合できることが判明し、さらにアフィニティ-リガンドとしてプロテインキナ-ゼのアフィニティ-精製に応用ができ、比較的簡便にしかも迅速に目的のプロテインキナ-ゼが得られることから、機能ドメインの三次構造の推定に非常に役立つことが期待できる。

その他のプロテインキナ-ゼ(ミオシン軽鎖キナ-ゼ、Aキナ-ゼ、Cキナ-ゼ、カゼインキナ-ゼIなど)についても化合物の各プロテインキナ-ゼに対する阻害作用と化学構造に関する相関関係のデ-タベ-スを補完・充実させ、最適化合物の選出が容易に行なえるようにしている。生命現象における細胞機能の調節に重要であると考えられている蛋白質リン酸化反応を触媒する酵素であるプロテインキナ-ゼの構造的・機能的研究は必須である。我々は、独自に創製した阻害剤デ-タベ-スとそのデ-タベ-スから検索した選択的阻害剤を用いる分子薬理学的方法論により以下の成果を得た。オリジナル化合物の各プロテインキナ-ゼに対する阻害作用と化学構造に関する相関関係のデ-タベ-スを充実させ、新しい阻害剤の創製に役立てた。特に、現在最も注目されているカルモデュリン依存性プロテインキナ-ゼII(キナ-ゼII)に関しては、その特異的阻害剤KN-62の他に、さらに新しく有用な阻害剤を見いだし、その阻害メカニズムをin vitroで明らかにした。これらの阻害剤を用いて、キナ-ゼIIが平滑筋収縮・中枢性血圧調節・イオンチャネルの制御・中枢神経系における長期増強現象などに関与している可能性を示唆する結果を得た。また、選択的阻害剤と標的プロテインキナ-ゼとの直接結合性は、選択的阻害剤またはその誘導体をアフィニティ-リガンドとして応用し、アフィニティ-クロマトグラフィ-によるプロテインキナ-ゼの大量・迅速精製法の完成により証明した。今後は、さらに補完・修正を加えたオリジナルデ-タベ-スとコンピュ-タ-三次元分子モデルを活用し、より特異性が高く効力の強い阻害剤を選出するとともに新しい阻害剤モデルを構築することを目指す。また、検索した特異的阻害剤を用いて、プロテインキナ-ゼの生理的役割も明らかにしていく予定である。蛋白質燐酸化反応を触媒するプロテインキナーゼは、近年ますますその重要性が示唆され、またその多様性も増している。こうした現状を鑑みると、各プロテインキナーゼの構造的・機能的研究は必須である。我々は、独自に創製した阻害剤とそのデータベースから検索した選択的阻害剤を用いて、各プロテインキナーゼの生理的機能を明かにしてきた。本年度は、更に細胞運動・分泌現象や細胞増殖・分化に於けるカルモデュリンキナーゼII(キナーゼII)の生理的役割について明かにした。既ち、インスリン分泌細胞からのインスリンの分泌がキナーゼIIによって制御されていること、エンドセリンに依る心房細胞からの心房利尿ホルモンの分泌にキナーゼIIが必要なこと、等をin vivoに於て証明した。また我々が新しく発見したカルモデュリンキナーゼVがキナーゼII同様、KN-62に依って阻害されることも明かにし、カルモデュリン依存性蛋白質燐酸化酵素のカルモデュリン結合部位に相同性が有ることを間接的に証明し得た。その他のプロテインキナーゼに関しては副腎皮質ホルモンによるc-fos m RNAの増加、或いは、PC12細胞に於けるカルシウム流入に依って引き起こされるimmediate earlygeneのインダクションに、cAMP依存性蛋白質燐酸化酵素が重要な役割を果たしていることを、夫々、H-89を用いて明かにした。
心理学手法を用いて人間の潜在意識から抽出した構造安全水準に関する研究

経済的要因を考慮した最適な構造安全水準を確立するため、社会的に要求される今後の構造安全水準を、設定する立場である人間の潜在的意識から抽出することを試みた。特に心理学的手法を応用したアンケートを行うことで、人間の表面的な意識だけでなく、潜在的な意識を捉えようとしている。研究計画の実施は、次のように行った。(1)一般居住者が潜在的にもっている要求安全意識の抽出社会的に要求される構造安全水準を考えるため、社会を3つの立場(設計者・一般居住者・行政関係者)に分け、それら各立場にアンケートすることによって、総合的な安全水準を追求する。このため、まず一般居住者の構造安全に関する潜在的な意識を解明するためのアンケートを作成した。結果には信頼度と正確さが要求されることから、予備調査を繰り返して仮定条件の洗練を行った。その成果を発表しながら、仮定条件の洗練を行っている途中である。仮定条件に関しては議論が多く、試行錯誤の結果、破壊確率で算定できる程度にまで結果を得ることができた。(2)設計者が考えるこれからの安全水準に対する要望意識の抽出設計者が考えるこれからの安全水準を把握するため、(2)と同様の心理学的手法を活用したアンケートの作成を目的として、作業を行った。(3)実施設計において確保された安全水準の検証調査(4)構造設計者による特殊建物に対する試設計(3)および(4)については、実際に建築された建物の調査および設計者への試設計を計画し、そのつめを行った。以上の成果は、日本建築学会および関連諸学会と紀要論文に発表した。
船舶への伝送を目的とした静止衛星画像の可逆圧縮

安全かつ経済的な航海のためには航路上の気象状況を把握することが不可欠であり,これには静止気象衛星GMSのVISSR画像が役立つ。本研究の目的は,画像データを効率よく圧縮することで陸上-船舶間の通信回線によるVISSR画像の伝送を可能にし,これを船舶の航行に利用することである.画像データの可逆圧縮では,予測器の多段適用による圧縮効率の向上を検討した.複数の領域に分割した画像に線形予測器を適用し,さらにその予測誤差に二次元の非線形予測器を施して得た予測誤差をエントロピー符号化した.その結果,データ量は約32%に減少し,国際標準であるJPEG方式に比して20%の圧縮効率の向上が実現できた.次に,船舶上でのVISSR画像の利用として,台風中心位置の自動推定を試みた.仮定した中心位置から等距離にある雲の稜線を用いて最も確からしい中心位置を推定し,これを次の仮定中心として同じ操作を繰り返すことで,真の中心を機械的に自動推定できることが明らかになった.安全かつ経済的な航海のためには航路上の気象状況を把握することが不可欠であり,これには静止気象衛星GMSのVISSR画像が役立つ。本研究の目的は,画像データを効率よく圧縮することで陸上-船舶間の通信回線によるVISSR画像の伝送を可能にし,これを船舶の航行に利用することである.画像データの可逆圧縮では,予測器の多段適用による圧縮効率の向上を検討した.複数の領域に分割した画像に線形予測器を適用し,さらにその予測誤差に二次元の非線形予測器を施して得た予測誤差をエントロピー符号化した.その結果,データ量は約32%に減少し,国際標準であるJPEG方式に比して20%の圧縮効率の向上が実現できた.次に,船舶上でのVISSR画像の利用として,台風中心位置の自動推定を試みた.仮定した中心位置から等距離にある雲の稜線を用いて最も確からしい中心位置を推定し,これを次の仮定中心として同じ操作を繰り返すことで,真の中心を機械的に自動推定できることが明らかになった.
マルテンサイト生成初期段階の高分解能電子顕微鏡による観察

鉄合金におけるfcc→bccまたはfcc→bctマルテンサイト変態の解明は、理論的にもまた工業材料への応用という見地からもきわめて重要である。本研究では、この変態における核生成段階を高分解能電子顕微鏡を用いて原子レベルで解明することを試みた。使用した合金は、断熱型マルテンサイト変態(fcc→bct)をするFe-9 Cr-1.1C合金(重量%)と等温マルテンサイト変態するFe-23Ni-3.8Mn合金(重量%)で前者では次のような結果が得られた。1)マルテンサイトの核は幅8nm厚さ2nmで長さは20nm以上ある飛行機の翼のような形をしている。その晶癖面は母相fccの{111}面(//{110}bct)で長手の方向は、〈110〉(//〈111〉bct)である。2)この核の原子配列はfccからbctへの変態途中の遷移構造をしているものが大部分である。後者のFe-Ni-Mn合金の場合は、独立したマルテンサイトの核と呼べるようなものは見いだされなかったが、マルテンサイトの成長端で変態転位と名付けてしかるべきものが観察された。この転位は〈110〉fcc(//〈111〉bcc)にそって形成されていて、{111}fcc(//{110}bcc)の面上を移動しているようである。その密度は数層に一本の割合でマルテンサイトの成長端に{111}fcc面上に並んでいる。さらに、その成長端は、入り江のようになっていてこれらの変態転位が割合独立に移動できることを示唆している。この点が、断熱型マルテンサイト変態する場合と大きな違いということができる。これらのマルテンサイト生成初期についての原子レベルの観察は、マルテンサイトの核生成について極めて貴重な情報を与えるものであり、また、断熱変態型と等温変態との変態kineticsを考える上でのキーポイントとなるであろう。
アジア諸国における契約意識の研究

契約意識についての国際比較研究プロジェクトの最終段階である本助成期間の当初に予定した調査国は、台湾、シンガポール、インド、パキスタン、イスラエルの5ヶ国であった。このうち、1998年度秋に台湾調査を実施し1614ケースの有効サンプルを収集した。1999年度夏にインド調査を実施し、1331の有効ケースを収集した。同年にパキスタン調査を実施する予定であったが、クーデターが発生し、調査実施が不可能になったので、代替国としてエジプトを対象とした調査を1999年度末から2000年度にかけて実施した。エジプトについては、商学部サンプルとして691サンプルを収集することができた。しかし、法学部サンプルは収集することができなかった。これはカイロ大学法学部でエジプト文部省の許諾がなければ調査実施ができないといわれたためである。継続してエジプト文部省に対して許諾を求めつづけたが、残念ながら2001年3月現時点で、許諾は得られていない。2000年度秋にはイスラエル調査を実施し、1464の有効サンプルを収集した。シンガポールについては、十分なサンプル数を確保できるめどがたたなかったため、実施に至らなかった。本助成研究との関連で、スウェーデンの研究者と連絡を取り、実施を依頼した。2000年度は調査とともに、本助成研究により収集したデータを含めた21ヶ国・地域のデータにつき、再度慎重に点検を行い、データセットの統合作業を進めた。2001年3月現在のデータセットとして21ヶ国・地域分のデータセットにつき度数分布や平均値などをまとめた基本報告書を作成したが、本格的な比較分析を引き続き慎重に進めていく予定である。平成10年秋、加藤雅信、李衛束の両名は台湾を訪れ、現地の契約意識調査を行った。加藤が東大法学部の助手時代に研究室で一緒であった邸聯恭氏か、台湾大学法学部の民事訴訟法の教授となっており、また、台湾で立法その他において非常に重要な役割を果たしている旨を聞いた。20年以上連絡をとっていなかったこともあり、邸教授の指導教官を通じた依頼状を送るとともに、調査に先立つ一年以上前から調査計画や具体的な研究内容を比較的こまめに連絡していたところ、邸教授がきわめて綿密な調査スケジュールを組んでくださり、きわめて効率的に現地調査を行うことができたうえに、台湾の学者とも何度か意見交換の機会をもつことができた。現段階での調査結果からは、台湾においては、ビジネスを学ぶ学生の方が法学部の学生よりも契釣遵守意識が高く、男子学生の方が女子学生よりも契釣遵守意識が高いという結果が出ている。また、法学部学生の内部では、法律を学べば学ぶほど、契釣遵守意識が低くなるとの結果が出ている。この点は、他国の調査における結果と傾向としては変わるところはないが、同じ東洋人の中での日本人、韓国人、中国本土人との程度の差異する必要がある。この点につき、あらかじめ韓国人研究者とは若干の意見交換を行っていたが、より重要な問題として、文化的ルーツを基本的には同じくしながら、社会主義体制下と資本主義体制下で暮らしてきた人々の思考の差異を読みとるという意味で、中国本土人との契約意識の差異を比較しながら、中国本土人のこの結果に対する見解を3月に開くことを予定している。平成11年8月から10月にかけて、加藤雅信はインドを訪れ、現地の契約意識調査を行った。インドには、当初調査協力を依頼できるような協力者がいなかったため、平成11年2月以来半年にわたって種々の調査対象先となりうるところと手紙やメールで調査準備をしたうえでの実態調査があった。準備は大変ではあったが、かなりていねいな準備をした結果、法学部、経営学部(ビジネススクール)双方で、総計二千数百の調査票の回収に成功し、当初の予定は達成できた。データは現在コンピューターに入力されたばかりでまだ分析はしていないが、来年夏から約十回程度の雑誌連載報告を、出版社と予約済みである。

これに対応して予定していたパキスタン調査は、パキスタンでのクーデターのため、行うことはできず、急遽イスラム地域での調査対象国をエジプトに切り替えることとなった。この調査は3月に岡田・加藤の両名が行うこととなっている。本年度が調査の2年目で、来年最終調査報告を行う予定であるので、インド、エジプトの分析結果の発表は、来年度となる。エジプト調査については、エジプト文部省からの許諾が得られず、現在のところ、1999年度に収集した約600サンプルにとどまっている。継続して許諾を得られるようアプローチしているが、見通しはついていない。研究会メンバーのうち2名が、11月から12月にかけ、イスラエルに出向いて、各大学の関係者と連絡を取りながら、大学生対象の調査を実施し、1460ケースのデータを収集した。また、スウェーデンの研究者と連絡を取り、スウェーデンの大学での調査を依頼することができた。このデータは2001年3月現在、日本へ向け、郵送中である。本年度は研究プロジェクトの最終年次にあたり、全体の報告書を作成するため、これまでに収集した20ヶ国(地域)のデータ(約23000ケース)を整理、統合するための作業を2000年4月より継続して行っている。高等教育システムや事情の異なる国ごとに調査をするため、調査票のフェイスシートは、国によってことなり、また準実験計画法を用いているため、調査票は各国につき416のバージョンに分かれている。このように複雑な設計をしているので、データ統合作業で誤りが生じないように慎重に作業を進めてきた。これまでに入力準備したすべてのデータセットにつき、オリジナル調査票との照合作業を再度行い、必要なものについては再入力を行った。そのため、予定以上に時間がかかってしまったが、データセットとしてより十全なものとすることができた。スウェーデンデータが入力・クリーニングが終わった時点で、統合作業が完成するように準備ができており、これをもって、基本的な記述統計の報告書を作成する。その後、パラメトリックならびにノンパラメトリックな多変量解析手法も含めた、より高次の分析をすすめ、本研究プロジェクトの全体報告書を2001年12月をめどに出版する予定である。
microRNAの制御による動脈硬化症の治療法開発

虚血性心疾患や脳卒中、動脈瘤などの粥状動脈硬化に起因する疾患は、悪性腫瘍と並ぶ我が国の2大死亡原因であり、粥状動脈硬化性疾患の成因解明や有効な予防・治療法の開発はこれからの高齢社会において火急の課題である。申請者らは粥状動脈硬化の分子・細胞・個体レベルでの解明に一貫して取り組んできた。今回我々は、血管のみならず、脂肪組織、肝臓を含めた代謝制御に関わるmiRNAの機能の制御が、動脈硬化の治療に応用できないかどうか検討を始めた。まず、脂肪細胞、肝細胞、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞において、miRNA合成を抑制したところ(レンチウイルスによるDicer、Ago2 siRNA発現)、細胞のATPが低下し、細胞死が亢進した。さらに、脂肪細胞、肝細胞、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞特異的miRNAの発現ライブラリーを構築した。次に、高脂肪食負荷マウスモデルの内臓脂肪、肝臓においてmiRNAの発現プロファイル解析を行ったところ、脂肪細胞分化に必要とされるmiR-143の発現が増加し、その標的遺伝子ERK5の発現減少を認めた。レンチウイルスを用いてmiR-143のデコイ遺伝子を脂肪組織で発現させ、miR-143を抑制するための予備実験として、レンチウイルスを用いて脂肪組織に特異的にGFP遺伝子を導入できることを確認した。現在、miR-143のデコイ遺伝子のマウスへの導入を行ったところである。このことにより、高脂肪食負荷での肥満を改善出来るかどうかを確認する。さらに動脈硬化モデルマウスであるApoE欠損マウスの動脈硬化巣より、miRNA発現プロファイル解析用のRNAを抽出した。
双生児と単胎児の社会関係と社会的認知能力の発達に関する比較研究

本研究課題では、幼児期の双生児と単胎児のきょうだいの社会関係及び社会性の発達について比較研究を行うことを目的としている。本年度は、双生児を対象とした調査についてはデータ収集と分析を行い、単胎児を対象とした調査については本調査実施に向けた準備を行った。双生児の4歳時点のきょうだい関係・親子関係・子どもの社会的認知能力について家庭訪問調査によるデータ収集を実施した。前年度までにデータ収集を完了していた3歳時点のきょうだい関係のデータと合わせて、2時点縦断データに基づいて、3歳時点の双生児のきょうだい関係が4歳時点の子どもの心の理論に及ぼす影響について分析した。分析の結果、きょうだい関係のみに着目すると、きょうだい間のポジティブな情動は一卵性双生児の方が二卵性双生児よりも多く表出されていた。しかし、心の理論への影響については、卵性による差異は見られなかった。3歳時点のきょうだい間のポジティブで同等なやり取りは4歳時点の心の理論の能力を高めることが明らかになった。また、3歳時点の双生児きょうだい間のネガティブなやり取りは4歳時点の心の理論の能力に有意な影響を及ぼさないことがわかったが、これは、年齢差のあるきょうだいを対象とした先行研究とは異なる結果だった。以上の点から、きょうだい間の平等なやり取りである「相互性」も、幼児期の社会性の発達に重要であることが示唆された。また、双生児のきょうだい間のネガティブなやり取りは、年齢差のあるきょうだいとは異なる機能を持つ可能性が考えられた。単胎児については、新たに研究協力者の募集を行い、大学に来校しての調査が実施できる体制を整備した。本年度得られた研究成果については、国際学術誌に投稿中である。また、国内学会のシンポジウムで発表を行った。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
外因性の尿酸前駆体物質及び尿酸に対するヒト特異的な生体防御機構の解明

外因性の尿酸前駆体物質であるプリン塩基の吸収に関わるトランスポーターとして、ラットよりSNBT1を同定した。SNBT1は、小腸のみに発現し、Na^+依存的に核酸塩基や尿酸を輸送することが明らかとなった。また、ヒトなどの高等霊長類においてSNBT1は遺伝的に欠損していた。これらの結果より、ヒトは尿酸分解能力を欠くため、外因性の核酸や尿酸の体内流入を制限する必要があり、その進化の過程でSNBT1の遺伝子欠損が惹起された可能性が考えられる。外因性の尿酸前駆体物質であるプリン塩基の腸管における吸収機構を明らかにするため、その吸収に関わるトランスポーターの探索を行った。ラット小腸に発現するトランスポーター様遺伝子について核酸塩基の輸送活性を指標にスクリーニングした結果、sodium dependent nucleobasetransporter 1 (SNBT1)の同定に成功した。SNBT1 mRNAの発現は小腸においてのみ顕著に高く、他の臓器ではその発現が認められなかった。SNBT1はuracil, thymine, hypoxanthineを基質とし、adenineとcytosineは基質としないことが明らかとなった。その輸送は顕著なナトリウム依存性を示し、核酸塩基(nucleobases)により顕著に阻害されたが、uridineなどの核酸(nucleosides)では阻害されなかった。これらの特性はラット小腸を用いた反転腸管実験におけるuracil輸送でも確認された。したがって、SNBT1はラット小腸上皮細胞における核酸塩基の吸収に寄与している可能性が考えられた。しかし、染色体遺伝子データベースを用いた遺伝子解析により、SNBTのorthologは、ゼブラフィッシュ、マウス、ラット、ウシにおいて存在が確認できたが、チンパンジーやヒトでは遺伝的に欠損していることが明らかとなった。尿酸の分解酵素であるuricaseもこれら霊長類において遺伝的に欠損しているため、SNBTの機能欠損は霊長類の進化過程におけるuricaseの欠損と同調している可能性が示唆された。したがって、ヒトはuricaseの欠損により尿酸分解能力を欠くため、外因性の核酸の体内流入を制限する必要があり、その進化の過程でnucleobaseの吸収に関わるSNBTの機能的な欠損が惹起された可能性が考えられる。前年度の研究において、SNBT1遺伝子がヒトで欠損していることが明らかとなったため、同様の遺伝子欠損が知られているuricaseとの接点を想定し、urateの体内動態との関わり合いについて検討した。rSNBT1発現系を用いてurateの細胞内取り込みを評価したところ、ナトリウム依存的なurateの輸送が認められたことより、rSNBT1は核酸塩基だけでなく、urateも輸送基質とすることが明らかとなった。しかし、rSNBT1が高発現するラット腸管組織においてurate取り込みは認められないことを踏まえ、urate排出トランスポーターのBCRPあるいはGLUT9の関与の可能性を探った。HEK293細胞を用い、rBCRPまたはrGLUT9をrSNBT1と一過性に共発現させて検討した結果、いずれの場合も排出輸送による顕著なurate取り込みの低下を生じた。また、rGLUT9がrBCRPよりも強い排出輸送活性を有することが示唆された。一方、反転腸管でのurate取り込みに対するrBCRP特異的阻害剤(ko143)の影響はみとめられなかった。rGLUT9の特異的阻害剤がないため、rGLUT9阻害の影響を検討することはできなかったが、遺伝子導入発現系においてrGLUT9がrBCRPより強い排出効果を示したことを考慮すると、rGLUT9が腸管組織でのurate排出において大きく関与している可能性が考えられる。血中urate濃度の低いラット等では、urateの生成源となる核酸塩基及びurateの供給ルートとしてのSNBT1の役割は重要と考えられる。これに対し、血中urate濃度が高く、腸管腔への排出方向のurate輸送が重要となっているヒトでは、SNBT1介在性のurate及び核酸塩基取り込み機構は無駄な面が強く、そのために遺伝子欠損に至ったのではないかと考えられる。