hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フィルムボンディング技術を用いた3次元磁気センサーモジュールに関する研究

本研究では、犠牲層エッチング技術を用いて、化合物半導体であるGaAs薄膜を誘電体基板やSi等他の基板上にボンディングし、平面構造上でx、y、z方向の配置ができ、信号処理回路との集積化が可能、小型化・空間高分解能をもつ三次元磁気センサーアレイの作製技術を開発した。我々は要素技術である貫通電極形成技術、三次元センサーアレイパターン形成技術、層間絶縁薄膜の形成技術の条件を検討した。その上で三次元磁気センサーを作製し、基本特性を評価した。実験結果は本技術の可能性を示した。平成21年では、貫通基板加工技術及び電極形成技術と高感度なホール磁気センサー用のエピ薄膜の構造及びエッチング・ボンディング技術を検討した。センサーモジュールを実現するため、貫通電極用基板加工技術が必須である。われわれは実験室レベルで簡単かつ低コストの貫通穴の加工と電極形成技術を検討した。サンドブラストミリング技術を用いて、大きさ22mm×24mm、厚さ0.3mmの基板上に直径0.2mm貫通穴を短時間で形成することができた。また、スパッタ技術を用いて、基板の両面に金属電極(Cr-Al-Cr-Au)を形成し、貫通電極ができた。電極の抵抗は約0.13Ωであった。貫通電極基板の信頼性を確認するため、弾性波電子デバイスの実装へ応用し、その有効性を確認できた。これをもって、次年度センサーモジュールの基板に活用する予定である。一方、磁気センサーの感度を向上するために、キャリアの移動度が速いAlGaAsヘテロ構造を有する半導体フィルムが適している。しかし、われわれが提案している犠牲層エッチング手法では、犠牲層はAlAsを使うため、AlとGaの比率を決めることは重要なパラメータである。薄膜ボンディング実験の検討結果として、Al_<0.3>Ga_<0.7>Asの薄膜なら、犠牲層エッチングの選択比が問題なく剥離とボンディングすることができた。さらに、3次元センサーとしてのバリエーションとして、単層薄膜ではなく、2層薄膜構造も考えられる。実験として、n+GaAs/nGaAs/n+GaAs/n+GaAs/nGaAs/n+GaAs/AlAsのような薄膜構造を設計し、犠牲層エッチングとボンディングを行い、成功した。H22年では、主に3次元磁気センサー用エビ薄膜を基板上にボンディングし、作製プロセス技術を用いて、2種類プレーナー構造の3次元磁気センサーを作製し、特性を評価した。作製プロセス条件に関して、下部電極の厚さの最適値は20nm30nm範囲であった。これによって、オーミックコンタクトの熱処理や後続のウェットエッチングプロセスは問題なくできた。試作デバイスに関して、3軸座標と同じ配置のパターンAとT字型配置のパターンBを設計した。センサー部の大きさはそれぞれx軸が6μm×30μm×3μm、y軸も30μm×6μm×3μm、z軸が30μmx30μm×3μmであった。バイアス電流は5mAで、印加した磁束密度は017mT変化するとき、それぞれの方向センサーのホール電圧はほぼ線形的に変化している。直線関数でフィッティングすると、相関はほぼ0.999であった。また、17mTの磁束密度をかけ、バイアス電流を1mA5mA変えて、ホール電圧を測定した。電流変化に対するホール電圧の線形性が得られた。パターンAのセンサー感度に関して、それぞれx軸が0.3Ω/Gで、y軸が0.4Ω/Gで、z軸が0.9Ω/Gであった。一方、パターンBの場合、原理上3軸方向に流れるバイアス電流が異なるため、感度の差はもっと大きなる。将来センサーアレイを形成する観点から、パターンAは配線が多くて、個々のセンサー寸法が大きく、空間的な分解能が少し低下する。それに対して、パターンBは配線が簡単、個々のセンサーサイズが小さくて、空間的な分解能が確保できる。また、試作センサー感度より信号処理回路のスペックを確定した。H23年では、主に磁気センサーアレイの作製技術とセンサーアレイの計測技術を検討した。センサーアレイの作製に関して、GaAsエピ薄膜を用いて、3軸座標と同じような配置で、3軸ホールセンサーをSi基板上に作製した。作製プロセス条件について、ボンディング薄膜によるGaAs薄膜エッチングの不均一性を改善するために、多重エッチングプロセスを施した。結果的にきれいなエッチングパターンが得られた。また、アレイパターンに関して、実験結果より電流バイアス端子を共通し、電圧の片側端子も共通にするように設計した。そして、五つセンサーからなるセンサーアレイを作製し、センサーの基本特性を測定した。センサー感度が単独のものより低い。センサー間のバラつきは1%以内に抑えることができた。一方、複数個センサーによる計測技術について、汎用な計測システムLABVIEWを活用し、実現した。LABVIEWを使用することによって、特別な計測プログラムを作成せずに、サンプルの磁気感度に合わせて測定条件を設定することができた。

今回五つのセンサーを使用する計測プログラムを構築した。バイアス電流は数十mA数十μAまで設定でき、電圧は数十mV数十μVまで測定できた。対応できる磁束密度の範囲は約数百μT数十mTであった。また、測定条件の設定や測定結果の表示もパソコン画面でアイコンクリックだけ操作できるようになり、非常に使いやすくなった。測定できるチャンネル数は現在1キットで24個となる。コスト面に関して、通常の同種類の計測機器よりやすいけれども、商品化レベルとしてちょっと高いので今後改善の余地がある。
ウォーレシア(インドネシア)先住民族の集団遺伝学的研究

アジア周辺の人類集団の起源を知るうえで、ウオーレシアを構成するインドネシア諸島の先住民について調べることは重要である。特に最近オーストラリアの古人骨マンゴーマンのDNA解析がなされ、新たな視点からのアジア大平洋地域の人類集団の系統関係の解析に関心が持たれ始めている。本研究では、3年度にわたり、セラム島、フローレス島、スラウェシ島の調査を行い、合計約600名について、人類学的計測、健康状態ならびに人口動態に関する情報収集、採糞を行った。そのうち約500名についてはインフォームドコンセントを得たうえで採血を行った。身長をはじめとする人類学的計測結果については、50項目におよぶ検査項目のデータが蓄積した。このような人類学的形態調査は、最近では殆ど行われなくなった。しかし、東南アジア諸地域の隔離集団についての同様の調査が過去に行われており、今回の結果はそれらとの比較解析から多くの情報が得られると期待する。現在、本調査で得られた結果につき、コンピュータによるデータ解析の途上にある。腸内寄生虫の感染率は極めて高かったが、感染の種類については島ごとに異なっていた。一方、末梢血液の塗沫標本の検査から、マラリア感染率は低かった。約400名分の末梢血リシパ球については、EB-トランスフォームにより細胞系として樹立し、液体窒素中に保存した。血清蛋白、血球酵素といった血液の遺伝標識によると、調査した3集団は有意な差を示す。ミトコンドリアDNAの多型を指標にしても上記3島の集団は顕著に異なるという興味深い結果が得られた。これらの結果を踏まえ、従来の東南アジア集団、特にフィリピンのネグリト集団との遺伝学的関係についての考察を加えている。1998年11月5日より11日まで、Indonesia国Ma1ku州Seram島Masohi地区Rouhua村の住民(アルフル族)の調査を実施した。対象としたのは、186名(15歳以上135名;15歳未満51名)である。(1)成人135名については、約20項目にわたる身体計測を行った。ガジャマダ大学の研究分担者はすでに他の近隣集団の計測データをもっているので、それとの比較を行い、形態的にみた系統関係についてデータの解析中である。(2)成人については採血をおこなった。現地でのディッブティック法により、2名が現在マラリアに感染していると判定された。実際の感染率はもっと高いが、乾季であったため見かけ上の感染者は少なかったものとおもわれる。血液の一部は分離し、ガジャマダ大学ならびに東京大学でDNAを抽出した。また、血液のリンパ球についてはEBウイルスにより樹立細胞系とした。(3)住民186名(15歳以上135名:15歳未満51名)について腸管寄生嬬虫類ならびに原虫類の感染状況を調査した。その結果,回虫卵陽性者は成人で60.2%(子供74.0%)、鞭虫63.2%(子供76.0%)、鉤虫50.4%(子供46%)、赤痢アメーバ嚢子18.0%(子供6.0%)、プラストシスチス65.4%(子供50.0%)と極めて高い感染率であり、成人の98.5%、子供の98.0%が何らかの寄生虫に感染していた。吸虫類,条虫類の感染者はみられなかった。(4)聞き取り調査により、村の住民の血縁関係や人口構成についての資料をえた。現地の医療機関や行政機関からの協力があり、調査は効率よく実施された。2000年2月27日より3月5日まで、Indonesia国Flores島Sikka地区Tana-Ai村の住民の調査を実施した。対象としたのは、149名(15歳以上132名;15歳未満17名)である。

(1)成人132名については、約20項目にわたる身体計測を行った。現地での研究協力者であるガジャマダ大学医学部のヤコブ教授らはすでに他の近隣集団の計測データをもっているので、それとの比較を行い、形態的にみた系統関係についてデータの解析中である。(2)成人のうち122名については採血をおこなった。そのうち2名が臨床像から現在マラリアに感染していると判定された。インタビューによると、全ての成人はこれまでにマラリア(3日熱型)とおもわれる症状を経験しているとのことである。したがって、高度のマラリア感染集団と考えられる。血液の一部は分離し、ガジャマダ大学ならびに東京大学でDNAを抽出した。また、血液のリンパ球についてはEBウィルスにより樹立細胞系とした。(3)採糞用チューブを渡して腸管寄生蠕虫類ならびに原虫類の感染状況を調査した。今回は一部試料を1晩培養して標本作製をおこなった。(4)聞き取り調査により、村の住民の血縁関係や人口構成についての資料をえた。本年度当初の予定では、昨年11月に現地調査をおこなうはずであったが、大統領選挙にともなう政情不安定の時期に当たったため、時期をずらせた。しかし、現地の医療機関や行政機関からの協力があり、調査は効率よく実施できた。アジア周辺の人類集団の起源を知るうえで、ウオーレシアを構成するインドネシア諸島の先住民について調べることは重要である。特に最近、オーストラリアの古人骨マンゴーマンのDNA解析がなされ、新たな視点からのアジア大平洋地域の人類集団の系統関係の解析に関心が持たれ始めている。本研究では、過去2年間に、セラム島、フローレス島の調査を行い、最終年度の本年度は地域の異なるスラウェシ島南部のトラジャ周辺の集団について注目し調査した。合計約200名について、人類学的計測、健康状態ならびに人口動態に関する情報収集、採糞を行った。そのうち134名についてはインフォームドコンセントを得たうえで採血を行った。身長をはじめとする人類学的計測結果については、他の3集団との明瞭な差は見い出されていない。腸内寄生虫の感染率は極めて高かった。一方、末梢血液の塗沫標本の検査から、マラリア感染率は低かった。甲状腺腫が女性において高頻度にみられるのが、この集団の特徴であった。遺伝的背景があるのか、何らかの環境要因によるものかは不明である。約100名分の末梢血リンパ球については、EB-トランスフォームにより細胞系として樹立し、液体窒素中に保存した。血清蛋白、血球酵素といった血液の遺伝標識によると、調査した3集団は有意な差を示す。DNAレベルでの多型については解析などであるが、ミトコンドリアDNAの多型を指標にしても、上記3島は顕著に異なるという興味深い結果が得られた。これらの結果を踏まえ、従来の東南アジア集団、特にフィリピンのネグリト集団との遺伝学的関係を調べることとした。
センチメーターサイズのゼオライト単結晶の合成とこれを基板とした薄膜の製膜

本研究の目的は・種々の評価や応用が可能なセンチメーターレベルのゼオライト単結晶の合成・異なる細孔を接合させるための単結晶上でのゼオライト薄膜のエピタキシャル成長の2点である。十分大きな単結晶の合成とこれを基板とした薄膜化技術を開発することができれば、一次元の分子レベルの細孔を三次元の細孔とつなぎその先で封止するというような究極の構造制御、およびこれをもとにした特殊反応場の創出が可能となる。本年度はゼオライト単結晶の育成を中心に検討を行った。以下の異なる手法を用いて、ミリセンチメーターサイズの結晶育成を検討した。これまでの成果より、フラックス法、高温高圧水熱法を用いてミリメーターサイズで結晶を育成できる目途がたった。更にFZ法やシ-ドを用いたフラックス法、高温高圧水熱法を用いることによりセンチメーターサイズの結晶成長を目指す。これらを基板として、ゼオライト薄膜をヘテロエピタキシャル成長させることにより、異なる細孔を接合させ、細孔空間のネットワークを実現し、特殊反応場の創出に展開していきたい。
アレンカロテノイドの生体内局在と機能解析

内臓WATでのUCP1の発現に基づくフコキサンチンの抗肥満作用の分子機構を解明した。フコキサンチンによるUCP1の発現誘導は、フコキサンチンの特異な構造、すなわち、アレン結合と、カロテノイド鎖の両側に結合した官能基を多数有する2個の6員環の存在に起因していることも明らかにした。したがって、その他のアレンカロテノイドやフコキサンチンの分解産物ではこうした作用は見られなかった。フコキサンチンはインスリン抵抗性を改善し、抗糖尿病作用も示した。また、筋肉でのGLUT4の発現増大とその細胞膜の促進がフコキサンチンの抗糖尿病作用の重要な分子機構であることを見出した。動物を用いて、褐藻色素フコキサンチンの内臓白色脂肪組織(WAT)中でのUCP1発現誘導機構について解析し、内臓白色脂肪組織(WAT)細胞中でのβ-3アドレナリンレセプターの発現とPGC-1の発現向上に加え、CREBのリン酸化促進活性がその主な分子機構であることを明らかにした。また、フコキサンチンと同様の化学構造(アレン構造とOH基を有する末端の6員環構造)を有するネオキサンチンを用いた動物実験を行い、ネオキサンチンが抗肥満効果と抗糖尿病効果を示すことを初めて明らかにした。一方、β-カロテン、リコピン、アスタキサンチンなどのカロテノイドを、フコキサンチンやネオキサンチンの場合と同様の条件で動物に投与しても、抗肥満効果は見られなかった。以上より、フコキサンチンやネオキサンチンの抗肥満作用の発現には、アレン構造と極性官能基を有する2個の6員環が重要なことが明らかとなった。その他、フコキサンチンの生体内抗酸化活性の詳細についても動物を用いて明らかにし、その分子機構として酸化関連酵素の制御(抗酸化酵素(SODとカタラーゼ)の発現増大と活性酸素産生酵素(NADPH)の発現抑制)を示した。ところで、アレンカロテノイドは、他の多くのカロテノイドと同様、イソプレノイド鎖をはさんで両サイドに2個の6員環(エンドグループ)を有するが、一方の6員環(アレン構造を持たない方)が消失した代謝物パラセントロン(Paracentrone)がウニから見出されている。23年度はこうした微量カロテノイドを用いた抗肥満作用について脂肪細胞での脂肪蓄積抑制作用などを指標として検討した。その結果、パラセントロンなどのように、一方の6員環(アレン構造を持たない方)が消失すると、アレンカロテノイドの抗肥満作用の活性が低下することを見出した。1.フコキサンチンの抗肥満作用の分子機構解明:フコキサンチンの抗肥満作用は、白色脂肪組織(WAT)でのUCP-1の発現誘導に特徴がある。そこで、この発現誘導機構について検討し、1)WAT内のβ3ARの発現上昇と細胞内のcAMPをメディエーターとするシグナル伝達の活性化、これによるPGC-1発現量の増加;2)転写制御因子であるPPARαおよびγの発現上昇;3)C/EBPβの発現上昇によるUCP1の直接的な転写促進;4)心臓から分泌されるANPおよびBNPの血中濃度の上昇と、NPRA-p38MAPKを介した経路の活性化の4経路を明らかにした。また、本研究では、フコキサンチン代謝物によるWAT中のミトコンドリア増生作用も見出した。これらの分子機構により、フコキサンチンによるWATのBAT化が誘発されていると考えられた。2.フコキサンチンによる血糖値改善効果の分子機構解明:フコキサンチン代謝物は骨格筋細胞で、Akt経路とAMPK経路の活性化を介してGLUT4の発現亢進作用と細胞膜移行促進作用すること、また、その効果は、骨格筋の種類によっても異なり、ヒラメ筋においてはGLUT4の細胞膜移行の亢進が、長趾伸筋ではGLUT4の発現量の増大が誘発されやすいことを明らかにした。3.各種カロテノイドの生理作用の特徴:アレン構造とアセチレン構造を有するカロテノイドを調製し、それぞれの生理作用について検討した。その結果、WATにおける脂肪蓄積抑制効果はアレン構造を有するカロテノイドに特徴的であり、その中でもフコキサンチンが特に強い効果を有すること、UCP-1の発現誘導もフコキサンチンのみに特異的であることが明らかになった。一方、アセチレン構造を有するカロテノイドは他のカロテノイドよりも強い抗炎症作用を示すことが分かった。フコキサンチンの機能性:フコキサンチンの抗肥満作用、特に内臓脂肪組織中でのUCP1誘導活性について検討し、これまで見出されたβ3アドレナリンレセプターとPGC-1の発現亢進の経路に加え、レプチンの発現制御による分子機構についても新たに明らかにした。各種アレンカロテノイドの生理作用:フコキサンチンの他、ネオキサンチン、フコキサンチノール、アマロウシアキサンチンAを天然物から分取した。

また、パラセントロンやその構造異性体も調製し、それぞれの機能性を比較した。その結果、脂肪組織(細胞)への過度の脂肪蓄積抑制や高血糖の改善効果は、すべてのアレンカロテノイドで認められるが、その活性はフコキサンチンが最も強いこと、また、その理由として代謝物が脂肪組織へ蓄積しやすい点を明らかにした。一方、各種アレンカロテノイドは、それぞれ独自の機能性を示すことも初めて見出した。例えば、ネオキサンチンには強い血中中性脂肪の抑制作用が、また、パラセントロンには効果的な抗炎症作用を認めた。以上の検討などにより、アレン構造は抗肥満作用や抗糖尿病作用を発揮する上で必須の構造であるが、その活性の強弱には、その他の部位の構造も大きく関わることを明らかにした。各種カロテノイドの内臓脂肪組織などへの蓄積:リコペン、β-カロテン、カプサンチン、ルテインなどの各種カロテノイドとアレンカロテノイドの体内への代謝物蓄積量について比較したところ、アレンカロテノイドが最も内臓脂肪組織に多く蓄積され、ついでカプサンチンの蓄積量の多いことが認められた。各種カロテノイドの抗酸化活性:各種カロテノイドの生体内抗酸化活性について検討したところ、それぞれのカロテノイドが有する活性酸素やラジカル補足能から推測される強弱とはまったく異なり、その生体内抗酸化活性は、主として、ターゲット部位への蓄積量と、生体膜に対する親和性に起因することが示された。23年度に予定していた動物実験と細胞実験をすべて行い、得られた成果もアレンカロテノイドの構造と活性との相関を明確に示すものであった。23年度に得られた成果により、24年度以降の計画内容も妥当であるとの判断を得ることができた。25年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度には、フコキサンチンの特徴的な生理活性の本質を明らかにした他、アレンカロテノイドの生理作用を、カロテノイドの構造相関との関連で検討できた。また、各種カロテノイドの脂肪組織への蓄積量の特徴についても明らかにできた。さらに、当初の計画では予想できなかった成果として、フコキサンチン以外のアレンカロテノイドの特異的な生理活性や、生体内でのカロテノイドの抗酸化活性の特徴についても解明することができた。当初の予定通り、平成24年度以降には各種のアレンカロテノイドを対象とした動物実験と細胞実験を行い、アレンカロテノイドの生理作用を、カロテノイドの構造相関との関連で検討する。具体的には、ネオキサンチンなどのアレンカロテノイドによるUCP1発現の分子機構、内臓WAT中への蓄積メカニズム、内臓WAT中でのサイトカイン分泌制御の分子機構などの解析;フコキサンチンの酵素変換物や化学変換を用いた活性の測定;ネオキサンチンの代謝物(ネオクローム)の活性測定などを行う。当初の予定通り、最終年度(平成25年度)には、フコキサンチンの示す特異的な生理作用、すなわち、内臓白色脂肪組織の褐色脂肪細胞化と血糖値改善効果について、その分子機構を解明する。この場合の活性と構造相関について、引き続き構造の異なる他のアレンカロテノイドなどとの比較により明らかにする。
乳幼児のけんか遊び行動に関する比較発達心理学研究

幼児の社会的相互交渉他児との社会的相互交渉と言語的コミュニケーションスキルの関連を検討するために19名の4歳齢幼稚園児を対象とした観察を実施した。幼児の発話量には個入差が大きかったものの、概ね、女児は男児よりも肯定的発話を示し、否定的発話は男児に頻繁にみられた。また、スキルレベルの低い児は、より単独で過ごすことが多く、より活動的で、遊び集団への仲間入りを頻繁に試みていた。しかしながら、その試みは他児から必ずしも受け入れられず、他児からの拒否や無視を受けることが多かった。一方スキルレベルの高い児は遊びを方向付ける発話が多くみられ、遊び集団から離脱しても他児の追従を受けることが頻繁であった。すなわち、言語コミュニケーションスキルの高低が幼児の行動としてあらわれ、ひいては仲間関係に影響を及ぼすことが示された。そこで、実際にいざこざが生起した際に彼らがどのような行動を示すのか、また、いざこざに関わっていない他児がどのように関与するのかを保育園において5歳齢児を対象とした観察を実施した。その結果、男児のいざこざおよびいざこざへの介入には社会的関係に直接影響を受けず、女児のいざこざは彼らの社会的関係を反映した傾向があることが示された。保育士のしつけ行動幼児が逸脱的な行動を示した際に保育士がどのように介入しているのかについて、保育園3歳齢児と担当保育士を対象とした観察を行った。食事場面等においては保育士は児の行動を方向付けるようなしつけを頻繁に行っていたが、自由遊び場面においては児の自主性に任せるようなしつけ行動を示した。また、効果的なしつけの存在が認められたものの、保育士は必ずしもそのようなしつけを用いず、児が自身で考えられるような機会を用意していることが示唆された。本年度の研究実績として次の2つの成果が得られた。1.2歳齢保育園児に対する保育士のしつけ行動の分析集団場面でのしつけが子どもの社会性の発達に与える影響を検討するために、集団生活の様々な場面において、保育士がどのようなしつけを行っているか、また、それらのしつけが児の行動に与える影響を明らかにするために、保育園の2歳齢クラスに所属する児26名および担当保育士を観察対象とする観察を実施した。具体的には、保育園における食事場面、絵本場面、自由遊び場面において、保育士のしつけ行動による介入と、児の行動をデジタルビデオカメラを用いて撮影を行い、分析を行った。分析の結果、集団場面において保育士は、場面や介入の対象となった児の行動に応じて、しつけの方略を柔軟に変化させていた。また、保育士によるしつけは、児が自ら考え、望ましい行動に気づくような機会を与えるという、児の自己制御能力の発達を促すものであることが示唆された。2.おやつ場面の席取り行動からみた5歳齢保育園児の仲間関係保育園での様々な場面における児の仲間関係、および相互交渉のきっかけとなる他児への働きかけを詳細に示し,児の仲間関係を多面的に捉えることを目的として、5歳齢の保育園児(30名)を対象として観察を実施した。具体的には、自由遊びとおやつのそれぞれの場面を8mmビデオカメラを用いて撮影し、児が一緒に遊んでいる相手および誰と一緒に座っているか、おやつ場面で行った席取り行動の種類を記録した。また8名の対象児(男児4名、女児4名)については、誘い行動および仲間入り行動とその相手も記録した。その結果、5歳齢児は、保育園の生活のなかの異なる活動においても、安定した仲間関係を築いていることが明らかになった。

児の仲間関係と相互交渉のきっかけとなる働きかけは密接に関わってわり、特に、児の位置が席によって空間的に固定され、活動が限定されているような場面において顕著になることが示された。本年度においては、保育所に通園する幼児を対象として、けんかが生起した際に周囲の幼児がいかなる介入行動を示すのか、行動学的に観察、分析を行った。具体的には、5歳齢および6歳齢の幼児を観察対象とし、彼らの間で起こったけんかの内容、そのけんかに対して他児が介入を示したか否か、介入を示した場合にはその内容を記録した。10分間あたりのけんかの生起頻度は、5歳齢で2.7回、6歳齢で1.1回であった。いずれの年齢においても、けんかを生起させた当事者間の性別に有意な偏りは認められなかった。けんかの内容については、5歳齢においては、物や場所の占有に関するものが、6歳齢においては、アクシデントからけんかに発展したケースが最も多かった。いずれの年齢においても生起したけんかのほぼ半数において、他児からの介入が認められた。けんかに介入した児の性別は、5歳齢では男児女児それぞれが同程度介入していたのに対して、6歳齢においては女児の方が男児よりも、より頻繁に介入していた。けんかへの介入は、けんかの当事者からの働きかけにより介入がなされたものと、他児から自発的に行われたものに分類された。いずれの年齢においても、前者の事例は後者のそれより少なく、けんかへの介入は多くの場合、他児が自発的に行っていることが明らかとなった。介入について、けんかに声援を送る等、けんかをより助長させるような介入、けんかにおいて優勢な児を非難する等、劣勢者に加勢する介入、状況の把握のため当事者に説明を求める中立的な方略が認められた。いずれの年齢においても劣勢者に加勢する方略が多く用いられており、けんかを助長させるような方略を用いたのは男児のみであった。以上の結果より、けんかへの介入には、児の性別が影響を与えている可能性があることが示唆され、幼児がけんかに介入する場合の様相が明らかとなった。本年度においては、5歳齢保育園児を対象として、いざこざ、および、他児によるいざこざへの介入行動について重点的に調査、分析を行った。分析の結果、児がいざこざへ介入する場合、自身と同性の児によるいざこざへ介入することが多かった。また、男児のいざこざは、一緒に遊んでいない児に対して生起しやすく、介入児は自分と一緒に遊んでいない相手への「連合」を女児に比べて多く示した。一方、女児のいざこざは一緒に遊んでいる高親密児に対して生起しやすく、介入児は自分と一緒に遊んでいる相手への「連合」を多く示した。すなわち、女児においては、他児との関係性が、いざこざや、いざこざへの介入に影響を及ぼすことが明らかとなった。男児においては、そのような傾向は認められず、生起しているいざこざの状況がいざこざへの介入に影響を及ぼしている可能性が示唆された。介入の具体的な方略については、いざこざ当事者が求援サインを示した場合には介入が生起しやすく、特に当事者が「泣いた」場合は他児による「なぐさめ」介入が、当事者が「他児を見た」場合は他児による「中立」介入が生起しやすいことが明らかになった。「泣く」はいざこざ当事者の優劣関係が明確になるため介入児は「なぐさめ」を示しやすく、他者に直接的に助けを求める意味合いの弱い「他者を見る」が生起した場合には「中立」介入が生起しやすかったと考えられる。これらのことから、当事者も他児の存在を取り入れながらいざこざをすすめている側面が明らかになった。
堅果類の豊凶周期パターンの変化が哺乳類成長動態に与える影響解析

堅果類の結実度(豊凶)が大型哺乳類の個体群動態に与える影響は明らかになっていない。気候変動によると考えられる堅果類の豊凶周期パターンの変化が指摘されているが、中・長期的な個体群動態への影響を把握した上で、今後の個体群管理、農業被害対策、生息地管理を検討しなければならない。本研究ではツキノワグマを対象とし、最終年度は堅果類の豊凶が繁殖や成長に与える影響について、以下の成果を得た。春夏にはメスは母系に由来する土地への定住性が高く、堅果不作年の秋には母系に由来しない土地へも移動するものの、冬眠前までに春夏の行動圏に戻ることを明らかした論文が2018年度の日本哺乳類学会論文賞を受賞した。メスにとって不作年の秋は長距離の移動を伴って餌場を探し、再び出生地付近に長距離を戻る必要があることを示している。また、歯根部セメント質に形成される年輪幅が、メスでは育児を行うことで狭くなることを明らかにした。さらに、オスの歯の年輪幅は堅果類の豊凶によって有意に変化することはなく、不作年であってもオスでは栄養状態が極端に悪化していないと考えられた。このように、堅果類の豊凶がツキノワグマの成長や繁殖率などの個体群動態に与える影響について議論するための基盤となる知見や、そしてこれまでデータの取得が難しかったメスの繁殖率に関わる情報を歯の年輪幅から解析できる可能性を示すことができた。堅果類の豊凶がツキノワグマ等の大型哺乳類の行動に与える影響の解明は進んできたものの、気候変動によると考えられる堅果類の豊凶周期パターンの変化が大型哺乳類の個体群動態に与える影響は明らかになっていない。本研究ではツキノワグマを対象として、堅果類の豊凶周期パターンが異なる年代で成長、繁殖率を比較することで、中・長期的な個体群動態への影響を踏まえた農業被害対策や個体群管理、生息地管理を検討するための基盤となる知見を得ることを目的とする。今年度は豊凶周期パターンの情報取集、ツキノワグマの頭骨標本の整理、計測、年齢および繁殖率推定のための歯の年輪解析に着手した(作業の一部は東京農工大学学生に依頼した)。なお、研究開始前に把握していた標本数では不足気味であった東北地方の2000年代以降の標本について、新たに利用できる標本を準備できたことでより良いデータセットを整備できた。また、個体群動態を考える上で重要なメスの定住性について検証した論文を投稿した。歯の年輪計測については次年度にまとめて行うこととしたために当初の計画から遅れている部分がある。しかし一方で、当初の計画にはない標本を利用できることとなりより良いデータセットが準備できたこと、一部計測データについては既存データを利用できることとなったため、全体としてはおおむね順調である。堅果類の結実度(豊凶)が大型哺乳類の行動に与える影響の解明は進んできたものの、大型哺乳類の個体群動態に与える影響は明らかになっていない。気候変動によると考えられる堅果類の豊凶周期パターンの変化が指摘されているが、単年度単位の影響のみならず、中・長期的な個体群動態への影響を把握した上で、今後の個体群管理、農業被害対策、生息地管理を検討しなければならない。本研究においては、ツキノワグマを対象として堅果類の豊凶及びその周期パターンが繁殖・成長に与える影響を検証している。今年度は、メス個体が春夏期は母系家系に由来する土地への定住性が高く(母娘、祖母孫娘、姉妹は空間的にも近い場所に行動圏を持つ)、堅果の不作年秋には通常の行動圏から離れた地域を利用するが、冬眠前までに通常の行動圏に戻ってきていることを明らかにした論文を発表した。これにより、メスの捕獲(標本採取)地点に基づき、地域個体群を分類することの妥当性が確かめられた。さらに年齢査定・繁殖履歴推定のために歯の切片標本の作成と解析を進めた(作業の一部は東京農工大学学生に依頼した)。歯の年輪幅から当該個体の繁殖履歴を明らかにできるかについて検証した論文を投稿した。おおむね順調に標本からの採材、計測を進められている。また、論文としても成果発表及び投稿が進められている。

このように、堅果類の豊凶がツキノワグマの成長や繁殖率などの個体群動態に与える影響について議論するための基盤となる知見や、そしてこれまでデータの取得が難しかったメスの繁殖率に関わる情報を歯の年輪幅から解析できる可能性を示すことができた。頭骨計測はおおむね終了していることから、今後は主に歯の年輪解析のための切断切片の作成、年輪幅の計測を進める。これらの計測終了後、性、地域個体群、豊凶周期パターンが異なる年代等のグループ毎に成長、繁殖率を比較し、それぞれの特徴を明らかにする。また、豊凶周期以外で個体の成長、繁殖率に影響を与える可能性のある要因の検討も行う予定である。引き続き解析を進め、堅果類の豊凶が個体群動態、ひいては農業被害に与える影響を考察する。新たに利用できる標本が増えたこと等によって、本格的な標本処理、計測作業を平成29年度にまとめて実施することとし、また、一部で既存の計測データを利用できることとなり、予定していた旅費等の支出が少なくすんだため、次年度使用額が発生した。これまでは既存の機材で作業が行えたため、物品費をあまり使用せずに済んだが、最終年度にあたる次年度は、解析作業の効率化をはかるため、追加機材等の購入費に当てる予定である。次年度使用額1,524,795円は、標本の処理作業等にかかる人件費・謝金、効率的な歯の年輪計測に必要な画像解析ソフト等の購入費として使用する。
「活性化」概念を利用した記憶定着メカニズムの学際的検討とCAIへの応用

平成14年度は,(1)分散効果の原因が記憶活性度の変化量にあるとする活性化量理論(水野,1996-2001)が,形態・音韻・意味処理を反復した際の再生率を処理水準説よりも合理的に説明できることを検証し(水野,2003a,2004a-次頁掲載順alphabet),(2)本理論に基づいた効果的な分散学習方式,改良Low-First方式のa.教育工学的な応用可能性(水野,2002a),b.効果の均質性(水野,2002b),c.効果の持続性(水野,2002c),d.動機づけ効果(水野,2002d,e)を立証した.平成15年度は,(1)活性化量理論が3種の処理を異なる順序で反復した際の再生率をも処理水準説より的確に予想・説明できることを検証するとともに(水野,2003b,c),(2)改良Low-First方式のCAIにメタ認知的モニタリングを促進するマルチメディア・フィードバック追加してその効果を実験的に検証し(水野,2003d,e;Mizuno,2004),本方式のe-learningシステムでの応用可能性を国際会議で発表した(Mizuno,2003).平成16年度は,(1)活性化量理論が平成15年とは異なる条件で反復した際の再生率をも的確に予測しうることを確認した上で(水野,2004b,c),新たに本理論が維持・精緻化リハーサルの再生率の違いをも的確に予想・説明しうることを検証し(水野,2004d,2005a),その記憶定着メカニズムの包括的説明理論としての妥当性を立証するとともに,(2)フィードバック機能を付加した改良Low-First方式を様々な教材のe-learnimgシステムに適用して教育実践で利用し,その効果・効率・学習者の評価が高いことを実証し,実践的利用に足るe-learningシステムを構築した(水野,2004e,2005b).平成14年度は,(1)分散効果の原因が記憶活性度の変化量にあるとする活性化量理論(水野,1996-2001)が,形態・音韻・意味処理を反復した際の再生率を処理水準説よりも合理的に説明できることを検証し(水野,2003a,2004a-次頁掲載順alphabet),(2)本理論に基づいた効果的な分散学習方式,改良Low-First方式のa.教育工学的な応用可能性(水野,2002a),b.効果の均質性(水野,2002b),c.効果の持続性(水野,2002c),d.動機づけ効果(水野,2002d,e)を立証した.平成15年度は,(1)活性化量理論が3種の処理を異なる順序で反復した際の再生率をも処理水準説より的確に予想・説明できることを検証するとともに(水野,2003b,c),(2)改良Low-First方式のCAIにメタ認知的モニタリングを促進するマルチメディア・フィードバック追加してその効果を実験的に検証し(水野,2003d,e;Mizuno,2004),本方式のe-learningシステムでの応用可能性を国際会議で発表した(Mizuno,2003).平成16年度は,(1)活性化量理論が平成15年とは異なる条件で反復した際の再生率をも的確に予測しうることを確認した上で(水野,2004b,c),新たに本理論が維持・精緻化リハーサルの再生率の違いをも的確に予想・説明しうることを検証し(水野,2004d,2005a),その記憶定着メカニズムの包括的説明理論としての妥当性を立証するとともに,(2)フィードバック機能を付加した改良Low-First方式を様々な教材のe-learnimgシステムに適用して教育実践で利用し,その効果・効率・学習者の評価が高いことを実証し,実践的利用に足るe-learningシステムを構築した(水野,2004e,2005b).1.記憶の再活性化量と記憶定着に関わる知見との関係の学際的検討水野(1996-2001)は,分散効果の原因が記憶の再活性化量にあるとする再活性化説を提起し,その妥当性を数多くの実験で検証してきた。本年度はこの再活性化説が,(1)処理水準,(2)リハーサルという分散効果以外の記憶定着の知見をも合理的に説明しうるか否かを学際的な方法で検討した。その結果,(1)従来処理水準説によって説明されてきた形態・音韻・意味処理による再生率の違いが,再活性化説でより合理的に説明・予測可能であること(水野,2003a,b,d-次頁掲載順にalphabet添付),(2)これまで不明だった維持リハーサルと精繊化リハーサルの再生率の違いが,再活性化説で極めて合理的かつ具体的に説明可能であることが示された(水野,投稿中)。2.再活性化量を多くする改良Low-First方式で定着した記憶の持続性,均質性等の検討改良Low-First方式とは,再活性化説を基に考案した,学習毎の再活性化量を多くして効果を高めようとする分散学習方式である。本年度は上の基礎研究と並行し,これを教育実践で利用する準備として,この方式の(1)効果の持続性,(2)効果の均質性,及び,より実践的な,(3)やる気への影響を実験的に検討した。その結果,この方式の効果は,(1)長期間持続し水野,2002b),

(2)均質であること(水野,2002c)が明らかとなるとともに,水野(2002b)ではその長期的効果を予測するモデルも構築した。さらに,この方式を適用したCAIでの学習実験・調査からは,この方式が,(3)効果・効率だけでなく,学習者のやる気をも高めることが明らかとなり(水野,2002a,e,2003c),この方式が,教育実践での利用に足る頑健性と実用性を有することが明らかとなった(水野,2002d)。1.形態・音韻・意味処理,及び,2種のリハーサルの再生率の違いの再活性化説による説明可能性の検討従来処理水準説で説明されてきた上記2種の記憶定着メカニズムが,再活性化説(水野,1998)でより合理的に説明可能であることを学際的方法で検証した。(1)同一処理を反復した際の再生率は処理水準説では上昇しないとされてきたが,再活性化説では上昇すると予想された。水野(2003b;2004a-次頁掲載順にalphabet添付)は,再生率が反復で上昇し再活性化量と相関することを明らかにし,再活性化説の優位性を検証した。(2)意味→形態,形態→意味と異なる処理を異なる順序で反復した際の再生率は,処理水準説では等しいとされてきたが,再活性化説では後者の方が高いと予想された。水野(2003c,2004d)は後者の方が再生率が高いことを,水野(2003d,2004b)はその再生率が再活性化量から推定しうることを示し,再活性化説の優位性を検証した。(3)維持・精緻化リハーサル中の記憶活性度の変化を測定し,前者では概念の最大活性化量・再活性化量が少なく伝播も生じないが,後者では最大活性化量・再活性化量ともに多く,伝播が関連概念に集中的に生じることを明らかにし,両者の違いが深さよりも再活性化量でより具体的に説明可能であることを示した(水野,2004c)。2.改良Low-First方式のCAIでのマルチメディア・フィードバックの効果の実践的検討再活性化説から導かれた改良Low-First方式のCAI(水野,2002)は,効果的だが習得状況のメタ認知が難しく,学習しにくいと評価されていた。水野(2003a,e),Mizuno(2004)は,習得状況がわかるマルチメディア・フィードバックを考案し・追加し,このCAIの学習しやすさのみならず,効果・効率をもさらに高めることに成功した。1.記憶定着メカニズムの活性化量理論による説明可能性の学際的・包括的検討記憶定着の促進に関わる様々な知見が,再生率は記憶の活性化量で決定されるとする活性化量理論で統一的に説明可能であることを学際的方法で検証した。1)形態・音韻・意味処理を反復した場合の再生率が,処理水準説の予想とは異なり,活性化量理論の予想通り,活性化量に応じて高まることを実験的に検証した(水野,2004a)。2)形態→意味,意味→形態のように異なる処理を異なる順序で反復した場合の再生率を昨年とは違う条件下で測定し,処理水準説の予想とは異なり活性化量理論の予想通り,反復順序によって再生率が有意に異なることを実験的に検証するとともに(水野,2004c),「活性化量理論」の数理モデルである活性化量モデルにより,この結果を正確に再現できることをシミュレーションで検証した(水野,2004d)。3)維持リハーサルと精緻化リハーサルによる再生率の違いが活性化量の違いに起因する可能性を実験的に示した(水野,2004e)。4)上述の処理水準やリハーサル以外にも,精緻化,検索経路の強化,文脈の影響,処理資源量,符号化多様性と特定性などの記憶定着に関わる知見が,活性化及び活性化量という概念を用いることでいかに整合性をもって説明しうるかの理論的展望を行うとともに,活性化量理論により,維持リハーサルと精緻化リハーサルによる再生率の違いが的確に予測・説明できることを実験的に検証した(水野,2005a)。
プリオン病の発症前診断および治療法の臨床研究へのアプローチ

本課題においてはβアミロイドプローブ化合物のプリオン病への応用を試み、病原因子画像化および治療薬開発の基礎研究を行った。今年度は病理標本を用いた病変描出と、モデル細胞における治療効果を検討した。(病理標本における病変描出)ヒトプリオン病(GSS,sCJD,duraCJD)脳標本をβアミロイドプローブ化合物溶解液で染色し、蛍光顕微鏡で観察した。今年度はStyrylbenzoazole関連化合物に注目し、異常プリオン蛋白の斑状沈着が高い感度で蛍光染色された。染色は十分な分別の後は背景をほとんど染めず、極めて特異的であった。しかし、いずれの化合物でも免疫染色においてsCJD大脳皮質に認められた瀰漫性微細顆粒状異常プリオン蛋白沈着、あるいはduraCJD・脳の空胞周囲性沈着を検出することは出来なかった。(プリオン持続感染細胞における治療効果)モデル培養細胞の培地中に、Styrylbenzoazole関連化合物を種々の濃度で加えた。細胞を回収し、蛋白質分解酵素抵抗性の異常型プリオン蛋白産生量をウエスタンブロット法により検討した。検討した多くの化合物について抗プリオン効果を認めた。50%の異常型プリオン蛋白産生阻害を生じるのに必要な濃度(IC50)はナノモルオーダーのものが殆どで、かつ細胞毒性は10μMまで認められず非常に広く安全な治療域が期待された。イメージング研究の結果から、抗プリオン効果の作用機序としては化合物が異常なプリオン蛋白凝集と結合することにより新たな異常型プリオン蛋白の産生を阻害することが示唆された。これらの化合物はプリオン病診断用プローブとしてだけでなく、予防・治療薬としても有用である可能性がある。
HBV組み込みが肝発癌に果たす役割

我々は,HBV感染肝細胞の遺伝子中に見られる組み込みウイルスが,細胞増殖に関連した遺伝子近傍に存在すること,染色体脆弱部位(common fragile sites)と呼ばれるゲノムの転写・翻訳が盛んな領域に組み込みの頻度が多いこと,hTERTなど複数の症例に共通の組み込み(common integration site)が存在することを明らかにした.これらのことから,HBV組み込みはランダムな現象ではなく,肝発癌に至るまでの宿主細胞の維持・存続に有利な影響を与えている可能性が示唆された.B型肝炎ウイルス(HBV)は,ほぼすべての肝癌組織において宿主DNAに組み込まれた形で存在していることがわかっている.宿主遺伝子へのウイルス組み込みは,組み込まれた遺伝子産物の変異や,プロモーター領域への組み込みによる発現増加,逆に発現低下などさまざまな形で遺伝子発現に変異を与える可能性がある.宿主細胞に組み込まれたHBVが肝細胞の増殖にどのような影響を与えるかを検討するため,慢性肝炎患者の肝組織,肝癌組織,担癌患者の非癌肝組織からDNAを抽出し,HBVとヒトのキメラDNAのクローニングを試みた.我々の開発したHBV-Alu PCR (Minami et al. Genomics 1995)を用いて,HBV特異的プライマーとヒトAlu配列特異的プライマーにより増幅されるPCR産物をクローニングし,ウイルス宿主接合部位を含む断片をスクリーニングし,ウイルスヒトキメラDNAを得た.得られた宿主遺伝子につき,GenBankを検索し,ウイルス組み込みの見られる宿主遺伝子の特徴と染色体についての情報を解析した.約10種類の遺伝子が得られた.同一染色体や同一遺伝子への組み込み(いわゆるcommon integration site)は,今回の検討では見られなかった.しかし,組み込みの存在した染色体には,染色体の遺伝子欠失や組み換えの好発部位とされるcommon fragile sites近傍に頻度が多い傾向が示唆された.従来の我々の検討を裏付ける結果であり,HBVウイルスの組み込みが染色体の脆弱性や遺伝子の改変に影響を及ぼし,組み込みにより肝細胞の増殖に有意な遺伝子変化を起こし,肝発癌に先行する最初の遺伝子変化である可能性が示唆された.また,この組み込みはすでに慢性肝炎組織においても観察され,ウイルス感染初期の段階ですでに発癌につながる遺伝子変化が起こっていることが示された.B型肝炎ウイルス(HBV)は,ほぼすべての肝癌組織において宿主DNAに組み込まれた形で存在していることがわかっている.宿主遺伝子へのウイルス組み込みは,組み込まれた遺伝子産物の変異や,プロモーター領域への組み込みによる発現増加,逆に発現低下などさまざまな形で遺伝子発現に変異を与える可能性がある.宿主細胞に組み込まれたHBVが肝細胞の増殖にどのような影響を与えるかを検討するため,慢性肝炎患者の肝組織,肝癌組織,担癌患者の非癌肝組織からDNAを抽出し,HBVとヒトのキメラDNAのクローニングを試みた.我々の開発したHBV-Alu PCR (Minami et al. Genomics 1995)を用いて,HBV特異的プライマーとヒトAlu配列特異的プライマーにより増幅されるPCR産物をクローニングし,ウイルス宿主接合部位を含む断片をスクリーニングし,ウイルスヒトキメラDNAを得た.得られた宿主遺伝子につき,GenBankを検索し,ウイルス組み込みの見られる宿主遺伝子の特徴と染色体についての情報を解析した.1例においてヒトhTERT遺伝子近傍への組み込みが見られた.hTERTプロモーター領域は,近年HBV陽性肝癌において最も高頻度にHBV組み込みが見られる部位であることが明らかになってきた(南日本臨牀73:409-413,2015).HBV組み込みによりhTERT活性が亢進し,肝発癌に至るまでの細胞増殖に有利な影響を及ぼしていることが示唆された.また,別の組み込みはAXIN3遺伝子近傍に見られた.AXINはWNT/βカテニン経路に関与し,肝発癌における重要なドライバー経路である.この組み込みはすでに慢性肝炎組織においても観察され,ウイルス感染初期の段階ですでに発癌につながる遺伝子変化が起こっていることが示唆された.HBV組み込みのある遺伝子の同定が進んでいる.B型肝炎ウイルス(HBV)は,ほぼすべての肝癌組織において宿主DNAに組み込まれた形で存在していることがわかっている.宿主遺伝子へのウイルス組み込みは,組み込まれた遺伝子産物の変異や,プロモーター領域への組み込みによる発現増加,逆に発現低下などさまざまな形で遺伝子発現に変異を与える可能性がある.宿主細胞に組み込まれたHBVが肝細胞の増殖にどのような影響を与えるかを検討するため,慢性肝炎患者の肝組織,肝癌組織,担癌患者の非癌肝組織からDNAを抽出し,HBVとヒトのキメラDNAのクローニングを試みた.我々の開発したHBV-Alu PCR (Minami et al. Genomics 1995)を用いて,HBV特異的プライマーとヒトAlu配列特異的プライマーにより増幅されるPCR産物をクローニングし,ウイルス宿主接合部位を含む断片をスクリーニングし,ウイルスヒトキメラDNAを得た.得られた宿主遺伝子につき,GenBankを検索し,ウイルス組み込みの見られる宿主遺伝子の特徴と染色体についての情報を解析した.ヒトhTERTやAXIN3など,細胞増殖に関連した遺伝子近傍に組み込みが見られた.また,組み込みのあった遺伝子が染色体脆弱部位(common fragile sites)に多い可能性が考えられたため,組み込み遺伝子をプローブとして,染色体の脆弱部位に存在するかどうかを免疫蛍光染色で検討した.少なくとも4個のHBV組み込み遺伝子が染色体脆弱部位に存在することが判明した.これらの結果からHBV組み込みはランダムな現象ではなく,肝発癌に至るまでの細胞増殖に有利な影響を及ぼす可能性のある遺伝子近傍に多く見られることが示唆された.

我々は,HBV感染肝細胞の遺伝子中に見られる組み込みウイルスが,細胞増殖に関連した遺伝子近傍に存在すること,染色体脆弱部位(common fragile sites)と呼ばれるゲノムの転写・翻訳が盛んな領域に組み込みの頻度が多いこと,hTERTなど複数の症例に共通の組み込み(common integration site)が存在することを明らかにした.これらのことから,HBV組み込みはランダムな現象ではなく,肝発癌に至るまでの宿主細胞の維持・存続に有利な影響を与えている可能性が示唆された.HBV組み込みクローンの解析が進行している.hTERTやAXINなどHBV組み込みのあった遺伝子の肝発癌への意義について培養細胞での実証や文献的にも検索していく.肝臓病学得られたHBV-ヒトキメラDNAについてそのコピー数と肝細胞増殖に果たす役割について解析していく.
Ｃ型慢性肝炎におけるＣＤ３６分子を標的としたインスリン抵抗性の解明

C型慢性肝疾患(CLD-C)患者における血中の可溶型CD36(sCD36)が肥満、インスリン抵抗性または肝脂肪化に関与するか否かを検討した。CLD-C患者における血中sCD36値は、肝組織におけるKupffer細胞上のCD36の発現の程度を反映していた。また、CLD-C患者における血中sCD36値は、肥満と有意に相関していた。しかしながら、CLD-C患者におけるインスリン抵抗性や肝脂肪化にCD36が関与している可能性は低いものと思われた。CD36欠損症の頻度について対象患者のうち19例について末梢血中の血小板および単級におけるCD36の発現をフローサイトメトリーで解析した。19例中1例(5.3%)に2型CD36欠損症を認めたが1型の欠損症はみられなかった。CD36欠損症の症例が非常に少数であったっため,CD36欠損症とCD36の発現が正常である患者との臨床パラメーターの比較はできなかった。次に,前年度の研究で肝臓組織におけるCD36分子の発現は類洞に認めらることを明らかにしたが,本年度はCD36陽性の類銅はCD14とmergeすることを免疫染色(二重染色法)で確認した。この結果から,CD36陽性の類銅はKupffer細胞であることが示唆された。さらに抗ウイルス療法(PEG-IFN単独またはPEG-IFN+ribavirin)による血清sCD36,oxLDL値の変動について対象患者のうちの11例で解析を行った。抗ウイルス療法により血清oxLDL値は低下する傾向を示した(2.95+2.99 vs 1.61+1.06 uMlo/ml, p=0.0598)。血清中のsCD36値も低下傾向にあった(192+71 vs 156+44 pg/ml, p=0.1635)が,oxLDL/sCD36比においては有意な変動はみられなかった(11.3+8.7 vs 10.7+6.9)。本年度は、C型慢性肝疾患患者における末梢血中のCD36欠乏症とインスリン抵抗性との関連についてフリローサイトメトリーによって解析したが、両者の間には明らかな相関を認めなかった。最後に、平成23年度から行った研究の成果をまとめて論文化し、投稿したところ採択された。最初に,C型慢性肝炎患者44例の肝組織におけるCD36分子の発現およびその局在について免疫組織化学法を用いて検討した。CD36分子の発現は全例とも類洞にみられたが,肝細胞には発現していなかった。次に,肝組織におけるCD36分子の発現の程度と血中の可溶型CD36 (sCD36)値との関連について検討した。肝組織におけるCD36分子の発現が高度な症例の血中sCD36値は,軽度な症例のそれと比較して有意に高値を呈しており,肝組織におけるCD36分子の発現と血中sCD36値は正の相関を示した。また,C型慢性肝炎患者における血中sCD36およびoxidized low-density lipoprotein (oxLDL)値を健常人8例のそれらと比較した。C型慢性肝炎患者における血中sCD36およびoxLDL値は,健常人のそれらと比較して有意に高値であった。C型慢性肝炎患者における血中sCD36またはoxLDL値とインスリン抵抗性との関連について検討した。インスリン抵抗性はHOMA-IR値を算出して評価した。血中sCD36値とHOMA-IR値との間には有意な相関は得られず,oxLDL値とHOMA-IR値との間にも有意な相関は認められなかった。しかしながら,oxLDL/sCD36比とHOMA-IR値との関連を解析したところ,緩やかな負の相関を認めた。なお,血中sCD36値と肝脂肪化の程度との関連について検討したところ,肝脂肪化がgrade0からgrade1,grade 2へと高度になっても血中sCD36値に有意な変動を認めなかった。血清ALT値,HCV-genotypeまたはHCV-RNA量と血中sCD36値との関連についても解析を行ったが,いずれも有意な相関はみられなかった。対象患者におけるCD36遺伝子解析までには至っていないが,CD36陽性の類洞がKupffer細胞であることを明らかにすることができた。また,対象患者におけるCD36欠損症の頻度についても算定することができた。さらに,抗ウイルス療法による血中sCD36およびoxLDL値の変動も解析できた。以上より,当初計画した項目については概ね解析できたものと思われる。現時点では対象患者は目標の50例には到達していないものの40例ほど集まり,保存血清や肝組織はすでに確保されている。データ解析に必要な血液検査データは概ね揃っている。