hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
量子・分子論に基づいた高酸素透過性を有する燃料電池触媒層ナノ構造の理論設計

白金表面上アイオノマー薄膜における酸素透過現象を解析するにあたって、前年度より理論式の構築とシミュレータの開発を進め、それを用いてアイオノマー薄膜の酸素輸送抵抗を評価した。その結果、アイオノマー薄膜全体の酸素輸送抵抗は、シミュレーションによる計算結果と非常に良い一致を示し、従来よりも遥かに高精度な酸素輸送抵抗の評価手法を確立した。この成果は、米国電気化学会のECS Transactionsで発表した。さらに、酸素輸送抵抗の含水率依存性を解析した結果、含水率上昇に伴いアイオノマー薄膜全体の酸素輸送抵抗が増加することに加え、全ての含水率において、ionomer/Pt界面の酸素輸送が律速であることを明らかにした。この成果は、Elsevier社のJournal of Power Sources、及び国内外の学会にて発表した。また、従来よりも酸素輸送抵抗の低いアイオノマー薄膜の提案に向けて、高分子側鎖の影響に着目し、量子化学計算により新たな高分子モデルを構築した。これを用いて、側鎖長による酸素輸送抵抗への影響を解析した結果、特に白金表面の吸着水の量との強い相関が見られ、吸着水が少ないほど低い輸送抵抗を示すこと、そしてそれに伴う薄膜構造の変化を明らかにした。次に、官能基の影響として、従来とは異なる官能基を導入したことで酸素輸送抵抗が低下し、こちらも同様に白金表面の吸着水の量と相関が見られた。しかし、官能基の導入よりも側鎖長の変化の方が、より大きく酸素輸送抵抗に寄与した。従って、高分子の側鎖長を最適化することで、酸素輸送抵抗の低減が期待できることが示唆された。よって、これまでの成果を通して、白金表面上アイオノマー薄膜における酸素透過現象に関する理論の構築及びメカニズムの解明、そして酸素透過に優れたアイオノマー薄膜に関する設計指針の提案を行ったことで、本研究課題の目的は達成されたと考える。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。固体高分子形燃料電池の効率を向上させる上で、酸素輸送効率の改善は非常に重要な課題となっている。その中で本研究では、白金触媒表面を覆うアイオノマー薄膜における酸素輸送特性に着目し、より酸素透過性に優れたアイオノマーの理論設計を目的として解析を行っている。今年度は、気体の透過特性を表す透過係数、溶解度係数、拡散係数について、白金表面上アイオノマー薄膜における酸素の拡散係数の評価手法を構築した上で、アイオノマーへの酸素透過シミュレータを用いてこれらの透過特性ついて解析した。その際、アイオノマーが白金表面ならびに気相との界面を含むナノスケールの3層構造を有していることから、これらのナノ構造を考慮した上で、メゾ・マクロスケールでの知見となる酸素透過特性を解析した。その結果、アイオノマーと白金との界面における酸素透過係数が最も小さく、アイオノマーの酸素透過における支配要因となっていることが明らかとなった。さらに、酸素透過性における溶解性と拡散性の寄与に関して、アイオノマーの含水率による変化をもとに解析し、含水率の上昇によって酸素透過性が低下することに加えて、透過性の変化に対しては溶解性の方がより大きな影響を及ぼしていることが分かった。また、酸素透過の支配要因であるアイオノマーと白金との界面について、含水率の変化によるナノスケール構造の変化に着目して解析したところ、含水率の上昇に伴う水分子数の増加によって界面内部の空隙が塞がれており、これによって酸素溶解性が低下することが明らかとなった。この成果は、米国電気化学会雑誌のECS Transactionsに発表した。今年度の研究計画として掲げていた課題に関して、まず白金のポテンシャルについて量子力学計算を行うことで、より厳密なアイオノマー構造を模擬する予定であった。しかしながら、当該内容については別グループにより先行研究が行われいたことが分かり、それらの論文によるアイオノマー構造の解析結果と、現在のシミュレータで得られている解析結果と比較したところ、大きな差異は見らずほぼ同様の結果となった。そのため、白金ポテンシャルの開発はしなかったものの、量子化学計算を考慮した結果として十分な妥当性が得られたと言える。次に、白金表面上アイオノマー薄膜における酸素拡散係数の評価手法を確立し、アイオノマーの酸素拡散性の評価については達成することができた。さらに、酸素透過性を示す透過性と溶解性を考慮して、アイオノマー薄膜では透過性に対して溶解性がより大きく影響していることを明らかにした。また、アイオノマー薄膜における酸素透過について、溶解に要する時間スケールを考慮する必要性があることが新たに分かった。アイオノマー薄膜を透過する際の、酸素の溶解速度および拡散速度について着目して解析することで、より厳密な酸素特性の解明が期待できることから、より酸素透過性の高いアイオノマーの理論設計を行う上で欠かせない課題であると考える。そこで今年度は、溶解速度と拡散速度を考慮した酸素透過現象を表すための理論モデル構築を行った。このモデルに基づいて、来年度にかけて溶解速度と拡散速度の解析を行う予定である。固体高分子形燃料電池の効率を向上させる上で、酸素輸送抵抗の低減は非常に重要な課題となっている。その中で本研究では、白金触媒表面を覆う高分子薄膜である、アイオノマー薄膜における酸素輸送特性に着目し、より酸素透過性に優れたアイオノマー薄膜の理論設計を目的として解析を行っている。今年度は、アイオノマー薄膜における酸素透過メカニズムの解明を目的として、薄膜を透過する酸素の溶解速度、拡散速度を考慮した理論式を新たに構築し、その理論式に基づいて酸素輸送シミュレータの開発ならびに解析を行った。

そして、溶解抵抗と拡散抵抗について評価したところ、ある一定の含水率の下では拡散抵抗の方が大きく、白金との界面における輸送抵抗が最も大きいことが明らかとなった。しかしながら、この理論式では、薄膜の膜厚方向の不均一性が酸素輸送に与える影響について考慮し切れていないことが分かった。そこで、その後さらに理論を発展させ、化学ポテンシャルに基づく理論式を新たに構築した。この理論式を用いることで、上述した酸素の溶解抵抗、拡散抵抗について、酸素の易動度による統一的な解釈可能となると考えられる。従って、従来の理論と比較して、より厳密にアイオノマー薄膜内部の酸素輸送現象を解析できると考えられる。また一方で、高酸素透過性を有するアイオノマー薄膜の提案に向けて、量子論的な手法である第一原理計算を用いて、新たな高分子モデルを開発した。この高分子構造の特徴として、従来の高分子よりも側鎖長を伸ばしたことで、より疎水領域が増加することが予想され、これによって酸素透過性が向上すると予想される。さらに、この高分子モデルを用いて、バルク膜の特性について解析を行うことで、モデルの妥当性について検証を行った。前年度から進めていた、アイオノマー薄膜における酸素の溶解速度、拡散速度に関する理論構築ならびに解析については十分に達成することができたと言える。しかしながら、その成果を踏まえて、現状の理論では考慮し切れていない要因があることが分かったことから、その点を見直して改良を行い、化学ポテンシャルに基づいた新たな理論を構築した。また、高酸素透過性を有するアイオノマー薄膜の理論設計として、量子論的な手法を用いて高分子モデルの構築、ならびにバルク膜の特性に関する解析を行った。これにより、高分子モデルの妥当性について検証できたことから、アイオノマー薄膜としての性能評価に向けて、十分な準備が整ったと言える。以上の点から、今年度の本研究課題の進捗としては、おおむね順調に進展したと考える。白金表面上アイオノマー薄膜における酸素透過現象を解析するにあたって、前年度より理論式の構築とシミュレータの開発を進め、それを用いてアイオノマー薄膜の酸素輸送抵抗を評価した。その結果、アイオノマー薄膜全体の酸素輸送抵抗は、シミュレーションによる計算結果と非常に良い一致を示し、従来よりも遥かに高精度な酸素輸送抵抗の評価手法を確立した。この成果は、米国電気化学会のECS Transactionsで発表した。さらに、酸素輸送抵抗の含水率依存性を解析した結果、含水率上昇に伴いアイオノマー薄膜全体の酸素輸送抵抗が増加することに加え、全ての含水率において、ionomer/Pt界面の酸素輸送が律速であることを明らかにした。この成果は、Elsevier社のJournal of Power Sources、及び国内外の学会にて発表した。また、従来よりも酸素輸送抵抗の低いアイオノマー薄膜の提案に向けて、高分子側鎖の影響に着目し、量子化学計算により新たな高分子モデルを構築した。
会計学の教育及び研究の国際動向

会計学の教育及び研究の国際動向をさぐるうえで、国際会議における各国代表の報告と討議を分析することは効果的である。この研究では、世界会計士会議、国際会計教育会議及び世界会計史会議における各国代表の報告を歴史的に考察するとともに、昭和63年10月に京都市で開催された第6回国際会計教育会議における各国代表の報告と討議について分析を試みた。この結果、次のことが明らかにされた。1.企業の経済活動を測定し、経営成績及び財政状態を利害関係者に伝達する会計の諸制度は、産業の発展に従って、どの国でも同じような発展のプロセスをたどっている。会計学の教育及び研究は、世界的な規模で進めることができるし、また進められるべきである。2.会計学の教育及び研究について国際協力の必要性はいよいよ高まっている。会計理論及び実務は各国の士壤のなかで醸成されてきているが、これを国際的に相互に交換するならば、会計学は飛躍的に発展すると考えられる。3.企業の経済活動が国境をこえて展開していくとき、会計学の教育及び研究は新局面を迎える。社会、経済、法律環境が相違する諸国において,また産業の発展段階が異なる諸国において、会計のはたすべき職能は必ずしも同じでない。証券市場が発達し、産業資本が広く大衆の貯蓄から調達される諸国において、大衆投資家の投資意思決定のために必要な財務情報を提供することは、会計の主要な職能と考えられている。資本が特定の階層の人々、あるいは国によって所有され、証券市場が資本調達市場として機能していない場合、投資家への財務情報の提供といった会計職能は、ほとんど問題とされない。国際的に会計学の教育及び研究が進められる場合、あるいは会計の諸基準について国際的な調和化をはかる場合には、こうした事情を十分に考慮しなくてはならない。本研究は, (1)世界各国における会計学の教育と研究の現状を調査し,社会・経済環境の差異や産業の発展段階によって会計職態にどのような差異があり,会計学の教育と研究にたずさわる人々の関心にどのような差異があるかを明らかにすること,及び(2)国際間の財務報告・監査の諸基準にどのような差異があり,国際的調和化がどのように進められているかを明らかにすることを目的とした.本年度は62年10月7日から10日まで京都市で開催された第6回国際会計教育会議に焦点をあわせ,それまでの期間は資料収集の方法について,またその後の期間は資料整理の方法について研究を進めた.会議期間中の資料収集は,国際会議の主題にあわせ,(a)社会・経済環境の差異と会計教育,(b)社会・経済環境の差異と会計職能,(c)産業の発展段階と会計教育及び研究(d)高度技術社会と会計教育及び研究,(e)財務報告及び監査の国際的調和化,(f)財務ディスクロージャーの促進の6領域について行われた.各国代表の報告と討議から,(1)各国とも経済発展にともない会計専門家の著しい不足という事態に直面しており,有能な会計専門家の育成が大きな課題となっていること,(2)各国の歴史的背景や慣習等の特質を認識し,各国の置かれた環境のもとで固有の社会的ニーズに対応した会計教育や会計システムの整備充実を図ることが重要である反面,会計学を世界的学問として確立させることが重要であることが知られた.これらの調査結果の概要は,「企業会計」昭和62年12月(第39巻第12号)に発表した.当年度の研究は昭和63年度の研究の準備段階となるものであり,所期の目的は達成されたものと考えている.

昭和63年度の研究は、昭和62年度に収集した第6回国際会計教育会議における各国代表の報告及び討議資料を分析するとう方法で行なわれ、次の事実がこりりによって明らかにされた。1)企業の経済活動を測定し、その経営成績及び財政状態を利害関係者に伝達する会計の職能は、企業の経済活動が国境をこえて展開していくとき、新しい局面を迎える。社会、経済、法律環境が相違し、産業の発展段階を異にする国々において、会計の職能は必ずしも同じでない。たとえば、証券市場が高度に発展し、産業資本が広く大衆の貯蓄から調達される諸国において、大衆投資家の投資思想決定のめに必要な財務情報を提供することは、会計の主要な職能と考えられている。しかしながら、資本が特定の階層の人々によって、あるいは国よって所有され、証券市場が産業資本の調達市場として機能していない諸国では、投資家に対して財務情報を提供するといった会計の職能は、ほとんど問題とされることはない。これらの諸国では、経営担当者の受託責任の設定とその解除、あるいは経営能率の測定が会計の主要な職能となっている。従って、国際的に会計学の教育と研究が進められる場合、あるいは会計及び財務報告の諸基準の国際的な調和化をはかる場合、こうした社会、経済、法律環境や産業の発展段階の差異を十分に考慮しなけばならない。2)政治、経済その他あらゆる面で、人々の間、国と国との間の相互依存性が増してきており、国際協力の必要性はいよいよ高まっている。このことは会計学の教育と研究についてもいえる。会計理論や会計実務は、自らの社会のなかで醸成されてくるだけでなく、他国のそれを学ぶことによって急速に発展する。各国の会計思考や会計実務を知り、当面する会計学の教育及び研究の諸問題を討議することは、会計学の発展に対して大きく貢献する。
中世顕密聖教の史料学的研究

中世寺院史料において質的・量的にも中核に位置する聖教を素材として、その史料学的な検討を行うことこそ,本研究の課題である。また研究素材としての聖教については、顕教・密教を中心にして、さらに真宗までその範囲を拡げて調査・蒐集を実施した。中心的に史料調査を行ったのは、奈良東大寺、京都醍醐寺であり、そのほか三重高田専修寺、神奈川県立金沢文庫であり、諸寺・機関に伝来する膨大な聖教の中に興味深い素材を見いだすことができた。諸寺・機関に伝来する聖教の調査にあたっては、個々の史料から調書を作成してデータベース化し、また複製写真を入手することにより、それらを用いた検討作業を進めた。まず作成した調書は、画像参照と目録自動編成を機能にもつ専用システムにより逐次データベース登録した後に、その利用の簡便化を図るため目録化を行った。なお東大寺図書館に架蔵される聖教類(114架、法相・律部)については、その目録を科研報告書に掲載した。また醍醐寺・称名寺・高田専修寺において作成した調書データは、紙幅の関係で科研報告書に掲載することはできなかったが、各寺・機関において進行中の重要文化財指定目録の作成に提供することにより、その有効利用を図った。蒐集史料の検討作業のなかで得られた最大の成果は、聖教が顕・密・真宗において固有の機能を果たしていたことを実証できたことである。特に聖教のなかで量的に多きをしめる「抄物」について、顕・密・真宗においてその形式は類似しているものの、各々が修学・伝授・教化という固有の機能を果たしていたことが確認できた。これら固有の機能を通して、聖教を生み出した各寺・各時代の仏教受容の具体的な有様が,今後明らかにされよう。そのほか、顕教の論義法要、密教の伝授、門跡にとっての聖教など、多彩な聖教が活用された具体的な場が明らかにされた。本年度からの具体的な研究方針をめぐる検討作業を踏まえ、東大寺図書館および醍醐寺に所蔵される顕密聖教を研究対象とした。すなわち東大寺図書館所蔵の114架(法相・律)、121架(華厳)、112架(倶舎・大乗起信論)、123架(三論)、124架(因明)等の諸宗にわたる冊子様の聖教類、および醍醐寺所蔵の真言聖教類(四百凾以前)を対象に調査・撮影を実施することとし、所蔵者の了解を得て作業に着手した。また作業の前提として、史料調査において有効な情報を確保するために調査項目を検討し調書を作成した。さらに採取した調書データの有効利用を図るため、史料データベースの構築、画像データの蓄積管理、目録編集の専用システムを導入し、その整備を進めている。なお今年度後期に実施した調査では、東大寺図書館においては114架、醍醐寺においては50凾台の聖教を対象に、調書作成と撮影作業を実施し、分類体系を措定するための有効な素材を確保した。今年度は、昨年度の継続としての史料調査を実施するとともに、併せて調査成果のデータベース化を進め、その中で注目すべき史料の検討作業を行った。特に今年度は、京都醍醐寺において真言聖教の調査を行うとともに、聖教の管理・相伝に重要な役割を果たした目録と抄物に注目し、その形式・形態から多彩な機能について検討を試みた。また聖教の料紙にも留意して、聖教の先述作業においていかなる料紙の選択がなされたかを、具体的な事例をとおして、特に楮紙打紙が盛んに用いられた事実とその理由について考察した。

また奈良東大寺において、天平写経以降の写経類及び論疏について点検作業を行い、冊子体の聖教類との関係について明らかにする必要を痛感した。つまり個々の経論とそれらの疏が、それ自体で書写されるわけではなく、寺僧による教学活動の中で書写・撰述されたはずで、その環境を明らかにすることにより、さかのぼってそれらの具体的な役割を明らかにする必要があろう。また東大寺図書館においては、昨年度に完結しなかた顕教聖教の内、114架(法相、律)について調書作成と撮影作業を実施した。ただし「定唯識論同学抄」等の叢書本があり、今年度も114架の調査を終了することはできず、来年に継続することにした。なお調査済み調書のデータ入力は、昨年度分は終了し、今年度分はその半ばの入力を終えている。今後はこれらの文字データに対応する画像データについても、追加入力の作業に着手する予定である。1東大寺図書館所蔵聖教の調査・蒐集作業研究年度当初からの継続として、奈良東大寺図書館に所蔵される114架(法相・律)の聖教について、その調査・撮影を実施した。律部については全点の調査を終えたが、法相部については来年度継続することになる。法相聖教については、他寺(特に興福寺)との交流のなかで、東大寺僧の手で生成されたものが少なからずあり、寺院の枠を越えた教学活動に基づく南都仏教相承の姿が確認される。2醍醐寺所蔵資料の調査・蒐集作業醍醐寺に所蔵される聖教類のなかで、特に50・390・550函台を抽出して調査を実施した。特に断簡一括として番外処理されていた報恩院隆源自筆の聖教類残闕を確認した。南北朝時代から室町前期における醍醐寺の碩学隆源の手になる、主に事相に関わる聖教から、真言聖教の構造を検討する手がかりが得られた。3史料データベースの構築蒐集した史料について、調書データを入力するとともに、併せて画像データの登録を併行して実施している。なお蓄積したデータは成果報告の時点で目録化する予定であるが、東大寺図書館所蔵聖教については同館において構築中の史料データベースに、醍醐寺聖教についても同様に同寺文化財データベースに、採取したデータを提供する予定である。4史料翻刻醍醐寺聖教調査のなかで確認された同寺所蔵の「寺家雑筆至要抄・雑々記」を翻刻したが、今後も注目すべき史料の翻刻作業を継続する予定である。本年度は研究期間の最終年度にあたり、調査及び研究活動のとりまとめを専一に、年間の活動を進めた。第一に、奈良東大寺図書館における聖教調査については、研究初年度に着手した第114架(法相・律部)の調査・撮影を終了するとともに、第124架(三論部)に着手した。また調査にあたり採取した調書と撮影写真により、データベースの構築を進め、114架についてはその作業を終了した。なお東大寺図書館所蔵聖教(法相・律部)については、データベースを基礎にして日録化を実施し、その目録は本科研報告書に掲載した。第二に、京都醍醐寺における真言聖教の調査については、個別函の調査を進めるとともに、密教修法の勤修に関わりの深い修験関係史料を確認・蒐集し、その成果を、平成18年10月より醍醐寺霊宝館において開催された特別展「醍醐寺と修験道」の開催に結びつけた。第三に、「顕密」という枠から離れるが、共通した聖教を伝える高田専修寺(三重県津市)の原本調査を実施し、親鷺上人真筆をはじめ歴代祖師の手になる聖教の調査を実施し、貴重な成果を得た。第四に、四年にわたる調査・研究の成果を、研究会・講演会における報告、学会誌への論文投稿に加えて、本科研報告書に個別論文として掲載した。
自然環境と急性大動脈解離発症との関連性：全国循環器専門施設データを用いた疫学研究

循環器救急疾患のひとつである急性大動脈解離の入院に気温・大気汚染物質等の自然環境が与える影響について、日本循環器学会の循環器疾患診療実態調査データベース(日本全国の循環器専門施設の入院データ)と気象庁の気象データ、国立環境研究所の環境数値データベースを用い検討する。
移動エージェントと進化アルゴリズムを用いた群ロボットの効率的な制御の研究

本研究は、きわめて多数の群ロボットを効率よく任意の集団へとまとめることを目的としている。考えられるアプリケーションは空港などで見かけるカートである。カートは決められた場所から旅行者によって取られ、不要になった時点で任意の場所に放棄される。再度集めるのはかなりの重労働であるが、現在では世界中の空港ですべて人手によって集められている。われわれは、現実的な解決法として、カートであるロボットが、最小のコスト(移動距離)で、ある程度の集団にまとまり、それを人手で回収する方法を提案した。これまで研究してきた階層型移動エージェントとアントコロニー最適化手法あるいは遺伝アルゴリズムを組み合わせることにより、知的な振舞いをするロボットが実現できた。以上が、当初計画に記載した研究の成果であるが、単に集合させるだけでなく整列もさせるべく実装を進めている。これまで研究してきた階層型移動エージェントとアントコロニー最適化手法あるいは遺伝アルゴリズムをくみあわせることにより、知的なロボットが実現できるはずである。平成20年度の成果は次のとおり。1.ロボット制御用言語によって記述されたモバイルエージェントには、群ロボットを一つずつ巡回し、位置の測定を行なう。2.回収された位置から最適な集合場所を、進化計算を用いて算出する。3.効率のよい集合場所を算出するアントコロニー最適化のアルゴリズムを、シミュレータを作成して考案する。1と2については実現できた。しかし進化計算を用いて算出した結果にわれわれは満足していない。より効率のよい集合場所を算出するアントコロニー最適化のアルゴリズムがあると確信しているが、いまだ発見できていない。平成21年度は、この点を重点的に取り組みたい。あわせて衝突回避運動を巧みにかつ省エネルギーとなるように経路を算定できるようにしたい。平成21年度の成果は次のとおり。位置とロボットの向きの測定にはRFIDを用いた。正確なデータが取得できた。2.新たにフェロモンエージェントという移動エージェントを導入し、群ロボット全体で群知能を実装した。3.単に最適な集合場所を求めるだけでなく、具体的な軌跡を各ロボットに与える再帰的なアントコロニー最適化のアルゴリズムを、シミュレータを作成して考案している。現在実装中であり、今年度前半には完成予定である。これにより衝突回避運動を巧みにかつ省エネルギーとなるように経路を算定できることが期待できる。2のフェロモンエージェントを用いた群知能による最適化と3の再帰的にアントコロニー最適化を実施する方法のどちらか、あるいは両方により集合問題の最適解を得られることを期待している。平成22年度は、この点を重点的に取り組みたい。あわせて単に集合するだけでなく整列するような実装も行ってみたい。平成22年度の成果は次のとおり。

1.回収された位置から最適な集合場所を、進化計算を用いて算出した上で、集合位置のみならず、最適な経路を、新たなシミュレータを組み込むことで求めることができるようになった。2. 1.の算出を繰り返し行うことにより、ロボットの移動に合わせて、新しい経路を求める。1.のシミュレータを複数回実行させることにより、可能になった。最適な回数を求める実験を行った。3.ロボットを集合させ、全体で要した費用(モーターの駆動時間、移動距離、バッテリ容量等)を計測した。今年度の新しい試みとして、現状では集中して行っているアントコロニー最適化の計算を分散させた、分散アントコロニークラスタリングアルゴリズムを考案し実装した。具体的には、アントェージェントとフェロモンエージェントという移動エージェントを導入し、移動ロボットを含めたシステム全体でアントコロニー最適化の実装を行った。これまで提案され報告されているアントコロニー最適化システムはシミュレータ上のものであり、実際のロボットを使った実装は、われわれが初めてである。移動ロボットによる実装ではなく、移動ソフトウェアエージェントによる実装なので、効率上の問題はない。中央制御を不要にすることができた。フェロモンをソフトウェアエージェントで実装することにより、単にロボットを集合させるのみならず一列に整列させる実装も行なった。検証実験を継続している。
新規ノシセプチン作動薬の睡眠障害に対する治療および改善機構の研究

概日周期は真核生物に広く認められる生命現象であり、生物が地球の昼夜変化に適応する過程で進化した機能と考えられている。この概日周期の発振中枢は約1万個の細胞からなる脳基底部に存在する視交叉上核(SCN)であることが分かっている。そのSCNが司る外部環境に適応する現象(同調による位相変化)を引き起こすものは、光刺激による光同調系と薬物などによる非光同調系に大別される。本研究ではノシセプチン作動薬によるSCNの非光同調位相変化作用機序を分子生物学的・免疫組織学的手法を用いて明らかにすることを目的としている。これまでに私は、この作動薬による位相変化が有意な主要時計遺伝子産物PER2蛋白質が翻訳レベルで減少したことによって惹起されたという結果を得ている。概日周期発振中枢であるSCNは、組織解剖学的に直接視神経入力があり光反応性を持つ領域と、視神経の入力が無く光には反応しないが固有の体内時計を刻み続ける領域に大別できる。そこで組織免疫学的手法で詳細に解析したところ、この作動薬投与は、SCNで固有の体内時計を刻み続ける領域でPER2蛋白質の顕著な減少を引き起こしたことが分かった。この作動薬投与は、直接視神経入力がある領域には影響を及ぼさないことが示唆される結果を得た。この作動薬による非光同調位相変化作用は、SCNの固有の体内時計を刻み続ける領域でPER2蛋白質を翻訳レベルで減少させることにより引き起こされることが示唆された。非光同調系の同調位相変化は、動物種で感受性が異なっていたことがこれまで問題であった。しかし、本研究で用いた作動薬は著しく非光同調位相変化感受性が低いマウスにおいても有意な位相変化を示すことが分かった。薬理学的手法を用いて解析した結果、この作動薬は明らかにin vivoでノシセプチン受容体を介してマウスの位相を前進させたことも明らかになった。
老化T細胞の再活性化に注目した新たな高齢者敗血症治療戦略

予後不良の高齢者敗血症の病態として、T細胞の疲弊が近年注目されている。CD8+Tやナチュラルキラー細胞の成長因子であるインターロイキン-15(IL-15は高齢マウス敗血症モデルの生命予後を改善し、高齢者由来T細胞を活性化し、加齢により低下していたインターフェロンγの産生能を改善した。またIL-15は、高齢マウス敗血症モデル由来CD8+T細胞において、suppressor of cytokine signaling 1(SOCS1)の発現量を減少させた。T細胞の分化・成熟に重要な役割を果たすSOCS1の発現制御が新たな高齢者敗血症の治療ターゲットとなる可能性が示唆された。高齢者の敗血症は重症化しやすくその予後は極めて不良である。申請者は高齢者敗血症では亜急性期の免疫抑制状態が死亡要因となっていることを報告し、免疫賦活効果のある薬剤が治療薬の有力な候補となると考えている。申請者はCD8+Tやナチュラルキラー細胞(NK細胞)の成長因子であるインターロイキン-15(IL-15)がマウス敗血症モデルの生命予後を改善し、高齢者由来T細胞を活性化することを発見した。これらの研究成果をもとに本研究では1)IL-15による老化T細胞の活性化のメカニズムを解析し、2)そのシグナル伝達系に関与する新たな治療標的分子を探索することで、今後先進国で爆発的に増加する高齢者敗血症の新規治療薬の開発を目指す。救急医学本研究では高齢敗血症におけるIL-15の治療薬としての可能性と新規標的分子を明らかにするため、本研究計画では以下の研究項目を予定している。研究1高齢者由来T細胞に対するIL-15の活性化および増殖効果判定(平成25年度)研究2高齢マウス/高齢IL-15ノックアウト(KO)マウス敗血症モデルにおけるIL-15の効果判定(平成25年度)研究3高齢者由来T細胞非活性化の原因遺伝子の探索(平成26年度)研究4原因遺伝子の高齢者由来T細胞における制御とその機能解析(平成26年度)この4つの研究計画のうち、研究1,研究2はほぼ終了している。研究1では組み換えタンパクIL-15の老化T細胞の再活性化とインターフェロンγ(IFN-γ)産生能を確認した。また組換えタンパクIL-2、IL-7、抗programed death 1(PD-1)抗体、抗cytotoxic Tlymphocyte antigen 4 (CTLA-4)抗体など、IL-15以外にT細胞を活性化する分子の効果も判定。その結果、高齢者由来CD8+ T細胞の再活性化効果はIL-15が最も強いことが明らかになった。研究2では、高齢マウス敗血症モデルにおいてIL-15はT細胞の敗血症誘導性アポトーシスを抑制し、腹腔内および血清のIFN-γ濃度を上昇し、腹腔内のバクテリアクリアランスを改善し、7日後生存率をコントロー群と比較して有意に改善した。研究3高齢者由来T細胞非活性化の原因遺伝子の探索IL-15による高齢者由来T細胞活性化シグナル伝達系の詳細は不明であり、これを探索することで新たな新規治療標的分子の発見につながる可能性がある。研究1の1と同様に1)高齢者由来リンパ球、2)若年者由来リンパ球、3)高齢者由来リンパ球+IL-15の3群で各24時間培養後CD4+およびCD8+T細胞を単離し、mRNAを抽出。次世代シーケンサーを用いて、mRNAの発現状況を網羅的に解析する。上記3群で比較検討し、高齢者由来リンパ球+IL-15投与群で高齢者由来リンパ球群と比較し有意に上昇し、その発現が若年者由来リンパ球と同程度である核内転写因子を「ヒト高齢者由来T細胞非活性化の原因遺伝子」と同定する。また高齢(生後2歳)および若年(生後6週)のマウス脾細胞を用いて同様の研究を行い、高齢者由来T細胞非活性化の核内転写因子を探索し、ヒトとマウスの相同性を確認する。

研究4原因遺伝子の高齢者由来T細胞における過剰発現/ノックダウンとその機能解析研究3で同定した原因遺伝子をエレクトロポレーション法にて高齢者由来T細胞に遺伝子導入する。その後リンパ球増殖因子刺激下で24時間培養後に遺伝子導入後のT細胞を回収し、活性化/増殖の変化を細胞イメージアナライザーにて定量解析し、原因遺伝子の過剰発現による影響を評価する。また原因遺伝子のsiRNAを作成し高齢者由来T細胞でノックダウンすることで、活性化/増殖の変化を評価する。2.研究3で同定した原因遺伝子がT細胞膜受容体関連遺伝子であればそのアゴニスト/アンタゴニストの添加実験をin vitroで行う。末梢血単核球を分離し、リンパ球増殖因子(抗CD3/28抗体)刺激下で24時間培養後に回収し、活性化/増殖の変化を細胞イメージアナライザーにて定量解析する。前年度は研究計画が順調で、大きな再実験を必要とせず、試薬や消耗品の支出を抑えることができたため。当該年度はマイクロアレイやフローサイトメトリーを用いた細胞単離を行うため、マイクロアレイやフローサイトメトリー関連の消耗品を購入する予定である。
重金属汚染から魚体を守るプロバイオティクスの開発に関する研究

ヒ素(50μg/ml)に対して耐性を示す乳酸菌をこれまでに103株単離している。それらの分離株の中から、ヒ素を効率的に吸収し、魚のプロバイオティクスとして利用可能な乳酸菌を選別するのが今年度の一番目の課題であった。そこで、まず高濃度のヒ素に対して耐性の乳酸菌のスクリーニングを行ったところ、2000μg/ml以上の濃度に対しても耐性を持つ株が3株(As99-1, As100-2, As101-3)、1000μg/ml程度の濃度に耐性を持つ株が3株(As102-4, As105-7, As112-9)選別された。このうち、As102-4が最も高いヒ素の取り込み能を有していた。16S rDNA塩基配列を解析したところAs99-1, As100-2, As101-3はいずれもPediococcus dextricus、As102-4, As105-7, As112-9はPediococcus acidolacticusであった。一方、カドミウムと鉛に対して耐性を示す乳酸菌についても、同様の解析を行った。カドミウム耐性菌としては、Clostridium属細菌やEnterobacter属細菌が、また鉛耐性菌としては、Klebsiella属細菌が優先的に単離されたが、両方の重金属に耐性を持つ細菌としてEnterococcus faeciumを得ることができた。本細菌のMICはカドミウムが120μg/ml、鉛が800μg/mlと高く、また金属の除去活性は0.0377μg Cd/h/mg of cells、0.0460μg Pb/h/mg of cellsであった。このことは、本研究で得られたE.faeciumが、魚の内臓からこれらの重金属を除去するためのプロバイオティクスとして利用できる可能性を強く示唆している。ホーチミン市沿岸、インド東部沿岸のエビ養殖池や水路および日本の河川の65地点から水と底泥および魚体サンプルを採取した。これらのサンプルから好気条件下および嫌気条件下でMRS培地を使ってバクテリアを培養したところ、カドミウムCdと鉛Pbに対し50ppb、ヒ素Asと水銀Hgに対して100ppbの耐性バクテリア97株を見つけた。また、重金属耐性菌と毒素産生菌とを区別するため乳酸産生能を調べた。97株のバクテリアのうち、Pb,Cd,As,Hgに高耐性を示すものが、それぞれ64,20,10,3株あった。そのうち、7株は桿菌で他のすべては球菌であった。また、19株が胆汁塩(2000ppm)および酸培地(pH=3.0)で生育したが、残りは生育しなかった。これらの試験株は、MRSブイヨン培地で24時間培養した場合、産生した乳酸量は30-70mMol/lであった。16SrDNAを解析したところ、97株のうち、乳酸産生の39株は異なる9種(Enterococcus faecium, Enterococcus durans, Enterococcs dispar, Enterococcusfaecalis, Enterococcus asini, Enterococcus hirae, Bacillus sp.s, Bacillus cereus, Bacillus thuringiensis)に属す。39株のうちEnterococcus faeciumに属す19株はCd,Pb,As,Hgに耐性を有し、Enterococus faecalisに属す2株はCdに、4株はPbに耐性を有した。Enterococcus faeciumに属す株は抗生物質濃度の影響を受けるが、CdおよびPb除去能はきわめて高く、それぞれ603.5,737.5ug/l/cellと推算された。さらにプロバイオティックの特性を詳しく調べる必要がある。

本細菌のMICはカドミウムが120μg/ml、鉛が800μg/mlと高く、また金属の除去活性は0.0377μg Cd/h/mg of cells、0.0460μg Pb/h/mg of cellsであった。このことは、本研究で得られたE.faeciumが、魚の内臓からこれらの重金属を除去するためのプロバイオティクスとして利用できる可能性を強く示唆している。
亜鉛フィンガーモチーフによるDNA認識と遺伝子ターゲティング

DNA結合蛋白質の特定塩基配列への結合、およびそれに伴うDNA構造変化は転写をはじめとする様々な生体反応において重要な役割をはたしている。それゆえ、任意の塩基配列結合能を有し、さらにDNA構造変化を誘発する分子は転写制御因子としての可能性を秘めている。これまでに代表的なDNA結合モチーフの1つである亜鉛フィンガーモチーフを複数個連結させることによって、結合塩基配列の拡張が可能であることが示されてきた。本研究では、転写因子SplのDNA結合領域に存在する三つの亜鉛フィンガーを基に新規6-亜鉛フィンガー型蛋白質を創製し、これらがDNA構造に及ぼす影響について検討した。その結果、リンカーが短いSplZF6(Gly)_4では11bp隔てた二つのGCboxの両側に1分子で結合することはできず、その結合は非特異的であると考えられる。しかし、SplZF6(Gly)_7とSplZF6(Gly)_<10>の結合は特異的で、11bp隔てた二つのGCboxの両側に1分子で結合していることが示唆される。wtが2分子で結合した状態を、仮想的に最も自由度の高いリンカーを介した6-亜鉛フィンガー型蛋白質の結合状態であるとみなすと、SplZF6(Gly)_7とSplZF(Gly)_<10>の結合による位相のずれの大きさは、リンカーに起因し、リンカーが短いSplZF6(Gly)_7の方がDNAに大きな方向性の変化を誘起していることが示唆された。本研究において、新しい機能を有する新規亜鉛フィンガーペプチドが創製されたが、将来、人工遺伝子機能制御分子の開発に道を拓いたものと思われる。
ポリマー結合型エンドスタチンによる癌のターゲティング療法

腫瘍転移におけるNOの関わりについて誘導型NO合成酵素(iNOS)欠損マウスと野生型マウスを用いて解析した。また、内因性血管新生抑制物質であるエンドスタチンとNOS阻害剤の併用し、それらの抗腫瘍効果についても検討した。810週令iNOS欠損マウスと野生型マウスに、マウス大腸癌colon adenocarcinoma 38(C-38)腫瘍組織30mgを背部左右2カ所に移植個形腫瘍を作成した。マウス肺癌Lewis lung carcinoma (LLC)細胞を、4×106 cells/site、同様にマウス背部に移植し転移モデルを作成した。この腫瘍経を経時的に測定して腫瘍体積を求めた。転移は肺表面にある転移結節数および肺湿重量にて比較検討した。エンドスタチンは、当教室にてマウス横隔膜よりクローニングした遺伝子を大腸菌に発現させ精製した。腫瘍移植後7日目からエンドスタチン(50mg/kg、1日2回,s.c.)及び、NOS阻害剤であるS-methylisothiourea sulfate (180mg/kg/1日1回,i.p)を投与し腫瘍増殖を比較検討した。C-38腫瘍モデルでは、野生型マウスに比較してiNOS欠損マウスの腫瘍増殖が著明に抑制されており、野生型マウスにエンドスタチンとNOS阻害剤を併用することで、単独よりもさらなる腫瘍増殖抑制効果が認められた。LLCの肺転移モデルでは、野生型マウスはiNOS欠損マウスと比較して転移が促進されており、NOが腫瘍増殖促進効果のみならず、転移促進効果も発揮している可能性が示唆された。以上の知見より、NO産生抑制に血管新生制御療法を併用した新しい抗腫瘍療法の可能性が示された.現在、ポリマー結合型エンドスタチンの作製に成功しており、今後さらに癌組織への指向性を高めた血管新生抑制療法の確立を目指している。
中世禅林における黄山谷詩解釈史研究―五山版書入れと漢文抄との比較検討から

本研究は、宋代の詩人、黄庭堅(号は山谷)の詩集である、五山版『山谷黄先生大全詩註』・『山谷詩集注』における書入れのうち、禅僧の号等が冠された説を対象とする。これら山谷詩五山版書入れを、現存する山谷詩漢文抄、万里集九『帳中香』、月舟寿桂『山谷幻雲抄』、彭叔守仙『山谷詩集注』の説と照合・精査することにより、いかに五山版の書入れが山谷詩漢文抄に取り入れられたか、あるいは山谷詩漢文抄の説が五山版に書き入れられたのかについて検討することにより、本邦禅林における山谷詩の説の継承と展開について、山谷詩漢文抄のみならず、その前後を含めた、より長いスパンで明らかにすることを目的とする。平成30年度において、主な調査対象としたのは、西尾市岩瀬文庫蔵『山谷詩集注』における書入れである。岩瀬文庫蔵本の書入れに冠される禅僧の号が、現存する最古の山谷詩漢文抄『帳中香』の抄者である万里よりも古い年代の禅僧ばかりであるため、岩瀬文庫蔵本の書入れ時期が、現存する山谷詩漢文抄の成立よりも以前であろうことに着目した。さらにこの書入れを、現存する山谷詩漢文抄である万里集九『帳中香』、月舟寿桂『山谷幻雲抄』、彭叔守仙『山谷詩集注』と比較検討することで、いかに書入れが山谷詩漢文抄に取り入れられ、いかに展開したかを想定した。その成果を「西尾市岩瀬文庫蔵五山版『山谷詩集注』における書き入れについてー黄山谷詩漢文抄との関わりからー」の題目で、日本宋代文学学会第5回大会(5月26日、慶応義塾大学日吉キャンパス)において口頭発表し、未刊行ではあるが、論文も執筆した。本研究課題の進捗状況を、おおむね順調に進展していると判断する根拠は、下記の2点である。(1)平成30年度に実施予定であった、西尾市岩瀬文庫蔵『山谷詩集注』における書入れ調査、また山谷詩漢文抄との比較検討、口頭発表、また、論文化を果たしたためである。また、(2)平成31年度(令和元年)に実施予定であった、大東急記念文庫蔵本『山谷黄先生詩集注』書入れの調査にすでにとりかかっており、巻4までの書入れの抄写を済ませているためである。平成30年度に引き続き、大東急記念文庫蔵『山谷詩集注』書入れをはじめ、他の山谷詩五山版書入れを、現存する山谷詩漢文抄と比較検討をし、論文化したい。また、平成31年度(令和元年)は、科研費採択課題の関連するものとして、山谷詩漢文抄の一つである、彭叔守仙『山谷詩集注』における彭叔の説の傾向を論文化する予定である。

また、平成31年度(令和元年)は、科研費採択課題の関連するものとして、山谷詩漢文抄の一つである、彭叔守仙『山谷詩集注』における彭叔の説の傾向を論文化する予定である。名古屋大学文系経理課の事務補佐員として、平成30年度より雇用され、平日のみ閲覧可能の所蔵先もあって閲覧の予約が取れなかったため、想定以上に調査に赴くことができなかった。そのため、旅費が使いきれなかった。
水稲のオゾンのクリティカルレベルの評価に関する実験的研究

本研究では2週間生育させた水稲に対して9日間にわたってオゾン(0ppb、40ppb、80ppbおよび120ppb)を毎日6時間暴露し、応答するタンパク質のプロテオーム解析を行った。オゾン暴露開始から2日目に120ppbオゾン処理区の第3葉に褐色斑点が発現したが、他の処理区には可視障害の発現は観察されなかった。暴露開始から4日目に80ppbオゾン処理区の第3葉にも褐色斑点が観察された。その後、可視障害の発現は暴露日数の増加に伴って全てのオゾン処理区へ拡大すると共に、80と120ppbオゾン処理区においては上位葉(第4葉)へ可視障害の発現が進行した。しかし、40ppb処理区における可視障害の発現は第3葉のみに限定された。清浄区(0ppb)と120ppbオゾン処理区において、無作為にサンプリングしたイネ葉身からタンパク質を抽出し、二次元電気泳動を行い、プロテインシーケンサーおよび質量分析計を用いて同定した。二次元電気泳動の画像解析により清浄区(0ppb)と120ppbオゾン処理区において、各350個のタンパク質スポットが検出され、19個のタンパク質スポットに有意な変化が認められた。光合成に関与するタンパク質の発現量はオゾン暴露により有意に減少したが、アンチオキシダント生体防衛システムに関与するタンパク質の増加傾向が認められた。Pathogenesis-related(PR)タンパク質(PR5),RSOsPR10とOsPR10a/PBZ1がオゾン暴露により誘導され,PR5は低濃度オゾン(40ppb)でも誘導されたが,OsPR10a/PBZ1とRSOsOPR10は低濃度では誘導されず,高濃度(80と120ppb)で誘導されることが明らかになった。また,抗PR5抗体および抗PR10抗体を用いたウエスタンブロットによる実験でも同じ傾向にあることを確認できた。日本の代表的な水稲品種を対象に,オゾン感受性の品種間差異とそのメカニズムに関する基礎データを得ることを目的として,水稲幼苗に3段階のオゾン濃度(50,100,150ppb)を2週間連続で暴露し,可視障害の発現状況と葉中のタンパク質の変化について対象(0ppb)区と比較検討を行った。オゾンを暴露すると,若い葉よりも古い葉に可視障害が発現し,葉の老化が促進される傾向にあることがこれまでにも報告されているが,本研究においても同様の結果が得られた。これにともなってタンパク質含量も対照区より減少する傾向にあった。タンパク質の減少を定量的に検討するため,可溶性タンパク質の変化をSDS-PAGE電気泳動法で調べた結果,オゾン暴露により葉中の分子量40kDaのポリペプチドバンドが消滅する傾向にあった。また,光合成活性に直接関与するRubiscoの含有量はオゾン暴露によって減少することも明らかとなった。本研究の実験期間は2週間と非常に短い期間であったが,オゾン暴露によってRubisco量の変化が暴露の早い段階から捉えられたことから,これらの変化に関連したタンパク質の変化を特定できれば,品種間差異のメカニズム解明につながる可能性が考えられた。このため,タンパク質の電荷の違いを利用した等電点電気泳動と分子量の違いを利用したSDS-PAGEの二次元電気泳動を行った。その結果,オゾンを暴露すると対象区よりもタンパク質のスポットがうすくなる傾向が認められた。したがって,平成18年度は,マイクロアレー法およびITRAQ法を用いて,これらの変化がみられるタンパク質の同定などの詳細な解析を行う予定である。
次世代血友病治療法の開発と非ヒト霊長類を用いた前臨床研究

血友病A遺伝子治療:In vivoへのベクターの直接投与には染色体への組み込みがほとんどおこらないアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターを用い、ex vivoにて細胞への遺伝子導入し再移植する遺伝子細胞治療には染色体への組み込みが必要であるためSIVベクターを用いることとした。ヒトに近い種属の血友病モデル動物(血友病Aクローンブタ)の作製に成功した。血友病Aブタは出生後から出血傾向を示し、遺伝子治療効果判定に優れたモデル動物である。遺伝子細胞治療として、SIVベクターをもちいて間葉系幹細胞に導入し、血友病マウスへ移植し治療効果を確認出来た。血友病B遺伝子治療:マウスでの検討を終え、カニクイザルを用いた前臨床実験を遂行している。AAV8ベクターの遺伝子導入を阻害する中和抗体陽性サルでマイクロカテーテルを用いた門脈内ベクター投与を行い3頭のサルにおいて治療域に達する導入遺伝子由来FIX発現が得られ、抗AAV8抗体が存在していても遺伝子治療が可能であることが示された。血友病B遺伝子治療臨床研究に向けて作製したGMPグレードヒトFIX遺伝子搭載AAV8ベクター(GMP-AAV8hFIX)の純度および生物学的活性を検討したところ、SDS-PAGEにてGMP-AAV8hFIXの純度は極めて高く、電子顕微鏡による解析でもempty vectorの混入は低く抑えられていた。生物学的活性は血友病Bマウスを用いた検討では5x10の11乗/kgで平均58%の活性発現がえられマウス血漿中のFIX蛋白濃度とFIX活性は一致し、GMPグレードベクターの遺伝子導入活性が確認できた。血友病A遺伝子治療:In vivoへのベクターの直接投与には染色体への組み込みがほとんどおこらないアデノ随伴ウイルス(AAV)ベクターを用い、ex vivoにて細胞へ遺伝子導入し再移植する遺伝子細胞治療には染色体への組み込みが必要であるためSIVベクターを用いることとした。血友病Aブタは出生後から出血傾向を示し、遺伝子治療効果判定に優れたモデル動物であることが確認できた。非ヒト霊長類のカニクイザルを用いた血友病A遺伝子治療の前臨床実験を行うことを目的として、カニクイザルでのFVIII発現実験を開始した。既感染に基づく抗AAV抗体は、AAVベクターを用いた遺伝子導入を阻害し、遺伝子治療の重要なリミティングファクターである。抗AAV8抗体陰性のサルにおいては第IX因子遺伝子搭載ベクターを末梢静脈から投与することで治療域に達する導入遺伝子由来の第IX因子発現がえられた。しかし、低力価であっても抗AAV8抗体があるサルでは同じベクターを用いても導入遺伝子由来の第IX因子発現は得られなかった。AAV8ベクターの遺伝子導入を阻害する中和抗体陽性サルであってもマイクロカテーテルを用いた門脈内ベクター投与を行い3頭のサルにおいて治療域に達する導入遺伝子由来FIX発現が得られ、抗AAV8抗体が存在していても遺伝子治療が可能であることが示された。血友病B遺伝子治療研究は、非ヒト霊長類を用いた検討からAAVベクターを用いた遺伝子治療研究は、抗AAV抗体が存在しなければカニクイザルでも第IX因子遺伝子導入と発現はマウスよりも効率は悪いものの確立できた。同時に、既感染に基づく抗AAV抗体が遺伝子導入を強く阻害することが最大の問題であることが明らかとなった。カニクイザルでは野生型AAVに感染しAAVベクターに対する阻害活性を有する頻度が高い。ヒトもサルと同様に生活環境において野生型AAVに感染し抗体を保有する頻度が高く、既感染に基づく抗AAV抗体はAAVベクターを用いた遺伝子治療を阻害する重要なリミティングファクターであり、重要な課題である。本研究で非ヒト霊長類を用いこの抗AAV抗体の影響を回避しえる

ベクター投与法の開発が出来た意義は大きい。血友病B遺伝子治療研究に比較し血友病A遺伝子治療研究は遅れている。血友病Aモデル動物である血友病Aブタが研究に用いられるようになれば、血友病A遺伝子治療研究も進展が期待でき、血友病Aブタの確立は意義が大きい。ウイルスベクターを用いた遺伝子治療研究では、ベクター投与後の免疫反応の検討が必要となる。ベクターにより遺伝子導入された細胞への免疫担当細胞の反応(リンパ球による排除)である。この反応はマウスではみられないことであり、カニクイザルを用いる。具体的には、ベクター投与カニクイザル個体より採取したリンパ球を抗原刺激しインターフェロンの産生をELISPOTアッセイにより検討する。また、ベクターの安全性に関して、遺伝子挿入変異の影響は多数個体を用いて短期間で結果が得られるマウスを用い検討する。具体的には、100匹程度のコホートで、マウスへ高純度のベクターを低用量から高用量まで投与し1-2年観察し腫瘍発生を検討する。血友病A遺伝子治療研究のため、血友病Aブタのコロニーを確立し、遺伝子導入実験を行う。研究費は、ベクター作製のための分子細胞生物試薬・細胞培養試薬・培養用器具、免疫担当細胞の反応の検討に用いるELISPOTアッセイを行うためのサル特異的な検出試薬、血友病Aブタのコロニーを確立するため実験動物の購入や飼育費に用いる。