hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高速拡散過程とトンネルイオン化過程の非線形ダイナミクス

このモデルの特徴は稠密にサドルが分布しないため解析が比較的簡単になり、場合によっては臨界点、安定-不安定多様体と初期値集合の関係等が解析計算によって詳細に研究できる点にある。他方、カオストンネル問題に関連して幾何光学極限でカオス的挙動を示すマイクロディスクキャビティでの発振問題の研究も推進してきたが波動カオス状態(「量子カオス波動関数」)がほぼ単一モードで安定発振する事が初めて理論的に確認された。<高速拡散過程の研究>クラスター高速合金化を支配する高速拡散の素過程の詳細を解析し支配的な反応経路が存在する研究を進展させた。まだその支配過程が完全には解明されていないが、数値実験から得られた活性化エネルギーを説明できる候補はかなり絞られてきた。一方昨年度から進展させてきたアルカリハライドクラスター系の高速混晶化現象のsimulationが軌道にのり近距離力とは非常に異なる拡散過程が存在する事が明らかになってきた。特に単種クラスターでも構成イオンの半径比が大きい場合には顕著な<カオス的遍歴>現象を示す事があきらかになってきた。シミュレーションはイオン半径比が拡散を支配するという実験の大筋を説明するが実験との完全な対応を得るには更に研究を進展させる必要がある。<トンネルイオン化過程の研究>動的トンネル問題に関して漸近極限において我々が証明した基本定理''カオス的トンネル集合(我々がいうLaputa集合)がJulia集合内で稠密である''と現実の有限時間の計算の比較がカオスの理想極限の馬蹄形極限、双曲極限の場合、現実的局面である混合相空間の場合それぞれに関して対比され、その整合性が明らかになると同時に双曲極限や混合相空間の場合に特徴的に見られる多世代階層構造の数学的意味が解明された。数学的極限では見えない実際の波動関数の構成にあたって定理の有効性と限界が明瞭になった。一方、多次元障壁トンネル問題の周期的摂動モデルの研究では観測量であるトンネルスペクトルの計算を行いトンネルスペクトルは我々が主張するトンネル機構が動作する領域で従来の理論が予言するものと著しく異なる特徴的形状を持つ事が明らかになりつつある。<高速拡散過程の研究:>本年度は力の性質がはっきりしているアルカリハライド(AH)クラスターの高速混晶化過程の研究に一応のメドをつけた。AHクラスターでは表面空孔配列が異なる構造異性体に加え、体積内で空孔をもつ構造異性体(高位の異性体)がクラスターでは比較的低いエネルギーをもって安定に存在する。これらの異性体を巡る遍歴現象が動的に発生する。特に高位の異性体を巡る過程で混晶化が誘発される事が判明した。混入の活性化エネルギーが評価され1eV程度である事が分かった。この値はバルク中の拡散過程の2eVに比べその半分程度である。常温では混入速度が少なくとも$10^{12}$倍程度高速化する事が分かった。我々が関心をもつ、メソタイムスケールダイナミクスの観点からすると活性化エネルギーを与える、遷移状態とそれを乗り越える力学過程の解明が今後の大きな課題である。同時にanion-cation半径が顕著に異なるNaIの様なクラスターでは<動的ガラス状態>が現れる事が判明した。
ｉＰＳ細胞由来Ｋｉｉ　ＡＬＳ／ＰＤＣ新規病態モデルの作製と診断・治療法の確立

1)病態再現のための神経細胞-アストロサイト共培養系の確立2)iPastの機能解析新たに開発したhuman iPastについて、1iPast間を波状に伝わるCa2+ oscillation、2iPast同士が接する細胞境界部分におけるconnexin 43蛋白の高発現、3グルタミン酸の取り込み能、といった成熟アストロサイトとしての機能を確認した。健常者3名、Kii ALS/PDC患者5名のiPS細胞から誘導した各種神経系細胞についてマイクロアレイ解析を実施。分化過程を追って、かつ纏まりをもってクラスタリングがなされた。iPast群ではGFAPが高発現し、クラスタリング解析並びにPCA解析から、1)健常者群、2)Kii群3例、3)Kii群2例に分類されることが明らかとなった。加えてGO解析では、Kii ALS/PDC群においてタンパク質結合、エクソソーム、細胞外基質、細胞膜、Ca2+結合、ER関連などのキーワードが抽出された。さらに、健常者群との比較において、Kii群の1例でTransforming Growth Factor Beta 1(TGF-β1)遺伝子の発現上昇を認めた(58.6倍)。2015年に、遠藤、山中らにより、アストロサイト由来TGF-β1によるALS病態増悪についての報告がなされており(F Endo, et al. Cell Rep 2015)、Kii ALS/PDCにおいても病態の一部に寄与している可能性が示唆された。29年度が最終年度であるため、記入しない。紀伊半島南部に多発する筋萎縮性側索硬化症(ALS)とパーキンソン認知症複合(parkinsonism-dementia complex; PDC)(Kii ALS/PDC)は、地域集積性及び家族性を有し、パーキンソニズム・認知症・筋萎縮が複合して出現する特有の神経難病である。本研究課題では、これまでに存在しなかったKii ALS/PDCの生物学的モデルを作製し、生体内で生じている事象・過程を解明するための動的研究を試みる。具体的には、Kii ALS/PDC患者由来の疾患特異的ヒトiPS細胞を作成し、各種神経系細胞に分化誘導を行う。それらを用いて、異常蛋白の蓄積や各種細胞ストレスといった病態解析並びに環境因子に対する反応性、遺伝学的背景、更には生前診断バイオマーカーや新規治療薬の開発を目的とする。本年度の研究成果は以下の通り。Kii ALS/PDC患者6名(男性:3名、年齢:66-72歳(平均65.8歳)、表現型:ALS+PDC 4名、PDC 1名、Dementia 1名)の血液(単核球ないしはT細胞)よりiPS細胞の樹立を完了した。それぞれの患者からのiPS細胞の樹立効率や形態・増殖には明らかな違いは認めなかった。また、iPS細胞としての性能を確認するために、1遺伝子導入ベクター残存の確認、2多能性マーカーによる染色、33胚葉分化能の確認、4核型解析を行った。2疾患特異的iPS細胞から各種神経系細胞への分化誘導技術の確立Dualsmad inhibitionを基礎としたニューロスフェア法ないしは胚葉体形成法を用い、運動神経細胞、ドパミン産生神経細胞、海馬歯状回顆粒細胞、及びアストロサイトを誘導することに成功した。これらは、Kii ALS/PDCの疾患病態を解析するためのfirst stepとして重要な成果である。平成27年度達成目標である、1Kii ALS/PDC患者由来iPS細胞の樹立、及び2iPS細胞から各種の神経系細胞への分化誘導については達成した。それぞれの細胞種の純化については、1細胞表面マーカーによるFACS、2耐性レポーターによる薬剤選択の方法を検討している。1)神経細胞及びアストロサイト(iPast)の純化は、ほぼ100%のレベルで成功した。現在、今回開発したiPast誘導系について論文化を準備中。2)Kii ALS/PDCの病態モデルとしての解析について、複数の評価項目の内、本年度は部分的な評価に留まった。しかしながら、本疾患の病理学的病態として最も重要なリン酸化タウ(ptau)の神経細胞内蓄積の再現に成功した。ptauの分布は、細胞質内及びdendritesの中にも広がっていた。神経細胞-iPast共誘導系での評価から、ptauは主にiPastではなく神経細胞に蓄積していることがわかった。タウ蛋白の発現自体も、免染ではiPastではみられず、神経細胞のみで確認された。但し、患者脳内では、iPastにおいても著明にptauが蓄積することが知られており、iPastへのptauの蓄積様式が例えば神経細胞からの伝播によるものかなどの仮説を検証する必要がある。そのために、さらに培養期間を延長したり、過酸化水素による酸化ストレス負荷などの条件を検討していく。また、昨今類縁疾患であるGuam ALS/PDCにおいてタウ病理にかかわる新たな病態概念が報告された。PP2Aの活性が低下することで、タウのリン酸化が亢進し、ptauの蓄積が起こるというものである。そこでまず、今回誘導した神経細胞内でのPP2Aの発現を確認した。その結果、患者由来神経系細胞において、コントロール群と比較してPP2A mRNAの発現増加(2-6倍程度)を認めた。しかしながら、PP2Aの抑制シグナルであるI2PP2AのmRNAの増加(1.5-3倍程度)も併せて認め、PP2AのWestern blotではコントロール群と比較して有意な蛋白レベルの差は認められなかった。

したがって、PP2Aの蛋白発現ではなくその活性自体に異常がある可能性が示唆され、今後活性状態の解析を行う。平成28年度達成目標である、1)神経系細胞(神経細胞やグリア細胞それぞれについて)の純化には成功した。2)分化神経系細胞を用いたKii ALS/PDCの病態解析については、リン酸化タウの蓄積再現及びタウの異常リン酸化カスケードに寄与するメカニズムの一端を明らかにした。1)病態再現のための神経細胞-アストロサイト共培養系の確立2)iPastの機能解析新たに開発したhuman iPastについて、1iPast間を波状に伝わるCa2+ oscillation、2iPast同士が接する細胞境界部分におけるconnexin 43蛋白の高発現、3グルタミン酸の取り込み能、といった成熟アストロサイトとしての機能を確認した。健常者3名、Kii ALS/PDC患者5名のiPS細胞から誘導した各種神経系細胞についてマイクロアレイ解析を実施。分化過程を追って、かつ纏まりをもってクラスタリングがなされた。iPast群ではGFAPが高発現し、クラスタリング解析並びにPCA解析から、1)健常者群、2)Kii群3例、3)Kii群2例に分類されることが明らかとなった。加えてGO解析では、Kii ALS/PDC群においてタンパク質結合、エクソソーム、細胞外基質、細胞膜、Ca2+結合、ER関連などのキーワードが抽出された。さらに、健常者群との比較において、Kii群の1例でTransforming Growth Factor Beta 1(TGF-β1)遺伝子の発現上昇を認めた(58.6倍)。2015年に、遠藤、山中らにより、アストロサイト由来TGF-β1によるALS病態増悪についての報告がなされており(F Endo, et al. Cell Rep 2015)、Kii ALS/PDCにおいても病態の一部に寄与している可能性が示唆された。次年度は、本年度明らかとなったリン酸化タウの病態解析やその改善薬の探索、更には他の異常蓄積蛋白であるα-synucleinやTDP-43についても引き続き検討を進めていく。29年度が最終年度であるため、記入しない。
新素材のハイドロゲルを用いた心筋梗塞に対する心筋幹細胞治療

GFP陽性ラット由来の心筋幹細胞をラット心筋梗塞周囲巣に投与した。投与の際に細胞を温度感受性ハイドロゲル(Hg)を用いて細胞の流出を少なくする工夫をしたところ、細胞投与後4週間後の心機能では細胞のみ投与した群に比べて心機能がより改善した。組織切片および分子生物学的解析からは、Hg群で細胞の残存率が高く、また心筋や血管の再生がより進んでいた。これらのことから、徐放性ハイドロゲルの使用は、長期において心機能の改善に有用であると考えられた。心筋幹細胞培養: GFP陽性の雄性Sprague-Dawleyラット(SD-Tg(CAG-eGFP))の心臓を麻酔下に摘出。これより、心筋幹細胞を含むOutgrowth細胞を培養、これを2回継代した後、凍結保存とした。カタラーゼを混入したハイドロゲル内に得られた細胞を100μlあたり2x105個の割合で封入した。ハイドロゲル非使用群は同容量のPBSにて懸濁した。次いで雄性SDラットを麻酔下にて挿管、人工呼吸器に接続した。左開胸にて心臓を露出し左冠動脈を7-0モノフィラメント糸にて結紮、心筋梗塞を作成した。次いで心筋梗塞周囲巣に各10&#61549;Lずつ7か所、計70uLのa) PBSで懸濁した細胞、b)ハイドロジェルにて懸濁した細胞、およびc)PBSのみを投与した。細胞は3.5x105個/70uLの濃度で使用した。投与後に心機能を計測するとともに、心臓を摘出し組織化学的、分子生物学的に解析した。結果として細胞投与群でいずれのポイントでも心機能が有意に改善した。投与後1週間ではハイドロゲル使用群と細胞投与群に心機能に有意差は見られなかったが、4週間後においてはハイドロゲル使用群で術後4週間の心機能が有意に改善した。組織切片および分子生物学的解析からは、ハイドロゲル使用群で細胞の残存率が高く、また心筋マーカーおよび血管マーカーが多く発現していたことから、徐放性ハイドロゲルの使用は、長期において心機能の改善およびリモデリングの抑制に有用であると考えられた。加えて、本研究期間内において、腫瘍形成は見られなかったことから、心筋幹細胞の使用は安全であることが示唆された。投与する心筋幹細胞の準備: GFP陽性の雄性Sprague-Dawleyラット(SD-Tg(CAG-eGFP))の心臓を麻酔下に摘出。これを細かくトリミングし10cm2の培養ディッシュ上で心筋幹細胞の培養を開始した。4週間後に組織から培養された細胞(Outgrowth Cells)を採取し75cm2の培養フラスコに移動する。これを2回継代した後、凍結保存とした。ハイドロゲルへの細胞封入:カタラーゼを混入したハイドロゲル内に得られた細胞を100μlあたり2x105個の割合で封入した。ラット心筋梗塞モデル:雄性SDラットを麻酔し挿管し人工呼吸管理下におく。左開胸にて心臓に到達し冠動脈を7-0モノフィラメント糸にて結紮、心筋梗塞を作成した。次いで心筋梗塞周囲巣に各10&#61549;Lずつ5か所、計50&#61549;Lのa) PBSで懸濁した細胞、b)ハイドロジェルにて懸濁した細胞、およびc)PBSを投与した。細胞は5x105個/50&#61549;Lの濃度で使用した。現在各群数匹ずつの投与が終了しており、来年度はそれぞれ目標匹数まで投与する予定である。心機能評価:手術後第2病日に心機能を測定、これをベースラインの心機能とした。2、4,8週間後にそれぞれ心機能を測定し各群における心機能の変化を記録した。心機能は研究計画では超音波を用いる予定であったが、再現性に乏しく正確な評価が困難であると判断。小動物用のCTを用いて評価することとした。ラットを麻酔下におき、造影剤を微量シリンジポンプを用い経静脈的に投与、小動物CT装置を用い心拍同期モードにて拡張期と収縮期を撮像、心機能を評価した。現在、数匹のラットが心機能観察期間を終了し、組織試料作製済みである。来年度はこの試料の解析を行う予定である。当初の実験計画では心機能測定のために超音波装置を使用する予定であった。実際のラットを用いて超音波検査を行った結果、今回のモデルは局所の心機能回復を評価するものであり、各群における正確な心機能の測定には非常に困難を伴うことがわかり、心機能測定の方法を変更せざるを得なかった。新たな方法は小動物用CTを用いて評価する方法であるが、これまでにこの装置を使用しての心機能測定の報告がほとんど見られなかったため撮像条件の設定にやや時間を要した。このため当初の計画よりもやや遅延する部分があったが、現在のところほぼプロトコールは確立し、今後の実験はほぼ予定通り順調に進む予定である。

各群を予定匹数まで処置を行い、心機能を測定するとともに、組織解析を行う。得られた結果を学会に発表するとともに論文の執筆を行う。予定匹数に達するまで、ラットを購入しモデルを作成する。組織試料解析のための抗体およびプライマー、試薬を購入する。また学会発表および論文投稿に必要な経費を使用する予定である。
ドイツ語で「気づく」－自律学習を促進するプロジェクト授業の開発

気づきを促す仕組みづくりについて、学習過程および学習後に、学習者が何をどのように振り返るのかを可視化する方策を検討した。仮に同じ授業を受講しても、そこから何を得る(得た)のか、何を学習する(した)のかは、学習者によって異なるはずである。この仮説のもと、受講内容が同一でありながら、学習成果・学習内容・気づきが異なる場合の学習記録のあり方を考察した。その際、学習者間の比較が容易となるような学習記録となるよう心がけた。eポートフォリオ導入が進められている中、本研究でもブラウザやアプリを利用した学習記録を模索した。その中でwebブラウザおよびアプリケーションソフトウェアで編集可能なマインドマップを学習記録に用いることを試みた結果、一部で上記の目的を達成することができた。特に、マインドマップの高い自由度を活かして、学習者は自ら学び取ったことや感じ取ったことをそのまま記録することが可能であったと同時に、マインドマップの高い図解化力によって容易に全体像を把握することができ、これによって学習者間での比較検討が容易であった。課題は、ドイツ語初級クラスでは学習の記録を全てドイツ語で記録することが難しく、結果的に母語で記録することになったことである。単語や各種表現を記録することは可能であったが、学習者の感想や疑問点、課外活動などを目標言語で記述することは叶わなかった。学習者の気づきを可視化し、自身や他者もその内容を把握しやすい学習記録の方策としてマインドマップを利用することに高い意義を見出すことができた。これは当初の予定通りに進められており、今後は記録の取り方によって学習者の学習への態度や学習成果にどのような影響があるのかを分析していくことになる。一方、目標言語で「気づく」ための方策を完全に提案するに至っていない。中級ドイツ語学習者以上であれば、自身の気づきを目標言語で記録することが十分可能であることは推測できるが、ドイツ語初学者は利用可能なドイツ語語彙数が非常に限定されていることもあり、自身の気づきを十分に記録できない。学習者の「内側」で起こる「気づき」を他者が観察・分析するにはそれのメディア化が不可欠である以上、言語化(ドイツ語)以外の方策も検討する必要が出てきた。加えて、学習の記録と併せて、授業の記録のあり方についても検討する必要がある。学習者からヒアリングを行う際、すでに受講した授業や、研究者が立ち会っていない授業がヒアリングの対象となるが、すでに終了した授業がどのようなものであるのかを整理して記録するフォーマットがないことに気が付いたからである。これの開発も急務であると考えている。目標言語(ドイツ語)で気づくことは可能であり、その記録方法もマインドマップを利用することで十分目的を達成できることが明らかになってきたが、それにはすでに必要十分なドイツ語力が備わっている必要がある。したがってドイツ語初学者が目標言語で気づくことは、限られた語彙数の中でのみ可能であると言える。今後は、以上の成果を論文にまとめると同時に、学習者からのヒアリングを進め、マインドマップを利用した学習記録が学習にどのような影響を与えているのかを分析する。また、学習の記録と併せて、授業の記録のあり方も検討・開発していきたい。本研究はドイツ語学習者の「気づき」について、日本語を介さず目標言語であるドイツ語によって気づくことを促進する方策を追求するものである。これについて、これまで目標言語で気づきを得るための「仕掛け」について研究を進めてきた。その仕掛けの一つとしてICTに着目し、語学教育現場におけるICT利用方法について調査を行った。特に授業支援アプリケーションを用いた授業に着目し、授業時間内における授業支援アプリケーションの利用が学習者にどのような効果をもたらすかを中心にデータを収集してきた。なお、授業支援アプリケーションを用いた授業を展開しているドイツ語クラス数が限定されていることから、調査段階では英語教育にも対象を拡大してデータ収集を行った。前年度に学習者1人につきタブレット端末1台および授業支援アプリケーションの導入を行った高等学校の生徒を対象に、英語授業時においてICTを利用したことによる内省的な変化についてインタビューを行った。同校はICT導入1年目にあたるため、対象者はそれ以前にICTを利用した教育に親しんでおらず、それゆえICT利用前と利用後の変化に気づきやすいと判断した。インタビューは学習成績の上位グループから1名と下位グループから1名を対象に行い、研究協力者がインタビュアーとなり内容を録音した。分析方法はインタビュー分析手法の1つであるSCATを用いる予定であるため、SCAT専門家を招いて分析に関する講習を受けた。当初はドイツ語クラスに限定して研究を行う予定であったが、授業支援アプリケーションを導入しているクラス数が非常に少なかったため、対象を英語教育にも拡大することとした。その際、大学のドイツ語授業と同レベルの英語教育を実施していることが望ましいと考え、高等学校を追加研究対象とした。それゆえ高等学校の選別、英語教師への研究協力依頼などをする必要が生じ、結果としてやや遅れることとなった。

eポートフォリオ導入が進められている中、本研究でもブラウザやアプリを利用した学習記録を模索した。その中でwebブラウザおよびアプリケーションソフトウェアで編集可能なマインドマップを学習記録に用いることを試みた結果、一部で上記の目的を達成することができた。特に、マインドマップの高い自由度を活かして、学習者は自ら学び取ったことや感じ取ったことをそのまま記録することが可能であったと同時に、マインドマップの高い図解化力によって容易に全体像を把握することができ、これによって学習者間での比較検討が容易であった。課題は、ドイツ語初級クラスでは学習の記録を全てドイツ語で記録することが難しく、結果的に母語で記録することになったことである。単語や各種表現を記録することは可能であったが、学習者の感想や疑問点、課外活動などを目標言語で記述することは叶わなかった。学習者の気づきを可視化し、自身や他者もその内容を把握しやすい学習記録の方策としてマインドマップを利用することに高い意義を見出すことができた。これは当初の予定通りに進められており、今後は記録の取り方によって学習者の学習への態度や学習成果にどのような影響があるのかを分析していくことになる。一方、目標言語で「気づく」ための方策を完全に提案するに至っていない。中級ドイツ語学習者以上であれば、自身の気づきを目標言語で記録することが十分可能であることは推測できるが、ドイツ語初学者は利用可能なドイツ語語彙数が非常に限定されていることもあり、自身の気づきを十分に記録できない。学習者の「内側」で起こる「気づき」を他者が観察・分析するにはそれのメディア化が不可欠である以上、言語化(ドイツ語)以外の方策も検討する必要が出てきた。加えて、学習の記録と併せて、授業の記録のあり方についても検討する必要がある。学習者からヒアリングを行う際、すでに受講した授業や、研究者が立ち会っていない授業がヒアリングの対象となるが、すでに終了した授業がどのようなものであるのかを整理して記録するフォーマットがないことに気が付いたからである。これの開発も急務であると考えている。本年度について、高等学校生徒のインタビューデータは収集が完了しているが、比較対象としてICT未導入クラスの生徒にもインタビューを試みるつもりである。また、インタビュー対象を中等学校にも拡大する必要があるかを検討する。ドイツ語クラスに関しては本年度にインタビューを行う。これらのインタビューデータをそれぞれSCATで分析し、それらに共通する気づきの要素を見つけ出す。次年度について、インタビュー分析を完了させたのちに研究成果発表の準備に取り掛かる。具体的には著書を出版することとする。目標言語(ドイツ語)で気づくことは可能であり、その記録方法もマインドマップを利用することで十分目的を達成できることが明らかになってきたが、それにはすでに必要十分なドイツ語力が備わっている必要がある。したがってドイツ語初学者が目標言語で気づくことは、限られた語彙数の中でのみ可能であると言える。
ヒバ漏脂病に対する個体と林分の抵抗性機構の解明

地域特産樹種であるヒバの人工造林においてはヒバ漏脂病(ろうしびょう)が問題となっている。ヒバ漏脂病は、樹幹から樹脂流出が起こり樹幹変形に至る病害である。ヒバ漏脂病は病原菌の接種による再現が困難で発病機構がほとんど分からない病害であったが、本研究では新たな接種法により病理学的な個体レベルの抵抗性機構を解明する。一方、研究代表者らは野外の発病林分で強度間伐施業を実施し、無間伐林分に比べ低発病率の林分を作る実証実験に成功しており、この林分間の発病率の差異を利用して、病原菌密度に着目した林分レベルの発病率抑制要因を解明する。
青銅器銘文に於ける韻文と石鼓文の研究

従来『詩経』の成立を論じたものは、成立の不確かな他文献と比較、あるいは『詩経』の注釈における時代設定の無批判な踏襲によるもので、その結論は論証し得ない。『詩経』の成立を考える場合、第一次資料である青銅器の銘文、および『詩経』との類似が指摘されている石鼓文との比較以外に方法はないと考える。秦の作器である石鼓文と『詩経』との先後関係は、石鼓文が『詩経』を模倣したものであるとする考え方が定説化しつつある。本研究では『詩経』および石鼓文と比較しうる青銅器銘文を可能な限り収集し、『詩経』・石鼓文・青銅器銘文の三者について、押韻方法・章立て・一章の句数・一句の字数・畳詠形式の有無・主題という観点から比較検討を進めてきた。その結果、(1)石鼓文では一篇に主題が一つであったものが、『詩経』においては一篇に二つ以上の主題が混在しているものがあること、(2)『詩経』における形式的完成体である畳詠形式が石鼓文には見られないこと、(3)押韻方法および形式的に石鼓文が『詩経』詩篇より整斉さを欠くこと(4)赤塚忠が、石鼓文には同語重複、同型表現の反復が見られ、表現が一見朴訥であって石鼓文のほうが『詩経』に先立つ作品ではないかと思われるが、それは朴訥さによるものではなく、模倣者の語彙不足・表現能力の稚拙によるものだとする見解は、実は石鼓文との類似が指摘されている小雅車攻篇・吉日篇にも同語重複、同型表現の反復が見られ、両者の共通点ではあるが石鼓文が『詩経』を模倣したという根拠にはなり得ない点から、石鼓文が『詩経』を模倣したものではなく、石鼓文が『詩経』の畳詠形式に発展する前段階に位置付けられること、また西周期・春秋期の銘文には、石鼓文と比較し得る韻文が存在しないことから、石鼓文の製作が春秋期に溯らないとの結論を得た。その研究成果の一部として「石鼓文製作年代攷」を発表した。
フミン質との関係よりみた農薬類の環境動態

環境中の農薬の動態は微生物の生息場所や生息条件等の影響も受けるもので一様に扱うことは難しいが、ある時点における環境中の農薬濃度は、農薬分解菌による作用のほか、フミン質への吸着と微生物によるフミン質の分解の三者の関係によって決まると考えれば、フミン質を中心に据えた環境中での農薬の動態を記述することができるのではないかと考えている。本年度は昨年に引き続き、フミン質への農薬吸着についての検討をおこなった。水への溶解度が異なる農薬を用い、弱塩基性陰イオン交換セルロースを媒体として使用する方法により、タイプの異なるフミン質への吸着ならびに脱着に関する検討を行なった。実験より求められた分配定数は農薬の溶解度とよい相関性があり、それが小さい農薬ほど分配定数は大きくなった。また、吸着実験と脱着実験とで得られた分配係数は大きく異なることはなかった。さらに、実験より得られた分配係数はフミン質のタイプによる差は小さかった。これより、フミン質のタイプが異なっても農薬吸着を担う画分、すなわち陰イオン交換セルロース吸着画分、の吸着能には差がなく、土壌の農薬吸着能はこの画分の存在量に依存すると考えられることが指摘できた。また吸着および脱着における分配係数がほぼ等しいことは、フミン質のこの画分への吸着に化学的な結合は大きく関与していないことを意味しているとともに、フミン質が農薬のキャリアーとなりうることを実証できたと考えている。環境中の農薬の動態は微生物の生息場所や生息条件等の影響も受けるもので一様に扱うことは難しいが、ある時点における環境中の農薬濃度は、農薬分解菌による作用のほか、フミン質への吸着とフミン質の分解の三者の関係によって決まり、その関係におけるキーマテリアルはフミン質であるとの見方で現象を切り取ることもできる考えられる。そこで本研究では、フミン質をキーマテリアルとしてとらえ、環境中での農薬の動態を記述することを目的としている。言い換えれば、農薬分解菌やフミン質分解菌との作用を通して土壌中並びに水環境中での農薬の動態にフミン質はどの程度関与しているかを明かとすること、ともいえる。本年度は農薬やフミン質の微生物分解に関する検討に先立ち、フミン質への農薬吸着についての検討をおこなうことを計画していた。水への溶解度が異なる農薬4種(クロロピリホス、シマジン、フェニトロチオン、メチダチオン)を選び、弱塩基性陰イオン交換セルロースを媒体として使用する方法により、タイプの異なるフミン質への農薬の吸着ならびに脱着に関する検討を行なった(詳細はIHSS10(2000年7月)にて発表予定)。各農薬の吸着に関してみると、実験より求められた分配定数は農薬の溶解度とよい相関性があり、それが小さい農薬ほど分配定数は大きくなった。これはこれまで報告されている結果と同様であった。またこれのフミン質のタイプによる差は小さかった。一旦フミン質に吸着した農薬の脱着実験からは、溶解度が高い農薬の場合は簡単に脱着しやすいことが明かとなった。また比較的溶解度が小さい場合も、脱着後の分配係数は脱着前のそれと大きく異ならないことがわかった。これより、フミン質のタイプが異なっても農薬吸着を担う画分、すなわち陰イオン交換

セルロース吸着画分、の吸着能には差がなく、土壌の農薬吸着能はこの画分の存在量に依存すると考えられることが指摘できた。また吸着および脱着における分配係数がほぼ等しいことは、フミン質のこの画分への吸着に化学的な結合は大きく関与していないことを意味しているとともに、フミン質が農薬のキャリアーとなりうることを実証できたと考えている。環境中の農薬の動態は微生物の生息場所や生息条件等の影響も受けるもので様に扱うことは難しいが、ある時点における環境中の農薬濃度は、農薬分解菌による作用のほか、フミン質への吸着と微生物によるフミン質の分解の三者の関係によって決まると考えれば、フミン質を中心に据えた環境中での農薬の動態を記述することができるのではないかと考えている。本年度は昨年に引き続き、フミン質への農薬吸着についての検討をおこなった。水への溶解度が異なる農薬を用い、弱塩基性陰イオン交換セルロースを媒体として使用する方法により、タイプの異なるフミン質への吸着ならびに脱着に関する検討を行なった。実験より求められた分配定数は農薬の溶解度とよい相関性があり、それが小さい農薬ほど分配定数は大きくなった。また、吸着実験と脱着実験とで得られた分配係数は大きく異なることはなかった。さらに、実験より得られた分配係数はフミン質のタイプによる差は小さかった。これより、フミン質のタイプが異なっても農薬吸着を担う画分、すなわち陰イオン交換セルロース吸着画分、の吸着能には差がなく、土壌の農薬吸着能はこの画分の存在量に依存すると考えられることが指摘できた。また吸着および脱着における分配係数がほほ等しいことは、フミン質のこの画分への吸着に化学的な結合は大きく関与していないことを意味しているとともに、フミン質が農薬のキャリアーとなりうることを実証できたと考えている。
慢性閉塞性肺疾患（COPD）の息切れ対策と治療法の開発

呼吸リズムの生成には延髄腹側に存在しているpre-Botzinger complex (preBotC)とBotzinger complex (BotC)が重要な役割を担っている。本研究では呼吸困難に対する鍼刺激の効果を解明する一端として、呼吸負荷(CO2 8%)を行いその際に鍼刺激を行い2領域の影響について脳内モノアミン(ドーパミンおよびセロトニン)を用いて評価した。結果ドーパミンは呼吸負荷群32.2(SD 5.65)、鍼刺激群77.4(SD 32.6)、セロトニンは呼吸負荷群79.1(SD 34.2)、鍼刺激群144.5(SD 71.4)と鍼刺激群で有意な上昇が認められた。本研究の目的は生活習慣病である慢性閉塞性肺疾患(COPD)の労作時呼吸困難のメカニズムを解明し、その対策と治療法を開発することである。さらに、COPDの労作時呼吸困難に対しては統合医療の一つである鍼治療が有効であることが報告されているため、今回の研究ではCOPDの労作時呼吸困難に対する鍼刺激のメカニズムも同時に解明することが目的である。本研究の申請採択時に予算減額があったため、予定していた研究計画を変更する必要があったため、動物研究の他にヒトを対象とした研究も実施した(採択時の再提出用の申請書に記載)。ヒトを対象とした研究実績:申請者が行っているCOPDに対する鍼治療の臨床試験(UMIN000008934)において、通常治療群(薬剤、酸素療法等)と鍼治療群(鍼治療+通常治療)を比較して労作時呼吸困難とQoLについて検討を行っている。まだ、最終的に試験が終了をしていないため現状の結果では、労作時呼吸困難(6分間歩行試験後のBorg scale)では通常治療群(14例)ではBase line 5.5±2.1(SD)から3ヵ月後5.3±2.8(SD)であり、鍼治療群(13例)ではBase line 5.7±2.3(SD)から3ヶ月後2.5±1.7(SD)であった。動物を対象とした研究実績:動物を対象とした研究については、本実験研究を実施するにあたり明治国際医療大学での研究を行う予定としていたが、当該年度において実験室の使用体制が整わず外部からの受入が出来なかったため、動物実験について準備として綿密なプロトコル作成を行った。本研究の申請採択時に予算減額のため予定していた研究計画を変更する必要があったため、動物実験の他に人を対象とした研究も実施している(採択時の再提出用の申請書に記載)。ヒトを対象とした研究実績:申請者が行っているCOPDに対する鍼治療の臨床試験(UMIN000008934)において、通常治療群(薬物治療や在宅酸素療法実施等)と鍼治療群(通常治療群+鍼治療)を比較して労作時呼吸困難とQoLについて検討を行っている。H27年度は前年度に引き続き症例の集積を行っており、最終的に試験が終了していないため現状の結果では、労作時呼吸困難(6分間歩行試験後の修正Borg scale)では通常治療群(17例)Baseline 5.4±3.2(SD)から1年後5.8±3.5(SD)と変化が見られなかったのに対して、鍼治療群では(17例)Baseline 5.6±2.8(SD)から1年後2.6±1.9(SD)と改善傾向を示していた。目標症例数は40例のため、今年度も引き続き症例の集積を行って行く予定である。動物を対象とした研究実績:昨年度12月まで実験施設(明治国際医療大学)と代表研究者との間で共同研究締結が上手く進まなかったが、12月以降実験が開始出来たため、現在実験を進めている。実績としては、電気生理学的手法を用いて、ラットの呼吸中枢(Botzinger complex)より神経活動を計測しており、現在はコントロール群の集積を行っている。本年度はさらに実験を進めて薬剤投与群(βエンドルフィン)および体制刺激群(鍼刺激)との比較を行う。当該研究において、ヒトを対象とした臨床試験は進めているが、症例集積に際して少し滞りが認められている。目標症例数は40例であるが、現段階では35例がエントリーされているため、残りの症例数も今年度に確保していく予定である。動物を対象とした研究では実験施設との間で共同研究締結が上手く進まなかった事が要因である。しかし、昨年度12月より実験が開始出来たため現在は実験を進める事が出来ている。今年度はその後れを取り戻すべく、急ピッチで実験を実施している。そのため、本研究では2つの研究手法においてBotCおよびpreBotCの機能を明らかにするために実験を実施した。1つめの研究としてin vivoにて、これらの領域の活動電位を取るためにガラス電極を挿入しニューロンの活動を記録した。しかし、これらの領域が延髄腹側に存在しているため実験手技面において難易度が高く、研究期間内にニューロンの活動電位を得ることが困難であった。そのため、同時進行で2つめの研究を実施しており、呼吸負荷時(CO2負荷)に鍼刺激を行いこの領域の活動を神経伝達節物質(サブスタンスP、セロトニンおよびドーパミン)の動態を解明するために高速液体クロマトグラフィー法にて観察を行った。その結果、一定の成果を得るに至った。一方、当初予定をしていたサブスタンスPの解析に関しては、微量であったためか今回の実験系では同定が困難であった。

呼吸リズムの生成には延髄腹側に存在しているpre-Botzinger complex (preBotC)とBotzinger complex (BotC)が重要な役割を担っている。本研究では呼吸困難に対する鍼刺激の効果を解明する一端として、呼吸負荷(CO2 8%)を行いその際に鍼刺激を行い2領域の影響について脳内モノアミン(ドーパミンおよびセロトニン)を用いて評価した。結果ドーパミンは呼吸負荷群32.2(SD 5.65)、鍼刺激群77.4(SD 32.6)、セロトニンは呼吸負荷群79.1(SD 34.2)、鍼刺激群144.5(SD 71.4)と鍼刺激群で有意な上昇が認められた。当該研究において、ヒトを対象とした研究は臨床試験を通して着実に実施している。本試験の目標症例数は40例で設計されており現在のエントリー数は27例であるが、今後脱落も予想されるため残り15例程度の集積を見込んでいる。動物研究について、実施施設である明治国際医療大学での実験室の使用体制が整わず外部からの受入の時期が大幅にずれこんでしまったため、準備として綿密なプロトコル作成を行った。今後の研究方策であるが、ヒトを対象とした臨床試験は昨年度に引き続き症例の集積を行って行く。その際に対象者が増えるように多方面への呼びかけを行う。試験終了となれば最終解析を行い、COPD患者の労作時呼吸困難の要因を統計学的手法を用いて、呼吸困難の対策を検討する。動物を対象とした研究では、電気生理学的手法を用いて、ラットの呼吸中枢(Botzinger complex)からの神経活動を計測しており、現在はコントロール群の集積を行っているため、今後は薬剤投与群(βエンドルフィン)および体制刺激群(鍼刺激)との比較を行うとともに、同部位からサブスタンスPなどの物質を測定して、呼吸困難への対策を検討する。鍼灸学今後の研究の方策であるが、ヒトを対象とした研究は昨年度と同様に臨床試験の実施を行い、多くでも対象者が増えるように多方面目の呼びかけを行う。試験の終了となれば最終解析を行い、COPD患者の労作時呼吸困難の要因などを統計手法を用いて実施して、呼吸困難の対策を検討する。また、動物研究については、今年度より実験施設の受け入れ体制が整ったため、現在動物倫理委員会へ研究計画書の提出を行った。審査終了後より実験の開始を行い、当初予定していた、呼吸困難における呼吸中枢の影響を電気生理学的手法を用いた実験によりメカニズムを明らかにするとともに、呼吸中枢における神経伝達物質の影響について検討を行う予定である。本研究は当初より2年計画で実施する予定であったが、昨年度も実験施設との共同研究締結が進まず、実験が開始出来なかったが、昨年度の12月より共同研究の締結が完了したため実験を進める事が可能となった。今後は実験が順次進むため、実験に必要な機材、薬品、解析カラム、動物の購入が発生する。本研究は当初より2年計画で実施する予定であったが、昨年度は動物実験施設の使用体制が整わず、受け入れが困難であったため、実験の準備としてプロトコル作成を行っていた。今年度は実験施設の利用が出来るようになったため、当初予定をしていた動物実験を開始するため、実験に必要な機材や動物の購入等が発生する。使用計画については、本研究は呼吸困難の中メカニズムの解析を中心とした研究であるため、動物実験を実施する際の動物(ラット)や薬品類(麻酔、オピオイド、拮抗薬)、実験器具等の消耗品の購入が必要となる。
非局所的な線形・非線形光学応答の理論

非局所応答理論の応用として以下の問題を研究し、個々に述べられているような成果を得た.(1)半導体微粒子集合系の共鳴光学応答を「粒子数・配置方法・サイズ・入射光の方向と偏り」の関数として詳しく調べ、サイズ量子化準位の輻射補正を含む形で応答スペクトルを計算し、その物理的解釈を与えた.特に輻射寿命のサイズ依存性に関して孤立原子から1-3次元周期配列におよぶ範囲の系について非相対論的QEDと同じ結果を得た.(2)この計算を更に発展させて試料近傍の近接場強度分布やそこにプローブがあるときの信号強度の計算を行った.これは共鳴フォトンSTMの理論の基礎になる結果で既に「プローブ位置に敏感な共鳴エネルギー変化を与える配置共鳴効果」や「反射モード測定において電気双極子遷移と多重極遷移が同程度の強度で現れる選択則消失効果」等が見いだされている.(3)半導体薄膜の励起子・励起子分子遷移をポンプする光学的シュタルク効果の計算では,膜厚dで決まるサイズ量子化準位間の遷移に対応したさまざまなスペクトル構造がdの増大にともなって波数選択則を満たす領域に主な構造が集中して行く様子を導出し,非線形スペクトルのサイズ変化を光波長に比べて試料サイズが小さい領域から大きい領域まで合理的に与えた.(4)メスバウアー共鳴回折の非局所理論的定式化を行った.(5)半導体・絶縁体界面の2次元的電子バンド間の遷移による共鳴2次高調波発生の理論を厚さ方向の長波長近似と2次元周期性に基づいて非局所理論的に定式化した.非局所応答理論の応用として以下の問題を研究し、個々に述べられているような成果を得た.(1)半導体微粒子集合系の共鳴光学応答を「粒子数・配置方法・サイズ・入射光の方向と偏り」の関数として詳しく調べ、サイズ量子化準位の輻射補正を含む形で応答スペクトルを計算し、その物理的解釈を与えた.特に輻射寿命のサイズ依存性に関して孤立原子から1-3次元周期配列におよぶ範囲の系について非相対論的QEDと同じ結果を得た.(2)この計算を更に発展させて試料近傍の近接場強度分布やそこにプローブがあるときの信号強度の計算を行った.これは共鳴フォトンSTMの理論の基礎になる結果で既に「プローブ位置に敏感な共鳴エネルギー変化を与える配置共鳴効果」や「反射モード測定において電気双極子遷移と多重極遷移が同程度の強度で現れる選択則消失効果」等が見いだされている.(3)半導体薄膜の励起子・励起子分子遷移をポンプする光学的シュタルク効果の計算では,膜厚dで決まるサイズ量子化準位間の遷移に対応したさまざまなスペクトル構造がdの増大にともなって波数選択則を満たす領域に主な構造が集中して行く様子を導出し,非線形スペクトルのサイズ変化を光波長に比べて試料サイズが小さい領域から大きい領域まで合理的に与えた.(4)メスバウアー共鳴回折の非局所理論的定式化を行った.(5)半導体・絶縁体界面の2次元的電子バンド間の遷移による共鳴2次高調波発生の理論を厚さ方向の長波長近似と2次元周期性に基づいて非局所理論的に定式化した.半導体超微粒子の光学応答を(A)1個の微粒子球のサイズ(半径R)依存性と(B)サイズの決まった微粒子をいろいろに配列したときの粒子数および配列依存性,に分けて非局所理論により計算した.(A)についてはサイズ量子化エネルギーと誘起分極の自己相互作用の相対的な重みがRの変化とともに移りかわり,それが応答スペクトルに反映する様子を詳しく調べた.第1ピークの幅はRを大きくして行くと,QEDで知られている長波長近似の値(R^3に比例する)から次第にずれて行く.また,第1量子化準位を励起したときの内部電場のサイズ依存性を計算し,Rに対して共鳴的な増大を示す一連のピークを得た.各ピークに対応する電場の空間構造はみな違っており,ポンプ・プローブなどの非線形光学過程の中間状態として大きな信号強度に寄与するだけでなく,各ピークが異なる共鳴非線形過程を引き起こし得るという,非局所理論ならではの,従来知られていなかった興味深い予測を得た.(B)については,サイズ量子化準位を1つだけ(x,y,z方向の分極の縮退はある)もつような同一の超微粒子(球,半径R)を1,2,3次元的に並べたときの共鳴散乱スペクトルを計算し,粒子数Nと配列の仕方に対する依存性を調べた.粒子間の双極子・双極子相互作用と励起状態間の(光を媒介とする)遅延相互作用を対角化することによって,光学応答が定まるが,その中には輻射場との相互作用による準位のずれとぼけ(自然放射の寿命幅)が含まれる.このずれとぼけをNの関数として求めると,Nに比例して増大する領域(N小)から飽和する領域(N大)まで連続的に追跡できる.(N小の領域のぼけはQEDから導かれる値と一致している.)これに対応するスペクトル(無限遠での電場強度を入射エネルギーの関数として表したもの)は入射光・観測光の向きと偏光により大きく変化する.1次元配列では1波長程度のサイズまで並べると,波数保存則を反映するような傾向が見え始める.非局所応答理論の応用により、以下の諸問題を研究した.[1]半導体超微粒子を0-3次元に配列した系の共鳴応答を調べ,各サイズ量子化準位の輻射補正のサイズ変化を明らかにした.

誘起分極と内部電場の大きさと空間分布も同時に計算し,ある特定のサイズと振動数(エネルギー)に対して特定の空間分布を持つ成分がサイズ共鳴増大することを示した.これは微粒子系に限らず,一般に全てのメゾスコピック系に期待されることがわかった.更にこの計算結果を用いて微粒子系の近接電磁場の分布を計算し,それぞれの共鳴に特徴的な分極密度の空間分布を反映した近接電磁場分布を得た.これは目下注目を集めている走査型近視野顕微鏡(フォトンSTM)において理想的な超高分解能チップがみる電磁場分布に対応しており,今後の理論的検討の基礎になるデータである.[2]メスバウアー共鳴回折の理論を定式化し,原子核の共鳴エネルギーにたいする輻射補正(シフトおよび幅)を導く方程式を求めた.有限の放射寿命幅を与える結晶試料のモデルとして,2次元結晶面をN枚積み重ねたものを考え,Nおよび幾何学的配置を変えたときの放射寿命幅の変化を数値的に計算している.[3]半導体・絶縁体の界面電子状態による共鳴SHG(2次高調波発生)の理論を定式化した.従来の方法と違って,界面部分の電磁場に対する境界条件は要らない形に定式化されている点がこの非局所的な方法の利点である.面内の並進対称性と長波長近似を用いることにより,問題を3元連立2次方程式を解くことに帰着させることが出来た.界面バンドの分散や遷移行列要素の波数依存性はすべて係数の中に含まれる.現在適当なバンドモデルを用いて,SHG強度の入射光エネルギー依存性を数値計算している.[4]CuClの薄膜に対する3次非線形応答(ポンプ光存在下でのプローブ光応答の変化)の計算を従来より厚い膜厚まで実行できるようになった.これは共鳴条件の詳しい検討により不要な非線形項をより分けて無視することが可能になったため,数値計算が大幅に簡略化されたためである.この結果応答スペクトルの形は,以前代表者が使った理論の結果と非常によく似たものとなり,理論を第1原理的に改良しても厚い膜にたいする実験と理論の不一致は改良されないことがわかった.不一致の原因は理論側よりむしろ実験側にある(例えば,薄膜が一様でなく面欠陥を含んでいるなど)可能性が高いと考えられる。非局所応答理論を用いて以下の問題を研究した.[1]半導体薄膜のポンプ・プローブ分光(光学的シュタルク効果)の計算を行い,膜厚dの増大にともなって電子遷移における波数選択則が次第に明瞭になる様子,非線形電子遷移の中間状態で共鳴か非共鳴かに依存したスペクトルのシフトおよび幅の増大が起こること,さらに非線形スペクトルに単純な2光子吸収スペクトルも重なって現れること,シュタルクシフトの向きは励起子ポラリトン分散曲線の非線形変調の形から簡単に指定されることなどを明らかにした.また,以前代表者が用いた誘電関数の非線形変化のモデルと本理論の比較を行い,解析的によく対応がつくことを示した.[2]これまで調べてきた半導体微粒子系の光学応答の計算を拡張して,フォトンSTMのモデル計算を始めた.サンプルとプローブ端を半導体微粒子の集合としてモデル化し,その近接電磁場の強度分布と,「プローブ端に誘起される分極が遠くにつくる電磁場」で定義される信号強度とを計算した.分解能を上げることと信号強度をなるべく落とさないことを目的として共鳴条件下での測定に注目している.
ヒトiPS細胞由来網膜オルガノイド形成過程におけるNMNAT1の機能解析

本研究は遺伝性網膜変性疾患・レーバー先天性黒内障(LCA)の原因遺伝子であるNMNAT1の機能不全が変性をもたらすメカニズムを、ヒト網膜オルガノイド形成を通して明らかにする事を目的としている。本年度は以下の研究成果を挙げた。【1】CRISPR/Cas9を用いたNMNAT1ノックアウトiPS細胞の樹立当初の研究実施計画に基づきCRISPR/dCas9KRABによるDox誘導性NMNAT1ノックダウンiPS細胞の樹立を試みた。NMNAT1転写開始点をターゲットとしたgRNA/dCas9KRAB発現プラスミドを作製したが、十分なノックダウン効率を有する細胞を得られなかった。この結果を踏まえ、CRISPR/Cas9によるNMNAT1ノックアウトiPS細胞の樹立を行った。gRNA/Cas9/EGFP発現プラスミドを作製、導入後、EGFP陽性細胞を回収し、genomicPCR、RT-PCRによる解析の結果、NMNAT1のノックアウトを確認した。【2】網膜細胞種毎の細胞内NADレベルの測定NMNAT1機能不全が細胞内NADレベルに与える影響を明らかにするために、マウス網膜を用いNmnat1発現阻害時のNADレベルの比較研究を進めた。当初予定していたHPLCによる解析ではなく、細胞内コンパートメント(細胞核、細胞質、ミトコンドリア)毎にNADレベルを捉える事のできるNADセンサー発現プラスミドを入手し、FACS、イメージングによる解析を進めた。Nmnat1発現阻害により生じる網膜細胞死に先立ち、細胞核内特異的にNADレベルが低下している事を見出した。また、CD73抗体により網膜細胞を視細胞系列、非視細胞系列に分離して解析を行なった結果、非視細胞系列と比較し視細胞系列では細胞核内NADレベルが低いことが見出された。本年度は、“網膜オルガノイド誘導に用いるNMNAT1ノックアウトiPS細胞の樹立"および“網膜細胞内種毎の細胞内NADレベルの測定"を中心に研究を進めた。NADレベルに関する研究では、細胞内コンパートメント毎のNADレベルがNmnat1発現抑制時にどのように変動をするのかを捉える事ができた。一方、iPS細胞樹立においては、研究開始当初、研究実施計画に基づき、NMNAT1転写開始点をターゲットとしたgRNA/dCas9KRAB発現プラスミドを作製し、ノックダウンiPS細胞の作製を試みた。しかし、十分にノックダウンできる細胞を得られなかった。そこで、研究計画を変更し、NMNAT1ノックアウトiPS細胞の樹立を行なった。このため、やや遅れていると言える。現在、NMNAT1ノックアウトiPSC細胞株のクローニングを進めている。今後はホモ接合型NMNAT1ノックアウトiPSC細胞を得て、網膜オルガノイドへの誘導実験を行う。網膜形成過程において、複数のタイムポイントで組織学的解析による細胞死や細胞分化の評価を行う。また、遺伝子発現変動やヒストンアセチル化レベルに着目し、ゲノムワイドに解析を進める事で、変性を引き起こす新規因子の探索を行う予定である。

今後はホモ接合型NMNAT1ノックアウトiPSC細胞を得て、網膜オルガノイドへの誘導実験を行う。網膜形成過程において、複数のタイムポイントで組織学的解析による細胞死や細胞分化の評価を行う。また、遺伝子発現変動やヒストンアセチル化レベルに着目し、ゲノムワイドに解析を進める事で、変性を引き起こす新規因子の探索を行う予定である。本年度は研究の進捗状況がやや遅れ、予定していた実験を行うことができず、次年度使用額が生じた。この結果を踏まえ、平成30年度に行えなかった研究と併せて、研究実施計画に記載した平成31年度分の研究を進めていく予定である。