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落葉木本植物の春の成長時における冬期貯蔵リンの重要性の解明

落葉木本植物では落葉前に葉から様々な栄養素を回収し、冬期の貯蔵を経て春に再転流することで、貴重な栄養素を効率的に利用していることが知られている。多量必須栄養素であるリンの春の成長時における冬期貯蔵リンの利用動態とその重要性は明らかにするために、本研究では落葉木本植物ポプラの冬期のリンの貯蔵分子であるイノシトール6リン酸(IP6)という有機リン酸化合物を分解する酵素に着目し、酵素の同定と、IP6分解酵素の発現抑制形質転換体、すなわち貯蔵リン利用できない樹木の作出をとおして、開芽時の個体内の貯蔵リンの成長への寄与と季節的なリン循環の重要性を明らかにする。当該年度において、冬期貯蔵リンが分解・再利用されると考えられる春に働くIP6分解酵素の候補を絞り込むために、野外と実験室内で四季を再現した短縮周年系のポプラを用いて継時的なRNA-seq解析を行い、野外・実験室内系で共通した季節的な発現変動を示す遺伝子群を同定した。IP6は種子のリン貯蔵形態であることが知られており、シロイヌナズナなどにおいてIP6分解酵素が同定されている。これらの既知のIP6分解酵素との配列比較から得たポプラにおけるホモログ遺伝子のうち、RNA-seq解析の結果から、開芽前に野外・実験室内ポプラにおいて発現が上がる遺伝子群を抽出しIP6分解酵素候補遺伝子を得た。これらの候補遺伝子についてクローニングを進め、そのタンパク質の機能解析と形質転換体作成を進めている。当該年度において、野外・実験室内短縮周年系のRNA-seq解析が完了し、シロイヌナズナなどにおける既知のIP6分解酵素遺伝子との配列比較から、ポプラ(Populus alba)におけるIP6分解酵素遺伝子候補を得て、タンパク質機能同定や発現抑制形質転換体作成に向けたクローニングを進めた。野外・実験室内短縮周年系のRNA-seq解析から得られた季節発現変動遺伝子のデータは、実験室内短縮周年系が遺伝子発現レベルでどの程度野外を再現できているのかを明らかにし、本研究が着目しているリン転流以外の樹木の季節現象の研究についても応用できる可能性を示した。一方で今後の研究を進めるにあたり、当初計画していたPopulus albaは形質転換体の作成効率がやや低いため、より形質転換体作成効率のよいPopulus tremula L.とP. tremuloides Michxの交雑種のクローンT89系統を用いることとし計画を進めている。当該年度の成果によりポプラにおいて春に発現の上昇するIP6分解酵素遺伝子候補が見出された。今後は候補遺伝子について短期落葉-開芽系のポプラを用いた下記の実験を行う。1冬期のリン貯蔵分子であるIP6分解酵素の機能同定:P6分解酵素をベンサミアナタバコを用いたタンパク質合成系で合成し、in vitroでIP6分解能の測定を行う。2IP6分解酵素発現抑制形質転換体の作出:1と並行して、IP6分解酵素候補遺伝子について、CRISPR-Cas9による発現抑制形質転換体の作成を行う。得られた形質転換体について、実験室内短期落葉-開芽系を用いて開芽時における候補遺伝子の発現量・タンパク質量・IP6濃度の測定を行い、効率よく発現が抑制された形質転換個体を選抜し、挿木により必要個体数確保して以下の実験に用いる。3開芽時の成長における貯蔵リン・土壌リンの寄与の評価:2で得られたIP6分解酵素発現抑制形質転換体を用いて、開芽時の成長における貯蔵リンの重要性を評価する。野生型のポプラと形質転換体それぞれを、実験室内系において培養し、休眠期から開芽時にかけてIP6・無機リン酸・有機リン酸の測定と、開芽後の新しい枝葉の成長量を定量する。これにより算出された貯蔵リン由来の利用可能なリン量の減少が、開芽後の成長にどのような影響を与えるのかを明らかにする。また開芽時における土壌のリン条件を調整することで、リン充分条件時とリン欠乏時における野生型・形質転換体ポプラの成長と個体内リン濃度の比較を行う。4RNA-Seqによる個体内リン応答変化の解析:実験室内系を用いてリン十分条件・欠乏条件下で野生型と形質転換体ポプラを培養し、開芽時の各組織のRNAseq解析を行うことで、樹木が貯蔵リンに依存できなくなった場合にどのように応答し、成長を補うのかを明らかにする。

これらの既知のIP6分解酵素との配列比較から得たポプラにおけるホモログ遺伝子のうち、RNA-seq解析の結果から、開芽前に野外・実験室内ポプラにおいて発現が上がる遺伝子群を抽出しIP6分解酵素候補遺伝子を得た。これらの候補遺伝子についてクローニングを進め、そのタンパク質の機能解析と形質転換体作成を進めている。当該年度において、野外・実験室内短縮周年系のRNA-seq解析が完了し、シロイヌナズナなどにおける既知のIP6分解酵素遺伝子との配列比較から、ポプラ(Populus alba)におけるIP6分解酵素遺伝子候補を得て、タンパク質機能同定や発現抑制形質転換体作成に向けたクローニングを進めた。野外・実験室内短縮周年系のRNA-seq解析から得られた季節発現変動遺伝子のデータは、実験室内短縮周年系が遺伝子発現レベルでどの程度野外を再現できているのかを明らかにし、本研究が着目しているリン転流以外の樹木の季節現象の研究についても応用できる可能性を示した。一方で今後の研究を進めるにあたり、当初計画していたPopulus albaは形質転換体の作成効率がやや低いため、より形質転換体作成効率のよいPopulus tremula L.とP. tremuloides Michxの交雑種のクローンT89系統を用いることとし計画を進めている。当該年度の成果によりポプラにおいて春に発現の上昇するIP6分解酵素遺伝子候補が見出された。今後は候補遺伝子について短期落葉-開芽系のポプラを用いた下記の実験を行う。1冬期のリン貯蔵分子であるIP6分解酵素の機能同定:P6分解酵素をベンサミアナタバコを用いたタンパク質合成系で合成し、in vitroでIP6分解能の測定を行う。2IP6分解酵素発現抑制形質転換体の作出:1と並行して、IP6分解酵素候補遺伝子について、CRISPR-Cas9による発現抑制形質転換体の作成を行う。得られた形質転換体について、実験室内短期落葉-開芽系を用いて開芽時における候補遺伝子の発現量・タンパク質量・IP6濃度の測定を行い、効率よく発現が抑制された形質転換個体を選抜し、挿木により必要個体数確保して以下の実験に用いる。3開芽時の成長における貯蔵リン・土壌リンの寄与の評価:2で得られたIP6分解酵素発現抑制形質転換体を用いて、開芽時の成長における貯蔵リンの重要性を評価する。野生型のポプラと形質転換体それぞれを、実験室内系において培養し、休眠期から開芽時にかけてIP6・無機リン酸・有機リン酸の測定と、開芽後の新しい枝葉の成長量を定量する。これにより算出された貯蔵リン由来の利用可能なリン量の減少が、開芽後の成長にどのような影響を与えるのかを明らかにする。また開芽時における土壌のリン条件を調整することで、リン充分条件時とリン欠乏時における野生型・形質転換体ポプラの成長と個体内リン濃度の比較を行う。4RNA-Seqによる個体内リン応答変化の解析:実験室内系を用いてリン十分条件・欠乏条件下で野生型と形質転換体ポプラを培養し、開芽時の各組織のRNAseq解析を行うことで、樹木が貯蔵リンに依存できなくなった場合にどのように応答し、成長を補うのかを明らかにする。
児童・生徒の教室用机・椅子の検討

普通教室用机・椅子を小・中学生が使用した場合の号数変化による着座時の学習者の意識と身体的変化を明らかにするために,高さの異なる3種類の机・椅子を使用した。予備調査として実験では大学生を対象に,アンケートによる学習者の意識の変化と,体圧分布計測システムを使用した体圧分布の変化,唾液アミラーゼモニターを使用したストレス反応の変化,フリッカー値計測器を用いた疲労度の変化,超音波双方向血流計を用いた血流速の変化,簡易型脳波測定器を用いたα波とβ波の脳波の測定を行った。その結果, 1号だけ低い高さの机・椅子を使用したときに,疲労度が高くなることがわかった。大学生15名(男性11名,女性4名)を対象にして,普通教室用木製机・椅子の使用時の動作分析を行った。被験者の身長から割り出した適正な机・椅子の高さ(適と略す)を基準とし,その高さから1号だけ高い高さ(高と略す)と,1号だけ低い高さ(低と略す)の机・椅子を使用し,この3段階に高さを変えて実験を行った。学校での学習場面を想定して,15分間文字を書くという着座時の動作を3段階の高さ毎に被験者に行ってもらい,机上面に貼付した体圧分布測定システムで着座時の体圧分布の変化を測定した。また,筆記作業直後の休憩時間に,使用した机・椅子についてアンケートによる意識調査を行った。この実験の結果,低・適・高のすべての机・椅子の高さにおいて,机上面の荷重分布重心の移動距離は左右方向の方が前後方向よりも常に100mm以上の大きい値を示した。過去の実験結果では,座面では前後方向の移動が大きかったのに対し,今回の机上面では左右方向の移動で大きくなった。また,適正な机・椅子を使用した場合,他の高さと比べて前後・左右方向の重心の移動距離が大きい値を示した。机上面の体圧分布を左右の2つのタイルに分割し,それぞれのタイルにかかる荷重値を分析した結果,左腕の荷重値は机・椅子の高さが高くなるにつれて減少を示したのに対し,右腕の荷重値では大きな変化はみられなかった。アンケートによる意識調査では,椅子の高さについて,適と高では「ちょうど良い」と回答する人が多く,低は明らかに「とても低い」と意識されていることがわかった。また,机の高さについては,低から高へ順に「とても低い」から「ちょうど良い」へ意識の変化がみられた。高さの違いによる主観的疲労度についての回答では,適を使用したときに最も疲労度が低く,低のときに疲労度が高く回答されていた。大学生18名(男性9名,女性9名)を対象にして,机・椅子の号数変化による着座時の学習者の意識,ストレス反応,疲労度および血流速の変化を測定した。被験者の身長から割り出した適正な机・椅子の高さ(適と略す)を基準とし,その高さから1号だけ高い高さ(高と略す)と,1号だけ低い高さ(低と略す)のスチールパイプ製の机・椅子を使用し,この3段階に無作為に高さの順序を変えて実験を行った。また,20分間文字を書くという着座時の作業を3段階め高さ毎に被験者に行ってもらい,各作業の直前と直後に着座状態で,唾液アミラーゼモニターを使用して学習者のストレス反応を計測し,同時にフリッカー値測定器を用いて疲労度を計測した。また同時に,超音波双方向血流計を使用して足の内果近くの後脛骨動脈の血流速の変化を計測した。また,各作業後の10分間の休憩時間内に,使用した机・椅子についてアンケートによる意識調査を行った。机・椅子の高さの違いによって学習者に影響が出てくるかを検証するために,一元配置の反復測定による分散分析を行った。その結果,机・椅子の高さの違いによる唾液アミラーゼ値の有意差は特にみられなかった。一方,作業直前と直後のフリッカー値の差を比較した場合は,高と低の間に危険率5%以下で有意差がみられ,各作業後の値を比較した場合は,高と低の間に危険率5%以下で有意差がみられ,高と適でも危険率10%以下で有意差がみられた。すなわち,低の机・椅子でほ,適や高と比べ疲労度が高いことが明らかになった。また,机・椅子の高さの違いによる最高血流速の値では有意差はみられなかったが,作業直前と直後の平均血流速の差を比較した場合は,高と低の間に危険率10%以下の有意差がみちれ,低のときに平均血流速が最も速くなっていたことがわかった。また,アンケートによる意識調査の結果から,主観的疲労度は低の場合に最も高く,適と高の場合に少ないことがわかった。

小・中学生を対象とする実験の予備調査として,大学生20名(男性10名,女性10名)を対象にして,机・椅子の号数変化による着座時の学習者の脳波測定によるストレス反応と意識の変化を測定した。被実験者の身長から割り出した適正な机・椅子の高さ(適と略す)を基準とし,その高さから1号だけ高い高さ(高と略す)と,1号だけ低い高さ(低と略す)のスチールパイプ製の机・椅子を使用し,この3段階で無作為に高さの順序を変えて験者を行った。被験者には,電極配置法によって定められている両後頭部(2カ所)と左耳朶(1カ所)に電極を取り付け,簡易型脳波測定器を使用して1秒毎に3.030.0Hzの周波数帯域の脳波を測定した。文字を書くという5分間の着座作業と安静にしている5分間の着座状態を3段階の高さ毎に被験者に行ってもらい,この後の10分間の休憩時間内に,使用した机・椅子についてアンケートによる意識調査を行った。机・椅子の高さの違いによって学習者に影響が出てくるかを検証するために,一元配置の反復測定による分散分析を行った。その結果,リラックスしている状態を示すα波(713Hz)では,書き取り時に机・椅子の高さの違いによる有意差が危険率10%でみられ,特に高でα波が多いことがねかった。一方,安静状態ではα波の有意差はみられなかった。また,緊張している状態を示すβ波(1723Hz)では,書き取り時と安静時の両方で,高さの違いによる有意差が危険率10%でみられ,特に高でβ波が多いことがわかった。また,アンケートによる意識調査の結果から,机・椅子それぞれの高さの感じ方は,机・椅子ともに適と高はちょうど良いという意識に対し,低は低いと意識されている結果が出た。主観的疲労度ついても,高の机・椅子が最も疲労度が低く,低の時に疲労度が高く,特に臀部と肩の部位で高いことがわかった。
健康機能性を有する食用野生植物資源についてのブータン王国における現地調査

2008年10月にブータン王国の南西部および北西部の13か所、2009年5月に東部および南東部の農村8か所において、さらに2010年5月に南部および西部の7か所において食用野生植物の利用状況に関する調査を実施した。この結果、2005年から2007年までに実施してきた調査結果から累計して、種子植物で60科172種、シダ植物で6科18種の植物種が利用されていることが明らかになった。現地で利用される食用野生植物の中には健康効果が信じられているものもあった。2008年10月1429日にブータン王国南部2県8カ所、西部2県2カ所、北部1県4カ所において農村住民もしくは市場の販売員より食用野生植物利用についての聞き取り調査と標本採取を行った。結果、種子植物32科58種、シダ植物4科13種が同定されたが、一部は種の同定に至らなかった。また、これまで同国では草本生植物を食用利用する例が多かったが、南部ではウコギ科のMacropanax undulatusのように木本生植物の新芽を食用利用する例もみられた。さらに、これらの中には健康効果が信じられている植物もあり、例えばウコギ科のM.undulatusは体の痛みを和らげる効果が、スズラン科のTupistra nutansは熱冷まし、風邪や咳に加え、アルコールを飲み過ぎた際に効果があるとされた。また、シダのうちNaleyは食べ過ぎると胸の痛みの原因になる、Pangkeyを食べ過ぎると目眩の原因になるといった、食用に際しての健康上の注意事項も信じられていた。次に現地で食用とされるアスパラガス野生種のAsparagus racemosusの機能性成分測定(ルチン)に向けた最適試料調整方法を明らかにするための試験を栽培種A.officinalisで行ったところ熱風乾燥による調整が適していることが明らかになつた。同時にDNA抽出のための予備試験も行った。今回、両国間のMTAの締結に間に合わなかったことから、本結果は次年度以降のサンプリング・成分分析に活用することとする。なお、本課題の一環として本学において11月22日に「信州大学農学部国際シンポジウム2008『持続的な森林との共生:ブータン王国における野生植物の食用利用』」を開催し、ブータン農業省から二名の研究員を招聘し、三名の国内研究者とともにシンポジウムを行った。個々の講演については信州大学紀要にプロシーディングスとして掲載した。2009年5月717日にブータン王国東部2県2カ所,南東部2県4カ所,西部2県2カ所において農村住民もしくは市場の販売員より食用野生植物利用についての聞き取り調査と標本採取を行った。結果,種子植物45科78種,シダ植物3科8種が同定されたが,一部は種の同定に至らなかった。また,これらの中には健康効果が信じられている植物もあり,例えばキツネノマゴ科のPhlogacanthus thyrsiformisは解熱作用があるとされ,ノウゼンカツラ科のOroxylum indicumは体の痛みの軽減、グミ科のElaeagnus parvifoliaは下痢に,トウダイグサ科のPhyllanthus emblicaは風邪や咳に,スズラン科のTupistra wattiiは体の痛み、咳、風邪、頭痛に,イラクサ科のGirardinia diversifoliaは関節痛や高血圧にそれぞれ効果があると信じられていた。次に現地で食用とされるアスパラガス野生種のAsparagus racemosusの機能性成分測定(ルチン)に向けた最適試料調整方法を明らかにするための試験を昨年に引き続き栽培種A.officinalisで行ったところより詳細な熱風乾燥条件が明らかになった。また,DNA抽出のための予備試験も行った。今回,ブータン王国農業省事務次官と直接交渉を行ったが,両国間のMTAの締結には至らなかった,本結果は次年度以降のサンプリング・成分分析に活用することとする。なお,本課題の一環として本学において10月15日に「信州大学農学部国際セミナー2009『ブータン王国にRNR(Renewable Natural Resources)利用にもとづく持続的発展』」を開催し,ブータン農業省から二名の幹部職員を招聘し,申請者を含む二名の国内研究者とともにセミナーを行った。2010年5月にブータン王国南部および西部の農村6か所および都市部の市場1か所等において調査を実施した。本調査の結果,食用野生植物として42科86種の種子植物と3科8種のシダ植物を確認できた。また,これら食用植物とは別に南部のSarpang県Hilley郡のMuga村では14種類の薬用植物が利用されていることも明らかになった。なお,これまで本調査をあわせ6カ年にわたり同国の全20県における現地調査を行ってきた結果,同国において種子植物では合計60科172種が,シダ植物で合計6科18種が、食用利用されていることが明らかになった。

また,本調査の聞き取り調査の結果,これら食用野生植物の中には様々な健康効果が信じられているものがあった。例えば,イラクサ科のBhangrey Sisnoo(Girardinia palmate)については5調査地で食用利用されており,関節痛に効くと信じられていた1調査地を除き,その他の4調査地で高血圧に効果があると信じられていた。また,同じイラクサ科のGharia Sisnoo(Urtica parviflora)についても同様の傾向にあり,食用利用されていた4調査地のうち1か所で関節痛に効くとされ,他の2調査地では高血圧に効果があると信じられていた。一方で禁忌が信じられている植物もあり,例えば,Tamarkeyと呼ばれるツヅラフジ科のStephania glabraは黄疸の出ている患者,肝炎患者に食べさせるのは良くないとされていた.次に現地で食用とされるアスパラガス野生種のAsparagus racemoususの機能性成分測定(ルチン)に向けた最適試料調整方法を明らかにするための試験を昨年に引き続き栽培種A.officinalisで行ったところ,60°C72時間熱風乾燥条件が簡易で最も適した感想調整方法と考えられた。
化学合成独立栄養細菌におけるＲＮＡ干渉酵素の生理学的意義の解明

微生物はストレス環境下において「RNA干渉酵素」と呼ばれる配列特異的エンドリボヌクレアーゼを用いることで,自身のRNAを切断し,その翻訳を制御する。興味深いことに,これらRNA干渉酵素が認識・切断する配列は微生物種ごと,酵素ごとに異なり,その生物学的役割は多岐に渡る。本研究では,微生物の中でもRNA干渉酵素を多数有するNitrosomonas europaeaをモデル細菌とし,本微生物に保存されたRNA干渉酵素の特性を解明することで,これら酵素の生理学的意義の解明を目的とした。昨年度,本微生物に保存された2種類のRNA干渉酵素の取得およびその基質特異性(配列特異性)の同定に成功した。そこで本年度はまずこれら2種類のRNA切断酵素に対し,細胞内での遺伝子発現を確認した。次にN. europaeaのゲノム情報・同定したRNA干渉酵素の切断配列情報を参照し,これら酵素がN. europaeaの翻訳・増殖に与える影響を推定した。RNA干渉酵素は配列特異的エンドリボヌクレアーゼであることから,これら酵素が切断する配列を内部に多く含む遺伝子群は細胞内で優先的にノックダウンされると考えられる。一方,切断配列が含まれない遺伝子群は,理論上,RNA干渉酵素の切断を受けないことから,これら遺伝子はストレス環境下で優先的に翻訳されることが予測される。生物情報学的手法を用いて全遺伝子を解析したところ,これらRNA干渉酵素は重金属耐性の向上や休眠状態への移行に寄与している可能性が示唆された。29年度が最終年度であるため、記入しない。Toxin-Antitoxin機構は原核生物に広く保存されている増殖抑制機構であり,毒性タンパクであるToxinと抗毒性タンパクであるAntitoxinから構成される。通常AntitoxinがToxinと複合体を形成することでその毒性を抑制しているが,微生物がある種の環境ストレスに曝された際,Antitoxinの分解が起き,Toxinが細胞内で遊離,微生物の増殖が抑制される。Toxinが増殖抑制を引き起こすメカニズムは種々あるが,この中で最も多く報告されているメカニズムは細胞内RNAの切断,続くタンパク合成阻害である。このように翻訳阻害を誘起するToxin分子はRNA干渉酵素と総称され,細胞内RNAを配列特異的に切断することが知られている。興味深いことに,遅増殖性の独立栄養細菌や病原性微生物はその染色体上に多くのRNA干渉酵素を持つと予見されている。しかしながら,現状,これら微生物が持つRNA干渉酵素の酵素学的性質,生理学的意義は未解明なままである。そこで本研究では,化学独立栄養細菌に保存されているRNA干渉酵素を対象とし,これらタンパクを取得,その酵素特性を解明することでRNA干渉酵素の生理学的意義の解明を目指す。当該年度,申請者は化学独立栄養細菌ゲノム上に存在が予見されている複数種のRNA干渉酵素の取得を試みた。これらRNAを単離しその酵素活性を確認した所,RNA切断活性を確認することに成功した。また取得したRNA干渉酵素(Toxin)の対となるAntitoxinタンパクが,RNA干渉酵素の切断活性を抑制することを実験的に証明すること成功している。以上の結果から,これらToxin-antitoxin機構が機能遺伝子群であることが判明し,化学独立栄養細菌が本機構を用いて,環境ストレスに対応している可能性が示唆された。RNA干渉酵素をコードすると推定される遺伝子を選定し,これら遺伝子断片を化学合成にて取得した。遺伝子断片を発現ベクターへとクローニングしたところ,一系を除く全ての系でプラスミドの構築に成功した。発現用宿主である大腸菌へのプラスミドの形質転換後,各RNA干渉酵素の誘導を行った。結果,全ての系で大腸菌の増殖抑制を観測出来,RNA干渉酵素が機能酵素であることが示唆された。次にアフィニティークロマトグラフィーにより,それぞれのRNA干渉酵素の精製を行った。取得したフラクションそれぞれに関してSDS-PAGEを行なったところ,複数のRNA干渉酵素では目的分子量のサイズに十分な濃度のバンドが確認された。取得したタンパクフラクションと基質RNAとのインキュベーションを行ったところ,一系を除いてRNA切断活性の観測に成功した。そこで対となるAntitoxinタンパクも同様に取得し,RNA干渉酵素との共インキュベーションを行った。共インキュベーションにより,RNA切断活性の抑制が確認された。超並列シーケンシング法を用いて,RNA干渉酵素の認識切断配列の推定を試みた。結果,これらRNA干渉酵素が特異的な配列を認識していることが示唆された。そこで蛍光消光現象を用いることで,これらRNA干渉酵素の認識切断配列の同定を行った。

RNA干渉酵素は配列特異的エンドリボヌクレアーゼであることから,これら酵素が切断する配列を内部に多く含む遺伝子群は細胞内で優先的にノックダウンされると考えられる。一方,切断配列が含まれない遺伝子群は,理論上,RNA干渉酵素の切断を受けないことから,これら遺伝子はストレス環境下で優先的に翻訳されることが予測される。生物情報学的手法を用いて全遺伝子を解析したところ,これらRNA干渉酵素は重金属耐性の向上や休眠状態への移行に寄与している可能性が示唆された。今後,未だ取得出来ていないRNA干渉酵素の取得を引き続き試みるとともに,これら酵素がどのような環境ストレス下で活性化するのかを検討することで,本化学合成独立栄養細菌が持つRNA干渉酵素の生理学的意義の解明を試みる。プラスミドを構築に失敗したRNA干渉酵素はそのコーディングシーケンス中にポイントミューテーションが挿入されており,アミノ酸配列がWTのものと一残基異なるものになってしまっていた。今後,変異導入法を用いて,WTのアミノ酸配列を持つRNA干渉酵素の取得を試みる。切断活性が確認できなかったRNA干渉酵素に関しては,本RNA干渉酵素が長鎖認識であり,使用した基質RNA中にRNA干渉酵素の認識切断配列が含まれなかったものと考えている。今後,基質RNAのバリエーションを増やすため,大腸菌から抽出したTotal RNAを利用し,ゲノムスケールで解析を行う予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。
核内レセプター相互作用に依存した制御遺伝子ネットワークの解析

動物初期胚で発現している核内レセプター群に注目して、転写制御におけるレセプター間、レセプター・介在因子間の相互作用について解析を試みた。培養細胞系でのtwo hybrid assay実験系を用いて、RAR-RXR,VDR-RXRヘテロ2量体形成におけるリガンド結合の効果と、コリプレッサーSMRT、コアクチベータ-SRC-1とこれら核内レセプターの相互作用を解析し、以下の結果を得た。1、RAR-RXR複合体はRARのリガンド結合に依存した転写活性化を示す、2、リガンドフリーのRARがSMRTと強く結合しているとRXRのリガンド応答能が抑制される、3、3種のRARアイソフォームのうち、RARβは細胞核内ではSMRTに結合できない、4、VDR-RXR複合体では、VDRに依存した転写活性化を示すが、RXRのリガンド結合はこの複合体を解離させる、5、RAR,RXRによる転写の活性化はSRC-1への結合を伴うが、VDRはSRC-1に対して全く結合しない。6、神経発生に重要と考えられる核内レセプターTlxの場合には、リガンドを要求せずにOtx-1,Chx10,NeuroDなどの転写を誘導できることを見いだした。そこで、Tlxに結合する因子を探索したところ、RARの介在因子として報告されているRIP140を得た。以上、核内レセプターのリガンド結合による転写活性化について、介在因子との相互作用モードを合成アゴニスト・アンタゴニストをプローブとしたアッセイ系によって確立した。この系は、新たな合成化合物の活性評価にも有用である。また、Tlxの場合には、リガンド非依存的にRIP140などの介在因子と結合できることも明らかとなりつつあり、介在因子を介した核内レセプターネットワークにおけるクロストークの重要性が指摘できる。
植物の温度検知機構の分子生物学的解析

1.研究の目的-植物は、低温に曝されると膜脂質の脂肪酸を不飽和化して、低温による膜脂質の流動性の低下を補償する。この現象は、植物が温度の低温を何等かの手段によって感知し、脂肪酸を不飽和化して低温に適応していくことを示している。本研究では、この現象に関わる不飽和化酵素の遺伝子が温度によって発現を調節する機構を調べ、植物細胞の温度感知の機構を解明することを目的としている。2.研究成果-(1)Synechocystis PCC6803の不飽和化遺伝子desAをプローブとして、他のラン藻Synechocystis PCC6714とSynechococcus PCC7002から、desA遺伝子を単離した。これらの新しい遺伝子を用いてSynechococcus PCC7914を形質転換して、desAであることを確認した。さらに、ヌクレオチド配列を決定した。(2)Synechocystis PCC6803におけるdesAの発現調節をノーザンブロット法でしらべ、desAの転写は低温に応答して著しく促進されることを明らかにした。(3)Synechocystis PCC6803のゲノムに、プラスミドpBSΔAVを用いてプロモーター検出カセットを挿入し、多数の形質転換を作成した。この中に温度に応答して発現量の異なる数個のクローンが得られた。この解析から、温度に応答するプロモーターおよびこの遺伝子の同定することができる。1.研究目的ー植物は、低温に曝されると膜脂質の脂肪酸を不飽和化して、低温による膜脂質の流動性の低下を補償する。この現象は、植物が温度の低下を何等かの手段によって感知し、脂肪酸を不飽和化して低温に適応していくことを示している。本研究では、この現象に関わる不飽和化酵素の遺伝子が温度によって発現を調節する機構を調べる、植物細胞の温度感知の機構を解明することを目的としている。2.研究成果ー(1)ラン藻<Synechocystic>___ーPCC6803より単離したΔ12不飽和化酵素の遺伝子(<desA>___ー)をプロ-ブとして、<desA>___ー以外の3種類の不飽和化酵素の遺伝子の単離を試みた。この結果<desA>___ーの近傍にこれとハイブリダイズする3つの領域が存在することが明かとなった。今後、各々の領域について塩基配列を決定して対応する遺伝子の構造を解析すると共に、相同組換えを利用した遺伝子破壊法によってそれらの遺伝子の機能を明らかにしていく予定である。(2)<Synechocystis>___ーPCC 6803のゲノムDNAのライブラリ-をプラスミドpBSΔAvを用いて作製した。このプラスミドにプロモ-タ検出カセット(カナマイシン耐性遺伝子とガラクトシタ-ゼの構造遺伝子をもつ)を挿入した。これにより、pBSΔAvに組み込まれているラン藻DNAにカセットが挿入され、本来の遺伝子機能が破壊されると共に、その遺伝子のプロモ-タ活性がガラクトシダ-ゼを指標として検出されるようになる。約5,000個からなる形質転換体バンクを作製し、Xgal含有培地を用いて低温によりガラクトシダ-ゼ活性が発現される株を選択している。1.研究の目的ー植物は、低温に曝されると膜脂質の脂肪酸を不飽和化して、低温による膜脂質の流動性の低下を補償する。2.研究成果ー(1)Synechocystis PCC6803の不飽和化遺伝子desAをプロ-ブとして、他のラン藻Synechocystis PCC6714とSynechococcus PCC7002から、desA遺伝子を単離した。

(2)Synechocystis PCC6803におけるdesAの発現調節をノ-ザンブロット法でしらべ、desAの転写は低温に応答して著しく促進されることを明らかにした。(3)Synechocystis PCC6803のゲノムに、プラスミドpBS△AVを用いてプロモ-タ-検出カセットを挿入し、多数の形質転換を作成した。この中に温度に応答して発現量の異なる数個のクロ-ンが得られた。この解析から、温度に応答するプロモ-タ-およびこの遺伝子の同定することができる。
ＥＭＤＲ（眼球運動による脱感作と再処理法）による記憶の変容過程の研究

EMDR実施中の脳機能部位、および自律神経系の変動パターンの特定を目的に、脳血流内の酸素濃度を24チャンネル光トポグラフィ装置で、自律神経系指標を皮膚伝導性・皮膚温度・指尖容積脈波・呼吸振幅によって、4名の被験者で測定した。EMDR前後で有意に臨床的指標は低下した。前頭葉付近、特に眼窩前頭皮質において、[oxy-Hb]が、外傷記憶の想起に伴い急激に増加、その後減少する様子が観察された。また、安全な場所のイメージに水平方向の眼球運動がどう影響するかを大学生を用いて検討した。水平な眼球運動で、安全感や穏やかさの程度が低下し、眼球を動かさない条件において、イメージをより深く体験する傾向が上昇した。市井担当部分:EMDRがもたらす治療効果に関連する脳機能部位、および自律神経系の変動パターンの特定を目的に、EMDR標準プロトコル実施中に、脳の活性部位を脳血流内の酸素濃度によって測定可能な24チャンネル光トポグラフィ装置(ETG-4000日立メディコ製:以下NIRS)で、自律神経系指標を皮膚伝導性・皮膚温度・指尖容積脈波・呼吸振幅によって測定するバイタルモニターProComp(T7500Mエムピージャパン製:以下ProComp)で、それぞれ測定した。今年度は5名の被験者に実験を行い、5名共にSUD(主観的障害単位)において、減少を認め、改善、及び維持を確認した。ターゲットとしては、死別、適応上の問題、性的被害体験などが扱われた。吉川担当部分:安全な場所のイメージに対する眼球運動の効果を検討する目的で、1イメージの鮮明さと安全な感覚は低下する、2イメージは広がらない、と仮説を設定した。大学生22名を対象とし、安全な場所のイメージを浮かべた後に、その映像の鮮明さと感情の強さを評定させ(pre測定)、水平眼球運動条件と眼球固定条件のいずれかを経験させた。水平眼球運動条件では、左右交互の眼球運動を、1セットあたり24秒間行わせた後、回想の量と質、鮮明さと感情の強さを評定させた(post 1測定)。その後、眼球運動を3セット行い、同様の指標を測定した(post 2測定)。眼球固定条件では、刺激として黒い画面の中央に白い点を提示し注視させた。その結果、水平眼球運動条件は、刺激を加えることで安全や穏やかさの強さが低下したが、眼球固定条件は変化は見られず、回想の量が増加した。また、水平眼球運動条件では否定的なイメージへの変化が生じた被験者が見られ、2つの仮説はほぼ支持された。市井担当部分:治療効果に関連する脳機能部位と血流の変動パターンの特定を目指すことを目的とし、EMDR標準プロトコル実施中の活動を22チャンネル光トポグラフィ装置(ETG-4000日立メディコ製:以下NIRS)を用いて測定した。研究計画の同意を得られた右利きの健常成人4名を対象とした。過去に体験された外傷的な出来事の聴取、臨床評価尺度(IES-R、DES-II、NCQ-IF、JBCSS)を施行した。測定機器を装着し、体験に伴う苦痛の度合い(主観的障害単位:SUD、最大の苦痛を10とする)が01になるまで介入を行い、その際の前頭部の血中ヘモグロビン濃度[oxy-Hb]の変化を測定した。外傷的な出来事の内容は、近親者との死別体験、職場での不適応、性被害であり、EMDR前後でSUDおよび臨床評価尺度は有意に値が減少した。[oxy-Hb]は、前頭葉付近、特に眼窩前頭皮質において生じ、外傷性記憶の想起に伴い急激に増加、その後減少する様子が観察されたことから、EMDRにおける外傷性記憶の処理の過程が脳血流に影響を与えている可能性が示唆された。吉川担当部分:EMDRで用いられる眼球運動の効果を検証するために2つの実験を行った。実験1では、水平方向の眼球運動の有無によって安全な場所のイメージの変化にどのような違いが見られるかを測定した。大学生22名を対象に、二元配置被験者間計画の実験を行った結果、水平眼球運動条件は、安全感や穏やかさの程度が低下することが示された。実験2は、眼球運動の種類を以下の2種類に分けた。ひとつは滑らかな水平方向の動きの眼球運動で、もうひとつは急速に眼球を動かすものである。眼球固定条件も加え、3条件を用意した。大学生および大学院生15名を対象に、二元配置被験者間計画の実験を行った結果、眼球固定条件において、イメージをより深く体験する程度の上昇傾向が見られた。

市井は、EMDR中の脳活動を調べる目的で、非臨床の20代の女性の外傷記憶の処理をする際に52チャンネルのNIRS(近赤外線スペクトロスコピィ)と心拍数が測定した。ターゲットの記憶は10歳時に受けた性的被害で、加害者の性器を触らされたことだった。IES-Rは11点と低かった。経験を積んだEMDR治療者が標準的EMDRプロトコルを実施した。否定的認知は、「私は恥ずべき人間」肯定的認知は「私は生きる価値がある」だった。身体感覚は両腕、両手だった。37セットの眼球運動で、SUDは7.5が0に低下し、VOCは3.5が7に上昇した。心拍数は息苦しさの報告とともに、一旦上昇したが、その後減少に転じ、中盤の責任の認知の編みこみ以降ほぼ、低下した状態で推移した。右の眼窩皮質[oxy-Hb]の変化は、ほぼ一貫して増加し、中盤の認知の編みこみなどにより急な上昇を示した。左の側頭回の[oxy-Hb]は、眼球運動の開始とともに高まったが、中盤の責任の認知の編みこみ以降、急激に減少した。NIRSをモニターすることで、EMDR中のさまざまな技法、重要な過程が脳に影響を与えていることが推測できる。こうした関係を確認するためには、より多くのデータの収集が今後必要と考えられる。吉川は、安全で穏やかなイメージを題材として、眼球運動がイメージの鮮明さや喚起される感情の強さに与える影響を検討した。実験のために、ノングレア素材のPCモニタを用意した。ノングレア素材は、実験中に被験者の顔がモニタに映り込まないという利点がある。実験プロトコルは、書籍、論文などを参考に作成した。実験の被験者は大学生24名を目標とし、初年度は大学生3名に対して実験を行った。市井担当部分に関しては、実験の実施場所がようやく確保でき、実験遂行中であり、今年度中に必要な数を分析できると考える。吉川担当部分に関しては、予定を順調にこなせている。市井は、NIRSデータは1例収集、解析し、結果を考察することができた。実験やデータ解析のおよその流れがつかめた。吉川は、初年度は大学生3名に対して実験を行って、現在も継続中で、24名を最終的に解析対象と考えている。市井は、実験を継続すると共に、すでにあるデータも、随時分析を開始し、生理的データについて整理し、論文化して行く。吉川は、一旦結果をまとめることはでき、論文化作業に入っている。一方、臨床適用を視野に入れて、新たな実験を行う方向も検討中である。市井は、NIRS測定機器に関して、恒常的な測定場所となる研究機関との協力体制の構築を行なっている。チャンネル数、プログラムなどについて近々業者と相談し、この夏以降本格的なデータ収集を行う予定にしている。吉川は、現在も実験データは収集を継続しており、順調に進んでいる。予定していたデータ収集が悪天候のため年度内に実施できなかった。25年度に実施予定である。市井分:学会参加費用50万円、消耗品費10万円、謝金20万円吉川分:学会参加費用(参加費、交通費、宿泊費)10万円、実験に係る諸費用(謝金、印刷代、実験者の交通費など)10万円、書籍および機器購入費用10万円。
下歯槽神経障害に対するリコンビナント神経栄養因子の再生促進効果

本研究では、マウス下歯槽神経の切断術後、持続的にリコンビナント神経栄養因子を投与し、歯根膜ルフィニ神経終末の再生過程を検索し、リコンビナント神経栄養因子投与のより効果的な作用時期、投与時期を明らかにすることを最終目的としている。trkBのリガンドであるBDNFとNT-4/5の役割について、BDNF-KOマウス(ヘテロ型)、NT-4/5-KOマウス(ホモ型)に対して、下歯槽神経切断実験を行い、BDNFは神経再生過程の全般にわたり、またNT-4/5は神経再生過程の初期に関与することが想像された。一方、ラット下歯槽神経切断実験では、GDNFが歯根膜ルフィニ神経終末の成熟過程に関与していることが示唆され、歯根膜神経の再生過程には複数の神経栄養因子が時期依存的に関与していることが考えられた。また、NT-4/5-KOマウス(ホモ型)に対する浸透圧ポンプを利用した持続的リコンビナントNT4/5投与実験により、持続的リコンビナント神経栄養因子の投与は歯根膜神経の再生を促進することが明らかとなった。本研究では、マウスに下歯槽神経の切断術後、持続的にリコンビナント神経栄養因子を投与し、歯根膜ルフィニ神経終末の再生過程を検索し、リコンビナント神経栄養因子投与のより効果的な作用時期、投与時期を明らかにすることを目的としている。本年度は、(1)下歯槽神経切断によるBDNF-KOマウス、NT-4/5-KOマウスの歯根膜神経分布密度の変化、(2)リコンビナントNT-4/5の持続的投与による歯根膜神経の回復現症について検索した。得られた成果は以下の通りである。1.BDNF-KOマウス(ヘテロ型)、NT-4/5-KOマウス(ホモ型)の下歯槽神経を切断し、神経線維の特異的マーカーであるprotein gene product9.5 (PGP9.5)の交替による免疫染色を行い、歯根膜神経の再生過程の定量化を画像解析法により求めたところ、BDNFは神経再生過程の全般にわたり、またNT-4/5は神経再生過程の初期に関与することが想像された。一方、GDNFが歯根膜神経終末の成熟過程に関与していることが報告されていることから、歯根膜神経の再生過程には複数の神経栄養因子が時期依存的に関与していることが考えられた。2.NT-4/5-KO「マウス(ホモ型)に対する浸透圧ポンプを利用した持続的リコンビナントNT4/5投与実験では、下歯槽神経切断後7日、14日後の神経密度はvehicle群に比べそれぞれ上昇したが、7日と14日後の上昇率に有意差はなかった。また、下歯槽神経傷害を行わなかった群の歯根膜神経の密度も上昇した。このことから、持続的リコンビナント神経栄養因子の投与は歯根膜神経の再生を促進することが明らかとなった。本研究では、下歯槽神経の切断術後、持続的にリコンビナント神経栄養因子を投与し、歯根膜ルフィニ神経終末の再生過程を検索し、リコンビナント神経栄養因子投与のより効果的な作用時期、投与時期を明らかにすることを最終目的としている。前年度は歯根膜ルフィニ神経終末が特異的に発現しているtrkBのリガンドであるBDNFとNT-4/5について検討を加えたが、今年度はグリア細胞株由来神経栄養因子(glia-cell line neurotrophic factor ; GDNF)の下歯槽神経切断における役割を検討した。Atsumiらの方法に従い、ラット下歯槽神経を切断し、下顎切歯歯根膜におけるGDNFの発現変化を免疫組織化学で染色したところ、切断後3日1週には歯根膜ルフィニ神経終末に付属する終末シュワン細胞は消失し、正常時には存在しない歯牙寄りの歯根膜(tooth-related part ; TRP)にシュワン細胞が遊走した。この細胞は紡錘形を示し、またGDNFは陰性であった。切断後2週でこのGDNF陽性細胞の数はピークに達したが、以後、TRPから消失した。一方、この時期、歯根膜ルフィニ神経終末は再生が進むとともに、GDNF陽性の終末シュワン細胞が出現した。三叉神経節では術後24週でGDNF陽性ニューロンの数が増加したが、GDNF陽性三叉神経節ニューロンの大きさには変化がなくこれら陽性ニューロンは中型ニューロンであった。これらのことはGDNFが歯根膜ルフィニ神経終末の再生過程の成熟期に関与することを示している。

前年度の研究成果と考えあわすと、BDNFは歯根膜ルフィニ神経終末の再生のトリガーとなり、再生期間中にわたって作用し、NT-4/5は再生の初期、GDNFは再生の成熟期に作用していることが伺え、歯根膜ルフィニ神経終末の再生には多様な神経栄養因子が時期依存的に作用していることが考えられた。
アロステリズムを利用する非線形の化学情報伝達に関する研究

アロステリズムは、生体内において分子惰報変換部位として重要な役割を担っている。アロステリズムを人工系でも再現し、分子情報変換システムを構築することは、分子テクノロジーの第1歩となると考え、分子設計の提案から研究を立ち上げた。本年度までにアロステリズムの概念を分子認識素子に組み込み、すでに世界初の水中におけるガン関連オリゴ糖鎖認識システムや、分子不斉記憶システムの構築に成功した。更に、ダブルデッカー型錯体が中心金属の種類,価数および紫外・可視光の照射によリポルフィリン間の距離および回転能の制御が可能であることに注目し、「他の金属の挿入」あるいは「光照射やredoxによる認識能のスイッチング」について引き続き検討し,分子機械としてのポテンシャルを探った。銀イオンをダブルデッカー型ポルフィリンに加えると、周辺置換基によらず、3当量の銀イオンが捕捉されることを明らかとした。さらには、銀イオンとの錯形成にともない上下のポルフィリン環の回転(振動)速度が加速されることを見いだした。認識情報が回転速度の加速、つまり力学応答として変換されたとも考えることができ、興味深い系である。さらに回転軸を金属イオンから、アセチレンなどの回転軸に展開した分子を合成し、フラーレンを協同的に認識することにも成功した。これは我々の提案したコンセプト「回転軸周りに論理的に認識部位を配置すること」がアロステリズム発現には重要であり、本コンセプトが一般性を持つことを改めて示すことができた。ダブルデッカーポルフィリンの集積化(機能性材料化:さらなるアロステリーの発現)を目指しオリゴマー化あるいはポリマー化を検討した。手法としては、ポルフィリン2量体からのダブルデッカー化および重合可能な周辺置換基を持つトリプルデッカー型ポルフィリンの酸化重合を試みた。いずれの場合もオリゴマー、ポリマー成分が観測され、本手法がポルフィリン多量体の新規合成法になることが示された。環状オリゴマーは、多数の酸化還元電位を有することを利用して単一分子メモリとしての機能に関しても検討した。「face to face型ポルフィリン二量体」のなかでもランタノイド系列の金属を2枚のポルフィリン環でつないだ形状を有するポルフィリンダブルデッカー型錯体について検討を行った。申請者らはすでにCe(IV)ポルフィリンダブルデッカー型錯体を用いたジカルボン酸類の正のアロステリックな認識に成功した(Angew.Chem.Int.Ed.,Vol.37(NO.15)2096-2099(1998))。これまでの結果をうけ,以下の研究を行った。アロステリックホスト分子としてのCe(IV)ダブルデッカー型錯体のScaffoldとしての妥当性および一般性を確かめるために,第一段階として種々の官能基の導入とアロステリックな分子認識能について,各種分光法(NMR,UV-Vis,円二色性,蛍光,マススぺクトル)を用いて検討した。ゲスト分子として糖質を利用したところ、複数の認識サイトにおいて協同性の発現が認められ、アロステリック効果が観測された。今後さらに、様々なゲスト分子に応用範囲を広げていく。ランタノイド系列の金属を2枚のポルフィリン環でつないだ形状を有するポルフィリンダブルデッカー型錯体について検討を行った。すでにCe(IV)ポルフィリンダブルデッカー型錯体を用いたジカルボン酸類の正のアロステリックな認識に成功した(Angew.Chem.Int.Ed.,Vol.37(No.15)2096-2099(1998))。

アロステリックホスト分子としてのCe(IV)ダブルデッカー型錯体のScaffoldとしての妥当性および一般性を確かめるために、種々の官能基の導入とアロステリックな分子認識能について、各種分光法(NMR,UV-Vis,円二色性,蛍光,マススペクトル)を用いて認識情報が非線形に得られるかを確かめた。ゲスト分子として金属イオン(銀イオン)を選び検討を行ったところ、ダブルデッカー型錯体に3当量の銀イオンが協同的に捕捉されることを見いだした。カチオンが一分子のホストに複数個取り込まれる系は珍しく、現在その機構について詳細に検討している最中である。また糖質と親和性のあるボロン酸をCe(IV)ポルフィリンダブルデッカー型錯体に導入したところ、世界で初めてオリゴ糖を認識することに成功した。この結果は、アロステリズムが発現しないホスト分子では得られないことから、アロステリズムによる、シグナルおよび錯形成定数の増幅が深く関与していると考えられる。現在、本系を生理活性オリゴ糖の認識へと展開している最中である。アロステリズムを分子認識系に組み込むための指針として、回転軸周りに論理的に認識部位を配置するという我々の作業仮説が正しいかを検討するために、ダブルデッカー型ポルフィリン錯体を基本骨格として選び、種々の分子認識系を構築してきた。本年度は、ゲストイオンあるいは分子として、カリウムイオン、アミン誘導体、アニオン、ガン関連糖鎖抗原であるルイス糖類を選び、それぞれ対応する認識部位をダブルデッカー型ポルフィリン錯体に導入した。その結果、(1)弱い化学・物理シグナルの増幅、(2)ゲスト分子に対する選択性、感度の向上にアロステリズムが非常に有効であることが明瞭に示された。特にボロン酸誘導体を導入した化合物においては、我々のグループで行ってきたボロン酸を用いた糖質認識化学に新たに正のアロステリズムという概念を加えたことになる。その結果、従来の手法では認識することが非常に困難であったマルトオリゴ糖、ラミナリオリゴ糖などのオリゴ糖鎖のセンシングが可能であることを世界に先駆けて示すことに成功した。さらにボロン酸を導入したダブルデッカー型ポルフィリン錯体は単糖よりもオリゴ糖に対して高い親和性を示し、アロステリズムを発現しない化合物に比べて、認識に伴うシグナル強度が約18倍にも増幅されることが明らかとなった。驚くべき事に細胞接着に重要でありかつガン関連糖鎖抗原であるルイスオリゴ糖類を世界で初めて「水中」かつ「人工合成分子」で認識することに成功した。ダブルデッカー型錯体は,中心金属の種類,価数および紫外・可視光の照射によりポルフィリン間の距離および回転能の制御が可能であることに注目する「他の金属の挿入」あるいは「光照射やredoxによる認識能のスイッチング」について引き続き検討し,分子機械としてのポテンシャルを探った。銀イオンをダブルデッカー型ポルフィリンに加えると、周辺置換基によらず、3当量の銀イオンが捕捉されることを明らかとした。さらには、銀イオンとの錯形成にともない上下のポルフィリン環の回転(振動)速度が加速されることを見いだした。認識情報が回転速度の加速、つまり力学応答として変換されたとも考えることができ、興味深い系である。
コンドルセの社会数学と科学アカデミーの政治学

今年度当初には、前年度に執筆した論文に若干の加筆訂正を施した「18世紀パリ王立科学アカデミー終身書記による『科学の有用性』をめぐる言説の変遷とその背景」(『化学史研究』第29巻、第3号、2002年)が出版された。年度前半はフランスに長期滞在して、前年度に引き続きパリ王立科学アカデミーに関連する資料を集めた。フランス科学アカデミー古文書館、国立学士院図書館、国立古文書館などに所蔵されたマニュスクリプト及び当時の印刷文献が主な資料となった。その結果、当時の科学研究活動の具体的な内容のみならず、研究者達の人事の様子や、旧体制下の身分制度と複雑に関わり合ったその政治力学なども明らかになった。また、アカデミーと学術的な面で交流のあった各種機関、特に技師養成学校に関する資料をも集めるため、陸軍歴史古文書館や土木学校図書館を訪問した。アカデミーを中心に構成された、当時の科学研究の場が、他の諸機関とどのような関係性を保っていたかを分析するためである。その成果は仏語論文"Transformation des relations entreScience et Etat aumilieu du XVIII^e siecle"(仮題、投稿準備中)にまとめられた。年度後半は日本にて、協力者と共に、集めた資料の整理や日本の大学図書館などに点在する資料収集を遂行した。また、その作業と並行して、政治と科学の関係を問うに当たっての方法論的問題の考察に取り組み、論文「科学と国家-外的科学史と内的科学史の超克へ」(『科学史科学哲学』、2003年、印刷中)を執筆した。上記の作業及び、前年度から継続する研究により、コンドルセの社会数学がいかなる形で当時の知的・政治的文脈と接続し、相互影響を及ぼし合っていたのかを立体的に把握することが出来た。
スポーツする女性の身体へのまなざしの変容

二つの英文論文がそれぞれ近く出版される予定である。学会発表も行った。3)学会「European Consortium of Political Research」(ハンブルグ大学、2018年8月)において、ジェンダーに関するパネルでディスカッサントを務め、発表論文三稿に対してそれぞれリスポンスを準備した。日本女性がスポーツとどうかかわったかの歴史的研究において、予想以上に多くの資料に出会い、現時点で1930年代までしか進んでいない。しかし、歴史を探ることは現在を語る上で有効なツールになると考えるので、この部分を割愛することは望まない。研究目標の修正の可能性も考えている。また、この分野では、新たな研究が次々に出版されているため、それらの資料の読破にも時間をかけている。さらに、今年度は、海外研究者との交流において、お互いのスケジュールの不具合から予定どおりに進まなかった。大学での教育業務とのバランスを再考慮して、研究時間を確保する必要を感じている。研究の中心を歴史的資料から現代へと移行し、「近代都市空間における身体」「労働とスポーツ」「見世物としてのスポーツ」という三点に焦点をあて、フェミニズムの視点から論文を書く。自身の研究と海外の研究者の状況を踏まえて、2020年3月に予定していた国際シンポジウムを11月に変更し、またそれによって、東京オリンピック終了後の所感を研究発表に含めることができると考える。学会発表も行った。