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我が国の障害児教育の経費策定と評価に関する研究

平成16年会計年度では,盲聾養護学校一人当たりの経費は約879万円(8,785,322円),中学校生徒一人当たりは約103万円(1,032,028円)小学校児童生徒一人当たりは約90万(901,573円)である。日本の障害児の教育経費と,小中学校の教育費の比率は,障:中:小=879:103:90となっている。2イギリスにおける障害児の教育経費バーミンガムにおいて,特殊学校・小中学校との教育経費・内容に関する実地調査を行った。支出経費として(1)人件費(教職員),(2)教育支援関連(教育委員会の支援サービス活用料等),(2)必要経費(ガス代金,掃除等),(3)教育活動費(プール使用料,給食等),その他に評議委員会の費用など支出があることが分かった。教育経費は,特殊学校の障害児一人当たりの経費は14,708ポンド(約353万円H18,1£=240円換算),中学校一人当たり4,008ポンド(約96万円),小学校一人当たり3,239ポンド(約78万円),中学校で障害児の教育(リソース活用)を受けている生徒一人当たりは14,286ポンド(約343万円),小学校で障害児の教育を受けている児童一人当たりは18,085ポンド(約434万円)であった。障:中:小=353:96:78という結果となった。日本では,小中学校で学習する障害児の経費については統計データが無いが,イギリスのバーミンガムでは,特殊学校の児童生徒よりも,中学校のリソースを活用する障害児の経費の方が,高額であることが分かった。
曲がったポルフィリン類縁体の合成と機能開拓

o-ジピロロリルベンゼンとベンズアルデヒド誘導体から湾曲構造を有するポルフィリン(2.1.2.1)の合成に成功した。ポルフィリン(2.1.2.1)は、折れ曲がった構造を持ち、内部に配位する金属イオンの種類によってその曲率が変化することを明らかにした。また、湾曲構造を用いて、2種類の環状ポルフィリン(2.1.2.1)三量体の合成に成功した。特にベンゼン架橋ポルフィリン(2.1.2.1)三量体はフラーレンと1:2の超分子構造を形成することを明らかにした。一般的にアセン類やポルフィリンに代表されるπ共役分子は平面性の高い構造を有している。一方、フラーレンやカーボンナノチューブなどの化合物はπ曲面を有しており、平面型の分子とは異なった性質を示す。本研究において、湾曲構造有する化合物としてポルフィリン(2.1.2.1)を見出し、その合成法の確立と機能開拓を目的に研究を遂行した。本年度は、ポルフィリン(2.1.2.1)の合成法を確立するとともに単結晶X線構造解析によるポルフィリン(2.1.2.1)の構造評価を行った。市販化合物から簡便に合成および;誘導体化が可能な1,2-ジピロリルベンゼン誘導体を用いて、酸触媒存在下ベンズアルデヒドと環化および酸化させることでポルフィリン(2.1.2.1)を比較的良好な収率で得ることに成功した。この反応は、電子供与基や電子球引基を持つベンズアルデヒド誘導体の他、チオフェンやピロール等のヘテロ環、エチニル基など幅広い置換基を導入可能な一般性の高い合成法であった。さらに、1,2-ジピロリルベンゼンのベンゼン環をチオフェン環に置き換えることにも成功し、様々な芳香環を導入出来る可能性を見出した。また、ポルフィリン(2.1.2.1)は一般的なポルフィリンと同様の配位子構造を持つため、様々な金属錯体へと誘導することにも成功した。これまでに、ニッケル、銅、パラジウム、白金、スズ、レニウム錯体の合成に成功している。ポルフィリン(2.1.2.1)の構造は単結晶X線構造解析によって明らかにした。ポルフィリン(2.1.2.1)は、架橋o-フェニレン部位の立体障害によって大きく歪んだ構造を有していた。また、配位子する金属の大きさや配位構造によって曲率が変化し、中心部の金属によってポルフィリン(2.1.2.1)の湾曲構造を制御出来る可能性を見出した。本研究の鍵であるポルフィリン(2.1.2.1)の合成法を確立し、様々な誘導体を合成することに成功した。また、ポルフィリン(2.1.2.1)の構造を単結晶X線構造解析によって明らかにし、ポルフィリン類では珍しく大きな湾曲構造を示した。現在、この湾曲構造を活用した環状多量体の合成および単離にも成功しつつあるなど、π曲面をもつ新たな分子として有望である。またこれらの結果は、論文1件および国内および国際学会にて発表を行った。これまでに、市販化合物から簡便に合成および誘導体化が可能な1,2-ジピロリルベンゼン誘導体を用いて、酸触媒存在下ベンズアルデヒドと環化および酸化させることでポルフィリン(2.1.2.1)を比較的良好な収率で得ることに成功した。さらに、ポルフィリン(2.1.2.1)の湾曲構造を活かして環状ポルフィリン多量体の合成を試みた。1,2,4,5-テトラピロリルベンゼンを用いて環化反応を行うことで環状ポルフィリン多量体に成功し、単結晶X線結晶構造解析からベルト状の構造であることを確認した。またこの環状ポルフィリン多量体はフラーレンと超分子錯体を形成するとも見出した。以上のように、本研究において、湾曲構造を有するポルフィリン(2.1.2.1)や環状構造を有する化合物の合成法を確立し、この湾曲構造を活用した超分子構造や有機半導体への応用の可能性を見出すことに成功した。ポルフィリン(2.1.2.1)の更なる誘導体化および機能開拓を目指して以下の研究を遂行する。[1]「湾曲構造を活用した環状多量体の合成」環状多量体の合成には、テンプレート分子や歪みを解消するための中間体が必要であるが、ポルフィリン(2.1.2.1)はそれ自身が湾曲構造を持つため、環状多量体合成のためのモノマーとして有用であると考えられる。

[2]「多環芳香環が縮環したポルフィリン(2.1.2.1)の合成およびホスト-ゲスト化学への展開」ポルフィリン(2.1.2.1)の曲がったπ曲面は、フラーレンなどの分子に対してホスト分子として利用可能であると考えられる。そこで、分子認識能の向上を目指して、多環芳香環が縮環したポルフィリン(2.1.2.1)の合成を行い、ホスト分子としての調査を行う。[3]「有機薄膜太陽電池材料への応用を目指した電子球引性基を導入したポルフィリン(2.1.2.1)の合成とデバイス応用」近年、非平面構造有する化合物が、有機薄膜太陽電池の材料として有望であることが報告されている。そのため、ポルフィリン(2.1.2.1)にフタルイミド基などの電子求引性基を導入して、新たなn型材料の開発を試みる。材料科学
カルモジュリンの心筋細胞内動態を標的とした新しい心肥大、心不全抑制治療法の探査

我々は、心筋筋小胞体のCa2+放出チャンネルであるリアノジン受容体(RyR2)からRyR2の修飾蛋白の一つであるカルモジュリン(CaM)が解離することによってRyR2が構造変化を来たし、不全心筋や致死的不整脈等でみられるRyR2からの異常なカルシウム放出に寄与していると報告してきた。しかし、RyR2から解離したCaMの役割については、まだ解明されていなかった。本研究では、RyR2から解離したCaMの役割を解明するとともに、心不全や心肥大のシグナル伝達にRyR2から解離したCaMがどのように関わっているかを検証した。心肥大を惹起するアンジオテンシンII (AngII)を心筋細胞に負荷し、内因性CaMの細胞内動態を評価したところ、AngII負荷によりRyR2に結合しているCaMは減少し、核内のCaMは増加していた。さらに、CaMの核内移行のキャリアーとなり得るGRK5の細胞内動態も評価したところ、AngII負荷によりCaMと同様に核内のGRK5発現量は増加していた。また、心肥大シグナル伝達を担うヒストン脱アセチル化酵素(HDAC5)は核外に移行しており、心肥大のシグナルが活性化されていることが実証された。次に、RyR2からのCaMの解離を抑制すると言われているダントロレンをAngIIやPEを負荷する前に投与したところ、RyR2からのCaMの解離、核内へのCaMの移行や、核内GRK5発現量も抑制され、HDAC5の核外への移行も抑制された。さらに、特異的にRyR2のCaMを強制的に解離されるスラミンを負荷した心筋細胞やTACモデルでもCaM、GRK5、HDAC5の細胞内動態を評価したところ、AngII負荷と同様な動態を示した。この結果からRyR2からのCaMの解離を抑制することやGRK5の核内移行を抑制することで、心肥大や心不全の進展を抑制できる可能性があることが示唆された。本研究では筋小胞体上に存在するCa放出チャンネルであるリアノジン受容体(RyR2)から解離したカルモジュリン(CaM)が心肥大や心不全のシグナル伝達に重要な役割をしているとの仮説に基づいて、単離心筋細胞の免疫染色法を用いて研究を行った。まず、心肥大を惹起するアンジオテンシンII (AngII)、フェニレフリン(PE)を心筋細胞に負荷し、内因性CaMの細胞内動態を評価した。その結果、AngIIやPE負荷によりRyR2に結合しているCaMは減少し、核内のCaMは増加していた。さらに、CaMの核内移行のキャリアーとなり得るGRK5の細胞内動態も評価したところ、AngIIやPE負荷によりCaMと同様に核内のGRK5発現量は増加していた。次に、RyR2からのCaMの解離を抑制すると言われているダントロレンをAngIIやPE負荷する前に投与したところ、RyR2からのCaMの解離は抑制され、核内へのCaMの移行も抑制された。さらに核内GRK5発現量も抑制され、HDAC5の核外への移行も抑制された。さらに、特異的にRyR2のCaMを強制的に解離されるスラミンを負荷し、CaM、GRK5、HDAC5の細胞内動態を評価したところ、AngIIやPE負荷と同様な動態を示した。すなわち、RyR2からCaMは解離し、核内へ移行、それに伴いGRK5も核内へ移行し、HDAC5は核外へ移行した。この結果はRyR2からのCaMの解離が、病的な心肥大の進展に関わっており、このRyR2からのCaMの解離を抑制することにより、病的な心肥大や心不全の進展を防ぐことができる可能性があることが示唆された。単離心筋細胞を用いた心筋細胞内のカルモジュリンの免疫染色法の条件設定を確立できたことにより、その後の研究がスムーズに行うことが出来た。また、この成果は国内外で研究発表することができた。研究の細部を詰めることにより、論文作成まで可能な状態である。

次に、RyR2からのCaMの解離を抑制すると言われているダントロレンをAngIIやPE負荷する前に投与したところ、RyR2からのCaMの解離、核内へのCaMの移行や、核内GRK5発現量も抑制され、HDAC5の核外への移行も抑制された。さらに、特異的にRyR2のCaMを強制的に解離されるスラミンを負荷し、CaM、GRK5、HDAC5の細胞内動態を評価したところ、AngIIやPE負荷と同様な動態を示した。また、GRK5の活性阻害薬であるAmlexanoxを投与することで、CaMの核内移行は制御された。この結果はRyR2からのCaMが解離することで、CaM-GRK5複合体の核内移行が病的な心肥大の進展に関わっており、このRyR2からのCaMの解離を抑制すること、またGRK5の核内移行を抑制することにより、病的な心肥大や心不全の進展を防ぐことができる可能性があることが示唆された。現在、論文作成も進んでおり、残す実験も後一つとなっているが、既に論文の構成はほぼ固まっており、今夏中には投稿予定である。我々は、心筋筋小胞体のCa2+放出チャンネルであるリアノジン受容体(RyR2)からRyR2の修飾蛋白の一つであるカルモジュリン(CaM)が解離することによってRyR2が構造変化を来たし、不全心筋や致死的不整脈等でみられるRyR2からの異常なカルシウム放出に寄与していると報告してきた。しかし、RyR2から解離したCaMの役割については、まだ解明されていなかった。本研究では、RyR2から解離したCaMの役割を解明するとともに、心不全や心肥大のシグナル伝達にRyR2から解離したCaMがどのように関わっているかを検証した。心肥大を惹起するアンジオテンシンII (AngII)を心筋細胞に負荷し、内因性CaMの細胞内動態を評価したところ、AngII負荷によりRyR2に結合しているCaMは減少し、核内のCaMは増加していた。さらに、CaMの核内移行のキャリアーとなり得るGRK5の細胞内動態も評価したところ、AngII負荷によりCaMと同様に核内のGRK5発現量は増加していた。また、心肥大シグナル伝達を担うヒストン脱アセチル化酵素(HDAC5)は核外に移行しており、心肥大のシグナルが活性化されていることが実証された。次に、RyR2からのCaMの解離を抑制すると言われているダントロレンをAngIIやPEを負荷する前に投与したところ、RyR2からのCaMの解離、核内へのCaMの移行や、核内GRK5発現量も抑制され、HDAC5の核外への移行も抑制された。さらに、特異的にRyR2のCaMを強制的に解離されるスラミンを負荷した心筋細胞やTACモデルでもCaM、GRK5、HDAC5の細胞内動態を評価したところ、AngII負荷と同様な動態を示した。この結果からRyR2からのCaMの解離を抑制することやGRK5の核内移行を抑制することで、心肥大や心不全の進展を抑制できる可能性があることが示唆された。今後は、この研究成果(RyR2からのCaMの解離を抑制することの重要性)の信憑性をより強固なものにしていくために、CaM高親和性ノックインマウスなどを作成し、CaMの心筋細胞内動態に注目した全く新しい病的心肥大、心不全抑制効果を要する薬や治療法の探査を目指す。今後は、この研究成果(RyR2からのCaMの解離を抑制することの重要性)の信憑性をより強固なものにしていくために、CaM高親和性ノックインマウスなどを用いて(作成済み)、圧負荷心不全モデル(TACモデル)を作成し、心不全抑制効果や致死的不整脈の減少効果などを検証することにより、CaMの心筋細胞内動態に注目した全く新しい病的心肥大、心不全抑制効果さらには致死的不整脈に対する薬や治療法の探査を目指す。
走化性モデルと複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の研究

本研究課題では次の2つの研究に関する数学的研究を行うことを目的としていた。A.走化性モデルの時間大域的可解性及び解の漸近挙動B.複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の時間大域的可解性及び解の漸近挙動研究最終年度にあたる平成30年度は、研究A、研究Bの双方の研究の完成と総括を中心に行った。研究Aについては、前年度までに考察した幾つかの走化性モデルの時間大域的可解性と解の漸近挙動に関する研究の完成と総括を中心に行った。特に、拡散項、凝集項、増殖項の一般化をしたモデルについて、時間局所解の存在と一意性、時間大域解の存在と有界性、有限時刻で爆発する解の存在について研究成果を2編の論文としてまとめ、専門誌に投稿した。また、2種の走化性モデルや癌浸潤モデルに対しても同様に研究の完成と総括を行い、専門誌に論文を発表した。特に、爆発解の存在時刻に対する下からの評価について、先行研究を改良する精密な結果を得ることができた。研究Bについては、初年度に考察した方程式の拡散項が空間変数にも依存する場合や方程式が1階導関数やポテンシャルを含む場合の研究の完成と総括を中心に研究を進めた。特に解の爆発や消滅についての研究はほぼ完成したといえる。得られた研究成果は、日本数学会秋季総合分科会、日本数学会年会、発展方程式研究会等の国内学会で報告した。さらに、国際会議「The 12th AIMS Conference on Dynamical Systems, Differential Equations and Applications」における講演やドイツ・パーダーボルン大学のMichael Winkler教授のグループの研究者を招聘して国際研究集会の開催により、本研究課題の総括として有意義な研究交流ができた。本研究では、発展方程式の抽象理論と実解析的手法を用いて、次の2つのテーマに関する数学的研究を行うことを目的としている。A.走化性モデルの時間大域的可解性及び解の漸近挙動B.複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の時間大域的可解性及び解の漸近挙動研究初年度にあたる平成28年度は、A、Bの準備的な研究を中心に行った。特に研究Aについては、感応性関数をもつ走化性モデルの時間大域的古典解の存在と有界性に関する決定的な結果を得ることに成功した。また、これまで扱われていなかった流体中の2種の走化性モデルの研究を行い、空間次元が2次元という特別な場合ではあるが、今後の研究の指針となる基礎的な結果を得ることができた。さらに、感応性関数をもつ走化性モデルの解の漸近挙動に関する詳細な結果を得ることにも成功した。以上の結果は、すべて論文としてまとめ、日本数学会秋季総合分科会、日本数学会年会、発展方程式研究会等の国内学会で報告し、国際会議「The 11th AIMS conference on Dynamical Systems, Differential Equations and Applications」における招待講演の中で報告した。研究Bについては、熱方程式に対して知られる解の爆発解析の手法を、複素ギンツブルク・ランダウ型方程式に適用できることを論文としてまとめ専門誌へ投稿した。さらに、一般化に向けた準備的な研究を進めることができた。また、本研究課題に関連する研究者を海外から多数招聘して、国際研究集会を東京理科大学において開催し、有意義な研究交流を行った。本研究では、走化性モデルの時間大域的可解性及び解の漸近挙動に関する研究Aと複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の時間大域的可解性及び解の漸近挙動に関する研究Bを並行して行うことを目的とし、研究初年度にあたる平成28年度は、A、Bの準備的な研究を行うことが目標であった。研究実績の概要で書いた通り、Aについては、多数の問題に取り組み、それぞれに対する価値のある結果を導くことができたことから、順調に進展したと評価できる。Bについては、すでに見通しが立っていたことを数学的に厳密に議論した上で論文としてまとめ、一般化に向けた準備的な研究を進めることができたことから、順調に進展してると評価した。総合的に当初の計画以上に進展していると判断した理由の1つとして、研究Aにおいて、特に感応性関数をもつ古典的なKeller-Segel系の解の有界性に関して、Winklerによる証明の間違いを修正し、決定的な結果を得たことがあげられる。また、その結果は幾つかの研究で使用されていたことから、証明が不完全であることの学術的問題は大きいため、それが改善できたことの意義がとても大きく準備的な研究を超えていると判断した。さらに、感応性関数をもつKeller-Segel系の解の漸近挙動については、ロジスティック項等の人工的な補正項をもつ特別な場合を除いて先行結果は見当たらない。これに対して、本研究ではロジスティック項等で補正しない、本来のKeller-Segel系に対して、解の漸近挙動を決定する方法を発見した。これも当初の計画を超えた成果である。本研究は次の2つのテーマに関する数学的研究を行うことを目的としている。A.走化性モデルの時間大域的可解性及び解の漸近挙動B.複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の時間大域的可解性及び解の漸近挙動研究2年目にあたる平成29年度は、研究Aを中心に具体的な研究課題を複数設定して実施した。研究Bについては、解の挙動に関する研究を実施した。

特に研究Aについては、感応性関数をもつ走化性モデルの時間大域的古典解の存在と有界性に関して平成28年度に得ていた決定的な結果をもとに、ドイツ・パーダーボルン大学のMichael Winklerk氏との共同研究により、時間が経つと解が定数定常解に収束するという結果を得ることに成功した。また、流体中の2種の走化性モデルの研究を行い、空間次元が2次元の場合の平成28年度の考察に基づいて、平成29年度は空間次元が3次元の場合の解の時間大域的可解性と解の漸近挙動に関する結果を得ることができた。以上の結果は、すべて論文としてまとめ、日本数学会秋季総合分科会、日本数学会年会、国際会議「Equadiff 2017」、国際研究集会「Mathematical aspects of chemotaxis, cross-diffusion effects and concentration phenomena」等の国内外の研究集会で報告した。また、本研究課題に関連する研究者をドイツ・パーダーボルン大学のMichael Winkler氏の学生や研究員を中心に、海外から多数の研究者を招聘して、国際研究集会「The 3rd International Workshop on Mathematical Analysis on Chemotaxis」を東京理科大学において開催し、有意義な研究交流を行った。本研究では、走化性モデルの時間大域的可解性及び解の漸近挙動に関する研究Aと複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の時間大域的可解性及び解の漸近挙動に関する研究Bを並行して行うことを目的とし、研究2年目にあたる平成29年度は、研究A、Bの具体的な研究を行うことが目標であった。研究実績の概要で書いた通り、研究Aについては、多数の問題に取り組み、それぞれに対する価値のある結果を導くことができたことから、当初の計画以上に進展したと評価できる。研究Bについては、解の消滅に関する限定的な結果を得るにとどまったことから、期待以上に進展したとは評価し難い。総合的におおむね順調に進展していると判断した理由の1つとして、研究Aにおいて、特に感応性関数をもつ古典的なKeller-Segel系に対して、初めて解の漸近挙動に関する結果を得たことがあげられる。これまで感応性関数をもつ走化性方程式の解の漸近挙動については、ロジスティック項等の人工的な補正項をもつ特別な場合にみ先行結果があった。これに対して、本研究ではロジスティック項等で補正しない、本来のモデルに対して、解の漸近挙動を決定する方法を発見し、Michael Winkler氏と共著論文を完成させ、国際専門誌「Nonlinear Analysis」に掲載が決定した。他に、準線形退化型Keller-Segel系の解の有限時刻爆発を証明する新しい方法とchemotaxis-haptotaxis系の解の有界性を導く新しいテスト関数を発見できたことも重要な成果であると考えている。本研究課題では次の2つの研究に関する数学的研究を行うことを目的としていた。A.走化性モデルの時間大域的可解性及び解の漸近挙動B.複素ギンツブルク・ランダウ型方程式の時間大域的可解性及び解の漸近挙動研究最終年度にあたる平成30年度は、研究A、研究Bの双方の研究の完成と総括を中心に行った。
脂防組織由来幹細胞を用いた組織再生、血管新生に関する基礎的、臨床的研究

脂肪吸引手術による吸引物(元来、生理食塩水、血液、脂肪組織破砕物からなる)は浮遊する脂肪部分と下層の液体成分に分けることが可能である。脂肪部分由来の細胞をprocessed lipoaspirate(PLA)細胞、液体部分由来の細胞をliposuction aspirate fluid(LAF)細胞と呼ぶ。どちらも組織、液体を処理して採取した細胞群をstromal vascularfractions(SVF)と呼ぶ。両部分より採取したSVFを新鮮状態で、また培養して、その細胞群の性質を調べた。ほぼ同等数のLAFとPLA cellsが採取されたが、接着培養するとLAFの方が有意に少なかった。新鮮LAF細胞から採取したCD34+CD45-細胞を接着培養すると細胞の増殖が観察され、LAFには脂肪由来幹細胞(ASC)が含まれていることが示唆された。新鮮細胞の状態ではPLAとLAFは非常に異なる細胞表面マーカーを示すが、培養後の接着細胞は非常に似通った細胞増殖能、形態、分化能、細胞表面抗原発現を示した。接着培養すると、PLA細胞もLAF細胞もCD29,CD44,CD49d,CD73,CD90,CD105,CD151の発現する細胞の割合が増え、CD31、Cn45の発現する細胞の割合は減少した。Multicolor FACSによる分析により、新鮮SVFは不均一な細胞集団であることがわかり、血液由来細胞群(CD45+)、ASC (CD31-CD34+CD45-CD90+CD105-CD146-),血管内皮細胞(CD31+CD34+CD45-CD90+CD105lowCD146+),血管周細胞(CD31-CD34-CD45-CD90+CD105-CD146+)、その他の細胞で構成されていることがわかった。接着培養を始めると、ASCはCD105の発現が劇的に増加した。ASCsは細胞培養により時間の経過とともにCD34発現を失う細胞が増えたが、われわれの細胞培養法においてはCD34を少なくとも10-20週間は維持することが可能であった。これらの結果は脂肪吸引物由来の細胞が細胞療法において有用であることを示唆している。脂肪由来幹細胞について、脂肪吸引術によって得られる吸引脂肪のみならず、吸引廃液からも得られることがわかった。吸引廃液からも吸引脂肪の1/3程度の量の脂肪幹細胞が得られ、また吸引脂肪からは正常脂肪組織塊と比較して、1/2から1/5の脂肪由来幹細胞しか得られないことが明らかとなった。すなわち、吸引脂肪は機械的破壊により、成熟脂肪細胞間に存在する脂肪幹細胞(ASC)が廃液中に遊離されていることが示唆された。我々は培養方法を最適化することによりCD34陽性ASCを培養増殖することに成功し、倍化時間20-50時間での増殖を実現し、20週の培養においても10-20%のCD34+ASCが得られた。吸引脂肪由来幹細胞(PLA)と吸引廃液由来幹細胞(LAF)の際について調べた。

PLAと比較し、LAFは新鮮な状態においては、LAFに多くの末梢血由来CD45+細胞が含まれており、CD31+血管内皮細胞が見られた。しかしながら、培養して接着細胞をPLAとLAFで比較すると、そのCD抗原プロファイルは酷似しており、LAFからもPLAと同様のASCが多数採取されていることが明らかとなった。新鮮な状態ではCD34+細胞が多く、CD105+細胞は1%程度であるが、培養1週後にはCD105+細胞が70-90%となり、細胞の表現型が大きく変化することが明らかとなった。その後の培養においても同様のプロファイルが見られ、新鮮時に見られた内皮細胞などは培養とともに失われることがわかった。また、吸引脂肪にASCを混合してSCIDマウスに移植することにより、ASCが血管内皮細胞に分化し、さらに生着脂肪組織の量が20-50%増加することが示され、組織増大目的の臨床応用が可能と思われた。脂肪吸引手術による吸引物(元来、生理食塩水、血液、脂肪組織破砕物からなる)は浮遊する脂肪部分と下層の液体成分に分けることが可能である。脂肪部分由来の細胞をprocessed lipoaspirate (PLA)細胞、液体部分由来の細胞をliposuction aspirate fluid (LAF)細胞と呼ぶ。どちらも組織、液体を処理して採取した細胞群をstromal vascularfractions (SVF)と呼ぶ。両部分より採取したSVFを新鮮状態で、また培養して、その細胞群の性質を調べた。ほぼ同等数のLAFとPLA cellsが採取されたが、接着培養するとLAFの方が有意に少なかった。新鮮LAF細胞から採取したCD34+CD45-細胞を接着培養すると細胞の増殖が観察され、LAFには脂肪由来幹細胞(ASC)が含まれていることが示唆された。新鮮細胞の状態ではPLAとLAFは非常に異なる細胞表面マーカーを示すが、培養後の接着細胞は非常に似通った細胞増殖能、形態、分化能、細胞表面抗原発現を示した。接着培養すると、PLA細胞もLAF細胞もCD29,CD44,CD49d,CD73,CD90,CD105,CD151の発現する細胞の割合が増え、CD31、CD45の発現する細胞の割合は減少した。Multicolor FACSによる分析により、新鮮SVFは不均一な細胞集団であることがわかり、血液由来細胞群(CD45+)、ASC(CD31-CD34+CD45-CD90+CD105-CD146-),血管内皮細胞(CD31+CD34+CD45-CD90+CD105lowCD146+),血管周細胞(CD31-CD34-CD45-CD90+CD105-CD146+)、その他の細胞で構成されていることがわかった。接着培養を始めると、ASCはCD105の発現が劇的に増加した。ASCsは細胞培養により時間の経過とともにCD34発現を失う細胞が増えたが、われわれの細胞培養法においてはCD34を少なくとも10-20週間は維持することが可能であった。これらの結果は脂肪吸引物由来の細胞が細胞療法において有用であることを示唆している。
湿度コントロ-ルによる鋼製箱桁・主塔内部の防錆の可能性

(1)実橋における腐食環境調査(a)本四公団大島大橋をはじめ、5つの実橋において裸鋼板の腐食環境調査を612ヶ月行ない、ボックス内であれば、きれいな鋼板で0.1μm/年、錆のある鋼板で4μm/年程度であることがわかった。ちなみに外部では40μm/年といわれており、ボックス内部の腐食環境は極めてよく、塩分などの侵入、漏水のないボックスであれば内部は無塗装でも問題がないことになる。(b)橋梁ボックスタワ-ではボックス桁に比べ、腐食環境が劣ることが、鋼板の腐食量調査より明らかとなった。この原因としては現行タワ-に設けられている換気口により空気とともに塩が流入するためであることが実証的に明らかにされた。換気口は防錆上何ら益のないことが示された。(c)海塩粒子の測定ボックス内部の海塩粒子量を測定し、少ないことが示された。(d)シリカゲルによるボックス内部の防錆ボックス内部の除湿をシリカゲルで行なう防錆法を検討し、工学的に十分行いうる方法であることを示した。(1)鋼ボックス断面タワー内部の防錆に除湿機を導入したときの経済性について検討を行った。対象としたのは明石海峡大橋主塔設計案である。換気回数n=0.02回/時間を仮定し、相対湿度を60%以下にするという条件で、東京標準気候モデルを用いてシミュレーションを行った。夜間ほう射冷却も考慮に入れている。その結果、50KWの除湿機2台を一日平均6時間程度稼働させることで十分防錆が行なえるとの結論を得た。除湿機の設置、メインテナンス等を考慮しても、塗装よりも格段に経済性の面で優ると判断された。(2)実際の主塔内部の腐食、環境を調べる目的で、本四公団大島大橋ボックス主塔内部に無塗装鉄片を置き、その腐食状況を長期的に調べた。その結果、鉄片の多くは数カ月で十分さびることが判明した。したがって主塔内部を無塗装にする際には湿度コントロールを行なう必要があることになる。同橋の補剛桁内にも鉄片を置いたが、こちらの方の錆は圧倒的に少なかったが、これは橋面のアスファルトの保温効果のために結露が生じなかったことによるものと判断される。(3)除湿気流の流れのシミュレーションを行ない、ダクトを設けなくとも塔内の隅々まで湿度を下げられることが判明した。
遺伝子治療をめざした制限酵素の認識特異性の拡大

大腸菌H709c株ゲノムDNAから、EcoO109I制限修飾酵素遺伝子をコードする9-kbのBamHI断片をクローニングした。このうちの3.2-kbのEcoT22I断片上に、制限修飾酵素遺伝子はクラスターを形成していた。制限修飾酵素遺伝子の周辺配列を解析した結果、P4ファージのインテグラーゼと溶菌サイクルに必須な遺伝子群が整列しており、大腸菌K-12株ゲノムの96分に存在するleuX遺伝子下流に、制限修飾酵素遺伝子を含む遺伝子群がインテグレートされたゲノム構造を持つことから、P4ファージの宿主菌株間でEcoO109Iシステムが水平伝播した可能性が示唆された。さらに、本菌株ではI型やメチル化DNA特異的エンドヌクレアーゼ遺伝子が欠損しており,唯一の制限系としてEcoO109I-II型制限修飾システムを保持するという、大腸菌としては極めて特異なゲノム構造を持つことが明らかとなった。制限酵素を大量発現させるため、3.2-kbEcoT22I断片から2.7-kbのHpaI-EcoT22I断片を切り出し、pUC118のlacプロモーターの下流に挿入して、IPTG添加で誘導を行った結果、制限酵素の生産量は親株であるH709c株の約160倍に増加した。高発現組換え体大腸菌から、3種類のカラムクロマトグラフィーを用いて、制限酵素を電気泳動的に均一に精製した。ハンギングドロップ法を用いて結晶化条件を検討した結果、PEG 4000を沈殿剤として用いたとき、柱状結晶が生成した。また、高発現化の過程で、制限酵素遺伝子の上流に存在する0.3-kbのORFから合成される蛋白質が、制限酵素遺伝子の転写活性化に関与していることも明らかにした。
胃がん関連マイクロＲＮＡの探索とエピジェネティック治療への応用

本研究では、胃悪性腫瘍における重要なマイクロRNAとして、胃がんにおけるmiR-29cの発現低下および胃MALTリンパ腫におけるmiR-142、-155の発現上昇をそれぞれ特定した。胃がん細胞に対しSAHAやDZNepなどのEZH2阻害薬を投与したところ、miR-1246、-302a、-4448の活性化を認めた。さらにエピジェネティクス変化により制御されているマイクロRNAを特定する独自のChIP on chip法を開発した。胃発がん過程においてマイクロRNAの発現異常は重要な役割を果たしており、エピジェネティック治療ががん抑制マイクロRNAの活性化を介して抗腫瘍効果を発揮することが示された。申請者らは一部のマイクロRNA(miRNA)がエピジェネティクス変化により制御されており、がん治療の新たな標的になり得ることを世界に先駆けて報告した。本研究では、miRNAに加え、近年同定された長さ1-10k塩基程度のnon-coding RNAであるlong interventional non-coding RNA(lincRNA)の発現解析およびエピジェネティクス解析を行うことで、胃がんをはじめとする消化器がんの分子病態の解明や革新的な治療戦略を構築することを目的とした。H23年度の研究では、胃がん細胞株ならびに肝がん細胞株に対してDNAメチル化阻害薬やピストン脱アセチル化酵素阻害薬を用いたエピジェネティック治療を行い、遺伝子発現の網羅的解析を行った。蛋白をコードする遺伝子のみならず、miRNAやlincRNAなどのnon-coding RNAの発現プロファイル解析も行った。解析の結果、複数のmiRNAやlincRNAがエピジェネティック治療によって有意な発現変化を示すことが明らかになった。また、胃がん細胞と肝がん細胞におけるエピジェネティック治療後のnon-coding RNAの発現プロファイルを比較したところ、全く異なる発現パターンを示しており、悪性腫瘍におけるエピジェネティクス変化も臓器により異なっていることが示唆された。さらに胃がん細胞をヒストン脱アセチル化酵素阻害薬であるSuberoylanilide Hydroxamic Acidで処理したところ、細胞増殖の抑制と共にinduced pluripotent stem(iPS)細胞に特異的なmiRNA発現プロファイルと同様の変化を認めた。これは胃がん細胞がエピジェネティック治療により多分化能を有する細胞にリプログラミングされたことを示唆しており、正常細胞へ分化誘導することで全く新しい胃がんの治療法が開発されることが期待される。近年、がん細胞においてヒストンH3の27番目のリジン残基が高頻度にメチル化されており、クロマチン構造の変化を介してがん抑制遺伝子が不活性化されていることが明らかとなった。EZH2はヒストンH3の27番目のリジン残基を修飾するメチル化酵素であり、多くのがん細胞でその発現が上昇していることが報告されている。3-deazaneplanocin A (DZNep)はEZH2を阻害することで抗腫瘍効果を発揮することが明らかとなり、エピジェネティック治療薬の候補として注目されている。今年度の研究では、胃がん細胞株AGSならびにその比較対象として肝がん細胞株HepG2を用い、EZH2阻害薬の投与によるマイクロRNAの発現プロファイルと抗腫瘍効果について検討した。DZNepならびにヒストン脱アセチル化酵素阻害薬であるsuberoylanilide hydroxamic acid (SAHA)をAGSおよびHepG2細胞に添加したところ、いずれの細胞においてもEZH2の発現が低下し、細胞増殖能が抑制されることが示された。さらにマイクロRNAの発現変化を網羅的に解析した結果、miR-1246がSAHAおよびDZNepの両薬剤により共通して活性化されることが明らかになった。また、miR-4448がDZNepの投与により、miR-302aがSAHAの投与によりそれぞれ活性化することが示された。EZH2阻害薬の投与により、これらのマイクロRNAの標的遺伝子であるDYRK1A、CDK2、BMI-1、Girdinの発現が抑制され、アポトーシスの活性化、細胞周期停止、細胞遊走能の低下などが認められた。以上から、がん細胞にEZH2阻害薬を投与すると、複数のがん抑制マイクロRNAを活性化することで抗腫瘍効果を発揮することが示された。胃がんの発生・進展に重要な役割を果たすマイクロRNAを探索するため、胃がん組織におけるマイクロRNAの発現プロファイルの網羅的解析を行った。その結果、miR-29c発現が非がん部に比べがん部において有意に低下していることを見出した。さらにmiR-29c発現が前がん病変である胃腺腫から早期胃がんへと進行する過程で低下し、進行胃がんでは早期胃がんよりも顕著にmiR-29c発現が低下することを発見した。miR-29cの標的遺伝子の一つであるMcl-1の発現が進行胃がんにおいて上昇しており、miR-29cの発現低下がMcl-1を活性化して胃発がんに重要な役割を果たしていることが考えられた。

また、AGS細胞に選択的COX-2阻害薬であるcelecoxibを投与したところ、miR-29cの有意な発現上昇を認め、標的遺伝子Mcl-1の発現が抑制されることでアポトーシスを誘導した。次に、胃がんにおいてエピジェネティクス変化により制御されているマイクロRNAの同定を試みた。クロマチン免疫沈降法(ChIP)と独自に開発したマイクロRNAプロモーターアレイ解析を組み合わせたChIP on chip解析にて、アセチル化ヒストンH3およびメチル化ヒストンH3リジン4の有意なシグナル上昇を認め、かつCpGアイランドを有している22のマイクロRNAを同定した。特にがん抑制マイクロRNAとして機能することが報告されているmiR-9が非がん胃粘膜に比べ胃がん組織で有意に低下していた。胃がん細胞株をDNAメチル化阻害薬およびヒストン脱アセチル化酵素阻害薬で処理することによりmiR-9の著明な発現上昇を認めた。以上の結果から、miR-9およびmiR-29cが胃がんにおける新たな分子マーカーになると同時に、エピジェネティック治療の標的になることが考えられた。H23年度中の目標であったDNAメチル化やピストン修飾などのエピジェネティクス変化により制御されている胃がん関連miRNAおよびlincRNAの同定については、non-codingRNA発現の網羅的解析によりほぼ完了している。25年度が最終年度であるため、記入しない。当初の目的であった胃がん関連マイクロRNAの探索については、順調に進展していると判断している。十分なインフォームド・コンセントのもと、胃がん患者より採取した胃がん組織および非がん胃粘膜を用いて網羅的解析を行い、胃がんの発生・進展に深く関与するマイクロRNAとしてmiR-29cを同定した。miR-29cの発現は正常胃粘膜よりも前がん病変で低下し、早期胃がん、進行胃がんと病期や悪性度が進むにつれさらに低下することを見出した。さらにがん遺伝子Mcl-1を標的としていることから、miR-29cの発現低下はMcl-1の上昇を誘導し、がんの進展に重要な役割を果たすと考えられる。miR-29cが胃がんの新たな分子マーカーとなり、胃がん患者の予後や治療反応性などの予測因子となることが期待される。一方、エピジェネティック治療への応用についても、おおむね順調に進展している。クロマチン免疫沈降法(ChIP)と独自に開発したマイクロRNAプロモーターアレイ解析を組み合わせたChIP on chip解析にて、miR-9が胃がん細胞においてエピジェネティクス変化により制御されていることを発見した。miR-9はがん抑制マイクロRNAとして機能することが報告されているが、胃がん細胞をDNAメチル化阻害薬およびヒストン脱アセチル化酵素阻害薬で処理することによりmiR-9の著明な発現上昇を認めた。miR-9が胃がんに対するエピジェネティック治療の新たな標的になると考えられる。今年度以降はH23年度の研究により同定された胃がん
カツオ漁船乗組員の海域移動と生活交流に関する研究 -生活史法による実態把握-

本研究の目的は、カツオを漁獲する漁船乗組員たちを漁撈集団、そして、そこでの集団生活を海上生活構造と位置付けて、その移動と交流に着目した実態把握を推進し、その特性を明らかにすることである。漁船の大型化、航海・漁撈機器の高度化、エンジンの高馬力化のなかで、太平洋海域を大きく移動しながらカツオを漁獲する漁船乗組員の生活にっいて、生活史法をもとに検討した。主たるフィールドは沖縄県(宮古島市)、鹿児島県(枕崎市)、愛媛県(愛南町)、高知県(土佐清水市、中土佐町)、静岡県(焼津市)などである。カツオ漁船乗組員(現役者・引退者)のライフヒストリーをインタビューにより収集するとともに、関連のライフドキュメントを確保した。また、併せて、地域社会の基本的な文献・史料も収集して整理した。また、鰹節製造業者、さらには、マグロ漁船乗組員との対比によって、カツオ漁船乗組員の移動と交流の実態をより明確に把握できように配慮した。本研究で得られた知見を概括すると、以下のようになる。1.海上生活構造の生産的局面である漁業労働においては、閉鎖性、随時性、危険性という特殊性がより明確になり、カツオ漁船乗組員は労働規則・慣行上、大きく行動規制されている。特に、海域移動が拡大するに伴い、操業期間が長期化し、労働強化は顕著になっている。2.海上生活構造の消費的局面である衣食住については、漁業労働への従属性が高く、また、海域移動の拡大と航海期間の長期化のなかで、少しでも娯楽性を高めようとする生活の創意工夫が見られる。3.こうした環境下にあるカツオ漁船乗組員は母港への帰港、あるいは、補給地への寄港で、家族との交流、さらいは、地元住民との交流が物心の両面において展開されることが素描できた。この点は質的調査のメリットが遺憾なく、発揮でき、調査手法の妥当性も検証できた。(770字)本研究の目的は、カツオを漁獲する漁船乗組員たちを漁撈集団、そして、そこでの集団生活を海上生活構造と位置付けて、その移動と交流に着目した実態把握を推進し、その特性を明らかにすることである。(770字)初年度である平成15年度の研究実績は次のとおりである。本研究の目的を達成するために、フィールドワーク(実地調査)を精力的に推進した。具体的な調査研究に関しては、次の6点に留意して行なった。(1)漁業労働の特殊性(閉鎖性、随時性、危険性など)に起因する労働慣行・労働規則の実態を把握し、その特性を明らかにした。(2)漁業労働との相互補完性(漁業労働に対する従属性)を念頭に置いて、船内における消費生活上の慣行の実態を把握し、その特性を明らかにした。(3)漁船乗組員・漁船を単位にする「漁撈集団」の「海域移動」に着目しながら、オキ(海上)とオカ(陸上)における「生活交流」の詳細を把握し、その特性を明らかにした。(4)漁船乗組員を中心に据えるが、家族(家族歴)や水産関係団体(社史、業界史、組合史、市場史)、地域社会(自治体史)についても丹念に把握した。(5)口述内容はテープレコーダーに記録するとともに、写真などの映像資料のほか、船員手帳や船員名簿などのライフドキュメント、生活グッズも併せて収集した。本年度は以下の調査地でフィールドワークを行った。カツオ漁船乗組員(現役者、引退者)の生活史調査を進めるとともに、地域社会の基本的な文献・史資料などを整理した。また、必要に応じて、カツオ漁業やカツオ文化に関する資料・情報を関係機関で収集した。

生活史調査:沖縄県伊良部町、高知県中土佐町、高知県佐賀町、高知県宿毛市、高知県土佐清水市、徳島県海部町・海南町、愛媛県城辺町関連資料の収集調査:国立民族学博物館(大阪府)、広島大学(広島県)など。第2年度である平成16年度の研究実績は次のとおりである。本研究の目的を達成するために、フィールドワーク(実地調査)を精力的に推進した。具体的な調査研究に関しては、次の6点に留意して行なった。(1)漁業労働の特殊性(閉鎖性、随時性、危険性など)に起因する労働慣行・労働規則の実態を把握し、その特性を明らかにした。(2)漁業労働との相互補完性(漁業労働に対する従属性)を念頭に置いて、船内における消費生活上の慣行の実態を把握し、その特性を明らかにした。(3)漁船乗組員・漁船を単位にする「漁撈集団」の「海域移動」に着目しながら、オキ(海上)とオカ(陸上)における「生活交流」の詳細を把握し、その特性を明らかにした。(4)漁船乗組員を中心に据えるが、家族(家族歴)や水産関係団体(社史、業界史、組合史、市場史)、地域社会(自治体史)についても丹念に把握した。(5)口述内容はテープレコーダーに記録するとともに、写真などの映像資料のほか、船員手帳や船員名簿などのライフドキュメント、生活グッズも併せて収集した。本年度は以下のとおり、インフォーマント確保が容易にできた高知県下でのフィールドワークを行った。カツオ漁船乗組員(現役者、引退者)の生活史調査を進めるとともに、地域社会の基本的な文献・史資料などを整理した。また、必要に応じて.カツオ漁業やカツオ文化に関する資料・情報を関係機関で収集した。生活史調査:高知県土佐清水市、高知県土佐市、高知県奈半利町、高知県中土佐町、高知県佐賀町、高知県室戸市、愛媛県城辺町関連資料の収集調査:国立歴史民俗博物館(千葉県)、国立民族学博物館(大阪府)、名古屋大学(愛知県)第3年度である平成17年度の研究実績は次のとおりである。本年度は以下のとおり、インフォーマント確保が容易であった高知県や愛媛県、沖縄県でフィールドワークを推進した。また、必要に応じて、カツオ漁業や国際漁業に関する資料・情報を関係機関で収集した。生活史調査:高知県土佐清水市、高知県中土佐町、高知県佐賀町、愛媛県愛南町、沖縄県本部町、宮古島市(旧伊良部町)関連資料の収集調査:広島大学(広島県)、高知県漁連(高知県)最終年度である平成18年度の研究実績は次のとおりである。
突然死発症における喫煙の影響

乳幼児突然死症候群(SIDS)について主要なリスクファクターとして挙げられるのが喫煙である。このことから、我々は突然死にニコチンが影響していることを想定している。我々はニコチンを作用させた副腎髄質クロム親和細胞における遺伝子発現変化をDNAマイクロアレイにより解析し、約150程度の遺伝子において転写量の上昇または減少を確認し、現在これら遺伝子について解析中である。また、ニコチンの代謝に関わる遺伝子であるCYP2A6、CYP1A1、GSTT1の多型性の出現頻度について健常者群とSIDS群との間で比較した結果、表現型、遺伝子型ともに健常者群とSIDS群間で出現頻度に差は認められなかった。SIDS検体についてはニコチン受容体と低酸素関連遺伝子群についてもDNAシーケンシングにより変異検出を試みたが、タンパク質機能に異常をきたすような変異はみられなかった。今回の検討では日本人集団におけるニコチン代謝に関わる遺伝子群が、SIDS発症に関わる可能性は低いことが示唆された。乳幼児突然死症候群(SIDS)について様々な国で疫学調査が実施されているが、どの調査でも親側のリスクファクターとして挙げられるのが喫煙である。今回の研究では、ニコチンを作用させた副腎髄質クロム親和細胞における遺伝子発現変化をDNAマイクロアレイにより網羅的に解析し、ニコチンにより引きおこされる低酸素応答メカニズムの解明をおこなった。ニコチン刺激を与えていないものと比較し、約150程度の遺伝子において転写量の上昇または減少が確認された。現在はこれらの変動について有意なものを算出し、どのようなシグナリング経路との関連があるかについて絞りこみをおこなっている。さらにSIDSと診断された検体より抽出したDNAについて、ニコチン受容体を含む低酸素関連遺伝子群の異常の有無をエクソン領域について検討したところ、健常者にもみられる変異のみが確認され、タンパク質機能に異常をきたすような変異はみられなかった。平成24年度はニコチンの代謝に関わる遺伝子であるCYP2A6、CYP1A1、GSTT1の多型性の出現頻度について、健常者群とSIDS群との間で比較した。表現型、遺伝子型ともに健常者群とSIDS群間で出現頻度に差は認められず、このことから日本人集団におけるニコチン代謝に関わる遺伝子群が、SIDS発症に関わる可能性は低いことが示唆された。乳幼児突然死症候群(SIDS)について様々な国で疫学調査が実施されているが、どの調査でも親側のリスクファクターとして挙げられるのが喫煙であり、我々は突然死にニコチンが影響していることを想定している。平成23年度の研究では、ニコチンを作用させた副腎髄質クロム親和細胞、および肝細胞における遺伝子発現変化をDNAマイクロアレイにより網羅的に解析した。現在、これら細胞において変動のあった遺伝子について、経時変化および、ニコチン濃度変化における変動の違いを確認している。また、変動の確認された遺伝子群のなかには、シグナル伝達に関わる遺伝子や機能の解明されていない遺伝子も含まれていた。このことから、ニコチン作用により、細胞内で引きおこされるシグナル経路の解明や、新規遺伝子の機能解明をおこなっている。また、肝臓でのニコチン代謝を行うCYP2A6には多型が報告されており、特に4型はCYP2A6完全欠損であることが知られている。現在、SIDS検体集団と、コントロール検体集団でのCYP2A6の多型の関連解析をおこなっている。さらにSIDS検体においては、ニコチン受容体、低酸素応答に関わる遺伝子についてDNAシーケンスを行った。現在は低酸素応答因子によって制御されるとの報告のあるP450 oxidoreductaseについて、新規の非同義置換である、G537Sを確認した。SIDSに対する遺伝的背景の研究は国内外問わず盛んであり、遺伝的背景から原因を解明することは、法医分野での診断において重要な役割をもつと考えられる。乳幼児の突然死は家族にとって悲劇的なものであり、また社会的損失も大きいと考えられる。一方で、乳幼児に限らず、成人の虚血性心疾患を含めた突然死においても、喫煙は重要なリスクファクターであることから、細胞内応答を含めた病態の解明および診断法の確立による社会的貢献は大きいものと考えられる。DNAマイクロアレイによるニコチンで変動のある遺伝子の確認、SIDS検体における、変異検出や多型解析等交付申請書に記載した内容の実験計画について、ほぼ予定通り進めることができた。

DNAマイクロアレイにより網羅的に解析した遺伝子群についての変動を詳細に確認した後、これら遺伝子について、SIDS検体での変異および多型解析を進めていく予定である。また、アミノ酸置換の生じた変異が認められたものについては、発現ベクターを作製し、その活性を確認する予定である。また、機能が不明な遺伝子については、転写制御についての解明も行う予定である。SIDS検体において変異の確認されたアミノ酸置換体発現ベクターを作成するための試薬や細胞培養用の培地やPCR試薬の購入にあてる予定である。また転写調節領域での活性を調べるためのルシフェラーゼアッセイ系の試薬およびルミノメーターを購入する予定である。