hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
無花粉スギの分子育種基盤の構築とそれを用いた識別DNAマーカーの開発

スギ高密度連鎖地図の情報を利用して、雄性不稔遺伝子ms2, ms3, ms4がそれぞれ第5連鎖群、第1連鎖群、第4連鎖群に座乗することを明らかにした。そして、それぞれの雄性不稔遺伝子近傍の部分連鎖地図を構築した。また、4つの交配家系(TO13S, S3T67, F1N4, T5)について、ms1を含む領域の部分連鎖地図を作成した。これらの家系では、近傍マーカーを用いることにより、約96%以上の精度で無花粉スギを識別することができた。さらに、TO13S家系において、無花粉スギを識別するための簡易DNAマーカーを開発した。先行研究でスギ基盤連鎖地図の第9連鎖群に位置することが明らかになっている雄性不稔遺伝子ms-1については、ms-1近傍の部分連鎖地図に新たなマーカーを加え、既存の部分連鎖地図を高密度にした。雄性不稔遺伝子ms-2については、スギ基盤連鎖地図に散在するマイクロサテライトマーカーを利用し、ms-2がスギ基盤連鎖地図の第5連鎖群に位置することを明らかにし、ms-2近傍の部分連鎖地図を作成した。最もms-2の近傍に位置するマーカーを使用して家系内選抜を行った場合、94%の確率で無花粉スギを正しく評価することができた。雄性不稔遺伝子ms-3については、2010年に人工交配を行って作成した交配家系168個体の針葉を採取し、DNA抽出を行った。また、2013年7月にジベレリン処理を行って雄花の着花促進を行い、2014年2月に花粉稔性を顕微鏡を使用して評価した。得られた花粉稔性データと、スギ基盤連鎖地図上に散在するマイクロサテライトマーカーを用いて得られた遺伝子型データを使用して連鎖解析を行い、ms-3が第1連鎖群に位置することを明らかにした。さらに、スギ基盤連鎖地図の第1連鎖群にマッピングされているマーカーのうち家系親間に多型のあるマーカーを用いて、ms-3近傍の部分連鎖地図を作成した。雄性不稔遺伝子ms-4については、2011年に人工交配を行ったためまだ花粉稔性の評価には未熟と考えられたが、ms-3と同様の方法で花粉稔性の評価を試みた。4つの無花粉スギの交配家系(TO13S 198個体, S3T6799個体, F1N4 67個体, T5 173個体)についてms-1を含む領域の詳細な連鎖地図を作製した。TO13S家系は富山不稔(ms1ms1)と小原13号(MS1ms1)のF1と珠洲2号(MS1ms1)との人工交配、S3T67家系は新大3号不稔(ms1ms1)と富山不稔(ms1ms1)と中頚城4号(MS1MS1)との人工交配、F1N4家系は福島不稔1(ms1ms1)と中4号(MS1ms1)との人工交配、T5家系は富山不稔(ms1ms1)と富山不稔(ms1ms1)と中頚城4号(MS1MS1)との人工交配で作出した。雄性不稔遺伝子ms-1近傍のDNAマーカーは家系ごとに異なったが、近傍DNAを用いることにより、これらの交配家系では約96%の精度で無花粉スギを識別することができた。TO13S家系は優良無花粉スギ「立山森の輝き」の生産に使用されている。本研究では、TO13S家系において、無花粉スギを識別するための簡易DNAマーカーを開発した。芽生えから抽出したDNAを鋳型にPCR増幅を行い、アガロースゲルで電気泳動した結果、TO13S家系の無花粉スギを明確に識別することができた。本研究で構築した雄性不稔遺伝子近傍マーカーの探索とその簡易マーカー化の技術を芽生えからの高速DNA抽出法と組み合わせることにより、どのような無花粉スギ品種においても芽生え段階での家系内選抜を行うことができると考えられた。雄性不稔遺伝子ms-4については、昨年度の花粉稔性評価の結果を確実なものにするため、2014年7月にジベレリン処理を行って雄花の着花促進を行い、2015年3月に花粉稔性を顕微鏡を使用して再評価した。2011年度に人工交配を行ったS8HK5家系122個体の針葉を採取し、DNA抽出を行った。この家系は、雄性不稔遺伝子ms4に支配される無花粉スギである新大8号に東蒲原5号を交配したF1を新大8号に戻し交配して作成したものである。2015年3月と2016年3月に顕微鏡を使用して花粉稔性を評価した。得られた花粉稔性データと、スギ基盤連鎖地図上に散在するマイクロサテライトマーカーを用いて得られた遺伝子型データを使用して連鎖解析を行い、ms4が第4連鎖群に位置することを明らかにした。さらに、スギ基盤連鎖地図の第4連鎖群にマッピングされているマーカーのうち家系親間に多型のあるマーカーを用いて、ms4近傍の部分連鎖地図を作成した。

さらに、TO13S家系において、無花粉スギを識別するための簡易DNAマーカーを開発した。研究は、ほぼ申請したとおりに進んでいるため、おおむね順調に進展していると判断できる。林木遺伝育種学平成27年度は、S8HK5家系(新大8号×(新大8号と東蒲原5号のF1))を用いて雄性不稔遺伝子ms-4の連鎖地図上の位置を特定し、ms-4近傍の部分連鎖地図の構築を行う予定である。3月末に予定していた出張が急遽取りやめになったため。平成26年度は、ms-1近傍のマーカーが連鎖地図作成に使用した家系以外でも使用可能かどうかを検証するため、新たに4つの家系(TO13S家系198個体、S3T67家系99個体、F1N4家系67個体、T5家系173家系)を研究に供試し、ms-1近傍の部分連鎖地図を作成する予定である。また、部分連鎖地図の情報を利用し、PCRと電気泳動装置のみで解析できる簡便なマーカーを開発し、実際に富山県で生産している苗木(ms-1)を用い、識別の精度を検証する予定である。消耗品に使用する予定である。
骨芽細胞と破骨細胞の賦活化により新生骨との完全置換を促す骨代替材料の開発

リン酸オクタカルシウム(OCP)結晶を合成し,機械破砕によって微粒子を調整した後,天然高分子であるゼラチンに分散して多孔質のスポンジ成型体を作製した.破砕結晶はnano-submicroの範囲のサイズの粒子であった.OCP結晶含有複合体について生体活性を評価した.擬似体液浸漬で1週間までにハイドロキシアパタイトの形成が認められた.またラット頭蓋冠骨欠損へ埋入し8週間までに組織学的に骨組織の再生が認められた.材料は完全には吸収されなかったが,新生骨に置換する傾向にあった.本研究から材料の結晶性状が骨再生に影響を及ぼす可能性が示唆され,結晶の物理的パラメーターについて生体材料設計の指針が得られた.リン酸オクタカルシウム(OCP)結晶を合成し,機械破砕によって微粒子を調整した後,天然高分子であるゼラチンに分散して多孔質のスポンジ成型体を作製した.破砕結晶はnano-submicroの範囲のサイズの粒子であった.OCP結晶含有複合体について生体活性を評価した.擬似体液浸漬で1週間までにハイドロキシアパタイトの形成が認められた.またラット頭蓋冠骨欠損へ埋入し8週間までに組織学的に骨組織の再生が認められた.材料は完全には吸収されなかったが,新生骨に置換する傾向にあった.本研究から材料の結晶性状が骨再生に影響を及ぼす可能性が示唆され,結晶の物理的パラメーターについて生体材料設計の指針が得られた.開始年度である平成23年度は材料の開発に着手した.異なる結晶性状を持つOCPの調整のため,まず確立済みの50°C以上,pH一定下の湿式合成法(Suzuki et al.Tohoku J Exp Med 1991)で行った.この方法を基本として,OCPを含むOCP/Gel複合体の直接沈殿の検討,乾燥沈殿物をミルにてナノサイズまで機械破砕した後Ge1に分散する方法の検討を行った.OCP/Gel複合体の直接沈殿では,OCP含有量がwtで0%約50%となるような材料を得た.結晶相の同定を今年度の申請設備であるリートベルト解析が可能な卓上X線回折装置の導入により,OCP結晶の格子定数の精密化の解析に着手した.また,OCP結晶含有量とGelのアミドの割合を定性的にFTIRにより解析した.結晶の形態をSEMにて,水銀圧入法によってマクロポアを評価した.ナノ結晶分散の複合体についても同様に検討した.これらの分析からOCP/Gel複合体中の結晶はGelとの混合比によらず単一結晶相を示すこと,一方,ナノ結晶では分散量によってGe1のマクロポア構造が調節を受けることがわかった.OCPおよびOCP/Gelのin vivo評価にも着手した。ラット頭蓋冠の臨界径骨欠損にOCP/Ge1のディスクを埋入し,一定期間経過後の標本について軟X線による不透過像の上昇の有無を検討し,直接沈殿で得たOCP/Gel複合体については良好な骨形成が生じている様子が得られ始めた.結晶を機械破砕しその特性を解析した.走査型電子顕微鏡による観察ではオリジナルOCP結晶の長軸方向への長さは数μmであったが,機械破砕した結晶は数百nmから1μm以下の範囲の粒子となった.他の特徴として,オリジナル結晶では板状であったが板状ではなくなり,様々な形態を含む粒子となった.一方,X線回折による分析では,OCP結晶に特有の回折パターンは維持されており,機械破砕によっても結晶構造は保持されていた.この結晶を特定濃度のゼンラチン溶液と結晶が50wt%含有となるように混合し,その複合体を凍結乾燥,熱架橋することにより,多孔質のスポンジ成型体を作製した.この複合体について,1)ヒト血漿と無機イオン濃度が類似の擬似体液中への浸漬で結晶相がどのように変化するか,2)ラット頭蓋冠欠損への埋入で骨の再生に有効かどうか検討した.その結果,擬似体液への浸漬では1週間までにOCP相は不明瞭となり,ハイドロキシアパタイトの形成が認められた.また,ラット頭蓋冠骨欠損への8週間までの埋入により組織学的に骨組織の再生が認められた.一方,材料はこの時期では完全には吸収されないで一部残存が観察された.新生骨部分は材料と置換する傾向にあったのでより長期にはさらに吸収していく可能性があると考えられた.このように,本研究からリン酸カルシウム材料の結晶特性が骨の再生に関連する可能性が示唆された.今後は本研究結果の情報を骨補填材料設計の一指針としていく.平成24年度は平成23年度に検討した,ミルにてナノサイズまで機械破砕したOCPナノ結晶をポーラスGelスポンジに混合して成型し,その複合体の材料学的検討を行った.一方,OCP結晶の性状を調節する目的でOCPにHAの前駆物質群を混合して擬似体液浸漬し結晶相の変化および材料学的検討を行った.X線回折装置によるリートベルト解析にて格子定数の精密化を行った.また,OCP/Gel複合体あるいはOCP/HA前駆体複合体中の結晶の表面の変化をFTIRによるカーブフィッティングにより解析した.結晶の形態変化をSEMにて,ピノメーターあるいは水銀圧入法によって真比重およびマクロポアの容量を評価した.ナノ結晶は破砕によってもオリジナルの結晶構造を示した.

一方,結晶性の低下も確認された.OCP/HA前駆体複合体では混合比によってHAへの結晶化が影響を受けた.ラット頭蓋冠の臨界径骨欠損にOCP/Gelのディスクを埋入し,一定期間経過後の標本について軟X線による不透過像の上昇の有無を検討した.ナノOCP/Gel複合体ではコントロール群に比較して不透過像の向上が確認された.また,脱灰標本を用いてヘマトキシリン・エオジン染色切片の観察で,ナノOCP/Gel複合体に骨基質と思われる組織形成が生じていることがわかった.ナノOCP/Gel複合体の経時的な生体反応の検索,および,OCP/HA前駆体複合体のラット頭蓋冠の臨界径骨欠損における生体反応の解析を続けている.基盤となる材料のプロトタイプが予備検討ながら良好な生体親和性を示すことが確認できたことから,おおむね順調に進展していると判断した.25年度が最終年度であるため、記入しない。H24年度は開発に成功したいくつかの基盤材料が骨欠損への埋入により定性解析レベルではあるが良好な生体親和性を示すことが確認できたことから,おおむね順調に進展していると判断した.短期の軟X線の観察を生体親和性の指標とし材料学的改質へ反映させていく.生体内における材料吸収性は長期の検討が必要であることから,in vivoの試験においては長期埋入向けの実験から着手している.同時にin vitroにおける材料の物理化学的溶解も早めに見極め,材料開発の評価と作製のループへ反映できるように務める.25年度が最終年度であるため、記入しない。生体反応が材料上のどの性質と深くかかわるか着目すべきパラメータを絞り込んでいくようにする.特に複合体ではパラメータが多岐に渡ることから,結晶条件を一定とし,生体内における材料吸収性,組織形成能について短期から比較的長期までの解析を進める.
動脈硬化症におけるマイクロRNAおよび遺伝子ネットワークの解明

動脈硬化の進展に関わる分子メカニズムは未だ不明な点が多い。動脈硬化に重要なLDLコレステロールの中でも、特に促進的に働くと考えられている酸化LDLでマクロファージを刺激し、マイクロRNAという遺伝子発現の制御に重要な特殊な小さいサイズのRNAの発現パターンを調べ、刺激の有無で8種類のマイクロRNAに変化があることを発見した。これらの制御が、動脈硬化病変の進展抑制につながる可能性が示唆された。1)マウスにおける動脈硬化モデルの研究のための、予備実験としてマウス大動脈内皮細胞の培養を行い、その内皮細胞における様々な物質に対する反応を検討した。まず、Minimally oxidized LDL(mmLDL)を用いて、異なるストレインであるC57BL/6とC3H/HeJ由来の大動脈内皮細胞の反応を検討した。培養液へのmmLDL添加4時間後に細胞からRNAを抽出し、炎症性サイトカインの発現を比較検討した。C57BL/6由来内皮細胞はC3H/HeJ由来内皮細胞に比べて、4時間でのInterleukin-6(IL-6), Monocyte Chemotactic Protein-1(MCP-1)の発現レベルが有意に高値であった。マウスのストレインによる炎症反応がRNAの発現レベルで異なることを確認した。内皮細胞に対してのmmLDLによる刺激で、両ストレインの遺伝子発現にどのような違いが出るかを網羅的にメッセンジャーRNAのレベルで検討するために、Dr.Shiの研究室と共同でマイクロアレイの実施に向け調整を行った。2)動脈硬化モデルであるApoEの欠損マウスに対して、生後4週から高脂肪食を負荷して動脈硬化病変の進展を経時的に確認した。血液中の脂質のレベルも確認できた。高脂肪食負荷後8週では、大動脈での動脈硬化病変は小さく、異なるストレインを比較する際にこの時期が有用と考えられた。C3H/HeJストレインのApoE欠損マウスを用いて今後検討予定である。動脈硬化病変形成における、マイクロRNAの役割を明らかにすることが本研究の目的である。まず、その基礎的実験として、動脈硬化巣に集積するマクロファージに注目し、そのマイクロRNAのプロファイリングをおこなった。マウス腹腔内マクロファージを採取し、培養条件下で酸化LDL(100マイクログラム/ミリグラム)による刺激を行い、6時間後にRNAを回収。酸化LDLの刺激の有無によるマイクロRNAの変化をマイクロアレイを用いて検討した。プロファイリングの結果によると、有意な変化を示したマイクロRNAが8個同定された。次にデータベース(miRBaseなど)を用いて、これらのマイクロRNAの標的となりえるメッセンジャーRNAを絞り込んだ。選ばれたマイクロRNAがマクロファージの中で実際にどのようなメッセンジャーRNAの制御に関わっているかを明らかにするために、候補の8つのマイクロRNAを合成し、マクロファージに過剰導入。その後、候補となるメッセンジャーRNAの発現の変化をPCR法を用いて評価した。導入は、リポフェクション法を用いて行い、ラミンのSiRNAを同時に行うことでその導入効率を確認した。
チロシンキナーゼの局在選別機構とシグナル伝達

Src型チロシンキナーゼは細胞膜に係留し受容体からのシグナルを伝達して、細胞の増殖・分化・運動・形態などに深く関与し、その異常は細胞を癌化へと導く。しかし、時空間的局在解析を行なった結果、Src型キナーゼは細胞膜の他に、リソソーム膜とゴルジ体膜や核内にも存在し、脂肪酸付加の状態により巧妙に選別されることが分かった。本研究は、局在特異的Srcキナーゼを標的とした新規抗癌剤創製へ向けた第一歩となろう。Src型チロシンキナーゼは細胞質で生合成されるが,N末端脂質修飾によって細胞膜に係留し,受容体からのシグナルを伝達し,増殖、分化、運動、生存などに深く関与する。Src型キナーゼはSrc/Lyn/Yes/Fyn/Lck/Hck/Fgr/Blkの8種類のメンバーから成り,細胞膜局在の他に,リソソームとゴルジ体や核内にも存在するが,細胞膜直下以外では機能は殆ど明らかでない。本研究では,Src型キナーゼの輸送経路と局在を研究し,各メンバーのオルガネラ選択的な機能の特異性を調べた。(1)FRAP法などを駆使して研究したところ,c-SrcはLynと異なり,サイトゾルでの生合成後に細胞膜と後期エンドソーム/リソソームとの間を非常に速い速度で巡回していることが判明した。その際,c-Srcは膜係留状態からサイトゾルへ可溶性状態経ることで,速い移動が起こっていることを見いだし,膜輸送によるc-Srcの移動ではないことを示した。また,ひとたびc-Srcは活性化されると,SH2領域による蛋白質-蛋白質相互作用を介して細胞接着斑へ移動することも判明した。(2)Lynはc-Srcと異なり,サイトゾルでの生合成後にゴルジ装置膜の細胞質側にアンカーして,分泌経路を経て細胞膜に運ばれる。構造上c-Srcはミリスチン酸付加のみで,Lynはミリスチン酸付加とパルミチン酸付加をする。そこで,c-SrcとLynのトラフィッキングの違いに関してパルミチン酸付加に着目して研究したところ,LynのN末端から3番目のシステイン残基にパルミチン酸が共有結合することがトラフィッキングの違いを生み出すことが判明した。(3)c-Srcがリソソームのサイトゾル側の膜に係留することは,Rab7と相互作用してリソソームの動きを制御する可能性があることを見いだした。Src型チロシンキナーゼは、細胞質で生合成されるが、N末端脂質修飾によって細胞膜に係留し、受容体からのシグナルを伝達し、増殖・分化・運動・生存などに深く関与する。Src型キナーゼは8種類のメンバーから成り、細胞表面膜局在の他に、リソソームとゴルジ体や核内にも存在するが、細胞内輸送選別機構や細胞膜直下以外での機能は殆ど明らかでない。本研究では、各Src型キナーゼメンバーのオルガネラ選択的な細胞内輸送経路の分子機構を調べた。まず、c-SrcとLynは輸送経路が異なり、細胞表面膜での貯留状態に差異があるので、細胞膜表面でもc-SrcとLynの局在差異があるかどうか調べたところ、c-Srcと異なりLynはcortical actin capと共局在しており、cortical actin capはチロシンリン酸化シグナリングのプラットフォームになることが分かった。次に、Src型チロシンキナーゼc-Src,Lyn,c-Yes,Fynは、c-Src型(パルミチン酸0本)・Lyn型(パルミチン酸1本)・Fyn型(パルミチン酸2本)に分類され、細胞内でそれぞれ異なる動きをして異なる場所に存在することが分かり、パルミチン酸付加数は輸送経路変換の指標になることを示した。そして、Lynの核局在は脂質修飾を受ける前に核膜孔を通過して核内移行し、エクスポーチンによりサイトソルヘ排出され核内Lynの量を適正に保っていた。Lynキナーゼ活性抑制により、Lynの核内量が増加することも判明した。更に、増殖因子刺激時、Src型チロシンキナーゼによる核内蛋白質のチロシンリン酸化の程度とユークロマチン化/ヘテロクロマチン化の程度と正の相関関係があること、しかも、Src型チロシンキナーゼは大部分がユークロマチン領域に局在していた。従って、Src型チロシンキナーゼの時空間的局在解析は、細胞内局在特異的な阻害剤の開発へ向けて新たなコンセプトを提供することが可能になるかもしれない。
2軸回転鍛造法の開発研究

2軸回転鍛造法の例として、高さと直径の比の大きい円柱の回転すえ込み加工を取り上げて研究した。素材は下型にそう入され、下型と共に回転する。上ロールが圧下しはじめると、通常は偏心を起こし座屈が生じてほとんどの場合、アスペクト比が大きければすえ込み加工ができない。そこで、回転する素材軸に直交する方向から一個の側面ロールによって素材を支持し、回転すえ込み中にロールの位置制御を行う装置を考案して合理的にすえ込みできるような2軸回転鍛造機を開発した。この方法はロッキングプレスの様に素材を回転しない場合は適用することができないので、本加工機のように素材回転するものの一つの特徴ということができる。側面ロールが素材軸と直角の方向から素材を支える位置は、圧下用円すいロールの圧下量に呼応して決定される。本研究ではこの圧下ロールストロークと側面ロールのストロークとの関係を種々の加工条件について明らかにしたものである。すなわち、両者の間にはある特定範囲の関係を保つ必要があり、その範囲を逸脱すれば製品に欠陥が生ずることが判明し、その範囲を加工条件に対して明確に特定することができた。例えば圧下用円すいロールの圧下速度が早ければ、上記の成功領域がせまくなり、ある限られた範囲の側面ストロークと圧下ロールストロークの関係をとらなければならなくなってくることが明示できた。このような範囲を圧下速度の関連において定めればきわめて大きいアスペクト比のものまですえ込みが可能となり、頭部体積の大きいすえ込みができることになる。しかも、その加工力は小さく従来法に比し有利である。例えば、直径の大きい熱間ボルトのように加熱を用いなくても、その圧造は可能であろうかと考えられる。以上、主軸回転,第2軸従動機構により新しい鍛造を考案した。
史料学的検討を重視した『延喜式』の基礎的研究

昨年度までに主要写本はほぼ収集し終えたため,今年度は版本や部分的に残る写本,注釈書等の調査に力を注いだ。調査した資料は,神宮文庫所蔵延喜神名式写本・写真帳,天理大学附属天理図書館版本・『神祇官八神殿秘决』・『諸神記』,国会図書館所蔵『式内染鑑』等である。このうち,神宮文庫所蔵の『兼永本延喜式神名帳』写真帳の調査により,兼永本の模写本とされてきた天理大学附属天理図書館所蔵本が,必ずしも模写の精度が高くないことが判明した。これらを踏まえ,まず昨年度に写本系統を検討した巻5について校訂本文を作成し,また巻17についても写本系統検討および校訂本文作成を行なった。さらに巻9・10・14について写本系統の検討をおこなった。これらの成果は論文の形にとりまとめており,2019年度刊行予定の『国立歴史民俗博物館研究報告』特集号等において公表する予定である。また版本書き入れ研究の重要性については,「古代文献史料本文研究の課題ー『延喜式』を中心にー」(『九州史学』181)において論じた。本文研究についても,巻17について現代語訳を作成した(2019年度公表予定)。また国立歴史民俗博物館共同研究「古代の百科全書『延喜式』の多分野協働研究」と連携し、『延喜式』研究に関心を持つ研究者や大学院生にも参加を呼びかけて,2018年8月31日・9月1日に国立歴史民俗博物館にて公開研究会を開催した。なお,本年度は「古代の百科全書『延喜式』の多分野協働研究」で進めていた延喜式関係論文目録データベースのデータ収集・整備にも協力した(2019年3月第一次公開)。当初計画のうち写本・版本調査については、2018年度までに主要写本・版本調査を終えることとしており、2016年度より休館し閲覧を停止した無窮会専門図書館所蔵本を除いて、予定通り調査を終え、さらに新たな写本・版本や関連注釈書等の調査を実施することができた。また本文研究・校訂作業についても、底本確定作業を進め、既に数巻分について校訂本文案を作成することができた。さらに成果発信についても、公開研究集会を開催し、論文5本を公表、また『国立歴史民俗博物館研究報告』特集号に投稿した論考の査読が終了し、2019年度刊行予定で進めている。国立歴史民俗博物館共同研究「古代の百科全書『延喜式』の多分野協働研究」にて進めていた延喜式関係論文目録データベースの作成にも協力し、2019年3月の第一次公開を果たすことができた。写本・版本研究については、昨年度に調査した資料の紙焼写真購入を行ない、またようやく閲覧を再開した無窮会専門図書館の『延喜式』写本・版本調査を実施する。本文研究・校訂作業を継続し、できるだけ多くの巻について、写本系統の解明、校訂本文作成を実施する。さらに新たな研究の展開を目指し、海外日本史研究者の育成に向けた取り組み(ワークショップ)を実施する。今年度は本文比較研究・校訂作業に必要な写本等の収集作業に重点を置き、宮内庁書陵部図書寮文庫所蔵藤波家旧蔵本・壬生家旧蔵本、天理大学附属天理図書館所蔵梵舜本・梵舜別本等、京都大学附属図書館所蔵近衛家旧蔵本等の収集・調査を行なった。巻5について諸本の書写系統を比較検討し、従来あまり注目されてこなかった近衛家旧蔵本が、国立歴史民俗博物館所蔵土御門家旧蔵本と極めて近い関係にある善本であることを明らかとした。また近世の学者による校合書入れを持つ版本についても調査を進め、現存が確認されていない写本による書入れを有する宮内庁書陵部図書寮文庫所蔵勢多家旧蔵本や筑波大学附属図書館所蔵享保版本等を収集し、さらに『延喜式』を引用する『政事要略』や『礼服制』等の史料、また『延喜式』巻37典薬寮と関係の深い史料である『本草和名』の善本とされる岩瀬文庫本、近世の『延喜式』研究書である『延喜式工事解』等の調査および紙焼写真収集を実施し、本文校訂の参考資料とした。『延喜式』研究に関心を持つ研究者や大学院生にも参加を呼びかけて、9月と3月の2回にわたり、公開研究会を国立歴史民俗博物館において開催した。研究会にあわせ、8月から9月にかけての1か月間、「『延喜式』ってなに!?」と題する特集展示を開催した。また特集展示開催中の9月17日には古代史以外の研究者や一般を対象として「歴博フォーラム『延喜式』ってなに!?」を開催し、257名の参加を得た。研究会およびフォーラムには海外の研究者も招き、国際的な『延喜式』研究の可能性について検討した。本年度の目標に掲げていた『延喜式』写本の紙焼写真収集について、その多くは実施できたが、写本所蔵機関の一つである無窮会専門図書館については耐震工事のため年度当初より休館したことにより、調査・収集がかなわなかった。代替策として、版本調査・収集や関連史料の調査・収集を当初計画に先行して進めたが、他機関所蔵写本の調査を進めていくなかで、やはり無窮会専門図書館所蔵写本が写本系統解明のために重要な鍵を握る史料であることがより明確になってきた。そのため全面的に他機関所蔵の版本や他史料の調査・収集等に計画変更することはせず、次年度の無窮会専門図書館閲覧再開を待って同館所蔵写本の調査・収集をめざすこととした。

本年度の計画のうち、この無窮会専門図書館調査・収集分が遅れている。それ以外については順調に研究を進めることができ、なかでも国際的研究の推進や成果発信という点においては当初計画以上の成果を挙げることができた。昨年度に調査・紙焼収集がかなわなかった無窮会専門図書館が、今年度も閲覧再開が見込めない状況であることが明らかになったことにより方針転換を図り、同館所蔵『延喜式』写本紙焼写真所蔵者から協力を得るとともに、校合書入れを有する版本の捜索・紙焼写真収集に力を注いだ。調査・収集した主な『延喜式』写本は尊経閣文庫本、静嘉堂文庫所蔵西洞院時慶書写本、三手文庫泉亭本、天理大学附属天理図書館吉田文庫『上延喜格式表』、國學院大学図書館所蔵三条西家旧蔵神名帳、版本は岐阜大学図書館度会義利書入れ版本、大和文華館鈴鹿文庫所蔵清岡長親書入れ版本、刈谷市立図書館村上文庫所蔵神谷元平書入れ版本である。その他、『延喜式』注釈書として京都大学文学部所蔵『上延喜式表』、天理大学附属天理図書館吉田文庫所蔵『延喜式神名帳頭註』、また関連史料として、同館吉田文庫所蔵の近世吉田家蔵書目録、宮内庁書陵部図書寮文庫所蔵『郷薬救急方』、大阪市立大学福田文庫所蔵『政事要略』等を調査収集した。このうち西洞院時慶書写本は現所在不明の三条西実隆抄出本の江戸初期転写本として貴重であり、清岡長親書入れ版本は現在宮内庁書陵部に蔵されている壬生本に欠けている巻19のうち、巻15の内容を校異の形で伝えるものとして重要であることが判明した。これらを踏まえ、まず巻5を主な考察対象として諸本の書写系統について比較検討し明らかにした。これらの成果は論文の形で公表した他、九州史学会において研究代表者が公開講演を行なっている。また『延喜式』研究に関心を持つ研究者や大学院生にも参加を呼びかけて,8月に国立歴史民俗博物館にて、2月に宮内庁正倉院事務所および奈良文化財研究所にて公開研究会を開催した。なお、8月の公開研究会では校訂方針についての検討を行ない、今後の方向性を定めた。昨年度に耐震工事により調査・紙焼収集がかなわなかった無窮会専門図書館について、情報収集に努め、今年度も閲覧再開が見込めない状況であることが明らかになったことにより早期に方針転換を図り、同館所蔵『延喜式』写本紙焼写真所蔵者から協力を得る一方で、校合書入れを有する版本の捜索・紙焼写真収集に力を注いだ。その結果として、紙焼写真収集の遅れを取り戻すことができ、現在所在が明らかになっている主だった『延喜式』写本の調査をほぼ終えるとともに、現在所在不明である写本との校合書入れを有する版本の存在を発見したことにより、近世写本の大まかな書写系統図を描くことができた。これらの成果は論文等の形で発表し、また公開講演に招致され、学界に対して広く成果発信を行なうことができた。昨年度に課題としてあげた近世における『延喜式』研究の調査や朝鮮半島薬物の調査についても、上述の版本調査・『延喜式』注釈書収集、『郷薬救急方』の収集などにより成果を挙げることができた。昨年度までに主要写本はほぼ収集し終えたため,今年度は版本や部分的に残る写本,注釈書等の調査に力を注いだ。調査した資料は,神宮文庫所蔵延喜神名式写本・写真帳,天理大学附属天理図書館版本・『神祇官八神殿秘决』・『諸神記』,国会図書館所蔵『式内染鑑』等である。このうち,神宮文庫所蔵の『兼永本延喜式神名帳』写真帳の調査により,兼永本の模写本とされてきた天理大学附属天理図書館所蔵本が,必ずしも模写の精度が高くないことが判明した。
糖輸送体(GLUT4)量からみた、インスリン抵抗性に及ぼす様々な食事性油脂の影響

実験1)高脂肪食による高血糖と肥満:ソディウムコレート及びコレステロール添加による予防効果高サフラワー油食(脂肪エネルギー比60%)でマウスを飼育すると、高炭水化物食(10%)に比し、内臓性肥満と糖尿病を生じる。しかし、0.5%のコレートを高脂肪食の中に加えておくと、肥満及び糖尿病の発症が防止された。又、血中インスリン値も低下し、in vitroでの筋肉(滑車上筋)での糖の取り込みもインスリンンの有無にかかわらず、高脂肪食のみの群に比して2040%増加し、筋肉組織でのインスリン抵抗性の改善が認められた。又、0.5%コレートと1%コレステロールの両方を添加すると、糖の取り込みが更に増加し、5080%の増加が認められインスリン抵抗性が著明に改善された。しかしGLUT4の蛋白量、mRNA量は各群で変化なく、コレートのインスリン抵抗性の改善はインスリンレセプターのシグナリングやGLUT4の活性化などGLUT4蛋白量増加以外の機序が働いていることを示た。以上の結果から、コレート、コレステロール及び他の類似物質が肥満や糖尿病の発症防止に役に立つ可能性を示した。実験2)高脂肪食による高血糖と肥満:各種食事性油脂の効果どのような食事性油脂が糖尿病や肥満の発生に深く関与しているかを明らかにするために、脂肪酸組成の異なる7種類の食油(ラ-ド、パーム油、サフラワー油、シソ油、大豆油、菜種油、魚油)について、高脂肪食を作成し、インスリン抵抗性及び肥満の程度をC57BL/6マウスを用いて検討した。各食餌群間で、摂取エネルギー量に差が見られないにも係わらず、約8周目から各群間に体重差が観察され、大豆、パーム油、なたね油、ラ-ド、サフラワー油で顕著な肥満を示したが魚油では肥満を生じなかった。OGTTの30分値についてみると、シソ油、魚油、パーム油の3群はそれ程血糖値は上げないなどの、食油の違いによる差異が明らかになった。また、内臓の脂肪量あるいは体重量とOGTTの30分値との間に強い正の相関が得られ、このときのr^2値より、肥満、特に内臓肥満が高血糖の原因の約60%寄与していることが明らかになった。以上のことから、食事性脂肪酸の種類によって糖尿病や肥満の発生に違いが生じること、さらに肥満、特に内臓肥満が高血糖の原因として大きく寄与していることを明らかにした。
潜在性結核感染症と発病期におけるmiRNA探索と免疫制御における役割

結核感染を受けても発症に至らない潜在性結核感染症(LTBI)患者の1-2割は2年以内に発病するとされている。本邦では、未だLTBIとされただけで治療の対象とはなっていないことから、多数のLTBI患者群をコーホート研究することで、実際に発症に至る群に特徴的な何らかのバイオマーカーを見出すことは今後の治療戦略を決定する上で大きな意味があろう。この研究では、患者血清中のエクソソームに含まれるmiRNAを解析し、LTBI患者、結核発症患者に特有なバイオマーカーを探索している。コーホートに入るLTBI患者を未治療のまま発症まで統計的解析が可能なほど多数追跡することは困難であることから、大阪はびきの医療センターにて入院治療を受けることになった結核患者群、外来にてLTBIと判明し、LTBIの治療を行う予定の群でコーホートを開始している。2017年度に、LTBIで治療前の症例10例、結核発症患者10例の血清エクソソーム中のmiRNAを次世代シークエンサーで解析を行ない、LTBI患者群で発現が低く、結核発症患者群で発現の高いmiRNAが二つ見出したことから、2018年度には、グループ間の性別、年齢分布の偏りを補正するため、症例を増やし検討を重ねることで、解析結果の精度を高められるよう進めている。今年度は、LTBI群と結核発症患者群に含める症例の年齢分布が揃うよう、新たにそれぞれ6症例ずつサンプル数を増やし、LTBI症例に特徴的なmiRNA、結核発症症例に特徴的なmiRNAを見出すことを期待してNGSシークエンス法での解析を行なっているところである。データを得る段階で一部問題が起こり、現時点では再度のデータ収集を行なっている。データが得られ次第、解析を終了し、残りの症例などを含めてRT-PCR法を用いて結果の再確認を行う予定である結核感染を受けてはいるが発症にまで至っていない潜在性結核感染症(LTBI)患者の1-2割は2年以内に発病するとされている。我々の大阪結核研究グループは、QFT陽性のLTBI患者からの発病に至る過程に特徴的なバイオマーカーを患者血清中のエクソソームに含まれるmiRNA群の中から求めようとしている。H28年の半ばまでには、当初予定していたLTBI患者のグループ分けから、結核発症者を含めた解析を行なう予定であったが、そのような群を解析に有効な症例数得ることが困難であることが判明した。そのため大阪府立呼吸器・アレルギー医療センターで入院治療を受けることになった結核患者群,外来にてLTBIと判明し、LTBIの治療を今後行う群、QFT結果判定の保留の群でコーホートを開始することにした。2017年にはいり、それぞれの群への登録数が20を越えてきた。2017年度中も登録を行うことで症例数を得、それぞれ2年以上にわたり追跡、治療前後、6ヶ月ごとの検診、採血を行う。まずLTBIで治療前の症例8例、結核発症患者8例、QFT陰性者8例の血清エクソソーム中のmiRNAをmicroarray法にて解析する予定が立ったところであり、新年度になって速やかに結果を得る段取りが出来たところである。この結果を待って、LTBIに特徴的なmiRNAパターン、結核患者に特徴的なmiRNAパターンを見つけられることを期待している。Microarray法を用いて漏らすことなく網羅的に解析することから、おおよそのmiRNAパターンを得ることが最も重要である。その後は、限られたmiRNAの中で多数の症例を検討することが可能になる。実績の項で述べたように、LTBI患者の中で、結核を発症してくる群を一定数以上得るのは大変難しいことがわかった。これは登録数を増やすことで可能ではあるが、LTBI患者さんに説明する際に治療をせずに経過を見るという選択は実際にはほとんど期待できないためでもある。そこで新規に結核として大阪府立呼吸器・アレルギー医療センターにて入院治療を行う群を含めることで結核感染症者に特徴的なmiRNAパターンを探索することにした。LTBI患者さんに特徴的なmiRNAパターンと結核感染症に特徴系なmiRNAパターンを得ることを最初の到達点とする。多数のLTBI患者群をコーホート研究することで、実際に発症に至る群に特徴的な何らかのバイオマーカーを見出すことは大きな意味がある。この研究では、患者血清中のエクソソームに含まれるmiRNAからそのようなバイオマーカーを探索している。昨年度報告のように、コーホートに入るLTBI患者を未治療のまま発症まで統計的解析が可能なほど多数追跡することは困難であることから、大阪はびきの医療センターにて入院治療を受けることになった結核患者群、外来にてLTBIと判明し、LTBIの治療を今後行う群、QFT結果判定の保留の群でコーホートを開始することにした。これらのうち、2017年度は、LTBIで治療前の症例10例、結核発症患者10例の血清エクソソーム中のmiRNAを次世代シークエンサーで解析を行った。LTBI患者群で発現が低く、結核発症患者群で発現の高いmiRNAが二つ見出された。それぞれある値で高発現、低発現を分けると、それぞれ85%の確かさで2群を分けることができた。この結果は、患者グループの年齢差などの影響を受けている可能性もあり、年齢などを揃えた症例を加え、検討を重ねる必要があろう。

病院外来においてLTBI患者さんに治療をせずに数年間経過を観察するという選択は実際にはほとんどできないことから、LTBI患者の中で、結核を発症してくる群を一定数以上得ることはできない。そこで今回、大阪はびきの医療センターにて新規結核発病患者として入院治療を行う群を含めて、結核感染症者に特徴的なmiRNAパターンを探索することにした。まずは潜在性結核感染症患者群との比較で有意に発現量の変動するmiRNAを求めた。検索にあたっては、次世代シークエンス(NGS)法を用いることで有意に違いのあるものを見出す方法を用いた。今回QFT陰性の健常人のデータを得ていないため、LTBIに変動するmiRNA解析はできておらず、LTBIと結核発症者群との比較になった。今回の解析経験から、NGS法が十分有効であることが確認できたことから、含める症例の年齢分布などを揃えて、症例を増やすことで、LTBI症例に特徴的なmiRNA、結核発症症例に特徴的なmiRNAを見出すことが可能となると期待される。結核感染を受けても発症に至らない潜在性結核感染症(LTBI)患者の1-2割は2年以内に発病するとされている。本邦では、未だLTBIとされただけで治療の対象とはなっていないことから、多数のLTBI患者群をコーホート研究することで、実際に発症に至る群に特徴的な何らかのバイオマーカーを見出すことは今後の治療戦略を決定する上で大きな意味があろう。この研究では、患者血清中のエクソソームに含まれるmiRNAを解析し、LTBI患者、結核発症患者に特有なバイオマーカーを探索している。コーホートに入るLTBI患者を未治療のまま発症まで統計的解析が可能なほど多数追跡することは困難であることから、大阪はびきの医療センターにて入院治療を受けることになった結核患者群、外来にてLTBIと判明し、LTBIの治療を行う予定の群でコーホートを開始している。2017年度に、LTBIで治療前の症例10例、結核発症患者10例の血清エクソソーム中のmiRNAを次世代シークエンサーで解析を行ない、LTBI患者群で発現が低く、結核発症患者群で発現の高いmiRNAが二つ見出したことから、2018年度には、グループ間の性別、年齢分布の偏りを補正するため、症例を増やし検討を重ねることで、解析結果の精度を高められるよう進めている。今年度は、LTBI群と結核発症患者群に含める症例の年齢分布が揃うよう、新たにそれぞれ6症例ずつサンプル数を増やし、LTBI症例に特徴的なmiRNA、結核発症症例に特徴的なmiRNAを見出すことを期待してNGSシークエンス法での解析を行なっているところである。データを得る段階で一部問題が起こり、現時点では再度のデータ収集を行なっている。データが得られ次第、解析を終了し、残りの症例などを含めてRT-PCR法を用いて結果の再確認を行う予定である先に述べたように、まずはLTBI患者群、結核発症者群でmiRNAパターンを見つけることを優先し、それらを基本として、それぞれの群での症例数を増やす。それぞれの患者の前向きコーホートとして結核発症に伴うmiRNAパターンの変化を追いかける。これらのことを行いながら、それらmiRNAがいずれの細胞系から由来するのか、どのような機能とたいそうするのかなどの研究へと進めることがよいと考えている。
視神経脊髄炎におけるインフラマソームを介した自然免疫機構の解明

視神経脊髄炎(neuromyelitis optica; NMO)は、中枢神経系炎症性疾患であり,アクアポリン4 (aquaporin 4; AQP4)水チャネルを標的とするNMO-IgGの検出により,多発性硬化症と区別できる.剖検凍結組織でのmRNA発現解析において,活動性病変を含むNMO症例でインフラマソーム関連分子発現が亢進していることを見出した。NMO末梢血中のリンパ球亜分画においてIFNγに加え、インフラマソーム関連分子の発現が亢進していた。NMOの病態に自然免疫機構が関与していることが示唆される。中枢神経系炎症性疾患である視神経脊髄炎(neuromyelitis optica; NMO)は、アストロサイトに発現するアクアポリン4 (aquaporin 4; AQP4)水チャネルが標的となり、アストロサイト障害に引き続き二次性脱髄病変を形成する疾患である。NMO患者血清中にAQP4抗体が発見されて以降、NMOは、髄鞘を標的とする多発性硬化症(multiple sclerosis; MS)とは分離独立する疾患と捉えられるようになっている。NMOにおいてAQP4抗体が最も重要な標的分子であるが、この自己抗体の存在のみでは発症には不十分であると考えられている。T細胞に加え、単球やマクロファージ、ミクログリアなどの自然免疫細胞の活性化がNMOの病態に深く関与していることが示唆されている。しかし、その病態機序は十分に解明されていない。そこで本研究では「NMOの病態における自然免疫機構」について解明することを目的として研究を行った。本年度は病理学的評価および凍結組織を用いたRNA発現解析を行った。まず、免疫組織化学染色により病理組織学的検索を行った。NMO剖検脊髄急性期病変には、T細胞の浸潤に加え、マクロファージの浸潤および活性化したミクログリア、好中球、好酸球を含む顆粒球の浸潤の存在を認めた。続いて、NMO剖検3例、非炎症性神経疾患の剖検3例の凍結組織よりRNAを抽出し、リアルタイムPCR法を用いて免疫分子を解析した。活動性病変を含むNMO症例においてインフラマソーム関連分子発現が亢進していることを確認した。この結果は、NMO急性期病変においてインフラマソームを含む自然免疫機構が病態に関与していることが示唆される。今年度、NMO病変部位のインフラマソーム関連分子の発現を解析し、NMOにおける病態への役割の一端を明らかにすることができた。平成28年度は病理学的評価および凍結組織を用いたRNA発現解析を行った。活動性病変を含むNMO剖検凍結組織ではインフラマソーム関連分子のmRNA発現が亢進していることを確認した。平成29年度(本年度)は、NMOおよび健常者の血液中のリンパ球を分離し、RNAを抽出してインフラマソーム関連分子を含む免疫分子を解析した。NMOでリンパ球亜分画においてIFNγに加え、インフラマソーム関連分子の発現が亢進していた。以上より、病変局所だけではなく血液中のリンパ球においてもインフラマソームの活性化が存在しており、NMOの病態に自然免疫機構が関与していることが示唆される。NMOの自然免疫システム、特にインフラマソーム病態の解析は進行の途上であるため、今後、完了することを目標にする。特に、免疫組織化学染色による病理組織学的検討を用い、病変部位自然免疫細胞の浸潤形態を明らかにし、NMO病態の詳細を明らかにする予定である。また、血液、髄液におけるインフラマソーム解析にも着手する方針である。神経免疫患者サンプルは十分量検体を収集した後、一括して解析したほうが効率的と判断したため、解析を次年度に行う方針とした.予定の解析を次年度に行う.
骨格筋興奮・収縮連関分子進化の系統発生、個体発生的アプローチに関する国際共同研究

1. Bournaud博士らと骨格筋の信号伝達機構の研究を開始した。骨格筋興奮・収縮連関分子機構のみを遺伝的に欠いた突然変異マウス(Muscular Dysgenesis, MDG)を用い正常筋と比較する事で膜電位センサー信号の特定を試みた。その結果、MDG筋においてはDHP誘導体Nifedipineによって特異的に阻害されるコンポーネント(Q_δ)が欠如していることを見出した。2.膜電位センサー構造を抽出するために系統発生的進化の中で異なった進化の段階にある動物をGene Bankとして利用する方法があると考え、英国立海洋生物研究所のQ. Bone博士らと共同で研究を開始した。骨格筋型興奮・収縮連関獲得の分子進化は、動物系統発生樹における頭策類Amphioxus(ナメクジウオ)と次に位置する最も古い脊椎動物である無顎類Lamprey(ヤツメウナギ)の間で不連続的に起こったこと、その進化は確かにQ_δの出現を伴っていることを発見した。3.進化直前に位置する原索動物横紋筋には、その細胞内構造と機能に、進化に向けたさまざまな試行が認められる。特に、細胞内のカルシウムイオン制御機構に系統発生的進化が見られることが判明した。4.マウス胎児骨格筋細胞、MDG筋細胞を用い、筋成長過程でDHP受容体が組み込まれる時間過程を調べた結果、骨格筋個体発生の初期段階では骨格筋型とは異なるプロトタイプのDHP受容体が発現され、成長とともに骨格筋型と置き換わっていく事を見出した。プロトタイプDHP受容体は横紋筋型に似た生理的薬理的特性を持つ事を見出した。5. MDG筋を日本に持ち込み培養し、DHP受容体機能発現系を確保した。1.仮説「格筋L-型カルシウムチャネル分子(DHP-受容体)の系統発生的進化が個体発生の初期過程において繰り返されている」を電気生理学的、薬理学的に検証した。薬物として黒蛇毒calciseptine(Cal)を用いた。このペプチド毒は心筋、平滑筋などのL-型カルシウムチャネルを特異的に阻害するが、骨格筋L-型カルシウムチャネルに対しては例外的に作用がない。系統発生的進化直前に位置する頭策類Amphioxus横紋筋細胞のL-型カルシウムチャネルは50nM Calで完全に阻害された。2.マウス胎児成長過程における骨格型L-型カルシウムチャネルチャネルに対するCalの効果を調べた。妊娠14日目胎児において、CalはL-型カルシウムチャネルの60%を阻害した。阻害の割合は生長とともに減少し16日目では25%、18日目では0%であった。3.MDGマウス骨格筋は骨格筋型DHP-受容体α1サブユニットをコードする遺伝子に欠損があり骨格筋型カルシウムチャネルおよび膜電位センサー機能が発現されない。MDG筋から僅かなL-型カルシウムチャネルが検出されるが、このチャネルはCalで完全に阻害される事が判明した。仮説は電気生理学的、薬理学的には支持された。4.仮説を分子生物学的に検証するため培養MDG筋細胞をフランスから日本に持ち込み増殖、保存した。これで我々はDHP-受容体の系統発生的進化点の直前直後に位置するAmphioxusと無顎類Lampreyの筋標本、個体発生初期過程の筋標本を得た。すでに一次構造が判明しているマウス骨格筋DHP-受容体とあわせると系統発生、個体発生におけるDHP-受容体分子進化の全情報を得る手がかりを得た。骨格筋興奮・収縮連関分子機構のみを遺伝的に欠いた突然変異マウス(Muscular Dysgenesis.MDG)を用い正常筋と比較する事で膜電位センサー信号の特定を試みた。

2.膜電位センサー構造を抽出するために系統発生的進化の中で異なった進化の段階にある動物をGene Bankとして利用する方法があると考え、英国立海洋生物研究所のQ.Bone博士らと共同で研究を開始した。骨格筋型興奮・収縮連関獲得の分子進化は、動物系統発生樹における頭策類Amphioxus(ナメクジウオ)と次に位置する最も古い脊椎動物である無顎類Lamprey(ヤツメウナギ)の間で不連続的に起こったこと、その進化は確かにQ_δの出現を伴っていることを発見した。3.進化直前に位置する原索動物横紋筋には、その細胞内構造と機能に、進化に向けたさまざまな試行が認められる。特に、細胞内のカルシウムイオン制御機構に系統発生的進化が見られることが判明した。4.マウス胎児骨格筋細胞、MDG筋細胞を用い、筋成長過程でDHP受容体が組み込まれる時間過程を調べた結果、骨格筋個体発生の初期段階では骨格筋型とは異なるプロトタイプのDHP受容体が発現され、成長とともに骨格筋型と置き換わっていく事を見出した。プロトタイプDHP受容体は横紋筋型に似た生理的薬理的特性を持つ事を見出した。5. MDG筋を日本に持ち込み培養し、DHP受容体機能発現系を確保した。
動画共有システムによる授業研究を踏まえた家庭科教育パッケージ教材の開発

本研究の目的は家庭科教師のための授業研究パッケージを開発することである.まず小学校や中学校,高等学校で実践された家庭科授業をビデオ撮影し,編集した.次に,動画共有システムとしてVISCOを利用することとし,本研究用に設定した.VISCOはインターネットを通じて複数の参加者のコメントが共有されるシステムである.そして,編集された家庭科授業ビデオに,教員養成系大学・学部で家庭科教育に携わる研究者が分担して,VISCOを使って優れた点や課題・助言,解説等のコメントを付与した.VISCOと家庭科授業ビデオをDVDにパッケージ化した教材を作成し,家庭科教員らに配布した.現在一人で試行錯誤しながら授業をしている家庭科教員が,将来すぐれた家庭科授業を実施できるようになることを支援するものとして,家庭科教育パッケージ教材を作成することを研究の目的とした.平成25年度は,中学校の家庭科授業に関して,A)授業ビデオの撮影・編集,B)動画共有システムVISCOを用いて収集した授業について家庭科の専門家らが討議,C)討議結果を踏まえた家庭科授業パッケージDVDの作成,までを実現することができた.今回作成したしたパッケージ教材には,VISCOおよび10本の中学校家庭科授業の動画ファイル,各授業の指導案が含まれている.VISCOはWindows7を推奨環境とするシステムで,動画の映像場面にコメントを付与すると,インターネットを通じてコメント情報がサーバに蓄積される.視聴時には,インターネットを通じて,蓄積された複数人のコメント情報を動画上に吹き出しの様に重ねて表示させることができる.またコメントはリスト表示され,そこからコメントを挿入した場面に動画を移動させることもできる.中学校家庭科授業およびその指導案は日本家庭科教育学会近畿地区会の有志によって収集・編集された.授業は学習内容ADから各1本以上とし,題材(テーマ)は重ならないように調整した.授業は学校長の許諾を得た上で撮影し,かつ生徒の名前や顔にはモザイク加工を施した.音声が聞き取りにくい場面にはテロップを付け,授業内容がわかる程度の長さにカットした.このように編集された10本の授業ビデオに,教員養成系大学・学部で家庭科教育に携わる研究者7名が分担して,VISCOを使って優れた点や課題・助言,解説等のコメントを付与した.現在一人で試行錯誤しながら授業をしている家庭科教員が,将来すぐれた家庭科授業を実施できるようになることを支援するものとして,家庭科教育パッケージ教材を作成することを研究の目的とした.平成24年度は,小学校の家庭科授業に関して,A)授業ビデオの撮影・編集,B)動画共有システムの設定,C)動画共有システムVISCOを用いて収集した授業について家庭科の専門家らが討議,D)討議結果を踏まえた家庭科授業パッケージDVDの作成,までを実現することができた.今回作成したしたパッケージ教材には,VISCOおよび7本の小学校家庭科授業の動画ファイル,各授業の指導案が含まれている.VISCOはWindows7を推奨環境とするシステムで,動画の映像場面にコメントを付与すると,インターネットを通じてコメント情報がサーバに蓄積される.視聴時には,インターネットを通じて,蓄積された複数人のコメント情報を動画上に吹き出しの様に重ねて表示させることができる.またコメントはリスト表示され,そこからコメントを挿入した場面に動画を移動させることもできる.小学校家庭科授業およびその指導案は日本家庭科教育学会近畿地区会の有志によって収集・編集された.授業は学習内容ADから各1本以上とし,題材(テーマ)は重ならないように調整した.授業は学校長の許諾を得た上で撮影し,かつ子どもの名前や顔にはモザイク加工を施した.音声が聞き取りにくい場面にはテロップを付け,授業内容がわかる程度の長さにカットした.このように編集された7本の授業ビデオに,教員養成系大学・学部で家庭科教育に携わる研究者7名が分担して,VISCOを使って優れた点や課題・助言,解説等のコメントを付与した.現在,1人で試行錯誤しながら授業をしている家庭科教員が,将来すぐれた家庭科授業を実施できるようになることを支援するものとして,家庭科教育パッケージ教材を作成することを研究の目的とした.平成24年度は,小学校家庭科の授業に関して,「A)授業ビデオの撮影・編集」,「B動画共有システムVISCOを用いて収集した授業について家庭科の専門家らが討議」,「C討議結果を踏まえた家庭科授業パッケージDVDの作成」まで進めることができた.平成25年度は,中学校家庭科の授業に関して,「A)授業ビデオの撮影・編集」,「B動画共有システムVISCOを用いて収集した授業について家庭科の専門家らが討議」,「C討議結果を踏まえた家庭科授業パッケージDVDの作成」まで進めることができた.平成26年度は,高等学校の家庭科授業に関して「A)授業ビデオの撮影・編集」までを実現することができた.今回収集した授業ビデオは5本で,日本家庭科教育学会近畿地区会の有志によって収集・編集された.収集する授業は多くの学校で採用されている共通科目「家庭基礎」で参考にできるようなものとした.授業は学校長の許諾を得た上で撮影し,かつ生徒の名前や顔にはモザイク加工を施した.音声が聞き取りにくい場合にはテロップをつけ,授業内容がわかる程度の長さに編集した.また研究成果の報告として,「中学校家庭科授業の授業研究パッケージの開発」と題して,日本家庭科教育学会近畿地区会実践・研究発表会で発表を行い,DVDの頒布を行った.現在一人で試行錯誤しながら授業をしている家庭科教員が,将来すぐれた家庭科授業を実施できるようになることを支援するものとして,家庭科教育パッケージ教材を作成することを研究の目的とした.平成27年度は,高等学校の家庭科授業に関して,A)