hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
選挙制度と投票行動：政治の代表性と応答性に対する有権者の認知メカニズムの解明

本研究の目的は,選挙制度が有権者の投票行動に与える影響を明らかにすることである.2018年度に行った研究は,次の通りである.分析1:自然実験の分析枠組みから,衆議院選挙の復活当選制度が投票率に与える影響を明らかにした.分析では「前回選挙における民主党候補者の復活当選は,次回選挙の投票率を上昇させる効果があり,前回選挙における自民党候補者の復活当選は,次回選挙の投票率に影響するとはいえない」との結果を得た.以上の結果は,当選者の政党ラベルが有権者の投票参加の程度を規定すること,特に野党候補者の当選が有権者の投票参加を促すことを示唆する.分析結果は,日本政治学会において報告した.分析2:政治家は,選挙制度改革後,どのような政策を有権者にアピールするのか,計量分析により明らかにした.分析では「政治家は,同一選挙区内で候補者の数が増えると,外交・安全保障政策に対する立場の違いが分かりにくくなるよう行動する」との結果を得た.以上の結果は,政治家は選挙状況の変化に応じて有権者に訴える政策を戦略的に選択していることを示唆する.分析結果は,日本選挙学会において報告した.分析3:投票実験により,候補者に関する情報の「量」と「質」が投票参加に与える影響を明らかにした.分析では「有権者は,選挙に出馬する候補者が増加しても,政策に関する情報が与えられれば投票に参加する傾向にある」との結果を得た.以上の結果は,有権者の投票参加を促す要因は,情報の「量」ではなく「質」にあることを示唆する.また,有権者に提示される政策の内容が候補者によって選択されることで,有権者は包括的な情報に接触できなくなり,投票に参加する誘因を高められない可能性も指摘できる.選挙制度が有権者の投票行動に与える影響について,マクロな視点に基づく分析(分析1,分析2)に主眼を置くとともに,一部ミクロな側面に着目し分析(分析3)を行った.また,複数の分析結果を論文としてまとめており,投稿準備も進んでいる.さらに,「選挙制度が有権者の投票参加に対する認識に与える影響」「選挙制度に対する有権者の選好」を明らかにするために実験を計画し,実施に向け準備を整えた.研究課題を着実に遂行できていることから,おおむね順調に研究は進展していると考える.2019年度は,選挙制度が投票行動に与える影響を有権者個人レベルで精緻に分析し,研究を推進する予定である.まず,2018年度に計画した実験を実施し,有権者はどのような選挙制度の下で投票意欲を高めるのか明らかにする.さらに,実験を用いて,選挙制度の変化が有権者の「一票の価値に対する認識」「候補者間の差異の認知」に影響を与えるのか分析する.また,選挙制度を複数の要素に分解し,有権者がどのような要素を好み投票するのか明らかにする.これらの分析と同時に,2018年度にまとめた複数の論文を国内の学術誌に投稿する予定である.本研究の目的は,選挙制度が有権者の投票行動に与える影響を明らかにすることである.2018年度に行った研究は,次の通りである.分析1:自然実験の分析枠組みから,衆議院選挙の復活当選制度が投票率に与える影響を明らかにした.分析では「前回選挙における民主党候補者の復活当選は,次回選挙の投票率を上昇させる効果があり,前回選挙における自民党候補者の復活当選は,次回選挙の投票率に影響するとはいえない」との結果を得た.以上の結果は,当選者の政党ラベルが有権者の投票参加の程度を規定すること,特に野党候補者の当選が有権者の投票参加を促すことを示唆する.分析結果は,日本政治学会において報告した.分析2:政治家は,選挙制度改革後,どのような政策を有権者にアピールするのか,計量分析により明らかにした.分析では「政治家は,同一選挙区内で候補者の数が増えると,外交・安全保障政策に対する立場の違いが分かりにくくなるよう行動する」との結果を得た.以上の結果は,政治家は選挙状況の変化に応じて有権者に訴える政策を戦略的に選択していることを示唆する.分析結果は,日本選挙学会において報告した.分析3:投票実験により,候補者に関する情報の「量」と「質」が投票参加に与える影響を明らかにした.分析では「有権者は,選挙に出馬する候補者が増加しても,政策に関する情報が与えられれば投票に参加する傾向にある」との結果を得た.以上の結果は,有権者の投票参加を促す要因は,情報の「量」ではなく「質」にあることを示唆する.また,有権者に提示される政策の内容が候補者によって選択されることで,有権者は包括的な情報に接触できなくなり,投票に参加する誘因を高められない可能性も指摘できる.選挙制度が有権者の投票行動に与える影響について,マクロな視点に基づく分析(分析1,分析2)に主眼を置くとともに,一部ミクロな側面に着目し分析(分析3)を行った.また,複数の分析結果を論文としてまとめており,投稿準備も進んでいる.

さらに,「選挙制度が有権者の投票参加に対する認識に与える影響」「選挙制度に対する有権者の選好」を明らかにするために実験を計画し,実施に向け準備を整えた.研究課題を着実に遂行できていることから,おおむね順調に研究は進展していると考える.2019年度は,選挙制度が投票行動に与える影響を有権者個人レベルで精緻に分析し,研究を推進する予定である.まず,2018年度に計画した実験を実施し,有権者はどのような選挙制度の下で投票意欲を高めるのか明らかにする.さらに,実験を用いて,選挙制度の変化が有権者の「一票の価値に対する認識」「候補者間の差異の認知」に影響を与えるのか分析する.また,選挙制度を複数の要素に分解し,有権者がどのような要素を好み投票するのか明らかにする.これらの分析と同時に,2018年度にまとめた複数の論文を国内の学術誌に投稿する予定である.
4D(xyλt)画像解析による収穫後青果物の非破壊非接触鮮度評価

本年度はホウレンソウ葉を対象に、低浸透圧耐性の評価、および酸化ストレスマーカーの測定を行った。0.5 Mマンニトール水溶液中での生存率を100 %として正規化した低浸透圧環境下における相対生存率を正規累積分布関数で回帰することで、プロトプラスト直径10&#181;mごとの平均破壊浸透圧を算出した。Young-Laplaceの式を用いた解析の結果、膨張破裂時の膜張力はプロトプラストのサイズによらず一定であることが明らかとなった。またこれを受けて、プロトプラスト単離時における工程の影響を評価した結果、酵素処理時間と脱気による酵素溶液の浸潤処理の有無では膨張破裂時の膜張力に有意差が生じないのに対して、遠心分離処理は遠心強度によっては膨張破裂時の膜張力を下げ得る可能性が示唆された。他方、ジアミノベンジジン(DAB)およびニトロブルーテトラゾリウム(NBT)を用いた過酸化水素(H2O2)およびスーパーオキシドアニオン(O2・ー)の組織学的染色を行った結果、過酸化水素濃度が葉の位置によらず貯蔵後期に急増する一方、スーパーオキシドアニオン濃度は収穫直後に高く時間経過と共に減少することが示された.これらの観察事実は、SOD様活性は収穫後も十分に高く維持される一方で、カタラーゼ(CAT)活性やアスコルビン酸ベルオキシダーゼ(APX)活性などの過酸化水素消去に関連する酵素の機能は収穫後に不十分になることを示唆した。Young-Laplaceの式による膨張破裂時の膜張力の解析結果は、単離操作そのものによる膜へのダメージを最小化するプロトプラストの最適単離法の開発を可能にするものであり、プロトプラストを観察試料とする核磁気共鳴法と二層流法とによる細胞膜の拡散・浸透透水係数の測定など、他の膜物性計測にとっても重要な発見となった。また、一連の酸化ストレスマーカーの計測データの収集が進み、膜機能劣化と相関を持つ酸化ストレスや化学種が同定されつつあると評価される。年末に導入された備品の操作についても想定の範囲内で習熟が進んでいる。他方、プレッシャープローブ法による膜物性計測は、マイクロキャピラリーの先端加工の精度不足のため遅れが生じている。以上を総合すると、本研究課題はおおむね順調に進展していると自己評価される。当初の計画通り、温度およびガス環境を変化させる環境での貯蔵試験を行うことにより、鮮度状態が段階的に異なる青果物試料を作出し、細胞膜の輸送物性や力学物性の計測、抗酸化酵素や抗酸化物質など抗酸化能に関わる一連の酸化ストレスマーカーの計測、および脂質過酸化・分解産物の網羅分析によって、細胞膜の機能劣化を定量化する。また、高精度のマイクロキャピラリー先端加工を行うためのガラスプーラーや研磨機などの導入を検討し、プレッシャープローブ法による細胞弾性率の計測とそれを通した組織レベルにおける細胞の水透過性の測定を推進し、プロトプラストを観察試料とする核磁気共鳴法と二層流法とによる細胞膜の拡散・浸透透水係数との比較により、膜の機能劣化と鮮度低下との関係性を明らかにする。加えて、タイムラプスハイパースペクトル画像の収集と機械学習による解析を行い、鮮度の非破壊推定法とその分光学的解釈について議論する。

当初の計画通り、温度およびガス環境を変化させる環境での貯蔵試験を行うことにより、鮮度状態が段階的に異なる青果物試料を作出し、細胞膜の輸送物性や力学物性の計測、抗酸化酵素や抗酸化物質など抗酸化能に関わる一連の酸化ストレスマーカーの計測、および脂質過酸化・分解産物の網羅分析によって、細胞膜の機能劣化を定量化する。また、高精度のマイクロキャピラリー先端加工を行うためのガラスプーラーや研磨機などの導入を検討し、プレッシャープローブ法による細胞弾性率の計測とそれを通した組織レベルにおける細胞の水透過性の測定を推進し、プロトプラストを観察試料とする核磁気共鳴法と二層流法とによる細胞膜の拡散・浸透透水係数との比較により、膜の機能劣化と鮮度低下との関係性を明らかにする。加えて、タイムラプスハイパースペクトル画像の収集と機械学習による解析を行い、鮮度の非破壊推定法とその分光学的解釈について議論する。
レオ・シュトラウス政治哲学研究の方法による思想史研究と政治哲学の可能性

3年間にわたる研究で得られた成果は以下のように纏められる。(1)シュトラウスの著作の翻訳(『僭主政治論』『リベラリズム、古代と近代』「近代性の三つの波」「迫害と著述の技法・序論」など)。(2)アメリカをはじめ世界各地の研究者たちと共同研究が進められた。アメリカ:ネイサン・タルコフ教授(シカゴ大学)、スティーヴン・スミス教授(エール大学)マイケル・ズッカート教授、キャサリン・ズッカート教授(ノートルダム大学)ドイツ:ハインリヒ・マイアー教授(ジーメンス研究所)、オーストラリア:ヘイグ・パタパン博士(グリフィス大学)ら6人の学者による連続講演会と研究集会(東京と京都・大阪で計十二回の講演集会を持つ)の実現がそれである。(3)シュトラウスの政治哲学をベースにしたポストモダンの時代の政治・倫理問題の解明(山内、霜田など)。(4)シュトラウスの思想史研究の方法による思想史の再解釈(石崎、飯島、柴田、川出、柘植、太田など)。(5)近年のシュトラウス派の政治思想の研究(田中によるローゼンの研究、マイケル・ズッカートの報告など)。(6)僭主政治や君主政治と哲学の関わりの研究(金田、飯島、添谷、谷らの研究)。(7)「共和主義」「立憲主義」「近代の国家秩序の後にくる政治と社会思想」の研究(川出、太田による)。(8)中金聡によるオークショット、ジュヴネルらの研究。(9)またシュトラウスの思想史研究の方法(秘教的著述技法と注意深い読解)による古典的政治哲学の研究(飯島、石崎)には多くの若手(助手や学術振興会特別研究員など)研究者や院生も加わり、研究が推し進められた。(10)また雑誌『政治哲学』を創刊してそれらの成果を公表する体制が整いつつある。『政治哲学』2号ではタルコフの「僭主政治論・序論」が翻訳して公表されたが、第3号においてスミス、C.ズッカートの講演が日本語版で公表されることになっている。3年間にわたるわれわれの研究によって、これまで秘密のヴェールに包まれていたシュトラウスの政治哲学の真の姿を明るみにだす作業が大きく前進させられた。われわれの研究は、最近のアメリカに見られる歪んだ形でのシュトラウス理解とも一線を画し、真のシュトラウス像の解明に向けた研究となったと確信している。今年度は三年間に亘る研究の最初の年であったが、去る9月11日に生じたニューヨーク貿易センタービルなどに対するテロ事件の勃発によって、当初の計画を幾分変更を加えて遂行することを余儀なくされた。まず、変更せずに予定通り研究が進められたところから述べると、シュトラウスの著作の翻訳はほぼ予定通り進める事ができた。『僭主政治倫(On Tyranny)』は研究代表者石崎、分担者飯島、金田に加え面が担当して、「シュトラウス-コジェーヴ往復書簡」を除いて訳文がほぼ出来上がり、「コメンタリー」の部分と「シュトラウス-コジェーヴ論争」の部分は3月中に印刷にとりかかる段階に至っている。また『リベラリズム古代と近代』も訳稿がほぼ出来上がる段階に差し掛かっている。

また、右崎は「近代性の三つの波」、田中はS.ローゼンの「レオ・シュトラウスと哲学の可能性」の翻訳を完成させ、石崎は「レオ・シュトラウスと古典読解の現代的意義」を執筆し、それらはいずれも小冊子『政治哲学』創刊号において公表される。また、研究分担者飯島はシカゴ大学に赴き、クロプジー教授らと連絡を取り合いながら研究を続行し、同じく分担者山内はミュンスター大学のジープ教授らと連絡を密にして研究を遂行している。さらに、12月22日には、摂南大にて石崎、太田、川出、柴田、柘植らに東京や大阪の若手研究者が加わり、研究会が開催された。変更を余儀なくされたのは、海外での資料収集と情報交換である。9月10月予定の出張を三月に変更する事になり、その結果幾人かが出張を取りやめたため、出張旅費での執行分を備品購入にまわす事になった。備品はほとんど図書備品であり、結果的には来年度購入予定のものを前倒しした形となったが、研究に役立てられている事は言うまでもない。今年度の研究は、昨年度の研究成果(資料収集と海外の研究者との交流)を引き継ぎ、それをさらに前へ進める研究となった。研究代表者石崎は昨年度備品として購入した雑誌や書籍および直接シカゴ大学図書館から収集してきた資料の整理を続行する傍ら、シカゴ大学に滞在して研究を続けていた研究分担者飯島と連絡を密にしながら研究を続行した。そのなかから、クロプシー教授の指示を仰ぎながら北米とヨーロッパで活躍中のシュトラウス研究者とのコンタクトの輪を広げることができた。飯島は6月ミュンヘンで開催されたシュトラウス・コンファレンスに出席し、主催したジーメンス研究所のハインリヒ・マイアー教授、および8月からフェローとしてミュンヘンに赴くシカゴ大学のネイサン・タルコフ教授から、日本での講演と研究指導の確約を取りつけてきた。またそれと平行しながら、イェール大学のスティーヴン・スミス教授、ノートルダム大学のマイケル・ズッカート、キャスリーン・ズッカート教授、シカゴ大学ピピン教授らにも共同研究を申し入れた。9月から12月の研究は12月に来日することになったマイアー、タルコフ両教授の講演研究集会の準備を軸にして研究が推し進められた。東京と関西のでの講演集会開催に向け資料整理・翻訳などをおこない、12月、東京会場(7日:早稲田大学)でのタルコフ教授「シュトラウス『僭主政治論』日本語版序文」、マイアー教授「神学-政治問題」、それに続く京都会場(9日:京都大学)、タルコフ教授「レオ・シュトラウス『自然権と歴史』における正しい生き方としての哲学」、マイアー教授「哲学の歴史と哲学者の意図」の講演会とそれを受けて討論集会を実現した。これに続いて、三月15日と17日にはイェール大からスティーヴン・スミス教授を招いて東京会場「シュトラウスのスピノザ」、京都会場「レオ・シュトラウスのプラトン的リベラリズム」と題する二つの講演を軸にした討論集会を実現し、研究を進めた。今年度の研究は(1)シュトラウス政治哲学の全般に関わる研究、(2)シュトラウスの哲学思想と現代の政治的諸問題および倫理的諸問題との関わりについての研究、(3)シュトラウスの思想史研究の方法による過去の政治哲学者の思想史的研究を柱として進められた。
神経幹細胞における選択的スプライシング制御の生理学的役割の解明

今年度は、当初の計画を変更して作製に取り組んでいたPTB/nPTB二重欠損マウス(Ptbfl/fl ; Nestin-CreERT2マウス)の解析を行った。具体的には、生後8週齢の成体Ptbfl/fl ; Nestin-CreERT2マウスに対して、経口投与によりタモキシフェンを導入し、コンディショナルにPTB/nPTBを欠損させ、投与後5週までの期間において、神経幹細胞の生存、分化、増殖に着目し、組織学的な解析を行った。申請した研究計画では、PTB遺伝子の欠損により成体神経幹細胞に見られる異常を端緒して、選択的スプライシング制御の役割に迫る予定であった。しかしながら、成体神経幹細胞では、胎生期神経幹細胞と異なり、PTB遺伝子単独の欠損では顕著な異常がみられなかった。一方で、胎生期神経幹細胞では、PTBとその相同遺伝子nPTBの二重欠損により、表現型が激しくなることを見いだした。このことから、成体神経幹細胞ではPTBの働きはその相同遺伝子であるnPTBにより補償されるのでないかと考え、計画を変更しPTB/nPTB二重欠損を誘導できるPtbfl/fl ; Nestin-CreERT2マウスの作製に取り組んだ。研究期間内に作製が間に合ったため、解析を開始した。予備的な実験結果では、PTB/nPTBの二重欠損を誘導したマウスの海馬では幹細胞マーカーであるNestin陽性細胞が減少するという結果が得られており、さらに詳細な解析を行っていく予定である。(抄録なし)(抄録なし)今年度は、PTB欠損胎生期神経幹細胞においてスプライシングパターンに異常が出る遺伝子を網羅的に調べるために、エクソンアレイを用いた解析を行った。また、成体神経幹細胞におけるPTB欠損の影響を調べるために、成体脳においてコンディショナルにPTBを欠損させ、組織学的解析を行った。さらに、本研究課題に関連する以前の研究をまとめた論文を発表した。1)胎生期神経幹細胞について胎生14.5日PTBcKOマウス脳より大脳皮質領域を外科的に取り出し、シングルセルにしたのち、成長因子添加条件で培養し、幹細胞を選択的に増殖させた。培養後の細胞からRNAを抽出し、PTBの発現やNestinやTuj1といった分化マーカーの発現をqPCRで確認し、分化状態にcKOと対照群とで差がないことを確認した。エクソンアレイの結果では、複数の標的候補遺伝子が同定されおり、今後RT-PCRによる確認、PTB強制発現によるスプライシングパターンのレスキュー実験、アイソフォームの機能解析を行う予定である。2)成体脳神経幹細胞について生後8週齢のPtbf1/f1;Nestin-CreERT2に対して、タモキシフェンを投与し、1週間後にPTBの発現が消失している幹細胞が側脳室下帯や海馬穎粒細胞下層に存在していることを確認した。同時に、Sox2/GFAP二重陽性の幹細胞の数を調べたが、対照群と比較して大きな差は見られなかった。さらに、側脳室下帯における神経新生に対する影響を調べるために、BrdU投与により新生神経細胞を標識後、それらの細胞の数や位置を投与2週間後に調べたが、最終的な移動地点である嗅球におけるbrdU陽性細胞の数や嗅球内での位置には大きな変化はなかった。これらの結果から、成体神経幹細胞ではPTBの働きはその相同遺伝子であるnPTBにより補償されるのでないかと考え、現在、PTB/nPTB二重欠損を誘導できるマウスを作製しており、準備ができ次第、解析する予定である。エクソンアレイのデータ解析に時間を要したため。また、成体脳を対象した解析では期待通りの結果が出ず、計画の変更を余儀なくされたため。(抄録なし)1)胎生期神経幹細胞について今後は、エクソンアレイの結果をRT-PCRやqPCRにより確認し、PTB強制発現によるスプライシングパターンのレスキュー実験、アイソフォームの機能解析を行う。
IL-6/IL-12関連サイトカインによる免疫制御

IL-6/IL-12関連サイトカインIL-23、IL-27、IL-35は、炎症性サイトカインやヘルパー(Th)分化誘導因子、エフェクター分子などとして、生体内の免疫反応の制御において重要な役割を担っている。本研究では、これらのサイトカインの産生機構や作用機序、種々の病態モデルにおける役割や治療応用、新しい会合分子の存在の可能性が明らかにされた。ゆえに、本研究の成果は、新規サイトカインの同定のみならず、癌や自己免疫病などの種々の疾病の治療応用にも繋がる可能性が期待される。IL-27の細胞増殖の誘導および阻害する作用機序について、種々の遺伝子欠損マウスや遺伝子導入細胞を用いて検討した。その結果、細胞増殖の誘導にはgp130/STAT3を介したc-MycやPim-1等の増殖誘導に関与する分子の発現誘導により、さらに、細胞増殖の抑制にはWSX-1/STAT1を介した腫瘍の増殖抑制作用を有するIRF-1の発現誘導により、巧妙に制御されていることが明らかになった。一方、昨年、IL-27の免疫抑制作用の作用機序の1つとしてIL-10産生を介していることが複数のグループより報告された。その中で、Weiner(Harvard University)らは、樹状(DC)細胞をTreg細胞で刺激すると、いわゆる制御性DC様の修飾されたDC細胞になり、この修飾DC細胞でナイーブCD4^+T細胞を刺激するとIL-10を産生する制御性T(Tr1)細胞が誘導され、その際、修飾DC細胞からIL-27が産生されことが重要であることを報告した。そこで、今年度は、IL-27によるTr1細胞の誘導能について既知のIL-10で刺激する方法やデキサメタゾンとビタミンD3で刺激する方法等と比較検討した。その結果、IL-27とTGF-β1で刺激するのが一番効率よくIL-10産生細胞を分化誘導し、in vitroおよびin vivoにおいて制御活性を有しているTr1を分化・増幅させることが可能であることが明らかになった。この細胞は、Treg細胞が発現する転写因子Foxp3発現は低く、IL-10の他にIFN-γも産生していた。さらに、この細胞を、喘息モデルマウスに細胞移入すると、喘息の発症を軽減することも示された。この方法により増やしたTr1細胞を用いた細胞療法への応用が期待される。今年度は、IL-23とIL-6によるTh17分化誘導機構と、IL-27の抗腫瘍免疫の誘導機構について明らかにした。ナイーブCD4^+T細胞はIL-23受容体(R)を発現していないが、IL-6がT細胞受容体を介した刺激と共にナイーブCD4^+T細胞にIL-23R発現を増強しIL-23と相乗的にプライマリーのIL-17産生やTh17分化を誘導し、さらに、これらの効果はTGF-βに対する中和抗体で抑制されることより内在性のTGF-β産生が重要であることを見出した。これは、TGF-βの産生が不十分な時でも、例えば感染などによってIL-6やIL-23が産生されれば、Th17分化が誘導されることを示唆している。また、マウス肝癌細胞株MM45T.Liに対する抗腫瘍効果を調べたところ、IL-12とIL-27は腫瘍接種早期からNK細胞を介して抗腫瘍効果を示したが、IL-23の抗腫瘍効果は後期からCD8^+T細胞を介して見られ、マウス肝癌細胞に対しても3者の抗腫瘍効果の作用機序の違いが明らかになった。このようにIL-27は、抗腫瘍機構の1つとしてNK細胞を介して抗腫瘍効果を示すが、精製したNK細胞に対する直接の作用は弱いことが報告されている。そこで、さらにマウス扁平上皮癌細胞株SCCVIIを用いてNK細胞の関与を詳細に調べたところ、IL-27は直接NK細胞のSCCVII腫瘍に対する細胞傷害活性を増強する能力は低かったものの、そこへSCCVII腫瘍を植えたマウスの血清を加えるとSCCVII腫瘍に対する細胞傷害活性が誘導されることがわかった。我々は、以前にIL-27が直接B細胞に作用してIgG2aへのクラススイッチを増強することも報告しているが、以上の結果よりIL-27がNK細胞を介した抗体依存性細胞傷害活性(ADCC)により抗腫瘍効果を示すことが明らかになった。今年度は、まずコンカナバリンA(Con A)投与で誘導されるヒト自己免疫性肝炎モデルを用いて、肝臓での炎症誘導におけるNotchシグナルとIL-23の役割について検討を行った。初めに、Notchシグナルを介した刺激によるT細胞で発現誘導される分子をマイクロアレイを用いて網羅的に探索したところ、その1つの分子として肝臓保護作用を有するIL-22が芳香族炭化水素受容体(AHR)を介して発現が強く誘導されることを見出した。そこで、Con A肝炎モデルを用いて、Notchシグナル伝達に必須の転写因子RBJ遺伝子のT細胞

特異的欠損マウスを用いて検討したところ、Notchシグナルは、AHRさらにその下流のIL-22産生誘導を介して肝障害からの肝臓の保護に作用していることを明らかにした(PNAS, 2010)。さらに、IL-22産生誘導作用を有するIL-23の肝炎誘導における役割をp19遺伝子欠損マウスを用いて検討したところ、内在性のIL-23を欠損すると肝障害が増悪化し、IL-22蛋白投与で回復が見られたが、IL-23蛋白投与はIL-22のみならず炎症性のサイトカインIL-17産生も誘導し、肝障害の保護効果は弱かった(論文Revice中)。次に、IL-27の破骨形成の抑制効果を見出し、その作用機序や治療効果を検討した。その結果、IL-27は、T細胞レセプターを介した刺激によりT細胞上に発現誘導されるRANKL発現や可溶性(s)RANKL産生を強く抑制することを見出した(Immunol Let, in press)。さらに、タイプII型コラーゲンで免疫し誘導するコラーゲン誘導関節炎(CIA)で、IL-27を発現するアデノウイルスを関節内に投与することにより関節炎を軽減させることが可能であることも明らかにした(Arthritis Rheum, in press)。
咀嚼における下顎と表情筋の協調運動に関与する神経回路の解析

咀嚼時の下顎・頬・口唇の協調運動を制御する神経機構が未だ明らかでないことから、本研究では三叉神経運動核および顔面神経核に出力を送るプレモーターニューロンの存在領域について検証した。光学的膜電位測定法およびパッチクランプ法を用いた電気生理学的検証により、顔面神経核背側の網様体に閉口筋・開口筋運動ニューロンおよび表情筋運動ニューロンへ出力を送る神経細胞が存在し、咀嚼の協調運動制御に関与することが示唆された。咀嚼における協調運動は、脳幹に存在する咀嚼のパターンジェネレーターと呼ばれる神経回路によって形成されるとされているが、その詳細は明らかでない。本研究では三叉神経運動核および顔面神経核に出力を送る顔面神経核背側網様体(RdVII)のニューロンが、咀嚼筋および表情筋の協調運動に関与するか検証した。初年度は、RdVIIで三叉神経運動核(MoV)および顔面神経核(MoVII)に同時に出力を送る領域を、光学的膜電位測定法およびパッチクランプ法を利用して検索した。生後0-3日齢のWistar系ラットから作製した矢状断脳幹スライス標本において、RdVIIの吻側部の電気刺激により、MoVおよびMoVIIに同時に光学的応答が確認された。そこでMoVおよびMoVIIに存在する閉口筋運動ニューロン(MMN)と開口筋運動ニューロン(DMN)、表情筋運動ニューロン(FMN)から同時にパッチクランプ記録を測定し、RdVIIの電気刺激で誘発される応答のタイミングを検証した。RdVIIの電気刺激により各運動ニューロンでシナプス後電位が同時に記録されたが、応答が誘発される閾値が異なったことから、各運動ニューロンに出力を送るプレモータニューロンはそれぞれ別に、近接して存在することが示された。本年度は、各運動ニューロンに出力を送るプレモータニューロンがRdVIIでどのように分布しているのか検証した。caged glutamateのレーザー照射によってグルタミン酸を投与し、照射部位に存在する細胞体のみを選択的に興奮させる手法を用いた。この結果、FMNのプレモータニューロンはRdVIIの腹側かつ吻側に、MMNのプレモータニューロンはDMNのプレモータニューロンよりも背側に分布することが示された。RdVIIニューロンの種類によって分布領域が異なることは、各運動筋の協調運動制御に役立つ可能性が考えられる。本研究は咀嚼運動において口腔周囲組織を協調的に活動させるプレモーターニューロンを同定し協調運動制御を担う神経回路を検索することを目的とした。平成23年度は、顔面神経核の背側で三叉神経運動核の腹側に位置する網様体(RdVII)のニューロン群に着目し、このニューロン群から顔面神経核の表情筋運動ニューロンおよび三叉神経運動核の閉口筋・開口筋運動ニューロンに出力が送られていることを検証した。新生仔ラットから顔面神経核および三叉神経運動核を含む脳幹スライス標本を作製しRdVII領域の吻側部を電気刺激すると、刺激後3msで両運動核に光学的膜電位応答が誘発されることから、RdVIIから両運動核へ興奮性の出力が送られることが示唆された。RdVIIニューロンが両運動核の運動ニューロンを協調させるとすれば、RdVIIニューロンから両運動ニューロンへの入力は同期すると考えられる。しかし表情筋運動ニューロン、閉口筋運動ニューロン、開口筋運動ニューロンから同時パッチクランプ記録をとり、RdVIIの電気刺激によって誘発される応答が各運動ニューロンで同期するか検証したところ、どのニューロンも同期しないことが明らかとなった。また記録された応答パターンから、各運動ニューロンに入力するプレモーターニューロンは近接しているが混在せず、独立して分布する可能性も示唆された。以上の結果を、第53回歯科基礎医学会学術集会にて報告した。次年度は各運動ニューロンに入力するプレモーターニューロンの存在部位を検証し、協調運動制御を担う神経回路の解明につなげたいと考える。本研究では、RdVIIに咀嚼筋運動ニューロンおよび表情筋運動ニューロンにシナプス結合するプレモーターニューロンが存在することを明らかにし、咀嚼運動における協調運動制御機構を検証することを目的とした。平成23年度は、RdVII領域に咀嚼筋運動ニューロンおよび表情筋運動ニューロンに出力を送るニューロンが存在することを明らかにすることが計画された。当初はCagedグルタミン酸を用いたレーザーによる光刺激で明らかにする予定であったが、電気刺激を用いて各運動ニューロンの応答の同期性を検討する実験に変更した。研究手法は変更したが、各運動ニューロンに出力を送るプレモーターニューロンがRdVII領域に存在することが示唆され、次年度に計画されていた応答パターンの電気生理学的特性の検証なども実施されていることから、本研究はおおむね順調に進展していると言える。

平成23年度の研究結果から、各運動ニューロンに出力を送るプレモーターニューロンがRdVII領域で近接はするが混在せずに存在することが示唆されたことから、各プレモーターニューロン群の存在部位を検索し、口腔周囲組織の協調運動制御への関わりを検討する。プレモーターニューロン群の存在部位検索にはCagedグルタミン酸を使用したレーザーによる光刺激を用いて行う。RdVII領域を網羅的にレーザー照射し、パッチクランプ記録した運動ニューロンに応答が誘発される刺激部位を検索する。平成23年度と同様、脳幹スライス標本作製のための実験動物準備、手術関連器具・消耗品購入、試薬類購入の費用が必要となる。申請時に予定された刺激用アイソレーターは研究計画の変更により購入の必要がないため、Cagedグルタミン酸の購入に充てる。研究成果を発表するため、学会発表に関する費用および論文発表に関する費用が必要となる。
極微量DNAをクロ-ン化できるシャロミドベクタ-の開発と応用

極微量のウイルスゲノム・cDNAのクロ-ン化を目的として、一連のシャロミドベクタ-(ラムダファ-ジベクタ-と同等のクロ-ン化効率を持ちながら、大きさや構造を自由に改変できるコスミドベクタ-)を作製した。まず一本の肝組織針生検から抽出したDNAの一部、わずか5マイクログラムからB型肝炎ウイルス(HBV)ゲノムの全長をクロ-ンできるシャロミドSを開発した。このベクタ-は制限酵素SalIをクロ-ン化部位に持ち、XhoIで直鎖状にしたHBVゲノムを選択的にクロ-ン化できる特徴を持っている。それにより肝炎患者針生検組織から、このウイルスがコ-ドする逆転写酵素を発現すると思われる新しいHBVRNAの同定に成功した。またさらにこのベクタ-に改良を加えたシャロミドSBを開発した。このベクタ-は、制限酵素SnaBIをクロ-ン化部位に持ち、平滑末端にしたほとんど全てのDNA断片を選択的に(すなわち、インサ-トを持った組換え体のみが大腸菌のコロニ-を作るように)クロ-ン化することができる。これを用いて、タイ国のHBV保因者の血清のわずか1m1からHBVゲノムの全長のクロ-ン化に成功した。この場合、クロ-ン化に用いたXhoIで直鎖状にしたHBVゲノムは再びXhoIを用いて切り出せる点が、シャロミドSよりも優れている。またこのシャロミドSBは、特にPCR法により増幅されたC型肝炎ウイルス(HCV)のcDNAのクロ-ン化にきわめて有用であることが示された。これらのベクタ-の使用法が確立されたことにより、微量のウイルス遺伝子のクロ-ン化がより容易に出来ることになった。
液体の動的構造因子と横波の関係～古典および第一原理分子動力学法

液体中においても横波が存在することが、古くから理論や分子動力学によって知られている。また最近、非弾性X線散乱実験においても様々な液体の動的構造因子に横波の存在を示唆するピークが観測されるようになってきた。本研究は液体中の横波の情報がどのような機構によって縦波の情報のみを含む動的構造因子に現れるかを明らかにすることを目的としている。その結果、液体中の横波は局所構造の異方性により、同一波長の波においても、その方向により異なる振動数を持つことが示され、それらの平均または、何らかの機構により縦波として現れやすい横波の情報が動的構造因子に現れる可能性を示した。液体の動的構造因子には、異なる振動数をもつ二つ(以上)のピークが含まれている場合があることが、非弾性X線散乱実験や分子動力学法によって明らかにされてきている。ひとつは通常の縦波音波であり、もうひとつは横波の振動を表していると考えられている(T-modeと呼ぶことにする)より低振動の縦波振動である。本研究の目的は、この縦波T-Modeがどのような機構によって生じ、横波と定量的にどのように関係しているのかを局所的な原子のダイナミクスから明らかにすることである。動的構造因子で観測される量は、波数ベクトルに対して縦方向に振動する密度ゆらぎである。したがって、動的構造因子に横波の情報が現れるためには、横方向の振動と同程度の振動数を示す縦方向の振動が存在している必要がある。今年度は、液体中の二つの原子に着目し、横方向の振動が縦方向の振動に影響を与えるかどうかをミクロな原子配置をもとに解明することを試みた。これまでに、液体中の二つの原子間の振動を、その原子を結ぶ方向と、それに垂直な方向に分け、縦方向と横方向の振動数を調べる方法を開発してきた。今年度はさらに、周囲の環境によってそれらがどのように変化するかを調べる方法を開発し、古典分子動力学によって求めた統計精度の十分な液体銅の時系列データに適用した。その結果、注目している2原子の近傍に別の原子が存在しているとき、その2原子間の縦方向の振動数は、そうでない場合に比べ小さくなり、横方向の振動に近づくことを発見した。注目している二つの原子A、Bの近傍に別の原子Cが存在しているとき、そのAB間の相互作用は、AB間の直接相互作用だけでなく、Cを介した間接相互作用ACBも含むことになる。横波を起こす復元力は、3原子以上による間接的な相互作用によって起こるので、今回発見した機構は、横波が縦波として観測される可能性をミクロに示す証拠であると思われる。予定通り、T-modeの起源を解明するための解析方法のひとつを開発し、2原子間の縦方向の振動は、3つめの原子が加わることによって生じる横方向の振動によって、影響を受けることをミクロに定量的に示すことができた。液体ガリウム、銅、鉄、スズなど、1種類の原子から構成される比較的単純と考えられる液体においても、動的構造因子に2つ以上の振動ピークが含まれていることがX線非弾性散乱実験により示されている。ひとつはよく知られている通常の縦波音波であり、もうひとつは、より低振動数の縦波振動である(これをT-modeと呼ぶことにする)。このT-modeは、液体中の横波の振動の様子を、間接的に表していると考えられているが、現在のところ、そのT-modeの出現機構は明らかになっていない。本研究の目的は、このピークが、どのような原子の運動によって現れるかを明らかにすることである。昨年度、液体中の二つの原子に着目し、互いが、横方向に振動するとき、それが縦方向の振動にどう影響するかを分析する方法を開発し、その方法を古典分子動力学によって求めた統計精度の十分な液体銅の時系列データに適用した。その結果、注目している二つの原子A,Bの間の縦方向の振動数は、A,Bの近傍に別の原子Cが存在するときは、そうでない場合に比べて小さくなり、横方向の振動数に近づくことが分かった。つまり、横方向の振動が、縦方向の振動として現れる可能性を示した。今年度は、この分析方法を、第一原理分子動力学法によって求めた液体銅、およびカルシウムに対して適用し、同様な結果を得ることができた。これは、横波の振動の情報が、縦波(T-mode)として観測される可能性をミクロに示していると考えられる。おおむね予定どおりに、T-modeの起源となる原子の運動を特定するための解析方法を開発し、それを具体的な物質に適用して分析を行ってきた。高校物理では横波は固体中のみを伝わり気体や液体中では伝わらないことを学ぶ。しかし2009年、液体の動的構造因子に横波の存在を示唆するピークが実験で観測された。液体ガリウム、銅、鉄、スズなど1種類の原子から構成される比較的単純な液体においても動的構造因子に2つ以上の振動ピークが含まれていることがX線非弾性散乱実験により示されている。ひとつは通常の縦波音波であり、もうひとつは、より低振動数の縦波振動である(これをTモードと呼ぶことにする)。このTモードは液体中の横波の振動の様子を間接的に表していると考えられているが、Tモードの出現機構は明らかになっていない。成果は以下のとおりである。

液体中の二つの原子に着目し、互いが横方向に振動するとき、それが縦方向の振動にどう影響するかを分析する方法を開発し、その方法を古典および第一原理分子動力学によって求めた液体銅やカルシウムの時系列データに適用した。その結果、注目している二つの原子A,Bの間の縦方向の振動数は、A,Bの近傍に別の原子Cが存在するときは、そうでない場合に比べて小さくなり、横方向の振動数に近づくことが分かった。つまり、横波の振動の情報が縦波として観測される可能性をミクロに示すことに成功した。Tモードと横波の関係を調べる際の問題点のひとつは、動的構造因子の中のT-modeを明確に特定することが困難であることである。そこで液体に比べてTモードが明確に現れる多結晶を対象にして分子動力学を行い横波の情報が縦波として現れる可能性を調べた。その結果、Tモードの振動数は、横波の振動数とは必ずしも一致せず、それらの中間の値を取る場合があることがわかった。つまり、多結晶では横波の振動数とTモードは一対一に対応しているわけではないことを明らかにした。液体中においても横波が存在することが、古くから理論や分子動力学によって知られている。また最近、非弾性X線散乱実験においても様々な液体の動的構造因子に横波の存在を示唆するピークが観測されるようになってきた。本研究は液体中の横波の情報がどのような機構によって縦波の情報のみを含む動的構造因子に現れるかを明らかにすることを目的としている。その結果、液体中の横波は局所構造の異方性により、同一波長の波においても、その方向により異なる振動数を持つことが示され、それらの平均または、何らかの機構により縦波として現れやすい横波の情報が動的構造因子に現れる可能性を示した。当初の計画どおり、次のとおり進めていく。1.T-modeの起源となる機構と横波の起源との関係の解明:T-modeと横波の共通点を探るために、3つ以上の原子に注目して、それらの運動を詳細に調べる方法を開発する。2.現実の物質を対象にした定量的な研究:長時間の第一原理MDにより高精度で、原子位置、速度の時系列データを求め、T-modeと横波の定量的な関係を解明する。本研究の最終段階では、X線非弾性散乱実験でT-modeが観測された実際の液体を対象として、それぞれの物質固有の性質を定量的に議論するために、長時間の第一原理分子動力学シミュレーションを行い、原子ダイナミクスを分析する。T-modeと横波が同時に存在するとき、どのような機構でそれらの振動数が近い値となるのか、また、横波が存在しないにもかかわらずT-modeが存在するのはなぜかについて、分析を進める。液体の分子動力学シミュレーション残額1251円は、当初予定していた学会出張の日程を1日短縮したために生じたものである。次年度の出張旅費に使用する予定である。
生細胞マイクロRI動態イメージングへの挑戦

近年、細胞内の遺伝子発現メカニズムや細胞周期といった個々の細胞特性の解明が求められている。本研究では、放射性同位核種をトレーサーとする細胞単位での核医学イメージング装置を開発した。具体的には、β線と150μm厚CsIシンチレータの相互作用で生まれた光をCMOSカメラで撮影した。さらに、CsIよりも密度と発光量が高く、潮解性の無いGPSについても検討した。シミュレーションの結果、シンチレータ厚による半値幅の変化は小さいものの、1/10幅では厚くなるほど大きく広がり、低出力な成分が増えていくことが分かった。また、10μm厚のGPSであっても全体の9割程度の感度を持つことがわかった。患者由来の人工多能性幹細胞(iPS細胞)から成熟細胞へ分化させて病態をモデル化し、治療法開発・創薬とつなげる研究が注目されている。しかし、この病態再現ヒト細胞の様々な注目分子動態を、定量的に評価する方法はまだ確立していない。そこで、非侵襲的分子イメージング法である核医学診断法を応用した「マイクロRI動態イメージング」へ挑戦する。核医学診断法の解像度はmmオーダーが原理的限界であるのに対して、細胞単位の解析に必要な10ミクロンオーダーの解像度をどのように達成するかが挑戦のポイントである。具体的には、シンチレータによるβ線トラック計測を基本として、1レンズ無し撮像のContact Image Sensing、2超薄膜シンチレータ開発、3β線トラック画像処理の3つへ挑戦し、提案システムのコンセプト実証を目指す。薄膜シンチレータの上にRI標識の生細胞を直接乗せて、薄膜シンチレータの下に光学レンズを介することなくCMOS撮像センサーを結合する方法に挑戦する。具体的には、薄膜シンチレータ内でのβ線トラックを撮像し、画像処理することによって、もとのRIトレーサーの分布および時間変化を画像化する。平成28年度は、(1)超薄膜・高蛍光出力シンチレータとしてCsI+ファイバーオプティクスプレートを採用し、(2)CMOSカメラをレンズ系と用いて接合した試作システムを開発した。そして、18F-FDG薬剤のファントム撮像を行い、サンプルの分解能と感度の点で実現可能性を確認した。おおむね、計画通り進捗している。一部物品購入については、シミュレーションおよびプレ実験による仕様確定の時期が多少遅れてしまったため、平成28年度中の物品購入をあきらめて、平成29年度中に購入することとした。そこで、非侵襲的分子イメージング法である核医学診断法を応用した「マイクロRI動態イメージング」へ挑戦した。核医学診断法の解像度はmmオーダーが原理的限界であるのに対して、細胞単位の解析に必要な10ミクロンオーダーの解像度をどのように達成するかが挑戦のポイントであった。具体的には、シンチレータによるβ線トラック計測を基本として、(1)超薄膜シンチレータの開発と、(2)シンチレーション光の光学カメラ撮像に挑戦し、システムのコンセプト実証を行った。試作装置では、150ミクロン厚のCsI(ヨウ化セシウム)シンチレータを用いた。このシンチレータ後部には、直径6ミクロンの光ファイバーアレイが光学接着されており、シンチレーション光はこれを介して出力される。また、イメージングセンサには、蛍光観察等に特化したscientific-CMOS(ORCA-Flash 4.0 V2,浜松ホトニクス)を採用した。カメラレンズには、明るさの優れたハイスピードイメージングレンズ(1-22130, NAVITOR)を採用し、作動距離や倍率を調整し、且つ感度の向上を図った。試作装置による実験から、要求される3.5Mbq/ml付近でのイメージングが可能であることがわかった。また、更なる空間分解能や感度の向上に向け、シミュレーションによるシンチレータ仕様の検討を行い、GPSではCsIの2.5倍の応答が期待できるとわかった。当初計画どおりの推進を予定している。核医学物理一部の物品購入(シンチレータおよびレンズ)については、シミュレーションおよびプレ実験による仕様確定の時期が多少遅れてしまった。そのため、平成28年度中の物品購入を取りやめ、平成29年度に購入することとした。上記のシンチレータおよびレンズの購入を平成29年9月までに完了する予定である。
統合的病態パスウェイ解析に基づく白血病の発症機構と治療基盤の確立

本研究では、Evi-1、BAALCといったAMLの予後不良関連因子の下流パスウェイと特異的な治療標的、Evi-1による急性白血病発症における重要な協調因子、治療抵抗性を示す白血病幹細胞分画の維持機構を明らかにした。またEvi-1の発現を可視化したマウスにおいて、Evi-1陽性細胞が白血病幹細胞をマークし、治療抵抗性と関連することを示した。さらに白血病の進展機序、周囲環境と白血病細胞の相互作用、エピゲノム異常が難治性白血病発症に果たす役割から、白血病の病態を統合的に明らかにした。これらは、難治性造血器腫瘍の治療耐性を克服し、根治に向けた新たな分子標的療法を開発する上で貴重な成果である。BAALC高発現は急性骨髄性白血病の予後不良因子として広く知られている。我々はBAALC過剰発現によりMEK-ERK経路が特異的に活性化されること、さらにBAALCはMAPK経路の足場タンパクMEKK1(MAP3K1)および細胞の分化成熟に重要な転写因子KLF4に結合することを発見した。BAALCは定常状態において細胞質内でKLF4と結合しその核内移行を阻害しているが、刺激依存的にKLF4から解離しMEKK1と結合し、MKP3のERKへの結合を競合的に阻害することで、ERKのリン酸化の維持に働くことを見出した。さらに我々はBAALC高発現白血病においてMEK-ERK経路が有効な治療標的となりうることをヒト白血病検体を用いて明らかにした。また、骨髄微小環境との相互作用は造血細胞の機能を規定する重要な因子であるが、我々は、骨髄に存在する脂肪細胞の重要な液性因子であるアディポネクチン(Adipo)のノックアウトマウスを用いて造血系への作用を解析した。Adipoを欠く造血環境では骨髄マクロファージからの炎症性サイトカインTNF-αの分泌が慢性的に亢進し、造血幹・前駆細胞分画において増殖シグナルの細胞内抑制因子であるSocs3が異常に高発現する結果、G-CSFや感染に対する顆粒球増殖応答が減弱することを明らかにした。また、ヒト変異型ASXL1ノックインマウスおよびヒト変異型DNMT3Aノックインマウスの作製が完了し、解析の基盤が整った。われわれは以前、p53ノックアウト造血細胞にJAK2V617F変異を導入して移植すると白血病を発症することを見い出している。この白血病モデルにおいて、分化マーカー陰性cKit陽性Sca-1陽性の最も幼若な白血病細胞、および赤芽球系分化マーカーCD71陽性の白血病細胞が二次移植によって白血病を再構築できることを見出した。本モデルは骨髄増殖性腫瘍から白血病への進展の機構などを追究する上で有用なツールと考えられる。われわれは、MLL融合遺伝子白血病モデルを用いて、白血病細胞のなかでも幹細胞に富む分画において、NF-kBシグナルが活性化されていること、このような機構が他の白血病モデルやヒト症例検体でも働いていることを示した。この機構の重要性を、in vivo白血病モデルにおいてボルテゾミブなどを用いたNF-kBシグナルの阻害がAML治療効果を認めることによって証明した。さらに、このシグナルの活性化には、自身が産生するTNFalphaによるポジティブフィードバックが重要であることを明らかにした(投稿中)。骨髄微小環境との相互作用は造血細胞の機能を規定する重要な因子である。われわれは、骨髄に存在する脂肪細胞の重要な液性因子であるアディポネクチン(Adipo)に注目し、そのノックアウトマウスを用いて造血系への作用を解析した。その結果、Adipoを欠く造血環境では、G-CSFや感染に対する顆粒球増殖応答が減弱すること、Adipo投与によりこの応答性が回復することを明らかにした。また、われわれは、Evi1高発現白血病では高頻度にC/EBPbが高発現していること、C/EBPbアイソフォームの一つだけがEvi1との協調により白血病発症を促進させることを報告した(Watanabe-Okochi N, et al. Blood in press)。造血器腫瘍の成立や進展を助長する要素の一つにゲノム不安定性がある。このメカニズムの一端を解明するため、われわれはJAK2V617F変異体強制発現によるマウスでの骨髄増殖性腫瘍発症系を用いて、腫瘍細胞の産生する液性因子Lcn2によって隣接する細胞内の活性酸素が増加し、ゲノムDNAの損傷が亢進することを見出した。細胞内の活性酸素増加には細胞内への鉄の蓄積が関与していた。この成果をBlood誌に報告した。白血病原性転写因子Evi1の過剰発現は急性骨髄性白血病症例の510%で認められ、予後不良な傾向にある。

われわれは、Evi1過剰発現によって白血病を発症したマウス、およびin vitroで不死化したマウス造血細胞を用いて、Evi1の過剰発現細胞ではthrombopoietin(THPO)シグナルが重要な役割を果たしていることを示した。Evi1過剰発現白血病細胞の中でもTHPOの受容体であるMPLを発現している分画にはleukemia-initiating-cellがより多く含まれており、この分画はフィーダー細胞との共培養においてTHPO依存性にBCL-xLの過剰発現傾向を示し、高い生存・増殖活性を示した。このようなシグナル経路がEvi1過剰発現白血病の治療抵抗性の一因を担っているものと考えられた。この成果をBlood誌に報告した。また、急性骨髄性白血病細胞におけるオートファジーの役割を明らかにするため、オートファジー経路の主要構成因子であるAtg5とAtg7のノックアウトマウスを用いて、MLL-ENL白血病キメラ遺伝子強制発現によるマウス白血病発症系などで解析を行なった。その結果、Atg5あるいはAtg7の欠損により、末梢血中の白血病細胞数の減少とアポトーシスの亢進が認められた。この成果を第56回米国血液学会で報告した。26年度が最終年度であるため、記入しない。血液内科学26年度が最終年度であるため、記入しない。BAALC高発現急性骨髄性白血病細胞の成立において協調的に働くシグナルのいくつかを同定し、実際に治療標的になりうることを患者検体を用いて明らかにしたほか、Adiponectinが造血系に果たす役割を明らかにした。また、いくつかの白血病関連遺伝子の変異ノックインマウスの作製が完了した。白血病細胞の成立において協調的に働くシグナルのいくつかを同定したほか、白血病幹細胞において重要であるNF-&#61547;Bシグナルが活性化される機構を明らかにした。また、条件的欠失マウスを用いた難治性白血病遺伝子BAALCの機能解析や、いくつかの白血病関連遺伝子の変異ノックインマウスの作製が進んでいる。研究の体制に大きな変更はない。作製が完了した遺伝子変異ノックインマウスを利用して、さまざまな白血病遺伝子との組み合わせによって造血器腫瘍のマウスモデルを構築する。このモデルマウスを用いて治療標的となるようなシグナルを網羅的に探索して同定する。また、今後もヒト症例検体が利用しやすい研究環境である利点をいかして、ヒト症例検体のゲノム解析を推進し、治療抵抗性や病像の進展に関わるクローンの遺伝学的な特性を明らかにする。そのほか、現在進行中の白血病関連遺伝子の分子生物学的な機能解析や、造血環境側の因子と白血病細胞の相互作用の解析を引き続き進め、化合物スクリーニングなどの創薬にまで展開することを目標とする。現在作製中の遺伝子変異ノックインマウスを利用して、さまざまな白血病遺伝子との組み合わせによって造血器腫瘍のマウスモデルを構築する。また、ヒト症例検体が利用しやすい研究環境である利点をいかして、ヒト症例検体のゲノム解析を推進し、治療抵抗性や病像の進展に関わるクローンの遺伝学的な特性を明らかにする。