hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
誘導型遺伝子改変マウスによるケラチン病に対する蛋白フォールディング調節療法の創生

我々は本研究課題において、ケラチン病における蛋白フォールディング異常の分子基盤を解明するため、野生型および変異ケラチン遺伝子を導入したマウス由来の角化細胞を解析した。その結果、変異ケラチンを強制発現させても、内在ケラチンは球状の形態を取らず、またアポトーシスも誘導されないことが判明した。導入遺伝子をさらに解析したところ、変異ケラチン遺伝子の一部が切断されていることを示唆する所見が得られた。ケラチン14をコードする遺伝子に点突然変異を導入した遺伝子改変マウスを作成するため、まずoverlapping PCRの手法を用いて、ケラチン14遺伝子の125番目のアルギニンをシステインに置換(Arg-125→Cys)した。こうして得られた変異ケラチン14遺伝子および野生型ケラチン14遺伝子をplND/V5-Hisベクターに導入し、さらにAatIIおよびDraIIIを用いて、可能な限りベクターDNA部分を除去した。これらのDNA断片を用いて遺伝子改変マウスを作成し、上記の遺伝子が導入されていることをPCR法により解析した。pVgRXRベクターには、レチノイドXレセプターとエクデイソン受容体をコードする2個の遺伝子が組み込まれている。レチノイドXレセプターとエクデイソンレセプターより形成されるヘテロダイマーにポナステロンAが結合し、pIND/v5-Hisベクターに存在するエクデイソンリスポンスエレメントに結合することにより、その下流域に組み込まれているWtおよびMut K14の転写が開始される。そこで、遺伝子改変マウスの角化細胞を、ポナステロンAを培養液中に添加し培養中である。plND/v5-Hisベクターから発現される蛋白質にはタグ(His tagおよびV5 tag)が付着しているので、今後の計画として抗V5抗体を用いて、変異ケラチンの発現を免疫組織学的に確認する予定である。その結果、変異ケラチンが発現していることが確認され、また既存のケラチン・ネットワークは球状の形態を取り変異ケラチンと共存していることが予想される。変異ケラチンの発現により、小胞体シャペロン群やユビキチンリガーゼなどの蛋白の品質管理に関与する分子群が活性化され、やがてアポトーシスが誘導されることが予想される。そこで今後は、これら機能分子群の動態をDNAマイクロアレイ、PCRおよび免疫プロットにより解析する予定である。こうして得られた変異ケラチン14遺伝子および野生型ケラチン14遺伝子をpIND/V5-Hisベクターに導入し、さらにAatIIおよびDraIIIを用いて、可能な限りベクターDNA部分を除去した。レチノイドXレセプターとエクデイソンレセプターより形成されるヘテロダイマーにポナステロンAが結合し、pIND/V5-Hisベクターに存在するエクデイソンリスポンスエレメントに結合することにより、その下流域に組み込まれているWtおよびMut K14の転写が開始される。pIND/V5-Hisベクターから発現される蛋白質にはタグ(His tagおよびV5 tag)が付着しているので、抗V5抗体を用いて、変異ケラチンの発現を免疫組織学的に確認した。その結果、変異ケラチンが発現により、既存のケラチン・ネットワークは球状の形態を取らず、またアポトーシスが誘導されてないことが判明した。今後の計画として、予想と異なる所見が得られたことの原因を解析するため、胞体シャペロン群やユビキチンリガーゼなどの蛋白の品質管理に関与する分子群の動態をDNAマイクロアレイ、PCRおよび免疫ブロットにより解析する予定である。ケラチン病における蛋白フォールディング異常の全貌を解明し、新規治療法を探索するため、我々は誘導型遺伝子改変マウスを作成し、変異ケラチン凝集塊による蛋白フォールディング異常の分子基盤を解明する。この研究戦略は、これまで掴み所の無かったケラチン病を含むフォールディング病の病態解明と新規治療法の開発に有用であり、この分野における従来の研究を大きく発展させることが予想される。昨年度までに、overlapping PCRの手法を用いて、変異ケラチン14遺伝子および野生型ケラチン14遺伝子をpIND/V5-Hisベクターに導入し、さらに可能な限りベクターDNA部分を除去した後に、これらのDNA断片を導入した遺伝子改変マウスを作成した。さらに、遺伝子改変マウスの角化細胞を、ポナステロンAを培養液中に添加し培養した。

その結果、変異ケラチンが発現により、既存のケラチン・ネットワークは球状の形態を取らず、またアポトーシスが誘導されてなかった。そこで今年度は、この原因を解析するため、変異ケラチン14遺伝子および野生型ケラチン14遺伝子を含むDNA断片全長の遺伝子配列を解析したところ、一部に変異が導入されていることが判明し、そのため予想と異なる所見が得られたものと推察される。
表面共吸着系の電子状態の同時観測法の開発と電極反応への展開

金属表面上に分子が共吸着した系は、触媒反応や電極反応のモデル系であり、共吸着層の存在比率を系統的に変化させた表面の電子状態を調べることが求められてきた。本研究では、レーザー脱離法により表面上に共吸着種の比率の異なる状態を連続的に作成し、その表面を位置分解型電子分光器で一度に測定する手法の開発を行った。これにより様々な比率の共吸着層のX線吸収分光法、共鳴オージェ電子分光法の測定が可能となった。本研究の目的は金属表面上に比率の異なる共吸着層を作成して、その電子状態の変化を調べることにある。表面上の共吸着層は触媒反応や電極反応のモデル系であり、比率の異なる共吸着層の電子状態を調べることがこれまで求められてきた。本研究では、ナノ秒パルスレーザーを用いて、表面上に比率の異なる共吸着層を連続的に作成して、その表面を位置分解型電子分光器で一度に測定することにより、様々な比率の共吸着表面のX線吸収分光法と共鳴X線光電子分光法を同時観測する手法を開発する。X線吸収分光法は異なる位置のオージェ電子の量を、励起工ネルギーを変化させながら測定することにより得られる。21年度は共吸着層を作成するためにナノ秒のYAGレーザーを導入して、またレーザー光を試料表面に適切な集光で導くためのシステムの構築を行った。実験装置は分子研の極端紫外光研究施設(UVSOR-II)の軟X線アンジュレータビームラインBL6Uに接続した。そして放射光から得られる軟X線を用いて、位置分解型電子分光器(SCIENTA SES200+MBS A-1)のエネルギー分解能と位置分解能のテストを行い、本研究を遂行する上で十分な性能を発揮することを確認した。上述のように、21年度で異なる比率の共吸着層の電子状態を同時に観測するためのシステムの構築がほぼ完了した。現在、このシステムを用いて、Ni(111)表面上のベンゼンと一酸化炭素の共吸着層の測定準備を進めている。この系はベンゼンと一酸化炭素の間の相互作用の変化により異なる混合比率で構造変化をすることが知られているため、異なる比率の共吸着層の電子状態を調べることが重要である。本研究の目的は金属表面上に存在比率の異なる共吸着層を作成して、その電子状態の変化を調べることにある。表面上の共吸着層は触媒反応や電極反応のモデル系であり、比率の異なる共吸着層の電子状態を明らかにすることが重要である。本研究では、ナノ秒パルスレーザーを用いて、表面上に比率の異なる共吸着層を連続的に作成して、その表面を位置分解型電子分光器で一度に測定することにより、様々な比率の共吸着表面のX線吸収分光法と共鳴オージェ電子分光法を同時観測することを目的とする。この方法は過去にレーザー脱離法と位置分解型電子分光器を合わせることにより、Pt(111)表面上のOHと水の間のプロトン移動の速度を明らかにした手法を更に発展させた方法である。平成22年度は昨年度に引き続き、ナノ秒のYAGレーザーを超高真空槽の中の単結晶表面に適切な集光で導くためのシステムの調整を行った。また超高真空槽を分子研の極端紫外光研究施設(UVSOR-II)の軟X線アンジュレータビームラインBL6Uに接続して、Ni(111)表面上に一層吸着させたベンゼンのX線光電子分光の測定を行った。また超高真空槽に設置されている位置分解型電子分光器(SCIENTA SES200 + MBS A-1)のソフトウェアにTCP/IP通信により外部から制御することが可能なプログラムを自作して加えることにより、ビームライン側で軟X線のエネルギーを変えながら、電子分光スペクトルを自動測定することを可能にした。これによりオージェ電子収量の軟X線吸収分光法を共吸着表面で測定することが可能になり、Ni(111)表面上のベンゼンと一酸化窒素の共吸着層の軟X線吸収分光法と共鳴オージェ電子分光法を行うことを可能にした。
抗がん剤の投与ルートによる抗腫瘍効果と臓器障害の発現様式の差異に関する研究

抗がん剤の全身投与に際し,経口投与と静脈内投与では薬剤の門脈系への移行性が異なるので,当然肝臓への影響が異なることが考えられる.そして抗がん剤の経口投与は上部消化器癌に対しては接触による直接的な抗腫瘍効果も期待される.また直腸内投与された抗がん剤も門脈系に移行するが,直腸内に病巣が存在する場合には接触による効果が期待できる.本研究では胃癌患者を対象としてフッ化ピタミジン系制がん剤の投与ルートによる抗腫瘍効果と肝障害の程度を比較検討した.術前に5-FU1.33.1gの経口あるいは2.54.5gの静脈内投与を行った胃癌患者は,末梢血および肝機能などに異常値を指摘しえなかったが,肝生検を行うと脂肪沈着,巣状肝細胞壊死,好酸体,空胞核,および細胞質淡染などの所見が散見された.これらの所見は経口投与群に著明であった.肝組織の電子顕微鏡所見は脂肪滴,ミトコンドリアの腫大,封入体, SER・RERの開大,およびライソゾームなどが認められた.Tegafur(FT)7.815.0gおよびUFT7.213.2g(FT換算)の経口投与についても5-FUと同様の所見が認められた.術前胃癌患者にFT600mgを経口, 800mgを静脈内,そして750mgを直腸内に投与し, FTと5-FUの血中濃度を測定すると,経口と静脈内投与では投与後60分以内に,直腸内投与では180分後に最高血を示した.これらの薬剤を数日間投与しておき,手術時に採取した材料につき5-FUの組織内濃度を測定したところ,血中濃度より高値でとくに肝が高く0.1430.431μg/g,ついで胃癌の0.0330.116μg/g,胃粘膜0.0210.083μg/gの順であった.担がんマウスにつきCarmofurの癌細胞内局在がアクチノマイシンDによりどのような影響を受けるかをオートラジオグラフィーにより検討した.またブレオマイシンの副作用が組換え型スーパーオキシド・デスムターゼにより軽減される現象を発見した.抗がん剤の全身投与に際し,経口投与と静脈内投与では薬剤の門脈系への移行性が異なるので,当然肝臓への影響が異なることが考えられる.そして抗がん剤の経口投与は上部消化器癌に対しては接触による直接的な抗腫瘍効果も期待される.また直腸内投与された抗がん剤も門脈系に移行するが,直腸内に病巣が存在する場合には接触による効果が期待できる.本研究では胃癌患者を対象としてフッ化ピタミジン系制がん剤の投与ルートによる抗腫瘍効果と肝障害の程度を比較検討した.術前に5-FU1.33.1gの経口あるいは2.54.5gの静脈内投与を行った胃癌患者は,末梢血および肝機能などに異常値を指摘しえなかったが,肝生検を行うと脂肪沈着,巣状肝細胞壊死,好酸体,空胞核,および細胞質淡染などの所見が散見された.これらの所見は経口投与群に著明であった.肝組織の電子顕微鏡所見は脂肪滴,ミトコンドリアの腫大,封入体, SER・RERの開大,およびライソゾームなどが認められた.Tegafur(FT)7.815.0gおよびUFT7.213.2g(FT換算)の経口投与についても5-FUと同様の所見が認められた.術前胃癌患者にFT600mgを経口, 800mgを静脈内,そして750mgを直腸内に投与し, FTと5-FUの血中濃度を測定すると,経口と静脈内投与では投与後60分以内に,直腸内投与では180分後に最高血を示した.これらの薬剤を数日間投与しておき,手術時に採取した材料につき5-FUの組織内濃度を測定したところ,血中濃度より高値でとくに肝が高く0.1430.431μg/g,ついで胃癌の0.0330.116μg/g,胃粘膜0.0210.083μg/gの順であった.担がんマウスにつきCarmofurの癌細胞内局在がアクチノマイシンDによりどのような影響を受けるかをオートラジオグラフィーにより検討した.またブレオマイシンの副作用が組換え型スーパーオキシド・デスムターゼにより軽減される現象を発見した.前年度に引き続き(-hexylcarbamoyl-5-fluoro-6-【^(14)C】-uracil(【^(14)C】-HCFU,比活性3.5μCi/mg)の腫瘍細胞内局在のオートラジオグラフィーによる検討を行った。Fujimoto ascites tumor移植マウスに体重1gあたり0.0001mgのアクチノマイシンD(AD)を腹腔投与してから1時間後に0.1mg/gの【^(14)C】-HCFUを腹腔内投与した。そのあとマウスを2,4,8,12,16,20,24,30,36,48時間後に屠殺,腫瘍細胞を採取して塗抹標本を作製した。この塗抹標本はクロロホルム処理により、標本内の遊離の【^(14)C】-HCFUを除去したのちオートラジオグラフィーを行った。AD非投与では最初に細胞内に銀粒子の集積が認められるのは【^(14)C】-HCFU投与後12時間であったが、AD前投与の場合は2時間目より細胞内に銀粒子の集積が認められた。

AD非投与および前投与の両群とも48時間目まで細胞内取り込みを認めたが、AD投与群では核小体は不明瞭となり、AD非投与群のように核小体に一致した銀粒子の集積は認められず、細胞障害の程度が高かった。以上の所見から、少量のADの前投与がHCFUの細胞内取り込みを促進すると考えられた。このメカニズムを解明するためHCFUを担癌マウスに腹腔内投与したあと、腹水中のHCFUに由来する5-fluorouracil(5-FU)の濃度を経時的に48時間まで測定した。AD非投与では2時間0.31,0.26μg/ml,4時間0.22,0.11μg/ml,8時間0.04μg/ml,12時間以後測定限界以下であった。AD前投与では2時間0.77,0.50μg/ml,4時間0.21μg/ml,8時間以後測定限界以下であった。したがってAD前投与では2時間値が高いことが細胞内取り込みを促進する要因の1つになっていると考えられる。しかしAD非投与では腹水中の5-FUの減衰が遅延しているので、【^(14)C】-HCFUの投与後8時間まではバックグラウンドが高くなり、たとえ細胞内取り込みがあっても、それが細胞内の銀粒子の集積として認められなかったという可能性も考えられる。
自己免疫疾患における眼表面の血管異常の病態解明と新規治療法の開発

自己免疫疾患およびGVHD症例における共焦点レーザー生体顕微鏡を用いた血管の形態学的異常の評価に加えて、ヒトGVHDをよく反映するマウスGVHDモデルによる基礎研究の観点から病態解明に取り組み、以下の点を追究する。1)自己免疫疾患およびGVHDにおける眼瞼血管異常の有無について対照との比較検討2)初期病変にかかわると考えられる、血管内皮の異常に至る病態機序と分子基盤の解明3)病的変化を来す血管内皮に発現する分子の中和抗体による病態抑制および新規治療法開発自己免疫疾患およびGVHD症例における共焦点レーザー生体顕微鏡を用いた血管の形態学的異常の評価に加えて、ヒトGVHDをよく反映するマウスGVHDモデルによる基礎研究の観点から病態解明に取り組み、以下の点を追究する。1)自己免疫疾患およびGVHDにおける眼瞼血管異常の有無について対照との比較検討2)初期病変にかかわると考えられる、血管内皮の異常に至る病態機序と分子基盤の解明3)病的変化を来す血管内皮に発現する分子の中和抗体による病態抑制および新規治療法開発
血管内皮由来因子による腎幹細胞数の制御

本研究では腎幹細胞の増殖・分化における血管内皮の役割を検討した。BrdUラベリング法を用いて、分裂の遅い腎幹細胞をBrdU標識して解析した結果、加齢に伴い腎幹細胞数および腎間質周囲の毛細血管網が減少していた。分離したBrdU陽性腎幹細胞をHUVECと共培養すると、その数は有意に増加した。ヒト培養近位尿細管細胞を3次元ゲル培養し、HGFを添加すると微絨毛を有する管腔構造が誘導された。さらにHUVECと共培養すると、管腔形成が有意に促進され、複数のチロシンキナーゼ型受容体のリン酸化が確認された。以上の結果から、血管内皮由来因子の中には腎幹細胞活性化因子が存在することが強く示唆される。本研究では腎再生医療の確立を目標として、我々が以前に同定した腎幹細胞の増殖・分化における血管内皮の役割を検討している。最近我々が開発した尿細管再生のIn vitroモデルを利用して、3次元尿細管構造を効率よく誘導する因子やその情報伝達経路を明らかにするため、本年度は以下の検討を行った。ヒト培養近位尿細管細胞を基底膜構成成分であるマトリゲル(IV型コラーゲン、laminin)とI型コラーゲンを混合したもので3次元培養し、In vivoに類似した環境を作成した。ここに様々な既知の腎再生因子を添加し、尿細管構造の有無を調べた結果、HGF刺激により管腔構造が誘導されることが判明した。電子顕微鏡レベルでも極性を持ったMicrovilliを有する尿細管様管腔構造であることが確認できた。これを臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVEC)と共培養し、血管内皮由来因子の管腔形成能に対する影響を調べた結果、共培養により管腔形成が有意に促進されることが判明した。既知の血管内皮由来因子(VEGF、PDGF、bFGFなど)の添加では、その作用は再現できなかったことから未知の管腔形成促進因子の関与が疑われた。血管内皮細胞のと共培養の際に、尿細管細胞でどのようなシグナルが活性化しているかを調べるため、Proteinarrayを用いて解析した。その結果、HGF受容体以外に複数のレセプターチロシンキナーゼ型受容体のリン酸化が確認された。このことは新規の尿細管管腔形成促進システムの存在を示唆していると考えられる。本研究では腎再生医療の確立を目標として腎幹細胞の増殖・分化における血管内皮の役割を検討している。最近我々が開発した尿細管再生のIn vitroモデルを利用して、3次元尿細管構造を効率よく誘導する因子やその情報伝達経路を明らかにするため、ヒト培養近位尿細管細胞を基底膜構成成分であるマトリゲル(IV型コラーゲン、laminin)とI型コラーゲンを混合したもので3次元培養し、In vivoに類似した環境を作成した。ここにHGFを添加すると管腔構造が誘導されることが判明し、電子顕微鏡レベルでも極性を持ったMicrovilliを有する尿細管様管腔構造であることが確認できた。既知の血管内皮由来因子(VEGF、PDGF、bFGFなど)の添加では、その作用は再現できなかった。本年度は、血管内皮細胞との共培養の際に尿細管細胞でどのようなシグナルが活性化しているかを調べるため、プロテインアレイを用いて解析した。その結果、管腔構造を形成しつつある尿細管細胞内では、HGF受容体以外に複数のレセプターチロシンキナーゼ型受容体のリン酸化が確認された。現在、それぞれの活性化(リン酸化)した受容体の発現をラット虚血・再灌流急性腎不全モデルの組織を用いて確認し、尿細管再生における役割について検討を進めている。組織幹細胞の数は加齢とともに変化することから、腎幹細胞数と加齢の関連について検討した。様々な週齢(7週、7ヶ月、12ヶ月)のラットに対して、浸透圧ポンプを用いてBrdUを1週間ラベルし、その後2週間の観察期間をおいて腎臓を摘出。ホルマリン固定した後、パラフィン切片を作成しBrdU染色を行った。この方法により理論上、活発に増殖する細胞は観察期間に分裂を繰り返し、取り込まれたBrdUは希釈され検出不能となる。

つまり、分裂の遅いSlow-cyclingな腎幹細胞は、BrdU陽性細胞として同定される。その結果、加齢に伴い腎幹細胞数は減少することが明らかになった。組織幹細胞の増殖・分化は、その周囲の環境(Niche)により制御されるため、腎幹細胞の増殖・分化もその周囲の間質、特に毛細血管網により規定されている可能性が高い。そこで様々な週齢のラット腎間質毛細血管網の面積を免疫染色により比較したところ、加齢に伴い毛細血管網が減少することが判明した。次に腎幹細胞の増殖・分化に対する血管内皮細胞の影響を調べた。上記BrdUラベリング法でラット腎幹細胞をBrdU標識し、尿細管を分離。分離した尿細管を3次元ゲル内でヒト臍帯静脈由来血管内皮細胞(HUVEC)と共培養し、BrdU陽性腎幹細胞数を比較すると、HUVECとの共培養により腎幹細胞数の有意な増加を確認した。以上のことから、腎幹細胞の増殖・分化に血管内皮細胞が深く関与している可能性が示唆された。研究計画で行う予定の各種実験は既に習得した技術であり、実施する上で特に支障は来さなかった。予想された結果と異なる結果が得られても、その知見をもとに適宜仮説を修正することにより、当初の目的に向かって順調に研究計画を実施できている。当初の研究計画に従って、次年度は我々が開発した「尿細管再生のIn vitroモデル」を用いて同定された腎幹細胞活性化因子の腎障害における役割を明らかにする。その蛋白の産生量や局在変化および役割(特に腎機能改善効果の有無)についてIn vivoの検証を行う。当初の研究計画に従って、次年度は我々が開発した「尿細管再生のIn vitroモデル」を応用して、腎幹細胞活性化因子のスクリーニングを行う。その結果、活性化因子の候補となる蛋白が同定できたら、腎障害におけるその蛋白の産生量や局在変化および役割(特に腎機能改善効果の有無)についてIn vivoの検証を行う。本年度は最近我々が開発した尿細管再生のIn vitroモデルを利用して、3次元尿細管構造を効率よく誘導する因子やその情報伝達経路を明らかにした。次年度は、上記実験により新たに見出された腎幹細胞の活性化候補因子が、様々な腎疾患に対してどのような役割を果たすのかを検証する。具体的には、虚血・再灌流障害急性腎不全モデル、5/6腎摘慢性腎不全モデル、一側尿管結紮腎線維化モデルなどを作成し、尿細管再生あるいは腎間質線維化の過程でその活性化因子の発現量、発現部位の変化を調べる。各疾患モデルを作成した後、経時的に腎臓を摘出し、免疫組織染色、In Situ Hybridizationにより組織学的評価を行う。最終的にはリコンビナント蛋白を作成し、腎障害モデルに対する腎機能改善効果の有無を評価する。最近我々が開発した尿細管再生のIn vitroモデルを利用して、3次元尿細管構造を効率よく誘導する因子やその情報伝達経路を明らかにする。具体的には、ヒト培養近位尿細管細胞を基底膜構成成分であるマトリゲル(IV型コラーゲン、laminin)とI型コラーゲンを混合したもので3次元培養し、In vivoに類似した環境を作る。
外科侵襲時の生体防御・炎症遷延化・臓器障害における好中球細胞死の意義に関する研究

本研究の目的は、外科侵襲での炎症・感染における生体防御・炎症遷延化・臓器障害における好中球細胞死の意義を明らかにし、さらに重症感染や重症炎症での好中球のネクローシス防止、アポトーシス誘導に焦点をあてた対策を開発することにある。本研究では以下の研究実績を得た。1)手術患者では、術後経過とともにドレーン排液中と末梢血の好中球のアポトーシスが誘導され、好中球機能も正常化し、炎症所見も消退した。この術後好中球アポトーシスにサイトカインが関与することが示唆された。このような侵襲時の好中球アポトーシスをめぐる現象は、生体防御にとって合目的と考えられる、2)In vitroの検討で得られたIL-6の好中球アポトーシスの抑制作用は、術後患者での早期の好中球アポートシス抑制とサイトカインの関連を支持する、3)細菌数が少ないときには好中球アポートシスは抑制され、好中球寿命が延び、その感染防御能は増強する、逆に細菌数が多いときには好中球はネクローシスで死滅して多量の細胞傷害性メディエーターを放出、これが組織傷害や全身性炎症反応の助長につながる、4)細菌からのエンドトキシン放出や好中球からの炎症性サイトカインを多量に放出させるフィラメント化細菌するβ-ラクタム系抗生剤は、好中球のネクローシスを増加させ、これに対しエンドトキシンやサイトカインの放出が少量である球状殺菌性抗生剤は好中球のアポトーシスを誘導し、ネクローシスを防止する、5)成長ホルモンは好中球アポトーシス抑制、活性酸素産生能を増強する。本研究は、外科侵襲での生体防御・炎症遷延化・臓器障害における好中球細胞死の意義を明らかにし、さらに重症感染や重症炎症での好中球ネクローシス防止、アポトーシス誘導に焦点をあてた対策を開発することを目的とする。本年度は、以下のような研究成績を得た。1、外科手術患者の末梢血を術前、術後第1、3、7日目に、腹腔ドレーン排液を術後1、2、3日目に採取した。それぞれの分離好中球を用いてフローサイトメトリーによる好中球細胞死と光学顕微鏡による好中球細胞死形態を測定した。電気泳動法によるDNA断片化も測定した。また、好中球機能の評価として活性酸素産生能とCD16(IgGFcレセプターIII)発現能、TNFレセプター発現能をも測定した。末梢血の好中球のアポトーシスは術後1日目から術後3日目において抑制され、術後7日目には回復すること、腹腔ドレーン排液中の好中球アポトーシスも術後1日目では極めて抑制され、その後に回復すること、術後局所の好中球アポトーシスが抑制されているほど、好中球の活性酸素産生能が亢進していること、これらの末梢血および局所の好中球のアポトーシスの抑制は手術侵襲と相関すること、腹腔局所の術後早期の好中球のアポトーシスにTNF-α、IL-6、IL-10濃度が関与する可能性があること、などが示唆された。2、健常成人の好中球をin vitroで各種濃度のTNF-αと培養し、好中球細胞死、細胞内Caspaseファミリー(ICE/CPP32)の発現およひNF-κBの活性化を測定した。低濃度のTNF-αは単独培養に比べ好中球アポトーシスを抑制、高濃度では逆に誘導を促進すること、アポトーシスが抑制された低濃度TNF-α処理により好中球NF-κBの著明な活性化が認められ、アポトーシス誘導された高濃度TNF-α処理では好中球ICE/CPP32の発現増加が認められること、などが明らかとなった。

本研究の目的は、外科侵襲での炎症・感染における生体防御・炎症遷延化・臓器障害における好中球細胞死の意義を明らかにし、さらに重症感染症や重症炎症での好中球のネクローシス防止、アポトーシス誘導に焦点をあてた対策を開発することにある。本年度では以下の研究実績を得た。1、サイトカインの好中球細胞死への影響の検討では、低濃度のTNF-αは単独培養に比べ健康成人好中球アポトーシスを抑制、高濃度では促進する、IL-1β、IL-6、GM-CSFは好中球のアポトーシスを抑制する、IL-10はIL-6による好中球アポトーシス抑制効果を減弱する、など明らかとなった。2、細胞の好中球細胞死への影響の検討では、健常成人好中球は細胞量が少ない場合はアポト-シス優位で、細胞数が多い場合はネクローシスで細胞死する、そのアポトーシス抑制には、TNF-α、IL-1β、IL-6などの炎症性サイトカインが関与する、細菌の混合比率が高いほど、活性酸素産生能は増強され、CD16発現能は低下する、などが明らかとなった。3、抗生剤の好中球細胞死への影響の検討では、球状殺菌する抗生剤は好中球のアポトーシスを誘導し、ネクローシスを防止するが、フィラメント化殺菌するβ-ラクタム系抗生剤は好中球のネクローシスを増加させる、しかも球状殺菌する抗生剤によるE.coliからのエンドトキシン遊離と好中球からの炎症性サイトカイン放出は、フィラメント化殺菌するβ-ラクタム系抗生剤に比べて少ない、などが明らかとなった。
自己免疫性高カイロミクロン血症の発見とそれに基づく肝性リパ-ゼの意義

我々は従来特発性とされていた高カイロミクロン血症を検討し、いわゆる「自己免疫性高カイロミクロン血症」であることを見いだした、本症はtriglycerideーrichリポ蛋白の代謝に重要な役割を果たすLPLやHーTGLに対する自己抗体が出現し、これらの酵素活性低下をきたし、高カイロミクロン血症を発症していた。この異常免疫フロブリンは、IgAであった。本症ではこの自己免疫性機序により高カイロミクロン血症、頻回の急性膵炎等の著名な病気を来すという点で世界で初めての病態でありN.Engl.J.Med.に報告した。従来「酵素」に対する自己抗体を有する症例も報告されているが、これらの自己抗体はすべて血中逸脱酵素に対するものであり臨床検査上異常値を示す故に発見されるものの、それにより病気を来すと言うものではなく、本症はその点でもきわめて珍しい病態であった。酵素活性低下のメカニズムを検討するため、本症の免疫グロブリンの両酵素への影響を検討した。両者を混合し、遠心した上清を酵素源とした場合は活性が著名に低下するが、遠心せず酵素活性を検討するとその低下は軽度であったので、本症にみられる自己免疫性免疫グロブリンによる酵素阻害様式は酵素活性部位や基質結合部位を認識しているのではなく、免疫グロブリンが酵素蛋白と結合することにより、本来の酵素活性が出現しないことによるものと推定された。さらに、HーTGL活性を制御するホルモンの影響を調べたところ、甲状腺ホルモンが、培養肝細胞HepーG2培養系においてHーTGLの分泌を促進するすることを見いだした。今後は同じ系においてmーRNA定量も試みる予定である。
前立腺組織の異常増殖機構に関する研究

1.ラット前立腺は組織学的にも生化学的にも古くから研究されているが、今回、微小解剖法を用いてその腺管構造を明らかにできた。ラット前立腺は前葉、後葉および側葉からなり、特に側葉はその腺管分枝形態の差から2群に分かれることが見出された。さらに、これらの葉間において性ホルモンの依存性が異なることが示され、研究分担者の林が発表した。以上より前立腺の腺内における異質性が明らかであり、ラット前立腺の発癌モデルにおいて報告されている葉間の発生頻度の差に何らかの関係があると考えられた。2.マウス前立腺においては、生直後短期間における性ホルモンの投与が、生長後の前立腺の形態形成に重大な影響を及ぼすことが示された。特に女性ホルモンであるdiethyl stilbestrol(DES)の投与は、前立腺の分枝形態発生を抑制するとともに、結節状の異常分枝形態を高率に誘導することが示された。この異常形態は悪性所見は認めないものの、前立腺肥大症あるいは前立腺癌の発生母地となる可能性があり、今後さらに検討する予定である。また、この異常構造は、後側葉にのみ発生していることから、前述したラット前立腺同様に、腺内における細胞反応の異質性が関与していると考えられた。3.dimethylaminobiphenyl(DMAB)を用いて、マウス前立腺の発癌実験を施行したが、微小解剖法を用いた巨視的なレベルでの腺管構造の変化は、女性ホルモン投与群および抗男性ホルモン投与群においても明確な所見は認めなかった。DMABの投与量、投与期間、性ホルモンの投与法などについて更に今後検討をする予定であり、現在組織学的にも検討中である。以上、ラットあるいはマウス前立腺において、その正常構造、性ホルモン投与における変化、発癌剤投与による変化を検討し、特に前立腺成長初期における性ホルモン環境が重要な役割りを持つことが示された。1.ラット前立腺の微小解剖においては,生後成長時における前立腺各葉の腺管形態発生が明らかにされ,マウス前立腺と同様の腺管分枝を認めた.特に,ラット前立腺においては側葉は2つの腺管構造の異なる葉に分かれることが明らかにされ,その形態発生の差および生化学的にも,ホルモン依存性に差異があることもわかり前立腺が形態的かつ機能的に異質性に富むことが再確認された.2.生後初期の性ホルモン環境は前立腺の生長において重要であることが知られているが,生下時より13日間にdihydro testosterone(DHT)とdiemylstil bestrol(DES)の投与が生後の前立腺にどのような影響を及ぼすか検討中である.今までのところ, DES単独投与群において有意に腺管分枝形成が抑制され,これはDHTの併用により防止はできない結果を得ている.更に, DESとDHTの同時投与群においては前立腺管発達の抑制とともに後側葉末端部において結節様の異常形態を認めており,この形態を今後組織学的に検討していく予定である.3.dimethylaminobiphenyl(DMAB)を用いた前立腺発癌実験は,今まで主にラットにおいて行なわれてきたが,我々はマウスを用いて萎縮した前立腺がアンドロジェンを投与することにより増殖すると同時にDMABを投与しこれをくり返すシステムを用いて現在検討中である.本年度より投与開始し来年度から微小解剖法を用いて前立腺癌が腺管のどの部位から発生しやすいか検討を予定している.1.生後13日のマウスに男性ホルモンおよび女性ホルモンを投与し生長後の前立腺を形態学的に検討したところ、diethylstilbestrol(DES)投与群では、前葉および後側葉の腺管分枝構造は有意に減少しており、オイル投与群の約25%であった。

この変化は、dihydrotestosterone(DHT)の同時投与によって防止できず、約30%の腺管分枝状態であった。更に、DES投与群およびDHTの同時投与群の後側葉においては、結節状の異常腺管構造を4090%に認めた。DHT単独投与群およびコントロール群においてはこの変化は認めなかった。組織学的には悪性所見は認めないものの腺管腔の狭い腺組織により形成されていた。以上より、生下時において性ホルモンの投与がその後の前立腺の生長に多大な影響を与えることが示唆された。以上をとりまとめ昭和63年国際内分泌学会(京都)にて発表し、現在論文作製中である。2.dimethylaminobiphenyl(DMAB)をマウスに投与して前立腺発癌を検討した。抗男性ホルモンおよび女性ホルモン投与後、男性ホルモンにより前立腺を再生させると同時にDMAB(30mg/kg)を投与するサイクルを11回(1サイクル:1ヶ月)施行した。10回終了時において女性ホルモン投与群の前立腺を組織学的に検討したが、微小解剖による巨視的な腺管構造に変化はなく、現在投与開始12ヶ月になり各実験群の前立腺を形態的に検討中であり、このマウス発癌モデルの有用性についてさらに検討を加える予定である。
心臓マクロファージの老化を起点とした新たな心疾患発生機序の解明

心不全は高齢者において最大の医療費を費やしている疾患であるにも関わらず、5年生存率50%と生命予後の悪い疾患である。心不全の基本的病態は心臓からの拍出が低下するポンプ失調であり、それを担う細胞は心筋細胞である。これまで心不全の新しい治療標的を検討する上で、心筋細胞に着目した研究がほとんどであったが、我々は我々は心臓を構成する細胞の内、細胞数比で約1%しか存在しない心臓マクロファージが心筋細胞の収縮力の維持に必須であることを見出した。しかし心臓マクロファージの心臓の基本的恒常性維持に必要であることまでは分かったが、心臓マクロファージがもとになって心不全が発症するかどうかなどは、いまだまったく不明である。今回我々は心不全が老化に伴って増加してくる老化関連疾患であるという観点から、心臓マクロファージが老化した際に心臓への影響がどのように変化するのかという検討を行うこととした。まず、マウスモデルを用いて、心臓マクロファージは老化した個体ではどのように変化が生じるのかを明らかにするために、遺伝子発現変化、エピジェネティック変化などに着目し、検討を行い、老化に伴う変化の実態を把握する。また、その老化に伴う変化はどのような因子によって生じる変化かどうか、同定した老化関連因子への介入によって、心臓機能にどのような影響が出るのかを明らかにする。心不全の発症を心臓の老化ととらえ、さらにその心臓の老化は心臓の免疫系細胞の老化によってドライブされるという新しい概念を提供するとともに、新しい治療標的を同定、治療への可能性を検討することを目的とする昨年度、心臓マクロファージの経年変化に重要な因子Xを同定することに成功した。エピジェネティック変化を惹起し得る因子Xをレンチウィルスを用いたCRISPR/CAS9システムを用いたノックアウトを行ったところ、若年のマウスにおいても経年変化した心臓マクロファージを得ることが出来た。当初の研究開発では、この因子Xの同定を目的とし、そのin vivoでの効果を同定することを目的としており、この目的は達成していると考えているが、in vivoでの効果をさらに確定させるために、マクロファージ特異的ノックアウトマウスを作成することとした。このため、研究期間を1年延長して、解析を継続することとした。心臓マクロファージの経変変化、および経年変化によるストレス応答に変化を与える因子Xのマクロファージ特異的ノックアウトマウスを用いて、この因子の心臓マクロファージでの働きをin vivoで同定する。前年に確認し得たレンチウィルスに搭載したCRISPR/CAS9を用いたノックアウトマウスの結果が正しいかどうかを検証する。良好な結果が得らえれた場合には、この因子Xがどのようなエピゲノム変化、その結果どのような下流因子を制御して心臓全体にストレス応答を惹起しているのかを次世代シーケンサーを用いて検討する。この結果が得らえた後に論文化を行う。心不全の発症を心臓の老化ととらえ、さらにその心臓の老化は心臓の免疫系細胞の老化によってドライブされるという新しい概念を提供するとともに、新しい治療標的を同定、治療への可能性を検討することを目的とする。老化に伴い、心臓内で生じる現象について、マクロファージが関連する所見を複数同定し、そのキーとなる因子も同定した。現在そのノックアウトマウスも作出に成功しており、期間内に目的を達成できる見込みである。

まず、マウスモデルを用いて、心臓マクロファージは老化した個体ではどのように変化が生じるのかを明らかにするために、遺伝子発現変化、エピジェネティック変化などに着目し、検討を行い、老化に伴う変化の実態を把握する。また、その老化に伴う変化はどのような因子によって生じる変化かどうか、同定した老化関連因子への介入によって、心臓機能にどのような影響が出るのかを明らかにする。心不全の発症を心臓の老化ととらえ、さらにその心臓の老化は心臓の免疫系細胞の老化によってドライブされるという新しい概念を提供するとともに、新しい治療標的を同定、治療への可能性を検討することを目的とする昨年度、心臓マクロファージの経年変化に重要な因子Xを同定することに成功した。エピジェネティック変化を惹起し得る因子Xをレンチウィルスを用いたCRISPR/CAS9システムを用いたノックアウトを行ったところ、若年のマウスにおいても経年変化した心臓マクロファージを得ることが出来た。当初の研究開発では、この因子Xの同定を目的とし、そのin vivoでの効果を同定することを目的としており、この目的は達成していると考えているが、in vivoでの効果をさらに確定させるために、マクロファージ特異的ノックアウトマウスを作成することとした。このため、研究期間を1年延長して、解析を継続することとした。心臓マクロファージの老化に伴って生じる現象を再現するマウスを作出した。今年度はこのマウスを用いてこれまでの観察、考察した結果をマウスで証明する予定である。作出したマウスからマクロファージを単離し、その遺伝子発現、エピジェネティック変化の検討を行い、論文作成を行う。心臓マクロファージの経変変化、および経年変化によるストレス応答に変化を与える因子Xのマクロファージ特異的ノックアウトマウスを用いて、この因子の心臓マクロファージでの働きをin vivoで同定する。前年に確認し得たレンチウィルスに搭載したCRISPR/CAS9を用いたノックアウトマウスの結果が正しいかどうかを検証する。良好な結果が得らえれた場合には、この因子Xがどのようなエピゲノム変化、その結果どのような下流因子を制御して心臓全体にストレス応答を惹起しているのかを次世代シーケンサーを用いて検討する。この結果が得らえた後に論文化を行う。平成29年度中に納品予定であった遺伝子改変マウスの納入が平成30年度になったため、翌年度に支払う必要がしょうじたためこれまでに得られた結果をノックアウトマウスをさらに作成して検証する必要が生じた。このため、ノックアウトマウスの作出を行っているが、現時点ではまだ解析結果が得られておらず、次年度に解析を行うようにするために、研究期間を1年間延長したため。
塩分環境下におけるスケーリングを受けた既設コンクリートの劣化度評価手法の開発

既設コンクリートのスケーリングによる表層部の劣化度評価を目的とし,スケーリングによって劣化したRC構造物表面コンクリートの劣化度を定量的に評価する手法を開発した.その結果,鉄筋の有無,鉄筋量によりスケーリング劣化の進行が異なること,実RC部材のスケーリング測定より平均スケーリング深さが増加すると局所的にも深くスケーリングが進行することを明らかにした.また,平均スケーリング深さと最大スケーリング深さを求めることで将来のスケーリング劣化が予測可能なことを示した.既設コンクリートのスケーリングによる表層部の劣化度評価を目的とし,スケーリングによって劣化したRC構造物表面コンクリートの劣化度を定量的に評価する手法を開発した.その結果,鉄筋の有無,鉄筋量によりスケーリング劣化の進行が異なること,実RC部材のスケーリング測定より平均スケーリング深さが増加すると局所的にも深くスケーリングが進行することを明らかにした.また,平均スケーリング深さと最大スケーリング深さを求めることで将来のスケーリング劣化が予測可能なことを示した.本研究課題では,既設コンクリート構造物が塩害と凍害の複合劣化を受け生じたスケーリングによる表層部の劣化の程度を現地で測定する方法を構築し,その劣化度を定量的に評価する手法を開発することを目的としている.平成21年度は,本研究課題である評価手法の確立を目的とした凍結融解試験を実施した供試体は,既設コンクリート構造物における計測を想定し,縦3000mm×横2000mm×高さ200mmとする大型の版状供試体と小型のかぶりや鉄筋量をパラメータとした供試体を作成した.この供試体に対し,湛水法による融雪剤を用いた凍結融解試験を行ったもので,通常の凍結融解試験同様,凍結融解回数の増加に伴うスケーリングによりはく離したモルタル片等の採取と粗骨材の露出状態の計測,そして,本研究課題で開発を目指すスケーリング深さ測定を行った.スケーリング深さ測定は,試験面水平方向(X変位)と深さ方向(Z変位)の変位により凹凸形状の測定を行うもので,Z変位計がガイドレール上を移動し,X変位による移動量との関係から凹凸形状を測定するシステムを製作した.そして,測定値の解析により,計測間隔や計測距離等の評価に必要なデータの収集,および計測精度の検証から,スケーリング劣化を評価するに十分な計測が可能なことを確認した.今年度の実験結果からは,実物大RC床版でも十分な精度でスケーリング深さを測定できることが確認でき,測定結果を基に塩害による腐食ひび割れの有無による劣化形態を整理することができた.また,鉄筋の有無,鉄筋量,およびかぶり厚の違いでスケーリング量が変化し,かぶり厚が大きく,鉄筋量が少ない方がスケーリング量は増加し,かぶり厚が大きい場合,局所的にスケーリング劣化が進行する傾向を示すことを明らかにした.本研究課題では,既設コンクリートのスケーリングによる表層部の劣化度評価を目的とし,スケーリングによって劣化したRC構造物表面コンクリートの劣化度を定量的に評価する手法を開発した.具体的には,スケーリングにより生じた表面の凹凸を深さで表し,これを基にスケーリング劣化度評価を行ったものであり,そのための計測システムも開発した.計測システムは,計測面の水平方向(X変位)と深さ方向(Z変位)の変位により凹凸形状を数値情報として取り込む仕組みである.平成22年度は,スケーリングにより劣化した実RC部材(道路橋橋台:供用70年経過)の現地調査を実施した。現地にて開発した計測システムによりスケーリング深さを計測し,平成21年度の室内試験結果との比較より現地計測値の精度確認と,実RC部材のスケーリング劣化度評価およびスケーリング劣化進行予測を行った.その結果,計測面の平均スケーリング深さと最大スケーリング深さの関係は,ほぼ比例関係にあり,平均スケーリング深さが増加するとこれとともに局所的にもスケーリングが深く進行すると言え,かぶりコンクリートからの塩化物といった劣化因子の侵入を考えるとスケーリング劣化の評価は両者の進行の程度を評価することが重要であると考えられた,また,調査した橋のスケーリング劣化の進行を平均および最大のスケーリング深さと供用年数の関係より推定した.推定より,かぶり厚が30mmの場合,平均スケーリング深さは供用年数100年を過ぎても30mmには達しないが,最大スケーリング深さは供用年数約80年で鋼材位置に到達するということがわかった.このように,計測値を基に平均スケーリング深さと最大スケーリング深さを求めることで,将来のスケーリング劣化の進行が予測可能と判断された.今後は,3次元レーザー変位測定によりスケーリング深さ測定方法を合理化し,実用的な手法に発展させる予定である.
鶏卵白中L-PGDSによる卵アレルギー発症メカニズムの解明

先行研究により、オボアルブミン(OVA)で感作したマウスに、我々が既に卵白アレルゲンとして報告しているlipocalin-type prostaglandin D synthase(L-PGDS)をOVAと共に経口投与すると、OVA単独の経口投与に比べてOVA特異的IgEが上昇することを見出していた。本研究においては、L-PGDSがTh1/Th2バランスの偏向を引き起こして、OVA-IgE上昇を引き起こすこと、また、末梢のアレルギー炎症にも関与することを明らかにした。さらに、鶏卵白中のL-PGDS量を定量し鶏卵種および保存期間によってその量が変化することを示した。Foxp3の発現量に有意差はなく、TGF-βはOVA/L-PGDS群で有意に高かった。(2)卵白中L-PGDS量の測定は、ELISAの感度を上げるため、変性条件で行った。また、鶏卵中に存在する主要タンパク等の成分がL-PGDSと競合したため、内部標準を用いて測定を行った。その結果、卵白中L-PGDSは鶏卵種および保存期間によって異なり、その範囲は240700μgであることを明らかにした。【結論】(1)L-PGDSはIL-2、IL-10の発現を抑制し、OVA特異的IgEを上昇させている可能性が示唆された。(2)今回は、鶏卵白中のL-PGDSを卵白粗抽出液を用いて測定を行ったが、今後、精製段階を踏み、回収率を加味した卵白中L-PGDS量を明らかにし、今回の結果と比較する必要があると考えられる。【目的】これまでに我々は、鶏卵白中に含まれるLipocalin-type prostaglandin D synthase(L-PGDS)の組み換え型鶏L-PGDSを大腸菌にて発現させ、精製した組み換え型鶏L-PGDSをマウスにovalbumin(OVA)と共に経口投与すると(OVA/L-PGDS投与群)、OVA単独投与群および生食投与群に比べ、OVA特異的IgEが上昇し、脾臓中のIL-4、IL-5のmRNA発現量も上昇することを明らかにした。本研究では、このメカニズムをさらに詳細に明らかにすることを目的に行った。【方法】I.L-PGDSによるOVA特異的IgE上昇にL-PGDSの酵素活性が関与している可能性を明らかにするため、組み換え型鶏L-PGDSを(1)未処理(2)ペプシン処理(3)トリプシン処理(4)ペプシン+トリプシン処理に分け、酵素活性の測定をPGD_2 EIA kitにより行った。ペプシンおよびトリプシンによる酵素消化は基質と酵素の割合が100:1になるようにし、ペプシン処理は37°Cで30分、トリプシン処理は37°Cで2時間行った。L-PGDSの酵素反応は常法を用い、25°C、1分で行った。II.脾臓中で見られたIL-4、IL-5のmRNA発現量の上昇をタンパク質レベルで確認するため、血清中のサイトカイン測定をCytometric Beads Array(CBA)法により行った。【結果】I.組み換え型鶏L-PGDSは4.4nmol/min/mgの活性を持ち、その活性はペプシン処理後も60%維持され、トリプシン処理によって失活した。II.血清中IFN-γはOVA群OVA/L-PGDS投与群に比べ有意に高かった。【結論】L-PGDSはペプシンに耐性を示すことから、経口的にL-PGDSを摂取した場合、胃内においては酵素活性が維持されていることが示唆された。したがって、L-PGDSによるOVA特異的IgEの上昇機構には、酵素活性が関与していることが考えられる。また、OVA/L-PGDS投与群はOVA単独投与によるTh1細胞への分化を抑制することが示唆された。
アーツ・アンド・クラフツ運動と分離派建築会にみる近代建築草創期の「惑い」

本研究は,19世紀末から20世紀初頭に近代化を経験しつつあった建築家やデザイナーの思想の揺らぎを「惑い」として捉え,その広がりと意味について,英国のアーツ・アンド・クラフツ運動と日本の分離派建築会の活動を事例として記述することを試みるものである。具体的には,装飾芸術家ウォルター・クレインの理論と実践,建築家ベイリー・スコットと雑誌The Studioの関係,分離派建築会のメンバーが捉えた大正末期から昭和初期の生活像,という3つの論題から「惑い」に関わる諸概念を析出する。
人工関節置換術を受けた患者の感染予防に焦点をあてたケアサポート

本研究は、人工関節を挿入している患者の挿入局所および全身感染の予防に必要な整形外科看護ケア、患者のセルフケアにつながる看護師のケアサポートを明らかにする目的で、整形外科経験の豊富な看護師を対象に郵送法質問紙調査を行った。質問紙は、整形外科勤務の看護師数名にインタビューを行い、先行文献と検証して作成した。術後感染の経験症例の有無、感染予防に実施している術前観察と必要度認識、感染予防・早期発見に必要な外来看護ケアの必要度認識について、外来および病棟看護師各1名の回答を、北海道内の整形外科標榜病院220、第39回日本人工関節学会抄録集に掲載の道外病院288、計508施設の看護部に依頼した。配布1016枚で436枚(回収率42.9%)の返送を得た。股関節および膝関節置換術の看護経験者は9割以上おり、感染症例を半数が経験していた。感染予防の術前観察は、「糖尿病」の有無が約8割、「全身観察」と「CRP等検査結果」が約7割、「リウマチ」や「足白癬・変形」が約6割と実施されていたが、「虫歯」と「口腔内」把握は約3割程度の実施と低かった。「糖尿病」を除くケア項目で、その必要性を「まあまあ」とした者は「とても」に比べ実施割合が有意に低かった。感染予防・早期発見に必要な外来ケアとして、「内科疾患の管理」、「CRP等検査結果」把握、「遠位の感染兆候」観察の肯定が90%を超え、「フットケア」実施と指導は約80%、「外来相談窓口」設置が約70%であった。「退院後ハガキ」での注意喚起は約40%に留まった。自由記載欄には、全身状態の悪化で死亡に至ったケースや療養が長期になり精神的フォローが必要なケースの記載があった。感染予防の看護ケアを実施するには、看護師の強い必要度認識が重要であると示唆された。とくに虫歯や口腔内観察の必要性、足白癬や変形確認のための外来フットケア、長期間のセルフケア喚起について、実施への再認識が必要と考える。
マリネスコ-シェーグレン症候群の分子病態解明を目指した研究

臨床的に小脳失調,精神発達遅滞,先天性白内障があり,マリネスコーシェーグレン症候群と診断され,骨格筋症状を有し,筋生検が施行されていた患者13例全例にSIL1のホモ接合型変異を認めた.MSSは日本で3番目に多い先天性筋ジストロフィーであった.筋病理学的には,全例縁取り空胞を認め, nonspecific esterase染色では筋核で活性が上昇し,電顕観察では核膜の異常が認められた.臨床的に小脳失調,精神発達遅滞,先天性白内障があり,マリネスコーシェーグレン症候群と診断され,骨格筋症状を有し,筋生検が施行されていた患者13例全例にSIL1のホモ接合型変異を認めた.MSSは日本で3番目に多い先天性筋ジストロフィーであった.筋病理学的には,全例縁取り空胞を認め, nonspecific esterase染色では筋核で活性が上昇し,電顕観察では核膜の異常が認められた.マリネスコーシェーグレン症候群(Mar inesco-Sjogren syndrome=MSS)は,常染色体劣性の全身性疾患であり,小脳萎縮先天性白内障,精神運動発達遅滞を三徴とするが,多くの例で筋力低下や高CK血症などの骨格筋症状を伴う.筋病理学的にはrimmed vacuole(RV)を伴う筋原性変化を認め,先天性筋ジストロフィーに分類される,近年,シャ.ペロン蛋白質,BIPのco-chaperon, BAPをコードするSIL1遺伝子の変異により引き起こされることが明らかになった.本邦での遺伝子変異検索は行われておらず,変異の頻度や遺伝子型-臨床型相関は不明である.【対象・方法】19782006年までに,国立精神・神経センターで筋組織診断がなされ,臨床病理学的にMSSと診断された17例を対象とした.血液または筋肉からDNAを抽出し,SIL1の全エクソンとエクソンイントロン近傍領域の遺伝子解析を行った.【結果】17例中14例にSIL1にホモ接合型変異を認めた.1塩基置換によるナンセンス変異が1例,5塩基の欠失によるフレームシフト変異が1例,1塩基の重複によるフレームシフト変異が12例であった.見出したフレームシフト変異は,報告例のない,新しい変異であった.変異のあった14例では,病理学的には全例にRVがみられた,そのうち詳細な臨床症状が得られた11例は全例が三徴を呈していた.変異がない3例は,何れもRVは認められなかった.臨床的には2例で小脳萎縮がなく,残りの1例で極軽度の萎縮を認めるのみであった.または精神遅滞のない例であった.【結論】本邦で初めてSIL1変異を伴うMSSの患者例を見出した.SIL1変異例は,例外なく三徴を呈する典型例であり,筋病理学的には全例にRVを認めた.マリネスコーシェーグレン症候群(Marinesco-Sjogren syndrome=MSS)は,常染色体劣性遺伝の全身性疾患であり,臨床的に,小脳失調(萎縮),精神発達遅滞,先天性白内障の三徴を呈する.我々は臨床的にMSSと診断された13例全例に対し,ミオパチー,骨格筋線維に縁取り空胞(RV)の存在,SIL1遺伝子の変異を認めた.昨年,電顕観察にてERの形態学的異常を観察するとともに,免疫組織学的検討にて,ERシャペロン蛋白,オートファジー関連蛋白の核周囲での蓄積を見出し,ERが病変の首座であることを本学会で報告した.SIL1は小胞体(ER)シャペロン蛋白であるBiPのATP-ADP交換因子であり,ERでの分泌糖蛋白の翻訳,フォールディングに関わる重要な役割を果たしていると考えられているため,フォールディング出来ない蛋白の蓄積により,ERストレスが引き起こされ,オートファジーを誘導しているのではないかと仮定し,以下の研究を行った.【対象・方法】臨床病理額的にも遺伝学的にもMSSと診断された13例のうち,解析に十分な検体量の得られた7例について,小胞体ストレス応答(UPR)について,XBP1遺伝子のスプライシング変化,BiP mRNAの発現応答,eIF2αのリン酸化の解析を行った.【結果】コントロール群に比し,BiP mRNAの発現は上昇し,XBP1遺伝子のスプライシングは誘導されていた.eIF2αのリン酸化の亢進も見られた.また,これらUPRは病理学的に各々の骨格筋線維のRVの量と関連が見られた.【考察】SIL1の機能損失がBiPの機能不全を引き起こし,ERに異常蛋白の蓄積を来たした結果,ERストレスを生じていると考えられた.MSSで見られるRVはERストレス誘導性オートファジーが原因であると考えられた.