hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ハイブリッド符号化を用いた高性能なSAT型制約プログラミングシステム

本研究の意義は,SAT符号化の新しい方向性を開拓できる点,既存のCPシステムでは求解困難な問題に対して.より高性能な推論基盤を提供できる点である.CPシステムはサッカーのJリーグの対戦スケジュール開発に使われるなど実用性が非常に高く,研究成果の産業分野への応用も期待できる.平成30年度は研究計画に記載された提案方法を基に実装を行なったSAT型制約プログラミングシステムであるsCOPの研究開発を継続して行なった.またsCOPの有効性の評価を行うためにsCOPを制約プログラミングシステム(CSPソルバー)の国際的な競技会である2018XCSP3 Competitionに参加登録した.具体的には, sCOPはこの競技会のスタンダードソルバーCSP部門(逐次・並列)の2部門に登録した.結果として登録した両方の部門で優勝した. XCSP3 Competitionは, 2005年にその前身が始まった歴史のある競技会であり,欧米各国の教育研究機関で研究開発されたシステムが毎年参加している.平成28年度について計画していた研究内容は,順調に進めることができた.今後は,「(B-1)既存符号化の網羅的評価の開始」の結果を確認しながら,「(B-2)ハイブリッド符号化の自動構成の研究の開始」「(C)アプリケーション研究の開始」を行う.平成29年度について計画していた研究内容は,順調に進めることができた.最終年度も計画通り「(B-2)ハイブリッド符号化の自動構成の研究」と「(C)アプリケーション研究」を行う.
高次元代数多様体の標準因子の研究

代数多様体の極小モデルと導来圏の関係を中心に研究した.導来圏はKontsevichのホモロジー的ミラー対称性予想の提唱以来注目を集めているホットな研究対象であるが,極小モデル理論の立場から見ても自然な対象であり,見かけの複雑さの奥に美しい単純さを備えていることがわかってきた.論文「D-equivalence and K-equivalence」(D同値とK同値)においては,二つの代数多様体が同値な導来圏を持つ(D同値)ことと,それらが双有理同値である場合に標準因子(Kであらわす)の共通特異点解消への引き戻しが一致する(K同値)ということとが同値であるという予想を立てた.そして,標準的フリップや3次元の一般のフロップの場合にこの予想が正しいことを証明した.この論文は高く評価され,発表以降多くの文献で引用されるようになっている.Bourbakiセミナーでも,以下に説明する論文とともに紹介された.極小モデル理論においては特異点を持つ多様体が必然的に現れてくるので,その後の論文では特異点を持った多様体への拡張を考えた.そして,適当な条件の元にDeligne-Mumfordスタックを構成し,拡張した予想を証明した.例えば,トーリック多様体の場合には,完全に予想を証明することができ,極小モデル理論と導来圏の理論の間の関係に見通しを与えることができた.また,Grassmann多様体G(2,4)上の余接束に対して構成されたフロップなどの場合にも予想を証明した.さらに,比較的簡単な構造をもった代数多様体に対して,その導来圏を決定するという問題を考え,トーリック多様体の導来圏は連接層の特異列で生成されるということを証明した.代数多様体の極小モデルと導来圏の関係を中心に研究した.導来圏はKontsevichのホモロジー的ミラー対称性予想の提唱以来注目を集めているホットな研究対象であるが,極小モデル理論の立場から見ても自然な対象であり,見かけの複雑さの奥に美しい単純さを備えていることがわかってきた.論文「D-equivalence and K-equivalence」(D同値とK同値)においては,二つの代数多様体が同値な導来圏を持つ(D同値)ことと,それらが双有理同値である場合に標準因子(Kであらわす)の共通特異点解消への引き戻しが一致する(K同値)ということとが同値であるという予想を立てた.そして,標準的フリップや3次元の一般のフロップの場合にこの予想が正しいことを証明した.この論文は高く評価され,発表以降多くの文献で引用されるようになっている.Bourbakiセミナーでも,以下に説明する論文とともに紹介された.極小モデル理論においては特異点を持つ多様体が必然的に現れてくるので,その後の論文では特異点を持った多様体への拡張を考えた.そして,適当な条件の元にDeligne-Mumfordスタックを構成し,拡張した予想を証明した.例えば,トーリック多様体の場合には,完全に予想を証明することができ,極小モデル理論と導来圏の理論の間の関係に見通しを与えることができた.また,Grassmann多様体G(2,4)上の余接束に対して構成されたフロップなどの場合にも予想を証明した.さらに,比較的簡単な構造をもった代数多様体に対して,その導来圏を決定するという問題を考え,トーリック多様体の導来圏は連接層の特異列で生成されるということを証明した.私は高次元代数多様体の極小モデル理論をずっと研究してきたが,今年度は極小モデルと導来圏の関係について研究した.論文「D-equivalence and K-equivalence」では以下のような結果を得た.二つの代数多様体は,同値な導来圏(正確には連接層の有界導来圏)を持つときにD同値であるという.また,これらの多様体が双有理同値の場合には,それらの標準因子(Kであらわす)の共通特異点解消への引き戻しが一致するときK同値であるという.K同値という概念は極小モデル理論では自然に導かれる定義であるが,これとD同値とは本来何の関係もないものである.この論文ではこれらの同値関係は実は一致するのではないかと予想した.そしていくつかの場合にこの予想が正しいことを証明した.まず,DからKを導く方向では,代数多様体Xが一般型の代数多様体であると仮定すると,Xがもうひとつの代数多様体YとD同値ならば,これらは必然的に双有理同値になり,しかもK同値になることを証明した.逆に,KからDを導く方向では,K同値な代数多様体はフロップと呼ばれる双有理変換の列で結ばれることが極小モデル理論から予想されることを考えに入れて,XとYがフロップで結ばれる場合にこれらがD同値になるかという問題を考えた.そしてこれらが標準的なフロップや向井のフロップで結ばれるような場合にはD同値にもなることを証明した.さらに,3次元の場合には,任意のK同値な代数多様体はD同値になることを証明した.ここで,極小モデル理論においては特異点を持つような多様体が必然的に現れてくるのであるが,3次元の場合には,このような特異点を持った多様体に対してもその導来圏をうまく定義することができて,このようにして拡張されたD同値の概念に対しても,K同値からD同値が導かれることが証明できた.代数多様体の双有理幾何学と導来圏の理論の関係を研究した.

射影的代数多様体に対して,その上の連接層全体のなす圏はアーベル圏になり,逆にこのアーベル圏から元の代数多様体を復元することができる.ところが,さらにこのアーベル圏を元にして,その有界複体のなす導来圏を構成すると,もはや元の代数多様体を復元することはできない.しかし,同値な導来圏を持つ代数多様体の間には密接な関係があり,双有理幾何学の立場から見て面白い現象が起こることが知られている.標準因子のレベルが等しいような滑らかな代数多様体は,同値な導来圏を持つであろうと予想し,いくつかの場合にそれを証明した.また逆に,一般型の滑らかな代数多様体と同値な導来圏を持つような滑らかな代数多様体は,もとの代数多様体と双有理同値であり,しかも標準因子のレベルが等しいということも証明した.そこで,これらの主張を滑らかなDeligne-Mumford stackの場合に拡張した命題を考えた.そして,滑らかもどきなトーリック多様体に付随した滑らかなDeligne-Mumford stackの場合に,対数的標準因子のレベルが等しいならば導来圏が同値になることを証明した.さらに,フロップのように対数的標準因子のレベルが等しい場合だけではなく,フリップのように対数的標準因子の間に大小関係がある場合も考察し,この場合には導来圏の間の忠実充満な関手が存在することを証明した.証明では,与えられたトーリック多様体上にいくつかの可逆もどき層からなる集合であって,導来圏全体を生成し,しかも自己準同型層の高次コホモロジーが消えるものの存在を示した.前年度に引き続き,代数多様体の導来圏の研究を進めた.まず,「代数多様体のK同値から導来圏の同値が導かれるか」というかねてからの予想を研究した.極小モデル理論のよれば,K同値を与える双有理写像はフロップの積に分解すると思われるので,フロップから導来圏の同値が導かれるということを証明することを目標とした.ところが,京都大学の並河良典氏が,Grassmann多様体G(2,4)上の余接束に対して構成されたフロップに対しては,自然に考えられる核を使った積分変換では導来圏の同値を与えないということを証明し,予想の反例の存在の可能性を示した.そこで,研究代表者はこの場合をさらに詳細に研究し,自然に考えられる核とは異なる核を導入すれば,やはり導来圏の同値が得られることを証明した.こうして,この場合には予想が正しいことを証明した.証明は,ある種のベクトル束のコホモロジー群の消滅を示すことに帰着されるのだが,小平型の消滅定理からは導かれないので,複雑な計算が必要になった.次に,比較的簡単な構造をもった代数多様体に対して,その導来圏を決定するという問題を考えた.導来圏は複雑な対象であるが,射影空間やGrassmann多様体に対しては,その上の特異ベクトル束の列から構成できることが知られていた.これを使えば,例えば射影空間上のベクトル束を調べることができた.この研究では,トーリック多様体の場合を考察した.そして,トーリック多様体の導来圏は,連接層の特異列で生成されるということを証明した.証明には,対数的極小モデル理論をトーリック多様体に対して適用し,因子収縮写像や対数的フリップに対しては前年度に得られた結果を使った.はじめに与えられたトーリック多様体がたとえ滑らかでかつ境界のないものあっても,途中の双有理変換や森ファイバー空間の考察から,特異点や境界を持った場合も考える事が必然的に必要になることに注意した.
四倍体欧米雑種ブドウの果皮色に関わる遺伝子座の探索

ブドウの果皮の色は、赤い色素であるアントシアニンの蓄積量とその種類によって決定される。アントシアニンの含有量はMYB様転写因子遺伝子に遺伝子断片が挿入されたり、欠失したりすることやMYBハプロタイプの構成に影響されることが報告されている。現在、国内では四倍体欧米雑種ブドウの`ピオーネ'(黒色果皮)とその枝変わり(突然変異)品種`赤いピオーネ(あかり)'(赤色果皮)が販売されている。本研究では、果皮色が異なるといわれているこれらを遺伝子レベルで比較し、色が変化した原因を明らかにすることを目的とした。両品種のMYB様転写因子遺伝子の塩基配列を解読したが、配列に違いはなかった。また、MYBハプロタイプの構成も検討したが、黒色果皮色を示すハプロタイプを両者とも持っていることが分かった。品種識別で用いられるいくつかのSSRマーカーを用いて多型検出も行ったが、多型は検出されなかった。系統の識別に用いられるレトロトランスポゾンの外向きプライマーを利用したIRAP解析にて、`ピオーネ'および`赤いピオーネ'のいくつかの多型バンドを検出した。レトロトランスポゾンの挿入の有無が果皮色に影響を及ぼした可能性から、県立広島大学福永健二教授らがMiSeqを利用して四倍体ブドウのレトロトランスポゾンVINE1及びGret1の挿入位置を解析したデータから、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'を比較した。挿入の違いはそれぞれ数か所あった。しかし、この違いからプライマーを設計したが、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'とで特異的なバンドを検出できなかった。以上の結果からは、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'とで果皮色の違いを生じる原因を明らかにできなかったが、今後、VINE1やGret1以外のレトロトランスポゾンの挿入の有無の解析や、また、果皮着色期のRNA発現のRNA-seq解析よる原因遺伝子の発見を行う予定である。ブドウの果皮の色は、赤い色素であるアントシアニンの蓄積量とその種類によって決定し、これらの含有量はMYB様転写因子遺伝子の塩基配列への遺伝子断片の挿入・欠失やMYBハプロタイプの構成に影響されることが報告されている。しかし、四倍体ブドウでは、同じMYB様転写因子遺伝子配列かつ同じMYBハプロタイプ構成の品種であっても、アントシアニン含有量が異なる場合がある。本研究では、四倍体欧米雑種ブドウの`ピオーネ'(黒色果皮)とその枝変わり品種`赤いピオーネ(あかり)'(赤色果皮)を用い、多型の検出やMYB遺伝子配列の比較、遺伝子発現解析などを通じ、アントシアニン含有量に影響する遺伝子(座)を明らかにしようとする。平成28年度は、まず、品種識別で用いられるSSRマーカー(VMCNG2E2、VMCNG2b7.2、Vvll51、VVS2a、VVMD5、VVMD7、VVMD27、VrZAG21、VrZAG47、VrZAG62、VrZAG64、VrZAG79、VrZAG83)による多型検出を行った。しかし、いずれのSSRマーカーを用いても、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'に多型はなかった。このことから、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'は、遺伝的に「品種」の差ほど大きくないことが示唆された。また、両者のMYBハプロタイプ構成を検討したが、両者とも同じハプロタイプを持ち、黒色果皮色を示す構成であった。さらに、VvMYBA1a、VlMYBA1-2、VlMYBA1-3、VlMYBA2の塩基配列も比較したが、個体間で数箇所の一塩基置換はあったものの、`赤いピオーネ'に特異な変異は見られなかった。今年度の結果から、`ピオーネ'から果皮色の異なる`赤いピオーネ'の枝変わりの出現は、MYBA1遺伝子以外の変異が関係していることが示唆され、これまで報告されていない果皮色決定遺伝子が存在する可能性が考えらえた。当初の計画では、平成28年度から`ピオーネ'および`赤いピオーネ'の果皮中のアントシアニン含有量を検討する予定であったが、樹齢が若く、また、前年度の栽培管理の失敗により、正常な果実を採取することができず、検討できなかった。栽培管理を徹底することで、平成29年度から測定を開始したい。その他の平成28年度研究実施予定としていた、`ピオーネ'および`赤いピオーネ'のSSRマーカーによる多型検出、MYBハプロタイプの検討、MYB様転写因子遺伝子の塩基配列の比較については、計画通り進んでいる。以上のことから、進捗状況は「やや遅れている」と判断した。しかし、平成29年度に実施予定の両品種のレトロトランスポゾンに注目した多型解析にすでに取り掛かっており、研究の遅れが生じないようにしている。しかし、四倍体欧米雑種ブドウの`ピオーネ'(黒色果皮)とその枝変わり品種`赤いピオーネ(あかり)'(赤色果皮)は両者とも黒色果皮色を示す同じハプロタイプを持ち、また、MYB様転写因子遺伝子のVvMYBA1a、VlMYBA1-2、VlMYBA1-3、VlMYBA2の塩基配列について、`赤いピオーネ'に特異な変異は見られなかった。

さらに、品種識別で用いられるいくつかのSSRマーカーを用いて多型検出を行ったが、多型は検出されなかった。平成29年度は、まず系統の識別に用いられるレトロトランスポゾンの外向きプライマー16種類を利用したIRAP解析にて、`ピオーネ'および`赤いピオーネ'の多型検出を行った。その結果いくつかの多型バンドが検出された。しかし、`赤いピオーネ'だけでなく他の系統の`大粒ピオーネ'、`川合系ピオーネ'も加えて多型解析を行うと、大粒や川合系のほうが多くの多型が存在していることが分かった。次に、県立広島大学福永健二教授らにご提供いただいたMiSeqを利用した四倍体ブドウのレトロトランスポゾンVINE1の挿入位置のデータから、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'のVINE1の挿入の違いは一カ所しかないことが示唆された。今後、この箇所の配列について詳しく調べていく予定である。Azuma et al.(2015)により、果皮の色調は第2染色体上のMYB遺伝子座と第一染色体上のAOMT遺伝子座のそれぞれの遺伝型による違いの影響が大きいと報告されている。前年度、`赤いピオーネ'のAOMT遺伝子座の解析を予定していたが、レトロトランスポゾンの解析を優先したため検討できなかった。また、`ピオーネ'および`赤いピオーネ'の果皮色の違いを観察することはできたが、HPLCを用いたアントシアニン含有量の測定ができていなかった。しかし、両品種のレトロトランスポゾンに注目した多型解析は予定通りに進んでおり、いくつかの多型を検出し、予定にはなかったがMiSeqによるデータを得ることができ、一カ所の挿入位置の違いを確認できた。以上のことから、進捗状況は「やや遅れている」と判断した。ブドウの果皮の色は、赤い色素であるアントシアニンの蓄積量とその種類によって決定される。アントシアニンの含有量はMYB様転写因子遺伝子に遺伝子断片が挿入されたり、欠失したりすることやMYBハプロタイプの構成に影響されることが報告されている。現在、国内では四倍体欧米雑種ブドウの`ピオーネ'(黒色果皮)とその枝変わり(突然変異)品種`赤いピオーネ(あかり)'(赤色果皮)が販売されている。本研究では、果皮色が異なるといわれているこれらを遺伝子レベルで比較し、色が変化した原因を明らかにすることを目的とした。両品種のMYB様転写因子遺伝子の塩基配列を解読したが、配列に違いはなかった。また、MYBハプロタイプの構成も検討したが、黒色果皮色を示すハプロタイプを両者とも持っていることが分かった。品種識別で用いられるいくつかのSSRマーカーを用いて多型検出も行ったが、多型は検出されなかった。系統の識別に用いられるレトロトランスポゾンの外向きプライマーを利用したIRAP解析にて、`ピオーネ'および`赤いピオーネ'のいくつかの多型バンドを検出した。レトロトランスポゾンの挿入の有無が果皮色に影響を及ぼした可能性から、県立広島大学福永健二教授らがMiSeqを利用して四倍体ブドウのレトロトランスポゾンVINE1及びGret1の挿入位置を解析したデータから、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'を比較した。挿入の違いはそれぞれ数か所あった。しかし、この違いからプライマーを設計したが、`ピオーネ'と`赤いピオーネ'とで特異的なバンドを検出できなかった。
膀胱癌免疫療法における作用機序の解明

Bacillus Calmette-Guerin(BCG)は結核症に対するMycobacterium bovis由来の弱毒化生ワクチンである。Molares(1976)が表在性膀胱癌患者の治療に初めてBCG膀胱内注入療法を施行して以来、表在性膀胱癌に対するBCG膀胱内注入療法単独の治療成績についていくつかの報告がある(Kelley et al.,1985;Akaza et al.,1991)。また、近年BCG膀胱内注入療法は表在性膀胱癌に対する直接効果のみではなく、経尿道的膀胱腫瘍切除術後の再発に対する予防効果もあり、現在、残存腫瘍や上皮内癌に対する治療として最も有用な免疫治療法と考えられている。しかしその反面、BCG膀胱内注入療法は頻尿、排尿痛、排尿障害などの膀胱刺激症状、肉眼的血尿及び発熱などの多彩な副作用が認められている。これらの副作用は大部分が一過性であるが、BCG療法の中止を余儀なくされる重症例も少なくない。さらに頻度的には少ないが、最も重大なBCGの全身的副作用としてBCGの他臓器への移行による肉芽性感染症(肺炎及び肝炎、BCG敗血症)がある。その治療には抗結核菌剤や加えてステロイドの併用をおこなうが、免疫系の低下した患者では、これらの治療が無効である為、より副作用の少ないBCG膀胱内注入療法が期待される。一方、これまで膀胱癌に対する膀胱注入療法の研究に適した実験モデルが様々報告されている。Kameyamaら(1995)はヌードマウスの後腹膜腔に異所性膀胱を移植し、この膀胱に設置したりザーバーから膀胱癌細胞を注入・生着させることのできるHeterotopic urinary bladdersystem(以後HTBシステムと略す)を報告した。BCG膀胱内注入療法で死菌が生菌と同様の効果を得ることができれば生菌の副作用を除き得る。そこで、これを評価するモデルとして、免疫系を有するC3H/HeNマウスにHTBシステムを作製して、BCG生菌・死菌により誘導されるサイトカインの測定と、その機序を検討した。あわせて膀胱癌細胞をマウス皮下に移植して、腫瘍に対するBCG生菌・死菌の抑制作用について検討した。BCGの膀胱癌に対する治療、即ち、BCG膀胱内注入療法のもつ、免疫学的意味について、基礎的検討を行った。C3H/HeNマウスを用いて、異所性稼植膀胱内にBCG生菌を0.4mg注入し、48時間後に膀胱内貯留液のサイトカイン(TNFα、IL-6、IL-1α)を測定した。BCGに比較するものとして、オートクレーブ処理を行ったBCG死菌及び生理食塩水を用いた。その結果、BCG生菌のみでなくBCG死菌においても、同等のサイトカイン誘導がもたらされた。次に、マウス移行上皮癌(MBT-2)の皮下移植モデルで、抗腫瘍効果を検討したところ、in vitroでのサイトカイン誘導能と同じく、BCG生菌ばかりでなくBCG死菌でも、同様の抗腫瘍効果を得た。BCGによる膀胱内注入療法は、臨床上有用性が認められている。しかしながら、その作用機序については解明されていない。そこで、免疫学的意味について、基礎的検討を行った。C3H/HeNマウスを用いて、異所性移植膀胱内にBCG生菌を0.4mg注入し48時間後に膀胱内貯留液のサイトカイン(TNFα、IC-6、IL-1α)を測定した。

BCG生菌に比較するものとして、オートクレーブ処理を行ったBCG死菌、及び生理食塩水を用いた。その結果、BCG生菌と同程度にBCG死菌においても、サイトカインが誘導された。マウス移行上皮癌(MBT-2細胞)の皮下移植モデルで、抗腫瘍効果を検討したところ、BCG死菌でBCG生菌と同様の抗腫瘍効果が得られた。
バイオ電池に有用な酸化還元酵素の効率的なスクリーニング技術の開発

酸化還元酵素はバイオ電池などに広く利用されているが、さらなる機能向上が求められており、そのためには、酸化還元酵素の効率的なスクリーニング技術が必要である。そこで本研究では、導電性ダイヤモンド電極を用いて、低濃度の酸化還元酵素の活性を、短時間で、定量的に測定できる条件を検討し、この電極を組み込んだマイクロ流体デバイスを世界で初めて構築した。これにより、極微量の多検体の酸化還元酵素のライブラリーをハイスループットにスクリーニングすることが期待できる。酸化還元酵素およびその遺伝子を固定したマイクロビーズをマイクロ流路に順番に流して活性を測定できるハイスループットなスクリーニング系を構築するために、無細胞タンパク質合成系を利用したマイクロビーズディスプレイ法の検討、および、3種類のマイクロ流体デバイスの構築をおこなった。マイクロビーズディスプレイの条件検討は、酵素バイオ電池によく用いられているグルコースデヒドロゲナーゼ(GDH)をモデルとしておこなった。HAタグを融合したGDH遺伝子1分子と抗HA抗体を固定したマイクロビーズ1個をwater-in-oilエマルションのミセル内に封入し無細胞翻訳をおこなうことで、合成された酵素をマイクロビーズに固定した。その結果、1個のマイクロビーズに最大約15万分子の酵素を固定できることが分かった。また、DNAを約1分子固定したマイクロビーズ上で合成・固定されたGDHの活性を電気化学的に測定することに成功した。構築した3つのマイクロ流体デバイスは、酵素を固定したマイクロビーズを約1個ずつ極少量の酵素反応液に区画化するための「区画化デバイス」、電気化学的に酵素活性を評価する「活性測定デバイス」、および、活性の高い酵素を固定したマイクロビーズのみを回収する「選別デバイス」である。それぞれの性能評価をおこなった後、活性測定デバイスで検出したデータを解析して、その結果に基づきアナログ電圧信号を選別デバイスに出力する「解析・制御システム」を構築し、これらを組み合わせたスクリーニング系全体の動作確認をおこなった結果、系全体が正常に動作することを確認した。有機物を直接電気に変換できるバイオ電池は、環境負荷が小さい新しいエネルギーデバイスとして期待されているが、天然の酸化還元酵素を用いるため出力や寿命が限られており、実用化にはまだ多くの課題がある。そこで本研究では、酵素の進化工学により、バイオ電池の高出力化・長寿命化に役立つ、高い活性と安定性をもつ酸化還元酵素を汎用的かつ効率的にスクリーニングできる新しいシステムを開発することを目的とした。初年度は、モデルとなる酸化還元酵素遺伝子をクローニングし、アフィニティー精製用のタグなどを付加した融合遺伝子を作成し、大腸菌発現系または無細胞タンパク質合成系を利用して酸化還元酵素を調製した。それぞれの酵素ごとに従来の測定法を用いて、酵素活性を保持していることを確認した後、ハイスループットスクリーニングに向けた活性検出の条件を確立することに成功した。初年度の研究実施計画の目標をすべて達成することができた。ダイヤモンド微小電極による酸化還元酵素の活性測定条件を確立することができたので、今後は、ダイヤモンド微小電極を組み込んだマイクロデバイスを作成し、酸化還元酵素を固定したマイクロビーズをマイクロ流路に順番に流して活性を測定するスクリーニング系を構築する。まず、フォトリソグラフィによる標準的な集積回路・微細加工技術を用いて、ダイヤモンド微小電極とその検出回路を組み込んだマイクロ流路デバイスを試作し、多数の変異体酵素の活性を連続自動測定できる計測システムを構築する。具体的には、ダイヤモンド微小電極と信号処理用の回路を組み込んだ反応槽に、酵素と酵素反応に必要な共通の基質を供給するマイクロ流路とマイクロポンプを連結する。酵素を固定したビーズをマイクロ流路に順番に流し、電極を組み込んだ反応槽の中で、ビーズ上の酵素の活性により生じる電流値を測定する。ビーズへの酵素の固定には、すでに当研究室で方法を確立している水/油型エマルジョン内でのPCRおよび無細胞タンパク質合成を用いる。次に、構築したスクリーニング系を用いて、実際に活性または安定性の向上した変異体酵素のスクリーニングを行う。このとき安定性の高い変異体を得るための選択圧として、あらかじめ酵素を段階的に上昇させた温度で熱処理を行い、その後、高い残存活性を維持している変異体を選択する。上記スクリーニングにより得られた変異体酵素について、大腸菌における大量発現または無細胞タンパク質合成系による大量合成を行い、アフィニティー・タグを利用して精製する。その後、従来の吸光度などを指標とした活性測定や、円二色性や内在性の蛍光などを指標とした熱変性実験により、タンパク質の活性や安定性の特性評価を行う。フォトリソグラフィによるマイクロ流体デバイスの作成費用の内訳は、集積回路作製用の抵抗・ICなどの電子部品、レジストなどの化学薬品、ガラス・Si基板などである。その他に、酸化還元酵素をビーズに固定するためのPCR酵素やオリゴDNA、無細胞タンパク質合成系などの分子生物学試薬の費用を計上している。
アニオンチャンネルのCa^<2+>による制御機構の解明

シャジクモ(Chara corallina)の原形質膜に存在するアニオンチャンネルの性質を原形質分離法とパッチクランプ法を組み合わせることにより、研究の方向を切り拓いた。この方法により、開閉の挙動の異なる2種類のCl^-ーsensitiveなチャンねるの分離に成功した。A型と呼ぶチャンネルは、Ca^<2+>の1.0,10,0.1μΜの濃度によって、その挙動は全く異なる。B型と呼ぶチャンネルは膜の過分板電圧と共にチャンネルの関く頻度が高くなる。前者をCa^<2+>ーdependent Cl^-ーsensitive anion channel,後者をHyperpolarizationーactivated Cl^-ーsensitive anion channelと呼ぶことにした。Ca^<2+>ーactivated Cl^-ーsensitive anionチャンネルは0.1μMCa^<2+>濃度では殆ど閉じている。1.0μΜCa^<2+>濃度では膜電圧の-180-40mVの領域で開き、その開確率は-80-100mVに最大値を持つ。ある仮定の下に、その最大値は0.15程度と予想された。10μΜCa^<2+>濃度では開確率が上記膜電圧領域において減少した。1.0μΜCa^<2+>濃度において、カルモジュリンの阻害剤(Wー7,TFP,クロルプロマジン)を投与すると、チャンネルは開かなくなる。パッチクランプ法により同定されたCa^<2+>ーdependent Cl^-ーsensitive anion channelの性質は、シャジクモ細胞の興奮時に一過的にコンダクタンの増大を示す、Ca^<2+>ーactivated Cl^-channelの性質を充分に充たしている。シヤジクモ原形質膜におけるbreakaown現象について、I〕膜の電気的耐圧性、II〕breakdown時に流れる電流成分の分離の2点から論文を投稿中である。概要〕、I〕耐圧性について:1)生理条件下において、Mg^<2+>は膜のCa^<2+>結合部域とCa^<2+>と拮抗的に結合し、膜の電気的耐圧性を滅ずる。2)Ca^<2+>溶液中での耐圧性を基準にすると、Mg^<2+><Ni^<4+><Co^<2+>≦Ca^<2+>〓Ba^<2+>、Sr^<2+><Zn^2の順で耐圧性が増し、この順は平滑筋で得られているCa^<2+>結合部域への他の2価陽イオンの結合順にほぼ一致する。3)pH=7において耐圧性が一番高い。従ってH^+はCa^<2+>の結合部域への結合定数を支配している。4)Na^+、K^+の1価陽イオンは耐圧性に影響を持たない。II〕電流成合について:1)外向きのCl^-の流れが主であること。2)Na^+の寄与は殆どないこと。3)K^+は多少の寄与をすること等を、コリン、テトラメチルアンモニウム塩、Cs^+等を利用することにより明確にした。III〕電気浸透的な水の流れがこの現象に絡む可能性を考え、外液浸透圧を750mM程度に迄変えてみたが、その影響はなかった。IV〕膜インピーダンスがいわゆる興奮時には容量性を顕著に示すのに対し、breakdown時にはインダクティヴになる。これはCa^<21>の結合により電気的耐圧性を維持されているCl^-チャンネルの構造が、高圧のために歪む過程に現れる現象と解釈され、その速度論的解析方法を見出した。(以上投稿中論文要約)。V〕現在と次年度:現在細胞内Cl^-濃度を変え、細胞内よりCl^-チャンネルの性質を研究中である。

このチャンネルはCl^-に対する特異性が低く、陰イオンチャンネルとして考えるべきではないかとのデータを得つつある。この陰イオン性チャンネルと、興奮時に主役を果たすCa^<2+>によって活性化されるCl^-チャンネルとの関係をより明確に出来る実験系を進めている。I.パッチクランプ法によるCl^-チャンネルの研究。通常のシャジクモ節間細胞の原形質膜を、高張液により原形質膜分離を誘導し、細胞壁に切り口を開くことによりパッチクランプ法をこの細胞に適用することが可能になった。1)シャジクモ節間細胞のCl^-チャンネルの単位コンダクタンスの大きさから分類すると少なくとも2種類存在する(100mM Cl^-溶液中において1520pSおよび数pS)。単位コンダクタンスの大きさはCl^-濃度に依存するが、その依存の仕様について検討中である。2)細胞内+側と一側の両方向において電圧依存性をもってこのチャンネルは開くが同じCl^-チャンネルか異なるチャンネルかも現在検討中である。3)いわゆるアニオンチャンネルの阻害剤が有効に効かないことにより、実験の組立が極めて困難である。4)Ca^<2+>ーbufferによりCa^<2+>濃度依存性を調べると、10^<-7>Mで開き、10^<-5.5>Mで閉じる。このことは生理条件とは異なっており、生理条件下における調節因子を考慮しつつ現在研究を進めている。II.上記の研究と平行して1)通常の細胞の過分極側において開くCl^-チャンネルの2価イオン依存性のシリ-ズを決定した。2)またその電圧依存性と時間依存性とのkineticsを明確にした。3)局所麻酔剤をリピッド層より細胞内にいれることにより、H^+ーpumpおよびCl^-チャンネルの性質を整理している。局所麻酔剤はシャジクモ節間細胞の膜の脱分極を引き起こすが、これはいわゆる受動チャンネルとH^+ーpumpのいずれにも影響を与えているからである。I.ジャジクモ(Chara corallina)の原形質膜に存在するアニオンチャンネルの性質を原形質分離法とパッチクランプ法を組み合わせることにより.研究の方向を切り拓いた。この方法により.開閉の挙動の異なる2種類のCl^-ーsensitiveなチャンネルの分離に成功した。A型と呼ぶチャンネルはCa^<2+>の1.0,10,0.1μMの濃度によって,その開閉の挙動は全く異なる.B型と呼ぶチャンネルは膜の過分極電圧と共にチャンネルの開く頻度が高くなる。前者をCa^<2+>ーdependent Cl^-ーsensitive anion channel,後者をHyperpolarizationーactivated Cl^-ーsensitive anion channelと呼ぶことにした。Ca^<2+>ーactiveted Cl^-ーsensitive anionチャンネルは,0.1μM Ca^<2+>濃度では殆ど閉じている.1.0μMCa^<2+>濃度では膜電位の-180-40mVの領域で開き.その開確率は.-80-100mVに最大値を持つ。ある仮定の下に.その最大値は0.15程度と予想した。10μM Ca^<2
包装紙等の実用的作例における浮世絵師の画業研究

本研究に関しては、今年度は昨年度までの調査にて収集したデータをもとに考察を行い、研究誌に論文を発表した。なお、今年度は出産に伴う産前産後休業及び育児休業を取得したため論文を1本発表したにとどまったが、育児休業から復帰後は、さらに収集したデータをもとに学会発表及び論文発表を行う予定である。産前産後休業及び育児休業を取得していることから、調査した資料の考察作業が遅れているため。育児休業より復帰した後、収集したデータの考察等を中心に行い、学会及び論文発表を行うよう努める。本研究に関して、今年度は日本国内の図書館・資料室等で浮世絵師の手による引き札等、実用的な作例を中心とした調査を行った。なお、調査は基本写真撮影を伴うものとし、作品のデータを整理する際により視覚的に確認できるように努めた。収集したデータは一覧にまとめ、描かれた画題や媒体の傾向等の考察も行った。また、浮世絵師や江戸時代の出版業界に関する書籍等も入手し、当時の制作背景等の考察も実施した。その結果として、幕末期における浮世絵師の実用的作例を数点提示することは可能となったが、今後さらなる調査を行い資料データの母体数を増やすことによって、より精度の高い考察結果を示すことができるだろう。所属の業務の増加等により十分な研究時間が確保できなかったため、予定していた資料調査の中で本年度中に行うことができなかったものがあり、またそれをもとにした考察作業も遅れてしまったため。本研究に関して、今年度は日本国内の博物館を中心に、図書館・資料館等で浮世絵師の手による実用的な作例の現地調査を行った。とりわけ、浮世絵師が手掛けた菓子袋を今年度の調査対象の主な資料として取り上げ、集中的に調査を実施した。菓子袋は実用的な作例の中でも、博物館や資料館で比較的所蔵数が多いものであり、調査対象として取り上げやすかったという利点がある。その結果、さまざまな浮世絵師が菓子袋作成に関わっていた点、また菓子袋の制作背景など、一定の調査結果を提示することが可能となった。なお、調査は基本的に写真撮影を伴うものとし、作品のデータを整理する際により視覚的に確認できるように努めた。収集したデータをまとめた上で、描かれた画題や媒体の傾向等の考察も行った。また、浮世絵師や江戸時代の出版業界に関する書籍等の入手も行い、当時の制作背景等の考察も実施した。研究の途中成果として、今年度は山梨県立博物館で所蔵する菓子袋を主とする考察を行い、『山梨県立博物館研究紀要第12集』に論文の掲載を行った。本論考においては、山梨県立博物館所蔵資料を中心として、現状で判明している浮世絵師が携わった菓子袋制作の一端を提示したが、今後も追跡調査を行い、研究成果を随時公表していくこととする。なお、今年度取り上げた菓子袋以外にも浮世絵師の実用的作例は多く存在する。今後さらなる調査を行い、資料データの母体数を増やすことによって、菓子袋以外の作例も提示し、より精密な調査結果を示すことを来年度の目標とする。多くの博物館等で調査を行うことはできたものの、所属の業務の増加等により、調査結果をまとめる十分な時間が確保できず、それに伴い十分な途中成果報告を行うことができなかったため。引き続き、浮世絵師の実用的作例の現地調査を行う。さらにその結果をまとめ、作画傾向等を考察したうえで、将来的に論文等で広く成果を公表できるように努める。引き続き浮世絵師の実用的作例の調査も行うが、来年度は調査結果の考察作業に多く時間を費やす予定である。制作背景等を十分に考察した上で、学会発表及び論文で多く成果を公表できるように努める。所属の業務の増加等により十分な研究時間が確保できなかったため、予定していた資料調査等の中で本年度に行うことができなかったものがあり、それにともない経費の使用額が当初の予定より少なくなってしまったため。(理由)所属業務の増加等により十分な研究時間が確保できなかったため、予定していた資料調査及び調査結果の考察、論文での発表等、本年度中に十分に行うことができなかったものがあり、それに伴い経費の使用額が当初の予定より少なくなってしまったため。(使用計画)資料調査を実施(旅費)し、その調査ならびに結果について調査協力者等と情報を共有し、検討する機会を積極的に設けるなど(人件費・謝金)、計画的な執行に努める。(理由)産前産後休業及び育児休業を取得したため当初の予定通りに経費を使用することができなかったため。(使用計画)育児休業から復帰後は、資料調査(旅費)及び研究を考察する機会を設け(人件費・謝金)、計画的な執行に努める。作品調査を実施(旅費)し、その調査ならびに結果について調査協力者等と情報を共有し、検討する機会を設けるなど(人件費・謝金)、計画的な執行に努める。
内部境界層の形成過程とその中での大気拡散現象に関する研究

本研究の目的は、沿岸部での内部境界層の形成過程やその中での汚染物の拡散過程について風洞実験と数値シミュレーションの手法で解明することである。平成7年度及び8年度の研究実績は以下の通りである。1。2次元及び3次元風洞の特性の解明。(1)多数の送風機を持ち、それぞれをコンピュータで制御することで、複雑な特性を持つ乱流を発生させることのできる乱流風洞を開発している。2次元風洞は、11個の送風機を持ち、3次元風洞は、2次元風洞を横に6列並べた構造を持ち、合計66個の送風機を持っている。これらを独立に制御することで、平均風速、乱れ強度、乱れスケールなど多くの乱流特性を制御することが可能であることが見いだされた。この結果を第14回風工学シンポジウムで発表した。(2)自然の風を計測し、この変化を風洞内で忠実に再現できることが明らかとなった。この際の相関は、流れ方向と鉛直方向共に90%以上が得られた。この結果を、第2回計算風工学シンポジウム(米国コロラド州立大学)で発表した。2。汚染物質の拡散過程を確認するための3次元風速場の測定。(1)拡散過程の確認には、まず、流れ場の可視化が必要である。レーザー可視化装置によって、流れの可視化を行った結果、予定されていた流れが観測された。(2)次に、内部境界層内外の流速の測定を行うことが重要である。熱線流速計による測定によって、流れ場の解析を行った。(3)3次元風洞内に簡単なモデルを置き、内部境界層の発生とその中での拡散過程を測定した。その結果、パフ・フュミゲションモデルによる予測を裏付ける拡散現象が確認できた。本研究の目的は、複雑な地形上での内部境界層の形成過程やその中での汚染物の拡散過程を風洞実験と数値シミュレーションによって解明することである。平成7年度の研究実績は以下の通りである。1.本研究に用いるために開発中の2次元と3次元の乱流風洞の特性が明らかになった。(1)本乱流風洞は多数の送風機を用いた吹き出し型風洞である。2次元風洞はACサーボモータで駆動される小型送風機11個を持ち、3次元風洞はインダクションモータで駆動される同様の小型送風機66個を持つ。各送風機をパソコンで個々に制御することにより、任意の速度分布を持つ境界層流れを容易に実現できる。モータの応答性の範囲内において、流れ方向気流の平均風速、乱れ強度、渦のスケール、パワースペクトル等の乱流パラメータを任意の目標値に近づける制御法を確立した。鉛直方向の乱流パラメータの目標値の再現には乱れ発生装置の改善が必要で、検討中である。(2)自然風を超音波風速計で観測し、その特性を明らかにした。また、従来から言われているように、カルマンのパワースペクトルは自然風の乱流特性をよく表すということも確認できた。(3)応答性のよい2次元風洞を用いて(2)で得られた自然風の再現を試みた。モデルと実物の縮尺1/100程度までは自然風の再現が可能であることが明らかになった。2.汚染物質の移流・拡散過程の数値シミュレーションに必要な3次元風速場推定モデルの有効性を確認した。(1)内部境界層内での汚染物の拡散過程に適用できるパフ・フュミゲーションモデルをすでに開発している。(2)すでに開発している3次元風速場推定モデルによる計算値を実測値や他のモデルによる計算値と比較検討した結果から、本モデルが大気境界層内に適用可能であることを確認した。1。2。

本研究の目的は、複雑地形上での内部境界層の形成過程やその中での汚染物質の拡散過程を風洞実験と数値シミュレーションによって解明することである。平成8年度の研究実績は以下の通りである。1。本研究に用いるために開発中の2次元及び3次元乱流風洞の特性がさらに詳細に解明された。(1)乱流特性を表すパラメータには、平均風速、乱れ強度、乱れスケール及びパワースペクトル密度などが通常考えられている。これらはすでに十分な精度で風洞内に再現できる。大気拡散現象を解明するには、さらに大気中の乱れ応力(せん断応力またはレイノルズ応力)の分布を作り出す必要がある。このため、送風機の回転数制御によって、流れ方向の乱れを制御し、同時に風路中に置かれた振動翼列によって鉛直方向の乱れを発生させた。これらを個々に制御することで、レイノルズ応力の鉛直分布を作り出せることが明らかとなった。(2)乱流の制御方法には、目標に合わせるために、繰り返し法によって漸近する方法と、送風機や振動翼の遅れ特性や風洞自身の遅れを補正することで、特性を改善する方法がある。この両方のプログラムを開発した。2。汚染物質の拡散過程のシミュレーション(1)内部境界層内での汚染物の拡散過程に適用できるパフ・フューミゲーションモデルを改良した。(2)このモデルを適用して、内部境界層内の拡散過程をシミュレートし、同時に、乱流風洞内でモデル実験によって検証する。このため、風洞内でのトレーサー濃度の計測装置を準備中である。
ラット頭蓋骨骨欠損部における生体活性ガラスとエムドゲインの効果の解明

エムドゲイン(EMD)の破壊された根尖部歯周組織における影響について検証するため、ラット根尖病変モデルを用いて免疫組織化学的に解析を行った。その結果、術後28日目においてEMD群で顕著なセメント質の形成が認められ、EMDは破壊された根尖部において硬組織形成の誘導因子の一つとなる可能性が示唆された。また、ラット頭蓋骨骨欠損モデルを用いて、EMDと生体活性化ガラス(BAG)併用療法の硬組織形成能に及ぼす影響について評価した。その結果、EMDとBAGを併用することによって、術後28日目において顕著な新生骨の形成が認められたことより、骨再生に有用である可能性が示唆された。ラット根尖病変モデルを用いて、免疫組織化学的に解析を行った結果、エムドゲイン(EMD)は根尖部において硬組織形成の誘導因子の1つとなる可能性が示唆された。次にラット頭蓋骨骨欠損モデルを用いて、大きな骨欠損でのEMDの骨組織形成促進作用について検証するともに、生体活性化ガラス(BAG)を足場として併用することで、EMDとBAG併用療法の硬組織形成能に及ぼす影響について評価した。新生骨形成量については、まず0日目にマイクロCTにて骨欠損部位を撮影し、画像診断ソフトにて直径5mm、深さ0.5mmの骨欠損が形成されていることを確認した。その後、術後7日目、14日目、28日目にそれぞれ撮影を行い欠損部の深さを計測し、EMD群、BAG群、EMD+BAG群、および何も貼薬していないコントロール群とを比較することで、組織定量的に評価した。また、それぞれラットを屠殺後、試料を作成し、HE染色およびトルイジンブルー染色およびALP染色を用いて組織学的に観察した。その結果、欠損部の深さは28日目において、コントロール群と比較して、EMD群、BAG群、EMD+BAG群ともに有意に低い値を示した。また、EMD群と比較してもBAG群およびEMD+BAG群は共に有意に低い値を示した。しかしながら、BAG群とEMD+BAG群との間に有意差は認められなかった。また、コントロール群では28日後においても新生骨はほとんど認められなかった。一方、EMD群では欠損部周辺にALP陽性を示す骨芽細胞が多数観察され、わずかながら新生骨の形成が認められた。また、BAG群およびEMD+BAG群ではBAG粒子の周辺に、多孔性の幼若な新生骨の形成が認められ、特にEMD+BAG群で顕著な新生骨の形成が認められた。以上のことからEMDとBAGを併用することによって、硬組織再生が促進される可能性が示唆された。エムドゲイン(EMD)の硬組織形成能に及ぼす影響を評価するため、ラット根尖病変モデルを用いて、特に破壊された根尖孔部における新生セメント質形成量と増殖因子発現細胞の動態に焦点をあてて免疫組織化学的に解析を行った。新生セメント質形成量についてはHE染色およびトルイジンブルー染色を用いて組織学的に観察するとともに、根尖直下の歯根膜幅を測定し、EMD群とEMDの溶解液であるプロピレングリコールアルジネートを貼薬したコントロール群とを比較することで数量的に評価した。その結果、EMD群はコントロール群と比較して早期に、破壊された根尖部における新生セメント質の添加が認められ、処置後28日目においてEMD群ではコントロール群と比較して有意に厚い新生セメント質の形成が観察された。また、根尖直下の歯根膜幅も有意差を示した。増殖因子発現細胞の動態においては、EMDの貼薬後7日目に、TGF-β1およびBMP-2発現細胞の有意な増加が観察された。その後、TGF-β1発現細胞は経時的な減少傾向を示す一方、BMP-2発現細胞は持続的な増加が認められた。以上の結果から、ラット根尖病変モデルにおけるEMDの応用は、TGF-β1を発現細胞の一時的な増加と持続的なBMP-2を発現細胞の持続的な増加を誘導し、破壊された根尖孔の治癒および硬組織の再生に関与している可能性が示唆された。組織再生療法においては細胞と誘導因子、そして足場が重要な3つの鍵とされているが、今回の実験にてEMDは誘導因子の1つとなる可能性が示唆された。平成23年度における研究計画では(1)エムドゲイン(EMD)の硬組織形成能に及ぼす影響を評価するため、ラット根尖病変モデルを用いて、破壊された根尖孔部での硬組織形成能を免疫組織学的に解析すること。(2)生体活性化ガラス(BAG)の硬組織形成能に及ぼす影響を評価するため、ラット頭蓋骨骨欠損モデル根尖病変モデルを用いて骨欠損部での硬組織形成能を免疫組織学的に解析すること。以上の2つを目標としていた。

(1)に関しては実験は予定通りに終了し、その結果よりラット根尖病変モデルにおけるEMDの応用は、TGF-β1を発現細胞の一時的な増加と持続的なBMP-2を発現細胞の持続的な増加を誘導し、破壊された根尖孔の治癒および硬組織の再生に関与している可能性が示唆されたとの結論を得た。この成果については日本歯科保存学会の平成23年度秋季大会で報告するとともに、現在、論文作成のため資料の整理を行っている。(2)に関しては実験手技の確立までは終了しており、現在、動物実験と試料作製を並行して進めている。(1)平成23年度と同様の方法で骨欠損動物モデルを作製する。(2)平成23年度の生体活性化ガラス(BAG)との実験結果を検討し、最も骨組織誘導能の高かったBAGをエムドゲイン(EMD)と併用して平成23年度と同様の解析を行う。以上の実験にて得られた結果を総合的に解析することにより、エナメルマトリックスタンパク(再生促進因子)と生体活性化ガラス(再生の足場、微小環境)の併用療法による根尖部歯周組織再生機構について検証するとともに、破壊された根尖部歯周組織を再生するためのより予知性の高い歯周組織再生療法の基盤構築を計る。本年度もラットを用いた動物実験を予定しており、ラットの購入費用および飼育費用としての使用を計画している。また、資料作製および標本作製の際に用いる実験器材や各種薬剤、抗体などの消耗品の購入費用としての使用を予定している。また、本年度でも国内学会での学会発表を予定しており、旅費としての使用を予定している。
エスノレクトからみる日本の多言語社会化

本研究は「エスノレクト」をキーワードとしたものである。欧米などでは、「ethnolect(エスノレクト)」という用語は「immigrant(移民)」という用語と共に研究論文などにおいて多数見られるようになった。国家・地域が多民族化・多様化するのに従い、その存在がより強く意識されるようになっている。他方、日本社会においては、現在、多言語化が進展しているとはいえ、いまだ、多くの人が日本語には高い規範性があると考えており、「言語の多様性」を超える「日本語の多種性」を容認することは難しい。しかし、「国語」とイコールではない「日本語」には多様性があることも徐々に認知されつつあることが明らかにできた。本研究では、次の2点を取り組むべき課題として設定した。まず、一つは、海外での「エスノレクト」という用語の使用やその背景にある多言語社会状況について分析を行い、日本への紹介的役割を担う、というものである。これについては、平成24年度は、連携研究者の金が、韓国とアメリカに赴き、外国人の言語的支援状況とその支援を受けている外国人の言語状況について調査した。対象は移住者など、主として長期的に韓国・アメリカに滞在する外国人である。金の調査からは、生活支援の一環として行われている言語支援の状況とこれらの公的支援がいかに当事者に活用されているのか、またはどのような問題点を残しているのかを知るための手掛かりとなる資料が得られた。研究分担者である安田は、近代以降の日本語に対する学問のあり方を問い直す作業を継続して行った。もう一名の研究分担者である寺尾は、昨年度、南米のボリビアとペルー、欧州のルクセンブルクとオランダで調査した結果をまとめ、博士論文の中にも含めて、よりいっそう、考察を深めている。設定した課題のうち、残る1つは、日本における多言語社会の問題をエスノレクトの視点で考察することの可能性であるが、こちらについては、研究代表者の藤井が、日本の中の一地方都市である宮崎の若年層に対してアンケート調査を行い、外国人が話す日本語に対する意識を調査した。アンケートの作成にあたっては、中国人・韓国人に対しての反応と、欧米系の言語を母語とする話者への反応とを分けて調べた。年度末に結果が得られたので、詳細な分析は次年度に行うが、両者に対する反応には差があることがうかがえる。平成24年度は全員が集まるミーティングは行わなかったが、設定した2つの課題に沿って、各自が研究を進めることができたと考える。これについては、平成25年度は、連携研究者の金は、平成24年度に訪問した韓国とアメリカにおける調査結果をまとめた。外国人の言語的支援状況とその支援を受けている外国人の言語状況についてである。韓国やアメリカに長期的に滞在する外国人に対して、公的支援の形でどのような言語支援が行われているかを資料から考察した。研究分担者である安田は、継続的に、近代以降の日本語に対する学問のあり方を問い直す作業を行っている。もう一名の研究分担者である寺尾は、昨年度に行った調査結果についてさらに考察を深めている。設定した課題のうち、残る1つは、日本における多言語社会の問題をエスノレクトの視点で考察することの可能性である。研究代表者である藤井が、外国人が話す日本語に対する意識調査を平成24年度に行っており、継続的にこの結果の考察を行った。平成25年度は全員が集まるミーティングは行わなかったので、各自がそれぞれに研究を進めることになった。これについては、平成23年度は、研究代表者である藤井がカナダで、研究分担者である寺尾は南米のボリビアとペルー、欧州のルクセンブルクとオランダで調査を実施した。まず、カナダでの調査では、藤井が中僑互助会(S.U.C.C.E.S.S.)を訪問し、バンクーバーにおける中国系移民の言語使用について聞き取りを行った。また、ブリティッシュ・コロンビア大学では、カナダにおけるエスノレクトに関連する資料収集などを行った。寺尾は、ボリビアでは、主たる調査地であるサンタクルス市では教育局長に、オキナワ村ではケチュア系先住民である村長から話を聞くなど、細かくフィールドワークを回り、聞き取り等を行った。欧州については、ルクセンブルクでは教育省を訪問し、さらに、多言語による放送を行っている民間放送局の局長にインタビューを行った。オランダでは移民向け識字学校の訪問なども実施した。