hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
個人と集団の事業撤退の意思決定に関する実験研究

3.自分の行為によってたとえ1人でも命を失うことは、感情的に抵抗感が強いが、認知的熟慮性が高い人は、その感情を皃抑えて功利主義的な結論に至りやすいのかもしれない。行動意思決定研究は伝統的に実験などの心理学のアプローチが中心であったが、本研究でわれわれが注目したのは進化心理学的なアプローチである。もちろんこのアプローチは従来の行動意思決定研究にもあって、協力行動の進化などについて一定の成果をあげてきた。われわれが注目するのは人間が抱いている倫理観に関係する進化論的アプローチである。たとえば、経済学では利己主義がモデルの根本にあるし、一般に人間はリスク・アバースな存在であることが仮定されている。しかし、リスク回避的であることがリスク・シーキングやリスク・ニュートラルよりも合理的であると証明することはできない。たしかに人間が生きていく上でリスク・アバースで得をすることもあるだろう。しかし逆にリスク・シーキングで得をする場面も多いし、リスク・アバースな選択だけをして生きていくことは不可能である。リスク・アバースなモデルが経済学の基礎になっているのは、そうしないと人間の意思決定を最大化問題に置き換えることが難しいという事情が大きい。しかしそれは学問上の都合に過ぎないのであって、生身の人間の意思決定の本質を探る行動意思決定研究では、そのようなアプローチを採用することはできない。本研究のトピックである撤退の意思決定についても、進化論的なアプローチでうまく説明することがいくつかあることがわかった。企業活動に限らず、何か前向きなことをしていて、それがしばらくうまくいかなかったとしよう。そんなときにすべての人間がさっさと撤退することは、本人にとっては得かもしれないが、人間社会全体としてはイノベーションがあまりおこらない。リスクをとることで多くの人間が失敗しても、ごく一部の人間が大成功を収めることでイノベーションが達成され、人間社会が発展しやすいと考えられる。
生体肺移植における再灌流肺傷害に対する一酸化窒素の効果とサイトカインの変動

岡山大学グループは平成10年に日本で初めての生体部分肺移植を施行し成功した。肺移植は心臓移植に比較しても術後急性期の死亡率が高い。肺移植後の急性期死亡の大きな原因の一つは虚血再灌流肺傷害であり,虚血再灌流傷害を予防する方法は肺移植の先進国である欧米においてさえ確立されていない。一酸化窒素(NO)は、酸素化能を改善し、再灌流傷害と移植後肺高血圧を予防する効果が発現することが期待されるが、使用に関しては意見が統一されていない。生体肺移植では、移植される肺が小さいために移植後に肺高血圧や再灌流傷害が発生しやすいが、生体肺移植の管理に関する研究はほとんどなされていない。我々は生体肺移植患者の救命率を向上させることを目的として、術中からNO吸入を開始し再灌流傷害を積極的に予防する治療方針を立て、周術期の生体肺移植管理を行った。国際心肺移植学会の統計によれば欧米の術後急性期死亡率は約20%、5年生存率は約45%と報告されている。岡山大学においては1998年から2004年4月までに計30例の生体肺移植を施行し、全例生存(術後1ヵ月から最長66ヵ月)している。術後管理が困難と考えられている生体肺移植にもかかわらず非常に良好な成績であった。推定余命が幾ばくもない末期の肺疾患患者にとって生体肺移植は脳死肺移植に勝る治療法となりうることを示すことが出来た。同時に、肺移植における再灌流傷害の病態の解明を目的として移植前後の血中サイトカインの変動を検討した。移植肺の再灌流直前よりNOの吸入(15ppm)を開始した。再灌流傷害に大きな影響を持つインターロイキン-6と好中球エラスターゼの血中濃度は術中の人工心肺中に有意に上昇し移植後も高値が持続した。一方、同様に肺傷害への関与が予想された血中TNF-αは移植前後で有意の変動を示さなかった。人工心肺の使用時間や虚血時間はインターロイキン-6や好中球エラスターゼの血中濃度と相関は示さなかった。今後は肺移植における虚血再灌流傷害をさらに軽減する治療法の開発が望まれる。岡山大学グループは平成10年10月に日本で初めての生体部分肺移植を施行し成功して以来、平成15年3月までに20例の生体肺移植を施行し、全例生存している。この成績は世界最高であり例を見ないものである。われわれ麻酔蘇生科・集中治療部は麻酔および術前・術後集中治療管理を担当している。多くの症例において術中の移植直後から術後数日間にかけて虚血再灌流傷害が原因と考えられる重篤な呼吸不全(移植早期グラフト不全)を経験し、治療に難渋した。肺移植が心臓移植に比較して術後急性期の死亡率が高いのは,移植された肺は容易に傷害を受けやすく移植後に急性呼吸不全をきたしやすいからであり、肺移植においては術中から術後の管理が非常に重要である。虚血再灌流傷害は,肺移植後の死亡原因の大きな一つであり、虚血再灌流傷害を予防する方法は,各種考案されているが肺移植の先進国である欧米においてさえ確立されていない。

我々の研究目的は,虚血再灌流傷害に対する一酸化窒素(以下NO)吸入療法の予防効果をプロスペクティブに検討し,移植肺における酸素化能と移植後に発生しやすい肺高血圧症に対する効果を判定することである。同時に,移植肺の病態と治療に対する効果を検討するために,移植前,移植肺への再灌流直前・直後,移植後の血中インターロイキン6,8,lOとtumor necrosis factor-alpha(TNF-α)を測定し,再灌流傷害の原因を探索することを目的とする。平成14年度は6例の生体肺移植(原発性肺高血圧症4例、肺リンパ脈管筋腫症1例、閉塞性細気管支炎1例、突発性肺線維症1例)を行い,NOの臨床的効果とサイトカインの再灌流傷害への関与を検討中である。今後さらに移植症例が増加してくるものと考えられており、臨床での治療の質をさらに向上させると同時に研究を継続し、症例数を積み重ねる必要がある。岡山大学グループは平成10年に日本で初めての生体部分肺移植を施行し成功して以来、平成16年2月までに25例の生体肺移植を施行し、全例生存している。この成績は世界最高であり例を見ないものである。われわれ麻酔蘇生科・集中治療部は麻酔および術前・術後集中治療管理を担当しているが、多くの症例において術中の移植直後から術後数日間にかけて虚血再灌流傷害が原因と考えられる重篤な呼吸不全を経験し、治療に難渋している。肺移植が心臓移植に比較して術後急性期の死亡率が高いのは,移植された肺は容易に傷害を受けやすく移植後に急性呼吸不全をきたしやすいからであり、肺移植においては術中から術後の管理が非常に重要である。虚血再灌流傷害は,肺移植後の死亡原因の大きな一つであり、虚血再灌流傷害を予防する方法は肺移植の先進国である欧米においてさえ確立されていない。同時に,移植肺の病態と治療に対する効果を検討するために,移植前,移植肺への再灌流直前・直後,移植後の血中インターロイキン6,8,10とtumor necrosis factor-alpha(TNF-α)を測定し,再灌流傷害の原因を探索することを目的とする。平成14年度は6例の生体肺移植(原発性肺高血圧症4例、肺リンパ脈管筋腫症1例、閉塞性細気管支炎1例、間質性肺炎1例),平成15年度は5例(原発性肺高血圧症2例、間質性肺炎2例、アイゼンメンジャー症候群、気管支拡張症1例)を行い、NOの臨床的効果とサイトカインの再灌流傷害への関与を検討中である。この研究に関し、平成15年10月には、米国麻酔学会(サンフランシスコ)に参加し討議を行った。今後、平成16年2月から3月にかけて数件移植が予定されており、臨床での治療の質をさらに向上させると同時に研究成果を集計する予定である。
文芸におけるアフリカ表象の変容:日欧比較研究

18世紀英独仏の文芸は、トルコの脅威やイスラーム教徒による海賊行為等の過去の記憶と現に横行する事件を好んで題材に選び、トルコ人とアフリカ人の登場する通俗的「トルコものオペラ」が人気を博した。他方、アフリカを舞台に、或いはアフリカ黒人を主人公に据えて、英独仏の現実を映し出す観念的な作品も生まれた。本研究は、これらの埋もれた作品を発掘し分析を施したうえで、視覚資料や地理的情報が主流の江戸の黒人像との相違も明らかにした。本研究の基軸となるサミュエル・ジョンソンの『ラセラス』は、アビシニアの王子ラセラスとその妹がエジプトを遍歴しつつ幸福の意味を探求する観念的な物語である。だが、王女の侍女がアラブ人に誘拐されたり、トルコ兵が登場したりと、当時流行していた文芸モチーフも巧みに取り入れられている。従って、藤田は本年度、ジョンソンの非ヨーロッパ受容を研究の中心に据え、『ラセラス』以外にも、ジョンソン唯一の戯曲でありながら、現代に至るまで等閑視されてきた『アイリーニ』を取り上げ、同戯曲の典拠ともなったノールズ著『トルコ史』(1603)等を読み解きながら、18世紀英国におけるアフリカ・オリエント像に考察を加えた。また英国図書館等にて奴隷貿易・奴隷制廃止関係資料およびアフリカ・アラブを題材にした戯曲・小説の文献調査に従事した。佐藤の本年度の課題は、18世紀ドイツ文芸における非ヨーロッパの受容を見定めることである。そこで、当文芸が、北アフリカを領有するオスマントルコとの遭遇の衝撃をいかに伝えるか、検証を加えた。具体的には、ヘルダーが複数座標軸に則って、従来の歪曲された非ヨーロッパ像を批判した点を検討し、『後宮からの奪還』(1782)等の「トルコものオペラ」を考察した。その結果、当文芸には、「野蛮」なオリエント像のみならず、異文化の衝突から生まれる創造的変化も読み取れる点が知られた。さらに、オーストリア国立図書館では18世紀オリエント・アフリカ関係文献を調査し、軍事史博物館やウィーン市立歴史博物館では絵画資料を蒐集した。笠原は、アフリカ表象とも密接に関連する啓蒙期ヨーロッパのイスラーム像を解明する作業を行ない、その成果を日本ヘルダー学会のシンポジウム「ヘルダーと異文化世界(2)」において、「レッシングとイスラーム」として発表した。また、『アビシニア啓蒙物語』分析の前段階として、18世紀後半のドイツ思想史のなかでのクニッゲの位置を考察した論文、「クニッゲと啓蒙の社交性」を執筆した(07年10月公刊予定)。藤田は、S.ジョンソンの非ヨーロッパ受容を基軸に、周辺の作品のトルコ・ペルシャ・北アフリカ表象に照準を合わせ、それらの影響関係をめぐり考察を加えた。具体的には、ヴォルテールの『ザイール』、『カンディード』、A.ヒルの『ザーラ』、コングリーヴの『喪に服する花嫁』、W.ドッド「アフリカの王子」を取り上げ、その結果、少なくとも18世紀英国において文芸上ではトルコ人、ペルシャ人、ムーア人はほぼ同一視されているばかりか、彼らのイメージはアフリカ黒人のそれとも錯綜しているとの感触を得た。ドッド等の資料は、英国図書館での文献調査(8月)に基づく。佐藤は、まず18世紀ドイツ文芸が、いかに非ヨーロッパ、特に北アフリカを領有するトルコを受容したのか見極めようとした。具体的には、ヘルダーの『人類歴史哲学考』(1784-91)を貫くヨーロッパ中心主義批判を踏まえて、『民謡集』(1778/79)のトルコ像に検討を加えた。その結果、「野蛮なトルコ」とは、オリエント・アフリカに対する暴虐なヨーロッパ自身の謂である点が明らかとなった。ついで、オーストリア国立図書館に於ける18世紀トルコ・アフリカ関係文献の調査(8月)に基づき、J. M. R.レンツによるプラウトゥスの翻案劇『トルコの女奴隷』(1774)と『アルジェの人々』(1775作)に焦点を絞り、後者の北アフリカ像の特徴を、前者のトルコ像と比較検討し考察した。笠原は、18世紀ヨーロッパのイスラーム像を解明する作業を引き続き行なった。とりわけ、レッシングやヘルダーにおけるイスラームの問題に焦点を絞って考察を加えた。また、共著『ノイズとダイアローグの共同体』においては、クニッゲと啓蒙の社交性をめぐって論究した。これらの作業は、啓蒙と非ヨーロッパ世界像が交錯する作品であるクニッゲ『アビシニア啓蒙物語』の分析の前提をなすものである。藤田は、英国図書館にて、黒人の登場する戯曲や黒人自身の手記を中心に、虚構と現実世界における黒人像の分析を行った。その結果、米国独立戦争後の黒人人口の流入や奴隷解放運動の興隆により、18世紀後半の黒人イメージは、アフリカではなく西インド諸島の黒人像にとってかわられ、一般的には「高貴」な野蛮人から滑稽な西インド訛りの英語を話す奴隷/下僕として定着したことが明らかとなった。他方、日本では、世界図や万国人物図においてギネア、マダガスカル、「黒人国」の人々がアフリカを代表する人物として描かれた。

彼らは「黒坊」あるいは「黒ん坊」と称されて川柳に詠われ、戯作にも登場した。国を閉ざし、三国世界観が支配的な日本でも、黒人が無縁の存在では決してなかったのである。佐藤は、考察の焦点を非ヨーロッパからアフリカに絞り込み、J. M. R.レンツのプラウトゥス翻案劇『アルジェの人々』に表れるアフリカ像を分析し、独善的ヨーロッパ文明の自己批判の契機を読み解いた。また、オーストリア国立図書館所蔵の18世紀ドイツ戯曲の「アフリカもの」や「黒人奴隷もの」を考察した。「トルコものオペラ」のアフリカ黒人が「後宮の番人」役として野蛮ないし滑稽な人物像を表すのに反して、ここでは、舞台がヨーロッパであれ、西インド諸島であれ、「市民劇」の主人公として登場することが判明した。だが、概ねアフリカ黒人には、ヨーロッパ文明批判の道具としてドイツ教養市民自身が投影されており、現実のアフリカを冷徹に描くには、フランス革命を待たねばならない。笠原は、クニッゲの『ベンヤミン・ノルトマンのアビシニア啓蒙物語』から伝統的な定型的アフリカ表象と、18世紀に獲得されつつあった新たなアフリカ認識との交錯を見て取った。このアフリカ像こそクニッゲが提示する啓蒙の理念の内実と緊密に結び合っていたのである。
金属に配位した分子の交換反応に関する高圧NMR法による研究

中心金属の電子移動が、その金属上にある配位子の交換のひきがねとなりうるかどうかについて研究を行い成果を得た。四面体型配位構造の安定な、ビス-(2、9-ジメチル-1、10-フェナンスロリン)銅(I)、Cu(dmp)_2^+、錯体はアセトニトリル中で共存するCu(dmp)_2^<2+>錯体を電子交換をしている。Cu(I)錯体の2、9位メチル基の1H-NMRにより直接、交換速度定数を求めたところ、k_2=8.3×10^3mol^<-1>S^<-1>(298K)であった。このk_2は、morcusの関係式を用いる間接的方法(従来4×10^4という値の報告がある)によらない方法で求めた初めての値である。また、ΔH^*=32.7KJ・mol^<-1>、Δ5^*=60.7J・mol^<-1>.deg^<-1>であった。この系に遊離のdmpを共存させてNMRの温度依存性を観測したが、配位子交換を示すようなスペクトル変化はおこらなかった。このことは、Cu(I)→Cu(II)という電子交換の過程において、Cu(II)錯体にとって有利な平面4配位型や、D4h対象の5、あるいは、6配位型配位構造へ変化がおきていないということを示したと思われる。なぜなら、もしそのような構造変化があれば、配位子交換が必然的に伴うはずだからである。このことを確認するため、高圧NMP法により、Cu(dmp)_2^+【double arrow】bu(dmp)2^2^<2+>の電子交換の活性化体積、ΔV^*を求めたところ、-2.4cm^3mol^<-1>となった。絶対値がこのように小さなΔV^*は、電子交換が外圏機構でおこっていることを示唆している。すなわち、電子交換の活性化状態において内圏構造は保持されることが示された。2、9位の2つのメチル基の存在がCu(II)錯体の四面体型配位構造を異常に安定化させているものと思われる。
うつ病をはじめとする気分障害と家族の感情表出に関する研究

日本人の気分障害の患者の家族を対象として,カンバウェル家族面接(Camberwell Family Interview,CFI)を用いたEE(expressed emotion)評価の信頼性を評価し,そのEEの特徴を明らかにする目的で研究を行った.研究対象は27名の気分障害患者とその家族31名だった.家族とのCFI面接を行った.2名の評価者がそれぞれ独立にEE評価を行い,2者間の信頼性をスピアマン順位相関係数(Spearman's correlation coefficient by ranks),カッパ値(kappa value)などで評価した.その結果,気分障害におけるEE評価の評価者間信頼性を再検討する必要があること,気分障害患者家族の感情表出は分裂病患者家族と比較して抑制されたものであること,日本人の感情表現は欧米人よりも控えめであることが明らかとなった.また,気分障害と診断された32名の患者と36名のその主要な家族が研究対象として,9カ月間および2年間追跡するコホート研究を行った.その結果,批判3個以上あるいはE0I3点以上を高EE群,それ以外を低EEとしての9カ月再発リスクはそれぞれ83.3%(5/6),19.2%(5/26)であり,再発リスク比(95%信頼区間)は4.3(1.8-12.2)であった.この分け方での,妥当性の指標の値が最良であった.多重ロジスティック分析の結果でも,EEの影響は有意であった.また,2年間のコホート研究においても,同様の結果が得られた.したがって,日本においてもCFIによるEEは再発と関連していると結論できる.日本人の気分障害の患者の家族を対象として,カンバウェル家族面接(Camberwell Family Interview,CFI)を用いたEE(expressed emotion)評価の信頼性を評価し,そのEEの特徴を明らかにする目的で研究を行った.研究対象は27名の気分障害患者とその家族31名だった.家族とのCFI面接を行った.2名の評価者がそれぞれ独立にEE評価を行い,2者間の信頼性をスピアマン順位相関係数(Spearman's correlation coefficient by ranks),カッパ値(kappa value)などで評価した.その結果,気分障害におけるEE評価の評価者間信頼性を再検討する必要があること,気分障害患者家族の感情表出は分裂病患者家族と比較して抑制されたものであること,日本人の感情表現は欧米人よりも控えめであることが明らかとなった.また,気分障害と診断された32名の患者と36名のその主要な家族が研究対象として,9カ月間および2年間追跡するコホート研究を行った.その結果,批判3個以上あるいはE0I3点以上を高EE群,それ以外を低EEとしての9カ月再発リスクはそれぞれ83.3%(5/6),19.2%(5/26)であり,再発リスク比(95%信頼区間)は4.3(1.8-12.2)であった.この分け方での,妥当性の指標の値が最良であった.多重ロジスティック分析の結果でも,EEの影響は有意であった.また,2年間のコホート研究においても,同様の結果が得られた.したがって,日本においてもCFIによるEEは再発と関連していると結論できる.これまでの知見の集積とメタアナリシスについては,まず資料収集のためにMEDLINEで感情表出(EE)と気分障害に関する論文を検索した.70論文が検索されたが,このうち家族のEEと気分障害の再発を検討していた研究は6論文であった.カンバウェル家族面接(CFI)によって家族のEEを測定していた4論文のオッズ比をペトの方法によって併合した結果,併合オッズ比(95%信頼区間)は2.7(1.2-5.9)であった.さらにFMSSで家族のEEを測定していた2論文では,併合オッズ比(95%信頼区間)は3.5(1.2-9.9)であった.家族のEEと気分障害の経過に関するコホート研究については,地域精神保健を担っている精神病院,高知医科大学神経精神科,川崎医科大学精神科を受診した気分障害圏の患者30名とその家族を研究対象とした.対象となる患者と家族から文書によるインフォームドコンセントを得た後,主要な家族を対象にCFIを行い,EE評価を行った.評価者間信頼性を検討した結果,スピアマンの順位相関係数は批判的コメントで0.72(p<0.001)敵意で0.48(p=0.013),巻き込まれ過ぎで0.70(p<0.001),暖かみで0.79(p<0.001),肯定的言辞で1.0(p<0.001)であった.しかし,敵意と巻き込まれ過ぎでの陽性評価に関して問題が残った.ひとりの家族でも高EEと判定された場合には患者を高EE群,それ以外を低EE群として,コホート研究を行った.最初の観察期間は9カ月に設定し,治療開始後の経過を比較検討した.経過の観察にはEE評価とは独立した精神科医が当たり,1カ月ごとにハミルトンうつ病評価尺度,およびうつ病診断調査票を用いて気分障害の症状評価を行った.その結果,家族のEEと気分障害の経過は有意に関連していた.家族のEE(expressed emotion)と気分障害(mood disorders)の経過についての知見は一貫しておらず,また,これについてのアジアからの報告はなかったことから,これらの関連を検討するためのコホート研究を行った.

アメリカ精神医学会の診断基準(DSM-IV)と国際疾病分類(ICD-10)に従って気分障害と診断された32名の患者と36名のその主要な家族が研究対象となった.患者の入院後2週間以内に,その家族に対してカンバウェル家族面接(Camberwell Family Interview,CFI)による面接を行い,EE評価を行った.患者の退院後から9カ月間追跡するコホート研究を行った.CC(critical comments)とEOI(emotional overinvolvement)のいくつかのカットオフポイントで患者を高EE群と低EE群に分け,9カ月再発リスクを比較検討し,再発リスク比とその95%信頼区間を計算した.また感度(sensitivety),特異度(specificity),陽性反応的中率(positive predictive value),陰性反応的中率(negative predictive value)を算出し,最良のカットオフポイントを検討した.可能性ある交絡要因の影響をコントロールするために多重ロジスティック回帰分析を行った.その結果,CC3個以上あるいはEOI3点以上を高EE群,それ以外を低EE群としての9カ月再発リスクはそれぞれ83.3%(5/6),19.2%(5/26)であり,再発リスク比(95%信頼区間)は4.3(1.8-12.2)であった.この分け方での,妥当性の指標の値が最良であった.多重ロジスティック分析の結果でも,EEの影響は有意であった.日本においてもCFIによるEEは気分障害の再発に影響を与えることが示唆された.研究対象は昨年に引き続いて、地域精神保健を担っている精神病院、および高知医科大学神経精神科、川崎医科大学精神科を受診した気分障害圏の患者30名とその家族を新たな研究対象とした。対象となる患者と家族に研究の目的とその内容を説明し、文書によるインフォームドコンセントを得た後、家族(主には父母および配偶者)を対象にカンバウェル家族面接(CFI)を行い、EE評価を行った。ひとりの家族でも高EEと判定された場合には患者を高EE群、それ以外を低EE群として、コホート研究を行った。観察期間は2年に設定し、治療開始後の経過を比較検討した。経過の観察にはやはりEE評価とは独立した精神科医が当たり、1カ月ごとにハミルトンうつ病評価尺度(Hami1ton depression rating scale)、およびうつ病診断調査票(Inventory to diagnose depression : IDD)を用いて気分障害の症状評価を行った。2年のコホート研究の分析を行い、一定の基準で再発を定義し、高EE群と低EEの再発リスクを比較検討した。2年間再発リスク比(95%信頼区間)は3.60(1.57-8.26)であった。性、診断、罹病期間などの交絡要因をコントロールした多重ロジスティック回帰分析を行ったが、調整オッズ比(95%信頼区間)は4.20(1.23-9.91)であった。したがって2年間の観察期間でも家族のEEの気分障害の経過に及ぼす影響は重要と考えられた。また、これからの家族への心理社会的介入による気分障害の予後の改善のための具体的方法を検討し、わが国の気分障害患者の家族に最適な家族教室、家族介入方法を確立するための資料を作成した。本年度は当該研究の最終年度に当たることから、最終報告書の作成、論文の執筆を行った。
エクソーム解析における疾患原因変異同定率の低迷を打破するための多面的アプローチ

本研究の目的は次世代シーケンサーを用いたエクソーム解析の疾患原因変異探索において、約70%と言われる未同定変異を探索する手法を解析し、実際に原因変異を同定するものである。計画書の段階で複数手法の実施予定を挙げたが、それらを進めると共に、以下のように予定以上の実績を残した。1)コピー数変異(CNV)探索について、多数の方法を試行し各手法ごとに異なるCNVがcallされること、故にcallが複数手法で一致する積集合ではなくいずれかの手法でcallされた和集合のCNVの中から探索することで疾患変異の偽陰性を少なくできること、そして実際に複数の家系で疾患原因変異を同定することにも成功した。2)複数のエクソームプラットフォームを解析し、mtDNAが大部分のプラットフォームで非選択的mtDNAの混入により全領域シーケンスされていること、しかしPCRベースの手法の場合にはmtDNAがほぼ全く読まれていないことが明らかになった。mtDNAのheteroplasmyの率が次世代シーケンスのアレル頻度と良く相関していることをデジタルPCRでの検証と合わせて確認することができ、エクソーム解析でmtDNA解析が可能であることを実証した。3)迅速な機能解析スクリーニング法は、マウスや細胞を用いる実験は未だ大きな時間がかかるため、各種予測ソフトのモデルと既知アノテーション情報を統合することで、多数の候補変異からより精度高く候補変異を絞り込む手法を構築した。4)通常ではcallが難しい1万bp程度までの長いindelのcall手法を開発し論文化公表した。5)エクソーム補完リシーケンスの改良も行ったが、さらに網羅性の高い全ゲノムシーケンス(WGS)の検討を行い、エクソーム解析よりもエクソン領域のカバー率すらWGSが凌駕していること、CNV解析にもWGSが優位であること、等を明らかとした。計画書の段階で、1エクソームからのコピー数探索、2ミトコンドリアDNA(mtDNA)解析、3候補変異の迅速な機能解析スクリーニング法開発、4エクソーム補完リシーケンス法の改良、の4つを計画していた。このうち、1のコピー数探索については、Exome Depth、XHMM、CoNIFER等、何種かのコピー数多型検出プログラムを実データに適用し、一部検体にてエクソームデータから疾患原因変異の同定も行うことができた。そのCNVについてはCGH arrayにてvalidation実験を行い確かに存在することが確認された。2のmtDNA解析についても、エクソームデータから高精度にmtDNA変異を検出できるパイプラインの基本構造の構築ができ、読み深度の差こそあれmtDNAの全長の全塩基でエクソームデータからシーケンスを得ることに成功した。実際にいくつかの検体でポジティブコントロールとなる既知のmtDNA変異の同定ができることも確認でき、サンガーシーケンスでも確認実験を行った。3は機能解析候補変異の絞り込みまで行った。実際の機能解析は来年度に実施予定である。4は最新データベース情報(ヒトリファレンスゲノム最新build38情報およびそのbuildに基づく最新タンパク質コード遺伝子情報)を収集し、その遺伝子情報に基づくエクソーム補完用のプローブ設計を行った。過去の3世代にわたるエクソームキャプチャープローブ(SureSelectのバージョンV4、V5、V6)の全てに対応させ、最大で9899%程度のタンパク質コード領域をカバーできると推測される。プローブの合成まで完了済で、次年度に実際のシーケンス実験試験予定となっている。一部は計画予定以上の早さで進んでいるが、概ね計画に沿って順調に推移しているため。1に関しては昨年度までに研究を終了し、実際に幾つかの検体でコピー数異常の検出に成功しその論文も出版済である。2に関しても昨年度までに解析手法を確立させた。さらに全ゲノム解析にも拡張し、エクソームよりもさらにmtDNAのシーケンス読み深度を深く正確に検出できることを確認した。3は昨年度までに候補変異の絞り込みまで幾つか行っており、今年度は実際の機能解析を進めて幾つか論文化も行った。4は最新データベース遺伝子情報に基づき追加リシーケンス用プローブを設計し完成させたが、今年度は全ゲノム解析にまで手法を拡張させることによって、その解析データを解析し、エクソーム解析では読み逃しの起こりやすい領域についても全ゲノム解析の方がより広範囲にカバーできていることが確認された。実際のタンパク質コード領域のカバー率はエクソーム解析単独が95%程度補完リシーケンス法との統合時が98%程度、全ゲノム解析時は99%以上という結果が得られている。全ゲノムシーケンスのコストは年々低下しているため、今後は変異解析手法の第一選択として全ゲノム解析も十分考慮に入れられると考えられた。さらに上記の予定以上に研究を拡張し、エクソーム解析の通常手法では検出が難しい100bp以上の長さの挿入・欠失(indel)を検出する手法も開発し、論文化も行った。現在、実際の疾患検体について解析を進めている段階である。当初の研究計画を更に拡張させ、疾患原因変異の同定を目指し、エクソーム解析の通常手法では検出が難しい100bp以上の長さの挿入・欠失(indel)を検出する手法も開発し、論文化も行ったため。現在はこれまでの解析手法で疾患原因変異が同定できなかった検体の再解析を行っている段階である。さらに、エクソーム解析のみならず全ゲノム解析についても検証し、全ゲノム解析が疾患原因変異探索に有用かどうかの検証も進めているため。

本研究の目的は次世代シーケンサーを用いたエクソーム解析の疾患原因変異探索において、約70%と言われる未同定変異を探索する手法を解析し、実際に原因変異を同定するものである。計画書の段階で複数手法の実施予定を挙げたが、それらを進めると共に、以下のように予定以上の実績を残した。1)コピー数変異(CNV)探索について、多数の方法を試行し各手法ごとに異なるCNVがcallされること、故にcallが複数手法で一致する積集合ではなくいずれかの手法でcallされた和集合のCNVの中から探索することで疾患変異の偽陰性を少なくできること、そして実際に複数の家系で疾患原因変異を同定することにも成功した。2)複数のエクソームプラットフォームを解析し、mtDNAが大部分のプラットフォームで非選択的mtDNAの混入により全領域シーケンスされていること、しかしPCRベースの手法の場合にはmtDNAがほぼ全く読まれていないことが明らかになった。mtDNAのheteroplasmyの率が次世代シーケンスのアレル頻度と良く相関していることをデジタルPCRでの検証と合わせて確認することができ、エクソーム解析でmtDNA解析が可能であることを実証した。3)迅速な機能解析スクリーニング法は、マウスや細胞を用いる実験は未だ大きな時間がかかるため、各種予測ソフトのモデルと既知アノテーション情報を統合することで、多数の候補変異からより精度高く候補変異を絞り込む手法を構築した。4)通常ではcallが難しい1万bp程度までの長いindelのcall手法を開発し論文化公表した。5)エクソーム補完リシーケンスの改良も行ったが、さらに網羅性の高い全ゲノムシーケンス(WGS)の検討を行い、エクソーム解析よりもエクソン領域のカバー率すらWGSが凌駕していること、CNV解析にもWGSが優位であること、等を明らかとした。上記4つの研究項目、1エクソームからのコピー数探索、2mtDNA解析、3候補変異の迅速な機能解析スクリーニング法開発、4エクソーム補完リシーケンス法の改良、について以下の予定となっている。1のコピー数探索については、今後さらに最適アルゴリズムの検討を続ける。2のmtDNA解析については、構築したパイプラインについて今後、精度検証をすると共に、実データに順次適用し、疾患原因変異探索を行う。3は有力な疾患原因候補変異について機能解析を始める予定。4は最新データベース情報に基づいて設計したエクソーム補完プローブを用いて実際のシーケンスを実施し、改良によるexon領域の読み深度の向上の確認と疾患原因変異探索を平行して行う予定である。当初の計画の項目については、手法開発はほぼ終了したので、実際の検体データの解析を行い、既存手法では疾患原因変異が同定できなかった検体についての新規変異同定およびその機能解析を進める。さらに、追加で研究を拡張したindel解析と全ゲノム解析においても、同様に実際の神経変性疾患の患者さんの家系データを用いて原因変異探索を行っていく予定である。当初の予定より試薬代が値引きされ残予算が生じたため。
in situ PCRによるリンパ性樹状細胞内の肝炎ウイルスの同定と抗原提示能の解析

肝炎ウイルスが持続感染する機構として、宿主の免疫能低下によるウイルス排除の障害が想定されているが、その機序は不明である。我々はB型肝炎ウイルスキャリアのモデルマウスにおいて樹状細胞機能が低下していることを明らかにしてきた。本研究は、B型肝炎ウイルスの持続感染機構と感染宿主の免疫能低下の機序を解明するための一環として、リンパ球、樹状細胞にB型肝炎ウイルス(HBV)が感染しているか否かを明らかにすることを目的として、通常のPCRとともに、in situ PCR法により個々の細胞レベルでHBV-DNAの有無を検討した。ヒトB型肝炎ウイルスキャリアから得た末梢血単核球(PBMC)および末梢血からIL-4、GM-CSF添加下に8日間培養して採取した樹状細胞を対象として約1×10^5の細胞よりDNAを抽出し、HBVに特異的なPCRプライマーを用いて通常のPCRでHBV-DNAの有無を検討した。次に、HBVトランスジェニックマウス(HBV-mouse)の脾臓から得た単核球を陽性コントロールとしてin situ PCRの手技を検討した後、ヒト樹状細胞とPBMCについて検討した。in situ PCRは、細胞サンプルをスライドガラスに接着させ、in situ PCR用機器を用いてHBV-DNAを増幅した後、hybridizationを行い(PCR-in situ hybridization)、細胞形態を保持した状態でHBV-DNAの検出を試みた。通常のPCRでは、ヒトB型肝炎例の単核球、樹状細胞ともにHBV-DNAの存在を認めた。in situ PCRでは、HBV-mouseの脾臓から得た単核球で安定して検出する手技を確立し、ほぼすべての細胞核にHBV-DNAの存在を認めた。しかし、HBV-mouseの検出条件では、ヒト樹状細胞では、安定した結果が得られず、更なる検出手技の改善を行っている。in situ PCRでの研究は未完であるが、通常のPCRの成績より、ヒトB型肝炎例では樹状細胞、末梢血単核球ともにHBVがこれらの細胞に感染または細胞に接着して存在することが明らかになった。本研究は、肝炎ウイルス持続感染患者においてリンパ球、樹状細胞にB型肝炎ウイルス(HBV)が感染しているか否か、及びその感染比率をin situ PCR法で検出し臨床像との関係を明らかにすることを目的とした。平成10年度はIn situ PCR法の手技のための基礎実験を行った。陽性コントロールとしてHBV産生トランスジェニックマウス、又陰性コントロールとしてBalb-Cマウスの脾臓より分離したリンパ球を用いてIn situ PCR法でHBV-DNAの検出を試みた。種々の条件設定のための検討の結果、以下の方法が正確に陽性率を検討する上で最適であった。Lymphoright Mを用いた比重遠沈法にて分離したリンパ球を3000rpm 8分のサイトスピンでスライドグラスに張り付け、パラホルムアルデヒドで4°C20分固定、オートクレーブ処理120°C2分行った後、パーキンエルマ社のGene Amp In situ PCR Systemを用いて94°C2分、50°C1分30秒、72°C2分30秒-25サイクルのPCRを行った。PCRプライマーはHBVのX領域とC領域に設定した。その後ジゴキシゲニン標識したプローベを用いてハイブリダイゼイション行った後ペルオキシダーゼ標識抗ジゴキシゲニン抗体を使用し発色を行った。上記方法によりHBV産生トランスジェニックマウスはほぼ全てのリンパ球が陽性で、通常のBalb-Cマウスでは全て陰性であった。

平成11年度は上記方法により人慢性肝炎忠者より分離培養を行ったリンパ球、樹状細胞を用いIn situ PCR法を使ったB型肝炎ウイルスの検出を試み、臨床像との関係を明らかにする予定である。本研究は、B型肝炎ウイルスの発症、進展機構、持続感染機構の解明するための一環として、リンパ球、樹状細胞にB型肝炎ウイルス(HBV)が感染しているか否かを明らかにすることを目的とし、通常のPCRとともに、in situ PCR法により個々の細胞レベルでHBV-DNAの有無を検討した。ヒトB型肝炎ウイルスキャリアから得た末梢血単核球(PBMC)および末梢血からIL-4、GM-CSF添加下に8日間培養して採取した樹状細胞を対象として約1×10^5の細胞よりDNAを抽出し、通常のPCRでHBV-DNAの有無と検討した。次に、HBVトランスジェニックマウス(HBV-mouse)の脾臓から得た単核球を陽性コントロールとしてin situ PCRの手技を検討した後、ヒト樹状細胞とPBMCについて検討した。in situ PCRは、細胞サンプルをスライドガラスに接着させ、in situ PCR用機器を用いてHBV-DNAを増幅した後、hybridizationを行い、細胞形態を保持した状態でHBV-DNAの検出を試みた。通常のPCRでは、ヒトB型肝炎例の単核球、樹状細胞ともHBV-DNAの存在を認めた。in situ PCRでは、HBV-mouseの脾臓から得た単核球で安定して検出する手技を確立しえた。しかし、HBV-mouseの検出条件では、ヒト樹状細胞では、安定した結果が得られず、更なる検出手技の改善を行っている。in situ PCRでの研究は未完であるが、通常のPCRの成績より、ヒトB型肝炎例では樹状細胞内または樹状細胞に接着してHBVが存在することが明らかになり、HBVが樹状細胞機能に影響を与えている可能性が推察された。
EGFRvIII特異的CAR導入免疫細胞を用いた膠芽腫治療法の開発

末梢血由来T細胞への抗EGFRvIII-CARの導入効率は良好であった。作製した抗EGFRvIII-CAR導入T細胞はEGFRvIIIを発現していないU87MGに対して細胞増殖抑制効果をほとんど示さなかったが、EGFRvIIIを発現するU87MGに対しては強力な細胞増殖抑制効果を示した。一方で、末梢血由来NK細胞への抗EGFRvIII-CARの導入効率は低かった。末梢血由来T細胞への抗EGFRvIII-CARの導入効率は良かった。このため、NK cell line NK92やKHYG-1を用いてこれらの細胞に抗EGFRvIII-CARの導入を行い、2回magnetic beads sortingを用いて発現効率の高いNK細胞群を獲得した。今後、NK細胞株でまず抗EGFRvIII-CARの導入を行い、効率の良い導入方法を検討する。次いでその改良された導入方法を用いて、末梢血由来NK細胞に抗EGFRvIII-CARの導入を行う。もし、それでも導入効率が低い場合は、抗EGFRvIII-CAR導入T細胞およびNK細胞株を用いて、抗腫瘍効果の判定を行っていく。具体的には抗EGFRvIII-CAR導入T細胞や抗EGFRvIII-CAR導入NK細胞を用いて、EGFRvIII発現膠芽腫細胞に対する増殖抑制効果、細胞傷害活性、サイトカイン分泌能を評価する。また、EGFRvIII発現膠芽腫細胞移植NOGマウスに対する抗がん効果を評価する。これらの知見をもとに膠芽腫に対するEGFRvIII特異的CAR発現NK細胞ならびにγδ型T細胞の抗がん効果を明らかにする。今後、抗EGFRvIII特異的CAR-T細胞や、抗EGFRvIII特異的CAR-NK細胞のサイトカイン分泌能を評価する。これらの知見をもとに膠芽腫に対するEGFRvIII特異的CAR発現NK細胞ならびにγδT細胞の抗がん効果を明らかにする。平成28年度の研究進行状況から1366円の次年度使用額が残った。平成29年度の研究進行状況から10516円の次年度使用額が残った。細胞培養に必要なピペット等の実験消耗品使用のための購入費として使用させていただく予定です。
ビタミンCおよび凍結保存処理を併用した新たなウイルスフリー化技術の開発

国内のアスパラガスにはウイルスが重複感染しており、収量低下との因果関係が示唆されている。安定したアスパラガス生産のためにウイルスフリー株の導入が必要であると考え、抗ウイルス効果があると期待されているアスコルビン酸および凍結保存処理を利用して、ウイルスが感染しているアスパラガス実生からのウイルス除去について検討した。どちらの処理においても、ウイルス除去効果が認められたが、除去率は感染ウイルスの種類や用いたアスパラガスの系統によって異なっていた。また、凍結処理によってウイルスが除去された実生では、生育促進効果が認められた。食用となるアスパラガス若茎(市販品および4品種)から取り出した茎頂を培養する方法により多数のin vitro培養体を作製し、Asparagus virus1および2(以下、AV1およびAV2と表記)に感染した培養系統をPCR法により選抜した。選抜したウイルス感染培養体は、継代培養により維持増殖し、ウイルスフリー化のための実験材料とした。まず、ウイルス除去に及ぼす凍結保存処理の影響について検討した結果、AV1では市販系統以外、AV2ではMM8(超雄)系統以外のすべての供試系統で、ウイルスフリー個体を獲得することに成功した。この場合、凍結処理区における再生個体の生育は、無凍結区に比べ何れも旺盛であった。また、凍結に用いる組織片の長さを3段階(2、5および8mm)に変えて比較したところ、ウイルス除去率に差は認められなかったが、8mm区で再生個体の生育が旺盛となった。次に、ウイルス除去に及ぼすアスコルビン酸誘導体処理の影響について検討したところ、凍結処理と同様にAV1では市販系統以外、AV2ではMM8(超雄)系統以外のすべての供試系統で、ウイルスフリー個体を獲得することに成功した。この場合、培地に添加するアスコルビン酸誘導体の種類(AsGおよびAsANa)並びに濃度(200、500、1000および1500ppm)を変化させて検討したが、ウイルスフリー化の効率に一定の傾向は認められなかった。以上の結果、凍結処理およびアスコルビン酸処理によるgene silencing誘導を用いたアスパラガスのウイルスフリー化は可能であるが、一部の系統には適さないことが明らかになった。前年度に引き続き、Asparagus Virus 1および2(AV1およびAV2)の複合感染が確認されている4品種のアスパラガスin vitro培養体を材料として、アスコルビン酸誘導体処理(RNA silencingの誘起)および凍結保存処理が、培養体のウイルスフリー化に及ぼす影響を調査した。なお、複合感染培養体は、随時継代培養を繰り返すことにより増殖・維持を図っている。アスコルビン酸誘導体処理について、培養体の生存率は、アスコルビン酸-2-グルコシド(AsG)処理区がアスコルビン酸硫酸エステル(AsSNa)処理区に比べて、各濃度で高かった。培養体の成育は、両処理区とも対照区に比べて劣っており、特にシュート伸長の阻害が顕著に認められた。再生したシュートのウイルス感染状況をRT-PCRで調査したところ、全品種(培養系統)について、AV1の除去が確認された。一方、AV2については、Onestep-PCRでは検出されず、より精度の高いNested-PCRでウイルスの存在が確認されたことから、アスコルビン酸誘導体処理により培養体中でAV2ウイルス密度は減少したが、完全除去には至らなかったものと考えられる。凍結保存処理後の組織を、アスコルビン酸誘導体添加培地で培養した結果、再生個体は得られなかった。凍結保存処理した組織・細胞からの植物体再生に、アスコルビン酸誘導体が悪影響を及ぼしたものと考えられる。凍結保存処理とアスコルビン酸誘導体処理の併用を図るには、アスコルビン酸誘導体を低濃度で使用するか、通常の培地で個体再生を促した後、改めてアスコルビン酸誘導体添加培地に移植するなどの方策を取る必要があると考えられる。園芸学研究計画で、平成25年度は凍結処理およびアスコルビン酸誘導体処理を各々単独で行い、各処理がアスパラガスのウイルスフリー化に及ぼす影響を明らかにすることを目的としていた。研究の結果、両処理ともウイルス除去に有効であるが、単独では除去できない材料のあることが判明した。従って、当初の計画どおりに研究は進行している。平成25年度の研究結果に基づき、培養組織の生存とウイルスフリー化に最適なアスコルビン酸および凍結保存処理の併用条件を探索する。また、凍結処理後の再生植物体で生育が通常の継代培養を行った場合と比べ、生育が旺盛になることを再確認できたので、ウイルスフリー培養体の最適な育苗条件を検討する。特に、発根した培養体を寒天培地から移植するタイミングや移植先の培地の種類(土壌または培養資材等)について検討する。平成26年4月に開催予定の国際学会(AnalytiX 2014、中国大連市)で研究成果の一部を発表予定のため、参加費相当額を次年度に繰り越した。平成26年4月に開催予定の国際学会(AnalytiX 2014、中国大連市)の参加費用に充てる。
住宅の床下環境とシロアリの食害生態に関する基礎的研究

本研究は、温度、湿度、風量などの床下環境条件を変化させてシロアリを飼育し、木材摂食活性および蟻道構築活性の比較を行ったものであるが、温度及び風量については、現在も継続して検討中であり、これまでのところ湿度および木材の含水率とシロアリの摂食活動との関係について、下記のような興味深い結果が得られている。(1)体表が常時直接大気に触れている場合、相対湿度60%はイエシロアリにとって過酷な条件であるが、70%以上であれば摂食活動への影響はない。(2)十数%の含水率の木材であっても、水分の供給源さえあればイエシロアリは十分摂食することができる。(3)低相対湿度条件下であっても、土壌の存在によって摂食活動は促進される。(4)蟻道の構築活動、特に空中蟻道の形成には高相対湿度条件が必要である。(5)アコースティック・エミッション(AE)モニタリングによって、木材内部での摂食活動と湿度条件との関係を検討したところ、70%近辺が最適な相対湿度である。(6)室内コロニーの方が野外コロニーよりも湿度変化に対してより敏感である。本研究の結果から、イエシロアリの食害活動にとって最適な湿度環境が初めて明らかになった。現在、温度、風量などその他の要因とシロアリの食害活性との関係について引き続き検討を行っており、これらの結果を総合的に考察することによって、近い将来シロアリ防除における床下環境基準の策定が可能になると考えられる。研究初年度の本年は、まず住宅の床下環境に関する基礎データの収集、特に湿度環境について調査を行った。その結果、通常の住宅では外気の相対湿度が年間を通じて4575%であるのに対して、床下の相対湿度は6595%と20%ほど高いことがわかった。この調査結果から、今年度はまず温度を28°Cに固定し、相対湿度60.0、72.5および85.0%の3条件を設定して、購入した恒温恒湿室を用いて下記の2つの実験を行った。1.木材摂食試験:室内飼育中のイエシロアリを用い、上述の条件で3週間アカマツ辺材木片を強制的に摂食させ、その質量減少量から木材摂食能力を推定した。2.蟻道構築試験:同じくイエシロアリを用い、上述の条件で土壌および餌木を入れた容器内で3週間飼育し、蟻道の構築速度を算出した。試験の結果、相対湿度60%の場合、木材摂食試験に供したシロアリのほとんどが死亡し、また木材試験片の質量減少量も他の2条件と比較して4分の1以下となった。さらに蟻道構築速度も、相対湿度85.0%の場合と比較して約3分の1という低い値を示した。以上のことより、相対湿度60.0%という条件が、イエシロアリの食害活動に関して非常に過酷な条件であることが明らかとなった。現在、食害活動を非破壊的に探知することのできるAE(アコースティック・エミッション)装置を用い、連続的な湿度変化と食害活動との関係について検討を進めている。前年度に行った直接的な観察から、イエシロアリの食害活動における最適な相対湿度範囲の存在が示唆されたことから、本年度はより実際の状況に即した摂食活動の追跡方法としてAE(アコースティック・エミッション)モニタリングを用い、湿度環境と木材中でのシロアリの摂食活動との関係を検討することを試みた。実験には、イエシロアリ室内および野外コロニーがら得た職蟻および兵蟻を用い、(1)固定湿度条件下(55,65,75,85%RH)、あるいは(2)連続的湿度変化条件下(2時間毎に55-65-75-85-75-65-55%と相対湿度を変化させる)でアカマツあるいはセンゴン試験体内部で食害を行わせながら、AEモニタリングを行った。湿度固定条件下および連続的湿度変化条件下での結果をまとめてみると、昨年度と同様、イエシロアリにとってその摂食活動に最適な相対湿度条件というものが明らかに存在していた。ここでの結果からは65.0から75.0%の間に最適条件があると考えられ、また、室内コロニーの方が野外コロニーよりも湿度変化に対してより敏感である、という結果が得られた。

これには安定した温・湿度条件における室内コロニーの長期に亘る飼育というものが影響したものであると考えられる。本研究の結果から、イエシロアリの食害活動にとって最適な湿度環境が初めて明らかになった。現在、温度、風量などその他の要因とシロアリの食害活性との関係について引き続き検討を行っており、これらの結果を総合的に考察することによって、近い将来シロアリ防除における床下環境基準の策定が可能になると考えられる。
細胞性粘菌ミトコンドリア遺伝子の発生・分化への影響

1.細胞性粘菌Dictyostelium discoideumのミトコンドリア(mt)DNAは約54kbであるが、その約10kbにわたる配列を決めた。他の生物の遺伝子との比較やtRNAの共通配列などに注目して遺伝子の同定を行なったところ、ATPase subunit9,NADH dehydrogenase subunits1,3,6(ndh)cytochromeoxidase b(cob)機能不明のORF209,そのに、NADH dehydrogenase subunitの1つである49kdタンパク質の一部、その他small rRNAとlarge rRNAの一部、またArg,Asn,Cys,Gln,Lys,Met,fーMet,Pro,Trpに対応する9種のtRNAが存在していた。全てのtRNAがDル-プとTル-プを有し、クロ-バ-葉構造を形成出来た。ndhlとcobのアミノ酸配列を他の生物のそれと比較したところ、細胞性粘菌のmtでは普遍暗号を使用しているものと思われた。また、large rRNA遺伝子の中にはgroupー1ーintronが存在した。ORF209に関して、ホモロジ-検索を行なったところ、タバコやゼニゴケのクロロプラストやラン藻の核遺伝子に相同な遺伝子があることが分かった。また、parameciumのmtDNA中にも相同な遺伝子は存在したが、ウニ以上の高等動物mtDNAには存在しなかった。このことから、この遺伝子は生物進化の過程でmtから核に移行した遺伝子の一つであり、クロロプラストで呼吸に関与しているものと考えられる。2.細胞性粘菌Polysphondylium pallidumの有性生殖過程におけるmtDNAの伝達様式をRFLPを用いて調べたところ、(1)両交配型(mat1,mat2)の細胞当りのmtの数や、mtDNAの長さ、それにメチル化の程度などに差がなかったので、細胞レベルでmtDNAの選択はないと考えられ、(2)mtDNAは全てuniparentalに遺伝されたが、同じ系統株間の交配の場合、mat2細胞のある遺伝子がmat1細胞のある遺伝子よりも優性であり、異なる系統株間の交配ではその核遺伝子が相互優性であると考えられた。研究実施計画の2)と3)に関して、次のような成果を得た。細胞性粘菌Dictyostelium discoideumの細胞から、ミトコンドリアを精製し、ついでCsCl超遠心法によってミトコンドリアDNAを精製した。ついで、3.6KbのPvuI断片をpBR322にクローン化したのち、3.6Kb断片を著量調製し、M13ジデオキシ法を用いてDNAの配列をほぼ全て決定した。その結果、この断片の中には、ミトコンドリアATPase subunit 9の他に、少なくともNADH-dehydrogenase(EC1.6.5.3)のchain 1とchain 6の遺伝子が存在することがわかった。まだ詳細に解析を行っていないが、ATPase subunit 9のアミノ酸配列と他の生物とのそれを比較して次のようなことが明らかになった。1.タンパク質の配列を決めていないので正確なことは不明であるが、遺伝暗号は酵母のミトコンドリア用の暗号を用いると、他の生物とのホモロジーが高くなり脊椎動物のミトコンドリア用の暗号を用いると途中で終止コドンが入り、正確な読み方ができなくなった。2.アミノ酸レベルでのホモロジーの比較では、アカパンカビや酵母と相同性が高く、次いで牛、次に植物のクロロプラストの順であった。