hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
環境協定と貿易協定の両方に係わる貿易紛争の解決のためのデータベース研究開発

初年度(平成9年度)は、研究代表者である岩田(青学大)および高瀬(東海大)の両名で、研究のベースとなる資料・情報を収集し、研究の基本となる枠組み概念を構築することに努めた。二年目は、前年度に集積した資料その他のデータを整理するために、鈴木(高千穂大)の指導下でデータ・ベースの作成を進め、同時に、武井(青学大)のアドバイスを受けて、岩田が関連の学会(「環境・経済政策学会」、「日本貿易学会」、国際経済学会、他)にて発表した。(以下)。(1)「WTOの環境政策」、環境経済政策学会(全国大会)1998年9月27日(2)「WTOの環境関連国際標準」、日本貿易学会(全国大会)1998年6月14日(3)「WTOにおける環境関連貿易紛争の動向と課題」、国際経済学会(関東部会)1997年9月20日(4)「環境をめぐるWTOルールの検討」、日本貿易学会(関東部会)1997年7月26日(5)「WTOと食品衛生基準」、フード・システム学会(関東部会)1997年7月5日三年目(平成11年度)は、これまでのWTOの環境関連のルールを検討・分析し、WTOの環境に対する取り組みの方向性および、その問題点について調査・研究を進めた。その結果、新たに明らかになった点は、以下のようである。第一に、環境関連の主要な国際協定・国際機関は、WTOとの関係を深めることにより、環境ルールを強化する傾向が見られること、第二に、WTOルールの管轄範囲は、GATT時代の工業製品および一次産品のみならず、生産工程・生産方法にまでも及びつつあり、この結果、国々の環境関連の国内経済活動までもWTOルールに縛られるケースがあること。第三に、従来まで、GATT・WTOは「生産者の利益」をめぐる交渉の場であったが、今後は、環境保全・保護に対する世界的な機運の中で、「消費者の利益」をめぐる交渉の場にもなりつつあること。以上の三点を引き継ぎ、今後は、次期WTO交渉で主テーマとなる「農業分野」と「サービス分野」の二分野における環境関連貿易紛争の関連につき、客観的な見地から調査、分析を行い、望ましいWTOの環境指針を考察する予定である。なお、これまでの研究成果を整理した上で、近々に"WTOの環境政策"(仮題)として、発刊の準備を進めている。本年度の研究実績は、高瀬と岩田が実施した下記の事柄に基づく。1、環境関連の国際機関の分野別資料収集2、貿易関連の国際機関の分野別資料収集3、環境関連の国際協定・条約の分野別資料収集今年度は資料収集による現状の整理・分析に力点をおいた。そのことによって、幾つかの事実・課題が判明した。第一に、WTOでは現在のところウルグアイラウンドの終結後、すでに数年経ていることもあって、環境関連の貿易紛争に関する内部での検討は、別に設けられた委員会(環境と貿易に関する委員会:通称「CTE」)に委ねられた、そこで継続的な検討が行われていること、第二に、環境関連の多数国間紛争の解決には、国連の関連組織(CODEXなど)の意見がWTOで参考にされるが、WTOとそれら組織の間で、若干のトラブルが発生していること、第三に、環境関連の貿易問題を事前に防止するために、国際的な任意の規格・基準が次第に普及しつつあること、第四に、環境関連の貿易紛争はすでにWTO下で幾つか発生しているが、その紛争処理の仕方が未だ完全ではないこと、などである。以上の事柄を踏まえて、岩田が、これらを研究実績として整理し、下記のとおり発表した。1、関連学会(国際経済学会、日本貿易学会、フードシステム学会)での発表2、学術雑誌(青山学院大学)への掲載。裏面へ記載済み。今後は、これらをベースにさらに研究を発展させる予定である。(以下)。

第一に、環境関連の主要な国際協定・国際機関は、WTOとの関係を深めることにより、環境ルールを強化する傾向が見られること、第二に、WTOルールの管轄範囲は、GATT時代の工業製品および一次産品のみならず、生産工程・生産方法にまでも及びつつあり、この結果、国々の環境関連の国内経済活動までもWTOルールに縛られるケースがあること。第三に、従来まで、GATT・WTOは「生産者の利益」をめぐる交渉の場であったが、今後は、環境保全・保護に対する世界的な機運の中で、「消費者の利益」をめぐる交渉の場にもなりつつあること。以上の三点を引き継ぎ、今後は、次期WTO交渉で主テーマとなる「農業分野」と「サービス分野」の二分野における環境関連貿易紛争の関連につき、客観的な見地から調査、分析を行い、望ましいWTOの環境指針を考察する予定である。なお、これまでの研究成果を整理した上で、近々に"WTOの環境政策"(仮題)として、発刊の準備を進めている。
電気化学的手法を用いた高圧下における物質合成

本研究の目的は遷移金属酸化物に高圧下で電気化学的手法を用いてキャリアードーピングを行い物質合成の一つの手法を開発する事にある。圧力の利点は純粋に物質の体積を変化させることができることであるが、特に複合酸化物の場合は原子間距離の圧縮される割合は結晶内の場所場所によって異なることが多く一様に圧縮されるのではない。このことは結晶内の電荷分布が圧力によって変化することを示しており、電気化学的な手法を用いる場合、圧力に対しその効果が異なることが期待される。このような発想から本研究では高圧下で遷移金属酸化物に対し酸素ドープを試み試料の電子・磁気状態への影響を調べた。交付された科研費では2GPaまで発生できる圧力発生システムを構築し、測定系の整備も行った。また酸化実験をするための試料を合成する電気炉の整備も行った。試験物質として最初に絶縁体のLa_2CuO_4の合成を行い、一気圧下でNaOH水溶液中での電解酸化とKMnO_3水溶液に直接浸す方法を行って金属化を試みた。生成物の帯磁率測定から約20Kで超伝導を示したことから、酸素がドープされたと判断された。今年度の大きな成果は、高圧セル中でKMnO_3水溶液を圧力媒体としてLa_2CuO_4粉末を加圧し60°Cで1週間反応させたところ超伝導を示したことから、高圧セル中でも酸素ドープがされていることがわかったことである。現在、反応させる圧力を変化させて超伝導転移温度、超伝導の体積分率などに及ぼす影響を調べる予定である。物性物理学的見地からのこのようなアプローチは先例がなく独創的であり物質開発において開発領域が大きく広がることは間違いない。La_2CuO_4以外の物質でも実験を検討中である。本研究の目的は遷移金属酸化物に高圧下で電気化学的手法によってキャリアード-ピングをすることにある。ところが溶液中での電解酸化はMnO_2など電気化学の分野では確立された手法であるが高圧下での電解酸化はほとんど開拓されていない。本研究では初年度には比較的試料体積の大きくとれるピストン-シリンダー型高圧発生装置を本研究費で製作し次年度内には酸化物超伝導体の電解酸化の圧力効果の実験を行う計画である。本年度製作した高圧発生装置は現在加圧テストを行っており電極はリ-ド線をスタイキャスト(エポキシ系接着剤)でシールすることでとりだす。実際最近発見された新しい超伝導物質のスピンラダー物質などいくつかの試料を用いて高圧下の電気抵抗測定を行っている。電解酸化の設備は本研究費で直流電流源を購入し立ち上げた。一方試験物質としてLa_2CuO_4の合成を行い、一気圧下でNaOH溶液中で電気分解を行った。La_2CuO_4は酸素が導入されることによって超伝導を発現することが報告されているので超伝導転移温度、超伝導の体積分率などを電気抵抗、帯磁率測定から詳しく解析する予定である。
高血糖における心保護戦略の開発：PDE3阻害薬の効果

ブタを用いて左前下行枝の12分間閉塞と再灌流による気絶心筋モデルを作製し、気絶心筋における心筋収縮能の回復に与える急性高血糖の影響とホスホジエステラーゼ3阻害薬の心筋保護効果を、オルプリノンの虚血前投与および再灌流時投与に分けて検討した。オルプリノンの虚血前投与および再灌流時投与によりブタの気絶心筋における心筋収縮能の回復が有意に促進された。この心保護作用にはPI3K/AktおよびPKAの活性化が関与していることが示唆された。糖尿病患者あるいは高血糖状態における虚血耐性の減弱が虚血性心疾患患者の周術期管理における大きな問題となっている。安全な周術期循環管理のためには、高血糖状態においても虚血耐性の増強効果が発揮される抗虚血効果の高い薬剤の開発が期待される。ホスホジエステラーゼ(PDE)3阻害薬は周術期に用いられる強心薬であり、その心筋保護効果は高血糖状態においても十分に発揮される可能性が高い。PDE3阻害薬のプレコンディショニング効果が高血糖状態の気絶心筋の回復に与える影響とその細胞内機序を用いて検討した。ブタを用いて左前下行枝の15分間閉塞および90分間の再灌流による気絶心筋を作製し、PDE3阻害薬が高血糖状態の気絶心筋の回復に与える影響とその細胞内機序を検討した。左室収縮機能の指標として心筋に埋め込んだ超音波クリスタルによる局所心筋短縮率を用いた。血糖値400mg/dLの高血糖状態を作成し、虚血前にPDE3阻害薬であるオルプリノンを投与した。PI3K/Akt阻害薬およびPKA阻害薬の前投与の有無により、高血糖状態でのPDE3阻害薬の心筋保護効果におけるPI3K/AktおよびPKAの関与を検討した。高血糖状態において、オルプリノンの虚血前投与により、気絶心筋の回復が有意に促進された。PI3K/Akt阻害薬およびPKA阻害薬で前処置した群で、オルプリノンの心保護作用におけるPI3K/AktおよびPKAの関与を示唆する傾向が得られたが、例数が十分でなく、有意差を見いだすには至らなかった。27年度も引き続き検討を行い、オルプリノンのプレコンディショニング効果とその機序におけるPI3K/AktおよびPKAの関与を検討したい。冠動脈疾患患者は糖尿病を合併する頻度が高いが、糖尿病患者あるいは高血糖状態における虚血耐性の減弱が虚血性心疾患患者の周術期管理における大きな問題となっている。安全な周術期循環管理のためには、心筋酸素需給バランスを安全域に維持する全身管理に加えて、高血糖状態においても虚血耐性の増強効果が発揮される抗虚血効果の高い薬剤の開発が期待される。心筋虚血の前後でPDE3阻害薬を投与し、そのプレコンディショニングおよびポストコンディショニング効果が高血糖状態の気絶心筋の回復に与える影響とその細胞内機序を、ブタを用いて明らかにする。左室収縮機能の指標として心筋に埋め込んだ超音波クリスタルを用いた局所心筋短縮率を用いる。血糖値400mg/dLの高血糖状態を作成し、虚血前および再灌流時にPDE3阻害薬であるオルプリノンを投与する。オルプリノンの虚血前投与により、気絶心筋の回復が有意に促進された。この効果はPI3K/Akt阻害薬およびPKA阻害薬の前投与により消失し、オルプリノンの心保護効果にはPI3K/AktおよびPKAが関与することが示唆された。平成28年度は高血糖ブタにおけるオルプリノンの再灌流時投与による心保護効果とPI3K/AktおよびPKAの関与について検討したい。オルプリノンの虚血前投与による心保護効果とPI3K/AktおよびPKAの関与は示されたものの、オルプリノンの再灌流時投与による心保護効果の検討が十分ではない。

ブタを用いて左前下行枝の12分間閉塞と再灌流による気絶心筋モデルを作製し、気絶心筋の回復に与える急性高血糖の影響とPDE3阻害薬の心筋保護効果を、PDE3阻害薬の虚血前投与および再灌流時投与に分けて検討した。気絶心筋の回復は心筋に埋め込んだ超音波クリスタルを用いた局所心筋短縮率で評価した。心筋保護作用の機序として、ホスファチジルイノシトール3キナーゼ/Akt(PI3K/Akt)およびプロテインキナーゼA(PKA)の関与の有無について検討した。オルプリノンの虚血前投与および再灌流時投与は、いずれも、正常血糖ブタおよび高血糖ブタにおける気絶心筋の回復を促進した。この心保護効果はPI3K/Akt阻害薬およびPKA阻害薬の前投与により消失した。オルプリノンのコンディショニングは高血糖状態においても心保護効果を発揮し、その機序にはPI3K/AktおよびPKAの活性化が関与することが示唆された。ブタを用いて左前下行枝の12分間閉塞と再灌流による気絶心筋モデルを作製し、気絶心筋における心筋収縮能の回復に与える急性高血糖の影響とホスホジエステラーゼ3阻害薬の心筋保護効果を、オルプリノンの虚血前投与および再灌流時投与に分けて検討した。オルプリノンの虚血前投与および再灌流時投与によりブタの気絶心筋における心筋収縮能の回復が有意に促進された。この心保護作用にはPI3K/AktおよびPKAの活性化が関与していることが示唆された。高血糖状態におけるオルプリノンの気絶心筋回復効果は明らかになったものの、その機序におけるPI3K/AktおよびPKAの関与が十分に検討できなかった。PI3K/AktおよびPKAの関与を検討する実験が予定よりも半分程度の例数でしか検討できておらず、27年度もPI3K/AktおよびPKAの関与を検討する実験を継続したい。傾向はあるので、例数を増やすことで有意差が見いだせると考えている。オルプリノンの虚血前投与による心保護効果についての研究成果をまとめ、国内外の学会で発表する。同時に、オルプリノンの再灌流時投与による心保護効果とPI3K/AktおよびPKAの関与についても検討を継続して国内外の学会で発表し、最終的には両者の研究成果をまとめて論文作成を作成したい。麻酔科学27年度は26年度の検討を継続し、その後に27年度に行う予定であった、オルプリノンのポストコンディショニング作用とその機序に関する検討を行いたい。プレコンディショニング作用の結果が纏まったところで、その成果を国内外の学会で発表したい。平成27年度からの繰越金があったこと、動物の購入数が予定よりもすくなかったこと、学会発表に関わる経費を計上しなかったこと等により予定額との間に差が生じた。実験の例数がやや少なかったため、動物の購入費も少なく、予定と差額が生じた。当初の計画を達成するために必要な動物や薬品等の購入を前提として、海外で開催される国際学会に関わる旅費や論文作成に必要な英文校正費に使用したい。26年度に不足した例数分の動物を購入する費用として、27年度の予算に加えて使いたい。
翻訳終結の調節機構

タンパク質合成(翻訳)の終結機構の研究は、2つの点で重要である。第1に、遺伝暗号の解読機構は1970年前にその基本機構が完全に解明されたと理解されているが、その認識は誤りである。翻訳終結については、(1)終止コドンの認識、(2)23S rRNAのリボザイムによるペプチド鎖の切断、(3)リボソーム複合体の最終解離、等の基本的な問題が分子レベルで未解決である。第2に、終止コドンは翻訳の停止信号とならない事例が生物種を問わず数多く発見されている。フレームシフトやアミノ酸の読み替え等、暗号解読の普遍則から外れた翻訳現象が、リコーディング機構と命名されて、翻訳研究のフロンティアとなっている。終止コドンで翻訳を、「止めるべきが、止めざるべきが」、それが問題となるようになってきたのである。さらに、翻訳終結の効率を調節することによる遺伝子発現の制御システムの存在も明かになってきた。このような理由がら、「終止コドンの認識→プペチド鎖切断→リポソーム複合体の解離」に至る翻訳終結の基本的な分子機構に関する研究を、大腸菌および酵母のモデル系で優先的に実施する必要性から、本研究を行った。終止コドン認識に関する研究のブレークスルーは、翻訳調節に働く一群のタンパク質が、核酸であるtRNAの構造とそっくり、という「分子擬態」の発見である。我々は、終結に働く解離因子がアンチコドンをも擬態し終止コドンを認識すると考え、分子擬態(molecular mimicry)仮説を提出した。タンパク質とRNAの分子擬態は、生物学にとって新しい概念であり、生命がRNAワールドがらタンパク質(DNA)ワールドへと進化してきたことを考えれば、生命の根幹に係わる基本的な原理のひとつと考えられる。この研究は、基礎生物学に役立つのみならず、バイオテクノロジーに新たな技術を生み出すチャレンジともいえる。現在、分子擬態の基盤原理の解明とともに、タンパク質による遺伝暗号の解読という新しい領域を確立する方向へ研究を進めている。終止コドンの認識からリボゾーム複合体の解離に至る翻訳終結の仕組みは、分子生物学の基本的な問題であるにもかかわらず、その分子機構が今日まで明かにされていない。本研究では、翻訳終結の基本的な分子機構を解明する目的で、ペプチド鎖解離因子の機能・構造、リボソームとの相互作用、転写後調節における役割等を解析した。その結果、ペプチド鎖解離因子は、原核生物から真核生物に至るまで普遍的なモチーフを保存し、その蛋白質ドメイン部分がtRNA分子の構造と酷似することを、生化学的および分子遺伝学的に明らかにした。特に、バクテリアでは2種類の解離因子(RF1,RF2)が異なる終止コドンを識別できるが、この選択的な終止コドン認識特性が変化する突然変異を分離することに成功した。これは、tRNAのアンチコドンに対応する蛋白質のアンチコドン部分が存在して終止コドンを直接認識することを裏付けるものである。この「tRNAもどき」の解離因子という考えは。何故解離因子が終止コドンを識別できるのという、分子生物学創設以来の難問を簡単明瞭に説明し、あわせて「分子擬態」(Molecular Mimicry)という新しい概念を生物学に提出するものであり、その学術的意義は極めて大きい成果といえる。今後は、構造生物学的な立場から、分子擬態研究を推進する予定である。

さらに、グアニンヌクレオチドに依存して解離反応を促進する制御因子(RF3,eRF3)が原核生物、真核生物に普遍的に存在し、解離因子のリサイクリングに係わることを明らかにした。このうち、出芽酵母から分離されたeRF3は動物細胞のプリオンと同じ特性を持つプリオン様タンパク質であるという、驚くべき事実も明らかになった。その生理的な意義は、現在のところ不明であり、今後の研究によって解明したいと考えている。終止コドンの解読は、分子生物学のん基本的な問題であるにもかかわらず、その分子機構が今日まで明かにされていない。我々は、終止コドンの認識を触媒するペプチド鎖解離因子が原核生物から真核生物に至るまで普遍的なモチーフを保存し、その蛋白質ドメイン部分がtRNA分子の構造を擬態することを明らかにしつつある。この「tRNAもどき」の解離因子という考えは、蛋白質による終止コドン識別の仕組みを簡単明瞭に説明しうる新しい概念である。翻訳終結の分子機構の解明と分子擬態モデルを検証する目的で実施した研究成果を以下にまとめる。1.解離因子のtRNA擬態ドメインに保存されるアミノ酸をシステマチックに改変し、それら変異体の活性をin vivo及びin vitroで解析することによって、アンチコドンを擬態すると考えられるアミノ酸領域を同定した。2.原核生物RF2の1アミノ酸置換(E167K)によて、3種類の終止コドンに対して終結能を獲得した変異体を分離した。この置換は、原核系から真核系への機能特性変換であると同時に、原核系RF2に担われる終止コドン3文字目の選別機構を明らかにするものである。3.テトラヒメチは、3種類の終止コドンのうち、UGAのみが終止コドンで、UAA/UAGはグルタミンのコドンとして使われる。テトラヒメナの解離因子(Tetra-eRF1)に機能・構造を研究する目的で、遺伝子をクローニングした。塩基配列決定から、Tetra-eRF1は435アミノ酸長で分子両49.5kDaの蛋白質である、構造遺伝子内に、UAGコドンを1個、UAAコドンを9個含むことが分かった。これら全てのUAG/UAAコドンを、部位特異的突然変異法によって、グルタミンのコドンに変換し、過剰産生系を作成し、in vitroおよびin vivoでの翻訳終結活性試験を開始した。4.分裂酵母から解離因子eRF3(Sup35)遺伝子を分離し、eRF1(Sup45)上の結合部位を詳細に決定した。分裂酵母eRF3のN末端には、出芽酵母のプリオン様ドメインとは配列特性が異なる240アミノ酸長のトメインが存在した。終止コドンの解読は、分子生物学の基本的な問題であるにもかかわらず、その分子機構が今日まで明かにされていない。我々は、終止コドンの認識を触媒するベプチド鎖解離因子が原核生物から真核生物に至るまで普遍的なモチーフを保存し、その蛋白質ドメイン部分がtRNA分子の構造を擬態することを明らかにしつつある。1.解離因子のtRNA擬態ドメインに保存されるアミノ酸をシステマチックに改変し、アンチコドンとして終止コドンの選択的な識別に必要不可欠な5つのアミノ酸の組みを同定した。
歯科X線写真像のデジタル化における診断精度の評価

本年度も引き続きデジタル化した口内法X線写真像の診断精度について検討した。デジタル化装置としてはレーザースキャナ、ドラムスキャナ、TVカメラの3種を用い、画像ディスプレイとしてはX線像専のVIEW2000とIMLOGIX、およびパーソナルコンピュータ用Apple RGBディスプレイについて比較した。またデジタル化における濃度階調度と画像処理の診断精度に及ぼす影響について調べた。その結果、3種のデジタル化装置のうちではドラムスキャナが比較的高い診断精度を示したが、装置間での統計的な有意差は見られなかった。ディスプレイについては、X線像専用のものの方が、パーソナルコンピュータ用ディスプレイよりも比較的高い診断精度を示したが、これも装置間での統計的な有意差は見られなかった。注目された点はディスプレイ上で観察者に自由に像の拡大率、輝度、コントラストの調整を行わせた場合には診断精度は有意に低下したことで、人工的な画像操作で誤診が増加することを意味していると思われた。デジタル化の方法については、32、64、256の濃度階調でデジタル化した像で診断精度の統計的な差は見られなかった。画像処理についてはコントラスト強調は診断精度の向上にはつながらなかったが、辺縁強調は診断精度を向上させることがわかった。前年度の結果も合わせて考えると、デジタル画像の臨床における実用化にあたり、診断精度の面においては十分に実用可能であるといえた。また一画素100μm、32階調でデジタル化しても診断精度は有意に低下しないことが示され、このデジタル化では50μm、256階調でのデジタル化の場合に比べ情報量は32分の1になるため、画像処理を目的とせず、単に画像観察の為だけのデジタル化においては情報量をできる限り小さくするために、この程度まで画質を下げることも可能であると思われた。本年度はデジタル画像の診断能について特に歯科で主となる口内法X線写真像を対象として検討を行った。診断精度にはデシタル化装置や画像ディスプレイの性質、ならびにデジタル化手法や画像処理などが影響を及ぼすが、それらの影響を調べた。デジタル化装置としてはレ-ザ-スキャナ、ドラムスキャナ、TVカメラの3種を用い、標本化は50μmと100μmと8bitsとした。画像ディスプレイとしてはX線像専用に作られたVIEW2000とIMLOGIX、およびこれらに比べて安価なMacintoish用ディスプレイについて比較した。また、観察対象としては隣接面齲蝕の有無が確定してある抜去小臼歯の口内法写真像32画像を用いた。これらはウルトラスピ-ドフィルムを用いて咬翼法と同様にして撮影され、34隣接面には齲窩の無い齲蝕が有り、残り30面には齲蝕は無い。デジタル画像の観察は上記の3種のCRTディスプレイ上で行い、観察者は歯科放射線科医6名、予防歯科医2名、歯科保存科医2名の計10名とした。隣接面齲蝕の有無は5段階に評価してもらい、ROC解析により診断能をROC曲線で囲まれる領域の面積として求めた。レ-ザ-スキャナは濃度差の大きい辺縁部でのデジタル化精度に問題があり、幾分、診断能を悪化させた。TVカメラも読み取り濃度のダイナミックレンジが小さいため診断能はオリジナルフィルム像に比べて低くなった。ドラムスキャナではオリジナルフィルムと同程度の診断能があることが示された。またX線像専用ディスプレイでなく、比較的低価格のディスプレイでも同様の診断能が得られることも示された。以上より、デジタル画像の臨床における実用化にあたっても診断精度の面においては十分に実用化が可能であることが示唆された。次年度はさらに画像処理の診断能向上の方法について検討する予定である。

デジタル化装置としてはレーザースキャナ、ドラムスキャナ、TVカメラの3種を用い、画像ディスプレイとしてはX線像専用のVIEW2000とIMLOGIX、およびパーソナルコンピュータ用Apple RGBディスプレイについて比較した。またデジタル化における濃度階調度と画像処理の診断精度に及ぼす影響について調べた。その結果、3種のデジタル化装置のうちではドラムスキャナが比較的高い診断精度を示したが、装置間での統計的な有意差は見られなかった。ディスプレイについては、X線像専用のものの方が、パーソナルコンピュータ用ディスプレイよりも比較的高い診断精度を示したが、これも装置間での統計的な有意差は見られなかった。注目された点はディスプレイ上で観察者に自由に像の拡大率、輝度、コントラストの調整を行わせた場合には診断精度は有意に低下したことで、人工的な画像操作で誤診が増加することを意味していると思われた。デジタル化の方法については、32、64、256の濃度階調でデジタル化した像で診断精度の統計的に有意な差は見られなかった。画像処理についてはコントラスト強調は診断精度の向上にはつながらなかったが、辺縁強調は診断精度を向上させることがわかった。前年度の結果も合わせて考えると、デジタル画像の臨床における実用化にあたり、診断精度の面においては十分に実用可能であるといえた。また一画素100mum、32階調でデジタル化しても診断精度は有意に低下しないことが示され、このデジタル化では50mum、256階調でのデジタル化の場合に比べ情報量は32分の1になるため、画像処理を目的とせず、単に画像観察の為だけのデジタル化においては情報量をできる限り小さくするために、この程度まで画質を下げることも可能であると思われた。
請来典籍の集積・活用からみた古代王権の「知」の統合策に関する総合的研究

初年度は、以後の研究の進展の下準備として、これまでの自身の研究蓄積を踏まえ、古代国家・王権が主導して整備した請来典籍の目録群、具体的には8世紀の「布施勘定帳」、10世紀初頭の「五宗禄」・「安然録」の概括的な比較検討などをもとに、古代国家・王権の仏教との関わりとその特質の推移についてごく大まかな見通しをつけ、その成果を学術論文「古代王権と仏教」(『古代王権の史実と虚構』2019年2月、所収)として公表した。また、申請時点での研究目的の一つに、「7世紀から10世紀にいたる東アジア諸地域からの請来仏典と中央学僧集団たる「宗」編成の推移と傾向」を跡づけることをあげたが、本年度はその一環として、鑑真渡来以後の国家的受戒制度および戒律修学システムの整備動向と律宗関連の請来典籍との関わりについて検討を進めた。具体的には、古代国家の設定した東大寺・下野薬師寺・筑紫観世音寺のいわゆる天下三戒壇における受戒儀礼の作法・様式や、戒本師田の設定、さらには東大寺唐禅院の十方衆僧供養料田をもとにした衆僧への戒律修学制度などが、いずれも請来された律関連典籍、すなわち「戒本」や唐の南山律宗のを開いた道宣の律関連の典籍および南山律以外の律関連典籍の受容と活用に密接に連動しながら整備されていったこと。またその際、律系典籍に習熟した律宗が、戒律制度が転換される9世紀末まで、得度の審査や戒律儀礼、官僧の昇進(階業)審査に一定の役割を果たしたことを示した。なお以上の研究成果はほどなく公表する予定である。本年度は、研究代表者が所属研究機関を変更したこともあり、研究基盤の基礎的整備に重点を置かざるをえなかった。そのため当初予定していた研究計画通りには進まない点があった。ただし研究実績の概要覧でも触れたように、律宗に関わる諸典籍と戒律制度・律の修学システムの整備との関係の推移に関する研究を一定程度進めることが出来たのは、重要な成果と評価できる。本年度、律宗の請来典籍と戒律関連制度との関係構造の推移の検討を進める中で、東アジア諸国との比較をもとに、戒律に則した日本古代の「知」の集積と活用、宗教組織の国家による組織・編成の特質を鮮明にしうることを再確認した。同様の手法は、他の宗についても適用できると思われるので、次年度以降、他の諸宗の典籍の受容・活用の特質についても、東アジア規模での比較をもとに解明していく。また次年度より研究分担者を追加し、外典の受容と活用についての研究も行い、請来典籍の活用を通じた「知」の統括の実態について、より立体的に明らかにする。

また次年度より研究分担者を追加し、外典の受容と活用についての研究も行い、請来典籍の活用を通じた「知」の統括の実態について、より立体的に明らかにする。研究代表者の研究機関の移動により、当初予定していた典籍データの電子入力のための研究補助の人員を確保できず、そのため予定した人件費を使用しなかったため。次年度以降には、研究補助を確保し、データ入力作業も進める。また次年度から研究分担者を追加する予定であるため、分担者への配分にも充当する。
ヘパラン硫酸プロテオグリカンによる増殖因子HB-EGFの生理活性制御機構の解明

HB-EGFはEGFフアミリーに属するヘパリン結合性の増殖因子である。我々は最近、HB-EGFのヘパリン結合ドメイン(HBD)を欠失させヘパラン硫酸(HS)との結合能を失わせた変異HB-EGFを発現するノックインマウス(ΔHBマウス)を作製したところ、このマウスがHB-EGF KOマウスと同様に、心臓弁形成段階で間質細胞の過増殖による心臓弁肥厚を引き起こすことを見いだした。このことはHB-EGFによる細胞増殖抑制機能発揮における、HB-EGFとHSプロテオグリカン(HSPG)との相互作用の生理的重要性を強く示唆するものである。そこで本研究では、このマウス心臓弁形成過程に焦点を当て、HB-EGFによる細胞増殖抑制におけるHB-EGFとHSPGの相互作用の機構と意義の解明を目的としている。HSPGによるHB-EGF機能制御機構を分子的に解析するため、昨年度は心臓器官培養系による解析を行ったが、今年度は心臓弁間質細胞の初代培養系を立ち上げ、その解析を行った。その結果、1)KO及びΔHBマウス胎仔由来弁間質細胞の増殖性昂進、2)野生型マウス胎仔由来弁間質細胞に対するEGFR阻害剤添加による細胞増殖性昂進、3)野生型マウス胎仔由来弁間質細胞に対するヘパリン添加による細胞増殖性昂進、4)KOマウス胎仔由来弁間質細胞に対するリコンビナントHB-EGFあるいは変異ΔHB蛋白添加によるレスキュー、などのことを確認した。これらの結果から、HB-EGFによる弁間質細胞の増殖抑制はEGFRシグナルを介しており、HSPGとの相互作用が必須であることが明らかとなった。さらに、発生過程の心臓弁間質におけるHB-EGFと相互作用するHSPGの同定を目的として、レーザーマイクロダイセクション(LMD)法によって弁間質組織からRNAを調整し、各種HSPGに対するRT-PCRを行ったところ、シンデカン、グリピカン、パールカンなどを含む少なくとも9種類以上のHSPGsが発生過程の弁間質で発現していることが分かつた。HB-EGFはEGFファミリーに属するヘパリン結合性の増殖因子である。我々は最近、細胞外マトリックスヘパラン硫酸プロテオグリカン(HSPG)を発現する細胞において、HB-EGFが細胞表層のHSPGに結合することで、EGFR発現細胞に対する活性が、増殖促進から増殖抑制に転換することを見いだした。さらにHB-EGFのヘパリン結合ドメイン(HBD)を欠失させHS結合能を失わせた変異HB-EGFを発現するノックインマウス(HB^<Δhb>)を作製したところ、このホモマウス(ΔHBマウス)は、HB-EGF KOマウスと同様に、心臓弁形成段階で間質細胞の過増殖を引き起こすことを見いだした。これらは、HB-EGFによる細胞増殖抑制機能発揮における、HB-EGFとHSPGとの相互作用の生理的重要性を、in vitro、in vivoの両面から強く示唆するものである。そこで本研究では、HB-EGFの機能様式としてのHSPGとの相互作用と、これによるHB-EGFの増殖抑制活性への転換という点に着目し、これらを強く示唆する上記の細胞レベル及び生体レベルの知見をさらに詳しく検証することを目的として、(1)培養細胞系を用いた、細胞表面HSPGとの相互作用によるHB-EGFの増殖抑制活性発揮機構の解析、(2)HBD欠失変異マウスを用いた、心臓弁形成過程でのHB-EGFによる細胞増殖抑制におけるHB-EGFとHSPGの相互作用の機構と意義の解析、のin vitro、in vivo両面から研究を行っている。本年度の進捗状況は以下の通りである。HSPGに結合したHB-EGFの活性を評価する実験系として、HSPGを内在性に豊富に発現するVero細胞にHSPGを介してHB-EGFを結合させ、その上でIL3あるいはHB-EGF依存性に増殖するDER細胞を共培養する系を確立し、HSPG結合HB-EGFは、遊離型HB-EGFの増殖活性とは異なり、EGFR-MAPKの持続的活性化を誘導し、その結果、DER細胞の増殖を停止させることがわかった。現在、さらにHSPG結合HB-EGFの活性を直接評価するため、Cell-free実験系の構築を試みているところである。ΔHBマウスにおける心臓弁での間質細胞過剰増殖の機構を実験的に検証する目的で、この時期の心臓の器官培養系を立ち上げた。この系において、KO由来の培養心臓における間質細胞の増殖昂進及び外来性HB-EGFによるこれらの異常のレスキュー、野生型培養心臓におけるHS合成阻害に伴う細胞増殖昂進を確認している。この実験系を駆使することで、心臓弁形成過程でのHB-EGFによる細胞増殖抑制において、HSPGとHB-EGFが機能的にどのように関わっているのか、さらには、HB-EGFと相互作用するHSPGの同定など、さらに検討していく予定である。

そこで本研究では、このマウス心臓弁形成過程に焦点を当て、HB-EGFによる細胞増殖抑制におけるHB-EGFとHSPGの相互作用の機構と意義の解明を目的としている。HSPGによるHB-EGF機能制御機構を分子的に解析するため、昨年度は心臓器官培養系による解析を行ったが、今年度は心臓弁間質細胞の初代培養系を立ち上げ、その解析を行った。その結果、1)KO及びΔHBマウス胎仔由来弁間質細胞の増殖性昂進、2)野生型マウス胎仔由来弁間質細胞に対するEGFR阻害剤添加による細胞増殖性昂進、3)野生型マウス胎仔由来弁間質細胞に対するヘパリン添加による細胞増殖性昂進、4)KOマウス胎仔由来弁間質細胞に対するリコンビナントHB-EGFあるいは変異ΔHB蛋白添加によるレスキュー、などのことを確認した。これらの結果から、HB-EGFによる弁間質細胞の増殖抑制はEGFRシグナルを介しており、HSPGとの相互作用が必須であることが明らかとなった。さらに、発生過程の心臓弁間質におけるHB-EGFと相互作用するHSPGの同定を目的として、レーザーマイクロダイセクション(LMD)法によって弁間質組織からRNAを調整し、各種HSPGに対するRT-PCRを行ったところ、シンデカン、グリピカン、パールカンなどを含む少なくとも9種類以上のHSPGsが発生過程の弁間質で発現していることが分かつた。
成人T細胞白血病の病因レトロウイルス

1.ATLウイルスキャリアの国内国外分布青森県住民成人(40才以上)993名について抗体保有者をしらべたところ,女性10名,男性2名が陽性であった.島根県16才以上成人4287名について抗体をしらべた結果, 245名(4.7%)が陽性であり,ある村落では15%陽性のところもあった.フィリッピンのネグリト(狩猟系住民)746名中19名陽性であった.古い蒙古系人種にまたキャリアが発見されたことになる.2.キャリアの免疫不全の解析先ずEBウイルス特異的細胞性免疫(EBV・CI)について, ATL患者は殆どの場合EBV・CIの低下があることが我々の研究で証明されていた.今回は健康成人キャリア63名についてしらべたところ18名(29%)にこのEBV・CIの低下がみられた.ノンキャリア対称成人ではその低下をみたのはゼロであった.糞線虫感染症患者36名についてATLウイルス感染についてしらべた.全員抗体陽性者であるがこのうち14名(39%)にATL患者と同様にモノクロンウイルスcDNAが検出された.ATLウイルス感染で免疫不全がおこったため糞線虫感染が増悪したと考えられる.以上のような免疫不全症がATLウイルスキャリアにみられることは, ATL発症のひとつの重要な個体要因として指摘しておきたい.3.ATLウイルスワクチンの基礎的研究ATLにはあるワクチンを開発するために,ワクチニアウイルスのHA遺伝子とATLウイルスのenv遺伝子をくっつけて,この組換え遺伝子をもつ弱毒ワクシニアウイルス株を作成した.これを生ワクチンとして,ウサギに1回注射したところ, envに対する抗体上昇が認められたのみならず, ATLウイルス攻撃に対して感染予防効果も明らかにされた.1.ATLウイルスキャリアの国内国外分布青森県住民成人(40才以上)993名について抗体保有者をしらべたところ,女性10名,男性2名が陽性であった.島根県16才以上成人4287名について抗体をしらべた結果, 245名(4.7%)が陽性であり,ある村落では15%陽性のところもあった.フィリッピンのネグリト(狩猟系住民)746名中19名陽性であった.古い蒙古系人種にまたキャリアが発見されたことになる.2.キャリアの免疫不全の解析先ずEBウイルス特異的細胞性免疫(EBV・CI)について, ATL患者は殆どの場合EBV・CIの低下があることが我々の研究で証明されていた.今回は健康成人キャリア63名についてしらべたところ18名(29%)にこのEBV・CIの低下がみられた.ノンキャリア対称成人ではその低下をみたのはゼロであった.糞線虫感染症患者36名についてATLウイルス感染についてしらべた.全員抗体陽性者であるがこのうち14名(39%)にATL患者と同様にモノクロンウイルスcDNAが検出された.ATLウイルス感染で免疫不全がおこったため糞線虫感染が増悪したと考えられる.以上のような免疫不全症がATLウイルスキャリアにみられることは, ATL発症のひとつの重要な個体要因として指摘しておきたい.3.ATLウイルスワクチンの基礎的研究ATLにはあるワクチンを開発するために,ワクチニアウイルスのHA遺伝子とATLウイルスのenv遺伝子をくっつけて,この組換え遺伝子をもつ弱毒ワクシニアウイルス株を作成した.これを生ワクチンとして,ウサギに1回注射したところ, envに対する抗体上昇が認められたのみならず, ATLウイルス攻撃に対して感染予防効果も明らかにされた.
90年代中国広東省の宗教復興にみる伝統と創造-「グンータ-香港」との関連を中心に

本年度の研究は、昨年度の補充調査として、現地調査と文献収集を兼ねた調査旅行を2回実施し、昨年度の成果と合わせて、学会、研究紀要等に研究成果を積極的に公表していくことに力を入れた。(1)調査:第1回目は、平成12年8月4日から8月19日まで、香港、広東省恵州市、梅州市、南海県、順徳市、清遠県の道観と廟を訪れ、関係者へのインタヴュー及び資料収集を行った。昨年度の補充調査が中心であるが、今回は梅州の呂祖廟や香港、清遠県の先天道の道堂などの調査を通して、この地域の宗教結社が清末から民国期にかけて、東南アジア華僑と緊密なネットワークを持っていたことが明らかにすることができた。また香港、広州では、香港大学図書館や中山文献館で民国期の宗教結社関係の資料をかなりの数収集できた。第2回目は平成13年3月9日から3月17日まで、香港で初めて行われる第1届道教節に参加するとともに、香港大学、広州等で文献収集を行った。(2)昨年度収集した資料と合わせて、現在文献の目録作成、ビデオ編集と写真の整理を行っており、現在開設準備中のインターネットのホームページに随時公表していく予定である。(3)研究成果の公表:(1)平成12年4月と10月、道教文化研究会で「広東道教の歴史と現状」というタイトルで、本研究の調査成果を紹介する報告を行った。(2)8月27日から9月3日までカナダのモントリオールで開かれた第36回国際アジア・北アフリカ研究会議(ICANAS)に出席し、「「香港道教」のアイデンティティとその変容-1997年を越えて」というタイトルで、本研究に関わる報告を行った。(3)平成12年10月13日、慶応義塾大学の地域研究センターで「広東省における道教復興の諸相」というタイトルで報告し、同内容を平成13年度2月発行の『アジア遊学』24号に掲載した。(4)平成12年11月に行われた日本道教学会の大会で先天道に関する報告を行った。本年度は(1)1980年代以降広東省における道観復興事業の推移、(2)廟と道士、風水師等宗教職能者の活動の現状の2点に焦点をあて、現地調査によるインタビューと資料収集を中心に研究を進めた。現地調査は、平成11年8月2日9月6日、平成11年12月18日25日、平成12年3月19日31日の3回に分けて行った。まず8月の調査では、香港道教聯合会に香港道教界の現状について話を聞き、次に約1週間広東省の羅浮山、清遠県など著名な道教聖地を尋ね、復興した道観の歴史と復興の経緯、そして現状についてのインタビューを行った。その後の1週間は広東省海豊、陸豊県において風水師と道士の活動の現状についての調査を行った。また12月の調査では四邑地域の廟や祠堂を参観した。3月の調査では、広東省道教協会が置かれている花都市の圓玄道観を訪問し、広東省における道観復興の全般的状況について話を聞いた。これらの調査で収集した資料の整理、分析を行った結果、80年代の道観復興事業は、主として重点文物単位の保全が主たる目的であったのに対し、90年代の道観復興事業は、地方政府、地元政府、地元の開発業者による地域振興の一部として進められ、これに香港の道教教団の勢力争い、97年に向かって昂揚したバブル経済とナショナリズムなど、様々な要素が複雑にからみあって進行したこと、農村、都市ともに宗教職能者の活動が復活しているが、都市化に伴い骨灰安置施設や霊位安置サービスなどの需要が増加していることなどが明らかになった。これらの見解をまとめた中間報告は、平成12年1月29日、道教文化研究会において、「広東道教の歴史と現状」と題して発表している。また写真、映像資料をインターネットのホームページで公開すべく、現在準備中である。

(2)8月27日から9月3日までカナダのモントリオールで開かれた第36回国際アジア・北アフリカ研究会議(ICANAS)に出席し、「「香港道教」のアイデンティティとその変容-1997年を越えて」というタイトルで、本研究に関わる報告を行った。(3)平成12年10月13日、慶応義塾大学の地域研究センターで「広東省における道教復興の諸相」というタイトルで報告し、同内容を平成13年度2月発行の『アジア遊学』24号に掲載した。(4)平成12年11月に行われた日本道教学会の大会で先天道に関する報告を行った。
慢性関節リウマチの関節内リンパ球異常におけるリウマトイド因子の役割に関する研究

慢性関節リウマチ(RA)患者の関節液に関し、IgM、IgMリウマトイド因子(IgMーRF)、アルブミン、インタ-ロイキン6(ILー6)を測定した。SF/S・IgMーRF比はSF/Sアルブミン比よりも高値で、SF/S・IgM比はSF/Sアルブミン比よりも低値であった。また、ILー6(SF)活性はILー6(S)活性よりも顕著に高く、RF値(SF)と相関を有した。さらに、SFのILー6活性およびIgMーRF値は血沈値やランスバリ-指数と相関した。この結果は疾患活動性を規定する免疫異常によってILー6およびRFが関節内で産生されることを示すものであった。しかし、リウマトイド因子陰性の患者のおいてもILー6(SF)高値であったことから、RF産生はILー6のみによって支配されるのではないと考えられた。RA患者の末梢血単球に関し、CD14、Fcレセプタ-(FcγRIおよびFcγRII)、HLAーDRの発現を検討した。活動性の高い患者の単球においてはHLAーDR以外の3者の発現は増強していた。緩解にある患者ではFcγRIおよびFcγRIIのみの発現増強が認められた。この結果は活動性の高い患者の単球が活性化されていることを示すだけでなく、患者単球にはFcレセプタ-の発現増強として表現されるような本質的な異常が存在することを示唆するものであった。輸血によるC型肝炎ウイルス感染に続発したRA症例の検討を行った。患者はHLAーDR4およびHLAーBw54陽性で、このウイルスは遺伝的素因を有する個体に対しRAを惹起する因子の1つである可能性が示唆された。慢性関節リウマチのリンパ球異常のひとつとして多様な整理機能を有するサイトカインであるインタ-ロイキン6が患者関節液中に高濃度で存在することが知られている。我々はまずリウマチ因子とインタ-ロイキン6を関節液と血清でそれぞれ定量し、その関連を調べた。リウマチ因子については両者で一定の傾向はなかったが、インタ-ロイキン6は血清に比べ関節液でより高値であり、関節局所における産生の亢進が示唆された。また関節液中のリウマチ因子とインタ-ロイキン6との間に正の相関関係を認めた。上記の事実をFcレセプタ-を介する刺激として理解するために、免疫複合体のモデルとしてプレ-トに固相化したIgGを設定し、これに付着法により得られる正常ヒト単球を作用させ培養液中に放出されるインタ-ロイキン6を定量したところ、固相化したIgGによりインタ-ロイキン6産生は促進されることを見出した。今後はこの系にポリクロ-ナルおよびモノクロ-ナルなリウマチ因子を作用させ、Fcを介したシグナルがいかに修飾されるかを検討する予定である。また、0937・H160等の単球系cell lineがTPA刺激によりマクロファ-ジへと分化誘導され、インタ-ロイキン6を産生することを確認しているので、作用させる細胞としてこれらのcell lineや滑膜浸潤マクロファ-ジを用いる予定である。慢性関節リウマチのリンパ球異常のひとつとして多様な生理機能を有するサイトカインであるインタ-ロイキン6が患者関節液中に高濃度で存在することが知られている。

上記の事実をFCレセプタ-を介する刺激として理解するために、免疫複合体のモデルとしてプレ-トに固相化したIgGを設定し、これに付着法により得られる正常ヒト単球を作用させ培養液中に放出されるインタ-ロイキン6を定量したところ、固相化したIgGによりインタ-ロイキン6産生は促進されることを見出した。一方、固相化したF(ab)'_2によるインタ-ロイキン6産生亢進はほとんど認められなかったことから、免疫複合体による単球上のFCレセプタ-のクロスリンキングからもたらされる刺激が、インタ-ロイキン6を介して慢性関節リウマチにおけるリンパ球異常に関与している可能性が示唆されるに至った。さらに、フロ-サイトメトリ-を用いた解析から、活動性の高い慢性関節リウマチ患者の単球においてはCD14抗原の発現が増強しているだけでなく、CD64の発現も増強していることが判明した。これは患者単球の質的異常、とくにFCrRI発現の異常を示唆する所見であり、病態を理解する上で重要なものと考えられた。慢性関節リウマチのリンパ球異常のひとつとして多様な生理機能を有するサイトカインであるインタ-ロイキン6が患者関節液中に高濃度で存在することが知られている。我々はまずリウマトイド因子とインタ-ロイキン6を関節液と血清でそれぞれ定量し、その関連を調べた。リウマトイド因子については両者で一定の傾向はなかったが、インタ-ロイキン6は血清に比べ関節液でより高値であり、関節局所における産生の亢進が示唆された。また関節液中のリウマトイド因子とインタ-ロイキン6との間に正の相関関係を認めた。上記の事実をFcレセプタ-を介する刺激として理解するために、免疫複合体のモデルとしてプレ-トに固相化したIgGを設定し、これに付着法により得られる正常ヒト単球を作用させ培養液中に放出されるインタ-ロイキン6を定量したところ、固相化したIgGによりインタ-ロイキン6産生は促進されることを見い出した。一方、固相化したF(ab)'^2によるインタ-ロイキン6産生亢進はほとんど認められなかったことから、免疫複合体による単球上のFcレセプタ-のクロスリンキングからもたらされる刺激が、インタ-ロイキン6を介して慢性関節リウマチにおけるリンパ球異常に関与している可能性が示唆されるに至った。さらに、フロ-サイトメトリ-を用いた解析から、活動生の高い慢性関節リウマチ患者のの単球においてはCD14抗原の発現が増強しているだけでなく、CD64の発現も増強していることが判明した。これは患者単球の質的異常、とくにFcγRI発現の異常を示唆する所見であり、病態を理解する上で重要なものと考えられた。また、C型肝炎ウイルスによる慢性肝炎に慢性関節リウマチを合併した症例に関する検討から、このウイルスが本疾患を惹起する因子の1つである可能性が示唆された。
カルバペネム系抗生剤はバルプロ酸以外の薬物と相互作用しないのか?

【研究の目的】カルバペネム系抗生剤(CBPMs)の併用によりバルプロ酸(VPA)の血清中濃度が低下することが知られており、併用は禁忌とされている。最近、東京大学医学部附属病院薬剤部において、肝臓中や血液中に高活性に存在する脱グルクロン酸抱合酵素(酵素X)が、VPAグルクロン酸抱合代謝物(VPA-G)の脱抱合に関与し、CBPMsは酵素X(他グループの研究によりアシルペプチド加水分解酵素と同定された)を臨床濃度域においてほぼ完全、かつ不可逆的に阻害することを見出した。その結果を基に、本研究では、カルバペネム系抗生剤(CBPMs)が、グルクロン酸抱合により代謝される薬物一般と相互作用を生じうるかを明らかとすることを目的として検討を行った。【研究の方法・結果および考察】まずin vitroにおいて酵素XがVPA-Gの脱抱合に関与するか否かを明らかとするため、4-メチルウンベリフェロングルクロナイド、ミコフェノール酸グルクロナイド等の典型的なグルクロン酸抱合代謝物を基質として、血液および肝から調製した酵素Xによる脱抱合実験を実施した。その結果、これらのグルクロン酸抱合代謝物の脱抱合はCBPMsでは阻害されず、β-グルクロニダーゼ阻害薬であるサッカロラクトンにより一部阻害された。このことは、酵素XはVPA-Gに選択性が高く、その他の薬剤の脱グルクロン酸抱合にはほとんど関与しないことを示唆しており、臨床レベルにおいてもミコフェノール酸等との相互作用が起こる可能性は低いと考えられた。一方で、当院のカルテ調査の結果、CBPMsとミコフェノール酸の併用症例を5症例程度見出し、当該患者の血清検体を回収した。現在は、血清中のミコフェノール酸およびミコフェノール酸グルクロナイドの定量分析系の構築を急いでいる段階であり、早急に定量法を確立し、臨床における相互作用の有無を確認するとともに、動物実験による詳細な動態学的検討を行う予定である。
白血病とウイルス特異的不死化細胞傷害性T細胞の細胞バンク化に向けての基礎研究

白血病と難治性ウイルス感染症に対する細胞免疫療法の開発目的で研究を遂行し、以下の成果を得た。1)白血病細胞に高発現し、正常細胞における発現量は極めて低値であるWT1およびhTERT特異的細胞傷害性T細胞(CTL)クローンを樹立した。これらのCTLクローンは白血病細胞や肺がん細胞などの固形癌細胞に対してHLAクラスI拘束性細胞傷害性を示した。CTLクローンをHerpesvirussaimiri感染によって不死化させた。不死化CTLクローンは抗原刺激なくして増殖を示し、本来の抗原特異性は保たれていた。さらに、thymidine kinase遺伝子を導入し、ガンシクロビル添加によって死滅することを確認した。2)腫瘍細胞に強い細胞傷害性を示すWT1特異的CD8陽性CTLクローンからT細胞レセプターα鎖およびβ鎖遺伝子をクローニングし、正常CD4陽性およびCD8陽性T細胞に遺伝子導入した。TCR遺伝子導入CD8陽性T細胞はWT1特異的細胞傷害活性を獲得し、白血病細胞に対してHLAクラスI拘束性に細胞傷害性を示した。同様に、TCR遺伝子導入CD4陽性T細胞もHLAクラスI拘束性にWT1特異的免疫応答を示し、Th1サイトカインを産生した。ただし、CD4陽性T細胞による機能発現には標的細胞上のHLAクラスIIとCD4分子との結合が必要であることも明らかとなった。3)HLA-DP5拘束性CD4陽性T細胞が認識する新たなWT1エピトープを同定した。このペプチド特異的CD4陽性T細胞はHLA-DP5拘束性かつWT1特異的に白血病細胞を傷害した。4)新たな免疫不全マウスにヒト造血幹細胞を移植することによってヒト免疫系を構築したマウスを作製した。今後、ヒトにおけるワクチン開発に有用であると思われる。以上の研究成果から、白血病ならびに難治性ウイルス感染症に対する効果的で安全な新たな細胞免疫療法の開発が可能であることが示された。白血病と難治性ウイルス感染症に対する普遍的細胞傷害性T細胞(CTL)養子免疫療法の開発の目的で、特定の特異性とHLA拘束性を有するCTLを大量に供給できる2つのシステムを考案した。1)われわれは、Herpesvirus saimiri (HVS)がヒトT細胞を本来の免疫学的機能を維持したまま不死化させることを報告した。このような不死化CTLクローンに自殺遺伝子を導入し、必要時人為的に患者体内から排除することによってその安全性はさらに増すと考えられる。そこで本研究では、その基礎実験として、白血病特異的CD8陽性CTLをHVSで不死化し、単純ヘルペスウイルスthymidine kinase遺伝子を導入した。その結果、HVS不死化CTLは特異的細胞傷害性を維持したままIL-2依存性に増殖を続けた。さらに、これらのCTLクローンはガンシクロビル添加によって短期間にほとんど全て死滅することが確認された。2)われわれが樹立したWT1ペプチド特異的HLA-A24拘束性CTLクローンTAK-1はWT1由来ペフチドとHLA-A24複合体に高い結合性を有し、極めて効率的にWT1発現腫瘍細胞を傷害する。そこで、TAK-1からT細胞レセプター(TCR)α鎖およびβ鎖遺伝子をクローニングし、レンチウイルスベクターを用いて正常CD4およびCD8陽性T細胞に遺伝子導入した。導入後2回のペプチド抗原刺激を加えたところ、TAK-1由来TCR発現効率は7080%と高率であった。TCR遺伝子導入細胞は親株のTAK-1同様にWT1発現腫瘍細胞をHLA-A24拘束性に傷害することが示された。また。TCR遺伝子導入CD4陽性T細胞は、HLA-A24陽性、HLAクラスII発現白血病細胞に対して細胞傷害性とTh1サイトカイン産生を示した。このような方法を用いることによって将来はCTLのバンク化を図り、普遍的なCTL養子免疫療法が可能になると考えられる。

このペプチド特異的CD4陽性T細胞はHLA-DP5拘束性かつWT1特異的に白血病細胞を傷害した。4)新たな免疫不全マウスにヒト造血幹細胞を移植することによってヒト免疫系を構築したマウスを作製した。今後、ヒトにおけるワクチン開発に有用であると思われる。以上の研究成果から、白血病ならびに難治性ウイルス感染症に対する効果的で安全な新たな細胞免疫療法の開発が可能であることが示された。