hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高齢者における取扱説明書からの手順理解とその支援

これらの遂行結果から、高齢者における1)標識の利用、2)手順の理解、3)読解過程における体制化方略の活用、4)最上位手順の再生が検討され、上述した仮説13が検証された。結果、本年度の研究実施計画は遂行された。なお、研究結果は、日本心理学会大会ワークショップ、日本基礎心理学会フォーラム、大阪学院大学流通・経営科学会で発表され、日本基礎心理学会雑誌「基礎心理学研究」に掲載される。1.研究の目的:認知機能の低下する高齢者が住まいの中で新技術の学習を余儀なくされることは多い。こうした高齢者の学習を支援するために取扱説明書は重要である。ところが、その手順文の構造は明示されないため、手順の理解し記憶は難しい。そこで、見出しなどの標識で手順文の最上位構造性を示すと記憶が促進されるとされるが(標識化効果)、効果メカニズムは解明されていない。本研究では、平成15年度より、高齢者が手順文を記憶する際の体制化方略に着目し、標識化すると、高齢者の「質の高い」体制化方略の使用が支援され(仮説1)、高齢者の手順文の理解と記憶が向上する(仮説2)と仮説し、検証した。平成16年度では、手順文の最上位構造性の明示性を高める標識化を用いると、上記の効果が鮮明になり、高齢者の理解・記憶を支援すると仮説し(仮説3)、検証した。2.研究の実施と結果:前期高齢者30人と大学生30人を被験者とした実験を行った。ドーム型照明器具の取付の手順文を課題に用い、アンダーラインなど形式的特徴を伴った見出しを用いて最上位手順の切れ目を明示した。10の手順文を短冊状に裁断し、文配列課題ならびに再構成課題とした。実験では、次の4つの課題を実施した。第1に、文配列課題として10枚の手順文をランダムな順序に提示し、体制化させた。第2に、再認課題として標識を再認させた。第3に、再生課題として最上位手順を再生させた。第4に再構成課題として手順文を再構成させた。結果から、1)手順文の体制化、2)標識の再認、3)最上位手順の再生、4)手順文の再構成に関する加齢差の検討を通じて、手順文の最上位構造性の明示性を高める標識化を用いると、高齢者の理解・記憶を支援することが示され、本年度の研究実施計画は遂行された。なお、これまでの研究結果は、本年度において、米国心理学会大会で発表され、日本基礎心理学会雑誌「基礎心理学研究」に掲載された。目的と方法平成15年度と16年度の研究から,明示性の異なる標識が高齢者の手順文記憶に及ぼす効果が示された。これらの知見を統合し,以下の4点を総合的に検討した。第1は,明示性の異なる標識が体制化方略の変更に及ぼす効果を検討することであった。第2点は,明示性の異なる標識が記憶レベルに及ぼす効果を検討することであった。第3点は,明示性の異なる標識によりもたらされる標識化の効果に介入する加齢の影響の検討であった。さらに,以上3点の検討を踏まえて,第4に,高齢者における手順文の記憶に及ぼす標識化効果に関するメカニズムを共分散構造分析により検討した。実験参加者は,65歳から74歳の高齢者90人と,18歳から23歳の若齢者(大学生)90人となった。高齢者と若齢者は,それぞれ3群に分けられた(非明示群,低明示群,高明示群)。ドーム型照明器具の取付の手順文を課題に用いた(アンダーラインを伴った見出し等を用いて最上位手順の明示性が操作された)。結果と考察文
経管栄養法の実践的な技術修得に向けた装着型シミュレーターの開発

本研究の目的は、看護技術「経鼻経管栄養法」について装着型シミュレーターを開発し、看護基礎教育において実践的な技術修得に向けて活用するための示唆を得ることである。2016年度は、文献検討に基づき装着型経鼻経管栄養シミュレーターの試作品を作成し、臨床看護師と看護教員に対してプレゼンテーションを行い、試作品の利点・改善点について意見交換を行った。2017年度は、改良した試作品を用いて、看護学生に技術演習を行い、受講学生を対象に無記名自記式アンケート調査を行った。アンケートの結果から、今回開発したシミュレーターは、限界はあるが患者の気持ちを追体験しながら経鼻経管栄養法の技術が修得可能であると評価した。【文献検討と試作品の作成】試作品を作成するにあたり、看護基礎教育課程で活用する経管栄養法シミュレーターに必要な要素を明らかにするために、基礎看護技術の教科書に記載されている経鼻胃管栄養法に関する内容を比較検討し、修得が必要な要素を抽出した。Ciniiを用いて過去10年間の図書でキーワードを「基礎看護技術」として検索し、書籍のタイトルから経管栄養法とは関連がないものを除外した10件の文献を分析対象とした。分析の結果、看護基礎教育課程において経鼻胃管栄養法で修得すべき内容は5つの要素「患者の準備」「流動食の準備」「胃管の位置確認」「注入中の観察」「注入後の観察」で構成されることが明らかとなった。以上から、各要素について技術演習で患者・看護者体験ができることを目指し、市販の経管栄養シミュレーターを参考にしながら、装着型経管栄養シミュレーターの試作品を作成した。【臨床看護師・看護教員との意見交換】A県内総合病院2施設の看護師10名、看護専門学校1校の看護系教員5名に対して、試作品のプレゼンテーションを行い、その後フォーカスグループインタビューで意見を聴取した。インタビューは研究協力者の承諾を得て録音し、逐語録に書き起こしてデータとした。収集したデータは、試作品の良い点・改善点について類似した内容をコーディングし、それぞれコードの類似性によってカテゴリー化してまとめた。結果に基づき、より実践的な技術修得に向けたシミュレーターとして活用するための方法ついて考察した。なお本研究は、研究者所属の研究倫理審査委員会の承認を受けてから実施した。結果から、経管栄養法のより実践的な技術修得に向けて装着型シミュレーターを活用するためには、経管栄養を受けている患者のリアルなイメージを学生が描けるようにすること、経管栄養法の重要な実施項目をもれなく演習できるよう工夫することが必要と考えられた。平成28年度は、文献検討に基づいた試作品の作成と、試作品に対する臨床看護師と看護教員との意見交換を計画していた。計画通りに年度内に実施できたため、概ね順調に進展していると評価する。本研究の目的は、看護技術「経管栄養法」について、実践的な技術修得のための装着型シミュレーターの開発である。文献検討に基づいてシミュレーターの試作品を作成し、試作品を用いて、看護学生を対象に「経管栄養法」の演習授業を展開した。授業科目終了後、受講した学生80名を対象に、経管栄養法技術の修得状況と、シミュレーターに対する意見を、無記名自記式のアンケートにて調査した。調査結果は単純集計し、自由記述データは意味内容をコード化・カテゴリー化してまとめた。アンケートは、37名から回答が得られた(回収率46.3%)。経管栄養法技術の修得状況については、97.2%の学生が「充分に修得できた」または「まあ修得できた」と回答していた。経管栄養法を受ける患者の気持ちが理解できたか、という問いに対して、「とてもそう思う」「まあそう思う」と回答した学生と、「あまりそう思わない」「全くそう思わない」と回答した学生は、それぞれ50%であった。「そう思う」と答えた学生は、「顔に貼ってあるテープを引っ張られて不快」「チューブやテープが肌にずっと触れている煩わしさ」「自分の目の前で器具を操作される」など、患者役の体験を通して、患者の気持ちを理解したと回答していた。「思わない」と答えた学生は、「チューブを入れたわけではないので、患者の気持ちを全て理解するのは難しい」「本当に管が入っている感覚、違和感とかは体験できないので、そこは理解できなかった」など、チューブ挿入の未体験を理由にあげていた。以上から、今回開発したシミュレーターは、胃チューブ挿入の体験は想像に留まるという限界はあるが、装着をすることで患者の気持ちを追体験しながら経鼻経管栄養法の技術が修得可能なシミュレーターと評価した。【シミュレータの試作品のブラッシュアップ】

文献検討に基づいて作成した経管栄養装着型シミュレーターの試作品に対して、臨床看護師・看護教員から得た意見をまとめ、日本看護科学学会に学会発表を行い、学会参加者と意見交換を行い、試作品の改良点、演習での活用方法について、ブラッシュアップする。【改良した試作品の活用と活用後の学生のからの意見聴取】改良した試作品を用いて、研究者の所属する教育機関の学生に対し、演習を行う。演習後、演習を受けた学生を対象にアンケート調査を行い、改良した試作品に対する意見を聴取する。アンケート調査の結果から経管栄養装着型シミュレーターを評価し、今後の課題を提示する。【研究結果の公表】研究結果をまとめて、日本看護学教育学会へ論文投稿し、公開する。基礎看護当初は、シミュレーターの試作品を作成するにあたり、人を雇って作成する予定であったため、人件費を確保していた。しかし、試作品で作成したのは5点であり、全て研究者で作成し、人件費を使用しなくとも対応可能であったため、その分の使用額に差が生じた。本年度は、学生80名が演習できるよう、シミュレーターを作成するための、物品費、人件費が必要である。また、昨年度の研究結果から、より効果的な演習にするための物品を購入する必要がある。学生対象のアンケート調査の集計において、人件費が必要である。さらに、研究結果をまとめて学会発表するための学会参加費、旅費等で使用する。
小脳長期可塑性の複合的アプローチによる研究

1、シナプス伝達と遺伝子発現:代謝型グルタミン酸受容体依存性の小プルキンエ細胞のslowEPSPに数分以内の早い蛋白合成が必要であることを明らかにした(伊藤正男博士との共同研究)。2、数時間持続する小脳LTDの誘導:本研究では、Kado博士が工夫した、比較的大きな二極電極で記録することにより、2-5時間という比較的長時間に亘る小脳プルキンエ細胞のLTDを記録することができた。3、ラット脳特異的に発現する新規反復配列遺伝子の発見:ラット脳特異的(海馬、小脳プルキンエ細胞等)に発現している新規反復配列(Brain Specific Repetitive)遺伝子を発見した。この遺伝子は、ラットゲノム上に150コピー程度存在するが、驚いたことに調べた限りラット属以外には存在しないユニークなものである。4、学習課題下での遺伝子発現:京都大学文学部櫻井芳雄教授との共同研究で、ラットに於ける視聴覚弁別課題遂行下での脳内におけるc-fos遺伝子発現を調べ、聴覚学習下で有意にc-Fos発現が増大することをを観察した。又、木津川等は、マウス歩行の足場となるペグのパターンを変化させた時のみに、被殻背側部にc-Fosの発現が誘導されることを明らかにした。5、霊長類の大脳皮質領野特異的に発現する遺伝子:ヒトを含む高次脳機能に重要な役割を果たすことが知られている大脳皮質は、領野と呼ばれる解剖学的、機能的に分割された領域に分割することができるが、この領野がどの程度遺伝的にプログラムされどの程度視床から等の入力により決定されるかは、長い論争があるがなお決着をみていない。我々は、霊長類の大脳皮質領野特異的に発現する遺伝子を同定することにより、この問題開明にアプローチしようとしており、視覚野特異的遺伝子occl、運動野特異的遺伝子gdf7を同定した。本研究は、平成9年度よりの3年間の国際共同研究により、小脳長期記憶成立の分子機構を分子生物学、電気生理学,組織化学的手法を複合的に用いて明らかにすることを目指している。具体的には、全細胞パッチ記録法を用いて、小脳プルキンエ細胞にLTDを誘導し、その条件下で変動する遺伝子群の構造と機能を明らかにし、更に、これらの遺伝子が小脳の長期可塑性に関与する様式を分子細胞レベルで明らかにしようとしている。1)本年度、小脳プルキンエ細胞での電気的変化をスライス下でパッチクランプ記録法を用いて解析する為、小脳LTDをパッチクランプ下で誘導することができた。2)理化学研究所脳総合科学研究所の細胞情報チームと共同で研究を行い培養プルキンエ細胞において、共刺激特異的に発現する遺伝子群の分離を行った。in vivoで薬理学的刺激と電気的刺激を組み合わせた共刺激特異的に発現するものを分離した。その内、脳特異的に発現する新規反復配列RNAの発現様式をより詳しく解析した。本研究は,3年間にわたる国際共同研究であるが,2年目にあたる本年度は,記憶学習と遺伝子発現の関わりについての研究を引き続き行い,以下の成果をあげた.1)理化学研究所の脳総合科学研究所の細胞情報チーム(矢野良治チームリーダー)と共同研究を行い培養プルキンエ細胞に於て,共刺激特異的に発現する遺伝子群の分離解析を行って来たが,その中で,ラット脳特異的に発現する新規反復配列遺伝子(Bsr:braia specific repetitive)発見し,その解析を行った.

その結果,Bsr遺伝子は,海馬の錐体細胞,小脳プルキンエ細胞,嗅球の僧帽細胞等の分化の早い大きな細胞に多く発現がみられた.Bsr遺伝子は,150コピーほどの反復配列であるがFISHによる解析から染色体上の一箇所に集中していると考えられる.驚いたことに,この遺伝子はラット属にしか存在せず,他の動物種には存在しないことが解った.この遺伝子は,有意なORF(open read-ing frame)を持たず,しかも,核内にそのmRNAが局在することから,おそらく核内RNAとして機能すると考えらるが,その解析は今後の課題として残っている(印刷中).2)小脳LTD下における遺伝子発現の役割について理化学研究所脳総合科学研究所の伊藤正男チームと引き続き共同研究を行なった(投稿準備中).3) Kado博士とBatirli博士と共同で,in vivoでの小脳LTDの条件検討を行った.4)視聴覚弁別学習下での遺伝子発現を京大霊長研の櫻井芳雄博士と共同で行い,学習依存的な遺伝子発現を観察した.平成11年度は、以下の成果をあげた。1)本年度は最終年度にあたるので、ここ三年間、Batini博士、Kado博士と共同で行って来たin vivoで小脳LTDを記録することを集中して行い成功させることができた。小脳LTDは、1982年に伊藤正男博士によって報告されて以来、運動学習のモデルシステムとして、分子、細胞、システムレベルでの研究が進み、脳機能解明の一つのモデルケースとなっているが、小脳LTDの研究自体は、主にスライスや培養細胞系を用いて行われて来た。しかし、海馬のLTPで良く用いられるような場電位記録による、小脳LTDは、in vivoでは、殆ど行われていない。これは、幾つかの技術的困案によるものであるが、小脳LTDと遺伝子発現の関連を明らかにするには、どうしても必要な系である。そこで、我々は、中脳レベル以上を除脳した標本を用いて平行線維と登上線維を共刺激することにより最高数時間までの小脳プルキンエ細胞の場電位LTDを観察することに成功した(投稿準備中)。2)小脳LTDと遺伝子発現の関連について伊藤正男博士のグループと引き続き共同研究を行った(投稿準備中)。3)脳神経系の進化を研究すべく大脳領野特異的な遺伝子の分離と解析の仕事を更に進めた(投稿準備中)。
多血小板血漿(PRP)による矯正学的歯の移動促進への試みとその分子生物学的解析

歯科矯正治療の基盤は歯に矯正力を加えて動かすということであり、この基本は変わらない。歯科矯正治療の課題として審美性の向上や疼痛の軽減、清掃の簡易化などが挙げられるが、その治療期間の長さから治療期間の短縮も大きな課題の1つである。近年、様々な材料の開発やメカニクスの研究により治療の効率化がなされ、治療期間の短縮が図られるようになってきた。しかしながら、その効果はまだ十分とは言えない。歯科矯正治療は生体反応を利用した治療にもかかわらず、生体自身に対するアプローチはほとんど行われておらず、生体反応をコントロールすることでさらなる治療期間の短縮が可能になると考えられる。本研究では、整形外科や他の歯科分野でも用いられる多血小板血漿(PRP)用いて歯の移動の効率化を図ろうとするにあたり、マウスの歯の移動の実験モデルを用いて基礎的なエビデンスを得ることを目的とする歯の移動に対するPRPの効果の検討をおこなった。マウスの上顎切歯部歯槽骨と左側第一臼歯間にのクローズドコイルスプリングを装着し、第一臼歯を近心移動した。PRPは同種マウスの心臓より採血を行い、遠心分離した。歯の移動開始時に左側第一大臼歯頬側皮下にアクチベーターを混合して活性化したPRPを注射した。12日後に歯科用シリコーン印象材を用いて上顎を印象採得し、第一臼歯と第二臼歯間距離を実体顕微鏡下で計測し歯の移動量とした。PRP投与群とPBS投与群(対照群)において歯の移動量に有意な差は認められなかった。しかし、PRPの至適量が不明であるので、今後はまず至適投与量について検討が必要であると思われる。本研究では、整形外科や他の歯科分野でも用いられる多血小板血漿(PRP)用いて歯の移動の効率化を図ろうとするにあたり、マウスの歯の移動の実験モデルを用いて基礎的なエビデンスを得ることを目的とする。歯の移動に対するPRPの効果の検討をおこなった。

近年、様々な材料の開発やメカニクスの研究により治療の効率化がなされ、治療期間の短縮が図られるようになってきた。しかしながら、その効果はまだ十分とは言えない。歯科矯正治療は生体反応を利用した治療にもかかわらず、生体自身に対するアプローチはほとんど行われておらず、生体反応をコントロールすることでさらなる治療期間の短縮が可能になると考えられる。本研究では、整形外科や他の歯科分野でも用いられる多血小板血漿(PRP)用いて歯の移動の効率化を図ろうとするにあたり、マウスの歯の移動の実験モデルを用いて基礎的なエビデンスを得ることを目的とする。歯の移動に対するPRPの効果の検討をおこなった。マウスの上顎切歯部歯槽骨と左側第一臼歯間にのクローズドコイルスプリングを装着し、第一臼歯を近心移動した。PRPは同種マウスの心臓より採血を行い、遠心分離した。歯の移動開始時に左側第一大臼歯頬側皮下にアクチベーターを混合して活性化したPRPを注射した。12日後に歯科用シリコーン印象材を用いて上顎を印象採得し、第一臼歯と第二臼歯間距離を実体顕微鏡下で計測し歯の移動量とした。PRP投与群とPBS投与群(対照群)において歯の移動量に有意な差は認められなかった。しかし、PRPの至適量が不明であるので、投与量や方法に工夫が必要だったのではないかと思われる。
リモ-トセンシングによる大気・海洋相互作用の研究

本研究は衛星デ-タを利用し大気海洋間の熱・運動量・淡水等のフラックスの推定、海洋過程、大気過程の研究に分けられ、本年度は以下のような成果を得た。1.フラックスの推定:昨年度開発した新アルゴリズムを用い、日本近海の熱フラックスを再評価した(今里)。可降水量デ-タから海面気温を算出する方法を開発した(久保田)。日本近海に適用するのに最も精度の良いバルク法を見つけた(木村)。OMLET航海時の各種衛星デ-タの整備と精度検証を行った(川村)。日射量の季節空間分布の特徴を明らかにした(古賀)。2.海洋過程:GEOSAT高度計デ-タより求められた渦運動エネルギ-は、黒潮続流域のほか20゚Nを中心とした東西に広く広がった海域で高い事が分かった。(今脇)。海面高度アノマリ-は季節的に赤道上で東進、±5゚では西進していた(和方)。熱赤外画像と粒子追跡数値実験から、黒潮変動に伴い流軸を横切る物質循環が起きている事を見つけた(淡路)。CZCSデ-タを用い、日本近海クロロフィル濃度場を作成し、熱画像や実測デ-タとの比較検討を行った(才野、向井)。海色リモ-トセンシングによるクロロフィル濃度の誤差要因の一つである溶存有機物質の蛍光特性を測定し、数種の成分を光学的に識別した。主成分の一つはクロロフィル濃度と正の相関を持つ事がわかった(千賀)。3.気象過程:次世代衛星による偏光観測を利用した雲パラメ-タの推定について研究を行った。そして雲による大気上端での放射に与える影響を見積もった(高島)。ウラジオストックと札幌の2地点でエアロソル捕集装置を設置し同時連続観測を行った。そして、黄砂をひまわりやNOAAの衛星画像等から調べ、1990年4月の降下量が1.3mg/cm^2/yrと算出した(植松)。海上風の実測場と衛星デ-タからの推定値を比較し相違点の要因を探った結果、実測場自体にも不確定要因がある事が明確になった(轡田)。(今脇)。
水溶性有機白金化合物の開拓とそれらの生体分子認識能の評価

トリメチル白金(IV)系は生体分子との相互作用を調べるのに好適な化合物群を提供する。常に八面体錯体を形成し、3個のメチル基はfac配置を取りやすいからである。メチル配位子の高いトランス効果のため残りの配位点は比較的置換活性となる。典型的な出発原料,PtCl^<2->_6,は、反応が遅いのに反し、PtMe_<>(H_2O)^+_3は直ちに反応し、NMR法に好適な一連の生成物を与える。各メチル基のtrans位にあるドナー原子は、通常は^2J(Pt-CH_3)の値から判断しうる。また配位した有機物と^<195>Ptのカップリング定数から結合点と配位子のコンフォメーションに関しての情報を引き出すことができる。水溶性白金(IV)[PtMe_3]_2SO_4H_2Oの反応については殆ど調べられていない。そこで上述のNMRの長所を生かして、白金原子に対する配位子の化学量論を変化させながらスペクトル変化を調べた。配位子としては最も簡単な生体関連分子を使用した。なお水溶液中の溶存種を同定する一助として、有機溶媒系に可溶な配位子については[PtMe_3I]_4との反応を行い参照実験とした。結晶化できた幾つかのものについてはX線構造解析を試みた。メチルイミダゾールとの反応では、順次3個の分子が平衡に従い配位していく様子が判明した。有機溶媒中での[PtMe_3I]_4とメチルイミダゾールの反応では単結晶が得られ構造決定により配位状況を確定する予定である。イミダゾール(C_3H_4N_2)は水溶液中では不溶性沈殿を生じ、ろ液についても解析不能のシグナルが得られた。一方有機溶媒中の反応ではメチルイミダゾールと同様に平衡が認められ単結晶が得られた。水溶液中ではおそらくクラスター化反応が進行しているものと思われる。グアノシンとの反応では白金:配位子の当量比が1:1付近で8位のCHプロトンとの^<195>Ptによるカップリングが認められるが、錯体の単離には至っていない。一方、メチルアミンでは錯形成が認められるが不溶沈殿として[PtMe_3(OH)]_4も副生する。ヒドロキナトリウムのナトリウム塩との反応では錯形成が認められるものの溶液が不透明に濁る状態で化学量論は不明である。酢酸やそのアルカリ塩は錯形成を全く起こさなかった。全体としてイミダゾール系は、よく吟味できる反応を起こすが、他の生体関連小分子は同定の困難な副反応を起こしやすい。
血小板凝集因子ポドプラニンの腫瘍型糖鎖構造の徹底解明と抗体医薬開発

ポドプラニン(PDPN)は、種々の腫瘍に高発現しているムチン型糖タンパク質で、申請者らは腫瘍組織由来PDPN上に腫瘍特異的な糖鎖修飾の存在を示すデータを取得し、腫瘍型PDPNを認識する複数の新規抗体を樹立した。変異型PDPNを用い腫瘍型PDPN認識抗体の認識部位を特定する、代表的な糖鎖不全株を樹立し利用する、種々の細胞株の糖鎖関連遺伝子の網羅的解析を行い腫瘍型糖鎖構造を推定する等、様々な解析結果を総合して腫瘍型PDPNの実態を明らかにした。また腫瘍型PDPN抗体の抗体遺伝子からキメラ抗体を作製し、抗腫瘍効果を検証した。その結果、腫瘍型PDPN認識抗体が抗体医薬開発に有効であることが示唆された。ポドプラニン(PDPN)は、種々の腫瘍に高発現しているムチン型糖タンパク質で、リンパ管マーカーやがん幹細胞群マーカーとして使用されている。申請者らは腫瘍組織由来PDPN上に腫瘍特異的な糖鎖修飾の存在を示すデータを得、腫瘍型PDPNを認識する複数の新規抗体を取得した。本研究では、これらの抗体を利用してPDPN上の腫瘍型糖鎖構造とその生合成機序を徹底的に解明し、さらに、PDPN上の腫瘍特異的糖鎖構造のがん幹細胞形質への関与を調べること、また、得られた腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体医薬開発の可能性を検証することを目的とした。本年度は、腫瘍特異的糖鎖構造の付加部位の絞り込みとして、まず、欠損型PDPN-Fcキメラタンパク質をほ乳類細胞に強制発現、精製し、種々の腫瘍型糖鎖構造認識抗体の反応性についてELISA法を用いて解析を行い、糖鎖付加部位候補領域を特定した。糖鎖付加部位候補領域に存在するセリンとスレオニンをアラニンに置換し、抗体の反応性をフローサイトメトリー解析、ウェスタンブロット法にて解析した。さらに、特定された糖鎖付加部位周辺のアミノ酸配列もアラニン置換を行い、詳細な解析を行った。その結果、腫瘍型糖鎖構造認識抗体は、これまでの解析法では糖鎖付加の検出されなかった部位に付加された糖鎖構造と、かつ、糖鎖付加部位周辺のPDPN本体のアミノ酸配列の両方を認識することで、腫瘍に特異的な反応性を示す事が可能になったと推測された。また、腫瘍型糖鎖構造の生合成に関与する糖転移酵素関連遺伝子群の特定のため、独自に開発した185種類の糖鎖関連遺伝子に対する定量的real-time PCRの系を用い、各種がん細胞株や正常細胞株の糖鎖遺伝子の網羅的解析を行い、神経膠腫の中で最悪性の神経膠芽腫と低悪性の神経膠腫を区別する糖転移酵素のプロファイリングを明らかにした。本年度は、特定の付加部位に腫瘍特異的糖鎖構造を保持した腫瘍型タンパク質の安定供給源として、N末端にタグを付加した複数種類のN末端欠損PDPN安定発現株を樹立した。N末端欠損PDPNタンパク質の産生・精製等を行う過程で、意図した位置よりC末端側の、特定の部位で切断されたPDPN分子が一定量混入する現象が明らかとなった。このPDPN断片の由来等の解析を行った。また本年度は、腫瘍型糖鎖構造の生合成に関与する候補糖転移酵素遺伝子のノックアウト(KO)細胞株の樹立を開始した。GnTI-KO細胞株、シアル酸トランスポーターKO細胞株、ガラクトーストランスポーターKO細胞株など、レクチンで表現型の変化を簡単に検出出来る株から着手し、KO株樹立方法を確立した。樹立されたKO細胞株を基にPDPN強制発現株を樹立し、得られた腫瘍型糖鎖構造認識抗体の反応性を確認した。本年度は、腫瘍型糖鎖構造の生合成に関与する候補糖転移酵素遺伝子のノックアウト(KO)細胞の樹立と、樹立した細胞へのPDPN分子の強制発現再構築により、腫瘍特異的PDPN抗体の反応性の検索の実行を目標とした。その結果、KO細胞株における腫瘍特異的PDPN抗体の反応性消失を確認できた。ただし、いくつかの腫瘍特異的PDPN抗体において、予想された反応と異なる反応性を示す場合があったため、引き続き精査中である。また、計画通り、本研究に使用している腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体遺伝子を取得し、遺伝子改変によりヒト定常領域とのキメラ抗体を作製し、活性を保持していることを確認した。申請者らは腫瘍組織由来PDPN上に腫瘍特異的な糖鎖修飾の存在を示すデータを得て、腫瘍型PDPNを認識する複数の新規抗体を取得した。本研究では、これらの抗体を利用してPDPN上の腫瘍型糖鎖構造とその生合成機序を徹底的に解明し、さらに、PDPN上の腫瘍

特異的糖鎖構造のがん幹細胞形質への関与を調べること、また、得られた腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体医薬開発の可能性を検証することを目的とした。本年度は、N末端にタグを付加した複数種類のN末端欠損型PDPN安定発現株樹立により、特定の付加部位に腫瘍特異的糖鎖構造を保持した腫瘍型PDPN発現細胞の安定供給を行い、これまでに得られた複数の腫瘍特異的抗体の抗原となる糖鎖修飾部位特定のための実験に供した。また、GnTIノックアウト細胞株、シアル酸トランスポーターノックアウト細胞株、ガラクトーストランスポーターノックアウト細胞株など、レクチンで表現型の変化を簡単に検出出来る糖鎖不全細胞株を樹立し、樹立した糖鎖不全細胞株に発現している強制発現ではないPDPNに対して、これまでに得られた複数の腫瘍型糖鎖構造認識抗体の反応性を確認し、どのような糖鎖構造が腫瘍特異的抗体の抗原となっているかを推定した。さらに腫瘍型糖鎖構造認識抗体について、ヒトキメラ型に変換し、マウスにおける抗腫瘍実験を実施し、腫瘍特異的抗体の抗腫瘍効果を検証した。ヒトキメラ型に変換した際、活性が低くなってしまった抗体について、L鎖の改良など実施し、抗体結合活性が上昇する結果として抗腫瘍活性が上昇することを確認した。ポドプラニン(PDPN)は、種々の腫瘍に高発現しているムチン型糖タンパク質で、申請者らは腫瘍組織由来PDPN上に腫瘍特異的な糖鎖修飾の存在を示すデータを取得し、腫瘍型PDPNを認識する複数の新規抗体を樹立した。変異型PDPNを用い腫瘍型PDPN認識抗体の認識部位を特定する、代表的な糖鎖不全株を樹立し利用する、種々の細胞株の糖鎖関連遺伝子の網羅的解析を行い腫瘍型糖鎖構造を推定する等、様々な解析結果を総合して腫瘍型PDPNの実態を明らかにした。また腫瘍型PDPN抗体の抗体遺伝子からキメラ抗体を作製し、抗腫瘍効果を検証した。その結果、腫瘍型PDPN認識抗体が抗体医薬開発に有効であることが示唆された。本年度は、がん細胞表面抗原ポドプラニン(PDPN)上の腫瘍型糖鎖構造を決定するため、糖鎖付加部位の同定と糖付加最小単位PDPNタンパクの大量精製を行うこと、また、種々の腫瘍細胞における腫瘍型糖鎖構造プロファイルと糖転移酵素関連遺伝子プロファイルの比較検討によりその生合成機序を解明し、糖鎖構造の特定を行うこと、を計画しており、順調に達成している。また、腫瘍特異的糖鎖構造の付加部位の絞り込み研究材料として、種々のPDPN-FcキメラやAla置換型PDPNなどを安定的にタンパクを取得できる系を確立したことは大きな成果である。さらに、腫瘍細胞株だけでなく、比較的正常に近いと考えられる細胞株についても糖転移酵素関連遺伝子プロファイルのデータを蓄積したことも、プロファイルの比較検討に役立った。また、本研究については、学会発表および論文発表を行っており、研究は順調に進んでいる。当初の計画通り、本年度に樹立した糖転移酵素遺伝子ノックアウト細胞株を用い、対象とした糖鎖構造の種々のがんの機能的関与(多分化能・自己複製能や浸潤能・運動能など)の解析を行う。作製したキメラ型抗体の抗体依存性細胞障害活性や補体依存性細胞障害活性を調べる。糖鎖生物学当初の計画通り、本研究に使用している腫瘍型糖鎖構造認識抗体の抗体遺伝子を取得し、遺伝子組換えによりヒト定常領域とのキメラ型抗体を作製する。作成したキメラ型抗体の活性を検定する。また、腫瘍型糖鎖構造生合成に関与する糖転移酵素関連遺伝子のノックアウト細胞株の樹立を行い、糖鎖構造の表現型(浸潤能や運動能など)への機能的関与を調べる。
アモルファス半導体における非線形光学応答

テスト試料として、疑似アモルファス相と考えられるエタノール溶液中のクレシルヴィオレットを用い、我々の開発したCPG法によりその吸収及び発光帯領域において微細に分解されたスペクトルの観測に成功した。CPG法は新しい非線形分光法であるため、非線形応答の基礎自身が必ずしも明確でなく、その点に関する以下の知見を得た。二種類のCPG信号の発生機構を見いだした。このことより、CPG法における選択励起機構が有効に機能していることを示した。励起エネルギーに依存した位相緩和時間の値として、0.3psから4psをラインフィッテングにより求め、分子構造の安定性との相関を示した。観測される微細エネルギー構造の起源に関連し、分子構造を反映した高周波振動モードと低周波モードとの結合モードの存在によることを強く示唆するデータを得た。CPG法と共鳴CARSとの非線形応答の相違を明らかにした。我々の提案による新しい非線形分光法であるコヒーレント・ポピュレーション・グレーティング(CPG)法のアモルファス半導体への適用に関わる基礎的検討を行った。研究実績の概要は以下の通りである。探索用光源として紫外から近赤外に渡る広帯域サブナノ秒パラメトリックパルス光の発生を実現した。これにより、各種アモルファス系を対象とするCPG法の適用が可能となった。次に、CPG信号の微細スペクトルの一般的な解析法を確立した。これにより、アモルファス半導体における電子遷移に伴う不均一幅、均一スペクトル幅、位相緩和時間等を求めることが可能となり、更に、アモルファス相において観測されることの期待される微細スペクトルのエネルギー位置を精密に決定することが可能となった。本解析法の有効性を確かめるため不均一系の一例として、エタノール中クレシルバイオレットにおいて観測されるCPG信号に対して本解析法を適用した。その電子遷移に伴う不均一幅が2cm^<-1>以下、基底状態及び励起状態での均一半値半幅が各々1.3cm^<-1>及び2.3cm^<-1>であることが分かった。又、基底状態及び励起状態でのそれぞれに対応する位相緩和時間は4.0及び2.3ピコ秒以上であることが分かった。その微細スペクトルは、特定のエネルギー間隔よりなる集合により形成されていることが判明した。以上のことから、アモルファス半導体の微細構造をそのエネルギー構造の測定を通じて調べるためにCPG法を応用する事は、十分可能であることが分かった。これまで、疑似アモルファス相と考えられるエタノール溶液中のクレシルヴィオレットを用い、CPG法によりその吸収及び発光帯領域において微細に分解されたスペクトルの観測に成功してきた。本年度は、非線形応答の基礎自身を明確にするため、テスト試料として各種色素溶液を用いCPG信号の観測及び解析を行った。すでに得られている他に、新しいCPG信号の発生機構を見いだした。CPG法と共鳴CARSとの非線形応答の相違を時間分解測定により明らかにした。
インドネシアにおける現代ダンスの史的考察-サルドノ・W・クスモを中心に

サルドノ・W・クスモの活動をめぐって、インドネシアでの現地調査および国内での文献調査を行った。結果として比較的豊富な映像資料、詳細に記された活動履歴、文献を入手した他、多くの貴重な証言を得た。とりわけサルドノ本人の証言は、広く流布するサル・ムルギヤントの言説と食い違う部分が多く、アメリカのモダンダンスの影響よりもむしろインドネシアの政治・社会状況との深い連関をふまえた、より内在的な歴史記述の可能性が見えてきた。サルドノ・W・クスモを中心に据えつつ、インドネシアの現代ダンスの歴史と現状を調査し、考察するための第一歩として、これまで学術的にはほとんど扱われてこなかったサルドノ個人の活動に関する資料収集とその分析を本年度の研究の主たる内容とした。当初の実施計画通り、10月下旬と3月下旬に二度の現地調査を行った。特に「23月」を予定していた二度目の調査については、大学での業務の合間を縫う形になり、十分な時間を確保できなかったが(次年度はタイミングを調整し、作業の遅れを取り戻したい)、サルドノ自身の側で既に詳細な活動履歴が整理されていること、また想像以上に映像資料が多く残されていることが判明した。加えて、サルドノ自身の著作『ハヌマーン、ターザン、ホモ・エレクトゥス』はその完全な英語訳を入手し、かつてサルドノのもとでダンサーとして活動していた研究者サル・ムルギヤントによる先駆的な研究論文(NY大学に提出された未刊行の博士論文)も入手できた。インタヴューについては、地域の政治・社会状況に積極的にコミットしながら多様な活動を展開してきたサルドノの経歴について概略を知るとともに、サルドノがソロ(スラカルタ)で指導している学生の作品の記録映像をいくつか見ることができ、これによって芸術家、教育者、社会的アクティヴィストとしてのサルドノの非常にユニークな側面が見えてきた。いわゆるインドネシアの「現代ダンス」の父というイメージよりは、過激な前衛性と、多文化主義の立場ゆえに、きわめて独特の位置を占めながらも大きな影響力を保つ存在という、より具体的な認識を得た。いまだ手探りの調査・研究ではあるが、収集した資料については調査と分析を現在進めており、近く何らかの形で成果の公表を始めたい。
腎移植患者におけるPolyomavirus BK感染に関する前向き研究

BKウイルス(BKV)腎症は腎移植後の重要な合併症であり、発症すると移植腎生着率が大きく低下する。BKVに関する研究の殆どが欧米から発せられたものである。今回、尿と血漿を用いたBKVの定量的核酸同定検査を確立し、前向きにスクリーニングを行うことで、日本の腎移植患者におけるBKV再活性化につき検討した。対象は九州大学病院で実施した腎移植62例で全て生体腎移植であった。BKV尿症を14例に認めたが、血症、腎症への進展はなかった。14例中8例は尿中BKVが自然消失し、6例でBKV尿症は低ウイルス量のまま遷延している。現代の免疫抑制療法における日本の腎移植患者ではBKV感染が軽症であることが判明した。現在外来通院中の腎移植後の患者のうち、新規にBKウイルス腎症を発症した症例を平成25年度は3症例に認めた。そのうち難治例であった1症例の尿検体を経時的に保存、他の尿中デコイ細胞陽性例の尿検体も多数保存し、陽性と思われる検体を十分量得た。その後、核酸抽出装置によりDNAの抽出を試みた。尿中のウイルスDNAは微量であり、尿濃縮の工程や抽出キットの選択のため複数回の検討を要した。抽出キットは4種類あり、その中から最もDNA収量の多いものを選択した。また、PCRのプライマも結果的に3種類準備して複数回の検討を行った後、そのうち一つを選択、PCRの条件設定を行った。最終的には同じ検体を用いた外注検査の結果と照合し、診療に応用可能な感度でPCR検査が行えることを確認した。この間、米国移植学会のBKウイルス感染症に関するガイドライン改訂版が平成25年に発表された。PCR検査の頻度と期間が本研究の当初の計画(最初の6ヶ月間は毎月、以後3ヶ月毎に24ヶ月まで)と異なるものになっている(最初の24ヶ月間は3ヶ月毎、以後年1回5年まで)。また、生体腎移植症例については今後、移植前にドナーとレシピエントのBKウイルス抗体を測定できるようになったことから、BKウイルス陽性ドナーから陽性、あるいは陰性レシピエントに対して腎移植が行われた際の腎症発症リスクに対する検討も加えるため、申請内容の変更を要し、前向きコホート研究が平成25年度中には開始できず、平成26年からの開始予定となった。前者の問題については当院のBKウイルス腎症の診断時期が移植後平均156日後であることから、PCRスクリーニングの期間を移植後5年まで延長しても、BKウイルス腎症の頻度、本研究結果に大きな影響を与えないものと推測している。平成25年度は腎移植患者の尿および血漿検体を用いたBKウイルスの定量的PCR法の条件設定を行い、同一検体を用いた検討で外注業者が行っている同検査とほぼ同じ結果が得られることを確認した。同時に米国移植学会の診療指針の最新版が発行されたため、それに沿ってPCRスクリーニングの間隔を変更、倫理委員会に変更の承認を得た。平成26年度より実際の腎移植患者から前向きに尿・血漿検体を採取し、PCRスクリーニングを開始した。平成26年度は同意を得た27症例で検査を行い、平成27年度もこれを継続、平成27年度末で55例に対して前向きスクリーニングを行った。欧米での報告を見ると、BKウイルス腎症の頻度が1-2%に低下しているものの、ウイルス血症8-10%、ウイルス尿症30-40%であり、全ての段階を含むウイルス再活性化率は40-50%程度とされている。これに対し、本研究では12例/55例(21.8%)にウイルス尿症を認めたが、血症や腎症に進展する症例を認めなかった。尿症の発症時期としては全12例が6ヶ月以内に初回診断しており、早期スクリーニングの重要性は再確認できた。ただし、再活性化の頻度は欧米の報告に比して明らかに低い。最終報告をまとめるにあたり、免疫抑制療法や患者背景を含め、低い再活性化に関与する因子を統計学的手法を用いて明らかにする予定である。泌尿器科学核酸抽出装置のデモンストレーションおよび購入に要する期間、抽出キットの選択およびプライマの設計を含むPCRの条件設定に時間を要したことと、腎移植前向きコホート研究の開始が遅れていることがある。前者については平成25年度内に達成出来たため、現在の問題は後者である。研究課題の方向性に変更はない。平成25年も当院の腎移植症例は105件と前年より更に増加しており、病理学的に確認し得たBKウイルス腎症や10000コピー/mL以上のBKウイルス尿症の存在が示唆される

尿中デコイ細胞持続陽性症例も一定の頻度で発生しているため、早期に前向き研究が開始されれば目標症例数、あるいはそれに近い数の症例の集積が可能と推測している。平成25年度に必要な機器と試薬、旅費に必要な額を使用したが、次年度の試薬購入のための金額が増加することが予想されるため、次年度に一部回すことにしている。PCR用試薬の購入に充てる予定。
新規の肥満糖尿病抵抗性マウスにおける著しい異所性褐色脂肪変容の基盤解明

本研究は、可溶性受容体LR11ノックアウトマウスを用いて、白色脂肪から褐色脂肪への機能転換を制御する機序を解明し新規の肥満と糖尿病の修飾法を探索することを目的とした。細胞生物学的解析から、褐色細胞の機能獲得にLR11がインヒビターとして働くことが明らかになった。細胞内シグナル解析から、可溶性LR11の褐色脂肪分化への抑制作用には、BMP受容体と結合することでBMP7により刺激されるシグナル伝達を抑制することが一因と考えられた。以上より、LR11は褐色脂肪機能獲得のインヒビターであり、肥満や糖尿病の新規治療に結びつく可能性が示された。近年、機能的な褐色(ベージュ)脂肪がヒト成人脂肪組織に存在することが明らかになった。本研究は、申請者が世界に先駆けて作成した平滑筋細胞分化モジュレータ受容体LR11(J Clin Invest 2008)のノックアウトマウスの脂肪細胞に異所性褐色脂肪分化が誘導されることから、このモデルを用いて、白色脂肪から褐色脂肪への機能転換を制御する分子機序を解明することを目的とする。昨年度、一部の代謝生理学的解析、細胞生物学的のための細胞調整を終了した。以下、要約する。ノックアウトマウスに高脂肪食負荷を行うと、野生型マウスでは体重増加と脂肪肝、高血糖、高インスリン血症を認めるのに対し、ノックアウトマウスでは体重はほとんど増加せず肝脂肪蓄積を認めない。糖負荷試験で、ノックアウトマウスは野生型マウスに比べ糖負荷30分、60分の血糖値とインスリン値が有意に野生型マウスより低下していた。インスリン投与試験では、インスリン投与15分、30分のノックアウトマウス血糖値は有意に低下していた。脂肪組織のリアルタイムPCRによる遺伝子発現解析の結果、皮下脂肪の褐色特異的な遺伝子PGC1α、Cidea、UCP-1、Elovl3、BMP8bmRNA発現が亢進していた。このような状態を示すノックアウトマウス皮下脂肪組織と褐色脂肪組織からそれぞれの初代培養前駆脂肪細胞を樹立し、分化誘導をかけて遺伝子発現について検討した。ノックアウトマウス由来細胞はPGC1α、Cidea、UCPー1発現が亢進し、この作用はLR11可溶性蛋白を添加することで低下した。このような培養脂肪細胞解析結果から、本マウスの表現型は脂肪細胞の遺伝子異常とそれにもとづく代謝異常に起因することが推測された。褐色脂肪は白色脂肪と異なりエネルギー消費を担うため、それを発生誘導し機能発現することで糖尿病や代謝疾患の治療に結びつくと期待される。申請者は世界に先駆けて作成した新規分化モジュレータ可溶性受容体LR11のノックアウトマウスの脂肪細胞に異所性褐色脂肪分化が著しく誘導されることを発見し、海外共同研究によりその一部の分子機構を解明した。本研究は、このモデルを用いて、白色脂肪から褐色脂肪への機能転換を制御する分子機序の全容を解明し新規の修飾法を探索することを目的としている。LR11ノックアウトマウスと野生型マウスの安静時エネルギー消費量を測定したところ、ノックアウトマウスではエネルギー消費量が増大していた。この変化は、ノックアウトマウスと野生型マウス脂肪細胞から培養した細胞レベルでも同様に認められ、マウス個体のエネルギー消費量の増大は、主にマウス脂肪細胞の変化に基づくことが明らかになった。培養細胞のmRNA発現解析を行った結果、マウス脂肪組織同様に、ノックアウトマウスでは褐色遺伝子の発現が亢進し、この発現誘導はBMP/smad経路の活性化を伴っていた。可溶性リコンビナントLR11を添加することで、この活性化は抑制された。さらに免疫沈降実験から、可溶性LR11はBMP受容体と複合体形成することが明らかになり、可溶性LR11が本経路の受容体と結合することでシグナル伝達を抑制すると考えられた。LR11ノックアウトマウスの病態生理学解析と培養細胞にみとめられる遺伝子発現変化の原因となるシグナル伝達異常を同定することができた。褐色脂肪細胞は脂肪細胞の特徴を有するとともに、熱産生によりエネルギー消費を担うため、それを誘導することで糖尿病や代謝疾患の治療に結びつくことが期待される。研究代表者は可溶性受容体LR11のノックアウトマウスの脂肪に異所性褐色脂肪分化が著しく誘導されることを発見した。本研究は、このモデルを用いて、白色脂肪から褐色脂肪への機能転換を制御する分子機序を解明し新規の修飾法を探索することを目的とした。はじめに、培養細胞を用いた細胞生物学的解析を行ない、ノルエピネフリン刺激により亢進した酸素消費量がリコンビナントLR11を添加することにより抑制された。また、亢進したグリセロールの放出もLR11リコンビナントを添加することにより抑制された。これらの結果から褐色細胞の機能獲得にLR11がインヒビターとして働いていることが明らかになった。そこで、LR11作用に関わる細胞内シグナル解析を行なった。マウス初代培養脂肪細胞において、褐色脂肪細胞の機能獲得に重要な因子であるBMP7刺激によりSmad1/5/8のリン酸化が誘導されるのに対し、リコンビナントLR11存在下ではBMP7によるリン酸化が抑制された。免疫沈降実験により、可溶性LR11はBMP受容体と複合体を形成することが示された。これらの結果から、可溶性LR11の褐色脂肪分化への抑制作用には、BMP受容体と結合することでBMP7により刺激されるシグナル伝達を抑制することが一因であると考えられた。

したがって、LR11はBMP7シグナル経路を抑制することにより褐色脂肪形成及びエネルギー産生を負に調節する可能性がある。以上より、LR11は脂肪細胞の褐色脂肪機能を獲得する過程を調節するインヒビターであり、LR11やその作用経路を標的とした抑制治療は褐色脂肪を賦活化することで、肥満や糖尿病の治療に結びつく可能性が示された。本研究は、可溶性受容体LR11ノックアウトマウスを用いて、白色脂肪から褐色脂肪への機能転換を制御する機序を解明し新規の肥満と糖尿病の修飾法を探索することを目的とした。細胞生物学的解析から、褐色細胞の機能獲得にLR11がインヒビターとして働くことが明らかになった。細胞内シグナル解析から、可溶性LR11の褐色脂肪分化への抑制作用には、BMP受容体と結合することでBMP7により刺激されるシグナル伝達を抑制することが一因と考えられた。以上より、LR11は褐色脂肪機能獲得のインヒビターであり、肥満や糖尿病の新規治療に結びつく可能性が示された。モデルマウスの表現型を負荷試験で証明できた。病態生理学解析から予想された病態変化とその起因となる遺伝子変化を検出することができた。これらの結果、計画とおり遺伝子解析へと移行することができた。また、初代培養細胞の調整方法を樹立し、次年度それを用いた解析を行うことが可能となった。計画とおりに、マウス病態生理学解析と生物学的解析に着手したことから、さらなる原因解明とともに、この褐色脂肪トランスディファレンシエーションのインヒビターであるLR11遺伝子誘導の環境による制御機構の解明に着手する予定である。1.環境変化に伴うLR11発現制御に関わる病態生理学解析野生型マウスの寒冷刺激、食餌負荷における脂肪組織などのLR11mRNA発現制御と血中可溶性LR11濃度を解析し、昨年度明らかにした褐色脂肪へのブラウニングインヒビターとしての生理学的意義を明らかにする。2.培養細胞を用いた細胞生物学的解析リコンビナント可溶性受容体LR11による前駆脂肪細胞、白色脂肪細胞における分化誘導の抑制効果と、それに対する中和抗体の効果を解析する。これらの、病態生理学、細胞生物学的アプローチにより得られた成果を合わせて、本研究目的である世界で初めて同定された脂肪細胞トランスディファレンシエーションモデルでみられた、白色脂肪から褐色脂肪への機能転換を制御する分子機序を総合的に解明し、その成果から新規の修飾法を提示する。代謝学初年度、計画とおりに、マウス病態生理学解析と生物学的解析を進めることができたことから、次年度はこれらを基盤に包括的な遺伝子発現解析とそれによる細胞病態の原因解明に着手する。1.LR11ノックアウトマウスの病態生理学解析LR11ノックアウトマウスと野生型マウスの褐色脂肪組織、皮下脂肪組織と腸間膜脂肪組織からRNA抽出し網羅的にマイクロアレイ解析を行い遺伝子発現プロファイルからそれぞれのLR11とその標的遺伝子を解析する。脂肪組織の熱産生能、酸素消費量、細胞内小器官に関する組織学的検討、LR11ノックアウトマウスの皮下脂肪における異所性褐色脂肪と個体の生理学的指標、代謝病態的解析結果を比較検討する。2.培養細胞を用いた細胞生物学的解析初年度に樹立したマウス皮下脂肪組織と褐色脂肪組織
臨床検体データーによる肉腫様腎癌実験モデルの有用性の検討と新たな治療標的の模索

本研究では、悪性度が高く、薬物療法による治療が困難とされる肉腫様腎癌(s-RCC)について、その悪性度と関連する特異的分子の同定とその悪性度に関与する機能の解明を目的とした。まずs-RCCの実験系を確立するために、s-RCC類似細胞株の樹立を行い、臨床検体として使用可能なヒトs-RCC組織と比較検討を行い、s-RCCの進展に関連する分子の同定とメカニズムの解明を行った。また腎癌の進展に免疫機構の特異性が考えられており、s-RCCにおいて免疫系の関与するメカニズムの解明が必要であると考え、s-RCCと免疫関連細胞の臨床的意義について検討した。肉腫様腎癌(sarcomatoid RCC; s-RCC)症例について同意の得られた症例に限り、臨床倦怠を採取し、臨床データーを収集し、解析を行った。またs-RCCと同様の生物学的特性を合わせもつ細胞株を用いて、s-RCCの悪性度(増殖、アポトーシス、浸潤への関与)調査し、その悪性度に関与する分子を同定しつつある。s-RCCの臨床検体データーの収集と解析はおおむね終了している。また細胞培養を用いたs-RCCの生物学的特性あるは悪性度に関与する因子の同定についても、現在進行中である。これまでの期間に、主たる研究課題である、肉腫様癌実験モデルの有用性の検討と新たな治療標的の検索をおこなった。ヒト肉腫様腎癌の臨床プロファイルについて考察し、他の腎細胞癌との臨床的事項の差異について比較検討し、分析を行った。次にヒト肉腫様腎癌において、他の腎癌細胞株と比較して、特徴的に発現している分子を検索した。さらに病理学的に類似している鉄ニトリロ三酢酸腹(Fe-NTA)誘導ラット腎癌において癌関連因子として特徴的に発現している分子を同定し、臨床的にヒト肉腫様腎癌細胞株に特徴的に発現している分子として、共通して高発現している可能性が高いと考えられる分子を同定した。次にFe-NTA誘導ラット腎癌から肉腫様腎癌の特徴を有する細胞株を樹立し、細胞株による実験系の確立を行うことを計画した。まず、その樹立した細胞株に対して分子生物学的検討を行い、肉腫様腎癌細胞株に特徴的に発現していると考えられる分子の検索を行った。さらにsh-RNAを用いた機能抑制実験やそのほかの分子生物学的手法を用いることにより、肉腫様腎癌細胞株の増殖や分化に関連する可能性があると考えられる関連分子を検索するととともに、同定された分子の機能解析を行った。今後は同定された関連分子について、臨床プロファイルと検討することにより、生命予後あるいは病勢進行との関連性について統計学的手法を用いて調査することにより、その候補分子が治療の標的分子となる可能性があるかどうかについて詳細な検討を加える予定である。現在までのところ、大きな問題はなく、臨床的な情報の収集および細胞株の樹立、細胞株を用いた分子生物学的手法の確立とその応用を計画しているところである。本研究は、悪性度が高く、薬物療法による治療が困難とされる肉腫様腎癌(s-RCC)について、その悪性度と関連する特異的分子の同定とその悪性度に関与する機能の解明を目的とした。最初に、s-RCCの実験系を確立するために、s-RCC類似細胞株の樹立を行った。Fe-NTA誘発ラット腎癌から安定した細胞株(RKFe細胞)を樹立した。臨床検体として使用可能なヒトs-RCC組織とRKFe細胞に同様に高発現している癌関連分子の検索、同定を分子生物学的あるいは遺伝子工学的手法を用いて行った。上記の特異的な分子を同定し、それらの癌の進展に関与するメカニズムに関する解明を行った。それら特異的分子が癌の進展に関して、増殖、アポトーシス、浸潤、遊走、接着のどのメカニズムに関与するのかを各種アッセイ法を用いて解明した。またRKFe細胞とACHNや786-Oといったそのほかの腎癌細胞株における発現分子の違いおよび癌の進展に関与するメカニズムの違いについて、分子生物学的手法および免疫組織学的手法を用いて解明に努めた。腎癌の進展に免疫機構の特異性が考えられている。s-RCCにおいても免疫系の関与するメカニズムの解明が必要であると考え、ヒトs-RCC組織を用いて、CD57陽性細胞、CD68陽性細胞、肥満細胞といった免疫関連細胞のs-RCCへの臨床的意義について検討した。s-RCCにおける肥満細胞の発現は、血管新生を介した癌の進展に関与している可能性が示唆されることが判明した。今後さらにRKFe細胞を用いた免疫応答細胞との関与およびクロストークの可能性とそこに関与する分子の同定を検討する予定である。s-RCCの癌の進展に関与する分子とそのメカニズムの同定について、国際学会等で発表を行い、情報提供と情報発信を行った。今後は科学雑誌における論文化を目指し、さらなる情報発信に努めたい。

今後はs-RCCの臨床検体データーと細胞株の悪性度に関与する生物学的因子について比較、検討する。その中で、悪性度に関する分子について網羅的解析を行い、重要な分子を同定する。その重要分子の機能抑制による創薬の可能性について検討する。今後は肉腫様腎癌の臨床プロファイルと樹立肉腫様腎癌細胞株における特有に発現する、あるいは機能する分子を同定し、さらにそれらの分子の発現による、癌の進展への関与について明らかにする予定である。さらに臨床プロファイルに中で生命予後あるいは病勢進行と関連する分子を検索し、候補分子が治療対象となる標的分子の可能性となるかどうかについて検討する予定である。泌尿器腫瘍学