hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低環境負荷型RPC埋設型枠を用いたRC床版の実用性と低コスト施工システムの構築

これは合成面が曲げ引張を受け、RC床版コンクリートとRPC埋設型枠とで弾性係数や引張強度の差により「ずれ」、すなわち一面せん断破壊となりはく離が生じた。改善し凸型はコンクリートが挿入される部分を60%とすることで、コンクリートが挿入される面のせん断強度が向上される。静荷重実験および走行荷重実験の結果では、凸型とすることではく離の防止が可能となり、破壊時にはRPC埋設型枠が引張破壊した。次に、RPC埋設型枠は工場で製作し、現地で組みあわせすることから、埋設型枠と埋設型枠の接合部が弱点となる。そこでこの構造として(1)埋設型枠の接合部にφ30mmのコアを設け直接コンクリートを挿入し、一体構造とする方法、(2)φ30mmのコアにRPC材で製作した円柱、(3)鋼棒を挿入する方法で試験体を製作した。走行荷重実験を行った結果、耐荷力は(3)鋼棒、(2)RPC材、(1)直接コンクリートを挿入する順となった。したがって、埋設型枠との接合部には同一材料で製作したRPC材を用いることを提案する。以上より、RPC埋設型枠RC床版は、RPC埋設型枠の付着面を凸型とし、埋設型枠と埋設型枠の接合部を重ね継ぎ手構造とし、そとの一部にコアを設け一体性を高めることで実用性を評価することができる。
Mycoplasma Capricolum染色体複製開始因子の同定

(1)申請者は過去に、マイコプラズマ(Mycoplasma capricolum)のゲノム複製がdnaA遺伝子とその下流に存在するnon-coding領域に相当する1560bpの領域内から開始されることを、neutral/alkalineの2次元電気泳動法を用いて示していた。本研究ではこの1560bpをさらに狭めるために、調べる領域の見直しと、得られた結果の定量的な解析を行った。その結果、複製開始は上記の1560bpの中のdnaAの下流側882bp中で起こっていることが明らかになった。また複製フォークは両方向へ進行するが、dnaA遺伝子の5 ́側への進行が3 ́側への進行より遅いことが示された。これらのneutral/alakaline二次元電気泳動の結果に対する解釈は、neutral/alakaline二次元電気泳動法の結果によっても確認された。複製フォークの非対称の進行は過去において大腸菌でも報告されている。しかし解析する系によっては全く非対称性が見られないこともあり、これら結果の不一致は解析法の違いによるものであると見なされて来た。本研究では過去におけるどの系よりも本来の原核生物染色体複製に近い状態を観察しており、上記の論争に一つの決着をもたらしたものと考えられる。(2)マイコプラズマのdnaA遺伝子を大腸菌中で過剰発現させた。このポリペプチドがATP結合能を有することをクロスリンク法で確認した。またこのペプチドに対する抗体を作製し、マイコプラズマにおけるDnaA蛋白質の検出を試みた。作製した抗体は用いた抗原のみならず、別の構成を持つ発現系から得られたマイコプラズマdnaA由来のポリペプチドにも効率よく結合した。しかしマイコプラズマ細胞由来の蛋白質への結合は認められなかった。このことはマイコプラズマ細胞中におけるDnaA蛋白質の存在量が、大腸菌で報告されている800から2000分子より二桁以上少ないことを示唆している。
ワイヤレス式・有線式を統合したEV向け次世代大容量超急速充電器の開発

電気自動車の有線充電及びワイヤレス充電の両者に適用可能な,次世代超急速充電器を開発することを目的とし,要素技術としてマルチセル方式を用いた高圧向け電力変換器の試作,高周波絶縁DC-DCコンバータの新たな制御方法の開発及び,漏えい磁界の低減が可能な新たなワイヤレス給電システムの開発を行った。電力伝送の増加に伴い,システムの入力が高圧受電(6.6kV)となることが想定されるため,本研究では,セル方式を用いた新たな絶縁型三相AC-DC電力変換回路トポロジーを考案し,ミニモデルを用いた実証試験を行った。なお,実証試験に実施したミニモデルの定格電力は実システムの1/5(1.32kV)である。実証試験より,提案した新たな絶縁型三相AC-DC電力変換器により所望の動作が可能であることを確認した。また,三相AC-DC電力変換器内で使用される高周波絶縁DC-DCコンバータでは,回路の入出力電圧比が大きい場合に回路効率が急激に低下するという問題があった。そこで本研究では,1次側にT形3レベルインバータを適用した絶縁型DC-DCコンバータに対して,入出力電圧に応じて動作モードを変更することで,入出力電圧比が大きい場合にもソフトスイッチングを維持することが可能となる新たな制御方法を開発し,実験機による検証を行った。実機検証により従来の変換器よりも高効率化が実現可能であることを明らかにした。一方,ワイヤレス充電システムの開発では,大電力化によって問題となる漏えい磁界を抑制するため,新たな構造をもつワイヤレス給電システムを開発した。本システムは,三相交流によりワイヤレス給電を行うことに特徴があり,伝送コイルを複数に分割することで漏えい磁界の抑制が可能である。本システムの有用性を評価するため,出力電力22kWのシステムを開発し,電力伝送試験を実施した結果,システム効率91.5%を達成した。研究開発状況は,申請時点に示した研究開発スケジュールにおおむね則って進展しており,おおむね順調であると判断した。平成30年度から31年度第一四半期にかけて実施予定となっていた「有線充電器の要素技術開発」においては,電圧変動と負荷変動に対してロバストなDABコンバータとその制御法を開発し,実験機による検証が完了している。当初予定に則り,本成果を平成31年度中を目処に三相DABコンバータ回路に拡張することで,本マイルストーンは完了する。また,平成29年度から31年度第二四半期にかけて実施予定である「ワイヤレス充電器の要素技術開発」では,漏えい磁界を低減可能な新たな三相コイルの開発が完了し,22kWシステムでの実証試験を終えている。平成31年度第二四半期をめどに,漏えい磁界低減効果の評価を実施することで本マイルストーンは完了しているとみなすことが可能である。以上より,本研究は順調に進展していると判断する。本研究では,引き続き有線式とワイヤレス式の両者に適用可能な超急速充電器用回路トポロジーを開発する。まず,有線充電器の要素技術開発とし,これまで開発した電圧変動と負荷変動に対してロバストなDABコンバータの制御技術を絶縁型三相ーDC電力変換器に応用し,超急速充電器の小型・大容量化の小型化を図る。また,ワイヤレス充電器の要素技術開発として,平成30年度に開発した三相ワイヤレス給電用コイルによる漏えい磁界の抑制効果の基礎検証を実施していく。上記の有線式とワイヤレス式充電器の要素技術を統合することで,有線充電式とワイヤレス充電式の両者に対応可能な,セル方式絶縁型三相ーDC電力変換器の試作機を開発し,50kW級ミニモデルによる実証試験を実施する。さらに平成32年度以降,超急速充電器のさらなる小型化を図るため,マトリックスコンバータ技術を応用したAC-AC直接変換形セルを適用することを検討する。

本システムは,三相交流によりワイヤレス給電を行うことに特徴があり,伝送コイルを複数に分割することで漏えい磁界の抑制が可能である。本システムの有用性を評価するため,出力電力22kWのシステムを開発し,電力伝送試験を実施した結果,システム効率91.5%を達成した。研究開発状況は,申請時点に示した研究開発スケジュールにおおむね則って進展しており,おおむね順調であると判断した。平成30年度から31年度第一四半期にかけて実施予定となっていた「有線充電器の要素技術開発」においては,電圧変動と負荷変動に対してロバストなDABコンバータとその制御法を開発し,実験機による検証が完了している。当初予定に則り,本成果を平成31年度中を目処に三相DABコンバータ回路に拡張することで,本マイルストーンは完了する。また,平成29年度から31年度第二四半期にかけて実施予定である「ワイヤレス充電器の要素技術開発」では,漏えい磁界を低減可能な新たな三相コイルの開発が完了し,22kWシステムでの実証試験を終えている。平成31年度第二四半期をめどに,漏えい磁界低減効果の評価を実施することで本マイルストーンは完了しているとみなすことが可能である。以上より,本研究は順調に進展していると判断する。本研究では,引き続き有線式とワイヤレス式の両者に適用可能な超急速充電器用回路トポロジーを開発する。まず,有線充電器の要素技術開発とし,これまで開発した電圧変動と負荷変動に対してロバストなDABコンバータの制御技術を絶縁型三相ーDC電力変換器に応用し,超急速充電器の小型・大容量化の小型化を図る。また,ワイヤレス充電器の要素技術開発として,平成30年度に開発した三相ワイヤレス給電用コイルによる漏えい磁界の抑制効果の基礎検証を実施していく。上記の有線式とワイヤレス式充電器の要素技術を統合することで,有線充電式とワイヤレス充電式の両者に対応可能な,セル方式絶縁型三相ーDC電力変換器の試作機を開発し,50kW級ミニモデルによる実証試験を実施する。さらに平成32年度以降,超急速充電器のさらなる小型化を図るため,マトリックスコンバータ技術を応用したAC-AC直接変換形セルを適用することを検討する。
GFP発現トランスジェニックマウスを利用した選択的神経細胞死の解析

パーキンソン病で変性・脱落することで知られる中脳ドーパミン神経を対象に、クラゲ由来の生体蛍光タンパク質であるgreen fluorescence protein(GFP)を用いて、本ニューロンの生存あるいは神経細胞死を検出する新しいシステムの確立を試みた。ドーパミン合成の律速酵素であるチロシン水酸化酵素(TH)の遺伝子プロモーターの組織特異的な遺伝子発現の活性を利用し、中脳ドーパミンニューロンにおいてGFPを発現するトランスジェニックマウス系統(32系統)を作製した。これらのうち2系統に、中脳ドーパミンニューロンにおけるGFPの発現が検出された。GFPによる神経細胞の生存をモニターするモデル実験として、TH-GFPトランスジェニックマウスの中脳基板より初代培養細胞を調製し、培養下での神経細胞の生存がグリア細胞株由来神経栄養因子(GDNF)によって促進される過程をGFPの蛍光を利用して解析した。GDNFの存在によって、GFP陽性細胞の生存率は、培養後4日で2.5倍に、培養後7日で4倍に増加した。以上の結果から、TH-GFPマウスを用いて、特定神経細胞の生存をリアルタイムで検出できることが示された。本検出システムは、神経細胞の生存に関係する種々の因子の解析のために、今後有効な実験系を提供する。
ガブリエル・ノーデとマザリナード-『マスキュラ批評版作成のための研究

1.すでに入手済みの『マスキュラ』初版(フランス国立図書館蔵)のマイタロフィルムを,ハードコピー化し,同書第二版(京都大学文学部図書室蔵)とのテキスト校合を行なった.2.上記の『マスキュラ』初版と再版のテキスト異同に関わる問題とテキストに頻出する古典古代の引用の源泉とイタリア語文献についての調査を行なった.3.マザリナード総体と,フロンドの乱との関係についての調査を行なった.4.『マスキュラ』初版のテクスト全文に解説を付して,研究成果報告書とし,専問的研究のための資料として配布することとした.5.『マスキュラ』批評版の完成(解説と注を付す)は2004年を目途としている。本研究の採用が遅れ,平成10年12月16日に追加採用としての交付決定があったため,予定の研究をすべて行なうことが出来なかった.そのために,既に取得してある,マザリナード資料のマイクロフィルムをコピー化し,その整理を主として行なった他,東京大学付属図書館所蔵のマザリナードならびにフロンドの乱関係資料の調査を行なった.特に得られた知見としては,マザリナードとジャンニストとの関係であって,アルノー・ダンディー執筆のマザリナード二点について,詳細な分析をすることが出来た.1.すでに入手済みの『マスキュラ』初版(フランス国立図書館蔵)のマイタロフィルムを,ハードコピー化し,同書第二版(京都大学文学部図書室蔵)とのテキスト校合を行なった.2.上記の『マスキュラ』初版と再版のテキスト異同に関わる問題とテキストに頻出する古典古代の引用の源泉とイタリア語文献についての調査を行なった.3.マザリナード総体と,フロンドの乱との関係についての調査を行なった.4.『マスキュラ』初版のテクスト全文に解説を付して,研究成果報告書とし,専問的研究のための資料として配布することとした.5.『マスキュラ』批評版の完成(解説と注を付す)は2004年を目途としている。1.既に取得してあるマザリナード資料のマイクロフィルムのコピー化と整理を行なった。総点数は約2000点に上った。また、その整理を行ない、すでに整理の完了しているハーヴァード・ホートン図書館所蔵のマザリナード資料との照合を開始した。2.東京大学付属図書館において、マザリナードならびにフロンドの乱の資料調査を行なった。3.ガブリエル・ノーデ『マスキュラ』批評版の作成に着手し、初版と再版との照合、文中引用されるイタリアルネサンス期の文献の調査を行なった。イタリア語による引用箇所を日本語に翻訳した。2)マザラン枢機卿批判文書が一括して《マザリナード》と呼ばれるに至った時期はこれまで明確に決定されていなっかったが、この問題に関して、ポール・スカロンの風刺詩『ラ・マザリナード』が一般に流布した時期を、マザリナード・パンフレットの分析によって確定し、そこから《マザリナード》概念の拡張が行なわれていく経緯を調査した。その結果、1719年にジャック・ルロン神父が刊行した『フランス歴史書誌』の「マザラン枢機卿批判文書の集成」の項目に、《マザリナード》の語が包括的な意味で使用されていることを発見し、現行の《マザリナード》概念が確立されたのがほぼこの時期であるという知見を得た。3)1649年2月から3月初頭までに刊行されたマザリナード・パンフレットの分析によって、当時一種の出版爆発の状況が生まれていたことを具体的に確認した。
傍濾胞細胞を使用したインスリン産生細胞の作製と糖尿病マウスの病態改善の試み

筆者は内分泌細胞である傍濾胞細胞が、発生初期に一時的にインスリンを合成していることを発見した。この知見を元に、傍濾胞細胞は膵β細胞に分化できるか検討された。発生初期の傍濾胞細胞を培養し、膵β細胞の分化に関係する遺伝子を導入した。MafAとPdx1遺伝子を同時に導入した場合、19倍インスリン遺伝子の発現が増加することが分かった。免疫染色によりこの細胞がインスリンを産生していることを確かめた。これらのことから本研究により、傍濾胞細胞から膵β細胞を再生させる可能性が開かれた。平成25年度は,平成24年度の結果をもとに,培養した鰓後体C細胞に対してインスリン産生細胞に分化させる遺伝子を導入後の細胞の変化を,ELISAや2重蛍光染色法により調べた.1.孵卵12日のニワトリ卵から鰓後体を取り出し分散後,1日培養し,Pdx1とMafAを導入したpTargeT発現ベクターをトランスフェクションした. 48時間後, 20mMグルコースを含む培地に入れ替えグルコース応答性をELISAにて確認した.その結果,この培養方法ではグルコース応答性が確認できなかった.通常の膵島初代培養細胞でも分散させるとグルコース応答性が失われるという結果があるので,鰓後体も分散させずに塊のままグルコース応答実験を今後行う予定である.しかし,発現ベクターをトランスフェクションした培養C細胞に対して,RIPAバッファーを使用して細胞を溶解し,その溶解液を用いてELISAを行ったところ,コントロールと比較すると約8倍インスリンタンパク量が増加していた.Pdx1とMafA導入によりC細胞がインスリンタンパクを合成していることが確認できた.2.発現ベクターをトランスフェクションした培養C細胞に対してカルシトニンとインスリン抗体の二重免疫染色を行った.その結果,培養C細胞はカルシトニンを含む本来の細胞,カルシトニンとインスリンを含む細胞,およびインスリンを含む細胞と3種類の細胞が観察された.これは孵卵12日の鰓後体C細胞の分化進行度が異なるため,複数の性質を持つ細胞が現れたと考えられる.次に分化の進行が進んだ孵卵後期の鰓後体で,Pdx1とMafAを導入した発現ベクターをトランスフェクションした場合に,どのような性質の細胞が現れるか観察する予定である.筆者は内分泌細胞である傍濾胞細胞が、発生初期に一時的にインスリンを合成していることを発見した。平成24年度は、培養した鰓後体C細胞に対して様々な遺伝子を強制発現し、その細胞の分化状態をリアルタイムPCRや免疫染色法により調べた。1.鰓後体C細胞は孵卵14日前後に細胞の運命を決定する遺伝子の発現変化が見られる。鰓後体C細胞を効率的にインスリン産生細胞に分化転換させる前段階として、C細胞に他の遺伝子を強制発現させることで、本来のC細胞の機能を抑制し、他の機能を獲得することができるか調べた。神経細胞の増殖関連タンパク質であるSCG10遺伝子を孵卵12日の培養C細胞に強制発現させた。リアルタイムPCRや免疫染色法により調べたところ、神経細胞マーカーであるTuJ1の発現や、神経伝達物質であるエンケファリンの発現が約2倍に増加した。一方、本来のC細胞の機能であるカルシトニンの発現は0.7倍と減少した。これらのことは、C細胞がSCG10強制発現により、神経様細胞に分化転換したと考えられた。2. 1の結果を基に、膵臓の外分泌腺細胞をインスリン産生細胞に再分化させる3つの転写因子の遺伝子(Ngn3 + Pdx1 + MafA)をそれぞれ単独、あるいは複数組み合わせて、培養C細胞に強制発現させた。その結果、それぞれ単独で遺伝子を強制発現させた場合は23倍、インスリンの発現が増加した。さらにPdx1 + MafAの組み合わせで強制発現させた場合は約15倍と、単独よりもかなり多く発現が増加することが分かった。これらのことは、鰓後体C細胞がインスリン産生細胞に分化転換できることを強く示唆する。平成26年度は、平成25年度の結果をもとに、培養した鰓後体C細胞に対してインスリン産生細胞および膵臓に分化させる遺伝子を導入後、細胞の変化をリアルタイムPCR、ELISAおよび蛍光染色法などにより調べた。1.平成25年度の結果から、Pdx1とMafAを導入した培養C細胞がインスリン遺伝子、インスリンタンパクを発現合成していることは明らかにされたが、C細胞全体の数と比較するとまだ12%しか分化転換されていなかった。これらの細胞はカルシトニンを発現する細胞、カルシトニンとインスリンを発現する細胞およびインスリンを発現する細胞と3種類の細胞が混在していた。そのため、このままでは糖尿病マウスの病態改善には使用できないと考え、さらにより多くの細胞がインスリンを発現する細胞に分化転換する方法を模索した。ここで、Nkx2.2遺伝子はβ細胞の発生に必須であり、Rfx6遺伝子は膵臓の発生に重要な遺伝子である。これらの遺伝子を培養C細胞に導入することでさらに作成効率が上がるのではないかと考え研究を行った。その結果

Nkx2.2遺伝子を単独で導入した培養C細胞は23倍、インスリンの発現がコントロールと比較して増えていた。様々な組み合わせで導入を行ったが、Pdx1とMafAを導入した場合に得られる15倍を超えることはできなかった。また、Rfx6遺伝子を導入した場合はインスリンの発現が見られなかった。そのため、現時点ではPdx1とMafAを導入した場合が最も作成効率がよいと結論した。2.1の結果を基に、今後遺伝子導入とは異なるアプローチでインスリン産生細胞の作成効率の増加を目指す。腸内分泌細胞に対してFoxo1遺伝子を欠失させるとインスリン産生細胞が生じる(Nature Genetics 44, 406412, 2012doi:10.1038/ng.2215)ことが言われており、C細胞もFoxo1遺伝子の抑制によりインスリン産生細胞が樹立できる可能性がある。分子内分泌当初の目的ではトリからマウスに実験動物を変更し,臨床応用に近づくことを計画していた.しかし,いくつかの培養方法を試してみたが,Pdx1とMafA導入培養C細胞ではグルコース応答性が見られなかった.そのため,生理活性を持つ培養方法の確立や,他の遺伝子の導入を検討する必要がでてきた.また,インスリン分泌顆粒の状態を電子顕微鏡で観察するなど,いくつかの別の実験が必要になったため.本研究の第1目標は、C細胞を効率よくインスリン産生細胞に分化転換させることである。平成24年度の研究により、膵β細胞の発生・分化に必須の転写因子Pdx1の他に、MafAがC細胞を効率よくインスリン産生細胞に分化転換させる鍵であることが示された。これは本研究の遂行にかなり重要な発見である。Pdx1とMafA導入培養C細胞を,グルコース応答性を持つ細胞にするために,他の遺伝子の導入や培養方法の検討を行う.同時に電子顕微鏡を使用して,培養C細胞におけるインスリン分泌顆粒の状態を観察する.25年度はC細胞にこれらの遺伝子を導入し、より効率の良い作成方法を検討する。さらに、より人に近い実験動物であるマウスを使用して同じ結果が得られるかを検討する。当初の実験計画で購入する予定であったマウスを計画の遅れにより購入しなかったため.物品費に使用する予定である.主に消耗品だけに研究費を使用する予定である。1.実験動物費として、有精卵とマウスを購入する。2.遺伝子実験用試薬として、リアルタイムPCR試薬などを購入する。3.実験動物からC細胞を取り出し、培養するために培地などの培養用試薬を購入する。
MAMP受容体を介した細胞壁での防御応答機構

病原菌感染に対する細胞壁における防御機構としてのカロース蓄積に着目し、キチン認識を介したカロース蓄積の制御機構を明らかにすることを目的として検討を進めた。キチン受容体直下でカロース蓄積を制御している因子として、前年度に見出した細胞質型受容体様キナーゼPBL27の機能解析を、近畿大学・川崎グループとのプロジェクト内共同研究として進め、論文として発表した。また、感染時におけるカロース蓄積は細胞表層の特定の部位において起こることに着目し、この過程に関わる膜輸送系の解析を進めた。こうした解析を進めるため、エリシター処理によって誘導されるカロース応答の定量化について検討した。画像解析プログラムの一つであるRotational Morphological Processing (RPM)を利用し、RPMを複数回繰り返すことによって、さまざまなバックグラウンドからカローススポットを抽出し、定量するプログラムを開発した(論文投稿準備中)。この手法を利用し、プロジェクト内共同研究として、東大・上田グループから提供されたさまざまな膜輸送系変異体のキチン誘導性カロース蓄積を調べた結果、カロース蓄積が顕著に低下した変異体やカロース蓄積が亢進する変異体をそれぞれ複数見出した。これらのうち、カロース蓄積が低下したものはキチンによる局所的カロース蓄積誘導過程に重要な役割を果たしている可能性があるため、今後さらに詳細な解析を進める予定である。一方、カロース蓄積が亢進する変異体の中には植物体の表面に穴が開くなどの症状がみられるものもあり、一種の傷害応答によってカロース応答が亢進しているものも存在することが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。キチン受容体CERK1を介した細胞壁における防御機構であるカロース蓄積に着目し、その制御機構解明を目指して検討を進めた。シロイヌナズナ幼植物体におけるエリシター処理とカロース定量の条件を設定し、種々の変異体を用いた解析から、CERK1直下で作用する細胞質型受容体様キナーゼPBL27がキチン応答性のカロース蓄積制御で重要な役割を果たしていることを明らかにした。一方、PBL27は細菌鞭毛由来のペプチドであるflg22応答には関与しないこと、また、キチン応答でも活性酸素生成には関わらないという特性をもつことも明らかにした。また、MAPキナーゼカスケード変異体を利用した解析から、キチン誘導性のカロース蓄積がMAPキナーゼであるMPK3/6によって制御されていることを示す結果を得た。一方、細胞表層・アポプラストにおける防御応答でユニークな機能が想定されるGPIアンカー型分子であるAtCEBiP(LYM2)の抵抗性応答への寄与を調べたところ、AtCEBiPはイネCEBiP同様に、極めて特異的にキチンオリゴ糖に結合するにもかかわらず、キチン誘導性の活性酸素生成や防御応答関連遺伝子の発現誘導には関わっていないことが明らかになった。一方、AtCEBiPの病害抵抗性への関与を調べるため、AtCEBiPノックアウト変異体を用いてA. brassicicolaによる感染実験を行ったところ、本変異体では抵抗性が有意に低下していることが見いだされた。このことは、AtCEBiPが通常のキチンシグナル伝達とは別の形で病害抵抗性に寄与していることを示唆するものであり、今後の研究に新しい視野をもたらすものと考えられる。細胞壁における典型的な防御応答であるカロース合成・蓄積に関して、キチン受容体を介した誘導機構についての重要な知見が得られている。また、細胞壁・アポプラストにおける防御応答での機能が想定されるGPIアンカー型キチン結合タンパク質AtCEBIPがユニークな形で抵抗性に寄与することを示唆する結果を得ている。基本的に当初計画に基づいて研究を推進する。次年度においては、キチン受容体下流でカロース蓄積制御に関わるシグナル伝達機構の解明を中心に検討を進める。
日本中世の紛争処理における「濫訴」の定位

鎌倉幕府は、法制定段階では様々な手段を講じて威嚇効果的に「濫訴」防止を企図しながらも、運用段階ではごく一部の悪質性の高い「濫訴」を除き積極的な制裁を科すまでには至っていなかった。本研究はこれまでの中世法・中世裁判権力研究の成果をトレースし補強したものと位置づけられるが、「濫訴」の分析という幕府権力の検討を行う新たな視点が提供できた。「濫訴」を介した研究のさらなる深化は可能であると考える。また、検討対象が鎌倉幕府裁判に終始しており、室町期をほとんど対象とできなかった。反省すべき点であり今後の課題としたい。(1)本研究課題の目的本研究は、日本中世における紛争解決の過程において、裁判権力が「濫訴」として排除していた訴訟事例について実証的かつ多角的な検討を加え、当該期の裁判権力および社会の特徴について明らかにすることを目的としている。本研究では、これまで研究の手薄であった「濫訴」に関する研究をさらに深化させるものである。とりわけ、「裁判の判決(裁許状)」だけではなく、「訴訟当事者の提出文書」を含めた訴訟資料全般を検討対象とする。さらに、裁判担当者から「濫訴」とは認定されなかったものの「濫訴」類似の訴訟事例全般についても再検討を加えていく。そして、判決の導出のなかで「濫訴」という言葉を使って排除されていた事例を整理・検討し、訴訟制度全体のなかで定位することを目指す。また、裁判によって「濫訴」と判断される背景には、「裁判権力側による何らかの思惑」・「社会情勢」が影響を与えていた側面があったと推察できるので、あわせて検討していきたい。(2)本研究課題の内容本応募課題は、以下の細分化した3つのテーマに沿って期間を区切り、段階的に目標を達成していく計画手法をとっている。(1)当事者提出文書における「濫訴」言及事例の検討(平成19年度・平成20年度前期)(2)日本中世の訴訟制度における「濫訴」の概念整理(平成20年度後期・平成21年度)(3)日本中世の紛争処理における「濫訴」の定位(平成22年度)鎌倉幕府は、法制定段階では様々な手段を講じて威嚇効果的に「濫訴」防止を企図しながらも、運用段階ではごく一部の悪質性の高い「濫訴」を除き積極的な制裁を科すまでには至っていなかった。本研究の目的は、目本中世における紛争解決過程において、裁判権力が「濫訴」として排除していた訴訟事例について実証的かつ多角的な検討を加え、当該期の裁判権力および社会の特徴を明らかにすることである。平成19年度の到達目標は、「当事者提出文書における「濫訴」言及事例の検討」であった。これまでの研究内容を拡充するため、不充分であった史料の蒐集および検討を行った。これからの研究に向けての基盤的成果を得たが、史料蒐集に時間がかかり十分な検討には至らなかったので、次年度以降補完していきたい。以下、本年度の具体的成果を述べる。1,史料の収集本年度の主たる研究目標である史料の収集については、ほぼ達成できた。しかし、なお検討すべき史料も残っており、また、未刊行史料については十分な調査ができなかったので、次年度以降の課題としたい。2,データベース化作業データベース化作業については、研究補助者を雇用し、データ化に向けた収集史資料の整理を行った。しかし、史資料の整理に想定外の時間を費やしてしまい、入力作業まで到達できなかった。作業を効率化し迅速に進めることを課題としつつも、最終的には精確なデータベースを構築できるよう、段階ごとの資料整理を確実に行っていきたい。3,研究者との交流学会報告や資料収集の作業を通じて、様々な分野の研究者と交流を持つことができた。「濫訴」という概念定義自体に対する議論や、研究手法、さらには資料の所在等について有意な助言を得、知見が拡がった。4,学会報告法制史学会で、本研究の到達点を報告した。法制史研究者からの評価を得るとともに欠落した論点などの指摘を受けた。また、2007年度日本法社会学会では、これまでの「濫訴」研究に「法意識論」の視点を導入し、再構成したうえでシンポジウム報告を行った。法社会学的観点からの有益な示唆を得ることができたので、今後の研究に活用したい。本研究の目的は、日本中世における紛争解決過程において、裁判権力が「濫訴」として排除していた訴訟事例について実証的かつ多角的な検討を加え、当該期の裁判権力および社会の特徴を明らかにすることである。平成20年度の到達目標は、「当事者提出文書における「濫訴」言及事例の検討」および「日本中世の訴訟制度における「濫訴」の概念整理」であった。この目標のもと、これまでの研究内容を補充するため、不充分であった史料の蒐集および検討を行った。これからの研究に向けての史料の基盤的整理作業は一定のレベルに到達したものの、史料蒐集に時間がかかり、十分な史料の批判・検討には至らなかった。次年度以降は、史料のさらなる整備について継続して配慮しつつ、本格的な検討作業を進めたい。

以下、本年度の具体的成果を述べる。1,史料の収集本年度の主たる研究目標である史料の補充的収集については、ほぼ達成できた。しかし、なお検討すべき史料も残存しており、また、未刊行史料についての調査もまだ十分とはいえないので、次年度以降の課題としたい。2,データベース化作業データベース化作業については、データ化のために整理した資料について、入力作業を開始した。しかし、史資料の整理や入力項目の精査に時間を費やしてしまい、はかばかしい進捗とまでは行かなかった。作業を効率化し迅速に進めることを課題としつつも、最終的には精確なデータベースを構築できることを至高の目標とし、各段階ごとに資料整理を確実に行っていきたい。3,研究者との交流学会出席や資料収集の作業を通じて、様々な分野の研究者と交流を持つことができた。「濫訴」という概念定義自体に対する議論や、研究手法、さらには資料の所在等について、多方面からの助言を得ることができ、知見が拡がった。本研究の目的は、日本中世における紛争解決過程において、裁判権力が「濫訴」として排除していた訴訟事例について実証的かつ多角的な検討を加え、当該期の裁判権力および社会の特徴を明らかにすることである。平成21年度の到達目標は、「日本中世の訴訟制度における「濫訴」の概念整理」であった。この目標のもと、不充分であった史料の蒐集および検討を行った。最終年度の研究に向けて基盤的整理作業は一定のレベルに到達したと考える。しかし、史料の整理に時間がかかり、理論的・制度的批判・検討はまだ途上の段階にある。次年度は、最終年度として「濫訴」の定位を行うことになるが、現在収集した史料を中心として、鎌倉幕府の裁判における「濫訴」処理についての理論的・制度的な位置づけを完成させたい。1,史料の収集本年度はこれまで収集では手薄だった古記録などの史料について補充的な蒐集を行い、資史料研究基盤はほぼ確立できたといってよい。しかし、研究成果をより精緻なものとするため、時宜に応じて新たな史料蒐集を行うことも視野に入れておきたい。2,データベース化作業データベース化作業については、時間的な制約などから構築が遅れがちになっているものの、徐々に体裁を整えているように思う。昨年度同様、作業の効率化・迅速化を課題としながらも、最終的に精確なデータベースを構築できるよう、作業を確実に行っていきたい。4,「濫訴」概念の整理蒐集した史料的基盤をもとに概念整理の作業の緒についたが、充分な作業を行い得なかった。最終年度の前期において、概念整理作業にとりくみたい。平成22年度の到達目標は、「日本中世の紛争処理における「濫訴」の定位」であった。本年度は本研究の最終年度にあたり、これまでの各研究段階で得られた結果をもとに、「濫訴」の処理過程について考察を行った。
皮膚におけるパントンバレンタインロイコシジンの発現機構と病態形成の解明

パントンバレンタインロイコシジン(PVL)は黄色ブドウ球菌が産生する好中球により特異性の高い毒素で、PVL陽性の黄色ブドウ球菌はおできや市中肺炎に強く関連する。我々はPVL陽性のおできの特徴は基礎疾患のない若年者に多く、多発性で発赤が強いことを明らかにした。しかしながら、せつ腫症におけるPVLの役割は明らかではない。我々はPVLの毒素産生制御因子を解析し、PVLのケラチノサイト、線維化細胞、血管内皮細胞に与える影響について検討した。さらにせつ腫症におけるPVL変換ファージの多様性について調査した。1PVL毒素発現制御機構の解明黄色ブドウ球菌より産生されるパントンバレンタイン型ロイコシジン(PVL)の皮膚病変部での発現機構と病態形成を解明する目的で研究した。黄色ブドウ球菌のグローバルな毒素制御因子であるAgr、SarA、SigBの遺伝子欠損株を作製しin vitroでのPVL産生能について検討し、組み合わせにより数種類のPVL高発現株を作成した。in vitroではSigBの欠損株がPVL高発現株であった。高発現株をウサギ皮膚に接種し、PVL陽性基準株、PVL陰性株と形態的、病理組織学的な比較検討を行ったが、有意差はなかった。PVLが発現するためにはある特別な環境が必要であることがわかった。2PVL、PSMの線維芽細胞、ケラチノサイト、血管内皮細胞に与える影響PVLによる壊死の病態解明を目的に好中球以外の細胞を介した炎症の惹起や好中球の活性化については検討した。ケラチノサイトや培養線維芽細胞を使用し、PVL毒素を暴露させ、IL-8の産生についてリアルタイム-PCRとELISAで測定した。PVLの線維芽細胞に与える影響についてはIL-8mRNAレベルが24時間後ではLukF-PV、LukS-PVの刺激でともにコントロールよりも有意に高かったが、ELISAでは各群に有意差はなかった。PVLのケラチノサイトに与える影響についてはIL-8mRNAレベルが8時間後でLukF-PV、LukS-PVともにコントロールよりも有意に高く、さらにLukF-PV+LukS-PVで相加作用が認められた。PVLの血管内皮細胞に与える影響についてIL-8mRNAレベルがLukF-PV+LukS-PVで相乗作用がみられた。1黄色ブドウ球菌のグローバルな毒素制御因子であるAgr、SarA、SigBの遺伝子欠損株を作製しin vitroでのPVL産生能について検討し、in vitroではSigBの欠損株がPVL高発現株であった。2PVLのケラチノサイト、培養線維芽細胞、血管内皮細胞に及ぼす影響について、ケラチノサイト、培養線維芽細胞、血管内皮細胞を使用し、PVL毒素を暴露させ、IL-8の産生についてELISA、RT-PCRで測定した。線維芽細胞に対しては、IL-8の産生については有意差はなかった。ケラチノサイトと血管内皮細胞に対してIL-8産生についてLukF-PV+LukS-PVで相加作用が認められた。3PVL産生黄色ブドウ球菌によるせつ腫症の組織学的検討し、産生黄色ブドウ球菌によるせつ腫症の病理組織好中球浸潤が著明で毛包部の破壊や周囲の血管の壊死像が認められた。4せつやせつ腫症由来のPVL産生黄色ブドウ球菌について、ファージを誘発して、新たに分離されたPVL保有ファージのゲノムについてサザンハイブリダイゼーション及び部分的なシークエンスを解析し、既知のPVL変換ファージと比較した。ファージのタイプを検討したが、多様性があり、臨床型とは関連しなかった。PVL毒素発現制御機構の解明や病態形成については、概ね予定通り実施したが、関連病院ネットワークを通じた黄色ブドウ球菌性全身感染症との関係についての疫学調査については黄色ブドウ球菌性の重症全身感染症(壊死性肺炎、心内膜炎、骨髄炎、敗血症など)から分離された株についてはPVLの陽性株が少ないのが現状であり、その追跡調査はできていない。PVL、PSM毒素発現制御機構の解明や病態形成については、概ね予定通り実施したが、PVL、PSMの血清抗体価および毒素量のELISAシステムの構築については、担当する大学院生の数が少ないこと、東日本大震災の影響で共同研究している東北大学大学院農学部からの精製毒素の供給(recombinant LuKS-PV、LuKF-PV)が一時的に途絶えたこと、PVLのモノクローナル抗体が海外研究協力者から分与されなかったことなどを理由で、このプロジェクトについては研究着手が遅れ、停滞している。まず、ウサギせつモデルの血清で検討していく予定で、システムが構築されれば、健常人コンロコントロールで抗体価を測定予定であり、倫理委員会に申請する。

PVLによる病態形成への関与について重点を置いて進めていく予定である。1PVLのケラチノサイトに与える影響:ケラチノサイトに、PVL毒素を暴露させ、IL-8以外の他のサイトカインの産生についてリアルタイム-PCRとELISAで測定する。2PVLの血管内皮細胞に与える影響:培養血管内皮細胞を使用し、PVL毒素を暴露させ、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFNβなどの産生についてELISAキット、リアルタイム-PCRで測定する。またHumanβデフェンシン(HBD)やLL-37の抗菌ペプチドについても検討する。また、好中球をPVLで刺激して、その上清と培養血管内皮細胞を暴露させ、その影響にについて検討する。3黄色ブドウ球菌性全身感染症との関係についての疫学調査:当院および関連病院における黄色ブドウ球菌性の重症全身感染症(壊死性肺炎、心内膜炎、骨髄炎、敗血症など)から分離された株について、PCR法にてPVLのスクリーニングを行う。臨床情報については、特に皮膚病変(せつ、膿瘍)の合併の有無や既往歴の調査を引き続き行う。PVLの毒素発現機構の解明については昨年度の研究により動物実験での再現が困難であることが予想されるので、PVLによる病態形成への関与について重点を置いて進めていく予定である。(1) PVLのケラチノサイトに与える影響:ケラチノサイトに、PVL毒素を暴露させ、IL-8以外の他のサイトカインの産生についてリアルタイム-PCRとELISAで測定する。(2) PVL、PSMの血管内皮細胞に与える影響:培養血管内皮細胞を使用し、PVL、PSM毒素を暴露させ、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFNβなどの産生についてELISAキット、リアルタイム-PCRで測定する。(3)黄色ブドウ球菌性全身感染症との関係についての疫学調査:当院および関連病院における黄色ブドウ球菌性の重症全身感染症(壊死性肺炎、心内膜炎、骨髄炎、敗血症など)から分離された株について、PCR法にてPVLのスクリーニングを行う。臨床情報については、特に皮膚病変(せつ、膿瘍)の合併の有無や既往歴の調査も行い、PVL陽性例と陰性例の比較を行う。また現在までのPVL皮膚感染症の患者の追跡調査(再発の有無、肺炎などの全身性感染症の発症の有無)を行う。該当なし(1)培養血管内皮細胞を購入予定である。上記の計画を遂行するためには、リアルタイムーPCRのプライマーなどは既存のもので行う予定であるが、ELISA法はL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFNβなどの産生について、一部は既製品のELISAキットが必要である。またケラチノサイトや血管内皮細胞の培地は継続的に必要である。疫学調査を予定しており、各施設へ郵送する郵送料、分離培養する培地、PCR試薬などが必要である。(2)研究成果については第15回国際ブドウ球菌学会(ISSSI)で発表予定であり、旅費等に使用する。
ラップ接着された円筒体の合理的設計法の開発に関する研究

ラップ接着された円筒体の設計法開発の基礎的資料として以下の点が明らかになった。[静的弾性問題](1)接着層の最大応力は,接着層の両端で生じる。その位置は,一般に荷重作用側の端である。(2)接着層両端の垂直応力とせん断応力の最大値は,接着層中央に関する応力分布が対称か非対称かに大きく依存する。すなわち,一般に,対称性が成立する場合は応力は緩和され,非対称の場合は,高い応力が生じる。(3)非対称な分布形状になりやすいのは,異種結合の場合,被着体の弾性係数が小さい場合,被着体の厚さに差がある場合,被着体の長さが長い場合,および接着層の弾性係数が大きい場合である。(4)異種結合の場合であっても,非対称は,荷重作用側の被着体に弾性係数の大きい材料を用いれば緩和される。[線形粘弾性問題](1)継ぎ手を被着体を引き離す方向に作用する剥離引張応力は,接着層の長さ方向のせん断応力より大きくなり,せん断応力は引張応力よりも早く減衰する。(2)応力減衰は,被着体の剛性にも依存し,剛性が大きい程減衰の程度は小さい。(3)応力減衰に大きな影響を与えるパラメータは剛性を除けば,接着層長さおよび接着層厚さで,前者はその値が大きいほど,後者はその値が小さい程,時間の変化に対する応力の減衰の程度が大きい。[弾性衝撃問題](1)接着層両端の応力は,縦波の到達と同時に立ち上がり,強い応力集中が発生する。(2)動的応答倍率は,被着体の剛性に大きく依存する。[予備設計における留意点]接着層の最大剥離引張応力(垂直応力)および最大せん断応力は,以下のようにすれば軽減できる。(1)同種材料からなるラップ継手接着すること。(2)柔軟な接着剤と剛性のある被着体を接合させること。平成7年度は,ラップ接着された円筒殻に対して以下の研究を行った。[解析手法の確立]・接着層の離散化のための特別な有限要素を開発した。この要素は三次元弾性理論に立脚し,応力-ひずみ関係式に合理的な近似を導入して得られたもので,その数値解は薄い円筒殻理論によるReisserらの結果と良い一致を示す。[線形弾性解析]:同種・異種材料の被着体の接着層内の応力分布特性の検討を行い,以下の点が明らかになった。・接着層における応力(半径方向応力とせん断応力)の最大値は,荷重載荷側の接着層の端で発生し,被着体の弾性係数が小さい場合,接着層の弾性係数が大きい場合,薄い円筒体の場合,および被着体の厚さが異なる場合に大きくなる。[線形粘弾性解析]:被着体を弾性体,接着層を4要素モデルの線形粘弾性体と仮定し,接着層内部の応力分布特性の検討を行い,以下の点が明らかになった。・応力(半径方向応力とせん断応力)の減衰は,被着体の剛性の大きさに大きく依存し,その程度は被着体の剛性が大きい程小さい。・半径方向応力の減衰は,せん断応力のそれより大きい。平成8年度は,粘弾性・衝撃応答解析を実施し,以下のような結果を得た。[線形粘弾性問題]

(1)初期の時間における接着層の垂直応力とせん断応力の分布は,接着層の弾性的性質が強く現れ,静的弾性問題から確認された特性,すなわち,接着層中央に関して対称,非対称な分布形状を示すが,被着体,接着層の寸法・剛性によらず,時間の経過とともに非対称性は薄れていく。その結果,接着層両端の応力集中は,軽減される。(2)継ぎ手の被着体を引き離す方向に作用する剥離引張応力は,接着層の長さ方向のせん断応力より大きくなり,せん断応力は引張応力よりも早く減衰する。(3)応力減衰は,被着体の剛性にも依存し,剛性が大きい程減衰の程度は小さい。(4)応力減衰に大きな影響を与えるパラメータは剛性を除けば,接着層長さおよび接着層厚さで,前者はその値が大きいほど,後者はその値が小さい程,時間の変化に対する応力の減衰の程度が大きい。[弾性衝撃問題](1)接着層両端の応力は,縦波の到達と同時に立ち上がり,強い応力集中が発生する。(2)応答が立ち上がった後では,薄い円筒体では長い周期で応答が繰り返され,厚い円筒体では短い周期で応答が繰り返される。(3)動的応答倍率は,被着体の剛性に大きく依存する。[予備設計における留意点]接着層の最大剥離引張応力(垂直応力)および最大せん断応力は,以下のようにすれば軽減できる。(1)同種材料からなるラップ継手接着すること。(2)柔軟な接着剤と剛性のある被着体を接合させること。
重金属による血管構成細胞のグリコサミノグリカン糖鎖合成異常の解析

環境汚染重金属であるカドミウムの血管細胞毒性を軽減することが知られている亜鉛について,プロテオグリカン合成に対する作用を検討し,以下の知見を得た。ウシ大動脈由来血管内皮細胞は主としてヘパラン硫酸プロテオグリカンの大型分子種であるパールカンを産生しているが,亜鉛は増殖期の内皮細胞に対して,パールカン分子のコア蛋白合成に影響を及ぼさなかった。また,内皮細胞が産生するヘパラン硫酸糖鎖の二糖組成を定量したところ,細胞層において,GlcA/IdoA-GlcNAc,GlcA/IdoA-GlcNSおよびGlcA/IdoA(2S)-GlcNSの構成二糖が検出された。一方,培地画分においてはさらにGlcA/IdoA-GlcNS(6S)およびGlcA/IdoA(2S)-GlcNS(6S)も検出された。しかしながら,これらの構成二糖の割合は亜鉛により変化せず,亜鉛はヘパラン硫酸糖鎖の形成においても影響を及ぼさないことが示唆された。また,コンドロイチン/デルマタン硫酸糖鎖の二糖組成についても検討を行ったが,亜鉛による有意な変化は認められなかった。我々は先に,亜鉛が内因性FGF-2依存的に内皮細胞の増殖を促進させることを明らかにしているが,FGF-2の活性発現に重要なヘパラン硫酸プロテオグリカンの合成に対して亜鉛が影響を及ぼさないことが示されたことから,亜鉛の内皮増殖促進作用はプロテオグリカン代謝とは独立した作用機序で起こることが示唆された。また,環境汚染金属であるヒ素はカドミウムや鉛と同様に動脈硬化症を含む血管病変の危険因子の一つとされていることから,内皮細胞のプロテオグリカン代謝に対する亜ヒ酸の作用を検討したところ,亜ヒ酸が非特異的な細胞傷害性を伴わずに,ヘパラン硫酸プロテオグリカンとコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの合成を共に抑制することを明らかにした。本研究の目的は,動脈硬化症などの血管病変の危険因子である重金属が,血管構成細胞によって産生される各種プロテオグリカン(PG)分子のグリコサミノグリカン(GAG)糖鎖の微細構造をどのように変化させるのかという点を明らかにすることである.今年度は血管平滑筋細胞および血管内皮細胞GAG糖鎖の微細構造に対する重金属の作用を検討し,以下の知見を得た.鉛およびカドミウムによる血管平滑筋細胞GAG糖鎖の微細構造の解析高細胞密度の血管平滑筋細胞において,鉛はコンドロイチン硫酸(CS)の構成二糖であるGlcA-GalNAc,GlcA-GalNAc(4S)およびGlcA-GalNAc(6S)量を減少させた.一方,低細胞密度において,カドミウムはGlcA-GalNAc(4S)およびGlcA-GalNAc(6S)量を減少させたが,デルマタン硫酸(DS)の構成二糖単位IdoA-GalNAc(4S)量を増加させた.以上より,鉛およびカドミウムは,血管平滑筋細胞の細胞密度に依存して,動脈硬化病変の進展過程における血管壁のCS/DS組成を変化させることが示唆された.鉛による血管内皮細胞GAG糖鎖の微細構造の解析細胞層および培地の両方において,鉛はヘパラン硫酸(HS)の構成二糖であるGlcA/IdoA-GlcNAc,GlcA/IdoA-GlcNSおよびIdoA(2S)-GlcNS量を有意に減少させた。また,HS糖鎖のN-硫酸化および2-O-硫酸化は鉛によりわずかに阻害されたが,各構成二糖の存在比は鉛により有意に変化しなかった。これらの結果から,鉛は内皮細胞のHS合成を阻害するが,その糖鎖構造に対しては影響を及ぼさないことが示唆された.また,鉛はCS/DSの糖鎖構造の形成に対しても影響を及ぼさないことが示唆された.環境汚染重金属であるカドミウムの血管細胞毒性を軽減することが知られている亜鉛について,プロテオグリカン合成に対する作用を検討し,以下の知見を得た。

また,環境汚染金属であるヒ素はカドミウムや鉛と同様に動脈硬化症を含む血管病変の危険因子の一つとされていることから,内皮細胞のプロテオグリカン代謝に対する亜ヒ酸の作用を検討したところ,亜ヒ酸が非特異的な細胞傷害性を伴わずに,ヘパラン硫酸プロテオグリカンとコンドロイチン硫酸プロテオグリカンの合成を共に抑制することを明らかにした。
コラーゲン糖化修飾における定量評価法の確立

還元糖は生理条件下でタンパク質と結合し、不可逆的に糖化最終産物(Advanced Glycation End products, AGEs)を生成する。AGEsの蓄積は動脈硬化や骨粗鬆症などの一因となる。象牙質は代謝がほとんどなく、AGEsの経年的増加はほとんどないと考えられてきたが、加齢や、う蝕時のエナメル質の喪失に伴い増加が認められた。2型糖尿病モデルラットを用いたAGEsの分布解析によって、通常の象牙質の糖化は歯髄中の血液より供給される糖のよることが示唆された。また歯周組織においてはAGEsは骨小腔に多くみられたことから骨細管を経て供給される糖による糖化と考えられる。ヒトの歯の象牙質中に存在する糖化最終産物の分布状態を免疫組織染色と、微小部分からコラーゲン分子を3N塩酸で抽出しWestern blottingで確認した。これまでの研究で糖化最終産物のうち、付加型AGEsであるカルボキシメチルリジン(CML)に関しては、抗CMLモノクローナル抗体が象牙前室から歯冠方向に減少する濃度勾配で結合することが検出できていた。その濃度は若年者、高齢者、2型糖尿病罹患患者と増加することが確認された。しかしながら、架橋型AGEsのペントシジンに関しては検出が困難であった。本研究で新たに抗原抗体反応の条件を検討することで免疫染色、Western blottingともに検出ができた。その分布状態はCMLとほぼ一致していた。CMLは蛍光を発しないため、夾雑物が多い状態や微量な状態では検出できないが、架橋型ペントシジンは励起波長335nmで375nmの特異的な蛍光発光があり、この蛍光を指標とすることで夾雑物存在下での微量試料に中のペントシジン検出が可能である。微小領域の象牙質コラーゲンを6N塩酸で完全分解することで蛍光検出器を用いて高速液体クロマトグラフィーで分析した。C18逆相カラムでペントシジン標準試料と同一保持時間で溶出するピークがペントシジンであることをイオンスプレー型質量分析装置(ESI-Mass)で確認することができた。2型糖尿病モデルラットにおいても臼歯部での免疫組織染色によりペントシジンの分布状態が確認できた。また液体クロマトグラフィー法で血液中、尾腱中にもペントシジンが生成していることを確認している。ヒトおよびラットの象牙質における糖化最終産物の産生状態、分布状態が確認および液体クロマトフィーによる分析条件を確立できた。さらに比較測定としてラットの血液、尾腱等、歯以外の組織中に含まれるペントシジンの検出条件も確立できた。ヒトの歯の象牙質より微小部分(1mg以下)より抽出したコラーゲン中に存在する糖化最終産物(AGEs)をAGEsの一種であるペントシジンの蛍光をターゲットとした高速液体クロマトグラフィー(HPLC)により定量化に成功した。若年者、高齢者、2型糖尿病患者の象牙質の分析をしたところ、若年者、非糖尿病の高齢者、2型糖尿病患者とAGEsの蓄積量が多くなることがわかった。また糖尿病患者では歯髄内結石が多発することが報告されているが、患者では倫理的にも経時変化を観察するといった歯髄内石灰化メカニズムの解明は困難である。我々は遺伝系統的に血糖コントロール不良でレプチン遺伝子が機能低下している2型糖尿病モデルラット(SDT fatty rat)の歯を免疫染色法やマイクロCTで解析した。免疫染色においては象牙前室や歯周組織にペントシジンの蓄積見られた。マイクロCTでは週齢に相関して歯髄象牙質の肥厚、歯髄内結石が多くなっていることが認められた。この結果から高血糖値が維持されている状態でのAGEsが蓄積が歯髄内での石灰化や異所性石灰化を促進することが示唆された。歯髄細胞の初代培養も成功しており、AGEsの石灰化への関与が明らかにできると考えている。また2型糖尿病モデルラットの尾腱中のコラーゲンのAGEsのHPLC解析により、象牙質コラーゲン同様週齢に相関した蓄積が認められており、病的な靭帯の石灰化のメカニズム解明ができると考えている。今後、象牙質中の糖化最終産物の詳細な分布状態の測定ならびにペントシジン以外の糖化最終産物の分布も一度に測定できる質量イメージング分析に適した試料調製法を開発する。ヒトでは倫理的にも実験的にも困難なライフステージに沿ったAGEsの変化を若年、高齢ラット、および2型糖尿罹患ラットを各週齢も比較することで解析する。29年度が最終年度であるため、記入しない。保存治療系歯学29年度が最終年度であるため、記入しない。