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浮世絵における西洋陰影法の消去に関する基礎研究

本研究「浮世絵における西洋陰影法の消去に関する基礎研究」は、江戸中期後期を中心にした浮世絵の一次資料調査および文献調査を通じて、絵師による西洋陰影法の利用と、その背景にある日本固有の観察方法や陰影概念を明らかにすることが目的である。調査によって、浮世絵における西洋陰影表現は眼鏡絵や洋風版画の影響を受け、葛飾北斎以降江戸の実景とともに使用されていることが明らかになった。また歌川国芳を中心に、西洋陰影表現は月影と影法師との関係として再解釈されていたことが明らかになった。本研究は、浮世絵の一次資料調査および文献調査を通じて、浮世絵師と西洋画家との描画技法・思想の相違と、その背景にある日本独自の観察方法の獲得経緯を調査する基礎研究である。具体的には江戸中期後期を中心にした浮世絵の資料収集と文献調査を行い、平行して浮世絵師が参考にしたと考えられる西洋画の資料調査を行う。これらの比較によりこれまで本格的に調査されて来なかった、日本における西洋陰影法の解釈と否定について実証を試みる。本年度は、1江戸中期後期を中心にした浮世絵の資料収集と文献調査として、浮世絵の影の表現を分析するために歌川国芳の絵を中心に、歌川広重、歌川派周辺、葛飾北斎、葛飾応為、葛飾派周辺の浮世絵の調査を行った。2浮世絵師が参考にしたと考えられる西洋画の資料収集と両者の比較を行った。先行研究によって歌川国芳が参考にしたとされている、ニューホフ著『東西海陸紀行』やフランス語版『イソップ物語』等の図像と国芳の影の描画表現を比較し、西洋画技法をどのように浮世絵の陰影表現に取り入れたかを分析した。平成27年度の本研究は、歌川国芳を中心に一次資料調査および文献調査を行い、西洋陰影法を浮世絵師がどのように扱い、描画表現として利用してきたのかについて調査を行った。前年度で調査した歌川派・葛飾派の陰影表現の中でも国芳の西洋描画技法の利用は突出しており、陰影法に対する理解のみならず、西洋遠近法、解剖学的表現などと関連した陰影表現も他の絵師に比較して導入例が最も多かった。本年度は、国芳の陰影表現を絵のテーマごとに分類し、特に地面に落ちる影(shadow)の表現の違いについて重点的に調査を行った。また、国芳が参考にしたと考えられている西洋画との比較を行う中で、影(shadow)の消去例も多数確認され、西洋陰影法の利用について国芳が自覚的だったことが明らかになった。同時に、浮世絵と同時代の書画と西洋画との関係についても調査を行い、最終的に浮世絵師の持つ写実概念に繋がるまでの系譜を「写真」という概念を調査することで明らかにした。陰影表現への絵師の言及は限られており、西洋画に対する絵師の思想を調査する上で写実性から考察を行った。今後、「明治昭和初期の浮世絵・版画により創出された和洋折衷の陰影表現」」(平成28ー30年度・科学研究費若手研究(B)・研究代表者:松浦昇・研究課題番号16K16745)において、明治以降の浮世絵・版画の陰影表現の調査に本研究の成果を生かしたい。本年度は、浮世絵における西洋陰影法の影響を調査するために、歌川国芳を中心に歌川派・葛飾派を対象として、文献調査や国内外のアーカイブが公開しているデータベース調査、研究者・専門家への聞き取りから資料調査を行った。この過程で、浮世絵における陰影表現の体系的な先行研究は行われていないことや、浮世絵師の西洋陰影法に対する思想についての調査が十分進んでいないことも浮かび上がってきた。1浮世絵資料調査1として、歌川国芳の浮世絵の中から影を描いた作品や、洋画を参考にした可能性のある作品を調査した。今後精査が必要であるが、150枚以上の国芳の浮世絵に西洋的な陰影表現が部分的に使われている事が確認できた。2浮世絵資料調査2として、歌川派・葛飾派の中から影を描いた作品や、洋画を参考にした可能性のある作品の調査を行った。歌川広重・国貞は控え目にであるが、西洋の陰影表現を使っていることが確認できた。葛飾北斎、葛飾応為の肉筆画における西洋陰影法表現はすでに指摘されてきたが、肉筆・浮世絵においていかなる表現技法を用いたのか調査した。3関連西洋画資料調査として、上記の調査から西洋画を参考にしたと思われる作品と、元になった思われる絵画の比較を行い、陰影表現と描画技法の相違について比較を行った。また、同時代の円山応挙や秋田蘭画・司馬江漢など書画で扱われる西洋陰影表現についても、平行して調査を行っているため、浮世絵の陰影表現の調査にやや遅れが生じている。映像メディア学今後は引き続き歌川国芳を中心に、西洋画と比較可能な浮世絵資料調査を行う。

歌川国芳は、西洋版画の陰影表現のみならず、中国経由の陰影表現、書画に使われる隈の表現などを巧に組み合わせながら陰影表現を行っていると思われるが、それらを実証するための技法研究や思想背景のさらなる調査が必要である。また、浮世絵師が西洋画法や陰影法に言及した文献や、後年の記述も含めた文献も同時に調査し、江戸に中後期における陰影表現に対する思想についても考察を行う。これらの成果を元にして、映像研究科の紀要や関連学会への論文投稿を行う予定である。次年度使用額が生じた理由としては、初年度のため文献のリスト化および文献調査・資料撮影に重点を置き、その後の浮世絵の図版と西洋画の比較に移るまでの時間が掛かったことから、旅費・人件費・謝金の支出が少なかった。本年度に引き続き浮世絵の一次資料調査と関連文献調査として使用する。浮世絵の高解像度の写真撮影および記録を行うために必要な機材を購入する。また、研究協力者への謝金、旅費への使用を見込んでいる。
現代ドイツにおける移民のドイツ語の言語意識の変容と言語使用の変遷

トルコ系移民は、現代ドイツにおいて最大の移民コミュニティーである。彼らの使用言語はドイツ社会から問題視されてきた。しかしトルコ系移民が話すドイツ語に対するドイツ人からの評価が、1990年代半ばから一部改善されてきたという言説が、先行研究において確認されている。Heike Wiese(2006)によると、移民背景を持つ者の話す言語が移住先の社会から受容され使用されるという現象は、ヨーロッパ全土で起こっているという。この言説に依拠し、次の2点を明らかにすることを2015年度の研究課題とした:(A)欧州諸国で移民背景を持つ者が話す言語は、移民背景を持たない人物の中でも特にどのような社会的集団に属する者によって、どのような目的で話されているのか。(B)移民背景を持つ者の言語を話す移民背景を持たない者は、移民背景を持つ者の言語をどのように評価し、またどのような理由からその評価を与えるのか。以上の点を、1)話者、2)話される場所、3)同言語の特徴、4)移民の言語が移民背景を持たない者によって話される目的に分けて調査した。なおここでの言語とは、移住先の国で話されている言語を指す。結論として、同じ移民背景を持たない若者のあいだでも、日常生活において移民背景を持つ者との接触があるかないかによって、移民背景を持つ者の言語を話す際の動機が異なることが明らかとなった。移民背景を持つ者と接触のある者が、自らのアイデンティティとして彼らの言語を話す一方で、移民背景を持つ者と接触の少ない者が、「不完全な言語しか話せない」という移民に対する意識から、彼らの話す言語を模倣していた。すなわち移民背景を持つ者の言語に対する評価に、二重性が存在しているのだ。27年度が最終年度であるため、記入しない。2014年度は研究課題のうち、現代ドイツにおけるトルコ系移民の「言語意識の変容」にテーマを絞り、研究を進めた。トルコ系移民の言語使用に関する調査は、林徹(2001, 2003, 2008)が2000年12月18日(月)から2001年1月9日(火)にかけて、ベルリンのクロイツベルク地区にある総合学校においてアンケートを実施した。林調査からおよそ13年経った現在、トルコ系移民の若者の言語意識にどのような変化が見られるか。トルコ系移民の若者の言語意識の変容を明らかにするために、研究代表者は次の2つの問題提起を立てた:(A)約13年前に行われた林調査と比較して、トルコ系移民の若者の言語使用に関して変化がみられるか。(B)もしトルコ系移民の若者の言語使用に変化が見られた場合、それはどういったコミュニケーションの相手、あるいは状況においてか。また、どのような言語意識が働いているため、言語使用に変化が生じたと推論できるか。研究代表者は今回、ドイツ全5都市で50人のトルコ系移民の若者を対象としたアンケート調査を実施した。本調査では、林調査よりも詳細な質問事項を設けることで、それぞれの質問項目間の相関性を見出すことを目指した。さらに本調査で扱う多くの数値の裏付けのため、統計解析ソフト"R"を使用し、精密な分析を試みた。結論として、トルコ系移民の若者が13年前と比較し、よりドイツ語を使用するようになったと言える。その理由として考えられるのは、第一にトルコ系移民の女性の教育改善、次にコミュニケーションの状況の公私性、そしてコミュニケーションの相手との心的距離である。研究代表者は2014年度の研究について、期待以上の進展をしたと考える。その理由は、主に次の2点である。第一に、研究代表がドイツで実施したアンケート調査を、統計解析ソフト"R"を使用して精密に分析した点である。

本調査の実施は、13年前に林がドイツでトルコ系移民の若者を対象に実施したアンケート調査の結果と比較することが、主な目的であった。しかしただパーセンテージを比較するのではなく、本調査では統計解析ソフトを使用し、さらに精密な分析を試みた。それにより、ただのパーセンテージの比較では見えてこない、質問項目間の相関性を見出すことができた。第二に、アンケートの分析内容の積極的な発表である。本調査の結果については、まずはドイツおよび日本の学会で、一度ずつ口頭発表した。それぞれの学会で参加者から分析方法について詳細なアドバイスをいただくことができ、さらなる分析へと繋げることができた。そしてその結果については、2014年度末に学習院大学ドイツ文学会刊行の『研究論集』で論文として発表している。以上の点から、研究代表者の研究内容は、2014年度に期待以上に進展したと言える。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はさらなる多面的アプローチを行う予定である。特に、(a)ドイツにおけるトルコ系移民の民族誌(エスノグラフィー)および(b)トルコ系移民を対象としたインタビュー:質的調査に特化して研究を進める。(a)を知るために、グローバルな視点で移民の言語現象を観察する必要があると研究代表者は考える。そのため、まずはドイツ以外の国における移民の言語現象を観察し、ドイツにおけるトルコ系移民のそれと比較する。この比較を通して、各国の移民が所有する言語意識の相関性、あるいは相違性が明らかになると考えている。次に、(b)の実施についてである。インタビューの実施に先立ち、まずはインタビューのプリテストを行うことを予定している。プリテストを行うために、まずはある人物に予備調査としてインタビューを行う。インタビューの際は参与型を取り、被験者と1対1の対面式で行う予定である。さらにインタビューは質問を通してではなく、自然な会話を通して導き出すものとする。次に社会言語学の分野で似た研究を行っている複数の人物で、作業グループを作成する。そしてインタビューの内容を、作業グループのメンバーで評価する。研究代表者はこのプリテストを行うために、2015年8月にドイツへの渡航を考えている。渡航中は、ドレスデン工科大学のJoachim Scharloth教授とインタビューの方法論について相談をし、インタビューのプリテストの実施と、作業グループでの分析も行う予定である。
基板上セラミック薄膜の熱膨張測定装置の開発

セラミック薄膜の用途は、電気・電子はもとよりオプティクスの分野においても、今後ますます広がるものと期待される。いずれの用途でも、単に常温・常圧下のみならず、高温や低温、あるいは腐食性雰囲気下で仕様されることも多い。したがって、薄膜自体の耐候性や耐久性などの力学的特性の向上のみならず、基板材料との付着力や薄膜内の応力分布に影響を及ぼす両者間の熱膨張率マッチングが重要な問題となる。薄膜の力学的性質、特に弾性率については高温に至るまで精度よく簡便に測定できるシステムが既に構築されているが、熱膨張についての簡便な測定システムは未だ見あたらない。本研究は、セラミック薄膜の熱膨張率を求めるために、入手が困難な単独膜を用いずに、基板上に付着した状態の薄膜を用いて熱膨張の測定ができる装置を新たに開発することを目的とした。そこで、基板の反りの曲率半径の温度依存性から薄膜の熱膨張率を求めるために、レーザー干渉計と顕微鏡下で物質の高温状態変化や溶融状態での挙動を観察するために開発された電気炉とを組み合わせることにより、基板変位の温度変化を測定するシステムを構築した。測定システムの有用性を、シリカガラス基板に付着した非晶質シリカ薄膜を用いて検討した。さらに、本システムを用いて求めた約1μmの非晶質アルミナ薄膜の熱膨張率の値を報告した。セラミックス薄膜は、絶縁体や耐摩耗用コーティング材料として、また光りディスク用薄膜として多方面で利用されている。しかしこの場合、これら薄膜材料と基板材料との付着力に大きく影響を及ぼす両材料間の熱膨張マッチングが重要な問題となるため、薄膜の熱膨張の測定が緊急かつ重要な課題となっている。そこで申請者らは手に入れるのが困難な単独薄膜ではなく、基板に付着した状態の薄膜の熱膨張を得るために膜付き基板の加熱時の反りを求める方法を採用し、その測定装置の構築を行うことを目的に、本年度は基板の微小な反りを測定解析できる干渉計と干渉縞解析装置を購入した。ガラス基板試料を用いて機器の操作法の習得と測定技術の向上をはかるとともに、測定精度に関与する因子の探索を行い、試料基板の平滑度や平行度さらには基板裏面からの干渉の除去などが測定精度の向上には極めて重要であることを明らかにした。この問題を解決するには基板材料の選択や基板裏面に摺りなどを施すことが必要であろう。また、基板の微小な反りを求めるために、レーザ干渉計で測定した干渉縞を干渉縞解析装置で解析したデータをコンピュータに出力し、コンピュータ上で基板の曲率半径を計算する必要がある。このために、コンピュータへのデータとりこみ、データをもとにした基板の反りを求めるプログラムを各々作成し、その有効性について検討した。さらに、プログラムの作成と並行して、測定窓を有した試料加熱用電気炉の製作についての検討も行った。干渉計が当初の想定より炉の加熱により生じる干渉計と炉との間の空気の擾乱やわずかな振動にも極めて敏感であるために、いかに振動を少なくして空気の擾乱を防ぐかが炉については重要な課題であることがわかった。平成8年度では、まず、前年度からの課題として残った熱膨張測定システムの主要部分である加熱炉について調査した。その結果、顕微鏡下で物質の高温状態変化や溶融状態での挙動を観察する場合に用いられている電気炉を購入し、その炉の有効性について検討した。本電気炉においては、昨年度に製作した炉とは異なり、熱による大気の擾乱を、炉と干渉計との間の距離を近づけることにより極力抑えれることがわかった。したがって、本電気炉と干渉計とを組み合わせることにより、基板上薄膜の熱膨張率を基板の反りの曲率半径の温度依存性から求めるシステムを新たに構築した。構築後は、基板試料の最適寸法や種類を探索するとともに、構築したシステムの適否を判定するために、シリカをスパッタして得たシリカガラス基板上の非晶質シリカ薄膜について薄膜について基板の反りの温度依存性を調べた。

その結果、薄膜形成時に導入される膜内の真応力が基板の反りの温度依存性に大きく影響を及ぼし、この応力を如何に熱処理によって除去するかが重要な問題であることが明らかとなった。この応力を除去するための熱処理条件を決定したのち、熱処理による真応力除去後の基板上非晶質シリカ薄膜試料について基板の反りの曲率半径の温度依存性から薄膜の熱膨張を求めた。得られた曲率半径の温度依存性はより直線性を示し、その直線の傾きから得られる非晶質シリカ薄膜の熱膨張係数は、シリカガラスの熱膨張係数と同じ値を示した。この結果は、本研究で新たに構築した熱膨張測定システムの有用性を立証するものである。さらに、本システムを用いて、約1μmの非晶質アルミナ薄膜の熱膨張率を初めて求め、報告した。
繊毛運動を用いたバイオミメティックアクチュエータの開発

PVDFフィルムを用いて繊毛運動を行うアクチュエータ群を製作するために、個々の繊毛の動きをPVDFフィルムを用いて実現した。PVDFフィルムの両面に蒸着したアルミニウムをリングラフィによって加工し、PVDFフィルムの両面に電強を製作した。PVDFフィルム上にアルミニウムを蒸着して製作した櫛形電極など、設計通りの形状のアクチュエータが製作できることが明らかとなった。製作したアクチュエータの両面の電強に電圧を印加することによってPVDFフィルムの厚み方向に変位を発生した。製作したアクチュエータの電極の形状や、印加電圧に対するPVDFフィルムの変形の静特性をヘテロダイン干渉計を用いた原子間力顕微鏡で精度良く測定した。微小なアクチュエータを製作するためには、微小な電極を製作することが必要となる。そこで、走査型トンネル顕微鏡を用いて原子レベルの微細な形状の製作を目的とした加工を行った。被加工物には原子レベルで規則正しく配列した高配向性グラファイトを使用した。原子レベルのピットの生成とエッチング動作を確認した。バイオミメティックアクチュエータのような多数の動作の協調によって一つの目的動作を実現するアクチュエータの動作を観察するためには、一定の領域の動作を同時に観察する必要がある。そのため、半導体パルスレーザを用いた高精度の表面変位分布計測法を開発した。この方法はパルスレーザを用いるため、運動中の試料を静的に観察することができる。この装置により、試料表面の微小な変位分布の計測が可能になった。繊毛運動を用いたアクチュエータ群を製作するために,個々の繊毛の動きをPVDF薄膜を用いて実現した.はじめに,PVDF薄膜を用いた単体のアクチュエータ素子を設計した.PVDF薄膜の両面に成膜したアルミニウム蒸着膜をエッチングすることにより電極を製作し,単体のアクチュエータ素子として利用した。製作したアクチュエータ素子の形状,静特性,動特性をヘテロダイン干渉計を用いた原子間力顕微鏡により精度良く調べた.厚さ9μmのPVDF薄膜の厚さ方向の変形量は入力10Vに対して10nm程度であることが確認された.単体のアクチュエータ素子の特性測定の結果に基づき,複数のアクチュエータ素子の並んだアレイ構造の設計を行なった.アクチュエータ素子間の干渉について詳細な検討を行ない,アレイ間隔,間隔領域の形状を設計した.PVDF薄膜上のアルミニウム薄膜に複数のアクチュエータ素子のアレイをリソグラフィ設備を用いて加工し,各アクチュエータ素子の形状を測定した.酸化シリコン薄膜のカンチレバーアレイやアルミニウム薄膜の櫛形電極など,設計通りの形状のアクチュエータが製作できることが明らかとなった.ヘテロダイン干渉計を用いた原子間力顕微鏡によって各アクチュエータ素子の静特性と動特性を測定した.単体のアクチュエータ素子の特性と大差なかった.酸化シリコンの自立薄膜を用いたカンチレバーアレイを製作し,弾性特性を調べた.また,電極として使用されるアルミニウム蒸着膜の弾性特性を調べた.これらの測定結果より,実験で使用される薄膜の弾性特性はバルクのものと大差ないことが明らかとなった.この結果、薄膜を用いたアクチュエータの設計が容易になった.PVDFフィルムを用いて繊毛運動を行なうアクチュエータ群を製作するために、個々の繊毛の動きをPVDFフィルムを用いて実現した。PVDFフィルムの両面に蒸着したアルミニウムをリソグラフィによって加工し、PVDFフィルムの両面に電極を製作した。製作したアクチュエータの両面の電極に電圧を印加することによってPVDFフィルムの厚み方向に変位を発生した。

微小なアクチュエータを製作するためには、微小な電極を製作することが必要となる。そこで、走査型トンネル顕微鏡を用いて原子レベルの微細な形状の製作を目的とした加工を行なった。被加工物には原子レベルで規則正しく配列した高配向性グラファイトを使用した。原子レベルのピットの生成とエッチング動作を確認した。バイオミメティックアクチュエータのような多数の動作の協調によって一つの目的動作を実現するアクチュエータの動作を観察するためには、一定の領域の動作を同時に観察する必要がある。そのため、半導体パルスレーザを用いた高精度の表面変位分布計測法を開発した。この方法はパルスレーザを用いるため、運動中の試料を静的に観察することができる。この装置により、試料表面の微小な変位分布の計測が可能になった。
多核NMR法による有機イオン間相互作用の研究

我々は、ピリジニウムおよびアニリニウムハロゲン化物の水溶液について、陽イオン・陰イオンのNMR線幅を測定して、陰イオンの線幅にアンモニウム陽イオンの大きさに比例する濃度領域があることを見出し、この効果が接触イオン対の生成に起因することを示した。本研究ではこの方法を、次の1、2について研究した。1.多酸塩基の塩におけるイオン間相互作用(1)pKaの大きい二価の分子(ビピリジル、1,10-フェナントロリン)については、一価の塩基と同様の結論を得た。(2)pKaの小さい二価の分子(キノキリリン,フタラジン,ナフチリジン)は、完全にはイオン対を形成できずアニオンの補正線幅は対応する一価の塩基(キノキリリン,イソキノリン)よりも狭くなる。(3)ジアジンについてはpKaが小さいにもかかわらずピリジンと同様な結果となった。また、分子を大きくしたアルキル置換ジアジンでもイオン対の形成が可能であり、塩基分子の形もイオン対形成に関与している。この方法により有機アンモニウムイオンとハロゲン化物イオンとの高濃度領域での接触イオン対の生成について知見をさらに深め、水溶液のミクロな構造に関して知ることができた。2.多核NMR法のその他の相互作用系への応用p-,m-置換アセトアニリド、ベンズアニリド、トリフルオロアニリドの^<15>N-NMR化学シフトに対する置換基効果を検討し、分子中のπ電子系の分極の問題や電子的相互作用の解明にも拡張して応用する。1.多酸塩基の塩におけるイオン間相互作用(1)pKaの大きい二価の分子(ビピリジル、1、10-フェナントロリン)については、一価の塩基と同様に「アニオンの補正線幅は主にカチオンの体積に支配されている」という結論を得た。(2)pKaの小さい二価の分子(キノキサリン、フタラジン、ナフチリジン)は、完全にはイオン対を形成できずアニオンの補正線幅は対応する一価の塩基(キノキサリン、イソキノリン)よりも狭くなる。また、その線幅はpKaの値と相関がある。(3)ジアジンについてはpKaが小さいにもかかわらずピリジンと同様な結果となり、小さい分子ではpKaが小さくてもイオン対の形成が可能であると考えられる。2.多核NMR法のその他の相互作用系への応用p-,m-置換アセトアニリド、ベンズアニリド、トリフルオロアニリドの15^N-NMR化学シフトに対する置換基効果を検討し、分子中のπ電子系の分極の問題や電子的相互作用の解明にも拡張して応用する。1.多酸塩基の塩におけるイオン間相互作用(1)pKaの小さい二価の分子(ビピリジル、1、10-フェナントロリン)については、一価の塩基と同様に「アニオンの補正線幅は主にカチオンの体積に支配されている」という結論を得た。(2)pKaの大きい二価の分子(キノキサリン、フタラジン、ナフチリジン)は、完全にはイオン対を形成できずアニオンの補正線幅に対応する一価の塩基(キノキサリン、イソキノリン)よりも狭くなる。

また、その線幅はpKaの値と相関がある。(3)ジアジンについてはpKaが小さいにもかかわらずピリジンと同様な結果となった。また、分子を大きくしたアルキル置換ジアジンでもイオン対の形成が可能であり、塩基分子の形もイオン対形成に大きく関与している。この方法により有機アンモニウムイオンとハロゲン化物イオンとの高濃度領域での接触イオン対の生成について知見をさらに深め、水溶液のミクロな構造に関して知ることができた。多核NMR法のその他の相互作用系への応用p-,m-置換アセトアニリド、ベンズアニリド、トリフルオロアニリドの^<15>N-NMR化学シフトに対する置換基効果を検討し、分子中のπ電子系の分極の問題や電子的相互作用の解明にも拡張して応用する。
精子表面抗原とその安定化因子の分離・精製およびその総合的解析

2年間で次の事柄を明らかにした。1.単クローン抗体T21が認識する抗原分子は分子量約54,000のシアル酸を含む糖蛋白質(sgp54と略)であり、精子成熟抗原である。2.sgp54のエピトープはシアル酸で隠蔽され、通常の抗原抗体反応を利用したアフィニティー法では分離が困難であったが、レクチンを用いたアフィニティー法と組合せると分離が良くなった。3.シアリダーゼ処理して抗原隠蔽を解除するとエピトープは暴露された。この方法をgerm cellーfreeマウスであるWBB6F_1w/w^rに応用し、電顕レベルでsgp54分子の動態を解析した。すなわち、(1)sgp54は精巣上体の明細胞から小顆粒あるいは膜系に伴って分泌され精巣上体管腔内で未成熟精子表面に結合する。(2)その結合には抗原安定化因子と呼ばれるべき物質が密接に関係していた。4.抗原安定化因子の解析用のアッセイ法を検討し改良を重ねた。安定化因子の分子量は50,00060,000程度と推測されたが量的には少ない。5.sgp54に対するレセプターが存在することが判明した。(1)レセプターは精子形成過程の精母細胞で合成され精娘細胞以後の細胞膜表面に発現される。(2)このレセプターはsgp54を有しないラットやハムスターにも存在する。従って、成熟抗原に対するレセプターは哺乳動物の精子に共通した分子である可能性が強い。これらの事実を総合すると、哺乳動物の精子成熟過程には精巣上体上皮細胞から分泌される精子成熟抗原分子が安定化因子の存在下に未成熟精子細胞膜に存在するレセプターに結合するという過程であると考えることができる。1.今年度に次の点を明らかにした.(1)モノクローナル抗体T21が認識する抗原物質は,分子量54,000のシアル酸を含む糖蛋白質である.(2)そのシアル酸は抗原のエピトープを隠蔽しているための通常の抗原抗体反応を直接利用するアフィニティー法では抗原分子を分離し難い.脱シアル化するかあるいはWGAレクチンを用いてアフィニティー法を組合わせて分離する方が良い.(3)シアリダーゼ処理して抗原隠蔽を除くとエピトープは効率良く暴露され,抗原分子の動態を詳細に解析できた.(4)その結果,抗原分子は精巣上体明細胞から分泌され未成熟精子の尾部細胞膜に特異的に結合する分子であり,その結合には安定化因子が深く関係している.(5)その安定化因子のアツセイ法を確立した.(6)予想される抗原安定化因子の分子量は40,000-50,000であるが,小さい分子量のものも存在する可能性がある.2.今年度新たに次の知見を得た.(1)精子上体に到達した未成熟精子にT21抗原に対するレセプターが既に存在する.(2)レセプターは,精子形成過程で合成され,少くとも精娘細胞以後の細胞膜表面に発現される. (3)T21

抗原を持たないラットやハムスター精子にもレセプターが存在するため,このレセプター分子は哺乳動物精子に共通した成熟抗原と結合する分子である可能性がある. (4)従って,哺乳動物の精子成熟は,精巣上体明細胞から分泌される分子が抗原安定化因子の存在下に未成熟精子細胞膜に存在するレセプター分子に結合するというふうに考えることができる.これらの一つでも欠けたら精子は受精能を獲得できないかも知れない.次年度以後は,これらの一つ一つの点を解析し,精巣上体における哺乳動物の精子成熟過程全体を解析していく予定である.今年度は、次の点を明らかにした。1.単クローン抗体T21が認識する精子表面抗原、すなわちシアル酸を含む分子良54,000の糖蛋白質(sgp54と略す)の精製のため、次の組み合わせにて精製を試みた。ファルマシアのQセファロースあるいはmonoQとレンチルレクチンアフィニティー法を組み合わせることにより、一次元SDS電気泳動のクマシーブルー染色/ウェスタンブロッティング・免疫染色では1本のバンドになったが、銀染色にて薄く染色されるバンドがまだ23本存在する。このように精製されたsgp54を現在種々の実験に用いている。現在のところ種々の目的の実験には使用可能であるので、今後大量に精製する計画である。2.抗原安定化因子検索のためのアッセイ法を改良した。3.このアッセイ法に基づき抗原安定化因子の分子量(50,00060,000)を推測できたが、まだ因子の精製には成功していない。その理由は、因子検索のためのアッセイの殆どの工程が手動であり、また陽性・陰性を目で判定せねばならず、実験回数をこなせない点が最大の問題点である。現在、抗原安定化因子の分画を種々のクロマトグラフィーにて採取しつつある。現在のアッセイ法を使用すると同時に、光学顕微鏡からテレビカメラ出力しビデオテープに入力後、本大学センター設備の2次元画像解析法を用いて実験を効率良く回転させる方法も検討している。
有機農産物の安全性を考慮した消費者への情報提示と小売店の店舗デザイン

(1)消費者調査2004年、東京都内の青果店店頭において、東京地場産野菜・有機野菜・特栽野菜についての消費者調査を行った(アンケート用紙配布、回答郵送方式、有効票数686票、有効回答率34.3%)。データから、回答者の76%は有機や減農薬・減化学肥料栽培野菜に関心を持っている一方、「東京」の地場野菜についての認知や評価は低く、43%が地場産野菜へのプレミアム価格の支払い意志をもたなか、った(小川・酒井)。調査の自由回答部分は、テキスト・マイニングの手法で解析したところ、消費者は有機と減農薬野菜の違いをはっきり認識しておらず、知覚している消費者は有機への不信感が大きいことがわかった(西尾・竹内)。また、これらの野菜購入動機の背景にある知覚されたベネフィットは、個人間で異なっていた。消費者の態度を分析すると、「有機」は独立したカテゴリーというより、「一般野菜」との関係で、相対的な評価により購買されている(阿部)。(2)視察・専門家による講義国内外の有機農産物の生産・流通・認証の実情を調べるため、筑波や中国・山東省、.オランダ、合衆国の小売り「ホールフーズ」(小川2005)などの視察を行った。また、エクスパートによるレクチャーも企画した。講師はイオン(「グリーンアイ」)、イトーヨーカドー(「顔が見える野菜。」)、ワタミファーム、イーアグリ、首都圏コープGPS、認証機関SEQの各社の野菜生産・流通の最前線の専門家で、講義は講義録にまとめられた(小川・青木2006)。(3)その他2004年、アジア消費者調査学会(ACR>で、研究メンバー全員が韓国で学会発表を行った。その他、研究の基礎となる資料の収集整理を行い、有機農産物と食の安全性に関する文献レビューを発表した(小川、2004,2005)。関連文献数百点に要約をつけた文献データベースが作成された。本年度に実施した本プロジェクト研究の活動は、以下の通りである。(1)資料収集と文献整理有機野菜に関連した国内・海外文献を整理した。収集した資料はリサーチアシスタント(青木恭子)の手により、基本共有ファイルを作成した。海外文献の資料点数は合計で100点、国内文献の点数は300点である。来年度早々に、有機野菜の関連文献資料集として、要約版を記録として公刊する予定である。(2)築地市場見学と調査実験店の視察(2003年10月16日)来年度(2004年度)、店頭消費者調査を実施する予定になっている「スターフルーツ」(東京都巣鴨)と「安信屋」(東京都御嶽山)を視察した。専門店(東京とれたて野菜プロジェクト参加店)の店頭観察により、有機野菜の購買行動を理解するとともに、実際の業務を担当している経営者たちをインタビューした。その際、取引を仲介している築市場(泉組合長)の分荷作業を見学した。(3)海外視察(2003年12月22日27日)中国上海と青島(山東省)の大規模有機栽培農場(3箇所)と日本・欧州向け野菜加工工場(2箇所)を視察した。なお、青島では、日本のキリン麦酒と現地研究所の合弁種苗会社を調査取材した。(4)FRフーズの調査・視察(2003年11月16日、2004年3月2日)FRフーズの事業について、インタビューした。また、「SKIP」の百貨店内の店舗視察(銀座松屋B2)を実施した。(5)招待セミナー開催と公開セミナーへの参加(2003年11月)

農業監査法人(AFAS)代表、徳江倫明氏(元らいでぃっしゅぼうや社長)を招いて、有機野菜市場の歴史的発展と現状についてレクチャーを受けた(11月13日)。また、メンバー全員が「日中韓有機野菜セミナー」に参加した(2003年11月14日)。(6)定期研究会の開催研究の正式発足(2003年6月)以降、研究会メンバーは、各自の発表を含めてほぼ月一回程度、定期的にミーティングを持ってきた(於いて、法政大学市ヶ谷キャンパス小川研究室)。今年度は、プロジェクトチームで3つの課題に取り組んだ。I文献レビュー:有機JAS認証がはじまる直前の2001年前後の文献を集中的に収集した。内容的には、国内・国外を問わず、学術雑誌、商業誌、一般紙などに発表されている論文・記事類を網羅的にサーチし、データベースの形式で文献を整理した。収集範囲には一部アジア地区(台湾、中国、マレーシアなど)のものが含まれるが、日本・米国・欧州を主として、その数は全部で250点弱になる。発表資料としては、生産と流通に関するものが、小川(2004)にまとめられている。II研究会でのヒアリングと実査:実績2003年4月2004年8月の実績は、以下の通りである。(1)東京とれたて野菜プロジェクト(2003年10月16日:築地市場見学・取材、小売事業者現地訪問)、(2)有機農業と農産品の歴史的な展望(2003年11月13日:徳江倫明氏、AFAS代表)、(3)ユニクロ(SKIP)の野菜事業(2004年3月2日:銀座松屋・野菜売場視察、2003年11月13日および2004年4月7日:柚木社長取材)、(4)イトーヨーカ堂・顔の見える野菜事業(2004年6月25日:押久保氏講演)、(5)Eアグリ(株)のネットビジネス(2004年5月28日:堂脇社長講演)、(6)首都圏コープの宅配事業(2004年7月9日:高橋氏講演)、(7)有機野菜栽培現地調査(2004年8月17日:茨城県谷田部町現地視察)。III消費者アンケート調査:「東京とれたて野菜プロジェクト」に参加している4店舗で、有機野菜に関する消費者アンケート調査を実施した。調査項目については、有機野菜に対する消費者の態度と実際の購買行動および「東京とれたて野菜プロジェクト」の事業評価であった。日時は、2004年11月18日(木)、22日(月)。サンプル数は700票強。調査内容と結果については、後日学会で発表予定である(阿部・青木担当分と西尾・竹内担当分)。今年度、研究グループ全体、各チーム、個人の研究は、以下のように進展した。1全体としての取り組み(1)最終報告のまとめに向けて、法政大学で2回の合同ミーティング(8月5日、12月19日)を開いた。(2)有機野菜を食材として使った外食産業の取り組みを知るために、12月5日に、講演セミナー(ワタミファーム社長:武内智氏)を開いた。(3)同日には、イトーヨーカ堂本社(四ッ谷)訪問し、押久保清志氏に、「顔の見える野菜」のその後の展開についてインタビューした。(4)イオングループの取り組みについて、6月27日、幕張本社を訪問し、植原千之氏に「有機野菜ブランド化と流通(グリーンアイ)」についてインタビューを実施した。2座長の小川(1)インド・マレーシアの花き野菜産地・パッキング施設訪問(7月1日7日)、(2)米国テキサス州の自然食品系スーパー、ホールフーズの店舗調査(7月23日30日)、(3)小川孔輔(2005)
急性期病棟における看護としてのケアリングに関する技術的能力の認識調査

平成27年度は、郵送調査を行うための質問紙の準備を行った。医学とテクノロジーの進歩によって、患者の延命治療に伴うケアが行われている。そのケアがただ単に手順に基づくものであるとすれば、患者のニードを十分に満たすものではない。急性期における看護では、科学技術の進歩による機械の操作が看護師のあたりまえの仕事になる一方で、患者には疎外感をもたらす一因となる。研究分担者のLocsinは、看護におけるケアリングとしての技術的な能力を測定するための評価尺度(Technological Competency as Caring in Nursing Instrument: TCCNI)を米国で開発している。これを共同研究者らで日本語に翻訳し、内容を検討するとともに、協力者によって回答者が理解しやすいような表現や質問になるようプレテストし、改良を重ねた。また、翻訳した日本語を第三者の翻訳業者を用いて逆翻訳し、翻訳上の問題を確認して、高い精度の日本語版アンケートを作成できた。さらに、Locsinの著書から、看護におけるケアリングとしての技術的な能力についての集中治療室(ICU)の看護師の考え方とその実態を測定するための、質問紙の準備も完了した。平成27年度は、郵送調査を行うための質問紙の準備を行ったが、1看護におけるケアリングとしての技術的な能力を測定するための評価尺度(Technological Competency as Caring in Nursing Instrument: TCCNI)の日本語版を作成するとともに、2「看護におけるケアリングとしての技術的な能力についてのICUの看護師の考え方とその実態を測定するための質問紙」の準備も完了した。現代の看護活動は多くの高度なテクノロジーを使用している。本研究の共同研究者であるLocsinは、「看護におけるケアリングとしての技術力」を用いるための実践理論を開発している。さらに、看護師のケアリングとしての技術力に関する思考を測定するための評価尺度(TCCNI)を開発した。TCCNIを日本で使用するために、研究代表者の谷岡により日本語に翻訳され、翻訳業者による英語への逆翻訳によって日本語への翻訳精度が確認された。看護におけるケアリングとしての技術力に関する第1回国際セミナーへ参加し、海外の研究者との交流を通してグローバルな視点からTCCNIへの理解を一層深めることができた。平成28年度は、平成27年度に作成したアンケート(1.ケアリングとしての看護に対する看護師の考え方と実践状況,2.看護師のテクノロジーに対する考え方について)を改良し、評価尺度である日本語版の評価尺度(TCCNI-J)を作成した。そして、日本国内の急性期病院30施設の集中治療室(ICU)の看護師500名を対象に、前述したアンケート調査を行った。調査手順は、看護管理者に電話による調査協力依頼を行い、協力が得られた病院に郵送もしくはWebアンケートツール(Survey Monkey)を用いて回答を依頼した。TCCNI-Jの構成概念妥当性を検討するため、確認的因子分析により適合度指標を算出した。さらに内的整合性を検討するため信頼性係数を算出し、信頼性を確保した。なお、急性期病棟へのテクノロジーの導入状況と看護の関係についての調査は、先進的な病院を10病院訪問し、看護におけるケアリングとしての技術的能力に関するとらえ方について聞き取り調査を行なう予定であったが、前述の調査でデータの取得ができたため、訪問調査は29年度に変更した。平成28年度は、27年度に作成したTCCNI日本語版アンケートを用い郵送調査を行った。調査の結果を、探索的因子分析により因子構造を明らかにした。急性期看護の中でも高度なテクノロジーが使用されているICUに勤務する看護師が,看護におけるケアリングとしての技術力をどのように認識しているのかを測定する尺度を作成した(Perceived Inventory of Technological Competencyas Caring in Nursing:PITCCN)。本尺度を用いて,個々の看護師の看護におけるケアリングとしての技術力が測定できれば,現任教育への活用や看護師個人の内省に使用することができる。看護におけるケアリングとしての技術力に対する看護師の認識を確認できることにより,生命危機状態にある患者と家族に対するケアに必要な技術力とは何かを看護師個々あるいは部署全体で再認識し,ケアの質向上につなげることが可能になる。急性期病棟へのテクノロジーの導入状況と看護の関係や看護におけるケアリングとしての技術的能力に関するとらえ方について、6病院にて訪問調査を行い、「看護におけるケアリングとしての技術的な能力についてのICUの看護師の考え方とその実践状況を測定するための質問紙」の構成概念妥当性について、討論し助言をいただいた。次に、松山市民病院・香川大学医学部付属病院で、作成したPITCCN、23項目について、患者理解の観点から尺度の内容妥当性を検討した。また、因子分析により明らかにされてた構成概念についても検討した。香川大学附属病院では、「看護におけるケアリングとしての技術的な能力についてのICUの看護師の考え方とその実態を測定するための質問紙」について、尺度の内容を患者理解の観点から内容妥当性を検討し、香川大学付属病院での現任教育への具体的な活用方法についても審議した。全診療科で使えるようにするため、三重大学および岐阜大学で、尺度の妥当性と今後の課題について議論した。急性期病棟の中でもICUにおけるテクノロジーの導入状況と看護との関係について、先進的な病院を10病院訪問し、看護におけるケアリングとしての技術的能力に関するとらえ方について、聞き取り調査を行う予定である。また、ICUで勤務する看護管理者や看護師600名程度を対象にして、27年度に作成した1TCCNI日本語版アンケートと2「看護におけるケアリングとしての技術的な能力についてのICUの看護師の考え方とその実態を測定するための質問紙」について、Web調査(SurveyMonkey)を行う。

回収結果については、探索的因子分析により因子構造を明らかにするとともに、尺度の構成概念妥当性を検討するため、確認的因子分析により適合度指標を算出する。内的整合性を検討するため信頼性係数を算出する。看護におけるケアリングとしての技術的な能力について,看護師の思考を測定するための評価尺度である日本語版の評価尺度(TCCNI-J)を作成し、確認的因子分析により適合度指標を算出した。内的整合性を検討するため信頼性係数を算出した。テクノロジーとケアリング(思いやり)は対義語のように使用されることがあるが、本来は融和共存する概念である。今後の研究では、TCCNI-Jを活用して、国内の急性期医療における看護師の、「看護における科学技術」と「ケアリングとしての技術的能力」に関するとらえ方について、調査対象者と調査範囲を拡大して調査し、科学技術とケアリングを融和させた質の高い看護を提供する方法を探索することにすすめていきたい。看護学文献調査補助にかかる謝金にかかる費用が不必要になったため。・病院への聞き取り調査をするための旅費が不要になったため。・年度内に論文投稿をする予定であったが、論文の完成度を高めて29年度の投稿することとした。ICUのある病院の看護管理者を対象に、予備的訪問調査を行うための出張費および調査準備にかかる謝金に使用する予定である。・先進的な10病院のうちの数か所を厳選して訪問調査するための旅費に使用する。・論文投稿費に充てる予定である。また、7月にタイで行われる国際学会への参加し、本研究の成果の一部を発表する。
常染色体優性網膜色素変性原因遺伝子の発現調節を用いた視細胞変性機序の解析

対象と方法ヒト常染色体優性網膜色素変性の動物モデルとしてへテロ接合体のretinal degeneration slow(ヘテロrds)マウスを作成し、その病態について詳しく検討した。ヘテロrdsマウスにカルシウム拮抗薬であるニルバジピンを200日腹腔内に連日投与した。投与終子後、網膜内での遺伝子発現の変化を調べるため、マイクロアレイ法を用いて対照群との各種遺伝子の発現比を検索した。発現が増大ないし減少した主な神経栄養因子や増殖因子について定量的RT=PCR法とウエスタンブロット法により発現を確認した。また200日間のうち20日ごとに網膜電図(ERG)を測定し、薬物の網膜機能に及ぼす影響を検索した。さらに形態的な特徴を探るため、200日間投与した後の組織所見をヘマトキシリン・エオジン染色にて光学顕微鏡的に観察するとともに、細胞内の所見を電子顕微鏡にて観察した。結果ヘテロrdsマウスに200日間ニルバジピンを腹腔内に投与したところ、ERGのa波およびb波ともに非投与群に比べて有意に振幅が大きく、薬物による視細胞変性阻止効果が確認された。形態的観察では、光学顕微鏡的には両者の間には差がなかったが、電子顕微鏡による形態計測では視細胞外節の円板構造が投与群では非投与群に比べその数において有意に形態が保たれていた。マイクロアレイによる遺伝子発現解析では、CNTF(ciliaryneurotrophic factor)の発現がニルバジピン投与により4倍に発現が亢進し、こればRT-PCRやウエスタンブロット法により確認された。ロドプシンタンパク質の発現量も投与群において上昇していた。考察ニルバジピン投与によりヘテロrdsマウスの網膜変性の進行は遅延する。その分子機構としてはニルバジピン投与による内因性のCNTFの発現が亢進するためであることが考えられた。本薬剤のヒトヘの治療効果が示唆される結果となった。対象と方法ヒト常染色体優性網膜色素変性のモデルとしてヘテロ接合体のretinal degeneration slow(ヘテロrds)マウスを作成し、その病態について詳しく検討した。200日間のうち20日ごとに網膜電図(ERG)を測定し、ニルバジピン非投与群とのERGの波形の差を検討した。形態的な特徴を探るため、200日間投与した後の組織所見をヘマトキシリン・エオジン染色にて光学顕微鏡的に観察するとともに、細胞内の所見を電子顕微鏡にて観察した。ニルバジピン投与による網膜内での遺伝子発現の変化を探るため、投与群と非投与群の網膜を摘出し、そのホモジネート内に含まれるメッセンジャーRNAの差異をマイクロアレイ法(イルミナ社)を用いて網羅的に解析した。さらにその結果を確認するために、定量的RT-PCR法により転写レベルを、さらにウエスタンブロット法により翻訳レベルでの発現状況を検討した。結果ヘテロrdsマウスに200日間ニルバジピンを腹腔内に投与したところ、ERGのa波およびb波ともに非投与群に比べて振幅が大きかった。形態的観察では、光学顕微鏡的には両者の間には差がなかったが、電子顕微鏡による観察では視細胞外節の構造が投与群では非投与群に比べ形態が保たれていた個体が多く、非投与群では外節膜の小胞形成や配列の乱れをきたしていたものが多かった。遺伝子発現に注目すると、マイクロアレイによる解析では、投与群ではタンパク合成系に関与するタンパク質および各種神経栄養因子や成長因子の遺伝子の発現が多く、非投与群では、タンパク分解型系やアポトーシスに関与するタンパク質の遺伝子の発現が多い傾向があった。中でもCNTF(ciliary neurotrophic factor)の発現がニルバジピン投与により4倍に発現が亢進し、こればRT-PCRやウエスタンブロット法により確認された。

マイクロアレイによる遺伝子発現解析では、CNTF(ciliaryneurotrophic factor)の発現がニルバジピン投与により4倍に発現が亢進し、こればRT-PCRやウエスタンブロット法により確認された。ロドプシンタンパク質の発現量も投与群において上昇していた。考察ニルバジピン投与によりヘテロrdsマウスの網膜変性の進行は遅延する。その分子機構としてはニルバジピン投与による内因性のCNTFの発現が亢進するためであることが考えられた。本薬剤のヒトヘの治療効果が示唆される結果となった。
クロマチン修飾による褐色脂肪細胞分化制御機構の解明

#マウス褐色脂肪組織形成におけるMATIIαの与える影響の検討マウスモデルにおけるMATIIαの褐色脂肪細胞分化作用について検討した。MATIIα全身ノックアウトマウスは褐色脂肪組織が形成される前に胎生致死であるため、MATIIαのfloxマウスを作製し、Myf5プロモーター下にCreを発現するマウスと交配することで褐色脂肪組織特異的にMATIIαをノックアウトしたマウスモデルを作成した。E18.5における肩甲骨間組織を採取し組織学的な検討を行ったところ、褐色脂肪組織は顕著に縮小していた。また褐色脂肪組織をレーザーキャプチャーマイクロダイセクションにより切り出し遺伝子発現を検討すると、熱産生関連遺伝子の低下を認め、MATIIαが褐色脂肪組織の形成に重要な働きを持っていることが明らかとなった。現在さらにRNAシークエンスにより網羅的遺伝子発現解析をすすめている。さらに、マウスモデルでのベージュ脂肪細胞でのMATIIαの機能を調べる目的でMATIIαfloxマウスに、Adiponectinプロモーター下にCreを発現するマウスと交配することで、脂肪細胞特異的にMATIIαをノックアウトしたモデルを作成している。今後はさらに熱産生能の検討や全身の糖代謝変化、また寒冷刺激などによるベージュ脂肪細胞の誘導などを検討する予定である。現在までの研究により、MATIIαはエピジェネティック調節機構を介した褐色脂肪細胞およびベージュ脂肪細胞の分化調節を行っているだけでなく、クレアチン生合成を介したUCP1非依存的な熱産性能をも制御しているという多面的な機能が明らかとなった。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。PRDM16/EHMT1を前駆筋肉細胞に導入すると褐色脂肪細胞への分化誘導が認められるが、EHMT1のヒストンメチル化活性を持つ部位であるSETドメインを欠失させる変異体を導入すると褐色脂肪細胞への誘導が解除された。MATIIαはそのEHMT1のSETドメインとのみ相互作用を有しており、MATIIαのノックダウンによってPRDM16/EHMT1複合体のヒストンメチル化活性が抑制されたことから、MATIIαはヒストン修飾を介した褐色脂肪細胞の分化誘導に関与しているのではないかと考えられた。そこでPRDM16/EHMT1/MATIIα複合体が褐色脂肪細胞の分化決定に与える影響を検討するため、培養前駆褐色脂肪細胞でMATIIαのノックダウンを行い、脂肪細胞へと分化誘導を行った後に、遺伝子発現の変化を検討したところUcp1やCideaなどの褐色脂肪細胞特異的遺伝子の低下を認めた。またRetnやAgtといった白色脂肪細胞特異的遺伝子は上昇していた。そこで上記白色脂肪細胞特異的遺伝子群のプロモーター領域でのヒストン修飾状態をChIPアッセイで検討すると、MATIIαのノックダウンによってH3K9のメチル化が低下していた。以上より、MATIIαは白色脂肪細胞特異的遺伝子群の発現制御部位のヒストンメチル化を抑制することで発現を抑制し、褐色脂肪細胞への分化誘導を制御していると考えられた。白色脂肪組織中に誘導される褐色脂肪細胞であるベージュ脂肪細胞の分化にもPRDM16/EHMT1複合体は大きな役割を果たしている。そこで、マウス鼠径部白色脂肪組織より採取した初代培養白色脂肪細胞でMATIIαをノックダウンした後に、ベージュ脂肪細胞への分化刺激を加えると、褐色脂肪細胞特異的遺伝子群の低下が認められ、ベージュ脂肪細胞の分化にもMATIIαが重要な役割を果たしているものと考えられた。褐色脂肪細胞の分化誘導の運命決定を担うPRDM16/EHMT1の構成因子として新たにMATIIαを同定し、その機能解析を順調に行うことができた。並行して、MATIIαの褐色脂肪組織特異的ノックアウトマウスの表現型の解析予定であったが、当初計画されていたEMMA repositoryより入手した胚から繁殖させたマウスにfloxアリルを確認できなかったため、筑波大学生命科学動物資源センターに依頼しCrispr/cas9を用いた方法で作成した。マウスの表現型解析を行うための繁殖を継続しているところである。#ベージュ脂肪細胞におけるMATIIαの熱産性能における役割の検討MATIIαはメチル基供与体として,細胞内クレアチン産生の代謝経路に直接関与しており,また近年クレアチン依存的な熱産生経路の存在が明らかになってきていることから,MATIIαのクレアチンを介した熱産性能への影響を検討した。MATIIα阻害薬であるFIDAS-5をベージュ脂肪細胞に添加すると,細胞内クレアチンの減少とともに,UCP1非依存性の酸素消費量の低下が認められた。またベージュ脂肪細胞により近い性質を持つヒトの培養褐色脂肪細胞においてもFIDAS-5の添加に伴い酸素消費量の低下を認め,ベージュ脂肪細胞とヒト褐色脂肪細胞におけるクレアチン生合成を介したMATIIαのUCP1非依存性熱産性能への働きが明らかとなった。#マウス褐色脂肪組織形成におけるMATIIαの与える影響の検討MATIIαのエクソン2-6をfloxで欠失するマウスを、筑波大学生命科学動物資源センターに依頼しCrispr/cas9を用いた方法で作成した。このマウスにmyf5プロモーター下にCreを発現するマウスと交配させることで褐色脂肪組織特異的MATIIαノックアウトマウスを作製した。出生直後の褐色脂肪組織の表現形を検討する予定であったが,褐色脂肪組織特異的MATIIαマウスは低体温により出生直後より致死であり,その表現型を解析するのは困難であった。

そこで褐色脂肪組織が充分に形成されているE16.5-18.5期におけるマウスの組織採取に切り替えて現在検討を行っている。#ヒト褐色脂肪組織におけるNF1Aが与える影響の検討ヒト褐色脂肪組織における検討で,転写因子NF1Aがヒト褐色脂肪組織の形成にも重要であることを東京大学との研究チームとの共同研究で明らかにした(雑誌論文1)PRDM16/EHMT1/MATII複合体が褐色脂肪細胞やベージュ脂肪細胞における転写活性制御で重要な役割を果たしていることだけでなく,細胞内クレアチン産生を介したUCP1非依存的熱産性能にも関与していることを明らかにできた。並行して、MATIIαの褐色脂肪組織特異的ノックアウトマウスの作製にも成功しており,表現型解析を今後行う基盤を確立することができた。#マウス褐色脂肪組織形成におけるMATIIαの与える影響の検討マウスモデルにおけるMATIIαの褐色脂肪細胞分化作用について検討した。MATIIα全身ノックアウトマウスは褐色脂肪組織が形成される前に胎生致死であるため、MATIIαのfloxマウスを作製し、Myf5プロモーター下にCreを発現するマウスと交配することで褐色脂肪組織特異的にMATIIαをノックアウトしたマウスモデルを作成した。E18.5における肩甲骨間組織を採取し組織学的な検討を行ったところ、褐色脂肪組織は顕著に縮小していた。また褐色脂肪組織をレーザーキャプチャーマイクロダイセクションにより切り出し遺伝子発現を検討すると、熱産生関連遺伝子の低下を認め、MATIIαが褐色脂肪組織の形成に重要な働きを持っていることが明らかとなった。現在さらにRNAシークエンスにより網羅的遺伝子発現解析をすすめている。さらに、マウスモデルでのベージュ脂肪細胞でのMATIIαの機能を調べる目的でMATIIαfloxマウスに、Adiponectinプロモーター下にCreを発現するマウスと交配することで、脂肪細胞特異的にMATIIαをノックアウトしたモデルを作成している。今後はさらに熱産生能の検討や全身の糖代謝変化、また寒冷刺激などによるベージュ脂肪細胞の誘導などを検討する予定である。現在までの研究により、MATIIαはエピジェネティック調節機構を介した褐色脂肪細胞およびベージュ脂肪細胞の分化調節を行っているだけでなく、クレアチン生合成を介したUCP1非依存的な熱産性能をも制御しているという多面的な機能が明らかとなった。現在繁殖しているMATIIαfloxマウスを、myf5プロモーター下にCreを発現するマウス(Jackson Laboratoryより購入済み)と交配させることで褐色脂肪組織特異的MATIIαノックアウトマウスを作成する。出生直後の褐色脂肪組織をマウス肩甲骨間より採取し、組織学的な検討を行う。