hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
液状基板で作成する有機半導体薄膜の高機能化と高性能化

合成した材料は構造評価により、既報のNR-P3HTとほぼ同様の立体規則性を有する重合体であることを確認した。配向度を誘起する主因子として液状基板の粘性に着目した。粘性の異なる液体として、水(粘度:1mPa.s),エチレングリコール(16mPa.s),グリセリン(1420mPa.s)を選定した。得られた浮遊膜は液状基板により膜厚と配向度に違いが見られた。そこで2液体の混合で調整した様々な中間粘性液状基板を用いたところ、特定の混合液状基板で配向度7の高配向膜が得られた。AFM像から光学配向軸に沿った明瞭なNR-P3HTの配向ドメインが確認できた。高配向NR-P3HT薄膜の積層膜を用いて汎用FTIR装置で偏向解析を行ったところ、既報論文と同様の偏光スペクトルを得た。以上の結果により、FTM法で得られた配向膜を用いることで、高額な顕微FT-IR装置等を必要とせずに、簡易にかつ迅速に導電性高分子の主軸と側鎖に関した配向構造情報を廉価に得られることを実践的事例として示すことができた。導入した高速度カメラによる成膜形成過程の解析では、溶液の滴下後に生じる液状基板上での溶液の展開とそれに伴う浮遊膜の凝集化や移動を経て浮遊膜が形成されるまでの過程をモーションイメージとして収集・解析した。例えば使用した液状基板の温度と溶液の展開速度の関係が判明した【部分課題の達成】。以上の結果を基にして、液状基板の粘性の違いから得られる浮遊膜の配向度の変化についての研究成果を得ることができた【部分課題の達成】。形成膜の配向度の空間分布計測については、導入した個々の装置による配向状態の評価能については既に確認を行った。例えば、光ファイバガイド型の吸収スペクトル装置による偏光スペクトル測定の確認を行った【部分課題の達成】。空間マッピングにおいては、手動による転写基板のX-Y駆動の動作確認を行った。【部分課題の達成】。一方で、これらの個々の装置を連動させて空間マッピングを行うための自動データ収集システムが年度内に完成しなかった。【部分課題の遅延】。以上の結果から、当初計画より若干の遅延状態にあると判断した。初年度(平成27年度)の部分課題として、配向状態の空間マッピングの収集システムの確立が遅延している状況にあり、本件の解決をすすめる。一方で、本研究の主目的である「FTM法で得られる浮遊膜の形成機構と高分子半導体膜の配向化機構の解明と電子物性との相関性」を迅速に行うため、浮遊膜の成膜機構解明に向けた研究実験を平行して進めていく。当面の研究として本年度(平成28年度)は、P3HT以外の高分子半導体を用いた浮遊膜内での高配向化技法を探求することを主たる研究課題と位置付けて研究を行う。特に高い移動度が期待される高分子半導体材料,pBTTT,を主たる研究対象用の材料として選定し、動的なFTM法によるpBTTTの高配向化と高移動度化を目指す。低分子系有機半導体材料は静的なFTM法により薄膜化が期待できる。極めて高い移動度が報告されている低分子半導体を対象材料として、これらの材料の薄膜形成への静的FTM法の適用性を調査する。得られた薄膜を電界効果トランジスタ(FET)に組み込み、薄膜の電子物性(移動度)を評価することで、高移動度低分子有機半導体へのFTM法の適用性について調査する。所属大学内で本研究の成果発表に関連する国際会議が行われ、本会議に参加するための旅費が不要となった。差額の一部は消耗品購入に充当した。その際当該研究に関与する必須消耗品の購入を進めたが、最終的に若干の残高(約3万円)が生じた。
切除不能進行膵がんにおける網羅的ゲノム解析による個別化治療法の確立に関する研究

本研究では切除不能進行膵癌患者より超音波内視鏡下生検によって採取した膵癌組織を用いて網羅的ゲノムコピー数異常解析を行い、治療の有効性などの臨床的因子との関連性を解析し、治療効果予測因子となりうる新規ゲノムバイオマーカーについて探索的な検討を行った。切除不能膵癌患者からの生検癌組織を用いたゲノム解析の報告は少なく、本研究により得られた知見は切除不能膵癌の個別化治療への礎になるものと期待される。本研究の目的は進行膵癌に対する化学療法において、治療前の針生検によって採取された癌組織を用いてゲノム構造異常などの網羅的分子情報解析を行い、薬剤感受性や予後など臨床的特性に関わる分子情報を解明し、個別化治療の構築を目指すことにある。平成23年3月までに89例の切除不能進行膵癌患者より超音波内視鏡下に針生検を行い、膵癌組織の凍結保存を行った。これまで本年度行った30例を含む41例に対しオリゴチップゲノムアレイ(アジレント・テクノロジーHuman Genome CGHマイクロアレイ4×44k)を用いたDNAの網羅的解析を行った。解析対象となった41例の治療法はゲムシタビン療法22例、ゲムシタビン+S-1併用療法14例、S-1療法1例、S-1併用放射線療法2例、重粒子線治療2例であった。針生検の検体であっても1μg程度のDNA抽出は可能であり、全症例でアレイCGHによるゲノム解析を施行し得た。コピー数の変化として1p、3p、9p、17p、18q、19p、20p、22qの領域にlossを、1q、19pの領域にgainを認めた。これらの変化のうち1p、3p、9p、17p、18q、19p、22qのlossは過去にも報告される染色体異常であり、生検検体を用いた本検討においても評価可能であった。また癌遺伝子であるKRASの増幅を1例で認め、癌抑制遺伝子であるSMADfamilyおよびP16のlossを各々約60%の症例に認めた。本年度は3年の研究期間の初年度であるが、今後さらなる症例を集積し網羅的分子情報解析を行い、抗腫瘍効果、生存期間、有害事象などの臨床データとの関連を検討する。本研究の目的は切除不能進行膵癌患者を対象として治療前に針生検によって採取した癌組織を用いてゲノム構造異常などの網羅的分子情報解析を行い、抗癌剤感受性や予後など臨床的因子に関わる分子情報を解明し、個別化治療の構築を目指すことにある。平成24年3月までに131例の切除不能進行膵癌患者より超音波内視鏡下生検を行い、膵癌組織の凍結保存を行った。これまで本年度34例を含む75例の生検検体よりDNA抽出を行い、オリゴチップゲノムアレイ(アジレント・テクノロジーHuman Genome CGHマイクロアレイ4×44kまたは8×60k)を用いたゲノムコピー数異常の網羅的解析を施行中である。これまでの75例の検討では微小な針生検検体であっても平均2.26μg程度のDNA抽出が可能であった。解析の精度を高めるためには、検体中の膵癌組織の含有率が問題となるが、今回われわれは生検検体のKRAS変異の有無をdirect sequence法にて検討した。この結果、変異解析を行った27検体中22検体(81.5%)にKRAS変異を認め、過去の報告と比較し遜色ない結果が示された。昨年度、癌抑制遺伝子であるp16、SMADfamilyのlossを約60%に認めることを報告したが、これらの結果と併せ、生検検体であっても癌組織の分子情報評価が可能であると考えられる。全75例の治療法はゲムシタビン療法40例、ゲムシタビン+S-1併用療法24例、S-1療法1例、S-1併用放射線療法8例、重粒子線治療2例であった。本年度は3年の研究期間の2年目であるが、今後さらなる症例を集積しゲノムコピー数異常の解析を行い、抗腫瘍効果、生存期間などの臨床データとの関連を検討する。本研究の目的は切除不能進行膵癌患者を対象として治療前の超音波内視鏡下生検によって採取した膵癌組織を用いてゲノム構造異常などの網羅的分子情報解析を行い、抗癌剤感受性や予後など臨床的因子に関わる分子情報を解明し、個別化治療の構築を目指すことにある。平成25年3月までに172例の切除不能進行膵癌患者より超音波内視鏡下生検による膵癌組織の凍結保存を行った。これまで、本年度42例を含む117例の生検検体よりDNA抽出を行っており、平均2.24μgのDNA抽出が可能であった。なお、KRAS変異解析(Direct Sequence法または一塩基伸長法)を行った75例中61例(81.3%)に遺伝子変異を認めた。また、これまでのアレイCGH解析では膵癌における代表的な癌抑制遺伝子であるp16およびSMAD4のlossを各々約60%および50%の症例に認めた。

これらは上記KRAS変異解析と同様に、切除標本を用いた過去の報告と比較し再現性のある結果であり、微小な生検検体であっても癌組織の分子情報評価が可能であると判断された。全117例の治療法はゲムシタビン療法50例、ゲムシタビン+S-1併用療法31例、ゲムシタビン+エルロチニブ療法13例、S-1療法3例、S-1併用放射線療法18例、重粒子線治療2例である。現在治療の有効性データ(化学療法の抗腫瘍効果、生存期間など)を集積中であり、オリゴチップゲノムアレイ(アジレント・テクノロジーHuman Genome CGHマイクロアレイ4×44kまたは8×60k)を用いて解析した膵癌ゲノムコピー数異常のプロファイルとの関連性を検討する。2年間で64例(平成22年度30例、平成23年度34例)の集積を達成しており、交付申請書に記載した60例(平成22年度30例、平成23年度30例)と比較し、おおむね順調と判断した。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後さらなる症例を集積しゲノムコピー数異常の解析を行い、抗腫瘍効果、生存期間などの臨床データとの関連を検討する。同時に解析精度を高める工夫が必要ど考えており、このためには生検検体中の膵癌組織の含有率が問題となる。現在、生検検体のKRAS変異の有無により正常細胞混入率の推定を行うことを検討している。
19世紀イギリス文学と都市

本研究は文学を都市との関連で考察し、19世紀イギリスのロンドンをモデルに、文学テクストを、都市の地理的配置と人間心理・身体、制度との相関において分析することを目的とした。当初、跡づけを試みたのは、ブルジョアが他者としての「下層」を構築しつつ自己形成する過程であったが、30・40年代からの「都市改良」が内包する思想性を読み取るために、あらたな権力論を援用して分析することが必要となった。都市行政上の主たる分析対象は、警察制度、衛生改革、住宅建設であるが、その理解のために、『監獄の誕生』から『知への意志』にいたるミシェル・フーコーの思想的展開が重要となったのである。ミクロの権力をマクロな権力に編成する力学は、前者から後者にかけて切れ目のない連続性のなかで考察されていると理解した。前者で呈示された「個人化」の問題性は、後者の「人口」論に無理なく引き継がれて展開されている。この理解は、政治・経済的に個人を軸に展開する近代社会を解読するために有用であり、また、文学が、個人のアイデンティティ、あるいは近代的主体を巡って展開されていることの説明になっている。そのことをテクスト分析によって確認した。17世紀オランダ市民社会の絵画で誕生した個人とその視点が19世紀イギリスの小説に生きているというマリオ・プラーツの古典的な解釈があらたな意味づけを施されるのはこの点である。主としてロンドンを分析するために、1852年にはじまったナポレオン三世によるパリ改造の政治的・思想的な位置づけを試みた。それによって得られた知見をロンドンにおける住宅建設の理解に及ぼし、その政治的・思想的な意味をさぐった。それを文学解釈に応用して、個人と家族を創出する近代イギリスの試みを、権力論の文脈で捉えることができたのが大きな成果であった。都市改良と警察に関する文献・資料の収集と分析に当たって、19世紀的「予防警察」構築に向けた理論展開をたどった。主たる分析対象は、パトリック・カフーンの著書A Treatise on the Police of the Metropolis(1806)とエドウィン・チャドウィックの論文"Preventive Police"(1829)である。ミシェル・フーコーのいわゆる規律・訓練的社会の成長を、公開処刑が新警察制度に移行する時代相の中にとらえることができた。特に18世紀、19世紀前半になされた死刑をめぐる諸家の発言の分析は、制度と人間心理の関わりを確認させた。ミシェル・フーコーの所論を援用すれば、警察は群衆のなかに潜行して権力を行使する。近代の社会形態の分析における群衆論は必須であったが、フロイトの諸論文などから群衆形成に関する理論を抽出して理解を深めた。都市改良については、主としてロンドンにおけるリージェント・ストリートの建設事業の実際を検証し、その理論的分析を行った。この事業が行う空間的操作には前近代性が指摘されるが、このような評価はこれ以降の都市計画がもつ性格を理解する基礎を与えると考える。30年代の文学作品では、教育に言及する点においてブルワー=リットンのPaul Clifford(1830)の重要性が確認できた。他にチャールズ・ディケンズのSketches by Boz(1833-36)から"A Visit to Newgate"をはじめとする短編数編の読解に当たり、それらを一連の物と見なしたときに、スケッチ的描写がリアリズムに移行し、物語が萌芽することを確認し、その様態を検証した。今年度は、行政の都市空間における力学を思想的に考察することと、都市空間の実地研究をおこなった。併行して、事実関係を確認し、19世紀イギリスの言説を把握するために内外の研究書と諸種の報告書、並びに新聞雑誌の記事を分析した。

思想的考察と実地研究を支えるためである。思想的考察としては、ミシェル・フーコーとジークムント・フロイトの論考を精読したが、前者は主に『臨床医学の誕生』、『知への意志』を読解し、それと併行してなされた彼のさまざまな発言も分析した。後者は「快感原則の悲願」以降になされた論考を精読・分析した。フーコーの場合は、医学における認識論的転換を都市空間の認識との関連で理解しようというものであり、フロイトは、集団形成のメカニズムと個人の問題に関する理解を深めるために読解して、第一次世界大戦以前の彼の思想との比較の上で分析した。歴史資料としては、19世紀イギリスの雑誌、エドウィン・チャドウィックの諸論文を現地調査と思想的分析を背後から支える言説的史料として位置づけ、分析を行った。ロンドンに赴き現地調査をおこなった。各地区の図書館で、19世紀ロンドンの時代毎の区分図を収集するほか、現地を具体的に見て、時代的変化の跡をたどり、21世紀における現状を確認し、また記録のために写真撮影を行った。地図の解読では、街区の変更が確認でき、行政による都市改良の方針が、調査地区の空間構成に具体的に現れているのを確認できた。この実地調査に上記の思想的分析を援用するのが目下の作業である。結果的にフーコー並びにフロイトらの思想を批判的に読解することができ、ロンドン都市改良についての新たな視点を見いだす可能性が出てきたと思われる。以上の考察はすでに草稿としてまとめてあり、平成18年度中に脱稿予定の著書の一部として組み入れる予定である。ミシェル・フーコーの権力論を、主として『監獄の誕生』、『知への意志』を読解しながら分析し、19世紀イギリスの都市と文学の分析に援用を試みた。それが、フーコーの理論によっていかに解明できるか、その可能性と限界を探ることに主眼があった。文学を都市空間における事象と併置したとき、時代精神によっていかに説明可能かを探る試みでもあった。歴史的事象の分析対象の重点は、ロンドンの衛生改革に移し、19世紀の貧困地区に関する文献資料を読解して、平成18年12月に現地調査を行った。資料は、従来ほとんど分析対象とならなかったか、重要性が見逃されてきたものを数点含み、分析に具体性とあらたな視点をあたえた。医療関係者による調査報告書はその一つである。実態を統計処理し、数値を都市改良の指標にするという手法が、時代の新しい認識方法、新しい知の形であることを、併行して分析した文献資料で確認することができた。ロンドンの現地調査では、19世紀の地図、版画を参考に調査地区の現状を確認し、テクスト解明に援用した。この地図と版画は、その他の資料と共に、著書に挿絵として用いる予定である。文学テクストのうち、あるものがスラム、墓地、警察と医療といった、都市問題をめぐる言説の干渉を被っていることを確認した。ほかにも、都市の変貌を反映したものとして、19世紀における各時期を典型的に表象する作家の文学テクストを分析した。昨年度に引き続いて、ジークムント・フロイトの集団心理学と、フーコーの権力論は都市空間における人口の布置に関する分析の中心として、文学表象と関連させた。本研究は単著の図書として出版予定で、平成19年中に脱稿、出版作業に入る予定である。
マイクロ波のスポット放射が可能な経尿道的前立腺治療器の開発とその臨床応用

指向性を持つマイクロ波による前立腺焼灼術が可能となるか研究を行った。マイクロ波発生装置として,我々が開発を行ってきたオリンパス光学工業(株)製のエンドサ-ムUMWを使用した。(1)内視鏡のチャネルに挿入可能な太さ(約7Fr)のアプリケーターを試作した。アプリケーターの先端は,集束性のあるマイクロ波が放射されるようにアンテナ状とした。内視鏡下で前立腺へ放射するために,アンテナはアプリケーター側方に設け,周囲の絶縁体の材質は合成樹脂を使用した。(2)前立腺ファントムとして鶏の砂肝を使用し,アプリケーター先端を挟みマイクロ波を放射した。出力30W,50Wとも焼灼によるcavity及び白色の熱変性部の体積は焼灼時間と正の相関が認められた。生体に対する検討として,麻酔下で豚の肝臓へマイクロ波をスポット放射した。焼灼中,問題となる出血はなく,数秒で2-5mmのcavityが形成された。麻酔下で兎に皮下トンネルを作製し,生理食塩水で灌流しながら,内視鏡下に筋層の焼灼を施行した。気泡の発生を伴うが,視野を妨げるようなことはなく,cavityの形成が可能であった。cavity周囲に3-5mmの深さの熱変性が生じることが組織学的に確認された。(3)基礎的検討にて,マイクロ波スポット放射の組織焼灼能,及び出血,周囲温度などの安全性が確認できたため,前立腺肥大症6例に対し,通常の経尿道的前立腺切除術前に,前立腺マイクロ波スポット放射を施行した。5分間で深さ約5mmのcavityが形成され,その周囲に約2mmの熱変性層が組織学的に確認された。出血は殆ど認められなかった。現状では,マイクロ波のみで前立腺閉塞部を完全に焼灼するには時間がかかりすぎると考えられたが,より高出力のマイクロ波が放射できれば,通常の電気メスによる切除術に比べ低侵襲で,手技の簡単な前立腺肥大症手術が可能となることが示唆された。
自己組織化によるドナー・アクセプター間の分子配向・距離の制御および光励起電子移動

ベンズイミダゾールは金属によく付着することが知られている。また、ドナーとしての性質を有する。本研究はこれを利用してベンズイミダゾールを含むドナー・アクセプター系を構築し、金属基板への自己組織化を試み、さらにこれによって分子配向・距離の制御できる系における電子移動反応を調べることを目的としている。今年度まず、ベンズイミダゾールの金属板への自己組織化について調べた。モデル化合物として、一連の長鎖(炭素鎖が13から17まで)ベンズイミダゾール誘導体、または置換基をもつベンズイミダゾール誘導体を合成した。これらの誘導体は銀,銅などの金属板に自己組織化できることがわかった。これらの誘導体は本来紫外励起によって蛍光を示したが、自己組織化によって蛍光が消失し、ドナーとしての性質を失った。これはこれらの誘導体は金属と錯体を作ったからである。そこで、これらの化合物の金属イオンとの錯体組織膜の形成についてさらに詳しく調べた。すなわち、これらの誘導体の溶液をさまざまな金属イオンを含む下層水上に展開し、そこにおける錯体形成を調べた。その結果、これらの誘導体は鉄、コバルト、亜鉛、ニッケルおよび銅などの二価遷移金属イオンと何らかの相互作用を示したものの、安定な錯体単分子膜を形成できないことがわかった。しかし、一価の銀イオンときわめて低い濃度でも安定な単分子膜をつくることがわかった。炭素鎖の鎖長がC10でも一価の銀イオンと安定な錯体をつくって、安定な単分子膜を形成することを見い出した。さらに、この単分子膜の一価の銀イオンに対する濃度依存性を明らかにした。また、これらの膜にγ線または紫外線を照射すると、Ag(I)が還元され、層状有機/無機複合体をつくる可能性を示唆し、いまそれについてさらに研究をつづけている。
イヌｉＰＳ細胞の樹立と疾患モデルイヌ研究への応用

イヌiPS細胞の樹立を目指して、イヌ胎仔線維芽細胞にイヌのリプログラミング4因子を、EOSベクターを併用して導入し、内因性のOct3/4を発現することにより薬剤耐性能を獲得しGFP蛍光を発するクローンを選択した.幹細胞マーカーの発現、胚様体形成能及び三胚葉分化マーカーの発現誘導が確認できたが、奇形腫形成能は確認できなかった.Chemically definedmediumを用いることで、短期間は未分化状態を維持した培養が可能であったが、長期培養では自然分化傾向が現れ、永続的に未分化状態を維持するクローンは樹立できず、更なる培養条件の探索が必要であると考えられた.前年度までの研究として、Oct3/4のプロモーターにより薬剤耐性遺伝子が発現し、同時にGFP遺伝子も発現するように構築されたEOSベクターを、イヌの4因子(Oct3/4、Sox2、Klf4及びcMyc)を発現するレトロウィルスと同時に、イヌの線維芽細胞に導入し、薬剤耐性及びGFP蛍光を指標としてイヌiPS細胞の候補クローンを樹立した。平成25年度は、そのiPS細胞の安定した培養維持方法の開発に取り組んだ。血清を用いた数種類の培養条件を検討したが、いずれも未分化状態を維持することが困難であったため、血清を含まず、含有物の組成が判明している培地(Chemically defined medium、CDM)を用いる方法に変更したところ、比較的安定して未分化状態が維持できるクローンの樹立に成功した。このクローンは内因性のOct3/4及びNanog等の幹細胞マーカー遺伝子を発現しており、胚様体を形成する能力を有し、遺伝子発現解析でも三胚葉の代表的遺伝子の発現が確認された。しかしながら免疫不全マウスへの移植による奇形腫形成能は確認できなかった。更にその後の解析で、CDMを用いた培養系であっても長期に培養を継続すると、徐々に内因性幹細胞マーカー遺伝子の発現が減弱し、未分化状態を失い、自発的に分化する傾向があることが判明し、最終的に長期にわたって未分化状態を維持できるクローンは樹立できなかった。なぜ内因性の幹細胞遺伝子がサイレンシングを受けてしまうのかについて、いくつかの検討を行ったがその原因は解明できなかった。イヌiPS細胞の樹立を目指して、イヌ胎仔線維芽細胞にイヌのリプログラミング4因子を、EOSベクターを併用して導入し、内因性のOct3/4を発現することにより薬剤耐性能を獲得しGFP蛍光を発するクローンを選択した.幹細胞マーカーの発現、胚様体形成能及び三胚葉分化マーカーの発現誘導が確認できたが、奇形腫形成能は確認できなかった.Chemically definedmediumを用いることで、短期間は未分化状態を維持した培養が可能であったが、長期培養では自然分化傾向が現れ、永続的に未分化状態を維持するクローンは樹立できず、更なる培養条件の探索が必要であると考えられた.正常ビーグル犬体細胞を用いてiPS細胞の作製と維持の技術の確立を目指した。1.イヌ体細胞からiPS細胞の作製:EOSシステムを用いたリプログラミング:イヌの4因子(Oct3/4、Sox2、Klf4及びcMyc)を通常のウィルスベクターにより導入する方法では、iPS細胞様のコロニーは多数出現するが、いずれも内因性の幹細胞マーカーの発現が誘導・維持できていない等の不完全な点があった。そこでOct3/4のプロモーター、すなわち内因性の遺伝子発現が誘導された時にのみ、薬剤耐性遺伝子が発現し、同時にGFP遺伝子も発現するように構築されたEOSベクターを、4因子を発現するレトロウィルスと同時に、イヌの線維芽細胞に導入した。導入後、薬剤耐性及びGFP蛍光を指標として、完全にリプログラミングされたクローンを選択した。その結果、形態、細胞表面抗原の発現、及び内因性幹細胞マーカーの発現の点から、iPS細胞として評価できるクローンを複数樹立することが出来た。2.作製したイヌiPS細胞の培養維持:血清を含まず、含有物の組成が判明している培地(Chemically defined medium、CDM)による維持を試みた。種々の市販のCDMに、いくつかの増殖因子あるいは阻害剤を添加した培地により、形態を維持したまま培養可能な条件を見出すことができた。3.作製したイヌiPS細胞の機能評価:作製したiPS細胞が標準的ヒトiPS細胞と同等な機能を有しているかについて、ヒトiPS細胞の評価法である幹細胞マーカーの発現確認、導入遺伝子のサイレンシング、核型解析、奇形腫形成能などを検討している。ヒトiPS細胞の樹立と異なり、イヌiPS細胞の樹立の場合は、4因子を用いたオリジナルのリプログラミング法では、完全にリプログラミングされる細胞は、極めて少数であることが判明した。この問題に対して内因性の多能性維持遺伝子が誘導されることを指標として薬剤選択可能なEOSベクターを用いることで対応できることが判明したことは、大きな進歩であると考える。また含有物の組成が判明している培地での培養が可能となったことは、血清ロット間の影響等を考慮する必要がなく、また今後、種々の増殖因子等の役割を解析する上でも意義あることを考える。短期の培養での問題は解決されたが、長期培養においてのサイレンシングの問題がまだ解決されていないために、サイレンシングを考慮しないでよいプラスミドベクターによる樹立・維持を検討する必要があると考えている。またin vivoでの多分化能の証明の一つである奇形腫形成能に関しても検討する必要がある。研究の進展に伴い、年度末に新たな消耗品の購入が必要となったが、期間内での購入が困難な物品であったため、繰越金(613,467円)として、平成25年度での購入費に充てた。
藤島武二の活動からみる官展の画家の社会的な役割と美術制度の研究

藤島武二の遺品のノートの中に、海外のポスターや本、雑誌の表紙などを小さな図に写した縮図帖がある。図は一頁のなかに多数描き込まれており、アール・ヌーボー様式のものが多い。今年度は1それら縮図の元になったものが何かを探した。2それによって縮図帖の制作年、原画の持ち主を推定した。3縮図帖のもとになった作品から藤島がアール・ヌーボースタイルについて学んだことがわかり、その成果が藤島が描いた雑誌『明星』のイラストにどのように反映したかについて比較検討をおこなった。雑誌『明星』は復刻版で調査することが可能だが、今年度貴重なオリジナル雑誌を入手することができた。この成果および、藤島の資料から明らかにした年譜的な事実は、児島薫『女性像が映す「日本」ー合わせ鏡の中の自画像』(ブリュッケ、2019年4月)のなかの「4章、藤島武二」で発表した。また藤島と当時双璧を成した洋画家岡田三郎助については、岡田が明治末に描いた新聞附録絵と同時期におこなわれた美人コンテストの関わりについて、改めて詳しい資料を精査した。その内容は、ポーラ美術館「モダン美人誕生ー岡田三郎輔と近代のよそおい」展のカタログに寄稿した児島論文「女性像が示す近代、大衆、ニッポン」のなかで発表した。また東京美術学校で藤島、岡田、和田英作に学んだ画家安藤東一郎が韓国で描いた天井画《飛天》の下絵があることがわかり、ご遺族のもとで調査をおこなった。藤島、岡田、和田が描いた天女の図像との関連を考えさせられるものであるが、今年度は下絵の概要を明治美術学会誌『近代画説』26号において報告した。また女性画家については翌年度以降の課題としていたが、岡田三郎助の女子洋画研究所でのいわさきちひろ、栗原玉葉と官展の関わり、女子美術学校での学習について研究し論文にまとめた。藤島武二のスケッチブック、ノートから年譜的事実の洗い出し作業の途中であるが、洋画学習を始めた時期、複数の師のもとでの学習の経緯を整理し、現在までの成果を自著『女性像が映す「日本」』のなかで述べた。スケッチブックのうち初期のものから調査を進め、『明星』イラストを描いていた1905年からの留学以前の学習状況について新しい見解を提示することができ、前述の自著のなかで述べた。雑誌『明星』についてはオリジナルの雑誌を入手することができ、刷りの状況についても比較精査することができた。またポーラ美術館での岡田三郎助を中心とする洋画展ではカタログ執筆で協力し、黒田清輝、藤島武二作品などを比較調査することができた。群馬県立近代美術館「湯浅一郎」展では、藤島と山本芳翠のもとで兄弟弟子であった湯浅一郎の作品調査をおこなった。湯浅がスペイン留学中にフランス、イタリアに留学した藤島と会い、ともにヨーロッパ各地を旅行した際の絵はがきを見ることができ、藤島の現地の旅程を確認することができた。児島虎次郎についての調査は夏期の水害の影響が心配されたため翌年に延期した。一方、当初未知であった東京美術学校で学んだ安藤東一郎の資料の所在がわかり、調査を継続している。安藤は日本統治時代の韓国で美術館の天井画《飛天》を描いており、日本の洋画家による韓国での活動について新たな研究の手がかりを得た。この成果も学会誌に発表した。岡田三郎助が教えた女性画家については2年目の課題であったが、弟子有馬さとえについては女性雑誌の記事にもとづく調査を始めた。最後の時期の弟子、いわさきちひろについても資料にあたり調査結果を発表できた。女性画家と官展の関係については日本画家栗原玉葉についても論文「女性画家としての栗原玉葉」をまとめた。以上初年度としては予定以上の成果をあげ、単著および学会誌、展覧会カタログに発表することができた。藤島武二のスケッチブック、ノートは大量にあるため、引き続きその内容の分析をおこなう。今年度は特に留学時代のスケッチを精査する。後年それらから新聞挿絵を制作していたことについて青木茂氏からご教示をいただいたため、これらと対応関係を調査する。年譜的事実についても留学以後の足取りに関する資料を抽出し、これまで明らかでなかった部分について事実関係を整理する。まだ未見の文献もあるため、図書館、古書の探求を継続する。また藤島が弟子たちに宛てた書簡についても引き続き所在の有無を探し、調査を継続する。日本政府による植民地支配のもとに日本人画家たちが相次いで「朝鮮」に渡り、現地で古美術に関心を寄せたが、その先鞭を付けたのはいち早く朝鮮出張を命ぜられた藤島であった。以後、総督府壁画を和田三造が描き、朝鮮ホテル壁画を山下新太郎ら東京美術学校出身者たちが手がける。安藤東一郎と田中良による朝鮮物産共進会天井画もこの系譜に位置するものであり、韓国側からも報告書が出されたところである。新資料である安藤東一郎の朝鮮旅行スケッチを手がかりにこのような朝鮮での官学出身画家たちの活動についても考察を進める。文展から二科分裂騒動のなかでの藤島や周囲の動向については、当時文展の審査委員長であった森鴎外関連資料を用いて検証する。文京区立森鴎外記念館でも調査をおこなう。女性画家については、今年度は有馬さとえの作品の修復を修復家に依頼しており、修理過程で明らかになる技法材料に関する情報を取り入れ、師である岡田三郎助の技法との比較検討する。

図は一頁のなかに多数描き込まれており、アール・ヌーボー様式のものが多い。今年度は1それら縮図の元になったものが何かを探した。2それによって縮図帖の制作年、原画の持ち主を推定した。3縮図帖のもとになった作品から藤島がアール・ヌーボースタイルについて学んだことがわかり、その成果が藤島が描いた雑誌『明星』のイラストにどのように反映したかについて比較検討をおこなった。雑誌『明星』は復刻版で調査することが可能だが、今年度貴重なオリジナル雑誌を入手することができた。この成果および、藤島の資料から明らかにした年譜的な事実は、児島薫『女性像が映す「日本」ー合わせ鏡の中の自画像』(ブリュッケ、2019年4月)のなかの「4章、藤島武二」で発表した。また藤島と当時双璧を成した洋画家岡田三郎助については、岡田が明治末に描いた新聞附録絵と同時期におこなわれた美人コンテストの関わりについて、改めて詳しい資料を精査した。その内容は、ポーラ美術館「モダン美人誕生ー岡田三郎輔と近代のよそおい」展のカタログに寄稿した児島論文「女性像が示す近代、大衆、ニッポン」のなかで発表した。また東京美術学校で藤島、岡田、和田英作に学んだ画家安藤東一郎が韓国で描いた天井画《飛天》の下絵があることがわかり、ご遺族のもとで調査をおこなった。藤島、岡田、和田が描いた天女の図像との関連を考えさせられるものであるが、今年度は下絵の概要を明治美術学会誌『近代画説』26号において報告した。また女性画家については翌年度以降の課題としていたが、岡田三郎助の女子洋画研究所でのいわさきちひろ、栗原玉葉と官展の関わり、女子美術学校での学習について研究し論文にまとめた。藤島武二のスケッチブック、ノートから年譜的事実の洗い出し作業の途中であるが、洋画学習を始めた時期、複数の師のもとでの学習の経緯を整理し、現在までの成果を自著『女性像が映す「日本」』のなかで述べた。スケッチブックのうち初期のものから調査を進め、『明星』イラストを描いていた1905年からの留学以前の学習状況について新しい見解を提示することができ、前述の自著のなかで述べた。雑誌『明星』についてはオリジナルの雑誌を入手することができ、刷りの状況についても比較精査することができた。またポーラ美術館での岡田三郎助を中心とする洋画展ではカタログ執筆で協力し、黒田清輝、藤島武二作品などを比較調査することができた。群馬県立近代美術館「湯浅一郎」展では、藤島と山本芳翠のもとで兄弟弟子であった湯浅一郎の作品調査をおこなった。湯浅がスペイン留学中にフランス、イタリアに留学した藤島と会い、ともにヨーロッパ各地を旅行した際の絵はがきを見ることができ、藤島の現地の旅程を確認することができた。児島虎次郎についての調査は夏期の水害の影響が心配されたため翌年に延期した。一方、当初未知であった東京美術学校で学んだ安藤東一郎の資料の所在がわかり、調査を継続している。安藤は日本統治時代の韓国で美術館の天井画《飛天》を描いており、日本の洋画家による韓国での活動について新たな研究の手がかりを得た。この成果も学会誌に発表した。岡田三郎助が教えた女性画家については2年目の課題であったが、弟子有馬さとえについては女性雑誌の記事にもとづく調査を始めた。最後の時期の弟子、いわさきちひろについても資料にあたり調査結果を発表できた。
外場応答性を有するナノ磁性体の開発

近年、熱や光、圧力等の外部刺激により磁気特性、電気伝導性、色などの様々な物性の変化を自由自在にスイッチングできる新しい物質や新しい技術の開発を目指した研究が盛んに行われている。我々の研究室では、三次元CN架橋構造を有するプルシアンブルーとその類似体に着目して研究を行ない、これまでにHigh-Tc分子磁性体、光応答性分子磁性体の開発に成功し報告してきた。昨年は、光応答性三核モリブデン銅錯体を合成しその物性を詳細に検討した。本年度は金シアノ錯体と鉄からなる新規二次元架橋錯体[Fe(bipe)(Au(CN)_2)_2MeOH]について研究を行った。この錯体はKAu(CN)_2とFe(ClO_4)_2、bis(4-pyridyl)-ethaneを混合し静置することによって合成した。結晶構造の解析からこの物質は非常に珍しいポリロタキサン構造をとっていることが分かった。鉄は二価高スピン状態であり、金はオーロフィリック相互作用で三核のクラスターを形成していた。東邦大学グループとの共同で金のメスバウアースペクトルを測定したところKAu(CN)_2と異なるスペクトルが得られた。しかし、これまでに報告されている関連する文献の結果と同様に、その違いは大きなものではなかった。また、東京大学グループとの共同で圧力効果について検討したところ、スピン転移は誘起できなかったものの磁化の変化が観測された。現在、量子化学計算を用いてこの物質の電子状態の解明を進めている。また、つい最近カテナン構造を有する新規FeAu金属錯体の合成にも成功した。今回開発したこれらの物質は将来の高密度光記録材料への応用が期待できる。本研究では、光応答性三核モリブデン銅錯体を合成しその物性を詳細に検討した。合成した三核モリブデン銅錯体(MoCu_2錯体)の磁化率を測定したところ、原子価異性物質、スピン転移物質と異なり温度変化による相転移を示さなかった。磁化の値から銅がS=1/2、モリブデンがS=0であることが示唆された。次にこの物質の光応答性について検討した。吸収スペクトルの測定により金属-金属電荷移動バンドが紫外領域に存在することがわかった。そこで、5Kにおいて波長紫外光を照射したところXmT値の上昇が見られた。このことは、金属-金属間電子移動(Cu^<II>-Mo<IV>→Co^I-Mo^V)が光により誘起されたことを示唆している。すなわち、光照射前はCu^<II>上のスピンはS=0のMo^<IV>により架橋されており、磁気的相互作用が弱い。一方、光照射後はCu^IのスピンとMo^V上スピンがCNを介して直接相互作用しており強い強磁性的相互作用が働く。その結果磁化の増大が観測されたものと考えられる。また、準安定状態は室温付近まで温度を上げると最安定状態に緩和することが分かった。この変化は繰り返し観測でき、可逆であった。今回開発した物質は将来の高密度記録材料への応用が期待される。
半月板損傷補填材開発を目指した半月板細胞培養床に関する基礎的研究

半月板は膝関節において荷重吸収あるいは関節安定性の確保などにおいて重要である.半月板損傷は特にスポーツにおいて好発する.従来の半月板切除術ではスポーツあるいは日常生活に復帰は可能であるが,その後変形性膝関節症を誘発するため,補填材等による形状を維持した修復が必須である.本研究は半月板補填材開発を最終的な目標とした.平成13年度は,培養細胞の細胞外マトリックスの産生が亢進しかつ細胞層が重層化することが報告されているアスコルビン酸2リン酸(以下Asc-2p)添加培地での培養にて,半月板由来細胞を培養し細胞層の重層化の確認および細胞層に合成・沈着されたコラーゲンの分析を行った.半月板切除術により得られた半月板組織を出発材料とし,outgrowth法にて細胞を得た.DMEM+10%FBSに0.2m MAsc-2Pを添加した培地を用い,培養皿上にて2日おきの培地交換で5週間培養した.得られた細胞層からのコラーゲンの抽出条件は1)50mMTris-HCl, pH7.5, 0.5%SDS,8M ureaにて80°C5分熱処理による中性pH非酵素的抽出,2)0.1mg/mlのペプシンを含む0.5M酢酸にて4°C24時間処理による酸性pH酵素処理抽出とした.分析は非還元/還元条件でのSDS-5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて行った.その結果,1)半月板由来細胞は重層化し,2)中性pH非酵素的抽出物ではVI型コラーゲン由来のバンドが主成分であった.3)酸性pH酵素処理における抽出物ではI型あるいはV型コラーゲンに由来するバンドが確認された.以上の結果から半月板由来細胞がAsc-2p添加培養により形成する細胞-基質複合体は半月板の大部分を占める線維軟骨における主成分を多く含み,特に半月板膝内中心部から辺縁部にかけての修復基材として期待されると結論した.細胞を含んだ移植材料作成において、細胞数の確保は必須である。一方で、継代による細胞数の増加は細胞の表現型の喪失を伴う。本研究ではヒト半月板より細胞を採取し、系代を繰り返した後にその表現型が細胞培養基質によって変換可能かどうかを検討することを目的とした。特に繊維芽細胞に特徴的な中間径フィラメントとしてビメンチンをマーカーとしてその染色性から検討を試みた。半月板より得られた細胞は、プラスチック皿上にて二極性の形態を示した。また、得られた細胞は系代可能であり、I型コラーゲンコートしたガラス上、免疫染色にてビメンチン陽性であった。これらの細胞を含んだ状態のI型コラーゲンをガラス上にて半球形を保った状態でゲル化させた。位相差型顕微鏡にて細胞は二極性に近い形態を示した。ただし、ビメンチンの染色性は異なり、ゲルの周辺部ではビメンチン陽性、ゲルの中央部ではビメンチン陰性となった。I型コラーゲンコートしたガラス上での形態観察およびビメンチンの染色性から半月板から得られた細胞、系代して増加した細胞はともに繊維芽細胞様であった。これら細胞は同一コラーゲンゲル内において部位によってビメンチン染色性が異なったことから、その形質はコラーゲンゲルによって変化すると考えられる。半球状のコラーゲンゲルはその部位によって力学的性質が異なると考えられることから、細胞外基質の物性により系代後、一見表現型を消失している細胞であっても、その表現型は修飾可能であると考えられる。以上から、半月板細胞は採取した後、継代し十分な数を得た後でもなおI型コラーゲンゲルにて目的の表現型に転換可能である可能性があると考えられた。半月板は膝関節において荷重吸収あるいは関節安定性の確保などにおいて重要である.半月板損傷は特にスポーツにおいて好発する.従来の半月板切除術ではスポーツあるいは日常生活に復帰は可能であるが,その後変形性膝関節症を誘発するため,補填材等による形状を維持した修復が必須である.本研究は半月板補填材開発を最終的な目標とした.平成13年度は,培養細胞の細胞外マトリックスの産生が亢進しかつ細胞層が重層化することが報告されているアスコルビン酸2リン酸(以下Asc-2p)添加培地での培養にて,半月板由来細胞を培養し細胞層の重層化の確認および細胞層に合成・沈着されたコラーゲンの分析を行った.半月板切除術により得られた半月板組織を出発材料とし,outgrowth法にて細胞を得た.DMEM+10%FBSに0.2m MAsc-2Pを添加した培地を用い,培養皿上にて2日おきの培地交換で5週間培養した.得られた細胞層からのコラーゲンの抽出条件は1)50mMTris-HCl, pH7.5, 0.5%SDS,8M ureaにて80°C5分熱処理による中性pH非酵素的抽出,2)0.1mg/mlのペプシンを含む0.5M酢酸にて4°C24時間処理による酸性pH酵素処理抽出とした.分析は非還元/還元条件でのSDS-5%ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて行った.その結果,1)半月板由来細胞は重層化し,2)中性pH非酵素的抽出物ではVI型コラーゲン由来のバンドが主成分であった.3)酸性pH酵素処理における抽出物ではI型あるいはV型コラーゲンに由来するバンドが確認された.以上の結果から半月板由来細胞がAsc-2p添加培養により形成する細胞-
固体表面吸着分子の多光子励起反応

金属表面では吸着種の励起状態の迅速な脱励起が起きるにもかかわらず、光脱離、光解離などを含む多彩な光反応が誘起される。本研究では、表面光化学における直接励起の役割の理解を進めるために、多光子光電子分光法により金属表面やこれに吸着した分子の量子状態を研究し、多光子励起の可能性について検討を行なった。そこで、表面および吸着種の非占有電子状態の情報を得るためにPt(111)を主な対象にして多光子光電子分光を行なった。まず、この清浄表面においては、s,pバンドギャップ内に存在する表面状態から鏡像準位(n=1)への共鳴遷移が5.4eVで起きることを明らかにした。また、150fsのレーザー光源を用いることにより、3光子過程に基づく光電子スペクトルを観測することができた。この事から、フェルミ準位あるいは真空準位を基準としてそれぞれの表面に局在化した電子状態のエネルギー位置を決定することができた。吸着系としては手始めにCO/Pt(111)系について2光子光電子分光を行なった。その結果、COの励起状態に基づくと思われる光電子スペクトルを得ることができ、偏光依存性などから、2π^*からの光電子であることを確認することができた。現在、COの被覆率依存性について詳細な実験を継続している。Pt(111)上のメタンの光化学については、400nm付近のサブピコ秒のレーザーパルスを照射することにより、2光子過程による反応が起きるかどうかを調べた。今のところ、200nm付近のナノ秒レーザーで起きているような光解離・脱離が起きているという明白な実験結果は得られていない。これは、2光子過程の遷移確率が1光子過程に比べて3桁以上小さいことを示唆している。この点を確認するために更に先端出力の大きなサブピコ秒レーザーパルスを用いて実験を行なうことを予定している。
東・東南アジア地域における高齢化とリビング・アレンジメントに関する比較研究

本研究の目的は、対象地域5ヶ国(日本、韓国、台湾、マレーシア、シンガポール)の高齢者に関する社会統計データと実施予定の現地調査データを用いて、高齢者のリビング・アレンジメント(親子をはじめと祖父母と孫など世代間の同別居や近居などの居住形態)の実態とその規定要因、そしてリビング・アレンジメントが生活の質に及ぼす影響を明らかにすることである。平成16年1月から2月までに、埼玉県所沢市において、60歳以上の男女約600名を対象とし、「世代間の居住形態に関する調査」を行い、有効回答数は261名(男性143名、女性118名)を得た。同時に、マレーシアでは平成16年11月、シンガポールでは平成17年2月から3月にかけて、各国の研究者の協力をえて、日本と同じ調査票を用いて高齢者を対象とした調査を実施した。これらの調査のほかに、平成16年12月には台湾の研究者を招き、1989,1996,2003年の3回にわたって台湾で行われた高齢者の居住形態に関する調査についてのワークショップを開催して、日本の調査結果との比較検討を行った。所沢市で行った「世代間の居住形態に関する調査」から、子供との同別居という居住形態は、単身(11.9%)、夫婦のみ(37.5%)、既婚子同居(17.6%)、未婚子同居(29.1%)、その他(3.8%)という結果が得られた。マレーシアおよびシンガポールで行った同様の調査の単純集計作業が終了し、今後は今後得られたデータの詳細な比較検討を予定している。また、今後の課題としては、本調査の結果がどれだけ一般化可能なものであるのかを検証することも必要であろう。本研究では、対象地域5ヵ国(日本、韓国、台湾、マレーシア、シンガポール)の高齢者に関する社会統計データと実施予定の現地調査データを用いて、高齢者のリビング・アレンジメント(親子をはじめ祖父母と孫など世代間の同別居や近居などの居住形態)の実態とその規定要因、そしてリビング・アレンジメントが生活の質に及ぼす影響を明らかにする。人口高齢化は日本において特に急速に進展している現象であるが、それは本研究が対象とする東・東南アジア地域も例外ではない。国・地域によってその進展度は異なるものの、今後50年以内にほぼ例外なくすべての東・東南アジア諸国(地域)は高齢化社会となる。この高齢化という人口構造の変化と、経済発展および文化・慣習の変化に伴い、高齢者を中心とした人々の居住形態が、大きく様変わりをしている。この現象は、高齢者のみならず、高齢化社会に暮らすすべての人にかかわる問題であり、そのありようは従来の「家族」あるいは「世帯」といった概念では到底把握できなくなっているといえよう。そこで、比較的新しい「リビング・アレンジメント」という視点を用いて、世代間の居住形態の実態と意識調査を行った。調査対象者は分析の軸となる性別と年齢幅を考慮して500サンプル程度とし、調査項目は個人属性(性別・年齢・職業・学歴・収入)、健康状態、住宅形式、居住歴、世帯形式(子どもとの同居・別居、世帯構成)、居住環境、生活上の出来事経験、家族・親族との交流、世代間での財・サービスの移転、生活満足度などである。平成15年度の前半では、各国の海外共同研究者と緊密な連携をとりながら調査の企画と実施の準備を進めた。それにもとづいて後半に、まず日本において大量観察調査を実施(2004.12004.2)した。日本における大量観察調査の実施地域は埼玉県所沢市であり、対象者は60歳以上の男女約600名であった。今後は得られたデータの分析と、本調査の他地域での実施を行う予定である。

本研究の目的は、5ヶ国(日本、韓国、台湾、マレーシア、シンガポール)の高齢者に関する社会統計データと実施予定の現地調査データを用いて、高齢者のリビング・アレンジメント(親子をはじめと祖父母と孫など世代間の同別居や近居などの居住形態)の実態とその規定要因、そしてリビング・アレンジメントが生活の質に及ぼす影響を明らかにすることである。人口高齢化は、日本において特に急速に進展している現象であるが、本研究が対象とする東・東南アジア地域も例外ではない。国・地域によりその進展度は異なるものの、今後50年以内にほぼ例外なくすべての東・東南アジア諸国は高齢化社会となる。この高齢化という人口構造の変化と、経済発展及び文化・慣習の変化に伴い、高齢者を中心とした人々の居住形態が大きく様変わりをしている。この現象は、高齢者のみならず、高齢化社会に暮らす全ての人にかかわる問題であり、そのありようは従来の「家族」あるいは「世帯」といった概念では把握できないと考える。そこで、リビング・アレンジメントという視点を導入して、世代間の居住形態の実態と意識調査を行うこととした。平成16年1月から2月までに、埼玉県所沢市において、60歳以上の男女約600名を対象とし、「世代間の居住形態の実態と意識調査」を行い、有効回答数は261名(男性143名、女性118名)であった。同時に、マレーシアでは平成16年11月、シンガポールでは平成17年2月から3月にかけて、各国の研究者の協力をえて、日本と同じ調査票を用いて高齢者を対象とした調査を実施した。今後得られたデータの詳細な比較検討を予定している。これらの調査のほかに、平成16年12月には台湾の研究者を招き、1989,1996,2003年の3回にわたって台湾で行われた高齢者の居住形態に関する調査についてのワークショップを開催して、日本の調査結果との比較検討を行った。
視床下部エストロジェン受容体mRNAの多様性

我々は,既に,エストロジェンによるエストロジェン受容体mRNAの発現調節は,視索前野領域と視床下部内側底部で異なることを明らかにしている。今回は、このエストロジェン作用の違いが,エストロジェン受容体mRNAの多様性と関連するかを検討した。視索前野領域と視床下部内側底部領域からRNAを抽出し,まず,ランダムプライマーを用いてcDNAを合成した。いくつかの領域を規定するプライマーを用いてPCR法を行い,スプライスバリアントに有無を検討した。その結果,視床下部に特異的なものや,両部位で差のあるものなどは認められなかった。次に,両部位でのエストロジェン受容体mRNAのプロモーターの差異を検討した。エストロジェン受容体の第一エクソンのC末端に設計したアンチセンスプライマーを用いて逆転写しcDNAを合成し,このcDNAの3'端にpoly-Cを付加し,逆転写に用いたプライマーより内側のnestedプライマーとpoly-GプライマーとでPCR反応を行った,その結果,視索前野領域からのみ二つのPCR生成物を得た。視床下部内側底部から得られたものと,視索前野から得られたものの一つは,ダイレクトシークエンスにより既存のもでありることを確認し,いわゆるエストロジェン受容体α型であった。しかはしながら,視索前野のもう一つのものはダイレクトシークエンスが出来ず,PCR生成物が単一ではなかったことが考えられ,現在モノクローン化し,塩基配列を確認している。
微生物識別用RNAアプタマーの創製

アプタマー選択のための新たな二つの方法、「分子間相互作用の速度論的解析(シミュレーション)を基にした新たなアプタマー選択法」、および「迅速な蛍光ラベル法」を開発した。この方法を細菌芽胞を標的とするRNAアプタマー選択に用いた。得られたどのRNA分子種も芽胞への結合能を示した。これら新規RNAアプタマーは栄養細胞には全く結合せず、芽胞のみに結合した。得られたどの分子種も調べた限りすべての菌の芽胞に結合し、菌種を超えた共通の芽胞成分に特異的なRNAアプタマーが得られたものと結論された。本年度は、RNAアプタマー選択についてのまったく新しい方法の開発を試み、一定の成果を上げた。これまで、RNAアプタマーの選択は、一般に次のステップで行われている。1)ランダム配列を含むRNAの調製、2)このRNA集団と標的との接触、3)結合能の無いまたは弱いRNA種の洗浄による除去、4)結合能のあるRNAの回収、5)RT-PCRによる回収RNAのcDNAへの変換と増幅、6)cDNAを転写することによる第二世代のRNA集団の調製、そして上記2)以下を繰り返す。これら2)6)のステップを数サイクル行うことにより、標的との親和性の大きなRNAをるのが一般的である。文献的には成功例が述べられるため、このアプタマー選択法は一般に完成した方法と理解されているが、実際には、多くの失敗例がある。ここまで、微生物を標的にして、高い親和性をもつアプタマーはこの方法では得られていない。結合能評価は多くの場合数サイクル後に得られたRNAの標的への結合アッセイにより行われるため、RNAアプタマーが得られない場合、不成功の原因追求は簡単ではなく、操作自体も手間、時間、コストのかかる方法である。本年度、分子間相互作用の速度論的解析(シミュレーション)を基に、静的な結合定数K_dではなく、結合速度定数k_<ON>と遊離速定数k_<OFF>を考慮に入れた方法を開発した。実際には、結合反応の時間の考慮、洗浄液の量や時間などを従来法と大きく変えた方法である。数種類の標的を用いたモデル実験において、手間、コスト、また時間のかからない、RNAアプタマー選択法の開発に向けて、良い結果を得ることができた。これを基に今後微生物を標的としたRNAアプタマーの創製を行う。昨年度、分子間相互作用の速度論的解析(シミュレーション)を基に、静的な結合定数K_dではなく、結合速度定数k_<ON>と遊離速度定数k_<OFF>を考慮に入れた方法を開発した。実際には、結合反応の時間の考慮、洗浄液の量や時間を従来法と大きく変えた方法である。数種類の標的を用いたモデル実験において、手間、コスト,また時間のかからない、RNAアプタマー選択法がほぼ開発でき、良い結果を得ることができた。本年度は、これを基に微生物を標的としたRNAアプタマーの創製を行った。微生物芽胞を標的に、この方法を実行し、従来法(洗浄液量数ml、洗浄時間数分のSELEX)との比較も行った。従来法に付いては、9ラウンドを行った時点で、結合能の確認を行ったところ、明らかな結合を確認できず、さらなるラウンドを重ね、13ラウンドで、ようやく結合能の確認ができた。新しい方法では、9ラウンドで芽胞に確実に結合していることが確認できた。ただし、より少ないラウンドで結合能アッセイをしていないので、結合能を得るための最小ラウンド数が9であるという意味ではない。確認の方法は、得られるRNA集団を精製し、5'末端を蛍光ラベルした。その集団を芽胞標品と混ぜ、結合反応を行った後、蛍光顕微鏡で観察する方法を用いた。対象として、0ラウンド集団、すなわち、選択をまったく行っていないランダム配列RNAそのものを蛍光ラベルし、上記と同様に芽胞標品と混ぜ、結合反応を行った後、蛍光顕微鏡で観察した。この0ラウンドRNA集団では、蛍光ラベルRNAが結合した芽胞は、まったく観察されなかった。現在、得られたRNA集団の構造解析等を行っている。昨年度までに、分子間相互作用の速度論的解析(シミュレーション)を基に、静的な結合定数Kdではなく、結合速度定数kONと遊離速度定数kOFFを考慮に入れた方法の開発、これを基に微生物を標的としたRNAアプタマーの創製、また微生物芽胞を標的に、この方法を実行し、複数回のアプタマー選択を行った。その結果新しい方法では、9ラウンドで得られたRNA集団が芽胞に確実に結合していることが確認できた。本年度は、それら集団をクローニングし、共通配列をもとにいくつかのグループに分けることができた。それらクローンから得られた各RNAアプタマーについて結合能の確認を行った。確認の方法は、RNA集団で行った時と同様、調製したRNAを精製し、5'末端を蛍光ラベルした。その精製ラベル化