hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
性ホルモン依存性精神疾患を規定するエピゲノムコードの解明

急速な超高齢化社会を迎え、加齢に伴う更年期障害の一つとして気分障害が注目を集めている。女性では閉経に伴うエストロゲンの急激な低下により、抑うつ、不安やうつ病のリスクが増加する。また、代表的な男性更年期障害としてうつ病が広く認知されつつあり、前立腺癌治療を目的とした抗アンドロゲン療法時の副作用としてもうつ病が問題となる。このように、気分障害は更年期疾患に特徴的な症状であり、性ステロイドホルモンの関与が予想される。そこで、性ホルモン依存性気分障害発症の分子メカニズムを把握するため、性ホルモン作用を完全に遮断したトリプル性ホルモン欠損(TKO)マウスを作出し、昨年度はTKO雄マウスの気分障害の発症に、前脳領域におけるセロトニン1A受容体とDEAF1の発現低下が寄与することを明らかにした。本年度は、さらにセロトニン1A受容体とDEAF1の分子関連の解析を進めた結果、DEAF1は転写因子として機能し、セロトニン1A受容体遺伝子プロモーター領域に結合することで、セロトニン1A受容体の発現を正に制御していることが明らかとなった。このDEAF1の転写活性化能を発揮する際には、ヒストンH3K4のジメチル及びトリメチル化修飾が連関することが判明した。さらに、性ホルモン依存性気分障害におけるDEAF1の生理的必須性を調べるため、DEAF1遺伝子欠損マウスの作成に着手した。気分様障害を示すTKO雄マウスにおけるセロトニン1A受容体の発現低下の背景を探るため、DEAF1との分子機能関連をさらに検討した。DEAF1分子はN末端側にSANDドメイン、C末端側にMYNDモチーフを有することから転写因子として機能している可能性を想定した。先ずは神経細胞株でDEAF1のノックダウン実験を行った結果、セロトニン1A受容体mRNA発現が有意に低下することが判った。また、レポーターアッセイ法により、DEAF1はセロトニン1A受容体の転写活性促進能を有することが判明した。さらに、セロトニン1A受容体のプロモーター領域におけるDEAF1の結合様式を調べるため、DEAF1結合候補配列に変異を導入したコンストラクトを用いたレポーターアッセイを実施し、DEAF1応答領域がセロトニン1A受容体のプロモーターの約2kb上流領域に存在することが明らかとなった。このDEAF1応答配列における実際のDEAF1のリクルートをChIPアッセイ法により確認することができた。さらに、DEAF1がセロトニン1A受容体の転写活性能を発揮する際には、ヒストンH3K4のジメチル及びトリメチル化修飾が入ることが重要であることが明らかとなった。前脳の大脳皮質と海馬のセロトニン神経終末において、セロトニン1A受容体とDEAF1が共局在を示すこと、さらに、DEAF1陽性神経細胞にアンドロゲン受容体(AR)及びエストロゲン受容体α(ERα)、エストロゲン受容体β(ERβ)が局在していることを確認した。本研究により明らかとなった2つのカスケードである、1)性ホルモン受容体群によるDEAF1の転写制御、2)DEAF1によるセロトニン1A受容体の転写制御において、今後はより幅広いエピゲノム修飾変化を観察する必要があるため、ヒストンH3K4メチル化以外のヒストン修飾変化と、修飾酵素及び脱修飾酵素に着目した解析を行う必要がある。また、セロトニン1A受容体及びDEAF1が実際に気分障害に寄与しているかを検討するため、遺伝子欠損マウスを用いた高次機能解析を実施する予定である。さらに、TKOマウスの脳サンプルを用いたトランスクリプトーム解析をさらに試行し、miRNA等のnon-coding RNA制御などの他の視点からのアプローチも併せて行いたい。気分障害の発症・進行には明確な性差が存在し、その要因として性ホルモンによる内分泌学的関与が挙げられる。これら性ホルモン依存性気分障害発症の分子メカニズムを把握するため、性ホルモン作用を完全に遮断したトリプル性ホルモン欠損(TKO)マウスを作出して様々な神経行動学的解析を実施した。その結果、TKO雄マウスでは高架式十字迷路テストと明暗往来テスト、オープンフィールドテストで異常が検出され、重度の不安様行動の異常を示すことが明らかとなった。このTKO雄マウスで見られる不安様行動の増加は、抗うつ薬として用いられる選択的セロトニン再取り込み阻害剤であるFluoxetineに投与により、部分的に改善されることが判明した。こうしたTKOマウスにおける不安行動の亢進の背景を探るため、トランスクリプトーム解析や免疫組織学的解析を実施した結果、TKOマウスの大脳皮質及び海馬領域で、セロトニン1A(5HT1A)受容体の発現が低下していることが明らかとなった。そこで、セロトニン1A受容体遺伝子上流の転写調節領域に結合する転写因子の探索を行い、DEAF1による転写調節が重要であることも明らかにしつつある。気分様障害を発症するモデルマウスの樹立に成功し、性ホルモン依存的な気分障害解析系を構築した。TKO脳サンプルを用いて、各種マーカーによる組織学的解析を実施し、セロトニン神経との関連性を明らかにした。セロトニン神経終末が存在する大脳新皮質と海馬領域においてセロトニン1A受容体陽性細胞の著しい低下が認められたことから、気分障害の発症の要因の一つにセロトニン1A受容体が強く寄与していることが明らかとなった。次に、神経細胞株を用いたリポーターアッセイ法を実施し、アンドロゲン受容体(AR)及びエストロゲン受容体α(ERα)、エストロゲン受容体β(ERβ)はDEAF1遺伝子発現に対し、正に調節していることが明らかとなった。

また、経時的なクロマチン免疫沈降法により、DEAF1遺伝子のプロモーター領域にAR及びERαがそれぞれリガンド依存的にリクルートされること、一方、ERβは、3'UTR近傍のイントロン領域にリガンド依存的に結合することが観察された。この結果より、性ホルモン受容体群はそれぞれ転写開始と終結を協調的に制御している可能性が示唆された。急速な超高齢化社会を迎え、加齢に伴う更年期障害の一つとして気分障害が注目を集めている。女性では閉経に伴うエストロゲンの急激な低下により、抑うつ、不安やうつ病のリスクが増加する。また、代表的な男性更年期障害としてうつ病が広く認知されつつあり、前立腺癌治療を目的とした抗アンドロゲン療法時の副作用としてもうつ病が問題となる。このように、気分障害は更年期疾患に特徴的な症状であり、性ステロイドホルモンの関与が予想される。そこで、性ホルモン依存性気分障害発症の分子メカニズムを把握するため、性ホルモン作用を完全に遮断したトリプル性ホルモン欠損(TKO)マウスを作出し、昨年度はTKO雄マウスの気分障害の発症に、前脳領域におけるセロトニン1A受容体とDEAF1の発現低下が寄与することを明らかにした。本年度は、さらにセロトニン1A受容体とDEAF1の分子関連の解析を進めた結果、DEAF1は転写因子として機能し、セロトニン1A受容体遺伝子プロモーター領域に結合することで、セロトニン1A受容体の発現を正に制御していることが明らかとなった。このDEAF1の転写活性化能を発揮する際には、ヒストンH3K4のジメチル及びトリメチル化修飾が連関することが判明した。さらに、性ホルモン依存性気分障害におけるDEAF1の生理的必須性を調べるため、DEAF1遺伝子欠損マウスの作成に着手した。気分様障害を示すTKO雄マウスにおけるセロトニン1A受容体の発現低下の背景を探るため、DEAF1との分子機能関連をさらに検討した。DEAF1分子はN末端側にSANDドメイン、C末端側にMYNDモチーフを有することから転写因子として機能している可能性を想定した。先ずは神経細胞株でDEAF1のノックダウン実験を行った結果、セロトニン1A受容体mRNA発現が有意に低下することが判った。また、レポーターアッセイ法により、DEAF1はセロトニン1A受容体の転写活性促進能を有することが判明した。さらに、セロトニン1A受容体のプロモーター領域におけるDEAF1の結合様式を調べるため、DEAF1結合候補配列に変異を導入したコンストラクトを用いたレポーターアッセイを実施し、DEAF1応答領域がセロトニン1A受容体のプロモーターの約2kb上流領域に存在することが明らかとなった。このDEAF1応答配列における実際のDEAF1のリクルートをChIPアッセイ法により確認することができた。さらに、DEAF1がセロトニン1A受容体の転写活性能を発揮する際には、ヒストンH3K4のジメチル及びトリメチル化修飾が入ることが重要であることが明らかとなった。
英語時制・相の実証的研究―動詞の概念とスキーマの再構築および視聴覚教材の開発―

本研究は、日本人英語学習者が母語との違いを理解しながら英語の時制・相を習得できる動画教材を作成し、その教材を用いた教授法を開発して従来型の授業と比較することで効果を検証することを目的とした。英語の進行形や完了形は「相」と呼ばれ、時制の中でどのように状況を捉えるかを示している。動詞の種類によって振舞いが異なる上、日本語「ている」の影響があり習得が難しい。まず文献調査で国内外の時制・相に関する研究を概観し、英語進行形の動画教材を作成した。次に実践授業で効果を検証し、被験者である学生からのフィードバックをもとに修正して教材を完成させた。また、定期的に海外の学会で発表してアドバイスを得た。1.具体的内容国内外の時制・相に関する先行研究を文献調査して研究の概要を固めた。調査のために国立国会図書館で資料を閲覧・複写した。その後、英語母語話者の協力を得ながら学生に実施する「文法容認度調査」「英文読解と内容理解の設問」を作成した。動画は本学学生に原画を依頼して外部協力者のもと動画を作成した。さらに英語動詞の時制・相・スキーマが、日本語の時制・相にどこまで対応できるか、また出来ない場合の理由づけについて認知言語学の視点から分析して本学紀要の中でまとめた。2.意義・重要性従来の時制・相に関する研究は一言語のみのものが多く、二言語を扱う場合でも単なる比較に終わっていて日本語英語学習者を対象とした実践的研究は少ない。さらに動画と音声が一体となった視聴覚教材を用いた研究は貴重である。前回助成を受けた基盤研究Cでは英語句動詞の学習方法を視聴覚教材を用いて行ったところ、学生の興味が増し学習の動機づけが見られた。その中で英語時制と相の区別が不明確である日本人英語学習者が多いことが分かり、平成26年度からの基盤研究Cでは英語時制・相に絞った日本人学習者に有効な英語学習教材の開発を目指すことにした。平成26年度の研究意義としては、先行研究から本調査の参考となる文献を見出し研究計画の柱が確立したこと。先行研究および母語話者の助言から英語時制・相のスキーマを確定し、授業実践研究の準備が整ったことである。本研究では、日本語を母語とする大人の英語学習者(大学生)が母語との違いを理解しながら、目標言語である英語の動詞の時制・相を習得できるための動画視聴覚教材を用いた教授法を開発し、従来型の授業と比較することでその効果を検証することを目的としている。特に平成27年度は英語単純形と進行形を組み合わせた教材・教授法の完成を目指していた。平成26年度3月までに視聴覚教材を完成させ、4月にレベルわけテスト、5月6月にかけて視聴覚教材を用いた授業と従来型の授業を実施して統計的に処理して効果を比較した。7月にはイギリス、ニューキャッスルで開かれた国際認知言語学会に参加して最近の研究動向を探り、学会理事の一人であるジョージタウン大学大学院教授で研究代表者の指導教授からも本研究に関するアドバイスを得ることが出来た。秋には研究成果をまとめて平成28年1月にタイで開かれた国際学会で発表したところ「わかり易い」とのフィードバックを得た。発表原稿を論文にまとめたものが査読を経て学会論文集に掲載された。研究代表者個人の研究では、平成28年度研究の準備として、もう一つの相である完了相に関する研究を進め、看護系論文における英語現在完了受動態の役割について研究ノートとして本学紀要にまとめた。平成27年度に行った研究の意義として以下の3点を挙げることが出来る。1.英語進行形の視聴覚教材を完成した。2.国際認知言語学会に参加して最新の研究動向に触れ、指導教授からのアドバイスを得た。3.平成28年度研究に先立ち、英語完了形に関する理論を整理して認知言語学と談話分析の手法を用いて看護系論文を分析した。英語単純形と進行形の視聴覚教材を完成した点は順調であったが、残念ながら十分な効果が統計的に実証できなかった。これは動詞タイプによる微妙な意味の違いを被験者が十分に理解しきれなかったためであると分析している。ただし、最近の研究動向が確認出来、指導教授からのアドバイスも得られたことは心強い。さらに、英語完了形に関する先行研究を整理・分析して平成28年度研究のための準備も行うことが出来た。本研究の目的は、日本人英語学習者の英語時制・相の理解を深めるために動画教材を開発することであった。平成26年度には文献調査研究を中心に最新の時制・相に関する研究を概観した上、平成27年度は動画教材を作成して実践授業を実施し、被験者である学生からのフィードバックを基に修正を行った。最終年度である平成28年度は修正した動画教材を用いて実践授業を行いデータを分析した。事前に学生の英語力を調査して2グループに分け、統制群では従来どおりのプリント教材を用いた授業を行い、実験群では制作した動画教材を用いた授業を行った。その後、両グループの事前テストと事後テストの結果を分析した。実験群の方が伸び率は良かったものの、統計的な優位性まではでなかった。これは被験者グループの理解度の差に起因すると思われる。実験群のグループには、すでに塾などで動詞分類による進行相の違いを理解していた学生が数名いたために事前テストと事後テストの差が出なかったと分析する。後日、別のグループに英文完成タスクを実施した。

これは動詞分類による進行形の意味の違いを学習者が認識して正しく使用できるるかというプロダクション力を見る為の研究である。まず、プリント教材で様々な状況を設定して英文完成タスクを行った後に動画教材を視聴させた。その後、同じ動詞を用いた別の英文完成タスクの結果と比較したところ、動画教材によって理解度が深まったことが明らかとなり、文献調査で指摘されていた日本語「ている」の干渉についても解消されていた。文完成タスクの結果については平成28年11月にスペインで開催されたICERI2016で発表した。なお、英語の時制・相の研究を進めていくにあたり、時の副詞の役割まで踏み込む必要があると感じた。日本語と英語の副詞の比較を行うことで効率的な英語学習が提案できると想定され、平成29年度からは副詞も加えた研究としたい。本研究は、日本人英語学習者が母語との違いを理解しながら英語の時制・相を習得できる動画教材を作成し、その教材を用いた教授法を開発して従来型の授業と比較することで効果を検証することを目的とした。英語の進行形や完了形は「相」と呼ばれ、時制の中でどのように状況を捉えるかを示している。動詞の種類によって振舞いが異なる上、日本語「ている」の影響があり習得が難しい。まず文献調査で国内外の時制・相に関する研究を概観し、英語進行形の動画教材を作成した。次に実践授業で効果を検証し、被験者である学生からのフィードバックをもとに修正して教材を完成させた。また、定期的に海外の学会で発表してアドバイスを得た。英語時制・相の新たなスキーマを確定させたことと、平成27年度に実施する授業実践計画が整い視聴覚教材等の授業教材が完成したことが理由として挙げられる。ただし、スキーマの調査を米国の大学で実施する計画は準備が整わず見送られた。平成27年度に十分な効果が実証できなかったことから、内容を精査・修正して平成28年度前期に再度、単純形と進行形の視聴覚教材と従来型授業との比較を行い、後期には完了形に関する教材も作成したい。平成28年度は最終年度となることから教材を完成させて学会発表および論文執筆につなげたい。認知言語学平成27年度は2大学で学生対象に実践授業を行い視聴覚教材の効果を検証する。7月には国際認知言語学会に出席して最新の研究を学ぶとともに大会理事の一人であるジョージタウン大学時代の恩師に研究のフィードバックを得る。後期には実践研究の成果をまとめて海外の学会で発表する。そこでの助言を元に教材と教授法を完成させ、平成28年度の研究の基礎固めを行う予定である。テロなどの危険を避けるため、米国やヨーロッパでなくアジア(タイ)で学会発表を行ったため渡航費が節約された。また、学期中であったので短期間の滞在で済ませたこともあり、支出額が抑えられた。時制・相の概念・スキーマの調査を米国の大学で実施しなかったため。テキスト完成に向けて英文原稿作成者や実験協力者への謝礼と学生アルバイトへのアルバイト代、海外での研究成果の発表、コーパスデータの購入などに使用する予定。国際認知言語学会(イギリス)への出席、動画製作者および母語話者2名への謝礼、原画製作者への謝礼、データ整理のための学生アルバイトへの謝礼、海外の学会での研究成果発表等を予定している。
市町村教育委員会の組織論的研究ー組織の「健全性」とその規定要因の分析を中心にー

本研究は、市町村教育委員会の組織の健全性を規定する要因等を理論的、実証的に明らかにするため、初年度は、本研究の分析枠組(理論枠組)を決めるべく、先ず、市町村教育委員会の教育長と教育委員を対象に事例調査(面接調査)を行い、教育委員会の組織の健全性がどのようなものであるか、また形骸化の実態等について検討する。次年度は、前年度の面接調査の結果を踏まえ、市町村教育長を対象に「市町村教育委員会の組織特性に関する全国調査」を実施し、市町村教委の組織特性やその規定要因及び行政活動への影響について実証的に検討する。最終年度は、前年度の全国調査の結果を踏まえ、その成果を報告書にまとめる。
多段階翻訳後修飾反応を伴うキノヘムプロテイン・アミン脱水素酵素の生合成プロセス

本研究は、水溶性ビタミンに由来する従来の補酵素と異なり、タンパク質の翻訳後修飾反応により形成されるキノヘムプロテイン・アミン脱水素酵素(QHNDH)の生合成プロセスの解明を目的として以下の研究を実施した。1遺伝子破壊法によりQHNDHの生合成に必須な遺伝子を新たに3個(qhpF, qhpG, qhpR)を同定し、それらの機能を解明した。2QhpEタンパク質を機能解析し、QhpEが非常に奇妙な使い捨て型のタンパク質分解酵素であることを明らかにした。3QhpDタンパク質を無酸素状態で取り扱うことにより大量調製を可能とし、試験管内でチオエーテル架橋の形成反応を再現することに成功した。本研究では、タンパク質の翻訳後修飾反応により形成される新規ビルトイン型キノン補酵素、システイントリプトフィルキノン(CTQ)を含むキノヘムプロテイン・アミン脱水素酵素(QHNDH)を対象として、シグナル配列の切断から、CTQや分子内架橋構造の形成、ヘムの挿入、ヘテロ三量体形成に至る多段階の翻訳後修飾反応によるQHNDHの生合成プロセスの解明を目指している。本年度の研究の成果を以下に示す。1ORF2タンパク質を嫌気条件で調製し、試験管内で短縮型γサブユニットの架橋形成反応を進行させ、新規に開発した蛍光標識法により定量的に活性を測定した。さらに、全長のγサブユニットとその種々の変異体を用い、γサブユニットへの架橋反応がN末端側から順番に進行することを明らかにした。2前年度までに遺伝子破壊法によりORF6, ORF7, ORF8のQHNDH生合成への必須性の検討と生化学的な解析を行い、ORF6とORF7については必須であることを明らかにしたが、ORF8については必須ではないという結果が得られていた。しかし、今回、実験条件の再検討を行ったところ、ORF8遺伝子の破壊によりQHNDHのCTQ補酵素が生成されなくなることが判明した。この実験結果とORF8のアミノ酸配列の比較から、本遺伝子産物がCTQの前駆体であるトリプトファン残基に酸素を添加するFAD依存性のモノオキシゲナーゼであることが推定された。以上の成果のうち、1は日本生化学会において口頭発表を行った。本研究では、タンパク質の翻訳後修飾反応により形成される新規ビルトイン型キノン補酵素・システイントリプトフィルキノン(CTQ)を含むキノヘムプロテイン・アミン脱水素酵素(QHNDH)を対象として、シグナル配列の切断から、CTQや分子内架橋構造の形成、ヘムの挿入、ヘテロ三量体形成に至る多段階の翻訳後修飾反応によるQHNDHの生合成プロセスの解明を目指している。前年度までに遺伝子破壊法により新たに3種類の遺伝子(qhpFGR)がQHNDH生合成に必須であることを明らかにしたが、今年度はそれらの遺伝子の生化学的な解析を行い、複雑な生合成プロセスが次のように進行することを支持する結果が得られた。1ブチルアミン存在下で転写因子QhpRがqhpADCBEFオペロンとqhpGの転写を活性化する。2QhpA, -D, -C, -B, -E, -F, -Gが発現する。3γサブユニット(QhpC)内の3本のチオエーテル架橋がラジカルSAM酵素QhpDにより形成される。4FAD依存性モノオキシゲナーゼQhpGがQhpCのCTQ前駆体のTrp残基をヒドロキシル化する。5QhpCの28残基のリーダー配列がQhpEプロテアーゼにより切除される。6αβサブユニット(QhpAB)がSecまたはTat経路により、QhpCがABCトランスポーターQhpFによりペリプラズムに輸送される。7ヘムがQhpA内に挿入される。8QHNDH3量体(QhpABC)が形成され、QhpAのヘム依存型のペルオキシダーゼ活性によりCTQが完成する。また、これらのqhp遺伝子はデータベース解析により、広範囲の細菌に分布し、大部分はグラム陰性菌であるが一部のグラム陽性菌にも存在することが判明した。以上の結果については誌上発表を行った(Nakai et al., Biochemistry 53, 895-907 (2014))。本研究では、タンパク質の翻訳後修飾反応により形成される新規ビルトイン型キノン補酵素、システィントリプトフィルキノン(CTQ)を含むキノヘムプロテイン・アミン脱水素酵素(QHNDH)を対象として、シグナル配列の切断から、CTQや分子内架橋構造の形成、ヘムの挿入、ヘテロ三量体形成に至る多段階の翻訳後修飾反応によるQHNDHの生合成プロセスの解明を目指している。本年度の研究の成果は以下に示す。(1)遺伝子破壊法によりORF6ORF8の必須性の検討と生化学的解析を行い、ORF6及びORF7がQHNDH生合成に必須であり、ORF6はγサブユニットのペリプラズムへの輸送を担うABCトランスポーター、ORF7はアミンによる転写活性化因子であることを明らかにした。

(2)ORF2タンパク質を嫌気条件で調製し、大腸菌内や試験管内でγサブユニットの架橋形成反応を進行させることに成功した。さらに、変異型γサブユニットを用い、架橋形成にはCys及びAspまたはGluが必要でありそれ以外の残基では代用できないことを証明した。また、ORF2とγサブユニット(種々の短縮型を含む)共発現することにより、両者の間で安定な複合体が形成されることを見出し、リーダー配列が複合体形成に必須であることを明らかにした。(3)ORF5タンパク質の生化学的解析により、ORF5はγサブユニットのリーダー配列の切断を行うが触媒回転はしない言わば「使い捨てプロテアーゼ」であることが判明した。細菌においてはこのようなプロセシング酵素は非常に稀である。以上の成果のうち、(1)及び(2)はともに日本生化学会において口頭発表、(3)についてはJ. Biol. Chem.に誌上発表を行った。研究実績の概要の1については、現在のところ結晶が得られていないため申請書にある立体構造解析までは至っていないものの、生化学的な解析により当初の予定よりも詳細な活性測定が可能となり、架橋形成反応がN末端側から順番に生じることまで明らかにできた。2については、申請書の内容を全て達成し、QHNDHの生合成に必要と予測されていた遺伝子をすべて特定することに成功した。以上の成果を総合すると、「おおむね順調に進展している」として、申し分ないと考える。研究実績の概要の(1)については申請書の内容を全て達成した。(2)については、申請書の内容をほぼ全て達成するだけでなく、ORF2がγサブユニットとの安定な複合体を形成することを見出し、今後結晶化に進む上でも有用な収量増加にも成功した。(3)については、申請書では「ORF5タンパク質の生化学的解析および結晶構造解析により、触媒機構を原子レベルで明らかにする」という計画であったが、ORF5の結晶が得られなかったため結晶構造解析は実現しなかった。しかし、生化学的解析によりORF5の酵素としての新奇な性質を新たに明らかにし、誌上発表まで行った。(1)ラジカルSAMファミリーORF2タンパク質の結晶構造解析:ORF2タンパク質の原子レベルでの反応機構解明を目指して、γサブユニットとの複合体を含むORF2タンパク質の結晶化を試みる。精製などと同様に嫌気チャンバー内で、結晶化から液体窒素への凍結保存まで行う。X線回折測定可能なサイズの結晶が生成した場合には、データ収集を行い、結晶構造を決定する。位相決定は、鉄硫黄クラスター中の鉄原子の異常分散により、容易に行えるものと期待される。最終的に、ORF2の機能解析の研究結果も総合し、鉄硫黄クラスターが関与するチオエーテル架橋形成機構の詳細を解明する。(2)ORF6, ORF7及びORF8の機能解析:QHNDH生合成に必須であることが新たに判明したこれらの遺伝子産物の生化学的解析をそれぞれ進める。部位
英語カリキュラムに連動した語彙学習システムの開発

本研究は、高い効果が確認されている語彙指導法に基づき、英語カリキュラムに連動した語を、大学生の生活実態に合った方法で学習することを可能にする語彙学習システムを開発することを目的として実施した。本研究により、部品を用意すれば、ダウンロードして使用できる語彙教材とテストが自動生成されるシステムと、4つの英語授業の指導内容と連動した計1680語分の語彙教材コンテンツが完成した。本研究は、英語カリキュラムに連動した語を、高い効果が確認されている語彙指導法で、大学生の生活実態に合った実用性の高い方法で学習することを可能にする語彙学習システムを開発することを目的としている。初年度である平成22年度には、システム全体の仕様の決定と教材コンテンツの作成を行った。具体的には、本研究で開発する語彙学習システムをカリキュラムと連動したものにするために、指導語とその用例を英語授業で使用している教科書から抽出した。学習語は、妥当性の高い手法で抽出された語彙リストを参照して、学習者にとって未知語である可能性が高く、英語コミュニケーション活動において重要度の高い語を選定した。システムは、大きく分けて学習状況のモニターのためのオンラインテスト、教材からなる。教材は、通学時間等の「すき間時間」の活用を望む学生の強い要望に応えるために、オンラインでダウンロードした音声と印刷テキストを組み合わせて使用する形態とした。上記のことを実現するためのソフトウェア開発と、オンラインテスト、音声教材のための音声録音・編集は、業者に依頼することで実施した。その結果、Readingの教科書に対応した480語、外部テスト対策の教科書に対応した480語、Writingの教科書に対応した240語を学習・評価を可能にするシステムが完成した。平成23年度前半では、一部の授業で本システムを使った指導を開始し、形成的評価とそれに基づく改善を行い、平成23年度後半で数百人規模の試用を実施する予定である。2年目である平成23年度には、前半に本システムを使った指導を開始し、形成的評価とそれに基づく改善を行った。具体的には、必修英語科目の一部で、教材を使用させ、学習者から報告される随時学習者からの意見やトラブル報告等を収集すると共に、学期末にアンケート調査を実施した。その結果、主に次の点が改善すべき点として明らかになった。1.学習者のITスキル不足、2.音声を聞くための機器に関する問題。1.については説明書を詳しく作成しなおした。2.については貸出用の機器を準備することで対応することにした。また、数か月の試用の結果、試用前の確認では洗いだせなかったバグが新たに見つかったため、業者に改修を依頼した。その後、平成23年度後半で当初の計画通り、約200名規模での試用を実施した。その結果、87%の学習者がプログラムによる語彙学習が「教科書を読むのに役立った」と回答するなど、全体的に好意的な意見が多く観察された一方、「ダウンロードが面倒だった」と回答した学習者も55%いることから、実用面での問題が残されていることも判明した。この問題については、CALL教室の活用や、指導方法の工夫で改善を目指す予定である。本研究は、英語カリキュラムに連動した語を、高い効果が確認されている語彙指導法で、大学生の生活実態に合った実用性の高い方法で学習することを可能にする語彙学習システムを開発することを目的として実施した。平成24年度には、主に初年度と次年度に行なった教材開発とその試用毛結果をまとめ、分析を行った。また、その分析結果に基づき、英語Readingクラスで2年次学生が履修するクラスで使用する教材コンテンツのみでは不足していることが判明したため、新たに1年次学生用教材コンテンツを追加作成した。3カ年分の研究成果を報告書にまとめた。平成24年度に実施した教材コンテンツの追加により、部品を用意すれば自動的にダウンロードして使用できる語彙教材とテストが生成されるシステムと、4つの授業の指導内容と連動した、計1680語分の語彙教材コンテンツが完成した。学習前のプリテストの結果、高頻度の語を選定したにもかかわらず学習者にとって約7割が未知語であったことから、選定方法の妥当性が確認できた。それらを複数の授業で試用したその結果、87%の学習者が本研究で開発した教材で学習したことが「教科書の理解につながる」と感じ、学習語の67割程度が定着していたことが確認されたことから、一定の効果が得られたと結論した。一方、音声のダウンロードが障害となる場合があることや、定着率が先行研究よりも低いといった問題もあることがわかった。ただし、問題の多くは、本研究で開発したプログラムに改善の余地があることを示しているものもあるが、多くはカリキュラムや運用面での問題であると推定されたため、今後開発したシステムをより効果的に活用するためのカリキュラムの開発や必要なサポートについての研究につなげていく予定である。本研究は3カ年計画で実施している。当初の計画通り、語彙学習システムのコンテンツは初年度で、プログラムは2年目の前半にほぼ完成した。

また、大学生によるシステムの試用も2年目に始まり、3年目も継続しているため、必要なデータがそろってきているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。最終年度である本年度は、試用データの収集を続けると共に、収集したデータを分析する予定である。具体的には、大学の英語科目で試用した学生の、試用前・後の語彙力と、試用後の印象評価のデータを使用する予定である。また、試用の際に明らかになった問題点については、できる限り改善を試みる。最終的に、システムの開発と収集したデータの分析結果について、報告書にまとめることを予定している。
宋元明清期中国江南三角州の農業の進化と農村手工業の発展に関する研究

1.江南平原の二毛作は,宋代の高田に早稲,麦二毛作として成立した(高田二毛作)後,広大な低湿地帯の土地条件の改善を前提として,明末清初の時期までに低田を中心とする晩稲と麦・油菜の二毛作へと展開した(低田二毛作).この間初期の低田の米の総生産高の高い一毛作経営は,それが低く,裏作を行い,商品生産化した家内手工業部門を別に有する二毛作経営へと進化した.2.潮汐の堆積作用等を前提とし,基肥の位置を占めた河泥の施肥による積高効果を直接の要因として,江南の低湿地農田の田面は次第に高まり,宋代に特有の春夏の冠水と広域に及ぶ湿田とは次第に解消に向かった.この土地条件の改善とともに低田に二毛作が普及して行った.3.家内繊維手工業は,江南の農家経営の本来の経営要素であったが,木綿紡織と製糸織絹の発展過程で,古い繊維材料(麻・芋麻・黄草)の一面で衰退,他面で地域化による残存が見られ,また蓆草の裏作栽培を背景として蓆の家内手工業,またその専業的生産も行われるようになった.4.江南農村の手工業要素としては,各農家経営の家内繊維手工業の他,鉄治・酒醸造があったが,特に明代中期以降,製油業・豆腐製造業・製粉業その他の専業的農村手工業が顕著に発展した.研究の進んでいる家内繊維手工業に加え,この種の手工業を十分視野に入れることにより,前近代江南農村社会が基本的に農業の生み出す富に依りつつも,その加工を通じて農業外の領域で新たに富を獲得するような新しい段階を迎えつつあったことが判明するのである.5.江南農村社会の変容は,江南農村市場の村店を中心とする特異な構造を前提として,明代中期以降の農村社会の工業化とも密接に関連して比較的発達した市場組織を形成するに到った.1.江南平原の二毛作は,宋代の高田に早稲,麦二毛作として成立した(高田二毛作)後,広大な低湿地帯の土地条件の改善を前提として,明末清初の時期までに低田を中心とする晩稲と麦・油菜の二毛作へと展開した(低田二毛作).この間初期の低田の米の総生産高の高い一毛作経営は,それが低く,裏作を行い,商品生産化した家内手工業部門を別に有する二毛作経営へと進化した.2.潮汐の堆積作用等を前提とし,基肥の位置を占めた河泥の施肥による積高効果を直接の要因として,江南の低湿地農田の田面は次第に高まり,宋代に特有の春夏の冠水と広域に及ぶ湿田とは次第に解消に向かった.この土地条件の改善とともに低田に二毛作が普及して行った.3.家内繊維手工業は,江南の農家経営の本来の経営要素であったが,木綿紡織と製糸織絹の発展過程で,古い繊維材料(麻・芋麻・黄草)の一面で衰退,他面で地域化による残存が見られ,また蓆草の裏作栽培を背景として蓆の家内手工業,またその専業的生産も行われるようになった.4.江南農村の手工業要素としては,各農家経営の家内繊維手工業の他,鉄治・酒醸造があったが,特に明代中期以降,製油業・豆腐製造業・製粉業その他の専業的農村手工業が顕著に発展した.研究の進んでいる家内繊維手工業に加え,この種の手工業を十分視野に入れることにより,前近代江南農村社会が基本的に農業の生み出す富に依りつつも,その加工を通じて農業外の領域で新たに富を獲得するような新しい段階を迎えつつあったことが判明するのである.5.江南農村社会の変容は,江南農村市場の村店を中心とする特異な構造を前提として,明代中期以降の農村社会の工業化とも密接に関連して比較的発達した市場組織を形成するに到った.研究の結果明らかになった内容の概要を以下に記す。1.江南三角州の二毛作は宋代の高田地帯に早稲・麦二毛作としてまず成立し(高田二毛作)、その後より広い領域を占める低田地帯へと徐々に拡延し、明代後半期にその支配的部分に晩稲と麦ないし油菜等の二毛作が成立する(低田二毛作)に到った。これと並行し、宋代の納税・自給の意義をもつ家内手工業が、明代には商品生産として大きく発展した。農民経営体に即してこの経過を辿るならば、家族労働により30畝程度の耕地で水田1毛作と原初的家内手工業を営む宋代の本源的農民経営が、10畝程度の耕地で水田2毛作と発達した家内手工業を営む明代の農民経営へと進化したことが確認できる。2.江南二毛作の高い土地生産性は、宋代当初の低田地帯に見られた水害による不安定耕地の状況を克服する過程で実現された。肥料体系中で基肥の位置を占めた河泥の施肥は、施肥効果とともに客土の効果をもち、長期にわたる河泥施肥は、肥料の効果と低田田面の積高効果で二毛作を安定化せしめた。3.以上の1・2を支える土地条件を考える上で、潮汐作用が泥砂を伴いつつ内陸深く及んでいた事実が重要である。潮汐は多量の泥砂を内陸に運びこんだのであるが、唐代以降呉淞

江→婁江→黄浦江と最大河川が変化するにつれ、潮汐は湖沼等の積高を進め低地干拓の可能性を拡大しつつ、次第に内陸から後退した。充分な肥効ある河泥は無潮地域にのみ存佐し、潮汐作用の内陸からの後退は有効な河泥の採取可能地域を広げる結果をもたらした。4.家内手工業のうち最も重要な繊維部門は、夏・冬服の自己調達の必要と関連して早期に農民経営内に多角的に具備されていたが、木棉の登場とともに古い繊維材料(麻・苧・黄草)が衰退し、また商品生産の発展につれ、一定の専一生産化が進んだ。この間に材料供給部門である繊維作物ないし桑の栽培の技術も改良された。
超越論哲学から超越論的文献学への転回:カントに挑むベンヤミンの歴史的認識の理論

本研究は、ドイツの思想家ヴァルター・ベンヤミンの思想におけるカント哲学の意義を明らかにしようとするものである。本年度は、三年間の採択期間の最終年度にあたる。本年度に行なわれた具体的な研究活動は、以下の二点に要約される。(一)アリストテレスの術語法・問題構制からカントを再読すること、(二)ベンヤミンの術語法・問題構制の系譜を探究すること。(一)の作業は、昨年度から継続して取り組んできたものである。結果、以下のような点が確認された。第一に、『判断力批判』の思惟の場が、アリストテレスの『弁論術』のそれと類比的に画定されていること。アリストテレスにおける弁論術も、カントにおける判断力の批判も、固有の対象領域をもたないということを存立構造としている。重要なのは、この脱領域性が、両者で共通して「感情」という言葉で表示されていることである。第二に、カントの歴史哲学が『判断力批判』と類比的な位置づけにあること。「歴史」は、判断力と同様に、自然と自由との間に位置づけられる。自然にも自由にも還元されない「普遍史」の構想は「小説」と呼ばれる。この呼び名にふさわしく、『普遍史の理念』のテクストは、極めてレトリカルに構築されている。この第二の点の素描を、カント研究会にて口頭発表した(二〇一〇年二月二八日、於・法政大学)。(二)に関しては、ベンヤミンの神学的な言葉遣いやモティーフを辿ることも目的として、ヤーコプ・タウベス『パウロの政治神学』の研究会を行なってきた(その副産物として、拙訳になる『パウロの政治神学』が近刊の予定である)。これによって、旧約聖書からベンヤミンにいたる神学・哲学・政治・文学の伝統について、幾つかの鍵言葉が再確認された(メシア、自然、イメージ、儚さ、など)。言葉遣いのレベルでこの伝統を引き受け、再考し、再構築するところに、ベンヤミンの超越論的文献学と呼ぶべきテクスト実践があったのだと考えられる。本年度は、三年間の採択期間の初年度にあたる。本年度の研究は、上記の課題を直接的に論考に定着させるよりも、むしろその準備作業に集中した。その作業の内実は、(一)ベンヤミンの著作の研究はもちろんのこと、(二)ベンヤミン研究に関わる論考の収集・読解、(三)カントの著作の立ち入った読解の開始・継続として要約される。そのうち(二)および(三)からのひとまずの成果として、以下に掲げる翻訳および口頭発表を行なった。拙訳になるヴェルナー・ハーマッハー「(仮面をつけた芸術の終わり)」(『現代思想』二〇〇七年七月臨時増刊号、青土社、二〇〇七年、所収)は、ヘーゲル『精神現象学』における「喜劇」の働きを論じたものである。これは直接ベンヤミン研究に関わるものではないが、ヘーゲル論の枠を超えてテクスト読解一般についても示唆するところ大である。これの翻訳によって、ベンヤミン研究に取り組む際の指針を再確認することができた。表象文化論学会・第二回研究発表大会でのパネルディスカッション(二〇〇七年十一月十七日)では、議題となった竹峰義和『アドルノ、複製技術へのまなざし』(青弓社、二〇〇七年)の中心的論点とその意義とを要約・敷衍して呈示した。その際、本研究の主要論点のひとつである「ベンヤミンにおける認識可能性の時間性」を暗黙の背景として、竹峰の著作で展開されずにとどまっていた芸術作品および芸術批評の時間性を問い、ディスカッションの土台とした。結果、本研究を進めるにあたっての補助線が得られた。研究会(哲学/倫理学セミナー)での口頭発表「カント『判断力批判』第五八節について」では、本研究の課題のひとつとなるカント読解の端緒を呈示した。ベンヤミンの認識論で繰り返し強調される「認識可能性の今」の萌芽となる時間性は、カントその人の意識的主題ではなかったかもしれないが、カントのテクストには確かに書き込まれている。テクストに書かれた具体的な叙述が組織する時間性が問題である。この口頭発表では、第三批判の第五八節に例外的に書き込まれた「飛躍」にこの点を読み取るプログラムを立ててみた。これは次年度にさらに展開し、まとまった論考に定着させる予定である。本年度は、三年間の採択期間の二年目にあたる。昨年度に続いて本年度も、上記課題を達成するための準備作業に取り組んだ。具体的には(一)カントの著作の立ち入った続解の続続、(二)カント・コーヘン・ベンヤミンに引き続がれている術語法の伝続の調査として要約される。後者(二)については、特にプラトン・アリストテレスの著作の立ち入った続解の開始・継続として要約される。彼らの術語法がキケロ以降の著作物における翻訳・伝承を経て、どのようにカント・コーヘン・ベンヤミンのテクストにいたるのか、その概観を得ようとした。この作業は現在も精力的に継続中である。後者(二)の作業は、もちろん前者(一)の作業と連動して行なわれた。昨年度の口頭発表で取り祖んだカント

『判断力批判』の読解が、今年度には特にアリストテレス続解と結びつき始めた。具体的には、カントにおける判断力の概念を、歴史の概念ともども、アリストテレスの弁論術の術語法・思考法の枠組みのなかで再考しつつある。この作業も現在なお継続中である。プラトンとカントとについての調査・研究から生まれたひとまずの成果として、口頭発表「思弁の場所:快原理の彼岸・神話・夢」(第二回フロイト思想研究会大会、於・京都大学大学院人間・環境学研究科、二〇〇八年九月二八日)を行なった。この研究発表では、フロイト「快原理の彼岸」の重要な操作概念である時間・デモーニッシュなもの・神話・ファンタジーといった言葉が、フロイト自身の自負とはおそらく独立に、プラトン『饗宴』の枠組みで担っている機能をなお働かせている在り様を浮き彫りにした。本研究は、ドイツの思想家ヴァルター・ベンヤミンの思想におけるカント哲学の意義を明らかにしようとするものである。本年度は、三年間の採択期間の最終年度にあたる。本年度に行なわれた具体的な研究活動は、以下の二点に要約される。(一)アリストテレスの術語法・問題構制からカントを再読すること、(二)ベンヤミンの術語法・問題構制の系譜を探究すること。(一)の作業は、昨年度から継続して取り組んできたものである。結果、以下のような点が確認された。第一に、『判断力批判』の思惟の場が、アリストテレスの『弁論術』のそれと類比的に画定されていること。アリストテレスにおける弁論術も、カントにおける判断力の批判も、固有の対象領域をもたないということを存立構造としている。重要なのは、この脱領域性が、両者で共通して「感情」という言葉で表示されていることである。第二に、カントの歴史哲学が『判断力批判』と類比的な位置づけにあること。「歴史」は、判断力と同様に、自然と自由との間に位置づけられる。自然にも自由にも還元されない「普遍史」の構想は「小説」と呼ばれる。この呼び名にふさわしく、『普遍史の理念』のテクストは、極めてレトリカルに構築されている。この第二の点の素描を、カント研究会にて口頭発表した(二〇一〇年二月二八日、於・法政大学)。(二)に関しては、ベンヤミンの神学的な言葉遣いやモティーフを辿ることも目的として、ヤーコプ・タウベス『パウロの政治神学』の研究会を行なってきた(その副産物として、拙訳になる『パウロの政治神学』が近刊の予定である)。これによって、旧約聖書からベンヤミンにいたる神学・哲学・政治・文学の伝統について、幾つかの鍵言葉が再確認された(メシア、自然、イメージ、儚さ、など)。言葉遣いのレベルでこの伝統を引き受け、再考し、再構築するところに、ベンヤミンの超越論的文献学と呼ぶべきテクスト実践があったのだと考えられる。
プロテオミクスを用いたリン酸化シグナル定量系の構築と薬効予測モニタリングへの応用

現在、がん治療の分子標的薬の多くはキナーゼ阻害剤であるが、薬剤感受性の違いや耐性化が問題であり、薬効予測マーカーや耐性化メカニズムの解明が必要である。本研究では、それらのキナーゼの基質のリン酸化レベルを網羅的に定量し、キナーゼ活性を予測することで、薬効予測マーカー探索及び薬剤耐性化のメカニズムの検討を行った。具体的には、肺がん治療に用いられているerlotinibに対する感受性と耐性の肺がん細胞株のリン酸化プロテオーム解析により、薬効予測マーカー候補となるリン酸化タンパク質やキナーゼを同定した。同時に、erlotinib耐性に関与するキナーゼ群を同定し。それらの阻害剤を用いた検証に成功した。分子標的薬の登場でがん治療は画期的に進歩した。その反面、分子標的薬の感受性の人による違いや耐性化が問題となっており、その有効性や耐性化マーカーが必要である。現在、単一の遺伝子発現や変異での薬効予測が行われているが、それだけでは不十分であり、新規バイオマーカーの開発が急務である。本研究では、(1)質量分析計を用いて、細胞内シグナル伝達に関わるリン酸化タンパク質を網羅的に定量するシステムを構築し、細胞内シグナルの活性化状態の全体像をリアルタイムに定量する系を確立する。(2)その測定系を用い、種々の分子標的薬の薬効予測・耐性化のモニタリングに応用する。リン酸化シグナル定量系による薬効予測モニタリングは世界初の試みであり、これが臨床応用されれば、より適切な治療法の選択が可能となり、がん治療の質の向上のみならず医療費の削減に貢献できる。平成25年度は、種々のがん培養細胞を用い、細胞内シグナル伝達に関わるリン酸化タンパク質およびそのリン酸化サイトを網羅的に同定した。その結果、1回の実験で30,000リン酸化ペプチドの定量に成功した。また、そのMS情報を収集してデータベースを作成した。また、臨床検体を用いて上記のリン酸化タンパク質の解析を行うために、千葉大学附属病院、がん研有明病院から種々の消化器がん症例原発巣および転移巣約30症例の新鮮手術組織検体の収集を行った。平成26年度は、より多くの細胞内リン酸化タンパク質・リン酸化ペプチドの定量を目指して、前処理法の改良を行った。具体的には、リン酸化ペプチドの濃縮に、IMAC法と抗チロシン抗体を用いた免疫沈降法を併用することで、チロシンリン酸化ペプチドの同定率を上げた。また、リン酸化ペプチド濃縮後の分画法を、HPLCの代わりにイエローチップを用いた簡易分画法を開発した。細胞内増殖シグナルの伝達には、キナーゼによるリン酸化が重要な役割を担っており、現在抗がん剤として用いられている分子標的薬の多くはキナーゼ阻害剤である。従って、分子標的薬の薬効を予測するためには、薬のターゲットとなるキナーゼ活性をモニタリングすることが重要である。そこで我々は、同定されたリン酸化ペプチド(基質)の情報から、キナーゼ活性を予測する手法の開発を行った。上記のキナーゼ活性予測法を用いて、種々の阻害剤がどのようなキナーゼを抑制するかを肺がんや子宮がんの細胞株を用いて行った。平成27年度は、薬剤感受性株と耐性株を用いた薬剤効果予測マーカーの探索および検証を行う目的で、現在肺がん治療に用いられているチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブの薬効予測を行った。その結果、エルロチニブ感受性細胞株と耐性細胞株で発現の異なるリン酸化タンパク質及びそのリン酸化タンパク質のデータから活性が異なると予測されたキナーゼ群が同定された。これらのリン酸化タンパク質やキナーゼ活性は薬剤効果予測マーカーとして有用であると考えられた。また、上記の解析で、エルロチニブ耐性細胞株で発現の高いリン酸化タンパク質及び活性が高いと予測されたキナーゼは耐性メカニズムに関与していると考えられる。そこで、それらのキナーゼに対する阻害剤を用いて、マーカーキナーゼが本当に薬剤耐性に関与しているかどうかの検証を行った。それらの阻害剤を耐性株に用いたところ、いくつかのキナーゼ阻害剤処理によって細胞株の増殖が抑えられた。このことから、それらのキナーゼが肺がん細胞株のエルロチニブ耐性に関与していることが検証できた。さらに、臨床検体を用いた薬剤効果予測マーカーの探索および検証を行う目的で、臨床検体に近い初代培養細胞を肺がん組織検体約20例から樹立した。これらの薬剤効果予測マーカー、薬剤耐性関連キナーゼの探索については、現在進行中である。本年度予定していた初代培養細胞や三次元培養細胞を用いた薬剤効果予測マーカー、薬剤耐性関連キナーゼの同定・検証を完了することはできなかったが、当初の目的であるリン酸化

シグナル定量系による薬効予測モニタリングの基盤技術の構築については達成することができ、今後実臨床に応用していく予定である。現在、がん治療の分子標的薬の多くはキナーゼ阻害剤であるが、薬剤感受性の違いや耐性化が問題であり、薬効予測マーカーや耐性化メカニズムの解明が必要である。本研究では、それらのキナーゼの基質のリン酸化レベルを網羅的に定量し、キナーゼ活性を予測することで、薬効予測マーカー探索及び薬剤耐性化のメカニズムの検討を行った。具体的には、肺がん治療に用いられているerlotinibに対する感受性と耐性の肺がん細胞株のリン酸化プロテオーム解析により、薬効予測マーカー候補となるリン酸化タンパク質やキナーゼを同定した。同時に、erlotinib耐性に関与するキナーゼ群を同定し。それらの阻害剤を用いた検証に成功した。当初の計画1.SRM/MRMを用いた細胞内シグナル伝達に関わるリン酸化タンパク質の定量法の確立に関しては、SRM/MRMによる細胞内リン酸化タンパク質の定量解析が予想に反して難易度が高かったため、安定同位体標識TMT10を用いたショットガンリン酸化プロテオミクスの手法で解析を進め、培養細胞から常時約15,000種類のリン酸化ペプチドの定量、また約500種類のチロシンリン酸化ペプチドの定量ができる系を確立した。この数は世界最高レベルである。また、同定されたリン酸化ペプチド(基質)の情報から、キナーゼ活性を予測する手法(KSEA法:Kinase-Substrate Enrichment Analysis)及びキナーゼに対するATP結合能を指標にしたキナーゼ活性化予測法の開発を行った。当初の計画2.阻害剤による細胞内シグナル伝達に関わるリン酸化タンパク質の定量解析に関しては、上記の手法を用いて、肺がん、子宮がん細胞株の阻害剤処理後のリン酸化タンパク質の定量を行った。また、その定量結果より、肺がん細胞株ではチロシンキナーゼ阻害剤エルロチニブ処理後の細胞内キナーゼ活性、子宮がん細胞株ではマルチキナーゼ阻害剤であるスタウロスポリン処理後の細胞内キナーゼ活性予測を行った。その結果、薬剤処理により、各薬剤のターゲットとして知られているキナーゼ活性の低下が認められただけでなく、未知のキナーゼ活性も変化することが確認され、これらのキナーゼ活性の変化が薬剤効果予測マーカーとなる可能性が示唆された(J Proteome Res 2014)。27年度が最終年度であるため、記入しない。プロテオミクス分子腫瘍学1.薬剤耐性株を用いた薬剤効果予測マーカーの探索および検証昨年度までに確立した細胞内キナーゼ活性予測法を用いて、阻害剤処理前後の薬剤感受性株と耐性株のキナーゼ活性を予測し、薬剤効果予測マーカーキナーゼ群を絞り込む。また、それらのキナーゼ阻害剤を用いて、マーカーキナーゼが本当に薬剤耐性に関与しているかどうか検証する。検証できたキナーゼの活性は分子標的薬の薬効予測マーカーや耐性化のメカニズムとして有望である。また、その阻害剤は耐性化を克服する新たな治療薬となりうる。大規模リン酸化タンパク質定量は研究分担者の石濱の協力のもと行う。
聴覚障害者のリズムとボディコントロールに関する研究

本研究は、聴覚障害学生を対象に、リズム感とボディコントロールに着目した、リズムエクササイズプログラムを試作し検討することを目的とした。一回60分程度のリズムエクササイズプログラムを作成し、期間中毎週1回全15回実施した。評価の指標にはビデオ分析、心拍数(HR)、POMSを用いた。運動とリズムの同期を客観的に評価するためにビデオ分析を行った。その結果、運動持続時間が長くなるほどリズムとのずれがみられる傾向があったが、エクササイズの回数が進むにしたがい、運動とリズムの同期がみられるものが増加した。これは聴覚障害学生にとって聴覚情報の欠如だけでなくパーソナルなリズム感が十分形成されていないという側面と、パーソナルなリズム感はトレーニングによってある程度改善できる可能性を示唆するものである。したがって、リズミカルな動きや安定したボディバランスの獲得は、聴覚障害者にとって重要な課題であると思われる。リズムエクササイズ中の心拍数(HR)からみた運動強度は、エクササイズの回転が進むに従って、ターゲットHRに達しており、エクササイズとしては有効であると思われた。またPOMSを用い運動前後の気分の変化を調べ、運動とリズムとの関連を検討したが、抽象的な表現が多く、聴覚障害者にはあまり適さないことがうかがえた。聴覚障害者にリズム感を育成するための効果的な運動プログラムについて検討した結果、リズムエクササイズに対する学生の興味と関心は高いことがわかり、今後は、対象年齢を広げるなどさまざまな角度からのアプローチを行い、運動プログラムを検討していきたい。