hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
建築環境システムのエクセルギー・エントロピー過程に関する基礎的研究

建築環境システムのような熱現象を伴うシステムの評価は、エネルギーの保存則とエントロピー増大則を両立させて行うべきとの認識に基づき、建築の室内環境調整、即ち暖冷房・照明に関わる様々なシステムにおけるエクセルギーの投入・消費、エントロピーの生成・廃棄の一連の過程(エクセルギー・エントロピー過程)を数値モデル化することを目的として研究を行なった。本年度は、昨年度の研究において進展が見られた建築に関わる現象の一つである水の蒸発についての基礎的理論の整理を行ない、更に蒸発を利用した自然冷房技術のひとつである屋敷散水のエクセルギー・エントロピー過程を明らかにした。以下に得られた結果をまとめると、1)建築の周囲の湿り空気を環境と捉えた場合、環境と異なる温湿度の湿り空気は、温または冷エクセルギーと湿または乾エクセルギーとをもち、液体水は温または冷エクセルギーとをもつことを示した。2)蒸発作用に伴って行なわれる冷却という仕事は、液体水のもつ湿エクセルギーの一部が消費され、生産される冷エクセルギーを消費して行なわれるものであることがわかった。3)屋根散水が行なわれている外壁面では、温度上昇に寄与するはずの日射エクセルギーが、非散水の外壁面に比べて積極的に消費された結果として、室内に流入する温エクセルギーが小さくなる。即ち、建築での日射エクセルギーの消費の道筋を制御する技術であることがわかった。また、散水により外壁面で日射エクセルギーを消費した結果生成されるエントロピーは、地球の水循環(蒸発・降水)に上手に乗せられれば、適度にかつ定常的に廃棄し続けられるのではないかと考えられる。
複合ミストによるグリーン切削法の開発

本研究では,従来切削油を大量に必要としていた高速旋削やフライス加工をセミドライ化して,環境に優しいグリーン加工へと転換を図るための技術開発の一環として,複合ミスト加工法の開発を行った.この複合ミスト加工法とは,切削点の潤滑を確保するための潤滑剤として極めて少量の植物性油剤をミスト状にして加工点に供給し,さらに切削点の温度を下げるためにミスト状の水を切削油剤と同軸で噴射するもので,油ミストが水ミストに覆われていることから周囲への油の飛散が抑制出来る上,油と水の供給量を制御することによって被削材料の種類や加工形態,加工速度などの諸条件に合わせた最適な潤滑と冷却を行うことが出来る.平成12年度は難削材料であるSUS304ステンレス鋼のフライス加工に本方法を適用し,油供給を1060ml/h,水供給を100-300ml/h,エア流量を150-450Nm3/hとして完全ドライ切削と比較した結果,同じ加工条件で被削材温度が50°C低下,工具のフランク摩耗は半分に抑制,仕上げ面粗さが十点平均粗さで5倍以上向上するなどの顕著な効果があることがわかった.平成13年度は,ミスト供給によるフライス加工の潤滑性の向上のため,工具とノズルおよび,被削材の位置関係によらず常に安定した状態でミストを供給するような,環状ミストノズルの開発を行った.これは,フライス盤の工具基部からエンドミル先端に向かってちょうど工具を包み込むようにミストを供給する装置で,環状のチャンバーとリング状のミスト供給スリットを持つ.本装置を使用した場合と,通常のミストノズルを利用した場合とで,同条件の加工を行った場合の工具摩耗や仕上げ面粗さを比較した結果,チッピングの防止や仕上げ面あらさのばらつきの抑制などの顕著な効果が認められた.本研究では,従来切削油を大量に必要としていた高速旋削やフライス加工をセミドライ化して,環境に優しいグリーン加工へと転換を図るための技術開発の一環として,複合ミスト加工法の開発を行った.この複合ミスト加工法とは,切削点の潤滑を確保するための潤滑剤として極めて少量の植物性油剤をミスト状にして加工点に供給し,さらに切削点の温度を下げるためにミスト状の水を切削油剤と同軸で噴射するもので,油ミストが水ミストに覆われていることから周囲への油の飛散が抑制出来る上,油と水の供給量を制御することによって被削材料の種類や加工形態,加工速度などの諸条件に合わせた最適な潤滑と冷却を行うことが出来る.平成12年度は難削材料であるSUS304ステンレス鋼のフライス加工に本方法を適用し,油供給を1060ml/h,水供給を100-300ml/h,エア流量を150-450Nm3/hとして完全ドライ切削と比較した結果,同じ加工条件で被削材温度が50°C低下,工具のフランク摩耗は半分に抑制,仕上げ面粗さが十点平均粗さで5倍以上向上するなどの顕著な効果があることがわかった.平成13年度は,ミスト供給によるフライス加工の潤滑性の向上のため,工具とノズルおよび,被削材の位置関係によらず常に安定した状態でミストを供給するような,環状ミストノズルの開発を行った.これは,フライス盤の工具基部からエンドミル先端に向かってちょうど工具を包み込むようにミストを供給する装置で,環状のチャンバーとリング状のミスト供給スリットを持つ.本装置を使用した場合と,通常のミストノズルを利用した場合とで,同条件の加工を行った場合の工具摩耗や仕上げ面粗さを比較した結果,チッピングの防止や仕上げ面あらさのばらつきの抑制などの顕著な効果が認められた.本研究では,従来切削油を大量に使用していた旋削やフライス加工をセミドライ化して,環境に優しいグリーン加工へと転換を図るための技術開発の一環として,複合ミスト加工法の開発を行った.本方法は切削点の潤滑を確保するための潤滑剤として極めて少量の植物性油剤をミスト状にして供給し,さらに切削点の温度を下げるためにミスト状の水を切削油剤と同軸で供給する方法である.本年度は難削材料であるSUS304ステンレス鋼のフライス加工へ本方法を適用し,その有効性を評価した.実験装置はブロック状の試料の側面加工を行い,その際の工具摩耗や切削抵抗,加工面の表面あらさなどについて測定した.加工条件として切削速度200m/min,切り込みtx=1mm,切削深さtz=4mmおよび送り531mm/minとし,潤滑条件として切削油剤の供給量を10ml/h60ml/h,水の供給量を100ml/h300ml/hおよび,エア流量を150450m^3/hとした.実験結果から,複合ミスト供給により被削材温度がドライ切削と比較して50°C以上低下し,仕上げ面粗さについてもRz=5.5μmからRz=1.0μm程度と飛躍的に向上することがわかった.また供給する油量と水量を独立に制御することにより,潤滑性と冷却性をそれぞれ調整して加工に最適な条件を提供することが出来ることがわかった.さらにフランク摩耗幅がドライ切削の250μmから110μmへと半減したことから,複合ミストの適用により工具寿命が向上することがわかった.本研究では,従来切削油を大量に使用していた旋削やフライス加工をセミドライ化して,環境にやさしいグリーン加工へと転換を図るための技術開発の一環として,複合ミスト加工法の開発を行った.

本方法は切削点の潤滑を確保するための潤滑剤として極めて少量の植物性油剤をミスト状にして供給し,さらに切削点の温度を下げるためにミスト状の水を切削油剤と同軸で供給する方法である.本年度はフライス加工時に複合ミストを常に刃先先端に供給するためのノズルを開発し,従来の一方向からの供給法と比較した.被削材にはS45Cブロックを,工具はφ10mmのTiNコーティッドエンドミルを用い,工具摩耗の進行状況と被削材の仕上げ面粗さについて検討した.実験の結果,従来の供給方法で発生していた工具逃げ面のチッピングが防止できたほか,切削距離が等しい場合フランク摩耗幅も20%程度減少することがわかった.さらに矩形試料の側面の仕上げあらさを場所ごとに測定した結果から,従来の供給方では場所ごとの仕上げ面あらさのばらつきが見られたのに対して,本供給法ではいずれの場所に置いてもほぼ同等な仕上げを行うことが出来ることがわかった.以上の結果から,本方法によってフライス加工において複合ミストの効率をさらに向上できることが示され,一層の切削油使用量の削減への道を拓く可能性があることがわかった.
遺伝子組み換えマウスを用いた自己免疫疾患の発症機序の研究

自己免疫疾患は遺伝子効果の明らかでない複数の同義遺伝子の共同効果の上に発症するポリジ-ン系疾患である。従って、自己免疫疾患の発症気孔を理解するためには、まず、これら同義遺伝子の同定とその遺伝子効果を探る必要がある。我々はここ数年来、代表的自己免疫疾患である全身性エリテマト-デス(SLE)を自然発症するNZB×NZW(B/WF1)マウスについてSLE発症に主遺伝子効果を示す2つの遺伝子座を明らかにした。その1つは、MHCに密接に連鎖しており、B/WF1マウスでは両親系由来の最低2個の疾患遺伝子の存在が示唆された。他の1つはT細胞抗原受容体β鎖(TCRβ)遺伝子複合体に連鎖しており、ここにNZW系由来の疾患遺伝子の存在が推定された。本研究では、これらの背景をもとにNZBおよびNZW系にMHC、あるいはMHCクラスII遺伝子、TCRβ鎖遺伝子領域の組み換えを試み、これら遺伝子のSLE発症における役割を解析した。先ずはじめにNZBとNZW系のMHC領域を組換えたH-2 congenicマウスを生産し検討した結果、SLE病態の発症にH-2^α/H-2^zヘテロ接合体が拘束素因になっていることを発見した。この所見から、両親系由来のMHCクラスII遺伝子から生産されるF1ユニ-クhybridクラスII分子の重要性が示唆されたので、クラスII遺伝子の塩元配列を調べた結果、I-E分子にユニ-クな抗原結合構造の形成される可能性が示唆された。この成果をもとに、クラスII genomic DNAを用いたtransgenicマウスを生産し、現在、その遺伝子効果を検討中である。一方、TCRβ遺伝子については、なおcongenic NZB、NZWの樹立が進行中であるが、その過程で行った実験により、NZW由来のTCRβがH-2^α/H-2^zヘテロ接合性の拝啓で遺伝子効果を示すことが裏付けられた。以上の事実から、SLEの発症は特有の構造を持つTCRとMHCクラスII分子の相互作用が重要と考えられた。NZB×NZW(B/w)F1マウスに自然発症する全身性エリテマトーデス(SLE)の疾患遺伝子中, MHC連鎖及びTcRβ連鎖遺伝子についてcongenicマウスとtransgenicマウスの生産のために研究を進めている.現在までの成果は以下の如くである.(1).NZB系のTcRβ鎖遺伝子を持つNZW系congenicマウスとNZW系のTcRβ鎖遺伝子をもつNZB系congenicマウスの作成を行ない,現在5代までbackcrossを進めている.(2).NZB系マウス脾臓細胞mRNAよりλgt11を用いてcDNAライブラリを作成し, HLAーDRβ鎖cDNAをプローブとしてMHCーclassII分子cDNAのクローニングを行なった.NZB系マウスはHー2^αハプロタイプを持つとされているが, AgpーIに相当すると考えられるclassII分子がBalb/cマウスのものと同一のものであるかどうかcDNAの塩基配列より検討を進めている.(3).NZW系マウス由来のB lympnomaよりmRNAを得, cDNAライブラリーの作成を行なった.現在, Agpー3に相当するMHCーclassII分子のクローニングを行なっている.(4).

トランスジェニックマウス作成のための技術の修得につとめ(57Bl/6系マウスより受精卵を得, ICR仮性妊娠マウスに移植する実験を行ない, (57Bl/6系マウスを生産させることができた.現在効率を上げることに努めている.全身性エリテマトーデス(SLE)を自然発症する(NZB×NZW)F1 (B/W F1)マウスの疾患遺伝子群についてコンジェニックマウスとトランスジェニックマウスの生産を行いつつ、これらを用いて研究を続けた。SLE遺伝子中主要組織適合遺伝子複合体(H-2)に連鎖した遺伝子についてはNZBマウス(H-2^α)とNZWマウス(H-2^z)についてその各々を交換したコンジェニックNZB(H-2^z)とNZW(H-2^α)マウスの生産が確立し、これらマウス系の交配を通してSLE病態はNZB(H-2^α)×NEW(H-2^z)F1マウスあるいはNZB(H-2^z)×NZW(H-2^α)F1マウス、つまりH-2複合体がヘテロ接合体を形成している個体にのみ発症することが明らかにされた。この遺伝子効果は抗DNA抗体のIgMからIgGへのクラス転換に密接に関係したものであり、in vitroの検索でIgG抗DNA抗体を産生するB細胞はH-2^α/H-2^zヘテロ接合体のマウスからのは証明された。一方このようなH-2領域の役割をより詳細に解明するために、NZB及びNZWマウスのH-2複合体の工亜領域産物であるI-AとI-E分子についてその遺伝子のcDNA塩基配列の検討を行った。その結果、NZBマウスではI-E^α、I-A^αのβ鎖は、ともにBALB/c系マウスのI-E^α、I-A^αとほぼ同じであること、また、NZWマウスのそれはPL系マウスのI-E^V、I-A^Vと同じであることが明らかにされた。現在、これらクラスII分子のα鎖について調べている。なお、これらクラスII遺伝子の役割については、gehomic DNAをとり、これらを適当なH-2コンジェニックマウスにトランスジーンすることで検討している。自己免疫疾患は遺伝子効果の明かでない複数の同義遺伝子の共同効果の上に発症するポリジ-ン系疾患である。従って、自己免疫疾患を発症機構を理解するためには、まず、これら同義遺伝子の同定とその遺伝子効果を探る必要がある。我々はここ数年来、代表的自己免疫疾患である全身性エリテマト-デス(SLE)を自然発症するNZB×NZW(B/W)F1マウスについてSLE発症に主遺伝子効果を示す2つの遺伝子座を明らかにした。その1つは、MHCに密接に連鎖しており、B/W F1マウスでは両親糸由来の最低2個の疾患遺伝子の存在が示唆された。他の1つはT細胞抗原受容体β鎖(TCRβ)遺伝子複合体に連鎖しており、ここにNZW系由来の疾患遺伝子の存在が推定された。本研究では、これらの背景をもとに、NZBおよびNZW糸にMHC、あるいはMHCクラスII遺伝子、TCRβ鎖遺伝子領域の組み換えを試み、これら遺伝子のSLE発症における役割を解析した。昨年度までのMHC(Hー2)congenicマウスでの研究成果から、B/w F1マウスのSLE発症にはHー2^α/Hー2^δヘテロ接合性が拘来素因となっていることが明らかにされたので本年度は、MHCクラスII分子、特にF1にユニ-クなhybridクラスII分子の関与を推定し、NZB、NZW系のクラスII遺伝子の解析を行なった。
嫌気性及び好気性微生物を併用するテトラクロロエチレンの完全分解系の開発

本研究の目的は、好気的微生物処理が困難といわれるテトラクロロエチレン(PCE)を対象に、嫌気的分解菌の有する脱ハロゲン化能と好気的メタン酸化細菌Methylocystis sp.M株の有する酸化分解反応を併用して、微生物的に完全に分解できる系を構築することである。これまでに、蓮田土壌に有機酸と水素を添加することにより、嫌気的PCE分解が促進される現象が明らかとなったため、PCR-DGGE法及びクローニング手法を用いて分解と微生物群集構造の解析を行った。その結果PCEからトリクロロエチレン(TCE)及びcis-ジクロロエチレン(DCE)までの嫌気的分解には、Clostridium属細菌が大きく関与していることまたcis-DCEからの分解には低濃度の水素の存在が重要でこのときの分解にDehalococcoides属細菌が大きく関与していることが示唆された。ついで嫌気的分解が困難なcis-及びtrans-DCE対するM株の好気的代謝経路及び分解動力学、さらにM株の土壌中における挙動について検討を加えた。M株は100mg/lのcis-及びtrans-DCEを24時間でほぼ完全に分解し、分解生産物としていずれの物質からもジクロロ酢酸及びグリオキシル酸が生成されることが確認された。cis-DCE、trans-DCEおよびTCEに対するVmax(mol/hr・cell)は、7.5、1.2、6.3X10^<-13>、Km(mg/l)は0.54、1.04、1.84であり、DCEはTCEより高い親和性を有することが判明した。また土壌中におけるM株の挙動をモデル化することができた。以上の結果から、嫌気反応と好気反応を併用することによりPCEを効率良く分解することが可能であることを明らかにした。本研究は、微生物処理が困難といわれるクロロエチレン類を対象に、嫌気的分解菌の有する脱ハロゲン化能と好気的メタン酸化細菌の有する酸化分解反応を併用して、微生物的に完全に分解できる系を構築することである。まず各地の土壌及び河川底泥を用いて、テトラクロロエチレン及びジクロロエチレンの脱ハロゲン化能を調べた。その結果、蓮田土壌が100mg/lと高い濃度のクロロエチレン類を脱ハロゲン化できること、この脱ハロゲン化能は、有機酸やグルコースなどの有機物及び水素の添加により促進されることを明らかにした。そこで土壌共存下における水素の濃度及び添加方法について検討を加えた結果、水素濃度が高くなると脱ハロゲン化反応が阻害されること、また水素濃度が数十ppmと低いと脱ハロゲン化反応が促進されることが判明した。ついで脱ハロゲン化反応を有する微生物の分離を試み、低濃度の有機酸と水素を共存させることにより脱ハロゲン化能を安定的に保持する混合微生物系を構築することができた。さらに、嫌気的分解が困難であるシス、トランス、1,1-3種のジクロロエチレン類のメタン酸化細菌Methylocystis sp.M株による好気的分解特性を調べた。M株は、シス、トランス、1,1-ジクロロエチレンすべてを分解できたが、トランスジクロロエチレンが最も分解されやすく、1,1-ジクロロエチレンが最も分解されにくいことが判明した。以上のことから、嫌気反応と好気反応を併用することによりテトラクロロエチレンを効率良く分解することが可能であることが明らかとなった。本研究の目的は、好気的微生物処理が困難といわれるテトラクロロチレン(PCE)を対象に、嫌気的分解菌の有する脱ハロゲン化能と好気的メタン酸化細菌Methylocystics sp.M株の有する酸化分解反応を併用して、微生物的に完全に分解できる系を構築することである。

これまでに、蓮田土壌に有機酸と水素を添加することにより、嫌気的PCE分解が促進される現象が明らかとなったため、PCR-DGGE法及びクローニング手法を用いて分解と微生物群集構造の解析を行った。その結果PCEからトリクロロエチレン(TCE)及びcis-ジクロロエチレン(DCE)までの嫌気的分解には、Clostridium属細菌が大きく関与していることまたcis-DCEから分解には低濃度の水素の存在が重要でこのときの分解にDehalococcoides属細菌が大きく関与していることが示唆された。ついで嫌気的分解が困難なcis-及びtrans-DCE対するM株の好気的代謝経路及び分解動力学、さらにM株の土壌中における挙動について検討を加えた。M株は100mg/lのcis-及びtrans-DCEを24時間でほぼ完全に分解し、分解生産物としていずれの物質からもジクロロ酢酸及びグリオキシル酸が生成されることが確認された。cis-DCE、trans-DCEおよびTCEに対するVmax(mol/hr.cell)は、7.5、1.2、6.3X10^<-13>、Km(mg/l)は、0.54、1.04、1.84であり、DCEはTCEより高い親和性を有することが判明した。また、土壌中におけるM株の挙動をモデル化することができた。以上の結果から、嫌気反応と好気反応を併用することによりPCEを効率良く分解することが可能であることを明らかにした。
大陸地殻物質のマントル深部での挙動:実験的アプローチ

大陸地殻関連物質のマントル深部での挙動に関連し、以下の3つの物質についての超高圧高温実験がおこなわれた(1)カヤナイト(Al_2SiO_5)の固相相転移、(2)サニデイン(KAlSi_3O_8)の相転移および融解関係、(3)大陸上部地殻物質の相転移・融解関係および元素分配。この結果(1)についてはカヤナイトの単純酸化物混合相への分解の確認とともに、相境界の正確な決定をおこなった.また、この結果に基づきカヤナイトの非圧縮率を熱力学的に見積った.更に下部マントル領域下でのV_3O_5構造相の存在についても検討した.(2)サニデインの約12GPaまでの固相相転移および融解関係を明らかにするとともに、相境界の正確な決定を試みた.この結果は最近の放射光を利用したX線解析実験の結果とほぼ一致するが、リキダス相や融点の圧力変化について新たな知見が得られた.(3)については花こう岩的組成のモデル大陸地殻物質の27GPaまでの回相相転移を実験的に明らかにするとともに、マントル中での密度変化を計算した.この結果、大陸地殻物質がマントル深部(7200km)で非常に高密度になることが明らかになり、その沈み込みの可能性が示唆された.また融解関係や元素分配実験の結果、このような物質のマントル中での部分融溶がマントル中での元素の地球化学的挙動にとって重要であることが明らかになった.大陸地殻関連物質のマントル深部での挙動に関連し、以下の3つの物質についての超高圧高温実験がおこなわれた(1)カヤナイト(Al_2SiO_5)の固相相転移、(2)サニデイン(KAlSi_3O_8)の相転移および融解関係、(3)大陸上部地殻物質の相転移・融解関係および元素分配。この結果(1)についてはカヤナイトの単純酸化物混合相への分解の確認とともに、相境界の正確な決定をおこなった.また、この結果に基づきカヤナイトの非圧縮率を熱力学的に見積った.更に下部マントル領域下でのV_3O_5構造相の存在についても検討した.(2)サニデインの約12GPaまでの固相相転移および融解関係を明らかにするとともに、相境界の正確な決定を試みた.この結果は最近の放射光を利用したX線解析実験の結果とほぼ一致するが、リキダス相や融点の圧力変化について新たな知見が得られた.(3)については花こう岩的組成のモデル大陸地殻物質の27GPaまでの回相相転移を実験的に明らかにするとともに、マントル中での密度変化を計算した.この結果、大陸地殻物質がマントル深部(7200km)で非常に高密度になることが明らかになり、その沈み込みの可能性が示唆された.また融解関係や元素分配実験の結果、このような物質のマントル中での部分融溶がマントル中での元素の地球化学的挙動にとって重要であることが明らかになった.
ゼノパスにおける部位特異的遺伝子組換え技術に資する遺伝子座の同定

トランスジェニック動物ではノックイン等の特殊な手法を用いなければ外来遺伝子が複数個所に導入されるため、こうしたトランスジェニック動物を用いて部位特異的遺伝子組換え技術を応用した場合、想定外の遺伝子組換えが生じることが懸念される。本研究では、再生可能動物である両生類(特にゼノパス)において、部位特異的遺伝子組換えによるspatiotemporalな遺伝子発現制御を可能とするため、部位特異的遺伝子組換えに資する遺伝子座位(safe-harbor locus)に類似する遺伝子座位を同定すること、あるいは部位特異的遺伝子組換えが可能となる程度に導入外来遺伝子数が少なくなる手法を開発すること、そして、低温生育動物である両生類における遺伝子組換えに適した遺伝子組換えシステムの同定を目的としている。2018年度はゼノパスにおける遺伝子組換えを検討するため、ゼノパス腎上皮由来の培養細胞であるA6細胞を用いて、I-SceI酵素を利用したゲノム内遺伝子挿入を行い、遺伝子組換えにより発現する蛍光蛋白質が変化する細胞株を作成した。I-SceIを用いることで高効率の遺伝子挿入が可能となっただけでなく、導入遺伝子数の最小化が可能となった。また、Flpリコンビナーゼはオリジナルのものに加え37°Cでの酵素活性を向上させたFlpe、及び哺乳類に最適化したFlpoが知られているが、これらにCreリコンビナーゼを加えた4種のリコンビナーゼ活性について遺伝子組換え効率の検討を開始した。プラスミドを用いた遺伝子導入では、蛍光蛋白質の蛍光で検定される表現型において、いずれの活性も大きな違いを生じなかった。現在ウイルスを用いた遺伝子導入による遺伝子組換え効率の検討を行っている。「研究実績の概要」欄に記載した通り、予定通り、プラスミドベクターの開発や、それを用いたゼノパス細胞株の作成、および各種リコンビナーゼによる一定程度の遺伝子組換え効率の検討を行うことができた。一方で、ゼノパス胚を用いた研究に遅れを生じている。これは、プラスミドベクター構築の段階で蛍光蛋白質の発現が思いがけず低くなってしまった事象を是正するために生じた遅延である。この点を勘案し、やや遅れていると判断した。「現在までの進捗状況」欄に記載したとおり、ゼノパス胚を用いた研究に遅れを生じている。プラスミドベクター構築において蛍光蛋白質の発現レベルが想定よりもかなり低いという問題が生じたため、その問題の解決に時間を要した。現在では蛍光蛋白質発現レベルの向上をさせることができたため、今後は遅滞なく研究を進めることが可能となるものと考えている。「現在までの進捗状況」等に記載したとおり、ゼノパス胚を用いた実験に遅れを生じていたため、その実験に要する費用として次年度使用額を計上する必要が生じた。前述のとおり、現在ではゼノパス胚を使用した実験の見通しが立ったため、来年度中の速やかな実験遂行が可能と考えている。
ムージルの演劇批評研究―価値評価の試みと『特性のない男』創作への影響分析

研究成果は以下のとおりである。ムージルの1920年代の演劇批評は第1次大戦後のウィーンの精神状況の観察と批判である。それらの演劇批評は、往々にしてアルフレート・ケルの演劇批評を参照して執筆されている。ムージルの小説『特性のない男』もケルの演劇批評の影響のもとに生まれた。ケルはムージルの「産婆」と称される。ムージルの処女作『テルレス』を激賞して、世に出したからである。しかしムージルの『特性のない男』がケルの批評をきっかけに生まれたことが明らかになった今、ケルはムージルについて二度の産婆役を果たしたと言いうる。平成24年度の研究実績は以下のI,II,IIIの3項目である。I.ムージルの演劇批評のうちで最も重要な批評と見なされるもの3点について、翻訳し、かつムージルのこれらの演劇批評の内容を分析した成果を印刷に付し、公表した。その第一は「モスクワ芸術座」への批評、第二は「ロシア人カバレット」への批評、第三はゲオルク・ビュヒナー作「ダントンの死」への批評である。すなわちムージルのロシア人演劇賞賛は、そのままドイツ演劇の現状批判の裏返しであること、ロシア人演劇を理想の演劇とムージルが言うとき、それはそのままドイツ演劇に対する失望と不満の裏返しであること、そしてその批判の主たる対象はウィーン演劇界に向けられていたとの結論を得た。ビュヒナー作「ダントンの死」への批評からはムージルの文学観を確認することができた。すなわち科学者ならではの観察眼あるいは認識能力を持った作家としてのビュヒナーを、ムージルは高く評価している。II.ムージルの演劇批評のうち、マリー・ルイーゼ=ロート版「ムージル、テアター」の批評番号で8,9,12,17,24,25,29,31,54,59,64,74の12本の批評については分析または翻訳作業を開始した。すなわちムージルにより批評の対象とされた作品は、1)シェークスピア演劇とマックス・ラインハルト演出による演劇作品批評:12,17.25,54,55,59,64,74、2)自然主義作品への批評:24、3)民衆劇:8,9,29,31に分類しうるものである。III.ムージルが批評の対象とした演劇作品のすべてについて、所在場所の確認を行ない、このうち2作品を除いて、すべての作品の現物を見ることを行なった。なお、上記I.で挙げた「ダントンの死」に関する論考は現在印刷中のためにページ等が不明である。そのために次ページの過年度業績欄には記載しない。実績の概要は以下の4点である。I.ムージルの演劇批評のうち、1マックス・ラインハルト演出の劇への批評3本「ラインハルトのウィーン進軍」、「ラインハルトーウィーン客演」、「ウィーンのラインハルト新劇場」について、日本語への翻訳と内容分析を行い、論文として公表した。また、2シェークスピア劇へのムージルの批評について、同じく日本語への翻訳と内容分析に取り組み、論文にまとめるための作業を行った。II.ムージルの演劇批評82本が、批評の対象とした演劇作品については概ね資料の収集を終えることができた。それらの中には、オリジナルのタイプ原稿のもの2作、全ドイツならびに全オーストリアで唯一所蔵が確認できたコーブルク州立図書館での『王様のバレリーナ』を含んでいる。収集したそれらの作品のうち、およそ65%の作品については読了し、その内容を知ることができた。そしてこの内容理解に基づいて、ムージルの演劇批評を読み進めた。III.以上IとIIの結果、ムージルの演劇批評における主張について全体の輪郭を理解することができた。その輪郭とは1ムージルは劇評家として立った1920年代初頭の時期は、ウィーンないしは新生オーストリアのイデオロギーに批判的観念を抱いていること、2これと対照的に、ベルリン並びにロシア人演劇その他ユダヤ人演劇に強い共感を抱いている、ということである。この1については、ムージルの代表作『特性のない男』においてムージルがウィーンに対して示している共感ないしは愛着との関連を分析・考察することがムージル文学理解の根幹に触れる問題であるとの認識を得ることができた。IV.その他の成果として、ムージルの演劇批評についての基本書として知られるマリー-ルイーゼ・ロート氏の『ローベルト・ムージル-テアーター』には、ムージルの批評の初出データの記載に関してずさんな記述が少なからず存在することが判明した。本「研究目的」のうち、研究初年度(平成23年4月)から取り組むべき課題は以下の2点であった。1.ローベルト・ムージルの演劇批評を分析し、作家としてのムージルではなく、演劇批評家としてのムージルの評価判定を行う。2.ウィーンが「特性のない都市」としてムージルに意識化される過程について、明らかにする。

演劇批評家としての4年間にわたる体験によって、ムージルは「性格のない男」や「特性のない都市・ウィーン」のモチーフを着想し、これが下敷きになって『特性のない男』が生み出されたことを論証する。また「研究実施計画」は以下の2項目であった。1.資料収集とその分析により研究を進める。収集する資料は(1)ムージルが批評対象としてとりあげた演劇作品。(2)同時代のムージル以外の演劇批評家の批評。(3)研究文献、関連の参考文献。以上の資料を、国内外において収集する。2.R・ムージル協会ならびにコリーノ博士より研究推進に必要な支援を受ける。「研究実施計画」の結果についてー研究初年度は上記計画の1.に関し集中的に取り組んだ。ムージルが批評した演劇作品を購入した。購入できない作品のうち、コピー可能なものはコピーした。閲覧のみ許可された作品については、ノートをとる作業を行った。作品の所在が確認できないものがあることが判明した。23年度についてはムージル協会やコリーノ博士からの研究サポートを受けることはなかった。23年度「研究実績」結果は以下の3項目である。1.演劇作品の一部モデルとみなしうる作品があることを確認した。2.ムージルの基本概念「特性」が、批評対象の演劇作品で複数回、取り上げられていることを確認した。3.ローベルト・ムージルとアルフレート・ケルリヒャルト・ベーア-ホフマン:『シャロレー伯爵』批評について(椙山女学園大学「人間関係学研究」第10号p.27ー40)で、研究課題に関連する分析を書いた。平成26年度の研究成果として論文2本の印刷・公表と口頭による研究報告1件を行なった。また、研究成果全般を踏まえてドイツ語論文の執筆を終えた。以上4点のタイトルと概要は以下のとおりである。1.論文「ローベルト・ムージルのウィーン演劇批評についてーH.シュティフテッガーとA.ヴィルトガンス批判」。本論では、同時代のウィーン演劇を第1次大戦後のオーストリアの偏狭なドイツ・ナショナリズムの反映あるいはこれへの迎合と見るムージルの批判的見解を分析した。2.論文「ローベルト・ムージルのシェークスピア批評ーアルフレート・ケルの影響について」。本論ではムージルの演劇批評が全体としてアルフレート・ケルの演劇批評に強い影響を受けている点について、ムージルとケル両者のシェークスピア批評を比較論証した。3.口頭発表「ローベルト・ムージルの特性のある演劇批評」。ムージルの演劇批評の傾向が強く出ているものとして、シュティフテッガーの民衆劇「ラックス山」へのムージルの批評を紹介した。4.論文「ローベルト・ムージルの演劇批評についてーまたはアルフレート・ケルの、ムージルへの影響」(ドイツ語論文。カール・コリーノの校閲を経ている)。本論文はこの3月に執筆し終えたもので、未発表である。概要は、ムージルの演劇批評とムージルの長編小説「特性のない男」との関連を論じたものであり、本研究課題「ムージルの演劇批評研究ー価値評価の試みと『特性のない男』創作への影響分析」についての成果報告の本体部分をなすものである。
ヒト尿細管に特異的なアンジオテンシンIIによるNa輸送活性化機序と生理的意義

AngIIはマウスの近位尿細管輸送に対し低濃度で刺激,高濃度で抑制を示すが,ヒトでは濃度依存的かつ一相性に亢進させる。この機序を解明するため,ヒト,野生型及びcGKII欠損マウス腎にてNBCe1活性測定等を行った。ヒトでは高濃度AngIIの作用はNO阻害により消失し、NOドナーはERKを介しNBCe1を亢進させた。野生型マウスでは高濃度AngIIの作用はNO阻害により刺激に転じ、NOドナーはNBCe1を抑制した。ヒトではNO経路からERK活性化によりAngIIが一相性刺激作用を持ち,AngIIによる血圧調節がより重要であることが示唆された。本研究はヒト近位尿細管に特異的なアンジオテンシンII(AngII)の作用機序の詳細を解明するために立案された。AngIIはラット・ウサギ・マウスの近位尿細管(PT)輸送に対し二相性作用(低濃度で刺激,高濃度で抑制)を示すが,ヒトにおいてはPT輸送を濃度依存的かつ一相性に亢進させる。このヒトPT特有のAngII作用機序を明らかにするため,腎癌摘出術から得られた正常ヒト腎皮質,野生型及びcGMP依存性キナーゼcGKII欠損マウス腎にて,単離潅流PTのNBCe1活性測定,Western blotによるキナーゼアッセイを行った。MEK及びcGKII経路の活性化は腎皮質でのERK及びGSK3βリン酸化により評価した。ヒトでは10-6M AngIIのNBCe1亢進(+103%)はNOS阻害剤(L-NAME)、可溶性グアニリルシクラーゼ(sGC)阻害剤(ODQ)により完全に阻害され、NOドナー(SNP)および8Br-cGMPはNBCe1活性を亢進させた。これらの刺激作用はcGKIIではなくERK経路に依存していた。野生型マウスでは10-6M AngIIの抑制(-30%)はL-NAME, ODQにより刺激に転じ、SNPおよび8Br-cGMPはNBCe1活性を抑制した。cGKII欠損マウスでは全濃度のAngIIは刺激作用(+30%)を有し、SNP, 8Br-cGMPはNBCe1活性に影響しなかったため,マウスでは高濃度AngIIの抑制作用はNO/sGC/cGMP/cGKII経路に依存することが示された。ヒトではNO/sGC/cGMPからcGKIIを介さずMEK/ERKを活性化する特異的経路が存在するためAng IIが一相性刺激作用を持つと考えられた。ヒトではAngIIによる血圧調節がより重要であること,PT輸送に対するNOの刺激作用をターゲットにした高血圧治療の可能性も示唆された。本研究はヒト近位尿細管に特異的なアンジオテンシンII(AII)の作用機序,特にNO/cGMP経路の関与の詳細を解明するために立案された。AIIはラット・ウサギ・マウスの近位尿細管(PT)輸送に対し二相性作用(低濃度で刺激,高濃度で抑制)を示すが,ヒトPT輸送を濃度依存性に一相性に亢進させる。ヒトPTに特有のAII作用機序を明らかにするために,本年度は腎癌摘出術から得られた正常ヒト腎皮質及びマウスにおいて,単離潅流PTの細胞内pH測定実験,及びWestern blotによるキナーゼアッセイを行った。ヒトでは10-6M AIIのNBCe1活性亢進作用(+103%)はNOS阻害剤(L-NAME),可溶性グアニリルシクラーゼ(sGC)阻害剤(ODQ)により完全に阻害された。一方,マウスでは10-6M AIIが抑制作用(-41%)を示すがL-NAME, ODQにより亢進作用(+20+40%)へと転じた。またNOドナー(SNP)および8Br-cGMPはヒトではNBCe1活性を亢進させたが(+40+80%),マウスではNBCe1活性を逆に抑制した(-20-40%)。更にSNPおよび8Br-cGMPはヒト腎皮質ではcGKII活性化を伴わずERKを活性化させたが,マウス腎皮質では逆にcGKIIを活性化したがERKを活性化しなかった。Western blotにおいて,ERKはマウスでは10-10MのAIIのみによりリン酸化されたが,ヒトでは10-10Mから10-6MのAII全てでリン酸化された。一方GSK3βはマウスではAII全ての濃度でリン酸化されたのに対し,ヒトではいずれもリン酸化されなかった。以上より,AII作用におけるNO/sGC/cGMP経路はマウスではcGKIIを介して抑制的に働くのに対し,ヒトではERK経路を介して亢進的に働くことが初めて明らかになった。

当初の計画において,H23年度は(1)AngII尿細管作用におけるNOS/NO/cGMP/cGKの意義,(2)cGKを介したNa輸送体調節機構の解析,(3)AngIIのヒト近位尿細管重炭酸再吸収に対する作用の検討を予定していた。また,H24年度はこれらを継続するとともに(4)AngIIのマウス近位尿細管重炭酸再吸収に対する作用の検討,(5)腎内AngII産生経路の解析,(6)AngIIによる尿細管Na輸送体細胞内局在変化の検討も行う予定であった。このうち,(1)(3)については上述の実績概要のように既に結果が出ている。(4)についても一部解析を開始しており,cGKII欠損マウスにおいて同様の解析をおこなっているところである。(2)については現在計画通り各種培養細胞にsiRNAを使用した発現抑制解析を行っており,順調に進行しているところである。このように,現在のところ一部順序の変更などはあるものの,概ね計画通り進行しているといえる。今後においては,当初の計画通り研究を実施することを主眼とする。具体的には,(1)(3)と関連し,(4)のcGKIIノックアウトマウスにおける解析を遂行し,他のノックアウトマウス(AT1欠損マウス,cPLA2欠損マウス)での解析も行い,NOS/NO/cGMP経路とAT1受容体、cPLA2/P450/5,6-EET経路の関係を明らかにする。また,(2)においては各種培養細胞にAT1受容体,NBCe1受容体を安定発現させ,cGKIIの発現をsiRNAにより抑制することにより,近位尿細管でのAT1受容体がcGKIIによってどのように影響を受けるか検討する。この際にAT1受容体安定細胞株がうまく得られない場合には、AT1受容体を組み込むベクターを代えて対処する。(5)(6)においては,ヒト特異的なAngII尿細管作用の生理的意義を明らかにするために既報のRIA法を用いてヒト腎内AngII濃度を測定し、年齢・性別・高血圧の有無およびARBを含む降圧剤試用の有無、CKD・糖尿病の有無などと腎内AngII濃度の相関を明らかにする。また外因性のアンジオテンシノーゲンやAng Iの添加、さらには直接レニン阻害剤などを用いて腎内におけるAngII産生機構の詳細を検討する。またAngIIの尿細管Na輸送体細胞内局在に対する作用を明らかにするために免疫組織化学的検討を行う。具体的には腎癌摘出術から得られた正常腎皮質スライスにAngIIを一定時間添加し、特異的抗体を用いて共焦点レーザー顕微鏡による観察を行う。これらはいずれも,対照として野生型ないし高血圧自然発症ラット(SHR)等を用いて比較検討を行う。本研究を遂行するためには,まず比較検討のための各種実験動物(マウス,ラット)及びその各種ノックアウト及び変異型を必要とする。また,生理実験のために各種試薬(蛍光色素BCECF,各種阻害剤,アナログなど)を必要とする。発現抑制実験においては,各種細胞及びその培養に必要な培地や血清,AT1受容体などの発現のためのベクター,遺伝子工学試薬,また発現抑制のためのsiRNAや各種阻害剤等を要する。キナーゼアッセイを行うためには,各種のアナログや阻害剤,リン酸化のtriggerとなる試薬,またwestern blotのための物品を要する。組織や細胞の免疫組織学的検討のためには,各種抗体他同様の阻害剤やアナログ等が必要となる。
植物における熱ストレス応答の分子遺伝学的解析

本研究では、高等植物における熱ストレス応答の研究を、熱ショックタンパク質遺伝子の発現調節という観点から研究している。材料として、生活環が短く、植物体が小さく、DNA含有量・遺伝子重複の少ない、アブラナ科のシロイヌナズナを採用する。本年度は、以下のような新たな知見を加えることができた。1)HSP90遺伝子ファミリーの構成員を更にもう一種同定した。この遺伝子は既に単離した遺伝子の近傍に存在した。2)HSP90ファミリー遺伝子の詳細な発現解析をNorthern法、レポーター遺伝子=トランスジェニック・植物を用いる方法、により解析した。その結果、1つの熱ショック誘導性遺伝子と、DNA配列では相同性を持つあと2つの構成性発現遺伝子を同定するに至った。構成性発現遺伝子は、分裂組織などの器官・組織特異的な(レポーター遺伝子活性でみた)発現を示すことを見いだした。3)HSP90ファミリー遺伝子の発現を更にin situで観察し、mRNAの器官特異的発現の確認を行なった。これらの知見を更に発展させるために、現在、a)HSP90ファミリー遺伝子の発現を制御する遺伝子の同定・単離、b)融合遺伝子のレポーター活性を指標に遺伝子発現に関する調節変異体をトランスジェニック植物から単離、を目指しており、年度内に更に成果を得るつもりである。
低分子量G蛋白質とその標的蛋白質による血管構築の分子機構

血管の構築は、動脈硬化に基づく虚血性心疾患などの様々な疾患に深く関与している。しかし、血管が構築される分子メカニズムは依然として不明である。一方、我々は低分子量GTP結合蛋白質のRhoファミリーのうち、Rhoの標的蛋白質としてセリン・スレオニンキナーゼであるPKN、Rho-kinase、myosin phosphataseの制御サブユニットであるMBS(myosin-binding subunit)を見出した。我々は、Rho-kinaseがMBSをリン酸化してmyosin phosphataseの活性を抑制するとともに、myosin light chainそのものも直接リン酸化することを見出した。Rho-kinaseは、この二つのpathwayによりmyosin light chainのリン酸化レベルを上昇させ、その結果myosin ATPase活性を上昇させることを見出した。また、Rho-kinaseの新たな基質として細胞膜裏打ち骨格蛋白質のひとつであるadducinを見出した。Rho-kinaseによるadducinのリン酸化が細胞運動、細胞遊走に深く関わっていることを明らかにした。一方、Cdc42、Racの標的蛋白質としてIQGAP1を同定し、IQGAP1が細胞間接着部位に特異的に濃縮することを見出した。さらに、IQGAP1がβ-cateninと直接結合し、cadherin・catenin複合体からα-cateninを解離させることによりcadherinを介する細胞間接着をネガティブに制御することを明らかにした。また、活性型Cdc42とRacは、IQGAP1のβ-cateninへの結合を阻害することにより、IQGAP1の機能を阻害し、細胞間接着をポジティブに制御することも明らかにした。また、血管内皮細胞においても、IQGAP1は細胞間接着部位に濃縮されていることを見出した。血管の構築には、血管内皮細胞などの細胞骨格系の再構築や細胞運動、細胞遊走、細胞間接着による極性形成が必須である。本年度の、我々のこれらの成果は血管構築の分子メカニズムを理解する上で、極めて重要である。したがって、本年度の研究計画はほぼ達成することができたと考えている。
照射放射線量の吸収線量空間分布制御による反応場のデザインと反応プロセスの開拓

(1)ガンマ線高吸収性微粒子の最適作製条件のさらなる検討を行なった。すなわち、水溶性金属ナノ粒子を含むマイクロカプセル、疎水性金属ナノ粒子及び油性ヨード化微粒子を含むマイクロスフィアの調製を、温度、濃度、攪拌速度をパラメータとして行い、微粒子からの漏洩がなく、安定な状態を長時間保持できる条件を決定した。この過程で得られた微粒子は、本研究の目的である秩序構造を持つ材料のテンプレートとなるだけでなく、診断用途あるいは治療用途にも適用可能であることが新しく見出された。(2)得られた微粒子を透過型電子顕微鏡とX線CTを用いて観察し、形態や大きさのコントロールが可能であることが確かめられただけでなく、ガンマ線あるいはX線を効率よく吸収する材料であることが確かめられた。(3)ガンマ線高吸収性微粒子を含有するガンマ線架橋型高分子の濃厚溶液にガンマ線を照射することにより、局所的な架橋密度に分布を持つ材料が形成される、ガンマ線線量及び高分子濃度に関する条件について検討した。1.マイクロカプセルを用いたフィルターの作製(1)フィルター法によるガンマ線照射量制御に用いるため、ナノ粒芋を包含するポリウレアウレタンを壁膜とするO/W型とW/O/W型の単分散マイクロカプセルを膜乳化法を用いて作製した。また、ホモジナイザーを用いた乳化法によりサイズ分布の異なるマイクロカプセル懸濁液系を調製した。壁膜の厚み、外径、マイクロカプセルの濃度および分散媒中へのカプセル投入法を変え、最適調製条件を探索した。(2)(1)で得られたマイクロカプセルの構造と物性を調べた。(3)(1)の条件を用いて高エネルギー放射線のフィルターを作製した。2.スピノダル分解を用いたフィルターの作製ポリスチレン溶液及びポリメチルメタクリレート溶液の自由エネルギーを実験的に求め、これよりスピノダル条件を求めた。また、スピノダル領域へのクエンチにより構造が形成される過程を光散乱により調べ、制御されたサイズの構造が得られたときにガラス化が起こる条件を調べた。放射線照射用フィルターの作製に関する以下の実験を行った。(1)紫外線照射により金属ナノ粒子含有マイクロカプセルを調製した。壁膜成分とマイクロカプセル化法を変えた実験を行った。そのうちで膜乳化法を用いてバイオベースポリマーを壁膜成分として用いたものはほぼ単分散でまた壁膜は放射線分解性であり、フィルターとして必要な条件を満たすことが確認できた。(2)温度制御により容易にスピノダル領域での放射線照射を行うことのできる系としてヒドロキシプロピルメチルセルロース(HPMC)水溶液を選択し、この系の相図、スピノダル線、粘弾性、ゲル化点の測定を行なった。また、塩を加えることによるスピノダル腺の温度をを下げる実験を行った。さらに、相図上のいくつかの点においてガンマ線照射を行い、得られた試料についても同様の測定を行なった。これらの実験により、フィルターとして用いることの出来る条件を決定した。(3)(2)の系を用いて、室温に近い温度でのスピノダル分解過程のクエンチによる規則構造の保持を行った。
小児特発性ネフローゼ症候群患者の制御性T細胞機能にApo C1が与える影響の検討

我々の先の研究で、小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群患者血中において、急性期にApolipoprotein C-1(Apo C-1)が特異的に上昇していた。また、小児特発性ネフローゼ症候群患者の急性期において、regulatory T cell(Treg)の機能異常を示す報告がされており、Tregの機能異常が小児特発性ネフローゼ症候群の病態に関連していることが示唆されている。これらのことから、Apo C-1がTreg機能に何らかの影響を与え、小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群の病態に関与している可能性を検討するために、小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群患者のリンパ球にApo C-1を加えて培養し、培養液中のTregの量的(フローサイトメトリー法による評価)・機能的(血清Il-10濃度の測定)変化の有無を確認することが本研究の目的である。当初、研究計画通りにリンパ球の培養を行っていたが、培養結果が安定せず、TregやIL-10の測定値に大きなばらつきが生じたため、培養後ではなく、採取した血液に直接、Apo C-1を添加し、その後培養下でのTregやIL-10産生の変化を観察する方針とした。しかし、これもリンパ球の培養が安定せず、評価に値するリンパ球の増殖がみられず、断念した。これに伴い、小児特発性ネフローゼ症候群の病態解明の一環として、並行して実施していた、頻回再発型ネフローゼ症候群患児に対するリツキシマブ治療前後でのTリンパ球のプロファイル変化に関する研究を進めていくこととした。これに関する成果として、リツキシマブ治療前後で、活性化T細胞の減少やT細胞のプロファイルに変化が生じていることが確認できており、現在論文投稿準備中である。当初の研究計画に沿って、寛解期に入った小児期の特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群(ISSNS)の患児の血液を採取、そこからリンパ球を分離し、それにApolipoprotein C-1(Apo C1)を添加して細胞培養を行った。さらに、患者リンパ球と脱イオン水のみを培地に加えたものを陰性対照群とした。培養後、「Apo C1が調節性Tリンパ球機能やその数へ与えうる影響」を評価する目的で培養液中のIL-10濃度(ELISA法)とCD3+CD25+FOXP3+T細胞数(マルチカラーフローサイトメトリーを用いて)を測定した。現在まで実施し得られたのは数例の検体データのみで、上記の様にApo C1と調節性Tリンパ球との関連を評価しうる程のデータの集積が得られていない。今後結果として報告できるデータを集積するため、症例の集積に努める。具体的には、対象を「ステロイド薬および免疫抑制薬の中止後半年以上経過した寛解症例」に限らず「ステロイドあるいは免疫抑制薬使用の有無に関わらず、寛解直後の全ての症例」に拡大する、研究者の本研究に対するエフォートを上げる等でH28年度はデータを上積みしていきたい。予想以上に対象となる症例数が少なかったことが原因である。これに関しては、当初設定していた対象の条件を、『ステロイド薬および免疫抑制薬の中止後半年以上経過した寛解症例』のみとしておりましたが、この範囲を『ステロイドあるいは免疫抑制薬使用の有無に関わらず、寛解直後の症例』に拡大して対象症例とする方針である。小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群(ISSNS)患者のTリンパ球プロファイリングにApolipoprotein C1(Apo C1)が与える影響を調べるため、寛解期に入った小児ISSNSの血液を採取、そこからリンパ球を分離しApo C1を添加してT細胞の培養を行った。超純水を添加したものと比較し、Apo C1を添加したものでは調節性T細胞の割合が少ない傾向にあった(中央値34.04% vs 28.89%)。いまだ症例数が少ないため、統計学的な評価は行っておらず、今後症例をさらに集積して、両群間で有意差が見られるのかを検討していく必要があるが、Apo C1に調節性T細胞を抑制する作用があるのであれば、小児ISSNSの病態解明のための重要な知見となり得る。今年度から、対象を寛解直後で副腎皮質ステロイドや免疫抑制薬を中止していない症例に拡大し増加が見られたが、いまだ十分とは言えない。さらに時間をかけて症例を集積していく。当初、研究計画通りにリンパ球の培養を行っていたが、培養結果が安定せず、TregやIL-10の測定値に大きなばらつきが生じたため、培養下ではなく、採取した血液に直接、Apo C-1を添加し、血中のTregIL-10産生の変化を観察することとした。具体的には、Apo C-

1添加前後の、Treg数(フローサイトメトリー法による評価)、IL-10値(血清IL-10濃度の測定)を測定し比較を行う。現在、改めて症例を集積中であり、Apo C-1添加にてTreg機能に変化が生じるのかを観察していく。リンパ球の培養をおこなっていく過程で、各回に大きなバラつきが生じ、結果が安定しないことから、培養下での測定を中止し、採取した血中に直接Apo C-1を添加して、Treg機能の評価を行う方法に切り替えた。これに伴い、改めて検体の収集を行う必要性が生じている。我々の先の研究で、小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群患者血中において、急性期にApolipoprotein C-1(Apo C-1)が特異的に上昇していた。また、小児特発性ネフローゼ症候群患者の急性期において、regulatory T cell(Treg)の機能異常を示す報告がされており、Tregの機能異常が小児特発性ネフローゼ症候群の病態に関連していることが示唆されている。これらのことから、Apo C-1がTreg機能に何らかの影響を与え、小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群の病態に関与している可能性を検討するために、小児特発性ステロイド感受性ネフローゼ症候群患者のリンパ球にApo C-1を加えて培養し、培養液中のTregの量的(フローサイトメトリー法による評価)・機能的(血清Il-10濃度の測定)変化の有無を確認することが本研究の目的である。当初、研究計画通りにリンパ球の培養を行っていたが、培養結果が安定せず、TregやIL-10の測定値に大きなばらつきが生じたため、培養後ではなく、採取した血液に直接、Apo C-1を添加し、その後培養下でのTregやIL-10産生の変化を観察する方針とした。しかし、これもリンパ球の培養が安定せず、評価に値するリンパ球の増殖がみられず、断念した。これに伴い、小児特発性ネフローゼ症候群の病態解明の一環として、並行して実施していた、頻回再発型ネフローゼ症候群患児に対するリツキシマブ治療前後でのTリンパ球のプロファイル変化に関する研究を進めていくこととした。これに関する成果として、リツキシマブ治療前後で、活性化T細胞の減少やT細胞のプロファイルに変化が生じていることが確認できており、現在論文投稿準備中である。現在までの進捗状況の項目でも述べた様に、適応症例の範囲を拡大していくことでデータの集積を促していく。今後は患者から分離したリンパ球の培養を行うに際し、ナイーブヘルパーT細胞を選択的に分離し培養を行う。これまでの様な分化したヘルパーT細胞を含む培養ではなく、分化前のヘルパーT細胞を用いることで、Apo C1が調節性T細胞の分化や活性化にどのような影響を与えるかを直接的に見ることができると考えた。リンパ球の培養結果が安定しないことから、培養過程を省き、採取した血液に直接Apo C-1を作用させて、Treg細胞の数およびIL-10の数値に変化がでるかを評価する。予測に比べ検体の集積数が少なく、物品費がかからなかったことが主因であると判断しております。昨年度に比べその件数は増加しているものの、いまだ十分な症例数を行えておらず、物品費が予測よりかからなかったことが原因と考えております。現状、実験が遅れており、それに伴い必要物品等の消耗品の購入を今年度行わなかったため、次年度へ繰り越すこととなりました。