hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
セルロースナノファイバー表層への分子認識機能付与とその作用機序

最終年度はセルロース産生微生物を用いた発酵ナノバクテリアセルロース(NFBC)について、表層水酸基のみを疎水性改質する目的で、アセチルエステル化を選択し、その合成条件の最適化と樹脂との複合化を検討した。実験方法はNFBCの1溶解状アセチル化と2固液不均一状アセチル化、の2つの方法を検討した。溶解状アセチル化ではNFBCを酢酸に分散させ、硫酸を触媒として無水酢酸を作用させた。NFBCを構成するグルコースに対し、0.212mol倍量と変化させ、置換度(DS)の異なる試料を調製した。固液不均一状アセチル化では溶媒としてトルエンを用い、過塩素酸触媒下で無水酢酸を反応させた。NFBC構成グルコースの1.717 mol倍量の無水酢酸を反応させ、同様に試料を調製した。得られたアセチル化NFBCの置換状態解析はFTIR、固体高分解能NMRによって行い、内部の水素結合状態をXRDによって解析した。さらにアセチル化セルロース層とセルロース層の相分離状態は固体NMR緩和測定より確認した。樹脂との混和に向けた検討として、クロロホルム中での分散状態を検討した。具体的にはクロロホルムに分散させ、その分散液をSEMによる微細構造観察により明らかとなった。以上の検討により、表層が疎水化されたナノセルロース繊維を合成可能なアセチル化条件を明らかにした。本研究ではNFBCの表層アセチル化に限定して検討を行なったが、アセチル基を他のエステル、エーテル基へ変更すれば、用途に応じたオーダーメード型のナノファイバーを合成できる。今後は樹脂との複合化とその優位性の実証を図ることで、北海道発の新規工業材料としての展開を図る。セルロースナノファイバーとして酢酸菌が生産する発酵ナノセルロースを用い、ナノファイバーの表層疎水性改質とシクロデキストリンを分子認識素子としたナノファイバー表層への分子認識能付与を検討した。表層疎水化はシリル化剤を用いて行なった。セルロースナノファイバーを凍結乾燥後、有紀溶媒に機械的に再分散させ、シリル化との反応を実施した。その結果、ナノファイバー表層水酸基の置換反応を29Siおよび13C固体NMRによって確認した。本表層改質ナノファイバーは撥水性が高く、油との親和性が高いことが明らかになった。しかし、凍結乾燥を合成過程で行なうため、有機溶媒分散性が極めて低いことが課題として残った。またシクロデキストリンを水系で架橋剤を介して不均一系でナノファイバー表層へグラフト化した結果、ゲスト分子能を付与することが可能となった。セルロースナノファイバーのナノサイズおよび超表面積効果によって、そのグラフト化率は通常のパルプを用いた場合の10倍程度に飛躍することが確認された。この場合も水との分散性が低下しており、反応プロセスの改善が必要であることがわかった。次年度は反応プロセスについて水を用いた反応性を選択し、改質効率の向上と生成物の溶媒分散性についての評価を徹底的に実施する。また生成物の構造解析、分子認識能や撥水性といった諸性能の評価、原子間力顕微鏡による分散性の評価、機能性と構造の相関性について精力的に実施することで、目標を達成する。セルロースナノファイバー表面への改質方法とその評価法について一定の成果を挙げることができた。また共同研究者とともに原料(発酵ナノセルロース)の生産性向上を図ることが可能となり、安定して合成検討を実施できる状況になった。さらに改質技術の方向性に一定の目処がつき、次年度に達成できることに確信ができるため。酢酸菌の旋回培養法によって合成したセルロースナノファイバー(CNF)を大量合成し、その分子構造、および動的ダイナミクスを固体NMR法により解析した。その結果、通常の静地培養法によって合成したセルロースと異なり、二結晶成分の存在比が逆転することを明らかになった。これはセルロース分子鎖が結晶化する過程で培養条件が影響を及ぼしていることを示唆するもので、この特異な現象を次年度明らかにする予定である。次に合成したCNFを有機化学的手法により、シクロデキストリン(CD)表層グラフト化を検討した。CNF水酸基にスペーサーとしてジエポキシ化合物を作用させ、アルカリ条件下で効率良くCNF表層のみを選択的にCDグラフト化可能であることを明らかにした。さらに水系溶媒下でのCNF表層疎水化についても検討を行なった。弱酸性水溶液にCNFを分散させ、低分子シリル化合物を加えると、酸性条件下でCNF表層水酸基のみがシリルエーテル化することを確認した。特にメチルトリメトキシシランを用いた場合にCNF表層の疎水性が増大した。これらCDグラフト化CNF、表層疎水化CNFの官能基導入量について固体NMR、FTIR等で定量し、XRDによる結晶構造解析を実施した。また分子認識能、ゲスト化合物選択性、疎水性、溶媒分散性等の各種物性評価を実施した結果、CNF表層への官能基置換制御が可能となり、同時に材料として最適な反応条件を見出すに至った。平成29年度には「CDをグラフト化したCNFの合成とその分子認識能評価」「CNFの表層疎水化法の確立」を計画していた。CDグラフト化についてはグラフト化法を見出し、CD導入量の最適化条件を明らかにすることができた。また表層疎水化についてもシリル化合物を用いて、水系で疎水化を達成でき、CNFの特徴である分散性を損なうことなく疎水化CNFを合成するに至っている。よって当初の計画どおりに研究成果が得られている。

最終年度はセルロース産生微生物を用いた発酵ナノバクテリアセルロース(NFBC)について、表層水酸基のみを疎水性改質する目的で、アセチルエステル化を選択し、その合成条件の最適化と樹脂との複合化を検討した。実験方法はNFBCの1溶解状アセチル化と2固液不均一状アセチル化、の2つの方法を検討した。溶解状アセチル化ではNFBCを酢酸に分散させ、硫酸を触媒として無水酢酸を作用させた。NFBCを構成するグルコースに対し、0.212mol倍量と変化させ、置換度(DS)の異なる試料を調製した。固液不均一状アセチル化では溶媒としてトルエンを用い、過塩素酸触媒下で無水酢酸を反応させた。NFBC構成グルコースの1.717 mol倍量の無水酢酸を反応させ、同様に試料を調製した。得られたアセチル化NFBCの置換状態解析はFTIR、固体高分解能NMRによって行い、内部の水素結合状態をXRDによって解析した。さらにアセチル化セルロース層とセルロース層の相分離状態は固体NMR緩和測定より確認した。樹脂との混和に向けた検討として、クロロホルム中での分散状態を検討した。具体的にはクロロホルムに分散させ、その分散液をSEMによる微細構造観察により明らかとなった。以上の検討により、表層が疎水化されたナノセルロース繊維を合成可能なアセチル化条件を明らかにした。本研究ではNFBCの表層アセチル化に限定して検討を行なったが、アセチル基を他のエステル、エーテル基へ変更すれば、用途に応じたオーダーメード型のナノファイバーを合成できる。今後は樹脂との複合化とその優位性の実証を図ることで、北海道発の新規工業材料としての展開を図る。次年度は昨年度実施したナノファイバー表層改質法を再検討を行う。主に1)表層シリル化、2)シクロデキストリングラフト化を行う。1)については水系での反応を検討し、生成したナノファイバーの溶媒中での分散性をAFMを用いて解明する。2)については、反応速度論解析を実施するととも、ゲスト分子の認識および徐放性評価、固体NMRによる動的ダイナミクス評価を行ない、当初の目標を達成する。最終年度であるH30年度は計画どおり、CNFの自己組織化について検討を実施する。また酢酸菌CNFについては通気攪拌培養を適用すると結晶構造に大きな違いが見られた。この発見はセルロース生合成における結晶成長に関して新たな知見をもたらす可能性を持ち、並行してCNF培養条件と結晶成長について検討を実施していきたい。
網膜剥離の視細胞死におけるFasリガンドの役割と神経保護

網膜剥離は裂孔原性網膜剥離や糖尿病網膜症、加齢黄斑変性など様々な疾患でみられる。治療によって網膜が復位しても、剥離期間中に起こる視細胞死により恒久的な視力低下が起こる。このため、剥離網膜における視細胞死の抑制が重要である。本研究では、Fasリガンドの遺伝子改変マウスに網膜剥離を作製することによって、剥離網膜における視細胞死にFasリガンドが関与することを証明した。また、可溶型Fasリガンドが剥離網膜における視細胞死を抑制することも明らかにした。これらの結果から、Fasリガンドは剥離網膜における細胞死抑制の治療標的になりえると考えた。網膜剥離は裂孔原性網膜剥離や加齢黄斑変性、糖尿病網膜症など様々な疾患でみられる。治療によって網膜が復位しても、剥離期間中に起こる視細胞死により視力が低下する。これまでの研究で、剥離網膜の視細胞死とFas-Fasリガンドの関与が報告されている。本研究では、研究代表者らが報告したマウス網膜剥離モデルを用いて、Fasリガンド遺伝子欠損・改変マウスに網膜剥離を作製し、網膜剥離におけるFasリガンドの役割について検討した。また、剥離網膜における視細胞保護のために、Fasシグナルを抑制する新たな治療の開発を試みた。本研究では、Fasl-/-マウスとΔCSマウスを用いて実験を行った。ΔCSマウスでは、野生型マウスよりもFasシグナルが強く入ると考えられている。Fasl-/-マウスとΔCSマウスに網膜剥離を作製し、剥離網膜における視細胞死の量を評価した。Fasl-/-マウスでは野生型マウスと比較して有意に視細胞死が少なく、ΔCSマウスでは有意に多いことを確認した。また、剥離網膜内で上昇すると報告されている炎症性サイトカインを測定した。視細胞死と同様に、Fasl-/-マウスでは野生型マウスと比較して有意に炎症性サイトカインの発現が少なく、ΔCSマウスでは有意に多いことを確認した。これらの結果は、Fasシグナルが網膜剥離における視細胞死に関与していることを意味する。次に、可溶型Fasリガンドの神経保護作用について検討した。ΔCSマウスに網膜剥離を作製する際に、リコンビナント可溶型Fasリガンドを網膜下に注入して剥離網膜における視細胞死を評価したところ、コントロール群と比較して有意に視細胞死が抑制された。可溶型Fasリガンドが膜結合型Fasリガンドのアンタゴニストとして機能し、Fasシグナルが抑制されたと考えられた。申請者が開発した再現性の高いマウス網膜剥離モデルを用いて研究を行ったため、効率的に実験を進めることができた。本研究で得られた結果の一部を2015年の日本眼科学会総会(札幌)で発表し、論文をCell Death and Disease (2015) 6, e1986; doi:10.1038/cddis.2015.334に報告した。これまでの研究の進捗状況に関しては満足いくものである。網膜剥離は裂孔原性網膜剥離や糖尿病網膜症など様々な疾患でみられる。このため、剥離網膜の視細胞死の抑制が重要である。Fasリガンド(膜貫通型タンパク)は、Fasに結合することによって細胞にアポトーシスを誘導するデス因子である。Fasに結合した膜結合型Fasリガンドは、メタロプロテアーゼによって切断され可溶型となる。可溶型Fasリガンドのアポトーシス誘導能は非常に低く、膜結合型Fasリガンドのアンタゴニストとしての働きも示唆されている。本研究では、研究代表者らが報告したマウス網膜剥離モデルを用いて、網膜剥離におけるFasリガンドの役割について検討した。また、剥離網膜における視細胞保護のために、Fasシグナルを抑制する新たな治療法の開発を試みた。Fasl-/-マウスとΔCSマウスを用いて実験を行った。ΔCSマウスは、Fasリガンドのメタロプロテアーゼ切断部位に遺伝子変異があるため、野生型マウスよりもFasシグナルが強く入ると考えられている。Fasl-/-マウスとΔCSマウスに網膜剥離を作製し、剥離網膜における視細胞死と炎症性サイトカインの発現を評価した。その結果、視細胞死と炎症性サイトカインの発現ともに、野生型マウスと比較して、Fasl-/-マウスでは有意に少なく、ΔCSマウスでは有意に多かった。また、ΔCSマウス眼に網膜剥離を作製する際に、リコンビナントマウス可溶型Fasリガンドを網膜下に注入して網膜剥離後の視細胞死を評価したところ、コントロール群と比較して有意に視細胞死が抑制された。これらのことから、Fasリガンドは剥離網膜における視細胞死に関与し、視細胞死抑制の治療標的になりえると考えられた。

また、可溶型Fasリガンドが剥離網膜における視細胞死を抑制することも明らかにした。これらの結果から、Fasリガンドは剥離網膜における細胞死抑制の治療標的になりえると考えた。剥離網膜における視細胞死のデスシグナルは、未だ完全には解明されていない。Fasの活性化に伴い、細胞内のカスパーゼ8、続いてカスパーゼ3が活性化され細胞死が起こることが知られている。本研究では、マウス剥離網膜を用いて活性型カスパーゼ8と3の発現量をWestern blotにより評価し、網膜剥離における視細胞死においてもカスパーゼカスケードが関与しているかを明らかにしていく。また、可溶型Fasリガンドで視細胞死を抑制した場合に、活性型カスパーゼ8と3が減少することも確認していく。医歯薬学申請者が開発した再現性の高いマウス網膜剥離モデルを用いて研究を行ったため、効率的に実験を進めることができた。このため、実験動物や物品が当初予定していたよりも少なく済んだ。また、学会参加のための旅費や英文校正費を今回は計上しなかった。これらの理由で実支出額が請求した金額よりも少なくなり、次年度使用額となった。網膜剥離の視細胞死におけるデスシグナルの解明のために、引き続き動物実験を行う必要がある。また、本研究で得られた成果を海外学会で発表したいと考えている。助成金はこれらの費用にあてる予定である。
児童の肥満予防に効果的な臨床看護師による健康教育プログラムの開発

子どものライフスタイルや健康は,子どもの健全な発育・発達にとって不可欠なものであり,子どもを取り巻く環境と家庭・地域,学校などのあり方に強く影響されている.現代の子どもの遊び場は激減し,ゲーム機に代表される室内遊びの増加,体力・運動能力の低下もみられ,子どものライフスタイルと健康に大きな影響を与えている.これら現代の健康課題を解決していくために,ヘルスプロモーションの理念を踏まえ,研究者の先行研究から得られた知見をもとに,平成29年度は地域調査と調査用紙の開発を行った.本研究はTranslational Researchの手法を取り入れ,step1として,全国(青森,神奈川,京都,愛媛,宮崎)の小学性を対象に調査する調査用紙の開発を行った.身体状況や生活習慣(運動,栄養,睡眠等)の他,肥満に影響する要因として,“子どものQOL「日本語版KINDL(古荘編,2014)",“自己肯定感(自尊感情尺度東京都版2011)",“ボディイメージ(児童・保護者)",“家族機能(中村)"を調査用紙に取り入れた.また,調査前の準備として地域調査を行い,これら調査項目の洗練化を図った.2017年度は2018年度調査の準備として,各地域の看護系大学の小児看護学教授等に研究協力者として協力を得、また各地域の教育委員会や小学校の協力も得て,調査対象の小学校を決定した.2018年度は、研究協力が得られた小学校である青森県1校,埼玉県1校,京都府1校,愛媛県1校,宮崎県2校、計小学校6校から約800名からのデータを得、分析に着手した。わが国の生活習慣病を減少するためには,子どもの健康に影響する要因を探索し,地域ごとの子どもの生活習慣の実態を踏まえた健康教育が必要である.本研究では健康教育プログラム開発の基礎的資料とするために,青森県,埼玉県,京都府,愛媛県,宮崎県にある小学校に在籍している児童の体格や生活習慣(運動,栄養,睡眠等)の他,肥満に影響する要因として,“子どものQOL「日本語版KINDL(古荘編,2014)",“自己肯定感(自尊感情尺度東京都版2011)",“ボディイメージ(児童・保護者)",“家族機能(中村)"を調査し,実態を明らかにしつつある.現在分析をすすめており,6校中4校の小学生の身体活動量の実態については2019年度の小児保健学術集会に発表予定である。その結果として,2日間ともWHOが推奨する中等度以上の運動を60分間以上行っていたのは平約20%強,休日約1%であった.性別では男子の平日の歩数と運動量,活動時間が女子より有意に多かったが,地域によっては女子の活動時間が増えており,その理由としてダンスなどの学習プログラムとの関連性が推測された.睡眠時間や起床時刻,就寝時刻,テレビ視聴時間,ゲーム時間および身体活動量すべてにおいて平日と休日との有意差が認められ,平日の身体活動量が多かった.休日の起床時刻と就寝時刻は遅く,テレビ視聴時間,ゲーム時間も有意に多かった.とりわけ,休日の活動量が少なく,スクリーンタイムが長いことから,特に休日の非活動時の過ごし方について介入が必要なことが考えられた.さらに,歩数が多い場合であっても活動強度が中等度以上の活動が少ないことから,運動としての身体活動量には至っていないことが伺われた.筋力や持久力を高めるための運動習慣を促す健康教育が必要であることが示唆されている.2018年度に調査したデータを分析を行っていく.全国(青森,埼玉,京都,愛媛,宮崎)5地域において調査を行ったその結果から,各地域共通の標準的な活動量等の基準を明らかにする.また,子どもの現状を地域ごと,男女児間で比較する,あるいは親の考え方などの子どもに与える影響を明らかにすることにより,地域の特徴を明らかにする(step3).その後,わが国の子どもたちに一般化できる構造方程式モデリング手法を用いた保健行動モデルを構築する.それらを反映して,臨床の場で実践でき,かつ生活習慣に特化した簡便な健康教育方法を構築するための教育方法の準備を行い,わが国の子どもたちに一般化できる児童の保健行動教育方法を構築する(step4)予定である.子どものライフスタイルや健康は,子どもの健全な発育・発達にとって不可欠なものであるが,子どもを取り巻く環境と家庭・地域,学校などのあり方に強く影響されている.現代の子どもの遊び場は激減し,ゲーム機に代表される室内遊びの増加,体力・運動能力の低下もみられ,子どものライフスタイルと健康に大きな影響を与えている.これら現代の健康課題を解決していくために,ヘルスプロモーションの理念を踏まえ,研究者の先行研究から得られた知見をもとに,平成29年度は地域調査と調査用紙の開発を行った.Translational Researchの手法を取り入れ,step1として,全国(青森,神奈川,京都,愛媛,宮崎)の小学性を対象に調査する調査用紙の開発を行った.身体状況や生活習慣(運動,栄養,睡眠等)の他,肥満に影響する要因として,“子どものQOL「日本語版KINDL(古荘編,2014)",“自己肯定感(自尊感情尺度東京都版2011)",“ボディイメージ(児童・保護者)",“家族機能(中村)"を調査用紙に取り入れた.また,調査前の準備として地域調査を行い,これら調査項目の洗練化を図った.

2018年度調査の準備として,各地域の教育委員会や小学校の協力が必要不可欠であり,まずはその地域の看護系大学の小児看護学教授等に研究協力者として協力を得,調査対象の小学校を決定した.2018年度の学校行事が決定する2018年1月から3月に研究協力依頼を行い,2018年4月からの研究計画スケジュールをたて,大学の研究倫理委員会に倫理審査を依頼した.平成29年度の予定である地域調査とTranslational Researchの手法を取り入れたstep1として,全国(青森,神奈川,京都,愛媛,宮崎)の小学性を対象に調査する調査用紙の開発を行った.身体状況や生活習慣(運動,栄養,睡眠等)の他,肥満に影響する要因として,“子どものQOL「日本語版KINDL(古荘編,2014)",“自己肯定感(自尊感情尺度東京都版2011)",“ボディイメージ(児童・保護者)",“家族機能(中村)"を調査用紙に取り入れ,各尺度の使用許可も得ている.また,調査前の準備として地域調査を行い,これら調査用紙の調査項目の洗練化も図っている.2018年度調査の準備として,各地域の教育委員会や小学校の協力が必要不可欠であり,まずはその地域の看護系大学の小児看護学教授等に研究協力者として協力を得,調査対象の小学校を決定した.2018年度の学校行事が決定する2018年1月から3月に研究協力依頼を行い,2018年4月からの研究計画スケジュールをたて,大学の研究倫理委員会に倫理審査を依頼し,調査実施の準備ができている.子どものライフスタイルや健康は,子どもの健全な発育・発達にとって不可欠なものであり,子どもを取り巻く環境と家庭・地域,学校などのあり方に強く影響されている.現代の子どもの遊び場は激減し,ゲーム機に代表される室内遊びの増加,体力・運動能力の低下もみられ,子どものライフスタイルと健康に大きな影響を与えている.これら現代の健康課題を解決していくために,ヘルスプロモーションの理念を踏まえ,研究者の先行研究から得られた知見をもとに,平成29年度は地域調査と調査用紙の開発を行った.本研究はTranslational Researchの手法を取り入れ,step1として,全国(青森,神奈川,京都,愛媛,宮崎)の小学性を対象に調査する調査用紙の開発を行った.身体状況や生活習慣(運動,栄養,睡眠等)の他,肥満に影響する要因として,“子どものQOL「日本語版KINDL(古荘編,2014)",“自己肯定感(自尊感情尺度東京都版2011)",“ボディイメージ(児童・保護者)",“家族機能(中村)"を調査用紙に取り入れた.また,調査前の準備として地域調査を行い,これら調査項目の洗練化を図った.2017年度は2018年度調査の準備として,各地域の看護系大学の小児看護学教授等に研究協力者として協力を得、また各地域の教育委員会や小学校の協力も得て,調査対象の小学校を決定した.2018年度は、研究協力が得られた小学校である青森県1校,埼玉県1校,京都府1校,愛媛県1校,宮崎県2校、計小学校6校から約800名からのデータを得、分析に着手した。わが国の生活習慣病を減少するためには,子どもの健康に影響する要因を探索し,地域ごとの子どもの生活習慣の実態を踏まえた健康教育が必要である.本研究では健康教育プログラム開発の基礎的資料とするために,青森県,埼玉県,京都府,愛媛県,宮崎県にある小学校に在籍している児童の体格や生活習慣(運動,栄養,睡眠等)の他,肥満に影響する要因として,“子どものQOL「日本語版KINDL(古荘編,2014)",“自己肯定感(自尊感情尺度東京都版2011)",“ボディイメージ(児童・保護者)
腎保護物質の探索

腎機能障害と交感神経系の亢進が相関すること、腎機能障害患者の生存率と血中ノルアドレナリン濃度とは逆相関すること、抹消循環におけるカテコールアミンの代謝は特に腎機能障害患者ではカテコールアミンO-メチル転移酵素(COMT)が司ること、そして、腎機能障害時にはCOMT活性が低下することなどから、COMT活性を向上させることは腎保護作用に結びつくと考えられた。そこで活性化物質の探索を企画し、そのための物質探索系(アッセイ系)の構築と少数の化合物のスクリーニングを実施したところ、化合物濃度10μMにおいて、酵素反応生成物の量を10%程度向上させる化合物を複数みいだした。組換えCOMTの取得:ヒトのCOMTcDNAが含まれるプラスミドで形質転換された大腸菌(FL1002cloneid=3503220, Invitrogen社)を購入し、プラスミドDNAを常法により精製した。このDNAから、合成した順方向プライマーならび逆方向プライマーを使用したPCRにより、COMT遺伝子を含む断片を増幅した。アガロース電気泳動により精製した断片を、BamH1, EcoR1で消化し、Gluthathion S-transferase (GST)融合タンパク質として発現させるために、pGEX-2Tプラスミド(GE Healthcare社)に組み込み、発現ベクターpGEX/COMTを得た。DNAの組み込みは核酸配列分析により確認した。この大腸菌を通常のLB培地で培養し、波長600nmに対する濁度が0.4に達した時点でIPTGを添加して、GST融合タンパク質としてCOMTを発現させた。Gluthathioneアフィニティカラムで精製し、SDS電気泳動では高度に精製されていることを確認した。活性測定系:高速液体クロマトグラフィーの立ち上げを実施した。イオン交換によるカテコールアミンの濃縮、濃縮したアミンのカウンターイオン法による逆相クロマト分離、カテコールのインライン反応による蛍光誘導体化に成功した。0-メチル化体の電気化学酸化による脱メチル化に取り組んでいる。ヒトCOMTをグルタチオンS-転位酵素(GST)の融合タンパク質としてCOMT(可溶型S-COMT)を発現させた。培養1mLあたり6μgのCOMTを得た。組換えCOMTの酵素学的パラメーターはノルアドレナリン(NE)に対するKm:160μM,S-アデノシルメチオニン(SAMe)に対するKm:70-170μMであった。阻害剤である3,5-ジニトロカテコールのKi値:2nM,IC50値:30-60nMであった。組換えS-COMTはヒト赤血球や肝臓のS-COMTと同等性を有するものと判断できた。酵素反応アッセイはCOMT反応生成物であるメタネフリン(NMN)をイオン交換-イオン対逆相HPLCで分離し、電気酸化後にエチレンジアミンと反応させ生じるキノキザリンを蛍光により定量した。COMTに関しては既知の活性化物質は知られていないため、活性化物質を検出する条件も未知であった。実際に小規模の化合物のスクリーンングを、NE濃度とSAMe濃度を変化させて実施した。被検化合物(濃度1-10μM)が共存する場合と化合物の無い場合でのNMN生成量を比較して活性化を調べた。二個の化合物に10%程度の生成物増加を認めた。この化合物を利用して、さらに活性化を検出しやすくする条件を調べたところ、SAMeの濃度をKm程度(100μM)に下げることが有効であった。NEの濃度には依存性は小さかった。このことから、活性化物質はSAMeまたはSAHとCOMTの結合あるいは解離に影響を与えている可能性が示唆された。COMTの代謝回転数は数回/秒と小さいが、その理由がCOMTの反応機構(ping-pong Bi-Bi機構:SAMe in-NE in-NMN out-SAH out)におけるSAH(S-アデノシルホモシステイン)が酵素に対して持つ強い親和性によることとよく対応すると考えられる。
体外肝切除術における一時的異所性体外肝移植の影響に関する研究

今回は、体外肝切除に向けての基礎的な知識を広げるとともに、具体的な手術のシュミレーションについて検討した。今後、大動物を使って体外肝切除の手術手技の詳細を詰めるとともに、手技的改良を加えていく。また、肝摘出後の無肝期が生体に及ぼす影響について、さらに検討する。一方で、Back tableでの操作は、無肝期が許す限り長時間の方がよい。しかし、実際に、本術式が適応となる可能性が最も高い肝細胞癌では、肝硬変症を合併していることが多く、この場合、術前の肝障害の程度と保存時間の関係が問題となってくる。この点については、ラットを用いて四塩化炭素投与による肝硬変を作成し、その肝障害の程度と保存時間について検討する。これにより、肝硬変症を合併した肝細胞癌に対しても、より安全な体外肝切除が可能になると考えられる。また、長時間の無肝期に耐えれない症例に対しては、一時的異所性体外肝移植のサポートによる耐術を検討する。本術式が外科手術にもたらす恩恵には計り知れないものがあり、将来的には、当施設でも臨床例において、従来の外科的手術では不可能でありかつ肝移植の適応とはならないような転移性肝癌や肝細胞癌に対して、安全に体外肝切除ができるように準備を進めていくつもりである。
真核細胞鞭毛における屈曲生成の分子機構に関する研究

本研究は、真核細胞鞭毛の屈曲生成の分子機構の研究から、生体運動の本質にかかわる重要な知見を得ることを目的として行われた。バフンウニ・アカウニ・イトマキヒトデの精子の屈曲波形を高分解能写真記録し、ディジタル画像処理によって解析した。その結果、鞭毛の屈曲波形は、鞭毛基部からの距離に対する曲率のグラフで表すと、複数の曲率変化の少ない部域(局所的円弧)が変化の速い部域(遷移部域)でつながっているステップワイズなものであることが分かった。本研究では、空間分解能を重視し超微粒子のフィルムを用いたが、このために写真感度が低く特別に高輝度のストロボ照明を利用したために、毎秒5駒までの撮影頻度にとどまった。一方、鞭毛打の頻度は毎秒40Hzであったので、屈曲波形の時間変化を直接解析することはできなかった。そこで、一匹の精子について百数十の屈曲波形をランダムにサンプリングして解析し、屈曲波形生成の動的過程を推定した。鞭毛のある部域が上に述べた局所的円弧の屈曲形をとるとき、その部位は内部的に準安定の状態にあると仮定し、この準安定な状態に対応する曲率値の負荷依存性を解析するために、自由遊泳の精子と頭部を固定し鞭毛を自由に運動させている精子の屈曲波形を比較解析した。これらの解析の結果、次のことが明かとなった。(1)準安定な状態の長さ、出現の有無には変動がある。(2)準安定な状態に対応する曲率の値は、個体間で一致している。(3)頭部が固定されたものでは曲率の振幅が増大するが、これにともなって自由遊泳のものに特有の準安定曲率の他に、新たな準安定状態に対応するより大きな曲率の値が観測されるようになる。以上のことから、鞭毛の屈曲は、複数の構造的に準安定な状態(エネルギーの低い状態)の態動的遷移によって形成されることが示唆される。
抗酸化ストレスに関連した遺伝子多型と大腸発がん

酸化ストレスはDNA損傷に起因する遺伝子変異を惹起し、発がんに関与している。酸化ストレスの大腸発がんへの影響を明らかにする目的で、生体内酸化ストレス消去酵素であるスーパーオキシドディスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオンペルオキシターゼの機能的遺伝子多型と大腸腺腫および大腸がんリスクとの関連を検討した。これらの多型と大腸腺腫リスクとの関連はみられなかった。一方、カタラーゼの機能的遺伝子多型CAT-262C>TのTアレルを有する者において、統計学的に有意な大腸がんリスクの減少がみられた。酸化ストレスは、DNA損傷に起因する遺伝子変異を惹起し、発がんに重要な役割を果たしている。生体内には、スーパーオキシドディスムターゼ(SOD)、カタラーゼ(CAT)、グルタチオンペルオキシターゼ(GPX)等の、酸化ストレスを消去する抗酸化システムに関わる酵素や蛋白が存在する。本研究では、酸化ストレスの大腸発がんへの影響を明らかにする目的で、抗酸化ストレス関連遺伝子の機能的遺伝子多型と大腸前がん病変である大腸腺腫との関連を検討した。本研究はDNA試料及び調査資料が整備されている自衛官研究データベース(研究責任者:九州大学大学院医学研究院・古野純典)を活用したものである。研究対象者は、1997年1月から2001年3月の期間に福岡または熊本の自衛隊病院において定年退職前健康診断を受けた男性自衛官である。解析対象は組織学的に大腸腺腫と診断された大腸腺腫症例445名と全大腸内視鏡検査でポリープ病変を認めなかった対照1052名である。機能的多型であるMnSOD 47T>C(rs4880)とCAT-262C>T(rs1001179)、及び大腸腺腫との関連が報告されているGPX1 594C>T(rs1050450)について多型解析を行った。各多型の遺伝子型はPCR-RFLP法によって決定した。遺伝子多型と大腸線種との関連はオッズ比により検討し、多重ロジスティック解析により関連要因の調整を行った。3つの遺伝子多型はいずれも大腸腺腫との明らかな関連を示さなかった。統計学的に有意ではなかったが、MnSODのTアレルを有する者で大腸腺腫リスクの低下傾向がみられた。大腸腺腫の大きさ別の検討、MnSODとGPX1及びMnSODとCATとの交互作用の検討も行ったが、注目すべき関連あるいは交互作用はみられなかった。本研究では、酸化ストレスの大腸発がんへの影響を明らかにする目的で、抗酸化ストレス関連酵素遺伝子の機能的遺伝子多型と大腸がんとの関連を検討した。本研究はDNA試料及び調査資料が整備されている大腸がん症例対照研究データベース(研究責任者:九州大学大学院医学研究院・古野純典)を活用したものである。研究対象者は、症例群が福岡市と近郊3地域に在住する大腸がん患者685名、対照群が大腸がんあるいは大腸切除術の既往のない地域住民778名である。機能的遺伝子多型であるMnSOD 47T>C (rs4880)とCAT-262C>T(rs1001179)、及び大腸がんの前がん病変である大腸腺腫との関連が報告されているGPX1 594C>T(rs1050450)について多型解析を行った。遺伝子多型と大腸がんとの関連はオッズ比により検討し、多重ロジスティック解析により関連要因の調整を行った。CATのTアレルを有する者において統計学的に有意な大腸がんリスクの減少がみられた。この傾向は男性において顕著であり、女性においては、リスクの減少傾向はみられたが統計学的に有意ではなかった。さらに、CATとMnSOD及びCATとGPX1との交互作用の検討を行ったところ、女性において統計学的に有意なCATとMnSODとの交互作用がみられた。
胎盤における母体環境ストレス緩和初動因子の機能発現制御

胎盤は母体および胎児間の物質輸送を担う臓器であるが、母体における循環血中の成分変動の影響を緩和し、安定的に機能する作用をもつ。胎盤において、胎児が必要とするアミノ酸の一部はシステムAと呼ばれるアミノ酸輸送機構を介して母体から胎児に供給される。本研究では、このアミノ酸輸送システムAの一部の分子は、母体循環血成分の変動に対し速やかに反応し、特に高い浸透圧ストレス負荷時には他の機能分子に先駆けて発現が増加すること、およびその発現変動機構の一部を明らかにした。胎盤は母体の浸透圧変動による胎児への影響を緩和するために浸透圧調節因子群の発現を変動させる能力を持つ。ラットにおいて循環血での浸透圧変動に応答する胎盤での浸透圧調節因子の発現変動を解析した。中性アミノ酸輸送担体であるSNAT2の発現は上昇し、胎児胎盤系の保護に寄与すると考えられる。このSNAT2の胎盤における発現変動は、胎児発育不全時に観察される現象であり、母体環境が胎盤での遺伝子発現変動と胎児発育に与える影響として重要である。胎盤の培養細胞においても同様に、SNAT2の発現誘導機構を解析した。SNAT2のmRNAの変動は、ゲノムDNAからの転写速度よりもmRNAの分解速度調節に基づくとの我々の知見により、mRNA分解速度調節機構の解明に取り組んでいる。mRNA分解を促進するマイクロRNA(miRNA)との結合に着目し、miRNAが主に結合するとされるmRNAの下流域である3'UTR(Untranslated region)領域の安定性を検討した。SNAT2 mRNAの3'UTRは約2.7kbaseの塩基鎖長があるが、実験的スクリーニングによりこのうち150base程度に領域を絞り込むことに成功した。以上の研究成果の一部は既に学会等により報告している。今後はmiRNAを同定することが目標になる。miRNAの同定は母体の血液の分析により、胎盤機能の分析が可能になる手法の開発に繋がるため、従来には区別が困難であった胎児発育不全の発症機構に基づく診断や予測に応用可能である。当初の目的としているSNAT2の発現変動機構のうち、関与する分子機構が推定が進み、同定に近づいている。ヒトおよびラットのSNAT2の転写領域の活性評価により、胎盤の細胞で転写活性を示す転写調節領域がわかった。またこの転写調節領域は浸透圧への感受性が低いことも示された。一方で、SNAT2 mRNAの分解速度評価により、SNAT2 mRNAは高浸透圧条件下で、比較的特異性をもって分解速度が下がることが示された。また実験動物を用いてSNAT2のin vivoでの発現変動も観察されたので、本研究の基本的概念の重要性も検証できた。本年度の目標としていた計画の大部分は達成された。胎盤細胞は浸透圧ストレスに対し、ストレス負荷直後から細胞を保護する機構を有する。その調節分子として着目しているアミノ酸輸送システムAのSNAT2は、mRNAの急速な発現変動がmiRNAによる分解速度調節である可能性が高い。これまでに、ラット胎盤細胞においてSNAT2 mRNAの3'UTR領域2.7千塩基のうち、どの部分が浸透圧感受性の領域であるかを検討した。領域推定のため、SNAT2 mRNAの3'UTR領域をクローニングしたのち、部分配列をルシフェラーゼベクターに導入することにより、ルシフェラーゼアッセイによって、SNAT2発現調節に関与する領域推定できるよう実験系を構築した。その結果、これまでにSNAT2の分解に関わる領域として約150塩基の領域を推定済みである。今年度はさらに、その領域が等張条件と比較して、高浸透圧条件において、発現上昇に関わることを見出した。したがって、これまでに推定された領域が高浸透圧時において、SNAT2の発現上昇に関与する領域である可能性を、複数の実験結果が支持している。この配列情報を基に、関与するmiRNAのスクリーニングをデータベース検索により行った。さらに、2次スクリーニングとして、高浸透圧負荷試験より得られている網羅的miRNA発現変動の結果のうち、1.5倍の発現変動が観察されているmiRNAを選別し、1次スクリーニングを重複したmiRNAを選定した。結果として、約10種のmiRNA候補の選別に至った。現在は、これら候補miRNAの関与を実験にて直接的に評価している途中である。本年度はSNAT2の発現調節に関与するmRNA上の領域の推定結果の確認のための実験を行い、多方面からの実験を追加したため、miRNA同定解析は少し遅れている。アミノ酸の中でも中性で分子量が比較的小さいアミノ酸の体内における動態を決定する機構としてシステムAアミノ輸送システムがある。システムAは、3つの遺伝子で構成されSNAT1,2,4が存在する。なかでもSNAT2はSNAT1,4にない特徴として、浸透圧調節物質を輸送したり、細胞外の浸透圧変動に対するセンサーとしての役割がある。胎盤におけるSNAT2発現量は胎児発育不全において減少することから、胎児成長に重要な因子であるとも考えられている。SNAT2の発現量は浸透圧に感受性があることから、我々は胎盤における浸透圧感受性発現機構解析を行っている。当該研究課題においてはSNAT2の胎盤細胞における浸透圧調節にかかわるmRNAの3'UTR上の領域の推定を行った。3'UTR上の後半領域に約150bpの浸透圧感受性領域を推定した。当該領域の配列および、浸透圧負荷時におけるmiRNA発現変動から、SNAT2の発現量調節に関与するmiRNAを推定した。SNAT2の高浸透圧時における発現誘導に対し、関与を推定したmiRNAを導入することによる影響を評価した。導入したmiRNAのSNAT

2の発現量に対する影響は観察されなかった。ただし、導入したmiRNAの細胞質内への移行および文献上報告されている標的mRNAへの影響も観察されておらず、現在のところ導入したmiRNAがSNAT2の発現に対する影響がないのか、導入効率が低いのかの区別はついていない。また、妊娠ラットにおいて腹腔内浸透圧負荷による羊水過少誘導において、胎盤内SNAT2および他の浸透圧感受性遺伝子の発現変動を観察したところ、TonEBPにより制御される緩速浸透圧制御遺伝子の一部の発現変動は観察されたものの、SNAT2の誘導は観察されず、さらなる条件の最適化が必要であることがわかった。以上より、本研究において、SNAT2の発現量調節に関わる遺伝子配列上の部位の推定がなされた。胎盤は母体および胎児間の物質輸送を担う臓器であるが、母体における循環血中の成分変動の影響を緩和し、安定的に機能する作用をもつ。胎盤において、胎児が必要とするアミノ酸の一部はシステムAと呼ばれるアミノ酸輸送機構を介して母体から胎児に供給される。本研究では、このアミノ酸輸送システムAの一部の分子は、母体循環血成分の変動に対し速やかに反応し、特に高い浸透圧ストレス負荷時には他の機能分子に先駆けて発現が増加すること、およびその発現変動機構の一部を明らかにした。計画通りにSNAT2の発現変動因子の同定を目標に進める。因子同定後はどの程度の精度で血液からの変動因子の検出が可能であるか、また実験動物とヒトとの種差があるかを検証する必要がある。昨年度までに実験結果の確認作業を慎重に追加してきたが、確認すべき事項は大部分解消された。今年度は順調に遂行できる予定である。生物薬剤学計画が比較的順調に進んだため、必要以上の経費がかかることはなかった。一方、研究推進の都合上、一部の比較的費用がかかる研究計画が結果的に次年度以降になった。国際学会にも参加したが、航空運賃が安くなるように航空便を確保したため、経費が抑制できた。研究の方向性は当初の想定通りに進んでいる。データベース解析に当初予定より時間がかかったため、実験消耗品の注文が次年度になるものが多く生じた。計画の前半が比較的経費を抑えて遂行できたため、計画の中後半に重点的に費用を配分することができる。また、費用がかかる研究計画に取りかかるため、今年度以降で特に物品費を使用する予定である。時期が次年度使用にはなったが、当初予定の通り使用する計画で、次の年度が最終年度であるが、およそ計画通りに遂行できる見込みである。
戦前と戦後を「分断」から「連続」としてとらえ直す日本の中国語教育史の新たな研究

【書籍等出版物】『東亜同文書院の教育に関する多面的研究』(愛知大学東亜同文書院大学記念センター叢書、不二出版、2019年3月)は東亜同文書院の教育活動とそこに学んだ学生や卒業生の行動を通して、その展開を明らかにしようとした。【研究ノート】「荒川清秀先生に聞--中国語との出会いから愛知大学へ」(『同文書院記念報』Vol. 27、45-54頁、2019年3月)は愛知大学の中国語教育活動の変化を明らかにするために行った聞き取り調査の記録である。「愛知大学の歴史についての講義--2018年度の大学史教育の取り組みについて」(同56-62頁)で扱った講義内容には東亜同文書院の中国語教育が含まれている。「上海の東亜同文書院とその歴史マップ」(同103-114頁)は同名の講演記録を整理したものである。【口頭発表】「日清貿易研究所と東亜同文書院の連続性について--東亜同文書院院長根津一発奉天軍政署小山秋作中佐宛書信から」(ワークショップ「日清貿易研究所から東亜同文書院へ」愛知大学東亜同文書院大学記念センター、2019年3月16日、愛知大学豊橋キャンパス)は東亜同文書院生の中国語講義の成績と進路について報告した。「上海の東亜同文書院とその歴史マップ」(講演会「上海と東亜同文書院大学・愛知大学」愛知大学東亜同文書院大学記念センター、2018年7月1日、岡崎市立図書館交流プラザりぶら)は、東亜同文書院の中国語教材の出版を行っていた蘆澤印刷所についての現地調査の結果を含む。【現地調査】北京国家図書館において東亜同文書院関係の資料調査を行い、一部が閲覧不可能であること、同窓会誌は旧東亜同文書院所蔵でないことを確認した(2019年3月17-20日)。「満洲国」文学研究会定例研究会(2018年12月22日)、荒尾精追悼式(同9月23日)に参加して関係者と研究上の交流を進めた。平成30年度は、東亜同文書院の中国語教育活動の実態を明らかにする内容を含む単著『東亜同文書院の教育に関する多面的研究』(愛知大学東亜同文書院大学記念センター叢書、不二出版、2019年3月)を刊行し、東亜同文書院大学の後身である愛知大学における中国語教育の変遷に注目した聞き取り調査の成果を「荒川清秀先生に聞く--中国語との出会いから愛知大学へ」(『同文書院記念報』Vol. 27、45-54頁、2019年3月)として発表し、さらに研究成果を教育にフィードバックしたことについて「愛知大学の歴史についての講義--2018年度の大学史教育の取り組みについて」(同56-62頁)をまとめた。さらに東亜同文書院の中国語教材の出版を行っていた蘆澤印刷所についての現地調査を内容に含む2018年7月1日の講演会の記録を「上海の東亜同文書院とその歴史マップ」(同103-114頁)に整理し、2019年3月16日のワークショップでは中国語教育の成果の延長にあるキャリア形成について「日清貿易研究所と東亜同文書院の連続性について--東亜同文書院院長根津一発奉天軍政署小山秋作中佐宛書信から」として口頭発表した。ほかに北京での資料調査を実施したり、国内の関連研究会や集会に参加して関係者と研究上の意見交換等を進めたりすることができた。以上のように調査と研究、その公表について着実に活動を展開することができており、おおむね順調に進展していると評価する。平成30年度における研究活動のペースにしつつ、当初計画の東亜同文書院と愛知大学との中国語教材間の比較や、国内の教育機関の中国語教材の比較といった文献資料の検討を進める。同時に、愛知大学において東亜同文書院系教員の次の世代を担った教員への聞き取り調査を継続的に実施することにより、本研究の目的である戦前と戦後の中国語教育の継続性について実証的な検討を行う。さらに、東亜同文書院と愛知大学両校で使用された『華語萃編』初集については詳細な注釈を附した復刻を作成して早急に公表できる形に整理する予定である。【口頭発表】「日清貿易研究所と東亜同文書院の連続性について--東亜同文書院院長根津一発奉天軍政署小山秋作中佐宛書信から」(ワークショップ「日清貿易研究所から東亜同文書院へ」

愛知大学東亜同文書院大学記念センター、2019年3月16日、愛知大学豊橋キャンパス)は東亜同文書院生の中国語講義の成績と進路について報告した。「上海の東亜同文書院とその歴史マップ」(講演会「上海と東亜同文書院大学・愛知大学」愛知大学東亜同文書院大学記念センター、2018年7月1日、岡崎市立図書館交流プラザりぶら)は、東亜同文書院の中国語教材の出版を行っていた蘆澤印刷所についての現地調査の結果を含む。【現地調査】北京国家図書館において東亜同文書院関係の資料調査を行い、一部が閲覧不可能であること、同窓会誌は旧東亜同文書院所蔵でないことを確認した(2019年3月17-20日)。「満洲国」文学研究会定例研究会(2018年12月22日)、荒尾精追悼式(同9月23日)に参加して関係者と研究上の交流を進めた。平成30年度は、東亜同文書院の中国語教育活動の実態を明らかにする内容を含む単著『東亜同文書院の教育に関する多面的研究』(愛知大学東亜同文書院大学記念センター叢書、不二出版、2019年3月)を刊行し、東亜同文書院大学の後身である愛知大学における中国語教育の変遷に注目した聞き取り調査の成果を「荒川清秀先生に聞く--中国語との出会いから愛知大学へ」(『同文書院記念報』Vol. 27、45-54頁、2019年3月)として発表し、さらに研究成果を教育にフィードバックしたことについて「愛知大学の歴史についての講義--2018年度の大学史教育の取り組みについて」(同56-62頁)をまとめた。さらに東亜同文書院の中国語教材の出版を行っていた蘆澤印刷所についての現地調査を内容に含む2018年7月1日の講演会の記録を「上海の東亜同文書院とその歴史マップ」(同103-114頁)に整理し、2019年3月16日のワークショップでは中国語教育の成果の延長にあるキャリア形成について「日清貿易研究所と東亜同文書院の連続性について--東亜同文書院院長根津一発奉天軍政署小山秋作中佐宛書信から」として口頭発表した。ほかに北京での資料調査を実施したり、国内の関連研究会や集会に参加して関係者と研究上の意見交換等を進めたりすることができた。以上のように調査と研究、その公表について着実に活動を展開することができており、おおむね順調に進展していると評価する。平成30年度における研究活動のペースにしつつ、当初計画の東亜同文書院と愛知大学との中国語教材間の比較や、国内の教育機関の中国語教材の比較といった文献資料の検討を進める。同時に、愛知大学において東亜同文書院系教員の次の世代を担った教員への聞き取り調査を継続的に実施することにより、本研究の目的である戦前と戦後の中国語教育の継続性について実証的な検討を行う。さらに、東亜同文書院と愛知大学両校で使用された『華語萃編』初集については詳細な注釈を附した復刻を作成して早急に公表できる形に整理する予定である。当該年度において次年度使用額が生じたのは、当初計画していた文献資料の検討よりも本研究の基底となる研究成果を『東亜同文書院の教育に関する多面的研究』(愛知大学東亜同文書院大学記念センター叢書、不二出版、2019年3月)として発表することと、聞き取り調査や実地調査を先行させたことによって高額な文献資料の購入を延期したためであり、単に実施時期が前後しただけである。愛知大学や東亜同文書院大学記念センターが所蔵する東亜同文書院系の資料整理は順調に進めており、今後は購入予定の文献資料を入手することによって計画通りの活動を行う。
非侵襲的血糖測定法の開発-レーザ赤外分光分析法の応用-

光学的手法を用いた生体物質の計測法は、非侵襲的、連続的、即時的計測を可能とするものであり、近未来の計測法として極めて有望視されている。本研究においては、内部多重全反射(ATR)プリズムを組み込んだフーリエ変換赤外分光分析装置(光源、発熱体)を用い、体液成分、殊にブドウ糖濃度計測のための基礎的検討を行った。1.ブドウ糖溶液の吸光スペクトルでは波数1033および1088cm^<-1>にピークが認められ、頂点吸光度および面積吸光度はブドウ糖濃度と高い相関を示した。2.体液成分のうち、赤血球、血清アルブミン、血清コレステロールがブドウ糖の吸光度のピーク値に干渉することが認められた。3.血清、血漿、全血試料の吸光スペクトルにおいてブドウ糖固有のピークが認められ、頂点強度法、面積強度法(いづれもベースライン法)と血糖値の間に有意な相関関係が認められた。殊に、干渉物質の影響を除外すべく、空腹時の血清、全血試料の吸光度の差スペクトルで表現することにより吸光度とブドウ糖増加量とは有意に相関を認めブドウ糖濃度の定量化が可能となった。4.皮膚、粘膜組織の吸光スペクトルにおいてもブドウ糖固有のピークを認めたが、干渉物質の更なる検討が必要と考えられた。以上、基礎的検討の結果、生体試料、生体組織のブドウ糖濃度の非侵襲的計測の可能性を示唆しえたが、今後、機器の改良に加え、定量解析、殊にブドウ糖濃度の定量的解析のための検量線(コンピュータ分離アルゴリズム)の開発が急務と考えられた。いづれにしても、生体物質の非侵襲的計測法の高分離、高分解能化、定量化には、ハードウェア的に、光輝度の高い炭酸ガスレーザを適用、発振スペクトルを従来の光源の1/1000と細かくし、高分解能化、出力安定化を計る必要がある。内部多重全反射(ATR)プリズムを組み込んだフーリエ変換赤外分光分析装置を用い、生体試料中のブドウ糖濃度の計測の可能性をもとに、本年度は、ブドウ糖の吸光度に及ぼす生体内干渉物質の影響および血清(血漿)、全血試料におけるブドウ糖濃度の非侵襲的計測のための検量線の作成を試みた。1.血清試料と血漿試料の吸光スペクトルに差を認めなかった。血清、全血試料においてブドウ糖濃度のピークに対応した1033および1080cm^<-1>の頂値を認めたが、1033cm^<-1>の頂値より1080cm^<-1>の頂値の方が高く、この関係はブドウ糖溶液のそれと逆の関係を示し、干渉物質の存在を強く示唆することが出来た。2.生理的濃度の尿酸、尿素はブドウ糖の赤外吸光スペクトルに影響を与えなかった。しかし、赤血球、血清アルブミン、血清コレステロールは、ブドウ糖吸収スペクトルの頂値に干渉すると共に、基線の変動に大きく関与することを認めた。3.血清試料の吸光スペクトルにおいて、頂点吸光度、面積吸光度(ベースライン法)はブドウ糖濃度と相関したが、データのバラツキは大であった。しかし、血糖日内変動追跡時の血清試料において、空腹時の血清の吸光度の差スペクトルとして表現することにより、血糖増加量(空腹時血糖値より)は頂点吸光度、面積吸光度と有意に高い相関関係を認めた。4.血液試料においても同様に空腹時試料との差スペクトルとして表現することにより血糖値と吸光度の間に有意に高い相関関係をえた。

以上、ATRプリズムを応用したフーリエ変換分光分析装置により生体試料のブドウ糖濃度の非侵襲的計測を可能としたが、解決すべき問題点も多い。今後、マイクロコンピュータを駆使したソフトウエア的な干渉物質の除去方法、それに基づく定量化方法の確立が必要と考えられた。
英語教育を目的としたマルチメディア教材利用方法の研究

マルチメディア教材の利用方法に関する本研究は、その対象教材をワールド・ニュースと文芸ビデオの二種類に絞って考察した。ワールド・ニュースで扱われる内容は、命がけの政治闘争や民族対立、死に至る病の感染経路、などである。そこには悲惨極まる民衆の苦悩する表情があり、心から湧き上がる人々の偽らざる想いが冷徹なカメラワークを通して伝えられる。語学教育のための教材として、強力な動機付けを持つものが少なくない。ニュース英語を聞き流すだけではなく、スクリプトを作成してみると、さまざまな利点があることに気づく。(1)ニュース内容がグローバルであるので、社会情勢についての関心の持ち方において、国際的感覚を養える。(2)音声の省略がどのようにおきているかを正確に把握できる。この関係がおさえられると、Liaisonやelisionが頻繁に起きる音声英語の聞き取りが正確になる。したがって、卒業以前に学生の日常生活の中でワールド・ニュースを聞く楽しみをどの程度習慣化することができるかが、大学における英語教育の目標となる。また、今日の学生はそれ以前の世代と比較して、その成長過程において、文字メディアによるよりも、音声・映像メディアに接する機会が格段に増大している。虚構の仕組みに慣れて映像も虚構の一形式に置き換えられる一世代前の感受性様式とは違って、今日の学生は虚構と事実とを区別する判断力が薄れてヴァーチュアルな世界を現実の一部として受け止めているように、筆者には思われる。その変化はとりあえず「フィクショナルなものからヴァーチュアルなもの」への変化と名づけられるものである。このような状況の変化に応じて、英語教育の教材及び英語教育の方法もまた適切な対応が迫られるものである。本研究では、その利点や限界は何かと考えながら、映像芸術を大学の英語教育の中でどのように利用できるか考察した。なお,本研究の詳細な内容は,筆者のホーム・ページ(http://www.ipc.shizuoka.ac.jp/ekmhaya/)で公開してあるので,参照されたい。(1)『ワールド・ニュース音声英語スクリプトを利用した英語教育の研究』(2)『英語教育のためのマルチメディア映像教材利用方法の研究』-フィクショナルからヴァーチュアルへ: Jane Eyreを例にして-マルチメディア教材の利用方法に関する本研究は、その対象教材をワールド・ニュースと文芸ビデオの二種類に絞って考察した。(1)『ワールド・ニュース音声英語スクリプトを利用した英語教育の研究』(2)『英語教育のためのマルチメディア映像教材利用方法の研究』-フィクショナルからヴァーチュアルへ: Jane Eyreを例にして-