hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
「可罰的な犯罪関与行為」と「不可罰的な犯罪関与行為」との区別について

その成果の一つとして、論文「従犯の主観的要件の実体」を纏めた(掲載決定済。現在最終のとりまとめ中である)。この論文においては、他人による著作権法違反行為のために有用となるコンピューターソフトをネット上に公開し導入可能状態にする行為を可罰的とするか否かの問題(高裁で無罪判決が出ている)についても言及しており、現代的課題にも対応する内容となっている。本年度当初の研究計画に則し、犯罪関与理論(共犯理論)研究の土台とすべく、刑法の基本原理、一般理論、法文化等を主たる検討対象とし、考察を進めた。我が国の文化と刑法(刑法理論・刑法学)との関係性、刑罰の正当性、さらには死刑制度の本質と同制度の今後のあり方についてまで検討範囲を広げた。このような基礎的研究を経た(今後も続けていくつもりであるが)ことにより、刑法の基本原理・一般理論と整合する犯罪関与行為処罰論の展開が可能になってくるものと考える。目下、犯罪関与行為処罰の基本原理についての再検討を進めているが、このような刑法それ自体の基礎的原理を見据えたうえでの総合的・立体的な研究手法(いわば、あえて採った迂回的な研究手法)によって、原理的齟齬を起こさない、より説得的な可罰的犯罪関与行為の理論を構築できることになるものと思っている。拙稿「Japanische Kultur und Strafrecht」における自殺関与罪に関する分析、ならびに、前年度内にまとめ今年度に刊行された拙稿「従犯の主観的要件の実体」における可罰的幇助行為の本質に関する検討は、共犯処罰の原理にかかわる考察を含んだ内容であるが、これらも合わせ、共犯理論の発展に寄与しうる基礎的な考え方の枠組みが整ってきたといいうる。今後、さらに具体的に犯罪関与行為を掲げ、それぞれの犯罪関与行為の可罰性ないしは不可罰性についての検討・検証をおこない、一定の答えを順次提示していきたいと考えている。
インド、ミゾラム州のトライブ市民社会－丘陵地帯と世界のつながり－

【研究目的】本研究の目的は、インド北東部の丘陵地域と低地の大都市、そして海外をつなぐ広大なネットワークを構成するマイノリティ集団の社会に関する歴史的動態を研究することによって、地域独自に展開するエスニシティと市民社会のなりたちを明らかにすることである。平成26年度は、研究対象地域であるインド北東部、ミゾラム州における植民地統治開始以前から第二次大戦後までのエスニシティの変容を明らかにすることを試みた。また、その変容過程において、多様な他者(植民地行政、低地の人々、近隣の類縁山岳民族、大戦期における日本軍)との関わりがいかなる影響を及ぼし、エスニシティの変容と政治・社会運動がどのように結びついていったのかを明らかにしようとした。【現地調査、史料収集】平成26年度は、インド、ミゾラム州において約2か月の現地調査と史料収集を行い、首都デリーの国立公文書館にて約3週間、194050年代の研究対象地域における植民地行政史料を収集した。ミゾラム州内での現地調査では、ミャンマー国境近くの村落を数か所訪ね、第二次大戦中に日本軍から爆撃を受けた建物跡を見学し、当時を知る高齢者から聞き取りを行った。また、別の村落では、第二次大戦期に英軍に従軍し、ミャンマーやコヒマの戦いに参戦した元軍人の回顧録や写真を収集した。【成果発表の内容】植民地以前から戦後までの対象地域におけるエスニシティの変容を歴史的に分析することによって、ナショナリズムを必ずしも目的論とせず、宗教的アイデンティティをも含んだ倫理を問い、村落や既存の範疇を超えるという意味では普遍的ともいえる連帯の基盤となる共同態の「名」として、ミゾ・エスニシティが立ち現れる様態を明らかにした。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。【研究目的】本研究の目的は、インドの丘陵地域と大都市、そして海外をつなぐ広大なネットワークを構成するマイノリティ集団の社会に関する歴史的動態を研究することによって、地域独自の市民社会のなりたちを明らかにすることである。特に平成25年度は、研究対象とするエスニック集団「ミゾ」が集中的に居住するインド、ミゾラム州内における青年団をはじめとする諸団体に着目し、地域社会の市民社会的諸団体の動態を明らかにすることを試みた。また、同州で非常に強い影響力を持つキリスト教長老派教会の史料にあたり、青年団設立初期の時代における隣接地域や日本とのトランスナショナルな関係についての予備研究を行っている。【現地調査から得られたデータの意義、重要性】25年度は約3ヶ月間の現地調査を行い、主に調査対象である青年団やキリスト教青年団体の活動を参与観察した。調査で得たデータの二部は、政治権力に対しある程度自律的な集団を保持するという、ミゾ人による地城の社会結合のありかたが、植民地化以前の首長一若者宿関係にだけでなく、現代にもみられることを実証するために有効だと考える。【予備研究】26年度に予定しているビルマ国境の農村部での調査に向け、キリスト教長老派教会の別冊誌として青年団が執筆していた機関紙のうち、第二次大戦中に発行されたものを分析している。当時の青年団が日本軍のピルマ支配によって翻弄されながらも、国境をこえた移動を行い、隣接地域の人々とやりとりをしていたことや、遠い戦地で戦うミゾ人同胞を思い、故郷の美しさをたたえ、英国追従の近代化に対するオルタナティブを模索する姿が明らかになった。成果発表については、当初目指していた達成度より遅れているものの、25年度の発表で多くの有益なコメントが得られ、これまで曖昧であった理論構築の部分を補強するのに寄与した。

現地調査では、予想よりも多くのデータを収集でぎ、現地の人々の協力も期待以上に得られている。今年度は特に、史料分析と平行して農村調査を集中的に行い、「青年団は英国の支配に表面上従属し、近代化を希求する一方で、隣接地域の山地民や日本軍と変則的でトランスナショナルな接触をもつことで、世界との新たなつながりを見出し、それが独自の文化的ナショナリズムの醸成に寄与した」という仮説を実証することを目指す。また、その成果を投稿論文として発表する。
植物の膜交通多様化機構の解明

植物特異的RAB GTPaseであるARA6の機能発現機構を詳細に解析した.エフェクター分子として同定したPUF2の機能解析を通して,ARA6と保存型RAB5であるARA7が液胞輸送経路において拮抗的に機能する仕組みを明らかにした.また,植物特異的な膜融合実行因子であるVAMP727について,その分子機能の獲得にいたる進化の道筋を再構築することを試みた.その結果,longin domainへの挿入配列の付加と,その挿入配列の酸性化の2段階でVAMP727の機能が獲得されたことが明らかとなった.この他,ゼニゴケの膜交通網の全貌をつかむべく,RAB GTPaseとSNAREの網羅的解析を進めた.植物特異的RAB GTPaseであるARA6の機能発現機構を詳細に解析した.エフェクター分子として同定したPUF2の機能解析を通して,ARA6と保存型RAB5であるARA7が液胞輸送経路において拮抗的に機能する仕組みを明らかにした.また,植物特異的な膜融合実行因子であるVAMP727について,その分子機能の獲得にいたる進化の道筋を再構築することを試みた.その結果,longin domainへの挿入配列の付加と,その挿入配列の酸性化の2段階でVAMP727の機能が獲得されたことが明らかとなった.この他,ゼニゴケの膜交通網の全貌をつかむべく,RAB GTPaseとSNAREの網羅的解析を進めた.VAMP727のlongindomainに存在する特徴的な挿入配列がどのように獲得され,VAMP72メンバーの機能分化においていかなる役割を果たしたのかを調べるため,まずゼニゴケ(苔類),ベイトウヒ(裸子植物),グネツム(裸子植物),イネ(単子葉植物),ミヤコグサ(真正双子葉植物マメ科),レタス(真正双子葉植物キク科)などの植物からVAMP72ホモログを単離し,そのアミノ酸配列を調べた.その結果,挿入配列は選択的スプライシングに起因しており,さらに進化の過程で挿入配列中の酸性アミノ酸の数が増加する傾向が認められた.そこで,この挿入配列の獲得とその酸性化がそれぞれVAMP72の機能にどのような影響を与えたのかを,挿入配列の欠失や酸性度の減少をもたらす変異を導入することにより調べた.その結果,挿入配列の有無は分泌経路から液胞輸送経路への機能転換に,酸性度の上昇は定常的な細胞内局在がトランスゴルジネットワークから多胞化したエンドソームに変化するのに必要であることが示唆された.続いて,VAMP727と相互作用する因子を酵母ツーハイブリッド法を用いて探索した-その結果,VAMP727とVAMP721の双方と相互作用する分子の単離に成功した.植物特異的なRABGTPaseであるARA6についても,ゼニゴケにおけるホモログ(MpARA6)の機能解析を進めた.これまでに,MpARA6が多胞化したエンドソームから葉緑体外胞膜への輸送において機能することを示唆する結果を得るとともに,ARA6のエフェクター候補も葉緑体機能に関わることを示す結果を得ている.R-SNAREであるVAMP727のlongindomainに存在する挿入配列が局在に与える影響についてさらに詳細に調べるため,挿入配列の有無でVAMP727との結合が変化する分子の探索を,共免疫沈降と質量分析解析により行った.その結果,複数の候補分子を単離することに成功した.植物特異的RAB5であるARA6について,シロイヌナズナとゼニゴケにおける解析を並行して進めた.シロイヌナズナにおいては,エフェクターであるPUF2の機能解析を一層進めるとともに,他のエフェクター候補についても,細胞内局在や他のRABとの相互作用の確認など,基礎的な解析を進めた.ゼニゴケについては,シロイヌナズナから得られた知見を敷衍し,エフェクター候補分子の機能解析を進めた.その結果,エフェクター候補であるMpPUF2はエンドソーム間の繋留において,MpPUF3は葉緑体の構造と機能の維持に関わっていることを示唆する結果を得た.RAB5とRAB7の関係においても,新たな知見が得られた.RAB7の活性化因子(SAND-CCZ1複合体)の機能解析を行い,この複合体が活性型RAB5に結合することを示すとともに,確かにRAB7の活性化能を持つことを生化学的に示した.さらに,RAB5とRAB7に関連する様々な変異体を用いた解析から,植物においては,動物や酵母とは異なる複数の輸送経路でこれらのRAB GTPaseが機能しており,それぞれの輸送経路が異なるタンパク質の輸送を担っていることを明らかにした.VAMP727のlongindomainに存在する挿入配列の有無とその酸性度が局在と機能に与える影響を調べるため,挿入配列の有無や酸性度の違いによってVAMP727との結合様式が変化する分子を複数単離した.それらの分子とVAMP727との相互作用を生化学的に確認するとともに,その変異がVAMP727の局在に与える影響を解析するべく,変異体の収集と形質転換体の作成を進めた.植物特異的RAB5であるARA6について,シロイヌナズナとゼニゴケを用いて機能解析を進めた.シロイヌナズナARA6のエフェクターであるPUF2の機能解析を一層進め,PUF2がARA6のエフェクターとして機能すると同時に,保存型RAB5の負の制御因子としてはたらくことを明らかにした.

そこで,その分子機構を詳細に解析したところ,PUF2は不活性型の保存型RAB5とも結合すること,この結合を活性型ARA6が阻害する可能性があることを突き止めた.PUF2は保存型RAB5の活性化因子であるVPS9aとも結合することから,PUF2がVPS9aの基質濃度を微小環境中で高めることにより,その活性化効率を高めること,また,その過程をARA6が阻害することにより,ARA6と保存型RAB5が拮抗して機能することが明らかとなった.ゼニゴケにおいては,ノックアウト変異体の表現型を解析するとともに,相互作用因子の機能解析をおこない,MpARA6と葉緑体機能の関連を突き止めた.ゼニゴケのRAB GTPaseとSNAREの網羅的単離と解析を進めた.ゲノム解析の結果を活用し,ゼニゴケゲノムにはRAB GTPaseをコードする遺伝子が17個,SNAREをコードする遺伝子が34個存在することを突き止めた.それらを全て単離するとともに,細胞内局在の解析を進めた.26年度が最終年度であるため、記入しない。植物分子細胞生物学26年度が最終年度であるため、記入しない。VAMP72グループの機能転換に必要な領域を明らかにすることに既に成功しているとともに,相互作用因子の解析も順調に進んでいる.また,ゼニゴケのMpARA6の機能解析においても大きな進展があった.申請時には計画していなかったRAB7を含めた輸送系にまで研究を展開することが出来たことにより,植物における膜交通の多様化と進化を明らかにする上で重要な知見を得ることに成功した.26年度が最終年度であるため、記入しない。これまでに引き続き,植物の進化の過程でVAMP72がどのようにして機能的多様化を果たしたのかを解析してゆく.また,ARA6の機能が植物の各系統群でどのように多様化しているのかについてもさらなる解析を進める.これまでの研究をさらに発展させ,VAMP72が植物の進化の過程でいかに多様化してきたのかを解明する.さらに,ARA6を含むRAB5とRAB7によって制御される植物のエンドサイトーシス経路,及び液胞輸送経路の全貌を明らかにするべく研究を推進する.26年度が最終年度であるため、記入しない。抗体の作成や委託解析(質量分析等)を次年度におこなう予定であるため,計画的に資金を繰り越した.今後これらの解析,物品の購入等に使用する予定である.多数の抗体を作製する予定であったが,抗原タンパク質の精製がなかなかうまくいかず,条件検討に手間取った.現在良好な発現条件が見つかりつつある.前年度からの課題である抗体作成にかなりの額を使用する.質量分析等の委託解析を,次年度においてもまとまった回数行う予定である.さらに,消耗品費の購入や,成果報告のための国内外の旅費に使用する予定である.
非Edg型LPA受容体の胎生期血管形成における機能解析

リゾホスファチジン酸(LPA)受容体の胎生期血管形成における重要性を明らかにする目的で、非Edg型LPA受容体の二重欠損マウスを作製・解析した。血管内皮細胞に発現しているLPA4とLPA6の二重欠損マウスは全て胎生11.5日までに胎生致死となった。胎生9.5-10.5日のLPA4/LPA6二重欠損マウスの卵黄嚢は血管形成が著しく不良であり、胎仔も頭部や体節間の血管形成不良と背部大動脈の拡張が認められるとともに心嚢浮腫を伴う異常な形態であった。本研究の目的は、リゾホスファチジン酸(LPA)受容体を介した胎生期血管形成の分子機構の解明であり、本研究を通して、血管研究の進展と血管形成関連病態の治療につながる新たな知見の提供を目指している。Gタンパク質G13の血管内皮細胞特異的欠損マウスやLPA合成酵素オートタキシンの欠損マウスは全て胎生致死となるが、血管内皮細胞においてG13に共役して血管形成を制御するGPCRは未だ同定されていない。我々はG12/13に主に共役する非Edg型LPA受容体(LPA4, 5, 6)に着目し、各欠損マウスの交配により得られた胎仔を解析した。その結果、LPA4/LPA6二重欠損マウスは胎生9.5-10.5日に血管形成不全と心嚢液の貯留を示し、胎生11.5日までに全てが胎生致死となることを明らかにした。また、LPA4/LPA6二重欠損マウスはCD31抗体によるホールマウント染色により頭部領域の血管形成不良が認められ、さらに体軸形成の異常や背部大動脈の拡張を観察した。LPA4/LPA6二重欠損マウスの卵黄嚢も著しい血管形成不良を示した。なお、LPA4/LPA5二重欠損マウスやLPA5/LPA6二重欠損マウスは正常に出生し生育した。これらの知見は、LPA4とLPA6が協調して胎生期における血管形成に重要な役割を果たすことを強く示唆している。ヒトLPA4とLPA6の胎生期血管形成における役割を解明するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞等を用いてLPA4やLPA6の下流で発現制御される幾つかの血管形成調節因子を同定した。リゾホスファチジン酸(LPA)は複数のGタンパク質共役型受容体を介し、多彩な機能を発揮する生理活性脂質である。我々は、主にG12/13-Rho経路を強く活性化するLPA受容体としてLPA4とLPA6を報告し、LPA4欠損マウスは胎生期における血管・リンパ管形成異常により約3割が胎生致死となることを見出した。G12/13を介したLPAシグナルに関連するオートタキシン、G13、およびROCKI/ROCKIIの遺伝子欠損マウスは、それぞれが血管形成異常のために全てが胎生10.5日前後で致死となることから、LPA4以外のLPA受容体も胎生期の血管形成に寄与する可能性がある。そこで、我々は血管内皮細胞に高発現しているLPA6に着目し、LPA4とLPA6を介した血管形成分子機構の解明を目指して検討を行った。LPA6単独欠損マウスは正常に出生・発育するが、LPA4とLPA6の二重欠損マウス(LPA4/6-DKO)は全てが胎生致死になることがわかった。そこで、胎生9.5 -10.5日の卵黄嚢や胎仔を観察したところLPA4/6-DKOの卵黄嚢は血管網が欠損しており、その胎仔は著しい心嚢液の貯留を伴う未熟な形態であった。さらに、血管マーカーPECAM-1抗体を用いた胎仔ホールマウント染色により、LPA4/6-DKOの頭部で血管形成異常が認められた。また、LPA4とLPA6を介した血管形成の分子機構を明らかにするために、LPA4/LPA6-siRNA処理したヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)およびLPA4やLPA6欠損マウス由来の血管内皮細胞を用いた実験を行った。その結果、LPA4/LPA6活性化により発現誘導される幾つかの血管形成制御因子を見出し、関連するシグナル伝達分子の解析からLPAによって制御される新たな血管形成機構が示唆された。平成26年度に予定していたLPA受容体欠損マウスの胎生期の解析は順調に進み、LPA4とLPA6が胎生期の血管形成に重要な役割を担うことを明らかにすることができた。血管内皮細胞特異的なLPA受容体欠損マウスの作製も進んでおり、胎生期の血管形成における役割を今後詳細に解析する予定である。血管内皮細胞にLPA受容体をノックダウンする評価系も構築することができ、既にLPA4とLPA6が寄与する幾つかの血管形成調節因子を同定した。

分子細胞生物学in vivo解析ではタモキシフェン投与により新生仔期に血管内皮細胞特異的にLPA受容体を欠損させるマウスを用いて、LPA4/LPA6二重欠損マウスの網膜血管新生の程度を解析する。in vitro解析ではLPA4やLPA6がどのようなシグナル伝達経路で血管形成調節因子の発現を制御しているかを明らかにする。また、血管内皮細胞の管腔形成、増殖、遊走の機能におけるLPA4やLPA6の役割を解析する。消耗品購入の際に端数が生じたため。平成27年度の使用額に合算して使用する。
極限的短パルスによる共役ポリマーの超高速分光

ポリジアセチレンに光を照射すると、その励起状態においては構造変化に基づき分子振動の周波数が変化する。この動的過程は、光化学反応における分子構造変化過程の基礎になると考え、励起状態における構造変化の様子を実時間分光により測定した。その結果、結合音と分子振動モード間のパラメトリック相互作用をはじめて観測することに成功した。すなわち、Auger過程により双極子-双極子相互作用した2個の励起子のうち1個はほぼ2倍のエネルギーを持った励起子の励起状態に遷移するが、その高いエネルギーのため、基底状態の高い振動順位(励起子の電子エネルギーの2倍もの振動準位)に高速に緩和すると考えられる。この高い振動励起準位ではその非調和性が顕著であり、倍音や結合音成分が期待される。これらの非調和性により発現された振動モードはAuger過程がその起源であるとすると励起光強度の2乗に比例すると考えられる。今回、結合音の励起光強度依存性を調べた結果、確かに2乗に比例していることが確かめられ、Auger過程がその起源であることが明らかになった。さらに、差周波も低周確であるにもかかわらず、振動励起子の相互作用の結果として発生したものと考えられる。これは、励起子間のパラメトリック相互作用であり、電子のやり取りと同時に振動エネルギーのやり取りが行われていることを示している。さらに、スチルベンの異性化反応、インジゴカルミンのプロトン移動反応などの機構解析も行った。
フィブリノゲンの組み立て・分泌におけるBβ鎖・γ鎖の機能の相違に関する研究

1.フィブリノゲン(Fbg)γ鎖D領域の153Cys-182CysのS-S結合の役割について研究した。γ153CysをAlaに変異させた実験結果は、正常γ鎖と異なり、Aα鎖あるいはBβ鎖と複合体(AαγあるいはBβγ)を形成できないことがわかった。したがって、γ153Alaでは、細胞内でこれらの複合体を形成できないために最終的なFbgが組み立てられず、細胞外に分泌されないことが明らかになった。(論文1)2.Fbgγ鎖D領域の319Asn,320Aspの役割について研究した。正常γ鎖と異常γ鎖の同時発現CHO細胞において、γ鎖319Asn,320Aspの2アミノ酸を欠損する異常Fbgは細胞内での組み立てはほぼ正常であるにもかかわらず、細胞からの分泌が低下していることを証明した。この結果より、γ鎖D領域の立体構造がFbg分泌機序に影響を及ぼすことが明らかになった。(論文3,6)3.Fbgの組み立て・分泌におけるγ鎖387Ile残基の役割について研究した。γ鎖387IleをArg, Leu, Met, Ala, Aspに置換させる実験を行った。前4種はFbgの組み立てと分泌に影響は認められなかったが、Aspにおいては著しい低下が認められた。このことから、γ鎖387番のアミノ酸の性質および388番以降411番までのペプチド鎖の立体構造の重要性が明らかになった。(論文5)4.Fbgの組み立て・分泌におけるBβ455Arg役割について研究した。γ鎖387Ile残基に相当するBβ鎖455Argが存在しないとFbgの分泌が起こらないことを明らかにした。また、Bβ455ArgをIle, Asp, LysとAlaに変異させた細胞株の樹立を行ったがうまくいかなかった。5.Bβ111Ser欠損した異常Fbg症のヘテロ患者を発見した。変異部位はFbgのcoiled-coil領域あり、欠損によるFbgの組み立て・分泌への影響はなかった。(論文4)1.フィブリノゲン(Fbg)γ鎖D領域の153Cys-182CysのS-S結合の役割について研究した。(論文4)研究テーマ1)であるフィブリノゲン(Fbg)γ鎖D領域の立体構造の維持におけるγ鎖内S-S結合の重要性の研究においては,153Cys,182CysをAlaに変異させたベクターを導入してFbgを産生させた細胞では,細胞外へのFbg分泌が認められなかった.特に153Cysを用いた実験では,この異常γ鎖は正常γ鎖と異なり,正常なAα鎖あるいはBβ鎖とそれぞれAαγあるいはBβγ複合体を形成することができないために,細胞内でFbg分子への組み立てが行われない.このためにFbgが細胞外へ分泌されないことが明らかにできた(Terasawa論文として報告).また,326CysをAlaに変異させたベクターを導入した細胞では,正常γ鎖ベクターを導入した細胞に比較して細胞内でのFbg組み立てと細胞外へのFbg分泌がいずれも著しく低下していた.

一方,339CysをAlaに変異させたベクターを導入した細胞では,正常γ鎖ベクターを導入した細胞に比較して,細胞内でのFbg組み立ては同程度であるのに比較して,細胞外へのFbg分泌が著しく低下していた.研究テーマ2)であるFbgγ鎖D領域の立体構造の維持におけるγ鎖387Ileの重要性の研究においては,387IleをArg, Leu, Met, Alaに変異させたγ鎖ベクターを導入した細胞では,正常のものと同様にFbgを組み立て・分泌することがあきらかになったが,387IleをAspに変異させたものでは,正常γ鎖ベクターを導入した細胞に比較して細胞内でのFbg組み立てと細胞外へのFbg分泌がいずれも著しく低下していた.1)フィブリノゲン(Fbg)γ鎖D領域の立体構造の維持におけるγ鎖319Asn,320Aspの役割について研究した。従来γ鎖319Asn,320Aspの2アミノ酸を欠損する異常症例においては、機能異常の著しい低下のみが注目されていたが、今回われわれが実施報告したCHO細胞における正常γ鎖と異常γ鎖の同時発現細胞における注意深い研究により、γ鎖319Asn,320Aspの2アミノ酸を欠損する症例においては、異常Fbgの細胞内での組み立てはほぼ正常であるにもかかわらず、細胞からの分泌が低下していることを証明した。これらの結果より、γ鎖D領域の立体構造の異常はFbgの機能だけでなく、蛋白の分泌機序に影響を及ぼすことが明らかになった。(S.Kani et al.の研究論文)2)Fbgの組み立て・分泌におけるγ鎖387Ile残基の役割について研究した。我々はすでにFbgの組み立てと分泌にγ鎖387残基が重要な働きをすることを報告した。そこで今回γ鎖387IleをArg, Leu,Met,Ala,Aspに置換させた実験を行い、γ鎖387残基の性質あるいはアミノ酸の存在が重要であるのかを検討した。この結果、前4種のFbgの組み立てと分泌には低下は観察されなかったが、Aspにおいては著しい低下が観察された。このことから、γ鎖387番のアミノ酸の性質およびその変異によってもたらされる388番以降411番までのアミノ酸の立体構造の変化によりFbgの組み立てと分泌が影響されることが明らかになった。さらに、分泌された4種類のFbgの機能解析おいては、γ鎖387番アミノ酸の性質およびその変異による388番以降411番までのアミノ酸の立体構造の変化は、フィブリン繊維が太くなる性質と、凝固第XIII因子によるγ鎖388Gluとγ鎖407Lysの架橋結合反応の起こりやすさにも影響することが明らかになった。(論文はBLOODに投稿中)3)Fbgの組み立て・分泌におけるBβ455Arg役割について研究した。γ鎖387Ile残基に相当するBβ鎖の残基は455Argであるこの残基が存在しないとFbgの組み立て・分泌が起こらないことが明らかになった。すなわち、各細胞での合成量と分泌量は、それぞれ正常223±141、331±236、Bβ鎖455残基109±31、160±38、Bβ鎖454残基10±5、<20(単位ng/ml)であった。1)フィブリノゲン(Fbg)の組み立て・分泌におけるγ鎖387Ile残基の役割について研究した。Fbgの組み立てと分泌に重要な働きをするγ鎖387IleをArg, Leu, Met, Ala, Aspに置換させた実験を行い、γ鎖387残基の性質の重要性を検討した。その結果、前4種はFbgの組み立てと分泌に低下は認められなかったが、Aspにおいては著しい低下が認められた。
グリオーマ抗原ペプチドの同定と特異的免疫療法への応用

一方、新たな抗原特異的な免疫療法の開発を目的として、同定した抗原遺伝子GARC-1を発現ベクターに組込み、遺伝子銃によりマウスを免疫した後、脾臓よりT細胞を調整し、グリオーマ特異的な免疫誘導性を解析した。その結果、GARC-1抗原遺伝子を用いた癌ワクチンを行うことにより、グリオーマ特異的なT細胞が誘導された。今後は、マウス脳腫瘍モデルにおけるGARC-1抗原を用いた免疫療法の有効性の検討を行う予定である。極めて治療困難な疾患であるグリオーマに対する抗原特異的な免疫療法の開発を目的として、本年度はグリオーマ特異的CTLに認識されるグリオーマ抗原分子の同定を行った。我々はすでに、in vivoで腫瘍内に変異型単純ヘルペスウイルスを投与することにより、マウスグリオーマGL261細胞に対する腫瘍抗原特異的なT細胞を誘導し、cytotoxic T lymphocyte(CTL)の株化を行っている。そこで、このグリオーマ特異的CTL(GCL-1)を用いて、グリオーマ抗原遺伝子のスクリーニングを行った。第一に、グリオーマGL261細胞よりmRNAを調整し、cDNA発現プラスミドライブラリーを作製した。このcDNAライブラリーをマウスのMHC class I(H2-K^bおよびH2-D^b)を発現する293細胞に遺伝子導入して、GCL-1との共培養を行ない、GCL-1より放出された培養上清中のIFN-_γを測定し、抗原遺伝子のスクリーニングを行った。このスクリーニングを繰り返すことにより、GCL-1と強く反応する遺伝子をクローニングして、配列を決定した。BLAST(National Library of Medicine, NIH)サーチにより、遺伝子配列のホモロジーを検索したところ、単離された遺伝子はMus musculus RIKEN cDNA 1190002L16 gene(1190002L16Rik)であることが明らかになった。さらに、同定したグリオーマ抗原遺伝子には、1190002L16Rikと比較して、数カ所に遺伝子変異が存在し、open reading frame内に存在する一つの遺伝子変異によりアミノ酸置換が生ずることが明らかになった。今後は、同定した抗原遺伝子のT細胞エピトープを検索し、さらにグリオーマ抗原特異的な免疫誘導法の検討を行う予定である。本研究では、極めて治療困難な疾患であるグリオーマに対する抗原特異的な免疫療法の開発を目的として、マウスグリオーマGL261細胞を特異的に障害する細胞障害性T細胞(cytotoxic T lymphocyte;CTL)株を用いて、グリオーマ抗原遺伝子のスクリーニングを行い、新たなマウスグリオーマ抗原遺伝子、GARC-1を同定した。同定したグリオーマ抗原遺伝子、GARC-1には、報告されている遺伝子1190002L16Rikと比較してアミノ酸置換が起きうるopenreading frame内の遺伝子変異が存在したため、同部位を主な標的として、BioInformatics & Molecular Analysis Section(BIMAS)Peptide Binding Predictions programを用いてMHC class Iとの結合性の高いペプチド配列を選出した。さらに結合性から選出されたペプチドを合成し、実際にGL261特異的CTL株(GCL-1)との反応性を解析することにより、グリオーマ特異的なT細胞が認識するMHC class I(H-2D^b)結合性のエピトープペプチドを同定した。一方、同定した抗原遺伝子GARC-1を発現ベクターに組込み、遺伝子銃によりマウスを免疫した後、脾臓およびリンパ節よりT細胞を調整し、グリオーマ特異的な免疫誘導性を解析した。その結果、GARC-1抗原遺伝子を用いた癌ワクチンを行うことにより、GARC-1抗原特異的なT細胞を誘導しうることが明らかになった。以上、グリオーマ抗原GARC-1由来のH-2D^b結合性のT細胞ペプチドを同定し、抗原特異性、MHC結合特異性、さらにT細胞誘導能を証明した。
岡山県78市町村の地域社会構成及び企業・世帯のニーズ変動調整とその指標化

本研究は、岡山県の地方都市(岡山・倉敷市)近郊の異なった類型である総社市、山陽町の住民階層の生活ニーズ・コミュニティ意識を調査し解明したもの。第一部で、岡山県78市町村全体を一つの県域としてマクロな視点からその全体構造を明らかにし、県全体が二つの主要な中心都市の同心円的な空間構造を持ち、その構造上の位置との関連で、78市町村がそれぞれの社会構成上の特性を持つことになっていることを明らかにして市町村の類型を析出し、二つの地域の地域特性を明らかにしている。第二部で、両地域の社会構造の内部的構成を解明し、なぜそのような特性を持つかをマクロな視点から説明している。両地域は例えば、現在人口の過半が高度成長期以後の移住者からなるなどの近郊混住地域の特性を共有するが、その住民階層構造はかなり対照的で、一方は倉敷の新産都市化とともに製造業を市内に持ち、その発展とともに、郡部からの労働力の移入を重要な住民層として、移住人口の推移からみられた自立性の高い製造業地域であるが、他方は岡山市のベッドタウンとして、岡山市と一体で定住圏を構成している地域であり、こうした差異がこの地域の住民階層構成に大きな違いを生んでいる。第三部として、このような異なった地域の異なった階層構成の地域社会での、住民の地域社会でのニーズのあり方、住民関係のネットワークの違い、地域社会発展に関するイメージ、コミュニティ意識の差異などを明らかにし、更に実際のコミュニティ活動の場をなしている単位に近い市町村内部の地区単位についてまで、その住民階層とその意識を分析し、町内会分析では得られない県全体の空間構造のマクロな枠組みの中でのコミュニティ解明を手がけて、その構造を説明理解する試みを行った。自治体の総合計画の策定過程、その政策について調査・参与観察を行ったが山陽町についてのみ一定のコメントを行い、マクロな定住圏との関連で有効な問題設定を行い得ることを示唆している。平成2年國勢調査第一次・第二次基本調査のうち、磁気テープ形態で公表されている部分に関して、岡山県78市町村の地域特性分析を行ない、中間報告を作成中である。この分析にもとづき、特に、社会変動がきわだって大きな、しかし地域社会構成上異なった特性をもつ混住な市町村である総社市と山陽町について調査を行なった。前者は、製造業、大を学〓〓〓の構成〓で特性をもつ倉敷市の郊外にあり、現業労働従事者の多い製造業型の混住地域である。後者は、第三次産業と地方中枢〓機関の点で特性を示す岡山市の郊外住宅地で、社会増のきわだつ第三次産業従事者型の混住地域といえる。この二つの地域社会について調査を行なったが、山陽町について中間報告書を発表する予定(3月末)となっている。山陽町を6地区に分離し、各々について國調第一次基本集計の基本単住区データにより人口統系上の実態を明らかにし、各地区の1)町内全住宅からのききとり、2)一般世帯からの二棟の調査によって、地域生活ニーズの充〓について、どのような公共的な問題解決を期待しているかをたずね、〓〓〓〓の〓言をしてもらうに〓しい調査を行なった。また同時に、特に〓〓化社会問題と、近く開通する山陽自動車道インタチエンジの完成に関して、公共的な手段のみならず、どのようなタイプの問題解決〓式をとろうとしているかを調査した。その際、親族ネットワーク、社会的ネットワーク、町内会、市〓、公共〓機関、協同組合〓関係などの意義を明らかにしようとした。職業構成、ライクステーで〓世帯層構成、土着、流動の社会層構成学の、社会層の特性の独自な各地区が、上記の〓項目でどのような特性を示しているかを分析している。

最後に、特に、高令者〓〓についての各地区のニーズ、それに対する〓〓〓制度との対応関係を〓〓に〓対し、この分野の社会〓〓及び〓〓目標値などの問題を検討している。岡山県78市町村についての平成2年国勢調査及び平成3年事業所統計についての磁気テープの発刊がほぼ出揃ったと思われ,またそれぞれの基本調査区のデータもテープ化された。これらを利用し,社会諸層の地域構成特性を明らかにする作業を行なった。ついで昭和60年から平成2年にいたる78市町村の地域社会構成の変動の分析に入っている。また,S市,K市,S町等々の市町村内の町・丁特性をも解析中である。他方で,社会諸層の生活体系の現時点での特性をどう考えるべきか,多様な社会階層的地位についての文献をまとめ中で,まだその具体的成果を出すにいたっていない。現時点での生活の地域性の要因と階層性の要因のそれぞれをどう理論的に考えるべきか,検討中である。また地域社会内の地区の社会的主体による自主的な計画のネットワークを基盤にした市町村の総合計画が地域住民の生活水準を効率的に高めるためには,どのような要件をみたせばよいか,理論的仮説を検討中である。国勢調査、事業所統計を中心に岡山県78市町村がその人口構成においてどのような内部構成上の特性を持っているかについて、それぞれの市町村について分析してみた。その際の比較基準は、78市町村の平均構成である。また、岡山県全体についての人口の諸要素が78市町村にどのように配分されているかについて分析した。これら分析結果を岡山県78市町村の地図上に描くことによって、視覚的にも、全体の社会構成の空間構造がどのようなものとなっているかを分析した。分析は産業構造、就業構造、企業規模・開設時期別事業所立地などによる市町村特性と県全体の構造について行われ、また、職業階層、年齢層、世帯形態、住宅形態などの社会諸階層の配置構造からみた特性の分析、それぞれの地域の内部での就業、外部への通勤状態からみた地域の定住生活圏としての性格の分析などを、それぞれ個別に分析すると同時に、これら諸項目が相互にどのように関連して地域の特性を作ることになっているかを分析した。これらの多数の変数間の多次元的な相関分析から、地域特性全体にどのような全体を貫く傾向性があるか、基本的に地域社会はどのような類型として識別できるかなどを明らかにし、各市町村の特性を幾つかの基本的因子スコアによって定量的に表現することができた。その結果は、産業化、都市化と総称される変数を構成すると考えられる諸要因が、上記のあらゆる点で大きな説明力を有する傾向性をなし、その都市化の一次元的尺度上に78市町村が配置されることがきわめて明瞭な形で浮かび上がった。岡山県全体としていえば、岡山市、倉敷市を圧倒的な中心とした形で、県の周辺部に行くほど、この尺度上の値が少なくなっていく様が描かれている。また、とりわけ、この中心部の隣接するきわめて社会的変動の顕著な市と町を選び、その自治体の総合計画の作成過程や各社会諸層の生活問題について調査を行い、上記の空間構造がもつ問題を内在的に分析している。
シミュレーション外科的手法による能動義手の動的設計

機能性の高い能動義手の作製にあたり、症例に応じたものを用意するためには、患者個人の動きのくせや動作・作業などの内容によって個別に設計しなければならないのはいうまでもない。このような目的のため、近年シミュレーション外科の概念が確立されつつある。本研究においては、他分野では使われ始めている動的な状態を考慮した設計技法(ダイナミックデザインシステム)を利用し、能動義手の動的設計を行おうとした。これに加えて、我々は、比較的安価なワークステーションコンピュータを用い、これを実現しようとした。上記目的のため、初年度(平成5年度)においては、主としてダイナミックデザインシステムの構築までを行なった。すなわち、全体のシステムのプラニング、3次元リアルタイムシミュレーションに必要なコンピュータおよびソフトウェアの整備および全体システムのデザインを行なった。平成6年度(最終年度)では、長谷川がシステムのかなめといえる3次元リアルタイムダイナミックシミュレーションのソフトウェアを主として開発し、三宅は主として全体のシステム構築のプランおよびシミュレーションの検証を行ない、さらに医学的評価を行ない、全体の研究を統括する予定であったので、(1)平成5年度に取得したグラフィックスワークステーションを用い、シミュレーションの立ち上げと実行、(2)シミュレーションの検証と具体的デザイン、(3)医学的評価を行なった。なお、リアルタイムシミュレーションに必要な生体筋運動の解析の結果が豊富で、実際に臨床応用可能な実用的なシステムの完成にはあと少しの検討が必要と考えられる。本研究においては、他分野では使われ始めている動的な状態を考慮した設計技法(ダイナミックデザインシステム)を利用し、能動義手の動的設計を行おうとするものである。これに加えて、我々は比較的安価なワークステーションコンピュータを用い、これを実現しようとするものである。この目的のため、本年度においては以下の計画によって、主としてダイナミックデザインシステムの構築までを行なった。(1)全体のシステムのプラニング---3次元リアルタイムシミュレーションに必要なコンピュータおよびソフトウェアの整備および全体システムのデザインを行なった。(2)3次元化---現在の2次元モデルを立体的な3次元に拡張すべく、全体のアルゴリズムの開発を行なった。(2)リアルタイム変更---種々の条件(寸法、筋力、負荷等)の変更をリアルタイムで処理可能なシステムとした。(4)シミュレーションの立ち上げ---(1)、(2)を取り入れた3次元リアルタイム処理のダイナミックシミュレーションソフトウェアの開発を行なった。次年度においては、(1)シミュレーションの実行、(2)シミュレーションの検証と少数の具体的デザイン、(3)医学的評価等を行なうことにより、本手法の有用性を検証する予定である。これに加えて、我々は比較的安価なワークステーションコンピュータを用い、これを実現しようとした。
教員のための遺伝看護教育プログラムの開発と評価

わが国の看護基礎教育において遺伝遺護教育を導入・発展させていくために、看護教員のための教育プログラムの開発にあたり、国内・外の遺伝看護教育の実態調査を行った。それによると、基礎教育全体に遺伝看護の要素が盛り込まれる傾向にあること、看護学以外のコースに「遺伝カンセラー養成」等の大学院修士レベルのコースが設置されつつあった。しかし、「遺伝看護教育」とはどのようなものであり、その教育展開はどうあったらよいかを知りたいというニーズが多かった教育プログラムの内容および展開方法については、海外の研究協力者と共に国際的な視野から検討を行い、実施した。そして、臨床遺伝学の基礎と主な疾病の事例展開を中心に、E-ラーニングと対面授業を行い、websiteでの調査とフォーカスグループ・インタビューによる評価を行った。学習モニターは、全国を8ブロックに分けて募集をした看護学教員30名であった。対面授業による学習者の情報交換および交流は、遺伝看護教育のあり方を検討する上で、有意義な反応がみられた。また、学習者の要請により、本研究において作成したE-ラーニング教育内容および「国際遺伝看護教育セミナー2007&2008」の講義内容を冊子体に編集をしたわが国の看護基礎教育において遺伝遺護教育を導入・発展させていくために、看護教員のための教育プログラムの開発にあたり、国内・外の遺伝看護教育の実態調査を行った。また、学習者の要請により、本研究において作成したE-ラーニング教育内容および「国際遺伝看護教育セミナー2007&2008」の講義内容を冊子体に編集をした今年度の実施内容は以下の通りである。1.国内・外の遺伝看護教育の実態について、報告論文や通信媒体物から情報収集、有識者からの聞き取り調査により整理を行った。聞き取り調査は、国内外で開催された遺伝看護教育の関連学会の機会に行った(国際学会:19^<th>ISONG Conference, NCHPEG 2007)。国内の遺伝看護教育の状況は、教育機関に違いはあるが、看護教育内容の全体に遺伝看護の要素が導入されてきている。看護学以外のコースとして「遺伝」の大学院修士レベルのコースが設置されつつあった。2.わが国の遺伝看護の専門性に関する見通しについて、看護界の現状から分析を行った。継続教育として、遺伝専門看護師として立ち上げるか、専門看護師教育の中に「遺伝看護」を位置づけるかの検討が行われていた。本研究においては、遺伝看護の基礎教育と継続教育の有り方を考えていく必要がある。3.教育方法・教材作成についての検討を行った。e-ラーニングに関する学習会の開催や教育の実施者からの情報収集を行い、教材の作成に着手した。また、遠隔対面授業の送信を試みた。4.対面授業として「国際遺伝看護教育セミナー」を企画した。平成19年10月に東京で開催することとし、開催会場の予約を行った。また、海外研究者との打ち合わせ、講師依頼を行った(海外研究脇力者:Skirton Heather, Prows A. Cynthia)。5.全国を8ブロックに分け、看護教育者を対象に学習モニターの募集を行った。平成19年度の実施内容は以下の通りである。3.学習モニターへ教育プログラムの展開を開始した。1)学習の事前調査をwebsiteで行った。2)対面授業に2名の海外専門家を講師としてし招聴して"International Symposium Genetic Nursing Education 2007"を東京国際交流センターで開催した。本研究者達は、これまでの調査や教育実践について講義を行った。講義に対する質疑・応答が活発に行われ、また交流の時間の活用により、情報収集・交換が行われた。4.E-ラーニング教材の内容についての企画・検討を行い、作成中である。また、演習用の教育媒体物を考案し、業者に作成を依頼した。平成20年度の実施は以下の通りである。1.遺伝看護のE-ラーニング教材として、主な遺伝性疾患の事例展開学習ができる5事例を作成した。そして、研究協力者である看護教員にE-ラーニングを行い、さらに対面授業である「国際遺伝看護教育セミナー2008」で、フォーカス・グループインタビューによる教材活用についての評価を行った。2.本プログラムにおける第2回目の対面授業である「国際遺伝看護教育セミナー2008」において「遺伝学の知識」「遺伝情報の活用」「事例展開のE-ラーニング教材から3事例の学習」「米国における遺伝看護教育:招聘講師KAREN GRECO, RN, PhD」の講義を行った。3.本プログラムにおいて作成したE-ラーニング教育内容および「国際遺伝看護教育セミナー2007&2008」の講義内容を冊子体に編集をした。
関西エリアにおける入力地震動モデルの策定と建築構造物の地震被害軽減に関する研究

上記の研究課題に関連して、以下に示す研究成果として纏めることができる。1.関西大学における地震観測記録を整理しデータベースを構築した。そして,特に長周期地震動としての顕著な特徴を有する2004年東海道沖・紀伊半島沖の地震を中心に,各種建物(免震建物,S造建物,RS造建物)の応答観測の分析やシミュレーション解析を通して,構造物の振動特性並びに耐震性能を評価した。2.地震動の長周期成分を適切に表現し得る簡易な入力地震動モデルとして「疑似加速度型パワースペクトル密度関数モデル(PAモデル)」を新たに提案した。そして,PAモデルの予測的策定のため,関西エリアを中心とする地震観測記録の統計的分析により,これを規定するパラメータに関する距離減衰式を作成した。更に作成した距離減衰式を用いて,各種地震動(マグニチュード,震源距離,表層地盤特性)が構造物に与える影響を,地震入力エネルギースペクトルとして定量的に評価した。3.コンクリートブロック組石造と木造長屋の住宅を対象に行われた静的・動的実験から、その基本的な動的パラメータの特性を明らかにし,それを導入した地震応答計算を通してその応答特性を比較した。入力レベルが大きくない地震動を想定した場合,建物の構造特性としてブロック型にはQuad Linear型に近い復元力モデルを、一方入力レベルに関係なく、長屋には履歴型に加えてスリップ型とハードニング型を採用すれば、実態に即した耐震性能の高い建物を作ることができ,地震被害低減,防災対策に繋がることが判断できた。4.長屋の住戸が集合する場合、直交壁の効果が地震時に有効であること、住戸が単体で建つ場合には、直交壁量の多少よりも間口、奥行方向それぞれの耐力確保が必要であることを確認した。1.関西大学においてこれまでに観測された地震動記録を整理し,データベースを構築した。そして,主要な地震記録について,次のような分析を行った。(1)岩盤と地表の観測記録の比較により表層地盤の増幅特性を評価した。(2)免震建物における観測記録より,免震層下部(入力)-免震層上部建物(出力)の伝達関数,コヒーレンスを評価し,これに基づいて免震装置の動特性を同定した。(3)地下階を有するRC造建物の観測記録より,構造物と地盤の動的相互作用(入力損失)を定量的に評価した。(4)剛性が偏在するS造建物の観測記録より,水平成分の達成を考慮した伝達関数(マトリクス)を評価し,捩れ振動の性状を明らかにした。2.長周期成分に富む2004年9月5日の東海道沖,および紀伊半島沖の地震の観測記録を拡幅して「仮想長周期地震動モデル」とみなし,これに対する免震建物の地震応答解析を行った。そして,耐震安全性と居住性の観点から指定した最大変位および最大加速度に関するクライテリアを満足するために必要とされる免震装置の性能について検討を加えた。3.入力地震動モデルとして,高層建物や免震建物などの長周期構造物の応答評価にも適用可能なパワースペクトル密度関数モデルを新たに提案し,それに基づく確率論的なエネルギー応答評価を通して,「仮想長周期地震動」を含む各種地震動に対する適用性について検討を加えた。4.長屋を想定した1軸偏心を有する在来軸組木造建物において,偏心軸と直交する方向の壁の多少が建物の捩れ振動を抑制する効果について,建物モデルの地震応答解析を通して検討した。5.実大3次元震動破壊実験施設(E-Defence)において実施された京町家耐震補強震動台実験の記録の一次処理を行い,伝統木造家屋の復元力特性の評価を試みた。今年度の研究成果は以下に示すとおりである。1.長周期地震動に対する実在免震建物の耐震性能を評価するために,2004年東海道沖・紀伊半島沖の地震での関西大学工学部第1実験棟免震建物における地震観測記録のシミュレーションを行った。

振幅は小さいが,継続時間が長く長周期成分に富む地震動に対する免震建物の応答挙動を精確に評価するためには,免震層の微小振幅時における復元力特性の非線形性を考慮することが不可欠であることが明らかとなった。2.地震動の長周期成分を適切に表現し得る簡易な入力地震動モデルとして新たに提案した「疑似加速度型パワースペクトル密度関数モデル(PAモデル)」の予測的策定のため,関西エリアを中心とする地震観測記録の統計的分析により,PAモデルを規定するパラメータの距離減衰式を作成した。更に作成した距離減衰式を用いて,各種地震動(マグニチュード,震源距離,表層地盤特性)が構造物に与える影響を,地震入力エネルギースペクトルとして定量的に評価した。3.実大振動実験に採用された京町屋を簡易な建物モデルと復元力特性を仮定して再現を試みた。その結果、伝統木造軸組の場合、在来木造軸組と同様に履歴型とスリップ型のような簡単な復元力特性で実験結果の再現が可能である。再現を試みる場合には、繰り返し加振による剛性低下を適切に考慮しないと再現性が低い。大変形時の復元力の硬化現象を再現するためには、履歴型、スリップ型、更にハードニング型の復元力特性を用いると良いが、応答波形の再現性を高める為には粘性及び履歴減衰を精査する必要があることも確認できた。4.長屋を対象に、住戸が集合する場合、直交壁の効果が地震時に有効であること、住戸が単体で建つ場合には、直交壁量の多少よりも間口、奥行方向それぞれの耐力確保が必要であることが判った。
中枢機能を利用した哺乳動物の病体制御に関する研究

本研究の主要な目的は,視床下部による代謝と摂食の制御機構の神経機序を追究することで,肥満,糖尿病,摂食異常などの病態を制御するとともに,脂肪蓄積や体成長を中枢性に制御する方法論の基礎を確立することである.このために,我々が既に作出しているヒト成長ホルモン遺伝子導入形質転換ラットに加えて,新たにヒト成長ホルモン受容体遺伝子,ならびに摂食・代謝制御に関わる遺伝子として同定されたobese(ob)遺伝子を導入した形質転換ラットを作出し,これら三者,あるいは三者間の子孫を代謝疾患モデル動物として確立させることを試みた.ヒト成長ホルモン遺伝子を発現する形質転換ラットでは,視床下部におけるソマトスタチンニューロンの活動が亢進し,成長ホルモンのパルス状分泌が抑制され,高度の肥満を呈することが明らかとなった.一方,ヒト成長ホルモンおよびヒト成長ホルモン受容体をもつバイジェニックラットでは,脂肪重量,血中レブチン濃度の減少が認められた.すなわち,肝臓に成長ホルモン受容体が過剰に発現することにより,脂肪重量が低下することが明らかとなった.一方,視床下部による摂食の制御については,アンチセンスDNAを効率に細胞内に取り込ませるHVJリポソーム法によりGABA合成酵素(GAD)アイソザイム遺伝子を視床下部により投与し,GAD65が摂食の制御に深く関わっていることを明らかにした.これらの結果より,成長ホルモンのパルスパターンを変化させたり,GAD65などの遺伝子の発現を制御することにより,肥満,糖尿病,摂食異常などの病態を制御することができることが考えられた.本研究の主要な目的は,視床下部による代謝と摂食の制御機構の神経機序を追究することで,肥満,糖尿病,摂食異常などの病態を制御するとともに,脂肪蓄積や体成長を中枢性に制御する方法論の基礎を確立することである.このために,我々が既に作出しているヒト成長ホルモン遺伝子導入形質転換ラットに加えて,新たにヒト成長ホルモン受容体遺伝子,ならびに摂食・代謝制御に関わる遺伝子として同定されたobese(ob)遺伝子を導入した形質転換ラットを作出し,これら三者,あるいは三者間の子孫を代謝疾患モデル動物として確立させることを試みた.ヒト成長ホルモン遺伝子を発現する形質転換ラットでは,視床下部におけるソマトスタチンニューロンの活動が亢進し,成長ホルモンのパルス状分泌が抑制され,高度の肥満を呈することが明らかとなった.一方,ヒト成長ホルモンおよびヒト成長ホルモン受容体をもつバイジェニックラットでは,脂肪重量,血中レブチン濃度の減少が認められた.すなわち,肝臓に成長ホルモン受容体が過剰に発現することにより,脂肪重量が低下することが明らかとなった.一方,視床下部による摂食の制御については,アンチセンスDNAを効率に細胞内に取り込ませるHVJリポソーム法によりGABA合成酵素(GAD)アイソザイム遺伝子を視床下部により投与し,GAD65が摂食の制御に深く関わっていることを明らかにした.これらの結果より,成長ホルモンのパルスパターンを変化させたり,GAD65などの遺伝子の発現を制御することにより,肥満,糖尿病,摂食異常などの病態を制御することができることが考えられた.本研究の主要な目的は,視床下部による代謝と摂食の制御機構の神経機序を追究することで,肥満,糖尿病,摂食異常などの病態を制御するとともに,脂肪蓄積や体成長を中枢性に制御する方法論の基礎を確立することである.このために,今年度は我々が既に作出しているヒト成長ホルモン遺伝子導入形質転換ラットに加えて,新たにヒト成長ホルモン受容体遺伝子,ならびに摂食・代謝制御に関わる遺伝子として同定されたobese(ob)遺伝子を導入した形質転換ラットを作出し,これら三者,あるいは三者間の子孫を代謝疾患モデル動物として確立させることを試みた.後二者の遺伝子を導入した形質転換ラットを作出するにあたって,全く新たな画期的な遺伝子導入方を開発した.これは導入遺伝子をリポソーム複合体の形で精巣内に投与し,一定期間経過後に正常雌と交配させ,出産個体を形質転換動物として得るものである.我々はこの手法を用いて,ヒト成長ホルモン受容体遺伝子およびob遺伝子を導入した形質転換ラットを作出することに成功した.特にヒト成長ホルモン受容体遺伝子を導入したラットにおいてはそのmRNAの発現を肝臓において確認することができ,また既にF2世代まで継代することができ,系統化することに成功した.さらに,ヒト成長ホルモン遺伝子導入ラットとの間のハイブリッド個体を作成することにも成功した.次年度においては,これらのラットの表現型,特に中枢機能の解析を中心的に行う予定である.本研究の主要な目的は,視床下部による代謝と摂食の制御機構の神経機序を追究することで,肥満,糖尿病,摂食異常などの病態を制御するとともに,脂肪蓄積や体成長を中枢性に制御する方法論の基礎を確立することである.このために,今年度は我々が既に作出しているヒト成長ホルモン遺伝子導入形質転換ラットに加えて,新たにヒト成長ホルモン受容体遺伝子,ならびに摂食・代謝制御に関わる遺伝子として同定されたobese(ob)遺伝子を導入した形質転換ラットを作出し,これら三者,あるいは三者間の子孫を代謝疾患モデル動物として確立させることを試みた.後二者の遺伝子を導入した形質転換ラットを作出するにあたって,全く新たな画期的な遺伝子導入方を開発した.これは導入遺伝子をリポソーム複合体の形で精巣内に投与し,一定期間経過後に正常雌と交配させ,出産個体を形質転換動物として得るものである.我々はこの手法を用いて,ヒト成長ホルモン受容体遺伝子およびob遺伝子を導入した形質転換ラットを作出することに成功した.