hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
家庭用大型洗濯機による毛布の洗浄力評価法に関する研究

わが国では家庭用電気洗濯機の普及が全世帯のほぼ100%に達している現状で、家電メーカーは全自動式をはじめ二槽式洗濯機についても種々改良を加え、新製品の開発に工夫をこらしている。なかでも洗濯容量を大型化して毛布などの大物の洗濯を可能にすること、各社が独自に開発した回転翼による新しい水流によって、洗浄力の向上と被洗物の損傷劣化を最少限にすること、などを目標に、実用性・操作性の向上を強張している。われわれはこれまでに実施してきた全自動を含む数種の新水流洗濯機に関する一連の研究に引きつづき、今回はとくに洗濯容量の大型化に注目して、新しく試験洗濯機を加え、宣伝されている毛布の洗浄において、洗浄力評価方法を中心に、被洗物の損傷劣化(収縮率、減量、風合い等)の程度と、すすぎ率(毛布に残存する洗剤量の定量)、および取り扱い易さ(操作性)などについて検討を行った。使用洗濯機は二槽式(三菱Mr.かくはん、日立からまん棒、三洋手もみL、シャープ愛情センサー)の4機種、自動二槽式(ナショナルNew愛妻号、東芝最洗ターン)の2機種、全自動式(ナショナル愛妻号、東芝最洗ターン)の2機種の計8機種とJIS標準洗濯機の併せて9種で、いずれも規準コースを基準とした。被洗物にはアクリルのタフト毛布(サイズタテ200cm、ヨコ140cm、厚さ9.0mm±0.2mm、重量1.41.5kg)を(各洗濯機につき2枚宛)使用した。洗浄力の評価法は標準人工汚染布による電気洗濯機のJIS法に準じて行った。その結果汚染布の取り付け位置、ネット使用の有無等による洗浄効果への影響が大きいこと、ネットの使用が毛布の損傷劣化を軽減すること、二槽式では洗濯槽の容量に対して脱水槽の容量に問題があること、すすぎ効果が必ずしもじゅうぶんでないことなどが明らかになった。
北方日本地域における木造磯舟製作技術から木造動力船建造技術確立への史的研究

産業資本の展開の一つは採鉱冶金業である。北方日本では早くは釜石、小坂、鹿角であるが、採鉱冶金業はまた運送業でもある。日本列島で3番目の鉄道建設は釜石である。一方、水産業を支える港湾の建設は函館や八戸、石巻地域において顕著な工業化を推進する。これは地下資源の船舶輸送、造船、水産加工品輸送が決めてで、無動力船から動力船への移行はこの港湾建設と深く関わる。このうち動力船建造は鉄工所そのものであったから、金属、機械、電気、鍍金、塗装工業などと連結する。さらに、精巧なエンジンの開発やメンテナンスが求められ、船体の素材はさまざまな起業を促進した。しかし、大資本との競合は地域の造船数を縮小する。だが、磯舟技術が動力船に先行する地域の技術遺産であり、そこには「産業間の連鎖」反応を確認することができる。八戸地域ではハイテク造船業があるが、その背景に「産業間の連鎖(ネット)」を高度化する知的基盤の一つとして磯舟建造技術から動力技術への移行に関わる技術展開がある。本研究は、無動力船・磯舟を建造していた船大工たちが木造動力船建造技術を修得する過程を証明した。具体的には、・三陸・八戸地区の磯舟製作者たちの技術伝達の系譜・幕末期の北東北地域における洋式船建造の実態・幕末開港期の外国船舶来航の実態・開港場における技術教育の実態-造船部局はどうなっているか。・明治昭和期における漁船建造の実態・造船業構造の変遷と「時代のニーズ」の変化・造船大工・技術集団の技術講習などについて調査し、比較分析した。北方日本地域の木造動力船技術の特徴を明確にするには、地元八戸地域の造船の特徴を基準にして、北は函館から南は石巻・塩釜に及ぶ三陸沿岸、北海道道南部沿岸、更に三重県鳥羽市における造船技術について比較検討する必要が出た。八戸地域で木造動力船建造の技術が萌芽するのが大正初年で、その確立は大正末年からという仮説をたてた。2.そのため、調査先は、(1)鳥羽市、(2)石巻市、(3)宮古市、(4)函館市を主とし、その近辺の造船所、旧造船所関係者(山田佑平、北村亀蔵の子孫)たちに両親調査し、資料の収集を行なった。その結果、(1)「西洋形帆船講習録」(明治43年岩手県下閉伊郡大沢村)、(2)「木造船戦時標準型要項」(昭和17年、函館市日魯漁業造船所)、(3)「木造船設計図」多数(宮古市・北村造船所ほか)などを収集、あるいは撮影、記録することができた。また、木造動力船の工程を記録した8ミリフイルムも発見した。3.地元の八戸地域、青森県・岩手県では、博物館収集の木造動力船とは別に、係留されているそれを発見した。たとえば、八戸鮫港・漁吉丸(昭和45年9月15日進水、八戸佐川造船所)、八戸市川港・松和丸(不明)である。漁吉丸の建造者は生存していることもわかった。4.私的・公的資料の存在時少ないが、青森県八戸水産事務所には漁船の「船籍簿」が戦前のものとしては多数残存していることがわかった。また、国土交通省の各海事事務所にはやはり、大型船の「船籍簿」が残存していて、これらに目を通した。特に、八戸では漁船の船籍簿の古いものはほとんど木造船であるところから、これをすべて手書きで写し取る許可を得て、収集した。この分析はまだであるが、これは貴重なものと判断した。他県各所の水産事務所ではこのような資料は殆んど廃棄されていることを確認している。5.磯舟船大工の技術系譜を調ぺたが、磯舟の大工が木造動力船の木工となるには技術の「壁」があり、各地で「技術講習会」などが繰り返されたこと、そして若手大工がそれを習得したが、高齢の棟梁たちがそれから脱落したことがわかった。

産業資本の展開の一つは採鉱冶金業である。北方日本では早くは釜石、小坂、鹿角であるが、採鉱冶金業はまた運送業でもある。日本列島で3番目の鉄道建設は釜石である。一方、水産業を支える港湾の建設は函館や人戸、石巻地域において顕著な工業化を推進する。これは地下資源の船舶輸送、造船、水産加工品輸送が決めてで、無動力船から動力船への移行はこの港湾建設と深く関わる。このうち動力船建造は鉄工所そのものであったから、金属、機械、電気、鍍金、塗装工業などと連結する。さらに、精巧なエンジンの開発やメンテナンスが求められ、船体の素材はさまざまな起業を促進した。しかし、大資本との競合は地域の造船数を縮小する。だが、磯舟技術が動力船に先行する地域の技術遺産であり、そこには「産業間の連鎖」反応を確認することができる。八戸地域ではハイテク造船業があるが、その背景に「産業間の連鎖(ネット)」を高度化する知的基盤の一つとして磯舟建造技術から動力技術への移行に関わる技術展開がある。本研究は、無動力船・磯舟を建造していた船大工たちが木造動力船建造技術を修得する過程を証明した。具体的には、・三陸・八戸地区の磯舟製作者たちの技術伝達の系譜・幕末期の北東北地域における洋式船建造の実態・幕末開港期の外国船舶来航の実態・開港場における技術教育の実態-造船部局はどうなっているか。・明治昭和期における漁船建造の実態・造船業構造の変遷と「時代のニーズ」の変化・造船大工・技術集団の技術講習などについて調査し、比較分析した。
ニューロダイバーシティによる感覚再統合のためのメディアアート脱構築

ニューロダイバーシティによる多様な世界像を体験できる場の構築を進めるための実験として展覧会「アートと遊びと子どもをつなぐメディアプログラムメディア実験室」に今年度前半の研究成果を出展した。同展覧会は愛知県児童総合センターにて、2018年9月22日から30日までの9日間実施された。同展覧会開催を通じてコンコルディア大学所属の研究協力者との共同による研究および制作についての方向性や手法についての発展的な意見交換ができた。また、同展覧会では、3歳から5歳までの児童らに制作段階から参加させる手法を取った。同手法は作品の調整や展示方法などに活かされ、愛知県児童総合センターに訪れた鑑賞者を体験者として参加させる際に、特に児童らの参加しやすさを醸成するうえで効果的であった。一方で展覧会での体験を、より親密な体験とするためには、従来の愛知県児童総合センターにおける展示への鑑賞者の参加方法では十分ではないことがセンタースタッフの意見として挙がってきたため、展示への参加方法についても研究を進めることとなった。加えて、多様な世界像を持つ児童の研究を進めるために、特別支援学校の協力を得て、多様な生徒の教育現場における生活の現場を知り、その知見からメディアを活用した創造的空間の構想を進めることとなった。同施設での研究成果をもとに、愛知県児童総合センターでの展覧会を発展させることとなった。2019年度および2020年度の9月に展示を実施し検証する。ニューロダイバーシティによる多様な世界像をメディアアートを活用して体験的に相互理解できる場として創造する本研究の成果発表および検証の場として、愛知県児童総合センターでの展示を研究期間中の3年間実施する計画であり、2018年9月に1回目の展示を実施することができた。同展示を通して、コンコルディア大学所属の研究協力者との共同制作や、3歳から5歳までの児童との共同制作の手法を実践的に進めることができた。また、特別支援学校の協力を得て、ニューロダイバーシティによる多様な世界像への理解を深めることができた。同施設での理解をもとに研究協力者との情報共有を進めることができた。これらの実践をもとに、2年目の展覧会に向けた研究制作を進めている。研究成果を広く一般に展覧会という形態で発信しながら研究を進める手法を継続していく。具体的には2019年度および2020年度の9月にそれぞれ展覧会を愛知県児童総合センターで実施していく。同展覧会へ出展する作品は、東京方面の特別支援学校などの施設に所属する児童らのために開発するメディアアート作品をもとに、多様なニューロダイバーシティの相互理解の視点から開発を進める。開発にあたっては、コンコルディア大学所属の研究協力者との共同制作を進める。

当該年度は所属する研究機関の近隣施設である愛知県児童総合センターにおける研究を中心に実施していたため旅費がかからなかったため。次年度は遠方での調査研究を計画しており、次年度使用額を効果的に活用する。具体的には東京方面の特別支援学校での調査研究および展示を計画している。
Crow-Fukase症候群の病態と治療法に関する研究

1996年にCrow-Fukase症候群において血清中のVEGFが著明に増加していることを報告(Lancet;1996)して以来、国内外の施設においてその事実が追試・確認され、これまで困難であったCIDP (chronic inflammatory demyelinating polyneropathy)や多発性骨髄腫との鑑別が容易となった。それはまた、VEGFが本症候群の病態に密接に関与していることを裏付ける結果ともなった。血清中に著明に増加しているVEGFはすべて血小板由来であり凝集反応の際に放出されることを証明した。またこのVEGF放出反応はADPなどの血小板凝集アゴニストの生理的濃度において認められることを証明した。本症候群において末梢血血小板数は治療前ほぼ全ての症例において高値を示し、血清VEGF濃度とは有意に正の相関を示した。本症候群においてVEGFが血小板に高濃度に存在することにより血管内皮細胞上でのVEGFの局所濃度は更に高まり血管透過性亢進、血管新生、凝固反応の亢進、単球・マクロファージの遊走等の生理活性が加速されると予測される。事実、培養血管内皮細胞の増殖反応は患者血清による刺激では亢進しなかったが、濃縮した血小板の抽出産物を用いることにより亢進を認めた。また血小板細胞質内のVEGFをflow-cytometry、immunofluorescence-confocal laser scanning microscopyにて確認した。また1患者において血清VEGFを診断からDIC発症による死亡にいたるまでフォローし得る機会を得た。その結果、患者の血清VEGFはDIC発症前には低下傾向を示し,血清VEGF値がDIC発症の予知的マーカーになることも示すことができた(投稿中)。これらのことから血小板VEGFの過剰蓄積と本症候群の病態には密接な関係が予測されるが、この仮説を立証するためにVEGF血小板特異的発現トランスジェニックマウスの作成を試みた。血小板特異的にVEGFを発現させるため、血小板第4因子のプロモーターの下流にLox P-EGFP-Lox P-VFGF165の構成を持つコンストラクトを作成した。3系統のF0マウスを得ることに成功し現在F1マウスを取得中である。本マウスの解析により、血小板VEGFの本症候群の病態への関与のみならず、血小板VEGFの生理的機能の解明、例えば創傷治癒、動脈硬化、血管新生、血管リモデリングへの関与の機構も明らかになると期待している。(1)全国からの依頼検体を含めた本症候群30症例の血清・血漿VEGF濃度の測定および個々の臨床症状との関連を解析した.その結果,血清VEGF濃度は血漿VEGF濃度に比べ著しく高値であり,また主要症候と血清VEGF濃度に関連のあることが示され本症候群の病態におけるVEGFの重要性が裏付けられた.(2)ラット坐骨神経へのVEGFのintraneural injectionによる神経障害の電気生理学的・病理学的検討によりVEGFのisoformと神経障害との関連が明らかとなった.

(3)本症候群に伴う凝固亢進状態の機序解明のため,患者より調製した血小板の解析により血漿よりも高値を示す血清VEGFは血小板中に存在していること,血小板への生理的刺激による凝集により多量のVEGFが放出されることが明らかとなり,本症候群における抗血小板療法の重要性が示された.次年度は血小板中にVEGFがstoreされる機序について骨髄巨核球によるVEGFの過剰産生および血小板の末梢血中でのVEGFの取り込みの二方向より検討する予定である.(4)VEGF産生ヒトglioblastomaのnude mouseへの移植に成功し血清VEGF濃度の上昇を確認した.次年度は諸臓器摘出標本を用いて病理学的に本症候群患者の剖検標本と比較検討し高VEGF血症の生体組織に及ぼす影響を検討する予定である.(5)VEGF発現transgenic mouse作成のための準備が整い次年度より開始予定である.(1)全国のCrow-Fukase症候群患者40例で血清VEGF濃度を測定し,臨床症状および臨床検査所見との関連について検討した。その結果,Crow-Fukase症候群の主症状の数が多いほど血清VEGF濃度が高く,診断的価値が高いことが明らかになった。また血清VEGF濃度と血小板数は正の相関を示し,昨年度明らかにした血清VEGFの多くが血小板中に存在することをさらに裏付けた。(2)VEGFを産生するヒトglioblastomaを移植したヌードマウス(血清VEGF>3000pg/ml)とCrow-Fukase症候群患者の病理所見を比較検討した。剖検時,浮腫が著明で,臓器腫大は肝臓,脾臓,腎臓に見られた。肝臓ではSinusoidの著明な拡張と相対的肝細胞の減少が特徴的であった。脾臓では血管腔の著明な拡大,リンパ濾胞の減少,megakaryocyteの増加が,腎臓では糸球体の著明な腫大,糸球体内のcapillary拡大,sinusoid様に血管内皮細胞の増殖,Mesangium matrixの増殖が見られた。一方,その他の臓器には明らかな異常はなく,末梢神経系では一部に神経周膜下に軽度の浮腫が見られるのみで,軸索,髄鞘には異常を認めなかった。以上から高VEGF血症ヌードマウスの臓器病変は基本的にはCrow-Fukase症候群で見られる臓器病変と一致し,VEGFの病態への関与が確認されたが,末梢神経の病変には,VEGF以外のT細胞機能の関与が示唆された。(3)Crow-Fukase症候群患者の血清あるいは血漿中のmatrix metalloproteinase(MMP)を測定した。その結果,血清中のMMP-2,MMP-3,MMP-1,血漿中のMMP-9が有意に上昇していた。またGelatin zymographyではProMMP-2,ProMMP-9ともに有意に増加していた。MMPsはVEGFとともに血管新生,内皮細胞障害,内皮barrier機能を障害する事が報告されており,とくにCrow-Fukase症候群における末梢神経障害の発症に強く関与していることが考えられた。(4)本年度はtransgenic mouse作成のためのベクターの作成がほぼ終了し,次年度に作成予定である。
ラット肝臓培養細胞におけるセレンの有効性に関する研究

セレニウムは過酸化物の代謝に重要な役割を果たしている酵素、グルタチオンペルオキシダーゼの反応中心を構成している、動物にとっての必須微量元素である。人をはじめとする動物はセレニウムを主に食物から摂取しているが、その吸収後の利用については明らかにされていない部分が多い。本研究は、セレニウムによるグルタチオンペルオキシダーゼ誘導の機構及びその代謝の機構を明らかにしようとしたものである。動物培養細胞(セレニウム欠乏及び充足ラットから分離した初代肝実質細胞、及びヒト肝癌由来株細胞)を用いて、細胞の生育とグルタチオンペルオキシダーゼ活性に対するセレニウム化合物(亜セレン酸、セレノメチオニン、エブセレン)の添加効果を検討した。1)セレニウム欠乏及びセレニウム充足ラット肝臓の初代培養細胞における検討;セレニウム欠乏及び充足飼料で飼育したラットから、コラゲナーゼ潅流法によって肝実質細胞を分離し、セレニウム化合物を添加して培養した。セレニウム欠乏ラット由来の肝細胞においては、亜セレン酸の形態のセレニウム添加がグルタチオンペルオキシダーゼ活性の発現に最も有効であった。セレニウム充足ラット由来肝細胞の場合では、セレニウム化合物の添加によって、グルタチオンペルオキシダーゼ活性を維持する傾向が認められた。2)ヒト肝ガン由来株細胞HepG2における検討;Hep G2細胞において、亜セレン酸、セレノメチオニン、エブセレンを添加すると、細胞の増殖を促進する効果が認められた。また、グルタチオンペルオキシダーゼ活性に対しては、亜セレン酸、セレノメチオニンの順に活性増加に有効であったが、エブセレンでは効果がみられなかった。これらのことから、セレニウムの化学形態によって細胞内での機能と有効性の異なることが明らかになった。
エマルゴトレーニングによる学校事故・災害の教育プログラム

養護教諭養成課程の必修科目「教職実践演習」において、自然災害発生のエマルゴトレーニングを用いたシミュレーション学習を実施し、展開の様子の分析と実施者・観察者アンケートを実施した。学生の演習満足度は高い結果であったが、「実際の災害時に自分が動けるか不安」「大変なことは理解できた。ただ、繰り返ししないと自信につながらない」等の意見があった。実践力に関する分析では、全体活動のイメージ化の高さにより、実働可能な人材へのアクセス、活動の優先順位をふまえた実施などの判断と対応の決定の所要時間と連絡・連携に影響していた。以上から、養成教育におけるエマルゴトレーニングシミュレーション演習は実践力の確認と獲得に有効であるが、確認を予測性の裏付けを相互評価する必要があった。養護教諭現職研修では、感染症集団発生のエマルゴトレーニングシミュレーションを実施し、展開の様子の分析と実施者・観察者アンケートを実施した。参加者の研修満足度は高い結果であったが、「自校では、そこまで出来ない」「協力が得られるか不安」「自校の校内研修で実施し、教員にイメージさせることも重要だと感じた」等の意見があった。現職研修では、参加者の学校の現状を事前に把握し、現状を踏まえた設定で事例を提供することで活動に関するイメージ化するプログラムの準備が課題であった。以上から、養成教育と研修により即した修正プログラムを検討し、その内容から評価を設定する。研究計画にそってすすめている。研究計画にそって、すすめていく。養護教諭の行う救急処置の対応の評価(養護診断)の在り方について、学校事故事例の質的分析、学校管理下におけるケガの頻度と程度を量的に分析し、緊急度・重症度に応じたフィジカルアセスメントの技術の選択と実施順序を提案した。その結果、医療や消防が行う解剖的・生理的身体変化による方法は、緊急時の第一選択としてもつべき基盤の力量として有効であるが、学校現場では傷病に応じたトリアージ実践力のためのフィジカルアセスメントの技術の獲得が必要であった。フィジカルアセスメントの方法は、学校事故の死亡事例・障害・後遺症事例から絞り込みを行って選択する。発育発達段階を理解して実施することが有効であった。以上の調査から、視診で判断する観察力と症状や受傷機転から絞り込みを行う問診力が、学校現場の救急処置実践力として求められることをふまえ、教職実践演習で実施するエマルゴトーレニングプログラム案を作成し大学院生に試用した。今後は、教職実践演習の準備として、事前学習テキスト作成、ファシリテーターの介入、評価の数値化を実施する。次に、学校救急体制の実際と課題の明確化のために、現職養護教諭に対して半構成インタビューガイドを用いて面接調査を実施した。その結果、校内で発生するケガや事故には、養護教諭の学校救急処置実践と、校内連携の在り方が、相互に影響していた。さらも、運動部活動の顧問教諭に対して、アンケート調査を実施した。顧問教諭の指導や応急処置に対する自信の有無は、自身のスポーツ経験が影響しており、研修を受けたり、正しい知識を得るための校内体制は整っていなかった。このことより介入の必要性が理解できた。以上は、論文としてまとめ、現在投稿している。次年度使用額がないため、記入しない。
表現運動(舞踊)の指導力を向上させるために有効な指導言語と評価との関係について

本研究における目的は、舞踊運動における指導内容と方法に関する指導言語と、指導者の舞踊運動を見る観察の眼である評価との関連を明らかにすることによって、今後の舞踊表現の指導に資することである。本研究では、評価しようとする舞踊運動が対象として妥当かどうかの検討のために運動分析を行い、舞踊運動の物理的な特性を考察した。IIでは、舞踊を「見る」ことがどのような認知枠組みに基礎づけられるのかを検討するために、評定実験を行い、その結果を多変量分析した。評定実験の結果を因子分析したところ、力性、時間性、空間性に関する語彙から8つの舞踊運動の多様性に応じるには少なくとも19対語の評定用語が必要なことが示唆された。評価する観点(観察する眼)に対する客観性の検証(動作分析と評価実験との対応)の段階では、まず、舞踊経験が舞踊運動を見ることにどのように関連しているのかを検討し、その見るという評価と舞踊運動の物理的な特性との対応も検討することができた。舞踊経験と評価との関連では、舞踊経験が「見る」ことにどのように関与するのかを検討するために、舞踊経験の異なる3つのグループに対して評定実験を行い、有意差の検討と多変量解析を行った。有意差の検討から、舞踊熟練者の評定が学生より教師に近いことが示唆され、経験の異なるグループ別の因子分析から、舞踊熟練者の認知構造が学生や教師と比べて、また学生より教師がより統合されていることが示唆された。授業実践における有効な指導言語と評価の関係の検証に関しては、本研究結果において舞踊運動の評価が舞踊経験に基づく身体性(身体言語)に関与すると考えられることを踏まえて、評価と指導における有効な言語との関連を検討することが望まれる。3年度計画の初年度にあたる平成16年度は、下記のように研究を進め、その成果の一部を2つの研究論文として発表した。1.舞踊運動を評価する観点(観察の眼)の抽出舞踊運動を運動的側面から評価する観点を抽出するために、言語を道具とした評定用語を設定することにした。具体的に、スポーツ専攻学生106名に対して8つの基本感情を表現した舞踊運動を評価する評定実験を行うことによって評定用語の妥当性・信頼性の検討を経て、舞踊運動の運動的側面から評価に用いる評定用語を19対38語で設定した。2.8つの基本感情を表現した舞踊運動の運動分析3.舞踊運動を評価する観点(観察の眼)の検証1で設定された19対38語の評定用語を用いて、舞踊経験の異なる3つのグループ(舞踊熟練者、ダンス授業の経験を持つ教師、スポーツ専攻学生)に8つの基本感情を表現した舞踊運動を評価する実験を行った。3つのグループの中で舞踊熟練者を基準とした評価の差の検討、2で行われた8つの舞踊運動の運動特性と評価との検討を通して、舞踊経験の差は、舞踊を観察する眼である評価する能力と対応するという結果が得られた。さらに、基準とした舞踊熟練者の評価と学生及び教師の評価では、教師の評価が学生の評価より舞踊運動の持つ運動特性を評価できると推測されるが、全体としては、両者のグループとも舞踊運動の持つ運動特性を舞踊熟練者と同様に評価するには至らなかった。3年度計画の2年目にあたる平成17年度は、3つの観点で研究を遂行する予定であったが、1つ目の観点である舞踊運動を評価する観点と運動分析との関連の検証を中心にして遂行した。そこで、下記のように研究を進め、その成果を博士論文の一部としてまとめた。1.舞踊運動を評価する観点(観察する眼)と運動分析との関連の検証スポーツ専攻

学生、舞踊指導経験のある教師、舞踊熟練者のグループに8つの舞踊運動を19対語の評定用語で評価することを求めた評定実験とその呈示刺激である8つの舞踊運動の動作分析の結果との関連の検討を通して、次のように考察された。(1)舞踊熟練者は、19対語の評定用語を個別に捉えるのではなく、2つから3つのまとまったグループとして捉え、一方、学生では6グループ、教師は36グループであり、熟練するにつれて舞踊運動をより有機的な全体性として捉えていく。(2)舞踊熟練者は、時間性では継続する時間感覚で捉え、空間性では2次元的なデザインで捉えるのではなく、3次元的な運動範囲で捉えるということが考察された。2.舞踊指導のビデオ記録からその言語と舞踊運動の変容の分析中学1年女子1名の舞踊指導における指導言語と舞踊運動の変容を分析することを通して、力性の用語を中心に16年度で設定された評定用語と同様な語彙を用いていることが考察されたが、この点は今後の課題として検討していく予定である。3.抽出された有効な指導言語と評価の観点の検証16年度の研究において導き出された19対語の評定用語と上記の2における分析により考察された指導言語を検討することを通して、普遍的な評価の観点である評定用語の設定に関しては、来年度の課題として残された。本研究における目的は、舞踊運動における指導内容と方法に関する指導言語と、指導者の舞踊運動を見る観察の眼である評価との関連を明らかにすることによって、今後の舞踊表現の指導に資することである。本研究では、評価しようとする舞踊運動が対象として妥当かどうかの検討のために運動分析を行い、舞踊運動の物理的な特性を考察した。次の段階では、舞踊を「見る」ことがどのような認知枠組みに基礎づけられるのかを検討するために、評定実験を行い、その結果を多変量分析した。評定実験の結果を因子分析したところ、力性、時間性、空間性に関する語彙から8つの舞踊運動の多様性に応じるには少なくとも19対語の評定用語が必要なことが示唆された。評価する観点(観察する眼)に対する客観性の検証(動作分析と評価実験との対応)の段階では、まず、舞踊経験が舞踊運動を見ることにどのように関連しているのかを検討し、その見るという評価と舞踊運動の物理的な特性との対応も検討することができた。舞踊経験と評価との関連では、舞踊経験が「見る」ことにどのように関与するのかを検討するために、舞踊経験の異なる3つのグループに対して評定実験を行い、有意差の検討と多変量解析を行った。有意差の検討から、舞踊熟練者の評定が学生より教師に近いことが示唆され、経験の異なるグループ別の因子分析から、舞踊熟練者の認知構造が学生や教師と比べて、また学生より教師がより統合されていることが示唆された。すなわち、舞踊熟練者は、舞踊運動をより有機的な全体性として捉え、時間性ではひと流れで捉え、空間性では3次元的な運動範囲で捉えていることが示唆された。授業実践における有効な指導言語と評価の関係の検証に関しては、本研究結果において舞踊運動の評価は舞踊経験に基づく身体性(身体言語)に関与すると考えられることを踏まえて、評価と指導における有効な言語との関連を検討することが望まれる。
僻地教育でのボランティアを介した協同学習を支援するネットワークシステムの基礎研究

僻地教育でのボランティアを介した協同学習を支援するネットワークシステムの基礎研究として2年間の研究に取り組んだが、僻地校指定を受けている島根県、岩手県、鳥取県、青森県の4つの小学校に加えて、東京都の都心小規模校も含めた5校を中核に取り組んできた。僻地の小学校間の協同的な学習を支援するネットワークシステムの研究目的は、協同学習を支援するためのWebなどの開発と人的な支援体制の運営方法の開発の二つにわけることができる。本研究の研究実績の概要としては、まず、小規模校の教師がネットワークやそれを運営していく情報ボランティアにどのような意識を持っているのかに関する調査を行った。この調査では、小規模校の情報教育担当者には、恒常的な人的資源の不足に悩んでいる構図が浮かんできた。また、ネットワークを活用した実践にも小規模校には有益な面が多いという意識を持っているものの、実際に自分が操作することに対しては、技術力に自信を持ち得ない実態が明らかになった。この情報機器の操作技術に対して不安を持っている教師に対しての本研究での支援の実際は、「佐伯、苅宿共著『インターネット教育をどう支援するのか』岩波書店2000」で詳述してある。次に、僻地小学校間の協同的な学習を支援するためのWebなどの開発については、苅宿「情報ボランティア等による小規模校への学習支援」日本教育工学会研究報告集2000に詳述してある。児童の作品をWeb化し、その作品を中心に共感的理解者としての情報ボランティアとメールを中心にしたシステムを構築する事ができた。児童の作品作りには再構成型ソフトウェア「脳の鏡」を活用し、プロセスの作品化として制作履歴を情報ボランティアと共有していった。本研究は僻地の小学校間の協同的な学習を支援するネットワークシステム(協同学習を支援するWEBの開発、人的な支援体制の運営の開発)に関する基礎的な研究である。初年度としては、コンピュータやネットワークが導入され日が浅い青森県と鳥取県の僻地校と、コンピュータやインターネットを日頃の学習活動に活用している島根県の僻地校と東京都の小規模校を研究協力校として、フィールドワークを行った。また、共感的理解者グループとして、大東文化大学刈宿ゼミ、学習環境デザイン研究工房が参加した。本研究の初年度として、次の3点の研究実績を報告できる。1.インターネットを介した協同学習を実践している小規模校(僻地校として島根県高田小学校と都心の過疎の東京都神応小学校)の学習共同体づくりに、共感的理解者として大学生がコーディネーターやメディエーターとして、機能することが可能であることがメールボランティアの活動や学習履歴のWEB化を通して明らかにすることができた。2.1の実践や、僻地校(青森県有戸小学校と鳥取県大山小学校赤松分校)どうしの交流の推進役として情報コーディネーターボランティアが当該学校の教員との協力体制を作り、授業実践に活かしていくための手段・方法をネットワーク上で交換できるようになり、実際に学校訪問した際にも、授業に参加できるなど、学校支援の一つの方向性を見いだすことができた。3.僻地校である島根県高田小学校に情報コーディネーターや大学生ボランティアなどが一週間にわたり訪問し、授業支援を行った。この活動を通して児童とのコミュニケーションとの深まりがその後のメール等の中に反映されてきたことから、情報コーディネーターやメールボランティアの授業支援の方向性が分かった。

本研究の研究実績の概要としては、まず、小規模校の教師がネットワークやそれを運営していく情報ボランティアにどのような意識を持っているのかに関する調査を行った。この調査では、小規模校の情報教育担当者には、恒常的な人的資源の不足に悩んでいる構図が浮かんできた。また、ネットワークを活用した実践にも小規模校には有益な面が多いという意識を持っているものの、実際に自分が操作することに対しては、技術力に自信を持ち得ない実態が明らかになった。この情報機器の操作技術に対して不安を持っている教師に対しての本研究での支援の実際は、「佐伯、苅宿共著『インターネット教育をどう支援するのか』岩波書店2000」で詳述してある。次に、僻地小学校間の協同的な学習を支援するためのWebなどの開発については、苅宿「情報ボランティア等による小規模校への学習支援」日本教育工学会研究報告集2000に詳述してある。児童の作品をWeb化し、その作品を中心に共感的理解者としての情報ボランティアとメールを中心にしたシステムを構築する事ができた。児童の作品作りには再構成型ソフトウェア「脳の鏡」を活用し、プロセスの作品化として制作履歴を情報ボランティアと共有していった。
がん細胞特異的細胞死誘導分子の局在制御に着目した分子標的がん治療の新たな展開

正常細胞には細胞死を誘導せず,腫瘍細胞に対してのみ細胞死を誘導するTRAILタンパク質は,そのレセプターの一つであるDR5タンパク質と腫瘍細胞膜で結合して死のシグナルを伝達する.TRAIL低感受性ヒト腫瘍細胞株では,DR5が膜より核内に多く局在していることから,薬剤の添加で,核内のDR5が細胞膜に移行するようにしたヒト腫瘍細胞を作製,マウスの皮下に生着させた.腫瘍塊が一定の大きさに達した時点で,局在変化を誘導する薬剤とDR5に対する刺激抗体を投与したところ,腫瘍の退縮または消失が見られた.腫瘍細胞のDR5の局在を核から細胞膜に変化させる薬剤の開発が,今後のがん治療に繋がる可能性が示された.1)TRAIL(TNF-related apoptosis inducing ligand)に抵抗性を示すヒト腫瘍細胞株HeLaについて、DR5(Death receptor 5)タンパク質が核へ運ばれずに細胞表面に発現し、TRAILと結合してより強い細胞死が誘導可能な条件で、in vivoでの抗腫瘍効果を見るため、shRNAによりインポーチンβ1をノックダウンした変異株の作製を試みた。テトラサイクリン誘導性にshRNAを発現する市販のプラスミドベクターpSingle-tTS-shRNAのTight/U6下流に、インポーチンβ1のsiRNA配列とヘアピンループ形成配列、およびそれらを挟む制限酵素サイトを含む合成オリゴDNAを連結、大腸菌に遺伝子移入した。得られたプラスミドDNAをHeLaにトランスフェクションし、セレクションを行ったが、ウェスタンブロットにおいて、インポーチンβ1の発現低下が確認できるクローンが得られなかった。そこで、テトラサイクリン誘導性にノックダウンを誘導する市販のpTRIPZレンチウイルスベクターに、3種のインポーチンノックダウン標的配列を組み込んだものそれぞれを、HEK293Tにパッケージング、増幅したウイルスを精製してHeLaに感染させた。ピューロマイシンによるセレクションの後、3種全てでテトラサイクリン誘導性に発現するTurboRFPの蛍光とインポーチンβ1のノックダウンが確認された。2)核内DR5結合タンパク質を同定する目的で、HeLaとTRAIL感受性ヒト腫瘍細胞株DU145の核タンパク質可溶化分画を調製、抗体結合ビーズを用いてDR5と結合タンパク質複合体を免疫沈降した。電気泳動後に抗体特異的なバンドとコントロールバンドを切り出し、トリプシン消化後ペプチドを抽出、LC/MS/MSにて解析を試みた。データ解析を行ったが、多数の候補タンパク質が上がったものの量的に少なく、同定には至らなかった。正常細胞には細胞死を誘導せず,腫瘍細胞に対してのみ細胞死を誘導するTRAILタンパク質は,そのレセプターの一つであるDR5タンパク質と腫瘍細胞膜で結合して死のシグナルを伝達する.TRAIL低感受性ヒト腫瘍細胞株では,DR5が膜より核内に多く局在していることから,薬剤の添加で,核内のDR5が細胞膜に移行するようにしたヒト腫瘍細胞を作製,マウスの皮下に生着させた.腫瘍塊が一定の大きさに達した時点で,局在変化を誘導する薬剤とDR5に対する刺激抗体を投与したところ,腫瘍の退縮または消失が見られた.腫瘍細胞のDR5の局在を核から細胞膜に変化させる薬剤の開発が,今後のがん治療に繋がる可能性が示された.1) TRAIL (TNF-related apoptosis inducing ligand)が,DR5 (Death receptor 5)・DR4 (Death receptor 4)に結合して誘導される細胞死に対して,抵抗性を示すマウス腫瘍細胞株:B16,3LL-2について,FACSとレーザー顕微鏡による解析を行い,DR5の発現と局在を調べた結果,細胞膜とゴルジ装置を含む細胞質に局在していた.一方,ヒト腫瘍細胞株:A549,SW620,SK-Mel 5,526 Melは,いずれもTRAILの作用に対して抵抗性を示し,DR5は細胞膜とゴルジ装置を含む細胞質の他,主に核に局在していた.このヒト腫瘍細胞株の結果は,TRAIL感受性のヒト腫瘍細胞株では核にDR5がほとんど見られず,TRAIL抵抗性のヒト腫瘍細胞株では核に局在していた事実と,矛盾がなかった.従って,マウスでは,ヒトで見られるTRAIL抵抗性とDR5の局在との関係がそのまま成立せず,他の因子による何らかの制御が働いている可能性が考えられた.3)ヒト腫瘍細胞株の核内DR5の機能を解析する目的で,HeLaでDR5のノックダウンを行ったところ,アポトーシスが誘導された.核内DR5がほとんどないDU145細胞株では変化がなかったことから,核内DR5が腫瘍細胞の生存に寄与している可能性が示唆された.TRAIL(TNF-related apoptosis inducing ligand)に抵抗性を示し,TRAILレセプターであるDR5(Death receptor 5)タンパク質を核内に持つヒト腫瘍細胞を用いて,ヒトインポーチンβ1(Imp β1)の機能を抑えた場合に,in vitroで見られた抗腫瘍効果がin vivoでも見られるかを調べた.薬剤誘導性にImp β1 shRNAを発現する,レンチウイルスベクタープラスミドDNAを元に作製した非増殖型レンチウイルスをHeLa細胞に感染させ,薬剤誘導性にImp β1がノックダウンされる細胞を得た.それらをクローニングし,ウェスタンブロットで顕著なImp β1ノックダウンが確認された2つのクローンとコントロールの細胞を,BALB/c RAG-2 (-/-)

背部皮下にそれぞれ異種移植した.飲水に薬剤を添加した群と非投与群に分け,更に,ヒト抗DR5アゴニスティック抗体またはヒトIgGの腹腔内投与群の計4群に分けて,薬剤と各抗体をそれぞれ週2回投与しながら,生着した腫瘍の腫瘍径を経時的に計測した.また,生着した各群の腫瘍を回収し,薬剤誘導性にshRNAと共に発現する蛍光タンパク質の発現を確認した.同時に,各群の腫瘍細胞の細胞膜と細胞全体におけるDR5の発現レベルを比較・検討した.その結果,Imp β1ノックダウン細胞を移植したマウス4群のうち,薬剤投与群2群にshRNAが誘導された.更に,薬剤と抗DR5同時投与群のみ,有意に腫瘍の退縮及び消失を見た.この時,細胞膜でのDR5の発現の上昇が観察された.in vivoで腫瘍細胞のImp β1をノックダウンすることが,DR5の核から膜への移行を促してTRAIL/DR5依存性のアポトーシスを誘導し,腫瘍の退縮や拒絶が可能になったと考えられ,今後のがん治療への応用の可能性が期待される.生物系薬学インポーチンβ1のshRNAをHeLa細胞に導入するのに、プラスミドDNAのトランスフェクションでは導入効率が低く、クローニングも行ったがテトラサイクリン依存性の顕著なノックダウンが確認できなかった。その後、導入効率を上げ、且つノックダウンの成否を簡便に確認できるシステムを選択すること、及びその発注から納品までに時間を要した。レンチウイルスの系でテトラサイクリン誘導性にインポーチンβ1をノックダウンした細胞の調製は、バルクの細胞を得るまでは順調に進んだが、マウスに異種移植するために細胞を増やした段階で、ノックダウンの効果が減弱していることが判明、クローニングの必要性が生じたため、平成25年度内にマウスへの異種移植に着手することができなかった。マウスのDR5のアミノ酸配列からは,ヒトのDR5のアミノ酸配列と相同性のある,NLS (Nuclear localization signal)様配列が存在したが,実際に実験で調べた限りでは,マウス腫瘍細胞株では,ヒトで見られたようなDR5の核内局在は見られなかった.従って,予定していた実験のうち,マウス腫瘍細胞株でのNLSの同定は行えなかった.それに代わって,がん治療の観点から,新規に発売されたものを含む低分子の薬物によって,インポーチンβ1によるDR5の核内への運搬を阻害することができないかを調べた.DR5の局在には顕著な変化が見られなかったものの,TRAILによりカスパーゼが活性化されて細胞死が亢進した薬物があったことから,これらには腫瘍の拒絶効果が見られる可能性があり,今後の展開によっては更に調べる余地がある.次年度は,マウスへのマウス腫瘍細胞株の同種移植ではなく、マウスにヒト腫瘍細胞株を異種移植することで,インポーチンβ1のノックダウンによって細胞膜上の発現が高くなった状況で,より効果的にTRAILによる腫瘍拒絶が可能になるか,in vivoの効果を見る予定である.従って,概ね進行状況には大きな変化はないものと考えている.動物実験には,結果の判定まで時間を要することから,核内DR5の機能解析も視野に入れて,実験を進める予定である.
クロマチン制御因子による神経幹細胞の維持機構に関する研究

本研究は、クロモドメインを持つクロマチン結合タンパク質MRG15の神経幹/前駆細胞における役割を解明することを目的とした。神経幹/前駆細胞特異的MRG15欠損マウスは、正常に生まれてきたが、成長にともなう体重の増加がコントロール群に比べ、著しく抑制されていた。神経幹/前駆細胞特異的MRG15欠損マウスから分離された神経幹/前駆細胞は、その数が少ないだけでなく、増殖も抑制されていた。MRG15を介した遺伝子発現制御やスプライシング機構が、神経幹/前駆細胞の維持および機能に重要な役割を担っていることが明らかとなった。エピジェネティックな調節機構を介したクロマチン制御は種々の細胞機能に重要であり、神経幹細胞の自己複製能や多分化能の維持にも重要である。本研究では、神経幹細胞の自己複製および神経分化におけるヒストンアセチル化の役割を明らかにすることを目的とする。特に神経系での役割が明らかとなっていないTip60ヒストンアセチル化酵素複合体の役割の解明に焦点をあてる。Tip60ヒストンアセチル化酵素及びその構成成分であるクロマチン制御因子MRG15欠損マウスを用いた機能解析を行い、神経幹細胞におけるヒストンアセチル化の分子機構を明らかにする。当該年度は以下のことを行い、神経幹/前駆細胞でのクロマチン制御因子の重要性を示した。1、Mrg15欠損により発現が影響される遺伝子が、直接表現型に関与しているかどうかを確かめるために、レンチウイルスによる神経幹細胞への遺伝子導入系を確立した。2、条件付きMrg15欠損マウスとネスチンプロモーターにより神経幹細胞特異的にCre組換え酵素を発現するマウスを掛け合わせ、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスを作製した。ウエスタンブロット法により神経特異的なMrg15の欠損が確認された。3、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスが少なくとも6ヶ月以上生きることが明らかとなっている。神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの行動解析及び学習機能解析を行うためにC57BL/6Jマウスラインへのバッククロスを開始し、10世代交配した。4、C57BL/6Jマウスへバッククロスされた神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスも、メンデルの法則に従って生まれてきたが、同腹のコントロール群に比べ体が優位に小さかった。体重調節機構における神経系でのMRG15の重要性が示唆された。5、条件付きTip60ヒストンアセチル化酵素欠損マウスを作製するために、ノックアウトベクターを構築し、胚性幹細胞のスクリーニングを行った。幹細胞の存在が中枢神経系を含む多くの組織で報告されており、その自己複製能と分化能の厳密な調節を通じて組織の恒常性維持に関与すると考えられている。神経幹細胞は中枢神経系を構成するニューロンとグリアに分化することができる多分化能を持つ細胞で、器官形成の活発な発生期(胎児期)のみならず成体脳にも存在し、継続的に機能的な神経細胞を個体の一生を通じて供給している。本研究では、神経幹細胞の自己複製および神経分化におけるTip60ヒストンアセチル化酵素複合体の役割を、その構成成分であるクロマチン制御因子MRG15の機能解析を通じて明らかにすることを目的とする。1、構成的Mrg15欠損マウスの胎児脳由来神経幹/前駆細胞では、インテグリンβ1等の遺伝子発現が優位に低下しており、Mrg15欠損神経幹/前駆細胞の増殖能低下との関連が示唆された。3、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの肝臓や腎臓では野生型マウスと同程度のMRG15の発現が認められたが、脳ではMRG15の発現が認められず、マウスモデルの有用性が示された。4、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスは、メンデルの法則に従って生まれてきたが、体が同腹のコントロール群に比べ優位に小さかった。5、6ヶ月齢の神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの脳の大きさはコントロール群に比べ小さく、またニューロスフェアーを形成する神経幹/前駆細胞の数も優位に少なかった。神経系で高い発現が認められるが、神経系でのその役割が明らかとなっていないTip60ヒストンアセチル化酵素及びその酵素複合体の構成成分であるクロマチン制御因子MRG15欠損マウスを用いた機能解析を行い、神経幹細胞におけるヒストンアセチル化の分子機構を明らかにする。

1、ニューロスフェアー法で細胞を増幅された細胞のRNA解析により、インテグリンβ1などがMRG15により調節を受ける遺伝子の候補として同定された。2、ニューロスフェアー法で解析した結果、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの神経幹/前駆細胞の数はコントロールに比べ減少していることが示唆された。3、C57BL/6Jマウスラインへバッククロスされた神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの加齢にともなう体重変化を追跡調査したところ、20週齢前後まで優位なMrg15欠損マウスの体重減少が認められた。この体重減少はオスで特に顕著だった。4、条件付きTip60ヒストンアセチル化酵素欠損マウスを作製するために、ノックアウトベクターを構築し、胚性幹細胞のスクリーニングを行った。エピジェネティックな調節機構を介したクロマチン制御は、神経幹細胞の自己複製能や多分化能の維持に重要であることが知られているが、その詳しい分子機構は未だ不明の点も多い。本研究では、神経幹細胞の自己複製および神経分化におけるヒストンアセチル化の役割を明らかにすることを目的とした。神経系で高い発現が認められるTip60ヒストンアセチル化酵素及び酵素複合体の構成因子であるクロマチン結合タンパク質MRG15の欠損マウスを用いた機能解析を行い、神経幹細胞におけるヒストンアセチル化の分子機構を明らかにした。1、ニューロスフェアー法で解析した結果、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの神経幹/前駆細胞の数はコントロールに比べ減少していた。2、ニューロスフェアー法で増幅された細胞のRNA解析により、MRG15の標的遺伝子の候補としてインテグリンβ1などが同定され、神経幹細胞の増幅機構の一端が明らかとなった。3、C57BL/6Jマウスへバッククロスされた神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの加齢にともなう体重変化を追跡調査したところ、優位なMrg15欠損マウスの体重減少が認められた。4、神経幹細胞特異的Mrg15欠損マウスの脳は、コントロールに比べ優位に小さく、小頭症であることが解った。ニューロスフェアー法の結果と合わせ、神経幹細胞の維持にMRG15が必須であることが示唆された。5、神経幹細胞特異的Tip60欠損マウスを作製した。神経幹細胞特異的Tip60欠損マウスは、メンデルの法則に従って生まれてきたが、生後すぐに致死で、脳が明らかに小さく、小頭症であった。以上の結果は、Tip60ヒストンアセチル化酵素が神経発生に必須であることを示していた。以上の結果より、Tip60ヒストンアセチル化酵素複合体が神経幹/前駆細胞の維持に必須の役割を担っていることが明らかとなった。本研究は、クロモドメインを持つクロマチン結合タンパク質MRG15の神経幹/前駆細胞における役割を解明することを目的とした。神経幹/前駆細胞特異的MRG15欠損マウスは、正常に生まれてきたが、成長にともなう体重の増加がコントロール群に比べ、著しく抑制されていた。神経幹/前駆細胞特異的MRG15欠損マウスから分離された神経幹/前駆細胞は、その数が少ないだけでなく、増殖も抑制されていた。MRG15を介した遺伝子発現制御やスプライシング機構が、神経幹/前駆細胞の維持および機能に重要な役割を担っていることが明らかとなった。現在までの研究目的は、おおむね順調に進展している。神経幹細胞
細胞膜の不均質性の意義：低温環境応答機構への関与を例として

本研究は、「細胞膜の不均質性」の環境ストレス応答機構への関与を調べる目的で、低温馴化過程で細胞膜マイクロドメイン組成の変動と細胞膜マイクロドメイン・低温応答性タンパク質が凍結耐性増大に果たす機能を解析した。その結果、1)細胞膜マイクロドメインプロテオームやリピドームは低温馴化過程で動的に変動し、しかも、種間の凍結耐性の違いに応じた特徴的な変動があること、2)エンドサイトーシスに関与するダイナミン様タンパク質1Eが凍結耐性増大に機能的に関与していること、そして、3)GPIアンカー型タンパク質・グルカナーゼ様タンパク質も細胞間物質輸送を介して凍結耐性増大に関与していることなどを明らかにした。本研究は、近年注目を浴びつつある植物における「細胞膜の不均質性=細胞膜マイクロドメイン」が環境(特に低温)ストレス応答に果たす役割を理解することを目的としている。平成24年度は、以下の2点について研究成果を得た。1凍結耐性と細胞膜脂質組成が異なるイネ科作物(ライムギとカラスムギ)を用いて、細胞膜及び細胞膜マイクロドメインのプロテオームとリピドーム解析を実施した。その結果、両種での低温応答プロテオーム構成は類似している部分と大きく異なる部分があることが明らかになり、凍結耐性獲得能力と関連しているタンパク質・脂質グループがあることが明らかになった。2低温馴化過程で細胞膜マイクロドメイン中に誘導されるエンドサイトーシス関連のダイナミン様タンパク質(DRPlE)発現変異シロイヌナズナ(欠損体と相補発現体)を使い、凍結耐性や細胞膜プロテオームに与えるDRPIEの影響を解析した。その結果、低温馴化後、DRPlE欠損体では凍結耐性が野生型と同程度まで上昇しないこと、また、細胞膜プロテオームにおいても、特異的にDRPIE欠損によって低温誘導性変動が押さえられるものが存在することが明らかになった。また。DRPIE欠損体に野生型DRPIE遺伝子を相補したものでは、低温馴化による凍結耐性上昇が野生型と同程度であることも明らかになった。以上の結果から、DRPIEタンパク質が関わる低温下でのエンドサイトーシス系により細胞膜プロテオーム改変の一部が制御されており、それが機能しない場合に凍結耐性の上昇が十分に起こらないことが考えられた。また、特異的ステロール除去剤(メチル-β-シクロデキストリン)による細胞膜ステロール脂質を除去、あるいは、含量低下させた場合の細胞の凍結耐性、凍結融解過程に対する影響を調査するための実験系構築を進めた。低温馴化後の凍結耐性と細胞膜脂質組成が大きく異なる2種のイネ科作物(ライムギ、カラスムギ)を用いて、低温馴化前後における細胞膜及び細胞膜マイクロドメインのプロテオーム解析とリピドーム解析を実施した。その結果、種間や低温馴化能力の違いが細胞膜マイクロドメインのタンパク質および脂質組成に強く関連していることを示唆する結果を得た。さらに、低温馴化過程において細胞膜マイクロドメインで誘導されるエンドサイトーシスに関連するダイナミン様タンパク質(DRP1E)発現が欠損あるいは恒常的に発現しているシロイヌナズナ変異体を用いて、凍結耐性、細胞の凍結挙動を調査するとともに、DRP1Eの組織および細胞内分布などを調べた。その結果、DRP1E欠損株は低温馴化後の凍結耐性が野生型より低いこと、欠損株にDRP1E野生型遺伝子を組み込むことによって欠損株の凍結耐性は野生型と同程度まで戻ることなどを明らかにした。また、生化学的および細胞学的に解析によりDRP1Eタンパク質は細胞膜に局在していることも観察できた。一方、特異的ステロール除去剤(メチル-β-シクロデキストリン:MβCD)により細胞膜ステロール脂質を除去、あるいは、含量低下させた場合の細胞の凍結耐性、凍結融解過程における細胞膜の挙動、さらには、細胞膜マイクロドメインタンパク質の局在に対する影響を調査するための実験条件を検討したが、条件確立までには至らなかった。凍結耐性が異なる二種の単子葉植物(カラスムギとライムギ)を用い、マイクロドメインタンパク質と脂質の大規模網羅解析を行った。その結果、両種において、各種トランスポーターやステロール、スフィンゴ脂質などがマイクロドメインに集積していることを明らかにした。さらに、低温馴化過程で、これらの成分がダイナミックに変動しており、さらに、いくつかのマイクロドメイン構成成分の低温馴化過程における変動パターンが凍結耐性の低いカラスムギと高いライムギで異なっていた。従って、マイクロドメイン組成や低温応答性の違いが細胞膜の安定性やマイクロドメイン機能の調節に影響し、植物の凍結耐性の差異に関与していることが示唆された。次に、シロイヌナズナを用いて、GPIアンカー型タンパク質(GPI-AP)の網羅的同定および低温馴化過程における変動の検出を試みた。その結果、163種のGPI-APが同定され、多くのGPI-APが低温馴化処理により増減していることを明らかにした。さらに、低温馴化応答性GPI-APとしてAt3g04010を選び出し解析を進めた。低温馴化後のAt3g04010ノックダウン変異体は野生型よりも凍結耐性が低かった。また、At3g04010は維管束組織などの物質輸送に関与する組織で強く発現する遺伝子であった。これらの結果から、At3g04010は低温馴化過程や凍結融解過程で物質輸送を適切に調節し、凍結耐性獲得に貢献しているものと考えられた。凍結耐性が異なる二種の単子葉植物(カラスムギとライムギ)を用いて細胞膜マイクロドメイン脂質の大規模網羅解析を行い、その結果を論文として公表した。