hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
癌の発生・進展過程で起きる染色体変化の集中的蓄積の機構

異倍体は105例(60%)、der(1;16)は65例(37%)で検出された。der(1;16)の形成が16q切断例の45%(55/121)で見られたが、その頻度は切断部位の近・遠位に関わらず高かった。第16染色体のセントロメアの数は、近位切断例の82%(43/52)が異倍体、18%(9/52)が二倍体であったが、遠位切断例では57%(29/51)が二倍体、43%(22/51)が異倍体であり、16q切断部位と倍数体形成の間に関連を認めた(p<0.001)。倍数体とder(1;16)の間に関連はなかった。16q切断部位とは種々の臨床病理学的指標との間に中等度までの相関を認めたが、異倍体は組織学的異型度およびリンパ節転移の個数と、der(1;16)は低異型度、管状篩状索状型、ホルモンレセプター高値、予後良好と、各々強い相関を示した。以上から非相同的染色体交叉、DNA組換えにより16q切断及びder(1;16)等の組換え体が生じると共に、16q切断部位が第16染色体の本数にも影響を及ぼすと考えられた。16q切断、der(1;16)等を生じる非相同的染色体間の組換え過程で、異倍体形成が規定され、組換え体と異倍体のパターンの組み合わせによってがんの形態、転移性及び悪性度を規定するcascadeの存在が考えられた。
長波長ＡＩＥＥ作動性プローブの開発とその応用展開

採用最終年度となる本年はAIEEを含めて多角的に蛍光団の分子設計を検証することで、当初の目的の一つである細胞内滞留性を長波長の蛍光領域で持つ蛍光プローブの開発に取り組んだ。より具体的には酵素活性検出対象をb-galactosidaseに定め、赤色蛍光を発する蛍光団の構造修飾法を精査することで細胞内滞留性機能を付与する研究を行った。b-galactosidaseはその高い酵素活性や哺乳類動物細胞における内在性発現の低さから、green fluorescent protein (GFP)と並ぶ代表的なレポータータンパク質として幅広い生命科学分野で汎用されており、蛍光プローブを用いる蛍光法により生きた細胞や組織におけるb-galactosidase活性を高感度に検出することが可能である。しかしながら、従来までのb-galactosidase活性検出蛍光プローブは、その細胞膜透過性の低さや酵素反応生成物の細胞内滞留性の低さから、b-galactosidase発現細胞を1細胞レベルで特異的に蛍光標識できないという課題があった。近年この課題を克服すべく、酵素反応に続き反応性の高いキノンメチド活性中間体を形成するよう分子設計を施すことで、蛍光性および細胞内滞留性を同時に獲得する新たなプローブSPiDER-bGalが開発されたが、本プローブは、ロドールを母核とする黄色蛍光プローブであるため、GFPとの共染色が難しくその応用範囲が限定される他、b-galactosidase活性検出以外の機能を付与することは難しかった。そこで本研究では、複数の細胞種を1細胞レベルで可視化し、その機能を解析可能な新たなツールの開発を目指し、GFPとの共染色が可能な赤色領域(> 600 nm)で機能する新たなb-galactosidase活性検出蛍光プローブの開発を目指し研究を行った。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は黄色領域でAIEE特性を示すBzBMNを合成展開して、その特性が保持される構造的要因を検証することで、従来の蛍光制御法では検出し得ない酵素活性を細胞内で検出できる蛍光プローブの設計法を確立することを目指した。まず、BzBMNのdiethylamino基を種々のアルキル鎖に置換した化合物を設計・合成し、このdiethylamino基の置換がバッファー中における光学特性に与える影響を精査した。その結果、BzBMN誘導体がAIEE特性を示すためにはdiethylamino基構造が保存されている必要があることが示唆された。また、細胞内環境を模倣したFBS中での蛍光測定においてdiethylamino基と特に類似しているpyrrolidyl基を導入した化合物BzpyrがBzBMNより大きなAIEE特性を示し、細胞系アッセイに適用する上ではBzpyrの方がAIEE特性を示す母核としてBzBMNより実用的であることが示唆された。次に酵素認識部位を付与するためのリンカー構造が導入できるかを検討するため、benzyloxy部位からアミド結合を介して末端にアミノ基を持つ種々の長さのアルキル鎖を導入したBzBMN誘導体を設計・合成しその物性、光学特性を精査した。その結果、アルキル鎖が一定以上の長さの化合物において凝集体を形成することが動的光散乱法により確認され、またAIEE特性はアルキル鎖の長さに相関して大きくなった。このように、機能性蛍光プローブの母核が見出せたため、その知見を基にcaspaseプローブBzC11DVEDAcを開発した。開発したBzC11DVEDAcは、酵素反応前は目的通りバッファー中に分散していることが動的光散乱法により確認され、蛍光量子収率も低い値に抑えられていた。そしてcaspase-3の添加直後においては蛍光が増大し、活性検出が可能であることが明らかとなった。

黄色領域でAIEE特性を示す蛍光団BzBMNを合成展開し、AIEE特性を示すための構造的要請ならびに化学的要請を精査することで、酵素活性検出蛍光プローブへと構造展開するために蛍光団が満たすべき条件を明らかとしたため。また、caspaseプローブを開発して酵素活性検出が可能であることを示し、同時に今後改善すべき方向性を見出したため。27年度が最終年度であるため、記入しない。開発したBzC11DVEDAcの更なる構造展開により、細胞内導入性およびAIEE特性の保持の観点から細胞実験へ応用可能な構造要因の検討を行う。そして、この知見を踏まえてこれまで優れたプローブの開発が困難であった官能基を基質に転移する転移酵素に対する蛍光プローブの設計し、マルチウェルプレートを用いたスクリーニングおよびへの応用可能性の検討を行っていく。
子宮筋腫のAllelotype及び原因遺伝子の単離

1.インフォームドコンセントの得られた子宮筋腫患者の子宮筋腫手術検体41検体及び、末梢血リンパ球、正常子宮筋層組織検体にてmicrodissectしDNAを注出た。2.染色7番の16種のSTSmaker、染色体18番長腕のSTSmakerをターッゲトとし^<32>pにて標識しPCRを行い、シークエンス用のアクリルアミドゲルを用い泳動しmicrosatellite解析を行った。子宮筋腫において染色体7番長腕で情報の得られた41例中例10%にallelic imbalanceを認められた。最も高率にallelic imbalanceを認めたlocusはD7S501で20%であった。replecation errorは41例中7例17%に認められた。共通欠失領域は染色体7qの約2.4Mbであり、この領域に子宮筋腫の原因遺伝子が存在することが示唆された。3.さらにmicrodissectした正常子宮筋層及び筋腫よりRNAを抽出し、Differential Displayを行う予定である。1。インフォームドコンセントを得た20例の子宮筋腫患者の末梢血よりリンパ球を分離し、さらに筋腫手術検体をOCT compoundを用い液体窒素で凍結後、フリーザ-に保存した。2。筋腫手術検体を顕微鏡レベルで筋腫領域および正常筋層領域にmicrodissectした。3。リンパ球およびmicrodissectした検体よりDNAを抽出した。4。第7染色体上の5種のSTS markerのプライマーを作製した。5。^<32>Pを用いたhot PCR productをポリアクリルアミド電気泳動を行い、Allelic imbalanceを接索したが、4のSTS markerにおいてAllelic imbalanceは検出されなかった。6。今後、症例数を増やし、すべての染色体のおいてAllelic imbalanceを検索する予定である。7。さらにmicrodissectした正常子宮筋層および筋腫よりRNAを抽出し、Differential Displayを行う予定である。目的)子宮筋腫は婦人科良性腫瘍のなかで最も頻度が高く、主たる治療法は手術療法である。現在GnRHanalogueを用いた保存的治療法もあるが、再発が多く、根治治療とはならない。また子宮筋腫の原因遺伝子は単離されておらず、分子生物学的解析もまだ少ない。そこで我々は子宮筋腫の原因遺伝子を単離するためにMicrosatellite解析により原因遺伝子の存在するであろう染色体領域を決定を試みた。方法)1)インフォームドコンセントを得た40例の子宮筋腫患者の末梢血リンパ球および正常子宮筋層よりDNAを抽出し、さらに筋腫手術検体をOCT compoundを用い液体窒素で凍結後、顕微鏡レベルで筋腫領域をmicrodissectしDNAを抽出した。結果)1)第7染色体においてその情報となる22例中3例(14%)にAlを検出した。2) Alが検出された3例の共通欠失領域は、D7S2446とD7S480の間に存在し、D7S501,D7S471の近傍であることが示唆された。3) 4例においてRERが検出された。結論)第7染色体において子宮筋腫のmicrosatellite変化が検出され、その共通欠失領域はD7S2446とD7S480の間であり、この領域に子宮筋腫の原因遺伝子の存在が示唆された。
ヒトアルツハイマー病剖検脳におけるセレクチン-糖鎖発現解析

本年度は、細胞の組織内浸潤に関わる細胞表面接着分子セレクチンのアルツハイマー病脳における関与を解明するため、(1)ヒトの剖検脳におけるセレクチン分子発現解析、(2)アルツハイマー病モデルマウスと野生型コントロール群の脳に発現する接着分子の解析、(3)セレクチン糖鎖リガンドを欠損したアルツハイマー病モデルマウスの作製を行なった。(1)研究協力者より提供された非認知症およびアルツハイマー病のヒト剖検脳サンプルにおけるセレクチンの発現変動を解析した。アルツハイマー病剖検脳嗅内皮質におけるセレクチン分子の発現上昇をウェスタンブロット法により明らかにした。(2)ヒトAPP遺伝子をもった遺伝子改変マウスAPP-Tg(アルツハイマー病モデルマウス)とNon-Tgコントロールマウス群の脳からtotal RNAを調整し、リアルタイムPCR法を用いて解析を行なった。その結果、APP-Tgマウスにおける単球、活性型アストロサイトのマーカー分子とセレクチンの増加を確認した。(3)セレクチン認識糖鎖合成酵素欠損マウスとAPP-Tgマウスを掛け合わせ、両者の表現型を併せもつマウスの作製を試みた。当該マウスの作製に成功した。これらのマウスは現在、アルツハイマー病変が観察される月齢まで加齢育成を行なっている。免疫組織化学染色法により表現型の解析を行なう。以上の結果より、アルツハイマー病脳において細胞表面セレクチンの発現とその機能的関与が考えられるが、より明確に証明するためには、加齢育成中であるセレクチン糖鎖リガンドを欠損したアルツハイマー病モデルマウスの表現型解析が望まれた。
カルシウム錯体のハイブリッド組織体の合成

合成高分子を用いて多くの有機一無機複合体が合成されてきたが、これらの境界面では、有機配位子の分子認識によって無機部分の結晶の形態制御を行うことが推定されている。一方、バイオミネラルデハ無機結晶部分と有機高分子部分が強固に結合しているものがあるが、合成配位子をもつ複合体では水による解離が徐々におこり、無機結晶部分と有機高分子配位子部分は分離する。本課題において、カルボキシラート配位子の配位酸素原子にアミド基のNHから水素結合を形成させて、カルシウム一酸素結合を水の加水分解から保護して、カルボキシラート配位子を安定化した合成Caポリマー錯体をつくり、炭酸カルシウムの結晶との複合体を合成した。二重NH...O水素結合を形成するカルボキシラートを持つユニットを重合させたポリアミドを用いて、カルシウムの無機結晶一有機高分子複合体を合成した。固体状態でのCP/MAS^<13>C NMRの測定を行ったところ、炭酸カルシウム中でカルシウムに配位したカルボキシラート状態のスペクトルが得られ、二重の分子内水素結合により強い錯形成が行われることがわかった。スペーサーにtrans-フマル酸アミドを用いた時、カルボン酸が同一方向に配向した構造を取り得ないこと、および主鎖が直線状になりにくいため、炭酸カルシウムに強く配位できない。このように高分子配位子に適当に配列したNH...O水素結合をもつカルボキシラートによって、水による解離を阻止したときに強固に炭酸カルシウム結晶に結合する無機結晶一有機配位子複合体を作ることができることがわかった。
東アジアにおける人間活動に基づく生態系の劣化と修復

塩性土壌班の研究の主要な対象地区である中国・河北省南皮県において、研究開始時より観測をはじめた種々の気象観測データを本地域の作物生育との関連で解析した。境界層数値モデル式を用いて、冬小麦が初-中期生育で多量に水分を必要とする2月下旬から5月中旬における土壌水分の動態と塩分集積をシミュレートし、作物栽培からみた干ばつ害、塩類障害にを対する対応策を検討した。一方、南皮農業生態試験場に設置したライシメーターによる土壌塩分の動態試験結果は上記の気象データによる土壌塩分の動態をより定量的に示すとともに、土壌水中の溶解イオンの行動はイオン種により大きく異なり、NaイオンはCa、Mg、Kイオンに比べ、移動範囲が大きいことが明らかになった。4年間にわたって日本から導入した麦類10,000品種の耐塩性選抜試験の結果、14種を本地域でもっともよく適合する品種として選抜した。また、本地域の耐塩性雑草の解析から、これと類縁の栽培品種を推定し、アスパラガスなど5種の食糧作物が有望であるとした。空中写真撮影による塩類土壌の分布を地形図と併せて示すと、きわめて明確な塩類の分布が特性され、この方法が安価で、効率的な優れた土壌調査法になることを示した。酸性雨と陸水・森林生態系班では重慶を中心とした工業都市から排出される石炭ばい煙中の二酸化硫黄と硫酸イオンが森林、土壌などに及ぼす影響をまとめた。重慶市における酸性降下物の主要なものは硫黄成分の高い石炭を燃焼することから生ずる二酸化硫黄の濃縮物であることがわかった。そのため、アニオンの90%は硫酸根で占められるという典型的な硫酸酸性降下物で構成されている。重慶市付近の年間の森林への硫黄の沈着量は湿性沈着:88.1、樹冠へのSO_2の乾性沈着:62.4、林床へのSO_2の乾性沈着:2.5kg/ha/aとなることを推定した。この量は他の東アジア地域の国々に比べると高く、また、ドイツのルール地方のマツ林への乾性沈着量が83.4kg/ha/aと低いとはいえ、かなり深刻な事態に近づきつつあることが裏付けされた。また、年間降水平均pHを降水、林地内降雨、樹木流下液で調べてみると、それぞれ4.47、3.82、2.92と観測され、とくに樹木流下液のpHが極端に低くなっていることがわかった。酸性雨の土壌への影響では、土壌の種類とその植生とくに樹木種で大きく異なった。一般に紫色土壌は黄色土壌に比べると、酸性降下物による影響は小さく、土壌の緩衝作用が大きく作用すると考えられた。本年度は本研究の最終年度にあたるので、1994年11月3日5日にかけて、中国北京市の友誼賓館で塩類土壌班と酸性雨班共同で、日中合同の「東アジアの陸域生態系に及ぼす土壌塩類化と酸性雨の影響と修復」と題してシンポジウムを開催した。約120名の参加者を得て、活発に討議された。なお、本シンポジウムの記録を231ページにわたるProceedingとして刊行した。

また、年間降水平均pHを降水、林地内降雨、樹木流下液で調べてみると、それぞれ4.47、3.82、2.92と観測され、とくに樹木流下液のpHが極端に低くなっていることがわかった。酸性雨の土壌への影響では、土壌の種類とその植生とくに樹木種で大きく異なった。一般に紫色土壌は黄色土壌に比べると、酸性降下物による影響は小さく、土壌の緩衝作用が大きく作用すると考えられた。本年度は本研究の最終年度にあたるので、1994年11月3日5日にかけて、中国北京市の友誼賓館で塩類土壌班と酸性雨班共同で、日中合同の「東アジアの陸域生態系に及ぼす土壌塩類化と酸性雨の影響と修復」と題してシンポジウムを開催した。約120名の参加者を得て、活発に討議された。なお、本シンポジウムの記録を231ページにわたるProceedingとして刊行した。
戦前・戦中のタイにおける日本語普及―バンコク・チェンマイ・コタバルの日本語学校

本研究は、戦前・戦中のタイにおける日本語普及の全容を明らかにするものである。日本語普及は、政策として政府の方針などにより、普及させられ、日本語教育はその下位に位置する。タイにおける日本語教育史の研究として以下の不明点を解明していく。1)チェンマイ日本語学校があったボルネオ・カンパニーに南機関の支部があったのか。2)コタバル日本語学校はどこにあったのか。3)コタバル日本語学校はF機関と関係があったのか。4)日本語教師の中に諜報工作に従事した者はいたのか。
完全無容器処理による球状高品質バルク酸化物単結晶の超高速育成に関する研究

1.昨年から実施していたアルミナ(Al_2O_3)研磨は,コロイダルシリカ程度の研磨では十分ではなく,沸騰硝酸等のケミカルな研磨手法が必要である.JAXAではこれを安全に実施する検討をしたが,実験は準備中のままである.2.アルミナに不純物として酸化クロムCr2O3を添加した結晶の合成に成功した.出来た結晶は薄い赤色をしており,現在添加量の同定方法を検討中である.この結晶を合成する際に,かなり酸化クロムが蒸発し,結晶直上にあるチャンバー窓に粉末が付着した.この粉末はレーザーを吸収するため,放置すると窓を破損する危険がある.これを解決するため,加圧式ガス浮遊を立ち上げた.加圧式ガス浮遊炉は,ガス流量調整器の設置位置をチャンバーへのガス導入側でなく,ガス排出側に設置した.これにより,チャンバー内圧力はガスボンベのレギュレーター2次圧にて容易に制御する事が出来,ガス流量は排気側の調整器で制御する事が出来た.また,試料の浮遊状態も常圧式と変わらず安定していた.しかし,排気側には試料から蒸発した粉末などが流入し,流量調整器の制御が利かなくなる不具合が発生した.これは配管中にフィルタを詰めるなどで対応をしている.また,不純物の蒸発がないアルミナとイットリア(Y203)の混合物であるガーネット結晶Y3Al5012についても単結晶合成を試み,結晶の合成が出来た.本結晶は透明ではあるが,単一グレインの単結晶ではなく複数のグレインが目視でも確認できる程度のクオリティである.今後本研究で得られた成果を学会にて報告する予定である.1.常圧環境での単結晶合成用チャンバーの仕様を決定した。CCDカメラ、放射温度計、レーザー加熱方法は既に論文として報告した[1]。最も重要な仕様は、レーザー加熱方向とガス流量調整方法であった。レーザー加熱は、試料の被加熱部をなるべく最小にする為にレンズで0.5mmφ程度にフォーカスさせた。また、照射方向は、浮遊試料の中心に垂直に照射される様に光学系の調整を随時実施した。試料位置を安定させる為に、ガス流量調整したが、新たな技術的課題を発見した。より温度勾配を付ける為にガス流量を増加させると、軸方向の回転が強く誘起される事が判明した。この軸回転を有効に利用すると、スピン安定性による浮遊試料の位置安定性向上等の発展性が考えられる。2.研究課題であったサファイア球状単結晶化は、常圧下にて合成に成功した。完全単結晶化の課題であった、未溶融部である種結晶部を単結晶化する為に、一旦結晶化させ室温まで冷却した後、球状試料を手動で上下をひっくり返し、単結晶させた部位を種結晶として再度同様の手順で凝固させた。単結晶化の確認の為に、合成された試料を全く研磨加工せずにラウエ写真を撮影した。成長軸方向と平衡にX線を入射させた実験結果は、サファイア単結晶のC軸方向で観測されるラウエパターンと一致した。この結果より、得られた試料は、単結晶として成長した単一バルク球状結晶であることを確認した。単結晶化が可能な理由は、次のように考察している。成長方向に対して、成長界面が凸型でなければ単結晶は成長しない。浮遊状態では、周囲が気体であり、ガズが最初に吹付ける種結晶部以外では気体が加熱され熱伝導率が低下する。一方で、結晶化部分は熱伝導が相対的に大きいため、この領域から熱が抜けると考えられる。1.日本結晶成長学会(8月19日、広島大学)に参加し、研究の成果について次の様に報告をした。"Aerodynamic浮遊法は,試料下部からのガス流により直系数ミリの試料を完全無容器状態に維持し,レーザー等の外部加熱により溶融凝固させる無容器処理法である.この手法を利用して光学レンズ等に利用されているサファイア(Al_2O_3単結晶)について,Al_2O_3焼結体原料から60mm/hr程度の成長速度で球状結晶を育成した実験に関して詳細な報告を行った"[1]Aerodynamic浮遊炉による球状Al2O3結晶の育成(宇宙航空研究開発機構)荒井康智,余野建定,石川毅彦,依田眞一.,第35回日本結晶成長学会国内会議19aB03.2.昨年度成功したサファイアに続き、球状単結晶成長させるべき酸化物について、次の強誘電体物質とその元素添加物質群をターゲットとしてガス浮遊法により溶融凝固させた。BaTi_2O_5、Ba_xSr_<1-x>Ti_2O_5(X=0.1-0.95)、Ba_xCa_<1-x>Ti_2O_5(X=0.05-0.99)、Ba_xFe_<1-x>Ti_2O_5(X=0.1-0.99)。これらの単結晶合成中に、アモルファスの合成に成功した。これらは、報告されていない新規の物質群であったため、日本物理学科会にて報告を行った。[2]BaTi_2O_5ガラスの誘電特性における添加物の影響II宇宙航空研究開発機構,荒井康智,その他,日本物理学会2005年度秋期大会20aYM-101.昨年から実施していたアルミナ(Al_2O_3)研磨は,コロイダルシリカ程度の研磨では十分ではなく,沸騰硝酸等のケミカルな研磨手法が必要である.JAXAではこれを安全に実施する検討をしたが,実験は準備中のままである.

2.アルミナに不純物として酸化クロムCr2O3を添加した結晶の合成に成功した.出来た結晶は薄い赤色をしており,現在添加量の同定方法を検討中である.この結晶を合成する際に,かなり酸化クロムが蒸発し,結晶直上にあるチャンバー窓に粉末が付着した.この粉末はレーザーを吸収するため,放置すると窓を破損する危険がある.これを解決するため,加圧式ガス浮遊を立ち上げた.加圧式ガス浮遊炉は,ガス流量調整器の設置位置をチャンバーへのガス導入側でなく,ガス排出側に設置した.これにより,チャンバー内圧力はガスボンベのレギュレーター2次圧にて容易に制御する事が出来,ガス流量は排気側の調整器で制御する事が出来た.また,試料の浮遊状態も常圧式と変わらず安定していた.しかし,排気側には試料から蒸発した粉末などが流入し,流量調整器の制御が利かなくなる不具合が発生した.これは配管中にフィルタを詰めるなどで対応をしている.また,不純物の蒸発がないアルミナとイットリア(Y203)の混合物であるガーネット結晶Y3Al5012についても単結晶合成を試み,結晶の合成が出来た.本結晶は透明ではあるが,単一グレインの単結晶ではなく複数のグレインが目視でも確認できる程度のクオリティである.今後本研究で得られた成果を学会にて報告する予定である.
三次元乱流せん断層の渦構造のフォトクロミズム可視化による研究

三次元乱流せん断層は燃焼室内流や、翼後流など工業的に多くみられる流れであるが、その流れ構造は縦渦の存在などによって複雑になっている。その複雑さや非定常性のため平均速度の計測から流れ構造を解明することは困難で、不明な点が多い。本研究では流れの可視化によって三次元乱流せん断層の渦構造を実験的に明らかにすると共に、可視化方法の特徴、問題点などを検討した。可視化方法としては従来から用いられている煙霧法および蛍光染料のシート光切断観察方法に加え、光機能性染料を用いたフォトクロミズム可視化法を用いた。流れ場として、平板壁に沿って噴出する円形噴流および一様平行流中の円形噴流を取り挙げた。前者については空気流で煙霧を用いて可視化を行い、流れの非等方的な拡大を観察した。この非等方性は縦渦によって生じていると推測されたが煙霧法では流れの内部まで観察できないので、流れ構造に関する詳細な検討はできない。また後者については水流を用い蛍光染料を噴出流に混入してシート状の光を照射して流れ場の断面を観察した。この蛍光染料を用いた方法では励起光の照射を受けている流体のみが蛍光を発するので流体粒子の時間的な流動展開を観察するには適さないことがわかった。以上の可視化方法の欠点を補う方法として光機能性流体を用いたフォトクロミズム可視化法について種々検討した。光機能性流体としては、ケロシンに1、3、3トリメチルインドリノ-6'ニトロ-ベンゾピリロスピランを微量溶解して用いた。励起光としては発光時間1ms程度のストロボフラッシュ光を用いて(1)照射光量と変色濃度との関係(2)溶解濃度と変色濃度の関係(3)変色時間など基本的な特性を調べた。その際、励起光スペクトル以外の多くの光スペクトルを含むストロボ光では照射光エネルギーによる温度上昇およびその結果としての浮力が生じ問題となることがわかった。
ＧＭ２ガングリオシドーシスの新規バイオマーカーの開発

ザンドホッフ病(SD)マウスの脳及び血漿中のリゾGM2ガングリオシド(リゾGM2)含量をHPLCで測定し、ヘキソサミニダーゼA(HexA)活性を持つ改変型ヘキソサミニダーゼB(HexB)の効果を解析した。次に、テイ-サックス病(TSD)及びSD患者の血漿中のリゾGM2濃度を測定した。SDマウスの脳及び血漿中のリゾGM2含量は、対照と比べて増加しており、改変型HexBの脳室内投与により減少した。TSDやSD患者の血漿中リゾGM2レベルは、対照に比べて高く、その増加の度合いは、HexA活性の低下と相関していた。リゾGM2は、GM2ガングリオシドーシスのバイオマーカーとなり得ると考えられた。ヘキソサミニダーゼA(HexA)の活性低下により、脳神経系にGM2ガングリオシド(GM2)などの糖脂質が蓄積し、重篤な神経障害を来たすGM2ガングリオシドーシスが発生する。本症のバイオマーカーを開発するため、リゾーGM2ガングリオシド(Lyso-GM2)に注目した。高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を利用したLyso-GM2測定法を確立し、GM2ガングリオシドーシス疾患モデルマウスと野生型マウスの脳組織中のLyso-GM2含量を測定した。野生型マウスの脳組織においては、Lyso-GM2は測定感度以下の含量であるのに対し、疾患モデルマウスでは顕著な含量増加が見られた。我々は、疾患モデルマウスに対して、酵素補充治療薬候補となる改変型HexB(Mod. HexB)を脳室内に投与し、その効果を解析した。その結果、GM2ガングリオシドーシス疾患モデルマウスの脳組織において、HexA活性の増加とLyso-GM2含量の減少が認められることが示された。一方、薄層クロマトグラフィー(TLC)により、脳組織中のGM2含量を測定し、Lyso-GM2含量の値と比較した所、両者は、ほぼ並行した値をとることが明らかになった。さらに、GM2ガングリオシドーシス疾患モデルマウスの血漿中Lyso-Gb3濃度について解析した。本症疾患モデルマウス血漿中のLyso-Gb3濃度は、野生型マウスのそれに比べて明らかに高値を示したが、Mod. HexBの脳室内投与により減少した。これらの実験結果から、血漿中Lyso-GM2濃度は脳中のLyso-GM2含量と同様に、GM2ガングリオシドーシスで増加するが、治療によって減少することが判明した。これらの結果から、Lyso-GM2は、GM2ガングリオシドーシスのバイオマーカーになり得ると考えられた。進行性脳障害を来たす遺伝性難病であるGM2ガングリオシドーシス(テイ-サックス病、略称TSD及びザンドホッフ病、略称SDを含む)のバイオマーカーを発見する目的で、リゾGM2ガングリオシド(略称lyso-GM2)に注目した。研究初年度には、高速液体クロマトグラフィー(略称HPLC)法で、組織や血液中のlyso-GM2を定量する方法を確立するとともに、HPLC法で測定した物質が、真にlyso-GM2であることをMALDI-TOF質量分析法で証明した。さらに、SDモデルマウスを用いた動物実験で、本マウスの脳組織や血漿中のlyso-GM2含量が著しく増加していることを示した。研究第2年度には、SDモデルマウスの脳室中に、開発中の治療薬候補である改変型ヘキソサミニダーゼBを投与し、脳組織や血漿中で増加していたlyso-GM2の含量が薬剤投与により減少することを明らかにした。研究最終年度である今年度は、ヒト血漿を試料として、HPLC法でlyso-GM2濃度を測定した。健常人の血漿中lyso-GM2濃度は、2.0 nmol/L以下の値を示したが、SD患者では、313 nmol/L、TSD患者では、2640 nmol/Lと増加がみられ、その程度は、疾患責任酵素であるヘキソサミニダーゼAの低下度にほぼ比例していた。これらの一連の実験結果から、血漿lyso-GM2の値は、TSDやSDの診断や治療の評価に役立つバイオマーカーに成り得ると結論された。さらに、lyso-GM2の定量を、迅速かつ高精度に行うため、タンデム型質量分析/(略称MS/MS)による測定法を検討した。本法は、試料の前処理が簡単で短時間でlyso-GM2の測定が可能であった。今後、さらに改良を加えることで、より優れたlyso-GM2測定法を確立出来るものと期待される。

遺伝性難病であるGM2ガングリオシドーシス(テイーサックス病およびザンドホッフ病を含む)の診断や治療評価に役立つバイオマーカーを開発する目的で研究を行い、同疾患の患者の脳に蓄積する糖脂質GM2ガングリオシド(GM2)の誘導体であるリゾーGM2ガングリオシド(lyso-GM2)に注目した。研究初年度は、脳組織や血液中のLyso-GM2を迅速かつ簡便に測定するための方法の確立を目指した。野生型マウスおよびGM2ガングリオシドーシス・モデルマウス由来の脳ホモジネートと血液を試料として、クロロホルム・メタノール法で脂質画分を抽出した。得られた脂質画分を乾固し、水を加えて超音波処理し、ブタノール抽出、さらにメタノール抽出を行い、lyso-GM2を含む画分を分離した。この画分にオルトーフタルアルデヒド試薬を加え、lyso-GM2の蛍光誘導体化を行った。蛍光誘導体化したlyso-GM2を高速液体クロマトグラフィー(HPLC)法で定量する方法を作製した。この方法で同定される物質が真にlyso-GM2であることを確認するため、脂質抽出画分を薄層クロマトグラフィーで展開し、lyso-GM2を分取し、これをMALDI-TOF質量分析機で解析した。その結果、HPLC法で測定した物質がlyso-GM2であることが確認された。本法を用いた分析で、GM2ガングリオシドーシス・モデルマウス由来の脳組織および血液中のlyso-GM2濃度が、野生型のそれに比べて著しく増加していることが確認された。当初の研究計画に基づき、研究初年度には、脳組織や血液試料中のLyso-GM2を、HPLCで簡便に測定する方法を確立した。さらに本法で測定している物質が目的物質に間違いないことを質量分析法で確認した。研究第2年度(本年度)は、前年度に確立した測定方法を用いて、GM2ガングリオシドーシス疾患モデルマウスの脳組織や血液において、Lyso-GM2含量が増加していること、酵素補充治療薬候補である改変型HexBの脳室内投与によりLyso-GM2含量が低下することを明らかにして、動物実験で、Lyso-GM2のバイオマーカーとしての有用性を示した。これらの結果から、研究は予定通り進行したと考える。当初の計画に基づき、研究初年度は、脳組織や血液中のlyso-GM2を測定する方法を確立することを目標に研究を行った。今後、臨床試料を用いることを考慮し、迅速性と簡便性に優れたHPLC法を用いたアッセイ系を作製した。このアッセイ系で測定している物質が確かにlyso-GM2であることを質量分析法でも確認した。これらの結果から、研究は予定通りに進行したと考える。これまでに、Lyso-GM2の測定法を確立し、動物実験で、Lyso-GM2がGM2ガングリオシドーシスのバイオマーカーとして有用であることを示唆する結果を得た。研究第3年度(最終年度)には、これまでの診断研究で得られたテイーサックス病、ザンドホッフ病やGM2活性化因子欠損症の患者および対照者由来の血液を試料として、その血中Lyso-GM2濃度を測定する。その解析結果と臨床および生化学的情報とを照合し、Lyso-GM2のGM2ガングリオシドーシス・バイオマーカーとしての有用性を証明する。研究初年度に、脳組織や血液中のlyso-GM2を定量する方法を確立した。この方法を利用して、研究第2年度には、脳組織および血液中のlyso-GM2濃度が高値を示したGM2ガングリオシドーシス・モデルマウスに組換え酵素を投与した場合、治療効果に相関して、lyso-GM2濃度が低下することを確認する。これにより、lyso-GM2が治療評価のマーカーとして役立つか否かを判定する。
日米両国語による音声入力可能な高機能ユーザインターフェースの開発

本研究の計画に、いろいろなテーマが絡んでいた。それぞれについて述べる。1.コネクショニスト処理コネクショニスト音声理解は、現在、有効的である主流のアプローチとして認識されている。これについての研究はMorgan(ICSIチーム)の担当である。現在Morganは問題点をいろいろな角度から研究しており、"AVENTによる音声認識"を提案している。2.両国語のシステムこれはブレークスルーに導く可能性がないと分かった。その代わりとして、英語と日本語のシステムを別々に構築することを考えている。3.解析理解ICSI側ではstochastic文脈解析を研究しており、良い結果を得られている。また統合stochastic解析も研究したが(Jurafsky担当)、こちらは予想していた結果は得られなかった。東大側ではコネクショニストの原理をもとに、システムを構築し、評価した。パフォーマンスは非常に貧弱であった。このシステムの「理解」へのアプローチにおける問題点を中心とした論文を発表した。4.フリー・ソフトいくつかの改良、バグの修正、そして、拡張を加え、Lotec音声理解システムversion2を作った。また、SLUM(the Spoken Language Understanding Mini-Challenge)を作成し、リリースした。これは、音声言語の理解、文法解析、言語モデルの開発をサポートするソフトである。これは評価するtoolのセットとちいさなコープスで作られており、音声理解システムのパフォーマンスの測定を容易にするものである。5.マン・マシン・インタフェースマルチモデルシステムの構成要素として音声認識を使用してみた。1、実時間システムの制御(tetrisゲーム)2、マウスインテンシブの制御(お絵書きtool、tgif)など。6.音韻及びモファロジーJurafskyは新しい語形論、音韻論の研究をはじめた。7.概念構造の基礎これは、すぐ応用できる研究ではない。しかし人間の脳のなかの概念構造の数要素が明らかになった。8.対話のやりとり我々は「あいづち」について研究した。最大の発見は、日本語において、低調部分は「今、あいづちをうって下さい」を意味していることであった。この結果を踏まえて、人間のあいづちを真似するプログラム"Aizula"を構築した。「うん」というあいづちしかつかないのだが、ときどきコンピュータでなく本当に人間があいづちをついているとだまされる人もいた。<進展状況>知能留守番電話(自動応答、転送、伝言のうけとりなどの機能を音声で応答するもの)の日本語版を作成した。PEPとBeRPの、それぞれに基づいた、簡単な質問に応答するシステムを作成し、評価した。研究用word spotter(単語認識ソフト)をインターネットで公開した。実験及び評価用データを7年度に公開するためのソフトを半分できた。<得られた知見>構文木を組み立てる必要は(少なくても小語彙の場合)なく、文法知識活用にはより簡単な方法がある。数値的かつ並列的なパーザー(PEPなど)を使用すれば、ニューラル的な意味推論モジュールからのフィードバックは活用できる。BeRPの実験結果で、言語モデルより、正確な文法知識を使用する方が音声認識率が高くなる。

<新点>計画した研究とは違うが、人間が緊張せずに音声理解機能付きインタフェースを利用できるための不可欠な機能であるあいづち機能の研究を始めた。これは見発表の研究なので、この機会を使って、概要を説明する。まず、会話における相槌の観察から、相槌が必ずしも言語情報によってのみ打たれるものではないことを示した。即ち、情報は抑揚・話す速さ・身振などの言語情報以外の情報も相槌を打つ手がかりになるのであることを確認した。そこでこの中から抑揚を注目し抑揚の持つ情報を研究した。抑揚は「疑問」・「念押し」などの意思・感情を伝えることを実験により示した。その実験の結果は、発言に込められた意思・感情が話し終りの抑揚とその時間方向の勾配に反映されるというものであった。そして、この抑揚と意思・感情の関係をモデル化し、人間の発言から人間の意思・感情を判定するシステムを作製した。このモデルは、意思判定に言語情報を用いていないにもかかわらず、意味的にもふさわしい判定を多く行なった。勿論、誤判断もあったが、抑揚という非言語情報のみで意思読みとりという意味論的な判断を行うことが出来た。
日本海有害藻類赤潮の発生・維持・輸送機構の解明と監視・予測システムの構築

観測データ及び数値モデルを用いて、山陰沿岸での有害藻類赤潮発生機構を明らかにした。過去の発生事例解析から、2002年以降に山陰沿岸で発生したコクロディニウム赤潮は、対馬暖流上流域から輸送された海流依存型赤潮である可能性が高く、この赤潮は、対馬暖流上流域の大規模発生、対馬海峡周辺の南西風、山陰沖の対馬暖流の接岸流路、という3つの要因が揃ったときに発生することが示唆された。有害藻類赤潮の維持・輸送機構に影響を与える夏季の海洋環境を明らかにするために,対馬海峡周辺海域で船舶観測を行った。対馬海峡周辺の夏季表層では植物プランクトンの増殖に必要な栄養塩が枯渇しており,亜表層(30m深付近)に形成された栄養塩躍層以深で濃度が高かった。また,クロロフィル(植物プランクトン色素)濃度は亜表層で極大層を形成しており,栄養塩が枯渇している表層では極めて低かった。Cochlodinium polykrikoides赤潮が山陰沿岸に漂着した2003年夏季,及び隠岐諸島に漂着した2007年夏季の衛星クロロフィル・水温画像を調べた結果,赤潮とみられる高クロロフィル濃度域は移動しながら表層で2週間以上継続しており,高濃度域は低水温域と一致していた。このことは,栄養塩が枯渇している表層に亜表層以深の栄養塩が供給され,C. polykrikoides赤潮が維持されたことを示唆している。今後,表層への栄養塩供給の要因を検討することで赤潮の維持・輸送機構解明につながると考えられる。九州大学応用力学研究所で開発された日本海海況予報モデルによる流動場計算結果(水平解像度1/12度)を用いて,2003年及び2007年のラグランジュ輸送モデル計算を行った。クロロフィル衛星画像で濃度1μM以上の海域に赤潮を想定した粒子トレーサーを配置し,その後の粒子の移動をシミュレーションした結果,衛星画像で確認された高クロロフィル濃度域の時空間変動と良く一致した。この計算結果より,2003年及び2007年に山陰沿岸一隠岐諸島で発生したC. polykrikoides赤潮は,韓国沿岸で発生し,対馬暖流等によって日本沿岸に受動輸送される海流依存型赤潮であった可能性が高く,赤潮被害防止のためには人工衛星を用いた広域モニタリングや赤潮原因種特定のための観測体制構築が必要であることが明らかとなった。日本海海況予報モデルによる2002-2008年の流動場計算結果(水平解像度1/12度)を用いて、過去のCochlodinium polykrikoides赤潮の発生海域(対馬海峡周辺の4地区:麗水(ヨス)沖、巨済(コジェ)沖、蔚山(ウルサン)沖、及び長崎県平戸沖)を初期投入位置とし、ラグランジュ輸送モデルによる粒子追跡シミュレーションを行った。初期投入時期については、韓国国立水産科学院(NFRDI)の赤潮データベースや「九州海域の赤潮(九州漁業調整事務所発行)」により、実際に上記の4地区周辺で赤潮が発生した時期(及びその前後の期間)を設定した。年別の粒子追跡シミュレーション結果によると、投入した初期位置によって粒子の軌跡が異なり、特に2003、2005、2007年に山陰沿岸及び隠岐諸島で発生した赤潮は、韓国沿岸から輸送された可能性が大きいことが示唆された。これらの年には、韓国南東沿岸で南南西風によって、粒子が沖合の対馬暖流強流域に輸送される過程が確認されており、この過程の有無が山陰沿岸への粒子漂着に関係する可能性が考えられた。現時点で想定される発生シナリオでは、時系列に従って、(1)韓国沿岸での発生、(2)韓国南東沿岸での南西風、(3)対馬暖流沖合分枝の接岸傾向、以上の要因が全て揃うことが、山陰沿岸での赤潮発生の必要条件であると考えられた。これまで、山陰沿岸での発生の約1カ月前に韓国沿岸での大発生が認められることから、上記(1)-(3)について監視することで、山陰沿岸での赤潮発生可能性を明らかにし、被害軽減に役立つことが期待される。対馬海峡周辺観測で得られた水温-栄養塩関係式から栄養塩分布を推定し、既往知見で明らかとなっている増殖速度や環境要因に対する応答を用いて、プランクトン密度の増減を考慮した計算を行った。2003年以外の発生年(2002、2005、2007年)には、韓国沿岸での初期細胞密度と比べて山陰沿岸(2007年は隠岐諸島)到達時に細胞密度は減少しており、この原因として、輸送途中において表層栄養塩がほぼ枯渇していたため増殖できず赤潮は徐々に薄まりながら輸送されたことが考えられた。韓国沿岸での初期細胞密度からほとんど減少せずに山陰沿岸に到達した2003年についても表層への栄養塩の供給は乏しく、小さい死亡率を仮定した場合のみ個体群を維持できるという結果となった。

本種の生理生態学的特徴として日周鉛直移動や混合栄養が報告されていることから、今後は、輸送途中での個体群のサンプリングや室内実験等を組み合わせることで、赤潮維持機構をより詳細に検討していく必要がある。昨年度提示した発生シナリオをもとに、(1)長期予察(1カ月程度):7月以降の韓国沿岸及び九州北部沿岸での発生状況とその際の風向風速(特に南西寄りの風)の監視、(2)中期予察(1週間程度):対馬暖流流路の検討、衛星画像による高クロロフィル濃度域の時空間変動監視と粒子追跡シミュレーションによる赤潮到達可能性の検討、(3)短期予察(数日程度):調査船による現場調査(有害種細胞数密度等)、衛星画像による高クロロフィル濃度域監視、山陰周辺海域の気象・海象条件の検討、という3段階での赤潮監視・予測の手順を設定した。2009年度は上記に従って赤潮監視・予測を行う予定であったが、対馬暖流上流域での大規模発生がなかったことから検証できなかった。2010年以降も上記手順の検証・手法改良を続けることで、山陰沿岸における赤潮被害軽減に役立つことが期待される。
都市的港湾環境の再開発手法に関する研究

本研究は、大都市に隣接する都市的港湾を対象として、都市的機能と港湾機能の向上及び、陸域と水域を含む沿岸域の一体的高度利用を目指した港湾環境の総合的な再開発手法を確立することを目的として行ったものである。特に、本研究では、危険物取り扱い施設や公害発生施設の移転などによる土地利用の純化、統合と機能分担による港湾施設の効率的活用、公園・住宅・文化施設などの都市的施設の積極的導入による開かれた港づくりなど、港湾環境と都市環境の機能的かつ秩序ある融合をはかり、臨海部の総合的利用を目指した都市的港湾環境の改善計画を取り扱った。主たる成果を以下に示す。1.わが国における95の港湾について再開発の動機を調査し、これを港湾内部に対する動機と港湾背後地または間接的な動機とに分類して整理した。2.再開発に要請される事項を調査し、更新,現状維持,機能変更,機能廃止,修理,修繕,移転,放置の7つの再開発パターンを抽出した。3.港湾の再開発には多くの利害グループが関与し、全員の合意する代替案の選定は非常に困難である。そこで、相異なる利害グループをゲームのプレーヤーとみなし、非零和n人ゲームによる代替案選定を開発した。ここでは、各グループが複数の代替案を独自に評価した結果を総合評価マトリックスで表現すると共に、グループが提携を組む場合をも考慮してその声の大きさを特性関数値として反映させるため提携の人数を新たに定義し、「仁」を満たす解をもって選択すべき代替案とする方法を提案している。4.事例研究を実施し、港湾再開発計画を立案するに際して、[動機]→[計画への要請]→[再開発パターンの同定]→[再開発計画案の作成]→[案の選定]といった一連の計画法を同定し実用できることを確認した。また、「仁」の解を電子計算機で容易に求められるプログラムをも開発した。
一般Lens方程式と混合特異点の幾何学

混合特異点の超曲面の研究に関して(1)ミルナー束のファイバーの連結性に関して、超曲面の非特異点が原点のまわりに十分にあるとき、連結であることををしめした。この結果は自明のようで自明はない。(2)3変数混合斉次多項式で定義された射影曲線を2次元射影空間で考えてその補空間の基本群に関して基本予想を述べ、じっさいに予想が満たされている例をあげた。この結果はBrieskornに捧げるプロシーディング(journal of Singularity)に発表した。この結果を高次元に拡張を試みているところである。複素射影曲線の場合では基本群の計算にVan-Kampen, Zariskiの方法があるが、混合射影曲線の場合はそのような一般論はないので、基本群の計算は格段に複雑である。(3)C.Eyralとの共同研究で非退化であるが特異点は孤立特異点でないばあいの族を考察しそのWhitney正則性や位相具編成を示した。(4)天文学に現れるレンズ方程式のけっかを混合特異点のモジュライ空間の連結成分との対応の基本定理を示し、拡張されたレンズ方程式に関して連結成分の個数を上から評価した。(5)$f(z)g(\bar z)$型の混合関数に関して、ミルナー束の存在のための実証かのうな十分条件を与えた。この結果は、Pichon-Seadeの研究の誤りを補完するものである。この形の混合関数は、従来研究してきた、ニュートン境界の意味で非退化ではないので、自明ではないが、複素解析的超曲面の性質を巧妙につかった興味ある手法を考案した結果である。(6)稲葉、川島との共同研究で残されていた混合擬斉次多項式ノートパソコン巡回型なものに関してな、正則リンクとアイソトーピックなことを示した。混合特異点の研究の一つとして、残されていた縮約とイソトピーの問題を稲葉、川島と共著で解決したことは重要な結果の一つである。これは数年前に私がBrieskorn型の混合多項式と、Tree型の時示して、その時予想として残されていた巡回型混合多項式に関して問題を肯定的に解決したものである。またレンズ方程式と混合多項式のモジュライ空間の関連に関してはメキシコーブラジルの共同国際会議で2015年に発表し、そのプロシーディングに論文として発表したものが今年度中に出版予定である。この結果は数学者のみならず、天文学の研究者にも興味を持たれている。また新しい関連テーマとしてLojasiewicz不等式の非退化超局面の場合の具体的評価式を与え、それを混合多項式に拡張して2017年2月21日ハノイでの特異点ワークショップで発表したことも重要な結果の一つである。これは30年前の福井の評価式の間違いを修正して少し弱い評価式を与えたものである。また非孤立超曲面族の位相不変性に関してはC. Eyralとの共同研究で肯定的な結果を得て、6月3ー11ポーランドでの「多変数関数とその幾何学」国際会議で発表し、さらに拡張を共同研究中である。C.Eyral, T. Ohsawa氏たちと研究議論を行い充実した情報交換が持てた。2017年2月6ー10日、スペインのSevilleでの「Panorama of Singularities」でレンズ方程式とモジュライの関係を講演して、Le.D.T, B. Tessier, M. Tosun, A. Nemethi, L. Paunescu氏などと最近の研究状況に関して情報を交換して意義ある議論を行った。レンズ方程式とモジュライ空間の関係に関しては、一般化されたレンズ方程式の根の上限を正確に決定する作業が実際の例の不足などによって、多少難航している。また縮約に関したイソトロピー問題は擬斉次多項式以外では、計算が極度に複雑となりあまり進んでいない。非孤立特異点属の位相具編成に関しては「馴れた」特異点のもとでは肯定的は結果が得られたが、この条件を外すといまのところ決定的な結果は得られていない。Lojasiewicz不等式のニュートン非退化な場合の具体的な評価はすでに得られている「福井」の評価式の間違いを治すことから出発し、少し弱い評価式は得られたが、さらに強い結果はいまだ格闘中である。混合特異点に関するミルナー束に関し、以下の結果を得た。1。Lojasiewicz不等式の混合多項式への拡張と非退化の時の具体的な評価を与え、その応用として利便でない混合多項式をトポロジーを変えずにどのような高次の項を加えて利便多項式にできるかを示した。この結果はKodai JOurnal of Math.に発表した。またポーランド学派と何回か議論して説明し、興味を示してもらった。3。混合多項式のミルナー束のファイバーの連結性は一般には何も知られていない。この連結性を(正則関数に関して一般的な)モース関数の手法を使わずに新しい手法を使って示した。この結果は正則関数の場合にも加藤-松本の定理では記述できない新しい結果を与える。この結果は近々発表予定である。arXiv:1711.09537に仮発表してある。4。超曲面特異点の入門的教科書を出版し、正則関数の場合から出発して混合多項式までの特異点理論を説明した。修士、博士課程の学生が特異点理論を勉強する際の入門書として使えると期待している。混合多項式のミルナー束の連結性は一般には何も知られていなかった。

然るに混合多項式からくるノットやリンクは正則関数からくるそれよりはるかに豊かで応用が期待できる。それに関してまず連結性を一般に示せたのは大きな一歩と言える。また単列性に関しては、単体的混合多項式、ジョイン型多項式などでは知られているが、それ以外では全く知られていなかったのであるが、予想として幾つかの非自明な例を示して、今後の研究テーマとしてあげた。また「複素および混合超曲面特異点入門」を丸善出版から出版したことは混合特異点の入門書としては初めてのものなので、今後学生がこのテーマを研究する際の手助けとなることが期待できる。混合特異点の超曲面の研究に関して(1)ミルナー束のファイバーの連結性に関して、超曲面の非特異点が原点のまわりに十分にあるとき、連結であることををしめした。この結果は自明のようで自明はない。(2)3変数混合斉次多項式で定義された射影曲線を2次元射影空間で考えてその補空間の基本群に関して基本予想を述べ、じっさいに予想が満たされている例をあげた。この結果はBrieskornに捧げるプロシーディング(journal of Singularity)に発表した。この結果を高次元に拡張を試みているところである。複素射影曲線の場合では基本群の計算にVan-Kampen, Zariskiの方法があるが、混合射影曲線の場合はそのような一般論はないので、基本群の計算は格段に複雑である。(3)C.Eyralとの共同研究で非退化であるが特異点は孤立特異点でないばあいの族を考察しそのWhitney正則性や位相具編成を示した。(4)天文学に現れるレンズ方程式のけっかを混合特異点のモジュライ空間の連結成分との対応の基本定理を示し、拡張されたレンズ方程式に関して連結成分の個数を上から評価した。(5)$f(z)g(\bar z)$型の混合関数に関して、ミルナー束の存在のための実証かのうな十分条件を与えた。この結果は、Pichon-Seadeの研究の誤りを補完するものである。この形の混合関数は、従来研究してきた、ニュートン境界の意味で非退化ではないので、自明ではないが、複素解析的超曲面の性質を巧妙につかった興味ある手法を考案した結果である。(6)稲葉、川島との共同研究で残されていた混合擬斉次多項式ノートパソコン巡回型なものに関してな、正則リンクとアイソトーピックなことを示した。1. Lojasiewicz不等式のさらなる精密化を行い、便利性を持たない超曲面の便利性を持つ超曲面に直してそれがイソトピーの中で行われることを、正則特異点、混合特異点でしめすこと。Lojasiewicz非退化の仮定をいかに除くことができるかを決定したい。2.擬斉次多項式でない混合特異点のニュウトン境界の縮約の位相不変性を調べる。さしあたっていくつかの具体例を調べることから始める。3.一般化されたレンズ方程式の根の理論的な上限をoptimalに求める。ミルナーファイバーの連結性を具体例で調べて、一般化を試みる。単連結性の予想の解決を目指して新しい研究手段の開発を試みることが重要である。さらに高次元の場合には高次の連結性(n変数なら(n-2)連結)を調べることが重要となる。一般混合多項式の今の個数の精密な評価式を与えることはモジュライ空間の連結成分の個数と対応して極めて重要と思われる。
「シワ」のメカニズムに関する基礎的研究-cutis laxa及びin vivo, in vitro及び老化線維芽細胞におけるコラゲナーゼ遺伝子転写調節機構の解析-

1.cutis laxa患者皮膚より初代培養を行った3株の真皮由来線維芽細胞と、性・年齢をマッチさせた正常人皮膚のそれとを比較したところ、cutis laxa由来ではコラ-ゲナーゼ、ストロムライシンmRNAレベルの35倍の増加が認められた。また本症由来線維芽細胞3株を用いたnuclear run-off法でも、正常と比較して35倍のコラ-ゲナーゼ遺伝子転写活性の増加が認められた。2.コラ-ゲナーゼ遺伝子の転写活性の増加が著しい細胞株で、コラ-ゲナーゼ・プロモーター遺伝子(-500+55)にchloramphenicol acetyltransferase (CAT)遺伝子を結合した発現ベクター(pKCAT)を用いたtransient expression assayを行ったところ、約5倍の活性増加がみられた。さらに-244, -98塩基までプロモーターを欠失しても、依然5倍前後の活性増加が認められた。以上より、cutis laxa由来線維芽細胞におけるコラ-ゲナーゼのmRNAレベルの上昇は、その転写レベルが増加するためであることが明らかとなった。またそれはTREを介しAP-1結合の活性化によりなされることが示唆された。