hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
反応抑制機能に関する大脳皮質活動と運動単位動員様式との関係性の解明

本研究は、ストップシグナル課題時の脳波ならびに筋電図記録により、抑制機能に関連した大脳皮質活動様式および筋活動との関係について検討した。その結果、反応準備期後期の前頭前野の活動性(後期CNV)が高いほど実行処理が早期に完了し、抑制に失敗することが考えられた。さらに、抑制成功時において僅かに筋活動をともなう試行とそうでない試行があり、反応準備期前期の右下前頭回の活動性(前期CNV)が高い場合には、筋活動が認められなかった。これらの結果より、前頭前野における反応準備期の前期と後期の活動は、それぞれ異なった機序により抑制の情報処理に影響を与えることが示唆された。抑制機能は、ヒトが意図する行動を遂行するために非常に重要な機能である。これまでストップシグナル課題(SST)を用いて抑制機能についてさまざまな検討がなされてきたが、反応抑制の成否と筋活動との関連性についての検討は十分には行われていない。本研究では、抑制機能に関連した脳活動様式を明らかにしたのち、反応抑制のレースモデルと筋の動員様式との関連性の有無について解明し、抑制機能の機序における新概念の構築に加え、ブレインマシンインターフェイスへの応用を見据えた基礎的データの収集を目指す。本年度は、抑制機能に関連した脳活動様式について脳波から随伴陰性変動(CNV)と事象関連脱同期/同期(ERD/ERS)を求め、大脳皮質の活動性と反応抑制の成否との関連について検討した。まず、先行研究において、反応抑制失敗時は成功時と比較して反応準備期に前頭前野におけるERDが亢進しているという知見を得ている。そこで、準備期における大脳皮質の活動性が反応抑制の成否に影響するという先行研究結果の妥当性について検討するため、反応準備期の大脳皮質活動の指標として用いられるCNVを求めた。その結果、左運動感覚領域を除く前頭前野領域において、反応抑制成功時よりも失敗時のほうが有意にCNVの振幅が高かった。特に運動準備と予測的注意活動を反映している後期CNVで顕著であった。つまり反応準備期における前頭前野の活動性が高いため、遅れて開始する抑制の情報処理よりも反応実行の情報処理が先に完了し、反応が実行される(抑制に失敗する)ことが推察された。本年度の研究結果より、次年度検討する筋活動との関連性については、脳活動は特に反応準備期に着目して行う準備ができた。本研究においては、ヒトの抑制機能と脳活動ならびに筋活動との関係について検討と行った。前年度までは、抑制機能に関連した脳活動様式について随伴陰性変動(CNV)と事象関連脱同期/同期(ERD/ERS)を求め、大脳皮質の活動性と反応抑制の成否との関連について検討した。そして、反応抑制失敗時は成功時よりも反応準備期に前頭前野におけるERDが亢進していること、さらに反応抑制成功時よりも失敗時のほうが有意に後期CNVの振幅が高かったことを明らかにした。そして、本年度は筋活動と反応準備期の脳活動の関連性について検討した。本実験においては反応用ボタンを用いているが、反応抑制に成功した際に、筋活動がみられない反応抑制とわずかに筋活動が出現するもののボタン反応に至らず反応抑制が(見た目上)成功する場合がある。筋活動がある場合の反応抑制と筋活動がみられない反応抑制時の脳活動を比較検討したところ、筋活動がみられない場合のほうが反応準備期の前期CNVの振幅が高かった。つまり、反応準備初期段階における前頭前野における高い活動が反応抑制処理を亢進させることを示唆している。前年度の研究結果との比較から、CNVの前期成分と後期成分の発生機序は異なっており、反応時の実行処理と抑制処理への関与の方略が異なることが示唆された。本研究結果により、より高い時間分解能で反応抑制における反応準備期の脳活動様式について明らかになった。運動生理学本年度は実施計画通りに研究を進め、期待していた実験結果を得ることができた。この結果により、H26年度の研究において主に解析対象とする領域ならびに局面を絞り込むことができた。本年度の研究成果については、学会で研究発表を行ったが論文作成については現在、投稿準備段階である。H25年度の実験方法に倣い、SST時のERD/ERSを算出する。加えて、SST時の筋活動を記録するため、表面筋電図(EMG)を運動肢側の短母指外転筋(APB)より導出し、反応抑制の成功と失敗の閾値の%MVC(最大筋収縮)を求める。そして、抑制の情報処理が完了したと想定されるストップシグナル反応時間(SSRT)を算出し、閾値の%MVCとレースモデルとの間の対応関係の有無を解明する。旅費が予定額内に抑えることができた。また、論文執筆にともなう校正費用および抜き刷り費用を予定していたが、現在、論文は投稿準備段階にあり、年度内に当該予算を使用することができなかった。
骨髄細胞を用いた心不全の細胞移植治療

これまで、われわれは心筋梗塞において骨髄幹細胞が梗塞部位に動員されることを報告した。しかし、サイトカインを用いて心筋梗塞部位に骨髄幹細胞が誘導され心機能が改善されるか否かは明らかではなかった。そこでえ本研究では、サイトカインによって循環血液中に動員した骨髄幹細胞による組織再生をマウスを用いた骨髄移植の系で評価した。[方法]Lac-ZあるいはGFPトランスジェニックマウスの骨髄細胞を致死量放射線照射後の同系(C57BL/60マウス)に移植した。次いでドナー骨髄細胞の生着が確認されたレシピエントマウスの左冠動脈を、全身麻酔下で結紮することによって心筋梗塞を作成した後、さまざまなサイトカインの連日投与を施行した。その後、心エコーにて心機能を評価したのち心臓を摘出し、免疫組織科学的に骨髄由来細胞による心筋組織再生について検討した。[結果]G-CSF投与群はサイトカイン非投与群に比べて心筋梗塞後の死亡率が低く、リモデリングによる心拡大の抑制および心機能の改善を認めた。さらに、ドナー骨髄由来細胞による心筋細胞、血管内皮細胞、平滑筋細胞の再生が認められた。M-CSFおよびGM-CSF投与群では炎症性細胞の浸潤が強くコントロール群と比べて心拡大および心機能の低下を認めた。G-CSF投与による心筋組織再生は、心筋梗塞の新しい再生治療となる可能性があると考えられた。骨髄間質細胞を分化誘導することにより心筋細胞を作製し、心不全治療に応用しうるレベルに至るまでの基礎研究を目的とした。心筋細胞にはカテコラミン受容体、アセチルコリン受容体が多数存在し、心拍数・心収縮力の調節、心肥大の促進等の重要な心機能の調節に関与している。本年度は骨髄由来の心筋細胞(CMG細胞)の性質を明らかとするため、CMG細胞のカテコラミン受容体の発現と機能解析を行った。さらに、さまざまに分化した細胞中より心筋細胞のみを単離する方法を開発した。(1)CMG細胞のカテコラミン受容体の発現:CMG細胞よりRNAを抽出し、カテコラミンα1受容体(α1A、α1B、α1D)およびβ受容体(β1、β2)のRT-PCRを行った。CMG細胞をフェニレフリンにて刺激し、ERK1/2の活性化を測定した。さらにα1拮抗薬プラゾシン前処置による抑制効果を観察した。IBMX存在下にイソプロテレノールにより細胞を刺激し、cAMP生成量を測定した。さらにプロプラノロール前処置によるcAMP生成量への影響を検討した。CMG細胞ではα1A、α1B、α1Dすべてのα1受容体が最終分化誘導前より発現していた。フェニレフリンで刺激するとERK1/2の活性化が容量、時間依存性に観察され、この活性化はプラゾシンにより抑制された。β1受容体、β2受容体は心筋細胞に分化誘導された後に発現し、イソプロテレノールで刺激すると細胞内cAMPの濃度が容量依存性に増加した。以上よりCMG細胞はカテコラミンα1、β1、β2受容体をmRNAレベルだけでなく蛋白レベルでも発現しかつ生理機能を有していることが観察された。(2)ミオシン軽鎖-2v遺伝子プロモーターとEGFPの組み換え遺伝子を用いた心筋細胞の単離:心筋細胞特異的に発現するミオシン軽鎖-2v遺伝子のプロモーターにEnhancedGreen Fluorescent Protein(EGFP)-cDNA遺伝子を組み替えたプラスミドを作製した。この遺伝子組換えプラスミドとNeomycin耐性遺伝子プラスミドをCMG細胞に共遺伝子導入し、G418存在下に細胞を選別した。CMG細胞に5-azacytidineにより最終分化誘導を行い、心筋細胞に分化した細胞のみをFACSによりsortingを行ったところ、CMG細胞は完全な心筋細胞の分画にすることが可能となった。(1)CMG細胞のカテコラミン受容体の発現:CMG細胞よりRNAを抽出し、カテコラミンα1受容体(α_<1A>、α_<1B>、α_<1D>)およびβ受容体(β_1、β_2)のRT-PCRを行った。CMG細胞ではα_<1A>、α_<1B>、α_<1D>すべてのα_1受容体が最終分化誘導前より発現していた。β_1受容体、β_2受容体は心筋細胞に分化誘導された後に発現し、イソプロテレノールで刺激すると細胞内cAMPの濃度が容量依存性に増加した。

以上よりCMG細胞はカテコラミンα_1、β_1、β_2受容体をmRNAレベルだけでなく蛋白レベルでも発現しかつ生理機能を有していることが観察された。(2)ミオシン軽鎖-2v遺伝子プロモーターとEGFPの組み換え遺伝子を用いた心筋細胞の単離:心筋細胞特異的に発現するミオシン軽鎖-2v遺伝子プロモーターにEnhancedGreen Fluorescent Protein(EGFP) -cDNA遺伝子を組み替えたプラスミドを作製した。この遺伝子組換えプラスミドとNeomycin耐性遺伝子プラスミドをCMG細胞に共遺伝子導入し、G418存在下に細胞を選別した。CMG細胞に5-azacytidineにより最終分化誘導を行い、心筋細胞に分化した細胞のみをFACSによりsortingを行ったところ、CMG細胞は完全な心筋細胞の分画にすることが可能となった。われわれはこれまでin vitroにおいて骨髄間葉系幹細胞が心筋細胞に分化できることに報告してきたが、生体内で間葉系幹細胞が心筋細胞に分化するか否かは明らかではない。生体内で親近本研究では心筋梗塞部位に骨髄幹細胞が誘導され心筋再生が行われるか否か、さらにサイトカインを用いることにより骨髄幹細胞による心筋組織再生が促進されるか否かを解析した。【方法】GFPトランスジェニックマウスの骨髄細胞を採取し、致死量放射線照射後の同系マウス(C57BL/6)に骨髄移植した。2月後マウスの末梢血を採取し、血球系細胞をFACS解析した。また、骨髄血のサイトスピン標本を作成した。血球系細胞のキメラ率が90%を超えるマウスに関して、麻酔開胸し左冠動脈結紮により心筋梗塞を作成した。梗塞作成の翌日より10日間G-CSF、GM-CSFを投与した。生存率を観察するとともに、2ヶ月後心エコーにて心機能を評価後に心臓を摘出した。レーザー顕微鏡により抗心筋アクチニン抗体、抗平滑筋アクチン(SMA)抗体、抗von Willebrand Factor(vWF)抗体とDAPI(核染色)の共染色により心筋組織再生について解析した。【結果】梗塞後2ヶ月の時点での生存率は生食投与群では約60%、G-CSF投与群で約90%であり、著明な生存率の改善を認められた。一方、GM-CSF投与群では生食投与群に比し急性期の死亡率の増加が観察された。GM-CSFを投与した群では急性期において梗塞巣に多数のCD45陽性、MAC1陽性のマクロファージの浸潤を認めたが、G-CSF投与群ではCD45陽性細胞は認めるもののMAC1陽性の細胞は有為に低かった。梗塞後2か月の段階の心エコーによる解析ではG-CSF投与群では生食投与群に比べて左室駆出率(EF)の上昇、左室拡張末期径(LVEDD)の短縮が観察され、心機能の改善を認められた。一方、GM-CSF投与群ではEFの低下、LVEDDの拡大を認め、心機能の増悪が観察された。梗塞後2ヶ月の時点での組織では梗塞部位に一致してGFP陽性細胞が多数観察され、その一部は心筋、血管内皮、平滑筋細胞の抗体と共染色され、骨髄幹細胞により組織再生がなされていること、G-CSF投与によりこのGFP陽性細胞が著しく増強することが観察された。
眼組織のバイオイメージング

本年度は酸化ストレスならびに細胞内情報伝達の可視化を中心に検討を進めた。1.酸化ストレスの可視化活性酸素のひとつであるO2^-を化学発光によって可視化する試みを検討した。発光試薬として、これまでのルシジェリンに代えてM-PECを用いることにより、O2^-の発光効率を大幅に上昇させることに成功し、脳スライス標本では低酸素-再灌流モデル等でO2^-発生をリアルタイムに画像として捉えることができた。現在、鶏胚水晶体および眼球の組織培養による検討を進めている。また、M-PECは高感度に利点をもつが、酸素によるバックグラウンドの上昇と活性酸素種特異性にまだ難点があり、今後の検討課題と考える。2.細胞内情報伝達の可視化細胞内情報伝達系を培養細胞で可視化する研究は数多くなされているが、組織・器官として観察する試みは少ない。ここでは細胞の増殖や分化、細胞周期等の制御系のひとつであるプロテインキナーゼ・プロテインホスファターゼの酵素活性を可視化することを目的として検討を進めた。タンパク質としての存在や発現を見るのではなく、活性を可視化することで組織状態(健常か病的かなど)の評価が可能ではないかと考えた。生化学的手法によって、水晶体および網膜に高いプロテインホスファターゼ活性が存在することを認め、組織化学的手法で酵素分布の局在等を検討した。現在、活性可視化プローブとして、キナーゼやホスファターゼの基質となる化合物をデザイン、検証している。脂溶性を持たせて膜透過性を高め、細胞内で酵素反応によって水溶性になって組織に保持されることを基本とし、酵素反応が律速段階となるものが必要であり、蛍光と放射性同位元素のどちらでも標識が可能なものを検討している。水晶体は、ただ一層の上皮細胞と、細長く密にかつ規則正しく配列された線維細胞の2種類のみの細胞から構成される、無血管で透明な組織である。この透明性の維持には酸化ストレス防御機構が極めて重要な役割を果たしていると考えられており、透明性が損なわれる疾病、すなわち白内障の発症と酸化ストレスとの関連には多くの報告がある。本研究では、水晶体で発生する種々の酸化ストレスおよび抗酸化物質(還元型グルタチオンGSHなど)のイメージングを可能にする系の構築を試みた。比較対照としてグルココルチコイド誘発鶏胚白内障モデルを用いた。1鶏胚水晶体中のGSHの局在を未固定凍結切片、マーキュリオレンジ染色で観察した結果、白内障発症により、GSHは大きく低下し、しかもその低下は白濁部分のみでなく、水晶体全体に及んでいることが明らかとなった。現在、器官培養系での観察を試みている。2 dichlorofluorescin diacetate(DCFH-DA)は細胞膜を透過し、細胞内で活性酸素である過酸化水素や過酸化物の反応して蛍光を発する。従って、白内障発症時、その蛍光の増加が予想されるが、現時点では未固定凍結切片では、正常水晶体と白内障水晶体に大きな差は認めらなかった。この系は細胞が生きている状態のほうが望ましいと考えられるため、器官培養、共焦点レーザー顕微鏡での観察の系を構築中である。3活性酸素のひとつO_2^-の可視化のため、ルシジェリンを用いた化学発光観察を行った。グルココルチコイド投与鶏胚および卵黄に強い発光が認められ、O_2^-が発生している可能性が強く示唆された。現在水晶体での局在性を観察できる系を検討している。4白内障発症時の線維細胞を観察した結果、細胞間の空隙発生および細胞接着と細胞骨格タンパクの低下を見いだした。これらの結果を、酸化ストレスがどのようにして水晶体白濁を誘発するのかの検討の端緒としたい。
断層至近距離の強震動に関する実験的研究

断層至近距離における高周波強震動は,断層でのすべり過程の詳細を最もよく表していると考えられるため,地震工学的に重要であるだけでなく,断層すべり破壊の物理を理解するうえでも重要である.しかし,地震発生時に,断層至近距離で強震記録が得られることはまれであり,また,その記録も,とくに高周波領域で,表層の構造の影響を強く受けているため,震源での断層すべり過程の詳細を地震動観測から推定するのは容易ではない.これに対して,既存断層面をもつ岩石試料を用いた固着-すべり実験では,表層の構造の不均一性の影響を考慮する必要はなく,また,断層のすべり量や断層近傍での応力変化などを直接に測定できる.したがって,断層すべり過程の物理を理解するうえで,岩石試料の固着-すべりの詳細を調べることは,非常に有効と考えられる.実験には長さ40cmの既存断層をもつ30cm×30cm×5cmの花崗岩試料を用い,断層に沿って配置した半導体歪ゲージによって断層近傍のせん断歪を,金属箔歪ゲージにより断層のすべり量を,広帯域AEセンサーによって高周波震動をそれぞれ測定した.これらのセンサーにより記録された固着-すべり発生時のせん断応力,すべり量,すべり速度,すべり加速度,地動速度の結果から,以下のことが明らかとなった.1)せん断応力は急激に低下する.2)すべりは急激にに立ち上がり,すべり速度とすべり加速度は破壊開始直後に顕著なピークをもつ.3)すべり速度と同じように,地動速度は破壊開始直後に顕著なピークをもつ.4)測定された高周波震動は,理論的に予測される上限周波数よりも高く,断層面上のアスペリティーの局所的破損が高周波震動を励起していると考えられる.断層至近距離における高周波強震動は,断層でのすべり過程の詳細を最もよく表していると考えられるため,地震工学的に重要であるだけでなく,断層すべり破壊の物理を理解するうえでも重要である.しかし,地震発生時に,断層至近距離で強震記録が得られることはまれであり,また,その記録も,とくに高周波領域で,表層の構造の影響を強く受けているため,震源での断層すべり過程の詳細を地震動観測から推定するのは容易ではない.これに対して,既存断層面をもつ岩石試料を用いた固着-すべり実験では,表層の構造の不均一性の影響を考慮する必要はなく,また,断層のすべり量や断層近傍での応力変化などを直接に測定できる.したがって,断層すべり過程の物理を理解するうえで,岩石試料の固着-すべりの詳細を調べることは,非常に有効と考えられる.実験には長さ40cmの既存断層をもつ30cm×30cm×5cmの花崗岩試料を用い,断層に沿って配置した半導体歪ゲージによって断層近傍のせん断歪を,金属箔歪ゲージにより断層のすべり量を,広帯域AEセンサーによって高周波震動をそれぞれ測定した.これらのセンサーにより記録された固着-すべり発生時のせん断応力,すべり量,すべり速度,すべり加速度,地動速度の結果から,以下のことが明らかとなった.1)せん断応力は急激に低下する.2)すべりは急激にに立ち上がり,すべり速度とすべり加速度は破壊開始直後に顕著なピークをもつ.3)すべり速度と同じように,地動速度は破壊開始直後に顕著なピークをもつ.4)測定された高周波震動は,理論的に予測される上限周波数よりも高く,断層面上のアスペリティーの局所的破損が高周波震動を励起していると考えられる.
アモリファス太陽電池のキャリア再結合中心の探求

1.何故、半導体の評価が、結晶半導体に対して比較的簡便に且つ有効に適用できるのにも関わらず、アモルファス半導体に対しては適用困難であるかを議論し、各々において評価すべき対象を明確にした。結晶半導体においては、ホ-ル測定により微視的キャリア移動度に直接対応するホ-ル移動度と熱平衝時のキャリア濃度が得られる。非平衝時のキャリア濃度にはキャリア寿命が対応しそれは光伝導度の時間減衰から定まる。その上、そのようにして得られた少数キャリア寿命により、任意の非平衝状態におけるキャリア再結合率が表されるので、結晶半導体においてはキャリア寿命を測定すれば十分であり再結合中心の姿にまで言及する必要性は余りない。一方、アモルファス半導体においては、ホ-ル測定はそのままでは適用できず、光伝導度の時間減衰は一般に時間に対して指数的でないので、キャリア寿命はその値を決定できても、それによりキャリア消滅現象を記述するのには不十分であり、再結合率は複雑である。従って、アモルファス半導体においては、キャリア寿命よりさらに一歩踏み込んで、再結合中心そのものを明らかにする必要がある。2.アモルファス太陽電池のキャリア再結合中心になり得る局在電子状態を有効に検出する手法として、新たに“電流過渡分光法(CTS)"を開発した。3.CTSを初めとする深い準位のスペクトロスコピ-において、測定信号は求めるべき局在状態密度分布に一種の変換が施されたものであることに着目し、近似を使わずに、測定信号にその逆変換を数値的に施すことにより局在状態密度分布を求める手法を確立した。4.それにより、通常には検出困難なエネルギ-・ギャップの中央近辺の局在状態が明らかになった。
仰角を有する円錐体上の3次元的衝撃波反射における反射形態の空間的遷移

固体壁による衝撃波反射現象の解明は,衝撃波が発生するような高速流動を取り扱う流体機械の高効率化を図るときの重要な課題の1つとなっており,これまでにも数多くの研究が行なわれてきた.しかし,従来の研究の多くは2次元的反射に関するもので,3次元的反射現象の研究は少なく,実用上重要であるにも関わらず3次元的反射現象については十分な理解が得られていない.仰角を有する円錐体による衝撃波反射はその典型的な例であるが,この場合壁面に対する衝撃波の入射角が局所的に異なるため,複数の反射形態が同時に存在し,反射形態の空間的な遷移が起こり得る.本研究では,この3次元的反射に特有な反射形態の空間的遷移を調べることを目的として,以下の実験を行った.事件には矩形断面100mm×100mmを有する既存の衝撃波管を用いた.半頂角30度の円錐体(底面の直径が30mm)モデルを衝撃波管の中心軸に対して20度の仰角で観測部内に置き,衝撃波管で発生させたマッハ数1.35の平面衝撃波をその円錐体上で反射させて反射形態をシュリーレン法により可視化した.シュリーレン法では密度変化が光路に沿って積分された2次元的な情報しか得ることができないが,衝撃波管中心軸周りでモデルを回転させて様々な方向から撮影を行うことにより得られる数多くの2次元的情報から,入射衝撃波,反射衝撃波,マッハ衝撃波の交点(三重点)の空間分布を再構成することを試みた.その結果,入射衝撃波面内の三重点の空間分布を再構成することができ,正常反射からマッハ反射への反射形態の空間的遷移点を見出すことができた.また,円錐体壁面と入射衝撃波とのなす角が大きい場所では反射波は非常に弱く,反射形態はマッハ反射よりもフォン・ノイマン反射と呼ばれているものに近いことがわかった.固体壁による衝撃波反射現象の解明は,衝撃波が発生するような高速流動を取り扱う流体機械の高効率化を図るときの重要な課題の1つとなっており,これまでにも数多くの研究が行なわれてきた.しかし,従来の研究の多くは2次元的反射に関するもので,3次元的反射現象の研究は少なく,実用上重要であるにも関わらず3次元的反射現象については十分な理解が得られていない.仰角を有する円錐体による衝撃波反射はその典型的な例であるが,この場合壁面に対する衝撃波の入射角が局所的に異なるため,複数の反射形態が同時に存在し,反射形態の空間的な遷移が起こり得る.本研究では,この3次元的反射に特有な反射形態の空間的遷移を調べることを目的として,以下の実験を行った.事件には矩形断面100mm×100mmを有する既存の衝撃波管を用いた.半頂角30度の円錐体(底面の直径が30mm)モデルを衝撃波管の中心軸に対して20度の仰角で観測部内に置き,衝撃波管で発生させたマッハ数1.35の平面衝撃波をその円錐体上で反射させて反射形態をシュリーレン法により可視化した.シュリーレン法では密度変化が光路に沿って積分された2次元的な情報しか得ることができないが,衝撃波管中心軸周りでモデルを回転させて様々な方向から撮影を行うことにより得られる数多くの2次元的情報から,入射衝撃波,反射衝撃波,マッハ衝撃波の交点(三重点)の空間分布を再構成することを試みた.その結果,入射衝撃波面内の三重点の空間分布を再構成することができ,正常反射からマッハ反射への反射形態の空間的遷移点を見出すことができた.また,円錐体壁面と入射衝撃波とのなす角が大きい場所では反射波は非常に弱く,反射形態はマッハ反射よりもフォン・ノイマン反射と呼ばれているものに近いことがわかった.
首都圏周辺部における多文化家族のネットワークとライフスタイルの研究

本研究の目的は、首都圏の東北端に位置し、東京のベッドタウンとして近年急速な人口増を示しているX市、Y市およびその周辺地域に居住する多文化家族(multicultural family.本研究では、国際結婚カップルと、カップルと同居する他の構成員から成る家族を意味する。)が、どのようなライフスタイルを形成しており、また多文化家族間および地域社会の他の構成員とのネットワークにどのような意味を付与しつつ、地域的ネットワークを再生産しているかを明らかにすることにある。調査対象を、研究代表者自身もその一員である、ニューカマー韓国人女性と日本人男性カップルを中心とした家族に絞り、主要インフォーマントへの集約的な面接と参与観察によって、データを収集して、韓国人女性の生活・来住歴、家族生活への適応と不満、地域の社会生活への適応や不安、不満などの分析を行なった。結果として、キイ・インフォーマントたちの生活史と来住歴には、個人-世代的な多様性と一定の共通性がともにみいだされた。共通性は、出身地域、「専業主婦」としての母親、両親に対する扶養責任からの相対的な自由さ、韓国での就労経験と日本への関心の連関、最終学歴、現在の家族形態(配偶者の親との非同居)などの点にみられた。また、在韓当時の日本イメージ及び日本人との接触経験と、日本への来住目的に注目して、彼女たちを類型化することもでき、このような日本イメージ、来住目的と、「生活上の難点」として示された日本社会へのコミットメント、ないしスタンスとのあいだに、関連性がみいだされた。研究の理論的基盤を確立するために、国際結婚、多文化家族、マルチカルチュラリズム一般に関する先行研究文献資料を収集整理するとともに、調査対象地域における韓日二重文化家族のライフスタイルとネットワークの実態を解明するための基礎的、準備的作業として、調査対象となる韓国人女性たちが形成している地域的交際ネットワークへのラポールを高めるとともに、キーパーソンとみなしうる韓国人女性数名への予備的な聞き取りを行なった。予備的な聞き取りは、行なったケースと面接の深度がともにまだ不足しているため、現段階の収集データから確定的な傾向を読み取ることはできない。あえていえば、現段階で面接に応じてくれた女性は、日本社会に比較的よく適応しているケースとみなしうるにもかかわらず、ケースによってかなり異なるタイプの自己のアイデンテイティと周囲からの役割期待の乖離に悩んでいる傾向がみられた。たとえば、あるケースは日本人配偶者からの、「日本人と同じように」行動することへの過剰な期待(「『中元やお歳暮への礼状ぐらい書けるだろう』って言うのよ」*)に悩んでいるかと思えば、別のケースは地域社会が何年たっても自分を「韓国人」としてしかみてくれず、たえず「韓国人」としての発言を求められることへの不満を訴えた(「何年たっても『韓国ではどうなの?』『韓国は・・・』・・・。ここに住んで20年近くになるんだから、今の韓国のことなんかよく知らないのに」*)*-面接は、韓国語と日本語を適当に混ぜて行なった。「」内の表現は発言の趣旨の意訳であり、逐語訳ではない。今後引き続き、予定している全韓国人女性だけではなく、他の家族成員や地域社会における日本人の知人友人などにも面接をおこない、ライフスタイルとネットワークの全般的解明をめざしたい。本研究の目的は、首都圏の東北端に位置し、東京のベッドタウンとして近年急速な人口増を示しているR市、U市およびその周辺地域に居住する多文化家族(multicultural family.本研究では、国際結婚カップルと、カップルと同居する他の構成員から成る家族を意味する。調査対象を、研究代表者自身もその一員である、ニューカマー韓国人女性と日本人男性カップルを中心とした家族に絞り、主要インフォーマントへの集約的な面接と参与観察によって、データを収集した。

対象とするニューカマー韓国人女性は、来日3年から20年程度、年齢は30代前半から40代後半までの幅を有し、主として専業主婦である。彼女たちは、在住外国人密度が大都市中心部に比べると低いこの地域において、孤立しがちな一般のニューカマーと異なり、相互間に活発な交際・相互扶助のネットワークを積極的に維持、発展させているという特徴がある。しかし、彼女たちの家族が、「多文化家族」という規定に一般的に合致するかには疑問の余地がある。現在までに確認しえたところ、夫婦の会話は、ほとんど、あるいは完全に日本語のみでなされているケースが大多数であり、子どもへの韓国語、韓国文化の意図的な継承は、ほとんど成功していない。彼女たちは、周囲の日本人と親しい交際を深めることにあまり期待せず、ニューカマー相互の親密圏にアイデンティティ維持を大きく依存している。今後、日本人配偶者、子どもの調査をさらに進め、ニューカマー韓国人女性とその家族の生活構造について、より多面的なデータを収集、分析する予定である。
不確実環境下における航空機のコンフリクトフリー４次元軌道最適化

近年、航空交通需要は増加の一途をたどり、現在の航空管制システムでは、航空管制官のワークロードの限界、安全性への脅威等、様々な問題が顕在化しつつある。そのため、航空管制官のワークロードを軽減し、安全性を確保した上で交通容量の拡大を図るには、航空管制システムの自動化が不可欠となる。昨年度は、航空管制官の主な役割である航空機のコンフリクト検出および回避手法として、確率的最適制御手法を新たに構築した。そこで平成27年度は、昨年度に構築した確率的最適制御手法を拡張し、複雑な運動モデルの扱いが可能となるように、アルゴリズムの汎用性を高めた。そして、拡張した確率的最適制御手法を、「コンフリクトフリー軌道最適化」だけでなく「混雑空港への着陸機の到着順序最適化」へ応用した。27年度が最終年度であるため、記入しない。そこで本研究では、航空管制官の主な役割である航空機のコンフリクト検出および回避手法を新たに構築する。平成26年度は、風等の飛行中の不確実環境を考慮し、コンフリクト検出および回避のための確率的手法を新たに提案した。そして、2次元平面内でのコンフリクト状況を設定し、提案手法の有効性を、数値シミュレーションにより示した。提案手法を適用することで、従来手法に比べて大幅に計算コストが減少できることを示した。飛行中の不確実環境として風速の予測誤差を扱い、多項式カオス展開を用いたコンフリクト検出手法を構築した。提案する確率的手法により不確実性の定量化を効率良く行うことができ、莫大な計算コストを要するモンテカルロ法等を用いた従来手法に比べ、大幅に計算コストを減少することができた。次に、決定論的最適制御手法として近年注目されている擬スペクトル法に、多項式カオス展開を適用し、確率的最適制御手法を提案した。そして、コンフリクト検出手法を組み込み、コンフリクト回避のための確率的最適制御手法を構築した。さらに、実時間でのコンフリクト回避を可能にするために、最適なコンフリクト回避軌道のサロゲートモデルを、多項式カオスクリギングにより構築した。サロゲートモデルを用いることで、実際に確率的最適制御問題を解くことなく、準最適なコンフリクト回避軌道を、実時間で高精度に生成することができた。これら提案手法の有効性を、2次元平面内でのコンフリクト状況を設定した数値シミュレーションにより示した。また、提案手法を適用することで、従来手法に比べて大幅に計算コストが減少できることを示した。平成27年度は、本年度に考慮した2次元平面内での航空機の運動モデルの複雑化を行う。本年度で扱った運動モデルに垂直面内を加えた3次元空間での運動を考慮することで、提案するアルゴリズムの拡張を図る。また、設定するコンフリクト状況としては、航空機が非常に密集している羽田空港周辺の空域を設定し、数値シミュレーションを行うことで、提案するアルゴリズムの汎用性を高める予定である。対象とする航空機数が多くなることが予想されるため、並列計算等により解析効率の向上を図ることが考えられる。さらに、実際の運航データと本研究で構築するアルゴリズムとの比較検討をし、アルゴリズムの有効性を定量的に評価する予定である。
新規酸化LDL受容体LOX-1の病態生理学的意義に関する研究

酸化LDLが動脈硬化の進展および動脈硬化プラークの破綻に重要な役割を担うことが示唆されている。新規酸化LDL受容体LOX-1はN型糖鎖修飾の不完全な前駆体として生成され、糖鎖修飾を付加され完全型となり細胞表面に運ばれること、このN型糖鎖修飾は細胞表面への輸送と酸化LDLとの結合において重要であることを明らかにした。さらにヒト動脈硬化病変でのLOX-1の発現を検討すると、進行した病変では内膜に集まるマクロファージおよび平滑筋細胞に、初期病変ではそれをを被う血管内皮細胞に強く発現されることが示された。また、細胞表面に発現されたLOX-1の一部は膜近傍の細胞外ドメインにて切断され、可溶型分子として放出されることをみいだした。さらに、培養血管平滑筋細胞におけるLOX-1を介した酸化LDLの取り込みが、Baxの発現を誘導しBcl-2の発現を低下させることによりアポトーシスを誘導することが、LOX-1の機能遮断抗体を用いることにより明らかとなった。また、実際にヒトの動脈硬化病変において、LOX-1の発現とBaxの発現される部位が一致することが、免疫組織蛍光抗体法で示された。粥腫を被う内膜の平滑筋細胞のアポトーシスは、プラークの破綻と急性冠動脈症候群の発症に重要と考えられているが、このように、平滑筋細胞でのLOX-1を介した酸化LDLの取り込みが、主要な役割を担うことが示された。また、可溶型LOX-1の血中濃度が急性冠動脈症候群の発症の危険を予知する分子マーカーとなる可能性が考えられ、現在その鋭敏な測定系の開発が進められている。われわれは、培養血管内皮細胞から、既存のスカベンジャー受容体と構造上の類似性をもたない、全く新規の酸化LDL特異的な膜型受容体LOX-1を同定し(Nature,386:73-77,1997)、これまでに、LOX-1のリガンド特異性や、LOX-1がTNF-α等の炎症性刺激やシェアストレスによって発現誘導をうけること、血管内皮細胞以外にマクロファージにも発現されることを見いだしてきた。昨年度は、さらにLOX-1の生体での機能を明らかにするため、ヒト動脈硬化病変におけるその発現を頸動脈内膜切除術の手術標本を用いて明らかにした。すなわち、LOX-1は動脈硬化初期病変を覆う内皮細胞に、また進行病変では新生内膜下のマクロファージや平滑筋細胞に豊富に発現しており、動脈硬化病変形成過程におけるその重要性が示唆された。またLOX-1の構造と機能に関する検討においては、小胞体で合成されたLOX-1前駆体が、ゴルジ体でN-結合型糖鎖の付加をうけ細胞膜表面に輸送されること、このN-結合型糖鎖の付加が酸化LDLとの結合性に重要であることを示した。さらにわれわれは、培養血管内皮細胞やLOX-1強発現細胞の培養上清中に、可溶型LOX-1が存在すること、これは細胞膜上に発現したLOX-1が何らかのプロテアーゼの作用により切断されて生じたものであることを明らかにした。ヒトの血中にもこのような可溶型LOX-1が存在する可能性があり、その血中濃度は内皮細胞機能異常や動脈硬化病変の病態を推定する新しい指標になりうると考えられ、現在鋭意検討中である。酸化低比重リポ蛋白質(LDL)が動脈硬化惹起性リポ蛋白質として注目されている。我々は血管内皮細胞に発現する新規の酸化LDL受容体LOX-1を同定し、解析を進めた。そして、LOX-1は酸化LDLに結合するもののアセチル化

LDLには結合しないこと、TNFaなどの炎症性サイトカインや血流シアストレスで発現が誘導されること、また、マクロファージや、活性化された血管平滑筋細胞でも発現されること、さらに、ヒトの動脈硬化病変では、進行した病変の内膜に集まるマクロファージおよび平滑筋細胞に、また初期病変を被う血管内皮細胞に発現されることなどを見いだした。このように、LOX-1は生体内でも動脈硬化発症に重要な役割を果たしている可能性が示唆されているが、本年度の研究では、LOX-1を介した酸化LDLの取り込みが、細胞の機能をどのように改変させているかを、平滑筋細胞に焦点をあて検討した。培養血管平滑筋細胞は酸化LDLを取り込み、アポトーシスに陥るが、その分子機構として酸化LDLによりBaxが誘導されBcl-2の発現が低下することが示されている。われわれは、LOX-1の機能遮断抗体を用いることにより、この経路にLOX-1を介した酸化LDLの取り込みあるいは結合が関与することが示された。また、実際にヒトの動脈硬化病変において、LOX-1の発現とBaxの発現される部位が一致することが、免疫組織蛍光抗体法で明らかとなった。平滑筋細胞のアポトーシスは、プラークの破綻と急性冠動脈症候群の発症に重要と考えられているが、このように、LOX-1を介した酸化LDLの取り込みが、主要な役割を担うことが示された。
インビトロ選択法とコンビケム法による超分子認識素子の開発

本研究では、触媒機能を有する核酸(リボザイム)を高機能性生体分子のお手本として捉え、生体分子認識の観点から、その高次構造に及ぼす環境因子の重要性を、分子レベルで考察する。さらに、その結果に基づき、コンビナトリアルケミストリー法(ファージディスプレイ法を含む)及びインビトロ選択の手法を用いて、“情報"と“機能"をあわせもつ超機能性分子を開発することを目的とする。本年度は、DNA認識能を有する機能性ペプチドの開発に重点を置いた。タンパク質によるDNAの認識は、非常に重要な相互作用の1つである。しかしながら多数の相互作用から目的の相互作用を観測するのは一般に困難であり、タンパク質を用いたDNAの認識機構の解明は捗々しくない。一方、オリゴペプチドの化学合成法はすでに確立されており、望みのペプチドを大量に入手することが可能である。さらに、ペプチドはアミノ酸の置換や非天然アミノ酸の導入などの操作も比較的行いやすく、タンパク質の性質の解明や他の分子との相互作用を調べる上で有効である。本研究では、DNAの組換えを行うRecAタンパク質に注目し、このタンパク質のL2とへリックスG領域のアミノ酸配列(195-218領域)を持つ24残基のモデルペプチド(L2-Gペプチド)を化学合成し、このペプチドによるDNA認識能力を調べた。その結果、このペプチドは、一本鎖DNAを特異的に認識できることが明らかになった(二本鎖DNAに対してよりも結合定数にして1000倍も大きい)。また、このペプチドを利用して一本鎖DNA分離カラムの作製もできた。
アミロイドβ蛋白の凝集開始初期過程の高感度解析

アルツハイマー病発症の第一段階は可溶性アミロイドbeta蛋白(Abeta)の毒性型凝集体への変換と神経細胞への沈着であり、この過程の分子機構の解明は、本疾患の予防・治療法の開発にとってきわめて重要である。我々は、膜の脂質ラフトにおいて、コレステロール依存的に形成されるガングリオシドのクラスターを可溶性Abetaが認識して結合し、凝集核となるガングリオシド結合型Abetaが形成されるとの仮説を,リポソーム膜を用いた実験結果をもとに立てている。本年度は,フルオレセインラベルAbeta-(1-40)(Flu-Abeta)を用い、PC12細胞上での凝集過程を共焦点レーザー顕微鏡で追跡した。細胞は本研究費で購入した凍結保存容器に保存した。GM1ガングリオシドを認識するAlexa Fluoro647標識コレラトキシンBサブユニットで強く染色される細胞膜上の領域(GM1-rich領域)にFlu-Abetaは蓄積し、蓄積量はFlu-Abeta濃度とインキュベート時間に依存して増大した。一方、予め培地中でプレインキュベートしたFlu-Abetaはほとんど細胞に結合しなかったことから、Flu-Abetaの蓄積は細胞膜上で起こったことが明らかとなった。Flu-Abetaが高度に蓄積した細胞はエチジウムホモダイマーで染色され死滅していた。また、メチルbetaシクロデキストリンで前処理してコレステロールを除去するとGM1-rich領域は消失し、Flu-Abetaの蓄積は抑制された。以上のように、リポソーム膜を用いた研究で観測された現象が、細胞レベルでも確認され、我々の仮説が指示された。
広島の女性作家・岡田（永代）美知代に関する総合的研究

本研究の目的は、広島県上下町出身の女性作家・岡田(永代)美知代(1885-1968)について、田山花袋の「蒲団」のモデルとしてのフィルターを排して、一人の女性作家として総合的に評価し直すことである。上下歴史文化資料館と協力しつつ、文献調査やインタビュー実施によって詳細な著作リストや年譜を作成し、既知の2倍以上の作品を発掘した。生前未発表原稿の翻刻紹介を行なうとともに、残された作品や書簡を解析し、花袋との関係や地域性・労働・少女小説といった観点から、美知代の文学の特質を解明した。本研究は、広島県出身の女性作家・岡田(永代)美知代(1885-1968)について、田山花袋の「蒲団」のモデルとしてのフィルターを排して、一人の女性作家として総合的に評価し直すことを目的とし、著作リストや年譜の作成と、作品の総合的な評価を行うものである。昨年度の著作調査の実績から、本年度も美知代の著作の全貌を明らかにすることを優先して、各地図書館等で調査を行った。年度後半からは、調査対象の範囲を雑誌から新聞に広げ、国立国会図書館や日本新聞博物館ライブラリーにおいて調査した。『中央新聞』や『富山日報』に美知代が作品を発表していることが確認でき、著作リストを改訂した。『中央新聞』掲載の推定・美知代作品のうち一作品について資料紹介を行うとともに、著作権継承者の許可を得て、広島大学学術情報リポジトリに、作品の新聞版面をPDFファイルで登録した。当該作品は、田山花袋「縁」との関連でも見逃せないものである。作成した美知代の著作リストを利用し、田山花袋と岡田(永代)美知代の師弟の攻防の様相を、作者と地域性の二つの側面から明らかにし、論文化した。うち一つは『日本近代文学』に掲載が確定している。また、田山花袋記念文学館(群馬県館林市)において、田山花袋と岡田美知代の間で交わされた書簡類や美知代の生前未発表作品の調査を行なった。『「蒲団」をめぐる書簡集』(館林市)の翻刻に修正すべき点が発見されたので、今後、報告したい。さらに、上下歴史文化資料館(広島県府中市)において美知代の文化的背景と地域性の核心を探るとともに、美知代の生前未発表小説の調査も行い、館との連携を強化した。分担者のうち、瀬崎圭二は上京前の美知代を取り巻く広島の言論状況を調査し、遠藤伸治は著作リスト作成に際して収集した作品群の分析を行った。本研究は、広島県出身の女性作家・岡田(永代)美知代(1885-1968)について、田山花袋の「蒲団」のモデルとしてのフィルターを排して、一人の女性作家として総合的に評価し直すことを目的とし、著作リストや年譜の作成と、作品の総合的な評価を行うものであった。美知代の著作の全貌が未解明のため、著作リスト作成を最優先に進めたが、その結果、これまで100作品弱しか知られていなかった美知代の著作が、200作以上あることが判明した。作業は府中市上下歴史文化資料館所蔵の著作コピーの書誌事項の確認から始め、大学院生の補助を得て、国立国会図書館、日本近代文学館、日本新聞博物館、大阪府立国際児童文学館等において、新聞・文芸雑誌・少年少女雑誌の索引・目次・本文の調査を行い、これらを整理して著作リストを作成した。このリストは、美知代研究のみならず、明治・大正期の女性作家研究や少女小説研究、さらに田山花袋研究にも寄与する基礎的な資料として活用できるものである。研究代表者は、花袋の「蒲団」や以降の美知代に関連する作品と美知代の書き物との関係を考察して、従来の「蒲団」の成立過程とは異なる見解を示した。また、生前未発表原稿の翻刻と解説、『中央新聞』に掲載された無署名の連載小説を美知代作だと推定して、紹介・解説を行なった。研究分担者と共に上下歴史文化資料館を複数回訪問して、美知代の文化的背景と地域性の核心を探るとともに、美知代の著作権継承者である親族の方々や関連する研究者との交流もはかった。本研究の成果は、論文や口頭発表によるほか、開館10周年記念講座の担当などを通じて、地域に還元してきた。研究分担者の瀬崎圭二は美知代を取り巻く言論状況を調査し、遠藤伸治は美知代の作品群と花袋との関係の分析を行った。今後は、さらに著作リストや年譜の修正を進めるとともに、著作権に留意しながら作品の公開をはかる予定である。本研究は、広島県出身の女性作家・岡田(永代)

美知代(1885-1968)について、田山花袋の「蒲団」のモデルとしてのフィルターを排して、一人の女性作家として総合的に評価し直すことを目的とし、著作リストや年譜の作成と、作品の総合的な評価を行う。美知代の著作の全貌が未解明のため、平成23年度は、すべての研究の基礎となる著作リスト作成を最優先した。まず美知代の生家に開館した府中市上下歴史文化資料館所蔵の著作コピーの書誌事項の確認を行った。さらに、大学院生の補助を得て、国立国会図書館、日本近代文学館、東京大学明治新聞雑誌文庫、お茶の水図書館、大阪府立国際児童文学館等において、文芸雑誌・少年少女雑誌の索引・目次・本文の調査を行った。これらを整理して著作リストを作成し、刊行した。これまで知られていた美知代作品は80作ほどであったが、今回の調査により、単著5冊、共著1冊、雑誌・新聞掲載作品200作、生前未発表原稿10作が判明した。このリストは、美知代研究のみならず、明治・大正期の女性作家研究や少女小説研究、さらに田山花袋研究にも寄与する基礎的な資料として、大いに活用できるものである。また、生前未発表原稿の一つ「国木田独歩のおのぶさん」の翻刻と解説も刊行した。翻刻に際しては、晩年の美知代と親しかった原博己氏への聞き取りと美知代が在籍していた神戸女学院での調査も行い、国木田独歩の最初の妻・佐々城信子(有島武郎『或る女』のモデル)が神戸女学院に在籍していたこと等が明らかになった。これも研究上の成果である。研究分担者と共に上下歴史文化資料館を2度訪問して、美知代の文化的背景と地域性の核心を探るとともに、吉川豊子氏など関連する研究者との交流もはかった。分担者のうち、瀬崎圭二は上京前の美知代を取り巻く広島の言論状況を調査し、遠藤伸治は著作リスト作成に際して収集した作品群の分析を行った。美知代の著作の全貌が未解明のため、初年度の平成23年度は、すべての研究の基礎となる著作リスト作成を最優先したが、その結果、これまで80作品しか知られていなかった美知代の著作が、200作近くあることが判明した。このため、本年度も年譜作成よりも著作リストの充実を優先することとし、引き続き、各地図書館等で調査を行い、作品の発掘と、本人が保存していて作品現物のみある作品の書誌事項の解明に努めた。また、美知代作品と師の花袋との関係に関して、研究論文と口頭発表を行ない、従来の花袋研究とは異なった成果を出すことができた。従来知られていなかった美知代の新聞掲載作品についても紹介し、著作権継承者の許しを得て、インターネット上で作品本文を掲載する道筋をつけた。各地での文献調査や、美知代・花袋に関連する文学館・資料館での調査も順調に行った。関連する文献や索引類の購入や複写を行い、A3サイズのスキャナ等の必要な機器も予定通り購入を進めた。「おおむね順調に進展している」との評価はこのためである。すべての研究の基礎となる著作リストを作成することが、平成23年度の最大の目標であったが、上下歴史文化資料館での基礎作業と各地図書館での調査により、著作リストを作成し、刊行することができた。このリスト作成によって、岡田(永代)美知代が従来知られている以上に多くの作品を残していることが判明した。また、生前未発表原稿のうち一作を翻刻刊行することもでき、明治・大正期の文壇や女学生の様相などが明らかになった。さらに、上京前の美知代を取り巻いていた環境の分析や美知代の著作の解読も進行中である。美知代の著作の購入や複写を行い、索引類や基礎的な文献についても予定通りに購入を進めた。平成24年度は、前年度に引き続いて著作リストの作成・整備を継続するとともに、その成果を生かして、作品紹介と分析に入り、花袋との関係を明らかにした。本年度も引き続き、著作調査と資料紹介、作品分析に努めて、美知代の著作の特色を明らかにしたい。
細胞情報伝達阻害物質の探索と天然分子プローブの創製

本研究では、1)がんと神経変性疾患に関わる細胞内情報伝達系に特異的に作用する機能性低分子化合物を探索するアッセイ系を構築し、これまでに集めた海綿を中心とする海洋生物の抽出エキスライブラリーから探索した。2)そして新たに発見した阻害物質から設計・合成した光親和性放射性標識体やビオチン標識体などの天然分子プローブを用いて細胞内情報伝達系への作用機構を解析した。研究成果:1)Neuro2A細胞に対する分化誘導物質として発見している海綿由来のポリケチドlembehyne Aについて、構造活性相関の知見をもとに標的分子を同定するために、光反応性のアジド基と放射性同位体でラベルした分子プローブを設計合成し、Neuro 2A細胞に特異的に結合する蛋白の検出に成功した。2)ヒト慢性骨髄性白血病細胞(K562)を赤芽球様細胞へと分化誘導する物質として、海綿からセスキテルペンキノンsmenospongine類を見出し、作用の詳細な解析や、構造と活性の相関を解析した。3)先に構築したP-gpを過剰発現する多剤耐性がん細胞(KB-C2)を用いるアッセイ系を用いて、海綿から多剤耐性克服活性を有する脂溶性ペプチドkendarimide Aを見出し、詳細なスペクトル解析とモデル化合物の合成によりその全化学構造を決定した。4)細胞周期におけるブレーキの役目をするCDK inhibitorであるP21の発現を上昇させる化合物を探索するために、p53ネガティブ細胞であるMG63(ヒト骨肉腫)に、p21プロモーター遺伝子およびルシフェラーゼレポーター遺伝子を導入した細胞を用いるアッセイ系でp21プロモーターの転写活性化を評価した結果、アユルヴェーダ生薬Sida cordifoliaからindoloquinoline型アルカロイドcryptolepineを見出した。また、海綿Aaptos suberitoidesからbenzonaphthyridine型アルカロイドaaptamineを見出した。これらの化合物について細胞周期に対する作用やp21プロモーター領域に対する作用など詳細な解析を行った。未解明の細胞内情報伝達機構を詳細に明らかにすることが、細胞内情報伝達機構の破綻による疾病の発症メカニズムを解明し、新たな治療法の開発につながると期待される。本研究では、特にがんと神経変性疾患に着目し、これら疾患に関わる細胞内情報伝達系に特異的に作用する機能性低分子化合物を探索するアッセイ系を構築し、これまでに集めた海綿を中心とする海洋生物の抽出エキスライブラリーから探索する。そして新たに発見した阻害物質とそれらから設計・合成した光親和性放射性標識体やビオチン標識体などの各種の天然分子プローブを用いて標的分子を同定し、細胞内情報伝達系への作用機構を解析する。さらに、見出した微量活性物質については、細胞情報伝達系解析のための新しいツールとして広く世に供給するために全合成研究を展開する。今年度は、すでに、Neuro 2A細胞に対する分化誘導物質として発見している海綿由来のポリケチドlembehyne Aについて、構造活性相関の知見をもとに標的分子を同定するために、分子末端に光反応性のアジド基と放射性同位体でラベルした分子プローブを設計合成した。そして、Neuro 2A細胞に特異的に結合する蛋白の検出に成功した。また、ヒト慢性骨髄性白血病細胞(K562)を赤芽球様細胞へと分化誘導する物質として、海綿からセスキテルペンキノンsmenospongine類を見出し、作用の詳細な解析や、構造と活性の相関を解析した。

また、先に構築したP-gpやMRP1に代表されるABCトランスポーターを過剰発現する多剤耐性がん細胞(KB-C2,KB-CV60)を用いるアッセイ系を用いて、海綿から多剤耐性克服活性を有する脂溶性ペプチドを見出し、その平面構造を決定した。未解明の細胞内情報伝達機構を詳細に明らかにすることが、細胞内情報伝達機構の破綻による疾病の発症メカニズムを解明し、新たな治療法の開発につながると期待される。本研究では、1)特にがんと神経変性疾患に着目し、これら疾患に関わる細胞内情報伝達系に特異的に作用する機能性低分子化合物を探索するアッセイ系を構築し、これまでに集めた海綿を中心とする海洋生物の抽出エキスライブラリーから探索する。2)そして新たに発見した阻害物質とそれらから設計・合成した光親和性放射性標識体やビオチン標識体なとの各種の天然分子プローブを用いて標的分子を同定し、細胞内情報伝達系への作用機構を解析する。今年度は、がんの無限増殖の一因と考えられる細胞周期制御に関わる一連のタンパク質の異常に着目し、活性物質の探索を行った。すなわち、細胞周期におけるブレーキの役目をするCDK inhibitorであるP21の発現を上昇させる化合物を探索するためにp21プロモーターの転写活性を化学的に検知できるアッセイ系を構築した。p53ネガティブ細胞であるMG63(ヒト骨肉腫)に、p21プロモーター遺伝子およびルシフェラーゼレポーター遺伝子を導入した細胞を用いてp21プロモーターの転写活性化を評価した結果、アユルヴェーダ生薬Sida cordifoliaから活性本体としてindoloquinoline型アルカロイドcryptolepineを単離した。また同様に、インドネシアで採集した海綿Aaptos suberitoidesからbenzonaphthyridine型アルカロイドaaptamineを単離した。これらの化合物について細胞周期に対する作用やp21プロモーター領域に対する作用など詳細な解析を行った。
中世・近世前期における九条家の蔵書の生成とその変遷

各地に分蔵される九条家旧蔵書の追跡調査とそれらによる九条家蔵書の復元を目指す。どのような典籍がどの程度所蔵されていたのか、どのような構成蔵書構成であったのかについて明らかにする。そして、九条家旧蔵書の伝本が、個別の作品研究において、どのような位置を占めるものであるのかを明らかにする。どのようにして書写されて九条家に所蔵されるようになったのか、またどのような経緯でそれが他に写されていったのか、といった過程、本の伝来の状況を明らかにする。また、九条家の蔵書の形成と伝来に関わった人物について調査を行い、それらの同時代における人物の相関関係の解明を目指す。