hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト遺伝性疾患に関わるAAAタンパク質の線虫における分子細胞生物学的解析

ヒトでは1種類のp97/VCPしか存在しないが、線虫では2種類存在する。それぞれにのみ作用するdsRNAを作成しRNAi assayを行なった。それぞれ単独ではなんら効果を示さなかったが、両者を同時に用いると胚性致死の表現型を示した。このことは2種類のホモログは機能的に相補的であることを示している。このときの胚を電顕観察すると、多数の空胞が観察された。これはp97/VCPは膜融合に重要な役割を担っているというこれまでの知見と一致している。線虫の体壁筋で蛍光緑色タンパク質を結合した長さの異なるポリグルタミン鎖を発現させ、鎖長が40を越えると凝集体が形成されることを確認した。形成された凝集体は細胞質にのみ存在した。また凝集体形成は加齢には依存しなかった。このときp97/VCPホモログを共発現させると、凝集体形成が部分的に抑制されることを見いだした。このことは、AAAシャペロンが凝集体形成を阻止することを示唆している。パラプレジンのRNAiでは、胚性致死・幼虫致死・成長遅延が観察された。進行性の運動能低下も観察された。組織化学的検討及び電顕観察からミトコンドリア異常を認めた。これらのことは線虫が遺伝性痙性対麻痺の解明に向けてのモデルになりうることを示している。同じ遺伝性疾患を引き起こすスパスチンのRNAiでは欠損は観察されなかった。Fidgetinホモログに関してはRNAiによりこれが欠損すると成虫にはなるが生殖腺形成不全、その結果として不稔になることを明らかにした。このことはfidgetinは初期発生には必要ではなく、形態形成特に生殖腺形成に必須であることを示している。バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系でATPase活性を持つfidgetinタンパク質を精製することに成功した。種々の変異体も作製し、同様に精製した。この中で現在まで報告がなかった位置に存在するシステイン残基が活性に重要であることを見いだした。さらにはATP加水分解機構として提唱されていた「分子間触媒機構」を強く支持する結果を得た。今年度は、ポリグルタミン凝集体形成とp97/VCPホモログとの関連性を検討し、以下の結果を得た。1:線虫の体壁筋で蛍光緑色タンパク質(GFP)を結合した長さの異なるポリグルタミン鎖(polyQ32,40,56,79)を発現させ、鎖長が40を越えると凝集体が形成されることを確認した。2:凝集体をつくらなければ細胞全体に分散して存在しているが、形成された凝集体は細胞質にのみ存在した。凝集体の細胞質局在はポリグルタミン鎖が40でも56でも79でも同じであった。3:凝集体は胚発生の時期から観察された。すなわち凝集体形成は加齢には依存しなかった。ポリグルタミン凝集体形成が発生過程に及ぼす効果は特に認められなかった。また、形態形成・成長速度・運動能にも影響は認められなかった。4:このときp97/VCPホモログ(C41C4.8,C06A1.1)やその近縁タンパク質(MAC-1)をそれぞれ共発現させると、いずれの場合にもpolyQ56凝集体形成が部分的に抑制されることを見いだした。

このことは、p97/VCPおよびその近縁タンパク質(AAAシャペロン)とポリグルタミン凝集体形成との関連性、すなわちAAAシャペロンが凝集体形成を阻止することを示唆している。5:ヒトでは1種類のp97/VCPしか存在しないが、線虫では2種類存在する。これらの機能を解析するために、それぞれにのみ作用するdsRNAを用いてRNAi assayを行なった。それぞれ単独ではなんら効果を示さなかったが、両者を同時に用いると胚性致死の表現型を示した。このことは2種類のホモログは機能的に相補的であることを示している。このときの胚を電子顕微鏡で観察すると、多数の空胞が観察された。これはp97/VCPは膜融合(小胞体・ゴルジ体・核膜)に重要な役割を担っているというこれまでの知見と一致している。1.パラプレジンのRNAiでは、胚性致死・幼虫致死・成長遅延が観察された。進行性の運動能低下も観察された。組織化学的検討及び電顕観察からミトコンドリア異常を認めた。これらのことは線虫が遺伝性痙性対麻痺の解明に向けてのモデルになりうることを示している。同じ遺伝性疾患を引き起こすスパスチンのRNAiでは欠損は観察されなかった。2.Fidgetinホモログに関してはRNAiによりこれが欠損すると生殖腺形成不全、その結果として不稔になることを昨年度に明らかにした。ゲノムリソースセンターからfidgetin欠失線虫を分与頂いた。その結果、染色体上でfidgetin欠失をホモで持つとRNAiで観察されたのと同じ表現型が観察された。このことはfidgetinは初期発生には必要ではなく、形態形成特に生殖腺形成に必須であることを示している。3.バキュロウイルスを用いた昆虫細胞系でATPase活性を持つfidgetinタンパク質を精製することに成功した。種々の変異体も作製し、同様に精製した。この中で現在まで報告がなかった位置に存在するシステイン残基が活性に重要であることを見いだした。さらにはATP加水分解機構として提唱されていた「分子間触媒機構」を強く支持する結果を得た。4.2種類のp97/VCP遺伝子のそれぞれの欠損変異体を入手し解析した。どちらの変異体も野生体に比べて成長速度が遅くなっていた。運動能や化学走性などには異常は観察されなかった。C06A1.1遺伝子の欠損変異体は、生まれる子供の数が約半分になっていた。これは産生される精子の数の減少に起因していると考えられる。
心臓リモデリングとその変容による心不全発症・進展の分子機構解明

心不全は健康長寿社会実現の大きな阻害要因であり、高齢社会の到来に伴いその患者数も増加していることから、効果的な新規治療戦略の開発が望まれている。我々は、加齢や高血圧などの圧負荷によるストレスによって心筋細胞におけるANGPTL2の発現が増加し、心筋細胞におけるカルシウム濃度調節機能と心筋エネルギー代謝機能の低下を引き起こすことで心不全の発症・進展を促進することを明らかにした。さらに、心筋に対する感染指向性を持つアデノ随伴ウイルスを用い、shRNAにより心筋細胞におけるANGPTL2の発現誘導を抑制する遺伝子治療が、心不全病態に対する新規治療法となることを明らかにした。平成26年度の研究成果として、ヒトおよびマウスの心臓組織におけるANGPTL2発現の局在解析で、心筋細胞および心臓組織の微小血管にANGPTL2が発現していることを明らかにした。脂肪細胞やマクロファージでANGPTL2を高発現するaP2-Angptl2 Tgマウスの心臓機能が、野生型マウスに比べ低下し、生化学的にも病的な心肥大を呈することを見出した。aP2は脂肪細胞やマクロファージに加え、心臓組織の微小血管において発現することが報告されており、実際に野生型マウスの心臓に比べTgマウスの心臓でANGPTL2が高発現していることを見出した。以上より、心臓組織におけるANGPTL2の高発現が心肥大・心不全の病態発症の原因となる可能性が示唆された。一方、Angptl2 KOマウスでは、野生型マウスに比べ心肥大が認められるものの心機能は良好で、生化学的所見も含めて、Angptl2 KOマウスの心臓が生理的な心肥大を示すことが明らかとなった。さらに、Angptl2 KOマウスを用いて圧負荷心肥大・心不全モデルを作製したところ、野生型マウスに比べて心機能低下が抑制され、心不全病態の増悪が軽減されることを見出した。また、野生型マウスに生理的心肥大を誘導するような適度な運動負荷を行うと、心臓組織におけるAngptl2の発現が減少することも見出した。以上より、心臓組織におけるANGPTL2発現減少が生理的な心肥大を引き起こし、逆にANGPTL2発現上昇が病的な心肥大を引き起こすことが示唆された。平成27年度では、心肥大・心不全病態に関連する標的遺伝子Xの下流シグナルを検討したところ、圧負荷などのストレスによって心筋細胞における標的遺伝子Xの発現がNFATを介して誘導され、その結果、標的遺伝子Xの下流シグナルによって心筋細胞におけるAKTの分解が促進され、その結果SERCA2Aの発現が低下し、カルシウムイオン濃度の調節機能が低下することで、心臓の収縮力低下、病的心肥大の誘導が促進されることが明らかとなった。さらに、野生型マウスに生理的心肥大を生じるような適度な運動負荷圧負荷を与えると、標的遺伝子Xの発現が減少すること、標的遺伝子X KOマウスでは生理的心肥大が生じ、圧負荷による心不全に対して抵抗性を示すことを前年度に見出していたが、本年度において、適度な運動負荷によって心筋細胞における特定のmiRNAの発現が亢進し、これが標的遺伝子Xの発現を抑制すること、標的遺伝子Xの発現抑制によってAKT-SERCA2A経路の活性化およびPGC-1aやPPARa発現亢進によるATP産生促進効果をもたらし、心保護作用を示すことが明らかとなった。また、アデノ随伴ウイルスを用いて心筋細胞における標的遺伝子Xノックダウンを行うことで、圧負荷心不全モデルマウスにおける心機能低下を抑制することに成功した。(特許の関係上、研究対象としている遺伝子名を標的遺伝子Xと標記)当初の計画とおり心肥大・心不全病態の進展における標的遺伝子Xの機能および適度な運動刺激による生理的心肥大の誘導における標的遺伝子Xの発現抑制機構やその下流シグナルを明らかにできた。さらに、アデノ随伴ウイルスを用いた標的遺伝子Xのノックダウンによって圧負荷心不全モデルマウスにおける心機能低下を抑制することに成功し、新たな心不全病態に対する治療法開発の可能性も見出している。以上のことから、本研究は当初の計画以上に進展していると考える。これまでの研究成果として、加齢や高血圧などの圧負荷によるストレスにより心筋細胞におけるANGPTL2発現が誘導され、その結果、心筋細胞におけるAkt-SERCA2a経路を介した細胞内カルシウム濃度調節機能および心筋エネルギー代謝の減弱による心収縮力低下が引き起こされ、心不全病態の進展につながることを明らかにした。Angptl2 KOマウスの心臓では、生理的心筋リモデリングを生じ、圧負荷による心不全病態の発症に対して抵抗性を示すことから、心筋細胞におけるANGPTL2発現誘導の抑制が心不全病態に対する新規治療法になると考えられた。そこで、免疫反応を起こしにくく心筋への感染指向性を持つアデノ随伴ウイルス(AAV6)を用い、心筋特異的にANGPTL2に対するshRNAを発現させ、ANGPTL2発現を抑制する遺伝子治療法を開発した。圧負荷による心不全モデルマウスに経静脈的に組換えAAV6ベクターを投与したところ、対照群に比べ心筋組織におけるANGPTL2発現減少、Akt-SERCA2a経路およびエネルギー代謝経路の活性化を認め、有意に心機能低下を抑制することに成功した。本年度においては、全身でのAngptl2 KOマウスと同様に、心筋特異的Angptl2 KOマウスが、圧負荷による心不全病態発症に対して抵抗性を示すことから、心筋細胞におけるANGPTL2発現抑制が心保護作用をもたらすことが確認された。さらに、ヒトiPS細胞から分化誘導した心筋細胞においても、ANGPTL2ノックダウンによってAkt-SERCA2a経路やエネルギー代謝経路が活性化することを見出した。

以上より、心筋細胞におけるANGPTL2発現抑制を標的とした遺伝子治療がヒトにおいても心不全に対する新規治療戦略となる可能性が示唆された。心不全は健康長寿社会実現の大きな阻害要因であり、高齢社会の到来に伴いその患者数も増加していることから、効果的な新規治療戦略の開発が望まれている。我々は、加齢や高血圧などの圧負荷によるストレスによって心筋細胞におけるANGPTL2の発現が増加し、心筋細胞におけるカルシウム濃度調節機能と心筋エネルギー代謝機能の低下を引き起こすことで心不全の発症・進展を促進することを明らかにした。さらに、心筋に対する感染指向性を持つアデノ随伴ウイルスを用い、shRNAにより心筋細胞におけるANGPTL2の発現誘導を抑制する遺伝子治療が、心不全病態に対する新規治療法となることを明らかにした。当初の計画通り、心肥大・心不全の発症とANGPTL2発現との連関を明らかにした。また、心臓組織においてANGPTL2を発現する責任細胞が心筋細胞や心臓組織の微小血管であることも見出している。さらに、Angptl2 KOマウスの心臓が生理的な心肥大を示すことを見出し、その分子機構としてANGPTL2シグナルが心筋細胞のAktの安定性を制御している可能性を見出している。以上のように、本研究計画は順調に進展している。さらに詳細に心肥大・心不全病態における標的遺伝子Xの機能を解析するため、心筋細胞特異的な標的遺伝子X KOマウスを用いて圧負荷心肥大・心不全マウスモデルを作製することで、生理的応答としての心臓リモデリングとその変容による心不全の発症に及ぼす影響を、心肥大・心不全病態関連遺伝子の発現解析、心エコーを用いた心機能解析および心臓の線維化の程度などを指標に解析する。さらに、標的遺伝子Xを対象とした心肥大・心不全病態の遺伝子治療の有効性についてもマウスモデルやヒトiPS由来心筋細胞等を用いて更に検証を行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。循環器病態学/分子遺伝学野生型マウスおよびAngptl2 KOマウスを用いて圧負荷心肥大・心不全モデルを作製し、術前、代償期、非代償期の各心臓サンプルを用いてANGPTL2下流シグナルを網羅的に解析し、心肥大・心不全病態に関連するANGPTL2シグナルを同定する。我々は既にANGPTL2の下流でAktシグナルが心肥大・心不全病態において重要な役割を果たしていることを見出していることから、Aktシグナルを中心に解析を進める。また、心筋組織におけるANGPTL2の発現誘導機構を明らかにするため、ラット心筋培養系を用いてAngptl2発現誘導機構の解析を行う。平成26年度において作製した心臓特異的Angptl2 Tgマウスを用いて、圧負荷心肥大・心不全モデルを作製し、心臓におけるANGPTL2高発現が生理的応答としての心臓リモデリングとその変容による心不全の発症に及ぼす影響を解析する。
新奇Na^+非依存性グルタミン酸トランスポーターの機能と同定

それ自身では何の作用も示さない低濃度のα-アミノピメリン酸は、強力な代謝調節型グルタミン酸受容体アゴニストF2CCG-Iをラット脊髄スライス標本に短時間暴露し、それを完全に洗浄した後では、単独で単シナプス脊髄反射の抑制を起こすようになる。α-アミノピメリン酸がF2CCG-Iと殆ど同じ作用を示すようになるのである。この現象は数時間以上持続する。私どもは'キスカル酸priming'の例に倣って、この現象を'F2CCG-I priming'と呼んでいる。グルタミン酸も脱分極を生じない極めて低い濃度でα-アミノピメリン酸と同様の作用をもつ。F2CCG-Iが脊髄組織に取り込まれ、それが再び遊離されるとの仮説を立て、種々の薬理学的検討した結果、Cl^-依存性グルタミン酸トランスポーターを介した現象である可能性が強まった。また'キスカル酸priming'とほぼ同様の機序で生ずることが明らかとなった。さらにF2CCG-Iの取り込まれる部位が、グリア細胞よりむしろ神経細胞である可能性が示唆された。既知のNa^+依存性グルタミン酸トランスポーターは低酸素および低グルコースの環境では殆ど機能しなくなるが、この環境下でもF2CCG-I暴露後のpriming現象は通常通り認められ、むしろかえって増強された。一方、ラット大脳皮質スライス標本でのビククリン誘発epileptiform activityに関してもこの'F2CCG-I priming'現象が認められ、α-アミノピメリン酸により効率的にepileptiform activityが抑制された。このpriming現象に関与するNa^+非依存性グルタミン酸トランスポーターの生理的役割を解明することはグルタミン酸シナプス伝達機構の研究に多くの示唆を与えるものと考えられた。
日本における料理形式の特微と変容

本研究は、近世・近代の料理書、近世の随筆、黄表紙、各家に残る婚礼・客膳料理に関する食事記録などを調査・分析することにより、とくに料理屋の会席料理の形成と展開について明らかにすることを目的とする。1)会席料理の成立に関わると考えられる即席料理形式の特徴を黄表紙・随筆類、明治以降の料理書等を調査する。2)料理屋の会席料理の事例を収集し、1)とあわせその成立時期を明らかにする。3)本膳料理を中心とした各地域の婚礼献立を収集・調査し、時代、地域により饗応の形態の特徴を明らかにし、その饗宴の形態に会席料理形式が浸透する時期と地域とを明らかにする。<研究結果・考察>1)黄表紙による「即席料理」は、吸物、硯ふたなどの酒肴の後に本膳があり、さらに酒肴が続く形式であり、本膳と異なり1品ずつ「即席」で個人別に供することからつけられたものと推察される。2)『守貞謾稿』にみられる会席料理の名前のほか、近代以降の料理書には、略式調膳、袱紗料理、半会席などと呼ばれ、個人盛りの酒肴が供された後に飯が供される形式の献立が見られる。また、大正期になると、酒肴として、何度も供され、ほとんどの献立に例外なく出されていた吸物が、それほど多くはなくなったこと、吸物と汁物の区分が不明瞭となり、汁の位置づけに吸物が置かれる例も見られるようになる。3)本膳料理形式が基本であった婚礼献立にも、明治後期には、会席料理形式が浸透していく様子がうかがえる。<研究目的>本研究は、近世・近代の料理書、近世の随筆、黄表紙、各家に残る婚礼・客膳料理に関する食事記録など、視点の異なる史料から献立の形式・内容を分析することにより、次のことを明らかにすることを目的とする。1)会席料理の成立に関わると考えられる即席料理形式の特徴を黄表紙・随筆類、明治以降の料理書等を調査することで明らかにする。3)本膳料理を中心とした各地域の婚礼献立を収集・調査し、時代、地域による饗宴の形態の特徴を明らかにし、その饗宴の形態に会席料理形式が浸透する時期と地域とを明らかにする。以上の結果より、会席料理形式と本膳料理形式との関連性を解明する。<平成16年度研究結果・考察>交付1年目は、すでにかなり収集のすんでいる地域の婚礼献立を時代毎に整理し、その料理形式の地域による内容を精査するとともに、さらに新たな事例を調査した。特に東京家政学院大学大江文庫に所蔵される料理書を中心に、料理屋の形式である「会席料理」について記述のある資料を調査し、これをデジタルカメラで撮影し、CD-Rにまとめる作業を行った。それらの資料の範囲では、会席料理形式は、膳くずし、即席料理などと呼ばれ、本膳料理を簡略化した形式としてはじまった可能性が示唆された。

以上の結果より、会席料理形式と本膳料理形式との関連性を解明する。<平成17年度研究結果・考察>交付2年目は、近代以降の料理書が充分蒐集されていないために、この蒐集につとめ、東京家政学院大学大江文庫に所蔵される料理書とともに料理屋の形式である「会席料理」など、料理形式について記述のある資料を調査し、これをスキャンして、CD-R資料を作成した。また、婚礼などの本来本膳料理形式で供される儀礼食も明治以降、次第に料理屋による仕出しなどにより料理屋の形式である会席料理形式に変化している様子が事例研究より明らかになり、その一部を日本調理科学会誌に公表した。本研究は、近世・近代の料理書、近世の随筆、黄表紙、各家に残る婚礼・客膳料理に関する食事記録など、視点の異なる史料から献立の形式・内容を分析することにより、次のことを明らかにすることを目的とする。1)会席料理の成立に関わると考えられる即席料理形式の特徴を黄表紙・随筆類、明治以降の料理書等を調査することで明らかにする。2)料理屋の会席料理の事例を収集し、1)とあわせその成立時期を明らかにする。3)本膳料理を中心とした各地域の婚礼献立を収集・調査し、時代、地域による饗宴の形態の特徴を明らかにし、その饗宴の形態に会席料理形式が浸透する時期と地域とを明らかにする。<研究結果・考察>近代以降の雑誌類、『月刊食道楽』(1905年創刊)『料理の友』(1913年創刊)から料理献立に関する記事を抜き出し、そこでの料理献立と儀礼、行事との関係等について検討した。また、料理屋の探訪記などから、献立の特徴を記述した記事を集めた。大正期になると、酒肴として、何度も供され、ほとんどの献立に例外なく出されていた吸物が、それほど多くはなくなったこと、吸物と汁物の区分が不明瞭となり、汁の位置づけに吸物が置かれる例も見られるようになる。これらの献立についてはスキャンして、報告書に掲載した。
び慢性湿潤癌の細胞増殖マーカーと遺伝子異常に関する免疫組織化学的研究

び漫性浸潤舌癌における細胞増殖マーカーである増殖細胞核抗原(PCNA)と核小体形成体(NORs)と、癌抑制遺伝子p53ならびにCyclin D1蛋白、p34cdc2遺伝子産物、アポトーシスおよび癌遺伝子bcl-2の発現について検索した。対象は舌癌63例の生検標本を用い、PCNA、Cyclin D1、p53、p34cdc2、アポトーシス、およびbc1-2の免疫組織染色と、NORsの鍍銀染色を行った。発現状況は顕微鏡下で観察し陽性細胞比率を算定した。浸潤様式の判定は山本・小浜分類に従い、4Cと4D(4型)をび慢性浸潤癌とした。結果1. PCNAとの関連:PCNAとの関連では1-3型で低値(26.5±7.9)を示し、4型で高値(41.1±6.7)を示した。2. NORsとの関連:浸潤様式との関連ではNORs数は1-3型で3.2±0.8、4型で4.9±1.4であった。1-3型は低値を示すのに対し4型では高値を示した。3. Cyclin D1との関連:Cyclin D1との関連では浸潤様式1-3型で10/24例(41.3%)であるのに対し、4型では12/13例(92.3%)と高値であった。4. p53との関連:p53は10%未満を陰性とした。陽性例は1-3型では16/34例(47.0%)であるのに対し、4型では9/13例(69.2%)と高値であった。5. p34cdc2との関連:p34cdc2は5%以上を陽性とした。陽性例は1-3型で24/48例(50.%)であるのに対し、4型では10/15例(66.7%)と高値であった。6.アポトーシスとの関連:アポトーシス細胞標識率は1.2型で2.53±1.0、3型で1.95±1.5,4C,4D型で1.54±1.04であった。4C,4Dで低値を示した。7. bcl-2との関連:bcl-2陽性症例数は1,2型で4/13例(30.8%)、3型で11/27例(40.7%)、4C,4D型で9/11例(81.8%)であり、4C,4D型では高値を示した。結論と考察舌癌では、高度浸潤癌はPCNA,NORs,Cyclin D1,p53,p34cdc2,bcl-2のすべてが高値を示した。これに対し、アポトーシスは低値を示した。このことから高度浸潤癌では細胞増殖活性に関連する遺伝子異常の細胞の発現比率が高値であり、これら遺伝子異常の集積がび漫性浸潤癌の発生に関与していることが示唆された。び慢性浸潤癌における細胞増殖マーカーである細胞増殖核抗原(PCNA)と核小体形成体(NORs)と、細胞増殖と関連のある癌抑制遺伝子p53ならびに細胞増殖に制御するサイクリンD1蛋白の発現について検索した。対象は舌癌症例58例から得た生検組織片で方法はPCNA、サイクリンD1およびp53は免疫組織染色を行ない、一次抗体はそれぞれP10、DCS6,DO7を用いた。NORsは関口の変法に準じて鍍銀染色を行った。顕微鏡下で観察し陽性細胞比率を算定した。浸潤様式の判定は山本の分類に従い、4Cと4D(4型)をび慢性浸潤とした。結果:1.PCNAとの関連(43例)舌癌症例のPCNAはM±SD=30.2±13.4で、舌粘膜上皮より高値を示した。PCNAは1-3型で低値を示し(M±SD=26.5±7.9)、4型で高値(M±SD=41.1±6.7)を示した。2.NORsとの関連(55例)舌癌症例のNORs数は3.8±1.4と高値を示した。浸潤様式との関連はNORs数は1-3型で3.2±0.8、4型で4.9±1.4であった。1-3型は低値であるのに対し4型では高値であった。3.サイクリンD1との関連(37例)サイクリンD1との関連では浸潤様式1-3型で10/24例(41.3%)であるのに対し、4型では12/13例(92.3%)と高値であった。4.p53との関連(47例) p53は10%未満を陰性とした。考察と結論:舌偏平上皮癌では、び慢性浸潤癌はPCNA,NORa,サイクリンD1およびp53の全てが高値を示した。このことから瀰慢性浸潤癌は細胞増殖活性が高いことが明らかとなり、p53遺伝子異常ははひ慢性浸潤癌の発生に関与していることが示唆された。

び漫性浸潤舌癌における細胞増殖マーカーである増殖細胞核抗原(PCNA)と核小体形成体(NORs)と、癌抑制遺伝子p53ならびにCyclin D1蛋白、p34cdc2遺伝子産物、アポトーシスおよび癌遺伝子bcl-2の発現について検索した。対象は舌癌63例の生検標本を用い、PCNA、Cyclin D1、p53、p34cdc2、アポトーシス、およびbc1-2の免疫組織染色と、NORsの鍍銀染色を行った。発現状況は顕微鏡下で観察し陽性細胞比率を算定した。浸潤様式の判定は山本・小浜分類に従い、4Cと4D(4型)をび慢性浸潤癌とした。結果1. PCNAとの関連:PCNAとの関連では1-3型で低値(26.5±7.9)を示し、4型で高値(41.1±6.7)を示した。2. NORsとの関連:浸潤様式との関連ではNORs数は1-3型で3.2±0.8、4型で4.9±1.4であった。1-3型は低値を示すのに対し4型では高値を示した。3. Cyclin D1との関連:Cyclin D1との関連では浸潤様式1-3型で10/24例(41.3%)であるのに対し、4型では12/13例(92.3%)と高値であった。4. p53との関連:p53は10%未満を陰性とした。陽性例は1-3型では16/34例(47.0%)であるのに対し、4型では9/13例(69.2%)と高値であった。5. p34cdc2との関連:p34cdc2は5%以上を陽性とした。陽性例は1-3型で24/48例(50.%)であるのに対し、4型では10/15例(66.7%)と高値であった。6.アポトーシスとの関連:アポトーシス細胞標識率は1.2型で2.53±1.0、3型で1.95±1.5,4C,4D型で1.54±1.04であった。4C,4Dで低値を示した。7. bcl-2との関連:bcl-2陽性症例数は1,2型で4/13例(30.8%)、3型で11/27例(40.7%)、4C,4D型で9/11例(81.8%)であり、4C,4D型では高値を示した。結論と考察舌癌では、高度浸潤癌はPCNA,NORs,Cyclin D1,p53,p34cdc2,bcl-2のすべてが高値を示した。これに対し、アポトーシスは低値を示した。このことから高度浸潤癌では細胞増殖活性に関連する遺伝子異常の細胞の発現比率が高値であり、これら遺伝子異常の集積がび漫性浸潤癌の発生に関与していることが示唆された。び慢性浸潤癌における細胞増殖マーカーである細胞増殖核抗原(PCNA)と核小体形成体(NORs)と、細胞増殖と関連のある癌抑制遺伝子p53ならびに細胞増殖を制御するCyclin D1蛋白ならびにp34蛋白の発現について検索した。対象は舌癌症例63例から得た生検組織片で方法はPCNA、cyclin D1およびp53,p34は免疫組織染色を行ない、NORsは関口の変法に準じて鍍銀染色を行った。顕微鏡下で観察し陽性細胞比率を算定した。浸潤様式の判定は山本の分類に従い、4Cと4D(4型)をび漫性浸潤とした。結果1.PCNAとの関連(43例):PCNAとの関連では1-3型で低値を示し(M±SD=26.5±7.9)、4型で高値(M±SD=41.1±6.7)を示した。2.NORsとの関連(55例):浸潤様式との関連ではNORs数は1-3型で3.2±0.8、4型で4.9±1.4であった。1-3型は低値を示すのに対し4型では高値であった。3.サイクリンD1との関連(37例):サイクリンD1との関連では浸潤様式1-3型で10/24例(41.3%)であるのに対し、4型では12/13例(92.3%)と高値であった。4.p53との関連(47例):p53は10%未満を陰性とした。5.p34との関連(63例):p34は5%以上を陽性とした。陽性例は1-3型で24/48(50.0%)であるのに対し,4型で10/15例(66.7%)と高値であった。考察と結論舌扁平上皮癌では、び慢性浸潤癌はPCNA,NORa,サイクリンD1,p53およびp34の全てが高値を示した。
左室駆出率の保たれた心不全における、心臓交感神経活性のPETによる画像解析

2018年度は12例のPET検査を実施した:心不全8例とコントロール症例4例。研究計画の内容に沿って解析を実施しており、安静時における心筋血流量と、心臓交感神経の節前機能評価を行っている。少数での解析であるが、これまでの研究成果を2019年3月に行われた第83回日本循環器学会学術集会にて発表した。以前に実施した左室駆出率の低下した心不全患者の結果と同様に、左室駆出率の保たれた心不全患者においても心臓交感神経-節前機能の低下が示唆される結果となっている。ただし、その低下の程度の分布は幅が広く、機能低下と関係する因子を分析する必要がある。研究計画での症例総数は約20例としており、現在のところ13例を登録し、引き続き研究を現状のペースで進めていく予定である。予定どおりの研究内容で、研究対象数を順調に増やせている。現在の研究内容にて研究を推進し、予定の研究対象数に達したら、研究成果を解析して学会発表や論文化を行う方針である。研究計画を倫理委員会に提出し研究の承認までに時間を要したため、研究の開始時期が遅延した。現在までに3例でPET撮像を実施している。これまでの検査において研究手順で問題は生じておらず、研究プロトコルに変更の必要はないと考える。残念ながら症例数が少ないため結果の解析には至っていないが、10例ほどの結果が集まったところでまとめて解析を行う予定である。そこで得られた研究結果を考察し、必要があればプロトコールの変更や対象患者にバイアスがないように調整を行っていく。研究計画を倫理委員会に提出し研究の承認までに時間を要したため。毎月あたり2症例の実施を目標にPET検査の被検者を募集し、倫理委員会での承認後は順調に研究が進められている。研究開始時期が遅れたため、次年度使用額が生じた。次年度使用額をPET検査費用として使用し、本年度に遅れた分を次年度に行う計画である。
エポキシシクロヘキセンジオン類によるADP/ATP輸送体の凝集メカニズムの解明

ミトコンドリアADP/ATP輸送体(AAC)は、ミトコンドリア内膜上でADPとATPの交換反応を行う分子質量約30 kDaの膜輸送体であり、マトリックス側で生産されたATPを細胞質へ供給する役割を担っている。ウシ心筋ミトコンドリアAACの新規阻害剤を探索する過程で、epoxycyclohexenedione類(ECH類)がAACによる[14C]ADPの取り込みを阻害することを見出した。2018年度は、ECH類の作用機構を解明することを目指した。ECH類は分子内に2箇所の求電子性反応点を持つため、AACの阻害には求核性アミノ酸残基との共有結合形成が関わっている可能性が高い。そこで、アルキル側鎖にクリックケミストリーを指向した末端アルキンを持つECHD誘導体を合成した(AMM-120)。ウシ心筋亜ミトコンドリア粒子(SMP)をAMM-120存在下でインキュベートし、2次タグとなる蛍光タグ(TAMRA-N3)をクリックケミストリーによって導入したところ、AACに相当するバンドに蛍光バが観察された。また、システイン修飾剤であるN-エチルマレイミドで、AAC表面上の3箇所のシステイン(Cys57, Cys160, Cys257)のうち、Cys57を選択的に修飾した場合、AMM-120による化学修飾が顕著に抑制されたことから、Cys57が主たる修飾部位であることが強く示唆された。これまでの研究で、ECH類はAACに存在するシステイン残基と特異的に化学修飾することでAACを阻害することがわかった。また、後述の通り、高濃度のECH類でSMPを処理した場合、AACの顕著な凝集が誘導されるというユニークな現象を見出した。このような理由から、研究は概ね順調に推移していると考えている。ECH類に関する特筆すべき現象として、より高濃度(50-100 micro-M)のECHD類でウシ心筋SMPを処理すると、還元・非還元条件に関わらずAACの顕著な凝集が誘導され、SDS-PAGEのゲル上からAAC単量体のバンドは完全に消失した。このような凝集誘導効果は、BKAやCATRでは認められない極めてユニークな現象である。ECHD類によるAAC選択的な凝集誘導は、NEM処理によって抑制されたため、システイン修飾に起因することが示唆された。以上の結果より、ECHD類は既知のAAC阻害剤とは異なる作用機構を有する新規なAAC阻害剤であることがわかった。2019年度以降は、ECH類によるAACの凝集メカニズム解明に焦点を当てて研究を進める予定である。2018年度は、生化学実験の比率が多かったため、有機合成関係で計上した予算に余りが発生した。2019年度は実験における有機合成の割合が増える予定なので、余剰の予算を含めて計画的に使用したい。
有限代数群の表現論

主に次の2つのテーマについて研究を行った。II.A_n型のGreen関数は,GL_n(F_q)の表現論と関連してGreenによって導入されたが,Schur関数とHall-Littlewood関数による組合せ論的な構成が知られている.一般の簡約群に関するGreen関数は,Deligne-Lusztigによって,l進cohomologyを使って定義された.この研究でHall-Littlewood関数を古典群の場合に拡張することができ,それによってGreen関数の組合せ論的な構成が可能になった.またWeyl群を複素鏡映群G(r,1,n)に置き換えても,上記の方法は意味を持ち,これらの群に付随したGreen関数が構成できた.その後,複素鏡映群G(r,p,n)(D_n型を含む)に対しても,Hall-Littlewood関数や,Green関数が構成できることが分かった.これらのGreen関数は、非常に一般的な性質によって統制されているように思われる。今後の研究で,その背後にある幾何的な対象,例えば,quiver variety,Hilbert Scheme,affine Hecek環など,との関係を解明していきたい.主に次の2つのテーマについて研究を行った。今後の研究で,その背後にある幾何的な対象,例えば,quiver variety,Hilbert Scheme,affine Hecek環など,との関係を解明していきたい.有限reductive群の指標表については、その計算の障害となる、unipotent classの良い代表元の存在について、以前からの研究を進めた。これについては、群SUnの場合が最も難しいが、これについては、Lisztingとのdiscussionで、Lustingによるgroded affine Heate環の理論がうまく使えることが判明した。これにより、今まで不明だった点が克服できる見通しがついた。現在、論文を準備中である。複素鏡映群、及びそのHocke環については、長さ関数や、ルート条の理論を、より一般の群G(r、p、n)に拡張することに成功した。また、群G(r,r,n)についてのDemazure作用素についても、ある程度分って来た。又、G(r,l,n)のHecke環Hu,rのSchurWeylの相互律を利用して、HurのCharacterに関するFrobeninsの公式の類似を示すことが出来た。これは、A.Ramが神保の結果を利用して、Au型のHecke環のFrobeniusの公式を尊いたこの拡張になっている。又、この論文で使ったアイディアを発展させて、古典群のGreen関数の組合せ論的構成に関する新しい結果を得た。これは、今まで、GLn(Fq)のGreen関数に対して知られていた、Hall-Littlewood関数を利用した、Green関数の組合せ論的記述を、古典群、あるいは、より一般的に、複素鏡映群G(r,l,n)に付随した、Green関数にまで拡張するもので、新しいタイプのHall-littlewood関数も得られる。組合せ論的にも、非常に興味ある関数になっている。今まで、古典群のGreen関数については、指標層を利用した幾何的な構成のみが知られていたが、この研究により、G(r,l,n)を含んだ、より広凡な研究が可能になると思われる。前年度に引き続いて,複素鏡映群に付随したGreen関数の研究を発展させた.前年度では、複素鏡映群G(r,l,n)に付隋したGreen関数を考えたが,今年度は、これを複素鏡映群G(r,p,n)の場合に拡張した.まずG(r,p,n)の場合のSchur-Weylの相互律,およびFrobenius formulaを定式化した.この際,新しいタイプのSchur関数,中和対称関数が得られた.これらを利用して.Hall-Littlewood関数を構成し,Green関数がcombinatorialに構成できることが分った。
不健康行動の習慣化防止におけるポジティブ感情の役割と一次予防アプローチ法の確立

平成30年度は、これまでの研究成果を受けて、不健康行動の習慣化防止という積極的な健康行動の維持にポジティブ感情が与える影響と役割について検討を行った。喫煙行動に関する研究では、非喫煙者を対象にした実験(受動喫煙に関する意識や態度から定義づけした前熟考期のステージ分類をもとにIATを用いて喫煙画像に対する潜在的態度について検討した実験)を、喫煙者に対しても実施し、喫煙行動が習慣化している/していないという対象者の違いからも比較検討を行った。食に関する研究では、食べ物の新規性に関する要因をとりあげ、ポジティブ情動やおいしさといった食への意識等に及ぼす影響について実験的に検討した。この他、ストレスや心身の健康に大きな影響を与えると考えられる対人関係や行動にも着目し、ポジティブ感情の表出の有無やポジティブ感情に関する共感性といった要因が、他者の印象や他者に対する行動(例:向社会的行動)にどのような影響を与えるのかという点についても研究を試みた。これらの研究成果は、2018年度の学会発表だけではなく、シンポジウムの企画等も通して公表し、ポジティブ感情に関する実験のデータの一部は、現在、学術誌に投稿中である。また、次年度以降も成果発表を予定している。平成30年度は、研究実績でも記載したように、喫煙と食行動に関する実験を継続して行い、さらにポジティブ感情の機能についても対人関係との関係に注目して実験を行った。また、これらの研究成果は、学会発表や学術誌への論文投稿という形で公表した。以上の状況から、「おおむね順調に進展している」と判断した。これまでの研究では、健康行動の変容ステージを細分化して検討してきたが、一次予防対策を行う上で個人の認知として、顕在意識だけではなく、潜在意識について詳細に検討する必要性が示唆された。また、ストレス対処としても対人関係についても考慮した検討が必要だと考えられた。本実験結果を応用研究に適用するためには、対象者及び実験条件の違いを含めて再現性を確認する必要があると考え、追加の実験とこれまでの一連の研究成果の公表(学会発表や論文投稿)を行う予定である。平成27年度は、これまでの研究知見を発展させ、非喫煙者の受動喫煙行動変容ステージに関連する諸要因について検討するため、大学生を対象に研究を行った。具体的には、調査研究では個人の喫煙に関する意識や受動喫煙をする/しない動機、喫煙に関する知識、社会的スキルについて、実験研究では喫煙に関する画像や動画を用いて印象評定を行い、各喫煙ステージとの関連性を検討した。その結果、非喫煙者で受動喫煙をしないという嫌煙高期の人たちが受動喫煙に関する動機づけのとくに健康意識が高く、喫煙に関する正しい知識や社会的スキルの主張性に関する得点が高かった。また、これらの得点は、喫煙行動ステージが進むにしたがって低下することが確認され、つまり、受動喫煙容認期になるにしたがって知識や主張性のスキルが低くなる可能性が考えられた。同様に、画像と動画に関する実験でも、喫煙行動ステージが進むにしたがって喫煙風景に関する画像や動画に対する否定的な印象が低下する傾向が示され、とくに受動喫煙を断固拒否する嫌煙高期では男性よりも女性の方が喫煙に関する否定的な印象や意識が強く、一方、受動喫煙を容認している嫌煙低期や受動喫煙容認期では女性よりも男性の方が否定的な意識が高いことが示された。以上の結果から、自身は喫煙をしない非喫煙者であるにもかかわらず、受動喫煙を容認している人たちの特徴として、正しい知識の不足と主張性スキルの低さ、喫煙に関する否定的印象の低さが明らかにされた。また、非喫煙者で受動喫煙を拒否する人と容認する人の違いとして、共感性や感情を伴うコミュニケーションでの意識や行動の違いについても示唆された。平成27年度は、先の研究実績の概要でも記載したように、非喫煙者の受動喫煙行動変容ステージに関連する諸要因として、正しい知識の不足と主張性スキルの低さ、喫煙に関する否定的印象の低さ等を明らかにした。これらの結果から「おおむね順調に進んでいる」と判断した。平成28年度は、健康習慣に代表されるような健康行動を支える重要な要因としてポジティブ感情を位置づけ、これまで行ってきたポジティブ感情の喚起実験に関する手法を、より現実場面に近い健康行動に適用した。具体的には、おいしさをポジティブ感情経験と位置づけ、ポジティブ感情の機能という観点から健康的な食行動の特徴やおいしいと評価するメカニズムについて検討した。個人の主観的幸福感の高さと食刺激に対する情動的反応に関する個別実験では、主観的幸福感の高低によって日常生活での食べることに対する意識が異なっていることを調査研究から明らかにし、その知見をもとに3つの条件(食物画像呈示条件、実際の食物呈示条件、実際に食物を摂取する条件)を設定し、実験を行った。その結果、主観的幸福感が高い人は低い人に比べて、食物画像呈示時および実際の食物呈示時においてポジティブ感情が喚起され、おいしさ評価や摂取欲が高まることが明らかにされた。一方、実際に食物を摂取する条件では、主観的幸福感の高低における差はみられないことが確認された。これらの研究成果を今年度、国際誌のJournal of Happiness Studiesに論文として掲載した。また、個人のポジティブな特性だけではなく、ポジティブ感情に関する状態を操作し、ポジティブ感情が喚起されることによって食に対する認知の広がり(食に対する考え方や感じ方、食への意識)や食物選択、さらに実際に摂取する食物の量に影響が認められるかという点についても予備的な実験を試みた。以上、本年度は、食行動に影響することが予測されるポジティブ感情に関する個人特性および感情状態を取り上げ、食への動機づけや意識や態度といった認知、実際の食物選択や摂取量といった食行動との関連について検討した。

平成28年度は、先の研究実績の概要でも記載したように、主観的幸福感を個人のポジティブな感情に関する特性、おいしさをポジティブ感情のひとつと位置づけ、ポジティブ感情の機能という観点から健康的な食行動の特徴やおいしいと評価するメカニズムについて検討し、その成果についても国際誌に論文として掲載した。これらの結果から、「おおむね順調に進展している」と判断した。平成29年度は、これまでの「喫煙」と「食」に関する基礎研究から得られた知見を発展させ、不健康行動の習慣化防止という積極的な健康行動の維持にポジティブ感情が与える影響と役割について検討した。喫煙行動に関する基礎研究として、非喫煙者の受動喫煙に関する意識や態度から定義づけした前熟考期のステージ分類をもとに、IATを用いて喫煙画像に対する潜在的態度について実験的な検討を行った。非喫煙者の中でも受動喫煙を容認している人と嫌煙高期に該当する人で比較を行い、さらに喫煙者との比較についても実験を継続中である。食に関する研究では、ポジティブ情動に関連する刺激呈示の頻度や状況・評価の違いが反応に及ぼす影響について実験的に検討し、対象の評価がポジティブに変化する単純接触効果が内的に生起したイメージに対しても生じること、食画像刺激の呈示によって評価が減少する感性満腹感において食物刺激に注意を向けることが重要であることを示し、これらの成果はJournal of Health Psychology Researchに英文論文として掲載した。また、これまでの研究に引き続き、ポジティブ感情と心身の健康に関する実験も継続しており、動画によってポジティブ感情を喚起し、覚醒度の違いによる影響について、食に対する認知や実際の摂取量、対人場面での人物の信頼性を従属変数にして検討した。以上、本年度は、喫煙と食行動に関する実験を中心に行いながら、ポジティブ感情の機能についても実験を継続し、さまざまな行動への影響について検討した。平成29年度は、研究実績でも記載したように、喫煙と食行動に関する実験を継続して行い、さらにポジティブ感情の機能についても実験を行い、行動への影響について検討を進めた。これらの研究成果の一部を英文論文として掲載した。以上の状況から、「おおむね順調に進展している」と判断した。平成30年度は、これまでの研究成果を受けて、不健康行動の習慣化防止という積極的な健康行動の維持にポジティブ感情が与える影響と役割について検討を行った。喫煙行動に関する研究では、非喫煙者を対象にした実験(受動喫煙に関する意識や態度から定義づけした前熟考期のステージ分類をもとにIATを用いて喫煙画像に対する潜在的態度について検討した実験)を、喫煙者に対しても実施し、喫煙行動が習慣化している/していないという対象者の違いからも比較検討を行った。食に関する研究では、食べ物の新規性に関する要因をとりあげ、ポジティブ情動やおいしさといった食への意識等に及ぼす影響について実験的に検討した。
セル型回路網による知的画像処理の進化的自動生成

平成12年度の研究実績の概要を次に示す.(1)実験環境の整備:本研究の実施にあたり,実験効率を向上させるため,設備備品費により調達した複数台の高性能パーソナルコンピュータをネットワークを介して接続した擬似並列計算システムを構築した.この実験環境により,従来よりも処理速度を大幅に高速化することに成功した.(2)画像処理自動生成手法の確立:画像処理の事例(原画像と目標画像の組)を与えるだけで,その画像処理を既存のフィルタを木構造状に組み上げて自動推定する画像処理自動生成手法(ACTITシステム)を確立した.作成したACTITシステムをさまざまな画像処理に適用し,画像処理の自動化に有効であることを確認した.また,ACTITシステムをさらに発展させ,任意の画像処理の自動生成が実現できるよう拡張を行った.扁平率や凹凸形状,直線性,円など,特に図形形状に着目したフィルタを用いることによって,ACTITシステムの汎用性を大幅に拡張することができた.(3)セル型回路網の自動生成手法の確立:各ユニットが近傍だけに接続された構造をもったセル型回路網(ACNN)を用いて画像処理を実現する基本的な方式を確立した.また,このACNNを上記(2)で述べたACTITシステムに融合させることによって,画像処理自動生成プロセスの処理速度の大幅な高速化を実現するための基礎的検討を行った.(4)本研究の有効性の検討:続いて,ACTITとACNNを融合させて生成した試作システムを実際の画像処理の問題に適用して検討した.実験結果から,本システムが瞬時知的画像処理の自動構築に非常に有効であることを確認した.平成12年度の研究実績の概要を次に示す.(1)実験環境の整備:本研究の実施にあたり,実験効率を向上させるため,設備備品費により調達した複数台の高性能パーソナルコンピュータをネットワークを介して接続した擬似並列計算システムを構築した.この実験環境により,従来よりも処理速度を大幅に高速化することに成功した.(2)画像処理自動生成手法の確立:画像処理の事例(原画像と目標画像の組)を与えるだけで,その画像処理を既存のフィルタを木構造状に組み上げて自動推定する画像処理自動生成手法(ACTITシステム)を確立した.作成したACTITシステムをさまざまな画像処理に適用し,画像処理の自動化に有効であることを確認した.また,ACTITシステムをさらに発展させ,任意の画像処理の自動生成が実現できるよう拡張を行った.扁平率や凹凸形状,直線性,円など,特に図形形状に着目したフィルタを用いることによって,ACTITシステムの汎用性を大幅に拡張することができた.(3)セル型回路網の自動生成手法の確立:各ユニットが近傍だけに接続された構造をもったセル型回路網(ACNN)を用いて画像処理を実現する基本的な方式を確立した.また,このACNNを上記(2)で述べたACTITシステムに融合させることによって,画像処理自動生成プロセスの処理速度の大幅な高速化を実現するための基礎的検討を行った.(4)本研究の有効性の検討:続いて,ACTITとACNNを融合させて生成した試作システムを実際の画像処理の問題に適用して検討した.実験結果から,本システムが瞬時知的画像処理の自動構築に非常に有効であることを確認した.
細胞骨格の再構築による細胞分化および脱分化機構の解明

細胞分化は特異的な転写因子群の発現によって制御される。また、細胞分化に伴ってアクチン細胞骨格を再構築し、分化細胞それぞれに特徴的な形態へと変化することが知られている。しかし、アクチン細胞骨格の形成、崩壊および再構築による形態変化と分化および脱分化という現象がどのような分子機構によって惹起されるのかについては明らかではない。本研究では、細胞分化、脱分化および多能性獲得がアクチンの動態によって直接制御されることを明らかにし、細胞の「かたち」の変化が分化あるいは脱分化、さらには多能性獲得(幹細胞への可塑性)といった細胞機能の転換を決定する普遍的な機構であることを明らかにする。
骨格筋に及ぼす虚血・再灌流による活性酸素の酸化的ストレスの影響

組織が低酸素状態に陥ると、キサンチンオキシダーゼ(XOD)の活性化により活性酸素の生成が増大する。激しい運動中には生体内において低酸素状態が生じ、XODの活性化によるO2・が生成される。そこで本研究では、骨格筋の虚血・再灌流により、活性酸素の生成が増加するかどうかを、抗酸化物質であるビタミンEを過剰に投与したラットにおいて検討した。5週齢のSD系雄ラットを5日間予備飼育した後、2週間通常食群(C)とビタミンE(1000IU/kgdiet)食群(VitE)に分けて飼育した。実験は、疑似手術(Sham)群を加えて計3群とし、12時間以上の絶食後に行った。ラットをネンブタール麻酔下で開腹し、腹部下行大動脈の血流を阻止し、20分間の虚血後に血流を再灌流した。血流再灌流20分間後に下肢の筋肉をサンプリングした。氷冷した生理食塩水で振り洗いした後、水分をとり液体窒素に凍結保存した。大川らの方法によって筋肉のホモジネイトの過酸化脂質(MDA)を測定した。筋肉のMDAは、VitE群とSham群がC群に比べ、有意に低い値を示した。また、ビタミンEの濃度は、VitE群がC群よりも約20%程度有意に上昇した。筋肉の損傷の指標である血漿CK活性を測定したところ、VitE群が最も低い値を示した。さらに、活性酸素を発生させるFe^<2+>を2mM加え、37°Cで1時間インキュベーションした結果、C群に比べVitE群が有意に低い値を示した。これらの結果から、骨格筋の虚血-再灌流は活性酸素の増加を促し、筋肉の酸化ストレスを増加させることが示唆された。また、骨格筋の虚血-再灌流による酸化ストレス、もしくは活性酸素発生物質に添加による酸化ストレスは、ビタミンE含量が高い状態で軽減することが明らかになった。さらに、ビタミンEがCKなどの血中逸脱酵素の上昇を抑える可能性も示唆された組織が低酸素状態に陥ると、キサンチンオキシダーゼ(XOD)の活性化により活性酸素の生成が増大する。さらに、ビタミンEがCKなどの血中逸脱酵素の上昇を抑える可能性も示唆された
分化制御面におけるミトコンドリア新奇機能の解明に向けた先駆的アプローチ

粘菌細胞の細胞周期上に特定された増殖/分化のチェックポイント(PS点)において特異的に、あるいは飢餓に呼応して発現するタンパク質のうち、2つのミトコンドリア・タンパク質(ミトコンドリア・リボゾームタンパク質S4;RPS4、およびミトコンドリア局在型の分子シャペロンである熱ショックタンパク質90(Dictyostelium homologue of TRAP1);Dd-TRAP1)に特に注目して研究を展開した。まず、増殖から分化への移行プロセスに密接に関与するこれらのタンパク質それぞれについて特異抗体の作製を試み、これに成功した。そこで、細胞内でのそれらの動態を免疫細胞化学的方法等により追跡し、双方の分子とも分化に伴って興味深い挙動を示すことを明らかにした。すなわち、分化開始に必須であるRPS4は分化に際してミトコンドリアから細胞核に移行し、Dd-TRAP1は増殖期においては主として細胞表層にあってF-アクチンと共存在すること、しかし分化の開始にあたってミトコンドリアに再び戻ることが示された。ホモロガス・リコンビネーションによるDd-TRAP1のノックアウト株やアンチセンスRNA発現株の作製をこれまでに幾度も試みたが、成功していない。この事実は、Dd-TRAP1の欠損は致死性であることを強く示唆した。また最近、臭化エチジゥム処理によりミトコンドリアDNAのみを著しく減少させた細胞(ρ^0-like cells)の作製に成功し、この細胞では分化の開始が大幅に遅れるばかりでなく、形態形成・パターン形成に顕著な異常があることを見出した。