hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
静脈血採血における最適な穿刺角度に関する研究

本研究の目的は血管の深さによる静脈穿刺角度を明らかにすることである。65名の上肢の静脈エコー画像をもとに,血管の深さによる穿刺角度の違いを明らかにした。結果より、採血時の穿刺角度は穿刺する針の長さや血管の深さに影響し、テキストに記載されている幅は適切であることが根拠づけられた。採血時は、テキストなどで述べられている角度を覚えるだけではなく、血管の深さを考慮して穿刺する必要性があることが示唆された。静脈穿刺は、看護師にとって日常的に広く臨床現場で行う医療行為である。そのためできるだけ患者に苦痛を与えることなく、安全かつ確実に穿刺できる技術と穿刺困難な場合への判断能力や対処方法を身につけることが求められている。採血に適した血管として、肘部屈側の肘正中皮静脈が選択されることが多い。採血を行う際の穿刺角度として、標準採血法ガイドラインでは、皮膚に対して30°以下程度、深部の血管以外は通常20°以下の角度で十分穿刺可能であると記載されている(日本臨床検査標準協議会(JCCLS),2011)。また、看護のテキストには、穿刺角度は1030°の範囲と書かれているものが多いが、血管の深さとの関係は述べられていない。よって、本研究では、超音波診断装置を使用して、静脈血の採血における血管の深さと針の穿刺角度の関係を明らかにすることが目的として研究を行っている。本年度は、20歳以上の健康な成人60名を対象とし、超音波を用いて、両側上肢の撮影を行った。撮影に関しては、駆血前後に上腕骨内側上顆と上腕骨外側上顆とを結ぶ線である、肘窩線上にある肘正中皮静脈の短軸撮影および長軸撮影を行った。駆血部位は、目盛駆血帯を使用し、肘窩より10cm中枢側で駆血した。現在、結果整理しており、今後皮膚表面から血管の深さと針の先(ベベル)の部分が全て入る角度を算出していく。さらに、分析結果に基づき血管の深さによる数種類のパターン模型を使用し、実際の穿刺を想定して検証を行うこととする。本年度は、昨年度収集していたデータについて、血管の深さによる静脈穿刺角度の検討を行った。対象は健常人で、同意が得られた男性6名、女性59名の65名であった。結果は、注射針10mm挿入するケースでは、穿刺角度は最も距離の短かった2.0mmの場合、穿刺角度は11.2度、最も距離の長かった5.9mmの場合、穿刺角度は36.2度であった。以上の結果より、テキストに記載されている角度範囲の穿刺角度がほぼ根拠づけられた。しかし、採血時の穿刺角度は、穿刺する針の長さや血管の深さに影響する。初学者への教育にあたり、一般的な角度のみならず血管の深さを考慮した穿刺角度についても指導する必要があることが示唆された。本研究では、血管の深さによる静脈穿刺角度を明らかにすることを目的とし、本年度は得られた画像をもとに血管の深さによる穿刺角度を明らかにした。32mmの穿刺針を使用し、8mm挿入するケースでは、穿刺角度は最も皮膚表面から血管の中心までの距離が短かった2.0mmの場合、穿刺角度は14.5°、最も距離の長かった5.9mmの場合、穿刺角度は47.5°であった。穿刺針を10mm挿入するケースでは、穿刺角度は最も皮膚表面から血管の中心までの距離が短かった2.0mmの場合、穿刺角度は11.5°、最も距離の長かった5.9mmの場合、穿刺角度は36.2°であった。穿刺針を12mm挿入するケースでは、穿刺角度は最も皮膚表面から血管の中心までの距離が短かった2.0mmの場合、穿刺角度は9.6°、最も距離の長かった5.9mmの場合、穿刺角度は29.5°であった。最小の値である、1015°の角度は、標準採血法ガイドラインで、皮膚に対して深部の血管以外は通常20°以下の角度で十分穿刺可能であると記載されているが、特に浅い場合は、角度をつけ刺入長さを長くすれば血管を突き抜ける可能性を示唆している。よって安全に刺入するためには、1015°の角度を考えて穿刺すればよいと考えられる。最大の値である3045°の角度が得られたことに関しては、標準採血法ガイドラインや看護学テキストには、皮膚に対して30°以下の範囲と書かれていることから誤差が生じる。この理由として、採血中には血管の中で針が動かないように注射器を保持している以外の指で対象者の上肢との安定を保つ必要があるが、角度を大きくすると採血者の指と置いている対象者の上肢とが安定しないことが一つとして考えられる。

模擬血管作成にあたり、業者との連絡および調整に時間を要し、研究の遂行にわずかに支障をきたしている。しかし、現在作成中であり、近日納品予定となっている。基礎看護学模擬血管を使用して評価および検討を行う。さらに、教育効果の検討を行う。2013年度前半に購入する予定であった超音波診断装置が、2013年度後半に購入したため、データ収集の時期が遅くなったことが要因として考えられる。また、データ収集後結果の分析に取りかかる時期が遅くなったことも要因として考えられる。現在、データ収集は終了したため、現在、分析を行っている。平成26年度に発注予定であった物品(模擬血管)の請求および納品が平成27年度に決定しているため。次年度は、昨年に引き続き、データの分析を行う。結果により、明らかとなった血管の深さによる数種類のパターン模型を作成し、実際の穿刺を想定して検証を行う。さらに、昨年度から取り組んできた研究成果の公開について学会で発表する予定である。物品(模擬血管)代および学会参加費や論文投稿費用のため超音波診断装置購入のために、研究費を400,000円前倒し申請した。超音波診断装置が予定額より安く購入できたため、145,787円次年度に繰り越された。研修会や学会発表のための参加費および旅費に使用する。また、データ収集および実験に必要な機材を購入するための費用に使用する予定である。
小型ピロプラズマ病の貧血発生機構の解明

小型ピロプラズマ病の主要症状である貧血の発生機構を明らかにするために、活性酸素による細胞傷害(酸化ストレス)の観点から、赤血球の寿命短縮にかかわる細胞生化学的な性状を解析した。主要な研究成果は、以下のとおりである。1.実験感染牛の末梢血において、自己抗体(IgG)が付着した赤血球の割合は貧血発生前は低かったが、貧血の進行に一致してIgG付着率は著明に増加し、貧血ピーク期にIgGの付着率は最大値を示した。2.感染牛の血清中に存在するIgGは、無傷赤血球よりも人工酸化赤血球に多く付着した。また、人工酸化赤血球へのIgG付着は、非感染(正常)牛の自己血清よりも感染牛血清と反応させたときに高い値を示した。3.赤血球表面への膜リン脂質ホスファチジルセリン発現は、実験感染牛の貧血の程度に応じて発現率の増加がみられた。また、実験感染牛の酸化傷害赤血球では、未負荷の赤血球に比べて早い時期からホスファチジルセリンが発現し、さらに貧血時におけるホスファチジルセリン発現率も高かった。4.赤血球内過酸化物の含量は、実験感染牛の貧血発生前は一定量で推移していたが、貧血の進行に一致して過酸化物含量は増加し、貧血ピーク期に最大値を示した。5.実験感染牛の赤血球についてハインツ小体の証明を試みたところ、貧血の進行に一致してハインツ小体の生成量は著明に増加した。6.実験感染牛の単球による自己および非感染(正常)牛の非自己赤血球に対する貪食率は、正常牛の単球による自己および正常牛の非自己赤血球の貪食率より高かった。本研究を総括すれば、本病における赤血球寿命短縮の機序に関して、「小型ピロプラズマ病では感染経過で原虫寄生・非寄生赤血球の両者に著明な酸化ストレスが負荷され、貪食細胞がこれらの酸化傷害赤血球を認識・貪食することで末梢血中から排除する」という貧血の発生機構が提唱される。小型ピロプラズマ病の主要症状である貧血の発生機構を明らかにするために、実験感染牛を用いて赤血球への自己抗体(IgG)の付着率、酸化ストレス下における赤血球表面への膜リン脂質ホスファチジルセリン(PS)の発現率、および赤血球内過酸化物の生成量をフローサイトメトリーで調べた。赤血球へのIgG付着は、貧血発生前は低い値で推移していたが、発病時には貧血の進行に応じてIgG付着率が増加し、ほぼ貧血ピーク期に最大付着率を示した。赤血球表面へのPS発現は、貧血発生前にはほとんど認められなかったのに対し、発病時には貧血の程度に応じたPS発現率の増加がみられた。また、酸化ストレス負荷の赤血球では、未負荷の赤血球に比べて早い時期からPSが発現し、さらに貧血時におけるPS発現率も高かった。赤血球内の過酸化物は、貧血発生前は定量で推移していたが、発病時には貧血の進行に一致した生成量の増加を示し、ほぼ貧血ピーク期に最大値となった。貧血発生時に認められる赤血球のこれらの傷害的変化は、血中での赤血球寿命を決定する要因として、重要な役割を演じている可能性がある。小型ピロプラズマ病の貧血機構を解明するために、さらに赤血球寿命の短縮と傷害赤血球の認識・排除との関係を明らかにする必要があるが、今回得られた知見は有効な手がかりとなる。

小型ピロプラズマ病の主要症状である貧血の発生機構、特に赤血球寿命に影響を及ぼす赤血球膜表面の変化を明らかにするために、実験感染牛の感染経過における赤血球への自己抗体(IgG)の付着を調べた。また、人工的に酸化傷害させた赤血球に対するIgGの付着状況について調べた。実験感染牛の末梢血中において.自己IgGが付着した赤血球の割合は、貧血発生前は低かったが、貧血の進行に一致して著明に増加し、貧血ピーク期にIgGの付着は最大値を示した。その後、貧血回復期にかけて、IgG付着は低下する傾向を示したが、貧血の回復が遅れた牛ではIgG付着も高く推移していた。IgG自然抗体付着の増加は、生理的な老化赤血球で明らかにされており、付着IgGに依存した赤血球貧食が起こる。感染牛の赤血球におけるIgG付着の増加は、これらの赤血球がいずれ早期に血中から除去されることを意味しており、本病の貧血発生を説明できるひとつの現象として注目できる。本病非感染牛から作成した人工酸化赤血球および同一牛の無傷赤血球を本病慢性感染牛の血清と反応させたところ、酸化赤血球に対するIgG付着が無傷赤血球への付着よりも高かった。また、酸化赤血球に対するIgG付着を本病非感染の自己血清と慢性感染牛の血清による違いで比較したところ、慢性感染牛の血清と反応させたときのIgG付着が、非感染の自己血清を反応させたときよりも高かった。これらの結果から、本病感染牛の赤血球に対してIgG付着が増加する原因のひとつとして、憾染牛の末梢血中における酸化傷害赤血球の増加が考えられる。また、慢性感染牛の血清中には、酸化赤血球に結合する抗体が増加している可能性がある。小型ピロプラズマ病の主要症状である貧血の発生機構を明らかにするために、活性酸素による細胞傷害(酸化ストレス)の観点から、赤血球の寿命短縮にかかわる細胞化学的な性状を調べた。正常(非感染)牛の赤血球を人工的に酸化傷害させたもの、および同一牛の無傷赤血球を貧血発生時の実験感染牛から採取した血清と反応させたところ、感染牛血清中の自己IgG抗体は無傷赤血球よりも酸化傷害赤血球に多く付着した。この結果から、感染牛の血清中には酸化傷害された赤血球に結合する自己抗体が増加していると考えられる。実験感染牛および正常(非感染)牛から単球と赤血球を分離し、チェンバースライドシステムを用いて単球の赤血球貪食能を調べた。慢性感染牛の単球による自己および非自己(正常)赤血球に対する貪食率は、正常(非感染)牛の単球による自己および非自己赤血球の貪食率よりも高かった。感染牛では原虫感染による何らかの作用で貪食細胞が活性化され、末梢血中における赤血球貪食能が亢進している可能性がある。実験感染牛の感染経過から採取した血液に超生体染色を行い、赤血球破壊亢進の指標となるハインツ小体(酸化変性したヘモグロビンの赤血球膜への沈殿物)の証明を試みたところ、貧血の進行に一致してハインツ小体の生成量は著明に増加した。本研究を総括し、これまで不明であった本病における赤血球寿命短縮の機序に関して、「小型ピロプラズマ病では感染経過で原虫寄生・非寄生赤血球の両者に著明な酸化ストレスが負荷され、貪食細胞がこれらの酸化傷害赤血球を認識・貪食することで血中から排除する」という貧血の発生機構が提唱される。
イギリスの領土紛争としてのフォークランド戦争の研究

申請者は2008年に出版した『サッチャーと英国政治』第3巻ですでに、フォークランド戦争について132頁の論文を掲載した。しかしこのとき非開示であった公文書が2013年に原則公開となった。2013年から2017年までの研究助成事業期間に3回の資料収集を行い、研究に必要な公文書を取得した。既発表論文の骨組は再確認された。そのうえで、骨組みに肉付けする材料のコレクションを作成した。現在、その内容を精査しながら、順次、論文化を行っている。イギリスの研究者との交流も行い研究水準の高度化を図っている。資料の整理を進めて、フォークランド戦争についての新しい単著の出版をしたいと考えている。1、本科学研究費補助事業「イギリスの領土紛争としてのフォークランド戦争の研究」は、初年度である25年度から29年度までの5年間の計画で行う。そこで、初年度である本年度の目標は、第1が一次資料の収集、第2が内閣制度の考察の開始、第3が文献収集であった。2、まず第1の資料収集であるが、25年度は4月よりの日本での資料収集に加えて、イギリスでの資料収集を2回行った。第1回目は、私費によって、25年の8月23日から8月27日まで、イギリスの公文書館(The National Archives)で、資料の収集を行った。第2回目の資料調査については、科研の費用で26年3月11日より23日まで、公文書館に行き、資料収集を行った。その成果であるが、サッチャー首相の行動記録、内閣の閣議の記録、外務省の交渉に関する記録、戦時内閣の記録、さらにフランクス委員会の調査記録、アメリカとの交渉記録、当時の官僚や議員たちの手紙類、アメリカのヘイグ国務長官の交渉の手紙や電報などの記録、国連との交渉に関する国連関係文書と手紙や電報などの記録などが、入手できつつある。資料は、公文書館での一次資料現物の写真撮影で収集しており、その写真の数は6000枚を超える膨大なものになった。3、第2の目標である内閣制度の考察の開始については、初年度は、資料の整理をはじめている。これは簡単ではないが、その内容は、大学紀要に執筆した「フォークランド諸島をめぐる戦争を防止できなかったのはなぜか(フランクス調査委員会報告書)」(印刷中)で一部を発表した。さらに、研究代表者編著の『比較安全保障』(25年9月、成文堂)の編集およびイギリスの章に反映させている。4、第3の目標である文献収集についても、科研の費用とともに大学の研究費や私費を使いながら、網羅的に開始してきている。本科学研究費補助事業「イギリスの領土紛争としてのフォークランド戦争の研究」は、平成25年度から29年度までの5年間での研究である。平成26年度は研究期間の2年目であった。2年目の目標は、第1が、初年度に続く資料の収集であった。第2が、フォークランド戦争における英米関係の解明を進展させることであった。第3が、二次資料としての文献収集であった。第1の目標であった資料収集であるが、本年度は、イギリスの公文書館とケンブリッジ大学のチャーチル・アーカイブでの資料収集が目標であった。初年度の調査で、公文書館が平成25年度から公開している資料が膨大なものであることが判明していたので、2年目の本年度もまずは公文書館での資料収集を続け、次にケンブリッジのチャーチル・アーカイブでの資料収集を行った。そのために、8月11日に日本を出発し、イギリス時間で11日から21日まで収集活動をして日本時間で22日に帰国した。公文書館では、首相官邸文書(PREM)および外務省関係文書(FCO)さらに軍関係文書(ADM,WO)を中心に収集した。チャーチル・アーカイブでの資料収集は、特にサッチャー文庫を中心に資料の探索を開始した。その内容も膨大であるが、フォークランド戦争関係の書簡類の収集をはじめた。収集の方法は、一次資料の各書類を写真撮影するというものであるが、滞在期間が短期間であったので、収集できた資料はまだ極めて不十分である。第2の目標は、英米関係の考察の開始であった。本年の調査で、アメリカのレーガン政府の関与のしかたをしめす概要は掌握することができた。第3の目標が、二次資料の収集であった。特に、単にフォークランド戦争だけでなく戦争と領土と平和の関係に関する哲学的な考察に関する文献収集をめざしたが、この点での目標はおおむね達成した。本研究は、平成25年度から29年度までの5年間での研究である。平成27年度は研究期間の3年目であった。平成27年度の目標は、第1に資料収集の継続であり、第2に文献収集であり、第3にイギリスの研究者との交流であり、第4に論文の執筆であった。第1の目標である資料取集は、イギリス公文書館で収集している資料がまだ不十分であるので、27年8月10日に日本を出発し、イギリス8月10日より18日まで公文書館で資料収集を行い、8月19日に帰国した。しかし、予算上、文献の収集に多くの資金を必要するようになった。そこでロンドンのイギリス公文書館での資料収集は、自己資金で行うこととして、科学研究費は使用しなかった。しかし、その成果はあった。第2の文献収集については、フォークランド戦争についての多くの出版物を集める作業を行った。特に、27年度は、戦争一般の問題と接合する理論問題に関心をあわせて文献の収集を行った。

第3の目標であったイギリスの研究者との交流については、本補助金を使うことはしなかったが、非常に大きなものがあった。エディンバラ大学のガレー・ナブラジ・シン教授との研究会を愛知学院大学で4月11日に行った。ウォリック大学のジョン・マッケルダウニー教授との研究会を愛知学院大学で9月1日に行った。ジョン・マッケルダウニー教授およびエディンバラ大学のクリス・ヒムズワース教授の両教授との研究会を名古屋大学で9月2日に行い、私は討論者として議論した。第4の論文執筆については、フォークランド戦争を考えるために、単にフォークランド戦争についてのみならず、イギリスの現代政治についての論文や、軍と国家との関係を支えるイギリス民主主義についての論文などを執筆するよう努力した。平成27年度の目標は、第1に資料収集、第2に文献収集、第3にイギリスの研究者との交流、第4に論文の執筆であった。第1の資料取集については、イギリス公文書館で、たとえば内閣文書であるCab292/21および外務省文書であるFCO7/4532、FCO7/4533、FCO7/1234他の資料を収集して、フォークランド戦争中の内閣や外務省の行動の一部の資料を得た。第2の文献収集については、戦争と領土問題、および軍と国家との理論的な関係の文献にひろげて収集した。特に、尖閣問題などに直面する日本にとって、領土紛争がどのような場合に武力戦争になるのか、この点を考えることは重要であるが、そのためにはナショナリズムや軍制度の問題も考察する必要があり、これらの文献収集も開始した。第3の目標であったイギリスの研究者との交流については、「概要」でのべたイギリスの3人の研究者と、特にナショナリズムと国家の関係について、議論を継続している。第4の論文執筆については、フォークランド戦争の勃発の理由に焦点をしぼって「フォークランド戦争の前兆(2)」を執筆して、愛知学院大学『法学研究』57巻3・4号に掲載するが、現在まだ印刷中であり、出版は来年度になる。さらに、イギリスがナショナリズムに苦しんでいる現状について「英国2015年総選挙(分裂に直面する時代)」を、陸上自衛隊「修親」刊行事務局『修親』平成27年7月号2-5頁(平成27年6月発行)に掲載した。さらに、ナショナリズムに直面するのは、イギリスだけではなく日本も同じであるが、この点についてReferendums in Britain and Japanを愛知学院大学論叢『法学研究』57巻1・2号、平成28年2月(129-133頁)に掲載した。2016年度(平成28年度)は、5年間の研究期間のうちの4年目にあたった。この年度での目的は、第1に、資料収集と、第2に文献収集と、第3にイギリスの研究者との交流、第4に執筆であった。第1の資料収集については、平成28年(2016年)8月22日から30日にかけて、イギリスのウォリック大学現代史資料館で、資料収集を行った。前年度までに、ロンドンの公文書館での内閣関係の資料については、ある程度の収集を行ったので、今年度は、戦争に関する一般市民の反応を中心に資料収集した。現代史資料館が保存している、船員組合の資料や、市民の反応の資料を入手した。これらの資料は、フォークランド戦争が、持っていた、これまで、問題にされてこなかった重要な点を示している。
近交系DRHラットの発癌抑制機構とアポトーシス促進機構の関連性

DRHラットはクローズド・コロニーのDonryu系ラットから樹立された3'-Me-DABによる肝の近交系発癌耐性ラットである。これまで我々はDRHラットは肝癌に耐性を示すのみならず、4NQO(4-nitroquinorine 1-oxide)による舌癌発生にも若干の抵抗性を示すことを観察してきた。肝臓における発癌耐性機構については、その責任遺伝子まで追求がなされつつあるが肝臓以外の臓器の発癌耐性機構の詳細については報告も少なく未だ不明な点が多い。細胞が癌化し、増殖するためにはアポトーシスの抑制も一つの必要な条件であると考えられる。本研究ではDRHラットの発癌耐性機構へのアポトーシスの関与を調べる目的で、DRH、Donryuラットの舌発癌過程におけるミトコンドリア依存性のアポトーシス誘導経路に関連した代表的な遺伝子bc1-2, baxのmRNAレベルをRT-PCR法を用いて検討した。さらに、ラットのリンパ球を採取し、アポトーシス誘発剤Dexisamethason、Actinomicyn Dを用いてアポトーシス誘導、DNAラダー解析および同様にbc1-2, bax mRNAの発現を検討した。DRHラットは舌の発癌過程の初期に抵抗性を示したが、予想に反してDRHラットの舌発癌過程の各ステージでbc1-2, baxの発現は一様であり、変化は認められなかった。さらに、リンパ球のアポトーシス誘導実験においてもDRHラットにbc1-2発現が抑制されている所見は認められなかったが、Donryuと比較すると発現の様子に差が認められることから、アポトーシスに関わる多くの要因、機構に何らかの差異がある可能性が示唆された。Donryu系ラットにごく少数、肝臓の発癌性物質を投与しても癌の発生を認めない個体が見つかり、このようなラットを兄妹交配を繰り返し近交系発癌耐性ラットDRHが樹立された。本研究はDRHラットの発癌耐性機構を解明するために、発癌剤投与によるDonryu及びDRHラットの標的臓器細胞のアポトーシスのメカニズム、及びテロメラーゼの制御機構の相違を調べることを目的とする。Donryu, DRHラットに4NQOを投与し、発癌に至るまでの舌におけるテロメラーゼ活性の上昇過程を独自に開発した改良TRAP法を用いて観察した。その結果、両ラットの舌には微弱ながらテロメラーゼ活性の存在を認めた。また、4NQO未投与のDRHラットでは、テロメラーゼ活性はDonryuラットの1/3以下の値であった。Donryuラットの舌のテロメラーゼ活性は4NQO投与後二日目から上昇を認め、約3週間後にピークに達した。一方、DRHラットでは4NQO投与後七日目からテロメラーゼ活性の上昇を認め、同じく約3週間後にピークを示し、ほぼDonryuラットと同程度の活性を認めた。DRH、Donryuラットの細胞のアポトーシスの差異を調べるために、血液中のリンパ球を採取。リンパ球にActinomycinD、及びDexamethasoneを投与しアポトーシスを誘発した。ホスファチジルセリンに結合する蛍光プローブとフローサイトメトリーを用いてアポトーシス細胞を検出した。その結果、DRH、Donryuラットにおけるリンパ球細胞のアポトーシス細胞の様相に顕著な差は認められなかった。今後、予想されるDRH、Donryuラットのアポトーシスの差異に関して、さらにリンパ球を用いてP-53,bcl-2等アポトーシス関連蛋白の検出、またラットにin vivoで4NQOを投与した際のアポトーシスの様相や細胞のproliferation potentialについてもDNA合成等を測定することで検討を行う予定である。癌の発生、発育には細胞増殖やテロメアの制御異常に加えてアポトーシス機構の異常が重要な役割を果たしていると考えられる。癌細胞は増殖因子や受容体の異常によりアポトーシスの抑制がおこることで発生してくると予想されるが詳細な分子機構については不明である。

Donryu系ラットから樹立された近交系発癌耐性ラットは化学発癌剤4NQOによって舌癌を誘発した場合にも、ある程度の発癌耐性を示すことがわかった。本研究はDRHラットの発癌耐性機構を解明するためにDonryu及びDRHラットの舌発癌過程における組織細胞レベルでのアポトーシスの比較を行うとともに、誘発剤によるリンパ球のアポトーシスを比較検討することで、アポトーシス抑制と発癌耐性機構の関係を調べることを目的とした。Donryu DRHラットに4NQOを投与し、発癌に至るまで経時的に組織を採取、病理組織学的変化、TUNEL法によるアポトーシス細胞の発現を比較した。過形成、前癌病変の発現はDonryuラットが発癌剤投与後、約4ヶ月以降に認められたのに対し、DRHラットでは約5ヶ月目以降に認められた。DRH、Donryuラットの脾臓より採取したリンパ球を用いてアポトーシスを誘発した場合のアポトーシスに陥る細胞の割合を各種方法によりそれぞれ調べた。アポトーシスの誘発剤としてActinomycinD及びDexamethasoneを用い、37°C、CO_2インキュベーターで24時間培養を行った。両誘発剤ともにDRHはDonryuラットよりもリンパ球DNAの断片化程度は若干低かった。ホスファチジルセリンに結合する蛍光プローブとフローサイトメトリーを用いてアポトーシス細胞を検出した。その結果、DRH、Donryuラットにおけるリンパ球細胞のアポトーシス細胞の様相に顕著な差は認められなかった。さらに他のアポトーシス誘発剤、又は方法を加えて検討を行いDRH、Donryuラットのリンパ球にアポトーシスの差異が認められた場合、各種アポトーシス関連因子の発現を調べる予定である。
膵島脂肪由来幹細胞シートにおける皮下と肝表面移植成果及び免疫応答能の差異の検討

膵島移植の成績向上のため、細胞シート工学を用いた皮下移植が研究されてきた。我々は、糖尿病ラットへの膵島/間葉系幹細胞(MSC)複合シート皮下移植での耐糖能改善、MSCの中でも脂肪由来幹細胞(ADSC)の有用性を報告した。一方膵島単体シートでは、マウスで皮下より肝表面移植の方が血糖正常化に優れていたと報告された。肝表面移植は臨床的には侵襲が大きい。膵島/ADSC複合シートであれば、血管新生誘導/膵島細胞保護効果により皮下移植でも肝表面移植と同等な成績が期待できる。本研究では膵島/ADSC複合シート移植における、皮下と肝表面の移植効果の差異の検討、ADSCによる免疫応答緩和の有無を明らかにする。
GTP結合蛋白質による自食作用系蛋白質分解の制御

本研究では、自食作用の機構解明のため、細菌毒素ストレプトリジンO(SLO)によるセミインタクト肝細胞を作成した。この系は蛋白質などの高分子物質を自由に透過させる性質を持ち、自食作用については後半の成熟段階のみを保持していることが明らかにされた。この成熟段階はATPおよびサイトゾル依存性であり、非加水分解性GTP誘導体であるGTPγSによる阻害を受けることが判明した(J.B.C.,投稿中)。以上の結果に基づき、サイトゾル中に存在が予想されるGTP結合蛋白質(GTP-BP)をはじめとする成熟段階に関わる調節蛋白質の検索を開始した。まず、サイトゾルの硫安分画から始めたが、各画分の効果に再現性がなかった。これは各画分中に微量に混入するアンモニアによる蛋白質分解阻害効果と思われ、本実験には不適切と判明した。次いで、SDS-PAGEによりサイトゾル中には19.5,23.5,25.5,26.5,28kDaと少なくとも5本の^<32>P-GTP結合活性が検出された。生理活性を追跡するためゲル濾過(Toyopearl HW55-F)を行い、各画分の^<32>P-GTP結合活性とSLO細胞での蛋白質分解促進活性を検討したところ、分子量25-30kDaに両活性の一致するフラクションが得られた。現在、さらに陰イオン交換クロマトであるPOROS HQ/M,およびRESO URSE Qなどのカラムを用いて精製を進めている。また、いわゆる低分子量GTP-BPは数多くの同族体があるので、二次元電気泳動による精製のチェックを行っている。以上とは別に、この自食作用成熟段階には膜融合ステップが存在するが、サイトゾルをN-エチルマレイミド(NEM)処理することにより明らかに蛋白質分解促進作用が失われたので、小胞輸送などで報告されているNSF様の調節蛋白質が存在することが示され、現在その精製も進行中である。
微小変化型ネフローゼ症候群における蛋白透過性因子に関する研究

ネフローゼ症候群の患児の抹消単核球にprednisoloneを各種濃度で添加しcon A刺激下に培養後,3H-thymidineの取り込みを測定し,無添加に比しthymidineの取り込みを1/2に抑制するprednisolone濃度(ID50)を求め,ネフローゼ症候群のprednisolone感受性を予見することが可能か否かを検討した。健常人,ス剤抵抗性ネ症,ス剤感受性ネ症いずれもID50は0.1-1ng/mlであり,この方法ではス剤感受性を予想することができなかった。この理由としてネ症患児の単核球より芽球化反応を抑制する因子が産生されることが考えられ,芽球化反応に替え,モルモットの皮内反応でみる血管透過性活性を用いス剤感受性の予見の可能性を検討中である.蛋白透過性因子と各種サイトカインの関係を検討するため,ネ症患児の培養上清中のIL-1beta,IL-8, IL-6, TNF-alphaを測定したが,大多数の症例でいずれも測定感度以下であった.ネフローゼ症候群の患児の抹消単核球にprednisoloneを各種濃度で添加しcon A刺激下に培養後,3H-thymidineの取り込みを測定し,無添加に比しthymidineの取り込みを1/2に抑制するprednisolone濃度(ID50)を求め,ネフローゼ症候群のprednisolone感受性を予見することが可能か否かを検討した。この理由としてネ症患児の単核球より芽球化反応を抑制する因子が産生されることが考えられ,芽球化反応に替え,モルモットの皮内反応でみる血管透過性活性を用いス剤感受性の予見の可能性を検討中である.蛋白透過性因子と各種サイトカインの関係を検討するため,ネ症患児の培養上清中のIL-1beta,IL-8, IL-6, TNF-alphaを測定したが,大多数の症例でいずれも測定感度以下であった.
金属系多層膜におけるスピン流と磁気緩和の光学的検出

強磁性金属に対しパルスレーザー光を照射した際にサブピコ秒領域で発生する減磁現象について、ホイスラー合金を中心に調べた。Mn-Ga合金並びにCo系垂直磁化膜の超高速減磁時間τは励起レーザー強度Pに対し増大する傾向を示し、微視的な理論と傾向が一致した。他方、AgやCr下地上に積層したCo_2MnSiホイスラー合金のτはPに対し減少する傾向を示した。金属系薄膜においてレーザーで励起した電子がスピン系に緩和する際に誘起するスピンのダイナミクス観測を行う.また強磁性共鳴を用いたスピン流の生成と磁気緩和に関する系統的な測定を行う.これらにより金属強磁性体におけるスピン緩和のメカニズムを明らかにすることを目指す.具体的には(1)高品位薄膜およびトンネル接合の作製(2)高スピン分極率,低磁気緩和定数ホイスラー薄膜のスピンダイナミクス(3)ホットエレクトロンの注入とスピン流(4)強磁性共鳴と磁気緩和,を行う.強磁性金属に対しパルスレーザー光を照射した際にサブピコ秒領域で発生する減磁現象について、ホイスラー合金を中心に調べた。1.高品位薄膜およびトンネル接合の作製規則構造であるL2_1構造を有するCo_2MnSi薄膜,およびこれを電極としMgOを絶縁層としたエピタキシャル成長トンネル接合を作製した.スパッタ条件,基板温度,熱処理温度を系統的に検討した結果,低温で753%,室温で217%の磁気抵抗比を得た.また,強磁性共鳴によりスピンコヒーレンス長を測定するために,強磁性体の材料をFeCo合金,FeNi合金,ホイスラー合金で組成を系統的に変化させた薄膜,非磁性体をスピン拡散長の長いCuとした多層膜を超高真空スパッタにより作製した.2.ポンププローブ法によるスピンダイナミクス検出装置の構築ポンププローブ法を用いて,ピコセカンド領域のスピンダイナミクスを検出するための光学系を構築した.基本的なレーザーシステムは申請者がこれまで行ってきた研究で使用したものを用い,本研究用に光路の改良,検出装置の改良を行った.これらの結果,ピコセカンド領域においてレーザー照射後の磁化の減少に伴うカー効果信号の急激な減少,および磁化の回復に伴うスピンの才差運動の検出に成功した.3.強磁性共鳴によるスピン流の生成と磁気緩和強磁性共鳴を用いて強磁性からスピン流を生成し,非磁性体内を伝搬した後にもう一方の強磁性内で緩和する過程を調べた.強磁性の膜厚を0-20nmの範囲で変化させて,強磁性共鳴の共鳴線幅の変化を解析した.強磁性共鳴からのスピン流は磁化の方向に対する横成分が主であることから,強磁性体内の横スピン侵入長を見積もることに成功した.CoFeB, Co, CoFe, FeNiにおけるスピン侵入長は12nm,1.7nm,2.5nm,3.7nmであることがわかった.(1)高品位薄膜の作製ポンププローブ法によるスピンダイナミクス測定用の単結晶Co_2MnSi薄膜を作製した.また,MgO(001)基板上に成膜したCr(40nm)/CMS(30)/MgO/CoFe(5)/IrMn(10)/Ta(5)構造の強磁性トンネル接合の磁気抵抗特性を評価した.トンネル磁気抵抗比は室温で217%, 2Kでは753%もの非常に大きな値が観測された.さらに,強磁性共鳴によりスピンコヒーレンス長を測定するための接合はMgO基板上にMgOシード層を設けた上にCo_2MnSi/Cu/CoFe層を積層した.しかしながら,熱処理によりCo_2MnSi層とCoFe層の共鳴磁場が重なってしまったため,他の材料を検討する必要があることがわかった.(2)ポンププローブ法によるスピンダイナミクス検出装置の構築ポンププローブ法を用いて,ピコセカンド領域のスピンダイナミクスを検出するための光学系を構築した.パーマロイを用いて装置の動作の検証を行った結果,ピコセカンド領域においてレーザー照射後の磁化の減少に伴うカー効果信号の急激な減少,及び磁化の回復に伴うスピンの才差運動の検出に成功した.(3)強磁性共鳴によるスピン流の生成と磁気緩和強磁性共鳴を用いて強磁性からスピン流を生成し,非磁性体内を伝搬した後にもう一方の強磁性内で緩和する過程を調べた.強磁性の膜厚を0-20nmの範囲で変化させて,強磁性共鳴の共鳴線幅の変化を解析し,強磁性体内の横スピン侵入長を見積もることに成功した.また,励起層の材料,励起層の膜厚を変化させてスピン侵入長を測定すると侵入長の見積もり値が変化することから,理論と実験から詳細に検討する必要があることが示唆された.1高品位薄膜およびトンネル接合の作製Co_2MnSi(CMS)/MgO/CoFe接合の下部界面にCoFeを挿入したCMS/CoFe(0.5)/MgO/CoFe接合において,室温で350%,2Kで886%の磁気抵抗比を得た.

また,CMS/CoFe(0.5)/MgO/CoFe(0.5)/CMS接合において,室温で245%,2Kで1275%の磁気抵抗比を得た.さらに,理論的にCMS/MgO界面準位を消失させると期待されるCo_2MnAl(CMA)を挿入したところ,トンネルコンダクタンス特性において,ゼロバイアスアノマリーが減少し,界面準位が減少したことが明らかとなった.2高スピン分極率,低磁気緩和定数ホイスラー薄膜のスピンダイナミクスポンププローブ法でCo_2Fe_xMn_<1-x>Siホイスラー合金薄膜の緩和過程を詳細に調べた.ダンピング定数はx=0.2-0.4付近で0.006程度の低い値を得た.この結果は強磁性共鳴による結果と一致した.一方,psオーダーにおける減磁時間はいずれの試料においても0.2ps程度であり,スピン分極率との関係は不明な点が残されており,更なる実験が必要である.3ホットエレクトロンの注入とスピン流本研究内容を行うためのポンププローブ系の測定系を検討した.4強磁性共鳴と磁気緩和,を行う.強磁性体/非磁性体/強磁性体(F1l/Cu/F2)の積層構造試料において,F1およびF2の材料をNi_<80>Fe_<20>,Co,Co_<75>Fe_<25>,Co_<90>Fe_<10>,Co_<40>Fe_<40>B_<20>と変化させ,種々の組み合わせで横スピン侵入長の測定をおこなった.非磁性体/強磁性体界面の状態,特にミキシングコンダクタンスの値が侵入長に影響を及ぼすことが実験的に示唆された.1高品位薄膜およびトンネル接合の作製ハーフメタルホイスラー合金を電極に用いた強磁性トンネル接合において、室温で高い磁気抵抗効果を得るために、Co_2MnSi/MgO界面にCo_2MnAl、CoFe、CoFeBの極薄膜を挿入し、界面電子状態の制御を試みた。これらのうち、0.5nmのCoFeを界面挿入した場合において、2Kで947%、室温で350%の磁気抵抗比を得た。磁気抵抗比の温度依存性はCoFeを界面挿入しない場合と比較して若干改善された。また、温度依存性改善の要因を調べるためにトンネル伝導特性を評価し、界面における非弾性散乱の減少が要因の一つであることを明らかにした。2高スピン分極率,低磁気緩和定数ホイスラー薄膜のスピンダイナミクス強磁性金属に対しパルスレーザー光を照射した際にサブピコ秒領域で発生する減磁現象について、ホイスラー合金を中心に調べた。Mn-Ga合金並びにCo系垂直磁化膜の超高速減磁時間τは励起レーザー強度Pに対し増大する傾向を示し、微視的な理論と傾向が一致した。他方、AgやCr下地上に積層したCo_2MnSiホイスラー合金のτはPに対し減少する傾向を示した。これらの結果は、Co_2MnSiの高いスピン分極率との相関を示唆する結果であり、今後、ハーフメタル性を考慮した微視的な理論を確立した上で、実験と詳細に比較していく必要がある。3強磁性共鳴と磁気緩和強磁性共鳴を用いて強磁性体F1からスピン流を生成し、Cu膜内を伝搬した後にもう一方の強磁性体F2内で緩和する過程を調べることにより、強磁性体F2の横スピン侵入長を測定した。F1としてMgO単結晶基板を用いたNi_<80>Fe_<20>エピタキシャル合金とした、Ni_<80>Fe_<20>/Cu/Co_<40>Fe_<40>B_<20>多層膜の構成において、Co_<40>Fe_<40>B_<20>の横スピン侵入長が12nm程度と見積もられ、多結晶で同じ構成の積層膜のそれ(3.2nm)と比較して増大した。以上の結果は、非磁性(N)/強磁性(F2)界面状態が侵入長に影響を及ぼしていることを示唆するものであると結論した。
印象採得時のストレスの負荷に対するインフォームドコンセントの効果

近年,歯科治療時のインフォームドコンセントの重要性が指摘されている.しかしその効果については科学的には実証されていない.そこで補綴治療の中で印象採得時のストレスを循環動態および血漿中カテコールアミンの変化から把握し,インフォームドコンセントによる処置内容の説明の有無によりストレス緩和の効果について検討を行った.方法および結果:被験者は大阪歯科大学男子学生20名(平均21.6歳)とした.このうち10名についてアルジネート印象材による印象採得を行うこととその術式,予想される口腔内状況説明した群(以下I.C.あり群)とし,他の10名を何も説明しない群(以下I.C.なし群)とした.ストレス反応の指標として自動血圧計を用い血圧,脈拍数の測定を,レーザー血流計を用い指尖部末梢血流量の測定を,また肘静脈から採血を行い血漿中カテコールアミンの測定を行った.測定時期は安静時,印象用トレー挿入時,挿入後2分(トレー除去時),5分,15分,30分とした.循環動態(血圧,脈拍数,RPP)および血漿中カテコールアミンは印象採得時に上昇する傾向を示し,有意な変化はみられなかったが,I.C.なし群の方がI.C.あり群よりも高い上昇率を示した.印象採得後の各測定値は両群とも低下し,I.C.あり群では安静時の値より低下し,収縮期血圧において15分後に安静時比較および群間比較で,ノルアドレナリンにおいて15分後に安静時比較で有意差がみられた.一方I.C.なし群では各測定値は印象採得後に低下したが安静時の値よりも高値を示した.以上よりI.C.あり群において印象採得中の各測定値の上昇率が低く抑えられたこと,および印象後のストレスの回復がI.C.あり群の方がI.C.なし群より低下したことからインフォームドコンセントのストレス緩和の効果が示唆された.近年,歯科治療時のインフォームドコンセントの重要性が指摘されている.しかしその効果については科学的には実証されていない.そこで補綴治療の中で印象採得時のストレスを循環動態および血漿中カテコールアミンの変化から把握し,インフォームドコンセントによる処置内容の説明の有無によりストレス緩和の効果について検討を行った.方法および結果:被験者は大阪歯科大学男子学生20名(平均21.6歳)とした.このうち10名についてアルジネート印象材による印象採得を行うこととその術式,予想される口腔内状況説明した群(以下I.C.あり群)とし,他の10名を何も説明しない群(以下I.C.なし群)とした.ストレス反応の指標として自動血圧計を用い血圧,脈拍数の測定を,レーザー血流計を用い指尖部末梢血流量の測定を,また肘静脈から採血を行い血漿中カテコールアミンの測定を行った.測定時期は安静時,印象用トレー挿入時,挿入後2分(トレー除去時),5分,15分,30分とした.循環動態(血圧,脈拍数,RPP)および血漿中カテコールアミンは印象採得時に上昇する傾向を示し,有意な変化はみられなかったが,I.C.なし群の方がI.C.あり群よりも高い上昇率を示した.印象採得後の各測定値は両群とも低下し,I.C.あり群では安静時の値より低下し,収縮期血圧において15分後に安静時比較および群間比較で,ノルアドレナリンにおいて15分後に安静時比較で有意差がみられた.一方I.C.なし群では各測定値は印象採得後に低下したが安静時の値よりも高値を示した.以上よりI.C.あり群において印象採得中の各測定値の上昇率が低く抑えられたこと,および印象後のストレスの回復がI.C.あり群の方がI.C.なし群より低下したことからインフォームドコンセントのストレス緩和の効果が示唆された.
原始惑星系円盤上空衝撃波によるダスト加熱とコンドリュール形成

本研究は,中心星近傍で発生したX線フレアを起源とする星風が原始惑星系円盤に衝突し,衝撃波が発生するという現象をとりあげ,(1)そのような現象が発生するかどうか,(2)発生するとしたら円盤内の物質にどのような影響を及ぼすか,(3)それらの現象を天文学的あるいは隕石学的な手法により確認することができるか,などを明らかにすることを目的とした。そのために,電磁流体力学数値シミュレーションや流体力学,輻射輸送計算,解析的検討など種々の手法を用いて研究を推進した。電磁流体力学数値シミュレーションの結果,円盤上層部に衝撃波が発生することが確かめられた。また,これらの衝撃波はコンドリュール形成やダストの加熱結晶化にとって適当な衝撃波となることも明らかにした。つまり,(a)3AU程度以内ならば,円盤の上空に強い衝撃波が発生してダスト粒子を十分加熱することが可能なこと,(b)X線フレアによって発生した星風は磁場によるコリメーションを受けるため,5AU程度よりも外には影響を及ぼしにくいこと,などがわかった。一方,発生する衝撃波の性質をより的確に理解することが出来るようになり,衝撃波の発生場所,すなわち,ダストが加熱を受ける場所をより具体的に議論することが出来るようになった.このことにより,加熱を受けて結晶化したダストが彗星に取り込まれる可能性について,検討することが可能となった。それによれば,X線フレアに伴って発生する円盤上空衝撃波で加熱・結晶化できるダスト粒子は中心星から5AU程度までのものであるから,彗星中の結晶化ダストがそのようなものであるとすると,なんらかの機構によって5AU以内にあったダスト粒子を彗星形成領(30AU程度)まで運ぶ必要があることになる。ダスト粒子の輸送機構にはいくつかの可能性があるが,今後はそれらの輸送機構の適否を詳しく検討することが必要になるだろう。本研究の目的は,星形成期における原始惑星系円盤に対するX線フレア起源の中心星からの星風の影響を明らかにすることであった.特に,結晶質シリケイトやコンドリュールなど加熱を受けたと思われるダスト粒子の起源との関係を調べることが主目的であった.この目的を達成するために,今年度は次のようなことを行った.(1)X線フレアの発生も含めた星風の伝播の数値計算を行った.具体的には,中心星と原始惑星系円盤,およびそれらを取り巻くコロナを考え,適当な磁場を想定してMHD数値計算を行った.いくつかのパラメータに対して計算を実行したが,一般にこれらの計算は,磁気圧が比較的高く,かつ中心星(0.01AU)から数AUまでの広い領域を含むため計算が容易ではなく,時間がかかる.よって,実行できた計算例は2例ほどにとどまった.今年度得られた計算結果については,現在,解析中である.(2)X線フレアによって原始惑星系円盤表面に衝撃波が形成されることが予想されるが,その衝撃波によってダスト粒子がどの程度加熱されるかを調べた.これにより,シリケイトダスト粒子の結晶化が起こる可能性について,その位置がある程度推定できた.ただし,詳細な検討は(1)の数値計算が全て完了してから行う必要がある.第2年度は引き続き本研究の目的を達成するため,次のような研究を進める予定である.(a)X線フレアとその伝播のMHD計算をいろいろなパラメータに対して行い,X線フレア現象と原始惑星系円盤に発生する衝撃波との間の関係を調べ明らかにする.(b)円盤表面に発生した衝撃波が円盤内部に伝播する様子をより詳細に調べるためのモデルを開発する.(c)X線フレアと衝撃波を伴う原始惑星系円盤の観測的可能性を検討するため,輻射輸送計算を行う.衝撃波加熱によるコンドリュールモデルの研究を進めた。

本年度は主に,2つの効果に着目した。一つは,ガス流の動圧が衝撃波後面のダスト粒子に与える影響についてであり,もう一つは,輻射輸送がダスト粒子加熱に与える影響についてである。衝撃波加熱現象においては,ダスト粒子とガス流の間に相対速度が存在する。これによってダスト粒子は摩擦加熱を受けるわけであるが,一方でこれは,ダスト粒子に対して動圧を与える。このガス流動圧により,ダスト粒子が変形することが考えられる。その変形の程度や形状について,解析的および数値的に検討を行った。その結果,衝撃波加熱現象で期待される動圧の効果によって,ダスト粒子は溶融した後プロレート形状(ラグビーボール型)やオブレート形状(どら焼き型)に変形し,さらにその変形を保ったまま再固化する可能性が高いことがわかった。これは,観測されるコンドリュールの形状の特徴と一致している。さらにその変形の程度は,やはり観測される値とよい一致を示すことがわかった。一方,衝撃波加熱現象において,熱エネルギーが輻射によってどのように輸送されるかという問題を,従来よりも正確に考慮して衝撃波加熱現象を数値シミュレーションした。これにより,現実のコンドリュールを作り得る衝撃波の条件を,定量的により精度良く明らかにすることが出来た。これは従来よりもはるかに精度良く数値モデルと観測結果の比較が可能になったことを意味し,コンドリュール形成の研究を,質的に一段高めることになったと思われる。本研究ではこれまで,電磁流体力学数値シミュレーションを行って中心星近傍で発生したX線フレアを起源とする星風が原始惑星系円盤に衝突し,衝撃波が発生することを確かめた.また,状況によってはこれらの衝撃波はコンドリュール形成やダストの加熱結晶化にとって適当な衝撃波となることも明らかにした。ただし,X線フレアの性質と発生する衝撃波の間の関係については,不明の点がまだ多かった。19年度はこれらの点の物理的な理解を深めることを目標とし,数値シミュレーションを行った。その結果,(1)3AU程度以内ならば,円盤の上空に強い衝撃波が発生してダスト粒子を十分加熱することが可能なこと,(2)X線フレアによって発生した星風は磁場によるコリメーションを受けるため,5AU程度よりも外には影響を及ぼしにくいこと,などがわかった。一方,発生する衝撃波の性質をより的確に理解することが出来るようになり,衝撃波の発生場所,すなわち,ダストが加熱を受ける場所をより具体的に議論することが出来るようになった.このことにより,加熱を受けて結晶化したダストが彗星に取り込まれる可能性について,検討することが可能となった。それによれば,X線フレアに伴って発生する円盤上空衝撃波で加熱・結晶化できるダスト粒子は中心星から5AU程度までのものであるから,彗星中の結晶化ダストがそのようなものであるとすると,なんらかの機構によって5AU以内にあったダスト粒子を彗星形成領域(30AU程度)まで運ぶ必要があることになる。ダスト粒子の輸送機構にはいくつかの可能性があるが,今後はそれらの輸送機構の適否を詳しく検討することが必要になるだろう。
Bas-Congo virusのウイルス学的および人獣共通感染症の可能性検索

Bas-Congo virus (BASV)は出血熱患者から同定された新興ラブドウイルスである。3人の患者が報告され、2人が死亡した。ウイルスが分離されていないため、BASVのG蛋白質を外套したシュードタイプウイルスを作製し、実験に用いた。H29年度まではBASVの宿主域が広いこと、Gタンパク質による膜融合能が低pH処理により誘導されること、細胞侵入がpH依存的であることが分かった。さらに、未同定の受容体に結合後にclathrinを介して細胞内に侵入することが示唆された。H30年度はBASV感染におけるclathrinなどを含む細胞内侵入経路を調べた。その結果、Huh7細胞においてはchlorpromazineやdynasore等のclathrin介在性経路阻害剤及びgenisteineやnystatin等のcaveolin介在性経路阻害剤の処理にBASVの感染が影響を受けないことが分かった。一方、tunicamycinでHuh7細胞に処理すると、BASVpvの感染が40%程度抑制されることから、BASVpvの感染には細胞の糖鎖が関与することがが示唆された。また、HeLa細胞をclathrin介在性経路阻害剤であるdynasoreで処理すると、BASVの感染が抑制された。この結果から、細胞によりBASVの細胞内侵入経路が異なることが示唆された。すなわちclathrin介在性感染を主体とする細胞と別経路を感染経路の主体をする細胞があると考えられた。さらに、BASVの受容体を同定するためviral overlay protein binding assay (VOPBA)を用いた。すなわち、BASVpvに最も感受性の高いHuh7の細胞膜を精製しBASVpvを反応させ、結合するタンパク質をimmunoblotにより確認した。現在、更に検討中である。平成30年度はBASV細胞内輸送経路及び受容体の解明に関する研究を行った。まず、細胞内輸送経路については感受性の高い細胞を用いて検討したが、細胞によって異なる結果が得られたため、更なる検討が必要となった。受容体の解明については感受性の高い細胞の細胞膜を精製し、BASVpvを反応させ、結合するバンドをimmunoblotにより検出するVOPBA法を用いて、弱陽性のバンドが確認されたため、更なる検討が必要となった。HeLa細胞もHuh7同様、BASVpvに高い感受性を示すため、HeLa細胞を用いて、更なる細胞内輸送経路を検索する。受容体検索においてはVOPBA法で確認された陽性バンドをゲルから切り取り、質量分析による同定等更なる解析を行う。Bas-Congo virus (BASV)は出血熱流行時に患者から同定された新興ウイルスで、ラブドウイルス科に属する。今年度はBASVのウイルス学的性状解析を実施した。BASVは分離されていないため、BASVのG蛋白質を外套したシュードタイプ水胞性口炎ウイルス(BASVpv)を作製し実験に用いた。まず、BASVpvはヒト、サル、イヌ、ネコ、ハムスター、コウモリ、マウス等様々な哺乳類由来細胞に感染し、宿主域が広いことが示唆され、ubiquitousな受容体を介して感染すると考えられた。また、BASVのG蛋白質抗体によりBASVpvの感染が中和されるこからとG蛋白質を介して感染することがわかった。G蛋白質を一過性に発現させた細胞を低pH処理すると細胞融合が誘導された。さらに、bafilomycin等lysosomotropic agentsの処理によりBASVの感染が抑制されたことから、pH依存的に細胞に侵入すると考えられた。上記の結果を踏まえて、次はBASVの細胞内輸送経路を検索した。まず、cholesterol transportprotein (Niemann-Pick C1; NPC1)のinhibitor及びknock out細胞を用いて、BASVの細胞内侵入におけるNPC1の役割を調べたが、いずれも影響されなかったことからBASVはNPC1を介してendosomeから細胞内に輸送されるエボラウイルスとは異なる経路により輸送されると考えられた。一方、dynasore (dynamin inhibitor)をHeLa細胞に処理すると、BASVpvの感染が濃度依存的に抑制される傾向が見られた。更なる解析が必要であるが、BASVはclathrin等の受容体を介して細胞内に侵入する可能性が示唆された。平成29年度は1)BASVの感染宿主域の検索、2)BASV細胞内輸送経路の解明に関する研究を行った。まず、1)に関しては様々な哺乳類由来細胞がBASVpvに対して高い感受性を示し、宿主域が広いことがわかった。このことからubiquitousな受容体を介して感染すると考えられる。当初は感受性の高い細胞や低い細胞があることを予期し、平成30年度に3)感受性細胞由来のcDNA library-レトロウイルスを用いた受容体検索を予定したが、平成29年度の結果で多様な細胞が高い感受性を示したため、計画を修正する必要がある。2)BASV細胞内輸送経路の検索においては高い感受性を示したHuh7細胞とHeLa細胞を用いて行ったが、結果に一部相違があり、更なる検討が必要である。