hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト・マウスでの右側鋸歯状大腸発癌の生物学的メカニズムの解明

昨年度末(前回報告後)、ヒト鋸歯状大腸癌の結果は論文化できた。以下の内容である。大腸における鋸歯状病変は組織学的に現在、過形成ポリープ、鋸歯状腺腫/ポリープ、鋸歯状腺腫に大別されている。しかし、これらの病変の発生過程における組織形態と分子生物学的背景は未だ明らかではない。【方法】今回、我々は、過形成ポリープ22例、鋸歯状腺腫/ポリープ41例、鋸歯状腺腫19例において、増殖マーカーKI67,老化マーカーP16,さらに、間質から分泌され陰窩の形態形成に関与するといわれるWNT5Aの抗体による免疫組織化学染色を行った。また、上皮内リンパ球の発現についても各病変においても検討した。【結果】過形成ポリープと鋸歯状腺腫/ポリープにおけるKI67やP16陽性上皮細胞の分布は、鋸歯状腺腫と大きく異なっていた。KI6とP16共陽性上皮細胞は過形成ポリープと鋸歯状腺腫/ポリープでは少なかったが、興味深いことに、鋸歯状腺腫/ポリープでは、P16陽性上皮細胞や間質のWNT5A陽性細胞は、ちょうど腺管のcleft(くびれ)の部分に目立つ特徴がみられた。また、上皮内リンパ球の発現は、過形成ポリープよりも鋸歯状腺腫/ポリープで豊富であった。【結論】組織形態学的に増殖と老化、間質因子からみると、鋸歯状腺腫/ポリープの特徴である底部のT字、L字型の陰窩の拡張は、増殖細胞と老化(増殖停止)細胞のpatchyな分布や間質からの不規則な入力によって起きていることが示唆された。本研究結果は、鋸歯状病変の形態形成メカニズムの解明、さらには治療標的への応用が期待される。第一に目的としていたヒト鋸歯状大腸病変の形態形成メカニズムの一つの解明し、論文化できた。ここから、さらに治療標的への応用を目的としたマウスモデルの検証を進める。当教室の有する遺伝子改変マウスを交配することによって作製するマウスで下記のマウスを作製し、腫瘍形成を検証中である。1)発現ロス:p16, p53, Pten, Smad4遺伝子ノックアウト(コンディショナルも)、2)組織特異性:Lgr5CreERT2, Bmi1-CreER, Villin-CreERなど腸管の分化細胞あるいは幹細胞など1)と交配することで、選択的に遺伝子をノックアウトできる。Braf V600E/Lgr5CreERT/p16 floxマウス(Braf変異とp16ノックアウトを大腸の幹細胞で引き起こす)をはじめ、数種類は既に交配終了し、腫瘍形成の検索中。今年度はまず岐阜大学病院の内視鏡あるいは、外科手術の標本を用いて、免疫組織化学染色を行った。その結果、Ki67染色にて、過形成ポリープ(32例)とSSA/P(31例)とは1腺管あたりの増殖能については差がなかった。そこで、老化に注目した。老化因子であるp16腫瘍抑制遺伝子の免疫染色を行うと、p16陽性細胞は分岐部や底部に多かった。また、p16陽性細胞とKi67陽性細胞は、局在はほぼ一致しなかった。つまり、「増殖能が高まり、過形成ポリープとなった→何らかの原因でp16陽性細胞により増殖停止細胞(老化細胞)が散発性に出現→それにより、増殖と停止(老化)の細胞がまだらとなり、特殊な形態が形成されているようだ」ということが示唆された。さらに、HE染色にて過形成ポリープ(32例)とSSA/P(31例)との間に、陰窩上皮細胞内リンパ球浸潤が有意に増加していることを見出した。腸管上皮細胞間にはリンパ球(intraepithelial lymphocytes, IEL)が存在することが知られ、腸管内の異物に対する免疫防御に関与すると考えられている。IELの大多数(>90%)は成熟T細胞で、TCRγδ+細胞の割合が高く、末梢T細胞とは大きく違う性質を持つ。つまり、IELは末梢T細胞と異なるユニークなT細胞サブセットから構成されており、腸管に固有の生理的役割を担うと考えられている。今回、申請者はこのIELの局在と数を詳細に調べ、過形成ポリープとSSA/Pにおける形態の違いにも寄与している可能性を認めた。初年度の免疫染色の結果を得られた。次年度の計画に移ることができる。以下の内容である。KI6とP16共陽性

上皮細胞は過形成ポリープと鋸歯状腺腫/ポリープでは少なかったが、興味深いことに、鋸歯状腺腫/ポリープでは、P16陽性上皮細胞や間質のWNT5A陽性細胞は、ちょうど腺管のcleft(くびれ)の部分に目立つ特徴がみられた。また、上皮内リンパ球の発現は、過形成ポリープよりも鋸歯状腺腫/ポリープで豊富であった。【結論】組織形態学的に増殖と老化、間質因子からみると、鋸歯状腺腫/ポリープの特徴である底部のT字、L字型の陰窩の拡張は、増殖細胞と老化(増殖停止)細胞のpatchyな分布や間質からの不規則な入力によって起きていることが示唆された。本研究結果は、鋸歯状病変の形態形成メカニズムの解明、さらには治療標的への応用が期待される。第一に目的としていたヒト鋸歯状大腸病変の形態形成メカニズムの一つの解明し、論文化できた。ここから、さらに治療標的への応用を目的としたマウスモデルの検証を進める。今回、また、過形成ポリープやSSA/P病変にも、大腸上皮内へのリンパ球侵入がみられた。これは、現在悪性黒色腫や肺癌に対して、非常に強力な抗腫瘍効果を示し、大腸癌への臨床投与も期待される抗PD-1抗体(リンパ球活性化剤;オブジーボ)との関連が推測される。我々は、いち早くこの関連を世界に先駆けて示すため、上記のヒト標本で上皮内リンパ球の局在・数そして、PD-1抗体による免疫染色を行っている(29年度後期から30年度前半に結果を得る予定)。当教室の有する遺伝子改変マウスを交配することによって作製するマウスで下記のマウスを作製し、腫瘍形成を検証中である。1)発現ロス:p16, p53, Pten, Smad4遺伝子ノックアウト(コンディショナルも)、2)組織特異性:Lgr5CreERT2, Bmi1-CreER, Villin-CreERなど腸管の分化細胞あるいは幹細胞など1)と交配することで、選択的に遺伝子をノックアウトできる。Braf V600E/Lgr5CreERT/p16 floxマウス(Braf変異とp16ノックアウトを大腸の幹細胞で引き起こす)をはじめ、数種類は既に交配終了し、腫瘍形成の検索中。
連続短周期パルス法(TAP)による新規酸素吸蔵ー放出材料の開発

自動車の排気ガス中に含まれるCOやHC、NO_xによって引き起こされる大気汚染、酸性雨は重大な問題である。自動車用触媒はこのCOとHCを酸化することによりCO_2とH_2Oに、NO_xを還元してN_2とO_2に転化させる。しかしエンジン始動時は低温であるため排ガスを浄化させることができない。したがって、より低温で酸素を放出・吸蔵する能力の高い触媒の開発が求められている。現在は主に、自動車用触媒として貴金属担持セリア系酸化物が用いられているが、熱安定性が低くコストが高いという欠点がある。これまで、高い酸化還元能と熱安定性を有するペロブスカイト型酸化物(ABO3)について着目し、LaCoO_3,LaFeO_3が高活性であること、LaにSrを添加したものがCO酸化活性能の向上と低温での反応が進行することを見出した。そこで本年度では、ペロブスカイト化合物のBサイト添加効果について検討し、またコストが高いCoに代替する他元素を探究し、熱安定性に優れた高活性な高容量酸素ストレージ材料の開発を目的とする。さらには酸素の吸収・放出量、それらの速度について過渡パルス法(TAP法)により検討を行った。また、400°CでもCeO_2(500°C)と同等の活性を示した(Fig.2)。Bサイトに価数の異なるMnを導入したことにより、欠陥が生じ酸素が脱離しやすくなったためであると推察している。LaFe_<0.5>Mn_<0.5>O_3は高非面積を有し,反応前後で結晶相の変化はなく安定であることがわかった。(1)PrドープCeO_2の酸素吸蔵能の評価とその添加効果の解明CeO_2およびプラセオジウム添加セリア(Ce_0.9-Pr-0.1O_2),とそれらにPt-Rhを担持したPt-Rh/CeO_2,Pt-Rh/Ce-PrはCe,Pr硝酸塩のアンモニアによる沈殿(共沈法)により調製した。TAPシステムはバルブタイミング可変可能な4基の電磁パルスバルブを持ち、検出系に四重極質量分析器を用いた自作の装置を用いて内径4mmの石英製のリアクターに32-60メッシュ(250-500μm)に整粒した触媒を50100mg充填した。この試料に酸素及びCO(CO,H_2,CO_2)短周期パルスを導入し、流出する反応生成物を質量分析器で追跡した。パルス量はCO0.612×10^-5mol/pulse,O_2 0.510x10^-5mol/pulseとする。測定温度は室温500°Cで酸素吸蔵能、吸蔵速度についてパルス量、パルスプログラムを変化させて評価を行った。各O、COパルスガス導入時の減衰プロファイルを解析し、吸蔵速度の評価を行い、共沈法で調製したセリアにPrを複合化したセリウムープラセオジム複合酸化物が優れたOSC能を有することを見いだし、かつ、CeO_2格子中にPrをドープすることにより極短時間内(ミリ秒)で酸素吸蔵・放出速度が増大することを見いだした。(2)短周期連続交互パルス導入による材料の酸素吸蔵-放出速度の評価Ce-Pr系複合酸化物にO_2-CO短周期連続交互パルスを導入し、リーチリーンの短いサイクル時での酸素吸蔵-放出過程について検討し、繰り返しパルスの際も効率よく酸素の吸蔵-放出を行えることを見出した。(1)固相反応法で合成したペロブスカイト型化合物の酸素吸蔵能の評価SrFeO_3, LaCoO_3、LaMnO_3系ペロブスカイトを各種硝酸塩あるいは酢酸塩から固相反応法により合成し、その酸素吸蔵挙動を評価すると共に、異原子価カチオンをドープした材料の酸素吸蔵能についてCO-O_2逐次パルスを導入し検討を行った。この試料に酸素及びCO(CO, H2, CO_2)短周期パルスを導入し、流出する反応生成物を質量分析器で追跡した。パルス量はCO 0.612×10^<-5>mol/pulse, O_2 0.510×10^<-5>mol/pulseとする。各O_2, COパルスガス導入時の減衰プロファイルを解析し、吸蔵速度の評価を行ったLa_<0.6>S_<0.4>CoO_3がセリア系複合酸化物より優れたOSC能を有することを見いだし、かつ、Aサイトカチオンへの異原始ドープにより極短時間内(ミリ秒)で酸素吸蔵・放出速度が増大することを見いだした。(2)短周期連続交互パルス導入による材料の酸素吸蔵-放出速度の評価ペロブスカイト系酸化物に02-CO短周期連続交互パルスを導入し、リーチリーンの短いサイクル時での酸素吸蔵-放出過程について検討し、繰り返しパルスの際も効率よく酸素の吸蔵-放出を行えることを見出した。

自動車用触媒はこのCOとHCを酸化することによりCO_2とH_2Oに、NO_xを還元してN_2とO_2に転化させる。しかしエンジン始動時は低温であるため排ガスを浄化させることができない。したがって、より低温で酸素を放出・吸蔵する能力の高い触媒の開発が求められている。現在は主に、自動車用触媒として貴金属担持セリア系酸化物が用いられているが、熱安定性が低くコストが高いという欠点がある。これまで、高い酸化還元能と熱安定性を有するペロブスカイト型酸化物(ABO3)について着目し、LaCoO_3,LaFeO_3が高活性であること、LaにSrを添加したものがCO酸化活性能の向上と低温での反応が進行することを見出した。そこで本年度では、ペロブスカイト化合物のBサイト添加効果について検討し、またコストが高いCoに代替する他元素を探究し、熱安定性に優れた高活性な高容量酸素ストレージ材料の開発を目的とする。さらには酸素の吸収・放出量、それらの速度について過渡パルス法(TAP法)により検討を行った。また、400°CでもCeO_2(500°C)と同等の活性を示した(Fig.2)。Bサイトに価数の異なるMnを導入したことにより、欠陥が生じ酸素が脱離しやすくなったためであると推察している。LaFe_<0.5>Mn_<0.5>O_3は高非面積を有し,反応前後で結晶相の変化はなく安定であることがわかった。
職業経歴からみる階層構造と階層生成メカニズムの再検討

本研究の目的は戦後日本の労働市場における階層構造がいかに変化してきたのか、またそれがいかに生成されるのかを、職業経歴から明らかにすることにある。第1に産業構造の転換に着目して階層構造の長期的な趨勢を明らかにする。第2に、現代日本に焦点を当てて、階層移動の生成メカニズムを明らかにする。以上の問いを、個人の職業経歴に関する情報を聴取した調査データの分析を通して解明する。
造血幹細胞移植時の免疫抑制下における3DSを用いた全身的感染予防プログラムの開発

造血幹細胞移植を受ける小児を対象として3DSを応用した口腔除菌プログラムを開発し適用したところ,口腔内の細菌数を減少させ,それを維持することができた。また口腔粘膜の状態にも改善が見られたことから, 3DSが患児の全身的感染予防とQOLの向上に寄与できる可能性が示された。本研究は,口腔からの全身的感染を防止し患児のQOLを向上させるために,各患児専用に作製されるドラッグリテーナーと抗菌薬を用いた3DSを応用し,易感染状態にある患児を対象とした全身的感染予防プログラムを開発することを目的としている。本年度は,成人を対象として3DS施行前後の口腔内細菌数および細菌叢の変化について検討した。対象:健常な成人5名(研究の目的および方法について説明を行い、同意を得た。)方法:3DSを以下のような一連の流れで行った。1.術前口腔内診査2. 3DS歯科治療:必要に応じ,う蝕や歯周疾患の治療を行い,口腔内感染源を根絶した。3. PMTC:歯科衛生士が30分以上かけて歯面を機械的に清掃し,バイオフィルムを除去した。4. 3DSの施行:個人用にドラッグリテーナーを作成し,薬剤を入れて使用した。診査項目:3DS施行の術前、術中、終了時、術後1カ月および術後3カ月時の計5回にわたり,口腔内細菌数および細菌叢の変化について検討した。これらを3DSの効果の指標として,除菌を行う適切な時期や期間を明らかにした。研究成果:m-MSB培地,BHI培地,カンジダ培地を用いて口腔内細菌数の変化を検討した。その結果,3DS施行期間を2週間,使用薬剤を1%クロルヘキシジンとした場合に,全ての培地において術中に細菌数が減少した。m-MSB培地,BHI培地の好気培養および嫌気培養では,終了後に細菌数が検出限界以下まで減少し,その効果は術後3カ月経過しても維持された。以上より,3DS施行期間を2週間,使用薬剤を1%クロルヘキシジンと決定し,次年度以降臨床における検討を行うこととした。本年度は,入院患児を対象として3DS施行前後の口腔粘膜状態および口腔内細菌数の変化について検討した。対象:広島大学病院小児科にて造血幹細胞移植および化学療法を受けた患児35名(男児22名,女児13名,平均年齢9歳11か月)。研究の目的および方法について説明を行い,同意を得た。方法:全患児に対して,以下のような一連の流れで口腔ケアプログラムを行った。1.術前口腔内診査(粘膜評価,口腔内細菌数評価)2。歯科治療:必要に応じ,う蝕や歯周疾患の治療を行い,口腔内感染源を根絶した。3.PMTC:歯科衛生士が歯面を機械的に清掃し,バイオフィルムを可及的に除去した。4.3DSの施行:個人用ドラッグリテーナーを作成し,薬剤を5分間口腔内に保持する3DSをPMTC後の7日間,就寝前に行った。全患児に対し,PMTCと3DSによる口腔ケアプログラムを試みた。そのうちPMTCと3DSの両方を行うことができた群を3DS群(14名),低年齢や強い嘔吐感のためドラッグリテーナーの口腔内保持が困難であった患児にはPMTCのみを行い,これをPMTC群(21名)とした。研究成果1.口腔粘膜障害への効果:頬粘膜および歯肉粘膜において,PMTC前とPMTC後30日目との比較を行ったところ,3DS群では有意に粘膜障害が軽減した。一方PMTC群では,粘膜障害の改善は認められなかった。2.口腔内細菌数の変化:3DS群ではミュータンスレンサ球菌,嫌気性菌および好気性菌において,PMTC前と比べ術後14日でCFUが減少した。またカンジダではPMTC前と比べ術後7日でCFUが有意に減少し,30日後まで長期に渡り低値を維持した。一方PMTC群では,いずれの菌群においてもPMTC前後でCFUにほとんど変化は認められなかった。本研究は,造血幹細胞移植を受ける患児の口腔からの全身的感染を防止し,放射線療法および化学療法を受ける患児のQOLを向上させるために,各患児専用に作製されるドラッグリテーナーと抗菌薬を用いた3DSを応用し,全身的感染予防プログラムを開発することを目的としている。前年度までに,口腔内除菌を行うことで化学療法を受けた患児の口腔粘膜炎が軽減することが明らかとなった。そこで本年度は,口腔細菌表面に存在する菌体外毒素が化学療法中の口腔粘膜炎の増悪因子であるとの仮説を立て,in vitroにて検証した。

対象と方法:実験にはヒト歯肉由来正常線維芽細胞Gin-1を用い,粘膜障害性の強い化学療法剤であるL-PAMと,細菌由来高分子としてリポ多糖(LPS),およびリポタイコ酸(LTA)を同時に作用させた際の細胞障害性を検討した。結果:Gin-1に対する細胞障害性はL-PAM単独と比較して,LPSまたはLTA存在下の方が有意に高かった。また,細胞障害性はLPSまたはLTAの濃度依存性に増強した。これにより,化学療法剤L-PAMと細菌由来高分子LPSおよびLTAは,相乗作用で細胞障害性を高めることが明らかとなった。以上より,LPSおよびLTAが粘膜障害の増悪因子となっている可能性が示唆された。
地域の光環境条件がもたらすヒトの環境適応能への影響に関する研究

ヒトの生体機能が季節により変動することはよく知られているが、原因がはっきりしている例は少ない。また、生体リズムの季節変動についても報告が少ない。季節により生体リズムが変化する機序としては、日長の変化によるリズム同調の変化が考えられる。このことから本研究では、緯度が異なる3地域(高・中・低緯度)及び季節(春・夏・秋・冬)において人々が日常生活の中で受ける光の量及び質の違いを把握し、ヒトはその環境にどのように適応しているのかという環境適応能の観点から分析を行った。その結果、自然の光環境が気候や季節及び緯度により大きく異なることが明らかになった一方、被験者の受光量や活動量は季節や緯度との関係性は低く、むしろ個人の生活スタイルや過ごす場所に依存している可能性も示唆された。しかし生体リズムの指標となるメラトニンリズムには、季節変動及び地域差における特徴が明確に表れた。特に中緯度:日本の秋において、高いメラトニン分泌量及び位相後退の特異的季節変動が認められたが、これが外部の光刺激変化によるのか、また冬に備える内分泌機能の働きによるものなのなど、その原因を明確にすることはできなかった。本研究における調査は、フィールド調査であり、生体リズムに影響する様々な因子の厳密な制御は行っていない。しかし、日常生活における実際の光環境下で確認した本成果は、今後の光環境計画を考える上での基礎的知見を提供するものと考えている。近年、種々の環境要因の中で特に光がヒトの生理・心理・行動に大きく影響することが明らかにされつつある。健康で快適な現代生活環境を計画する基礎として、本研究では季節、時間によって異なる自然光の地域環境条件に注目し、その中で住みこなしてきたヒトの環境に対する、あるいは環境の変化に対する適応(環境適応能)を明らかにするとともに、地域の光環境がもたらす生理的多型性を考察することが第一の目的である。さらに得られた知見を基に、今日の人工照明環境計画について、ヒトのテクノ・アダプタビリテイーの視点から提案することが第二の目的である。具体的には、高・中・低緯度地域および季節において人々が一般生活の中で受ける光の量と質が、メラトニンリズムおよび睡眠-覚醒リズムにおよぼす影響を把握する。本年度は、本研究の予備調査期間と位置付け、測定設備・機器の確立を行うとともに、中緯度地域の福岡において、秋分・冬至・春分における自然光環境特性の把握と、ヒトが生活の中で実際に受ける光の特性およびメラトニンホルモンの関係について調査を行った。即ち、被験者10名に対し、各季節それぞれ7日間、自然光および日常生活の中で受ける光の照度と波長分布および色温度を測定した。また併せて、その間のメラトニンリズムおよび睡眠-覚醒リズムを測定・分析した。高緯度地域としてポーランドを設定し、被験者数名を用いた予備調査と、各季節の自然光実態の把握を行った。健康で快適な現代生活環境を計画する基礎として、本研究では、季節、時間によって異なる自然光の地域環境条件に注目し、その中で住みこなしてきたヒトの環境に対する、あるいは環境の変化に対する適応(環境適応能)を明らかにするとともに、地域の光環境がもたらす生理的多型性を考察することが第一の目的である。さらに得られた知見を基に、今日の人工照明環境計画について、ヒトのテクノ・アダプタビリティーの視点から提案することが第二の目的である。本年度は、高緯度地域のポーランド(ポツナム)と中緯度地域の日本(福岡)において春分、夏至、秋分、冬至における自然光環境特性の把握と、ヒトが生活の中で実際に受ける光の特性およびメラトニンホルモンの関係について測定・調査を行った。すなわち、被験者1015名に対し、各季節それぞれ7日間、自然光および日常生活の中で受ける光の照度と波長分布および色温度を測定した。

また併せて、その間のメラトニンリズムおよび睡眠-覚醒リズムを測定した。それらの分析の結果、秋分のメラトニン挙動が他の季節に比べ特異的である事を示し、その光環境との関連性について考察を行なった。さらに12月に香港理工科大学にて関連研究者が集まり、ワークショップを開催し議論を行った。近年、種々の環境要因の中で特に光がヒトの生理・心理・行動に大きく影響することが明らかにされつつある。健康で快適な現代生活環境を計画する基礎として、本研究では、季節、時間によって異なる自然光の地域環境条件に注目し、その中で住みこなしてきたヒトの環境に対する、あるいは環境の変化に対する適応(環境適応能)を明らかにするとともに、地域の光環境がもたらす生理的多型性を考察することが第一の目的である。さらに得られた知見を基に、今日の人工照明環境計画について、ヒトのテクノ・アダプタビリテイーの視点から提案することが第二の目的である。具体的には、高・中・低緯度地域および季節において人々が一般生活の中で受ける光の量と質が、メラトニンリズムおよび睡眠-覚醒リズムにおよぼす影響を把握する。本年度はまず、低緯度地域のベトナム(ハノイ)において春分、夏至、秋分、冬至における自然光環境特性の把握と、ヒトが生活の中で実際に受ける光の特性およびメラトニンホルモンの関係について測定・調査を行った。すなわち、被験者15名に対し、各季節それぞれ7日間、自然光および日常生活の中で受ける光の照度と波長分布および色温度を測定した。また併せて、その間のメラトニンリズムおよび睡眠一覚醒リズムを測定した。それらの分析の結果、低緯度地域(ベトナム:ハノイ)のメラトニン分泌リズムは夏にやや後退傾向が認められるが、四季を通して類似したリズムを示すこと、高緯度地域(ポーランド)や中緯度地域(日本)に比べてその分泌量が年間を通して低濃度であることが明らかとなった。これらの3地域におけるメラトニン分泌の特異性と光環境との関係について関連研究者が2007年2月ベトナムHanoi Medical Universityに集まり、議論とまとめをおこなった。
腎機能低下を有する患者に対する薬剤投与量の適正化

【研究目的】腎機能低下患者では薬剤投与量を適切に調節する必要があるが、調節の必要な薬剤は多岐に渡るため、その把握は容易ではない。本研究では、腎機能低下時の薬剤投与量調節の目安を把握する一覧表を作成して効果的な薬剤師教育を行い、腎機能低下患者に対する不適切な薬剤使用を未然に防ぐ体制構築を試みることを目的とする。【研究方法】CKD診療ガイド2012等を基に、腎機能低下時における各薬剤の投与量調節の一覧表を作成した。一覧表は腎機能低下時に禁忌となる薬剤は「赤」、禁忌ではないが腎機能に応じて調節を考慮すべきものは「黄」、調節の必要がないものは「青」というように多忙な臨床現場で使用するにあたり視認性に優れるよう、また経験の浅い薬剤師が判断に困らないよう表記した。一覧表は調剤棚や監査台に掲示すると共に電子カルテ端末上でも閲覧できるようにした。腎機能低下患者への薬剤使用に対する薬剤師の業務貢献を評価するために、病棟薬剤師の疑義照会のうち腎機能低下患者への薬剤投与に関するものを対象として、その件数(薬剤ベース)と対象薬剤の種類数を、取り組み開始前後で比較した。調査期間は、取り組み開始前の2013年4月11月を前期、取り組み開始後の2013年12月2014年7月を後期とした。【研究成果】病棟薬剤師の疑義照会の内、腎機能低下患者への薬剤投与に関するものは前期: 214件、後期: 266件であった。疑義照会対象薬剤は前期: 60種類、後期: 88種類であり、この内前記に無く後期のみ対象となった薬剤は49種類で、中でも今回注意喚起を行った薬剤の疑義照会件数が増加した。後期における病棟薬剤師の疑義照会は前期と比べて件数、対象薬剤の種類が共に増加しており、腎機能低下時の薬剤投与に対する薬剤師の知識・意識の向上が見られ、今回の取り組みの有用性が示唆された。
葉層構造に対するThurstonの不等式に関する研究

3次元多様体上の余次元1葉層構造でThurstonの不等式を満たすものとして知られていたのはReeb成分を持たないものであったが,近年の研究でReeb成分を持たないという条件は必要条件では無いことが知られてきていた.また,Thurstonの不等式を満たさない葉層構造の実例も知られていなかった.本研究は回転可能葉層と呼ばれる葉層構造を精しく調べることにより,Reeb成分を持つ葉層構造であってThurstonの不等式を満たすものの族を構成し,またThurstonの不等式を満たさない葉層構造の実例を構成した.3次元多様体上の余次元1葉層構造でThurstonの不等式を満たすものとして知られていたのはReeb成分を持たないものであったが,近年の研究でReeb成分を持たないという条件は必要条件では無いことが知られてきていた.また,Thurstonの不等式を満たさない葉層構造の実例も知られていなかった.本研究は回転可能葉層と呼ばれる葉層構造を精しく調べることにより,Reeb成分を持つ葉層構造であってThurstonの不等式を満たすものの族を構成し,またThurstonの不等式を満たさない葉層構造の実例を構成した.3次元多様体の実係数2次元homology群のThurston normに関する単位多面体を計算することが一つの大きな目標であった.円周上の閉曲面束については,そのmonodromy微分同相をDehn捻りの積の形に表したとき,それらのDehn捻り達のデータから全空間の2次元homology群を計算することがまず問題となる.その為に繊維曲面の1次元homology群の基底を指定しておき、monodromy準同型(monodromy微分同相の誘導する1次元homology群上の同型写像)の固有値1の固有ベクトルを計算し、その固有ベクトルを代表する1輪体から全空間内の有向閉曲面を構成する.その構成の為には古典的結び目のSeifert曲面を構成する為の所謂Seifertのアルゴリズムを援用する.構成された曲面がThurston norm minimizingであることを示す為にD.Gabaiによる縫い目付き多様体論を用いる.以上の計算方法の正当性に関して,まだ若干の問題があり,現在も細かい検証を行っているが,同様の議論により回転可能葉層についても計算可能であると期待される.P. OzsvathとZ. SzaboによるHeegaard Floer homologyの理論の発展により、Thurstonnormは(理論的には)Heegaard Floer homology群により計算できるようになった。従って,本研究に於いてもHeegaard Floer homologyを調べる必要がでてきた.Ozsvath-Szabo理論は膨大なものでそれを取り込むのは容易ではなく時間もかかっている.さらに,実際にHeegaard Floer homology群を計算するのは容易ではなく、また具体的な例について直接(素朴に)計算する例を多く得ることが意味を失った訳ではない.提案されていたThurston norm計算のアルゴリズムは一部技術的な問題を克服するのに時間がかかっており,満足いく結果を得るに至っていないが解決の見通しがある.またThurston normに関する様々な状況を解明する為になすべき事は多いが,必ずしも容易に達成することが可能なわけではなく,地道に研究を進めている.或る意味で新展開とも言える方向の研究業績が得られつつある.Thurstonの不等式は3次元多様体の実係数2次元cohomology群のThurston normによって表現され,葉層構造が「きれい」であるとき,あるいは或る種の凸性を持っとき,成立すると考えられている.葉層構造はその葉が無駄なく巻きつき合っているとき典型的と呼ばれる.正確には,全ての葉のholonomy被覆が可縮のとき,その葉層は典型的であるという.従って,典型的葉層はThurstonの不等式を満たすかどうかが自然な問題となる.研究代表者が2010年7月にBarcelonaのCentre de Recerca Matmaticaで開催された国際会議で講演した結果は「任意の可附向閉3次元多様体上に余次元1の滑らかな典型的葉層が存在する」という定理であって,この事実は「任意の可附向閉3次元多様体は,或るholonomy亜群の分類空間とhomotopy同値である」ことを意味する.ここで,そのholonomy亜群とはその多様体上の或る(典型的)葉層に付随するものである.この意味で,典型的葉層構造はThurstonの不等式のみならず,葉層構造論に於いて非常に重要かつ興味深い対象であり,上記定理は基本的重要性を持つと思われる.また,研究分担者による一連の結果は4次元多様体上の2次元葉層による葉実現問題及び5次元多様体上の余次元1葉層の葉のsymplectic構造と複素構造に関するもので,3次元に於ける研究への研究の深化とその関連の解明が期待される.またこれらの結果のうち一部は,知られていた定理の誤りを訂正するものでその点でも大きな注目を浴びている.
重水系におけるポーラログラフ接触水素波に関する同位体効果について

コバルト(II)塩を含むアンモニア緩衝液中でボバイナルブミンの接触水素波のポーラログラフィーをH_2O-D_2O系中で研究し、水素同位体効果についてポーラログラフ的観点から検討を行った。以下その結果について報告する。1)Brdicka接触水素波の基礎液でであるアンモニア緩衝液中において、D_2O含量が増加するにともないNH^+_4の析出電位は、わずかに負電位側へ移行する。D_2O含量100%の場合には0%の場合より0.027V負電位側へ移行する。2)コバルト(II)塩の緩衝液の半波電位も1)と同様0.034V負電位側へ移行する。3)接触領域におけるピーク電位については、D_2O含量に依存しない4)ピーク電位(ip)に関してはD_2O含量が大きな影響を及ぼすことがわかった。Calusaruは、システインの接触水素波の同位体効果を3.22であると報告している。筆者らはCalusaruが求めた比は系中における電流に依存するものと考え、水素同位体比を算出したボバインアルブミン濃度を2×10^<-6>、5×10^<-6>、1×10^<-5>と変化させた時、水素同位体効果は、それぞれ3.63、5.71、5.78であり、システインの場合より大きな値を得た。これはアミノ酸とタンパク質の構造上に差異があるのではないかと考えられる。5)触媒であるコバルト-タンパク錯体にH^+を補給するイオンをNH^+_4であると考えると、H_2O-D_2O系中においてNH^+_4 →NH_3D^+→NH_2D^+_2→NHD^+_3ND^+_4なる交換反応が起こり、コバルト-タンパク錯体のSH基に補給する際に同位体効果が生じ、電極界面での電子授受に差があるのではないかと考えられる。
アンドロゲン共役因子発現解析による前立腺癌再燃メカニズムの解明

【目的】AR cofactorでありp160 familyの一つであるGRIP1と、ARに比較的特異的なAR cofactorであるARA70の正常前立腺、未治療前立腺癌、再燃前立腺癌組織におけるmRNA発現レベルを解析した。【対象と方法】朱治療前立腺癌39例及び再燃癌10例を対象にARA70、GRIP1のmRNA発現レベルをreal time PCR法で定量的に測定した。これらの症例の腫瘍組織及び非腫瘍組織よりRNAを抽出し、さらにcDNAを合成した。iCycler iQdetectionsystem (Bio-RAD)を用い、色素はiQ SYBERGreen supermix (Bio-RAD)を用いた。GRIP1,ARA70に対するprimerを作成し、GRIP1,ARA70が発現している検体を用いて標準曲線を作成。β-actinの発現量を内部コントロールとして相対発現値を検出した。群間の比較はMann-Whitney U検定を用い、Spearmann's rank testを用いてAR cofactorの発現レベルと再燃までの期間との相関を検討した。全例で文書による説明と同意を得た。【結果】正常前立腺、未治療前立腺癌と再燃前立腺癌組織との間でARA70、GRIP1の発現レベルに有意差を認めなかった。発現レベルと組織学的悪性度との関係ではARA70の発現レベルは高分化癌に比べ中・低分化癌で低く、GRIP1の発現レベルは高分化癌に比べ、中・低分化癌で高かった。再燃癌の中でARA70の発現レベルと再燃までの期間には明らかな相関はなかったが、GRIP1の発現レベルと再燃までの期間には負の相関があった。【結語】前立腺癌の再燃にはAR cofactorの発現が関与している可能性が示唆された。前立腺癌は発生初期にはホルモン依存性であり、前立腺癌のホルモン非依存性となるメカニズム、すなわち再燃機構の解析はtranslational researchにおいて非常に重要と考えられる。アンドロゲン受容体(AR)の転写はcoactivator, corepressor等のcofactorにより調節されている。Changらのグループは前立腺癌細胞株からARA70をはじめARA55などいくつかのARのcofactorをcloningしている。これらはARのリガンド特異性を変化させARの転写を上昇させることにより前立腺癌の再燃に関与している可能性がある。以前の我々の検討ではARA55の発現レベルが高いほど再燃前立腺癌において予後が不良であることを明らかにした(Miyoshi et al. Prostate,2003)。AR cofactorの前立腺癌再燃への関与が明らかとなれば前立腺癌再燃の予防または再燃前立腺癌に対する治療への応用が期待される。今回我々はAR cofactorの臨床検体での発現を解析し、そのprofileから前立腺癌の再燃に関与するAR cofactorを同定しAR cofactorの前立腺癌再燃メカニズムへの関与を解明することを目的に研究を計画した。まず、正常前立腺、未治療前立腺癌、再燃前立腺癌凍結組織よりRNAを抽出しcDNAを作成した。ARA70、GRIP1,他のAR cofactorのprimerを作成しTaqman PCRを用い定量PCRを行った。現在発現解析結果をprofile中である。
大正・昭和文学における外地人表象の研究：朝鮮人表象を中心に

本研究は、韓国併合から関東大震災に至るまでの朝鮮人表象を分析し、関東大震災時における朝鮮人虐殺の背景を探ると同時に、同時期の文学との関連性を考究する。1910年の日韓併合時には、日本の新たな同胞として迎えられた朝鮮人はいかなる経緯で「不逞鮮人」という恐怖と憎悪の記号へと転換したのかという問題を、内地・外地の新聞報道を主な資料として解明する。同時に、朝鮮人を描いた同時代の文学は「不逞鮮人」言説をどのように相対化し、朝鮮人虐殺に対していかなる批判点を構築しえているのかを明らかにする。この作業を通じて、現代的問題でもある旧植民地に対するレイシズムの構造を解明し、これに対する抵抗の理論を探究する。
トランスポゾンγδ配列の転移免疫に必要なDNA塩基配列の特異性に関する研究

トランスポゾンγδ配列の末端にある38bpのDNAを含むプラスミドには, γδが転移しない.即ち,この38bpのDNAには,転移免疫能がある.この研究では, 36番から38番までの塩基配列および, 38bpのDNAに隣接するDNAの塩基配列を変えると,転移免疫の強さがどのように変わるかを合成DNAをクローニングして調べた.(1)36番から38番の塩基配列では, δ末端の配列(AAG)がγ末端の配列(TAT)より45倍免疫能が強かった.(2)γ末端の38bpDNAの外側の隣接DNA塩基配列を, TCCCCからGTAAAに変えると転移免疫能は7倍増強した.(3)この配列で36から38番の塩基配列をTATからATGに変わると,転移免疫は28分の1に低下した.以上を要約すると,転移免疫能に影響する隣接塩基の特異性は(A)37番の塩基Aは特異性が非常に高く,これが他の塩基に変わると転移免疫能は殆どなくなる.(B)36番(A), 38番(G)の塩基は, 37番に比べるとはるかに特異性が低い.(C)外の隣接塩基配列は, GCリッチのものよりATリッチのものの方が転移免疫能が高いと考えられる.これは,転移酵素が隣接塩基配列としてATリッチの配列を好むことと関係があると思われる.トランスポゾンγδ配列の末端にある38bpのDNAを含むプラスミドには, γδが転移しない.即ち,この38bpのDNAには,転移免疫能がある.この研究では, 36番から38番までの塩基配列および, 38bpのDNAに隣接するDNAの塩基配列を変えると,転移免疫の強さがどのように変わるかを合成DNAをクローニングして調べた.(1)36番から38番の塩基配列では, δ末端の配列(AAG)がγ末端の配列(TAT)より45倍免疫能が強かった.(2)γ末端の38bpDNAの外側の隣接DNA塩基配列を, TCCCCからGTAAAに変えると転移免疫能は7倍増強した.(3)この配列で36から38番の塩基配列をTATからATGに変わると,転移免疫は28分の1に低下した.以上を要約すると,転移免疫能に影響する隣接塩基の特異性は(A)37番の塩基Aは特異性が非常に高く,これが他の塩基に変わると転移免疫能は殆どなくなる.(B)36番(A), 38番(G)の塩基は, 37番に比べるとはるかに特異性が低い.(C)外の隣接塩基配列は, GCリッチのものよりATリッチのものの方が転移免疫能が高いと考えられる.これは,転移酵素が隣接塩基配列としてATリッチの配列を好むことと関係があると思われる.1.トランスポゾンγδ配列のγ末端およびδ末端にある38bpのDNAを合成し、ベクタープラスミドpUC13にクローニングしてそれらのプラスミドにγδが転移するか否かにより、転移免疫能を調べた。その結果、δ末端の38bpには強い免疫能があったが、γ末端のそれには弱い活性しかなかった。2.自然転移したγδから各末端を含む0.2ないし0.4kbの断片をそれらの外側のDNAを含めて別々にクローニングしたプラスミドでは、両端ともに強い転移免疫能をもっていたから、38bpのそと(標的部位)の塩基配列も転移免疫能に影響することが示唆された。因みにγδが自然転移するときは、AT-richの標的部位に転移することが知られており、一方われわれが合成DNAをクローニングしたのはpUC13とSmaIサイトでGC-richである。3.γ末端の38bpDNAをAT-richの部位にクローニングするため、pUC13をEcoRIで切断し、Klenow酵素で処理して、AT-richなblunt endを作り、38bpDNAを結合させることを試みた。しかしDNAがクローニングされたプラスミドをスクリーニングする適当な方法がなかったため、クローニングは成功しなかった。4,γ末端の38bpDNAを既知の標的部位配列の1つ(GTAAA)を含めて合成し、クローニングを試みた。5.これまでに目的のDNAとほぼ同じ大きさのDNAがクローニングされたプラスミド4つを得、その1つの塩基配列を決定したところ、クローニングされていたDNAには中央付近に1塩基の脱落があった。6.現在ほかの3つのプラスミドの塩基配列を決定するとともに、転移免疫能の有無を調べる実験を行っている。トランスポゾンγδ配列の末端にある38bpの逆繰り返し配列を含むプラスミドには,γδの転移が抑制される.即ち,この38bpにはγδ配列に対する転移免疫能がある.この免疫の強さに対する隣接DNAの塩基配列の影響を調べるため,より弱い転移免疫能をもつγ末端の43bpDNAの外側に,自然にγδが転移したときの隣接塩基配列の1つであるGTAAAという5塩基の配列を加えて合成し,ベクタープラスミドpUC13にクローニングした.その結果,目的通りの配列がクローニングされたプラスミドが1つ,合成DNA配列内に1塩基の脱落や置換があるプラスミド3つが得られたので,これらを用いて転移免疫における塩基配列の特異性を調べた.1.36番から38番の塩基配列は,AAG,TAT,ATGの順に免疫能が強く,GGGには全く免疫能がなかった.

このことから,37番の塩基Aの特異性は非常に高く,36番と38番は余り高くないことが分った.2.36番から38番の塩基がγ末端と同じTATのとき,外部の隣接塩基をTCCCC(SmaIサイト)からGTAAA(自然転移の隣接塩基)に変えると,転移免疫は強くなった.恐らく隣接塩基としてはATリッチの配列を好むものと思われる.
狭帯域半導体レーザーを用いた極微量同位体分析手法に関する研究

緒言レーザーキャビティーリングダウン(CRD)吸収分光法は、単純かつ高感度で、対象とする検出物質の絶対濃度が測定可能な分光法である。本研究では、狭帯域波長可変半導体レーザーによる高速走査型CRD吸収分光法を用いたコンパクトかつ簡便な同位体計測手法の確立と適用性評価を目的とし、二酸化炭素同位体分子種(^<12>CO_2、^<13>CO_2)を分光対象としたCRD吸収分光基礎実験を通じて^<13>C/^<12>C同位体比分析を試みた。CO_2同位体測定実験高フィネスファブリーペロー型光共振器(FPI)を構築し、波長1.6μm DFB半導体レーザーを入射した。共振器長をピエゾ素子により高速(10^<-4>m/s)で走査すると、光共振器内で光の蓄積・減衰が繰り返される。この様子をFPI透過光強度としてInGaAs/PINフォトダイオードで検出した。この透過光強度(リングダウン信号)の減衰速度は吸収物質の濃度と比例関係にあるため、この減衰速度より光共振器内に導入したCO_2ガスの吸収スペクトルを測定した。結果と今後の課題その結果、^<12>CO_2/^<13>CO_2に対応した吸収線が測定され、それらのピーク面積(濃度)より求めた^<12>CO_2/^<13>CO_2の同位体比は^<13>C/^<12>C=(0.97±0.42)%であり、天然存在比1.122%と不確かさの範囲内で一致することを確認した。また、高分解能吸収線データベースHITRANとの比較を通して本方式の測定限界濃度を算出した結果、0.1atm・296Kで測定を行う場合、二酸化炭素濃度が約1%(^<13>CO_2:100ppm)まで測定可能であることが分かった。現時点では精度が不十分ではあるが、データ取り込みの高速化を行い統計精度上げる等の改良を行うことで人間の呼気を用いた医療診断技術等への応用や大気循環トレーサーとしてのCO_2中の炭素同位体比リアルタイム計測が可能であると考えられる。キャビティーリングダウン(CRD)レーザー分光に基づく同位体分析手法の^<14>Cや長半減期放射性同位体分析への適用拡大、同位体絶対濃度測定の原理実証のために、本年度は対象とする同位体分子種の選定およびをCRD分光用半導体レーザーシステムの構築を行なった。(1)対象とする同位体分子種の選定HITRANデータベースを基に^<12>C/^<13>Cを含むCO_2同位体分子種の吸収スペクトルを詳細に検討し、半導体レーザーの発振波長領域に吸収線が存在し、同位体分子種の間で吸収線の重なりがなく吸収強度が比較的強い、等から^<12>CO_230013←00001バンド(HITRAN表記)のR(60)6361.597176cm^<-1>と^<13>CO_230012←00001バンドのR(30)6261.826574cm^<-1>を測定対象吸収線と決定した。(2)CRD分光用半導体レーザーシステムの構築緒言レーザーキャビティーリングダウン(CRD)吸収分光法は、単純かつ高感度で、対象とする検出物質の絶対濃度が測定可能な分光法である。
タンパク質線維状重合体を用いた生体ナノゲージの開発と応用

タンパク質線維状重合体として、アクチンフィラメントと微小管を取り上げ、これらの機能(ミオシンやキネシンなどの分子モーターの運動性への寄与)を解折するとともに、"生体ナノゲージ"として細胞生物学研究に利用することを企てている。その第一歩として、蛍光色素をラベルしたアクチン分子をアクチンフィラメントに組み込み、フィラメントの状態を蛍光画像化しモニターすることを試みている。1)蛍光タンパク質GFPをfusionしたアクチンのプラスミドを、ニワトリの未分化筋芽細胞・マウス筋芽細胞株C2C12に導入し、その未分化細胞を筋管へと分化させることを試みた。まず、アクチン分子のN末端とC末端にそれぞれGFPを導入し培養心筋細胞に発現させたところ、細胞は正常に発達し、GFPアクチンはフィラメントに組み込まれた(共焦点蛍光顕微鏡により観察)。つぎに、アクチン分子を2つの部分に分割し、そこに、前後を入れ替えたGFPを導入した。こうすることによってGFPの構造を不安定化し、アクチン分子に加わる力によって生じる分子歪みに応じてGFPの蛍光性が変化することを期待した。これまで、分割する場所を2箇所検討したが、両方ともに大量発現させると、細胞は正常には発達しないことが分かった。現在、別の部位へのGFPの導入や、変異アクチンの発現量の制御、別タイプのGFP導入アクチンの調製を行っている。2)アクチン分子のCys374を蛍光ラベルし、これをフィラメントに導入することによってフィラメントの状態をモニターすることを試みた。ローダミンを導入するとミオシン分子モーターの運動性(運動速度、ATPase活性)が導入率に応じて減少することを見出した。今後は、フィラメントに負荷を加えることによる蛍光強度や蛍光スペクトルの変化、モーター機能への影響を、1本のフィラメントのレベルで検討したい。
後腎間葉の細胞移動による尿管芽誘導機構

哺乳類の腎臓発生において後腎間葉はGDNFを分泌し、それがウォルフ管に発現するRetに作用することでウォルフ管におけるErkシグナルを活性化し、その結果1本の尿管芽が誘導される。我々は前年度までに、Ror2およびWnt5a欠損(KO)マウス胚の後腎間葉が異常な配置を示すことを見出している。そこで本年度はまず、GdnfとRetの発現パターンをin situハイブリダイゼーション法によって解析した。その結果、胎生11日目の野生型マウス胚ではGdnfがウォルフ管に近接する後腎間葉領域に限局していたのに対し、Ror2およびWnt5a KOマウス胚ではその局在がより前方にまで拡大していた。一方、Retの発現は遺伝子型に関係なく尿管芽先端での強い発現を伴うウォルフ管・尿管芽全体に認められた。これらの結果から、Ror2およびWnt5a KOマウス胚ではGdnfの発現領域の拡大によってGDNF-Retシグナルが異所的に活性化している可能性が考えられた。実際、GDFN-Retの下流シグナル因子であるErkのウォルフ管での異所的な活性化が、抗リン酸化Erk抗体を用いた免疫染色によって確認された。これらの結果から、Ror2およびWnt5a KOマウス胚では、Gdnfの発現拡大に伴い、GDNF-Retシグナルが異所的に活性化していることが明らかになった。後腎間葉におけるGdnfの発現はRobo2-Slit2シグナルやFoxc1によって負に制御されることが知られている。しかし、KOマウス胚におけるそれらの発現パターンは、野性型マウス胚における発現パターンと同じであった。以上の結果から、Wnt5a-Ror2シグナルは後腎間葉の配置を制御することによって、後腎間葉とウォルフ管との適切な相互作用による正常な尿管芽形成に必須な役割を担っていることが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。哺乳類の腎臓発生はウォルフ管から1本の尿管芽が誘導されることによって開始する。正常な尿管芽形成には、ウォルフ管と後腎間葉との適切な上皮-間葉相互作用が必須である。受容体型チロシンキナーゼRor2はWnt5a受容体として細胞の極性形成や移動、がんの浸潤・転移などにおいて重要な役割を担っている。Ror2欠損マウスおよびWnt5a欠損マウスが重複腎・尿管奇形を呈することから、本研究ではこれらのマウス胚の尿管芽形成に着目し解析を行った。尿管芽を可視化するため、ウォルフ管と尿管芽でGFPを発現するマウスを用い、腎臓原基の器官培養によって尿管芽形成の過程をライブイメージングによって解析した。その結果、Ror2欠損マウスおよびWnt5a欠損マウス共に、尿管芽が出来はじめる胎生10.5日目において既に異常な形態の尿管芽が認められ、その後、2本の尿管芽を形成した。それらの尿管芽の成長は野性型の尿管芽の成長に比べて遅く、さらに、Wnt5a欠損マウスにおいては全く尿管芽が伸長しない場合が約半数認められた。Ror2の発現は後腎間葉に特異的であったことから、尿管芽形成過程における後腎間葉の配置を免疫染色によって解析した。野性型マウス胚では、後腎間葉がウォルフ管の後端付近で腹側から背側にねじれるように配置し、尿管芽の伸長と共に後腎間葉もより背側に配置した。一方、両欠損マウス胚の後腎間葉は主にウォルフ管の腹側に配置し、背側への配置はほとんど認められなかった。これらの結果からWnt5a-Ror2シグナルは後腎間葉の配置を制御することによって、適切な上皮ー間葉相互作用による尿管芽形成に重要な役割を担っていることが示唆された。現在、後腎間葉でGFPを発現するSix2-GFPマウスや光刺激で緑から赤に蛍光が変わるKaedeマウス等を用いて、後腎間葉の細胞移動について解析を行っている。

後腎間葉におけるGdnfの発現はRobo2-Slit2シグナルやFoxc1によって負に制御されることが知られている。しかし、KOマウス胚におけるそれらの発現パターンは、野性型マウス胚における発現パターンと同じであった。以上の結果から、Wnt5a-Ror2シグナルは後腎間葉の配置を制御することによって、後腎間葉とウォルフ管との適切な相互作用による正常な尿管芽形成に必須な役割を担っていることが示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。腎臓の発生段階に応じた後腎間葉の配置の変化を明らかにし、それがWnt5aやRor2の遺伝子欠損マウス胚において異常になっていることを見出すことができ、この結果を基に各種蛍光レポーターマウスを用いた後腎間葉の細胞移動解析に進むことができた。後腎間葉の細胞移動をライブイメージング解析することで、Wnt5a-Ror2シグナルがどのように後腎間葉の配置を制御しているのかを明らかにする。そのために、後腎間葉でGFPを発現するSix2-GFPマウスを用いているが、解析に用いる発生ステージ(胎生10.5日目)ではGFPの蛍光強度が予想以上に弱かったことから、より感度の高いレポーターマウスを検討する必要がある。そのため、Wt1-CreERT2マウスとR26R-H2B-mCherryの交配によって後腎間葉細胞の核で赤色蛍光タンパク質mCherryを発現するマウスを作成する予定である。また、KaedeマウスとHoxB7-EGFPマウスの交配によって、ウォルフ管と尿管芽を同定しながら、任意の場所を緑から赤に変えることができたため、このマウス胚の培養腎臓において尿管芽周辺の細胞移動について解析を行う。
1,3-ジエンによるパラジウム触媒カルボニル-アリル化反応の開発

筆者は、π-アリルパラジウム錯体の形成をキ-ステップとする、1,3-ジエンへのスズヒドリドの位置選択的付加によるアリルスズ化合物生成法の開発、およびそのカルボニル-アリル化反応への応用を試み、以下の点を明らかにした。(1)イソプレンとベンズアルデヒドとの反応をモデルとして、パラジウム触媒、配位子、ヒドリド源、溶媒、反応温度など反応条件を種々調べたところ、そのカルボニル-アリル化反応は、Pd(PPh_3)_4またはPd(OAc)_2/PPh_3触媒(1-2 mol%)、H_2O/HOAc溶媒、40°Cという反応条件が最も有効であり、ほぼ100%の位置選択性、85%の収率で2,2-ジメチル-1-フェニル-3-ブテン-1-オールを生成した。(2)上記の反応条件をイソプレンと種々のアルデヒドの反応に応用した。電子求引基を持った芳香族アルデヒドでは、高い位置選択性と高い収率を示した。脂肪族アルデヒドと電子供与基を持った芳香族アルデヒドでは、位置選択性は良いが、収率は30%と低かった。そこで、反応条件を再検討したところ、Pd(PPh_3)_4触媒にPPh_3を添加すると、最も収率が低かった脂肪族アルデヒドでも50%以上まで改善することができた。(3)この方法を1,3-ペンタジエンやミルセンを用いる位置選択的カルボニル-アリル化反応に応用した。現在のところ、反応機構を明らかにすることはできていないが、アリルアルコールを用いるカルボニル-アリル化反応の機構から推定して、系内で生成したスズヒドリド化合物がパラジウム(0)へ酸化的付加し、続いてジエンがパラジウム-ヒドリド結合へ位置選択的に挿入したπ-アリルパラジウムスタナ-トを経て進行したと考えている。