hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
液状化による変状抑制を目的としたクリンカとごみ溶融スラグを混合した人工地盤材料

昨今の大震災により埋立地や沿岸部を含めて道路,宅地などの液状化被害があり地盤流動によって大規模な地盤沈下など多大な被害が発生しており,早急な対策が強いられている。液状化が予測される地盤上の道路では道路変状対策として,従来の土材料の軽量化あるいは強度ある材料に置き換えることが必要であり,このための材料として従来の地盤材料に比べて密度が30%程度も軽減でき,多孔質であるクリンカが最適と考える。本研究では,クリンカの特性を生かした有効利用を図るため,クリンカと資源循環型社会を推進する一つとして,秋田市の溶融施設から排出されるごみ溶融スラグさらに安定材として消石灰を添加し,固化することによって液状化を抑制できる強度ある人工地盤材料の開発からクリンカとごみ溶融スラグの有効利用を図る。クリンカは石炭火力発電施設から排出されたもので,スラグは秋田市総合環境センターの溶融施設から排出されたものである。用いた材料の粒径はクリンカ5mm以下,スラグは粉砕することによって潜在水硬性が期待できるため2mm以下とし粒径調整した。実施した試験は全て一軸圧縮試験であって,以下の3種類の実験条件に基づいて実施した。1)クリンカのみによる圧縮試験。2)クリンカとスラグの混合土による圧縮試験。クリンカとスラグの混合割合はそれぞれ乾燥重量比で25,50,75%とした。3)クリンカとスラグの混合土に消石灰を添加し,所定の養生後の圧縮試験。また,消石灰の添加率は5,10,15%とし,これらの混合土に対してそれぞれ養生期間を3,7,10,28,90日に設定した。なお, 1)3)までの混合材料の含水比はそれぞれの最適含水比によるものとした。主な結果として,クリンカとスラグに消石灰添加した混合土はスラグの潜在水硬性と消石灰の水和反応が複合的に発揮され地盤材料としての強度増大が認められた。地盤沈下を軽減した宅地の地盤改良材としての強度(50kN/m2)は,スラグ混合割合25%において消石灰5%,養生期間3日で必要強度を確保できる。また,道路の路盤材を置き換えた場合の必要強度は各種混合土において消石灰5%,養生期問10日で上層路盤材(980kN/m2)および下層路盤材(700kN/m2)としての強度が確保できる。クリンカおよびスラグを使用した場合の経済性について,一般使用されている山砂と費用の比較から1m3当たりの運賃と材料単価の試算から,溶融排出施設から半径45km圏内であれば山砂使用と費用は変わらない。

クリンカおよびスラグを使用した場合の経済性について,一般使用されている山砂と費用の比較から1m3当たりの運賃と材料単価の試算から,溶融排出施設から半径45km圏内であれば山砂使用と費用は変わらない。
連合学習の成立過程における感覚情報統合の制御に関わる新規分子の探索と機能解析

動物は,環境から様々な情報を感覚細胞を通じて受容し、神経回路上で必要な情報を取捨選択・統合し適切な応答をする。その際、それまでの経験(記憶)などに応じて、感覚情報に対する応答が変化する。我々は、高次の感覚情報処理システムに関わる新しい分子機構を明らかにすることを目的として、C.elegansをモデルとして用い、学習・感覚情報の選択などの高次行動に関わる変異体について遺伝学的解析を行っている。我々は、一つの刺激に対する応答には異常はないが、二つの感覚情報の統合に異常を持つhen-1変異体の解析を行っている。このhen-1変異体は学習にも異常がみられる。hen-1変異体の原因遺伝子は、LDL受容体リガンド結合ドメインを持つ分泌タンパク質をコードしており、ショウジョウバエの発生制御遺伝子産物と配列上Jebと弱い相同性を持つ。HEN-1は二つの神経でのみ発現し、神経小胞と同じ機構で軸索へ運ばれる。この分子は成熟した神経回路において細胞非自律的に働くことから、この分子は感覚情報の修飾や学習に広く関わる新規の神経機能調節因子であると考えている。ショウジョウバエの発生制御タンパク質Jebの受容体がDALKであることがわかった。DALKは、ヒトALK(anaplastic lymphoma kinase)のショウジョウバエ相同遺伝子産物であり、受容体型チロシンキナーゼをコードする。ALKのC.elegans相同遺伝子scd-2は、耐性形成制御に関わる遺伝子として同定されたが、詳細な解析は行われていない。そこで、C.elegansのscd-2変異体の行動解析の結果、二つの感覚情報の統合とNaClと飢餓の対提示による条件付け後のNaClに対する走化性のの変化のパラダイムにおいて、hen-1変異体と類似の表現型を示した。このことは、SCD-2がHEN-1の受容体である可能性を示唆している。
血液脳関門病態を予測するバイオマ-カープロファイル法の開発

血液脳関門(BBB)は、"脳が活きる"環境の恒常性を厳密に保つ高次に分化した脳特異的機構で、医薬品を含む異物の排出等を実現している。従って、病気に伴うBBB障害は、薬物の脳移行動態に密接に関連する。しかし、BBB障害を検出しうる生体での評価法はない。本研究では、循環血液中のTNF-〓、RANTES及びS100A4が、BBB機能変化を予測するBBBバイオマーカーとして有用である可能性を提示した。血液脳関門の病変化は薬物の脳移行動態に密接に関連している。しかし、病変化を検出しうる生体での血液脳関門機能評価法はない。血液脳関門は循環血中の様々な生理活性物質(血液脳関門バイオマーカー)により正負の機能調節を受けている。バイオマーカーによる修飾を統合した表現型として血液脳関門が機能しているので、そのプロファイル法の開発が血液脳関門機能評価の有力な手段となりうる。本研究では、血液脳関門機能を修飾するバイオマーカーの網羅的解析を行い、データマイニング技術によって血液脳関門病態を検出可能なプロファイル法構築を目指す。本手法の開発は、血液脳関門病変化に基づく関連疾患発症・病期予測、治療設計・評価および薬物中枢性副作用予測を可能にし、それらに対する早期介入および治療適正化の実現を推進する。本年度は、(1)炎症病態下で増加する生理活性物質として、TNF-α、RANTES、oncostatin M、PAI-1、IL-6およびcyclophilin Aに着目し、これらの血液脳関門機能(密着結合性およびトランスポーター)に対する作用をin vitro BBBモデルを用いて検討した。その結果、血液脳関門機能は、TNF-α処置およびoncostatin M処置によって低下し、PAI-1処置によって亢進することを明らかにした。また、IL-6処置およびcyclophilin A処置は血液脳関門機能に影響を及ぼさなかった。(2)病態モデルとして、肝移植後初期の肝障害をシミュレートした部分肝切除肝障害モデルマウスを作製し、免疫抑制薬cyclosporine Aの脳内移行性および中枢毒性を検討した。その結果、急性肝障害時には血液脳関門のP-糖蛋白質機能および密着結合能の低下によってcyclosporine Aの脳内移行が増加し、その中枢毒性が増悪することを明らかにした。昨年度は、いくつかの炎症性サイトカインが血液脳関門機能を低下させることを明らかにした。本年度は、血液脳関門機能調節細胞である脳ペリサイトおよび脳内免疫担当細胞であるミクログリアにおける22種類の炎症性サイトカイン産生能について比較検討した。炎症誘発因子として血液脳関門機能を低下させるTNF-αを用いた。TNF-α刺激により脳ペリサイトおよびミクログリアともMCP-1,MIP-1α,IL-6,GRO/KC,RANTESなどのケモカインが大量に産生されることが明らかになった。実際、これらケモカイン産生量は、ミクログリアと比較して脳ペリサイトにおいて約3-10倍多かった。これらの結果は、炎症性刺激に対しては免疫担当細胞であるミクログリアよりも脳ペリサイトの感受性が特段に高いことを示している。脳ペリサイトは血液脳関門の実体である脳血管内皮細胞に密着し存在していることから、血液脳関門病変化を惹き起す起因細胞である可能性がある。従って、脳ペリサイト産生内因性物質、特に血液脳関門機能低下因子、が血液脳関門バイオマーカーの候補物質と挙げられるかもしれない。血液脳関門(BBB)の病変化は薬物の脳移行動態に密接に関連している。本研究は、循環血中の様々な生理活性物質濃度の変動を指標にBBB機能を修飾するBBBバイオマーカーを提案しようとするものである。昨年度は、BBB機能調節細胞である脳ペリサイトが炎症刺激に応答してTNF-a, MCP-1, MIP-1, IL-6, GRO/KC, RANTESなどのサイトカイン・ケモカインを大量に産生すること、またこの産生能は脳内免疫担当細胞であるミクログリアよりも特段に高いことを明らかにした。そこで本年度は炎症刺激により脳ペリサイトから誘発される上記のケモカインのBBB機能への作用についてin vitro BBBモデルを用いて検討し、病態モデル動物での結果と併せてBBBバイオマーカーの抽出を試みた。TNF-aはBBB機能の障害因子であり、IL-6はBBB機能に影響しないことは既にin vitro BBBモデルにおいて明らかにしている。

今回、RANTESがBBBモデルにおいて薬物の脳移行を支配するP糖タンパク質の機能を亢進することを初めて明らかにした。MCP-1, MIP-1, GRO/KCはBBB機能に影響しなかった。このことは炎症病態下において脳ペリサイトから誘発されるRANTESがBBB機能を修飾することを示唆する。一方、炎症誘発物質リポ多糖(LPS)を投与したマウスではBBB機能変化に伴い、循環血中のTNF-a, MCP-1, MIP-1,IL-6, RANTESが上昇する。これらのことからTNF-aに加え、RANTESは脳ペリサイトに起因したBBB機能変化を予測しうる「真の」BBBバイオマーカーとして有用である可能性がある。またMCP-1, MCP-1,IL-6自身は直接的にBBB機能には変化をもたらさないが、BBB機能変化を予測するサロゲートマーカーとなりうるかもしれない。血液脳関門病変化を惹き起す生理活性物質を明らかにするため、血液脳関門機能調節細胞からの炎症性サイトカイン産生能について検討した。本年度は、脳ペリサイトおよびミクログリアから産生される数種類のケモカインを血液脳関門機能低下因子候補として列挙できたため、研究はおおむね順調に進展していると評価することができる。24年度が最終年度であるため、記入しない。血液脳関門病変化モデル動物を用いて、血液中および脳中の炎症性サイトカイン濃度変化について検討し、血液脳関門機能低下因子を同定する。この成果は、血液脳関門病変化に基づく関連疾患発症・病期予測、治療設計・評価および薬物中枢性副作用予測を可能にし、それらに対する早期介入および治療適正化の実現を推進する。
原虫共生ウイルスの遺伝子発現制御による共生機構の解明

原虫に共生しているウイルスが、原虫やその宿主(ヒト)に対していかなる役割を持つのかを明らかにするため、原虫およびその宿主(ヒトやマウス)の遺伝子発現に与える影響を調べる。そのため、まずはRNA依存的RNAポリメラーゼ阻害薬(RdRpi)を用いることによって、リーシュマニア共生ウイルス(LRV2)を持つLeishmania majorから、共生ウイルスを持たないリーシュマニアを作出・クローン株を得る。その後、原虫共生ウイルスの有無のみ異なる原虫およびその宿主のトランスクリプトーム解析を行い、共生ウイルスが存在することによって発現が変化している遺伝子を網羅的に探索する。
藻場の生物育成機能における植生多様性の意義と生態的回廊によるその向上の検証

瀬戸内海西部の広島湾および伊予灘に位置する4つの島嶼(柱島、周防大島、片島、平郡島)に調査地を設定し、天然の岩礁性藻場および投石等による造成藻場においてライントランセクト法により海藻植生の垂直分布構造を詳細に明らかにした。また、周防大島においては調査地周辺の沖出し300m、水平距離およそ3kmの範囲においてサイドスキャンソナーと魚群探知機により、藻場・投石(藻・漁)礁の分布と周辺の底質分布・海底地形を精査し、マッピングするとともに、他の島嶼の調査地における過去の類似調査データについても収集した。天然藻場の主要な底質は岩盤や大小様々の礫であり、概して水深2ー3m以浅ではアカモク、ホンダワラ、ノコギリモク、ジョロモク等をはじめとする大型褐藻のホンダワラ類が、またそれ以深ではコンブ目藻類のクロメが藻場を形成していた。しかし、岩盤を主として底質が構成されている場所では、岩盤上部にクロメが、砂泥海底との境界に近い岩盤下部もしくは岩盤下部に続く礫場ではホンダワラ類が優占するなど、植生の垂直構造が逆転している場所もあった。さらに潮間帯や基質の大きさが小さい場所では、アオノリ類、シキンノリなどの小型海藻の被度も大きかった。一方で柱島や周防大島北岸等、広島湾内の調査地では深所の基質上に浮泥が堆積し、海藻植生が貧相化している場所もあった。漁業者が良い漁場として認識している場所は、藻場の規模が大きく浅所(潮間帯)から深所まで連続して海藻植生が分布している特徴があった。複数の藻場の海藻植生や底質特性については初年度において詳細なデータが収集でき、藻場の海藻植生と磯根生物の生産との関係を解析する基盤を整備することが出来た。また、周防大島北岸については、個々の藻場だけでなくその周辺の広域にわたる地形、底質分布、藻場・漁礁分布のマップを作製した。このデータは、藻場だけでなくその周辺を利用するメバルなどの沿岸性魚類の漁場特性の解析に用いることも可能であり、データ取得は順調に進捗している。初年度に調査した藻場(天然・造成)において水産有用種(磯根生物)を中心とした生物相調査を行う。磯根生物の生物量と海藻植生、基質構造、水深、藻場の規模(面積)、植生多様度などとの関係を統計的に解析し、磯根生物の育成に優れた藻場の特性について予備的な解析を試みる。
アクチナイド元素の消滅を目指した核反応断面積の測定に関する研究

本研究では、まず、京都大学原子炉実験所に既設の46MeV電子線型加速器と組み合わせて、平成3年に付設された鉛(減速)スペクトロメータを用いて、Np-237及びAm-241等のアクチニド元素の消滅を目指した核反応断面積の測定を実施した。鉛スペクトロメータの諸特性として、中性子の減速時間とエネルギーの関係及びそのエネルギー分解能(約40%)を共鳴フィルターを用いて実験的に求めると共に、連続エネルギー減速モンテカルロコードMCNPを用いた計算によっても求めた。次に、このスペクトロメータを1eVから10keV領域における^<237>Np(n,f)反応断面積の測定に応用した。その結果、Plattard等の実験値、ENDF/B-VIおよびJENDL-3の評価データは、何れも本実験値より大幅に小さい(約3分の1)こと、Jiacoletti等の実験値は、低エネルギー側を除けば、全体に本測定値に近いことが分かった。^<241>Am(n,f)反応断面積についても、ENDF/B-VI及びJENDL-3評価データはエネルギー依存断面積曲線の形状としては本実験値とよく似ているものの、絶対値としては評価データが本実験値より約3倍小さいことが分かった次に、^<237>Np(n,γ)^<238>Np反応の熱中性子断面積を放射化法により測定した結果、JENDL-3、ENDF/B-VI、-Vの評価値、及び従来の実験値は何れも我々の実験値(158±3バーン)より718%大きいこと、^<237>Np(n,γ)^<238>Np反応の共鳴積分については、先の評価データ値は本実験値(652±24バーン)とよい一致を示しているが、旧来の実験データは殆んどが我々の測定値より2438%も大きいことが分かった。本年度は、消滅を目指した反応核種として注目されるものの中から、まず、代表的なアクチナイド元素であるNpー237を取り上げ、その核分裂反応断面積を数eVから10keV領域において測定した。本研究の方法、及び、得られた成果をまとめると:1.Npー237試料に化学処理を施し、これを溶液化して、厚さ0.2mmのステンレス製バッキングの上に直径約25mmの薄膜(100μg)として電着し、焼結した。Npー237のα線スぺクトル測定を表面障壁型シリコン検出器により測定した結果、試料中の不純物としては、僅かに0.5ppm以下のNpー238が観測されたのみである。この電着手法を濃縮ウラン(Uー235:99.4%)の薄膜作成にも適用し、同様に電着膜をつくって、α線スペクトルの測定を実施した。その結果、得られたスペクトルには、Uー235に対して半減期の短いUー234(約2x10^5年)のα線ピ-クが観測されたが、両者はα線エネルギ-の違いから良く分離できた。2.上で得られたNpー237とUー235の電着膜を背中合わせとし、これをアルゴン97%、窒素3%を含む1気圧の混合ガスと共に、直径48mm、長さ40mmのケ-スに封入して核分裂計数管とした。これを、最近、京大原子炉実験所に付設され、電子線型加速器と組み合わせて使用できるようになった鉛減中性子スペクトロメ-タ(KULS)のビスマス実験孔に挿入し、Npー237(n,f)反応断面積の測定を行った。

本スペクトロメ-タは、加速器にて発生したパルス状高速性子の減速特性が減速時間と良く対応する特徴を有しており、エネルギ-分解能としては、約40%前後と劣るものの、中性子強度が通常の飛行時間に比べて格段に高くなる(数1000倍以上)利点がある。3.本実験に依って得られたNpー237(n,f)反応断面積の測定結果を下図に示す。これでは、日本で作成された評価デ-タ(JENDLー3)並びに米国の評価デ-タ(ENDF/BーVI)について、鉛減速スペクトロメ-タでのエネルギ-分解能の広がりを考慮した結果と本実験値を比べているが、何れの評価値も大きく下回っている。これは、何れの評価デ-タにおいても全エネルギ-領域にわたり低い側の実測デ-タを中心にデ-タ評価が行われたためで、本実験値は評価の対象とされなかった高目の実験デ-タ群に一致する傾向を示した。4.今後は、本実験結果について、再測定を含めた実験的評価を行うと共に、従来の高目、低目のNpー237(n,f)反応断面積のデ-タ群を含めた比較検討を行う。また、Npー237の中性子捕獲反応断面積は、低エネルギ-領域において比較的大きいとされるので、Npー237の核変換による消滅の点から注目して、これの測定実験を行う予定である。本研究では、消滅を目指した核反応断面積の測定に関する研究の一環として、まず、代表的なアクチナイド元素であるNp-237を取り上げ、昨年度において、これに関する核分裂反応断面積を数eVから10keV領域において測定した。本研究において得られた本年度の研究成果をまとめると:1.上記、Np-237の核分裂断面積の測定、並びに明かとなった研究の成果をとりまとめ、現在、専門雑誌に投稿中である。2.アクチナイド元素の消滅を目指す方法の1つとして、中性子吸収反応を利用し、核変換させて、短半減期核種、或いはより燃焼しやすい核種に変換する手法がある。一般に、低エネルギー領域では中性子吸収断面積が大きいため、その有効性が期待できる。本年度は、Np-237(n,γ)Np-238反応断面積測定を中心に実験的研究を進めた。Np-237の半減期は2.14x10^6年であるのに対し、Np-238の半減期は2.12日と極めて短いものである。本実験では、Np-237(n,γ)Np-238反応断面積を放射化法によって測定した。3.京大研究炉(KUR)の重水熱中性子設備におけるMaxwell分布型の標準的な中性子スペクトル場を利用し、まず、Np-237(n,γ)の熱中性子反応断面積を測定した。Np-237試料の精製、準備は従来通りで、α線スペクトルの測定結果より、その不純物による影響を評価した。試料に入射する熱中性子束は、標準としてしばしば利用される金箔・金の放射化断面積(98.65±0.09b)によってモニターした。本実験の結果を表1に示す。従来値は何れも約10%以上も大きいことが分かる。4.次に、共鳴中性子領域でのNp-237(n,γ)反応断面積として、その共鳴積分の測定を行った。原子炉の中性子減速エネルギー領域で標準的な1/Eスペクトルを示す中性子場において、金箔をモニターとして使用し(1550±28b)、厚さ0.5mmのカドミニウムカバーを付けたNp-237試料の照射を行った。共鳴積分の測定結果を表2に示す。代表的な評価済み核データの値より20%以上も大きくなったが、共鳴積分の定義として、エネルギー下限を0.5eVに定め、その補正を行えば641±61bの値が得られた。従来の評価値は、本実験値を満たしていることが分かった。
神経変性疾患タンパク質はどの様に伝播するか：放出機構の包括的解析からのアプローチ

αシヌクレインを原因タンパク質とするパーキンソン病ではドーパミン神経が特異的に脱落する事が知られており、神経細胞種特異的にαシヌクレインが伝播し、変性を引き起こす可能性が示唆されている。ショウジョウバエにおいても細胞種によって伝播性に違いが生じるのか検討する為に、Gal4/UASシステムによって細胞種特異的にヒトαシヌクレインを発現させ、羽化後1日目、1週間、4週間で解剖し、ヒトαシヌクレインを蓄積する細胞が時間経過によって増加していくのか実験を行った。その結果、ドーパミン作動性神経及びオクトパミン作動性神経特異的Gal4において時間経過によってヒトαシヌクレインを発現している細胞領域の増加が確認できた。今後は、この発現領域の増加が伝播に依存するものなのか検討を行う。また、疾患タンパク質の伝播の様式として、疾患タンパク質そのものが神経細胞間を伝播する可能性とプリオンのように病変型の疾患タンパク質が正常型の疾患タンパク質に何らかの方法で働きかけて病変型に変えてしまう可能性が示唆されている。本年度では後者の可能性も検討する為に、全神経細胞で蛍光タンパク質GFPが融合した正常型ヒトαシヌクレインを発現している遺伝子組換えショウジョウバエ系統を作製した。既に作成していた特定の神経細胞でのみ病変型ヒトαシヌクレインを発現させる遺伝子組換えショウジョウバエ系統と組み合わせることにより、病変型を発現させた細胞以外で正常型のαシヌクレイン-GFPが凝集するかどうかを確認する事ができる。病変型αシヌクレインのみ時間経過と共に凝集が増える事は既に確認している。今後は、この系統を用いて伝播が確認できるか検討を行う。様々な神経細胞種において疾患原因タンパク質の伝播の有無を検討し、ドーパミン作動性神経及びオクトパミン作動性神経細胞においてヒトαシヌクレインを発現している細胞領域の増加を確認した。そして、予定していたよりも計画を拡大し、よりヒト脳に近いin vivoモデルの確立のために必要な遺伝子組換えショウジョウバエの樹立を行った。昨年度に作成した伝播モデルで、伝播の有無を検討する。伝播が確認された場合は、Expansion Microscopy法を用いてシナプス前細胞における疾患タンパクの放出源を同定する。疾患タンパクのシナプス小胞への局在が確認された場合、エキソサイトーシスを抑制するTetanus toxinを発現させて伝播が抑制されるか検証する。また、エキソソームに局在が見られた場合はv-SNAREの一種でありエキソソームの放出に必須であるykt6遺伝子をRNAi法で抑制した状態で伝播が抑制されるか確認する。細胞質にのみ局在が観察された場合、ナノチューブの形成に必要な鞭毛内輸送関連因子であるoseg2遺伝子等を抑制し、伝播が抑制されるか確認する。細胞質にのみ局在が観察された場合、ナノチューブの形成に必要な鞭毛内輸送関連因子であるoseg
図像解明を手がかりとした中国摩崖石窟の空間構想-唐宋時代の千手観音像を中心に-

中国の摩崖石窟がどのような宗教的空間を現出していたかを明らかにするため、四川地域と関係の深い唐宋時代敦煌石窟の実地調査で図像資料を収集し、関連する経軌の解読および図像との照合を行い、論文を執筆した。また四川地域の千手観音龕における図像の解明および仏教儀礼との関係について、海外で研究発表を行った。敦煌地域の石窟壁画の千手観音変相についての実地調査は、莫高窟13箇窟14図〔第148窟主室東壁門上(盛唐)・第231窟甬道天井(中唐)および前室天井(宋)・第292窟前室西壁北側(五代)・第332窟前室天井(五代)・第335窟前室天井(宋)・第79窟前室南壁(盛唐)・第172窟前室南壁(宋)・第386窟主室東壁門上(中唐)・第45窟前室天井(五代)・第302窟甬道天井(宋)・第329窟前室天井(五代)・第402窟前室西壁門上(五代)・第380窟甬道南壁(宋)〕、西千仏洞1箇窟2図〔第13窟甬道東西壁(五代)〕、楡林窟7箇窟8図〔第36窟主室北壁(五代)・第35窟前室天井(五代)・第38窟前室天井(五代)・第39窟甬道南北壁各一図(回鶻)・第40窟前室天井(五代)・第30窟北壁(晩唐)・第3窟東壁南北両側各1図(西夏)〕に及んだ。各図における眷属像の配置図を作成するとともに、眷属像の種類や表現の相違について関連経軌によって解釈を加え、石窟の千手観音変相図と大悲会との密接な関連を指摘するに至った。また、石窟内の空間構想に関しては、莫高窟北周時代の中心柱窟の構造と図像考察を通して、窟内全体が説法空間に構想されていることを論じ、研究誌に発表した。そのほか、上記の海外研究発表を契機とし、宗教的な空間形成のコンセプトと図像および儀礼とが密接に関わるという筆者の理論を軸とした共同研究の計画が立ち上がった。当該研究の一年目に当たる本年は、中国山西省の大同・天龍山、四川地域の大足・安岳・資中・内江・夾江・丹〓における摩崖石窟、及び山西省の五台山諸寺・山西博物院・山西省芸術博物館、山東省の諸城市博物館・青州市博物館に蔵する仏教造像の現地調査を行い、これらの摩崖や図像の特徴を把握できたことが主な研究成果として挙げられる。なかでも、副題に挙げる唐宋時代の千手観音像については、四川省の大足北山(第9・60・220・235・243・273号龕)・宝頂山、安岳円覚洞(第26・31・37号龕)・臥仏院第45号龕・千仏寨、資中重龍山(第4・11・40・73・83・102・113号龕)・西岩(第4・45号龕)、内江聖水寺・東林寺、夾江牛仙寺第183号龕・千仏岩(第34・82・83号龕)、丹〓鄭山第40号龕・劉嘴(第34・45・52号龕)を調査し、これら各龕の図像の略図および形状記述を行った。この現地調査を通して、唐末から五代の千手観音像が、しばしば高6m前後の大像であらわされること、像下部背後に涌泉が付随する等の際立った特徴があることを確認した。加えて『千手千眼観世音菩薩広大円満無礙大悲心陀羅尼経』をはじめとする千手観音および眷属諸尊に関する経典や儀軌について『大正新脩大蔵経』本を基とし敦煌遺書を参照してテキストクリティークを行った。これらの調査に基づく各データを整理し、データベースを作成した。また、摩崖石窟の空間構想および仏教図像の解明に関する当該研究の成果の一部を、国内外の学会で口頭発表した(「試論慶陽北石窟寺北魏時期中心柱窟的造像構思」中国慶陽石造像与古石刻芸術鑑賞研討会05年6月3日、「初唐時代の洛陽周辺における優填王像をめぐって」早稲田大学美術史学会総会05年6月18日、「四川摩崖石窟的維摩詰経変龕-〓〓金華山天宮寺摩崖為中心-」中国重慶大足石刻国際学術研討会05年8月22日)。当該研究の二年目に当たる本年は、前年度に実地調査を行った中国四川省資州の千手観音像、および龍門石窟ほかにみられる仏教造像についての論文を執筆し、学会誌に発表するとともに、前年度に引き続き、仏教美術作例の実地調査および文献解読に基づく各データを整理し、データベースの作成作業を進行した。中国四川資

州に現存する唐末宋初の千手観音像についての論文は、漢訳経典はもとより、日本において執筆された千手観音像の図像を説いた著作の記述などに基づき、図像解明を行い、さらに、その図像が現れた時代的地域的背景について言及したものである。その地域・時代に礼拝者に求められた要素が尊像の図像および摩崖石窟の空間に反映されていることを明らかにでき、中国唐宋時代の摩崖石窟美術を研究する上での一つの指針を得た。また、中国龍門石窟などの洛陽周辺に、しばしば千仏図像を伴い、初唐7世紀後半という限られた時期に造像された優填王像についての論文では、その造像が、当時の則天武后をめぐる政治情勢と、仏教と道教との対立、および初期禅宗との相互の密接な関わりを投影するものであったこと、そして、仏教初伝地である洛陽の権威を喧伝するという役割を担っていたこと、さらには、それが優填王像と周囲の尊像とで寵窟内の空間に有機的に表現されていることを明らかにした。なお文献解読および実地調査においては、日本に残された文献の有用性を再認識するとともに、栃木宇都宮大谷寺、京都清水寺、那智大社や補陀洛山寺などの日本の平安時代に盛んに造られた千手観音像と、中国の千手観音像に、多くの類似点を見出すことができ、今後、研究対象を日本古代中世の仏教美術作品に拡大させていくことも当該研究に有用であると確認した。中国の摩崖石窟がどのような宗教的空間を現出していたかを明らかにするため、四川地域と関係の深い唐宋時代敦煌石窟の実地調査で図像資料を収集し、関連する経軌の解読および図像との照合を行い、論文を執筆した。また四川地域の千手観音龕における図像の解明および仏教儀礼との関係について、海外で研究発表を行った。敦煌地域の石窟壁画の千手観音変相についての実地調査は、莫高窟13箇窟14図〔第148窟主室東壁門上(盛唐)・第231窟甬道天井(中唐)および前室天井(宋)・第292窟前室西壁北側(五代)・第332窟前室天井(五代)・第335窟前室天井(宋)・第79窟前室南壁(盛唐)・第172窟前室南壁(宋)・第386窟主室東壁門上(中唐)・第45窟前室天井(五代)・第302窟甬道天井(宋)・第329窟前室天井(五代)・第402窟前室西壁門上(五代)・第380窟甬道南壁(宋)〕、西千仏洞1箇窟2図〔第13窟甬道東西壁(五代)〕、楡林窟7箇窟8図〔第36窟主室北壁(五代)・第35窟前室天井(五代)・第38窟前室天井(五代)・第39窟甬道南北壁各一図(回鶻)・第40窟前室天井(五代)・第30窟北壁(晩唐)・第3窟東壁南北両側各1図(西夏)〕に及んだ。各図における眷属像の配置図を作成するとともに、眷属像の種類や表現の相違について関連経軌によって解釈を加え、石窟の千手観音変相図と大悲会との密接な関連を指摘するに至った。また、石窟内の空間構想に関しては、莫高窟北周時代の中心柱窟の構造と図像考察を通して、窟内全体が説法空間に構想されていることを論じ、研究誌に発表した。そのほか、上記の海外研究発表を契機とし、宗教的な空間形成のコンセプトと図像および儀礼とが密接に関わるという筆者の理論を軸とした共同研究の計画が立ち上がった。
地方大学における留学生の就職支援のためのキャリア理論研究

本研究は、地方大学に留学した私費外国人留学生のキャリア形成の過程を明らかにすべく、彼(女)らの「日本国内での就職に至るまでの経験と変容」に焦点を当て、調査・分析を行うものである。本研究では、3年間の研究期間において、まず留学生の「就職」や「キャリア」に関する各種統計資料の分析、先行研究調査を実施する。次に、約30名の留学生を対象とした複数回のインタビュー調査を実施し、結果の分析と考察を行う。以上の成果に基づき、日本国内での「就職」に至る留学生の意識形成の過程を明らかにすることで、留学生を受け入れる大学・企業・地域などの社会に広く共有可能な留学生のキャリア理論の構築を目指す。
室町・戦国期畠山家・赤松家発給文書の帰納的研究

研究の結果えられた新たな知見は、以下の通りである。1.奉書の署判者を直ちに奉行人と捉えるべきではないことを明らかにした。従来、それが十分に意識されることなく、奉書の署判者=奉行人と考える傾向が強かった。しかし、奉行人奉書とは別に、有力内衆が署判する老臣奉書と称すべき文書があることを明らかにした。2.戦国期の守護家・守護代家の奉書の署判者は、港町を支配し、城下町を経営し、連歌会を主催し、自らの支配領域の住人の要求に応えて判物を発給する領主であることを明らかにした。署判者から考えると、戦国期の守護家・守護代家の奉書は、守護家・守護代家当主の意志が貫かれていると考えるよりも、署判者の意志が相当反映されている文書であることを明らかにした。3.浦上則宗は守護代ではないことを明らかにし、さらに、浦上則宗は守護家の政治組織を統括し、奉書署判者として守護代以下の機関等に指示をする存在であることを明らかにした。4.守護被官層の家格上昇の原因は守護被官層の将軍との直接的関係を基礎にして起こったことがらであることを明らかにした。5.浦上則宗・多賀高忠・斎藤妙椿を事例として、将軍と守護被官層の関係を考察したもので、守護被官層が将軍と「直接的関係」を有していることを明らかにした。6.守護被官層と将軍の「直接的関係」は、有力守護を中心とした幕府体制から転換して、守護被官層に幕府体制を補完させるためのもので、応仁・文明の乱をへて守護の在京制度が崩壊し全国政権としての実質的機能を失い始める将軍権力は、直臣団だけで構成されたものではなく、守護被官層によっても支えられた権力であったことを明らかにした。1.史料に「奉行所」と記され、その奉行所の構成員が奉書を発給しているならば、奉行人奉書と呼んでいいとすると、伊勢の場合、神宮の引付には、坂内・岩内・大河内の奉行所宛の文書が頻串する。ならば、北畠一族の坂内家・岩内家・大河内家は奉行人奉書を出していた、もしくは出す可能性があるということになる。彼等は官位、城、奉行人制から考えて、岩内・坂内などの一族家は相当自立度が高いと考えざるをえない。以上は伊勢北畠氏の研究によって得られた結論である。越後上杉氏の守護家奉書の奉者は奉行人と呼ぶに相応しい人物は奉者になっていない。以上は、越後上杉氏の研究によって得られた結論である。史料にr奉行所」と記されるような場合がないのであれば、奉行人奉書という用語を使用すべきではない。奉者が奉行人かどうか確定されないまま呼ばれていた播磨守護赤松家奉行人奉書という文書名は正しくないこと、守護赤松家年寄奉書と呼ぶべきであることを明らかにした。2.播磨守護赤松家年寄奉書の奉者(浦上、芦田)の検討により、赤松家年寄奉書は赤松氏の主体性ではなく、奉者の主体性を重視して考えねばならないことを明らかにした。3.従来、守護代であるといわれていた浦上則宗(播磨守護赤松家年寄奉書の奉者でかつ判物発給者)は守護代ではないことを明らかにした。

4.越後との比較研究により、越後のように基本的には自らの支配地域の独自の支配を保証されながら一国規模で領主がまとまる場合と、播磨のように守護赤松家の力が規制力が弱まり赤松下野守家・別所氏などめ領主が自立していく場合があるが、判物の発給から考えると、地域の領主の権力が強大化していくという観点でみれば、それは本質的には同じ事態を示していることを明らかにした。1.奉書の署判者を直ちに奉行人と捉えるべきではないことを明らかにした。従来、それが十分に意識されることなく、奉書の署判者=奉行人と考える傾向が強かった。しかし、奉行人奉書とは別に、有力内衆が署判する老臣奉書と称すべき文書があることを明らかにした。2.戦国期の守護家・守護代家の奉書の署判者は、港町を支配し、城下町を経営し、連歌会を主催し、自らの支配領域の住人の要求に応えて判物を発給する領主であることを明らかにした。署判者から考えると、戦国期の守護家・守護代家の奉書は、守護家・守護代家当主の意志が貫かれていると考えるよりも、署判者の意志が相当反映されている文書であることを明らかにした。3.浦上則宗は守護代ではないことを明らかにし、さらに、浦上則宗は守護家の政治組織を統括し、奉書署判者として守護代以下の機関等に指示をする存在であることを明らかにした。4.守護被官層の家格上昇の原因は守護被官層の将軍との直接的関係を基礎にして起こったことがらであることを明らかにした。5.浦上則宗・多賀高忠・斎藤妙椿を事例として、将軍と守護被官層の関係を考察したもので、守護被官層が将軍と「直接的関係」を有していることを明らかにした。6.守護被官層と将軍の「直接的関係」は、有力守護を中心とした幕府体制から転換して、守護被官層に幕府体制を補完させるためのもので、応仁・文明の乱をへて守護の在京制度が崩壊し全国政権としての実質的機能を失い始める将軍権力は、直臣団だけで構成されたものではなく、守護被官層によっても支えられた権力であったことを明らかにした。
極低温におけるシリコンフォノニック結晶中の熱伝導に関する研究

本研究は、低温環境においてシリコンフォノニック結晶ナノ構造を用いたフォノンの波動性に基づく熱伝導を実現し、その物理を体系的に明らかにすることを目的として実施した。フォノンの波動性に基づいた熱伝導の制御はアイデアとして長く存在していたが、有限温度ではフォノンのインコヒーレント散乱によっての位相は容易に破壊され、実現が困難であった。そこで、本研究では、液体Heを用いた4 Kにおける実験と希釈冷凍機を用いた極低温での実験を行うことで、フォノンの波動性に基づいた熱伝導制御を行う準備を進めた。4 Kにおいては、シリコン薄膜にフォノニック結晶ナノ構造を形成することで、熱輸送を担うフォノンの分散関係を制御し、目的通り観測することができた。これは、フォノニック結晶の短距離秩序を系統的に制御することで、熱伝導率を変化させることが可能なことを示した初めての実験であり、固体物理学においてマイルストーン的成果となる。希釈冷凍機は、現在立ち上げ作業を継続中であり、試料構造の設計は完了している状況である。今後、極低温実験を進めてゆく。また、モンテカルロシミュレーションによってフォノニック結晶ナノ構造中の熱フォノンの輸送特性を計算した。その結果、整列したナノ構造によって、本来拡散する性質を有する熱流に指向性を与えることが可能なことを見出した。さらに、世界で初めて固体中で集熱が可能なことも実証した。この成果もマイルストーン的成果であり、Nature Communication誌に掲載が決定した。28年度が最終年度であるため、記入しない。本研究は、現在の技術での到達限界である100 mK程度の極低温環境において、シリコンフォノニック結晶ナノ構造を用いたフォノンの波動性に基づく熱伝導を実現し、その物理を体系的に明らかにすることを目的とする。フォノンの波動性に基づいた熱伝導の制御はアイデアとして長く存在していたが、有限温度によるインコヒーレント散乱によってフォノンの位相は容易に破壊され、実現が困難であった。そこで、本研究では希釈冷凍機を用いてフォノンの位相の保持に理想的な100 mK程度の極低温における熱伝導測定系を構築し、周期100 nm程度の周期微細構造におけるフォノンの干渉効果による熱伝導制御を目指して研究を進めている。本年度は、主に既存の希釈冷凍機を本研究用にカスタマイズすることに注力した。ルテニウム温度センサー、測定用電気配線、RFノイズフィルターなどを作製し、自動測定プログラムの構築、50 mKへの冷却試運転を終えた。また、試料加熱用ヒーターと温度センサーになる半導体-絶縁体-金属-絶縁体-半導体ジョセフソン接合の作製を開始した。それと並行し、バリスティックフォノン伝導環境におけるフォノン輸送エンジニアリングをシミュレートするプログラムを構築した。これにより、拡散熱伝導領域では実現しないフォノンフォーカシングなどの指向性をもった熱輸送が、電子線描画装置を用いて作製できる寸法で実現可能なことを見出した。来年度は、本年度の研究を進める過程で新たに見出した物理も、予定していた計画に加えて遂行する。希釈冷凍機の立ち上げ作業は順調に進んでおり、試料の作製も開始しているが、今のところ問題は見つかっていない。したがって、実験系の立ち上げは予定通りである。また、当初計画になかったシミュレーションの構築も加えて行っており、新しい物理を見出したことから、計画を上回る進展をみせていると評価できる。実験系においては、熱伝導の量子化を確認できるナノメカニカル振動子を作製し、SINISジョセフソン接合ヒーターおよび温度センサーが機能するかを確認する。次に弾性理論に基づいたシミュレーションにより、熱コンダクタンスの制御が明確になるフォノニック結晶ナノ構造を設計し、電子線描画装置およびドライエッチング装置などを用いて作製する。熱散逸過程が、フォノニック結晶ナノ構造の構造パラメータによってどのように変化するかを測定し、シミュレーション結果と比較する。また、シミュレーションによって得られている新奇物理の実証実験も行う。
近世品川宿村の分節的な社会＝空間構造に関する基礎的研究

本研究は江戸南端に隣接し、一部江戸町方に包摂される「品川宿村」を対象とし、江戸近郊における地帯構造の解明をめざした。主たる成果は下記のようである。1品川宿村の社会=空間について、とくに北品川の構造を解明した。そこでは宿駅としての北品川宿13丁目、歩行新宿13丁目のほか、数個の寺社門前町群を見いだした。2当該地帯のヘゲモニー主体として、a地方百姓の共同組織としての村、b食売旅籠屋の共同組織からなる有機的結合の存在を解明した。3歩行新宿における疑似遊廓的な様相とその特質を検討した。4南北品川宿や隣接部における都市下層社会の分厚い存在に注目し、悪党・無宿・ぶらんさんなどの特徴について解明した。本研究は、近世の品川宿村における社会=空間構造の全体像把握を試みるための第一段階としての基礎研究である。当該年度では、まず前提として、基本となる史料群の再把握を実施した。その中での主たる成果は1『品川町史』全三巻(1932年刊)収録史料の詳細目録のデータ入力に着手した(依頼により実施中)、2南品川宿名主利田家文書の階層構造分析を開始した、3東海寺文書、稲荷門前文書、南品川妙国寺裏門前文書などの寺社文書に関する所在状況と内容の概況を確認した、などである。また、研究成果としては、1当該テーマに関する二つの論考、「幕末期、江戸の周縁と民衆世界」(『歴史評論758)、「品川歩行新宿と食売旅籠屋」(『シリーズ遊郭社会』上巻、吉川弘文館)を公表した、2上海大学で開催された国際シンポジウム「都市社会史の方法と実践ー中国と日本の比較をとうして」(2014年1月、主催:上海大学文学院歴史系)で「伝統都市・江戸の分節的把握」と題する基調講演を行い、品川宿村に関する研究成果の一部を報告した、3品川区で開かれた「人権啓発・社会同和教育講座で「人々の暮らしと社会ー近世品川と民衆世界」(2013年10月7日、品川区中小業センター)というテーマで、当該年度の研究成果を基に講演を行った、などがある。またこれらの研究により、1江戸西部近郊の町村社会、2南信州山里と小城下町における都市・農村を包括する地域社会構造、との比較類型把握について、それぞれの史料所在状況や、論点の摘出と明確化に取り組み始めることができた。本研究は、近世の品川宿村における社会=空間構造を全体的に把握し、これを叙述するための基礎作業として位置づけられる。前年度における基本的な史料群の所在状況の把握を前提として、今年度は以下の作業を実施した。1『品川町史』全三巻収録の史料に関する詳細目録の作成とデータ入力について、ほぼ8割を完成させた、2南品川宿名主利田家文書の階層構造分析を推進し、当該文書に包摂される二日五日市村などの関連史料群の位置づけについて検討した、3妙国寺関係の史料群をはじめとする寺社関係文書について、史料収集と分析を推進した、4地帯構造分析という視点から、南信州の山里である清内路との比較類型把握を実施した、5フランス・リール第二大学で開催されたコロークにおいて、当該テーマに関する研究報告を行った、6これまでの成果を岩波新書『都市ー江戸に生きる』の叙述に反映すべく原稿執筆に努めた。本研究は、江戸南端に隣接し、一部が江戸町方に包摂される「品川宿村(しゅくむら)」を対象とし、江戸近郊における地帯構造の解明をめざして取り組んだものである。そこでは、次のような成果をあげた。1品川宿村の社会=空間について、まず地帯としての「北品川」に注目した。そこでは、宿駅である北品川宿13丁目・歩行新宿13丁目、及び数個の寺社小門前町群の複合的な併存がみられ、それぞれにおける社会構造の分節的な特質を具体的に明らかにした。2また当該地帯の社会を統合するヘゲモニー主体として、a地方百姓の共同組織である村、b食売旅籠屋の共同組織、の二つから構成さえる特異な有り様を見いだした。3特に、北品川歩行新宿における食売旅籠屋や茶屋仲間を中心に、「疑似遊廓」の存在形態とその特質を解析した。4南北品川宿における都市下層社会の分厚さを論じ、なかでも当該社会に定在する「悪党」や無宿、また「ぶらんさん」(無為徒食の者)と呼ばれる社会層に注目し、併せてそうした民衆存在のライフヒストリーの叙述を試みた(吉田伸之『都市ー江戸に生きる』岩波新書、2015年)。今後の課題としては、i南品川宿村の構造分析、ii品川猟師町の社会=空間構造の解明、などが残された。

研究実績の概要で述べたように、研究は引き続き順調に進展し、第二年度として一定の成果を得た。しかし、当該テーマとの関わりで比較類型把握の視点から、その対象について、山里地帯に限定される点が課題として自覚された。日本近世史最終年度である2015年度においては、1南品川宿村関係の個別研究を推進し、モノグラフをまとめる、2これと北品川宿村との比較を試み、論点の一般化を試みる、などを介して本研究のまとめとし、次のステージにむけての課題を摘出したい。研究実績の概要に記したように、第一年度としてはほぼ順調な成果を得た。しかし、1史料調査関係の機材整備に手間取る、2データ入力などの補助員確保がスムーズに進展しない、3本研究課題の主要な調査研究対象である品川宿村以外への研究展開がまだ端緒的な段階にある、などの問題点を残した。20142015年度においては、申請書類に記した研究計画に準拠し、着実に調査研究を推進し、成果を積み重ねる。また、特に江戸西部近郊の町村区域における社会=空間構造や、これらと対蹠的な位置にある山里における町村地域社会との比較類型把握を同時に推進し、本研究の意義をさらに高度化する取り組みを試みたい。1史料目録のデータ入力に関する人員確保に手間取り、謝金支出が滞った。2史料調査機材の一部が未購入である。次年度において、前年度計画に基づき、上記12について速やかに執行する。
ＩｇＧ型Ｂ細胞受容体のユビキチン化によるＢ細胞活性化・分化制御機構の解明

主に膜型IgG (mIgG)を発現する記憶B細胞は、抗原の再感作時に迅速に活性化して抗体を産生する形質細胞へと分化し、生体内の抗原を排除するという重要な役割を持つ。記憶B細胞への分化や素早い反応についての詳しいメカニズムは未だ不明であるが、先行研究から、それにはmIgGの特性が関与している可能性が示唆されている。これまで、私たちはmIgG1がユビキチン化されることを見出した。そこで本研究では、IgG陽性B細胞の活性化・分化制御機構におけるmIgG1のユビキチン化の役割を明らかにすることを目的とし、野生型mIgG1 (mIgG1-WT)とユビキチン化しない変異体(mIgG1-2KR)を比較解析し、研究を進めた。平成30年度の成果として以下の結果が得られた。1)ユビキチン化には、ユビキチン分子が基質に1つだけ会合するものユビキチン化、ユビキチン同士が連結するポリユビキチン化が存在する。ポリユビキチン化はさらにユビキチンに存在する7個のリジン残基の結合パターンで細分化される。mIgG1のユビキチン化修飾様式を調べるために、野生型mIgG1 (mIgG1-WT)を発現するBAL17にHAでタグ付けされた種々のユビキチン変異体を導入し、抗原刺激後のユビキチン化をウェスタンブロット法で調べた。その結果、mIgG1はユビキチンの33番目のリジンを介したポリユビキチン鎖修飾を受けていた。2)これまで、抗原刺激によるmIgG1のユビキチン化は、BCRの初期エンドソームから後期エンドソームへの輸送を促進していること、一度取り込まれたBCRの膜表面へのリサイクルを抑制する働きを持つことを明らかにした。リサイクル阻害剤を用いた結果から、mIgG1のユビキチン化はリサイクルを抑制することでMAPキナーゼのp38の活性化を促進することがわかった。今年度は、mIgG1のユビキチン化がリサイクル経路への移行抑制による、MAPキナーゼp38の活性化制御機構、ユビキチン化修飾様式・付加機構の解明に取り組んだ。しかし、平成30年度目標の変異体IgG1ノックインマウスの作製を進めきれず、個体の免疫応答におけるIgG1のユビキチン化の意義を明らかにする目的は果たせていない。新たな方法論やアイデアを積極的に取り入れ、それに変わる新しい実験系を確立する必要がある。また最終年度でもあり、論文執筆のためには効率的に結果を出す必要がある。今年度は、B1-8ノックインAIDノックアウトマウス由来のB細胞にIgG1-WTあるいはIgG1-2K/Rを発現させ、野生型マウスに移入する。その後、免疫し、継時的にドナー由来の抗体価(IgMa)を測定し、抗体産生におけるユビキチン化の役割を明らかにする。さらに、ユビキチン化によって制御されているp38の活性化がB細胞にどのように影響を与えるのか調べるために、p38阻害剤存在化でIgG1-WTあるいはIgG1-2KRを発言した初代培養細胞を刺激し、フローサイトメトリーを用いてその表現系を調べる。さらに、in vivoにおいて、p38の活性化がB細胞にどのような役割を果たすのかはあまり知られておらず、野生型マウスを免疫後、p38阻害剤を投与し、種々の免疫応答を解析することで、mIgG1のユビキチン化が制御するp38の活性化の生理的意義を明らかにする。平成29年度の成果として以下の結果が得られた。2)抗原を認識して架橋された抗原受容体(BCR)は細胞内のエンドソームを介してリソソームへと取り込まれ、そこで抗原が分解される。分解された抗原はMHCII上にペプチドとして結合し、T細胞へと提示される。そこで、抗原架橋時のmIgG1の細胞内輸送と抗原提示におけるmIgG1のユビキチン化の役割を調べた。その結果、mIgG1のユビキチン化は早期エンドソームから後期エンドソームへの細胞内輸送を促進しているが、抗原提示には影響していないことが明らかとなった。マウス個体の免疫応答におけるmIgG1のユビキチン化の意義は未だ明らかでなく、ユビキチン化部位を置換したノックインマウスの完成を待っている状況である。また、ユビキチン化酵素の同定も成功しておらず、今後の課題である。

記憶B細胞への分化や素早い反応についての詳しいメカニズムは未だ不明であるが、先行研究から、それにはmIgGの特性が関与している可能性が示唆されている。これまで、私たちはmIgG1がユビキチン化されることを見出した。そこで本研究では、IgG陽性B細胞の活性化・分化制御機構におけるmIgG1のユビキチン化の役割を明らかにすることを目的とし、野生型mIgG1 (mIgG1-WT)とユビキチン化しない変異体(mIgG1-2KR)を比較解析し、研究を進めた。平成30年度の成果として以下の結果が得られた。1)ユビキチン化には、ユビキチン分子が基質に1つだけ会合するものユビキチン化、ユビキチン同士が連結するポリユビキチン化が存在する。ポリユビキチン化はさらにユビキチンに存在する7個のリジン残基の結合パターンで細分化される。mIgG1のユビキチン化修飾様式を調べるために、野生型mIgG1 (mIgG1-WT)を発現するBAL17にHAでタグ付けされた種々のユビキチン変異体を導入し、抗原刺激後のユビキチン化をウェスタンブロット法で調べた。その結果、mIgG1はユビキチンの33番目のリジンを介したポリユビキチン鎖修飾を受けていた。2)これまで、抗原刺激によるmIgG1のユビキチン化は、BCRの初期エンドソームから後期エンドソームへの輸送を促進していること、一度取り込まれたBCRの膜表面へのリサイクルを抑制する働きを持つことを明らかにした。リサイクル阻害剤を用いた結果から、mIgG1のユビキチン化はリサイクルを抑制することでMAPキナーゼのp38の活性化を促進することがわかった。今年度は、mIgG1のユビキチン化がリサイクル経路への移行抑制による、MAPキナーゼp38の活性化制御機構、ユビキチン化修飾様式・付加機構の解明に取り組んだ。しかし、平成30年度目標の変異体IgG1ノックインマウスの作製を進めきれず、個体の免疫応答におけるIgG1のユビキチン化の意義を明らかにする目的は果たせていない。新たな方法論やアイデアを積極的に取り入れ、それに変わる新しい実験系を確立する必要がある。また最終年度でもあり、論文執筆のためには効率的に結果を出す必要がある。ノックインマウスの完成に先立ち、mIgG1-WTあるいはmIgG1-2KRを発現させた初代培養細胞を野生型マウスに移入、免疫をすることで胚中心形成と記憶B細胞分化におけるmIgG1のユビキチン化の役割を調べる。また、ユビキチン化酵素同定の為に、mIgMとmIgG1を比較することで、mIgG1特異的に会合するタンパクを得るとともに質量解析等でリガーゼの同定を進める。今年度は、B1-8ノックインAIDノックアウトマウス由来のB細胞にIgG1-WTあるいはIgG1-2K/Rを発現させ、野生型マウスに移入する。その後、免疫し、継時的にドナー由来の抗体価(IgMa)を測定し、抗体産生におけるユビキチン化の役割を明らかにする。さらに、ユビキチン化によって制御されているp38の活性化がB細胞にどのように影響を与えるのか調べるために、p38阻害剤存在化でIgG1-WTあるいはIgG1-2KRを発言した初代培養細胞を刺激し、フローサイトメトリーを用いてその表現系を調べる。さらに、in vivoにおいて、p38の活性化がB細胞にどのような役割を果たすのかはあまり知られておらず、野生型マウスを免疫後、p38阻害剤を投与し、種々の免疫応答を解析することで、mIgG1のユビキチン化が制御するp38の活性化の生理的意義を明らかにする。