hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
モーションステレオと分布センサによる柔軟索状ロボットの形状と運動の推定と制御

能動スコープカメラの内界センサを用いた運動と形状の推定の研究を行った.カメラ映像と運動センサのみによる方法では,室内等では6自由度運動推定が可能だが,瓦礫内では照明の移動などによって推定が困難となることがわかった.ANCFによる柔軟ケーブル力学モデルにアンセンティッドカルマンフィルタを用いることによって,センサ密度が低い場合や外乱ノイズが大きい場合の形状推定精度を向上させることができた.能動スコープカメラの内界センサを用いた運動と形状の推定の研究を行った.カメラ映像と運動センサのみによる方法では,室内等では6自由度運動推定が可能だが,瓦礫内では照明の移動などによって推定が困難となることがわかった.ANCFによる柔軟ケーブル力学モデルにアンセンティッドカルマンフィルタを用いることによって,センサ密度が低い場合や外乱ノイズが大きい場合の形状推定精度を向上させることができた.能動スコープカメラは,柔軟ケーブルを繊毛振動で分布的に駆動する柔軟機構である.本研究は,柔軟索状体の全体形状や運動等を計測・状態推定することにより,瓦礫内での運動制御能力を向上させることを目的とする.具体的には,先端広角カメラの映像によるモーションステレオ,ケーブルに組み込む超小型慣性センサ等からの運動計測データをもとに,能動スコープカメラの力学モデルを用いて,分布的運動,形状,トラクションなど,柔軟ケーブル全体の状態を推定する.それに基づき,分布振動駆動と根元の運動を併用して,(半)自律的な運動制御を実現する.研究計画に従って,本年度は,次の成果を挙げた.1.ケーブル先端の運動計測法の研究開発先端のカメラから得られる映像に対してKLTとSIFTの2つの特徴を用い,6点法とRANSACによって6自由度の運動推定を行った.その結果,外部照明条件が十分な環境では良好な運動推定を可能とした.一方で,瓦礫内では遠点近点において照明条件の問題で特徴点抽出がうまくいかない,照明の移動に伴う影響が甚大である,という問題が残った.2.センサユニットの開発先端に組み込んで3軸加速度が計測できる小型センサユニットを開発し,ベースに設置したコントローラに加速度データを送るシステムを実現した.3.ケーブル全体の運動制御ケーブルの直線部に着目し,ルールベースによる制御則を適用することで,ケーブル全体を運動制御できることを示した.能動スコープカメラは,柔軟ケーブルを繊毛振動で分布的に駆動する柔軟機構である.本研究は,柔軟索状体の全体形状や運動等を計測・状態推定することにより,瓦礫内での運動制御能力を向上させることを目的とする.具体的には,先端広角カメラの映像によるモーションステレオ,ケーブルに組み込む超小型慣性センサ等からの運動計測データをもとに,能動スコープカメラの力学モデルを用いて,分布的運動,形状,トラクションなど,柔軟ケーブル全体の状態を推定する.それに基づき,分布振動駆動と根元の運動を併用して,(半)自律的な運動制御を実現する.研究計画に従って,本年度は,次の成果を挙げた.1.ケーブル先端の運動計測法の研究開発と瓦礫内SLAM研究室内の映像と運動センサデータからは6自由度の運動推定をある程度の精度で行うことができ,マップを作成できることが確認できた.一方で,瓦礫内では特徴点抽出が困難であることが主たる原因となって,運動推定自体が困難であった.そのため,ケーブルとアクチュエータの運動モデルを利用した新たなSLAMの定式化が必要であると考えている.2.ケーブル全体の運動制御新たな運動制御の方式として,摩擦異方性を利用したインチウォーム機構を考案した.これによりこれまで運動が困難だった環境条件を補完し,ケーブルの運動性能を飛躍的に向上できることがわかった.これによって制御の自由度が増えるため,それを活用した新たな運動制御方式の検討が必要である.3.実証試験床面の材質などを変更した様々な実験室条件での試験を行うとともに,レスキュー部隊の訓練所などを活用して瓦礫等への適用試験を行った.能動スコープカメラは,柔軟ケーブルを繊毛振動で分布的に駆動する柔軟機構である.本研究は,柔軟索状体の全体形状や運動等を計測・状態推定することにより,瓦礫内での運動制御能力を向上させることを目的とする.具体的には,先端広角カメラの映像によるモーションステレオ,ケーブルに組み込む超小型慣性センサ等からの運動計測データをもとに,能動スコープカメラの力学モデルを用いて,分布的運動,形状,トラクションなど,柔軟ケーブル全体の状態を推定する.それに基づき,分布振動駆動と根元の運動を併用して,(半)自律的な運動制御を実現する.研究計画に従って,本年度は,次の成果を挙げた.SLAMのモデルとして,Absolute Nodal Coordinate Formulationによる柔軟ケーブルの力学モデルを構築した.これに対して,ケーブル中間に設けられた分布姿勢センサと,先端のカメラから得られる画像列を用いることによって,Unscented Kalman Filterによって,環境中の地図を得ながら高精度に先端カメラ位置を推定すること,柔軟ケーブルの形状推定を行うことを可能にした.瓦礫環境下では,画像の特徴点が得られない,照明条件がケーブルの移動に伴って変化する,という問題があり,モーションステレオの適用が困難であったが,分布力学モデルによって,センサ密度が低い場合や外乱ノイズが大きい場合でも精度良く形状推定を行うことができる.種々の条件の平面上を運動する能動スコープカメラについて,ケーブルの一端に任意運動を与えて制御しながら,形状推定の精度評価を行った.その結果,本手法によって精度が向上すること,少数のセンサでも精度良く推定できること,ケーブル全体の運動制御が可能であること,この手法ではセンサオフセットの悪影響があること,を実験的に明らかにした.
超音波Virtual Endoscopeに関する研究

本研究では、数10MHzの送受波が可能な超音波振動子の設計作成を行い,振動子で獲得する超音波エコーデータの収集システムを確立するとともに,高分解能のB-mode像を再構成して人体内部を可視化することを目的とした.平成13年度は,画像再構成のアルゴリズムの開発を行う.1.3次元画像再構成まず,獲得した超音波信号に,フィルタリング等の信号処理を施した後,検波を行って超音波B-mode像を再構成した.超音波イメージングでは身体内や臓器内が可視化できるので,表面のみを描画するポリゴンレンダリングではなく立体的な描画であるボリュームレンダリングでモデリングを用いてモデリングを行った.また,立体表示の際,単に距離画像に変換するだけではなく,超音波画像上の輝度値は,組織の硬さ等の情報を含んでいるため,これらの情報も残したまま,3次元表示を行った.仮想的に毛細血管に超音波振動子を挿入して獲得したような,内視鏡的な表示を行った.具体的には,●血管内走行●血管部位の同定●視点変更等を行った.拡大表示に伴い,オーバサンプリングが生じるが,動的に画像補間を用いて拡大した.本研究では,数10MHzの送受波が可能な超音波振動子の設計,作成を行い,振動子で獲得する超音波エコーデータの収集システムを確立するとともに,高分解能のB-mode像を再構成して人体内部を可視化することを目的とした.平成12年度では,下記の事項を行った.□超音波振動子の作成数10μm程度の分解能で可視化するために,送波周波数が数10MHzである超音波振動子を設計,作成した.□データ収集まず,高周波超音波振動子を2次元的に走査するメカニズムの開発を行った.具体的には振動子を機械的に走査するための治具を開発し,計算機により制御可能とした.次に,振動子で獲得したアナログ信号である反射波をディジタル化し,計算機に取り込んだ.□3次元画像再構成まず,獲得した超音波信号に,フィルタリング等の信号処理を施した後,検波を行って超音波B-mode像を再構成した.超音波イメージングでは身体内や臓器内が可視化できるので,表面のみを描画するポリゴンレンダリングではなく立体的な描画であるボリュームレンダリングでモデリングを用いてモデリングを行った.本研究では、数10MHzの送受波が可能な超音波振動子の設計作成を行い,振動子で獲得する超音波エコーデータの収集システムを確立するとともに,高分解能のB-mode像を再構成して人体内部を可視化することを目的とした.平成13年度は,画像再構成のアルゴリズムの開発を行う.1.3次元画像再構成まず,獲得した超音波信号に,フィルタリング等の信号処理を施した後,検波を行って超音波B-mode像を再構成した.超音波イメージングでは身体内や臓器内が可視化できるので,表面のみを描画するポリゴンレンダリングではなく立体的な描画であるボリュームレンダリングでモデリングを用いてモデリングを行った.また,立体表示の際,単に距離画像に変換するだけではなく,超音波画像上の輝度値は,組織の硬さ等の情報を含んでいるため,これらの情報も残したまま,3次元表示を行った.仮想的に毛細血管に超音波振動子を挿入して獲得したような,内視鏡的な表示を行った.具体的には,●血管内走行●血管部位の同定●視点変更等を行った.拡大表示に伴い,オーバサンプリングが生じるが,動的に画像補間を用いて拡大した.
新規脳浮腫治療の創薬標的分子としてのアストロサイトのエンドセリン受容体

本研究では、脳病態時におけるエンドセリンの役割について、脳浮腫関与因子の一つであるアクアポリン(AQP)の発現および機能変化について着目して研究を進めており、平成22年度では以下の知見が得られた。1.すでにエンドセリンによる浮腫抑制にはAQP4の発現量低下が関与する可能性を示したが、今回、AQP9とAQP1の関与について阻害剤を用いて調べた。低張液による水の流入は、AQP1とAQP9の阻害剤である水銀によって抑制されたが、その阻害効果は、エンドセリン処置したアストロサイトにおいても同程度認められた。よって、エンドセリンのアストロサイトにおける浮腫抑制作用にAQP9とAQP1が関与しないことを示唆した。また、エンドセリン受容体ETBのアゴニストによっても浮腫抑制作用が認められたことからETB受容体の関与を示した。2.また、細胞膜表面の蛋白をビオチン化し、精製することで細胞膜に発現するAQP4の量を検出することに成功した。この方法により、エンドセリンの処置により細胞質ではなく細胞膜上のAQP4蛋白が減少することを明らかにした。以上の結果を論文発表した。さらにエンドセリンのグリア細胞に対する作用を追求していく中で以下の知見が得られた。3.ラット大脳皮質におけるMatrix Metalloproteinase-2および-9の発現がETB受容体のアゴニストにより増加することを明らかにした。また、この作用は、ETB受容体拮抗薬により抑制されることを示した。本研究では、脳病態時におけるエンドセリンの役割について、脳浮腫関与因子の一つであるアクアポリン(AQP)の発現および機能変化について着目して研究を進めており、平成21年度では以下の知見が得られた。1.エンドセリンおよびETB受容体アゴニストを処置したアストロサイトにおいて、低張液による浮腫の程度が減少していた。さらに、水銀存在下においてもエンドセリンの作用が認められた。我々はすでにエンドセリンにより培養アストロサイトのAQP4とAQP9のmRNA、タンパク量が減少することを明らかにしており、これらのことからエンドセリンによる浮腫抑制にはAQP4の発現量低下が関与する可能性を示した。2.エンドセリンによる培養アストロサイトのAQP4とAQP9のmRNA、タンパク量の減少は、ETA受容体アンタゴニストによって影響を受けなかったが、ETB受容体アンタゴニストの前処置によってその作用が消失した。また、ETB受容体の選択的アゴニストによって培養アストロサイトのAQP4とAQP9のmRNA、タンパク量の減少が認められた。以上の結果を日本神経科学会で発表した。3. ETB受容体アゴニストのラット脳室内への持続注入は、大脳皮質のAQP4mRNAと蛋白量を減少させた。免疫組織化学的解析により脳内のAQP4産生細胞はアストロサイトであることを明らかにした。さらにエンドセリンの作用を追求していく中で以下の知見が得られた。4.培養アストロサイトおよびラット大脳皮質におけるVEGF発現がエンドセリンにより増加することを明らかにした。以上の結果を日本薬理学会で発表した。
食道扁平上皮癌の増幅遺伝子SOX2のmiRNA発現制御を介した発癌促進機構の解明

SOX2は食道扁平上皮癌において、高頻度に遺伝子増幅によって発現亢進し、癌の発育進展に寄与している。これまでに、SOX2はAKT-mTOR経路を亢進させ、in vitro/in vivoにおいて腫瘍増殖を促進していることを明らかにしてきた。本研究において、SOX2はmiR-19a-3pの発現を間接的に制御し、AKTを負に制御するPTENを抑制することでAKTーmTOR経路を亢進させることを明らかにした。さらにAKT-mTORの阻害剤はSOX2増幅癌細胞の増殖を著明に抑制し、SOX2増幅癌細胞に対する治療の有効性が示唆された。SOX2の遺伝子増幅を認める食道扁平上皮癌細胞KYSE140、KYSE70に対してSOX2をノックダウンしたクローンをshRNAを用いて作成した。それらの細胞において、コントロールの細胞と比較し、SOX2の発現低下に伴って発現が低下しているmiRNAを探索する目的でPCR arrayを行った。その結果、miR-17 clusterを含め、複数のmiRNAの発現低下を認めた。miR-17cluster(miR-17, miR-18, miR-19a, miR-19b-1, miR-20, miR-92)について、定量PCRを行い、arrayの結果を検証した。PTENをターゲットにしているmiRNAとしてmiR-17 clusterのうち、miR-17, miR-19a, miR-19b-1が報告されていることからこれらのmimicおよびinhibitorを用いてin vitroでPTENの抑制効果を調べた。miR-17については、SOX2を抑制した細胞株に対してmimicを導入してもPTENの抑制は確認できなかった。一方、miR-19a, miR-19b-1はともにこれらの細胞にmimicを導入するとPTENは抑制された。逆にSOX2を抑制していないコントロールの細胞に対してinhibitorを導入すると、miR-19a, miR-19b-1とも程度の差はあるもののPTENの増加を認めた。以上の結果から、SOX2の遺伝子増幅に伴い、miR-17 clusterは増加し、その結果PTENが抑制されていると考えられた。2つの細胞株において、SOX2の抑制に伴い発現が低下している共通のmiRNAをPCR arrayを用いて拾い上げることがある程度可能であった。安定してSOX2の発現をノックダウンしたクローンを用いることで一過性のノックダウンの実験を省くことができ、miRNA mimicやinhibitorの導入を簡便に行うことが可能であった。前年度までに得られた結果から、SOX2が食道扁平上皮癌細胞において、miR-19a, miR-19b-1を介してPTENを抑制し、その結果、SOX2の発現亢進(遺伝子増幅に伴う)が、PTENの抑制、AKT経路の亢進につながっていることが示された。そこで次に、SOX2がmiR-19a, miR-19b-1をダイレクトに制御しているかどうかをクロマチン免疫沈降(CHIP)を用いて検証した。miR-19a, miR-19b-1はmiR-17cluster (miR-17, miR-18a, miR-19a, miR-19b-1, miR-20, miR-92a)に含まれ、そのプロモーター領域についてはすでに詳細に検討されており、これらのmiRNAは共通の転写制御を受けることが報告されている。そこで、まずこのプロモーター領域の配列をデータベースを用いて検索し、SOX2 binding motifが存在することを確認した。SOX2が遺伝子増幅している高発現の細胞を用いて、SOX2でCHIPを行い、miR-17 clusterのプロモーター領域内に6つの領域を設定したprimerを用いて、PCR法を行った。仮説とは異なり、SOX2のCHIP産物において、コントロールと比較して、この領域の増幅は得られず、SOX2が直接miR-17 clusterの転写制御をしていることは否定的であった。以上の結果から、SOX2はmiR-19a, miR-19b-1を直接は制御しておらず、間接的に制御していることが考えられた。また、臨床検体において、SOX2の発現と臨床情報の関連を免疫組織学染色で行ったところ、これまでの報告通り、SOX2は多くの食道扁平上皮癌で発現亢進しているが、予後や臨床病理学的背景との関連は現時点では認めなかった。当初、想定していた仮説通りの結果が得られなかったため。SOX2がmiR-19a, miR-19b-1を直接制御していることを想定して、実験計画を立て、条件検討、細胞腫の変更を含め、繰り返し検証したが、否定的な結果となった。食道扁平上皮癌において高頻度に遺伝子増幅により活性化しているSOX2が、癌促進的に働くメカニズムについて検討を行った。これまでに食道扁平上皮癌臨床検体において、SOX2の発現亢進とリン酸化AKTの発現は正の相関を認めることを明らかにした。本研究においては、SOX2がAKT-mTOR経路を亢進させる機序を明らかにすることを目的とした。まず、SOX2はPTENの発現抑制を介してAKT経路を亢進させることを見出した。miRNAの生成をDICERのノックダウンで行うと、SOX2の発現は変化しないもののPTENの発現が上昇したことからSOX2増幅食道癌細胞においてはSOX2はmiRNAの発現を介してPTENを抑制していることが考えられた。

そこでSOX2をノックダウンした時に変動するmiRNAを網羅的に解析した結果、miR-17-92クラスターが抑制されることを見出した。miR-17-92クラスターのうち、miR-19a-3pがダイレクトにPTENを制御していることを確認した。SOX2をノックダウンした後、miR-19a-3pを導入すると、PTENの抑制、AKT-mTOR経路の亢進、それにともなう増殖が回復し、逆にmiR-19a-3p inhibitorはSOX2高発現細胞においてPTENを増加させ、増殖を抑制した。次に、SOX2がmiR-17-92クラスターを直接制御しているかどうかをクロマチン免疫沈降法(CHIP-qPCR)を用いて検証した。miR-17-92クラスターのプロモーター領域内にはSOX2 bindingmotifが複数存在するが、CHIP-qPCRにおいて、いずれの領域においてもSOX2の結合は認めることはできなかった。以上の結果からSOX2は間接的にmiR-17-92 clusterの発現を上げ、AKT-mTOR経路を通じて増殖を促進していることが明らかとなった。SOX2は食道扁平上皮癌において、高頻度に遺伝子増幅によって発現亢進し、癌の発育進展に寄与している。これまでに、SOX2はAKT-mTOR経路を亢進させ、in vitro/in vivoにおいて腫瘍増殖を促進していることを明らかにしてきた。本研究において、SOX2はmiR-19a-3pの発現を間接的に制御し、AKTを負に制御するPTENを抑制することでAKTーmTOR経路を亢進させることを明らかにした。さらにAKT-mTORの阻害剤はSOX2増幅癌細胞の増殖を著明に抑制し、SOX2増幅癌細胞に対する治療の有効性が示唆された。miR-17 clusterの発現制御をSOX2がダイレクトに行っているかどうかを検証する。まずは、クロマチン免疫沈降を行い、miR-17clusterのプロモーター領域にSOX2が結合しているかどうかを検証する。また、PCR arrayで発現が低下していた他のmiRNAについても発現の確認(定量PCR)、mimic、inhibitorを用いたin vitroの解析を行う。SOX2がmiR-19a, miR-19b-1を直接制御していることを想定して、検証実験を行ったが、否定的な結果となった。今後はSOX2がどのような機序でmiR-19a, miR-19b-1の制御を行っているかどうかを検討するため、miR-19a, miR-19b-1の発現を制御するメカニズムを検討する一方、SOX2が制御する可能性のある他のmiRNAについてもこれまでの結果を踏まえて検証する予定である。消化器内科学余った金額で購入できる必要な試薬がなかったため。余った金額で購入できる適切な試薬、物品がなかったため。翌年度分として請求した助成金と合わせて使用する。用途としては培養試薬や抗体、miRNA mimicなどの物品費に充てる。翌年度請求額と合わせて、使用する。用途としては、培養試薬、抗体、核酸など消耗品を充てる。
修復材料の溶出成分が小児歯周組織の免疫反応に与える影響の解析

目的:材料から長期にわたって溶出する微量成分が細胞内の代謝系に及ぼす影響について検討した。材料と方法:ヒト単球系細胞THP-1を培養した。低濃度のHEMA(0-1.2mM)、TEGDMA(0-0.75mM)、Hg^<2+>(0-20μM)、Ni^<2+>(0-400μM)を細胞培養液に添加して2週間培養した後に細胞を回収した。さらに、同一成分を高濃度で24時間細胞に刺激した。これらについて細胞総蛋白量、細胞内ミトコンドリア活性(SDHact)ならびにTNF-α分泌能を検索した。結果と考察:細胞蛋白量とSDHactは、低濃度のHEMAで細胞を刺激して高濃度のHEMAに曝露すると、SDHactは低下した。しかし、蛋白量は有意に増加した。これは細胞分裂が阻害されて、細胞内に何らかの蛋白が貯留されたことを示唆している。TEGDMAおよびHg^<2+>では有意な変化は認められなかった。Ni^<2+>では蛋白量に変化は認められず、低濃度で長期に刺激した細胞を高濃度のNi^<2+>に曝露してもSDHactへの影響は少なかった。Ni^<2+>が毒性を発現するには高濃度の量が必要であった。TNF-α分泌では、材料成分を単独で細胞に刺激しても分泌は促進されなかった。しかし、大腸菌由来LPS存在下ではTNF-α分泌は影響を受けた。低濃度のHEMAあるいはTEGDMAで刺激した細胞では、その濃度に依存してTNF-α分泌が40-70%低下した。しかし、Hg^<2+>では約2倍に増加した。Ni^<2+>では有意な差は認められなかった。以上の結果から、毒性を示さない濃度の材料を長期間にわたって細胞に作用すると、細胞内の代謝に何らかの影響を及ぼした。また、ヒト単球系細胞THP-1は短時間に高濃度の材料の溶出成分に曝露すると異なった反応を示すことが示唆された。目的:歯科材料から溶出する成分の生体に対する安全性の研究は数多く行われている。金属成分では、アマルガム中の水銀、鋳造修復物中のニッケル、またコンポジットレジンでは2-hydroxyethylmethacrylate(HEMA)やtriethyleneglycoldimethacrylate(TEGDMA)に関して報告されている。本研究では、これらの成分について、低濃度で顕著に細胞毒性を示さない量を2週間にわたり培養細胞に刺激を与えた場合に、細胞が分泌するTNF-αの影響について検討した。材料と方法:ヒト由来単球系培養細胞THP-1を用い、HEMA(0-1.2mM)、TEGDMA(0-0.75mM)、Hg^<2+>(0-2mM)、そしてNi^<2+>(0-20mM)を添加した培地で2週間培養した。材料成分を添加した培地は4日毎に交換して実験を行った。その後、細胞を回収し、さらに24時間大腸菌由来LPS存在下、または非存在下で培養し、TNF-αの分泌能について比較検討した。結果および考察:材料成分のみでTNF-αが誘導されたものはなかったが、LPS存在下では全ての実験群でTNF-αの誘導を認めた。HEMAおよびTEGDMAで刺激を受けた細胞はLPS存在下では、TNF-αの誘導は各成分の濃度に依存し、40-70%低下した。Hg^<2+>で刺激を受けた細胞はLPS存在下では、TNF-α分泌がHg^<2+>濃度に依存して増加した(2mMではコントロールの2倍)。Ni^<2+>によって細胞を刺激した場合は、TNF-αの分泌は影響を受けなかった。以上の結果から、一般的に顕著な毒性を示さない物質であっても、低濃度で長期間にわたり細胞に作用すると、細胞の代謝や免疫反応に影響を及ぼす可能性が示唆された。

しかし、大腸菌由来LPS存在下ではTNF-α分泌は影響を受けた。低濃度のHEMAあるいはTEGDMAで刺激した細胞では、その濃度に依存してTNF-α分泌が40-70%低下した。しかし、Hg^<2+>では約2倍に増加した。Ni^<2+>では有意な差は認められなかった。以上の結果から、毒性を示さない濃度の材料を長期間にわたって細胞に作用すると、細胞内の代謝に何らかの影響を及ぼした。また、ヒト単球系細胞THP-1は短時間に高濃度の材料の溶出成分に曝露すると異なった反応を示すことが示唆された。
非発光ラジカルのイオン付加による新しい計測法

本課題は、まったく新しい着想のもとずく質量分析法を用いた非発光ラジカル等の活性化学種の計測法に関するもので、化学種にLi^+イオンを付加反応させ、Li^+付加complexを作り、質量分析法によって検出する方法により、非発光ラジカルを含む全ての気相中低濃度ラジカルの計測システムの確立を目的とする。4年度は、ノズルとスキマ-計からなる3段の差動排気装置を持つ大気圧四重極質量分析計を骨格とした本格的なシステムの組立を行なった。一次反応イオンLi^+の強度等の基本的特性を求めた後、CH_4のマイクロ波放電により生じる多種多様のhydrocarbonラジカル(主なものとしてC_nH_<2n-1>,C_nH_<2n+1>,nが少なくとも8まで)が本課題の方法により、初めて高感度に検出、確認された。5年度は主にCH_4/O_2の混合ガス系で実験を行なった。一定流量12cc/minのCH_4(80)/O_2(20)の混合ガスを流し、MW放電によって生成した生成物の検出を行なった。CH_4/O_2で生成される化合物のうち、主なものは多くの含酸素炭化水素であり、これを分類するとC_nH_<2n+2>0,C_nH_<2n>0,C_nH_<2n>0_2(nは9にまでなる)最終年度の6年にはCH_4/O_2混合ガス系のマイクロ放電で生成する種々の化合物の中に、長い間存在が議論の的となっている三酸化水素(H_2O_3)を気相において検出、H_2O_3Li^+の形でその存在を本格的に検討確認できた。又、付加生成の難易さの度合いは、Li^+affinityに依存するが、この化学定数を計算(M0法)で簡単に求める方法をフリーラジカルの定量法確立のために検討した。本課題は、まったく新しい着想のもとずく質量分析法を用いた非発光ラジカル等の活性化学種の計測法に関するもので、化学種にLi^+イオンを付加反応させ、Li^+付加complexを作り、質量分析法によって検出する方法により、非発光ラジカルを含む総ての気相中低濃度ラジカルの計測システムの確立を目的とする。本年度は、ノズルとスキマーの系からなる3段の差動排気装置を持つ大気圧四重極質量分析計を骨格とした本格的なシステムの組立を行った。特に今回新しく製作した部分は、マイクロ波キャビティが取り付く石英製のガスフロー管、放電ガスのための複数の流路系、アルカリ金属イオン源(Li^+イオン発生源)、ラジカルにLi^+アルカリイオンを付加させるためのイオン付加反応室、反応によってできた付加イオンを効率よく質量分析するためのinterfaceを組上げた。一次反応イオンLi^+の強度等の基本的特性を求めた後、本法のキャラクタリゼーションを行うために、活性ラジカル種の検出法の検討を行った。材料化学に於ける基盤技術として注目される低温プラズマ、主にCH_4のマイクロ波放電プラズマ中のラジカル種の検出、同定を行った。CH_4のマイクロ波放電による生じる多種多様のhydrocarbonラジカル(主なものとしてC_nH_<2n>-1,C_nH_<2n>+1,nが少なくとも8まで)が本課題の方法により、初めて高感度に検出、確認された。又、CH_4/O_2混合ガス系のマイクロ放電で生成す種々の化合物の中に、長い間存在が議論の的となっている三酸化水素(H_2O_3)を気相において検出、H_2O_3Li^+の形でその存在を確認できた。

本課題は、まったく新しい着想のもとずく質量分析法を用いた非発光ラジカル等の活性化学種の計測法に関するもので、化学種にLi^+イオンを付加反応させ、Li^+付加Complexを作り、質量分析法によって検出する方法により、非発光ラジカルを含む総ての気相中低濃度ラジカルの計測システムの確立を目的とする。本年度は主にCH_4/O_2の混合ガス系で実験を行った。一定流量12cc/minのCH_4(80)/O_2(20)の混合ガスを流し、MW放電によって生成した生成物の検出を行った。これらのピークを同定した後、分類した。主な結果を次に箇条書きにすると、(1)CH_4/O_2で生成される化合物のうち、主なものは多くの含酸素炭化水素であり、これを分類すると(2)この分類に対して、最も可能性のある化合物は、アルコール、アルデヒド、カルボン酸類と考えられる。これらの結果を説明する。MWプラズマ内の反応スキームとして主な初期の反応としてR+O_2→ROO(R:alkyl radical)が考えられる。これらのパーオキシラジカルの生成からROO+ROO→R-CHO+R-OH+O_2等の反応が進行するものと推測した。又、付加生成の難易さの度合いはLi^+affinityに依存するが、この化学定数を計算(MO法)で簡単に求める方法をフリーラジカルの定量法確立のために検討した。本課題は、まったく新しい着想のもとずく質量分析法を用いた非発光ラジカル等の活性化学種の計測法に関するもので、化学種にLi^+イオンを付加反応させ、Li^+付加complexを作り、質量分析法によって検出する方法により、非発光ラジカルを含む全ての気相中低濃度ラジカルの計測システムの確立を目的とする。最終年度の6年にはCH_4/O_2混合ガス系のマイクロ放電で生成する種々の化合物の中に、長い間存在が議論の的となっている三酸化水素(H_2O_3)を気相において検出、H_2O_3Li^+の形でその存在を本格的に検討確認できた。一定流量10cc/minのCH_4/O_2の混合ガスをフローキューブに流し、MW放電によって生成した生成物のLi^+付加イオンスペクトル(m/z5-9,m/z38-42,m/z54-59,m/z83/87)の中にm/z57に明白なピークが検出された。50amuの質量を持つ化合物をCAS-onlineシステムで検索し、これらの中、今回の実験条件を考察すると、可能性のある化合物として、H_2O_3が確認された。予備的実験の結果から得られた主な結果を箇条書きにすると、(1)CH_4/O_2で生成される化合物のうち、H_2O_3はむしろminorな生成物である。(2)O_2の混合比が多くなるとともにH_2O_3の量は増加し、O_2(10%)/CH_4(90%)で最大となる。(3)H_2O_4は観測されないが、H_2O_2は最小検出量レベルで観測される。今後の方向として、H_2O/O_2,H_2O_2/O_2系等での実験が望ましいと考えている。
在中国日本関連遺跡及び記念物の基礎研究-中国における日本イメージの形成をめぐって

本研究は、中国における日本関連の遺跡及び記念物の調査を通して、中国の日本に対する記憶とイメージの形成において、記憶の表象物としての役割を明らかにするものである。具体的には、南京・広東・広西などを調査対象地域にして、文献調査・フィールドワークなどの手法を取り、南京大虐殺記念館・広西桂林の月嶺村などの日本関連の遺跡や記念物の現状及び変遷について包括的に調査を行った。これによって、現在の中国人の日本に対する記憶の特徴を明らかにした。平成22年度は本研究を開始した最初の年にあたる。調査研究計画に基づき、2回の海外実地調査、1回の国内実地調査、5回の学会研究報告・特別講演を行った。第1回海外調査は、8月、中国・南京市において実施した。南京市にある南京大虐殺を記念する「南京大虐殺記念館」では、調査日とした8月15日、すなわち終戦65周年記念の日に、日中の関係者によって記念行事が行われた。同館では、記念館の建設、変遷、展示のあり方及び記念行事などを中心に、中国における戦争記憶と保存・表象のあり方を調査した。また、南京市に現存する従軍慰安婦の遺跡を訪ね、地元住民に対し、日本軍占領期間中の生活状況についてインタビューを実施した。さらに、南京大学高等研究院で開催された「近代中国の記憶の場-南京」国際シンポジウムにおいて、研究報告を行った。第2回海外調査は、9月、中国・広州市、桂林市において実施した。広州市では、日中戦争中に日本軍の空爆を受け、多くの村民が死亡した場所に建てられた記念碑「血涙洒黄華碑」を中心に調査を行った。この記念碑は民間人によって建てられた、現存する数少ない日本に関係する記念物で、現在広州市の指定文化財となっている。だが、記念碑の建設者はすでに死去しており、人々の空爆に関する記憶は薄れてきているのが現状である。この記念碑は、中国の地域社会において日本に関する記念物は年々風化していく状況にあることを知る重要な手掛りとなる。広西省桂林市では、1939年-1944年の広西戦の遺跡、特に当時国民政府によって造られた慰霊碑、戦争跡地の網羅的な調査を行った。国内においては、2011年3月、東京・靖国神社の遊就館の戦争展示施設を訪ね、日本の戦争の記憶及び記録について調査した。これらは中国の戦争の記憶との比較材料となるものである。12月20日、香港大学において、南京大虐殺記念館をめぐる中国の文化政策における日本イメージの形成について、研究報告を行った。平成23年度は本研究を開始した第二の年にあたる。調査研究計画に基づき、3回の海外実地調査、1回の国内実地調査、2回の学会研究報告を行った。これは去年に続き、南京市にある南京大虐殺を記念する「南京大虐殺記念館」にで、第二回の調査である。去年の調査は、記念館の建設、変遷、展示のあり方及び記念行事などを中心に、中国における戦争記憶と保存・表象のあり方を調査した。今年度は一部の事実の再確認、今年の記念行事への参加、南京大学図書館での関連資料調査を中心に行った。第2回海外調査は、10月、中国上海において実施した。中国華東師範大学が主催する国際シンポジウム「都市化と都市研究フォーラム」に参加、「戦争、災害の遭難者における記憶研究について」という研究報告を行ったほか、「上海事件」の記念施設を調査した。二回目の学会報告は、平成23年12月10日15日に広西省桂林市で行われた、広西桂学研究会、広西抗戦文化研究会、桂林市文化局が主催する国際シンポジウム「李宗仁生誕120周年記念シンポジウム」に参加した。「日中戦争における記録と記憶の研究について」という研究報告を行った。その際、地元の日中戦争の研究者と接触し、「広西会戦」をめぐる戦跡と記念物、記念行事の調査のため、資料取集、調査地の選定を行った。第3回海外調査は、平成23年12月2431日に中国広西省灌陽県月嶺村に日中戦に関連する遺跡を調査し、村の戦争体験者及びその子孫へのインタビューをし、日本に関する記憶とイメージ及びその伝承を調査した。月嶺村では、日中戦争中に日本軍が1944年8月-1945年2月にかけて駐在した。今回の調査は、村人は日本軍と「共存」していたこの半年において、日本軍の行動はどのように村人に映っていたのか、口述調査を行った。国内においては、2011年10月27-29日、東京の国会図書館で南京戦に関連する資料を調査した。本年度は研究の最終年度にあたる。調査研究計画に基づき、1回の海外実地調査、1回の国内研究報告、1回の海外研究報告を行った。海外調査は、2013年2月3月、中国・上海、北京、南京市で実施した。

1.上海において、戦争遺跡及記念物の意義を理解するために、日中戦争の体験者の聞き取り調査を行った。この調査は上海の老人療養施設で、70歳以上の老人を中心に行った。その内容は、日中戦争中の体験、よく行く戦争記念館、記念碑、戦争遺跡、行く時間、回数、目的、同行者、そして時代に合わせて、行く場所、時間、回数などの変化の有無、その理由、記念施設へ行くときの心情、どのような祭祀、記念活動をしたかなどである。これは、現在の戦争記念物が中国社会においての役割を理解するには、重要な意義があると思われる。2.北京において、中国人民抗日戦争記念館及国家図書館に日中戦争関連の資料を調査、確認作業を行った。3.南京大学人文社会科学高級研究院に「近代中国の記憶の場ー南京」というワークショップに出席、戦争記憶問題について、特に南京大虐殺をめぐって、日本における研究動向を報告した。2012年5月、神奈川大学歴史民俗資料研究科に、「中国における日本イメージの形成及びその特徴ー月嶺村を例にして」講演を行った。その内容は2012年度に行った広西桂林月嶺村での調査報告であり、戦争中の1944年日本軍がこの村に駐留し、残した遺跡は村人への日本イメージの形成への影響を分析するものである。この報告を通して、戦争を巡って日中間記憶の共有の可能性について日本近現代史の研究者と意見交換ができた。今年度の調査は、中国における日本人イメージの形成にあたって、戦争遺跡の役割を中心に行った。その三年間の記念物の資料調査と一部の聞き取り調査の音声を文字化し、分析することによって、研究計画の完成に向けて、最終作業を行う。研究計画に基づいて調査や資料収集を行うことができたため、おおむね順調に進展しているといえる。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後の研究の推進方策においても、研究計画に基づく調査や資料収集を進める予定である。
自閉症傾向者における物体認知特性の解明

本研究は,行動指標および生理指標の観点から,自閉症スペクトラムのパターン認知処理機構を検討しようとするものである。行動指標から,統制群では視覚処理に対するパターンの複雑さの影響が認められたものの,自閉症傾向群ではその影響が認められず,複雑なパターンも十分に処理できることが分かった。この傾向は,生理指標でも確認された。パターンの複雑さを反映すると考えられている脳波成分(P300)を用い,自閉症傾向群の脳波を検討した。結果から,複雑なパターンであっても,処理負荷が小さいことが明らかとなった。本研究では,以上に加えて,アレキシサイミア(感情障害)やADHDのパターン認知についても検討した。本研究の目的は,パターン認知に関する「1心理物理実験(行動指標)」および「2生理実験(事象関連電位)」を行なうことで,自閉症スペクトラムのパターン認知機構を解明しようとするものである。「1心理物理実験(行動指標)」において,統制群では視覚的短期記憶に対するパターンの複雑さの影響が見られた。一方で,自閉症傾向群ではその影響が認められず,単純なパターンであれ複雑なパターンであれ,記憶成績が高かった。この現象を生理指標の観点から証明するため,「2生理実験(事象関連電位)」を行なった。分析では,パターン認知処理の負荷を示唆すると考えられている「P300」を指標として検討した。結果から,統制群では,複雑なパターンの方が単純なパターンよりもP300の振幅が大きかった。つまり,複雑なパターンに対する処理負荷が高かったと言える。一方で,自閉症傾向者では,パターンの複雑さに関わらず,P300の振幅が小さかった。つまり,複雑なパターンであっても,単純なパターンと同様に処理負荷が小さいと推測できる。以上の行動実験および脳波実験が終了し,論文化を行なった。一方で,実験中および論文の査読中に,自閉症スペクトラムの個人差変数としての信頼性に関する疑問が生じた。そのため,他の個人差変数(特に,アレキシサイミア:感情障害)を導入することで,新たな観点から検討を始めた。アレキシサイミアは多くの精神疾患や発達障害の背景因子と考えられている。そのため,アレキシサイミアのパターン認知処理機構を検討することで,既に本研究で得られている自閉症スペクトラムのパターン認知機構を新たな角度から複合的に検討できるものと期待できる。本研究は,パターン認知に関する「1心理物理実験」および「2生理実験」を行うことで,自閉症スペクトラムのパターン認知処理機構を解明しようとするものである。平成26年度に得られた生理実験(事象関連電位)の結果として,自閉症傾向者ではパターンの複雑さの影響を受けにくいことが明らかとなった。これは,視覚的短期記憶の処理段階(符号化・記憶保持・検索)のうち,記憶処理段階での結果として考察された(Takahashi et al., 2014)。平成27年度は,後期の処理段階である検索段階に着目し,分析を行なった。結果から,記憶保持段階で生じた群間差は,後期の処理段階においても持続する可能性が推測された。現在,より信頼性のある方法で分析を行なっており,論文投稿の準備を進めている。また,平成26年度より継続しているアレキシサイミア傾向者のパターン認知処理機構の解明についての検討,およびパターン認知に基づいたADHD児の漢字書字エラー特性の解明についても検討を行なった。当初の計画に加えて,アレキシサイミアの顔パターン認知実験も実施することができた。新たな個人差変数を導入することができ,順調に進展したと言える。認知科学自閉症スペクトラムを対象としたパターン認知実験は,データをまとめて論文化の最中である。今後は,アレキシサイミアを対象とした実験を行なうことで,自閉症スペクトラムとアレキシサイミアとの関連についてパターン認知の観点から検討を行なう。アレキシサイミアは,多くの精神疾患や発達障害の背景因子として想定されているが,未だその実態は解明されていない。本研究の手法をアレキシサイミアにも応用することで,新たな展開を模索する。本申請課題は平成26年度より研究を開始したが,科研採用と同時に現在の研究機関に異動した。これまでの実験(特に脳波実験)は,他の協力機関において実施してきた。現在所属している研究室には脳波計がなく,現況で購入可能なものを購入するため,残額の予算を平成27年度の扱いとした。現在の残額予算で購入可能な脳波計を購入し,新たな脳波実験を実施する。
三連四重極型質量分析計による尿バイオマーカーのハイスループット多項目同時定量

健常男子3名(25-35歳)の尿を対象にして、Thermo LTQ-Orbitrap XLを用いて網羅的解析を行った。ペプチド試料は還元、非還元化でのSDS-PAGEにより分離後、ゲル内トリプシン消化により調製した。偽陽性率5%以下で同定された1434種のタンパク質のうち、2個以上のペプチドがマッチした1068種のタンパク質を対象にして、GO annotation解析、HUPOのHuman Plasma Proteome Projectから報告されている高信頼性の2389種のタンパク質からなるヒト血漿プロテオーム解析結果と我々が新たに解析を行った高信頼性の1815種のタンパク質からなるヒト糸球体プロテオーム解析結果との比較を行った。GO annotationによる解析結果は、尿タンパク質には細胞接着、炎症、免疫、血液凝固、ペプチド分解に関与するものが有意に多く含まれていることが明らかになった。また、血漿プロテオームとの比較により、尿にはおよそ30%の血漿由来タンパク質が含まれること、さらに、糸球体プロテオームとの比較によりおよそ20%の糸球体由来タンパク質が含まれることが示された。また、AKIの新規バイオマーカーとして報告されている多くが尿中で同定され、そのうち、KIM-1、NGAL、IL-18、Cystatin-C、Clusterin、L-FABP、Osteropontinについて、そのペプチドの質量数とMS/MSスペクトルから、TripleQ-MSを用いたSRM法による定量の条件(SRM transition)を構築した。また、報告されている多くのAKIバイオマーカーが近位尿細管障害のマーカーが多いことから、糸球体障害の新規マーカー候補として、尿中に同定され、かつ糸球体上皮細胞に局在する複数の蛋白質を見出し、同様に定量のためのSRM transitionを構築した。昨年度の健常男子の尿タンパク質の網羅的解析で、AKIの新規バイオマーカーとして有望視されているタンパク質の多くが正常ヒト尿中にも同定されることを見出した。さらに、ヒト正常糸球体タンパク質の網羅的解析の結果との比較から、糸球体に特異的あるいは多く発現しているタンパク質が尿中でも検出されることが明らかになった。尿中AKIバイオマーカーの多くは、分泌型あるいは細胞質タンパク質であり、化学的あるいはタンパク質分解酵素による分解に抵抗性のタンパク質であり、尿中でも安定であるという特徴をもつ。さらに多くのバイオマーカーが、近位尿細管あるいは遠位尿細管に局在し、尿細管傷害を直接的に示すマーカーとなり得る。一方、これまで糸球体に局在し、糸球体の傷害マーカーとなり得る尿中バイオマーカーは報告されていない。以上のような背景から、AKIあるいはCKDの尿バイオマーカーの多項目同時定量の対象タンパク質として、NGAL、L-FABP、KIM-1、Podocalyxin、Megalinを選択した。これらのタンパク質の定量のためのペプチドの選択は、これまでの尿あるいは糸球体プロテオーム解析で実際に取得し、データベース化しているペプチドのMS/MSスペクトルから、三連四重極型質量分析計を用いたSRMモードで定量するための条件に合致したものを選び、さらに正確な相対/絶対定量を行うためにC末端のArginineあるいはLysineを安定同位体標識した合成ペプチドを入手し、現在定量系の至適化を行っている。(1)前年度までに、標的にするバイオマーカーに帰属するペプチドとそのMS/MSスペクトルを取得するために、健常男子3名の早朝第二尿を試料として質量分析計による網羅的解析を行った。その結果、AKIの尿中バイオマーカーとして有望視されているタンパク質の多くが同定され、目的のペプチドとMS/MSスペクトルを取得した。(2)これらのバイオマーカーの多くは、近位尿細管あるいは遠位尿細管に局在し、尿細管傷害を直接示すマーカーとなり得ると考えられる。しかし、糸球体に局在し、糸球体の傷害マーカーとなり得る尿バイオマーカーは報告されていない。そこで、正常糸球体プロテオームと正常尿プロテオームを比較し、尿中に出現するタンパク質で、糸球体に特異的もしくは高度に選択的に発現しているタンパク質をHuman Protein Atlasdatabaseを用いて選択し、糸球体傷害マーカーになり得るタンパク質候補の絞り込みを行った。(3)以上の検討から、AKIあるいはCKDの尿中バイオマーカーパネルとして、尿細管傷害マーカーとしてNGAL、L-FABP、KIM-1、Megalinを、糸球体傷害マーカーとして、Podocalyxin、SHPS-1、Crumbs-like protein 2を選択した。現在、TripleQ-MSによる多項目同時定量法の確立のため、検討を行っている。このためには、臨床尿試料の入手、定量の対象となるタンパク質ごとに少なくとも2つ以上のペプチドのMS/MSスペクトル資料と、内部標準として用いる、それぞれのペプチドに対応する安定同位体標識合成ペプチドが必要であるが、ほぼ準備は整っている段階である。三連四重極型質量分析計を用いたSRMモードによるタンパク質定量は、最近広く用いられるようになったが、特異性の点で新たな問題点も指摘されている。それは定量対象となるタンパク質のトリプシン消化ペプチドの中から厳格な条件に適うものを選択しないと正確な定量ができないことに起因する。このためには、実際に質量分析計でMS/MSスペクトルが取得できることが確認されており、タンパク質に特異的な配列を持ち、化学的に安定で、翻訳後修飾を含まないペプチドを選択する必要がある。この条件に適うペプチドはかなり数が限定されることになるため、準備段階として質量分析計による対象タンパク質の質量分析による解析が必要になり、概ね適切なペプチドの選択に至ることができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。

すでに定量の対象とするタンパク質と定量のためのペプチドの選択が終了しているので、実試料(尿)を用いた定量系の確立が近々の課題である。内部標準として用いる安定同位体標識合成ペプチドを正常尿に添加することにより、定量感度・特異性を検討する。次の課題は、AKIの病歴の有無が明らかな尿を用いて、同時多項目定量により時間的な変化を測定し、バイオマーカーとしての意義づけを行うことである。現在日本腎臓学会の「尿のバイオマーカーパネル化に関する小委員会」で尿のバンキングを行っており、試料の入手の準備は整ってきた。24年度が最終年度であるため、記入しない。
剣道7段が8段の動きを全く探知できない事象の理論的解明に関する研究

本研究の目的は、剣道7段は、なぜ剣道8段の動きの情報を全く入手(入力)できないのかという事象を解明することである。剣道8段は、7段相手に全く情報を発しないで動作を発現しているのか、あるいは、7段は8段の発現している動作を入力できる技能がないのか、または、双方の交互作用的な因果なのか、という問題を解決することを意図している。また、7段は8段に対するときに学習性無力感の状態にあり情報入力遮断の環境にあるという心理学的な理論が当てはまるかという仮説も検証する。2018年度は研究資料収集と研究仮説の厳密な検証、実験環境の整備を行った。研究代表者は自身の身体を剣道7段の被験者として剣道8段の被験者に対して実施調査を行った。具体的には剣道の稽古、練習であるが、本研究仮説を検証するための実験仮説を念頭において稽古を行い、稽古後に剣道8段の被験者とともに省察を行った。省察の結果は、バイオメカニクスの視点、運動生理学の視点、運動心理学の視点からまとめた。バイオメカニクスの視点からの省察が最も多く、運動生理学の視点や運動心理学の視点からの省察は少なかった。特に、学習性無力感に関する内容は、ほとんど認められなかった。しかしながら、被験者が学習性無力感を全く自覚していなくても深層心理学的に情報の入力を無意識に遮断している可能性については検討していないので、次年度からの課題とする。本年度はできれば予備実験まで行う予定であった。しかしながら、研究仮説を十分に確立することを最優先課題として情報の収集を行った。本研究の目的を達成するための実験心理学的な視点からの省察が少なかったこと、また、反応時間を実験の中核として行うための仮説が十分に構築できなかったことがやや遅れている理由である。本研究課題の申請時の内容に大きな変更はない。本年度実験設備において、反応時間の位相を行うために、一方に被験者に刺激が呈示されてから、もう一方の被験者に遅延した刺激の呈示をする装置の開発提案ができ、見積もりの入手もできたので、基本的な実験環境は整備できた。しかし、この装置の単価が高価なので、仮説の検証を再度行い、多少の経費を節約するための実験方法を再構築する可能性はある。実験環境の整備のための複数刺激遅延装置の購入について慎重に検討し、次年度に判断することとした。この費用が約20万円である。また、約10万円は資料収集のための旅費予算であったが、近隣の場所での資料収集ができたので節約の形となった。次年度は遠方での資料収集を予定しているので計画的に使用する。
クエン酸発酵性Lactococcus lactisにおける代謝機能の遺伝学的解析

クエン酸発酵性Lactococcus lactisはラクトース代謝能,タンパク質分解能およびクエン酸代謝能を持ち,乳業分野において応用範囲の広い乳酸菌である。しかし,それらの代謝機能が核外遺伝子に支配されており,遺伝的に不安定で失われやすいことが知られている。本研究では,わが国の乳業界で広く使用されているLactococcus lactis subsp.lactisbiovardiacetylactis NIAI N-7(以下Lactococcus diacetylactisと記す)を供試菌株とした。筆者らのこれまでの研究成果より,Lactococcus diacetylactisでは,分子量の異なる3種類のプラスミドDNAはいずれも重要な発酵的性質の発現に関与しており,特に,タンパク質分解酵素の生産には34Mdalと23Mdalプラスミドが関与していた。そこで,それらの欠損株と親株の酵素学的性状を詳細に比較検討することによって,タンパク質分解機能の遺伝学的解析を行った。まず,乳中の主たるタンパク質であるカゼインに対する作用をSDS-PAGEによって調べたところ,両プラスミドに支配されているタンパク質分解酵素系は,いずれもβ-カゼインを基質として作用していることが明らかとなった。次に,各菌株の培養液より菌体外,表層結合および細胞内プロテアーゼを調製し,タンパク質分解酵素の活性を調べた。その結果,23Mdalプラスミドは細胞内プロテアーゼの生産に関与しており,この欠損株ではペプチダーゼ活性の有意な減少が認められた。特にLys-P-NAを基質とした時のアミノペプチターゼ活性は親株の1/5であった。しかし,34Mdalプラスミドの機能とプロテアーゼの関係は特定できなかった。今後,23Mdalプラスミドに支配されているペプチダーゼの基質特異性をさらに明らかにすることは,プラスミド欠損株を発酵乳製品製造に応用する上で有益と思われる。