hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新規脳内薬物トランスポーターの機能解析と中枢神経疾患治療への応用

新たに見出された薬物トランスポーターSLC10A4の安定発現細胞を作製し、胆汁酸であるケノデオキシコール酸およびウルソデオキシコール酸の輸送に寄与することを明らかにした。SLC10A4を発現している小脳由来TE671細胞を用い機能解析を行った結果、プロテアーゼであるトロンビンによってタウロコール酸の輸送活性が上昇することを発見し、その基質結合能が既知の胆汁酸トランスポーターに比較して高いことを明らかにした。脳機能に及ほす胆汁酸およびその輸送機構の役割を明らかにするため、新規に見出した脳黒質に局在する薬物トランスポーターSLCIOA4を取り上げ、その機能解析を行った。SLC10A4の機能解析を行うためSLC10A4発現ベクターを作製し、培養細胞(MDCKII、CHO-K1)に遺伝子導入を行うことでSLC10A4安定発現株を樹立した。樹立した発現細胞株を用いて輸送基質の探索を行った。胆汁酸、抱合ステロイド、甲状腺ホルモン、プロスタノイド、また本トランスポーターは黒質に局在することからドーパミンの取り込みを検討したところ、胆汁酸であるケノデオキシコール酸およびウルソデオキシコール酸の輸送が観察された。しかしそのコントロール細胞(エンプティベクター導入)に対する取込み比は1.3L8倍程度と低いものであった。この理由として発現量が低いことが考えられたため、アデノウィルス発現系の構築を行うこととした。SLCIOA4遺伝子を挿入したコスミドベクターを作製し、SLC10A4遺伝子発現ウィルスを調製した後、HepG2細胞をはじめとする数種の培養細胞に感染させて機能解析を試みた。しかしながら、ケノデオキシコール酸の取り込み比は、安定発現細胞と同程度であった。以上の結果より、脳黒質に局在するSLC10A4は、胆汁酸の輸送に関与することが明らかとなった。本研究成果は、脳内における胆汁酸の役割・機能を解明する上で重要な手がかりになるものと考える昨年度は、新規に見いだしたSLC10A4が、脳局所における胆汁酸の輸送に関与することを明らかにした。本年度は、定量系開発を試みるとともに、GEO登録情報を利用したin silico解析を行った。定量系にはLC/MS/MSを用いることとして、4種のトリプシン消化ペプチド配列(1 : SLLVTLVVLF : 1102.70, 552.40[M+2H]2+→726.7, 807.4 ; 2 : QSAEAGIF : 821.39, 411.70[M+2H]2+→639.2, 657.6 ; 3 : DTPLNHGLNVF : 1225.61, 613.70[M+2H]2+→441.1, 1329.8 ; 4 : DPLDEDTDISYK : 1653.69, 827.75M+2H)2+→441.1, 1329.8)を選択した。ISとして、GAPDHのVIPELNGKを設計した。はじめにLC条件を検討し、標品ペプチドを用いて1fmol10pmolまでの検量線を作成した。続いて、試料の前処理方法(SDS補助消化法、MeOH補助消化法、ゲル内消化法、チューブゲル消化法、in-solution法、modified in-solution法、stage-tip法)について種々検討した結果、modified in-solution法を基本とすることとした。しかしながら、回収率に問題があることから、ペプチド修飾化蛋白質をISとする新規測定法の検討を行っている。in silicoによる機能解析も有用であることが知られてきたが、SLC10A4の発現プロファイル情報は、NCBIのGEOに443登録されていた。その中で注目するべき情報として、パーキンソン病患者剖検脳の黒質(PD)プロファイル(GDS2821)およびハンチントン病患者血液試料プロファイル(GDS1332)から、slc10a4発現が発症により減少傾向にあることを確認した。以上の結果は、今後のSLC10A4の機能解析に有用なツールとなるものと考える。(1)培養細胞を用いた機能解析:各種培養細胞におけるSLC10A4発現状態を検討し、安定にSLC10A4を発現している細胞の探索を行った。継代可能な培養細胞におけるSLC10A4の発現について検討したところ、ヒト小脳由来TE671細胞で安定に発現していることをウエスタンブロット法によって見出した。(2)ヒト小脳由来TE6771細胞を用いたたSLC10A4の機能解析:プロテアーゼ・グリコシダーゼ活性化トランスポーターの発見TE671細胞を用いて、SLC10A4の機能解析を行った。

トロンビン処置したヒト小脳由来TE671細胞におけるタウロコール酸輸送能の変化をLC/MS/MSを使用して検討した結果、トロンビン処置後のタウロコール酸細胞内輸送能は、未処置細胞に比較してタウロコール酸濃度依存的に上昇し、また飽和化現象が認められた。基質結合定数が1.8nMと求められ、既知の胆汁酸トランスポーターに比較して小さいことを明らかにした。細胞外グリコシル化の輸送への影響をN-あるいはO-グルコシダーゼ処置したTE671細胞におけるタウロコール酸輸送能の変化により調べた結果、グリコシダーゼ処置により、TE671細胞からのタウロコール酸の検出量が対照に比較して5.220.4倍に増加することが示された。(3)プロテオーム解析によるin vitro評価系の開発培養細胞を用いて、網羅的にタンパク質発現を解析する評価系を微量高速液体クロマトグラフ接続リニアイオントラップ/フーリエ変換型ハイブリッド質量分析装置を用いて開発した。試料の前処理法をNTCB/Lys-C/トリプシン消化法とLC-MSを駆使することにより、解析対象タンパク質数が4,800個を超える評価系開発に成功した。
心と体に優しいマウスガード作製マニュアルの確立

本研究の目的は,競技,種目,ポジションによってマウスガードデザインが異なると言うことを調査し,また装着する人によっても変化することがあり得ると言うことを明らかにすることである。アメリカンフットボール,アイスホッケー,ボクシングあるいは空手と言ったコンタクトスポーツでは外傷発生の危険性が高く,特に,顎口腔系の外傷予防にはマウスガードの装着が有効であり,我が国においても歯科関係者の努力とスポーツ関係者の理解によって広く認められるようになってきた。そして,一部の競技では試合中のマウスガード装着が義務化されたり,ラグビーやバスケットボールのようにトッププレーヤーが自主的に装着するようにもなってきている。また,一般市民の健康志向の高まりや,スポーツ少年少女の低年齢化などからマウスガードは一部のスポーツアスリートばかりのものでなく,一般歯科保健や学校歯科保健の見地からも重点目標として捉えられている。マウスガードに関しては,歯科医師が提供するカスタムメイドタイプのマウスガードの方が装着感,使用感に優れていることは明らかであり,いまや,その上の段階である競技特性や,個人の状況等,選手個々のニーズにまで応えた真のカスタムメイドマウスガードというものが必要とされている。その道の一流の選手が認めたマウスガードは一般競技者にとって良いアピールとなり,普及につながるからだ。そこで各種スポーツに対しマウスガードを装着し,空手道,サッカー,アメフト,フロアホッケーなどの競技におけるマウスガードのデザインを検討し,学会発表および誌上発表をしてきた。一方,コンタクトスポーツにおける外傷予防効果を目的とした使用方法以外のマウスガードの用い方についても着目し検討をしてきた。その結果トレーニング時のマウスガード装着により,より効果的なトレーニングが行えると言うことで,今後さらなる検討をしていきたい。マウスガードはコンタクトスポーツにおいて特に重要視され,顎口腔系の外傷予防に役立っている。しかしながら市販のマウスフォームドタイプのマウスガードを装着しているケースが多く,カスタムメイドマウスガードの必要性,重要性を広く啓蒙する必要がある。著者はコンタクトスポーツでも素面で荒々しく戦う空手道に着目し,(財)全日本空手道連盟ナショナルチームに対しマウスガードに関する調査を実施した。結果,ナショナルチーム選手であってもカスタムメイドマウスガードの使用度は低く,不適合な市販品を使っているケースがほとんどであった。これを踏まえ,ナショナルチームのメンバーにカスタムメイドタイプのマウスガードを作製,提供した。著者はカスタムメイドマウスガードであっても空手道に即した形態でなければ意味がない。つまり競技によってマウスガードの形態は当然異なるべきだし,同じ競技であってもポジションや戦術によって異なつておかしくないと考えている。装着後のアンケート調査の結果から,選手個々によって厚さや硬さ,大きさ等を調整することによって,ナショナルチームのメンバー全員が良しとするマウスガードを作製することができた。このように,空手道における一流選手から太鼓判をもらったと言うことは,空手道におけるマウスガードの基本形が確立したものと考えられる。さらに,ナショナルチームのメンバーは個々の生活のなかで地域の道場や学校において指導者的立場であることが多く,彼らが道場や学校に帰ったときに,カスタムメイドマウスガードの必要性を説いてもらえば,普及して行くものと思われる。空手という打撃瞬発系のスポーツにおけるマウスガードの基本形ができあがったことから,今後打撃持久系のスポーツであるアメリカンフットボール,ラグビー,ラクロス等の競技に着目し,調査,報告していきたいと考える。本研究課題の一番の目的はマウスガードは一種類ではなく,競技,種目,ポジションによってデザインが異なると言うことを調査し,また装着する人によっても個人差があるため,変化することがあり得ると言うことを明らかにすることである。ラグビー,ボクシングあるいは空手と言ったコンタクトスポーツでは外傷発生の危険性が高く,特に,顎口腔系の外傷予防にはマウスガードの装着が有効であり,我が国でも歯科関係者の努力とスポーツ関係者の理解によって広く認められるようになってきた。そして,一部の競技では試合中のマウスガード装着が義務化されたり,義務化されないまでも,ラグビーやバスケットボールのようにトッププレーヤーが自主的に装着するようになってきている。マウスガードに関しては,歯科医師が提供するカスタムメイドタイプのマウスガードの方が装着感使用感に優れていることは明らかであり,いまや,その上の段階である競技特性や,個人の状況等,選手個々のニーズにまで応えた真のカスタムメイドマウスガードというものが必要とされている。その道の一流の選手が認めたマウスガードはその下にいる競技者にとって良いアピールとなり,普及につながるからだ。そこでコンタクトスポーツを代表して全日本空手道連盟ナショナルチームの選手にマウスガードを装着し,空手道におけるマウスガードのデザインを検討した。またフロアホッケーという競技におけるマウスガードのデザインも検討した。一方,モータースポーツにおけるマウスガードの存在がにわかに注目され,ロードレーサーやモトクロスライダーにマウスガードを装着し,好感触を得ている。今後さらに検討を続けていきたい。

また,一般市民の健康志向の高まりや,スポーツ少年少女の低年齢化などからマウスガードは一部のスポーツアスリートばかりのものでなく,一般歯科保健や学校歯科保健の見地からも重点目標として捉えられている。マウスガードに関しては,歯科医師が提供するカスタムメイドタイプのマウスガードの方が装着感,使用感に優れていることは明らかであり,いまや,その上の段階である競技特性や,個人の状況等,選手個々のニーズにまで応えた真のカスタムメイドマウスガードというものが必要とされている。その道の一流の選手が認めたマウスガードは一般競技者にとって良いアピールとなり,普及につながるからだ。そこで各種スポーツに対しマウスガードを装着し,空手道,サッカー,アメフト,フロアホッケーなどの競技におけるマウスガードのデザインを検討し,学会発表および誌上発表をしてきた。一方,コンタクトスポーツにおける外傷予防効果を目的とした使用方法以外のマウスガードの用い方についても着目し検討をしてきた。その結果トレーニング時のマウスガード装着により,より効果的なトレーニングが行えると言うことで,今後さらなる検討をしていきたい。
弥生時代における武器消費形態の変質からみた階級分化過程の研究

本年は、西日本および朝鮮半島の石製武器の資料集成と分析を進めた。具体的な資料調査先としては、佐賀県吉野ケ里遺跡、香川県鴨部川田遺跡、岡山県南方遺跡、奈良県唐古・鍵遺跡、京都府市田斉当坊遺跡である。とくに唐古・鍵遺跡については8月から11月の期間、現地での発掘作業に参加し、実際の出土状況を含めた検討を進めた。また、朝鮮半島出土の石製武器についても検討を進め、12月には現地にて資料実見を行った。分析の方法としては、共伴遺物から帰属時期を求めたのち、形態の類似性から、それぞれの地域間の影響関係を検討した。また、石材や製作技法の検討を行い、特定の生産地の製品がどのような範囲に分布、流通しているかを検討した。以上の検討の結果、日本列島では、朝鮮半島に由来する石製武器が弥生時代開始期に出現するが、その定着度は低いこと、むしろ弥生時代中期以降の金属製武器の出現期において石製武器の発達がみられることがあきらかとなった。弥生時代中期の石製武器の発達期において、金属製武器との関係がどのようなものであったかをあきらかにするために、次年度以降は金属製武器の検討も進める予定である。さらに香川県鴨部川田遺跡、岡山県南方遺跡などの例から、特定の産地でしか獲得できない石材を用いた石製武器が、中部瀬戸内地域の広い範囲で使用されていること、その石材流通が石庖丁などの生産具と同様であることなどが、西日本地域との違いとして指摘できた。その成果の一端は、「武器」『考古資料大観』9(小学館刊行)にまとめた。
寒冷多雪地における冬期の地表付近の水動態と森林の機能

この研究は、北海道のような寒冷多雪地における冬期の水動態に関する森林の役割について、次のような仮説を設け、これを実証しようとしたものである。(1)冬期に強風の多い地域では、森林は堆雪機能をもつ。(2)この堆雪効果により土壌凍結を防止し、積雪下面融雪の続く条件を保持する。(3)従って、森林地帯は、草地や畑地などより冬期の流出量は大きく融雪出水のピ-ク流量は少ない。1987-1989年の3冬期間、強風の多い宗谷丘陵、北海道大学中川地方演習林等を調査地とし、積雪と土壌凍結を観測し、仮説の(1)(2)が成立することを実証した。また、森林の構成によって堆雪効果は異なり、気象条件の変動が大きいことを考慮すると、常緑針葉樹林よりも落葉樹林が堆雪林としては優れていることが明らかになった。冬期の地表付近の水動態については、観測方法の改良・開発も含めて行った。十分なデ-タは得ていないが、凍結時の水動態、積雪下面融雪量、山地小流域の冬期流出の特性の一部を明らかにし、今後の研究の展望を開いた。この研究の進展、完成には多くの課題があるが、当面つぎの2つの課題の追究が必要となった。(1)植生指標による積雪及び土壌凍結の判別法に関する研究。(2)寒冷地における森林地帯の冬期流出特性に関する研究。課題(1)は、森林造成・森林施業計画に必要な面的な広がりと、気象の年変動も含めて把握する方法の確立である。課題(2)は冬期流出の資料の集積とともに、化学成分分析も含め、降雪-流出の水質成分構成の面も含めて、流出機構の解明をめざすものである。1.宗谷丘陵及び中川町で,森林の構成と森林及びこれに接する草地等で積雪の調査を行った.降雪期にも10m/sec以上の強風の多い宗谷丘陵では,地形的な突出部や,草地化した緩斜面でも風が吹き抜ける部分では積雪が020cm位で土壌凍結が生じている.樹高510m,胸高直径1020cmの樹冠の鬱閉している林地では積雪深0.51.5mと推雪していて,土壌凍結はみられなかった.なお,風衝地で土壌水分動態を把握するため地中温度を測定しているが,これは融雪後に結果が得られる.内陸に位置し,平年の積雪深が1.5mに達する中川町でも,草地を造成し大面積に無立地化した稜線部では積雪深は0.20.4mで土壌凍結がみられた.草地内に0.5haほど残された被蔭林内では,周囲の森林内よりは若干少ない1.01.5mの積雪深で土壌凍結はなかった.以上のように,強風域では森林の推雪効果が認められ,ここでは土壌凍結がなく積雪下面の融雪があった.2.北海道大学構内で,積雪下面の融雪量を簡易ライシメータで測定している.今冬は平年より気温が高く,積雪下面融雪量を測定しうる期間(真冬日)は少ないが, 2月の真冬日の続いた期間に0.20.8mm/dayの融雪量があった.この期間の積雪深は約0.6mである.3.札幌市郊外の低山帯のカラマツとオニグルミ・エゾイタヤ等の混交林で覆われる約20haの流域で,冬期間の流量を測定している.2月中旬の低温時期には量水堰が凍結して一部欠測となったが, 2月の流量は0.150.20mm/dayであった.これは夏期(7・8月)の無降雨期間の流量0.2mm/dayにほぼ等しい値である.

4.昭和63年度も13の観測を行ない,年による変動巾や特殊条件を把え,より総合的研究に進展させる.1.前年と同様に宗谷丘陵・中川町及び札幌市で調査観測を行った。1988'89年冬期は、上記の調査地も少雪暖冬であり、特異条件下の積雪・土壌凍結等が観測できた。2.一般的に積雪は、平年にくらべると積雪深で1/2、積雪水量では1/3であり、平均気温は約2°C高い。また、宗谷丘陵でも小河川の水面がみられる状態で、吹雪も少なかったと推定される。このような暖冬でも、宗谷・中川の風衝地では枯草が露出し、固い土壌凍結がみられ、その凍結深は深いところでは60cmをこえていた。しかし、谷底のように少雪でも20cm前後の積雪で覆われているところでは、凍結深は10cm前後で比較的浅かった。森林内の積雪についてみると、落葉樹林内では堆雪効果が認められたが、トドマツなどの常緑樹林内では林冠の降雪遮断効果のためか積雪量が少なく(落葉樹林の1/3位)、土壌凍結がみられた。しかし、その凍結深は数cmで、草地などの無立木地の凍結深にくらべると小さな値であった。3.昨年試行した温度計により凍結の進行状況を推測することは、解凍後の解析により、ほぼ有効な方法であることが確かめられた。今冬も継続している。4.積雪下面融雪量は、前年度と同様に札幌苗畑と新たに簾舞試験地にライシメーターを設け、測定を行っている。簾舞は少雪のためにしばしば融雪水測定部分が凍り十分なデータを得てないが、苗畑では少雪のため(約40cm)、寒気が積雪層を移行し、積雪下面の融雪が12日位中断する現象がみられた。5.冬期の流出は、前年より多く、厳冬期でも0.51mm/dayあった。6.次年度は、融雪期までの観測を続け、とりまとめる。最終年度であり、とりまとめとそれに必要な補足的調査等を行った。1.融雪期に、宗谷丘陵・間寒別・中川地区で土壌凍結の調査をした。1988'89年冬季は、暖冬・少雪・少積雪移動の年であり、3月には常緑針葉樹林の積雪深は小さく、10cm前後の土壌凍結がみられた。融雪期は、常緑針葉樹林内は周辺の落葉樹林や無立木地よりも消雪が早かったが、土壌凍結も融雪期には消失していた。稜線部の無立木地ではまだ、この時期には凍土層があり融けた表土層が不安定な状況にくらべると、森林の存在は融雪期の出水やエロ-ジョンに大きなマイナスにはなっていなかった。2.夏期に、まとめのための地形・植生等の補足調査を行った。3.宗谷丘陵・簾舞で冬季流出調査を行った。まだ、デ-タの取込中であるが、宗谷丘陵でも冬期流出(減水期)に、小変動がみられた。4.1990年3月に宗谷丘陵・間寒別・中川地区で積雪と土壌凍結の観測を行った。この冬期も暖冬で少雪であったが、積雪深の分布・土壌凍結はこれまでと同じ傾向であった。5.土壌凍地域の判別指標として、宗谷丘陵ではササ分布域の中に小面積に点在するススキの群落が、植生指標の一つとなる可能性をみいだした。積雪上の調査であり、夏期のススキ群落の構成等の詳しい調査や、ササの生育・生長と土壌凍結の生態的調査を必要とするが、植生は土壌凍結地域の判別の有力な指標となりうると考えられ、この面的な拡がりを把握すれば、森林造成計画や森林の施業計画に展開できる
中世フランスにおける粉争解決法の研究

本研究は、中世フランスを対象として、王国裁判および裁判外紛争処理過程(国王恩赦や住民集会)を分析することで、前近代型紛争解決システムの解明を目指すものである。2年間の研究活動の後半にあたる今年度は、前年度までの研究成果を受け、特にフランス国王ルイ九世治世期の裁き(=通常の裁判)と恩赦(=裁判外紛争処理)の相補的関係の実態解明を目指した。王の直轄領であるフランス中央部のイル・ド・フランス地方やピカルディー地方において、殺人などの重罪を犯した犯罪者がいかに裁かれたか、その後親族・知人からの申し出により開始される恩赦の審査がどのように行われたか、また有罪となって刑が確定してから恩赦決定に至るまでの共同体住民の心性はどのように変化したのか、といった点に注目して研究を進めた。その結果次の諸点が明らかになった。・王の恩赦は、嘆願に対して無原則・無制限に決定されているわけではなく、暴力の行使を抑止するための政治的キャンペーンの一つとして意識的に展開されている。恩赦証書に現れる<iustitia(=公正さ)>という表現は、王国裁判権の信託性を高めると同時に、社会に弥漫する暴力的な風潮への戒めという意図を持って恩赦が行われていたことを示している。・王による恩赦行為は数的には必ずしも多くはないが、王国歴史叙述の中では治世を特徴づけるものとして頻繁かつ詳細に言及されており、王権による世論誘導、プロパガンダ政策のひとつの重要なキーワードとして、実態以上に機能していた。本研究は、法人類学の成果を援用して、これまで法思想史研究と法制度史研究の狭間でほとんど注目されることのなかった、国王恩赦や共同体集会などの裁判外紛争処理の実態を解明することで、中世における紛争解決システムの構造的把握を目指すものである。かかる課題の解明のため、本年度は特に国王恩赦に重点を置き、具体的には以下の研究活動を行った。(1)13世紀以降急速に整備が進んだ王国司法行政機構の再確認。(2)ルイ9世期を中心に、「パリ国王法廷判例集成」に記録された予備調書・判決原本の内容から当時法廷で取り扱われた事案の性格分析。(3)「国王の特別介入」を受けて判決が下されている事案にとくに着目し、法官が判決を下す際の準則を明らかにするとともに、王権側の法意識との微妙な緊張関係の解明。その結果、次の諸点が明らかになった。○聖別を受けて地上における「神の似姿」としてその職務を遂行する国王にとって、「(厳格な)裁き」と「(寛大な)赦し」の集権的行使こそ王権の核をなすものであり、その統合・強化という点から見て「聖王」と呼ばれるルイ9世治世期の13世紀後半は、理論的にも現実的にも一つの到達点をなす。○しかしこのキリスト教的統治観が確立した13世紀において既に、知的エリートである法官層の中には王国司法から神の意志の排除、所謂「世俗化」を意識し始める者もおり、現実の紛争処理過程上で王と王国司法行政機構とが相反する判断を示し対立する事案も確認される。
外科専門医手術手技トレーニングにおける注視視点解析の有効性に関する研究

本研究は、専門医教育の開始に伴い、心臓血管外科医を目指す専攻医や指導医を目指す専門医や修練医の手術手技向上のための新たな教育方法の確立および評価を行うものである。方法として、冠動脈バイパス術や弁膜症手術における血管吻合および運針手技について注視視点解析という手法を取り入れて手技の評価および視点の定量的解析を行う。さらに、測定結果を専攻医および修練医にフィードバックして、吻合手技の上達度を評価する。本研究の成果が、今後の外科専門医研修プログラムにおける専攻医の手術手技の上達の一助になり得るように研究を発展させたい。
水中・底泥内におけるダイオキシン等難分解性物質の挙動とゼロエミッション処理技術

大阪府下の河川を対象としたダイオキシン類の挙動について調べたとこと、底泥への移行は、各ダイオキシン類のオクタノール-水分配係数と相関すること、また、ダイオキシン類のような難分解性物質は20μm以下のような粒径の小さい底泥粒子により多く付着していることから、微細な粒子の処理が重要であることがわかった。ダイオキシン類を含む模擬底泥含有水を凝集処理したところ、ろ過水中に溶解または微細粒子に付着したダイオキシン類が存在した。精密ろ過によりほとんどのダイオキシン類が分離されたが濃縮水の処理が必要となった。底泥間隙水や上記のような濃縮水中に存在する難分解性物質については、光触媒法やオゾン法をあわせた促進酸化法、さらに高濃度の場合には超(亜)臨界水酸化法により、ダイオキシン類擬似物質としての2,4-D(2,4-ジクロロフェノキン酢酸)の分解が可能であったことから、汚染水に対してはこのような化学的あるいは物理化学的手法が有効であると考えられた。一方、底泥のような固形分を含む場合については特に化学的方法には限界があることから、熱的手法として間接熱脱着法による16種の多環芳香族化合物の分解処理を試みた。その結果400°Cで模擬底質から全PAHsがほぼ除去でき、微細な粒子ほどPAHsの分解が進むこと、一部はガス中へと移行することがわかった。模擬底泥中ダイオキシン類については500°C以上でほぼ土壌から除去され、極一部がガス中へ移行する結果となった。本研究の総合的成果として、汚染底泥浄化においては底泥微細粒子の処理が重要であることを示し、その具体的処理方法を提示できたことが挙げられる。ダイオキシン類等の難分解性物質の水中及び底泥中における挙動を明らかにするため、まず測定手法と精緻な測定技法の獲得について検討した。底泥中のダイオキシン類については公定法を基礎とする測定において、とくに底泥中のイオウ成分による妨害除去を目指した測定手法を開発し、湿潤状態の試料であっても高速溶媒抽出が効果的であることを明らかにした。また同時に、Ahイムノアッセイによる測定の簡易化について検討し、簡易な前処理法との併用により公定法と極めて相関が高い結果が得られることを示した。さらに、水中の17B-エストラジオールやビスフェノールAについてELISA法による簡易測定法について検討し、GC-MS等の機器分析と比較しても低濃度域から高濃度域までの広範囲について信頼性の高い測定値が得られることを示した。このような測定法に関する精緻な検討を行ったうえで、河川底泥中のダイオキシン類について、粒径分布ごとの含有量を調べた。その結果、20μm以下の画分においても総量の43%が存在し、その内の534%が1,2,3,7,8-PeCDDと2,3,7,8-TeCDDであった。また、1μm以下の画分においても総量からすると少量であるが少なからずのダイオキシン類が検出された。この結果は、ダイオキシン類を含む底泥の浚渫においては流出水中の小粒径の底泥についても十分な注意が必要であることを示している。また、底泥に含まれる有機物量とダイオキシン類との間には高い相関が見られ、小粒径の底泥ほど有機物含有量が高いことから、ダイオキシン類は底泥の有機物に付着すると推察され、ダイオキシン類が小粒径のものから多く検出する結果と符合した。また、土壌により類分解性物質の吸着挙動について検討を進めるとともに、底泥水中のダイオキシン類が精密ろ過(0.2μm)によりほとんど分離されることを明らかにした。

大阪府内の木津川と住吉川の底泥を粒径ごとに7つに分画し、それぞれに含まれるダイオキシン類を公定法により詳細に分析した。その結果、PCDDsについては木津川、住吉川ともにOCDDが最も多く、ついでHpCDDsとTeCDDsが多く、PCDFsについてはMCDFsを除いてDiCDFsからOCDFまで均等に分布していることがわかった。ただし、木津川については2塩素のDiCDFsがあまり見られず住吉川の結果と相違が見られた。co-PCBsを含め、両河川の底泥中ダイオキシン類には類似性が認められたが、排出源由来の差によると考えられる相違点があった。粒度分布と粒径区分ごとのダイオキシン類含有量の比較について前年に引き続き詳細に検討した。底質自体は重量として425から2000μmの画分が41%で最も多く含まれており、次に多いのが20μm以下の粒子で約17%であることがわかった。これに対して粒径区分ごとに含まれるダイオキシン類については75μm以下の粒子に含まれるダイオキシン類が底質全体の約61%で、その中でも20μm以下の粒子が多く、底質全体の41%を占めていた。このことから、底質中に含まれるダイオキシン類はシルト以下の微粒子に多く含まれていることがわかる。底質の強熱含量を調べたところ、底質に含まれるダイオキシン類と有機物量には相関があること、また、底質中の微粒子(110μm)は有機物を多く含み、沈降しにくい傾向が見られた。このことは、底質の処理において微粒子の処理が重要であることを示している。1μm以下の粒子を含む底質上澄み液を精密ろ過膜(孔径0.2μm)により処理したところ、ろ過水中にダイオキシン類はほとんど見られず、底質上澄み液の処理に精密ろ過が有効であることが明らかになった。前年度までの研究で、ダイオキシン類等の難分解性物質は粒径の小さい底泥粒子により多く付着していることから、微細な粒子の処理が重要であるが明らかになった。ダイオキシン類を含む模擬底泥含有水を凝集処理したところ、ろ過水中に溶解または微細粒子に付着したダイオキシン類が存在した。精密ろ過によりほとんどのダイオキシン類が分離されたが濃縮水の処理が必要となった。底泥間隙水や上記のような濃縮水中に存在する難分解性物質については、光触媒法やオゾン法をあわせた促進酸化法、さらに高濃度の場合には超(亜)臨界水酸化法により、ダイオキシン類擬似物質としての2,4-D分解が可能であったことから、汚染水に対してはこのような化学的あるいは物理化学的手法が有効であると考えられた。一方、底泥のような固形分を含む場合については特に化学的方法には限界があることから、熱的手法として間接熱脱着法による16種の多環芳香族化合物の分解処理を試みた。その結果400°Cで模擬底質から全PAHsがほぼ除去でき、微細な粒子ほどPAHsの分解が進むこと、一部はガス中へと移行することがわかった。模擬底泥中ダイオキシン類については500°C以上でほぼ土壌から除去され、極一部がガス中へ移行する結果となった。本研究の総合的成果として、汚染底泥浄化においては底泥微細粒子の処理が重要であることを示し、その具体的処理方法を掲示できたことが挙げられる。
早期新生児期における腸管血流の検討

1.早期新生児期の腸管血流の経時的変化成熟正常新生児100例を対象に新生児早期(日齢05日)の上腸間膜動脈の血流速度の変化について検討し,また上行大動脈,下行大動脈の血流変化についてもあわせて検討し比較した.上腸間膜動脈の血流は生後次第に増加した.生後24時間までは拡張期血流度の増加が著しく,動脈管閉鎖を反映していると考えられた.その後も上腸間膜動脈の血流は増加したが、上行大動脈,下行大動脈の血流速度の変化とは異なっており,血流速度の増加は血流分配の変化によると考えられた.2.正常新生児における初回経口摂取後の腸管血流の変化上腸間膜動脈と腹腔動脈の血流変化を,5%グルコースと人工乳の異なる2種の摂取物を用いて,正常成熟新生児を20例を対象として検討した.上腸間膜動脈では,収縮期最高血流速度と平均血流速度は摂取後5%グルコース,人工乳いずれでも増加したが,人工乳でより長時間増加していた.拡張終期血流速度は平均血流速度と似た変化を示した.腹腔動脈では,収縮期最高血流速度は5%グルコース,人工乳のいずれも摂取後に増加したが,人工乳摂取後により長時間増加した.平均血流速度は5%グルコース摂取後は明らかな変化を示さず,人工乳では有意に増加した.拡張終期速度は平均血流速度と似た変化を示した.成人での報告と同様に成熟新生児の初回経口摂取においても摂取後の血流増加が認められ,また摂取内容に違いにより腸管血流の変化に違いがみられることが明らかとなった.1.早期新生児期の腸管血流の経時的変化成熟正常新生児100例を対象に新生児早期(日齢05日)の上腸間膜動脈の血流速度の変化について検討し,また上行大動脈,下行大動脈の血流変化についてもあわせて検討し比較した.上腸間膜動脈の血流は生後次第に増加した.生後24時間までは拡張期血流度の増加が著しく,動脈管閉鎖を反映していると考えられた.その後も上腸間膜動脈の血流は増加したが、上行大動脈,下行大動脈の血流速度の変化とは異なっており,血流速度の増加は血流分配の変化によると考えられた.2.正常新生児における初回経口摂取後の腸管血流の変化上腸間膜動脈と腹腔動脈の血流変化を,5%グルコースと人工乳の異なる2種の摂取物を用いて,正常成熟新生児を20例を対象として検討した.上腸間膜動脈では,収縮期最高血流速度と平均血流速度は摂取後5%グルコース,人工乳いずれでも増加したが,人工乳でより長時間増加していた.拡張終期血流速度は平均血流速度と似た変化を示した.腹腔動脈では,収縮期最高血流速度は5%グルコース,人工乳のいずれも摂取後に増加したが,人工乳摂取後により長時間増加した.平均血流速度は5%グルコース摂取後は明らかな変化を示さず,人工乳では有意に増加した.拡張終期速度は平均血流速度と似た変化を示した.成人での報告と同様に成熟新生児の初回経口摂取においても摂取後の血流増加が認められ,また摂取内容に違いにより腸管血流の変化に違いがみられることが明らかとなった.
副甲状腺ホルモン受容体を介する情報伝達系の分子生物学的検討 偽性副甲状腺機能低下症におけるPTH受容体異常を含めて

偽性副甲状腺機能低下症(pseudohypoparathyroidism:PHP)は、副甲状腺ホルモン(PTH)に対する不応性を特徴とする疾患である。本症は、いくつかの病型に細分されるが、PHPIb型はPTH受容体自体の異常に起因するものと想定されていた。そこで、1名の健常対照、3例のPHP1b型患者の皮膚線維芽細胞のPTH受容体を、reverse transcription-coupled polymerase chain reaction(RT-PCR)、single strand conformation polymorphism(SSCP)、PCR産物のdirect sequence、Northern blot解析などにより検討した。PTH受容体の全コード領域を五つに分けたRT-PCRでは、PHP患者と健常者でPCR産物の大きさに相違はなく、またNorthern blot解析でもPTH受容体mRNAの大きさの変化は認められなかった。PCR産物のSSCP解析、direct sequenceでは、PHP患者のPTH受容体のコード領域に変異は認められなかった。一方PTH受容体mRNAの発現は、健常対照に比較し、2例のPHP1b型患者では低下していた。そこで本症患者におけるPTH受容体発現低下の機序を明らかにする目的で、PTH受容体遺伝子プロモーター領域の異常の有無を検討した。ヒトPTH受容体遺伝子の5'端のクローニングにより、本遺伝子5'端には三つの非翻訳エクソンと少なくとも二つのプロモーターが存在すること、これらのプロモーターのうち一つは多くの組織で使用されているのに対し、もう一つは腎臓で特異的に使用されることが明らかとなった。一方PHP1b型患者のPTH受容体遺伝子のプロモーター領域のDNA配列は、健常対照と異ならなかった。従って、PHP1b型患者のPTH受容体発現の低下は、PTH受容体遺伝子プロモーター領域の異常に基づくものではなく、これらの領域に作用する核蛋白の量的、あるいは質的異常に起因するものである可能性が明らかとなった。本症は、いくつかの病型に細分される疾患群であるが、このうちPHPIb型はPTH受容体自体の異常に起因するものと想定されていた。そこでPHPlb型の病因を明らかにするために、1名の健常対照、3例のPHPlb型患者、および1例のPHPla型患者の皮膚線維芽細胞のPTH受容体を、reverse transcription-coupled polymerase chain reaction(RT.PCR)、single strand conformation polymorphism(SSCP)、PCR産物のdirect sequence、Northern blot解析などにより検討した。PTH受容体の全コード領域を五つに分けたRT・PCRでは、PHP患者と健常者でPCR産物の大きさに相違はなく、またNorthern blot解析でもPTH受容体mRNAの大きさの変化は認められなかった。一方PTH受容体mRNAの発現は、健常対照に比較し、2例のPHPlb型患者では低下しており、逆に他の1例のPHPlb型、およびPHPla型患者では増加していた。しかしこれらの細胞のPTHに対するサイクリックAMP産生反応とPTH受容体mRNAの発現との間に明確な相関は認められなかった。従つて検討したPHP患者の皮膚PTH受容体cDNAには、mRNAのスプライシングは変異などの異常は認められず、PHPlb型の病因の解明には、組織特異的なPTH受容体の変化の有無の確認のためにも、腎臓におけるPTH受容体の検討が必要と考えられた。(1)PTH受容体のin vitroでの発現ヒトPTH受容体cDNAを発現ベクターpcDNA

3にサブクローニングし、chinese hamster ovary(COS)細胞、およびhuman embryonal kidney(HEK)細胞に導入することにより、本cDNAを恒常的に発現する細胞株を得た。現在これらに細胞株を用い、ヒトPTH受容体に作用する物質の検索を行っている。(2)偽性副甲状腺機能低下症のPTH受容体の検討PTH受容体の異常に基づくと想定されてきた偽性副甲状腺機能低下症1b型患者のPTH受容体cDNAには変異は認められなかったものの、一部の患者ではPTH受容体の発現の低下が認められた。そこで本症患者におけるPTH受容体発現低下の機序を明らかにする目的で、本症患者のPTH受容体遺伝子プロモーター領域の異常の有無を検討した。ヒトPTH受容体遺伝子の5′端のクローニングにより、本遺伝子5′端には三つの非翻訳エクソンと少なくとも二つのプロモーターが存在すること、これらのプロモーターのうち一つは多くの組織で使用されているのに対し、もう一つは腎臓で特異的に使用されることが明らかとなった。一方偽性副甲状腺機能低下症患者のPTH受容体遺伝子のプロモーター領域のDNA配列は、健常対照と異ならなかった。従って、偽性副甲状腺機能低下症患者のPTH受容体発現の低下は、PTH受容体遺伝子プロモーター領域の異常に基づくものではなく、これらの領域に作用する核蛋白の量的、あるいは質的異常に起因するものである可能性が明らかとなった。
媽祖崇拝の比較宗教史的研究―民間信仰と諸宗教の融合による東アジア海域世界への伝播

本研究は東アジアの海域世界で守護女神として圧倒的な信仰を集めている媽祖を対象に、中国の民間で芽生えたその崇拝が、多様な宗教的伝統と接触を重ねて信仰圏を拡大した過程を比較宗教史の視点から解明することを目的とする。媽祖崇拝の歴史的展開と空間的拡大のありようを明らかにするための基礎作業として、研究期間内のすべての年度で文献研究と現地調査を併行して行なう。第2年度にあたる本年度(平成30年度)は、媽祖伝承に関する基本的な漢文資料の解読・邦訳作業を継続し、あわせて日本国内および海外における現地調査を行なった。12世紀宋代に誕生したとされる媽祖の伝記資料はいずれも後世に撰述されたものであり、それを理解するためには宋代の同時代文献をもとにした史料批判が不可欠となる。伝記資料としては初年度に解読を行なった『天妃顕聖録』に引き続き、『天妃娘媽伝』と『天后聖母聖蹟図誌』を解読した。いずれも媽祖の事蹟に神話的要素が混入した後の産物であることを念頭に置きつつ、現代につながる媽祖の絶大な崇拝を準備した文献として精読したうえで邦訳を試みている。現地調査については、本年度は報告者が勤務大学における国内特別研究期間に該当するため時間を有効に活用できた。国内調査は東アジアにおける媽祖信仰の北限とされる青森県下北半島を対象とし、2018年5月28日から30日まで国内特別研究学部予算による調査旅費によって行なった。また紀伊半島沿岸地域の社寺における海の守護神崇拝の実態を明らかにするため、2019年3月11日から13日まで本科学研究費によって行なった。海外調査はスペインおよびポルトガル南端の大西洋沿岸部の教会における航海の守護聖者の信仰実態を比較宗教史の視点から明らかにするため、10月31日から11月10日まで本科学研究費によって行なった。本研究を推進していくうえで基本となる作業は、文献研究と現地調査を併行して行なうことである。まず文献研究については当初計画していた『天妃顕聖録』の解読ならびに該当箇所の邦訳を初年度内に完了できたので、本年度は『天妃娘媽伝』と『天后聖母聖蹟図誌』の解読作業に取りかかった。いずれも媽祖の伝記資料としてきわめて重要なものだが、成立は媽祖の没年から多くの時を隔てているため著しく神話的な潤色が加わっており、同時代の文献資料をもとにした資料批判が不可欠の作業となる。両書とも大部な分量であるが本年度はその解読に多くの時間を割くことができたので、次年度(平成31年度)のうちに作業を完了する予定である。国内の現地調査のうち、青森県下北半島では東アジア海域世界に伝播した媽祖信仰の北限を踏破し、天妃と呼ばれた媽祖を併祀する神社において中国起源の神格が漁民の民俗信仰として同化していることが確認できた。また和歌山県紀伊半島では沿岸地域にある社寺の多くが観音菩薩を祀る聖地であり、近世以降は観音が海難救助の守護者として崇拝されていることが確認できた。海外調査においては、ポルトガルのサグレス岬にあるノッサ・セニョーラ・ダ・グラサ礼拝堂で恩寵聖母像を実見したことは今回の調査における最大の収穫であった。ユーラシア大陸の西南端に位置するこの土地は16世紀以降の大航海時代に船乗りの崇拝を集めてきた場所であり、守護者としての恩寵聖母の信仰がスペイン南部からポルトガルの大西洋沿岸部に及んでいることを現地調査によって明らかにできた。その信仰は東アジアの海域世界にもたらされており、媽祖がさまざまな民間信仰を取り込みつつ海の守護神として崇拝された存在であることを顧みたとき、両者の接点を比較宗教史の視点から解明していくことが今後の課題となった。媽祖崇拝を研究対象として民間信仰と東アジアの諸宗教との融合のありようをたどる考察は、上述のとおり当初の計画以上に進展しつつあるが、研究途上で新たな課題も浮かび上がってきた。南中国沿岸部の地方神であった媽祖の崇拝が海域世界の守護神として東アジアの広い範囲に伝播し始めた16世紀明代は、世界史上の大航海時代にあたり、ヨーロッパの宣教師や船乗りがこの地に頻繁に渡来していた。キリスト教世界における海の守護聖女の崇拝も東アジアの海域世界に伝播しており、媽祖崇拝との融合ないしは混淆も当初予想していた以上に盛んであったことが明らかになってきた。媽祖崇拝の比較宗教史的考察を推進していくためには、このことを大幅に視野に入れる必要が生じた。報告者はすでに発表したいくつかの学術論文において16世紀のカトリック教会による対抗宗教改革運動の世界的拡大という視野から東アジアの宗教の変容について考察を試み、ポルトガルやスペインの宣教師が海の守護聖女の崇拝をもたらした土地に媽祖崇拝も根付いた可能性に言及してきたが、本年度に行なった国内および海外の現地調査によってこうした視点をさらに追求していくことが一層重要であると認識するに至った。次年度(平成31年度)は媽祖に関する伝記資料の解読に加え、海外調査のおりに古書店で入手した宗教史関係の研究文献を精読していく。さらに国内および海外での調査中に撮影した写真資料が相当数にのぼるので、それらを整理して研究に活用できるようにすることが急務である。

以上の成果を東洋大学東洋学研究所の紀要『東洋学研究』に学術論文として執筆する予定であり、さらに『東アジアの信仰と造像』と題する単著を科学研究費の研究期間が満了する次々年度(平成32年度)に刊行したいと考えている。本研究は東アジアの海域世界で守護女神として圧倒的な信仰を集めている媽祖を対象に、中国の民間で芽生えたその崇拝が、多様な宗教的伝統と接触を重ねて信仰圏を拡大した過程を比較宗教史の視点から解明することを目的とする。媽祖崇拝の歴史的展開と空間的拡大のありようを明らかにするための基礎作業として、研究期間内のすべての年度で文献研究と現地調査を併行して行なう。初年度にあたる平成29年度は、媽祖伝承に関する基本的な漢文資料を解読・邦訳し、あわせて日本国内における現地調査を行なった。12世紀宋代に誕生したとされる媽祖の伝記資料はいずれも後世に撰述されたものであり、それを理解するためには宋代の同時代文献をもとにした史料批判が不可欠となる。伝記資料としては16世紀明代撰述の『天妃顕聖録』が代表的なものとして知られるが、媽祖の事蹟に神話的要素が混入した後の産物であることを念頭に置きつつ、現代につながる媽祖の絶大な崇拝を準備した文献として精読したうえで邦訳を試みた。現地調査は日本における媽祖崇拝の典型的な事例が残されている茨城県に焦点をしぼって行なった。茨城県下では媽祖が在地信仰と接触をかさねた点が特徴としてあげられる。現在は漁業従事者の民俗事象と溶けあっており、北茨城市磯原の天妃社では今も天妃姫の名のもとに媽祖の祭礼が行なわれている。大洗町磯浜にかつてあった天妃社は現在では弟橘比賣神社に改称されたが祭礼はなおも存続しており、開基の東皐心越が住持した水戸市八幡町の祇園寺に媽祖像が安置されていた。以上の現状を写真撮影と聞き取り調査をもとに把握した。本研究を推進していくうえで基本となる作業は、文献研究と現地調査を併行して行なうことである。まず文献研究については当初計画していた『天妃顕聖録』を入手してその解読ならびに該当箇所の邦訳を終えることができた。この書物は媽祖の伝記資料としてもっとも重要なものの一つだが、成立は媽祖の没年から多くの時を隔てているため著しく神話的な潤色が加わっている。歴史的な事実を解明するためには媽祖と同時代の文献である『宋会要輯稿』等を参照する必要がある。これも初年度内に参照でき、媽祖伝承の成立に関する文献的な基礎を固めることができた。次に現地調査については計画どおり茨城県下における媽祖崇拝の変容の痕跡をたどることができた。そこでは媽祖が神社において在地の神格に習合していたことを写真撮影と聞き取り調査をもとに実地において明らかにした。次の課題は、これを受け継ぐかたちで東アジアにおける媽祖崇拝の最北の到達点を訪ねることである。次年度(平成30年度)のなるべく早い時期に青森県下北半島での現地調査を予定しているが、これによって東日本における媽祖崇拝地はおおむね網羅できる。これに続いて海外における現地調査を試みたい。第2年度にあたる本年度(平成30年度)は、媽祖伝承に関する基本的な漢文資料の解読・邦訳作業を継続し、あわせて日本国内および海外における現地調査を行なった。
金属イオンとの配位に基づく親水性抗生物質の新規な分析法の開発と水環境分析への応用

本研究課題では,親水性抗生物質を金属イオンに配位させることにより,高速液体クロマトグラフ法の既存の分離モードに配位能をプラスした新規な分離モードで分離分析する方法を開発し,その水環境中での環境動態を解析することを目的としてきた。親水性抗生物質は分子内にヒドロキシル基を多数持っていることから,研究一・二年度はモデル化合物としてアルコール類を対象として分析法の開発を試みた。炭素数が1-3のアルコール5種について,移動相に銅イオンを加えることにより逆相HPLC-UV法により分析する方法を開発し,食品や家庭用品の分析に応用し投稿した。炭素数が4以上の糖アルコール類についてはモリブデン酸イオンを用い,炭素数6の糖アルコール3種を逆相HPLCにより,また炭素数4-6の糖アルコール6種を逆相イオンペアHPLCにより分離しUV法により検出する分析法を開発し,医薬品,食品および家庭用品の分析に応用し投稿した。紫外/可視領域に特異な吸収を持たないカナマイシン・ストレプトマイシンなどのアミドグルコシド系抗生物質は分子内にアミノ糖を持つ。研究三年度である本年度は,このアミノ糖についてHPLC-UV法による分離・検出条件を検討した。また,糖アルコールのモリブデン酸イオン添加移動相を用いての分離を検討している中で,試料中の無機陰イオン類も同時に検出されることを見出した。このことより,逆相HPLC-UV法によるイオン分析についても検討を行った。その結果,アミノ糖の分析について新たな知見は得られなかったが,無機陰イオン分析についてはいくつかの知見が得られたことから,学会発表を行った。さらにこの無機陰イオン分析について,今後検討を続けていく(基盤研究(C)19K06348逆相カラムでできる無機陰イオン分析ー分離機構の解明と水環境分析への応用)。本研究課題では,親水性抗生物質を金属イオンに配位させることにより,高速液体クロマトグラフ法の既存の分離モードに配位能をプラスした新規な分離モードで分離分析する方法を開発し,その水環境中での環境動態を解析することを目的とする。申請者らはこれまでに,親水性の高い金属キレート剤や有機酸類の金属イオンとの錯体を,逆相高速液体クロマトグラフ-紫外吸収検出(HPLC-UV)法により一斉かつ高感度に分析する方法を開発し,環境水や食品,家庭用品の分析に適用してきた。親水性抗生物質は分子内にヒドロキシル基を多数持っていることから,研究初年度である本年度はヒドロキシル基を持つアルコール類を対象として分析法の開発を試みた。アルコール類は親水性が非常に高くまた特異的な吸収をほとんど持たないことから,これまでは親水性HILICモードまたは配位子交換モードで分離,示唆屈折率検出器や蒸発型光散乱検出器で分析されてきた。しかしながら,これら検出器に特異性はなく,充分な感度が得られていない。炭素数4以上のポリオールについてモリブデン酸を用いた逆相モード(A)を用いて,また炭素数が1-3のアルコールについて銅イオンを用いた逆相モード(B)を用いて,HPLC-UV法による分離・検出について検討した。その結果,(A)では炭素数6以上の糖アルコール3種が逆相モードで,また炭素数4以上の糖アルコール6種がイオンペア/逆相モードで保持・分離され, (B)では炭素数が1-3のアルコール5種が逆相モードで保持・分離され,ともに紫外部吸収により検出できることが分かった。開発した分析法を,食品や家庭用品の分析に応用した。紫外部に吸収を持たず,通常逆相カラムでは保持されないアルコール類が,移動相に金属イオンを加えることにより,金属イオンと配位した形で逆相カラムにより分離されること,また紫外部に吸収をもつようになることがわかった。これはアルコール類が,既存の逆相モードに配位能をプラスした,新規な分離モードで分離されたことを示しており,今後,この方法を親水性抗生物質の分析に適用することができると思われるため。親水性抗生物質は分子内にヒドロキシル基を多数持っていることから,まず,モデル化合物としてアルコール類を対象として分析法の開発を試みた。アルコール類は親水性が非常に高くまた特異的な吸収をほとんど持たないことから,これまでは親水性HILICモードまたは配位子交換モードで分離,示唆屈折率検出器や蒸発型光散乱検出器で分析されてきたが,これら検出器に特異性はなく,充分な感度が得られていない。申請者らは研究一年度において,炭素数6の糖アルコール3種について,移動相にモリブデン酸イオンを加えることにより,逆相モードにより分離し紫外部吸収により検出する方法(逆相HPLC-UV法)を開発し,食品の分析に応用し投稿した。研究二年度である本年度は,炭素数が1-3のアルコール5種について,移動相に銅イオンを加えることにより逆相HPLC-UV法により分析する方法を開発し,食品や家庭用品の分析に応用し投稿した。また,モリブデン酸イオンを用い,炭素数6のみでなく,炭素数4-5の糖アルコールを含めた6種の糖アルコールについて,逆相イオンペアHPLC-UV法により一斉分析する方法を開発し,医薬品,食品および家庭用品の分析に応用し投稿した。

紫外部に吸収を持たず,通常逆相カラムでは保持されないアルコール類を,移動相に金属イオンを加えることにより金属イオンと配位させ,逆相カラムにより分離・紫外部吸収により検出することができた。これはアルコール類が,既存の逆相モードに配位能をプラスした,新規な分離モードで分離されたことを示しており,今後,この方法を親水性抗生物質の分析に適用することができると思われるため。本研究課題では,親水性抗生物質を金属イオンに配位させることにより,高速液体クロマトグラフ法の既存の分離モードに配位能をプラスした新規な分離モードで分離分析する方法を開発し,その水環境中での環境動態を解析することを目的としてきた。親水性抗生物質は分子内にヒドロキシル基を多数持っていることから,研究一・二年度はモデル化合物としてアルコール類を対象として分析法の開発を試みた。炭素数が1-3のアルコール5種について,移動相に銅イオンを加えることにより逆相HPLC-UV法により分析する方法を開発し,食品や家庭用品の分析に応用し投稿した。炭素数が4以上の糖アルコール類についてはモリブデン酸イオンを用い,炭素数6の糖アルコール3種を逆相HPLCにより,また炭素数4-6の糖アルコール6種を逆相イオンペアHPLCにより分離しUV法により検出する分析法を開発し,医薬品,食品および家庭用品の分析に応用し投稿した。紫外/可視領域に特異な吸収を持たないカナマイシン・ストレプトマイシンなどのアミドグルコシド系抗生物質は分子内にアミノ糖を持つ。研究三年度である本年度は,このアミノ糖についてHPLC-UV法による分離・検出条件を検討した。また,糖アルコールのモリブデン酸イオン添加移動相を用いての分離を検討している中で,試料中の無機陰イオン類も同時に検出されることを見出した。このことより,逆相HPLC-UV法によるイオン分析についても検討を行った。その結果,アミノ糖の分析について新たな知見は得られなかったが,無機陰イオン分析についてはいくつかの知見が得られたことから,学会発表を行った。さらにこの無機陰イオン分析について,今後検討を続けていく(基盤研究(C)19K06348逆相カラムでできる無機陰イオン分析ー分離機構の解明と水環境分析への応用)。今後は,本年度のアルコール類の分析で得られた知識を活用し,親水性抗生物質について,金属イオンを添加した移動相を用いたHPLC-UV法による分析法を開発する。カナマイシン等アミノグルコシド系抗生物質は分子内にアミノ糖を含むが,アミノ糖もアルコール類と同様極性が高く発色団を持たないため,通常の逆相HPLC-UV法では分離・検出が難しい。研究二年度である次年度は,まずアミノ糖について,金属イオンや移動相の種類,使用するカラムなどを変え,HPLC-UV法による分離条件を検討する。また,開発した分析法を多様な試料に適用するため,濃縮また妨害因子除去等の前処理法の検討を行う。研究一・二年度の結果を踏まえ,研究三年度において,親水性抗生物質の新規な分析法の開発と水環境試料への適用を目指す。今後は,研究一・二年度の結果を踏まえ,親水性抗生物質について,金属イオンを添加した移動相を用いたHPLC-UV法による分析法を開発する。紫外/可視領域に特異な吸収を持たないカナマイシン,ゲンタマイシンやリンコマイシンなどの親水性抗生物質は,分子内に金属イオンと錯化合物を形成しうる構造を持っている。