hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
珪藻の細胞壁の進化を新奇パルマ藻から探る

細胞壁形成過程の形態学的解析細胞がケイ酸質の鱗片で覆われているスケールパルマ株を用いて,鱗片形成過程の形態学的解析を行った。スケールパルマ株は均質な円形の鱗片で細胞が覆われているが,鱗片の形成過程の観察により鱗片は、環状のパターンセンター(PC)から形成される鱗片と線状のPCから形成される鱗片の2種類が存在することが示された。スケールパルマ株で、2種類の環状と線状の2種類のPCを持つという結果は、29年度に形態学的解析を行ったTriparma laevisの細胞壁に見られる円形プレートの形成過程の観察結果と一致していた。そのため新奇スケールパルマ株の鱗片形過程の解析結果は、29年度のTriparma laevisのプレート形成過程の観察結果から導かれた現在の羽状珪藻のvalve形成時に見られる線状のPCは、羽状珪藻で新に獲得されたものでは無く、パルマ藻と珪藻の共通の祖先の段階で環状と線状の2種類のPCを持っていたという仮説を支持するものである。殻形成に関与する分子機構の解明ゲノム解析の結果から、パルマ藻T. laevisのケイ素輸送体(silicon transporter: SIT )は、一般的な珪藻の10回膜貫通型のSITとは異なり、膜貫通領域を20回持つ可能性が示唆されている。cDNAを用いたSIT遺伝子のクローニングにより、SIT遺伝子領域から3種類の転写産物(TlaSIT1-3)が転写されているこが示され、それぞれの転写産物から予測されるSIT1-3タンパク質の分子量は、105 kDa、72 kDa、67kDaであった。T. laevisのSITタンパク質を同定するため、抗SIT抗体を作製し、免疫ブロット解析を行ったところ、250 kDa付近にバンドが検出された。この結果は、SITは細胞内では2量体もしくは3量体として存在していることを示唆している。1.細胞壁形成過程の細胞学的解析:パルマ藻T. laevisのプレートの形成過程の観察により、パルマ藻のプレートの形成過程では、中心珪藻のvalveの形成過程の見られる環状のパターンセンター(PC)だけでなく、羽状珪藻のvalve形成時に観察される線状のPCも観察されることが示された。これまでは羽状珪藻のvalveで見られる線状のPCは,中心珪藻から羽状珪藻が進化するときに獲得されたと考えられていたが,この結果からパルマ藻と珪藻の共通の祖先が既に環状と線状の2種類のPCを持っていたことが示唆された。この成果の一部は、国際雑誌に公表した。2.細胞壁形成に関わる分子機構の解析網羅的遺伝子発現解析:パルマ藻T. laevisの細胞壁形成に関わる遺伝子発現の変化を詳細に解析するため、ケイ素添加1,12,24時間後の遺伝子発現をRNA-seqにより解析した。現在はRNA-seqにより得られたデータのバイオインフォマティクス解析を行っている。ケイ素重合に関与する遺伝子の探索:パルマ藻ゲノムから珪藻のケイ素重合に関与する遺伝子(silicanin)と類似性が高い遺伝子(Tlsil)の部分配列が見いだされたため。Tisilのパルマ藻細胞における機能を解析するため、クローニングを行い、全長1149bp (383AA)からなるTlsil遺伝子の全長を得た。現在は本研究室が有しているパルマ藻6株のゲノム情報とデータベースに含まれる珪藻ゲノム情報を元に、パルマ藻と珪藻間におけるsilicanin遺伝子の系統解析を行うと共に、Tlsil遺伝子の局在解析を行うために、GFP融合Tlsilタンパク質を合成する発現ベクターを構築している。網羅的遺伝子発現解析:パルマ藻T. laevisにおけるケイ素添加後の経時的な遺伝子発現変動についてGO(gene ontology)解析とKEGGを用いた代謝パスウェイエンリッチメント解析行い、パルマ藻の環境中の及び細胞内のケイ素濃度の変化に適応したシグナル伝達経路とケイ素の細胞壁合成に関わる物質代謝に関わる遺伝子群の同定を行う。パルマ藻におけるシリカの細胞壁形成に関わる遺伝子の機能解析:ケイ藻の研究によりケイ素輸送(SIT)とケイ素重合(Silicanin)に関わることが示唆さているそれぞれ遺伝子について、パルマ藻細胞での機能を解明するため、抗体を用いた免疫蛍光染色法・免疫電子顕微鏡法及び、GFP融合タンパク質を用いた局在解析、リアルタイムPCR法のよる発現解析を行う。分子生物学的知見と、これまでに電子顕微鏡を用いた細胞壁形成過程の細胞学的知見を組み合わせることで、パルマ藻におけるシリカの細胞壁形成機構の包括的な理解を目指す。[細胞壁形成に関わる分子機構の解析]パルマ藻Triparma laevisの細胞壁形成に関わる遺伝子を同定するため,ケイ素欠乏条件では細胞壁を作らないまま増殖する特性を利用し,RNA-seq解析を用いて細胞壁を持つ細胞と持たない細胞間の遺伝子発現の違いを比較した.細胞壁を持つ細胞と持たない細胞では,それぞれ207,99個の遺伝子で,有意な発現量の上昇が見られた.細胞壁を持つ細胞で発現量の上昇が見られた遺伝子の中には,ポリアミン合成に関わる遺伝子や脂肪酸の分解に関わる遺伝子がそれぞれ2個ずつ含まれていた.珪藻ではポリアミンがシリカの重合に関与することが報告されており,パルマ藻のシリカ重合も珪藻と同様にポリアミンが関与していることが示唆された.また,T. laevisの細胞壁形成過程の透過型電子顕微鏡(TEM)観察により,T. laevisの細胞は細胞壁を放出した後に,細胞壁を覆っていた膜を細胞内に回収することが報告されている.

RNA-seqの結果により細胞壁を形成している細胞は,脂肪酸の分解に関わる酵素の量を増し,膜のリサイクルを促進していることが示唆された.[細胞壁形成過程の形態学的解析]パルマ藻は,シリカの円形のプレート(shield,ventral)と非円形のプレートで覆われている.パルマ藻のプレートは,装飾や形状が中心類珪藻の栄養細胞の被殻や増大胞子の鱗片と類似していることが知られているが,プレートの形成過程は調べられていないため,発生学的観点からの相同性は十分に検証されていない.T. laevisのプレートの形成過程の形態学的解析を行った.熱硫酸法によるシリカの重合過程の観察により,円形のshieldプレートは常に中心珪藻と良く似た環状のパターンセンター(PC)から形成されるが,ventralプレートは環状のPCだけでなく線状のPCからも形成されことが示された.[細胞壁形成過程の細胞学的解析]祖先型パルマ藻のスケールパルマ株の細胞壁である鱗片の形成過程を解析し,29年度に明らかにしたパルマ藻Triparma laevisのプレートの形成過程との比較を行っている.スケールパルマ株の鱗片は,T. laevisの円形プレートと同様に環状のパターンセンターから形成されることが示された.この結果はスケールパルマ株の鱗片とパルマ藻のプレートは発生学的観点から相同の構造であることを示唆している.[細胞壁形成に関わる分子機構の解析]T. laevisを用いて細胞壁を持つ細胞と持たない細胞の遺伝子発現の違いから,細胞壁形成に関わることが示唆される複数の遺伝子が検出された.細胞壁を持つ細胞では,207個の遺伝子で発現量の増加が見られる一方で,珪藻の報告では細胞壁形成時に発現量の増加が報告されているケイ素輸送体(silicon transporter, SIT)の発現量に有意な違いは見られなかった.珪藻のSITは,転写調節による発現制御に加えて,転写後の翻訳調節による制御も報告されているため,パルマ藻のSITの予測されるアミノ酸配列に基づきペプチド抗体を作成し,蛍光抗体法によるSITの細胞内局在部位の同定とウエスタンブロット法のよるSITタンパク質の発現量解析に着手した.蛍光抗体法では珪藻と同様に細胞膜へのSITの局在が確認される一方で,ウエスタンブロット法では遺伝子のアミノ酸配列から予想された分子量とは異なる位置にSITのシグナルが検出された.現在はウエスタンブロットで得られた結果を検証するため,SIT組換えタンパク質を抗原とした,抗体作製に向けて大腸菌を用いた組換えSITタンパク質の作成を行っている.これまでの結果は,国際学会で1回,国内の学会で2回発表し,30年度中に国際誌への論文投稿を予定している.細胞壁形成過程の形態学的解析細胞がケイ酸質の鱗片で覆われているスケールパルマ株を用いて,鱗片形成過程の形態学的解析を行った。スケールパルマ株は均質な円形の鱗片で細胞が覆われているが,鱗片の形成過程の観察により鱗片は、環状のパターンセンター(PC)から形成される鱗片と線状のPCから形成される鱗片の2種類が存在することが示された。スケールパルマ株で、2種類の環状と線状の2種類のPCを持つという結果は、29年度に形態学的解析を行ったTriparma laevisの細胞壁に見られる円形プレートの形成過程の観察結果と一致していた。
顎顔面領域へのBMP、SHH遺伝子を用いた遺伝子治療の基礎的研究

ヒト、マウス由来臓器cDNAライブラリーよりヒト、マウスBMP-2、BMP-4、SHHcDNAを単離し,遺伝子配列を確認、cDNAを作製、ヒト、マウスのBMP-2、BMP-4、SHH活性部位をプラスミドベクターへ組み込み、ヒト、マウス口腔由来線維芽細胞に遺伝子導入を行い、遺伝子発現強陽性細胞のスクリーニングを行った。スクリーニングの結果得られた強陽性細胞はマウス遺伝子導入マウス由来細胞のみであった。遺伝子発現強陽性細胞を大量培養し、ゼラチンカプセル内に細胞を封入し、ヌードマウス大腿部皮下へ移植したところ、軟X線写真で石灰化が確認でき、摘出組織のトルイジンブルー染色では軟骨のメタクロマジーとともに軟骨内骨化誘導が確認された。マウス頸部、肩部、胸部、前後肢周囲において有茎筋弁の作製、維持に対する検討を行い、BMP-2、BMP-4、SHH遺伝子導入細胞移植、BMP-2、BMP-4、SHH遺伝子の直接導入による筋弁の骨化実験は、大胸筋、浅殿筋、大腿二頭筋において評価可能であることが示唆された。マウスBMP-2、BMP-4、SHHcDNA挿入プラスミドベクターを各種cell line(A9,C3H10T1/2,KMS-6)、マウス口腔由来線維芽細胞に遺伝子導入したところ、C3H10T1/2、マウス口腔由来線維芽細胞では良好に遺伝子導入、上記遺伝子蛋白分泌が認められたが、A9、KMS-6ではほとんど認められなかった。また、マウスBMP-2、BMP-4、SHH遺伝子導入C3H10T1/2、マウス口腔由来線維芽紳胞の強陽性細胞の遺伝子発現は予想された様に一過性であり、継代数が1-12継代までは安定した蛋白分泌が認められたが、それ以降は急激に減少した。大胸筋、浅殿筋、大腿二頭筋の筋弁にBMP-2、BMP-4、SHH遺伝子導入強陽性細胞移植、同様の筋弁に直接遺伝子導入実験を行った。筋弁にマウスBMP-2、BMP-4、SHHcDNA挿入プラスミドベクター遺伝子導入強陽性細胞をゼラチンカプセル内に封入し、筋弁中央部に移植したところ、移植10日後にはいずれの筋弁の移植部位おいても軟X線写真で石灰化が確認でき、摘出組織のトルイジンブルー染色では軟骨のメタクロマジーとともに軟骨内骨化誘導が確認された。しかしながら骨軟骨形成部位は担体ゼラチンカプセルを移植した範囲に限定されていた。また、マウスBMP-2、BMP-4、SHHcDNA挿入プラスミドベクターをマイクロバブルと混合、1mlシリンジにて筋弁内に注入し、直上より超音波刺激による遺伝子導入を施行した。遺伝子導入14日後にはいずれの遺伝子導入部位においてもわずかながら軟X線写真で石灰化が確認でき、骨軟骨組織形成がトルイジンブルー染色で確認された。骨軟骨形成は細胞移植による形成範囲に及ばず、極めて狭い範囲であった。本研究においてBMP遺伝子、SHH遺伝子を組み込んだベクター導入細胞移植、直接遺伝子導入のいずれにおいても移植筋の骨軟骨への転化という現象が確認された。

筋弁にマウスBMP-2、BMP-4、SHHcDNA挿入プラスミドベクター遺伝子導入強陽性細胞をゼラチンカプセル内に封入し、筋弁中央部に移植したところ、移植10日後にはいずれの筋弁の移植部位おいても軟X線写真で石灰化が確認でき、摘出組織のトルイジンブルー染色では軟骨のメタクロマジーとともに軟骨内骨化誘導が確認された。しかしながら骨軟骨形成部位は担体ゼラチンカプセルを移植した範囲に限定されていた。また、マウスBMP-2、BMP-4、SHHcDNA挿入プラスミドベクターをマイクロバブルと混合、1mlシリンジにて筋弁内に注入し、直上より超音波刺激による遺伝子導入を施行した。遺伝子導入14日後にはいずれの遺伝子導入部位においてもわずかながら軟X線写真で石灰化が確認でき、骨軟骨組織形成がトルイジンブルー染色で確認された。骨軟骨形成は細胞移植による形成範囲に及ばず、極めて狭い範囲であった。本研究においてBMP遺伝子、SHH遺伝子を組み込んだベクター導入細胞移植、直接遺伝子導入のいずれにおいても移植筋の骨軟骨への転化という現象が確認された。本年度は,最初にヒト,マウス由来臓器cDNAライブラリーよりそれぞれデザインしたプライマーを用いてヒト,マウスBMP-2,BMP-4,SHHcDNAを単離し,遺伝子配列を確認した.続いて,ヒト,マウスBMP-2,BMP-4,SHHcDNAの活性部位をプラスミドベクター,アデノウィルスベクターへ組み込み,ヒト,マウス口腔由来線維芽細胞に遺伝子導入を行った.導入効率は,プラスミドベクターを用いた場合,ヒト遺伝子のマウス細胞への導入は約6%,ヒト細胞へは約4%,マウス遺伝子のマウス細胞への導入は約8%,ヒト細胞へは1%以下であった.アデノウィルスベクターを用いた場合,ヒト遺伝子のマウス細胞への導入は約30%,ヒト細胞へは約27%,マウス遺伝子のマウス細胞への導入は約46%,ヒト細胞へは10%以下であった.遺伝子導入した細胞だけを単離し,ALP活性,オステオカルシン活性についてELISAを用いて検討した.遺伝子導入前後の細胞を比較すると,ALP活性,オステオカルシン活性は経時的に上昇が見られた.遺伝子導入前後の細胞を位相差顕微鏡で形態を比較すると,線維芽細胞の紡錘形から敷石状の細胞への変化,石灰化の凝集が観察された.また,本年度予算で購入した落射蛍光顕微鏡を用いたBMP-2,BMP-4,SHH抗体を用いた蛍光免疫組織化学染色では,遺伝子導入後の細胞で各抗体に対する陽性反応が認められた.BMP-2,BMP-4,SHHプラスミドベクターを遺伝子導入した細胞を大量培養し,ゼラチンカプセル内に細胞を封入し,ヌードマウス大腿部皮下へ移植したところ,軟X線写真で石灰化が確認でき,摘出組織のトルイジンブルー染色では軟骨のメタクロマジーとともに軟骨内骨化誘導が確認された.今年度は,マウスにおける筋皮弁モデル,血管柄付き筋皮弁モデルを作製し,皮弁部に遺伝子組み込みプラスミドベクター,アデノウィルスベクターを直接注入し,硬組織形成について検討を行う予定である.本年度はマウス頸部,肩部,胸部,前後肢周囲において有茎筋弁の作製,維持に対する検討,マウスBMP-2,BMP-4,SHHcDNA挿入プラスミドベクターを各種Cell line(A9(マウス皮膚由来由来線維芽細胞),C3H10T1/2(マウス胚由来線維芽細胞様細胞),KMS-6(マウス胚由来線維芽細胞様細胞)),マウス口腔由来線維芽細胞にリン酸カルシウム法を用いた遺伝子導入,BMP-2,BMP-4,SHH蛋白を強陽性で分泌している細胞のスクリーニング,強陽性細胞の大量培養継代数での蛋白分泌の評価を行った.マウス頸部,肩部,胸部においては,僧帽筋,鎖骨頭筋,大胸筋を,前後肢周囲においては浅殿筋,大腿二頭筋を有茎筋弁として挙上,筋弁はゴアテックス膜にて覆い,静置,皮膚縫合し,約2週間経過観察とした.2週間後,各筋弁の状態を評価した.
線虫glad-4/GDL1遺伝子のエピジェネティクスな発現調節機構の解明

ブドウ糖や果糖などの糖質が代謝されることにより生じるメチルグリオキサール(MG)は非常に細胞毒性が強い。MGの蓄積は糖尿病合併症の発症・進展に関与するだけでなく、神経変性疾患などの多様な疾患にも深くかかわることが示されている。MGの解毒酵素であるGlyoxalase1 (GLO1)が統合失調症などの精神疾患との関連が示唆され、ヒトGLO1遺伝子内に存在するホモポリマー遺伝子多型とGLO1の発現量の変化が統合失調症の病態と相関することから、線虫C. elegansを用いた遺伝学、生化学、分子生物学及びエピジェネティクな解析から統合失調症を含む神経機能障害のメカニズムを解明し治療薬の開発に繋げる。
ストレスによる動脈硬化症の発症メカニズムの解明と運動療法への応用

本研究では、ストレスによる動脈硬化症の発症因子の特定とその役割について検討することを目的とした。さらに、動脈硬化症の予防に効果的とされる運動トレーニングとストレスによる動脈硬化症の発症因子の変動を評価することで、定期的運動が動脈硬化症の予防に有効であることの科学的な裏付けを目的とした。動脈硬化症は、血液中を循環する単球が血管壁へ浸潤し、マクロファージへ分化後、コレステロールを取り込み、泡沫化することで発症する。我々は、単球の血管壁への浸潤誘導因子であるCCL2とその受容体であるCCR2に着目し、ストレスにより分泌が促進される因子との関連性を検討した。その結果、ストレスホルモンは単球のCCR2の発現を増加させ、単球の浸潤能力を増加することをin vitroの検討から明らかにした。In vitroの結果と実際に生体でみられる現象を統合的に解明するため、-過性の高強度運動ストレスを負荷し、運動前、運動直後および運動2時間後の単球のCCR2とその血清を用いたex vivoの検討を行った。その結果、単球のCCR2の発現は、運動ストレス負荷律の血清刺激にて増加し、単球の浸潤能力を増加することを明らかにした。さらに、動脈硬化症の予防に効果的である運動トレーニング介入を高齢者に介入し、CCR2の発現変化を検討した。その結果、単球のCCR2の発現はトレーング期間前後で変化しなかった。これらめ結果は、ストレスによる動旅硬化症の発症はストレスホルモンにより制御される可能性があること、さらに、高齢者における定期的運動は単球のCCR2の発現を制御しない可能性が示唆された。ストレスは動脈硬化症のリスクファクターの1つである。動脈硬化症の発症にはケモカインとケモカイン受容体の相互作用を介した単球の動脈壁への浸潤が必要不可欠であると考えられている。単球に発現するケモカイン受容体CCR2と動脈壁から産生されるケモカインMCP-1(CCL2)の相互作用は、単球の動脈壁への浸潤を制御する中心的役割を果たしていると考えられている。本研究ではストレスホルモンによる単球のCCR2の発現制御の有無を明らかにすることを研究の第一課題とした。ヒト末梢血から単核球を比重分離し、カテコールアミン(エピネフリン、ノルエピネフリン)あるいはグルココルチコイド(コルチゾール)にて刺激培養後、単球CCR2の発現変化を観察した。その結果、単球CCR2の発現はカテコールアミンでは変化しなかったが、グルココルチコイドでは刺激培養開始6時間後より有意な増強を開始し、以降24時間後まで培養時間依存的な発現増強を示した。また、この単球のCCR2の発現増強はコルチゾール濃度依存的な増強を示した。さらに、単球のCCR2の発現増強による浸潤能力の変化を観察するため、末梢血単核球をコルチゾールにて24時間刺激培養しCCL-2に対する浸潤能力を評価した。その結果、コルチゾールで刺激培養した単球はコントロールと比較してCCL2に対する移動能力が高かった。これらの結果、ストレスホルモンの1つであるグルココルチコイドは単球のCCR2の発現を増強させ、単球の移動能力を上昇させることが明らかとなった。今後、ストレスホルモンと動脈硬化症の関連性をin vivoにて検証することで、ストレスによる動脈硬化症の発症メカニズムの解明と予防への応用が期待できる。
産業集積地域のネットワーク・イノベーションに関する国際地域間比較研究

研究代表者は新潟県燕市の産業集積について、洋食器・ハウスウェアの「地場産業」地域と見られてきた燕地域が、実は業種の転換や多角化、流通チャネルの再編、新技術・高度技術を駆使した新分野進出に取り組む地域中小企業の多様な取り組みにより、多様な消費財・生産財を産出する「地域産業集積」へ変容している点を明らかにした。本研究は、地域中小企業の新しいネットワークの形成とそこから派生したイノベーションの連鎖を「ネットワーク・イノベーション」ととらえ、産業集積地域が持続的に発展していくという、ひとつの仮説を構想している。「ネットワーク・イノベーション」が地域から内発的かつ持続的に形成・発展していくためには「地域的な必要十分条件の抽出」と「地域の持続的発展を側面支援する基盤整備」について理論的・政策的に解明していくことが必要である。そこで、中小企業のパフォーマンスが高く評価されているイタリアの産地と国内産地との国際地域間比較研究を行うため、イタリア・ブレッシャにて現地調査を2度にわたって実施した。狭隘な山間地に位置するこの地域では、第3のイタリア諸地域と同様に、195070年代にかけて活発な創業がみられ、周辺地域にまでその勢いが及んだ。しかし、面会した現地企業家がわれわれに語った「もはやかつてのような産地の意味は消滅した」という言葉が示すように、拡大EU、中国製品との競合、欧州市場の低迷は、現地の中小企業地域に大きな影響を及ぼしている。この間の政策的支援・関与は、この地域・州では希薄なもので、現市長においてようやく産地企業・技術データベースの構築が進められる段階に至った。このことは、日本の地域産業政策・支援がイタリア北部に比べると先進的で充実していたことが示唆され、それ故にネットワーク形成の発展がみられない原因とも考えられる。日本の地域経済再生のためには「ネットワーク・イノベーション」が地域から内発的かつ持続的に形成・発展していくための「地域的な必要十分条件の抽出」と「地域の持続的発展を側面支援する基盤整備」について理論的・政策的に解明していく。そこで、中小企業のパフォーマンスが高く評価されているイタリアを中心に国際地域間比較研究の試みを通して、日本中小企業の課題と政策的含意の抽出を行うため、本年度は研究協力者を伴い、イタリアにて現地調査を実施した。イタリアでの訪問先は、企業では洋食器メーカーやバルブメーカー、研磨下請け企業、自動車部品メーカー、産業用機械メーカー、測定器具メーカー、また公的・私的機関としては、商工会議所、産業連盟、中小企業連盟、地域企業振興公社である。一部で「もはやかつてのような産地の意味は消滅した」という現地経営者の言葉が示すように、拡大EU、中国製品との競合、欧州市場の低迷は、イタリアの中小企業地域に大きな影響を及ぼしている。その中にもネットワークとイノベーションの可能性を示唆しうる取り組みが調査から看取され、次年度に向けてさらなる調査と分析が不可欠である。
核内受容体活性化を基盤とした漢方方剤における厚朴配合の意義の解明

本研究により、漢方方剤に含まれる厚朴に含有されるhonokiolが新規RXRアゴニストとして、様々な核内受容体アゴニストによる作用を増強する機能を明らかにした。結果として、honokiolはヘテロダイマーパートナーアゴニストと共存することにより、ABCA1やGLUT4のmRNA発現誘導を大きく増強する作用を有していることが明らかになった。さらに、honokiolは動脈硬化症やメタボリックシンドロームに有用な作用を有していることが明らかとなった。今年度は研究室の異動があったため、これまでの研究対象としていたメタボリックシンドロームや動脈硬化症などの疾患への応用という目的から、新たな研究室での研究対象となる自己免疫疾患への応用へと対象の変更を行って研究を進めることとした。自己免疫疾患の抑制に大きく関与すると考えられている制御性T細胞は核内受容体RARのアゴニストであるレチノイン酸によって分化促進することが知られている。そこで、RARとヘテロダイマーを形成するRXRについて合成アゴニストであるベキサロテンと厚朴に多く含有される天然由来RXRアゴニストであるホーノキオールについて制御性T細胞への分化促進作用を検討した結果、ともに分化促進作用を有している結果を得た。また、レチノイン酸との相乗効果も見出され、核内受容体を介した自己免疫疾患治療効果が期待される。現在、自己免疫疾患のモデルとして使用されるEAEモデルマウスを使用してホーノキオールおよび厚朴抽出エキスの効果を検討している。これまでの研究結果からRARアゴニスト活性を示す生薬も多数みいだしていることから、今後、RARアゴニスト活性を有する生薬を含む漢方方剤において厚朴を加えることにより、自己免疫疾患モデルでの有効性が変化するかどうか検討を行っていきたいと考えている。平成23年度は、in vitroにおけるhonokiolによる核内受容体アゴニストとの増強作用の解析を中心に研究を行ってきた。具体的には、メタボリックシンドロームに関わる核内受容体として、PPARガンマおよびPPARデルタのアゴニストとhonokiolを共存させた際における標的遺伝子発現の誘導作用の変化について調べた。その結果、脂肪細胞において脂肪細胞の分化誘導を促進するとともに、標的遺伝子であるaP2,C/EBPalpha,GLUT4,adiponectinなどの発現誘導を増強する作用をhonokiolが持つ結果が得られた。また、骨格筋細胞においては熱産生などに関わる遺伝子であるUCP-2の遺伝子発現誘導を増強する結果も得られた。これらの結果より、脂肪組織や骨格筋においてadiponectinを産生したり、糖の取り込みや熱産生を活性化することにより、メタボリックシンドロームに有効性が期待される。また、これまでにスクリーニングを行ってきた生薬エキスの数を60種類ほど増やしたところ、厚朴と同様にRXRアゴニスト活性を示す生薬エキスを見出し、アゴニスト成分を同定した(特許申請予定)。合成RXRアゴニストとhonokiolなどのヘテロダイマー活性化の選択性を評価するため、脂肪細胞および骨格筋細胞において、LXR,PPARガンマ,PPARデルタのアゴニストと共存させた際の標的遺伝子発現の誘導作用を網羅的に見るため、200300程度の遺伝子発現が解析できる生活習慣病マイクロアレイで解析を行った。その結果、合成アゴニストbexaroteneではLXRとのヘテロダイマー活性化が強く、honokiolではPPARとのヘテロダイマーのほうが活性化作用が強い傾向が見られた。In vivo実験に関しては、honokiolの短期経口投与を試みたがあまり大きな遺伝子発現変化は見られなかった。In vivoにおける検討において、標的遺伝子発現の変化がhonokiol単独ではほとんど見られなかった。そのため、ヘテロダイマーパートナーとなるLXR,PPARなどのアゴニストとの同時投与を試みる必要があると考えられる。また、同時投与を行うにあたり相乗作用を検討したいので、それぞれの薬剤単独では大きな作用が見られない程度の投与量を設定する必要があり、投与量に関して入念な検討が必要である。また、平成23年度の研究において予想外に厚朴と同じくRXRアゴニスト活性を示す生薬エキスが一つ出てきたことから、厚朴と比較しつつ効果を検討するべきであると考え、そちらの成分におけるこれまでhonokiolで行ってきたのと同様なin vitroの解析を優先したため、in vivo実験が遅れてきている。in vivoにおける厚朴の効果を検討する前段階として、活性成分となるhonokiolの効果が検出することができることが必要であると考えられるため、厚朴が配合される漢方方剤4種類について熱水抽出を行い、honokiolの含有量を調べ、honokiolでのin vivoでの効果と比較する必要があると考えられる。平成24年度より研究室の異動があり、これまでのメタボリックシンドロームに関わるような動物モデルの利用が難しくなった。しかし、逆に免疫関連の動物モデルに関しては充実していることから、免疫系に対する核内受容体を介した厚朴の配合の意義について解析をおこなっていくことに計画を変更していくつもりである。この変更に対して、核内受容体のRARはT細胞の分化誘導に影響を与えていることも知られており、腸管免疫などにも関わっていることから、充分対応して行くことができると考えられる。

また、動物モデルもコラーゲン誘発性関節炎モデルマウス、EAEモデルマウス、大腸炎モデルマウス、食物アレルギーモデルマウスなど様々なものがあるとともに、成分の吸収や血中濃度などを考える必要があまりないと思われる腸管免疫系のモデルが数多く存在することも、現在の遅れを取り戻すのに都合が良いと考えられる。また、honokiolの自己免疫疾患に対する効果を示す論文もいくつか報告があり、その機序は様々であるが、実際には核内受容体RXRのヘテロダイマー活性化を介した作用である可能性も高く、詳細な検討を行うとともに、厚朴の効果も検討する必要があると考えられる。最終的には、他の核内受容体を活性化する生薬との組み合わせでの効果を検討し、漢方方剤における厚朴の配合意義について解明していく。平成24年度は最終年度になるので、研究のまとめを行っていく必要がある。したがって、学会参加や論文報告のための研究費使用が多くなってくると考えられる。また、遺伝子発現やFACSにおける解析などに分子生物学の試薬や抗体などが新たに必要になると考えられる。特に、自己免疫疾患に対する効果を検討するにあたっては、T細胞の分化に及ぼす影響を詳細に解析する必要があり、その際にはT細胞の表面マーカーを蛍光ラベルした抗体を一通り揃える必要があり、これまで揃えた試薬だけでは対応できない部分も多く出てくると考えられる。このようなことから、平成24年度の研究費の使用計画としては、分子生物学試薬や抗体などの購入、学会発表などの旅費や論文作製のための経費が多くを占めると考えられる。
DisulfiramによるMenkes病の新規治療法確立

先天性銅代謝異常症であるMenkes病は銅輸送蛋白ATP7A遺伝子異常により生体内へ銅が吸収されず著明な銅欠乏症状を呈する。本症に対する有効な治療法はいまだ確立していない。本研究では銅と脂溶性キレート剤disulfiramの併用投与をMenkes病モデルマウスに行いその効果を検討した。この併用投与により銅の吸収が増加し、銅酵素活性が上昇したと考えられた。また、銅が血液脳関門を通過するとともにカテコラミン代謝を促進したと考えられた。本研究結果から銅とdisulfiram併用投与によるMenke病への新規治療法は有用であると考えられた。Menkes病(Menkes kinky hair disease, trichopoliodystrophy)はX染色体劣性遺伝形式をとる先天性銅代謝異常症で、男児18万人に1人の頻度で発症する。本研究の目的はMenkes病の治療法を開発し、有効な治療法を確立することである。本年度はDEDTCのダイマーであり、すでに医薬品として認可されているdisulfiramを使用して臨床での応用を念頭に、macularマウスにdisulfiramと銅の併用療法を検討した。Menkes病患者に対する臨床応用を可能とするため、銅を皮下注射、disulfiramを経口投与し、容量を確定した。投与計画は生後45日で銅を50μg皮下注射した後、週1回銅を10μg皮下注射するとともにdisulfiram 0.3mg/gbody weightの経口投与を2ヶ月行った。コントロールにはmacularマウスにdisulfiramの代わりにDDWの経口投与を行った。2ヵ月後にdisulfiramの効果を検討した。その結果、生後2ヶ月における体重はdisulfiram群において有意に体重の増加が認められた。臓器重量は肝臓において有意に臓器重量の増加が認められた。2ヵ月後の各臓器の銅濃度測定を行った結果、小脳及び血清中銅濃度がコントロール群に比べ有意に銅濃度が増加していた。これらの結果からdisulfiramがMenkes病患者に有用な治療方法である可能性が示唆された。今後は細胞内小器官に銅が輸送されているかを検討する。また、銅酵素活性を測定するとともに副作用についても検討を行う。Menkes病患者に対する臨床応用を可能とするため、銅を皮下注射、disulfiramを経口投与した。投与計画は生後45日で銅を50μg皮下注射した後、週1回銅を10μg皮下注射するとともにdisulfiram 0.3mg/gbody weightの経口投与を短期間群2ヶ月、長期間群6ヵ月投与を行った。各期間終了後にdisulfiramの効果を検討した。各臓器の銅濃度測定を行った結果、短期間、長期間ともに大脳、小脳でdisulfiram群で有意に増加していた。Cytochrome ooxidase活性については短期間においてdisulfiram群で酵素活性が認められた。また、短期間、長期間投与における副作用は組織学的に認められなかった。
難治性てんかんに対する軟膜下皮質多切除の効果についての実験的及び臨床的研究

近年運動、感覚、言語領野などの切除不可能な皮質に焦点を持つ難治性てんかんに対し、外科的治療として軟膜下皮質多切除(MST)が用いられているが、本法の有効性に関する実験的裏付けは十分なされていない。また臨床面においても、症状の改善よりのみ有効せいが示されているが、MST前後での血流、代謝変化に関しては検討されていない。そこで今回我々はMSTの有効性を実験的および臨床的検証すべく研究をお子名多。まず実験的には、家兎を全麻下に開頭を行い、皮質を50Hz,8mA,10秒間で15回電気刺激し、MST施行群(n=7)と対照群(n=7)で後発射持続時間の差を検討した。その結果MST施行群で後発射持続時間の有意な短縮が認められ、MSTの有効性が電気生理学的に示された。またアミノ酸測定では対照群でグルタミン酸の上昇を認めたが、MST群では上昇が軽度であり、MSTにより興奮性アミノ酸の上昇がやはり抑制されることが示された。組織学的検討ではMSTにより、神経線維のうち水平線維は断裂されているが、垂直線維は温存されている保健が確認された。臨床的には、6例に対しMSTを施行した。焦点切除とMSTを組み合わせた2例で発作消失、MSTのみ施行した1例で90%発作減少、MSTと脳梁離断術を行った2例およびMSTと皮質焦点切除を行った1例で70波80%の発作減少と良好な結果が得られた。6例ともMST施行後、皮質脳波で明かな棘波の消失または軽減が認められた。またMSTによる合併症は1例も認められなかった。以上の結果よりてんかん手術としてのMSTの実験的および臨床的有効性が証明された。さらに我々の剖検脳における検討より、MSTの施行が困難な脳溝埋没部に位置する皮質が54.9±7.2%存在することが確認され、今後MSTの効果をさらに高めるためには、脳溝埋没部皮質に対するMST手技の工夫が重要と考えられた。近年運動、感覚,言語領野などの切除不可能な皮質に焦点を持つ難治性てんかんに対し、外科的治療として軟膜下皮質多切除(MST)が用いられているが、本法の有効性に関する実験的裏付けは十分なされていない。また臨床面においても、症状の改善よりのみ有効性が示されているが、MST前後での血流、代謝変化に関しては検討されていない。そこで今回我々はMSTの有効性を実験的および臨床的検証すべく研究を行った。組織学的検討ではMSTにより、神経線維のうち水平線維は断裂されているが、垂直線維は温存されている所見が確認された。臨床的には、現在まで4例に対しMSTを施行した。そして4例ともMST施行後、皮質脳波で明らかな棘波の消失または軽減が認められた。皮質血流に関しては、レーザー血流計を用い2例において測定した。今のところMST施行後、脳血流の低下する傾向が認められているが、さらに今後の検討が必要である。

またプロトンMRSにより手術前後での代謝変化も今後さらに検討する予定である。平成8年度に家兎を用い軟膜下皮質多切術(MST)の実験的有効性を証明したので、本年度は臨床的に難治性てんかん症例に対しMSTを施行し、その有効性を検討した。対象は難治性てんかん症例6例(年齢13才39才、男性1例、女性5例)。てんかんの原因は、周産期脳血管障害2例、皮質形成異常、脳炎、血管腫および原因不明各1例であった。6例のてんかん焦点は前頭葉3例、頭頂葉2例、側頭葉1例であった。前例開頭による硬膜下電極留置を行い、1週間から10日間の持続脳波記録により発作起始部位(焦点皮質)を同定した後、再開頭を行いてんかん根治手術を施行した。6例ともMST施行後、術中皮質脳波で明らかな棘波の消失または軽減が認められた。結果は焦点切除とMTSを組み合わせた2例で発作消失、MSTのみ施行した1例で90%発作減少、MTSと脳梁離断術を行った2例およびMSTと皮質焦点切除術を行った1例で7080%の発作減少と良好な結果が得られた。またMSTによる合併症は1例も認められず、13才の2症例では、術後精神運動機能の改善が認められた。以上の結果よりMSTの臨床的有効性が証明された。さらに我々の剖検脳における検討より、MSTの施行が困難な脳溝埋没後に位置する皮質が大脳円蓋部で54.9±7.2%存在することが確認され、今後MSTの効果をさらに高めるには、脳溝埋没部皮質に対するMST手技の工夫が重要と考えられた。
腎内血流不均衡が敗血症性急性腎障害を引き起こす

動物モデルで大腸菌Lipopolysaccharide(LPS)による敗血症導入によって,尿量の減少と血清クレアチニン値の上昇があり,敗血症性急性腎障害が誘導された.敗血症性急性腎障害では糸球体が多く存在する腎表層の酸素分圧の変動は少なく,糸球体の組織学的変化はなかった.一方,尿細管間質が存在する腎深部の酸素分圧は変動が大きく,組織学的変化も認められた.しかし,血圧の低下と酸素分圧との間に有意な相関は無かった.LPSによる敗血症では,敗血症性急性腎障害の主因は尿細管障害で,必ずしも虚血(酸素分圧の低下)のない状態でも尿細管障害が誘導されることが分かった.本研究でseptic AKIにおける各区域ごとの腎内血流の不均衡を証明することで,腎血流が増加し腎機能低下が起きるseptic AKIを尿細管障害も含め一元的に説明することが出来ると仮設を立てた。平成24年度に整備を行った酸素分圧計と血圧、心拍計を実際に1羽のウサギに装着した。実際には、当大学の動物研究センターに実験計画書を提出し審査を受け、許可をうけた。ウサギに耳介静脈を利用し経静脈的に麻酔薬を投与し鎮痛・鎮静を行った。麻酔導入後に、尿道ーカテーテルを挿入し、尿を採取し、腎機能,尿中バイオマーカー,尿中NO代謝産物測定用の尿の保存を行った。また、開始時の腎機能評価のために採血行い保存した。次に、左背側から切開を行い、腎臓を描出した。これに長さの異なる(表層糸球体付近、約2mm)と髄質(約1cm)のところで酸素分圧を連続測定した。また、血圧計を装着して持続の心拍、血圧を測定した。動物モデルで大腸菌Lipopolysaccharide(LPS)による敗血症導入によって,尿量の減少と血清クレアチニン値の上昇があり,敗血症性急性腎障害が誘導された.敗血症性急性腎障害では糸球体が多く存在する腎表層の酸素分圧の変動は少なく,糸球体の組織学的変化はなかった.一方,尿細管間質が存在する腎深部の酸素分圧は変動が大きく,組織学的変化も認められた.しかし,血圧の低下と酸素分圧との間に有意な相関は無かった.LPSによる敗血症では,敗血症性急性腎障害の主因は尿細管障害で,必ずしも虚血(酸素分圧の低下)のない状態でも尿細管障害が誘導されることが分かった.以下の機器購入を行い、研究開始のための備品の整備を行いました。1、septic AKIモデルとしてウサギの選定を行いました。2、血圧・心拍数測定用のカテーテルの選定を行いました。3、敗血症の導入にcecum ligationand puncture (CLP)という方法を選定しました。4、敗血症の評価基準には体温の上昇(40度以上),血圧10%低下,心拍出量30%増加,心拍数が50%増加,血液ガス所見で乳酸値の上昇と二酸化炭素分圧の低下としました。5、測定項目は腎機能測定:血中・尿中のクレアチニンとナトリウム、血液ガス、乳酸値、尿中NOxの測定としました。上記の実験系を岩手医科大学動物研究センターでの研究を平成25年度から開始します。敗血症性急性腎障害(septic AKI)の成因に腎内血流の不均衡が関係するのではないかということを検証するため,平成25年度にcecum ligation and puncture (CLP)による敗血症導入を試行した.腎の皮質と髄質の酸素分圧のモニタリングは可能であったが,敗血症の導入は一定でなかった.このため平成26年度は,大腸菌Lipopolysaccharide(LPS)の投与による敗血症の導入に切り替え,安定した結果を得た.LPSの投与によって,生理的には血圧の低下,心拍数の上昇,呼吸数の増加が観察され、血液検査では白血球数は(3,614±1,303/μl)から、(614±227/μl)に,二酸化炭素分圧は(42.7±4.4Torr)から(25.8±6.1Torr)にともに減少し敗血症性ショックの基準を満たした.LPS投与後6時間では尿量は減少し,血液検査ではbase excessha(BE)は24.3±1.8から13.3±1.9へ減少しアシドーシスを呈し,糸球体慮過量を反映する血清クレアチニン値は0.88±0.10mg/dlから1.65±0.42mg/dlへ上昇し,尿細管障害を示す尿中NAG(N-acetyl-β-D-glucosaminidase)は1.3±0.5U/lから26.5±27.8へ上昇した.LPSの投与後,血圧の低下を認めたものの,皮質・髄質の酸素分圧の低下は認められず,むしろともに上昇傾向を示した.この結果から,LPS導入によるseptic AKIでは血圧低下に伴う虚血や低酸素がその成因とは考え難く,LPSそのものによる尿細管障害が関与する可能性が示唆された.これを他の検査所見や組織所見と併せて今後、考察を進める予定である.小児科実験のセットアップが終わり、残念ながら研究のデータとはならなかったが、モニタリング方法、cecum ligation and puncture (CLP)による敗血症を導入の改善点をつかむことができたので、今後の研究に生かせる状態となった。今後、実験データを積み上げ、仮説が正しいかを検証する予定である。

平成24年12月に機器購入が可能となった。また、動物の確保等と動物研究センターの使用申請を行い、以下の検討を行なった。1、septic AKIモデルとしてウサギの選定を行いました。2、血圧・心拍数測定用のカテーテルの選定を行いました。3、敗血症の導入にcecum ligationand puncture (CLP)という方法を選定しました。4、敗血症の評価基準には体温の上昇(40度以上),血圧10%低下,心拍出量30%増加,心拍数が50%増加,血液ガス所見で乳酸値の上昇と二酸化炭素分圧の低下としました。5、測定項目は腎機能測定:血中・尿中のクレアチニンとナトリウム、血液ガス、乳酸値、尿中NOxの測定としました。平成25年6月からの研究の開始が可能となり、やや遅れているものの研究達成と考えられ、実験を開始し製化を得る予定である。実験の準備と予備実験を行うことができた。これに基づいて今後、症例を重ね無作為Angiotensin II投与群(AgII群),選択的iNOS阻害薬である1400W投与群(治療群)、生理食塩水を投与群(vehicle群)とに分け,8時間持続点滴静脈注射を行う。24時間の時点でKCLを投与し腎臓を摘出し実験を終了する。(可能ならば、急性心不全治療薬である心房性ナトリウム利尿ペプチドは腎血流を改善させるという報告もあり、追加実験を行う。)研究計画に基づき、研究の遂行を進める。研究開始のためのセットアップは全て、整ったので、今後実験を行い各種測定項目の測定費用に次年度費用額を充てる。実験の項目測定、動物購入費に使用を行い、データを蓄積し仮説を検証する。動物の購入、各種試薬、生化学検査費とて計上し使用する。
ナノエレクトロニクスへの応用を目指したカーボンナノチューブの構造制御

カーボンナノチューブ(CNT)は、その物性が構造に依存していることがよく知られており、その精緻な応用には物性の制御された、即ち、構造の制御されたカーボンナノチューブが必要となる。そのような背景から、報告者らは構造の制御されたCNTを得ることを目的に、分子認識を利用した方法論をデザインし、現在、検討を進めている。具体的には、CNTとピンセット型ジポルフィリン化合物からなる超分子を鍵とする、CNTの可溶化、ならびに、それに伴うCNTの構造選別である。また、このピンセット型分子は、巻き方のみならず、直径をも識別することも見出した。また、ごく最近、上記のジポルフィリン化合物より合成が簡便なジピレン化合物を設計、合成し、SWNTの選択的な抽出を行ったところ、ジピレン化合物がSWNTsの抽出能を有すること、また、SWNTsの直径を識別できることが明らかとなった。以上の成果に基づき、23年度は、carbazolyleneスペーサーの窒素上にアルキル基を導入し、分子ピンセットのメタノール溶媒への溶解性を高めることで、その選択性のさらなる向上が達せられた。その成果はNanoscaleに掲載され、また、2011年第10号のinside cover pictureに採択され、報告者らの成果を広くアピールすることができた。さらに、pyridileneスペーサーを有する分子ピンセットを以前用いた65-CoMoCATではなく、より大きな径を有する76-CoMoCATの分離に用いたところ、直径が0.84-0.92nmと狭い範囲のSWNTsを選択性よく得ることに成功した。さらに、従来得られてきた(6,5),(7,6)以外の(8,4),(9,1),(9,4)等の光学活性カーボンナノチューブを得ることに成功した。この成果は、Org. Biomol. Chem.の10周年記念号に、近く掲載される予定である。当研究グループでは、これまでにm-phenylene, pyridilene, carbazolyleneをスペーサーとするピンセット型ジポルフィリンを設計、合成し、単層カーボンナノチューブ(SWNTs)の抽出を行い、上記ピンセット型分子がSWNTsの右巻き、左巻きを識別し、光学活性SWNTsを与えることを明らかにしてきた。平成22年度は、上記のジポルフィリン化合物より合成が簡便なジピレン化合物を設計、合成し、SWNTの選択的な抽出を行ったところ、ジピレン化合物がSWNTsの抽出能を有すること、また、SWNTsの直径を識別できることが明らかとなった。(N.Komatsu et al., Chem. Sci., 2011)。本検討においては、0.84nm-0.97nmの直径を有するSWNTsが優先的に抽出された。また、これまで用いてきたCoMocATのSWNTに代え、HiPCO-SWNTを用いたところ、これもうまく抽出され、0.97nm以下の直径を有するSWNTsが優先的に抽出された。なお、本論文は、Chem. Sci.誌5月号のinside cover pictureに採択され、報告者らの成果を広くアピールすることができた。今後は、得られた成果に基づき、さらなるスペーサーの検討などを行い、直径の選別能の向上を図る。

さらに、従来得られてきた(6,5),(7,6)以外の(8,4),(9,1),(9,4)等の光学活性カーボンナノチューブを得ることに成功した。この成果は、Org. Biomol. Chem.の10周年記念号に、近く掲載される予定である。
フッサールにおける知覚と真理－知覚経験を構造化する機能的な真理概念の研究

1.志向的体験における真理の機能を考察し、フッサール現象学における真理論の構造を明らかにする。2.外在主義との対比を通じて、現象学の内在主義的な理論の射程を明らかにする。以上の二つが、採用期間中の課題であった。第二年度目に当たる平成24年度では、これらの課題に関連して、以下の研究成果を上げることができた。(1)観念説という思潮と現象学とを比較することにより、フッサールが継承した態度・方法を明らかにした。(2)1970年代以降のノエマ論争において提示された、いくつかの解釈を検討した。その結果、フッサールの志向性論にかんする現代の解釈は、現象主義から導かれる困難を十分に克服するものではないことが確認された。(3)現象主義をめぐるいくつかの批判的な議論を念頭に置きながら、現象学が目指すべき方向性として、「直接存在論」を模索した。(4)外在主義の理論と現象学を比較し、志向的な作用とそれを取り巻く状況とのあいだの相互関係を捉える外在的な視点を、現象学のうちに確保した。(5)経験を一定の方向へと導く理念ないし規範の起源が、意味付与の沈殿の結果として意識生の現在においてそのつど保持される、流動的な習慣のうちに求められた。以上の研究成果は、真理や現実についてフッサール現象学に依拠した見解を提示するのみならず、それによって認識論の新しい地平を切り拓くことに貢献するものと考える。現象学における「真理」概念の意義を、フッサールの著作から読み取っていった。また、現象学の立場から、分析哲学やプラグマティズムにおける真理論との対話を試みた。たとえば、ウィリアム・ジェームズのプラグマティズムとの比較がなされた。その結果、<経験を調和的に導く>という経験的な効能に真理の認識価値が求められるという、プラグマティズムに近い見解が得られた。その一方で、経験を導く真理そのものに、経験には解消されえない理念的な価値を認める見方を、フッサールの主要著作から掘り起こしていった。以上の二つの見解は、経験主義と理念主義という形で、古くから対立させられていた考えである。この二つの見解を統合することに、フッサール現象学の現代的な意義があることがわかった。上の見解を裏付けるために、マイケル・ダメットらの議論を引きながら、フッサールの位置づけを<統制論>と<構成論>という対立軸のなかで探っていった。現象学は、構成論を基本的な立場としながら、経験をさらなる確証へと導く推進力として、真理を機能的な側面から語ってもいる。この点で現象学は、現代の真理論のなかで際立った位置を占めていることが明らかになった。また、研究の進捗状況に鑑みて、第二年度目で取り組む予定であった現象学と外在主義との比較研究にも前倒しして着手した。この研究の独創的な点は、ヒンティカやギュルヴィッチらの先行研究を視野にいれながら、可能世界意味論の考え方を現象学に接合したことである。これによって、外在主義が強調する文脈的な視点を現象学も重視していることが示された。結果、現象学という思考方法の有効性の射程が大きく広げられたものと考える。フッサールにおける真理論の特徴と現代的な意義とが、概ね当初の目論み通りに検証された。次年度に集中的に取り組む予定であった、外在主義との比較研究にも部分的に着手することができた。本研究の報告者は、以前より、現象学を観念説の伝統の潮流に位置づけ影響関係を考察してきた経緯がある。このような歴史的な視点を生かして、上記のそれぞれの研究成果を統合的に評価することが可能であると考えている。経験主義と理念主義、あるいは相対主義と絶対主義、内在主義と外在主義、これらを止揚することによってフッサールが切り開こうとした独自の立場を、彼の「超越論主義」にかんする著述に即して、見極めてゆきたい。
層のカテゴリーとモジュライの研究

研究計画2)に挙げたK3曲面上の層のカテゴリーとモヂュライを研究し、次の二つの結果を得た。(A)シャファレビッチ予想の解決1970年の国際数学者会議において、I.R.SharevichはHodge予想の特別な場合として『二つのK3曲面の直積上のホッヂ・サイクルは、交点形式を保つなら代数的であろう』と予想した。この予想は1984年のタタ研究所での国際研究集会の報告集に掲載された拙著において、ベクトル束のモヂュライ空間を使って、部分的に解かれていたが、一般の場合もこれに変形議論を加味することによって解決に到達した。現在、アーベル多様体に対するHodge予想や志村多様体との関係に興味を持っている。(B)3次元ファノ多様体の新記述上掲論文において定義された、二つの3K曲面の同種の概念は、曲線と3次元ファノ多様体上の層のカテゴリーの関係について示唆をあたえている。拙著Vector bundles and Brill-Noethertheory,MSRI Publ.♯28(1995),pp.145-158においては、これを使って、種数7のファノ多様体が種数7の曲線上の階数2の安定ベクトル束のモヂュライ空間におけるBrill-Noether部分多様体として得られることを報告していた。今年度は、層の対応をより詳しく調べることによって、少し設定は異なるが、種数9のファノ多様体も同様であることを発見した。Zagier,King等によるモヂュライ空間のコホモロジー環の決定やVerlinde型問題と関係して、将来的に有望と思える。
銅酸化物の局所電子・磁気物性

本研究では原子位置指定トンネル分光法の装置開発に努め(AST法),その有用性を示すとともに,高温超伝導を適用して,励起スペクトルの超伝導・常伝導状態の比較から超伝導ク-パ-対の対称性にアプローチしようとした.キ-ポイントはAST装置の安定化と試料表面の調製,及び測定結果の解釈の問題であった。装置上の問題としては,原型とするSTMが特に低温ではまだ未完成技術であるため,ユニット廻り及び周辺のデザインを試行錯誤により改善して来た。特に温度分布の均一性を得る方向で,ドリフトを防いだ.また,フィードバック回路の増幅度の周波数特性を平坦化することで,多くのSTM装置で生じている課題である発振の防止にかなりの程度成功を収めることができた.一方,超伝導ギャップの分光曲線は1)高温超伝導体試料の表面第一層が何が露出しているかが場合によって異なり,それにより曲線形状は異なる.2)我々以外に世界で4グループが同様の実験によるデータを出し始めているが,いずれも微妙な実験事実の喰い違いがあり,これが試料の微妙な差によるものか,それとも実験そのものの技術的問題に基づくものであるかは,まだ結論できない.再現性を機器的にはかなり向上させることができたので,Bi22/2系などでは早急に,試料調製条件を変化させた実験を挙行し,どれが物性の真性なデータであるかを確立する必要があり,その準備がほぼ整った.本研究では原子位置指定トンネル分光法の装置開発に努め(AST法),その有用性を示すとともに,高温超伝導を適用して,励起スペクトルの超伝導・常伝導状態の比較から超伝導ク-パ-対の対称性にアプローチしようとした.キ-ポイントはAST装置の安定化と試料表面の調製,及び測定結果の解釈の問題であった。特に温度分布の均一性を得る方向で,ドリフトを防いだ.また,フィードバック回路の増幅度の周波数特性を平坦化することで,多くのSTM装置で生じている課題である発振の防止にかなりの程度成功を収めることができた.一方,超伝導ギャップの分光曲線は1)高温超伝導体試料の表面第一層が何が露出しているかが場合によって異なり,それにより曲線形状は異なる.2)我々以外に世界で4グループが同様の実験によるデータを出し始めているが,いずれも微妙な実験事実の喰い違いがあり,これが試料の微妙な差によるものか,それとも実験そのものの技術的問題に基づくものであるかは,まだ結論できない.再現性を機器的にはかなり向上させることができたので,Bi22/2系などでは早急に,試料調製条件を変化させた実験を挙行し,どれが物性の真性なデータであるかを確立する必要があり,その準備がほぼ整った.