hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
メチルグリオキサールによる骨芽細胞分化制御機序の解明

近年、糖尿病の新たな合併症として骨粗鬆症が注目されている。2型糖尿病では骨量が減少しないにもかかわらず骨折リスクが増加するが、その理由として、骨基質が終末糖化産物(AGEs)によって変性し、劣化することで脆弱性を示すと考えられている。我々は2型糖尿病で血中濃度が増加するAGEsであるメチルグリオキサール(MG)に着目し、MGが骨芽細胞の石灰化に及ぼす影響について解析した。マウス骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1細胞の石灰化物はMG添加によって硬さが増し、粘弾性が低下した。このことから、MGは石灰化物の物性を変化させることで2型糖尿病患者の骨質に影響を与える可能性が示唆された。糖尿病は代表的な糖代謝異常疾患であるが、近年、糖尿病の新たな合併症として骨粗鬆症が注目されている。インスリン依存性の1型糖尿病では骨芽細胞のインスリンシグナルが不足する事により骨形成が低下する事が知られている。一方、インスリン非依存性の2型糖尿病では『骨量は減少しないが、骨折リスクは上昇する』という特徴がある。その理由として、骨基質が終末糖化産物(AGEs)によって糖化変性し、劣化することで『硬くて脆い』骨になり脆弱性を示すと考えられているが、高骨密度が維持される機序については不明である。我々は、2型糖尿病で血中濃度が増加するAGEsの一つとしてメチルグリオキサール(MG)に着目し、MGが骨芽細胞の分化・石灰化能に及ぼす影響について細胞レベルで解析を行った。in vitroにおける骨芽細胞分化誘導系として、筋芽細胞株C2C12細胞をリコンビナントヒトBMP-2で刺激し骨芽細胞分化を誘導する系を用いた。C2C12細胞はBMP-2で刺激すると、ALP陽性の骨芽細胞様細胞へと分化するが、MGは濃度依存的にALPのmRNA発現を促進した。さらに、BMP刺激後のALP活性もMGの添加により増強された。ALPグルコース取り込み阻害による糖尿病様の糖代謝異常を実験的に再現するためにC2C12細胞を低グルコース環境下で培養したところ、BMP-2刺激後のALP発現は抑制された。一方、低グルコース環境下でも培地中にMGを添加すると、濃度依存的にBMP-2刺激後のALP活性の上昇を強く促進した。以上より、グルコースの代謝産物であるMGはALPの発現および活性化を促進することで骨芽細胞分化を調節すると考えられた。インスリン依存性の1型糖尿病では骨芽細胞のインスリンシグナルが不足することにより骨形成が低下することが知られている。一方、インスリン非依存性の2型糖尿病では『骨量は減少しないが骨折リスクは上昇する』という特徴がある。我々は、2型糖尿病で血中濃度が増加するAGEsのひとつとしてメチルグリオキサール(MG)に着目し、MGが骨芽細胞の分化・石灰化能に及ぼす影響について細胞レベルで解析を行った。前年度はin vitroにおける骨芽細胞分化誘導系として筋芽細胞株C2C12細胞をリコンビナントヒトBMP-2で刺激し骨芽細胞分化を誘導した。今年度は、石灰化部物の形成におけるMGの影響を検討するために骨芽細胞様細胞株MC3T3-E1細胞をコラーゲンコートプレート上で培養し、石灰化誘導培地で骨芽細胞分化を誘導し、形成された石灰化物の物性をナノインデンテーション法を用いて解析した。MC3T3-E1細胞の培地中にMGを添加すると、形成された石灰化物は対照と比べて硬さが増し、粘弾性が低下していた。これは形成された石灰化物が対照と比べ硬く、脆い性質を示したと考えられた。以上より、グルコースの代謝産物であるMGは石灰化物の物性を変化させることで2型糖尿病の骨質に影響を与える可能性が示唆された。糖代謝異常状態での骨芽細胞分化におけるMGの重要性を確認できた。具体的には、C2C12細胞をBMPで刺激する骨芽細胞分化誘導モデルにおいて、低グルコース環境では骨芽細胞分化マーカーであるALPのmRNA発現が抑制され、ALP活性も低下するが、MGの存在はそれを回復させることを発見した。

また、通常のグルコース濃度においてもMGはALPのmRNA発現を促進しALP活性を増強することから、糖代謝異常状態においてのみならず、MGは骨芽細胞分化を調節する可能性を示唆していることを見いだした。口腔生化学低グルコース環境下と高グルコース環境下において、MGの存在がC2C12細胞のエネルギー代謝経路に及ぼす影響について解析する。さらに、骨芽細胞分化における主要なBMPシグナル伝達経路であるSmad経路、MAPK経路などの細胞内シグナルの変化についても解析し、MGが骨芽細胞分化を調節する機序を明らかにするとともに、MG以外のAGEsが骨芽細胞分化に及ぼす影響についても解析する。次に、ob/obマウスなどの2型糖尿病モデル動物における血中MGならびにAGEs濃度を測定し、骨密度をμCTで解析することでMG、AGEsを中心とした糖代謝異常と骨代謝異常の相関関係を明らかにする。今年度は種々のAGEsを用いて、AGEsがC2C12細胞におけるBMP誘導性骨芽細胞分化に及ぼす影響についての解析を予定していた。しかし、低グルコース環境下においてC2C12細胞のALP発現とALP活性が低下すること、さらにMGの存在がそれを回復させることが明らかとなり、培地中グルコース濃度とMGが骨芽細胞分化に及ぼす影響を解析するにとどまった。そのため、種々のAGEsの購入に関わる費用ならびに解析にかかる費用を次年度使用する。MGの前駆物質ならびに代謝産物とされる種々のAGEsを購入する。また、それらのAGEsがBMP刺激後のC2C12細胞の骨芽細胞分化に及ぼす影響として、遺伝子発現および細胞内シグナル伝達の変化を解析するための各種試薬を購入する。
微小電極を用いた濃度場計測による微小隙間内での粘性の異なる液相反応流場の解明

研究者代表者らの従来の研究において、ヘレ・ショウセル内に形成される化学反応を伴うMiscible viscousfingering (MVF)の反応性流れ場の物理モデルを考案した。しかしながら、その妥当性を検討するにはMVFの各領域、セルの深さ方向の各点における反応物濃度の詳細を実験的に知る必要がある。また、セルの深さ方向の二液体のシート状構造に関しても、類似の実験結果と低粘性溶液の色の濃さから判断して提唱されたものであり、実際にシート状構造が形成されているのかを実験的に確認した例は未だ無い。物理モデルの妥当性の検討、シート状構造の存在の確認のどちらにおいても、セル内に存在する溶液の濃度場を直接計測することができれば可能であると考えられる。しかしながら、ヘレ・ショウセルによって形成される微小空間のサイズを考えると、そのような計測は非常に困難であると予想され、それを可能にしたという研究は報告されていない。そこで研究者代表者は、従来主に生物学の分野で用いられてきた微小電極を利用して、ヘレ・ショウセル内に形成されるMVFの濃度場計測を行うことを考案した。微小電極には先端の感応部が数μmスケールのものがあり、本研究で用いた間隔が0.3mmのセルでも詳細な濃度場計測が可能であると考えられる。平成19年度は、微小電極を利用してセルの間隔方向の濃度場計測を可能にする実験手法を確立し、これをヘレ・ショウセル内に形成される化学反応を伴わないMVFに適用してシート状構造の存在とその形状の実験的な確認を試みた。得られた結果は従来考えられていた形状を表すものとは異なり、シート状構造領域では低粘性液体が主にセルの隙間の上半分に存在するというものになった。これを低粘性液体と高粘性液体の密度差に原因があると考え、低粘性液体の密度を上げた実験も行ったが、今回密度を変化させた範囲では明確な影響を確認できなかった。また、今後の課題として、実験精度の改善が挙げられる。この一年を要して微小電極によるヘレ・ショウセル内のセルの深さ方向の濃度分布計測を可能とする実験装置の作成を行った。後述のように本研究ではセルの上側に板に微小電極を挿入するための小さな穴を設ける。研究代表者らの従来の研究で用いた幾何形状のセルではFingerが放射状に広がり、Fingerのパターンが実験ごとに異なり、その穴にFingerが到達するとは限らないため、本研究ではこの幾何形状は適さない。そこで実験ごとの再現性が期待される直線的に成長する単一のFingerが形成されるようなヘレ・ショウセルを作成した。そして、従来の放射状に広がるFingerで観察された、反応を伴わない場合に見られるFinger先端付近において着色した低粘性液体の色が急激に薄くなる現象と、反応を伴う場合に見られる生成物分布の反応物質の濃度依存性が観察できる実験条件を明らかにした。次に微小電極実験装置を構築した。業者とのやりとりから明らかになった、厚さ10mmのガラス板であるセルの板に微小電極を挿入するために開けることのできる穴の最小径とされる0.3mmの穴を設けた。微小電極のその穴への正確な挿入を可能とするため、画像をPCのモニターに出力することができるデジタルマイクロスコープ(ナカデン製、FS1400)を購入した。微小電極のセルの平面方向の移動のために手動の、またセルの深さ方向には、コントローラーで制御することができる最小分解能1μmのマイクロマイクロマニピュレーターを購入した。当初の計画では、本研究では微小電極で計測する物理量はpHを予定していたが、測定部が数脚のガラス微小電極を販売している世界で唯一の会社がなくなっており、代替案として測定部が数μmの微小電極がデンマークのユニセンスという会社で唯一販売されている、酸化還元電位を測定する方法を考案し、塩酸・水酸化ナトリウム水溶液では、pHと酸化還元電位との相関性があることを見出し、本研究では酸化還元電位を測定することとした。

平成19年度は、微小電極を利用してセルの間隔方向の濃度場計測を可能にする実験手法を確立し、これをヘレ・ショウセル内に形成される化学反応を伴わないMVFに適用してシート状構造の存在とその形状の実験的な確認を試みた。得られた結果は従来考えられていた形状を表すものとは異なり、シート状構造領域では低粘性液体が主にセルの隙間の上半分に存在するというものになった。これを低粘性液体と高粘性液体の密度差に原因があると考え、低粘性液体の密度を上げた実験も行ったが、今回密度を変化させた範囲では明確な影響を確認できなかった。また、今後の課題として、実験精度の改善が挙げられる。
尿路結石におけるオステオポンチンアンチセンスによる遺伝子治療についての基礎的研究

結石マトリクスとして結石形成に重要な役割を担うオステオポンチンを遺伝子治療の標的とすべくin vitroおよびin vivoの両者で検討した。ほぼ全長に渡るオステオポンチンcDNAをRT-PCR法を用いて作製し、真核細胞発現ベクターにantisense mRNAが発現するように組み込み、サブクローニングした。腎尿細管細胞にオステオポンチンantisense mRNA発現ベクターをtransfectoionしstable発現細胞を確立した。尿路結石のstepの一つであると考えられる蓚酸カルシウム結晶の細胞への付着を検討した。オステオポンチンantisense mRNAの発現、mRNAの発現はNorthern blottingで、オステオポンチン蛋白の発現はWestern blottingで行った。細胞と結晶の付着は走査電子顕微鏡を使って行った。in vitroの結晶付着実験でオステオポンチンantisense RNA安定発現細胞ではオステオポンチンの発現が低下し、結石形成過程のステップの一つであるシュウ酸カルシウム結晶の細胞への付着が抑制されていることを電子顕微鏡的に証明した。オステオポンチンの発現が結石形成の初期段階である、結晶の細胞への付着に重要であることを確認した。antisenseオステオポンチン発現ペクターをリポフェクション試薬と混合して結石モデルラット腎に注入して結石形成とオステオポンチン発現を検討した。オスチオポンチンantisense mRNA発現ベクターを結石モデルラット腎に直接注入しliposomeをもちいた遺伝子導入を試みた。注入部周囲にantisense mRNA発現がみられ、sense mRNA発現が抑制されるのをin situ hybridizationを用いて明らかにした。結石形成も抑制される傾向にあった。結石の遺伝子治療の可能性が示唆され、オステオポンチンがその標的遺伝子となりうることを示唆するものであった。antisenseオステオポンチン発現ベクターをリポフェクション試薬と混合して結石モデルラット腎に注入して結石形成とオステオポンチン発現を検討した。オステオポンチンantisense mRNA発現ベクターを結石モデルラット腎に直接注入しliposomeをもちいた遺伝子導入を試みた。腎結石を持ったヒトの腎尿細管細胞と実験的蓚酸カルシウム結石形成ラットの腎尿細管細胞において遺伝子レベルでもオステオポンチン、カルプロテクチンの強い発現を認めており、ヒトのカルシウム含有結石のマトリックスにオステオポンチン、カルプロテクチンの存在を証明した。

また、腎結石を持ったヒトの腎だけではなく実験的蓚酸カルシウム結石ラットの腎においてもマクロファージが尿細管細胞の周囲の間質に遊走してきておりそれは結石の形成や、オステオポンチンの発現が増強するよりも早期であった。ヒトの腎と結石形成ラットの腎においては炎症性サイトカインの発現が認められる。また、細胞接着因子の発現もサイトカインと同時点で認められた上部尿路結石の形成機序においてオステオポンチン、カルプロテクチン、MGP、サイトカイン、マクロファージと腎尿細管細胞が関与しており、それは、腎尿細管細胞とその間隙で蓚酸濃度が増加すると蓚酸を排除するためにマクロファージが集積し、サイトカインが分泌されその作用のために腎尿細管細胞内のオステオポンチンの発現が増強され、細胞は肥大、泡沫化してオステオポンチン、カルプロテクチン、MGPの基盤となり、カルシウムの沈着が起こる。オステオポンチン、カルプロテクチン、MGP、サイトカイン、マクロファージが結石形成初期の段階から重要な役割を果たしていることをさらにはっきりさせるために、in vivoとin vitroの実験系でオステオポンチン発現とサイトカインの発現を抑制することで結石形成が抑制できるのではないかと考えた。結石マトリクスとして結石形成に重要な役割を担うオステオポンチンを遺伝子治療の標的とすべくいin vitroおよびin vivoの両者で検討した。またin vivoの実験系ではより効率的な遺伝子導入方法を確立すべく導入手技を検討した。オステオポンチンcDNAをRT-PCR法を用いて作製し、真核細胞発現ベクターにantisense mRNAが発現するように組み込み、サブクローニングした。腎尿細管細胞にtransfectoionしstable発現細胞を確立した。in vitroの結晶付着実験でオステオポンチンantisense RNA安定発現細胞ではオステオポンチンの発現が低下し、結石形成過程のステップの一つであるシュウ酸カルシウム結晶の細胞への付着が抑制されていることを示した。オステオポンチンの発現が結石形成の初期段階である、結晶の細胞への付着に重要であることを確認した。antisenseオステオポンチン発現ベクターをtransfection試薬と結石モデルラット腎に注入して結石形成とオステオポンチン発現を検討した。mRNA
分散協調ネットワークエージェントによる設計・生産のプロジェクト管理

別々の専門領域を持った多人数の設計者が製品を開発する際には,お互いの設計者が持つ知識を効果的につなぎ合わせ,一つの整合性のあるシステムを構築しなければならない.しかし,設計者の持つ知識の専門性が深まり,かつより多くの知識を必要とするような,大規模な製品を構築していく際には,設計作業同士の連携が不十分となり思わぬ設計の見落とし・ミスの防止が行いきれていないのが現状である.そこで,個々の設計者の知識をエージェントにより管理し,それらの個々の設計者に分散している知識情報を情報ネットワークにより結び付け,一元的な情報管理システムとして融合する新しい統合的設計環境を構築する必要がある.今年度の研究では,生産システム設計における協調設計に着目し,そのコラボレーション環境の開発を行った.生産システム設計では,行程設計者,製造機械設計者,部品設計者など,多くの開発担当者がおり,また生産システム自体に非常に多くの評価項目があるため,有効な分散協調環境の確立が必須である.ここでは,その基礎的研究として,設計者が各々別個に設計モデルを操作しながら,一つの生産システムを設計するシステムの構築を行った.ブロックを用いたポインタにより生産システムモデルを構築し,それをExcelをベースとしたVBA環境による評価システムと組み合わせ,迅速なモデル構築と評価システムを構築することができた.参加者が参加しながらモデル構築から評価までを行うことができるため,コラボレーションがより円滑に進むことが確認できた.大規模製品を開発する際の,全設計・生産システムのプロセスを推進し,グローバルに最適な製品を生み出すための意思決定支援手法の理論を確立し,システムの開発を行うために,分散協調ネットワーク環境上で,設計・生産の各部門が有機的に結びつき最適なプロジェクト遂行および意思決定を行うための新しい理論を開発した.まず,製品の評価特性の相互関係に基づいた意思決定順序の最適化手法を構築した.製品の評価特性間,および評価特性と設計変数との入出力関係をマトリクス形式に表現した.このマトリクスに基づき,評価特性の協調関係および優先順位を考慮した配列手法を提案した.また設計作業の同時並行作業も考慮に入れ,さらに製品開発期間の短縮をはかった.この方法により意思決定の循環が最小になるような設計手順が構成され,設計の手戻りによるコストアップ,開発時間の延長を最小限に抑えることができるようになった.さらに設計・生産のプロジェクトにおけるヒューマンリソースの配置を最適化する方法論を構築した.プロジェクト遂行に必要な能力を,ヒューマンリソースの持つスキルの合計から算出し,プロジェクトが効率よく実行できるようにヒューマンリソースを最適配置する問題を最適化問題として定式化を行った.目標関数を,プロジェクトを実行することによる利益,各開発プロジェクトにおいて必要とされるスキルの充足度,ヒューマンリソースのキャリアパスの満足度,ヒューマンリソースのモチベーションの4つで表現し,多目的最適化問題を構成した.この問題を遺伝的アルゴリズムを用い,さまざまな配置パターンをパレート最適解として提示することができた.別々の専門領域を持った多人数の設計者が製品を開発する際には,お互いの設計者が持つ知識を効果的につなぎ合わせ,一つの整合性のあるシステムを構築しなければならない.しかし,設計者の持つ知識の専門性が深まり,かつより多くの知識を必要とするような,大規模な製品を構築していく際には,設計作業同士の連携が不十分となり思わぬ設計の見落とし・ミスの防止が行いきれていないのが現状である.そこで,個々の設計者の知識をエージェントにより管理し,それらの個々の設計者に分散している知識情報を情報ネットワークにより結び付け,一元的な情報管理システムとして融合する新しい統合的設計環境を構築する必要がある.しかしながら,知識を明示化することはできても,それを効果的につなぎ合わせる設計解創成エンジンを開発することは非常に困難であり,今後の研究が待たれる分野である.そこで本年度は,設計の上流過程に着目し,そのような設計解を創成するためのプロセスの研究を行った.まず,コラボレーションパートナー選択の意思決定モデルを構築した.協調的に製品を開発することの効果とパートナー選択の必要性を明らかにし,最も製品開発のパートナーとして適切な相手を選択する手法を構築した.自社が持つ技術とパートナー候補が持つ技術の分類し,製品開発の目標となるゴールまでのコストを評価する.さらにパートナーとなった場合の利得を算出し,もっとも最適なパートナーの選択が行われる.次に,生産ラインの設計問題を例題として取り上げ,複数の設計者による協調的な生産ラインのレイアウト設計の意思決定モデルの構築の研究を行った.設計の上流段階と,下流段階での情報量・決定事項の詳細度の差を比較検討し,設計の種々の段階で,どのような意思決定を行うべきか検討した.その結果,設計の段階により情報の粒度の差が生じ,評価項目とすべき指標,情報が根本的に異なることから,それぞれの段階で最適な意思決定モデルおよび設計階創成エンジンが必要であることが確認できた.別々の専門領域を持った多人数の設計者が製品を開発する際には,お互いの設計者が持つ知識を効果的につなぎ合わせ,一つの整合性のあるシステムを構築しなければならない.しかし,設計者の持つ知識の専門性が深まり,かつより多くの知識を必要とするような,大規模な製品を構築していく際には,設計作業同士の連携が不十分となり思わぬ設計の見落とし・ミスの防止が行いきれていないのが現状である.そこで,個々の設計者の知識をエージェントにより管理し,それらの個々の設計者に分散している知識情報を情報ネットワークにより結び付け,一元的な情報管理システムとして融合する新しい統合的設計環境を構築する必要がある.今年度の研究では,生産システム設計における協調設計に着目し,そのコラボレーション環境の開発を行った.

生産システム設計では,行程設計者,製造機械設計者,部品設計者など,多くの開発担当者がおり,また生産システム自体に非常に多くの評価項目があるため,有効な分散協調環境の確立が必須である.ここでは,その基礎的研究として,設計者が各々別個に設計モデルを操作しながら,一つの生産システムを設計するシステムの構築を行った.ブロックを用いたポインタにより生産システムモデルを構築し,それをExcelをベースとしたVBA環境による評価システムと組み合わせ,迅速なモデル構築と評価システムを構築することができた.参加者が参加しながらモデル構築から評価までを行うことができるため,コラボレーションがより円滑に進むことが確認できた.
生体内でポリアミンが起こす環化反応の検証とターゲット探索

これまでに、ポリアミンがDNAやRNAと結合して、細胞増殖に寄与したり、エピジェネティクスを制御することが知られている。そこで、報告者が見出した共役イミンの[4+4]反応により生成する、8員環のエピジェネティクスに関する効果を検討した。生体内でポリアミンが自身でアクロレインを放出して8員環を形成しているならば、これらの化合物もエピジェネティクスを自在に制御しているのではないかと想起した。平成27年8月までの研究期間内で、様々な8員環を作用させた細胞に対して、抗体を用いた蛍光観察、あるいはその抽出物をWenstern blottingで検討した。その結果、1,5-ジアザシクロオクタンは、ヒストンの特定リジン残基のメチル化レベルを顕著に向上させることを見出した。さらに、これらメチル化されたヒストンは核小体へと速やかに移行することを明らかにした。一方、末端に水酸基やアミノ基を持つアミンとa,b-不飽和共役アルデヒドとの新規反応に基づいて、キラルなポリアミン誘導体を合成することに成功した。これらキラル化合物とアクロレインとの[4+4]反応によって生成する8員環ライブラリーを用いることによって、今後、エピジェネティクスを選択的に制御する化合物やクロマチンの凝集効果を示す化合物を探索する基礎を築いた。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成26年度では、アミノ基を多数持つポリアミンに加えて、さらに水酸基を持つアミノアルコール天然物であるスフィンゴシンやノルアドレナリンも形式的な[4+4]環化反応を起こすことを見出した。このように、報告者の見出した反応は天然でも普遍的に進行している。さらに、これら[4+4]環化反応の生成物である8員環誘導体は、分子中のアセタールの安定化度合いよって、放置しておくだけで次第に、現在、酸化ストレス条件下でのアクロレインマーカーとして利用されている3-ホルミル-3,4-デヒドロピペリジン(FDP)へと変換されることを見出した。最もアセタールの安定化効果が小さいと考えられる8員環化合物の1つ、2,6,9-トリアザビシクロ[3.3.1]ノナンの場合では、2日間でほぼ定量的に対応するFDPへと変換される。これまでに報告者が得た成果を総合的に考えると、酸化ストレス条件下では、生体内アミンがアクロレインと反応し、報告者が見出した形式的な[4+4]環化反応が優先的に進行し、まずは8員環化合物を与えている。しかし、8員環化合物は比較的不安定であり、次第により熱学的に安定なFDP化合物へと変換され、そしてこれが安定に取り扱いやすいバイオマーカーとして認識されていると考えられる。逆の観点から、生体内アミンとアクロレインとの反応性一番先に生成する化合物は8員環化合物である。当初、8員環化合物の抗体を作成して生体内での生成を確認しようと考えていたが、8員環化合物の不安定性のため、モノクロナール抗体を作成することが困難であった。しかし、その反応性を詳細に検討することにより、思いがけずこの8員環化合物の生成を間接的に証明することができた。さらに、現在臨床などで使用されているFDPの新しい生成機構を提唱した。当初の計画に従って、生体内で一般的に様々なアミンがアクロレインとの反応によって8員環化合物を与えることを明らかにした。また、この8員環化合物の抗体こそ作成することは困難であったものの、その化学的反応性の知見から、これを間接的に証明できた。平成27年度では、8員環のエピジェネティクスやクロマチン凝集に関する効果を検討する。予備結果から、1,5-ジアザシクロオクタンは、ヒストンの特定リジン残基のメチル化レベルを顕著に向上させることを見出している。様々なポリアミン誘導体や1,3-ジアミン誘導体を合成し、アクロレインとの環化反応に付すことにより、8員環ライブラリーを合成する。この中から、エピジェネティクスを選択的に制御する化合物やクロマチンの凝集効果を示す化合物を探索する。

さらにこれらの結果をもとに、8員環化合物の各種標識体を調製し、細胞内での挙動観察やターゲット分子の探索を行い、エピジェネティクス制御機構を検討する。27年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度から新規の科学研究費助成事業(新学術領域)に採択されたため、本課題を辞退する。8月時点での実績を報告するが、この時点では本成果を外部に報告していない。
大規模履歴データからの因果確率モデル構築のための時間発展類型の抽出

多量の個人履歴データを用い,行動の類型の上での時間発展の共通性から,個人のクラスターと時間発展モデルを抽出する各種の方法論を提案した.個体集団の細分の方法としては,古典的SOMを用いる方法の事例を検討するとともに,そこで生じた問題点を解決するために,位相的な構造を表現する新たな方法論として,可変自己組織化マップを提案した.また,クラスター上での予測方法として各種の予測モデルを作成した.多量の個人履歴データを用い,行動の類型の上での時間発展の共通性から,個人のクラスターと時間発展モデルを抽出する各種の方法論を提案した.個体集団の細分の方法としては,古典的SOMを用いる方法の事例を検討するとともに,そこで生じた問題点を解決するために,位相的な構造を表現する新たな方法論として,可変自己組織化マップを提案した.また,クラスター上での予測方法として各種の予測モデルを作成した.本研究は,多量の個人履歴データの中からのデータマイニングの方法論の一つとして,履歴の時間発展の類型を構成する方法を提案することを目的としている。具体的には,時点ごとの個体類型を見出した上で,個人が時間とともに異なる個体類型へ遷移してゆくようすを類型化することを目標としている.この際,データ解析の利用目的に有用な類型を構築するため,利用目的が注目する現象に関する,確率的予測モデルを考え,共通の因果確率モデルが適用できる時間発展を同一視する類型化を目指す。これにより個人履歴群をグループ化し,注目する現象に関して同一の因果モデルを適用可能なクラスターを構成する。多様な個人をこのようなクラスターに分割することで,それぞれのクラスターに対し予測精度の良い因果モデルが構築できることが期待される。`以上を実現するにあたり,3年間の研究の第1年度である本年度は,次の2点について研究を行った。(1)介護保険サービス利用履歴データ,クレジットカード利用履歴データ,Webアクセスログデータなどを対象とした分析事例を作成し,履歴データの分析方法について検討を進めた。その中で,原変量り性格を考慮した基準化と類似度の定義を検討し,時点ごとの個人類型を抽出する方法としてSOM(自己組織化マップ)を利用した個人類型の分析結果を得た。(2)個体の時間発展の表現モデルとして,SOMマップ上の遷移確率を,マップの位相を考慮して説明するモデルを考案し,モデル選択基準を用いた推定アルゴリズムを作成し,介護保険データに対し推定事例を与えた。本研究は、多量の個人履歴データの中からのデータマイニングの方法論の一つとして、履歴の時間発展の類型を構成する方法を提案することを目的としている。具体的には、時点ごとの個体類型を見出した上で、個人が時間とともに異なる個体類型へ遷移してゆくようすを類型化することを目標としている。この際、データ解析の利用目的に有用な類型を構築するため、利用目的が注目する現象に関する確率的予測モデルを考え、共通の因果確率モデルが適用できる時間発展を同一視する類型化を目指す。これにより個人履歴群をグループ化し、注目する現象に関して同一の因果モデルを適用可能なクラスターを構成する。多様な個人をこのようなクラスターに分割することで、それぞれのクラスターに対し予測精度の良い因果モデルが構築できることが期待される。以上を実現するにあたり、3年間の研究の第2年度である本年度は、次の2点について研究を行った。(1)介護保険サービス利用履歴データ、クレジットカード利用履歴データ、Web入札履歴データなどを対象とした分析事例を作成し,履歴データの分析方法について検討を進めた。その中で、原変量の性格を考慮した基準化と類似度の定義を検討し、時点ごとの個人類型を抽出する方法としてSOM(自己組織化マップ)を利用した個人類型の分析結果を得た。(2)個体の時間発展の表現モデルとして、SOMマップ上の遷移確率を推定し、マルコフ連鎖として将来の所在ノードを予測するモデルを考案し、クレジットカード利用履歴データに対し推定事例を与えた。3年間の研究の最終年度として、これまでに整備した介護医療保険サービスデータやクレジットカード利用履歴データなどの実際のデータのデータベースなどに基づき研究を進めた。本研究では、(1)時点ごとの個人類型の抽出の方法、(2)個体の時間発展の表現法、(3)注目する原因系変量と結果系変量に関する確率的因果モデルの定式化法の3点を目標とした。時点毎の状態をSOMなどにより層別して時点個人類型を構成し、その上で、時間発展に対し時間発展類型を構成することが基本アプローチとなる。このうち(1)ついて、これまでの遷移関係のモデル化の検討の中で、類型間の距離関係構造がSOMマップ上での距離関係に適切に反映されていない部分があると、遷移関係のモデル化が困難が生ずることが分かった。これを踏まえ、本年度はまず、時点個人類型の抽出法の再検討を行った。まず、類型間の距離関係構造がSOMマップ上に反映される類型化の方法として、サンプルの位相関係が適切に表現できるようにSOMマップの形状を変形する可変自己組織化マップを提案した。これについてクレジットカード利用履歴データについて分析例を与えた。また、注目現象に関する因果確率モデルの提案としては、データ解析コンペティションに参加して解析したデータについて、メニューリコメンデーションシステムとして、前日メニューを配慮した当日メニューの予測を行う多項ロジットモデルを提案した。ここでは、メニュー遷移の説明モデルに因果関係を説明する回帰構造を想定したモデルを提案している。さらに、医療需要の時系列変化や、個人間の会話関係の変化について、事例分析を行って発表した。以上を通じ、介護医療福祉の領域、経営の領域で有益な知見を得られるモデルとその解法を提案できた。
コンディショナルRac1欠損マウスを用いた発がんの研究

個体レベルで低分子量G蛋白質Racの発がんに関する役割を検討するため、Rac1欠損マウスを、rac1の翻訳領域をloxPで挟んだrac1染色体DNAのBACトランスジーン(floxed-rac1-EGFP)でレスキューする実験を計画し、6系統の独立なrac1(+/-)/floxed-rac1-EGFPトランスジェニックマウス(Tg)を得た。さらに、Rac1の欠損とがん遺伝子の発現が同時に同一の細胞で起こるためのマウスの作成も行った。すなわち、乳腺特異的プロモーターMMTV-LTRの制御下にドキシサイクリン投与によって転写活性が抑制できるテトラサイクリン調節性トランス活性化因子(tTA)を発現するTgと両方向性のテトラサイクリン応答因子(TRE)制御下にCreとポリオ-マウイルスミドルT(PyV-mT)を発現するTgの2重Tgを7系統作成した。この2重Tgではドキシサイクリン投与により、PyV-mTの発現とCreの発現が同時に制御でき、rac1(-/-)/floxed-rac1-EGFPTgへこの2重Tgを導入することにより、ドキシサイクリン投与中止により乳腺の同一の細胞でRac1の欠損、PyV-mTの発現が生じる。従って、PyV-mT発現によって生じる乳癌発生、転移におけるRac1の関与を解析することが可能である。また、PyV-mTの代わりに活性型H-Rasを発現する同様のマウスも2系統作製した。この系では、活性化型H-Rasのように発がんの初期段階で必要とされる分子ががん細胞の悪性化、もしくは悪性であることの維持に必要であるかどうかを、腫瘍形成後に発現をドキシサイクリン投与によつて停止することによって、腫瘍の進行に変化が生じるかどうかを検討することにより明らかにできる。
グリーンテクノロジーを用いた木質系廃棄物の総合的有効利用法の開発

近年、人間活動からの環境への排出を限りなくゼロに近づけ、かつ生産活動を持続可能とするために業種を越えた産業ネットワークによる物質循環を実現しようとするゼロエミッションの試みが行われているが、木質系廃棄物の資源化はゼロエミッションネットワークの要となる場合が多い。また、木質系廃棄物を無駄なく完全に有用物質あるいは製品に変換する技術は排ガス、排水、固形残渣物を発生しないので、人体や環境に優しい(悪影響を与えない)技術、すなわちグリーンテクノロジーとして非常に期待される。本研究では水蒸気爆砕と種々の変換操作から成るグリーンテクノロジーを用いて廃材、おがくず、樹皮などの木質系廃棄物を無駄なく完全に有用製品化するための環境調和型変換プロセスを開発した。能登空港建設用地などから大量に発生する木質系廃棄物であるカラマツやスギ等のチップを原料として木質系廃棄物の総合的有効利用のための新規メタン発酵プロセスの構築を試みた。リグノセルロース系原料を基質とする場合、メタンの生成源は木材中のホロセルロース(セルロースやヘミセルロース)であり、リグニンはメタン発酵されない。それゆえ、メタンを効率よく得るためには、ホロセルロースを覆っているリグニンを除去する必要がある。そこで脱リグニンのための前処理方法として水蒸気爆砕(水のみの使用なので後処理不要)を用い、リグニン除去のための効果的爆砕条件を決定した。さらに、除去されたリグニンもオゾン分解(オゾンは酸素に自己分解するので後処理不要)によって低分子有機酸に分解することにより、木質廃棄物中の全構成成分を基質とする新規メタン発酵プロセスを開発した。また、リグニンから環境ホルモン活性を示さないエポキシ樹脂を合成し、その物理的・化学的特性や安全性を評価した。近年、環境汚染の対策として大量の排出物を高効率で処理するための技術開発も待たれているが、汚染物無排出型システム(ゼロエミッション型システム)によって限りある資源を無駄なく完全に有用物質あるいは製品に変換する資源化方法の構築が望まれている。木質系廃棄物のセルロース、ヘミセルロース、リグニンなどの成分がそれぞれの物質に最も適合した製品に変換されるならば、限りある資源の多様かつ高効率の製品化は排出物を著しく低減させた工業生産として今後ますます期待される。すなわち、木質系廃棄物の総合的有効利用法の開発は、汚染物無排出型システムの構築に有効であり、環境汚染対策としても非常に注目される。本年度は木質系廃棄物の総合的有効利用法の一例として、ユーカリと竹を原料とし、水蒸気爆砕法・抽出を行い、それぞれの成分を用いたパルプ化・メタン生産・樹脂製造について研究した。爆砕パルプの引張強さと破裂強さは蒸解パルプとほぼ同じ値であったが、引裂強さは蒸解パルプの約半分であった。爆砕パルプの引裂強さを高くするための水蒸気爆砕などの操作方法の開発は今後の課題である。木質系廃棄物中のセルロースを効率よくメタン発酵するためにはリグニンの低分子化が重要であった。メタノール可溶性リグニンから合成される樹脂はE-Screenアッセイ法によるとエストロゲン作用の心配のない樹脂であった。これら一連のプロセスの開発は、木質系廃棄物の資源化のみにとどまらず、再生可能な木質資源のリサイクルや汚染物無排出型システム(ゼロエミッション型システム)の確立に一石を投じたと思われる。また、ファイトレメディエーション(植物を用いた汚染浄化・修復法)に木質バイオマスのゼロエミッション型資源化システムの応用を試みた。重金属などで汚染された土壌から植物によって重金属を吸収させ、土壌の浄化・修復をするとともに、その植物からの有価金属のリサイクルと木質物質のゼロエミッション型資源化システムの開発である。木質系廃棄物を含む植物性バイオマスのゼロエミッション型資源化システムの開発は今後ますます多方面に応用され、環境負荷の少ない社会の創生に少なからず付与していくものと確信する。

近年、人間活動からの環境への排出を限りなくゼロに近づけ、かつ生産活動を持続可能とするために業種を越えた産業ネットワークによる物質循環を実現しようとするゼロエミッションの試みが行われているが、木質系廃棄物の資源化はゼロエミッションネットワークの要となる場合が多い。また、木質系廃棄物を無駄なく完全に有用物質あるいは製品に変換する技術は排ガス、排水、固形残渣物を発生しないので、人体や環境に優しい(悪影響を与えない)技術、すなわちグリーンテクノロジーとして非常に期待される。本研究では水蒸気爆砕と種々の変換操作から成るグリーンテクノロジーを用いて廃材、おがくず、樹皮などの木質系廃棄物を無駄なく完全に有用製品化するための環境調和型変換プロセスを開発した。能登空港建設用地などから大量に発生する木質系廃棄物であるカラマツやスギ等のチップを原料として木質系廃棄物の総合的有効利用のための新規メタン発酵プロセスの構築を試みた。リグノセルロース系原料を基質とする場合、メタンの生成源は木材中のホロセルロース(セルロースやヘミセルロース)であり、リグニンはメタン発酵されない。それゆえ、メタンを効率よく得るためには、ホロセルロースを覆っているリグニンを除去する必要がある。そこで脱リグニンのための前処理方法として水蒸気爆砕(水のみの使用なので後処理不要)を用い、リグニン除去のための効果的爆砕条件を決定した。さらに、除去されたリグニンもオゾン分解(オゾンは酸素に自己分解するので後処理不要)によって低分子有機酸に分解することにより、木質廃棄物中の全構成成分を基質とする新規メタン発酵プロセスを開発した。また、リグニンから環境ホルモン活性を示さないエポキシ樹脂を合成し、その物理的・化学的特性や安全性を評価した。
シュルレアリスムの芸術創造における科学的思考ーハンス・ベルメール作品を中心にー

昨年度は、同時代の自然科学における言説をハンス・ベルメールの制作に関わりの深い他作家たちがどのように受容していったかについて調査を行った。その結果、彼らの自然科学への関心は、テクストであれ造形作品であれ、その表現対象の主体化という事態への関心に結びついていると考えられた。この表現対象の主体化という問題は、ベルメールにおいてはしばしば自我と外界の間の〈交換可能性〉という概念によって扱われており、同時代の他作家の中でベルメール作品の座標を設定していく時に有効な軸であろうと思われる。そこで本年度は、とりわけ作家の〈交換可能性〉概念が発展する戦中戦後、マックス・エルンスト、ジョルジュ・バタイユとともにベルメールが行った共同制作に注目し、両者の比較考察と、これを実証する事実関係の細部を確認していく作業を行った。この作業はまず、昨年から準備を行っていたパリでの資料調査を中心に進められた。ベルメールのカタログ・レゾネ編纂中の研究者と本研究に関する意見交換を行う機会を得、その際ベルメール作品を網羅的に把握できる貴重な一次資料を得た。加えて昨年度より遺族と交渉を進めていたジャック・ドゥーセ文学図書館でのベルメールによるアンドレ・ブルトン、トリスタン・ツァラ、パトリック・ワルドベルグ宛書簡の調査は、予想外の分量が保管されており時間はかかったものの、精読および記録が完了した。これらの資料的充実は、本研究テーマに留まらず、これまで行ってきたベルメール作品研究成果についても新たな裏付けを与えてくれるものであった。帰国後は以上の成果をもとにまずはエルンストを軸にした内容をまとめ、第65回美学会全国大会にて口頭発表を行った。バタイユについては現在分析中であるが、来年度中に雑誌への投稿を予定している。26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は一次資料の収集を目的とした渡仏調査により、自然科学の言説の各シュルレアリストたちによる受容を探ることで、ハンス・ベルメールの制作に関わる他作家との比較のための素地をつくっていった。ベルメールとマルセル・デェシャンの比較研究については、フランス国立図書館での調査により、デュシャンの四次元幾何学とエロティスム研究に関する新たな知見を得た。これをもとにベルメールがデュシャンの作品に言及するテクストを精読し、関連するベルメールの造形作品の選別と各作品の分析を進めた。マックス・エルンストについては、その戦時期のキメラ的イメージに、収容所で同室であったベルメールがどのように反応したか、という点を中心に比較分析を行った。これは従来のベルメール研究では殆ど等閑視されてきたが、プリニウス『博物誌』をもとに生成されたエルンストの独自の自然に対するアプローチはベルメールのそれを考える上で非常に重要な点を占めている。そこで、2人が収容されたアクサンプロヴァンスのミル収容所に赴き、両者の収容時書類等の資料を得、加えて造形作品にも見出される収容所のイメージを多数確認した。また、解放後にも見られる共通する技法やイメージをカンディンスキー図書館において確認した。以上のような各作家との関係調査と平行して、日本ではアクセスの困難なベルメール自身の制作および生活状況、交友関係を補完する資料の網羅的収集を行った。ベルメールの友人であった精神科医ジャン・フランソワ・ラバン氏にはインタビューを行い、晩年の作家の制作・生活状況についての情報を得、書簡約20通の調査を進めている。また、ベルメールの遺族と友人パトリック・ワルドベルク氏の遺族の便宜を得て、ジャック・ドゥーセ文学図書館でのベルメールとブルトンらの往復書簡約90通の閲覧調査を進めている。カンディンスキー図書館ではマン・レイ・ファウンデーション所蔵のベルメールからマン・レイへ宛てた書簡を閲覧し、晩年のベルメールの交友関係に関する情報を補強することができた。またブルトンのマン・レイ宛書簡により、ベルメールの出展したシュルレアリスム国際展(1947年展及び1959-60年展)の展示意図と各作家の展示裁量などが把握されたことは大きな進展であった。

帰国後は以上の成果をもとにまずはエルンストを軸にした内容をまとめ、第65回美学会全国大会にて口頭発表を行った。バタイユについては現在分析中であるが、来年度中に雑誌への投稿を予定している。26年度が最終年度であるため、記入しない。渡仏調査によってデュシャン、エルンストにおける自然科学の言説受容についての一次資料と文献調査、及びベルメール作品に関連する一次資料と関係者の聞き取り調査は在仏の研究者による助けもあり、当初の計画以上に進展した。この進展によってある程度残りの調査の目処をたてることができたので、相対的に進みの遅いバタイユにっいての研究調査も、在仏中に一層進展させることができると考える。調査の経過において、ベルメールを取り巻く作家たちの自然科学的言説やその歴史へのアプローチから抽出されるのは、自然科学の研究対象である「ものobjet」の変容、あるいはそうした「もの」のもつ役割の変化、そしてそれに伴ってアーティスト自身に起る変化という主題であることが明らかになりつつある。2014年度はこの点に着目して、計画していたバタイユ作品のベルメールへの受容について考察を加え、帰国後は引き続き得た資料の精読及び綿密な比較分析を実施し、渡仏調査の研究成果を美学会および学会誌にて発表していくことに尽力する。
頭頸部癌患者の宿主免疫抑制機構の解析

生体内での癌細胞排除帰転は、抗原提示細胞(APC)が腫瘍関連抗原(TAA)を認識し、T細胞にTAAを提示することから生じる。したがって、発癌の初期段階ではマクロファージをはじめとしたAPCの機能が抑制されていると考えられている。マクロファージ活性化因子として報告されているGcMAFは、Gc蛋白のO型糖鎖が修飾をうけて生成される。すなわちある種の癌細胞はO型糖鎖を分解することでマクロファージの活性化が抑制し、宿主免疫を抑制していることで発癌を起こすと考えられる。本年度は、ヒト唾液腺癌細胞由来alpha-acetylgalactosaminidase(以下alpha-Nagalase)につき検討を行い、alpha-Nagalaseがendo活性でGc蛋白の、exo活性でGcMAFの脱糖鎖に関わることをウエスタンブロットにて確認した。GcMAFにて賦活化したマクロファージにalpha-Nagalaseを作用させるとマクロファージの蛍光ビーズ食食能が著明に低下し、以上の結果からalpha-Nagalaseが宿主免疫におけるマクロファージ活性の抑制に関わることが示唆された。またさらなるO-glucanase活性物質の同定を目指して、ヒト単球マクロファージにGcMAFを作用させ、DNAマイクロアレイにて発現量の変化する遺伝子のスクリーニングを行っている。本研究結果により、発癌初期における宿主免疫抑制機構の一部が明らかになりつつある。本年度は,頭頸部癌細胞から抽出したα-N-acetylgalactosaminidase蛋白の生化学的性質を検討するとともに、精製蛋白に対する抗体を作製することを目的として行った。【方法】本研究では、1)唾液腺癌細胞から細胞抽出液を調製し、イオン交換ゲルクロマトグラフィーに供した。2)イオン交換ゲルクロマトグラフィーからα-N-acetylgalactosaminidase活性を示す蛋白分画を回収し、ゲルクロマトグラフィーに供した。3)ゲルクロマトグラフィーで精製された蛋白分画をSDS-PAGEで展開し、分子量を求めた。4)精製蛋白を、ラビットに免疫し、抗ヒト唾液腺癌由来α-N-acetylgalactosaminidase活性蛋白抗体を作製した。5)抗体の力価は、ELISAで測定した。【結果】1)唾液腺癌細胞から蛋白を抽出し、イオン交換ゲルクロマトグラフィーで展開したところ、#76のフラクションを中心としてα-N-acetylgalactosaminidase活性物質が分離された。これらのフラクションをゲルクロマトグラフィーで分離したところ、#58のフラクションでα-N-acetylgalactosaminidase活性物質が分離された。2)#58のフラクションを濃縮し、SDS-PAGEで展開した結果、約48kDaのシングルバンドを得た。3)本精製蛋白は、exo-とendo-α-N-acetylgalactosaminidase活性を有する特徴がみられた。4)本蛋白を濃縮し、ラビットに免疫した結果、ポリクローナル抗体を得た。5)ポリクローナル抗体はELISAによってその特異性が確認された。現在、顎下腺癌細胞(HSG)由来O-glucanaseを精製し得られた抗体を用いてクローニングを継続中である。
インド伝統医学理論に関する文献学的研究

1.インド伝統医学の古典的文献のうち、医学全書としての性格をもつ『チャラカ・サンヒター』(紀元後6世紀頃成立)、『スシュルタ・サンヒター』(紀元後67世紀頃成立)、『アシュターンガフリダヤ・サンヒター』といった基本文献のうち、既に出版されているテキストを出来る限り収集した。2.これら基本文献のうち、Bower Manuscriptsのテキスト全文をパーソナルコンピューターを用いて入力、デジタル化し、テキストデータベースを構築するための作業を進めた。3.古典医学書『ベーラ・サンヒター』の手書き写本とその転写写本のマイクロフィルムを入手し、それらを用いて校訂テキスト作成の作業を進めた。また、特に重要な写本のマイクロフィルムをパソコン用スキャナーを用いて読み込み、デジタル化し、写本画像のデータベース構築のための作業を進めた。4.インド伝統医学の治療実践に関して、文献から得られる情報を補うために、インド共和国ケーララ州にて、現地研究者の協力を得て、特定の疾病に対する診察・診断・治療の実態についての記録、および医学写本に関する情報を収集した。この現地調査結果の一部は「インド伝統医学の現在-ケーララ州における調査結果(2)-」(『京都学園大学経営学部論集』第12巻第3号pp.65-88)として発表した。1.インド伝統医学の古典的文献のうち、医学全書としての性格をもつ『チャラカ・サンヒター』(紀元後6世紀頃成立)、『スシュルタ・サンヒター』(紀元後67世紀頃成立)、『アシュターンガフリダヤ・サンヒター』(紀元後8世紀頃成立)、『アシュターンガ・サングラハ』、『ベーラ・サンヒター』といった基本文献の、既にインド国内で出版されているテキストを出来る限り収集した。2.これら基本文献のうち、『チャラカ・サンヒター』、『スシュルタ・サンヒター』、『ベーラ・サンヒター』のテキスト全文をパーソナルコンピューターを用いて入力し、テキストデータベースを構築した。3.所在が確認されている『ベーラ・サンヒター』の手書き写本とその転写写本のすべてのマイクロフィルムを入手し、それらを用いて校訂テキスト作成の作業を進めた。その一部を"Bhelasamhita,Sarirasthana Chapters 2-3."(『インド思想史研究』12pp.83-93)として発表した。4.インド伝統医学の治療実践に関して、文献から得られる情報を補うために、Aroor Ravi Memorial Ayurvedic Research Center(インド共和国、カルナータカ州コッパ)と共同で、特定の疾病に対する診察・診断・治療の実態についての記録を収集するための準備的作業を行った。このための現地調査と今後の研究の展望について、「インド伝統医学の保存と再評価へ向けて」(『京都学園大学経営学部論集』第10巻第3号pp.165-174)として発表した。5.インド伝統医学の疾病概念と疾病分類に関して、インド伝統医学特有の医学理論を踏まえて、その特徴の一端を明らかにした。また、中国伝統医学の疾病概念および疾病分類との比較研究を行い、その成果の一部を、「伝統医学における疾病分類について-中国とインド-」として日本科学史学会第47回年会(2000年5月21日桃山学院大学)において京都大学人文科学研究所東郷俊宏助手と共同で口頭発表を行った。1.インド伝統医学の古典的文献のうち、医学全書としての性格をもつ『チャラカ・サンヒター』(紀元後6世紀頃成立)、『スシュルタ・サンヒター』(紀元後67世紀頃成立)、『アシュターンガフリダヤ・サンヒター』(紀元後8世紀頃成立)、『アシュターンガ・サングラハ』、『ベーラ・サンヒター』といった基本文献のうち、既に出版されているテキストを出来る限り収集した。2.これら基本文献のうち、『アシュターンガ・サングラハ』のテキスト全文をパーソナルコンピューターを用いて入力、デジタル化し、テキストデータベースを構築した。この現地調査結果の一部は「インド伝統医学の現在-ケーララ州における調査結果(1)-」(『京都学園大学経営学部論集』第11巻第3号pp.135-155)として発表した。特に、古典医学書『マーダヴァ・ニダーナ』に見られる疾病分類に関しての研究を行い、その成果の部を、「古代インドの病理論書『マーダヴァ・ニダーナ』について」として日本医史学会第102回総会(2001年9月29日東北大学)において口頭発表を行った。

3.古典医学書『ベーラ・サンヒター』の手書き写本とその転写写本のマイクロフィルムを入手し、それらを用いて校訂テキスト作成の作業を進めた。また、特に重要な写本のマイクロフィルムをパソコン用スキャナーを用いて読み込み、デジタル化し、写本画像のデータベース構築のための作業を進めた。4.インド伝統医学の治療実践に関して、文献から得られる情報を補うために、インド共和国ケーララ州にて、現地研究者の協力を得て、特定の疾病に対する診察・診断・治療の実態についての記録、および医学写本に関する情報を収集した。この現地調査結果の一部は「インド伝統医学の現在-ケーララ州における調査結果(2)-」(『京都学園大学経営学部論集』第12巻第3号pp.65-88)として発表した。