hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高地の低圧環境を利用した新トレーニング法の開発

1年目は、低圧環境下でのジャンプ運動の特徴を明確にするため、通常気圧と低圧でのジャンプ運動中のキネティクスおよびキネマティクスを算出した。低圧においては、リバウンドジャンプの接地時間が短くなるという傾向が認められた。これに関しては低圧の影響により接地瞬間の衝撃が大きくなり、伸張短縮サイクルが強化されたものと考えられる2年目は、平地、標高1200mと1900mの異なる条件でのスプリント走の動作解析を実施し、キネティクスおよびキネマティクスを算出した。条件間での有意差が認められなかったが、個人で見ると変化が認められた。これまでにプライオメトリックジャンプ経験のある大学陸上競技部に所属する男子大学生16名を被検者に、1通常気圧でのジャンプ試技、2環境制御室における低圧状態でのジャンプ試技を課した。ジャンプ試技は、垂直跳び(CMJ)、連続リバウンドジャンプ(RJ)の2種類とした。なお、環境制御室内の気圧は、標高2500m相当とした。前試技の影響を考慮して、16名を2グループに分けて、1→2、2→1の順に行うようにした。ジャンプ高、接地時間、RJインデックス(跳躍高/接地時間)、接地中の地面反力、下肢の筋電図(大腿直筋、大腿四頭筋、腓腹筋)を分析項目として選んだ。筋電図分析は現在進めている状況であるが、これまでの分析結果からは、低圧環境におけるRJの接地時間が有意に短いという傾向が明確になっている。しかも、有意傾向に達しないが、跳躍高も増加を示している。これらのことから、低圧環境が短時間で効率の良いキックを可能にした可能性が考えられる。今後、詳細な地面反力の分析、筋電図分析を進め、そのメカニズムについての検討を進めていく。高地の低圧環境下では、1空気抵抗が小さくなり動作スピードが増す、2接地瞬間の衝撃に変化があり、それが接地中の下肢の筋腱複合体の機能を高める、などの変化が生じることが予想できる。本研究では、高地における最大努力のスプリント運動中のキネティクスおよびキネマティクスを明らかにし、高地トレーニングの新たな可能性を明確にすることを目的とした。最終年度である平成27年度は、高地環境(飛騨御岳高原にある陸上競技場:標高1200m、1900mの2箇所)と平地(筑波大学陸上競技場)での最大スピードでのスプリントの計3試技を、陸上競技者でスプリント運動に習熟している大学生10名に課した。測定項目は、疾走速度、ピッチ、ストライド、下肢三関節の角度・角速度変化などのキネマティクス、回復脚のトルク・パワーなどのキネティクスであった。3種類のスプリント間で平均値の比較を行い、低圧環境のスプリント動作の特徴を検討した。疾走速度、ピッチ、ストライドには試技間に有意差は認められなかった。また、キネティクスにも有意差の認められた項目はなかった。しかしながら、個々の被験者別に検討していくと、低圧環境でのスプリント動作がよりスピードが発揮できる形態に変化している被験者も見られた。それは、下肢の前方及び後方へのスウィング速度が高まり、ストライドが伸長したという変化であった。現在、これらの動作の変化がどのようなキネティクス要因に裏付けられたものであるかを検証中である。これの変化が身体全体にかかる圧力(空気抵抗)が一定に軽減されたことによる動作スピードのアップによるものであるのか、走運動の接地瞬間の衝撃が強くなり、その後の下肢の伸張ー短縮サイクル運動が効率良く行われることにより、プライオメトリック機能が強化されたことによるものなのかを検討することにより、今後、トレーニングの新たな可能性を明確にしていきたい。予定していた被検者を確保することに時間を要したことで、実験の時期が予定より遅れた。現在、すでに終了した分の地面反力および筋電図の詳細な分析を進めているが、より多くのサンプルを確保するため追加の実験の実施およびデータ解析を進める必要がある。コーチング、マネジメント27年度の課題として、まず26年度から繰り越しになっている実験とデータ分析に取り組みたい。26年度からの繰り越し金を謝金として充当し、追加実験を実施し分析を進める。この課題終了後に、空気抵抗がスピード制限要因になると考えられるスプリントについての研究を推進する。高地の低圧環境における最大努力の走運動中のキネティクス、キネマティクスおよび筋活動を測定することで、気圧の変化が運動形態に及ぼす影響を明確にし、トレーニングの新たな可能性を検討する。平成27年度の研究計画は以下の通りである。1場所:1300m2000mの高地にある陸上競技場、2被検者:陸上競技者でスプリント運動に習熟している大学生10名程度、3実験試技:a)高地環境での最大スピードでのスプリント、b)平地(筑波大学陸上競技場)での最大スピードでのスプリント、4測定項目:

a)動作解析、b)筋活動、c)運動の内省調査、5研究の役割分担:尾縣貢(研究の企画・統括)、大山卞圭悟(筋活動の測定)、木越清信(ジャンプ運動の撮影および動作解析)。測定補助およびデータ解析には、大学院前期・後期課程の学生を短期雇用する。26年度は、「その他」の項目で20万円を計上したが、この主たる費目は低圧環境施設の使用料であった。しかしながら、年間の低圧環境施設の使用料として所属機関(筑波大学)の個人研究費から支出することになった。旅費についても予定していた実験が遅れたため、情報収集や研究成果のための学会参加を断念したため。繰り越し金は、平成26年度に収集したデータが予想以上になったため、データ分析補助のための謝金の一部に充てることとする。
ヒドラ細胞腫に特異的に発現する遺伝子群の同定

1.ヒドラ間細胞系譜(幹細胞,神経細胞,刺細胞及び幹細胞より後2者への分化途上細胞)に特異的に発現するマーカーとしてのモノクローン抗体の分離:当初計画には無かったが,幸いモノクローン抗体を分離する機会に恵まれたため,細胞種に特異的なマーカーとして多方面に利用出来る本抗体を多数分離した.例,神経細胞の亜集団を認識する抗体,刺細胞4種の中, 1種のみ, 2種, 3種,全部を認識する抗体,幹細胞から刺細胞への分化経路の色々な段階を認識する抗体.この中,刺細胞前駆体細胞の4種への分化決定期前後を認識する抗体は特に興味深い.2.ヒドラcDNAライブラリィの作製:モノクローン抗体をプローブとして細胞種に特異的に発現する遺伝子をスクリーンするため,抽出したヒドラmRNAを鋳型としてcDNAを合成し,更にこれを2重鎖として発現ベクターλgt11に組み込んだ.同時に,核酸プローブ用にλgt10に組み込んだcDNAライブラリィも作製した.3.現在モノクローン抗体をプローブとしてλgt11のcDNAライブラリィから目的の遺伝子をスクリーニング中である.4.ヒドラの形態形成に関与すると考えられる血小板由来の細胞増殖因子(PDGF)様物質の遺伝子をヒトPDGFのRNAプローブを用いてλファージ(charor4A)に組み込んだヒドラのゲノミックDNAライブラリィからスクリーニングし,数個のポジティブクローを得た.現在この遺伝子のクローニングを行っている.1.ヒドラ間細胞系譜(幹細胞,神経細胞,刺細胞及び幹細胞より後2者への分化途上細胞)に特異的に発現するマーカーとしてのモノクローン抗体の分離:当初計画には無かったが,幸いモノクローン抗体を分離する機会に恵まれたため,細胞種に特異的なマーカーとして多方面に利用出来る本抗体を多数分離した.例,神経細胞の亜集団を認識する抗体,刺細胞4種の中, 1種のみ, 2種, 3種,全部を認識する抗体,幹細胞から刺細胞への分化経路の色々な段階を認識する抗体.この中,刺細胞前駆体細胞の4種への分化決定期前後を認識する抗体は特に興味深い.2.ヒドラcDNAライブラリィの作製:モノクローン抗体をプローブとして細胞種に特異的に発現する遺伝子をスクリーンするため,抽出したヒドラmRNAを鋳型としてcDNAを合成し,更にこれを2重鎖として発現ベクターλgt11に組み込んだ.同時に,核酸プローブ用にλgt10に組み込んだcDNAライブラリィも作製した.3.現在モノクローン抗体をプローブとしてλgt11のcDNAライブラリィから目的の遺伝子をスクリーニング中である.4.ヒドラの形態形成に関与すると考えられる血小板由来の細胞増殖因子(PDGF)様物質の遺伝子をヒトPDGFのRNAプローブを用いてλファージ(charor4A)に組み込んだヒドラのゲノミックDNAライブラリィからスクリーニングし,数個のポジティブクローを得た.現在この遺伝子のクローニングを行っている.
生物機能オリゴ糖中分子の高効率合成と機能評価

本研究の主たる研究目的である生物活性オリゴ糖の合成に関してはTMG-キトトリオマイシンのTMG部位をオリゴ糖の内部に移動させた誘導体の合成に成功し、生物活性評価を共同研究者が実施している状況にある。合成の際には本研究で開発した、支持電解質を混合した条件下での電解グリコシル化反応が鍵反応となった。また、生物活性に関しては未知であるが、環状オリゴグルコサミンの合成が電解グリコシル化反応によって効率的に達成できることを見出している。この知見を活かし、環状オリゴ糖を含んだ生物活性オリゴ糖の基質拡張を検討している。本研究の開始と同時に着手したマンノースやグルコース糖鎖ビルディングブロックの開発については目処が立ったことから、これまでに化学合成が報告されていないβグルカンの合成に着手した。その結果、昨年度までに環状βグルカンの部分構造であるグルコースからなる六糖の合成を達成した。なお、標的とする環状βグルカンは12糖を環化するため、前駆体となる鎖状12糖の合成に取り組んでおり、グリコシル化反応中間体とその安定性に関して詳細なデータが得られつつある。この他、生物活性の評価についてはTMG-キトトリオマイシンのグルコサミニダーゼ阻害の作用機序が共同研究者によってITCを用いて明らかにされた。以上の検討と並行してスケールアップと合成の迅速化を目指して、液相電解自動合成装置の改良も企業との連携によって進めており、本研究で開発された手法を社会に実装するための取り組みも継続的に行っている。オリゴ糖合成に対する電解グリコシル化反応の有用性が明らかになりつつあり、新しい立体制御のコンセプトにつながったり、これまでに合成が困難であった環状オリゴ糖合成が効率化されたりしている。また、グリコシル化反応中間体の構造や安定性に関してもNMRによる直接観測により明らかになり、本研究の終了後も展開できるようなデータが蓄積されつつある。以上のような状況から、本研究はおおむね順調に進展していると判断している。最終年度となる今年度は生物活性を有するオリゴ糖の合成に注力する。糖鎖ビルディングブロックとしてはまだ手付かずであったガラクトースについて最適化を行い、糖鎖にガラクトースを含む生物活性オリゴ糖の合成につなげる。糖水酸基の硫酸化やアノマー位への官能基導入を継続して検討し、オリゴ糖の生物活性発現や機能開拓につなげる。また、天然型の環状βグルカン13糖の全合成を達成し、構造ー活性相関研究へと展開する。1年目の本年度はTMG-キトトリオマイシンの全合成と大量合成を目標に研究に取り組んで来た。このうち、全合成に成功し共同研究者の協力を得て、酵素阻害活性評価を行うことも出来た。その結果、文献値に近いIC50を示すことが分かったが、大量合成を実施するにあたり、いくつかの課題が浮かび上がってきた。特に、アジド糖を用いたグリコシル化反応における立体選択性は完全ではないため、望みの異性体を得るためには煩雑なカラムクロマトによる分離精製作業が必要であり、大量合成に向けて最優先で解決すべき課題と位置付けた。そこで、本年度の後半において集中的に検討を行った結果、二種類の支持電解質を混合した反応条件下で電解グリコシル化を実施することで、95%以上のβ選択性で目的の二糖を得ることに成功した。この反応系は2位にアジド基を有する糖供与体のほか、2位水酸基がベンジル保護された糖供与体へも拡張可能であり、隣接基関与を用いないグリコシル化反応の立体制御法として一般化出来る可能性がある。目標としていたTMG-キトトリオマイシンの大量合成実施には至らなかったものの、大量合成に向けて解決が必要な立体選択性の問題について、ある程度解決の見込みが出てきたのは大きな進歩である。また、我々が見出した混合支持塩系は隣接基関与に依存しないグリコシル化反応の立体選択性制御法として一般化出来る可能性を秘めており、今後の標的糖鎖合成において強力な手法となると期待される。従って、本研究課題はおおむね順調に進展していると判断した。計画では本年度前半までに1TMG-キトトリオマイシン合成をモデルとしたオリゴ糖合成の高効率化を完了し、年度当初から2硫酸化されたオリゴ糖のライブラリー合成に着手する予定であった。1については当初、糖供与体に対応する糖鎖ビルディングブロックに対してイオン液体タグを導入してオリゴ糖合成を計画していたが、糖供与体の水酸基に導入した場合にはイオン液体タグが立体選択性に影響を及ぼし、特に今回の合成では目的としないα体を選択的に与えることが分かった。そこで、糖受容体側の糖鎖ビルディングブロックに対してイオン液体タグを導入して、還元末端側からの糖鎖伸長反応を行い、TMG-キトトリオマイシン前駆体四糖の合成に成功した。2についてはこれまでに立体選択的合成に成功していた単糖がグルコサミンに限られていたため、グルコースとマンノースについて1,2-trans-グリコシド結合を選択的に与える糖鎖ビルディングブロックを開発した。隣接基効果を期待して、2位水酸基上の保護基を種々検討したが、いずれの場合も2位水酸基上にピバロイル基を導入した場合が最も高い収率で目的のグリコシドを与えることが明らかになった。マンノースの場合では6位水酸基にピバロイル基を導入した場合でもα選択的に目的のグリコシドが得られたことから、6位からの隣接基関与の可能性も示唆された。

イオン液体タグによる糖鎖合成効率化に関しては予想外の立体選択性への影響から3か月程度予定をオーバーしたが、目的のTMG-キトトリオマイシン前駆体四糖の合成は予定通り達成し、イオン液体タグの効果も明らかに出来た。硫酸化オリゴ糖合成に関しては、基礎的な知見を集めることが出来、グルコサミン以外にマンノースやグルコースにまで基質拡張出来たのは大きな成果であると考えている。生物活性オリゴ糖の合成に関してはTMG-キトトリオマイシンのTMG部位をオリゴ糖の内部に移動させた誘導体の合成に成功し、生物活性評価を共同研究者が実施している状況にある。合成の際には本研究で開発した、支持電解質を混合した条件下での電解グリコシル化反応が鍵反応となった。また、生物活性に関しては未知であるが、環状オリゴグルコサミンが電解グリコシル化反応によって効率的に進行することを見出している。この知見を活かし、環状オリゴ糖を含んだ生物活性オリゴ糖の基質拡張を検討している。昨年着手したマンノースやグルコース糖鎖ビルディングブロックの開発については、化学合成が報告されていないβグルカンの合成に着手し、環状βグルカンの部分構造であるグルコースからなる六糖の合成を達成した。この他、生物活性の評価についてはTMG-キトトリオマイシンのグルコサミニダーゼ阻害の作用機序が共同研究者によってITCを用いて明らかにされた。以上の検討と並行して液相電解自動合成装置の改良も企業との連携によって進めており、本研究で開発された手法を社会に実装するための取り組みも行っている。生物活性オリゴ糖の合成と評価が並行して進行しており、液相電解自動合成装置についても改良が進んでおり、研究はおおむね順調に進展していると考えているが、いずれも共同研究者の尽力によるところも大きい。なお、環状オリゴ糖の効率的合成という想定外の成果も得られており、今後の進展に期待が持てる。一方、当初予定していた硫酸化オリゴ糖の合成についてはまだ着手出来ておらず、当初の研究計画を実施するためには残された期間で一層の努力が必要な点もある。本研究の主たる研究目的である生物活性オリゴ糖の合成に関してはTMG-キトトリオマイシンのTMG部位をオリゴ糖の内部に移動させた誘導体の合成に成功し、生物活性評価を共同研究者が実施している状況にある。また、生物活性に関しては未知であるが、環状オリゴグルコサミンの合成が電解グリコシル化反応によって効率的に達成できることを見出している。本研究の開始と同時に着手したマンノースやグルコース糖鎖ビルディングブロックの開発については目処が立ったことから、これまでに化学合成が報告されていないβグルカンの合成に着手した。その結果、昨年度までに環状βグルカンの部分構造であるグルコースからなる六糖の合成を達成した。なお、標的とする環状βグルカンは12糖を環化するため、前駆体となる鎖状12糖の合成に取り組んでおり、グリコシル化反応中間体とその安定性に関して詳細なデータが得られつつある。
近世五山の国際関係資料の調査研究ー京都金地院所蔵未整理資料を中心にー

京都金地院は、周知のごとく南禅寺を再興した以心崇伝が住した同寺の塔頭の一つである。崇伝は、徳川家康の信任を得て、寺社および外交関係事務を管掌し、内政上でも秀忠・家光期まで「黒衣の宰相」として活躍した。同院所蔵の「異国日記」・「異国渡海御朱印帳・異国近年御書革案」「本光国師日記」等は夙に著名であるが、その他所蔵資料については、収蔵庫収納品のみが昭和56年に櫻井景雄氏らによる、ごく簡単な仮目録があるに過ぎない。(1)本研究は、金地院の収蔵庫にもとより、本堂・庫裡等に散在する古文書・古記録、障壁画、墨跡等にいたるまで悉皆調査を完了し、(2)東博・京博等へ寄託中の、国宝・重文指定の記録・絵画を調査し、その讃などで、従来知られている刊本等との字句の異同を明らかにし、(3)明治期に同寺より流出し、現在東京大学史料編簒所に架蔵される「五山衆試文・杜鶴文集」「本光国師大和尚入山記」「五山碩学并朝鮮修文職次目」「金地日録」等を採訪し、以上の総目録を完成させた。(4)主要資規や資料の存在状況について、解説を施した。(5)以上により、崇伝の外交・寺社・文教および寺院経営のほか、彼をめぐる幕閣・諸大名との関係がより鮮明になった。しかし崇伝の死後、外交機能は老中や長崎奉行へ、寺社統制権は寺社奉行に斬次吸収され、五山の上に位した南禅寺一金地院の実権は衰退しながら幕末に及ぶことが「金地役記」等から知られる。(6)什器類のうち、陶磁器については専門的知識を欠くので、調査から除外した。その数量は多くはない。(7)対馬の以町案の位置には数説あり、現段階では正確な場所を確定するには材料不足と言わねばならない。本年度は後期からの採用であるので、1、京都金地院所蔵の古文書・古記録類、東大史料編纂所所蔵「金地日録」(一部)、対馬以酊菴関係史料、長崎県立図書館所蔵の対馬関係文書のマイクロ複写、2、金地院所蔵頂相・絵画・典籍類の目録化(一部)、3、それらの整理、にとどまり、4、屏風・頂相・絵画類などの網羅的目録化・撮影、古文書の筆耕と検討、および南禅寺・相国寺、薩摩の文之元昌・対馬宗家などとの文書(情報)伝来の関係については、来年度にもちこさざるを得なかった。5、準備段階から続行した、「異国日記」ほか金地院崇伝関係記録についての解説、詳細な目次・索引作製を終え、所蔵者と共同し、『影印本異国日記ー金地院崇伝外交文書集成ー』として東京美術より刊行した。京都金地院は、周知のこどく南禅寺を再興した以心崇伝が住んだ同寺の塔頭の一である。彼は家康の信任を得て寺社及び外交関係の事務を管掌し、秀忠・家光期まで「黒衣の宰相」として重きをなした。所蔵の「異国日記」「本光国師日記」等は夙に有名であるが、所蔵資料については、収蔵庫収納品のみが、昭和56年に櫻井景雄氏らによるごく簡単な仮目録があるに過ぎない。

(1)本年度は、金地院の収蔵庫はもとより、本堂・庫裡等に散在する吉文書・古池録・障壁画・黒跡等の悉皆調査を完了し、(2)明治期に同寺より流失し、現在東京大学史料編纂所に架蔵される「五山家詩文・杜鶻文集」「本光国師大和尚入山記」「五山碩学兼朝鮮修文職次目」「金地目録」等を採訪し、以上の目録を作成した(別途提出)。(3)東博・京博等へ寄託中の国宝・重文の絵画・記録を調査し(目録に「特」として収録)、讃などを記録し、従来刊本等で知られているものとの異同を明らかにした。(4)主要資料について解題を施した。(5)以上により、金地院崇伝の外交・寺社・文教及び寺院経営資料のほか、彼をめぐる幕閣・諸大名との関係が浮彫りされる。しかしその死後、彼の権能が主として寺社奉行に吸収され、五山の上に位置する南禅寺ー金地院ーの位置と実権が、急速に衰えていくことが、幕末に及ぶ厖大な「金地役記」等から知られる。(6)什益類のうち、陶磁器については専門的知識を欠くため、目録から除外にした。(7)対馬の以酊庵の跡は諸説あり、現段階では正確な位置を决するには至らなかった。
脊髄小脳変性症の病因と微小管蛋白代謝障害との関係について

群馬大学病理学教室および関連施設よりOPCAの剖検例の収集を行い、現在12例が得られた。いずれも過去に剖検された症例であり、研究期間中に新規に剖検された症例はない。検索症例12例中、家族性OPCA2例を除く10例にOMTの出現がみられた。OMTは散発性OPCAに特異的と考えられる。OMTは中枢神経系の変性病変部位に関連して出現しており、神経核領域と線維路の両者に出現していた。OMTを保有する細胞の同定のため免疫組織化学的検索を行ったが、OMT陽性細胞はLNー1陰性、LNー5陰性であり、これらが陽性であるmicroglia,macrophageとは異なったグリアのなかに存在することが明らかとなった。また、αBーcrystallinの抗体による免疫組織化学では、OMT保有細胞にはcrystallinの抗原性が細胞質内に局存しており、この細胞とoligodendrogliaとの関連性が強く示唆された。OMT自体は今回収集した症例においても免疫組織化学的にはtubulinとubiquitinの抗原性を保持していることが証明された。さらに、OMT本体内にもαBーcrystallinの抗原性が免疫組織化学的に証明された。透過型電子顕微鏡を用いたOMTの微細構造の検索では、OMTの構成にかかわる成分は、2030nmの細管要素、細管を取り巻く架状物質のほかに、3050nm径の電子密度の高い顆粒状物質があることが明らかになった。なお、本研究期間中には新規のOPCA剖検例はなく、当初計画した新鮮脳組織からの抗原抽出、モノクロ-ナル抗体作成、生化学的分析等は行えなかった。
『解深密経』におけるツェルパ・テンパンマ両系統のテキスト比較分析

唯識思想の重要な教義が説かれている『解深密経』に関して、「新しい形の校訂対照テキスト」を作成した。まず、本経の諸々のチベット語訳をツェルパ系、テンパンマ系、敦煌写本という3種類に大きく分類し、これらを各章の各段落ごとに、見開き2ページ中に対照的に配置した。これまでのどの校訂テキストよりも理解しやすく、内外の研究者にとっても有益なものとなった。この成果によりいまだサンスクリット原本が失われている本経に関して、今後、よりサンスクリット語の原義に近い形での内容理解が進むものと推測される。『解深密経』チベット語訳テキストを作成するため、26年度では、まず、土台となるテキストの作成を目指した。当初の予定のうち、第5章第7章のテキストについて全14種類の写本・版本を参照しつつ、各章の各段落ごとに東西両系統のチベット語訳を対照的に配置し、現段階で考えうる最良の「比較対照テキスト」の雛形に近づけることができた。テキストの作成にあたっては、各系統のチベット語訳を使用し、さらに、漢訳・和訳を参照して、TeXという組版ソフトを使用して、見開き2頁に1段落を原則に、見やすい配置を心がけた。これまで、比較対照が現実的でなかった本経のテキスト事情を鑑みても、格段に参照しやすい本経比較対照テキストの雛形が整った。和訳と詳細な訳注についても第5章第7章の大部分につけることができた。これまで顧みられることのなかった西系統のチベット語訳(4種類)を常に参照し、かつ、まったく別の系統に位置する敦煌写本、さらに漢訳などを、系統だてて参照しえる環境においては、これまで気づかれることのなかった本経解釈の新たな問題点も発見され、本経研究に有益な情報を提供している。また、平成26年5月24日に、華東師範大学(中国・上海)における国際学会において「『解深密経』のチベット語訳テキストの作成について」と題し、その新たな作成意義について研究発表(英語)を行い、続けて、本内容について議論を交わした。文献学・宗教学・民俗学などの研究者が集う本学会での意見交換は、今後のテキスト作成において大変に有意味なものとなった。研究課題にも掲げているごとく、本プロジェクトの成果は『解深密経』テキストの完成度に依るところが大きい。初年度から一貫して本経チベット語訳テキストの作成に時間を費やしてきた。目標としていた量にはまだ達していないが、昨年度に作成した本テキストの雛形を参考にして、第5章第7章にかけての本経校訂テキストをブラッシュアップすることができた。本経の重要性とは裏腹に、これまで、当該テキストの校訂はほとんどなされていない。そのような現状で、本テキスト作成の意義は大きい。全章にわたる校訂テキストが望まれるところであるが、本プロジェクトでは、テキストの質を落とさないためにも第5章から第7章までの校訂テキスト作成に力を注ぎ完成とする方が、現実的であり、かつ正確な資料を提供できるものと考え、当初予定していた第8章については、参考資料とするべきであるか判断に迷っている。できる限り予定通り進めていくつもりであるが、14種類にもわたる写本・版本を比較検討してのテキスト校訂は、相当の時間を要するものであることを実感している。和訳と詳細な訳注については、昨年のものよりもさらに緻密に、また正確に行なった。敦煌写本や漢訳テキストの対照方法を一部改良するなど、より扱いやすい資料を目指した。これらは日々更新中である。平成27年度は、高野山大学(和歌山県伊都郡)における日本印度学仏教学会と、東京大学(東京都文京区)で開かれた金剛大学校との合同ワークショップにおいて本プロジェクトの課題である「『解深密経』チベット語訳テキストの作成」から導かれる問題点について研究発表を行ない、参加者と議論を深めた。今後のテキスト作成において大変有意味な発表となった。計画遅延の理由は、昨年度までに完了予定の「研究協力者による校訂作業」が計画通り進んでいないことにある。14種類にもわたるチベット語訳写本・版本を突き合わせ、丹念に精査し、文字の違いを一文字一文字拾っていくという緻密な作業に耐えられる研究協力者(大学院学生)の確保が困難であったことが大きな理由である。もともと学生の数が少ない上、さらに信用に足る研究協力者を確保することは容易ではない。研究代表者が独力で細々と校訂・確認作業を続けているが、それではとても追いつかず、23人の研究者と協力する体制を早急に築きたい。平成28年度も引き続き『解深密経』のチベット語訳テキストの作成に多くの時間を費やした。これまで蓄積してきたチベット語訳テキストの作成方法、すなわち東西系統のチベット語訳写本・版本の比較検討を用いることにより、現段階で考えうる最良の「比較対照テキスト」の実現が可能となる。現在、完成には至っていないが、すでに承認されている補助事業期間延長により、完成の目途がたっている。ただ、問題点も生じた。Texという組版ソフトを使用して、これまでには考えられなかったような画期的な対照テキストを作成する予定であったが、OSがヴァージョンアップする度に、Texの基本設定について、必ず大幅なシステム変更を伴うことが判明した。今回作成しているテキストは、今後多くの研究者によって利用されることが予想され、作成者サイドとして、継続的にシステムのヴァージョンアップの対応に迫られることは容易に想像がつく。

それゆえ、万一のバックアップ用として、また論文などに引用する際の利便性などを考え、Wordソフトを使用しての対照テキストの作成も同時進行することにした。その際、これまで作成したTexファイルからWordファイルへのデータの移行、および成形という作業を追加した。この作業には、思いのほか時間が取られ、実際難航している。また、平成28年度になって初めて大学院生による研究協力者を得た。これまで研究代表者一人で行っていた校閲作業、およびTexのシステムエラーの対応について、格段に効率があがった。現在までに作成した範囲の和訳と訳注についても完成の目途はたっている。とはいえ、テキストの完成までには、未だ時間を要する状態である。作成の範囲を、第5章第7章に絞ることで、より質の高い対照テキストを目指す予定である。平成26年度から28年度までの間に、対照テキストのひな型は完成しており、入力は8割以上済んでいる。ただし、一番時間のかかる校訂作業において、最初の2年間に、優れた研究協力者が見つけられなかった。緻密なチベット語訳校訂作業に耐えられる学生の確保は予想以上に困難であった。平成28年度になり、ようやく有能な大学院生の協力を取り付けて、現在に至っているが、テキストの完成にはまだ時間がかかる。また、問題となるのは、対照テキストの中身ではなく、むしろ技術的な点である。Tex(組版ソフト)により当テキストの作成を目指していたが、今後、汎用性を追求するためにも、Tex用のファイルとWord用のファイルという両スタイルの必要を感じ、現在、当該箇所について二種類のテキストを作成中である。現在も、Tex(組版ソフト)のシステムメンテナンスを含め、校訂作業を粛々と進行中である。従来、北京版・デルゲ版というツェルパ系統に属する二種類の版本のみに頼って理解されてきた『解深密経』であるが、これまで顧みられることのなかったテンパンマ系統のチベット語訳あるいは敦煌写本などと比較対照させた校訂テクストを今回作成した。研究範囲としては本経典の最も重要な章とされる第5 8章のテクスト校訂を行った。本経典に関しては、すでに諸研究者より本校訂テクストの完成を期待されているが、今回の成果により、特に唯識思想の色濃く反映した重要な章について網羅的に研究する条件が整い、いまだ解明されていない初期瑜伽行派の思想研究に新たな基礎資料を提供することができた。本チベット語訳テクストは、現段階で考えうる最良のものであり、これにより本経の思想研究の問題点およびその起源がより具体的に明らかになる可能性がある。最終年度の進行状況に関し、すなわち平成28年度および延長した平成29年度については、当初の予定通り進まなかった。本校訂テクスト作成にあたっては、TeX(テフ)という組版ソフトを使用し、また本校訂テクストオリジナルのマクロを作成してもらう必要があるなど、実際のテクスト校訂作業とは異なる範囲で技術的なトラブルが多発した。TeXが使いこなせることが必須である研究協力者を随時確保することもまた困難であり、当初の予定よりかなり遅れが生じた。平成28年度および平成29年度は、ひたすら、その遅れを取り戻すため、14種類にのぼる写本・版本を正確に比較校訂することに集中した。唯識思想の重要な教義が説かれている『解深密経』に関して、「新しい形の校訂対照テキスト」を作成した。
HCV遺伝子発現による肝細胞ア-ポトシスや癌抑制遺伝子サイタリン相互作用の変化

癌抑制遺伝子であるP53やRbがコードする蛋白はアポトーシスを誘導する。遺伝子の変異によりこれらの蛋白が不活化された場合に細胞はアポトーシス誘導機構をすりぬけて無限増殖し癌化する。肝炎ウイルスはアポトーシス誘導を阻害し細胞を癌化させる可能性がある。このことが現実に起っているか否かはHCV遺伝子をレトロウイルス発現ベクターに組み込み肝由来細胞に発現させ、薬剤や癌抑制遺伝子産物によるアポトーシス誘導がどう変化するかの解析により明らかにすると推測される。最初に肝癌細胞に抗癌剤でアポトーシスを誘導した場合にP53が核に集積することを確認した。発癌プロモーターはこのP53の核への集積を阻止した。同時にアポトーシスも抑制した。発癌プロモーターはPCNAの核への集積には著明な変化をもたらさずP53に特異的と考えられた。これらの結果を踏まえてHCV蛋白が発癌プロモーターと同様にP53の核への集積に影響する可能性の解析を始めた。具体的にはHCV遺伝子やヘルペスウイルスのチミジンチャーゼ遺伝子をレトロウイルス発現ベクターpZIPneoに組み込み肝癌細胞で発現させ,P53の核への集積への影響を調べている。HCV遺伝子断片やチミジンキヤ-ゼ遺伝子が組み込まれた発現ベクターをPA317パッケージング細胞に導入した。その細胞でつくられたレトロウイルスを肝癌細胞に感染させたところこの細胞はガンシクロビルに感受性となった。これらの基礎実験を終えて現在HCV遺伝子産物のアポトーシスやP53の核への集積をみる実験を進めている。癌抑制遺伝子p53やRbの産物はアポトーシスを誘導するがこれらの遺伝子に異常を有する細胞はアポトーシス誘導機構をすりぬけて無限増殖し癌化する。そこでHCV遺伝子をレトロウイルス発現ベクターに組込み肝細胞に発現させた場合に、薬剤や癌抑制遺伝子産物によるアポトーシス誘導がどう変化するかを明らかにする。これらの実験を通じて、HCVのどのような作用が肝細胞癌化に直接寄与するのかを分子レベルで明らかにする。研究の過程で、抗癌剤による肝癌細胞のアポトーシス誘導でp53が核に集積することを見い出した。発癌プロモーターはこのp53の核への集積を阻止することによりアポトーシスを抑制する可能性を見い出した。この抑制作用はp53に特異的と考えられ、これらの発癌プロモーターはPCNAの核への集積には著明な変化をもたらさなかった。HCV蛋白は発癌プロモーターと同様にp53の核への集積に影響する可能性が示唆された。またHCV遺伝子やヘルペスウイルスのチミジンキナーゼ遺伝子をレトロウイルス発現ベクターpZIPneoに組み込む実験を行なっている。チミジンキナーゼ遺伝子を組み込まれた発現ベクターは肝癌細胞にトランスジュースされガンシクロビルに感受性が生じる。HCV遺伝子の組み込みとHCV遺伝子産物のアポトーシスやp53の核への集積への影響をみる実験を行なっている。HCV遺伝子の断片をレトロウイルス遺伝子に組み込み肝癌細胞で十分量の蛋白をつくらせるベクターを開発している。いくつかのプロモーターをベクターに組み込む試みをしている。癌抑制遺伝子p53やRbのコードする蛋白はアポトーシスを誘導する.これらの遺伝子に異常を有する細胞はアポトーシスが誘導されず無限増殖し癌化する.C型肝炎ウイルスによる発癌機序は不明であるが,細胞周期制御やアポトーシス誘導機構と関連すると推測される.この可能性を検証するためHCV遺伝子をレトロウイルス発現ベクターに組込み肝細胞に発現させ,薬剤や癌抑制遺伝子産物によるアポトーシス誘導に対する影響を解析する.抗癌剤は肝癌細胞にアポトーシスを誘導しp53を核に集積させた.発癌プロモーターはp53の核への集積を阻止することでアポトーシスを抑制する可能性を見い出した.

発癌プロモーターはPCNAの核への集積には著明な変化をもたらさなかったことからこの抑制作用はp53に特異的と考えられた.HCV蛋白は発癌プロモーターと同様にp53の核への集積に影響する可能性が推測された.そこでHCV遺伝子やヘルペスウィルスのチミジンキナーゼ遺伝子をレトロウイルス発現ベクターpZIPneoに組み込み,肝癌細胞で発現させる実験を行っている.対照実験でチミジンキナーゼ遺伝子を組み込まれた発現ベクターを肝癌細胞に導入した場合にこの細胞はガンシクロビルに感受性となった.従ってこの実験系を用いてHCV遺伝子の発現が可能になると考えられた.現在HCV遺伝子の組み込みとHCV遺伝子産物のアポトーシスやp53の核への集積への影響をみる実験を行っている.さらにHCV遺伝子の断片をレトロウイルス遺伝子に組み込み肝癌細胞で十分量の蛋白をつくらせるベクターを開発している.
細胞内伝達物質としての一酸化炭素の新しい生理機能に関する研究

新しいタイプの化学伝達物質として注目されている一酸化窒素と化学的性質に類似点が多い一酸化炭素にguanyl cyclase、cGMPを介する化学伝達物質の可能性が示唆されている。従来有毒ガスとして捉えられてきた一酸化炭素の、生体内におけるメッセンジャーとしての生理作用を明らかにし、一酸化窒素と一酸化炭素の作用の関連を知ることは、今後、細胞の情報伝達機構の解明に新たな展開をもたらすものと考えられる。生体内で一酸化炭素を産生するhemeoxygenaseには2つのisozymeが存在し、一方(HO-1)はヘモグロビンの代謝に伴うヘムの分解に関わる脾臓、肝臓等種々の組織に分布し、各種のストレスにより高度に誘導される。本研究では、まず、一酸化窒素と一酸化炭素の産生の相互の関連について検討するためinterferon-γ(IFN-γ)およびlipopolysacchalide(LPS)による一酸化窒素合成酵素(NOS)の誘導が確認されているマクロファージ系の培養細胞を用いて検討した。HO-1を高度に誘導するheminを培地に添加しても一酸化窒素の産生は影響を受けず、また、INF-γおよびLPSによるNOSの誘導にも影響はみられなかった。しかし、INF-γおよびLPSによる一酸化窒素の産生亢進にともないheme生合成系の最後の酵素であるferrochelataseの活性低下が観察され、一酸化窒素の産生亢進がhemeoxygenaseの基質であるhemeを減少させ、一酸化炭素の産生に抑制的に作用する可能性が示された。
幹細胞を用いた神経疾患の脳内移植-遺伝子治療法の開発

平成13年度の成果(各種遺伝子導入幹細胞の作成)を受け、14年度はこれらの細胞を用いて小動物実験を行った。ラットパーキンソン病モデルの脳(線条体)に遺伝子導入幹細胞を移植し、行動学的検討(回転運動)および組織学的検討(免疫染色)を行った。行動学的には、遺伝子導入幹細胞移植後812週間は回転運動が減少し、一時的に症状の改善が観察された。しかしその後はモデルラットと同様に異常回転運動が再燃され症状が観察された。組織学的には免疫染色で黒質ドーパミン細胞の数を比較検討したが、モデルと移植ラットでは有意差がなく、申請細胞の再生は認められなかった。一時的な症状回復が認められたが、ドーパミン細胞の再生が確認できなかったことから、幹細胞に導入した遺伝子は働いているものの、幹細胞の生着が悪かったものと思われる。これは初代線維芽細胞を媒体とした遺伝子導入線維芽細胞を移植した結果と同様であった。今後の検討課題として、いかに移植した幹細胞の生着させるか、また生着をいかに継続させるかなどの詳細な検討が必要である。初代線維芽細胞、神経幹細胞に限らず、各種細胞を遺伝子導入の媒体とするためには、生着率の向上をいかに上げるかが課題である。この課題をクリアーすることが脳内移植治療の実用化につながる。来年度は、移植用細胞の調整液や移植法などを工夫し、再度動物実験を繰り返していく予定である。H1011年度の科学研究費助成金により、神経幹細胞の採取および培養法の技術を確立した。これを受け、H13年度の科研費により以下の成果を得た。*ドパミン産生神経幹細胞;カテコラミンの律速酵素であるTHおよびGTP-CH1遺伝子を導入し遺伝子導入幹細胞を作成した。*神経栄養因子産生神経幹細胞;強力な栄養因子であるGDNFおよびHGF遺伝子を導入し遺伝子導入幹細胞を作成した。*アポトーシス抑制因子産生神経幹細胞;bc1-2遺伝子を導入し遺伝子導入幹細胞を作成した。上記の各種細胞が実際に遺伝子産物を産生しているかの機能解析を行った。液体クロマトグラフィーを用いて測定を行い、各種因子が産生されていることを確認した。予測より発現量は少なく、プロモーターなどベクターの改良が必要と思われた。また免疫染色を行い、各種抗体にて確認を行った。免疫染色は全て陽性反応の結果を得た。H14年度は上記結果を受けて、モデル動物での実験を行っていく。
殺人に関する社会医学的疫学調査

調査した5つの地域の人口10万人当たりの年間死亡者数(他殺死亡率)は、秋田、茨城、千葉の3地域が0.70.8であって、札幌の0.44、富山の0.58に比べて高かった。男女別に他殺死亡者を比較してみると、他殺死亡率が低い地域では特に男性の死亡が低いことが分かる。年齢別の死亡を見ると、何れの地域でも10歳以下と40歳前後にピークがあるが、秋田での嬰児殺による死亡は0.22で、他の地域に比べて極めて高い。家族内で発生した他殺死亡は、嬰児殺が多いために秋田が高くなっているが、これを除けば、地域間でそれ程大きな差異は見られない。他殺の背景で最も多いものは、秋田の嬰児殺を除けば、何れの地域でも喧嘩・口論である。喧嘩・口論を背景とする他殺死亡が多いのは茨城と千葉で、これらの地域で他殺死亡率が高い原因となっている。殺害の方法は鈍器または鋭器損傷、および窒息が一般的である。このうち窒息は嬰児殺が多いために秋田で高くなるが、嬰児殺を除けば地域間にそれほどの差異はない。しかし、鋭器と鈍器を加えた死亡は茨城と千葉で高く、それは喧嘩・口論が多いことと関連していると考えられる。人口10万人当たりの年間他殺加害者数を他殺死亡率と同様にして計算すると、その数値は他殺率を僅かに下回るものとなる。これを男女別に見ると、札幌の男性加害者の割合が著しく低く、札幌で他殺死亡が少ない原因になっていることが分かる。一方女性の加害者は秋田と札幌で多いが、その原因は秋田の場合は嬰児殺であるが、札幌では様々な殺害の背景がある。殺害の場所は茨城と千葉で自宅の割合が低くなり、また関係者が県内である割合が低くなる。更にこれらの地域では、外国人が関係する事件が見られる。
抗生物質生成菌と光合成細菌の転写関連データベースの構築とその応用

転写制御因子の進化速度は他のタンパク質に比べ速く、近縁種においてもその制御関係が保存されていない。そのため、一部のモデル微生物にのみ注目するのでは、バクテリアの多様性を理解するのにおいて不十分である。そのため本研究では、特出すべき特性を持つ、抗生物質生産菌の放線菌と光合成細菌の藍藻に注目し、約500文献から転写制御情報を抽出し、データベースを構築した。またそのデータを用いて、比較ゲノム解析やネットワークモチーフ解析を行ない、生物種特有の機能(放線菌の抗生物質合成、藍藻の光合成)に関する転写ネットワークの特異性を示した。近年、バクテリアの転写ネットワーク解析により、転写制御因子の進化速度が他のタンパク質に比べ速く、近縁種においてもその制御関係が保存されていないということが明らかになった。これは現在までのように、大腸菌や枯草菌といった一部のモデル微生物に注目した転写制御に関する文献データ抽出型データベースだけでは、多様な微生物のモデルとして不十分であることを示し、より多くのモデル生物種で同様のデータベース(DB)を構築する必要が示唆された。そこで本研究では特出すべき特性を持つ、抗生物質生産菌の放線菌と光合成細菌の藍藻に着目し、それらの転写制御ネットワークのDBの構築を行い、さらに収集した転写制御情報に基づき、抗生物質生産や光合成による有機物(バイオマス)の増産への応用を目的とした。研究初年度は、マニュアルキュレーションによる転写制御情報の抽出を中心に進めた。まず放線菌においては対象生物を放線菌15種に広げ、データサイズを2倍以上(転写因子数152、被制御遺伝子数458、転写開始点数325、文献数299)に拡張した。これにより対象ユーザを広めると共に、比較ゲノム解析の基礎となるデータ構築が行えた。またこれらのデータの配布においては、現在すすめている論文が発表され次第、タブ区切りや、セマンティック・ウェブに準拠したデータフォーマットなど、多様な形式でデータ一括配布を行う準備を終えた。また各データの閲覧においてはhttp://dbscr.hgc.jpより公開し、放線菌近縁種における転写制御データの比較・閲覧に有用な情報を公開している。また光合成細菌のSynechocystisにおいてもデータ収集を進め、170文献から50転写因子が1090被制御因子を制御するデータを抽出した。今後は放線菌同様にDB構築も進める。近年のバクテリアの転写ネットワーク解析により、転写制御因子の進化速度が他のタンパク質に比べ速く、近縁種においてもその制御関係が保存されていないということが明らかになった。そこで本研究では特出すべき特性を持つ、抗生物質生産菌の放線菌と光合成細菌の藍藻に着目し、それらの転写制御ネットウークのDBの構築を行い、さらに収集した転写制御情報に基づき、抗生物質生産や光合成による有機物(バイオマス)の増産への応用を目的とした。平成23年度は、昨年度マニュアルキュレーションにより収集した転写制御情報の確認作業と、さらなるデータの更新、また光合成細菌のSynechocystisにおけるデータ公開準備を進めた。その結果、精査されたデータ数は176文献から52転写因子が1093被制御因子を制御するデータを精査した。さらに今年度は、転写因子・シグマ因子の認識する195配列の収集も行ったので、それらのモチーフ抽出作業を進め、光合成細菌における転写因子のモチーフを決定した。データベースの作成においては、非公開での準備を進めた。最終年度となる次年度には公開する予定である。研究の総仕上げである平成24年度は、文献からの転写制御関連データ更新、ウェブインターフェイスの改良に加え、比較ゲノム解析とネットワークモチーフ解析の4点を行なった。1)データ更新においては、放線菌の対象生物種を15種に広げ、データサーズを2倍以上(転写因子数152、被制御遺伝子数459、転写開始点数325、文献数302)に拡張した。藍藻では、177文献から、52転写因子、1093被制御遺伝子、86オペロンを抽出した。これらは、マニュアルキュレーションによるデータの質の高さから、トランスクリプトーム解析やバイオインフォマティクス研究のリファレンスデータとして使われている。2)ユーザインターフェイスでは、生物種の比較表示機能と、重み行列を使ったモチーフ検索機能の改良を行った。3)比較ゲノム解析では、本プロジェクトで収集した放線菌・藍藻データに加え、既存のDBから大腸菌、枯草菌、緑膿菌、結核菌の転写因子の結合配列を比較した。その結果、転写因子のモチーフ配列の認識には、一定の結合力を保つため、一定のAT含量を持つことを想定したが、実際には背景となるゲノムGC含量(プロモータ領域もほぼ同じ)から一定の割合でAT含量が高くなった。

これは転写因子がモチーフ配列と結合する力を一定に保つのではなく、モチーフ探索の際に背景GC含量との比較をみて探している可能性を示唆した。最後に、4)ネットワーク解析では、少数のハブ転写因子が多くの遺伝子の転写を制御しているスケールフリー性は、大腸菌同様にどの種でも確認できた。しかしその他のネットワークモチーフ解析の結果では、生物種特有の機能に関する転写ネットワーク(枯草菌の胞子形成、放線菌の抗生物質合成、藍藻の光合成)においては、大腸菌とは異なる傾向を示した。これは一部のモデル微生物に注目した解析だけでは不十分で、本研究の重要性が指示された。申請書の記載通り、一年目の目標は達成した。二年目となる本年度は、最終年度となる予定であったが、7月より産休を取得したため、産前産後の休暇、かつ、育児休業の取得に伴い、研究期間の延長を申請し、受理された。産前休暇に入る前の3ヶ月間においては、予定通りデータの収集・確認作業、さらにデータベース化への準備を完了することができた。期間の延長はあるが、本研究の進捗状況においては、申請書の予定通りに進んでいる。24年度が最終年度であるため、記入しない。研究再開となる来年度4月より、引き続きデータベースの公開、論文化を行う。マニュアルアノテーションによるデータの収集においては、本年度中に完了しているため、来年度は、藍藻の転写関連データベースの公開、そのための論文化を中心に進める予定である。
転写因子AML1とc-mybとによる造血幹細胞の発生と成立のメカニズム

昨年度までに作製した、新規のARF-GAP遺伝子SMAP-2の遺伝子破壊マウスの、詳しい解析を行った。精子の形から、円頭精子症であることを既に明らかにしていたが、これに加えて、精巣の大きさ、精子の数に関しては顕著な異常は見られないものの、ホモのオスが不妊であることを明らかにした。これらは全て、B6/129の混合遺伝背景のもとで解析を行った。解析と平行して、円頭精子症の原因遺伝子を修飾するmodifier遺伝子を探索するために行った戻し交配は、B6マウスとの交配について8代目となったので、現在ホモのオスマウスを作成中である。129系に関しては、交配スペースの問題で未だ解析に至っていない。細胞内局在等を検討するために作製したSMAP-2特異的な抗体は、エスタン解析には使えるが、組織化学的な解析には使用できないことが判明した。このために、培養細胞を用いた遺伝子導入系を用いて、細胞内局在解析を行った。その結果、SMAP-2がTGNとエンドソームに存在している知見を得た。また、CALMなどクラスリンと関係している細胞内小胞輸送系の構成因子とSMAP-2とが会合することも明らかにした。円頭精子症では、ゴルジ体からできることが知られている先体の形成異常が見られることが知られているので、SMAP-2ホモマウスの精子ではどうであるのか今後電子顕微鏡による解析を行う。SMAP-2に加えて、SMAP-2のホモログであるSMAP-1が、クラスリン依存性のエンドサイトーシスに関与していることを明らかにした。通常の遺伝子破壊を行ったところ、ヘテロ欠損体で胎生致死であったので、詳しい解析を行うために、SMAP-1のコンディショナル遺伝子破壊マウスを作製し生殖系列への伝播を確認した。同時に解析に必要なCreマウスのコロニーを作製出来た。幹細胞発生に必須の遺伝子であることを我々が明らかにして来た転写因子Runx1とc-mybとを用い、造血幹細胞が発生するメカニズムを明らかにすることが本研究の第一の目的である。このために、1)Runx1の発現制御に注目した解析、2)Runx1の活性を制御する機構に注目した解析、3)造血幹細胞発生過程におけるRunx1とc-mybとの関係に注目した解析を現在行っている。(1)Runx1は2つのプロモーターを持ち、N末端が異なるd-Runx1、p-Runx1の2つのアイソフォームができる。N-末端の長いd-Runx1が造血幹細胞、T細胞で特異的に発現している。まずT細胞株でのd-Runx1の転写制御領域を解析した。この結果をもとに現在Tgマウスを作製して個体での解析を開始している。またアイソフォーム間の機能に差があることをTgマウスで初めて明らかにした。さらに、造血幹細胞の発生にd-Runx1が必須なのか、その発現パターンはどのようなものかを探るために、d-Runx1-lacZ-KIマウスを現在作製している。(2)造血幹細胞が血管内皮細胞から発生する際には細胞骨格の大きな変化が見られる。そこで細胞骨格変化による転写因子Runx1の転写活性化能の制御の可能性を考え解析した。解析の結果、アクチン結合蛋白質FilaminAが、Runx1の活性発現にとって必須のサブユニットPEBP2βを細胞質に留めおくことにより、Runx1の転写活性を抑制できることを見い出した。
バクテリア染色体のセントロメア様領域の特定とその分配機構の解明

大腸菌をはじめとするバクテリア細胞において、複製した染色体は極めて正確に娘細胞に分配される。この過程で染色体の複製起点(oriC)領域は細胞の中央から両極へと移動する事が知られており、oriCの近傍に染色体分配に機能するDNA配列が存在するのではないかと考えられてきた。しかしながらバクテリアにおいて、このような(真核生物におけるセントロメア領域に相当する)染色体上の配列はこれまで同定されていなかった。大腸菌染色体を分断し、2つの染色体に分ける方法を導入し、複製起点題域を中心に体系的な染色体分断変異株を作成した。これらの変異がoriCの両極移動に及ぼす影響を調べ、これを阻害する染色体領域をoriCの近傍に見いだした。さらに、この阻害領域を染色体欠失変異により特定することを試みた。その結果、私たちは、大腸菌のoriC領域の複製後の細胞両極への局在化に機能する、わずか25bpのDNA配列をoriCの近傍より同定し、これをmigSと名付けた。migS配列は両極移動に阻害を持った分配変異プラスミドに対して、両極への移動を相補する。また、migS配列を染色体上の複製終結領域に移すと、その部位が細胞両極へと移動とする。さらに、このmigS配列が、染色体の折りたたみ、すなわち核様体の再構築にも深く関与している事を示した。migS配列を多コピーのプラスミドにクローン化し細胞内に導入すると、本来の染色体上のmigSの機能が阻害される。このことは、migS配列に作用する因子の存在を示唆するものと考えられる。本研究により、バクテリア染色体分配機構の解明のさらなる進展が期待される。大腸菌の染色体分配において、複製起点(oriC)領域は細胞の中央から両極へと移動させるシス領域の特定を試みた。そのため、染色体の一部を切り出しシス機能部位を失った染色体をもつ変異株の作成し、染色体分配について調べた。大腸菌染色体上oriCの近傍の84.7minから0.1minにわたる720kbの領域を切りだした染色体分断株では染色体分配に異常が認められた。この領域内の範囲の異なる一連の染色体分断株を順次作成し、それぞれの株について核様体の分布とoriCの細胞内局在性の解析を行った。これによりoriC領域の移動に関わるシス領域を染色体上89.1minから89.5minの15kbの範囲まで狭めることができた。つぎに、この15kbの染色体領域にDNAを両極へ移動させる活性があるか調べた。プラスミドの分配変異の中に細胞中央から両極方向への移動する機能を失ったものを見出していた。この分配の変異プラスミドに89.1minから89.5minの15kbを組み込こんだところ、プラスミドDNAは両極へと分配されるようになった。染色体の欠失変異株のoriCの細胞内局在性の解析に加え、分配の変異プラスミドへの影響を調べることで最終的に大腸菌の染色体分配においてDNA分配にシス位で機能している領域を45bpまで特定することができた。さらに、この45bpの配列を高コピー数のpUC118プラスミド上に組み込み、このプラスミドを持つ細胞でのoriC領域の両極への移動を調べた。45bp配列を細胞内に過剰に存在させると複製後のoriC領域の両極方向への移動が、この領域の欠失変異株と同様に阻害された。このことは染色体上の45bp配列を作用し、DNA分配に働く細胆内因子が存輩していることを強く示唆している。

この過程で染色体の複製起点(oriC)領域は細胞の中央から両極へと移動する事が知られており、oriCの近傍に染色体分配に機能するDNA配列が存在するのではないかと孝えられてきた。しかしながらバクテリアにおいて、このような(真核生物におけるセントロメア領域に相当する)染色体上の配列はこれまで同定されていなかった。大腸菌染色体を分断し、2つの染色体に分ける方法を導入し、複製起点領域を中心に体系的な染色体分断変異株を作成した。これらの変異がoriCの両極移動に及ぼす影響を調べ、これを阻害する染色体領域をoriCの近傍に見いだした。さらに、この阻害領域を染色体欠失変異により特定することを試みた。その結果、私たちは、大腸菌のoriC領域の複製後の細胞両極への局在化に機能する、わずか25bpのDNA配列をoriCの近傍より同定し、これをmigSと名付けた。migS配列は両極移動に阻害を持った分配変異プラスミドに対して、両極への移動を相補する。また、migS配列を染色体上の複製終結領域に移すと、その部位が細胞両極へと移動とする。さらに、このmigS配列が、染色体の折りたたみ、すなわち核様体の再構築にも深く関与している事を示した。migS配列を多コピーのプラスミドにクローン化し細胞内に導入すると、本来の染色体上のmigSの機能が阻害される。このことは、migS配列に作用する因子の存在を示唆するものと考えられる。本研究により、バクテリア染色体分配機構の解明のさらなる進展が期待される。