hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大脳皮質前頭前野－背側縫線核の神経活性制御に基づく新たな精神疾患治療戦略の探索

環境要因はエピジェネティクス制御機構を介して、脳機能に影響を与えると考えられる。本研究では、離乳期から隔離飼育したマウスが示す異常行動のエピジェネティクス制御機構を解析した。隔離飼育マウスでは背側縫線核において、GABAB1a(GABAB受容体サブユニットの1つ)の発現が増加していた。GABAB1aのプロモーター領域では、DNAメチル化の減少とヒストンH3アセチル化の増加が見られた。行動薬理学的検討から、背側縫線核のGABAB受容体が異常行動に関与することが示された。以上より、隔離飼育による異常行動に、背側縫線核GABAB1aのエピジェネティクス制御変動が関与していることが示された。本研究は、長期隔離飼育マウスの異常行動発現の分子基盤を明らかにすることを目的とし、これまでに申請者が異常行動発現との関連を明らかにしている大脳皮質前頭前野ー背側縫線核神経回路の過剰な活性化のメカニズムを解析するものである。以前の検討から、大脳皮質前頭前野ー背側縫線核神経回路の過剰な活性化には大脳皮質前頭前野の神経興奮が大きく寄与していることが示唆されたことから、本研究ではまず、大脳皮質前頭前野における興奮性グルタミン酸神経ならびに抑制性GABA神経に注目して解析を行った。長期隔離飼育マウスの大脳皮質前頭前野において、PCRアレイやreal-time PCRによるグルタミン酸神経系関連遺伝子、GABA神経系関連遺伝子の網羅的な発現解析を行った結果、いくつかの遺伝子において発現変動が認められた。そのうちの1つの遺伝子に関しては、異常行動の発現に関与していることを見出した。次に、長期隔離飼育マウスの異常行動発現への関与が見出された遺伝子に関して、エピジェネティックな発現調節機構の関与を解析した。メチル化DNA解析を行った結果、長期隔離飼育マウスで発現変動している遺伝子のプロモーター領域において、DNAのメチル化レベルの変化が認められた。さらに詳細にDNAのメチル化部位を解析し、GC boxにおけるDNAのメチル化が顕著に変動していることを明らかにした。そこで、GC boxに結合することが知られている転写因子の結合量をクロマチン免疫沈降法により解析し、長期隔離飼育マウスの大脳皮質前頭前野において、目的遺伝子のプロモーターGC boxにおける転写因子の結合量が変化していることを見出した。本成果は、長期隔離飼育マウスの異常行動発現に、エピジェネティックな遺伝子発現制御の変化が関与していることを示唆している。申請者は精神疾患発症の分子基盤を明らかにするために、精神疾患の発症に重要な発育期の環境要因の影響を加味した長期隔離飼育マウスを用いた検討を行っている。これまでに、本マウスにおいて異常行動が発現する分子基盤の一端として大脳皮質前頭前野セロトニン神経の過剰な興奮を明らかにしてきた。本研究では、このセロトニン神経を制御する分子に着目し、長期隔離飼育マウスが示す異常行動の発現機序を明らかにすることを目的とした。まず、セロトニン神経の投射先である大脳皮質前頭前野において、興奮性グルタミン酸神経関連遺伝子や抑制性GABA神経関連遺伝子のmRNA発現量を解析したところ、長期隔離飼育マウスと対照の群飼育マウスとの間に違いは見られなかった。しかしながら、セロトニン神経の投射元である背側縫線核において解析を行ったところ、長期隔離飼育マウスにおいてGABAB受容体のサブユニットの1つであるGABAB1aのmRNA発現量が有意に増加していることを見出した。こうしたGABAB1aの発現増加はタンパク質レベルでも確認された。さらに長期隔離飼育マウスの背側縫線核ではGABAB1aのプロモーター領域において、DNAのメチル化の減少やヒストンH3のアセチル化の増加と言ったエピジェネティクス制御の変化が認められた。加えて、長期隔離飼育マウスの背側縫線核内に、GABAB受容体アゴニストbaclofenを投与すると隔離飼育マウスが示す異常行動の1つである多動反応が増強すること、逆にGABAB受容体アンタゴニストphaclofenを投与すると多動反応が減弱することを見出した。本成績は、幼少期からの隔離飼育といった環境要因により、背側縫線核のGABAB1aのエピジェネティクス制御機構に変化が生じ、GABA1aの発現量が増加することで多動反応などの異常行動が発現する可能性を示している。26年度が最終年度であるため、記入しない。神経精神薬理学26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度研究計画として挙げていた1)大脳皮質前頭前野ー背側縫線核神経回路の過剰な活性を制御する分子の探索に関しては、まず、グルタミン酸神経やGABA神経に注目しPCRアレイ解析やreal-timePCR解析を行うことにより、いくつかの発現が変動している遺伝子を見出した。そのうち1つの遺伝子に関しては異常行動発現への関与を明らかにした。

PCRアレイ解析において発現変動が認められた他の遺伝子に関しては未だ詳細な解析を行っておらず、今後、異常行動発現との関連を詳細に検討する予定である。2)大脳皮質前頭前野ー背側縫線核神経回路の過剰な活性を制御する分子のエピジェネティックな発現制御メカニズムの解析に関しては、異常行動発現への関与が見出された遺伝子の発現変動に、DNAのメチル化変化とそれに伴う転写因子の結合量変化といったエピジェネティックな遺伝子発現調節機構の関与を明らかにした。平成26年度は、PCRアレイ解析により変動が認められた遺伝子のうち詳細な解析を行っていない5つの遺伝子に関して、異常行動発現との関与、エピジェネティックな遺伝子発現調節機構等について解析を行う。加えて、セロトニン神経関連遺伝子に関しても網羅的な発現変動解析を予定している。また、長期隔離飼育マウスの大脳皮質前頭前野において、DNAのメチル化変化が認められたことから、DNAメチル化酵素やDNA脱メチル化酵素の発現解析をreal-time PCR法、ウェスタンブロット法により解析する。さらに、株化細胞や初代培養細胞を用いて、DNAのメチル化による遺伝子発現制御機構を簡便に解析できるin vitro評価系を構築し、異常行動発現との関連が見出された遺伝子のDNAメチル化機構の解析や、新規治療薬候補化合物の探索を試みる。
乳児の睡眠構造の発達を促す光環境の検証

慨日リズムの発達が阻害されている乳児では、その発達を促す光刺激の情報が十分に与えられていない可能性がある。そこで本研究は、乳児の睡眠構造の発達を促す光環境を検証した。その結果、夜間の光刺激量は夜間の睡眠割合を減少させており、睡眠構造では動睡眠が減少していることが明らかとなった。夜間に20Lx/分以上の光刺激を受ける割合が多いほど、夜間の睡眠割合が減少していた。乳児の夜間睡眠割合を増加させる要因を検証したところ、添い寝をせず、光刺激量の少ない環境にて睡眠割合が増加することが明らかとなり、中でも光刺激の影響を取り除くことが重要と考えられた。慨日リズムの発達が阻害されている乳児では、その発達を促す光刺激の情報が十分与えられていない可能性がある。そこで、本研究は、1生後3か月の乳児50名を対象として、実際に育児環境における児が受ける光刺激の一日の変化を詳細にモニタリングするともに、光刺激の一日のパターンと児の睡眠覚醒リズム・睡眠構造の発達との関係について明らかにする、2児の概日リズムの発達に問題があると予測される児を対象として、光刺激を人為的に操作することで、児の概日リズムの形成を促進できるかどうかを検証することを目的に研究を行っている。H26年度は、本研究の前段階として「Assessment of nocturnal sleep architecture by actigraphy and one-channel electroencephalography in earlyinfancy(Early Human Developmentに投稿中)」をテーマに、乳児の睡眠時脳波データとアクチグラフを解析し、本研究の今後の方向性も視野に入れつつ、論文を作成した。その結果から、生後3-4か月時各2回の睡眠時脳波は、その日その日で変化に富んでいるため、各乳児の常日頃の睡眠を反映するデータには成り難いと考えられた。よって、脳波データは睡眠構造を判断する上では欠かせない情報であるが、長期間の測定が困難であり、乳児の自然な睡眠を損なう可能性があるため本調査から外し、アクチグラフによる測定をこれまでより長めに(4日間)行うこととした。また、この期間の児の唾液中メラトニン濃度を測定することで、児の既日リズムの発達を評価することとした。現在、修正後の研究計画を学内の倫理委員会に提出し、審査を待っているところである。そこで本研究は、生後3か月の乳児50名を対象として、実際に育児環境における児が受ける光刺激の一日の変化を詳細にモニタリングするともに、光刺激の一日のパターンと児の睡眠覚醒リズム・睡眠構造の発達との関係について明らかにする(研究1)。また、児の概日リズムの発達に問題があると予測される児を対象として、光刺激を人為的に操作することで、児の概日リズムの形成を促進できるかどうかを検証する(研究2)ことを目的に研究を行っている。H27年度は、H26年度に修正した研究計画に基づいて、14日間の児のアクチグラフの装着と2照度計による光のモニタリング、3唾液によるメラトニン採取、4日記、5アンケートから児が受ける光刺激の一日の変化を詳細にモニタリング調査を行った。現在で20名の乳児のデータが得られたが、調査の内容が複雑なため協力者を得ることや欠損のない十分なデータを得るのに苦慮している。よって、研究2を進める前に、研究1に絞ってしっかりと十分なデータを得る必要がある。一方で今回、夏季に生後3か月を迎える児と冬季に生後3か月を迎える児の違いはどうかという新たな視点を加えて、意識してデータ収集を行っている。この結果から、季節による日照時間がメラトニンの分泌や児の睡眠や成長にどう影響するかという意義深い考察が可能と考える。今年度は倫理審査後、予定通り6月より調査をスタートした。9月までで夏季のデータを5名と冬季のデータを15名取ることができたが、調査の内容が複雑なため協力者を得るのに苦慮している。冬季のデータ収集時から調査のフィールドを新たに開拓し、集団健診にて協力者を募ることとしたが、様子をみて、不足があればさらにフィールド拡大が必要か検討したい。一方で、集団健診で一度に複数の方に協力を募る体制をとってから、説明の時間にゆとりがなく、データの欠損が見られるようになってきた。本研究は、対象者に5つの項目をお願いするため、測定が少しでも単純に簡単に行われるようマニュアル等を見直しして取り組みたい。また、従来から行っている研究依頼方法である、研究協力施設での個別交渉は説明に時間を要するが、協力者に十分な説明ができるため確実なデータが得られる。よってこちらも並行して行うこととする。そこで本研究は、生後3か月の乳児50名を対象として、実際に育児環境における児が受ける光刺激の1日の変化を詳細にモニタリングするともに、光刺激の1日のパターンと児の睡眠・覚醒リズム、睡眠構造の発達との関係について明らかにする(研究1)。

H28年度は、前年に引き続きデータ収集を行い、計46名の1アクチグラフによる睡眠・覚醒データ4日分、2アクチグラフと照度計による光データ4日分、3日記による睡眠・泣き・授乳のデータ4日分、4唾液中メラトニンデータ(1日4回採取)2日分、5アンケートによる日頃の育児環境に関するデータをそれぞれ収集することができた。また、季節による日照時間がメラトニンの分泌や児の睡眠や成長に影響する可能性を予測して、データを収集したところ、収集した計46名のデータは夏季21名、冬季25名であった。本研究は、児の睡眠や光環境について上記の5つの視点から調査を行っており、調査内容が多く複雑なため、研究対象者を得るのに苦慮した。しかし、調査をスマートとするマニュアルの作成やフィールドの拡大、H28年度までのデータ収集期間の延長により、当初の計画通りのデータ数を収集することができた。また、季節による日照時間がメラトニンの分泌や児の睡眠や成長に影響する可能性も予測して、夏季と冬季を意識してデータを収集することができた。慨日リズムの発達が阻害されている乳児では、その発達を促す光刺激の情報が十分に与えられていない可能性がある。そこで本研究は、生後3か月の乳児を対象として、実際に育児環境における児が受ける光刺激の一日の変化を詳細にモニタリングするともに、光刺激の一日のパターンと児の睡眠・覚醒リズム、睡眠構造の発達との関係について明らかにする(研究1)。また、児の概日リズムの発達に問題があると予測される児を対象として、光刺激を人為的に操作することで、児の概日リズムの形成を促進できるかどうかを検証する(研究2)ことを目的とした。途中、研究計画に修正が必要となり、研究1についてはアクチグラフによる測定(4日間)と児の唾液中メラトニン濃度の測定を行うこととした。また、光刺激のデータには季節の影響が考えられることから、その差を比較するために夏季と冬季を意識したデータ収集を行うこととした。研究2については、研究1で得られたデータに基づいてそれらの光環境を比較・検討することとした。計46名の乳児のデータを集積し、うち43名(160日分、そのうち夏季85日、冬季75日)のデータを解析対象とした。乳児の月齢は3か月21例(83日分)、4か月17例(58日分)、5か月5例(19日分)であった。睡眠割合に対する光刺激量の影響を明らかにするために、月齢と季節及び昼と夜の光刺激量を独立変数とした重回帰分析(強制投入法)を行った結果、昼間の睡眠割合は昼間の光刺激量と負の相関(β=-0.296, p=0.001)にあり、夜間の睡眠割合は夜間の光刺激量と負の相関(β=-0.397, p<0.0001)にあった。睡眠構造では、夜間の動睡眠割合と夜間の光刺激量が負の相関(r=-0.244, p=0.002)にあった。以上の結果ついて現在論文を作成中であり、Early Human Developmentへの投稿を考えている。そこで本研究は、乳児の睡眠構造の発達を促す光環境を検証した。その結果、夜間の光刺激量は夜間の睡眠割合を減少させており、睡眠構造では動睡眠が減少していることが明らかとなった。夜間に20Lx/分以上の光刺激を受ける割合が多いほど、夜間の睡眠割合が減少していた。
卵巣癌における糖転移酵素C2GnT1発現と機能の解析

糖鎖のうち、O-グリカン鎖のcore2分枝構造の形成に係わる酵素Core 2 β1-6 N-acetylglucosaminyl transferase 1 (C2GnT1)は、腫瘍細胞の悪性形質の獲得に重要な役割をもつと考えられている。我々はこれまでに子宮内膜癌において、C2GnT1高発現が独立した予後因子であることを報告した。本研究では、卵巣癌におけるC2GnT1発現とそれにより形成される糖鎖構造の機能を解析し、新規治療ターゲットとなる可能性を検討することを目的とする。卵巣癌組織においてC2GnT1抗体を用いた免疫染色による検討では、腫瘍細胞中の染色陽性細胞の割合は、漿液性癌26.8、明細胞癌72.5、類内膜癌47.5、粘液性癌66.8と、漿液性癌で低く、明細胞癌、粘液性癌で高い傾向を認め、組織型により発現が異なると考えられた。卵巣癌全体での予後解析では、陽性率の高低と予後との関連性は認められなかったが、一般的に抗がん剤耐性である明細胞癌、粘液性癌で発現が強いことから、抗がん剤耐性への関与が考えられた。また細胞株での検討では、子宮内膜癌細胞株HHUA、Ishikawa、HEC1B、卵巣癌細胞株ES2、A2780、OVCARでのC2GnT1 mRNAおよび蛋白発現をRT-PCR、Western blottingで確認した。これらの卵巣癌細胞株に対し、C2GnT1 mRNA導入による強制高発現細胞、およびCRISPR-Cas9法での同遺伝子knock-out (KO)細胞を作成してきた。今後、これらの細胞による機能解析を開始していく予定である。細胞株におけるC2GnT1の発現抑制について、やや手間取ったが、CRISPR法でknock-outとすることにした。今後、これらの細胞を用いて機能解析を行っていく予定である。基本的に実験計画に沿って、研究を進めていく。主に細胞株を用い、強制高発現および、CRISPR法によるknock-outによるC2GnT1発現変化の細胞機能への影響や糖鎖発現状態の変化について検討を進める。C2GnT1による細胞表面の糖鎖構造は、免疫応答に影響する可能性が考えられることから、ヌードマウスへの異種移植により、腫瘍増殖能だけでなく、NK細胞活性の変化についても検討を行う。C2GnT1抗体を用いた免疫染色による検討では、腫瘍細胞中の染色陽性細胞の割合は、漿液性癌26.8、明細胞癌72.5、類内膜癌47.5、粘液性癌66.8と、漿液性癌で低く、明細胞癌、粘液性癌で高い傾向を認め、組織型により発現が異なると考えられた。また細胞株での検討では、子宮内膜癌細胞株HHUA、Ishikawa、HEC1B、卵巣癌細胞株A2780、SKOV3、子宮頸癌細胞株CaSKiでのC2GnT1 mRNA発現を確認した。C2GnT1発現の弱いCOS7細胞にC2GnT1 cDNAを遺伝子導入、RT-PCR、Westernblottingおよび蛍光免疫染色で発現増強を確認した。今後これらの細胞を用い、siRNAやCRISPR法でC2GnT1の発現を変化させることにより、細胞機能がどのように変化するかを検討していく予定である。予定通り、臨床検体での検討と、細胞株での検討を進められており、C2GnT1高発現細胞株を明らかにしている。今後、C2GnT1高発現株であるES2、A2780、OVCARにおいてC2GnT1発現をsiRNA/shRNA法でknock-down、もしくはCRISPR法でknock-outすることによる、細胞機能の変化を検討する糖鎖のうち、O-グリカン鎖のcore2分枝構造の形成に係わる酵素Core 2 β1-6 N-acetylglucosaminyl transferase 1 (C2GnT1)は、腫瘍細胞の悪性形質の獲得に重要な役割をもつと考えられている。

卵巣癌全体での予後解析では、陽性率の高低と予後との関連性は認められなかったが、一般的に抗がん剤耐性である明細胞癌、粘液性癌で発現が強いことから、抗がん剤耐性への関与が考えられた。また細胞株での検討では、子宮内膜癌細胞株HHUA、Ishikawa、HEC1B、卵巣癌細胞株ES2、A2780、OVCARでのC2GnT1 mRNAおよび蛋白発現をRT-PCR、Western blottingで確認した。これらの卵巣癌細胞株に対し、C2GnT1 mRNA導入による強制高発現細胞、およびCRISPR-Cas9法での同遺伝子knock-out (KO)細胞を作成してきた。今後、これらの細胞による機能解析を開始していく予定である。細胞株におけるC2GnT1の発現抑制について、やや手間取ったが、CRISPR法でknock-outとすることにした。今後、これらの細胞を用いて機能解析を行っていく予定である。基本的に実験計画に沿って、研究を進めていく。次年度は主に細胞株を用い、強制高発現および、siRNAによるknock-down、もしくはCRISPR法によるknock-outによるC2GnT1発現変化の細胞機能への影響や糖鎖発現状態の変化について検討を進める予定である。主に細胞株を用い、強制高発現および、CRISPR法によるknock-outによるC2GnT1発現変化の細胞機能への影響や糖鎖発現状態の変化について検討を進める。C2GnT1による細胞表面の糖鎖構造は、免疫応答に影響する可能性が考えられることから、ヌードマウスへの異種移植により、腫瘍増殖能だけでなく、NK細胞活性の変化についても検討を行う。当初予定していた免疫染色の調整で遅延が生じたため次年度使用額が生じた。次年度使用額は平成30年度請求額と合わせて、細胞培養とsiRNAやCRISPRによる遺伝子発現変化させる実験のための消耗品費として使用する予定である。
昆虫の脱皮・変態を支配する幼若ホルモン生合成の時期特異的な制御機構の解明

昆虫の発育に幼若ホルモン(JH)は重要であるが、JHの合成制御が発育時期でどの様に制御されるかはよくわかっていなかった。JH合成制御因子であるallatotropin(AT)、allatostatin-C(AST-C)、short neuropeptide F(sNPF)の役割を時期を追って検証した結果、AST-Cは幼虫期全般において抑制作用を示したが、sNPFは幼虫期では時期特異的にJH生合成を抑制した。一方ATは幼虫期ではsNPFの転写制御を行い、成虫への羽化前後ではJH生合成を抑制していた。このようにJH生合成は種々の因子が時期特異的に作用することで、制御されていることを明らかにした。昆虫の脱皮・変態はエクダイソンと幼若ホルモン(JH)のバランスによって制御されている。そこでJH生合成の機構を探ることで変態の制御機構の解明に取り組んでいる。1、JH生合成制御因子の探索:これまで脱皮という行動を支配すると考えられていた脱皮行動刺激ホルモン(ETH)がJH生合成を促進することを見出した。JHの産生組織であるアラタ体をETHで刺激すると濃度依存的にJH合成の促進が認められた。2、受容体のアラタ体での発現変動解析:short neuropeptide F (sNPF)、Allatostatin (AST)、ETHへのアラタ体の応答は時期特異的にみられ、それはそれぞれの受容体の発現変動によって引き起こされると考えられる。そこでsNPF、AST、ETH受容体の発現解析を行った。sNPFはJH合成を時期依存的に抑制し、それはsNPF受容体の発現が高い時期に限られていることがわかった。このことからsNPFによる抑制効果は受容体の発現に制御されていることが示唆された。またETHについては脱皮直前にJH合成促進効果が見られたが、これに先だって受容体の発現が一過的に上昇することで、ETHに対する応答性を獲得することが示唆された。3) Allatotropin (AT)によるsNPFを介したJH生合成制御機構:これまでATは成虫期ではJH生合成を促進するとされてきたが、sNPF産生細胞で発現していたことから、ATはJH生合成抑制因子であるsNPFの合成を制御する可能性が強く示唆された。そこでATを培地に添加し側心体の組織培養を行い、ATがsNPFを転写レベルで制御するかについてreal-time PCRで検証した。その結果、ATによりsNPFの発現が有意に誘導された。このことから従来の定説とは異なり、ATはsNPFの発現制御を行うことでJH合成制御に関与することがわかった。幼若ホルモン生合成を抑制的に制御するペプチドホルモンであるshort neuropeptide F (sNPF), Allatostatin-C (AST-C)の作用機構を検証するために、幼若ホルモン生合成に関わる酵素群への影響を調べた。幼若ホルモン生合成の経路は、前期経路(メバロン酸合成経路)と後期経路に分けられる。そこでsNPFまたはAST-Cの存在下でアラタ体(CA)の培養を行い、前期経路を構成する全ての酵素遺伝子と、後期経路の最終段階を触媒するJH acid O-methyl transferase (JHAMT)の発現量の変化を調べた。その結果、sNPFは前期経路のMevalonate kinaseの発現を強く抑制し、またHMG-CoA reductaseの発現も抑制した。一方で、AST-CはMevalonate kinaseとIsopentenyl diphosphate isomeraseおよびHMG-CoA reductaseの発現を抑制した。これまで、AST-Cは幼若ホルモン生合成において基質の取り込みを阻害すると考えられていたが、本申請研究によって酵素遺伝子を転写レベルで制御していることが明らかになった。加えて、成虫期におけるAllatotropin (AT)の作用についての検証も行った。ATはチョウ目において、成虫メスのアラタ体においてのみJH生合成を促進することが知られている。そこで羽化直後のメスから側心体(CC)-CA-食道(Oe)複合体、CA-Oe複合体及びアラタ体を摘出しATを作用させたところ、CC-CA-Oe及びCA-OeでJH合成が抑制された。一方、羽化1日前のCC-CA-Oe、CA-Oe及びアラタ体単独に対してATを作用させたところ、羽化直後とは異なり、側心体が連結した状態のCC-CA-OeでのみでJH合成活性の抑制がみられた。このことから、カイコにおいては他のチョウ目昆虫とは異なりATはJH合成抑制作用を持つこと、またその作用機構は発生段階で異なることが明らかになった。このようにJH生合成は発生段階に応じて種々のペプチドホルモンにより制御されていることを明らかにできた。

24年度は新規のJH生合成制御因子の探索と、既知の制御因子の受容体の発現解析を通した時期特異的なJH生合成制御の解明を目標とした。その結果、新規のJH生合成制御因子としてETHを見出した。また、目標とした受容体の発現変動解析は終了し、それによってsNPFとETHによる時期特異的なJH生合成制御は受容体の発現状態によっていることが示唆できた。また、JHを制御する因子として知られていたATがsNPFの転写制御を行うことを発見した。これらはいずれも24年度に達成することを目標としており、順調に研究が進んでいることを物語っている。25年度が最終年度であるため、記入しない。sNPF、AST、ETH、PTSPがお互いに合成・分泌に対して影響を与えることが想定されるので、このことをsNPF、AST、ETH、PTSPを各ペプチドホルモン産生組織に作用させ、合成量・分泌量を測定することで検証する。JH生合成の変動はJH合成酵素遺伝子の発現変動に大きく依存するため、sNPF、AST、ETH、PTSPがJH合成酵素遺伝子の転写制御を介してJH生合成を制御することが考えられる。そこでsNPF、AST、ETH、PTSPによるJH合成酵素遺伝子のmRNA発現への影響を組織培養によって調べる。このことによりいつ・どのJH合成酵素遺伝子の発現がsNPF、AST、ETH、PTSPで制御されるかが明らかになる。
突発性心停止におけるサルコペニアの関与および作用点の解明

突発性心停止は社会に多大な悪影響を及ぼし、非常に治療成績が悪い疾患群であることから、予防のインパクトが大きい。突然死の多くは、その予防が可能である植込み型除細動器が適応となる集団とは異なり、突然死全体における心停止リスク予知に関する知見は極めて不足している。サルコペニアの筋力、身体能力の低下が人体に与える影響は非常に大きく、運動障害、転倒などの傷病リスクの増加、活動性の低下、生活の質の低下をきたし、慢性疾患や術後患者における増悪因子であり、最終的には死亡率を増加させる。高齢化率の急上昇に伴い、骨格筋萎縮状態であるサルコペニアは、介入可能な予後不良因子として慢性疾患において注目されているが、急性疾患における報告は少ない。本研究においては、心停止蘇生例とサルコペニアの関連およびメカニズムを明確にすることを目的として臨床データの蓄積をおこなっている。20172018年度、サルコペニアと心停止予後に関与する臨床的因子について、抽出を行った。心停止蘇生後の予後と推定骨格筋肉量の関連があること、発見時の心臓リズムと推定骨格筋肉量に関連を認めないことが判明した。既に確立した心停止後の予後規定因子との関連について、解析を進めている。また、サルコペニアは低栄養、炎症との関連を認めており、心機能の各要素、血液マーカーについて、サルコペニアと心停止およびその予後に関わる作用点について、今後解析を進める予定である。臨床因子のカルテからの抽出作業に時間を要したため引き続き、心停止後の予後とサルコペニアに関連する臨床因子の解析を進めるとともに、血液マーカーを用いた前向き研究を予定している。本研究においては、心停止蘇生例とサルコペニアの関連およびメカニズムを明確にすることを目的とする。2017年度、サルコペニアと心停止予後に関与する臨床的因子について、抽出を行った。臨床因子のカルテからの抽出作業に時間を要したため突発性心停止は社会に多大な悪影響を及ぼし、非常に治療成績が悪い疾患群であることから、予防のインパクトが大きい。引き続き、心停止後の予後とサルコペニアに関連する臨床因子の解析を進めるとともに、血液マーカーを用いた前向き研究を予定している。後ろ向き研究の解析の結果を踏まえる必要があり、前向き研究の実施段階に至っていないため後ろ向き研究の解析の結果を踏まえる必要があり、前向き研究の実施段階に至っていないため
骨の形成に関連する遺伝子をマーカーに用いたサンゴ礁のリスク管理

海洋酸性化や人為的撹乱によりさんご礁が受ける影響を調べるため、骨格の成長率測定といった生態学的・地質学的レベルでの観察が行われている。骨格ができる以前の、幼生における骨の形成を調べれば、各海域でのサンゴのストレスをいち早く発見し、さんご礁の予防的管理を行うことが出来ると考え、幼生におけるカルシウム形成量を測定した。その結果、後期プラヌラにおいてカルシウム量が上がり、骨片のようなものが既につくられているのではないかと考えられた。海洋酸性化や人為的撹乱により、さんご礁が受ける影響を調べるため、骨格の成長率測定といった生態学的・地質学的レベルでの観察が行われている。しかし、或るさんご礁海域で骨格の成長率が低下したことが分かった時点で、既にサンゴは相当のダメージを受けており、海域のサンゴは復元不可能である事が多い。そこで、骨格ができる以前の、骨を造る遺伝子の発現量や発現パターンを調べることで、上述のストレスによる応答を解析し、各海域でのサンゴのストレスをいち早く発見する方法を開発し、さんご礁の予防的管理を行えるようにするということで、研究を行ってきた。1年目には、目的とするキクメイシ科のサンゴの配偶子を採取するための手法について研究を行い、1年に1度の産卵期には、沖縄県の琉球大学瀬底臨海実験所において、サンゴの産卵を予測し、稚サンゴを生産するための配偶子の採取を行った。配偶子を受精させた後に出来る胚から、DNAとRNAを採取し、RNAがどこで発現しているのかを調べる(In Situ Hybridization)ための固定を、ホルマリンとメタノールによって行った。1年目の結果により、キクメイシ科のサンゴから配偶子を採取する方法が明らかとなったので、2年目の今年は、キクメイシ科とそれに近縁のサンゴから5種類、Oulastrea、Favites、Cyphastrea、Goniastrea、Montastreaの成体を採取し、また、比較として、遠いグループで良く研究されているAcroporaの成体を採取して、出来る限りの種類で配偶子の採取を行い、稚サンゴの作出を試みた。ただ、今年度の実験から、骨の形成を調べるには、稚サンゴを用いる必要がなく、幼生の発現を調べるだけでも良いことがわかった。そして、キクメイシ科のサンゴ幼生において、骨の形成に関連する遺伝子を見つけることができた。人為的撹乱や、地球規模での変動による環境要因の変化が、サンゴにどのような影響を与えるのかという観点から、サンゴの生態や生理に関する研究が数多く行われている。特に、海洋酸性化や温暖化等の影響によってサンゴの成長率が低下するといった報告がそうである。しかし、サンゴの成長は年に0.1mm - 1cmと大変遅く、生態学的な観察で成長率が低下しているのに気づいた時には、既に相当のダメージを受けており、その海域を保護するにも手遅れである。ならば、環境ストレスにより、骨を造る遺伝子の発現量が減少している、といった成長率として現れるよりもっと手前のmRNAレベルでの研究を組織学的観察等により行えば、サンゴにかかる負荷をいち早く発見でき、原因の究明や生息場所の保全を行うことができるが、骨の形成に関わる可能性が高い遺伝子は、アザミサンゴという種で見つかったgalaxin (Fukuda et al. 2003)という1種のみで、他の遺伝子は未だに発見されていない。そこで私は、幼生が着底変態して骨を造り始める「稚サンゴ」の時期に着目し、骨を造る前の幼生と造り始めた稚サンゴでその生態と発現する遺伝子情報を比較することで、骨形成に関連する遺伝子を見つけようと試みている。1年目の今年は、目的のサンゴの配偶子を採取するための手法について研究を行った。2012年6月、沖縄県にある琉球大学瀬底実験所において、サンゴの産卵を予測し、稚サンゴを生産するための配偶子採取を行った。サンゴ胚からDNA・RNAを採取し、In Situ Hybridizationを行うため、発生過程において特に原腸形成期から連続的にプラヌラのホルムアルデヒド・メタノール固定を行った。そこで、骨格ができる以前の、骨を造る遺伝子の発現量や発現パターンを調べることで、上述のストレスによる応答を解析し、各海域でのサンゴのストレスをいち早く発見する方法を開発し、さんご礁の予防的管理を行えるようにする。これまで、キクメイシとクサビライシの2種で配偶子を採取し、育ったプラヌラからmRNAを採取し、cDNAクローニングを行い、アダプタープライマーをつけ、次世代シーケンサーにかけ、発生時期に発現する全ての遺伝子を採取した。

そして、そのデータから、サンゴの骨格形成に関係するタンパク質のアミノ酸配列を探索し、骨形成遺伝子の候補を複数見つけ、水温やpHを変えた飼育化の稚サンゴや、各種海域のサンゴを用いて発現量や発現パターンを解析し、環境ストレスに応答するマーカー遺伝子を決定し、実用化するという予定だった。しかし、例えば、ある骨格形成遺伝子において、発現量や発現パターンが時間や季節によってかなり変化することがわかり、自然界で試験したときに、その遺伝子の発現が何によって変化したのか、特に骨が出来てしまったサンゴではほぼ不可能であることが示唆された。また、オーストラリア国立大学の共同研究者によれば、その研究者らが作成したマイクロアレイでも、同じような問題が出てくることがわかったので、研究の方向性を変えて、申請者が新たに発見したプラヌラ幼生時のカルシウムの量により、ストレスの解析を行うこととした。そして、現在も実験が継続中である。海洋生物学最初の申請では、稚サンゴまで育ててRNAを採取するという計画であったが、キクメイシ科において、稚サンゴでなくとも、幼生の時期に骨の形成に関連する遺伝子が発現しており、幼生の時期でのシーケンスも明らかにすることが出来た。未発表のため詳細は書けないが、その結果は、幼生の段階ですでに実験に用いることが出来るということであり、わざわざ時間をかけて稚サンゴを育成し、試験する必要がないということである。現在、その論文を作成中である。幼生が着底変態して骨を造り始める「稚サンゴ」の時期に着目し、骨を造る前の幼生と造り始めた稚サンゴでその生態と発現する遺伝子情報を比較することで、骨形成に関連する遺伝子を見つけようと試みており、1年目の今年は、目的のサンゴの配偶子を採取するための手法について研究を行った。2012年6月、沖縄県にある琉球大学瀬底実験所において、サンゴの産卵を予測し、稚サンゴを生産するための配偶子採取を行った。サンゴ胚からDNA・RNAを採取し、In Situ Hybridizationを行うため、発生過程において特に原腸形成期から連続的にプラヌラのホルムアルデヒド・メタノール固定を行うことが出来たため。稚サンゴを用いる必要がなくなったので、幼生を用いて、骨形成に関連する遺伝子の発現を探索する。同時に、遺伝子の発現のみではなく、幼生の体成分分析を行い、必要な成分を検出したいと考えている。当初の計画では、配偶子を採取し、稚サンゴを作出し、育った稚サンゴからmRNAを採取し、cDNAクローニングを行い、アダプタープライマーをつけ、次世代シーケンサーにかけることで、稚サンゴの時期に発現する全ての遺伝子を採取する予定である。しかし、最近行われている他の動物でのストレスと遺伝子発現の結果をみると、同じ個体でも一日のリズム(例えば、朝と夜)によって、かなり遺伝子発現に差があることがわかってきた。また、サンゴの場合には、生息場所の光環境によって、骨形成に差がある可能性が高くなった(大久保・予備調査より)。サンゴに良い生息環境かどうかは、遺伝子の比較では不十分であり、サンゴの代謝状態を調べる必要があると分かってきた。さらに、前所属先の指導教官であるオーストラリア国立大学のHeyward博士によると、サンゴのマイクロアレイをつくったものの、あまり信頼性がなく、汎用性が低いということであった(Grasso et al. 2008)。
ｅＥＦ１ＢδＬによるポリグルタミン蛋白質凝集の制御

研究者らはこれまでに、脳特異的に発現するeEF1BδLが新規のストレス応答性の転写因子であることを発見している。本研究ではeEF1BδLのポリグルタミン病での役割を明らかにすることを目的として研究を進めたが、eEF1BδLがポリグルタミン蛋白質凝集に関与する明確な根拠は得られなかった。一方で、eEF1BδL欠損マウスでその表現型を解析したところ、欠損マウスは正常に発育するが学習行動に障害が出ることがわかり、eEF1BδLは成体での学習・記憶機能を制御する可能性が示唆された。本研究ではeEF1BδLの選択的スプライシングの制御機構とポリグルタミン病での役割を明らかにすることを目的として研究を遂行した。◯平成25年度(最終年度)の研究成果1スプライシング調節因子の同定:Fox、Nova、Mbnlなどのスプライシング調節因子の発現ベクターによりHEK293細胞にそれぞれ強制発現させRT-PCR法によりeEF1Bδ遺伝子のスプライシング変化を解析したところ、どの調節因子の発現系でもスプライシングは変動しなかった。現在までに約40のスプライシング調節因子がわかっているが、今後は全ての遺伝子のノックダウン系を用いて網羅的に解析する必要がある。2前脳特異的eEF1BδL欠損マウス:CAG-Creとの交配により全身の欠損マウスは正常に生まれることがわかっている。そのため、本マウスについてその表現系を行動学的に解析したところ、8方向放射状迷路において欠損マウスは野生型マウスより作業効率が有意に劣ることがわかった。3ポリグルタミン蛋白質凝集:eEF1BδLをノックダウンしたHEK293細胞において82Q-GFPを強制発現させ、蛋白質凝集を比較したところ影響は見られなかった。また82Q-GFPの蛋白質凝集はeEF1Bδ遺伝子のスプライシングにも影響しなかった。◯研究期間全体の研究成果1eEF1BδLはマウスの学習・記憶機能に関与することが示唆された。2eEF1BδLはポリグルタミン蛋白質凝集にさほど影響しないことが示唆された。3熱ストレスに応答してeEF1BδLと結合する核内蛋白質を見いだした。4eEF1BδLは脱リン酸化によりその転写活性が制御されることを見いだした。本研究はeEF1BδLは成体での学習・記憶を制御する可能性を示唆し、さらに認知性疾患におけるeEF1BδLを標的とした治療法の開発に繋がる可能性がある。本研究ではeEF1BδLの選択的スプライシングの制御機構とポリグルタミン病での役割を明らかにすることを目的として研究を遂行している。平成24年度では申請書の「研究計画」に示したものを含む以下4つの項目でそれぞれ実績を得ている。1スプライシング調節因子の同定:eEF1Bδ遺伝子のエクソンスキッピングが起こるゲノム領域のクローニングが完了した。今後はスプライシング調節因子結合配列の変異体を作成し、培養細胞に発現させRT-PCR法によりスプライシングの変化を解析する。またFox、Nova、Mbnl1などのスプライシング調節因子のクローニングも完了した。2前脳特異的eEF1BδL欠損マウス:当施設にてCaMKII-Creとの交配により作成している。今年度にホモ個体を作成し脳内遺伝子変動をマイクロアレイにより解析する。またCAG-Creとの交配により全身の欠損マウスも作成し、そのホモ個体は正常に生まれることがわかった。このことはeEF1BδLは胎仔の発達段階にはさほど関与せず成熟した個体において機能している可能性を示唆している。3ポリグルタミン蛋白質凝集:82Q-GFPプラスミドの構築が完了しており、今後は培養細胞にてポリグルタミン蛋白質凝集によるスプライシング変化を解析する。さらに研究の過程で熱ストレスに応答してeEF1BδLと結合する蛋白質を見いだした。ヒストン修飾に関与する核内蛋白質でeEF1BδLと同様に脳に高発現していた。eEF1BδLと協同してシャペロン蛋白質の転写を制御する可能性があり非常に興味深い。4 eEF1BδLのリン酸化修飾:研究計画には記してないが、研究の過程でeEF1BδLは熱ストレスに応答した脱リン酸化によりその転写活性が制御されることを見いだした。本知見はeEF1BδLを標的とした化合物の開発にも繋がる可能性があり重要である。スプライシング調節因子の同定に用いるeEF1Bδ遺伝子のゲノム領域のクローニングは順調に完了し、現時点でスプライシング調節因子結合配列の変異体も複数種類完成している。今年度には培養細胞に導入し、どの結合配列がエクソンスキッピングに重要かを解析できる。また、前脳特異的eEF1BδL欠損

マウスのホモ個体も今年度に得られ、脳内遺伝子変動を解析する予定である。ポリグルタミン蛋白質凝集に関する研究では82Q-GFPプラスミドが完成しており、今年度にeEF1Bδ遺伝子のスプライシング変化や欠損マウス神経細胞における細胞死の解析ができる。さらに平成24年度では、eEF1BδLの結合蛋白質や脱リン酸化による転写活性制御など新たな知見も得られた。以上のことより、現在までの達成度は当初の計画以上に進展していると評価する。今後も申請書の「研究目的」に示す通り、eEF1Bδ遺伝子のスプライシング調節因子を同定すること、またポリグルタミン蛋白質凝集への応答の解析および遺伝子改変マウスを用いてeEF1BδLとポリグルタミン病との関わりを明らかにすることを目的として研究を遂行する。さらに平成24年度に新たに得られた知見から以下の2項目についても解析を行なう。研究の過程で熱ストレスに応答してeEF1BδLと結合する蛋白質を発見しており、ヒストン修飾に関与する核内蛋白質であることがわかっている。概して遺伝子の転写には転写伸長因子、コアクチベーターやヒストン修飾酵素など多くの蛋白質が関与している。eEF1BδLによるシャペロン蛋白質の転写制御にどのような核内蛋白質が協同的に働くかを明らかにすることは熱ストレス応答機構の解明の点からも非常に重要である。今後は培養細胞にてeEF1BδL結合蛋白質のノックダウンを行ない、シャペロン蛋白質の発現が変動するか否か解析する。2 eEF1BδLのリン酸化・脱リン酸化による活性制御機構の解明研究の過程でeEF1BδLは熱ストレスに応答した脱リン酸化によりその転写活性が制御されることを発見した。今後はeEF1BδLのリン酸化酵素および脱リン酸化酵素を免疫沈降法などにより同定する。本研究はeEF1BδLを標的とした化合物の開発にも繋がる可能性があり重要である。該当なし。
戦国時代禁裏文芸の総合的研究

本研究では、応仁の乱(1467-1477)後の、後土御門天皇・後柏原天皇時代における禁裏文芸について、以下の研究を進展させた。(1)室町時代後期の後宮女官の文学活動について。特に和歌詠作と、文学作品の書写活動について、具体例を紹介し、以後の研究の基本となる資料を紹介した。(2)三条西家における伊勢物語注釈始発である、三条西実隆『伊語聴説』の翻刻本文と解説の公開。平成27年度の研究成果として、「室町時代の女性歌人たち」(『中世文学』第60号、平成27年6月)と「『内裏女中月次続歌』考」(『国文学研究資料館紀要文学研究篇』第42号、平成28年3月)を発表した。いずれも、後土御門天皇時代の女性歌人の活動についての論考である。前者は女性歌人の活動を概観するとともに、当該時代を境として女性歌人たちの活動が知られなくなる理由や背景について考察した。後者は特に国立歴史民俗博物館蔵『内裏女中月次続歌』について取り上げた。女性歌人による詠作がほとんど残されていない中で、まとまった数の和歌を収める当該資料は非常に貴重であり、出詠する女性歌人たちの伝記事項をまとめ、資料として活用できる下地を整えた。後土御門天皇時代についての資料を収集し、特徴を抽出するという平成27年度の目標は、おおむね順調に進展している。収集した資料に基づいた論考は、次年度以降に発表を予定している。また、次年度の課題として設定している後柏原天皇時代の資料の収集も、順調に進展している。平成28年度は、後柏原天皇期における女性歌人の文芸活動と、古典、特に『伊勢物語』注釈に関する研究の基盤となる資料を閲覧調査し、研究の現況に関する情報収集を行った。研究代表者は、後柏原天皇期の一代前にあたる後土御門天皇期の女性歌人に関しては、すでに「室町時代の女性歌人たち」(『中世文学』第60巻、2015年6月)と「『内裏女中月次続歌』考」(『国文学研究資料館紀要文学篇』第42号、2016年3月)の二本の論文を発表し、当該時代に関する研究基盤を築いてきた。しかし後柏原天皇期に関しては、女性歌人の活動が一段と低調になり、資料も前代以上に乏しい状況にある。散在する資料を収集してきた結果、わずかではあるが注目すべき事象を見いだすことができたので、それについては平成29年度に論文化する予定である。また、当該時代に制作された古典注釈として、三条西実隆による『伊勢物語』注釈書である『伊語聴説』に注目している。当該書は、実隆およびその子孫によって陸続と作られる三条西家の『伊勢物語』注釈書の中で、最初期のものであり、注釈史においても重要な書物である。『伊語聴説』の翻刻作業を進め、これは概ね終了している。また、『伊勢物語』注釈と和歌実作の関係についての調査も進めている。なお、研究成果の一部を平成29もしくは30年度に刊行予定の『百人一首』に関する論文集に発表する上で、その前段階となるパリ国際シンポジウム「百人一首みやび・近世大衆文化・世界文学」に参加し、各発表者の発表を聴講、論文集の打ち合わせに出席、関連資料調査を行った。予測していたよりも、資料の伝存状況の確認や翻刻作業に時間が掛かっている。平成28年度に予定していた論文・資料紹介の発表が遅れている。平成29年度は、最終年度ということもあり、これまでに収集してきた資料の整理・分析し、成果発表に向けてのまとめを進めてきた。また、特に当該時代についてのトピックスとして、2方向から研究を進展させた。一つは、禁裏における女性歌人の活動についてである。具体的には、女性歌人による連歌等聯句活動について調査を進め、後土御門後奈良天皇期の女官による物語書写に関する調査を行った。これまでに判明した資料を天理大学付属天理図書館・陽明文庫・京都学歴彩館において調査し、詳細な情報をまとめた。その結果を「陽明文庫蔵「後柏原院宸筆其外寄合書『源氏物語』」考」として、陽明文庫古典資料研究会(2017.10.15於陽明文庫)にて発表し、論文発表に向けての準備を整えた。この研究により、今まで確実な資料の無かった後柏原天皇期後宮女官の筆跡を報告し、今後の研究の基礎資料となることを考察した。また、禁裏における注釈活動研究の一環として、三条西実隆による『伊勢物語』注釈書である『伊語聴説』の翻刻を発表した(小山順子(単著)「陽明文庫蔵『伊語聴説』翻刻と解題」『調査研究報告』第38号、国文学研究資料館、2018年3月)。当該研究が当初目指した、後土御門後奈良天皇期全般を概括するという目標には届かなかったが、これまでほとんど注目されてこなかった当該時代における女性歌人の活動と残された資料の整理を行い、この分野における研究の先鞭を付けたこと、および当該時代禁裏文芸活動の特質のいくつかを抽出しえた点が、当該研究の意義である。

特に和歌詠作と、文学作品の書写活動について、具体例を紹介し、以後の研究の基本となる資料を紹介した。(2)三条西家における伊勢物語注釈始発である、三条西実隆『伊語聴説』の翻刻本文と解説の公開。残されている御会資料を、公家日記・『お湯殿の上の日記』などの史料と照合することで、文学作品としての特質や特徴を明らかにしてゆくのが、本研究課題の柱となる研究方法である。御会資料の多くは、宮内庁書陵部蔵本・国立歴史民俗博物館蔵高松宮旧蔵本として伝わっており、それらは基本的に国文学研究資料館蔵マイクロ資料によって調査し、必要なものについては原本を調査する。また、龍谷大学大宮図書館・京都府立総合資料館にも重要な資料が所蔵されているため、これらも適宜調査してゆく。平成29年度は、前年度に引き続き資料調査と収集にあたり、遅れている論文の活字化を完遂することとする。本年度に予定しているのは、後柏原天皇期の文芸活動として、文学の書写活動およびそれに関わった女性に関する論考と、後柏原天皇自身の和歌表現に関する論考、さらには資料紹介の発表を予定している。昨年度は、資料の翻刻作業に時間が掛かり、進捗が遅れたため、アルバイトを雇用して、速やか且つ正確なデータ作成を行えるよう、体制を整える。古典文学資料調査にあたり、紙焼写真の作成のために「その他」を100,000円計上していたが、今年度は主にマイクロ資料による調査で要が足りたため、複写作成に費用が掛からなかった。そのために、「その他」は成果としての論文の抜き刷り費用のみにとどまり、次年度使用額が生じた。論文の活字化が遅れており、論文の抜刷代等、論文発表に必要と計上していた額が残った。今年度は、出張に掛かる費用が、当初予定していたよりも大きくなる見通しである。そのため、昨年度の残額は、旅費として使用する計画である。平成29年度は、遅れている研究成果の論文化を確実に行うことにより、平成28年度に使用予定であった額を執行する。
中赤外超高速分光による一重項励起子分裂における構造ダイナミクスの解明

本研究課題では、主に1.機能性有機分子の固体について、光励起状態の構造ダイナミクスを追跡する技術として有機固体に適用可能な時間分解赤外分光(TRIR)の技術を確立でき、2.機能性有機分子の例として近年有機発光材料として注目されている熱活性化遅延蛍光(TADF)分子のTRIRによる励起状態構造ダイナミクスの解明と機能発現の関連に関して重要な知見を得ることに成功した。研究を進めるうえで根幹を担うTi:Sapphireレーザーのメンテナンスや修理に予算を割く必要が急遽生じたため当初計画していた設備を必ずしも整えることはできなかったが、臨機応変に研究計画を考え直し共同研究先から得た材料の測定にスムーズに切り替えることができたため、補って余りある成果を得ることができた。まず、TRIRを光ダメージの閾値が低い機能性分子の集合体に適用するためには、細やかな実験条件の検討ができるよう自由度が高い実験装置を構築する必要があった。そこで、均一な試料を得るために有機分子をホスト材料に均一に分散させる調整方法の確立、および試料の光ダメージを軽減するために常に照射場所をかえられるTRIR装置を構築した。また、機能性分子の集合体としての機能を解明するためには、溶液中での挙動も分子レベルで理解する必要がある。そこで、TADFを示すカルバゾール-ベンゾニトリル誘導体に注目し、TADFの機能の発現の有無と励起状態構造ダイナミクスの関連を詳細に調べた。結果として、励起状態での構造ダイナミクスを抑えることがTADFの活性化障壁を軽減することを示唆する、重要な知見を得ることができた。当初狙っていた系を測定するには至らなかったものの、一重項励起分裂の知見をまとめたレビューを発表することもでき、広く凝縮系における機能性分子の構造ダイナミクスを追跡する装置を構築できたため重要な足がかりを得たと考えている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
古墳時代中期・畿内中枢地域における埴輪生産組織の研究

古墳時代中期・畿内地域における事例として百舌鳥御廟山古墳出土埴輪および久津川古墳群出土埴輪、当該期の畿内的埴輪の地方波及事例として西都原古墳出土埴輪の資料化を行うことができた。百舌鳥御廟山古墳出土埴輪については、ほぼ全ての個体を調査し、全面拓本作業を7割方終了することができた。久津川古墳群出土埴輪については、ほぼ全ての個体を調査し、ほぼ全ての個体から試料を採取し、蛍光X線分析を行った。宮崎県西都原古墳群出土埴輪については、補足実測を行い、ほぼ全ての個体について実測図作成を完了できた。以上を通じて、当該期・当該地域の埴輪生産組織の実態解明に必要な基礎調査・基礎分析を行うことができた。畿内中枢部における埴輪生産組織の実態解明には、各古墳出土埴輪の悉皆的な調査研究を必要とする。今年度は主に下記のような調査研究を実施した。まず、宮内庁書陵部所蔵の大阪府堺市百舌鳥御廟山古墳出土埴輪について、数回にわたって調査研究を実施し、観察・計測・写真撮影・拓本採取を行った。また、宮内庁書陵部所蔵の大阪府羽曳野市白鳥陵古墳出土埴輪についても調査研究を実施し、観察・計測・写真撮影・拓本採取を行った。この他、京都府城陽市久津川車塚古墳・梶塚古墳出土埴輪の調査研究も実施した。久津川車塚・梶塚両古墳出土資料については、胎土分析のための試料を採取させていただき、蛍光X線分析を実施している。また、畿内型埴輪が地方に波及した典型例として、宮崎県西都市西都原古墳群出土埴輪の調査研究を実施し、宮崎県教育委員会所蔵資料および京都大学総合博物館所蔵資料についての補足調査を実施した。主な作業内容は、作業未了であった一部資料についての観察・計測・実測・写真撮影・拓本採取作業である。また、いずれも、連携研究者や研究協力者の協力を得ながら、調査記録の整理作業や、写真資料の整理作業を進めることができた。1宮内庁書陵部所蔵の大阪府堺市百舌鳥御廟山古墳出土埴輪について、数回にわたって調査研究を実施し、観察・計測・写真撮影・拓本採取を行うとともに、平成23・24年度に実施した同古墳の調査研究の成果も合わせて、分析検討を行った。2京都府城陽市所在・久津川古墳群出土埴輪の調査研究の一環として、山道東古墳出土埴輪の調査研究を実施した。同古墳出土埴輪の観察・計測・写真撮影を行うとともに、胎土分析のための試料を採取し、蛍光X線分析を実施した。3畿内型埴輪が地方に波及した典型例として、宮崎県西都市西都原古墳群出土埴輪の調査研究を実施し、宮崎県教育委員会所蔵資料についての補足調査を実施した。このほか、これまでに作成した実測図のトレース作業を進めた。上記について、いずれも連携研究者や研究協力者の協力を得ながら調査研究を進めることができた。当該調査研究を通じて、畿内中枢部大形古墳の埴輪製作における工人編制の一端を解明することができた。この他、京都府城陽市青塚古墳・芭蕉塚古墳出土埴輪の調査研究も実施し、観察・計測・写真撮影・拓本採取を行った。青塚・芭蕉塚両古墳出土資料については、分析試料を採取させていただき、蛍光X線分析を実施している。当該調査研究を通じて、畿内縁辺部の埴輪製作における工人編制の一端を解明することができた。また、畿内型埴輪が地方に波及した典型例として、宮崎県西都原古墳群出土埴輪の調査研究を実施し、宮崎県教育委員会所蔵資料・京都大学総合博物館所蔵資料・宮内庁書陵部所蔵資料とも、図化・撮影・拓本採取など当初予定していた全資料の調査研究が終了したところである。以前に実施した東京国立博物館所蔵西都原古墳群出土埴輪の調査研究と合わせて、現在確認できる西都原古墳群出土埴輪全ての資料化が完了したことになる。