hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プリオン蛋白遺伝子領域におけるコンジェニックマウスの開発

1.昨年度の研究実績の概要で,それまでのラジオアイソトープを用いたドットハイブリダイゼーションから安全迅速な制限酵素の切断長による方法を開発し,マウスのプリオン蛋白遺伝子変異の診断技術が向上したこと,同時に,個体について診断に基づき実施した戻し交配が6世代まで進んだ後,繁殖が困難になったので4世代まで元に戻って行なったことを報告した。ところが,うまく繁殖できたものの,その中にPrn-P^aとPrn-P^bとのヘテロが生まれず,次の世代につなぐことができなかった。したがって,F1世代から交配をやり直しており,もう少し時間がかかりそうである。2.その代わり,プリオン接種後の潜伏期間,病理などの感受性がプリオン蛋白遺伝子変異以外の要素で変わることをSCIDマウスで発見した。そして,それがコンジェニックマウスと同様にプリオン病のモデル動物として重要であることがわかったのでその概要を報告する。(1)SCIDマウスではクロイッツフェルトヤコブ病病原体を脳内接種後,プリオン蛋白遺伝子型がPrn-P^aのマウスと同様に150日程度の潜伏期間で発症するが,脳内接種では600日経っても発症しなかった。(2)この原因として,SCIDマウスでは,脾臓やリンパ節の濾胞樹伏細胞に異常プリオン蛋白が沈着しないという特異的な反応があり,それが示唆された。(3)このことから,SCIDマウスは,プリオン病の発病のメカニズムを解析するうえでも重要なモデル動物となることが判明した。(4)今後も,プリオン蛋白遺伝子のコンジェニックとSCIDマウスを組み合わせて,プリオン病解明のモデル動物開発を推し進めていきたい。NZW/Seaマウス(以下NZW)に、われわれの所で繁殖維持しているI/LnJマウス(以下I/LnJ)を交配させ第1代雑種F1を作り、それをNZWに戻し交配させた(N2代マウス)。このN2代マウスの中からプリオン蛋白遺伝子(PrnーP)に関してPrnーP^bをもったマウスをポリメラ-ゼチェインリアクション(PCR)法とドットハイブリダイゼ-ションにより選抜した。すなわち、マウスの尾端約1.5cmをエ-テル麻酔下で切断し、プロテナ-ゼーKによる55°C、24時間処理後、フェノ-ル・クロロフォルムで抽出、さらにエタノ-ルでDNAを析出した。このDNAをTaqポリメラ-ゼを用いたPCR法によりDNAを増幅の後、マウスプリオン蛋白遺伝子の置換が起こっているコドン108、コドン189を含むオリゴヌクレオチドプロ-ブによるドットハイブリダイゼ-ションを行なった。その結果、NZWに戻し交配したN2代マウスのうち約半数のマウスがNZWのプリオン蛋白遺伝子の型であるPrnーP^aとI/LnJの遺伝子型であるPrnーP^bの両方を示すヘテロタイプのマウスであった。もちろん、これは理論値に一致した。このヘテロタイプのマウスを次世代の親として選抜し、さらにNZWへの戻し交配を行なった。この戻し交配により得られたN3世代のマウスにも同様に遺伝子診断を行い選抜、戻し交配を行なった。戻し交配は世代を重ね、現在N6世代に達している。また、CJDagent接種後の発症までの潜伏期間については、まだN2世代までの成績しか得られていないが、PrnーP^aホモを示す個体は短く、PrnーP^6を持つヘテロ型は長くなるという結果が得られている。このことはプリオン蛋白遺伝子のうち潜伏期間に関連している遺伝子は優性であることを示している。症状、病理所見についてはホモ型、ヘテロ型の間に差異は認められていない。現在、さらに世代を重ねるため戻し交配、遺伝子診断、選抜を継続中である。マウスの尾端切断によりDNA抽出後、PCR法にてプリオン遺伝子領域を増幅、dot hybridizationと制限

酵素切断長にてPrnーPa,PrnーPbを検出し,PrnーPb遺伝子型のマウスをNZWマウス(PrnーPa)に戻し交配することによりコンジェニックマウスの作成を行ってきた。ところが、戻し交配6代(N6)まできたところで繁殖が困難になってきた。それと同時にdot hybridizationが必ずしもうまく行かないことが判明した。そこで本年度はN4世代まで逆戻りして繁殖をやり直すこと、制限酵素の切断長による方法のみで遺伝子診断ができるようにプライマ-を新たに作り直すことを行った。すなわち、プリオン蛋白遺伝子のコドン108の置換の有無を制限酵素Mnl1,コドン189をBst E〓でそれぞれ切断しその切断長を電気泳動により判定できるような位置のプライマ-を2組作成した。その結果、これらの2組のプライマ-を用いたPCR法では増幅されるプリオン遺伝子の量も多くなるとともに、制限酵素Mnl1,Bst E〓による切れもよく、電気泳動により2カ所の塩基配列の置換が明確に検出できるようになった。この方法だと放射性同位元素を使う必要もなく、安全かつ簡単にDNA診断が出来るようになった。繁殖障害については、N4世代まで戻って再び戻し交配をやり直すこととNZWマウスの種親を更新することによって何とか克服することが出来た。現在、N5世代のもどし交配を行っている。N4以前のマウスについては各世代のホモ型,ヘテロ型についてCJD潜伏期間の比較実験を継続中である。1.昨年度の研究実績の概要で、それまでのラジオアイソトープを用いたドットハイブリダイゼーションから安全迅速な制限酵素の切断長による方法を開発し、マウスのプリオン蛋白遺伝子変異の診断技術が向上したこと、同時に、個体について診断に基づき実施した戻し交配が6世代まで進んだ後、繁殖が困難になったので4世代まで元に戻って行なったことを報告した。ところが、うまく繁殖できたものの、その中にPrn-P^aとPrn-P^bとのヘテロが生まれず、次の世代につなぐことができなかった。したがって、F1世代から交配をやり直しており、もう少し時間がかかりそうである。2.その代わり、プリオン接種後の潜伏期間、病理などの感受性がプリオン蛋白遺伝子変異以外の要素で変わることをSCIDマウスで発見した。そして、それがコンジェニックマウスと同様にプリオン病のモデル動物として重要であることがわかったのでその概要を報告する。(1)SCIDマウスではクロイッツフェルトヤコブ病病原体を脳内接種後、プリオン蛋白遺伝子型がPrn-P^aのマウスと同様に150日程度の潜伏期間で発症するが、脳内接種では600日経っても発症しなかった。(2)この原因として、SCIDマウスでは、脾臓やリンパ節の濾胞樹状細胞に異常プリオン蛋白が沈着しないという特異的な反応があり、それが示唆された。(3)このことから、SCIDマウスは、プリオン病の発病のメカニズムを解析するうえでも重要なモデル動物となることが判明した。(4)今後も、プリオン蛋白遺伝子のコンジェニックとSCIDマウスを組み合わせて、プリオン病解明のモデル動物開発を推し進めていきたい。
Amenabilityの研究

以下,Sは半群とする。Sがleft reversibleのとき,Sの最大右消約的商半群S_rが定義される。特にSがleft amenableならば常にS_rが対応する。S_rが群になる場合,SをRGー半群と呼ぶことにする。RGー半群のamenability研究を研究テ-マとした。まず,RGー半群の代数的構造を調べることから着手した。SがRGー半群であるための条件,準同型によってRGー半群性がどのように保存されるか,RGー半群の部分半群がそれ自身RGー半群になるための条件,SがRGー半群であることと,SがRGー半群になる左または右イデアルを含むことと同値であること,RGー半群の半直積がまたRGー半群の半直積がまたRGー半群になるための条件等を明らかにした。left reversibleな正則半群や極小左イデアルを含む半群はRGー半群であり,RGー半群のカテゴリ-は予想以上に大きいことがわかった。以上の研究結果は,論文“On RGーSemigroups"として公表予定である。次に,RGー半群の代数的特徴とamenabilityの一般論を結びつけることにより,RGー半群Sのleft amenabilityに関するいくつかの結果を導いた。Sがleft amenableことと,S_rがleft amenableなることが同値であり,さらにS_rが群であることより,Sのleft amenabilityはleft amenable群と類似の特徴付けが可能になる。例えば,RGー半島では,left amenabilityは,強Fφlner条件(SFC),弱Fφlner条件(WFC),いずれとも同値になる。この事実により,任意のRGー半群Sに対して,そのFφlner数は,SがLeft amenableであるか否かに応じて,0または1であるという結果も得られた。これらについては,論文“Amenability and Fφlner Numbers of RGーsemigroups"として公表予定である。
ミトコンドリアDNAの進化における生殖的隔離と地理的隔離の効果

ミトコンドリアDNA(mtDNA)は、分子系統学において、近縁な分類群間の系統関係を研究するために広く用いられている分子マーカーである。しかし、遺伝様式が核ゲノムと異なることから、mtDNA分子の系統関係は種の系統関係を必ずしも反映しない可能性も予想される。事実、異種間浸透により、異所的に分布する同種の集団よりも同所的に分布する他種の集団に近い配列を持つ現象は、種々の動物種で報告されている。そこで、本研究は、種分化に際して生殖的隔離と地理的隔離がmtDNAの分化にどのように影響するのかを明らかにすることを目的とし、テングショウジョウバエ亜群(Drosophila nasuta subgroup)の11種・亜種について、mtDNAと核遺伝子の分子系統樹の比較を行った。今年度はmtDNAの比較対照として核のwhite遺伝子の分子系統学的解析を行った。その結果、white遺伝子の系統関係は、形態、生殖的隔離などから総合的に判断される種の類縁関係と一致した。例外は、非常に近縁で生殖的隔離が不完全であるD. nasutaとD. albomicans、及びD. pulauaとD. sulfurigasterの間では、種間のDNA配列間の差異が種内変異の範囲に入る場合で、むしろwhite遺伝子の系統関係は生殖的隔離の程度を反映するものであることが示唆される。一方、mtDNA塩基配列間の系統関係に見られたような、分布域が近い種の配列が分子系統樹上でクラスターを形成するような傾向は全く見られなかった。以上の結果から、mtDNAの分化は、生殖的隔離の確立による種の分岐より、むしろ分布域の変化に伴う地理的隔離により大きく影響されることが明らかとなり、mtDNAを分子マーカーとして種の系統関係を議論する際の危険性が結論づけられた。そこで、本研究は、種分化に際して生殖的隔離と地理的隔離がmtDNAの分化にどのように影響するのかを明らかにすることを目的とし、テングショウジョウバエ亜群(Drosophila nasuta subgroup)の11種・亜種、合計132系統について、mtDNAのCOI遺伝子、675塩基の配列を決定し、分子系統学的解析を行った。その結果、D.pallidifrons、D.niveifronsを除く9種・亜種のmtDNAは、わずかな例外はあるものの、インド、タイ、中国南部など、主に東南アジアに分布する分類群のクラスターと、ボルネオ、フィリピン、オーストラリア、ニューギニアなど、主に南太平洋の島々に分布する分類群のクラスターに分かれた。同一のクラスターに所属する分類群は必ずしも生物学的に近縁であるとは限らず、逆に近縁であるが分布域の異なる分類群が2つの大きなクラスターに分かれる傾向が観察された。すなわち、テングショウジョウバエ亜群の種分化過程においては、mtDNAの分化は、生殖的隔離の確立による種の分岐より、むしろ分布域の変化に伴う地理的隔離により大きく影響されたと考えられた。以上の結果から、mtDNAを分子マーカーとして、種の系統関係を議論する際の危険性が強く示唆された。
血管系における新しい転写調節の分子機序と病的意義の解明

心筋梗塞、脳梗塞、癌は先進国における死因の上位を占めるが、いずれも病態の進展や代償過程において、血管新生が深く関与することが知られている。そのため、血管新生とその分子基盤であるシグナル伝達機構を研究することは非常に重要である。Hairy-Related Transcription Factorは、Notchシグナルの下流に位置する転写因子である。これまで、ノックアウトマウスの解析から、個体発生において血管内皮細胞のHrt機能が必須であることが明らかになった。一方、様々な成人疾患における血管新生の病的意義が注目されていることから、成体におけるHrtの機能解明は重要であると考えられる。本研究では、Hrt1KOマウスを用いて下肢大腿動脈結紮モデルを作製し、虚血が誘導する血管新生に基づく血流回復を解析した。対照の野生型マウスに比べてHrt1KOでは、有為に血流回復が減弱していることが判明した。以上のことから、Hrt1は血管新生に必要な機能を有していることが示唆された。虚血性心疾患や癌をはじめ様々な病態において血管新生の役割が解明されるとともに、基盤となる血管形成に関する研究が重要性を帯びてくる。転写調節因子であるHrt1/Hrt2の遺伝子変異マウスの解析から、個体発生において血管内皮細胞のHrt1/Hrt2機能が必須であることが明らかにされている。一方、様々な成人疾患における血管新生の病的意義が注目されていることから、成体におけるHrtの機能解析は重要であると考えられるが、Hrt1/Hrt2ダブルノックアウト(KO)マウスが胎生致死であることから成体におけるHrtの機能は不明のままである。当初の計画では、ドイツMax Planck InstituteのRalf Adams博士より供与いただいたCadh5-Cre^<ERT2>に対して適切な交配を行い、Cadh5-Cre^<ERT2>・Hrt1^<ko/ko>・Hrt2^<ko/flx>マウスを作成し、内皮特異的にHrt2を誘導欠損させる予定であった。予想に反して、中間産物であるHrt1^<ko/ko>・Hrt2^<ko/->が胎生致死性であり、目的の遺伝型マウスへの到達は困難であった。次善の策として、血管内皮細胞におけるHrt1とHrt2の意義を解明するために、Hrt1^<ko/ko>あるいはHrt2^<ko/ko>マウスを用いて、下肢動脈結紮モデルを作成して、解析を行った。Laser Dopplerによる血流量測定の結果、これまで少なくともHrt1^<ko/ko>において術後の血流回復が有為に減少することが明らかになった。以上のことから、Hrt1遺伝子は血管新生に重要な機能を有していることが示唆された。血管内皮細胞のどのような細胞機能にHrt1欠損が影響を与えるのかを解明することが今後重要であると考えられる。以上のことから、成体の血管内皮細胞におけるHrtの病的意義の解明を試みた。(1)最初に、野生型マウスにおける下肢動脈結紮モデルの作成を行ったところ、大腿筋におけるHrt1mRNAの発現上昇が確認されたが、一方Hrt2発現は検出されなかった。(2)Hrt1^<ko/ko>マウスを用いて、下肢動脈結紮モデルの作成と解析を行った。Laser Dopplerによる血流量測定の結果、術後の血流回復が有為に抑制された。そこで、(3)血管内皮細胞のどのような細胞機能にHrt1欠損が影響を与えるのかを明らかにするため、FACS sorterを用いて肺から内皮細胞の分離を試みた。これまでのところ、内皮細胞の分離条件が確立出来たことから、引き続きHrt1^<ko/ko>
F.n菌を用いた慢性歯周疾患を起因とする腸管炎症の粘膜免疫ネットワークの解明

本研究では慢性歯周疾患を起因とした腸炎誘発機序を解明するために、申請者らが確立した歯周病モデルマウスを応用し、Fusobacterium nucleatum (F.n)を用いて歯周病モデルマウスを作製したうえ、生体恒常性を制御する免疫細胞の臓器間(口腔-腸管)ネットワークの解明を行った。結果、有意差を持って歯槽骨吸収量の増加し、形態観察においてリンパ球浸潤を伴った歯槽骨破壊像、また小腸、大腸の粘膜固有層に炎症症状がみられた。加えて、フローサイトメトリー法による免疫細胞の解析を行ない、F.n感染マウスの歯周組織、腸管組織ではマクロファージ、樹状細胞の発現頻度が上昇しているのを確認した。本研究では慢性歯周疾患を起因とした大腸炎誘発機序を解明するために、申請者らが確立した歯周病モデルマウスを応用し、Fusobacterium nucleatum (F.n)を用いて歯周病モデルマウスを作製したうえ、生体恒常性を制御するTh17細胞の臓器間(口腔ー腸管)ネットワークを解明するものであり、現在のところ下記までの実験を行うことができた。1F.n口腔感染による歯槽骨吸収の度合いを測定するために、小動物用のマイクロCTを用いて、歯槽骨の骨密度ならびに歯槽骨吸収について確認を行った。また腸管粘膜組織の形態観察するため、ヘマトキシリン・エオジン染色を行い、病理組織検査を行った。また当初、平成28年度の計画には含めていなかった歯槽骨のアパタイト結晶構造に変化が見られるのかを確認するためにX線回折法用いた結晶構造解析を行い始めた。2F.n口腔感染による歯肉単核細胞(Gingival mononuclear cell; GMC)の動態を解析する為に歯肉粘膜下固有層を単離し、T細胞、樹状細胞、およびマクロファージについて、フローサイトメトリー法により解析を行った。さらに、Thサブセットの解析するために同じくフローサイトメトリー法により制御性T細胞(Treg)の発現頻度や歯肉炎症と破骨細胞の誘導についてRANKLの発現頻度も解析を行った。上記1、2の経時的変化を解析するため、F.n最終感染から1、7、15、30日目の解析を行った。今後、統計学的処理を行える数を実施し有意差があるかを検討する。有意差が認められない場合はデキストラン硫酸ナトリウム(DSS)誘導性腸炎モデルマウスを用いて同様の実験を行うことも視野にいれる。実験の開始が他業務との兼ね合いの都合で3ヶ月程遅れてしまったこと、また平成28年度の計画には入れていなかった歯槽骨のアパタイト結晶構造の解析を現在行っていることもあり、平成28年度中に計画を予定していたELISAでのFusobacterium nucleatum(F.n)特異的抗体価のELISA法での検討、および炎症歯周組織の特定部位を組織切片上から切断・分離し、RNAを採取し定量性リアルタイムPCR法により解析がまだ一部終了していない。本研究では慢性歯周疾患を起因とした大腸炎誘発機序を解明するために、申請者らが確立した歯周病モデルマウスを応用し、Fusobacterium nucleatum (F.n)を用いて歯周病モデルマウスを作製したうえ、生体恒常性を制御する免疫細胞の臓器間(口腔-腸管)ネットワークを解明を行った。その結果、申請者らが以前、確立したPorphyromonas gingivalis (P.g)を用いた歯周病モデルマウスと同様、有意差を持って歯槽骨吸収量の増加が起きていることが確認できた。また、マウス歯周組織、腸管粘膜組織の形態観察をヘマトキシリン。エオジン染色にて行い、リンパ球浸潤を伴った歯槽骨破壊像、腸管粘膜組織では小腸、大腸ともに粘膜固有層に炎症症状がみられた。申請時の実験計画には含まれていなかったマウス歯槽骨のアパタイト結晶構造の変化を確認するためにX線回折法を用いた結晶構造解析を行ったみたが、実験群とコントロール群との間に違いは認められなかった。F.n口腔感染による歯肉単核細胞、マウス腸管の単核細胞の動態を経時的に解析する為に歯肉粘膜下固有層、腸管粘膜固有層を単離し、T細胞、樹状細胞、およびマクロファージについて、フローサイトメトリー(FACS)により解析を行った。その結果、F.n感染マウスの歯肉組織ではマクロファージ、樹状細胞(DC)それぞれの発現頻度が上昇しており、DCサブセットのうちCD11c+ CD11b+およびCD11c+ CD8+に増加が認められた。しかし、腸管組織からはDCサブセットの上昇は認められなかった。これは免疫反応の抑制が働いている可能性が考えられ、制御性T細胞(Treg)の発現頻度の解析をおこなったところ発現の上昇を確認した。以上より、F.nの影響による臓器間(口腔-腸管)ネットワークの一端を確認することができた。

加えて、フローサイトメトリー法による免疫細胞の解析を行ない、F.n感染マウスの歯周組織、腸管組織ではマクロファージ、樹状細胞の発現頻度が上昇しているのを確認した。平成28年度中に終了できなかった項目を早急に行い、引き続き平成29年度の計画を実行していく。新にFusobacterium nucleatum(F.n)が歯槽骨のアパタイト構造に何か変化を及ぼしていないかをX線回折法などを用いて解析を行い始めており、また当大学の理工学部にあるParametric X-ray Radiation (PXR)装置を用いて骨の微細構造に変化が見られるのかを検討していく予定である。組織発生学他業務のとの兼ね合いの都合、研究開始が3ヶ月程遅れてしまい当初の予定よりマウスの購入匹数が少なくなっており、その分の次年度使用額が生じてしまったものである。平成28年度に余ってしまった助成金と平成29年度分として請求した助成金については今後、統計的有意差を出すために必要なマウスの購入また、薬品など消耗品の購入など重点的に充てることに計画をしている。加えて、当大学の理工学部で行う研究にも助成金を充てることを計画をしている。
c-kitがん原遺伝子の発現と機能

精細胞の増殖にc-kitとそのligandによる刺激が重要な役割をはたす事が明らかになったが、精巣においてより強いc-kitの発現がみられるLeydig細胞ではその増殖にも又分化機能の発現にも大きな働きを持たない事が分かった。さらに、始原生殖細胞の増殖はEG細胞よりクローニングしたレセプター型チロシンキナーゼSkyのリガンドであるGas6の刺激により促進される事を見い出した。又、HPVE6E7トランスジェニックマウスにおける精巣腫瘍の発生はc-kitに依存しないがその増殖がc-kitとそのリガンド刺激により促進される事が分かった。マスト細胞におけるc-kitの発現にはmi遺伝子がコードするMITFが関与している事を明らかにした。又c-kit活性化変異が造血系腫瘍の発症に関わっている可能性が強く示唆され、AMLとALLの鑑別にc-kitの測定が有用である事が示された。
計画経済とは何であったのか:ソ連経済発展の貨幣的側面

貨幣・金融市場の存在しないソ連経済は不換通貨の管理において根本的な困難を抱えていると考えられる。文献研究から、1950年代後半までは不換通貨管理の問題は無視され、その後問題の重大性が認識されるものの具体的解決策が見いだせなかったことがわかった。定量的分析は、通貨管理がソ連全期間を通じて期待通りには機能していなかったことを明らかにした。ロシア経済公文書館および米国議会図書館においてソ連経済アーカイブ資料を収集した。この作業によって、1924/25年度から1990年までのほぼすべての国家予算案および遂行実績のデータを体系的にそろえることができた。このデータが体系的に収集さているのは、ロシア以外では、本研究プロジェクトのみと思われる。収集したデータによってソ連経済における貨幣と実物との関係の分析をおこなった。非現金流通と経済発展に関する問題の最初の分析結果は、比較経済体制学会第8回秋季大会において発表した。現金流通と経済発展については、一橋大学経済研究所のディスカション・ペーパーとして最初の成果を発表し、続いて、その拡大・改訂版を当該分野の最高水準の雑誌の一つであるEurope-Asia Studiesに投稿した。本論文は基本的にアクセプトされており、本研究の目的である「計画経済」の非計画性を貨幣的側面から確認するという課題の意義が認められたものと考える。以上の他、収集したソ連時代のデータを利用し、現在のロシア経済の動向を輸出、輸入の観点から分析をおこなった。その成果は、研究年報経済学(東北大)に発表した。ロシア中銀より入手した1922-90年のゴスバンク(国家銀行)バランスシートのデータを用いてソ連貨幣・金融経済の分析をすすめた。Europe-Asia Studies誌掲載(印刷中)の論文はそのうちの現金通貨流通についての研究成果である。非現金通貨(預金通貨)流通についての分析結果もすでに論文としてまとめ,現在投稿中である。今年度は,予定外の学内業務(教務委員長)と震災の影響のため予定していたロシア経済公文書館における資料収集をおこなえず,今年度の必須課題としていた1951-54年の国民所得データの収集はできなかった。このデータの欠如により,研究の最終段階にはいたらなかった。一方,ロシア中央銀行がとりまとめたソ連全期間の国家銀行バランスシート・データを入手できたことにより,本研究のためのデータベースは大幅に拡充された。国家銀行バランスシート・データの分析をすすめることができたのは本年度の大きな成果であった。次年度,上記の1951-54年国民所得データを収集できれば,最低限ではあるが,ソ連期全体をカバーする実物-金融分析用のデータセットができあがる。このデータセットにより,VARモデル,資金循環モデルによりソ連期の貨幣と実物との関係の分析おこない,最終的な結論を得る。ロシア国立経済公文書館に所蔵されているソ連期通貨統計資料を発掘し、その資料をもちいてソ連経済発展の貨幣的側面を定量的に分析するという課題は基本的に達成された。ソ連期の通貨管理、金融経済の定量的分析から、貨幣市場、資本市場、為替市場を排除したソ連経済は、必然的に貨幣市場、資本市場、為替市場から得られる情報を不換通貨管理に利用できず、これらの市場において行使されるべき政策手段も持たない。すなわち、ソ連経済が不換通貨を管理するためのメカニズムを本質的に欠いていたことをデータによる裏付けを持って立証できたと考える。ソ連が社会主義計画経済の運営に失敗したのではなく、貨幣市場・資本市場を排除する社会主義計画経済は不換貨幣を管理する機能を欠いているためにソ連の経済運営は破たんした。予定していたソ連マクロ経済フレームワークによる反事実的シミュレーション分析にまでは到達できなかった。2011年の震災によりロシア国立経済公文書館における資料調査が行えなかったことの影響が大きい。1970-80年代の国家予算データ、ソ連期全期間についての国際収支データはなお欠如したままである。また、1950年代前半の生産国民所得データの発掘が遅れ、この時期に生じた資金循環の変化を定量的に示すことができなかった。この理由で、国家銀行(ゴスバンク)バランスシートによる非現金通貨供給管理の分析、1957-62年のソ連資金循環の再構成、実物経済と金融経済との相互関係の定量的分析という3つのトピックスを3本の論文とするにはいたらなかった。
膀胱癌の糖鎖と細胞接着に関する研究

細胞表面に糖蛋白質性、糖脂質性に存在する糖鎖は細胞間識別現象を通じて転移に関与する可能性がある。SSEA-1,シアリル2量体Le^XおよびLe^Xとtype2のH抗原を識別するロータスレクチン(LTA)は正常尿路上皮では雨傘細胞以外には発現していなかった。これら糖鎖エピトープの原発巣における発現の程度と膀胱癌の転移能はよく相関した。たとえば、リンパ節転移はLTAと強く反応する場合はみられたが、弱く反応するか反応しない場合はみられなかった。また、LTAとの反応性は膀胱癌のステージや予後とも相関した。糖蛋白質と膀胱癌の転移との関連性をさらに解明するためにモノクロナール抗体を作成した。ヌードマウスの皮下に移植したとき,肺に転移を起こす培養膀胱癌細胞BOYからLTA-アガロースアフィニテイークロマトグラフィーによってLTAリセプターを抽出し、それを免疫原とすることによりモノクロナール抗体を作成した。得られた抗体の中で、MM4が最も転移能と関連の強い発現を示した。検討の結果、LTA,SSEA-1,シアリル二量体Le^XおよびMM4抗原のなかで転移能と最もよく相関したのはMM4抗原であった。MM4 Abと膀胱癌との反応性をウエスタンブロテイングによって検討した。MM4 Abは免疫原として用いた培養膀胱癌細胞BOYからのLTAリセプターとは60KDaの糖蛋白質とのみ反応した。膀胱癌の原発巣や転移リンパ節では他のバンドがみられたが,60KDaの糖蛋白質が主要なバンドであった。こうして、60KDaの糖蛋白質がMM4抗原を担う分子であると結論した。一方,シアリル2量体Le^Xは60KDaと42KDaの糖蛋白質上に存在していた。そこで,転移関連抗原であるMM4抗原やシアリル2量体Le^Xを担う60KDaの糖蛋白質が膀胱癌の転移に重要な役割を果たしていると結論した。細胞接着に関わるセレクチンが腫瘍細胞上のこれらの糖鎖エピトープを誤って識別してしまい癌の転移を促進すると考えるのは極めて魅力的である。
アショー・チン語の記述言語学的研究

平成26年度は,5月,および8月から9月にかけてミャンマー連邦ヤンゴン市インセイン地区でフィールドワークを行い,アショー・チン語(チベット・ビルマ語派クキ・チン語支南部チン語群)の文法事項に関する聞き取り調査を行ったほか,様々な物語や文例のデータも収集できた。昨年度に引き続き,ヤンゴン市内にあるアショー・チン語話者のキリスト教団体Asho Chin Baptist Conferenceおよびアショー・チン言語文化委員会から全面的な協力を受けての言語調査であったが,今回は研究結果の話者コミュニティー還元にあたり,現代のアショー・チン語における言語使用状況や,アショー・チン語の学校教育への導入計画,各種方言をはじめとした社会言語学的な情報や,アショー・チン語話者を取り巻く文化および政治に関する背景事情についても教わった。一方,日本国内では昨年度に引き続きアショー・チン語初等読本の翻訳作業を進めたほか,フィールド先で収集した言語データの整理・分析を行いながら,東京大学言語学論集や九州大学言語学論集に論文を投稿した。また,現地研究者および日本国内の言語研究者からの助言を受け,日本言語学会第148回大会では『アショー・チン語における人称標示とinverse marker ma-』と題してアショー・チン語における逆行に関する口頭発表も行っている。現在は,これまでに得られた言語データをもとに,アショー・チン語の参照文法と語彙集を執筆しているほか,アショー・チン語による物語など,各種言語データをアーカイブスに登録するための準備も進めている。26年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は,主にミャンマー連邦でのフィールドワークを通して,アショー・チン語(チベット・ビルマ語派クキ・チン語支南部チン語群)のデータおよび関連文献の収集に努めた。2012年の5月に1週間,7月に2週間,8月から9月にかけて1か月,そして2013年の1月に3週間,ミャンマー連邦のヤンゴン市に滞在して基礎的な言語調査を行った。ヤンゴン市内では,アショー・チン語話者のキリスト教団体AshoChinBaptistConferenceとアショー・チン言語文化委員会を訪問し,調査の計画と方法,および調査結果の現地話者コミュニティーへの還元方法について話し合った。また,言語調査に協力して下さる話者の方を紹介していただき,アショー・チン語基礎語彙の調査をはじめ,言語使用状況に関するインタビュー,アショー・チン文字の習得,エリシテーションによる文例収集,アショー・チン語による物語の録音と書き起こし,アショー・チン語話者の多く住む村(ヤカイン州南部)への訪問を行った。今後,調査結果を順次公開していく予定である。更に,アショー・チン語の周辺言語である,ミゾ語(中部チン語群)の記述言語学的な調査と習得を目的として9月下旬から12月下旬にかけてインド共和国ミゾラム州のアイゾール市に渡航・滞在した。クキ・チン語支に属する諸言語は,北部チン語群,中部チン語群,南部チン語群という3種類のグループに大きく分かれる。博士課程ではティディム・チン語という北部チン語群の言語を専門として研究してきたため,既に北部チン語群の言語を研究する上で充分なデータは手元にある。しかし,中部チン語群の言語学的手法に則ったデータは乏しく,今後南部チン語群(アショー・チン語)の研究も併せてクキ・チン語支の包括的な研究を進めていく為には中部チン語群の言語を調査することも必要だと考えた。そこで,ミゾラム大学ミゾ語科の受け入れのもと,ミゾ語の基礎語彙調査,文例収集と言語資料の収集を行うことにした。平成25年度は,主にミャンマー運邦ヤンゴン市でのフィールドワークを通してアショー・チン語(チベット・ビルマ語派クキ・チン語支南部チン語群)のデータ収集に努めたほか,日本国内で言語データの整理を行った。平成25年の8月から9月にかけて2週間,そして平成26年の3月に2週間,ミャンマー連邦のヤンゴン市に滞在しながら言語調査を行った。ヤンゴン市内にあるアショー・チン語話者のキリスト教団体Asho Chin Baptist Conferenceおよびアショーチン言語文化委員会による全面的な協力のもと調査を進めた。具体的にはアショー・チン語における音韻体系の見直しと基礎語彙の調査,言語使用状況に関するインタビューさらにはアショー・チン語の初等読本の翻訳作業を行った。これまでの調査結果は国内外で発表した。国内ではチベット=ビルマ言語学研究会第31回会合でアショー・チン語の調査状況を報告をした。また,インド共和国アッサム州グワバティでの北東インド言語学会第8回会合にてinverse markerに関する発表を行った。また, 2014年3月にはNPO法人「地球ことば村」のrことばのサロン」にて"インド・ミャンマー国境地帯に広がるー大言語群,チン語のはなし"と題して一般向け講演を行った。

一方,日本国内では昨年度に引き続きアショー・チン語初等読本の翻訳作業を進めたほか,フィールド先で収集した言語データの整理・分析を行いながら,東京大学言語学論集や九州大学言語学論集に論文を投稿した。また,現地研究者および日本国内の言語研究者からの助言を受け,日本言語学会第148回大会では『アショー・チン語における人称標示とinverse marker ma-』と題してアショー・チン語における逆行に関する口頭発表も行っている。現在は,これまでに得られた言語データをもとに,アショー・チン語の参照文法と語彙集を執筆しているほか,アショー・チン語による物語など,各種言語データをアーカイブスに登録するための準備も進めている。26年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度は,ミャンマー連邦のヤンゴン市とヤカイン州で主にアショー・チン語(南部チン語群)の言語調査を行った。また,インドのミゾラム州でも長期間にわたるフィールドワークを行い,アショー・チン語の周辺言語であるミゾ語(中部チン語群)の語彙調査と簡単な文法調査を行った。アショー・チン語の文法を記述する上で必要な言語データが収集できて,今後のクキ・チン語支の包括的な研究に必要なデータを収集した点において,研究がおおむね順調に進展したと言えよう。平成25年度はミャンマー連邦ヤンゴン市にてアショー・チン語の言語調査を進め,文法記述に必要な言語データを収集してきた。今後の文法書執筆や言語データ公開に不可欠なデータが収集できた点において,研究がおおむね順調に進展したと言えよう。平成24年度の現地調査で得られたアショー・チン語のデータの管理と分析を行い,言語学に関係する研究者から指導や助言,あるいは他の文法記述を基にアショー・チン語文法書の内容や構成を検討したいと考えている。また,調査あるいは分析の途中で言語学的に興味深い現象が見られた場合には,関連する国際学会で発表し,各種論集への論文投稿も積極的に行っていきたいと考えている。なお,不足している言語データを収集する為,夏季に2カ月程度フィールドワークを実施する予定である。平成25年度にフィールドワークを通して得られたアショー・チン語のデータの管理と分析を行いながら,アショー・チン語の文法記述を続けていく予定である。また,アショー・チン語の人称標示や動詞の形態などに関する報告を国内外の学会および論集にて行いたいと考えている。なお,不足している言語データを収集する為,夏季と春季に短期間のフィールドワークも実施する予定である。
非A非B型肝炎起因因子の同定

非A非B型肝炎の起因因子はそれまでの種々の状況証拠からウイルスであることが想定されていたが、通常のウイルス分離方法や、抗原抗体検出系に基づく方法でその因子を同定することができなかった。共同研究が開始された1982年から、感染したチンパンジ-の肝組織または、血漿からRNAを抽出し、そのcDNAをライブラリ-化して、非A非B型肝炎ウイルス遺伝子の断片を得ることを試みた。1988年に、カイロンのグル-プが、λgtllを用いたイムノスクリ-ニングによりその発現産物が非A非B型肝炎患者の血清と特異的に反応するcDNA断片を得ることに成功した(Choo et al.Science 244,359ー362;文献1)。日本で全く独立にそれまでに収集、解析されていた輸血後非A非B肝炎の患者の血清中に病型に対応してこの抗体の産生が認められた。更にこの患者に実際に輸血された血液の供血者にもこの抗体が検出された(文献2及び4)。この抗体は日本の非B型の肝がん患者の実に6070%にも検出される(文献3)。カイロングル-プはgene walkingによりこのcDNAが長さ約9.5キロベ-スの一本鎖RNAをそのゲノムとしてもつ全く新しいRNAウイルスであることをつきとめ、これをC型肝炎ウイルス(HCV)と名付けた(Choo et al.1989,Science 244,359ー362;Choo et al.1991,Proc.Natl.Acad.Sci.in press)。一方予研側は、このカイロンとの共同研究から塩基配列の情報を得て、日本人の供血者からHCVのcDNA断片を直接PCR法によって増幅、クロ-ン化した(文献6、7、9、12)。つまり日本とアメリカとで、各々ヒトと実験的に感染させたチンパンジ-の血液からHCVcDNAを得ることができた。この2つのHCVのcDNAの塩基配列とアミノ酸の配列を比較、更に類似していることが以前から提唱されているフラビウイルスのそれと比較した。フラビウイルスとの類似性もさることながら、ウシ下痢症ウイルスなどペスティウイルスとの一部の相同性もみつかり、これら3種のウイルスが互いに類似しながら全く別のウイルスであることが明らかとなった。この間、カイロングル-プは、HCVの非構造遺伝子NS4の領域を酵母で発現させ、その発現産物を利用した特異抗体検出ELISAを作出した。この検査法の有用性を世界で最初に示したのがこの協同研究による日本での患者及び、供血者での血液検査であった。その結果1989年の11月、日本が世界に先駆けて、このHCV抗体アッセイを輸血のスクリ-ニングに用いることとなった。このHCV抗体アッセイ系はその後世界中で輸血用血液のスクリ-ニングに用いられるようになっているが、C型肝炎の診断には必ずしも適さない点があった。我々の初期の検討により抗体が陽転するまでに数カ月を要することが示されていたからである。日本でのクロ-ン化されたHCVの遺伝子構造を詳細に調べた。まず、ウイルスの構造蛋白をコ-ドする構造遺伝子をサルCOS細胞でSRαプロモ-タ-の統御下で組換え、更にバキュロウイルスを用いて昆虫細胞でヌクレオキャプシド(コア)蛋白を発現させることに成功した(文献14、15、16)。これらの蛋白に対する抗体が患者血清中に特異的に検出されることにより同定することができた。これにより遺伝子の機能を同定されたのみならず、この蛋白を用いたELISAが、C型肝炎の早期診断やより感度の高い輸血血液のスクリ-ニングにも応用可能であることが示された。現在世界各国の協同研究者とその有用性を検討している。このコア蛋白にひきつづきエンベロ-プ蛋白の発現実験にも成功した(論文準備中、Matsuura et al)。分子量約35キロダルトンの糖蛋白である。この蛋白及びその下流にあるNS1の領域の発現産物を用いて今後、ワクチンやγーグロブリン製剤の実用化を検討してゆきたい。

カイロングル-プはgene walkingによりこのcDNAが長さ約9.5キロベ-スの一本鎖RNAをそのゲノムとしてもつ全く新しいRNAウイルスであることをつきとめ、これをC型肝炎ウイルス(HCV)と名付けた(Choo et al.1989,Science 244,359ー362;Choo et al.1991,Proc.Natl.Acad.Sci.in press)。一方予研側は、このカイロンとの共同研究から塩基配列の情報を得て、日本人の供血者からHCVのcDNA断片を直接PCR法によって増幅、クロ-ン化した(文献6、7、9、12)。つまり日本とアメリカとで、各々ヒトと実験的に感染させたチンパンジ-の血液からHCVcDNAを得ることができた。この2つのHCVのcDNAの塩基配列とアミノ酸の配列を比較、更に類似していることが以前から提唱されているフラビウイルスのそれと比較した。フラビウイルスとの類似性もさることながら、ウシ下痢症ウイルスなどペスティウイルスとの一部の相同性もみつかり、これら3種のウイルスが互いに類似しながら全く別のウイルスであることが明らかとなった。この間、カイロングル-プは、HCVの非構造遺伝子NS4の領域を酵母で発現させ、その発現産物を利用した特異抗体検出ELISAを作出した。この検査法の有用性を世界で最初に示したのがこの協同研究による日本での患者及び、供血者での血液検査であった。その結果1989年の11月、日本が世界に先駆けて、このHCV抗体アッセイを輸血のスクリ-ニングに用いることとなった。このHCV抗体アッセイ系はその後世界中で輸血用血液のスクリ-ニングに用いられるようになっているが、C型肝炎の診断には必ずしも適さない点があった。我々の初期の検討により抗体が陽転するまでに数カ月を要することが示されていたからである。日本でのクロ-ン化されたHCVの遺伝子構造を詳細に調べた。まず、ウイルスの構造蛋白をコ-ドする構造遺伝子をサルCOS細胞でSRαプロモ-タ-の統御下で組換え、更にバキュロウイルスを用いて昆虫細胞でヌクレオキャプシド(コア)蛋白を発現させることに成功した(文献14、15、16)。これらの蛋白に対する抗体が患者血清中に特異的に検出されることにより同定することができた。これにより遺伝子の機能を同定されたのみならず、この蛋白を用いたELISAが、C型肝炎の早期診断やより感度の高い輸血血液のスクリ-ニングにも応用可能であることが示された。現在世界各国の協同研究者とその有用性を検討している。このコア蛋白にひきつづきエンベロ-プ蛋白の発現実験にも成功した(論文準備中、Matsuura et al)。分子量約35キロダルトンの糖蛋白である。この蛋白及びその下流にあるNS1の領域の発現産物を用いて今後、ワクチンやγーグロブリン製剤の実用化を検討してゆきたい。
HLA-DQ拘束性アレルゲン抗原特異的T細胞クローンによる免疫応答の調節

T細胞はIL-4やIL-5を産生しIgE抗体産生と好酸球活性化を調節すると考えられているが、これらサイトカイン産生能とT細胞活性化におけるMHC拘束性との関連は不明である。そこで、スギ花粉症患者からHLA-DQ拘束性スギ抗原特異的T細胞クローン(TCC)を作成し、その機能を解析した。TCCは、スギ花粉症患者の末梢血単核球をスギ抗原で刺激し限界希釈法により樹立した。MHC拘束性は各種抗HLA classII抗体による阻害試験で検討した。サイトカイン産生能はTCCを4000rad照射した末梢血単核球の共存下でスギ抗原と3日間培養した上清中のIFN-r、IL-4、IL-5を検討した。In vitro IgE抗体産生は、B細胞を単球とT細胞と共にスギ抗原刺激下に10日間培養した上清中のIgEをRIAにて測定した。まずこのTCCの細胞表面マーカーはCD3+、CD4+、TCRalphabetaのヘルパーT細胞でCD29+、CD45RO+のメモリー細胞であった。このTCCのスギ抗原による増殖反応は抗HLA-DQ抗体で抑制され、抗HLA-DR抗体と抗HLA-DP抗体では抑制されなかった。サイトカイン産生能は抗原刺激によりIFN-r、IL-2、IL-4、IL-5全てを産生しTh0細胞のサイトカイン産生を示した。さらに本TCCの共存下ではIgE抗体産生が抑制され、この抑制は抗IFN-r抗体により解除された。以上から、HLA-DQ拘束性T細胞クローンは機能的にIFN-r産生優位であり、アレルギー性炎症に抑制的に機能することが示唆される。
古代インディオ文明における育児習俗と教育-アステカ社会を中心に-

本研究は、古代インディオ文明における教育の思想、育児習俗、制度について紹介するとともに、現代の教育学的観点からみたその特色を考察することを目的とする。14、15世紀世紀にメキシコ中央部にアステカ王国とよばれる広大な地域を支配したアステカ族は、その首都テノチティトラン(現在のメキシコ市)を中心に、高度な都市文明を築き上げており、また、かなり高度に組織化された独特な教育の制度をもっていた。こうした土着の教育の伝統と制度は、スペイン人による征服、植民地化の過程のなかで破壊されたが、その当時の育児習俗や教育の様子を書き記したさまざまな文献資料が残されており、それらを基にして、約五百年前の先スペイン期のアステカ族の教育の実像を再構成することが可能になっている。具体的には、次のような研究作業を行った。1.アステカ文明に関する文献(英語、スペイン語、邦語)約40点を収集し、整理した。2.その成果の一部を、教育史学会第37回大会において「先スペイン期インディオ文明の教育史的研究の可能性」の題で口頭発表をおこなった。3.アステカ族の伝統的な教育制度と征服・植民後のスペイン人が展開した対インディオの教育事業の連続性と断絶という観点の分析を中心にして論文「ラテンアメリカ教育史の原像」を執筆した。4.メキシコで編集された『先スペイン期アステカ族の教育関係史料集』(主に16世紀初頭の征服直後に、この文明に直接的に接したスペイン人たちが書き留めた記録類からインディオの教育習俗や制度に関する記述の部分をひろいだし集成したもの)を基礎テキストとして、その主要部分を翻訳紹介した成果報告書を作成した。本研究は、主としてメキシコにおける最近のアステカ文明研究の成果を基礎して、わが国の教育学研究においてはほとんど知られることがなかった古代インディオ文明における教育の思想、習俗、制度を紹介するとともに現代の教育学的観点からみたその特色を考察することを目的とする。1992年が「アメリカ発見」五百周年、また93年が国連の「国際先住民年」とされたことに関連して、最近、スペイン・中南米諸国のみならず、わが国においても、大航海時代、征服・植民地化の前後のラテンアメリカのインディオ文明に関係する文献の出版事業や古典的著作の復刻などが盛んになっている。本年度は、こうした関連文献(スペイン語、英語、邦語)を体系的に収集し整理する作業を中心におこなった。1.本主題に直接関連する分析作業としては、メキシコで編集された『アステカ族の教育に関する関係史料集』(十六世紀当時、はじめてこの文明に直接的に接触したスペイン人たちが書き留めた記録類からインディオの教育習俗、制度に関する史料をひろいだし集成したもの)から訳出、分析を行った。2.また、その成果の一部を、教育史学会第37回大会(於山形大学)において「先スペイン期インディオ文明の教育史的研究の可能性」の題で口頭発表を行った。3.アステカ族の伝統的な教育の慣習や制度と征服・植民後にスペイン人の展開した対インディオの教育事業の連続性と断絶という観点の分析を中心として、論文『ラテンアメリカ教育史の原像』を執筆した。

こうした土着の教育の伝統と制度は、スペイン人による征服、植民地化の過程のなかで破壊されたが、その当時の育児習俗や教育の様子を書き記したさまざまな文献資料が残されており、それらを基にして、約五百年前の先スペイン期のアステカ族の教育の実像を再構成することが可能になっている。具体的には、次のような研究作業を行なった。1.アステカ文明に関する文献(英語、スペイン語、邦語)約40点を収集し、整理した。2.その成果の一部を、教育史学会第37回大会において「先スペイン期インディオ文明の教育史的研究の可能性」の題で口頭発表をおこなった。3.アステカ族の伝統的な教育制度と征服・植民後にスペイン人が展開した対インディオの教育事業の連続性と断絶という観点の分析を中心にして論文「ラテンアメリカ教育史の原像」を執筆した。メキシコで編集された『先スペイン期アステカ族の教育関係史料集』(主に16世紀初頭の征服直後に、この文明に直接的に接したスペイン人たちが書き留めた記録類からインディオの教育習俗や制度に関する記述の部分をひろいだし集成したもの)を基礎テスキストとして、その主要部分を翻訳紹介した成果報告書を作成した。
四次の非線形光学過程による表面振動分光法の開拓

本研究の目的は、四次の非線形光学過程を用い、赤外プローブを用いないあらたな表面振動分光法の開発を目指した基礎研究を行う。一般に非線形光学過程の確率は次数の増大に伴い小さくなっていく、このため実際にこのような光学過程が分光手法として使用に耐ええるかは、未知である。この点の確認が研究の主たる目標である。上記の目標を実現するため、16フェムト秒の波長可変光源を用いた四次の非線形分光用の測定装置を作製した。この装置を用い、プローブ光として可視光のみを用いる界面選択的な振動スペクトルの測定に成功した。以下に測定の概略を述べる。四次の非線形光学測定は、極短パルスを使用したポンプ-プローブ法の配置で行った。時間遅延を制御しながら、ポンプ光とプローブ光を試料面に照射し、プローブ光から発生する倍波(紫外光)強度を遅延時間の関数として測定する。倍波強度は、界面の分子振動を反映した振動構造を有するので、これをフーリエ変換することによって界面の振動スペクトルが得られる。この測定原理にしたがい、ポンプ光およびプローブ光としては時間幅16フェムト秒波長600nmの光を用い、試験測定用の試料としてオキザジン色素水溶液の表面を用いた。その結果、0700cm-1の領域の水溶液の表面の色素のスペクトルを、得ることができた。これは、四次光学過程を用いた界面選択的な手法による、世界初の界面の分子の振動スペクトルの測定である。今後この手法の適用範囲をさらに拡大するための研究を継続する予定である。本研究の目的は、より高い三次、四次の非線形光学過程を用い、赤外プローブを用いないあらたな表面振動分光法の開発を目指した基礎研究を行う。可視光のみを使用したラマン遷移を伴う、四次の非線形感受率X(4)(ω_1-ω_2+2ω_3,ω_1,ω_2,ω_3)を利用した四次の非線形光学過程が、表面振動分光の手段として利用可能であるかを検討する。この光学過程には、次の2つのパターンのプローブ光の使用が考えられる。(1)ω_1、ω_2、ω_3すべて時間幅約フェムト秒の光を用いる。(2)ω_1、ω_2は時間幅約フェムト秒の光を用い、ω_3として時間幅が数ピコ秒、周波数幅が数cm^<-1>の光を用いる。プローブ法(1)の場合は、全てのプローブ光の尖頭出力が高く、高次の非線形光学過程の観測に有利である。しかし一方、周波数分解能が時間幅で制限される。プローブ法(2)の場合はω_3光の周波数幅が狭いため周波数分解能が優れているが、ω_3の時間幅がピコ秒であるため、使用できる尖頭出力が(1)よりも低い値に制限される可能性がある。つまり四次の信号が観測可能であるかを確認するという観点では、やや不利な選択である。以上の得失を鑑み、平成14年度は信号検出という点で優れたプローブ法(1)に関してレーザーシステム(時間幅、波長)、および検出方法(ホモダインおよびヘテロダイン)などに関して検討し測定システムの設計を行った。平成15年度に設計に従いシステムを実装し、四次の信号の検出を試みる。
制御性T細胞の強化による非アルコール性脂肪肝炎制御の実現とその免疫学的機構の解明

非アルコール性脂肪肝炎(NASH)は、有病率が人口の数%から10%と高く、肝細胞がん・肝硬変の基礎疾患であるばかりか心血管事故の危険因子ともなる重要な肝疾患である。しかし、現在のところNASHに対する有効な治療法は確立されていない。治療法が確立しない原因の一つにNASH発症の病態が解明されていないことがあり、NASHの病態解明が進まない原因としてヒトNASHに近似した動物モデルがないことが挙げられる。このため、我々はヒトNASHに近似したマウスモデルを確立し、NASH発症の新規的病態を解明し、その観点から新規的治療の可能性を検討することを本研究の目的とした。研究代表者は、ヒトでの高レプチン状態とNASHの関連に注目し、高レプチンNASH動物モデルマウスを作成した。このNASHモデルマウスを用い、肝在住ヘルパーT細胞が活性化すると単純性脂肪肝からら脂肪肝炎(NASH)への進展するを明らかとした。肝在住ヘルパーT細胞の活性化に肝在住制御性T細胞の免疫抑制機能が低下すること、生理的条件下での低下の原因として、高レプチン状態があることを発見した。研究代表者はさらに、この高レプチンNASH動物モデルにおいて、制御性T細胞の質的・量的強化がNASHを抑制すること、特に炎症細胞浸潤と肝線維化を抑制することを明らかした。さらに、NASHでは制御性T細胞の減弱によりヘルパーT細胞が活性化、これにより、自己抗体が出現している可能性が見いだされた。この知見を基に申請者は抗PLCO抗体が非アルコール性脂肪肝炎の特異的診断マーカーとなることを検出し、特許を出願した(特願205-46367脂肪肝疾患の患者の検査方法)。肝硬変の基礎疾患であるばかりか心血管事故の危険因子ともなる重要な肝疾患である。我々はすでに単純性脂肪肝からら脂肪肝炎への進展を肝在住制御性T細胞が抑制しており、肝在住制御性T細胞が減弱すると脂肪肝炎が発症することが明らかとなり、これを論文にて報告した(Hepatology, on submittion)。本成果は第1回肝臓と糖尿病・代謝研究会【東京、2014年7月】にて発表、学術奨励賞を受賞した。肝在住制御性T細胞の免疫抑制機能が生理的条件下で減弱する原因として、高レプチン状態があることを発見、論文を投稿している。平成26年度研究計画は、この高レプチンNASH動物モデルにおいて、制御性T細胞の質的・量的強化し、NASHを制御することを観察することにあった。我々はすでにこの目標を達成し、制御性T細胞の強化が脂肪肝炎の重症度、特に炎症細胞浸潤と肝線維化を抑制することを明らかした。また、NASH発症に関する制御性T細胞の免疫抑制機能分子としてCD25によるIL2の吸収があることを明らかにした。これらを論文にまとめ、投稿している。

平成27年度研究計画は、1.制御性T細胞の免疫抑制性機能分子を強化し、NASHを制御すること、および、2.T細胞の活性化を抑制しうる低分子阻害薬を投与し、NASHを制御することであった。このうち、1に関してNASH発症に関する制御性T細胞の免疫抑制機能分子としてCD25によるIL2の吸収があることを明らかにした。このため、当該研究は当初の計画以上に進展したと判断した。高レプチン状態により肝在住制御性T細胞の免疫抑制力が減弱すると肝臓への炎症細胞浸潤、繊維化が進展することが明らかとなった。またこれは制御性T細胞の強化により改善・抑制が期待されることを示した。上記成果を踏襲し、新規制御性T細胞の免疫抑制性機能分子強化法、低分子阻害薬によるT細胞活性化抑制法を検討する予定である。本課題の中心をなす遺伝子改変マウスに微生物感染が認められたため、現在クリーンナップ処置をしている。次年度使用額917,689円はこのクリーンナップ費用に充当する予定である。917,689円を遺伝子改変マウスの微生物感染に対するクリーンナップ費用に充当する。