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ダイヤモンドＮＶ中心における量子情報の電気的制御に向けた研究

NV中心は、固体系では唯一、室温で単一スピンの観測及び操作が可能で、量子情報や磁気センサー等の分野で注目される。近年、特にNV中心の電荷状態制御について関心が持たれている。電荷状態は光励起によりStochasticに変化することが報告された。例えば532 nmの光励起では、-1価の電荷状態(NVー)と中性の電荷状態(NV0)の割合が、定常状態ではNVー:NV0=3:1である。光照射中の電荷状態のStochasticな変化は光学特性やスピン特性に大きな影響を与えるため、その制御は非常に重要である。また光励起による電荷状態の変化により核スピンのT2が室温で1秒を超えたという報告もなされた。電気的な電荷制御では更なる変化の高速化と効率向上により、更なるT2の長時間化が期待されるため、その実証研究は重要である。今回我々は単一NVーの電荷状態を電気的に初めて制御することに成功した(PRX 2014)。p-i-nダイヤモンド半導体を用い、i層に形成された単一NV中心に電圧を印可して電流を注入し電荷状態を変化させる。電荷状態のシングルショット測定設備を立ち上げ、ほぼ100%の確率でNVーからNV0に制御したことを定量的に示すことができた。これまで光照射と電気的操作を同時に行いながら電荷を制御した報告例はあったが、純粋に電気的効果のみでの操作、及び定量的に電荷の変化量を明らかにした点も初である。またdeterministicに純粋状態への生成を電気的に制御できた点も重要である。電荷変化速度は0.72 /(マイクロ秒)と見積もられ、遠い13C核スピンの電気的デカップリングの観点からは十分速い変化が達成できた。一方、暗状態では0.45秒以上安定なことが示された。成果は将来の量子ビットの速い電気的制御、電気的制御による量子メモリ時間の長時間化、センサー、単電子デバイス等にとって重要な結果である。25年度が最終年度であるため、記入しない。ダイヤモンド中の単一NV中心は優れたスピン特性及び光学特性を有し、近年注目されている。我々はこの優れた系を発展させるため、固体での特徴である半導体特性を生かし、スピンの電気的制御に関する研究を行っている。平成24年度はNV中心が1価の負に帯電した状態(NV-)の電荷状態の制御に成功した。これまでアンサンブルでの成功例は報告されていたが、単一のNV中心での成功は初めての例である。現在論文投稿準備中である。具体的には我々は単一NV中心からのみの発光を検出するための高品質層(i層)をボロンドープp型層とリンドープn型層で挟んだ試料を作製した。これまでアンサンブルでNV-の電荷状態の制御に成功した例では不安定な表面伝導層を利用したものであったが、これに比べ我々の試料では高電界印可でも安定である。昨年ハーバード大らのグループから電荷状態の変化を速くすることにより核スピンのコヒーレンス時間の長時間化に成功した報告がなされた(Science, 336, 1283 (2012))。これはレーザー励起によるイオン化を利用したものであり、高いパワーの光励起による温度上昇がコヒーレンス時間の長時間化の限界を与えていた。この観点からは電気的な制御を高速に効率よくできることが技術面からは重要で、その機構の理解は学術的に重要である。

我々は平成24年度に時間分解の測定を導入し、NV-から中性状態のNV中心(NV0)へ変化のダイナミクスを世界で初めて明らかにした。電流注入による電荷の変化は核スピンのコヒーレンス時間の長時間化の研究で見積もられた変化速度と同レベルの値が実現していることを示すことができた。またNV-とNV0間の電気制御では速度が著しく違うことを明らかにした。これは機構解明という点で重要である。また、計画通り、電気検出磁気共鳴(EDMR)装置の立ち上げも行えた。本研究の主眼である電気的操作に関連し、NV中心が1価の負に帯電した状態(NV-)の電荷状態の制御に成功した。今後のスピンの制御等に結びつく大きな一歩であると考えている。また、計画通り、電気検出磁気共鳴(EDMR)装置の立ち上げも行え、スピン状態の検出に向けた研究も順調に進んでいる。平成24年度はおおむね順調に計画を進めることができており、平成25年度も計画通りに進めたいと考えている。特に、スピン状態の電気的検出に関しては装置が立ち上がってきているため、平成25年度も測定を進め研究を推進していきたい。電気的なスピンの制御に関しても実験的な準備ができてきており、研究を推進していきたい。25年度が最終年度であるため、記入しない。
胃癌の新規診断,化学療法を目指したES細胞特異的Ras,Erasの機能解析

われわれが独自に作製したヒトERas抗体を用いた免疫組織染色を胃癌142症例に行い,ERas発現を臨床病理学的に検討した.ERas発現と組織型の間には有意な相関は認めなかったが,リンパ節転移(p<0.05)および肝転移(p<0.001)と有意な正の相関を認めた.分子生物学的検討からは,ERas発現により胃癌細胞の転移・浸潤能が増強することが示された.またERas発現による胃癌細胞の形態変化,FibronectinやVimentinなどの間葉系マーカーの発現増強,E-cadherinなどの上皮マーカーの発現抑制などから,ERasは腫瘍転移の重要なメカニズムの一つとされている上皮間葉移行を誘導することが示唆された.以上の結果から胃癌においてERasは,上皮間葉移行を誘導することにより転移能を獲得していると考えられた.なおsiRNAを用いた検討では,ERasのkockdownにより間葉上皮移行が誘導される結果が得られた.ヌードマウス(BALB/c Slc-nulnu)を用いた腫瘍皮下移植モデルの検討では,ERas高発現胃癌細胞株で腫瘍形成能および増殖能が有意に増強されていた.また免疫不全マウス(Nod-skid mouse)を用いた転移モデルの検討から,ERas高発現胃癌細胞株では有意に転移能が増強されており,臨床病理学的検討および分子生物学的検討の結果を支持するものであった.以上の結果から,胃癌においてERasは,浸潤・転移を誘導する重要な因子の一つであり,胃癌の予後診断マーカー,胃癌治療の標的因子となりうると考えられた.ERasの標的遺伝子の検索のため,胃癌細胞株GCIYおよびERas遺伝子を高発現させたGCIYを用いたマイクロアレイ解析を行った.マイクロアレイ解析の結果,ERas発現はいくつかの間葉系マーカーの発現を誘導する一方で上皮マーカーの発現を抑制し,上皮間葉移行を誘導していることが示唆された.われわれはERasの発現により上皮間葉移行において重要な役割を果たしているmoleculeであるE-cadherinの発現が抑制される点に注目した.定量的RT-PCRおよびwestern blotを用いた実験においてERas発現によりE-cadheinの発現が抑制されることをダイレクトに確認した.さらに,われわれが独自に作成したヒトERas抗体を用いた胃癌組織の免疫組織染色を行い,ERas発現とE-cadherin発現の関連いついて検討したところ,これらの発現が逆相関していることを見出した。また臨床病理学的検討からERasの発現と胃癌肝転移に有意な正の相関を認めた.ERasの機能解析の結果からは,ERas発現により胃癌細胞の足場非依存性発育能,浸潤能が増強することが示された,以上の分子生物学的検討,および臨床病理学的検討の結果からERas発現は胃癌の転移能を増強し,肝転移を誘導することが示唆された.9種類の胃癌細胞をDNAメチル化阻害剤,5-Aza,またはヒストン脱アセチル化酵素阻害剤,Tricostatin Aで処理し,ERas発現の変化を検討した.いくつかの胃癌細胞株において,薬剤で処理後にERas発現が誘導され,ERas発現はエピジェネティック修飾によりコントロールされていると考えられた.われわれが独自に作製したヒトERas抗体を用いた免疫組織染色を胃癌142症例に行い,ERas発現を臨床病理学的に検討した.ERas発現と組織型の間には有意な相関は認めなかったが,リンパ節転移(p<0.05)および肝転移(p<0.001)と有意な正の相関を認めた.分子生物学的検討からは,ERas発現により胃癌細胞の転移・浸潤能が増強することが示された.またERas発現による胃癌細胞の形態変化,FibronectinやVimentinなどの間葉系マーカーの発現増強,E-cadherinなどの上皮マーカーの発現抑制などから,ERasは腫瘍転移の重要なメカニズムの一つとされている上皮間葉移行を誘導することが示唆された.以上の結果から胃癌においてERasは,上皮間葉移行を誘導することにより転移能を獲得していると考えられた.なおsiRNAを用いた検討では,ERasのkockdownにより間葉上皮移行が誘導される結果が得られた.ヌードマウス(BALB/c Slc-nulnu)を用いた腫瘍皮下移植モデルの検討では,ERas高発現胃癌細胞株で腫瘍形成能および増殖能が有意に増強されていた.また免疫不全マウス(Nod-skid mouse)を用いた転移モデルの検討から,ERas高発現胃癌細胞株では有意に転移能が増強されており,臨床病理学的検討および分子生物学的検討の結果を支持するものであった.以上の結果から,胃癌においてERasは,浸潤・転移を誘導する重要な因子の一つであり,胃癌の予後診断マーカー,胃癌治療の標的因子となりうると考えられた.
遷移金属酸化物における電界効果ドーピング

本研究は主にAl_2O_3を誘電層とする電界効果トランジスタ構造によるドーピング(FED)の実現を目指すものである。そのためにまず必要である平坦かつ級密なAl_2O_3膜の製膜方法を確立し、次いでFED素子を作成した上でFEDの可否・正当性を明らかにすることを目的としている。まず、SrTiO_3・LaAlO_3などの酸化物単結晶を研磨したものを購入し基板とした。さらに薄膜の原料となる酸化物・炭酸化物などの薬品・製膜時の雰囲気ガス(酸素・アルゴン・窒素およびそれらの混合ガス)を購入した。スパッタリング・レーザーアブレーション・電子線蒸着・真空蒸着など製膜装置の変更に伴い製膜条件を最適化する必要があるが、製膜装置にかかわらず作成した薄膜試料の平坦性並びに諸物性を調べ、製膜条件へフィードバックする必要がある。すでに研究室が所持する磁気特性評価装置・電気抵抗測定装置に加え、Al_2O_3をはじめとする絶縁層薄膜の誘電体としての評価を行う必要がある。このため本年度は薄膜試料作成技術の確立を計画し、Sawyer-Tower法による分極電場特性測定装置の構築を行った。装置は関数発生器(BIOMATION社2416A)・電源(KEPCO社BOP1000M)・オシロスコープ(Tektronix社TDS2024)からなり、それらはGPIBを用いてコンピュータ制御されている。最高印加電圧1000V・最高周波数1.8kHz(波形は正弦波および三角波)の性能を実現した。試料として室温で強誘電性を示す焼結体のBaTiO_3を用いて測定したところ、すでに知られている特性を再現することができた。これにより分極特性測定装置は完成し、作成した誘電体薄膜の分極特性を知ることができるようになった。
遺伝子増幅(PCR)による共生生物種の識別法

リボソームの5'末端から1100から1400の部位を増幅するプライマーを合成し,これを用いて微生物相の分析を試みた。モデル実験として大腸菌と枯草菌を用いた系では菌体重量と分析結果はよく相関していた。そこで,この方法をUASBと呼ばれているメタン発酵槽の汚泥に適用した。メタン菌は極めて培養が困難で菌相の分析は不可能な状況であったが,この方法ではおおよその菌相を推定できた。UASBの場合は約60%がMethanothrixであった。さらに,この方法を深海に生息するシロウリガイ共生細菌の分析に適用した。この貝から検出された細菌はイオウ酸化細菌と類似したものであったが,既知の種には同じものが見い出されない新しイタイプのものと判断された。これとは別に緑藻類葉緑体の起源をリボソームRNA配列から検討し,こくつかの新しい知見を得た。
パルス型プラズマスラスタにおける磁気スイッチの特性を利用した推進機構の開発

本研究の目的は、パルス型プラズマスラスタの駆動電源にパルス制御技術を用い、パルスの特性によって推進機構及び推進機特性を制御し、推進機性能を向上させる事を目的としている。今年度は、前年度に得られた結果を基に、電磁加速型と電熱加速型の双方に対してアプローチを行った。以下に、それぞれにおける実施した研究内容を示す。1.電熱加速型パルスプラズマ推進機パルス周波数の推進機性能に及ぼす影響を調査した。PTFEを推進剤としたΦ4-20mmのキャビティー形状の熱加速型パルスプラズマ推進機を製作。また貯蓄エネルギーを20Jとし、パラメータを調節可能なパルス電源を用い、サブマイクロから数マイクロ秒のパルス幅で駆動した。各パラメータに対して推進機の基本性能を測定するとともに、放電電流からプラズマ抵抗値を求め、プラズマの発光よりプラズマ温度を導出した。実験結果より、推進機性能のパルスパラメーターへの依存性は低い事が分かった。しかし、プラズマ温度及びプラズマ抵抗値において影響が見られ、これによりエネルギー転送効率の向上のための指針が得られた。2.電磁加速型パルスプラズマ推進機磁気パルス圧縮回路の持つ多段パルス特性の、プラズマの動きへの影響調査を行った。プラズマの発光を、超高速ICCDカメラ(露光時間20ns)を用いて観測した。磁気スイッチが未飽和時には電極間に薄いプラズマの層が確認できた。またこの時の放電電流(リーク電流)は100A以下であるため、ほとんど推力に寄与しないと考えられる。このリーク電流による薄いプラズマは単に、主電流時に電極間に存在するガスの量を増加させ推進剤の供給量の制御を行うだけでなく、均一な分布により主放電を安定させる効果がある事が分かった。推進剤供給制御の難しい固体推進剤において電源による供給制御の可能性が示された。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、パルス型プラズマスラスタの駆動電源にパルス制御技術を用い、与えるパルスを最適に調節することで、推進機性能を向上させる事を目的としている。従来にない電源からのアプローチで、構造的な制約が多いパルスプラズマスラスタにおいて、構造を変更することなく性能向上を目指す事ができる。当研究が実現すれば、推進機性能、耐久度、応用性全てにおいて高い水準の推進機が開発できると考える。以下に目標達成のために、本年度行った研究の概要を示す。1.実験環境及び観測系の構築磁気パルス圧縮回路一体型のパルスプラズマスラスタを作製。また磁気パルス圧縮回路の能動的なパルス放電に対応するため自爆式イグナイタを開発した。2.真空沿面放電によるアブレーション特性の評価パルスプラズマスラスタに投入するパルスの特性を調節し、アブレーションの特性を調査した。結果、アブレーションはパルス周波数の影響を大きく受け、高周波域であるほど多くのアブレーションを起こす事が判明した。また推進剤表面の炭化剥離面積の周波数依存性を調査し、安定動作の条件を示した。今後はこれらの結果をもとに、極短パルスのアブレーション特性を活かした電熱加速型のパルスプラズマスラスタの開発と、ロングパルス電源を用いた電磁加速型のパルスプラズマスラスの開発を行っていく。3.電熱加速型パルスプラズマスラスタの開発アブレーション特性調査の結果をもとに、その特性を活かした極短パルス電源駆動の熱加速型パルスプラズマ推進機の試作機を作製、評価した。結果180nsという短い時間で、従来の数μSのパルスと同等以上のアブレーション量と高いエネルギー転送効率が得られた。また他の研究報告と比較してもほぼ最高水準の推進性野を得ることができた。本年度はプラズマ源となる推進剤のアブレーションの特性と、推進剤加速への移行の境界条件を調査すると予定していた。

しかしアブレーション特性の調査の結果、電源特性を変更する必要があることが分かり境界条件の調査まで至らなかった。その一方、アブレーション特性の調査より、熱加速型パルスプラズマスラスタに極短パルスを与えることで高いエネルギー転送効率を達成できる事を示し、当研究に新しい可能性を見出した。当初は電磁加速型パルスプラズマスラスタに磁気パルス圧縮回路の特性を活かし、プラズマの動きを制御するというアプローチを考えていた。しかし今年度の実験により、この手法のためには電源特性を大幅に変更しなければならない事、また熱加速型パルスプラズマスラスタへの極短パルスの適応とういう新しい可能性が示された。そこで来年度は、パルスプラズマスラスタの電源からの推進機生の向上という最終目的のために電磁加速型、電熱加速型の両方向からのアプローチを行う。電熱加速型においては、今回の実験結果をもとに電源を設計しなおし、その後に境界条件の調査を行う。電熱加速型においては実験とシミュレーションを合わせてパルス周波数が及ぼす影響をより具体的に評価・解析していく予定である。
エストロゲン受容体遺伝子多型と薬剤選択との相関性に関する研究

本研究は性差医療の中でエストロゲン受容体(ER)の重要性に着目し、ER遺伝子多型と疾患の病態および薬剤選択との相関性を明らかにすることを目的とした。その結果、更年期障害において、ERβCAリピート多型が漢方治療薬の桂枝茯苓丸の治療効果に影響する可能性が示された。一方で、関節リウマチ症(RA)においては、ERβRsa多型のGG遺伝子型が特に女性の重症患者と相関することが示唆された。以上の成果は性差に基づく服薬指導やテーラーメイド薬物適正使用の確立に貢献できると考えられた。女性に多い疾患である更年期障害、骨粗髭症や関節リウマチ症においてエストロゲンの関与が指摘されているが、ER遺伝子多型との関連についてはエビデンスが少ない。そこで、ER遺伝子多型との相関が病態や処方薬剤との間に認められれば、病因と薬物療法選択にエビデンスを与えることができる。本年度はER遺伝子多型と更年期障害との相関を明らかにするために、研究協力者天野恵子より提供を受けた127検体についてERβ遺伝子CAリピート等の多型解析を行った。ERβ遺伝子CAリピート多型のうちリピート数21以下をSsgenotypeとした。Ssgenotype患者は血管運動神経症状の自覚スコアがLlgenotype(22以上)に比べ有意に高く、症状が強い群の割合も高い傾向を示した。このことから、血管運動神経症状の発症リスクに対するCAリピート多型Ssgenotypeの関連性が示唆された。一方、ERβ遺伝子Rsa多型解析の結果、AAgenotypeの患者は血管運動神経症状の自覚スコアがGGgenotypeに比べ有意に高く、症状が強い群の割合も有意に高かった。このことから、血管運動神経症状の発症リスクに対するRsa多型AAgenotypeの関連性も示唆された。また、CAリピート多型およびRsa多型の間に連鎖不平衡の傾向が見られ、血管運動神経症状の発症リスクに対する上述の相関がハプロタイプおよびデイプロタイプとなった際にも認められた。さらに、更年期障害治療における処方薬剤実態調査の結果、CAリピート多型SSgenotypeおよびRsa多型AAgenotypeにおいてホルモン製剤の使用率が有意に高いことが示された。このことから、両genotypeが血管運動神経症状のリスクを反映し、ホルモン製剤という治療薬の選択に応用できる可能性が示唆された。女性に多い疾患である更年期障害、骨粗鬆症や関節リウマチ症(RA)においてもエストロゲンとの関連が指摘されているが、ER遺伝子多型との関連についてはエビデンスが少ない。ER遺伝子多型との相関性が病態や処方薬剤との間に認められれば、病因と薬物療法選択にエビデンスを与えることができる。本年度はER遺伝子多型とRA処方との相関について検討した。RA患者264名(男性53名、女性211名)及び変形性関節症(OA)患者174名(男性19名、女性155名)を対象にERβ遺伝子Rsa多型及びERβ遺伝子CAリピート多型について頻度分布を解析した。その結果、ERβ遺伝子Rsa多型について、男性では両患者とも同様の頻度分布であったのに対し、女性では重症RA患者において軽症RA患者およびOA(変形性関節炎)患者とは異なりGG genotypeの頻度が有意に高かった。このことから、Rsa多型と女性における重症RAの発症に何らかの関与がある可能性が示唆された。さらに、RA患者とOA患者間のERβ遺伝子CAリピート多型の頻度分布の差を検討したところ、ERβ遺伝子CAリピート多型について、RA患者とOA患者との間に頻度分布の差は認められなかった。そこで、Rsa多型についてRA患者群を重症度別に比較した。この検討では各群の間にgenotype頻度の差は見られなかったが、OA患者のものと比較すると、重症RA患者においてGG genotypeの頻度が有意に高く、症状に応じてgenotype頻度の分布傾向に有意な差が見られた。また性別で層別化すると、OA女性患者と比較して重症RA女性患者はGG genotypeの頻度が有意に高いことがわかった。以上の結果から、Rsa多型GG genotypeは、女性において重症RAの発症に何らかの関与を示す可能性が示唆された。エストロゲンβ受容体(ERβ)遺伝子多型と更年期障害患者の処方薬剤治療効果や病態との相関性を検討した。ERβ遺伝子多型としては、intron 5に存在するCytocine-Adenineの2塩基の繰り返し配列数の違いからなるマイクロサテライト多型の一つであるCAリピート多型に焦点を当てた。更年期障害の本邦における治療法は主にホルモン補充療法と漢方療法が使用されているが、本研究においては日本人に需要が多い漢方治療に的を絞り、薬剤には患者の不定愁訴に多い血管運動神経障害に効果が高いとされる桂枝茯苓丸を選択した。対象患者は、千葉大学医学部附属病院和漢診療科及び千葉大学環境フィールドセンター柏の葉診療所において、更年期障害を主訴として受診した40歳以上の女性で、Kupperman

index(更年期指数)において軽症以上かつ血管運動障害様症状が認められた方に対し、既往歴の問診及び血液検査等で症状の起因となる他の器質的疾患や除外項目が認められず、漢方専門医師の診察により桂枝茯苓丸の証と認められた34名とした。同意の得られた患者より採血後、ゲノムDNAを抽出してCAリピート多型(繰り返し数に応じてSS,SL,LLに分類)を決定した。期間中、1ヶ月ごとに来院戴き、問診などにより治療経過を観察し、3ヵ月後の状態を確認したところ、ERβ遺伝子多型のLL genotypeの患者で、桂枝茯苓丸服用で血管運動症状及び不眠症状等の更年期症状の改善がみられ、漢方医学的な病態の改善もみられた。また、SL genotypeの患者に血管運動症状及びゆううつ症状の改善効果がみられた。このため、LL genotypeおよびSL genotypeでは桂枝茯苓丸での更年期障害薬物治療効果が期待できることが示唆された。
細胞内水チャネルによるオートファジー制御と腎嚢胞形成機構の解明

水チャネルであるAQP11は細胞内オルガネラ膜に存在し、その欠損マウスは生後1カ月で多発性のう胞腎による腎不全のために死にます。のう胞形成に先だって腎臓の近位尿細管細胞内に空胞が出現しますが、この一部にオートファジー(細胞内のタンパク質を分解するための仕組みの一つ)が関与していることが、オートファジーの発現を可視化したマウスや培養細胞を使った今回の研究で明らかにできました。今後オートファジーを制御することによってのう胞腎を治療できる可能性があります。1.全身のオートファゴソームが蛍光標識されるGFP-LC3トランスジェニックマウスとAQP11ノックアウトマウスを交配して、AQP11ノックアウトマウスの生後3日において近位尿細管でのトートファジーが亢進していることが確認された。その後のう胞形成まで皮質の深い部分にオートファジーが強く、浅い部分では弱くアポトーシスが亢進していることが示唆された。さらに絶食によるオートファジーの誘導でも、AQP11が半分しかないヘテロマウスのほうが野生型マウスよりオートファジーが強く誘導された。2.AQP11ヘテロマウスではシスプラチン腎障害が野生型マウスより強く出ることがあからかになり、活性酸素を軽減させるD-システインの経口投与で腎障害が軽減した。3、脈絡叢の細胞内空胞がAQP11欠損でみられるのにオートファジーが関与しているかどうかを検討する目的でGFP-LC3を観察したが誘導は確認できなかった。さらに脈絡叢細胞での遺伝子発現の差があるかどうかマイクロアレイも試みたが、検体が十分とれずAQP11欠損による遺伝子発現変化は未確認である。さらに、東北大学寺崎哲也教授から脈絡叢の株細胞をいただいてAQP11の発現がみられるかPCRで確認した。4.AQP11が脳浮腫に関連しているかどうかをみる目的で、片側の内頸動脈を一過性に縛ってできる脳梗塞モデルでのAQP11発現による生存率への影響を検討した。1.全身のオートファゴゾームが蛍光標識されるGFP-LC3トランスジェニックマウスを東京医科歯科大学難治疾患研究所の水島教授から供与をうけて、繁殖させるとともに、すでにこちらにある水チャネルAQP11欠損マウスとかけあわせた。約半年後に使用可能となった。絶食マウスの筋肉、肝臓、腎臓のオートファジーの発現をGFP蛍光で確認することができた。AQP11欠損マウスの腎臓においても、生後1週で近位尿細管細胞でのオートファゴゾームと思われる蛍光を観察できた。正常のマウスでは蛍光がみられなかったのでAQP11欠損によってオートファジーが誘導された可能性がある。また腹腔に大量アルブミンあるいは葉酸を投与した腎障害モデルでの腎臓でのオートファジーも確認した。2.脳毛細血管内皮細胞にAQP11が発現しているので、野生型マウスおよびAQP11ノックアウトマウスの左総頸動脈を結紮し、脳梗塞モデルを作成した。結紮後12時間までの脳を摘出し、リアルタイムPCR法にてAQP11、その他AQPs、GFAP(アストログリア細胞マーカー)の発現量に対して比較検討した。結紮後2時間では、コントロールマウスの未結紮群と比較してAQP11の発現量は約1/2に減少した。それに対し、結紮後12時間では、AQP11の発現は未結紮群と同程度あるいは、わずかに増加した。その他AQP1、AQP4、GFAPの発現量はいずれの場合でも減少した。また、AQP11ノックアウトマウス(ヘテロタイプ)においては、結紮によりAQP1の発現量がわずかに増加することがわかった。東北大学大学院薬学研究科薬物送達学分野寺崎哲也先生より脳毛細血管内皮細胞の供与をうけてAQP11の発現の確認をした。1.引き続きAQP11欠損マウスでのオートファジーをLC3-GFPでの蛍光で検索した。腎臓とは違い、肝臓、小腸、筋肉においてオートファジーは野生型とは差がみられなかった。AQP11欠損マウスの腎臓の近位尿細管の初代培養をおこなってオートファジーをLC3-GFPでの蛍光で検索した。野生型細胞と比べてオートファジーが亢進していることがあきらかになった。AQP11欠損マウスの腎臓のオートファジー関連遺伝子の発現をreal-time PCRで定量した。生後2,3,6,8週のマウスを用いて野生型を1にして定量した。Map1lc3b, Becn1, Lamp2はすべての週齢において1以上であったが、Nbr1, Bnip3は1と差がなかった。週齢による変化はすべてにおいてみられなかったので、のう胞腎になってもオートファジーが刺激されていることが推定された。一方、アポトーシス関連遺伝子ではApaf1, Caspase1,4,12が週齢を経るにつれて増加していくことがあきらかになった。

さらに酸化ストレス関連の遺伝子ではKeap1, Nrf2も1と差がなかった。以上の結果は2014.11にアメリカ腎臓学会で発表した。2.AQP11欠損マウスの腎臓と脳のmRNAをそれぞれマイクロアレイで野生型と比較して変化した遺伝子をKeyMolnetで解析したところアポトーシスや小胞体ストレスと関連した遺伝子が腎臓・脳に共通して増加していた。3.AQP11欠損マウスの脳脈絡叢(AQP11発現)のmRNAをマイクロアレイで野生型と比較したところ、Ca輸送、アポトーシス、細胞接着に関連した遺伝子の増加がみられた。4.脳の血管内皮細胞(AQP11発現)を密度勾配法で集めてきて遺伝子発現を比較したところ、AQP11欠損マウスではGLUT1の発現が野生型より増加していた。水・電解質代謝1、当初の目的である、全身のオートファゴソームが蛍光標識されるGFP-LC3トランスジェニックマウスとAQP11ノックアウトマウスをかけあわせることでAQP11欠損によるオートファジーの状態があきらかにできるマウスは順調に作成できた。今後、条件をそろえた腎障害モデルを作成して比較する必要があるため、交配を多くして十分な実験マウスの確保していく必要がある。また、オートファジーが経時的に起きてLC3が視覚化できるのは一過性であるため、生後日数のそろったマウスで比較できるように十分な実験マウスを確保していく必要がある。2、条件を整えた実験を行う目的のAQP11ノックアウトマウス腎臓からのプライマリーカルチャー(初代培養)も進行中である。3、脈絡叢のマイクロアレイや培養細胞などの導入をすすめている。4、腎、脳の部分だけでなくそれ以外の、肝、精巣、胸腺、白血球、小腸などAQP11の発現の多い組織でのオートファジーの検討が進行中である。1.全身のオートファゴゾームが蛍光標識されるGFP-LC3トランスジェニックマウスの繁殖とAQP11欠損マウスの掛け合わせで6ヶ月を要したが。その間に葉酸、大量アルブミン、ラパマイシン、バフロマイシン、トプシガージンなどによる腎障害の検討ができた。オートファジーマウスが使えるようになってから絶食などのポジティブコントロールの検討をおこなうことができた。2.トランスジェニックマウスはホモの状態では継代が難しく(GFPの負荷のためか)、ヘテロマウスを掛け合わす必要があり、実験に十分なマウスを得るのに予想以上に時間がかかることが明らかになった。そのため掛け合わすマウスをスケールアップして対応している。3.腎障害のモデルによるオートファジーの関与に差があるので、モデルごとにAQP11と有無とのかかわりをみていく必要があるので、実験系が多くなって、取捨選択をしている。4.腎臓以外の組織の検討は脳を中心におこなっているが、他の臓器の検討が不十分である。1、オートファジーとAQP11の関係を近位尿細管で十分あきらかにする。western blotなど定量的な手法を導入する。2、LC3に依存しないオートファジーの可能性についても検討する。3、腎以外は別のメカニズムがあるかもしれないので、GFP-LC3をマーカーにして簡便に全身のオートファジーの状態についてあきらかにして、オートファジーの関与がある組織と無い組織にわけてその違いを検討できるようにする。4、最終年度では治療薬の開発につながりそうなD-システインのような病変を軽減させる可能性がある薬剤の検討にも力を入れる。
初期地球の海洋化学組成および初期生命体活動環境の規定

本研究課題は、平成14年度に採択された。グリーンランド・イスア地域を対象に調査研究するものである。グリーンランド・イスア地域には地球最古の地層が広く存在する。地層の中には、38億年前の海洋で形成された地層も存在する。それらを用いて38億年前の海洋化学組成を復元するのが研究の目的である。また、イスア地域から採集された岩石の化学分析を通して最古の生物活動と当時の海洋化学組成との関係を検討することも目的に含まれる。グリーンランドイスア地域で3年にわたり地質調査・試料の分析を行った。ここでは東北大学の学生2名、教員2名が携わって調査研究した。コペンハーゲン大学との共同研究という事で調査は進められローシング博士の多大な支援をいただき調査自身は問題なく行えた。岩石を研究する上でのスタンダードな分析手法から、X-ray Scanning microscopeを用いた最新鋭分析も行った。その結果、38億円前の海洋のリンや炭酸塩に関する新しい知見を得て成果発表を行えた。38億年前の生命活動に関する新しい証拠も発見できた。38億年前の海洋環境と類似する場が現在の陸上温泉や海底熱水系に存在すると仮説をたて、そうした「Modern Analog」の研究も同時進行で行った。また、フィールドで得られたデータを室内実験に応用し、初期地球環境での有機系分子の安定性(生命の安定性)を議論する研究も行った。科学的な成果のみならず、科学雑誌やNHKスペシャルにも我々の研究の一端が紹介された。これによってパブリックアウトリーチも促進された。各種招待講演でも研究内容を公表してきている。本研究課題は基盤研究Bの海外学術研究に属する研究課題であり、海外地質調査を主体にする研究である。初期地球に生息した生命体の活動を理解する為に、生命体活動場としての海洋環境(海洋への元素フラックスや海洋のpH、二酸化炭素分圧など)を復元する事が主目的である。初期地球海洋環境に堆積した海洋堆積物や海水と反応して形成された岩石の地質調査および無機・有機化学分析、安定同位体分析などが主だった、研究手法になり、海外研究者を研究協力者として加え研究を遂行してきている。本年度は、グリーンランドイスア地域に産する38億年前の地球最古の地層をターゲットとして、7月初旬から8月上旬にかけて現地調査を行った。大陸氷河末端部でアプローチ困難な地域の調査であったが、デンマーク、コペンハーゲン大学の協力が得られ調査は成功した。詳細な地質調査および帰国後の岩石記載研究、卓上蛍光X線顕微鏡などを用いた分析により、38億年前の海洋底の情報とその後の変成作用から来る情報の分別が可能である事が分った。それにより、(1)リンに富んだ38億年前の海洋の姿が具体化されつつあり、リンに乏しかったとする定説と異なった見解を得つつある。また(2)縞状鉄鉱層の堆積に関して火山灰などの寄与が大きく火山活動が活発な初期地球の姿が具体化されつつある。この海外での調査の様子は、科学雑誌「ニュートン」にも紹介され、この研究の社会的関心の高さを物語る。本研究の目的は、地球史で最古の海洋堆積物、化学沈殿物を最新の地球科学的手法を用いて分析し、コペンハーゲン大学と共同で(1)海洋化学組成を規定する事、(2)初期生命体の痕跡を見出す事、(3)初期生命体の生態系を示す痕跡を見出す事にある。その為に、世界最古の岩石が露出するグリーンランドで地域でフィールドワーク、および岩石採集を行い、最新の分析方法で様々な分析を行った。その結果、縞状鉄鉱層の初生鉱物において酸化物と炭酸塩両方が共存すること、高圧変成作用でのグラファイト生成とその地質環境が明らかになり地表-地殻をむすぶ炭素循環モデルが可能になった。縞状鉄鉱層に挟まれた有機炭素層を新たに見いだすなど、生命活動の痕跡も検出されつつある。

グリーンランドから採集された試料は、東北大学で記載、観察、分析が行われた。特に卓上蛍光エックス線顕微鏡で岩石自身の元素分布様式と有機物の関係を明らかにした。そこでは有機-金属複合体を示す試料もみられ、変成作用で、生物が使う事ができる有機金属系物質が形成されたとする新しい仮説を生みつつある。いくつかの研究成果は、国内論文を中心に発表(「化学」など)し、国際学会でも公表した(Goldschmidt会議)。現地ではNHKなどの取材に協力し、学術的側面のみならず一般普及活動にも本研究は役に立ってきている。本研究では、世界最古の地層から、初期地球の海洋化学組成を温存している物質をとおして、当時の海洋化学組成を復元し、最初の生命を育んだ海洋の姿を具体化させる事を目的としている。本研究ではグリーンランドのイスア地域(38億年前)をターゲットに調査研究を行ってきた。この調査はコペンハーゲン大学との共同研究の形で行われた。15年度までの調査で、38億年前に形成された枕状溶岩が海洋化学組成を温存している可能性、特にリンの存在度が得意的である事などを指摘してきている。同時に縞状鉄鉱層にも炭酸塩が富み、当時の海洋化学組成を規定する重要な要素である事を見いだしてきた。16年度は最終年度であり、今までの発見を再調査すると同時に、外国人関係者と現地で小カンファレンスを開き、我々の成果に対する議論を行った。本研究を通して、現在の海洋と同じようなリンのサイクルが行われていた事、海洋中溶在二酸化炭素濃度は著しく高かった事、それらをふまえると海水のpHは弱酸性にふれ、鉄、シリカ成分に著しく富んだ状態であった事が判明した。こうした環境では現在の温泉環境にいる微生物のみが生息可能であり、初期生命体を考える上でも重要な知見を与えた。本年度行った調査で新たに生物の死骸を含んだと思われる地層を発見した。現在も分析・解析が進行中であり、本当に生物の死骸を含んだ地層である場合は、非常に大きな発見となる。同時に、生物が生きていた環境も規定するため、国際的なインパクトは極めて大きい。様々な国内誌にその成果は既に公表してきている。国際学会では既に招待講演などで、成果を公表してきている。国際誌にも投稿準備中である。
政党システム変動期におけるイギリス二大政党の政党組織改革についての研究

本研究は、政党システムの変動期のイギリス二大政党(労働党・保守党)の政党組織改革を対象に、いかなる方向性を有する組織改革が行われており、それが両党の統合能力の再生に対していかなる効果をもっているのかについて分析した。その結果、特に労働党において、一人一票制度などの個人党員重視の傾向は進んでいるものの、それが「中道化」に結びついた1990年代とは逆に、2010年以降には「左傾化」を生み出す要因となっている点や、2000年代以降分権化が進んだにもかかわらず、二大政党の政党組織改革は過渡期にあることがその支持調達能力の低下の原因となり、多党化の一要因となっていることなどを結論として得た。本研究の主な対象となるイギリス二大政党(労働党・保守党)について、本年度は以下のような研究を行った。まず労働党に関しては、比較の観点からその政党組織の特徴と、変化を可能にした要因を分析すべく、特にドイツ社会民主党との比較研究を行った。その結果、1990年代末から2000年代以降において、イギリス労働党の路線転換が可能になった要因が、1990年台前半における政党組織改革によるものであるとの結論を得た。このことにより、政党の戦略的・政策的な柔軟性が、政党組織との関わりの中で変化することを比較の観点から分析した点は、本研究の持つ意義の一つである。しかし、労働党におけるこの変化は、その後、党員の減少などマイナス面を生み出していることにも言及し、今後の検討課題として明確化した。第二に保守党に関しては、主に2010年以降のキャメロン政権以降を対象としながら、サッチャー期との連続性・非連続性を中心とする変化の観点から、検討を行った。その結果、緊縮財政の中での福祉削減などにおいて、サッチャー期との連続性が強く見られるが、社会や公共サービスを重視する点には、非連続性も存在することを確認した。このような政策的連続性と転換についての検討は、その政党組織の変化との関連についての分析へと進むための準備作業としての意味を持っている。第三として、イギリスの二大政党制がどのようなダイナミクスを持っていたのかについて、戦後の福祉国家を事例としながら検討する作業を行った。その結果、この両党は広い観点でコンセンサス政治を形成してきたが、その要因の一つが以前の政権からの経路依存性にあることや、しかし各政党において独自に経路形成が行われるために、コンセンサス政治の中でも対立が顕在化し、その動態によって変化が生み出されている点について、言及した。本年度は、(1)政党組織変化についての理論枠組の形成、(2)政党組織変化と政党システム変化との関連性についての検討、(3)とくにイギリス労働党の組織変化についての現状分析について、研究を進展させた。(1)については、近年のイギリスの政党組織の変化を、イギリス全体で進行する分権化と関連づける形で理論化を行った。その際、連邦制研究との関係を意識し、政党組織もまた分権化することで、一定の変化が生じるという事態がイギリスでも起こっていると結論づけた。(2)については、(1)で述べたような分権化の中で、選挙制度のマルチ・レベル化という現象が生じていることに注目し、そのようなマルチ・レベル化に対応しようとする中で、政党組織の変容が生じており、またそのことが、国政レベルにおいても政党システムの変化を引き起こすという、相互作用の関係にあることを検討した。(3)については、今年度はイギリスで総選挙が、またイギリス労働党で党首選挙が行われたという背景もあり、特に労働党に注目する形でその政党組織の変化の新たな側面を検討した。その結果、従来は「中道化」「穏健化」の要因となると考えられていた、一般党員による一人一票制度が、今回の党首選では逆に作用していることに注目し、その理由について検討した。その結果、ソーシャル・メディア上での党員ネットワークの形成という新たな現象などが、上記の「逆作用」を引き起こしているという結論を得つつある。以上のように、今年度の研究によって、これまでイギリス政党組織に関してあまり言及されてこなかった分権化や連邦化といった要素を理論的に導入するとともに、ソーシャル・メディアといった新しい動向も踏まえた方向へと研究を進展させたという点で、意義と重要性を持つと考えられる。本年度は、本研究課題の研究期間の中間年度に当たるが、1)理論枠組の形成および2)経験分析についての調査に関して、大きく進捗した。1)に関しては、分権化・連邦化と政党組織の変容との関係について、政党システムという要素との関係の中で検討するという理論枠組の形成が、ほぼ完成に近づきつつある。この点についての一部はすでに成果として発表済みであるが、さらに完成度を高めたうえで、次年度において口頭発表を行う準備が整いつつある。2)に関しては、イギリス総選挙と労働党党首選挙が行われたという時宜をとらえ、その政党組織の変容に向けた状況の調査が進むとともに、一定の分析を進行させた。この問題についても、次年度において成果を公開する方向で既に書き進めており、準備が整いつつある。以上の点から、本研究はおおむね順調に進展しているということができる。本年度は、(1)これまでに形成した政党組織変化の理論枠組に基づき、イギリスの二大政党の組織変化について結論づける、(2)政党組織変化が、イギリスの政党システムの変化との間にどのような関係性を持つかについての分析を行う、(3)政党システムの変化を、イギリス民主主義全般の中に位置づけ、それが持つ意味について検討する、という3点において、下記のような成果を見た。

(1)については、イギリス労働党の組織変化に焦点を定め、ドイツ社会民主党や日本社会党との比較も含めながら検討し、個人党員の参加を中心とした組織改革が行われた点に特徴があるが、現在においては、その効果が薄れつつあり、新たなジレンマを生み出している点について解明し、『社会民主主義は生き残れるか:政党組織の条件』(勁草書房、2016年)として公刊した。(2)については、1990年代末のイギリスにおける分権化によって、選挙制度のマルチ・レベル化という状況が生まれたが、それに対する保守党・労働党の組織的対応が移行過程にあり、そのことが、イギリスの政党システムに対しても多党化といった形で影響を及ぼしつつあることについて解明し、日本比較政治学会において「イギリスにおける多党化と選挙制度」と題する口頭発表を行った。(3)については、上記で見たような政党組織変化と政党システムの変容が、これまで「多数決型民主主義」の典型とみられてきたイギリスの民主主義に、「分解」とも呼ぶべき大きな変化をもたらしていることについて解明した。この成果については、2017年度中にも公刊する予定である。期間全体を通じて、1990年代以降にイギリス保守党・労働党の組織改革が集権化の方向に進んだこと、しかし2000年代以降には分権化に応じた新たな組織改革が試みられているが、その効果が現れず、多党化などの政党システムの変化が生じている点について解明した。本研究は、政党システムの変動期のイギリス二大政党(労働党・保守党)の政党組織改革を対象に、いかなる方向性を有する組織改革が行われており、それが両党の統合能力の再生に対していかなる効果をもっているのかについて分析した。その結果、特に労働党において、一人一票制度などの個人党員重視の傾向は進んでいるものの、それが「中道化」に結びついた1990年代とは逆に、2010年以降には「左傾化」を生み出す要因となっている点や、2000年代以降分権化が進んだにもかかわらず、二大政党の政党組織改革は過渡期にあることがその支持調達能力の低下の原因となり、多党化の一要因となっていることなどを結論として得た。本研究は、政党システムの変動が顕著となったイギリス二大政党(労働党・保守党)の政党組織改革を対象に、近年においていかなる方向性を有する組織改革が行われているのか、またそれが両党の統合能力の再生に対していかなる効果をもっているのかについて検討することを目的としている。この目的に照らして、まず労働党に関しては、それが行った政党組織改革の特徴と変化の要因について、比較の観点から析出する作業が進んだ。今後は、より最近の組織改革について検討する必要があるが、その準備は整ったといえる。また、資料収集も順調に進んでいる。また保守党に関しては、それが置かれた現代的位置・歴史的位置についての検討を行い、それを政党組織との関連から分析する準備が整った状況である。資料収集も順調に進んでいる。また、分析のための理論枠組について、主に政党論の観点からの検討が順調に進むとともに、イギリス二大政党制について位置づける作業も、福祉国家という政策に焦点を当てた形で行ってきた。
プロソディの音声解析による自閉症スペクトラム障害児の就学前診断ツールの開発と検証

イントネーション、リズム、アクセントといった話し言葉の質的側面をプロソディという。多くの主観的研究の結果により、自閉スペクトラム症児(ASD)のプロソディ異常は支持されている。そこで、本研究では、独自の音声解析プログラムを開発し、ASDのプロソディ異常を定量的に分析した。ASD、定型発達児(TD)の発話音声を収録した。本プログラムを用い、就学前と就学後のプロソディを比較した。その結果、ASDのプロソディ異常は就学後に顕著となることが明らかになった。また、発話の中でも特に序盤に、ASDとTDの識別点が存在する可能性が示唆された。神戸大学大学院保健学研究科、同大学院工学研究科と研究連携し、本年度は以下3点について研究を進めた。(1)「予備調査における音声データ収集」神戸大学医学部附属病院小児科発達神経外来を受診する自閉症スペクトラム障害児(以下、ASD)、発達支援モデル教室・すまいるぽっとらっくに参加するASDから音声データを収集した。(2)「本調査に向けた音声データ収集の準備」(1)によって得られたデータをもとに、神戸大学大学院工学研究科・滝口哲也准教授と研究打合せを行った。これにより、音声収録環境の設定、独自に開発する音声解析プログラムのデータ処理に関する課題が明確となった。また、大阪国際大学短期大学部・松井学洋講師とも研究打合せを行い、音声収録環境におけるASDの行動特徴について議論した。これにより、音声収録機材の配置、ASDに対する教示の配慮点について、具体的に想定することができた。(3)「研究成果の発表」日本小児科学会、日本小児保健学会、日本音響学会、IEEE/SICE International Symposium on System Integrationにて、本研究の成果について発表を行った。発表時の意見交換を通じ、神経生理学的視点及び福祉工学的視点から新たに本研究を検討する機会を得ることができたと同時に、本研究の新奇性、臨床への応用可能性について評価するコメントを受けた。また、本研究の元となる論文が学術誌「Brain & Development」に採択された。神戸大学大学院保健学研究科、同大学院工学研究科と連携して本研究を進めた。本年度は以下3点を実施した。(1)発達支援モデル教室・ぽっとらっくに参加する子どものうち、自閉症スペクトラム障害児27名の音声データを収集した。(2)前年度に収集したデータと(1)で収集したデータを合わせ、神戸大学大学院工学研究科・滝口哲也准教授とともに、音声の質的要素であるプロソディを独自に開発した音声解析プログラムを用い、自閉症スペクトラム障害児と定型発達児の違いをより書斎に検討した。その結果、発話した単語においては、語頭に自閉症スペクトラム障害児と定型発達児のより顕著な違いがあることが明らかになった。また、両者の違いは一部分の極値的なものではなく、発話全般に認められることが明らかになった。これらの結果に基づき、独自に開発した自閉症スペクトラム障害児と定型発達児の音声識別プログラムに改良を加えた。また、自閉症スペクトラム障害児の最新の知見について、大阪国際大学短期大学部・松井学洋講師をはじめ、複数の専門家から情報提供を得た。(3)第117回日本小児科学会(名古屋)、第56回日本小児神経学会学術集会(静岡)、第111回日本小児精神神経学会(東京)、第61回日本小児保健協会学術集会(福島)にて本研究の成果を発表し、小児医療の観点から検討を行った。また、自閉症と音声研究会(東京)にて本研究成果を発表し、音声工学の観点からも検討を行った。これらにより、複合領域を融合した観点から本研究を振り返ることができた。また、本研究内容を学術誌に投稿中である。イントネーションやアクセント等、音声の質的要素を総称してプロソディという。自閉スペクトラム症児の話し言葉にはイントネーションの単調さや疑問文のような語尾の上昇といったプロソディ異常が観察される。そこで、本研究では、音声解析技術を活用し、自閉スペクトラム症児のプロソディ異常を定量的に分析した。これにより、自閉スペクトラム症児の早期診断の可能性について検討した。そのために、自閉スペクトラム症児と定型発達児の発話音声を収集し、データベース化した。また、本研究のために独自に音声解析プログラムを開発した。本プログラムでは音声の3大要素であるピッチ、振幅、波形のそれぞれを高次元の特徴量で評価した。本プログラムを用いて自閉スペクトラム症児と定型発達児を音声識別した。その結果、人間の聴覚による判定よりも本プログラムによる判定の方が優位であることが明らかになった。自閉スペクトラム症児のプロソディ異常は局所的なものではなく、発話全般に及ぶものであることが示唆された。また、自閉スペクトラム症児のプロソディ異常に大きく影響を与えるものは、音声の3大要素の中ではピッチであることも示唆された。さらに、発話の中でも特に序盤に、自閉スペクトラム症児と定型発達児の識別点がある可能性が示された。これには末梢気管の運動要因(発話における最初の口唇運動の固さ、発話の最初に息を吐くことに対する緊張の高さ)と中枢性要因(単語の認知)の関与が考えられた。

そこで、本研究では、独自の音声解析プログラムを開発し、ASDのプロソディ異常を定量的に分析した。ASD、定型発達児(TD)の発話音声を収録した。本プログラムを用い、就学前と就学後のプロソディを比較した。その結果、ASDのプロソディ異常は就学後に顕著となることが明らかになった。また、発話の中でも特に序盤に、ASDとTDの識別点が存在する可能性が示唆された。交付申請書に記載した通り、「自閉症スペクトラム障害児と定型発達児の音声データ収集」と「音声識別プログラムの改良」を達成しているため。人間医工学交付申請書に記載した通り、今後は「音声識別プログラムの有効性の検証」と「本研究成果の公表」を確実に進める。交付申請書に記載した通り、「音声データ収集の準備」、「音声データ収集」を達成しているため。交付申請書に記載した通り、今後は「音声データ収集」、「音声識別プログラムの改良及び有効性の検証」、「研究成果の公表」を確実に進める。その際、神戸大学大学院保健学研究科、同大学院工学研究科に研究協力を求め、適宜議論する。これにより、こまめに検証及び修正を行い、確実性を高める。物品費によって購入予定であった音声収録機材(ラベリアマイクロホン、オーディオインターフェース、デジタルビデオカメラ、三脚)を次年度に購入することとしたため。パソコンのOSであるWindows 8.1が2013年に提供されたばかりで、対応ソフトとの互換性などの情報を確認してから購入した方が良いと判断したため。物品費によって音声収録機材(ラベリアマイクロホン、オーディオインターフェース、デジタルビデオカメラ、三脚)を次年度に購入する。