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希少糖エステルライブラリーからの新規な抗線虫薬の探索

モデル生物である線虫Caenorhabditis elegansを用いて,天然にはほとんど存在しない希少糖及びそれらのエステル誘導体の中から新たな抗線虫薬を探すスクリーニングを行った。その結果,アルドヘキソースの一つであるD-アロース(D-グルコースのC3エピマー)に抗線虫活性を認めた。D-アロースを脂肪酸エステル化することによりその活性が上昇すること,脂肪酸エステルの中で6-O-オクタン酸エステルが最も活性が強いことを明らかにした。人や家畜の寄生線虫症治療薬(抗線虫薬)に対する薬剤耐性虫の出現が深刻な問題となっている。そのため,従来の抗線虫薬とは全く異なる作用モードを持つ薬剤の開発が望まれている。研究代表者は,モデル生物である非寄生性線虫C.elegansを用いて,希少糖の中から新たな抗線虫薬候補を探すスクリーニングを行ってきた。その過程で,ケトヘキソース立体異性体8種(D-,L-フルクトース,プシコース,タガトース,ソルボース)のうち,D-フルクトースのC-3エピマーであるD-プシコースのみがC.elegans幼虫の成長を抑制することを明らかにした。また,アルドヘキソースの立体異性体のなかでは,D-グルコースのC-3エピマーであるD-アロースに成長抑制活性を認めた。研究分担者(川浪)は,リパーゼを用いて希少糖の第一級水酸基を選択的にエステル化する方法を確立している。この方法で,簡便・迅速に多数の希少糖エステル誘導体の合成が可能となる。上記の方法で合成したD-アロース6-0-オクタン酸エステルの生物試験を行ったところ,D-アロースと比較して,著しい活性上昇が認められた。これは分子の疎水性が増したことにより,細胞膜透過性が向上したためと考えられた。この結果を足がかりとして,本研究では,様々な希少糖エステル誘導体を合成し,活性の向上を図ることで,新規な抗線虫薬候補の開発を目指す。平成22年度は(1)のC.elegans成長抑制活性への炭素鎖長の寄与を明らかにするために,様々な炭素鎖長を持つD-アロース脂肪酸エステルを合成し,その成長抑制活性を評価した。糖をリード化合物とした抗線虫薬はこれまでに無く,新しいクラスの薬剤の開発につながる可能性がある。本研究では、D-グルコースのC-3エピマーである希少糖D-アロースの脂肪酸エステルの抗線虫活性について検討を行なった。抗線虫活性試験には、同調培養によって得られたC.elegans第一期(L1)幼虫を用いた。試験容器には24ウェルフレートを用い,液体培地中20°Cで培養を行った。72時間後の死亡率からLC_<50>値を計算し,抗線虫活性の評価を行った。D-アロースと炭素鎖長の違う直鎖脂肪酸(C8,C10,C12)を,リパーゼを用いた位置選択的エステル化によって6-O-脂肪酸エステル(A11-C8,A11-C10,A11-C12)とした。LC_<50>値はA11-C8が204μM,A11-C12が343μMであった。A11-C10には1.25mMでも抗線虫活性が認められなかった。短鎖脂肪酸には抗線虫活性が報告されているが,我々の方法でD-グルコース-C8エステルのアッセイを行ったところ抗線虫活性は認められなかったため,加水分解された短鎖脂肪酸が活性の本体であるという可能性は否定できた。D-アロースそのものの抗線虫活性は非常に弱いが、脂肪酸エステル化によって活性が大幅に上昇した。以上の結果から、希少糖誘導体を抗線虫薬として使用できる可能性が示された。人や家畜の寄生線虫症治療薬(抗線虫薬)に対する薬剤耐性虫の出現が深刻な問題となっており,そのため,従来の抗線虫薬とは全く異なる作用モードを持つ薬剤の開発が望まれている。研究代表者は,モデル生物である非寄生性線虫C.elegansを用いて,希少糖の中から新たな抗線虫薬候補を探すスクリーニングを行った。その過程でD-プシコース及びD-アロースに成長阻害活性があることを明らかにした。しかし,糖類は親水性が高く生体膜透過率が低いため,活性を発揮するのには高濃度が必要である。膜透過性を向上させれば,希少糖の抗線虫活性は強まると考え,糖の第一級水酸基をリパーゼで選択的にエステル化し,希少糖の脂肪酸エステル誘導体を合成した。D-アロース脂肪酸エステル誘導体は,D-アロースと比べて約1/1000の濃度で活性を示し,それは致死性のものであった。そこで合成したD-

アロースのオクタン酸エステル(D-All-C8),デカン酸エステル(D-All-C10),ドデカン酸エステル(D-All-C12),対照としてD-グルコースのオクタン酸エステル(D-Glc-C8)について殺線虫活性を調べた。D-All-C8とD-All-C12のLC50はそれぞれ,204μM, 343μMとなり,D-アロースが成長阻害活性を現した濃度の約1/1000で殺線虫活性があることが分かった。D-All-C10とD-Glc-C8は活性を認めなかった。エステル誘導体と対応する脂肪酸の活性を比較すると,D-All-C8はオクタン酸の活性よりも明らかに高いこと,D-All-C10とD-Glc-C8で効果が見られないことから,線虫の体内で加水分解されず,エステルのまま致死性の効果を発揮しているものと考えられた。本年度まででD-アロースのエステル誘導体の抗線虫活性の構造活性相関をほぼ明らかにした。24年度が最終年度であるため、記入しない。最終年度である平成24年度は、最も活性が強かったD-アロースの誘導体について動物寄生性線虫であるイヌカイチュウをもちいて活性を評価する予定である。
形状記憶合金の相転移現象を記述する方程式系に対する調和解析的手法を用いた研究

今年度の主たる研究は、ポーランド科学アカデミーのI.Pawlow氏とW.M.Zajaczkowski氏との共同研究で、粘性付きの2次元及び3次元形状記憶合金方程式の可解性について考察した。この方程式は、金属の変形と温度の分布が相互作用するいわゆる熱弾性の非線形偏微分方程式であり、特に形状記憶合金の相転移現象を表現したものである。形状記憶合金の持つ性質のエッセンスを単純な多項式で表現したFalk-Konopkaの非線形項と呼ばれるものがある。我々の研究の目的はこの非線形項をもつ形状記憶合金方程式の解の存在と一意性を示すことである。特に、ここでは既存の結果で取り扱われてきた非線形項よりも一般化された非線形項を取り扱う。この非線形項に対して導出される方程式は一般に準線形方程式になる。これまではこの準線形方程式を半線形化した方程式に対しての結果しかなかったが、最近PawlowとZajaczkowskiはこの準線形方程式の解の存在と一意性に対しての結果を発表した。しかし、彼らの結果は非線形項の冪に強い仮定を必要とする上、証明に不十分な点が幾つかあった。我々の結果は、この証明のギャップを埋め、更に冪の仮定も改善することに成功したというものである。この結果における非線形項の冪の仮定は、Falk-Konopkaの非線形項は取ることが出来ないが、これに十分近い性質のものをとることが出来るようになった点が重要である。またどのようにギャップを埋めたかであるが、彼らの証明の不十分な点は大きく二つあり、一つは境界を含めた正則性をきちんと評価していない点、二つ目は温度の非負値性を証明していない点であった。一つ目についてはClement-Liの時間局所解を利用し、二つ目については弾性方程式の切断問題を考察することで、これを解決した。この結果については既に論文にまとめ現在投稿中である。
Brain Functional NMR Spectroscopyの開発-NMRによるヒト高次脳機能の無侵襲的計測技術の開発

我々が提唱しているBrain Functional NMR Spectroscopyを開発するために、我が国において臨床応用可能な最高静磁場強度を有する2テスラ高磁場ヒト全身用NMR装置の抜本的な改造・改良を行った。このNMR装置を用いてヒト脳の精神(神経)活動に伴う脳内の物質変化や生化学変化を脳内の部位別に無侵襲・非破壊的にしかも高い時間・空間分解能で計測できるNMR技術-Brain Functional Spectroscopy法-を開発した。傾斜磁場(静磁場勾配)のスイッチングにより周辺の導体に発生する渦電流の影響を抑制する方法を、ハード/ソフトウェア両面から開発・改良を加えて、ヒト脳^1HNMR局在化スペクトル測定法を改良・高性能化した。2テスラ・ヒト頭部用^1Hバ-ド・ケージ型quadrature送受信コイルを試作し、線形送受信を行う在来型コイルと比較して信号検出感度を3060%向上させた。局在化^1H同核種スペクトル編集法(多量子コヒーレンス法)をグラジェント技術を応用して開発し、従来のパルス系列を適用しては、他の代謝物質のシグナルにうづもれて分離測定が困難であったヒト脳内の微量な乳酸やグルタミン酸、GABA等の代謝物質のシグナルを選択的に検出することに成功した。また、多量子コヒーレンス・スペクトル編集法を組み込んだスペクトロスコピック・イメージング法を開発し、特定の代謝物質を選択的に可視化、画像化するNMR画像法を開発した。さらに、高速データ転送能力・処理能力・表示能力をもつワークステーション及び高機能パーソナルコンピュータからなる多次元画像処理ネットワークを構築し、NMRパラメータを空間情報に従って多次元的に再構築し、脳機能・代謝に関する分子レベルの情報を可視化、画像化するプログラムを開発するための技術的基盤を確立した。本研究では、臨床用NMR装置の抜本的な改造・改良を行ない臨床用装置における装置的制約を取り除き、NMRを用いてヒト脳の精神(神経)活動に伴う脳内の物質変化や生化学変化を脳内の部位別に無侵襲・非破壊的にしかも高い時間・空間分解能で計測できる技術を開発する。そして、これを用いてヒト脳機能局在の無侵襲解析や脳機能画像診断を可能とするNMR先端技術を開発することを目的とする。申請者は、脳研究におけるこの新しいNMR技術をBrain Functional NMR Spectroscopyと名付けた。このBrain Functional NMR Spectroscopyを実現するためには、以下の6つの要素技術の適用を可能とする臨床用NMR装置を開発する必要がある。【.encircled4.】高時間分解能化技術初年度は【.encircled1.】【.encircled6.】の各要素技術の開発を可能とするために、我々が既に開発した2テスラ高磁場ヒト全身用NMR装置に各種ハードウェア及びソフトウェアの装備を行なった。これにより、従来の臨床用NMR装置では不可能であった多次元NMR測定や選択的スペクトル編集が可能となった。また、多次元画像解析システムを整備した。これにより多次元画像処理技術を開発することが可能となった。来年度は、Brain Functional NMR Spectroscopyの要素技術である2テスラ・ヒト全身用NMR装置の高性能化をさらに発展させ、感度、分解能、シグナル局在化NMR計測技術の向上を進めるとともに脳機能測定のための新しいパルス系列を開発する。Brain Functional NMR Spectroscopyによってヒト高次脳機能を無侵襲計測するためには、従来のNMR計測技術に比べて信号検出感度のみならずNMRスペクトルの分解能を飛躍的に向上させる技術の開発が必要である。in vivo測定においては、とりわけ^1HNMRでは、狭い化学シフト範囲に多種類の相異なる代謝物質由来の信号が重なり合う。本年度は、このような場合にも測定対象となる代謝物質を選択的に検出することができる^

1H同核種スペクトル編集法をグラジェント技術を応用した多量子コヒーレンス法を用いて開発した。さらに、新たに開発したスペクトロスコピック・イメージングパルス系列にこの多量子コヒーレンス・スペクトル編集パルス系列を組み込み、特定の代謝物質を選択的に画像化するNMR画像法を完成させた。また不均一なRF磁場を作るため多重パルス系列を組み立てるのが困難なサーフィス・コイルを用いても動作させられるようにスペクトル編集パルス系列に改良を加え、信号検出感度の向上を得た。これらの新技術の開発により、皮下脂肪由来の妨害信号が測定上の問題となる脳表近傍でも神経細胞の興奮に伴って生成される乳酸のNMR信号を特異的に抽出することが可能となった。本年度に開発したパルス系列はパラメータの調節によって、脳の機能的変化を支えると考えられる神経伝達物質アミノ酸を含む様々な代謝物質の選択的検出に応用することができる。また、皮下脂肪信号の混入を避けることが一般的には困難な骨格筋内の乳酸のin vivo測定にも適用可能である。
前周期遷移金属錯体の柔構造の自在制御による新重合触媒の創成

ポリエチレン系材料の一つとして、エチレンとα-オレフィンの共重合体である直鎖状低密度ポリエチレンの需要が高まる中、コモノマーとなるα-オレフィンの選択的合成に関する研究が活発に行われている。その合成法としては一般に、遷移金属触媒によるエチレンの多量化反応力が挙げられるが、生成物はSchultz-Flory分布によるため合成後の分離精製が必要となるプロセスであった。そこで最近では、チタンやタンタル、クロムといった前周期遷移金属の低原子価錯体を用いて、1-ヘキセンや1-オクテンの高選択的な合成法が報告されつつある。これらの反応では、触媒活性、および選択性をコントロールする最も大きな要因は金属中心回りの配位子であることがチタンやクロムを用いた触媒系において報告されている一方、タンタルを用いた場合には、その触媒活性種となる低原子価の3塩化タンタルの発生方法が触媒反応に大きな影響を与えることが知られている。最近、ビス(シリル)シクロヘキサジエン誘導体が前周期遷移金属塩化物に対して還元剤として作用し、副生成物となる金属塩の生成を伴うことなく低原子価種を発生させることができることを見出した。そこで本手法をエチレンの多量化反応に適用したところ、触媒活性種となる三塩化タンタルが選択的に生成するため、従来の金属試薬を用いた還元手法に比べて1-ヘキセン生成が高活性かつ高選択的に進行することを見出した。また、本触媒系の中間体に関する知見を得るため、NMRチューブ中、エチレン雰囲気下で還元反応を行って直接生成した化学種を観測したところ、5員環メタラサイクルと考えられる化学種に基づくシグナルを^1H NMRにおいて確認することに成功した。近年、エチレンやα-オレフィン類の重合触媒として分子設計の自由度の大きい窒素などのヘテロ元素を含む多座配位子が用いられ注目されている。1)われわれは、種々の置換基を有するα-ジイミン配位子とテトラベンジルジルコニウムおよびテトラベンジルハフニウムとの反応により、置換基の違いにより3種のイミド錯体を選択的に合成することができることや得られ錯体がα-オレフィンの重合触媒となることを見いだした。ZrおよびHfのテトラベンジル錯体とα-ジイミン配位子との反応により、配位子のモノベンジル化が進行し、対応するZr錯体およびHf錯体が得られた。オルト位に置換基を導入した芳香環を持つ配位子を用いた場合も、対応するHf錯体が高収率で得られたが、Zrの場合は、熱的に不安定で単離できなかった。これらの錯体は、ベンジル基がα-ジイミン配位子のC=N結合に分子内1,2-付加した後、分子内で、水素移動反応が進行する反応機構で進行する。従って、Zrとアルキル基の結合に比べHfとアルキル基の結合が強いため、Hf錯体が単離できたと考えられる。アルキル基をもつ配位子とHf(CH_2Ph)_4を反応させた場合、低温から室温まで昇温することにより水素移動する前の段階の錯体が合成単離できる。得られた錯体を加熱することにより2つ目のベンジル化が進行し、ビスイミド錯体が得られる。イミノ-アミド錯体から導いたカチオン性アルキル錯体の合成を行った。得られた錯体は、エチレン、1-ヘキセン、ビニルシクロヘキサンの重合触媒となる。特に、ビニルシクロヘキサンの重合はアイソタクチック([mmmm]>95%)なポリマーが得られた。
多成分共沸系の膜＋蒸留複合プロセスの解析法の開発

蒸留と膜分離の複合化プロセスによる共沸混合物を含む多成分系分離の可能性,プロセスの分離特性および有効な適用範囲(分離系,原料組成)を解明するために,蒸留と膜分離複合プロセスの解析プログラムをプログラミング言語FORTRANを用いて作成した。1)塔頂に膜分離モジュールを適用した複合化プロセス(VP膜,PV膜)について,前年度に開発した解析プログラムを多成分系混合物にも対応できるように改良し,水ーiPAに最低共沸混合物を持つアセトン+水+iPA系およびアセトンーメタノールに最低共沸混合物を持つびアセトン+水+メタノールの2つの分離系について,アセトンを回収する目的の例題で原料条件を変えたシミュレーションを行い,分離膜の違い(PV膜,VP膜)による共沸物の分離の可能性および複合プロセスの分離特性について検討した。蒸留塔内の組成分布により,共沸組成を超えて分離が可能となること,PV膜においては,操作温度が分離特性に大きく影響することが確認できた。(分離技術会年会2017, S2-P6),(化学工学会第50回秋季大会,PA302)2)PV膜モジュール計算プログラムをベースに,原料タンクと膜モジュールで構成されるバッチ式PV膜分離プロセスの解析プログラムを作成し,3成分系膜分離における原料液組成および透過蒸気組成の経時変化の計算を行った。組成を三角線図上にプロットし,成分のパーミアンスが組成変化の軌跡に及ぼす影響を視覚的に確認できるようにした。(分離技術会年会2018,S7-P15)平成29年度十分に達成できなかった,「汎用プロセスシミュレータによる膜+蒸留複合プロセスの解析」については,汎用プロセスシミュレータ(PRO/II)に標準装備されている膜モジュールモデルによるシミュレーションが可能となった。膜モジュール計算については本研究室で作成した膜モジュール解析プログラムによる計算結果を比較し,モデルの違いを確認し,整合性を取ることが可能となった。「膜モジュール解析モデルの改良」については,多管式膜モジュールに適用される,クロスフロー+プラグフローモデルの多成分系への改良が達成できていない。多成分系に対応したPV膜,VP膜と蒸留複合プロセスのシミュレーションが可能となり,汎用シミュレータとの比較が可能となった。以上総合すると,「やや遅れている」と判断する。複合化プロセスを効果的に適用できる範囲を明らかにするために,気液平衡関係が異なる他の分離系について広く分離特性を検討する。汎用シミュレータ(PRO/II)にはUser Added Subroutineの機能があり,研究室で作成した膜モジュール計算プログラムの導入を試みる。バッチ式PV膜分離プロセスの計算プログラムについては,最適化手法と組み合わせて実験結果からパーミアンスを決定できるように改良する。蒸留と膜分離の複合プロセスの特性を解明するための解析プログラムをを開発するために、分離膜モジュールの解析プログラム、および蒸留と膜分離複合プロセスの解析プログラムをプログラミング言語FORTRANを用いて作成した。1)透過側・非透過側の完全混合を仮定した分離膜モジュール(VP膜)に透過膜の両側の成分蒸気分圧差を推進力とする透過流束モデルを適用し、全体の物質収支を満足するように透過分率と透過側・非透過側の組成を交互に求める多成分系膜分離解析プログラムを開発・作成した。多成分系では,多元連立二次方程式をNewton-Raphson法を用いて数値的に解くため,多重解(物理的に意味を持たない解),収束計算の途中で発散するなどの問題があり,初期値の選定と過剰修正を回避する手順を考案し,収束安定性を向上させた。(ICSST17,EP-02)2)蒸留塔の塔頂蒸気の分離に分離膜モジュール(VP膜)を適用した、複合プロセスの解析プログラムを作成し、3成分系分離の例題(アセトンーイソプロパノールー水系)を用いて収束解を得られることを確認できた。3成分系での検討の前段階として,2成分系混合物(アセトンー水系)について,複合プロセスの蒸留塔の段数と省エネルギー性について検討した。(分離技術会年会2017,S2-P9)3)膜性能を表現するパーミアンスの組成・温度依存性を考慮した既報の相関式を膜分離モジュールの計算プログラムに導入し,2成分系混合物の透過側/非透過側組成関係を求める計算が可能となった。(分離技術会年会2017, EP-02)当初,計画した4項目について。1)多成分系膜モジュール解析プログラムを作成し,収束安定性を向上させるための手法を考案した。2)計画1)で作成したプログラムを蒸留計算プログラムに組み込むことにより,複合プロセスの解析プログラムを作成した。3)膜のパーミアンス(透過率)の濃度・温度依存性について,文献より得られた相関式を適用して,膜分離解析プログラムを作成した。4)汎用プロセスシミュレータによる膜+蒸留複合プロセスの解析モデルの作成については,ミュレータの導入が遅くなったこと,および膜モジュールの計算方法の違い(パーミアンスを用いるか分離係数を用いるか)への対応ができなかったことにより,プロセスを組むことができなかった。以上より,3項目について目標を達成できたので,おおむね順調に進展していると考える。1)塔頂に膜分離モジュールを適用した複合化プロセス(VP膜,PV膜)について,前年度に開発した解析プログラムを多成分系混合物にも対応できるように改良し,水ーiPAに最低共沸混合物を持つアセトン+水+iPA系およびアセトンーメタノールに最低共沸混合物を持つび

アセトン+水+メタノールの2つの分離系について,アセトンを回収する目的の例題で原料条件を変えたシミュレーションを行い,分離膜の違い(PV膜,VP膜)による共沸物の分離の可能性および複合プロセスの分離特性について検討した。蒸留塔内の組成分布により,共沸組成を超えて分離が可能となること,PV膜においては,操作温度が分離特性に大きく影響することが確認できた。(分離技術会年会2017, S2-P6),(化学工学会第50回秋季大会,PA302)2)PV膜モジュール計算プログラムをベースに,原料タンクと膜モジュールで構成されるバッチ式PV膜分離プロセスの解析プログラムを作成し,3成分系膜分離における原料液組成および透過蒸気組成の経時変化の計算を行った。組成を三角線図上にプロットし,成分のパーミアンスが組成変化の軌跡に及ぼす影響を視覚的に確認できるようにした。(分離技術会年会2018,S7-P15)平成29年度十分に達成できなかった,「汎用プロセスシミュレータによる膜+蒸留複合プロセスの解析」については,汎用プロセスシミュレータ(PRO/II)に標準装備されている膜モジュールモデルによるシミュレーションが可能となった。膜モジュール計算については本研究室で作成した膜モジュール解析プログラムによる計算結果を比較し,モデルの違いを確認し,整合性を取ることが可能となった。「膜モジュール解析モデルの改良」については,多管式膜モジュールに適用される,クロスフロー+プラグフローモデルの多成分系への改良が達成できていない。多成分系に対応したPV膜,VP膜と蒸留複合プロセスのシミュレーションが可能となり,汎用シミュレータとの比較が可能となった。以上総合すると,「やや遅れている」と判断する。汎用シミュレータを用いた膜+蒸留複合プロセスのモデルの開発は,簡単な構成から初めて,複雑な構成に向けて継続して行い,本研究計画で作成する解析プログラムの結果と比較できるようにする。解析プログラムに関しては,多成分系PV膜モジュールについて開発を行う。膜性能の組成・温度依存性に関して,使用できるデータが殆どなく,回分式の膜分離実験装置(PV膜)に対する解析プログラムを作成し,可能であれば実験データを入手して,相関式のパラメータを決定したい。複合化プロセスを効果的に適用できる範囲を明らかにするために,気液平衡関係が異なる他の分離系について広く分離特性を検討する。汎用シミュレータ(PRO/II)にはUser Added Subroutineの機能があり,研究室で作成した膜モジュール計算プログラムの導入を試みる。バッチ式PV膜分離プロセスの計算プログラムについては,最適化手法と組み合わせて実験結果からパーミアンスを決定できるように改良する。シミュレータPRO/IIの契約時期の関係で,会計システムの理由から支払いが2分割されたためであり,残額は30年度に支払われる。ほぼ予定通りの支出ができたが,1万円未満の残額が生じた。
Williarn Faulknerの草稿・資料の調査・研究

草稿・資料の照合研究によって、フォ-クナ-の文学世界構築の過程を細かく辿ることが出来た。その成果の一端は、昨年度と平成3年度との2年間にわたる東京大学文学部での構義ノ-トに纒めた。また、フォ-クナ-未発表短篇集を飜訳し、冨山房「フォ-クナ-全集」第26巻として刊行するが、巻末の「訳者解説」において、未発表短篇と既刊主要作品との照合・対比を行ない作品の成立過程を辿り;主題の解明を試みた。(目下,再校まで進んでおり、今年中には刊行の予定である)フォ-クナ-を、国際的視野からも提えるべく、グレッセ・パソ大教授,ポ-ク・南ミシシツピ-大教授,大橋健三郎氏との共同編集で、山口書店からFaulkner Studies一巻一号を刊行した。目下、一巻二号の校正準備中である。昨年11月初めから、本年2月末まで、NHKラジオ第2放送の番組「原書で読む世界の名作・ウィリアム・フォ-クナ-短篇集」に計16回出演し、「エミリ-のバラ」,「納屋を焼く」,「あの夕陽」,「赤い葉」について解説した。リスナ-からかなりの反響があったので、出版する計画がある。拙論「フォ-クナ-と歴史・『死の床に横たわりて』と『緋文字』」が、劉〓氏によって中国語に飜訳され、中華民国・四川省の綿陽師専の学報に掲載された。拙論『モ-ゼよ、往け』論が、ア-サ-・キニ-・マサチュセッツ大教授の編集による「フォ-クナ-代者論文集」に収載された。日本人として初めてのことである。光学読み取り機で、フォ-クナ-の主要作品をフロッピ-・ディスクに読み込んだ。作品照合研究の有力な武器となるであろう。初期習作時代の作品、Soldiers'Pay,Mosquitoesの草稿を丹念に照合し、作品の成立の跡を辿った。それによって、どのように当時の時代を反映しているか、どのような作家から影響を受けているかを解明すると同時に、その後の作品にも一貫して流れる作家の性と死、男と女、時間と空間の観念の崩芽なども見出した。これは、一人の作家の誕生の秘密・創作活動のプロセスそのものを解明するだけではなく、偉大な作家へと成熟する過程をも見透すことになる。また社会的・歴史的背景を考察することによって、1920年代のアメリカ南部・南部分化を別の角度から見透そうとする試みに連なっていく。このような根本的な研究に関して、少なくとも誌上で国際的な研究交流の場を作ろうと、山口書店からFoulkver Studiesという年2回刊行の研究誌を発刊しようと準備中である。パリ大・グレッセ教授、南ミシシッピィ大・ポ-ク教授、鶴見大学・大橋健三郎教授の協力を得て、目下原稿募集中である。もちろん、今年の研究成果を、この研究誌に順次発表すべく準備を進めている。先行する草稿研究の成果も十分考慮に入れなくてはならないので、それらを読み分類作業も進めている。これから、学生に協力して貰って、すべての資料をワ-プロに打ち込む作業も併行して行なわねばならない。そして、差し当たっては、4月から東京大学文学部の特殊研究を担当することになっているので、そこでこれまでの研究成果を少しずつ披露してゆきたい。2.<ーGo Down,Moses>___ー論が,ア-サ-・キニ-教授による編集で,代表論文集に収載された。

昨年10月,ボストンのG.K.Hallから出版された。(日本人研究者としては初めてのことである)3.未発表短篇を完訳。冨山房・フォ-クナ-全集第26巻として刊行の予定。目下、その巻末に付す「訳者解説」を執筆中。4.これまでの調査。研究の一部を、東京大学で併任講師として、一年間、講義。初期・習作時代から、<The>___ー<Sound>___ー<and>___ー<the>___ー<Fury>___ーまで講じた。5.フォ-クナ-の影響を強く受けている黒人作家・Ernest Gainesについて、書評として南ミシシッピィ大学が出している<Southern>___ー<Quarterly>___ーに寄稿した。6.草稿研究の副産物として、フォ-クナ-の作品中における「抽象名詞」の持つ意味,殊に「名誉」「愛」の概念が深く,南部文化の伝統と深く結びついていることに気づくようになった。「抽象名詞の歴史性・地方性」ということも、今後の研究課題の一つに加えたい。7.資料研究を重視した国際的研究誌を、山口書店の協力で刊行することになり,その創刊号の編集を終えた。(雑誌名<Faulkuer Studies>___ー;共同編集者,ミシェル・グセッセ・パリ大教授,ノエル・ポ-ク・南ミシシッピ大教授,大橋健三郎・鶴見大教授)8.「アメリカにおける弱者の歴史」(拙論)で、南部の人種問題を論じた。研究成果の一端は、昨年度に続き、東京大学での講義「フォ-クナ-研究II]で、後期スノ-プス三部作まで、ノ-トに纏めた。「フォ-クナ-と歴史」が、劉捷氏によって中国語に訳され、綿陽師専の学報に掲載された。「モ-ゼよ、往け」論が、ア-サ-・キニ-教授編集によるフォ-クナ-代表論文集に収載された。昨年11月初めから、本年2月未まで、NHKラジオ第2放送の番組の原書で読む世界の名作・ウィリアム・フォ-クナ-短篇集」に計16回出演し、「エミリ-のバラ」,「納屋を焼く」,「あの夕陽」,「赤い葉」について解説した。(出版計画あり)フォ-クナ-未発表短篇集を訳し、冨山房「フォ-クナ-全集」、第26巻として刊行の予定。目下、再校まで終了し,詳細な訳者解説を準備中である。ここでは,未発表作品と既刊作品との照合・対比を行ないつつ、フォ-クナ-の作品世界の成立過程をさぐることになっている。フォ-クナ-を、国際学界の祖野からも捉えるべく、国際的学術研究誌Faulkner Studiesを山口書店から出版した。目下、一巻二号の校正中である。新潟大学教育学部の集中講義で、ジェイムズ・ジョイスと対比しつつフォ-クナ-の特質について論じた。光学読み取り機で、フォ-クナ-の主要作品をフロッピ-に収めた。作品照合研究の有力な武器になるであろう。
トリチウム水による核酸損傷の分子構造

トリチウム水による核酸損傷の分子構造という統一テーマの基で、各班員は、各々の分担テーマを中心に研究を行った。高倉,石川は、トリチウム水照射によるプラスミドDNAの大腸菌に対する形質転換能の不活化の効率を調べた。線量率を種々かえて(500μCi/ml,100μCi/ml,10μCi/ml)の形質転換能の不活化の効率を調べた所、線量率の減少とは逆に、不活化の効率が増大していく、いわゆる賀田効化が認められた。実験使用前、トリチウム水保存中に蓄積された過酸化水素は、カタラーゼ処理をして、取り除いた後、実験に用いたが、処理をしなかったものと較べて、大きな差が生じ、形質転換能の不活化に与える過酸化水素の影響が確認された。また、トリチウム水照射とほゞ同じオーダーの低線量率でのCo-60γ線による照射を試み、RBEがほぼ1である事を確認した。γ線照射における線量率の問題は、トリチウム照射による損傷を正しく評価する上で、今後検討を続ける価値があると思われる。安田はまた、トリチウム水照射されたプラスミドDNAの形質転換能の効率を調べ、混在する過酸化水素の影響が大である事を確認している。また、培養動物細胞でのDNA鎖切断においても、過酸化水素の影響が認められ、カタラーゼ処理により、RBEがほゞ1になる事を示した。プラスミドDNA鎖では、鎖切断に過酸化水素の存在が影響した事もわかった。長谷川は、過酸化水素の定量を硫酸チタン法で行う事を試み、また、金属と過酸化水素の混在する系でのDNA鎖切断について種々の知見を得た。朝野は、トリチウムの生物学的影響の原因として、放射性壊変に伴う効果(T効果)を調べているが、本年度は、T効果による放射性ウラシルの分解について研究し、その分解率の平均値は約55%/【^3H】壊変、また分解生成物の総収率の平均値は約34%/【^3H】壊変としている。
脳血管障害者と家族の生活再構築にむけた看護支援:エンパワメントと協働

在宅で生活している脳血管障害者の生活の再構築という観点から看護ニーズ・学習ニーズを明らかにした。障害の程度が比較的軽度で日常生活が自立できていても、脳血管疾患による身体症状、情緒面の不安定、認知機能の変化等がみられており、生活全般に対する意欲の低下や社会生活の縮小に影響を与えていた。この調査結果と国内外の資料を検討して、脳血管障害者と家族が活用できる教育媒体を作成し、それを活用した看護支援の方法を検討した。平成18年度は初年度の取り組みとして、在宅で療養する脳血管障害者の援助ニーズ・学習ニーズを把握する目的で面接調査を行なった。調査内容は、先に行なった予備調査の結果ならびに先行研究を参考にして作成した。具体的には、体の状態と日常生活への影響の内容およびその対処、体調と心の状態、運動の取り組み、仕事や地域での交流に現状と意識、疾患理解や療養生活において必要な情報である。調査を行なった11名の性別は、男8名、女3名、年齢は60歳代3名、70歳代8名であり、疾患名は脳梗塞、脳出血、くも膜下出血であった。独居生活者は1名のみ。全員が日常生活は自立していたが、脳血管障害による症状として、痛み・しびれ、ろれつがまわらない、嚥下困難、疲れやすい、感情を押さえられないことを感じていた。医療者からの指導を受けている者もいたが、中には痛みが強く生活に支障があると伝えても主治医から痛みは治らないと言われてしまい、自分で開業医を探して対処している例もあった。体調と心の状態では、"身体機能が低下する不安"をいつも感じており、自分なりに考えた歩行訓練や運動を毎日行なっていた。"周囲の人がよそよそしいと感じる"ことが強くなり、発病以前の社会生活や交流関係を意識して縮小させていたが、同じ病気の人と体験を交流したいという希望もあった。これらの結果から、日常生活が自立できていても脳血管障害による症状によって生活に影響していること、周囲の人と発病前と同じように交流しにくいと感じていること、自分の体験や気持ちを表現できる場を求めていること等がわかった。また、脳血管障害者と家族への退院支援の実際について、活動実績のある山梨県内の医療機関を訪問して実地調査を行なった。医療機関内の関係職種が連携するとともに、退院前に病院職員が自宅を訪問して、退院後の生活環境を把握して退院指導に反映させていた。平成18年度に行った脳血管障害者11名の面接調査の結果を、症状や体調、精神心理面、社会参加、家族関係、学習の側面から分析し、援助ニーズ・学習ニーズを検討した。その結果、脳血管疾患による障害が経度の場合でも、しびれ、だるさなどの症状や体調の不調を感じている、精神・心理面では、身体機能低下の不安や発病前のように自由に動くことができないことへのもどかしさを感じている状況などから、多様で慢性的な症状への対処方法や体調管理の方法のアドバイスや学習の機会が求められる。仕事や地域での交流・活動の現状からは、発症前と同じではないことへの理解が周囲の人から得にくく、社会参加の機会があっても消極的になっていた。家族との関係では、これ以上負担をかけたくないと再発しないよう日常生活に注意を払っていた。これらのことから、軽症ゆえに医療職者と接触する機会の少ない在宅療養者には、同じ障害を持つ人同士の情報交換や学習の機会が必要と考えられた。脳血管障害者向けに日本語で書かれた療養生活に関する書籍を調べたが、その内容の多くは片麻痺の場合のリハビリテーションや寝たきりを防ぐ介護方法、介護保険制度等に関することであった。前述した調査結果に対応する内容が書かれている書籍もごく少数あったが、手軽に使うのは難しいものであった。脳血管障害に関する患者・家族教育が充実しているオーストラリアを訪問して現地調査を行ったところ、再発予防、リハビリテーション、身体面・精神面・社会生活面の多側面からみた回復過程について説明された資料が作られ、患者と家族のケアに活用されていた。以上のことから、長期に渡る脳血管障害の回復過程の見通しを持つことができ、慢性的な症状への対処方法や体調管理の方法、社会生活を縮小しないための工夫などを盛り込んだガイドブックを作成し、それを用いて脳血管障害者が自身のセルフケア方法を学ぶための支援を今後検討する。平成18・19年度に行った調査ならびに資料分析等の結果を踏まえて、脳血管障害とともに生きながら生活の再構築させていくことの助けとなるガイドブックを作成した。ガイドブックの構成は、「脳卒中についての説明」「脳の障害と後遺症」「脳卒中後にみられる体調不良の内容と対処方法」「再発予防の留意点」「地域の相談窓口や脳卒中友の会、利用可能な施設一覧」となっており、体調不良への対処方法、リラクゼーションの方法などを具体的に示している。また、ガイドブックの別冊として体験やメモに活用できるノートを作成した。

これは療養生活において“思わずわらってしまったこと"“これからやってみたいこと"などを記すようになっており、“できないこと"ではなく“できていること"“やってみたいこと"を書くことによって意識化し生活目標とすることを狙いとしている。作成の過程では、脳血管障害者へのケアに従事している看護職者の意見を参考とし、読みやすくするためにイラストを使用したり専門用語の表現を理解しやすい平易な表現にしたりする工夫をこらした。このガイドブックを用いる方法としては、個別支援と集団支援の両方が可能である。また、使用する時期としては回復期リハビリテーションの実施と並行してガイドブックを用いてグループワークや個別指導を行うことによって、退院後の在宅生活でも活用できるようになると考えられる。ガイドブックの作成を進める一方で、脳卒中患者の医療環境の現状について情報収集を行った。A県内では脳卒中地域連携パスを用いて脳卒中患者の医療情報の連携方法の検討が医師を中心に行われているが、看護の継続性を持たせるための方策についての検討は十分とはいえない。
アニオン交換輸送体AE1の膜トラフィック制御メカニズム

分泌タンパク質や膜タンパク質は小胞体(ER)で産生され、内在アミノ酸配列による輸送モチーフによって選別され、細胞内の適切な場に輸送されその機能を発揮する。申請者らは、牛AE1のN末端近傍に存在するΦXΦXΦ(Φは疎水性アミノ酸、Xは任意のアミノ酸を表す)配列が小胞体からゴルジ装置(Golgi)への輸送を効率化していることを明らかにしてきた。本研究の最終目的は「新規モチーフ配列によるER-Golgi間輸送の分子基盤の解明」である。この新規配列がタンパク質間相互作用に重要であるとの仮説のもと、ΦXΦXΦ配列と結合するタンパク質の同定を試みた。AE1のN末端領域を含むペプチドを精製し、それをBaitとして用いてHEK293T細胞の細胞可溶化物と反応させたところ、牛AE1のN末端領域を含むペプチド(ΦXΦXΦ配列を含む)と特異的に結合する、見かけの分子量が約120kDaと85kDaのタンパク質が検出された。それらのバンド抽出物に対しFT-MS/MSによる質量分析を行った結果、それぞれの抽出物からSec24アイソフォームCとSec23アイソフォームAのペプチドが同定され、特異抗体を用いたイムノブロットおいても、実際にそれらのタンパク質のシグナルが検出された。さらに詳細な解析の結果、牛AE1のN末端ペプチドはCOPII小胞複合体のうちSec24Cと直接結合しており、その相互作用にSec24Cの895番目から897番目のアミノ酸配列(L895IL)が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。以上の結果から、ΦXΦXΦ配列は新規モチーフ配列としてSec24に認識されることによって、ER-Golgi間の輸送を効率化していることが実証された。申請者らは牛AE1のN末端近傍に存在するΦXΦXΦ(Φは疎水性アミノ酸、Xは任意のアミノ酸を表す)配列が、小胞体からゴルジ装置(Golgi)への輸送を効率化していることを明らかにしてきた。本研究の目的は「新規モチーフ配列によるER-Golgi間輸送の分子基盤の解明」であり、ΦxΦxΦ配列がタンパク質輸送にもたらす影響について検討を行った。小胞体からのタンパク質輸送はCOPII小胞が担っていることが明らかとなっており、まずはこのCOPII小胞構成タンパク質と牛AE1との相互作用について検討を行った。作製したコンストラクトは予想通りの分子量のタンパク質を発現させ、細胞内局在の観察結果においても、既存の報告通りCOPII小胞構成タンパク質の核周囲への局在が認められた。しかしながら、免疫沈降の結果では牛AE1とcOPII小胞構成タンパク質との相互作用は観察されなかった。次に、プルダウン法による相互作用タンパク質の探索のため、AE1のN末端領域リコンビナントタンパク質の発現コンストラクトを作製した。現在、細胞可溶化物に対してプルダウン法による解析を行っているところである。また、このΦXΦXΦ配列は牛AE1内には存在するが、ヒトAE1内には存在しない。この種差について検討するため新たに馬、犬、マウスのcDNAライブラリーからAE1をクローニングし、そのN末端構造の比較を行った。ΦXΦXΦ配列は馬、マウスのAE1には存在したが、犬マウスのN末端領域には存在しなかった。レポータータンパク質によるキメラタンパク質モデルの解析において、ΦxΦxΦ配列の有無がやはりER-Golgi間輸送に影響を及ぼしていることが明らかとなった。本研究の目的は「新規モチーフ配列によるER-Golgi間輸送の分子基盤の解明」であり、ΦXΦXΦ配列がタンパク質輸送にもたらす影響について検討を行った。ER-Golgi間輸送はCOPII小胞により行われており、ゴルジ装置へ運ばれるタンパク質の認識はCOPII小胞構成因子であるSec24が担っていることが明らかになっている。従って、新規モチーフ配列についてもCOPII小胞を構成するタンパク質と相互作用することで輸送小胞へ組み込まれ、輸送が効率化していることが予想される。本年度はΦXΦXΦ配列と相互作用するタンパク質を同定するため、AE1のN末端領域を含むペプチドを精製し、それをBaitとして用いて、HEK293T細胞の細胞可溶化物と反応させ、SDS-PAGEおよびCBB染色にて結合タンパク質を分離、可視化した。その結果、牛AE1のN末端領域を含むペプチド(ΦXΦXΦ配列を含む)に特異的に結合する、見かけの分子量が約120kDaと85kDaのタンパク質を分離することができた。これらの分子量はそれぞれSec24とSec23に相当する大きさであり、特異抗体を用いたイムノブロットにて、実際にそれらがこれらのCOPII構成タンパク質であることが明らかとなった。以上の結果から、ΦXΦXΦ配列はモチーフ配列としてSec24に認識されることによって、ER-Golgi間の輸送を効率化していると考えられる。

分泌タンパク質や膜タンパク質は小胞体(ER)で産生され、内在アミノ酸配列による輸送モチーフによって選別され、細胞内の適切な場に輸送されその機能を発揮する。申請者らは、牛AE1のN末端近傍に存在するΦXΦXΦ(Φは疎水性アミノ酸、Xは任意のアミノ酸を表す)配列が小胞体からゴルジ装置(Golgi)への輸送を効率化していることを明らかにしてきた。本研究の最終目的は「新規モチーフ配列によるER-Golgi間輸送の分子基盤の解明」である。この新規配列がタンパク質間相互作用に重要であるとの仮説のもと、ΦXΦXΦ配列と結合するタンパク質の同定を試みた。AE1のN末端領域を含むペプチドを精製し、それをBaitとして用いてHEK293T細胞の細胞可溶化物と反応させたところ、牛AE1のN末端領域を含むペプチド(ΦXΦXΦ配列を含む)と特異的に結合する、見かけの分子量が約120kDaと85kDaのタンパク質が検出された。それらのバンド抽出物に対しFT-MS/MSによる質量分析を行った結果、それぞれの抽出物からSec24アイソフォームCとSec23アイソフォームAのペプチドが同定され、特異抗体を用いたイムノブロットおいても、実際にそれらのタンパク質のシグナルが検出された。さらに詳細な解析の結果、牛AE1のN末端ペプチドはCOPII小胞複合体のうちSec24Cと直接結合しており、その相互作用にSec24Cの895番目から897番目のアミノ酸配列(L895IL)が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。以上の結果から、ΦXΦXΦ配列は新規モチーフ配列としてSec24に認識されることによって、ER-Golgi間の輸送を効率化していることが実証された。本年度は相互作用タンパク質の同定に力を注ぎ、期待通りにタンパク質の分離・同定をすることができた。今後その機能について解析し、より詳細な分子機構を明らかにしていくための大きな一歩を踏み出すことができたと確信している。申請者らはこれまでに牛アニオン交換輸送体AE1のN末端新規モチーフ配列ΦXΦXΦ(Φは疎水性アミノ酸、Xは任意のアミノ酸)が、Sec24と相互作用することによってER Golgi間輸送の効率化に働くことを明らかにしてきた。今後は、siRNAを用いたノックダウン実験によって、実際にSec24が細胞内での輸送効率化に寄与しているのかについて明らかにする予定である。また、このΦXΦXΦ配列が極性細胞において、どのような働きを担っているのかについて、MDCKI細胞を用いた実験により明らかにしていきたいと考えている。
東南アジアにおける日本に脅威となる豚の越境感染症の病理学的調査・解析

東南アジアにおける日本の脅威となる豚の越境感染症のうち、豚コレラについて病理学的調査を実施している。日本でも現在、新しく発症して養豚場でも大きな問題となっている。東南アジアのうち、ベトナムとミャンマーについて調査したが、ベトナムでは病理学的調査が進行している。ベトナムでも、高病原性のPRRSと肉眼的、臨床的に類似点が多いので、病理学的に調査することには意義がある。ベトナムの4県の異なった農場でアウトブレークした20-50日齢の子豚と母豚の12頭を豚コレラの病理解剖を行った。症例はOIEの推奨するリアルタイムPCRすべて急性症例で死亡率は10-70%であった。アウトブレークの期間は1-2週間であった。外貌は10頭のうち6頭の体幹部皮膚に発疹が、9頭の耳には斑状出血が見られた。共通した剖検所見としては脳の充血、下顎リンパ節の充出血、腸間膜リンパ節の充出血、耳にみられた斑状出血であった。その他腎臓等にも出血が見られた。組織学的には脾臓とリンパ節のリンパ球著明な減少と充血、扁桃の拡張とリンパ球の著明な減少、間質性気管支肺炎、非化膿性脳炎等がみられた。抗豚コレラ抗体を用いた免疫化学染色では、脳、扁桃、唾液腺、リンパ節、肺、胃、小腸、大腸、腎臓に陽性を認めた。細胞としては、リンパ球、上皮細胞、血管内皮、神経細胞に陽性が見られ、多種類の細胞が陽性、すなわち、ウイルスが増殖することがわかった。同新鮮材料をストックし、遺伝子RNAを抽出した。その遺伝子についてRT-PCRを行い、シークエンスを行っている。このデータは整理して学会報告又は論文にする。さらに、ベトナムでは豚流行性下痢(PED)が10年以上発生している。日本では2013年から大発生し、近年散発的になったが、その状況は不明である。日本での発生を解析した上で、ベトナムの症例について病理学的解析を行う。東南アジアにおける日本の脅威となる豚の越境感染症のうち豚コレラの病理学的調査を実施した。もっとも、日本に越境感染症として危惧される感染症であり、日本でも現在、新しく発症して養豚界で大問題となっている。しかし、日本では病態の詳細は不明のまま殺処分が実施されている。東南アジア諸国のうち、ベトナムの豚コレラの病理学的調査をすすめた。常在化している高病原性のPRRSと肉眼的、臨床的に類似点が多いので、病理学的に調査することには意義があり、明確にする必要がある。ベトナムの4県の異なった農場で発生した計12頭を豚コレラの病理解剖を行った。症例は地区毎に別々に発症したものの、OIE推奨リアルタイムPCRにより全例ウイルス陽性、死亡率10-70%の急性症例である。アウトブレークの期間は1-2週間で、外貌所見、剖検所見、組織学的検索をすすめた。その後、抗豚コレラウイルス抗体で、ウイルス局在を調べ、上皮、リンパ球、血管内皮に陽性を見いだしそれぞれの場所で増殖していることを見いだした。現在は、データ整理中で、さらに詳細に解析する必要があれば他の抗体用いて解析する。さらに、同新鮮材料をストックし、遺伝子RNAを抽出し、その遺伝子についてRT-PCRを行い、シークエンスを行っている。データは整理され次第学会で報告し、論文にもする。概ね順調である。ベトナム以外でも、ミャンマーのイエジン獣医大学、タイの大学、マレーシアのプトラ大学でも打合せを行っている。現在、死亡率の高いアフリカ豚コレラ(ASF)が中国からベトナムへ広がりメコンデルタまで見られるようになってきた。それに伴って農場へ入っての材料採取に制限がかかる可能性があるので状況を見守る必要がある。ASFは豚に大損害を与える危険な重要疾病であるが蔓延防止のため材料入手の困難、又は不可能であることが予想され、現在病理学的解析の予定はしていない。東南アジアにおける日本の脅威となる豚の越境感染症のうち、豚コレラについて病理学的調査を実施した。これまで日本に越境感染症としてもっとも危惧される感染症であり、現在、日本でも侵入経路は不明確であるが新しく発生して養豚界では大きな問題となっている。しかし、病態の詳細はわからずに殺処分のみが実施されている。東南アジアのうち、ベトナムについて病理学的調査をすすめた。さらに遺伝子検査をすすめ系統樹解析を行う。今後は、他の国ミャンマーについての豚コレラ発生について、病理学的調査研究を進める。また、ベトナムにおいては、豚下痢症(PED)の発生は常時本ウイルスが存在し治まらない。日本では、治まったり、ぶり返したりしているが、日本での調査も加えて、解析した上でベトナムでの調査を始める。特に注目すべきは、ベトナムでは多様なPEDウイルス株が存在し、日本の状況とは異なり問題が大きい。治まる気配は全くなく、越境感染症の原因となる。日本では、従来と感染部位には変化が出てきているとされているが(パーソナルコミュニケーション)、ベトナムでも、小腸、大腸、肺のウイルス局在が従来のものと同じかを調査する。さらに、免疫組織化学的染色に使用するモノクローナル抗体作成のためにベトナムで、組換え抗原作成を行い、その後のマウスに接種する過程に備える。この抗体では最初に豚コレラについての抗体を作成し、成功することによって、次に口蹄疫について抗体を作成する。

日本でも現在、新しく発症して養豚場でも大きな問題となっている。東南アジアのうち、ベトナムとミャンマーについて調査したが、ベトナムでは病理学的調査が進行している。ベトナムでも、高病原性のPRRSと肉眼的、臨床的に類似点が多いので、病理学的に調査することには意義がある。ベトナムの4県の異なった農場でアウトブレークした20-50日齢の子豚と母豚の12頭を豚コレラの病理解剖を行った。症例はOIEの推奨するリアルタイムPCRすべて急性症例で死亡率は10-70%であった。アウトブレークの期間は1-2週間であった。外貌は10頭のうち6頭の体幹部皮膚に発疹が、9頭の耳には斑状出血が見られた。共通した剖検所見としては脳の充血、下顎リンパ節の充出血、腸間膜リンパ節の充出血、耳にみられた斑状出血であった。その他腎臓等にも出血が見られた。組織学的には脾臓とリンパ節のリンパ球著明な減少と充血、扁桃の拡張とリンパ球の著明な減少、間質性気管支肺炎、非化膿性脳炎等がみられた。抗豚コレラ抗体を用いた免疫化学染色では、脳、扁桃、唾液腺、リンパ節、肺、胃、小腸、大腸、腎臓に陽性を認めた。細胞としては、リンパ球、上皮細胞、血管内皮、神経細胞に陽性が見られ、多種類の細胞が陽性、すなわち、ウイルスが増殖することがわかった。同新鮮材料をストックし、遺伝子RNAを抽出した。その遺伝子についてRT-PCRを行い、シークエンスを行っている。このデータは整理して学会報告又は論文にする。さらに、ベトナムでは豚流行性下痢(PED)が10年以上発生している。日本では2013年から大発生し、近年散発的になったが、その状況は不明である。日本での発生を解析した上で、ベトナムの症例について病理学的解析を行う。東南アジアにおける日本の脅威となる豚の越境感染症のうち豚コレラの病理学的調査を実施した。もっとも、日本に越境感染症として危惧される感染症であり、日本でも現在、新しく発症して養豚界で大問題となっている。しかし、日本では病態の詳細は不明のまま殺処分が実施されている。東南アジア諸国のうち、ベトナムの豚コレラの病理学的調査をすすめた。常在化している高病原性のPRRSと肉眼的、臨床的に類似点が多いので、病理学的に調査することには意義があり、明確にする必要がある。ベトナムの4県の異なった農場で発生した計12頭を豚コレラの病理解剖を行った。症例は地区毎に別々に発症したものの、OIE推奨リアルタイムPCRにより全例ウイルス陽性、死亡率10-70%の急性症例である。アウトブレークの期間は1-2週間で、外貌所見、剖検所見、組織学的検索をすすめた。その後、抗豚コレラウイルス抗体で、ウイルス局在を調べ、上皮、リンパ球、血管内皮に陽性を見いだしそれぞれの場所で増殖していることを見いだした。現在は、データ整理中で、さらに詳細に解析する必要があれば他の抗体用いて解析する。さらに、同新鮮材料をストックし、遺伝子RNAを抽出し、その遺伝子についてRT-PCRを行い、シークエンスを行っている。データは整理され次第学会で報告し、論文にもする。概ね順調である。