hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト血液脳関門有機カチオン-プロトン交換輸送系の薬物認識性と実体の解明

この細胞の栄養物質並びに薬物トランスポーターの遺伝子発現を検討したところ、hCMEC/D3細胞における発現と弱い相関がみられた。モノカルボン酸輸送系、BCRPなどのトランスポーターの発現はhCMEC/D3細胞に比べて10倍以上高かった。一方、P-gpの発現は弱かった。このように、hiPS-BMECとhCMEC/D3細胞では遺伝子発現に差異がみられたものの、ジフェンヒドラミンを基質とするプロトン-有機カチオン交換輸送系の輸送能は保持していることが明らかになった。本年度の課題はほぼ達成したが、今回作製したiPS-BMECのプロトン-カチオン交換輸送系の活性は、hCMEC/D3細胞と大きな差異はなく、輸送活性の変動を利用した差分解析には至らなかった。しかし、本助成金をもとにiPS-BMECを調整できたことは大きな進歩であり、論文化を急いでいるところである。本研究の目的は「ヒト血液脳関門(BBB)のプロトンー有機カチオン(H+/OC)交換輸送系の薬物分子認識性および実体を解明すること」であった。昨年度は異なるBBB細胞(ヒトiPS細胞由来脳毛細血管内皮細胞(hiPS-BMECs)とヒト不死化脳毛細血管内皮細胞(hCMEC/D3))におけるトランスポーター遺伝子の発現解析とH+/OC交換輸送系の活性について検討した。その結果、hiPS-BMECsとhCMEC/D3細胞では既知トランスポーター分子の発現に差異がみられたものの、両細胞でH+/OC交換輸送系の輸送能は保持していることがわかった。本プロジェクトと平行して、我々の研究グループはfunctional based molecular cloning (FBMC)法を開発し、H+/OC交換輸送系の輸送活性が大きく異なるクローンを選別した。このクローン細胞を用いて、差分解析によりH+/OC交換輸送系の分子実体の解明を試みた。まず、FBMC法で得られた31の候補分子の遺伝子をsiRNAでノックダウンし、H+/OC交換輸送系の基質であるバレニクリンの取り込みを測定した。その結果、9種のノックダウン細胞でバレニクリンの取り込みがコントロールに比べて有意に減少した。次に、この中の6種の遺伝子の過剰発現細胞をHEK293細胞で作製し、バレニクリンの取り込みを測定した。導入した遺伝子はいずれも1000倍以上過剰発現していることが確かめられたが、バレニクリンの取り込みについては有意な上昇はみられなかった。以上、本研究の最終目標であるH+/OC交換輸送系の分子同定には至らなかったものの、基質認識性、FBMC法の開発など多くの重要な知見が得られた。本年度の課題はほぼ達成したが、残された課題は有機カチオン-プロトン交換輸送系の基質探索に必要な化学構造上の特徴を明らかにすることである。そのために、薬物の物性のみならず、他のトランスポーターへの認識性など、情報を集めて整理する。この課題とは別に、有機カチオン-プロトン交換輸送系の分子実体をみつけるため、hCMEC/D3細胞のみならず、他のBBB細胞(正常ヒト脳毛細結果内皮細胞, iPS細胞由来BBB細胞)を用いて有機カチオン-プロトン交換輸送系輸送活性の差異を明らかにする。
脂肪組織由来幹細胞から再生した組織の皮弁移植

前年度同様にF344ラットの脂肪組織由来幹細胞(以下ASC)を採取し、2回継代培養した後にβ-TCPに播種し骨分化誘導培地内で培養したものを同種ラットの両側側腹部皮下に移植した。6週間後、片側のASC/β-TCP複合体を内包する形で浅腸骨動静脈皮弁として挙上し、血管茎を4時間clumpして一過性虚血状態にした後に開放し、元の位置に戻した。その2週間後に両側の組織を摘出した。摘出標本はHE染色およびオステオカルシン免疫染色により組織学的に評価した。コントロールとして骨分化させていないASC/β-TCP複合体、幹細胞を含まないβ-TCPも同様に評価した。その結果、ASCの有無や分化の有無にかかわらず、皮弁化した組織のほうが皮下移植群に比べ組織内に侵入する血管密度が増加していた。またオステオカルシン免疫染色においては、骨分化誘導培地内で培養されたASCを播種した群において陽性細胞数が有意に増加していた。さらに皮弁化された複合体におけるオステオカルシン陽性細胞は皮下移植群と比べ明らかな有意差は認められなかった。以上より、(1)骨分化ASC/β-TCP複合体より再生された骨組織は皮弁化することでより多くの血液供給を受けることが出来、(2)再生骨組織を皮弁化した後に移植しても骨組織としての形質は維持されることがわかった。従って予め異所性に作成した再生組織を皮弁化することで目的とする場所へ安全に移動可能であることが示唆された。F344系ラット左鼡径部から我々がこれまでに報告してきた脂肪組織由来幹細胞を含むASC精製プロトコールに従ってASCを獲得した。すなわち、約1gの脂肪塊を採取し、細切した後コラゲナーゼ処理し、幹細胞を含むと考えられる間質細胞を採取した。この初代継体ASCを10%FBS添加DME培地内で培養、継代を繰り返した。第2継代ASCをトリプシン処理後、細胞浮遊液を作成し移植に供した。その細胞を気孔を有するハイドロキシアパタイトからなるscaffoldに播種し(以下再生組織と称す)、脂肪を採取したラットの脂肪採取部皮下に移植した。1か月後、その再生組織を内包する形でSuperficial inferiorepigastric vesselsを茎とする常径皮弁を採取し、反対側鼡径部の大腿動静脈と顕微鏡下に吻合した。さらに2週間後、再生組織を摘出し、ホルマリン固定および脱灰処理後、パラフィン切片を作成し、HE染色にて組織学的に評価した。一方コントロールとして、鼡径部皮下に移植したのみの再生組織も同様に評価した。その結果、皮弁とともに移植した再生組織は、コントロールの再生組織と同様、形態的にはほぼ変化なく移植さてれていた。また組織学的には気孔の中に骨組織及び骨髄の形成を認めた。次年度以降については、今回形成された骨様組織中に含まれる骨芽細胞の免疫組織化学による同定、および再生軟骨組織を用いた同様の研究を予定している。
大規模な意思決定のための匿名保証型DSSの開発

実験用匿名保証型DSSを以下の形式的仕様で構築した(主にWeb技術とRDBを基礎に用いた)。参加者集合M(Mn,n=1..N),ハンドルネーム集合H(Hn,n=1..N),発言集合D(Dx,x=1..d_max),評価選択肢集合C(Cy,y=1..c_max)とし(括弧は要素),HnのDxへのz回目の評価をEz(Hn,Dx)とする(型はCの要素の組。最新のEz(Hn,Dy)をEont(Hn,Dy)とする)。MとH間の1対1対応は管理者を含め隠蔽される。Dの要素別に各Hnの評価系列を公開するが,特にEont(Hn,Dy)を整形して表示する形式とした。前提する過程は以下の通り。1)テーマ設定,2)多数案に対する「検討保証」等の価値設定,3)協力者へのハンドルネームのランダム設定,4)討議(署名評価)。匿名保証型DSSの議論の質への貢献をA)反対案や代替案の提出が増し,B)無責任な発言が抑制されるか否かの観点から実験的に検討した。商工会議所(意見提出先等でなく全職員の討議参加)等の協力で市民対象の利用実験を3度行った。協力者はファシリテータを除き計132名。この他に各132名の学生実験を2度行った。学生実験も含め,結果過程から以下の点を見出した。a)意見総数は増加しなかった,b)他者の意見への評価傾向が同様の実名実験と比べ変化した(本心の評価と判断される),c)無責任な問題発言は生じなかった。以上,従来理論のみであった匿名保証型DSSの最初の実験データを得た。A)に弱く,B)に強い肯定的結果となった。実験結果に関して,ハンドルネームを用いた署名評価とその公表には,匿名でも品行方正を促す効果と,自然な発言を抑制する効果の双方があると仮説を立てた。また,後者の抑制は,対立点の強調を避ける心理の表れであり,意見相互の収斂支援の技術を加えることで改善できると予想した。同技術は今後の課題である。本研究のDSS設計は現時点でも国際的に独創性が高く,実用化の見込も大きい。また,プライバシ保全技術としての応用可能性も現れている。a)実験用の匿名保証型DSSのインプリメント,b)内外の関連資料の収集,c)討議実験と評価,d)研究成果の発表を行った。各作業は,具体的には以下のように行った。a):現実の意思決定機関に対し議案提出を行うための匿名討議システムの雛型を構築した。匿名性と責任感の維持の両立を図るため,匿名性を保証する代わりに全参加者に唯一不変もしくは少数不変のハンドルネームを与え,情報の受発信の履歴が各参加者を特徴づけていく環境とした。b):既存のコミュニケーションシステムに関し,匿名性による不法な発言に対処するための対処法の調査を行った。DSS研究に関しても同様の調査を行った。不法な発言を招かないためのコーディネータの役割は比較的に大きく見積もられることが判った。ただし,現在までのところ,本研究におけるようなシステム的対処を合わせて行った前例は見出されていない。c):次年度に行う本格的な討議実験の準備として,システムの動作確認を目的に,異なる大学で2030人規模の学生実験を2度行った。動作不良の箇所は見出されず,議論の質の向上に関する実験協力者の評価も良好だった。しかし,参加学生の討議状況より,結果的に匿名性が失われる状況(全員一致の場合等を含む)や文脈が失われる状況(発言者が文脈よりも発言回数を重視する場合等)が比較的容易に生じ得ることが判った。また,これらの問題には,投票集計ルーチンに詳細な投票結果を隠蔽する機構を含める技法や,発言資格を確率的に変動させる枠組みが有効であると判断した。現在,この観点から設計システムに改良を加えつつある。d):匿名保証型DSSを紹介するとともに学生実験で得られた知見を説明するため,当初の計画通り,情報処理学会・社会情報学会(JASI, JSISの両学会)・情報文化学会・経営情報学会で大会報告を行った。また,16年度に開催される国際会議への投稿も行っている。匿名保証型DSSの議論の質への貢献をA)反対案や代替案の提出が増し,B)

無責任な発言が抑制されるか否かの観点から実験的に検討した。商工会議所(意見提出先等でなく全職員の討議参加)等の協力で市民対象の利用実験を3度行った。協力者はファシリテータを除き計132名。この他に各132名の学生実験を2度行った。学生実験も含め,結果過程から以下の点を見出した。a)意見総数は増加しなかった,b)他者の意見への評価傾向が同様の実名実験と比べ変化した(本心の評価と判断される),c)無責任な問題発言は生じなかった。以上,従来理論のみであった匿名保証型DSSの最初の実験データを得た。A)に弱く,B)に強い肯定的結果となった。実験結果に関して,ハンドルネームを用いた署名評価とその公表には,匿名でも品行方正を促す効果と,自然な発言を抑制する効果の双方があると仮説を立てた。また,後者の抑制は,対立点の強調を避ける心理の表れであり,意見相互の収斂支援の技術を加えることで改善できると予想した。同技術は今後の課題である。本研究のDSS設計は現時点でも国際的に独創性が高く,実用化の見込も大きい。また,プライバシ保全技術としての応用可能性も現れている。
ベクトル量子化アルゴリズムを用いたスマイルの三次元動態解析

本研究の目的は個体内でのスマイルの個性について明らかにするとともに,顎顔面の解剖学的形態と表出されるスマイルとの関連について解明することである。3Dデジタイザ(Danae1OOSP,NECエンジニアリング)等を用いた表情の三次元動画像の解析により、1)右半側の顔面の幅が左半側よりも広い被検者の発現頻度が高く、またオトガイが左側に変位する被検者の発現頻度が高いことなどが示された。この結果はAngle Orthodontist誌に掲載された。2)Voluntary Smile表出時における口角の変位は左右非対称であり、左側の口角の変位が大きい一側優位性を示すことが明らかとなった。また、顔の左右半側の大きさが相違している場合とそうでない場合とで、表情表出の対称性に異なった傾向が現れる可能性が示唆された。この結果はThe Mouth and Face Forum 2008 in silico Dentistry,Osakaにて発表され、American Journal of Orthodontics and Dentofacial Orthopedics誌に投稿予定である。以上の成果より、ヒトの笑顔の特徴、とりわけ左右対称性に関する知見が得られた。これは歯科矯正治療および形成外科学の分野において、治療前後のスマイルを評価する際に重要な評価項目となるものである。また、3)安静時とVoluntary Smile表出時の頬部の表面形状の変化について、年齢によって差があることが示唆され、この結果はThe Mouth and Face Forum 2008 in silico Dentistry,Osakaにて発表された。この成果により、表情のAgingを定量的に評価することが可能となった。本研究の目的は個体内でのスマイルの類似性と個体間でのスマイルの相違性,すなわちスマイルの個性について明らかにするとともに,顎顔面の解剖学的形態と表出されるスマイルとの関連について解明することである。このため、3Dデジタイザ(Danae100SP, NECエンジニアリング)を用いた表情の三次元動画像解析システムを構築した。その上で若干名の被験者を用いて計測精度実験および顔面上の計測座標系の設定方法について検討を行うとともに、モーズレイ性格検査(MPI)を用いて、気分や性格が表情に与える影響を検討した。この結果については現在報告論文を作成中である。さらに大阪大学大学院歯学研究科倫理委員会の承認および本人の承諾を得て成人男女合計76名を被験者としてPosed smileをはじめとしたいくつかの種類の表情の記録を行い、Rest時の顔面の3次元形態と表情表出時の3次元形態を、ベクトル量子化を用いた分析手法を応用して解析を行っており、現在データの解析中である。被験者に関しては、大阪大学歯学部附属病院矯正科に来院され歯科矯正治療を受診希望の患者についても採得後資料の研究目的利用に関して大阪大学大学院歯学研究科倫理委員会の承認を得ており、そのための環境が整備され次第データ採得が開始される予定である。また、本研究の一部である顎顔面の解剖学的形態の左右差について、「顔の非対称の左右差について」と題して第64回日本矯正歯科学会に発表を行い、優秀発表賞を受賞した。その詳細についてはAngle Orthodontist誌に投稿予定である。このため、3Dデジタイザ(Danae100SP,NECエンジニアリング)を用いた表情の三次元動画像解析システムを構築し、被検者を用いた資料採得および解析作業を進行中である。現在すでに、モーズレイ性格検査(MPI)を用いて、気分や性格が表情に与える影響を検討し、この結果について第82回ヨーロッパ矯正学会および第65回日本矯正歯科学会で発表し、現在報告論文を作成中である。さらに大阪大学大学院歯学研究科倫理委員会で承認された同意書に基づく本人の承諾を得て、成人男女合計200名についてPosed smileをはじめとしたいくつかの種類の表情の記録を行い、Rest時の顔面の3次元形態と表情表出時の3次元形態を解析し、スマイル時の頬部の表面形状の変化について第82回ヨーロッパ矯正学会で発表した。また、本研究の一部である顎顔面の解剖学的形態の左右差について、左右の顔の大きさおよびオトガイの偏位方向に一側優位性があることを示唆する結果を得て、その内容をAngle Orthodontist誌に投稿中である。さらに表情の左右差についても定量的に解析を行い、その詳細について本年度中にAngle Orthodontist誌に投稿予定である。

以上の成果より、ヒトの笑顔の特徴、とりわけ左右対称性に関する知見が得られた。これは歯科矯正治療および形成外科学の分野において、治療前後のスマイルを評価する際に重要な評価項目となるものである。また、3)安静時とVoluntary Smile表出時の頬部の表面形状の変化について、年齢によって差があることが示唆され、この結果はThe Mouth and Face Forum 2008 in silico Dentistry,Osakaにて発表された。この成果により、表情のAgingを定量的に評価することが可能となった。
文楽人形遣いにおける阿吽の呼吸の分析

文楽における人形遣い間の協調を調べるために,(1)「ず」が合図として重要なのかどうか,(2)主遣いの「ず」の出し方が経験に依るかどうか,ならびに(3)人形遣い間の呼吸の同期が演技において「息が合う」ことを意味するのかどうかを検討した.その結果,(1)「ず」が協調の重要な合図として機能していること,(2)「ず」の出し方は経験に依らないこと,(3)呼吸の同期は演技において「息が合う」ことを意味はしないことが示唆された.文楽における人形遣い間の協調を調べるために,(1)「ず」が合図として重要なのかどうか,(2)主遣いの「ず」の出し方が経験に依るかどうか,ならびに(3)人形遣い間の呼吸の同期が演技において「息が合う」ことを意味するのかどうかを検討した.その結果,(1)「ず」が協調の重要な合図として機能していること,(2)「ず」の出し方は経験に依らないこと,(3)呼吸の同期は演技において「息が合う」ことを意味はしないことが示唆された.文楽人形遣いにとって「息の合った」状態とは何かを科学的に明らかにするために,主遣いが他の人形遣いに発する合図であり,人形動作自体に隠されている「ず」がどのようにして合図として機能しているのかを詳細に分析することが目的である.この目的のために,まず,人形動作の取得が可能な,センサーを内蔵した計測用文楽人形(男役の立役の人形)を設計し,実際の製作を人形細工師に依頼した.具体的には,傾城反魂香に登場する狩野雅楽之介の人形の内部12箇所(頭2箇所,両手に3箇所ずつ,胴体2箇所,両足に1箇所ずつ)に磁気センサーを設置し,東京大学が所有している3次元磁気式位置計測システムによって各点の位置計測が可能な人形を設計した.次に,既に製作した女形の政岡の人形を用いて,3人の人形遣いが協調して1体の人形を遣う際に司令塔の主遣いが発する合図である「ず」の役割を明らかにするために,(1)「ず」のみが使える場合,(2)「ず」と演目情報(どんな人形動作を行うのかに関する情報)が使える場合,(3)「ず」,演目情報,音楽情報(三味線による演奏と義太夫節を指す)が使える場合とで,人形動作を計測して比較した.その結果,(1)の「ず」しか使えない場合でも,基本的な人形動作は実現可能であったことから,「ず」が人形操作において主要な合図としての役割を果たしていることが示唆できた.さらに,動作の型の速度を変化させた場合でも「ず」自体の速度は変わらないこと,左右方向で10cm程度離れた物体を区別できる程度の精度を「ず」が有することなど,「ず」の性質を明らかにした.文楽人形遣いにとって「息の合った」状態とは何かを科学的に明らかにするために,本年度は人形遣いの呼吸に焦点を当てて分析を行った.スポーツや洋舞などでは,プレーヤーや演者が熟達するにしたがって,身体運動のある特定のタイミングに彼ら自身の呼吸相が同期することが確かめられてきた.これに対して,能楽では,所作や型などの基本的な演技動作を行った場合,舞台歴の短い演者に比べ,舞台歴の十分に長い演者の身体運動と呼吸相は非同期的になり,両社が互いに独立に行われることが示唆されている(小林・森下,2000;森田).そこで本研究では,同じ日本の伝統芸能でありながら芸態が異なる文楽の人形遣いを対象に,同様な現象が見られるかどうかを検討した.具体的には、人形の演技動作と,三人の人形遣いのうちリーダーであり,演技動作のタイミングなどを決定する「主遣い」の呼吸相の関係を検討した.その結果,型を演じる場合には,能楽の場合と同様に,舞台歴の長い演者の方が短い演者よりも,演技動作と呼吸相とが非同期的になる傾向が確認された.さらに,呼吸曲線の自己相関を算出したところ,舞台歴の長い演者の相関が高いという結果が得られた.これは,舞台歴の長い演者の方が短い演者よりも一定の呼吸を行っていることを示唆している.しかし,型ではなく,舞台上と同様に浄瑠璃に合わせて演技した場合には,舞台歴の長短によらず呼吸の一定性が低下した.その現象の原因を調べた結果,人形遣いの呼吸が,浄瑠璃の語り手である大夫が息を吸うタイミングとある時間幅をもって同期している可能性が示唆された.以上の知見は,文楽研究に新たな知見を与えるものだと言える.認知科学

磁気センサーを内蔵した狩野雅楽之介の人形の製作が本年度内に終了する予定であったが,立ち役の人形は女形の人形に比べて金属を利用している部分(例えば,人形遣いが足を操作するための足金)が多く,できるだけ金属を使わないように人形を製作すべく,人形細工師と相談の上で何度か設計図を書き直したため,製作が若干遅れている.しかしながら,平成26年度4月末には人形本体が,6月前半には鬘と衣装が完成する予定のため,研究の進捗に大きな問題は生じない.また,「ず」の性質については,当初予定していた計測と分析が実施できたため,おおむね順調に進展していると考えている.狩野雅楽之介の人形の完成後すぐに,政岡の人形と狩野雅楽之介の人形の両者を用いて,人形動作の計測を行い,以下を明らかにしていく.すなわち,(1)立役の人形(狩野雅楽之介の人形)と女形の人形(政岡の人形)とでは,主遣いが発する「ず」に違いはあるのか,(2)経験の浅い主遣いと経験を積んだ主遣いとでは「ず」の出し方に違いがあるのか,を明らかにする.さらに3名の人形遣いの「息が合う」とは,人形遣いの間の生理的な呼吸が同期することとも解釈できるため,(3)人形遣い間の呼吸の同期性,および(4)主遣いの呼吸と,人形動作から感じられる人形の呼吸の同期性を分析し,3名の人形遣いと人形との身体的な関係性を明らかにする.当初予定では,平成25年度内に狩野雅楽之介のセンサー内蔵人形の本体と,人形につける鬘ならびに衣装が完成し,その支払いを済ませることにしていたが,設計のやり直しにより人形の製作が遅れたため,人形本体,人形につける鬘ならびに衣装の費用が次年度使用額として生じた.平成26年度4月末には人形本体が,6月前半には鬘と衣装が完成する予定であり,次年度使用額はこれらの費用に充てる予定である.
ヒト腎細胞癌における第5染色体長腕増幅と予後との関連およびその機構について

ヒト腎細胞癌における我々のこれまでの86症例における染色体分析では約42%の症例に第5染色体長腕(5q)の増幅が認められている。本研究ではさらに,これまで染色体解析が出来なかった35症例を対象として間期核FISH法により5q増幅の有無について解析を行なった。その結果,35症例中17症例(約48.5%)において5qの増幅が認められた。これらのうち6症例では5qが3コピーのいわゆる(部分)トリソミーの症例と予想される。これらの結果を集計すると全121症例中53症例(約44%)に5qの増幅が認められたことになる。染色体異常の解析および間期核FISH法の解析結果から第5染色体長腕のコピー数(2,3,≧4)により腎癌を分類し,患者さんの術後の生存率を調査した。その結果,これまでの傾向と同様に術後120ヶ月で観察すると≧4コピーのグループは明らかに2,3コピーのグループよりは予後は不良であった。≧4コピーのグループに属する腎癌の多くは転移性の腎癌であった。また,術後60ヶ月で観察すると2倍体をバックグランドとして3コピーを持つ症例は2コピーの症例よりも予後が不良である傾向が確認された。これらの結果から2倍体のバックグランドで第5染色体を2コピーだけ持つ細胞株(非乳頭型1例,乳頭型2例)に微小核細胞融合法により正常細胞由来の第5染色体を導入し,得られた融合細胞の細胞生物学的性質を解析した。非乳頭型腎細胞癌の細胞株(5qは2コピー)から得られたクローンについて第5染色体を従来の分染法及び染色体ペインティング法によって調べた結果,殆どのクローンでは完全な状態で第5染色体が導入されておらず,細胞の増殖性も親細胞と大きな違いは認められなかった。一方,乳頭型腎細胞癌の細胞株(5qは2コピー)に同様の方法で第5染色体を導入した結果,得られた多数のクローンにおいて3本の第5染色体が確認された。これらのクローンについて細胞増殖を解析したところ多くのクローンで増殖抑制が認められた。これらの結果から,腎細胞癌の中でも乳頭型腫瘍の発生に関わるがん関連遺伝子が第5染色体長腕に存在する可能性が示唆される。しかも,もし,相同染色体の領域に第二次の変化が生じていないとすれば1個の突然変異が発がんに何らかの役割を担っている可能性がある。第5染色体が3コピーになっている症例では術後の生存率が良好である傾向が認められているが,これは正常対立遺伝子の方が1コピー増加し,その遺伝子産物が腎癌細胞の増殖に何らかの抑制効果を示していることが予想される。また,突然変異を持つ第5染色体が増加すれば,逆に,がん細胞の急速な増殖をもたらす可能性も考えられる。転移性の腎癌で第5染色体を≧4コピーもち,予後示不良な症例ではむしろ突然変異を持つ遺伝子が増幅していることも考えられる。今後は,第5染色体の癌関連遺伝子の探索および突然変異の同定をする必要がある。第5染色体長腕には大腸がん関連の抑制遺伝子がマップされているが,これらの遺伝子が何らかの影響を及ぼしているかどうか今後の解析を待たなければならない。また,5qのトリソミーあるいは部分トリソミーが認められた腎細胞癌の症例において増幅している領域に存在する遺伝子の有無を解析しなければならない。今回の非乳頭型腎癌細胞株では第5染色体が完全な状態で導入されたクローンが得られなかったが再度,微小核細胞融合法を試みて実験的にトリソミーを持つクローンを採取する必要がある。

一方,乳頭型腎細胞癌の細胞株(5qは2コピー)に同様の方法で第5染色体を導入した結果,得られた多数のクローンにおいて3本の第5染色体が確認された。これらのクローンについて細胞増殖を解析したところ多くのクローンで増殖抑制が認められた。これらの結果から,腎細胞癌の中でも乳頭型腫瘍の発生に関わるがん関連遺伝子が第5染色体長腕に存在する可能性が示唆される。しかも,もし,相同染色体の領域に第二次の変化が生じていないとすれば1個の突然変異が発がんに何らかの役割を担っている可能性がある。第5染色体が3コピーになっている症例では術後の生存率が良好である傾向が認められているが,これは正常対立遺伝子の方が1コピー増加し,その遺伝子産物が腎癌細胞の増殖に何らかの抑制効果を示していることが予想される。また,突然変異を持つ第5染色体が増加すれば,逆に,がん細胞の急速な増殖をもたらす可能性も考えられる。転移性の腎癌で第5染色体を≧4コピーもち,予後示不良な症例ではむしろ突然変異を持つ遺伝子が増幅していることも考えられる。今後は,第5染色体の癌関連遺伝子の探索および突然変異の同定をする必要がある。第5染色体長腕には大腸がん関連の抑制遺伝子がマップされているが,これらの遺伝子が何らかの影響を及ぼしているかどうか今後の解析を待たなければならない。また,5qのトリソミーあるいは部分トリソミーが認められた腎細胞癌の症例において増幅している領域に存在する遺伝子の有無を解析しなければならない。今回の非乳頭型腎癌細胞株では第5染色体が完全な状態で導入されたクローンが得られなかったが再度,微小核細胞融合法を試みて実験的にトリソミーを持つクローンを採取する必要がある。ヒト腎細胞癌における我々のこれまでの86症例における染色体分析では約42%の症例に第5染色体長腕(5q)の増幅が認められている。本研究ではさらに,これまで染色体像が得られず解析が出来なかった35症例を対象として間期核を用いたFISH法により5q増幅の有無について解析を行なった。その結果,35症例中17症例(約48.5%)において5qの増幅が認められた。これら17症例のうち6症例では5qが3コピーのいわゆる(部分)トリソミーの症例と予想される。これらの結果を集計すると全121症例中53症例(約44%)に5qの増幅が認められたことになる。現在,間期核を調べた35症例について腎細胞癌に特異的な第3染色体短腕の欠失が存在するか否かについて同様の方法で解析を行なっている。また,これらの患者さんの術後の経過についても情報を収集している。本研究では5qの増幅が腎細胞癌の発生あるいは進展においてどのような役割を担っているかを調べるために,非乳頭型腎細胞癌の細胞株(5qは2コピー)に微小核細胞融合法を用いて実験的に第5染色体の導入を試みた。しかしながら細胞融合によって得られたクローンについて第5染色体を染色体ペインティング法によって調べた結果,殆どのクローンでは完全な状態で第5染色体が導入されておらず,細胞の増殖性も親細胞と大きな違いは認められなかった。このことは第5染色体上にがん細胞の増殖を抑制するがん抑制遺伝子の存在が想定される。
木質材料の接着耐久性に関する基礎的研究

木質材料の性能と耐久性を接着および接着剤との関連において総合的に研究するため、基礎的な知見の集積と整理を行ってきたが、本年度は最終年度にあたり、平成4年9月に奈良市において研究グループの会合を開き、持ち寄った研究状況について討議を行った。本年度も接着剤の硬化挙動および接着性能発現の機構ならびに劣化機構、木質材料の製造条件と製品の性能、耐久性評価方法に関して新しい知見が得られた。それらの成果は研究成果報告書として刊行したが、その内容を表題で示せば以下のごとくである。(1)パワーフィード法によるエマルション型接着剤の物性と接着性(2)パーティクルボード用レゾールの構造と特性(3)湿気硬化型ポリウレタン系接着剤の物性と接着性(4)フェノール・メラミン樹脂接着剤の耐久性に対する高分子量ノボラック添加の効果(5)メラミン系樹脂の劣化機構についてーSEM観察からの考察(6)ユリア樹脂接着剤の耐久性向上のための低架橋フェノール樹脂の利用(7)室内環境下における木材接着層内のクリープき裂の成長(8)フェノール樹脂の分子量と素材およびボードの寸法安定化(9)パーティクルボードの調湿性能および強度・耐水性能に及ぼす低比重化の影響(10)低比重ボードの小片結合力(11)スギ材を原料としたパーティクルボードの製造と材質(12)ラジアータパイン単板の接着耐久性(13)弾性波による木材接着接合部における強度評価の非破壊検査にかんする基礎的研究(14)乾湿繰り返し試験法による耐水性の評価(15)木質構造における接着評価。研究組織をA、B、Cの3グル-プに分け、Aグル-プは現在使用されている接着剤および、開発されつつある接着剤の硬化挙動および劣化挙動を木質材料の製造条件および木質材料の耐久性との関連で解析し、Bグル-プは合板、単板積層材、削片板系統の木質ボ-ドの製造条件と製品の性能、およびボ-ドの使用環境条件と性能劣化の関連についての解析を行い、Cグル-プは新規木質材料の耐久性評価法の検討を行った。平成2年11月1日、2日の2日間にわたり福岡(九州大学)において第1回の会合を開き、各グル-プメンバ-の持ち寄った研究状況について、討論と意見交換を行った。ここでは特に削片板系統のボ-ド類について、屋外および屋内での長期暴露試験のデ-タが極めて乏しいこと、また既に外国からの輸入製品が出まわり始めていることから、早急にデ-タを整備する必要があることが指摘され、試験を開始することになった。この際、暴露条件にも地域差があること、市場に出まわっている製品のみでなく、製造条件を変えた試料についての試験も行い、製造条件と使用環境条件とを共に考慮にいれた解析ができるような試験条件を設定する必要があることが指摘された。接着の劣化機構に関しては、同一接着剤でも被着材の形状(例えばラミナ、単板、パ-ティクル)により、劣化に関わる因子の影響が異なることが明らかにされた。また、最近出まわってきたイソシアナ-ト系(ウレタン系)接着剤には成分を異にする各種製品があり、その性能、耐久性には幅があり、一律に論じられないことが指摘された。その他、建築におけるユ-ザ-からの木質材料製品の性能についての信頼性に関して、性能のバラツキの問題の評価方法などについて討論を行った。なお、平成2年度分について研究成果報告書を刊行した。本年度も研究参加者34名が3つのグル-プに分かれ分かれ、以下のテ-マで研究を行なった。1)現在使用されている接着剤および開発されつつある接着剤の硬化挙動と接着性能発現の機構2)各種接着剤の劣化機構3)各種木質材料の製造条件と製品の性能、耐久性の関連についての解析4)各種木質材料の使用環境条件と性能劣化の関連についての解析5)木質と他材料からなる複合材料の製造条件と製品の性能、耐久性の関連についての解析

6)新規木質材料の耐久性評価法の検討。平成3年10月16日に長野県塩尻市において会合を開き、各自が持ち寄った研究状況について、討論と意見交換を行なった。平成4年3月に各研究参加者の報告をとりまとめて、平成3年度科学研究費補助金(総合研究(A))研究成果報告書を刊行した。本年度の研究成果は多岐にわたっているので、ここにその全てを述べることはできないが、接着性能発現の機構および接着劣化の機構、木質材料の環境条件による材質変化、木質材料の使用環境の計測と評価、接着耐久性の評価方法、複合接着部材の評価方法などについて、新しい知見と進展だ得られた。木質材料の性能と耐久性と接着および接着剤との関連において総合的に研究するため、基礎的な知見の集積と整理を行ってきたが、本年度は最終年度にあたり、平成4年9月に奈良市において研究グループの会合を開き、持ち寄った研究状況について討議を行った。本年度も接着剤の硬化挙動および接着性能発現の機構ならびに劣化機構、木質材料の製造条件と製品の性能、耐久性評価方法に関して新しい知見が得られた。それらの成果は研究成果報告書として刊行したが、その内容を表題で示せば以下のごとくである。(1)パワーフィード法によるエマルション型接着剤の物性と接着性(2)パーティクルボード用レゾールの構造と特性(3)湿気硬化型ポリウレタン系接着剤の物性と接着性(4)フェノール・メラミン樹脂接着剤の耐久性に対する高分子量ノボラック添加の効果(5)メラミン系樹脂の劣化機構について-SEM観察からの考察(6)ユリア樹脂接着剤の耐久性向上のための低架橋フェノール樹脂の利用(7)室内環境下における木材接着層内のクリープき裂の成長(8)フェノール樹脂の分子量と素材およびボードの寸法安定化(9)パーティクルボードの調湿性能および強度・耐水性能に及ぼす低比重化の影響(10)低比重ボードの小片結合力(11)スギ材を原料としたパーティクルボードの製造と材質(12)ラジアータパイン単板の接着耐久性(13)弾性波による木材接着接合部における強度評価の非破壊検査にかんする基礎的研究(14)乾湿繰り返し試験法による耐水性の評価(15)木質構造における接着評価。
含ホウ素核酸塩基アナログの合成と機能

核酸塩基のアナログ体として、種々のBN置換核酸塩基を合成し、その構造を同定した。6-位置換ピリミジン塩基の含BNアナログ体である、B(6)-置換5-アザ-6-ボラウラシル(UBN)類、及び5-アザ-6-ボラチミン(TBN)類の結晶構造や種々のスペクトル分析により、これらのアナログ体がオリジナルの核酸塩基と同様の骨格かつ水素結合様式を有する事が明らかとなった。これらの「BN核酸塩基」は、ホウ素原子上の置換基との相互作用により特異な発光特性を示す事から、新たな発光プローブとしての応用が期待される。本研究は、分子骨格中にB-N結合を有する特異な核酸塩基類縁体の合成、及びその物性を明らかにすることを目的としている。ホウ素-窒素結合(B-N)は炭素-炭素二重結合(C=C)と電子的に等価であるため、機能性分子中のC=C結合をB-N結合に置換することにより、分子の構造を変化させることなく、特異な機能を持つヘテロ環を開発することが可能である。本研究ではBN置換生体分子開発の第一歩として、BN置換核酸塩基の開発を行った。本年度は、ピリミジン環を持つチミンのC_5=C_6結合をN_5-B_6結合に置換したBN置換チミン(T_<BN>s)をターゲットとし、このBNヘテロ環の物性を明らかにするため、ホウ素上にテキシル基及びメシチル基を有するThxT_<BN>及びMesT_<BN>を設計した。合成は、N-メチルビウレットとモノ置換ボランとの1段階環化反応で行い、ホウ素上に置換基を有するBNチミンアナログ体を得た。ThxT_<BN>は、空気中で不安定であり徐々に分解されたが、MesT_<BN>は、同様の条件で極めて安定であった。X線結晶構造解析より、MesT_<BN>はオリジナルのチミンと比較すると、B-N結合の導入により核酸塩基骨格に歪みが生じているものの、B-N結合は二重結合性を有していることが明らかとなった。また、このBNヘテロ環は平面構造を保っていることから、核酸塩基アナログとしての分子認識が可能であることが示唆された。これらの分子は、核酸塩基骨格の電子構造を全く変えない初めての人工核酸塩基である。今後、ホウ素やその他の部位に置換基を導入することにより、人工核酸塩基のアナログ体としてのみならず新たな機能性分子としての応用が期待される。本研究は、分子骨格中にホウ素一窒素結合(B-N)を有する特異な核酸塩基類縁体の合成を行い、その物性を明らかにする事を目的としている。本年度は、プリン環を有するアデニン前駆体であるヒポキサンチンのBNアナログ体(HBN)、ピリミジン塩基であるウラシルのBN-アナログ体(UBN)の開発を行った。HBNの合成は、トリフルオロボランとアミジン誘導体との環化反応により、プリン環の5員環部位を先に形成し、次いでホウ素上のフッ素をアミンに置換した後に分子内環化反応により6員環を形成する経路で合成した。現在までに、2-Ph-9-PMB-HBNの生成が示唆きれている。昨年度合成したチミンのBN-アナログ体(TBN)と同様の手法を用いてビウレットと1置換ホウ素と一段階反応よりホウ素原子上にメシチル基及びテキシル基を有するBN-ウラシル(MesUBN.ThxUBN)の合成を行った。ThxUBNは種々のスペクトルよりその生成が示唆されたが、溶解性及び安定性が低く、単離には至らなかった。一方、MesUBNは空気中で極めて安定であり、単結晶X線構造解析により、分子構造を決定することができた。また、MesUBNの1,5-位をメチル基で置換したmlMesTBNも同様の方法で合成した。相補的な水素結合を形成するアデニン誘導体及び2,6-ジアミノピリジンとの会合定数を求める事により、このBN置換核酸塩基が、天然の核酸塩基と同程度の水素結合能を有する事を明らかにした。これらのBN-人工核酸塩基は、環構造に組み込まれたホウ素原子に由来する特異な発光を示すことから新しい核酸塩某プローブとしての応用が期待される。
仏教聖典研究方法の再考――大乗という概念の問い直しを通して

大乗仏教の問い直しを通して,仏教研究方法の再考を掲げた本研究課題をまとめる年に当たり,今年度は将来の研究に発展させる目的も含め,以下の3つの視点から,新たな課題に取り組んだ.(1)従来の大乗,小乗という仏教の区別の弊害は,聖典化という作業の意味を考慮しないことから生じていることについてはすでに昨年指摘したが,今年度は,その聖典化の作業に口伝と書写(ralityとliteracy)の文化のもつ相違を考慮すべきことを論じ,現在この視点を導入することによって仏教研究史が書き換えられえることを指摘した.(2)近代仏教学が仏教の伝統をもたない西洋世界から生まれ,歴史的,批判的研究に偏ってきたため,過去の思想体系を明かすことに終始し,生活経験世界の中の仏教という視点を失って現在を相手とすることができなくなってしまった.この問題を解決するためには,解釈学的な態度を取り入れ,伝統内部から観察する視点を回復しなければならない.(3)大乗涅槃経の教団を考察したとき,明らかに部派との連続性が伺えるが,しかし初期仏教経典と比べてみたとき,その発信の対象が異なっていることが明らかとなった.このため,初期仏教から大乗仏教へという発展の読み取りには,テクストの変化のみならず,そのテクストを成り立たせるコンテクストの変化を同時に考察せねばならない.明治以降に始まったわが国の仏教研究は,それ以前に各宗派単位でなされてきた伝統的な仏教研究に対し,これまで近代仏教学の名で区別されてきたが、その内実は必ずしも明らかではなかった.本年度の研究は,近代の仏教学における研究方法に関する諸問題を関係資料の分析により明解にし,この新たな研究態度が研究成果自体に与えた影響を分析したものである.近代仏教学は近代西洋において,17世紀に生まれた聖書の高等批評にその方法を学び,東洋の言語・宗教解明への熱烈なロマン主義的関心に支えられて,19世紀初めから頓に発達する.この近代仏教学は,歴史的イエス研究を研究の範としたこと,ヨーロッパにおける人文主義隆盛の最中に生まれたことが主要な要因となり,研究において文献のみを対象とする態度が鮮明となり,かつ文献研究においても歴史主義的な接近方法が専一となった。この影響の下に歩みだした日本の近代仏教学は,仏教という複数の要素によって成り立つ文化全体から切り離して,単独に合理的に解釈可能な思想を表した文献のみを抽出し,儀礼や修行法という実践的側面、そしてそれを映し出した律蔵文献、考古学的遺物などを考察の対象から外すことによって進んでいった.この偏った研究態度に基づいて,仏教の厳密な定義とその歴史的変遷が探られることとなったため,そこに生まれた研究成果は,実際に現在確認される仏教世界の現実とも,あるいは考古学的な発見とも説明のつかない矛盾点を残している.今後の研究は,こうして考察の対象から漏れ落ちてきた要素を復活し、従来の成果に対峙させ,それらを総合する地平に出ることを目指さなければならない.大乗仏教の問い直しを通して,仏教研究方法の再考を掲げた本研究課題をまとめる年に当たり,今年度は将来の研究に発展させる目的も含め,以下の3つの視点から,新たな課題に取り組んだ.(1)従来の大乗,小乗という仏教の区別の弊害は,聖典化という作業の意味を考慮しないことから生じていることについてはすでに昨年指摘したが,今年度は,その聖典化の作業に口伝と書写(ralityとliteracy)の文化のもつ相違を考慮すべきことを論じ,現在この視点を導入することによって仏教研究史が書き換えられえることを指摘した.(2)近代仏教学が仏教の伝統をもたない西洋世界から生まれ,歴史的,批判的研究に偏ってきたため,過去の思想体系を明かすことに終始し,生活経験世界の中の仏教という視点を失って現在を相手とすることができなくなってしまった.この問題を解決するためには,解釈学的な態度を取り入れ,伝統内部から観察する視点を回復しなければならない.(3)大乗涅槃経の教団を考察したとき,明らかに部派との連続性が伺えるが,しかし初期仏教経典と比べてみたとき,その発信の対象が異なっていることが明らかとなった.このため,初期仏教から大乗仏教へという発展の読み取りには,テクストの変化のみならず,そのテクストを成り立たせるコンテクストの変化を同時に考察せねばならない.
語彙構造と統語構造との関係について

この科学研究費助成研究の研究題目である「語彙構造と統語輪造の関係」を探る上で、特に英語及び日本語の自動詞にみられる「非対格性の交替」現象に焦点を当て研究を行った。自動詞の類型に関する一般的仮説に「非対格の仮説」がある。この仮説の基本的考えは、自動詞は全て均質であるわけでなく、統語上laugh等に代表される非能格タイプとfreeze等の非対格タイプに分けられるというものである。自動詞は全てこれら2つのタイプのどちらかに分類されるが、非対格性の基準に照らし非能格タイプと分類されていた自動詞のなかに、ある環境におかれると非対格の特性を示すものがLevin & Rappaport Hovav(1995)等の研究により見つかっている。英語を例に具体的に述べると、非能格と分類されている自動詞のうち、ある意味タイプの動詞(動作の様態動詞(run,jump,etc.)や音放出の動詞(roar,rumble,etc.)等)は場所の変化を示す句をとる場合に典型的非対格動詞の振る舞いを示す。これら一連の現象を「非対格性の交替現象」と名付け、英語と日本語について資料を収集・整理・分類した上で最近の生成文法の枠組みでこの現象の分析を試みた。英語の非対格性の交替現象は、日本語の「・・・ていく」形が関わる交替現象(走る-走っていく)と共通の特性を持つことに注目し、英語の非体格性卒交替現象に日本語の「・・・ていく」に相当するゼロ動詞が関与する可能性を、Hale and Keyser(1993)が提唱する項構造分析の枠組みを用いて考察した。この経験的研究は、いわゆるリンキング問題をどのレベルの問題としてとらえるかという辞書と統語論の関係についての理論的研究へとつながっていく。本研究は、Levin & Rappaport Hovav(1998)のように辞書における余剰性規則の類の規則を仮定するのではなく、むしろ各言語の辞書はPesetsky(1995)の意味でのゼロ形態素を持ちゼロ形態素が交替現象に深く関わっているという立場を支持するものである。このような動詞の交替現象に関する経験的研究が、句構造に対する極小主義のアプローチであるBare Phrase Structure理論にどのような意味合いをもつかを探ることが現段階での課題である。この科学研究費助成研究の研究題目である「語彙構造と統語構造の関係」を探る上で、今年度は特に英語及び日本語の自動詞にみられる「非対格性の交替」現象に焦点を当て研究を行った。自動詞は全てこれら2つのタイプのどちらかに分類されるが、非対格性の基準に照らし非能格タイプと分類されていた自動詞のなかに、ある環境におかれると非対格の特性を示すものがLevin&Rappaport Hovav(1995)等の研究により見つかっている。

英語を例に具体的に述べると、非能格と分類されている自動詞のうち、ある意味タイプの動詞(動作の様態動詞(run,jump,etc.)や音放出の動詞(roa,rumble,etc)等)は場所の変化を示す句をとる場合に典型的非対格動詞の振る舞いを示す。これら一連の現象を「非対格性の交替現象」と名付け、英語と日本語について資料を収集・整理・分類した上で最近の生成文法の枠組みでこの現象の分析を試みた,英語の非対格性の交替現象は、日本語の「・・・ていく」形が関わる交替現象徒る-走っていく)と共通の特性を持つことに注目し、英語の非対格性交替現象に日本語の「・・・ていく」に相当するゼロ動詞が関与する可能性を、Hale and Keyser(1993)が提唱する項構造分析の枠組みを用いて考察した,さらに、これらの動詞の交替現象に関する経験的研究が、Chomsky(1995)が提唱する句構造に対する極小主義(Minimalist Program)のアプローチであるBare Phrase Structure理論にどのような意味合いをもつかを研究しているところである。本研究は言語の語彙構造と統語構造の関係を経験的及び理論的観点から考察することが目標であった。研究は次の手順で行われた。まず研究対象を主に日英語の構文の交替現象に絞り、これに関する経験的データを収集し比較研究を行う。そのデータに基づき、交替現象を示す動詞について統語的・意味的観点から類型論的研究を行い、それぞれのタイプの動詞の特性を明らかにする。さらに、この段階で明らかになった動詞の統語的・意味的特性がどのように計算システムである統語へと関係づけられるのかを、極小主義の枠組みで考察する。今年度は、昨年度行った日英語の動作の様態や音放出動詞の非対格性の交替現象に基づくゼロ形態素についての考察を、使役動詞構文や中間態構文等の交替現象にも広げ研究を行った。あるタイプの動詞の派生には、それ自体意味構造を有するゼロ形態素が関与しているという仮設をたて、この仮説を経験的に支持するデータを収集・分析した。この経験的研究は、いわゆるリンキング問題をどのレベルの問題としてとらえるかという辞書と統語論の関係についての理論的研究へとつながっていく。中間態構文などの交替現象では交替を示す二つの構文間で同一の動詞が異なる項構造をもつように見える。本研究は、Levin & Rappaport Hovav(1998)のように辞書における余剰性規則の類の規則を仮定するのではなく、むしろ各言語の辞書はPesetsky(1995)の意味でのゼロ形態素を何タイプか持っておりゼロ形態素が交替現象に深く関わっているという立場を支持するものである。このような動詞の交替現象に関する経験的研究が、Chomsky(1995)が提唱する句構造に対する極小主義のアプローチであるBare Phrase Structure理論にどのような意味合いをもつかを探ることが現段階での課題である。
原油回収技術の開発に向けたメタン発酵共生系の鍵微生物の獲得と分子機構の解明

原油回収技術のひとつに,原油のメタン発酵が挙げられる。原油の主成分であるアルカンを基質にメタン発酵する微生物群集を構築し,その構成微生物から鍵となる微生物の獲得と分解機構の推定を試みた。アルカン分解メタン発酵微生物群集中には,未培養のPeptococcaceae科細菌と酢酸資化性メタン生成アーキアが優占した。更にメタゲノム解析によって,Peptococcaceae科細菌には嫌気的炭化水素分解に関わる遺伝子が存在し,更にホモ酢酸生成経路の遺伝子群を有したことから,アルカンを酢酸に分解している可能性が示唆された。生じた酢酸は酢酸資化性メタン生成アーキアによってメタンに変換された可能性が考えられる。1アルカン分解菌の集積培養,分離とその性状解析アルカン分解メタン発酵共生培養系(以降,共生培養系)から,アルカン分解に関与するとされるSyntrophaceae科の未培養細菌を試みた.既知Syntrophaceae科細菌が低級揮発性脂肪酸を利用することから,プロピオン酸,酪酸塩を基質に共生培養系を分離源として分離を試みた.その結果,プロピオン酸塩添加系では細菌の生育は確認できず,酪酸塩では確認できた.酪酸塩培養系で生育する細菌を分離培養したところ,標的としたSyntrophaceae科細菌でなくSyntrophomonadaceae科細菌であった.Syntrophomonadaceae科細菌もメタン菌と共生して脂肪酸を分解する共生菌で,アルカン分解メタン発酵共生培養系に存在する未培養Syntrophaceae科細菌はプロピオン酸や酪酸のような脂肪酸を利用しない可能性が考えられた.2パイロシーケンサーによる優占アルカン分解菌の解析アルカンを添加した培養系とアルカン非添加の培養系(共生培養系),さらに植菌源試料のパイロシーケンサーを用いた16S rRNA遺伝子の解析を行った.その結果,アルカン添加培養系はアルカン非添加培養系とも植菌源試料ともその細菌組成が大きく変化していた.アルカン添加培養系では,Firmicutes門に属する未培養の細菌が組成の半分以上を占め優占化していた.このFirmicutes門未培養細菌はカナダの原油採掘関連環境からも検出されていた.一方Syntrophaceae科細菌はFirmicutes門未培養細菌に次ぐ優占種であった.Firmicutes門未培養細菌はその優占性からアルカン分解に関わる可能性が高く,我々の保有する共生培養系がアルカン分解共生菌の多様性とその新奇性を示す重要な試料であるといえる.パイロシーケンサーによるメタ16S解析で優占細菌として検出されたFirmicutes門未培養細菌(以下標的細菌)の機能解析のため,アルカン分解メタン発酵共生培養系からメタゲノム解析を行った。得られた配列をアッセンブルしそのコンティグから16S rDNA配列の抽出と系統解析を行った。メタ16S解析結果と異なり,標的細菌と考えられる配列は細菌35配列中3配列のみであった。これはバクテリア毎に16S rDNAのコピー数が異なり,メタ16S解析では実際の数より標的細菌を過大評価した可能性も考えられた。今回のメタゲノム解析に用いた培養系DNAでは標的細菌の集積が不十分な可能性もあったが,データベースに標的細菌と近縁細菌のメタゲノム情報が公開されたので,それをテンプレートに標的細菌ゲノムをde novoアッセンブルした。その結果,コンティグ数113,総塩基数2,477,083で2,467遺伝子が推定された。更に推定遺伝子群の代謝経路解析の結果,β酸化経路とホモ酢酸生成に関わる遺伝子群の殆どを有していた。更に嫌気的アルカン分解初発酵素のアルキルコハク酸合成酵素に高い相同性を持つ遺伝子を有した。これらの結果は,標的細菌がアルカンをアルキルコハク酸合成酵素で脂肪酸とし,脂肪酸はホモ酢酸生成で代謝される可能性を示唆し,更にメタ16S解析で酢酸資化性メタン菌が優占種だったことから,『標的細菌がアルカン代謝・酢酸生成→酢酸資化性メタン生成菌によるメタン生成』という流れが予想できた。また,好温性水素資化性メタン菌2株の水素資化速度パラメーターと,メタン発酵によるATP生産効率の指標⊿Gcを解析した。その結果,水素親和性および最大水素資化速度には有意差はなかったものの,⊿Gcに有意差が見られ,ATP生産効率の差が水素資化性メタン菌の優占化に寄与する可能性が示唆された。応用微生物学,環境微生物学,微生物生態学我々の有する共生培養系内の未培養のSyntrophaceae科細菌の分離培養を試みたが,既知のSyntrophaceae科細菌が利用する基質を利用しなかった.