hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
溶液反応における微量元素の接触作用の研究と接触分析への応用

(1)4+アミノアンチピリンは臭素酸塩の存在下で、N,N-ジメチルアニリン(DMA)と反応して青色化合物を生成する。この反応は活性化剤としてタイロンを共存させるとバナジウム(V)により著しく促進される。このことを利用するバナジウムの接触分析法をFIA法により検討した。(Anal.Sci)(2)(1)の反応で触媒として鉄(III)を使用してH_2O_2を定量することを可能にした。一方、グルコースはグルコースオキシダーゼの作用によりH_2O_2を生成するので、このH_2O_2測定によりグルコースの定量を可能にした。(3)3+メチル-2-ベンゾチアゾリノンヒドラゾン(MBTH)をDMAとから青色化合物を生成する反応は、EDTAの存在でクロム(III)により、またO-フェニレンジアミンの存在によりマンガン(II)により接触的に促進される。このことを利用して各イオンの接触分析法をFIA法により検討した。(4)(3)の反応はまた銅(II)やコバルト(II)によっても触媒される。この作用をキレート滴定の終点指示に利用する接触滴定法の検討を行った。(5)N-フェニル-P-フェニレンジアミンは、臭素酸塩の存在下でDMAと反応して緑色化合物を生成する。この反応を利用するバナジウム(V)の接触分析法をFIA法により検討した。タイロンが活性化剤として作用する。(6)EXAFS/XANESによるピアセレノール類の構造解析を各種溶媒中で行った。NとSeとの結合距離は溶媒によりあまり変化がなく、溶媒の影響をあまり受けないことがわかった。セレン(IV)と芳香族ジアミン類との反応をセレン(IV)からセレン(II)への還元反応としてとらえた。(8)放射光蛍光X線分析による生体組織中の微量金属元素の2次元イメージングに成功し、生体組織のどこに金属元素が濃縮されるかなどの知見を得た。-((2)(8)はいずれも分析化学会37年会(1988)にて講演)1.微量元素の接触分析法(1) 4ーアミノアンチピリンとN,Nージメチルアニリン(DMA)との反応により青色化合物を生成する反応はバナジウム(V)によって著しく促進される.色素静成反応はスルホサリチル酸やタイロンの共存により更に促進されるので,このことを利用してバナジウムの接触分析法を検討した. (FIA法による. )(2) 3ーメチルー2ーベンゾチアゾリノンヒドラゾンとDMAとの酸化カップリング反応により青紫色の色素を生成する反応は,活性化剤としてEDTAを共存させるとクロム(III)によって,また0ーフェナントロリン(phen),2,2′ービピリジン(bpy),タイロンなどを共存させるとマンガン(II)により接触的に促進される.この反応を利用しFIA法によりそれぞれ接触分析法の検討を行い,420ng/mlクロム(III),630ng/mlのマンガン(II)の定量を可能にした.クロムの分析では6価クロムは接触作用を示さないので,クロム(III)とクロム(VI)の分別定量も可能と思われる. (3) pーヒドラジノベンゼンスルホン酸とDMAとの反応によりメチルオレンジを生成する.この反応はphenの共存により鉄(II,III)が著しい接触作用を示す.このことを利用して分光光度計を用いるFIA法及び光熱偏向法により鉄(II,III)の接触分析法を行った. ((1)及び(3)は日本分析化学36年会(1987),第48回分析化学討論会(1987)で講演)2.固体及び溶液試料のEXAFS/XANES CH_3^-,Cl^-,NO_2^-置換ピアセレノール類の各種有機溶媒中の構造に関する知見を得るために,高エネルギー物理学研究所の放射光実験施設ビームラインBLー10BにおいてEXAFS/XANES測定を行い,ピアセレノール類のSeーN結合距離に及ぼす溶媒の効果について検討した.またスピンクロスオーバー鉄錯体のEXAFS解析も行った.(1)4+アミノアンチピリンは臭素酸塩の存在下で、N,N-ジメチルアニリン(DMA)と反応して青色化合物を生成する。

タイロンが活性化剤として作用する。(6)EXAFS/XANESによるピアセレノール類の構造解析を各種溶媒中で行った。NとSeとの結合距離は溶媒によりあまり変化がなく、溶媒の影響をあまり受けないことがわかった。セレン(IV)と芳香族ジアミン類との反応をセレン(IV)からセレン(II)への還元反応としてとらえた。(8)放射光蛍光X線分析による生体組織中の微量金属元素の2次元イメージングに成功し、生体組織のどこに金属元素が濃縮されるかなどの知見を得た。-((2)(8)はいずれも分析化学会37年会(1988)にて講演)
子宮頸部発癌に関与する新規アポトーシス関連蛋白の探索とそれに基づく治療戦略の開発

子宮頸癌の発症には約95%においてヒトパピローマウイルス(HPV)の感染が関与するとされている。HPVはE6およびE7という2つの癌遺伝子をもち、それらのコードする癌蛋白はユビキチンープロテアソーム系を介して、ヒトの癌組織において遺伝子変異が認められる癌抑制蛋白質であるp53およびpRbを分解する。私はGST fusion蛋白としてE6APを発現させ、baculovirusを用いてE6蛋白を発現し、GST pull-down法により、E6-E6AP複合体の結合蛋白の同定を試み、細胞極性の決定に関わる癌抑制蛋白としてhuman Scribble(hScrib)を同定した。ショウジョウバエにおいてはScribbleは上皮の形成に不可欠な細胞極性決定因子であり、その遺伝子変異により、細胞は極性を失い、組織の異常増殖と腫瘍形成を来す。そのヒトホモログであるhScribは細胞に与えられたTNFもしくはUVなどのアポトーシスシグナルにより、分解されるdeath substrateであることが分かった。このdeath signalにより分解を受けないhScribの変異体(Asp-504-Ala)を導入した細胞では、UVを照射しても細胞膜に発現したhScribやE-cadherinは分解されなかった。このため、hScribはアポトーシスシグナル伝達経路においてdeath signalにより分解を受けることがアポトーシスの進展に重要な役割を持つことが分かった。この研究成果をGenes to Cellsに発表した。また、GST fusion E6蛋白に選択的に結合する蛋白をペプチドマススペクトロメトリー(PMF)法により解析し、新規のE6の結合蛋白として、乳癌において遺伝子の欠失が報告されているdeleted in breast cancer-1(DBC-1)を同定された。DBC-1はそのEF hand motif等を介してE6と結合し、E6はubiquitin-protein ligaseであるE6APとともにDBC-1をユビキチン化することにより分解する。細胞内において、プロテアソーム阻害剤もしくはE6に対するRNAiを添加したところ、HPV陽性の子宮頸癌細胞内のDBC-1の発現が増加することより、DBC-1の発現がこの細胞内ではE6によりコントロールされていることが明らかになった。プロテアソーム阻害剤の投与がこれらのE6により分解を受けているhScribおよびDBC-1の発現抑制を回復することから、プロテアソーム阻害剤の子宮頸癌に対する新規治療薬としての意義を現在検討しており、マウスの移殖したHPV陽性の子宮頸癌細胞の移植片に対して抗腫瘍効果を発揮することが明らかになった。今後は臨床への応用を検討して行く子宮頸癌の発症には約95%においてヒトパピローマウイルス(HPV)の感染が関与するとされている。今後は臨床への応用を検討して行く子宮頸がんの発症には約95%においてヒトパピローマウイルスの感染が関与するとされている。子宮頸部扁平上皮癌では、検出されるヒトパピローマウイルス(HPV)は16型がもっとも頻度が高いことが知られ、一方子宮頸部腺癌では検出されるHPVは18型がもっとも頻度が高いことが知られている。

HPVはE6およびE7という二つの癌遺伝子をもち、E6,E7蛋白はそれぞれヒトの癌抑制蛋白p53,pRbと結合し、それらの癌抑制蛋白の機能を阻害することで癌化に寄与すると考えられる。high-risk E6蛋白はp53と結合する際にヒトの細胞蛋白であるE6APを必要とする。E6APはubiquitin-protein ligaseであり、E6蛋白はp53およびE6APと3量体を形成し、ターゲットとするp53に分解のマーカーとなるubiquitinを付加し、枝状にいくつものubiquitinを付加されたp53はプロテオソームで認識され、分解を受ける。私は大腸菌の中でGST fusion蛋白としてE6APを発現させ、baculovirusを用いてE6蛋白を発現し、GST pull-down法により、E6-E6AP複合体の結合蛋白の同定を試み、細胞極性の決定に関わる癌抑制蛋白としてhuman Scribble(hScrib)を同定した。細胞抽出液として、HPV陰性の細胞株を用いた。このGST fusion E6蛋白に選択的に結合する蛋白を銀染色をしたSDSゲルから切り出して、ペプチドマススペクトロメトリー(PMF)解析により解析した。本研究により、新規に同定されたE6の結合蛋白は乳癌において遺伝子の欠失が報告されているdeletedin breast cancer-1(DBC-1)であった。In vitroで発現させたDBC-1はE6の存在下では時間依存性に分解を受けた。DBC-1はアポトーシスの誘導により核移行シグナルを失い、ミトコンドリアに移行し、ミトコンドリアの凝集を来したことより、HPV陽性の子宮頸癌においては、DBC-1のアポトーシス過程における機能はE6による分解により阻害されており、遺伝子の欠失を認める乳癌同様に子宮頸癌の発癌過程に重要な働きをもつことが示された。さらにE6のユビキチン化により分解されるターゲットとして同定したhScribがcyclophosphamide等によるアポトーシスの誘導により、caspase依存性に分解を受けることを見いだした。In vitroで発現させたhScribはcaspase存在下に分解を受けた。またin vivoでhScribはUV照射等のDNA障害により分解を受け、その分解能はcaspase依存性であった。このことよりhScribは新規のdeath substrateであることが明らかとなり、蛋白のアミノ酸配列内でcaspase存在下に分解を受けるかを検討している。hScribは16のleucine-rich repeatsと4のPDZ domainをもつ。In vitroで発現させた。hScribはleucine-rich repeatsとPDZ domainの間でcaspaseにより分解を受けた。以上の実験結果をもとにcaspaseがhScribのどの部位を分解するかを探索し、分解のターゲットとなるアスパラギン酸のアミノ酸を同定することを試みている。
文化特異的感情意識構造と「恥」の研究

本年度は基本的に収集したデータの分析をおこない,同時に聞き取りデータの整理をおこなった。また,鹿児島県日吉町の調査協力者への情報還元として,感構意識構造についての3地域比較レポートを刊行した。日吉町の最大特徴としては,他地域に比較して親子の絆に非常に高い評価が与えられていたことである。また,感情表出スタイルとしてはなんでも開けっぴろげに表出する傾向が見られた。新しい活動としては,現在50歳以上の人たちが受けてきたしつけ教育と比較するために,現在の学生たちが親からどのようなしつけを受けてきたかについての調査をおこなった。この調査は現代青年が子ども時代にどのような親子関係にあったのかを,学生の回想をもとに分析したものである。それによると,男子学生は勉強に関連して父親から叱られ,次いで生活態度に関連した内容で叱られていた。女子学生は,父親からも母親からも,生活態度に関連した内容で一番多く叱られ,母親からは家事や手伝いに関連した内容で叱られていた。男子学生は,家事や手伝いに関連して叱られることが少なかった。男女ともほめられることが少なく,叱られることの方が多かった。父親の年齢を50歳以上と以下に分け,しつけの内容を検討したところ,50歳以下の父親は,家事・手伝いに関連した内容で子どもに多くの注意を与えていた。ほめる行動において,50歳以下の父親が勉強関連で子どもをよくほめており,50歳以下の男性を配偶者とする母親も,勉強で子どもをよくほめていた。ほめられた記憶がないと回答した学生の父親は50歳以上に多かった。母親からほめられた記憶がないという学生も,50歳以上の男性を配偶者とする母親に多かった。7月末から8月初めにかけて,静岡県磐田郡水窪町(人口4008名)に,感情意識構造(100項目),恥(60項目),自己(30項目)に関する質問紙調査に入った。調査対象地区は神原区,西浦区であった。これに先立って,比較の目的で,自己に関する質問紙調査を大学生対象におこなった。調査は対象地区全戸訪問で,60歳以上対象者には調査員が質問紙を読み上げながら回答を求める形式で,また60歳以下についても可能な限り読み上げて回答を求める形式で調査した。回答総数は,感情意識構造調査318,内有効回答243,恥の意識調査282,内有効回答225,自己に関する調査271,内有効回答231であった。2月から3月にかけて,都市部サラリーマンと主婦を対象とした,上記3種類の調査を郵送形式でおこなった。現在まで回収した用紙は全766通であり,有効回答は感情意識構造が644,恥が660,自己が706である。大学生を対象とした自己に関する調査は,男子91名,女子167名が分析対象となった。3月に,同地区対象の,人間の生き方に関する基本調査を,聞き取り形式でおこなった。この調査は,原則50歳以上の対象者に対しておこなわれた。調査項目は聞き取りを含めて75項目,それぞれの大項目に対応した13の短い物語に対する回答で,全134名の対象者に戸別訪問でおこなった。それぞれの結果は現在入力中であり,また主婦とサラリーマンのデータが未だ返送されてくる過程にあって,統計的な比較は成されていない。唯一分析が終了した大学生のデータから判明した事実は,男子大学生が利己主義的で依存心が強く,社交下手で人間不信がきつく,社会的関心が欠如していることが明らかになった。逆に女子学生は以上5点において男子学生とは反対であり,従来考えられていた利他的な男性,利己的な女性というジェンダー像は,完全に逆転していることが明らかになった。

前年度調査対象地が,全町民(4000人)が一日に消費する米が生産できないという山村であったこと,また日本の中部地域であったことから,今年度は山形の庄内平野,中でも平均4町歩の水田を耕す鶴岡市栄地区をフィールドとして4種類の調査をおこなった。夏に3種類の質問紙,3月におこなった,「人間の生き方に関する基本調査」である。いずれも,前年度に得た水窪町との比較がなされた。現在,分析が終了したのはセルフに関する意識構造のみであるが,いくつかの特徴が明らかになった。まず注目できるのは,天水依存の畑作農耕をおこなっている水窪町住民の,自主独立傾向の強さである。つまり他人の援助を拒み,自助努力を追求する生き方が水窪町に強いのである。逆に,今でこそ農地整理がなされ,省略化で機械化耕作の水田稲作農耕であるが,40年前には,まだ牛や馬,あるいは人力によって全ての作業がおこなわれていた。そのため,共同作業や協調性が強く意識されてきた平野部の人たち,つまり鶴岡市栄地区では,援助を抵抗なく受け入れる意識構造が未だに強く残っていた。これは黄河流域の河北省の学生に見つかった自助努力重視の意識構造,及び,上海の学生に見つかった人間関係重視の意識構造と比較をするとき,人間の意識構造を根底で規定するのは,文化ではなく労働内容であるということを示唆している点でおもしろい。当然のことながら,50歳以上,50歳未満という年齢コホート間にも違いが見つかっている。典型的なのが,50歳以上は自己主張が強い人間が嫌いなことである。一方,50歳未満は人の話をあまり聞こうとしなかったり,妥協を嫌う行動傾向が強いことなどが一つの特徴であった。特にこの傾向は鶴岡の若い世代に強調されたが,彼らは兼業農家であり,日常的には会社などで勤務しているということが影響している可能性は残る。今年度で地方におけるフィールド調査が一応終了した。計画書に記載したように,調査値は平成ll年度が静岡県水窪町,12年度が山形県鶴岡市,13年度が鹿児島県日吉町であった。それぞれの地域は山村で畑作,平野部で稲作,両方の生産構造が見られる地域で,かつ,日本列島の南,中部,北に位置している。集められた資料は,恥の意識構造(60項目),感情意識構造(100項目),セルフの構造(30項目),それに人間の生き方に関する基本調査(聞き取り・質問紙併用)の4種類であった。また,人間の生き方以外の3種類の質問紙調査は,都市部のサラリーマン・主婦,および学生にもおこなわれており,14年度に総合的な解析がなされる予定である。インフォーマントに対しては毎回,調査リポートを送っており,水窪町に対しては既に3回,鶴岡市に対しては2回,日吉町に対しては今回初めての報告書を送付した。分析された質問紙は,感情意識構造100項目である。調査地は,(1)生産構造のあり方,(2)地域文化が伝承されているという2点を基準に選定されたが,生産構造の違いが住民の意識構造に反映されていることが明らかになった。例えば山村畑作地帯の住民は他者に対して親和的であり,逆に水田稲作地帯住民は排他的であった。日吉町住人は両者の中間に来ることが多かったが,例外は家族に関する項目であった。日吉町住民には家族のまとまりを強調する意識が非常に強かった。薩摩人の気質からか,くよくよ思い悩まないという項目にも,他地域に比較して高い評定が与えられた。
関節リウマチにおける骨髄細胞の機能と動態の検討

目的:関節リウマチの病態進展メカニズムを解明し新たな関節炎治療に結びつけるコラーゲン誘導性関節炎モデル(Collagen-Induced Arthritis:CIAモデル)は、関節リウマチと多くの共通点を持つ関節炎モデルである。自己免疫学的機序を介すると考えられ、関節リウマチのモデルとして広く用いられている。CIAモデル作製には動物種ChickenのTypeIICollagenを用いる。Green Fluorescent Protein geneを移入したC57BL/6トランスジェニックマウス(C57BL/6-Tgマウス)から骨髄細胞を採取し、それをpoly ICと5-FUで前処置したwild type C57BL/6レシピエントマウスに骨髄内骨髄移植する。このレシピエントマウスを用いてCIA関節炎を発症させ、GFP陽性骨髄細胞の機能と動態を検討する。平成26年および27年度の研究成果:上記のように骨髄内骨髄移植を施行し、経時的に0,7,14,21,28日目の骨髄を採取し、蛍光顕微鏡で移植の成功を確認した。CIAモデル作製には動物種ChickenのTypeIIcollagenを用いる。Green Fluorescent Protein(GFP) geneを移入したC57BL/6トランスジェニックマウス(C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)マウス)から骨髄細胞を採取し、それをpoly ICと5-FUで前処置したwild-type(WT) C57BL/6レシピエントマウスに骨髄内骨髄移植する。平成26年度の研究の成果:CIAマウスモデル(Collagen-induced arthritis model)における骨髄細胞の機能解析のため、モデルマウス作製方法を確立した。C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)マウスの雄をドナーとして骨髄を採取し、それをpoly ICと5-FUで前処置したwild-type(WT) C57BL/6マウスの雌に骨髄内骨髄移植した。経時的に、0日目、7日目、14日目、21日目、28日目の骨髄を採取し、蛍光顕微鏡で移植の成功を確認した。骨髄内骨髄移植を用いて、C57BL/6-Tg(CAG-EGFP)マウスモデル作製方法を確立することが出来たが、予定よりも期間が必要であった。初年度にCollagen-Induced Arthritisを惹起させるまでには至らなかったが、これより施行していく予定である。作製したマウスモデルにCollagen-Induced Arthritisを惹起させ、CIAモデルにおけるGFP陽性骨髄細胞を解析していく予定である。
芯鉄骨挿入合成柱と鉄骨梁で構成される骨組の耐震性能評価法に関する研究

平成9年度に芯鉄骨合成柱部材が地震荷重に対応する軸力と繰返し水平力を載荷したときの弾塑性挙動を調べ,高軸力下の芯鉄骨合成柱部材は大変形域においても曲げ抵抗力は減少するものの軸力を保持できず崩壊することがないことを明らかとし,鉄筋コンクリート(以下RC)柱の耐震補強の一つとして有効であることを示した.本年度は昨年度の研究成果を元に芯鉄骨合成柱と鉄骨はりで構成された一層一間ラーメン骨組が地震荷重に対応する荷重を受けるときの弾塑性性状を調べることを目的とし,骨組に一定軸力と繰返し水平力を載荷する実験を行った.試験体はRC柱・鉄骨はり骨組1体,芯鉄骨合成柱・鉄骨はり骨組2体である.RC柱・鉄骨はり骨組の柱の軸力として断面圧縮耐力の30%の軸力を,芯鉄骨合成柱・鉄骨梁骨組の柱には断面圧縮耐力の30%および40%の軸力を加え,一定に保持した状態で柱頭に繰り返し水平力を載荷した.骨組の設計は3体とも柱脚部と梁端に塑性ヒンジが生じることにより塑性崩壊機構が形成されるように設計した.RC柱・鉄骨梁骨組および芯鉄骨合成柱・鉄骨梁骨組では鉄骨梁の全塑性モーメントを柱に伝えるためには,仕口部のせん断補強および支圧補強が必要であるため,本実験では6mm鋼板の塞ぎ板で接合部パネルを覆う補強を行った.載荷実験の結果,3体とも設計どおり,柱頭と柱脚に塑性ヒンジが生じ塑性崩壊機構を形成したことから,仕口パネルの補強方法の妥当性が確認できた.軸力比0.3程度のRC柱であれば層間変形角が4/100rad.程度までは軸力を保持できたが,柱脚部の主筋の座屈発生と共に軸力を保持できず崩壊した.一方,芯鉄骨合成柱・鉄骨梁骨組では柱脚部での主筋の座屈が発生した後も軸力を保持でき,鉄骨梁の優れた変形能力を発揮させることができることが明らかとなった.SRC柱では内蔵鉄骨に曲げ耐力を期待するが,鋼材を断面の芯に配置し,曲げに効かせず,軸方向剛性に効かせる設計法もあると考える.1995年の兵庫県南部地震では,中間層崩壊の被害を受けたRC建物が多く見受けられたが,これは高軸力下でのRC柱の変形能力の乏しさに起因するものと考えられる.RC柱の変形能力の乏しさを改善する方法として,RC柱断面に芯鉄骨を挿入する方法が考えられる.そこで,芯鉄骨合成柱の弾塑性挙動を把握するために柱の載荷実験を行った.実験変数に,a)断面構成(芯鉄骨合成柱,RC柱,SRC柱の3種類),b)芯鉄骨の断面形状(異形鉄筋とH形鋼の2種類),c)鉄骨鋼材量(RC断面積の1.5%,3.0%,5%の3種類),d)軸力比(SRC規準に規定されている制限軸力および断面圧縮耐力の30%の軸力の2種類),e)芯鉄骨の柱脚での定着の有無を選んだ.試験体は総計16体である.試験体は片持ち柱であり,一定軸力を載荷した状態で,水平力を正負交番繰り返し載荷した.実験を行った結果,以下のことが明らかとなった.1)RC柱は軸力を保持できなくなり崩壊したが,芯鉄骨合成柱は,大変形域で曲げ耐力が低下するものの,水平力が0となる実験終了まで軸力を保持でき,崩壊しなかった.2)芯鉄骨合成柱の曲げ耐力は,コンクリート強度を0.85倍したものと鉄骨の降伏応力度を用いて計算した一般化累加強度で,ほぼ評価できる.3)芯鉄骨の断面形状は,H形鋼よりも異形鉄筋を用いたほうが,軸縮みの進行が抑制され,耐震的に優れている.4)芯鉄骨の圧縮耐力に対する柱の作用軸力の割合を1.5程度にしておけば,耐震的に優れた性状を示す.5)柱脚部で鉄骨の定着を切った試験体は,土台部分にパンチングシア-型のひび割れが生じ,大変形域で耐力の低下が大きかった.今後,この定着を切ったもので,安定した挙動を得る方法を検討する.平成9年度に芯鉄骨合成柱部材が地震荷重に対応する軸力と繰返し水平力を載荷したときの弾塑性挙動を調べ,高軸力下の芯鉄骨合成柱部材は大変形域においても曲げ抵抗力は減少するものの軸力を保持できず崩壊することがないことを明らかとし,鉄筋コンクリート(以下RC)柱の耐震補強の一つとして有効であることを示した.本年度は昨年度の研究成果を元に芯鉄骨合成柱と鉄骨はりで構成された一層一間ラーメン骨組が地震荷重に対応する荷重を受けるときの弾塑性性状を調べることを目的とし,骨組に一定軸力と繰返し水平力を載荷する実験を行った.試験体はRC柱・鉄骨はり骨組1体,芯鉄骨合成柱・鉄骨はり骨組2体である.RC柱・鉄骨はり骨組の柱の軸力として断面圧縮耐力の30%の軸力を,芯鉄骨合成柱・鉄骨梁骨組の柱には断面圧縮耐力の30%および40%の軸力を加え,一定に保持した状態で柱頭に繰り返し水平力を載荷した.

骨組の設計は3体とも柱脚部と梁端に塑性ヒンジが生じることにより塑性崩壊機構が形成されるように設計した.RC柱・鉄骨梁骨組および芯鉄骨合成柱・鉄骨梁骨組では鉄骨梁の全塑性モーメントを柱に伝えるためには,仕口部のせん断補強および支圧補強が必要であるため,本実験では6mm鋼板の塞ぎ板で接合部パネルを覆う補強を行った.載荷実験の結果,3体とも設計どおり,柱頭と柱脚に塑性ヒンジが生じ塑性崩壊機構を形成したことから,仕口パネルの補強方法の妥当性が確認できた.軸力比0.3程度のRC柱であれば層間変形角が4/100rad.程度までは軸力を保持できたが,柱脚部の主筋の座屈発生と共に軸力を保持できず崩壊した.一方,芯鉄骨合成柱・鉄骨梁骨組では柱脚部での主筋の座屈が発生した後も軸力を保持でき,鉄骨梁の優れた変形能力を発揮させることができることが明らかとなった.
ヴィクトリア朝における家族パラダイムの変換の核としての従兄弟/従姉妹表象

本年度は、当研究の最終年度であり、これまでに収集した一次史料から抜け落ちている箇所の確認、調査収集をおこない、その史料の分析を基に研究全体の枠組み再確認しながら、論文の執筆作業に専念した。具体的には1.平成16年9月29日10月4日まで、ロンドンのブリティッシュ・ライブラリを訪問し、ヴィクトリア朝における結婚と相続に関する教会関係の一次史料を収集した。2.その際にサセックス大学教授Lindsay Smithと面談し、主に論文の結部について意見交換をおこなった。3.論文の3章にあたるトロロープについての章で、Mr.Scarborough's Family, Sir Harry Hotspur of Humblethwaite, Miss Mackenzieの3作に見られる従兄妹間の結婚の可能性と、相続、セクシュアリティの関係性を分析し、さらにThe Eustace Diamondsでは、亡夫の弟との結婚という法的に禁じられた結婚の可能性をつぶすために、身内と他者の境界線に位置する従兄妹間の関係が不可欠であったことを証明した。4.論文の最終章ではバーディのTess of the d'UrbervillesとJude the Obscureを取り上げ、前者については従兄妹間の結婚と亡妻の妹との結婚が、このテクストにおいて有機的に関連していること、そして後者においては従兄妹間の結婚の問題とからんで、結婚という制度に潜むセクシュアリティの意味作用の場に、いかにヒロインがとりこまれているかを分析した。5.結婚(セクシュアリティ)と相続を軸に成立するヴィクトリア朝小説にとって、身内と他人のあわいに立つ従兄弟/従姉妹の存在がいかに重要であったかを、結婚法の改正についての歴史的背景とからめながら、論文全体の枠組みとして、「イントロダクション」の形で総括的に論じた。当研究では、主として19世紀イギリス小説のプロットを支える構成軸としての血縁・類縁関係のなかで、従兄弟/従姉妹の表象に着目するが、そのヴァリエーションとして、亡妻の姉妹もしくは亡夫の兄弟との(類縁関係の)結婚の禁止という法的規制の問題と同時に、縦軸としての相続の問題に視野に入れることによって、身内と他者のあわいにたつ従兄弟/従姉妹の位置付けをより明確に浮かび上がらせることを目指している。従って今年度は1.平成14年9月9日19日にかけて、ロンドンのブリティッシュ・ライブラリを訪問し、すでにほぼ終了済みの、亡妻の姉妹、亡夫の兄弟との結婚をめぐる一次資料の補足収集をおこないつつ、主に19世紀イングランドにおける長子相続、限嗣相続関連の資料収集をおこなった。2.その際に、イギリスのサセックス大学教授Lindsay Smithと面談し、博士論文の全体の構想について意見交換をおこなった。3.すでに分析済みのMansfield Park, Jane Eyreにおいては、縦軸としての相続の問題が後景に退いていたのに対し、今年度は相続が重要なプロットを担っているトロロープを取り上げ、なかでも従兄弟/従姉妹の関係が鍵となると思われるMr.Scarborough's Family, The Eustace Diamonds, Sir Harry Hotspur of Humblethwaite, Miss Mackenzieを中心に作品の読解分析をおこなった。4.さらに上記の作品の分析をより強固なものとするために、結婚という横軸と、相続という縦軸の問題が緊密に絡み合っているMrs.Oliphantの短編小説を当時の雑誌から発掘し、議論展開の要として用いた。5.その他にも、前章で論じるセンセーション・ノヴェルとの連続性を持たせるため、センセーション・ノヴェリストの一人であるM.E.Braddonが編集長を務めていたBelgraviaという雑誌をマイクロフィルムで調査し、相続、結婚をキーワードに、資料収集をおこなった。今年度は、縦軸としての相続をめぐる法的規制と、横軸となる結婚に関する法的規制(とりわけ亡妻の姉妹もしくは亡夫の兄弟との結婚を禁じる法律、相続の規定に関する法律)をより精密に整理し直したうえで、当研究の核となる、センセーション・ノヴェリストを扱った章を、「従兄妹」をキーワードとして、完成させた。より具体的には1.9月24日10月3日まで、ロンドンのブリティッシュ・ライブラリで、主に19世紀イングランドにおける相続関連の一次資料を収集した。2.サセックス大学のLindsay Smith教授と、センセーション・ノヴェルにおける男性像の変遷について意見交換をおこなった。3.M.E.BraddonのLady Audley's Secretを、従来のような家父長社会における女性の狂気という視点からではなく、Lady Audleyの狂気の物語のカウンタープロットとして、相続の放棄と従兄妹間の結婚の物語に着目する新たな視点から分析をおこなった。4.Wilkie CollinsのThe Woman in White, Armadale, The Law and the Ladyの主に3作を、相続と結婚を軸として、identityの偽装、illegitimacyという視点から分析することにより、男女間の力関係の表象をめぐるCollinsのイデオロギーをあぶり出し、そのうえで、センセーショナリズムという要素の低いと見られるThe Moonsoneを再度検討し、実はCollinsにお馴染みのテーマをふんだんに隠し持つこのテクストの意外な、そして過度なセンセーショナル性を明らかにした。

3.論文の3章にあたるトロロープについての章で、Mr.Scarborough's Family, Sir Harry Hotspur of Humblethwaite, Miss Mackenzieの3作に見られる従兄妹間の結婚の可能性と、相続、セクシュアリティの関係性を分析し、さらにThe Eustace Diamondsでは、亡夫の弟との結婚という法的に禁じられた結婚の可能性をつぶすために、身内と他者の境界線に位置する従兄妹間の関係が不可欠であったことを証明した。4.論文の最終章ではバーディのTess of the d'UrbervillesとJude the Obscureを取り上げ、前者については従兄妹間の結婚と亡妻の妹との結婚が、このテクストにおいて有機的に関連していること、そして後者においては従兄妹間の結婚の問題とからんで、結婚という制度に潜むセクシュアリティの意味作用の場に、いかにヒロインがとりこまれているかを分析した。5.結婚(セクシュアリティ)と相続を軸に成立するヴィクトリア朝小説にとって、身内と他人のあわいに立つ従兄弟/従姉妹の存在がいかに重要であったかを、結婚法の改正についての歴史的背景とからめながら、論文全体の枠組みとして、「イントロダクション」の形で総括的に論じた。
不活化変異の導入を治療原理とした多変異対応型遺伝子医療の実証的研究

KID症候群の変異遺伝子で、症例および研究報告の多い、GJB2-G12R、GJB2-G45E、GJB2-D50N mutantsの3系統の変異遺伝子について、BLACK-6Jのマウスを用いてトランジェニックマウスを作成した。作成したトランスジェニックマウスの組織からPCRで変異遺伝子の存在を確認したが、生体でのタンパク質発現が確認できなかった。この原因として、げっ歯類の胎盤にGJB2がコードするコネキシン26が発現しており、これによって胎生期に胎児へのグルコース輸送を阻害され胎生致死にいたっている可能性や、変異遺伝子がうまく発現されないゲノム領域に挿入されているなどの可能性が考えられた。平成27年度の研究計画に基づき、まず最初に、目的の遺伝子と緑色蛍光タンパクであるEGFPを、IRESの存在下でそれぞれ発現するコンストラクトの作成に取り掛かった。次に、コンストラクトのシークエンスにより、プラスミドに変異が入っていることを確認し、大量調整と精製を行った。その後に、精製されたコンストラクトを用いて、トランスジェニックマウスの作成を外部に委託した。しかしながら、ここで作成した最初のマウスには、角化異常の臨床像の発現が見られなかったために、再度、異なる遺伝子変異を導入したコンストラクトを作成し、異なる系統のトランスジェニックマウスを作成する必要が生じた。念のため、ヒト表皮の培養角化細胞である、HaCaT細胞を用いて、このIRESの入ったプラスミドが、適切な量のタンパク質を発現するかどうかについても、検証する実験を並行して行った。現在は、再作成されたトランスジェニックマウスの表現型を確認する作業を行っている。今後の研究の展開としては、まず再作成したトランスジェニックマウスの表現型を確認、評価を行う。次に、遺伝子編集技術を用いて、適切な部位に目的の変異遺伝子をノックインする。その後に、ノックインされたマウスの表現型及び分子生物学的な解析を行い、それと並行して、不活化変異導入用ベクターセットの配列の決定と効果確認をする。これらの結果を踏まえて、作成したモデルマウスの受精卵に、遺伝子編集による不活化変異の導入実験を行う計画である。研究計画に基づき、トランスジェニックマウスの作成を外部に委託した。作成したマウスに臨床像の発現が見られなかったために、再度、異なる遺伝子変異を導入したコンストラクトの作成からし直す工程が必要になり、トランスジェニックマウスの作成に、当初予期していない遅れが生じた。従来個々の遺伝子変異に個別に対応する方向で遺伝子編集による治療が研究されてきたが、当研究の不活化遺伝子を導入する治療法では、複数の遺伝子変異に効果を示す不活化変異を導入する汎用ベクターセットで治療できる可能性がある。GJB2-G45E mutantのみのKID症候群モデルマウスで検討するのでは十分でなく、複数の遺伝子変異のマウスモデルを作成する必要があった。したがって、KID症候群の変異遺伝子で、症例および研究報告の多い、GJB2-G12R、GJB2-G45E、GJB2-D50N mutantsの3系統のモデルマウスを作成することを検討した。優性変異であるKID症候群の変異遺伝子上記3系統について、それぞれFLAG-tagを付加した融合タンパクに加え、緑色蛍光タンパクであるEGFPをIRESの存在下で発現するコンストラクトを作成した。構築する遺伝子改変マウスを3系統に増やす必要上、ドキシサイクリン依存性転写配列をノックインするのではなく、遺伝子導入された時点から変異遺伝子が発現するトランスジェニックマウスを作成する方針へ計画を修正した。BLACK-6Jのマウスを使用し、pIRES2-AcGFP1ベクター(タカラバイオ株式会社)に上記コンストラクトを乗せ換えて使用した。発現プロモーターは、pIRES2-AcGFP1ベクターのCMVプロモーターをそのまま使用した。作成したトランスジェニックマウスの組織からPCRで変異遺伝子の存在を確認した。しかし、FLAG融合タンパクおよびEGFPの発現を確認できず、生体でのタンパク質発現が確認できなかった。この原因として、げっ歯類の胎盤にGJB2がコードするコネキシン26が発現しており、これによって胎生期に胎児へのグルコース輸送を阻害され胎生致死にいたっている可能性(Gabriel HD, et al. J Cell Biol. 1998)や、変異遺伝子がうまくタンパク発現されない場所に挿入されているなどの可能性が考えられた。再作したトランスジェニックマウスの表現型を確認、評価する。さらに、遺伝子編集技術を用いて、適切な部位に目的の変異遺伝子をノックインする。次に、不活化変異導入用ベクターセットの配列の決定と効果確認を行う。マウスの受精卵に遺伝子編集による不活化変異の導入を行う。皮膚科学トランスジェニックマウス作成に、当初予定していたよりも長い月日を必要としたため、研究計画を次年度に延長することになったから。
自然生活体験学習の実態とその成果に関する研究(フロンティア・アドベンチャ-事業を中心に)

今年度の研究目的は、平成2年度にフロンティア・アドベンチャ-事業での国庫補助を受けた事業体の内、特色あるプログラム運営や指導者養成を行っている5事例(山口県、徳島県、静岡県、神奈川県、川崎市)を選択し、フロンティア・アドベンチャ-経験が参加者に及ぼす教育的効果(自己概念、自然認識)について事前・事後・1カ月後の調査により検討することにある。対象は、5事例に参加した小・中・高校生283名(男子157名、女子126名)である。参加者の自己概念の変容を見るために梶田(1980)の作成した自己成長性検査を、また自然認識の変化を見るために「自然」を刺激語として自由連想法による調査と自然に対する8つの刺激語毎に10対の形容詞を5段階評定するSD法により調査をそれぞれ実施した。主な結果は、以下の通りである。1.フロンティア・アドベンチャ-経験により参加者の自己概念は、キャンプ直後に向上する傾向にある。しかしながらその効果は、1カ月後まで持続するものではない。2.「自然」に対する連想語は、風景的・生物的要因が主で、あまり変化はみられない。しかしながら、その構成語は、体験がなされた自然環境や内容により影響を受ける。3.自然に対するイメ-ジは、フロンティア・アジベンチャ-に参加することにより、より身近で生き生きしたものに変容し、それは1カ月後まで持続する傾向にある。本研究は、2ヵ年の研究期間において、自然生活体験学習の1つであるフロンティア・アドベンチャ-事業の実態と参加者に及ぼす教育的効果を明らかにすることにより、より安全で効果的なアドベンチャ-・プログラムの展開及び今後の指導者養成に資することを目的としている。今年度の研究は、フロンティア・アドベンチャ-事業の実態を把握することを目的に、平成元年度に国庫補助を受けた55事例を対象に、各事業の1)ねらい、2)地域・施設、3)プログラム内容、4)指導組織と指導者養成方法、5)健康・安全管理、6)成果、7)問題点について質問紙郵送法で調査を実施した。主な結果は次の通りであった。1.事業目的は充分に達成できたと評価されている。2.活動が展開された地域・施設については概ね良好であると評価されている。3.プログラム内容については、自然環境の理解、参加者の冒険的欲求の充足、発展性のある指導などの点でやや低い評価がみられたもの、概ね良好であると評価されている。4.指導組織と指導者養成については、事前トレ-ニングの不足が指摘されており、今後は集団運営能力や安全管理技術を身につけた指導者の養成が必要であるとされている。5.事業の今後の課題としては、長期間にわたる多様な活動が展開できる場所・施設の確保とその指導者の確保・養成、プログラム内容の充実などが大きな課題とされている。
乳児の「なだまりやすさの発達」についての縦断的観察;情緒の状態変化をもたらす制御パラメ-タの探索

自己組織化モデルでは、乳児期における情緒調整を、状態間のダイナミックな位相変化であるとみる。不快な情緒から「なだまり」へと変化し、また「なだまり」が崩壊して泣きやぐずりへと変化する過程はその一部といえよう。この研究では、乳児の情緒行動システムのリアルタイムの変化を記述するための2つのデ-タを解析することにした。いずれも、ヴィデオ録画された行動を特定の分析単位によって微細分析し、システムとしての組織化の過程を記述することを目的としている。<第1のデ-タ>これは家庭での縦断的観察であり、14名の乳児を生後1,2,4,6カ月に観察した。この乳児たちについては次年度以降も観察し、2歳まで追跡を継続する。この観察では(1)「自発的泣き」の状態から母親が抱き上げ、そして再度おろすという文脈、また(2)母親との言語的・非言語的コミュニケ-ションが中断されるという文脈で録画がなされた。ここから概略つぎの結果を得ている。乳児の「泣き」あるいは「ぐずり」を調整する制御パラメ-タとしては、身体接触と姿勢の垂直化という2成分を持つ「抱きあげ」が、およそ生後1カ月から効果をしめした。また母親との遠隔モ-ドのコミュニケ-ションが中断されることで乳児に「ぐずり」を生み出すのは、早い乳児でも、生後4カ月になってからであることも見いだされた。行動の微細な次元での組識化の過程を解明するにはまだ時間を要するが、さらに、生後6カ月時に得た気質検査(RITQ)およびデンバ-発達検査(JDDST)をもちいて乳児の個人差を説明するかたちでとりまとめることにする。さて、<第2のデ-タ>では、生後24カ月の幼児5名について観察をおこなった。これは玩具をとりあげるという文脈での幼児の行動を解析し、この月齢の幼児における母親への遠隔的モ-ドの情緒的行動(e.g.,「表情」)と近接モ-ドの情緒的行動(e.g.,「抱きつき」)との関係を調べた。
転写と共役したクロマチン制御機構の解明

本研究では、「転写と共役したクロマチン制御」の分子機構の理解を目指して、以下の知見を得た。1)Spt6と直接相互作用する転写装置(RNAポリメラーゼII)の点変異はセントロメア周縁部のサイレンシングを「徐々に」脱抑制した。2)同じくSpt6と直接相互作用するIws1タンパク質は、Spt6と同様に転写領域のヒストン量の維持に貢献し、転写と共役する「ヌクレオソームのずれ」を抑制する。本研究で得られた知見は、転写領域においてエピジェネティックな記憶を維持するためには、RNAポリメラーゼIIがSpt6やIws1と共に丁寧にヌクレオソームを鋳型とした転写を実施することが重要であることを示唆している。転写装置であるRNAポリメラーゼII(Pol2)と直接相互作用するヒストンシャペロンであるSpt6は、転写領域の既存のヒストンの流出を抑制する。このSpt6と相互作用するIws1は、試験管内においてSpt6とヒストンの相互作用を拮抗阻害するという報告があるが、細胞内での役割はほとんど分かっていなかった。本研究ではクロマチン免疫沈降(ChIP)等によってIws1の機能をゲノムワイドに解析した。Iws1の遺伝子破壊は、ヘテロクロマチンにおけるサイレンシングを脱抑制するだけでなく、ヘテロクロマチンやユークロマチンの転写領域においてヒストン量を減少させた。ヒストン量の減少の程度は転写量(Pol2の結合量)と相関した。ただし、これらの表現型はSpt6の遺伝子破壊より程度が弱く、この傾向はヒストンH3のメチル化修飾の維持という観点からも同様であり、Iws1は補助的に働くことが示唆された。本研究では、ChIPで得たサンプルの高速シーケンシング(ChIP-seq)の解析系の改善にも取り組んだ。興味深いことに、遺伝子の配向性を考慮に入れたゲノムワイドな検討の結果、Spt6とIws1の遺伝子破壊によってヒストンH3の配置が転写の下流方向にシフトすることが判明した。このことから、Iws1はSpt6を補助してDNAとヒストンの結合の維持に貢献し、その機能が損なわれることで転写時のヒストン流失やヒストンのズレが生じると考えられる。本研究はSpt6とIws1を中心とした「転写と共役したクロマチン制御」の分子機構を理解することを目的としており、平成24年度においては、これらの分子と関連する因子の探索を行った。結果として多数の候補因子を得る事ができ、その機能解析を進めているところである。例えば、Spt6と直接相互作用するRNAポリメラーゼII(Pol2:転写を行う酵素)の変異をもつ細胞がきわめて特徴的な表現型を示すことが分かった。野生型細胞のセントロメアと変異型細胞のセントロメアを識別できるよう遺伝的改変を加え、野生型細胞と変異型細胞との掛け合わせによって野生型細胞由来のセントロメアとPol2の変異を併せ持つ子孫細胞を効率的に単離する仕組みをつくった。この方法によって得られた子孫細胞では、Pol2の変異の影響により、正常だったセントロメアヘテロクロマチンの構造が「徐々に」失われて行く様子が伺えた。偶発的に起きるヘテロクロマチンの崩壊を修復できないためにこのような表現型が見られるのではないかと考えられる。この変異はもともとRNAiに欠陥をもたらすものとして単離されたものであるが、ヘテロクロマチン構造が失われた結果としてRNAiに欠陥が生じる可能性も排除できない。偶発的なクロマチンアイデンティティの消失を防ぐメカニズム、そして万が一の場合に修復するメカニズムがあると考えられ、それを分子レベルで理解するためのツールとして、この現象を利用できると考えている。本研究で同定した他の因子との関係も考慮しなければならない。相互作用因子の単離後に計画していた条件変異体の作成と、PTGSへの関与の検討を実施できていないため。24年度中に作成するに至らなかった条件変異体の作成を行い、PTGSへの関与も検討する。また、計画書にある通り、相互作用因子のゲノム上での分布を、クロマチン免疫沈降産物の高速シーケンス解析(ChIP-seq )で解析する。並行して当該因子の変異株における遺伝子発現のマイクロアレイ解析を行い、spt6とiws1の変異株の解析結果との比較解析を行う。必要に応じてタンパク質のドメイン解析を行い、その重要性を検討する。同定している相互作用因子のうちPTGSに関与するものについては、エクソソームとの機能的な関係を調査する。また、24年度に見いだしたPol2変異の特別な表現型についても、その表現型が見られる仕組みを様々な視点から考察し、転写と共役したクロマチン制御の理解につなげたい。該当なし
ネパールヒマラヤと日本の土地被覆変動に関する比較研究

これまでは来年度の本調査に向かっての文献レビューならびに,調査地点の選定のための基礎調査,これまでに蓄積してきたデータの解析を行った。ネパールにおいては,水に関連した災害に関して,既存のデータを収集して,コンパイルし,災害を通しての土地被覆状態の変動をさぐる基礎資料を得た。具体的には,過去の土地被覆状態(とくに,農地,森林,放牧地)の復元を行い,これらの変動について考察した。さらに,これらの変動が,住民の生活にどのようなインパクトを与え,またインパクトに対して,住民がどのようなアダプテーションを行っているのかを調べた。これらの変動の一部は温暖化によって生じているが,同時に人為的影響の結果でもある。今後は,これらの関係を明らかにしてゆく必要があるが,そのために,ネパールのマディ地区の集水域において,来年度に設置予定の観測機器の調整,現地での聞き取り調査項目シートの開発などを行い,現地調査準備を進めている。日本の現地調査に関しては,来日時期がすでに野外調査の時期ではなく,来年度に実施することになるが,これまでのところ,文献レビューを通して,調査地点の選定を進めている段階である。
酵素を用いた加齢臭成分ノネナールの可視化計測による全身加齢臭の３Ｄマップ化

平成30年度は本研究課題にてこれまで開発した計測原理を基盤として皮膚ガス成分のリアルタイム可視化を目的に1「ガス可視化システム(探嗅カメラ)の高感度化」および、2「正確な皮膚ガスイメージングの達成」のため、エタノールガスをモデルとして研究開発を実施した。探嗅カメラでは、アルコール脱水素酵素(ADH)をコットン繊維のメッシュへと固定化した検出素子を利用した。このシステムでは、エタノールガスの存在下で生じる、蛍光特性(励起波長340 nm、蛍光波長490 nm)を有するニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)を生成するADHの触媒反応を利用して、蛍光強度分布からADH固定化メッシュに負荷されたエタノールガスの濃度分布を可視化する。1「システムの高感度化」においては、撮像素子を従来のモノクロカメラからカラーCMOSカメラへと変更し、新規に高感度なNADH蛍光検出用の画像処理手法を開発し、2「正確な皮膚ガスイメージング手法の開発」では、複雑な凹凸を有する体表面とADH固定化メッシュ間の距離を均一化するフィッティングデバイスを開発した。その結果、皮膚ガス中エタノールの可視化に十分な感度が得られ、飲酒後の皮膚ガス中エタノールの可視化実験では、飲酒に伴ってエタノールガスが放出される様子の可視化を世界で初めて実現した。その際、計測する体表面の部位により同量の飲酒を行った場合でもエタノール濃度の濃淡が観察され皮膚ガスイメージングによる放出部位の特定の可能性が示唆された。これらの結果はノネナール分布を始め、種々の皮膚ガス評価の礎となると考える。また、本実験はカメラを固定して実施したものの手持ち可能なサイズにまで小型化が進んでおり、アーム型ロボット等と組み合わせて身体全体の皮膚ガス濃度マッピングへの展開も実現できると考えている。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成28年度はノネナールと同様にアルデヒド基を有し、モデル成分として選択したアセトアルデヒド(AcH)について、1飲酒後にアルコール代謝にて生成され、生体ガスに含まれるAcHを対象としたバイオ計測法の検討を行い、2AcHガス用の可視化システムを構築した。まず、1AcHの高感度センシングを目指して2種のニコチンアミドアデニンジヌクレオチド(NADH)依存型脱水素酵素による測定法を検討し、アルコール脱水素酵素(ADH)の逆反応を用いることで、感度と選択性に優れる液相及び気相のAcH用のバイオセンサを開発した。はじめにAcH溶液測定系にてアルデヒド脱水素酵素(ALDH)の正反応およびADHの反応条件について最適化し、次に定量範囲を比較したところ、ADH逆反応を用いることでALDH正反応に比して広いダイナミックレンジ(ALDH: 0.025-0.2 mM→ADH: 0.001-0.5 mM)を以ってAcHの選択的測定が可能であった。また、同様に気相AcH測定系においても定量範囲を比較した結果、気相計測においてもADHの逆反応を用いることで飲酒後の呼気中AcH濃度(1.2-6.0 ppm)を含む、0.02-10 ppmの濃度範囲にて定量が可能で、AcHガスに対する高い選択性を確認した。上記結果に基づき、2ADHを用いたAcH用の可視化システム(探嗅カメラ)を開発した。本システムではNADHを浸漬したADH固定化メッシュを用いて、AcHガス負荷に伴うNADHの蛍光強度変化を高感度CCDにて撮像し、AcHガスの可視化を実現した。本年度は、人体から定常的に放出される加齢臭成分ノネナールの濃度分布の可視化を行うための基礎検討として、アセトアルデヒド(AcH)をモデル成分とした可視化システムを開発した。ノネナールとAcHは共にアルデヒド基を有している。AcHはアルデヒド類の中でも単純な構造を有しており、飲酒により呼気および皮膚ガス中に含まれる濃度が増加することが報告されていることからモデル成分として選択した。まず、AcHを触媒可能なNADH依存型脱水素酵素として「アルデヒド脱水素酵素(ALDH)」に加えて、「アルコール脱水素酵素(ADH)の逆反応」について比較・検討した。その結果、ADH逆反応を用いることでALDH正反応に比して広いダイナミックレンジ(ALDH: 0.025-0.2 mM→ADH: 0.001-0.5 mM)を以ってAcHの選択的測定が可能であった。次に、AcHガスの気相計測についてADH逆反応にて検討を行った。実験の結果、気相計測においてもADHの逆反応を用いることで飲酒後の呼気中AcH濃度(1.2-6.0 ppm)を含む、0.02-10 ppmの濃度範囲にて定量が可能で、AcHガスに対する高い選択性を確認した。次に本センサ系を呼気計測に用いたところ、呼気中AcHの計測が可能で、ALDH2の活性が異なる被験者の間にて呼気濃度を比較したところ、明確な差異を観察した。最後に、気相および液相での結果に基づき、AcH用の探嗅カメラの開発を進めた。構築にあたりADH固定化メッシュの同軸上に「励起系」と「蛍光CCD系」を対向するように配置した。実験では、ADH固定化メッシュにNADH溶液を浸漬した後、標準AcHガスを負荷し、蛍光強度変化を高感度CCDにて撮像した。実験の結果、負荷点を中心に蛍光強度の減少が観察され、構築した画像解析法にてAcHガス濃度変化のリアルタイムな可視化を実現した。