hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
エクソソーム取り込みを標的とする口腔癌治療薬の探索

【目的】我々はこれまでに口腔扁平上皮癌において、癌細胞が分泌するエクソソームは、癌細胞自身に取り込まれ、浸潤や転移を促進することを明らかにしてきたが、エクソソームの分泌および細胞内への取り込み機構は十分に解明されていない。本研究では、口腔扁平上皮癌の発育・進展を促進する上皮成長因子受容体(EGFR)に着目し、口腔扁平上皮癌細胞におけるエクソソームの分泌および取り込みにおける関与を検討した。【方法】OSC4にEGFR-siRNAを導入し、内在性EGFRの発現をノックダウンさせた細胞を用いるとともに、rhEGF、EGFR分子標的治療薬であるエルロチニブ、セツキシマブでOSC4細胞を処理し、培養上清よりエクソソームを分離した。分泌への影響はエクソソームのCD9の発現についてWestern blottingにて比較検討を行い、取り込みへの影響はPKH26で各エクソソームを標識した後、培養液に添加し、共焦点顕微鏡およびフローサイトメトリー法にて評価した。【結果】EGFRノックダウン細胞ではエクソソームの分泌量および取り込み量は共に減少した。一方、rhEGF刺激によりエクソソームの分泌量、取り込み量は増加し、エルロチニブ、セツキシマブ処理により減少した。また、その効果はセツキシマブよりもエルロチニブ処理でより顕著に認められた。【考察】以上より、OSC細胞においてEGFRシグナルはエクソソームの分泌と取り込みの両者を促進し、癌の発育・進展を正に制御している可能性が示唆された。【目的】癌細胞が分泌するエクソソームは、癌細胞および周囲の間質細胞に取り込まれ、エクソソーム内包物質を介して下流のシグナルを活性化し、癌の発育・進展を促進する。エクソソームの細胞への取り込みには主にエンドサイトーシスが関与することがいわれているが、その機構の解明は未だなされていない。そこで、口腔扁平上皮癌細胞において、エンドサイトーシス経路の一つであり、EGFなどの成長因子により誘導されるアクチン依存性マクロピノサイトーシスによるエクソソームの取り込みの関与を明らかにすることとした。【材料・方法】株化OSC細胞(OSC-4)より分離したエクソソームをPKH26で標識した後、マクロピノサイトーシス阻害剤であるEIPA存在および非存在下でOSC-4の培養液に添加して3時間培養し、共焦点顕微鏡にてエクソソームの取り込みを評価した。これとともに、EIPAのOSC-4の増殖およびアポトーシスへの影響をそれぞれWST-1アッセイおよびAnnexin-V/PIによるフローサイトメトリー法にて検討した。【結果】OSC-4へのエクソソームの取り込みは、EIPAの添加により濃度依存性に有意に抑制された。一方、EIPAのOSC-4の増殖能への影響は認められなかったが、50μM以上の濃度ではAnnexin-V/PI陽性細胞の割合が増加し、アポトーシスが誘導された。以上のことより、EIPAはOSC-4へのExosomeの取り込みを阻害するが、それ単独では細胞増殖抑制効果をもたないことが示唆された。今年度は口腔扁平上皮癌細胞におけるマクロピノサイトーシス誘導因子(各種成長因子、K-ras強発現など)を決定する予定であったが、そこまで着手できていないことから判断した。【目的】癌細胞が分泌するエクソソームは、癌細胞自身に取り込まれ、エクソソーム内包物質を介して下流のシグナルを活性化し、癌の発育・進展を促進することが知られているが、エクソソームの細胞への取り込み機構は十分に解明されていない。そこで、口腔扁平上皮癌細胞において、EGFなどの成長因子により誘導されるアクチン依存性マクロピノサイトーシスによるエクソソームの取り込みの関与を明らかにするとともに、EGFR標的薬により癌細胞へのエクソソームの取り込みが阻害されるか検討した。【材料および方法】OSC-4由来エクソソームをPKH26で標識後、培養液に添加し、EGFR標的薬のエルロチニブ、セツキシマブ、さらに、マクロピノサイトーシス阻害剤EIPAの存在および非存在下でOSC-4を培養した後、共焦点顕微鏡およびフローサイトメトリー法にてエクソソームのOSC-4への取り込みを評価した。【結果】EGF処理によりエクソソームのOSC-4への取り込みは促進された。一方、エルロチニブ、セツキシマブおよびEIPAはいずれもエクソソームのOSC-4への取り込みを経時的に抑制したが、その効果はエルロチニブでより顕著に認められた。OSC-4由来エクソソームによる腫瘍促進効果については、エクソソームは濃度依存的にOSC-4細胞の増殖・遊走・浸潤を促進したが、EIPAおよびEGFR阻害剤はエクソソーム非存在下においてもOSC-4細胞の増殖・遊走・浸潤を抑制し、エクソソーム処理により誘導される各促進作用も抑制した。【考察】以上のことより、OSC細胞はEGF誘導性マクロピノサイトーシスを介してエクソソームを取り込むが、EGFR標的薬はこの作用を阻害することが明らかとなった。このエクソソーム取り込み阻害による癌の発育・進展阻止の可能性が示唆された。本年度計画していた実験は遂行できたため【目的】我々はこれまでに口腔扁平上皮癌において、癌細胞が分泌するエクソソームは、癌細胞自身に取り込まれ、浸潤や転移を促進することを明らかにしてきたが、エクソソームの分泌および細胞内への取り込み機構は十分に解明されていない。

本研究では、口腔扁平上皮癌の発育・進展を促進する上皮成長因子受容体(EGFR)に着目し、口腔扁平上皮癌細胞におけるエクソソームの分泌および取り込みにおける関与を検討した。【方法】OSC4にEGFR-siRNAを導入し、内在性EGFRの発現をノックダウンさせた細胞を用いるとともに、rhEGF、EGFR分子標的治療薬であるエルロチニブ、セツキシマブでOSC4細胞を処理し、培養上清よりエクソソームを分離した。分泌への影響はエクソソームのCD9の発現についてWestern blottingにて比較検討を行い、取り込みへの影響はPKH26で各エクソソームを標識した後、培養液に添加し、共焦点顕微鏡およびフローサイトメトリー法にて評価した。【結果】EGFRノックダウン細胞ではエクソソームの分泌量および取り込み量は共に減少した。一方、rhEGF刺激によりエクソソームの分泌量、取り込み量は増加し、エルロチニブ、セツキシマブ処理により減少した。また、その効果はセツキシマブよりもエルロチニブ処理でより顕著に認められた。【考察】以上より、OSC細胞においてEGFRシグナルはエクソソームの分泌と取り込みの両者を促進し、癌の発育・進展を正に制御している可能性が示唆された。OSC細胞におけるマクロピノサイトーシス誘導条件を決定するとともに、その条件下においてエクソソームの取り込みが促進されるかを検討する。さらには、マクロピノサイトーシス抑制によるエクソソーム取り込み阻害がOSC細胞の増殖、遊走、浸潤などの生物学的特性に対する影響について検討する。In vivoの系で、エクソソーム取り込み阻害剤が腫瘍の成長や転移を抑制するか検証する。
京都府口丹波地方の方言敬語の動向

本研究は、京都語に隣接する京都府口丹波方言の敬語展開の現状を明らかにすることを目ざしたものである。口丹波地方では、従来、尊敬語として機能するハル敬語と、親愛語として働くテヤ敬語とが併存し、使い分けられていた。しかし、2012年から2015年までの現地調査の結果、京都市に近い南東部、特に中心部の亀岡地区で、テヤ敬語が廃れつつあることがわかった。そして女性は京都市女性話者に近い敬語運用を行い、男性は京阪地方で盛んな軽卑語のヨルを取り入れ、テヤ敬語の役割の一部を担わせつつある。また、ほぼ全域で、存在動詞がハルに承接する場合、オラハルとイハルないしイヤハルとのあいだでゆれがみられることがわかった。京都府口丹波地方の方言敬語の展開を調べるという本研究の二年目となる今年度は、亀岡市南西部の曽我部町、北東部の馬路町、最北部の南丹市園部町の3地点で調査を実施した。面接調査の結果からは、亀岡市域を中心に高年層で美化語や「おさん」のような言い方がよく使用されていること、方言敬語のハル敬語は全域的に使われている一方で、テヤ敬語の使用は地域差と年齢差があることが確認できた。奥村三雄(1962)「京都府方言」(楳垣実編『近畿方言の綜合的研究』三省堂p.282)には「...口丹波には、れっきとした敬語書カハル形が存しており、書イテヤ形は、むしろ、親愛語となっている」と記されているが、亀岡市曽我部町の調査からは、このハル敬語とテヤ敬語の使い分けの詳細をつかむことができた。テヤ敬語の活用は一般に複雑で、地域差も大きいが、当地でのその活用変化や承接関係についても詳しく調べることができた。また、高年層男性はテヤ敬語とハル敬語に加えてヨルも京都市の影響からか取り入れており、その三者の使い分けに関して興味深い結果が得られた。さらに、オラハルの形はどの地域でも使用されていること、オヤスは定型表現でわずかに使用されていることがわかった。前年度同様、軽卑語ないし親愛語とされるヨルは当該地方の男性にかなり浸透していること、その意味や機能に地域差と属性差があることが確認できた。亀岡市域において丁寧表現ドス(名詞接続)・()オス(本動詞「ある」・形容詞接続)は60代以下の年齢層ではほとんど使用されないことが確認できた。現代日本語の敬語の一般的動向とは異なる特質を持っていることが予想される京都府口丹波地方の方言敬語の展開を調べるという研究目的にあわせ、今年度は、まず、予備調査として、当該地域の社会文化状況や、言語状況について記された文献を収集し、調査地の選定や調査票の策定を行った。その上で、亀岡市市街地、亀岡市南西部の曽我部町、北部の千歳町、南丹市園部町の4地点で調査を実施した。各地点の調査方法と対象者は以下のとおりである。亀岡市市街地...60代男女・70代女性への面接調査、および、60代女性と70代女性による自然談話の収録。亀岡市曽我部町...70代男女への面接調査、亀岡市千歳町...60代女性と馬路町出身在住の60代女性への面接調査、南丹市園部町...30代男性、60代男女、70代性女性への面接調査面接調査では、動詞述語の敬語運用について詳細かつ網羅的に調べた他に、美化語や京都市で盛んな「おさん」のような言い方やドス・オスのような丁寧語などについても調べた。また、テヤ敬語(「行ってや」「読んでや」のような言い方)をよく使用する話者を対象として、テヤ敬語の活用変化や承接関係についても調べた。調査の結果、全地点でハル敬語(ア段接続、「行かはる」のような形)は盛んに使われていること、テヤ敬語は園部町の高年層女性、亀岡市市街地・曽我部町の男性が使用していること、男性は軽卑語ないし親愛語とされるヨルも使用していること、ハル敬語・テヤ敬語・ヨルとも意味・機能に地域差と属性差があることがわかった。また、高年層話者は一般に美化語の類をよく使用し、園部町の話者はドス・オスも使用していることがわかった。京都府口丹波地方の方言敬語の展開を調べるという本研究、三年目である今年度は、亀岡市南西部の曽我部町、北部の東本梅町、亀岡市旧市街地(亀岡地区)、中部の千代川町、東部京都市寄りの篠町の5地点で調査を実施した。亀岡市曽我部町(60代男性と70代女性への調査票による面接調査。70代女性2名による自然談話の収録)。亀岡市東本梅町(70代男性と70代女性、および40代女性への面接調査。70代男性2名と80代男性1名の計3名による自然談話の収録)。亀岡市旧市街地(30代男性および30代女性への面接調査。50代80代男性7名による自然談話の収録)。亀岡市千代川町(60代男性、50代女性、30代男性および30代女性への面接調査)。亀岡市篠町(70代男性と60代女性への面接調査)。

今年度実施した面接調査により、尊敬表現に関しては、全域で方言敬語のハル敬語が活発に使われている一方、テヤ敬語は丹波地方に近づくほどよく使用されているが、京都市に近い地域や、若い世代ではほとんど使用されなくなっていることが確認できた。方言敬語の種類別では、ハル敬語は話し相手待遇としても、第三者待遇としてもよく使われているが、特に後者の適用範囲は非常に広い。存在動詞に承接する場合、オラハルとイ(ヤ)ハルとを併用するとの回答が多く、1990年代の調査結果と異なりをみせる。これは、男性のヨルの使用とあわせ、存在動詞自体のオルからイルへの変化を反映している可能性がある。テヤ敬語の親愛語としての用法、現在形チャとテヤ、過去形チャッタとテヤッタの先後関係についても手がかりをつかむことができた。面接調査に関しては調査地点として3地点追加することができたので、年度当初の目標を達成することができた。談話収録調査に関しては4地点完了し、1地点を残しているので80%の達成度といえる。前年度やり残していた亀岡市中部の曽我部町での談話収録調査を2015年5月6日に実施した。収録談話の文字化作業は業者に委託し、8月30日に文字化されたデータを受け取っている。以上で計画していた調査はほぼ終了した。後は、調査票や談話文字化資料を点検し、必要ならフォローアップ・インタビューをする心積もりであったが、2015年9月10日にクモ膜下出血を起こして手術入院し、それにともない半年間の休職ということになってしまった。したがって、2015年度中の研究活動も休止せざるを得なかった。今年度行った談話収録調査(亀岡市曽我部町70代女性2名による談話)により得られた資料により以下のようなことがわかった。奥村三雄「京都府方言」(楳垣実編『近畿方言の総合的研究』1962年、282頁)に、「この書イテヤ形は、上述口丹後・奥丹波地方の他、船井・南桑田・亀岡の口丹波でも、かなり使用されるが、この口丹波には、れっきとした書カハル形が存しており、書イテヤ形は、むしろ、親愛語となっている。つまり先生が書カハッタ兄チャンが書イチャッタ、という様な使い分けが存するのである」と記述されている。文字化資料には、ちょうどこの記述と並行するような使い分けが認められた。なお、小学校からの同級生同士の談話で、その同級生を話し相手に、また子や孫を話題にテヤ敬語(=書イテヤ形)を用い、先生を話題にしてハル敬語(=書カハル形)を用いる他に、大半の同級生にもハル敬語を用いているので、ハル敬語は上位だからというより、心理的距離がある場合に用いられるという解釈もできそうである。形態面についても、ハル敬語が一段活用動詞に続く際、ハル、ヤハルだけでなくヤルとなる場合があることがわかった。また、存在動詞に続く場合については、テヤ敬語の場合オッテヤとなるが、ハル敬語の場合オラハルが多いがイハル、イヤルも出現している。本研究は、京都語に隣接する京都府口丹波方言の敬語展開の現状を明らかにすることを目ざしたものである。口丹波地方では、従来、尊敬語として機能するハル敬語と、親愛語として働くテヤ敬語とが併存し、使い分けられていた。しかし、2012年から2015年までの現地調査の結果、京都市に近い南東部、特に中心部の亀岡地区で、テヤ敬語が廃れつつあることがわかった。そして女性は京都市女性話者に近い敬語運用を行い、男性は京阪地方で盛んな軽卑語のヨルを取り入れ、テヤ敬語の役割の一部を担わせつつある。また、ほぼ全域で、存在動詞がハルに承接する場合、オラハルとイハルないしイヤハルとのあいだでゆれがみられることがわかった。前年度の春休み体調を崩して実施できなかった調査の分も含め、今年度夏休み以降鋭意調査を進めた。結果として面接調査はほぼ予定を達成した。
イッテルビウム光格子時計における青方魔法波長の探索

本研究では、イッテルビウム(Yb)光格子時計における、光格子レーザー由来の不確かさ低減のために、Yb原子の青方離調魔法波長を探索することを目的として、以下の成果を得た。1Yb光格子時計のさらなる高度化を達成し、絶対周波数測定不確かさを1桁以上低減した。これによりYb光格子時計が秒の2次表現に採択された。2Yb/Sr光格子時計周波数比の直接測定に成功した。マイクロ波周波数基準による光シフト周波数測定と比べて、1桁以上測定時間を短縮できる。3光シフト誘起用青色レーザー光源の開発に成功した。赤外線半導体レーザーを光増幅し、第2次高調波発生により、波長399nmで100mWの出力を達成した。青方離調魔法波長を探索・決定するには、まず、素の状態のYb光格子時計の評価を完成しなくてはならない。そのために、Yb光格子時計の絶対周波数測定をさらに進めた。特に、光格子レーザー偏光の変動を抑制するために、光ファイバー出射後に偏光ビームスプリッターを設置した。これにより、ベクトル光シフトに伴う周波数変動を抑制できた。各種レーザーの周波数安定化システムの改善により、最大6時間に渡る連続運転が可能となった。この状態で、当所の保有するUTC(NMIJ)を基準として、絶対周波数計測を行った。この結果、3年前と比べて、一桁以上の不確かさ低減に成功した。この成果は、国際度量衡局傘下の時間周波数委員会に報告され、Yb光格子時計が秒の2次表現と採択されるに至った。青方離調光シフト誘起用レーザー光源として、第二次高調波発生による青色レーザーシステムの開発を行い、共振器安定化の結果、青色レーザー光発生に成功した。また、LED光源による光シフト測定を試みたが、有意な光シフトを観測することはできなかった。そのため、波長373nmと396nmの半導体レーザーを準備した。以上により、青方離調魔法波長探索のための光シフト測定の準備は整いつつあるといえる。さらに、当所で開発がほぼ完了しているSr光格子時計を参照として用いることにより、マイクロ波周波数基準を使わない、光周波数標準同士の比較を行えば、さらに短時間での光シフト評価が可能になると考えられる。本研究では、申請者らが世界で初めて開発した「イッテルビウム(Yb)光格子時計」について、光格子レーザーによる高次光シフトに起因する不確かさの軽減のため、原子を捕獲しつつ時計遷移周波数にはなんの影響もない、光格子の波長(魔法波長)の中でも特に原子の共鳴から正に離調をとる、「青方離調魔法波長」の探索を目的とした。この場合、原子は光格子の腹ではなく節に捕獲されるため、高次光シフトに起因する不確かさが大幅に軽減できると期待される。申請者による簡便な計算によれば、Yb原子の場合、青方離調側では波長399nm以下に魔法波長が存在するので、まずは、波長399nmの光源の開発を行った。このために、波長798nmの外部共振器半導体レーザーの光をテーパードアンプによって2W程度まで増幅し、光共振器中におけるPPKTP結晶による第二次高調波発生により約100mWの399nmの光を得た。また、この青色レーザーによる光シフト量を速やかに測定するためには、セシウム原子時計やUTC(NMIJ)などのマイクロ波周波数標準に基づく測定ではなく、他の光周波数標準との直接的な比較を行うことが望ましい。そのために、独立に開発されたストロンチウム(Sr)光格子時計(絶対周波数評価済)との周波数比直接測定実験を行い、これに成功した。これは、異種光格子時計同士の直接比較実験としては世界で初めてである。実際の青方離調魔法波長の探索には至っていないが、上記の二つの達成状況により、Yb原子の青方離調魔法波長の探索は速やかに実行可能と考えられる。一方、399nmの光源はYb原子の冷却に必要であり、大強度の399nm光源の開発に成功したことは、捕獲原子数の増大にも直結するため、Yb光格子時計自体の性能向上に貢献する重要な成果と言える。東日本大震災の影響(機械的振動、直後の停電、夏季節電による空調機運転の制限)により、本年度前半は実質的にYb光格子時計の運転は不可能だった。その後、復旧作業にあたり震災前の状態に復帰できた。その際、超高真空装置において、ターボ分子ポンプからイオンポンプに交換することで、振動の影響を排除できた。観察する原子数を規格化することにより時計遷移スペクトルのSN比向上に成功した後、このスペクトルに対して、時計遷移励起用レーザー周波数を安定化することに成功した。これにより、従来よりも短時間で絶対周波数計測が可能となり、安定度評価ができるようになった。

絶対周波数計測は以下の方法で行った。原子遷移に安定化された時計遷移レーザー(波長578nm)と、波長1064nmの狭線幅レーザーに位相ロックされた狭線幅光コムの第二次高調波成分とのビート信号とその光コムの繰り返し周波数を計測する。また、時計遷移レーザーを時計遷移にロックするためのAOM駆動周波数も同時に記録することで、時計遷移の絶対周波数を測定することができる。アラン分散を用いた安定度評価ができるようになり、1,000秒の平均時間で、5Hzの不確かさでの周波数計測が可能となった。本研究課題である、青方離調の光シフトを起こさせるための、レーザー光源の開発に着手した。波長798nmの外部共振器半導体レーザー、テーパーアンプによる光強度増幅器、第二次高調波発生用光共振器等の開発に着手した。青方離調魔法波長がどの程度のものかという理論予測が皆無であるので、まずは、LED光源を用いた大まかな状況把握も必要となる。そのための、青色LED光源の準備も行った。以上により、青方離調魔法波長探索の準備が整いつつあるといえる。今年度でYb光格子時計本体はおおむねの完成を見た。さらに、光シフト誘起用青色レーザー光の生成にも成功しているので、来年度には光シフト測定実験に本格的に着手できるものと期待できる。平成23年度科研費交付申請書の研究実施計画に記述したように、本年度は光シフト用青色レーザー光源の開発に着手した。また、Yb光格子時計装置の完成度も高まり、来年度には、光シフト測定実験に着手できるものと期待できる。Yb光格子時計の分光時に、波長373nm、及び、396nmにピークを持つレーザー光を照射し、その光シフトを測定する。その2点における光シフトの符号を見て、より大きな波長範囲を掃引できる第2次高調波発生による青色レーザー光源の波長を同調し、より精密に魔法波長を決定することを目指す。Yb光格子時計の分光時に、波長365nm、及び、385nmにピークを持つLED光を照射し、その光シフトを測定する。また、波長798nmの外部共振器半導体レーザー、テーパーアンプによる光強度増幅器、第二次高調波発生用光共振器等を用いたレーザー光源システムを完成させる。青色レーザー光を原子に照射するための光学系(レンズ、ミラー等)の購入に充てる。光シフト測定用光学系の構築や、第二次高調波レーザー光源システム(光学系、電子回路)等のために研究費を使用する予定である。本年度は大震災の影響により、本格的な分光実験に遅延が生じたため、次年度使用額が生じた。
ras遺伝子産物とその標的蛋白質の相互作用の機構

(1)ras蛋白質の標的である出芽酵母アデニル酸シクラ-ゼを可溶化して精製した。その結果、シクラ-ゼは高分子量複合体を形成しており、Mg^<2+>存在下ras蛋白質依存性シクラ-ゼ活性をもつ複合体は、Mn^<2+>依存性活性をもつ複合体と分離可能であり、従来未発見の分子量5万と1.5万の蛋白質がras蛋白質依存性複合体中に見い出された。昨年度発見された分子量7万シクラ-ゼ結合蛋白質CAPは、ras依存性複合体中には少量しか存在せず、その遺伝子を破壊してもシクラ-ゼのras蛋白による活性化に影響はないので、ras蛋白質との相互作用には不必要と結論された。現在、発見された2つの蛋白質の作用機構を検討中である。(2)出芽酵母アデニル酸シクラ-ゼの全域を、200アミノ酸位の小領域に分割して大腸菌内で産生し、その各々にポリクロ-ナル抗体を作成して、各抗体の試験管内でのras蛋白質によるシクラ-ゼの活性化に対する影響を調べた。その結果、Leucineーrich repeatsの少しCOOH末端側の一領域に対するポリクロ-ナル抗体のみが、出芽酵母アデニル酸シクラ-ゼをras蛋白質と同程度(約100倍)に活性化する事を発見した。この抗体のシクラ-ゼ活性化に関するエピト-プをマッピングした所、シクラ-ゼのアミノ酸番号1452ー1465の14アミノ酸の小領域が抗原決定領域である事がわかった。この抗体による活性化は、ras蛋白質による活性化と拮抗的(相補的)であるので、この抗体はシクラ-ゼ分子上のras蛋白質結合部位の少なくとも一部を認識している事が推測された。昨年度報告したleucineーrich repeatsについては、その変異がシクラ-ゼ分子の異常な凝集をひきおこす事が判明し、シクラ-ゼの超構造の維持に必要であると考えられた。上記ras蛋白質様作用を示す抗体によって特異的に認識される蛋白質が哺乳類細胞抽出液中に少なくとも一種類存在する事が判明したので、現在その遺伝子をクロ-ン化中である。
ナス科体細胞雑種植物のRAPD分析による品種識別及びその評価

1.体細胞雑種におけるRAPD分析結果は以下の通りである。(1)検索に用いたプライマー数は46種、その内雑種識別可能なプライマー数は29種であった。(2)種特異的なバンド数はSolanum toxicariumが57本、Solanum sisymbriifoliumが52本であった。体細胞雑種植物において、Solanum toxicriumの種特異的な57本のバンドは全て保持されていたが、Solanum sisymbriifoliumの種特異的バンドは52本中51本と殆ど脱落し、1本しか検出できなかった。この結果は、体細胞雑種と同定した20個体で全て同じ結果となった。2.体細胞雑種の染色体数1.体細胞雑種におけるRAPD分析結果は以下の通りである。2.体細胞雑種の染色体数
項書換え系を対象としたモデル検査手法に関する研究

本研究では,計算機システムの自動検証技術の1つであるモデル検査法と項書換え系の理論を融合し,一般に無限の状態空間を持つソフトウェアに対しても自動検証できるようモデル検査法を拡張することを目指した.特に本年度は,以下の2点を中心に研究を進めた.●モデル検査可能なクラスの拡張昨年度の研究において研究代表者らは,拡張PDS(LL-GG-TRS)と呼ばれるTRSの部分クラスを定義し,そのLTLモデル検査アルゴリズムを開発した.さらに,拡張PDSを用いることにより,従来検証が困難であった例外処理機能(exception handling)付き再帰プログラムが検証可能となることも発見した.本年度は実用性のさらなる向上を目指し,オブジェクト指向型プログラムをも検証できるよう,新しい計算モデルAliasingPDSをグラフ書換え系の部分クラスとして定義し,そのモデル検査アルゴリズムを開発した.AliasingPDSは,再帰呼び出しとオブジェクトの無制限な動的生成を同時に扱いつつ,到達可能性判定問題が決定可能となるよう設計された実用的かつ強力な計算モデルである.AliasingPDSの上にJavaプログラムをモデル化することで,より現実的なソフトウェアモデル検査法構築の基盤となることが期待される.●モデル検査システムの開発モデル検査システムの木言語処理部(所属判定,積集合演算)に関する基本調査および設計を行った.本研究では,計算機システムの自動検証技術の1つであるモデル検査法と項書換え系の理論を融合し,一般に無限の状態空間を持つソフトウェアに対しても自動検証できるようモデル検査法を拡張することを目指している.本年度は,この目標にしたがって主に基礎理論の構築を行ってきた.その結果,当初の予想通り項書換え系に以下のような制限を加えたクラスに対して,線形時相論理式(LTL式)によるモデル検査問題が決定可能となることを証明することができた.(1)書換え位置をルートに限定する.(2)書換え規則を左線形(規則左辺に同じ変数が2回以上出現しない)とする.(3)書換え規則の左辺と右辺における変数の出現位置に一定の制約を加える.これらの制限を加えても,再帰プログラムのモデルとして広く用いられているプッシュダウンシステムをシミュレートするのに十分であることは,当初の予想通りであったが,それに加えて,(a)本クラスはプッシュダウンシステムのクラスより真に広いこと,(b)例外処理を含む再帰プログラムが真に広いことを示す一例になっていること,を示すことができた.特に(b)は,本研究の有用性を示す重要な発見であると考える.また,本研究の情報セキュリティ,特に暗号プロトコルの安全性検証への応用について理論的検討を重ねている.なお,本研究に関して,2003年7月に研究代表者は「社団法人情報処理学会平成15年度山下記念研究賞」を受賞している.本研究では,計算機システムの自動検証技術の1つであるモデル検査法と項書換え系の理論を融合し,一般に無限の状態空間を持つソフトウェアに対しても自動検証できるようモデル検査法を拡張することを目指した.特に本年度は,以下の2点を中心に研究を進めた.●モデル検査可能なクラスの拡張昨年度の研究において研究代表者らは,拡張PDS(LL-GG-TRS)と呼ばれるTRSの部分クラスを定義し,そのLTLモデル検査アルゴリズムを開発した.さらに,拡張PDSを用いることにより,従来検証が困難であった例外処理機能(exception handling)付き再帰プログラムが検証可能となることも発見した.本年度は実用性のさらなる向上を目指し,オブジェクト指向型プログラムをも検証できるよう,新しい計算モデルAliasingPDSをグラフ書換え系の部分クラスとして定義し,そのモデル検査アルゴリズムを開発した.AliasingPDSは,再帰呼び出しとオブジェクトの無制限な動的生成を同時に扱いつつ,到達可能性判定問題が決定可能となるよう設計された実用的かつ強力な計算モデルである.AliasingPDSの上にJavaプログラムをモデル化することで,より現実的なソフトウェアモデル検査法構築の基盤となることが期待される.●モデル検査システムの開発モデル検査システムの木言語処理部(所属判定,積集合演算)に関する基本調査および設計を行った.
プロサポシンの神経栄養因子作用

サポシンA,B,C,Dは各種のリソゾーム水解酵素を活性化する分子量約1万の糖蛋白質で、プロサポシンはこれら4種のサポシンをドメインとして持つ前駆体蛋白質である。プロサポシンは多くの分泌液中に豊富で、特に脳脊髄液中に高濃度存在する。脳神経系では、そのほとんどがプロセスされないプロサポシンの形で存在し、ある種の神経核その神経路の神経細胞に限局して分布している。最近我々は、プロサポシンがin vivoにおいて虚血性神経細胞死を抑制すること、坐骨神経切断後の神経再生を促進すること、培養細胞系においては海馬神経細胞で突起伸展を促進し、その細胞死を抑制することを明らかにし、さらにこの神経栄養因子活性がプロサポシンのサポシンCドメインのアミノ末端側に限局することを実証してきた。今回我々は、神経栄養因子プロサポシンの神経系における分泌の詳細を明らかにするために、免疫組織化学的手法を用いてラット中枢神経系での検討を行った。光顕レベルでは、脳実質内では神経細胞特異的に陽性細胞像を得たが、脈絡叢上皮にも強陽性像を得た。ラット胎児での発生を追うと、胎生10日の胎児中枢神経においても、脈絡叢上皮に強陽性像が観察され、発生初期からプロサポシンが脈絡叢上皮で多量に発現していることが明らかとなった。この脈絡叢上皮細胞の免疫電顕的観察を詳細に行ったところ、カテプシンDと局在を同一にするリソゾーム様構造物に陽性反応を認めた。さらに、この構造物からの細胞外への分泌途中の像が得られたところから、脳脊髄液中に高濃度に存在するプロサポシンは脈絡叢上皮細胞で生産され、積極的に分泌されているものと考えられた。
遷移金属錯体のマトリックス振動分光における特異的希ガス効果の理論的解明

第3年度では、希ガスマトリックス振動分光実験の結果を理解するために、高精度ab initio計算により得られるポテンシャル曲面から、振動SCF(VSCF)法及び振動Configuration Interaction(VCI)法を用いて振動数と強度を求めた。PtCO, PdCO,Ar-PtCO, Ar-PdCOに対してCCSD(T)/aug-cc-pVTZレベルで構造最適化及び基準振動解析を行い、同計算レベルで作成したポテンシャル曲面の非調和性・モード間カップリングを考慮したVSCF/VCI計算を行った。強度算出に関しては双極子曲面の算出が必須であるがCCSD(T)レベルの計算は困難であるため、同じ座標でレベルをCCSDに落として計算を行った。VSCF/VCI計算では基準振動の3モードカップリングまでを含めたところ、必要となる核座標のgridの総数は3原子分子で約4600点、4原子分子で約37000点となった。すべてのgridで電子状態計算を行い、得られたエネルギー及び双極子モーメントを用いて振動準位ならびにスペクトル強度を計算した。PtCOの変角振動は基本振動数は407 cm-1、倍音は816 cm-1となったが、強度について倍音は基音の約2/3であり、倍音の強度としては異常に大きいが基音は観測可能な強度を持つ。一方、Ar-PtCOの場合、基本振動数ν(Pt-C-O)は450 cm-1と10%程度青方遷移したが、同時に強度が0.2(km/mol)と非常に弱くなる。倍音準位は899 cm-1と計算されたが、その強度は基音の約4000倍と非常に大きい。倍音の振動数は、Ar-matrix分光実験でPtCOのν(Pt-C-O)として報告された916 cm-1とも非常に近く、実験ではAr-PtCOに由来する変角振動の倍音の準位が観測されたと推定される。変角振動の倍音の強度が基音の強度よりも大きくなる機構について、各基準座標に沿った双極子モーメントの解析を行った。PtCO分子のν(Pt-C-O)に関するμx成分は線形に変化するが、ArPtCO分子については倍音励起に相当する核座標変位の範囲において非線形な形状が見られた。26年度が最終年度であるため、記入しない。採用第一年度においては、まず対象とする系の全体像を得るため、まずDFTを用いて系統的に計算を行なった。高精度計算から得た構造と調和振動数を再現する汎関数を選び、計算を行なうこととした。PtCO及びPdCO分子に対し、DK3-QCISD(T)法による全電子計算を行い平衡構造及び振動数を算出して実験値との比較を行い、次に約40種類の汎関数と10種類の基底関数を組合せて行った。算出された値を実測値及び平衡状態近傍でのDK3-QCISD(T)法による結果と比較し、これを最も再現するPBEOMOL(0.75PBEx+0.25HF+1.0PW91c)/def2-TZVPPを用いポテンシャル曲面を作成した。DFT法によるPtCO分子の計算値はDK3-QCISD(T)法による計算値と比較しても遜色ない。PtCO分子のv(Pt-C-O)は412cm^-1であり、その倍音は826cm^-1であるが倍音の強度は基音の約1/30であり、実験において基音と見間違う程の強度はない。比較してArPtCO分子の場合v(Pt-C-O)は453cm^-1であり、その強度は0.1と非常に弱い。一方v(Pt-C-O)の倍音906cm^-1の強度は基音の10倍と倍音においては異常なほど強い。この振動数は既にPtCOのv(Pt-C-O)として報告されている916cm^-1とも近い。またCuF分子のAr,化合物は既に報告されているが、HeCuFをモデルとして計算を行なったところ、充分に強い結合が予測された。HeCuF分子についてDK3-CCSD(T)法による高精度計算によりPESを作成し、得られたPESより振動回転準位を予測した。1年目にDFT計算より得られた知見をもとに、高精度ab initio法によるポテンシャル曲面の作成を試みた。Ar-PtCOは平衡状態近傍では単参照の扱いが可能であったが、原子間距離が伸びた位置での電子状態は多配置性が強まり、単参照の範囲では計算が破綻する傾向が見られたため、コストの数倍高い多参照理論に基づくアプローチが必要になった。電子状態計算はcaspt2を用い、ポテンシャルの作成を行っており、現在も続行中である。同時に既に得られている低レベル計算のポテンシャル関数を4次の多項式にフィットし、その展開係数から非調和効果を考慮した振動回転準位を求め、振動CI計算により得られるCI係数から、各振動状態における振動波動関数の混合状態の解析を試みた。Ar-PtCO, Ar-PdCOについては、予想通り変角振動の倍音と伸縮振動との間にフェルミ共鳴が起こることが明らかとなった。変角振動数の基音の強度はフェルミ共鳴により弱まり、倍音に相当する振動数の強度が強められる。また変角振動数の実測値が報告されているため当該現象が起こらないと予測されていたAr-Nicoについてもフェルミ共鳴が確認された。

Ar-NiCOでは変角振動数の基音の強度が大きいため、フェルミ共鳴により基音が弱まっても実験で観測可能であったと考えられる。本研究における希ガスが錯体に結合することによる振動数シフトに加え、錯体周囲のマトリックス環境の影響も検討するため、周囲の希ガス原子を古典的に扱う量子古典混合ハミルトニアンを定義し、モンテカルロシミュレーションを行うことにより、XeまたはArマトリックス中での希ガス錯体(Ng-BeO)形成と周囲のマトリックス環境が振動数に与える影響を定量的に見積もった。第3年度では、希ガスマトリックス振動分光実験の結果を理解するために、高精度ab initio計算により得られるポテンシャル曲面から、振動SCF(VSCF)法及び振動Configuration Interaction(VCI)法を用いて振動数と強度を求めた。PtCO, PdCO,Ar-PtCO, Ar-PdCOに対してCCSD(T)/aug-cc-pVTZレベルで構造最適化及び基準振動解析を行い、同計算レベルで作成したポテンシャル曲面の非調和性・モード間カップリングを考慮したVSCF/VCI計算を行った。強度算出に関しては双極子曲面の算出が必須であるがCCSD(T)レベルの計算は困難であるため、同じ座標でレベルをCCSDに落として計算を行った。VSCF/VCI計算では基準振動の3モードカップリングまでを含めたところ、必要となる核座標のgridの総数は3原子分子で約4600点、4原子分子で約37000点となった。すべてのgridで電子状態計算を行い、得られたエネルギー及び双極子モーメントを用いて振動準位ならびにスペクトル強度を計算した。PtCOの変角振動は基本振動数は407 cm-1、倍音は816 cm-1となったが、強度について倍音は基音の約2/3であり、倍音の強度としては異常に大きいが基音は観測可能な強度を持つ。一方、Ar-PtCOの場合、基本振動数ν(Pt-C-O)は450 cm-1と10%程度青方遷移したが、同時に強度が0.2(km/mol)と非常に弱くなる。倍音準位は899 cm-1と計算されたが、その強度は基音の約4000倍と非常に大きい。倍音の振動数は、Ar-matrix分光実験でPtCOのν(Pt-C-O)として報告された916 cm-1とも非常に近く、実験ではAr-PtCOに由来する変角振動の倍音の準位が観測されたと推定される。変角振動の倍音の強度が基音の強度よりも大きくなる機構について、各基準座標に沿った双極子モーメントの解析を行った。PtCO分子のν(Pt-C-O)に関するμx成分は線形に変化するが、ArPtCO分子については倍音励起に相当する核座標変位の範囲において非線形な形状が見られた。26年度が最終年度であるため、記入しない。希ガスマトリックス分光実験で測定された遷移金属化合物の振動分光データが、希ガス原子が遷移金属化合物に結合した錯体に帰属されるべきとの観点から研究を進め、Arマトリックスで測定されたNiCO, PdCO, PtCOの振動数がそれぞれAr-NiCO, Ar-PdCO, Ar-PtCOに帰属されるべきであることを高精度ab initio計算に基づき示してきた。本年度は、特にAr-PtCO, Ar-PdCOについて、実験で報告されている基本振動数の値が倍音の準位に近いことに着目し、倍音を含めて強度の計算を行い、フェルミ共鳴の観点から実験でのアサインが間違っている原因を明らかにしている。さらにHe-CuFについても高精度ab initio計算とダイナミクス計算を組み合わせて理論的にスペクトルをシミュレートし、論文として発表している。
紫外光ポーリングによるX^<(2)>周期構造の形成と新機能デバイスの研究

1紫外光ポーリングによりガラスに発現する2次光非線形性の起源究明・紫外光ポーリングにより、Ge添加SiO_2ガラスにある種の規則化構造が誘起されることを、X線回折法や透過電子顕微鏡観察、さらにはラマン分光法などの手法を用いて発見した。(豊田中央研究所、ミクロ解析研究室広瀬室長、妹尾研究員らとの共同研究による)・紫外光ポーリングにより発現する2次光非線形性の大きさが、熱ポーリングなど従来法に比べて約1桁以上増大すること、また単一指数関数型の緩和挙動を示すことは、上述の規則化構造に起因することを明らかにした。・第三高調波発生(THG)の測定から、紫外光ポーリングにより3次の光非線形性(χ^<(3)>)が約15倍に増大することを見出した。・以上の結果は、2次光非線形性の発現及び緩和が空間電場モデル(χ^<(2)>=3E_<sc>χ^<(3)>)により説明出来ることを強く示唆しており、機構解明に決定的となる実験事実を明らかにしつつある。2光集積回路用の薄膜ガラスの2次光非線形性・フォトニクス分野において必須となる光集積回路として用いられる薄膜光導波路の基盤研究について、スパッタ法により精製したガラス薄膜に紫外光ポーリングを行ない2次光非線形性の発現を確認した。・ガラス薄膜のGe濃度やスパッタ中のAr/O_2のガス流量比、さらには成膜後の熱処理条件などについて、最大の2次光非線形性を得るための最適化を行なっている。現時点で得られた最も大きな値は、d=12.5pm/V(パルク:d=5.1pm/V)である。紫外光ポーリング(紫外光照射+高電場印加)によりガラス材料に誘起される2次光非線形性に関して、構造または物性変化を決定する因子、光非線形性を決定する因子などについて、それらの機構解明を行った結果、多くの重要な新しい知見を得た。以下に主な研究成果を示す。◎紫外光ポーリングによりゲルマニウム添加シリカ・ガラス材料に誘起される光非線形性と光吸収両者の緩和過程と紫外光照射のみの場合における光吸収の緩和過程を比較し、次に示す重要な結果を得た。1)紫外光ポーリングにより誘起される光非線形性並びに光吸収の緩和過程は単一の起因としてよく説明できることに対して、紫外光照射のみの場合、その吸収の緩和過程は複数の起因からなることを明らかにした。2)紫外光ポーリングと紫外光照射では、それぞれの光吸収の緩和過程におけるGeE'と呼ばれている欠陥の活性化エネルギーが大きく異なることを初めて明らかにした。3)紫外光ポーリングの場合には、その光吸収変化は紫外光照射のみには観測されない偏光依存性を示すことを見いだした。これらの実験結果は、ガラスに誘起される2次光非線形性の発現に主要な寄与を及ぼす欠陥構造が、ポーリング電場方向に配向した異方的な欠陥生成(GeE')であることを明確に示唆している。◎上述の得られた材料科学の知見に基づき、真空中で熱処理を行なうことによりGeE'生成の前駆体となる欠陥の増大に成功し、そのガラスに紫外光ポーリングを施すことによって従来に比べて約2倍の2次光非線形性を発現させることが出来た。これは、ガラスに誘起される2次光非線形性の値としては今までに報告されている中で最大である。以上のように、本年度の目標であった「さらに大きな光非線形性を持つガラス材料の探索と創製」は極めて順調に達成できたと自負している。
植物の刺激-応答におけるセカンドメッセンジャーとしてのカルシウムイオンの役割

【Ca^(2+)】濃度の一過的上昇が【Ca^(2+)】/カルモジュリン(CaM)依存性NADキナーゼを活性化し、細胞内NADPの上昇をもたらすと考えられるが、そのためには【Ca^(2+)】濃度変化が起る細胞内の場に、NADキナーゼとCaMが存在しなくてはならない。そこでこれらの細胞内分布をまず調査した。エンドウとコムギの緑葉では、NADキナーゼは大部分が葉緑体に分布した。葉緑体のNADキナーゼは、包膜とストロマに分布し、包膜の酵素のみがCaM依存性であった。黄化葉ではNADキナーゼはエチオプラストに存在した。また緑葉では植物の令と共に葉緑体の分布割合が低下し、可溶分画の分布割合が上昇した。CaMは90%以上が可溶分画に分布し、1-2%が葉緑体に、数%がミトコンドリアに分布した。葉緑体ストロマにはほとんど検出されなかった。従って、CaM依存性NADキナーゼは、葉緑体やエチオプラストの包膜に存在し、細胞質の【Ca^(2+)】濃度変化により、細胞質に分布するCaMによって活性化され、細胞質のNADPレベルを上昇させるものと考えられる。トウモロコシ緑葉では、NADキナーゼの80%以上が可溶分画に存在し、葉緑体には10%程度しか分布しなかった。可溶分画のNADキナーゼの60%がCaM依存性であった。黄化葉ではエチオプラストに20数%,ミトコンドリアに30数%,可溶分画に約40%が分布した。エチオプラストとミトコンドリアのNADキナーゼは全てCaM依存性であった。従って、黄化葉と緑葉とでは、CaM依存性NADキナーゼの生理的過程における役割が異っていよう。既に報告されているNADキナーゼの活性化にフィトクロームが関与している可能性を、黄化トウモロコシについて検討したが、赤色光,近赤外光の照射ともに、トウモロコシ細胞のNADP/NAD比に何等影響を与えなかった。
E型肝炎ウイルスの受容体候補蛋白質の機能評価と感染許容性に関わる宿主因子の同定

E型肝炎ウイルス(HEV)はノンエンベロープウイルスに分類されているが、培養上清中や血液中のHEV粒子は、宿主細胞のエンドソーム膜に覆われたエンベロープウイルス様の粒子形態をとる。これらの形態の異なるHEV粒子は培養細胞に対して同等の感染性を有するが、膜に覆われたHEV粒子の表面にはウイルス由来の糖蛋白質が存在していない。一方で、HEV粒子表面の膜成分はエクソソームと共通の抗原性を有することを見出した。本研究では、これまでの研究から同定された粒子形態の異なるHEVの受容体候補蛋白質の機能評価ならびにHEVに感受性を示す細胞の許容性を規定する宿主因子を同定し、増殖過程における機能を解析する。
エストロジェンによるロードシス発現に伴う視床下部ニューロン興奮特性の変化

発情期のげっ歯類の雌に見られるエストラジオール(E_2)依存性のロードシス発現には、中脳灰白質(PAG)に投射している視床下部腹内側核(VMH)のE_2感受性ニューロンが重要な役割を演じている。このニューロンに関する細胞レベルでの生理学的特性を明らかにするために、前年度の結果(投稿準備中)より、後部PAGの腹側に逆行性トレーサーを注入することで、生きた状態で蛍光ラベルされたVMHニューロンについてslice patch clamp法を用いた電気生理学的な検討を行った。まず視床下部で重要なトランスミッターであるGABAに対する反応性について検討を試みたが、細胞が非常に脆弱で、あまりデータが得られなかった。この原因は同条件で視索前野ニューロンについて記録可能であるためVMHニューロンの性質に起因すると考えられるが、一方で蛍光トレーサーの副作用である可能性も考えられる。現在、視床下部スライス作製時の条件の再検討を行っている。また実験計画には記載されていなかったが、E2感受性ニューロン、さらに言えばエストロジェン受容体を含有するニューロンを生きた状態で可視化する目的で、α型ER遺伝子のプロモーターに蛍光タンパクであるGFPを結合させたトランスジェニックラットを作製した。GFPの蛍光は脳内で確認され、視床下部のみならず、大脳皮質や海馬にもGFPでラベルされたニューロンが存在しており、免疫組織化学的にα型ERとの共存も確認された。今後はこのトランスジェニックラットのPAGに逆行性トレーサーを注入し、GFPと二重ラベルされた細胞について膜特性、特にエストロジェンの作用に着目して電気生理学的な研究を進めて行くつもりである。発情期のげっ歯類の雌に見られるエストラジオール(E2)依存性のロードシス発現には、中脳灰白質(PAG)に投射している視床下部腹内側核(VMH)のE2感受性ニューロンが重要な役割を演じている。このニューロンに関する細胞レベルでの生理学的特性を明らかにするための第一歩として、逆行性トレーサーにより標識されたE2感受性ニューロンを可視化することを試みたところ、後部PAGの腹側にトレーサーを注入することで、他の部位よりも確率良くVMHにα型E2受容体(ERα)含有ニューロンがラベルされることが明らかとなった。トレーサーにより単独ラベルあるいはERα免疫染色との二重ラベルされたニューロンは前部VMHの腹外側に多く観察された。同時にロードシス発現に関わるニューロン群について、c-Fos発現を指標に検討したところ、ロードシス発現に伴いERαが集積している腹外側VMHにc-Fosを発現するニューロンの増加が認められた。一方でトレーサーによりラベルされたニューロンに着目すると、c-Fos発現がごく少数のニューロンで観察された。本研究ではロードシス制御ニューロンを(1)中脳灰白質に投射し(2)エストロジェン感受性を持ち(3)ロードシス発現に伴いc-Fos等の初期発現遺伝子の活性化が起こる、腹内側核ニューロンと定義したが、これらの条件を満たすニューロンは非常に少ないことが示唆された。膣刺激が雄によるそれよりかなり強力でないと、ロードシス発現に伴うc-Fos発現が観察されないという報告があり、ロードシス発現とc-Fos発現の関係については今後の検討が必要である。現在、ERαを含有するVMHニューロンが確率良くラベルされる後部PAGの腹側にトレーサーを注入し、ラベルされたVMHニューロンについて、電気生理学的な検討を行っている。
ヘルスリテラシーの向上に着目した島民の「肝臓を守る健康教育プログラム」の開発

平成31年1月に健康劇に興味を持ってもらうために、学内で「演劇を使ったコミュニケーション・ワークショップ」を開催した。参加者は離島の住民・離島の保健師、名桜大学生、教員学生、合計40名。劇団の劇団員がファシリテーターとなり、演劇(簡単なシアターゲームや創作)を通じて、人の心の動き、言葉やコミュニケーションや体を使い表現することをグループそれぞれ楽しく体験することができた。今回は、島の過剰飲酒の健康問題を取り上げ「こんなお酒の飲み方は嫌だ」をテーマにして、グループ毎に即興の劇を演じた。日常で経験したお酒に関してのネタをメンバーが持ちより、ストーリーを作り、配役を考え、それぞれの役を即興で演じた。その動きには、素人とは思えない表情や動きがあり、感動と同時に心から笑い、楽しめたと感想があった。さらに演じた事例をもとに、嫌な飲み方を良い方向に向ける課題解決の方法をファシリテーターの導きによって、参加者みんなで考え、そこから解決方法や答えは多様にあることを参加者が自分で気づき、学ぶことができたと実感した。これは、本研究の健康劇にも有効に活用できる。平成31年4月に島民健康劇の練習に、このワークショップを取り入れる計画を劇団マネジメント担当と調整を行った。令和元年5月は、島の行政課長・保健師・島民(ヘルスレンジャー)とのワークショップの実施場所、案内など準備会議を実施した。また、11月実施の「島民の肝臓を守る健康教室プログラムの実施に向けて、学生スタッフをサークル化し、離島への愛着形成を目的に学習会を月2回実施。6月より島民、その他関係者と合同の演劇ワークショップを行っていく。研究共同者、研究協力者の担当課長、保健師と月に1回の連絡調整を行っている。健康教室の評価の指標の採血、腹部エコーの委託契約等の最終確認を行った。これから委託契約を進めていく。まず、健康教室の主要内容である健康劇について、大学学生、島民、島の保健師や行政職の連携体制を構築していく必要があったが、「演劇を使ったワークショップ」で三者が集うことにより、共同活動の士気が高まっている。伊江村の医療保健課長や保健師や行政職と毎月、情報共有のための調整会議を行い、実施に向けて詳細に検討を行い準備が進んでいる。島の事を知り尽くした人材なので、島に適した内容にできていると考える。特に島の保健師から良いアイディアがでてくる。会議もとても明るく、やる気のある雰囲気である。自分たちの健康教室プログラム、保健指導であると意識が高くなり、共同する意欲を感じている。今年度は島民の肝臓を守る健康教育プログラムを作成し、介入実践を行う。11月24日の初回健康教育から、中間評価を2月のを行う予定。6月から島民健康劇の練習のためワークショップを月1回2回実施する。劇団員、学生は離島でも宿泊となる。当初は練習を大学内で行う予定であったが島民の参加が多く見込めることや島の有識者の協力を得られることから、島での開催になったため船賃と宿泊費が追加になった。大事なところであり、可能な金額なので他の費用と調整を工夫して支払ことができる。健康劇の評価をどのように行うか検討中である。

島の事を知り尽くした人材なので、島に適した内容にできていると考える。特に島の保健師から良いアイディアがでてくる。会議もとても明るく、やる気のある雰囲気である。自分たちの健康教室プログラム、保健指導であると意識が高くなり、共同する意欲を感じている。今年度は島民の肝臓を守る健康教育プログラムを作成し、介入実践を行う。11月24日の初回健康教育から、中間評価を2月のを行う予定。6月から島民健康劇の練習のためワークショップを月1回2回実施する。劇団員、学生は離島でも宿泊となる。当初は練習を大学内で行う予定であったが島民の参加が多く見込めることや島の有識者の協力を得られることから、島での開催になったため船賃と宿泊費が追加になった。大事なところであり、可能な金額なので他の費用と調整を工夫して支払ことができる。健康劇の評価をどのように行うか検討中である。島民と行政機関、劇団と大学学生の共同にあたり、2018年度は繋がりをつくりをはじめとする準備調整の期間で使用額が少なかった。当初の計画を見直すなかで活動が2019年度に集中することとなり、旅費や人権費は2019年度の使用が大きくなる。