hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ミトコンドリアシグナルによる熱ショック応答の制御機構

細胞は、熱ストレスなどのタンパク質ミスフォールディングを引き起こすストレスに対して、熱ショック応答によりタンパク質恒常性を維持する仕組みを持つ。この応答を制御するのが熱ショック転写因子HSF1である。本研究により、ストレス条件下で、ミトコンドリアDNAの複製や代謝に関与するSSBP1がHSF1と相互作用して核へ移行し、タンパク質フォールディングを介助するミトコンドリアおよび細胞質シャペロンの遺伝子発現を誘導することが明らかとなった。その結果、HSF1-SSBP1はストレス条件下でのミトコンドリア機能の維持に関与していた。HSF1と相互作用するミトコンドリアSSBP1による熱ショック応答の制御機構を、以下のとおり明らかにした。1.ミトコンドリアSSBP1のHSP70発現誘導における効果:MEF細胞のSSBP1をノックダウンすることで、熱ストレスやプロテアソーム阻害剤等によるHSP70 mRNAの誘導が低下することを示した。内在性HSF1を相互作用変異体へ置換した場合も同様であった。2. SSBP1の熱ストレスによる核移行の共焦点レーザー顕微鏡による解析:内在性SSBP1および細胞へ導入したGFP-mSSBP1が熱ストレス処理により核内へ集積することを用いて明らかにした。3. SSBP1の核移行におけるHSF1の役割の解明:HSF1ノックダウンによりSSBP1は熱処理しても核移行しないことから、HSF1の核移行にともなってSSBP1が核へ運ばれることを示した。4. SSBP1核移行とミトコンドリアpermeability transition pore (PTP)の開口との関連:PTP開口を阻害するシクロスポリンA処理、そしてPTP複合体構成因子VDAC群のノックダウンによってSSBP1の核移行は抑制された。つまり、SSBP1核移行とミトコンドリアPTPが関連していることが分った。5. HSP70プロモーター上での転写複合体解析:熱ストレスによりHSP70プロモーター上にHSF1依存性にSSBP1が集積することを示した。6. HSF1-SSBP1複合体のターゲット遺伝子群の解析:SSBP1ノックダウンによりミトコンドリアHSPを含む一群のHSPの熱誘導が減弱した。つまり、SSBP1は全てのシャペロンの誘導に関与していた。また、それらのプロモーター上にはSSBP1が集積し、クロマチン再構成因子BRG1の集積を促進していた。おおよそ予定していた実験を行い、HSF1-SSBP1の熱ショック応答における役割と機能について一定の結論を得ることができた。これまでの研究から、ストレス誘導性HSF1転写複合体に転写因子ATF1が含まれることを明らかにしている。そこで、SSBP1、HSF1、ATF1とも共沈降するタンパク質群を同定する。そのために、それぞれをFlag標識したタンパク質をヒトHEK293細胞へ発現させた。その細胞を42°Cで0分、2分、5分の熱ストレス処理、1時間熱ストレス処理の後の1時間と3時間の回復の時点で細胞抽出液を作製し、hHSF1、mSSBP1、mATF1と共沈降するタンパク質群をそれぞれ高感度質量分析により同定した。その中でhHSF1、mSSBP1、およびmATF1に共通に含まれる因子として、これまでに解析を行ったヒストンシャペロンFACTが含まれていた。それ以外に一定の頻度で共通に含まれる因子としてRNAプロセッシングに関連するRNA結合タンパク質HNRNPK (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K)を見いだした。そこで、HNRNPKをノックダンするためのshort hairpin-RNAを発現するアデノウイルスを作製し、マウス胎児線維芽細胞(MEF)に感染させて後にRNAあるいはタンパク質を回収した後に熱ストレス誘導性のHSP70発現を調べた。詳細な実験によりHNRNPKをノックダウンすると熱ショック条件下でHSP70の発現が上昇、あるいは条件によっては低下することを明らかにした。しかし、ハウスキーピング遺伝子であるβアクチン遺伝子の発現も顕著に低下しており、HNRNPKは遺伝子発現に関与しているがその作用はHSP70あるいは熱ショック応答に特異的ではないと結論づけた。したがってHNRNPKのクロマチンへの影響の実験を進めないこととした。おおよそ予定していた実験を行い、予想外ではあるがHNRNPKの熱ショック応答における役割と機能について一定の結論を得ることができた。これまでに、細胞質を含む細胞のタンパク質毒性ストレスはHSF1-SSBP1を介して細胞質とミトコンドリアのシャペロンを誘導することを示してきた。今年度は、ミトコンドリアに特異的なタンパク質毒性ストレス条件下でのシャペロン群の誘導、およびその誘導のHSF1-SSBP1依存性を調べた。まず、野生型MEF細胞をロテノン、ミトコンドリアLONプロテアーゼ阻害剤CDDO、ミトコンドリアHSP90阻害剤GTTPで処理することで、細胞質HSP70とミトコンドリアシャペロン(mtHSP70、HSP60、HSP10)が誘導された。一方、HSF1欠損細胞ではHSP70およびミトコンドリアシャペロン群の誘導を全く認めなかった。HSF1だけでなく、SSBP1の関与を明らかにするために、それぞれをノックダウンして遺伝子発現を調べたところ、これら細胞質とミトコンドリアのシャペロンの誘導にはHSF1が必要であること、SSBP1は遺伝子の種類と刺激によって依存性が異なることが分った。次に、HSF1とSSBP1の活性化について調べた。

HSF1はもともと核に存在するが、ミトコンドリア特異的なタンパク質毒性ストレス条件下でSSBP1が核へ蓄積することが明らかとなった。転写活性と関連するHSF1-Ser326のリン酸化が亢進することも分った。さらに、これらの遺伝子発現誘導の一部は、活性酸素種を介することも示された。一方、HSF1-SSBP1のマウスにおける生理機能を解析するために、SSBP1と相互作用しないHSF1-K188Aを発現するマウスをCRISPR/Cas9技術を用いて作製した。しかし、変異部位がスプライシング部位に近いためにHSF1の発現が抑制され、マウスの解析には至らなかった。細胞は、熱ストレスなどのタンパク質ミスフォールディングを引き起こすストレスに対して、熱ショック応答によりタンパク質恒常性を維持する仕組みを持つ。この応答を制御するのが熱ショック転写因子HSF1である。本研究により、ストレス条件下で、ミトコンドリアDNAの複製や代謝に関与するSSBP1がHSF1と相互作用して核へ移行し、タンパク質フォールディングを介助するミトコンドリアおよび細胞質シャペロンの遺伝子発現を誘導することが明らかとなった。その結果、HSF1-SSBP1はストレス条件下でのミトコンドリア機能の維持に関与していた。1)新しいHSF1-SSBP1転写複合体の構成因子の同定:これまでの研究から、ストレス誘導性HSF1転写複合体に転写因子ATF1が含まれることを明らかにしている。そこで、SSBP1、HSF1、ATF1とも共沈降するタンパク質群を同定する。そのために、それぞれをFlag標識したタンパク質を発現させて熱ストレス処理したヒトHEK293細胞の抽出液を作成し、hHSF1、mSSBP1、mATF1と共沈降するタンパク質群を高感度質量分析により同定する。2)HSP70発現を指標とする新規因子の機能スクリーニング:HSF1-SSBP1転写複合体に含まれると推測される上記の実験で同定された遺伝子群のノックダウン実験を行い、HSP70発現を指標とする機能スクリーニングを行う。予備的な実験により、RNA結合タンパク質で、RNAプロセッシングに関連するHNRNPK (Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein K)が熱ショック応答を促進することが示唆されている。HNRNPKがどの因子と直接相互作用するか示し、相互作用変異体を同定し、それを用いてHSP70発現の促進効果を明らかにする。3)新規因子のクロマチン構造に与える効果の解析:HSP70遺伝子のプロモーターのクロマチン構造やヒストン修飾をChIP-qPCR解析等で解析し、HNRNPKのノックダウンによる影響を調べる。それらプロモーターへのクロマチン再構成複合体群やヒストン修飾酵素群のリクルートについても同様にして調べる。また、HNRNPKのRNA結合能が遺伝子発現に影響あるかを調べ、影響あれば熱ストレス時に結合するRNAの同定を試みる。
カンナビノイド受容体アゴニスト・2-アラキドノイルグリセロールの生理的役割の解明

カンナビノイドCB2受容体を発現しているHL-60細胞を用い、まず、細胞内カルシウムイオン濃度に及ぼす影響を指標にして、各種の合成カンナビノイド、モノアシルグリセロール、N-アシルエタノールアミンの構造活性相関を詳しく調べた。その結果、2-アラキドノイルグリセロールの活性が調べた中では最も強いものであることが明らかとなった。カンナビノイドCB1受容体だけでなく、カンナビノイドCB2受容体の場合も、真の内在性リガンドも、アナンダミドなどではなく2-アラキドノイルグリセロールである可能性が高い。また、この細胞において、2-アラキドノイルグリセロールがMAPキナーゼの速やかな活性化を引き起こすことも明らかとなった。これらの結果は、2-アラキドノイルグリセロールが炎症・免疫系において何らかの重要な役割を演じているものである可能性を強く示唆するものである。次に、神経系における2-アラキドノイルグリセロールの産生を調べた。その結果、脳ホモジネートをカルシウムイオンの存在下インキュベートしたり、シナプトゾームを脱分極させたりすると、2-アラキドノイルグリセロールがイノシトールリン脂質などから速やかに生成することが確認された。2-アラキドノイルグリセロールの生成は、イノシトールリン脂質代謝回転と密接にリンクしたものである可能性が考えられる。また、in vivoにおける2-アラキドノイルグリセロールの産生を調べた結果、ラットに中枢神経興奮薬であるピクロトキシニン等を投与すると脳内の2-アラキドノイルグリセロールレベルが著しく高まることも見い出した。刺激に応じてイノシトールリン脂質等から生成した2-アラキドノイルグリセロールには、一旦起こった神経の興奮を抑制するという重要な役割がある可能性がある。今年度の研究では、カンナビノイドCB2受容体を発現しているHL-60細胞を用い、まず、細胞内カルシウムイオン濃度に及ぼす影響を指標にして、各種の合成カンナビノイド、モノアシルグリセロール、N-アシルエタノールアミンの構造活性相関を詳しく調べた。一方、脳における2-アラキドノイルグリセロールの産生機構を調べる目的で、まず、脳ホモジネートにおける2-アラキドノイルグリセロールの生成を調べた、その結果、脳ホモジネートをカルシウムイオンの存在下、インキュベートすると、2-アラキドノイルグリセロールが速やかに生成することが確認された。2-アラキドノイルグリセロールの前駆体を調べる目的で、各種の標識リン脂質をホモジネートに加えて調べた。その結果、ホスファチジルイノシトールなどのイノシトールリン脂質が、2-アラキドノイルグリセロールの前駆脂質として機能することが明らかとなった。神経系における2-アラキドノイルグリセロールの産生を調べた。

このとき他の脂肪酸をもつモノアシルグリセロールの生成はわずかなものでしかなかった。また、1(3)-アラキドノイルグリセロールの生成もわずかなものでしかなかった。2-アラキドノイルグリセロールの生成はアラキドン酸を2位にもつイノシトールリン脂質の代謝回転と密接にリンクしたものである可能性が考えられる。なお、シナプトゾームを脱分極させたときには、生成した2-アラキドノイルグリセロールの約20%が外に放出されていた。この結果は、2-アラキドノイルグリセロールがシナプス間におけるメディエーターとして機能しうるということを示すものである。次に、in vivoにおける2-アラキドノイルグリセロールの産生を調べた。その結果、ラットに中枢神経興奮薬であるピクロトキシニン等を投与したり、断頭したりすると脳内の2-アラキドノイルグリセロールレベルが著しく高まることがわかった。カンナビノイド受容体は一般に神経の興奮を抑制すると考えられているので、刺激に応じてイノシトールリン脂質等から生成し、シナプス間隙に放出された2-アラキドノイルグリセロールには、一旦起こった神経の興奮を抑制するという重要な生理的役割がある可能性がある。
植物の病害抵抗性誘導時特異的な核膜孔を介したｍＲＮＡ輸送機構の解析

今年度は、ナス科植物の病害抵抗性におけるmRNAの細胞内輸送の重要性を明らかとするため、RNAなどの積荷を核内から細胞質へ輸送する役割を持つExportinの病害抵抗性における役割について解析を行った。Exportinサイレンシング株を作出し、カプシジオール蓄積量の定量、イオン漏出量の測定、GFPを付加したRanBP1の局在観察を行った。疫病菌の分泌タンパク質エリシターであるINF1を処理したNbXPO1サイレンシング株では、ファイトアレキシン蓄積と細胞死誘導が抑制されたのに対し,NbXPO2サイレンシング株では促進される傾向が認められた。また、GFPを付加したRanBP1の局在観察では、対照株や他のExportinサイレンシング株が細胞質および核の周縁部で観察されたのに対し、Exportin1Aサイレンシング株はGFP-RanBP1が核に蓄積していることが示された以上から、核外輸送を担う因子が病害抵抗性を対照的に制御していることが示唆された。さらに、免疫沈降法によってRanと相互作用する新奇な植物タンパク質の単離を行うためのGFP-Ranを発現するベンサミアナの形質転換体の作出を行った。"進捗が遅れている"とした理由は、年次計画1年目で予定している2)GFP-Ranを発現するベンサミアナの形質転換体の作出が遅れたことで、5)のRan結合タンパク質の単離を進めることが出来なかったためである。また、同じく予定していた1)病害抵抗性応答時の抵抗性関連遺伝子mRNAの細胞内局在性の解析法の確立について、さらにプローブの濃度や処理時間を検討する必要があることから、今年度も引き続き解析法の改良を続けていく。今年度は、作出したGFP-Ranを発現するベンサミアナの形質転換体を用いて以下の実験を進めていく。1) Ran結合タンパク質のスクリーニング:免疫沈降法およびYeast two hybrid法を用いたスクリーニングによりRanと相互作用する新奇な植物タンパク質の単離を行う。2) Ran結合タンパク質の病害抵抗性およびmRNA輸送における機能解析: Ranとの結合活性を持つ新奇タンパク質が特定出来た場合には、遺伝子のサイレンシング株を作出し、ジャガイモ疫病菌抵抗性及びEASのmRNAの細胞内局在への影響を調査する。3)植物の核-細胞質間輸送に作用する疫病菌エフェクターの探索: Ranおよび計画3, 4, 7で見出した病害抵抗性関連遺伝子mRNAの輸送に重要な役割を担うタンパク質を用いて、Yeast two hybrid法及び免疫沈降法を用いたジャガイモ疫病菌由来の結合タンパク質の単離を試みる。なお、ジャガイモ疫病菌が感染した罹病性ベンサミアナから調製したYeast two hybridスクリーニング用のcDNAライブラリーは、既に作成済みである。
熱プラズマCVDによるジルコニア系傾斜化複層機能材料の開発

ジルコニア材料に新機能の付与を目的として様々な方法で複合化させた。複合化にはCVD法、スパッタリング法、粉末冶金的手法を用いた。まず、チタニアナノチューブの生体親和性および骨芽細胞分化に及ぼす影響を検討し、骨牙細胞分化に有利に働くことを明らかにした。CVD法およびスパッタリング法では複合化が困難であり、粉末冶金的手法を検討したところ、ジルコニアとチタニアナノチューブの複合化に成功した。チタニアナノチューブが骨牙細胞分化に有効であることも明らかした。このことにより、金属アレルギー患者に対して、骨と加速的に結合する歯科用セラミックインプラント体としての応用が期待できる。ZrO_2とAl_2O_3およびTiO_2を積層し複合化することにより、多機能調和型歯科用セラミックスを開発することを目的とし、今年度ではZrO_2バルク体の表面におけるTiO_2のコーティングに関して検討を行った。TiO_2をナノチューブの形態でコーティングすることにより光触媒反応による抗菌性や、表面に超親水性が付与され唾液などの水分の流動性が高くなり清掃性が期待できる。TiO_2のコーティングはTiO_2の微粒子やTiのアルコキシドゾルを無機系あるいはフッ素樹脂などの安定な目的物に塗布し、その後熱処理を行うことによりなされてきた。しかし、TiO_2ナノチューブ(TNT)の場合はその低い熱安定性が故に熱処理による焼付けは困難であると予想される。そこで今回はZrO_2基板に化学的手法によって処理することにより、表面にTNT薄膜の生成を試みた。3Y-TZP粉末にTiO_2粉末を混合し調整した粉末を大気中で焼成し試料を作製した。10MのNaOH水溶液に試料を加えて、110°Cで20時間以上加熱還流した。その後試料を取り出し、数回イオン交換水で洗浄した。次に0.1M塩酸中に10分浸し、再びイオン交換水で数回洗浄しZrO_2基板上にTNTを析出させた。反応終了後に走査型電子顕微鏡を用いて微細構造観察を行った。ジルコニア基板上にまだ少量ではあるが表面にTNTと見られる繊維状の物質が確認できた。構成層を同定するためにx線回折分析を試みたがZrO_2とTiO_2のピークのみが検出され繊維状物質の相はわからなかった。化学処理することによりジルコニア基板表面にTNTと思われる生成物を作製することに成功した。また、CVD装置ではジルコニア膜の均一で安定した成膜ができず、条件を算出するのに多大な時間がかかり困難であることを確認した。対応法としてスパッタリング法によりZrO_2およびAl_2O_3薄膜を積層していく。セラミックス材料に関しては,最近では従来のセラミックスよりもはるかに高い強度をもつジルコニア系の材料をクラウンやブリッジ内層のフレームに用いることにより,臼歯部でも破折しにくいオールセラミック修復が可能になっている。しかし,ブリッジのように連結部に大きな歪が生じる部位で使用するには信頼性が低く,金属がもつ優れた機械的特性をセラミックスで補うには不十分な点が残るのが現状である。そのため,より高強度,高靭性を兼ね備えた材料が求められる。そこで今年度ではZrO_2とAl_2O_3を積層し複合化することにより曲げ強度および破壊靱性の向上を期待して、スパッタリング法を用いて複層成膜し、機械的特性評価を行った。出発原料には3Y-TZP(東ソー)を用いて1450°C、大気中で焼成し基板となるバルク体を作製した。反応性マグネストロンスパッタを用いて基板上にAl_2O_3膜を製膜し、さらに製膜温度800°CでYSZの製膜を行い積層した。スパッタガスにはO_2を用い、製膜圧力は0.1Paで行った。製膜後の評価に、X線回折により結晶の配向性評価を行い、SEMによる表面観察を行った。また機械的特性評価として曲げ強度、硬度、破壊靱性を測定した。X線回折では、Al_2O_3、YSZともにピークが強く結晶性が優れていることがわかった。また、SEM観察によりAl_2O_3膜は約1μm、YSZ膜は約60nmであった。膜表面は殆ど平らであった。曲げ強度は製膜前と製膜後では有意差が認められるほど差はみられなかった。硬度、破壊靱性に関しても差は認めなかった。剥離強度も低く、曲げ強度、破壊靱性を向上させるには膜厚を厚くし剥離強度を上げる必要があり、そのためには製膜条件の最適化を行う必要がある。
都市河口域生態系の劣化と修復・保全

多くの都市は河川域の下流から河口にかけて発達しているので、人間活動の影響を受け易く、土壌・水の化学汚染や治水、流通、居住圏の拡大等のために大幅に変形を受けている。一方、河口域は環境の多様性のために生物生息空間、景観構成空間、アメニティ-空間、環境浄化空間を形成し、人間に計り知れない利益をもたらしている。本研究は都市化にともなう矛盾が凝集し、陸域における人間活動の影響が象微的にあらわれる都市河口域に関して、その劣化の現実と修復・保全にかかわる知見と情報を収集するために、まづはじめに我国の研究者同志で密接な連絡恊議を持ち、ついで海外先進国の環境的かつ学問的に興味のある都市河口域と研究施設を選定し、分担者を派遣することによって、ハ-ド・ソフトの両面から有用な情報を入手し、さらに外国側分担者を招聘して研究情報を交換するとともに、国内のいくつかの河口域で共同調査を行い、調査区域の選定、調査方法について意見の調整を行った。本年度はヨ-ロッパ(ドイツ、オランダ、イタリア)およびオ-ストラリアの都市河口域において実地の見学および研究情報交換を行ってきた。エルベ川流域での強汚染は上流国の旧東ドイツ、チェコスロバキアの汚染が原因となっており、水銀、農薬などの強汚染によって、魚がほとんどすまない区域が拡大しつつある。エルベ川の経年的モニタリングは、東・西ドイツの統合、チェコの民主化といった政治形態と環境との関係について、今後極めて重要な情報をもたらすであろう。オランダのロッテルダム湾が位置するライン川河口においては、河川水を土壌浸透で瀘過して自然浄化し、重金属は堆積物中に濃縮して除去し、浄化した水で人工湖を作ってアメニティ-、レジャ-の場として市民に開放している。また、集落毎に池を作って、抽水植物のスゲの一種(Carex)による汚水の浄化と成長したスゲをカ-ペットや椅子のカバ-としてリサイクルさせる生物浄化・再生システムが国家レベルで推進されている。イタリアのベネチアでは、海水面の上昇による建造物の腐食が大きな問題となっている。現在、自然環境を極力損なわずに、歴史的景観、建造物を保存するため、可動式の堤防の建設計画(モ-ゼ計画)が進行しているが、そのほか工場、農地、都市排水処理の不備による水界の富栄養化対策が論議の対象となった。この場合ベネチア湾は日本の蒲生潟と原理的には同類のパタ-ンを有することが論議を通して明らかとなった。すなわち、蒲生潟においては水理学的制御によって富栄養化が改善されつつあるが、ベネチア湾においてもその水質改善策としては廃水処理の改善のほかに外海との海水交換の促進の重要性が指摘された。オ-ストラリアのモレトン湾は多様な生態系をもち、生物の種類と現存量は極めて高いことが特徴である。ブリスベン市の都市廃水は第一次処理水として直接河口のマングロ-ブ塩性湿地帯に放流され、自然浄化されている。このことはこの河口域が廃水を浄化するのに十分な生物活性を持っていることを示している。また干潟においては、日本、ニュ-ジ-ランド、シベリアを縦走している渡り鳥の観測を行った。また本年度はオ-ストラリアよりキッカワ教授、グリ-ンウッド助教授を招聘して、日本の河口域において底生動物、鳥類に関する共同調査を行い、今後の研究の進め方について討議した。河口域の中でも干潟は、その地形と豊富な底生動物の種類と現存量によって、渡り鳥の休息、採餌の場所となっているので、地球を縦走する渡り鳥をモニタリングすることによって地球環境の広域的な診断に役立てることの重要性とともに、シギ類の生態学的な研究および有機塩素化合物や重金属の体内汚染状況の研究の重要性が提案された。そして研究キイ・ステ-ションとしては、宮城県蒲生干潟をはじめとする日本のいくつかの干潟のほかに、モレトン湾のブリスベン川河口域が選定された。

オランダのロッテルダム湾が位置するライン川河口においては、河川水を土壌浸透で瀘過して自然浄化し、重金属は堆積物中に濃縮して除去し、浄化した水で人工湖を作ってアメニティ-、レジャ-の場として市民に開放している。また、集落毎に池を作って、抽水植物のスゲの一種(Carex)による汚水の浄化と成長したスゲをカ-ペットや椅子のカバ-としてリサイクルさせる生物浄化・再生システムが国家レベルで推進されている。イタリアのベネチアでは、海水面の上昇による建造物の腐食が大きな問題となっている。現在、自然環境を極力損なわずに、歴史的景観、建造物を保存するため、可動式の堤防の建設計画(モ-ゼ計画)が進行しているが、そのほか工場、農地、都市排水処理の不備による水界の富栄養化対策が論議の対象となった。この場合ベネチア湾は日本の蒲生潟と原理的には同類のパタ-ンを有することが論議を通して明らかとなった。すなわち、蒲生潟においては水理学的制御によって富栄養化が改善されつつあるが、ベネチア湾においてもその水質改善策としては廃水処理の改善のほかに外海との海水交換の促進の重要性が指摘された。オ-ストラリアのモレトン湾は多様な生態系をもち、生物の種類と現存量は極めて高いことが特徴である。ブリスベン市の都市廃水は第一次処理水として直接河口のマングロ-ブ塩性湿地帯に放流され、自然浄化されている。このことはこの河口域が廃水を浄化するのに十分な生物活性を持っていることを示している。また干潟においては、日本、ニュ-ジ-ランド、シベリアを縦走している渡り鳥の観測を行った。また本年度はオ-ストラリアよりキッカワ教授、グリ-ンウッド助教授を招聘して、日本の河口域において底生動物、鳥類に関する共同調査を行い、今後の研究の進め方について討議した。河口域の中でも干潟は、その地形と豊富な底生動物の種類と現存量によって、渡り鳥の休息、採餌の場所となっているので、地球を縦走する渡り鳥をモニタリングすることによって地球環境の広域的な診断に役立てることの重要性とともに、シギ類の生態学的な研究および有機塩素化合物や重金属の体内汚染状況の研究の重要性が提案された。そして研究キイ・ステ-ションとしては、宮城県蒲生干潟をはじめとする日本のいくつかの干潟のほかに、モレトン湾のブリスベン川河口域が選定された。
昆虫の摂食行動を調節する脳神経ペプチド連関図の作成とネットワーク評価系の基盤解析

生物の摂食行動は脳神経系から作られるホルモンにより制御されていることが知られている。ところが、「何を食べるか?」という問いには科学は答えを出していない。そこで、生物が何を食べるか?という本能行動を、昆虫を使って追究することにした。対象は、フタホシコオロギを使った。この種で、栄養分選好性行動の解析法のインフラを整えた。また、脳神経ホルモン類が摂食を制御し、脂肪組織などの末梢組織の代謝系がそれを修飾していることが分かった。さらに、ホルモンが作り出すネットワークをグラフ化し、その評価系の基礎を構築した。本研究の延長上で、ホルモンネットワークを評価系による、行動予測が可能になると考えられる。生物で広くみられる栄養分選好性摂食(Self-selection)は、1938年に提唱されて以来、分子レベルでは未解明な現象とされている。このような現象は内分泌系、すなわちホルモンとお代謝系により制御されていることが知られている。ところが、複数のホルモンがネットワーク構造を形成し制御調節していることが示唆されている。ところが、その分子レベルの解析はこれまで行われていなかったため、本研究では、以下の3点を進めることを計画した。(1)摂食行動に関わる脳神経系ホルモンネットワークの連関図を完成。(2)摂食行動に関わる脳神経ホルモンのネットワーク分析法(評価系)を確立する。(3)体内外の刺激により摂食行動が修飾される際のネットワーク変化を分析する。平成27年度の成果を上の(1)から(3)に沿って、以下の通りに記す。(1)、(2)まず、モデル生物としてカイコを用いた。カイコ幼虫の脳-食道下神経節-前額神経球の局所神経回路内の神経分泌細胞が摂食中枢であることは以前の研究から明らかにしていたので、そこにある単一細胞由来のcDNAを用いPCRで発現しているホルモン類及び受容体を確認している。現在、全単一細胞の解析は終わっていないが、幼虫体内の組織別の発現解析がまもなく終了する段階である。そのため、ホルモンー受容体でつなげた連関図の作成、およびネットワークを評価する系がまだ完成していない。(3)一方、ホルモンネットワーク解析が可能となった後に、分析するための行動解析プラットフォームは、フタホシコオロギを用いることで完成するに至った。これを用いることにより、長時間観察から選好性などの分析が容易に可能となった。また、この昆虫種は非モデル生物種であるため、次世代シーケンサーによるホルモンおよびその受容体の網羅的な解析がほぼ完了した。平成27年度の計画は、以下の3点に区分しており、それぞれの進捗状況を以下に記す。(1)摂食行動に関わる脳神経系ホルモンネットワークの連関図を完成:やや遅れている。カイコ幼虫の摂食中枢である脳-食道下神経節-前額神経球の内分泌細胞を酵素消化により単一細胞化、cDNAの増幅、PCRにてホルモン類や受容体の有無を細胞毎に確認するに至っているが、標的としている細胞全てに対しての分析が終了していない。(2)摂食行動に関わる脳神経ホルモンのネットワーク分析法(評価系)を確立する:やや遅れている。ペプチド性因子はMALDI-TOF MSを用いて半定量解析ができるようになっており、カイコ1頭の脳由来の抽出物で比較定量が行えるようになっている。一方、受容体の分析などが遅れているため、ネットワーク連関図作成に必要な全転写物の分析は終わっていない。(3)体内外の刺激により摂食行動が修飾される際のネットワーク変化を分析する:おおむね順調に進んでいる。ネットワーク解析と共に行う、個体の行動、及び体内の腸管蠕動運動などの解析は、Image Jを基礎としたソフトウェア(行動にはTracking、蠕動運動にはKymograph)が可能となった。現在、Protocolを改善中である。本研究計画の3つに区分毎に以下のように記す。(1)摂食行動に関わる脳神経系ホルモンネットワークの連関図の完成:やや遅れている。カイコを用いた脳神経系のネットワークに関しては、各ホルモンおよびそれらの受容体のRT-PCRの条件などが整った段階である。さらに、単一細胞からのcDNAの増幅に関して、手技的な困難さから難航している。ただし、先ずは、大きな組織および脳神経系では領域毎での各ホルモンおよび受容体の発現パターンはおよそ明らかになってきたので、まずはこれを用いてネットワークグラフを描いている。(2)摂食行動に関わる脳神経ホルモンネットワークの分析法を確立:やや遅れている。(1)の結果を受けて、ネットワークグラフの評価系を確立している。実際にRT-PCRによる電気泳動上での輝度による半定量性の数値を加味したネットワークグラフが上手くかけずにいるため、プログラミング的な改善が要求されることが分かった。(3)体内外の刺激により摂食行動が修飾される際のネットワーク変化を分析:当初の計画以上に進んでいる。哺乳類におけるグルカゴンに相当するAKH(脂質動員ホルモン)の受容体をノックダウンしたコオロギを用いた場合、脂質成分の組成比に顕著な変化が認められた。また、不足分の脂質成分を補償する行動も観察された。このことは、「なにを食べたいか?」という難題を解決するためのきっかけとなることが予想される。さらに、交尾前後の食嗜好が変化することなども同時に観察され、3大栄養素の選好性摂食の修飾やセルフセレクションに関わる分子の候補なども見いだされてきた。(1)摂食行動に関わる脳神経系ホルモンネットワークの連関図の完成:単一細胞からのcDNAの増幅に関して、手技的な困難さから難航している。

詳細なネットワークグラフの前に、まずは大まかな領域的なネットワークグラフを描いているが、こちらは間もなく完成する状態である。(2)摂食行動に関わる脳神経ホルモンネットワークの分析法を確立:ネットワークグラフの評価系には定量的な数値が加味されたものが良いと考えられている。定量的PCRによる方法で進めると非常に高価であるため、RT-PCRによる電気泳動上での輝度による半定量性の数値を加味したネットワークグラフの作成を試みているが上手くかけずにいる。(3)体内外の刺激により摂食行動が修飾される際のネットワーク変化を分析:AKH(脂質動員ホルモン)受容体をノックダウンしたコオロギを用い、不足分の脂質成分を補償する行動が観察された。また、交尾前後の食嗜好の変化も再現良くみられるようになり、3大栄養素の選好性摂食の修飾やセルフセレクションに関わる分子の候補なども見いだされてきた。また、これらは生体内で代謝構造が変化している可能性を示唆するデータも得られた。フタホシコオロギGryllus bimaculatusを用いて、摂食行動を解析しているが、個体レベルでの行動解析には、多くの個体を用いる必要がある。これを可能にするため、自動解析システムを構築していたが、これまでの解析では、処理能力が遅いため、およそ10倍速く画像解析処理ができるようなシステムを構築した。これを用いて、平成29年度は、栄養選好性行動を見ていくこととした。その際、3大栄養素の選好性行動に焦点を当て、フタホシコオロギGryllus bimaculatusの本能行動に迫った。実際には、この選好性行動と代謝系および内分泌系とがどのように関連しているかを探るために、まずは、フタホシコオロギの各組織から抽出したRNAを用いたRNA-sequence解析により、すべてのペプチド性ホルモンを同定した。これと同時にそれぞれに対する受容体も同定することができた。この成果を受けて、各ホルモンの受容体をRNA干渉法にてノックダウン個体を作成し、その選好性行動を検討した。その成果の一部として、例えば、AKH(Adipokinetic hormone脂質動員ホルモン)のシグナリングを抑制した場合は、選好性行動に変化が認められる。また、脂肪体のような末梢組織の代謝系に変化が認められる場合にも、栄養分の選好性が変化することが分かった。一方、脳神経系のホルモンネットワークに関しては、全ペプチドを合成したので、その機能を個体レベルでの行動解析を通じて検討している。最終的に、行動、代謝を結ぶネットワーク構造を明らかにしていくつもりである。これとは別に、これまでの莫大な先行研究からの知見をまとめた、内分泌系のネットワークも構築することもできた。今後は、これらのネットワークを、各ノードに重みを加味したものへと発展させ、その評価系を樹立することとなる。生物の摂食行動は脳神経系から作られるホルモンにより制御されていることが知られている。ところが、「何を食べるか?」という問いには科学は答えを出していない。
都市のトータルデザインの実現に向けた歩行シークエンスモデルの確立

歩行シークエンスモデルについて,「空間開放度モデル」を提案し,デザインツールとしての利用価値を高めるため,「触覚的リズム」と「視覚的リズム」を定義して実空間との連関を持たせることを検証した.また,面的な広がりとしてSpace Syntax理論を用い,都市の変遷と現状に対する評価を示した.都市のトータルデザインへの展開では,実際の整備において上記の考え方を用いる一方で,実現の評価の指標として滞留行動を限定的に分析し,モデルの提案を行った.歩行シークエンスモデルについて,「空間開放度モデル」を提案し,デザインツールとしての利用価値を高めるため,「触覚的リズム」と「視覚的リズム」を定義して実空間との連関を持たせることを検証した.また,面的な広がりとしてSpace Syntax理論を用い,都市の変遷と現状に対する評価を示した.都市のトータルデザインへの展開では,実際の整備において上記の考え方を用いる一方で,実現の評価の指標として滞留行動を限定的に分析し,モデルの提案を行った.本研究では,現在,周辺再開発が進む熊本駅の各整備において,それらをどのように関連させるかというトータルデザインの課題に対し,整備される空間を歩く歩行者に着目して都市の誘導空間という視点から検討を行う。歩行に関する線的なシークエンスモデルとして,これまでの研究で確立した「空間開放度モデル」には二つの課題があった。一つは分析結果が抽象的でデザインツールとして使いづらいこと,もう一つは面的な都市デザインに応用するための改善が必要なことである。平成21年度は,このモデルの問題点を改善し,デザインツールとしての有用性を高めるための基礎的な作業として「シークエンス概念の再整理に基づく街並み分析手法の提案」という修士論文において研究を行った。ここでは,空間の特徴を規定する指標として「触覚的リズム」と「視覚的リズム」を定義し,実空間における分析から具体的な成果を示して,街路設計への展開の可能性を検証した。また,熊本駅周辺整備における面的な都市デザインの分析として,平成20年度に景観・デザイン研究発表会で発表した「熊本駅周辺整備における都市デザインの戦略と展開」という論文の研究を進めた。ここでは、熊本駅で取り組んでいる面的な都市デザインを目指した駅前広場,主要街路,水辺の散策路などの歩行空間の設計手法を分析した。これらの空間は,駅周辺整備における主要な整備区域であり,ここから面的な広がりを持たせるときに,新しい歩行シークエンスモデルを用いながら検証をしていく必要がある。平成22年度は,修士論文の成果などを学会発表し,モデルの展開・確立に向けて研究を進めていく。本研究では,現在,周辺再開発が進む熊本駅の各整備において,それらをどのように関連させるかというトータルデザインの課題に対し,整備される空間を歩く歩行者に着目して都市の誘導空間という視点から検討を行う。歩行に関する線的なシークエンスモデルとして,これまでの研究で確立した「空間開放度モデル」には,分析結果が抽象的でデザインツールとして使いづらいこと,もう一方は面的な都市デザインに応用するための改善が必要なことの二つの課題があった。一つ目の課題に対しては,空間の特徴を規定する指標として「触覚的リズム」と「視覚的リズム」を定義し,実空間における分析から具体的な成果を示して,街路設計への展開の可能性を検証した。二つ目の課題に対しては,平成22年度の「都市形成における賑わいと街路網の関係に関する研究」において,都市の賑わいと街路網との関係を面的に捉え,街路網は都市の骨格を構成するだけでなく長期的に都市に影響を与えることに着目し,Space Syntax理論を用いて通史的に分析することで都市の賑わいの変遷と街路網の変化の関係を考察した.指標となるInt.Vの高さは賑わいが生じるための基盤として働き,建物等の施設がきっかけとなっていること,Int.Vが高い街路の密度が重要であることを明らかにした.また,「公園的な利用を意図した駅前広場における歩行・滞留空間に関する研究」では駅前広場に範囲を絞り,歩行者動線とたまりの関係について、ビデオ調査により分析を行った。平成23年度は,暫定整備が完了した熊本駅を対象に,これまでの取り組みの検証と分析を行う。本研究は,平成22年度末の九州新幹線全線開業に伴う駅周辺整備の暫定形完成を対象に,同時に進められてきたいくつかの事業をどのように関連させるかというトータルデザインの課題に対して整備される空間の歩行者に着目し,都市における誘導という視点から分析を行った渉行に関する線的なシークエンスモデルとして,これまでの研究で確立した「空間開放度モデル」があり,空間の特徴を規定する指標として「触覚的リズム」と「視覚的リズム」を定義し,実空間における分析から具体的な成果を示して,街路設計への展開の可能性を検証した.一方,面的な都市デザインに応用するため,都市の賑わいと街路網との関係を面的に捉え,街路網は都市の骨格を構成するだけでなく長期的に都市に影響を与えることに着目し,SpaceSyntax理論を用いて通史的に分析することで都市の賑わいの変遷と街路網の変化の関係を導いた.また,平成23年度から本格的に利用が可能となった駅前広場については「熊本駅東口駅前広場における歩行者の滞留行動分析」において,歩行者動線とたまりの関係について,ビデオ調査を行って分析した。都市というスケールに対して全体の歩行シークエンスを網羅的に把握することは難しいため,ひとつのモデルを提示して展開する手法が考えられる.

ここでは,駅前広場の歩行者の動線を観察し主要動線を導いたこと,一日のうちで滞留者の滞留地点と滞留時間の傾向を明らかにしたこと,時期別・時間帯別に滞留者の滞留地点の分布を比較したこと,滞留地点が広場全体に不規則に分布するという特性を明らかにしたことが成果であった.駅周辺整備全体が「公園のような駅」というコンセプトの元で進められており,そのモデル空間となる駅前広場での歩行シークエンスモデルの確立と検証は有用だと考える.
鼻咽腔上皮細胞と樹状細胞のクロストークによる炎症調節機構の解析

ヒト鼻粘膜の免疫学的バリア機能の検討に手術的に得られたヒトの初代培養細胞を用いることは,上気道での炎症調節機構を解析するための重要な方法論である。タイト結合は,粘膜からの物質の透過性や抗原の取り込み調節に重要な働きをしている。粘膜にも抗原提示のための樹状細胞がある。近年,上皮細胞は疾患の発症に重要であることが分かってきた。すなわち,抗原提示細胞である上皮内の樹状細胞との相互作用を検討することは上気道でのアレルギー性炎症や感染症の病態を解明するために重要であり,この研究からその基礎的意義が解析できた。上気道生体防御機構モデルの確立とその応用:初代ヒト鼻粘膜上皮細胞にテロメラーゼ遺伝子を導入して,延命効果,タイト結合の発現機能について検討した。遺伝子導入上皮細胞では安定した培養,経代が可能であり,細胞周期マーカーやタイト結合タンパクの発現は初代培養と同様であった。また,TGF-beta処置によりタイト結合タンパクであるclaudin-4の発現増強が認められた。タイト結合蛋白,特にclaudin-4選択発現増強はタイト結合蛋白の選択的抗原取り込み機構を示唆する(Kurose M, Kojima T, Himi T. Cell Tissue Res. 2007 330:63-74)。上皮は単なる機械的バリアを維持するにとどまらず、樹状細胞とのクロストークがナイーブT細胞に作用してTh2応答誘導を引き起こすことが次々と明らかになっている。この機能は、獲得免疫の中で粘膜上皮細胞の免疫機能が、従来の概念よりさらに重要な機能を持っていることを意味する。今年度は、新たに上皮細胞と樹状細胞との相互作用について検討した。まず,アレルギー性鼻炎にて鼻粘膜上皮で発現亢進を認めたサイトカイン(TSLP)の機能をさらに解析するため,樹状細胞とタイト結合への役割を解析した。マウスの樹状細胞株を用いたが,Claudin7が樹状細胞に発現し、TSLPがこのタイト結合タンパクの発現調節を担っているかどうかを確認した。さらに,シグナル伝達についてPKCシグナルがタイト結合調節に重要であることを確認したため,アレルギー性鼻炎に関与する他の因子としてPPARγとタイト結合についても今年度は解析した。鼻粘膜上皮機能と樹状細胞の関係を探ることは、感染防御機構などの広い範囲の炎症調節機構の解明につながると考えている。さらに,上皮に発現しているToll様受容体の刺激によるサイトカイン産生,タイト結合タンパクの発現を検討した。炎症に関与しているIL-8の産生はTLR3刺激でのみ産生が亢進した。このことは,ウイルスの感染との関連が示唆されたため,次年度の研究課題につなげることとした。今年度は、新たに上皮細胞と樹状細胞との相互作用を調節する因子について検討し治療への応用を探る。アレルギー性鼻炎にて鼻粘膜上皮で発現亢進を認めたサイトカイン(TSLP)の機能をさらに解析するため,産生刺激因子について検討したところ,TLRリガンドのうち,TLR3の刺激により産生が更新することがわかりウイルス刺激によるアレルギー発症因子の産生過剰が予想された。また,炎症性サイトカインの刺激についてはいくつかの組み合わせで産生亢進することがわかった。さらに,RSウイルス感染による上皮の変化にも注目し,タイト結合の変化やサイトカイン産生について検討した。基礎的な感染実験では遺伝子導入ヒト鼻粘膜上皮細胞にRSウイルスの感染が組成蛋白の発現を元に検証した。ウイルスの進入経路と体と結合の発現変化は鼻粘膜でのウイルスの感染増殖メカニズムに直結するものと考えられた。アレルギー性鼻炎に関与する他の因子としてPPARγとタイト結合についても今年度は解析した。
新しい甲状腺ホルモン作用の指標:ヒトリンパ球の甲状腺ホルモン感受性遺伝子の同定

ヒトの甲状腺ホルモン作用の敏感で特異的な新しい指標を求めるために、ヒト末梢血リンパ球と皮膚線維芽細胞のT_3(活性型甲状腺ホルモン)感受性遺伝子のmRNAの同定を試みた。末梢血リンパ球をB細胞、T細胞とに分け、T_3とincubateし、T_3投与によるmRNAの増加をcDNAのhybridization selectionにより同定しようとした。それに先立ち得られたpolyA-RNAの翻訳産物を二次元電気泳動にかけ、その増減を検討したが、T_3で増加を示す様にみえるspotも症例、実験により一定しないこと、一定するものはあるが増加巾が小さいこと、polyA-RNA全体の収量が少ないことなどの結果が得られ、先に研究を進める前に検討すべきことが出てきた。そこでより均一な細胞で、かつ培養中の細胞間修飾が少ないものとしてヒト皮膚線維芽細胞で同様の検討を行なうとともに、甲状腺ホルモンがT_3感受性遺伝子に作用する前に変化を受ける過程について、また甲状腺ホルモン感受性遺伝子として知られているSpot 14の発現に及ぼす甲状腺ホルモン以外の因子について検討した。正常人から得た皮膚線維芽細胞を継代培養系として確立し、この細胞がT_3核受容体を持つことを確認したあと、T_3とincubateし、増加するmRNAをリンパ球とはほぼ同様な方法で同定した。翻訳産物でみると増加を示すmRNAがみられ、再現性もよいことが判明した。これについてhybridization selectionを行なっている。polyA-RNAの収量も充分であった。また、甲状腺ホルモンの細胞内での動態についての検討で、細胞によっては投与した甲状腺ホルモンが脱ヨ-ド以外に抱合体形成を受け、不活性となり細胞外に出されることが明らかになった。Spot 14の発現は糖代謝産物によっても強い影響を受けていることが判明し、甲状腺ホルモン感受性遺伝子を求める場合、甲状腺ホルモン以外の因子の影響を充分考えておかねばならないことが明らかとなった。1.将来の臨床応用の為には、検体採取が容易であることが要求されるが、その為に、甲状腺ホルモン感受性遺伝子の検討の対象として末梢血リンパ球を選んだ。しかし、リンパ球が甲状腺ホルモンに良好な感受性をもつ組織であるかについては情報がなかった。そこでヒト末梢血リンパ球の甲状腺ホルモン核受容体の存在の確認をまず行った。^<125>I-トリョードサイロニンを用いてScatchard analysisをするとKd=1.01×10^<-9>M、Maximal binding capacity=4.09mol/μgDNAの核受容体があることが証明された。T細胞、B細胞をロゼット形成で分離した後での同様の検討では、両細胞間にKd、Capともに有意な差はなかった。いずれの細胞もトリヨード・サイロニンに対して反応する遺伝子があるものど考えられる。そこで、この甲状腺ホルモン感受性遺伝子同定の為に粘液水腫症患者の治療前及び甲状腺ホルモン補充療法後のリンパ球を採取し、B細胞、T細胞に分離後、凍結保存し、後日同時にpolyA-RNAを抽出した。これを^<35>S-メテオニン入りの無細胞培養系にかけ、その産出蛋白質を二次元電気泳動にかけ、分子量と等電点で分離し、治療前と後での量の変化をAutoradiographyで検討した。45spotで増加がみられ、24spotで減少がみられたが、個人差があり、共通するものをさらに症例を重ねて検討する予定でいる。一方、治療前リンパ球の培養によるトリヨードサイロニン添加急性実験でも同様のpolyA-RNA抽出とその翻訳産物の検討を行ない、増加を示すspotを得た。

最も増加の大きいものについて、別に作ったヒトリンパ球CDNAlibralyより、Hybria selectionによりそのcDNAをつりあげ、フローグとして確立する努力を行なう。前年度は粘液水腫症患者から得た抹消血リンパ球(Tリンパ球、Bリンパ球)をT_3とincubateし、polyAーRNAのtranslationproductの比較によりT_3感受性遺伝子のmRNA特定を行なったが、実験により(症例により)増加すると判定されるSpotが一定せず、また一定したと思われるものも増加巾が小さいこと、得られたmRNAの全体量が少なすぎることなどの結果を得た。そこで甲状腺ホルモンが遺伝子に作用する前の細胞内での変化について検討するとともに、ヒトリンパ球以外にヒト皮膚線維芽細胞について、T_3感受性遺伝子の同定をより改善した方法で行なった。ヒトリンパ球に比して、細胞が均一であること、量を多くすることができること、細胞間作用も均一にできることなどの長所があった。まず某正常人より皮膚切片を得、ヒト皮膚線維芽細胞の継代培養株を作った(Ar_1#_2と命名)。この細胞についてT_3核受容体の親和性と容量を検討したが、肝細胞とほぼ同様の値を得、T_3感受性のある細胞と考えられた。そこで同細胞を大量に培養し、様々な濃度のT_3とincubateした後、凍結することなくGuSCNでDNA、RNAを抽出、比重遠心法、フェノ-ルクラオロフォルム法でRNAを純化し、oligodTカラムでpolyAーRNAを得た。starting materialを多くすることにより約200μgのpolyAーRNAが得られ、T_3存在下、非存在下のもののtranslationproductの検討により、約6倍まで増加を示すspotが57個認められた。ヒトリンパ球とは異なり再現性があった。現在selection hybridizationを行なうことでCDNAの特定を行なっている。また、細胞内での甲状腺ホルモンの動態等の研究で様々の培養細胞が甲状腺ホルモンを抱合体形成により細胞外へ出していることが初めてわかったが、Ar_i#_2株はその機構が弱く、甲状腺ホルモン作用を量的にみていくには極めて良い細胞であることが判明した。
タンザニアにおける狩猟採集民の生業複合に関する研究

本研究の目的は、アフリカの狩猟採集社会を対象に、これまであまり注目されてこなかった狩猟採集民の生業複合に正面から取り組み、今日のアフリカの狩猟採集社会における狩猟採集以外の生業の多様な展開を明らかにすることである。このことをとおして、狩猟採集社会をめぐる「狩猟採集か農耕・牧畜か」といった二元論を突破し、両者のあいだにある人びとの生業実践のグラデーションを明らかにすることを目指す。主な研究対象は、タンザニアに暮らすサンダウェとハッツァという2民族である。平成25年度は、昨年度に明らかになった項目について、より詳細な研究を実施した。サンダウェ社会においては養蜂の社会的な意義と、その他の資源利用との関連について明らかにした。またハッツァ社会においては、昨年に明らかにした観光業の実態を、個人の移動と多民族との関係に注目しながら、補足データを収集した。また、今年度の成果のひとつとして、現地のNGOと協力をして、これまで互いに交流のなかったサンダウェとハッツァが、互いの社会が現在抱える問題について議論をする場を設けることができた。以上、これまでの2年間の調査から、これら2民族がおこなう多様な生業が、当該社会においてどのように展開してきたのか、また、それらが現在、彼らにとってどのような位置づけにあるのかという点を多角的に把握することができた。また、国際学会1件、国内学会1件、および複数の研究会での報告をおこなった。本年度は、1昨年度に収集した一次資料の分析とそれをもとにした英語論文の執筆、2現地調査や学会発表をとおして多様な資料を収集したこと、3調査対象である2民族をつなぐ試みを実施したことは、本研究の課題を遂行するうえで、十分に成果があったと考える。ただし、成果の発表に関しては十分とは言えず、今後の課題だと考えている。今後は、これまでの成果をまとめ、今日のアフリカの狩猟採集社会における狩猟採集以外の生業の多様な展開について、総合的に考察し、成果をまとめて公表する。本研究の目的は、アフリカの狩猟採集社会を対象に、これまであまり注目されてこなかった狩猟採集民の生業複合に正面から取り組み、今日のアフリカの狩猟採集社会における農耕の多様な展開を明らかにすることである。このことをとおして、狩猟採集社会をめぐる「狩猟採集か農耕か」といった二元論を突破し、両者のあいだにある人びとの生業実践のグラデーションを明らかにしたい。主な研究対象はタンザニアに暮らすサンダウェとハッツァという2民族である。平成24年度は本研究の初年度であり、サンダウェとハッツァの生業に関する一次資料収集を目的として、タンザニアでの3か月半にわたる現地調査をおこなった。ドドマ州チェンバ県において、サンダウェの近年の農耕や狩猟採集に関する動向を把握するとともに、彼らの養蜂に注目してデータを収集した。この現地調査から、養蜂の技術や知識、ハチミツの収量といった基礎情報に加え、養蜂と他生業との関係性や生計における重要性について明らかにした。一方、ハッツァに関する調査はアルーシャ州のマンゴーラ地区でおこない、生計維持の仕組みを主に観光業と食事に注目して明らかにした。同時に、同地域に暮らす農耕や牧畜をおこなう人びとにも、生計に関する聞き取りを実施した。以上の調査から、ハッツァ社会における農耕や農作物の位置付け、近隣民族との関係といった点についても、おおよそ把握することができた。また、国際学会2件、国内学会1件、および複数の研究会での報告をおこなった。多数の学会・研究会への参加やフィールドワーク等をとおして、広い視野を持ちつつも生業と資源利用という2点へ自分の強みを収斂してきた。国内および海外の学会では、これまでの研究を発展させる新しいテーマ(養蜂や先住民)での発表に挑戦できた。また、3か月半にわたるフィールドワークにおいて、新しいフィールドを開拓し、現代ハッツァの生計や観光業について詳細なデータを取得できた。しかし、論文を投稿するまでに至らなかった点を反省したい。

本年度は、1昨年度に収集した一次資料の分析とそれをもとにした英語論文の執筆、2現地調査や学会発表をとおして多様な資料を収集したこと、3調査対象である2民族をつなぐ試みを実施したことは、本研究の課題を遂行するうえで、十分に成果があったと考える。ただし、成果の発表に関しては十分とは言えず、今後の課題だと考えている。平成25年度は24年度の学会発表および現地調査の成果を論文として公表することを第一に進める。また、タンザニアでの短期間の現地調査を実施し、サンダウェの養蜂にかんする量的データの補足とハッツァの農耕についての広域調査をおこなう。さらに、ボツワナ共和国にてサンの文化観光を調査し、ハッツァの観光業や生計との比較をおこなうことを計画している。今後は、これまでの成果をまとめ、今日のアフリカの狩猟採集社会における狩猟採集以外の生業の多様な展開について、総合的に考察し、成果をまとめて公表する。