hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
医療グローバリズムを醸成するトランスカルチャラルナーシングシミュレーションの開発

近年の日本における外国人の人口潮流をみると、2017年に外国人の技能実習の適正な実施及び技能実習生の保護に関する法律(技能実習法)が施行されたり、2018年に「出入国管理及び難民認定法及び法務省設置法の一部を改正する法律」が交付されたことにより、日本に多様な背景を持つ生活者が増加している状況であるため、今後医療の現場においても同様の状況になっていくことが予測される。法律などの変更によって急速に変化していく社会状況に対応するためにも看護者の人材育成は重要な課題である。そのため、本研究は、医療者の外国人対応力の獲得をめざしたシミュレーション教育を導入し、医療グローバリズムを醸成することを目指して、『トランスカルチャラル・ナーシング・シミュレーション』の教育プログラム開発することを目的とする。平成29年度の主な計画は、参加者のレベルに合わせた初級、中級、上級、プロフェッショナルの4段階の各コースのパイロット調査をし、その後、プログラム提供を行う予定であった。しかし、パイロット調査や教育プログラムの提供にまでは至らなかった。教育プログラムの提供にまでは至らなかったが、教育プログラム提供の準備としてETHNIC(Education and Training for Healthcare Professionals to Foster Multicultural Coexistence)のWEBサイトの整備、またプログラムに使用する学習教材として「実際に起こったトラブルから学ぶ!現場で役立つ外国人患者とのコミュニケーション(丸善出版)」の全3巻の映像教材を作成した。今年度の計画はプログラムの作成と本調査であった。進捗としては、プログラム内容とプログラムに使用する教材作成はおおむね終了しているが、パイロット調査やプログラムの提供にまでは至らなかった。そのためやや遅れている状況である。現在はプログラム提供を行うための計画書を作成している段階である。プログラムの効果の評価検討、パイロットテストを行う。また、プログラム提供が行えるよう計画書の提出および対象者のリクルートを行う。プログラム提供が行えるよう倫理審査への計画書の提出および対象者のリクルートを行う。計画書が倫理審査を通過した後は、対象者のリクルートを開始する。4段階のコースを設定したがまずは初級のプログラム提供を行う。その後データを分析し、プログラムの評価を行う。定期的な研究補助の人材を見つけることが難しかったため、人件費の残額が生じた。
神経インターフェース技術に基づいたインスリン分泌制御手法の開発とデバイス化

多能性幹細胞よりインスリン分泌膵b細胞を誘導する試みは糖尿病治療の重要なステップとして注目を集めているが,幹細胞由来膵b細胞は実際の細胞と比べてグルコース応答性等の機能が劣るといった理由から,膵b細胞のインスリン分泌を人為的に制御する手法開発が求められている。これに対して本研究の目的は自家移植を目標とした分化細胞からの神経細胞・膵b細胞の誘導手法の開発、及び神経インターフェース技術を利用した工学的アプローチにより膵b細胞のインスリン分泌を制御する手法の確立である。本年度は特に線維芽細胞より神経細胞と膵b細胞を誘導する手法の確立に注力した。これまでにウイルスベクターを用いた遺伝子導入法による線維芽細胞から目的細胞へのダイレクトリプログラミングが行われているが、この手法には遺伝子への障害リスクや効率性・再現性などに課題があった。これに対して我々は低分子化合物を用いた細胞加工技術による神経細胞・膵b細胞誘導を試みた。これまでにマウス線維芽細胞に対してエピジェネティクス状態を制御する低分子化合物を作用させ、その後神経誘導培地を用いて培養を行うことで線維芽細胞から神経細胞を誘導することを可能とした。また、同様に低分子化合物を作用させた線維芽細胞をマウス膵b細胞株と共培養することで、膵b細胞特有の遺伝子発現を上昇することを確認している。これらの結果より低分子化合物を用いた神経細胞・膵b細胞の誘導技術確立に向けて重要な基盤を築けたと考えている。また、両細胞の神経インターフェース化に向けた共培養チャンバ作製に必要な微細加工機器の購入を行い、今後の微細加工実験に向けても立上げを行うことができた。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
miRNAを利用して抗ベクター免疫を抑制可能な新規アデノウイルスベクターの開発

本研究において、昨年度までに開発したアデノウイルス(Ad)ベクターの中で、従来型Adベクターよりも肝障害性が低いことが示された、E4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクター(Ad-E4-122aT)の機能評価と肝障害性が低い原因にっいて検討した。Ad-E4-122aTが従来型Adベクターよりも肝障害性が低い原因は、Ad-E4-122aT投与群においてはAdタンパク質に対する細胞障害性T細胞(CTL)の誘導が低いためではないかと考え、Adベクター投与後の脾臓中のヘキソン(Adベクターの主要エピトープ)特異的なCTLの誘導を検討したところ、Ad-E4-122aTをはじめ全てのAdベクター投与群において脾臓中のヘキソン特異的なCTLは誘導されたものの、その値は同程度であった。また、Adベクター投与後の肝臓におけるTリンパ球の誘導についても検討したところ、従来型Adベクター、Ad-E4-122aT投与群ともにTリンパ球の誘導は認められたが、両群の間に有意差な差はなかった。そこで、Ad-E4-122aT投与群においては肝臓でのAd遺伝子の発現が抑制されていたことから、肝細胞におけるAd抗原提示の程度が低くなっているのではないかと考えた。そこで、マウス初代肝細胞に従来型AdベクターまたはAd-E4-122aTを作用させた後、従来型Adベクターを投与したマウスから単離した脾臓中のCTLを用いてCTLアッセイを行った。その結果、Ad-E4-122aT作用群においては、従来型Adベクター作用群よりも細胞傷害性が抑制されていることが示された。以上の結果より、Ad-E4-122aT投与群では、肝細胞でのAd抗原提示の程度が低いことが示唆された。また、獲得免疫非依存的な経路による肝障害についても検討するため、免疫不全マウス(Rag2/IL2rγc欠損マウス)にAdベクターを投与し、血清中ALT・AST値を測定したところ、従来型Adベクターにおいては有意に上昇したことに対し、Ad-E4-122aTではPBS投与群と同様、全く上昇がみられなかった。これらの結果より、Ad-E4-122aTでは獲得免疫依存的及び非依存的な経路による肝障害が抑制されていることが示された。さらに、Ad-E4-122aTは、従来型Adベクターよりも搭載遺伝子を高効率に長期間発現可能であることが示された(論文投稿中)。開発したAdベクターの中で有意に肝障害が抑制されていることが示された、E4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクターは、肝細胞でのAd抗原の提示が低いこと、及び獲得免疫非依存的な経路による肝障害が抑制されることを明らかにした。さらに本Adベクターは、従来型Adベクターと比較して搭載遺伝子の発現量が高く、発現期間が長いことを示した。(抄録なし)アデノウイルス(Ad)ベクターは、遺伝子導入用ベクターとして多くの特長を有することから、遺伝子治療臨床研究において最も汎用されているベクターである。Adベクターは、自己増殖に必須のEl遺伝子を欠損させることで、理論上、Ad遺伝子が発現しないよう設計されている。しかしながら遺伝子導入後、わずかにE1遺伝子非依存的にAd遺伝子が発現してくることで、Adタンパク質に対する細胞性免疫が誘導されるとともに、Adタンパク質そのものによっても組織障害が引き起こされることが問題となっている。また、それによって、導入遺伝子の発現が減弱してしまうことが報告されている。そこで本研究ではAdタンパク質に対する細胞性免疫を抑制可能なAdベクターを開発することを目的に、Adベクター作用後に他のAd遺伝子と比較して高発現することが明らかとなったE2A、E4、pIX遺伝子(Shimizuet al., Mol. Pharmaceutics, 2011)の3'非翻訳領域に肝臓特異的miR-122a、または脾臓特異的miR-142-3pの完全相補配列4コピーを挿入したAdベクターを開発し、その機能を評価した。これら開発したAdベクターは、293細胞を用いた通常の調製法で、従来型Adベクターと同程度のタイター量が容易に回収可能であった。本Adベクターをマウスに全身投与後の肝臓・脾臓におけるE2A、E4、pIX遺伝子発現量は、各臓器のmiRNA発現パターンに従い、従来のAdベクターと比較して約1/21/100以下に抑制された。中でも、E4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクター(Ad-E4-122aT)は、肝臓においてE4遺伝子のみならず、他のAd遺伝子の発現も抑制された。Ad-E4-122aT投与群は、従来型Adベクターと比較して24倍低いALT・AST値を示し、作製したAdベクター中で最も肝障害が低かった。また、Ad-E4-122aT投与群では従来型Adベクター投与群と比較し、同程度またはそれ以上のmSEAP発現量を示した。さらに、肝臓でのE4遺伝子の発現を抑制することでAdベクターによる肝障害を軽減可能であることが示された。以上の本研究より、Ad-E4-122aTは高い安全性と遺伝子導入活性を兼ね備えたベクターであることが示された。

本研究において、昨年度までに開発したアデノウイルス(Ad)ベクターの中で、従来型Adベクターよりも肝障害性が低いことが示された、E4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクター(Ad-E4-122aT)の機能評価と肝障害性が低い原因にっいて検討した。Ad-E4-122aTが従来型Adベクターよりも肝障害性が低い原因は、Ad-E4-122aT投与群においてはAdタンパク質に対する細胞障害性T細胞(CTL)の誘導が低いためではないかと考え、Adベクター投与後の脾臓中のヘキソン(Adベクターの主要エピトープ)特異的なCTLの誘導を検討したところ、Ad-E4-122aTをはじめ全てのAdベクター投与群において脾臓中のヘキソン特異的なCTLは誘導されたものの、その値は同程度であった。また、Adベクター投与後の肝臓におけるTリンパ球の誘導についても検討したところ、従来型Adベクター、Ad-E4-122aT投与群ともにTリンパ球の誘導は認められたが、両群の間に有意差な差はなかった。そこで、Ad-E4-122aT投与群においては肝臓でのAd遺伝子の発現が抑制されていたことから、肝細胞におけるAd抗原提示の程度が低くなっているのではないかと考えた。そこで、マウス初代肝細胞に従来型AdベクターまたはAd-E4-122aTを作用させた後、従来型Adベクターを投与したマウスから単離した脾臓中のCTLを用いてCTLアッセイを行った。その結果、Ad-E4-122aT作用群においては、従来型Adベクター作用群よりも細胞傷害性が抑制されていることが示された。以上の結果より、Ad-E4-122aT投与群では、肝細胞でのAd抗原提示の程度が低いことが示唆された。また、獲得免疫非依存的な経路による肝障害についても検討するため、免疫不全マウス(Rag2/IL2rγc欠損マウス)にAdベクターを投与し、血清中ALT・AST値を測定したところ、従来型Adベクターにおいては有意に上昇したことに対し、Ad-E4-122aTではPBS投与群と同様、全く上昇がみられなかった。これらの結果より、Ad-E4-122aTでは獲得免疫依存的及び非依存的な経路による肝障害が抑制されていることが示された。さらに、Ad-E4-122aTは、従来型Adベクターよりも搭載遺伝子を高効率に長期間発現可能であることが示された(論文投稿中)。Adベクター作用後に非特異的な発現を示すE2A、E4、pIX遺伝子の3'非翻訳領域に、肝臓特異的miR-122a、または脾臓特異的miR-142-3pの完全相補配列4コピーを挿入したAdベクターを開発することに成功し、それらベクターの機能を評価することができた。中でもE4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクターは、従来型Adベクターよりも肝障害性が低く、高い遺伝子発現を示すベクターであることを明らかにした。開発したAdベクターの中で有意に肝障害が抑制されていることが示された、E4遺伝子の3'非翻訳領域にmiR-122aの標的配列を挿入したAdベクターは、肝細胞でのAd抗原の提示が低いこと、及び獲得免疫非依存的な経路による肝障害が抑制されることを明らかにした。さらに本Adベクターは、従来型Adベクターと比較して搭載遺伝子の発現量が高く、発現期間が長いことを示した。Adベクターはマウスに投与後早期および後期に肝障害マーカーであるALT・AST値が上昇することが知られている。
解析的トーションと不変量

対合付きK3曲面に対して筆者が解析的トーションを用いて2004年に導入した不変量(モジュライ空間上の関数)の具体的な公式を41個の双曲型格子に対して求めた。対合付きK3曲面の位相型は全部で75個存在するので、その中の41個に対して不変旦が決定された事になる。この不変量はモジュライ空間上の保型形式のPeterssonノルムとして表示される事は既に2004年に筆者により知られていたが、今年度の研究によりこの41個の場合には以下の著しい性質が観察された。・不変量に対応する保型形式はBorcherds積と井草保型形式の秋に因数分解される。・上のBorcherds積を定義するのに用いる楕円モジュラー形式は普遍的なエータ積とテータ関数の積に書ける。エータ積は楕円種数の普遍的な分母として現れる関数の適当な冪乗であり、テータ関数の冪はK3曲面を対合で割って得られる商曲面の2次元Betti数のみにより定まる。解析的トーションから得られる保型形式がこのような統一的表示を持つという事実は全く新しく、背後にその理由を説明する理論がある事を予感させる。関連して、Del Pezzo曲面のKahlerモジュライ上にノルムが-1のHeegner因子を特徴付ける保型形式を構成した。この保型形式は対合付きK3曲面の解析的トーションから構成され、結果としてある種の対合付きK3曲面とDel Pezzo曲面の間にミラー対称性的な現象が見いだされた。同様の現象を対合付きK3曲面の間で定式化することができる。Picard格子の階数が10以上の対合付きK3曲面に対して、そのKahlerモジュライ上に判別式軌跡を特徴付ける保型形式を解析的トーションを経由して構成できることがわかった。3次元カラビ・ヤウ多様体の解析的トーションの研究(Z.Lu氏とH.Fang氏との共同研究):物理学者バシャドスキー・チェコッティ・大栗・バッファにより導入された解析的トーションの適当な組み合せを用いて、3次元カラビ・ヤウ多様体の不変量(BCOVトーション)を構成した。さらに、通常2重点を持つ平滑化可能なカラビ・ヤウ多様体の倉西空間においてBCOVトーションがみたす微分方程式を決定し、カラビ・ヤウ多様体の一般の1次元退化族に対してBCOVトーションの特異性が代数的であることを示した。これらの結果の応用として、5次超曲面カラビ・ヤウ多様体のミラーカラビ・ヤウ多様体のBCOVトーションを決定することができた。このようにして、ミラー対称性の帰結としてバシャドスキー・チェコッティ・大栗・バッファが予想したミラー5次超曲面のBCOVトーションの公式を厳密に証明することができた。クイレン計量の退化に関する研究:ケーラー多様体の任意の1次元退化族とその上のベクトル束に対して、コホモロジーの行列式上のクイレン計量の退化を決定することができた。さらにクイレン計量がパラメーターに関して漸近展開を持つ事の証明も与えると同時に、その定数項を種々の2次特性類を用いて記述した。以上の結果は、ビスミュートと研究代表者によって知られていた結果の一般の退化への拡張を与える。また、上記BCOVトーションの退化の研究においても重要な役割を果たす。実K3曲面のラプラシアンの同変行列式の研究:実点を持たない実K3曲面のリッチ平坦ケーラー計量に関するラプラシアンの同変行列式が、ボルチャーズのΦ関数を用いて記述されることを示した。ただし、代数幾何の意味での周期ではなく、シンプレクティク幾何学の意味でのK3曲面の周期においてΦ関数の値を考える。
RANKL-TRAFシグナルによる破骨細胞プロトン放出の調節機構

破骨細胞はH^+輸送体を発現しH^+放出により骨基質の無機成分を溶解する。従来、このH^+放出には液胞型H^+ポンプ(V-ATPase)が主に関与すると考えられているが、機能的にこのH^+放出にH^+ポンプが関与しているのかを動的に捕らえた知見は非常に乏しいのが現状であり、これらのH^+放出機構の細胞内シグナルによる調節機序に関しては殆ど不明である。そこで、本研究におきて破骨細胞の分化・延命・活性化を調節する因子であるRANKL(receptor activator of NF-kB ligand)に注目し、RANKLが破骨細胞のH^+放出をどの様に調節するかを検討した。吸収状態のマウス破骨細胞でRANKLの急性投与により、H^+負荷からの細胞内pH([pH]_i)回復時間を早め、H^+放出活性を促進することが明らかとなった。また、吸収型の破骨細胞にはNa^+/H^+交換輸送体(NHE)と液胞性H^+ポンプ(V-ATPase)によるH^+放出能が存在し、移動型にはNHEのみによるH^+放出能が存在した。従って、破骨細胞が移動状態から吸収状態になるに従いV-ATPaseが発現し、このために吸収型のH^+放出能は移動型より活性化され、これに伴って吸収状態では[pH]_iが高く維持され、H^+放出活性が変化することが分かった。次に、RANKLの急性投与によりの定常状態の[pH]_iが可逆的に低下し、この作用RANKLのデコイレセプターであるOPG(osteoprotegerin)により阻害された。従って、RANKLは吸収状態の破骨細胞に対しては定常状態[pH]_iを酸性化する作用があることが分かった。以上より可RANKLは破骨細胞のH^+放出活性能を促進すると共に、細胞内でのH^+産生能も亢進させる作用を有することが示唆された。さらにヒトへの応用を考えるために、ヒト抜去乳歯から採集したヒト破歯細胞(破骨細胞様細胞)を用いRANKLの作用を調べたが、マウスの破骨細胞と同様に骨吸収を促進することが明らかとなり、ヒト破骨細胞様細胞の実験系が有用であることも示唆された。破骨細胞の分化・延命・活性化を調節する因子であるRANKL(receptor activator of NF-kB ligand)に注目し、RANKLが破骨細胞のH^+放出をどの様に調節するかを検討した。実験にはマウス骨髄細胞をマウス頭蓋骨より採集した骨芽細胞と共存培養することにより誘導した多核細胞を用いた。この培養系では多数の多核細胞を採集することが可能で、採集した細胞は酒石酸耐性酸性フォスファターゼ染色やカルシトニン受容体の存在などで破骨細胞であることが確認された。また、採集した破骨細胞をリン酸カルシウムの薄層でコートしたカバーグラス上に数時間培養すると、細胞直下に吸収窩を形成している吸収状態の破骨細胞を観察することが可能となった。従って、以後、この状態の細胞を吸収状態の破骨細胞として実験に用いた。

まず、破骨細胞のH^+放出を評価するために、pH指示薬であるBCECF/AMを破骨細胞内に取り込ませ、蛍光比より細胞内pH([pH]_i)を測定した。そして、NH_4Clを数分間前処理し除去すると、[pH]_iの一過性酸性化(アシドーシス)が生じ、次第にH^+放出により静止[pH]_iレベルに回復していった。この回復過程が破骨細胞のH^+放出活性を反映しており、アシドーシスよりの回復時間経過が早いほどH^+放出活性が高いことよりH^+放出活性の測定に有用であることが分かった。次に、H^+負荷後の[pH]_i変化を測定することによりH^+放出活性を評価し、可溶性RANKLの作用を検討した。その結果、RANKL(1040ng/ml)を実験用チャンバー内に、510分の短期間に急性投与すると、H^+負荷からの[pH]_i回復時間が遅くなることが分かった。従って、RANKLは吸収状態の破骨細胞に対してはH^+放出活性を促進し、その結果、破骨細胞の骨吸収能が活性化されるとものと考えられた。平成15年度は、RANKLがどのタイプのH^+放出経路を修飾するかを調べ、さらに、その細胞内情報伝達系を検討したいと考えている。また、今年度は破骨細胞の培養や吸収状態の細胞を準備するために必要な培養器具、[pH]_i測定のための実験器具等に費用が必要となった。平成14年度の研究において、吸収状態のマウス破骨細胞ではRANKL(receptor activator of NF-kB ligand)の急性投与により、H^+負荷からの細胞内pH([pH]_i)回復時間を早め、H^+放出活性を促進することが明らかとなった。一方、これらの結果は一過性酸性化からの回復過程を測定しH^+放出活性を評価しているので、人工的にH^+負荷をしない生理的定常状態での破骨細胞のH^+放出活性を評価する必要がある。そこで、まず最初に、共存培養系を用いないで採集できるラット破骨細胞をリン酸カルシウムでコートしたカバーグラス上で培養し、吸収窩を形成している多核細胞(吸収型)と、カバーグラス上で培養し吸収してない多核細胞(移動型)を破骨細胞として実験に用いた。実験はこれらの細胞にpH指示薬であるBCECF/AMを負荷し、種々の薬物投与による定常状態[pH]_i変化を測定しH^+放出能を評価した。その結果、吸収型にはNa^+/H^+交換輸送体(NHE)と液胞性H^+ポンプ(V-ATPase)によるH^+放出能が存在し、移動型にはNHEのみによるH^+放出能が存在した。従って、破骨細胞が移動状態から吸収状態になるに従いV-ATPaseが発現し、このために吸収型のH^+放出能は移動型より活性化され、これに伴って吸収状態では[pH]_iが高く維持され、H^+放出活性が変化することが分かった。こういった結果を踏まえ、吸収状態のマウス破骨細胞を再度用い、定常状態の[pH]、に対するRANKLの作用を検討した。その結果、RANKLの急性投与によりの定常状態の[pH]_iが可逆的に低下し、また、この作用はRANKLのデコイレセプターであるOPG(osteoprotegerin)により阻害された。従って、RANKLは吸収状態の破骨細胞に対しては定常状態[pH]_iを酸性化する作用があることが分かった。この結果は前年度のRANKLがH^+負荷からの細胞内pH([pH]_i)回復時間を早める作用と合わせると解釈が非常に難しいが、一つの可能性として、RANKLは破骨細胞のH^+放出活性能を促進すると共に、細胞内でのH^+産生能も亢進させる作用を有することが考えられる。しかしながら、これらの機序を解明するためには、今後、吸収状態と非吸収状態での作用や細胞内情報伝達をさらに詳しく検討していく必要がある。
界面活性剤溶液のレオロジー:ひも状ミセルの非線形伸長と流動誘起構造

ひも状ミセル系について,非線形レオロジーと高速流動下での構造との関係について調べた.ひも状ミセル系では,通常のからみ合い高分子系とは異なり,流動によりミセルが伸張し,伸びきりによる応力の発散現象が観測される.このミセルの伸びきり現象とミセルの構造,高速流動下での非線形レオロジー,あるいは流動誘起構造の関係について調べた.本研究費により,流動光散乱,流動可視化装置を試作した.ミセル系のレオロジーは添加塩濃度の増加によって,からみ合い系から一時網目系へと変化する.この点を考慮し,伸びきり現象の発現と添加塩濃度の関係について検討した.その結果,伸びきりの発現には,一時網目の単一緩和が観測される必要があることが判明した.光学測定のためにガラス製のコーン・プレートを作成して粘弾性測定を行ったところ,ガラス製のコーン・プレートでは,ステンレス製のものと比べて,印加できる応力の最大値が著しく減少することが判明した.この原因は表面状態の違いによるものであること検証するために,ガラスの表面処理が粘弾性に与える影響について調べた.この結果,界面自由エネルギーの分散成分が多い場合には,ミセル水溶液とコーン・プレートの接着性がよく,高い応力を印加できることが明らかになった.このようなひも状ミセル系の非線形粘弾性測定における表面処理の影響の重要性は,本研究によって初めて明らかにされたものである.表面状態を制御したコーン・プレートを用いて,流動可視化法及び流動光散乱法を用いて,流動誘起構造について調べたところ,接着性の悪い表面を用いた場合では,表面近傍でのすべりによって比較的均質な流動が観測された.一方,接着性の悪い表面を用いた場合では,ミセルの伸びきりによって液体内部で破壊が絶えず生じ,不均質な流動が生じることがわかった.以上のように,流動誘起構造の形成には,表面の状態が決めて重要であることが明らかにすることができた.この結果は,従来の研究結果に対して再考を求める極めて重要なものである.ひも状ミセル系について,非線形レオロジーと高速流動下での構造との関係について調べた.ひも状ミセル系では,通常のからみ合い高分子系とは異なり,流動によりミセルが伸張し,伸びきりによる応力の発散現象が観測される.このミセルの伸びきり現象とミセルの構造,高速流動下での非線形レオロジー,あるいは流動誘起構造の関係について調べた.本研究費により,流動光散乱,流動可視化装置を試作した.ミセル系のレオロジーは添加塩濃度の増加によって,からみ合い系から一時網目系へと変化する.この点を考慮し,伸びきり現象の発現と添加塩濃度の関係について検討した.その結果,伸びきりの発現には,一時網目の単一緩和が観測される必要があることが判明した.光学測定のためにガラス製のコーン・プレートを作成して粘弾性測定を行ったところ,ガラス製のコーン・プレートでは,ステンレス製のものと比べて,印加できる応力の最大値が著しく減少することが判明した.この原因は表面状態の違いによるものであること検証するために,ガラスの表面処理が粘弾性に与える影響について調べた.この結果,界面自由エネルギーの分散成分が多い場合には,ミセル水溶液とコーン・プレートの接着性がよく,高い応力を印加できることが明らかになった.このようなひも状ミセル系の非線形粘弾性測定における表面処理の影響の重要性は,本研究によって初めて明らかにされたものである.表面状態を制御したコーン・プレートを用いて,流動可視化法及び流動光散乱法を用いて,流動誘起構造について調べたところ,接着性の悪い表面を用いた場合では,表面近傍でのすべりによって比較的均質な流動が観測された.一方,接着性の悪い表面を用いた場合では,ミセルの伸びきりによって液体内部で破壊が絶えず生じ,不均質な流動が生じることがわかった.以上のように,流動誘起構造の形成には,表面の状態が決めて重要であることが明らかにすることができた.この結果は,従来の研究結果に対して再考を求める極めて重要なものである.1.臭化トリメチルセチルアンモニウムCTABにサリチル酸ナトリウムNaSalとの水溶液をモデル系として,通常のレオメーターを用いて,伸びきり現象の解析を行った.ミセルの伸びきりを,高速流動印加時の見かけの弾性率(ずり応力/ずりひずみ)のひずみ依存性として評価した.ミセル濃度,塩濃度を変えて測定を行い,見かけの弾性率をこれらの濃度の関数として求めた.スリップリンクモデル等を用いて精密な解析を行い,網目のサイズ(からみ合い点間の分子量),セグメントの分子量(ひも状ミセルを粗視化する際の屈曲性の単位)を評価した.2.レオメーターを改造し,流動複屈折測定の開発を行った.コーン・プレート,共軸円筒での測定を目指し,これらのガラス製ジグを作成した.ひも状ミセルについて,特に伸びきり近傍での応力と複屈折の関係を明らかにするため,流動複屈折測定を行った.その結果,ガラス製コーン・プレートを用いた場合,表面での滑りが大きく,応力の急激な立ち上がりが観測されないことが判明した.このような現象は,これまでほとんど認識されておらず,既存の可視化のデータに大いに疑問を投げかけるものであった.このため,ガラス表面での滑りを抑える方法を探査した.その結果,酸化チタンを用いた親水性処理剤の使用が有効であり,フテンレス治具を用いた場合とほぼ同等の応力データが得られることがわかった.3.上記2.で開発した滑り抑制の方法を用いて,複屈折・光散乱の測定を進めた.

伸びきり近傍で応力が増大し,白色になり,バタフライ+ストリーク状の強い散乱が観測された.ひも状ミセルの高速流動下での構造と非線形レオロジーについて調べた.特に,ひも状ミセル系では,流動により,ミセルが伸張し,ミセルの伸びきりによる応力の発散現象が観測されるため,ミセルの伸びきりと高速流動下での非線形レオロジー,あるいは流動誘起構造の関係について調べた.本研究費により,流動光散乱,流動可視化装置を試作した.光学測定のためにガラス製のコーン・プレートを作成して粘弾性測定を行ったところ,ガラス製のコーン・プレートでは,ステンレス製のものと比べて,印加できる応力の最大値が著しく減少することが明らかとなった.この原因は表面状態の違いによるものと考えられるため,この考えを検証するためにガラスの表面処理が粘弾性に与える影響について調べた.この結果,界面自由エネルギーの分散成分が多い場合には,ミセル水溶液とコーン・プレートの接着性がよく,高い応力を印加できることが明らかになった.このようなひも状ミセル系の非線形粘弾性測定における表面処理の影響の重要性は,本研究によって初めて明らかにされたものである.表面状態を制御したコーン・プレートを用いて,流動可視化法及び流動光散乱法を用いて,流動誘起構造について調べたところ,接着性の悪い表面を用いた場合では,表面近傍でのすべりによって比較的均質な流動が観測された.一方,接着性の悪い表面を用いた場合では,ミセルの伸びきりによって液体内部で破壊が絶えず生じ,不均質な流動が生じることがわかった.以上のように,流動誘起構造の形成には,表面の状態が決めて重要であることが明らかにすることができた.この結果は,従来の研究結果に対して再考を求める極めて重要なものである.
燃料電池電極面内の電流分布非接触計測に関する研究

固体高分子形燃料電池(PEFC)内部の電流分布を非接触で測定できる技術を確立した。本技術は, PEFCが発電する時に発生する磁界強さを磁気センサで測定し,その値からPEFC内部の電流分布を求める手法である。この技術で測定したPEFC内部の電流分布の正しさを国内外において初めて検証した。本技術により, PEFC内部において過負荷で発電している部分と余り発電していない部分を発電状態に影響を与えることなく測定でき, PEFCの性能・寿命向上のための有益な情報を提供できる固体高分子形燃料電池(PEFC)内部の電流分布を非接触で測定できる技術を確立した。本技術により, PEFC内部において過負荷で発電している部分と余り発電していない部分を発電状態に影響を与えることなく測定でき, PEFCの性能・寿命向上のための有益な情報を提供できる固体高分子形燃料電池(PEFC)は、小容量でも発電効率が高く、そのため、二酸化炭素排出量の削減が可能で、更に静粛性、多様な燃料利用および窒素酸化物や硫黄酸化物等の大気汚染物質排出量削減などの利点から、近年、自動車や家庭用コジェネレーションの動力源として、大きな期待が寄せられている.しかしながら、これら用途へのPEFCの本格的導入には、更なる発電効率の向上、長寿命化およびコスト低減などの課題がある.なかでも、PEFCの発電性能・寿命の向上にとって、PEFC内部の物質移動、その物質移動と密接に関連する電流分布を明らかにすることが重要である.本研究では、PEFC発電時にその周囲に発生する磁界を測定し、その磁界からPEFC電極面内の電流分布を明らかにする非接触計測法の確立を目的とする.その中で本年度実施した内容および成果を以下に述べる.1.磁界測定装置の設計・組立:小形磁気センサをPEFC表面(50mm×50mm)上に10mmピッチで25個配置した磁界測定装置を設計・組立を終了した.2.磁界から電流への変換法の検定:PEFC内部の電流の向きを一方向に限定できる特殊な構成部品(セパレータ)を作製した.このセパレータ内部を電流が流れることにより発生する電圧降下を測定することにより電流分布が求まる.磁界測定から求めた電流分布とセパレータで測定した電流分布は一致した傾向を示し、磁界測定から電流分布を求める本手法を検証できた.3.電界解析:実際のPEFC内部の電流の流れは複雑なため、磁界分布からPEFC内部の電流分布を推定できる数値解析プログラムを開発する必要があり、その第一歩として電流のPEFCへの入力および出力部分を設定し、PEFC内部の電流分布を求めるプログラムを開発した.固体高分子形燃料電池(PEFC)の電極面内の電流分布を,磁気センサを用いて非接触で測定する技術を確立した。本測定法は,PEFC内部を流れる電流により発生する磁界分布を測定し,その測定磁界から逆に電池内部を流れる電流を求める手法である。本年度得られた成果を下記する。(1)磁界測定時間の高速化:25個の磁気センサを用いることにより,従来約10分を要していた磁界測定を約1/4の2分30秒に短縮し,その測定結果から求めた電流分布の妥当性を,平成19年度に開発した特殊なセパレータを用いて検証した。(2)磁気センサ位置の検討:2方式の磁界測定位置について,電流分布を求めるための適・不適を比較検討した。(3)電流分布解析法の高度化:3次元有限要素法を使用して,PEFC内部の3次元電流分布およびこの電流分布により発生する静磁界分布を求める解析プログラムを開発した。この電流/磁界分布統合解析プログラムを用いて,PEFC内部の不連続な電流分布を磁界分布から逆問題的に推定することに成功した。(4)電流分布に及ぼすガス加湿の影響:PEFC電極面内には最小電流密度/最大電流密度が約0.6に及ぶ電流密度の大きな不均一が発生しているが明らかとなり,その分布は燃料ガスあるいは空気の加湿・非加湿により大きく変化することがわかった。本測定法はPEFCの構造をほとんど変えることなく電流分布を測定でき,PEFCの発電性能の向上および性能劣化の抑制に役立つ有益な情報を提供できる。今後はスタックへの適用を目指し更に研究・開発を進める。
トランスジェニックマウスを用いたマクロファージ遊走阻止因子の機能の解明

MIFは,本来リンパ球のみで産生されマクロファージを活性化すると考えられてきたが,免疫担当細胞に限らず血管内皮細胞など種々の組織でも産生され,多くの炎症性疾患に関与することを発表した.エンドトキシン刺激による劇症肝炎や急性呼吸窮迫症候群のモデル動物を作成して,抗MIF抗体投与により致死率や病理組織学的所見が顕著に改善することやanti-CD3による刺激による解析からMIFがTリンパ球の活性化に必須であることを報告した.さらにアトピー性皮膚炎,膠原病などの難治性疾患の病態に深く関与すること,また脂肪細胞におけるMIFの発現がインスリンやグルコースにより制御されることも示した.一方,MIFは細胞増殖因子として機能し腫瘍細胞増殖や血管新生に深く関与することも明らかにしてきた.具体的には,ICRマウス由来の癌細胞(Sarcoma180)を用いた皮下移植腫瘍増殖試験において,マウスの背部皮下に移植し,移植後隔日に腫瘍体積の推移を測定したところ,Tgマウスに皮下移植した腫瘍体積はcontrolマウスに比して有意に増加した.また,腫瘍血管新生誘導試験ではSarcoma180細胞を注入したMillipore chamberをマウスの背部皮下に移植し,移植後6日目に腫瘍血管の占有面積を定量的に測定したところ,Tgマウスにおいて血管新生が増強することから,MIFが腫瘍細胞の増殖と血管新生を促進する作用を有すると考えられた.驚くべきことに,9日目以降からTgマウスに移植した癌細胞は退縮し,21日目では完全に消失した.これらのマウスに腫瘍を再度移植しても全て拒絶された.腫瘍免疫を獲得したと考えられ,このことが本研究の主題となる.MIF刺激による細胞内シグナル伝達系についても解析を進め,リウマチ患者由来の滑膜細胞はMIFに感受性良く反応し,matrix metalloproteinase(MMP)1,-3の発現が上昇することから,MIFが直接間接の破壊に関わっていることを示した.MMPの発現上昇のシグナル伝達系に関する研究では、MIF刺激によりsrcの自己リン酸化,MAPKK(MEK)及びMAPK(Erk1/2)の活性化が認められた.またラット心筋細胞,骨髄芽細胞を用いた実験から,MIFの作用はsrc-MEK-MAPKを介することも明らかにした.MIFは,本来リンパ球のみで産生されマクロファージを活性化すると考えられてきたが,免疫担当細胞に限らず血管内皮細胞など種々の組織でも産生され,多くの炎症性疾患に関与することを発表した.エンドトキシン刺激による劇症肝炎や急性呼吸窮迫症候群のモデル動物を作成して,抗MIF抗体投与により致死率や病理組織学的所見が顕著に改善することやanti-CD3による刺激による解析からMIFがTリンパ球の活性化に必須であることを報告した.さらにアトピー性皮膚炎,膠原病などの難治性疾患の病態に深く関与すること,また脂肪細胞におけるMIFの発現がインスリンやグルコースにより制御されることも示した.一方,MIFは細胞増殖因子として機能し腫瘍細胞増殖や血管新生に深く関与することも明らかにしてきた.具体的には,ICRマウス由来の癌細胞(Sarcoma180)を用いた皮下移植腫瘍増殖試験において,マウスの背部皮下に移植し,移植後隔日に腫瘍体積の推移を測定したところ,Tgマウスに皮下移植した腫瘍体積はcontrolマウスに比して有意に増加した.また,腫瘍血管新生誘導試験ではSarcoma180細胞を注入したMillipore chamberをマウスの背部皮下に移植し,移植後6日目に腫瘍血管の占有面積を定量的に測定したところ,Tgマウスにおいて血管新生が増強することから,MIFが腫瘍細胞の増殖と血管新生を促進する作用を有すると考えられた.驚くべきことに,9日目以降からTgマウスに移植した癌細胞は退縮し,21日目では完全に消失した.これらのマウスに腫瘍を再度移植しても全て拒絶された.腫瘍免疫を獲得したと考えられ,このことが本研究の主題となる.MIF刺激による細胞内シグナル伝達系についても解析を進め,リウマチ患者由来の滑膜細胞はMIFに感受性良く反応し,matrix metalloproteinase(MMP)1,-3の発現が上昇することから,MIFが直接間接の破壊に関わっていることを示した.MMPの発現上昇のシグナル伝達系に関する研究では、MIF刺激によりsrcの自己リン酸化,MAPKK(MEK)及びMAPK(Erk1/2)の活性化が認められた.またラット心筋細胞,骨髄芽細胞を用いた実験から,MIFの作用はsrc-MEK-MAPKを介することも明らかにした.申請者は,MIFが多くの炎症性疾患及び細胞の分化・増殖に関与し,特に腫瘍細胞増殖や血管新生に深く関与することを明らかにしてきた.最近の研究では,MIF Tgマウスを作製し癌発症,増殖,転移との関連を検討し以下の結果を得ている.ICRマウス由来の癌細胞(Sarcoma S180)をマウスの背部皮下に移植し,移植後隔日に腫瘍体積の推移を測定した.Tgマウスに皮下移植した腫瘍体積はcontrolマウスに比して有意に増加した.このことから,MIFの上昇は腫瘍細胞の増殖を促すと考えられた.

また,腫瘍血管新生誘導試験ではSarcoma S180細胞を注入したMillipore chamberをマウスの背部皮下に移植し,移植後6日目に腫瘍血管の占有面積を定量的に測定した.TgマウスにおけるMIFの発現の上昇は癌細胞由来の可溶性因子による血管新生作用を増強することから,MIFが腫瘍細胞の増殖と血管新生を促進する作用を有すると考えられた.MIFは,本来リンパ球のみで産生されマクロファージを活性化すると考えられてきたが,免疫担当細胞に限らず血管内皮細胞など種々の組織でも産生され,多くの炎症性疾患に関与することを発表した.エンドトキシン刺激による劇症肝炎や急性呼吸窮迫症候群のモデル動物を作成して,坑MIF坑体投与により致死率や病理組織学的所見が顕著に改善することやanti-CD3による刺激による解析からMIFがTリンパ球の活性化に必須であることを報告した.さらにアトーピー性皮膚炎,膠原病などの難治性疾患の病態に深く関与すること,また脂肪細胞におけるMIFの発現がインスリンやグルコースにより制御されることも示した.一方,MIFは細胞増殖因子として機能し腫瘍細胞増殖や血管新生に深く関与することも明らかにしてきた.具体的には,ICRマウス由来の癌細胞(Sarcoma180)を用いた皮下移植腫瘍増殖試験において,マウスの背部皮下に移植し,移植後隔日に腫瘍体積の推移を測定したところ,Tgマウスに皮下移植した腫瘍体積はcontrolマウスに比して有意に増加した.また,腫瘍血管新生誘導試験ではSarcoma180細胞を注入したMillipore chamberをマウスの背部皮下に移植し,移植後6日目に腫瘍血管の占有面積を定量的に測定したところ,Tgマウスにおいて血管新生が増強することから,MIFが腫瘍細胞の増殖と血管新生を促進する作用を有すると考えられた.驚くべきことに,9日目以降からTgマウスに移植した癌細胞は退縮し,21日目では完全に消失した.これらのマウスに腫瘍を再度移植しても全て拒絶された.腫瘍免疫を獲得したと考えられ,このことが本研究の主題となる.MIF刺激による細胞内シグナル伝達系についても解析を進め,リウマチ患者由来の滑膜細胞はMIFに感受性良く反応し,matrix metalloproteinase(MIMP)1,-3の発現が上昇することから,MIFが直接間接の破壊に関わっていることを示した.MMPの発現上昇のシグナル伝達系に関する研究では、MIF刺激によりsrcの自己リン酸化,MAPKK(MEK)及びMAPK(Erk1/2)の活性化が認められた.またラット心筋細胞,骨髄芽細胞を用いた実験から,MIFの作用はsrc-MEK-MAPKを介することも明らかにした.
ソフトウェア品質管理規格に対応した開発支援環境の構成方法に関する研究

本研究では、CMMやISO9000-3などのソフトウェア品質保証システムで要求されている規格に従った開発支援環境の構築技術の確立を目的として、品質保証システムで要求されている管理作業の形式的な記述による明確化と、そのような形式的記述を元にして実際に規格を満たすような開発支援環境の構築方法を得る方法について検討した。当初の計画では、管理プロセス記述モデルの開発を行なった後に、モデルに基づいた品質保証システム対応プロセスの記述を試み、その結果をもって、品質保証システムに対応した支援環境の構築方法の検討することを予定していた。しかし、管理プロセス記述のためのモデルの検討過程において、進捗や品質といった抽象的な尺度の扱いの重要性を改めて認識するに至ったため、本年度は、複数人での作業におけるいくつかの性質について重点的に検討を重ねた。具体的には、「設計者」「プログラマ」「テスタ」といった役割別の開発における並行性に着目し、並行に作業を行なう際の人員投入量や投入時期についての見積りモデルを提案した。また、各作業を並行に行なうことにより、ある作業が他の作業に与える影響を、進捗度という観点から数式化し、シミュレートする方法についても提案を行なった。一方、これらの多人数作業における進捗の度合や、作業内容などを収集/提示する機構について検討を行ない、今日広く普及しつつあるWWW(World Wide Web)のブラウザ(閲覧プログラム)をインターフェースに、作業の進捗の収集や報告を容易に実現する機構を提案/試作した。以上のように、本研究では品質保証規格に基づいた開発支援環境構築のための要素技術を提案するに留まったが、これらはいずれも、研究目的を達成する上で重要な役割を果たすものであると考えられる。すなわち、本研究の成果を元に、品質保証規格に基づいたプロセス管理をWWWなどを用いて行なうとともに、プロセスの設計や管理に対する効果を予め予測/評価することが可能となることが期待される。
テロメラーゼ活性測定による胃癌切除後の微少遺残癌細胞の検出と腹膜再発との関連

本研究は癌細胞に高度な特異性をもつテロメラーゼ活性(T活性)をTRAPアッセイにより測定することで、胃癌切除後の腹腔内に遺残する微小な癌細胞を検出し腹膜再発の高危険群を同定しようとするものである。本研究により腹膜再発の高危険群の予測が可能となれば、術後早期からの化学療法など、治療の個別化により予後向上につながるものと思われる。過去2年間に引き続き症例を蓄積、漿膜浸潤±+の胃癌症例計26例につき開腹時に左横隔膜下、右肝下面、ダグラス窩の3ケ所に生食を注入、細胞診(cy)とT活性測定を行い、両者の判定結果を検討した。胃癌術後癌性胸膜炎患者1例の癌性胸水および5例の術後ドレーン排液につき、同様の検討を行った。また、これまで蓄積された症例の予後を検討した。結果:cy陽性23検体中、T活性陽性は3検体のみと、検体中の微少癌細胞の検出にはT活性測定の方がcyより鋭敏であろうという当初予想に反する結果であったが、他方、cy陰性80検体中、T活性陽性を4検体に認め、本研究の意義を支持する結果も得られた。短い観察期間ではあったが、cy陽性例に腹膜再発を認めたほか、cy陰性/T活性陽性の1例が腹膜再発が強く疑われており、今後の経過を注視している。また、同じくcy陰性/T活性陽性の別の1例についても注意深く経過観察中である。考察:cy陽性検体でのT活性検出率の低さは検体処理過程におけるT活性の失活(凍結と解凍の繰り返し、検体採取時における蛋白消化酵素の混入)、高蛋白濃度検体においてはPCR阻害防止のための、過度の検体希釈などが考えられ、今後はこれらを考慮したT活性測定法の改良が必要である。一方、cy陰性/T活性陽性を4検体(4例)に認めたことは本研究の有用性を示す結果である。このような症例が腹膜再発をきたすならば本研究の初期の目的を実現するものであるからである。本研究は術中に腹腔内に存在する微少な胃癌細胞を、癌細胞に高度な特異性をもつテロメラーゼ活性を測定することで検出し、胃癌切除後の腹膜再発の高危険群を同定しようするものである。本研究により腹膜再発の予測が可能となれば、再発の高危険群には術後早期からの化学療法の導入など、治療の個別化が可能となり、予後の向上につながるものと思われる。研究初年度の平成9年度は腹腔内洗浄細胞診の結果とテロメラーゼ活性との相関を検討することから始めた。すなわち、漿膜浸潤(±)(+)と判断される11例の胃癌症例の開腹時に左横隔膜下、右肝下面、ダグラス窩の3ケ所に生食100mlを注入し、30mlを細胞診、50mlをテロメラーゼ活性測定用に採取した。また、胃癌術後癌性胸膜炎患者1例において癌性胸水につき、同様の比較検討を行った。細胞診はパパニコロウ染色にて検討、テロメラーゼ活性測定用検体は遠心分離、細胞成分をペレットとして採取、凍結保存した。

一定量の検体が集積された時点で凍結保存検体を解凍し、TRAPアッセイ(Oncor TRAP-ese^<TM>テロメラーゼ活性検出キット使用)手順に従い、テロメア伸長反応とPCR法によるテロメアの増幅後、その産物を電気泳動に供し、オートラジオグラフィーによりテロメラーゼ活性の有無を確認した。結果は細胞診陽性であった14検体のうち、テロメラーゼ活性陽性であったものはわずか3検体のみであった。この結果は検体中の微少癌細胞の検出にはテロメラーゼ活性測定の方が細胞診よりも鋭敏であろうという当初の予想と全く反するものである。テロメラーゼ活性測定に供した検体中の細胞数の問題、Taqポリメラーゼ阻害物質混入の可能性、などがその原因と考えれれた。明年度以降はこれらの点を考慮にいれ、さらに症例を追加して同様の検討を行うとともに、順次、患者予後との関連を調査していく予定である。本研究は術中に腹腔内に存在する微少な胃癌細胞を癌細胞に高度な特異性をもつテロメラーゼ活性を測定することで検出し、胃癌切除後の腹膜再発の高危険群を同定しようするものである。本研究により腹膜再発の予測が可能となれば、再発の高危険群には術後早期からの化学療法の導入など、治療の個別化が可能となり、予後の向上につながるものと思われる。平成9、10年度の2年間は細胞診の結果とテロメラーゼ活性との相関を検討した。すなわち、漿膜浸潤(±)(+)と判断される胃癌症例22例につき開腹時に左横隔膜下、右肝下面、ダグラス窩の3ヶ所に生食100mlを注入し、30mlを細胞診、50mlをテロメラーゼ活性測定用に採取した。また、胃癌術後癌性胸膜炎患者1例の癌性胸水および2例の術後ドレーン排液につき、同様の検討を行った。細胞診はパパニコロウ染色にて検討、テロメラーゼ活性測定用検体は遠心分離、細胞成分をペレットとして採取、凍結保存した。一定量の検体が集積された時点で凍結保存検体を解凍し、TRAPアッセイ(Oncor TRAP-eze^<T.M>テロメラーゼ活性検出キット使用)手順に従い、テロメア伸長反応とPCR法によるテロメアの増幅後、その産物を電気泳動に供し、テロメラーゼ活性の有無を確認した。結果:細胞診陽性20検体中、テロメラーゼ活性陽性は3検体のみと、検体中の微少癌細胞の検出にはテロメラーゼ活性測定の方が細胞診よりも鋭敏であろうという当初の予想に反する結果であったが、他方、細胞診陰性56検体中、テロメラーゼ活性陽性を4検体に認め、本研究の意義を支持する結果も得られている。明年度以降はさらに症例を追加して同様の検討を行うとともに、特に後者の患者予後と再発形式などにつき追跡調査を行う予定である。本研究は癌細胞に高度な特異性をもつテロメラーゼ活性(T活性)をTRAPアッセイにより測定することで、胃癌切除後の腹腔内に遺残する微少な癌細胞を検出し腹膜再発の高危険群を同定しようするものである。本研究により腹膜再発の高危険群の予測が可能となれば、術後早期からの化学療法など、治療の個別化により予後向上につながるものと思われる。過去2年間に引き続き症例を蓄積、漿膜浸透±+の胃癌症例計26例につき開腹時に左横隔膜下、右肝下面、ダグラス窩の3ヶ所に生食を注入、細胞診(cy)とT活性測定を行い、両者の判定結果を検討した。胃癌術後癌性胸膜炎患者1例の癌性胸水および5例の術後ドレーン排液につき、同様の検討を行った。また、これまで蓄積された症例の予後を検討した。結果:cy陽性23検体中、T活性陽性は3検体のみと、検体中の微少癌細胞の検出にはT活性測定の方がcyより鋭敏であろうという当初予想に反する結果であったが、他方、cy陰性80検体中、T活性陽性を4検体に認め、本研究の意義を支持する結果も得られた。短い観察期間ではあったが、cy陽性例に腹膜再発を認めたほか、cy陰性/T活性陽性の1例が腹膜再発が強く疑われており、今後の経過を注視している。
B細胞の分化とアイソタイプ変換の分子機構とその制御

Cμから下流のCH遺伝子への組み替えにより、IgMからIgG,IgA,IgEへのアイソタイプ変換が起こる。末梢のナイーブ(sIgD+)CD40とサイトカインあるいはLPSとサイトカインで刺激するとCHスイッチ組み換えが起こる。スイッチ組み替えは各S領域の5′上流のIエクソンからの転写(胚細胞型転写)により始まり、胚細胞型CH mRNAの転写、リコンビナーゼ等の働きによりS領域間でスイッチ組み換えで終了する。IL-5はB-1細胞による自然抗体産生を促進するのみならず、活性化されたB-2細胞の抗体産生細胞への分化を促進する。本研究は、IL-5によるB細胞分化の制御ならびにアイソタイプ変換の制御の分子機構を明らかにすることを目的としている。我々はsIgD^+B細胞をCS/2(抗CD38抗体)とIL-5で共刺激するとμ鎖からγ1鎖への著明なスイッチ組み換えとIgG1抗体産生を惹起しうることを昨年報告した。本年はIL-5依存性のアイソタイプ変換におけるNF-κBやStat5の役割について詳細に解析した。B細胞をCS/2(抗CD38抗体)刺激するとNF-κBが活性化されること、主にc-Relが活性化されることがわかった。CD40刺激ではp50,Rel-B,c-Relが活性化されるのと対照的であった。また、NF-κBの活性化に重要であるNF-κB inducing kinase(NIK)に異常を示すaly B細胞はCS/2による増殖応答とIgG1産生が対照群と比較して減弱していた。Stat5a、Stat5b欠損マウスのB細胞をCS/2とIL-5共刺激したところIgMとIgG1産生はいずれも顕著に減弱していた。またSγ1-Sμ環状DNAの出現頻度も激減していた。しかし、CS/2刺激による胚細胞型γ1mRNA転写は影響を受けなかった。また、IL-4とCS/2刺激によるB細胞の増殖応答、IL-4と抗CD40抗体刺激によるIgG1産生は対照B細胞と大きな差が見られなかった。Stat5a欠損B細胞、Stat5b欠損B細胞のいづれもCS/2とIL-5により惹起される分裂回数は対照群と差がなかった。以上の結果より、NF-κBとStat5はそれぞれ胚細胞型g1mRNAとg1へのアイソタイプ変換に重要な役割を示すことが初めて明らかになった。IL-5刺激に依存性のアイソタイプ変換やB細胞分化特異的に重要な転写因子であることが初めて証明された。抗原特異性は抗体分子の可変部領域遺伝子の体細胞突然変異で惹起され、抗体のアイソタイプはIgH遺伝子の再構成(スイッチ組み替え)により起こる。近年、B細胞のスイッチ組み替えにCD40/CD40リガンド(CD40L)とサイトカインが重要であることが示されている。