hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
遺伝子・薬剤の細胞内導入のための超音波治療機の開発

以上により、超音波照射によりサイトカインの生物活性を増強することが、in vivoで確認された。また、そのための超音波の照射条件を特化することができた。次年度の照射装置開発の基礎データとなる。ラット肝からKupffer細胞を単離培養し、その培養上清中に気泡と遺伝子プラスミドを混じた溶液を流し、気泡が培養細胞と接触したときに超音波を照射して遺伝子導入を行い、導入効率を検討した。培養Kupffer細胞の気泡呑食能を検討した。超音波を構成する微小気泡は培養上清中では浮遊するため、細胞培養液を還流する円盤状の特殊な還流装置を用いた。還流液中にプラスミドを吸着させた微小気泡を入れ、還流した後鏡顕し気泡が細胞内に呑食されたことを確認した。培養液に超音波照射装置のプローブを漬けて超音波を諸種の照射条件下で照射して遺伝子導入効率を検討した。遺伝子としてルシフェラーゼプラスミドを用いた。超音波照射のためには超音波照射装置Electrotherapy ZC2を用いた。装置条件として、超音波照射のduty比、照射音圧、周波数、照射時間を変化させて照射した。微小気泡からなる超音波造影剤として、Optison、NC100100(Sonazoid)を用いた。超音波照射による遺伝子導入効率は、超音波照射の照射条件によって異なった。照射音圧が大きいか、照射時間が長いと導入効率は大きいが、音圧をMI値で1.0以上を20秒以上照射した場合には、逆に照射効率は低下を示した。これは、超音波照射による気泡の崩壊エネルギーが、細胞機能を障害する可能性を示唆した。指摘な照射条件下では、非照射のコントロール群に比べで、35倍の導入効率を示した。ラット肝細胞を用いて,超遠心によりKupffer細胞を主体とする分画を単離し,培養した。この培養液中に気泡を含む超音波造影剤と遺伝子プラスミドを混じた溶液を還流し,造影剤が培養細胞と接触した際に超音波を照射することで,細胞内への遺伝子導入効率が上昇するかを検討した。まずKupffer細胞の気泡貪食能を検討した。超音波造影剤は培養液中では浮遊するため,造影剤と細胞との接触機会を増加させるため,細胞培養液を還流させる特殊装置を用いた。還流液中にプラスミドを吸着させた微小気泡を入れ,培養液に還流させた後,顕鏡し気泡が細胞内に貪食されることを確認した。この予備実験より,次に培養液内に超音波照射装置を装着し諸種の条件下で超音波を照射して遺伝子導入効率を検討した。超音波照射にはElectrotherapy ZC2を用いた。超音波照射の条件設定として,duty比,照射音圧,周波数,照射時間を変化させた。微小気泡からなる超音波造影剤として,Optison,NC100100(Sonazoid),レポピスト,ソノビューを用いた。超音波照射による遺伝子導入効率は,超音波照射の照射条件と用いた超音波造影剤によって異なった。
清潔援助の免疫機能への影響に関する基礎的研究

清潔援助の免疫系への効果を検討するために一連の調査及び実験を行った。なお本研究においては主としてナチュラルキラー細胞に着目して行った。まず、末梢血単核白血球分画によるナチュラルキラー活性と単核白血球分画におけるナチュラルキラー細胞の割合に関する検討を行い、ナチュラルキラー活性の個人差が、ナチュラルキラー細胞の割合に依存するという結果を得た(看護技術vol.47,no.1に発表)。次に、サーカディアンリズムの中で、日中の入浴が、ナチュラルキラー細胞分画に与える影響を検討し(入浴後約1.5時間)、日中の入浴がナチュラルキラー分画を高める結果を得た(看護技術vol.47,no.1に発表)。さらに、ナチュラルキラー細胞に与える影響について詳細に検討するために、カテコラミン、成長ホルモン、副腎皮質ホルモンの変化を検討した。(入浴後約10分)入浴において成長ホルモンが特に著しく増加し、同時に、好中球が増加した(未発表)。NK細胞は減少傾向であった。入浴によって白血球における好中球割合は高まる結果は安定して得られたが、NK細胞分画は、入浴条件等によって異なる変化を示した。これらの変化における影響因子は現在検討中である。まず第一に、ユーロピウム法によるK562細胞をターゲットとした単核球のナチュラルキラー活性の測定およびフローサイトメーター法によるリンパ球のポピュレーション分布の測定技術を習得し、精度、信頼性について確認した。続いて、健康な成人女性若干名において平常時のナチュラルキラー活性およびリンパ球のポピュレーション分布の日内変動を測定し、また入浴前後でのナチュラルキラー活性およびポピュレーション分布の変化を測定した。その結果、ナチュラルキラー活性およびリンパ球のポピュレーション分布の入浴による変動が観察された。ナチュラルキラー活性およびナチュラルキラー細胞のポピュレーション共に、日内で低下するのに対して、入浴後では共に上昇していた。また、就寝前に入浴を行った場合と、入浴を行わなかった場合のナチュラルキラー活性およびリンパ球のポピュレーション分布の変化についても検討を行った。入浴を行わなかった翌日のリンパ球のポピュレーション分布は入浴を行った日の翌日の分布に比べて相違が観察された。入浴しなかった翌日はナチュラルキラー活性およびリンパ球のポピュレーション分布が低下していた。現在、これらの現象についての再現性・信頼性を高めるために実験を行っている。詳細については再現性・信頼性が確認され次第、発表する予定である。
孵化前有色光線処理による家禽胚への色覚の刷り込みとその応用に関する研究

(1)網膜の組織および視細胞の変化:発生初期からステージを追った網膜の組織学的変化を解析すると、孵卵10日目で成鳥と同様な10層の構造が認められた。網膜は孵化12日目から大きく分化していることが分かった。また、網膜の質的解析では色覚に係る油滴の発現は孵化中13日目に現れることも分かった。しかし、この時期では油球の色彩については識別できなかった。孵化15日目になって赤、オレンジ、緑および透明の4種類の油球に識別が可能となった。また、形成された各種の油球の比は各ステージとも赤1:オレンジ1:緑1:透明2の割合になっていた。さらに、油球の大きさは孵卵13日目で1.3ミクロン、16日目で2.6ミクロン、孵化1日目で3ミクロンと次第に大きくなっていることが分かった。(2)組織化学的検討:網膜形成におけるアミンニューロンの形成時期を免疫組織学的方法で調べたところ、アミン含有ニューロンは孵卵13日目の網膜の顆粒層に出現し、そのご神経突起を伸ばし成長することが分かった。成長した神経突起は網膜層に平衡に放射状に伸びていた。(3)色嗜好の行動学的検証:孵化14日目のウズラの卵に窓を作成し、赤、黄および緑の有色光を照射し、孵化後色の嗜好試験をおこなった。対照群においては緑色の累積停滞時間が長かった。赤色照射群では緑の累積停滞時間が短く、黄色照射群では黄色区の滞在時間が長くなった。緑色照射群でも黄色区への累積滞在時間が長くなった。このことより、黄色および緑色照射群では黄色を選択するようになる傾向が示唆された。(1)孵化中後期に卵殻に窓を設け、各種光線緑、赤、黄を照射する技術は確立し、現在孵化率は60%を越えている。現在、卵殻内膜の除去も手がけているところである。なお、卵殻、卵殻内膜の除去後のシール素材として、透明テープ、サランラップなど種々の効果も試した結果、透明テープが効果的であることが分かった。(2)色覚評価の行動実験に着手して、色つき餌の嗜好性および色つき迷路の選択性を調べ、迷路実験により赤、と緑照明が行動上では効果的であることが分かった。特に赤色について活動性を増すことが明かとなった。(3)発生初期からステージをおった網膜の組織学的解析によると、網膜は孵化中12日目から大きく分化していることが分かった。また、網膜の質的解析では色覚に係る油滴の発現は孵化中13日頃に起きることも分かった。(3)網膜投射を受ける視蓋の分化も網膜の分化に対応していることが分かった。(4)本研究の基礎となる視覚器、特に網膜の構造的変化について各孵卵時期ごとに解析し、以下の点も明かとなった1)孵卵7-8日に急速な細胞の増加がみられること。2)孵卵13日頃より網膜の層構造が孵化後のそれに近い構造になること。3)視覚認識の重要な要素となる視細胞の油滴形成が網膜の層構造完成とほぼ同時期であること。

また、形成された各種の油球の比は各ステージとも赤1:オレンジ1:緑1:透明2の割合になっていた。さらに、油球の大きさは孵卵13日目で1.3ミクロン、16日目で2.6ミクロン、孵化1日目で3ミクロンと次第に大きくなっていることが分かった。(2)組織化学的検討:網膜形成におけるアミンニューロンの形成時期を免疫組織学的方法で調べたところ、アミン含有ニューロンは孵卵13日目の網膜の顆粒層に出現し、そのご神経突起を伸ばし成長することが分かった。成長した神経突起は網膜層に平衡に放射状に伸びていた。(3)色嗜好の行動学的検証:孵卵14日目のウズラの卵に窓を作成し、赤、黄および緑の有色光を照射し、孵化後色の嗜好試験をおこなった。対照群においては緑色の累積停滞時間が長かった。赤色照射群では緑の累積停滞時間が短く、黄色照射群では黄色区の滞在時間が長くなった。緑色照射群でも黄色区への累積滞在時間が長くなった。このことより、黄色および緑色照射群では黄色を選択するようになる傾向が示唆された。
基底膜による上皮組織の形成および再生の制御機構

上皮細胞の細胞間接着部位に局在するインテグリンα3β1-CD151複合体の生理機能を解明するため、green fluorescent protein(以下GFP)を付加したCD151をヒトA431細胞に過剰発現させ、細胞間接着への影響をカルシウムスウィッチ法を用いて解析した。その結果、CD151を過剰発現させた細胞では、対照の細胞と比べて、カルシウム再添加後の細胞接着形成が有意に亢進していることがわかった。特に、E型カドヘリンのpuncta形成が有意に促進されていた。また、カルシウム再添加後のE型カドヘリンのpuncta形成はプロテインキナーゼCの阻害剤で強く阻害され、一方で同キナーゼを活性化するフォルボールエステルで促進された。以上の結果は、CD151が関与する細胞間接着形成にプロテインキナーゼCが関与していることを強く示唆している。実際、CD151の過剰発現によるE型カドヘリンのpuncta形成の亢進に伴って、プロテインキナーゼCのアイソフォームの一つが強く細胞間接着部位に集積することが観察された。次に、CD151による細胞間接着の制御の分子機構を明らかにするため、CD151から細胞内に伝達されるシグナルについて解析した。具体的には、基質に固相化したCD151抗体を用いて細胞表面のCD151を捕捉したところ、細胞内蛋白質(特にsrc family kinase)のチロシンリン酸化が強く誘導されることを見いだした。この結果は、CD151による細胞間接着の制御にsrc family kinaseが関与していることを強く示唆している。テトラスパニンCD151は、インテグリンα3β1と複合体を形成し、上皮の細胞-細胞間接着面に局在するが、その機能はこれまで不明であった。我々は、CD151を培養上皮細胞に過剰発現させると、上皮細胞の細胞間接着が増強されることをこれまでに見いだしている。CD151過剰発現による細胞間接着の増強の分子機構を明らかにするため、抗CD151抗体を固相化した基質上に細胞を播種し、細胞応答を調べたところ、著明な糸状仮足の形成が誘導されることが判明した。この糸状仮足の誘導は、Cdc42の活性化に依存的におこり、プロテインキナーゼCの阻害剤で強く阻害された。また、CD151を過剰発現させた細胞では、Cdc42の活性化と並んで、Racも強く活性化されることがわかった。さらに、CD151過剰発現細胞では、細胞膜裏打ちアクチン線維束に結合したE-カドヘリン量が有意に増加していた。CD151の細胞内領域には、プロテインキナーゼCが結合することが最近報告されているので、CD151はプロテインキナーゼC依存的にCdc42をまず活性化し、それによって細胞間接着の初期過程の律速段階であるadhesion zipper形成を促進している可能性が考えられる。また、CD151はCdc42に引き続いてRacも活性化する。これには、adhesion zipper形成に伴うカドヘリンのホモフィリックなtrans結合も関与していると推定される。Racの活性化は細胞膜裏打ちアクチン線維束の形成を亢進し、この細胞膜裏打ちアクチン線維束へのカドヘリンの結合が増加することによって、カドヘリン依存的な細胞接着がより強化されるものと推定される。
白質・ミエリン障害を病因とする統合失調症サブグループの同定

統合失調症、自閉スペクトラム症、双極性障害のゲノム解析により、発症に強く寄与するゲノム変異をRTN4RおよびCX3CR1において同定し、その生物学的意義を明らかにした。具体的には、Nogo受容体であるRTN4Rで同定されたゲノム変異は、in vitro機能解析からパートナー分子であるLINGO-1との相互作用の減弱をもたらし、神経細胞の生長円錐の形成に影響を与えることを明らかにした。また、脳内免疫細胞ミクログリアにおいて発現するCX3CR1で同定されたゲノム変異は、脂質分子との相互作用低下により構造安定性を損うこと、Aktを介したシグナル伝達を阻害することを明らかにした。統合失調症患者を対象として、アレイCGHを用いてゲノムコピー数変異(CNV)解析を実施した。その結果、頻度やサイズの異なるCNVを多数同定した。この中にはグリア細胞の機能に影響を与えうる稀な(<1%)欠失・重複も含まれていた。例として、CSK遺伝子を含む3.8Mbの重複、ZNF488遺伝子を含む5.8Mbの重複、SOX5遺伝子の複数のエキソンを含む299kbの重複、ADAM22遺伝子の複数のエキソンを含む192kbの欠失、TGFB1の複数のエキソンを含む30kbの欠失、PTENのエキソンを含む29kbの重複、ADORA2A遺伝子を含む1.3Mbの重複がある。ADORA2A遺伝子を含む領域の重複は、統合失調症との関連が報告されており、本研究では3名の統合失調症患者で同定した。ADORA2A(adenosine A2a receptor)はアストロサイトやミクログリアで発現することが確認され、アストロサイトの増殖・活性化、ミクログリアの増殖・NGF放出促進に関与すると報告されている。統合失調症の発症には多数の稀な変異が関与する可能性が指摘されており、上述のCNVがグリア細胞の機能に影響を与えて病因・病態に関与する可能性が考えられる。今後もサンプル数を増やしてCNV解析を継続し、グリア細胞に機能的影響を及ぼす稀なCNVを同定する。同定したCNVに関しては、患者の臨床表現型を確認し、グリアアセンブリの機能不全に起因する統合失調症患者の特徴を明らかにする。平成25年度に引き続き、精神疾患(統合失調症:SCH、双極性障害:BPD、自閉スペクトラム症:ASD)患者および健常者のゲノム、脳画像データ、リンパ芽球様細胞株の収集を進めた。高解像度アレイCGHを用いたSCH, BPDのゲノムコピー数変異(CNV)解析では、前年度報告したグリア関連遺伝子に影響を与える稀なCNVに加え、22q11.2欠失、3q29欠失を含む発症に強い影響を与える既報のCNVを複数同定した。特に22q11.2欠失はSCH, ASDの発症リスク因子だが、近年の画像研究から白質の形態学的異常との関連が報告されている。引き続き、サンプルサイズを拡大してCNV解析を実施する予定である。さらにSCH, ASDの病態に関与することが想定されるグリア関連の6遺伝子について、次世代シーケンサーのIon torrentを用いたシーケンス解析を実施し、患者300名余りのシーケンスが終了した。シーケンス結果は、同定された各変異のQualityとCoverageを用いてfilteringを実施した。さらに、SCH,ASDの病態に強く関連する可能性のある変異を同定するために、1)頻度が稀(1%未満)、2)各種データベースに収載されていない、3)Polypohen-2やSIFTを用いたin silico解析によりタンパク質機能変化が予想される、変異を抽出した。その結果、上述の6遺伝子より、7個の稀なミスセンス変異を同定した。今後は、これらの変異の病態への関与をより詳細に検討する予定である。統合失調症や自閉スペクトラム症の病態に関与することが想定される6つのグリア関連遺伝子について、次世代シーケンサー(Ion torrent)を用いたシーケンス解析を実施し、患者572名のシーケンスを終了した。同定した一塩基変異の中で、両疾患の病態に関与する変異を同定するために、1)頻度が稀(1%未満)、2)各種データベースに収載されていない、3)Polypohen-2やSIFTを用いたin silico解析によりタンパク質機能変化が予想される、変異を抽出した。抽出された変異の中で強く病態に関与する可能性が示唆された変異については、独立サンプル(患者1700名、健常者2000名)を用いた関連解析を実施した。その結果、RTN4RのR292Hが統合失調症と有意な関連を示した。加えて、九州大学神庭、藤田保健衛生大学池田と共同して、統合失調症や双極性障害のゲノムサンプル収集を進め、アレイCGHを用いたゲノム解析を実施し、病的意義を有するCNVを同定した。さらに、グリア関連遺伝子のゲノム変異から精神疾患の病態を明らかにするため、九州大学神庭と共同で昨年度同定したAIF1(Iba1)欠失をもつ双極性障害患者から血液を得てiPS細胞の樹立を行った。また、名大においてミクログリア様細胞(iMG)誘導を可能とするため九州大学神庭研においてiMG誘導の見学および技術習得を行った。平行して、ASTN2欠失をもつ統合失調症患者から血液を得てiPS樹立も進めた。

グリア関連遺伝子のシークエンス解析とそれに続く関連解析から、統合失調症の発症に比較的強い影響を及ぼしうる頻度の稀な一塩基変異を同定し、グリア関連遺伝子が統合失調症の病因に関与することを示唆する知見を得た。さらにグリア関連遺伝子にゲノム変異を持つ精神疾患患者からiPS細胞の樹立を進めた。以上から、現時点では概ね順調に進展していると考えられる。H27年度に引き続き、九州大学神庭と共同して、双極性障害、統合失調症、自閉スペクトラム症の患者からゲノムの収集を実施した。ゲノムコピー数変異(CNV)解析では、これまでにグリア関連遺伝子を含み、発症への関連が示唆されるCNVを複数の患者で同定した(ASTN2欠失、AIF1欠失)。統合失調症、自閉スペクトラム症を対象に、ミクログリア特異的に発現する遺伝子CX3CR1のターゲットシーケンス解析を実施し、発症へのオッズ比が8.3の頻度の稀なミスセンス変異A55Tを同定した。さらにこの変異は、in silicoの構造解析から、Helix8との相互作用が低下して構造安定性が失われること、in vitro機能解析でAktを介したFractalkine/CX3CR1シグナル伝達が低下することを明らかにした。上述のCNV解析から見出したグリア関連遺伝子ASTN2についてノックアウトマウスをCRISPR/Cas9法を用いて作成し、行動解析から自発運動活性の増大傾向を認めた。死後脳解析では、統合失調症で構造的異常が報告されている上側頭回におけるミエリン・オリゴデンドロサイトの組織形態学的変化を、抗MOG抗体を用いて検討した。その結果、罹病期間が30年以上を超える患者の上側頭回middle layerにおいて、MOGの分布の有意な減少を認めた。iPS細胞を用いた検討では、AIF1(iba1)欠失双極性障害患者およびASTN2欠失統合失調症患者から、iPS細胞の樹立を進めた。グリア関連遺伝子のゲノム解析から、CX3CR1の稀なミスセンス変異A55Tが統合失調症や自閉スペクトラム症の発症に比較的強い影響を与えることを見出し、このミスセンス変異の機能的意義をin silicoおよびin vitroの解析から明らかにした。また統合失調症や自閉スペクトラム症のCNV解析から見出したASTN2のノックアウトマウスの解析から、行動学的異常を見出しつつあり、今後その分子病態が明らかになると期待できる。以上から、おおむね順調に進展していると考えられる。統合失調症、自閉スペクトラム症、双極性障害のゲノム解析により、発症に強く寄与するゲノム変異をRTN4R、CX3CR1、ASTN2、AIF1 (IBA1)等のグリア関連遺伝子において同定し、それぞれのゲノム変異の生物学的意義を明らかにした。
カルテジアン・ジョイン・システムに基づく新しいパターン認識法の研究

1.本年度の報告本研究は、カルテジアン・ジョイン・システムとよぶ数学モデルに基づくパターン認識法の開発を目的としていた。本年度は、(1)カルテジアン積空間上で類別カテゴリー間の大局的構造を把握するプログラム(2)カルテジアン積空間上に定義された、ジョインとよぶ演算に基づく類別カテゴリーの記述プログラム(3)類別カテゴリー間の分離に本質的な特徴を発見する、0-1整数計画に基づく特徴選択プログラム(4)識別用プログラム以上4つの基本プログラムの開発を終了し、本研究費で購入したマイクロ・コンピュータ上での動作確認を完了した。本研究の成果の一部は、内外の研究会で既に発表したが、現在「カルテジアン・ジョイン・システムに基づくパターン認識法--特徴選択の一般的ツールとして--」という論文を作成中(電子・情報・通信学会論文誌に投稿予定)。2.今後の計画幾つかの予備的実験によって本研究の方法の能力を評価してきたが、対象から知識を獲得するための試行錯誤的過程において特に有用であると感じている。したがって、今後パターン認識系設計者のための知識獲得支援システムとしての完成度を高める努力もしていきたいと考えている。
ペア型免疫細胞受容体の免疫監視機構における役割

申請者らは最近,マクロファージや樹状細胞,顆粒球,肥満細胞などに発現する新しいペア型免疫グロブリン様受容体遺伝子群MAIR-I, MAIR-IIを同定した(J Exp Med,2003)。MAIR-IとMAIR-IIの細胞外領域は互いに90%程度の相同性を示すが、MAIR-Iは細胞内領域にITIMを有し、SHIPを介して抑制性シグナルを伝え、IgE結合によって惹起される肥満細胞からの脱顆粒反応を抑制した。一方、MAIR-IIはDAP12と会合し、マクロファージからの炎症性サイトカインの分泌を亢進させた。これら正と負の受容体がどのようにリガンドを認識し、どのような免疫応答を決定するかを明らかにするためには、これらのリガンドをそれぞれ同定することが必須である。本研究ではMAIR-I, MAIR-IIが認識するリガンドをそれぞれ同定し、それらとMAIR受容体との結合による免疫応答の様式を明らかにすることを試みた。そのため、MAIR-I, MAIR-IIの細胞外領域にIgGFc部分を結合させたキメラ蛋白を作製した。これを用いて、それぞれのリガンドを発現する細胞をスクリーニングし、すでにいくつかの発現する細胞株を同定した。さらにそれらの細胞株のうちリガンドを最も多く発現していると思われたEL4細胞株からレトロウイルスベクターを用いて発現クローニングのためのcDNAライブラリーを作製した。一方、肥満細胞におけるMAIR-Iの抑制シグナル伝達にはIgE受容体との共佳境が必要であることを明らかにした。
地表検出器の開発とAGASA検出器による較正

山梨県で2004年まで稼働した明野広域空気シャワー観測装置(AGASA)は理論的予測を超える量の極高エネルギー宇宙線フラックスを観測したが、その源は既知の天体とは同定されなかった。この結果を受けて、本計画研究では、より軽量・大型・高精度のシンチレーション地表検出器を開発・製造し、計507台をユタ州に展開して、大面積・高精度のテレスコープアレイ地表検出器観測装置を完成させた。本観測装置はAGASAの約9倍の感度を持ち、2008年3月に定常観測を開始した。10^<20>eV以上の一次宇宙線の存在とクラスターの存在を確立するためには、エネルギーと到来方向の決定精度を良くする事が必須である.エネルギーの決定精度にはシンチレーション検出器の粒子数測定、クラスターの発見には角度測定精度が良くなければならない.我々はこの目的のために大型の薄型シンチレーション検出器を開発し、その基本特性の向上を図ってきた.地表検出器としてシンチレーション検出器(3m^2)を採用することになった.そこで、現物の2分の1のプロトタイプ検出器を製作し、その特性について詳細な測定を行った.到来方向の高精度な測定(1度)するためには時間の測定精度で20ns程度が必要である.GPSを利用した時間測定を行い相対時刻に関しては目標の精度が達成できることを確認した.続いて世界標準時との絶対時間の比較を行い、20nsの精度を確保出来るようにテストを進める予定である.各検出器からのデータ転送は無線LANを用いて行われ、サブステーションまで最大15kmのデータ転送が必要となる.これまでに無線LANシステムのテストを行い、先ず転送距離8kmを達成した.今後は高感度の送受信アンテナを用い15kmの達成を図る.太陽電池パネルと鉛蓄電池を用いた自立型電源装置を開発し、3月から現地ユタ州ミラード郡に設置し実機テストを行っている.現在開発中のFADCボードは12bitsFlash-ADCを2台装備し、FPGAによりトリガー信号を作成する.これらの制御は全てオンボードのCPUによりなされ、第1フェーズのプロトタイプはテストが済み、現在は第2フェーズのボードが完成している.これらの機器を用いて平成16年5月から東大宇宙線研究所明野観測所においてシンチ検出器、FADCボード、GPS,無線LAN、太陽発電電源システムをフル装備した5台のシステムを用いて、実機テストを行う予定である.来年度はユタ州ミラード郡においてこれらの検出器の展開と観測の開始を予定している.10^<20>eV以上の一次宇宙線の存在とクラスターの存在を確立するためには、エネルギーと到来方向の決定精度を良くする事が必須である.エネルギーの決定精度にはシンチレーション検出器の粒子数測定、クラスターの発見には角度測定精度が良くなければならない.我々はこの目的のために大型の薄型シンチレーショシ検出器を開発し、その基本特性の向上を図ってきた.地表検出器としてシンチレーション検出器(3m^2)を採用することになった.そこで、現物の2分の1のプロトタイプ検出器を製作し、その特性について詳細な測定を行った.到来方向の高精度な測定(1度)のるためには時間の測定精度で20ns程度が必要である.GPSを利用した時間測定を行い相対時刻に関しては目標の精度が達成できることを確認した.続いて世界標準時との絶対時間の比較を行った結果、所定の性能20nsの精度を確保出来る事が確認された.各検出器からのデータ転送は無線LANを用いて行われ、サブステーションまで最大15kmのデータ転送が必要となる.これまでに無線LANシステムのテストを行い、高感度の送受信アンテナを用い転送距離15kmを:達成する事が出来た.太陽電池パネルと鉛蓄電池を用いた自立型電源装置を開発し、平成16年3月から現地ユタ州ミラード郡に設置し実機テストを行っており,その結果は所定の性能を満たしている事が確認出来た.現在開発中のFADCボードは12bitsFlash-ADCを2台装備し、FPGAによりトリガー信号を作成する.これらの制御は全てオンボードのCPUによりなさる.これらの機器を装備した実機を平成16年12月から現地ユタ州ミラード郡に18台設置し、テストを行った.各々の検出器において約10km程度のデータコミュニケーションなど,所期の性能が達成している事が確認された.10^<20>eV以上の一次宇宙線の存在とクラスターの存在を確立するためには、エネルギーと到来方向の決定精度を良くする事が必須である.エネルギーの決定精度にはシンチレーション検出器の粒子数測定、クラスターの発見には角度測定精度が良くなければならない.我々はこの目的のために地表検出器として大型の薄型シンチレーション検出器(3m^2)を開発した。その基本特性の測定を行いながら性能の向上を図り,平成16年度に最終モデルを完成した。

平成16年度にその特性について,詳細な測定と実地でのテストを行うために20台のエンジニアリングアレイを現地の観測場所に設置し,所期の成果を確認した。今年度は5月から12月にかけて350台の検出器を東京大学宇宙線研究所(柏市)において製作を行った。これらの検出器全てに対しては,1台ずつ宇宙線の測定を通して詳細な性能チェックを行った。また,複数の検出器に対しては位置によるレスポンスの一様性の測定を行い,所期の(概ね10%程度の変化)性能が得られていることを確認した。これらの検出器に使用する全ての光電子増倍管に対して光電面の応答性の一様性について測定を行い,所期の性能を満たす700本を選択した。その後,ユタ州ミラード郡デルタに250台を移送し,現地において平成18年1月中旬より最終組み立てを行った。その後,再び全検出器に対して日本で行ったのと同じ方法で性能チェックを行い,平成18年3月に250台の全ての検出器の稼働を確認した。今後は,これらの検出器にエレクトロニクスを組み込を行った後,平成18年6月頃現地ミラード郡の観測場所に展開,配置する予定である。また,現在宇宙線研究所にある残りの100台の検出器は平成18年8月頃にデルタに送り,同様なテストの後観測場所に設置する予定である。10^<20>eV以上の一次宇宙線の存在とクラスターの存在を確立するためには、エネルギーと到来方向の決定精度を良くする事が必須である.エネルギーの決定精度にはシンチレーション検出器の粒子数測定、クラスターの発見には角度測定精度が良くなければならない.我々はこの目的のために地表検出器として大型の薄型シンチレーション検出器(3m^2)を開発した。その基本特性の測定を行いながら性能の向上を図り,平成16年度に最終モデルを完成した。最高エネルギー宇宙線の放射機構と放射源天体を明らかにするために始まった特定領域研究の中で,本研究では,最高エネルギー宇宙線がつくる空気シャワーを観測するための地表検出器アレイの開発を担当してきた。
カーボニック・アンヒドラーゼの抗原分子解析と皮膚疾患での特異自己抗体の動態

先ず、イムノブロット法を用いて還元状態のカーボニック・アンヒドラーゼ(CA)に対するリウマチ性自己免疫疾患患者(RAD)血清の反応性を検討した。結果、全ての抗CA血清がヒトCAI及びIIの両方と反応した。この両アイソザイムはアミノ酸配列の相同性が高いことから、抗原として交差していると思われた。アイソザイムIIIからVIIについては、現在市販の精製抗原がなく、バクテリアを用いたリコンビナント抗原を作成中である。続いて無作為に取り出したRAD患者血清111検体について非還元状態のヒトCAIIを用いELISA法で検討した。結果、全身性エリテマトーデスの31.6%、シェ-グレン症候群の20.8%、全身性強皮症の27.5%、皮膚筋炎及び多発筋炎の22.2%が陽性であった。この結果は先のイムノブロットの結果とほぼ一致した。抗体の存在と特定の病態、症候群との関連は現在尚検討中である。CAI及びIIのエピトープを合成ペプチドを用いて検索した。結果、自己抗体はN端付近のαヘリックス構造及びzinccore周囲の活性部位の一次構造を認識していた。これは抗CA抗体がCA活性を阻害するとの見解に根拠を与えるものである。一方健常人の中にもCAに対する自然発生自己抗体を有する個体があるが、これらはC端を特異的に認識していた。これはRADに見られる抗体とは明らかに異なり、病的抗体の発生機序が自然発生自己抗体のそれとは別であることを裏付けた。また臨床面から、CA欠損症類似の病態を呈したRAD患者から高活性の抗CA抗体を検出、病態への関与を推察した。我々は過去、リウマチ性自己免疫疾患(RAD)の血清中にカーボニック・アンヒドラーゼに対する自己抗体(抗CA抗体)がしばしば観察されることを発見し、その病因的意義についての検討を行ってきた。本研究では、まず各種RADの患者血清の抗CA抗体をスクリーニングし、疾患や病態との関連を検討すると共に、抗CA抗体のエピトープを検索するためのELISA法の確立し、その結果から更に詳細な病態との関連や酵素活性に対する影響を検討した。患者血清のスクリーニングは、精製されたCAのホロタンパクを抗原に用いて免疫ブロット法、及びELISA法を用いて検索した。今までに総計154検体の血清を検索し、SLE、シャーグレン症候群、PSSを中心に39例の抗CA抗体陽性検体を認めた。現在の所、抗CA抗体と疾患、症候の間に特異的な関連は認めていない、今後さらに症例を追加し、また経過と抗CA抗体価の推移を前向き調査していく予定である。抗CA抗体のエピトープ検索はまず、その一次構造におけるエピトープを決定すべく、ペプチド断片を用いたELISA法の抗原の作成を行った。CAアイソザイムII全長のアミノ酸配列を20に区分し、各々アミノ末端にシステインを附加した14個のアミノ酸からなるペプチド断片を設計した。これをペプチドシンセサイザーで合成し、更に、精製したウシ血清アルブミンとカップリングさせた後、精製して抗原とした。現在、これを用いたELISA法のブロッキング等の条件設定を行っている。来年度の継続を待って実際のエピトープ検索が行われる。また患者末梢血から抗CA抗体を産生する不死化B細胞株の樹立はEBウイルスを用いて精力的に行ってきたが、今の所目的とするクローンは得られていない。来年度も更に続行する予定である。

アイソザイムIIIからVIIについては、現在市販の精製抗原がなく、バクテリアを用いたリコンビナント抗原を作成中である。続いて無作為に取り出したRAD患者血清111検体について非還元状態のヒトCAIIを用いELISA法で検討した。結果、全身性エリテマトーデスの31.6%、シェ-グレン症候群の20.8%、全身性強皮症の27.5%、皮膚筋炎及び多発筋炎の22.2%が陽性であった。この結果は先のイムノブロットの結果とほぼ一致した。抗体の存在と特定の病態、症候群との関連は現在尚検討中である。CAI及びIIのエピトープを合成ペプチドを用いて検索した。結果、自己抗体はN端付近のαヘリックス構造及びzinccore周囲の活性部位の一次構造を認識していた。これは抗CA抗体がCA活性を阻害するとの見解に根拠を与えるものである。一方健常人の中にもCAに対する自然発生自己抗体を有する固体があるが、これらはC端を特異的に認識していた。これはRADに見られる抗体とは明らかに異なり、病的抗体の発生機序が自然発生自己抗体のそれとは別であることを裏付けた。また臨床面から、CA欠損症類似の病態を呈したRAD患者から高活性の抗CA抗体を検出、病態への関与を推察した。
地球惑星科学仮想データセンターの構築と機能の実証的研究

大小様々な組織が提供する地球惑星科学関係のデータベースを、メタデータのデータベースを核として、サイバースペースで結合し、異分野横断・学際研究推進の母体となる『地球惑星科学仮想データセンター』創出の実現可能性を実証的に研究した。実施にあたっては、大学間連携プロジェクト『超高層大気長期変動の全球地上ネットワーク観測・研究』(IUGONET)と密接に協力し、使用するメタ情報フォーマットを検討、SPASE data modelが最適であると判断した。IUGONETと協力してシステムを開発し、微気圧観測データと地磁気データを具体例として、メタデータの入力およびデータベースの構築を実施した。世界資料センターや研究機関のデータ部門、或いは分野毎の仮想観測所(Virtual Observatory)などを、地球惑星科学メタ情報データベースを核として、サイバースペースで結合し、異分野横断・学際研究推進のための母体となる『地球惑星科学仮想データセンター』創出の実現可能性を実証的に研究する。具体的には、(1)テレビ会議装置とネットワークを駆使し、分野毎のデータセンターや仮想観測所、大学その他の研究機関に分散して所属するデータ関係者の日常的情報交換と共有の場を作り出す。(2)仮想データセンターが主導して、地球惑星科学メタ情報データベースの基となるメタ情報をできる限り広範囲かつ細部に亘って継続的に調査・収集する。(3)メタ情報データベースの最適なデータ形式を決定し、検索・表示システムを開発する。H20年度には、10機関以上の組織が同時に会議を行うための多地点接続制御装置を当予算で新規購入・設置した。また、テレビ会議システムを3セット購入・設置し、これらの利用を開始した。地球惑星科学仮想データセンターのホームページを京都大学に作成し、公開した。欧米からデータ関係者を産業技術研究所および東京に11月招へいし、国際メタ情報交換の技術的・組織的問題点について情報交換と今後の協力について打ち合わせを行った。8月にはオーストラリアで開催されたWPGM2008会議、10月には、ウクライナで開催されたCODATA会議に出席し、関係するセッションで講演を行った。H20年度には当研究計画の代表者も参加し同年度から開始した大学間連携研究『超高層大気長期変動の全球地上ネットワーク観測・研究』と密接に協力して、メタ情報フォーマットの調査と適用可能性の検討およびメタ情報を保持するリポジトリソフトウェアの調査を行った。その結果、大学間連携研究事業で採用することにしたSPASE data modelを当研究計画でも採用することにし、地磁気データを具体例として、メタ情報の入力を開始した。2010年2月2日-3日には、名古屋大学において研究集会『地球科学メタ情報のデータベース化:現状とその利用』を開催し、研究計画の進捗状況を報告すると共に、上記大学間連携事業関係者と情報交換を行った。世界資料センターや研究機関のデータ部門、或いは分野毎の仮想観測所(Virtual Observatory)などを、地球惑星科学メタ情報データベースを核として、サイバースペースで結合し、異分野横断・学際研究推進のための母体となる『地球惑星科学仮想データセンター』創出の実現可能性を実証的に研究することを進めた。具体的には、H20年度に当研究計画の代表者も参加し同年度から開始した大学間連携研究『超高層大気長期変動の全球地上ネットワーク観測・研究』と密接に協力して、メタ情報フォーマットとリポジトリソフトウェアを選定した。すなわち、SPASE data modelとDSPACEを当研究計画でも採用することにし、微気圧観測データと地磁気データを具体例として、メタ情報の入力を開始した。2011年2月2日-3日には、名古屋大学において研究集会『地球科学メタ情報のデータベース化:現状とその利用』を開催し、研究計画の進捗状況を報告すると共に、上記大学間連携事業関係者と情報交換を行った。また、テレビ会議システムを活用し、他機関研究者達と頻繁に打ち合わせや情報交換を行った。また、ロシア、英国の研究者達とメタデータや実時間観測データ交換について2010年12月のAGU秋季大会などで情報の交換あるいはデータ交換の打ち合わせをした。また、2011年9月3日から6日まで、京都大学にてThe 1^<st> ICSU World Data System Conferenceが開催されたが、当研究グループはその開催にあたっても平成22年度から中心的に準備を進め、その過程において分野横断的データシステムに関し、世界各国の、かつ、さまざまな分野の研究者と情報交換をすることができた。
比較ゲノミクス・メチロミクス・トランスクリプトミクスでのエピゲノム駆動進化の実証

ピロリ菌の日本の一つのコレクションからの30株について、イルミナのメイトペア法で全ゲノム解読を行った。集団構造を染色体ペインティング法で明らかにした。制限修飾系の有無、標的認識配列のアミノ酸配列による分類をおこない、多様性を明らかにした。逆位を網羅的に解析しシンテニーの進化を明らかにした。集団構造と制限修飾系とシンテニーの間には、密接な関係がないことを示した。世界のピロリ菌株の全ゲノム配列を比較し、適応的なアミノ酸置換の起きたコドンを探索した。外膜タンパク質、DNAメチル化系の遺伝子内にあった。種内の全ゲノム配列から相同組み換えのホットスポットを探索する方法を開発した。PabIファミリーの制限修飾遺伝子が、東アジア株の一部とアメリカ先住民株で、失われていることを発見した。制限修飾系の配列特異性伝子をノックアウトした。それらのPacbioによるメチローム解読から、メチル化配列を決定した。それらのトランスクリプトーム解析(RNA-seq, Illumina)から、発現変動遺伝子を同定した。それらの機能カテゴリー解析から、影響される適応的形質を推定した。運動性、酸化ストレス耐性、酸耐性など、適応的形質が影響されていることを実験で証明した。一つの形質に複数のメチル化系が逆の制御を及ぼすことを発見した。メチル化酵素遺伝子の間に互いの遺伝子発現に影響する複雑なネットワークを発見した。同一家族メンバーからのピロリ菌について、全ゲノム配列をイルミナショットガンで解読し、非同義アミノ酸置換が病原遺伝子、外膜タンパク質遺伝子、DNAメチル化系遺伝子に起きていることを発見した。以上の結果は、「エピゲノム駆動進化仮説」を支持する。日本、中国、インドの100株を収集し、Pacbioでゲノム、メチロームを解読した(ゲノム支援)。27年度が最終年度であるため、記入しない。日本、中国、インドの100株を収集し、一部については、ゲノムDNAを単離した。Pacbioによるゲノム、メチローム解読に供した。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
グローバルな生産ネットワークへの参加と国内技術開発・領域の変化に関する研究

本研究では、OECDが作成する国際産業連関表を用いて、国際生産ネットワークにおける位置や重要性を示す指標を計測し、それと日本を含む主要国企業の技術水準や領域の変化との関係を定量的に分析する。国際生産ネットワーク指標をみると、製造業では、日本や西欧、米国などがネットワーク中心性を下げたのに対し、中国がネットワークの中心部へと移動した。一方、米国は製造業では周縁部へと移っているが、サービス業ではより中心性を高めている。このようなネットワーク内での位置の変化と各国企業の技術領域の変化との関係を比較分析する。日本企業については、基課題の研究において、国際生産ネットワーク内における相対的な位置が周縁部に移ったことが、外国の産業や企業からの技術スピルオーバーの低下を通じて、日本企業の特許出願に負の影響を及ぼしたことを示した。本研究では、他の主要国企業も分析に加え、各国産業の国際生産ネットワーク内での相対的位置と各国企業の技術力との関係を分析する。当該年度(平成30年度)は、研究代表者が客員研究官を務める文部科学省科学技術・学術政策研究所のデータベースを利用して、各国企業の財務データ(ビューロ・ヴァン・ダイク社のORBISデータベース)や特許データベース(PATSTAT)から各国データを抽出、データ整理作業を行った。企業データ、特許データともに膨大なデータ数であり、データ整理に多くの時間を要した。また、日本企業については、企業間取引関係データの整理分析を進めた。海外の共同研究者とは、主にメールを通じて、データセット構築や予備分析について随時相談している。ネットワーク指標の作成は、OECD研究員のJonathan Timmis氏と協力し、特許の特徴等に関する指標は、フランス銀行研究員のAntonin Bergeaud氏と協力して作成を進める。OECDシニアエコノミストのChiara Criscuolo氏には、主に分析枠組の構築と論文執筆面で協力する。内定年度:2017本研究では、OECDが作成する国際産業連関表を用いて、国際生産ネットワークにおける位置や重要性を示す指標を計測し、それと日本を含む主要国企業の技術水準や領域の変化との関係を定量的に分析する。
伴性劣性遺伝性水頭症に関する研究-分子遺伝学的研究および遺伝子診断法の確立-

1.伴性劣性遺伝性水頭症の臨床像日本こども病院神経外科医会会員の協力を得て自験6家系14症例を含む15家系30症例についての臨床像を検討した。(JNeurosurg印刷中)(1)診断時期;在胎21週より生後2ケ月の間に診断した。胎生期に診断した18例はすべて胎児エコーで、生後診断した12例はCTあるいは気脳室撮影で診断した。(2)画像所見;シャント前CT(12例)では、著明な側脳室拡大を全例に認めたが、第3脳室の大きさは症例により異なった。シャント後CTでは、縮小した脳室壁は不整な波状の形態を示し、一側の非対称な縮小を認めた例が多かった。MR画像(6例)では、中脳水道は4例で開存しており、脳梁欠損、視床癒合、四丘体平坦化、小脳虫部前葉萎縮、硬膜肥厚などを大部分の症例で認めた。(3)中枢神経系外合併奇形としては、拇指の内転屈曲を77%に認めた。(4)治療および予備;無治療の10例では9例死亡、1例のみ重度精神運動発達障害を伴い生存中である。シャント施行20例では、14例生存中で11例は重度、3例は中程度の精神運動発達遅延を後遺している。(5)剖検(4例);中脳水道は全例で開存していた。以上のことから、本症は単なる中脳水道閉塞による水頭症ではなく、他の合併奇形を伴う複雑な病像を示す疾患であることが反映した。2.分子遺伝学的研究近年の分子遺伝学的研究により、本症の原因遺伝子座位がXq28に存在することが明らかとされ、本座位に存在するL1遺伝子変異が現在までに数家系で報告された。自験例で検討した結果、欧米と同一の変異は認めず、1家系においてL1遺伝子のヌクレオチド残基1963位に従来報告されていない変異を認めた。(投稿中)1.伴性劣性遺伝性水頭症の臨床像日本こども病院神経外科医会会員の協力を得て自験6家系14症例を含む15家系30症例についての臨床像を検討した。(投稿中)
川崎病血管炎から動脈硬化性変化への進展に関する増悪メカニズムを探る

血管障害や動脈硬化の発症に、炎症や酸化ストレス、血管内皮機能障害の重大な関与が知られている。これらはサイトカイン産生や血小板活性化を惹起し、さらに病態が進展する。本研究では、川崎病における炎症、酸化ストレス及び血小板活性化について検討した。急性期において、奏功例ではIVIGにより酸化ストレスおよび炎症性マーカーは速やかに低下したが、IVIG不応例では治療前の抗酸化マーカーが低値であり、治療後も酸化ストレス及び炎症性マーカーの高値が続いた。血小板の活性化は半年以上も持続していた。酸化ストレス及び血小板活性化の評価は、川崎病の病態把握に非常に有用であり、臨床的意義が示された。血管生物学的研究の進歩により、血管障害や動脈硬化の発症には炎症と酸化ストレスがtriggerとなり、血管内皮機能障害を中心とした病態から硬化性病変を形成していくことが明らかとなってきた。また、この血管内皮機能障害により種々のサイトカインネットワークの活性化により血小板活性化が惹起され、血管障害や動脈硬化性病変が進展していく流れも示されてきた。本研究では、川崎病において、血管障害および動脈硬化性変化の発現にとって主要な危険因子といえる酸化ストレスおよび血小板活性化の存在とその臨床的意義について臨床的な面から検討した。血小板活性化マーカーとしては血小板由来マイクロパーティクル(以下PDMP)を、酸化ストレス指標として血中ヒドロペルオキシドと血中還元力のバランスを評価した。川崎病急性期における血小板活性化は我々の予想をはるかに上回り、6か月以上の長期にわたって持続していた。このため、川崎病では血管障害と硬化性変化への進展に血小板活性化が長期にわたって関与する可能性が明らかとなり、抗血小板療法の臨床的意義が初めて示された。また、PDMPは病態の評価に有用な指標となる可能性が示された。また、酸化ストレス状態も急性期の炎症所見が消失した3か月以後も持続していた。このことは、より長期にわたってサイレントな血管障害進展の環境が続いていることを意味しており、酸化ストレスが川崎病の病態に重要な臨床的意義を有している可能性が初めて明らかとされた。この点から、酸化ストレス動態の評価は治療効果の評価のみならず、サイレントは血管障害の病態評価に有用であると考えられる。一方、IVIG不応例では明らかに血中還元力(BAP)が低値であり、その点から酸化ストレス状態が増強する傾向が見られ、この点がIVIG不応例での血管障害の発現頻度が高いことに関連している可能性が今後検討されるべきであると考えられた。本研究は、血管内皮障害、炎症、酸化ストレスの3者による悪循環が動脈硬化の発症・進展につながるという仮説のもと、各パラメーターの相互関係を探り川崎病における病態形成の解明を目的とした。これまでに、川崎病急性期において血管内皮障害により惹起される血小板活性化が回復期以降も持続していること、また酸化ストレスについても炎症所見が消失した後も亢進していることを報告してきた。このことから一見血管炎が終息したように見えても、実は血管障害進展の環境は続いており、後に動脈硬化性病変へと進展することが危惧される。そのため、これら指標を用いた病態評価の重要性が示唆された。今回さらに、川崎病急性期におけるIVIG治療奏功例および不応例の炎症および酸化ストレスの変動を検討した。炎症性マーカーとして高感度CRP、IL-1,2,6、TNF-αを、酸化ストレスの評価には活性酸素種生成系マーカーとして血中ヒドロペルオキシド(ROM)、消去系マーカーとして血中還元力(BAP)を用いた。その結果、IVIG治療奏功例では治療後にROMは速やかに低下し酸化ストレス状態の改善や炎症性マーカーの低下が認められた。しかしながら、IVIG不応例においては治療前のBAPが健常児および奏功例と比較して有意に低値を示し、IVIG治療後もROMの低下は遅れ酸化ストレス状態が持続していることが明らかとなった。またIL-1,2は高値が持続、TNF-αにおいては上昇しており、炎症が完全に鎮静化されていないことも示された。これらの結果から、BAPがIVIG不応の予測あるいは早期発見、また急性期治療の効果判定に有用である可能性が示唆された。今後、IVIG反応性における活性酸素種消去系機構の関与について、さらなる検討が必要であると考える。血管障害や動脈硬化の発症には、炎症と酸化ストレスがtriggerとなり、血管内皮機能障害を中心とした病態から硬化性病変を形成していくことが明らかとなってきた。また、この血管内皮機能障害は、種々のサイトカイン産生や血小板活性化を惹起し、さらに病態が進展していく流れも示されてきた。

本研究では、川崎病において、血管障害および動脈硬化性変化の発現にとって主要な危険因子といえる炎症、酸化ストレスおよび血小板活性化の存在とその臨床的意義について臨床的な面から検討した。炎症性マーカーとして高感度CRP、IL-1, 2, 6、TNF-αを、酸化ストレスの評価には活性酸素種生成系マーカーとして血中ヒドロペルオキシド(ROM)、消去系マーカーとして血中還元力(BAP)を、血小板活性化マーカーには、血小板由来マイクロ-パーティクル(PDMP)を用いた。川崎病急性期において、治療奏功例ではIVIGによりROMおよび炎症性マーカーは速やかに低下した。一方IVIG不応例において治療前のBAPは健常児および奏功例に比し有意に低値であり、治療後もROMの低下は緩慢であった。またIL-1, 2, TNF-αも高値が続いていた。さらに、PDMPは6か月以上にわたり持続していた。この長期にわたる血小板活性化は、川崎病における血管障害と硬化性変化への進展に関与していることが示唆され、抗血小板療法の臨床的意義が初めて示された。本研究により、酸化ストレスおよび血小板活性化の評価は、川崎病の病態把握に非常に有用であり、臨床的意義を有することが示された。またBAPはIVIG不応の予測あるいは早期発見、また急性期治療の効果判定に有用である可能性が示唆された。検討を計画した血小板活性化、炎症、酸化ストレスおよび血管内皮機能のうち、これまでに血管内皮機能以外のデータの集積が済んでいる。今後は、残る血管内皮機能について調べるとともに、それらパラメーターの相互関係を検討していく。24年度が最終年度であるため、記入しない。本研究における検体収集は通常検査の際に平行して行っているため比較的容易あり患者の負担も少ない。さらに研究成果は臨床へ直結する有用なデータとなり得ることから、患者や、また関連病院にも理解と協力を求めデータの収集に努める。