hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
悪性中皮腫のゲノム統合解析と合成致死性を利用した分子標的探索の基礎的検討

悪性中皮腫(Malignant Mesothelioma: MM)はアスベスト曝露が主要因で、極めて予後不良の腫瘍である。長期間に及ぶ酸化ストレスにより、中皮細胞の変異蓄積が腫瘍化に寄与することが予想されるが、その実態は未解明の部分が多い。現在、腫瘍化にBAP1を含む数遺伝子の関与が知られるが、すべてがん抑制遺伝子であり、治療標的分子とはなりにくい。そこで、アスベスト曝露による腫瘍の発生・進展過程で生じる変異の全体像を捉え、治療標的分子の探索、予後予測のための基礎的検討を行うことが目的である。我々はMMでは3p21領域遺伝子に激しいゲノム再構成が生じることを報告している(Yoshikawaら, PNAS. 113(47), 2016)。今回、3p21以外に17pや19pもゲノム再構成が生じやすいことを見出した。特にTP53(17p)は、以前MMでは変異頻度が低いと言われていたが、高頻度のエクソン/遺伝子単位欠損が見られており、3p21領域に限定されたものではなく、別領域でも激しいゲノム再構成が生じているということが裏付けられた。BAP1 signal pathwayの制御不能がMMの発症に深くかかわる可能性があり、本研究は、腫瘍化に直接寄与するドライバー遺伝子の発見につながる可能性がある。ターゲットとするY, Zとも転写調節に関わる遺伝子である。まずは、MM細胞株を用いノックダウンやノックアウトー>それぞれの遺伝子産物発現調節の相互作用ー>これら分子のターゲット遺伝子の探索ー>腫瘍化に直接寄与するドライバー遺伝子を探索する。ドライバー遺伝子候補が見つかれば、対応する分子標的薬の探索を行い、細胞増殖阻害、アポトーシス誘導が生じる物質を探す。試薬の値引きによりわずかだが残額が生じた。次年度に有効活用する予定である。
日単位で形成される弱い温度躍層と吹送流の相互作用に関する研究

まず始めに、昭和63年度の現地観測結果に基づき、日成層と吹送流の相互作用について検討した。その結果、(1)日成層の混合過程が吹送流のせん断不安定により生成される乱れによっている、(2)吹送流の速度分布が混合層内のエネルギ-バランスによって支配されている、と推論された。次に、上記の推論に基づいて、日成層と吹送流の相互作用を表わす数理モデルを検討した。まず日成層の混合過程が、いわゆるDIM(Dynamic Instability Model)と基本的に同じものであると考え、既存のDIMの問題点を明確にした後に、より完全な定式化を行った。今回構築されたモデルの特色は、日成層と吹送流の相互作用を力学的に厳密に取り扱っていくために、モデルパラメ-タの物理的意味が明確であるとともに、その値が演繹的に決定されている点にある。次に、上記モデルに、湖の岸のもたらす効果や日成層下部の密度勾配の影響を加えて、実際現象を十分シミュレ-トできる数値計算モデルを作成している。その結果を現地観測結果と比較したところ、非常に良い一致を見た。最後に、上記モデルを用いて、霞ヶ浦などの浅い富栄養湖の水質が急変する条件について検討した。日成層がその日のうちに消滅しないと底層水が数日間嫌気状態になって底泥から栄養塩の溶出することが昨年の現地観測で明らかにされている。そこで、日成層がその日のうちに消滅しなくなる気象条件、具体的には1日の総日射量と風速の関係について明らかにした。1.現地観測・霞ヶ浦湖心における水温の年間記録から、初夏や梅雨明けに日成層の強度が高まることを確認した。そこで梅雨明けを狙って7日20日から8月8日の3週間に、流れ、水温、水質の鉛直分布を1時間毎に測定した。実際の梅雨明けは7月31日だったので、8月1日から8月8日の1週間に有意なデータが得られた。すなわち、梅雨明け直後のように水温が比較的低く日射が強い状況では、日成層がその日の内に混合せず、翌日新たな日成層が形成されることにより、躍層が2段となる。その結果、下段の躍層が数日に渡って停滞し、底層の溶存酸素が枯渇する共に、湖底から大量のリン酸イオンが溶出した。従って、日成層の混合の具合が底層の水質に著しい影響を及ぼすことが明らかとなった。2.連行則の理論的検討、風が混合層に成す仕事が吹送流の運動エネルギーとせん断歪エネルギーに転換された後にせん段歪エネルギーの一部がポテンシャルエネルギーに転換されるものとして、連行速度と混合層の速度分布と密度分布を同時に求める理論式を導出した。これを観測データと比較したところ、非常によく一致した。3.連行速度に関する水理実験、上記理論の妥当性を調べるために、風洞水槽において温度密度流の混合実験を行った。ただし、現地では空間的にほぼ一様で時間的に躍層深さが変化する現象であるのに対し、風洞水槽では時間的には定常で空間的に水理量が変化する。そこで上記した連行則導出の基本仮定を風洞水槽の状況に当てはめ、同様の計算を行って、風洞水槽における連行則を導出した。その結果、理論式と実験データはよく一致した。4.日成層のシミュレーション、上記の連行則を用いた日成層モデルの基本フレームを構築した。
悪性腫瘍細胞におけるTrop-2の発現誘導、リン酸化機構及び生物学的意義の解析

Trop-2は発現量と予後の相関関係が報告されている癌悪性化因子であるが、悪性化抑制因子としての機能を示唆する報告も存在する。本研究では、同分子のリン酸化と癌悪性化の関係性に注目して解析を行っている。前年度の研究より、複数のPKCによるリン酸化への関与が示唆された為、本年度はその結果を基に以下の解析を行った。A)PKC阻害に伴う細胞移動能への影響の検討。B)Trop-2のリン酸化を誘導するリガンドの探索。また、癌での発現亢進が報告されているMUC1及びgalectin-3によるTrop-2発現亢進を示唆するデータが得られている為、その結果を基に以下の検討を行った。C)MUC1及びgalectin-3の発現制御によるTrop-2発現への影響の解析。下記にそれぞれの実績を記載する。A)前年度、Trop-2のリン酸化による細胞移動能の亢進及びPKCα/δによるリン酸化制御が示唆されたことから、PKC阻害剤によるPKCの活性抑制もしくはsiRNAによる発現の減少を行った上で、細胞移動能への影響をTranswell assayにより検討した結果、いずれの処理においても細胞移動能の抑制が示された。B)Trop-2の細胞外領域を結合させたビーズを用いたカラムを作製し、Trop-2と直接結合する生理的なリガンドを探索したが、同定には至らなかった。その結果を受けて、PKCの活性化への関与が報告されている各種増殖因子による、間接的なTrop-2のリン酸化への影響を検討した結果、EGF処理によるTrop-2のリン酸化亢進が示唆された。C)MUC1もしくはgalectin-3の発現をsiRNAにより減少させることで、Trop-2の発現量は減少した。また両分子が結合し、転写因子の1つであるSp1がMUC1へリクルートされることで、Trop-2の発現が誘導される可能性が示唆された。Trop-2はその発現量と予後の相関関係が報告されている癌悪性化因子であるが、悪性化抑制因子として機能していることを示唆する報告もされている。本研究では同分子の質的変化(リン酸化)に注目し、リン酸化に伴う癌悪性化機構への関与について主に以下の解析を行った。A)Trop-2のリン酸化を担うキナーゼの同定。B)細胞移動能及び転移能の測定による、Trop-2のリン酸化に伴う細胞機能への関与。C)Trop-2のリン酸化に伴うclaudin-7との相互作用への影響。A)Trop-2細胞質内領域のセリン残基のリン酸化が重要であることを示す予備的データが得られているため、種々のセリン/スレオニンキナーゼ阻害剤によるTrop-2のリン酸化への影響を解析した結果、同分子のリン酸化はPKC阻害剤によって著しく抑制された。更に、種々のPKC阻害剤及び遺伝子サイレンシング(siRNA)により、複数のPKCを同時に抑制することで、リン酸化が顕著に抑制されることが明らかとなった。B) Trop-2のリン酸化に伴う細胞移動能の亢進が、in vitro解析(transwell assay)により示され、加えて同移動能がPKC阻害剤により抑制されることを示した。また、Trop-2のリン酸化に伴う臓器(肺及び肝臓)への転移亢進が、in vivo解析(異種移植)により明らかとなった。C)合成ペプチドを用いて、Trop-2のリン酸化有無によるclaudin-7細胞質内領域との相互作用の変化を検討した結果、Trop-2のリン酸化の有無に関わらず、いずれのclaudin-7細胞質内領域(3か所)も、Trop-2との結合に関与していない可能性が示された。A)及びB)に関しては、当初の予定通り順調に進展させることが出来ている。C)に関しては、当初想定していた機構とは異なる機構による制御の可能性が解析結果により示唆されたため、現在別途細胞株の樹立や解析等を行っている。

その結果を受けて、PKCの活性化への関与が報告されている各種増殖因子による、間接的なTrop-2のリン酸化への影響を検討した結果、EGF処理によるTrop-2のリン酸化亢進が示唆された。C)MUC1もしくはgalectin-3の発現をsiRNAにより減少させることで、Trop-2の発現量は減少した。また両分子が結合し、転写因子の1つであるSp1がMUC1へリクルートされることで、Trop-2の発現が誘導される可能性が示唆された。今年度は、研究実績に記載の内容を更に発展させる。具体的には下記の研究を計画する。組み換え体Trop-2を調製し、カラムを作製することにより、癌微小環境下においてTrop-2のリン酸化を誘導する生理的なリガンドを探索する。また、in vitroでの細胞移動能亢進におけるPKCサイレンシング効果、in vivoでの転移亢進におけるPKC阻害剤の効果を検討する。更に、Trop-2の質的変化及びその影響のみではなく、Trop-2の発現誘導に関与する因子の同定及び機構を解析し、癌の悪性化に伴うTrop-2の発現亢進から質的変化に至る一連の機構の解析を目指す。
中期ビザンティン詩篇写本挿絵の総合的研究

科研を用いた海外調査では、申請書の計画通りブリティッシュ・ライブラリーの最重要写本のひとつである『テオドロス詩篇』、及びフランス国立図書館の『パリの74番』の実見調査が叶った。この二冊は11世紀ビザンティンの修道院写本工房を考える上で不可欠な写本であり、顔料の剥落の度合いや綴じの状態などを詳細に調査することができた意義は大きい。研究成果としては、まず美術史学会全国大会、美学会、比較文学研究会において計4回の口頭発表を行った。それぞれ、会の特質に合わせたテーマめ選定と研究手法を選んだことで、活発な質疑を行うことができた。本年度特に意識したことは西ヨーロッパとの関わりであり、両者に共通するモティーフを取り上げ分析することで、各方面の専門家からのご意見を伺うことができた。また、美学会では新しい余白挿絵詩篇の分析方法を提示し、方法論に優れた専門家からの意見を求めた。二度にわたる比較文学研究会の発表においては、比較文学的な観点からモティーフめ東西伝播を探り、あるいは美学会で示した新たな手法を実際に適用することで得られた知見を発表した。それらの口頭発表のうち2本を、今年度中に論文の形で発表することができた。ひとつでは西洋古代の写本から中世までのイメージの変遷を辿り、それがやがて日本近代に形を変えて受け入れられていく過程を指摘した。もうひとつでは、『ブリストル詩篇』のこれまで等閑視されていた頁に隠された意味と機能を、口頭発表でも示した手法を用いて分析・指摘した。年度はじめに、余白挿絵詩篇の絵画化について、大阪市立大学で開催された日本ビザンツ学会全国大会において発表した。研究の基盤となる手法及びその方向性を、予め明確に打ち出して、諸家の見解を仰ぐためである。曖昧な分類で進められていた同写本の挿絵について改めて定義し直すとともに、今後の可能性を示唆することができた。科研費を用いた調査では、ロンドン、ブリティッシュ・ライブラリーにて『ブリストル詩篇』及び同館所蔵の詩篇写本を調査した。研究の中心を占める、重要な『テオドロス詩篇』については、調査時にロイヤル・アカデミーで催されていた展覧会に出品されていたため、他の写本と同じ条件での調査は叶わなかったが、門外不出とされる『クルドフ詩篇』、『パリ詩篇』や『パルマ福音書』、『マリア讃歌』といった重要な写本の数々と併せて確認することができた。また、オックスフォードのデューク・ハンフリー図書館、クライスト・チャーチ図書館において、各館所蔵の、挿絵を有する詩篇写本を調査した。両図書館での実地調査に基づいて、余白挿絵詩篇比較対照データベースの情報を修正・追加することができた。図版では確認できなかった部分やコディコロジカルなデータを得ることができ、特に、実見かなった『ブリストル詩篇』に関しては、4月に発表した内容と強く関連する、極端にリテラルな要素を見出すことができた。これらの調査の成果をまとめて、2009年5月の美術史学会全国大会(於京都大学)にて発表する予定である。
ハロゲン・希ガスを用いたマントル内の水の起源・挙動・分布の解明

地球表層を移動する海洋プレートが陸側のプレートに衝突し、マントルへと沈み込む場(沈み込み帯)では、ハロゲンや希ガス、水、二酸化炭素などに代表される揮発性物質が、沈み込むプレートに取り込まれてマントルへ運ばれている。本研究では、揮発性物質が地球表層から地球内部へと沈み込む過程、沈み込みがマントルの揮発性物質の組成に及ぼす影響について、沈み込む揮発性物質の最も良いトレーサーと考えられるハロゲンと希ガスを用いて解明することを目的としている。研究対象としては、マントル中の揮発性物質について1次的な情報を最もよく保存していると考えられるマントル捕獲岩を扱う。今年度は、プレート内で産出した試料のハロゲン分析、プレート内と背弧側で産出した試料の微量元素分析を行った。プレート内の試料は、MORB(中央海嶺玄武岩)源マントル的な組成を起点に2種の傾向を示した。微量元素組成もハロゲン組成と対応し、研究対象としたマントル捕獲岩は、現在はハロゲン組成が変動しているが、元々はMORB源マントル的な組成を持っていたことを示唆する。研究対象とした地域では、10億年以上前に大陸化のマントルがマントル対流から分離したことが示唆されており、対流するマントルのハロゲン組成が少なくとも16億年間一定で、沈み込み帯でみられたヨウ素に富むハロゲンの沈み込みの影響がマントル全体に強く及んでいないことを示唆している。昨年度までに行った背弧側の試料のハロゲン分析結果から、背弧側では3種のハロゲンが混在していることがわかった。背弧側の試料の微量元素組成や同位体組成は、ハロゲン組成とよく対応しており、それらがマントルに元々存在していた成分と2種の起源が異なる沈み込んだ成分であることが示唆された。火山フロントと異なり、マントルに元々存在していた成分がみられたことは、沈み込みが及ぼす影響が火山フロントよりも小さいことを示唆する。28年度が最終年度であるため、記入しない。沈み込み帯では、海洋プレートが陸側のプレートに衝突しマントルへ沈み込んでいる。ハロゲンや希ガス、水、二酸化炭素などの揮発性物質は、沈み込むプレートに取り込まれマントルへ運ばれている。本研究の目的は、沈み込む物質の最も良いトレーサーであるハロゲンと希ガスを用いてその過程を詳細に解明することである。研究対象は、沈み込んだ成分の情報を最もよく保存していると考えられるマントル捕獲岩を用いる。昨年度までは、海溝に近い火山フロントで産出した試料を研究対象としてきた。今年度は、火山フロントより海溝から離れた背孤側で産出した試料と、沈み込みの影響を受けずプレート内の火山活動により産出した試料を扱った。マントル捕獲岩中の極微量なハロゲンは、原子炉で試料に中性子を照射し、試料中のハロゲン原子を希ガス原子へ変換し、高感度希ガス質量分析により定量する必要がある。今年度は日本国内での中性子照射は困難であったため、アメリカ・オレゴン大学の原子炉にて中性子を照射し、イギリス・マンチェスター大学にてハロゲン分析を行った。また、同じ試料について中性子照射をしない希ガス分析を、東京大学の所属研究室にて行った。火山フロントに比べ背弧側では、ハロゲン濃度は低く、マントル起源成分に比べ沈み込み成分の希ガスが少ないことから、海溝から離れるにつれ沈み込みが及ぼす影響が薄まっている確かな証拠を得た。一方で、背弧側の試料には火山フロントと同様なハロゲン組成を示すものもあり、沈み込みの影響が背弧側まで及んでいることを示唆している。プレート内で産出した試料は、中央海嶺玄武岩から推定されたマントルの組成からClに比べBrとIに富むように分別したハロゲン組成を示した。これは、沈み込みの影響を受けていない地域においてもハロゲン組成を変化させるメタソマティズムが起きたことを示唆している。沈み込み帯では、ハロゲンや希ガス、水、二酸化炭素などに代表される揮発性物質が、沈み込むプレートに取り込まれてマントルへ運ばれている。本研究では、揮発性物質が地球表層から地球内部へと沈み込む過程を、沈み込む流体(水や二酸化炭素)の最も良いトレーサーと考えられるハロゲンと希ガスを用いて解明することを目的としている。研究対象は、沈み込んだ流体が持つ1次的な情報を最もよく保存していると考えられるマントル捕獲岩を扱う。マントル捕獲岩中のハロゲンは極微量しか存在せず、通常用いられる分析手法での分析は極めて困難である。そのため、原子炉で試料に中性子を照射し、試料中のハロゲン原子を希ガス原子へ変換し、高感度希ガス質量分析により定量するという手法を用いた。今年度は日本国内での中性子照射は困難であったため、過去に照射をしていた試料を用いた。今年度は、アジア東縁の背弧側で産出したマントル捕獲岩の流体包有物に含まれるハロゲンを分析した。そのハロゲン組成は、MORBマントルと比べ数倍高いBr/Cl比と、数倍から数十倍高いI/Cl比を示し、背弧側にヨウ素と臭素に富む流体が供給されていることを示唆する。これまでに報告されている研究からは、ヨウ素と臭素に富む流体の運び手は、それぞれ蛇紋岩、エクロジャイトである可能性が考えられる。また、これまでに得られた試料のI/40Ar*比(40Ar*は、40Kからの壊変により生成した放射壊変起源の40Ar)をセッティングごとに比較すると、海溝に近いセッティングほど高い比を示す。

ヨウ素は、そのほとんどを沈み込み起源と仮定できると考えられる。一方で、40Ar*は、地表から沈み込む流体では乏しくマントル起源と考えられる。そのため、セッティングにより差が生じていることは、I/40Ar*比は沈み込みが及ぼす影響の強さのよい指標になることを意味している。本研究の目的であるマントル捕獲岩の極微量ハロゲン分析には、原子炉での中性子照射が必要不可欠であるが、今年度の日本国内での中性子照射は大変困難な状況であった。照射を予定していた京都大学原子炉実験所の研究用原子炉も稼働状況が芳しくなく、想定していた数の照射を行うことができなかった。また、すでに中性子を照射していた試料についても、分析に使用する予定であった希ガス質量分析計が移設とその後の故障、修理等により研究計画が遅れた。しかしながら、現在希ガス質量分析計については復旧しており、結果を得られつつある。これまで1地域しか分析されていなかった背弧側で産出したマントル捕獲岩のハロゲン組成が得られた。また、産地のセッティングによるI/40Arの変動などのように、沈み込む流体がマントルに及ぼす影響ついて新たな知見を得ることができた。来年度は、マントル捕獲岩の微量元素分析、流体包有物の分光分析を予定しているが、その準備は今年度中にほとんど終わらすことができた。来年度行う分析を通し、揮発性物質の沈み込みについて新たな知見を得ていく。地球表層を移動する海洋プレートが陸側のプレートに衝突し、マントルへと沈み込む場(沈み込み帯)では、ハロゲンや希ガス、水、二酸化炭素などに代表される揮発性物質が、沈み込むプレートに取り込まれてマントルへ運ばれている。本研究では、揮発性物質が地球表層から地球内部へと沈み込む過程、沈み込みがマントルの揮発性物質の組成に及ぼす影響について、沈み込む揮発性物質の最も良いトレーサーと考えられるハロゲンと希ガスを用いて解明することを目的としている。研究対象としては、マントル中の揮発性物質について1次的な情報を最もよく保存していると考えられるマントル捕獲岩を扱う。今年度は、プレート内で産出した試料のハロゲン分析、プレート内と背弧側で産出した試料の微量元素分析を行った。プレート内の試料は、MORB(中央海嶺玄武岩)源マントル的な組成を起点に2種の傾向を示した。微量元素組成もハロゲン組成と対応し、研究対象としたマントル捕獲岩は、現在はハロゲン組成が変動しているが、元々はMORB源マントル的な組成を持っていたことを示唆する。研究対象とした地域では、10億年以上前に大陸化のマントルがマントル対流から分離したことが示唆されており、対流するマントルのハロゲン組成が少なくとも16億年間一定で、沈み込み帯でみられたヨウ素に富むハロゲンの沈み込みの影響がマントル全体に強く及んでいないことを示唆している。昨年度までに行った背弧側の試料のハロゲン分析結果から、背弧側では3種のハロゲンが混在していることがわかった。背弧側の試料の微量元素組成や同位体組成は、ハロゲン組成とよく対応しており、それらがマントルに元々存在していた成分と2種の起源が異なる沈み込んだ成分であることが示唆された。火山フロントと異なり、マントルに元々存在していた成分がみられたことは、沈み込みが及ぼす影響が火山フロントよりも小さいことを示唆する。
ヒドリド伝導性水素膜とそれに基づくメンブレンリアクターの基盤技術創成

新な金属窒化物ヒドリド伝導体として、Eu3O4型Zr3N4、および岩塩型VNの二つの材料を見出した。Zr3N4薄膜はZr金属をターゲットとした反応性スパッタ法により基板温度100°Cで作製し、低結晶性の薄膜として得られた。Zr-K端のEXAFS測定から得られるZr原子の配位構造は、Eu3O4型構造の配列によくフィットし、よって構造が同定された。Operando XAFS測定から、Zr3N4は300°Cにて水素雰囲気にさらすと容易に水素化が起こり、その結果Zrの価数は高酸化状態へと変化することを確認した。従ってZR3N4は水素が電子アクセプターとして導入され、ヒドリドイオン欠陥を生成することが確認された。Zr3N4の膜厚方向の抵抗を、Ar⇒H2⇒D2の様に変化させて測定した。その結果ArからH2に雰囲気を切り替えると抵抗が増加し、更にD2に切り替えると抵抗が約1.3倍増加した。この値はD/Hの質量比の平方根に等しいことから、H2雰囲気ではヒドリドイオン伝導を示すことが示された。岩塩型VN薄膜はV金属ターゲットを用いた反応性スパッタ法により作製した。得られた薄膜は透過電顕やXRDにより、微細構造を調べた。この薄膜はTiN同様高い水素透過性を示した。La-Li-O-H系金属酸水素化物の粉末ペレットを加圧成型し、その両面に微結晶TiN薄膜電極を蒸着してTiN/La-Li-O-H/TiNセルを構築し、水素のポンピング実験を行った。その結果ほぼファラデー則に従った水素ポンピングが観察され、電気化学的膜セルの作動が確認された。当初の研究計画での目標は、1)新たな金属窒化物ヒドリド伝導体を2つ以上見出すこと、また2)ヒドリド伝導性金属水素化物およびNi金属を複合したサーメット、またはヒドリド電子混合電度制金属窒化物薄膜による水素透過膜作製、以上2点をとした。1)に対し、本年度はEu3O4型Zr3N4、および岩塩型VNの二つの新規ヒドリド伝導性金属窒化物材料を見出した。Zr3N4薄膜は300°Cにて水素雰囲気にさらすと容易に水素化が起こり、ヒドリドイオン欠陥を生成することが確認された。更にインピーダンス法により、このヒドリド欠陥が300°C付近にて薄膜内を伝導することも確認した。またVNについては、多孔質基板上に製膜することにより膜デバイスを作製し、その水素透過性を直接観察することに成功している。2)に関し、上記の様にVN膜を用いて水素透過膜デバイスを作製することに成功している。またLa-Li-O-H系金属酸水素化物の粉末ペレットを加圧成型し、その両面に微結晶TiN薄膜電極を蒸着してTiN/La-Li-O-H/TiNセルを構築し、水素のポンピング実験を行った。従って2)の目的もほぼ達成したと言える。昨年度までに、窒化バナジウムおよび窒化ジルコニウムのナノ薄膜が、高いヒドリドイオン伝導性を示すことを見出した。そこで本年度は、これらの膜の基礎物性をさらに調べ、またこれらを用いた膜リアクターを作製し、二酸化炭素還元反応への効果を調べる。具体的な項目を以下に述べる。1)Zr3N4およびVNナノ結晶薄膜のヒドリドイオン伝導率の向上:粒径サイズ制御、および窒素欠損量の調整によるヒドリド欠陥サイトの増加,および異種金属元素ドーピングによるサイト間ボトルネックの拡張などを検討する.焼結体の作製を検討する。3) metal | MN |多孔質触媒層ー膜リアクタの作製:ナノ結晶性金属窒化物膜を、二酸化炭素還元に有効な銅触媒を担持したBaZrY0.2O3系多孔質サーメット基板上に作製し、さらにその表面にNi微粒子水素乖離触媒を蒸着して膜リアクターを構築する.このNi微粒子側に水素、多孔質側に二酸化炭素を供給し、二酸化炭素のメタン再資源化反応を検討する.新な金属窒化物ヒドリド伝導体として、Eu3O4型Zr3N4、および岩塩型VNの二つの材料を見出した。

得られた薄膜は透過電顕やXRDにより、微細構造を調べた。この薄膜はTiN同様高い水素透過性を示した。La-Li-O-H系金属酸水素化物の粉末ペレットを加圧成型し、その両面に微結晶TiN薄膜電極を蒸着してTiN/La-Li-O-H/TiNセルを構築し、水素のポンピング実験を行った。その結果ほぼファラデー則に従った水素ポンピングが観察され、電気化学的膜セルの作動が確認された。当初の研究計画での目標は、1)新たな金属窒化物ヒドリド伝導体を2つ以上見出すこと、また2)ヒドリド伝導性金属水素化物およびNi金属を複合したサーメット、またはヒドリド電子混合電度制金属窒化物薄膜による水素透過膜作製、以上2点をとした。1)に対し、本年度はEu3O4型Zr3N4、および岩塩型VNの二つの新規ヒドリド伝導性金属窒化物材料を見出した。Zr3N4薄膜は300°Cにて水素雰囲気にさらすと容易に水素化が起こり、ヒドリドイオン欠陥を生成することが確認された。更にインピーダンス法により、このヒドリド欠陥が300°C付近にて薄膜内を伝導することも確認した。またVNについては、多孔質基板上に製膜することにより膜デバイスを作製し、その水素透過性を直接観察することに成功している。2)に関し、上記の様にVN膜を用いて水素透過膜デバイスを作製することに成功している。またLa-Li-O-H系金属酸水素化物の粉末ペレットを加圧成型し、その両面に微結晶TiN薄膜電極を蒸着してTiN/La-Li-O-H/TiNセルを構築し、水素のポンピング実験を行った。従って2)の目的もほぼ達成したと言える。昨年度までに、窒化バナジウムおよび窒化ジルコニウムのナノ薄膜が、高いヒドリドイオン伝導性を示すことを見出した。そこで本年度は、これらの膜の基礎物性をさらに調べ、またこれらを用いた膜リアクターを作製し、二酸化炭素還元反応への効果を調べる。具体的な項目を以下に述べる。1)Zr3N4およびVNナノ結晶薄膜のヒドリドイオン伝導率の向上:粒径サイズ制御、および窒素欠損量の調整によるヒドリド欠陥サイトの増加,および異種金属元素ドーピングによるサイト間ボトルネックの拡張などを検討する.焼結体の作製を検討する。3) metal | MN |多孔質触媒層ー膜リアクタの作製:ナノ結晶性金属窒化物膜を、二酸化炭素還元に有効な銅触媒を担持したBaZrY0.2O3系多孔質サーメット基板上に作製し、さらにその表面にNi微粒子水素乖離触媒を蒸着して膜リアクターを構築する.このNi微粒子側に水素、多孔質側に二酸化炭素を供給し、二酸化炭素のメタン再資源化反応を検討する.
リハビテーション運動療法と脂質低下療法の併用の有効性の機序解明

長期的運動とスタチンによる運動耐容能と糖・脂質代謝への効果を明らかにするため、Zucker肥満ラットにトレッドミル運動とatorvastatin投与の併用を行った。スタチンは、長期的運動による運動耐容能向上や遠心性心肥大には影響を与えずに左室壁厚や心重量の増加を抑制した。長期的運動とスタチンの併用により、血漿総コレステロール、トリグリセライド、グルコースは低下したが、血漿インスリン、レプチンおよびアディポネクチンの変化を認めなかった。長期的運動により肝臓トリグリセライド含有量と脂肪染色が著明に減少した。以上の結果から、長期的運動とスタチンの併用は、糖・脂質代謝や肝臓脂肪蓄積をアディポサイトカインの変化を伴わずに改善することが示された。長期的運動とスタチンによる血圧と組織NO合成酵素(NOS)発現への効果を明らかにするため、高血圧自然発症ラット(SHR)を1)Contro1群、2)ATV群、3)Ex群、4)ATV+Ex群の4群に分け、ATV群にはatorvastatin投与を、Ex群にはトレッドミル運動を、ATV+Ex群には併用を8週間行った。血圧はすべての治療群で有意に低下した。内皮型NOS蛋白発現は、ATV群の腎皮質、髄質外層、髄質内層で、Ex群の胸部大動脈、腎皮質、髄質外層で、ATV+Ex群のすべての組織で有意に増強した。神経型NOS蛋白発現は、ATV群の髄質外層と髄質内層で、Ex群の胸部大動脈、腎皮質、髄質外層で、ATV+Ex群のすべての組織で有意に増加した。誘導型NOS蛋白発現は、4群間のいずれの組織においても差がなかった。以上の結果から、SHRにおいて長期的運動とスタチンは降圧効果を有し、その機序の一つとしてeNOSとnNOS発現の増強が関与すると考えられた。長期的運動とHMG-CoA還元酵素阻害薬(スタチン)によるZucker肥満ラットの運動耐容能と糖・脂質代謝への影響を検討した。ラットを、1)Control群、2)atorvastatin群(ATV群)、3)運動群(Ex群)、4)併用群(ATV+Ex群)の4群に分け、Ex群にはトレッドミル運動を、ATV群にはatorvastatin投与を、ATV+Ex群にはその併用を行った。酸素摂取量測定から運動耐容能を検討し、超音波検査と重量測定により心臓の形態変化を検討した。血液サンプルを採取し、肝臓のトリグリセライド含有量と組織学的な検討も行った。Control群に比べ、Ex群の運動耐容能は向上した。ATV群やATV+Ex群の運動耐容能は、それぞれ、Control群やEx群に比べて変化はなかった。Ex群では拡張期および収縮期左室内径、左室壁厚、心重量は増加した。ATV群では収縮期左室内径は増加し、左室壁厚と心重量は減少した。ATV+Ex群では拡張期および収縮期左室内径はEx群と同様に増加したが、左室壁厚や心重量は変化しなかった。血漿総コレステロールはEx群とATV+Ex群で低下し、血漿トリグリセライドはATV群、Ex群、ATV+Ex群で低下した。血漿グルコースはATV群とEx群では変化を認めなかったが、ATV+Ex群では他の3群に比べて有意に低下した。血漿インスリン、レプチンおよびアディポネクチンは4群間に差を認めなかった。肝臓トリグリセライド含有量はEx群とATV+Ex群で低下し、Ex群で脂肪染色が著明に減少していた。

以上から、Zucker肥満ラットにおいて、スタチンは、長期的運動による運動耐容能向上や遠心性心肥大には影響を与えずに左室壁厚や心重量の増加を抑制し、長期的運動とスタチンの併用は、糖・脂質代謝や肝臓脂肪蓄積をアディポサイトカインの変化を伴わずに改善することが示された。長期的運動とHMG-CoA還元酵素阻害楽(スタチン)による高血圧自然発症ラット(SHR)の血圧と組織nitric oxide(NO)合成酵素発現への影響を検討した。5週齢の雄SHRを1)Control群、2)atorvastatin群(ATV群)、3)運動群(Ex群)、4)併用群(ATV+Ex群)の4群に分け、ATV群にはatorvastatin(20mg/kg/日)投与を、Ex群にはトレッドミル運動(速度20m/分、60分間/日、週6回)を、ATV+Ex群には併用を8週間行った。血圧、心拍数はtail-cuff法により測定した。断頭採血後、胸部大動脈と腎臓を摘出、ホモジネートし、内皮型NO合成酵素(eNOS)、神経型NO合成酵素(nNOS)、誘導型NO合成酵素(iNOS)蛋白発現をウェスタンブロット法で検討した。対照群に比べて、血圧はすべての治療群で有意に低下し、心拍数はEx群とATV+Ex群で有意に低下した。血漿総コレステロール、トリグリセライド、遊離脂防酸、クレアチニン、尿素窒素には4群間に有意差はなかった。eNOS蛋白発現は、ATV群の腎皮質、髄質外層、髄質内層で、Ex群の胸部大動脈、腎皮質、髄質外層で、ATV+Ex群のすべての組織で有意に増強した。nNOS蛋白発現は、ATV群の髄質外層と髄質内層で、Ex群の胸部大動脈、腎皮質、髄質外層で、ATV+Ex群のすべての組織で有意に増加した。iNOS蛋白発現は、4群間のいずれの組織においても差がなかった。以上の結果から、SHRにおいて長期的運動とスタチンは降圧効果を有し、その機序の一つとしてeNOSとnNOS発現の増強が関与すると考えられた。また、この長期的運動とスタチンによる腎NOS発現の増強は腎保護効果にも関与する可能性があることが示唆された。
創傷治癒・血管新生におけるマトリックスメタロプロテアーゼの役割

ラット皮膚創傷治癒過程におけるマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)遺伝子の発現を検討したところ、膜型MMP1型(MT1-MMP)、ゼラチナーゼA,ストロメリシン3遺伝子は創傷間質、特に肉芽組織や瘢痕組織に発現し、発現の強弱に違いはあるものの、その時間的推移における発現パターン、発現場所は似ていた。ストロメリシン1、ゼラチナーゼB、コラゲナーゼ3遺伝子は創傷部に近い上皮基底細胞に主に発現し、創傷初期から強く発現しており、再上皮化が完了するとこれらの遺伝子の発現はみられなくなった。次に、創傷洒癒過程に発現するMMP遺伝子のうちで、肉芽組織に発現し血管新生に関与すると考えられるMT1-MMPとゼラチナーゼAに重点を置き検討を行った。MT1-MMPは、直接的にも細胞外マトリックスを分解するが、また一方で、細胞膜表面でプロゼラチナーゼAを活性化して間接的に細胞外マトリックスを分解することもできる。MT1-MMPのプロゼラチナーゼA活性化の過程では、TIMP-2を介してプロゼラチチーゼAがMT1-MMPに結合する機構が重要で、そのように結合したプロゼラチナーゼAが活性型のMT1-MMPで活性化されることを証明した。さらに、MTl-MMPおよびゼラチナーゼAのノックアウトマウスを作成し、これらの分子の創傷治癒過程、血管新生における役割を検討中である。また、近年MMPインヒビターが開発され、それらの創傷治癒過程、血管新生過程におよぼす影響も検討中である。1.ラット皮膚創傷治癒過程におけるマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)遺伝子の発現をノーザンブロットおよびin situ hybridization法で、また発現しているゼラチン分解能のある酵素の同定をザイモグラフィを用いて検討した。創傷治癒過程に発現した6つのMMP遺伝子のうち、膜型MMP1型(MT1-MMP)、ゼラチナーゼA、ストロメリシン3遺伝子は創傷間質、特に肉芽組織や瘢痕組織に発現し、発現の強弱に違いはあるものの、その時間的推移における発現パターン、発現場所は似ていた。ゼラチン分解能のある酵素、ゼラチナーゼAおよびゼラチナーゼBのそれぞれの活性型の酵素はそれぞれMT1-MMP、ストロメリシン1遺伝子の発現パターンに類似して創傷部で同定された。2.ラットMMPのリコンビナント酵素をCOS-1細胞に発現させ、それらの酵素の機能、MMP間の相互作用を検討したところ、MT1-MMPはゼラチナーゼAを、ストロメリシン1はゼラチナーゼBを活性化することが確認された。さらに、MMPの生理的インヒビターで、創傷治癒の過程で遺伝子発現が確認されたTIMP-1、-2、-3をそれぞれ共発現させてゼラチナーゼAおよびゼラチナーゼBの活性化におよぼす影響をみたところ、MT1-MMPによるゼラチナーゼAの活性化にTIMP-1は影響を及ぼさないが、ゼラチナーゼBの活性化は完全に抑制することがわかった。しかしながら、TIMP-1、-2、-3は創傷治癒過程でそれぞれ異なる発現パターンを示し、in vitroではほぼどのMMPの働きも抑制したが、in vivoでは異なる役割を担っていることが示唆された。ラット皮膚創傷治癒過程におけるマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)遺伝子の発現を検討したところ、膜型MMPl型(MT1-MMP)、ゼラチナーゼA,ストロメリシン3遺伝子は創傷間質、特に肉芽組織や瘢痕組織に発現し、発現の強弱に違いはあるものの、その時間的推移における発現パターン、発現場所は似ていた.ストロメリシン

1、ゼラチナーゼB、コラゲナーゼ3遺伝子は創傷部に近い上皮基底細胞に主に発現し、創傷初期から強く発現しており、再上皮化が完了するとこれらの遺伝子の発現はみられなくなった.次に、創傷治癒過程に発現するMMP遺伝子のうちで、肉芽組織に発現し血管新生に関与すると考えられるMT1-MMPとゼラチナーゼAに重点を置き検討を行った.MT1-MMPは、直接的にも細胞外マトリックスを分解するが、また一方で、細胞誤表面でプロゼラチナーゼAを活性化して間接的に細胞外マトリックスを分解することもできる.MTl-MMPのプロゼラチナーゼA活性化の過程では、TIMP-2を介してプロゼラチナーゼAがMTl-MMPに結合する機構が重要で、そのように結合したプロゼラチナーゼAが活性型のMT1-MMPで活性化されることを証明した.さらに、MTl-MMPおよびゼラチナーゼAのノックアウトマウスを作成し、これらの分子の創傷治癒過程、血管新生における役割を検討中である.また、近年MMPインヒビターが開発され、それらの創傷治癒過程、血管新生過程におよぼす影響も検討中である.
次世代シーケンサーを用いたＨＣＶに対する３者併用療法中の耐性株の動態の解析

現在も世界で1.5億人が、慢性C型肝炎ウイルス感染症を有している。直動抗ウイルス薬(DAA)には治癒率は現在70%を超えるまで増加した。しかし、一部の患者はDAA薬に耐性を持つようになる。本研究の目的は、抗ウイルス抵抗性のリスクを最小化するためのガイドラインの確立を支援することでした。ウイルスの突然変異の分析は、直接的な配列決定によって、ならびに超深度配列決定によって行った。この研究の結果は抵抗があってもDAAの併用療法下で出現することができるということを示唆している。この研究は、耐性変異体の分析が、DAA療法の結果を予測するのは必要であるが十分ではないことを示している。テラプレビルのような薬物、daclatasvir ( DCV )及びasunaprevir ( ASV )等直接の抗ウイルス作用の利用( DAA )により、慢性C型肝炎ウイルス(HCV)感染の治療が改善されている。しかし、HCVには突然変異率が高いので、耐性株は、多くの場合治療中に出現する。このプロジェクトは、慢性HCV感染のため、DAA療法を受けている患者の耐性変異のタイミングと適応度を検証した。最初の研究では、8人の患者は、DCV、ペグインターフェロン、およびリバビリンで処理した。患者は8人のうち6人が硬化したが、治療の終了前には2人にはウイルスが発生した(ウイルスブレークスルー)。超深度配列決定は、これらの患者からの血清を用いて行った。治療中、NS5Aにおける耐性変異の頻度が急激に増加した。これらの結果は、DAA療法の前および治療中に耐性突然変異の出現を監視する必要があることを示唆している。第二の研究において、10人の患者は、DCVおよびASV併用療法で治療した。NS3およびNS5Aにおける抵抗の変異の頻度は、超深度配列決定を使用して、治療前および中に測定した。10人の患者のうち8人が硬化したが、ウイルスブレークスルーまたは再発は2人の患者に発生した。既存のDCV耐性変異は、ウイルスのブレークスルーを有された患者においてだけでなく、硬化させた患者の2人にも検出された。既存のASV耐性変異はどの患者で検出された変異であるかは判定できなかった。しかし、どちらも、硬化していない2人の患者において、DCVとASVの突然変異は検出された。逆に、前治療に対する耐性変異の存在は、常に治療の失敗につながるものではない。平成24年度はいくつかの達成目標があった。まず一つ目の目標は、抗ウイルス薬耐性株がHCV治療前に存在するかどうかを検証することであった。次世代シーケンシングのエラー率は高いので、稀な変異体およびシーケンスエラーを区別することは困難である。そこで私は、稀な変異体の検出値を決定するいくつかの方法を評価した。キメラマウスモデルを用いて、抗ウイルス薬耐性株は、治療前に存在していただけでなく、治療の過程で生じたことを証明した。この結果は、薬剤耐性が抗ウイルス薬耐性株は既に存在していなくても患者に出現するかもしれないことを示している。しかし、抗ウイルス薬耐性株の存在は必ずしもウイルスの突破口にはならない。研究の第2目標は、野生型株との競争の中で、耐性菌の適性を検討することであった。野生型株はしばしばDAA療法中にほとんど検出されなくなった。しかし、治療を中止したとき、野生型株は急速に回復し、変異株はほぼ検出されなくなった。これは、耐性変異が薬剤の存在下で強力な競争優位性を与えるが、薬剤が存在しないときに複製を妨げる可能性があることを示している。この結果は、耐性変異が低い適性を持っている薬をつくる上で役立つと考えられる。研究の第3目標は、HCVウイルス抵抗データベースを開発することである。DAAの有効性に関するHCV変異の効果について実験データを現在も集めている。データベースには、DAAの併用療法のための薬剤の薬物設計および選択のための重要なリソースとなるため、非常に重要である。研究計画は予定通りである。薬剤耐性株は通常野生株と同じほど効率的には複製しないために、DAA療法が行われていない場合にはその存在比が減少する。DAAの存在下と非存在下の耐性変異の比率の変化を比較した。HiSeqシーケンサにイルミナGenome Analyzerを使用してから切り替えた。これは、抗ウイルス薬耐性変異体のより迅速かつ高感度な分析が可能になる。さらなる改良と試験後のパブリックサーバーにウイルス抵抗性のデータベースを掲載する予定である。

今年度では、抗ウイルス薬耐性のリスクに関連する遺伝子マーカーを検討する。ウイルス因子は突然変異率に影響を与え、抗ウイルス抵抗性のリスクを高めるかどうか。を検討する。さらに、抗ウイルス抵抗性のリスクを高める患者の要因を検討する。もともとリバビリンの突然変異率を調べることを提案しのに、否定的な結果にはいくつかの類似の研究が最近発表されていた。
健常者の妄想的観念の研究:精神分裂病の妄想との比較研究と発生論的研究

精神分裂病には妄想・幻覚・自閉などの症状がある。本研究は,妄想と幻覚のアセスメント技法を新たに開発し,それを用いて症状の成立機序について検討し,いくつか興味深い知見を得た。1.妄想の内容的側面について,質問紙によるアセスメント技法である妄想観念チェックリストを新たに開発した。これを用いて,健常者の妄想的概念について調べ,多変量解析を用いて構造化を試みた。その結果,正感情と負感情,自己と他者の方向性という2つの次元で構造化できることを明らかにした。また,健常者の縦断調査をおこない,そのデータを階層的重回帰分析にかけることによって,妄想の素因とストレッサーの交互作用によって,妄想的観念が高まることを明らかにした。すなわち,素因の高いものが,ストレッサーを体験したときに,妄想的観念が高まっていた。2.妄想の形式的側面について,半構造化面接によるアセスメント技法である対人観念多次元面接法を新たに開発し,その信頼性と妥当性を検討するため,健常者を対象とした調査をおこなった。その結果,信頼性については十分高いことを確かめた。また,妄想を持つ精神分裂病を対象として臨床試用をおこない,このアセスメント技法が臨床場面でも十分に使用可能であることを見いだした。これを用いて,健常者の妄想的観念について調べ,多変量解析を用いて構造化を試みた。また,ライフイベントによって妄想的観念が高まることを,健常者の縦断調査から明らかにした。2.妄想の形式的側面について,半構造化面接によるアセスメント技法である対人観念多次元面接法を新たに開発し,本年度は,その信頼性と妥当性を検討するため,健常者を対象とした調査をおこなった。精神分裂病を対象とする臨床研究は来年度におこなう予定である。3.幻覚の体験頻度について,質問紙によるアセスメント技法である幻聴様体験尺度を新たに開発した。本年度は,健常者を対象とした調査をおこなった。その結果,健常者の幻聴様体験の頻度は想像されるより高いことを明らかにした。また,ライフイベントによって幻聴様体験が高まることを,健常者の縦断調査から明らかにした。4.幻覚の形式的側面について,半構造化面接によるアセスメント技法である幻聴構造化面接法を新たに開発した。精神分裂病の患者を対象として実施し,多変量解析を用いて構造化を試みた。その結果,自我障害の有無,体験への感情の正負という2つの次元で構造化できることを明らかにした。本研究は,妄想のアセスメント技法を新たに開発し,それを用いて症状の成立機序について検討し,いくつか興味深い知見を得た。妄想の内容的側面について,質問紙によるアセスメント技法である妄想観念チェックリストを新たに開発した。また,健常者の縦断調査をおこない,そのデータを階層的重回帰分析にかけることによって,妄想の素因とストレッサーの交互作用によって妄想的観念が高まることを明らかにした。すなわち,妄想の素因の高いものが、ストレッサーを体験した場合に,妄想的観念が高まっていた。妄想の形式的側面について,半構造的面接によるアセスメント技法である対人観念多次元面接法を新たに開発し,その信頼性と妥当性を検討するため,健常者を対象とした調査をおこなった。
アルツハイマー型痴呆の法医神経病理学的研究

当教室ならびに兵庫県監察医務室において行った法医解剖例のうちで,アルツハイマー型痴呆(ATD)と生前に診断されていた5例(症例1および症例36)および65歳以上の非痴呆3例(症例2, 7, 8)について,剖検時に摘出した脳の重量を測定し,右半球をそのまま4%ホルムアルデヒド溶液に浸漬固定し,左半球に0.51.0cmの厚さで前頭断を施し,4%パラホルムアルデヒド-0.01Mリン酸緩衝溶液(pH7.4)で2, 3日固定後,15%しょ糖-0.01Mリン酸緩衝溶液(pH7.4)に浸漬し保存した.左右それぞれから,海馬,扁桃核,前頭連合野(上前頭回),側頭連合野(上側頭回),連合連合野(角回)および高次視覚連合野を切り出し,右半球には,古典的染色に加え,蛍光抗体法によるアミロイド染色を施し,左半球に対しては,GFAP,ラクトトランスフェリン(LF)およびHLA-DR等の抗体を用いた免疫組織化学的染色を行った.LFによる老人斑(SP)およびアルツハイマー原線維変化(NFT)の検索では,ATD症例それぞれにおいてSPが優位に出現するもの,NFTが優位に出現するものがあり,また,好発部位においても一定していなかった.さらに同一症例においても部位によってSPが多数出現する部位とNFTが多数出現する部位があり,極めて多彩な表情を示した.GFAPによるreactive astrocyteおよびDRによるreactive midrogliaの検索ではATDのみならず対照群においても出現が認められたが,概ねATDに多く認められ,しかも,SPおよびNFTの出現頻度の高い部位に多く認められる傾向にあった.痴呆症状の有無が不明であった.2例については,部位別に程度の差は認められるが,総合的に判断すると,ATD症例であったと推定された.しかし,変化の認められない部位もあり,法医鑑定に応用するためには,本研究で行なったように連合野皮質全般にわたって検索を行ない,総合的に判定する必要があることが示唆された.当教室ならびに兵庫県監察医務室において行った法医解剖例のうちで,アルツハイマー型痴呆(ATD)と生前に診断されていた5例(症例1および症例36)および65歳以上の非痴呆3例(症例2, 7, 8)について,剖検時に摘出した脳の重量を測定し,右半球をそのまま4%ホルムアルデヒド溶液に浸漬固定し,左半球に0.51.0cmの厚さで前頭断を施し,4%パラホルムアルデヒド-0.01Mリン酸緩衝溶液(pH7.4)で2, 3日固定後,15%しょ糖-0.01Mリン酸緩衝溶液(pH7.4)に浸漬し保存した.左右それぞれから,海馬,扁桃核,前頭連合野(上前頭回),側頭連合野(上側頭回),連合連合野(角回)および高次視覚連合野を切り出し,右半球には,古典的染色に加え,蛍光抗体法によるアミロイド染色を施し,左半球に対しては,GFAP,ラクトトランスフェリン(LF)およびHLA-DR等の抗体を用いた免疫組織化学的染色を行った.LFによる老人斑(SP)およびアルツハイマー原線維変化(NFT)の検索では,ATD症例それぞれにおいてSPが優位に出現するもの,NFTが優位に出現するものがあり,また,好発部位においても一定していなかった.さらに同一症例においても部位によってSPが多数出現する部位とNFTが多数出現する部位があり,極めて多彩な表情を示した.GFAPによるreactive astrocyteおよびDRによるreactive midrogliaの検索ではATDのみならず対照群においても出現が認められたが,概ねATDに多く認められ,しかも,SPおよびNFTの出現頻度の高い部位に多く認められる傾向にあった.痴呆症状の有無が不明であった.2例については,部位別に程度の差は認められるが,総合的に判断すると,ATD症例であったと推定された.しかし,変化の認められない部位もあり,法医鑑定に応用するためには,本研究で行なったように連合野皮質全般にわたって検索を行ない,総合的に判定する必要があることが示唆された.申請した設備備品は予定通り購入し、当教室および兵庫県監察医務室において行った法医解剖例のうちで、1)明らかにアルツハイマー型痴呆と臨床的に診断されていた症例、16例(男性4例、女性12例、4985歳)。2)入院歴や通院歴はないが生前の行動からアルツハイマー型痴呆が疑われた、夜間の路上徘徊、赤信号無視で交通事故死した事例、山中にて道に迷い凍死や転落死などした事例など、4例(男性3例、女性1例、7285歳)。3)60歳以上で知能・行動などが普通の状態と判断された対照例55例(6096歳)。の4群について、現在までに、Bielschowsky、Bodianおよび渡辺法の鍍銀染色を施した組織切片を検鏡し、Khachaturianのアルツハイマー型痴呆剖検診断基準によってアルツハイマー型痴呆と診断された脳の凍結薄切切片にGFAP、LCA、HLA-DR、amyloid PおよびC_4d染色等の免疫組織化学的染色を行っている。アルツハイマー型痴呆剖検脳では、対照群に比べて老人斑周囲にreactive astrocyteおよびreactive microgliaの増加が認められている。Congo redとGFAP染色の二重染色では老人斑のアミロイド芯がCongo red染色で、周囲のreactive astrocyteがGFAP染色でともによく染色されている。

thioflavin S染色ではアミロイド芯や血管壁沈着のアミロイドが黄白色の蛍光を発している。また、一部の神経原線維変化がアミロイドの染色性をもつかは不明である。PGP9.5(Protein gene product 9.5)およびシナプスフィジンを用いた蛍光抗体法については、現在準備段階である。前年度に引き続き,当教室ならびに兵庫県監察医務室において行った法医解剖例のうちで,アルツハイマー型痴呆(ATD)と生前に診断されていた例および65歳以上の非痴呆例について,剖検時に摘出した脳の重量を測定し,右半球をそのまま4%ホルムアルデヒド溶液に浸漬固定し,左半球に0.51.0cmの厚さで前頭断を施し,4%パラホルムアルデヒド-0.01Mリン酸緩衝溶液(pH7.4)で2,3日固定後,15%しょ糖-0.01Mリン酸緩衝溶液(pH7.4)に浸漬し保存した.左右それぞれから,海馬,扁桃核,前頭連合野(上前頭回),側頭連合野(上側頭回),連合連合野(角回)および高次視覚連合野を切り出し,右半球には,古典的染色に加え,蛍光抗体法によるアミロイド染色を施し,左半球に対しては,GFAP,ラクトトランスフェリン(LF)およびHLA-DR等の抗体を用いた免疫組織化学的染色を行った.LFによる老人斑(SP)およびアルツハイマー原線維変化(NFT)の検索では,ATD症例それぞれにおいてSPが優位に出現するものNFTが優位に出現するものがあり,また,好発部位においても一定していなかった.さらに同一症例においても部位によってSPが多数出現する部位とNFTが多数出現する部位があり,極めて多彩な表情を示した.GFAPによるreactive astrocyteおよびDRによるreactive microgliaの検索ではATDのみならず対照群においても出現が認められたが,概ねATDに多く認められ,しかも,SPおよびNFTの出現頻度の高い部位に多く認められる傾向にあった.痴呆症状の有無が不明であった2例については,部位別に程度の差は認められるが,総合的に判断するとATD症例であったと推定された.しかし,変化の認められない部位もあり,法医鑑定に応用するためには,本研究で行なったように連合野皮質全般にわたって検索を行ない,総合的に判定する必要があることが示唆された.