hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
核医学の手法を用いる遺伝子導入ならびに発現の画像化と定量法の開発に関する研究

ならびに神経膠芽腫U-118MGのF-18標識deoxyglucose(FDG)の取り込みは細胞数に依存して増加し、それぞれ細胞数15×10^4で26.7%、21×10^4で32.5%であった。また、アミノ酸代謝、すなわち蛋白合成のマーカーと考えられるF-18標識methyl tyrosine(FMT)の取り込みは、SW1088が細胞数7.5×10^4で7.7%、U-118MGは細胞数10.8×10^4で7.4%であった。細胞膜を構成するphosphatidyl cholineの前駆体であるcholineのポジトロン核種標識体であるC-11標識cholineも腫瘍のイメージングを目的に臨床応用を行っているが、神経膠芽腫細胞のcholineの取り込みも細胞数依存性に増加し、17×10^4で11.2%であった。また、取り込みはインキュベートする温度および時間にも依存し、取り込みは37°Cでは4°Cよりも高く、30分後では10分後よりも高かった。以上の結果から脳腫瘍細胞は糖代謝、蛋白合成、細胞膜のマーカーであるポジトロン核種標識化合物を取り込み、それらの定量評価が可能であった。これらの化合物は、脳腫瘍をはじめ種々の癌の診断に用いられ、定量的評価が診断に有用であることが明らかにされ、研究発表を別頁のように行った。次の段階としてこれらの細胞をヌードマウスに移植した腫瘍モデルを作製し、腫瘍への取り込みならびに体内分布の画像化と定量化を行う。また、ソマトスタチン受容体遺伝子を獲得し、細胞への導入を行う。前年度の研究成果に基づき、脳腫瘍をはじめとする腫瘍の診断におけるポジトロン核種標識トレーサーの有用性評価を行った。臨床的にはフッ素(F-18)標識デオキシグルコース(FDG)が腫瘍診断のためのトレーサーとして最適であり広く用いられているが、偽陽性の多いことが指摘され、腫瘍の悪性度や治療効果の評価にはアミノ酸製剤など細胞増殖をよりよく反映するトレーサーとの対比の必要性が考えられた。ソマトスタチンアナログは当該受容体を発現する種々の腫瘍の増殖を抑制するため治療に用いられる。ソマトスタチン受容体には5つのサブタイプ、すなわちSSTR1-5が存在するが、おのおののサブタイプと腫瘍の特性との関連は明らかにされていない。オクトレオチドは10個のアミノ酸からなるソマトスタチンアナログであり、インジウム(In-111)標識体によりソマトスタチン受容体のイメージングが可能である。また細胞障害性の強いY-90で標識することによりソマトスタチン受容体を発現する腫瘍の治療にも用いられている。ソマトスタチン受容体を発現する腫瘍のIn-111-DTPA-D-Phe1-octreotideによる画像化を試みた。SSTR遺伝子導入は今年度までの研究では行うことができなかった。遺伝子導入法として最適な手法を選択したうえで今後の課題としたい。
出芽酵母における減数分裂時の微小管集合中心に関する分子生物学的研究

出芽酵母の胞子形成過程では、微小管集合中心(SPB)と胞子壁の成分が協調して機能して、全く新規に胞子壁を形成する。胞子壁の成熟に伴うグルカン合成機構に興味を持って研究を始めた。これまでの研究から、グルカン合成酵素の推定上の触媒遺伝子には3種類の相同遺伝子(FKS1、FKS2、FKS3)があり、生活環に応じて使い分けられていると報告されている。このうち、減数分裂特異的に転写が上昇するFKS3遺伝子の機能について解析を行った。遺伝子破壊した2倍体株fks3/fks3は減数分裂が正常に進み胞子を形成するが、生成した胞子は高温、エタノール、SDSなどのストレスに感受性を示し野生型と比べて生存率が著しく低下した。一方、fks1/fks1、fks2/fks2破壊株が生成する胞子はこれらのストレスに対して野生型と同様の感受性を示した。fks3/fks3株の胞子を電子顕微鏡で観察すると、野生型の胞子壁は厚さが一定であるのと比較して、変異体では胞子側に貫入したり部分的に薄くなるなどの異常な胞子壁が観察された。また、Fks3pの局在を間接蛍光抗体法で調べたところ、胞子形成直前に前胞子膜付近にドット状に局在していた。これらの結果から、Fks3pは正常な胞子壁形成に必須で胞子内部を保護するための堅牢な胞子壁を構築する役割があると明らかになった。さらに、Fks3pのグルカン合成機能を検証するために、栄養増殖時にFks3pが発現するようにFKS3のプロモーターを置換したキメラ遺伝子を作成した。fks1温度感受性株に過剰発現したところ制限温度においてグルカンの量と生育が回復したことから、Fks3pはFks1pと同じくグルカン合成に関わるの機能があると思われる。以上の実験結果から、グルカンが胞子壁の成熟の段階で重要な働きをしていること、新規タンパク質Fks3pがそのグルカン合成に関わっていることが分かった。現在、以上の結果をまとめて、雑誌に投稿する準備を進めている。
糖尿病におけるインスリンレセプター自己燐酸化能低下の機序解析 インスリンレセプターを基質としたProtein Tyrosine Phophatase(PTPase)活性の検討

糖尿病患者にみられるインスリン抵抗性は、インスリンレセプターの自己燐酸化の低下が主因であると考えられる。その際に、PTPaseが果たす役割を検討するため、大量のPTPase及びインスリンレセプターを発現させ、インスリンレセプターを基質としたPTPaseの酵素学的性状を検討せんとした。PTPase cDNA、インスリンレセプターcDNAを発現ベクター(pVL1392.pVL1393)に組み込んだ。これとともに野生型baculovirus(AcMNPV)を昆虫の細胞(sf9)へ感染させ、その際に組替えを起こさせ、組替え体を選択した。この組替えウィルスをsf9に感染させ、PTPaseを大量に発現、部分精製した。ラット肝より回収したインスリンレセプターを、^<32>P-ATPを用いて自己燐酸化し、これを基質として部分精製PTPaseの活性を測定、性状を検討した。その結果、このPTPaseは自己燐酸化したインスリンレセプターを基質とすることが明かとなった。また、ストレプトゾトシン糖尿病ラットの肝臓によりRNAを回収し、PTPase mRNAの発現量を測定した。その結果、非糖尿病ラットに比し、PTPase mRNAの発現量は有意な差を認めなかった。従って、少なくともこのPTPaseは、糖尿病状態では、mRNAのレベルではなく、翻訳以降の段階またはその酵素活性の亢進により、インスリンレセプターの自己燐酸化能を低下させている可能性が推測された。さらに、発現ベクターpcDL-SRαにPTPase遺伝子を組み込み、培養肝細胞HepG2にtransfectし、部分精製したインスリンレセプターの自己燐酸化能を測定し、糖尿病状態におけるPTPaseの果たす役割を検討した。その結果、PTPaseを発現させたHepG2においては、インスリン刺激時のインスリンレセプターの自己燐酸化能の低下が認められ、このPTPaseはインスリンレセプターの脱燐酸化を起こすことが確認された。以上より、糖尿病におけるインスリン抵抗性の一因として、PTPase活性の亢進によりインスリンレセプターの脱燐酸化が進み、インスリンレセプターの自己燐酸化が低下していることが証明された。PTPasecDNA、インスリンレセプターcDNAを発現ベクター(PVL1392、PVL1393)に組み込んだ。野生型baculovirusの昆虫の細胞(Sf9)へ感染させ、その際に組替えを起こさせ、組替え体をplague hybridizaかon法を用いて選抉した。この組替えウィルスをsf9に感染させることにより、PTPaseを大量に発現させ、WGAカラムを用いて部分精製した。ラット肝より回収したインスリンレセプターを、インスリン存在下に^<32>P-ATPを用いて^<32>Pを取り込ませ、これを基質として部分精製PTPaseの活性を測定、性状を検討した。また、ストレプトゾトシン糖尿病ラットの肝臓、脾臓よりRNAを回収し、PTPasemRNAを測定した。その結果、非糖尿病ラットに比し、PTPasemRNAの発現量は有為な差を認めなかった。従って、少なくともこのPTPaseは、糖尿病状態では、発現量ではなく、その酵素活性の亢進により、インスリンレセプターの自己燐酸化能を低下させている可能性が推定された。

さらに、発現ベクターpcDLにPTPase遺伝子を組み込み、燐酸カルシウム法により培養肝細胞HepG2にtraustectし、部分精製したインスリンレセプターに自己燐酸化能の検討を行うことにより、糖尿病状態におけるPTPaseの果たす役割を検討している。糖尿病患者にみられるインスリン抵抗性は、インスリンレセプターの自己燐酸化の低下が主因であると考えられる。その際に、PTPaseが果たす役割を検討するため、大量のPTPase及びインスリンレセプターを発現させ、インスリンレセプターを基質としたPTPaseの酵素学的性状を検討せんとした。PTPase cDNA、インスリンレセプターcDNAを発現ベクター(pVL1392,pVL1393)に組み込んだ。これとともに野生型baculovirus(AcMNPV)を昆虫の細胞(sf9)へ感染させ、その際に組替えを起こさせ、組替え体をplaque hybridization法を用いて選択した。この組替えウイルスをsf9に感染させることにより、PTPaseを大量に発現させ、WGAカラムを用いて部分精製した。ラット肝より回収したインスリンレセプターを、インスリン存在下に^<32>P-ATPを用いて^<32>Pを取り込ませ、これを基質として部分精製PTPaseの活性を測定、性状を検討した。その結果、このPTPaseは自己燐酸化したインスリンレセプターを基質とすることが明らかとなった。また、ストレプトゾトシン糖尿病ラットの肝臓、脾臓よりRNAを回収し、PTPase mRNAの発現量を測定した。その結果、非糖尿病ラットに比し、PTPase mRNAの発現量は有意な差を認めなかった。従って、少なくともこのPTPaseは、糖尿病状態では、mRNAのレベルではなく、翻訳以降の段階またはその酵素活性の亢進により、インスリンレセプターの自己燐酸化能を低下させている可能性が推測された。さらに、発現ベクターpcDL-SRαにPTPase遺伝子を組み込み、燐酸カルシウム法により培養肝細胞HepG2にtransfectし、部分精製したインスリンレセプターの自己燐酸化能を測定し、糖尿病状態におけるPTPaseの果たす役割を検討した。その結果、PTPaseを発現させたHepG2においては、インスリン刺激時のインスリンレセプターの自己燐酸化能の低下が認められ、このPTPaseはインスリンレセプターの脱燐酸化を起こすことが確認された。以上より、糖尿病におけるインスリン抵抗性の一因として、PTPase活性の亢進によりインスリンレセプターの脱燐酸化が進み、インスリンレセプターの自己燐酸化が低下していることが証明された。
μオピオイド受容体遺伝子欠損マウスを用いたオピオイド拮抗性鎮痛薬の作用解析

"痛み"の治療において非常に重要な役割を果たしているオピオイド拮抗性鎮痛薬の作用機序を明らかにすることを目的として研究を行った。本邦で臨床使用されているオピオイド拮抗性鎮痛薬のうち、ブトルファノール、ペンタゾシンを中心として鎮痛作用機序を解析し、熱ならびに機械刺激による痛みに対する鎮痛効果の発現にはμオピオイド受容体が主要な役割を果たしているが、化学(内臓)刺激に対してはμおよびκオピオイド受容体がその効果の発現に重要であることを明らかとした。本研究では、種々のオピオイド鎮痛薬の抗侵害受容作用特性と分子機構を解明することを目的とし、本邦で臨床使用されているオピオイド拮抗性鎮痛薬に焦点を絞り、解析を行っている。本年度は、ブトルファノールを中心として解析を行い、熱的、機械的、並びに化学的な種々の異なる痛み刺激に対する抗侵害受容作用の評価を、野生型並びにμオピオイド受容体遺伝子欠損マウスを用いて行った。野生型マウスにおいてブトルファノールは、皮下投与により比較的速やかに鎮痛効果を発現し、その作用は投与後3時間以上持続していた。μオピオイド受容体遺伝子のホモ欠損マウスを用いた解析においては、ブトルファノールの抗熱、並びに抗機械的侵害受容作用は完全に消失していた。一方、抗化学的侵害受容作用は、野生型と比較して減弱は見られたものの、依然として有意な作用が確認され、その作用はκオピオイド受容体選択的拮抗薬を前処置することで消失した。さらに、ヒトオピオイド受容体各サブタイプに対する選択性、並びにアゴニスト活性の検討を行ったところ、ブトルファノールはμ及びκオピオイド受容体に対して比較的高い結合親和性を有し、μ、δ並びにκオピオイド受容体のいずれに対しても部分作動薬として作用することが明らかとなった。これらの結果はブトルファノールの熱並びに機械刺激に対する鎮痛効果の発現にはμオピオイド炉主要な役割を果たしているが、化学(内臓)刺激に対してはμ並びにκオピオイド受容体がその効果の発現に重要であることを示している。本研究成果は、痛みの種類・程度に合わせた適切なオピオイド鎮痛薬の使用による疼痛治療に対し、有意義な知見を提供すると考えられる。また本年度は、条件付け場所嗜好性試験(CPP法)における依存性の評価を行うための条件検討を行い、モルヒネを用いた我々の結果とこれまでの文献等の報告とを比較し同等の評価が行えていることを確認した。本年度は、ペンタゾシンを中心として解析を行い、熱的、機械的、並びに化学的な種々の異なる痛み刺激に対する抗侵害受容作用の評価を、野生型並びにμオピオイド受容体遺伝子欠損マウスを用いて行った。野生型マウスにおいてペンタゾシンは、抗熱、抗機械、抗化学的侵害受容作用を示していたが、μオピオイド受容体遺伝子のホモ欠損マウスを用いた解析においては、ペンタゾシンの抗熱、並びに抗機械的侵害受容作用は完全に消失していた。さらに、ヒトオピオイド受容体各サブタイプに対する選択性、並びにアゴニスト活性の検討を行ったところ、ペンタゾシンはμ及びκオピオイド受容体に対して比較的高い結合親和性を有し、μオピオイド受容体に対しては部分作動薬として作動しているが、δ並びにκオピオイド受容体に対しては比較的強い作用(モルヒネと同程度の作用)をもつ部分作動薬として作用することが明らかとなった。これらの結果はペンタゾシンの熱並びに機械刺激に対する鎮痛効果の発現にはμオピオイドが主要な役割を果たしているが、化学(内臓)刺激に対してはμ並びにκオピオイド受容体がその効果の発現に重要であることを示している。また、条件付け場所嗜好性試験(CPP法)を用いて依存性の評価を行ったところ、野生型ならびにホモ欠損マウスいずれにおいても、ペンタゾシン投与による有意な報酬効果は見られず、ペンタゾシンは比較的依存性の弱い薬物であることが示唆された。
硝子体手術が眼内組織，特に水晶体と網膜に与える影響について

今年度は、各眼疾患に対する硝子体手術後の水晶体の変化、特に核白内障の発生頻度ならびに核白内障を促進させる因子の検索を目的として研究を行った。過去5年間に、当病院眼科で行った硝子体手術症例のうち、術後1年目の水晶体所見が明らかな有水晶体眼症例215例236眼を対象とした。各症例の術後1年の時点における核白内障発生に及ぼす20因子ついて、単変量解析さらにロジスティック回帰分析による多変量解析を行った。その結果、従来言われていたように、高年齢は術後の核白内障発生に有意に関与していた(P<0.000001)。年齢の他に、核白内障を抑制させる因子として原疾患(糖尿病網膜症)があり、またガスならびにシリコンオイルタンポテ-デは核白内障発生を有意に促進していた。術前の硝子体出血、網膜剥離、手術回数などは核白内障発生に関与していなかった。以上の結果から、年齢が核白内障発生に大きく関わることに加えて、糖尿病網膜症患者ではその発生が抑制されることが推察された。さらに、眼内タンポナ-デの有無も核白内障の発生促進に関与していることがわかった。これらのデータは硝子体・白内障同時手術を選択する場合の資料となると思われた。
少数多体ハイパー核大規模解析のためのエマルション全面探査法の高効率・高速化

第3のクォーク:ストレンジを持つハイペロンは、現代の原子核物理学の最重要課題の一つである、核力をバリオン間相互作用として統一的な理解を促す知見を与える。本研究は、ハイペロンを含む原子核(ハイパー核)を過去の数十倍のデータで取得・解析を目指すための研究開発である。約百万のハイパー核事象が記録されている写真乾板(エマルション)の全面を、機械学習を施して高効率で高速に探査できる顕微鏡システムを実現する。このシステムは、二重ベータ崩壊の研究や中性子を用いたCTの開発などへの新展開も期待できるものである。
マガキから見出された細菌特有の適合物質エクトインの蓄積機構と生理的意義の解明

LC-MS/MSによるエクトインの分析法を確立し、本法によりマガキがエクトインを蓄積していることが明らかとなった。また、マガキには、細菌類には見られないエクトインの構造類縁体が複数存在していることが示された。細菌類の既知生合成酵素遺伝子がマガキから検出されなかったことから、マガキには未知のエクトイン生合成経路が存在する可能性がある。さらに、様々な海洋無脊椎動物がエクトイン類縁体を蓄積していることが明らかとなった。これらの組織蓄積量は適合物質として有意な濃度であることから、様々な海洋無脊椎動物において、エクトイン類縁体が浸透圧をはじめとしたストレス適応のために利用されていることが示唆された。マガキ組織中のエクトイン、ヒドロキシエクトインを高精度で定量的に測定するため、LC/ESI-MS/MSによる測定を行った。マガキの全ての軟体部組織由来の抽出試料を分析した結果、エクトイン、ヒドロキシエクトインとも、標準物質と同様の保持時間に、相当するマススペクトルが確認されたことから、マガキ組織における両物質の蓄積が示唆された。全軟体部組織の平均蓄積量は、エクトインが111.3 nmol/g、ヒドロキシエクトインは100.1 nmol/gであった。植物培養細胞における既報論文では、70nmol/g以上のエクトインが細胞内に存在すると濃度依存的に塩分ストレス耐性が増大することが報告されており、マガキにおいてもこれらの物質が、塩分ストレスに対して生理的に有為な働きを担う可能性が示唆された。次に、外套膜、肝膵臓、閉殻筋、生殖腺、エラの5種類の組織におけるエクトインおよびヒドロキシエクトインの分布を調べた結果、全ての組織においてエクトインおよびヒドロキシエクトインが検出され、その合計濃度は、432.8 nmol/g(肝膵臓)から103.5 nmol/g(エラ)の範囲であった。筋肉組織を含む様々な器官に両物質が蓄積していることから、マガキ組織内にエクトインを含有する細菌が存在するのではなく、何らかの機構でマガキ自身が蓄積していることが推察された。また、マガキから抽出したcDNAから細菌のエクトイン合成酵素群のcDNAクローニングを試みたが、現在までに遺伝子の同定には至っていない。組織分布の結果からも、マガキ組織のエクトイン・ヒドロキシエクトインは細菌由来である可能性は低く、生合成経路も新規である可能性も考えられた。さらに、マガキ以外の二枚貝・腹足類からもエクトイン・ヒドロキシエクトインが検出されたことから、これらの物質は、広く貝類が蓄積し利用していることが示唆された。LC/ESI-MS/MSによるマガキ組織中のエクトイン、ヒドロキシエクトインの解析を進めた結果、各物質の表品と一致するピーク付近に類似のピークの存在が明らかとなった。プロダクトイオンスペクトル分析の結果、それぞれエクトイン及びヒドロキシエクトインの異性体あるいは構造類似体である可能性が示唆された。すなわち、マガキにはエクトイン、ヒドロキシエクトインの類縁体がそれぞれ少なくとも2種存在することが明らかとなった。これらの類縁体の構造情報を得るために、マススペクトル分析等を試みたが、主に分離不良のため構造情報が得られるような精度の分析には至っていない。マガキと同じ二枚貝類のアサリ、ハマグリにはマガキとほぼ同レベルのエクトイン、ヒドロキシエクトイン類縁体が蓄積していた。また、腹足類(巻貝)では、バイ貝にマガキの約3倍のエクトイン類縁体が認められた一方で、サザエでは両物質ともに検出限界以下であった。さらに魚類および淡水産の貝類からは検出されなかった。さらに、マガキ組織中の蓄積量が短期的な塩分変化に伴い変化することも明らかになった。(ヒドロキシ)エクトイン類縁体は海産貝類には広く存在しており、淡水種では検出されなかったこと、また、塩分変化によって短期間で蓄積量が変化することから、適合物質として貝類が生合成し塩分適応に利用している可能性が示唆された。類縁体の存在が明らかとなったことは新たな展開であったが、これらの構造情報取得のための解析に遅れが生じている。蓄積量の塩分応答性の解析は終了したが、マガキ以外の水産生物の解析種数が少ないため、エクトイン蓄積の種分布についての知見が十分得られていない。これまでの研究で確立した手法により、潮間帯ー潮下帯に生息する無脊椎動物および藻類におけるエクトイン類縁体蓄積を検討した。その結果、測定した節足類・軟体類・棘皮類・脊索類すべての分類群と、褐藻・緑藻からエクトイン及びその類縁体の蓄積が確認されたことから、エクトイン類縁体は海洋無脊椎動物および海藻類に広く蓄積されていることが明らかになった。なお、これまで研究で、魚類及び淡水性貝類からは痕跡程度しか検出されていない。また、海洋生物におけるエクトイン生合成についての知見を得るため、細菌類のエクトイン生合成酵素群の遺伝子情報をもとに、海洋無脊椎動物・藻類のゲノムからエクトイン生合成酵素遺伝子を探索したが、現在までに有意な相同性を示す遺伝子は確認されていない。また、RT-PCRによるcDNAクローニングでも、細菌の合成酵素に類似した遺伝子は確認できなかった。このことから、これらの生物は、微生物由来のエクトインを蓄積しているか、細菌とは異なる生合成経路を持つ可能性が考えられた。

しかし、昨年度の研究で、海洋生物からは、細菌類には見られない複数の類縁体が検出されていることから、未知の生合成経路の存在する可能性が高いと考えられた。そこで、生合成酵素を含め、エクトインと相互作用するタンパク質を探索するため、アフィニティークロマトグラフィーを実施した。その結果、エクトインに結合能を持つ複数のタンパク質を検出した。LC-MS/MSによるエクトインの分析法を確立し、本法によりマガキがエクトインを蓄積していることが明らかとなった。また、マガキには、細菌類には見られないエクトインの構造類縁体が複数存在していることが示された。細菌類の既知生合成酵素遺伝子がマガキから検出されなかったことから、マガキには未知のエクトイン生合成経路が存在する可能性がある。さらに、様々な海洋無脊椎動物がエクトイン類縁体を蓄積していることが明らかとなった。これらの組織蓄積量は適合物質として有意な濃度であることから、様々な海洋無脊椎動物において、エクトイン類縁体が浸透圧をはじめとしたストレス適応のために利用されていることが示唆された。計画していた既存のHPLCによるエクトイン定量法がマガキ抽出物には適応困難であったため、質量分析による定量法を確立した。また、マガキ以外の貝類からのエクトインの検出は、当初の計画にはない新たな展開であった。エクトイン蓄積の塩分ストレス応答性の解析は次年度に実施することとなったが、全般的には順調に進展している。各類縁体の構造情報を得るための分析条件の検討、各種類縁体の高精度定量分析のための分離条件の検討を行う。生合成経路に関する情報を得るためにエクトインをリガンドとしたアフィニティークロマトグラフィーを行い、生合成酵素の同定を試みる。海洋生化学エクトイン蓄積の塩分ストレス応答性を検討するとともに、当初の計画に従い、マガキにおけるエクトイン生合成についての解析をすすめる。しかし、細菌での既知経路とは異なる生合成経路を有する可能性が高まったことから、実施する実験を若干変更し、エクトインをリガンドとしたアフィニティークロマトグラフィーと、質量分析を組み合わせたタンパク質同定を行い、生合成酵素を含めたエクトインに親和性のあるタンパク質の同定を試みる。また、エクトインが細菌由来である可能性も否定されていないため、抗生物質による無菌化によるエクトインの消長もさらに検討をすすめる。さらに、他の貝類からエクトインが検出されたことから、各種水産生物におけるエクトイン蓄積の分布についても、解析を進める。LC-ESI/MS/MSによる分析法を確立しているため、効率的な解析が可能であると考えている。今年度は概ね計画通りに使用したが、平成26年度からの繰越額とほぼ同金額が次年度使用額となった。エクトインの定量分析法が当初計画から変更になり、カラムや溶離液等の消耗品について、既存の物を活用できたため、支出が小さくなった。類縁体解析のための質量分析のカラム・試薬などに使用する。今年度の研究でマガキ以外の水産生物におけるエクトイン蓄積が明らかとなったため、今後は、様々な水産生物の組織について広く分析を進める必要が生じた。次年度使用額は、そのための分析用の消耗品費に使用する。
保育者の学習過程を支える園内研修とリーダーシップの検討

第1には、園内研修に関して、外部研修の参加者に対し問紙による調査を行い,回答者数は1658名の回答を得た。うち園長・副園長など管理職243名,ならびに担任など職員1359名を対象として、園内研修の課題と工夫を分析した。その結果,管理職は職員が自ら意見を述べるなど積極的な参加を求めているのに対して,職員はより具体的な子どもの見方などを身につけたいと感じていた。管理職・職員とも,時間の確保や全員が参加できることが重要であると捉えており,それが質の向上にとって大切であると考えていた。以上のことから,園としてはより協働的で創発的な園内研修を促進し,全ての職員が積極的に参加できるような工夫が必要であることが示唆された。第2には、園内研修等を行うリーダーである園長に注目し、特に私立幼稚園園長を対象に2018年10月から12月にかけてアンケート調査を全国私立幼稚園6,877園のうちの約35%を任意に抽出し、2,484園に依頼し,857の回答を得た。それを9つの職務の内、1園の運営と5園内の環境整備を運営業務、2教職員指導と7園内研修を職員指導業務、3行政との連絡と4経理を事務職務としてまとめ、3つの職務内容で最も割合の高い職務で、運営職務中心園長(460名,53.7%)、事務職務中心園長(67名,7.8%)、職員指導中心園長(169名, 19.8%)に分類し、3つの内の最大値が2つで同じ場合は、バランス職務園長(100名, 11.7%)とした。その結果、園長が自園の教育理念や運営方針が職員集団と共有していることが事務職務中心園長で有意に低いこと、園長の業務の手応えについても、事務職務中心園長は「その他」が有意に高く、職員指導職務中心園長は「保育者の育成」が有意に高く、「園の経営」が有意に低いというようにタイプによるい異なることが明らかになった。実際に分析を行う中からアイデアが生まれ特に私立幼稚園園長の事業研究について深めることができている。研究分担者の所在大学が全国に点在しているので、スカイプ等を適切に活用したり、合宿などを行い、集中的に研究を進めていく。研究所年度である本年度は第一に研究実施体制を固め、各地域において研究協力園への依頼や予備調査を始めた。第二に園リーダーシップ、園内研修システム、保育者の学習過程、保育プロセスの質に関する先行研究のレビューとそれを交換交流し学び合う会合を複数回スカイプ等も活用しながら実施することによって、現在の先行研究課題と本研究プロジェクトが問うべき課題を明らかにした。そしてその一部は、保育におけるリーダーシップ研究の展望としてまとめた。その中ではリーダーシップは社会文化の影響を受けるため、各地域と共にその園の園文化を考えていくことやそこにおける談話様式や記録様式、使用ツールにもメーを止めてること、まだリーダーシップが誰にとっての学びを保障するのかという観点から多様な参加者の情報収集の必要性を明らかにした。そして翌年度にむけて園内研修の本の刊行準備やPEQMという写真を用いた環境に関わる研修ツール報告書を発行するための準備等にも取り組んだ。そして第三に第一、第二をふまえて調査をじっすするにあたり収集すべきデータやそれを記載するワークシートなどの調査ツールの開発を行い、1のパイロット園で思考を試みはじめた。ただし保育プロセスの質に関しては問うことが難しく、開発はまだ未定である。またさらに第四に実際にパイロット研究を実施する中で、リーダーシップに関して検討をしていく中では公立の園とは異なり、私立、民間園ではファミリービジネスとして継承されるケースが多いことからそこに焦点を今回は絞り、そのリーダーシップを問うことの必要性が議論され、新たな研究課題として導出され、聴き取り調査等を実施した。保育プロセスの質に関するスケール開発は十分に本年度行うことはできなかった。それは客観的信頼性を高めるスケール開発がかなり困難であることがわかったためである。また園内研修に関しても新たな課題として私立幼稚園、民間保育所の園長リーダーシップを焦点化して検討することが必要という新たな課題が見つかったために、当初の計画通りというよりはより意味のある課題は何かを検討するのに時間を要した。本年度の計画として4点の研究を行った。第一に、保育研修の質および保育者の学習過程を評価し、複数回の協議会や展開過程に関するデータの収集がある。この点に関しては各研究者が各地域で関与する園において研修に関しての振り返りができるようなシートを作成し毎回参加者に記録をしてもらうことを行いまたその一部の園では談話記録を作成し16園23の研修会事例収集を行い、そこでのシートのデータ入力や事例を紹介しながらの検討までを行った。その一部は30年度のヨローッパ幼児教育学会で発表予定である。また第二には、園外での研修参加者に園内研修に関して尋ねる質問紙調査を実施し、1071名の回答を複数の研修会において収集しデータを入力し予備的な分析を行った。第三に、リーダーシップに関しては私立幼稚園、民営保育所での事業継承という点からリーダーシップの問題にアプローチし、ファミリービジネスの事業継承の在り方として次世代園長に制約的・先導的・実質的という事業継承に3タイプがあることを見出し、29年度の乳幼児教育学会で発表し、さらに典型的な3名に焦点を当てた自立性と制約性の観点から園運営の在り方に関する研究を行った。

そして保育理念を受け継ぐという制約性と、代替わりした園長のもと保育者集団組織をどの様に作るのかという自律性を共通して感じつつも、園改善部分については、保育の中心的な活動の改善を行うか、周辺的な活動から行うか、といった運営改善の着手点に違いがあることを明らかにした。本結果は30年保育学会で発表予定となっている。第四には、園内研修のためのツール開発として、PEMQ(写真を用いた保育環境の質評価法)について各園や養成校での事例を含めた研修のための冊子を印刷作成した。また本内容を日本教育方法学会でも報告した。さらにこの事例集をもとに30年度には他園の一般保育者にも使える形のブックレット開発を行う予定である。上記に記したように年度当初にたてた計画についてはより研究の焦点化を図りその焦点部分についての研究を進めるということを行っており、当初の予定通り順調にデータ収集や分析を始められている。第1には、園内研修に関して、外部研修の参加者に対し問紙による調査を行い,回答者数は1658名の回答を得た。うち園長・副園長など管理職243名,ならびに担任など職員1359名を対象として、園内研修の課題と工夫を分析した。その結果,管理職は職員が自ら意見を述べるなど積極的な参加を求めているのに対して,職員はより具体的な子どもの見方などを身につけたいと感じていた。管理職・職員とも,時間の確保や全員が参加できることが重要であると捉えており,それが質の向上にとって大切であると考えていた。以上のことから,園としてはより協働的で創発的な園内研修を促進し,全ての職員が積極的に参加できるような工夫が必要であることが示唆された。第2には、園内研修等を行うリーダーである園長に注目し、特に私立幼稚園園長を対象に2018年10月から12月にかけてアンケート調査を全国私立幼稚園6,877園のうちの約35%を任意に抽出し、2,484園に依頼し,857の回答を得た。それを9つの職務の内、1園の運営と5園内の環境整備を運営業務、2教職員指導と7園内研修を職員指導業務、3行政との連絡と4経理を事務職務としてまとめ、3つの職務内容で最も割合の高い職務で、運営職務中心園長(460名,53.7%)、事務職務中心園長(67名,7.8%)、職員指導中心園長(169名, 19.8%)に分類し、3つの内の最大値が2つで同じ場合は、バランス職務園長(100名, 11.7%)とした。その結果、園長が自園の教育理念や運営方針が職員集団と共有していることが事務職務中心園長で有意に低いこと、園長の業務の手応えについても、事務職務中心園長は「その他」が有意に高く、職員指導職務中心園長は「保育者の育成」が有意に高く、「園の経営」が有意に低いというようにタイプによるい異なることが明らかになった。実際に分析を行う中からアイデアが生まれ特に私立幼稚園園長の事業研究について深めることができている。全国各地に研究者が散在していることで多様な園内研修等の研究ができる一方で集まっての会合を頻繁に持つことは難しいため、学会等の夜などを活用して研究会を実施することによって、研究発表と研究進展プロセスの連動を図ることを試みる。共同研究者が全国各地に点在しており頻繁の研究会開催が難しい状況の中で。メーリングリストの活用や学会時には必ず会合を開くなどを行ってきた。今後はさらにこの体制と共にスカイプ等の活用や、データをすでに収集したので今度は地区別分担ではなく研究内容の専門性によって成果のまとめを分担することによって、より効果的効率的な研究推進体制の構築を目指す予定である。
脳梗塞超急性期におけるMRIを使用した実用的脳循環代謝評価法の確立

本年度は,脳梗塞においてMRスペクトロスコピーで計測されるLactateの量と,PETで測定される酸素摂取率(OEF),酸素消費量(CMRO_2)との間に相関があるかどうかを検討した.目的:嫌気性代謝により生じるLactateを測定することで,脳梗塞における脳代謝の指標であるOEFとCMRO_2が推定できるかどうかを検討するために,それらの相関の評価を行った.方法:慢性期脳梗塞患者12名の16検査を対象とした.脳梗塞周辺部脳組織に2ヶ所のROIを置き,また,対側の健常領域にコントロールとして1ヶ所のROIを置いた。MRスペクトロスコピーにて,LactateとNAAの量を測定し,Lactate/NAA比にて標準化を行った.PETにてはOEFとCMRO_2を測定した.結論:脳梗塞においてMRスペクトロスコピーで計測されるLactateの量から,PETで測定されるOEFの推定がある程度可能であることが示唆された.しかしながら,Lactateの量からCMRO_2を推定することは困難であると推定された.脳虚血超急性期におけるMR灌流画像の有用性の検討を以下のごとく行った。これらの内容は日本医学放射線学会(2004年4月、横浜)および北米放射線学会(2004年11-12月、Chicago)において発表した。目的:脳虚血超急性期(発症24時間以内)において、MR灌流画像の一つであるMTT(平均通過時間)画像から得られるパラメータによる最終梗塞域の予測能の評価を行うこと。方法:脳虚血超急性期の患者13名(男性8名,女性5名,年齢3588歳,平均66歳)を対象とした。MTT画像による異常灌流域を、拡散強調画像、最終梗塞巣と比較し中心部から、領域1:拡散異常・最終梗塞(Core)、領域2.:灌流異常・最終梗塞、領域3:灌流異常・梗塞なしに区分し、対側の正常灌流域をコントロールとして評価した。MR灌流画像はsingle-shot GRE-EPI法を使用し、体重あたり0.05mmol/kgのGd-DTPAと20mLの生食水を肘静脈から2mL/秒の速度で急速静注し、first-moment法によりMR MTT画像を作成した。拡散強調像はsingle-shot SE-EPI法を使用した。画像解析ソフトにDr.Viewを使用し、各領域のMTT値、MTT値の対側との差および比の3パラメータを検討した。結果:MTT値は、領域1:9.6±2.5秒、領域2:10.3±2.5秒、領域3:8.5±0.8秒、対側:7.3±0.8秒であった。対側とのMTT差は各々、2.3±2.0秒、2.9±1.7秒、1.3±0.5秒で、MTT1比は各々、1.3±0.3、1.4±0.2、1.2±0.07であった。MTT値、MMT差、MTT比の3パラメータはともに4領域の違いに有意差が認められ(ANOVA, p<0.001)、また、領域2と領域3の間にも有意差を認めた(p<0.050.01)。結論:脳虚血超急性期において拡散強調像との組み合わせにおり、MR MTT画像から得られるMTT値、MMT差、MTT比の3パラメータはともに、最終梗塞域を予測するpotentialがあると思われる。本年度は,脳循環代謝の指標である平均通過時間(MTT)を使用して,モヤモヤ病の脳循環代謝に関する研究を行った。また,この内容はAJNR Am J Neuroradiol誌2006年2月号27巻:391-397に発表した。目的:脳血管狭窄を進行性にきたすモヤモヤ病において,脳の循環代謝と血管造影所見との関係は,いまだ完全には解明されてはない。この研究の目的は,モヤモヤ病における脳の血行動態をMR灌流画像と脳血管造影により評価することである。方法:モヤモヤ病患者20人を対象とした。MR灌流画像から求められるMTTを,前頭葉内側部,前頭葉後部,後頭葉,および基底核で計測した。脳血管造影から,内頚動脈と後大脳動脈の狭窄の程度とモヤモヤ血管と脳軟膜吻合の発達の程度を評価した。測定を行った各領域のMTTと脳血管造影の所見との対比検討を行った。結果:MTTは,内頚動脈の狭窄の程度と有意な正の相関を,前頭葉内側部(p<.01),前頭葉後部(p<.001),後頭葉(p<.001),および基底核(p<.001)で示した。また,MTTは,後大脳動脈の狭窄の程度と有意な正の相関を,前頭葉内側部(p<.001),前頭葉後部(p<.001),後頭葉(p<.001),および基底核(p<.001)で示した。MTTは,モヤモヤ血管の発達の程度と,前頭葉内側部(p<.05)と前頭葉後部(p<.01)において有意な正の相関を示した。多変量解析を行い,内頚動脈の狭窄の程度,後大脳動脈の狭窄の程度およびモヤモヤ血管の発達の程度は,MTTを延長させる独立した因子であることが判明した。結論:内頚動脈の狭窄と後大脳動脈の狭窄の両方がモヤモヤ病における総合的な脳灌流に影響を及ぼしていることが示された。

そしてまた,モヤモヤ血管の発達は脳循環代謝の障害を表していることが示唆された。本年度は,脳梗塞においてMRスペクトロスコピーで計測されるLactateの量と,PETで測定される酸素摂取率(OEF),酸素消費量(CMRO_2)との間に相関があるかどうかを検討した.目的:嫌気性代謝により生じるLactateを測定することで,脳梗塞における脳代謝の指標であるOEFとCMRO_2が推定できるかどうかを検討するために,それらの相関の評価を行った.方法:慢性期脳梗塞患者12名の16検査を対象とした.脳梗塞周辺部脳組織に2ヶ所のROIを置き,また,対側の健常領域にコントロールとして1ヶ所のROIを置いた。MRスペクトロスコピーにて,LactateとNAAの量を測定し,Lactate/NAA比にて標準化を行った.PETにてはOEFとCMRO_2を測定した.結論:脳梗塞においてMRスペクトロスコピーで計測されるLactateの量から,PETで測定されるOEFの推定がある程度可能であることが示唆された.しかしながら,Lactateの量からCMRO_2を推定することは困難であると推定された.
タンパク質翻訳後修飾体のライブイメージングと選択的単離を実現する新規解析法の開発

翻訳後修飾はタンパク質の機能調節において不可欠な役割を担っている。近年の質量分析技術の発達により、細胞内全タンパク質の翻訳後修飾の網羅的解析が可能となっているが、その後の個々のタンパク質修飾の高精度かつ簡便な検証に十分な手法はいまだ開発されていない。本研究では、BiFC/GFP-Trapシステムと翻訳後修飾結合プローブの組み合わせによる新規翻訳後修飾解析技術を開発することを目的としている。これにより、生きたままの細胞における翻訳後修飾のイメージングに加え、タンパク質修飾体のみを特異的に単離することが可能になり、質量分析技術との組み合わせで翻訳後修飾の検証や相互作用因子の同定が容易になる。
ルネサンス宗教思想研究:ジョヴァンニ・ピコの「人間の尊厳」の思想を中心に

本年度は採用第2年度にあたるが、昨年度に引き続き、ルネサンスの代表的哲学者であるピロ・デラ・ミランドラの著作を中心に研究し、成果を学会発褒及び論文発表の形で提出した。本年度の研究において主に扱ったのは、ピコの『900箇条の提題集』という著作である。このピコの『提題集』はルネサンスの思想を扱う著作において必ず言及されると言ってよいほど有名なものであるが、実際にはほとんどの研究者が、これまでこの著作の序文である『人間の尊厳についでの演説』にのみ依拠して議論を展開してきた。数年前にこの『提題集』の校訂版がようやく編集、出版されたことで、ピコの思想の全体像がようやく見え始めたと言えるが、特に国内の研究に目をやると、この著作を利用したものはまだ皆無に近い状況であり、今日の国際的なピコ批判研究の成果が十分に取り入れられているとは言えない。そこで、本年度は日本宗教学会、新プラトン主義協会という二つの学会発表で、共にこのピコの『提題集』に基づきながらこれまでのピコ研究に対する批判的な議論を展開し、新たなピコ理解を提示することを試みた。日本宗教学会での発表「ピコ・デラ・ミランドラにおける魔術と学知」においては、ピコの『提題集』における中心テーマと言える魔術論に焦点を当て、ピコがこの著作でそれまでの自然哲学の革新を試みた際、新たな方法論としていかなるものを提示しているかを明らかにした。また新プラトン主義協会での発表「ピコ・デラ・ミランドラにおけるプロクロスのヘナデスについて」においては、ピコが上記のような独特な理論を展開するに際し、いかなる知的伝統に依拠しているのかを明らかにするため、特にプロクロスのヘナデスの理論をピコがいかに理解し、利用しているかを議論した。この新プラトン主義協会での発表は、一部議論を手直しした上で学会誌「新プラトン主義研究」に論文として投稿された。昨年度は本研究計画にとっての第1年度目であったが、全体として本研究の主たる対象であるジョヴァンニ・ピコ・デラ・ミランドラの一次資料の読解に大半の時間を費やすこととなった。昨年度の49月期、103月期における研究状況はそれぞれ以下の通りである。・49月期ピコの『ヘプタプルス』を読み進め、その分析を行った。この著作は創世記注解の形を取りながらピコが宇宙論、人間論を述べる哲学的、神学的な著作であるが、研究の結果、この著作を支配しているのが諸世界の階層的秩序を重視するプラトン主義的な「調和の理論」であること、そしてピコの人間論も人間の自由の主張よりもむしろ諸世界との調和に重点を置いていることが確認された。この研究の成果は、昨年9月に開催された日本宗教学会において「ピコ・デラ・ミランドラにおける宇宙と人間」と題して発表された。・103月期ピコの『900箇条の提題集』を読み進め、その分析を行った。この著作は数十人にも上る古今東西の哲学者の学説を収集し、分析するという形でピコが一種の学問改造計画について述べるものであるが、研究の結果、ピコが諸哲学の中でプロクロスのヘナデスの理論やカバラーのセフィロートの理論といった魔術的思想に転化させることが容易なものを特に重視していること、そしてピコの哲学の核心部分も魔術的思想に強く影響されていることが確認された。この著作の性質上、古代、中世の諸哲学に関する広範な予備知識が必要となったため、それらの文献の入手と読解に時間を要し、昨年度中に成果を発表するまでには至らなかったが、本研究の成果は現在執筆中の論文「ピコ・デラ・ミランドラにおける魔術的神秘思想」において発表予定である。
遺伝的背景の異なる高齢マウスを用いた栄養調節と運動の併用による健康増進効果の解析

本研究は、遺伝的背景が異なる高齢マウスを用い、短期間の栄養素補給と運動の併用による健康増進効果を解析した基礎研究である。高齢マウスに食品由来のフラボノイドを継続摂取させると同時に、1回30分、1週間に4回のインターバル速歩運動を3週間実施すると、高血糖状態が改善し、肥満に対しては運動単独よりも効果が高いことが見いだされた。栄養素の摂取量、摂取期間やルート、作用機構等の詳細な解析が必要ではあるが、短期間の介入でも健康増進効果が示唆されたことから、高齢者の健康志向の促進に役立つ知見であると考えられる。本研究は、肥満高齢者に実施した短期間の栄養調節と運動との併用による健康増進効果を、遺伝的背景を異にする高齢モデル動物を用いて実証し、高齢者が意欲的かつ継続的に健康増進に取り組むための動機付けとしての『健康増進短期プログラム』の提案をめざしている。1年目の平成21年度はスタートアップ期間に位置づけ、1、高齢動物の養育と高齢に至るまでの身体パラメータ調査、2、候補栄養素のスクリーニング月齢の妥当性を検討し、下記の成果を得た。結果1.平成22年3月末の時点で栄養調節試験動物は8月齢に達し、順調に養育している。また、結果2の事由により、当初計画した12月齢より若齢も必要になったため、新たな動物の養育を開始した。さらに、血漿高密度リポタンパク質HDLの構成タンパク質であるアポリポタンパク質A-II(apoA-II)のタンパク質レベルを調整したマウス(mApoa2^cトランスジェニックマウス、信州大学にて開発・維持)を用い、体重測定、空腹時血糖値測定(2-10月齢)、および糖負荷試験(3,6,9,月齢)を行い、各種パラメータ変化を解析した。apoA-II高発現マウス(Tg+/+)は短命で、体重は野生系統(Tg-/-)の約70%、オスは若齢期に空腹時低血糖を示した。これらmApoA2^cトランスジェニックマウス(Tg+/+、Tg+/-、およびTg-/-)を基準系統とし、今後の研究を遂行していく。結果2.1月齢からの継続投与により抗老化作用が明白だった栄養素を同系統の促進老化モデルマウスに7月齢から適用した結果、投与6ヶ月後(13月齢)までに著明な健康増進効果はみられなかった。この結果より、候補栄養素のスクリーニングは当初計画の12月齢に加えて若齢動物も用いることにした。本研究は、肥満高齢者の短期栄養調節とインターバル速歩運動との併用により得られた健康増進効果(J.Sawashita, et al.Exp.Gerontol.44(10):666-75.2009)を、異なる遺伝的背景を有する高齢マウスを用いて多角的に実証し、高齢者が意欲的かつ継続的に健康増進に取り組む動機付けとしての『健康増進短期プログラム』の提案をめざすものである。本研究に先行して実施中の他研究において、老化促進モデルマウスに若齢期からの継続摂取によつて極めて有効な抗老化作用を示した栄養素(本研究の対照物質)が、7あるいは13月齢からの継続摂取では有効な抗老化作用を示さない可能性が高いことが判明したため(第57回日本実験動物学会総会で発表)、平成22年度当初に本研究計画を見直し、高齢群を12月齢までの中高齢群に、さらに、若齢群も同時に解析することとして、現在、研究遂行中である。平成23年3月末現在、下記の候補栄養素について、中高齢と若齢マウスを用いた抗老化効果を解析中にあり、平成23年度内には、高い抗老化作用を示した栄養素を用い、運動との併用効果を解析する計画である。運動併用効果を解析するためのマウスは、平成22年度内に動物飼養施設にて飼育を開始しており、平成23年度夏季より実施の予定にある。候補栄養素・カロリー調節:コエンザイムQ10(対照)、ルチン、レスベラトロール、緑茶ポリフェノール、DL-αリポ酸、ロスマリン酸、カロリー摂取制限(コントロールの85%相当)本研究は、ヒト肥満高齢者の短期栄養調節とインターバル速歩運動との併用による健康増進効果(J Sawashita et al.Exp Gerontol 2009)を、高齢マウスを用いて生化学的、分子生物学的手法により実証し、高齢者が意欲的かつ継続的に健康増進に取り組む動機付けとしての『健康増進短期プログラム』の提案をめざすものである。平成22年度に、先行する別研究の結果をふまえて解析対象を12月齢までの中高年相当のマウスに変更したが、この月齢の肥満・高血糖マウスは若青年期の運動量とほぼ同価の活動性を有しており、解析項目の一つである「運動性の向上」について、栄養素とインターバル速歩運動の併用効果の実証が困難であった。そこで、再度、研究計画を変更し、より高齢のマウスを飼養して、種々の候補栄養素とインターバル速歩運動との併用による健康増進効果を解析した。

その結果、肥満・高血糖を示すマウスに対して、インターバル速歩運動を週4回実施すると、運動量や空腹時高血糖が著明に改善した。特に、トレーニング前の明らかな高血糖状態が、わずか2週間のトレーニングで正常値に近いレベルにまで改善した。しかし、各種栄養素と運動を併用して運動単独群よりもさらに健康増進効果が得られた項目は過体重の軽減のみで、そのほかの項目は運動単独群とほぼ同等であり、著明な健康増進効果を発揮する栄養素を見いだすには至っていない。今後は、栄養素の摂取期間、濃度の検討、他の栄養素についても探索するとともに、複数系路からの栄養素補給も試みる。また、解析時期も複数ポイント設定し、加齢に伴う身体変化に対して栄養調節とインターバル速歩運動がもたらす効果の実証をめざす。
内毒素接種方法による各リンパ系器官の免疫応答の相違

抗原の種類による免疫応答性の違いを検察する目的で、ラット歯肉にLPSをはじめとする数種類の異なった抗原を接種すると、抗原の種類によって抗体産生応答性(抗体産生細胞数、免疫グロブリンのクラス、サブクラス等)、主要な免疫応答の場(脾臓、リンパ節)等が異なることを、前年度報告した。我々はこれら異なった免疫応答性を調節している重要なファクターはヘルパーT細胞(Th)ではないかと考え、さらに抗原特異的なThについての検索を行ってきた。我々は今年度、抗原特異的なThをクローニングした。そして、それらクローンのサイトカイン産生能(IL-2、IFN等)、細胞性免疫誘導能、B細胞調節能、マイトゲン応答性等を検討し、それらの性質を報告した。また、これらThクローンにサイトカイン(IL-4、IFN等)を作用させ、増殖能、サイトカイン産生能等を検討した(九州歯科学会総会〔第54回,北九州,1994年6月11日.安西ら〕、歯科基礎医学会総会〔第36回,大阪,1994年10月17日.安西ら〕)。その結果、OVAではTh1タイプのクローン(IFN、IL-2産生、DTH誘導等)がLPSではTh2タイプのクローン(IL-2非産生、抗体産生能誘導、DTH非誘導等)が誘導されることを示した。また、これらThサブセットの解離は抗原の種類の違いにより生じたものであることを示唆し、異なったThサブセットが誘導されるために上述の異なった免疫応答性が誘導されるたものと推察した。(現在、雑誌に投稿準備中)。ラットのクローンThの報告は少なく、その性質はマウスとは若干異なり、また研究者間でも相違が認められる。特にLPS特異的なThのクローニングはほとんど見受けられないため、今後これらのクローンを用いて他の実験への応用も考慮中である。抗原の種類別の免疫応答性の相違を検索する目的で,ラット歯肉に抗原を接種し,惹起される抗体産生の場、免疫グロブリンのサブクラス,血清中のサイトカイン量を検索した結果,(1)抗原の種類別に脾臓と顎下リンパでは抗体産生応答に差異を認めた.蛋白抗原では主に顎下リンパ節で抗体(IgG)産生をみとめた.多糖抗原では顎下リンパ節(IgG>IgM)より脾臓(IgG>IgM)に強い抗体産生を認めた.殺菌抗原のE.coli(E.c)では顎下リンパ節,脾臓ともに抗体産生(igG>IgM)の誘導とA.naeslundii(A.n),P.gingivalis(P.g.)では主に顎下リンパ節に抗体産生(IgG>IgM)が誘導された.(2)抗原の種類別のリンパ器官,血清中のIgGのサブクラスに差異を認めた.リンパ器官の蛋白抗原ではIgGが,多糖抗糖では(IgG2a>IgG1>IgG2C>IgG2b)が認められた.細菌抗原ではIgG2aが最も多くIgG2b,LgG2c,IgG1も検出された.血清中の蛋白抗原ではIgG1が最も多くIgG2aも認められた.多糖抗原ではIgG2a>IgG1>IgG2b,LgG2cで,P.gではIgG2aが最も多く検出された.(3)抗原を歯肉に接種することによりサイトカイン量に変化が認められた.このことはIL-1の減少とIL-6の増加が認められた.

in vitroにおいて,ラットの胸腺のT細胞をconanavalin A,と培養し,培養上清を刺激物質とした.さらに脾臓のB細胞をLPSで刺激後,刺激物質(T細胞培養上清,IFN-gamma,IL-2,IL-4,IL-6等)を加えて培養した.その培養上清中のサイトカインの産生により免疫グロブリンのクラススイッチを調節していることが示唆された。(4)抗原の種類別のリンパ器官の培養上清中のIL-2R量は免疫グロブリンのサブクラス量に類似した結果を得た.抗原の種類による免疫応答性の違いを検索する目的で、ラット歯肉にLPSをはじめとする数種類の異なった抗原を接種すると、抗原の種類によって抗体産生応答性(抗体産生細胞数、免疫グロブリンのクラス、サブクラス等)、主要な免疫応答の場(脾臓、リンパ節)等が異なることを、前年度報告した。我々はこれら異なった免疫応答性を調節している重要なファクターはヘルパーT細胞(Th)ではないかと考え、さらに抗原特異的なThについての検索を行ってきた。我々は今年度、抗原特異的なThをクローニングした。そして、それらクローニングのサイトカイン産生能(IL-2、IFN等)、細胞性免疫誘導能、B細胞調節能、マイトゲン応答性等を検討し、それらの性質を報告した。また、これらThクローンにサイトカイン(IL-4、IFN等)を作用させ、増殖能、サイトカイン産生能等を検討した。(九州歯科学会総会〔第54回,北九州,1994年6月11日.安西ら〕、歯科基礎医学会総会〔第36回,大阪,1994年10月17日.安西ら〕)。その結果、OVAではTh1タイプのクローン(IFN、IL-2産生、DTH誘導等)がLPSではTh2タイプのクローン(IL-2非産生、抗体産生能誘導、DTH非誘導等)が誘導されることを示した。また、これらThサブセットの解離は抗原の種類の違いにより生じたものであることを示唆し、異なったThサブセットが誘導されるために上述の異なった免疫応答性が誘導されたものと推察した。(現在、雑誌に投稿準備中)。ラットのクローンThの報告は少なく、その性質はマウスとは若干異なり、また研究者間でも相違が認めれる。特にLPS特異的なThのクローニングはほとんど見受けられないため、今後これらのクローンを用いて他の実験への応用も考慮中である。