hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ファブリシウス嚢におけるB細胞の正的選択機構

〈抄録〉ファブリシウス嚢に取り込まれた抗原が、対応する抗原特異的なB細胞の抗体レセプターと結合することにより、B細胞は、正的選択を受け記憶B細胞に分化すると考えられる。抗原を結合しているファブリシウス嚢B細胞が記憶B細胞であると考え実験を進めていたところ、ファブリシウス嚢に捕捉された抗原は、母親(卵黄)由来のIgGによってファブリシウス嚢濾胞の髄質の濾胞樹状細胞に保持されていることが明らかになった。〈研究成果〉1.BSA(ウシ血清アルブミン)にロ-ダミン(赤い蛍光色素)を結合し(ロ-ダミン-BSA)、BSAに特異的な抗体を含む卵黄IgGにFITCを結合させた(FITC-YIgG)。2.ロ-ダミン-BSAをファブリシウス嚢内腔に、FITC-YIgGをニワトリの雛の静脈内に投与した。3.二日後のファブリシウス嚢の凍結切片を共焦点顕微鏡で観察したところ、抗原(BSA)は、抗体と複合体を作っていることが明らかになった。〈考察〉トリのファブリシウス嚢では、B細胞濾胞内で体細胞突然変異を繰り返すB細胞ミュータントの選択に、濾胞樹状細胞に保持された抗原抗体複合体が重要なはたらきをしていることが我々の研究で示唆された。これらは、哺乳類のB細胞濾胞に出来る胚中心で見られる現象と類似である。1。ファブリシウス嚢の個体発生を追って、bcl-xのmRNAを発現している細胞の局在をin situ hybridizationの手法を使って検索した。〈結果〉i).孵化前(外界抗原に曝される前)には、bcl-xをしている細胞がファブリシウス嚢濾胞の皮質領域に多く観察された。ii).孵化後(外界抗原に曝された後)には、それらbcl-xを表現している細胞は、急速に減少した。2。孵化前にファブリシウス嚢を腸管から隔離したトリ(BDL-chicken)のファブリシウス嚢におけるbcl-xの発現を検索した。〈結果〉孵化前(外界抗原に曝される前)と同様に、bcl-xを発現している細胞がファブリシウス嚢濾胞の皮質領域に多く観察された。〈まとめ〉ファブリシウス嚢におけるbcl-xの発現は、外界抗原の刺激に強く依存していることが明らかになった。<抄録>ファブリキウス嚢に取り込まれた抗原が、対応する抗原特異的なB細胞の抗体レセプターと結合することにより、B細胞は、正的選択を受け記憶B細胞に分化すると考えられる。抗原を結合しているファブリキウス嚢B細胞が記憶B細胞であると考え実験を進めていたところ、ファブリキウス嚢に捕捉された抗原は、母親(卵黄)由来のIgGによってファブリキウス嚢濾胞の髄質の濾胞樹状細胞に保持されていることが明らかになった。<研究成果>1.BSA(ウシ血清アルブミン)にロ-ダミン(赤い蛍光色素)を結合し(ロ-ダミン-BSA)、BSAに特異的な抗体を含む卵黄IgGにFITCを結合させた(FITC-YIgG)。2.ロ-ダミン-BSAをファブリキウス嚢内腔に、FITC-YIgGをニワトリの雛の静脈内に投与した。3.二日後のファブリキウス嚢の凍結切片を共焦点顕微鏡で観察したところ、抗原(BSA)は、抗体と複合体を作っていることが明らかになった。<考察>トリのファブリキウス嚢では、B細胞濾胞内で体細胞突然変異を繰り返すB細胞ミュータントの選択に、濾胞樹状細胞に保持された抗原抗体複合体が重要なはたらきをしていることが我々の研究で示唆された。
日本人ダリエー病及びヘイリー・ヘイリー病患者における遺伝型/表現型相関関係の解明

近年、DDおよびHHDの原因遺伝子が相次いで同定され、それらはATP2A2(DD)およびATP2C1(HHD)という、二つの異なるゴルジ小胞体膜上のカルシウムポンプをコードする遺伝子の変異によって起こることが明らかとなった。これらの発見により、臨床的、あるいは病理組織学的にも類似点の多い二つの疾患が、実は原因タンパクのレベルでも類似したカルシウムポンプの異常に起因すること、さらにこれらの疾患は加齢に伴うこれらのカルシウムポンプの量的な不足状態によって発症する(Haploinsufficiency)ことが判明した。また、臨床の場では鑑別が困難な症例や、確定診断に至らない症例でも、これらのカルシウムポンプ遺伝子の変異を検索することにより正確な診断が可能になった。しかし、現在までにこれらのカルシウムポンプ遺伝子の変異パターンと表現型(発症時期、重症度など)の関連性、いわゆる遺伝型/表現型相関関係(Genotype/Phenotype Correlation)に関する検討は殆どなされていない。また、一般的に遺伝性皮膚疾患では人種間で遺伝子変異の部位やパターンに違いが認められることが知られており、DD及びHHDにおいても遺伝型/表現型相関関係を解析するためには単一人種において多数例を解析することが重要と考えられる。本研究では、以上のことをふまえた上で、北大付属病院皮膚科の遺伝相談外来で、日本全国から20例以上の日本人DDおよびHHDの症例を集積し、遺伝子変異についての解析を行った。HHDの10例については既にその遺伝子変異を解析して論文にまとめている(Yokota K, et al. J Invest Dermatol 118 : 550-551, 2002)。DDの10例については現在解析が終了して、論文を投稿中である。しかし、現在までにこれらのカルシウムポンプ遺伝子の変異パターンと表現型(発症時期、重症度など)の関連性、いわゆる遺伝型/表現型相関関係〕(Genotype/Phentype Correlation)に関する検討は殆どなされていない。HHDの10例については既にその遺伝子変異を解析して論文にまとめている(Yokota K, et al. J Invest Dermatol 118:550-551,2002)。
鉄型ニトリルヒドラターゼ活性化蛋白質の構造機能相関の解析

ニトリルヒドラターゼ(NHase)は、システイン酸化体を配位子とする新規な非ヘム鉄または非コリンコバルト酵素である。申請者らは鉄型NHase遺伝子下流に存在するORFがこの酵素の組換え体発現に必須なNHase活性化蛋白質であることを見出した。同様にコバルト型NHaseにおいても活性化蛋白質遺伝子が報告されている。そこで、本研究課題では、NHase活性化蛋白質の構造と機能を明らかにすることを研究目的とし、以下の研究を行った。1.NHase活性化蛋白質とNHaseとの相互作用NHase活性化蛋白質における金属結合部位を予想されるモチーフ^<73>CXC^<77>Cの一つまたは全てのシステイン残基をセリンに置換した変異体を作製し、NHase発現ベクターをともに大腸菌によって共発現させた。その結果、得られた大腸菌粗抽出液のNHase活性はいずれも野生型の場合の15%以下になった。このモチーフはこれまでに報告された金属シヤペロンにも保存されており、NHase活性化蛋白質はNHaseへの鉄イオンの挿入に関与することが示唆された。His-tagを結合させたNHase活性化蛋白質をNHaseα、βサブユニットと共発現させ、Ni-NTAカラムに吸着させたところ、NHaseα、βサブユニットの両方ともNHase活性化蛋白質と共に溶出した。この結果は、NHase活性化蛋白質がNHaseα、βサブユニットと相互作用をすることを直接示した初めての成果である。2.NHaseファミリーに属する他の酵素に関する研究鉄型NHaseに見られる翻訳後修飾はコバルト型NHaseおよびNHaseと高い相同制をもつチオシアネート加水分解酵素にも保存されていることを明らかにした。また、チオシアネート加水分解酵素遺伝子のオペロンからは同様な活性化蛋白質遺伝子は同定されていない。同酵素構造遺伝子のみを含む発現ベクターを大腸菌に導入したところ、金属も修飾も含まないアポ型と思われる蛋白質が得られた。NHaseファミリーにおける金属の挿入や修飾形成機構は酵素によって様々な方法で行われるのかも知れない。鉄型ニトリルヒドラターゼ(NHase)は活性中心である非ヘム鉄センターにシステイン酸化体を配位子として有することが明らかにされた唯一の蛋白質である。この修飾の触媒反応に対する機能および生成機構はまたく解っていない。申請者らはNHase遺伝子下流に存在するORFがこの酵素の組換え体発現に必須であることを見出した。この結果は、このORF産物はニトリルヒドラターゼ特異的な金属シャペロン様分子として働くNHase活性化蛋白質であることを示唆している。本研究課題では、NHase活性化蛋白質の機能を明らかにし、NHaseにおける新規な活性中心形成機構を明らかにすることを研究目的とする。本年度は以下の研究を行った。(1)NHase活性化蛋白質抗体の作製-これまでのところシークエンスデータベース中でNHase活性化蛋白質に高い相同性を持つ蛋白質は見つかっていない。従って、この蛋白質はNHase特異的に作用しているユニークな蛋白質である可能性が高い。NHase活性化蛋白質のポリクローナル抗体作製を目的として、同蛋白質の精製を行った。NHase活性化蛋白質遺伝子をT7プロモータ下流にサブクローニングし、大腸菌に形質導入し、37度にて発現させたところ、封入体として発現した。

封入体を単離後、6M尿素にて可溶化し、6M尿素存在下でのSuperQトヨパールおよびResourceQカラムクロマトグラフィーを行い、SDS-PAGEで単一のバンドとなるまでに精製することに成功した。(2)NHase活性化蛋白質とNHaseαサブユニットの相互作用解析-NHaseにおける金属配位子は全てαサブユニット上にあるので、NHaseはαサブユニットと相互作用する可能性が高い。αサブユニットのN末端にHisタグを導入した組換え体をNHase活性化蛋白質と大腸菌で共発現させ、Ni-Hisタグアフィニティクロマトグラフィーによって精製したところ、NHase活性化蛋白質は多くが素通り画分に溶出したが、αサブユニット同じ位置にも溶出した。SDS-PAGEのバンド強度からこの画分には1:20程度のモル比(NHase活性化蛋白質:NHase)でNHase活性化蛋白質が含まれていることが解った。すなわち、αサブユニットの一部がNHase活性化蛋白質と複合体を形成しているものを予想される。現在、イオン交換、疎水相互作用、ゲル濾過HPLCを用いてこの複合体の単離を試みている。鉄型ニトリルヒドラターゼ(NHase)は、活性中心である非ヘム鉄センターにシステインスルフェン酸(Cys-SOH)、システインスルフィン酸(Cys-SO2H)というシステイン酸化体を配位子として有することが明らかにされた初めての蛋白質である。この修飾の触媒反応に対する機能および生成機構はまたく解っていない。申請者らは鉄型NHase遺伝子下流に存在するORFがこの酵素の組換え体発現に必須であることを見出した。この結果は、このORF産物はニトリルヒドラターゼ特異的な金属シャペロン様分子として働くNHase活性化蛋白質であることを示唆している。また、同様にコバルトを中心金属とするNHaseにおいても構造遺伝子下流に活性化蛋白質遺伝子がコードされていることが示唆されている。本研究課題では、NHase活性化蛋白質の機能を明らかにし、NHaseにおける新規な活性中心形成機構を明らかにすることを研究目的とする。本年度はNHase活性化蛋白質をネイティブな条件で発現させて単離精製し、その機能を解析した。NHase活性化蛋白質遺伝子をT7プロモータ下流にサブクローニングした発現プラスミドを27度で培養し、0.1mMIPTGで10時間誘導し、NHase活性化蛋白質が可溶性画分に発現させた。菌体を超音波破砕した後、SuperQトヨパール、Butylトヨパールカラムを行い、NHase活性化蛋白質をSDS電気泳動CBB染色でほぼ単一バンドとなるまで精製することに成功した。精製したNHase活性化蛋白質を尿素変性したNHaseαサブユニット、NHaseβサブユニットまたは両サブユニットの混合物と種々の条件で混合し、NHase再構成の促進活性を調べたが、いずれの条件でもウシ血清アルブミンと同程度の促進効果しか示さなかった。また、翻訳後修飾の形成促進効果に関しても同様であった。
モジュラー設計可能な暗号プロトコルの設計技法に関する研究

既存の暗号技術は同時実行や組み合わせ利用された場合に安全性を保証するものではない。ほとんどの電子機器がネットに接続され、個人認証、端末認証などの様々な暗号技術を内包するサービスがマルチタスクで実行される社会を想定して、同時実行や組み合わせ利用された場合でも安全性を保証できるモジュラー設計可能な暗号プロトコルのための暗号技術を開発する。
複雑ネットワーク構造がもたらすロバスト臨界性の解明

複雑ネットワークと総称される、ランダムで非一様なつながり方をしたグラフ上のダイナミクスは、ユークリッド格子では見られない振舞いを示す。グラフの構造次第で、臨界点の唯一性は失われ、臨界状態がロバストに続く臨界相に代わる。本研究は複雑なつながり方がもたらすロバストな臨界性に焦点をあてることによって、グラフの構造とダイナミクスの関係の理解を深化させる。具体的には、以下の課題を解決していく:【1】ロバストな臨界性が出現するグラフの幾何的条件の特定【2】ロバストな臨界性を伴う平衡・非平衡統計物理モデルのダイナミクスの理解【3】ロバストな臨界性を伴う複雑ネットワークの生成メカニズムの解明複雑ネットワークと総称される、ランダムで非一様なつながり方をしたグラフ上のダイナミクスは、ユークリッド格子では見られない振舞いを示す。具体的には、以下の課題を解決していく:【1】ロバストな臨界性が出現するグラフの幾何的条件の特定【2】ロバストな臨界性を伴う平衡・非平衡統計物理モデルのダイナミクスの理解【3】ロバストな臨界性を伴う複雑ネットワークの生成メカニズムの解明
消化器癌における新規癌関連遺伝子REICの機能解析と臨床応用に関する研究

肝細胞癌、胆道癌の細胞株における実験で、REIC遺伝子の導入による癌細胞特異的なアポトーシスが誘導されることが証明された。また肝細胞癌手術検体を用いた免疫組織染色では、癌部でのREIC発現が低下していることが証明された。膵癌細胞株にヒトPBMCとREIC蛋白を加えることで、PBMCの樹状細胞への分化誘導を促進し、CTLの活性化を介した腫瘍免疫誘導効果をもたらすことが証明された。これらの結果をもとに、肝癌に対するREIC遺伝子導入治療の医師主導治験が開始された。REIC/Dkk-3遺伝子(以下REIC)は、様々な固形癌において、その発現が低下している。我々は難治性消化器癌に対するREIC遺伝子導入治療の有効性について検証した。膵癌、肝臓癌においても他の癌腫同様、細胞株、ヒト腫瘍組織におけるREIC発現低下を認めていた。膵癌、肝臓癌の細胞株にアデノウィルスベクターを用いてREIC遺伝子を導入することで、アポトーシスを誘導することが確認された。膵癌においては膵癌細胞株を移植したxenograftモデルマウスにおける抗腫瘍効果も確認されており、導入効率を改善した新型アデノウィルスベクター(Ad-SGE-REIC)を用いることで、従来のベクターと比較して有意に高い抗腫瘍効果を誘導できることが判明した。肝臓癌においても現在動物実験が進行中である。さらに遺伝子導入の副産物であるREICタンパクを、末梢血単核細胞(PBMC)とともに癌細胞に投与することで、PBMCの分化誘導を促進し、腫瘍免疫による抗腫瘍効果することが確認された。NOD/SCIDマウスにヒトPBMCと膵癌細胞を移植し、REICタンパクを投与することで、移植したリンパ球の癌細胞に対する細胞毒性が増強されることが判明した。この結果は、REICタンパクが樹状細胞の分化誘導を促進し、癌抗原の提示細胞として機能することで、キラーT細胞による抗腫瘍効果を高めている可能性がある。REIC遺伝子導入治療は局所の抗腫瘍効果のみならず、腫瘍免疫による転移性腫瘍などに抗腫瘍効果も期待できる可能性がある。今後は胆道癌、消化肝癌などに癌腫を広げ、さらに検証を進めていく予定である。当初の予定では、H27年度における計画は1REICの消化器癌における機能の解明、2新型アデノウィルスベクターAd-SGE-REICを用いた抗腫瘍効果の検討、3REIC蛋白を介した腫瘍免疫誘導効果の検討を行うこととしていた。前述の通り、23についてはいずれもREICの有用性が示され、2に関してはH28年度以降に計画していた動物実験を含めたpre-clinical studyの結果を得ることができた。またREICタンパクを、末梢血単核細胞(PBMC)とともに癌細胞に投与することで、PBMCの分化誘導を促進し、腫瘍免疫による抗腫瘍効果することも判明し、ヒトPBMC移植NOD/SCIDマウスを用いて、REICタンパク投与による腫瘍免疫効果を確認した。今年度は肝臓癌においても新型ベクターによるアポトーシスシグナルの増強を確認し、肝臓癌移植ヌードマウスを用いた動物実験においてもAd-SGE-REIC投与による抗腫瘍効果を確認した。これらの結果をもとに肝臓癌に対する臨床試験を岡山大学病院において平成29年度より開始予定である。また胆道癌細胞株を用いたin vitroの実験においてもAd-SGE-REICによるアポトーシスの誘導が確認された。当初の予定では、H28年度における計画は1REICの消化器癌における機能の解明、2新型アデノウィルスベクターAd-SGE-REICを用いた抗腫瘍効果の検討、3REIC蛋白を介した腫瘍免疫誘導効果の検討を行うこととしていた。前述の通り、23についてはいずれもREICの有用性が示され、膵臓癌、肝臓癌ともに新型ベクターによる抗腫瘍効果を証明できた。肝臓癌においては医師主導治験として第I/IIa相試験を開始予定である。REIC/Dkk-3遺伝子(以下REIC)は、様々な固形癌において発現が低下しており、REIC遺伝子を強制発現させることにより、癌細胞特異的なアポトーシスを誘導することが報告され、前立腺癌、悪性中皮腫、肝癌については医師主導治験が開始されている。また新型アデノウィルスベクター(Ad-SGE-REIC)の開発により遺伝子導入効率も大幅に改善された。今年度は胆道癌細胞株におけるAd-SGE-REICの導入効果を検証した。胆道癌細胞においても他癌腫同様、導入によるアポトーシス誘導効果が確認され、抗癌剤(Gemcitabine、Cisplatin)併用による効果の増強も認められた。Xenograftマウスモデルを用いたin vivo実験も進行中である。また以前膵癌細胞株で認められたREIC蛋白による腫瘍免疫誘導効果を、肝癌細胞株でも検証した。遺伝子導入の副産物として産生される

REIC蛋白を末梢血単核細胞(PBMC)とともに肝癌細胞株に投与することで、リンパ球の肝癌細胞に対する細胞毒性が有意に増強することが確認された。これらのデータから、岡山大学病院における肝細胞癌患者の保存血清を用いて、血清中REIC/DKK3蛋白をELISAにて測定し、臨床データとの関係性を検証した。結果、血中REIC蛋白の多寡が予後に影響することが示唆された。肝癌細胞におけるこれらの検証結果は今年度国際学会(UEGW2017)で発表し、論文化し投稿中である。また肝癌細胞xenograftマウスモデルを用いたAd-SGE-REICとCisplatinの併用実験も進行中であり、こちらもデータ集積次第、学会、論文等で発表予定である。肝細胞癌、胆道癌の細胞株における実験で、REIC遺伝子の導入による癌細胞特異的なアポトーシスが誘導されることが証明された。また肝細胞癌手術検体を用いた免疫組織染色では、癌部でのREIC発現が低下していることが証明された。膵癌細胞株にヒトPBMCとREIC蛋白を加えることで、PBMCの樹状細胞への分化誘導を促進し、CTLの活性化を介した腫瘍免疫誘導効果をもたらすことが証明された。これらの結果をもとに、肝癌に対するREIC遺伝子導入治療の医師主導治験が開始された。肝臓癌における動物モデルを用いた検証を行って行く。膵癌、肝臓癌のみならず、胆道癌、胃癌、大腸癌におけるデータを集積していく現在は胆道癌に対するREIC遺伝子治療の有用性について検証している。現在in vitroでの実験を行っているが、細胞株による違いはあるものの、他の癌腫と同様、アポトーシスを誘導することが確認されている。今後は動物実験も計画し、さらに検証する予定である。またREIC遺伝子治療と抗癌剤の併用による治療効果も検証を行っている。膵臓癌においてはGemcitabineとの併用によるシナジー効果を認めていたが、他の薬剤や、他の癌腫での検証も行う予定である。消化器内科学実験機材、試薬などを他研究のもので代用できたため、次年度に繰り越して使用することとなった。実験機材、試薬などを一部、他の研究のもので代用できたため、次年度に繰り越して使用することとなった。次年度は癌腫を広げて検証するため細胞株や試薬、動物実験資材の購入にあてる他、今年度の研究成果を発表するための学会出張費などにあてる予定である。次年度は動物実験を増やして、他の癌腫への検証を行う。また、国際学会へも積極的に参加する予定である。
日本近代文学における東南アジア

近代の「南洋」論に焦点を絞った論文を4編発表した。まず、「高浜虚子と<南洋俳句>-南洋の「夏」を遊びてモダニズム-」と題して<南洋俳句>とその背景を明らかにした。高浜虚子は、洋行の途上で自ら積極的に<南洋俳句>を作り、1940年には、『歳時記』を改訂して熱帯の季題を正式に採用した。南洋の俳人たちからの強い要望もあって実現した季題の拡張であった。<南洋俳句>が、フランスにおける「ハイカイ」、フィリピンにおける「ハイク」等とともに、俳句の近代化(国際化と土着化の共存)を促進してきた側面を指摘した。特集「モダニズム的表象」に寄稿。次に発表した「大正期「南洋」論の展開-鶴見祐輔と芥川龍之介-」では、「南洋」論の立場から芥川の小説「桃太郎」(1924)を読みかえた。すなわち、作中の「鬼が島」が在るのは「南洋」であり、「鬼」は読者に共感可能で人間的嗜みや情愛をもつ存在として表象されていた。それに対して「鬼」からみた「桃太郎」は、侵略のための侵略をして意気揚々たる「野蛮人」であった。そこには鶴見祐輔が同時代に描いた帝国主義的「南洋」像とは異なる「南洋」像が見出されることに着目して論述した。特集「幻想としての<地方>」に寄稿。続く評論「桃太郎の暴力」でも芥川の同作品をとりあげて、朝日新聞「天声人語」(2003年7月24日)の「桃太郎」論を批判した。「天声人語」は、行動における「大義」の重要さを読みとっていたが、芥川は「大義」の有無に関わらず生起し連鎖する「暴力」の問題をテーマ化しているのであり、桃太郎の「大義」の無さを皮肉っているわけではないとした。小林孝吉氏が主宰する『千年紀文学』に寄稿。最後に、「森三千代にみる戦時「南洋」文学の可能性-一九四〇年前後・翻案としての安南伝説-」では、森三千代の「南洋」文学の可能性について詳細に論じた。森三千代は、興味深い作家であるにもかかわらず詳細な年譜や書誌が存在しないため、独自の基礎調査を続けてきた。本稿はその成果の一部である。紀行文『晴れ渡る佛印』(1942)、そして安南伝説集である『金色の伝説』(1942)及び『龍になった鯉』(1944)をとりあげ、森三千代の仏印体験の所産が、伝説の翻案にあったことを論証することができた。二本分の枚数であるが論文集からの寄稿依頼に応じて一挙掲載とした。主な研究実績について、時系列に概要を述べたい。4月には、課題研究における明治期部分を調査するため、『東北文学』を中心とする文芸雑誌の整理、分析を開始した(7月)。調査結果の一部が、『島崎藤村と東北学院』(東北学院、2002・10、159頁)に収緑された。東北学院の教師であったの島崎藤村の詩「椰子の実」は南洋イメージの原型のひとつであり、また南洋冒険小説の草分けである押川春浪が学院創設者の息子として『東北文学』に関与しており、このときの調査は多くの点で有益であった。5月5日には、共著『「戦後」という制度-戦後社会の起源を求めて-』(インパクト出版会、3月10日刊行)の合評会に参加。そこでとりあげられた私の論考「文学における『土人』-中河與一と村上龍-」(60枚)に関する批評が「文学史を読みかえる会」ニュースレター19号(2002・7)に掲載。この合評会が契機となり、課題だった開高健論を執筆し、「ベトナム戦争と文学-開高健の潰したもの-」(40枚)を『大転換期-「60年代」の光芒-(インパクト出版会、2003・1)に収録されることになった。6月には、明治期文学における東南アジアの位相を探る「海峡植民地-永井荷風の新嘉坡-」(40枚)を掲載した『植民地文化研究』創刊号(不二出版)が刊行。8月16日には、韓国大田で開催された研究会(韓国日本文化学会/文学・思想懇話会共催)で、「戦後的思考-<からゆき小説>と<じゃぱゆき小説>-」と題する口頭発表(60分)をおこない、翌17日の共同討議に参加した。そして、明治期の「からゆきさん」を表象する<からゆき小説>と現代の「じゃぱゆきさん」を表象する<じゃぱゆき小説>を同時にみる観点を打ち出し、課題研究の立場から構想する文学史を提示し、反響を得た9月には、復刻資料「文化人の見た近代アジア」全24巻(ゆまに書房)が上梓、私が「解説」(各10枚)を担当した『萬歳』〔ルビでチャイヨウ〕』(16巻)と寺崎浩『マライの静脈』(19巻)も刊行された。9月29日には、「森三千代と仏印」と題して、植民地文化研究会例会で口頭発表(90分)。従来触れられることのなかった森三千代の仏印体験を明らかにし、その所産を「安南伝説」の翻案に見出した。

12月7日には、坂口安吾研究会にて、「坂口安吾とアジア」と題する口頭発表(60分+共同討議)をおこなった。続いて12月21日より台湾に渡り、第5回日台シンポジウムに出席。その後はベトナムにわたり、フィールドワークをおこなった。近代の「南洋」論に焦点を絞った論文を4編発表した。まず、「高浜虚子と<南洋俳句>-南洋の「夏」を遊びてモダニズム-」と題して<南洋俳句>とその背景を明らかにした。高浜虚子は、洋行の途上で自ら積極的に<南洋俳句>を作り、1940年には、『歳時記』を改訂して熱帯の季題を正式に採用した。南洋の俳人たちからの強い要望もあって実現した季題の拡張であった。<南洋俳句>が、フランスにおける「ハイカイ」、フィリピンにおける「ハイク」等とともに、俳句の近代化(国際化と土着化の共存)を促進してきた側面を指摘した。特集「モダニズム的表象」に寄稿。次に発表した「大正期「南洋」論の展開-鶴見祐輔と芥川龍之介-」では、「南洋」論の立場から芥川の小説「桃太郎」(1924)を読みかえた。すなわち、作中の「鬼が島」が在るのは「南洋」であり、「鬼」は読者に共感可能で人間的嗜みや情愛をもつ存在として表象されていた。それに対して「鬼」からみた「桃太郎」は、侵略のための侵略をして意気揚々たる「野蛮人」であった。そこには鶴見祐輔が同時代に描いた帝国主義的「南洋」像とは異なる「南洋」像が見出されることに着目して論述した。特集「幻想としての<地方>」に寄稿。続く評論「桃太郎の暴力」でも芥川の同作品をとりあげて、朝日新聞「天声人語」(2003年7月24日)の「桃太郎」論を批判した。「天声人語」は、行動における「大義」の重要さを読みとっていたが、芥川は「大義」の有無に関わらず生起し連鎖する「暴力」の問題をテーマ化しているのであり、桃太郎の「大義」の無さを皮肉っているわけではないとした。小林孝吉氏が主宰する『千年紀文学』に寄稿。最後に、「森三千代にみる戦時「南洋」文学の可能性-一九四〇年前後・翻案としての安南伝説-」では、森三千代の「南洋」文学の可能性について詳細に論じた。森三千代は、興味深い作家であるにもかかわらず詳細な年譜や書誌が存在しないため、独自の基礎調査を続けてきた。本稿はその成果の一部である。紀行文『晴れ渡る佛印』(1942)、そして安南伝説集である『金色の伝説』(1942)及び『龍になった鯉』(1944)をとりあげ、森三千代の仏印体験の所産が、伝説の翻案にあったことを論証することができた。二本分の枚数であるが論文集からの寄稿依頼に応じて一挙掲載とした。
ヒト・マウスiPSを用いた網膜発生時間制御のヒストンメチル化による制御機構の解析

網膜は6種類に大別される神経細胞とミューラーグリアで構成され、発生の時間軸に従って、各細胞系列が逐次的に共通のプロジェニター細胞から分化を遂げる。マウスと人の発生の時間軸が、網膜においても異なることを利用して、この時間軸の制御にヒストンH3K27のメチル化がどのように拘るのかを検討することを目的とした。human, mouse iPSの混合網膜誘導培養の系の樹立を試みていたが、それぞれ異なる条件で培養する細胞の混合培養は想定より技術的な困難が伴うことが明らかになったためこの系の開発は断念し、より直接的にヒストンメチル化の網膜発生時間軸の制御に果たす役割を解析することとした。このため、これまで網膜最終分化のフェノタイプ解析が主体であったH3K27me3メチル化酵素網膜特異的ノックアウトマウスについて、詳細な分化過程のフェノチアプの解析に加え、すでに整備したH3K27me3のChIP-seqデータの細胞系列特異的転写因子、サイトカイン類などの遺伝子座についての修飾状態を把握し、細胞系列、発生段階に加えて、遺伝子機能での検討を行いH3K27me3の網膜発生の時間軸制御について、新たな仮説を得ることができた。研究班内で関連遺伝子の新たなマウスモデルの提供を受け、この仮説の検証を行い、ヒストンH3K27me3の脱メチル化が発生にクリティカルな転写因子の遺伝子座の脱メチル化を行うタイミングを制御し、網膜発生時間軸を制御していることが示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。human, mouse iPSの混合網膜誘導培養の系の樹立を試みていたが、それぞれ異なる条件で培養する細胞の混合培養は、様々な条件を試したもののお互いに排除し、混合された条件での培養は困難であったためこの系の利用を断念した。そこで、すでに作成していた網膜細胞系列特異的H3K27me3/ChIP-seqデータを詳細に解析し、網膜細胞系列特異的、発生段階特異的な変動を解析するのみならず、機能グループによって遺伝子を分類し、ヒストンメチル化と遺伝子発現パターンの関連を検討したところ、遺伝子の機能特異的なパターンを示すことを見出した。特に転写因子は、発生段階特異的なヒストンメチル化制御を強く受ける可能性が示唆された。一方、ヒストンH3K27のメチル化酵素であるEzh2をノックアウトしたマウスでは網膜発生の時間軸の前倒しが観察されたが、これがグリア、神経にかかわらず、全ての系列で発生時間が圧縮されていることが明らかになった。研究方法の大きな変更はあったものの、別の方法により網膜分化の時間軸制御の分子メカニズムを示唆する研究結果を得ることができた。今回の成果に基づき、ヒストンメチル化制御による網膜発生時間軸をさらに複数種類のノックアウトマウスを組み合わせて検討していく。
扁平上皮癌における遺伝子学的解析に基づく癌の質的評価法・早期発見法の開発

1)独自開発口腔疾患解析用cDNA Microarrayを用いて、2種類の口腔癌細胞株(HSC-3,HSC-4)と4症例の口腔扁平上皮癌組織で共通して発現亢進している7種類の遺伝子と発現減弱が認められた1種類の遺伝子を同定した。半定量的RT-PCR、および定量的real time PCRによりマイクロアレイの結果を確認した。これらの遺伝子のうち共通して発現減弱が認められたClorf10遺伝子に着目して以下の実験を行った。Clorf10遺伝子の発現減弱は口腔癌40症例中24例(60.0%)に認められ、また9種類の口腔癌由来細胞株全てに認められた。Direct sequence法によりClorf10遺伝子の突然変異を検索したが、変異は認められなかった。また、9種類全ての細胞株において5-AzaCで脱メチル化処理してもmRNAの発現は回復しなかった。Clorf10遺伝子の機能についてはまだ良く分かっていないため機能解析を行った。先に作成したcDNAライブラリーよりClorf10遺伝子の完全長のクローンを選び出し、edycsone-regulated promoterを用いた発現ベクターに搭載した。3種類の口腔癌由来細胞株にこの系を導入し強制発現させたところ、増殖速度、率とも低下した。さらに、BrdU処理によりS-phaseの細胞が減少した。これらの結果から、Clorf10遺伝子は癌抑制遺伝子であり、細胞周期を停止させることにより増殖を抑制しているものと考えられた。2)口腔扁平上皮癌と正常口腔粘膜それぞれから抽出したタンパク質を2次元電気泳動により比較検討し、約24種類の発現状態の異なるタンパクスポットを検出した。これらのスポットのうち、特に正常と癌とにおける発現状態の相違が大きく異なるものについて、タンパクの同定を行ったところ、は癌関連タンパクであるannexinA1,heat shock protein 27,lamin A/Cなどを含んでいた。1)独自に開発した口腔疾患解析用cDNA Microarrayを用いて、2種類の口腔癌細胞株(HSC-3,HSC4)と4症例の口腔扁平上皮癌組織で、共通して発現亢進している7種類の遺伝子と発現減弱している1種類の遺伝子を同定した。半定量的RT-PCR、および定量的real time PCRによりこれらのマイクロアレイの結果を確認した。これらの遺伝子のうち共通して発現減弱が認められたC1orf10遺伝子に着目して以下の実験を行った。C1orf10遺伝子の発現減弱は口腔癌40症例中24例(60.0%)に、また9種類の口腔癌由来細胞株全てに認められた。Direct sequence法によりC1orf10遺伝子の突然変異を検索したが、いずれの症例、細胞株においても変異は認められなかった。また、9種類全ての細胞株においてdemethylating agentである5-aza-2'-deoxycytidine(5-AzaC)処理によっても、mRNA発現は回復しなかった。C1orf10遺伝子は、機能についてはまだ艮く分かっていないが、食道扁平上皮癌において特異的に発現減弱が認められることが既に知られている。本研究で口腔の扁平上皮癌においても発現減弱が認められ、C1orf10遺伝子は扁平上皮癌関連新規癌抑制遣伝子の可能性が高い。先に作成したcDNAライブラリーよりC1orf10遺伝子の完全長のクローンを選び出すことができたので、今後、C1orf10遺伝子の制御機構を解明するために、C1orf10発現減弱細胞中でC1orf10遺伝子強制発現等を行ない、機能解析をする予定である。2)口腔扁平上皮癌と正常口腔粘膜それぞれから抽出したタンパク質を2次電気泳動により比較検討し、約24種類の発現状態の異なるタンパク質スポットを検出した。現在、これらのスポットのうち、特に正常組織と癌組織とにおける発現状態の相違が大きく異なるものについて、タンパク質の同定を進めている。

これらのスポットのうち、特に正常と癌とにおける発現状態の相違が大きく異なるものについて、タンパクの同定を行ったところ、は癌関連タンパクであるannexinA1,heat shock protein 27,lamin A/Cなどを含んでいた。
胸腺細胞選択とT細胞抗原レセプター・CD3分子、アクセサリー分子の研究

1.自己抗原反応性のT細胞レパートリーの負の選択メカニズム全容を骨髄キメラの系で明らかにした。すなわち、寛容原産生細胞と寛容原提示細胞を同定し、負の選択の生ずる場(微小環境)と、時期を決定することができた。2.胸腺細胞の増殖を直接制御する、新しい胸腺細胞亜群を同定した。これらはNK1^+TCRαβ^<low>で、CD4^+8^+未熟型胸腺細胞をアポトーシスを誘導するFas分子を介して、障害することが判明した。またこのNK1^+胸腺細胞の機能不全が、自己免疫マウスの病因の一つとなることを明らかにした。3.胸腺細胞の分化を制御するマクロファージ系の細胞に発現される、サークファミリーのFgrに対する単クローン抗体を樹立し、Fgr陽性細胞の組織分布、Fgr分子との会合分子を明らかにした。マウスFgrは、ヒトとは異なりLy6Cや分子量70kDaを中心とする複数の蛋白質と会合することが判明した。4.ほぼ全てのH-2ハプロタイプのクラスII分子それぞれについて、これらと結合性のペプチド抗原上に、アグレトープモチーフを決定した。また、このアグレトープモチーフを応用して、インフルエンザウィルスに対して有効な合成ペプチドワクチンを開発した。これらのペプチドワクチンは、インフルエンザウィルスに対する中和抗体産生を誘導し、in vivo,およびin vitroで、マウスのインフルエンザウィルス感染を防御した。1.胸腺細胞が分化のどのような時期に、正または負の選択を受けるかを明らかにするために、胸腺支質細胞の機能と胸腺リンパ球の反応性の相関を解析した。その結果、胸腺支質細胞の中でマクロファ-ジ系の細胞の割合、及び胸腺マクロファ-ジの抗原提示能、ILー1分泌機能が高いマウス系統では、胸腺リンパ球の種々の刺激に対する反応性の発達が抑制されることが判明した。これらの抑制は、マクロファ-ジの分泌するプロスタグランディンE_2によることが示唆された。2.自己反応性T細胞のクロ-ンの消去は、マクロファ-ジ、樹状細胞によることを明らかにしてきたが、今回、胸腺内の放射線抵抗性細胞(上皮細胞)もクロ-ン消去に関与することを明らかにした。ただし、クロ-ン消去の効率は、マクロファ-ジ、樹状細胞と較べて上皮細胞上のMHC分子では低く、これらは寛容原、T細胞抗原レセプタ-、各支質細胞上のMHCクラスII分子間の結合力の差によると考えられた。3.MHCクラスII分子の突然変異によって、特定のT細胞クロ-ンの正の選択が障害され、T細胞レパ-トリ-に欠損の出来ることを明らかにした。4.新たなT細胞亜群を胸腺内に同定した。これらはCD4^+8^-,CD44^+、NK1.1^+で、α,β型のT細胞抗原レセプタ-の発現量は、通常のCD4^+T細胞と較べて低下していた。これらの亜群には自己反応性抗原レセプタ-を発見するものが認められたが、実際のアロ反応性は低かった。同様のT細胞亜群は、骨髄にも比較的多数認められた。1.胸腺細胞の分化に伴うチロシンキナーゼの変化を解析した。その結果、srcファミリーに基質特異性を持つc-src kinase(CSK)が、胸腺細胞の分化に伴い減少することを発見した。2.[B10.AQR→AKR]骨髄キメラにおける、レシピエント抗原(M1s-1^a+I-E)反応性Vβ6^+T細胞のクローン消去は、レシピエントのM1s-1^aがドナー由来のI-E^+細胞上に移行した結果生ずることを明らかにした。また、このM1s-1^a産生細胞が、レシピエントの放射線抵抗性T細胞であることを証明した。3.CD4^+T細胞、CD8^+細胞共にM1s-1^aを産生することを示した。特に、CD4^+T細胞によるM1s-1^a産生は、世界的に見ても新知見である。

4.2度骨髄移植を行ったダブル骨髄キメラを用いて、サブクリニカルなレベルのGVHRにより、リンパ節のホーミング機構が障害されること、またこの障害は主としてドナーのCD8^+T細胞によって生ずることを明らかにした。5.種々のH-2クラスII分子と結合性の高いアミノ酸モチーフ(アグレトープ)をp43-58類似ペプチド抗原上に同定した。また、このアグレトープと結合するエプトープ部分に、インフルエンザウィルスのヘムアグルチニン由来ペプチドを挿入したキメラ分子を作製した。このキメラ分子は、インフルエンザウィルスワクチンとして有効であることが確認された。6.ホーミングレセプター(MEL-14)陽性と陰性T細胞を種々のリンパ組織に同定し、これらの機能を解析した結果、MEL-14陽性T細胞は、メモリー細胞であることが判明した。7.NK1.1^+ CD4^+8^-胸腺細胞亜群を同定し、これらが著明なIL-4,IFN-γ産生能を持つことを証明した。1.胸腺細胞4つのメジャーポピュレーションのうち、CD4^-8^-とCD4^+8^-細胞中にNK1.1抗原を発現するTCR αβ^+亜群の存在を同定した。これらは加齢と共に増加し、全胸腺細胞の約1%にあたることが判明した。3.NK1.1^+TCRαβ^+細胞はIL-2レセプターβ鎖を発現し、IL-2存在下で培養するとLAK活性を獲得した。4.NK1.1^+TCRαβ^+細胞は、フレッシュな状態でも16時間のキラーアッセイにより同系、異系のCD4^+8^+末熟型胸腺細胞を殺すことが判明した。この細胞障害には、Fas抗原とFasリガンドの相互反応が必須であった。5.lpr,gldなどの自己免疫マウスでは、NK1.1^+TCRαβ^+細胞の細胞障害活性は、ほぼ完全に抑制されていた。6.胸腺細胞の分化に必須の骨髄由来単球・マクロファージ系細胞に発現する、サークファミリーのFgrに特異的な2H2単クロン抗体を樹立し、これを用いFgr発現を組織レベルで同定した。さらにFgrが、Ly6Cおよび70kDaの未知の蛋白と会合していることを証明した。7.Csk遺伝子をトランスフェクトしたマクロファージ系細胞株を用い、Cskが種々のマクロファジー機能を抑制すること、しかし、Cskのover-expressionによって、これらの細胞がHgCl_2による細胞死からレスキューされることを明らかにした。8.調べた範囲のマウスのI-A分子に結合して、免疫原性を示すペプチドのアミノ酸モチーフを決定した。これらを用いて、胸腺に発現するI-Aとペプチド分子の結合力が、胸腺細胞のpositive selectionにどのような影響を与えるか、研究継続中である。
澱粉食品へのアルカリ性物質の作用機構

pHを高くし,アルカリ性に調整したコーンスターチ,タピオカ澱粉,ジャガイモ澱粉の糊化および老化特性について検討した。高pHでの澱粉の糊化は,pHにより同様の傾向を示した。いずれの澱粉においてもpH11付近では糊化が起こりにくいため,澱粉糊液の粘度は低下した。一方,pH12を超えると糊化が起こりやすくなるため,糊液の粘度は上昇した。しかし,pH13付近では糊液の粘度は著しく低下した。これはアミロース鎖やアミロペクチン鎖の分解が原因だと考えられる。コーンスターチとジャガイモ澱粉糊液の保存に伴う離水量はpHが高くなるほど少なく,高pHほど老化の進行がゆるやかになるとわかった。アルカリ性に調整したコーンスターチの糊化および老化過程について検討した.塩濃度を一定とした緩衝液を用いてアルカリ性水溶液を調整し,pHを高くした場合と,水酸化カルシウムムおよび炭酸ナトリウム用いてアルカリ塩水溶液を調整し,pHを高くした場合を比較し,アルカリ性における塩濃度の影響について検討した.また,アルカリ性物質と澱粉との反応時間を変化させることによる澱粉の糊化への影響についても調べた.澱粉の糊化および老化過程についてはDSC測定,粘度測定,顕微鏡観察,透過度測定,離水測定により評価した.DSC測定より,緩衝液でpHをアルカリ性に調整したコーンスターチの糊化は澱粉とアルカリとの反応時間に関係なく,pHが12.4未満では起こりにくくなった.すなわち,pH12付近でコーンスターチの糊化はもっとも起りくくなるとわかった.この傾向は炭酸ナトリウム濃度を高くすることによりpHを高くした場合のコーンスターチにおいても見られた.すなわち,アルカリ性においては塩濃度の増加はほとんど影響しないと推察された.一方,pHを12.4以上に高くするとコーンスターチの糊化は起こりやすくなった.これは澱粉粒子の膨潤と粒子内が促進され,澱粉粒子内の結晶構造が壊れるためだとわかった.このことはコーンスターチ糊液の透明度にも影響し,pH12以上に調整した澱粉糊液の透明度は高かった.さらに,アルカリ性に調整したコーンスターチ糊液の粘度も糊化の影響を受け,pH11未満の澱粉糊液では糊化が起こりにくく,粘度は低下したが,pH12付近では糊化が起こりやすく,粘度は高くなった.しかし,pH13以上の強アルカリでは粘度は低下した.これは溶出したアミロースやアミロペクチン鎖の長さが短くなっている可能性が考えられる.老化過程については糊化が起こりやすくなったpH12以上では進行がゆるやかになるとわかった.アルカリ性に調整したコーンスターチの糊化と老化については当初の予定通り,緩衝液を用いてpHを調整した場合と水酸化カルシウムと炭酸ナトリウムを用いてpHを調整した場合については比較検討することができたため.この方法により,アルカリ性における塩濃度の影響について解明することができたため.しかし,アミロース鎖の長さについての検討は試料の調製方法を検討したが,うまくいっていない現状にあるので,この方法について再度検討しなければならないため.アルカリ性に調整したタピオカ澱粉の糊化および老化過程について検討した.塩濃度を一定とした緩衝液を用いてアルカリ性水溶液を調整し,pHを高くした場合と,炭酸ナトリウム用いてアルカリ塩水溶液を調整し,pHを高くした場合を比較し,アルカリ性における塩濃度の影響について検討した.澱粉の糊化および老化過程についてはDSC測定,粘度測定,顕微鏡観察,透過度測定,離水測定により評価した.DSC測定より,緩衝液でpHをアルカリ性に調整したタピオカ澱粉の糊化はpHが高くなるに伴い糊化温度は高くなり,糊化が起こりにくくなる傾向にあったが,pHが12.0を超えると糊化に要するエネルギーは小さくなり,温度さえ上がれば糊化は起こりやすくなった.このように高pHにおいて糊化が起こりやすくなる傾向は炭酸ナトリウム濃度を高くすることによりpHを高くした場合においてもみられた.すなわち,アルカリ性においては塩濃度の増加は糊化にほとんど影響しないと推察された.実際にpH>11.8のタピオカ澱粉粒子内では偏向十字が消失し,結晶構造が壊れた.そのため,澱粉粒子の膨潤が促進され,粒子内からアミロースやアミロペクチンの溶出が多くなり,タピオカ澱粉糊液の粘度が高くなった.また,糊液の透明度の高さにも影響した.しかし,pH11.8以下の澱粉糊液では糊化が起こりにくかったため,粘度は低下した.この影響については詳細な検討が必要であるが,弱アルカリ性の領域ではNa塩作用が強く,澱粉粒子内への水の侵入を阻害する可能性も考えらえる.また,高pHに調整したタピオカ澱粉糊液を保存しても,離水は起こらず,糊液の透明性に変化はなかった.したがって,糊化が起こりやすくなったpHが11.8を超えた糊液では,澱粉の老化の進行がゆるやかになるとわかった.

アルカリ性に調整したタピオカ澱粉の糊化とタピオカ澱粉糊液の特性,タピオカ澱粉糊液を保存することによる経時変化(老化)については当初の予定通り,緩衝液を用いてpHを調整した場合と炭酸ナトリウムを用いてpHを調整した場合について比較検討することができたため.この方法により,アルカリ性における塩濃度の影響について解明することができたため.しかし,アミロース鎖やアミロペクチン鎖の長さを調べるために,試料の粒度文うの測定を試みようと試料の調製方法について検討したが,試料内のナトリウム含量の高いことから,うまくいかなかったので,この方法について再度検討しなければならないため.アルカリ性に調整した馬鈴薯澱粉の糊化および老化過程および糊液の物理的特性について検討した.炭酸ナトリウム,水酸化カルシウムを用いてアルカリ塩水溶液を調整し,pHを高くした.結果についてはpHを高くしたコーンスターチとタピオカ澱粉糊液のアルカリ性における糊化・老化の影響と比較検討した.澱粉の糊化および老化過程についてはDSC測定,粘度測定,顕微鏡観察,透過度測定,離水測定により評価した.アルカリ性に調整した馬鈴薯澱粉の糊化は,塩の種類や添加濃度ではなく,pHにより同様に変化した.pH11付近までの弱アルカリ性にすると,高温にしないと糊化が起こらず,澱粉粒子の膨潤度が低くなった.その影響を受けてアルカリ塩を添加した弱アルカリ性の3.0wt%馬鈴薯澱粉糊液の粘度はpHの増加に伴い低くなった.一方,pHが12を超える強アルカリ性に調整すると,糊化温度と糊化エンタルピーは低くなり,澱粉粒子の膨潤度は高く,糊化が起こりやすくなった.そのため,pH12付近の強アルカリ性では,粒子から溶出したアミロース鎖やアミロペクチン鎖の絡まりあいが多くなったことから,馬鈴薯澱粉糊液の粘度は高くなった.また,水酸化カルシウムでpH13付近と非常に強いアルカリ性に調整すると,糊化は起こりやすくなったが,糊液の粘度は著しく低くなった.溶出したグルカン鎖の長さに関係するのではないかと推察される.馬鈴薯澱粉の老化過程への影響はpH11付近までの弱アルカリ性ではpHによる差はないことがわかった.しかし,pHが11を超える強アルカリ性に調整すると,老化の進行が非常にゆるやかになるとわかった.これらの結果もタピオカ澱粉やコーンスターチを高pHにした場合と一致したことから,澱粉を高pHにすると同様の影響を受けるとわかった.pHを高くし,アルカリ性に調整したコーンスターチ,タピオカ澱粉,ジャガイモ澱粉の糊化および老化特性について検討した。高pHでの澱粉の糊化は,pHにより同様の傾向を示した。いずれの澱粉においてもpH11付近では糊化が起こりにくいため,澱粉糊液の粘度は低下した。一方,pH12を超えると糊化が起こりやすくなるため,糊液の粘度は上昇した。しかし,pH13付近では糊液の粘度は著しく低下した。これはアミロース鎖やアミロペクチン鎖の分解が原因だと考えられる。コーンスターチとジャガイモ澱粉糊液の保存に伴う離水量はpHが高くなるほど少なく,高pHほど老化の進行がゆるやかになるとわかった。20wt%のコーンスターチを用いて,ゲルを調製した場合のアルカリ性の影響について検討する.澱粉のpHの調製方法は今年度同様,緩衝液を用いる方法と炭酸ナトリウムを添加する方法を用いて比較する.また,タピオカ澱粉を使用し,今年度と同様にアルカリ性におけるタピオカ澱粉の糊化過程とタピオカ澱粉糊液の特性,老化過程についても検討する.高アルカリにおけるアミロース鎖とアミロペクチン鎖の状態についての検討は引き続き行う.20wt%のコーンスターチを用いて,ゲルを調製した場合のアルカリ性の影響について検討する.澱粉のpHの調製方法は今年度同様,緩衝液を用いる方法と炭酸ナトリウムを添加する方法を用いて比較する.手法にはDSC測定,ゲル強度測定を主に用いる.
酵母細胞を用いた形態形成機構の分子遺伝学的解析

形態形成機構は、細胞周期や分化機構と連動した生物の基本的事象の一つである。形態形成は細胞内外の様々な情報によって制御される複雑な機構であるが、それら多様な情報の最終到達点は一細胞そのものであることから、多細胞における形態形成機構を理解する上で、単細胞での解析が必須であると考えた。そこで、高等動物と同様の細胞質分裂および極性成長様式をとり、その極性が細胞周期に依存してダイナミックに変化する分裂酵母(Schizosaccharomyces pombe)をモデル系として、形態形成機構の分子遺伝学的解析を行った。今回の研究から新規な形成形成関連分子を数種同定した。(1)成長極性が欠損している変異体の原因遺伝子sts5を同定した結果、形態形成との関連性が示唆されていなかった進化上高度に保存された分子が明らかになった。遺伝学的解析から、Sts5蛋白質は、細胞周期間期における成長極性の維持に必須な遺伝子であり、他のMAPキナーゼ情報伝達系と密接に機能関連していることが示唆された。(2)成長極性における対称性の維持に欠損をもつ変異体の原因遺伝子alp2を同定した結果、Alp2蛋白質は微小管構成分子であった。alp2変異体は成長極性のみならず、細胞内オルガネラの分配異常も示すことから、極性成長における対称性の維持機構に細胞骨格系蛋白質が重要な機能を担うことを明らかにした。今回得られた結果より、分裂酵母の形態形成関連分子の解析が、高等動物の細胞形態を理解する上で極めて重要であることが示唆された。
重力測定点が空白域である瀬戸内海における重力測定

申請者による最新のまとめ(河野・古瀬、1989)によって、瀬戸内海は日本周辺における重力測定値の最大の空白域であることが明らかとなった。この地域において重力測定を行ない、詳しい重力異常を作成し、瀬戸内海およびその周辺の地学的特徴を明らかにすることが目的であった。初年度においては、淡路島、小豆島、豊島、直島、本島など瀬戸内海東部のフェリ-によってアクセスできる島々と周辺の陸地(本州および四国)および大阪平野、六甲山脈、生駒山脈など瀬戸内海東端部においても測定を行なった.本年度は,(1)神戸大学理学部臨海実験所研究船を用いて瀬戸内海中部および東部に散在する多数の無人島を含む40以上の島々を,(2)因島,弓削島,大三島,岩城島,大島など瀬戸内海中部の大きな島々を,また,(3)東京大学海洋研究所研究船による瀬戸内海全域の海域を,それぞれ重力測定した.(3)は船上重力計による測定である.(1)において,接岸できない島ではボ-トを漕いで上陸し,測定を行なった.さらに,(4)高松南部において詳しい重力測定を行なったが,これは本調査中に高松南部に顕著な円形状の低い重力異常分布が発見されたからである.これは日本における始めての隕石クレ-タ発見につながる可能性があるものである.これらの測定値のほか、新たに多数の公表および未公表の他機関による重力測定デ-タを入力、検査、編集し、既存デ-タと合せて大阪平野から別府にかけての詳細な重力異常図を作成した。これによって,別府湾から四国北部を経由して大阪湾に至る顕著な重力異常が低い帯が発見された.この低重力異常帯は概ね中央構造線の北縁と一致するが,重力異常図を見る限り,紀伊半島へは上陸せず大阪湾を経て琵琶湖の方へ延びてゆく様に見える.また,全国重力異常図を参照すると,西は雲仙岳から東は敦賀まで連続した低重力異常帯の存在が浮び上がってくる.したがって,この低重力異常帯の意義を中央構造線だけではなく新たな視点で解釈する必要がある.これを"雲仙ー敦賀低重力異常帯"あるいは"雲仙ー敦賀線"と名付けた.申請者による最新のまとめ(河野・古瀬、1989)によって、瀬戸内海は日本周辺における重力測定値の最大の空白域であることが明らかとなった。これまでの研究により、本洲および四国についてかなりの数の重力測定デ-タを保有しているので、それらを使用して最も効率的な測定計画を立案した。初年度においては、7月に淡路島、小豆島、豊島、直島、本島など瀬戸内海東部のフェリ-によってアクセスできる島々と周辺の陸地(本洲および四国)において測定を行った。測定点数は約130点であった。10月には、大阪平野、六甲山脈、生駒山脈など瀬戸内海東端部において測定を行った。測定点数は約120点であった。測定間隔はいずれも1から2KMであった。これらの測定のほか、新たに多数の公表および未公表の他機関により重力測定デ-タを入力、検査、編集し、既存デ-タと合せて大阪平野から高松にかけての詳細な重力異常図を作成した。海上重力測定が本研究期間中に実現できるように関係方面に働きかけた。その結果、平成3年度夏に実施が可能になった。