hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
グラフ・ネットワーク上のゲーム理論に対するアルゴリズム理論的厳密アプローチ

グラフ・ネットワークに関わる協力ゲーム理論について,アルゴリズム理論・計算理論の観点から精緻な議論を行った.特に,最小彩色ゲームと呼ばれる費用分担問題に対して,今までに提案された公平な費用分担の中のいくつかが効率よく計算できることを示した.それに加えて,コア安定性問題に対する計算量理論的な解析も行った.さらに,最小費用全域木ゲームと呼ばれる費用分担問題に対して,公平費用分担が効率よく計算できるための十分条件である劣モジュラ性を満たす場合の考察をした.グラフ・ネットワークに関わる協力ゲーム理論について,アルゴリズム理論・計算理論の観点から精緻な議論を行った.特に,最小彩色ゲームと呼ばれる費用分担問題に対して,今までに提案された公平な費用分担の中のいくつかが効率よく計算できることを示した.それに加えて,コア安定性問題に対する計算量理論的な解析も行った.さらに,最小費用全域木ゲームと呼ばれる費用分担問題に対して,公平費用分担が効率よく計算できるための十分条件である劣モジュラ性を満たす場合の考察をした.組合せ最適化とゲーム理論の境界に跨る問題について次のような基礎的研究を行なった.(1)コア安定性問題に関する研究.コア安定性問題とは,コアと安定集合という重要な解概念が一致するような譲渡可能効用協力ゲームを特徴付ける問題のことであり,協力ゲーム理論における最も重要な未解決問題の1つである.本年度,この問題を組合せ最適化の立場から眺めた論文を権威の高い論文誌Mathematics of Operations Researchに発表した.この立場に基づく視点は他研究者にも取り込まれるようになり,1つの研究潮流を作ることとなった.このテーマは次年度以降も継続し,問題の最終解決を目指していく.(2)最小費用全域木ゲームの劣モジュラ性に関する研究.最小費用全域木ゲームと呼ばれる協力ゲームが劣モジュラであるための条件を考察した.未だ完全な解決には到っていないが,劣モジュラ最小費用全域木ゲーム全体の成す空間が幾何学的に凸ではない,という観察であり,これにより,劣モジュラ性に対する必要十分条件を発見することのある種の困難さが立証された.今後は,劣モジュラ最小費用全域木ゲーム全体の成す空間の幾何学的性質について深く考察を進め,アルゴリズム的な帰結を導く予定である.(3)最小費用全域木ゲームのシャプレイ値計算アルゴリズムに関する研究.シャプレイ値という重要な公平配分概念に対してアルゴリズム理論の見地から接近した.そして,この問題の本質的な難しさがグラフにおけるある種の数え上げ問題に帰着されることを発見した.今後は,この帰着された問題に対する理解を深めて,シャプレイ値計算の本質に迫る予定である.その他,本年度は幾何学的最適化,離散幾何学,グラフ・アルゴリズムに関する研究も行なった.組合せ最適化とゲーム理論の境界こ跨る問題について次のような基礎的研究を行なった.(1)コンフリクトのある状況下での費用公平分担問題こ関する研究.コンフリクトのある状況をグラフとゲーム理論を用いてモデル化し,費用を公平に分担する問題の計算複雑さを調査した.その結果をまとめた論文は論文誌Discrete Optimizationに掲載された.(2)最小費用全域木ゲームの劣モジュラ性に関する研究.最小費用全域木ゲームと呼ばれる協力ゲームが劣モジュラであるための条件を考察し,必要条件,および十分条件を導いた.さらに,辺コストが2種類に限定された場合に対しては必定十分条件を導き,それを基にして辺コストが2種類に限定された最小費用全域木ゲームの劣モジュラ性を判定する多項式時間アルゴリズムを開発した.(3)最小費用全域木ゲームのシャプレイ値計算アルゴリズムに関する研究.シャプレイ値という重要な公平配分概念に対してアルゴリズム理論の見地から接近した.昨年度の研究で,この問題の本質的な難しさがグラフにおけるある種の数え上げ問題に帰着されることを発見したが,本年度はそれがタット多項式と呼ばれる概念と深く関係があることを発見した.(4)多目的最適化問題に対する列挙解法に関する研究.離散的な構造を持つ多目的最適化問題の端点パレート最適解をすべて出力する統一的な枠組みを提案し,それを基にして効率的なアルゴリズムを開発した.その他,本年度は幾何学的最適化,離散幾何学,グラフ・アルゴリズムに関する研究も行なった.前年度までの研究で明らかとなった,ゲーム理論的問題とグラフにおける数え上げ問題の関連を踏まえて,グラフにおける数え上げ問題に関する基礎研究を行った.その中でもマッチングや森と呼ばれる部分構造を数え上げる問題に対して,考えるグラフクラスを制限した場合に,問題が効率よく解けるのか,または,効率よく解くことができなそうであるのか,ということを見極める結果を得た.また,弦グラフおよび弦二部グラフと呼ばれるグラフクラスに注目して研究を行い,与えられた2つの弦グラフの一方に含まれ,もう一方を含む弦グラフを数え上げる問題の困難性についても研究を行った.それに加えて,幾何学的なネットワークに対する公平配分問題への応用を踏まえて,簡単な幾何的環境である多角形領域における最短路問題に関する研究を行った.特に,最短路検索問題に対して,Davenport-Schinzel列と呼ばれる組合せ構造が重要な役割を果たすことを発見し,従来の結果から効率性を大幅に改善した.また,意思決定の際に重要となる情報可視化技法について,特に,系統学の応用がら現れる2つの根付き木を視覚的に比較する方法に関するアルゴリズム的な研究を行った.これらの研究成果と前年度までの研究成果は国内・国外の研究会・シンポジウムで発表した.

また,ゲーム理論とアルゴリズム理論の境界にある話題について,ナッシュ均衡計算の複雑さ,および,協力ゲーム理論に対するアルゴリズムに関する招待講演を行った.
新規光駆動ナトリウムポンプのイオン識別機構の解明と光操作技術への応用

本研究は、2013年に発見されたばかりで分子メカニズムは不明な点が多い、新規光駆動ナトリウムポンプのイオン識別機構を明らかにしようとしている。(1)分子レベルでの解析:BRにおいて機能に重要なD85とD96が、KR2ではそれぞれN112、Q123という特異的な配列になっている。2015年に解かれたKR2の結晶構造より、我々はD116の配向が変化し、Na+の輸送経路を形成するフリップモデルを提唱した。モデルにおいて重要なN112に着目し、19種の変異体を作製、ポンプ活性を測定した。19種はWTと同様のNa+/H+ハイブリッドポンプ(N112D,G,S,T)、H+ポンプ(N112A,C,P,V,E,Q,I,L,M,F,W)、ポンプ機能なし(N112H,K,Y,R)の3グループに分けられた。N112はNa+とH+のイオン選択性やポンプ機能そのものに、重要な役割を担っていることが明らかとなった。(2)細胞レベルでの解析:KR2の保持菌Krokinobactereikastusの近縁種Nonlabens dokdonesis DSW-6はProteorhodopsin(PR)とNaRの二つのロドプシン遺伝子を有している。ポンプ活性を測定すると、光駆動H+ポンプ活性が検出され、その活性は生育時期によって変化していた。この変化がPRの発現量やPR分子における比活性によるのかを明らかにするため、PRの発現量と光反応サイクルを測定したところ、どちらも生育時期に依存せず一定であった。これは、PRがN. dokdonesis DSW-6において恒常的に発現し、一定の活性を保持することを示している。一方で、N. dokdonesis DSW-6細胞全体における光駆動H+ポンプ活性が変化することは、PR分子と共役して働く他のtransporterがある可能性が考えらえる。28年度が最終年度であるため、記入しない。微生物型ロドプシンがポンプできるイオンはH+とCl-しかないと考えられてきたが、近年我々は海洋性細菌からNaCl中ではNa+、KCl中ではH+を細胞外側へポンプするハイブリッド型のロドプシンKR2を発見した。しかしながらKR2は発見されたばかりであり、輸送における(1)分子メカニズムおよび(2)生理的機能には不明な点が多い。(1)分子レベルでの解析:高度好塩菌から発見された光駆動プロトンポンプ、BRではプロトン輸送に重要なAsp85とAsp96が、KR2ではそれぞれAsn112、Gln123という配列になる。このNQをもつロドプシンとして、KR2、NdR2、GlR2、IndiR2についてポンプ活性を測定したところ、いずれもNa+存在下ではNa+、K+存在下ではH+を優先的に細胞外側へ輸送していることが分かった。さらに外液のpHに依存して、H+輸送能に明らかな差がみられた。ポンプ活性におけるpH依存性はNaRに共通の性質であること、つまりNa+とH+の輸送は競合していることが明らかとなった。このようなハイブリッドなイオン輸送は、微生物型ロドプシンでは観測されておらず、光駆動ナトリウムポンプに特異な性質であることを示唆している。(2)細胞レベルでの解析:海洋性細菌は難培養性であるため、これまで生細胞におけるロドプシンの機能測定はほとんど実現していなかった。まずNaRの遺伝子を有する微生物株2株をKorean Collection for Type Cultures (KCTC)よりより購入し、培養を行った。培養後、光駆動イオン輸送活性を測定したところ、1株はナトリウムポンプ活性のみ、もう1株はプロトン活性のみを示した。これは、近縁の微生物種であり、NaR、PRいずれも遺伝子を保有している株でありながら、その機能発現は異なることを示している。2013年に発見されたばかりで不明な点が多い、新規光駆動ナトリウムポンプの(1)イオン識別機構を明らかにすること、(2)生理的機能の解明を目的としている。(1)分子レベルでの解析:微生物型ロドプシンは「光吸収を担う発色団がプロトン化し正電荷をもつため、プロトン以外の正電荷をポンプするのは不可能」と考えられてきた。正電荷をもつNa+を輸送する際、一番の障壁となるのは、同じく正電荷を有するレチナールシッフ塩基の存在である。光反応のスイッチでもあるこの障壁を、どのように乗り越えているのかが問題となる。東大院理・濡木研との共同研究で明らかとなったKR2の立体構造では、KR2の対イオンAsp116の位置は、酸性と中性において対イオンAsp116の配向が異なることが明らかとなった。そこで我々は、Asp116が配向を変化することでナトリウムの輸送経路を形成するフリップモデルを提唱した。Na+の輸送に対して最大の障壁となるレチナールシッフ塩基の正電荷がなくなるとともに、Asp116の配向変化によりナトリウムイオンの経路が形成されると考えたのである。ただし注意が必要となるのは、今回明らかとなった立体構造は、光反応中間体ではなく暗状態の酸性条件における構造ということである。このモデルの正しさを示すためには、配向変化で形成されるAsp116とAsn112、Ser70の水素結合の重要性を明らかにする必要があると考えた。

変異体を用いたポンプ機能解析の結果、Asp116との水素結合を保持するN112DやS70Tはナトリウムイオンを輸送した一方、N112AやS70Aでは輸送能が失われ、Asp116との水素結合が輸送に必須であることが明らかとなった。(1)分子レベルでの解析H27年度は、KR2のイオン輸送機構特にカチオンの輸送メカニズムについて検討し、その結果、カチオンを輸送する際には対イオンであるAsp116のフリップモデルを提唱した。変異体を用いたポンプ機能解析の結果、Asp116との水素結合を保持するN112DやS70Tはナトリウムイオンを輸送した一方、N112AやS70Aではナトリウムイオン輸送能が失わたが、プロトン輸送能が残っていた。これはKR2のナトリウムとプロトンのイオン識別機構に重要な知見を与えるものである。(2)細胞レベルでの解析KR2を有するK. eikastusの近縁種N. dokdonesis DSW-6をKorean Collection for Tyep Culturesより購入、培養し、光駆動イオン輸送活性を測定した。K.eikastusと同様にナトリウムポンプNaRとプロトンポンプPRの遺伝子を保有していながら、N. dokdonesis DSW-6株は非常に強いプロトンポンプ活性を示し、ナトリウムポンプ活性は検出できなかった。そこで、培養条件を検討することでNaRの発現条件を探索したところ、NaCl濃度に依存していることが明らかとなった。これはNaRの発現が、外的要因により制御されていることを示しており、NaRの生理的機能に知見を与えるものである。本研究は、2013年に発見されたばかりで分子メカニズムは不明な点が多い、新規光駆動ナトリウムポンプのイオン識別機構を明らかにしようとしている。(1)分子レベルでの解析:BRにおいて機能に重要なD85とD96が、KR2ではそれぞれN112、Q123という特異的な配列になっている。2015年に解かれたKR2の結晶構造より、我々はD116の配向が変化し、Na+の輸送経路を形成するフリップモデルを提唱した。モデルにおいて重要なN112に着目し、19種の変異体を作製、ポンプ活性を測定した。19種はWTと同様のNa+/H+ハイブリッドポンプ(N112D,G,S,T)、H+ポンプ(N112A,C,P,V,E,Q,I,L,M,F,W)、ポンプ機能なし(N112H,K,Y,R)の3グループに分けられた。N112はNa+とH+のイオン選択性やポンプ機能そのものに、重要な役割を担っていることが明らかとなった。(2)細胞レベルでの解析:KR2の保持菌Krokinobactereikastusの近縁種Nonlabens dokdonesis DSW-6はProteorhodopsin(PR)とNaRの二つのロドプシン遺伝子を有している。ポンプ活性を測定すると、光駆動H+ポンプ活性が検出され、その活性は生育時期によって変化していた。この変化がPRの発現量やPR分子における比活性によるのかを明らかにするため、PRの発現量と光反応サイクルを測定したところ、どちらも生育時期に依存せず一定であった。これは、PRがN. dokdonesis DSW-6において恒常的に発現し、一定の活性を保持することを示している。
子宮内膜症病態メカニズムに関与するリポキシゲナーゼ経路関連因子の解析

本研究では、リポキシゲナーゼ(LOX)経路および関連する脂質メディエーターの働きに着目しながら、分子細胞生物学的な解析手法により、子宮内膜症の発症・進展・慢性化機序の一端を明らかにすることを目的とする。研究成果としては、LOX経路を構成する酵素のなかで、5-LOX mRNAならびに15-LOX mRNAが、卵巣チョコレート嚢胞組織において正所性内膜組織に比して有意に高発現していた。一方、12-LOXに関しては両組織間で発現量に有意な差は認められなかった。LOX経路の少なくとも一部が、子宮内膜症の病態メカニズムに関与し得る可能性が示唆された。また、LOXのin vivoの働きを明らかにするための研究ツールとして、重度免疫不全マウスを用いた複数のタイプのヒト内膜症モデルマウスの作成を行った。子宮内膜症により、月経困難症や慢性骨盤痛、といった女性のQOLを著しく損なう症状が随伴することは、女性の社会進出が著しい今日では看過できない問題である。本研究では、3年間にわたり、子宮内膜症の発症・進展・慢性化機序、特に、リポキシゲナーゼ経路とそこで合成される脂質メディエーターのはたらきに着目しながら、子宮内膜症の病態メカニズムの鍵となる因子の同定および機能解析を行い、新たな治療法の開発に結び付けていく計画であるが、本年度は、以下の成果を得た。患者の同意を得て採取した子宮内膜症患者由来卵巣チョコレート嚢胞組織と、子宮内膜症を発症していない患者より採取した正所性内膜組織よりそれぞれTotal RNAを抽出し、リアルタイムPCR法にて5-リポキシゲナーゼ(LOX)、12-LOX、15-LOXのmRNA量を定量し、両組織間での発現量の差を比較した。その結果、5-LOX mRNAならびに15-LOX mRNAが、卵巣チョコレート嚢胞組織において正所性内膜組織に比して有意に高発現していた。5-LOXはロイコトリエン類生成の鍵酵素であり、炎症反応に深く関与している。一方、15-LOXもヒドロキシ酸類やリポキシン類生成に関与する重要な酵素であり、炎症応答を制御していることが示唆されている。これらの酵素が子宮内膜症病巣局所で特異的に高発現していることより、子宮内膜症の発症および慢性化にも何らかの重要な役割を果たしている可能性があり、これらの酵素の阻害剤などが子宮内膜症治療に役立つのではないかと考えられた。本研究では、リポキシゲナーゼ(LOX)経路および関連する脂質メディエータの働きに着目しながら、分子生物学的な解析手法により、子宮内膜症の発症・進展・慢性化機序の一端を明らかにすることを目的とする。本年度は、手術検体より採取した内膜症病変ならびに正常内膜組織における5-LOX、12-LOX、および15-LOXの発現パターンを、リアルタイムPCRと免疫組織化学を用いて、昨年度に引き続いて更に詳細に解析し、昨年度と同様の結果が得られることを確認した。続いて、ヒト子宮内膜を異所性に担う内膜症モデルマウスにおいても、LOXが同様の発現パターンを呈するかを調べるために、内膜症モデルマウスの構築を行った。これまでホストになる免疫不全マウスとしてNOD-SCIDマウスが用いられてきたが、このマウスnatural killer(NK)活性を有していることより、異所性内膜組織の特性やポテンシャルをマスクする可能性がある。そこで、NK細胞およびNK活性もほぼ欠如した重度免疫不全マウスであるNOGマウスを用いて、その腹腔内にヒト内膜組織片を移植して、内膜症モデルマウスとした。LOX類の解析を行う前に、このヒト化NOGマウスが内膜症モデルとして妥当か否かについて免疫組織化学およびHE染色にて検証した。その結果、移植後3週間の時点で、腺管・間質構造を有する内膜様組織が維持されていた。従来、マウス由来の血管ネットワークが移植組織内に構築されると考えられていたが、本モデルでは、ヒト内膜移植片から宿主に向かって血管新生が起こり、ヒト-マウス間のキメラ血管が移植片の生着と維持に寄与していることが明らかになった。以上、本年度は、次年度の研究に向けての基盤となる材料や知見が得られた。本研究では、リポキシゲナーゼ(LOX)経路および関連する脂質mediatorの働きに着目しながら、細胞分子生物学的な解析手法により、子宮内膜症の発症・進展・慢性化機序の一端を明らかにすることを目的とする。

本年度は、子宮内膜症の病態メカニズムにおけるin vivoでのLOXの役割を明らかにするために、前年に引き続き、マウスを用いたin vivo異所性内膜モデルの更なる開発を主に行った。重度免疫不全マウスに対して、分散したヒト子宮内膜細胞を尾静脈より投与し、血行性に異所性生着する内膜症モデルマウスの作成を試みた。その解析対象臓器は、子宮、卵巣、肺、腹膜、消化管などとして、ヒト子宮内膜を構成する腺上皮、間質、血管内皮などの各細胞を特異的に認識する抗体を用いた免疫組織化学、ならびにヒトDNAを特異的に認識するプライマーを用いたreal-time PCRによりヒト組織の定量化を行った。一方、LOX関連遺伝子の導入を念頭において、まずluciferase(LUC)ならびにgreenfluorescent protein(GFP)などの標識遺伝子を組み込んだレンチウイルスの作成を行った。必要に応じて、このレンチウイルスを用いて移植内膜細胞をLUCおよびGFPで標識した。また、本モデルに同時に腹腔内に同じ分散内膜細胞を投与し、LOXが関与し得ると考えられる腹腔内炎症を惹起することで、異所性内膜の発生や進展にどのような影響が及ぶかについても検討した。これまでの結果として、移植内膜細胞は主に肺に集積しその後徐々に減少したが、移植後20週以降でも少なくとも肺実質にはヒト内膜由来の細胞集落を免疫組織化学で確認し得た。さらに、real-time PCRでもヒト由来DNAがマウス肺に認められた。以上より、異所性内膜症、特に肺内膜症のモデルになり得ると考えられた。
感覚網膜移植と網膜色素上皮細胞移植の基礎研究

近年、高齢化とともに本邦において増加しつつある加齢性黄斑変性および近視性血管新生黄斑症などの難治性黄斑疾患に対する治療として、感覚器網膜あるいは網膜色素上皮細胞移植の研究が行われてきた。我々は、本研究において、1.網膜色素上皮細胞の創傷治癒モデルを作成し、それを用いて創傷治癒に関与する因子の検討、2.臨床例における網膜色素上皮細胞欠損の治癒過程の検討、3.臨床例における中心窩移動術の検討を行った。ラット網膜色素上皮細胞をシート状に培養し、円形の創を作成し、創傷治癒に与える成長因子の効果および治癒過程における細胞外マトリックス発現の変化を検討した。臨床例では、走査型レーザー検眼鏡(SLO)を用いて脈絡膜新生血管板抜去後の変化を検討したところ、新生血管板抜去により網膜、網膜色素上皮、脈絡膜毛細管板に障害をもたらすことを明らかにした。そのため、血管新生黄斑症の治療には、中心窩移動術が現時点では最も臨床応用に近い治療法であると考え、その臨床検討を行った。我々は、独自に開発した部分的網膜切開を伴った中心窩移動術を行い、視力が1.0まで回復した症例を得た。また、強膜短縮を用いた中心窩移動術では、過半数の症例に視力回復を得た。術後経過の観察には、SLO,Optical Coherence Tomographyなどが黄斑機能の評価に有用であることを示した。現時点では、強膜短縮を用いた中心窩移動術は眼軸長が長く、脈絡膜新生血管膜の比較的小さな近視性血管新生黄斑症が良い適応であり、加齢性黄斑変性に対しては、周辺部網膜全周切開を用いた中心窩移動術を行うのが良いと考えられる。平成8年度は、黄斑変位術を3名の加齢性黄斑変性患者に施行し、患者の同意の下、術後視機能に関する前向き検討を行った。視力、色覚といった自覚的黄斑機能の改善に加えて、SLO micriperimetryおよび多局所ERGを用いることにより他覚的黄斑機能の改善を示すことができた。その他現在までの症例で、併発症として黄斑上膜形成が2眼にみられたが、いずれも観血的治療にて対処できた。術後平均観察期間が1028ヶ月と短期ではあるが、現在有効な治療法のない加齢性黄斑変性にとつて、黄斑変位術は効果のある治療法だと言えることを発表した。網膜色素上皮移植に関しては、まず移植の適した細胞採取の方法を確立し、発表した。また、その方法を更に改良することにより、単層上皮である網膜色素上皮細胞を生体内の形状を保ってシート状に採取、培養することに成功した。この培養系がin vitroにおいても、生体内と同様の細胞間接着装置、細胞骨格を有することを示し、従来の培養細胞と比較して優れていることを発表した。このモデルを用いて、移植後の生着、修復に重要な細胞外マトリックスの生成過程と創傷治癒過程を、時間を追って検討した。その結果、細胞外マトリックスは欠損部閉鎖に対し時間的に遅れて合成分泌され、また、細胞外マトリックスの中でも成分により分泌される順列があることが判明した。加齢性黄斑変性症および近視性血管新生黄斑症に対して黄斑変位術を施行し、1年以上の長期予後を検討した。黄斑変位術を施行した加齢性黄斑変性症の3例では、術後最高視力に比較して術後1年後の矯正視力は不変2例、低下1例であり、近視性血管新生黄斑症の2例では、術後最高視力に比較して術後1年後の矯正視力は低下2例であった。この視力低下の主な原因は、硝子体術後の核白内障の進行によるものが4例および新たな脈絡膜新生血管によるものが1例であった。

また、眼底所見では、黄斑下の脈絡膜新生血管膜は活動性が低下しており、出血などを生じることなく安定した状態が続いている。また、4年前に黄斑変位術を施行した加齢性黄斑変性症の1例では、術後1年後の矯正視力は1.0であったが、4年後の現在、0.4に低下しているが、これも術後の核白内障の進行によるものと考えられた。また、黄斑下の脈絡膜新生血管膜は同様に安定した状態が続いている。黄斑変位術後において、4症例が中心固視を維持しており、黄斑変位が外科的に成功していると考えられた。以上の臨床データより我々は、黄斑変位術がその長期予後において、過去に報告されている加齢性黄斑変性症の自然経過に比較して、予後が良好であり、治療効果があると考えられた。臨床的に黄斑変位術後の問題点として角膜乱視があるが、我々は、強膜短縮と角膜乱視の関連についてウサギ眼および摘出豚眼を用いて検討した結果、強膜短縮の幅に比例してその方向に角膜乱視が増加していくことが確認できた。以上の結果より、黄斑変位術のさらなる症例の検討および長期にわたる経過観察が今後も必要であり、術後視機能のさらなる向上を目指して、十分な黄斑移動量を得ながら、術後合併症を軽減していくための検討を重ねていく予定である。強膜短縮を用いた中心窩移動術(黄斑変位術)を臨床例で行い、その術後経過と合併症について検討した。強膜短縮を用いた場合、重篤な合併症は特に生ぜず、中心窩は平均0.7乳頭径の距離を鼻内側へ移動させることができた。中心窩移動術を施行した過半数の症例で視力改善が得られており、脈絡膜新生血管が比較的小さい近視性血管新生黄斑症に対しては、自然経過と比較して、有効な治療法であると考えられた。手術適応の選択において、SLO微小視野により、黄斑部網膜感度の測定、および固視点測定を行い、また、OpticalCoherence Tomography(OCT)による黄斑部網膜の断層像により、中心窩機能の術前評価を行うことが有用であった。また、術後の網膜機能評価としても、SLO微小視野測定は、矯正視力とともに有用な検査であった。術後の中心窩陥凹の回復は、OCTにより経過観察が可能であり、移動後の中心窩を機能的、解剖学的に経過観察できた。強膜短縮を用いた中心窩移動術では、視機能に影響を与える最も大きな合併症としては、角膜乱視と網膜襞の形成が挙げられた。術後2Dから6Dの角膜乱視を生じるため、乱視矯正の方法については、今後検討されるべき課題である。また、網膜襞は、強膜短縮に必ず伴うが、中心窩を含まないように襞形成をコントロールすることが必要である。今後は、脈絡膜新生血管の比較的大きな、加齢性黄斑変性の症例に対する中心窩移動術として、周辺部網膜全周切開法による中心窩移動術を検討していく必要があると考えられた。なお、上記研究計画の実施にあたっては、文書で患者の同意を得ている。
Trypanosoma brucei gambienseの活性酸素消去系の解析

我々は、以前に行っていたTrypanosoma brucei gambiense血流型原虫の糖代謝に関連した研究の過程から、本原虫が外部からの酸化ストレスに対して非常にダメ-ジを受けやすいというデータを得ている。他の研究者の報告を見ても、本原虫からは、唯一、トリパノソーマ科原虫に特異的と考えられているトリパノチオンレダクターゼが見出されているのみで、一般的な活性酸素消去系酵素の存在は報告されていない。しかしながら、本原虫自身の作り出す内因性の多くの種類の活性酸素種をトリパノチオンレダクターゼによって生成される還元型トリパノチオンのみで全て消去しているとは考えにくく、細胞内でこれ以外の消去系が機能しているはずである。そこで、本原虫の活性酸素消去系の検索を主目的に本年度の研究を行った。本原虫は、1433×24μmの紡錐形の形態をしているため、ポッター型ホモジナイザーを用いたマイルドな方法での細胞破壊が困難であった。そこで、超音波破砕機および凍結融解法を用いて粗酵素溶液の抽出を行った。ここで得られた粗酵素溶液を用いて、次に、他の生物の活性酸素消去系において重要な役割を果たしているカタラーゼなどの酵素活性を常法にしたがって測定した。その結果、カタラーゼ、スーパーオキシドジスムターゼおよびグルタチオンレダクターゼについては、マウスに感染させて得た虫体と培養によって得た虫体のいずれにおいても酵素活性は検出されなかった。しかし、本原虫に存在するかもしれない酵素が、哺乳類のカタラーゼに認められる様な非常に失活しやすい不安定な性質をもっていたため、測定時には既に失活し酵素活性が検出されなかった可能性が考えられる。そこで、現在、酵素抽出法や酵素活性測定法も含めて再検討を行っており、その存在が予想されているものの未だ見出されていないトリパノチオンペルオキシダーゼを含めた活性酸素消去系酵素種の検索を今後も引き続き行う予定である。
新規な立体保護場を利用した含カルコゲンインターエレメント化合物の創製

セレネン酸は、酸化状態の最も低いセレンの酸素酸であり、新しいセレン化学種としてのみならず、ヒドロペルオキシド(ROOH)の重カルコゲン原子類縁体としても興味深い。さらに、セレネン酸は生体内での過酸化水素の無毒化を触媒するグルタチオンペルオキシダーゼの触媒サイクルの重要な反応中間体としても仮定されている。しかしながら、極めて高い反応性を持ち、これまで単離された例がない。本研究においては、セレネン酸官能基(SeOH)をボウル型置換基(カリックス[6]アレーン骨格および全炭素骨格ボウル型分子、4-t-ブチル-2,6-ビス[(2,2^<11>,6,6^<11>-テトラメチル-m-テルフェニル-2^1-イル)メチル]フェニル基(Bmt基と略記))の底に共有結合で固定することにより、セレネン酸の安定化を試みた。カリックス[6]アレーン骨格を持つセレネン酸は、対応するプチルセレニドをまず合成し、その酸化、熱分解により合成した。Bmt基を持つセレネン酸は、対応するセレノールの酸化により合成した。これらは安定なセレネン酸の合成の最初の例である。これらはいずれもセレネン酸に期待される低磁場領域における^<77>Se-NMR(約1100ppm)を示した。また、カリックス[6]アレーン骨格を持つセレネン酸はX線結晶解析によりその構造を決定した。Bmt基を持つセレネン酸を用いることにより、グルタチオンペルオキシダーゼの触媒サイクルにおいて仮定されている4つの過程の全てを初めて実験的に示すことができた。
部分肝移植後の穿刺吸引微量肝細胞による移植肝再生能評価法の開発

生体部分肝移植術後のルケーン検査として実施することを目的とした経皮穿刺吸引細胞診の手法で採取される少数の肝細胞内mRNA定量法の開発のため、ラット肝におけるアルブミンmRNAの発現量を、その遺伝子のexon4からexon5に相当する部分(siteA)とexon11からexon12に相当する部分(siteB)に対するcompetitive RT-PCR法を用いた定量法により計測する方法を確立した。competitor(internal control)としては、PCRの増幅効率の相異による測定誤差を最小限に抑えるため、siteA・siteB各々にたいして末端から約20bpの部分にpoint mutationを導入した変異プライマーを作成してcDNAをtemplateとしたPCRによって得られた産物を用いた。この際導入された変異により、restriction siteが新たに生じるか、或いは消滅するように設計し、competitor由来のPCR productを当該のrestriction enzymeで消化したのち電気泳動を行うことによってmRNA由来のPCR productから識別することができるようにした。ところで、northern blotting法によるmRNA定量ではtotal RNA量をそろえることによって細胞数を一定にするが、穿刺吸引細胞診の手法によって得られるごく微量の検体からは、そのような細胞数カウントの系を独立させることは物理的に困難である。そこで検体からIso Quick^<TM>を用いて核酸全体を抽出し、Super Script PreamplificationKit^<TM>でmRNAより変換されたcDNAを、genomic DNAと分けることなく一緒に既知濃度のcompetitorと共に増幅して3者の量比をデンシトメトリーにて求めることによって、mRNA定量が可能であるだけでなく異なる微量検体間での比較ができるようなシステムが確立された。生体部分肝移植術後のルチーン検査として実施することを目標とし、経皮穿刺吸引細胞診の手法で採取される少数の肝細胞内メッセンジャーRNA(mRNA)定量法の開発に着手した。開腹下にラット肝細胞を穿刺吸引にて採取し細胞浮遊液を作成したところ、100-1000個の肝細胞が損傷なく採取できることが明かとなった。この細胞浮遊液より核酸を抽出し、逆転写酵素を作用させて相補的DNA(cDNA)とゲノムDNA(gDNA)の混合液を得、既知の濃度のmutant cDNA(competitor)を加えてPCRで増幅し、適当な制限酵素で消化することによってcDNA由来の産物とcompetitor由来の産物とを電気泳動分離し、その量比から目的とするmRNAの定量を行うことは原理的に可能である。一つのタンパクでのアッセイが確立すれば、即座に他のタンパクにも応用しうると考えられるため、まず肝のタンパク合成能をみる指標として、種々の実験で比較的情報量が多く産物の血中濃度測定が簡単なアルブミンのmRNAを選択した。ラットアルブミン遺伝子のうち、ヒトとのhomologyが高く比較的intronの短い、exon4とexon5にまたがる部分(sitdA)とexon11とexon12にまたがる部分(siteB)を選び、プライマーを作成した。現在internal controlとして適当なcompetitorの作成に移っているが、gDNA由来のPCR産物は、そのintronの部分に多少のpolymorphysmを認めており、sequencingも含めた慎重な初期設定が必要である。同様のアッセイ系をイヌアルブミンでも作成中である。一方、動物実験としてラットでは同所性部分肝移植を行い肝再生能および合成能の評価を、イヌではレシピエントの肝を温存した異所性肝移植モデルを作成して分肝機能測定(ホスト肝とグラフト肝の機能を別々に評価)を想定し、モデルの確立ならびにサンプルの収集を行っている。

生体部分肝移植術後のルチーン検査として実施することを目的とした、経皮穿刺吸引細胞診の手法で採取される少数の肝細胞内mRNA定量法の開発のため、ラット肝におけるアルブミンmRNAの発現量を、その遺伝子のexon4からexon5に相当する部分(siteA)とexon11からexon12に相当する部分(siteB)に対するcompetitiveRT-PCR法を用いた定量法により計測する方法を確立した。competitor(internal control)としては、PCRの増幅効率の相異による測定誤差を最小限に抑さえるため、siteA・siteB各々にたいして末端から約20bpの部分にpoint mutationを導入した変異プライマーを作成して、cDNAをtemplateとしたPCRによって得られた産物を用いた。この際導入された変異によりrestriction siteが新たに生じるか、或いは消滅するように設計し、competitor由来のPCR productを当該のrestriction enzymeで消化したのち電気泳動を行うことによって、mRNA由来のPCR productから識別することができるようにした。ところでnorthern blotting法によるmRNA定量ではtotal RNA量をそろえることによって細胞数を一定にするが、穿刺吸引細胞診の手法によって得られるごく微量の検体からは、そのような細胞数カウントの系を独立させることは物理的に困難である。そこで検体からIsoQuick^<TM>を用いて核酸全体を抽出し、SuperScriptPreamplificationKit^<TM>でmRNAより変換されたcDNAを、genomicDNAと分けることなく一緒に既知濃度のcompetitorと共に増幅して3者の量比をデンシトメトリーにて求めることによって、mRNA定量が可能であるだけでなく異なる微量検体間での比較ができるようなシステムが確立された。
機能性超微粒子の製造に関する研究

本研究において、機能性超微粒子の構造に関わる基礎的研究として、人工ダイヤモンド及びグラファイトに着目し、浮選法によるダイヤモンドとグラファイトの浮選分離について検討した。まず、捕収剤としてエロフロートあるいはケロシンを用い、ダイヤモンドおよびグラファイトの浮遊率に及ぼす各種抑制剤の添加濃度について検討した。ケイ酸塩およびピロリン酸塩のような抑制剤を用いた場合には、ダイヤモンドの浮遊率はこれらの抑制剤の添加濃度の増加とともに顕著に低下することが認められた。一方、グラファイトは、これら抑制剤の添加濃度を増加しても抑制されることはなく、浮遊率は約90%と一定値を示した。このような抑制剤によりダイヤモンドが抑制されるのは、OH^-濃度の増加によるものだけではなく、抑制剤の加水分解生成物が吸着してダイヤモンド表面がより親水性になり、ケロシンあるいはエロフロートのような捕収剤の吸着が阻害されることにより抑制されるものと思われる。一方、抑制剤としてヘキサメタリン酸塩を用いた場合には、ほとんど加水分解することなく、いずれの添加濃度においても浮選後のpHは6.5と一定であり、OH^-の寄与が少ないことによるものと思われる。次いで、上記の実験結果を基礎にして、ダイヤモンドとグラファイトの混合試料について、抑制剤としてピロリン酸ナトリウムおよびヘキサメタリン酸塩を選び、捕収剤としてケロシン(40mg/l)、起泡剤としてパイン油(25mg/l)を用いて、パルプのpH9と一定条件の下で浮選分離試験を行った。測定の結果、いずれの抑制剤を使用した場合についても良好な結果が得られ、尾鉱中のダイヤモンド品位および実収率はそれぞれ約97%および96%であった。このように、抑制剤を用いることにより、ダイヤモンドを抑制して尾鉱として回収し、グラファイトを浮鉱として除去することが可能であることが確かめられた。本年度は粒径分布制御法の一つとして、マイクロエマルション法を取り上げ、白金の単分散微粒子の製造についての研究を行った。マイクロエマルション法は粒径のそろった球形の微粒子を製造する方法としては最適であると考えられるので検討することを試みた。界面活性剤として臭化セチルトリメチルアンモニウムを選び、n-オクチルアルコールを分散剤として逆ミセルを生成し、その中に塩化白金酸溶液を閉ぢ込め、有機還元剤により還元して白金の球形微粒子を製造することについて検討した。上記のように、微粒子の製造法の一つとしてマイクロエマルション法について検討したが、未だ十分満足すべき結果が得られておよず、界面活性剤および分散媒の種類、温度、濃度などの諸因子について、さらに詳細な検討を行なう必要がある。本年度は、超微粒子製造法の一つとして、超音波法を取り上げ、シュ酸サマリウム微粒子の製造について研究を行った。サマリウムはSm-Co系希土磁石の原料として近年需要が著しく増大している。Sm-Co系希土磁石の製造工程では多量のスクラップが発生し、また製品の老朽化により最終的に廃棄される量も増加の傾向にある。したがって、これらスクラップのサマリウムの回収・リサイクリングは限りある資源の延命の観点からも緊急の課題である。本研究においては、Sm-Co系希土磁石を塩酸にて溶解したのち、D2EHPAを抽出剤として有機相中にサマリウムを抽出したのち、超音波を用いてシュウ酸溶液中にサマリウムを晶析逆抽出させ、Sm_2(C_2O_4)_3の超微粒子の製造について検討した。その結果、超音波出力の増大とともに、晶析率、晶析速度が顕著に増加し、最適条件において粒径が数μmの超微粒子の製造が可能であることが確かめられた。

本研究では、疎水性物質相互の分離技術の研究の一環として無機抑制剤と疎水性物質表面の相互作用に着目し、その相互作用の解明のための基礎的研究としてダイヤモンド及びグラファイトへのピロリン酸ナトリウム(Na_4P_2O_7)及びケイ酸ナトリウム(Na_2SiO_3)の吸着について検討を行った。まず、ダイヤモンドとグラファイトへのNa_4P_2O_7及びNa_2SiO_2の吸着実験を、pH8.5、25°Cで行った。いずれの抑制剤ともにダイヤモンドへ吸着するが、グラファイトへは吸着しなかった。これらのことより、上記抑制剤がダイヤモンドへ吸着するが、グラファイトへは吸着しなかった。これらのことより、上記抑制剤がダイヤモンド表面にのみ吸着することによって表面親水化し、グラファイトとの浮選分離を可能にしていることを考察した。次に、pH8.5、25°Cと50°CでダイヤモンドへのNa_4P_2O_7の吸着実験を行い、得られた吸着等温線から微分吸着熱を求めた。吸着等温線はLangmuir型を示し、いずれの抑制剤もダイヤモンドに対して単分子層吸着をしていることが分かった。また、得られた吸着熱の値は、物理的吸着と化学的吸着の中間程度の水素結合による吸着熱と同程度であり、本実験の濃度領域においてはNa_4P_2O_7がダイヤモンドに特異吸着をすることによって浮遊が抑制されることを推察した。更に、平衡pH8,5、25°Cと50°CでダイヤモンドへのNa_2SiO_3の吸着実験を行い、得られた吸着等温線から微分吸着熱を求めた。吸着等温線はFreundlich型を示し、得られた微分吸着熱の値は水素結合吸着と同程度であり、Na_4P_2O_7と同様にNa_2SiO_3もダイヤモンドに特異吸着することによって浮遊を抑制するものと考えられた。最後に、pHを変化させた吸着実験ではいずれの抑制剤ともに吸着のpH依存性が見られた。これは両抑制剤のある特定イオン種が優勢にダイヤモンドに吸着することに起因していると推察された。
メモリーB細胞分化誘導におけるCD19分子の役割

B細胞のメモリー細胞への分化は、抗原とT細胞上の共刺激分子等による増殖機能獲得・体細胞突然変異・選択などの過程を経ておこる。メモリー細胞の形成は、自己免疫疾患・移植片拒絶・骨髄移植時の免疫寛容の破綻に大きく影響を及ぼす。CD19はB細胞初期で発現し、成熟B細胞では活性化制御補助受容体として働き、抗体産生細胞となると消失する。CD19シグナルは会合しているCD35やCD21架橋を介して伝わり、共刺激分子のB7-1やB7-2の発現誘導しT-B細胞間相互作用を増強する。本研究では大きく分けて(1)CD19のメモリー分化に及ぼす影響(2)CD19のユビキチン化とCb1-bによる制御機構の解明の2点から解析をおこない、いくつかの新たな知見を得たのでここに報告する。1.B細胞上のCD19分子とBCRを架橋することにより、体細胞突然変異変異・クラススイッチに重要なAID分子の発現誘導が見られ、そのAID分子はヘルパーT細胞との共培養により増強され,た。その共培養B細胞はBclfamilyのRT-PCR解析から、メモリーB細胞の表現型を獲得していることがわかった。2.B細胞上のCD19分子とBCRを架橋または免疫マウスにおいて、Cb1-b分子依存性にCD19分子がプロテアゾーム(ユビキチン制御)により分解制御されていることが、Cb1-bノックアウトマウスを用いて明らかになった。そのCD19分子のプロテアゾームによる分解制御については、既に他の系で報告されているPI-3Kを介してではなく、ユビキチンが直接CD19分子に結合している結果を得た。CD19の活性化に伴うCb1-b-ユビキチン系によるシグナル制御はB細胞で今まで報告されていない新しい制御系である。CD19は、B細胞受容体の補助受容体として働き、CD19ノックアウトマウスでは、メモリーB細胞形成ができず、CD19分子はメモリーB細胞誘導に必須の因子の一つであると考えられる。CD19シグナルは会合しているCD35やCD21が架橋されることで伝わり、B7-1やB7-2の発現を誘導し、T-B細胞間相互作用を増強する(Y.Kozono et al.1998)。本研究は、免疫マウス及び自己免疫疾患マウスのメモリーB細胞において、CD19分子がCbl-bによりユビキチン制御を受けそのCD19がどのように、免疫マウス、自己免疫疾患マウスのメモリーB細胞誘導を制御しているかを検討することを目的としている。1.自己免疫疾患モデルマウスのB細胞のCD19分子のウエスタンブロッテイング解析から、NZBマウスではプロテアゾーム感受性(ユビキチン制御の可能性)、NZB×NZWF1でば、若い週齢と尿蛋白産生している発症時期でプロテアゾーム感受性となっていることがわかった。2.ウエスタンブロッテイング解析から免疫マウスのB細胞のCD19分子は、プロテアゾーム感受性になっていることがわかった。また、免疫沈降法による解析から、多価ハプテン抗原を用いることで、ほとんどのB細胞でのシグナル分子の再配列がおこっていることがわかった。3.Cbl-bノックアウトマウスをカナダより入手し、解析をしょうとしたところ、backgr ground及びphenotypeに問題があることがわかり、現在問題解決をおこなっている。4.CD19分子によるメモリーB細胞形成に関与するco-stimulatory分子の解析として、新規co-stimulatory分子、4-1BBL/4-1BB, OX40L/OX40について解析をおこなったところ、OX40Lの発現誘導を高めている結果を得た。CD19はB細胞受容体の補助受容体として働き、メモリーB細胞誘導に必須の因子の一つである。

CD19シグナルは会合しているCD35やCD21が架橋されることで伝わり、B7-1やB7-2の発現を誘導し、T-B細胞間相互作用を増強する(Y.Kozono et al. 1998)。本研究は、免疫マウス及び自己免疫疾患マウスのメモリーB細胞において、CD19分子がCbl-bによりユビキチン制御を受け、どのようにメモリーB細胞誘導を制御しているかを明らかにすることを目的とし研究をおこないいくつかの新たな知見を見いだしたので報告する。1.B細胞上のCD19分子とBCRを架橋することにより、体細胞突然変異変異・クラススイッチに1重要なAID分子の発現誘導が見られ、そのAID分子はヘルパーT細胞との共培養により増強された。その共培養B細胞は、Bcl familyのRT-PCR解析から、メモリーB細胞の表現型を獲得していることがわかった。2.B細胞上のCD19分子とBCRを架橋することにより、Cbl-b分子依存性に、CD19分子がプロテアゾーム(ユビキチン制御)により分解制御されていることが、Cbl-bノックアウトマウスを用いて明らかになった。3.CD19分子のウエスタンブロッテイング解析から、免疫マウスのB細胞のCD19分子は、Cbl-b分子依存性に、プロテアゾーム感受性になっていることがわかった。4.CD19分子のユビキチンによる制御に関しては、会合しているPI-3Kを介してではなく、ユビキチンが直接CD19分子に結合している可能性のある結果を得た。
カルシウム結合蛋白質の金属配位構造の安定性とその動的構造変化

カルモデュリンは、細胞内情報伝達にかかわるカルシウム結合蛋白質の代表的なものであり、細胞外からの刺激で細胞内のカルシウムイオン濃度が上昇すると4モルのカルシウムイオンと結合してその高次構造を変え、多くの種類の標的酵素を活性化する。この研究の目的は、カルモデュリンの酵素活性化機構を明きらかにすることである。この目的のために、遺伝子工学的な手法でカルモデュリンの変異体蛋白質をつくり、カルモデュリンがカルシウムイオンを結合してから酵素の活性化に至る過程と、そのときの動的な構造変化を追跡して検討するという手段をとった。平成4年度は、平成3年度の成果を基礎にして、4モルのカルシウムを結合することができる酵母カルモデュリン変異体蛋白質の作製に成功した。146残基からなるパン酵母カルモデュリンの第4番目のカルシウム結合サイトはカルシウムイオンを結合できないので、標的酵素活性化能力は低い。この第4サイト内の3つの位置のアミノ酸残基について以下の様に変異を加えた。(1)129番目のセリンをアスパラギン酸に置換、(2)欠如している130番目の位置にイソロイシンを挿入する、(3)140番目のグルタミンをグルタミン酸に置換する。この結果得られた変異カルモデュリンYCMDは、脊椎動物カルモデュリンと同様に4モルのカルシウムイオンを結合することができた。YCMDは、標的酵素の1つホスホジエステラーゼに対しては脊椎動物カルモデュリンと同レベルに近い活性化能力を示したが、ミオシン軽鎖キナーゼに対する活性化は改善されず、酵母カルモデュリンと同程度の活性化能力しか示さなかった。平成3年度に作製した、脊椎動物カルモデュリンと酵母カルモデュリンのキメラ蛋白質C4Y140Eは、YCMDと同じく3つの変異を加えることにより両標的酵素を脊椎動物カルモデュリンと同レベルに活性化できる。両者の高次構造の比較をNMR法で継続している。
携帯メールの書き手の同定に関する統計的研究

携帯メールの文面情報を構成する主な要素は、文字列と絵文字・顔文字である。携帯メールの中で同じ意味やニュワンスで用いる絵文字・顔文字は、機種によって形状が異なる。携帯機種に依存しない書き手の特徴データを抽出するため、本研究では絵文字について感情を表すもの、身振り・抑揚を表すもの、装飾として用いられているもののようにカテゴリ化し、データ集計を行った。文字列データ関しては、機械的に集計を行った。21年度は、これらのデータ抽出の見直しおよびチェックとそのデータに基づいた書き手の識別について繰り返し実験を行った。実験分析では、絵文字・顔文字データ、文面の文字列データを結合し、サポートベクターマシン法、バキング法、ブースティング法、ランダムフォレスト法など機械学習法の分類器を用いた。正解率の評価は交差確認法を用いた。その結果、正解率は分類器によって若干異なるが、平均約90%の正解率で書き手を同定することが可能であることが分かった。しかし、書き手の同定の正解率は、同定すべく書き手の組み合わせによって、そのバラツキが大きい。任意の2人間の場合、交差確認法による正解率の範囲は約70%99%になることが分かった。また、本年度ではメールの書き手の同定に関連する研究として、文学作品の書き手の同定や執筆時期の推定などに関する次の研究も行った。川端康成の作品の中で三島由紀夫が代筆したと言われている作品の書き手の同定文章の執筆時期の推定-芥川龍之介の作品を例として-19年度は、本研究の本となる携常メールのデータ収および研究環境の整備を行った。研究企画では、実験計画法に基づいて、実験を行う方法により携帯メールのデータを収集することを前提としたが、削減された経費では、統計分析に必要となる量を確保するのが困難であるため、研究計画に示したデータ収集の方法を修正せざるを得なかった。調査研究における調査対象は、通常ランダムサンプリングを行うが、本研究の場合は、ランダムサンプリングされた方の携帯メールの蓄積の量、協力の意思などの諸問題があり、ランダムサンプリングの方法を用いるのは困難である。そこで、公募する形態をとり、男女各10人からそれぞれ200400タイトルの携帯メールを収集した。携帯メールには、テキストファイル上で再現できない絵文字などが含まれているので、全ての携帯メールについてテキスト形式と画像形式の電子ファイルを提出することにした。提供者およびメール文面における特定の人・組織のプライバシーに関わる情報を守るため、しかるべき方策を講じた。例えば、提供者は匿名でファイルを提供する、メール文面におけるプライバシーに関わる個人名・個別組織などについては提供者が削除するなど。これらの作業には、一定の作業時間が必要であるため、提供者には可能な範囲内の謝礼を与えた。また、本研究の次のステップの研究作業を遂行するための必要最小限の物理的な環境を構築した。20年度は、収集した携帯メールをクリーニングしながら、メールからデータを抽出するための実験研究を行った。携帯メール文の大きな特徴は、絵文字や顔文字がメール文に混在していることである。絵文字や顔文字は、機械的に直接集計することが困難であるため、人工的にデータの集計を行った。絵文字は携帯機種に依存する。つまり、同じ意味やニュワンスを示す絵文字は、機種によって形状が異なる。したがって、絵文字や顔文字をメールの文面に表示された形状のままで類別・集計したデータには、メールの作成者の特徴と携帯機種に依存する情報が混合されるため、期待した効果が得られない。そこで先行研究を踏まえて、絵文字について感情を表すもの、身振り・抑揚を表すもの、装飾として用いられているもののようにカテゴリ化し、データ集計を行った。また、作成したデータ構造に適するデータマイニングの方法について実験研究を進めた。方法としては主に、近年注目されているサポートベクターマシン法、バキング法、ブースティング法、ランダムフォレスト法など機械学習法を用いて予備実験分析を行った。予備実験では、メールの書き手に偏りがあるが、平均的に約90%の正解率で書き手を同定することができ、ランダムフォレスト法が最も作成したデータに適していることが分かった。なお、メールの書き手の同定に関連する研究として、文学作品の計量分析やテキストデータの統計的解析に関する研究も行った。

また、本年度ではメールの書き手の同定に関連する研究として、文学作品の書き手の同定や執筆時期の推定などに関する次の研究も行った。川端康成の作品の中で三島由紀夫が代筆したと言われている作品の書き手の同定文章の執筆時期の推定-芥川龍之介の作品を例として-