hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
雌ウシの潜在能力を利用したホルモン処置を使わないダブル排卵モデルの確立

このことから、血管新生が激増する中卵胞以上で、むしろ血管を安定化させるといわれるANPT1が主なリガンドとなることから、顆粒膜細胞のANPT1は、血管新生ではなく、むしろエストロジェン合成と深く関わっている可能性が示唆された。2)ウシ卵胞液中のN型糖鎖の変換の第一段階を触媒するNアセチルグルコサミニルトランスフェラーゼI(GnT I.)活性を検索した結果、閉鎖卵胞液にその活性が高いことがわかり、卵胞の閉鎖過程とN型糖鎖の変換活性との関連が示唆された。3)乳牛の第1卵胞波の直径2mm以上の全ての卵胞の消長を、カラードップラー超音波診断装置を用いて、それらの基底膜の局所血流とともに詳細に調べた結果、閉鎖に向かう卵胞は、どのサイズにおいても血流がDay3を境に消失するのに対して、発育を続ける卵胞の血流は存続することを初めて実証した。4)LHサージの直前に優性卵胞を吸引除去(ダブル優性卵胞モデル)または、GnRH投与による誘起排卵(シングル優性卵胞モデル)直後から5日目まで、毎日8時間、15分間隔の連続採血を行い、LHとFSHのパルス状分泌を観察した。その結果、黄体が存在しない(プロジェステロン濃度が基底値)ダブル優性卵胞モデルでは、LHパルスが活発で、FSH濃度も若干高いことがわかった。
物価水準の国際的相違に関する理論的・実証的研究

平成10年度は、研究2年度として、まず生産性上昇率格差と賃金格差の平等度が実質為替レート増価の要因であることを明らかにし、「バラッサ=サムエルソン仮説」がとくに先進国と途上国の間では統計的に支持されることを示した。そのうえで、初年度の理論的研究を以下のように前進させた。金本位制のもとではすべての財が現実的・潜在的に貿易財と捉えられるのにたいして、金本位制崩壊後にカッセルが提唱した購買力平価説は、そもそも貿易財と非貿易財の区分を前提としたものであり、貿易財取引に用いられる国際通貨と非貿易財取引に用いられる国内通貨の分裂を想定していた。これを現在の状況に適用するならば、先進国の貿易財・非貿易財取引に用いられるのがともに先進国通貨(ハード・カレンシー)であるのにたいし、途上国においては、貿易財取引に用いられるハード・カレンシーと非貿易財取引に用いられる国内通貨(ソフト・カレンシー)が並存し、一種のバイメタリズムの状況にあると考えられる。前年度に明らかにした「不平等交易論」との関連で言えば、対外的な交易条件の決定要因が貿易財購買力平価であるのに対し、途上国内の貿易財にたいする非貿易財の交易条件を決定する要因は名目為替レートと実質為替レートの乖離指数である。先進国通貨の実質為替レート増価は、途上国にとってこの2つの交易条件がともに悪化することを意味する。この仮説の定式化および統計的検証は、その成果の一部を論文として発表したほか、続編を準備中である。また東アジア諸国に適用した実証研究も発表予定である。平成9年度は、研究初年度として、まず貿易と為替レートに関する理論的研究を進め、物価水準の国際的相違、言い換えれば現実の為替レートの購買力平価からの乖離をもたらすメカニズムを以下のように考察した。「バラッサ=サムエルソン仮説」は、先進国の貿易財部門に生産性上昇が生じた場合、輪出価格が一定に保たれれば、貿易財部門の賃金を上昇させ、これが生産性が上昇しない非貿易財部門の賃金上昇に波及することにより、国内物価を上昇させることを説いた。ここで、バ-ゲニング・パワーの優劣、および賃金独立変数という観点を導入するならば、この仮説は、「不平等交易論」として知られる「プレビッシュ=シンガー命題」ないし「ルイス・モデル」と表裏一体の理論である。先進国における貿易財部門の生産性上昇が、輪出価格を低下させることなく賃金上昇に結びつくのは、先進国企業・労働者のバ-ゲニング・パワーが強いことに起困している。逆に途上国の場合は、貿易財部門に生産性上昇が生じても、都市化の進行とバ-ゲニング・パワーの低さによって形成された硬直的低賃金構造により、輪出価格が低下し、交易条件悪化に帰結してしまうのである。平成10年度は、平成9年度の研究によって明らかになった上述の論理の理論的定式化を完成させるとともに、実証的分析に重点を移し、平成9年度に収集したデータの整理を進め、物価水準の国際的相違に関する統計解析を行う予定である。
神経細胞死とカルモデュリン依存性細胞骨格蛋白質燐酸化反応の分子細胞生物学的研究

平成5年度にPC12細胞を用いて、マウスCaMキナーゼIIアルファーサブユニットを大量に発現する複数の安定なクローン細胞の確立に成功した。得られたクローン細胞を用いて、以下の実験を行なった。1)CaMキナーゼIIアルファーサブユニットに対するcDNAを用いて、ノーザンブロットを施行した。クローン細胞では、CaMキナーゼIIアルファーサブユニットのmRNAの発現が確認された。野生型PC12細胞のCaMキナーゼIIのmRNAは本プローブでは検出されなかった。2)脳のCaMキナーゼIIに対する抗体を用いてイムノブロットを施行した。クローン細胞ではCaMキナーゼIIアルファーサブユニットの発現が確認された。野生型PC12細胞では抗体との反応性が弱く、PC12細胞内に、脳とは異なるアイソザイムの存在が示唆された。3)PCR法によりラットCaMキナーゼIIの4種類のサブユニットのcDNAを得た。野生型PC12細胞ではアルファーサブユニット以外の発現が確認された。4)クローン細胞では微小管付随蛋白質2(MAP2)の燐酸化反応が増強された。本反応は、細胞内カルシウム濃度を増加させる刺激により著しく促進された。5)野生型細胞では細胞内カルシウム濃度を増加させる刺激によりMAP2の燐酸化は著明に減少した。サイクロスポリンを用いた実験から、本脱燐酸化反応にはカルシニューリンが関与することが示唆された。6)細胞をdibutyryl cyclic AMPで処理した場合の神経突起伸展がクローン細胞では著明に抑制された。この抑制は酵素の発現量と相関した。以上の結果より、過剰発現されたCaMキナーゼIIがMAP2の燐酸化を増強させること、及び、神経細胞の形態変化に影響を与えることが明らかとなった。今後、本酵素の細胞死に対する影響を検討する予定である。
建築計画学における比較文化的手法の応用に関する研究

これからの医療施設計画を考えるにあたり、産科に注目してお産の文化的・社会的背景を考慮して研究を行った。神戸市のM助産院(3床・助産婦3名)にて過去2年間に出産を行った産婦のうち、出産体験を記したものの中から、病院でなく助産院を選択した理由について、主に療養環境の観点から分析を行った。その結果、産婦が出産を日常的な空間(周辺からの生活音、院内での調理や会話の様子、住宅的なしつらえ、医療用でなく家庭用の什器、適度な暗さ等)で行えることに対して積極的に評価していることが判明した。同時に施設規模(小ささ)や、規則への柔軟な対応等も病院と比較した上でプラスの評価であった。本研究と平行して行っている海外(バングラデッシュ、スリランカ、フィンランド、オランダ)での出産場所に関する評価研究では「安全」と「くつろげる環境」への欲求が、選択行動の二極対立軸にある。しかしいずれの文化でも「安全」が確保された上で、家庭的環境を望んでいる。本研究でも、日本国内で1%未満の病院外分娩ではあるが、安全を望みつつも病院的でない出産環境の確保を望む層が、住宅的しつらえを希望していることが判明した。産科という、多くは疾病でない分野を扱う科を皮切りに、病院建築のあり方についての指針を得ることができた。同時に療養型病床群、急性医療の分野にもとり入れることができる提案が、この出産環境の研究で見出すことができた。建築計画学の源流となる学問は戦前から培われてきたが、現在の計画学の土台となるものは、吉武学派を中心に、戦後それも高度成長期に芽生えた。本研究では、まず建築計画学の系譜そのものの流れを整理した上で、その考え方と領域を分類整理し、研究に使われる手法について考案を加えた。近代以降のわが国の流れとして、欧米を模範とし、技術や知識を導入して学問体系を築いてきたことは、建築計画学の分野でも明確に指摘できることであった。これまで空間を評価する上で主観的な判断材料しか持たないことに対する反省として、科学的視点を持ち込んだのは画期的であった。だが、人間と環境との関係を模索する上で、入り組んだ技術とそれに支えられる建築の中では評価が困難な場合が多々見られることも、調査手法の整理で判明した。ここ数年、世界各地の非西洋型ヴァーナキュラーな建築や集落を研究対象としたものに、成果を上げている研究が多く見られている。非西洋型の環境行動研究として、研究代表者がこれまで継続して行ってきた海外での医療施設計画研究の中での、出産にまつわるものについて整理・分析を行った。日本国内で現在とられている出産の形態やその施設まわりや行動選択について、過去に医療施設以外の場所で行われてきた出産の場面を海外の研究と同軸上に並べることを本年度の研究として行った。
正方晶鉄合金の磁性-特に高飽和磁化と巨大磁気異方性について-

今年度は、1鉄窒化膜の作成条件の決定とこれらの薄膜の磁性、2正方晶永久磁石R-Fe-Bの磁化と巨大磁気異方性、3 Fe-Sn合金の磁気異方性と磁化、4【Ni_3】Mn合金の巨大一方向誘導磁気異方性、などの研究を行った。本年度の設備備品として購入した日本真空技術(株)の高周波スパッタリング装置を改良して、反応型スパッタリングやイオン窒化ができるようにした。これを使って鉄窒化膜を作成することに成功した。膜作成時の条件を色々変えながら、鉄窒化膜の構造を精密X線回折(前年度購入備品)で調べた。その結果、【Fe_(1-r)】【N_x】膜の組成比xを0から0.5まで連続的に変えられることが判り、これらの磁性を調べた。(86応用磁気学会、物理学会で発表)。但し、目的とする【Fe_8】Nは、この報告書を提出する段階では、まだ得られていない。基板温度とガス流量の正確な制御が必要と思われるので、改良をしている。2の正方晶R-Fe-Bの磁性研究は大いに進展した。前年度製作した強磁場用トルク計(JJAPに発表)を用いて、磁気異方性定数【K_1】,【K_2】,【K_3】の温度変化とR原子依存性を世界に先駆けて決定した('86M3会議及びJAPで発表)。又、この異方性定数を用いて永久磁石の減磁曲線を定量的に説明できた('87Intermag会議にて発表)。単結晶【Nd_2】【Fe_(14)】Bの磁化ベクトルの空間・温度依存性を測定し、8つの磁区の動きから説明できた(JJAP投稿中、ISMIC'87会議で発表)。3のFe-Snは体心立方構造を持つ合金であるが、低濃度のSnを加えるとFe原子の磁気モーメントが増加することが初めて判った。これは体積効果の一種と考えられ、予想どうりの結果となった(86応用磁気学会で発表)。4の【Ni_3】Mnを磁場中冷却すると一方向磁気異方性定数が誘導され、50Kから4Kまで冷却すると約100倍に増加することが判った(Journal投稿中)。このように今年度はいろいろな成果を得ることができた。近日全報告をまとめたい。
ブラキシズム発現機序において舌の担う役割-睡眠時舌運動とプラキシズム動態の関連

被験者は8名(男性4名、女性4名、年齢24から45歳)とし、睡眠時に実験を行った。被験者は、舌運動を制限あるいは誘導するスプリントを下顎歯列に装着し、両側側頭筋、咬筋、顎二腹筋後腹の筋電計をそれぞれ装着した。筋電計からの信号はそれぞれ増幅器で増幅し、パーソナルコンピュータで経時的に記録を行った。スプリントの形態を2種類変えて,2晩大学内のスリープラボにて計測を行った.スプリントの形態は舌房をレジンで狭めて,強制的に舌の位置を左側のみに取らせるものと,舌房は通常であるがスプリントの舌側に丸い突起物を付与し,舌が自発的にその部位に接触しやすいものとを使用した.咬合面は覆わず,咬合状態に影響を与えないものとした.いずれの条件下においても,睡眠時の舌の位置と左右筋電図の計測値に関連があることが認められた.舌の位置していると思われる側の咀嚼筋筋活動が有意に高いという結果が認められた.筋活動の様相は、すべての被験者でほぼ同様の動態を呈した。以上の結果から、睡眠時の舌運動が咀嚼筋筋活動を惹起するトリガーとなっている可能性が示唆された。ブラキシズム要因の新たな可能性として,価値ある結果が得られたものと思われる.しかしながら本研究では、スプリント装着という非日常的状態での計測であるため,それらの要因を排除した考察を行うことができなかった.今後は,さらに被験者を増やすとともに,より日常的な状態に近い実験方法を模索していく必要があると思われる.被験者は8名(男性4名、女性4名、年齢24から45歳)とし、覚醒時に実験を行った。被験者は、下顎第一大臼歯舌側に圧力センサーを埋め込んだスプリントを下顎歯列に装着し、両側側頭筋、咬筋、顎二腹筋後腹の筋電計をそれぞれ装着した。圧力センサー、筋電計からの信号はそれぞれ増幅器で増幅し、パーソナルコンピュータで経時的に記録を行った。被験者は舌を圧力センサーに押し当て、コンピュータ画面上に表示される舌圧値のグラフをビジュアルフィードバックとして用いてその状態を6秒間維持させた。これらの動作を、下顎安静位および中心咬合位の2つの下顎位において、左右6回ずつ行った。舌運動を行っている間の、各被験筋筋電図のRoot mean squareとAREAをそれぞれ計算し、平均値を求めた。舌運動を行っている間の筋活動は、すべての被験者でほぼ同様の動態を呈した。両側顎二腹筋後腹は、咬合接触時、安静時ともに、舌運動に一致して有意な筋活動を示した。両側咬筋、両側側頭筋は、安静時にはほとんど活動を示さなかったが、咬合接触時には舌運動に一致して有意な筋活動を示した。以上の結果から、舌運動が咀嚼筋筋活動を惹起するトリガーとなっている可能性が示唆された。本研究では、舌運動時に有意な阻嚼筋筋活動を認めたが、その際に咬合力に関しては記録を行っていない。認められた筋活動が舌運動に起因するのか、ただ単に咬合力がかかったからなのかは、今後調査を行いたい。来年度は、睡眠時に舌位を変化させるスプリントを装着し、同様に筋活動について記録し、考察を行う予定である。ブラキシズム要因の新たな可能性として,価値ある結果が得られたものと思われる.しかしながら本研究では、スプリント装着という非日常的状態での計測であるため,それらの要因を排除した考察を行うことができなかった.今後は,さらに被験者を増やすとともに,より日常的な状態に近い実験方法を模索していく必要があると思われる.
植生や種々の粗度による開水路流制御と多機能水路の設計に関する研究

近年,河川整備は治水・利水・環境のいずれの機能も等しく向上させるという理念で行なわれるようになりつつある.すなわち多機能水路が目指されるが,それぞれの機能が充分発揮できるように水流を的確に制御する技術の開発・確立が望まれている.本研究ではとくに斜め桟粗度によるら旋流制御と植生帯を利用した横断混合促進を中心に多機能水路設計に必要な現象理解と記述・予測をめざし,室内実験,野外計測,数値解析の3つのアプローチを採用した.斜め桟は底面あるいは側岸に設置されるが,適当な間隔で設置された場合,流下方向に均質な乱流が形成される.桟が斜めに配置されることにより,抗力に横断方向あるいは鉛直方向成分が出現し,これが2次流を駆動する.抵力とそれによるエネルギー損失を局所的に平均化した力と乱れエネルギー生成として取り込んだ数値解析で現象を記述できることを計測結果と比較して示し,桟の配置と流れの関係を予測できるようにした.底面・側岸の斜め桟はストリーム型魚道の阻流板に相当し,魚道の設計への応用も示した.魚道はストリーム型にかかわらず典型的な機能型水路で,従来のその設計は経験式や模型実験に頼っていた.ここでは各種ストリーム型魚道,バ-ティカルスロット魚道について数値解析法を提案し,これによって標準型でない魚道も容易に工夫・設計できるようにした.一方,植生帯は横断混合を促進し,主流部の濁質を植生帯に引き込んで,主流の清浄化に役立つ.こうした効果を利用するため水路に植生帯を配置することを考えると,植生帯流入部から従来よく知られた植生帯を伴う平衡流れ場までの遷移距離の推定やその過程での流れの変化や浮遊砂の挙動を知る必要があり,室内実験・野外実験・数値解析を行なってそれらを調べた.近年,河川整備は治水・利水・環境のいずれの機能も等しく向上させるという理念で行なわれるようになりつつある.すなわち多機能水路が目指されるが,それぞれの機能が充分発揮できるように水流を的確に制御する技術の開発・確立が望まれている.本研究ではとくに斜め桟粗度によるら旋流制御と植生帯を利用した横断混合促進を中心に多機能水路設計に必要な現象理解と記述・予測をめざし,室内実験,野外計測,数値解析の3つのアプローチを採用した.斜め桟は底面あるいは側岸に設置されるが,適当な間隔で設置された場合,流下方向に均質な乱流が形成される.桟が斜めに配置されることにより,抗力に横断方向あるいは鉛直方向成分が出現し,これが2次流を駆動する.抵力とそれによるエネルギー損失を局所的に平均化した力と乱れエネルギー生成として取り込んだ数値解析で現象を記述できることを計測結果と比較して示し,桟の配置と流れの関係を予測できるようにした.底面・側岸の斜め桟はストリーム型魚道の阻流板に相当し,魚道の設計への応用も示した.魚道はストリーム型にかかわらず典型的な機能型水路で,従来のその設計は経験式や模型実験に頼っていた.ここでは各種ストリーム型魚道,バ-ティカルスロット魚道について数値解析法を提案し,これによって標準型でない魚道も容易に工夫・設計できるようにした.一方,植生帯は横断混合を促進し,主流部の濁質を植生帯に引き込んで,主流の清浄化に役立つ.こうした効果を利用するため水路に植生帯を配置することを考えると,植生帯流入部から従来よく知られた植生帯を伴う平衡流れ場までの遷移距離の推定やその過程での流れの変化や浮遊砂の挙動を知る必要があり,室内実験・野外実験・数値解析を行なってそれらを調べた.近年,治水・利水・環境のいずれの機能も充実させる河川整備が要求されてきているが,とくに環境機能には単に水環境の保全のみならず様々な生態の生息環境を保全したり,景観面の向上も含まれる.いわば河川は「多機能水路」として整備されるようになってきている.一方,治水機能も単に流量に対して充分な断面積を確保するだけでなく,局所的な洗掘,堆積を制御すること,言い換えれば土砂動態も制御することが重要となってきた.こうした状況では,平均流制御ではなく,流速分布や2次流れの制御が必要となってくる.本研究では植生や桟の配置によって2次流を生起させこれによって流速分布やながれの3次元構造をせいぎょすることを考えた。まず,斜め桟を底面に配置して螺旋流を誘起させることを実験的に確認,斜め桟を組み合わせたV型,A型などの配置によってさまざまに流れの構造を制御できることを見いだした.これを粗度層の流れに均質な抗力項(水の単位体積当たりの力で表現して基礎式に考慮する)を付加した流れの数値解析(k-ε乱流モデルを適用)によって記述し,さらに桟の間隔や高さ,配置角度でどのように流れ構造を制御できるかを調べた.一方,植生帯が横断混合を促進することに着目,この性質を利用した濁質横断除去法を考案,その機能評価のための水理学的検討をはじめた.本年は植生帯を伴う流れについて系統的な実験をはじめるとともに,遷移区間も含めた流れの特徴を表現できる数値解析の検討を行なった。斜め桟を底面あるいは側岸に設置下場合の数値解析法は昨年度に確立したが,とくにこれらの組み合わせを想定し,解析を一般化した.とくに桟あるいは阻流板(ベーン,フィンといった呼び方も可能)の主流方向となす角が一般的な場合について解析が可能なようにした.その典型的な適用例はストリーム型魚道である.標準デニール,舟通し型,スティープパスなどこれまでに提案され経験や模型実験によって知られている設計資料が数値解析で検討できることが示された.

こうした方法の開発で,標準型でないものについても流れが予測でき,より効率的な魚道やこれまでと異なる対象魚の性質にも対応できる.魚道はストリーム型にかかわらず典型的な機能型水路で,本研究目的の研究対象であり,バ-ティカルスロット魚道についての数値解析法を提案し標準形状でない場合についても容易に設計できるようにした.一方,植生帯は横断混合を促進し,主流部の濁質を植生帯に引き込んで,主流の清浄化に役立つ.昨年度までにこうした流れの平衡状態について代数応力モデルを用いた断面計算や浅水流モデルを使った解析を行なってきたが,こうした効果を利用するため水路に植生帯を配置することを考えると,植生帯流入部から平衡流れ場までの遷移距離の推定やその過程での流れの変化や浮遊砂の挙動を知る必要があり,室内実験・野外実験・数値解析を行なってそれらを調べた.とくに遷移過程の長さについては植生の透過度と水深,勾配と関係づけられることがわかり,こうした効果をねらったパイロット事業の設計などに適用が可能である.
米国における校長の専門職能開発プロセスの検証

本研究の目的は、米国の学校改善支援の一環として行われる校長の専門職能開発のプロセスを検証することを通じて、学校改善に資する校長のリーダーシップ開発の方策とその有効性を明らかにすることである。本研究では、カリフォルニア州を事例として取り上げ、1校長に対する専門職能開発プログラムの内容の調査・解明、2教育行政機関・学校へのヒアリングおよび訪問調査による専門職能開発の実態の解明に取り組み、3専門職能開発における教育行政の専門性の分析を行う。
感覚器障害代償における神経積分器の形態的機能的観察

一側の前庭破壊後、c-Fos proteinを検索した結果、舌下神経前位核(PrH)において、活性化に左右差が見られた。PrHは、前庭動眼反射(VOR)に必要な神経積分器の存在する場所と考えらていることから、前庭破壊後の代償期に同部に大きな変化が起きているとがわかった。この前庭代償機能を経時的に調べるために、前庭神経切断直後からマウスのVORゲインの変化を計測した。VOR計測は赤外線によるマウス用眼球運動記録装置を使用し、暗所で行った。内耳破壊後のゲインの推移を、周波数0.8Hzで最大角速度150度毎秒で測定したとき、術後2日目に最低値を取り、7日目までに急激に回復したが、その後は術前の約7割の値でほぼプラトーとなり、28日目でも、それ以上の回復の徴候はみられなかった。また、前庭動眼反射に対する視覚情報の関与を調べるために、ノックアウトマウスを用いて温度眼振に対する視覚情報の関与を検索した。前庭由来の眼球振盪は、固視によって抑制されることが知られている。温度眼振の視覚による抑制はvisual suppression (VS)testとして日常臨床で小脳機能評価に応用されている。今回我々は、小脳片葉の平行線維とプルキンエ細胞との間に局在するグルタミンδ2レセプター(GluRδ2)をノックアウトしたマウスを用いてVSを測定した。眼球運動は赤外線CCDを用いて測定した。野生マウスでは平均して約90%のVSが見られたが、GluRδ2欠損マウスではVS10%、変化無し、または逆に眼球振盪が増加するものが見られた。これらの結果から平行線維からプルキンエ細胞のグルタミンδ2レセプターを介して伝わる情報がVSに重要な役割を持つことが示唆された。この変化に対する視覚情報の関与を調べるために、前庭神経切断直後からマウスを24時間暗所で飼育し、VORゲインの変化を計測した。対照は、前庭神経切断後、飼育室の通常照明下で飼育した。画像データを毎秒60コマ取得した後、二値化処理をして、瞳孔を楕円近似して瞳孔の中心を求めて眼球位置を計算した。水平性前庭眼反射ゲインの解析は、眼球運動位置波形を微分して眼球運動角速度を求め、頭部運動角速度は角速度センサで測定した。横軸に頭部運動角速度を、縦軸に眼球運動角速度をとってデータをプロットし、これを直線近似し、その傾きをVORゲインとした。内耳破壊後のゲインの推移を、周波数0.8Hzで最大角速度150度毎秒で測定したとき、対照は術後2日目に最低値を取り、7日目までに急激に回復したが、その後は術前の約7割の値でほぼプラトーとなり、28日目でも、それ以上の回復の徴候はみられなかった。前提神経切断後24時間暗所飼育したものも対照とVORゲインの術後変化では明らかな差を認めなかった。

PrHは、前庭動眼反射(VOR)に必要な神経積分器の存在する場所と考えらていることから、前庭破壊後の代償期に同部に大きな変化が起きているとがわかった。この変化に対する視覚情報の関与を調べるために、前庭神経切断直後からマウスを24時間暗所で飼育し、VORゲインの変化を計測した。対照は、前庭神経切断後、飼育室の通常照明下で飼育した。VOR計測は赤外線によるマウス用眼球運動記録装置を使用し、暗所で行った。画像データを毎秒60コマ取得した後、二値化処理をして、瞳孔を楕円近似して瞳孔の中心を求めて眼球位置を計算した。水平性前庭眼反射ゲインの解析は、眼球運動位置波形を微分して眼球運動角速度を求め、頭部運動角速度は角速度センサで測定した。横軸に頭部運動角速度を、縦軸に眼球運動角速度をとってデータをプロットし、これを直線近似し、その傾きをVORゲインとした。内耳破壊後のゲインの推移を、周波数0.8Hzで最大角速度150度毎秒で測定したとき、対照は術後2日目に最低値を取り、7日目までに急激に回復したが、その後は術前の約7割の値でほぼプラトーとなり、28日目でも、それ以上の回復の徴候はみられなかった。前庭神経切断後24時間暗所飼育したものも対照とVORゲインの術後変化では明らかな差を認めなかった。また、前庭動眼反射に対する視覚情報の関与を調べるために、ノックアウトマウスを用いて温度眼振に対する視覚情報の関与を検索した。前庭由来の眼球振盪は、固視によって抑制されることが知られている。温度眼振の視覚による抑制はvisual suppression (VS)testとして日常臨床で小脳機能評価に応用されている。その機構は副視索路から下オリーブ核を経由して伝えられた網膜誤差情報を小脳プルキンエ細胞が処理し前庭眼反射を制御することによると考えられており、過去には小脳片葉の破壊でVSが消失した等の報告があるが、完全には明らかにされていない。今回我々は、小脳片葉の平行線維とプルキンエ細胞との間に局在するグルタミンδ2レセプター(GluRδ2)をノックアウトしたマウスを用いてVSを測定した。眼球運動は赤外線CCDを用いて測定した。野生マウスでは平均して約90%のVSが見られたが、GluRδ2欠損マウスではVS10%、変化無し、または逆に眼球振盪が増加するものが見られた。これらの結果から平行線維からプルキンエ細胞のグルタミンδ2レセプターを介して伝わる情報がVSに重要な役割を持つことが示唆された。
英語と多言語の共生：国際化社会における語学留学の意義と可能性を探る

共通語としての英語(以下、English as a Lingua Franca)の研究は、言語文化的規範の多様性、柔軟な適応能力の重要性、英語と多言語の共生を軸に、教室活動や教員養成の分野への教育的提言を多数示してきたが、言語学習を目的とした留学は限定的な扱いを受けてきた。そこで、本研究では非英語圏で英語を学ぶことを主たる目的としている日本人留学生の動機づけ、対人関係の形成、および言語使用状況を包括的かつ縦断的に調査する。近年の語学留学の研究動向を踏まえ、学習者一人ひとりの経験に焦点を当て、多様化の進む現代社会におけるにおける語学留学の展望を考察し、言語教育への示唆の提示を目指す。
光合成能の獲得に伴う色素体及びミトコンドリアのDNA複製活性の変化とその制御機構

本研究の目的は、色素体およびミトコンドリアのDNAおよびRNAポリメラーゼについてその多様性と役割分担を明らかにし、植物細胞進化過程におけるオルガネラゲノム間のクロストークについて考察することである。今年度の成果は、以下の通りである。1.タバコ培養細胞BY-2から細胞核、原色素体核、ミトコンドリア核を高純度で単離し、in vitro転写反応を行わせる系を確立した。単離原色素体核のin vitro転写活性は、葉緑体RNAポリメラーゼの阻害剤であるtagetitoxinによって部分的にしか阻害されず、原色素体では葉緑体と性質の異なるRNAポリメラーゼが主カを占めている可能性が示唆された。2.タバコ培養細胞BY-2とタバコ成熟葉における色素体遺伝子の発現様式を転写および転写産物蓄積のレベルで比較し、転写と転写産物蓄積との関係を検討した。単離葉緑体核のin vitro転写活性は単離原色素体核の約25倍(鋳型DNA1μgあたり)に達する。転写活性化の程度と転写産物量の増大との間には一定の直線的な関係が成り立ち、色素体転写産物蓄積量の決定において転写レベルでの制御が重要であることが示された。また、BY-2における色素体遺伝子発現の様相は、色素体ゲノムからrpoB(大腸菌型RNAポリメラーゼのβサブユニット遺伝子)を欠失させたタバコ(Alisonら、1996)における色素体遺伝子発現の様式に類似しており、BY-2の原色素体においては色素体コードの(大腸菌型)RNAポリメラーゼの役割が相対的に小さいと推測された。3.BY-2から単離した原色素体核のin vitro転写活性はtagetitoxinに比較的耐性であるのに対し、タバコ葉肉細胞から単離した葉緑体核の転写活性は感受性が高いことを明らかにし、分化にともなう色素体転写装置の性質の変化を示した。4、BY-2から単離した原色素体核およびミトコンドリア核に存在するDNAポリメラーゼの性質(鋳型選択性等)についてゲル内DNAポリメラーゼアッセイ法および単離核のin vitroDNA合成系を用いて検討し、その類似性を示した。
豚の起立-横臣人行動のエネルギー的評価に関する研究

家畜の行動には,すべてエネルギー消費が伴う.本研究では肉豚4頭を用い,飼料摂取レベルを一定(維持の2倍量)に設定し,1日の給餌回数のみを1,3,6回と変化させ,立つ-座るの行動と熱産生量との関係を,酸素消費量からモニターする間接熱量測定法で明らかにした.その結果,1回給餌区,3回給餌区,6回給餌区の日増体量は,それぞれ0.04,0.43,0.44(kg/日)であったが,統計的に有意な差とはならなかった。1日の熱産生量はそれぞれ558,555,521kJ/kg^<0.75>日と6回給餌区が有意に低くなった.1日の起立時間も561,468,430(分/日)と同様の傾向であった.24時間を1時間毎に区切り,1時間の平均の熱産生量(HP;kJ/kg^<0.75>)を起立時間(ST;分・時),採食時間(ET;分/時),給餌回数(NF;回)および給餌後経過時間(TF;時間)の4説明変数を用いて重回帰分析を行った結果,次式が得られた.本式から,1,3,6回給餌区における起立行動に伴う熱産生量は,それぞれ93,79,75kJ/kg^<0.75>日と推定され,1日熱産生量の1714%をしめたが,摂取代謝エネルギーの11.1,9.4,9.0%と,給餌回数の増加に伴って起立行動が減少し,起立行動に要するエネルギーの減少と合わせて飼料摂取に伴う熱産生量が減少する傾向にあり,多回数給餌が肉豚のエネルギー効率を高めるのに有効であることの知見を得た.今後に残された課題として,給餌レベルおよび,環境温度の影響について行動の変化と共に検討する必要がある.家畜の行動には,すべてエネルギー消費が伴う.本研究では肉豚4頭を用い,飼料摂取レベルを一定(維持の2倍量)に設定し,1日の給餌回数のみを1,3,6回と変化させ,立つ-座るの行動と熱産生量との関係を,酸素消費量からモニターする間接熱量測定法で明らかにした.その結果,1回給餌区,3回給餌区,6回給餌区の日増体量は,それぞれ0.04,0.43,0.44(kg/日)であったが,統計的に有意な差とはならなかった。1日の熱産生量はそれぞれ558,555,521kJ/kg^<0.75>日と6回給餌区が有意に低くなった.1日の起立時間も561,468,430(分/日)と同様の傾向であった.24時間を1時間毎に区切り,1時間の平均の熱産生量(HP;kJ/kg^<0.75>)を起立時間(ST;分・時),採食時間(ET;分/時),給餌回数(NF;回)および給餌後経過時間(TF;時間)の4説明変数を用いて重回帰分析を行った結果,次式が得られた.本式から,1,3,6回給餌区における起立行動に伴う熱産生量は,それぞれ93,79,75kJ/kg^<0.75>日と推定され,1日熱産生量の1714%をしめたが,摂取代謝エネルギーの11.1,9.4,9.0%と,給餌回数の増加に伴って起立行動が減少し,起立行動に要するエネルギーの減少と合わせて飼料摂取に伴う熱産生量が減少する傾向にあり,多回数給餌が肉豚のエネルギー効率を高めるのに有効であることの知見を得た.今後に残された課題として,給餌レベルおよび,環境温度の影響について行動の変化と共に検討する必要がある.
胎児あるいは新生児膵ランゲルハンス島移植の研究-特に発育能力について-

新生児膵ランゲルハンス島(以下ラ島)は,成人ラ島に比し増殖能を有すると推察される.平成2年度では,このような特徴を持つ新生児ラ島の移植の可能性を,pureな新生児ラ島の採取方法とその内分泌能を中心に実験的検討を行った.その結果,一週間の培養によって形態学的にも組織学的にも,またグルコース刺激によるインスリン分泌能からみた生物学的機能も,成熟ラ島とほぼ同等のラ島が得られることを示した.平成3年度では,より正確なラ島のviabilityの検索のため,ラ島のインスリン含有量とDNA含有量を測定し,より詳細な内分泌機能の検討を試みた.インスリン含有量やDNA含有量は培養によって徐々に増加し,その値はいずれも,培養約5週間前後でplateauに達することが判明した.最終年度では,BrdUrdを用いて求めたlabeling indexの検討と,移植実験を試みた.その結果,新生児ラ島のlabeling indexは,対照の成熟ラ島よりも明かに高値を示し,その増殖力の高さがうかがえた.また,細切した新生児膵を糖尿病ヌードマウスの腎被膜下に移植した実験では,生物学的機能が成熟ラ島の機能に達する約5週目に一致して,正常血糖に復し,移植後,新生児ラ島は移植部位で増殖し,移植効果を発揮することが類推された.さらに,腎被膜下へ移植された膵組織のABC法によるインスリン及びグルカゴン染色では,それぞれ茶褐色に染まるB細胞及びA細胞が認められ,移植された新生児ラ島の生着が組織学的にも確認された.新生児膵ランゲルハンス島(以下ラ島)は,成人ラ島に比し増殖能を有すると推察される.平成2年度では,このような特徴を持つ新生児ラ島の移植の可能性を,pureな新生児ラ島の採取方法とその内分泌能を中心に実験的検討を行った.その結果,一週間の培養によって形態学的にも組織学的にも,またグルコース刺激によるインスリン分泌能からみた生物学的機能も,成熟ラ島とほぼ同等のラ島が得られることを示した.平成3年度では,より正確なラ島のviabilityの検索のため,ラ島のインスリン含有量とDNA含有量を測定し,より詳細な内分泌機能の検討を試みた.インスリン含有量やDNA含有量は培養によって徐々に増加し,その値はいずれも,培養約5週間前後でplateauに達することが判明した.最終年度では,BrdUrdを用いて求めたlabeling indexの検討と,移植実験を試みた.その結果,新生児ラ島のlabeling indexは,対照の成熟ラ島よりも明かに高値を示し,その増殖力の高さがうかがえた.また,細切した新生児膵を糖尿病ヌードマウスの腎被膜下に移植した実験では,生物学的機能が成熟ラ島の機能に達する約5週目に一致して,正常血糖に復し,移植後,新生児ラ島は移植部位で増殖し,移植効果を発揮することが類推された.さらに,腎被膜下へ移植された膵組織のABC法によるインスリン及びグルカゴン染色では,それぞれ茶褐色に染まるB細胞及びA細胞が認められ,移植された新生児ラ島の生着が組織学的にも確認された.新生児膵ランゲルハンス島(以下ラ島)は成人ラ島に比し増殖能を有すると推察される.本年度は,このような特徴を持つ新生児ラ島の移植の可能性を,pureな新生児ラ島の採取方法とその内分泌能を中心に実験的検討を行った.実験動物には生後12日目にゴ-ルデンハムスタ-を用いた.まずハムスタ-を断頭後,膵を摘出し細切,さらにコラゲナ-ゼ処理を行い培養を行った.培地は10%牛胎児血清を添加したRPMIー1640を用い,毎日培地交換を行うことで,7日から10日後には,形態学的に成熟ハムスタ-膵より分離したラ島とほぼ同様のラ島が得られた.得られたラ島の組織学的検索では,H.E.染色で細胞変性や核の濃染像などもみられず,ABC法によるInsulinやglucagon染色では,β細胞やα細胞も成熟ラ島と同様の配列を示した.グルコ-ス負荷によるインスリン分泌能をみると,分離後3,7,14日目の基礎分泌量はそれぞれ,1.43±0.43,14.61±3.24,91.35±17.07 μU/10 islets/60minと培養日数が進むにつれ,著明な増加を示した.一方,300mg/dl濃度のグルコ-ス負荷時におけるスンスリン分泌能は,それぞれ,3.34±0.49,73.40±11.35,197.00±18.02,μU/10 islets/60minと培養日数が進むにつれて増加し,その値も基礎分泌量の2ー3倍と,成熟ラ島に近い値を示した.今後,より詳細なラ島のviabilityを検索するために,ラ島のインスリン含有量やDNA含有量を測定し,さらに^3Hーチミジンでラベルしたオ-トラジオグラフィ-法にて,ラ島の複製能を検討する予定である.さらに腎の複膜下への移植実験で,その移植効果についても追試の予定である.新生児膵ランゲルハンス島(以下ラ島)は成人ラ島に比し増殖能を有すると推察される.平成2年度では,このような特微を持つ新生児ラ島の移植の可能性を,pureな新生児ラ島の採取方法とその内分泌能を中心に実験的検討を行った.その結果,710日の培養によって,形能学的にも成熟ハムスタ-膵より分離したラ島とほぼ同様のラ島が得られ,一方,インストリンの基礎分泌量やグルコ-ス

負荷によるインスリン分泌能も,培養日数が進むにつれ著明な増加を示し良好な結果を示した.本年度は,より正確なラ島のviabilityの検索のため,ラ島のインスリン含有量とDNA含有量を測定し,より詳細な内分泌機能の検討を試みた.インスリンおよびDNA含有量は超音波破砕によりホモジネ-トされたラ島をインスリンは95%acid ethanolで処理後radioimmunoassay法にて測定し,DNA量はdiaminobenzoic acidで処理した後にfluoropho tometerを用いて測定した.インスリン含有量は,培養2日目で124.76±17.08μU/10islets(以下単位は同じ),7日目で763.35±120.60,14日目で1015.43±183.24,23日目で1381.73±237.38と徐々に増加し,39日目には,2896.32±215.14,51日目で3324.74±663.52と,培養約5週前後でplateauに達した.DNA含有量も培養2日目で0.1913±0.0231μg/10islets(以下単位は同じ),7日間で0.2204±0.0036,14日目で0.2841±0.0213,23日目で0.3220±0.0381,39日目で0.3557±0.0299,51日目で,と徐々に増加し,インスリン含有量と同様に培養約5週前後でplateauに達した.現在,STZ誘発糖尿病ヌ-ドマウスの腎被膜下へのラ島移植を試みているが,良好な結果が得られつつある.今後例数を重ね検討する予定である.新生児膵ランゲルハンス島(以下ラ島)は,成人ラ島に比し増殖能を有すると推察される.平成2年度では,このような特徴を持つ新生児ラ島の移植の可能性を,pureな新生児ラ島の採取方法とその内分泌能を中心に実験的検討を行った.その結果,一週間の培養によって形態学的にも組織学的にも,またグルコース刺激によるインスリン分泌能からみた生物学的機能も,成熟ラ島とほぼ同等のラ島が得られることを示した.平成3年度では,より正確なラ島のviabilityの検索のため,ラ島のインスリン含有量とDNA含有量を測定し,より詳細な内分泌機能の検討を試みた.インスリン含有量やDNA含有量は培養によって徐々に増加し,その値はいずれも,培養約5週前後でplateauに達することが判明した.本年度は,BrdUrdを用いて求めたlabeling indexの検討と,移植実験を試みた.その結果,新生児ラ島のlabeling indexは,対照の成熟ラ島の10-15倍と,明かに高値を示し,その増殖力の高さがうかがえた.また,細切した新生児膵をSTZ誘発糖尿病ヌードマウスの腎被膜下に移植した実験では,血糖値は生物学的機能が成熟ラ島の機能に達する約45週目頃より低下がみられ,6週目以降には正常な血糖値に復し,移植後,新生児ラ島は移植部位で増殖し,移植効果を発揮することが類推された.また,移植側の腎摘によって,再び血糖値は上昇した.腎被膜下へ移植された膵組織の,ABC法によるインスリン及びグルカゴン染色では,それぞれ茶褐色に染まるB細胞及びA細胞を認めた.
免疫抑制作用を有するMHC結合性ペプチドの開発

自己免疫疾患、アレルギーおよび臓器移植など過剰な免疫応答に起因する疾病の制御のために、MHC分子に強い結合性を有するがT細胞を活性化しないペプチドの開発を目的に、どのようなペプチドがHLA分子に結合するのか、動物モデルとしてのHLAトランスジェニックマウスの可能性、疾患感受性を規定するHLA分子の検討を行った。溶連菌M蛋白に対する免疫応答をモデルシステムとしてT細胞の認識するペプチド、HLA分子を解析したところHLA-DP9と結合しT細胞を活性化する部位が7カ所明らかになり、これらのアミノ酸配列より、HLA-DP9に結合するペプチドのモチーフが明らかになった。また、HLAクラスII分子を遺伝子導入したトランスジェニックマウス(Tg)で、導入したHLA分子による末梢での免疫応答および、胸腺での正の選択が観察され、HLA-TgがHLAの機能をin vivoで解析するための有用なモデルになることが示された。疾患の発症に関与するHLA遺伝子をより詳細に同定するために、DNAタイピングのシステムがセットアップされた。HLA-クラスIに関しては、PCR-SSOP法によるHLA-A遺伝子座のDNAタイピングがセットアップされ、いくつかの新しいアリルが同定された。HLA-クラスIIに関しては、HLA-DRB1,DRB3,DRB4,DRB5,DQA1,DQB1,DPA1,DPB1遺伝子座のDNAタイピングがセットアップされた。DNAタイピングにより従来の血清学的なタイピングでは区別できなかったサブタイプの同定が可能となり疾患と相関のあるHLAがより詳細に明らかになった。HLA分子とペプチドとの結合親和性を、種々のHLAクラスII対立遺伝子を導入したマウスL細胞トランスフェクタントとビオチン化ペプチドを用いて、フローサイトメトリーによって測定する系を開発した。モデルシステムとしてDR51分子に結合することが既知のHA307ペプチドを用いて、HLA分子と外から加えたペプチドとの結合は、HLA分子溝内の既存のペプチドとの競合置換によること、N末に結合した長腕ピオチンはペプチドのHLA分子への結合性に大きな影響を与えないことを確認した。ついで溶連菌M蛋白遺伝子塩基配列を基に30種のペプチドを合成した。これらのうち少なくとも3種の合成ペプチドは、DR51分子との結合親和性がHA307と同程度であることが明らかとなった。またDR51分子を発現するトランスジェニックマウスでは、DR51分子の発現に依存して、HA307ペプチド特異的CD4T細胞免疫応答が惹起され、ヒトの免疫応答を個体レベルで解析する動物モデルとなり得ることを明らかにした。前述の3種のM蛋白由来のペプチドは、DR51分子への高い結合性を示すにも関わらず、DR51トランスジェニックマウスにおける特異的免疫応答を惹起しなかったため、現在この免疫不応答機構を細胞レベルで解析中である。一方、種々のトランスフェクタントを用いたHLA-ペプチド結合親和性の解析により、血清学的には同じDR4分子では、13アミノ酸残基の相違を有する対立遺伝子間で、それぞれのM蛋白合成ペプチドに対する結合親和性が大きく異なることを明らかにした。この事は、各対立遺伝子毎に特異的に結合するペプチドを設計できる可能性を示しており、現在その結合モチーフを決定中である。HLA分子の遺伝的多型性による自己・非自己ペプチドとの結合親和性の相違を明らかにし、これを用いた免疫制御システムの開発を目的とした研究を行った。四重電極質量分析装置を用いてHLA分子に結合した自己ペプチドのアミノ酸配列を決定するシステムを確立し、Bリンパ芽球表面に発現したHLA-B52分子に結合した自己ペプチドを解析した。その結果、B52分子への結合モチーフは910アミノ酸より成り、第2番目にグルタミンまた第9番目にイソロイシンあるいはロイシンなどの疎水性アミノ酸を有することを明らかにした。またB51分子に結合した自己ペプチドの溶出パターンはB52分子とはかなり異なること、すなわちHLAの遺伝的多型性に依存した特異的結合モチーフの存在を明らかにした。

一方、溶連菌M蛋白の遺伝子塩基配列より推定されるアミノ酸配列に基き32種のオーバーラップペプチドを作製した。これを用いてDP9分子との結合親和性の解析とM蛋白特異的T細胞株の樹立ならびにそのペプチド抗原反応性を解析したところ、DP9分子に結合する外来抗原ペプチドは11アミノ酸より長いこと、またN末から第2あるいは第3番目に塩基性アミノ酸を有することを明らかにした。さらに置換ペプチドの作製により、この塩基性アミノ酸がDP9分子への結合アンカーであることを証明した。またDP9分子に結合するペプチドはDP4あるいはDP5分子には結合しないことから、DP分子についても遺伝的多型性に基く非自己ペプチドへの結合親和性の相違が明かとなった。一方、HLA-DR51あるいはDQ6分子を発現するトランスジェニックマウスを用いて、それぞれ特定のペプチド抗原(HAペプチドあるいはMペプチド)への免疫応答性を回復することを証明し、HLAによる免疫応答の制御を個体レベルで解析するマウスの実験系を確立した。特定の抗原に対し過剰な免疫応答を示したが為に生じる病態(自己免疫疾患、アレルギーおよび臓器移植における拒絶反応など)の制御のために、MHC分子に強い結合性を有するがT細胞を活性化しないペプチドを用いた制御システムの開発を目的とし以下の研究を行った。HLA分子に結合するペプチドのモチーフ、モデルシステムとしてのHLAトランスジェニックマウスの系の樹立、個々の疾患でターゲットすべきHLA分子に関する以下の知見をえた。1)HLA分子に結合するペプチドのモチーフに関し、溶連菌M蛋白上のT細胞の認識部位を解析し、HLA-DP9に結合してT細胞活性化を関与する部位を7箇所、HLA-DR4,HLA-DQ6に結合しT細胞を活性化する部位をそれぞれ1箇所同定した。これを利用して、HLA-DP9に結合するペプチドのモチーフを明らかにした。また、4種のHLA-A2サブタイプに結合しているペプチドをHLA分子より単離し、構造分析を行い、それぞれのHLA分子に特有なモチーフを明らかにした。HLA分子上に1アミノ酸の変化により結合ペプチドのモチーフが大きく変化することが証明された。2)HLA-A遺伝子座のDNAタイピングのシステムがセットアップされ、いくつかの新しいHLA-A遺伝子が同定された。また。HLA-A*0206とA*0207は異なる疾患感受性を示すことが明らかになった。3)HLAクラスIIトランスジェニックマウスにおいて、導入したヒトHLA分子の機能が確認され、モデルシステムとしての有用性が示された。
臓器移植免疫寛容誘導・維持機構の解明および関連新規遺伝子の探索に関する研究

本研究では、(1)臓器移植免疫寛容動物の作製・解析およびDNAチップによる既知遺伝子の解析:同種異系ラット肝移植免疫寛容ラットにおいて末梢血のリンパ球を分離し、CD4+、CD25+細胞集団がNaiveのラットより有意に増加していることを明らかにした。一方、免疫寛容動物から得られたリンパ球の養子移植実験を行い、免疫調節機能を持つリンパ球の存在を確認することができた。このリンパ球集団のRNAを分離し、Affymetrix社のgene chipを用い、isograftのそれと比較したところ、464個の有意に変化した遺伝子を見いだした。その中から統計学的な処理(t-test)を行い、211個(p<0.05)の候補遺伝子を見つけた。(2)臨床生体肝移植後免疫抑制剤離脱症例の解析:京都、三重大学医学部附属病院において免疫寛容状態に至った11人の患者、家族および健常人から遺伝子検査を含めたインフォームドコンセントを得た上、血液を採集した。末梢血リンパ球より、それぞれtotal RNAを抽出し、Agilent社のcDNAマイクロアレイを用いて解析を行った。分類したカテゴリーのうち「Immunity」のみで、圧倒的にDown数よりUp数のほうが多いという結果を得た。これは、免疫関連の遺伝子が、健常人より免疫寛容状態の人において発現が相対的に上昇しているという事を端的に表しており、能動的作用を以て免疫寛容を誘導する遺伝子の確かな存在を示唆すると考えられた。(3)補助シグナル経路を選択的の阻害に関する解析:上記DNAチップの解析より、リンパ球の活性化に関与する事が知られているco-stimulatory分子群に属する遺伝子が、今まで考えられていた以上に深く関与する事が明らかになった。そこで、抗ICOS抗体及びCTLA4Igを用いて、T細胞増殖に必要不可欠な副刺激シグナルを遮断する事で、ラットの心臓移植において安定かつ強固な免疫寛容が誘導される事を確認した。CTLA4Igと抗ICOS抗体を併用する事し、CD28-CTLA4/B7経路を介した抗原提示細胞の活性を抑制することにより、安定な免疫寛容状態の誘導および維持ができた。また、寛容ラットの末梢リンパ球を養子移植すると、別の個体に免疫寛容を誘導出来る事を明らかにした。本年度の研究では、(1)臓器移植免疫寛容動物の作製及び解析:同種異系ラット肝移植免疫寛容ラットの作成は臓器移植後の免疫抑制剤FK506の投与による誘導し、移植後グラフトが100日を超えた後、従来の細胞免疫学の方法を用いて末梢血のリンパ球を分離し、FACSにて細胞表面の分子について解析を行い、CD4+、CD25+細胞集団がNaiveのラットより有意に増加していることを明らかにした。(2)DNAチップによる既知遺伝子の解析:このリンパ球集団のRNAを分離し、Affymetrix社のgene chipを用い、isograftのそれと比較したところ、464個の有意に変化した遺伝子を見いだした。その中から統計学的な処理(t-test)を行い、211個(P<0.05)の候補遺伝子を見つけた。その内訳は既知遺伝子135個、ESTからなる未知の遺伝子76個である。

既知遺伝子について、免疫調節リンパ球において上昇した遺伝子は58個、isograftにおいて上昇した遺伝子は80個。未知遺伝子について免疫調節リンパ球において上昇した遺伝子は41個、isograftにおいて上昇した遺伝子は35個であった。(3)臨床生体肝移植後免疫抑制剤離脱症例の解析:京都大学医学部附属病院において、計画的減量を行っている80人の患者の内、完全離脱19人、減量中53人、拒絶反応をきたした者8人であった。非計画的減量を行っている50人では、完全離脱34人、減量中4人、拒絶反応をきたした者12人であった。三重大学医学部附属病院においても平成14年3月5日から生体肝移植が開始され、これまでに23例に生体肝移植が行われた。3名に対してEBウイルス感染症のために非計画的に減量が進められたが、2名は拒絶反応をきたして減量は中止された。1名は離脱後6ヶ月を経過しているが拒絶反応をきてしていない。また、三重大学医学部倫理委員会においても、新規遺伝子探索研究が平成14年10月に承認された。本年度の研究では、(1)臨床生体肝移植後免疫抑制剤離脱症例の解析:三重大学医学部附属病院ではH14年3月から生体肝移植が開始され、これまでに40人の生体肝移植が行われ、すでに3人が計画的減量を開始している。また、3人に非計画的減量が開始され、1人が免疫抑制剤からの離脱を1年6ヶ月維持しているが、2人は拒絶反応をきたした。免疫抑制剤減量中の患者における新規遺伝子探索研究の申請が行われ、H15年に三重大学医学部倫理委員会から承認され、免疫抑制剤を離脱した患者および減量中の患者からの採血が開始した。(2)DNAチップを用いた解析:京都、三重大学の免疫寛容状態に至った11人の患者、家族および健常人から遺伝子検査を含めたインフォームドコンセントを得た上、血液を採集した。末梢血リンパ球より、それぞれtotal RNAを抽出し、Agilent社のcDNAマイクロアレイを用いて解析を行った。寛容患者と健常人の比較で、「Up Regulation」635クローン、'Down Regulation」として、2005クローンが抽出できた。キーワードを用いて13のカテゴリーに分類した。各カテゴリーごとのUp Regulation数:Down Regulation数は、「Apoptosis」8:5、「Calcium」8:40、「Cell Cycle」5:8、「Chemokine」2:13、「Cytokine」7:20、「Immunity」40:11、「Kinase」18:65、「Membrane」49:109、「Metabolism」9:17、「Phosphatase」11:24、「Receptor」55:213、「Signal Transduction」11:35、「Transcription」20:88であった。分類したカテゴリーのうち「Immunity」のみで、圧倒的にDown数よりUp数のほうが多いという結果を得た。