hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
臨界期ストレスと生体ホルモン応答に対する分子・構造・行動解析

臨界期ストレスの成体ホルモン応答に対する解析を行った。Gastrin releasing peptide(GRP)を産生する神経細胞体はアンドロゲン受容体を有し、脊髄の腰髄(L2-3)灰白質の中心管周辺に分布、その軸索をL5-6,S1-2に存在する副交感性脊髄神経核や球海綿体神経核に送っていた。GRPのアンタゴニストを脊髄の髄腔に投与すると反射性勃起が抑えられた。GRPを産生する神経細胞には明瞭な性差があり、ラットのオスではメスよりも細胞数が多く、また細胞体にはアンドロゲン受容体が発現していた。去勢によってGRPは神経細胞体と終末レベルで減少するとともに反射性勃起行動も低下し、テストステロンの投与によってこれらは回復した。動物におけるPTSD実験モデルとされるsingle prolonged stress(SPS)をラットに負荷すると、これら脊髄のGRP系が抑えられた。すなわち、GRPニューロンのアンドロゲン受容体の発現量が低下し、その結果GRP発現が低下、抑制され、ニューロンの終末からのGRP放出が減少し、雄性性機能が減弱する回路が明らかとなった。SGN(視床下部矢状核)は雄で大きく、エストロゲン受容体を発現させている神経核であるが、一般的に脳内におけるこのような構造的な性差は、新生児期に雄の精巣から分泌されるアンドロゲンによって構築されることが知られている。SGNに見られる性差が新生児期におけるアンドロゲン作用によるものかどうかを調べる目的で、出生から24時間以内の新生雌ラットにテストステロンプロピオネート(TP)を皮下投与し、成熟後にコントロール群の雌と比較した。その結果、TPを投与した雌ラットではSGNの大きさやERα陽性細胞数およびその分布域が増加し、雄型へと分化していた。SGNは自律神経系および内分泌系の統合中枢である視床下部領域において神経伝達物質やホルモン、ペプチドやステロイドの作用を介し、性特異的な機能および行動発現の制御に深く関与している可能性が考えられた中枢神経系の特定の神経細胞はホルモン受容体を有しており、副腎皮質ホルモンや性ホルモンによってその機能形態が調節されている。Gastrin releasing peptide(GRP)は消化管のみならず神経系にも分布しており、その役割が次第に明らかになりつつあるGRPを産生する神経細胞体は脊髄の腰髄(L2-3)灰白質の中心管周辺に分布し、その軸索をL5-6, S1-2に存在する副交感性脊髄神経核や球海綿体神経核に送っていた。また、アンドロゲン受容体の異常を示す精巣女性化症(Tfm症候群)のラットにおいては、GRPの分布やホルモン反応はメスと同様の様態を示した。一方、動物におけるPTSD実験モデルとされるsingle prolonged stress(SPS)をラットに負荷すると、これら脊髄のGRP系が抑えられた。以上から、生体に対するストレス応答に対して、GRPニューロンシステムの新たな役割について、分子、細胞、組織、個体行動の観点かち研究を展開することができた。SGNは自律神経系および内分泌系の統合中枢である視床下部領域において神経伝達物質やホルモン、ペプチドやステロイドの作用を介し、性特異的な機能および行動発現の制御に深く関与している可能性が考えられた
乳歯歯髄の免疫機構および象牙芽細胞と歯髄細胞の増殖能に関する免疫組織化学的検討

目的乳歯生活断髄後の歯髄組織の歯髄細胞の分化・増殖と合成能について、免疫組織化学的検討を行った。非脱灰、脱灰標本(材料と方法)実験は、生後12カ月の幼若雑種犬で、全身麻酔を施し、下顎両側犬歯に通法とおり生活断随処置をおこなった。述後1時間,1.5時間,3時間,6時間,12時間,1日,3日,7日に抜歯した。直ちに硬組織から歯髄を取り出し、固定後通法とおりパラフィン標本を作成した。(非脱灰標本)標本を薄切後、抗PCNA免疫染色とAgNOR染色を行った。生活断髄後の残存している生活歯髄組織を表層より3等分し(浅部・中央部・根尖部)、各々の部位の歯髄細胞の染色態度について組織学的に検討を行った。(結果)(非脱灰標本)PCNA免疫染色術後3日で生活歯髄浅部では、限局性に陽性歯髄細胞がみられた。中央部には血管周囲で軽度に陽性歯髄細胞がみられた。術後7日では、生活歯髄浅部に散在性に陽性歯髄細胞がみられ、中央部において軽度散在性にみられた。術後6時間で生活歯髄浅部に核内にNOR粒子がみられる歯髄細胞(以下AgNOR陽性細胞)が軽度にみられた。術後12時間から術後1日では、AgNOR陽性歯髄細胞がより顕著にみられた。術後3日から7日では、生活歯髄浅部から中央部にかけてAgNOR陽性歯髄細胞が散在性に強くみられ、生活歯髄根尖部においても軽度に陽性細胞がみられる標本もあった。以上の結果から生活断髄後の組織修復に関与するなかで、歯髄細胞は高い分化・増殖と合成能を有する事が示唆された。(目的)水酸化カルシウム単味を用いた生活断髄後の乳歯歯髄組織における歯髄細胞の分化・増殖と合成能について、免疫組織化学的に検討を行った。(材料と方法)実験動物としては、生後12カ月の幼若雑種犬を用いた。実験動物に対して全身麻酔を施し、下顎両側乳犬歯に通法とおり断髄処置をおこない水酸化カルシウム単味を貼薬した。窩洞をセメントで封鎖後、術後1時間,1.5時間,3時間,6時間,12時間,1日,3日,7日に抜歯した。直ちに硬組織から歯髄を取り出し、固定後通法とおりパラフィン標本を作製した。標本を薄切後、抗PCNAマウス・モノクロナール抗体PC10(DAKO)をもちいての免疫染色とAgNOR染色を行った。(結果)術後3日で生活歯髄浅部では、限局性に陽性歯髄細胞がみられた。(目的)

水酸化カルシウム単味を用いた生活断髄後の乳歯歯髄組織における歯髄細胞の分化・増殖と合成能について、免疫組織化学的に検討を行った。(材料と方法)実験動物としては、生後12カ月の幼若雑種犬を用いた。実験動物に対して全身麻酔を施し、下顎両側乳犬歯に通法とおり断髄処置をおこない水酸化カルシウム単味を貼薬した。高洞をセメントで封鎖後、術後1時間、1.5時間、3時間、6時間、12時間、1日、3日、7日に抜歯した。直ちに硬組織から歯髄を取り出し、固定後通法とおりパラフイン標本を作製した。標本を薄切後、抗PCNAマウス・モノクロナール抗体PC10(DAKO)をもちいての免疫染色とAgNOR染色を行った。生活断髄後の残存している生活歯髄組織を表層より3等分し(浅部・中央部・根尖部)、各々の部位の歯髄細胞の染色態度について組織学的に検討を行った。(結果)術後3日で生活歯髄浅部では、限局性に陽性歯髄細胞がみられた。中央部には血管周囲で軽度に陽性歯髄細胞みられた。術後7日では、生活歯髄浅部に散在性に陽性歯髄細胞がみられ、中央部においては軽度散在性にみられた。術後6時間で生活歯髄浅部に核内NOR粒子がみられる歯髄細胞(以下AgNOR陽性細胞)が軽度にみられた。術後12時間から術後1日では、AgNOR陽性歯髄細胞がより顕著にみられた。術後3日から7日では、生活歯髄浅部から中央部にかけてAgNOR陽性歯髄細胞が散在性に強くみられ、生活歯髄根尖部においても軽度に陽性細胞がみられる標本もあった。以上の結果から生活断髄後の組織修復に関与するなかで、歯髄細胞は高い分化・増殖と合成能を有する事が示唆された。(目的)乳歯生活断髄後の歯髄組織の歯髄細胞の分化・増殖と合成能について、免疫組織化学的検討を行った。(材料と方法)実験は、生後12カ月の幼若雑種犬で、全身麻痺を施し、下顎両側乳犬歯に通法とおり生活断髄処置をおこなった。術後1時間、1.5時間、3時間、6時間、12時間、1日、3日、7日に抜歯した。直ちに硬組織から歯髄を取り出し、固定後通法とおりパラフィン標本を作製した。標本を薄切後、抗PCNA免疫染色とAgNOR染色を行った。活性断髄後の残存している生活歯髄組織を表層より3等分し(浅部・中央部・根尖部)、各々の部位の歯髄細胞の染色態度について組織学的に検討を行った。(結果)PCNA免疫染色術後3日で生活歯髄浅部では、限局性に陽性歯髄細胞がみられた。術後7日では、生活歯髄浅部に散在性に陽性歯髄細胞がみられ、中央部において軽度散在性にみられた。術後6時間で生活歯髄浅部に核内にNOR粒子がみられる歯髄細胞(以下AgNOR陽性細胞)が軽度にみられた。術後3日から7日では、生活歯髄浅部から中央部にかけてAgNOR陽性歯髄細胞が散在性に強くみられ、生活歯髄根尖部においても軽度に陽性細胞がみらえる標本もあった。以上の結果から生活歯髄後の組織修復に関与するなかで、歯髄細胞は高い分化・増殖と合成能を有する事が示唆された。現在、統計学的処理後、研究結果についての総括の段階である。
医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドラインの開発

本研究の目的は、医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドラインの開発することである。医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育むケアとは、倫理的姿勢を基盤に子どもと家族の体験を理解しながら、信頼関係の形成を図る。【安心をもたらすケア】を行い、病気管理や学校生活に主体的に取り組めるように【セルフケアの強化】を図る。学校生活における症状マネジメントの方略を共に考え【危機対処行動や対処能力の強化】をする。病気の開示や病気管理について【意思決定の支援】を行いマネジメント力の強化を図る。その子らしくある生活の実現に向けて【校内外の関係機関や専門職者との支援体制の構築】を図る。病気をもつ子どもと家族を支援した経験のある養護教諭、スクール・ソーシャル・ワーカー等52名を対象に、病気をもちながら学校生活を送る子どもと家族を支援していく中で大切にしている姿勢、支援内容について自記式アンケート調査を実施した。結果として、以下の視点が明らかになった。援助姿勢として、「病気をもつ子どもではなく、一人の人間としての尊厳の尊重、その子らしさの尊重」「意思決定を尊重」「信頼関係の構築」「ケアリング」といった倫理的視点が多く示されていた。また支援内容としては、「子どものもつ力、可能性を信じ希望を支える」「安全と安心を支え、社会とのつながりをもてるよう将来を見据えた支援者であり続ける」「子どもと家族のニーズを捉え、個に応じた環境を整える」「学校全体で支える体制をつくる」「家族と医療と学校が円滑なコミュニケーションのもとで協働する」「エビデンスに基づいた情報提供と説明責任を果たす」「養護実践の振り返りと専門性の強化を図る」といった内容が明らかとなった。また講師として招聘した小児領域のNPでSchool Nurseでもあるカリフォルニア州立大学サクラメント校のDr.Bakerから、school Nurseの役割について、「健全な学校環境における健康と安全の推進にあたりリーダーシップを発揮する」、「実際に起きている健康問題及び潜在的な健康問題に対し、質の高い医療サービスを提供する」、「臨床判断を活用してケースマネジメント(ケアコーディネーション)を行う。学校と医療システム間のギャップを埋める」「子どもが安全かつ健全に学校で学習する準備を整えられるよう協力する」「特別な医療ニーズをもつ子どもたちを擁護しサポートする」という示唆が得られた。さらに医療を要する子どもに対しては緊急事態や災害状況に対する救急処置計画の検討の必要性も示された。医療を要する子どもとともに生活している家族の体験を明らかにした。病気管理や理解についての困難、学校生活に関わる問題や偏見など、子どもの成長に伴い様々な困難に直面している。そうした状況を長期戦として捉える中、親として関わることの限界を認識し、他者のサポートを得ていくことへの必要性を見据えながら将来について考えている。そのような体験の中で、【子どもの意思決定と自律の尊重】を図りながら、必要な医療的ケアのスキルを身につけ、療養生活の【コントロールを維持】し、家族の【生活の正常化】を探し出していた。また学校生活や地域生活の中で【安全で安心できるネットワーク】を創り、【つながりを絶やさない】よう生活している。家族は、子どもに専心しながら、日々の流れに沿い、今日を生きると家族なりの目標をもって【経験の意味づけ】を行っている。そして、子どもを一生引き受けていくことを【親としての責務】と受け止め、子どもの存在を意義あるものと認め、ともに在ることを【家族らしさの存続】と意味づけしている。上記の家族の体験や病気をもつ子どもと家族に関わった経験のある養護教諭の語りから導かれた支援の方向性として、直接的ケアによる負担、緊張の軽減を図るとともに、危機的状況への対応の支援、問題解決能力、必要に応じて援助を求める能力、心配や不安をコントロールする能力、必要な情報を入手する能力などの医療的ケアに伴うスキルを高め、自信を育む支援が導かれた。また、子どもと家族の日常性を維持し、家族らしさを護るよう病気や療養生活の受け止め、どのような将来像を描いているのかを捉え、学校、家庭、地域が協働しながら支援していくことが求められる。平成27年度は、医療を要する子どもと家族の病気体験(病気の捉え、情緒的反応、ニーズ、生活への影響)、求める支援を明らかにすることであった。医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む支援方法に関しては、既存の文献検討や経験年数5年以上で大学院を修了した県内外の養護教諭、経験豊かなエキスパートの養護教諭に対して半構成的面接を行い、子どもと家族に対する支援方法(1援助関係の形成方法、2介入の意図、3ケア介入方法)について明らかにし、多様な視点からの支援方法を抽出することを目標としていた。より実践での活用可能性の高い妥当性のあるケアガイドラインを作成するためには、特別支援学校等の勤務経験があるエキスパートの養護教諭とともに、学校保健関係者や小児専門看護師、家族支援専門看護師等医療専門職者等に対してインタビューを実施し、養護教諭の技となる支援方法(1援助関係の形成方法、2介入の意図、3ケア介入方法)を明らかにすることが必要であると考えた。また、当初の予定より「医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドライン」(案)の作成時期が遅くなっていることから、データ収集にフォーカスグループインタビューも取り入れ、有用性の高い「医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドライン」(案)の作成に向けて取り組んでいきたいと考える。平成28年度は、「医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドライン」を作成することを目標に取り組み、支援の抽出を行った。

養護教諭は家族の体験の理解を基盤としながら、情緒的支援の提供や家族教育を行い、直接的ケアによる負担や緊張の軽減を図るとともに、危機的状況への対応の支援を行っていた。具体的に、先々の情緒的な揺れを予測してアセスメントし、学校ー家庭ー地域との連携の中での支援について検討していた。学年、校種を超え、人が変わっても提供するケアの継続を保証するなどの危機への働きかけを行いながら。活用できる社会資源へつなげていく地域社会資源の活用についても検討を重ね、資源が切れ目なく提供できる体制を整えるよう努めていた。医療的ケアに伴うスキルを高め、自信を育む支援として、多職種とのチームアプローチを基盤としながら病状にあわせた対応策を検討するなど目標、優先度を明確にし、病気や医療的ケアに対する不安の軽減を図ることで病状が理解できるよう家族教育を行っていた。必要な医療的ケアに対して、家族が取り組める具体的方法について提案し、失敗体験にならないよう働きかけることで親としての自信、つながりを育むよう支援していた。子どものセルフケアへの支援も重視しながら、その子のもつ力を最大限発揮できるよう支え、子どもと家族の日常性を維持し、その子らしさ、家族らしさを護るよう取り組んでいた。過去から現在、将来にわたる生活を家族とともに思い描きながら、臨床的推論を働かせ、社会とのつながりへと拡げ家族としての調和を図りながら子どもらしく、家族らしく生活できる環境を整え、セルフケアの強化を図っていた。そして、その子なりの成長発達過程があることを家族に分かりやすく伝えるなど、子どもの成長発達に見合った対応を共に行っていくようにして、これからの生活を具体的に意識できるように関わっていた。平成28年度は、抽出された支援内容をさらに特定化し、学校保健医療機関等の多様な専門職者によるインタビューを基に、実践の場での活用可能性・有用性の高い「医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドライン」を作成することを目標に取り組んでいた。しかし、業務多忙等の理由によりインタビューが予定よりも進まず、実践の場での活用可能性・有用性の高いケアガイドラインの作成に至っていない。そのため期間を延長して、さらにフォーカスグループインタビューを加えるなど妥当性のある洗練化したガイドラインの作成につなげたいと考える。平成29年度は、「医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭のケアガイドライン」を作成することを目標に取り組み、支援の抽出を行った。養護教諭を対象にしたインタビューから導かれた支援とともに既存の文献検討から抽出された支援を比較検討しながら「医療を要する子どもと家族のマネジメント力を育む養護教諭の支援」を明らかにした。養護教諭は医療的ケアが必要な子どもと家族の体験(病気の捉え、ニーズ、情緒的反応、生活への影響等)を理解しながら、援助関係を形成し、日常生活、セルフケアの強化、情緒的支援の提供、家族教育、発達課題の達成への支援、危機的状況への対応の支援等を行っていた。
放射線に応答し細胞内局在を変化するDNA二重鎖切断修復蛋白質の同定と機能解析

1)電離放射線に応答し細胞内局在を変化する蛋白質の探索できるだけ多くの候補蛋白質を得るために、昨年度確立した、電離放射線に応答し細胞内局在を変化する蛋白質を同定するための方法を用いたスクリーニングを引き続き行った。蛋白質の局在変化を調べるために、GFP融合蛋白質として発現する様にGFP遺伝子の下流に各cDNAを組み込んだ遺伝子発現ベクターライブラリーからの各遺伝子発現ベクターをプラスミドとして調整し、これをマイクロタイタープレートに培養しておいたヒト培養細胞ヘリポソーム法を用いて遺伝子導入した。遺伝子導入した培養細胞はGFP融合蛋白質を充分発現させるために、遺伝子導入後2晩培養した。培養後、このプレートを倒立蛍光顕微鏡で1穴毎に観察を行い、細胞内の局在を同定した。ついで、電離放射線照射装置により放射線を照射後、一定期間培養した後で、照射前の同じ方法で細胞内の局在を同定・記録した。2)候補蛋白質からのスクリーニング照射前後に融合蛋白質の局在が変化していたベクターについては、保存していたプラスミドを用いて自動シークエンサーによりDNAの塩基配列を順次行っている。また、候補蛋白質のDNAの塩基配列を公表されている塩基配列情報と照合し、既知の蛋白質と新規蛋白質に分類している。既知の蛋白質としては、これまでに、Rad familyに属する蛋白質等が同定されている。今後、記録したデータの解析を引き続き行うとともに、同定された蛋白質についてその局在変化の特徴について解析を行う予定である。3)DNA二重鎖切断修復に関与する蛋白質の同定電離放射線によるDNA二重鎖切断修復機構で機能する新たな蛋白質を同定するためには、まず、既知の蛋白質についての特徴を理解する必要がある。そこで、DNA二重鎖切断の修復機構で働く既知の蛋白質(Ku70,Ku80,Xrcc4等)の細胞内局在とその局在変化について解析を行った。その結果、Ku蛋白質の核局在化には核移行シグナルとともにヘテロダイマーの形成が重要であることが明らかになった。本年度はDNA二重鎖切断修復機構で機能する新たな蛋白質を同定するために、「放射線照射後に局在を変化させること」を指標に探索する新規同定法を確立することを目的に研究を進めた。1既知の放射線応答蛋白質を用いた予備的な実験:電離放射線によるDNA二重鎖切断修復機構で機能する新たな蛋白質を同定するためには、まず、既知の蛋白質についての特徴を理解する必要がある。そこで、DNA二重鎖切断の修復機構で働く既知の蛋白質(Ku70等)の細胞内局在とその局在変化について解析を行った。その過程で得た細胞内局在制御機構については別紙の通り論文発表を行った。2ヒト皮膚組織由来のcDNA発現ライブラリーの作成:人体を形成する各組織ではその特性を発現するために組織特異的なmRNA転写が行われている。本研究では最も放射線に曝される可能性が高い組織であるヒト皮膚で発現していたmRNAに由来するcDNAライブラリーを使用した。また、目的蛋白質を同定する指標が「放射線照射により細胞内局在が変化すること」なので、目的蛋白質を同定するためには放射線照射前後に蛋白質の細胞内の位置を確認する必要がある。従って、蛋白質の局在変化を調べるために、GFP融合蛋白質として発現する様にGHP遺伝子の下流に各cDNAを組み込んだ遺伝子発現ベクターライブラリーを構築した。3ヒト皮膚表皮角化細胞への遺伝子発現ベクターの導入:ライブラリーからの各遺伝子発現べクターはプラスミドとして調整し、これをマイクロタイタープレートに培養しておいたヒト培養細胞へリポソーム法を用いて遺伝子導入した。同時に、目的の蛋白質を発現するベクターを同定した後の塩基配列決定などを効率よく行うために、各プラスミドの一部を別途保存した。4電離放射線に応答し細胞内局在を変化する蛋白質の探索:遺伝子導入した培養細胞はGFP融合蛋白質を充分発現させるために、遺伝子導入後2晩培養した。培養後、このプレートを倒立蛍光顕微鏡で1穴毎に観察を行い、細胞内の局在を同定し、デジタル画像として記録した。ついで、電離放射線照射装置により放射線を照射後、一定期間培養した後で、照射前と同じ方法で細胞内の局在を同定・記録した。目的蛋白質を一つでも多く得るために初年度は探索を集中的に行った結果、現在約1万クローンまで解析を終えた。今後、照射前後に融合蛋白質の局在が変化していたベクターについては、保存していたプラスミドにより再検定を行い、局在変化を再確認した後、自動シークエンサーによりDNAの塩基配列を決定する予定である。

2)候補蛋白質からのスクリーニング照射前後に融合蛋白質の局在が変化していたベクターについては、保存していたプラスミドを用いて自動シークエンサーによりDNAの塩基配列を順次行っている。また、候補蛋白質のDNAの塩基配列を公表されている塩基配列情報と照合し、既知の蛋白質と新規蛋白質に分類している。既知の蛋白質としては、これまでに、Rad familyに属する蛋白質等が同定されている。今後、記録したデータの解析を引き続き行うとともに、同定された蛋白質についてその局在変化の特徴について解析を行う予定である。3)DNA二重鎖切断修復に関与する蛋白質の同定電離放射線によるDNA二重鎖切断修復機構で機能する新たな蛋白質を同定するためには、まず、既知の蛋白質についての特徴を理解する必要がある。そこで、DNA二重鎖切断の修復機構で働く既知の蛋白質(Ku70,Ku80,Xrcc4等)の細胞内局在とその局在変化について解析を行った。その結果、Ku蛋白質の核局在化には核移行シグナルとともにヘテロダイマーの形成が重要であることが明らかになった。
原子核動的過程における非断熱遷移効果

(1)重イオン反応に対応したポテンシャル障壁がある疑似交差する2準位問題に対して3転回点半古典理論と局所非断熱遷移の行列定式を用いて疑似交差点が障壁に外側と内側にある両者の場合について、S行列の解析的公式を導出し、ポテンシャル共鳴と非断熱遷移の相互影響を理論的に調べた。これらの公式はユニタリーティ条件を満たし、ポテンシャル障壁が無視できるエネルギーではランダウ・ジーナ・シュティケルベルクの改良された公式に帰着する。導出したS行列について弱及び強結合極限での定性的振舞いを明らかにした。また、ランダウ・ジーナー遷移とポテンシャル共鳴の可能な相互影響を論じた。^<12>C+^<17>O系の模型で具体的計算を実行し、半古典論による計算と量子力学による厳密な計算とを比較検討した。疑似交差がクーロン障壁の内側にある場合は、ランダウ・ジーナー遷移による非弾性散乱断面積がポテンシャル共鳴によって著しく増大すること、一方、疑似交差がクーロン障壁の外側にある場合はランダウ・ジーナー遷移に伴う位相と断熱ポテンシャルによる位相が打ち消すように干渉して非弾性散乱断面積が著しく小さくなることを明らかにした。(2)低エネルギー重イオン核融合反応の巨視的トンネル現象を扱う理論の開発と実験データの解析で種々の成果を得ている。クーロン障壁以下での重イオン核融合反応の障壁分布データの解析から振動の高次の項、非調和振動の重要性、変形の符号の情報の摘出、断熱トンネル効果の役割、散乱核の励起状態の幅が果たす役割などを明らかにした。また、重イオン散乱における新焦点現象として、虹散乱の影の効果のグローリー現象を理論的に予言し、その同定には前方散乱断面積の入射エネルギー依存性が有効であることを示した。(3)超低エネルギー核融合反応での束縛電子による遮蔽効果の研究に着手した。非断熱遷移効果を定量的に評価するため、時間依存法及び動的規格因子法による定式化を行い、数値計算を実行中である。(4)多価イオンと原子クラスターの衝突による多価クラスターの生成の非断熱過程を時間依存局所密度近似に基づく時間依存コーン・シャム方程式で理論的に調べた。この計算によるとポテンシャル鞍部を通過する多電子移行が出現し、古典的障壁模型の評価とよく一致する。また、多価イオンと稀ガス原子との衝突も同様な方法で計算し、電荷移行断面積の計算値が測定値及び半経験公式、分子的古典障壁模型とよく一致することを示した。(1)ポテンシャル共鳴と非断熱遷移の課題の現状は以下の通りである。半古典散乱理論を2準位チャネル問題に拡張し、エネルギーを変数として、複素転回点の位置を計算するプログラム、複素転回点間の作用積分を計算するプログラム、各チャネルでのポテンシャルポッケトでの作用積分から共鳴点を探すプログラムなどを作成し、非断熱遷移がポテンシャル共鳴に及ぼす効果を調べている。非断熱遷移がS行列要素S_<11>に

ほとんど効果が見られないが、S_<12>には共鳴的な影響が現れる、あるいは、ポテンシャル共鳴の位置と幅に効果をもたらすことを想定して、模型的な事例を探究している。(2)巨視的トンネル現象の解明については、以下の通り大きな成果を得ている。クーロン障壁以下での^<64>Ni+^<92.96>Zr核融合反応に対する表面振動の効果を結合チャネル法を用いて解析し、この高次の効果が励起関数などの種々の実験データを説明する上で非常に重要であること、また、非対称性の大きな系^<16>O+^<112>Cdにおいても高次の結合効果が重要であること、さらに、^<16>O+^<144>Sm核結合反応の相互作用するボゾン模型を用いた詳細な解析で、核融合の障壁分布の実験データを再現するには、非調和振動効果を考慮することが必要不可欠であること、逆に、核融合反応の障壁分布の解析を通して、原子核変形の符号に対する情報が得られることなどを示した。(3)他の系に対する模索の一つは、イオン・原子クラスター衝突、特に多電子移行反応の理論的枠組みの確立を目指して共同研究している。入射イオンの運動を原子クラスター内の電子群に対する時間依存の外場として扱い、TDLDA法を適用することを試み、その計算を物理的に解釈する現象論的取り扱い、半古典論に基づく障壁乗り越え模型を構築中である。また、他の模索として、原子核融合反応における電子が果たす役割について検討中である。(1)共鳴と非断熱遷移については、以下の通り面白い結果を得ている。疑似交差点がポテンシャル障壁の外側にある場合について、ポテンシャル共鳴が非断熱遷移に及ぼす効果を調べた。断熱表示で、ポテンシャル共鳴が弾性チャネルにあるが、非弾性チャネルにはない2チャネル問題を設定する。開発した非弾熱半古典理論の計算では、S行列要素|S_<12>|^2において、この共鳴エネルギー近傍で鋭いピークを予想していたが、鋭い谷となった。これは弾性チャネルの共鳴的な振幅と非弾性チャネルの寄与のデストラクティブな干渉によると考えられる。(2)低エネルギー重イオン核融合反応において原子核構造と励起の効果の理論の開発と実験データの解析を行い、以下の通り大きな成果を得ている。クーロン障壁以下での種々の重イオン核融合反応の障壁分布データを結合のすべての次数を含む結合チャネル法を用いて解析し、非調和振動の重要性、入射核構造の効果の違いを明確にしたこと、断熱的トンネル効果が障壁分布の形に影響を与えることなく状態を制限すること、結合チャネル効果は核融合障壁の静的変化で表されること等を示した。^<16>O+^<144>Sm、^<148>Sm核融合反応の解析で、標的核に相互作用ボゾン模型を用いた解析を実施し、世界で初めて球形核のフォノン状態の四重極能率の符号を核融合反応から決定し、核融合反応が球形核のフォノン状態の四重極能率を決める有力な方法であることを示した。(3)原子核の重イオン反応と似ているイオン・金属クラスター衝突における多電子移行等について微視的理論の開発、計算と古典的障壁超越模型による解釈を行った。
マラリア原虫スポロゾイトの肝細胞感染機構の解明

マラリア原虫のスポロゾイトは蚊から人への感染に関わる重要なステージである。スポロゾイトの肝臓への感染機構は、医学的にも生物学的にも興味深い対象である。しかし、これまで材料としての扱いにくさのために十分には研究されて来なかった。この研究ではスポロゾイトの肝細胞特異的感染にかかわる分子を同定し機能を解析して、原虫の肝細胞感染の分子機構を解明することを目的とした。逆遺伝学的方法で、スポロゾイトcDNAの網羅的解析、ESTデータベース構築、遺伝子ノックアウトによる機能解析を進めてきた。モデル実験動物としてネズミマラリア原虫P.bergheiとハマダラカAn.stephensiを用い、次の実験を行った。(1)ハマダラカ唾液腺スポロゾイトからcDNAライブラリーを作製し、cDNAの網羅的解析を行って、ESTデータベースを構築した。(2)細胞接着に関連する分子構造motifを持つ遺伝子をいくつか選定し、全塩基配列を解析した。(3)その中から更に数個の遺伝子を選定しノックアウトした原虫を作製し、機能解析を行って、スポロゾイトの肝細胞への接着感染を介在する鍵分子を同定した。(4)鍵分子の抗体を作製して、免疫電顕により細胞局在や原虫の接着侵入への関わり方を観察した。特に今回、(5)既知の分子との相同性を持たないマラリア原虫特異的新規分子の機能を同定し、Torinuke'と命名した。この分子はスポロゾイトが、肝臓の類洞壁のクッパー細胞を通過するのに必要な分子であることを同定した。
近代文芸の形成における傍訓の機能

「近代文芸における傍訓の機能」という本研究の成果報告として、「渡部温訳述《通俗伊蘇普物語》振り仮名一覧」を提出する。本研究は、近世から近代初頭までのさまざまな文学テクストを、「傍訓」という観点から調査した。その過程で、「傍訓」と「言文一致」の関係に着目し、振り仮名を施された漢字仮名交じり文が存在したからこそ、いわゆる「言文一致」が実現したことを確認した。最終的に考察の中心となったテクストは、渡部温《通俗伊蘇普物語》と二葉亭四迷《あひゞき》である。どちらも外国語からの翻訳でありながら、その文体は江戸・東京語をベースにしたものであり、とくに《通俗伊蘇普物語》は、近世から近代への「言文一致」の流れを知る指標として、もっと重視されて良い資料である。「言文一致」という観点からは、これまでは《あひゞき》の先進性のみが強調される傾向が強かったが,重要なのはその先進性の基盤であると考えられる。《通俗伊蘇普物語》は学校教育の場でも用いられ,きわめて広く流布したことが知られている。明治初年の言語状況に大きな影響を与えたテクストと見なしてよい。こうした観点から、今後の研究に資するため、《通俗伊蘇普物語》に現れた振り仮名をすべて網羅し、整理を加えた上で一覧リストを作成した。リストを一瞥して気づくのは、「ふりがな」というその名称から印象づけられるような、「かな」が従で「漢字」が主という関係ではないことである。漢字が読めない人のために振られる「ふりがな」とは根本的に異なっている。むしろ、仮名文に、漢字を付け加えることによって、意味の固定化を図り、さらに文章語への通路を確保していると見なすべきであろう。例えば人称代名詞についてみれば、相手を示すさまざまな語に「汝」の一字を当てることで、それが二人称へと抽象化されるでいることが、看取される。単純なリストではあるが、このように着目すべき点が多いと言えよう。今後は、本研究によって得られた知見と基礎データをもとに、より深い考察を加えていくこととしたい。従来の研究成果から、傍訓にかかわるものを収集・整理し、文化史的觀點から見たおおまかな流れをたどった。傍訓はたんなる「よみがな」ではなく、一種の語訳である事は言うをまたないが、その機能がより鮮明になるのは、中国より大量の白話語彙が流入することと関りがあるのではないかと察せられる。そのため、とくに小説や語録などの和刻に調査の重点をおき、そのうえで、《雑字類編》などの漢語辞書に語釈としてふせられた傍訓にも着目した。《雑字類編》は初学者が漢文を作るときに用いた辞書であり、和語から漢語を引く事が出来るいわば「和漢辞典」なのだが、それがどのような発達過程を経たか、このような辞書がなぜ必要であったかを念頭におきながら、その把握に努めた。總じてこの作業においては、近世日本における漢語と白話語彙と傍訓という三者間の関係の整理がおこなわれたと言える。

また《雜字類編》は、《蘭語訳撰》などにも影響を及ぼしているとされるが、この観点から、蘭和・英和・英漢辞書とのつながりにも重点をおいて調査をすすめた。その過程で、これまであまりとりあげられてこなかった永峯秀樹訓釋《華英字典》(じっさいは《英華辞典》)が、英和辞書発達史の観点から見ても興味深い素性をもつ書物であることがわかり、その電子テクスト入力を精力的に進めた。周知のごとく永峯秀樹には《欧羅巴文明史》などおおくの翻訳書があるため、それとの対照もおこなったが、いまのところ有意と看做しうる関係は見出されていない。来年度より計画している明治期のテクストの調査の前段としてはやや手を広げすぎた感もあるが、全体の見取図を作成するには有意義であった。前年度の作業をふまえ、明治初期の翻訳文学における傍訓の使用例と、明治以前の文献とにおける傍訓の使用例とを比較するために、明治以前の文献を、「辞書類/文学類/実学類」に分類した(なお「文学類」は必ずしも小説などのいわゆる文学に限るのでなく、歴史書や哲学書なども広く含んだ、近世以前の用例とほぼ同義「文学」を指し、「実学」は医学や工学、また兵学などを指す)。それに基づいて明治以前の文献の傍訓用例を整理し、明治以降の翻訳文学と初歩的な比較を行なった結果、翻訳文学における傍訓における遊戯性と啓蒙性とがそれぞれ別の系譜に属すること、両者の結合が明治になってから急速に広まることが確認された。単純化して言えば、遊戯性は文学類のうち近世小説(中国翻案もの、読本など)に由来し、まま衒学の要素を含み、啓蒙性は辞書類・実学類に多く由来する。さらに、文学類のうち歴史書(とくに翻訳もの)などは、しばしば両者が混淆した状態であらわれる。一般に、ヨーロッパ言語からの翻訳という点では、文学より歴史の方が先んじているが、表記の技法の点でも、文学の翻訳に当たって歴史書の翻訳が大いに参考にされたことは、近代小説の叙述技法の確立という観点からも、興味深い。ただし、近代以前の歴史書においても遊戯性と啓蒙性の混淆は一様でなく、また、明治以降となると、遊戯性の要素がほとんどなくなりひたすら啓蒙への道を歩むことになる。傍訓というのは末梢的な表記技法のように一見おもえるけれども、こうしてみると、それぞれのジャンルの本質をよく表しているとも言えるだろう。「近代文芸における傍訓の機能」という本研究のテーマに即し,これまで集積してきたデータを整理した結果,本年度の当初の目論見であった,「言文一致」から見た「傍訓」という観点は,むしろ逆に,「傍訓」から見た「言文一致」として考えねばならないことが痛感された。そのテクストが「言文一致」であるかどうかについて「傍訓」の果たす機能は,けして副次的なものでなく,むしろ決定要因にすらなり得るのである。翻訳小説を中心にさまざまなテクストを取り扱ったが,最終的に中心となったテクストは,明治初年に刊行された渡部温〈通俗伊蘇普物語〉と明治二十年代に版が重ねられた二葉亭四迷〈あひゞき〉である。どちらも翻訳でありながらその文体は江戸・東京語をベースにしたものであり,とくに〈通俗伊蘇普物語〉は,近世から近代への「言文一致」の流れを知る指標として,もっと重視されて良い資料である。これまではとかく〈あひゞき〉の先進性のみが強調される嫌いがあったが,重要なのはその先進性の基盤ではないだろうか。〈通俗伊蘇普物語〉は学校教育の場でも用いられ,きわめて広く流布したことが知られている。明治初年の言語状況に大きな影響を与えたテクストと見なしてよい。こうした観点から,最終年度にあたる本年は,これまでの成果の一部として,また今後の研究に資するため,〈通俗伊蘇普物語〉に現れた傍訓をすべて網羅し,整理を加えた上で索引を作成し,研究報告として提出することとした。
企業アカウントの運用とブランド・アカウント・パーソナリティの形成に関する実証研究

本研究では、ソーシャルメディア上の企業アカウントの運用とブランド・アカウント・パーソナリティ(BAP)の形成に関する実証的調査を行う。これまでのソーシャルメディアに関するマーケティング研究では、しばしば企業アカウントの運用が企業のブランド・ロイヤルティやブランド・パーソナリティに与える直接的な影響が考察されてきた。しかしながら、今日多くのソーシャルメディア上の企業アカウントは、例えばゆる系などと表現される通り、それぞれのアカウント自体に「人格」が形成されており、その人格や個性を経由してブランド成果がもたらされることが予想される。
医療用X線による被曝線量低減のための散乱X線の積極的利用

1.発生X線・被写体透過後の直接X線スペクトルとその影響(1)モンテカルロ法でX線管陽極内での電子エネルギーのばらつきを計算して,さらに量子理論の式を用いてスペクトルを計算した。その結果,Birch-Marshallのモデルの結果と比較的よく一致した。(2)自己整流型のX線発生装置で,X線スペクトルを測定するときに,管電流値を広範囲に変えても,測定スペクトルが変わらないことを確かめた。この結果,多くのパラメータを変えても,他の型の発生装置と比べて,スペクトルを能率よく測定できることがわかった。(3)X線管電圧脈動率の影響脈動率を上げると,一般に,線質が軟らかく,線量が少なくなると考えられてきたが,この常識に反して,脈動率60%以上では線質が少しずつ硬くなり,非飽和電流コードでは,線量も増加することがわかった。(4)この結果,単相全波整流型では,管電流が多いほど,患者の被曝線量が減少することがわかった。2.散乱X線スペクトルの測定ピンホール写真法を使って,X線管焦点の位置を正確に測定する方法を見出したので,正確にビーム軸を合わせることができるようになった。その結果ビームストッパの直径を2mmまで小さくし,外挿法で,直径0mmの点での散乱X線スペクトルを,正確に求めることができるようになった。こうして求めた散乱線含有率を変化させて,アルミニウムの周期的方形波パターンの写真を撮影し,写真コントラストと被曝線量との関係を示すためのContrast-dose diagramを新しく提案した。このグラフを頭部のトルコ鞍の臨床写真に適用して有効であることを確かめた。1.X線管電流の安定化交流安定化電源を本申請の研究費で購入して,X線管のヒ-タ回路に加わる電圧を安定化させた結果,管電流が今までよりも安定化したので,X線スペクトルのデ-タを正確に測定できるようになった.2.散乱X線スペクトル測定時のコリメ-タの向き散乱X線スペクトルを測定するために円錐形の鉛コリメ-タを使う方法を前に考慮した。また,この研究を行なうために,面積の大きい純Ge検出器を昨年度に設置した。本年度は、円錐形コリメ-タの向きを,線源側に向けるのがよいか、検出器側に向けるのがよいかを,理論的および実験的に検討した。その結果、検出器側に向ける方がよいことがわかった。理由は以下のとおりである。(1)線源側に向けたときには,円錐面でX線が散乱されて検出器に入射するので誤差が大きくなる。検出器側に向けたときには、わずかに透過したX線だけが余分に入るので誤差が少い。(2)線源側に向けたときには,円錐面から出たL特性線が10ー20keVのピ-クとなって現れるので誤差になる。検出器側に向けたときには、透過して検出器に入るL特性線が無視できる程度である。3.散乱X線スペクトルと直接線スペクトルとの分離照射野と被写体検出器間距離を変えて,(1)直接線十散乱線(円錐コリメ-タ使用),(2)直接線だけ(円筒のコリメ-タ使用),(3)散乱線だけ(円錐コリメ-タと鉛ストッパを使用)を測定した結果,(1)と(2)の結果が(3)とよく一致するようになった。これは,1,2で述べたように、スペクトル測定の精度が上ったからである。4.散乱線含有率を変えて,ファント-ムの写真の画質への影響の研究に着手した。1.蛍光量計を用いた散乱X線含有率の測定蛍光量計を用いてアクリルを被写体としたときの散乱線含有率を測定した。

パラメ-タとして、管電圧80kVp、アクリルの厚さ5ー20cm、被写体・検出器間距離0ー100cmと変化させた。蛍光量計の窓の直径が1cmであるから、ビ-ムストッパの直径を5,4,3,2,1cmと変化させて、外挿法で直径0cmの点での散乱線含有率を求めた。その結果、従来からの常識と違って、被写体・検出器間距離を数10cmにしても、例えば被写体の厚さが20cmのときには散乱線含有率が50%もあることがわかった。2.散乱X線スペクトルと直接線スペクトルの分離純ゲルマニウム検出器の直前に置く円錐形鉛コリメ-タの直径が2mm以下であるから、ビ-ムストッパの直径を30,20,15,10,5,3,2mmと小さくして散乱線スペクトルを測定せねばならない。そのときに、X線管焦点が、管球の窓の中心からずれていることがわかったので、焦点位置の正確な決定法を研究した。その結果、ピンホ-ルを使って、陽極の像を可視光で、焦点の像をX線で同じフィルムに撮影すれば、正確に焦点の位置を決定できることを見出したので、今までよりも正確に、レ-ザ光でビ-ム軸を設定して、スペクトルの分離測定ができるようにした。3.散乱線の写真効果散乱線含有率を変えて、バ-ガ-ファント-ムのX線写真を撮影し、検出限界が散乱線含有率の増加と共に低下する様子を研究した。1.X線管から発生するX線スペクトルもっとも基礎的なデータであるX線管から発生するスペクトル分布について次の二つの結果を得た。(1)従来のモデルでの制動放射スペクトルの理論計算では、X線管陽極内での電子のエネルギーのばらつきを考慮していなかった。今回は、モンテカルロ法でこのばらつきを計算して、さらに量子理論の式を用いてスペクトルを計算した。その結果、Birch-Marshallのモデルの結果と比較的よく一致した。(2)自己整流型のX線発生装置で、X線スペクトルを測定するときに、管電流値を広範囲に変えても、測定スペクトルが変わらないことを確かめた。この結果、管電圧、被写体の厚さ、等の、多くのパラメータを変えても、スペクトルを能率よく測定できるようになった。2.散乱X線スペクトルの測定昨年度に、ビンホール写真法を使って、X線管焦点の位置を正確に測定する方法を見出した。そのために、より正確にビーム軸を合わせることができるようになったので、ビームストッパの直径を2mmまで小さくし、外挿法で、直径0mmの点での散乱X線スペクトルを、正確に求めることができるようになった。こうして求めた散乱線含有率を変化させて、アルミニウムの周期的方形波パターンの写真を撮影し、写真コントラストと被曝線量との関係を示すためのContrast-dose diagramを新しく提案した。このグラフを、頭部のトルコ鞍の臨床写真に適用して有効であることを確かめた。
アミノ酸ラセマ-ゼのタンパク質構造と触媒機構の解明

1.グルタミン酸ラセマ-ゼに関して以下の研究成果を得た。(1)乳酸菌Pediococcus pentosaceusよりグルタミン酸ラセマ-ゼを単離精製し、その酵素化学的性質や反応機構の解析を行った。重水素磁識した基質や重水溶媒を用いるシングルタ-ンオ-バ-条件での反応生成物を解析した結果、基質から反応生成物へのα-水素の分子内転移が観察され、本酵素反応は単一水素受容体機構に従って進行することが示唆された。(2)乳酸菌の本酵素の構造遺伝子を大腸菌にクロ-ン化し、クロ-ン株より本酵素を高能率に精製する方法を確立した。(3)グルタミン酸ラセマ-ゼとD-アミノ酸トランスアミナ-ゼの共役反応系により各種のD-アミノ酸を高収率で合成する方法を開発した。2.アラニンラセマ-ゼに関して以下の研究成果を得た。(1)中等度好熱性細菌Bacillus stearothermophilusの耐熱性アラニンラセマ-ゼの構造遺伝子をクロ-ニングし、そのDNA配列を決定するとともに、精製酵素の部分アミノ酸配列とから本酵素の全一次構造を明らかにした。(2)塩酸グアニジンによる変性過程のCD測定やプロテア-ゼによる限定分解を行い、本酵素サブユニットが大小2個のドメイン構造をもつことを明らかにした。(3)本酵素の構造遺伝子中で、ドメイン間を接続するヒンジ領域に相当する部分に合成DNAを挿入し、ドメインを別々のポリペプチドとして発現させたところ、この遺伝子産物は野性型の酵素とほぼ同じ分子量と比活性を示した。(4)ポリエチレングリコ-ル蒸気拡散法により本酵素の単結晶を調製した。この結晶は分解能2.8Å以上のX線折像を与え、現在これを解析中である。アラニンラセマーゼは、DーおよびLーアラニンのラセミ化反応を触媒するピリドキサル酵素である。本酵素は原核生物に広く存在し、細胞壁ペプチドグリカン中のDーアラニンの生合成に中心的な働きをしている。このため、新規抗生物質のデザインのための標的酵素として、その構造と触媒機構を解明することは極めて重要である。本研究では、中等度好熱性細菌、Bacillus stearothermophilusのアラニンラセマーゼ遺伝子をクローン化し、そのDNA配列と酵素タンパク質のトリプシン消化ペプチド断片のアミノ酸配列とから、本酵素の全一次構造を解明した。また高発現プラスミドを構築して大腸菌内で大量の発現させ、耐熱性を利用する迅速酵素精製法を確立するとともに、単結晶を調製してX線結晶解析を開始した。本酵素は、分子量が約80,000で、386個のアミノ酸残基からなるサブユニット2個から構成されていることが判明した。本酵素は420nmに吸収極大を有するピリドキサル酵素特有の吸収スペクトルを示すとともに、この吸収領域において負の円二色性ピークを有していた。本酵素はアラニンに特異的に作用し、セリン、バリン、リジンなど他のアミノ酸は全く基質とならなかった。塩酸グアニジンによる本酵素タンパク質の変性過程を円二色性スペクトルにより追跡した結果、本酵素サブユニットが安定性の異なる大小2個のドメインから構成されていることが示唆された。また、本酵素は高い耐熱性を有するのみならず、ズブチリシンやパパインなどのタンパク質消化酵素により10ケ所以上の部位で切断を受けても、全くその活性を失わないという興味ある知見が得られた。一方、乳酸菌のグルタミン酸ラセマーゼについてもその全一次構造を解明し、アラニンラセマーゼの一次構造と比較した結果、ほとんど相同性は認められなかった。このことは、両酵素が補酵素要求性の点でも大きく異なる事実と一致する。

中等度好熱性細菌Bacillus stearothermophilusの耐熱性アラニンラセマ-ゼの構造遺伝子をクロ-ニングし、そのDNA配列を決定するとともに、精製酵素のトリプシン消化ペプチドのアミノ酸配列とから、本酵素の全一次構造を明らかにした。また、塩酸グアニジンによる変性過程のCD測定やプロテア-ゼによる限定分解を行い、本酵素サブユニットが大小2個のドメイン構造をもつことを明らかにした。本酵素は各種のプロテア-ゼによりTyrー268の付近で切断を受けるが、ほとんど酵素活性を失わないという特徴を示した。そこで、本酵素の構造遺伝子中で、ドメイン間のヒンジに相当する部位に合成DNAを挿入し、ドメインを別々のポリペプチドとして発現させたところ、この遺伝子産物は野生型のアラニンラセマ-ゼとほぼ同じ分子量と比活性を示した。一方、各ドメインをを別々にクロ-ン化し、発現させた場合、その産物は不溶化した。各ドメインを分別精製し、それぞれの物性を明らかにして再構成実験を行うことにより、酵素触媒機能発現には両ドメインが必須であるが、両ドメイン間は必ずしも共有結合している必要はないことが判明した。また、本酵素タンパク質の生合成過程で両ドメインのポリペプチドが立体構造形成において協同的に働いていることが示唆された。ポリエチレングリコ-ル蒸気拡散法により本酵素の単結晶を調製した。この結晶は分解能2.8Å以上のX線回折像を与え、現在これを解析中である。乳酸菌Pedococcus pentosaceusのグルタミン酸ラセマ-ゼをクロ-ン株から大量に精製して、本酵素反応における基質のαー水素転移の反応機構を解析した。重大素標識した基質や重水溶媒を用いるシングルタ-ンオ-バ-条件下での反応生成物を解析した結果、基質から反応生成物へのαー水素の分子内転移が観察され、本酵素反応は単一水素受容体機構に従って進行することが示唆された。
アミノ多糖の分枝化による機能性多糖材料の創製

キチンは未利用バイオマス資源であるが、得意な生物特性を示すため、機能性素材として高い可能性を秘めている。本研究は、キチンに対する効率的な化学修飾法を開発し、これにより枝分かれアミノ多糖を調整する手法を開発するとともに、その特性を解明することを目的とした。まず、キトサンに対し、位置選択的な一連の化学修飾(6位以外への保護基の導入、グルコサミンのオキサゾリン誘導体によるグリコシル化、脱保護)を行い、6位の側差を導入する方法を確立した。置換度は0.6程度まで上げることができた。得られた分枝型キチン、分枝型キトサンは水溶性で、高い抗微生物活性を発現した。また、生分解の挙動を調べ、側鎖の置換度により、分解速度を制御できることを明らかにした。二糖であるマルトースもオルトエステル誘導体を用いることにより、導入できた。また、オリゴエチレングリコールの片末端アルデヒドを用いて還元アルキル化したところ、高い置換度で側鎖を導入できた。生成物は高い溶解性と金属イオン吸着能を示した。分枝型アミノ多糖を、さらに短い経路で調整することを可能とするため、可溶性の反応前駆体としてもトリメチルシリル化キチンを精製し、評価した。シリル化反応において、β-キチンはα-キチンよりも高い反応性を示し、短時間のうちに完全置換体を与えた。得られたシリル化キチンは高度な溶媒親和性を示したそのキャストフィルムを脱シリル化することにより、キチンフィルムを容易に調整することを可能にした。シリル化キチンには高い化学反応が期待できるため、トリチル化、およびオキサゾリンを用いたグリコシル化を検討した。その結果、いずれの反応もスムーズに進行し、置換度はそれぞれ1.0,1.6に達し、シリル化キチンが機能性多糖を実現するための反応前駆体として有用であることを明らかにした。未利用バイオマス資源であるキチンの効率的な化学修飾法を開発し,これにより分岐型キチンを調製する手法を確立することを目的として研究を進めた。まず,6位のみに反応性基をもつキトサン受容体とグルコサミンのオキサゾリン誘導体との反応により,位置選択的に側鎖を導入した。得られた分岐型キトサン,分岐型キチンの特性解析を進めている。次に,反応性の低いキチンの化学修飾を容易にするためにトリメチルシリル化し,可溶性の反応前駆体として評価した。ピリジン中,シリル化剤で処理したところ,β-キチンはα-キチンよりも高い反応性を示し,完全置換体を調製することができた。得られたシリル化キチンは高度な溶媒親和性を発現した。このため,誘導体のアセトン溶液をキャストし,酢酸水溶液で脱シリル化することにより,きわめて容易にキチンフィルムを調製することが可能になった。シリル化キチンには高い化学反応性も期待できるため,典型的な反応としてトリチル化を検討した。反応をピリジン中でトリチルクロリドを用いて行ったところ,置換度1.0を達成できることを確認した。さらに,キトサンのアミノ基を位置選択的に修飾する可能性を広げるため,糖に類似のモデルを導入することを検討した。オリゴエチレングリコールの片末端アルデヒドを用いて還元アルキル化したところ,高い置換度で側鎖を導入できた。

現在,非天然の機能性多糖材料の創製を目指し,シリル化キチンの調製と反応前駆体としての評価,糖側鎖の導入,および,分岐型多糖の特性について重点的に検討を進めている。アミノ多糖であるキチンは未利用バイオマス資源であるが,特異な生物活性を示すため,機能性素材として高い可能性を秘めている。そこで,効率的な化学修飾法を開発し,これにより非天然型の枝分かれアミノ多糖を調整する手法を確立するとともに,その特性を解明することを目的として研究を進めた。まず,キトサンに対し,位置選択的な一連の化学修飾(6位以外への保護基の導入,グルコサミンのオキサゾリン誘導体によるグリコシル化反応,脱保護)を行い,6位に側鎖を導入する方法を確立した。得られた分枝型キチン,分枝型キトサンは可溶で,かつ,高い抗微生物活性を発現することから,水溶性の抗菌剤として有用であることを見いだした。また,生分解の挙動を調べ,置換度との関連を明らかにした.二糖であるマルトースもオルトエステル誘導体を用いることにより,導入が可能であることを示した。分枝型アミノ多糖が興味深い性質を示すため,さらに短い経路で調整する手法を開発することとした。キチンの直接グリコシル化をまず試みたが困難であったため,可溶性の反応前駆体としてトリメチルシリル化キチンを調整し,評価した。シリル化反応において,β-キチンはα-キチンよりも高い反応性を示し,短時間のうちに完全置換体を与えた。得られたシリル化キチンは高度な溶媒親和性を示した。そのキャストフィルムは酢酸水溶液で脱シリル化され,きわめて容易にキチンフィルムを調整することを可能にした。シリル化キチンには高い化学反応性が期待できるため,トリチル化およびグリコシル化を検討した。その結果,トリチル化では置換度1.0を達成し,シリル化キチンが機能性多糖を実現するための前駆体として有用であることを明らかにした。また,オキサゾリンを用いたグリコシル化もスムーズに進行し,分枝型アミノ多糖を簡単に調整するための新規な方法を開発することができた。