hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
基底膜ライブイメージングシステムの開発とその応用

基底膜の拡張やターンオーバーが亢進している発生期の唾液腺を例にとり、基底膜の動態を高精細にタイムラプス観察するシステムの構築を試みた。基底膜を標識するためのツールには、関口、二木らによって開発されたEGFP標識ナイドゲン-1組換え体(EGFP-hNid1)に着目した。ナイドゲンは基底膜の各成分を連結するリンクタンパク質である。器官培養液に添加されたEGFP-hNid1は、15分以内に顎下腺上皮基底膜を蛍光標識し、本システムの有用性が示された。まず、基底膜ライブ観察システムを構築した。ガラス培養皿に器官培養した胎生13日マウス顎下腺にEGFP標識組換えヒトナイドジェンー1(EGFP-hNid1)含有(10ー25μg/ml)培養液を添加し、簡易培養装置を組み込んだ倒立型共焦点顕微鏡上でEGFP-hNid1の局在を経時的に観察した。培養液添加後15-30分でEGFPの蛍光が上皮基底部に明瞭に認められた。毛細血管基底膜にはごく微弱な蛍光が認められた。蛍光を取り込んだ部位が実際の基底膜と一致することがEGFPの局在部位とマウス基底膜ナイドジェン1特異抗体(EML-1)を用いた蛍光抗体法による陽性部位とが一致することで確認できた。観察を継続し、分枝形態形成が進行中の顎下腺上皮基底膜の動態を6時間に渡り追跡することができた。次に、平成28年度以降に実施予定の研究の一部を前倒し、MMP阻害剤のGM6001, batimastat, actinoninについてそれぞれを顎下腺器官培養系に添加し、各20μM、5μM、50μM程度で明らかな分枝形態形成の阻害が認められることを確認した。計画通り、基底膜のライブイメージングに成功した。EGFP標識組換えヒトナイドジェンー1による基底膜の標識は安定しており、次年度以降の、基底膜ターンーオーバー機構の調査に活用可能であることを示すことができた。一部計画を前倒しにして、基底膜を分解するマトリクスメタロプロテアーゼ(MMP)種々阻害剤の実際の効果を試すことができた点は計画以上の進捗である。これらより、おおむね順調な進行と評価した。細胞分化、増殖、移動等を調節する超分子複合体としての基底膜の機能を明らかにするために、基底膜の拡張やターンオーバーが亢進している発生期の唾液腺を例にとり、基底膜の動態を高精細にタイムラプス観察するシステムの構築を試みた。基底膜を標識するためのツールとして、共同研究者の関口、二木らによって開発されたEGFP標識ナイドゲン-1(EGFP-hNid1)に着目した。EGFP-hNid1を器官培養系に添加するだけで、短時間(15分以内)に顎下腺上皮基底膜がライブ蛍光標識されることが示され、当初の目的の1つである基底膜ライブ観察システムを構築することができた。基底膜の標識は6時間以上に亘り安定であり、このシステムは基底膜の動態を観察できることが示された。また唾液腺のみならず、種々の器官系にも原理的に応用可能で基底膜研究に極めて有用なツールであると言える。次にこのツールを駆使し、分枝形態形成が進行中の顎下腺上皮の基底膜の動態とその調節機構を明らかにしようとした。顎下腺上皮の器官発生では初め大きな集団をなしていた上皮遠位部の終末集塊に裂け目(クレフト)が形成され、この侵入により、上皮組織が分割される。この過程が1次、2次と進行し、やがて複雑に分岐した導管系とそれぞれの先端の終末部が形成される(分枝形態形成)。従来の申請者らの研究により、クレフトの侵入には、その部分を覆う基底膜の伸長を伴うことが判っている。分枝形態形成が進行中の顎下腺上皮では、基底膜の沈着パターンとクレフト形成に興味深い関連性を認めたものの、その詳細については今後の検討にゆだねられた。また、この様な基底膜の動的性質をもたらす基底膜分解システムを明らかにしようと試みたが、MMPと基底膜分解との強い関連を示す結果は得られなかった。計画に基づいて、基底膜分解にはたらくマトリクスメタロプロテアーゼを明らかにする。この際、共焦点顕微鏡による観察は定量性に欠けることが問題となる。そこで、培養液中に予め既知の濃度のAlexa555ヒドラジドなどの細胞膜非透過性の蛍光色素をリファレンスとして共存させ、EGFPと同一励起波長(Alexa555はEGFP同様488nmでも励起される)で得られたAlexa555とEGFP蛍光強度の比を数値化する等して、各阻害剤の効果を半定量的に比較する。

解剖学(含む組織学)備品として試薬保存用冷蔵庫を購入したが、必要容量等を見積もりなおしたところやや小型の機種で十分との結論に達した。これにより物品費の支出に予定額との差額が生じた。また海外の学会での成果発表を予定していたものの、発表申し込みまでに十分な結果が出そろわず、本年度の成果発表を見送った。これにより、発表のための旅費分並びに英文要旨の添削に予定していた謝金分が差額として生じた。次年度は研究分担者への主に物品費として、20万円を分配する。研究代表者使用分としては、1)物品費としては簡易型倒立顕微鏡(50万円)、実験用マウス(@4000円x25匹)、培養用試薬(20万)、培養用プラスチック類(20万円)、各種阻害剤(25万円)で小計総額125万円、2)学会発表旅費として30万円、3)謝金として5万円、の合計を180万円の使用を計画している。
サル・モデルを用いた注意欠陥/多動性障害の要因の解明

注意欠陥/多動性障害(ADHD)、前頭連合野の機能異常、ドーパミン(DA)調節系の変化との間に密接な関係のあることが示されている。そこで、発達初期に前頭連合野で生じたDA調節系の変化がADHDの生物学的要因であると仮定し、これを検証するため、DA線維の神経支配を長期間にわたって阻害する作用をもつ6-OHDAを前頭連合野背側部に注入することにより前頭連合野のDA系を破壊した新生児サルを用い、ADHD児に見られる行動特徴(多動、集中力不足、衝動性、気分の易変性、落ち着きのなさ、無秩序性など)に類似した行動変化を示すかどうかを解析した。自発行動において多動傾向が観察されるかどうかを検討するため、ホームケージ内と小型のテストケージ内での行動量を測定したところ、対照群の無処置サルと比較して、6-OHDAの注入により前頭連合野のDA系を破壊したサルでは、明らかに行動量の増加が観察された。後者のサルでは、ケージ内での激しい回転運動が連続して観察されたが、前者のサルではこのような行動は観察されなかった。ADHDの有効な治療薬であるメチルフェニデート(MPD)の投与によりサルの行動に変化が見られるかどうかを調べたところ、後者のサルでは1.5mg/kg(体重)のMPDの経口投与により行動量の減少傾向が観察され、行動量の減少傾向が1日程度持続することが観察された。このように、6-OHDAの注入により前頭連合野のDA系を破壊したサルで多動傾向は観察された。次の課題として、注意障害や衝動性がこのようなサルで観察されるかどうかの確認が必要である。
認知心理学的手法を用いたカラー液晶モニタによる画像診断の臨床的安全性に関する研究

画像診断に用いる液晶モニタの性能を物理的測定と読影実験により評価し,頭部CT画像の診断について臨床的な安全性を検証した。頭部CT画像による脳梗塞の診断に用いるモニタは,医用画像の標準的なグレースケール(GSDF)でなくとも,パソコン用などのガンマ2.2で診断することが可能であると示唆された。また,反応時間測定というこの分野では用いられていない手法で読影実験を行ったが,このような方法においても画像評価を行えることがわかった。本研究は、医用画像の診断に用いる液晶モニタの性能評価に認知心理学的な手法を導入して、カラー液晶モニタによる画像診断の臨床的な安全性を検証した。実験は、実験(1)モニタ特性の物理的測定及び実験(2)ファントム画像(模擬画像)による認知心理学的な読影実験を行った。モニタは名古屋大学医学部附属病院で使用している液晶モニタを対象とし、医用画像表示用高精細液晶モニタ(高精細モニタ)と文字情報表示が中心の電子カルテ用液晶モニタ(汎用モニタ)を比較した。・実験(1)モニタの特性の物理的測定汎用モニタは高精細モニタと比較してグレースケール表示が異なり、頭部CT画像の脳実質のコントラスト分解能は良いことがわかった。これは、汎用モニタで表示されるグレースケールが、頭部CT画像脳実質の表示色のコントラスト分解能が良いことが理由で、コントラスト分解能が不良となる表示色もあった。他の部位、他の画像のモニタ表示についてはさらに評価が必要である。・実験(2)模擬画像による認知心理学的な読影実験コントラスト差の認知について汎用モニタと高精細モニタを比較するため、頭部CT画像の模擬画像を作成しモニタに表示させ、画像診断は医師である人が病巣を探す行動であることから、視覚探索の読影実験を行った。模擬画像は小さいコントラスト差の目標となるターゲットを探す画像を作成した。汎用モニタは実験(1)と同様に、高精細モニタよりも頭部CT画像脳実質のコントラスト差の認知が高かった。このような認知心理学的な視覚探索実験で画像評価を行ったが、画像診断に用いるモニタの評価を行えた。頭部CT画像の脳実質内において、正常組織と病巣など小さなコントラスト差の区別は、高精細モニタより汎用モニタの方が良好であると予測できた。近年の医用画像は,フィルム読影からモニタによる画像診断(以下,モニタ診断)に変わっている。モニタ診断には,医用高精細モニタ(以下,医用モニタ)が使用されるが,電子カルテなどでは文字閲覧を主目的としたパソコン用などの汎用モニタ(以下,汎用モニタ)で画像を表示することもある。このため,汎用モニタで表示することの臨床的安全性を検討することは,誤診などを招かない環境作りとして重要である。そこで,液晶モニタによる画像診断の臨床的安全性を検討するため,昨年度までに,モニタ特性の物理的測定と模擬画像による読影実験にて,医用モニタと汎用モニタを比較し頭部CT画像の診断について検討を行った。今年度は,実際の頭部CT画像を用いて,同様の検討を目的として読影実験を行った。医用モニタとiPadによる頭部CT画像の脳梗塞検出能を比較するため,100症例の頭部CT画像(健常50例,脳梗塞を含む50例)を,9人の放射線科医師で読影実験を行った。医用モニタは,DICOM用のグレースケールGSDF(以下,GSDFモニタ)と汎用モニタで使用されるグレースケールのガンマ2.2(以下,ガンマモニタ)に調整し,iPadの3種の液晶モニタを比較した。データ解析には,ROC解析を用いた。ROC曲線下面積は,GSDFモニタ0.862,ガンマモニタ0.872,iPad 0.824であった。GSDFモニタおよびガンマモニタのROC曲線下面積は,統計的有意差は認められなかったが,iPadとGSDFモニタおよびガンマモニタのROC曲線下面積は,それぞれ統計的有意差が認められた(p<0.05)。頭部CT画像の読影は,GSDFとガンマ2.2のグレースケールによる差はなく,どちらのグレースケールでも読影に問題はないと考えられる。また,iPadによる読影は,臨床的な安全性が低いことが示唆された。
データ・マイニングによるC型慢性肝炎・肝細胞癌の病態解明とその臨床応用

1. 1992年から2003年までインターフェロン療法を行ったC型慢性肝炎症例1241例を対象とし、インターフェロン療法著効を目的変数とするデータ・マイニング解析を行った結果、ゲノタイプ、ウイルス量、ISDR変異数、年齢、性別、AFP値、アルブミン値、AST値、ヘマトクリット値、血小板数、コレステロール値、血糖値が説明変数として同定された。今回データ・マイニング解析により個々の患者における治療効果予測が可能になり、その対策が個別に可能となると考えられた。2.しかし、PEG-IFN/ribavirin(RBV)併用療法の約20%は依然治療中HCVが減衰しない不応例(NVR)であり、この機序は不明で治療前予測も困難である。HCV排除には自然免疫が重要であることから、今回さらに自然免疫系と治療効果との関連について臨床検体を用いて検討した。PEG-IFN/RBV併用療法を施行した1b高ウイルス量のC型慢性肝炎を対象とし、治療直前の生検肝組織における自然免疫系分子のmRNA発現をRTD-PCR法により定量したところ、C型慢性肝炎におけるRIG-I、MDA5、LGGP-2、ISG15およびUSP18などの自然免疫系分子の肝内発現量は、非HCV肝疾患に比し2-8倍高値であった。これらの遺伝子発現は、NVR群でSVR群に比し有意に1.5-4倍高発現していたが、IPS-1とRNFl25はNVR群で有意に低発現で、特にRIG-I/IPS-1比またはRNFI25比はNVRと関連を認めた(NVR:SVR=1.3:0.4、2.3:0.8)。従って、RIG-I/IPS-1系を中心とする自然免疫に係る遺伝子発現はHCV抵抗性と密接に関与しており、これらの解析は治療効果予測に有用と考えられた。1.1992年から2003年までインターフェロン療法を行ったC型慢性肝炎症例1241例を対象とし、インターフェロン療法著効を目的変数とするデータ・マイニング解析を行った。その結果、ゲノタイプ、ウイルス量、ISDR変異数、年齢、性別、AFP値、アルブミン値、AST値、ヘマトクリット値、血小板数、コレステロール値、血糖値が説明変数として同定された。予測著効率がもっとも高かったのは、ゲノタイプ1b、ISDR変異数3以上、かつアルブミン4.25以上のセグメントで著効率は82%と予測された。反対にもっとも低かったのは、ゲノタイプ1b、ISDR2個以下、ウイルス量100KIU/mL以上、年齢60歳以上、かつAFP20以上のセグメントで予測著効率は0%であった。予測著効率の高かった上位10%のセグメントには、実際の著効例の70%が含まれており、モデルの判別性は優れていた。交差検証による予測制度平均は75%、予測誤差は1%であった。2.1と同様の対象において経過中の発癌を目的変数として発癌と関連が深い説明変数をデータ・マイニング解析により抽出した。その結果、ゲノタイプ、年齢、性別、肝線維化ステージ、AFP、アルブミン値、ヘマトクリット値、血小板数、MCV、コレステロール値、インターフェロン治療回数、インターフェロン投与量が説明変数として同定された。予測発癌率がもっとも高かったのは、AFP25以下、アルブミン4未満、肝線維化F2以上、かつ年齢70歳以上のセグメントで予測発癌率は45%であった。予測発癌率が高かった上位10%のセグメントには、実際の発癌例の70%が含まれておりモデルの判別効率は優れていた。

今回データ・マイニング解析により個々の患者における治療効果予測が可能になり、その対策が個別に可能となると考えられた。また、発癌高危険群を絞り込み、個々の患者における危険度に応じた対策が個別に可能となると考えられた。1.1992年から2003年までインターフェロン療法を行ったC型慢性肝炎症例1241例を対象とし、インターフェロン療法著効を目的変数とするデータ・マイニング解析を行った結果、ゲノタイプ、ウイルス量、ISDR変異数、年齢、性別、AFP値、アルブミン値、AST値、ヘマトクリット値、血小板数、コレステロール値、血糖値が説明変数として同定された。2.しかし、PEG-IFN/ribavirin(RBV)併用療法の約20%は依然治療中HCVが減衰しない不応例(NVR)であり、この機序は不明で治療前予測も困難である。HCV排除には自然免疫が重要であることから、今回さらに自然免疫系と治療効果との関連について臨床検体を用いて検討した。PEG-IFN/RBV併用療法を施行した1b高ウイルス量のC型慢性肝炎を対象とし、治療直前の生検肝組織における自然免疫系分子のmRNA発現をRTD-PCR法により定量したところ、C型慢性肝炎におけるRIG-I、MDA5、LGP-2、ISG1-5およびUSP18などの自然免疫系分子の肝内発現量は、非HCV肝疾患に比し2-8倍高値であった。これらの遺伝子発現は、NVR群でSVR群に比し有意に1.5-4倍高発現していたが、IPS-1とRNF125はNVR群で有意に低発現で、特にRIG-I/IPS-1比またはRNF125比はNVRと関連を認めた(NVR: SVR=1.3:0.4、2.3:0.8)。従って、RIG-I/IPS-1系を中心とする自然免疫に係る遺伝子発現はHCV抵抗性と密接に関与しており、これらの解析は治療効果予測に有用と考えられた。
独立成分分析を用いた脳機能画像解析法の実用化

平成22年度は、独立成分分析(ICA)を用いた脳機能画像解析法の実用化として、近年注目をされている近赤外スペクトロスコピー(NIRS)を用いた脳機能計測にICAの適用を試みた。NIRSによる脳機能計測では、信号に混入する皮膚血流信号の影響が問題とされ、これを脳活動由来の信号と分離除去する方法が模索されてきた。従来のICAを用いた方法では、脳機能活動は局所的に起るのに対し、皮膚血流の変動は広範に生じるという仮定の元に、空間的に広範囲に寄与している独立成分を皮膚血流成分とみなし、NIRS信号からこれを差し引くというものである。しかし、広範囲に寄与する成分が皮膚血流信号であるという生理学的根拠はない。また、各測定チャンネルのヘモグロビンの動態を観察するには、oxyHbとdeoxyHbの両信号をセットで解釈する必要があるが、従来法では片方の信号へのICAの適用しかなされていない。そこで我々は、これらの問題を補う新たな皮膚血流除去法を提案した。通常間隔の送受光プローブ(30mm)に加え、皮膚層のみを光が通過する短い間隔のプローブ(5mm)でのNIRS信号(5mmNIRS信号)、およびDoppler皮膚血流(Doppler信号)による皮膚血流の同時計測を行った。解析ではまず、5mm間隔のものも含めたNIRSの各チャネルについて、oxyHb信号とdeoxyHb信号を連結しICAを施した。次に、5mmNIRS信号への各独立成分の寄与順(混合行列の要素で表される)に独立成分の重みつき累積和を計算した。続いて、Doppler皮膚信号と各累積和の相関係数を求めた。さらに、その相関係数が基準を越える累積和を皮膚血流を反映した信号とみなし、観測信号から差し引いた。最終的に求まった連結波形からoxyHb信号とdeoxyHb信号の部分に分割した。これにより皮膚血流成分が良好に除去されることが確認された。平成20年度は、実験・解析環境の整備を行うとともに、健常被験者を用いて実験を行い、実験課題のデザインおよびICAアルゴリズムの改良を検討することを目的とした。まず、音声刺激の作成ツールや、データ保存機器、数値計算用ワークステーション等の機器をそろえ、実験・解析環境を整えた。また、健常被験者に対し次の言語課題実験を行った。fMRI計測中、被験者はヘッドフォンから1から10の数がランダムな順序で16秒おきに読み上げられるのを聞き、実験前に自ら決めた数を聞いた際には次の数が読まれるまで、心の中で早口言葉を繰り返し唱えた。このデータにICAを適用し、ブローカ野に顕著な値を持つ独立成分に対する時間波形のピーク時刻から、被験者が思い浮かべていた数字を高確率で当てることが出来た(94%,8名)。この結果は、ICAが脳活動パターンの事前予想が困難な課題に有効であることを言語課題により具体的に示したものであり、本研究の目的である患者を対象とした受容言語課題の客観的評価法の開発に大きなステップとなった。この成果の一部は当研究室メンバーにより、第10回日本ヒト脳機能マッピング学会にて口頭発表された。また、解析法の改良については、前処理として、各時点の画像データごとに空間フィルターを施すとともに、各ボクセルごとに時間軸方向に時間フィルターを施し、血流動態の時定数では起こりえない高周波数成分を取り除いた。この工夫により、独立成分の分離が圧倒的に改善されることがわかった。ICAアルゴリズム自体の改善は、様々な分野での応用例を調査し、我々のデータへの適用を試みているが成果には至っておらず、来年度に引き続き行いたい。平成21年度は、独立成分分析(以下、ICA)をfMRIデータに適応する方法の改善の検討を進めた。我々は先年度までに、fMRI計測中に被験者が早口言葉を心の中で唱えたタイミングをICA解析により高確率で当てる実験を行い、ICAが脳活動パターンの事前予想が困難な課題に有効であることを言語課題により具体的に示した(論文はrevision中)。しかし、その解析の過程において、意味づけ可能な独立成分(ノイズ成分も含む)に分離するための最適な独立成分の数をどのように設定するのかという問題が残った。先行研究では独立成分の数を全撮影ボリュームの半分に取る方法や、情報量基準による方法が知られているが、我々のデータに対しては、必ずしもうまくいかないケースがみられた(意味づけ不能な成分に分離された)。そこで今回、解析区間を短く限定してICAを施したところ、改善する傾向がみられた。このことから問題の原因のひとつは、被験者によっては空間的な脳活動パターンの多様性が高い場合があり、全撮影ボリュームに対し一度にICAを施すには無理がある場合があるものと推測した。そこで改善策として、データを小区間に分割して、各区間に対しICAを適用し、推定された各小区間の独立成分に対し多次元尺度法を施してクラスターに分類して小区間の間での独立成分の対応づけを行う、という方法を考案した。また、ICAの符号の不定性も大きな原因であると推測した。つまり、ICAでは独立成分の各ボクセルが正負の値をとり、さらには鏡映変換が許されているので、データを分解する自由度が極めて高くなり、意味づけが困難な脳活動パターンも分離されてくるものと考えた。これに対しては、データを非負の範囲に制約する非負行列因子分析の手法が有用であると考えており、現在検討を進めているところである。

平成22年度は、独立成分分析(ICA)を用いた脳機能画像解析法の実用化として、近年注目をされている近赤外スペクトロスコピー(NIRS)を用いた脳機能計測にICAの適用を試みた。NIRSによる脳機能計測では、信号に混入する皮膚血流信号の影響が問題とされ、これを脳活動由来の信号と分離除去する方法が模索されてきた。従来のICAを用いた方法では、脳機能活動は局所的に起るのに対し、皮膚血流の変動は広範に生じるという仮定の元に、空間的に広範囲に寄与している独立成分を皮膚血流成分とみなし、NIRS信号からこれを差し引くというものである。しかし、広範囲に寄与する成分が皮膚血流信号であるという生理学的根拠はない。また、各測定チャンネルのヘモグロビンの動態を観察するには、oxyHbとdeoxyHbの両信号をセットで解釈する必要があるが、従来法では片方の信号へのICAの適用しかなされていない。そこで我々は、これらの問題を補う新たな皮膚血流除去法を提案した。通常間隔の送受光プローブ(30mm)に加え、皮膚層のみを光が通過する短い間隔のプローブ(5mm)でのNIRS信号(5mmNIRS信号)、およびDoppler皮膚血流(Doppler信号)による皮膚血流の同時計測を行った。解析ではまず、5mm間隔のものも含めたNIRSの各チャネルについて、oxyHb信号とdeoxyHb信号を連結しICAを施した。次に、5mmNIRS信号への各独立成分の寄与順(混合行列の要素で表される)に独立成分の重みつき累積和を計算した。続いて、Doppler皮膚信号と各累積和の相関係数を求めた。さらに、その相関係数が基準を越える累積和を皮膚血流を反映した信号とみなし、観測信号から差し引いた。最終的に求まった連結波形からoxyHb信号とdeoxyHb信号の部分に分割した。これにより皮膚血流成分が良好に除去されることが確認された。
悪性髄膜腫の治療抵抗性獲得の機序と悪性転化の原因について

治療に関しては、1例を除いたatypical meningioma全例に放射線療法を施行し、全例5年以上現在まで再発は認めず、atypical meningiomaでは例え残存腫瘍があっても放射線療法は有効であることが示された。放射線療法を施行しなかったatypical meningiomaは、初回手術(全摘出術)後9ヶ月で再発を認めた。Anaplastic meningiomaには全例放射線療法を行ったが、繰り返す再発を抑えることはできなかった。また、anaplastic meningiomaで免疫染色上認められたp53 proteinは、1.mutant p53を認識すると言われているPAb240 monoclonal antibodyでは検出されないこと、2.最もmutationが多いとされるexon5からexon8の間ではPCRによるSSCP analysisにて明かなp53 gene mutationが見られなかったこと、以上の2点からmutant-typeではなく機能を喪失しstabilizeしたp53 proteinであると考えられた。c-myc monoclonalantibodyを用いた免疫染色でも、atypicalおよびanaplastic meningiomaのみでc-myc proteinの発現が認められており、p53 stabilizationが起こる前にc-mycの発現が起こりmeningiomaの悪性化に関与してくる可能性が示唆された。
顎骨骨質診断法開発のための基礎的研究

老年性骨粗鬆症モデルマウス(SAMP6)の下顎骨が骨粗鬆症様の骨の性質を有する可能性を組織学的および生化学的に検証した.コントロールマウス(SAMR1)と比べると,SAMP6の下顎骨は骨形態計測学的に骨量が少なく,骨基質の透過型電子顕微鏡像で明らかなコラーゲン線維の狭小化が認められた.両マウスの下顎骨の骨基質の生化学分析によると,その大部分はI型コラーゲンであった.SAMP6の下顎骨は,SAMR1に比べ,基質中のコラーゲン量が少なく,またコラーゲンの翻訳後修飾の一つであるハイドロキシリシンの量が多く認められた.リシンのハイドロキシル化が亢進するとコラーゲン線維の狭小化が起こることが報告されており,SAMP6の下顎骨のコラーゲンに認められるコラーゲン線維の狭小化はおそらくリシンのハイドロキシル化の亢進が関与しているものと推察された.リシンのハイドロキシル化の亢進は,同マウスおよび骨粗鬆症患者の大腿骨でも認められることが報告されており,骨粗霧症の骨質に大きく関与するコラーゲン性状に,コラーゲン翻訳後修飾の一つであるリシンのハイドロキシル化が寄与している可能性が示唆された.本研究の結果から,老年性骨粗鬆症モデルマウスの下顎骨は骨量的にも骨質的にも骨粗鬆症様の性質を有していることが明らかとなった.骨粗鬆症患者の顎骨も量的のみならず質的に低下している可能性が考えられ,今後の臨床研究により骨粗鬆症患者での傾向を明らかにしていくとともに,ゲノム解析による骨質診断法の確立とそれに対応した歯科治療の開発へと発展させていける可能性が見出せた.老年性骨粗鬆症モデルマウス(SAMP6)の下顎骨が骨粗鬆症様の骨の性質を有する可能性を組織学的および生化学的に検証した.コントロールマウス(SAMR1)と比べると,SAMP6の下顎骨は骨形態計測学的に骨量が少なく,骨基質の透過型電子顕微鏡像で明らかなコラーゲン線維の狭小化が認められた.両マウスの下顎骨の骨基質の生化学分析によると,その大部分はI型コラーゲンであった.SAMP6の下顎骨は,SAMR1に比べ,基質中のコラーゲン量が少なく,またコラーゲンの翻訳後修飾の一つであるハイドロキシリシンの量が多く認められた.リシンのハイドロキシル化が亢進するとコラーゲン線維の狭小化が起こることが報告されており,SAMP6の下顎骨のコラーゲンに認められるコラーゲン線維の狭小化はおそらくリシンのハイドロキシル化の亢進が関与しているものと推察された.リシンのハイドロキシル化の亢進は,同マウスおよび骨粗鬆症患者の大腿骨でも認められることが報告されており,骨粗霧症の骨質に大きく関与するコラーゲン性状に,コラーゲン翻訳後修飾の一つであるリシンのハイドロキシル化が寄与している可能性が示唆された.本研究の結果から,老年性骨粗鬆症モデルマウスの下顎骨は骨量的にも骨質的にも骨粗鬆症様の性質を有していることが明らかとなった.骨粗鬆症患者の顎骨も量的のみならず質的に低下している可能性が考えられ,今後の臨床研究により骨粗鬆症患者での傾向を明らかにしていくとともに,ゲノム解析による骨質診断法の確立とそれに対応した歯科治療の開発へと発展させていける可能性が見出せた.骨髄からの遺伝子発現量の分析は,顎骨の骨質の診断につながる可能性がある.Lysyl hydroxylase (LH)はコラーゲン分子間の架橋構造形成を担う酵素であり,結果的に骨質の決定に関わる可能性のある因子である.本年度は,潜在的に異なる骨質を有する老化促進マウスの下顎骨と大腿骨の骨髄におけるLHの遺伝子発現パターンを調べ,また骨芽細胞の分化マーカーであるI型コラーゲン(COLI)とアルカリフォスファターゼ(ALP)の発現パターンとも比較した.老化促進マウスは,老年性骨粗鬆症モデルのSAMP6,変形性顎関節症モデルのSAMP8,およびコントロールのSAMR1を用いた.遺伝子発現量は,それぞれの分子に特異的なプライマーを用いたリアルタイムPCR法によって測定した.COLI, ALP,とLH2は大腿骨骨髄に比べて下顎骨骨髄において高い発現量を示した.下顎骨骨髄のCOLIの遺伝子発現パターンが,3種類のマウス間で相違が認められ,SAMR1,SAMP8,SAMP6の順に高い値であった.下顎骨骨髄と大腿骨骨髄の双方において,COLIとLH1間およびALPとLH2間の遺伝子発現に高い相関が認められた.本法により,LH1とLH2の遺伝子発現パターンが骨芽細胞の分化マーカーのそれらと相関していたことから,骨髄による検討でも骨芽細胞に関わる因子の検出が可能であることが判明した.3種類のマウス間でのLHの発現パターンに相違が認められなかったことから,今後骨髄からの培養により誘導された骨芽細胞による検討およびLH2aとLH2bをさらに因子に加えた検討が必要であると考えられた.顎骨骨質診断は歯科治療前および予後診断の向上をもたらし,歯科医療を画期的に科学的な方向へと進展させうる.しかし,骨質診断には骨の基質成分であるコラーゲンの架橋構造の分析と骨の結晶化度を測定せざるをえず,ヒトへの応用には現状で非常に困難である.

臨床研究の前に,骨の老化変化が異なる動物モデルを用いた全身骨と顎骨の関係を明らかにする必要がある.本年度は,老化促進モデルマウス(SAM)の中でも,老年性骨粗鬆症を呈するSAMP6,骨粗鬆症は呈さないSAMP8および老化促進現象を呈さないSAMR1の大腿骨と下顎骨の組織学的所見を比較することにより,両骨の老化変化の関係を検証した.皮質骨の幅は,SAMR1と比べてSAMP6の大腿骨と下顎骨の両方とも相違が認められなかったが,SAMP8では両骨ともに大きな値を示した.海綿骨では,SAMR1と比べて,SAMP6の大腿骨と下顎骨の両方において骨面積の狭小化が認められたのに対して,SAMP8では大腿骨において骨面積の狭小化が認められた反面,下顎骨では骨面積の増大化が認められた.また,海綿骨における骨芽細胞と破骨細胞の密度では,SAMR1と比べて,SAMP6では大腿骨での骨芽細胞の減少と下顎骨での破骨細胞の増加が認められたのに対し,SAMP8では下顎骨での破骨細胞の減少のみが認められた.これらの結果から,SAMP6は下顎骨においても骨粗鬆症様老化を呈し,SAMP8では大腿骨でも下顎骨でも骨皮質が太くなる老化現象を呈することが判明した.また,これらの3種類のマウスの比較から,下顎骨の老化は,皮質骨に関しては大腿骨の老化と同様な組織所見を呈するが,海綿骨においては少なからず組織学的に異なる老化所見を呈する可能性が示された.以上より,SAMは全身骨との比較が検証できる,顎骨骨質診断法の開発のための有益なモデルマウスであることが示された.老年性骨粗鬆症患者は抜歯後の急速な歯槽骨の吸収をきたすなど少なからず歯科医学的にも問題となっているが,骨粗霧症患者の顎骨が骨粗霧症の性状を呈しているか否かについては議論の最中である.本年度は,老年性骨粗霧症のモデルマウスであるSAMP6とそのコントロールマウスであるSAMR1を用いて,SAMP6の下顎骨が骨粗霧症様の性状を呈している可能性を明らかにするために,骨の構造学的および材料学的見地から,それぞれ骨形態計測学的検証およびコラーゲン生化学的検証を試みた.6ヶ月齢SAMP6はSAMR1に比べ,下顎枝の皮質骨が薄く,歯槽骨の海綿骨量も少なかったことから,SAMP6の下顎骨は組織学的に骨粗鬆症様構造を呈していることが判明した.骨基質蛋白中に占めるコラーゲン量の割合も,SAMP6はSAMR1に比べ少なかったことから,SAMP6の下顎骨は材料学的特性としても弱い可能性が示唆された.また,コラーゲンのリシン基の水酸化が,SAMR1に比べSAMP6では多かった.水酸化したリシン基には糖鎖が結合しやすく,結合した糖鎖が多くなるとコラーゲン線維が細くなる現象が起こることが明らかにされていることから,おそらく,SAMP6の下顎骨のコラーゲンは線維が細いことが推測され,力学的に弱い可能性が考えられた.以上のことから,老年性骨粗霧症患者の顎骨は,全身骨と類似して構造学的および材料学的見地から,骨粗霧症様の骨性状を呈している可能性が示唆された.昨年度,老年性骨粗霧症モデルマウス(SAMP6)の下顎骨の生化学的検証により,骨粗鬆症マウスの顎骨は骨基質中に占めるコラーゲン量が少なく,リシン基の水酸化が亢進していることが明らかとなった。本年度は,同マウス下顎骨のコラーゲン線維を透過型電子顕微鏡レベルで分析した。コントロールマウス(SAMR1)に比べ,SAMP6のコラーゲン線維は直径が有意に大きかった(n=1,000,p<0.01)が,一定面積あたりのコラーゲン線維の本数に相違は認められなかった。これらの結果から,SAMP6の下顎骨骨基質中に占めるコラーゲン量の低下は,コラーゲン線維が細くなっていることによって起こっていることが強く示唆された。また,ピクロシリウスレッド染色切片を偏光顕微鏡で観察したところ,SAMR1では骨基質がオレンジ色から赤色を呈するのに対し,SAMP6では黄色から緑色を呈していた。
バーシカンコンドロイチン硫酸の生体内機能

バーシカンは細胞外マトリックスに存在する巨大なコンドロイチン硫酸(chondroitin sulfate、CS)プロテオグリカンで、細胞外マトリックスのダイナミズムを司ると考えられている。本研究の目的は、バーシカンが持つCS鎖の生体内機能を解明することである。平成21年度の成果を以下に記す。発生期四肢の間葉系細胞に特異的にバーシカンの発現を欠損するPrx1-Cre/Cspg2<flox/flox>マウスを解析したところ、同変異マウスは正常に出生するが下肢足指の変形が観察された。組織学的解析から足指の変形の本体は異所性の肥大軟骨細胞結節の形成と関節表面の傾斜であり、これらの変異の原因が軟骨分化の遅延とこれによるInterzone(将来関節を形成する部位)の形成不全によることがわかった。バーシカン欠損による軟骨分化遅延機構を解析する目的でmicromass culture系を用いてシグナル分子やそのリセプターの分布を検討したところ、バーシカンがTGF-βの細胞外局在を制御するころが明らかとなった。当該機能はバーシカンのCS鎖によるものではないことがわかった(論文投稿中)。現在、バーシカンによるTGF-βシグナル制御機構を解析中である。CS鎖糖鎖骨格の合成に関与する糖転移酵素は現在6種類知られている。我々はこれらのうち3つの遺伝子酵素群のノックアウトマウスの作製と解析を遂行してきた。表現型は認められないか、あってもごく軽度であり、これらの観察結果は6種類の糖転移酵素に機能的相補性があることを示唆している。今後はこれらのマウスに病態を作製して表現型が出現するか否かを判定するとともにダブルノックアウトマウスの作製と解析を通じて酵素群の生体内における役割の解析を行う予定である。本研究の目的は、バーシカンのコンディショナルノックアウトマウスとG1-G3ドメインから成るバーシカンV3バリアントのトランスジェニックマウス(V3-Tg)、さらにCS合成酵素遺伝子の強制発現系を駆使して、バーシカンが持つCS鎖の生体内機能を解明することである。平成20年度には、(1)バーシカンコアタンパク質G1ドメイン内のAサブドメインを欠失させた同分子のノックアウトマウスから得られた胎児線維芽細胞が、細胞外ヒアルロン酸とCD44との結合を通じて行われるシグナル伝達の変化によって早老症の表現型を呈することを明らかにした。当該成果は二報の論文として報告した。(2)Prx1-Cre/Cspg2flox/floxマウスは正常に出生するが下肢足指の変形が観察された。組織学的には軟骨分化の遅延と関節表面の傾斜が認められた。これら表現型発症の機構については現在解析中である。(3)生後1-2週齢のCAG-CreER/Cspg2flox/floxマウスにタモキシフェンを腹腔内投与して成長期にバーシカン発現が欠失するマウスの作製を試みたが、生後1ヶ月齢のマウスにおいてはバーシカン遺伝子のゲノムに変化は見られなかった。現在、効率よくバーシカンを欠失させる方法を模索中である。
超臨界流体中における固体表面と分子の相互作用

不均一触媒反応などのように、固体表面が化学反応の大きな影響を及ぼす場合が少なくない。将来、超臨界流体を用いる化学反応プロセスでも固体表面が重要になることが予想されるので、そのための研究手段の確立と、基礎的知見を得ることを目的として研究を行った。1.測定手法の開発表面における分子の吸着状態を分子レベルで、かつin situに研究する手段として、表面増強赤外分光法を開発した。はじめに、大気中、ならびに水溶液の中の金属表面測定で測定技術を確立した。ついで、その測定原理を理論的に確立した。こうした基礎研究に基づき、新たに作製した高圧赤外分光セルを使用して、超臨界二酸化炭素中の銀表面に吸着した分子の吸着構造、ならびに配向状態の解析にはじめて成功した。2.本研究で得られた知見(1)今回測定した数種の分子では、銀表面における吸着構造は、大気中、溶液中の場合と変わらなかった。(2)圧力の増加に伴って、吸着量が増大した。これは、圧力により、超臨界流体中の溶媒和構造が変化するためであると推定される。(3)圧力による吸着分子の吸光度変化は認められなかった。これは、均一系の結果と異なる。(4)金属表面の汚染物が、超臨界二酸化炭素によって除去できる。よって、フロンに代わる洗浄剤として利用できる。(5)類似吸着分子のスペクトルの比較から、溶質と溶存分子との相互作用を検討することができ、溶媒和構造の詳細が、均一系よりも単純化された形で検討できる可能性がある。3.今後の課題超臨界流体中の表面反応をin situに追及する手段をほぼ確立できたので、今後、いろいろな表面反応が研究できる見通しがついた。ただし、表面状態、ならびに反応を如何にコントロールするかという課題が残っているので、今後さらなる検討を続ける。
癌周囲微小環境を構成する癌関連線維芽細胞を標的とした新たな肺癌治療の開発

腫瘍間質の大部分を占める線維芽細胞は癌関連線維芽細胞CAFと呼ばれ、正常部の線維芽細胞に比して活性化している。われわれは、CAFが癌細胞の悪性化・癌幹細胞様形質獲得に関与することを明らかにした。さらに近年、CAFによる免疫抑制ネットワークの形成が注目されている。今回、我々が考案した癌周囲微小環境再現モデルを用いて、肺癌微小環境を構築するCAFを抑制することで、癌細胞悪性化・癌幹細胞様形質獲得・免疫抑制ネットワークを制御することができるかを明らかにし、新たな肺癌治療の開発を提唱する。
高性能不斉触媒の開発を基盤とする不飽和有機化合物の高度分子変換

医薬品,香料,食品添加物,高機能性材料等に用いられる光学活性化合物をアルケン,ケトン,イミン等の安価な不飽和有機化合物の触媒的不斉還元によって効率的に製造するためには,触媒活性とエナンチオ選択性の両面で優れた特性を発現するキラル配位子が必要である。当研究室では先にメチレン架橋のP-キラルボスフィン配位子(略称:ミニホス)を開発し,その配位子としての有用性を示した。その高い有用性にもかかわらず,メソ体の生成を伴うために目的物の分離で合成収率が低い難点があり,この配位子自体は広く用いられていなかった。今回,合成法の改良を試みた結果,光学活性二級ホスフィンボランとP-キラルポスフィノ基を有するアルコールのスルホナート体との求核置換反応によって目的物が良好な収率で得られることを見いだした。この方法の特徴は,メソ体の生成を伴わないため目的物の分離が容易であることと,二つのカップリング原料を同一の原料より合成できることである。また,この手法によって非対称のミニホス配位子の合成も可能である。さらに,この手法を用いて新規な配位子である光学活性ビス(t-オクチルメチルホスフィノ)メタン(t-オクチルミニホス)を合成した。この配位子を代表的なロジウム錯体不斉水素化に用いた結果,ほぼ完璧なエナンチオ選択性(99.4%)の発現が観測された。この実験結果はこの配位子が光学活性アミノ酸の不斉合成に有用であることを示唆するものである。また,不斉水素化のみならず炭素-炭素結合形成反応等の様々な触媒的不斉合成に役立てられるものと期待される。アルケン,ケトン,イミン等の官能基炭素分子を触媒的不斉合成によって一挙に付加価値の高い光学活性化合物に変換する新しい手法を開発することを目的として,高効率・高エナンチオ選択性を発現するP-キラルホスフィン配位子の合成とそれらの不斉触媒能を検討した。配位子としては,先に合成したt-Bu-QuinoxP^*のt-ブチル基を1-アダマンチル基に替えたAd-QuinoxP^*を光学活性アダマンチルメチルホスフィンボランと2,3-ジクロロキノキサリンより合成した。この配位子は,パラジウム錯体触媒不斉炭素-炭素結合形成反応においてt-Bu-QuinoxP^*を上回る立体選択性(最高98.5%ee)を発現した。また,この配位子のパラジウム錯体の精密な立体構造を単結晶X線解析によって明らかにした。t-Bu-QuinoxP^*は空気中で安定で取り扱いが容易である点で広く用いられる可能性がある。この点に着目して,その実用的製造方法について検討し,最適な反応条件を確立した。さらに,企業との連携により大量に製造し,Sigma-Aldrich社を通して販売されることになった。t-Bu-QuinoxP^*の不斉触媒能をルテニウム錯体触媒不斉水素化で検討した結果,β-ケトエステルの水素化で99.9%eeの不斉収率で目的物が得られた。この水素化の基質適用範囲は広く,基質によってはBINAPやSEGPHOSを用いた場合よりも高いエナンチオ選択性が見られた。しかし一方において,不斉アザコープ転位等の反応においては化学収率,不斉収率ともに満足な結果は得られなかった。
「声」の創造とその系譜――現代作家ベケット、デュラス、サロートをめぐって

本研究は、現代作家サミュエル・ベケット(1906-1989)、マルグリット・デュラス(1914-1996)、ナタリー・サロート(1900-1999)の作品を分析対象に据え、三作家による多分野(小説、劇、映像等)に亘る「声」の表現の探究の独自性とその複雑な相互関係を、厳密な作品分析に基づいて解明し、文学における「声」の問題の重要性を明示することを目的とする。本年度は、言葉とイメージの関係を作家たちがどのように捉え、かれらが共通して、(1)なぜ抽象的な声の表現を必要としたのか、(2)かれらがいかにして声を(あるいは声をともなう言葉を)表現し、それがなにを可能にしたのか、以上の二点を基軸に、これまで個別に行った作品分析の成果を下地にした考察を展開した。かれらの作品を全体的かつ具体的に辿ると、言葉によるイメージの表現には(テクストであれ、映像作品であれ)、共通して、言葉への強い執着と紙一重の懐疑が出発点としてあり、それが、かれらの作品に、断片的で輪郭の不確かなイメージを、頻度を高めながら繰り返させる。この点に着目し、(1)そこにどのように声の問題がかかわっているのか、(2)書かれたテクストにおける声の扱い方と、劇や映画における物質的な声を扱う実験的試み、これら異なる声へのアプローチが、いかなる共通の一貫した意図によって進められたのかを明示し、(3)さらにはその意図が、晩年の作家たちを、いかなる声のエクリチュールに向かわせたのかを、とりわけ自伝的・伝記的要素の独特の組み込み方に着目しながら分析した。この過程に、作家ごとの表現方法の変遷と、その差異を明確化することで、かれらの作品が、いかに必然的なかたちで記憶の問題に結びついているのかも明らかになった。「声」の問題は、アウシュヴィッツ以後の世界ゆえに生じた問題として検討する視点が立てられるが、本年度は、ジャック・デリダやモーリス・ブランショの声にまつわる議論の再検討を詳細に行うことで多くの示唆を得、戦後文学という時代性のみに思考を還元せず、エクリチュールと記憶の問題に根底的にかかわる問題として、声にかんする哲学的な考察をより自由に展開できる足場ができたため、作家たちの試みを単純化することなく、より広い視点からとらえなおし、かれらの文学のありかたを通して、文学とはなにかを問い直すことができるようになった。学術振興会の研究員に採用され、補助金を受けることで、研究指導の委託の制度によって、パリ第八大学のブリューノ・クレマン教授のもと、フランスでの研究を進めることができ、また、これに付随して、フランス国立図書館およびフランス国立視聴覚研究所(INA)、そして、イギリスのレディングにあるアーカイブでのベケットの映像資料の調査を行うという、日本ではできなかったことが可能になり、非常に大きな意義があった(費用は学術振興会の研究遂行費でまかなった)。非常にコーパスの広いテーマ研究であるため、補助金交付期間終了後も、引き続き、残された課題を遂行し、発表していく必要がある。期間中、研究資料のひとつであるデュラスの短いテクストの翻訳を水声社刊行の『水声通信』(28号)にささやかながら寄稿することができた。また、日本での資料調査のために一時帰国した際には、指導教官からの提案を受け、所属する大学院フランス文学科の修士以上のすべての学生・研究者を対象に、本研究にかんする四十五分間の発表をする貴重な機会を得た。さまざまな時代・作家を扱う専門家たちを対象に、一般的かつ専門的な内容の発表を行ったことで、テーマ研究のひとつの可能性を打ち出すことができた。以上の翻訳および発表は、学会や雑誌への公の研究発表ではないため、項目11の欄には未記入だが(なお、同じ理由から、帰国費用は私費によった)、個別作家研究が主流の日本の研究者たちに、テーマ研究の可能性、重要性をうったえることができたという意味でも重要な意義を持ったと考えている。今後、より正式な形での発表を行うことを強く希望している。本研究は、ベケット(1906-1989)、デュラス(1914-1996)、サロート(1900-1999)の作品を分析対象とし、戦後文学に生まれた「声」の問題の重要性を明示することを目指す。今年度は、膨大かつ複雑な作品(小説・劇・映像作品等)の分析・整理を行い、「声」の問題の形成と展開の全体像を明確にとらえる作業にとりわけ重点を置いた。1.三人の作家の共通点として、以下の三点を確認した。1)彼らの作品に頻出する断片的で不確かなイメージのあらわれ方は、何らかの形で声を介することで、言葉が記憶に結びつくということに深い関係がある。2)60年代までの「いかにして書くか」という問題が、80年代になると、「いかにして言うか」という問題に置きかわる。3)「声」は、何かを表象する事への強い懐疑に由来する作品の抽象性に、辛うじて形を与え、それが読者・観客に、日常の記憶、感覚という些細な事柄に関する想像力を要請し、それが彼らの作品の独創性につながっている。2.(発表論文の成果として)60年代後半の彼らのテクストは、"発声性"を帯びはじめる。たとえば、デュラスの小説『イギリス人の恋人』(67)は、録音された声としてテクストが示され、それが小説を読む行為を(書く行為を)、あたかも"聞く体験"であるかのようにする。

この小説は、テクストへの変更はほとんど加えうれずに劇化され、小説において"沈黙のうちに聞かれた"テクストが、舞台の"肉声として聞かれる"ことになり、それが、抽象的な時間・空間を創出する。劇や映画における声の特殊な使用は、彼らの作品における声の抽象性、物質性をより高めていく。3.80年代には、物質的な声の時代は終わり、自伝的な、あるいは作家の声がほかの複数の声に紛れ込むような書き方へと移り、テクストには"呼びかけ"の要素が強まり、新たな小説の形を作り出す。それは、ベケットの『伴侶』(80)や、サロートの小説『きみは自分のことが好きではない』(89)において、人称の問題として顕著にあらわれる。本研究が提示する、複数の作家の作品の多様な分野を通してイメージ・記憶・想像力という戦後文学の大問題を具体的に考察することを可能にした「声」の問題は、現代文学研究に新たな展開をもたらすことと期待できる。本研究は、現代作家サミュエル・ベケット(1906-1989)、マルグリット・デュラス(1914-1996)、ナタリー・サロート(1900-1999)の作品を分析対象に据え、三作家による多分野(小説、劇、映像等)に亘る「声」の表現の探究の独自性とその複雑な相互関係を、厳密な作品分析に基づいて解明し、文学における「声」の問題の重要性を明示することを目的とする。本年度は、言葉とイメージの関係を作家たちがどのように捉え、かれらが共通して、(1)なぜ抽象的な声の表現を必要としたのか、(2)かれらがいかにして声を(あるいは声をともなう言葉を)表現し、それがなにを可能にしたのか、以上の二点を基軸に、これまで個別に行った作品分析の成果を下地にした考察を展開した。かれらの作品を全体的かつ具体的に辿ると、言葉によるイメージの表現には(テクストであれ、映像作品であれ)、共通して、言葉への強い執着と紙一重の懐疑が出発点としてあり、それが、かれらの作品に、断片的で輪郭の不確かなイメージを、頻度を高めながら繰り返させる。この点に着目し、(1)そこにどのように声の問題がかかわっているのか、(2)書かれたテクストにおける声の扱い方と、劇や映画における物質的な声を扱う実験的試み、これら異なる声へのアプローチが、いかなる共通の一貫した意図によって進められたのかを明示し、(3)さらにはその意図が、晩年の作家たちを、いかなる声のエクリチュールに向かわせたのかを、とりわけ自伝的・伝記的要素の独特の組み込み方に着目しながら分析した。この過程に、作家ごとの表現方法の変遷と、その差異を明確化することで、かれらの作品が、いかに必然的なかたちで記憶の問題に結びついているのかも明らかになった。「声」の問題は、アウシュヴィッツ以後の世界ゆえに生じた問題として検討する視点が立てられるが、本年度は、ジャック・デリダやモーリス・ブランショの声にまつわる議論の再検討を詳細に行うことで多くの示唆を得、戦後文学という時代性のみに思考を還元せず、エクリチュールと記憶の問題に根底的にかかわる問題として、声にかんする哲学的な考察をより自由に展開できる足場ができたため、作家たちの試みを単純化することなく、より広い視点からとらえなおし、かれらの文学のありかたを通して、文学とはなにかを問い直すことができるようになった。学術振興会の研究員に採用され、補助金を受けることで、研究指導の委託の制度によって、パリ第八大学のブリューノ・クレマン教授のもと、フランスでの研究を進めることができ、また、これに付随して、フランス国立図書館およびフランス国立視聴覚研究所(INA)、そして、イギリスのレディングにあるアーカイブでのベケットの映像資料の調査を行うという、日本ではできなかったことが可能になり、非常に大きな意義があった(費用は学術振興会の研究遂行費でまかなった)。