hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ドーピング規制薬物(アドレナリン受容体作動薬)の影響における分子機構の解明

ドーピング規制薬物である喘息治療薬のβ^2アドレナリン受容体作動薬の影響を解明するために、クレンブテロールの鏡像異性体の(+)-S-体と(-)-R-体を用いて,遺伝子及び蛋白質レベルで検討を行った。その結果,心臓と骨格筋の筋肥大を誘発するが受容体の少ない速筋への作用が大きく,核内転写調節因子の発現が筋によって異なること及び蛋白質の結果がmRNAの結果と同期しないことや(+)-S-体が骨の成長を強く抑制することを解明した。本年度は,成長期ラットにドーピング規制薬物(アドレナリン受容体作動薬)やフォルスコリンなどのc AMP関連の類似薬物を投与して心臓や骨格筋の肥大を誘導し,各組織に存在し核内調節因子に影響を及ぼすことが予測される因子(IGF-I・MyoD・yogenin・PGC-1など)や未分化幹細胞関連因子(Wnt・Notch・Jaggedなど)や蛋白合成と分解に関連する因子(Foxol・Atrogin・wwp1など)のmRNA量をリアルタイムPCR法により定量解析し、その作用の分子機構の解明に取り組んだ。その結果,アドレナリン受容体作動薬のクレンブテロールの鏡像異性体の(+)-S-体と(-)-R-体が骨格筋の速筋モデルの長指伸筋(EDL)と遅筋モデルのヒラメ筋(SOL)に対してどちらも筋肥大を誘導するもののその原因と考えられる核内転写調節因子の発現に異なる作用を有することを明らかにした。同時にこの鏡像異性体のうち(+)-S-体で骨の成長を抑制する作用が強く表れることをを明らかにした。これは,通常薬物がラセミ体((+)-S-体と(-)-R-体の混合型)として使用された場合に生じるサリドマイドのような副作用発生の危険を取り除き,薬物が安全に使用されるために必要な貴重な資料を提供するものであり,結果的に生じる筋肥大は同じであっても,そこに至る調節のシステムに直接作用する場合と間接的に作用すると言う異なった形で影響を及ぼすことが明らかとなり,安全な薬物使用のために,単なるパフォーマンス向上を目的とした安易な薬物使用を抑制する上で社会的にも意義あるものである。来年度は,筋線維タイプ移行に関わるmRNAの解析に加えてウェスタンブロット法を活用し蛋白質のレベルからもこれらの因子の変化の解明に取り掛かる予定である。本年度は,成長期ラットにドーピング規制薬物(アドレナリン受容体作動薬)のクレンブテロールの鏡像異性体の(+)-S-体と(-)-R-体が骨格筋の肥大と筋線維タイプ移行に関わるmRNAの定量解析に加えて、ウェスタンブロット法を活用し蛋白質レベルからも関連する因子の変化の解明に取り組んだ。さらにβ2アドレナリン受容体の遺伝子多型(SNP)がアドレナリン受容体作動薬にたいする反応の違いを示す可能性があるため、それらの解明に取り組んだ。その結果,アドレナリン受容体作動薬の鏡像異性体が骨格筋の核内転写調節因子の遺伝子発現に異なる作用を示し、蛋白質レベルでもmRNAと必ずしも同期しない変化があることを明らかにした。これらは特にアポトーシス関連の蛋白分解に関連する因子(Foxol・Atrogin)の量の調節差が速筋と遅筋で異なっていることがその一因であることが明らかとなった。これは,通常薬物がラセミ体として使用された場合に生じるサリドマイドのような副作用の危険性を除去し,薬物を安全に使用するために必要な貴重な資料を提供するものであり,人の場合では受容体のSNPで更に影響が異なる可能性があり、一層の検討が必要であることが認められ、結果的に生じる筋の変化は同じであっても,そこに至る過程で直接または間接的に作用すると言う複雑な形で影響を及ぼすことが明らかであり,本研究は安全な薬物使用のためには,単なるパフォーマンス向上を目的とした安易な薬物使用を防止する上で社会的にも意義あるものである。次年度は,最終年度であり、新たな培養系での資料追加と不足しているデータの補充を行い、これまでの成果をまとめ、学会発表および論文資料として取りまとめ、公開する予定である。本年度は最終年度であり,昨年までの成果で不足している部分の補充を行い,これまでの成果の一部をまとめ海外(USA)での学会発表を行った。成長期雄ラットにドーピング規制薬物(アドレナリン受容体作動薬)のクレンブテロールの光学異性体を投与して筋肥大を誘導し核内調節因子に影響を及ぼすことが予測される因子(IGF-1・IGF-2など)や未分化幹細胞関連因子(Pax3・Pax7・Notch1など)や蛋白合成と分解に関連する因子(wwp1など)のmRNA量をqRT-PCR法により解析し,その作用機序の解明に取り組んだ。また,薬物は遺伝子多型(SNP)により効果が異なるため,原因となる因子群のSNPの検討を行った。その結果,筋肥大を誘導するアドレナリン受容体作動薬のクレンブテロールの鏡像異性体の(+)-S-体と(-)-R-

体は速筋モデルの長指伸筋(EDL)と遅筋モデルのヒラメ筋(SOL)に対して,どちらも作用するが,その原因と考えられる因子群の発現は一定で無く異なる事を明らかにした。蛋白分解に関与するwwp1はSOLにおいて(-)LR-体で有意な減少が,EDLでは(+)-S-体と(-)-R-体ともに有意な減少が見られた。IGF-1ではEDLにおいて(-)-R-体で有意な増加,IGF-2ではSOLにおいて(+)-S-体で有意な増加が観察された。細胞分化に関わるPax3ではSOLにおいて(-)-R-体で有意な増加,Pax7ではEDLにおいて(+)-S-体で有意な増加,Notch1ではSOLにおいて(+)-S-体で有意な増加が観察された。このようにアドレナリン受容体作動薬の鏡像異性体が筋肥大関連因子群の遺伝子発現でそれぞれ異なる作用を示す事が,速筋と遅筋の筋肥大で異なる事の一因であることが明らかとなった。本結果は,多くの薬物がラセミ体として使用された場合の副作用発生の危険性を除外し,有効かつ安全に使用するために必要な資料となるものであり,安全な薬物使用のためには,単なるパフォーマンス向上を狙った安易な使用を防止する上で社会的にも意義あるものである。今回これらの因子群のSNPでの影響も一部検討したが時間と予算が不足し,今後の検討課題とした。
イネのアルミニウム耐性遺伝子の単離と耐性機構の解明

本年度は以下のような成果を得た。1.単離したイネアルミニウム感受性突然変異体als1を用いて、Morin染色などにより細胞内アルミニウムの濃度や局在性を調べた結果、野生型イネと比べ、変異体イネの根の皮層細胞内に高濃度のアルミニウムが観察された。50μMのアルミニウムで3時間処理して、野生型と変異体の根の先端(0-1cm)のアポプラスト液を採集し、アルミニウムの濃度を測定した結果、外液のアルミニウム濃度より高い濃度が検出されたが、野生型と変異型との間に顕著な差は認められなかった。2.単離したアルミニウム耐性遺伝子Als1の機能解析を行った。定量的RT-PCRでAls1の発現パターンを調べた結果、Als1遺伝子の発現はわずか2時間のアルミニウム処理によって誘導された。またアルミニウム処理濃度の増加に伴って、Als1遺伝子の発現量も増加したが、30μMで飽和になった。Als1遺伝子は根の先端だけではなく、基部にも発現していた。Als1の抗体を作成し、Als1の組織局在性を調べた結果、Als1は根の先端においてすべての細胞に、基部側において表皮細胞以外のすべての細胞に局在していた。またAls1プロモーターの制御下にAls1とGFPの融合遺伝子をイネに形質転換し、Als1の局在性を観察したところ、抗体染色と同じ結果を得た。しかも、Als1は細胞膜に局在していることを明らかにした。Als1はATP結合ドメンだけを有するABCトランスポーター様タンパク質をコードしていることから、Als1はアルミニウムの細胞内への進入もしくは細胞内に入ったアルミニウムを外へ排出することに関与している可能性がある。1.イネアルミニウム感受性突然変異体の特性解析単離したイネアルミニウム突然変異体als1とals2について生理的解析を行った。両変異体ともアルミニウムに対して高い感受性を示すが、他の金属例えばカドミウムやランタンに対する耐性は野生型と同程度であった。またhomopipesという緩衝液の存在下においても高いアルミニウム感受性を示すことから、根圏のpHの変化はイネのアルミニウム耐性機構ではないことを示している。さらに、根から分泌される有機酸の量をals1変異体と野生型コシヒカリと比較した結果、両系統ともアルミニウムに応答してクエン酸の分泌が認められたが、分泌量が少なく、また野生型と変異体との間に差が認められなかった。このことはクエン酸の分泌が変異原因ではないことを示している。2.イネアルミニウム耐性遺伝子のマッピングイネ突然変異体と野生型コシヒカリと交配し、得たF_2について遺伝解析をしたところ、als1とals2とも単一劣性遺伝子によって支配されていることが分かった。またals1とals2と交配して得たF_1のアルミニウム耐性を調べたところ、野生型と同程度の耐性を示したことから、als1とals2は異なる変異に起因することがわかった。さらに、原因遺伝子をマッピングするために、インド型イネ品種カサラスと交配し、F_2のマッピング集団を作った。SSRマーカーなどを用いてマッピングしたところ、Als1は6番染色体、Als2は12番染色体に座乗していることを突き止めた。
神経修飾系として働く終神経のGnRH細胞群の入出力回路とその進化

終神経には生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)を含有するニューロンが存在する。これら終神経のGnRH細胞は下垂体制御系ではなく、神経修飾系として行動に対する動機付けに関わると考えられている。しかしながらその機能の全貌はいまだ不明であり、その大きな原因の1つはこの神経系の入出力回路がよくわかっていないことである。終神経のGnRH系は魚類で特に発達しており、有用なモデルである。唯一スズキ型魚類において入力神経路の研究が存在するが、スズキ型魚類での知見が他の動物に共通であるのか不明である。出力系についても、GnRH作動性入力を受ける構造について、解剖学的に正確かつ詳細に記載した報告は存在しない。1)メダカとキンギョなどスズキ型魚種以外を材料として、終神経GnRH細胞への入力回路を調査した。その結果、スズキ型魚類に近縁なメダカではスズキ型魚類と共通の神経回路が存在することがわかった。一方、キンギョでは回路はかなり異なることがわかった。しかしながらこれまで明らかになった神経回路は、全て感覚情報を終神経GnRH系に送ることがわかった。なお、キンギョにおける終神経GnRH細胞への入力源は我々哺乳類の視床に相当する場所であり、終神経以外にもここから終脳の大脳皮質に相当する領域にも情報が伝えられる可能性が浮かび上がってきた。2)GnRH作動性入力を受けるニューロンはGnRH受容体を発現しているはずである。ドワーフ・グーラミーのGnRH受容体に対する抗体を作製し、その脳内分布を調べた。免疫陽性ニューロンは、主に視索前野と二次内臓感覚核に特にみられた。視索前野は性行動の制御に関わることが知られている。GnRH神経系は内臓感覚処理にも関与するのかもしれない。GnRHの受容体の脳内分布を調べるために必要な抗体作成が年度末に間に合わなかったため、今年度は研究目的のうち「終神経への入力回路の進化」を前倒して、これを中心課題にすえて研究を行った。1)コイ科魚類コイ科魚類は、代表者が入力回路を既に報告しているスズキ型魚類よりも古くに分化した、比較的"原始的"な魚類である。終神経GnRH細胞群の近傍にトレーサーを投与する実験を多数行なった結果、コイ科魚類では、スズキ型魚類で発達している被蓋-終神経核(感覚情報を終神経GnRH細胞に伝える)は存在しないことが示唆された。その一方で、間脳の糸球体前核群と呼ばれる部位(各種感覚を中継することが代表者らの研究でわかってきている)から、終神経GnRH細胞群に情報が送られることを示唆するデータが得られた(現在、このデータを含む論文を投稿中)。2)メダカメダカはスズキ型魚類には属さないがかなり近縁の種である。メダカにおいては、終神経GnRH細胞群の近傍にトレーサーを投与すると間脳と中脳被蓋の境界領域に逆行性標識細胞群が出現した。この細胞群を含む領域にトレーサーを投与すると、終神経GnRH細胞群に順行性の標識終末が見られた。すなわち、メダカには被蓋-終神経核に相当する神経核が存在することが明らかとなった。上記の今年度の成果によって、以下の2つが明らかとなったと言える。(1)少なくともコイ科魚類が進化した時点で、すでに感覚情報を終神経GnRH細胞群へと伝える神経路は存在していたらしい。(2)スズキ型魚類およびメダカの仲間を含む魚類(棘鰭類)が出現する時点あるいはその前に、被蓋-終神経核が分化/進化した。

コイ科魚類では、被蓋-終神経核に相当するニューロンが未分化な状態で糸球体前核に混在している可能性があり、当初予定していたよりも研究対象を広げて、さらに"原始的"な魚類でも研究することは有意義と思われる。実験研究については、GnRHの受容体に対する特異的な抗体を作成し、GnRH受容体の脳内分布を調べることに集中した。また研究発表については、コイ科魚類の終神経GnRH細胞群への入力源に関するデータを論文にして学術雑誌に投稿し、受理・掲載された。1)実験研究GnRHの受容体は、大きく2つのタイプに分類され、さらにサブタイプも存在する。代表者がこれまでGnRH神経系の研究対象の中心としてきたスズキ型魚類の3つのサブタイプに対する抗体を作成し、免疫組織化学的にその脳内分布を調べた。その結果、3つのGnRH受容体サブタイプ全てについて、免疫陽性ニューロンは視床下部の脳室周囲に存在することがわかった。また、若干反応性は低いものの視蓋前域にも陽性ニューロンが存在するらしい。さらにある特定のサブタイプでは視床下部に免疫陽性の線維が見られた。この結果は、GnRHがこれらの線維に対して作用して、伝達物質放出を制御している可能性を示唆しており、今後注目して検討すべきと考える。来年度は、好適な反応条件を決定して検索個体数を増やし、さらに詳細に受容体の分布を調べる予定である。2)研究発表コイ科魚類では、スズキ型魚類で発達している被蓋-終神経核(感覚情報を終神経GnRH細胞に伝える)は存在しないことが示唆された。その一方で、間脳の糸球体前核群と呼ばれる部位(各種感覚を中継することが代表者らの研究でわかってきている)から、終神経GnRH細胞群に情報が送られることを示唆するデータが得られた。このデータは国際学術雑誌に論文として掲載された。来年度はコイ科魚類以外の魚類でさらに検討を進めたいと考えている。1)昨年度作成したGnRH受容体に対する抗体を用い、スズキ型硬骨魚類であるドワーフ・グーラミーを材料として免疫組織化学を行なった。調査した3つの受容体サブタイプのうちGnRHR2は特徴的な分布をすることを示す予備的データを得ていたので、特にこのサブタイプに注目してその分布を徹底的に調査した。その結果、多数の免疫陽性細胞が視索前野に存在することが明らかとなった。視索前野には、GnRH細胞を含むさまざまな神経内分泌細胞が存在する。GnRHがGnRH細胞自身あるいは他の神経内分泌細胞に作用することにより下垂体制御に関わっていることを示唆している。免疫陽性細胞は二次内臓感覚核にも存在しており、内臓感覚の処理をGnRHが調節している可能性が考えられる。2)コイ科魚類では、間脳の糸球体前核群から終神経GnRH細胞群に情報が伝わることを示唆するデータを昨年報告した。今年度はこの糸球体前核群の線維連絡の詳細を調べた。その結果、外側糸球体前核は視覚、聴覚、側線感覚を受けることがわかった。おそらく、これら複数の感覚が終神経GnRH系の活動を制御していると考えられる。この研究成果は国際学術雑誌に論文として掲載された。また、糸球体前核群の神経回路についての考察を著書(分担)の一部にも紹介し、学会発表を行なった。3)今年度は新たに、軟骨魚類についての研究を行った。終神経GnRH細胞群への神経入力を調べるために、アカエイの終神経節にトレーサーを注入する実験を行なった。一般的な実験
非機能的要件を考慮した適応的移動コードのモジュール化手法

本研究の目的は,移動コードを用いて構成される,適応性を備えた分散ソフトウェアシステムを,効果的に開発するための技術の提案である.具体的には,コードの移動や,それにともなうコードの実行緩急の変化などにかかわる非機能的要件(non-functional requirements)を対象としたソフトウェアのモジュール化機構を提案する.本研究の成果は以下の通りであり,全て査読付き国際会議で発表している.1.自己反映計算にもとづく,移動コードのための耐故障・セキュリティ機構のモジュール化方式を提案した.耐故障性とセキュリティは非機能的要件の重要な例であるが,一般にモジュラーな形での導入は困難とされている.我々は個々の移動コードとノードに関する耐故障・セキュリティ機構を,実行時・ロード時の自己反映操作として設計し,Java上で動作するブロトタイプとして実装して評価を行った.2.我々は現在までに,非機能的要件を実現するための動的適応動作を支援するソフトウェアモデルDASとその記述言語LEAD++を設計・実装してきた.本研究では,動的適応をより簡潔かつ安全に記述するための枠組みとして,LEAD++による動的適応可能なコンポーネントシステムの実現を行った.具体的には,コンポーネントの構成とコンポーネントの振る舞いそれぞれを,安全性に関する制約条件のもとで実行環境の状態に応じて動的に変更できるようにした.本研究の目的は,移動コードを用いて構成される,適応性を備えた分散ソフトウェアシステムを,効果的に開発するための技術の提案である.具体的には,コードの移動や,それにともなうコードの実行緩急の変化などにかかわる非機能的要件(non-functional requirements)を対象としたソフトウェアのモジュール化機構を提案する.本研究の成果は以下の通りであり,全て査読付き国際会議で発表している.1.自己反映計算にもとづく,移動コードのための耐故障・セキュリティ機構のモジュール化方式を提案した.耐故障性とセキュリティは非機能的要件の重要な例であるが,一般にモジュラーな形での導入は困難とされている.我々は個々の移動コードとノードに関する耐故障・セキュリティ機構を,実行時・ロード時の自己反映操作として設計し,Java上で動作するブロトタイプとして実装して評価を行った.2.我々は現在までに,非機能的要件を実現するための動的適応動作を支援するソフトウェアモデルDASとその記述言語LEAD++を設計・実装してきた.本研究では,動的適応をより簡潔かつ安全に記述するための枠組みとして,LEAD++による動的適応可能なコンポーネントシステムの実現を行った.具体的には,コンポーネントの構成とコンポーネントの振る舞いそれぞれを,安全性に関する制約条件のもとで実行環境の状態に応じて動的に変更できるようにした.本研究の目的は,移動コードを用いて構成される,適応性を備えた分散ソフトウェアシステムを,効果的に開発するための技術の提案である.具体的には,コードの移動や,それにともなうコードの実行環境の変化などにかかわる非機能的要件(mobility aspects)を対象としたモジュール化機構を提案する.本年度の成果は以下の通りであり,全て査読付の国際会議で発表している.(1)自己反映計算にもとづく,移動エージェントの耐故障動作を対象としたモジュール化機構を提案し,そのプロトタイプの実装を行った.耐故障動作は非機能的要件のnon-trivialな具体例であるが,特に移動コードを用いるシステムではモジュラーな導入が難しいとされている.我々は以前に提案したhybrid group reflectivearchitectureを用い,個々のエージェント,およびエージェントとノードに関する耐故障動作のモジュール化機構を設計し,Java上のアプリケーションフレームワークとして実装した.本フレームワークに基いて実現されたエージェントは,何種類かの非ビザンチン障害に対応することが可能となった.(2)また,我々はこれまでに動的適応支援するソフトウェアモデルDASとその記述言語LEAD++を設計・実装してきた.今回,我々はDASによる動的適応をより簡潔に記述するための枠組として,LEAD++による動的適応可能なコンポーネントウェアの実現を試みた.具体的には,コンポーネント間の構成と各コンポーネント内部の振舞いのそれぞれを,実行環境の状態に応じて動的に変更することで,動的適応可能なコンポーネントウェアを実現する.本研究の目的は,移動コードを用いて構成される,適応性を備えた分散ソフトウェアシステムを,効果的に開発するための技術の提案である.具体的には,コードの移動や,それにともなうコードの実行環境の変化などにかかわる非機能的要件(non-functional requirements)を対象としたソフトウェアのモジュール化機構を提案する.本研究の成果は以下の通りであり,全て査読付の国際会議で発表している.1.自己反映計算にもとづく,移動コードのための耐故障・セキュリティ機構のモジュール化方式を提案した.耐故障性とセキュリティは非機能的要件の重要な例であるが,一般にモジュラーな形での導入は困難とされている.我々は個々の移動コードとノードに関する耐故障・セキュリティ機構を,実行時・ロード時の自己反映操作として設計し,Java上で動作するプロトタイプの実装を行った.2.我々は現在までに,非機能的要件を実現するための動的適応動作を支援するソフトウェアモデルDASとその記述言語LEAD++を設計・実装してきた.本研究では,動的適応をより簡潔に記述するための枠組として,LEAD++による動的適応可能なコンポーネントウェアの実現を行った.具体的には,コンポーネント間の構成と各コンポーネント内部の振舞いのそれぞれを,実行環境の状態に応じて動的に変更することで,動的適応可能なコンポーネントウェアを実現した.
インド・アーリア語子音結合の変化―――通時的・共時的視点から

初年度である平成29年度は検証する文献の選択と方法論の確立に費やしたが、29年度末から30年度始めにかけて中期インド・アーリア語最初期のアショーカ王碑文のうち、方言の違いが明確に現れている岩石詔勅を精査する、また、先行研究では得られなかった成果を出すため、岩石詔勅に見られる全ての子音結合を詳細に調査することに決めた。扱う方言は西部のギルナール・シャーフバーズガリー・マーンセーフラーと東部のカールシー・ダウリ・ジャウガダの6方言に絞り、ドラヴィダ語圏で東部方言と同じ特徴を示す南部のエーラグディー・サンナティは調査の対象から外した。まず着手したのが比較的数が多く西部・東部の違いが明確に現れているrを含む子音結合、次にyを含む子音結合に関する論考をまとめ、さらに唇音v mを含む子音結合・閉鎖音を含む子音結合に関する研究が進行中である(「研究実績の概要」参照)。さらに、rを含む子音結合の発達に関する論考において、古期インド・アーリア語のr+子音が北西部方言で音転換により子音+rとして表記されることに着目したが、アショーカ王碑文北西方言およびダーディック諸語に見られるrの音転換に関する論考が構想段階にある。扱う文献と対象となる現象を決めることができたので初年度の遅れを取り戻すことができた。「研究実績の概要」で挙げた投稿済み2本・準備中2本の論文でアショーカ王岩石詔勅の子音結合のタイプがほとんど網羅される。その他では鼻音+閉鎖音など鼻音で始まる子音結合の資料も現時点でほぼまとまっている。これにより岩石詔勅の全てのタイプの子音結合の発達を分析することになり、その結果をもとに子音結合のタイプや方言による発達の違いを精査する。閉鎖音+閉鎖音のように比較的安定して画一的な変化をたどる子音結合と、閉鎖音+鼻音のようにもともと子音結合自体不安定で多様な発達を示す子音結合、またそり舌化や口蓋化・音転換などを伴う発達などがどのような条件で起こり、方言によるどう異なるかを明確にする。アショーカ王碑文の北西方言およびダーディック諸語に見られるrの音転換に関する研究では、一般音韻論の観点からr音性が気音や鼻音性と同様、他の口腔内ジェスチャーと独立しているため、より安定した韻律位置に移動することにより音転換が生じたことを示す。本プロジェクトの最終段階として、中期インド・アーリア語の子音結合の変化を概観する。分析の基盤となるのはGoldstein and Fowler (2003)など調音音韻論、Blevins (2013)など進化音韻論の音声学に基づいた理論的枠組みに、最近ではGordon (2016)に代表される類型論研究の成果、および音韻現象が複数の独立した要因の相互作用により生ずるという最適性理論の知見も取り入れる。現時点で予測される結論は、中期インド・アーリア語では同化・弱化・音転換が結合した他に例をみない包括的な子音結合の変化がおこっているが、これは声や調音点の逆行同化・摩擦音の弱化・r音の音転換など、より小規模な多数の音韻過程の集積であり、一見特異な現象も一般的・自然な要因の相互作用から帰結することを明らかにしたい。中期インド・アーリア語では古期から引き継いだ多様な子音結合が母音挿入や語中の完全同化・語頭の子音削除により変化し、子音結合が重子音・鼻音と子音の連続・共鳴子音とhの連続に限定された。本プロジェクトではこの大規模な子音結合の変化がどのように起こったかを資料をもとに実証するのを目的とする。この目的のために最初期の中期インド・アーリア語および後に変化した一部の子音結合が無変化のまま残っている方言を検証することにより変化の過程をたどることができる。最初期の中期インド・アーリア語を代表するアショーカ王碑文は紀元前3世紀で南アジア各地から発見されており、石柱詔勅ではほぼ統一されたテクストで東部方言を代表するものであるのに対し、岩石詔勅では複数の場所で発見された同じ内容のテキスト間に様々な方言差が見られる。岩石詔勅はマガダ国を含む東部では音変化により子音結合がほとんど残っておらず、sv tvなど一部の子音結合が少数の語で見られるのみである。他方、西部では一部の子音結合は失われたものの東部で失われた数多くの子音結合が保持されている。それぞれの子音結合の発達が例外のない規則的な部分や一般的な傾向がある一方で、方言間の特徴がより一般的な形ではなく特定の子音結合の発達に基づいて定義され、さらに一つの方言で特定の子音結合の発達においてもバリエーションが見られる。アショーカ王碑文岩石詔勅のテキストを精査することにより、後の大規模な子音結合の変化は、上記のように一般的な傾向に必ずしも適合しないものも含めてより小規模な変化の蓄積により達成されたと考えるのが妥当である。特定のテキストの検証により中期インド・アーリア語全体を対象とする研究では得られない成果を目指す。平成29年度はサンスクリット語重子音化のデータ収集および解釈にあてる予定であったが、文献の成立時期と写本作成時期の時間差のため、重子音化について伝承の際元の状態が正しく保持された確証が現時点では得られない。したがって、当初の計画を見直し、古期から中期への過渡期であるパーリ語の原始仏典およびアショーカ王碑文の調査へと計画を変更した。プロジェクトの趣旨は古期から中期への子音結合の変化のメカニズムを解明することにあるので、この変更は目的を達成するためにはより有意義である。

「研究実績の概要」で述べたようにアショーカ王碑文の岩石詔勅では、一般に西部方言の方がより多くの子音結合を温存する傾向にあるが、子音と母音に挟まれたmやvから両唇閉鎖音が発達するという特徴的な変化が観察される。この変化は同化によって消失するはずのmまたはvが阻害音の後ろで閉鎖音に変化するもので、方言によって異なる子音結合が対象となる。例えば西部のギルナールの碑文ではtm, tv > tp; dv >dbの変化が見られるのに対し、北西部のシャーフバーズガリーとマーンセーフラーの碑文では規則的ではないもののsv, sm > spの変化があり、東部のダウリーとジャウガダの碑文では人称代名詞にsm > phの変化が、東部全体でhm > mbh, bhの変化が起こっている。この閉鎖音化は先行する阻害音による調音方法の同化が主とみられ、西部方言でより顕著であるが、語彙的な要因も識別される。現在、以上のような閉鎖音化に関する観察および論考を論文に纏めている。平成29年度中に論文を完成させる予定であったがいまだに進行中であるため、進捗状況は「やや遅れている」とした。遅れの原因は上記のように大きな方向転換をしたためで、初年度は方法論を模索・確立するのに十分な時間を費やすべきであると考える。初年度である平成29年度は検証する文献の選択と方法論の確立に費やしたが、29年度末から30年度始めにかけて中期インド・アーリア語最初期のアショーカ王碑文のうち、方言の違いが明確に現れている岩石詔勅を精査する、また、先行研究では得られなかった成果を出すため、岩石詔勅に見られる全ての子音結合を詳細に調査することに決めた。扱う方言は西部のギルナール・シャーフバーズガリー・マーンセーフラーと東部のカールシー・ダウリ・ジャウガダの6方言に絞り、ドラヴィダ語圏で東部方言と同じ特徴を示す南部のエーラグディー・サンナティは調査の対象から外した。まず着手したのが比較的数が多く西部・東部の違いが明確に現れているrを含む子音結合、次にyを含む子音結合に関する論考をまとめ、さらに唇音v mを含む子音結合・閉鎖音を含む子音結合に関する研究が進行中である(「研究実績の概要」参照)。さらに、rを含む子音結合の発達に関する論考において、古期インド・アーリア語のr+子音が北西部方言で音転換により子音+rとして表記されることに着目したが、アショーカ王碑文北西方言およびダーディック諸語に見られるrの音転換に関する論考が構想段階にある。扱う文献と対象となる現象を決めることができたので初年度の遅れを取り戻すことができた。現在アショーカ王碑文の、特に西部諸方言に見られる、阻害音と母音に挟まれたv mの閉鎖音化の現象を検証しているが、その後アショーカ王岩石詔勅に観察される様々な子音結合の発達の相違を検証する予定である。アショーカ王碑文では写本とは異なりテキストが改編されることはないだけでなく複数の場所で発見された同じテキスト間に方言差が見られ、いずれの場合も変化の経緯解明に有意義である。並行して、パーリ語の原始仏典で最古のスッタニパータの中でも古層に属する「八つの詩句の章」「彼岸に至る道の章」を検証しているが、こちらの方はまだ有意義な一般化に到達していない。アショーカ王碑文では西部方言により多様な子音結合が残っているが、同様に北西部方言であるガンダーラ語のダンマパダおよびスッタニパータ「犀の角」、およびそのパーリ語版との比較、さらに他の北西部方言であるニヤ・プラークリット語における子音結合の変化の調査を予定している。
ビーグル成犬における末梢動脈瘤モデル作成法の開発

ビーグル犬の末梢の動脈に血管内からのアプローチのみ(外科的侵襲を伴わない方法)で動脈瘤を作成するための至適条件を検討した。次に、コントロール群と至適条件を適用した群に分けて動脈瘤作成実験を行い、至適条件を適用した群で統計学的有意差をもって動脈径が拡張した(動脈瘤が形成された)ことを確認した。さらに、病理組織学的にも動脈瘤の形成を確認した。本研究により、血管内からのアプローチのみで、破裂しない安定した動脈瘤の作成法が確立できた。研究初年度は、動脈瘤モデル作成の至適条件の検討・設定に費やした。【方法】1.ビーグル成犬(雄)を使用。左外腸骨動脈に留置したダブルバルーンカテーテルによって作成した閉鎖空間にエラスターゼ(2ml)を注入し、30分間放置して血管壁をエラスターゼに曝露させた。2.エラスターゼ曝露前に血管内皮を損傷することの有効性について検討した。(1)Cuttingバルーンカテーテルを使用(2)Fogartyカテーテルを使用(3)血管拡張用バルーンカテーテルを使用3.閉鎖空間へのエラスターゼ注入法(回数)の違いによる動脈壁への影響を検討した。【結果】1.ダブルバルーンの閉鎖空間にエラスターゼ(2ml)を注入し、血管壁に暴露させると、少なくとも1ヶ月後には動脈壁の拡張を認めた。2.CuttingバルーンカテーテルやFogartyカテーテルでは、血管壁に与える損傷が強く、過剰な血栓形成や動脈の急性破裂が生じた。3.血管拡張用バルーンカテーテルでは、外腸骨動脈径の約1.5倍のバルーン径までは急性破裂を生じることなく血管内皮損傷が可能で、エラスターゼを血管壁(弾性繊維)により効率的に作用させられる可能性が示唆された。4.閉鎖空間へのエラスターゼ注入法は、回数によらず1ヶ月後の動脈壁拡張程度はほぼ同様であった。【結論】以上から、次のことを明らかにした。1.ダブルバルーンによる閉鎖空間は、血管壁のエラスターゼへの曝露に有効。2.CuttingバルーンカテーテルやFogartyカテーテルは動脈破裂や過剰な血栓を生じ、動脈瘤作成に適さない。3.血管拡張用バルーンカテーテルを用いた血管内皮損傷は、血管壁全体へのダメージが少ない。4.エラスターゼ注入は1回でも、血管壁への作用は可能。平成22年度は、平成21年度に引き続き、動脈瘤モデル作成の至適条件の検討・設定に費やした。【方法】ビーグル成犬(雄)を使用。外腸骨動脈に留置したダブルバルーンカテーテルによって作成した閉鎖空間にエラスターゼ(2ml)を注入し、30分間放置して血管壁をエラスターゼに曝露させた。(1)エラスターゼ曝露前に血管内皮を損傷することを目的として施行する、バルーンカテーテルによる血管拡張法の至適条件について検討した。(a)対象血管径に対して、径の12倍から2倍の径を有するバルーンカテーテルを用いて血管拡張を施行(b)上記(a)の結果を基に、対象血管径に対し至適と思われるサイズのバルーンカテーテルを用いて、血管拡張回数の違いによる動脈壁への影響を検討(2)血管拡張およびエラスターゼ曝露後の経過観察期間による動脈拡張程度の違いを検討した。【結果】(a)対象血管径に対し、1.5倍までの径のバルーンカテーテルでは対象血管の硫裂等の有害事象を1例も認めなかったのに対し、1.6倍以上の径では有害事象の発生を経験した。(b)バルーンカテーテルでの血管拡張は、単回よりも複数回の方が、より広い範囲で血管内皮の損傷を認めた。拡張回数は6回程度で対象血管のほぼ全周で血管内皮の損傷が認められた。(2)経過観察期間1ヶ月、3ヶ月の比較では、血管拡張程度に多少の差を認めたが、統計的有意差は認めなかった。(a)対象血管の拡張に用いるバルーンカテーテルの至適サイズは、血管径の1.5倍。(b)血管内皮損傷を全周性に生ぜしめるためには、バルーンカテーテルでの血管拡張は6回以上必要。♂(2)動脈瘤形成のための経過観察期間は最低1ヶ月。成人ビーグル犬の外腸骨動脈に血管内からのアプローチのみ(外科的侵襲を伴わない方法)で動脈瘤を作成するための至適条件を検討した。次に、コントロール群と至適条件と想定されるもののうち、ひとつないし複数を適用した群に分けて(生理食塩水暴露群(コントロール群)、エラスターゼ暴露群、バルーン拡張後生理食塩水暴露群、バルーン拡張後エラスターゼ暴露群)動脈瘤作成実験を行った。その結果、複数の至適条件を組み合わせて適用した群(バルーン拡張後エラスターゼ暴露群)で統計学的有意差をもって動脈径が拡張した(動脈瘤が形成された)ことを確認した。

さらに、病理組織学的にも検討を行い、組織学的にも動脈瘤の形成(内弾性板の破壊、消失中膜弾性線維の消失および外弾性板の変性)を確認した。以上の結果より、成人ビーグル犬の外腸骨動脈に血管内からのアプローチのみ(外科的侵襲を伴わない方法)で、破裂しない安定した動脈瘤モデルの作成に成功した。本研究により、ビーグル成犬といった中型動物に生理的状態に近似した動脈瘤を容易かつ短期間で作成する方法を開発しえた。本研究を発展させることで、頭頚部・胸部・腹部・骨盤・四肢などを含めた全身の動脈に実験的に動脈瘤を作成することも可能である。これにより、今後の動脈瘤に対する低侵襲性の新しい治療法の開発・研究を促進し、その確立につながるものと期待される。さらには、動脈瘤の血行動態や増悪因子の解析など動脈瘤全般に対する基礎的研究への応用も可能と考える。24年度が最終年度であるため、記入しない。
J-Physics：多極子伝導系の物理の国際展開

国際ネットワークの形成のために、海外の研究機関との間に若手研究者の相互派遣と国際集会の支援を行った。若手研究者の相互派遣についてはスイスへ1名、ドイツへ2名、アメリカへ1名の派遣を行った。派遣する若手研究者に対しては、申請書を承認したのち出発前に面接を行い、研究テーマや海外での研究活動について助言を行った。若手研究者の海外からの招へいはインドから1名、イタリアから1名を行った。両名とも日本に滞在中に研究内容を聞く機会を設けた。総括班と共同で開催し「J-Physics 2018:サマースクール&新物質と結晶育成に関する国際ワークショップ」では、12名の研究者と4名の若手研究者を招へいして、国際共同研究の推進につとめた。サマースクールでは10件の講義、国際ワークショップでは29件の研究発表と33件のポスター発表があり、若手4名にポスター賞を授与した。12月にはニュージーランドのオタゴ大学でニュージーランドとオーストラリアを中心とした研究者を集めて"International Workshop on j-fermion Physics and Materials"を開催して、研究交流に努めた。また、琉球大学にドイツからレイネイゼン教授を招き招待講演と関連した講演を交えた国際集会を開催した。この他、4月に柏で開催された"Novel Phenomena in Quantum Materials driven by Multipoles and Topology"、7月にドイツ・ドレスデンで開催された"Frustration, Orbital Fluctuations,and Topologyin Kondo Lattices andtheir relatives"、2月に柏で開催された国際集会を共催し、領域の紹介や招待講演などを行い、国際交流に努めた。新たに4名の派遣と2名の招へいを行った。当初からの合計は派遣が14名で招へいが7名の計21名となった。総括班との共催での国際ワークショップに海外から研究者を招待して、国際交流と共同研究の推進につとめた。会議には、海外からの15カ国29名を含む117名の参加者があり、招待講演者と領域内研究者と広い交流が図られている。会議では29件の口頭講演と33件のポスター講演が行われたが、若手を対象としたポスター賞の審査を行い、4名を表彰した。招へい研究者にも審査委員に加わっていただき、若手研究者との積極的な国際交流を促進すると共に、若手育成にも努めた。海外から招へいした中国人の女性大学院生もポスター賞を受賞した。会議に参加した中国人の学生がフランスへ研究所に就職が決まるなど、世界規模の国際交流が行われている。この学生は、フランスの研究所で本新学術領域の研究にも参加している。この他にも国際会議の派遣や領域内と海外との共同研究に便宜を図るなどして、順調に国際ネットワークの形成が行われている。海外派遣した学生は順調にキャリアアップして、学位取得後に大学の常勤職に就くなど人財育成を通じた若手研究者のキャリアアップも順調に行われている。最終年度は9月により一層の国際活動の支援を行い、国際ネットワークの強化に努める。9月には領域主催の国際会議を開き、また東北大金研との共催でチュートリアルセッションを設けて若手育成につとめる。海外から5名程度の講師を招き英語で丸一日の講義を行う。国際会議では若手のポスターを審査して優秀なものにはポスター賞を授与する。7月にロシアで開催される国際集会(Dzyaloshinskii-Moriya Interaction and Exotic Spin Structures)にEuPtSiの研究者を派遣し、ロシアとの研究交流を促進する。測定と試料育成と理論の国際研究拠点との人的交流として、3ヶ月以内の若手研究者の招へいと派遣を推進する。具体的に派遣する研究者と派遣先は、領域外からも広く公募して、研究計画書などを審査の上、国際活動支援班で決定する。派遣者は報告書の提出と、研究会などでの報告を義務付ける。招へいに関しては、海外の研究拠点からの推薦を受け、同様に研究計画書を審査して、終了後には報告を義務付ける。今年度分として3件の派遣は既に予定している。これらの派遣や招へいに関して、国際活動支援班のメンバーが適宜拠点を訪問して研究打ち合わせや研究準備を行う。派遣研究者が大学院生の場合には、滞在中に指導教員も派遣して、海外拠点での研究指導も可能にする。また、若手研究者招へい期間内に相手先研究機関の研究リーダーを招へいして、国際ネットワーク形成に向けた研究打合せや研究集会を行う。A01班代表の中辻が共同研究のために滞在中のJohns Hopkins大学と共同の国際ワークショップ「Anomalous Transport in Multipolar and Topological Materials」を、3月11日と12日にMt. Washington Conference Centerで開催した。日本からは播磨、網塚、青木、野原の計画研究班代表者と研究協力者などが出席し、研究交流を行い今後の交流計画を話しあった。口頭講演数は22件、ポスター講演数は13件で、日本からの出席者は領域外1名を含む11名であった。領域外1名の大学院生にも若手育成を目的として滞在費の補助を行った。日本からの参加者は引き続き、3月14日からの米国物理学会のマーチミーティングに出席し、網塚は招待講演を行った。他の出席者はそれぞれ国際共同研究ネットワークの形成に必要な研究動向についての情報収集などを行った。日本から海外へ若手研究者を2名派遣した。1名は北海道大学の大学院生でプラハのカレル大学で研究を行うために1月に出発し、もう1名は東京大学の大学院生でJohns Hopkins大学で研究を行うために3月に出発した。

時間的に余裕があった後者の学生は、出発前に研究計画などについての面接を行った。カレル大学に滞在した学生は論文執筆のために一時帰国したが、両名とも順調に海外での研究を行っている。このほか、国際ネットワークの形成のために、カレル大学のセコフスキー教授やフランスCEAのフルケ教授を招へいした。日本からは、インドのタタ研究所とカレル大学に行き、セミナーを通じて新学術領域の紹介と今後の国際ネットワーク形成のための打合せなどを行った。また、ドレスデンMPI(マックスプランク研究所)で研究をしている安岡東大名誉教授が帰国した際に神戸大に招へいし、セミナーをしていただくとともに、今後のMPIとの研究協力関係について打合せを行った。タタ研究所のMaurya氏が日本滞在中に大洗に招へいして、今後の共同研究について協議した。当初予定していたJohns Hopkins大学と共同の国際ワークショップを核とした国際ネットワーク形成への取組は順調に行っている。この他、個々の研究者同士による研究協力への取組は予想以上に行っている。一方で、若手相互派遣と英文パンフレットの作成に遅れが生じている。若手相互派遣は4名の予定が2名に留まっているが、この原因の一つは、昨年起こったヨーロッパでのテロ事件とそれによる難民問題があると考えている。若手研究者において海外での滞在に不安を感じる気配が感じられる。これについては、安全を確認しながら今後も積極的な相互派遣に取り組む。また、新学術領域の活動を海外でより認知度があがる様に務める必要がある。そのためにも、英語によるホームページの充実と英文パンフレットについて早期の作成が必要である。国際ネットワークの形成のために、海外の研究機関十の間に若手研究者の相互派遣を行っている。昨年度から引き続きアメリカとチェコに滞在した2名に加えて、ドイツに2名、フランスに1名、アメリカに1名、チェコに1名の派遣を行った。派遣する若手研究者に対しては、申請書に基づいて承認したのち出発前に面接を行い、研究テーマや海外での研究活動について助言を行った。また、派遣する若手研究者が大学院生の場合は、派遣中に指導教員も滞在先に派遣し、共同研究の強化に努めた。さらに、7月にアメリカのボルチモアで開催された結晶合成サマースクールに大学院生と岡山大の准教授の計2名を派遣した。海外からはチェコからの2名の若手研究者の招へいを行い、国内の3ヶ所の大学を訪問し研究交流するとともに、日本物理学会での講演も行った。また、H29年度に招へいを予定しているCNRS-Grenobleの学生の面接も行った。新たに5名の派遣と2名の招へいがあり順調に国際ネットワークの形成が行われている。
放射線抵抗性がんの成因とその増感

悪性黒色腫(6例)を検討して高感受性株Pー39(Do=47cGy,Dq=85cGy)と、抵抗性株Gー361(Do=145cGy,Dq=249cGy)を見いだし、本年は、この2株を中心に検討した。Gー361は2種類(早いタイプと遅いタイプ)のPLDとも、Pー39に比べて大きな修復能を示した。X線によるDSB量と残ったDSB量およびDNA合成能を検討した。出来たDSB量やDNA合成能には差がなかったが、残ったDSB量は放射線抵抗性のGー361が少なく、DSB量の修復能が高いことを示した。この両細胞についてγ線で誘発される核タンパク質の解析を行った。両者の同じ生存率(1%生存率)を与える線量、又は同じ線量どうしで比較してもGー361は酸性タンパク質をPー39は中性タンパク質を誘導し本質的な差を示した。この差が感受性に関連しているのか検討中である。放射線抵抗性性がんが、必ずしもin vitroでは抵抗性ではない可能性がある。そこでin vivoの特殊性を検討するため、スフェロイドをin vivoモデルとして実験を行った。肺癌、結腸癌、悪性黒色腫、骨肉腫で直径150ー180μmのスフェロイドの放射線照射後の細胞生存率とスフェロイドの治癒を測定すると、骨肉腫が2Gy値で一番抵抗性を示した外に、スフェロイドの治癒も、一番抵抗性(Spheroid cure assayで求めた治癒線量より24時間後の細胞生存率より予測された治癒線量より抵抗性)を示した。骨肉腫が生体に近い状態のほうが抵抗性を示すのは、腫瘍の微小環境の重要性を示した貴重なデ-タだと思われる。Gー361、Pー39細胞に、活性化rafを導入したが両株の放射線感受性には変化がなかった。癌抑制遺伝子であるp53遺伝子の突然変異を持つ食道癌細胞と突然変異を持たない食道癌細胞株についてX線感受性を調べた結果、突然変異を持つ細胞株の方が抵抗性を示す予備的な結果を得た。
CEAプロモーターを用いた大腸癌肝転移巣の遺伝子治療

我々はまずヒト癌細胞株を用いたヌードマウス肝転移モデル確立を行った。1x10E6個の癌細胞をヌードマウスの脾臓より経門脈的に移植した。当初は大腸癌での肝転移モデルの確立に難渋したため、代用として膵癌細胞株を利用した。次に我々はサイトメガロウイルス(CMV)プロモーターおよび癌胎児抗原(CEA)プロモーターによって遺伝子発現される非増殖型N116Y発現アデノウイルス(Ad CMV-N116Y、Ad CEA-N116Y)を開発した。Ras抑制変異体N116Y遺伝子は癌遺伝子であるv-H-rasのGTP結合部位であるコドン116をアスパラギンからチロシンに置換して得られた。コントロールベクターとしてβガラクトシダーゼ(LacZ)をCEAプロモーターによって発現するAd CEA-LacZを開発した。癌肝転移モデルにおける転移巣の増殖に対するAd CEA-N116Yの治療効果を検討した。Ad CEA-N116Yを癌細胞の経脾的移植後5日目に投与することによって、いかなる副作用も認めず、選択的に癌転移巣の数を減じる効果が確認された。Ad CEA-LacZ投与マウスにおいて、癌肝転移巣でのみLacZの発現が認められ、正常の肝細胞での発現はみられなかった。以上のことから、N116Y遺伝子をCEAプロモーターを用いてヒト癌細胞で特異的に発現させ、その増殖を抑制することのできるアデノウイルスベクターを用いることによって、ヒト癌肝転移に対する遺伝子治療の臨床応用の可能性が示唆された。RAS抑制変異体N116Yは、v-H-rasのコドンの116番目をアスパラギンからチロシンに置換して得られた変異体であり、研究代表者らはこのN116YがRAS蛋白に対してdominant negativeな抑制効果を有し、RAS以降のシグナル伝達を阻害、癌形質を喪失させ腫瘍細胞の増殖を抑制することを、一連の癌細胞株を用いて明らかにしてきた。大腸癌においてはK-ras変異が50%以上に証明されており、活性化RASが癌細胞の増殖、転移に重要な役割を果たしていることが明らかにされている。今回「活性化RASの機能阻害により大腸癌細胞の増殖あるいは転移を抑制しうる」との仮説を立て、大腸癌肝転移巣に対する有力な補助療法としてN116Yを用いた遺伝子治療の可能性を探ることを目的に研究を開始した。本研究の手法の要として、ほとんどの肝転移大腸癌細胞がCEAを産生していることに着目し、正常組織に影響を及ぼさずに特異的な腫瘍抑制効果を得ることを目的としてCEAプロモーターウイルスベクターを作成し使用した。1.アデノウイルスベクター(Ad CMV N116Y)を用い、in vitroでの大腸癌細胞株に対する増殖抑制効果を確認した。同時に、CEAプロモーターを有したN116Yウイルスベクター(Ad CEA N116Y)を用いた同様の検討で、CEAを発現している腫瘍組織においてのみN116Yが特異的に発現される事を確認した。2.N116Yの腫瘍抑制効果を正常組織への影響のないより特異的なものとするために、細胞膜への結合を阻止できるN116YのC-末端欠損体を作成する予定で、完成寸前の段階である。3.N116Yによる大腸癌細胞周期への影響、アポトーシス誘導の有無、RASに対して抑制作用を発揮する際の標的物質の解析を行った。癌特異的遺伝子のプロモーターとしてCEAプロモーターを導入したアデノウイルスベクター導入用シャトルベクターを構築した.まずpGL3ベクターにCEA(他研究施設より供与)を導入し,βガラクトシダーゼ(LacZ)遺伝子をレポーターとして挿入したベクターを構築,これらを制限酵素で切り出してシャトルベクターpCA14に導入した.293細胞による相同組換えを利用してAdCEA-LacZが得られた.まずAdCEA-LacZとCEA産生癌細胞株

PCI43,PCI35およびCEA産生のない株PCI19,正常細胞株1C3D3を用いて発現実験および治療実験を行った.コントロールベクターとして,CMVプロモーターでLacZを発現するアデノウイルスベクター(AdCMV-LacZ)を用いて比較検討した.癌細胞の肝転移モデルを同時に構築した.エーテル麻酔下ヌードマウスの脾臓にPCI43を10E5個注入することによって約2週後には100%肝転移結節を作ることが明かになった.このモデルにおいて,癌注入後に前述のAdCEA-LacZを同経路で注入し,1週間後犠牲死させたマウスの肝転移巣をX-gal染色した結果,周囲の正常組織ではLacZの発現はみられなかったが,転移した癌細胞では高率にLacZの発現が確認された.このことから,CEAプロモーターを導入したアデノウイルスベクターは癌肝転移モデルにおいて副作用のない遺伝子導入系として利用できることが示唆された.一方,治療遺伝子として,RhoCが転移関連遺伝子であることから,ヒト胎児腎細胞株293細胞よりRT-PCR法によってRhoC遺伝子をクローニングした.さらにRhoCの活性化必須ドメインであるコドン117のアスパラギンをチロシンに置換した変異体であるdomonant negative RhoC N117Yを構築した.現在N117Y発現アデノウイルスを構築中である.
放線菌と動物細胞の共培養による未知天然物創製技術の開拓

放線菌には二次代謝産物の産生に関する生合成遺伝子が多数存在するもののそれら遺伝子の多くは通常休眠状態にあると考えられている.そのため休眠中の遺伝子群を活性化させて新たな二次代謝産物を得ることが重要である.放線菌の一種であるNocardia属は日和見感染症の原因となるグラム陽性細菌である.本属に関する二次代謝産物の研究はStrepotmyces属等に比べ少ないため,本研究では本属由来の独特な化合物(天然物)を見出すことを目的とする.とくに放線菌Nocardia属と動物細胞との“共培養"という新しい方法を介して休眠中の遺伝子群を活性化することにより新たな未知天然物創製技術を開拓することを目指す.放線菌には二次代謝産物の産生に関する生合成遺伝子が多数存在するもののそれら遺伝子の多くは通常休眠状態にあると考えられている.そのため休眠中の遺伝子群を活性化させて新たな二次代謝産物を得ることが重要である.放線菌の一種であるNocardia属は日和見感染症の原因となるグラム陽性細菌である.本属に関する二次代謝産物の研究はStrepotmyces属等に比べ少ないため,本研究では本属由来の独特な化合物(天然物)を見出すことを目的とする.とくに放線菌Nocardia属と動物細胞との“共培養"という新しい方法を介して休眠中の遺伝子群を活性化することにより新たな未知天然物創製技術を開拓することを目指す.