hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
咀嚼における脳機能画像による賦活ネットワークの統合解析

本研究では脳機能画像法を用いて咀嚼運動中の大脳皮質の賦活状態を捉えることとした.しかし,脳機能画像法では,頭部が振動を受けると脳の位置が動いてしまうと,データの信頼性が低下する可能性がある.この事も本研究の難易度を上げる原因となった.そこで我々は可能な限り実際の咀嚼運動を再現し,しかし脳機能画像法の妨げになりにくいTask方法として,咀嚼Taskを採用した.咀嚼Taskは右咬みタスク,左咬みタスクとした.各タスクは咬頭嵌合位にて上下顎の歯を軽く接触させ,タスク側の咬筋が等尺性収縮を起こさせるように指示し,咬みしめサイクルは1Hzとした,本Taskにより,実際の咀嚼運動に近いデータを得ることができたと考えている.本研究では咀嚼Taskにて大脳皮質が賦活する部位を検討している過程で,咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位が運動性言語野,言語優位半球との関連があるのではないかと考えた.そこで,我々はしりとりTaskを用いて被検者の言語優位半球を同定し,言語優位半球と咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位との関連を調べたところ,言語優位半球側に必ず咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位を認めた.よって,言語優位半球と咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位とは関連があることが明らかとなった.また本研究では脳磁図やfMRIでも使用可能な咬合力センサの開発を試みたが,実用化することは困難であった.実用化に向けて今後も改良を行う必要がある.本研究では脳機能画像法を用いて咀嚼運動中の大脳皮質の賦活状態を捉えることとした.しかし,脳機能画像法では,頭部が振動を受けると脳の位置が動いてしまうと,データの信頼性が低下する可能性がある.この事も本研究の難易度を上げる原因となった.そこで我々は可能な限り実際の咀嚼運動を再現し,しかし脳機能画像法の妨げになりにくいTask方法として,咀嚼Taskを採用した.咀嚼Taskは右咬みタスク,左咬みタスクとした.各タスクは咬頭嵌合位にて上下顎の歯を軽く接触させ,タスク側の咬筋が等尺性収縮を起こさせるように指示し,咬みしめサイクルは1Hzとした,本Taskにより,実際の咀嚼運動に近いデータを得ることができたと考えている.本研究では咀嚼Taskにて大脳皮質が賦活する部位を検討している過程で,咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位が運動性言語野,言語優位半球との関連があるのではないかと考えた.そこで,我々はしりとりTaskを用いて被検者の言語優位半球を同定し,言語優位半球と咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位との関連を調べたところ,言語優位半球側に必ず咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位を認めた.よって,言語優位半球と咀嚼Taskによる大脳皮質賦活部位とは関連があることが明らかとなった.また本研究では脳磁図やfMRIでも使用可能な咬合力センサの開発を試みたが,実用化することは困難であった.実用化に向けて今後も改良を行う必要がある.本年度は咀嚼機能を検討するためのタスクを確立する試みを行った.咀嚼機能を評価するには,実際に被験者に咀嚼を行わせ計測する方法が最良の方法と考えられるが,咀嚼の衝撃により大脳の位置が変化する可能性が高いため,今回は被験者には咬みしめるタスクを行わせた.咬みしめは左右側の歯が同時に接触するが,片側で咬んでいるイメージを同時に行わせた結果,良好な結果が得られた.被験者に利き手が右側である健常有歯顎者を選択し本タスクを行った.事前に習慣性咀嚼側について,(1)低粘稠性発色ガムによる咀嚼能力検査,(2)ガム咀嚼を行わせ,ガム咀嚼中における咬筋深部温の変化,(3)被験者の自覚の3項目に基づき判定を行った.結果,習慣性咀嚼側やイメージを右側もしくは左側で行っても大脳皮質の賦活は左半球のみ,もしくは両側に認めた.この結果について,今回調べた項目以外も含めて,さらに検討を行っている段階である.咬みしめタスクは脳磁図でもそのまま応用することが可能であり,簡便である.今後の咀嚼機能のタスク方法は咬みしめを中心とした方法で検討していく.また,咬合力を規定するために,MRI装置の中で使用可能な咬合力計の開発も試みた.

センサー部は非磁性体によって構成されていなければならない為,今回は光ファイバーを用いることにした.咬合力は100%の相対値で表現され,被験者には波形グラフの形で表示される.試作段階を終え,現在実際に使用に耐えうるか検討を行っている段階である.本年度は前年度に検討を行ったタスクを用いて実際に被験者の計測を行った.前年度の研究で咬みしめタスクの良好を確認したが,本年度は被験者を約20人計測し検討を行った.結果,前年度確認した通り,被験タスクの種類(右咬みタスクおよび左咬みタスク)を問わず大脳の賦活は左側もしくは両側に認めた.本年度は,この結果についてさらに突き詰めるため,言語優位半球を同定するためにしりとりタスクを追加した.本研究にしりとりタスクを追加した理由は咬みしめタスクによって賦活する部位が運動性の言語中枢に接近しているため,咬みしめタスクによって賦活する部位(ここでは便宜上,随意性の咀嚼中枢とする)は言語優位半球側に伴うのではないかという仮説に基づき本実験を追加した.結果,被験者20名中20人とも左半球が言語優位半球となった.報告によると,日本人の言語優位半球が左半球である比率は約90%といわれている.また,被験者は全員利き手が右手のため,言語優位半球が右側の者が無かった原因とも考えられるので,来年度は利き手が左手の被験者を集めてさらに研究を進めていく予定である.昨年開発したMRI装置の中で使用できる咬合力計は実用可能か実験を行っている途中に,センサー部の厚さの問題や,光ファイバーの接着部に関する問題点が浮かび上がってきたため,現在改良を行っている.厚さに関しては当初のものから,約1/3の4ミリまで削減することができ,十分実用に堪えうるものになった.接着に関しては,口腔内で使用するため,更なる改良を進めている途中であるが実用に向けての目処はついてきた.前年度まで開発を続けてきた,光ファイバーを応用した咬合力計を実験に応用してきたが,改良を加えることが必要であることが判明した.現在,不都合部の改良を行っている.来年度には改良が終了し,実験に応用できるものと思われる.Task方法を検討する上で行ってきた実験において,咀嚼運動時における大脳皮質賦活部位は,被検者の習慣性咀嚼側ならびに被検運動側に関わらず,左側のみ,もしくは両側に反応を認めた事が昨年度までの研究で判明していたが,本年度はさらに進めて行った.前記の結果について検討したところ,言語,特に発語を司るブローカ野に関連があると思われたため,被検者の言語優位半球側と咀嚼運動時における大脳皮質賦活部位との関係を研究した.fMRIを用いて言語優位半球側を判定するにあたり,しりとりタスクを行った.その結果,言語優位半球側が左側の被検者において,咀嚼運動による大脳皮質賦活部位は左側のみもしくは両側に認めた.また,言語優位半球側が右側の被験者において,咀嚼運動による大脳皮質賦活部位は両側に認めたが,言語優位半球側が左側の者とは反対に,大脳皮質の右側に広範囲かつ強い賦活を認めた.この事より,咀嚼運動による大脳皮質賦活部位は,言語優位半球側をかならず含むことが明らかとなった.そして,咀嚼と発語はその中枢において密接な関係があることが明らかとなった.現在咀嚼運動の咬合力の大きさによって,大脳皮質賦活部位に影響を及ぼすかどうかを検討している.前年度より行ってきた咬合力センサーの改良は,技術的な問題により,根本的な改良を行う必要があることが分かった.本年度は完成を見るべく,時間の許す限り改良を行った.しかし,まだ問題を抱えている.Task方法は昨年度までの研究により,咀嚼を行わせる方法を採用することを決定したが,本年度は咀嚼方法の吟味を行った.被験者の咬合状態により,脳の賦活状態に大きな差が考えられる為,より均等に歯根膜に刺激を与えるように被験者個人用のバイトプレート作成し,バイトプレートを装着している場合としていない場合での脳の賦活状態の差を見ることとした.結果,バイトプレートを装着することにより,脳の賦活状態が良くなった被験者も認められるが,装着する場合と装着していない場合との間に大脳皮質の賦活状態の変化を認めない被験者も確認した.原因については別のアプローチを行って確認する必要があるが,直接,歯根膜に刺激を与える方法を検討する必要があると考える.昨年度検討していた言語優位半球の決定におけるTask方法をより簡便にまた,より確実に行えるように検討を行った.しりとりを頭の中で行う方法を基本に,歌を歌わせる,昨日の出来事を言わせる方法の3方法を比較した.結果,歌を歌わせる方法は脳の賦活量が少なく,しりとりと昨日の出来事を言わせる方法では,両方法において脳の賦活を認める被験者と,しりとりのみ,もしくは昨日の出来事言わせる方法のみにおいて脳の賦活を認める被験者を認めた.
短時間の乾燥ストレスにより誘導されるArabidopsis遺伝子群の機能解析

植物から初めてsoluble epoxide hydrolaseのcDNA(1.1kb)を単離した。cDNAは動物のcDNAに比べて約半分の長さしかないものであった。しかし、単離したcDNAを大腸菌で発現させ、組み換えタンパク質の活性を調べたところ、trans-stilbene oxideを基質とすることができ、4-fluorochalcone oxide、(2R,3R)-3-(4-nitrophenyl)glycidol、(2S,3S)-3-(4-nitrophenyl)glycidolを加えると各々100%、21%、74%の阻害が確認された。これは動物で知られているsoluble epoxide hydrolaseの特徴と一致するものであった。植物のsoluble epoxide hydrolase遺伝子は地上部のみで発現しており、乾燥ストレスや植物ホルモンの1つであるオーキシンによって発現が誘導されることが明らかになった。また、動物のsoluble epoxide hydrolaseとの比較から植物の遺伝子はhaloacid dehalogenaseと同じ祖先遺伝子から、動物の遺伝子はこれに加えてhaloalkane dehalogenaseと同じ祖先遺伝子からも進化したものと考えられた。シロイヌナズナから短時間の乾燥ストレス処理によって誘導される遺伝子のcDNAを17種類得ているが、解析の結果、この中にHSP70-1、HSP81-2が含まれることが明らかとなった。これらの遺伝子発現は、熱ストレスヤ低温ストレスより乾燥ストレスによって強い誘導がかかることが判明した。従って、これらはHSPというよりHSCに分類されるべきものであることが分かった。また、これらのcDNA群のなかにグループIIのLEAタンパク質をコードしているものがあり、その遺伝子発現はこれまで報告されているグループIIのLEAタンパク質遺伝子と発現様式が異なることが明らかとなった。
グルココルチコイドがTh17細胞の機能を促進し腸管免疫を制御する機構の解明

CD4Cre-GRcKOマウスの未分化T細胞を用いて分化培養実験を行ったところ、CD4Cre-GRcKOマウスから分化したTh17細胞はコントロールマウスに比べ著減していた。これは、CD4Cre-GRcKOマウスT細胞においては、T細胞受容体(TCR)のシグナル伝達が障害されており、TCRシグナル下流の細胞内カルシウム流入量が減少していたためであることを発見した。またTh17細胞分化の際にHIF1aは解糖系を活性化し急速なATP産生と細胞分裂を誘導するが、CD4Cre-GRcKOマウスのT細胞においてHIF1aが著減しており、グルコースの細胞内への取り込みが障害されていることを見出した。以上の結果から、GRはTCR刺激およびHIF1aの発現亢進を介して、Th17細胞分化を促進することが明らかになった。次に、GRが腸管Th17細胞の分化後の維持を促進することを見出しているが、腸管のTh17細胞が活性化するB細胞のIgA産生がCD4Cre-GRcKOマウスおよびIL17Cre-GRcKOマウスにおいて減少傾向があり、腸管環境の維持に影響している可能性が示唆された。実際にCD4Cre-GRcKOマウス糞便中の腸内細菌叢の多様性を網羅的に解析したところ、コントロールマウスに比べて多様性に変化が見られた。さらにCD4Cre-GRcKOマウスおよびIL17Cre-GRcKOマウスの未分化T細胞をRag2KOマウスに移植し大腸炎を誘導したところ、両遺伝子改変マウスの大腸におけるTh17細胞の割合が減少したことから、GRが病原性Th17細胞の発生をも促進することが明らかになった。本研究から、GRがTCRシグナルおよび遺伝子発現を誘導してTh17細胞の分化を促進すること、また何らかの遺伝子発現を制御してTh17細胞の末梢における維持を促進することが明らかになった。本研究において、GRがTCR刺激を強化しTh17細胞を促進すること、腸管常在Th17細胞の維持に寄与すること、T細胞を免疫不全マウスに移入して大腸炎を誘導するモデルにおいてGRがTh17細胞の分化を促進することで病態の進行に寄与することを明らかにすることができた。これは本研究を始めるにあたり立てた仮説である「グルココルチコイドがTh17細胞の分化、維持、機能を促進して大腸炎の病態に寄与する」という考えを大いに支持するものであるため、ほぼ満足できる達成度と判断した。今後はGRがTh細胞の分化や維持、機能を促進する詳細な機構を調べるために、健常状態におけるTh17細胞、大腸炎時の腸管におけるTh17細胞をサンプルとしてRNAシークエンスを用いた網羅的な遺伝子発現解析を実施することで、Th17細胞におけるGRの標的遺伝子の探索を行う。標的遺伝子が同定された際には、標的遺伝子発現をGRがどのように制御しているかを解析するために、その標的遺伝子近位のGR結合配列の探索を行った上で、クロマチン免疫沈降法を用いてGRの結合を確認する予定である。さらにその標的遺伝子自体がTh17細胞の分化や維持、機能を促進するか確かめるために、標的遺伝子破壊マウスを用いて解析を進める予定である。また、健常時または病態時においてグルココルチコイドを投与した際に、標的遺伝子の発現上昇を介してグルココルチコイドがTh17細胞の機能を促進し、Th17細胞のステロイド抵抗性に寄与するかを確かめる予定である。

本研究において、GRがTCR刺激を強化しTh17細胞を促進すること、腸管常在Th17細胞の維持に寄与すること、T細胞を免疫不全マウスに移入して大腸炎を誘導するモデルにおいてGRがTh17細胞の分化を促進することで病態の進行に寄与することを明らかにすることができた。これは本研究を始めるにあたり立てた仮説である「グルココルチコイドがTh17細胞の分化、維持、機能を促進して大腸炎の病態に寄与する」という考えを大いに支持するものであるため、ほぼ満足できる達成度と判断した。今後はGRがTh細胞の分化や維持、機能を促進する詳細な機構を調べるために、健常状態におけるTh17細胞、大腸炎時の腸管におけるTh17細胞をサンプルとしてRNAシークエンスを用いた網羅的な遺伝子発現解析を実施することで、Th17細胞におけるGRの標的遺伝子の探索を行う。標的遺伝子が同定された際には、標的遺伝子発現をGRがどのように制御しているかを解析するために、その標的遺伝子近位のGR結合配列の探索を行った上で、クロマチン免疫沈降法を用いてGRの結合を確認する予定である。さらにその標的遺伝子自体がTh17細胞の分化や維持、機能を促進するか確かめるために、標的遺伝子破壊マウスを用いて解析を進める予定である。また、健常時または病態時においてグルココルチコイドを投与した際に、標的遺伝子の発現上昇を介してグルココルチコイドがTh17細胞の機能を促進し、Th17細胞のステロイド抵抗性に寄与するかを確かめる予定である。
マウス舌上皮in situカルシウムイメージング法の確立と水産食品複合味解析

H16年度は,長時間の測定に耐えるマウス舌上皮in situカルシウムイメージング法の確立を目指した.2時間程度まで舌上皮味細胞の生物活性を保つため,灌流液の基本組成,灌流液の酸素濃度,灌流チャンバーの構造,薬液灌流方法およびその速度などを最適化した.甘味物質としてサッカリンナトリウム,苦味物質としてデナトニウム安息香酸塩,うま味物質としてグルタミン酸ナトリウム(MSG)を採用し,それぞれ0.1から30mM程度の濃度範囲で味刺激を与え,その際の細胞内カルシウムイオン濃度の上昇を上述したカルシウムプローブの蛍光として捉えた.以上のようにして,甘味,苦味およびうま味に対する味細胞のカルシウム応答を多点同時観察する手法を確立できた.本法を用いて,甘味物質としてサッカリンナトリウム,苦味物質としてデナトニウム安息香酸塩,うま味物質としてグルタミン酸ナトリウム(MSG)に対するマウス味細胞のカルシウム応答を明らかにした.まず,うま味受容体については,代謝型グルタミン酸受容体4型(mGluR4)の関与が示唆されているが,通常mGluR4の下流には抑制性Gタンパク質が存在し,サイクリックAMP(cAMP)の分解酵素であるホスホジエステラーゼ(PDE)が活性化されるため,細胞内cAMP濃度が減少するはずである.そこで,cAMPを合成する酵素アデニレートシクラーゼ(AC)の阻害剤SQ22536およびMDL12330Aを投与したところ,MSGに対するカルシウム応答は影響を受けなかった.このことから,本受容体が口腔内におけるMSG応答に関与する可能性は小さいものと考えられる.また,2次元多点測光でMSG応答性味細胞を特定した後,それらの味細胞がイノシン酸(IMP)に対して示す応答およびMSGとIMPに対する応答を調べたところ,非常に大きな相乗効果が認められた.これはこれまで明らかにされてきた現象が末梢レベルで発現していることを支持するものである.また,同様な検討から,還元型グルタチオンがMSGに対するカルシウム応答を増強することも明らかとなった.以上のように,今後は複合した味質間の相互作用についても注意を払う必要があるものと考えられる.H16年度は,長時間の測定に耐えるマウス舌上皮in situカルシウムイメージング法の確立を目指した.2時間程度まで舌上皮味細胞の生物活性を保つため,灌流液の基本組成,灌流液の酸素濃度,灌流チャンバーの構造,薬液灌流方法およびその速度などを最適化した.甘味物質としてサッカリンナトリウム,苦味物質としてデナトニウム安息香酸塩,うま味物質としてグルタミン酸ナトリウム(MSG)を採用し,それぞれ0.1から30mM程度の濃度範囲で味刺激を与え,その際の細胞内カルシウムイオン濃度の上昇を上述したカルシウムプローブの蛍光として捉えた.以上のようにして,甘味,苦味およびうま味に対する味細胞のカルシウム応答を多点同時観察する手法を確立できた.本法を用いて,甘味物質としてサッカリンナトリウム,苦味物質としてデナトニウム安息香酸塩,うま味物質としてグルタミン酸ナトリウム(MSG)に対するマウス味細胞のカルシウム応答を明らかにした.まず,うま味受容体については,代謝型グルタミン酸受容体4型(mGluR4)の関与が示唆されているが,通常mGluR4の下流には抑制性Gタンパク質が存在し,サイクリックAMP(cAMP)の分解酵素であるホスホジエステラーゼ(PDE)が活性化されるため,細胞内cAMP濃度が減少するはずである.そこで,cAMPを合成する酵素アデニレートシクラーゼ(AC)の阻害剤SQ22536およびMDL12330Aを投与したところ,MSGに対するカルシウム応答は影響を受けなかった.このことから,本受容体が口腔内におけるMSG応答に関与する可能性は小さいものと考えられる.また,2次元多点測光でMSG応答性味細胞を特定した後,それらの味細胞がイノシン酸(IMP)に対して示す応答およびMSGとIMPに対する応答を調べたところ,非常に大きな相乗効果が認められた.これはこれまで明らかにされてきた現象が末梢レベルで発現していることを支持するものである.また,同様な検討から,還元型グルタチオンがMSGに対するカルシウム応答を増強することも明らかとなった.以上のように,今後は複合した味質間の相互作用についても注意を払う必要があるものと考えられる.本年度は,長時間の測定に耐えるマウス舌上皮in situカルシウムイメージング法の確立を目指した.2時間程度まで舌上皮味細胞の生物活性を保つため,灌流液の基本組成,灌流液の酸素濃度,灌流チャンバーの構造,薬液灌流方法およびその速度などを最適化した.甘味物質としてサッカリンナトリウム,苦味物質としてデナトニウム安息香酸塩,うま味物質としてグルタミン酸ナトリウム(MSG)を採用し,それぞれ0.1から30mM程度の濃度範囲で味刺激を与え,その際の細胞内カルシウムイオン濃度の上昇を上述したカルシウムプローブの蛍光として捉えた.得られた画像を開口数0.9程度の対物レンズ,倒立顕微鏡,超高感度ICCDカメラからなる顕微測光システムおよびパーソナルコンピューター上のNIH Imageおよび自作マクロプログラムによって多点について解析し,数値化することが可能となった.なお,マウス舌上皮には茸状乳頭,葉状乳頭,有郭乳頭などに味蕾が存在するが,茸状乳頭には味蕾が1つしかないことが知られており,本研究では2次元測光の利点を生かすために,葉状乳頭および有郭乳頭を観察対象とし,多数の味蕾を対象とする手法を確立した.以上のようにして,甘味,苦味およびうま味に対する味細胞のカルシウム応答を多点同時観察する手法を確立できた.昨年度研究で確立した長時間の測定に耐えるマウス舌

上皮in situカルシウムイメージング法を用いて,甘味物質としてサッカリンナトリウム,苦味物質としてデナトニウム安息香酸塩,うま味物質としてグルタミン酸ナトリウム(MSG)に対するマウス味細胞のカルシウム応答を明らかにした.まず,うま味受容体については,代謝型グルタミン酸受容体4型(mGluR4)の関与が示唆されているが,通常mGluR4の下流には抑制性Gタンパク質が存在し,サイクリックAMP (cAMP)の分解酵素であるホスポジエステラーゼ(PDE)が活性化されるため,細胞内cAMP濃度が減少するはずである.そこで,cAMPを合成する酵素アデニレートシクラーゼ(AC)の阻害剤SQ22536およびMDL12330Aを投与したところ,MSGに対するカルシウム応答は影響を受けなかった.このことから,本受容体が口腔内におけるMSG応答に関与する可能性は小さいものと考えられる.TIRsのようなmGluR4以外のGタンパク質共役受容体の関与が示唆される.また,2次元多点測光でMSG応答性味細胞を特定した後,それらの味細胞がイノシン酸(IMP)に対して示す応答およびMSGとIMPに対する応答を調べたところ,非常に大きな相乗効果が認められた.これはこれまで明らかにされてきた現象が末梢レベルで発現していることを支持するものである.また,同様な検討から,還元型グルタチオンがMSGに対するカルシウム応答を増強することも明らかとなった.以上のように,複合味を投与した際に単独の味質では得られないような複雑な応答が得られることから,味覚に関する研究においてこれまで味質をバラバラにして検討する(受容体の特定など)手法が取られていたが,今後は複合した味質問の相互作用についても注意を払う必要があるものと考えられる.
消化管吸収に関わる薬物輸送担体と機能調節因子の解明および生体膜透渦評価系への応用

消化管吸収に関わる薬物輸送担体と機能・発現調節因子の解明を目的として、in vitro系においトランスポーター機能・発現調節因子であることが示唆してきたPDZK1およびin vitro上皮細胞でタンパク質のsortingに働くとされてきたRab8に着目した。昨年度はPDZK1の薬物動態学的意義の解明として、pdzk1遺伝子欠損(pdzk1^<-/->)マウスを用いた薬物動態試験を行い、PDZK1が相互作用する複数のトランスポーター(PEPT1,OCTN2,OATP1A)の発現制御およびそれら基質の小腸刷子縁膜側からの取り込み制御を行っていることをin vivoで示した。そこで、本年度は新たなトランスポーター制御因子としてRab8に焦点を絞り、rab8遺伝子欠損(rab8^<-/->)マウスを用いたin vivo試験を行った。rab8^<-/->マウスでは小腸刷子縁膜に発現するPEPT1およびSGLT1のsorting異常が起こり、タンパク発現量の顕著な減少が観察された。そこで、それぞれの基質であるcefiximeおよび[^<14>C]α-methyl-d-glycopyranosid([^<14>C]α-MDG)をwildおよびrab8^<-/->マウスに経口投与したところ、両基質の血漿中濃度推移はwildよりもrab8^<-/->マウスで有意に低値を示した。また、単離小腸組織を用いた反転腸管法により小腸管腔側からの取り込み機構をwild、rab8^<-/->マウスで検討したところ、rab8^<-/->マウスにおける両基質の取り込みは細胞間隙マーカーであるmannitolと同程度まで低下しており、経口投与後の血漿中濃度推移の低下は小腸管腔側からの取り込み低下に起因すると考えられた。以上、消化管吸収に関わる薬物輸送担体と機能・発現(局在)調節因子の解明を中心として、本研究は順調に進行している。消化管吸収に関わる薬物輸送担体と機能調節因子の解明を目的として、in vitro系においトランスポーター機能調節因子であることが示唆されてきたPDZK1に注目した。薬物動態学的意義の解明には、in vivoでの解析が必須であるため、pdzk1遺伝子欠損(pdzk1^<-/->マウスを用いた薬物動態試験を行った。PDZK1により機能調節されるOCTN2の典型的基質であるカルニチンを用い、消化管吸収に対するPDZK1の影響を検討した。カルニチンをwild、pdzk1^<-/->マウスに経口投与したところ、pdzk1^<-/->マウスでは血中濃度がwildマウスに比べ有意に低く、小腸組織へのカルニチン取り込みもpdzk1^<-/->マウスで有意に低い値を示した。免疫組織化学的解析の結果、pdzk1^<-/->マウスにおいて小腸上皮細胞刷子縁膜でのOCTN2の発現が顕著に減少していたことから、PDZK1がin vivoにおいてもOCTN2の局在・機能制御因子であることが示された。また、アミノβ-ラクタム抗生物質などの消化管吸収に関与すると考えられているPEPT1に関して、免疫沈降法によりPEPT1とPDZK1が相互作用することを新たに見出した。PDZK1存在下においてPEPT1を介した[^3H]GlySar取り込みは有意に増加し、PEPT1の発現量の増加が観察された。さらに、wild、pdzk1^<-/->マウスにPEPT1の基質であるセファレキシンを経口投与したところ、pdzk1^<-/->マウスにおいて経口投与後の最高血中濃度到達時間までの血中濃度の低下が観測された。pdzk1^<-/->マウスでは小腸におけるPEPT1発現量が顕著に低下しており、このことがセファレキシンの消化管吸収性の低下の要因であると考察された。以上、消化管吸収に関わる薬物輸送担体と機能調節因子の解明を中心として、本研究は順調に進行している。

また、単離小腸組織を用いた反転腸管法により小腸管腔側からの取り込み機構をwild、rab8^<-/->マウスで検討したところ、rab8^<-/->マウスにおける両基質の取り込みは細胞間隙マーカーであるmannitolと同程度まで低下しており、経口投与後の血漿中濃度推移の低下は小腸管腔側からの取り込み低下に起因すると考えられた。以上、消化管吸収に関わる薬物輸送担体と機能・発現(局在)調節因子の解明を中心として、本研究は順調に進行している。
物理刺激による骨芽細胞の応答メカニズムの解明-メカニカルストレスと微弱電流刺激

われわれは骨芽細胞株MC3T3-E1細胞に対して交流電気刺激を行い,その反応をMAPK(mitogen-activated protein kinase)のリン酸化を指標として検証した.20分間の交流電気刺激により, MAPKの中でERKおよびp38のリン酸化は無刺激群よりも有意に上昇した.骨芽細胞の電気刺激に対する応答メカニズムの一部が解明され,有用なメカニカルストレスの条件や刺激方法の確立が期待できる.われわれは骨芽細胞株MC3T3-E1細胞に対して交流電気刺激を行い,その反応をMAPK(mitogen-activated protein kinase)のリン酸化を指標として検証した.20分間の交流電気刺激により, MAPKの中でERKおよびp38のリン酸化は無刺激群よりも有意に上昇した.骨芽細胞の電気刺激に対する応答メカニズムの一部が解明され,有用なメカニカルストレスの条件や刺激方法の確立が期待できる.近年,宇宙飛行において無重力空間での骨量減少や,長期臥床患者での骨代謝動態が研究され,細胞レベルでは重力からの影響をメカニカルストレス(シェアストレス,伸張刺激,静水圧,電流刺激など)と捉えた研究が行われている.メカニカルストレスが細胞環境において,細胞の成熟・分化に重要な役割を果たしていることが明らかになりつつある.しかし電気刺激をメカニカルストレスと考えた研究はない.本研究は,メカニカルストレスの解明に用いられている骨代謝研究を応用し,電気刺激による骨成熟促進効果の新しい知見を骨芽細胞を用いて検証することを目的としている.今回,われわれは骨芽細胞株MC3T3-E1細胞に対して交流電気刺激を行い,その反応をMAPK(mitogen-activated protein kinase)であるERK(Extracellular Signal-regulated Kinase)およびJNK(c-Jun N-terminal kinase)のリン酸化を指標とし,細胞応答を検証したウエスタンブロット法によってERKのリン酸化を測定した.20分間の交流電気刺激により,ERKおよびJNKのリン酸化は無刺激群よりも有意に上昇した.つまり,骨芽細胞は交流電気刺激からの信号を享受しており,その経路としてMAPKの中でERKおよびJNKがリン酸化されることが今回の実験からわかった.電気刺激が細胞内シグナルへと変換される応答メカニズムの解明できると,今後の臨床応用において,さらに有用なメカニカルストレスの条件や刺激方法の確立が期待できる.近年,重力からの影響をメカニカルストレス(シェアストレス,伸張刺激,静水圧,電流刺激など)と捉えた研究が行われている.メカニカルストレスが細胞環境において,細胞の成熟・分化に重要な役割を果たしていることが明らかになりつつある.しかし電気刺激をメカニカルストレスと考えた研究はない.本研究は,臨床研究で用いている交流電気刺激を、in vitroで用いることができる刺激器具を新たに作成し,メカニカルストレスの解明に用いられている骨代謝研究を応用し,電気刺激による骨成熟促進効果の新しい知見を骨芽細胞を用いて検証することを目的としている.今回,われわれは骨芽細胞株MC3T3-El細胞に対して交流電気刺激を行い,初年度は,その反応をMAPK(mitogen-activated protein kinase)であるERK(Extracellular Signal-regulated Kinase)およびJNK(c-Jun N-terminal kinase)のリン酸化を指標とし,細胞応答を検証したウエスタンブロット法によってERKのリン酸化を測定した.20分間の交流電気刺激により,ERKおよびJNKのリン酸化は無刺激群よりも有意に上昇した.つまり,骨芽細胞は交流電気刺激からの信号を享受しており,その経路としてMAPKの中でERKおよびJNKがリン酸化されることが今回の実験からわかった.当該年度は,細胞増殖について検討を行ったが,交流電気刺激により細胞増殖は生じていない傾向を検出した。さらに,今後は交流電気刺激によるALP活性および骨基質マーカーの反応について,検討を行う予定である.電気刺激が細胞内シグナルへと変換される応答メカニズムの解明できると,今後の臨床応用において,さらに有用なメカニカルストレスの条件や刺激方法の確立が期待できる.近年,宇宙飛行において無重力空間での骨量減少や,長期臥床患者での骨代謝動態が研究され,細胞レベルでは重力からの影響をメカニカルストレス(シェアストレス,伸張刺激,静水圧,電流刺激など)と捉えた研究が行われている.メカニカルストレスが細胞環境において,細胞の成熟・分化に重要な役割を果たしていることが明らかになりつつある.しかし電気刺激をメカニカルストレスと考えた研究はない.本研究は,メカニカルストレスの解明に用いられている骨代謝研究を応用し,電気刺激による骨成熟促進効果の新しい知見を骨芽細胞を用いて検証することを目的としている.今回,われわれは骨芽細胞株MC3T3-E1細胞に対して交流電気刺激を行い,その反応をMAPK(mitogen-activated protein kinase)であるERK(Extracellular Signal-regulated Kinase),p38,およびJNK(c-Jun N-terminal kinase)のリン酸化を指標とし,細胞応答を検証したウエスタンブロット法によってMAPKのリン酸化を測定した.20分間の交流電気刺激により,ERKおよびp38のリン酸化は無刺激群よりも有意に上昇した.しかし,JNKのリン酸化の上昇はなかった.つまり,骨芽細胞は交流電気刺激からの信号を享受しており,その経路としてMAPKの中でERKおよびp38がリン酸化されることが今回の実験からわかった.このことから交流電気刺激はメカニカルストレスの中でも伸張刺激と同様のMAPKの反応様式であることが判明した.

電気刺激が細胞内シグナルへと変換される応答メカニズムの一部が解明され,今後の臨床応用において,さらに有用なメカニカルストレスの条件や刺激方法の確立が期待できる.実験により,骨芽細胞が交流電気刺激からの信号を享受し,その経路としてMAPKの中でERKおよびJNKがリン酸化されることが判明するなど,一定の実験結果を出しているため.24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は交流電気刺激によるALP活性および骨基質マーカーの反応について検討を行い,電気刺激が細胞内シグナルへと変換される応答メカニズムを解明する.24年度が最終年度であるため、記入しない。
蛍光CBMを用いた紅藻アマノリ細胞壁の構造解析

海洋細菌Vibrio sp.MA-138のゲノムDNA由来の組換えβ-1.4-マンナン結合タンパク質(CBM)を蛍光標識し、これをプローブとして、アマノリと同じ科に属するウシケノリから単離したプロトプラストを用いて、細胞壁が形成される様子を観察した。その結果、蛍光CBMは12時間培養後のプロトプラストで結合が観察され始め、60時間培養でプロトプラスト全体がβ-1,4-マンナンで覆われることが判明した。我が国で広く養殖されている重要な産業用海藻であるアマノリの細胞壁はβ-1.4-マンナン,β-1.3-キシラン,ポルフィランというユニークな多糖で構成されている。しかしながら,本海藻細胞壁の構造に関しての知見は乏しいのが現状である。筆者はこれら3種類の多糖分解酵素の遺伝子をクローニングし,それらの塩基配列を解析した結果,いづれの酵素も多糖結合能を有する領域(CBM)を含んでいた。よって,本研究では蛍光標識したこれらCBMをプローブとして,アマノリと同じ科に属するウシケノリから単離したプロトプラストを用いて,細胞壁が構築される様子を観察し,細胞壁の構造に関する知見を得ることを目的とした。構築した蛍光ManCBM/CFPと蛍光TxyCBM/BFPはそれぞれグリコールβ-1,4-マンナンとβ1,3-キシランに結合することが,蛍光顕微鏡で確認された。また,24時間培養したウシケノリプロトプラストと結合実験を行ったところ,TxyCBM/BFPの結合は観察されなかったが,ManCBM/CFPはプロトプラストの外周に結合することが確認された。今後はさらに蛍光アガラーゼCBMを構築するとともに,これら蛍光CBMを用いて,様々な時間培養したプロトプラストとの結合実験を通して,細胞壁が何時どのように形成されていくのかを調べていく予定である。本研究はアマノリ細胞壁多糖分解酵素(β-1,4-マンナナーゼ-C (ManC)、β-1,3-キシラナーゼA(TxyA)、アガラーゼD (AgaD))に存在する各CBMを蛍光標識し、これら蛍光CBMをプローブとして、アマノリと同じ科に属するウシケノリから単離したプロトプラストを用いて、細胞壁が構築される様子を観察し、細胞壁の構造に関する知見を得ることを目的としている。平成19年度はManC由来CBMとTxyA由来CBMをそれぞれ大腸菌で発現させ、GFP融合タンパク質を調製し、これらGFP蛍光CBMはそれぞれβ-1,4-マンナンおよびβ-1,3-キシランに結合することを確認した。しかしながら、AgaDCBMのGFP融合体はアガロースに対する結合力が非常に弱かった。また、TxyA蛍光CBMはウシケノリ細胞壁に対する結合力が非常に弱かった。よって、本実験ではManC由来蛍光CBM(GFP-CBM27)を用いて、ウシケノリプロトプラスト表面におけるβ-1,4-マンナン形成を蛍光顕微鏡で観察した。まず、ウシケノリ葉体をパパインで前処理後、3種類のアマノリ細胞壁多糖分解酵素で処理し、プロトプラストを単離した。これらプロトプラストは60時間までは試験管で培養したものを、それ以後はガラスカバーに付着したものを用いた。その結果、GFP-CBM27は12時間培養後のプロトプラストで結合が観察され始めた。60時間培養でプロトプラスト全体がβ-1,4-マンナンで覆われることが判明した。また、12, 24, 36, 48および60時間ではそれぞれ3, 12, 17, 29, 25%のプロトプラストの細胞表面にGFP-CBM27の結合が観察された。以上の結果から、ウシケノリプロトプラストは12時間後からβ-1,4-マンナンを中心とした細胞壁を形成し始めることが明らかになった。
植物における浸透圧ストレス初期応答機構の解明

地球温暖化等の影響により、作物の成育環境が劣悪化している。安定的な農業生産を行うためにはストレス耐性作物の作出が急務となっている。環境ストレスの中でも干ばつや塩害などの浸透圧ストレスは作物の成育や収量に大きな悪影響を及ぼす。そこで本研究では浸透圧ストレス耐性作物の作出のために、モデル植物シロイヌナズナにおける浸透圧ストレスの初期応答機構の解明を試みた。これまでに浸透圧ストレスの初期段階において、サブクラスI SnRK2-VCS経路による不要なmRNAの分解経路が植物の成長維持に貢献していることを示した。しかし、浸透圧ストレスに応答してどの様にサブクラスI SnRK2が活性化するかは明らかになっていない。そこで次にサブクラスI SnRK2の活性化因子の同定を目指した。浸透圧ストレスの初期段階においてサブクラスI SnRK2と相互作用する因子を同定するため、共免疫沈降および質量分析による解析を行った。その結果、サブクラスI SnRK2の活性化に関与していると考えられるタンパク質キナーゼOSRK(初年度はAKSキナーゼとしていた)を同定した。本年度は、サブクラスI SnRK2とOSRKが植物体内で相互作用していることを確認した。またOSRKが直接的にサブクラスI SnRK2をリン酸化することで活性化していることを示した。また、浸透圧ストレス条件下においてサブクラスI SnRK2とOSRKの機能欠損変異体は類似の成育阻害を示した。さらにトランスクリプトーム解析によって、サブクラスI SnRK2とOSRKの機能欠損変異体において発現が変動している遺伝子の多くが一致していることを示した。以上の結果から浸透圧ストレス時に、OSRKはサブクラスI SnRK2の活性化を通じて転写制御および成長制御を行っていることが示された。本年度はシロイヌナズナにおけるサブクラスI SnRK2の上流活性化因子の同定について中心的に行った。サブクラスI SnRK2の活性化に関わる因子の網羅的な解析によって得られた多数の因子の中から、その最有力候補として3つのOSRK1/2/3タンパク質キナーゼを選抜した。本年度は当初の計画通り、OSRKタンパク質の細胞内局在を、GFPレポーターを用いた解析から明らかにした。またOSRK遺伝子の組織特異的解析を、GUSレポーターを用いて明らかにした。また共免疫沈降法やルシフェラーゼ再構成法などの複数の実験手法により植物体内においてサブクラスI SnRK2とOSRKとの物理的な相互作用を実証した。次に試験管内および植物生体内において、OSRKがサブクラスI SnRK2をリン酸化することで活性化していることを示した。それに加えて、試験管内においてOSRKがリン酸化するサブクラスI SnRK2のアミノ酸残基を特定できた。また、OSRKの機能欠損変異体を用いて表現型解析を行うことでOSRKが浸透圧ストレスの初期応答機構において、植物の成長維持に重要な役割を果たしていることが示された。トランスクリプトーム解析からもOSRKがサブクラスI SnRK2の上流活性化因子であることを示唆した。以上の結果より、OSRKはサブクラスI SnRK2-VCS経路を活性化することで不要なmRNAの分解を促進し、植物の成長制御に貢献していると考えられた。以上のように計画していたOSRKの解析に加え、OSRKがサブクラスI SnRK2の上流因子であることをより確実に証明したことから、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。今後は生体内においてOSRKがサブクラスI SnRK2のどのアミノ酸残基をリン酸化するかを質量分析等で確認する。またサブクラスI SnRK2のリン酸化部位をアラニンやアスパラギン酸に置換することで、擬似リン酸化あるいは非リン酸化型サブクラスI SnRK2を作出し、活性化に及ぼす影響を解析する。またOSRKとサブクラスI SnRK2の遺伝学的相互作用を確認するため、OSRKとサブクラスI SnRK2の両方が欠損した変異体を作出し、各変異体と比較して表現型が加算的にならないかを確認する。これらの成果をまとめ学術雑誌に投稿する予定である。また次なる課題としてOSRKの活性化機構についての解明を行う。OSRKは浸透圧ストレスに応答してリン酸化されるが、そのリン酸化部位を同定する。OSRKの活性化にリン酸化が必要であるを解析するとともに、リン酸化型OSRKを認識する抗体を作製する。また、そのOSRKのリン酸化に関わるキナーゼ等を同定することで浸透圧ストレス感知に関わるタンパク質因子を同定する。そのために、浸透圧センサーとして考えられている因子の機能欠損変異体におけるサブクラスI SnRK2の活性化の評価を行う。またOSRKと相互作用する因子を同定することでOSRKの活性制御因子の同定を試みる。以上の研究を通して、OSRKの活性化機構が明らかにされれば、植物における浸透圧ストレスの感知メカニズムが明らかにされる期待される。

しかし、浸透圧ストレスに応答してどの様にサブクラスI SnRK2が活性化するかは明らかになっていない。そこで次にサブクラスI SnRK2の活性化因子の同定を目指した。浸透圧ストレスの初期段階においてサブクラスI SnRK2と相互作用する因子を同定するため、共免疫沈降および質量分析による解析を行った。その結果、サブクラスI SnRK2の活性化に関与していると考えられるタンパク質キナーゼOSRK(初年度はAKSキナーゼとしていた)を同定した。本年度は、サブクラスI SnRK2とOSRKが植物体内で相互作用していることを確認した。またOSRKが直接的にサブクラスI SnRK2をリン酸化することで活性化していることを示した。また、浸透圧ストレス条件下においてサブクラスI SnRK2とOSRKの機能欠損変異体は類似の成育阻害を示した。さらにトランスクリプトーム解析によって、サブクラスI SnRK2とOSRKの機能欠損変異体において発現が変動している遺伝子の多くが一致していることを示した。以上の結果から浸透圧ストレス時に、OSRKはサブクラスI SnRK2の活性化を通じて転写制御および成長制御を行っていることが示された。本年度はシロイヌナズナにおけるサブクラスI SnRK2の上流活性化因子の同定について中心的に行った。サブクラスI SnRK2の活性化に関わる因子の網羅的な解析によって得られた多数の因子の中から、その最有力候補として3つのOSRK1/2/3タンパク質キナーゼを選抜した。本年度は当初の計画通り、OSRKタンパク質の細胞内局在を、GFPレポーターを用いた解析から明らかにした。またOSRK遺伝子の組織特異的解析を、GUSレポーターを用いて明らかにした。また共免疫沈降法やルシフェラーゼ再構成法などの複数の実験手法により植物体内においてサブクラスI SnRK2とOSRKとの物理的な相互作用を実証した。次に試験管内および植物生体内において、OSRKがサブクラスI SnRK2をリン酸化することで活性化していることを示した。それに加えて、試験管内においてOSRKがリン酸化するサブクラスI SnRK2のアミノ酸残基を特定できた。また、OSRKの機能欠損変異体を用いて表現型解析を行うことでOSRKが浸透圧ストレスの初期応答機構において、植物の成長維持に重要な役割を果たしていることが示された。トランスクリプトーム解析からもOSRKがサブクラスI SnRK2の上流活性化因子であることを示唆した。以上の結果より、OSRKはサブクラスI SnRK2-VCS経路を活性化することで不要なmRNAの分解を促進し、植物の成長制御に貢献していると考えられた。以上のように計画していたOSRKの解析に加え、OSRKがサブクラスI SnRK2の上流因子であることをより確実に証明したことから、本研究はおおむね順調に進展していると考えられる。今後は生体内においてOSRKがサブクラスI SnRK2のどのアミノ酸残基をリン酸化するかを質量分析等で確認する。
グローバル化時代における現代思想―概念マップの再構築

本研究は(1)現代思想のマッピング⇒(4)新しい普遍の創出に至る4つのステージに沿って着実に実施された。そのなかでICCT(東京大学、華東師範大学、北京大学、ニューヨーク大学を中心とする国際コンソーシアム)などの国際的協力関係が構築され、新しい普遍をめぐる最新議論の国際発信基地となった。最終年度の大型国際シンポジウム「“現場"の挑戦と文学の営み」と「“新しい普遍性"をめぐる東アジア三方対話」では東アジアから発信する新しい普遍すなわち地上的普遍性の可能性が議論され、今後の議論の発展に繋がるものとなった。その成果はブックレット『グローバル化時代の現代思想』Vol.15として発表した。第1回目は1月18・19日、香港中文大学にて15名が参加、研究代表者の中島および、分担者の原、石井、清水が参加した。香港中文大学以外からはハーバード大学などから研究者が参加発表した。第2回目は2月8日から10日にはハワイマノア大学で15名の内外の研究者が参加するリサーチミーティング、International conference "Contemporary Philosophy in the Age of Globalization"の第2回目を行った。本研究メンバーからは中島、梶谷、石原が参加、その他アメリカ、イギリス、フィンランドから研究者が参加した。これと並行し、カテゴリー分析に関するリサーチグループのミーティングを4回行った。2月6日は韓国から黄鎬徳氏(成均館大学副教授)を招き韓国文学批評における「アジア的生産様式」に関する講演および討論、2月15日にはRein Raud氏(ヘルシンキ大学)を招き道元解釈に関する講演および討論、同月22日にはYoung Huang氏(ペンシルヴェニア大学)およびJohn Tucker氏(東カルフォルニア大学)を招きそれぞれ儒教に関する講演および討論を行った。2月23日は柿並良佑特任研究員が国内の若手研究者によるワークショップ「ジャン-リュック・ナンシー『フクシマの後で』から出発して」を開催した。このほか、研究代表者と研究分担者によるカテゴリー分析に関するリサーチミーティングを5回ほど行った。まず「ステップ(1)現代思想のマッピング」に関して、10回のリサーチ・ミーティングを行った他、海外研究者の招聘講演を2回行った。平成25年11月9日にはギュンター・ペルトナー教授による講演「〈見えること〉の奇跡ー中世における〈美しさ〉についての思索」が行われ、12月15日にはディディエ・フランク教授を招き、UTCPとの共催でレヴィナス、ハイデガー、ニーチェに関するワークショップを行った。「ステップ(2)カテゴリー毎の分析」に関しては、10回のリサーチ・ミーティングを行った他、海外研究者の招聘講演を2回行った。4月10日にはロッコ・ロンキ教授の講演「盲目の直観ー現代思想における精神分析と現象学の討論」が行われ、10月25日にはピエール・ブリュノ氏による講演「幻想、欲望、および法」が行われた。「ステップ(4)新しい普遍の創出」に関しては、平成25年11月24日にCPAGブックプロジェクト・ワークショップを開き、研究代表者と研究分担者が参加し、新しい普遍の創出に寄与する書籍の刊行に向けた話し合いが行われた。平成26年度はステップ(3)カテゴリー横断的比較思想分析と(4)新しい普遍の創出を実施した。まず(3)に関して、平成25年度のカテゴリー分析で得られた成果を元にして、各カテゴリー担当者がリサーチ・グループを組織し計9回、リサーチ・ミーティングを開催した。このミーティングには研究代表者、研究分担者が参加した。これに関連して、国内外の研究者を招聘し、各講演会を開催した。4月23日にはエリック・カズデン氏、6月21日には飯塚容氏、7月14日にはギョーム・ルブラン氏の講演会を行った。上記のミーティングや講演会、ならびに初年度から行ってきたステップ(1)(3)の成果を踏まえ、ステップ(4)の実践となる大型国際シンポジウムを計4回、開催した。いずれも東アジアを発信源とする新しい普遍の創出を核心とし、研究代表者ならびに研究分担者が企画、司会、報告を行った。まず6月27日、28日にはCPAG/ICCT国際シンポジウム「“現場"の挑戦と文学の営み」を主催した。これは国際コンソーシアムICCT(東京大学、華東師範大学、北京大学、ニューヨーク大学)を母体とし、平野啓一郎氏、青山七恵氏、孫甘露氏という日中の文壇をリードする作家を中心に総勢25名が登壇した。11月14日にはCPAGラップアップシンポジウム「“新しい普遍性"をめぐる東アジア三方対話」を主催し、華東師範大学、延世大学、東京大学の研究者が「新天下主義」(許紀霖氏)などについて議論を展開した。その他4月7日には「東アジアから問う「新しい普遍」」を、1月24日には「新たな普遍性をもとめて」を東京大学UTCPとの共催で行った。

さらに新しい普遍の創出に寄与する書籍の出版に向け、東京大学EALAIとの共同で冬学期連続講義「グローバル化時代の現代思想ー東アジアから」を行い、全ての研究代表者ならびに研究分担者が講義を担当した。26年度が最終年度であるため、記入しない。東アジア思想26年度が最終年度であるため、記入しない。当初の計画では研究は平成24年4月に開始する予定だったが、実際には11月の開始となった。「ステップ1.現代思想のマッピング」については、当初4回のリサーチ・ミーティングを予定していたが、2回に留まっている。また「ステップ2.カテゴリー分析」に関しては当初延べ12回を予定していたが9回に留まっている。しかし、これら、ステップ1および2にかかわるミーティングの中にはすでに、「ステップ3.比較思想分析」に関わる議論も含まれており、全体としてはおおむね順調に進展しているといえる。ステップ(1)とステップ(2)については、それぞれリサーチ・ミーティングを10回ずつ行い、海外研究者の招聘講演も各2回ずつ行うことができた。またステップ(3)についても、4回の海外講演および若手ワークショップを行うことができた。ただステップ(4)については、ブックプロジェクト・ワークショップを行い、話し合いを進めるに留まった。以上の経過から、全体としては概ね順調に進展しているといえる。平成24年度は開始時期が遅れたので予定していた回数分のミーティングを行えなかったが、5か月の間に1年間に予定していた回数の半分以上を実施した。平成25年度は同じペースでミーティングを実施すれば、目標回数を達成できると思われる。これまで行ってきた2つのステップの作業を踏まえて、「ステップ3.比較思想分析」に関するミーティングを開始、10月からは「ステップ4.新しい普遍の創出」を開始する。これまでは、おもにステップ(1)からステップ(3)が中心となりリサーチ・ミーティングが行われてきた。最終年度となる平成26年度には、新しい普遍の創出に関わるリサーチ・ミーティングに注力する。
幼児期の投動作における筋発揮特性の縦断的変化

子どもの運動能力低下は,幼児期から始まっており,その要因として走・跳・投といった基本的な動きの未習得が挙げられる.また,同じような運動経験や運動指導があっても動作の質や技能に違いが見られ,その原因には,力を入れるタイミングなどの「勘」や「コツ」といった内的要因を決定する運動制御能力が大きく関与している可能性が考えられる.そこで本研究は,幼児を対象に,投動作中の筋活動について,ワイヤレス筋電計を用いて計測し,動作の内的要因となる筋発揮メカニズムを縦断的に検討することで,その発達過程を明らかにすることを目的とする.子どもの運動能力低下は,幼児期から始まっており,その要因として走・跳・投といった基本的な動きの未習得が挙げられる.また,同じような運動経験や運動指導があっても動作の質や技能に違いが見られ,その原因には,力を入れるタイミングなどの「勘」や「コツ」といった内的要因を決定する運動制御能力が大きく関与している可能性が考えられる.そこで本研究は,幼児を対象に,投動作中の筋活動について,ワイヤレス筋電計を用いて計測し,動作の内的要因となる筋発揮メカニズムを縦断的に検討することで,その発達過程を明らかにすることを目的とする.