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シスプラチン耐性細胞に対するタキソールの有効性と作用機序に関する分子生物学的検討

3種のシスプラチン耐性株中、2種においてはタキソールに対して感受性を示し、HRAにおいてはシスプラチンとの交差耐性を認めた。シスプラチンおよびタキソールの添加時に、DNAfragmentationを観察し、アポトーシスの関与が示唆された。bcl-2,p53の発現をRNAレベル(RT-PCR法)、タンパク質レベル(Western blotting)で解析し、使用した3細胞株すべてにおいてシスプラチン耐性株において、RNA,タンパク質レベルともにbcl-2の発現増強、p53の発現低下が観察された。シスプラチン投与時にはBcl-2のリン酸化は不明であったが、タキソール投与時にはBcl-2のリン酸化が全例において認められた。また、シスプラチン耐性株においては、タキソール感受性を示したTYK-RとNakajima-Rにおいてはbcl-2のリン酸化を認めたが、タキソール抵抗性のHRA-Rにおいては、bcl-2の発現は親株に比し増強しているものの、bcl-2のリン酸化は10μMタキソールの投与によっても認められなかった。シスプラチン耐性株において、タキソール感受性を示す細胞株ではタキソール添加時にbcl-2のリン酸化が起きさらにアポトーシスを誘導していると考えられた。これがタキソールの作用機序において重要な働きをしている可能性が示された。
電子顕微鏡によるBi_2Sr_2 Ca_<1-x>Lnx Cu_2Oz系の長周期変調構造の研究

正弦波的な格子変調を受けた結晶の超格子による測定可能な反射の数は極端に少ないために、その変調構造の解析は回折的手法だけでは困難を極める。Bi_2Sr_2(Ca_<1-x>Ln_xCu_2O_<8+>δ(Lnは希土類元素)置換系酸化物もその例である。本研究は、上記酸化物の変調構造を解明すること、および酸化物の価数が異なるY(Nd)、Pr、Tbを選び、変調周期のLn濃度依存性、置換元素が濃度依存性に与える置換効果を明らかにすることを目的とし、高分解能電子顕微鏡観察・電子線回折実験により系統的に研究した。以下にその概要を記す。1. 2種類の分域が規則配列した長周期変調構造模型を提唱し、その模型により電子線回析強度分布を説明できることを示した。2. [001]高分解能像の一次元輝度変調をこの系の変調構造の本質を反映したものとして捕らえ、輝度変調を定量化して記録した輝度分布曲線を解析した。その結果、結晶中^1の分域の配列は輝度分布曲線より直接決定されることを始めて解明した。3.変調周期はLn濃度とともに減少するが、置換効果はPrとTbの方がYとNdより大きく、Caの2価とYの3価を基準にすると、PrとTbは3.23.3価に相当する置換効果をもっている。変調周期はLn濃度に対して段階的に減少することが明らかにされつつある。その詳細な研究は、現在改めて進行中であるが、輝度分布曲線より見い出された全ての分域配列は一次元競合系の基底状態の分域配列に対応することが判明している。Bi_2Sr_2(Ca_<1ーX>Y_X)Cu_2O_<8+δ>置換系酸化物の結晶構造は謂わゆる'不整合'変調を受けた超格子の変調構造であるために、その結晶構造解析は困難を極める。最近、筆者らは[001]高分解能電子顕微鏡格子像上の周期的なコントラスト変調の解析により得られる変調構造に関する新しい知見はX線・中性子回折などでは得難いものであることを示した。そして、新しい実験結果を明示して、長周期変調構造モデルを提唱した(Phys.Rev.B43,(1991)13066)。Ln=Pr系についてはX=0.04×n(n=0,1,...,18)の19種の粉末試料を作製し、構造変化などを調べた。以下に実験方法および結果を記述する。2.高分解能電子顕微鏡格子像上のコントラスト変調の解析および電子線回折の強度分布を調べ、(N_<【,>N_<【【>)_<5、>(N_<【,>N_<【【>)_4など表せる長周期変調構造モデルを検証するとともに、以下のことを明らかにした。3.長周期変調構造モデルにもとづいて過剰酸素原子位置を考察し、ヨ-ド滴定法により求めた過剰酸素量(δ)のPr濃度変化を説明できた。上記項目3の内容はPhysica C 185ー189(1991)885に発表され、項目1と2の長周期変調構造に関係した内容はActa Crystallographicaに印刷中である。正弦波的格子変調を受けた結晶の超格子による反射の数は、測定可能という観点からすると極端に少ないために、その変調構造の解析は回折的手法だけでは困難を極める。Bi_2Sr_2(Ca_<1-X>Ln_X)Cu_2O_<8+>δ(Lnは希土類元素)置換系酸化物もその例である。筆者は、高分解能電子顕微鏡観察および電子線回折実験にもとづいた2種類の分域の規則配列から成る長周期変調構造模型を提唱し、電子線回折の強度分布はその模型による強度分布により説明できることを示してきた。

本年度は、平成4年度研究計画に沿って研究は遂行された。1.Ca元素をLn=Pr,NdおよびTb元素で置換し、変調周期の濃度変化および置換元素が変調周期の濃度依存性に与える置換効果の大小を調べた。その結果、Caの2価とYの3価を基準にとると、Ndは3価、PrとTbは3.23.3価の置換効果があることが明らかになった。Y,NdおよびPr置換系に関する結果の一部は、Acta Cryst.に投稿された。2.上記置換系の[001]高分解能像に観察され、且つその基本構造の[001]投影の原子配列より期待できない一次元輝度変調をこの系の変調構造の本質を反映したものとして捕え、輝度変調を定量化して記録した輝度分布曲線を解析した。その結果、結晶中の分域の配列は輝度分布曲線より直接決定されることを始めて解明した。この詳細はJ.Appl.Cryst.26,(1993)に印刷中である。変調構造の変調周期は置換元素の濃度に対して階段的に減少する。その詳細な研究は現在改めて進行中であるが、輝度分布曲線より見い出された全ての分域配列は一次元競合系の基底状態の分域配列に対応することなどが明らかにされている。
Ca^<2+>結合タンパク質NCS-1の細胞死抑制作用:その発見と分子機構の解明

全ての細胞は、酸化や機械的ストレスなど種々のストレスを受け得る。これに対し、細胞内にはその生死を決定する細胞内ネットワークが存在するが、それを"サバイバル"方向に維持することが細胞変性を防ぐ上で特に有効である。細胞内Ca^<2+>の過剰負荷は細胞死の引き金となるが、一方、微量のCa^<2+>濃度変化は、それを感知する特定のCa^<2+>結合タンパク質を介して様々な細胞応答を引き起こし、その中でサバイバル経路も活性化し得ることが近年指摘されている。従って、このような働きを持つCa^<2+>関連タンパク質を発見し、その作用機構を詳細に明らかにすることは、細胞を保護する新たな治療戦略につながる基盤研究として重要である。NCS-1 (Neuronal Ca^<2+> sensor -1)は、主に神経や心臓に発現しているCa^<2+>結合タンパク質で、私達が以前見出したイオンチャネルの制御因子としての働きの他、シナプス伝達や可塑性を制御するなど神経機能に重要な働きを持つことが知られている。しかし、NCS-1の興奮性細胞のサバイバル/アポトーシス経路における役割については全く報告がなかった。私達は本研究の中で、1)神経切断や各種ストレス下の神経細胞において、NCS-1の発現量が増加する。2)その生理的意義はサバイバル促進作用である。3)NCS-1は、サバイバル作用をもつ神経栄養因子GDNFの下流に存在し、PI3K/Aktの経路を活性化することにより、そのサバイバル作用を仲介する。4)神経切断時においても神経が死滅しないのは内因性の抗アポトーシス機構によるものであるが、それにNCS-1が重要な役割を果たしている。という4つの点に関し、in vitro, in vivo両方の系で示し、2006年のJ Cell Biolに掲載した。これらの知見は、生命現象の解明のみならず、各種神経変性疾患の予防、診断、治療のための新たな分子的戦略が得るうえで大いに役立つことが期待される。NCS-1(Neuronal Ca^<2+> sensor-1)は、主に神経や心臓に発現しているCa^<2+>結合タンパク質で、私達が以前見出したイオンチャネルの制御因子としての働きの他、シナプス伝達や可塑性を制御するなど神経機能に重要な働きを持つことが知られている。私達は本研究で、1)NCS-1が障害を受けた神経細胞において、その発現量が増加するサバイバル因子として働くという全く新しい重要機能を見出し、in vivo, in vitroの系でこれを証明した。

また神経障害時にはBDNFやGDNFといった種々の神経栄養因子が分泌されサバイバル促進的に働くことが知られているが、2)NCS-1がGDNFのサバイバル作用を仲介すること、3)その作用機構としてAKTの活性化を介してサバイバル促進的に働くことを明らかにした。本研究は、2006年のJ Cell Biolに掲載予定である。これらの知見は、生命現象の解明のみならず、各種神経変性疾患の予防、診断、治療のための新たな分子的戦略が得るうえで役立つことが期待される。全ての細胞は、酸化や機械的ストレスなど種々のストレスを受け得る。これに対し、細胞内にはその生死を決定する細胞内ネットワークが存在するが、それを"サバイバル"方向に維持することが細胞変性を防ぐ上で特に有効である。細胞内Ca^<2+>の過剰負荷は細胞死の引き金となるが、一方、微量のCa^<2+>濃度変化は、それを感知する特定のCa^<2+>結合タンパク質を介して様々な細胞応答を引き起こし、その中でサバイバル経路も活性化し得ることが近年指摘されている。従って、このような働きを待つCa^<2+>関連タンパク質を発見し、その作用機構を詳細に明らかにすることは、細胞を保護する新たな治療戦略につながる基盤研究として重要である。NCS-1(Neuronal Ca^<2+>sensor-1)は、主に神経や心臓に発現しているCa^<2+>結合タンバク質で、私達が以前見出したイオンチャネルの制御因子としての働きの他、シナプス伝達や可塑性を制御するなど神経機能に重要な働きを持つことが知られている。しかし、NCS-1の興奮性細胞のサバイバル/アポトーシス経路における役割については全く報告がなかった。私達は本研究の中で、1)神経切断や各種ストレス下の神経細胞において、NCS-1の発現量が増加する。2)その生理的意義はサバイバル促進作用である。3)NCS-1は、サバイバル作用をもつ神経栄養因子GDNFの下流に存在し、PI3K/Aktの経路を活性化することにより、そのサバイバル作用を仲介する。4)神経切断時においても神経が死滅しないのは内因性の抗アポトーシス機構によるものであるが、それにNCS-1が重要な役割を果たしている。という4つの点に関し、in vitro、in vivo両方の系で示し、2006年のJ Cell Biolに掲載した。これらの知見は、生命現象の解明のみならず、各種神経変性疾患の予防、診断、治療のための新たな分子的戦略が得るうえで大いに役立つことが期待される。
電解作用を併用した研削加工による超硬合金の高効率高品位加工技術の開発

本研究では、超硬合金(炭化タングステンWCとコバルトCoを主成分とした硬質の焼結材料)の高速高精度な加工方法として、電解加工を併用した研削加工(以下、電解複合研削と呼ぶ)に注目している。研削加工に電解加工の作用を複合させることで、加工効率を飛躍的に高めることができるが、一方で電解作用による超硬合金材料の品質を劣化させるという問題があることがわかってきている。本研究では、電解加工によりCoを適切な速度で溶出させ、研削加工の効率を上げると同時に、過多なCoの溶出を防止し、超硬合金の品質を劣化させず、高品位高効率に加工する技術の確立を目指している。平成30年度は、本方法により、超硬合金の高能率加工が可能であることの確認と、電解作用の加工面への影響の調査を行った。研削抵抗を測定するための簡易的な研削抵抗測定装置を製作し、電解作用のありなしでの研削抵抗への影響について調査した。その結果、概略ではあるが、研削抵抗がおよそ4分の1程度以下とできることが分かった。また、電解作用による加工面の反応について調べ、超硬合金の成分であるCoが先に溶出し、その後にWCの酸化現象が始まることが分かった。すなわち、研削加工との複合加工では、Coの溶出直後に効率よく超硬合金のWCを除去加工が可能であることがわかり、高能率加工できることを示した。さらに、複合加工を行った加工面を分析し、Coの溶出痕が残っていることを明らかにした。このことは加工速度をさらに上げることができるということを示している一方で、最終仕上げ加工においては、Coの溶出痕を表面に作らないように電解作用を停止するという加工方法上の指針を与えるものである。加工屑を分析したところ、成分は、WCとCであり、目指した通り、Coを溶出させ、WCが参加する前の状態で効率よく除去加工がおこなわれていることを示している。複合加工に利用する電解現象について調査し、加工部位表面に与える影響を調べたところ、期待する成果を得ることができた。電解により超硬合金に起こりうる反応には、CoのCo2+としての溶出、Coの酸化(CoOへの変化)、WCの酸化(WO3への変化)がある。Coの溶出は,超硬合金のバインダを除去して脆くし,切削の効率を上げる効果がある。Coの酸化は、超硬合金の表面に絶縁膜を作り、電解作用を妨げると考えられる。WCの酸化は硬質のWCを脆弱な材料に変える反応であり絶縁物であるため電解作用を妨げると考えられる。本方法では電解の電流をCoの溶出に使い、脆弱化した材料を効率よく削り落としたいので、できるだけCoの溶出反応のみを起こすことが望ましい。平成30年度の研究により、電解作用により、超硬合金表面には3種類の反応すべてが起きるが、反応には時間差があり、最初にCoの溶出が起き、表面のCoが溶出した後で、酸化現象が起きることが確認できた。電解の電流値を上げて反応を速めたときにも、反応の時間が短出されるものの反応の順番は変わらないことも確認できた。この結果は、実際に複合加工を行ったときの加工屑の分析からも裏付けられており、加工屑成分はWCとCのみしか検出できなかった。WCが検出されたということは、Coが溶出して脆弱化した超硬合金を効率よく除去できていることを示しており、Cが検出されたことは、工具として使用している砥粒が検出されたということと考えている。また、簡易的な方法ではあるが、計画前倒しで、研削抵抗を測定することができ、精度のよくない方法ではあるものの、大幅に研削抵抗を低減できることを示すことができた。以上のように、予定前倒しで本技術の有効性を示すことができたと考えている。計画前倒しで平成30年度に研削抵抗の低減効果を確認できたが、令和1年度は、電解作用の条件と研削の条件との関係について詳しく調査する。電解の電圧を上げて電解反応の速度を高めることで、どこまでの加工速度が可能かについて調査する。電圧を上げることで臨まない放電の発生も予想されるため、工具である砥石の構造についても検討を行う。また、電解の電圧を上げることにより、加工部位以外への影響も大きくなるため、電解電源の条件の観点と、電解液の成分の観点での検討を進める。さらに加工電極近傍に保護用の電極(工作物に対してプラスの極性とする)を設置する方法も検討する。

また、電解作用による加工面の反応について調べ、超硬合金の成分であるCoが先に溶出し、その後にWCの酸化現象が始まることが分かった。すなわち、研削加工との複合加工では、Coの溶出直後に効率よく超硬合金のWCを除去加工が可能であることがわかり、高能率加工できることを示した。さらに、複合加工を行った加工面を分析し、Coの溶出痕が残っていることを明らかにした。このことは加工速度をさらに上げることができるということを示している一方で、最終仕上げ加工においては、Coの溶出痕を表面に作らないように電解作用を停止するという加工方法上の指針を与えるものである。加工屑を分析したところ、成分は、WCとCであり、目指した通り、Coを溶出させ、WCが参加する前の状態で効率よく除去加工がおこなわれていることを示している。複合加工に利用する電解現象について調査し、加工部位表面に与える影響を調べたところ、期待する成果を得ることができた。電解により超硬合金に起こりうる反応には、CoのCo2+としての溶出、Coの酸化(CoOへの変化)、WCの酸化(WO3への変化)がある。Coの溶出は,超硬合金のバインダを除去して脆くし,切削の効率を上げる効果がある。Coの酸化は、超硬合金の表面に絶縁膜を作り、電解作用を妨げると考えられる。WCの酸化は硬質のWCを脆弱な材料に変える反応であり絶縁物であるため電解作用を妨げると考えられる。本方法では電解の電流をCoの溶出に使い、脆弱化した材料を効率よく削り落としたいので、できるだけCoの溶出反応のみを起こすことが望ましい。平成30年度の研究により、電解作用により、超硬合金表面には3種類の反応すべてが起きるが、反応には時間差があり、最初にCoの溶出が起き、表面のCoが溶出した後で、酸化現象が起きることが確認できた。電解の電流値を上げて反応を速めたときにも、反応の時間が短出されるものの反応の順番は変わらないことも確認できた。この結果は、実際に複合加工を行ったときの加工屑の分析からも裏付けられており、加工屑成分はWCとCのみしか検出できなかった。WCが検出されたということは、Coが溶出して脆弱化した超硬合金を効率よく除去できていることを示しており、Cが検出されたことは、工具として使用している砥粒が検出されたということと考えている。また、簡易的な方法ではあるが、計画前倒しで、研削抵抗を測定することができ、精度のよくない方法ではあるものの、大幅に研削抵抗を低減できることを示すことができた。以上のように、予定前倒しで本技術の有効性を示すことができたと考えている。計画前倒しで平成30年度に研削抵抗の低減効果を確認できたが、令和1年度は、電解作用の条件と研削の条件との関係について詳しく調査する。電解の電圧を上げて電解反応の速度を高めることで、どこまでの加工速度が可能かについて調査する。電圧を上げることで臨まない放電の発生も予想されるため、工具である砥石の構造についても検討を行う。また、電解の電圧を上げることにより、加工部位以外への影響も大きくなるため、電解電源の条件の観点と、電解液の成分の観点での検討を進める。さらに加工電極近傍に保護用の電極(工作物に対してプラスの極性とする)を設置する方法も検討する。中古の研削盤を購入して実験に使用する計画であったが、希望する機械を購入することができなかったため、平成30年度は、既設のフライス盤を使用し、電直砥石により基礎実験を行った。
夏期における室内気流の評価に関する研究-天井及び床吹きだし気流の快適性に関する実験的研究-

夏期のオフィス環境等の室内空間における、温熱的快適性と人体への気流の影響検討することを目的とする研究一環として、空調設備の気流の吹き出し方式の違いによる人体の温熱的快適性への影響を明らかにすることを目的として実験を行った。人工気候室にて夏期のオフィス環境を想定して、気温25°C、27.5°C、30°Cの3段階を設定し、相対湿度50%一定とした。気流は3室の人工気候室を用い、「天井吹きだし」「床吹きだし」「壁面吹きだし」の3条件とし、気流速度は被験者の位置で0.20.3m/sの微弱気流とした。夏服着用の健康な平均的体格の青年女子を被験者とし、実験中はパソコンのによる数値入力作業を科し、各温熱条件に60分暴露した。測定項目は生理的反応として皮膚温14点、心理的反応として温冷感、快適感、気流感等とした。(1)平均皮膚温は、吹き出し方式別に検討すると、壁面吹き出しが最も低く、天井吹き出し、床吹き出しの順に低くなる。これは、皮膚温が気流による人体の暴露面積の影響で暴露面積が大きい方がより低下することが考えられる。(2)全身温冷感は、顕著な差は認められないが、気温25°Cでは床面が、27.5°C及び30°Cでは天井吹き出しが最も涼しい側の申告である。(3)快適感は、気温25°Cでは壁面吹き出しが、27.5°C及び30°Cでは天井吹き出しが最も快適と申告され、天井吹き出しでは「やや涼しい」方が、床吹き出しでは「どちらでもない」で最も快適と快適された。(4)どの気温でも天井吹き出しが「好きな」「満足した」と評価された。
２型糖尿病患者の主体的な生活を支える連続性を基盤とした看護実践評価指標の開発

本研究では、看護師が2型糖尿病とともにある人の主体的な生活の営みを支援する看護実践を発展させていくことを目指す看護実践の評価指標を開発した。開発された看護実践評価指標は、看護師が患者の連続性を把握する、あるいは把握するための情報の不足に気付くことに活用でき、そのことによって患者が主体的に生活と糖尿病の療養行動が縒りあった生活調整を行うことを支援する糸口の発見につながることが示された。また、本評価指標は、看護師個人が一事例の看護実践を振り返り看護を発展させるだけでなく、複数の看護師で評価指標を活用することで、看護師の実践能力向上にも活用できうることが示唆された。今年度は、前年度に明らかにした2型糖尿病患者の連続性を把握し、評価するための構成要素毎に下位項目を先行研究の実践内容の二次分析により抽出した。その結果をもとに専門家会議に用いる仮評価指標の作成を行った。現在は評価指標の洗練のための専門家会議開催に向けての調整を行っている。また、糖尿病看護領域における研究を概観し、現在に至る糖尿病患者に関する研究知見を明らかにした。その結果【不快感情や困難さがありながらも、喜びを感じ、志向性・主体性を保ち拡張しつつ生きる自己の様相】【信じ拠りどころとなるものと共に生きようと抱いている思い】【食事療法継続に対する糖尿病患者のコーピング行動】【小児糖尿病患者の療養行動と影響しあう、年齢を重ねる変化や家族の関係性の中での行動の自立とは異なる判断・意味づけができる主体性】【糖尿病の自己管理と、自己の生活・身体状況・意識・価値観・感情・学習・社会的関係性との関連性】【心理面、社会面、身体面、自己管理行動が影響する糖尿病患者のQOLや治療満足】の6つのテーマに統合された。今後はこの研究結果を踏まえ、連続性を基盤とする看護実践の糖尿病看護領域における位置づけを明確にしながら評価指標を作成していく予定である。今年度の研究実施計画である評価指標の構成要素を抽出するために、2型糖尿病患者を支援する看護師が患者のウェルビーイングに重要な「連続性」を把握し評価するときの看護師の視点の構成要素を明らかにする研究を行った。データ収集は、外来通院している2型糖尿病患者3名に対し月1から2回の頻度で10か月間行った看護実践内容をデータとし、看護師が行った連続性のアセスメント及び評価を抽出し、質的統合法(KJ法)を用いて分析することで、連続性を把握し評価するための構成要素を抽出した。結果、2型糖尿病患者の連続性を把握するための評価の構成要素として、【変化度:生活調整の中での変化】【持続性:自己像の維持】【統合:自己と生活調整の相互浸透】【受容度:打開できない者の受け入れ】【掌握度:人生の道のりの見通し】【志向性:生活調整での関心の向き様】【関連性:出来事のつながり合い】の7要素が抽出された。本研究で明らかになった7要素は、連続性に着目した看護実践の評価指標の項目作成の際に活用できると考える。また、本研究で明らかになった7つの構成要素の内容及び関係性から、実践の中で少しづつこの7つの構成要素を紐解くことで、実践の一つ一つの患者との出会いの中で垣間見える患者の様子から、患者の連続性という全体論的なものを把握し評価していくことが出来ることが示めされた。この結果は、実践家にとって実用性があり、ケアを循環的に発展させるための評価指標の活用方法を考える際の示唆となる。平成26年度は、前年度までに作成した仮評価指標の洗練化のための専門家会議を行った。その結果、評価指標の位置づけ(評価指標と実践とのつながり、看護実践モデルの中での評価指標の位置づけなど)、活用する対象特性(使用する看護師の特性、活用が望ましい患者の特性など)を再検討し明確化し、それにあわせた文言や内容量に修正していくことが必要であることの指摘があった。また、評価指標を使用することにより看護実践がどう変化するのかや期待される患者の変化など評価指標活用による効果を明確化する重要性についての意見もあった。さらに具体的な使用方法について、説明文だけでなく、事例を用いて説明する方が実践看護師には理解しやすい等の活用に向けた説明方法についての指摘があった。これらの結果を踏まえて、仮評価指標を修正した。今後行う予定となっている糖尿病看護を実践している看護を対象とした実践適用可能性に関する研究について、方法、時期、対象者の選定方法などを検討し、研究計画書を作成した。本研究では臨床で実践を行っている看護師が2型糖尿病とともにある人の主体的な生活の営みを支援する看護実践を発展させていくことを目指すため、看護師自身が患者のウェルビーイングに重要な連続性の視点から自己の実践を評価することに活用する看護実践の評価指標を開発した。第一段階として、外来に通院している2型糖尿病患者へ行った看護実践内容から連続性を把握し評価するための構成要素を抽出する研究を行った。その結果、【変化度】【持続性】【統合】【受容度】【掌握度】【志向性】【関連性】の7要素が抽出され、各要素の下位項目から、看護実践の評価指標(案)を作成した。

第2段階として、糖尿病認定看護師および糖尿病看護の研究者が参加する専門家会議を開催し、作成した看護実践の評価指標(案)の実践適用可能性について討議・検討した内容を分析し、看護実践への適用方法およびそれに基づく評価指標の修正点を導き出し、最終的な評価指標を完成させた。本研究で開発された看護実践評価指標は、患者の主体的な生活調整が見えづらく、看護介入の方向性が見えづらくなっている看護師が、自分が持っている患者情報を整理し、患者の連続性を把握する、あるいは把握するための情報の不足に気付くことに活用できる。また、そのことによって、患者が生活と糖尿病の療養行動とを縒り合わせ主体的に生活を調整していくことを支援するための糸口の発見につながることが示された。また、適用方法として看護師個人が自己の看護を振り返ることに活用できるとともに、複数の看護師で評価することで、患者理解が膨らみより建設的な看護実践につながることが示唆され、今後は評価指標を活用した看護教育プログラムを開発することで、個々の事例での看護実践のみならず、看護師の実践能力向上にも活用できる可能性が示唆された。本研究では、看護師が2型糖尿病とともにある人の主体的な生活の営みを支援する看護実践を発展させていくことを目指す看護実践の評価指標を開発した。開発された看護実践評価指標は、看護師が患者の連続性を把握する、あるいは把握するための情報の不足に気付くことに活用でき、そのことによって患者が主体的に生活と糖尿病の療養行動が縒りあった生活調整を行うことを支援する糸口の発見につながることが示された。また、本評価指標は、看護師個人が一事例の看護実践を振り返り看護を発展させるだけでなく、複数の看護師で評価指標を活用することで、看護師の実践能力向上にも活用できうることが示唆された。今年度行う予定であった糖尿病看護の実践を行っている看護師への講義、グループインタビュー、および、看護実践の振り返りへの適用による実践適用可能性についての検討が、専門家会議の日程の遅延や講義内容の作成への時間が要したことから、予定通り進んでいない。補助事業期間の延長を申請し、来年度にこれらについて実施する予定となっている。慢性看護学年度早々に実践適用可能性に関するの研究の計画書を倫理審査にかけ、承認され次第、実施する。実践適用可能性について、看護師に対する講義の参加者へのアンケート調査、グループインタビュー調査で得られたデータの他、実際に看護実践の振り返りへ適用した際のデータから検討を行う予定である。しかし看護実践の振り返りは、モデルへの十分な理解の下で使用することが必要なため、必要時には研究者とともに実践を振り返る機会を作れるようにするなど、対象に合わせて柔軟に対応するようにする。当初の予定では、本年度で専門家会議を行い、仮評価指標の妥当性の検討および洗練を行う予定であったが、専門家とのスケジュール調整に難航し、実施できず、仮評価指標の作成段階でとどまった。そのため、本年度は本評価指標を説明するために有用となる連続性を基盤とする看護実践および評価指標の糖尿病看護領域における位置づけを明確化するための研究を行った。平成24年度の研究実施計画は、1)主体的な生活調整を支援する際の困難についての臨床看護師へのインタビュー調査により、評価指標の導入方法の基礎資料とすること、2)評価指標の項目の抽出の2点であった。2)評価指標の項目抽出は実践内容の分析により明らかとなり達成された。1)のインタビュー調査は未施行なのは、導入方法の検討を、看護師の現状の困難から明らかにする間接的方法ではなく、直接的に評価指標を作成し、専門家会議にかけることで、導入方法を検討する方法に変更したことによる。
IL-2遺伝子導入キラーT細胞を用いた癌養子免疫療法の確立

サイトカイン遺伝子導入による癌遺伝子治療の基礎的検討を行うため,転移性悪性黒色腫組織から分離した腫瘍浸潤Tリンパ球(TIL)にインターロイキン-2(IL-2)遺伝子を導入した.3'-非翻訳部分を除去した480bpのIL-2遺伝子を導入に用いることで,TILから高濃度のIL-2を産生させることに成功した.培地からIL-2を完全に除去してもIL-2遺伝子導入TILは自己増殖し,その増殖は抗IL-2抗体または抗Tac抗体で完全に抑制されることから,autocrine loopを介した反応であることを明らかにした.さらに,臨床応用に必要な基礎的実験を継続したものの,IL-2遺伝子の導入は悪性黒色腫症例由来のTILにのみ導入可能であり(導入成功率:3/12例),大腸癌由来のTILでは有意なタンパクの発現を確認できなかった.以上より,TILにサイトカイン遺伝子を導入することはきわめて困難であり,われわれの目的とする消化器癌に対するIL-2遺伝子導入キラーT細胞を用いた癌遺伝子治療は現実的には不可能であると考察した.そこで,腫瘍細胞,リンパ球につづく第3の遺伝子導入の担体として線維芽細胞に着目し,本研究を線維芽細胞を用いた遺伝子治療として発展させた.その結果,(1)レトロウイルスベクターを用いてマウス線維芽細胞(BALBCL7)およびマウス腫瘍細胞(CT26)へIL-2遺伝子を導入したところ,高濃度のIL-2を産生した.(2)IL-2遺伝子導入線維芽細胞は皮下接種局所の腫瘍増殖を抑制した.(3)IL-2遺伝子導入線維芽細胞により抗腫瘍効果を認めたマウスは,高いCTL(細胞傷害性リンパ球)誘導能を有していた.(4)そのeffectorcellは,各種抗体による検討から,CD8陽性Tリンパ球が大きく関与し,NK細胞も一部関与していた.(5)進行大腸癌モデルとしてマウスの盲腸に同所移植モデル(orthotopic model)を作成し,IL-2遺伝子導入線維芽細胞の皮下接種による遺伝子治療を行ったところ,腹腔内における大腸癌の局所増殖を抑制した.その際,ヌードマウスではその効果を認めないことから,Tリンパ球の関与が追証された.以上,得られた(1)(5)の成績を現在,英文学術誌に投稿中であり,さらにIL-2遺伝子導入線維芽細胞の臨床応用を目的とした安全性の検討を進めている.サイトカイン遺伝子導入による癌遺伝子治療の基礎的検討を行うため,転移性悪性黒色腫組織から分離した腫瘍浸潤Tリンパ球(TIL)にインターロイキン-2(IL-2)遺伝子を導入した.3'-非翻訳部分を除去した480bpのIL-2遺伝子を導入に用いることで,TILから高濃度のIL-2を産生させることに成功した.培地からIL-2を完全に除去してもIL-2遺伝子導入TILは自己増殖し,その増殖は抗IL-2抗体または抗Tac抗体で完全に抑制されることから,autocrine loopを介した反応であることを明らかにした.さらに,臨床応用に必要な基礎的実験を継続したものの,IL-2遺伝子の導入は悪性黒色腫症例由来のTILにのみ導入可能であり(導入成功率:3/12例),大腸癌由来のTILでは有意なタンパクの発現を確認できなかった.以上より,TILにサイトカイン遺伝子を導入することはきわめて困難であり,われわれの目的とする消化器癌に対するIL-2遺伝子導入キラーT細胞を用いた癌遺伝子治療は現実的には不可能であると考察した.そこで,腫瘍細胞,リンパ球につづく第3の遺伝子導入の担体として線維芽細胞に着目し,本研究を線維芽細胞を用いた遺伝子治療として発展させた.その結果,(1)レトロウイルスベクターを用いてマウス線維芽細胞(BALBCL7)およびマウス腫瘍細胞(CT26)へIL-2遺伝子を導入したところ,高濃度のIL-2を産生した.(2)IL-2遺伝子導入線維芽細胞は皮下接種局所の腫瘍増殖を抑制した.(3)IL-2遺伝子導入線維芽細胞により抗腫瘍効果を認めたマウスは,高いCTL(細胞傷害性リンパ球)誘導能を有していた.(4)そのeffectorcellは,各種抗体による検討から,CD8陽性Tリンパ球が大きく関与し,NK細胞も一部関与していた.(5)進行大腸癌モデルとしてマウスの盲腸に同所移植モデル(orthotopic model)を作成し,IL-2遺伝子導入線維芽細胞の皮下接種による遺伝子治療を行ったところ,腹腔内における大腸癌の局所増殖を抑制した.その際,ヌードマウスではその効果を認めないことから,Tリンパ球の関与が追証された.以上,得られた(1)(5)の成績を現在,英文学術誌に投稿中であり,さらにIL-2遺伝子導入線維芽細胞の臨床応用を目的とした安全性の検討を進めている.1.レトロウイルス感染に感受性の高いキラー細胞の誘導法の確立腫瘍組織より腫瘍浸潤リンパ球(TIL)を分離し,同時に未抹消血単核球と自己腫瘍細胞との混合培養で細胞障害性リンパ球を誘導する際に,固相化抗CD3抗体とIL-2を併用することで自己腫瘍細胞に特異的なキラーT細胞の誘導を確立できた.さらに,この系に固相化フイブロネクチンを併用することで,レトロウイルス感染に対する感染効率が亢進することを確認した.高発現性IL-2遺伝子の合成とpackaging細胞への遺伝子移入大腸菌プラスミドpBR322に挿入しているヒト

IL-2cDNAを鋳型として,PCR法により2種類の長さのIL-2遺伝子,すなわち,全長のもの(650bp)とAT配列に富む3′-非翻訳部分を除いたもの(480bp)を合成した.さらに,合成した2種類のIL-2遺伝子(pLNCIL-2)をPackaging細胞(amphotropic PA317,ectropic ψ2)にlipofection法を用いて遺伝子移入し,レトロウイルス産生細胞を樹立した.また,PA317細胞,ψ2細胞を限界希釈法でクローニングし,これらの細胞で感染させたNIH3T3細胞でウイルス価の測定を行い,titerの高いことを確認した.1.ヒトキラーT細胞へのIL-2遺伝子の導入平成7年度の研究より得られたPA317とψ2の高力価ウイルス産生Packaging細胞クローンを用いて,ping-pong反応を行い,viral titerを上昇させて遺伝子を導入した.この際,標的細胞へのレトウイルスベクターの感染は従来から用いられている上清による感染ではなく,独自に開発したdouble chamberを用いた.この方法は下層にping-pong反応させたPackaging細胞を,上層に導入標的細胞であるキラーT細胞を培養することにより持続感染させることで,さらなる感染効率の向上を目的とするものであり,実際,この方法により,遺伝子導入が困難とされていたヒトキラーT細胞に対しても高い導入効率でIL-2遺伝子を導入出来ることを確認した.また,今回遺伝子導入を行ったIL-2cDNAは全長のもの(650bp)とAT配列に富む3′-非翻訳部分を除いたもの(480bp)の計2種類を用いた.IL-2遺伝子導入キラーT細胞の分子生物学的検討IL-2遺伝子導入腫瘍浸潤リンパ球(TIL),細胞障害性リンパ球(CTL)からgenomic DNAを抽出し,遺伝子導入したIL-2遺伝子がgenomic DNAにintegrationされているかをSouthern blotting法により確認した.また,ping-pong反応において危惧される目的遺伝子の塩基配列の欠失も認められなかった.サイトカイン遺伝子の3′-非翻訳部分は,その存在によりmRNAがRNaseに障害され,半減期が短縮されると報告されているが,IL-2 cDNAの3′-非翻訳部分を除いたものを導入したキラーT細胞のIL-2 mRNAの発現をNorthern blotting法で検討すると,mRNAの半減期が延長していることが確認できた.平成8年度の研究実績に基づき,以下の知見を得ることができた.1.IL-2遺伝子導入キラーT細胞の生物活性の検討IL-2遺伝子導入キラーT細胞のIL-2産生能をELISA法およびIL-2依存性に増殖するHT-2細胞を用いたbioassay法で測定することにより,遺伝子導入細胞から生理活性を有するIL-2が産生されていることを確認した.
新規大環状機能性配位子の創製とそれを用いる希土類錯体の物性および相互分離の新展開

希土類元素はその錯形成反応が類似しているため最も分離し難いイオンでありこの分離能を向上させることはすべての元素の選択性に特異性をもたらすことである。アザチアクラウンエーテル(1,4,10,13-テトラチア-7,16-ジアザシクロオクタデカン,ATCO);FATCO;1,4,7,18,21,24-ヘキサチア[7.7]フェロセノファン;1,7,18,24-テトラチア-4,21-ジオキサ[7.7]フェロセノファン及び1,4,7,10,21,24,27,30-オクタチア[10.10]フェロセノファンの合成を行い、それらの化学的性質を検討した。それらはハード性の希土類と特異的相互作用のあることを見いだした(増田・佐藤)。また、ATCOとラウリン酸を用いた希土類の溶媒抽出機構を解明し、軽希土と重希土の分離が可能なことも見いだした。更に、ジクロルエタン中の抽出錯体の安定度定数log K_<ML>を求めた{Sm(5.8)>Pr(5.7)>Eu(5.6)>Ce(5.3)>Gd(2.8)}。同時に協同抽出系の熱力学的データについても検討し、新しい興味ある結果を得た(増田)。抽出剤TFAと水溶性錯溶剤(Kryptfix22)の組み合わせによる希土類の抽出機構を解明した。Kryptfix22の抽出へのマスキング効果が示され、これによりこの錯体の水溶液中での安定度定数を求めることが可能になったのは新しい発見である(log K_<ML>aq:Gd(11.0)>Ho(10.8)>Yb(10.6)>Eu,Y(10.0).協同効果を防ぐために0.1M塩化ナトリウム水溶液と四塩化炭素溶媒の組み合わせを用いたことが有効であった(増田、稲葉)。カリックスアレン誘導体(p-tブチルカリックス[n]アレン(n=4,6,8,)を用い、スカンジウム(III)及びセリウム(IV)の錯体を合成し、それらの化学的性質を明らかにした。化学種の構造についてもMMR法を用いて解明することに成功した。次に、2,6-ジアンセチルピリジンのシッフ塩基希土類錯体の電極反応機構の解明及び非水溶媒(DMF)中での錯体の安定度定数を伝導度測定によって求めた。これらは機能の発現に寄与し、分離・分析と新材料への応用が期待できる。
左室・右室圧負荷による電気的リモデリングと心筋リモデリングの相互関与に関する研究

心室負荷時の易催不整脈性は心室筋ストレッチ等による電気的変化を表すものと推察される。その機序は不明だが、電気的・病理的心筋リモデリングの相互関与は重要な役割を果たすものと考えられる。本研究ではモノクロタリン(MCT)誘発右室圧負荷モデルラットにin vivo心臓電気生理学的検査(EPS)を施行し、肺高血圧下の電気的特性・催不整脈性を検討した。【方法】6週齢雄S-DラットにMCT0.060mg/g(MCT群)又は生理食塩水(対照群)を皮下注射後4週目に体表面心電図記録(sECG)・EPSを施行した。Pentobarbital(0.033mg/g)腹腔内注射による催眠下にsECG(6肢誘導)を記録し、その後、内頚静脈切開法により遠位4極が右室内、近位4極が右房内に位置するよう2Fr8極電極カテーテルを挿入し、各々2極間で刺激又は電位記録を行った。従来の方法で洞結節、心房、房室結節、心室における電気特性を評価し、プログラム刺激で催不整脈性を検討した。【結果】MCT群(n=12)・対照群(n=25)の結果はそれぞれ以下の通りであった。sECG:SCL=162±7ms、157±3ms、PR=45±1ms、46±1ms、QRS=24±1ms、35±0ms(p<0.05)、QTc=75±6ms、57±1ms(p<0.05)、EPS:SNRT=179±4ms、190±4ms、AVERP=78±2ms、81±2ms、AERP=46±3ms、22±2ms(p<0.05)、心房頻回刺激下Wenckebach-AVB-rate=98±2ms、98±1ms、2:1rate=83±2ms、85±1ms、心室頻回刺激下Wenckebach-VAB-rate=131±2ms、149±5ms、RVERP=63±5ms、42±2ms(p<0.05)、心房頻拍はそれぞれ0 vs 7例、心室頻拍は1 vs 3例に誘発された。右室または左室圧負荷による致野性不整脈の出現において、電気的心筋リモデリングと病理的心筋リモデリングは相互に関与しているものと考えられるが、その詳細な検討は少ない。本研究では、心圧負荷モデルラットを使用して両者の相互関与について検討し、圧負荷による催不整脈性のメカニズムを解明する。【方法】6週齢のS-Dラットに対して、右室圧負荷群はmonocrotaline(0.060mg/g)を、対照群には生理食塩水を皮下注射し、投与後3過日に体表面心電図記録およびin vivo心臓電気生理学的検査(EPS)を施行した。まず、充分な鎮静下に、電極を四肢に装着し体表面心電図を記録した。その後、内頚静脈切開法により8極電極カテーテルを挿入し、遠位4極を右室内、近位4極を右房内に留置し、各々2極間で刺激あるいは電位記録を行った。

従来の方法で洞結節、心房、房室結節、心室における電気特性を評価し、更にプログラム刺激により催不整脈性を検討した。全過程終了後心筋標本を摘出した。【結果】正常対照群(n=25)における結果は以下の通りとなった。体表面心電図記録ではSCL=156.5±3.2ms(HR=387.2±7.8bpm)、PR=45.5±0.7ms、QRS=34.6±0.4ms、QT=71.2±0.6ms、QTc=57.2±0.7ms、in vivo EPSではSNRT=190.O±4.0ms、AVERP=81.4±2.3ms、AERP=22.2±1.7ms、心房頻回刺激下Wenckebach-AVB-rate=97.8±1.4ms、2:1rate=85.3±1.2ms、心房頻回刺激下Wenckebach-VAB-rate=148.5±4.8ms、RVERP=42.3±2.4ms、心拍頻拍は7例、心室頻拍は3例に誘発された。心室負荷時での催不整脈性には、心室筋のストレッチ等による電気的な変化が推察されるが、その詳細は不明である。その機序として電気的心筋リモデリングと病理的心筋リモデリングの相互関与が重要な役割を果たしているものと考えられる。本研究では、今年度、肺高血圧右室圧負荷モデルラットを用いて両者の相互関与について検討し、圧負荷による催不整脈性のメカニズムを解明した。【方法】6週齢のS-Dラットに対して、monocrotaline(0.060mg/g)を、対照群には生理食塩水を皮下注射し、投与後3週目に体表面心電図記録およびin vivo心臓電気生理学的検査(EPS)を施行した。まず、充分な鎮静下に、電極を四肢に装着し体表面心電図を記録し、その後、内頚静脈切開法により遠位4極を右室内、近位4極を右房内におさまるよう2Fr8極電極カテーテルを挿入し、各々2極間で刺激あるいは電位記録を行った。
アミノ酸の肝蛋白質分解調節作用に関わる細胞内活性因子の検索

本研究は肝臓における自食作用性タンパク質分解の代表的調節因子としてのアミノ酸を取り上げ、その作用機構を探る試みである。特にアミノ酸の情報が肝細胞膜近傍で受容されるという仮説に基づき、その情報を細胞内でタンパク質分解の場まで伝達する活性因子の存在を想定し、未知の水溶性低分子化合物の検索を試みた。本年度実施された研究状況は以下の通りである。1.本研究でのポイントはバイオアッセイ系としてのα-トキシン膜透過処理細胞の活用である。これは低分子のみ(MW<1,000)自由に透過させ、かつ自食作用を維持する細胞である。不運なことに、今回用いたα-トキシン標品は従来と異なりATP(MW500)を透過せず、当初不活性かと疑われた。が、詳細な検討により^<14>C-sucrose(MW360)までは透過させることが確認され、予定された計画に用いられた。2.アミノ酸刺激により肝臓内に低分子活性因子が生成すると想定し、ラット肝臓をin situでアミノ酸混合物を含むKRB緩衝液で10分灌流し、肝臓をアセトン処理で除タンパクし、低分子画分を濃縮した。これをα-トキシン細胞でタンパク分解抑制活性を調べたところ、アミノ酸(-)抽出物では全く影響はなかったが、アミノ酸(+)抽出物で明らかな抑制活性が認められた。この効果は抽出物中に残留するアミノ酸自身によるのでないことは確認された。また、抽出物中の陽イオン(Na^+,K^+,Ca^<2+>,Mg^<2+>)には差がなかった。従って、未知の低分子活性物質の存在を十分に予想させた。3.偶然にも、上記の実験中タンパク分解の指標であるVal分析のチャートの中に、アミノ酸(+)抽出物のインキュベーション時にのみ現れる未知物質のピークが常に認められた。ダンシル化陽性物質であることからアミノ酸関連物質と推定されるが(ペプチドの可能性は否定)、未知活性因子の候補として現在そのピークを単離し、構造決定を試みている。
68Ga-DOTATOC-PET/CTによる腫瘍および炎症の画像診断

68Ge/68Gaジェネレーターの枯渇を予想し、平成30年6月30日までを登録期間として倫理委員会に申請していたため、平成30年度は7人に対してDOTATOC-PET/CT検査を行い、以後は検査後の結果の追跡に努めた。本研究では、神経内分泌腫瘍以外の疾患に対するエビデンス構築に向けて、DOTATOC-PET/CT検査の有用性を明らかにすることが目的であり、以下1腎細胞癌術後、2腫瘍性骨軟化症、3異所性ACTH産生腫瘍疑い、の順に結果をまとめる。1腎細胞癌術後25人の患者がDOTATOC-PET/CT検査を受けた。病理組織あるいは経過観察にて76病変が最終的に真の病変と確認され、うち22人、66病変が本検査で陽性描画された。患者ベースおよび病変ベースの感度はそれぞれ88%、87%と比較的良好であった。clear cell typeでは陽性描画されるのに対して、papillary typeの4病変はいずれも陰性であり、同じ腎細胞癌であっても組織型によってソマトスタチン受容体の発現が異なる可能性が示唆された。2腫瘍性骨軟化症の責任病巣検索として、計33人の患者にDOTATOC-PET/CT検査を施行した。最終的に20人の患者56%で責任病巣が同定可能であった。必ずしも決め手になる画像診断法ではないが、他の画像診断法で有用な局在が得られない場合、あるいは確信が持てない場合に本検査は臨床的有用と考えられた。3異所性ACTH産生腫瘍が疑われ、責任病巣検索として18人の患者にDOTATOC-PET/CTが施行された。5人の患者で陽性所見が出たが、1人は病理的に裏付けが得られず、4人で最終的にACTH産生腫瘍であることが判明した。陽性率は必ずしも高くないが、非侵襲的に責任病巣を同定できる可能性があり、腫瘍性骨軟化症と同様に他の画像診断法で明らかでない場合に考慮されるべき検査と考えられた。平成28年4月1日より平成29年3月31日までに99人の患者に対してDOTATOC-PET/CT検査を施行した。初年度の平成28年度はサルコイドーシス患者が集まったので結果をまとめるとともに、投与後撮像までの待機時間が、30分と60分とで診断精度や定量値に差があるのかを検討した。臨床的にサルコイドーシスと確定した20人の患者について従来のガリウムシンチグラフィ、DOTATOC-PET/CT検査を施行した。ガリウムシンチグラフィでは17人が陽性所見を呈した一方、DOTATOC-PET/CTでは19人の患者でサルコイドーシス浸潤と考えられる陽性所見が得られた。特にDOTATOC-PET/CTでは、リンパ節炎のほか、ぶどう膜炎や筋肉浸潤の描出に優れていた。リンパ節病変が陽性描画された領域数は、ガリウムSPECT33領域に対して、DOTATOC-PET/CTでは57領域と多く、統計学的に有意差をみとめた。DOTATOCを投与して60分後の撮像とともに、30分後にも撮像を追加して、それぞれ得られた画像の診断精度を比較した。対象となった38人の患者に125病変(原発巣17、リンパ節転移22、肝転移39、肺転移5、骨転移37、その他の病変5)が描出され、両画像ともに描出能は同等であった。定量解析として、1ピクセルあたりの最大SUV(SUVmax)、病変1mLの最大平均SUV(SUVpeak)、SUVmaxの40%を閾値としたMTV、MTV内のSUVの総和(TLU)を両画像で比較したところ、スピアマンの順位相関係数はそれぞれ0.983, 0.986, 0.918, 0.981と強い正の相関がみられ、両者の差を平均で割った値はそれぞれ11.1%, 6.6%, 13.1%, 20.8%であった。DOTATOC-PET/CT検査では、投与30分後と60分後の画像の診断能は同等と考えられた。薬剤合成に必須の68Ge/68Gaジェネレーターの需要が世界的に増えたために入手が困難となり、2016年の秋に予定していた更新が2017年3月まで延期された。このため、1回合成で得られる放射性薬剤の収量が少なくなり(68Geの半減期は271日)、合成あたりの患者数の設定を数ヶ月間1人と限定せざるを得なかった。2017年1-3月の検査可能な患者数が限定されたことで症例数の蓄積が十分でなかった。しかしながら現在は、新しいジェネレーターを使用することができるようになり、1回合成で3人の検査が可能となったため、全国からの検査依頼を効率的に受けることによって、症例を鋭意蓄積中である。平成29年度は平成30年3月31日までに87人の患者に対し68Ga-DOTATOC-PET/CT検査を施行した。68Ge/68Gaジェネレーター枯渇に伴う薬剤合成終了まで、腫瘍性骨軟化症のような稀少疾患の登録を続け、検査の新規登録受付終了後には最終診断を確定して論文化を進めていく。今年度は以下の2つの新規発表を行った。168Ga-DOTATOC-PET/CT検査(以下、DOTATOCと略)と111In-Pentetreotide-SPECT/CT検査(以下、オクトレオスキャンと略)の臨床的有用性の比較。

両検査を同時期に受けた20人の神経内分泌腫瘍患者(病期診断12人、再発診断6人、原発巣検索2人)に対して、両検査の診断精度を比較し、治療方針への影響を検討した。結果、DOTATOCでは96病変が同定されたのに対し、オクトレオスキャンでは69病変が同定され、病変単位のDOTATOC-PET/CT検査の優位性が明らかであった。一方で、治療方針への影響は2人に留まった。2DOTATOCの生理的集積に対するホルモン上昇の影響。DOTATOC-PET/CT検査では下垂体、副腎、脾臓などに生理的集積が見られるが、ホルモンが上昇していた場合に生理的集積が変化する可能性があるが、まとまった報告は皆無でエビデンスも確立されていない。ACTH、ガストリン、インスリンのそれぞれ高値群とホルモン上昇の無い群とを比較して、生理的集積への影響を調査した。結果、ACTHしている群では、ACTHを含むホルモン高値の無い群に比べて、下垂体、膵鉤部、副腎への生理的集積が有意に減少する傾向が見られたが、その他のホルモンでは特に影響は見られなかった。この新しい知見は、今後DOTATOC-PET/CTのようなソマトスタチン受容体イメージングをする際の留意事項として臨床的に役立つ可能性がある。昨年度にも報告したが、薬剤合成に必須の68Ge/68Gaジェネレーターの更新が半年ほど遅れて2017年春となったため、検査に必須の放射性薬剤の合成が当初の予定より半年間延長できるようになった。よって、もともと2017年12月末までとしていたデータ登録期間を延長することになり、さらなるデータの蓄積、症例増加に努めており、まもなく終了となる。画像診断で得られた所見の正否は、病理組織で確定するとは限らず、この場合には半年以上の経過観察を考慮して最終診断を確定することが多い。データ登録期間の延長とともに、最終診断の確定も遅れるが、確定した最終診断に基づいて、診断精度を算出するとともに、治療方針への影響を考察する。68Ge/68Gaジェネレーターの枯渇を予想し、平成30年6月30日までを登録期間として倫理委員会に申請していたため、平成30年度は7人に対してDOTATOC-PET/CT検査を行い、以後は検査後の結果の追跡に努めた。本研究では、神経内分泌腫瘍以外の疾患に対するエビデンス構築に向けて、DOTATOC-PET/CT検査の有用性を明らかにすることが目的であり、以下1腎細胞癌術後、2腫瘍性骨軟化症、3異所性ACTH産生腫瘍疑い、の順に結果をまとめる。1腎細胞癌術後25人の患者がDOTATOC-PET/CT検査を受けた。病理組織あるいは経過観察にて76病変が最終的に真の病変と確認され、うち22人、66病変が本検査で陽性描画された。患者ベースおよび病変ベースの感度はそれぞれ88%、87%と比較的良好であった。clear cell typeでは陽性描画されるのに対して、papillary typeの4病変はいずれも陰性であり、同じ腎細胞癌であっても組織型によってソマトスタチン受容体の発現が異なる可能性が示唆された。2腫瘍性骨軟化症の責任病巣検索として、計33人の患者にDOTATOC-PET/CT検査を施行した。最終的に20人の患者56%で責任病巣が同定可能であった。必ずしも決め手になる画像診断法ではないが、他の画像診断法で有用な局在が得られない場合、あるいは確信が持てない場合に本検査は臨床的有用と考えられた。3異所性ACTH産生腫瘍が疑われ、責任病巣検索として18人の患者にDOTATOC-PET/CTが施行された。5人の患者で陽性所見が出たが、1人は病理的に裏付けが得られず、4人で最終的にACTH産生腫瘍であることが判明した。
最終糖化産物が尿路結石形成に及ぼす分子機構の解明とバイオマーカーの探索

当初の計画では、エチレングリコールを用いて尿中シュウ酸カルシウム結晶を誘発した結石形成モデルラットでのTAGEの生成・蓄積とRAGE発現の検証を予定していたが、当初の計画を達成しうる予備(基礎)実験として現在はHFCS単独での影響を検討行うため、Wisterラットを用いてDNAマイクロアレイによる腎臓での遺伝子発現検討を行っている。当初計画した通り、シュウ酸前駆物質であるエチレングリコールを投与し、シュウ酸カルシウム結晶を誘発した結石形成モデルラットでのTAGE蓄積やHFCS負荷によって変動をする遺伝子がH尿路結石形成に影響を与えるが検討を予定している。