hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
精神科入院患者の地域移行を促進する病棟地域連動型リカバリー支援ツールの開発

2018年度の研究では、精神疾患を有する人およそ10名を対象にWRAPクラスの運営やIMRに関する書籍等において有益な表現を整理した。その結果、たとえば妄想については「誤った確信」など、これまでは医療者によって整理されてきた表現に対する代替案が明確になった。これを踏まえて、精神疾患を有する人の精神健康の保持増進に活用するためのWRAP活用アプリケーションを開発した。このアプリケーションは、一般的なWRAPクラスではWRAPの作成(心の元気に役立つ行動を明確にし、他者の方法と交換することで増やすこと)を行うことを踏まえて、その人のWRAP(心の元気の保持増進に役立つこと)を思い出して使いこなせるようにするものである。心の元気度を聞く(アセスメント)、その元気度に応じてプランを推薦しつつ選択をすすめる(プランの選択)、翌日以降のアクセスにおいてその後の元気度とプランの有効性を聞く(プランの評価)という3つのフェイズで形成し、このほかにIMRで記載されている表現を盛り込んだ心理教育の内容を記載した。以上のような具体的なアプリケーション内の構成をおこない、精神疾患を有する人8人に対してWEBアプリケーションの形で試行した。WEBアプリケーションでの満足度は概して高く、スマートフォンなどからのアクセスによって継続的に使用する可能性が十分にあることがわかった。なお、2018年度は成果発表の機会として、筆頭及び分担によって複数の学会などでの発表と専門誌などへの寄稿を行った。具体的な援助の方略に資するWEBアプリケーションを開発することを通じて実行可能性の調査を行うことができた。面接モジュールにこのアプリケーションの導入を行うことで、研究の核となる部分をおおむね終了することができた。これまでの知見を、学会発表にとどまらずに論文などの形式で記述し、発表する。アプリケーションについては、IMRおよびWRAPの要素を持つプログラムをすでに有する医療機関と協働して、実行可能性に関する検証を続ける。研究では、大きく2方向の調査を行った。調査1.東北地方にある精神科病院3施設において、デイケア部門、地域支援(退院促進を含む)部門に勤務する精神科看護師および関連職者、その医療機関のある地域に暮らす当事者に、事前に書面にて同意を得て面接調査を行った。看護職者への面接調査ではリカバリーに視点を置いた援助例として、退院後の生活と呼ばずにリカバリーゴールと呼ぶことで心理的側面を話題にする、地域生活において複数の人の関係調整が必要な場面で権利擁護の観点を取り入れる、長期的に健康や生活に悪影響のありそうな生活習慣(例.タバコや飲酒)について即時中止ではなくストレス対処方略の増加に視点を置く、などが存在していた。調査2.退院促進や地域定着に有益な援助様式を明確化することを目的として、精神科医療機関のIMRおよびWRAPに該当する活動やそれに類する地域精神保健活動についてフィールドワークを行った。フィールドワークした活動において、以下の特徴が見出された。1)当事者と援助職者は互いに敬称を用いないなどの権威性の緩和を用いており、具体的には呼ばれたい名前を用いる、自己紹介に勤務経験や職位を言わない、2)リカバリー概念について「私は・・」などのIメッセージを多用するとともに権威的な他者の考えを紹介することを控えている(例.リバーマンは○○等を言わない)3)参加者の発言や考えの多くを筆記して可視化し、ファシリテーターあるいはサポーターが声に出して読み上げる4)プログラムの冒頭で安心のための同意(合意)を共有して合意形成を明確化する、といった特徴が存在していた。計画していた2種類の調査を実行することが出来、一定の知見を整理することが出来た。調査1については、東北地方にある精神科病院3施設において、デイケア部門、地域支援(退院促進を含む)部門に勤務する精神科看護師および関連職者、その医療機関のある地域に暮らす当事者に、事前に書面にて同意を得て面接調査を行うことと予定しており、実際に推敲することが出来た。なかでもピアスタッフに面接調査を行う事が出来たため、看護職者が考える地域移行のなかでも当事者の権利擁護の側面を浮き彫りにすることが可能となった。調査2については、退院促進や地域定着に有益な援助様式を明確化することを目的として、IMRおよびWRAPに該当する活動や類する地域精神保健活動についてフィールドワークを推敲することが出来た。大きく4種類の特徴を見出すことが出来、参加者に対する補足調査でもこれらの特徴が有益であった可能性が語られている。また、専門的知見を得るために参加を予定していた学会に参加することができ、29年度以降の研究に参考になる情報を多く得た。調査1.IMRと心理教育の違いを明らかにすべく、WRAPなどのリカバリー志向のプログラムの経験を一定以上有する精神障害を有する者(当事者)に対してIMRに用いられる映像や資料を読んでもらい、精神症状に関する表現やリカバリー志向とのバランスについての評価を聞いて比較した。当事者によると「幻聴」「妄想」よりも「存在しないものが聞こえる」「頑なで誤った確信」といった表現によって自分の立場から見た表現となっていて受け入れやすい、ストレス対処の全体像の中で治療等を扱うので自分に自信を持ちやすい、といった意見が得られた。調査2.退院促進や地域定着に有益な援助様式を明確化することを目的として、精神科医療機関のIMRおよびWRAPに該当する活動を行っていない医療機関に赴き、前年度に行ったIMRやWRAPに該当する活動を行う医療機関との援助場面や環境の違いを比較した。フィールドワークした活動において、IMRやWRAPを行わない医療機関には以下の特徴が見出された。

1)リスク管理の方法として行動範囲や所有物の制限が選択肢にあり、一部は実際に制限のニュアンスを持つ表現で実際に言語化されている2)敬称や職位などを単体で呼ぶ傾向があり、例えば主治医については「○○(名字)先生」ではなく「先生」、受け持ち看護師については「〇〇(名字)さん」ではなく「担当」と呼んでいる、3)質問や疑問に関する対話の場面ではお互いの考えの相違点に注目したり、考えに注目せずにその場にいない人物に解決の鍵を求めたりする場面が多くみられた。なお、国際学会に参加及び発表を行い、関連する研究を知るとともに意見交換を行った。計画していた内容をおおむね達成することができた。調査1を通じて、IMRを運用する場合に鍵となる構成要素が明らかになった。そのため、プログラムの構築は十分に可能な水準になってきている。リカバリー志向の支援については精神症状や困難の表現方法やその程度に熟練あるいは専門性を必要とするが、妄想や幻聴、抑うつ気分といった他者との比較による精神症状の記述(例えば妄想は、"他者から了解不能である"と開設されやすい)ではなく、自分自身で理解できる記述(例えば妄想は"頑なな信念")とすることで疾病による劣等感や疎外感を感じるリスクを減らすことができるだろう。また、調査2によってIMRおよびWRAPに該当する活動を行っていない医療機関と比較したことで、医療機関がもつべき直接ケア以外に存在する環境や文化的要因を明らかにすることができてきている。このことで、医療機関においてリカバリー志向の援助を構築する際の要点を援助そのものだけでなく全体のマネジメントから整理することができ、医療機関にとって導入しやすい知見になることだろう。また、当初に予定していた専門学会に参加するだけでなく国際学会において発表を行ったことで、国際的な視点からの知見を得ることができた。2018年度の研究では、精神疾患を有する人およそ10名を対象にWRAPクラスの運営やIMRに関する書籍等において有益な表現を整理した。その結果、たとえば妄想については「誤った確信」など、これまでは医療者によって整理されてきた表現に対する代替案が明確になった。これを踏まえて、精神疾患を有する人の精神健康の保持増進に活用するためのWRAP活用アプリケーションを開発した。このアプリケーションは、一般的なWRAPクラスではWRAPの作成(心の元気に役立つ行動を明確にし、他者の方法と交換することで増やすこと)を行うことを踏まえて、その人のWRAP(心の元気の保持増進に役立つこと)を思い出して使いこなせるようにするものである。心の元気度を聞く(アセスメント)、その元気度に応じてプランを推薦しつつ選択をすすめる(プランの選択)、翌日以降のアクセスにおいてその後の元気度とプランの有効性を聞く(プランの評価)という3つのフェイズで形成し、このほかにIMRで記載されている表現を盛り込んだ心理教育の内容を記載した。以上のような具体的なアプリケーション内の構成をおこない、精神疾患を有する人8人に対してWEBアプリケーションの形で試行した。
群落形成過程におけるクローナル植物同齢個体群の遺伝的多様性の動態

本研究は、典型的な長寿命クローナル植物であるササの群落形成期におけるgenetレベルの動態を記載することにより、クローナル植物の生活史を通じた遺伝的多様性の動態を明らかにしようとしたものである。そのために、一斉開花時からの履歴の判明している個体群を用いて、一斉開花期から群落形成終期までのクローン構造の変化を解析した。1.1995年に十和田湖南岸域で一斉開花したチシマザサの開花個体から採集保存してあった葉をサンプルとしDNA解析を行い、一斉開花現象が多数個体による同時開花であることを確認した。2.発生後21年を経たチシマザサ実生由来個体群に対して、掘り取り調査とDNA解析を併用して個体密度の推定やクローン構造の解析を行った。その結果、1)930個体/m^2発生した実生の個体密度は、20年間で10数個体/m^2程度にまで減少したこと、2)群落高や稈密度は開花前の集団に近づいているものの、genet間の成長の差は著しく、広域を1個体が占有するような大きなクローンは見られず、個体間競争により自己間引きが継続中であることなどが明らかになった。本研究により、(1)AFLPフィンガープリント法はクローナル植物の動態解析にとって大変強力なツールであること、(2)多数個体による一斉開花により明らかに遺伝的多様性が高まること、(3)実生発生後20年あまりで、群落サイズはほぼ回復したものの、個体を単位としてみれば激しい個体間競争が継続しており、ササ群落が平衡状態に達するにはまだかなりの時間を要することなどが明らかになった。また、本研究を通して、フィールド(永久方形区)での継続調査とDNA解析を併用することにより、クローン動態を直接観察するための手法を開拓した。今後、この手法の導入により、これまで全く知られてこなかったササ群落の全生活史を通じたクローン動態の解明が行える見通しがついた。本研究は、典型的な長寿命クローナル植物であるササの群落形成期におけるgenetレベルの動態を記載することにより、クローナル植物の生活史を通じた遺伝的多様性の動態を明らかにしようとするものである。そのために、一斉開花枯死後の実生発生時から履歴の判明している個体群を用いて、群落形成初期から終期までの個体群構造の変化を解析している。本年度は、調査手法の有効性の確認という意味も含め、以下の個体群に対する調査を行った。1.1980年に発生したチシマザサ同齢個体群(八甲田山)について、AFLPフィンガープリント法と地下茎の掘り取り調査を併用して、1)現存個体数の推定及び、2)クローン構造の解析を行った。本個体群については発生後10年間の生残曲線がすでに報告されているが、今回の調査で、1)930個体/m^2発生した実生の個体密度の減少は続いており、20年間で13個体/m^2程度にまで減少したこと、2)クローンサイズにはかなりの大小が見られるものの、広域を1個体が占有するような大きなクローンは見られないことが明らかになった。2.1996年に発生したチシマザサ個体群(十和田湖畔)において、rapid法により実生個体群と非開花個体群を対象に調査し、一斉開花に伴うgenotype密度の動態を解析中である。なお、今後チシマザサとは成長様式の異なるイブキザサについて同様の解析を行い、それらを比較検討することにより、生活史を通じたササ個体群構造の動態を議論する。クローナル植物の個体群動態を明らかにするためには、genetレベルの動態解析が不可欠である。本研究は、分子生態学的手法を導入することにより、長寿命一回繁殖性植物で一斉開花性をもつササの群落形成期におけるクローン動態を明らかにしようとするものである。

本年度は以下の調査を行い、その結果を元に研究を総括した。1.1995年に十和田湖南岸域で一斉開花したチシマザサの開花個体から採集保存してあった葉をサンプルとしてDNA解析を行い、一斉開花現象は、多数個体による同時開花であることを確認した。2.発生後21年を経たチシマザサ実生由来個体群に対して、掘り取り調査とDNA解析を併用してクローン構造の解析を行った。その結果、群落高や稈密度は開花前の集団に近づいているものの、genet間の成長の差は著しく、個体間競争により自己間引きが継続中であることが明らかになった。本研究により、(1)AFLPフィンガープリント法はクローナル植物の動態解析にとって大変強力なツールであることが確認され、(2)多数個体による一斉開花により明らかに遺伝的な多様性が高まること、(3)実生発生後20年あまりで、群落サイズはほぼ回復したものの、個体を単位としてみれば激しい個体間競争が継続しており、ササ群落が平衡状態に達するにはまだかなりの時間を要することが明らかになった。また、本研究を通して、フィールド(永久方形区)での継続調査とDNA解析を併用することにより、クローン動態の直接観察を行うための手法を開拓した。今後、この手法を導入することにより、これまで全く知られてこなかったササ群落の全生活史を通じたクローン動態の解明が行える見通しがついた。
Ｍｅｔａｒｈｉｚｉｕｍ属糸状菌における寄生能の多面性とその進化的背景の解明

本属糸状菌4種の無菌栽培のノシバの根面での増殖能力を調査した結果、無菌でないポット栽培のノシバでの試験とは異なり、すべての種で増殖した。この結果より根圏定着能力の主因となる生理学的能力は、植物との直接的相互作用よりも、他の根圏微生物との相互作用に関わる能力にあると推察された.本属糸状菌と根圏微生物との相互作用として、抗菌活性と土壌静菌作用に対する性状の調査を行った.本属糸状菌が根圏に定着している時の抗菌活性能力を評価するために、本属糸状菌4種について、インゲンマメの根滲出液で培養した時の培養濾液の抗菌活性を比較した結果、ノシバ根圏で増殖可能な2種(M. pingshaense, M. lepidiotae)は比較的高い抗菌活性を示し、ノシバ根圏で増殖しない2種(M. acridum, M. pemphigi)はほぼ抗菌活性を示さなかった。この結果より、根圏で増殖する能力は抗菌活性と関連していると考えられた。土壌静菌作用に関して、供試した4種とも土壌静菌作用の影響を受けることが確認されたが、ノシバ根圏で増殖可能な2種が特異な性状は示すことはなかった。本属糸状菌属の各種の寄主昆虫別の分離株数を、海外の既知データと本研究で新たに同定した日本株の結果から集計すると、ノシバの根圏で増殖する3種, M. pingshaense, M. lepidiotae,およびM. robertsiiを含む最小の単系統に所属する種はその外群と比較して、コガネムシ科を含め土壌生息性昆虫からの分離株数が多かった。この結果は、この単系統内で、土壌生息性昆虫へ寄主範囲を拡大と根圏定着能力の獲得が同時期に起こった可能性を示唆している。抗菌活性は根圏定着に重要であると考えられたが、土壌生息性昆虫への適応で抗菌活性が獲得され、それにより根圏定着能力が進化しやすかった可能性が考えられる。28年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では一般に昆虫寄生菌および土壌生息菌として知られてきたMetarhizium属糸状菌の昆虫寄生菌および植物内生菌としての能力の多様性を分子系統学的に解析し、昆虫適応と植物適応との進化的関連性を解明することを目的とする。本年度は、本属糸状菌について昆虫および植物寄生性における共通点・相違点の解明のため,本属糸状菌の様々な系統の植物に対する性状比較を中心に行った。第一に野草根圏からの本属糸状菌を分離し,M. pingshaenseのRS13型が最も高頻度で検出されることを明らかにし,その遺伝子型の性状の評価を行った。RS13型は宿主昆虫の範囲とカイコガに対する病原性から宿主範囲は広いと考えられた。RS13型はバッタ、コオロギ、コガネムシに特異的な菌株と比較して、植物クチクラに対する付着能力は特に高くはなかったが、ポット栽培のノシバ根圏に対する定着能力は高い傾向を示した。従って付着能力は広く保存されているが、根圏定着能力は宿主範囲の広い系統に限定されている可能性が考えられた。根圏定着能力の進化的背景としては「昆虫宿主範囲の拡大とともに植物にも宿主を広げて獲得した」可能性や、「根を生息環境とする宿主昆虫に適応する過程で獲得した」可能性を考えているが、結果は前者の可能性を支持している。今後は根を生息環境とする昆虫に特異的な菌株を比較に加えて後者の可能性も検証していく。第二にRS13型の植物根への初期侵入過程の解明を試みた。本属糸状菌の根への侵入過程はこれまで未解明であった。ノシバ根面上で分生子が発芽し、付着器および侵入菌糸様の形態の形成が確認されたが、観察される頻度が非常に低かった。今後この過程での昆虫病原性関連遺伝子の発現パターンを調査することにより、昆虫寄生性と植物への侵入の関連性を解明する予定であるが、そのためには、より高頻度で同調的に侵入が起こる条件を探索する必要がある。本研究では、Metarhizium属糸状菌の根圏定着能力の進化的背景の解明を目的とし、今年度は本属糸状菌の根圏定着能力の系統的起源および根圏定着を可能にする生理学的特徴の解明を試みた。根圏定着能力の系統的起源の解明のため、本属糸状菌の根圏定着能力の系統間比較を行った結果、宿主範囲の広いM. pingshaense (Mpi)とコガネムシ科選択的M. lepidiotae (Ml)がノシバ根圏での定着能力が高かった。Mlは供試菌株中でMpiに最も近縁でかつMpiよりも古く分岐した種である。MlとMpiの間に分岐した種にコガネムシ科特異的M. majus (Mm)も存在することから、これら3種の共通祖先はコガネムシ科特異的であると推察されるが、実験結果はその祖先種において根圏定着能力が獲得されたことを示唆していた。また属外の種も含めて植物クチクラに対する付着因子の遺伝子の保存性を調べる予定であったが、付着能力よりも抗菌活性能力が主要因子であると考えられたので、本年度は抗菌活性に関する実験を優先させた。

根圏定着を可能にする生理学的特徴の解明として抗菌活性能力および土壌の静真菌作用に対する性状を比較した結果、Mpi、Ml、Mmおよびその近縁種が貧栄養下でも高い抗菌活性をもつという性質が明らかになった。高い抗菌活性をもつことは,長期間土壌生活を営むコガネムシ科の幼虫に対して,多数の土壌微生物の存在下で感染を成立させることに寄与していると同時に,根圏定着を巡る微生物間の競争にも関わっている可能性がある。一方で土壌の静菌作用に対する本属糸状菌の性状については、供試菌株間での顕著な差異は認められなかった。本属糸状菌の植物根に対する侵入過程の解明も試みたが、植物クチクラへの貫入が観察される頻度は様々な条件で実験を行っても低く、本属糸状菌による内生的定着は起こりにくいと考えられた。Metarhizium属糸状菌において、ノシバの根圏での密度が接種後に経時的に増加する系統と減少する系統を明らかにすることができ、その結果により根圏定着能力の起源として可能性の高い祖先系統を選定できたため。また、根圏定着能力において抗菌活性能力が重要であることを示唆する結果が得られたため。本属糸状菌4種の無菌栽培のノシバの根面での増殖能力を調査した結果、無菌でないポット栽培のノシバでの試験とは異なり、すべての種で増殖した。この結果より根圏定着能力の主因となる生理学的能力は、植物との直接的相互作用よりも、他の根圏微生物との相互作用に関わる能力にあると推察された.本属糸状菌と根圏微生物との相互作用として、抗菌活性と土壌静菌作用に対する性状の調査を行った.本属糸状菌が根圏に定着している時の抗菌活性能力を評価するために、本属糸状菌4種について、インゲンマメの根滲出液で培養した時の培養濾液の抗菌活性を比較した結果、ノシバ根圏で増殖可能な2種(M. pingshaense, M. lepidiotae)は比較的高い抗菌活性を示し、ノシバ根圏で増殖しない2種(M. acridum, M. pemphigi)はほぼ抗菌活性を示さなかった。この結果より、根圏で増殖する能力は抗菌活性と関連していると考えられた。土壌静菌作用に関して、供試した4種とも土壌静菌作用の影響を受けることが確認されたが、ノシバ根圏で増殖可能な2種が特異な性状は示すことはなかった。本属糸状菌属の各種の寄主昆虫別の分離株数を、海外の既知データと本研究で新たに同定した日本株の結果から集計すると、ノシバの根圏で増殖する3種, M. pingshaense, M. lepidiotae,およびM. robertsiiを含む最小の単系統に所属する種はその外群と比較して、コガネムシ科を含め土壌生息性昆虫からの分離株数が多かった。この結果は、この単系統内で、土壌生息性昆虫へ寄主範囲を拡大と根圏定着能力の獲得が同時期に起こった可能性を示唆している。抗菌活性は根圏定着に重要であると考えられたが、土壌生息性昆虫への適応で抗菌活性が獲得され、それにより根圏定着能力が進化しやすかった可能性が考えられる。Metarhizium属糸状菌における、付着能力、根圏定着能力と宿主範囲との関係性、および植物への侵入過程を一部解明できたが、付着因子タンパクMAD1, MAD2のオルソログの機能解析については、まだ機能評価の方法が確立できず、結果が出ていないため。Metarhizium属のより多くの種の根圏定着能力を評価し、本属における根圏定着能力の起源をより詳細に解明する。根圏定着能力と抗菌活性物質産生能力および土壌静菌作用に対する性状の関係性を解明する。根圏定着能力の起源となる祖先種の昆虫宿主(現時点ではコガネムシ科である可能性が高いと考えている)への感染能力と根圏定着能力の共通性から、根圏定着能力の進化的背景を考察する。28年度が最終年度であるため、記入しない。Metarhizium属内外のより幅広い系統について、植物クチクラへの付着能力および根圏定着能力を比較し、それらの能力の系統的起源を解明する。
日中文化交流の諸相を宋・元版仏書類の受容の中に探り、説話研究に資する研究

宋版一切経のうち、東禅寺版・開元寺版に認められる日本僧の手に係る施財刊記を集め、主にその施財時期・背景について分析した。東禅寺・開元寺各版の詳細な刻工名調査を本源寺所蔵の一切経に即して行い、そこで得られた刻工名や施財刊記を東寺蔵宋版一切経などのそれと比較し、又、従来知られることのなかった施財刊語中の「下州千葉寺了行」・「日本西山法華寺慶政」の施財時期を約10年間に限定した。了行については『吾妻鏡』などに登場し、近時、石井進氏の詳細な解明のあった中山法華経寺蔵する日蓮遺文紙背文書群に活躍する「了行」であろうと推定し、意教については、東密の意教流の祖である意教上人頼賢であることを証明し、その入宋の可能性について解明した。更に「了行」「意教」を「慶政」に結び、彼らの入宋施財の政治的経済的支援を九条道家及びその周辺に求めた。傍ら、宋・元版を受容した寺院の聖教類の調査を行った。具体的には建仁寺両足院・随心院・高山寺・日光輪王寺・七寺などへ赴いて原本の書誌的調査を継続して行った。特に七寺蔵『大乗毘沙門功徳経』に関連して、「本地物」の研究を韓国の典籍・昔話のなかに探り、その典籍類の一部の書誌的調査に着手した。今年度は主に宋版一切経の調査を進めることで得られた資料から,補刻葉の「実態」を追求した。"補刻"の実態は,複雑で,特に東禅寺版の場合は刷印時期を異にした厖大な量の一切経が,我国に少くとも四セットは残存しており、その詳細について各々の悉皆調査にまつところである。本年度は,本源寺蔵(三聖寺旧蔵)の東禅寺・開元寺版(その他)混合蔵の具体的な調査に着手,500帖ほどの調査を了えた。又,東寺蔵東禅寺・開元寺版混合蔵の,サンプル的な調査は,恒例の毎夏の調査時等を活用して行ない,興味深い調査結果を得られたが,やはり,本格的な悉皆調査の必要を痛感した。以上の調査過程で解明できた幾つかの問題は,各々口頭発表や学会誌掲載論文にまとめ公表した。補刻葉に認められる日本人僧の関与に関しては,「千葉寺了行」の文化的・政治的環境(とくに九条家)に及ぶ推測が可能となり、野口実氏の千葉氏研究のアプローチをも得て,中山法華経寺日蓮白筆聖教類紙背文書中の人物に比定しうる点について探求した。更に,中国の仏書類舶載受容の場として機能した「寺院システム」の解明は必須であり,柏原成菩提院を始めとした,諸寺院に訪書した。前年度に引き続き、愛知県本源寺蔵(三聖寺旧蔵)宋版一切、経の基礎的な調査を原本に即して進めたが、本年度は常に十人の参加者を得て、年2回の集中調査を行ない、全体量の、ほぼ半分ほどの調査を了えた。その過程で、単行の宋版仏書類が確認されたが、詳細な書誌的調査研究は、今後の課題として残すこととなった。既に確認された成果を刻工名などを基軸にして分類・整理する作業は、調書整理の域を出なかったが、併行して行った東寺蔵宋版一切経の調書打ち込みを先行させており、その成果を活用する準備態勢はととのえつつある。一方、我邦の文学・文化との交渉に関する調査は、建仁寺両足院・随心院・東寺などで行なった。随心院においては、醍醐寺の宋版一切経舶載に関する、意教上人頼賢の弟子の聞書が蔵されており、貴重な資料となった。

その東密僧意教上人頼賢を介して、宋版一切経の舶載によってもたらされた我邦文化への影響の一端について追求し、学会で口頭発表を了え、その内容を学会誌に掲載した。従来、知られていなかった頼賢の入宋、宋版一切経の補刻事業への関与、これらの新事実は、高野山・醍醐寺を中心に展開した真言圏内にも新たな流れをもたらしたもの、と想像されるが、今後の課題として改めて追求すべき重要な問題となろう。前年度より引き続いて、宋版一切経のうち、本源寺一切経の調査を二回にわたって行った。7月20日22日806帖984帖12月1日4日985帖から1177帖東禅寺版の詳細な書誌調査を行った。今後の調査の進展によっては、さらに細かな補刻に関する新知見が得られよう。前年度までに判明した「了行」「意教」の入宋の問題を「慶政」に結び、その入宋施財の政治的経済的背景や文化的な影響についての考察を進めるべく、西山法華寺慶政上人にゆかりのある寺院の聖教類の調査をも行った。具体的には随心院・高山寺・真福寺などである。「延慶本『平家物語』における「東山鷲尾」の注釈的研究-寺院ネットワークということ-」(『説話論集』11集)は、その成果である。傍ら、宋・元版を受容した寺院、建仁寺両足院・日光輪王寺などへ赴いて原本の書誌的調査を継続して行ったが、宋版受容の周辺に眼を向け、特に書写経典のうちの疑・偽経典の問題を七寺蔵『大乗毘沙門功徳経』に関連して追求した。我が国の「本地物」の「ひろがり」を中国や韓国の典籍・昔話のなかに探り、日・中・韓を循環する「本縁」譚の実際を考察したが、韓国に赴いて、その典籍類の一部の書誌的調査にも着手した。齊藤隆信と共同で執筆した「中国国家図書館蔵『仏説孝順子修行成仏経』・俄羅斯科学院聖彼得堡分所蔵同経断簡と朝鮮順治十七年刊『釈迦如来十地修行記』所収「第七地金犢太子」について」(『実践女子大学文学部紀要』45集)は、その成果である。
針状物質を含む浮遊粉塵の簡易識別システムの開発

平成30年度は,浮遊粉じんの違いによる散乱強度の変化状況の把握を目的として研究を進める中で,トンネル坑内で通常使用される粉じん測定器より1台1万円以下と極めて安価で市販されている簡易粉じん測定器の利用可能性を検討した.簡易粉じん測定器とは空気清浄機の粉じん濃度センサーとして開発されたものを簡易粉じん測定器として市販されているものである.しかし,通常の室内環境測定を目的としてこの測定器は開発されたので,そのままでは感度が高すぎて適用を想定しているトンネル坑内のような高濃度な粉じん濃度環境下では適用できないことが最初から想定された.そこで,電子回路を調査し散乱光の光量を下げる方向で調整することで感度を低下することができることがわかった.この改良を行ったうえで,山口大学では小型室内粉じん実験装置を製作し,装置内で香取線香を発生粉じんとして浮遊状況を再現し,高濃度でも測定できることを確認した.この結果をもとに,労働安全衛生研究所内の小型チャンバー試験装置を使って,粒径加積曲線もあきらかな標準粉じんを使用した長時間粉じん測定実験を複数台の簡易粉じん測定器による同時測定と従来の粉じん測定器との比較実験を実施し,簡易粉じん測定器の個体誤差の確認および長期安定性について検討した.その結果,簡易粉じん測定器の個体差は低く,適用性の高さが明らかとなった.しかし,簡易粉じん測定器はフォトダイオードトランジスターによる反射光量測定のため粉じん形状の違いに関する検討には限界があることも明らかとなった.粒径による散乱強度の違いの確認に関して,山口大学での蚊取り線香を用いた粉じん測定実験並びに労働安全衛生研究所での標準粉じんを用いた簡易粉じん測定器による粉じん測定実験により確認できた.そのため,本研究は,ほぼ順調に推移していると判断している.今後は,簡易粉じん測定器内部の粉じん測定ユニットを改良して,フォトダイオードトランジスターを画像カメラに置き換える検討を行い,光源波長の違いによる散乱強度の変化を調べる.浮遊粉じん形状の違いに関しては,働安全衛生研究所に建設予定の実験施設の整備状況とも合わせて柔軟に対応していく.簡易粉じん測定器内の粉じん測定ユニットを3Dプリンターを使って試作し,カメラセンサーおよびIRセンサーを組み込む改良を行う.それにより,粉じん光源波長の違いによる散乱波形の違いや,散乱強度の違いを調べる.その結果を基に粉じん形状の違いによる散乱強度変化の可能性について検討を進める.平成30年度は,浮遊粉じんの違いによる散乱強度の変化状況の把握を目的として研究を進める中で,トンネル坑内で通常使用される粉じん測定器より1台1万円以下と極めて安価で市販されている簡易粉じん測定器の利用可能性を検討した.簡易粉じん測定器とは空気清浄機の粉じん濃度センサーとして開発されたものを簡易粉じん測定器として市販されているものである.しかし,通常の室内環境測定を目的としてこの測定器は開発されたので,そのままでは感度が高すぎて適用を想定しているトンネル坑内のような高濃度な粉じん濃度環境下では適用できないことが最初から想定された.そこで,電子回路を調査し散乱光の光量を下げる方向で調整することで感度を低下することができることがわかった.この改良を行ったうえで,山口大学では小型室内粉じん実験装置を製作し,装置内で香取線香を発生粉じんとして浮遊状況を再現し,高濃度でも測定できることを確認した.この結果をもとに,労働安全衛生研究所内の小型チャンバー試験装置を使って,粒径加積曲線もあきらかな標準粉じんを使用した長時間粉じん測定実験を複数台の簡易粉じん測定器による同時測定と従来の粉じん測定器との比較実験を実施し,簡易粉じん測定器の個体誤差の確認および長期安定性について検討した.その結果,簡易粉じん測定器の個体差は低く,適用性の高さが明らかとなった.しかし,簡易粉じん測定器はフォトダイオードトランジスターによる反射光量測定のため粉じん形状の違いに関する検討には限界があることも明らかとなった.粒径による散乱強度の違いの確認に関して,山口大学での蚊取り線香を用いた粉じん測定実験並びに労働安全衛生研究所での標準粉じんを用いた簡易粉じん測定器による粉じん測定実験により確認できた.そのため,本研究は,ほぼ順調に推移していると判断している.今後は,簡易粉じん測定器内部の粉じん測定ユニットを改良して,フォトダイオードトランジスターを画像カメラに置き換える検討を行い,光源波長の違いによる散乱強度の変化を調べる.浮遊粉じん形状の違いに関しては,働安全衛生研究所に建設予定の実験施設の整備状況とも合わせて柔軟に対応していく.簡易粉じん測定器内の粉じん測定ユニットを3Dプリンターを使って試作し,カメラセンサーおよびIRセンサーを組み込む改良を行う.それにより,粉じん光源波長の違いによる散乱波形の違いや,散乱強度の違いを調べる.その結果を基に粉じん形状の違いによる散乱強度変化の可能性について検討を進める.
biotubeを足場とした自己再生能力を用いた機能的小腸再生の研究

本研究は、自己の背部皮下組織に留置したシリコンチューブ周囲に形成される円筒状の自家結合組織(=biotube)を材料として腸管再生を試みるものであった。ES細胞やiPS細胞など幹細胞を用いないという新規性があり、成功すれば短小腸症となった患児への臨床応用につながる、重要な研究である。ラットを用いた実験は、移植手術後3日以内に縫合不全を生じることが続き、最終的にはbiotubeを用いた吻合は成功しなかった。今後は、腸管として小腸ではなく食道を利用することや、腸管壁の全周ではなく一部をbiotubeで置換することで腸管内皮や腸管平滑筋の再生が生じるかを確認することを計画している。1.ラット皮下にシリコンチューブを移植し、biotubeが作成されることを確認した。2. biosheetによる腸管欠損孔の縫合被覆後の再生組織の検討を行った。3. biotubeによる腸管吻合後の再生組織の検討を行った。小腸機能不全モデルにおいて、自らの組織がベースとなった足場を用いて腸管吻合を行う実験を行っている。シリコンチューブをラットの背中の皮下組織に埋め込むことにより、結合織が筒状(チューブ状)となる、バイオチューブが構成されることは確認できた。この長径1cm3cmとしたものを用意し、ラット小腸を切断した上で腸管吻合を全層一層にて行った。術後2-4日は生存したがいずれも死亡し、解剖を行うと、吻合部からの腸液の漏出が認められた。詳細な観察により、大きな穿孔はなかったものの、腸管粘膜の連続性が保たれていないことがわかった。一方、本研究の協力者らの研究により、同様の手法は血管再生・吻合で行われており、血管内皮の連続性が保たれていることがわかっている。血管吻合と消化管吻合の相違点として、血管内を流れる血液中には、血管内皮細胞の成長・生着に必要な成分が豊富に含まれているのに対し、今回の実験系ではバイオチューブそのものには血流のサプライは根本的には存在せず、隣接する細胞から毛細血管レベルでの新生血管が伸びてくるのを待つしかないものと思われる。加えて、腸液内には消化酵素や細菌を含むことから、吻合部からの腸液の漏れがわずかだとしても周囲組織に与える影響は非常に大きいと考えなければならない。従って、(1)腸内細菌が小腸よりは少ない食道を用いた吻合を行う(2)腸管内皮細胞新生を促進させるための物質を添加する(3)バイオチューブに血液を供給するための手段を考案する、などの工夫が必要と考え、研究を進めている。腸管吻合の際、粘膜を欠いた材料を用いているため、消化液の漏れを余儀なくされるという問題がある。小腸機能不全(腸管機能不全)モデルにおいて、自らの組織がベースとなった足場を用いて腸管吻合を行う実験を行っている。シリコンチューブをラットの背中の皮下組織に埋め込むことにより、結合織が筒状(チューブ状)となる、biotubeが構成されることは確認できた。大きな穿孔はなかったものの、腸管粘膜の連続性が保たれていないことがわかった。本研究の協力者の研究により、同様の手法は、血管再生・吻合で行われており、血管内皮の連続性が保たれていることが分かっている。血管吻合と消化管吻合の相違点として、血管内を流れる血液中には、血管内皮細胞の成長・生着に必要な成分が豊富に含まれているのに対し、今回の実験系ではbiotubeそのものには血流のサプライは根本的には存在せず、隣接する細胞から毛細血管レベルでの新生血管が伸びてくるのを待つしかないものと思われる。従って、(1)腸内細菌が小腸よりは少ない食道を用いた吻合を行う(2)腸管内皮細胞新生を促進させるための物質を添加する(3) biotubeに血液を供給するための手段を考案する、などの工夫が必要と考えられ、追加実験を行っているところであるが、残念ながら期待した結果を得るところまで至らなかったため、学会発表や論文発表を行うことはできなかった。今後、本研究費以外の研究費を獲得し、一定の成果が得られるよう研究を継続していく予定である。Biotubeは予想通り作成できているが、腸管の吻合後の生存が長期間得られていない。

これは、吻合の手技の問題以外にも、腸管上皮が欠如した状態での吻合を行っていることに対する対策が不十分であったことが一因であると考えられる。腸管吻合の成功率を向上させる方策を新たに構築する必要がある。小児外科、再生医療腸管上皮再生を促すEGFなどのサイトカインを加えるなどの工夫を行っていく。またできあがったBiotubeの組織学的検討および力学的検討を重ねていく予定である。腸管吻合の成功率が予想よりも低く、次のステップに進むことができなかったため。動物実験の進捗が予定より遅れているため、当初見込んでいた学会発表できるレベルまで成果が上がっていないことが一因である。腸管吻合の成功率を向上させる方策を講じる。動物実験を重ねていく。
血行再建術後の脳機能再構築：マルチパラメトリックMRIに基づく画像マーカーの創設

もやもや病では、血行再建術(バイパス術)を施行することにより高次脳機能予後が改善することが知られているが、その術前の予後予測因子や術後の神経ネットワークの再構築の機序は十分明らかになっていない。本研究の目的は、以下の2つである:〇非侵襲的な術前マルチパラメトリックMRI(IVIM灌流画像、NODDI、APTイメージング)に基づく、もやもや病血行再建術後の高次脳機能改善予測法の開発〇血行再建術後の脳機能改善の基盤となる脳内神経ネットワーク再構築の、マルチパラメトリックMRIによる解明もやもや病では、血行再建術(バイパス術)を施行することにより高次脳機能予後が改善することが知られているが、その術前の予後予測因子や術後の神経ネットワークの再構築の機序は十分明らかになっていない。本研究の目的は、以下の2つである:〇非侵襲的な術前マルチパラメトリックMRI(IVIM灌流画像、NODDI、APTイメージング)に基づく、もやもや病血行再建術後の高次脳機能改善予測法の開発〇血行再建術後の脳機能改善の基盤となる脳内神経ネットワーク再構築の、マルチパラメトリックMRIによる解明
磁気ディスク装置内に発生する非定常流れ自動解析システムの開発

二枚の平行円板を回転させると、その間に挟まれた流体には非軸対称な不安定旋回流れが発生する。電子計算機の外部記憶装置の主流をなす磁気ディスク装置内で発生するこの現象は、ディスクフラッタの原因となり、アクセスミスのみならず、ディスク面と浮動ヘッドの衝突(ディスククラッシュ)をも引き起こす。本研究は最終的には円板間の流体が円板に及ぼす流体励振力を定量的に求めることを目的としているが、本年度は円板間に発生する非定常流れの速度分布を求めることを目的として、以下に述べるシステムを作成した。(1)実験装置水中で二枚の円板を回転させ、陰極として円板間に張った一本のステンレス線から電気分解により水素気泡を発生させるものである。電極の形状は、まだら型と格子型の二種類である。(2)測定装置非定常流れのじょう乱成分と定常成分の分離を目的として、一体型ビデオカメラを円板と同期して回転させ、回転系に視点を置き、一本の陰極線から出る水素気泡の映像をビデオカメラに収録する。(3)画像データ処理システム一体型ビデオカメラに収録された画像から、編集機能付ビデオレコーダによって静止画像データ群を得る。この静止画像データ群を画像メモリ装置を用いて二値化し、電極の位置と水素気泡の位置を読み取り、速度ベクトルを得る。この手続きを一周期にわたって行い、平均化すると、非定常流れのじょう乱成分と定常成分が分離できる。本年度作成したシステムを用いて得られた成果は以下の通りである。(ア)円板間に発生する非定常流れはじょう乱成分と定常成分とから成り、じょう乱成分の振幅は、円板の回転数が高いほど、また円板間隔が広いほど大きい。(イ)非定常流れの定常成分は、半径に比例した直線分布とはならない。
新しい生体画像化技術を用いたマルチコントラスト三次元眼イメージング装置の開発

ジョーンズマトリックス方式を用いた偏光感受型光干渉断層計(Optical Coherence Tomography, OCT)を臨床試作機からengineering model(EM機)に改良し,正常眼,病的眼(翼状片,円錐角膜,緑内障術後眼)を対象に,筑波大学附属病院眼科外来でデータの蓄積を行った.同時にメーカーと協力して臨床機を作製し,指定管理医療機器(クラスII)認証を得ることができた.本機では測定だけではなく,取得したデータの解析ソフトの開発を行っており,眼科外来にて臨床応用に向けて評価を行った.偏光OCTを用いた円錐角膜の初期病変の検出や緑内障濾過手術後の瘢痕評価の有用性が示されているので,シュレム管や集合管といった房水流出組織は従来生体での観察を行った.また,phase retardationを数値化し,組織の質の評価をさらに精緻化する試みを行った.線維柱帯切除後の濾過胞を従来のOCTと偏光OCT同時に5ライン測定した.得られた画像をImageJソフトで解析し,phase retardation valueを算出した.また,濾過胞に様々な画像処理を施すことにより,fibrosis scoreを算出.これらのパラメータと,従来のOCTで評価される濾過胞内部形状に関する因子や,眼圧や点眼薬種類などの臨床因子との関連を,多数例にて解析した.phaseretardation valueやfibrosis scoreの臨床的意義,正当性を評価した.これらの評価を正常眼および緑内障術後眼のみならず,円錐角膜眼でも行い,定量的指標の妥当性について検討した.概ね,臨床的な重症度や病気進行程度を良く反映したものであり,絶対値の正当性はまだ確立していないものの,相対値としては有用な指標が得られていると考えられた.指定管理医療機器(クラスII)認証を得た装置を導入したことにより,当初の計画通り眼科外来における評価を進めることができている.あとで記入特に問題点はなく,データの蓄積のみならず,解析ソフトウエアの開発を行っていく.正常眼のみならず病的眼における測定値の妥当性を検討する.ジョーンズマトリックス方式を用いた偏光感受型光干渉断層計(Optical Coherence Tomography, OCT)を臨床試作機からengineering model(EM機)に改良し,正常眼,病的眼(翼状片,円錐角膜,緑内障術後眼)を対象に,筑波大学附属病院眼科外来でデータの蓄積を行った.同時にメーカーと協力して臨床機を作製し,指定管理医療機器(クラスII)認証を得ることができた.本機では測定だけではなく,取得したデータの解析ソフトの開発を行っており,眼科外来にて臨床応用に向けて評価を行った.偏光OCTを用いた円錐角膜の初期病変の検出や緑内障濾過手術後の瘢痕評価の有用性が示されているので,シュレム管や集合管といった房水流出組織は従来生体での観察を行った.また,phase retardationを数値化し,組織の質の評価をさらに精緻化する試みを行った.線維柱帯切除後の濾過胞を従来のOCTと偏光OCT同時に5ライン測定した.得られた画像をImageJソフトで解析し,phase retardation valueを算出した.また,濾過胞に様々な画像処理を施すことにより,fibrosis scoreを算出.これらのパラメータと,従来のOCTで評価される濾過胞内部形状に関する因子や,眼圧や点眼薬種類などの臨床因子との関連を,多数例にて解析した.phaseretardation valueやfibrosis scoreの臨床的意義,正当性を評価した.これらの評価を正常眼および緑内障術後眼のみならず,円錐角膜眼でも行い,定量的指標の妥当性について検討した.概ね,臨床的な重症度や病気進行程度を良く反映したものであり,絶対値の正当性はまだ確立していないものの,相対値としては有用な指標が得られていると考えられた.指定管理医療機器(クラスII)認証を得た装置を導入したことにより,当初の計画通り眼科外来における評価を進めることができている.従来,偏光感受型光干渉断層計(Optical Coherence Tomography, OCT)による生体計測は反射信号による評価や,複屈折の擬似カラー化による質的評価が行われてきたのみで,定量的な指標は存在しなかった.本年度我々は,phase retardationを数値化し,組織の質の評価をさらに精緻化する試みを行った.線維柱帯切除後の濾過胞を従来のOCTと偏光OCT同時に5ライン測定する.得られた画像をImageJソフト(National Institutes of Health, MD)で解析し,phase retardation valueを算出する.また,濾過胞に様々な画像処理を施すことにより,fibrosis scoreを算出.これらのパラメータと,従来のOCTで評価される濾過胞内部形状に関する因子や,眼圧や点眼薬種類などの臨床因子との関連を,多数例にて解析した.phaseretardation valueやfibrosis scoreの臨床的意義,正当性を評価した.これらの評価を正常眼および緑内障術後眼のみならず,円錐角膜眼でも行い,定量的指標の妥当性について検討した.概ね,臨床的な重症度や病気進行程度を良く反映したものであり,絶対値の正当性はまだ確立していないものの,相対値としては有用な指標が得られていると考えられた.装置のキャリブレーションを見直すことにより29年度中の遅れを取り戻し,当初の計画通り生体眼における評価を進めることができている.あとで記入特に問題点はなく,データの蓄積のみならず,解析ソフトウエアの開発を行っていく.正常眼のみならず病的眼における測定値の妥当性を検討する.特に問題点はなく,臨床症例の蓄積,解析方法の確立,正常眼のみならず病的眼における測定値の妥当性を検討していく予定である.
18世紀フランスにおける哲学的地下文学

十七世紀初め火刑に処されたジュリオ・チェ-ザレ・ヴァニ-ニは、これまで典型的なリベルタンと考えられてきた。しかし無神論者ヴァニ-ニという像は実際には、十七世紀前半には反宗教改革プロパガンダ中で、十七世紀末にはカルヴァン派の対カトリック攻撃の論争中で、一種の符丁として思想史に組み入れられた。その結果、彼の思想の継承と言うより、解体された作品の一部が無神論者ヴァニ-ニという像を媒介にして十八世紀前半の哲学的地下文学に流れ込んだ。カブリエル・ド・フォワニ『南大陸ついに知られる』(1676年)は、ごく早い時期に理神論をユートピア小説の形で表明したものと考えられてきた。しかしこれは実際には、カルヴァン派に改宗した元修道士が、聖書の一解釈から生まれた前アダム人と言う仮説を使って架空の社会を描き、キリスト教の救済史観称賛を企てた神学的コントであった。だがこのような不遜な試みはジュネ-ヴ教会から不審を持たれた。一方、これは十七世紀末に改作され、「善良な未開人」によるヨーロッパ批判という姿に変えられて哲学的地下文学に流れ込んだ。密かにオランダで出版された『スピノザの精神』(1719年)は、伝説の悪書『三詐欺師論』であり、過激な唯物論・無神論の書であると言われてきた。しかし、これは実際にはホッブズ、スピノザ、ヴァニ-ニらからの抜粋を寄せ集めたものにすぎず、その思想は粗雑な唯物論とは言えるものの、神についての観念は明確ではない。この作品は、オランダに亡命し文筆で生計を支える二流のインテリ、心中では啓示宗教に失望したプロテスタントの人々の手になると推定される。
線毛ｐｉｌｉから捉えなおす口腔レンサ球菌の定着戦略と病原性

本申請研究の結果、口腔レンサ球菌Streptococcus sanguinisにはユニークな複数の線毛piliが存在することが明らかになった。そのひとつは病原レンサ球菌のpiliと明らかに異なるものであり、唾液タンパク質と結合することによってバイオフィルム形成や口腔内への定着に密接に関与している。もうひとつの線毛PI-2型piliは、肺炎球菌で報告されたものと90%以上の相同性を有している。この2型piliは、大部分の口腔レンサ球菌で保有されており、唾液アミラーゼとの結合能を有することなどから、やはり菌の定着に関与していると考えられる。平成23年度における研究では、口腔レンサ球菌S. sanguinisにpiliが存在すること、病原性レンサ球菌のpiliとは遺伝子レベルでもタンパク質レベルでも大きな相違があること、piliが細胞外マトリックスタンパク質や唾液タンパク質と結合することなどを明らかにすることができた。この成果を踏まえ、平成24年度は、S. sanguinis以外の口腔レンサ球菌におけるpiliの分布を調べた。ゲノムデータベースを参照し、A群レンサ球菌、B群レンサ球菌、肺炎球菌、腸球菌などの病原細菌のpili遺伝子と相同性のある遺伝子の有無をPCR法で探索した結果、う蝕病原細菌であるS. mutansおよびS. sobrinusではpili関連遺伝子は検出されなかった。また、口腔常在菌であるS.salivariusにもpili関連遺伝子は存在しなかった。ところがmitis groupに属する口腔レンサ球菌については、肺炎球菌で発見された2型線毛PI-2 piliがS. oralis, S. gordonii, S. mitisから検出された。肺炎球菌におけるPI-2 piliの保有率は約20-30 %と報告されているが, mitis groupの口腔レンサ球菌におけるPI-2 piliの保有率は50-60%であり、肺炎球菌よりも広く分布していることが示唆された。S. sanguinisのpiliの研究に関しては、前年度の研究をさらに進展させるべく、これが口腔内定着に関与している可能性をマウスを用いて調べることを計画していた。ところが、S. sanguinisは野生株であってもマウス口腔に定着しないという予想外の結果が得られ、様々な条件を検討したものの、この研究は断念せざるを得なかった。昨年度の研究で、我々は肺炎球菌で発見された2型線毛(PI type 2 pili)がミテイス群の口腔レンサ球菌にも存在することを見出した。そこで、まず、この2型piliの保有する菌の分布状況を調べた。10人の健常成人の口腔プラークからDNAを調製し、PCR法で2型pili遺伝子の検出を行ったところ、10人中8人から2型pili遺伝子が検出され、このpiliを保有する口腔レンサ球菌が健常成人の口腔内に広く分布していることが明らかになった。次に、2型piliの機能を明らかにするため、その遺伝子をクローニングし、大腸菌で発現させて組換えタンパク質を作成した。2型piliはPitA, PitBの2種類のタンパク質から構成されている。それぞれについて、唾液成分タンパク質や細胞マトリックスタンパク質に対する結合能を調べた結果、唾液アミラーゼがPitBと結合することが判明した。細胞マトリックスタンパク質のフィブロネクチンも同様にPitBと結合することが分かった。肺炎球菌では2型piliの保有率は2, 3割程度でかなり低いという報告がある。唾液タンパク質と結合するという今回の知見を踏まえると、2型piliは肺炎球菌の病原因子なのではなく、むしろ口腔レンサ球菌の口腔内定着に関与するタンパク質である可能性が示唆される。平成23年から25年までの3年間にわたる研究によって、ミテイス群口腔レンサ球菌が保有する線毛piliの病原性への関与を明らかにすることが出来た。最も重要な知見は、口腔レンサ球菌S. sanguinisのpiliが唾液タンパク質と結合し、バイオフィルム形成に関与していること、そして2型のpiliがミテイス群口腔レンサ球菌に広く分布していることである。2005年に病原レンサ球菌で新しく発見された線毛piliはレンサ球菌の病原因子に関する従来の常識を一変させた。本研究申請では、口腔レンサ球菌におけるpiliの分布を調べると同時に口腔レンサ球菌の病原性に対するpiliの関与を明らかにすることを目的とする。平成23年度は、まず、口腔レンサ球菌S. sanguinisのpiliについてリコンビナントpiliを作成し、それを免疫して抗体を調製した。これらの抗体を利用し、pili欠損株とpili発現親株の蛍光免疫染色および金コロイド免疫染色を行ってpiliの菌体表層の局在様式を観察した。piliは菌体表層でほぼ一様に分布しており、長さは1-2 um程度であった。

染色像からは、3種類のpiliサブユニットのうちPilAがpiliのバックボーンを形成しており、おそらくPilCがpili末端に存在していると考えられた。宿主細胞マトリックスタンパク質との結合を調べると、フィブロネクチンがPilCと強く反応することが分かった。さらにPilCと唾液タンパク質との反応を調べると、これが複数の唾液タンパク質と結合することが見いだされ、そのひとつは唾液アミラーゼであった。口腔内への定着の際にS. sanguinisのpiliと唾液タンパク質との相互作用が重要な役割を果たしていると考えられることから、唾液をコートした培養用プレート上でS. sanguinisのバイオフィルム形成能を測定した。その結果、pili欠損変異株ではバイオフィルム量が明らかに低下しており、piliと唾液タンパク質との相互作用がバイオフィルム形成、ひいては菌の口腔内定着に関与していることが示された。マウスを用いた動物実験では、S. sanguinisの野生株がマウス口腔に定着しないという予想外の結果になったことは残念であった。しかし、口腔レンサ球菌におけるpiliの分布については、S. mutansなどのう蝕病原細菌には存在しないことが明らかになった一方で、病原レンサ球菌である肺炎球菌のPI-2 piliがmitis groupに属する口腔レンサ球菌に広く分布しているという知見を得ることが出来た。これは口腔レンサ球菌のpiliの機能を考える上で大きな成果であると考えている。上記の通り、口腔レンサ球菌S. sanguinisのpiliに関して、その局在と機能を明らかにすることが出来た。特に、S. sanguinisのpiliが唾液タンパク質と相互作用すること、それが本菌の口腔内への定着に関与していること、の2点は今回得られた重要な知見である。病原レンサ球菌である肺炎球菌のPI-2 piliがmitis groupの口腔レンサ球菌に広く分布しているという知見を踏まえ、このPI-2 piliの分布や発現、その機能を知ることが次年度の課題である。現在PI-2 piliの遺伝子クローニングを行っている。S. sanguinisのpiliが細胞外マトリックスタンパク質以外にも唾液タンパク質と相互作用するという知見は、本菌の口腔内定着機構を考える上で重要な知見である。予備実験の結果から、アミラーゼ以外にもpiliと結合する唾液タンパク質の存在が複数示唆されており、この点はさらに調べる必要があると考えている。また、S. sanguinis以外の口腔レンサ球菌におけるpiliの存在についても今後検討を加える予定である。初年度PCR機器の購入にかかる費用が節約できたという事情もあって、本年度の研究費にも若干の剰余が発生した。その一部は現在掲載予定の論文の掲載費用に充当する予定である。次年度の支出予定に大きな変更はなく、ほぼ申請書に記載した通りになると考えている。本年度は計画調書に記載した通りPCR装置を購入したが、当初購入を予定していたメーカーの機種と同程度の性能のPCR装置がキャンペーン中という理由もあって他メーカーからおよそ半額で購入することができた。このため、その分の研究費が次年度に持越しになっている。