hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
変異型Ret蛋白による細胞癌化に特異的なシグナル伝達の解析

Retはプロトオンコジーンで、受容体型チロシンキナーゼをコードしており、遺伝性の造腫瘍性疾患である多発性内分泌腫瘍症(MEN)2A型、2B型、家族性甲状腺髄様癌(FMTC)の原因遺伝子である。これらの疾患では、Retの点突然変異によりアミノ酸が置換されてRetの活性化が起きる。また、RetにはGDNF、Neurturinなどの複数のリガンドの存在が知られている。今回、Retの活性化により癌が発生するメカニズムを解明するため、Retの活性化による細胞内シグナル伝達の解析を行った。リガンドにより活性化され自己リン酸化したRetとSH2ドメインを有するアダプター蛋白との結合をスクリーニングしたところ、in vitroでGrb7、Shc、PI3-kinase subunit、Crkとの結合があり、in vivoではShc、Crkとの結合があった。Retの活性化により生じるCrkとRetの複合体には、チロシンリン酸化されたp130^<Cas>、Paxillinが結合していた。またFAKのリン酸化も検出された。これらの蛋白は接着斑関連の分子として知られる。これらの分子のリン酸化とPI3-kinase、Rhoとの関連を調べた結果、いずれもPI3-kinaseの下流であるが、更にFAKのリン酸化はRho依存性で、p130^<Cas>、Paxillinのリン酸化はRho非依存性であることが分かった。癌に見られる浸潤は、細胞の運動性の亢進として理解されるが、Retの活性化による発癌には、上記のメカニズムによる細胞接着の変化が関与している可能性が考えられた。c-retプロトオンコジーンは、細胞外ドメインにカドヘリン様構造を有する受容体型のチロシンキナーゼをコードし、多発性内分泌腫瘍症(MEN)2A・2B型の原因遺伝子として知られる。グリア細胞が分泌する神経栄養因子であるGDNFとGPIアンカー蛋白であるにGDNFR-_αの複合体の形成により、Retの活性化が導かれる。本年度の研究では、MEN2型変異によるRetの活性化と、GDNFによるRetの活性化について解析を行った。Ret及びGDNFR-_αを発現する神経芽細胞腫細胞株を用いた実験で、GDNFの添加によりRet蛋白は2量体と考えられる蛋白相互の会合を起こした。GDNFにより、GTP結合型Rasの増加、MAPキナーゼのリン酸化が検出され、Ras-MAPキナーゼ経路の活性化が判明した。シグナルに関与するアダプター蛋白について検索したところ、Shcが自己リン酸化したRetと結合し、Shc自身がチロシンリン酸化され、Grb2に結合することが分かった。したがって、Ret→Shc→Grb2→SosからRas→MAPキナーゼヘのシグナルが考えられた。Shcの解析を進めたところ、MEN2A型変異ではRetはShcのPTBドメインとSH2ドメインの両者に結合するのに対し、2B型変異ではPTBドメインのみに結合することが明らかとなった。GDNFにより活性化されたRetはShcのPTBとSH2の両者に結合した。これらの結合様式の違いが、Shcを介したシグナルに影響を与えている可能性がある。
中英語における時空間体系

本研究は、中英語における時空間体系を歴史語用論の視点から体系的に分析する初めての試みである。時空間体系を定義した上で、時制や人称代名詞といった時空間に関する要素が利用される頻度を分析した。また、ディスコースに踏み込んだ分析を行い、時空間の要素やファクターが統合された時空間体系において相互にどのように関連しているのか、また、談話においてどのように展開するのかについて検討した。本研究の目的は、中英語における時空間体系を歴史語用論の視点から体系的に分析することである。時空間体系には語用論的なファクターが密接に関わっているにもかかわらず、歴史的なデータにおいては、語用論的な分析はいまだ不十分であると言わざるをえない。時制や人称代名詞といった時空間に関する文法範疇や形式に着目し、言語行為等のミクロなレベルにとどまらず、談話等のマクロなレベルに踏み込んだ分析を行い、こういったファクターが相互にどのように関連しているのか、また、談話においてどのように展開するのかについて検討している。本年度は、時空間体系を包括的に分析するための土台を形成することを試みた昨年度の研究結果を踏まえ、時間体系、空間体系の分析を詳細に行った。チョーサーのコーパスにさまざまなファクターを取り込むことにより、量的・質的な分析の精密化を試みた。話者の社会言語学的なファクターと時空間体系との関連を分析した。また、談話分析の観点から、物語のプロットや、中英語の文化的・学問的背景(天文学、占星術等)と時空間体系がどのように関連しているのかについて検討を行った。さらに、歴史語用論に関する文献を調査・検討することにより、基本概念や方法論等を含めて明らかにすべき問題点を確認した。来年度については、これまでの研究結果を踏まえ、時間体系と空間体系における分析を精密化し、両体系を関連づけながら、中英語の時空間体系に関する一定の結果を得ることを期待している。本年度は、これまでの研究との連続性という観点から、中英語の時間に関するファクターについての分析を行い、さらに、空間体系に関するファクターを考慮に入れて分析し、時空間体系を包括的に分析するための土台を形成することを試みた。時間体系、空間体系、歴史語用論に関する文献を調査・検討することにより、基本概念や方法論等を含めて明らかにすべき問題点を確認した。分析にあたっては、チョーサーをコーパスとして韻文と散文のデータベースを構築した。代名詞、副詞類、時制、法助動詞等の量的および質的な分析を行うことにより、話者がこれらの項目をどのように近称と遠称とに分類しているのか、これらが談話においてどのように関連しあっているのかを検討した。来年度については、これまでの研究結果を踏まえ、時間体系に関する分析を精密化し、空間体系に関する分析をさらにすすめたうえで、中英語の時空間体系に関する見通しを得ることを期待している。時制や人称代名詞といった時空間に関する文法範疇や形式に着目し、言語行為等のミクロなレベルにとどまらず、談話等のマクロなレベルに踏み込んだ分析を行い、こういったファクターが相互にどのように関連しているのか、また、談話においてどのように展開するのかについて検討してきた。本年度は、時空間体系を包括的に分析することを試みた昨年度の研究結果を踏まえ、さらに詳細に時空間体系の分析を行った。それまでの韻文(物語)と散文(科学論文)に加え、コーパスを手紙(パストン家書簡集)に広げた。談話の分析においては、時空間の要素とその他の要素との典型的な組み合わせを特定し、談話を構築する要素(ディスコースマーカーやメタディスコース)を分析した。近称あるいは遠称の要素が関連し合っていずれかのパースペクティブを形成すること、その近称と遠称のパースペクティブが談話においてどのように交替するかを観察した。社会言語学的なファクターとの関連についても分析を行った。さらに、歴史語用論や時間体系、空間体系に関する文献を引き続き調査することにより、理論の展開を検討した。本研究プロジェクトにより、中英語における時空間体系を体系的に提示することが可能となり、歴史語用論の発展に寄与する貴重な知見を得ることができた。今後の課題として、時空間統計の分析方法を精密化し、より広い見地から時空間体系を眺める必要性を指摘しておきたい。

人文学、言語学、英語学散文について分析を行った論文が現在投稿中である。また、韻文、韻文と散文の双方をコーパスとして分析を行った研究については、研究発表を精力的に行っている。当初の予定では、時間体系、空間体系をそれぞれ分析した後に、それぞれの体系を相互に関連づけた時空間体系全体に関する分析を行う予定であったが、早い時期に本研究全体の見通しを得た方が、より効率的に研究の目的を達成できるという観点から、試験的に時空間体系全体に関する分析を行った。これが功を奏し、時空間体系を統合的に見る視点を得ることができ、また、分析をさらに精密化することにつながった。一方、コーパスの構築が予定より遅れている。したがって、総合的に研究の達成度を判断すると、おおむね順調に進展していると考えている。これまでの研究との連続性、また今後の分析の土台を形成するという観点から、時間に関するファクターのみを分析する予定であった。しかしながら、早い時期に本研究全体の見通しを得た方が、より効率よく研究の目的を達成できるという判断から、時空間体系全体に関する試験的な分析を始めることとした。分析にあたっては、コーパスの範囲を絞って、時間に関するファクターのみならず、空間に関するファクターを分析の対象に加えた。そのため、翌年度に開始する予定であった空間体系に関する分析に着手することはできたが、この年度に取り組む予定であった時間体系に関する分析が十分にできたとはいえない。したがって、研究の達成度としてはやや遅れていると判断する。平成26年度においては、次の項目に重点をおいて研究をすすめていく予定である。1チョーサーと同時代であるパストン家書簡集等をコーパスに取り込む。ただし、同時に多くのファクターを分析に取り込むため、コーパスの範囲を広げ過ぎないことが重要である。2時間体系と空間体系を相互に関連づけたデータベースを構築する。3歴史語用論の方法論が進展していくことが予想されるため、常に最新の情報に注意を払い、本研究の方法論に取り入れる。4ヤーツェック・フィシャック教授(アダム・ミツケビッチ大学(ポーランド))やそのほかの研究者から、研究をすすめるうえでのレビューを得る。5本研究の成果を国際学会等において発表し、学会誌等に投稿する。平成25年度と平成26年度においては、次のポイントに重点をおいて研究をすすめていく予定である。1チョーサーと同時代の作家であるガウワー、パストン家書簡集にもコーパスの範囲を拡大する。ただし、同時に多くのファクターを分析に取り込むため、コーパスの範囲を広げすぎないことが重要である。5本研究の成果を国際学会等で発表し、学会誌等に投稿する。該当なし
非接触式3Dスキャナーを活用した塑像制作トレーニングについての研究

本研究は、塑像制作者の造形力・観察力の向上のために3Dスキャナーで取り込んだデータを制作の補助資料としての活用することでその効果を実証し、塑像制作の基礎的な能力を育成していくことを目的とする。塑像教育は職人的な手わざによる部分が多く、言語で教授することが困難である。そこで本研究では、塑像教育における造形力向上という目的に特化した3D機器を整備し、解剖学の知識的な部分を視覚的・感覚的に補っていく。また、塑像制作者が3D機器を一つのツールとして身近に扱うことができるようになることで、デジタル技術と手わざのそれぞれの特質を知り、自身の表現活動へ応用していくための基盤的な能力を育成する。
基本転写因子TFIIDに支配される標的遺伝子群の網羅的単離とそのプロモーター特性

コアプロモーター構造を認識する基本転写因子TFIIDは、転写調節因子から受け取った信号を転写量の増減へと変換する上で中心的な役割を果たす。我々はTAF1のTBP機能阻害領域TANDがTFIIDによる転写活性化の分子スイッチとして機能する可能性を示すとともに、コアプロモーターの認識能に異常をきたすtaf1点変異体を複数単離し(N568Δ,T657K)、その解析を進めてきた。TFIIDを含む普遍的転写因子間の機能的ネットワークの実体を明らかにしていくためには、それぞれの標的遺伝子を網羅的に単離するというゲノム生物学的手法が極めて有効である。今年度は、昨年度までにDNAチップ法を用いて同定したTANDの標的遺伝子の一つであるHIS4について、制限温度下における転写量減少の分子機構について詳しい解析を行った。その結果、TAND欠失により(1)転写調節因子BAS1からRNAポリメラーゼIIへの転写活性化シグナルの伝達効率が著しく低下すること、及び(2)BAS1の有する二種類の転写活性化ドメイン(AD)のうち、C端側に存在するADからのシグナルが特異的に阻害されることが明らかとなった。またDNAチップ法により同定した数百個の標的遺伝子のプロモーター解析を効率よく行うため、ポリリン酸の蓄積量を指標に遺伝子発現量を非破壊的にモニタリングする新規ハイスループット型プロモーターマッピング法について検討を行った。その結果、転写オフのキネティックスをレスポンス良く測定できるレポーター遺伝子の開発と、この系を組み込んだ酵母を^<31>P-NMR測定用トレイに自動的に整列させるためのコロニースポッターの開発に成功した。
乳酸菌遺伝子のメチル化修飾による遺伝子発現調節に関する研究

畜産草地研究所がこれまでに収集した乳業用乳酸菌L. lactis 42株を対象として、DNAシトシンメチル化酵素遺伝子保有株を選抜した。その結果、L. lactis ssp. lactis 2株(ラクチスA,B)、およびL. lactis ssp. cremoris 2株(クレモリスC,D)の合計4菌株から新規な推定シトシンメチル化酵素遺伝子を見出し全配列を決定することができた。そのうちラクチスAおよびクレモリスC由来の推定m5CMTase遺伝子は大腸菌および乳酸菌plasmid free株で発現し、宿主DNAのメチル化割合を高めたが、形質転換株と野生株の表現形に違いは見出されなかった。一般にプロモーター領域など遺伝子近傍のDNAのメチル化は、その遺伝子発現を調節することが知られており、原核生物の遺伝子においてもDcmメチラーゼやDamメチラーゼによるプロモーター領域のメチル化によって発現調節される例が報告されている。乳業用乳酸菌Lactococcus lactis(L. lactis)は、多種多様な制限・修飾系(R/Mシステム)を有しているが、R/MシステムによるDNAメチル化のエピジェネティック効果について、情報は僅かしかない。本研究では、これまでにL. lactisから、C(5)-シトシンMTase(m5C MTase)遺伝子と相同性の高い遺伝子配列を見出し、3種類の推定m5C MTase遺伝子配列を決定した。相同性解析の結果、3つの遺伝子の翻訳アミノ酸配列には、いずれも典型的なm5C-MTaseのモチーフ(モチーフI, IV, VI, VIII, IX, X)が保存されていた。本年度は、本研究で見出した新規m5C-MTase遺伝子保有株のゲノムDNA、およびプラスミドDNAのメチル化割合を測定し、m5C-MTase遺伝子非保有株あるいは、欠損m5C-MTase遺伝子保有株のDNAよりもメチル化割合が有意に高いことを明らかにした。このことから、クローニングした新規m5C-MTase遺伝子がコードしているペプチドは、大腸菌でシトシンメチル化酵素として働き、宿主DNAのメチル化割合を増加させ、メチル化模様を変化させることが示唆された。次年度は、ゲノムDNAのメチル化割合およびメチル化配列の違いが、大腸菌および乳酸菌の遺伝子発現、さらには菌株の表現型に影響するか解析する。一般にプロモーター領域など遺伝子近傍のDNAのメチル化は、その遺伝子発現を調節する。原核生物の遺伝子においてもDcmメチラーゼやDamメチラーゼによるプロモーター領域のメチル化によって、発現調節される例が報告されている。本年度は、これまで数例しか報告のないL. lactisのシトシンメチル化酵素遺伝子保有株を、研究所ライブラリーから探査し、当該遺伝子のクローニングを目指した。畜草研L. lactisライブラリー42株からシトシンメチル化酵素遺伝子保有株を探査したところ、L. lactis ssp.lactis 2菌株およびL. lactis ssp.cremoris 2菌株から、m5CMTase遺伝子と相同性の高い遺伝子の部分配列を得た。インバースPCR法およびベクトレットPCR法で、得られた推定MTase遺伝子の全配列を決定したところ、cremoris菌株から得られたものは、M.EcoRIをプロトタイプとする推定MTase遺伝子と相同性が高く、lactis菌株から得られたものは、M.TspRIおよび認識配列不明の推定MTase遺伝子と相同性認められた。推定MTaseをクローニングした大腸菌と、ベクターのみを保有する大腸菌からDNAを抽出し、制限酵素による切断パターンを比較したところ、MspIあるいはAluIによる切断パターンに違いがあることがわかった。このことから、本年度クローニングしたL. lactis由来の推定MTaseは、大腸菌においても発現し、配列特異的なシトシンメチル化酵素として作用することが示唆された。乳業用乳酸菌Lactococcus lactis(L.lactis)は、多種多様な制限・修飾系(R/Mシステム)を有しているが、R/MシステムによるDNAメチル化のエピジェネティック効果について、情報は僅かしかない。本研究では、L.lactisから、3種類の新規C(5)-シトシンMTase(m5C MTase)遺伝子を見出し、推定プロモーター配列を含むコード領域全体をプラスミドベクターに組込み、大腸菌およびプラスミドフリーの乳酸菌を形質転換したところ、形質転換体DNAのメチル化割合を上昇させることが確認できた。そこで、各々の酵素を保有する乳酸菌から、OD=0.2, 0.5, 0.9の各生育ステージでmRNA,全ゲノムDNA,およびプラスミドDNAを抽出し、m5CMTaseの発現量、およびDNAメチル化割合を調べたところ、3種類のDNAメチル化酵素は、いずれも対数期前期のOD=0.2から定常期の0.9にかけて発現が検出されたが、酵素毎に発現量のピークが得られるODが異なり、生育ステージを通した発現パターには多様性があることがわかった。また全ゲノムDNAと比較し、プラスミドDNAを効率よくメチル化する酵素があることがわかった。

一般にプロモーター領域など遺伝子近傍のDNAのメチル化は、遺伝子発現を調節することが知られている。乳業用乳酸菌Lactococcus lactis(L.lactis)は、多様な制限・修飾系(R/Mシステム)を有しており、特にアデニン残基を配列特異的にメチル化するTypeI R/Mシステムは多様性がある。本研究では乳酸菌のDNAメチル化の主役であるR/MシステムによるDNAメチル化のエピジェネティック効果について、明らかにすることを目的としている。近年PacBioによるDNAシーケンスでは、これまで解析が非常に難しかったアデニン残基のメチル化状態について、DNA配列解析と同時に解析できることが明らかとなった。本年度は、乳発酵能に優れた乳酸菌Lactococcus lactis Q14について、全ゲノム解析をPacBioによる1分子シーケンス法で実施した。その結果、2.6 MbのクロモゾームDNAおよび17, 42, 47, 57, 61 kbのプラスミドDNAの全配列を決定することができた。相同性解析の結果、TypeI R/Mシステムの制限サブユニット(HsdR)およびメチル化サブユニット(HsdM)遺伝子の相同性配列はオペロン構造をとり、42kbプラスミドにコードされていた。一方メチル化配列を決定する認識サブユニット(HsdS)遺伝子の相同性配列はすべてのプラスミドにコードされており、多様性があった。また、本解析により配列特異的なアデニン残基のメチル化が特定され、例えば、CACNNNNNNTTYGの2番目のアデニン残基514箇所のうち、99%に相当する509箇所がメチル化されていることが明らかとなった。特に発酵関連遺伝子近傍のメチル化状態について詳細に検討し、アデニンメチル化によるエピジェネティック効果について考察し論文化する。畜産草地研究所がこれまでに収集した乳業用乳酸菌L. lactis 42株を対象として、DNAシトシンメチル化酵素遺伝子保有株を選抜した。その結果、L. lactis ssp. lactis 2株(ラクチスA,B)、およびL. lactis ssp. cremoris 2株(クレモリスC,D)の合計4菌株から新規な推定シトシンメチル化酵素遺伝子を見出し全配列を決定することができた。そのうちラクチスAおよびクレモリスC由来の推定m5CMTase遺伝子は大腸菌および乳酸菌plasmid free株で発現し、宿主DNAのメチル化割合を高めたが、形質転換株と野生株の表現形に違いは見出されなかった。本研究では、研究所乳酸菌ライブラリーとして保管しているL.lactis株の中から、3種類の新規m5C MTase遺伝子を同定した他、菌株特異的な多数のm5C MTase遺伝子断片を得ている。このことから、L.lactisにおけるm5C MTase遺伝子の多様性を明らかにすることができた。
B細胞の抗体産生とアポトーシスを制御する新規遺伝子in vivoにおける機能

平成14年度は、引き続き活性化B細胞で発現誘導される遺伝子Clast3と発現抑制される遺伝子Clast5の機能解析を行った。Clast3の発現をantisense oligoで抑制すると、分裂中期の細胞がアポトーシスに陥ることが判明した。逆に、Clast3を強発現させた細胞では、細胞の異常分裂を伴うDNAの倍数化現象と多核形成が誘導された。これらの結果より、Clast3は正常な細胞分裂に必須であるが、その発現は細胞周期依存性に厳密に制御されていなければならないことがわかった。一方、Clast5のin vivoにおける機能を明らかにするために、トランスジェニックマウス(Tg)を作製し、解析を行った。Clast5-Tgでは、体重はコントロールと変わりないものの、脾臓や胸腺が小さく、脾細胞数、胸腺細胞数ともには約半分以下に減少していた。また,Clast5-Tgの胸腺においては、CD44^+25^+のPro-T及びCD44^-25^+のPre-T細胞が減少し、初期T細胞の分化、増殖が阻害されていた。骨髄ではPro-B及びPre-B細胞が明らかに減少し、初期B細胞分化が著しく障害されていることが分かった。種々の刺激に対する脾細胞の増殖反応を調べたところ、Clast5-Tgでは、CD40 ligand(CD40L),抗IgM抗体,抗CD3抗体,Con-Aなどに対する反応性が低下していた。また骨髄では、IL-7に対する反応性が低くなっていた。さらに、Clast5-TgマウスをDNP-OVAで免疫した結果、12日目の脾臓ではB220^+PNA^+の胚中心B細胞が減少していた。以上の結果より、Clast5は抗IgM抗体、CD40L、IL4などの刺激によりその発現が速やかに抑制されること、また、強制発現させると、B及びTリンパ球の活性化が障害されることが判明した。従って、Clast5はB及びT細胞抗原レセプターをはじめ、様々な補助刺激分子やサイトカインレセプターからのシグナルの核内ターゲットで、リンパ球の活性化の閾値を決定する転写因子であることが示唆された。平成13年度は、CD40Lによって特異的に誘導される新規遺伝子であるClast3とClast5の機能解析を行った。Clast3は264個のアミノ酸からなる細胞質蛋白で、正常B細胞においては、CD40Lをはじめ、抗IgM抗体、IL-4またはLPSなどによってその発現が速やかに誘導されることが判明した。細胞周期での発現は、G0/G1期では低く、S期からM期にかけてその発現が急速に誘導される。NIH3T3細胞でClast3を過剰発現させると、細胞の異常分裂を伴うDNA量の倍数化現象がみられた。逆に、anti-sense oligoを用いてClast3の発現を抑制すると、分裂中期の細胞が減少するとともに、アポトーシスが誘導された。以上の結果により、Clast3は細胞分裂に必須な役割をはたすが、過剰発現すると分裂異常を誘導することが示された。一方、Clast5は、細胞周期のG0/G1でもっとも発現が高く、B細胞の活性化に伴いその発現が消失することが判明した。B細胞株で強制発現させると、細胞周期の進行を阻害することがわかった。また、NIH3T3細胞で過剰発現させると、コロニー形成能を抑制することが示された。従って、Clast5はB細胞活性化に対し抑制的に働くことが示唆された。現在、遺伝子改変マウスを用いた解析を進めているところである。

従って、Clast5はB及びT細胞抗原レセプターをはじめ、様々な補助刺激分子やサイトカインレセプターからのシグナルの核内ターゲットで、リンパ球の活性化の閾値を決定する転写因子であることが示唆された。
社会的課題に関わる制度の生成と影響に関する実証研究

制度的環境に合わせて企業が行動を選択することが、社会的課題の解消という場面においても発生する。制度は強制力のある法律や、強制力は伴わない企業独自の行動様式も含む。社会的課題に対応する制度に適応することは企業にとっては短期的なコストにつながることが多いが、企業が意図せずに自らそのような制度を生み出す動きをとっているように観察できる(寺本、2016、2018)。社会的課題にかかわる制度として対象としているのは、サプライチェーンにおける人権問題への対応である。当初、本研究では電子業界の紛争鉱物を対象としていたが、制度の広がりに着目すると他の業界も含めて分析する必要があると考え対象を広げて分析している。制度の広がりは次の通りである。1990年代、アパレル業界のスウェットショップがサプライチェーン上の人権問題として注目を浴びた際、川下のアパレルメーカーは「責任を引き受けない」という様式から「他組織に任せる」という様式へと変化した。2000年初頭、チョコレート業界で問題が顕在化すると、「責任を引き受けない」、「他組織に任せる」というアパレルメーカーの様式が採用できないか、NGOや行政など他の群集の反応を探った。それを採用するとリスクが大きいことがわかると「利害の一致する他群集との協力」という様式を採用した。2005年頃から、電子業界で問題が明らかになると「群内組織との協力」、「群内企業への関与(サプライチェーンの認証制度運用)」、「ルールの操作(金融規制改革法の紛争鉱物スキーム開発)」へと行動様式が生み出されていった。そしてチョコレート業界では2015年頃から「群内企業への関与」が始まっている。電子業界だけでなく他の業界の動きも包含して分析することで、群を超えて制度が広がっていること、制度の一部は既存の協力関係を崩すようなある種の裏切りがトリガーになり生み出されることが明らかになった。本研究を進めるためには、(1)文献研究、(2)ヒアリングが必要である。(1)文献研究について本研究で取り扱うテーマと分析する視点を考えるためには、複数の領域にまたがってレビューする必要がある。まず、企業の社会問題を取り扱う領域である企業倫理・CSRである。企業倫理・CSRが財務的な成果につながるか、なぜつながるのかという研究領域に研究が集中しており、生産者の貧困を取り除くためのフェアトレードや労働問題の研究量は減少傾向にある。しかし、サプライチェーンの人権問題は企業の評価に直結する重要な課題であることは先行事例から明らかである。次に、制度を取り扱う新制度派組織論では制度が構成されるプロセスの研究が期待されている。そして、複数組織の動きを射程に分析する理論である組織間関係、集合戦略、組織エコロジーに関わる理論を参照することで、企業や企業ではない異なる組織を分析する視点を得られる。いずれの領域のレビューは順調に進んでいる。また、サプライチェーンの人権上の問題に関する文献のレビューも進めている。(2)ヒアリングについて本研究で注目しているサプライチェーンの人権問題対応の制度が電子業界で生成された。その人権問題の背景にはコンゴ民主共和国の鉱山における児童労働、強制労働がある。予定していたことは電子業界をはじめとする企業の方々へのヒアリングであるが、それに先立ち、企業の制度運用により問題が減少したのかを確認する必要があると考え、コンゴ民主共和国の西隣にあるコンゴの元外交官にヒアリングを実施した。ここであきらかになった情報等をふまえ、電子業界等の方々へのヒアリングを実施する予定である。本研究を進めるために、引き続き(1)文献研究、(2)ヒアリングを実施する。(1)文献研究について先行研究とサプライチェーンの人権問題という大きく2つ文献研究を進めていく。まず、先行研究については企業倫理・CSR、新制度派組織論、組織間関係、集合戦略、組織エコロジーについてレビューを行なっていく。企業倫理・CSR、組織間関係、集合戦略の研究成果に関するレビューは現時点のものまではレビューが終わっているため、新制度派組織論のインスティテューショナルアントレプレナーシップと組織エコロジーの社会運動についてさらにレビューを進める予定である。サプライチェーンの人権問題については、アフリカの資源とチョコレートに関する問題と企業の動きについて、さらにレビューを実施する。(2)ヒアリングについて制度が現地にどのような影響を及ぼしたかについてヒアリングを実施した。今後、サプライチェーンの人権問題を抱える中で研究対象としている電子業界、チョコレート業界の方々にヒアリングを実施していく。また、同型性を考える上で、電子業界に限らず鉱物を取り扱う業界へのヒアリングも検討している。現時点では鉱物を取り扱う業界へのヒアリングの予定を組んでいる。

2000年初頭、チョコレート業界で問題が顕在化すると、「責任を引き受けない」、「他組織に任せる」というアパレルメーカーの様式が採用できないか、NGOや行政など他の群集の反応を探った。それを採用するとリスクが大きいことがわかると「利害の一致する他群集との協力」という様式を採用した。2005年頃から、電子業界で問題が明らかになると「群内組織との協力」、「群内企業への関与(サプライチェーンの認証制度運用)」、「ルールの操作(金融規制改革法の紛争鉱物スキーム開発)」へと行動様式が生み出されていった。そしてチョコレート業界では2015年頃から「群内企業への関与」が始まっている。電子業界だけでなく他の業界の動きも包含して分析することで、群を超えて制度が広がっていること、制度の一部は既存の協力関係を崩すようなある種の裏切りがトリガーになり生み出されることが明らかになった。本研究を進めるためには、(1)文献研究、(2)ヒアリングが必要である。(1)文献研究について本研究で取り扱うテーマと分析する視点を考えるためには、複数の領域にまたがってレビューする必要がある。まず、企業の社会問題を取り扱う領域である企業倫理・CSRである。企業倫理・CSRが財務的な成果につながるか、なぜつながるのかという研究領域に研究が集中しており、生産者の貧困を取り除くためのフェアトレードや労働問題の研究量は減少傾向にある。しかし、サプライチェーンの人権問題は企業の評価に直結する重要な課題であることは先行事例から明らかである。次に、制度を取り扱う新制度派組織論では制度が構成されるプロセスの研究が期待されている。そして、複数組織の動きを射程に分析する理論である組織間関係、集合戦略、組織エコロジーに関わる理論を参照することで、企業や企業ではない異なる組織を分析する視点を得られる。いずれの領域のレビューは順調に進んでいる。また、サプライチェーンの人権上の問題に関する文献のレビューも進めている。(2)ヒアリングについて本研究で注目しているサプライチェーンの人権問題対応の制度が電子業界で生成された。その人権問題の背景にはコンゴ民主共和国の鉱山における児童労働、強制労働がある。予定していたことは電子業界をはじめとする企業の方々へのヒアリングであるが、それに先立ち、企業の制度運用により問題が減少したのかを確認する必要があると考え、コンゴ民主共和国の西隣にあるコンゴの元外交官にヒアリングを実施した。ここであきらかになった情報等をふまえ、電子業界等の方々へのヒアリングを実施する予定である。本研究を進めるために、引き続き(1)文献研究、(2)ヒアリングを実施する。(1)文献研究について先行研究とサプライチェーンの人権問題という大きく2つ文献研究を進めていく。まず、先行研究については企業倫理・CSR、新制度派組織論、組織間関係、集合戦略、組織エコロジーについてレビューを行なっていく。
胃癌細胞におけるアポト-ジス誘導を応用した新しい制癌化学療法の開発

1、株化細胞における制癌剤によるアポプト-ジスの誘導(in vitro)株化胃癌細胞における制癌剤によるアポプト-ジスの誘導に関して、癌細胞の断片化を指標に検討を加えた。その結果、シスプラチン、アドリアマイシンにより、その添加濃度、接触時間に応じてアポプト-ジスが誘導される事が確認された。重要な事は、アポプト-ジス誘導の程度が細胞間で異なり、感受性が一様でない事である。2、術前化学療法によるアポプト-ジスの誘導(in vivo)術前に5-FUによる化学療法がなされた胃癌症例、大腸癌症例におけるアポプト-ジスの誘導を調べ、それとc-myc,Ki-67,p53発現との関連を検討した。術前化学療法により胃癌細胞、大腸癌細胞に高率にアポプト-ジスが誘導される事が確認された。しかし、このアポプト-ジスとKi-67,p53など他因子の発現には直接の関連はみられなかった。3、術前化学療法によるアポプト-ジスの誘導と術後生存期間との関連胃癌症例を対象に、術前に5-FUによる化学療法を施行し、アポプト-ジス誘導の程度が術後の再発と生存期間に及ぼす影響について検討中である。更に、再発癌、切除不能例の化学療法において、従来からintensive chemotherapyからmindな、主としてアポプト-ジス誘導をめざした化学療法に変えて、生存期間への影響を検討中である。1.株化細胞における制癌剤によるアポプトーシスの誘導(in vitro):株化胃癌細胞における制癌剤のアポプトーシスの誘導に関して,癌細胞の断片化を指標に検討を加えた.その結果,制癌剤の添加濃度,接触時間に応じてアポプトーシスが誘導されることが確認されたが,HSC-39(ヒト胃癌印環細胞癌株)はMKN-45(ヒト胃癌中分化腺癌株)に比べて,より低濃度のシスプラチン,アドリアマイシンで,また同薬剤のより短い接触時間でアポプトーシスが誘導された.この事実は,制癌剤によるアポプトーシスの誘導の程度が細胞間で異なり,より分化度が低い癌ほど制癌剤によりアポプトーシスが誘導されやすい事を示していると考えられる.即ち,同じ胃癌細胞であっても,癌の分化度の違いにより制癌剤に対する感受性が異なることが明らかになった.2.術前化学療法によるアポプトーシスの誘導(in vivo):術前に5-FUによる化学療法がなされた大腸癌症例におけるアポプトーシスの誘導を調べ,それと癌遺伝子産物(c-myc),細胞増活性(Ki-67),異常癌抑制遺伝子産物(p53)発現との関連を検討した.その結果,5-FUによりヒト大腸癌細胞に高率にアポプトシスが誘導されることが判明した.しかし,5-FUによるアポプトーシス誘導と癌遺伝子産物,細胞増活性,異常癌抑制遺伝子産物発現との関連性は見いだされなかった.1、株化細胞における制癌剤によるアポプト-ジスの誘導(in vitro)株化胃癌細胞における制癌剤によるアポプト-ジスの誘導に関して、癌細胞の断片化を指標に検討を加えた。

更に、再発癌、切除不能例の化学療法において、従来からのintensive chemotherapyからmildな、主としてアポプト-ジス誘導をめざした化学療法に変えて、生存期間への影響を検討中である。1、株化細胞における制癌剤によるアポプト-ジスの誘導(in vitro)株化胃癌細胞における制癌剤によるアポプト-ジスの誘導に関して、癌細胞の断片化を指標に検討を加えた。その結果、シスプラチン、アドリアマイシンにより、その添加濃度、接触時間に応じてアポプト-ジスが誘導される事が確認された。重要な事は、アポプト-ジス誘導の程度が細胞間で異なり、感受性が一様でない事である。2、術前化学療法によるアポプト-ジスの誘導(in vivo)術前に5-FUによる化学療法がなされた胃癌症例、大腸癌症例におけるアポプト-ジスの誘導を調べ、それとc-myc,Ki-67,p53発現との関連を検討した。術前化学療法により胃癌細胞、大腸癌細胞に高率にアポプト-ジスが誘導される事が確認された。しかし、このアポプト-ジスとKi-67,p53など他因子の発現には直接の関連はみられなかった。3、術前化学療法によるアポプト-ジスの誘導と術後生存期間との関連胃癌症例を対象に、術前に5-FUによる化学療法を施行し、アポプト-ジス誘導の程度が術後の再発と生存期間に及ぼす影響について検討中である。
遠紫外光照射による高分子レジストの自己現像と乾式剥膜

本研究の主目的は、高分子レジストの自己現像及び乾式剥膜を光照射のみによって実現するため、この光エッチングにおける反応生成物を固定することによりその反応機構を研究し、より高効率でエッチングするための条件を見いだす点にある。さらに、このエッチングに適した高分子レジストを開発するための知見を得ることも目的の一つにしている。これ等の目的に従って新しい実験装置の設計製作を行ない、種々の条件下で光エッチング実験を行ない、以下に示す結果を得た。(1)高分子レジストの光エッチング生成物を質量分析法で研究しうる実験装置を製作した。この装置では、種々の光源を用いて光エッチングを行ない、レジストから放出された気体反応生成物を高感度で検出し固定を行なえる。(2)主としてポリメチルメタクリレート(PMMA)の光エッチング生成物を光波長、温度等をパラメータとして検出、同定し、高効率エッチングには真空紫外光が極めて有効であること、さらに、真空中でのアンジッピングが天上温度よりはるかに低温で効率良く生じることを利用することが有効であること等を見いだした。(3)フッ素気体ラジカル存在下での真空紫外光エッチング実験も合わせて行ない、高分子レジスト表面で光化学表面反応が実際に生じており、これにより光エッチング効率が促進されることを見い出した。(4)以上の結果を総合的に考察することにより、エネルギー選択反応、位置選択反応が高分子レジストの光エッチングにおいて生じており、これらを利用することが今後の高分子レジストの乾式剥膜、自己光現像に重要であることがわかった。本研究の主目的は,高分子レジストの光エッチングにおいて気化した反応生成物を検出,同定することにより,その反応を支配する機構に関する知見を得ることである.又,これから,より高効率で光エッチングするための条件をみい出し,これに適した高分子レジストを設計する.62年度は,上記目的を達成するために必要な,光エッチング生成物分析装置の設計及び製作及び活性ガス(ラジカル)存在下で実際的な光エッチング実験を高分子レジスト及びシリコンウェハーを用いて行った.(1)分析装置の製作高真空チェンバーを製作し,これに温度コントロール可能な試料台,種々の光を真空内に導入するためのポート,反応生成物を高感度で検出可能な四重極貭量分析管を組み込み,さらに試料付近で反応性ガスの分圧を高くするための反応ガスビーム導入機構をとり付けた.現在, H_2放電管を製作し,これから放射される短波長光を用いて光エッチング生成物の検出を行ないつつ装置のテストを行っている.(2)高分子レジスト,シリコンの光エッチング微細加工におけるエッチングでは,いかにして異方性エッチングを行なうかが重要である.本研究ではレジスト,シリコンウェハーの光エッチングをFラジカル存在下で行ない,これら試料の光照射部でのエッチング速度が,Fラジカルのみによるエッチング速度よりも大きく,試料の光励起によりエッチングが増幅され異方性エッチングが両試料ともに可能であることが判明した.62年度に設計、試作した光エッチング生成物分析装置の最終完成を行ない、ポロメチルメタクリレート(PMMA)の側鎖のみを励起する紫外(UV)光及び側鎖に加え主鎖も励起可能な真空紫外(VUV)光を用い、真空中、酸素ガス中でのPMMAエッチングの生成物の分析を行った。この結果、UV、VUV光による光エッチング生成物に大きな差異が観測されるとともに、VUV光ではその大きな吸収係数のために、高効率で主鎖切断によるエッチングが進行することがわかった。酸素ガスの光エッチングに対する効果については、反応生成物としてCO_2の増加のみが観測されることから、酸素が切断された側鎖と反応をおこすことさらに、エッチング速度の向上には大きな効果を及ぼさないことがわかった。同様な結果は、PMMAとノナフルオロヘキシルメタクリレートとの共重合体(CFHMA)に対しても得られた。一方、光エッチングにより高分子膜を完全にかつ高効率で除去するためには、固体表面における光化学反応を用いる必要がある。

上記の結果をふまえ、CF_4/O_2プラズマにより生成したFラジカル存在下で、PMMA、CFHMA、シリコン(100)のVUV光によるエッチング実験を種々の条件下で行ない、表面光化学反応が生じていること、及びこの反応にはVUV光が極めて有効であることを明らかにすることができた。
意志決定過程におけるメタ・ストラテジ-の抽出と分析

本研究では実験ゲ-ム研究の枠組みにおいて,利莞立状態を解消するための方針として用いられるメタ・ストラテジ-を抽出・分析することを試みた。実験ゲ-ムにおける利害対立状況の典型としては、囚人のディレンマ,社会的ディレンマがあげられ,現代社会の典型的な葛藤状態を表現している。これらのゲ-ム状況では,実験条件として提示された利得表だけを意志決定の判断材料とするならば,その場限りの自己利益最大化しか観察されないことが数多くの実験結果で報告されている。本研究では,被験者のプロトコル分析にもとづいて,メタ・ストラテジ-の概念整理をおこない,意志決定過程におけるヒュ-リスティックスを抽出した。集団的意志決定過程においてもっとも顕著に見られたヒュ-リスティックスは平等分割を目指すことであった。また,社会的ディレンマを代表とする資源分割状況としての集団過程では,初期の不確定な状況に対するヒュ-リスティックスが必要となることが明らかとなった。現実の平等分割ヒュ-リスティックスは,提示されている利得表に対して,繰り返しゲ-ムを中心とした時間的に拡張をおこなうことによって実現される場合が多いことが明らかになった。これはゲ-ム過程も集団的問題解決過程としてとらえる必要があることを示している。今後の研究方向としては,平等ヒュ-リスティックスにもとづいて,各被験者がどのように平等化を実現するかの具体的方法を整理分析することが必要と思われる。
抗うつ薬誘発性躁転に対する気分安定薬の作用に関連する神経回路の探索

気分障害の治療では、抗うつ薬によって誘発される躁転や攻撃性は患者の対人関係に影響を与える重大な問題となる。我々は抗うつ薬投与により誘発される躁転の病態を解析するために、気分障害様の行動異常を示す変異ミトコンドリアDNA複製酵素トランスジェニックマウスを用いて抗うつ薬imipramineの慢性投与下における行動解析を行い、本マウスが社会的行動と活動リズムの異常、imipramine投与初期における高い敵対性を示すことを明らかにした。また、imipramine投与が本マウスの社会的順位を低下させること、気分安定薬lithiumの低用量投与では予防効果が認められないことを示した。本研究では気分障害モデルマウスである変異DNAポリメラーゼγ(POLG)トランスジェニック(Tg)マウスに対して三環系抗うつ薬を長期投与して攻撃性や躁転様行動を誘発しその行動解析を行うことを目的とする。変異POLG Tgマウスは、うつ病様の行動異常や周期的な輪回し行動量の低下が報告されている。本年度は、変異POLG Tgマウスに対し、1.ケージ内社会性行動、2.アンヘドニア様行動の解析、3.埋込型浸透圧ポンプを用いた三環系抗うつ薬の慢性投与条件の検討、を行った。1.変異POLG Tgマウス雌のヘテロ接合体を同腹の野生型雌とペアで24日間飼育しケージ内行動を動画撮影した後に、暗期開始直後の1時間について、社会性行動(攻撃的・非攻撃的)、非社会性行動の頻度・時間を隔日で測定した。変異POLG Tgマウスは対照群のC57BL/6Jに比べ、社会性行動である採餌競合、鼻を用いた身体接触に費やす時間が有意に長く、追跡行動の頻度についても有意に多かった。一方で、非社会性行動である自己グルーミングに費やす時間が有意に短かった。以上の結果より、変異POLG Tgマウスは高いケージ内社会性行動を示す可能性が示唆された。2. 24日間の社会性行動解析完了後にアンヘドニアの評価として用いられるショ糖嗜好性試験及び、未知の個体に対する社会性評価として用いられる社会性相互作用試験(social interaction test)を実施した。いずれの試験においても、Tgマウスと対照群の間に有意な差異は認められなかった。3.変異POLG TgマウスおよびC57BL/6Jに対して、浸透圧ポンプを用いて4週間にわたり三環系抗うつ薬imipramineを投与し、HPLCで測定した血清中薬物濃度を指標として至適投与量を検討した。本研究は気分障害様の行動を示すことが報告されている変異DNAポリメラーゼγ(Polg)トランスジェニック(Tg)マウスに対して三環系抗うつ薬および気分安定薬を慢性投与し、社会性行動の変化に関連する神経回路の探索を行うことを目的とする。本年度は雌Tgマウスに対し、双極性障害において躁転のリスクを高める三環系抗うつ薬の一種であるimipramineを慢性投与し、ケージ内社会性行動の継時的変化およびアンヘドニア様行動の解析を行った。雌Tgマウスに対し浸透圧ポンプを用いてimipramine (30 mg/kg/day)または対照群として生理食塩水を慢性投与し、暗期開始後1時間のケージメイト(雌野生型)に対する社会性行動(攻撃性、親和性)及び非社会性行動を隔日で24日間にわたり解析した。Imipramine投与群のTg及びnon-Tgマウスは生理食塩水投与群のTgマウスに比べ、有意に鼻-身体間接触の時間が短かった。Imipramine投与Tgマウスは、投薬期間の前半(<12日)に比べ後半において受動的な鼻-生殖器・肛門間接触の時間および無動時間が有意に増加した。24日間にわたる社会性行動解析の後に、未知の個体に対する社会性評価として用いられる社会性相互作用試験(social interaction test)、アンヘドニア様行動の評価として用いられるショ糖嗜好性試験を行った結果、いずれの試験においても群間に有意な差異は認められなかった。以上の結果より、変異Polg Tgマウスに対する三環系抗うつ薬imipramineの慢性投与がホームケージ内の既知マウス間における社会性相互作用に対して影響を与えた可能性が示唆される。本年度に実施する予定であった、三環系抗うつ薬慢性投与時におけるTgマウスの社会性行動解析、およびアンヘドニア様行動の解析については完了した。三環系抗うつ薬の投薬条件検討とケージ内社会性行動の録画データ解析に当初の予定より時間を要したために、本年度に実施する予定であった三環系抗うつ薬誘発性の行動変化に関連する神経回路の探索については遅延している。考慮すべき問題点として、Tgマウスに対する三環系抗うつ薬の慢性投与により暗期においてケージ内行動の変化は認められたが、躁転様の行動変化(活動量、攻撃性行動の増加等)を示唆する変化については認められなかった点が挙げられる。今後は明期におけるケージ内行動の録画データについても、Tgマウスの社会性行動に対する三環系抗うつ薬慢性投与の影響を解析することを予定している。気分障害の薬物治療においては、抗うつ薬によって誘発される躁転や賦活症候群が重大な問題となる。本研究は、気分障害モデルマウスである変異DNAポリメラーゼγトランスジェニックマウス(変異Polg1 Tgマウス)を用い、三環系抗うつ薬によって誘発される行動異常の解析と気分安定薬による予防効果の評価を行うことを目的とし、平成28年度に以下の成果を得た。

変異Polg1 Tgマウスに対し三環系抗うつ薬imipramine (30 mg/kg/day)を慢性投与して、明期初期の社会的行動(ケージメイトマウスに対する社会的接触、親和的・攻撃的行動)を隔日で24日間測定し、暗期の社会的行動(平成27年度に測定)とともに解析を行った。Tgマウスは野生型マウスに比べ、明期初期において無動・睡眠時間が短く、社会的行動(鼻を用いたケージメイトマウスへの接触、社会的グルーミング、採食競合、追撃行動)に費やす時間が長いことが明らかになった。またimipramine投与初期において、Tgマウスは野生型マウスより高い敵対行動を示すことが明らかになった。ケージメイトマウスとの社会的序列を評価する試験であるチューブテストを用いて、imipramine投与が序列に与える影響と、気分安定薬lithiumの前投与による予防効果を解析した結果、imipramine投与によりTgマウスの序列低下が認められたが、lithium前投与による序列変化への予防効果は認められなかった。以上の結果より、気分障害モデルマウスである変異Polg1 Tgマウスに対する三環系抗うつ薬の投与が敵対的行動と社会的序列の変化を引き起こす可能性が示された。気分障害の治療では、抗うつ薬によって誘発される躁転や攻撃性は患者の対人関係に影響を与える重大な問題となる。我々は抗うつ薬投与により誘発される躁転の病態を解析するために、気分障害様の行動異常を示す変異ミトコンドリアDNA複製酵素トランスジェニックマウスを用いて抗うつ薬imipramineの慢性投与下における行動解析を行い、本マウスが社会的行動と活動リズムの異常、imipramine投与初期における高い敵対性を示すことを明らかにした。また、imipramine投与が本マウスの社会的順位を低下させること、気分安定薬lithiumの低用量投与では予防効果が認められないことを示した。当初計画において本年度に進める予定であった、(1)「長期ケージ内社会行動解析」実験系の構築、(2)既存の行動試験との比較、(3)三環系抗うつ薬の投与条件検討、についてはいずれも実施しており、計画はおおむね順調に進展している。考慮すべき問題点は次の通りである。三環系抗うつ薬の慢性投与条件において、投与マウスの薬物血中濃度はヒト患者における治療濃度域であることが望ましいが、治療濃度域に達するようimipramineを高濃度で投与すると皮膚傷害を生じた。このため、治療濃度域以下のimipramineで今後の実験を実施し、並行して他の三環系抗うつ薬についても投与量の検討を行うこととする。今後は、(1) Tgマウスの明期における社会性行動に対して三環系抗うつ薬慢性投与が与える影響の解析、(2)気分安定薬lithium慢性投与時における社会性行動解析、(3)三環系抗うつ薬によって誘発される行動変化に関連する神経回路の探索を実施する。Tgマウスに対してimipramine (30 mg/kg/day)を慢性投与し24日間のケージ内社会性行動を録画したデータを用い、明期開始後1時間のケージメイトに対する社会性行動、および非社会性行動を隔日で解析し、明期と暗期の結果について行動変化の比較を行う。
ほ乳類の性決定に関わる新規エピゲノム制御因子の同定

Y染色体上には性決定遺伝子であるSryが存在し、このSryが雌雄に分化していない胎児期の生殖腺で一過的に発現することで個体を雄へと誘導する。我々は、H3K9脱メチル化酵素であるJmjd1aがSryのエピジェネティックな発現制御に深く関わっていることを明らかにした。しかし、Jmjd1a以外のエピゲノム制御因子の関りは不明であった。申請者の解析の結果、メチル化シトシン酸化酵素であるTetファミリーやH3K9メチル化酵素であるSuv39h、H3K9メチル化結合因子であるHP1ファミリーがSryの発現制御に関わる可能性を明らかにした。ほ乳類の「性」はY染色体の有無という先天的ゲノム情報によって決まる。一方で、エピ(後天的)ゲノムが性決定に果たす役割はほとんど分かっていなかった。Y染色上にある性決定遺伝子Sryが胎児期の生殖腺で一過的に発現することで個体を雄へと誘導する。本研究室では、ヒストン脱メチル化酵素のひとつJmjd1aがSryの発現を正に制御することでマウスの性決定に関わることを明らかにした。しかし、Jmjd1a以外の性決定に関与するエピゲノム制御因子及び性決定メカニズムの全容は未だ明らかになっていない。Jmjd1a欠損マウスは雌雄への分化が拮抗した状態になっており、精巣と卵巣を両方持つ個体が観察される。そこで本研究では、Jmjd1a欠損の遺伝子背景においてエピゲノム制御因子をヘテロ欠損させ、Jmjd1a欠損マウスの性決定に対する影響の有無を観察することで、性決定に関わる新規エピゲノム制御因子の同定ができるのではないかと考え解析を行った。今回、ヒストンH3・リジン9(H3K9)のメチル化制御因子及びDNAのメチル化制御因子をSryの発現制御に関わる候補因子とし、各々の欠損マウスの樹立を行っていた。現在、すべての候補因子の欠損マウスは樹立できており、Sryの発現制御に関わる新規のエピゲノム制御因子の絞り込みを行っている。いくつかの候補因子に関して、Sryの発現制御に関わる可能性を示す結果が得られており、その因子によるエピゲノム修飾を介したSryの発現制御メカニズムの解明を行っている。今年度、目標にしていた候補因子を欠損したマウスの樹立はすべて完了しており、いくつかの候補因子に関してはSryの発現制御に関わる可能性を示す有用な結果も得られている。ほ乳類の性はY染色体の有無という先天的ゲノム情報によって決まる。一方、エピゲノムが性決定に果たす役割は不明であった。これまで、ヒストン脱メチル化酵素Jmjd1aが性決定遺伝子Sry遺伝子座の抑制的エピゲノム修飾であるH3K9メチル化を消去することで、その発現を正に調節し、性決定の制御に関わることを明らかにした。しかし、他のエピゲノム制御因子の関与は不明であった。そこで、雌雄への分化が拮抗した状態にあるJmjd1a欠損の遺伝子背景においてエピゲノム制御因子をホモもしくはヘテロ欠損させ、Jmjd1a欠損マウスの性決定に対する影響(ヘテロ欠損することでJmjd1a欠損マウスの性転換の表現型がレスキューされるのか、または性転換の頻度が高くなるのか)を観察することで、Sryの発現制御に関わる新規エピゲノム制御因子のスクリーニングを行った。その結果、DNAメチル化制御に関わるヒドロキシメチル化酵素であるTetファミリー、H3K9メチル化酵素Suv39h1, Suv39h2及びH3K9メチル化結合因子HP1a, HP1bがSryの発現制御に関わることが明らかとなった。同じH3K9メチル化酵素ではあるがSetdb1に関してはヘテロ欠損による性決定への影響は見られなかった。Sryの発現制御に関わる可能性を示している候補因子に関しては、その因子によるエピゲノム修飾を介したSryの発現制御メカニズムの解明を行を行う。絞り込みの終わっていない候補因子に関しては、性転換の表現型を解析することでSryの発現制御に関わるのか否か解析を行う。Sryの発現制御に関わる可能性を示した場合、同様にエピゲノム修飾を介したSryの発現制御メカニズムの解明を行を行う。以上の解析を進めることで、エピゲノム制御を介した性決定メカニズムを明らかにしていく。分子生物学以下の2つの理由が挙げられる。1、予定より早く欠損マウスの樹立ができたため、欠損マウス作製に必要な試薬及びマウス維持費が抑えられた。2、予測より多くのSry発現制御に関わる候補因子が同定できそうであったので、次年度に行う予定であった分子生物学的手法を用いた候補因子によるSry制御

メカニズム解析に多くの予算が必要になるため、今年度の予算を次年度に使用することにした。以上の理由により次年度使用額が生じた。分子生物学的手法を用いた候補因子によるSry制御メカニズム解析及びマウス維持費に用いる。