hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
弾性波散乱解析のための係数行列の導出が不要な積分方程式の新しい高速解法の開発

固体を伝わる波動は障害物に入射すると散乱する.生じた散乱波がどのような性質を持つかを調べることは,障害物の情報を逆に推定する上でも重要な課題である.こうした散乱波の性質を調べることは積分方程式と呼ばれるクラスの方程式を用いることが多い一方で,数値計算を実際に行う場合には大規模で密な係数行列を導出しなければならない.本研究は,こうした積分方程式に付随した数値計算上の問題を解決する手法を提案するとともに,実際に数値計算を行い,波動場中の障害物の情報を取り出す数学理論の提案と検証を行った.係数行列を不要とする新たな積分方程式の高速解法として,当該年度のGreenの定理に基づく表現定理に着目し,表面力のGreen関数を含む境界積分と体積積分の両者を含む積分方程式に着目した.ここでは,境界積分を境界に直交する局所座標系のデルタ関数を定義することで,積分方程式を領域積分に変換した.そして,この方程式にFourier変換と逆変換を反復的に繰り返すことで積分方程式の解を求める手法を展開した.手法の妥当性の検証のために,全無限の弾性波動場における散乱解析を行った.数値解析結果によれば,境界積分に表面力のGreen関数が現れる場合でも精度の良い解が得られることが分かった.これらの研究成果は展開途上にある,この積分方程式法のもう一つの重要なアプリケーションは散乱逆解析にある.Fourier積分変換された積分方程式は波動場と媒質の変動領域や内部の境界の情報を数学的に分離することが可能となるためである.半無限弾性波動場の内部に埋め込まれた媒質の変動領域の推定のために,この積分方程式法を適用するための定式を行い,数値解析を実行した.散乱逆解析のための積分方程式は,これまでの既存の手法と同様に第1種のFredholm方程式となり,数値解析の結果,解の収束に問題があることが分かった.これを解決するためTikhonovの正則化を適用し,あらためて数値解析を実行したところ,散乱逆解析はかなりの精度で行えることが分かってきた.これらの結果はジョージア工科大学で開かれたSES2012と国内で開かれた理論応用力学講演会にて発表している.無限あるいは半無限領域中での媒質の変動領域で生じる散乱波動の解析のために,積分方程式は有力なツールである.また,地震学や地震工学の分野でも,媒質の変動領域での散乱解析は重要な課題である.しかし,一方で媒質の変動領域の解析に用いるべき積分方程式は領域型のものとなり,量子論など他分野での多くの理論的な研究にも関わらず.実際の数値計算には,大規模な係数行列を生成することから,実際のアプリケーションの実例は,あまり蓄積されてこなかった.こうした背景の中で,本研究は係数行列を導出することなく,方程式の解を求めるプロセスで高速アルゴリズムを用いる,新たな積分方程式の解法を行ってきた.当該年度は媒質の変動領域に波動を照射し,地表で観測された散乱波動場から媒質のゆらぎの性状を再構成する方法論を,係数行列を導出することなく積分方程式を解く手法をベースに展開し,その数値的な精度を実際の数値計算によって実証した.検証結果によれば,媒質の揺らぎに照射する人工震源のポイント数を増やすこと,入射波動場(Green関数)の計算に適切な正則化パラメータを用いることで,媒質の変動成分の中で,せん断弾性係数の変動は精度良く再構成できることを見出した.一方,体積変形に関連する弾性係数の精度良い再構成は,今後に残された課題となった.なおせん断変形に関連する弾性係数の再構成精度が比較的良好であった理由は,体積変形にくらんべせん断変形が弾性体中で起こりやすく,観測された散乱波動もせん断変形の情報を多く含んでいることによると考えられる.これらの結果は国際ジャーナル(EABE)のオンライン版で公開されている.固体を伝わる波動は障害物に入射すると散乱する.生じた散乱波がどのような性質を持つかを調べることは,障害物の情報を逆に推定する上でも重要な課題である.こうした散乱波の性質を調べることは積分方程式と呼ばれるクラスの方程式を用いることが多い一方で,数値計算を実際に行う場合には大規模で密な係数行列を導出しなければならない.本研究は,こうした積分方程式に付随した数値計算上の問題を解決する手法を提案するとともに,実際に数値計算を行い,波動場中の障害物の情報を取り出す数学理論の提案と検証を行った.半無限弾性波動場における高速領域積分方程式法の展開については概ね成功を見た.研究成果はint.j.solids and struct. vol. 48, pp. 3194-3208に掲載されている.ここでは,半無限弾性波動場のスペクトル理論で展開されたGreen関数およびこの表現で用いられるFourier変換を積分方程式に適用することで手法の展開を行っている.また,ここで展開された半無限弾性波動場のためのFourier変換はすべて単純なFourier sineおよびcosine変換ならびにLaplce変換に分解し,それぞれに高速変換アルゴリズムを適用することで,積分方程式の高速解法を実現している.また,積分方程式にFourier変換を施すことで,積分方程式の求解のプロセスで必要となるKrylov部分空間の構成方法が示されることになり,結果としてFourier変換と逆変換を積分方程式に繰り返し適用することで,積分方程式が解かれることになる.

この手法においては,従来より積分方程式の数値解法で必要と考えられてきた係数行列の導出が不要であり,大規模な波動場の数値計算に必要な計算機容量の削減が可能となる.さらに従来の積分方程式の高速解法が係数行列の作成の効率化に主眼を置いてきたことに対して,ここではKrylov部分空間の構成に高速解法を用いるなど,申請者はこの方法が極めて独創的なものであると考えている.なお,当該論文はscience direct Top 25 articlesにランキングされている.弾性波動場における境界積分項と領域積分項が現れる方程式に対して,Fourier積分方程式を適用し,係数行列を導出することなく,方程式を解くことができることが実証できたことは大きな成果であり.それが国際学術雑誌に掲載されたことで,研究は概ね順調に推移しているものと考える.また,この方法の延長上にある半無限弾性波動場における散乱逆解析手法を結果を整理し,国際雑誌に公表することは今後に残されており,この意味では大幅に当初の計画より進んでいるとは言えないと考えている.まず,国際的に権威のあるジャーナルに論文が掲載されるとともに,この論文がTOP25のランキングを受けたこと.また,この論文掲載後,展開された積分方程式法で,解の収束特性が劣化するケースの分析を続け,この問題の解決のために,Lippmann-Schwinger方程式に境界項を加え,その方程式をFourier変換する手法も展開している.そして,これについても良好な解を得はじめている.この結果についてはKAISTが発行する論文集に論文を投稿する準備をはじめている.申請者はこの論文集のeditorial boardも,前述の研究成果が認められ勤めるようになっている.editorial boardとして,論文に投稿することを依頼されており,投稿を急いでいる.以上のように,当該研究の達成度は良好と考えている.係数行列フリーの積分方程式法を半無限弾性波動場の散乱逆解析手法の展開を整理し,さらに数値計算計算結果をまとめてゆく.前年までに解析プログラムのMPI並列化が概ね完了しており,多数のテスト計算を短時間で行えることが可能になっている.多数のテスト計算を通して,どのような場合に解析精度が向上するかと言った問題.多数のソースから媒質の変動領域に波動を照射し媒質の変動領域を再構成する問題に取り組む.また,申請研究の最終年度に当たるため,散乱解析ならびに逆解析の手法や結果についてもまとめて,改めて論文を公表しなければならないと考えている.この研究の最終的なターゲットは,展開された積分方程式法を用いて,大規模な地殻構造を伝播する波動の散乱解析を行うことである.前述の弾性波動場に対するLippmann--Schwinger方程式に境界項を加える試みは,全無限の弾性波動場に対して成功を納めはじめたに過ぎない.半無限弾性波動場の境界条件のもとで,この方法を展開し,手法を実用化するための困難を乗り越えることが重要な課題になっている.海外での研究発表(BEM2013)ならびに研究室保有の3つのworksationで用いるFortranコンパイラのライセンス料(3件),英文論文の校閲料などがほとんどを占めることになると考えている.前年度とほぼ同様になると考える.論文の別刷にはカラーが必要であり,同様な経費が見込まれる.また謝金として,やや長い論文の英文校閲をお願いすることになり,150,000円程度が必要である.また,この年度では,研究室の高速並列計算機のリニューアルを予定している.高速計算機のリニューアルに伴い,周辺機器の整備が必要と考えている.
DNAの切断と再結合におけるhelicase遺伝子familyの機能解析

1)ATMとBLMの会合:BLMと会合するタンパクの同定をyeasttwo-hybrid systemを用いて行い、ATMとBLMが会合することを明らかにした。さらに、ATMがBLMのThr-99をリン酸化すると、放射線照射によりDNAの二本鎖切断がおきるとATMが活性化され、ATMによるBLMのリン酸化が増強することを明らかにした。2)ATM-/-BLM-/-のダブルノックアウト細胞株の作製:ATMとBLMの会合についてさらに解析するためにATMとBLMの両者を欠損するDT40細胞株を作製し、放射線感受性、sister chromatid exchange(SCE)等について検討した。ATM-/-BLM-/-のダブルノックアウト細胞株は、それぞれ単独のATM-/-またはBLM-/-細胞株とほぼ同様の表現型を示した。しかし、AATM-/-BLM-/-のダブルノックアウト細胞株はATM-/-細胞株とほぼ同様に放射線感受性は著しく亢進しており、BLM-/-細胞株とほぼ同様にSCEの頻度が著しく上昇をしていた。このことより、ATM,BLMが一部、協調的に働くが、大部分はそれぞれ独立のpathwayでDNAの複製・修復に関与していることが明らかにされた。3)BSの診断スクリーニング:BSは臨床上、非典型例もあり確定診断がつけにくい症例もある。BLMのcDNAは4.3kbと比較的大きな遺伝子であり全長の塩基配列を調べるのは時間を必要とする。そこで、患者由来の細胞の免疫染色をおこなったところ患者細胞では核内のdotが認められず、イムノブロットでもタンパクの発現が認められなかった。これらより、免疫染色とイムノブロットを組み合わせによりBLMのタンパク発現を解析することで、BS診断のスクリーニングが可能なことを報告した。本研究の目的は、DNAの切断と再結合におけるhelicase遺伝子family、特にBLMの機能と構造を多角的に解析し、至っては発癌老化の機序にも迫るものである.平成10年度には下記の点が進められた.(1) BLMヘリカーゼ領域の大量発現: BLMのヘリカーゼ領域をGSTベクターに組み込み大腸菌に大量発現させた.Glutathione-Sepharose4Bで融合タンパクを回収後、トロンビンできりだしBLMのへリカーゼ領域のみを回収することができた.(2)ヘリカーゼ活性の測定: ^<32>pでラベルしたoligo DNAをM13のベクターにannealingさせ基質とした.この基質とBLMヘリカーゼ領域をATPの存在下、または非存在下で反応させた.融合タンパクはATPの存在下でのみヘリカーゼ活性を示した.(3) BLMの核移行シグナルの解析: BLMの遺伝子とGreen fluoreseent protein(GFP)の融合タンパクをHeLa細胞に発現させ、細胞内の局在を観察した.BLMのC-末に2つの塩基性アミノ酸クラスターが存在しBLMの核移行シグナルとして機能することを明かにした.さらに、この部位に変異を導入し核局在の有無を観察したところ、遠位のアミノ酸のKRRが重要であることが明かになった.さらに、マウスBLMも同様にC-末に核移行シグナル有することを明かにした.(4)症例の解析: Fanconi貧血と診断されていた症例のBLMに1610insAというnon sense変異を検出した.BLMには非定型例も存在すると考えられ遺伝子解析による診断が重要である。(5) BLMと相互作用するタンパクの解析: Two-hybrid systemを用いてBLMと相互作用するタンパクのクローニングを行い数個の陽性クローンを得た.現在、塩基配列を決定し既知の遺伝子との相同性を解析中である.以上の成果をもとに次年度の研究を進める.本年度はBLMタンパクの機能について以下の点を明らかにした.1)抗体を用いたBS患者の診断:BLMをGSTとの融合

タンパクとして発現させ、ポリクロナール抗体を作成した.健常人由来のB細胞株では170kdのバンドを認めたが、BS由来では発現が認められなかった.末梢血リンパ球のhomogenateでは50μgのタンパクをのせてもBLMのbandが検出できなかったが、T細胞をPHAで誘導するとBLMタンパクの誘導が観察された.631del CAAの変異を有するリンパ球をPHAで刺激してもBLMタンパクの発現が認められないことより、PHAで誘導したBLMタンパクの検出は患者スクリーニング法として有用である.2)リンパ球の分化におけるBLMの関与:BLM遺伝子は胸腺、精巣に強く発現しており、リンパ球、生殖細胞の分化への関与が示唆された.Bloom症候群(BS)患者のB細胞のイムノグロブリン重鎖の塩基配列を解析したが、健常人と同様に組み換えがおこっておりjunction部位の多様性も認められたことからBLMはイムノグロブリンの組み換えについては直接関与していない.3)BLMタンパクとATMタンパクの会合:酵母two-hybrid systemを用いてBLMと会合するタンパクの同定を行いAtaxia-telangiectasiaの病因遺伝子産物(ATM)がその一つであることをあきらかにした.in vitro binding assayによりBLMはhelicase domainを中心にしてATMとbindingした.p53を基質としたATMのkinase assayではBLMの発現していないBS細胞株ではATMのkinase活性の低下が観察され2つのタンパクの機能的相互作用が示唆された.2つの異なる遺伝性の高発癌症候群の病因遺伝子産物の相互作用は高発癌化の機構を考えるうえで重要な知見である.本年度はBLMタンパクの機能について以下の点を明らかにした。1)BLM欠損細胞では細胞死の亢進が認めるれる。Bloom症候群では小柄な体型、免疫不全が認められるがその機序についての解析をおこなった。BLM-/-knockoutマウスは胎生13.5日までしか生存できない胎生致死マウスであるが、このマウスの胎生12.5日の身長、体重、肝細胞の細胞数についてしらべたところ、正常マウスと比較して身長、体重が1/2程度、肝細胞数は1/100以下に低下していた。神経管周囲の細胞はsingle strand DNAの染色にて陽性であり、細胞死の亢進が考えられた。細胞増殖の低下、DNA障害因子に対する感受性の亢進により細胞死が誘導されやすく、個体の細胞数の低下が小柄な体型の原因と考えられた。2)BLMはATM kinaseによりリン酸化をうける。yeast two-hybridsystemを用いてBLMと会合するタンパクの同定をこころみたところ、2つのクローンが得られ一つはataxia-telangiectasiaの病因遺伝子産物ATMであった。in vitroのtranscription/translationを用いて発現させたATMまたはBLMタンパクとGSTとの融合タンパクのbinding
胆道癌における遺伝子変異と免疫抑制分子及びネオアンチゲン発現の解析

胆道癌は予後が極めて不良な疾患であり、有効な治療法の開発が必須である。近年、生体内のT細胞抗腫瘍免疫応答を強く抑制する免疫チェックポイント分子が発見され、そのシグナルをブロックする抗体医薬が開発された。すでにメラノーマ、肺癌、腎癌、胃癌などで臨床効果が確認され薬事承認されており、一定の患者において著明な臨床効果を認めているが、胆道癌に対する開発は未だ進んでいない。生体のT細胞抗腫瘍免疫応答の発現には癌細胞における変異抗原(ネオアンチゲン)、HLA分子、PD-L1分子などの存在が重要であり、免疫治療の臨床効果は癌組織への腫瘍浸潤リンパ球(TIL)の高浸潤が必要とされている。今回、胆道癌における新規免疫治療の開発を目指して、胆道癌における遺伝子変異、ネオアンチゲン発現、HLA発現、PD-L1発現を解析して有機的な個々の免疫プロファイリングを試みる研究を進めている。研究開始当初は外科手術後のホルマリン固定パラフィン包埋標本(FFPE)を利用した画一的な解析を検討していたが、固定標本から抽出したDNAの量及びクオリティ等の問題により十分な解析が困難であり、サンプルを外科手術新鮮凍結組織として解析を進めている。現在までに、胆道癌組織からのDNA抽出、DNAのクオリティチェック、ライブラリ作成、テンプレート調整、次世代シーケンサーによるエクソームシーケンスの準備を整え、まとめて解析を行うためのサンプル集積を続けている。また、胆道癌の遺伝子変異データからネオアンチゲン候補を選択するためのインフォマティクスの検討を進めており、より正確なネオアンチゲン評価システムの構築を行っている。同時に胆道癌におけるHLA発現及びPD-L1発現の解析に必要な免疫組織染色用抗体を選択し、準備を整えており、染色条件を調整してまとめてのサンプル解析を予定している。本研究内容にはヒト胆道癌組織の遺伝子変異解析を実施する内容が含まれるため、遺伝子研究に関する倫理委員会での承認が必要であり、また、個人情報保護法の改定や臨床研究法の設定などが重なって、予想以上の時間を要したため、全体の研究遂行がやや遅れて進行している。さらに、研究実施の承認が得られてからの研究遂行において当初外科手術標本のホルマリン固定パラフィン包埋標本(FFPE)の利用を想定して進めていたが、サンプルからのDNA抽出において量とクオリティに問題があり、良好な結果が得られなかったため、新たに手術時の新鮮癌組織を利用することとして研究を進めているため、サンプルの集積に予定より時間を要しており現在まで多少の遅れを生じて推移している。癌細胞におけるHLAとPD-L1の発現解析については検査の均一性を保つため、サンプルがまとまった時点での解析を予定しており、そのための準備を整えてサンプルを集積に努めている。本年度まで研究用のサンプル集積が遅れており、研究全体にやや遅れが生じているため、引き続き精力的にサンプルの収集に努める。サンプル解析の準備は整っているため、次年度において、研究エフォートを十分増やして、集積されたサンプルをまとめて解析する予定である。また、研究データの解析のためのインフォマティクスの検討及び有機的免疫プロファイリングの検討をさらに進めて、追加情報として必要な解析(RNAシーケンスの導入、腫瘍組織中のTILのTCRレパトア解析など)について考察を進めていく予定である。胆道癌は予後が極めて不良な疾患であり、有効な治療法の開発が必須であることより、近年注目されている免疫チェックポイント阻害剤の胆道癌への適応について検討し、胆道癌における遺伝子変異の解析と変異遺伝子由来のネオアンチゲン解析を行い、胆道癌における新規免疫治療法の開発を目指して本研究を実施している。免疫チェックポイント阻害剤では抗PD-1抗体のニボルマブ、キートルーダなどがすでに肺癌、メラノーマ、腎癌などに薬事承認され、実際の臨床で使用されているが、現在までの臨床データの解析により癌細胞における遺伝子変異数が多いこと、PD-L1発現が強いこと、ネオアンチゲンの発現が多いことなどが免疫チェックポイント阻害剤の臨床効果と相関することが報告されている。今後、胆道癌での適応を検討する場合、胆道癌組織における遺伝子変異を解析して遺伝子変異数やネオアンチゲン数を検討することが重要と考えられ、当施設にて外科的に切除された胆道癌組織の遺伝子変異解析を計画して、最適な遺伝子変異解析法を検討した結果、次世代シーケンサーによる全エクソームシーケンスが有効であるとの結論に至り、当該施設の遺伝子研究に関する倫理委員会に研究計画書を提出し、途中、個人情報保護法の改正に伴う修正等があり、若干の時間を要したが、最終的に研究実施の承認が得られた。同時に、次世代シーケンサーでの全エクソームシーケンス実施の準備を進め、最適条件の設定を行った。今後、遺伝子発現の量的解析のためのRNAシーケンスや末梢血中のcirculating tumor DNAを解析するためのリキッドバイオプシーなどの実施も同様に進める予定で研究計画を作成中である。また、外科的に切除された胆道癌組織における免疫チェックポイント分子発現を検討するための研究計画書を作成し、倫理委員会に提出して承認を得た後に研究の実施を進めることを予定している。ヒト胆道癌組織の遺伝子変異解析を実施するための遺伝子研究に関する倫理委員会での承認が得られるまでに、個人情報保護法の改正に沿った内容への修正などに若干の時間を要し、実際の外科手術からのヒト胆道癌組織の入手が開始できる時期が予定よりやや遅れているが、次年度以降での研究推進を急ぎ、平成28年度の若干の遅れは十分取り戻せると考えられる。

近年、生体内のT細胞抗腫瘍免疫応答を強く抑制する免疫チェックポイント分子が発見され、そのシグナルをブロックする抗体医薬が開発された。すでにメラノーマ、肺癌、腎癌、胃癌などで臨床効果が確認され薬事承認されており、一部の患者において著明な臨床効果を認めている。しかし、その効果発現は癌細胞のHLA分子とPD-L1分子の発現及び癌細胞の遺伝子変異と変異抗原(ネオアンチゲン)数が関連することが示唆されている。今回、胆道癌におけるHLAとPD-L1の発現及び遺伝子変異とネオアンチゲンの解析を行い、胆道癌における新規免疫治療の開発を目指して本研究を実施している。個人情報保護法の改定等により研究計画書の修正が必要となり、遺伝子変異とネオアンチゲンの解析については平成29年4月に倫理委員会の承認が得られ研究を開始した。HLAとPD-L1の発現解析は倫理委員会の審査途中であり、平成30年度の実施を予定している。胆道癌の全エクソーム解析を行うために、癌組織からのDNA抽出、DNAのクオリティチェック、ライブラリ作成、テンプレート調整、次世代シーケンサーによるエクソームシーケンスのために必要な各試薬を準備し、Ion Protonのランニング調整を行った。癌組織の採取時間を短縮するために、外科手術後のホルマリン固定パラフィン包埋標本(FFPE)の利用を検討したが、胆道癌のFFPEからDNAの抽出及びDNAのクオリティチェックでは十分な量及びクオリティのDNA採取が困難であったため、手術時の新鮮癌組織からのDNAを採取することを検討し、引き続き研究を遂行中である。手術時の新鮮癌組織を利用することにより同時にRNAシーケンスが可能となるため、新たにRNAシーケンスにてトランスクリプトーム解析を行う研究を検討している。ヒト胆道癌組織の遺伝子変異解析を実施するための遺伝子研究に関する倫理委員会での承認が得られるまでに、個人情報保護法の改定や臨床研究法の設定などにより予定以上の時間を要し、一部の研究では現在も承認審査中である。承認の得られた遺伝子変異解析について研究を進めているが、最初に試みた外科手術標本のホルマリン固定パラフィン包埋標本(FFPE)を利用した胆道癌組織からのDNA採取ではエクソームシーケンスのために必要な量とクオリティのDNAが採取困難であったため、新たに手術時の新鮮癌組織を利用する方法にて研究を進めているが、十分な癌組織量の採取が可能なケースが多くないため、研究資料の採取に若干の遅れを認めている。HLAとPD-L1発現解析については倫理委員会の審査中のため、平成30年度に実施する予定である。胆道癌は予後が極めて不良な疾患であり、有効な治療法の開発が必須である。すでにメラノーマ、肺癌、腎癌、胃癌などで臨床効果が確認され薬事承認されており、一定の患者において著明な臨床効果を認めているが、胆道癌に対する開発は未だ進んでいない。
生理活性を有する白金錯体の体内動態と効果発現に関する研究

近年、白金錯体はその制癌作用の点から注目されているが、これまで制癌作用の主体を担うと考えられる未変化体の体内動態の追求は困難であったため、白金錯体の体内動態と活性発現の関連については、殆ど研究されていなかった。本研究では、この白金錯体の体内動態と活性発現の関連を明らかにする目的で、臨床で使用されている基本的な白金錯体のcis-diamminedichloro-platinum(【II】)(CDDP)を取りあげ、特に未変化体CDDPの体内動態を、家兎を用いて追求した。まず、体内動態研究に資する目的で、高速液体クロマトグラフィーによる生体試料中CDDPの分析法について検討した。その結果、分離カラムには陽イオン交換カラム及び陰イオン交換カラムを用い、両カラムの間で流路切り換え操作を行ない、CDDPが強い吸収を示す210nmでCDDPを検出することにより、血漿及び尿中のCDDPを高感度で分析できた。更に、本研究補助金で購入したフォトダイオードアレイUV-VIS分光光度計検出器(島津SPD-M1A)を活用することにより、従来保持時間でしか同定できなかった目的ピークを、そのスペクトルから確実に同定することができ、より正確な定量を行なうことができた。次に、この分析法を用いて、CDDPの副作用軽減剤の一つであるチオ硫酸ナトリウム(STS)を、併用投与した場合のCDDPの体内動態の変化を検討した結果、STSの腎毒性軽減効果と関連していることが強く推定される体内動態の変化を、明らかにすることができた。更に、CDDPに続く有望な第二世代制癌性白金錯体の一つである(trans-l-1,2-diaminocyclohexane)oxalatoplatinum(【II】)とCDDPの体内動態の相違を検討したところ、未変化体の体内動態,特に尿中排泄速度が大きく異なることを見い出すことができた。本研究は、CDDPのみならず他の制癌性白金錯体についても、体内動態と効果発現の関連を解明する糸口となるものであり、今後、更にこの方面の研究の発展が期待されるものである。
原猿類浅指屈筋の解析と立体ビデオライブラリの作成

(1)原猿類浅指屈筋の解析目的:(山田,1986)がヒト成体の精査によって提起した,浅指屈筋が2群の筋原基の癒合によって形成されるという仮説は,個体発生学的にはGrafenberg(1906)の所見で支持されるが,従来の系統的な説明とは合致しない.そこで,原猿類浅指屈筋の筋束構成と支配神経を精査し,上述の仮説の検定を行なった.結論:原猿類の浅指屈筋もヒトと同様,本質的にはヒトと同様2つの独立な筋束の癒合によって形成されている.さらに興味深いことに,霊長類のなかでも原猿類ではこの二原基の癒合様式に相違があって,キツネザル型とロリス型に区別され,分類群の関係を反映している.今回検索の機会を得たメガネザルは,系統学的位置が論議されているが,浅指屈筋の筋束構成からはロリス型に分類され,原猿帰属説が支持される.(2)希少原猿類解剖所見の立体ビデオライブラリの作成目的・方法:入手因難な動物標本の実体顕微鏡下での解剖所見を立体ビデオライブラリとして,希少動物の解剖所見として保管し,共同研究者との所見の交換をも行なう,日本光学製実体顕微鏡用ビ-ムスプリッタに偏心ビデオカメラマント(特注)を介して2台のTVカメラを装着左右の光路の映像を合成アンプ(特注)で合成して1台のモニタで交差法立体視によって立体観察する.結果:原猿類前腕屈筋群の解剖所見を立体録画法を確立し,立体ビデオライブラリの構築中である.一部は近くSchwartz(Pittsburgh大)に送付して共同研究への利用を開始する.(1)原猿類浅指屈筋の解析目的:(山田,1986)がヒト成体の精査によって提起した,浅指屈筋が2群の筋原基の癒合によって形成されるという仮説は,個体発生学的にはGrafenberg(1906)の所見で支持されるが,従来の系統的な説明とは合致しない.そこで,原猿類浅指屈筋の筋束構成と支配神経を精査し,上述の仮説の検定を行なった.結論:原猿類の浅指屈筋もヒトと同様,本質的にはヒトと同様2つの独立な筋束の癒合によって形成されている.さらに興味深いことに,霊長類のなかでも原猿類ではこの二原基の癒合様式に相違があって,キツネザル型とロリス型に区別され,分類群の関係を反映している.今回検索の機会を得たメガネザルは,系統学的位置が論議されているが,浅指屈筋の筋束構成からはロリス型に分類され,原猿帰属説が支持される.(2)希少原猿類解剖所見の立体ビデオライブラリの作成目的・方法:入手因難な動物標本の実体顕微鏡下での解剖所見を立体ビデオライブラリとして,希少動物の解剖所見として保管し,共同研究者との所見の交換をも行なう,日本光学製実体顕微鏡用ビ-ムスプリッタに偏心ビデオカメラマント(特注)を介して2台のTVカメラを装着左右の光路の映像を合成アンプ(特注)で合成して1台のモニタで交差法立体視によって立体観察する.結果:原猿類前腕屈筋群の解剖所見を立体録画法を確立し,立体ビデオライブラリの構築中である.一部は近くSchwartz(Pittsburgh大)に送付して共同研究への利用を開始する.
ケニア・中央州北部の半乾燥地域における土地利用変化の研究

第1に、ケニアの中央州北部に位置するニェリ県、およびリフト・バレー州中部のライキピア県の高地湿潤地帯低地半乾燥地帯における、新規入植に伴う農地の垂直的展開と環境改変の現状を検討した。まず、対象地域の衛星データ(SPOT画像)を、1987年3月29日と1992年4月14日の2時点について入手し、これらを近赤外線領域を含む合成カラー画像として出力し、植生および農業的土地利用の現状と、その変化を概観した。平成6年8月には現地調査におもむき、平成5年度科学研究費補助金(奨励研究A:課題番号05780124)で購入・分析した同地域のLandsat画像データをも援用して、あらかじめ作成した土地被覆分類図を現地において検討した。これによって、衛星データによって分類された土地被覆の特徴を、植生および農業的土地利用の実態と関連させて把握することができた。今年度購入した2時点のSPOTデータは、ケニアが1980年代に入って経験した数度の干ばつ、および急激な経済的変化が、この地域の農業的土地利用にどのような変化をもたらしたのかを検討することを可能にするものであり、現地調査でえた知見をもとにして、リモート・センシングの手法を用いて、その変化を解析しているところである。第2に、比較検討のため、高地湿潤地帯から低地半乾燥地帯にかけての垂直的農地利用や経済的環境の激変という点で同条件を備えた、タンザニア北東部高地のLandsatデータ(1984年12月17日)を入手し、同様の分析に着手した。第3に、現地調査で収集した資料、およびアジア経済研究所所蔵資料を用いて、1980年代の経済環境激変のもとでのタンザニアの工業の現状と変化を検討した。とくに、これまで検討されることのなかった個々の工業事業所の雇用規模の変化に注目し、農外就労機会として小農世帯にとって重要なタンザニア工業の動態を全国的に把握した。
内因性肺動脈平滑筋細胞エラスターゼの分子生物学的同定に関する研究

血管由来エラスターゼは、細胞外マトリックスに貯蔵されている各種のgrowth factorsを活性化し、血管平滑筋細胞(SMC)を肥大、増殖、結合組織産生亢進に導き、SMCの形質転換を起こすことが報告されており、血管病変のリモデリングの中心的役割を果たしている可能性がある。我々はこのエラスターゼの分子生物学的同定を目的としてブタ肺動脈平滑筋細胞よりguanidinium法よりtotal RNAを抽出。ヒト白血球と膵臓のエラスターゼDNAのconservative sequenceより3種類のprimerを用意し,RT-PCRを行った。(primer 1;pEL up(neutro)GCCGCGCACTGCGTG,primer 2:pEL down CAAGGGGCCGCCTGAGTCCCCprimer 3;pEL up(pancreas)CACACGTGTGGCGGT)RT-PCRのproductsはそれぞれ推定で450bpと500bpであったが、sequenceの結果ではprimer 2-3による284bpのPCR productを得ることが出来た。しかしprimer 1-2のcDNAは遺伝子解析が不能であった。このDNAsequenceをhomology検索で調べてみると、ヒトchromosome 16 BAC clone CIT987SK-44M2と73.4%(overlap252,score527)の高い一致を見たが、この蛋白がプロテアーゼとは考えられないため目的とする蛋白のcodingregionではないと判断。再度primerの設計を試みた。何種類かのprimerを作成し、試行錯誤を繰り返したが、その結果、初年度に得られたelastaseとのhomologyがないPCR productとは全く別な476bpのPCR productが得られ、sequenceを検討した。このDNAsequenceは、homology検索の結果、mouseのTリンパ球由来serine proteinaseの一部と59%のDNA配列にhomologyが認められた。ブタ肺動脈平滑筋細胞培養が思いの外難渋し、十分な検討が出来なかったが、これによってscreeningに移る段階まで達することができた。今回、限られた期間内に最終目的であるブタ肺動脈エラスターゼDNA sequenceの同定まで至ることができなかったが、我々はこのcDNAをprimerとしてつぎのステップに進めるものと自信を持っている。しかしスクリーニングのまえにこのcDNAを使って、ブタ培養肺動脈SMCでノーザンブロッティングを行い、primerとして使用できるかを確かめようと考えている。長い道のりとは思われるが、今回の研究によりその大きな切っ掛けが掴めたことは今後の研究の上で大きな自信となったと思われる。本研究の初年度(平成10年度)に使用したprimerでのPCRで、明らかなプロテアーゼ活性を持つPCR productを精製することが出来なかった。そのため別な、セリンプロテアーゼ活性部位に関連したconservative sequence(porcine pancreaticelastase,PPEとhumanleukocyte

elastase,HLE)より生成したdegenerate oligonucleotidesをprimerに使用し(primer1:5'-CCTCGGAGCGTTGGATGAA-3',5'-CTTCTGGGCAGGAACCGTG-GGA-3'.primer2:5'-CCAACGAGACACCCTGCTACAT-3',5'-TCCAGTCAATGAA-GGCGGAGAC-3')、PCR productの数、そのqualityをagarose gelにて確認したが、今回のprimerでは、全くPCR productが得られず、再び初年度のprimerに戻り、再検討した。その結果、初年度に得られた,elastaseとのhomologyがないPCR productとは全く別な476bpのPCR productが得られ、とりあえずそのsequenceを検討した。homology検索の結果、mouseのTリンパ球由来serine proteinaseの一部と59%のDNA配列にhomologyが認められた。ブタ肺動脈平滑筋細胞培養が思いの外難渋し、十分な検討が出来ないが、再度確認の上、screeningに移ることを今年度の目標とする。平成12年度は、初年度(平成10年度)で使用したプライマーによるpolymerase chain reaction(PCR)の検討を行った。しかし度重なるブタ肺動脈平滑筋細胞の感染が起こり、実験が難渋した。平成11年度で得られたPCR products(476bp)は、遺伝子検索の結果、mouse Tリンパ球由来のセリンプロテアーゼの一部と59%のDNA配列のhomologyが認められたため、ようやく本年度後半よりスクリーニングに取りかかった。スクリーニングはplate lysate法を用いて、mBNA libraryをベクターで増幅し感染させた大腸菌より、PCR product probeで拾い上げる作業を開始したが、今のところ陽性なものは見つかっていない。このスクリーニングと平行して、ブタ肺動脈平滑筋細胞よりのtotal mRNAを使って、今回のprimerによるNorthern blottingも施行して、probeとしての有用性も確認することができた。
韻律情報の有効性と視覚的文脈情報の関わりについての聞き手と話し手の立場からの検討

本課題の主な成果の代表として、視覚世界パラダイムを用いた実験により、情報のコントラストを示す韻律情報(ピッチレンジの拡大)と、構造的プライミングが、「ピンクのリスの手袋」というような日本語の枝分かれ構造曖昧性においてどのような役割を示すかを検討した結果を以下に記す。条件の組み合わせを異にする複数の実験の結果、枝分かれ構造の理解においてはプライミング効果が顕著に表れること、またプロソディの情報が情報コントラストの文脈と一致していないような条件においては、もともと選択されにくい右枝分かれ構造の解釈を促進することが示唆され、韻律情報の機能は、コンテクストや処理の即時性という要因により一義的に決まらないことが示された。このほか、Wh句の領域曖昧性についても産出および知覚実験を行い、上記結論をサポートする結果を得た。本研究では、視覚的文脈情報と文発話および文理解のそれぞれにおいて、視覚的文脈情報が韻律情報とその解釈にどのような影響を及ぼすかを検討することを目的としている。本研究は、実時間の音声言語処理にかかわる課題を遂行する際の自然な言語利用環境下での、即時的処理過程を反映したデータを得ることをめざした。本年度は、日本語における左右枝分かれに関する曖昧性およびWh句の作用域に関する曖昧性の理解および産出について、話し手と聞き手による韻律情報の使われ方について検討するための実験を引き続き行った。日本語における左右枝分かれに関する曖昧性においては、語彙アクセントおよび視覚的情報という、統語的情報以外の情報が文処理および産出に影響を与え、その結果、話し手と聞き手の間で韻律情報の操作における異なったパターンが観察された。即ち、これまで前提とされてきた、話し手と聞き手が、統語と韻律のインターフェイスのあり方について同じ知識を共有するという考え方に疑問を呈することとなった。この結果の一部は別途国際学会にて発表し、雑誌論文として発表した。さらにWh句の作用域に関する曖昧性)についても同様のアプローチで実験を行い、話し手と聞き手の間で韻律情報の操作における異なったパターンをリアルタイムの文処理という観点から説明を試みた。日本語のWh-scope ambiguityにおける韻律情報(イントネーション)め関係については、心内の文法知識の要請にあわせて一対一のマッピングが確立しているとされているが、実際はspeakersとlistenersが異なった方略を示すことを指摘し、その理論的検討を行った。Listenerにおいては、実時間処理の要請上、speakerがエンコードした情報と別の手がかりをもとに文を理解するという可能性である。この研究成果を2件の国際会議およびうち1件のプロシーディングズに発表した。また、英語のPP attachment site ambiguityについて、第二言語話者(日本人英語学習者)が母語話者と違ったprocessing preferenceを示すことを示し、日本語の文法特性上の要請が処理方略に影響を及ぼしている可能性を示唆した。この研究成果を国内学会誌に発表した。本年度は、非統語的諸情報を統制した言語材料を用いて、視覚的情報を操作したうえで、話し手を対象にした眼球運動測定実験および発話実験を行う予定であったが、研究代表者が産休を取得したため、実験の刺激文を作成するにとどまった。アクセント有無を統制したうえで、左右枝分かれ構造の曖昧性を有するフレーズを作成し、それに対しそれぞれの(左あるいは右枝分かれ)解釈に対応するオブジェクトを含む絵刺激を作成した。H22年に研究を再開し、刺激の自然さ評定等のノーミング調査を行った上で、眼球運動測定実験を行う予定であるが、そのための視覚刺激についても作成途中である。一方、昨年度より継続中であった形容詞付加位置に関する曖昧性を用いた読み時間実験については共同研究者を得て事象関連電位測定法を用いた実験としてデザインを再検討したうえでこれを遂行・完了した。この実験の当初の予測として、韻律的に複数のアクセント句からなる形容詞句では単一のアクセント句からなるそれに比べて、構造的に上位の名詞句に付加させる読み傾向を示すというものであったが、読み時間データ分析および事象関連電位のコンポネントパタン分析の結果、韻律的長さが形容詞句の付加位置に及ぼす影響は認められなかった。この実験結果に理論的考察を加えた論文を国内研究会で発表した。本研究では、視覚的文脈情報と文発話および文理解のそれぞれにおいて、視覚的文脈情報が韻律惰報とその解釈にどのような影響を及ぼすかを検討することを目的としている。本年度は、非続語的諸情報を統制した言語材料を用いて、視覚的精報を操作したうえで、話し手を対象にした眼球運動測定実験および発話実験を行った。

アクセント有無を統制したうえで、左右枝分かれ構造の曖昧性を有するフレーズを作成し、それに対しそれぞれの(左あるいは右枝分かれ)解釈に対応するオブジェクトを含む絵刺激を作成し、条件の組み合わせを操作しながら複数の実験を行った。この結果を国際学会にて発表した。この際、当初の計画に加えて、先行刺激によるプライミング効果と、また韻律的強調が起こる句の位置を要因として加え、プライミングによって引き起こされるコントラストと、韻律精報によってもたらされるコントラストの情報が整合している場合としていない場合に分けて検討した。この結果、同一の韻律情報が、状況によって異なる情報的価値(談話情報もしくは統語構造を示す情報)を持つことが示唆された。また、前年度に行った、日本語Wh句の領域曖昧性と韻律情報の働きについて発話および理解実験の結果を論文として出版した。本プロジェクトは、以下二点のテーマに沿って進めてきた。-まず、韻律情報がむしろ有効機能しない原因に注目し、発話における韻律構造を左右する要因と、聞き手にとって韻律情報がもたらすと期待される統語構造に関する情報との間の対応のあり方をより詳細に検証する。-さらに、韻律情報を左右しうる非統語的要因として、視覚的に操作された文脈情報に着目する。視覚的情報を含んだ状況下での話し手・聞き手の振るまいを観察することにより、より自然な言語使用に近い状態での発話および理解のしくみを捉えることが可能にすることをめざす。この具体的な成果としてはまず、枝分かれ構造における曖昧性の解釈に関して、韻律情報およびそれ以外(統語的処理偏向・視覚文脈の効果)の相互作用に関する視覚世界実験を行ってきた。最終年度である23年度は、視覚を通して得られる文脈情報・韻律情報により示される情報が整合している場合としていない場合の要因の組み合わせに多様性を持たせ、更にアクセントパターンについても条件を増やして多数の実験を行った。その成果は、いずれも共同研究者との共著として国内外の学会(Experimental and Theoretical Advances in Prosody 2等)で発表し、また論文の形にまとめたものを現在投稿中である。さらに、Wh句の解釈領域に関する暖昧性を題材にした知覚実験および産出実験の結果を論文にまとめ国際雑誌に投稿した。
エネルギー代謝が及ぼすストレス応答と骨格筋代謝とのネットワーク解明

本研究ではエネルギー代謝および骨格筋代謝に着目し,エネルギー代謝がストレス応答に及ぼす影響とこれらによる骨格筋代謝への関与を明らかにすることを目的とした.ストレス応答が魚類でも筋代謝および細胞外マトリックスの分解に影響を及ぼし,エネルギー代謝の差異が筋代謝に影響を及ぼすことを明らかにした.また,オリザノールによってゼブラフィッシュの筋肉中でのエネルギー代謝が活発になっていることも考えられた.本研究の結果,エネルギー代謝の改変はタンパク質合成系を促進させ,オートファジーに影響を及ぼすこと,ストレス応答を緩和させることで魚肉の品質にも影響を及ぼすことが示唆された.近年生育中の養殖魚の外部・内部環境が水揚げ後に商品となる骨格筋の質を左右することが分かりつつあるが,その詳細なメカニズムは明らかになっていない.本研究では特にエネルギー代謝および骨格筋代謝に着目し,エネルギー代謝がストレス応答に及ぼす影響とこれらによる骨格筋代謝への関与を明らかにすることを目的とした.今年度はエネルギー代謝が骨格筋の合成・分解系に及ぼす影響を明らかにするために,ペプチドーム解析を行った.各プロテアーゼの基質特異性を確認するために,タンパク質のモデルとしてウシ血清アルブミン(Bovine serum albumin; BSA)を用い,BSAを5つのプロテアーゼで消化したときの各プロテアーゼの基質特異性を確認した.また,エネルギー代謝の異なる状態として,飽食給餌および絶食給餌をしたゼブラフィッシュをサンプルとし,各プロテアーゼの基質特異性を参考に筋組織タンパク質の分解に関与したプロテアーゼを推定した.さらに飽食給餌によりゼブラフィッシュ筋肉中のオートファジーは抑制され,タンパク質合成系が促進されていることを明らかにした.また,ストレス応答が及ぼす筋代謝への影響を検討し,グルココルチコイドのアゴニストを用いたストレスモデル実験および空気暴露によるストレス実験の結果から,ストレス応答が筋代謝および細胞外マトリックスの分解に関与することを示唆した.また,エネルギー代謝の差異が筋代謝に及ぼす影響を検討するために,飽食給餌および絶食給餌のゼブラフィッシュを用いて筋代謝関連因子のタンパク質発現量を測定した.その結果,筋肥大抑制因子の活性化が抑制されたが,筋分化調節因子のタンパク質発現量は栄養状態による有意な差は見られなかった.今後はエネルギー代謝亢進作用のある米由来成分による筋代謝への影響を検討するとともに,エネルギー代謝の差異がストレス応答および筋代謝に及ぼす影響を詳細に検討する.生育中の養殖魚の外部・内部環境が水揚げ後に商品となる骨格筋の質を左右することが分かりつつあるが,その詳細なメカニズムは明らかになっていない.本研究では生育中のエネルギー代謝がストレス応答に及ぼす影響と,骨格筋代謝への関与を明らかにすることを目的とした.栄養状態の異なるゼブラフィッシュを用い,昨年度推定した筋細胞内タンパク質の分解に関与するプロテアーゼが分解対象とするタンパク質の同定を試みた.筋タンパク質の定量的ペプチドーム解析を行い,起源タンパク質の推定を行った.またPCA解析により摂食状態がタンパク質分解に及ぼす影響を明らかにした.その結果,分解断片から169種のタンパク質が同定された.飽食飼育のゼブラフィッシュ筋肉中では,筋肉の形成・維持,タンパク質の合成および細胞内のシグナル伝達に関与するタンパク質の分解が多く認められた.飽食時でも,筋組織タンパク質は合成だけでなく,オートファジーなどで定常的な分解が盛んに行われると推察された.さらに,代謝改変作用が確認されているオリザノールを投与したゼブラフィッシュを2週間飼育し,その後空気暴露によりストレスを負荷した.ストレスで上昇したコルチゾール量がオリザノール給餌により減少する傾向があった.オリザノール給餌は短期ストレスに対する緩和作用がある可能性を示唆した.また,オリザノールを投与したニジマスを3カ月飼育し,慢性的な飼育密度ストレスを負荷した.オリザノール投与により飼料効率の改善がみられた.また,通常飼料を給餌したストレス区でコルチゾール量の有意な減少が見られ,慢性ストレスは魚類においてHPA系の制御機構に影響を及ぼすことが示唆された.また,オリザノールを投与したストレス区でのコルチゾール量は非ストレス区と同レベルであったことから,オリザノール給餌により代謝が改変され,ストレス応答に影響を及ぼしたことが考えられた.生育中の養殖魚の外部・内部環境が水揚げ後に商品となる骨格筋の質を左右することが分かりつつあるが,その詳細なメカニズムは明らかになっていない.本研究では生育中のエネルギー代謝がストレス応答に及ぼす影響と,骨格筋代謝への関与を明らかにすることを目的とした.米由来成分であるオリザノールは魚類における脂質・糖質代謝の亢進作用やマウスにおけるストレス緩和作用を有することから,魚類への応用により養殖魚の品質改善に有効であると考えられる.そこで本年度は生育中のストレス応答が,オリザノールにより緩和されるかを,魚肉品質の観点から検討することを目的とした.これまでに代謝亢進作用があることが明らかになっているオリザノール含有飼料を作成し,対照飼料とともに飼育実験を行った.さらに慢性的ストレスを与えることで,オリザノールのもつストレス緩和作用を検討した.ストレス応答は血中コルチゾール量の測定により評価した.また,食用として重要な筋肉の水分含量,タンパク質含量,脂質含量を常法で測定した.さらに,食品としての評価をテクスチャー解析,K値,グリコーゲン,遊離アミノ酸含量等により検討した.また,骨格筋を急性摘出し,コラーゲン分解酵素およびオートファジー関連因子のmRNA量を,リアルタイムPCRにより測定した.ニジマスはストレスによりストレス応答性ホルモンであるコルチゾールが変動し,テクスチャー解析により軟化の促進が確認された.

また,細胞外マトリックスの分解に関与するMMPの遺伝子発現量が低下し,オートファジーが促進した.一方でオリザノール配合飼料によりストレス状況下でも魚肉の軟化が改善され,慢性的なストレスで亢進したコラーゲンの分解酵素とオートファゴソームの形成因子の発現が抑制された.このことからオリザノールは魚類においてストレスに伴う品質劣化の改善に有効であることが示唆された.昨年度代謝改変作用のあるオリザノールの投与によって生育中のエネルギー代謝を変化させることでストレスが緩和されることが明らかになったことから,本年度は,オリザノールによるストレス緩和が食品としての魚肉に及ぼす影響について検討した.その結果,代謝改変作用のあるオリザノールの投与によってストレスが緩和され,養殖魚で問題となっている魚肉の軟化が改善されることが明らかになった.またそのメカニズムとして細胞内マトリックスの分解抑制およびオートファジーの抑制の関与を示唆した.産休を取得したため年度途中からの研究となったが,復帰以降は予定通りの成果があったと判断し,おおむね順調に進展しているとの評価に至った.生育中の養殖魚の外部・内部環境が水揚げ後に商品となる骨格筋の質を左右することが分かりつつあるが,その詳細なメカニズムは明らかになっていない.本研究では生育中のエネルギー代謝がストレス応答に及ぼす影響と,骨格筋代謝への関与を明らかにすることを目的とした.米由来成分であるオリザノールは魚類における脂質・糖質代謝の亢進作用やマウスにおけるストレス緩和作用を有することから,養殖魚の品質改善に有効であると考えられる.前年度までに魚類において生育中のエネルギー代謝の違いがストレス応答に変化を引き起こし,食品としての劣化を抑制することを明らかにした.そこで本年度はこれらの変化が骨格筋代謝へ及ぼす影響を検討した.具体的には昨年度同様,餌によるエネルギー代謝改変を行い,エネルギー代謝の異なる状態のニジマスを用いて,ストレス環境下でのIGF/PI3K/TOR経路関連因子のmRNA量を測定した.また,致死後の骨格筋との関連をタンパク質分解酵素,骨格筋量調節因子について遺伝子レベルで検討した.その結果,オリザノール配合飼料給餌によりストレス応答性ホルモンのコルチゾールレベルが低下したと同時に,タンパク質分解酵素のカルパインのmRNA発現量が増加し,同時にカルパイン内在性阻害タンパク質であるカルパスタチンのmRNA発現量も増加した.これまでに明らかにした飽食飼育時と同様に,オリザノール給餌ではタンパク質の合成だけでなく,定常的な分解も盛んに行われていることが示唆され,体内のエネルギー代謝が改変されたことを確認した.筋代謝に関与するIGF-1 mRNA