hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地形・土壌・植生の入れ子構造的発達をふまえた流域水流出特性の変動予測

7)ヒノキ個体が斜面位置によって水利用特性がどのように異なるかを調べるための樹液流家速を開始した。8)崩壊輪廻の予測シミュレーション改良に向け、地形量と土層厚さの空間分布を三次元雨水浸透流計算に導入した結果、飽和帯の拡大が詳しく予測できるようになった。9)広島県の試験斜面を対象に、土層発達速度に関する従来の推定法を仮定して土層発達を計算し、斜面安定計算との結合によって、初歩的な土層発達シミュレーションモデルを作成した。1000年間の試算によって崩壊発生頻度の差を検討することができた。10)条件の異なる流域の洪水がどのような条件の影響を強く受けているかの比較水文学的検討に向け、多雪流域、熱帯林流域において伐採の影響を検討するためのデータベース化作業を進めた。平成26年度は、流域条件の流出への影響予測を、流出空間の時間入れ子的な発達・変化に基づいて評価する」という、本課題の中心テーマの解明に向け、進捗報告に示された4部門の成果をふまえて4部門毎の研究を推進した。第1部(植生成長等の蒸散水輸送に及ぼす影響)では、単木の蒸発散による樹液輸送と環境条件の解明を目的とした計測を進めるとともに、SVATモデルの改良を行って、ヒノキ林の蒸発散フラックスの年々変動を再現できる成果を挙げた。第2部(流出経路・流出メカニズムの観測に基づく解明)では、雨水の流域内滞留時間が表面地形ではなく基岩への浸透量によって変化すること、降雨に伴う基岩地下水の変動と土層内部の雨水流動との相互作用に関する観測に基づき、斜面崩壊を引き起こす降雨条件・流出メカニズムを明らかにすることなどの成果を得た。第3部(土壌層の発達・崩壊の長期変動の解明)においては、宇宙線生成核種による土壌層の形成速度と侵食速度の推定結果に対する地形、岩質、気候の影響を評価すること、多様な樹種の崩壊抑止効果を実験によって明らかにしたこと、ゼロ次谷における土壌層の移動と崩壊に関するシミュレーションモデルに植生の効果を組み入れる手法開発などの研究展開があった。第4部(帰納法的手法による流域条件の流出影響評価)においては、熱帯林で天然林伐採後に早生樹種を造林したところ、流域からの水流出量は増加し、洪水変動が大きくなる結果を得た。本科研は,蒸発散や流出という刻々変化する現象が,時間的に長い現象によって形成されるとの視点に基づいて開始された.植生の流出に及ぼす影響は,直接的には,蒸発散量を通じて行われる.そこで詳細な水・熱・炭素輸送プロセスを扱える多層モデルにより,植生成長の蒸発散影響を検討し,森林が少雨年においてさえ大きな蒸発散量を維持する傾向を見いだした.地中の流出過程については,高密度の基岩ボーリングでの地下水変動観測,溶存有機体炭素を含む水質の詳細観測などを行った.それにより,洪水流出を構成する流出水は,小流域ごとに,また出水ごとに,降雨による「新しい水」,以前から地中に貯留されていたしていた「古い水」の割合が異なるが,間隙内で押し出される流れとパイプ状水みちを通過する流れの混合によって説明された.また.風化基岩での観測によって,花崗岩流域では,それが主に基底流出に寄与するのに対し,堆積岩流域では直上の土壌層が湿潤になっ場合には,洪水流出に寄与することも示された.流域地下構造の発達については,宇宙線生成核種の調査によってゼロ次谷における土の移動過程を検討し,尾根線から凹地へのクリープでの土壌集積によって凹地部での土壌層の発達と崩壊の繰り返しが支えられていることがわかってきた.
B細胞特異的遺伝子の解析

B細胞特異的に発現されている遺伝子mb-1の単離に成功し、そのcDNAの構造を明らかにした。その結果、この遺伝子の産物は210個のアミノ酸で構成される膜糖タンパクであることが推定された。推定アミノ酸配列の解析から、細胞外部分は、免疫グロブリン用のドメイン構造を有し、また、T細胞のシグナル伝達に重要な働きをしているT細胞レセプター結合タンパクT3分子との相関性も示唆された。そこで、更に、この遺伝子産物に対する抗体を研究計画に従って作成した。特異的なウサギ抗MB-1タンパク抗体(アフィニティー情製)用いてBリンホーマ、や正常活性化B細胞に於て、MB-1タンパクの存在を証明することに成功した。その結果、このmb-1タンパクは、約34KDの糖タンパクで約7KDの糖鎖を有することが、Endo F処理によって明らかとなり、また^<125>l-をラクトパーオキシデース法でラベルした細胞表面タンパクからも同様のタンパクが沈降され、cDNAから推定される構造と一致した。更に、このMB-1タンパクが、B細胞表面上の1gMレセプターと結合している可能性が示唆されたので、現在、このMB-1結合タンパクの解析に全力を注いでいる。また、MB-1タンパクの機能的役割を解明するためにその第一段階として、研究計画に従って、このMB-1タンパク特異的モノクローナル抗体の作成を開始し、そのスクリーニング、クローンの選別、再クローニング等の必要な実験を終了した。現在、これらの抗体を用いてB細胞の活性化や分化に及ぼす影響や、正常B細胞での発現の変化の研究を推し進めている。また、同様に大量培養等で、精製モノクローナル抗体の作成を行っている。
肥大心における各種ペプタイド成長因子の発現意義とその相互作用の解明

心筋細胞自信より分泌されるペプタイド成長因子であるbasic Fibroblast Growth Factor (bFGF)、Transforming Growth Factor (TGF)β1の心肥大における役割とその相互作用の解明を、細胞外基質と接着分子の発現から検討する。【方法】培養心筋にnorepinephrine (NE), angiotensin II (A II), phorbol ester (PMA)、bFGFを投与し、bFGFとTGFβ1の発現を酸素抗体法による染色およびwestern blottingにて検討した。また細胞外基質であるラミニン(LM)、ファイブロネクチン(FN)、β1 Integrin (IN)の発現を検討した。【結果】controlの培養心筋細胞ではbFGF、TGFβ1の発現は軽度であり、NE, A II, PMAによる肥大細胞ではcontrolと比し、明かなbFGF、TGFβ1の発現の増加を示した。内因性bFGFによる肥大反応ではTGFβ1の発現の増加を示した。特に細胞質内に顆粒状のTGFβ1染色が増加すると共に核周囲の染色性の増強を認めた。western blottingにてもbFGF、TGFβ1は各刺激物質投与により発現の増強を認めた。細胞外基質であるLM、FNはcontrolにおいて胞体および細胞周囲に染色され、NE, PMA, bFGF投与によりその染色性が増強した。INではLM、FNに比しその染色性は弱く、controlではほとんど染色されなかった。しかしNE, PMA刺激により細胞周囲に強く染色性を示した。【考察】培養心筋での心筋細胞肥大にはbFGFのみならずTGFβ1の発現増強を認めた。このTGFβ1の発現増強は内因性bFGFで刺激した肥大細胞にも認められ、心肥大に伴う2次的な作用であると考えられた。さらにこれらの肥大細胞では細胞外基質であるLM、FN、INの発現増強も認められた。各肥大刺激による細胞形態は異なり、肥大様式の相違がこれらの細胞外基質の発現を規定しているものであると推測した。またTGFβ1は細胞外基質の強力な促進因子であり、細胞外基質の増強はTGFβ1の産生により惹起されたものと推測された。
保育所の利用と子供の発達に関する分析：親の学歴と育児行動の観点から

本研究の目的の一つである、保育所利用の個人間での異質な効果を測定するための手法に関する知見を深めた。具体的には"marginal treatment effect"や"quantile treatmenteffect"の推定手法に関する文献や機械学習を用いた処置効果の異質性の推定手法に関する文献をサーベイした。さらに、これらの複雑な手法は必ずしもStata等の統計ソフトウェアにパッケージとして実装されていないことが判明し、したがって、自ら推定プログラムを作成する必要があるため、Julia, Python, Rのコーディング手法やgitによるプログラムコードのバージョン管理手法を学んだ。データ整備に関しては社会生活基本調査のデータ読み込みと社会福祉施設等調査の保育所定員情報の収集を行い、この二つのデータを市区町村コードを用いてマッチした。平成13年から平成23年にかけての市町村合併に伴い、市区町村コードが変化しているため、平成13年、18年、23年のデータの市区町村コードを整合的な形にするために、市区町村コードの変換プログラムを作成した。また、複数年のデータを一つにまとめる際には、データ間で変数名を統一しなければいけないが、変換対応表のようなものは存在しない。そこで、符号表から自動で各変数に関する情報を抽出して、変数名を統一するプログラムを作成した。このプログラムにより、今後データを拡張した場合にもデータ整備の大部分を自動化できる。現在、上記で整備されたデータを用いて分析を進めている最中である。当初の予定と比べて、研究を進めるための下地を整えるのに多くの時間を費やすこととなったが、それを通じて得た知見や作成したプログラム等によって、今後の作業の効率性が大幅に上昇すると考えている。特に、市区町村コードの変換プログラムは任意の時点の市区町村コードに対して適用可能であり、今後、分析を平成28年や平成8年の社会生活基本調査を用いたものに拡張する際には非常に有益である。同様のことがデータ整備のプログラムに関しても言え、データ提供を受けてから分析を始めるまでに要する時間を大幅に減少できることが期待される。保育所の利用と親の時間利用の代替関係に関する分析を引き続き進めて、論文にまとめる。並行して学会報告・セミナー報告をして、そこで得られた知見をもとに分析を精緻化する。論文執筆が完了出来次第、学術誌に投稿する。また、上記の研究に加えて、世帯間における育児行動の異質性に関する分析も進める。まず、社会生活基本調査のB票のデータクリーニングを行い、2001年から2011年までのデータを整合的な形で扱えるようにする。その後、「育児時間」は、具体的にはどのような育児行動から構成されているのか、また、その構成は子供の年齢や人数、または、親の学歴などによってどのように異なるのかを明らかにする。最後に、上と同様の分析によって、保育所の利用によって、代替されやすい育児行動や代替されにくい育児行動を明らかにする。この研究に関しても随時学会報告やセミナー報告を行い、他の研究者から得られたフィードバックをもとに分析を精緻化していく。現在の分析では、2011年までの社会生活基本調査を使用しているが、2016年の同調査が利用可能になっているため、2011年までのデータとの比較可能性を検討して、必要であればそれを申請する。

まず、社会生活基本調査のB票のデータクリーニングを行い、2001年から2011年までのデータを整合的な形で扱えるようにする。その後、「育児時間」は、具体的にはどのような育児行動から構成されているのか、また、その構成は子供の年齢や人数、または、親の学歴などによってどのように異なるのかを明らかにする。最後に、上と同様の分析によって、保育所の利用によって、代替されやすい育児行動や代替されにくい育児行動を明らかにする。この研究に関しても随時学会報告やセミナー報告を行い、他の研究者から得られたフィードバックをもとに分析を精緻化していく。論文執筆が完了出来次第、学術誌に投稿する。現在の分析では、2011年までの社会生活基本調査を使用しているが、2016年の同調査が利用可能になっているため、2011年までのデータとの比較可能性を検討して、必要であればそれを申請する。
船体構造応答に対する重み関数に関する研究

本年度の研究実績は下記の通りである。構造応答の重み関数とは、外荷重とその点における重み関数の内積を領域にわたり積分した値が、求める応答を与える関数のことである。本研究ではある種の補助問題にMaxwell-Bettiの定理を適用することによって構造応答の重み関数を極めて効率的に定める手法を2次元問題、3次元問題に対して提案し、その船体構造解析への適用性を確認した。(1)2次元平面弾性問題における重み関数の定式化弾性問題の簡単な事例として2次元問題における重み関数を定めた。変位応答の重み関数は、補助問題として2種の集中力の作用する場合の変位場を用いることによって得られ、また、応力応答の重み関数は3種の集中力対に対する補助問題の解の変位場から得られる。また、外力が注目近傍に直接作用する場合、集中力や集中力対の作用する点の近傍の特異性を解析的に取り扱う手法が必要となることを示した。(3)3次元シェル構造における重み関数の定式化3次元シェル問題における重み関数を定めた。変位応答の重み関数は、補助問題として3種の集中力の作用する場の変位によって得られ、また、曲げモーメントと捩りモーメントの重み関数は3種のモーメント対に対する補助問題の変位場から得られることを示し、数値計算上のこれらの力対の取り扱いが精度に及ぼす影響を定量的に検討した。(4)船体構造における疲労危険部位の重み関数の算定と応力応答関数高速計算法船体構造解析に際して有限要素法で数値的に変位や応力応答の重み関数を定める計算法を開発した。特に、集中力対やモーメント対を作用させるための節点における近接した節点配置の指針を明らかにするとともに、応答値を求めるための効率的な内積計算のプログラム化について工夫を行う。これによって、疲労危険部位の応力応答関数を高速演算する新手法を提案し、ダブルハルタンカーの船倉モデルに対して計算時間の短縮効果を定量的に示した。評価すべき応答が20項目程度であれば、応力応答関数を定めるのに要する計算時間は従来法の数分の一になることがわかった。
界面障壁変化型有機/無機ヘテロ構造インテリジェントガスセンサーの開発に関する研究

有機物のガス吸着能力が高いことに着目し、新しいガス検知方法として、金属/有機層/半導体構造を持つセルを作製し、有機層へのガス吸着により、金属-半導体間の(ショットキー)障壁が変化することを利用してガスを検知する方法の可能性を検討してした。このセンサーは、アンモニア、二酸化窒素、酸素などのガスに応答し、その応答特性は、無機半導体の表面処理、有機層の膜厚、応答履歴(初期吸着ガスの効果)の影響を強く受けることがわかった。逆にこれらのパラメーターを制御することにより、高感度・高選択性を有するガスセンサーの構築が可能である。本研究では、有機層の膜厚の異なるセルを並べ、その応答特性の違いからガスを識別することを試みた。基板としてフッ化水素処理したn型シリコンを用い、電極としては金を用いてショットキー障壁を形成し、有機層として酸化バナジウムフタロシアニン(VOPc)薄膜(膜厚30nm,10nm,0nm)を挿入した。このセルを、アンモニアや二酸化窒素、酸素に曝し、その応答を調べた。いずれのセルも二酸化窒素に曝すと電気伝導度が増加したが、酸素の場合は減少した。同じ酸化性のガスに対して逆の応答を示すことは興味深い。応答の起源は有機層の伝導度変化ではなく、界面ポテンシャルの変化によると推定される。アンモニアに対しては、有機層の膜厚が厚いセルでは電気伝導度が減少するが、薄いセルでは増加した。これらの応答特性から、ガスを検知・選別できる可能性が示された。フタロシアニンは一般的にp型特性を示す。ところが、超高真空中で薄膜を作製し、酸素に曝すことなく特性をを調べるとn型特性を示すことがわかった。このセルは、ppmオーダーのガスに対して、極めて高速に応答し、有機半導体中の不純物濃度を制御することにより、高感度・高速に応答するガスセンサーの開発が可能になることが示された。
癌幹細胞制御におけるTGF-βの機能解析

ABCトランスポーターのひとつであるABCG2を強く発現する細胞群は、色素Hoechst33342を排出することから、フローサイトメトリー上でSide Population(SP)細胞として区別することができる。興味深いことにこのSP細胞には、正常臓器における幹細胞ないし多くの癌における癌幹細胞が多く含有されていることがわかっている。本研究では、腫瘍間質で産生されるサイトカインであるTGF-βが、スキルス胃癌のABCG2発現や、スキルス胃癌細胞中に存在するSP細胞に対してどのような作用をもたらすか、という点に着目し解析を行った。癌を形成する細胞集団の中には、腫瘍形成能に長け、同時に抗癌剤を排出するトランスポーターの発現が高く、癌の再発に大きく寄与する癌幹細胞が同定されている。本研究では腫瘍間質由来のTGF(Transforming growth factor)-βのスキルス胃癌幹細胞の制御に対する作用について研究している。平成20年度は、癌細胞集団のheterogeneityに関する実験病理学的検討、および薬剤排出能に関わるABCG2/BCRP遺伝子発現の生化学的検討、を行った。その結果として、(1)スキルス胃癌細胞株OCUM-2MLNは、腫瘍形成能の商いSide population細胞(SP細胞)と腫瘍形成能の低いnon-SP細胞、からなるheterogeneousな癌細胞集団であること、(2)OCUM-2MLN細胞に腫瘍間質由来のTGF-βが作用すると、SP細胞が消失し、腫瘍形成能が喪失すること、(3)反対に、OCUM-2MLN細胞に変異受容体を導入し、TGF-βに対する不応性を獲得させた場合には、腫瘍形成能が促進すること、(4)SP細胞の薬剤排出能にはトランスポーターABCG2/BCRPが大きく関与しており、ABCG/BCRP遺伝子の転写が、TGF-βにより負に制御を受けていること、等の結果が判明した。現在はSP細胞集団の特性を理解し、新規の治療標的を捜索する研究に取り組むとともに、これまでの研究成果を論文投稿する準備もすすめている。癌を形成する細胞集団の中には、腫瘍形成能に長け、同時に抗癌剤を排出するトランスポークーの発現が高く、癌の再発に大きく寄与する癌幹細胞が同定されている。本研究では腫瘍間質由来のTGF (Transforming growth factor)-βのスキルス胃癌幹細胞の制御に対する作用について研究している。平成21年度は、癌細胞集団のheterogeneityに関する実験病理学的検討、および薬剤排出能に関わるABCG2/BCRP遺伝子発現の生化学的検討、を行った。その結果として、3.SP細胞の薬剤排出能にはトランスポーターABCG2/BCRPが大きく関与しており、Smad2/3がABCG/BCRP遺伝子のプロモーター領域に直接結合し、ABCG2/BCRPの転写がTGF-βにより負に制御を受けていること、等の結果が判明した。現在は研究成果をまとめ、論文投稿をしている。
カプセル化によるアミロイドβ可溶性オリゴマーのＮＭＲ構造解析

核磁気共鳴分光法は、水溶液中でのタンパク質の構造を残基レベルの分解能で解析できる優れた手法です。その一方で、凝集性の高いタンパク質には適用する事ができません。本研究はこの欠点を克服するべく、分子シャペロンという巨大なカプセルの中に測定対象タンパク質を封じ込めて、核磁気共鳴法により解析する事を目指します。その第一歩として、緑色蛍光蛋白質をモデル基質としてカプセルの中に閉じ込め、カプセルが安定に存在する条件を調べました。昨年度までに作製した、SR398の内腔の最奥部にCysをただひとつもつSR398-C変異型GroELを用いて、モデル基質蛋白質GFP-Cの封入効率を解析した。塩濃度およびATPアナログの種類を変えて封入効率を比較した結果、ATP-gS > AMPPNP > ATPの順に高い封入効率を示す事が明らかとなった。また、溶液中に高濃度(200 mM)の塩化ナトリウムが存在すると封入効率が低くなることも明らかとなった。これらの結果をもとに、塩化ナトリウム比存在下においてATP-gSを用いて、GFP-Cおよびより小さい分子量をもつモデル基質Ubq-Cのそれぞれについてカプセル内における封入効率を算出した。その結果、分子量が27 kDaのGFP-Cは90%以上の効率で封入されたのに対し、分子量9.5 kDaのUbq-Cでは速やかにカプセルから漏出してしまう事が明らかとなった。以上の結果より、分子量4 kDaのアミロイドβペプチドを単独でカプセル内に封入することは困難であるものの、カプセル内に7分子を封入し、カプセル内において重合反応を進行させることにより分子量28 kDaの7量体を作製したのちにカプセル内に放出することにより、効率よく封入する事が可能になると考えられる。大腸菌により産生される分子シャペロンの一種であるGroEというタンパク質は、分子量800kDaの巨大な複合体であり、内部に様々なタンパク質を結合する事によりそのフォールディング反応を助けている。筆者は、GroEのこのような性質を利用する事により、これまでに蛋白質を一分子ずつ隔離することにより自己凝集反応を抑制する「分子シャペロンカプセル化システム」を開発してきた。本研究はではこれを更に応用・発展させ、カプセル内に封入する分子数を厳密に制御するシステムの開発を行ない、アルツハイマーの原因物質であるアミロイドβペプチドに適用する。それにより、分子シャペロンカプセル内において重合度も含めて完全に均一なオリゴマー分子を作製し、高分解能溶液NMRによる構造解析を行なう事を目的とする。アミロイドβペプチドに本手法を適用するのに先立ち、まず緑色蛍光タンパク質(GFP)をモデル基質として用いる事により、分子シャペロンカプセルの安定性を解析した。従来までに得られている知見から、GroEの変異型であるSR398というATP加水分解活性能の低下したタンパク質を用いた場合、カプセルは非常に安定に保持されると期待された。しかしながら、予想に反して、分子シャペロン単独では内部に封入されたGFPは数時間以内にカプセル外へと放出される事が明らかとなった。その一方で、分子シャペロンとともに過剰量のATP類似化合物を共存させる事により、内部に封入されたGFPが30時間以上安定に保持される事が明らかとなった。この事は、ATP加水分解活性能の低下した変異型GroEにおいて、ATP類似化合物が結合・解離を繰り返しているという事を意味する。分子シャペロンの作用機構を理解する上で重要な知見が得られた。ATP加水分解活性の低い変異型分子シャペロンSR398をもとに、内在性のCys残基をAlaに置換した(C138A/C458A/C519A)。更に、SR398の内腔の最奥部に位置するSer43をCysに置換し、システイン残基をただひとつもつ変異型分子シャペロンSR398-Cを作製した。また、モデル基質としてユビキチンおよび緑色蛍光蛋白質のそれぞれに、Cys残基を付加した変異体を作製した(Ubq-C, GFP-C)。これらの変異型SR398-Cと変異型基質蛋白質Ubq-C, GFP-Cのそれぞれをジスルフィド結合により架橋したヘテロダイマーを作製し、分子シャペロンカプセルを再構築した後に還元剤を添加して基質蛋白質を内腔に隔離した。上述の方法により作製した分子シャペロンカプセルの安定性をゲルろ過クロマトグラフィーにより評価した結果、周囲に過剰量のAMP-PNPとGroESが存在する場合には一日経過後でも、ほぼ100%の基質蛋白質が封入されていたのに対し、AMP-PNP, GroES非存在下においては封入効率が10%以下に低下することが明らかとなった。これらの結果から、見かけ上安定な複合体を形成しているSR398とGroESが、AMP-PNP存在下において、結合・解離のサイクルを繰り返している事が示唆された。モデル基質Ubq-CならびにGFP-Cを用いた解析により、分子シャペロンカプセルへの封入にはある程度の分子量が必要である事が明らかとなった。

その知見をもとに、カプセル内においてアミロイドβペプチドの重合反応を進行させる事とした。これまでに、アミロイドに特異的に結合する蛍光色素チオフラビンTを用いて、カプセル内において重合反応が進行する条件を見いだしている。ATPアナログであるAMP-PNPは、加水分解されない基質としてしばしば用いられて来た。本研究でもAMP-PNPを用いて分子シャペロンカプセルの安定化を図ったが、予想に反してSR398とGroESが結合・解離のサイクルを繰り返しているという結果を得た。SR398とGroESがより安定に複合体を形成する条件を探し出す必要がある。アミロイドβペプチドの大量発現系の構築等の他の研究状況は順調に進行している。カプセル内において、アミロイドβペプチド7量体オリゴマーが安定に存在する条件を見つけ出す。その後、安定同位体標識ペプチドを作製し、これまでに明らかにされていない「可溶性オリゴマー」の構造を世界に先駆けて明らかにする。現在までに、AMP-PNPの代わりにATP-gSを用いる事により分子シャペロンの安定性が向上するという結果を得ている。今後も引き続き条件検討を行ない、分子シャペロンカプセルの安定化を図る。必要に応じて、グルタルアルデヒドなどの架橋剤により、SR398とGroESにより形成されたカプセルを「固定化」する。分子シャペロンカプセルの安定性の解析のために、ゲルろ過HPLCカラムを購入する。また、高額な安定同位体試薬の購入に充てる。2011年度に予定していた、安定同位体標識蛋白質を得る為の15N-塩化アンモニウム、13C-グルコースなどの高額の試薬の購入がなかったため。本年度にその購入等に充てる。
ラジカル産生調節による糖尿病性腎症の進展抑制の研究

糖尿病性腎症の進展機序を解明するため、酸化ストレスの役割とラジカルの産生酵素の抑制により糖尿病性腎症の進展抑制ができるか検討した。ラジカル産生酵素としてNADPHoxidaseは細胞質成分のp47phox, p67phox, p40phoxと膜結合成分のp22phox, gp91phoxからなり、その腎内の局在を明らかにした。特にp47phoxはラジカル産生調節に重要であり、高血圧モデルの腎臓ではp47phoxの発現が増強していた。ストレプトゾトシン糖尿病モデルでも糸球体内皮細胞、糸球体上皮細胞にp47phoxの発現が増強した。NADPHoxidaseの産生するsuperoxideにより糖尿病ラットでは尿中および腎で過酸化脂質(LPO)が増加した。糖尿病初期では腎臓の内皮型NOSは増加を示し、NOおよびsuperoxideとの反応物peroxynitriteは細胞障害性が強く、近位尿細管のendocytosisを障害し、糖尿病性腎症初期の微量アルブミン尿の機序の一部にラジカルが関与することを示した。NADPHoxidaseはangiotensin IIにより発現が増強し、糖尿病性腎症をACE阻害薬およびAT1受容体遮断薬で治療するとNADPHoxidaseは抑制されラジカル産生は減少し、尿蛋白は減少した。ACE阻害薬およびAT1受容体遮断薬の腎保護作用の一つの機序としてNADPHoxidaseの抑制によるsuperoxide産生抑制が関与している。また糖尿病性腎症で接着分子セレクチンの重要性を示し、抗血小板薬ジピリダモールはNADPH oxidaseの発現を抑制し、NOSを増強しAEC阻害薬との併用でラジカル産生抑制とともに糸球体微小循環を維持に働く。今後、糸球体上皮細胞のNADPH oxidaseをより特異的に抑制し、糖尿病性腎症の進展を抑制する治療法を開発したいと考えている。Sprague-Dawleyラットにストレプトゾトシン(STZ)を静注し糖尿病モデルを作成し、4週目に腎を灌流固定しNADPHoxidase isoformsの局在を明らかにした。糖尿病ラットでは腎糸球体内皮細胞にNADPH oxidase p47phoxの発現がコントロールに比べ増強していた。NADPHoxidaseにより産生されたsuperoxide anionにより、糖尿病ラットでは尿中および腎内における過酸化脂質の産生が増加していた。初期の糖尿病では腎臓における内皮型NOSは軽度の増加を示し、NOおよびそのsuperoxide anionとの反応物peroxynitriteは糖尿病の腎臓で有意に増加していた。このperoxynitriteは細胞障害性が強く、近位尿細管のendocytosisを障害し、糖尿病性腎症初期の微量アルブミン尿の機序の一部にラジカルによる尿細管障害が関与していることを見い出した。ラジカル産生酵素としてNADPH Oxidaseは細胞質成分のP47phox, P67phox, p40phoxと膜結合成分のp22phox, gp91phoxからなり、その腎内の局在を明らかにした。特にp47phoxはラジカル産生調節に重要であり、高血圧モデルの腎臓ではP47phoxの発現が増強していた。ストレプトゾトシン糖尿病モデルでも糸球体内皮細胞、糸球体上皮細胞にpP47phoxの発現が増強した。NADPH

oxidaseの産生するsuperoxideにより糖尿病ラットでは尿中および腎で過酸化脂質(LPO)が増加した。糖尿病初期では腎臓の内皮型NOSは増加を示し、NOおよびsuperoxideとの反応物peroxynitriteは細胞障害性が強く、近位尿細管のendocytosisを障害し、糖尿病性腎症初期の微量アルブミン尿の機序の一部にラジカルが関与することを示した。NADPHoxidaseはangiotensin IIにより発現が増強し、糖尿病性腎症をACE阻害薬およびAT1受容体遮断薬で治療するとNADPHoxidaseは抑制されラジカル産生は減少し、尿蛋白は減少した。ACE阻害薬およびAT1受容体遮断薬の腎保護作用の一つの機序としてNADPHoxidaseの抑制によるsuperoxide産生抑制が関与している。また糖尿病性腎症で接着分子セレクチンの重要性を示し、抗血小板薬ジピリダモールはNADPH oxidaseの発現を抑制し、NOSを増強しAEC阻害薬との併用でラジカル産生抑制とともに糸球体微小循環を維持に働く。今後、糸球体上皮細胞のNADPH oxidaseをより特異的に抑制し、糖尿病性腎症の進展を抑制する治療法を開発したいと考えている。
細胞老化誘導因子p14ARFによる新規発がん抑制機構の解明

1. p14ARFによるSIRT1を介した細胞老化の制御機構を解析する目的で、p14ARF遺伝子を欠損する293T細胞の構築をCrispr-Cas9システムを用いて行った。p14ARF遺伝子の第1エクソン中の配列を標的とするgRNAおよびCas9ヌクレアーゼを発現する発現ベクターを構築し、この発現ベクターを293T細胞に導入して、その後、細胞のクローン化を行った。次に、増殖の見られたクローンにおけるp14ARFタンパク質の発現をウエスタンブロッティングによりを確認し、p14ARF遺伝子を欠損する細胞の選別を行った。その結果、p14ARF遺伝子を欠損する293T細胞の複数のクローンを得ることができた。2. p14ARFがSIRT1の基質であるストレス応答性転写因子Nrf2の機能に及ぼす影響の解析を、前年度に引き続き行った。(1) Nrf2のp14ARF結合領域の同定を行った。複数のNrf2のドメイン欠失変異体の発現ベクターを構築し、それをp14ARFの発現ベクターと共に293T細胞に導入して共免疫沈降法により解析した。その結果、p14ARFは、Nrf2のN末端側領域に存在する転写活性化ドメインの周辺に結合することが分かった。(2) PIAS1によるNrf2の転写活性化の促進にPIAS1の有するSUMO化修飾のE3リガーゼ活性が関与するか否かの解析を行った。SUMOリガーゼ活性を欠損したPIAS1 W372A変異体の発現ベクターを構築し、それをU2OS細胞に導入して、Nrf2の転写活性化に対する促進効果をレポーター遺伝子アッセイにより検討した。その結果、W372A変異体では野生型PIAS1と比較して促進効果が有意に減弱していることが判明し、PIAS1によるNrf2の転写活性化の促進にはPIAS1のSUMOリガーゼ活性が関与していることが示唆された。平成28年度は以下の解析を行った。1.癌抑制遺伝子産物p14ARFと脱アセチル化酵素SIRT1の物理的な結合性について検討を行った。293T細胞にHA-tagを付加したp14ARFとFLAG-tagを付加したSIRT1を共発現させ、そのライゼートを用いて免疫沈降およびウェスタンブロット解析を行った結果、両者の共沈が確認された。次に、SIRT1上のp14ARF結合領域の同定を行った。SIRT1の複数の欠失変異体を作成し、同様に293T細胞を用いて免疫沈降およびウェスタンブロッティングにより解析を行った結果、p14ARFとの結合部位は、SIRT1タンパク質の中央部に位置する脱アセチル化酵素活性部位(216-500 aa)内に存在することが判明した。以上の結果から、p14ARFはSIRT1と直接的に結合することにより、その酵素活性を阻害していることが示唆された。2. SIRT1の基質タンパク質である転写因子p53およびFOXO3aのアセチル化に対するp14ARFの効果の検討を行った。293T細胞に、p14ARFの発現ベクターを導入し、そのライゼートを用いて、部位特異的アセチル化p53抗体によるウェスタンブロット解析を行った結果、p14ARFの共発現によりp53 Lys382のアセチル化の増強が観察された。また、293細胞にHA-tagを付加したFOXO3aとFLAG-tagを付加したp14ARFを共発現させ、そのライゼートに対し免疫沈降を行い、抗アセチル化リジン抗体を用いたウェスタンブロッティングにより解析した結果、p14ARFの共発現は用量依存的にFOXO3aのアセチル化を増強させた。以上の結果から、p14ARFは、細胞内においてSIRT1の脱アセチル化酵素活性を阻害することにより、基質となる転写因子のアセチル化状態を制御している可能性が示唆された。SIRT1とp14ARFの結合を阻害するペプチドを作成するために、SIRT1上のp14ARFとの結合に必要十分な最小領域の同定が必要であるが、その領域の絞り込みが完了しておらず、その点で若干の計画の遅れが生じている。1. p14ARFがSIRT1の基質である老化関連転写因子の機能に及ぼす影響について解析した。(1) SIRT1の基質である転写因子FoxO3aおよびHIFの転写活性に対するp14ARFの影響を、レポーター遺伝子を用いたルシフェラーゼアッセイにより解析した。その結果、293細胞において、p14ARFの過剰発現は、FoxO3aおよびHIFにより誘導されるそれぞれのレポーター活性を有意に減弱させた。(2) p14ARFがHIFの標的遺伝子の発現に及ぼす影響をqRT-PCR法により解析した結果、p14ARFのknockdownは、低酸素下で誘導されるHIFの一部の標的遺伝子の発現を有意に増強した。2. SIRT1の基質であるストレス応答性転写因子Nrf2の機能制御におけるp14ARFの役割について解析を行った。(1) 293細胞およびH1299細胞において、p14ARFがNrf2標的遺伝子の発現に及ぼす影響をqRT-PCR法により解析した結果、抗酸化物質tBHQで誘導されるNrf2標的遺伝子の発現がp14ARFのknockdownにより有意に減弱した。

また、ルシフェラーゼアッセイを行ったところ、p14ARFのknockdownは、tBHQで誘導されるNrf2の転写活性の上昇を有意に減弱させた。(2) 293T細胞を用いた共免疫沈降実験の結果から、Nrf2とp14ARFは物理的に結合すること、p14ARFが転写共役因子PIAS1と複合体を形成すること、さらに、p14ARFの共発現はNrf2とPIAS1の結合性を増強させることが判明した。また、PIAS1のknockdownはNrf2の転写活性および標的遺伝子の発現を有意に減弱させた。以上の結果から、p14ARFはPIAS1リクルートすることにより、Nrf2を介した遺伝子発現を正に制御していることが示唆された。SIRT1の基質である老化関連転写因子のうち、FOXO3aをについては、その遺伝子発現制御に対するp14ARFの効果の解析(FOXO3aの標的遺伝子の発現に対する影響の解析)がまだ完了していないため。1. p14ARFによるSIRT1を介した細胞老化の制御機構を解析する目的で、p14ARF遺伝子を欠損する293T細胞の構築をCrispr-Cas9システムを用いて行った。p14ARF遺伝子の第1エクソン中の配列を標的とするgRNAおよびCas9ヌクレアーゼを発現する発現ベクターを構築し、この発現ベクターを293T細胞に導入して、その後、細胞のクローン化を行った。次に、増殖の見られたクローンにおけるp14ARFタンパク質の発現をウエスタンブロッティングによりを確認し、p14ARF遺伝子を欠損する細胞の選別を行った。その結果、p14ARF遺伝子を欠損する293T細胞の複数のクローンを得ることができた。2. p14ARFがSIRT1の基質であるストレス応答性転写因子Nrf2の機能に及ぼす影響の解析を、前年度に引き続き行った。(1) Nrf2のp14ARF結合領域の同定を行った。複数のNrf2のドメイン欠失変異体の発現ベクターを構築し、それをp14ARFの発現ベクターと共に293T細胞に導入して共免疫沈降法により解析した。その結果、p14ARFは、Nrf2のN末端側領域に存在する転写活性化ドメインの周辺に結合することが分かった。(2) PIAS1によるNrf2の転写活性化の促進にPIAS1の有するSUMO化修飾のE3リガーゼ活性が関与するか否かの解析を行った。SUMOリガーゼ活性を欠損したPIAS1 W372A変異体の発現ベクターを構築し、それをU2OS細胞に導入して、Nrf2の転写活性化に対する促進効果をレポーター遺伝子アッセイにより検討した。その結果、W372A変異体では野生型PIAS1と比較して促進効果が有意に減弱していることが判明し、PIAS1によるNrf2の転写活性化の促進にはPIAS1のSUMOリガーゼ活性が関与していることが示唆された。1.引き続き、より詳細にSIRT1の欠失変異体を作成し、SIRT1上のp14ARFとの結合に必要十分な最小領域の同定を行う。2. p14ARFが、SIRT1の基質である老化関連転写因子による遺伝子発現制御に及ぼす影響の解析を行う。H30年度は以下の解析を行う。2. p14ARFによるSIRT1脱アセチル化酵素活性抑制が、がん遺伝子の活性化で誘導される細胞老化および形質転換に及ぼす影響について解析を行う。
薬物依存治療薬開発に有効な新規創薬ターゲット分子の検索とその遺伝性相違の解析

精神および身体依存のいずれの成立においても共通に認められるL型高電位開口性カルシウムチャネル機能の亢進に影響を与える生体分子の検索、およびこれら経路とは異なる新規依存形成経路の同定を試みた。依存性薬物の長期曝露により生じる細胞内への持続的なCa2+濃度の上昇に対して、heat shockfactorのリン酸化とそれに続く熱ショック蛋白70の発現増加を介した防御機構が存在すること、また新たに細胞内Fe2+含量の著明な増加が生じることを見出し、新たな依存形成メカニズムの経路となる可能性を見出した。依存性薬物の長期曝露に伴うL型高電位開口性カルシウムチャネル(HVCC)の機能亢進の機序の詳細を明らかにする目的で、初年度は細胞内カルシウム濃度の上昇に伴う各種HVCCサブユニットの動態変化と細胞内局在の可視化について検討した。先ずmorphineの短期曝露がHVCCサブユニットのmembrane trafickingに影響を与える可能性について、plasma membraneより細胞内への移行に関与するvacuolar protein sorting(Vps)34に着目して検討した。その結果、Vps 34の発現量は初代培養大脳皮質神経細胞へのmorphine曝露の極めて早期より上昇すること、しかもこの反応に細胞内カルシウム応答性のprotein kinase C_γが関与していることが明らかとなった。したがって、依存性薬物の曝露早期には細胞内機能性蛋白質の局在が大きく変化している可能性が推察された。つぎに、各種HVCCサブユニットの局在を経時的に解析するために、HVCCサブユニットの可視化を試みた。Gatewaysystemによりhumanおよびmouseに特異的なHVCCサブユニットに蛍光色素を導入したplasmidを作製した。さらに、上記plasmidのtransfectionにより得られた細胞におけるsignal強度を上げるために、これら蛍光色素に対する1次抗体を作製した。本plasmidによる株化細胞への導入効率は極めて良好であり、またこのplasmid導入により発現したHVCCサブユニット蛋白は、内在性HVCCサブユニット蛋白と極めて一致した局在を示した。以上の成績より、依存性薬物の連続曝露に伴うHVCCサブユニットの機能変化に影響を与える細胞内調節因子を解析する上で、有用な細胞内局在の可視化法を確立した。依存性薬物の種類に関係なく長期曝露により機能亢進することが明らかとなったL型高電位開口性カルシウムチャネル(HVCC)について、初年度はL型HVCCサブユニットの機能変化に影響を与える細胞内調節因子を解析する上で有用な細胞内局在の可視化法を確立した。本年度はL型HVCCの機能亢進の関わる新規ターゲット分子の検索を行うことを目的として、アルコール曝露に伴う細胞内機能性蛋白質の動態変化を2次元電気泳動法により行った。その結果、アルコールの連続曝露によりL型HVCCの発現亢進に先行して、新たに熱ショック蛋白(HSP)の1つとして知られているheme oxygenase-1 (HO-1)およびHSP70の発現誘導が認められることを見出した。またこのHSP発現の誘導は、L型HVCC阻害薬の前処置によりL型HVCCの機能亢進を遮断しておくと起らなかった。したがって、依存性薬物の長期曝露により生じた細胞内への持続的なCa^<2+>濃度の上昇が、神経細胞へのストレス負荷になっている可能性が考えられる。つぎに、アルコール曝露に伴うHSPの発現の機序を明らかにする目的で、HSPの発現調節に重要なheat shock factor (HSF)の欠損した細胞株(MEF^<-/->細胞)を用いて検討した。対照となるMEF^<+/+>細胞では、アルコールの曝露より有意なHSP70の発現増加が認められたが、MEF^<-/>細胞ではHSPの発現増加は認められなかった。またアルコールの曝露急性期より、MEF^<+/+>細胞においてのみHSFのリン酸化の亢進が認められた。以上の成績より、アルコールの長期曝露により生じる細胞内への持続的なCa^<2+>濃度の上昇によるストレスに対して、HSFのリン酸化とそれに続くHSPの発現増加を介した防御機構が存在することが明らかとなり、新規ターゲット分子の候補となり得る可能性が考えられる。依存性薬物の種類に関係なく長期曝露により機能亢進することが明らかとなったL型高電位開口性カルシウムチャネル(HVCC)について、昨年度までにL型HVCCサブユニットの機能変化に影響を与える細胞内調節因子を解析する上で有用な細胞内局在の可視化法の確立、およびアルコールの長期曝露により生じる細胞内への持続的なCa^<2+>濃度の上昇によるストレスに対して、熱ショック蛋白の発現増加を介した防御機構が一部存在することを明らかにしてきた。本年度も引き続きCa^<2+>濃度の上昇に続く情報伝達系の変化から依存性薬物の治療に有用な新規ターゲット分子の候補について検討した。その結果、stored operated Ca^<2+>

channelの活性を細胞内Ca^<2+>キレート剤により抑制したところ、L型HVCCの機能亢進は生じなかった。一方、L型HVCCの活性持続に影響すると想定される、(1)L型HVCC C末端部位のリン酸化遅延、(2)L型HVCC遺伝子発現に影響するprotein phosphatase活性の変化、および(3)ミトコンドリアの細胞内Ca^<2+>濃度調節への関与についてそれぞれ検討したが、そのいずれの可能性も無いことが判明した。これらの成績はL型HVCCの機能亢進にはL型HVCCの活性経路とは異なる調節経路が存在する可能性を示唆するものである。そこで、アルコールやモルヒネの連続投与により変化する細胞内情報伝達経路の網羅的検索を試みた結果、新たに細胞内Fe^<2+>含量の著明な増加が生じることを見出した。この細胞内Fe^<2+>含量の上昇はL型HVCC阻害薬により消失したことから、依存性薬物の連続投与により生じる細胞内Fe^<2+>含量の増加は、新たな依存形成メカニズムの経路となる可能性が考えられる。
複雑ネットワーク上でのカルチャーダイナミクスの数理モデリング

社会ネットワーク上でのオピニオン形成の数理モデルとして、価値重み付き混合投票者モデルおよび時間減衰ダイナミクスをもつ投票者モデルを考案し、それらの挙動を解明するとともに、観測データからモデルパラメータを推定する手法を構築し、実データを用いた実験で有効性を実証した。また、社会ネットワーク上での情報拡散やオピニオン拡散におけるバースト期間の検出法、ソーシャルメディアデータにおけるリンク予測法など、各種応用を提案し、実験により有効性を示した。(1)価値重みつき混合投票者(VwMV)モデルとその学習法に対して、比較的短期間のオピニオン拡散データから、近い将来のオピニオンシェアが正しく予測できることを、実験で示した。また、局所オピニオンシェアが平均オピニオンシェアにより近似可能である場合に、「1)反多数派オピニオニストが存在しないならば、最大の価値重みをもつオピニオンが、最終的にはオピニオンシェアにおいて一人勝ちする。2)反多数派オピニオニストがある程度存在するならば、必ずしもそのようなことは起こらない。3)どちらの場合においても価値重みが一様であるならば、任意のオピニオンがオピニオンシェアにおける最終的勝者となりうる。」ということを、理論的に証明した。(2)人々のオピニオンが、彼ら自身や彼らの友人たちのオピニオン履歴によりどのように影響されるのかを論じるために、オピニオンダイナミクスの数理モデルとして、通常の投票者モデルに時間的減衰関数を組み込んだ、TDVモデルと呼ばれる新たな投票者モデルを構築し、そのパラメータを観測されたオピニオン拡散データから学習する効率的手法を提案した。さらに、TDVモデルにおける減衰関数モデルの候補が与えられたとき、観測データに最も適合する減衰関数モデルを選択する効率的手法を提案した。特に、典型的な減衰関数モデルとして、指数的減衰関数、べき乗的減衰関数、減衰なしの3つを採用し、実験評価した。まず、人工データを用いた実験で、提案法の有効性を実証した。次に、化粧品クチコミサイトからのオピニオン拡散の実データを分析し、ほんどのブランドがべき乗的減衰関数をもつTDVモデルに従うことを示した。(3)ソーシャルメディアデータに対して、情報拡散のバースト期間の検出法および、アクティビティからの未観測リンクの予測法を提案し、実験により有効性を実証した。最終年度では、各種応用を提案し評価した。研究成果は、次の3点である。(1)社会ネットワークにおいて影響力のあるノードの新たなタイプとして、そのノードを取り除くとネットワークの平均影響度が大きく減少するようなノードを超媒介者(super-mediator)ノードと定義し、ノードの超媒介者度の効率的な計算法を構築した。そして、実験により、超媒介者性はエンロンEメールネットワークの中で重要な役割を果たすノードを同定できること、さらに、超媒介者性と従来のネットワーク中心性との統計的性質の違いを明かにした。(2)社会ネットワークにおける影響最大化問題の新たなタイプとして、K個のノード群を選択し情報源である新ノードからそれらターゲットノード群へのリンクを追加する影響最大化問題をターゲット選択問題と定義し、その有効な解法を構築するとともに、従来の影響最大化問題の解との違いを明らかにした。(3)ソーシャルメディアに蓄積されている地理および時間情報をもつ大量の写真データに基づいて主要な観光スポットのバーストシーズンを可視化する手法を提案し、Flickrデータを用いた実験によりその有効性を実証した。研究期間全体を通じ、社会ネットワーク上のオピニオンダイナミクスの数理モデルとして、価値重み付き混合投票者モデル(VwMVモデル)および時間減衰ダイナミクスをもつ投票者モデル(TDVモデル)を考案し、それらの挙動を解明するとともに、観測データからそれらのモデルのパラメータ学習アルゴリズムを構築して、実社会ネットワークを用いた実験によりそれらモデルの有効性を実証した。(1)異なる価値をもつ複数のオピニオンが、反多数派オピニオニストの存在の下で社会ネットワーク上をどのように広がるかを研究するために、従来の2つのオピニオンの反投票者モデルを複数オピニオンに拡張して、価値重みつき投票者モデル(VwVモデル)と結合した価値重みつき混合投票者モデル(VwMVモデル)を提案した。機械学習の枠組みにおいてモデルを定式化し、観測データから各ノードの反多数派度と各オピニオンの価値を学習する手法を提案し、実社会ネットワークを用いた実験によりその有効性を実証した。(2)外的状況の変化により引き起こされる社会ネットワーク上での情報拡散の挙動変化を、限られた観測データから検出する問題を研究した。外的状況の変化を確率的情報拡散モデルにおけるパラメータ値の変化としてモデル化し、その変化がいつ生じ、どのくらい持続し、そしてどの程度に大きさであったかを検出する効率的手法を提案した。特に、非同期時間遅れ付き独立カスケードモデル(AsICモデル)と価値重み付き投票者モデル(VwVモデル)に対して提案法を適用し、実社会ネットワークを用いた実験でその有効性を示した。(3)社会ネットワークにおけるオピニオン形成モデルとして、ノード属性の関数によりノードの強度をモデル化して投票者モデルに組み込んだ、複数オピニオンをもつ属性重みつき投票者モデル(AwVMモデル)を提案した。

そして、オピニオン観測データから、そのノード属性パラメータの値を推定する効率的手法を提案し、実社会ネットワークを用いた実験でその有効性を示した、また、AwVMモデルの性質を解析した。社会ネットワーク上のカルチャーダイナミクスモデルとして、情報拡散やオピニオン形成におけるいくつかの数理モデルとそれらの学習法を提案し実データで評価した。また、オピニオンシェアの予測、オピニオン拡散における時間減衰ダイナミクスの分析、バースト期間の検出、未観測リンクの予測など、知識発見タスクへの応用も進めた。そして、研究成果をいくつかの論文として発表した。前年度に引き続き、さらなる実データの収集と分析を行い、それに基づいて数理モデルの改良とパラメータ推定法の改良を行う。また、情報拡散データやオピニオン形成データからの知識発見など、各種応用の提案を目指す。研究成果を国内の研究会および国際会議で発表するための費用として使用する。また、実データを収集するための費用にも使用する。また、実データ収集のための費用として、謝金に使用する。
中国における人化異類変身譚の研究

(1)漢代以前の総ての変身譚を調査し、その結果を論文「先秦時代の変身譚について」として発表した。(2)漢代以降については、変驢変馬譚(驢馬や馬への変身の話)と化虎譚(虎への変身の話)を中心に調査検討を進め、その成果を著書『唐代小説「板橋三娘子」考』に纏めて刊行した。(3)『太平広記』巻四六〇に見える李相公(李石)の話が、インドの説話に起源を持つことを発見・論証し、論文「睫毛と鏡」として発表した。本年度は中国の変身譚の特徴を上古に遡って考察検討することを主たる課題とし、神話資料に見える中国最古の変身について再検討を試みた。横浜国立大学教育人間科学部紀要II』No.12に発表した、「先秦時代の変身譚について」はその成果の一部である。この論考によって、中国の変身譚が、最古の資料である神話において既に、刑罰・遺恨などによる、死を介在させた受け身の変身によって占められることを確認した。神話に既に見えるこうした特質は、以後の人化異類変身譚にも受け継がれ、大量の因果応報譚を運で行くことになったと考えられる。しかし一方、死を介在させない変身が存在しなかった訳ではない。この点についても、徐志平説が漢代成立とする禹の変身の話を先秦にまで引き上げる考証を試みた。なお追記の形で示したが、『呂氏春秋』巻一四・孝行覧・本味に見える伊尹の母が空桑の樹木に化し、その樹の洞から尹が生まれる話は、禹の妻塗山氏が石化して啓を産んだ話と共通するモチーフを持っており、この類の話が先秦に遡ることを示している。とすれば、彼女の石化の原因としてセットになっている禹の動物への変身も、先秦に遡る古い神話である可能性が極めて高い。伊尹の母の話を傍証資料として禹と塗山氏の話を見るならば、超能力による動物への変身の話が漢代以前にも存在したことは、一先ず立証が可能となろう。六朝・唐代の人化異類変身譚については、作業の進捗が遅れたため、焦点を「板橋三娘子」および変驢変馬譚に絞って考察を進めることとした。その成果の一端は、東方学会第59回全国会員総会のシンポジウム報告、「六朝唐代の小説に見える西域起源の説話について」においても発表し、諸氏の意見・批判を仰いた。本年度は、六朝・唐代の変身譚を中心に考察を進めた。昨年度以来の作業の進捗状況を勘案し、特に人から驢馬や馬への変身に焦点を絞り、かねてから執筆を継続している唐代小説「板橋三娘子」に関する論考の補訂に当てた。中国における変驢変馬譚は、仏教の応報思想に基づく転生の話が圧倒的多数を占め、「板橋三娘子」に見られるような妖術による変身の話は稀である。こうした傾向は唐代以降も同じで、翻案作品は極めて少ない。しかしそうした中で、清代の長編白話小説『〓都別記』第二一二二一三回に見える挿入話、鬼谷の宿の主人白虎の一段が「三娘子」の明らかな翻案であることを発見したのは、新たな収穫であった。こうした新資料を織り込み、これまでの一連の論考を「唐代小説『板橋三娘子』考-東西変驢変馬譚の伝播と変遷-」として纏めて名古屋大学に提出、学位を授与された。また、この「板橋三娘子」の原文については、これまで詳細な校勘記が作成されていなかった。そこで管見の十数種のテキストをもとにした校勘を行い、訳注とあわせて「『板橋三娘子』校注稿」として『横浜国立大学教育人間科学部紀要II(人文科学)』第13輯に発表した。これによって、明代の『艶異編』(蓬左文庫所蔵本)『広艶異編』『太平広記砂』『古今譚概』以降、清代の『唐人説薈』『唐代叢書』『龍威秘書』に至るまで、男性主人公の人物像が読者に与える悪印象を考慮して、原文の一部を削除する改変がなされていることが明らかになった。この他、中国変身譚歴史的概観については、化虎譚を中心に関連資料の収集を行い、次年度に備えた。本年度は研究期間の最終年度に当たるため、昨年度以降の方針に沿い、人化異類変身譚中の変驢・変馬譚に焦点を絞るかたちで、成果の総まとめを目指した。具体的には、学位論文「唐代小説『板橋三娘子』考-東西変驢変馬の伝播と変遷-」の特に第三章