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言語の発達過程の認知科学的研究

直示(ostension)の出現と人間の共創的言語コミュニケーションの進化との関係について、言語の個体発達過程から明らかとするため、音の分節化を可能とする脳の神経基盤、直示コミュニケーションの形式の発生と精緻化、階層性と文法から調べ、知見を統合することを目指して研究を進めた。乳児の音声知覚による分節化を人の生後4ヶ月と8ヶ月乳児における脳波実験により調べ、5Hzにおいて神経律動に対応する引き込み現象が起こるらしいという結果を得、神経律動と音韻分節の関係をモーラ言語において世界で初めて見出した。「他者に伝える」課題において、年長幼児では指さしや指示詞による非曖昧化が可能であることを明らかとした。また異なる句構造の発話は異なるジェスチャーの連鎖とともに産出され、非曖昧化が生じることを見出した(CogSci 2019)。この研究でB03の大学院生が口頭発表に選ばれ、Student Travel Awardを受賞した。量の含意は論理的記述とは異なる発話意図推論から行われるかについて幼児・児童で調べ、発達的変化があることがわかった(BCCCD19)。さらに発話意図推論を自閉スペクトラム者と定型発達者について確率論モデルと心理学実験から検討を進めた。言語構造の階層化において、複合語は「他の情報とは区別する解釈」と「逐次的に句構造を解釈」という2段階で解釈される場合があることを世界で初めて見出し、意図共有と階層性の関係の一端を明らかとした。他者の心的状態に言及する補文構造「AはBと思っている」は、他者の意図を推測する能力の発達を促す可能性があることに着目、日本とイギリスに住むバイリンガル児とモノリンガル児を対象に、補文構造課題を含む言語課題と意図共有の課題を実施し、階層化と意図共有の融合に寄与する知見を得た。1.階層構造の基盤単位:神経律動と音韻サイクルの関係乳児の脳研究では一般的な脳波研究に加えて、乳児の脳を調べる特別なスキルの確保が必須である。乳児用の特殊な頭部計測用プローブを利用することに加え、乳児の脳を調べるための研究スキルを確立することなどを目指し、脳波解析国際シンポジウムを東京にて開催した。現在、取得した100人近くの乳児データを解析しており、神経律動と音韻分節の関係をモーラ言語において新たな知見を見出しつつある。知見の普遍性の検証については国際共同研究を進めているフランス(シラブル言語)、オーストラリア(英語)の結果との突き合わせが必須であり、国際間で詳細な実験手順のすり合わせや技術的問題の対応が欠かせない。現在協力してデータ収集を進めているところである。2.言語発達と認知発達の関係:階層化と意図共有の融合Michael Tomaselloを招聘し、国際シンポジウムを開催し意図共有に関する議論を深めた(2018年東京)。そこで指摘されたことの一つに、意図共有はヒトにおいて高度に出現した能力であるとすれば、それは階層性の獲得により高度化したという可能性である。意図共有に関する原初的能力が他の動物においても見出されているが(Suddendorf, 2013)、人間の場合、他の人の心の状態を意識的に考え、さらには他の人が別の他の人の心の状態を考えていることについて考察する、という他の人の心的状態を、入れ子構造を伴うメタ認知能力により考えることが可能となっている。意図共有と階層性がいかに融合したかを解明することは本領域の目的達成のために必須と考えられる。現在、文構造の意味解釈に関する研究と、言語発達と認知発達の比較研究が進んでおり、融合についての研究を行う体制が整った。現在、A01言語理論班との連携により新しい補文課題と心の理論課題を開発し、研究を進めている。令和元年以降は、1)階層構造の基盤単位:神経律動と音韻サイクルの関係、2)直示コミュニケーションにおける非曖昧化、3)直示コミュニケーションにおける発話推論、更に階層化と意図共有の融合研究として4)韻律が句の階層化に果たす役割、5)言語発達と認知発達の関係の研究推進に加え、他計画研究班との研究推進を行う。以上の研究の解析に加え、人数を増やす、条件を増やす等の研究知見の精緻化を行い、論文化するための知見を得ることに尽力する。連携研究に関して、令和元年度では予備実験あるいは予備調査を行うことを目指す。現在、必要な呈示刺激等の議論はなされており、連携研究で必要な土台の形成は終了しているため、予備実験を行うための体制は整っている。令和2年以降ではデータ収集等を行い、論文化を目指す。また、令和2年以降は、論文化に向けたデータ収集だけではなく、社会へのアウトリーチ活動をさらに強化し、知見の社会への発信を拡大する。また若手研究者には、若手研究支援旅費を支給するだけではなく、研究にも参画してもらい、学際領域の研究における研究推進や第一線の研究者との議論等の研究に関する経験を積んでもらえるように育成・指導する。B03認知発達班の計画研究では、意図共有と階層性が絡み合って直示(ostensive)コミュニケーションが出現し、人間の共創的言語コミュニケーションの進化に繋がったという仮説を立て、言語の個体発達過程からこの仮説を検討する。直示コミュニケーションとは、人が他者に明示的・意図的に行うコミュニケーション様式を指す。H29年度では、分節化・音韻・韻律の発達、直示コミュニケーションと意図推測に基づく語彙の発達、階層性と文法の発達を調べるための研究環境構築や刺激の作成、パイロット実験を中心に行った。

分節化・音韻・韻律の発達の研究進捗に関しては、自然言語音声を特徴づける、ストレス、シラブル、モーラに関する聴覚刺激の準備を行ない、フランスのCentre National de la Recherche ScientifiqueとオーストラリアのWestern Sydney University各研究チームとの研究推進を行えるよう、多チャンネル乳幼児用脳波計を購入・設置し、計測手法等についての打ち合わせを行った。また、韻律情報が意図共有にどの程度寄与しているかを認知発達・言語発達との関係を含め調べるために、University of Londonの研究チームとの研究体制構築を進めた。直示コミュニケーションと意図推測に基づく語彙の発達の研究進捗に関しては、指示詞とジェスチャーの直示的な役割を議論し、実験を行った。句の階層性と文法の発達の研究進捗に関しては、句構造の枝分かれの解釈過程を行動指標だけではなく生理指標からも調べるために、携帯式注視点計測装置を購入し枝分かれ構造解釈に関する実験を行った。他班との連携研究に関しては、学会・領域会議等の機会を通じてアイディアの検討を行い、具体的な共同研究計画策定のための議論を行った。H29年度では研究計画に基づき、分節化・音韻・韻律の発達、直示コミュニケーションと意図推測に基づく語彙の発達、階層性と文法の発達、を調べるための研究環境構築やパイロット実験を中心に行った。分節化・音韻・韻律の発達の研究進捗に関しては、計画当初よりも機器の納入等が遅れたが、機械の設置や計測手法等についての打ち合わせを行うことができたことで、平成30年度のデータ取得に向け計測環境を向上させることができた。韻律に関する研究に関しては、韻律情報と発話文や状況等の要因の選定・議論を行い、刺激等の作成を行うことができた。一方、University of Londonの研究者と綿密な議論を行い、平成30年度の共同研究に向けた実験の基盤を構築した。直示コミュニケーションと意図推測に基づく語彙の発達の進捗に関しては、研究計画通りに進捗したことに加え、新たに幼児の教示行動に関するデータを取得した。指示詞に関しての実験は、英語母語話者に関するデータの取得ができ、加えて指示詞が持つ直示性に関して新たな実験アイディアを議論することができた。階層性と文法の発達に関しての研究進捗に関しては、研究計画通りに進展した。他班との連携に関しては、当初の研究計画よりも早く、他班との連携研究に向けたアイディアの検討を行い、共同研究に向けての議論を行うことができた。以上の点から、おおむね順調に進展していると考えることができる。直示(ostension)の出現と人間の共創的言語コミュニケーションの進化との関係について、言語の個体発達過程から明らかとするため、音の分節化を可能とする脳の神経基盤、直示コミュニケーションの形式の発生と精緻化、階層性と文法から調べ、知見を統合することを目指して研究を進めた。乳児の音声知覚による分節化を人の生後4ヶ月と8ヶ月乳児における脳波実験により調べ、5Hzにおいて神経律動に対応する引き込み現象が起こるらしいという結果を得、神経律動と音韻分節の関係をモーラ言語において世界で初めて見出した。「他者に伝える」課題において、年長幼児では指さしや指示詞による非曖昧化が可能であることを明らかとした。
リエナ-ル方程式のランダム摂動と確率解析

本研究においては、小助変数、白色雑音および平均相場相互作用を伴うリエナ-ル型振動子の無限系列が満たす極限方程式を扱い、長い時間経過での解の漸近挙動を調べた。そして、振動子の応答を2次元確率微分方程式の解として定式化し、そこに現れるずれ係数が持つ非線形的な増加度や拡散係数が持つ退化性が起こす困難な解析を確率論的手法で解決した。新たな知見等の成果は通常の理論を拡散した次の事柄である。1.マッキ-ン型確率微分方程式の解の存在と一意性に関する従来の結果をリャプノフ関数の手法で拡張した定理を求め、かつ、1963年のハスミンスキ-による伊藤型確率微分方程式に対する平均法理論をマッキ-ン型確率微分方程式に対して証明した。このことからリエナ-ル型振動子が長い時間経過の後に従う極限周期軌道とも言うべき拡散過程を得ることが出来た。2.ずれ係数が大きく、ランダム媒質の影響を受け、しかも退化した拡散行列を持つ伊藤型確率微分方程式の解に対する大偏差原理を証明した。これは1987年のベヅィデンフットによる定理を拡張するものであり、かつ、ランダム制動項やランダム復元力に支配されるリエナ-ル型振動子に対する小助変数に依存した精密な確率法則を示している。3.大きな粘性を持つ液体中のブラウン粒子の運動に由来するところの大助変数を伴うリエナ-ル型振動子の応答を、2次元確率微分方程式の解としての数学的に厳密に定式化し、大助変数が限りなく大きくなっていくときの漸近挙動を支配する確率法則を導くことが出来た。これらの結果に基づいて今後展開され得る研究方向としては、拡散過程の系列に対する弱収束性のより一般的判定基準の設定、非ポテンシャル場の定常分布の分岐判定、スモルチョフスキ-・クラマ-ズの近似方程式の意味づけ等がある。また種々の計算機実験は研究に役立った。
高度侵襲外科手術後合併症予防法の開発

高度侵襲外科手術後にはバクテリアルトランスロケーションに伴う敗血症が高率に発生する。この術後敗血症は生体内での過剰な炎症反応を惹起し、しばしば多臓器不全へとつながる。近年、アミノ酸は、単に栄養素としてだけでなく、生体内での生理機能を制御する物質として注目されている。しかし、敗血症の病態にアミノ酸投与がどのように作用するのかは未だ不明な点が多い。本研究では、ラット敗血症モデルを用いて敗血症に伴う臓器障害にアミノ酸投与が有用であるという仮説のもとに実験を行った。具体的には敗血症にともなう臓器障害抑制に有用なアミノ酸の探索、さらにその作用機序を明らかにし、最終的には、本研究を通じて得られた結果を臨床応用へ発展させることを目的とする。LPS誘導性肝障害メカニズムとしてクッパー細胞が活性化されエンドセリンが産生され、そのエンドセリンに反応し、肝星細胞が活性化され細胞の収縮や細胞内Ca2+濃度が上昇するが、これらを予防する有効な手段はない。アミノ酸20種類の中に最近では、抗炎症性作用のあるものも報告されているがLPS投与によるクッパー細胞や肝星細胞活性化に対するアミノ酸の直接的効果を検討した研究は報告されていない。実験方法として、まずは、LPS投与によりマクロファージの活性化を直接的に抑制する効果を20種類全てのアミノ酸で確認したところシステインにもっとも強いエンドセリン発現抑制効果を確認した。今回はLPS誘導性肝障害に対するL-システインの効果を明らかにした。コラーゲンゲルを用いた肝星細胞の収縮反応に関する実験、細胞内カルシウム濃度測定を行った実験、LPSを投与したラットを用いた実験を行った。結果によりシステインの投与は、有用となりうる可能性があることが示唆された。
『現観荘厳論』の複注“rNam bshad snying po rgyan"の翻訳研究

『現観荘厳論』は般若経の注釈としてインドにおいて、重要視されたものである。この論書はチペットに伝えられ、そこでは仏教の学習の重要なひとつの柱とされていくが、中国には伝えられることはなかった。そのため『現観荘厳論』の研究には、チベットに残されているこの論書の翻訳や注釈を研究することが不可欠である。『現観荘厳論』は全体が八章七十項目(八支七十義)に分けられている。論の最初にこれらの項目が列挙され、論全体の構造が見渡せるようになっている。この部分を後代の注釈者たちは論の「摂義」と呼んで、八支七十義のそれぞれを簡潔に解説している。そのため、この部分の注釈は『現観荘厳論』の概説と見ることもできる。したがって、本研究では、この部分に焦点を絞って、ハリパドラの『小註(Sphutartha)』とそれの複注であるタルマリンチェンの『注釈、'心髄荘厳(rNam bshad snying po rgyan)』を和訳し、『現観荘厳論』の研究の端緒とする。チベットでは、『現観荘厳論』の入門書としてこの部分だけを取り出したものが多く作られており、"Donbduncu(七十義)"と呼ばれている。本研究では、『注釈、心髄荘厳』のチベット語テキストのサルナート版(刊本)と大谷大学所蔵版を校合して和訳の底本を作成し、その和訳草稿を作った。翻訳に際しては、ハリパドラの『小註』に対するインド撰述の複注二篇(Dharmakirtisri釈;北京No.5192,Dharmamitra釈;北京No.5194)を随時参照し、インドとチベットの注釈の伝統の違いの主なものを注記することにした。また、訳文中、《》によって『現観荘厳論』(本偈)の語を、下線によって『小註』の語を示して、タルマリンチェンの注釈の仕方を明示している。今後引き続いて、『現観荘厳論』第一章の残りの箇所の注釈部分の翻訳研究を行っていく予定である。『現観荘厳論』は『般若経』(特に『二万五千頌般若経』)に対する注釈であり、全体が八章七十項目(八支七十義)に分けられている。したがって、本研究では、この部分に焦点を絞って、ハリバドラの『小註(Sphutartha)』とそれの複注であるタルマリンチェンの『注釈、心髄荘控(rNam bshad snying po rgyan)』を和訳し、「現観荘厳論」の研究の端緒とする。チベットでは、『現観荘厳論』の入門書としてこの部分だけを取り出したものが多く作られており、“Don bdun cu(七十義)"と呼ばれている。本年度は、『注釈、心髄荘厳』のチベット語テキストのサルナ-ト版(刊本)、大谷大学所蔵版、東北大学所蔵版の三版を校合して和訳の底本を作成し、その和訳草稿を作った。現在は、訳注を作成中である。

(和訳の最初の一部分は当該研究申請時に発表済みである)翻訳に際しては、ハリバドラの『小註』に対するインド撰述の複注二篇(Dharmakirtisri釈;北京No.5192,Dharmamitra釈;北京No.5194)を随時参照し、インドとチベットの注釈の伝統の違いの主なものを注記する。また、訳文中、《》によって『現観荘厳論』(本偈)の語を、下線によって『小註』の語を示して、タルマリンチェンの注釈の仕方を明示している。『現観荘厳論』は般若経の注釈としてインドにおいて、重要視されたものである。この論書はチベットに伝えられ、そこでは仏教の学習の重要なひとつの柱とされていくが、中国には伝えられることはなかった。そのため『現観荘厳論』の研究には、チベットに残されているこの論書の翻訳や注釈を研究することが不可欠である。『現観荘厳論』は全体が八章七十項目(八支七十義)に分けられている。論の最初にこれらの項目が列挙され、論全体の構造が見渡せるようになっている。この部分を後代の注釈者たちは論の「摂義」と呼んで、八支七十義のそれぞれを簡潔に解説している。そのため、この部分の注釈は『現観荘厳論』の概説と見ることもできる。したがって、本研究では、この部分に焦点を絞って、ハリバドラの『小註(Sphutartha)』とそれの複注であるタルマリンチェンの『注釈、心髄荘厳(rNam bshad snying po rgyan)』を和訳し、『現観荘厳論』の研究の端緒とする。チベットでは、『現観荘厳論』の入門書としてこの部分だけを取り出したものが多く作られており、“Don bdun cu(七十義)"と呼ばれている。本年度は昨年度に引き続いて、『注釈、心髄荘厳』のチベット語テキストのサルナート版(刊本)と大谷大学所蔵版を校合して和訳の底本を作成し、その和訳草稿を作り、その一部を発表した。翻訳に際しては、ハリバドラの『小註』に対するインド撰述の複注二篇(Dharmakirtisri釈;北京No.5192,Dharmamitra釈;北京No.5194)を随時参照し、インドとチベットの注釈の伝統の違いの主なものを注記することにした。また、訳文中、《_》によって『現観荘厳論』(本偈)の語を、下線によって『小註』の語を示して、タルマリンチェンの注釈の仕方を明示している。今後引き続いて、『現観荘厳論』第一章の残りの箇所の注釈部分の翻訳研究を行っていく予定である。
組織FISH法を用いたびまん性大細胞型Bリンパ腫の染色体解析と予後との関連性

1)びまん性大細胞型Bリンパ腫(DLBCL)では化学療法で高率に寛解が得られるものの,5年生存率は30-38%と予後不良の疾患である.予後の改善を日指し,初診時に患者を層別化して治療計画を立てることを考え,染色体異常が予後予測因子となるかどうかを検討した.対象は50例のDLBCLで,IGH/BCL6は7例,IGH/BCL2は4例,IGH/c-MYCは3例で認められた.IGH/BCL6陽性例はIPIスコアの高い傾向があった.IGH/BCL2陽性例は陰性例と比較して早期死亡は少なかったが最終的には全例死亡していた.IGH/c-MYC, IGH/BCL6陽性例の予後は非常に不良であった(2年生存率0%,40%).IGH/BCL6陽性あるいはIGH/c-MYC陽性DLBLの予後は陰性例に比較して予後が不良であることが判明したので、このような転座をもつ症例は初診時より強力な治療を行うことで予後を改善できる可能性があることが判明した.2)MALTリンパ腫では,t(11;18)はすでに予後因子であることはすでに判明している.そこで組織FISH法をもちいて,13例のMALTリンパ腫について染色体異常を検討し,trisomy3が予後因子である可能性を示した.びまん性大細胞型Bリンパ腫(DLBL)では化学療法で高率に寛解が得られるものの,5年生存率は3038%と予後不良の疾患である.したがって新たな戦略が必要とされている.新たな統一プロトコールを作製しても,DLBLは病態が多様で,疾患としての均一性が乏しいので,予後の改善は期待しにくい.そこで初診時に患者を層別化して治療計画を立てることを考え,染色体異常が予後予測因子となるかどうかを検討した.染色体異常の検出には蛍光in situハイブリダイゼーション(fluorescence in situ hybridization, FISH)法を用いた.対象は50例のDLBCLで,内訳は男性31人,女性19人,年齢は28-86歳であった.短期培養後にカルノア固定し,FISHを行った.プローブは以下を用いた.bacteriophageクローンIgγ,人工酵母クローンI2,YA153a6,cosmidクローンcosB5-1,2.一部の症例ではパラフィン包埋組織切片上でFISHを行った.生存率はKaplan-Meier法により統計学的に解析した.IGH/BCL6は7例,IGH/BCL2は4例,IGH/c-MYCは3例で認められた.IGH/BCL6陽性例はIPIスコアの高い傾向があった.IGH/BCL2陽性例は陰性例と比較して早期死亡は少なかったが最終的には全例死亡していた.IGH/c-MYC, IGH/BCL6陽性例の予後は非常に不良であった(2年生存率0%,40%).IGH/BCL6陽性あるいはIGH/c-MYC陽性DLBLの予後は陰性例に比較して予後が不良であることが判明したので、このような転座をもつ症例は初診時より強力な治療を行うことで予後を改善できる可能性があることを本研究でしめすことができた.1)びまん性大細胞型Bリンパ腫(DLBCL)では化学療法で高率に寛解が得られるものの,5年生存率は30-38%と予後不良の疾患である.予後の改善を日指し,初診時に患者を層別化して治療計画を立てることを考え,染色体異常が予後予測因子となるかどうかを検討した.対象は50例のDLBCLで,IGH/BCL6は7例,IGH/BCL2は4例,IGH/c-MYCは3例で認められた.IGH/BCL6陽性例はIPIスコアの高い傾向があった.IGH/BCL2陽性例は陰性例と比較して早期死亡は少なかったが最終的には全例死亡していた.IGH/c-MYC, IGH/BCL6陽性例の予後は非常に不良であった(2年生存率0%,40%).IGH/BCL6陽性あるいはIGH/c-MYC陽性DLBLの予後は陰性例に比較して予後が不良であることが判明したので、このような転座をもつ症例は初診時より強力な治療を行うことで予後を改善できる可能性があることが判明した.2)MALTリンパ腫では,t(11;18)はすでに予後因子であることはすでに判明している.そこで組織FISH法をもちいて,13例のMALTリンパ腫について染色体異常を検討し,trisomy3が予後因子である可能性を示した.
ナンセンス変異により発生する中途ストップコドンの除去機構の解明と応用

慢性肉芽腫症は、好中球NADPHオキシダーゼ構成蛋白質の遺伝子異常により、活性酸素を生成できないために細菌感染を繰り返す疾患である。遺伝子異常の多くは中途ストップコドンによる。この中途ストップが存在する遺伝子から転写翻訳される異常蛋白質の発現を防ぐ生体防御機構の1つにmRNAレベルでのNonsense-mediated Altered Splicing (NAS)が存在する。私共はCGDにおけるNASを初めて発見し、解析を行なった。慢性肉芽腫症(CGD)は、好中球NADPHオキシダーゼ構成蛋白質の遺伝子異常により、活性酸素を生成できないために細菌感染を繰り返す疾患である。このオキシダーゼ蛋白質複合体の中でgp91だけはX染色体にコードされるのでCGDの多数をしめる。遺伝子異常の多くはNon-sense mutationによる中途ストップである。この中途ストップが存在する遺伝子から転写翻訳される異常蛋白質の発現を防ぐ生体防御機構の1つにmRNAレベルでのNonsense-mediated Altered Splicihg(NAS)が存在する。NASにより中途ストップが生じた変異を含むexonは取り除かれ、それから翻訳された蛋白質は完全長ではないものの、機能がある程度保持される可能性があり、実際NASによる筋ジストロフィーの軽症型が報告されている。私共はCGDの疾患原因を研究し、平成19年度、初めてCGDにおけるNASを発見した。また、その詳しい解析を行った結果、以下のような成果を得た。(1)gp91のexon5に中途ストップが存在する変異を持つCGD患者のgp91には、NASの機構により、exon5を丸ごとスキップしたmRNAが存在した。(2)ところが、このexon5をスキップしても、exon6でまた中途ストップが生じることから、exon5と6を丸ごと、そして同様の理由からexon5,6,7を全て欠損したgp91のmRNAを同定した。(3)また、exon3に中途ストップが存在するCGD例では、免疫染色の結果から微量ながらgp91を発現し、化学発光法による測定結果から活性酸素生成能も保持していた。抗体の認識部位がexon5以降であるので、exon3をスキップしたmRNAからの翻訳蛋白質が発現し活性酸素を生成していることが示唆された。好中球NADPHオキシダーゼの遺伝子異常により好中球、好酸球、単球とBリンパ球は活性酸素を生成できなくなる。そのために慢性肉芽腫症(CGD)は細菌感染を繰り返す。この酵素は蛋白質複合体から構成され、その内gp91phoxだけはX染色体にコードされるのでCGDの多数をしめる。この中途ストップが存在する遺伝子から転写翻訳される異常蛋白質の発現を防ぐ生体防御機構の1つにmRNAレベルでのNonsense-mediated Altered Splicing(NAS)が存在する。NASにより中途ストップが生じた変異を含むexonは取り除かれ、それから翻訳された蛋白質は完全長ではないものの、機能がある程度保持される可能性がある。私共はCGDの疾患原因を研究し、本応募課題のもと、昨年度、初めてCGDにおけるNASを明らかにし、本年度にかけて、その詳しい解析を行なってきた。即ち、gp91phoxのexon5やexon3に中途ストップが存在する変異を持つCGD患者のgp91phoxには、NASの機構により、当該exonを丸ごとスキップしたmRNAが存在し、活性酸素生成能も微弱ながら保持していた。このように、CGD患者好中球が生成する活性酸素は微弱であることから、本応募課題を進めるには、さらに微量活性酸素の検出法を開発する必要があり、応募者等は化学発光法と細胞接着を利用した新規な方法により、従来の100倍感度がよく、定量性にも優れた方法を開発した。
経済犯罪の研究

本研究は、経済犯罪の総論的課題については、従来の日本の経済犯罪研究の歩みと研究方法を分析・検討することによって経済犯罪研究の全体像を明らかにし、そして日本における経済犯罪現象の諸相を概観することによって今後の研究課題を模索した。各論においては、以下の諸分野の経済犯罪を取り上げて研究した。先物取引の分野においては、当該取引をめぐる犯罪の現状を分析した上で、判例、捜査実務、学説の役割を検討し、今後の当該犯罪についての経済刑法の課題を指摘した。企業秘密の分野においては、企業秘密の概念やその侵害に対して刑法とその他の法律はそれぞれどのような役割を果たすべきかを検討した上で、刑法の限界を明らかにした。証券取引の分野においては、特に、インサイダー取引の現状分析とその犯罪化立法の問題点を取り上げて検討した。出資法の分野においては、従来の犯罪形態を分析した上で、これらの犯罪対策手段として行政処分と刑罰はどのような役割を果たすべきかを検討した。連鎖取引の分野においては、無限連鎖講と連鎖販売取引をめぐる犯罪を取り上げ、その実態と対策を検討した。クレジット・カード濫用の分野においては、その実態、当罰性、刑法の役割について検討した。コンピュータ濫用の分野においては、コンピュータ犯罪の動向とコンピュータ・ウイルスの問題について詳細な資料を駆使して検討を加えた。外国における経済犯罪の実態と理論については掘り下げて研究する予定であったが、当初の計画通りには進展しなかった。これまで外国の経済犯罪に関する文献について5篇を取り上げ、紹介・論評することができたが、引き続き今後の研究に委ねることにする。1.コンピュ-タ犯罪の分野では、テレホン・カ-ド変造事件や電磁的記録たる馬券の変造事件の発生状況の調査をし、それについての判例・学説を理論的に検討してきたが、この種事件についての新たな立法論上の問題が浮かび上がってきた。2.輸出入の分野においては、ココム違反事件を取り上げ、あらゆる角度から検討した結果、この種事件においては、その政治的・経済的利害関係が背後にあり、立法論及び法理論上多くの問題があるので、引き続きその検討を要する。3.クレジット・カ-ドの分野においては、年々増加するクレジット・カ-ド濫用事件の件数及びその濫用形態の調査をし、濫用についての判例・学説を検討した結果、クレジット・カ-ド取引の特殊性を考慮した場合、当該取引システムにまつわる濫用について特別の刑事立法をする必要があるのではないかとの問題が浮かび上がってきた。4.詐欺まがい商法の分野においては、豊田商事事件、マルキ事件、同和商品事件、ネズミ講事件、マルチ商法等を取り上げ、被害の実態を調査するとともに、その対策のために、業法のあり方、主務官庁の役割、被害者・弁護士の役割、警察・検察当局の役割・業者団体の役割等が検討されたが、これらの間に有機的関連性が薄く、その点が今後の研究課題となる。5.独禁法・不正競争防止法の分野においては、石油カルテル事件以来、大きな事件が発生していないこともあって、事件中心の研究よりは、当該分野において刑罰法規の果たす役割と行政処分の果たす役割との関係が問題となった。当面の最大の課題は談合事件をどのようにコントロ-ルしていくかにある。6.証券取引の分野においては、インサイダ-取引についての法的コントロ-ルやリクル-ト事件を取り上げて検討してきたが、今後の課題としては証券取引にまつわる逸脱行為の実態の解明である。7.外国法の分野では、米国、西独、フランス、シンガポ-ル、香港の経済犯罪対策を検討した。1.独禁法、不正競争防止法の分野においては、日米構造協議で問題となった独禁法上の罰則強化について検討した結果、従来の日本の実務からすると罰則強化よりも現行の行政上のサンクションの適用強化が重要であることの結論に達した。不正競争防止法においては、平成2年の改正で問題となった営業秘密の不正使用について民事法及び刑事法の観点から検討した。

2.コンピュ-タ犯罪の分野においては、コンピュ-タウイルスとハッキングの実態調査、犯罪理論上の問題、その対策について検討した。3.クレジット・カ-ド濫用の分野では、その濫用件数の実態調査をした上で、信販会社等の濫用防止システムの現状及び判例・学説の状況を分析・検討した。4.詐欺まがい商法の分野においては、出資法上の預り金が経済犯罪の中でトップクラスの被害をもたらしている現状を重視し、その実態調査をした上、それについての判例を分析し、そして刑事規制と行政規制の役割を検討した。また、高金利犯罪の検挙件数の推移を分析し、高金利禁止の役割を検討した。5.証券取引分野においては、インサイダ-取引の立法後の法状態及び外国の立法状況を分析するとともに、株価操作の実態とその対策について検討した。6.輸出入の分野においては、ココム規制を中心に外為法上の犯罪の性質及びその現状を分析するとともに、法改正の問題点を検討した。7.外国における経済犯罪については、企業秘密・営業秘密の侵害とコンピュ-タ犯罪を中心に研究がなされた。
19世紀前半ケンブリッジにおける経済学-反発・受容・変容

ケンブリッジ大学では、19世紀前半にイングランドの大学で初めて独立の経済学講義が行われたが、その前後の経緯は研究史上あまり知られていない。本研究は、こうした空白を埋めるべく、以下の三点を明らかにした。第一に、同大学には、18世紀以来の功利主義的道徳哲学の伝統があり、そのなかで、同時代にスコットランドで誕生した経済学とは趣を異にした経済論が展開されていたこと(その影響は19世紀まで残る)。第二に、同大学に導入された経済学は、上のような伝統に負いながらも、エディンバラ大学で展開された経済学の影響を圧倒的に受けたものであったこと。第三に、当時の正統派経済学に対する方法的批判で知られるいわゆる「ケンブリッジ帰納主義者たち」は、功利主義哲学にも上のように導入された経済学にも、対立する存在であったこと。以上である。以上である。今年度遂行した具体的な研究計画は2つある。一つは、ケンブリッジ大学の初代経済学教授であるプライム(George Pryme)の経済学講義がいかなる影響のもとに形成されたのか、についてである(「研究計画調書」の「研究目標」の1に対応)。すでに海外で収集した資料をデータベース化し分析した結果(「交付申請書」の「研究実施計画」を参照)、1809年にエディンバラ大学で行われたステュアート(Dugald Stewart)の講義から非常に大きな影響を受けていることが明らかになったので、これをまとめ経済学史学会第73回全国大会で報告(裏面参照)した後、海外のリーディング・ジャーナルに投稿した。現在のところ、保留(acceptable with major revision)の扱いであるが、レフェリーからは、「これまで手つかずであった複数の一次資料を精査した意義ある研究」であることが認められる一方、「18世紀後半のケンブリッジでの経済学教育へ目配りを要する」との指摘があった。このため、次年度に予定していた海外での資料調査を前倒しし、2月にこれを行い、現在投稿原稿の改稿を行っているところである。第二に、ケンブリッジ帰納主義者たちが指導したとされる1830年代の統計運動についてである(「研究計画調書」の「研究目標」の2に対応)。1820年代における経済学方法論の諸議論をサーベイすることによって、統計運動に先立って認識論上の転換が生じていたのではないかという仮説を形成し(「交付申請書」の「研究実施計画」を参照)、3月にシンポジウムで報告した(裏面参照)。今後、この仮説の検証をより十全なものとして、海外の学会で報告する予定である。昨年度(平成22年度)の成果は主として三点である.1.一昨年度に行った資料調査の結果の一部を踏まえ,経済学史研究の国際的中心をなすジャーナルであるHistory of Political Economy誌に投稿していた論文の改稿を行った結果,当該論文が受理(掲載許可)された.ここで明らかにしたことは,ケンブリッジ大学のプライムの経済学講義が,その内容において,エディンバラ大学のステュアートがすでに行っていた経済学講義をモデルにしたものであり,そのことがケンブリッジ大学に経済学教授職を設立せしめる一要因となったことである.なお掲載は,平成24年度になる見通しである.2.同資料調査の結果の一部を分析し,その成果を豪州経済学史第23回大会にて"The Scope and Method of Political Economy in the Early Nineteenth Century"と題して報告した.ここで明らかにしたのは,従来ケンブリッジの卒業生たちが指導したとされる1830年代のイギリス統計運動が,社会科学の方法的革新を企図する西欧全体に広がりをもつ遙かに大きな運動の一部として解釈しうるということである.3.同資料調査の一部を利用した研究成果を,『イギリス経済学における方法論の展開』(只腰他編,昭和堂)の第三章「ヒューウェルとジョーンズ,そして『帰納科学としての経済学』」として発表した.ここで明らかにしたことは,従来「ケンブリッジ帰納主義者」として経済学史上一括されてきたヒューウェルとジョーンズが,経済学方法論において,実はかなり早くから思想的隔たりがあったことである.平成23年度は、本研究の第三のフェーズにあたり、昨年度までに収集・解析した資料に基づいて、研究成果をまとめ,口頭発表を行い,論文を発表した。具体的には、ケンブリッジ大学の初代経済学部教授プライム(George Pryme)の講義内容を復元し、それとエディンバラ大学においてステュアート(Dugald Stewart)による経済学講義との関係を分析した結果を論文として発表すべく校正を行いつつ(すでに受理済み)、ここで展開された主題をさらに精緻化・発展させるよう努めた。

成果のひとつは、ステュアートの経済学冒頭で展開された経済学方法論の議論が、ケンブリッジのみならず、当時のイングランドにおいて大きな影響力をもったことを示したことであり、これは北米の経済学史学会において、'From J.-B.Say to D.Stewart and J.R.McCulloch'として口頭にて報告された。第二に、同時代のケンブリッジ出身の経済学者としてもっとも重要なマルサス(Thomas Robert Malthus)もまた、18世紀以来のケンブリッジ道徳哲学内の経済論から多くの影響を受けていた可能性を見出したことであり、これについては「マルサス『初版人口論』-スコットランドおよびケンブリッジの伝統の関連において」とのタイトルで論文として発表された。これらは、18世紀末から19世紀中葉にかけてのケンブリッジにおける経済学を歴史的・総体的に理解するために、不可欠な知見を提供するものであるにもかかわらず、従来の研究史では比較的等閑に付されていた事柄であり、研究史上大きな意義を有するものである。
黄砂の気管支喘息への影響

黄砂の健康への影響について本邦ではほとんど調査が行われていない.平成20年度および21年度に黄砂の喘息患者への影響について調査を行った.この結果,黄砂飛散時に喘息患者の約15%から20%で呼吸器症状が増悪した.特にアレルギー性鼻炎を合併している場合に悪化頻度が高かった.しかし,増悪は重篤でなく救急受診を必要とする患者は1%であった.黄砂飛散により喘息患者では軽妙ではあるが呼吸器症状が増悪するために注意が必要と考えられる.黄砂の健康への影響について本邦ではほとんど調査が行われていない.平成20年度および21年度に黄砂の喘息患者への影響について調査を行った.この結果,黄砂飛散時に喘息患者の約15%から20%で呼吸器症状が増悪した.特にアレルギー性鼻炎を合併している場合に悪化頻度が高かった.しかし,増悪は重篤でなく救急受診を必要とする患者は1%であった.黄砂飛散により喘息患者では軽妙ではあるが呼吸器症状が増悪するために注意が必要と考えられる.本邦における黄砂の健康への影響を明らかにするために,黄砂飛散時の喘息患者における症状変化について調査を行った.2008年に鳥取県では3月3日にのみ黄砂が飛散した.この際,105例の喘息患者および対照として25例のCOPD患者に電話による症状変化の聞き取り調査を行った.この結果,喘息患者では16例(15.2%)で,COPD患者では2例(7,1%)で呼吸器症状の増悪を認めた.増悪した症状は咳,痰がほとんどであったが,3例では喘鳴と呼吸困難があり小発作を認めた.増悪した呼吸器症状により救急受診が必要であった者はなく,発作を起こした3例も自宅治療で改善した.PEFモニタリング解析のために黄砂飛散目と黄砂飛散終了後6日間を"黄砂飛散期間",黄砂飛散前の7日間を"黄砂非飛散期間"と定義し解析を行った。黄砂飛散時に呼吸器症状が増悪した喘息患者のMin%Maxでは,"黄砂飛散期間"は"黄砂非飛散期間"に比較して有意に低下していた.しかし,mean morning PEF/personal best value比は"黄砂飛散期間"と"黄砂非飛散期間"に有意な差は認めなかった.mean morning PEF/personal best value比に有意差がなかった原因として(1) PEFは低下するものの,その低下が軽妙であること,(2) PEF低下が極短期間であることが挙げられた,一方,MIn%Maxにおいては黄砂飛散期間に1日でも低値があれば差が生じやすくPEFの低下を反映しやすいためと推察された。対照としたCOPD患者でも2例で呼吸器症状の増悪があったものの,いずれもが喘息を合併していた.以上の結果は2007年調査とほぼ同様であり,黄砂飛散により喘息患者の10%20%で呼吸器症状が増悪する可能性があるものの症状増悪の程度は軽妙であった.さらにCOPD患者が黄砂飛散時に症状増悪を自覚する頻度は喘息患者に比較して少ないと考えられた.2008年度までの調査で黄砂飛散時に喘息患者の10%20%,COPD患者の5%10%で呼吸器症状が増悪することを確認した.黄砂飛散はスギ,ヒノキ花粉飛散と時期が重なることも多い.花粉飛散がない黄砂飛散期,スギ・ヒノキ花粉飛散を伴う黄砂飛散期,スギ花粉の大量飛散期における喘息患者の症状調査を行なった.また,黄砂飛散期の鼻症状についてJRQLQを用いて調査した.2009年3月には黄砂飛散時にスギ花粉の飛散を認めた.この際,呼吸器,眼,鼻症状のいずれかの増悪を認めた例は113例中34例であり,このうち23例(20%)で呼吸器症状が増悪していた.一方,スギ花粉の大量飛散期には13例(11%)で呼吸器,眼,鼻症状のいずれかの症状増悪があったが,呼吸器症状が増悪した例は4例(4%)であった.2009年12月に黄砂が飛散した際には花粉の飛散はなく,この際に呼吸器症状が増悪した例は104例のうち13例(12.5%)であった.2007年の調査でも黄砂とスギ花粉が同時に飛散した際の呼吸器症状増悪率は21%であったのに対して,黄砂のみの飛散では15%であった.この結果,黄砂のみの飛散時にも喘息患者で呼吸器症状は増悪するが花粉大量飛散が同時にあった場合にはより呼吸器症状が増悪しやすかった.PEFモニタリングにおいてもスギ花粉の飛散のみでは非飛散時に有意な変化は認めないが,黄砂飛散期にはMin%Maxが非飛散期に比較して有意に低下していた.一方,JRQLQにより鼻症状のQOL調査を行ったが黄砂飛散期と非飛散期で有意な差は認めなかった.以上の結果より,黄砂の飛散時には喘息患者の10%20%で呼吸器症状が増悪するが,スギ花粉をはじめ花粉の大量飛散が伴うとより増悪しやすいと考えられた.
海産甲殻類における硬組織形成と石灰化の分子生物学的研究

本研究は、海産甲殻類のクルマエビを用いて,外骨格を構成するタンパク質および外骨格形成を調節するタンパク質をコードする遺伝子を数多く単離し,その中から石灰化に関与するタンパク質をコードする遺伝子を見つけ,解析することを目的として行われた.今年度は先ず,昨年度に引き続き,石灰化の起こる時期(脱皮後期)に特異的に発現される遺伝子の検索を行った.脱皮段階により分けられたエビの尾扇および葉片(主に外骨格と表皮からなる部分)を用いて,ディファレンシャル・ディスプレイ法およびノザン解析により,脱皮後期に特異的に発現されるmRNAを6種同定し,そのうちの4種に対してcDNAクローンの単離をおこなった.さらに,これらmRNAのコードするタンパク質の構造と機能を推定するため,3種のcDNAクローン(DD-1,4,9と名付けた)のヌクレオチド配列の解析をおこなった.DD-1は,配列から機能の推定はできなかったが,アスパラギンに富んだアルカリ性のタンパク質をコードしていた.DD-9のコードするタンパク質は,昆虫の外骨格中に見つかる一群のタンパク質と類似した配列をもっていた.DD-4は,プロリンを多く含む酸性のタンパク質をコードしており.calphotinというカルシウム結同タンパク質との間に配列の相同性が見られた.このことから,DD-4のコードするタンパク質もカルシウム結合タンパク質である可能性があり,石灰化においてどのような役割(カルシウムイオンの輸送,貯蔵,または結晶形成の促進,阻害など)を果しているのか,今後詳しく調べて見たい.本研究は、海産甲殻類のクルマエビを用いて,外骨格を構成するタンパク質および外骨格形成を調節するタンパク質をコードする遺伝子を数多く単離し,その中から石灰化に関与するタンパク質をコードする遺伝子を見つけ,解析することを目的として行われた.今年度は先ず,昨年度に引き続き,石灰化の起こる時期(脱皮後期)に特異的に発現される遺伝子の検索を行った.脱皮段階により分けられたエビの尾扇および葉片(主に外骨格と表皮からなる部分)を用いて,ディファレンシャル・ディスプレイ法およびノザン解析により,脱皮後期に特異的に発現されるmRNAを6種同定し,そのうちの4種に対してcDNAクローンの単離をおこなった.さらに,これらmRNAのコードするタンパク質の構造と機能を推定するため,3種のcDNAクローン(DD-1,4,9と名付けた)のヌクレオチド配列の解析をおこなった.DD-1は,配列から機能の推定はできなかったが,アスパラギンに富んだアルカリ性のタンパク質をコードしていた.DD-9のコードするタンパク質は,昆虫の外骨格中に見つかる一群のタンパク質と類似した配列をもっていた.DD-4は,プロリンを多く含む酸性のタンパク質をコードしており.calphotinというカルシウム結同タンパク質との間に配列の相同性が見られた.このことから,DD-4のコードするタンパク質もカルシウム結合タンパク質である可能性があり,石灰化においてどのような役割(カルシウムイオンの輸送,貯蔵,または結晶形成の促進,阻害など)を果しているのか,今後詳しく調べて見たい.本研究は海産甲殻類の一種であるクルマエビを用いて、硬組織を構成するタンパク質および硬組織形成に調節するタンパク質をコードする遺伝子を数多く単離し、その中から石灰化に関与するタンパク質を見つけることを目的としている。そのために甲殻類の、外骨格を形成する時期(脱皮期)およびしない時期(脱皮間期)がわかれている、という特質を利用し、二つの時期に表皮細胞で発現されるmRNAをdifferential display法(以下DD法と略)を用いて比較することにより外骨格形成期にのみ発現されるmRNAを先ず同定し、次にそれらmRNAのコードするタンパク質の構造と機能を調べる予定である。現在までに、脱皮ステージごとに分けた表皮サンプルを用いてDD法によるmRNA種の脱皮ステージ間の比較行ってきたが、実験結果の再現性が悪かったため実験の各ステップの検討を行ってきた。その結果、(1)使用していたPCR機のサンプルスロット間の不均一性、(2)RNA試料からcDNAを調製する逆転写反応、の2つに問題があったことを突き止めた。現在改良した方法によりDD法を継続して行っており、脱皮期特異的に発現されるいくつかのRNA種をすでに見い出している。上記の研究と関連して、クルマエビの表皮において脱皮期に特異的に発現される、エンド型キチン分解酵素(キチナーゼ)cDNAの単離を行った。このキチナーゼは、肝膵臓から単離された2つのキチナーゼのいずれとも構造が異なっており、クルマエビでは組織特異的な複数のキチナーゼが存在することが示唆された。本研究は,海産甲殻類のクルマエビを用いて,外骨格を構成するタンパク質および外骨格形成を調節するタンパク質をコードする遺伝子を数多く単離し,その中から石灰化に関与するタンパク質をコードする遺伝子を見つけ,解析することを目的として行われた.今年度は先ず,昨年度に引き続き,石灰化の起こる時期(脱皮後期)に特異的に発現される遺伝子の検索を行った.脱皮段階により分けられたエビの尾扇および葉片(主に外骨格と表皮からなる部分)を用いて,ディファレンシャル・ディスプレイ法およびノザン解析により,脱皮後期に特異的に発現されるmRNAを6種同定し,そのうちの4種に対してcDNAクローンの単離をおこなった.

さらに,これらmRNAのコードするタンパク質の構造と機能を推定するため,3種のcDNAクローン(DD-1,4,9と名付けた)のヌクレオチド配列の解析をおこなった. DD-1は,配列から機能の推定はできなかったが,アスパラギンに富んだアルカリ性のタンパク質をコードしていた. DD-9のコードするタンパク質は,昆虫の外骨格中に見つかる一群のタンパク質と類似した配列をもっていた. DD-4は、プロリンを多く含む酸性のタンパク質をコードしており,calphotinというカルシウム結合タンパク質との間に配列の相同性が見られた.このことから,DD-4のコードするタンパク質もカルシウム結合タンパク質である可能性があり,石灰化においてどのような役割(カルシウムイオンの輸送,貯蔵,または結晶形成の促進,阻害など)を果たしてしるのか,今後詳しく調べて見たい.
小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答のピコバイオロジー的解析

分泌タンパク質は、小胞体で合成されて小胞体シャペロンによって立体構造形成をした後、ゴルジ体で糖鎖修飾などの翻訳後修飾を受けて、最終目的地へと輸送されていく。小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答は、細胞の需要に応じて小胞体とゴルジ体の機能を強化する機構である。本研究課題では、小胞体ストレス応答やゴルジ体ストレス応答の主要な制御因子であるpATF6(P)とpXBP1(U)、TFE3の立体構造を解析することによって、ヒトの小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答の分子機構を明らかにするものである。解析の結果、pXBP1(U)については、結晶構造解析に充分な量のタンパク質を調製することができた。小胞体ストレス応答とゴルジ体ストレス応答は、小胞体やゴルジ体の機能を細胞の需要に応じて増強する機構であり、その分子機構の解明は細胞生物学の根本的命題の一つである。研究代表者は、これまで哺乳類の小胞体ストレス応答やゴルジ体ストレス応答の分子機構を細胞生物学的に研究してきた。本研究課題では、これまでに同定した小胞体ストレス応答・ゴルジ体ストレス応答の制御因子を構造生物学的に解析することによって、ピコメートルレベルでの分子機構を解明することを目的としている。構造解析の対象として、小胞体ストレス応答のセンサー分子であるpATF6(P)と転写制御因子であるpXBP1(U)を選んだ。pATF6(P)は小胞体膜上に存在する膜貫通型タンパク質であり、内腔側の領域で小胞体ストレスを感知すると考えられているが、ストレス感知の分子機構はまだ解明されていない。そこで、pATF6(P)の内腔側領域を大腸菌や昆虫細胞で発現させることを試みた。低温発現型の発現ベクターやコドンバイアスを修正した大腸菌株を使用したが、発現量が非常に低く、現在発現条件を検討しているところである。pXBP1(U)は活性型転写因子pXBP1(S)の分解を促進したり、XBP1(U) mRNAを小胞体膜に結合したり、また翻訳中にリボソームトンネルと相互作用することでpXBP1(U)の翻訳速度を減速していることが知られているが、その構造的分子基盤については全く不明である。そこで、低温発現型の発現ベクターやコドンバイアスを修正した大腸菌株を使用して大量発現を試みたところ、可溶性の状態で大量に発現することができた。結晶化の条件検討として塩溶液への溶解性を調べたところ、高濃度のNaCl溶液では沈殿してくることを見出した。現在、結晶化スクリーニングプレートを用いて、結晶化の条件を更に検討している。小胞体ストレス応答の制御因子であるpXBP1(U)とpATF6(P)は、構造解析が極めて難しいため、これまでまったく構造の報告がない。そこで、本研究ではこららのタンパク質の構造解析を試みた。前年度までの研究によって、pXBP1(U)タンパク質の大量精製の方法を確立した。本年度は、得られたpXBP1(U)タンパク質を用いて結晶化条件を検索したが、構造解析に使用可能な結晶を得ることができなかった。タンパク質の精製度をより向上させることで、よりよい結晶を得ることを目的とし、精製条件の再検討を行った。pXBP1(U)タンパク質はヒスチジンタグを用いて精製しているが、これまでNi-NTAカラムへの吸着率が極めて悪かった。そこで、精製前のpXBP1(U)タンパク質抽出液をEDTA処理することで混在している金属イオンを除去し、EDTAを透析でのぞいてからNi-NTAカラムにかけることで、収量を著しく増大させることに成功した。また、イオン交換カラムやゲル濾過カラムにかけることによって、純度も著しく向上させることができた。更に、低イオン強度では凝集体を作ることがわかったので、高塩濃度にして凝集を防ぐことができるようになった。現在、様々な条件で結晶化を試みているところである。pATF6(L)については、大腸菌を用いた発現系を構築し発現を試みているが、今のところごくわずかな発現量しか得ることができていない。コドンバイアスなども修正し、低温下で発現誘導を試みているが、なかなか収量を上げることができていない。pATF6(L)自体が宿主の大腸菌に毒性を持つ可能性があるため、誘導条件を更に詳細に検討中である。また、S-S結合を形成できる大腸菌や酵母細胞や哺乳類細胞を用いたり、試験管内での翻訳系を利用することも検討している。また、pATF6(L)を分割して発現させることも考えている。細胞生物学pATF6(P)やpXBP

1(U)の構造解析はこれまでも多くの研究室で試みられてきたが、いずれも成功してこなかった。これらのタンパク質は大腸菌に対して毒性を示し、37°Cで培養すると大腸菌が死滅する。このように、pATF6(P)やpXBP1(U)の構造解析は極めて困難であるが、細胞生物学的にきわめて重要な研究対象である。大量発現や結晶化が困難であることはあらかじめ覚悟していたので、可溶性のpXBP1(U)の大量発現に成功したことは、むしろ驚きであった。分子シャペロンであるTrigger factorをpXBP1(U)に結合し、低温で発現させ、更にHistidine tagで精製したこと、コドンバイアスを修正した大腸菌を用いたことのみならず、発現誘導のタイミングを詳細に検討したことが成功の理由であった。pXBP1(U)に関しては、塩濃度などの諸条件を検討することで、結晶化への条件検討も順調に進んでいる。pXBP1(U)は極めて正に荷電していることから、高塩濃度で析出してくることはある程度予想されたが、結晶化条件の検討に極めて有効な情報であると考えている。pATF6(P)の内腔側領域に関しては、たいへんな困難が予想されたので、大腸菌だけでなく、昆虫細胞でも検討を行った。いずれの系でも今のところわずかな発現しか得られていないが、発現系の基盤は整えることができたので、今後諸条件を検討することで、少しずつ発現量を増やしていくことができるものと考えている。どうしても大量発現できない場合であっても、上記の様に少量の発現を得ることができたことで、下記に述べるX線自由電子レーザーを用いた単分子解析への道が開けたと考えている。pXBP1(U)に関しては、可溶性状態での大量発現系を確立することができたので、結晶化条件の網羅的スクリーニングを行う計画である。スクリーニング条件の検討には、本研究科の水島恒裕教授に指導を仰ぐとともに、本研究科の樋口芳樹教授が有する結晶化条件自動検討装置を借用する計画である。また、pXBP1(U)は小胞体膜に結合する疎水領域を持っていることから、3次元結晶だけでなく、2次元結晶を作製し、本研究科の宮澤淳夫研究室が有する超低温電子顕微鏡を用いた構造解析を行うことも計画している。pATF6(P)の内腔領域に関しては、大腸菌や昆虫細胞での発現条件検討を更に進める計画である。内腔領域に人工的に変異を導入したり、哺乳類細胞や試験管内でのタンパク質発現系も検討する予定である。pATF6(P)の内腔領域はジスルフィド結合を形成するシステイン残基が存在し、細胞内では酸化的な環境でフォールディングされることから、酵母や大腸菌の分泌型の発現系(酸化的な環境で発現・フォールディングさせる)を検討することも検討している。哺乳類のprotein disulfide isomeraseを共発現することで、ジスルフィド結合の形成を促進することも有効ではないかと考えている。どうしても大量発現できない場合や構造解析のための良好な結晶を得ることができない場合には、大学に隣接する理研播磨研究所のX線自由電子レーザー施設であるSACLAを利用し、単分子での立体構造解析を行う計画である。研究代表者が所属する兵庫県立大学大学院生命理学研究科は理研播磨研究所と緊密な連携関係にあり、当研究科の宮澤淳夫教授や小倉尚志教授の研究室は理研播磨研究所内にある。これらの人的・物的資源を活用し、pXBP1(U)やpATF6(P)の立体構造を明らかにする計画である。