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戦前・戦中期における社会事業に関する研究―朝鮮半島植民地時代の社会事業

本研究は、植民地時代における朝鮮半島において、わが国の植民地支配と社会事業がどのような影響をもたらしたのか、また特質をもっていたのかについて、資料・文献ならびに当時の社会事業に従事していた人々のヒストリーなどから分析することを目的としたものである。本年度は、本研究の最終年度となるので、これまで収集できた資料や文献などの分析を行うとともに、補足調査を実施し、研究成果をとりまとめた。本研究で収集した植民地時代の朝鮮半島の社会事業に関する文献・資料ならびに韓国の社会福祉研究者からの聞き取り調査の分析から、植民地時代の社会事業の特質について以下の3点が考察できた。(1)植民地政策の一環として、わが国の救護法が導入され、朝鮮総督府による救貧事業、社会事業施設が組織化された。その背景には、植民地政策の秩序維持と支配強化をはかるための日本の社会事業が手段として利用された傾向が強いことである。(2)特に民族独立運動に対して、朝鮮総督府は「宥和政策」として社会事業を位置づけていた。朝鮮における社会事業の発展に寄与するためとして、朝鮮社会事業協会の設立と「朝鮮社会事業」の発刊、日本の社会事業施設への視察を強化する事業を展開させたことはその一例である。(3)植民や政策の一環ではあったものの、朝鮮半島の歴史と文化と社会的特性の中で、朝鮮独自の社会事業のあり方を模索し実践してきた当時の朝鮮の官僚や社会事業家などの存在も大きかった。今後の研究課題としては、植民地時代の京城市(現・ソウル特別市)という中心都市ばかりでなく、地方にどのように継承され、あるいは地方独自で展開されてきたのかという視点にたって、ハングルで書かれた文献・資料の発掘と当事者への聞き取り調査などの実証的研究による考察を行う必要がある。1999年度は、主として、植民地時代における朝鮮半島の社会事業に関する文献や資料の収集と分析を行った。これまでに収集できた文献や資料は、韓国国立図書館をはじめ、慶応義塾大学付属図書館、法政大学大原社会問題研究所、日本女子大学図書館、北海道大学付属図書館、山口大学付属図書館に所属されている『朝鮮社会事業』や『朝鮮事情』『朝鮮社会事業要覧』『朝鮮総督府官報』『土幕民の生活・衛生』などである。これらの文献や資料の中で、今年度は雑誌『朝鮮社会事業』の分析を試みた。この雑誌は創刊(1923年5月)から1944年1月までほぼ毎月発行されていた。同雑誌は当初、朝鮮社会事業研究会が発行していたが、1929年1月から朝鮮総督府厚生局社会課内におかれた財団法人朝鮮社会事業協会に同研究会は改称され、さらには、1935年7月号から『同胞愛』と改題され、発行され続けられた。同雑誌は毎月3千冊発行されており、朝鮮の社会事業に関することだけではなく、日本の社会事業に関する記事や統計(調査結果など)、研究論文、法制度などについての内容が掲載されている。また、朝鮮総督府の動きが「内鮮融和」政策=植民地政策と連動して朝鮮社会事業に対する干渉となっていく経緯が明らかにされている。特に、社会事業から厚生事業へと転化する過程は、戦前・戦中の日本の社会事業の特質が、植民地支配関係にある朝鮮にも影響を与えたといえるだろう。今後の課題は、同雑誌は創刊号から20巻1月号までであるが、閲覧・複写した中には欠号や未確認の発行号もあるため、今後も発掘作業を継続したい。また、朝鮮総督府といういわば行政側の資料による公的社会事業に関する分析なので、民間社会事業などの私的社会事業からの朝鮮社会事業の特質を検討し、各文献や資料から総合的に分析したい。

本年度の研究計画は、(1)これまでに収集できた植民地時代における朝鮮半島の社会事業に関する文献や資料の補足調査、(2)韓国内の児童、高齢者、障害者、地域福祉館の資料発掘、(3)植民地時代の社会事業に従事した行政官、施設従事者などの関係者へのインタビューを実施することだった。(1)については、慶応大学図書館所蔵の雑誌『朝鮮事情』(朝鮮銀行調査部)の大正9年昭和13年までの資料を収集した。この雑誌は朝鮮銀行調査部が植民地時代の朝鮮社会情勢の概略を毎月発行したものである。朝鮮の経済・政治・文化そして社会事業について記載されている。当時の養老院、孤児院、さらに貧困者層の生活様子が把握できる資料である。また、韓国中央図書館では、『朝鮮統治論』『社会事業講習会講演録』(大正12年、昭和9年)の資料も入手できた。植民地時代の資料のマイクロ化が進みつつあるので、今後も植民地時代の社会事業に関する文献・資料の発掘の必要性がある。(2)と(3)については、主として高齢者施設の文書資料の収集を行ったが、現存するソウル養老院では当時の文書資料などが散逸しているということで今回は収集できなかった。当時を知る退職した修道女(元従事者)へのインタビューのみとなった。今後も引き続きインタビューを実施しながら、資料の発掘を行いたい。韓国では、主として朝鮮総督府が置かれていたソウル市を中心に資料調査やインタビューを実施してきたが、これまでに入手した資料から、テグ市やキョンジュ市の社会事業施設の文書収集や当時の関係者へのヒヤリングの必要性が明らかになった。さらに、今後は、大阪・堺市の「故郷の家」(在日韓国朝鮮人のための老人ホーム、設立者はモッポ市で植民地時代に孤児院を創設した沢田氏の子ども)へのヒヤリングをとおして、植民地時代の社会事業について補足したいと考えている。本研究は、植民地時代における朝鮮半島において、わが国の植民地支配と社会事業がどのような影響をもたらしたのか、また特質をもっていたのかについて、資料・文献ならびに当時の社会事業に従事していた人々のヒストリーなどから分析することを目的としたものである。本年度は、本研究の最終年度となるので、これまで収集できた資料や文献などの分析を行うとともに、補足調査を実施し、研究成果をとりまとめた。まず、本研究収集した植民地時代の朝鮮半島の社会事業に関する文献・資料ならびに韓国の社会福祉史研究者からの聞き取り調査の分析から、植民地時代の社会事業の特質について以下の3点が考察できた。(1)植民地政策の一環として、わが国の救護法が導入され、朝鮮総督府による救貧事業、社会事業団体が組織化された。その背景には、植民地政策の秩序維持と支配強化をはかるための日本の社会事業が手段として利用された傾向が強いことである。(2)特に民族独立運動に対して、朝鮮総督府は宥和政策として社会事業を位置づけていた。朝鮮における社会事業の発展に寄与するためとして、朝鮮社会事業協会の設立と「朝鮮社会事業」の発刊、日本の社会事業施設への視察を強化する事業を展開させたことはその一例である。(3)本研究で収集した現存する文献・資料のほとんどが日本語で執筆されており、しかも朝鮮総督府およびその関連機関のものという制約はあるが、植民地時代であっても、朝鮮半島の歴史と文化と社会的特性の中で、朝鮮独自の社会事業のあり方を模索し実践してきた当時の朝鮮の官僚や社会事業家などの存在も大きかったのである。
伝統芸能における身体づかいに関する研究 -日本の伝統芸能の基本的動作について-

本研究は、日本の伝統芸能において様々に語られる演技技法について実際に舞台で活躍中の役者を対象として実験研究を行い、その技法の奥義を科学的な手法で明らかにすることを目的としている。今年度主に取り上げた演技技法は"息づかい"である。筆者は既に、歌舞伎の熟練者役者(贈歴45年)や狂言の熟練度の異なる役者5名(同家の舞台歴10年55年,紫綬褒章受章者を含む)を被験者とし、基本的動作、舞、劇演技中の動作と呼吸パターンとの関係について調べ、熟練に伴う変化や、歌舞伎と狂言に共通する現象について検討を試みてきた。本年度は、新たに動作解析の要素を加え、現在検討中である。具体的には、動作の最小単元、すなわち「型」「所作」などと総称され、一つ一つに名称のついた動作単元をさらに動作相に分けた各相のつなぎ目に注目している。今までに得られた結果からは、動作を、頭部、上肢、体幹、下肢の身体部位別に区分し、それぞれの部位動作と動作相との関係に注目すると、熟練度が高く、かつ息づかいが整う傾向の強い狂言役者には、動作相に対して特に上肢と下肢とが非連携的に動く傾向が強くなる現象がみられた。またこの現象は、熟練歌舞伎役者においても同様の結果が得られそうである。今後検討を進め、より詳細な結果を導き出してゆく予定である。
線虫C.elegansをモデル動物としたp38MAPKカスケードの解析

神経細胞の機能の制御には、さまざまな細胞内シグナル伝達因子が関与することが知られている。本研究では線虫C.elegansをモデル動物として、p38MAPキナーゼを活性化するMAPKKであるsek-1の機能を解明することにより、p38MAPキナーゼカスケードの神経機能の制御における役割を個体レベルで明らかにすることを目的としている。sek-1変異株は、(1)感覚神経であるAWC細胞の非対称性の制御、(2)産卵行動、(3)雄の交尾行動の3つについて異常が見つかっている。そのうち、(1)はカルシウムシグナルの下流で、MAPKKであるNSY-1とキナーゼカスケードを構成することにより機能していることが判明した(発表論文参照)。さらに、nsy-1変異株についてsek-1変異株の他の表現型である産卵異常および雄の交尾異常の有無について調べたところ、nsy-1変異株はsek-1変異株と同様に産卵異常の表現型を示したものの、その異常はsek-1変異株ほど強くなかった。また、nsy-1変異株は雄の交尾行動には異常が見られなかった。このことは、(2)と(3)の制御については、(1)とは異なりNSY-1以外の制御因子も関与することを示唆している。SEK-1の下流で機能する因子を単離する目的で、sek-1変異株の産卵異常の表現型を抑圧するサプレッサー変異をスクリーニングし、その結果2つの変異を単離した。2つの変異は、それぞれ1番染色体およびX染色体に存在し、1番染色体上の変異は優性、X染色体上の変異は劣性であることが明らかになった。X染色体上のサプレッサー変異については、詳細なマッピングをSNP法により行い、左腕の約150kb以内の領域に限定できた。今回の研究では、sek-1は産卵や交尾行動だけでなく、感覚神経AWCでの左右非対称性の制御にも関わることが新たに明らかになった。更に、sek-1の上流で働くMAPKKKとして、哺乳動物ASK1の線虫ホモログNSY-1遺伝子およびその変異株を新たに単離・同定した。NSY-1は線虫においてカルシウムチャネルUNC-36や、カルシウムーカルモジュリン依存性キナーゼであるUNC-43の下流に位置しており、しかも細胞自律的に機能していることを遺伝学的手法により明らかにした。また、線虫内でのSEK-1のキナーゼ活性を測定する系を確立し、それを用いて野生株や各変異株での活性を生化学的に測定したところ、unc-43およびnsy-1変異株内ではその活性が著しく低下していたことから、UNC-43やNSY-1がSEK-1の上流でその活性化因子として働いていることが生化学的にも明らかになった。以上の結果から、線虫の感覚神経AWCにおいて、カルシウムシグナルがUNC-43をを介してNSY-1-SEK-1MAPキナーゼカスケードを活性化することにより、その左右非対称性を制御していることが示唆された。
現代日本の宗教動態を東アジア社会の宗教動態と比較して把握する研究

国内で実施した調査の成果と,中国,韓国,台湾などでの調査で得た知見との比較を通して(1)稲作との深い結びつき,(2)いやしをはじめとする呪術の重要性,(3)シャマニズム的要素の顕著な持続,(4)神への供物となる食物の種類とそれにまつわる信仰,(5)神道,仏教,道教,キリスト教などの既成宗教と新宗教および新新宗教が,その中で占めている位置と果たしている役割など,いくつかのもっとも肝心と思われる点に関して,現代日本の宗教事情の特徴を,共通するところの多い東アジアの諸地域と対比させ浮彫りにできた。現在では癈絶したが,もとは修験道の核を構成した冬の峰入れとそのあとの験くうべの名残りを留めている松例祭を他の祭と比較し分析することで,山伏と田の神信仰の習合の実態や,験力による浄火の操作が太陽の再生とも結びついたことなどを明らかにした。今年度の研究実績は、(1)教団訪問調査、(2)教団資料収集、(3)民俗祭祀調査、(4)東アジア祭祀活動の研究、(5)学生宗教意識の調査、の5分野にわたっている。(1)(2)は天理市天理教、生駒市生駒山麓の拝み屋、沖縄県宜野湾市いじゅん、沖縄県与那城町生天光神明宮、名古屋市神ながら教、熊本市肥州高野山、福岡県筑紫野市善隣教、鹿児島市惟神教、福岡市晴明教の9か所で実施した。(3)は沖縄竹富島種取祭、宮崎県銀鏡神楽、沖縄池間島オナリ神信仰、福岡県英彦山神社田植祭の4か所を重点的に調査した。また(4)は諏訪春雄編集『東アジアの神と祭り』(雄山閣出版、文部省刊行助成図書)に成果がもりこまれ、(5)では研究分担者の井上順孝に主要大学の学生を対象にした独自の調査がある。このような研究活動をとおして、あきらかになったことはつぎのようにまとめることができる。1)今年度の主要調査対象とした沖縄・九州地区では、新宗教といわれるものは、そのほとんどが風土にねざした民俗信仰を基盤にしている。これは、おそらく全国的にみられる一般的傾向であろう。2)新宗教の教組が女の宗教のばあい、すべて神がかりの能力を持ち、男性教祖でも妻、伯母などの肉親関係者に巫女の能力をもつものがいる。3)新宗教教団の永続性をささえる重要な要素の一つに祖先祭祀がある。4)新宗教教団の誕生と維持は教祖の強烈なカリスマ的個性による。5)新宗教教団の永続は後継者の経営能力による。今年度の研究実績は、(1)教団訪問調査、(2)教団資料収集、(3)民俗祭祀調査、(4)アジア祭祀活動の調査研究(別途資金による)、(5)研究会の開催、の5分野にわたっている。(1)(2)は広島市平等大慧会(別途資金による)、愛媛県松山市東洋最高道徳学会、徳島県川島町天地月日神明教の3箇所で実施した。(3)は諏訪市御柱祭、沖縄宮古島のパーントゥ、沖縄与那国島の神司儀礼の3つを調査した。また(4)はベトナムの巫女儀礼、中国湖南省のシャーマニズムの現地調査を実施した。(5)は(1)(3)(4)を実施したさいに、それぞれ現地で関係者をまじえて研究会をひらいた。このような調査研究をとおしてあきらかになったことはつぎの4点にまとめられる。1)今年度の主要調査地域に設定した広島市の大慧会は仏教、松山市の道徳学会は神道という既成の宗教を地盤に独自の教義を展開し、多くの信者を獲得しているのにたいし、女性教祖の神がかりの能力に依存している徳島の神明教は信者の高齢化が顕著で、教団勢力をのばすことができずにいる。2)大慧会はヨーロッパや中国にも教団勢力を伸長させており、道徳学会は病院経営で経済基盤を安定させている。教祖のカリスマ性がうしなわれてきたときに、独自の経営戦略をもっているかどうかで、その教団の命運が左右される。3)今回の主要調査対象地域の広島や四国では昨年度の沖縄・九州地域に比較して民俗信仰との結合はよわいが、教団の施設や教理のなかにたくみにとりこんで利用している。神明教は全面的に巫女儀礼に依存しており、巫女にたいする信仰が若い人たちのなかに根づかないために、教団経営に苦労している。4)中国のシャーマニズムはベトナムや韓国、日本にも類似現象をみとめることができアジア民俗信仰との十全な比較検討は今後の重要課題である。

今年度の研究実績も、昨年度と同様に、(A)教団訪問調査、(B)教団資料収集、(C)民俗祭祀調査、(D)アジア祭祀活動の調査研究(別途資金による)、(E)研究会の開催、の五分野に渡っている。(A)(B)は青森県の松緑神道大和山教団、岩手県の法師会教団、山形県の大和之宮教団の三カ所で実施した。(C)は、青森のねぶた、弘前のねぷた、羽黒山の松例祭、山形のあまはげ、熊本県阿蘇山の春祭りの5つを調査した。(D)は中国福建省の仏教、道教の遺跡、(E)は(A)(B)(D)を実施したさいに、現地で教団関係者、現地研究者を交えて研究会、検討会を行った。このような調査研究を通して明らかになったことを次にまとめる。(1)今年度は東北地区を中心に調査を実施した。東北は伝統的に仏教、ことに法華経信仰が根強い地域で新宗教教団の教義の中にもそれが取り入れられている。それが最も顕著なのは法師会教団で、法華経を仏の真実の教えとして信奉し、祖先供養と日常の人格修養を目的として教団活動を行っている。東北の詩人宮沢賢治の実践活動と通じるものがあるのは興味深い。やや教義は異にしても、仏教的実践活動を重視する点は松緑神道大和山教団にもみとめることができる。この両教団ともに教勢をのばしている。(2)女性教祖の神懸かり能力に依存して経営を行っている教団に信者の高齢化が進み、若い信者層を開拓できずに衰退化に向かっているという一般現象は、これまでの調査でも顕著であった。全く同じ傾向が大和之宮教団にもみとめられる。今年度の研究成果も、平成11年度と同様に、(A)教団訪問調査、(B)教団資料収集、(C)民俗祭祀調査、(D)アジア祭祀活動の調査研究(別途資金による)、(E)研究会の開催、の五分野にわたっていたが、最終年度にあたるので、さらにこれまでの成果のまとめと刊行のための打合せの会を開催した。(A)(B)は、栃木県栃木市の禊教真派、茨城県北茨木市の皇祖皇太神宮天津教の二か所で実施した。(C)は、栃木県の東照宮、二荒山、大平神社、茨城県の鹿島神宮、香取神宮、長野県下伊那郡の遠山の霜月祭り、おなじく新野の雪祭りの調査を実施した。また、(D)は、夏季休暇を利用して、中国青海省の少数民族蔵族、土族などの民俗祭祀の調査を実施した。(E)は、(A)(B)(C)(D)を実施したさいに、現地の関係者や研究者などをまじえて、調査対象にたいする検討会をひらいた。このような調査研究をとおしてあきらかになったことは、すでにこれまでの研究成果の確認におわることが多かったが、いくつかのあたらしい知見をくわえることもできた。それをまとめれば、(1)開明的な教団経営と同志の教団の横の連絡によって、あたらし信者の開拓につとめている禊教真派、それにたいし、竹内文書のような超古代文献とそこにしるされる超古代神話にたよって、近代的な経営努力をおこたっている皇祖皇太神宮という対照的な二つの傾向がある、(2)共同体成員の信仰と努力によって維持される日中の民俗祭祀に時間と空間を超えた顕著な共通性がみとめられる、の二点となる。
血管型エーラス・ダンロス症候群本邦例のCOL3A1変異と臨床症状重症度との相関性

血管型Ehlers-Danlos症候群(EDS)(MIM 130050)は動脈,消化管,妊娠中の子宮の破裂など突然死をもきたしうる重篤な合併症をもつ最重症型EDSで,常染色体優性遺伝性疾患である.血管型EDSはIII型コラーゲン遺伝子(COL3A1)の変異によりIII型コラーゲン分子の異常をきたし発症する.今回,我々は当教室で解析を行った本邦の血管型EDSのCOL3A1の遺伝子変異,臨床所見および培養線維芽細胞のIII型コラーゲン産生能について検討した.まずRT-PCRによってCOL3A1のcDNAのtriple-helixに相当する部位(3212bp)のシークエンスを解析し,変異が検出された場合に,さらにそれに相当あるいは関連する変異をgenomic DNAで解析した.これまでに血管型は20例を遺伝子診断した。欧米に比べてミスセンス変異に対しスプライス変異が多い傾向にあった(11/20)。遺伝子変異の型や変異の位置とIII型コラーゲン産生量や臨床症状に相関性は見られなかった。血管型Ehlers-Danlos症候群(EDS)(M-M 130050)は動脈,消化管,妊娠中の子宮の破裂など突然死をもきたしうる重篤な合併症をもつ最重症型EDSで,常染色体優性遺伝性疾患である.III型コラーゲンは少量成分としてI型コラーゲンと共存して多くの組織に分布し,血管壁,皮膚,さらに消化管などの臓器に特に多く存在するが,この血管型EDSはIII型コラーゲン遺伝子(COL3A1)の変異によりIII型コラーゲン分子の異常をきたし発症する.今回,我々は当教室で解析を行った本邦の血管型EDS 20例のCOL3A1の遺伝子変異,臨床所見および培養線維芽細胞のIII型コラーゲン産生能について検討した.まずRT-PCRによってCOL3A1のcDNAのtriple-helixに相当する部位(3212bp)のシークエンスを解析し,変異が検出された場合に,さらにそれに相当あるいは関連する変異をgenomic DNAで解析した.COL3A1の遺伝子変異はグリシンの置換変異が見られた症例が9例(45%)でexon skipなどexon junctionのsplice-site変異が見られた症例が11例(55%)であった.これは欧米における前者が2/3、後者が1/3というこれまでのデータと大きく異なり、日本人vEDSの特徴と思われ、大変興味深い結果である。一方,培養線維芽細胞のIII型コラーゲン彦生能の平均は正常の14.6%であった.臨床所見では皮膚の菲薄化・血管の透見の所見のあった症例は90%であった.顕著に見られる出血斑が90%,特徴的顔貌68%,小関節過可動94%であったが,動脈破裂・動脈解離・動脈瘤30%,消化管穿孔・消化管破裂25%であった.遺伝子変異の型やエクソン数など変異の位置と臨床所見とは相関性が認められなかった。動脈消化管の破裂など重篤な合併症は年齢が増すに従って増加するとされ,今回の解析時の年齢の平均が26.4歳と比較的低く,今後の経過観察と緊急時の対策が重要である.血管型Ehlers-Danlos症候群(EDS)(MIM130050)は動脈,消化管,妊娠中の子宮の破裂など突然死をもきたしうる重篤な合併症をもつ最重症型EDSで,常染色体優性遺伝性疾患である.III型コラーゲンは少量成分としてI型コラーゲンと共存して多くの組織に分布し,血管壁,皮膚,さらに消化管などの臓器に特に多く存在するが,この血管型EDSはIII型コラーゲン遺伝子(COL3A1)の変異によりIII型コラーゲン分子の異常をきたし発症する.今回,我々は当教室で解析を行った本邦の血管型EDSのCOL3A1の遺伝子変異,臨床所見および培養線維芽細胞のIII型コラーゲン産生能について検討した.まずRT-PCRによってCOL3A1のcDNAのtriple-helixに相当する部位(3212bp)のシークエンスを解析し,変異が検出された場合に,さらにそれに相当あるいは関連する変異をgenomic DNAで解析した.これまでに血管型22例を遺伝子診断しえた。欧米に比べてスプライス変異が多い傾向にあった(11/22)。症例数が少ないためバイアスがかかっている可能性があり、より多数例を検討する必要がある。

また、重症合併症の頻度が低い傾向にあったが、診断年齢が低いためである可能性がある。今後合併症の出現が増加することが懸念され、患者・主治医への指導が重要と考えられた。血管型Ehlers-Danlos症候群(EDS)(MIM 130050)は動脈、消化管,妊娠中の子宮の破裂など突然死をもきたしうる重篤な合併症をもつ最重症型EDSで,常染色体優性遺伝性疾患である。III型コラーゲンは少量成分としてI型コラーゲンと共存して多くの組織に分布し,血管壁,皮膚,さらに消化管などの臓器に特に多く存在するが,この血管型EDSはIII型コラーゲン遺伝子(COL3A1)の変異によりIII型コラーゲン分子の異常をきたし発症する.今回,我々は当教室で解析を行った本邦の血管型EDSのCOL3A1の遺伝子変異,臨床所見および培養線維芽細胞のIII型コラーゲン産生能について検討した.まずRT-PCRによってCOL3A1のcDNAのtriple-helixに相当する部位(3212bp)のシークエンスを解析し,変異が検出された場合に,さらにそれに相当あるいは関連する変異をgenomic DNAで解析した.これまでに血管型は20例を遺伝子診断した。欧米に比べてスプライス変異が多い傾向にあった(11/20)。症例数が少ないためバイアスがかかっている可能性があり、今後もより多数例を検討する必要がある。また、重症合併症の頻度が低い傾向にあったが、診断年齢が低いためである可能性が高い。
プロセス産業における工程間・組織間調整能力の研究

研究2年目である平成30年度は、これまでの文献・資料の収集・調査、企業の工場及び本社・事業部等の実地調査を踏まえて、研究課題に答えるための、より深い実地調査を行った。具体的には、企業の工場及び本社・事業部等の実地調査を、鉄鋼産業9回、化学産業2回、醸造産業3回行った。さらに、以上の実地調査などの知見を研究成果としてまとめつつ、調査成果の発信を積極的に行った。具体的な成果としては、雑誌論文2本、学術書の一部を出版し、学会報告9回を行った。平成30年度も、おおむね実施計画通りの成果が得られた。各産業において高級製品を生産する際、工程間で操業パラメータ調整の必要性と、それを実現するための工程間コミュニケーションの手法が分かった。特に、鉄鋼産業では、自動車用鋼板などの高級綱を生産するための組織間コミュニケーション手法に、主にフィードバックとフィードフォワードがあり、前工程の操業データ(公差など)を参考に、後工程でパラメータを調整する能力が一貫品質管理において非常に重要であることが分かった。例えば、自動車用鋼板の溶融亜鉛メッキ鋼板を生産するためには、各生産工程における厳しい公差管理が求められる。理想的には範囲概念の公差ではなく、ピンポイントの操業目標が実現できればいいが、現実的には公差の幅をいかに狭くするかが、管理目標となることが多い。前工程で公差をクリアした製品が後工程に移動するが、後工程に届いた製品の品質が、前工程の公差をどれぐらいの水準でクリアしたのかについて理解することも、一貫品質管理の重要な管理ポイントとなる。例えば、製鋼工程の公差をギリギリでクリアした製品が、熱延工程もギリギリの水準でクリアした場合、最後のメッキ工程で品質不良になる可能性が高い。操業データを前工程と後工程が共有し、前工程での品質課題を、後工程で修正する作業をするためには、組織間連携が重要である。おおむね順調に進展し、今年度もさらに体系的な研究を行う予定である。第一点目に、当初計画した実地調査は、おおむね計画通りに行った。そして前年度につくった企業担当者とのチャネルを十分活用して、フォローアップ調査に加え、研究成果などに関する意見交換も行った。第二点目に、企業現場の調査を重ねることで、各産業・企業における工程間調整、組織間調整の実態がより明確に見え、これに従って各事例をまとめ、一般化の可能性が見えてきた。ここまでの内容を国内、国際学会で発表し、コメントなどを研究に反映している。2019年度の前半には、前年度につづき、技術を導入した新興国企業の製造拠点に対する調査を実施する。鉄鋼産業に関しては、一貫品質管理システムの導入プロジェクトを進めている韓国の現代製鉄唐津製鉄所を訪問し、プロジェクトメンバーを対象にヒアリング調査を行う。調査の焦点は、工程間、組織間の調整能力を構築していくプロセス(本研究の第2の課題)を明らかにすることであり、工程間のコミュニケーション(フィードバック、フィードフォワード)などを中心に調べる。同様の調査を、化学産業、醸造産業でも行い、産業間比較分析を行う。研究1年目である平成29年度は、文献・資料の収集・調査を行いつつ、担当者とのヒアリングと企業の工場及び本社・事業部等の実地調査を行った。具体的に、企業の工場及び本社・事業部等の実地調査を、鉄鋼産業12回、化学産業3回、醸造産業4回行った。具体的な成果としては、雑誌論文2本を出版し、学会報告6回を行った。平成29年度は、おおむね実施計画通りの成果が得られた。各産業において高級製品(高付加価値製品)を生産する際、現場レベルで、操作パラメーターの数、通る工程の数などに差が存在することが分かった。特に、鉄鋼産業では、高級綱を生産するための組織間コミュニケーションのやり方、そして一貫品質管理を担当する組織のあり方の面で、企業ごとに大きな差が存在することが分かった。例えば、鉄鋼メーカーが生産できる最高級製品の一つである自動車用鋼板の溶融亜鉛メッキ鋼板をつくるためには、最終工程のメッキ工程だけではなく、前工程の製鋼工程、熱延工程、冷延工程が連携する必要があり、従って複数工程を跨った管理が求められる。その管理には複数工程間の調整負荷がかかるため、別組織を置くことが多く観察された。各工程を熟知しているベテランのエンジニアたちが、その組織に所属し、高級綱生産のための工程間調整、組織間調整をモニタリングしながら、適宜指示をすることが分かった。このような工程間・組織間調整能力は、単に設備に依存するよりは、各工程の操業知識と工程間の操業知識を持つ組織に依存する部分が大きいことが分かった。おおむね順調に進展し、今年度もさらに深い研究を行う予定である。第一点目に、当初計画した実地調査はおおむね計画通りに行った。フォローアップ調査ができるように企業担当者とのチャネルを確実につくり、研究のフレームワークなどに関する意見交換も行っている。第二点目に、研究フレームワークをベースに、各産業・企業における工程間調整、組織間調整の実態がより明確に見え、これに従って各事例をまとめた。ここまでの内容を平成30年5月の国際学会でも発表し、コメントなどを研究に反映している。

具体的には、企業の工場及び本社・事業部等の実地調査を、鉄鋼産業9回、化学産業2回、醸造産業3回行った。さらに、以上の実地調査などの知見を研究成果としてまとめつつ、調査成果の発信を積極的に行った。具体的な成果としては、雑誌論文2本、学術書の一部を出版し、学会報告9回を行った。平成30年度も、おおむね実施計画通りの成果が得られた。各産業において高級製品を生産する際、工程間で操業パラメータ調整の必要性と、それを実現するための工程間コミュニケーションの手法が分かった。特に、鉄鋼産業では、自動車用鋼板などの高級綱を生産するための組織間コミュニケーション手法に、主にフィードバックとフィードフォワードがあり、前工程の操業データ(公差など)を参考に、後工程でパラメータを調整する能力が一貫品質管理において非常に重要であることが分かった。例えば、自動車用鋼板の溶融亜鉛メッキ鋼板を生産するためには、各生産工程における厳しい公差管理が求められる。理想的には範囲概念の公差ではなく、ピンポイントの操業目標が実現できればいいが、現実的には公差の幅をいかに狭くするかが、管理目標となることが多い。前工程で公差をクリアした製品が後工程に移動するが、後工程に届いた製品の品質が、前工程の公差をどれぐらいの水準でクリアしたのかについて理解することも、一貫品質管理の重要な管理ポイントとなる。例えば、製鋼工程の公差をギリギリでクリアした製品が、熱延工程もギリギリの水準でクリアした場合、最後のメッキ工程で品質不良になる可能性が高い。操業データを前工程と後工程が共有し、前工程での品質課題を、後工程で修正する作業をするためには、組織間連携が重要である。おおむね順調に進展し、今年度もさらに体系的な研究を行う予定である。第一点目に、当初計画した実地調査は、おおむね計画通りに行った。そして前年度につくった企業担当者とのチャネルを十分活用して、フォローアップ調査に加え、研究成果などに関する意見交換も行った。第二点目に、企業現場の調査を重ねることで、各産業・企業における工程間調整、組織間調整の実態がより明確に見え、これに従って各事例をまとめ、一般化の可能性が見えてきた。ここまでの内容を国内、国際学会で発表し、コメントなどを研究に反映している。平成30年度の前半には、一部の日本企業の調査を進める同時に、海外から技術を導入した新興国企業の調査を実施する。日本企業の調査では、組織間調整のためのコミュニケーションに注目し、新興国企業の調査では、工程間・組織間調整能力の構築に注目する。平成30年度の後半では、これまで実施した調査を踏まえて、鉄鋼産業などのプロセス産業における工程間調整、組織間調整の実態を、技術と組織の面でより体系的に明らかにし、工程間、組織間の「調整能力」と「生産現場のパフォーマンス」の対応関係を明らかにする。加えて調査成果を国際的に発信していく。2019年度の前半には、前年度につづき、技術を導入した新興国企業の製造拠点に対する調査を実施する。鉄鋼産業に関しては、一貫品質管理システムの導入プロジェクトを進めている韓国の現代製鉄唐津製鉄所を訪問し、プロジェクトメンバーを対象にヒアリング調査を行う。
扁平上皮癌関連抗原TA-4のHeterogeneityとその臨床的意義

本研究の当初計画に基づき次の如き成績が得られた.1.扁平上皮癌組織よりTA-4亜分画を精製し,モノクローナル抗体を作製したが,その中では酸性TA-4に反応性の強いMab-317,中性TA-4との反応性の強いMab-21,あるいはいずれの亜分画とも同程度に反応するMab-13やMab-27が注目された.2.TA-4亜分画のうちのmainの亜分画の一つ(SCC抗原)につきアミノ酸組成が明らかにされた.更にパルスラベル実験やレクチン・アフィニティー・クロマトグラフィーの成績よりTA-4亜分画の中には糖を含有しているものがあることが示された.3.Mab-21とMab-317を用いてTA-4亜分画の局在を検討した.Mab-21で染色される中性TA-4は正常扁平上皮の中層細胞あるいは扁平上皮癌細胞に広く検出されたが, Mab-317で染色される酸性TA-4活性は腫瘍組織の中でも特に正常組織に近い周辺部分で増加しているとの興味ある結果が得られた.4.モノクローナル抗体を用いた新しいRIA法が確立された.この測定系は二種類のモノクローナル抗体を用いたサンドイッチ法で,測定感度も従来法の1.5ng/mlから0.1ng/mlへと大きく改善された.5.扁平上皮癌患者の頚管分泌液中の総TA-4活性(あるいは酸性/中性TA-4比)は対照例の値より高値を示す例が多かったが,良性疾患あるいは妊婦でも高値を示す例もあり,その臨床応用については更に検討が必要と考えられた.また唾液中にも極めて高濃度のTA-4活性が認められ, TA-4測定に際して十分な注意が必要と考えられる.本研究の当初計画に基づき次の如き成績が得られた.1.扁平上皮癌組織よりTA-4亜分画を精製し,モノクローナル抗体を作製したが,その中では酸性TA-4に反応性の強いMab-317,中性TA-4との反応性の強いMab-21,あるいはいずれの亜分画とも同程度に反応するMab-13やMab-27が注目された.2.TA-4亜分画のうちのmainの亜分画の一つ(SCC抗原)につきアミノ酸組成が明らかにされた.更にパルスラベル実験やレクチン・アフィニティー・クロマトグラフィーの成績よりTA-4亜分画の中には糖を含有しているものがあることが示された.3.Mab-21とMab-317を用いてTA-4亜分画の局在を検討した.Mab-21で染色される中性TA-4は正常扁平上皮の中層細胞あるいは扁平上皮癌細胞に広く検出されたが, Mab-317で染色される酸性TA-4活性は腫瘍組織の中でも特に正常組織に近い周辺部分で増加しているとの興味ある結果が得られた.4.モノクローナル抗体を用いた新しいRIA法が確立された.この測定系は二種類のモノクローナル抗体を用いたサンドイッチ法で,測定感度も従来法の1.5ng/mlから0.1ng/mlへと大きく改善された.5.扁平上皮癌患者の頚管分泌液中の総TA-4活性(あるいは酸性/中性TA-4比)は対照例の値より高値を示す例が多かったが,良性疾患あるいは妊婦でも高値を示す例もあり,その臨床応用については更に検討が必要と考えられた.また唾液中にも極めて高濃度のTA-4活性が認められ, TA-4測定に際して十分な注意が必要と考えられる.今年度の研究目標は下記の如くであった。1.TA-4亜分画の中でも特に扁平上皮癌に関連性の強い酸性TA-4について、レクチン吸着性などを中心にその性質を検討する。2.細胞における生合成に影響を与える因子につき検討する。3.酸性TA-4に特異的なモノクローナル抗体を作製する。4.臨床的には初期癌の診断率を高めるため、各種体液(特に頚管分泌液)に出現するTA-4分画の存在様式につき検討し、癌診断への応用性を明らかにすることである。以上の目的に添って得られた成績は次の如くである。1.TA-4亜分画を精製する原料としてヌードマウスに移植可能な細胞株を樹立し、継代移植して腫瘍組織を得た。2.TA-4亜分画の性状につき各種レクチンを用いて検討した結果、PHA-Eレクチンに吸着性を有する酸性TA-4を発見した。3.酸性TA-4に対して特異性の高いモノクローナル抗体を得た。本抗体を利用した免疫組織染色(ABC法)でTA-4の組織内局在を検討した結果、酸性TA-4活性は扁平上皮癌組織に多く、正常扁平上皮ではほとんど認められないことが確認された。現在このモノクローナル抗体を用いたRIA系を検討中である。4.子宮頚管分泌液のTA-4亜分画を等電点電気泳動法にて分析し、子宮頚癌では酸性TA-4/中性TA-4の割合が高い傾向を示すことを確認した。現在、検体の採取法など更に実用的な手技を検討中である。5.TA-4生合成に影響を与える因子については、扁平上皮癌培養株を用いて、現在検討中である。
ふく射性ガスの非灰色性質を利用した高効率熱交換器の開発

1.理論的研究:平行吸熱面で囲まれた流路内の二次元層流流動系を対象とし、吸熱面間の中間位置に固体面を入れた場合の伝熱促進効果を数値解析により明らかにした。気体としては炭酸ガス・水蒸気および燃焼ガスを対象とし、一様温度で入口より流入するものとする。初めに炭酸ガスを対象とした数値解析を行ない、固体面を配することにより吸熱面への伝熱量は入口近傍を除き約80%増加すること、この伝熱促進効果は主としてふく射伝熱促進によるものであることを明らかにした。また主として対流ふく射変換による伝熱促進を表わす灰色ふく射解析結果は入口近傍を除き高々30%の伝熱促進効果を予測するにすぎず、気体の非灰色性質に基づくふく射伝熱効果が主要な役割を果たしていることが明らかとなった。水蒸気、燃焼ガスの場合にも同様な伝熱促進効果が予測され、水蒸気の場合には約60%、燃焼ガスの場合には約70%の伝熱促進効果が期待できる。2.実験的研究:ふく射性ガスの非灰色性質に基づくふく射伝熱促進効果を実験的に検証するために実験的研究を行なった。燃料の都市ガスおよび空気は燃焼部で燃焼し、生成された高温燃焼ガスは絞り部を経て測定部に導入される。測定部は10cm×50cmの長方形断面を有しており、側壁はすべて水冷されている。燃焼ガスの温度測定はPt/Pt13%Rh熱電対により行ない、熱電対からのふく射損失に対して補正を施した。また燃焼ガス組成の測定はガスクロマトグラフにより行なった。吸熱面、固体面ともピロマルク塗装した黒体面の場合について、冷却水流量と冷却水温度上昇から伝熱量を求め、伝熱促進効果の測定を行なったところ、理論で予測される伝熱促進効果が得られ、ふく射性ガスの非灰色性質を利用した伝熱促進効果を実験的に検証することができた。
心筋細胞における虚血耐性因子としてのコネキシン43の役割

平成1819年度の主要な研究知見は以下の14のように総括することができる。1)心筋虚血はギャップ結合蛋白であるコネキシン43(Cx43)とSrc,PKC,p38MAPKとの結合を増加させるが、虚血プレコンデイショニング(PC)はCx43-PKC-εの結合を促進、Cx43-p38MAPK-α複合体形成を抑制、Cx43-Src結合には有意な影響を与えない。2)コネキシン43(Cx43)は、PKC-εとの結合とそのSer368リン酸化によりギャップ結合透過性を抑制し、虚血再灌流障害の心筋間伝播を抑制する。3)PCによるp38MAPK-αの活性抑制ならびにCx43-p38MAPK-α複合体形成の抑制は、PKC-εによるギャップ結合透過性の抑制を部分的に解除する役割を有し、虚血早期における心筋細胞の電気的結合を維持する役割を担っている可能性がある。4)D-Ala^2-D-Leu^5-enkephalin(DADLE,300nM)を用いたδ-オピオイド受容体刺激は心筋細胞におけるAktならびにGSK-3βリン酸化をもたらし、酸化ストレスによる細胞死を抑制する。これらのDADLEの効果はsiRNAを用いてCx43の発現を抑制することにより阻害される。5)IGF受容体刺激によるPI3K-Akt-GSK-3β経路の活性化ならびに細胞保護効果にはコネキシン43発現抑制の影響が全く認められない。6)δ-オピオイド受容体と同様にG蛋白連関受容体であるエンドセリン受容体刺激によるPI3K-Akt-GSK-3β経路の活性もCx43の発現抑制によって阻害される。以上の成績から、心筋虚血によるギャップ結合機能調節にはCx43を標的としたSrc,PKC-ε,p38MAPKがそれぞれ特徴的に関与するが、PCによるギャップ結合の抑制にはPKC-εとp38MAPKが拮抗的に作動していること、またCx43にはギャップ結合蛋白以外の機能として、G蛋白連関受容体によるPI3K-Akt活性化に必須の役割を担っていることが明らかとなった。このようにCx43には細胞障害の伝播ならびにその抑制を担う分子としてまた細胞保護シグナルの伝達する分子としての重要性があると考えられる。心筋細胞の虚血耐性を増強する操作である虚血プレコンディショニング(PC)がギャップ結合透過性を抑制する機序とそれに関わる蛋白キナーゼについて、ラットの摘出灌流心標本からの心筋サンプルを用いて検討した。左室心筋の介在板分画を調整し、ギャップ結合蛋白であるコネキシン43(Cx43)と蛋白キナーゼとの蛋白蛋白結合を解析した。35分の虚血の経過で、Cx43はprotein kinase C (PKC)、p38MAP kinase-α(p38MAPK-α)、Src kinase (Src)との結合量が有意に増加した。一方、p38MAPK-βとCx43との蛋白蛋白結合は検出されなかった。PCは虚血におけるCx43とSrcとの結合に影響を与えなかったが、Cx43とPKCとの結合を増加させる一方、Cx43とp38MAPKとの結合をむしろ抑制した。

PCによるCx43-PKC複合体形成にp38MAPK阻害薬(SB203580)は影響を与えなかったが、p38MAPK阻害薬単独でCx43-p38MAPK複合体形成が抑制された。またPCを行った心筋ではCx43-p38MAPK複合体におけるp38MAPK活性も低下していることが観察された。次に、PCによるギャップ結合透過性の抑制へのPKC-ε、p38MAPKの関与を検討するために、虚血時のギャップ結合透過性をLucifer yellowをtracerとして評価した。PCによるギャップ結合透過性の抑制はPKC-εの特異的阻害薬(PKC-ε-translocation inhbitory peptide)により阻害されたが、p38MAPK阻害薬には有意な影響を受けなかった。以上の結果より、心筋細胞保護に寄与するギャップ結合透過性の抑制はp38MAPK-αとは独立したPKC-εとCx43の結合によるCx43リン酸化によるものであると考えられた。PCによるp38MAPK-αの活性抑制ならびにCx43-p38MAPK-α複合体形成の抑制が心筋虚血耐性に及ぼす影響とその機序については次年度の検討課題とした。心筋細胞の虚血再灌流障害に対する耐性の成立にコネキシン43が関与する可能性とその機序を、心筋細胞由来のH9c2細胞を用いて検討した。D-Ala^2-D-Leu^5-enkephalin (DADLE,300nM)を用いたδ-オピオイド受容体刺激、IGF-1(10nM)を用いたIGF受容体刺激は、いずれもH9c2細胞においてPI3K-Aktの活性化ならびにglycogen synthase-3β(GSK-3β)リン酸化を惹起し、虚血再灌流障害を擬似するために用いた過酸化水素負荷による細胞壊死ならびにアポトーシスを有意に抑制した。siRNAを用いてコネキシン43の発現を約80%抑制すると、δ-オピオイド受容体刺激によるAktならびにGSK-3βリン酸化、過酸化水素負荷による細胞死の抑制はほぼ完全に阻害された。一方、IGF受容体刺激によるPI3K-Akt-GSK-3β経路の活性化ならびに細胞保護効果にはコネキシン43発現抑制の影響が全く認められなかった。共焦点レーザー顕微鏡を用いた免疫細胞染色ではH9c2細胞の細胞膜ならびにミトコンドリアにコネキシン43の存在が示され、いずれもコネキシン43siRNAにより発現が抑制されていた。これらの成績よりコネキシン43は細胞保護シグナルであるPI3K-Akt-GSK-3β経路のうちG蛋白連関受容体を介したものの活性化に特異的に寄与していると考えられた。こうした役割を担っているコネキシン43が細胞膜上のヘミチャネルであるのか、ミトコンドリアのコネキシン43であるのかについて細胞膜非透過性のギャップ結合阻害薬であるGAP27を用いて現在解析中である。
ＡＣＣ合成酵素の脱リン酸化を介してエチレン生合成を調節するホスファターゼの解析

エチレン生合成経路の鍵となるACC合成酵素は、プロテインキナーゼCDPKとMAPKのそれぞれによってリン酸化される。ACC合成酵素のリン酸化・脱リン酸化はACC合成酵素の細胞内の安定化には必要である。ACC合成酵素はPP2A型のプロテインホスファーターゼが脱リン酸化することを明らかにしたので、ACC合成酵素を認識するBサブユニットの同定を行い、B"タイプを候補として同定した。エチレンは果実の成熟、野菜・花卉の鮮度保存など園芸作物に大きな影響を与える。エチレン生合成経路の鍵となるACC合成酵素は、リン酸化によって安定化され、脱リン酸化によって不安定化(分解)される。本研究では、ACC合成酵素のリン酸化・脱リン酸化を介した翻訳後制御機構を解析することによって、エチレン生成調節機構を明らかにする。ACC合成酵素の脱リン酸化に関わると推測されているProteinPhosphatase2A(PP2A)は、3つのサブユニットA、B、Cから成り、それぞれが複数の遺伝子群から構成され、構成サブユニットの組合せにより多種多様なPP2Aが存在する。これらサブユニットのうち、Bサブユニットが基質認識に関わっており、ACC合成酵素を脱リン酸するPP2Aの同定を試みた。シロイヌナズナには16種のBサブユニット遺伝子が存在する。エチレンを過剰生成するシロイヌナズナの突然変異体rcnlは、PP2Aの1つのAサブユニット(RNCl)を欠失している。PP2Aに特異的な阻害剤ミクロシスチン-LRをリガンドにしたアフィニティカラムを用いて、野生型と突然変異体rcnlからPP2Aをそれぞれ単離した。iTRAQ法により質量分析計を用いて、ACC合成酵素を認識するBサブユニットとしてB"タイプを候補として同定した。この選抜されたB"タイプとACC合成酵素の結合を、酵母のtwo-hybrid systemで検討したが、同定できなかった。再度、条件を変えて解析する必要がある。ACC合成酵素の脱リン酸化に関わると推測されているProtein Phosphatase 2A (PP2A)は、3つのサブユニットA、B、Cから成り、それぞれが複数の遺伝子群から構成され、構成サブユニットの組合せにより多種多様なPP2Aが存在する。エチレンを過剰生成するシロイヌナズナの突然変異体rcn1は、PP2Aの1つのAサブユニット(RNC1)を欠失している。PP2Aに特異的な阻害剤ミクロシスチン-LRをリガンドにしたアフィニティカラムを用いて、野生型と突然変異体rcn1からPP2Aをそれぞれ単離した。Bサブユニットが基質認識に関わっており、ACC合成酵素を脱リン酸するPP2Aの同定を試みた結果、iTRAQ法により質量分析計を用いて、ACC合成酵素を認識するBサブユニットとしてB"タイプを候補として同定した。再度、条件を変えて質量分析計で解析したが、B"サブユニットの同定は再現しなかった。ミクロシスチン-LRをリガンドにしたアフィニティカラムを用いて解析してきたが、Aサブユニットを基にPP2Aを単離して解析する計画を立てた。Aサブユニットには3種類あるので、それぞれ異なるtagを、Aサブユニットに付けた遺伝子を導入したシロイヌナズナを作出し、次の同定を試みている。これまでの研究から、野生型と突然変異体rcn1からPP2Aをそれぞれ単離した。Bサブユニットが基質認識に関わっており、ACC合成酵素を脱リン酸するPP2Aの同定を試みた結果、ACC合成酵素を認識するBサブユニットとしてB"タイプを候補として同定した。この結果を基にトマトのゲノムデータベースから、シロイヌナズナのPP2A各サブユニットに類似するトマトのサブユニットを検索してcDNAを単離した。

cDNAを鋳型にしてin vitrotranscription/translationによって各サブユニットを合成した。同様にACC合成酵素SlACS2を合成した。in vitro translationの時にPP2AのサブユニットにはFLAG-tagを付け、SlACS2にはビオチンを付加した。これらを使い、2分子の結合を検出できるAlphaScreen法を用いて解析したが、著しい結合は検出できなかった。AサブユニットとCサブユニットは結合するが、Bサブユニットが結合するためにCサブユニットのC末端がメチル化される必要があるという報告がある。この点を考慮して解析しなくてはいけないが、次の機会に試みる。26年度が最終年度であるため、記入しない。植物生化学26年度が最終年度であるため、記入しない。予定通り計画に従って研究は行っているが、単離されたPP2AのBサブユニットはtwo-hybridsystemでは予想通りの成果にならず、同定されていない。予定通り計画に従って研究は行っているが、単離されたPP2AのBサブユニットはtwo-hybridsystemでは予想通りの成果にならず、同定されなかった。そこで異なるtagを3種類のAサブユニットに付けた遺伝子を導入したシロイヌナズナを作出したが、PP2A単離ための試料(種子)の調製に時間がかかっているので、まだ結果は出ていない。two-hybrid systemの条件を変えて、再度解析する。PP2Aをミクロシスチン-LRで単離したが、Aサブユニットの抗体を用いて、さらに単離を試み質量分析計で解析する。新たなシロイヌナズナ形質転換体を用いてPP2AのBサブユニットを単離する。同時にシロイヌナズナのRCN1のホモログのトマト遺伝子に変異の入っているトマトを用いて同じ解析を行う。さらに単離したPP2Aをこれまでと異なる高感度のLC-MS質量分析計を用いて解析する。次年度使用額は23,540円であり、実支出額で年度内の研究に問題なく執行できた。次年度に継続されるため、年度内に23,540円を消費する必要は考えられなかった。次年度使用額23,540円を加算して、今年度の研究を行うことに特別の計画を立てるほどの金額ではなく、問題はなく執行できる。
構造生物学的手法によるユビキチン-プロテアソーム系の分子認識および作動機構の解析

細胞周期の進行などに関わるユビキチンリガーゼ(E3)であるSCF複合体は、ユビキチン様タンパク質であるNedd8により修飾され、活性化されることが知られている。私は構造生物学的手法を用いてNedd8化修飾によるE3の活性化機構の解明を目指した。NMR解析により、Nedd8はIle44を中心とする疎水性表面を用いてUbc4と相互作用する一方で、Nedd8自身のE2であるUbc12とNedd8は相互作用しないことを明らかにした。Nedd8はUbc4のN末端セグメントに結合することを示した。興味深いことに、Ubc4分子表面上でNedd8結合部位とE3結合部位は隣接していることが判明した。さらに両者の相互作用部位をアラニンに1残基置換した各種変異体を作成し、変異が基質のユビキチン化に及ぼす影響を解析した。その結果、Nedd8変異体およびUbc4変異体がともにSCF複合体への活性化能が損なわれていることを明らかにした。以上の成果をもとに、ひとたびNedd8修飾を受けたSCF複合体はNedd8自身のE2であるUbc12を排除しつつ、Rbx1と協働してユビキチンのE2であるUbc4を選択的にリクルートすることにより、高いE3活性を獲得しているというモデルを提唱する。さらに、ユビキチンと共有結合を介して連結したUbc4 (Ubc4-Ub)の構造解析を行った。Ubc4の85番目のシステイン残基をセリンに置換した変異体を用いて、E1を用いた酵素反応によりユビキチンをエステル結合を介して連結させ、Ubc4-Ub複合体を調製した。蒸気拡散法によりUbc4-Ub複合体の結晶化に成功した。この結晶を用いて大型放射光施設を利用してX線回折実験を行い、その原子座標を2.2Åの分解能で決定した。本研究により、ユビキチン鎖形成反応の構造的基盤を与えることができた。本研究は、パーキンソン病、ポリグルタミン病などの神経変性疾患の原因遺伝子産物について構造生物学的研究を展開し、疾患の発症機序に構造的基盤を与えることを目的とした。常染色体劣性若年性パーキンソン症候群(AR-JP)の原因遺伝子産物であるparkinの分子認識機構を明らかにするため、バキュロウィルスを用いた発現系から得られた全長parkinの安定同位体標識法の開発を行った。更に、優性遺伝性パーキンソン病の原因遺伝子産物α-synucleinの構造解析も展開した。本研究によりparkinおよびα-synucleinの分子認識機構を原子レベルで解明する基盤が整ったポリグルタミン病の一つであるマシャド・ジョセフ病の原因遺伝子産物であるataxin-3(Atx-3)はN末端側にJosephin(Jos)ドメイン、C末端側に3つのポリユビキチン結合モチーフ(Pubh)を有する。本研究では、Atx-3の分子認識機構を明らかにするために、NMRや表面プラズモン共鳴法(SPR)を用いてAtx-3の相互作用解析を行った。MR解析により、Josドメインが6本のαヘリックスと6本のβシートから構成されていることを明らかにした。Ubとの相互作用解析の結果、JosドメインはPhe28、Ser29、Va186、Trp87周辺を用いてUbのC末端付近およびLys48付近に対して結合していることが明らかになった。Josドメインのこれら4つのアミノ酸残基は活性部位に空間的に近接してUbとの結合に必要なサブサイトを形成していると考えられる。次に、Atx-3の3つのPubhモチーフが基質認識においてどのように機能しているのかを明らかにするため構造機能解析を行った。NMR解析により、Atx-3の3つのPubhモチーフが、αヘリックスを形成していることを明らかにした。更にSPRを用いてhHR23a-Ub1との相互作用解析を行い、3つのPubhモチーフのなかでも特にPubh2が高い親和性を有していることを示した。また、SPR解析の結果、Pubh3とポリQ鎖がhHR23-Ub1とAtx-3との結合を阻害していることが判明した。この研究により、Atx-3の3つのPubhモチーフは基質認識において使い分けがされており、更に基質との結合は分子間相互作用により調節されているという新たな知見が得られた。本研究は、アルツハイマー病、パーキンソン病、ポリグルタミン病などの神経変性疾患の原因遺伝子産物について構造生物学的研究を展開し、疾患の発症メカニズムに構造的基盤を与えることを目的とした。Ataxin-3はポリグルタミン病の1つであるマシャド・ジョセフ病の原因遺伝子産物であり、N末端側に脱ユビキチン活性を有するJosephinドメインを配置し、C末端側にポリグルタミン鎖および3つのユビキチン(Ub)結合モチーフを有する373残基からなるタンパク質である。本研究ではataxin-3の分子認識機構を明らかにするために、2つのUbがイソペプチド結合により結合したダイユビキチン(Ub2)とJosephinドメインとの相互作用をNMRを用いて解析した。その結果、Ub2のproximalユニットのC末端はJosephinドメインの活性部位近傍に配向していることが示され、Josephinドメインがendo型の脱ユビキチン化酵素であることが示唆された。ユビキチンシステムは複数の酵素群の調和によって細胞内の恒常性を維持している。