hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
mRNA局在と翻訳制御における細胞質RNP顆粒動態

細胞の極性は,しばしばmRNAの細胞質内局在と,RNA局在と連携した翻訳制御によって確立される。このようなRNA局在と翻訳制御との連携機構の解明は,発生・細胞生物学上の最重要課題の1つである。しかし,その分子基盤はいまだ良くわかっていない。本研究では,細胞極性,RNA局在,翻訳制御,RNP動態制御を包括的に研究する上で理想的なモデル系の一つである,ショウジョウバエ生殖質形成を対象として,RNAレベルで行われる制御の普遍的分子基盤の実体解明を目指す。生殖質とは,生殖細胞形成分化に係わる母性RNAと蛋白質が集積した細胞質領域である。この過程では,oskar(osk)RNAの翻訳制御と卵母細胞後極への局在,Oskを核としたRNPアッセンブリーとその維持が重要である。oskRNP複合体の新規構成タンパク質として同定したEdc3について,突然変異体を作成し解析を進めた。その結果,Edc3は既同定のosk翻訳制御因子やモーター蛋白質との遺伝学的相互作用を示し,足場タンパク質(scaffold)として,構成タンパク質間の相互作用の安定化や,因子の入れ替わりを仲立ちする機能を持っていると推定された。さらに,生殖質の繋留に異常を示す突然変異体としてmon2を同定した。Mon2は,ゴルジ体及びエンドソーム膜上に局在することを明らかにした。さらに,Mon2がアクチン重合因子であるCappuccino, Spireと複合体を形成していること,これら重合因子の活性を制御するRho1の卵母細胞後極側への蓄積に関わっていることを見出した。一方,Oskがエンドゾーム経路を活性化することを見出し過去に報告してきた。以上の結果から,Mon2はOskによって活性化されるエンドゾーム上において,アクチン骨格のリモデリングを制御することで,生殖質の卵母細胞後極皮層への繋留を指揮していると考えられた。細胞の極性は,しばしばmRNAの細胞質内局在と,mRNA局在と連携した翻訳制御によって確立される。生殖質とは,生殖細胞形成分化に係わる母性RNAとタンパク質が集積した細胞質領域であり,生殖顆粒と呼ばれる特異的RNPが形成される。この過程では,oskar(osk)mRNAの翻訳制御と卵母細胞後極への局在,Oskを核としたRNPアッセンブリーとその維持が重要である。その結果,edc3を欠く卵母細胞において,oskmRNAやOskタンパク質の異所的集積が観察された。さらに,Edc3は既同定のosk翻訳制御因子と生化学的,及び遺伝学的に相互作用を示し,足場タンパク質(scaffold)として,構成タンパク質間の相互作用の安定化や,因子の入れ替わりを仲立ちする機能を持っていると推定された。一方,生殖質の卵母細胞後極への局在に異常を示す突然変異体原因遺伝子として同定したmon2に関しても解析を進めた。
日本におけるゲノム研究を巡る科学コミュニケーション活動の評価と課題に関する研究

ゲノム研究に関する科学コミュニケーション活動への適用を視野に入れながら、scientific citizenshipの考え方に基づく新しい科学コミュニケーションのあり方を理論的に考察することを行った。scientific citizenship(科学的市民権)の考え方は、受け身であり、科学技術の受容者になるという、これまでの市民像に代わって、本来のあり方として科学技術を支援あるいは制御しうる(すべき)主体としての市民という新たな市民の見方を提供するものである。とりわけ、本年度はこういった見方の問題点についても検討して、多面的な理解を得た。また、こういった理論的考察に加えて、現在のゲノム研究に関係する科学コミュニケーションが置かれいる状況を把握するための実証的な研究を行った。それは、現在の「ゲノム概念」(遺伝子、DNA等の遺伝学上の概念をこのように呼ぶ。以下同様)の社会的な広がりを知るために、様々な社会的な場面におけるゲノム言説(遺伝子、DNA等の遺伝学上の言説をこのように呼ぶ。以下同様)を収集し分析する研究という形をとる新聞記事とインターネット上のブログを対象として収集を行い、その分析からゲノム言説の傾向を明らかにした。さらに、これらの研究ガゲノム研究をめぐる科学コミュニケーションに示唆することをまとめた。本研究は、理論的な研究と実証的な研究の2つの方向から計画され実施されたものである。まず、理論的な研究においては、先行研究を整理して、「公共性」の観点およびgenetic citizenship論の批判的継承による科学コミュニケーションの新しいモデルの提唱を試みると同時に、そのモデルに従う科学コミュニケーションのモデル化の課題について理論的に検討を行った。また同時に科学コミュニケーションの実践を試みるコミュニケータへのインタビューやコミュニケーション事例への参与観察を通じて、それらのモデルの有効性や意味を考察した。次に、実証的な研究においては、「遺伝子」という単語の登場した日本語テキストの分析を行った。まずマスメディアに注目して、「遺伝子」の語の出現する新聞記事を収集し、それらの記事における単語の共起性(ある単語と別の単語が同じ記事に出てきやすいかどうかの度合い)を調査し、それを統計的に分析することで、新聞記事のテーマ傾向を分類した。他方で、同様のことを日本語で記述されたプログサイトについても行い、それを新聞記事の場合と比較検討の上分析した。このようにして、マスメディアの伝える情報と市民の関心のあいだに大きな違いがあることを示した。この事例は、非専門家の言説は単に専門家の言説を受け入れるというだけのものではないという見方に示唆を与えるものと言うことができ、いわゆる欠如モデルの問題点を示していると考えられる。
新調理システムを活用した食品の調理特性の解明

新調理システムで調理された食品は、短期的保存が可能である。そのため、新調理システムで調理された食品を利用することにより、災害時の被災者に衛生的で栄養バランスの整った食事を提供することができるようになる。給食施設は、緊急時に食事提供施設としての役割を果たすことが望ましい。そこで、その役割を果たすための基礎研究として、新調理システムで調理された食品の調理特性を検討することとした。トマトライスを新調理システムで調理したところ、加熱温度によって、硬さや付着性、凝集性が異なることがわかった。またスチームコンベクションオーブンで調理することにより、食味的に好まれるトマトライスが炊飯できることが確認できた。新調理システムを導入している大量調理施設は病院や福祉施設,事業所など多岐にわたるため,上手く活用すれば緊急時でも対象者に衛生的で栄養バランスの整った食事を提供することできる。災害時では野菜や果物など摂取不足が懸念されるため,レトルトではなく通常の献立として喫食できることが被災者にとっても非常に有用である。そこで本研究では給食施設が緊急時食事提供機関としての役割を果たすために,高い衛生基準を満たし中期的な保存性と高い嗜好性を併せ持った大量調理メニューの開発を最終目的とする。平成25年度はHACCP衛生基準で調理を行うための食材に合わせた調理プロセスを決め,それに基づいて作業工程,調理工程スケジュールを決定し,食品の調味液の量を確立させる。食材の適温加熱温度および調理時間の調整を行い,標準化に向け,一定の調理条件(温度,時間など)を決定し、食品の物性測定,官能評価を行うことでおいしい調理品の調製を行う。まず,緊急時に摂取不足しがちな栄養素を主食であり,エネルギー源として重要である炭水化物とともに同時に摂取可能である食品として,まずトマトジュースで炊飯を行うトマトライスを新調理システムでの標準化することを目的に実験を行った。その結果,トマトジュースに含まれる固形分の影響から水分が米粒に吸水されにくくなることから,トマトジュースを多く加えると硬く,付着性が小さい飯となったと考えられた。家庭用の鍋や炊飯器で炊く場合はトマト固形分の沈澱層が厚くなるため,鍋内の温度差が大きくなり,芯のある飯となる。スチコン炊飯は少量調理の場合よりも対流しにくいと考えられるため加熱ムラは生じやすいと思われたが,トマトライスの場合は,ホテルパンが浅いために比較的均等に加熱が行われたため,少量調理の炊飯と大きく異なりトマトライスの炊飯にはスチコンが適している可能性が示唆された。新調理システムとは、調理後、加熱調理した食品を急速冷却、急速冷凍し、喫食時間に合せて再加熱し提供するという調理システムであり、短期的な保存が可能である。この新調理システムを導入している大量調理施設は、病院や福祉施設、事業所など広範囲にわたっている。各地に多く存在するこれらの施設を活用することで、災害時の被災者に衛生的で栄養バランスの整った食事を提供することができるようになると考えられる。50%もしくは100%をトマトジュースに置き換えて調製したトマトライスをスチームコンベクションオーブンで調理し、炊きあがり重量、テクスチャー、還元糖の測定、官能評価を行った。その結果、加熱温度によって、硬さや付着性、凝集性が異なることがわかった。また、官能評価の結果からは、食味的に好まれるトマトライスが炊飯できることが確認できた。真空包装機および真空パック包装袋を用いてトマトライスを調理し、テクスチャー測定および冷蔵、冷凍の5日間の保存性の評価、米飯の形態観察を行った。真空パックで調理されたトマトライスは、保存温度よりもトマトジュースの割合に影響をうけることがわかった。しかし、保存性は良好ではあったものの、目視や顕微鏡観察により真空パックのトマトライスは炊きあがりにムラがあったため、調製方法にはさらなる検討が必要である。災害時などにおける食事提供は重要な課題である。本研究は、新調理システムを用いて調理された食品の調理特性を検討することにより、給食施設が緊急時に食事提供施設としての役割を果たすための一助となる基礎データを示すことができた。今後さらに検討を重ねることにより、「災害時における衛生的で栄養バランスの取れた食事の提供」という課題の解決につなげたい。食品栄養学調製した食品の物性測定,官能検査を行い,従来のクックサーブとの比較を行い,炊飯時に対流が起こりにくいトマトジュースが米飯に及ぼす影響を明らかにすることができた。しかし,他の新調理システムを活用した食品を調製した後にすべての食品の細菌検査を行うことで,細菌検査のための有効期限のある試薬などを無駄にすることなく,食品の品質保持期限を明らかにすることが可能であると考えられたため,現段階では食品の保存性を明確にするための細菌検査は行っていない。

そのため研究達成度は「(2)おおむね順調に進展している。」とした。平成26年度の計画として,平成25年度に調製した食品の調理過程の再考および新たに新調理システムを使用した食品の調製を行う。さらにそれらを発展させ,調製した食品の品質保持検査,組織観察を行い,大量調理に適した食品の調製および調理特性を明らかにすることを目標とする。調製した食品を異なる保持環境で保存し,保存期間を細菌検査にて明確にする。細菌検査は一般細菌数,E.Coli,大腸菌群数,黄色ブドウ球菌数,サルモネラ属菌数などそれぞれに適した培養方法を用いて測定し,食品規格(食品衛生法)の規格基準に当てはめて保存性を評価する。また組織形態の観察は、新調理システムにて調理された食品を顕微鏡にて食材形態変化を観察し,外観および食品内側の状態を評価する。新調理システムを活用した食品を調製した後にすべての食品の細菌検査を行うことで,細菌検査のための使用期限のある試薬を有効利用することで,食品の品質保持期限を明らかにすることが可能であると考えられたため,細菌検査を行う実験を次年度に行うこととした。そのため,細菌検査に使用する試薬などの消耗品費が次年度の繰越金として生じた。次年度についても今年度と同様に新調理システムを使用した食品の調製を行うための食材料費およびそれらの測定のための実験消耗品を補充する。また文献についても研究に関係する書籍の購入を行い,研究成果発表のための旅費および論文投稿料にも使用する。
貸付金利を考慮に入れた通貨統合モデルの構築

本研究では銀行部門を考慮に入れた小国開放経済体系の動学的確率一般均衡モデルを構築し、金利スプレッドが発生するときの望ましい為替相場制度について検証を行った。また、同モデルを用いて現行のASEAN諸国の為替相場制度選択が理論的に支持される制度と一致しているか否かを検証し、これらが整合的となり得ることを明らかにした。ただし、分析結果は頑健でなく、経済の開放度等のパラメータの値にも依存することが分かった。本研究の目的は政策金利が一本化されているにも関わらず、各国の貸付金利の乖離が存在するユーロ圏の現実を反映したモデルを構築し、そこで発生する通貨統合の費用(独立的金融政策喪失による厚生損失)を明らかにすることである。こうした目的に向けて、申請段階で3つの作業工程を設けた。第一工程はユーロ圏における貸付金利の収斂が進んでいるのか否かを実証的に確認すること、第二工程はモデルの構築を進めること、第三工程は経済厚生を考慮に入れたシミュレーション分析を実施することである。なお、第一工程(実証分析)は必ずしも第二・第三工程(理論分析)の前に行わねばならないという類のものではなく、性質上独立した研究として実施可能なものである。現在の進捗状況としては、理論分析について一応の結論を得ている段階である。実証分析については実施のいかんも含めてデータの存在等に関する調査を行っている。理論分析からは、共通通貨圏において発生している貸付金利変動のバラつきに対して各国中央銀行が独立的な政策対応をとれないことにより、加盟各国内のGDPギャップやインフレの変動を高めているとの結論が得られた。つまり、貸付市場の分断が残っている状況が貸付金利の非対称な変動を招き、通貨統合の費用を増大させているとの結論が得られた。現在ここまで得られた結論をベースに学会等での報告と意見収集を進めながら、ここまでの議論を経済厚生ベースで論じられるようモデルの改良を進めている段階である。平成23年度は報告を通じて得られる意見を反映させながら論文の形にまとめ、学術雑誌への投稿段階までまとめたいと考えている。本研究課題を通じた研究成果は、本務校である南山大学のワーキングペーパーとして取りまとめ、平成23年度に公刊を行った。ここで、私は銀行部門を考慮に入れた小国開放経済モデルを構築し、同モデルを用いてASEAN諸国の為替相場制度選択が、モデルから得られる示唆と整合的なものか否かを検証した。申請当初はモデルから得られるシミュレーション上の示唆を得るところまでを目標としていたが、現実のASEAN諸国が採用する為替相場制度選択の検証まで踏み込めた点は、申請時よりも前進した点であると考えている。一般的な小国開放経済モデルでは、通貨同盟や固定相場制度等の硬直的な為替政策は、変動相場制よりも劣るものと結論付けられてきた。しかしながら本論では小国内における銀行活動を一般の小国開放経済モデルに導入し、モデルのパラメータ設定をASEAN諸国のデータに基づいて行うことで、硬直的な為替相場制度が変動相場制よりも優位に立つ場合があることを示した。とりわけ、ASEAN諸国のなかで硬直的な為替政策を採用する国々について、固定相場制が変動相場制よりも経済厚生上優れた制度となり得るとの結論を導いた。こうした結論はこれまでの先行研究では得られていないものであり、一定の貢献を達成することが出来たと考えている。同研究成果は現在英文の査読付学術雑誌に投稿中である。また、これらの研究成果を踏まえて現在複数の拡張研究に取り掛かっており、これまでの貢献と今後の研究推進と関連して非常に有益な成果を得ることができたと考えている。
血管壁の修復過程およびそれに関与する細胞の配列と機能およびその由来について

内皮細胞や平滑筋細胞の細胞集団としての特徴,配列様式と血流や血管壁にかかる張力との関係を動物実験を通して明らかにすると同時に,血管壁内の物質輸送,変性,動脈硬化症発生機序等を攻究するための基礎的研究を行った.研究の手段として性質の異なる特殊な人工血管を作成し,特殊環境下における内皮細胞や平滑筋細胞の挙動,新しく形成される血管壁の代謝を検討し,合せてin vivoでの研究のモデル作成の基礎的資料を得た.方法:人工血管が生体内に植え込まれると,平滑筋細胞や内皮細胞,線維芽細胞が出現しこれらの細胞は膠原線維や弾性線維を産生し,ここに細血管が栄養血管として侵入し,あたかも平常の血管壁の如き新しい血管壁が形成ささる.これは血管壁修復の過程でもあり,血管壁新生の過程でもある.この血管壁新生というin vivoにおける過程を(a)布製人工血管,(b)バイオマトリックス人工血管の2つを用いて動物に植え込み,それぞれの環境下での血管壁形成の特徴を観察した.結果:布製人工血管では,前述の過程を経て血管壁形成が行われるが,用いる人工血管布の織り方が密であれば,新生血管壁に石灰化や退行性変性,潰瘍,壁の脱落等が生じやすいことが判明した.これは布の織りの網目を通る代謝経路の形成不全によるものと考えられ,一般の動脈硬化症における変性に酷似していることから,動脈硬化症発生の研究モデルとしての良い研究手段となると思われる.一方,バイオマトリックス人工血管においては,動物の血管壁から細胞成分を破壊,脱落させ,膠原線維や弾性線維のみからなる天然血管壁由来の特殊な人工血管であるが,これが植え込まれると,宿主の線維芽細胞や平滑筋細胞が壁内に侵入し,内表面を内皮細胞が覆って,天然の血管壁と全く同じ構造の血管壁を作りあげた.これは血管壁形成においてそのマトリックスが細胞新生に大きな影響を与えることを示していると思われる.内皮細胞や平滑筋細胞の細胞集団としての特徴,配列様式と血流や血管壁にかかる張力との関係を動物実験を通して明らかにすると同時に,血管壁内の物質輸送,変性,動脈硬化症発生機序等を攻究するための基礎的研究を行った.研究の手段として性質の異なる特殊な人工血管を作成し,特殊環境下における内皮細胞や平滑筋細胞の挙動,新しく形成される血管壁の代謝を検討し,合せてin vivoでの研究のモデル作成の基礎的資料を得た.方法:人工血管が生体内に植え込まれると,平滑筋細胞や内皮細胞,線維芽細胞が出現しこれらの細胞は膠原線維や弾性線維を産生し,ここに細血管が栄養血管として侵入し,あたかも平常の血管壁の如き新しい血管壁が形成ささる.これは血管壁修復の過程でもあり,血管壁新生の過程でもある.この血管壁新生というin vivoにおける過程を(a)布製人工血管,(b)バイオマトリックス人工血管の2つを用いて動物に植え込み,それぞれの環境下での血管壁形成の特徴を観察した.結果:布製人工血管では,前述の過程を経て血管壁形成が行われるが,用いる人工血管布の織り方が密であれば,新生血管壁に石灰化や退行性変性,潰瘍,壁の脱落等が生じやすいことが判明した.これは布の織りの網目を通る代謝経路の形成不全によるものと考えられ,一般の動脈硬化症における変性に酷似していることから,動脈硬化症発生の研究モデルとしての良い研究手段となると思われる.一方,バイオマトリックス人工血管においては,動物の血管壁から細胞成分を破壊,脱落させ,膠原線維や弾性線維のみからなる天然血管壁由来の特殊な人工血管であるが,これが植え込まれると,宿主の線維芽細胞や平滑筋細胞が壁内に侵入し,内表面を内皮細胞が覆って,天然の血管壁と全く同じ構造の血管壁を作りあげた.これは血管壁形成においてそのマトリックスが細胞新生に大きな影響を与えることを示していると思われる.
生体関連高分子の表面極近傍水の力学的物性評価

水晶発振子基板上に原子移動ラジカル重合法(ATRP法)を用いて様々な合成高分子をグラフト重合あるいは様々なタンパク質を固定化させ、それらの水和量と振動エネルギー散逸値を求めたところ、分子に固有の値を示すことがわかった。水晶発振子は基板上の分子を直接振動させることのできるデバイスであり、揺らしてみることで質量だけでなく物質の固さ・柔らかさ(粘弾性)などの力学的物性情報を得ることができる新たなツールになることがわかった。水晶発振子は基板上の分子を直接振動させることのできるデバイスであり、揺らしてみることで質量だけでなく物質の固さ・柔らかさ(粘弾性)などの力学的物性情報を得ることができる新たなツールになると期待できる。本研究では、水晶発振子基板上に合成高分子や生体高分子材料を固定化した基板を作製し溶媒と接触させることで様々な固液界面を作り出し、その中を振動伝播させることによって界面ごく近傍薄層空間内の固定化材料および溶媒の力学的物性に関する知見を得ることを目的とした。本年度は、水晶発振子の振動現象を高精度に解析することのできる装置の開発を行った。水和量と振動エネルギー散逸値を求めるために、ネットワーク・アナライザーを用いて水晶発振子に対し交流電場の周波数掃引を行いコンダクタンスの周波数応答より得られる共振曲線を解析して、共振周波数(F_s値)とその値に対する共振曲線の半値幅の比として与えられる振動エネルギー散逸値(D値;Dissipation Factor)を算出する手法を確立した。基板上へ物質を固定化する前後での水中および気相中での各数値の差分(ΔF_water、ΔD_water、ΔF_air、ΔD_air)から、単位質量当たりの水和量((-ΔF_water)/(-ΔF_air)-1)、単位質量当たりのエネルギー散逸値(ΔD_water/(-ΔF_air))を求め、そのキャリブレーションを行った。高精度化のために、恒温槽の温度制御を±0.1°Cから±0.001°Cへ高精度化、ネットワーク・アナライザーの周波数掃引速度の向上、共振曲線解析におけるプログラムの改良を検討した。また、これまでの水晶発振子装置を転用した容量500μLのセルを用いたバッチ式の利用とともに、連続的かつ経時的に測定可能なフロー式セルを作製した。本年度は、水晶発振子基板上に原子移動ラジカル重合法(ATRP法)を用いて様々な合成高分子をグラフト重合あるいは様々なタンパク質を固定化させ、それらの水和量と振動エネルギー散逸値を求めるために、ネットワーク・アナライザーを用いて水晶発振子に対し交流電場の周波数掃引を行いコンダクタンスの周波数応答より得られる共振曲線を解析して、共振周波数(F_S値)とその値に対する共振曲線の半値幅の比として与えられる振動エネルギー散逸値(D値; Dissipation Factor)を算出する測定を行った。その結果、pDMAEMA、pNIPAM、pMPC、pHEMAなどポリマーごとに水和量とエネルギー散逸値に違いが見られた。また、様々なタンパク質を比較したところ、それぞれのタンパク質形状に依存して水和とエネルギー散逸値に固有の値を示すことがわかった。すなわち、本手法を用いることで、固液界面に存在する物質の力学的の物性を評価することが可能であることを示すことができた。
ヒト表皮に発現するABC蛋白質遺伝子のクローニング

ABCタンパク質とはアミノ酸配列のよく似たATP結合ドメインを持ち、ATPの結合あるいは加水分解によって機能が制御されているタンパク質ファミリーである。真核生物のABCタンバク質において、ATP結合領域はちょうどカセットのようにペプチド鎖に2つ挿入されている。バクテリアのABCタンパク質において、2つのATP結合カセットはサブユニットとして膜貫通サブユニットと分子集合している。そのため、この一群の膜タンパク質は、ATP結合カセット(ATP Binding Cassette)の頭文字からABCタンパク質と名付けられた。角化細胞内部は外部環境とは非常に異なった環境に保たれている。それは、リン脂質二重膜に浮かぶさまざまな膜タンパク質がさまざまな物質やイオンを選択的に通すことによって保たれている。膜タンパク質は細胞内外にNa, K, H, Caなどのイオン濃度の差をつくり出している。さらにそのイオン濃度勾配を利用して、アミノ酸やグルコースなどの栄養素を細胞内に取り込むとともにATPの合成をする。ABCタンパク質ファミリーは、膜輪送タンパク質の最も大きな遺伝子ファミリーである。これまでに400個以上のABCタンパク質遺伝子がいろいろな生物種から同定されている。最近は、さまざまな遺伝病の原因遺伝子が膜輸送タンパク質をコードすることがつきとめられ、その中でも特にABCタンパク質がヒトのさまざまな疾病と深く関係していることが明らかになってきた。現在のところ、ABCタンパク質の機能に関しては、不明な点が多いが、細胞膜において、脂質のFlippingに関与しているのではないかと考えられている。つまり、何らかのかたちで脂質合成に関与しているのではないかと考えられている。ヒトABC1遺伝子の点突然変異により、Tangier病(familial HDL deficiency with defective cholesterol efflux)が生じることが明らかになった。(Rust Set al. Tangierdisease iscaused by mutations in the gene encoding ATP-bindingcassette transporter 1. Nat Genet 1999 ; 22 : 352-5.)また最近、弾力線維性仮性黄色種の原因遺伝子がABCタンパク質ファミリーの一種であるMRP6遺伝子であることが同定された。(Ringpfeil F etal. Pseudoxanthoma elasticum ; Mutations in the MRP6 gene encodinga transmemaraneATP-bindingcassette transporter. Proc Natl Acad Sa USA 2000 ; 97 : 6001-6006).ABC3タンパク質に関する論文のノザンプロットデータによればABC3タンパク質は,肺胞上皮細胞に大量に発現している。ABC3タンパク質は、肺胞のサーファクタントの分泌に関与しているのではないかと推測されている。興味深いことに、肺胞上皮細胞を電子顕微鏡で観察すると、角化細胞の層板顆粒に非常によく似た顆粒が見られる。皮膚に特異的なABC3タンパク質が存在するとすれば、それは角層間脂質の合成に密接に関連していることが推測される。近年、アトピー性皮膚炎の患者皮膚におけるセラミドの低下などが報告されているように、脂質代謝と皮膚疾患の関係が注目を浴びている。皮膚に特異的なABC3タンパク質をコードする遺伝子をクローニングすることは、皮膚科学のみならず医学的、生物学的に非常に有意義なことと考えられる。またABC3タンパク質遺伝子のフラグメントが皮膚のESTクローンから多々報告されており、恐らくABC3タンパク質は皮膚において重要な働きをしていることが推測される。本研究は皮膚科領域において研究が遅れている脂質代謝と皮膚疾患の関係に対し分子生物学的にアプローチしようとするものである。平成13年度の目標はcDNAライブラリーの作製とライブラリーのスクリーニングを行うことを目標としていた。HaCaT細胞を高カルシウム培地で培養し、mRNAを採取した。このmRNAを用いてcDNA libraryを構築しつつある所である。(Rust Set al. Tangierdisease iscaused by mutations in the gene encoding ATP-bindingcassette transporter 1. Nat Genet 1999 ; 22 : 352-5.)

また最近、弾力線維性仮性黄色種の原因遺伝子がABCタンパク質ファミリーの一種であるMRP6遺伝子であることが同定された。(Ringpfeil F etal. Pseudoxanthoma elasticum ; Mutations in the MRP6 gene encodinga transmemaraneATP-bindingcassette transporter. Proc Natl Acad Sa USA 2000 ; 97 : 6001-6006).ABC3タンパク質に関する論文のノザンプロットデータによればABC3タンパク質は,肺胞上皮細胞に大量に発現している。ABC3タンパク質は、肺胞のサーファクタントの分泌に関与しているのではないかと推測されている。興味深いことに、肺胞上皮細胞を電子顕微鏡で観察すると、角化細胞の層板顆粒に非常によく似た顆粒が見られる。皮膚に特異的なABC3タンパク質が存在するとすれば、それは角層間脂質の合成に密接に関連していることが推測される。近年、アトピー性皮膚炎の患者皮膚におけるセラミドの低下などが報告されているように、脂質代謝と皮膚疾患の関係が注目を浴びている。皮膚に特異的なABC3タンパク質をコードする遺伝子をクローニングすることは、皮膚科学のみならず医学的、生物学的に非常に有意義なことと考えられる。またABC3タンパク質遺伝子のフラグメントが皮膚のESTクローンから多々報告されており、恐らくABC3タンパク質は皮膚において重要な働きをしていることが推測される。本研究は皮膚科領域において研究が遅れている脂質代謝と皮膚疾患の関係に対し分子生物学的にアプローチしようとするものである。平成13年度の目標はcDNAライブラリーの作製とライブラリーのスクリーニングを行うことを目標としていた。HaCaT細胞を高カルシウム培地で培養し、mRNAを採取した。
細胞内脂肪酸組成の変化とインシュリン分泌酵素の分解制御機構に関する研究

培養マウス膵β細胞(MIN6細胞)のインシュリン分泌作用に及ぼす細胞内脂肪酸組成の影響を評価した。同じモル濃度の各種不飽和脂肪酸を培養液中に添加すると、オレイン酸、リノール酸、αリノレン酸の順に、MIN6細胞のインシュリン分泌が促進された。一方、これらの脂肪酸をそれぞれ72時間処理すると細胞内脂肪酸組成が変化し、同様な条件下で、αリノレン酸、リノール酸、オレイン酸の順にインシュリン分泌が促進された。これらの結果より、MIN6細胞のインシュリン分泌作用が、細胞内脂肪酸組成の変化に影響を受けることが示唆された。初年度は、培養MIN6細胞(マウス膵臓ランゲルハンス島ベータ細胞)を用い、インシュリン分泌パターンの評価方法を確立した。同等な継代数の培養MIN6細胞を用いるとデータの再現性が上昇することを考慮した上で、播種時の細胞数と、培養液交換後のサンプル採取時間の設定等の実験条件を確立した。次に、脂肪酸のインシュリン分泌に与える影響を評価するため、代表的な遊離脂肪酸であるオレイン酸を用いて実験を行った。オレイン酸を培養液中に投与するための溶媒と投与濃度範囲の選定、コントロール群とオレイン酸処理群における培養MIN6細胞からのインシュリン分泌量の差を効率よく検出するためのオレイン酸処理時間の設定、オレイン酸の前処理の有無によりインシュリン分泌量の違いが現れる処理条件の確立等を行った。さらに、飽和脂肪酸(パルミチン酸)と不飽和脂肪酸(リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸)を用い、同様の試験を行った。高グルコース及び低グルコースの培養液で各種脂肪酸のインシュリン分泌調節作用が異なること、脂肪酸の前処理時間を長くすると短時間前処理ではインシュリン分泌促進作用が認められた脂肪酸の反応性が変化する等のデータが得られた。次年度は、インシュリン分泌に促進的に作用する脂肪酸と抑制的に作用する脂肪酸の存在を明らかにし、その作用メカニズムをユビキチンとの関連性に着目して探索する。初年度は、培養MIN6細胞(マウス由来膵臓ランゲルハンス島β細胞)のインシュリン分泌作用に及ぼす遊離脂肪酸の影響を効率よく検出するための実験条件の確立を実施した。2年目となる本年度は、初年度に確立した実験条件のもと、各種遊離脂肪酸を長時間処理した後の培養MIN6細胞のインシュリン分泌作用の増減を測定評価した。また、同実験条件下にて、各種遊離脂肪酸処理後の細胞内脂肪酸組成の変化を分析した。各種遊離脂肪酸未処理培養MIN6細胞のインシュリン分泌量と比較して、オレイン酸、リノール酸、もしくはαリノレン酸を72時間処理した培養iMIN6細胞では、不飽和二重結合の数に比例して、オレイン酸、リノール酸、αリノレン酸の順にインシュリン分泌量の増加が認められた。また、細胞内脂肪酸組成の変化に関しては、オレイン酸を72時間処理した培養MIN6細胞ではコントロールとほぼ同等であったのに対し、リノール酸の72時間処理ではコントロールと比較してアラキドン酸が多くなり、αリノレン酸の72時間処理ではエイコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸が多くなっていた。これらの結果より、遊離脂肪酸による培養MIN6細胞のインシュリン分泌作用が、細胞内脂肪酸組成の変化に影響を受けることが示唆された。3年目の最終年となる本年度は、2年目に出した長時間遊離脂肪酸処理によるインシュリン分泌促進作用の本試験を実施した。また、長時間脂肪酸処理により変化した細胞内脂肪酸組成のうち、リノール酸処理で増加したアラキドン酸と、αリノレン酸処理で増加したエイコサペンタエン酸やドコサヘキサエン酸によるインシュリン分泌制御作用をあわせて評価した。長時間遊離脂肪酸処理の本試験においては、2年目に実施した予備試験結果と同様に、αリノレン酸(n-3系)で72時間前処理した培養MIN6細胞(マウス由来膵臓ランゲルハンス島β細胞)のインシュリン分泌量が最も多く、次いでリノール酸(n-6系)、オレイン酸(n-9系)の順であった。各種遊離脂肪酸の前処理がなかった場合にはオレイン酸が最もインシュリン分泌量が多く、次いでリノール酸、αリノレン酸の順であり、72時間前処理した場合とは逆の順序でインシュリン分泌促進作用が認められた。一方、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸をそれぞれ72時間前処理したMIN6細胞のインシュリン分泌制御作用は、エイコサペンタエン酸に最も高い促進作用が認められ、アラキドン酸とドコサヘキサエン酸は同等度の促進作用であった。なお、MIN6細胞のユビキチン化タンパク質の検出を試みたが、かつてわれわれが実施したメラノーマ細胞の検出条件では良好な結果が得られなかった。

これはユビキチン化タンパク質を検出するために必要なプロテアソーム阻害剤の細胞毒性がメラノーマ細胞とMIN6細胞では異なり、MIN6細胞に大きなダメージを与えることなくユビキチン化タンパク質の分解を阻止することができなかったことによると考えられた。
正規化戦略に基づく関数型プログラムの効率的実行に関する研究

本研究は,関数型プログラミング言語を高階書換え系としてモデル化し,高階書換え系の正規化戦略を用いることによって,関数型プログラミング言語プログラム(以下,関数型プログラム)の効率的な実行を動的に実現することを目的とする。これまで書換え型計算モデルの書換え戦略に関する研究の多くは,項書換え系の上で行われてきた。しかし,項書換え系には関数型言語の重要な機能である高階関数の概念がないため,これまでの項書換え系での成果をそのまま関数型言語に応用することができない。そこで,関数型言語の高階関数を扱うことのできる書換え型計算モデルである高階書換え系に着目し,次の3点の目標について研究をおこなった。(1)項書換え系の書換え戦略に関する性質を高階書換え系へ拡張する。そのために必須リデックス,高階書換え系の近似書換え計算,必須リデックスの決定可能性の性質を順次証明する。(2)高階書換え系とその上での必須書換え戦略を行う実行系を実現し,関数型プログラムの効率的な実行を行う。(3)本手法は近似計算を用いて計算戦略を実現するため,関数型言語の実行系として適用できる範囲を明らかにする。その結果(1)に関して,高階書換え系の頭必須書換えについての性質を明らかにし,その計算手法が正しい計算結果を導くことができるという正規化戦略となっていることを示すことができた。また,実際にこの戦略を用いて計算を実行するため,具体的な計算手順である必須リデックスの決定方法を示し,これらに関して論文発表の準備を行った。本研究は、関数型プログラミング言語を高階書換え系としてモデル化し、高階書換え系の正規化戦略を用いることによって、関数型プログラミング言語プログラム(以下、関数型プログラム)の効率的な実行を動的に実現することを目的とする。これまで書換え型計算モデルの書換え戦略に関する研究の多くは、項書換え系の上で行われてきた。しかし、項書換え系には関数型言語の重要な機能である高階関数の概念がないため、これまでの項書換え系での成果をそのまま関数型言語に応用することができない。そこで、関数型言語の高階関数を扱うことのできる書換え型計算モデルである高階書換え系に着目し、高階書換え系の効率的な計算を行う書換え戦略を明らかにする。また実行系を実現し、本研究の書換え戦略が関数型プログラムを効率的に実行させることを確認する。本研究の目標は、次の3点である。そのために必須リデックス、高階書換え系の近似書換え計算、必須リデックスの決定可能性の性質を順次証明する。(2)高階書換え系とその上での必須書換え戦略を行う実行系を実現し、関数型プログラムの効率的な実行を行う。(3)本手法は近似計算を用いて計算戦略を実現するため、関数型言語の実行系として適用できる範囲を明らかにする。この中で(1)の目標に関して、高階書換え系の頭必須書換えについての性質を明らかにし、正規化戦略となっていることを示すことができた。また、必須リデックスの決定方法について研究を進めており、これらに関して研究発表を行う予定である。

そこで,関数型言語の高階関数を扱うことのできる書換え型計算モデルである高階書換え系に着目し,次の3点の目標について研究をおこなった。(1)項書換え系の書換え戦略に関する性質を高階書換え系へ拡張する。そのために必須リデックス,高階書換え系の近似書換え計算,必須リデックスの決定可能性の性質を順次証明する。(2)高階書換え系とその上での必須書換え戦略を行う実行系を実現し,関数型プログラムの効率的な実行を行う。(3)本手法は近似計算を用いて計算戦略を実現するため,関数型言語の実行系として適用できる範囲を明らかにする。その結果(1)に関して,高階書換え系の頭必須書換えについての性質を明らかにし,その計算手法が正しい計算結果を導くことができるという正規化戦略となっていることを示すことができた。また,実際にこの戦略を用いて計算を実行するため,具体的な計算手順である必須リデックスの決定方法を示し,これらに関して論文発表の準備を行った。
新規手法による葉緑体タンパク質複合体の網羅的検出

タンパク質は単体として機能するだけでなく、タンパク質同士が結合したタンパク質複合体としても機能する。そのため、タンパク質複合体を調べることは、個々のタンパク質の機能を調べるためだけでなく、細胞内機構を調べるためにも重要である。本研究では、新規手法により光合成生物のタンパク質複合体を網羅的に調べ、この手法の有用性を明らかにした。同時に、Webデータベース(PCoM-DB; http://pcomdb.lowtem.hokudai.ac.jp/proteins/top)を構築し、その結果の一部を公開した。今後、PCoM-DBデータベースを通じて本研究の解析データが幅広く利用されることに期待したい。本研究のテーマは、Blue-Native PAGEとLC-MS/MSを用いた解析により、光合成生物のタンパク質複合体の検出を体系的に行うことである。まず、昨年までに解析を終えていたシロイヌナズナのチラコイド膜、およびシアノバクテリアPCC6803株についての解析データについては独自に構築したWebデータベース「PCoM-DB(Protein co-migration database for photosynthetic organisms):http://pcomdb.lowtem.hokudai.ac.jp/proteins/top」で現在公開中である。このデータベースを用いることでユーザーは自らの興味のあるタンパク質が複合体を形成しているかどうかを判断することができ、また複合体を形成していた場合には、相互作用する可能性のあるタンパク質群を容易に選抜することが可能である。今後このデータベースを利用した新たな発見がなされることを期待している。同時に、陸上植物のヒメツリガネゴケ、緑藻のクラミドモナス、シアノバクテリアのプロクロロコッカスと新たなモデル光合成生物の解析もすでに行っており、今後はこれら生物種についてもデータの解析と公開を進めていきたい。また、これまでの解析から新規なタンパク質複合体候補を見出すことができた。現在、詳細な解析により、それら候補タンパク質同士が実際に相互作用しているかどうかについても検討中である。本研究のテーマは、BN-PAGEとLC-MS/MSを組合わせた手法により、主に光合成生物のタンパク質複合体を網羅的に検出することである。前年度までにPCoM-DB(http://pcomdb.lowtem.hokudai.ac.jp/proteins/top)の構築と公開を済ませることができたため、今年度は主に解析データの蓄積とアップデートの準備を進めてきた。新たな解析対象の生物種としては、緑藻のMicromonas pusilla、珪藻Phaeodactylum tricornutumの解析を終え、シアノバクテリアThermosynechococcus elongatus BP-1の解析を進めている。同時に、シロイヌナズナの単離葉緑体およびストロマ画分の解析データについては、2014年中の一般公開を予定している。また、データベースのアップデートとして、機能面では、複数のタンパク質の結果を一度に検索できる機能やアノテーションのキーワード検索機能を追加した。レスポンスを良くするための改善やシステムのバージョンアップも進めている。今年度は、シロイヌナズナの無傷葉緑体、その葉緑体のストロマ画分、シアノバクテリアPCC6803を材料として、BlueNative-PAGE (BN-PAGE)とLC-MS/MS解析を組み合わせた網羅的なタンパク質複合体解析を行った。その結果、シロイヌナズナの葉緑体で800以上、ストロマ画分で450以上、シアノバクテリアPCC6803株で1400以上のタンパク質が検出され、それらタンパク質群の複合体サイズが明らかになった。なお、シアノバクテリアPCC6803株においては、全タンパク質のおよそ40%が検出された。また、葉緑体においてもタンパク質の総数が2000程度と見積もられていることから、やはり全葉緑体タンパク質の40%以上のタンパク質が検出されたと予想される。なお、葉緑体の包膜画分については、現時点でショ糖密度勾配を用いた純度の高いサンプルの精製に成功しており、来年度に解析を行う予定である。また、データ公開のためのWebデータベースの開発に関しては、現在プロトタイプが研究室内LANで稼働しており、来年度中の正式公開を予定している。現段階では、遺伝子IDからの検索機能、サンプル名からのブラウズ機能、各タンパク質についてのprotein migration profileの表示機能などの使用が可能になっており、これによってユーザーは、興味のあるタンパク質の複合体の大きさを調べられるだけでなく、各複合体に含まれる可能性のあるタンパク質の候補リストを容易に得ることができる。昨年度はWebデータベースのプロトタイプを研究室内で運用していたが、今年度は「PCoM-DB(Protein co-migration database forphotosynthetic organisms」を実際に公開にこぎつけることができた(http://pcomdb.lowtem.hokudai.ac.jp/proteins/top)。この公開データベース「PCoM-DB」の構築は本研究の大きな目的の1つであり、1つの山を越えたと考えている。

データベースの機能としては、検索モードとブラウズモードのいづれかを用いて興味のあるタンパク質を選択し、その"protein migration profile"を見ることで、そのタンパク質の複合体情報が得られるようになっている。さらに、そのタンパク質複合体が存在する位置に同時に存在するタンパク質群のリストもすぐに得ることができ、それら候補タンパク質群の"protein migration profile"と興味のあるタンパク質の"protein migration profile"との比較も容易に行うことができる。これらの機能は当初から予定していた機能であり、それを今年度に実装することができた。また、解析に関しては、当初の計画通り、シアノバクテリア、藻類、陸上植物、高等植物と様々なモデル光合成生物の解析がおおむね順調に進んでおり、次の解析サンプルの準備も進んでいる。予定よりも早くWebデータベースの開発が進み、今年度中に当研究室内で試験運用が可能になったことは当初の期待以上の成果であった。すでにいくつか要望等が出ており、改善できる点については改善して、本公開につなげる予定である。また、これにより、データの可視化が容易に行えるようになったため、データ解析、すなわち未知タンパク質複合体の探索や新規サブユニット候補の探索についてもこのデータベースを用いることで捗るようになった。さらに、学会発表等を通じてこのデータベースに興味を持った研究者から、すでに解析データについての問い合わせが来ており、このデータベースの有用性について自信を深めている。また、実験自体の進捗状況も基本的には当初の予定通りである。唯一、純度の高いシロイヌナズナ葉緑体の包膜サンプルを得ることには苦労していたが、これについても栽培条件や実験条件を工夫することで現在では高純度の包膜サンプルの単離に成功しており、来年度には解析可能である。また、来年度以降に行う予定の(単細胞)藻類サンプルについては、すでにストックセンターから取り寄せており、当研究室における培養にも成功している。さらに、いくつかの藻類においては、予備的な実験としてビーズを用いた破砕法で得たサンプルを用いてBN-PAGEを用いることで、タンパク質複合体の良好な分離プロファイルを得ており、当初の予定通りに解析を進められると考えている。当初の予定通り、Blue-Native PAGEとLC-MS/MSを用いて、様々なモデル光合成生物のタンパク質複合体の体系的な解析を行っていく予定である。なお、これまでの解析から、本研究の手法はとりわけ原核生物に対して非常に有力であることが明らかになってきた。これは予想外であったため、この結果を踏まえて、当初の予定よりも解析するシアノバクテリアの生物種類を増やす予定である。
次世代ディケンズ・レキシコン・デジタルの開発とそれに基づく後期近代英語研究

本研究は、平成23年度から25年度まで採択された科研費「高機能インターフェイスを備えたデジタルディケンズレキシコン作成とその活用研究」の発展的研究で、DLDの完成版をWeb上で公開し、海外の研究機関との国際連携を強化することを目的としている。これまで国内外で本研究を部分的に発表してきたが、平成26年度も国内外で次の研究発表やセッションを行った。(1)2014年7月スイスのローザンヌで開催されるDigital Humanitiesでポスターセッションに参加。(2)2014年10月4日、研究代表者の勤務校である熊本学園大学で開催された英語コーパス学会で90分のセッションを行い、今後どのような研究が可能であるかを発表。(3)12月1日台湾で開催されたDigital Humanities in Taipeiにおいて90分のセッションを行う。今後は、本DLDを活用した英語研究の英文論文集を出版し、Web上での全面公開によって、できるだけ早く世界初のDickens Lexicon Digitalを日本から発信することができるよう努力していきたい。本研究の出発点は、山本忠雄博士(1904-91)(元広島大学・神戸大学教授)の著書Growth and System of the Language of Dickens: An Introduction to ADickensLexiconである。この著書は、1946年東京大学より文学博士の学位を授与され、1953年には英語研究において最初の学士院賞を受賞された。山本博士はDickens Lexiconの完成を目指して、3度共同研究を試みられたが、いずれの共同研究も山本博士が意図したような結果は得られなかった。それ以降は、山本博士独力で用例の収集にあたったが、1991年に他界された。1997年に山本博士の自宅から約6万枚のLexicon作成のためのカードが発見された。1998年に研究者20名のプロジェクトチームを結成した。このプロジェクトは、紙媒体のDickens Lexiconではなく、コンピュータを駆使した多機能搭載型のDickens Lexiconを作成することにした。本研究の目的は、平成23年度から25年度まで採択された科研費「高機能インターフェイスを備えたデジタルディケンズレキシコン作成とその活用研究」の最終段階で、Dickens Lexicon Digitalの完成版をWeb上で公開し、海外の研究機関との国際連携を強化することである。新たに共同研究者として自然言語処理の専門家を加え、コロケーションの検索機能や統計処理機能を付与する。世界初のDigital Lexiconを日本から発信することを目指す。本年度は本研究課題に基づいて海外の学会で3名、国内の学会で4名が発表した。平成28年度には研究代表者である堀の編集で『コーパスと英語文体』(ひつじ書房)を刊行する。その内の1章は本研究課題に関する研究である。平成29年3月のWeb上で部分的に公開をするために、すでにデモ版の作成は終えている。残りのカードの内容、つまり見出し語、品詞、定義、作品名、章、引用、OEDの引用有無、コメントを完成する。また、Dickensの作品以外の18世紀と19世紀の英国小説の作品の電子化をほぼ終了している。Webアプリケーション開発の専門家と統計処理の専門家による様々な機能の開発を行っている。さらに部分的な公開による利用者からのフィードバックを参考に、問題点の修正や他の機能の可能性を探る。本プロジェクトの発信として、2015年6月13日にディケンズフェローシップ協会で、「シンポジウム:ディケンズの言語と文体」を行い本研究課題であるDikens Lexicon Digitalを利用した発表を研究代表者と分担者3人、合計4名で行った。全面公開を目指して研究代表者と分担者・協力者との打ち合わせや発表会を頻繁に行った。したがって、本研究課題は当初の予定通りおおむね順調に進展している。今年度も国内外で本研究の成果を発表している。28年度において本研究と関連したテーマで海外で研究発表した研究分担者は、田畑智司、舩田佐央子、西尾美由紀、永崎研宣である。また、出版物として直接本研究に言及した業績として、本研究代表者が編集した、英語コーパス研究シリーズの第5巻『コーパスと英語文体』(ひつじ書房,2016年)を刊行し、本科研の分担者の1人である西尾(島)美由紀が第4章「The Dickens Lexicon Digitalとその活用研究」においてこれまでの本研究の過程とその活用研究のモデルとして研究事例を報告している。Web上での一部公開を目指して、カード項目の見出し語の表記の統一ははぼ修了した。18世紀と19世紀の英国小説の電子テキストに関しては、電子テキスト化は終了したが、公開に伴う作業で、いくつか不具合が見つかり現在修復中である。今年度も定義入力をすすめてきた。新たに分担者として自然言語処理の専門家である三宅真紀が、コロケーションの検索機能のビジュアル化や統計処理機能について試案を発表した。定義入力に関しては、まだ全ての作品を修了していないが、一部公開をするためにどのような形が最も好ましいのかを現在検討中である。国内外への本プロジェクトの発信と国際連携に関しては、充分に目的を達成した。国内に関しては、英語コーパス学会(研究代表者の勤務校である熊本学園大学で開催)で90分のセッションを行った。国外に関しては、スイスのローザンヌで開催されたDigital Humanities 2014においてポスターセッションを行った。また、国立台湾大学Research Center for Digital Humanitiesのセンター長であるJieh Hsiang教授が主催されたDigital Humanities in Taipeiにおいて特別発表として90分のセッションをさせていただいた。

また、研究分担者が個別に国内外の学会で本研究課題に基づいた発表を行ってきた。Web上の公開に向けては、18世紀と19世紀の英国小説の電子テキストをLexiconに組み込む作業においていくつかの問題点が見つかったので、その解決に時間がかかったが、現在は順調に進んでいる。平成28年度も引き続き、全面公開に向けて分担者や協力者と連絡を密に取り作業を進め、発表会を少なくとも3回行い、研究代表者や分担者・協力者が国内外での発表や発信を行っていく。すでに平成28年度は、研究代表者である堀が、平成28年6月25日に安田女子大学で開催される近代英語協会のシンポジウムの講師として、本研究課題のDikens Lexicon Digitalを利用した研究発表を行う予定である。世界初のDigital Lexiconを日本から発信することができる日を目指して研究を進めていきたい。28年度が最終年度であるため、記入しない。英語学・文体論・コーパス言語学Web上での公開に向けて、カード作成と電子テキストの作成上の問題点を全員が共有するためにこれまで通り、年3回の打合せ及び発表会を開催する。Webアプリケーションの開発やコロケーションの機能や統計処理機能の開発に関しては、専門家の二人を中心に、共同研究者や協力者を交えた打ち合わせ会や発表会で検討を重ねていく。Dickens Lexicon Digitalに関する英文の論文集を海外の出版社から刊行するために、「発表会及び打ち合わせ」において、各自の論文の内容に関して、執筆者全員のテーマを発表し、討議を重ねていく。分担者が次年度に、次年度の使用額とあわせてパソコンを購入するため。予定していた海外の学会先の治安不安定のために渡航を延期したため。予定していた国内の学会への参加を取りやめたため。分担者は次年度の使用額とあわせてパソコンを購入する計画。次年度は海外の学会に参加予定である。研究協力者が海外の学会で当該課題に関連した発表を行うので、その旅費に充てる。