hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
筋線維芽細胞による肝硬変の病態形成におけるプロスタグランジンE2の役割

門脈圧亢進症においては、類洞周辺部で活発に増殖する筋線維芽細胞の異常収縮や線維産生が、血流抵抗の増加に寄与すると考えられている。肝硬変の病態形成に際してプロスタグランジンの血中濃度が上昇することが知られており、本研究は、筋線維芽細胞の収縮機構ならびに線維産生機構への、PGE2を始めとしたプロスタグランジン類の関与を分子生物学的に解明することを目的とした独創的な研究である。今年度は、昨年度の研究結果より得られた、プロスタグランジンD2(PGD2)による線維化抑制作用をより詳細に解析した。具体的には、組織の線維化におけるPGD2の関与を明らかにするため、生体内でPGD2を合成している酵素の1つであるH-PGDSに着目し、H-PGDSの遺伝子を欠損したマウス(KOマウス)を用いて検討を行った。線維症モデルマウスにおいて、H-PGDSは主に血管内皮細胞や、線維化病変部に浸潤した炎症性細胞に発現していた。KOマウスにおいて線維症モデルを作成したところ、野生型マウスと比較して線維化がより増悪した。線維症モデルにおいては、線維化に先立って炎症反応がおこることが知られており、KOマウスでは炎症性物質の発現が顕著に増加していた。また、KOマウスでは炎症期における血管の透過性が亢進しており、これらの要因によって病変部への炎症性細胞の浸潤がより加速することが、線維化増悪の原因であることが示唆された。以上の結果から、H-PGDSによって合成されたPGD2が線維化を抑制することが、in vivoレベルでも明らかとなった。今年度はまず、プロスタグランジンによる筋線維芽細胞の収縮作用を検討した。その結果、PGD2、PGE2ともに収縮作用を引き起こした。PGE2受容体であるEP3受容体に対する刺激は、カルシウム非依存的なPKCdeltaおよびPKCepsilon活性化経路を介する収縮作用を引き起こした。一方、PGD2受容体であるDP受容体に対する刺激は、細胞内cAMP濃度の上昇を介したPKA活性化による弛緩作用を惹起した。続いて、プロスタグランジン類のコラーゲン産生に対する作用を検討したところ、PGD2およびPGE2はともに線維芽細胞による線維産生を抑制した。EP2受容体、EP4受容体およびDP受容体作動薬によっても同様に抑制作用がみられたことから、PGD2およびPGE2によるコラーゲン産生抑制作用は、これら受容体を介した作用であることが示唆された。今年度は線維芽細胞のコラーゲン産生能に対するプロスタグランジンの作用を明らかにするため、TGF-βによる線維芽細胞のコラーゲン産生能に対するプロスタグランジンの作用を検討したところ、PGE2の前処置は10-8M以上の濃度で顕著に線維産生を抑制した。またこの抑制作用は、EP2受容体とEP4受容体のそれぞれの作動薬によって再現された一方、EP1受容体とEP3受容体の作動薬では観察されなかった。PGD2も、PGE2と同様に線維産生を抑制したが、10-7M以上の比較的高濃度でのみ作用が見られた。PGD2にはDP受容体とCRTH2受容体の2つの受容体が知られているが、DP受容体作動薬であるBW245Cでのみ抑制作用が再現された。これらの結果から、PGD2はDP受容体を介して線維産生を抑制していることが明らかとなった。DP受容体の下流シグナルにcAMPを介した経路が関与する可能性を検討したところ、PGD2ならびにBW245Cの刺激によって線維芽細胞内のcAMP量が顕著に増加した。また、forskolinならびにdibutyryl-cAMPによる前処置によっても、線維産生は抑制された。以上より、線維芽細胞にはPGD2受容体を介したコラーゲン産生抑制機構が存在することが明らかとなり、そのシグナル伝達にはcAMPを介した経路が関与する可能性が示唆された。

具体的には、組織の線維化におけるPGD2の関与を明らかにするため、生体内でPGD2を合成している酵素の1つであるH-PGDSに着目し、H-PGDSの遺伝子を欠損したマウス(KOマウス)を用いて検討を行った。線維症モデルマウスにおいて、H-PGDSは主に血管内皮細胞や、線維化病変部に浸潤した炎症性細胞に発現していた。KOマウスにおいて線維症モデルを作成したところ、野生型マウスと比較して線維化がより増悪した。線維症モデルにおいては、線維化に先立って炎症反応がおこることが知られており、KOマウスでは炎症性物質の発現が顕著に増加していた。また、KOマウスでは炎症期における血管の透過性が亢進しており、これらの要因によって病変部への炎症性細胞の浸潤がより加速することが、線維化増悪の原因であることが示唆された。以上の結果から、H-PGDSによって合成されたPGD2が線維化を抑制することが、in vivoレベルでも明らかとなった。
血管トーヌスを制御する新しい分子ならびにそのシグナル伝達の解析

リン酸化ミオシンを脱リン酸化する酵素"ミオシンホスファターゼ(MP)"は、38kDの触媒サブユニットと130kD(M130)ならびに20kD(M20)の調節サブユニットより構成される新しいタイプ1プロテインホスファターゼのホロエンザイムである。M30は、MP活性発現ならびにその活性制御に関与している分子と考えられている。精製MPに、M130をリン酸化し、そのホスファターゼ活性を抑制させる内因性キナーゼが混在していることが明らかとなってきたので、このキナーゼの解析を行った。ゲル内リン酸化法ならびに種々の抗体を用いて検討したところ、精製MP中にカゼインキナーゼ2(CK2)とRhoキナーゼ(RhoK)が混在していることが判明した。CK2によるリン酸化はホスファターゼ活性に影響を与えず、RhoKによるM130のリン酸化のみがホスファターゼ活性を阻害した。しかしながら、内因性キナーゼはchelerythrineによって活性阻害を受けたが、RhoK活性は阻害されず、内因性キナーゼがさらに別のキナーゼである可能性もあり、この点に関し研究を続ける予定である。内因性キナーゼによるMBSのリン酸化部位は、M130の654番目のスレオニンで、この部を含むぺプチドは、RhoKによってよくリン酸化されることが確認された。MBSのドメイン構造を、M133(ニワトリMBS)の種々のフラグメントを作成し検討した。ミオシンホスファターゼ活性発現には、N末端側より295番目までのアンキリンリピート構造が必要であり、この部に触媒サブユニットならびにミオシンとの結合ドメインがあると考えられた。もう一つの調節サブユニットであるM20は、M133のC端1/3に存在すると考えられた。以上より、MBSのN端側はミオシンホスファターゼ活性発現に、C端側は活性制御に関与していると考えられた。
安定・放射性同位体解析を用いた地下水流入の沿岸水産資源への影響評価

有明海西岸域の地下水中の^<222> Rn濃度が、河川に比べて約1 3桁高く、地下水の指標として有効であることを確認した。次に、調査時前の積算降水量と調査側線の水深の違いを標準化して、各沿岸域の^<222> Rn濃度分布の地点間の相対比較を可能とし、地域によって地下水の湧出量に差があることを明らかにした。更に、5つの定点連続観測で算出した地下水フラックスの絶対量と沿岸^<222>Rn濃度に相関があることを利用し、有明海西岸の^<222> Rn濃度分布から、地下水の総湧出量を見積もった。この湧出量に、隣接する地下水中の栄養塩濃度を乗じて概算した海域への地下水経由の栄養塩フラックスには地域的な違いがあり(溶存無機態窒素(DIN):7. 8510 kg-N day^<-1>,溶存無機態リン(DIP):0. 53. 9 kg-P day^<-1>)、地下水中の栄養塩濃度が最も高く、地下水湧出量も多かった島原沿岸域において最大値が観測された。一方で、沿岸域から離れた有明海湾口部において、硝酸のδ^<15> Nを用いた栄養塩の起源解析と、有機物のδ^<13> C、δ^<15> Nを用いた食物連鎖解析を行ったところ、大気降下物、有明海内部水、外洋底層海水に含まれる栄養塩の流入と、上位捕食者への転送は示されたが、地下水起源の栄養塩の寄与を診断することはできなかった。地下水中の栄養塩フラックスは、河川の影響が少ない有明海西岸域では重要な栄養塩源であり、二枚貝などの餌資源として重要な一次生産を高めるだけでなく、大型緑藻類の繁茂を促すなど、様々な生態系への影響が考えられるが、その影響範囲は沿岸浅層の狭い範囲に限られると考えられる。本研究では、今まで困難で試みられていなかった地下水流入量と、それに伴う栄養塩流入量の定量に初めて成功した。先ず、放射性同位体である<222>^Rnに着目し、有明海西岸域の諫早島原地域の地下水中の<222>^Rn濃度が、同じ淡水の河川に比べて約13桁高く、地下水の指標として有効であることを確認した。また、沿岸域の海水中の<222>^Rn濃度にも大きな空間変動が見られ、地域によって地下水の湧出量に差があることが示唆された。5つの定点で算出した地下水フラックス量、沿岸の<222>^Rn濃度、地下水中の栄養塩量から概算した海域への地下水経由の栄養塩フラックスには地域的な違いがあり(溶存無機態窒素(DIN):12490 kg-N/day,溶存無機態リン(DIP):0.113.6 kg-P/day)、地下水中の栄養塩濃度が最も高く、地下水湧出量も多かった島原沿岸域において最大値が観測された。結果として、有明海西岸地域からの地下水由来のDINフラックス総量は、有明海の主要8河川で見積もられている全窒素(TN:DIN+DON+PN)量(33300t-N/y:柳&阿部2005)と比較しても、約0.50.86%に相当する。このフラックスは、河川の影響が少ない有明海西岸域では重要な栄養塩源であり、二枚貝などの餌資源として重要な一次生産を高めるだけでなく、大型緑藻類の繁茂を促すなど、様々な生態系への影響が考えられた。

本調査地域は長崎県の水産業を支える地域の一つであるが、近年、諫早潮受堤防建設に伴う環境変化によってダメージを受けており、今後、計画されている長期的な開門調査事業によって受けるであろう影響も計り知れない。大きな河川水流入のない本地域では、地下水流入が陸起源物質を運ぶ主要な媒体であると考えられており、長期開門に伴う潮汐変動が地下水の圧力ポテンシャルを再び変化させ、淡水と陸起源物質の流入にも変化を与えることが想定される。RaDeCC(Radium Delayed Coincidence Counter)システムを立ち上げて、水道水や長崎県沿岸水をテスト試料水としてMnO_2ファイバーに通して、水中に含まれるRaを吸着させてRa核種の分析テストを行ったが、学内における下限数量以下のRa核種の使用に関する承認が下りず(2011年3月の原発事故で、学内の放射性管理委員会の主要メンバーが多忙であった)、値のキャリブレーションが出来なかった。そこで、地下水湧出とその分布に関しては、22年度の成果(^<222>Rnによる評価)を利用し、有明海湾口部(島原湾橘湾)において、低次生態系を支える栄養塩の起源(地下水由来栄養塩も含む)と、高次消費者への移送過程について、CTD観測により橘湾の水平・鉛直方向の水塊構造を明らかにし、比色分析で栄養塩の分布を調べると共に、代表的な無機態窒素である硝酸塩の窒素・酸素同位体比を用いた解析、及び、仔稚魚の代表的な餌として、カイアシ類や十脚甲殻類のハルマンスナモグリのゾエア幼生、画分別の懸濁態有機物の炭素・窒素安定同位体比を用いて解析を行った。栄養塩の供給源に関しては、陸水(δ^<15>N=89‰)・外洋底層水(δ^<15>N=45‰)に加えて、大気降下物(δ^<15>N=01‰)や、再生栄養塩(NH_4とNO_2分布から)の寄与があることを明らかにすることができ、本海域が、気候変動等の環境変化に対して、栄養塩供給の点では、脆弱でないことが明らかとなった。また、室内飼育実験の結果、スナモグリ幼生が動物プランクトンと植物プランクトンの混合食であることと、動物プランクトンの摂餌に伴う同位体効果(△δ^<15>N=3.3‰、△δ^<13>C=0.5‰)を明らかにすることに成功した。現場で得られた安定同位体データと合せて解析することで、スナモグリ幼生は20μm以下のナノ植物プランクトンを多く含む植物プランクトンと動物プランクトンを食物源としている可能性が高いということが分かった。一連の結果より、有明海湾口部における低次生態系と高次生態系のつながりを明らかにすることが出来た。
中国内蒙古産薬用植物中の抗腫瘍活性成分の探索

中国内蒙古産薬用植物(Euphorbia esula)の抽出エキス中の抗腫埠活性活性成分の分離・精製ならびにそれらの化学構造解析:中国内蒙古自治区にて採取・同定されたトウダイグサ科の薬用植物Euphorbiaesula L.(10キログラム)の抽出エキスについて、ヒト胃癌(Kato-III,MKN-28,MKN-45)ならびにヒト大腸癌(COLO205)細胞等に対する細胞増殖抑制活性を指標とした活性成分の分離精製を各種クロマトグラフィー(シリカゲルや分取HPLC)を用いて繰り返し行った。その結果、強力な活性を示す2種の微量成分をn-ヘキサン可溶性画分から単離した。これらの各種癌細胞に対する増殖抑制活性はアドリアマイシンの10倍程度の強力な活性であることが判明した。活性成分について各種スペクトル(UV,IR,FAB-MS,2D-NMR等)を測定し、その化学構造を詳細に検討した結果、ジテルペン系ingenol骨格を有するポリエステル体と結論された。また、活性を示す周辺のフラクションから6種の主成分を単離した。これらの化学構造は、同じくジテルペン系jatrophane骨格を有するポリエステル体と結論された。今回、化学構造が明らかにされた成分は全て新規化合物であった。さらに、同植物の採取時期ならびに抽出法の違いによる抽出エキスの活性の強弱について検討するとともに、各成分の生合成的関連性についても検討を加えた。中国内蒙古産薬用植物の抽出エキスの調製および抗腫瘍活性を指標とした活性成分の分離・精製:中国内蒙古自治区にて採取・同定されたトウダイグサ科の薬用植物Euphorbiaesula L.(10キログラム)を乾燥後、75%エタノールで抽出し、抽出液をロータリーエバポレーターを用いて減圧濃縮し、抽出エキスを得た。得られたエキスについて、各種有機溶媒(n-ヘキサン、ベンゼン、酢酸エチルおよびn-ブタノール)を用いて、順次、液-液分配し、得られた各可溶性画分についてひと胃癌(Kato-III,MKN-28,MKN-45)ならびにヒト大腸癌(COLO205)細胞等に対する細胞障害活性をMTT法にて測定した。その結果、n-ヘキサン可溶性画分にのみ強い活性が認められたので、この画分について同活性を指標とした活性成分の分離を各種クロマトグラフィー(シリカゲルや分取HPLC)を用いて繰り返し行い、強い活性を示すいくつかの画分を得た。さらに活性を示す周辺のフラクションから数種の成分を単離したので、各種スペクトル(UV,IR,MS,2D-NMR等)を測定し、ジテルペン系化合物と予想されるそれらの化学構造を詳細に検討中である。
腹部大動脈瘤発症・進展におけるN型カルシウムチャンネルの分子機構の解明

ApoEノックアウト(ApoE-/-)マウス(高脂血症モデルマウス)へアンギオテンシンIIを浸透圧ポンプを用いて4週間持続投与する群(腹部大動脈モデル:AII群)と、AngII投与と同時にN型Ca拮抗薬(Cilnidipine:Cil群)を浸透圧ポンプを用いて投与する群を作成し、腹部大動脈瘤発症・進展への影響を検討したところ、Cil群で有意に腹部大動脈の拡張が抑制された。また大動脈切片の免疫組織学的染色では大動脈組織におけるエラスチン断裂(EVG染色)やマクロファージ集積(CD68染色)、酸化ストレス(4-HNE、8-OHdG染色)がAII群にくらべCil群で抑制されていた。分子メカニズムを調べるためゼラチンザイモグラフィーを用いてマトリックスメタロプロテアーゼ9(MMP9)を定量したところAII群で有意に発現したMMP9がCil群で抑制されていた。また蛍光免疫染色では3-nitortyrosine(3-NT)染色にて酸化ストレスを評価したところAII群に比べCil群で酸化ストレス抑制がなされていた。CilはNタイプカルシウムチャネル(NCC)に加えLタイプカルシウムチャネル(LCC)もブロックすることから、今回得られた結果がNCCブロッキング由来の効果であることを検証することとした。よってNCC-/-マウスを京都大学森研究室から譲り受け、当のApoE-/-マウスと交配させ、ApoE/NCCダブルKOマウスの作成、継代に着手した。またヒト大動脈平滑筋細胞(HASMC)を購入し細胞実験を行った。免疫染色によりHASMCにNCCの存在が確認された。よってCilの投薬でHASMCへのAngII刺激による酸化ストレスレベル抑制されるか検証したが、抑制効果は確認できなかった。よって今後はヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた細胞実験と、上記マウスを用いた実験を行う。京都大学から譲渡されたNCC-/-マウスはヘテロであった。これはホモであった場合に生殖能力がないためであった。このためこのNCC-/-ヘテロマウスと当学のApoE-/-ホモマウスを交配させ、NCC-/-ヘテロ、ApoE-/-ホモの状態のマウスを一定数作成し、これを継代維持する必要があった。さらに実際に実験に用いるのはNCC-/-ホモ、ApoE-/-ホモマウスのオスのみであることから実験開始前に上記の継代マウスを実験開始日から逆算して一定数matingし、目的のオスを生ませる必要がある。このことから必要なマウスの作成および安定した継代が行える環境を整えるのに膨大な時間を要した。またin vivoにおけるCilのAII誘発性大動脈瘤抑制効果を裏付けるためHASMCを用いた細胞実験を行ったが、HASMCにNCCが確認できたものの、CilによるAII誘発性酸化ストレス抑制効果が確認できず、Cilの血管壁におけるNCCを介した大動脈瘤抑制効果の主座は内皮細胞にあると類推し、ヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)の購入を行い、これによる細胞実験への切り替えが必要となったことが遅延した理由である。HUVECを購入し、細胞実験(CilによるAII誘発性酸化ストレスの軽減効果の立証および内皮細胞におけるNCCの存在確認)をおこなう。またNCC-/-ホモ、ApoE-/-ホモマウスのオスを作成しこれを用いたin vivo実験も行うことで、CilによるAII誘発性大動脈瘤抑制効果が血管壁におけるNCCブロッキングを介したメカニズムによってもたらされることを検証する。ApoEノックアウトマウス(高脂血症モデルマウス)へアンギオテンシンIIを浸透圧ポンプを用いて4週間持続投与する群(腹部大動脈モデル:AII群)と、AngII投与と同時にN型Ca拮抗薬(Cilnidipine群)を浸透圧ポンプを用いて投与する群を作成し、腹部大動脈瘤発症・進展への影響を検討したところ、Cilnidipine群で有意に腹部大動脈の拡張が抑制された。また大動脈切片の免疫組織学的染色では大動脈組織におけるエラスチン断裂(EVG染色)やマクロファージ集積(CD68染色)、酸化ストレス(4-HNE、8-OHdG染色)がAII群にくらべCilnidipine群で抑制されていた。分子メカニズムを調べるためゼラチンザイモグラフィーを用いてマトリックスメタロプロテアーゼ9(MMP9)を定量したところAII群で有意に発現したMMP9がCilnidipine群で抑制されていた。また蛍光免疫染色では3-nitortyrosine(3-NT)染色にて酸化ストレスを評価したところAII群に比べCilnidipine群で酸化ストレス抑制がなされていた。CilnidipineはNタイプカルシウムチャネルに加えLタイプカルシウムチャネルもブロックすることから、今回得られた結果がNタイプカルシウムチャネルブロッキング由来の効果であることを検証することとした。よってNタイプカルシウムチャネルノックアウトマウスを京都大学森研究室から譲り受けるため手続きを進めることとした。またヒト血管内皮細胞(HUVEC)やヒト大動脈平滑筋細胞(HASMC)を用いた細胞実験を行うべく細胞の購入、培養を開始した。遅延理由としては1in vivoで得られた結果がNタイプカルシウムチャネル単独阻害でも得られるかを調べるためωconotoxin(Nタイプカルシウムチャネル特異的阻害剤)を投薬した群との比較を行うことを画策したが、これまでの文献報告ではω

conotoxinのinvivo実験は髄腔注射や静脈注射の単回投与による短時間の刺激、観察を行うものしかなく、我々の動物実験系に適応させるのが困難であった。2分子メカニズムを探るための炎症性サイトカインのmRNA定量を行ったが、いずれも有意な変化がえられなかったこと。3Nタイプカルシウムチャネルノックアウトマウスを京都大学森研究室から譲り受ける予定であったが、譲渡予定のため飼育されていたマウスが親マウスによる捕食やネグレクトの結果死亡してしまうという事例が繰り返された。そのため凍結胚を譲り受けるということに変更したが、京都大学自体には保存がなされておらず、共同研究先から譲り受けることになるなど予想外のトラブルに見舞われたことが原因と考えるApoEノックアウト(ApoE-/-)マウス(高脂血症モデルマウス)へアンギオテンシンIIを浸透圧ポンプを用いて4週間持続投与する群(腹部大動脈モデル:AII群)と、AngII投与と同時にN型Ca拮抗薬(Cilnidipine:Cil群)を浸透圧ポンプを用いて投与する群を作成し、腹部大動脈瘤発症・進展への影響を検討したところ、Cil群で有意に腹部大動脈の拡張が抑制された。また大動脈切片の免疫組織学的染色では大動脈組織におけるエラスチン断裂(EVG染色)やマクロファージ集積(CD68染色)、酸化ストレス(4-HNE、8-OHdG染色)がAII群にくらべCil群で抑制されていた。分子メカニズムを調べるためゼラチンザイモグラフィーを用いてマトリックスメタロプロテアーゼ9(MMP9)を定量したところAII群で有意に発現したMMP9がCil群で抑制されていた。また蛍光免疫染色では3-nitortyrosine(3-NT)染色にて酸化ストレスを評価したところAII群に比べCil群で酸化ストレス抑制がなされていた。CilはNタイプカルシウムチャネル(NCC)に加えLタイプカルシウムチャネル(LCC)もブロックすることから、今回得られた結果がNCCブロッキング由来の効果であることを検証することとした。よってNCC-/-マウスを京都大学森研究室から譲り受け、当のApoE-/-マウスと交配させ、ApoE/NCCダブルKOマウスの作成、継代に着手した。またヒト大動脈平滑筋細胞(HASMC)を購入し細胞実験を行った。免疫染色によりHASMCにNCCの存在が確認された。よってCilの投薬でHASMCへのAngII刺激による酸化ストレスレベル抑制されるか検証したが、抑制効果は確認できなかった。よって今後はヒト臍帯静脈内皮細胞(HUVEC)を用いた細胞実験と、上記マウスを用いた実験を行う。京都大学から譲渡されたNCC-/-マウスはヘテロであった。これはホモであった場合に生殖能力がないためであった。このためこのNCC-/-ヘテロマウスと当学のApoE-/-ホモマウスを交配させ、NCC-/-ヘテロ、ApoE-/-ホモの状態のマウスを一定数作成し、これを継代維持する必要があった。さらに実際に実験に用いるのはNCC-/-ホモ、ApoE-/-ホモマウスのオスのみであることから実験開始前に上記の継代マウスを実験開始日から逆算して一定数matingし、目的のオスを生ませる必要がある。
Ｄｕａｌ　Ｅｎｅｒｇｙ　ＣＴイメージングによる顎骨骨髄微小循環描出の試み

Dual Energy CT Imaging(DEI)を用いて下顎骨骨髄の微小血管分布を画像化することを目的に、病変切除のため下顎骨区域切除術が施行された患者の顎骨病理標本、および当該部位のCT画像を対象とし、組織切片上で骨髄の一定範囲内の微小血管分布を主観的に評価した。下顎骨切除術前のCT画像データからMPR画像を構築し組織像と照合した。評価対象の骨髄部は非常に小さく、かつ脂肪細胞の占める割合が圧倒的に大きく、至適CT画像生成方法の確立には至らなかった。組織切片上の微小血管の分布から、下顎骨骨髄の微小血管の割合は、CT画像に何らかの濃度変化を引き起こすほどには大きくないと思われた。平成24年度は、(1)DEI画像の最適化、(2)毛細血管内皮細胞の免疫組織化学的な同定、(3)デジタルマイクロスコープによる計測部位、範囲、方法の設定確認を行った。(1)DEI画像の最適化では、対象とする顎骨が小さく、さらに骨髄部の明瞭な描出は非常に困難である。描出された骨髄部の範囲内での微妙な濃度変化を識別するのはさらに困難であり、最適化をさらに進めるとともに、研究計画にある下顎底に平行な断面について現在検討中である。(2)毛細血管内皮細胞の免疫組織化学的な同定については、顎骨ファントムでは良好な染色結果が得られなかったため、病理検体として保存されている顎骨ブロックを用いて成功した。保管されている病理検体はその都度、脱灰の必要があり、実験日程が延長する結果となった。血管内皮細胞のほかに、マクロファージ、神経細胞、および低酸素マーカーを観察項目に追加した。(3)デジタルマイクロスコープによる計測部位、範囲、方法の設定確認については、DEIとの照合が可能な範囲としていたが、CT画像と組織画像の重ね合わせ画像を作成し、計数ではなく分布に重点をおく方法を試みることにした。Dual Energy CT Imagingを用いて下顎骨の骨髄の微小血管分布を画像化することを目的に、下顎骨骨髄部の脂肪組織における微小血管の分布を調べ、CT像と対比させ、CT像の特徴像と血管分布との関連性について考察した。また、マクロファージの分布、および組織の低酸素環境の既往についても同様に検討した。下顎骨の病変(良性腫瘍3症例、悪性腫瘍3症例)切除のために下顎骨区域切除術が施行された患者(男性3名、女性3名)の顎骨病理組織標本、および下顎骨切除前のCT画像を対象とした。下顎骨切除の原因病変部以外の部位を脱灰、包埋、薄切した。組織切片上で骨髄の脂肪組織の一定範囲を選び、範囲内の微小血管、マクロファージの分布を免疫組織化学的に同定し、評価対象範囲における陽性を示す領域の範囲を主観的に評価した。また、低酸素環境の既往についても免疫組織化学的に評価を試みた。下顎骨切除術前のCT画像データから、組織像の断面と対比できるようにMPR(multi-planar reconstruction )画像を構築し、組織像と照合した。骨髄内を良好に描出する微小血管分布の画像化のためのDEI生成では、Dual Energy CT Imagingの特徴を有効にするまでに至らなかった。通常のCT画像を用いても骨髄内を比較的良好に描出可能であったが、対象とする骨髄部が非常に小さく、骨の硬化の範囲が広い部位の評価は確実性を欠き、骨髄評価のための至適CT画像生成方法の確立には至らなかった。一方、DECT Imagingに関しては、画質評価についての研究報告を行った。評価対象範囲では圧倒的に脂肪細胞の占める割合が大きく、CT画像に何らかの濃度変化を引き起こすほどには微小血管の割合は小さく、造影を行わない微小循環の画像化には限界があると考えられる。平成23年度は、顎骨ファントムのCT像と組織像との照合方法の確認、および、DEI処理ソフトウェアを用いて骨髄のみを抽出したDEI像の作成を行った。CT像と組織像との照合は、以前の上顎の歯槽管についての画像解剖学的研究で用いた方法に準じて、組織切片の作成方向を基準に用い、画像処理ソフトウェア上で任意に回転させたCT像を組織像に対応させた。組織切片の断面とCT断面画像の一致には顎骨標本の包埋の方向が大きくかかわるが、顎骨標本が十分大きくない場合には近遠心的かつ内外側的にCT撮影時の基準平面と一致させることが困難であり、当初考えていた下顎下縁平面を基準とした包埋は不適切であると思われた。下顎骨の小さな標本でランドマークの設定が難しい場合、有歯顎は咬合平面を、無歯顎は歯槽頂を基準にした包埋を検討することにした。

また、以前の研究ではマイクロCT像と組織像を照合させたが、本研究では医科用CT像との照合であり微細な調整が困難で、顎骨のCT像と組織像をブロックごとで照合させ、その後、CTボリュームデータから断面像を再構成する方法を検討することにした。DEI処理ソフトウェアを用いた骨髄のみを抽出したDEI像の作成は研究協力者が行った。得られたDEI像は、研究代表者らが以前に下顎骨の骨髄部の病態評価のために検討したCT軟組織表示像に類似していた。また、下顎骨の基底部で、かつ、非常に狭い範囲の標本を対象とした場合でも評価が可能か検討を要する。したがって、両者の相違点を検討するとともに、下顎骨の狭小な骨髄部の表示により有効と考えられるDEI像の作成を進める必要が生じた。(1)DEI画像の最適化(2)毛細血管内皮細胞の免疫組織化学的な同定(3)デジタルマイクロスコープによる計測部位、範囲、方法の設定確認を行い、それぞれで予定を遅延させるか変更を余儀なくさせる問題が出たことが原因である。(1)については引き続き最適化を続けるものの、代替の方法でも並行して行う必要がある。(2)については保管されている病理検体はその都度、脱灰の必要があり、実験日程が延長する結果となった。一方で、病理検体で良好な染色結果が得られ、対象患者への適用が可能であることがわかった。(3)については(1)の問題とつながるが、むしろCT画像と組織像との重ね合わせから、観察対象の分布の評価が臨床に応用しやすいを考えられる。全般的には、24年度は、海外研修、施設における診療棟移転および研究棟改修により、研究のための時間の確保が困難であったことが原因のひとつとして挙げられる。平成23年度は、顎骨ファントムのCT像と組織像との照合方法の確認、および、DEI処理ソフトウェアを用いて骨髄のみを抽出したDEI像の作成にとどまった。本研究の目的は、DEI像を組織像と詳細に照らし合わせることにより、DEIの持つ物質分別情報の精度を検証し、顎骨骨髄の微小血管の分布、すなわち微小循環の画像化につなげることである。具体的には、遺体の顎骨ファントムを用いて照合方法を検討し精度検証を通じて最適化に反映させること、および、DEI像に現れる傾向と微小血管分布密度との関連性の検証を通じその有用性を明らかにすることである。現時点では、遺体の顎骨ファントムを用いて照合方法を検討する段階にとどまり、また、骨髄のみを抽出したDEI像の作成も進展しておらず、目的の達成度は非常に低い。主な理由として、研究代表者が長期海外研修のため不在であったこと、研究代表者と協力者との連携が希薄であったこと、予定したCT装置の使用制限があったことが挙げられる。全体流れは当初の計画どおりで問題ないが、DEI像の最適化をどの段階でやめるか、毛細血管内皮細胞など計数対象項目の評価範囲と方法を計数から分布にするか、の2点を早々に決め、最終年度は決定された方向で進める。また、脱灰、染色が予定していたよりも時間を要するため、当初予定していた研究協力者の補助にほかの協力者を回すことを考える。
プロテオーム解析によるネフローゼ症候群の病因・病態の解明

小児期発症の腎疾患の代表的存在であるネフローゼ症候群は、糸球体血管係蹄に存在する蛋白濾過障壁の破綻により発症する。近年、podocyte(糸球体上皮細胞)およびpodocyteを連結するslit膜が蛋白尿濾過障壁の実体であることが明らかになってきた。特に腎特異的発現分子であるnephrinがslit膜の機能と構造維持に中心的役割を担う。本研究において私共はnephrinやNeph1などのスリット膜複合体の構造をプロテオミクスの手段を用いて網羅的に解析した。その結果、スリット膜複合体がリン酸化を介したダイナミックな構造であること、この構造が細胞内シグナル伝達系を司るプラットフォームとして働きそのシグナル伝達が蛋白尿とネフローゼ症候群の発症と深く関連することが明らかになった。また、ネフローゼ症候群や巣状糸球体硬化症を起こす遺伝子変異について解析を行い、Epstein-Fechtner症候群においてMYH9遺伝子のR702変異が糸球体硬化のフェノタイプと最も相関する変異であることを見いだした。これらの結果は糸球体上皮細胞の機能分子がネフローゼ症候群を惹起するメカニズムを明らかにするものである。1)neph1細胞内領域でのリン酸化の解析in vitroでNeph1にFyn(Src family kinase)を添加し,抗リン酸化チロシン抗体で染色するとFyn存在下でのみNeph1のリン酸化を観察した。リン酸化されたNeph1の細胞内領域をトリプシンで消化し, MALDI-TOF質量分析装置およびLC-MS/MS法にを用いて解析し,Fynによりリン酸化されるNeph1のチロシン残基(Y604,Y637,Y638,Y654およびY657)を同定した。2)Neph1後のシグナル伝達の解析in vitroにおいてリン酸化Neph1にラット糸球体蛋自を添加し,リン酸化Neph1に特異的に結合する蛋自の同定を試みた。Grb2およびCskのがリン酸化Neph1に特異的な結合をした。一方,スリット膜蛋白として重要なnephrinにはリン酸化の有無にかかわらずGrb2の結合を認めなかった。さらに,Fynでリン酸化を受ける4つのチロシン残基のそれぞれをフェニルァラニンに置換した変異体を用いてNeph1のどのチロシン残基のリン酸化がGrb2との結合に重要かを解析し,Neph1とGrb2の結合はY637およびY638のリン酸化を介していることを明らかにした。3)ネフロ-ゼ発症モデル動物におけるNeph1リン酸化の意義の解析ネフローゼ発症モデル動物(PAN腎症およびプロタミン硫酸腎症)におけるNeph1リン酸化について解析した。ラットへのプロタミン硫酸の投与ではNeph1の蛋白量は変わらないが,Neph1が著明にリン酸化を受けることを明らかにした。さらにプロタミン硫酸投与によりY637のチロシン残基がりン酸化を受けることも判明した。さらに,PAN腎症モデルでも蛋白尿発症時期に一致してY637のチロシン残基がリン酸化されることを明らかにした。今回の研究は,スリット膜分子の構造異常ではなく,シグナル伝達機構の破綻がネフローゼ発症の病態を説明しうる可能性を示唆するものである。来年度は,ヒト腎生検検体を用い,実験動物で確認したスリット膜関連分子のシグナル伝達の変化がヒト蛋白尿発症期にも生じているかを明らかにする。また,上皮細胞関連分子のリン酸化とその下流にある関連分子の病態での変化についての解析をさらに進める予定である。小児ネフローゼ症候群の発症機序について解析し、以下の結果を得た。培養糸球体上皮細胞をvanadateで刺激し、NephlがSrc family kinaseによりリン酸化される。Fynによりリン酸化されるNephlのチロシン残基(Y604,Y637,Y638,Y654おおびY657)を同定した。アダプター蛋白質Grb2およびチロシンキナーゼCskがリン酸化Neph1に特異的に結合した。Neph1とGrb2の結合はY637およびY638のリン酸化を介する。プロタミン硫酸の投与でNeph1が著明にリン酸化を受け、Y637のチロシン残基がin vivoでリン酸化を受ける。Neph1Y637のリン酸化はGrb2の結合を介してRas-ERK経路に対して抑制的であった。

以上より、糸球体上皮細胞.傷害時にNeph11がin vivoでリン酸化を受け、その下流で細胞内シグナル伝達を制御する事が明らかとなった。さらに、リン酸化Nephrinに特異的に結合する蛋白質としてPLC-g1を同定した。PLC-g1は糸球体では糸球体上皮細胞に昨常に高発現していた。PLC-g1はそのSH2ドメインを介してNephrinのY1204のリン酸化に特異的に結合する。また、Nephrin pY1204の特異的なリン酸化を介してNephrinの近傍にPLC-g1がリクルートされ、NephrinY1204のリン酸化によりPLC-glが活性化される。ネフローゼ発症モデル動物(プロタミン硫酸腎症)にて、NephrinY1204の著明なリン酸化、およびPLC-g1の細胞膜へのリクルート、さらにPLC-g1の活性化が生じる。さらにNephrinのリン酸化が糸球体上皮細胞のカルシウムシグナルと直接関係する。本研究により、糸球体上皮細胞の傷害時にNephrinやNephlの細胞内領域がリン酸化を受け、その下流で多くのシグナル伝達を制御する事が明らかとなった。腎糸球体の上皮細胞接着装置であるスリット膜は現在尿を産生する際の濾過バリアーとして働いていることが知られている。そのスリット膜構成成分であるNephrinやNeph1が糸球体上皮細胞の傷害時にチロシンリン酸化の修飾を受け、細胞内に様々なシグナルを伝達していることが明らかになってきた。一方、TRPC6というカルシウムチャネル(CaC)の活性型変異により遺伝性ネフローゼ症候群が引き起こされることから、糸球体上皮細胞のカルシウム代謝に注目が集まっている。これまでCaCの障害による本症の発症機序は不明であった。今回、私共は質量分析器を用いて網羅的な結合蛋白質を解析し、TRPC6のリン酸化に伴い、TRPC6にNephrinおよびPLCγ1が結合し、PLCはTRPC6の細胞膜への移行およびチャネル活性に対して促進的に、Nephrinは抑制的に働くことを明らかにした(投稿準備中)。これらの成果は蛋白尿発症機序において最も重要性が高いとされている上皮細胞の傷害における細胞内カルシウム濃度の上昇機序を説明するものであり、その修飾による治療応用の可能性が示唆される。一方、MYH9の変異によるEpstein-Fechtner症候群の腎病変を解析し、糸球体上皮細胞の形態変化が著しいことを見いだした。これは糸球体上皮細胞におけるMYH9がその特異な細胞形態の形成・維持に重要な役割を果たす可能性を示唆する。さらに、蛋白尿の発症機序および糸球体硬化症発症の原因としてMYH9の役割を示しており、極めて重要な発見である。
カーボンナノチューブチタンを使用したインプラントの開発

UHMWPE (ultrahigh molecular weight polyethylene) on metal摺動部の摩耗特性を評価するために,ピンをUHMWPE,ディスクをCNT-SP700,SP700あるいはCo-Cr-Moにしてピンオンディスク型すべり摩耗試験を行った.ディスクがCNT-SP700,SP700のときのピンの摩耗量には差は確認されなかったが,これらをCo-Cr-Moの結果と比較すると,摩耗量が有意に小さかった(p<0.001).SP700とCNT-SP700のφ14 mmディスク上で, MC3T3-Eを培養した.培養後1, 3, 5, 7でAlamar Blue assayを用いて細胞増殖試験を行った.1日培養後, SEM観察を行った.Image J 1.42qを用いて写真を数値化し,細胞面積とアスペクト比について解析を行った.CNT-SP700とSP700を比較すると,培養1日目には細胞数に差はないが,培養3日目以降ではCNT-SP700で細胞数が有意に多かった.培養1日後のSEM観察の結果では, SP700とCNT-SP700の細胞面積およびアスペクト比に有意な差はなかった.CNT添加によりチタン合金の耐摩耗性と細胞増殖能の向上が確認された.Ti6Al4V、CoCrMo、0.9% wt CNT含有Ti6Al4VディスクとUHMWPE(ultra-high molecular weight polyethylene GUR1050使用)ピンを用いて、pin on disc試験(400000回)を試行した。Ti6Al4VとCoCrMoを用いた場合のポリエチレン摩耗量は、両群とも3.8 mm3と同じであった。0.9% wt CNT含有Ti6Al4Vを用いたときのポリエチレン摩耗量は3.0 mm3と約25%減少していた。しかし、実用化を目指すには更なる摩耗量の減少が必要であることから、新たなチタン合金表面処理について検討を行った。Ti6Al4VのプレートにDLC(diamond-like carbon)処理と炭素ドープ酸化チタン処理を行い、同様のpin on disc試験を行った。DLC群は試験初期より摩耗が急上昇し、20万サイクルの摩耗量が74.66±13.39 mm3であり、Ti6Al4Vプレート上のDLC膜が早期に剥がれていた。炭素ドープ酸化チタン処理群の摩耗量は2.01±0.12 mm3であり、Ti6Al4VとCoCrMoの摩耗量の約半分となっていた。Ti6Al4Vを鏡面仕上げした場合に白色干渉計で表面粗さを測定すると0.009μmであるが、これを炭素ドープ酸化チタン処理すると表面粗さは0.109μmとなっていた。炭素ドープ酸化チタン処理後に表面粗さを小さくできれば、更に摩耗量を低下することが可能であると考えられた。医歯薬学CNT添加Ti6Al4Vのpin on disc試験、マウス骨芽様細胞を用いた培養試験は達成できたが、CNT添加Ti6Al4Vの調整に手間取ったため実験は少し遅れ気味である。CNT添加Ti6Al4Vの表面処理(熱処理、酸やアルカリによる処理)を行うことで、擬似体液中でアパタイト形成能がどのように変化するかを検討する。また、マウス骨芽様細胞を用いて、細胞の遺伝子発現をreal-time PCRやwestern blottingで検討する。骨芽様細胞増殖の至適条件が得られれば、ウサギの大腿骨にサンプルを埋植して組織学検討や力学的検討を行う。平成25年度の計画は、SP700: Ti-4.5Al-3V-2Fe-2MoとCNT 0.7 wt%含有SP700を使用したピン(φ2 mm)とディスク(40 x 40mm)を用いたpin on disc試験を行う。CNTチタンとチタン(コントロール)材料よりdiscを作製して、disc上でマウス骨芽様細胞を培養して遺伝子発現などを検討することになっている。
「奥行きの感覚」を求めてー新しい奥行き知覚から導かれる新共通感覚の構築

この研究は、古今東西の美術作品を実見し調査するだけでなく、その作品の中に潜む奥行きのあり方を理解するために、研究対象ごとに制作課題を創案し、研究者も含む1015名ほどの被験者にその課題制作を行い、その制作結果から奥行きの感覚の核心に触れようとする試みである。奥行き研究の3年目は、西洋、東洋に共通して比較考察のできる風景画に焦点を絞って研究を開始した。手始めに大阪市立美術館で開催された中国絵画の特集展示「阿部房次郎と中国絵画」の見学、そして国立国際美術館での「プーシキン美術館展」の見学、さらに台北・国立故宮博物院の中国絵画の実見調査という手順をとった。特に故宮博物院の「国宝再現ー書画菁華特展」は国宝の書画を選りすぐっての陳列で、宋画における奥行きに関する様々な特徴を知ることができた。この知見を基に、風景画を風景画たらしめている要素について問いかける課題、山水画考察を深める制作課題を創案し試作した。その過程では、小林玉雨(博士課程学生)の中国留学体験談から得た山水画の制作方法についての実際や浅野均(日本画専攻教授)による山水画の講義を開講し課題制作の参考とした。また、前年度から引き続き、マチスの切り絵から伺える彫刻の空間との親和性についての研究を引き続き行ない、カットアウトが立体から平面に翻訳するための方法として、可能性に満ちていることが確認できた。この制作過程の詳細と分析、そして国立故宮博物院の実見調査記録は2018年度の京都芸大紀要に掲載した。また、それとは別に兵庫県立美術館と協力して彫刻における触覚とは何かについての課題を検討する展覧会を(中ハシの個展)行なった。視覚を遮断して触覚だけによる塑造を行う中で、触覚による奥行きには大きさやフォルムの捉え方において、通常の塑造とは大きく異なることが明らかとなった。この制作内容と記録も同じく2018年度の京都芸大紀要に詳述した。当初検討していた、1「領域ごとに異なる奥行き」の研究、2「領域をまたがる横断と応用の奥行き」の研究、3「原始的・根源的な奥行き」の研究の積み上げは、ほぼ順調に推移している。また、晴眼者による視覚を遮断して塑造する研究が、奥行き研究の内容に新たな項目として取り上げられた。これによって異なった視点からの奥行きの感覚の可能性を示唆することができたことは収穫であった。ただし、それをどのようにこれまでの研究の中に位置付けるかが、曖昧なままとなっており、奥行きに関する制作課題の積み上げられた考察の中で包括的な検討が必要である。31年度は、総括に向けて、これまで3年間に渉ってやってきた研究活動の検証と仮説作業にあてられる。すなわち、1「領域ごとに異なる奥行き」の研究、2「領域をまたがる横断と応用の奥行き」の研究、3「原始的・根源的な奥行き」の研究である。各項目のそれぞれの分析と総合的な奥行き知覚の新共通感覚の仮説作業に入りたい。今までのところ、各項目の実見作業は、ほぼ果たしてはいるが、なお再度確認のために、国内で実見のできる美術館等を追加して行かねばならないだろう。また本年度は、今までの研究の中で漏らしていたと思われる領域についての実見とそれに伴う制作課題による検証も併せる必要がある。例えば、前述の「触覚の奥行き」、それから「庭園空間」の奥行きの研究である。触覚については引き続き、視覚を遮断した制作を進めてみて、その成果を観察し、どのように位置付けるかの検討をしたい。また庭園については特に日本庭園に焦点を当て、その成り立ちや構造の仕組みを明らかにする実制作による検証を行う予定である。当初、この奥行きという特有の性質から発生する広範な領域の拡がりから、あえて平面表現、立体表現と呼ばれている領域での固有の奥行きを有する作例を取り上げてきたが、日本固有の空間表現で、かつ芸術作品としても鑑賞できる日本庭園は、四季を通じて変化し、目線を誘う道ゆきとそれに従いながら次々に開けてゆく空間は、2年前に調査したヴェゼール河流域にある洞窟壁画の空間性と比較しながら論じることができるのではないかと期待している。「人が意図的に造作する屋外の自然とその奥行き」(仮称)として付け加えてみたい。「奥行き」の調査研究の第一歩として、平面表現、立体表現と呼ばれている領域の中で特に固有の奥行きを有する作例に焦点を当てて研究を進めた。また、先史から古代の作例にも、奥行きの感覚は自然な形で存在し、その造形的な構造を知るための調査研究を行った。以下に時系列に符号を付けて記す。1・舟越桂5月に新潟市立美術館で開催された「舟越桂私の中のスフィンクス」展の見学、会場に作者自身を招き、出品作品を前にしながら彫刻の奥行きに関する質疑応答をした。2・ジャコメティ7月に上海の余徳耀美術館で開催されたジャコメティ大回顧展の見学。総点数250点を数える作品群は、ともすると幾つかのフェーズに分断して理解していた作風の推移が、極めて自然な流れの中で理解でき、収穫となった。3・ブランクーシ、セザンヌ、ブールデル9月の約2週間に渡るパリ研修旅行、ルーブル美術館、オルセー美術館、ブールデル美術館、アトリエブランクーシ、ロダン美術館などを数回にわたって見学した。4・宋元画12月の4日間の台湾の故宮博物館の見学。数年ぶりに郭熙の早春図の展示があると聞き、本学の東洋美術史の竹浪遠准教授に先導されて調査した。

2017年度より竹浪氏を奥行きの研究者に迎えることが研究者、全員一致で決まった。5・縄文土器10月翌年2月5月に十日町市博物館を見学した際、笹山縄文館を案内される機会を得て、所蔵している土器資料を借用した。完品5点と突起部断片8点は、我々の模刻対象となり、単なる形だけではなく、制作の順序、使われた道具、そして何よりも造形化の意識をその模刻する中で探った。6・洞窟壁画2017年2月、国立科学博物館で紹介されていたラスコー展を見学、見学に際してこの展示協力をした五十嵐ジャンヌ氏の解説と講義を受け、洞窟壁画の研究基盤を探った。7・紀要以上の活動(4月11月)を本学紀要に掲載した。当初予定していた研究計画に加え、研究するにあたり見過ごせない展覧会が、国内外にあり、その見学を優先した為、自然に内容が豊かになり研究が進捗した。ただその為に、当初の予算をオーバーし、台湾研修は研究代表者(中ハシ)のみが参加し自費にて調査研究した。初年度である今年は、まずは固有の奥行きを有する作例を実見をして、その対面から率直な実感を得ようとした。その意味で、試みは当初予想していたものをはるかに超えて、研究が進んだ一年となった。「奥行き」研究の次年度として、原始的・根源的奥行き知覚の調査、研究を行なった。前半は、先史美術の特に洞窟壁画の研究で知られる五十嵐ジャンヌ氏に特別授業を依頼し、洞窟実見に際しての具体的な知識や問題点を拾った。そこで得た知見に基づき洞窟の中の環境から想定される壁画制作の幾つかの実験的な制作課題を考案し制作を行なった。移動する光源と凹凸のある壁面の関係、ともしびの範囲のなかでの記憶による描画、その際に使われたであろう描画材料の考察を兼ねた制作も行なった。こうした洞窟研修を見据えた研究を行った後、フランス中部べゼール河流域の洞窟群、並びにピレネー山脈の麓にある洞窟群の現地調査となった。到着当初は、五十嵐ジャンヌ氏の同行もあり、現地での不自由な交通手段の確保や現地調査についての綿密なアドバイスを頂いた。その過程及び結果は、平成30年度の京都芸大の紀要に詳述している。また、洞窟から洞窟までの移動の折に訪れた幾つかののロマネスク教会での音響、広い石造りの建築空間、そして、そこに集う人々の心の有り様は、特に響きの良い洞窟空間でより多く観察できる動物壁画と相まって、その神聖なるものへの人々の共通性について考えることとなった。研修の後半は、南仏のヴァンスおよびニースにて、マチスの晩年の切り絵制作及びマチス教会を見学し、昨年度後半はそのマチスが行なった切り絵の空間性についての研究をすることとなった。理由としては、平面的な切り絵でありながら、彫刻としての奥行きを持ったフォルムが立ち現れるところにあり、この切り絵の中に、絵画としてのの奥行きと彫刻の奥行きの二つの問題を解く鍵が同時に内在していることに注目したからである。切り絵の模写から始まり、実際にモデルを呼んで、ポーズを取らせてみて、その制作に際してのマチスの意識の検証と実際の鋏の動かし方などを検証した。この研究活動も京都芸大紀要に詳述している。ラスコー展が一昨年、日本で開催され、その主要な企画者であり、また研究者である五十嵐ジャンヌ氏と出会い、昨年度は彼女から特別授業を受け、そしてラスコー洞窟にも同行していただいた。氏が推薦される洞窟群を見学し、事前に学習していた研究が意味のあるものとなった。
共同想起事態における符号化時と検索時の視点の違いと記憶成績との関係

1.研究目的物語文の学習後、(一人で想起する)個人想起事態と(二人で想起する)共同想起擬態(記銘時の視点の同じ条件と異なる条件)を設け、記銘時の視点の違いが、(1)共同想起全体のパフォーマンスを高くするのか、(2)共同想起による個人のパフォーマンスの抑制を消失させるのか、について検討を加えた。2.方法大学生を対象に、視点の異なる2種類の物語文を偶発的に学習させた直後に、全員に個人で偶発再生を行わせた。引き続いて、個人想起条件群の被験者には、もう一度、個人で再生を行わせた。これに対して、共同想起条件群の被験者には、個人再生に引き続いて、二人が一組になって話し合いながら共同で再生を行わせた。この時の二人の組み合わせとして、同視点共同想起群では、視点の同じ物語文を読んだ者同士が、異視点共同想起群では、視点の異なる物語文を読んだ者同士が、それぞれ、二人一組となって、再生を行った。3.結果(1)共同想起は、全体のパフォーマンスに関しては、個人想起よりも優れるもの、視点の違いによる共同想起条件の間には有意差が認められなかった。(2)記銘時の視点が異なっても個人のパフォーマンスの抑制は消失しなかった。4.考察共同想起による視点の違いが、共同想起のパフォーマンス全体に効果がなかったり、個人のパフォーマンスの抑制を消失させないのは、共同想起事態において個人が正確な想起を目指すため再生基準を厳しいものに変えてしまい、本来再生できる項目までも再生を控えてしまうことによると思われる。1.研究目的大学生を対象に、物語文を偶発的に学習させた後、(一人で想起する)個人想起事態と(二人で想起する)共同想起事態を設け、次の2つの観点から検討した。(1)共同想起は個人想起より想起成績が優れるのか?(2)共同想起を行うことによって、個人想起では想起できない情報が想起されるのか?2.方法物語文を偶発的に学習させた直後に、全員に個人で偶発再生を行わせた。これに対して、共同想起条件群の被験者には、個人再生に引き続いて、二人一組になって話し合いながら共同で再生を行わせた。3.結果(1)共同想起は個人想起より再生成績が優れることが明らかになった。(2)共同想起を行っても、個人想起では想起できない情報は想起されないだけではなく、むしろ個人のパフォーマンスが抑制されることが明らかになった。4.考察先行研究の結果と併せて考えると、共同想起の直前に、個人再生を行うことが、個人に特有な視点に合った記憶内容を強化(確認)することに役に立ち、共同想起の優秀性が現れることが示唆された。一方、共同想起によって個人のパフォーマンスが抑制されるのは、他者の再生した記憶がリスト内手がかりの抑制効果のように働くこと、集団になることによって個人が最大限の再生努力を行わなくなる社会的手抜きなどが考えられる。1.研究目的物語文の学習後、(一人で想起する)個人想起事態と(二人で想起する)共同想起事態(記銘時の視点の同じ条件と異なる条件)を設け、記銘時の視点の違いが、(1)共同想起全体のパフォーマンスを高くするのか、(2)共同想起による個人のパフォーマンスの抑制を消失させるのか、について検討を加えた。この時の二人の組み合わせとして、同視点共同想起群では、視点の同じ物語文を読んだ者同士が、異視点

共同想起群では、視点の異なる物語文を読んだ者同士が、それぞれ、二人一組となって、再生を行った。3.結果(1)共同想起は、全体のパフォーマンスに関しては、個人想起よりも優れるもの、視点の違いによる共同想起条件の間には有意差が認められなかった。(2)記銘時の視点が異なっても個人のパフォーマンスの抑制は消失しなかった。4.考察共同想起による視点の違いが、共同想起のパフォーマンス全体に効果がなかったり、個人のパフォーマンスの抑制を消失させないのは、共同想起事態において個人が正確な想起を目指すため再生基準を厳しいものに変えてしまい、本来再生できる項目までも再生を控えてしまうことによると思われる。