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承久の乱後における王権思想の変容と展開に関する研究

2、前年度、『徒然草』の第226段について、この段は従来のように『平家物語』の作者、成立説としてではなく、兼好の歴史認識(公武認識)を示すものとして理解されるべきことを明らかにしたが、本年度はこれを伝統的な音曲論との関わりにおいて捕捉し、論文化した(平成18年7月、和泉書院から刊行予定の『中世文学の展望台』に収載)。3、13世紀末の蒙古の襲来は、国家の危機として、国家、王権への認識を新たにさせたが、そのことを明らかにするための基礎作業の一つとして、『八幡宮愚童訓』の未紹介資料である岩国徴古館蔵本の調査を行った。次年度の紀要に解題を付して翻刻する予定である。本研究は、拙著『六代勝事記の成立と展開』(平成15年、風間書房刊)の成果を承け、承久の乱後に明確になってくる、イデアとしての帝王と現実の天皇とを峻別する二元的な王権思想について、その変容と展開の姿を中世文学史の中に見定めようとするものである。三年計画の最終年に当たる本年度は、次のような研究を行った。1.承久の乱の直前の思想状況を見定めておくことは本研究にとって不可欠であり、これを『愚管抄』によって検討した。その結果、『愚管抄』は摂家将軍の出現を宗廟神の約諾による歴史の必然と理解し、後鳥羽院の倒幕の企てを道理に惇るものとして牽制しようとする現実的な意図を有することが明らかになった。詳細は「研究成果報告書」(冊子)に論文化として掲げた。2.承久の乱後の王権思想については、『六代勝事記』と『吾妻鏡』を検討し、『神皇正統記』『梅松論』等への展開に見通しをつけた。3.『徒然草』第二二六段は従来『平家物語』の成立事情を説明したものとして注目されてきたが、その背景に承久の乱への記憶が存することを明らかにした。王権思想の展開の背景を理解する上で意味があろう。4.蒙古の襲来は、国家の危機として国家や王権への意識を顕在化させたが、そのことを明らかにするための基礎的な作業として、岩国徴古館蔵の『八幡宮愚童訓』の調査を行い、その位置づけと翻刻を行った。なお、当初に目論んだ課題のうち、『神皇正統記』や『梅松論』、説話集などの検証は未だ見通しの域を出ていないので、これらについては今後の課題としたい。
キリシタン墓と中国人墓にみる大航海時代の外来墓制に関する基礎的研究

戦国時代から江戸時代初期にかけて九州を窓口に日本列島につたわったキリスト教墓地の分布を調べるために、十字架碑やキリシタン墓特有の遺構の存在する遺跡の調査を、大分県内2か所で実施した。いっぽうキリシタン墓碑との類似が以前から指摘されていた江戸時代17世紀の唐人墓の様相を明らかにするため、華南様式の墳墓の分布調査を九州を中心に行い、その結果1620年前後を境にキリシタン墓碑が日本国中から消滅する一方で、中国風の唐人墓地が日本に出現することが明らかになった。キリシタン墓碑の調査については、大阪府茨木市千提寺西遺跡の中谷家墓地の調査を行った。現在大阪府教委が調査中のこの遺跡は、近世初頭にキリスト教徒となり、19世紀末まで潜伏が確認できる一家族の室町時代から現在に至る墓地であり、中世末から17世紀に作られた墓地の一部に、九州で確認された石組遺構が発見され、下音羽大賀家墓地とともに九州からキリシタン墓地の特徴が伝播していることを確認した。大分県では臼杵市下藤キリシタン墓地の十字架石造物の実測調査と、豊後大野市犬飼町御霊園クルスバ遺跡の石造物実測調査を行ったが、その中で新たに罪標十字架を陰刻した石造物を確認し、キリスト教遺跡であることが明瞭となった。また下藤キリシタン墓地と類似した石組遺構を伴う墓地である岡墓地の石造物調査を実施し、15世紀から始まった墓地を改作してキリシタン墓地となっている可能性が高くなった。近世初期のキリシタン墓地の上部構造=石組遺構が九州から関西に分布することが判明した。中国人墓については、九州の17世紀の墓地を調べるために、熊本県玉名市の3基の唐人墓の実測調査と鹿児島県坊津の略測調査を行い、これらの墓地が中国明代の福建省に遡源する華南様式の中国人墓で、とくに1619年日本最古の年号をもつ肥後四官墓は石材と切り出し方法の特徴から、被葬者の出身地である福建省から搬入された可能性高いことが判明した。17世紀後半には、黄檗宗の僧侶とくに18世紀初めまではその墓地の形式が華南様式の影響を強く受けたものであることが判明し、同時に当時の上層武士の流行した儒墓の一部と琉球王国の亀甲墓が華南様式の唐人墓から影響を受けていることが判明した。17世紀初頭のキリシタン墓碑は、福建を中心に展開した須弥壇形式の墓碑の一部と類似している可能性があり、次年度の調査でより詳細に比較する予定である。キリシタン墓地の調査としては、大分県豊後大野市犬飼町栗ヶ畑亀の甲墓地調査と臼杵市野津町神野家墓地のを踏査し、臼杵市下藤キリシタン墓地に存在する石組遺構と伏碑を確認した。とくに神野家墓地では伏碑の上にのちに近世墓石が付加されたきわめて特異である。昨年石組遺構の存在を確認した豊後大野市岡ナマコ墓遺跡の実測調査をおこない、20基以上の伏碑を確認し、仏教施設を破壊したうえでキリシタン墓地が設けられている状況を記録した。伏碑の型式の類似から見て近世17世紀初頭の墓地と推定された中国人墓地の調査としては、京都府宇治市黄檗山万福寺で1世隠元和尚墓から4世獨湛和尚墓を見学し、いずれも墓碑の背後に墳丘と半円形の外周施設、墓碑前面に前庭を有する華南様式の墓地であり,1660年代から1700年ごろに作られたことがわかった。さらに京都市嵯峨野二尊院墓地では18世紀の伊藤仁斎・東涯父子の墓地を調査し、周辺の儒教墓にまで華南様式の墓地の影響が認められることを確認した。長崎市悟真寺唐人墓地の実測調査をおこなった。17世紀代の銘のある唐人墓碑の実測調査を完了。最古の唐人墓の一群の中にキリシタン墓碑に類似する墓碑があることを確認し、唐人墓以前にキリシタン墓地が存在した可能性が高くなった。あわせて長崎市菩提寺唐人墓を踏査し、呉三官墓の立碑の石彫が玉名市の肥後四官墓碑によく似ていること。年代も同じ1619年で両者が本邦現存最古の唐人墓であることを確認した。鹿児島南さつま市坊津泊唐人墓は中国漆喰製の墓地であが、形態は華南様式の範疇に入る。唐人墓の型式が中国福建省に遡源する華南様式の墳墓であることを実測資料によって提示し、1619年を最古に17世紀に九州から関西まで分布することを確認した。長崎悟真寺ではキリシタン墓地から変化した可能性を指摘し、長崎においてキリシタン墓と唐人墓が接点を持つことが判明した。キリシタン墓碑の基礎カードの作成は終了したが、予定した6基の実測調査については、大阪府茨木市千提寺西遺跡の調査に切り替えたため、行えなかった。

しかしそこで九州で確認されたキリシタン墓特有の伸展葬を伴う長方形石組遺構を確認したことで、17世紀初頭の関西に分布するようになる半円柱形伏碑のキリシタン墓碑同様に、その下部遺構が九州から伝播したことを確認できたことは大きな収穫である。大分県内のキリシタン墓地遺跡については御霊園クルスバ遺跡の破壊された仏教石造物の実測調査を行った結果、最古の年号が判明するとともに、調査中に新たに罪標十字架を印刻した不況期の石造十字架碑を発見し、この遺跡がキリシタン遺跡であったことが確実となったことは、予定以上の成果である。さらに類似する石組遺構を有する遺跡の探索を進め、豊後大野市岡墓地にそれを見出し石造物の実測調査を行った。中国人墓については、熊本県と鹿児島県の現存例の実測調査を終了した。その中で熊本県玉名市所在の現存国内最古の中国人墓である肥後四官墓について、石材の矢穴の形状と石質から推定して、墓の石材は日本国内のものではなく、中国福建省つまり被葬者と推定されている朱印船貿易家の故郷からもたらされたものである可能性が強くなった。当初予定していた長崎市内の唐人墓地の実測調査は、次年度の回すことにした。それは長崎市内の墓地調査中に見出した黄檗宗の僧侶墓の初期例のなかに福建を中心に分布する華南様式の中国人墓の影響が顕著で、さらに西日本一帯の黄檗宗の古い寺院に同じ様式の墓が所在することが判明し、その分布を調べることを優先したためである。また中国の1314・1719世紀キリスト教墓地の資料収集おこない、途中経過と現状報告を平成24年12月のおおいた石造文化研究会の大会および25年3月に臼杵史談会総会でおこなった。25年度が最終年度であるため、記入しない。国内におけるキリシタン墓地と中国人墓地の基礎資料の収集を続けるとともに、比較資料として中国および東南アジアの既存の公刊資料を収集し、16世紀後半から17世紀にかけて東シナ海を中心に交流した墓制とその変遷過程を考古学的に明らかにする。そのために以下の研究を推進する。1キリシタン墓地については、大分県内に残る墓地遺構の石造物の資料化をおこなう。御霊園クルスバ遺跡、豊後大野市岡墓地、クリの木墓地。日本におけるキリシタン墓地の考古学的全体像を明らかにする。同時に禁教期にいたる変遷過程を追求する。2中国人墓地については、標識となる墓地の実測資料を整備して、日本における1719世紀の中国人墓の編年作業をおこなう。さらに江戸期日本国と琉球国に伝搬した中国華南様式の墓地を明らかにする。一つ目は西日本各地に点在する黄檗宗の中国人僧侶墓の型式的特徴を確定する、二つ目は1719世紀の日本の儒教墓にみられる中国墓地様式の影響を明らかにする。3つ目は琉球国において1670年代から採用される亀甲墓(華南の中国様式)の性格を明らかにする。3中国におけるキリスト教墓地などの宗教墓地はいずれも中国の在来墓制との混交が顕著であり、そのような16世紀17世紀の中国の宗教墓地と日本キリシタン墓地の比較をおこないたい。中国国内のキリスト教墓碑やイスラム教墓碑は共通する特徴をもっており、その特徴は中国の仏教に由来する須弥座形式や中国式墓碑の採用である。特に華南様式の墓は民族や宗教の違いを超えて採用されている可能性があり、その様相を考古学的方法で比較して見通しを得たい。4以上の資料の整備の上で、17世紀前葉に九州から始まり西日本に採用された伏碑形のキリシタン墓地と石組遺構の由来が、単純なヨーロッパからの伝搬ではなく、西北九州の在地の要素と、中国系の要素の影響をどの程度うけているか、明らかにしたい。
乳管腺葉系の3次元再構築による乳癌乳管内進展の評価と最適な乳房温存手術への応用

【目的】乳房全切除材料を用いて全乳管腺葉系をコンピューター支援下に3次元再構築し、乳管吻合と乳癌の乳管内進展の解剖学的特徴について検討した。【材料および方法】血性乳頭分泌を伴うDCISにて皮下乳腺全切除術を施行した69歳、閉経後女性の片側乳房を用いた。切除材料は10%メタノール加20%ホルマリン固定後、電動ハムスライサーを用いて厚さ2mmに全割し、厚切り標本法によって乳房内すべての乳管や小葉の走行を立体的に観察した。各切片上の乳管や小葉の断面を3次元再構築プログラム(TRI/3D-SRF、RATOC、Tokyo)によって連結し、全乳管腺葉系のコンピューター再構築画像を作製した。【結果】本症例は、乳頭を中心に16個の乳管腺葉系が放射状に配列していた。すべての乳管腺葉系は末梢方向に向かって不規則な分岐を繰り返し、全体として扇形の区域性分布を示した。乳房全体で計11箇所の乳管吻合がみられた。このうち、広範な乳癌の乳管内進展形成の危険因子である、異なる乳管腺葉系を連結する乳管吻合は2箇所であった。DCISが発生した乳管腺葉系には、隣接する乳管腺葉系との間に乳管吻合はなく、病巣は一つの乳管腺葉系の中にとどまっていた。16個の乳管腺葉系の中で、乳管吻合によって連結された乳管腺葉系は2個(12.5%)であり、残りの14個の乳管腺葉系は各々解剖学的に完全に独立した区域性を示した。また、乳頭から4cmの範囲内には乳管吻合による異なる乳管腺葉系同士の連結はみられなかった。本研究により、乳癌の乳管内進展は乳管腺葉系に沿って区域性に存在する連続病変であることが明らかになった。また、異なる乳管腺葉系の間に存在する乳管吻合(ductal anastomoses)の存在が、複数の乳管腺葉系にわたる乳癌の広範な乳管内進展を形成する危険因子であることが明らかになった。我々は、乳房温存手術材料を用いて乳管腺葉系を3次元的再構築する技法を開発し、乳癌の乳管内進展は乳管腺葉系に沿って区域性に存在する連続病変であること、また異なる乳管腺葉系の間に存在する乳管吻合(ductal anastomoses)が乳癌の広範な乳管内進展を形成する危険因子であることを明らかにした。本研究では、厚切り連続切片の立体的観察技法を全乳腺に応用することにより、全乳腺切除を行って得られた一つの乳腺全体について乳管腺葉系をコンピューター支援下に3次元再構築し、乳管吻合の解剖学的検討を行った。【材料および方法】皮下乳腺全切除術を施行したDCIS症例を用いた。切除材料は2mmに全割し、3次元再構築プログラム(TRI、RATOC、Tokyo)によって全乳管腺葉系のコンピューター再構築画像を作製した。【結果】一つの乳房には乳頭を中心に16個の乳管腺葉系が放射状に配列していた。

このうち、広範な乳癌の乳管内進展形成の危険因子である、異なる乳管腺葉系を連結する乳管吻合は2箇所であった。16個の乳管腺葉系の中で、乳管吻合によって連結された乳管腺葉系は2個(12.5%)であり、残りの14個の乳管腺葉系は各々解剖学的に完全に独立した区域性を示した。また、乳頭から4cmの範囲内には乳管吻合による異なる乳管腺葉系同士の連結はみられなかった。【考察】乳癌病巣の完全な切除を目指して乳管腺葉系を区域的に切除する場合、乳管腺葉系が解剖学的に独立しているかどうかは、手術治療上の極めて重要な解剖学的問題である。本研究では、乳管吻合により解剖学的な区域性が不完全であった乳管腺葉系の比率は全体の12.5%であった。また、乳管吻合発生部位の検討により、異なる乳管腺葉系を連結する乳管吻合は乳頭付近には存在しなかった。乳癌の乳管内進展が複数の乳管腺葉系に拡大する危険性は、乳頭付近に乳癌の乳管内進展が存在する場合よりも、むしろ乳腺の末梢領域に乳癌の乳管内進展が存在する場合の方が大きいと思われる。現代の乳癌に対する乳房温存療法は、切除断端癌遺残を出来るだけ減少させ、乳房切除術と同等に局所制御することが重要である。そのためには、本研究で明らかになったような乳管腺葉系の解剖学的特徴を充分理解した上で、乳癌の乳管内進展を含めた乳癌病変の必要充分な外科的切除に臨む必要がある。【目的】我々は、乳房温存手術材料を用いて乳管腺葉系を3次元的再構築する技法を開発し、乳癌の乳管内進展は乳管腺葉系に沿って区域性に存在する連続病変であること、また異なる乳管腺葉系の間に存在する乳管吻合(ductal anastomoses)が乳癌の広範な乳管内進展を形成する危険因子であることを明らかにしてきた。本研究では、乳房全切除材料を用いて全乳管腺葉系をコンピューター支援下に3次元再構築し、乳管吻合と乳癌の乳管内進展の解剖学的特徴について検討した。【材料および方法】血性乳頭分泌を伴うDCISにて皮下乳腺全切除術を施行した69歳、閉経後女性の片側乳房を用いた。切除材料は10%メタノール加20%ホルマリン固定後、電動ハムスライサーを用いて厚さ2mmに全割し、厚切り標本法によって乳房内すべての乳管や小葉の走行を立体的に観察した。各切片上の乳管や小葉の断面を3次元再構築プログラム(TRI/3D-SRF、RATOC、Tokyo)によって連結し、全乳管腺葉系のコンピューター再構築画像を作製した。【結果】本症例は、乳頭を中心に16個の乳管腺葉系が放射状に配列していた。すべての乳管腺葉系は末梢方向に向かって不規則な分岐を繰り返し、全体として扇形の区域性分布を示した。乳房全体で計11箇所の乳管吻合がみられた。DCISが発生した乳管腺葉系には、隣接する乳管腺葉系との間に乳管吻合はなく、病巣は一つの乳管腺葉系の中にとどまっていた。
積層芳香族化合物の固相合成とその結晶場における分子認識

面不斉カリックスアレーンをターゲットとした簡便な合成法を開発した。すなわち、オリゴオキシエチレンで架橋したジフェニルメタン骨格を直接ビニル化して前駆体オレフィンとし、これをベンゼン中、400W高圧水銀灯(パイレックスフィルター)を用い光環化付加反応させ、キラル体とアキラル体をそれぞれ収率5.143%,7.034%で単離した。前駆体オレフィンのベンゼン中の光環化付加反応では、キラル体とアキラル体の生成比には、差が見られなかった。このことは、MM2計算による双方の立体エネルギーに差が小さいという結果に対応している。光反応時に塩や粘土鉱物などの添加物を加えると、生成物分布が大きく変化することがよく知られているので、目的とするキラル体とアキラル体の生成比を変化させることを期待して、系中にアルカリ金属塩を分散させた。その結果、分散させた場合の生成比は、塩の存在しない場合と異なり、キラル体:アキラル体生成比が最大で5:1まで達した。特に、オリゴオキシエチレン鎖長が短くなるにつれ生成比が増大したことから、塩の表面においてビニル体が生成系に近い構造で吸着し、短い鎖長となるとキラル構造がより有利になるためと考えられた。さらに、同じ出発原料を用いて、ピンセット様開口部を持つカリックスアレーン型分子の位置異性体を作り分けることも可能なことが明らかとなった。すなわち、ビスフェノールを出発原料とし、位置異性体の関係にある前駆体オレフィンが容易に作り分けられ、それぞれを光反応して、対応する環化付加生成物のみが、収率3645%で得られることがわかった。このようなピンセット様開口部を持つカリックスアレーン型分子は、4つの芳香環を集約する方法に困難さがあるためほとんど検討された例がない。今回、シクロブタン環のような小員環で架橋することによって、四つのベンゼン環を向かい合せに配置させて、望みのピンセット型分子を得ることができた。
関節炎症性疾患における新規サイトカインレセプターWSX-1の役割

本申請研究は関節リウマチなど関節炎症性疾患における新規サイトカインIL-27の役割を明らかにすることを目的とし、IL-27のレセプターであるWSX-1遺伝子欠損マウスを用いて、関節リウマチのモデルであるマウスコラーゲン関節炎の病態解析を行った。元々WSX-1ノックアウトマウスはコラーゲン関節炎誘導抵抗性のC57BL/6マウス背景で作成されており、そのため昨年度では主にコラーゲン関節炎感受性のDBA/1マウスと戻し交配を行った。戻し交配を7世代まで終了(背景遺伝子99%以上)した時点で関節炎誘導実験を行った。ウシII型コラーゲンをフロイントコンプリートアジュバントとともにマウスに免疫し、同様の方法で3週間後に追加免疫を行った。関節炎の発症頻度はWSX-1遺伝子欠損マウスと正常マウスの間に明らかな差を認めなかったが、関節炎の重症度はWSX-1遺伝子欠損マウスでむしろ高かった。これは昨年度、戻し交配前のC57BL/6遺伝子背景のWSX-1遺伝子欠損マウスで行った予備実験で、正常マウスにはコラーゲン関節炎が発症しなかったが、WSX-1遺伝子欠損マウスにのみ弱いながらも関節炎の発症がみられたことと一致する。このWSX-1遺伝子欠損マウスでの関節炎増強機序を明らかにするため、II型コラーゲン特異的抗体産生を調べたところ、血清中の抗体価はWSX-1遺伝子欠損マウスで低値であった。T細胞のII型コラーゲン特異的サイトカイン産生能についても比較を行ったが、やはりWSX-1遺伝子欠損マウスでIFN-γ、IL-17などのサイトカインの産生がむしろ低下していた。これらの結果からWSX-1を介したIL-27のシグナルは関節炎の病態において負の制御因子として働いていること、その作用はT細胞やB細胞の機能抑制によるものではないことが明らかとなった。これはIL-27がT細胞やB細胞系の免疫機能は維持したまま、抗炎症活性を発現することを示唆しており、免疫抑制を引き起こさない抗炎症活性物質として、関節リウマチなどの関節炎症性疾患の新たな治療手段としてIL-27が応用できる可能性が考えられた。本申請研究の主な目的はWSX-1ノックアウトマウスを用いて、関節リウマチのモデルであるマウスコラーゲン関節炎におけるWSX-1分子の役割を明確にしてゆく。WSX-1ノックアウトマウスはコラーゲン関節炎誘導抵抗性のC57BL/6マウスの背景遺伝子を持つ。そのため、まずコラーゲン関節炎感受性のDBA/1マウスと戻し交配を行った。現在、戻し交配を7世代まで終了(背景遺伝子99%以上)し、ホモ個体の作成に移っている。十分数のホモ個体が揃い次第、関節炎誘導実験に用いる。近年コラーゲン関節炎誘導抵抗性のC57BL/6マウスでも、免疫時に用いるアジュバントを強力化することで、関節炎の誘導が可能であるとの報告があり、我々も追試を行うこととした。C57BL/6マウス背景のWSX-1ノックアウトマウス、およびコントロールとしてのC57BL/6マウスを、II型コラーゲンを通常の5倍量の結核菌死菌を含むフロイントコンプリートアジュバントとともに免疫した。同様の方法で3週間後に追加免疫を行ったところ、初回免疫後約4週からWSX-1ノックアウトマウスにのみ関節炎の発症が見られた。このことから予想と異なり、関節炎の誘導にはWSX-1分子は負の調節因子として働くことが示唆されたが、このC57BL/6マウス背景での関節炎の発症頻度はきわめて低く、更なる免疫学的解析には関節炎感受性DBA/1マウス背景のWSX-1ノックアウトマウスで研究を行う必要があることがあらためて確認された。

これらの結果からWSX-1を介したIL-27のシグナルは関節炎の病態において負の制御因子として働いていること、その作用はT細胞やB細胞の機能抑制によるものではないことが明らかとなった。これはIL-27がT細胞やB細胞系の免疫機能は維持したまま、抗炎症活性を発現することを示唆しており、免疫抑制を引き起こさない抗炎症活性物質として、関節リウマチなどの関節炎症性疾患の新たな治療手段としてIL-27が応用できる可能性が考えられた。
大分市における最近5年間の虚血性心疾患死亡の動向に関する研究

人口約42万人の大分市における1992-93年の25-74歳男女の全死亡例から、原死因が虚血性心疾患、心不全、その他の心疾患の者を抽出した。この全例321例について悉皆的に医療記録の調査を行い、モニカの基準を用いて虚血性心疾患死亡の再分類を行った。同様の方法による同一母集団である大分市の1987-88年の心疾患死亡例についての調査との比較を行ったところ、死亡統計ではこの5年間に心疾患死亡例全体で271例から321例に増加しており、特に心不全死亡が123例から180例と心疾患全体の増加のほとんどを占めていた。再分類後の比較においては、調査後、急性心筋梗塞確実及び可能性と分類されたものは1987-88年が96例中52例(54%)であり1992-93年が102例中77例(75%)とその割合が増えた。同様に心不全の中で調査後、虚血性心疾患・確実と可能性に分類されたものは1987-88年に123例中3例(3%)から1992-93年には180例中18例(10%)であった。また、急性死として分類されたものは逆に84例から80例に減少していた。男女別にみると急性心筋梗塞・確実、可能性に再分類されたものは、男性では45例から61例へ、女性では12例から36例に女性で大きく増えていた。また、急性死に再分類されたものは男性で56例から55例に、女性では28例から25例にほぼ同数で推移していた。再分類後に急性心筋梗塞・確実及び可能性である死亡例について、男女別に年齢調整死亡率を算出した。男女とも増加傾向を示しているが、男性では急性心筋梗塞・可能性に区分されたものの反映であるのに対し、女性では確実・可能性の両区分の増加の影響が考えられた。虚血性心疾患の動向をみる場合には、本調査で分類された急性死に含まれる虚血性心疾患死亡を加味する必要があり、虚血性心疾患の動向をみる上でも調査後の虚血性心疾患死亡と急性死を併せて観察する必要がある。本調査結果より、急性死の数は男女ともほぼ同数で推移しているが、これを調整死亡率でみるとやや減少傾向を示した。この急性死の死亡率を加味すれば、男性での虚血性心疾患死亡はほぼ横這いで推移しており、また女性においては増加傾向が考えられた。
DNAマイクロアレイとプロテオーム解析を用いた蝸牛障害関連遺伝子・蛋白質の解析

老人性難聴モデルとしてPolg^<D257A/D257A>(D257A)マウス(DNAポリメラーゼガンマのエキソヌクレアーゼ領域(Proof Reading活性領域)に点変異を導入したトランスジェニックマウス)を作成した。D257Aマウスと野生型マウスのABR閾値を検討したところ、D257Aマウスは9月齢で平均41-52dBSPLと聴力閾値が上昇し、加齢により早期に難聴が出現することが判明した。組織的には有毛細胞、らせん神経節の変性が高度であり、DNAマイクロアレイによる遺伝子解析では音受容、神経伝達、イオン代謝、エネルギー代謝、DNA合成・修復に関する遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加がみられた。ゲルマニウム過剰摂取によるミトコンドリア障害マウスも作成し、3ヶ月で高度難聴になること、蝸牛血管条・コルチ器の変性が強いことを確認した。このマウスでもD257Aマウスと同様の遺伝子群の変化が見られた。また老人性難聴モデルマウスのC57BL/6マウスでカロリー制限による難聴抑制効果を調べ、正常食では加齢により難聴および蝸牛組織の変性が出現するのに対し、カロリー制限群では1歳5ヶ月まで難聴出現が抑制できた。この2群の遺伝子解析により、加齢による蝸牛の遺伝子の変化(音受容、神経伝達、エネルギー代謝などの遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加)がカロリー制限で抑制できることが判明した。これらの結果を重要な遺伝子についてはreal time RT-PCR解析で確認し、また蛋白については免疫染色により確認を行った。最後に強大音響に曝露したマウス蝸牛のDNAマイクロアレイ解析を行い、現在一部の遺伝子に注目して解析中である。老人性難聴モデルマウス、DBA/2Jマウスの聴力経過をABRで調べ、生後4週では軽度難聴であったものが生後24週には高度難聴になることを観察した。生後4週に比べ24週では有毛細胞、らせん神経節の変性が高度であり、DMAマイクロアレイによる遺伝子解析では音受容、neuro-transmission、エネルギー代謝に関する遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加がみられた。もう一つの老人性難聴モデルマウスであるC57BL/6マウスではカロリー制限による老人性難聴抑制効果を調べた。正常食では加齢により難聴が出現するのに対し、カロリー制限群では少なくと1歳5ヶ月までは完全に難聴出現を抑制できた。この2群の組織検査およびDNAマイクロアレイによる遺伝子解析ではDBA/2Jマウスの結果がカロリー制限で逆転されることが判明した。さらにミトコンドリアDNAのprof-readingを障害したPOLGマウスを作成したところ、老化が促進され老人性難聴も有意に早く出現することを確認した。この動物の組織検索では有毛細胞・ラセン神経節の変性が促進され、DNAマイクロアレイマイクロアレイによる解析ではDBA/2Jマウスの結果と類似していた。この他にはゲルマニウム過剰摂取によるミトコンドリア障害マウスを作成し、4ヶ月で高度難聴になること、蝸牛では血管条・コルチ器の変性が強いことを確認した。また強大音響曝露直後および有毛細胞変性・scar形成の完成した時期のマウス蝸牛も採取した。これらもDNAマイクロアレイによる解析を開始した。老人性難聴モデルとしてPolg^<D257A/D257A>(D257A)マウス(DNAポリメラーゼガンマ(Polg)のエキソヌクレアーゼ領域(Proof Reading活性領域)に特定の点変異を導入したトランスジェニックマウス)を作成した。D257A

マウスと野生型マウス(Polg^<+/+>)を用いてABR閾値を検討したところ、D257Aマウス9月齢で平均41-52dBSPLと著明に聴力閾値が上昇し、加齢による中等度の難聴が出現することが判明した。組織的には有毛細胞、らせん神経節の変性が高度であり、DMAマイクロアレイによる遺伝子解析では音受容、neuro-transmission、イオン代謝、エネルギー代謝、DNA合成・修復に関する遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加がみられた。ゲルマニウム過剰摂取によるミトコンドリア障害マウスも作成し、35ヶ月で高度難聴になること、蝸牛では血管条・コルチ器の変性が強いことを確認した。このモデルマウスでもD257Aマウスと同様の遺伝子群の変化が見られた。老人性難聴モデルマウスであるC57BL/6マウスではカロリー制限による老人性難聴抑制効果を調べ、正常食では加齢により難聴が出現するのに対し、カロリー制限群では少なくと1歳5ヶ月までは完全に難聴出現および組織変性を抑制できた。この2群のDNAマイクロアレイによる遺伝子解析では加齢による遺伝子の変化(音受容、neuro-transmission、イオン代謝、エネルギー代謝などの遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加)がカロリー制限で抑制できることが判明した。これら3つのマウスについて、重要な遺伝子についてはreal time RT-PCR解析で確認し、また蛋白については免疫染色により確認を行った。強大音響曝露直後および有毛細胞変性・scarの完成した時期のマウス蝸牛のDNAマイクロアレイ解析では多くの遺伝子群が増減しており、現在どの遺伝子に注目して解析を行うか検討中である。老人性難聴モデルとしてPolg^<D257A/D257A> (D257A)マウス(DNAポリメラーゼガンマのエキソヌクレアーゼ領域(Proof Reading活性領域)に点変異を導入したトランスジェニックマウス)、を作成した。D257Aマウスと野生型マウスのABR閾値を検討したところ、D257Aマウスは9月齢で平均41-52dBSPLと聴力閾値が上昇し、加齢により早期に難聴が出現することが判明した。組織的には有毛細胞、らせん神経節の変性が高度であり、DNAマイクロアレイによる遺伝子解析では音受容、神経伝達、イオン代謝、エネルギー代謝、DNA合成・修復に関する遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加がみられた。ゲルマニウム過剰摂取によるミトコンドリア障害マウスも作成し、3ヶ月で高度難聴になること、蝸牛血管条・コルチ器の変性が強いことを確認した。このマウスでもD257Aマウスと同様の遺伝子群の変化が見られた。real-time RT-PCRにていくつかの遺伝子においてその結果を確認し、またアポトーシスが著明た起きていることを確認した。老人性難聴モデルマウスのC57BL/6マウスでは、正常食を与えると加齢により難聴および蝸牛組織の変性が出現するのに対し、カロリー制限すると1歳5ヶ月まで難聴出現が抑制できた。この2群の遺伝子解析により、加齢による蝸牛の遺伝子の変化(音受容、神経伝達、エネルギー代謝などの遺伝子群の低下、炎症反応やアポトーシス関連遺伝子群の増加)がカロリー制限で抑制できることが判明した。
電子映像と電子テクストによる英米圏文化の映画と文学に関する包括的比較研究

本研究の基本的目的は英米圏文化における映画と文学との相互作用をその界面において考究すべく、電子化された映画映像と電子化された文学テクストを利用することであった。だが同時に利用できる電子媒体が、真摯な文化研究計画にとっては、十分に活用できない不備なものであったり、研究にふさわしくないものも多く、自らデータベースを立ち上げる必要に迫られ、その作業に着手した。利用可能でその有効性が飛躍的に高まるようなデーターベースの構築を進めると同時に、文学と映画をオリジナルとアダプテーションという観点から捉え、その関係を、境界画定と境界破壊の両面から考察することになった。計画は両面あり、ひとつは材料を限りなく収集し、電子化しデータベース化する作業、いまひとつは理論的考察によって文学文化における映画の意味、文学と映画の相互作用などを考える準備として、文学の映画化作品との関係を考慮することであった。最終結果としてのデーターベースの完成(このようなデータベースは完全なものはありえないが)を見なかったが、作業は継続している。理論的考察としては、オリジナルとアダプテーションとの関係が明確ではなくなるという難題に直面した。これは現代の複製文化から翻案文化すべてに共通する大きな問題で、文学と映画と載然と二分化することを困難にする理論的難題であって、完全な解決などありえないが、この問題を契機にさまざまな思考や理論を考案することになった。文学と映画との関係は英米圏文化では、従来考えられていた以上の予測不可能な多様な関係を形成していることが確認され、また両者の関係は他の社会的文化的分野に波及しており、この研究は文化研究からさらに教育の場においても有効であることも確認できた。初年度は各分担者が、各分担領域(アメリカ南部文学、アメリカ現代文学、イギリス小説、シェイクスピアなどをコアとして、最終的には英米圏文学全体へと拡張する)において基礎資料となる映画化作品を確認し、これをもとに資料収集につとめた。ビデオしかない作品も、極力DVD化して、比較研究の基盤となる基礎資料作成をおこなった。ただ当初予想していていたよりも作品数が多いことが判明。基礎資料づくりに時間を要した。電子映像化作業と平行して、解析方法の検討と、現在英米圏の文学・文化・映画研究において、重要性をましているアダプテーション理論について検討し、その基本を吸収し、その限界と可能性とを検討した。その結果、解析方法と基盤となる理論については、研究の補助となり研究の動因ともなる使用法を考察できた。また、分担者相互で意見交換をしたところ、資料の膨大さを前に整理法の構築の必要性が確認された。またさらに、独自性と包括性をもつ解析なり分析方法の確立の必要性も確認され、それぞれ次年度への準備段階に入った。また情報公開と意見公開の場としてのインターネット・サイトの立ち上げは、今年度はできなかったが、次年度における実現のための整備を行なった。各研究分担者は、現在はまだ各分担者が独自に個別研究を行なっている段階で、相互の調整は行なっていない。この種の研究では研究者が、映画化作品の価値を、原作の文学作品よりも低くみがちであるが、時代と社会における映画化作品の文化効果と文化戦略の観点を常に年頭におき、文学と映画との、単なる比較ではない包括的な視点での研究の必要性を確認、その方向での研究続行の意志と研究目的とを、研究者が相互に確認した。なお外部研究者・外国研究者との意見交換の必要性が痛感されたので、次年度における意見交換のための基礎作業を完了した。次年度にあたる今年度は、初年度の資料収集・解析・考察を基盤として、作業を継続するとともに、研究成果の発表の準備にとりかかった。また収集した資料の解析については、解析に関する理論的根拠を初年度より模索中であったが、今年度も理論化を継続することになった。

文学作品の映画化とみるとき、原型と派生型との二分法による評価に左右されがちで、どうしても派生型としての映画の評価が低くなる。むしろ文学を原作とした映画でも、独自のジャンルとみなし比較系の価値評価行為から離脱させたほうが分析と考察によってよい成果を期待できるのではないかという点で意見の一致をみた。また映画化をアダプテーション問題として捉え直すことで、<原型→アダプテーション作品>との流れが通常想定されているが、原型(文学文化作品)そのものもアダプテーションであること、むしろ<アダプテーション→アダプテーション>としての流れを前提として、原型も実は原型ではなく社会的・文化的・歴史的交渉過程によって成立するアダプテーションであるとの視点の導入によって、従来の比較文化、比較文学、映画研究における諸前提を根底から覆し、新たな可能性を探ることができるという理論的改革を研究と討議の結果行なった。そのため初年度における整理法あるいは研究法を見直すと必要に迫られ、これまでの研究課程の点検に多くの時間を費やした。理論的考察と平行して、歴史的・文化的研究は順調にすすみ、アメリカ、イギリス、日本の三軸を中心として、個別特殊的な要素を確認することになった。方法論的見直しを慎重におこなったため、今年度はネット上でのサイトの立ち上げ、研究成果の公表、意見交換などは、次年度の課題とすることになった。最終年度にあたって、方法論上の問題と、分類に関して、研究者間で、見解の相違が露呈、度重なる打ち合わせ会議を通しても、統一的見解は出せなかったため、期間内での研究成果の公表は研究者の個々の論文が中心だが、今後、複数の学会等における公表を企画している。また従来の分類を踏襲し資料を整理しつつ、新たな分類可能性にむけて再度理論的考察を行なった。なお今年度において集中的に議論されたのは、映画と文学との関係が異なるメディアにおける翻訳の問題として議論されるべきこと(この議論は「ラオコーン問題」として18世紀の西洋の芸術思想にさかのぼる)、また文学作品と映画との双方向的・相互作用的現象の解析と応用が必要なことである。映画を文学教育で利用するなど、映画の解明力への認識が近年高まりつつある。そのため映画資料を、原作のアダプテーションではなく、固有の文化現象発信基盤としても整理する必要があり、文学を中心とした従来の整理分類、データベース化に根本的な変革を加える分類法の考案を試みた。また文学→映画というユニットが、文学を中心に構成継承されるのではなく、映画を起点とした映画の反復増殖として出現することに関して、これを包括する関係性の調節手段も考察した。資料の収集と個々の比較研究においては、多くの発見があり、それらは一様に文化基盤による映画あるいは文学の変容力を認識するものであったが、同時に、映画あるいは文学が文化基盤を創造する際、映画や文学が個別ではなく合体融合したときに大きな効力をもつことも確認された。またこうした洞察は、研究成果の多くの学会の場での積極的な公開により、さらに深めることができると確信を得た。
爆発的元素合成・第2ピーク領域に関わる中性子過剰核のベータ崩壊

超新星爆発など中性子が大量に放出される爆発的元素合成(r過程)において、急速な中性子捕獲が進むと考えられている。このr過程において、数秒程度で軽い原子核から非常に重いウラン領域までの中性子過剰核が一挙に生成される。しかし、その詳細なメカニズムは謎に包まれており、非常に中性子過剰な原子核の半減期、中性子放出確率、質量を非常に広範囲において精度良く測定することが要となる。理化学研究所のRIBF加速器施設が完成し、大強度ウランビームを用いた重い中性子過剰核の生成・識別が可能となった。生成した中性子過剰核を効率的に捕獲し、原子核崩壊に伴い放出されるβ線,γ線,中性子を効率的に測定する装置を開発し、中性子数N=82近傍の第2ピークに関わるr過程、非常に中性子過剰な原子核の核構造研究を行う。生成した中性子過剰な原子核を両面ストリップ型半導体検出器に埋め込み、β崩壊に伴い放出される低エネルギーβ線を効率的に測定する必要がある。そこで、非常に広いダイナミック・レンジを特徴とする高性能前段増幅回路の開発に成功した。前段増幅回路、整形増幅回路、波高測定回路の読み出し回路の不足のため、新たに抵抗分割型回路の開発と時間情報による位置決定に成功した。短寿命の原子核の埋め込みに伴い生じる7ミリ秒の不感時間の問題を解決した。効率的なγ線検出を実現させるために、大型ゲルマニウム・クラスター型検出器(EURICA)を欧州から導入し、大強度ウランビームを利用した^<128>Pd近傍のβγスペクトロスコピー実験を提案した。B. Meyer氏の開発したネットワーク計算を導入したr過程のネットワーク計算を行った。また、^<48>Caビームを利用した半減期一括測定装置(CAITEN)を利用した高速βγ分光実験を行い、高速β崩壊測定に関する十分な性能を確認した。^<128>Pd実験プロポーザル:世界最高性能重イオン加速器RIBFを利用した重元素合成の研究を行う。質量数110領域における非常に中性子過剰な原子核の寿命の系統性を調べた結果、質量数110近傍のZr,Nb(Z=40,41)は理論予想よりも23倍も速く崩壊することがわかった。この結果は、予想より速く元素合成が進むことを示唆しており、間接的にβ崩壊のQ値が想定よりも高い事を示唆する。この系統的な結果は、質量数110-125近傍の元素存在度の不足問題の謎を解く鍵となり得ることから、より中性子過剰な領域でのβ崩壊実験が必要となる。そこで、^<111>Zrから^<128>Pd(Z=46,N=82)までの非常に中性子過剰な原子核のβ崩壊実験を検討した。そして、2010年12月の国際・実験評価委員会(PAC)において実験を提案した結果、高く評価され、正式に承認された。半導体検出器:10ms以下の短い寿命を持つ不安定な原子核(RI)のβ崩壊実験を行う際に、RIを半導体検出器に埋め込む際の不感時間が問題となっていた。そこで、新しくFET型フィードバック回路を開発し、既存の前段増幅回路に導入した。その結果、不感時間の改善に成功した。CAITEN装置:革新的なβ崩壊測定装置(CAITEN)を利用したβ崩壊実験を行い、大強度の不安定核ビームに対応したβスペクトロスコピー実験が可能であることを確認した。中性子検出器:β崩壊に伴い放出されるβ線、遅発γ線、遅発中性子の最適化した装置開発を行うために、MCNP解析コードを導入したシミュレーション計算を行った。その結果、β線検出器の周囲を完全に中性子検出器で覆う事が有効であることを明らかにした。大強度ウランビームを利用した非常に中性子過剰な原子核のベータ崩壊実験を行い、爆発的重元素合成(r過程)のメカニズムを調べることを目的とする。ベータ線検出器:生成した中性子過剰な原子核を両面ストリップ型半導体検出器に埋め込み、β崩壊に伴い放出される低エネルギーβ線を効率的に測定する必要がある。原子核の埋め込み位置を正確に測定するために、非常に広いダイナミック・レンジ(10keV-5GeV)を持つ高性能前段増幅回路の動作試験を行った。総チャンネル数が600チャンネルにもおよび、前段増幅回路、整形増幅回路、波高測定回路の読み出し回路が不足している。そこで、低価格の前段増幅回路の開発、抵抗分割型回路の開発・導入を行った。その結果、原子核を埋め込む位置、エネルギー損失の測定が可能となった。また、原子核の埋め込みに伴うベータ線測定回路の不感時間(10msec)の問題を解決するために、前段増幅回路の動作保護回路の導入テスト、前段増幅回路のフィードバック抵抗の値を1GΩから1MΩに変更することにより、不感時間を0.1msec以下に抑えることに成功した。12月の大強度^<124>Xeビームを利用した^<100>Snのテスト実験において、この読み出し回路の性能を評価している。さらに、高いビーム強度でのベータ崩壊実験を実現させるために、分割数を1桁増やした半導体検出器の開発・導入を行った(1枚当たりの分割数:256を2,400にする)。ガンマ線検出器:ガンマ線の検出効率を大幅に改善する必要がある。そこで、ドイツGSI研究所に設置されていた大型クラスター型ゲルマニウム検出器(RISING)を理研RIBF施設に移設した。このプロジェクト(EURICA)により、ガンマ線検出効率を1桁改善可能とした。2012年度の^<128>

Pd領域のベータ崩壊実験に向けて準備を進めている。超新星爆発など中性子が大量に放出される爆発的元素合成(r過程)において、急速な中性子捕獲が進むと考えられている。このr過程において、数秒程度で軽い原子核から非常に重いウラン領域までの中性子過剰核が一挙に生成される。しかし、その詳細なメカニズムは謎に包まれており、非常に中性子過剰な原子核の半減期、中性子放出確率、質量を非常に広範囲において精度良く測定することが要となる。理化学研究所のRIBF加速器施設が完成し、大強度ウランビームを用いた重い中性子過剰核の生成・識別が可能となった。生成した中性子過剰核を効率的に捕獲し、原子核崩壊に伴い放出されるβ線,γ線,中性子を効率的に測定する装置を開発し、中性子数N=82近傍の第2ピークに関わるr過程、非常に中性子過剰な原子核の核構造研究を行う。生成した中性子過剰な原子核を両面ストリップ型半導体検出器に埋め込み、β崩壊に伴い放出される低エネルギーβ線を効率的に測定する必要がある。そこで、非常に広いダイナミック・レンジを特徴とする高性能前段増幅回路の開発に成功した。前段増幅回路、整形増幅回路、波高測定回路の読み出し回路の不足のため、新たに抵抗分割型回路の開発と時間情報による位置決定に成功した。短寿命の原子核の埋め込みに伴い生じる7ミリ秒の不感時間の問題を解決した。効率的なγ線検出を実現させるために、大型ゲルマニウム・クラスター型検出器(EURICA)を欧州から導入し、大強度ウランビームを利用した^<128>Pd近傍のβγスペクトロスコピー実験を提案した。B. Meyer氏の開発したネットワーク計算を導入したr過程のネットワーク計算を行った。また、^<48>Caビームを利用した半減期一括測定装置(CAITEN)を利用した高速βγ分光実験を行い、高速β崩壊測定に関する十分な性能を確認した。ベータ線検出器の読み出し回路の開発は完了した。非常に高い埋め込み頻度においても対応可能にするために、読み出し回路の工夫に加え、1mmの位置分解能をもつ両面ストリップ型半導体検出器の導入を行う。ガンマ線検出に関しては、理研にある5台のクローバー検出器と比較し、1桁も高い検出効率(15% at 662keV)を特長とするクラスター型ゲルマニウム検出器の導入を行った。これにより、想定以上に高精度ベータ核分光が実現可能となった。2011年度には、1桁高いウランのビーム強度(0.3pnA→3pnA)が達成された。以上、本研究課題の目的である^<78>Ni,^<110>Zr,^<128>Pd,^<100>Sn領域のベータ崩壊実験を実施するために装置の準備を進めている。本研究課題を遂行する上で、RIBF加速器を利用した実験の実施が必須となる。プロボーザルの承認はされているが、この4年間に3日と非常に少ないビームタイムしか消化できていない。新規に立ち上げたEURICAでは、欧州からのクラスター型ゲルマニウム検出器を利用した実験プロポーザルが13件あり、EURICAの使用期間である2013年6月末に全てを消化することが期待されている。2012年度には大強度のウランビームを利用したベータ崩壊実験のキャンペーン実験が実現できると考えている。
新しいヒルシュスプルング病モデルマウスを用いた基礎研究：神経提細胞移植を目指して

マウス胎仔の腸管から神経堤細胞を外科的に除去した条件下において、外来神経線維の増生の有無を観察し、ヒルシュスプルング病の無神経節領域腸管と同様に外来神経線維が増生することを明らかにした。この結果、ヒルシュスプルング病における外来神経増生が二次的現象であることを示した。また、本疾患の新たな治療法の確立を目指して、SOX10-Venusマウスを用いた腸管神経系の発達を促進する要素を見出す検討を行った。腸管組織に細胞外マトリックスであるラミニンを添加することで、無添加の腸管より有意に腸管神経系の発達が促進されることを明らかにした。腸管神経系(ENS)は、胎生期に迷走神経堤由来の神経堤細胞が口側から尾側に向かい増殖しながら遊走し、仙骨神経堤由来の神経堤細胞と消化管尾側末端で統合し形成される。ヒルシュスプルング病(H病)は、無神経節腸管における仙骨神経堤由来の外来神経線維の増生が病理学的特徴であるが、その詳細は未だ明らかでない。本年度は、神経堤細胞の発生に関連する遺伝子Sox10に緑色蛍光タンパクVENUSを標識したトランスジェニックマウス(Sox10-VENUS Tg)を用い、迷走神経堤由来細胞の遊走を外科的に離断することで無神経節腸管を作製した後、組織培養下で直接ENSを観察し外来神経線維が増生するか否かを検討した。E12.5のSox10-VENUSTgマウス胎仔を用い、食道近位結腸を実体顕微鏡下で切除後、組織培養を行い、直腸末端部からの神経堤細胞の動態を正常対象である非切除群と経時的に比較した。非切除群では培養開始2日後から口側へ遊走する仙骨神経堤由来細胞が直腸遠位部でわずかに観察され、3日後に口側から遊走してきた迷走神経堤由来細胞と統合した。切除群では培養開始から2日後、仙骨神経堤由来細胞が口側方向に遊走を開始し、3日後に近位部結腸の切断面まで到達した。切除群においては非切除群と比較し、多数の伸長した仙骨神経堤細胞からのVENUS陽性線維が観察された。これは本来消化管末端で統合するはずの迷走神経堤由来細胞の遊走が離断された為に仙骨神経堤細胞由来の神経線維が標的を求めて増生した結果と推測され、正常な腸管においてもH病同様の神経線維増生が起こり得る可能性が示唆された。現在この切除群での神経堤細胞の動態機序とH病における外来神経線維増生の機序の関連を明らかにする為の解析を進めている。同時に、神経堤細胞移植や薬剤を用いたH病における再生治療に関する検討も行っている。腸管の神経堤細胞の遊走・分布に関連する遺伝子SOX10に蛍光タンパクVENUSが標識され、神経堤細胞のみを器官培養下で生きたまま蛍光顕微鏡で観察できるトランスジェニックマウス(SOX10-VENUSマウス)を用いた神経堤幹細胞移植実験を行う事に先立ち、SOX10-VENUSマウスの腸管より蛍光タンパクVENUS陽性細胞のみをcell sortingにより分離した細胞での神経堤幹細胞塊の作製を試みた。また、SOX10-VENUSマウス胎仔の腸管を用いた組織培養で、細胞外マトリックスであるラミニンを添加し、無添加の腸管より有意に腸管神経系の発達が促進されるか否かを検討した。最初に、SOX10-VENUSマウスの腸管を用いた腸管神経系の発達を促進する要素を見出す検討を行い、腸管組織に細胞外マトリックスであるラミニンを添加することで、無添加の腸管より有意に腸管神経系の発達が促進されることを明らかにした。ここまでの成果は正常な腸管での知見であるため、現在ヒルシュスプルング病モデルマウス腸管にラミニンを添加する検討を開始しており、当初の目的である神経堤幹細胞移植実験を目指した研究と併せて継続していく。我々はこれまでに、腸管の神経提細胞の遊走・分布に関連する遺伝子SOX10に蛍光タンパクVENUSを標識したトランスジェニックマウス(SOX10-VENUS Tgマウス)と、既知のH病モデルマウス(エンドセリンレセプターB:EDNRB欠如)を交配させることにより、神経提細胞のみを器官培養下に生きたまま蛍光顕微鏡で観察できるヒルシュスプルング病(H病)モデルマウスを開発した。このH病モデルマウスを使用した神経提幹細胞移植実験を行う事に先立ち、平成23年度においては、SOX10-VENUS Tgマウスを用いた正常な腸管における神経提細胞の発生過程を観察する事が重要と考え、SOX10-VENUS Tg

マウスにおける神経提細胞の胎生期の経時変化を蛍光ライブイメージング法で詳細に観察した。方法としては、胎生12.5日齢のSOX10-VENUS Tgマウスから実体顕微鏡下で胎児結腸を摘出し、器官培養条件下にて共焦点レーザー顕微鏡を用いたライブイメージング法で経時的に撮影、観察した。結果は、迷走神経由来の神経提細胞が口側から肛門側へ、仙骨神経由来の神経提細胞が肛門側から水平方向と口側方向へと遊走し、腸管神経系が形成される過程を器官培養下にてリアルタイムに観察する事が出来た。今後、H病における腸管神経提細胞の分化・遊走過程の新たな知見を得る目的で、我々が作製したH病モデルマウスの腸管を蛍光ライブイメージング法で観察し、これまでに基礎実験で得られた正常腸管の神経系の発生過程と比較検討する。さらに、H病において異常増生する外来神経の機能を調べるために、腸管神経節細胞の発現、アセチルコリンエステラーゼとそのレセプターの発現、またシナプスの集合に関与するマトリックス蛋白、アグリンの発現などを観察する為に免疫染色を行い、解析を進める予定である。平成24年度においては、ヒルシュスプルング病における腸管神経系の神経線維増生の発生に関する検討を行った。研究の最終的な目的であるヒルシュスプルング病モデルマウスへの細胞移植治療の有効性を検討する為に、ヒルシュスプルング病腸管における神経堤細胞の発生動態を観察する事は必須である。最終年度においては、本研究課題の最終目的である細胞移植治療に関する具体的な検討を行っていく。現状においてはおおむね順調と考えている。平成23年度においては、器官培養や蛍光ライブイメージング法に適切な条件を確立し、正常な腸管神経の発生を観察し得た。研究の最終的な目的である疾患モデルマウスへの細胞移植治療の有効性を検討する為に、正常腸管における神経提細胞の発生動態を観察する事は必須である。初年度の進捗状況としては、おおむね順調であると考えられる。昨年度は本研究課題の最終目的である細胞移植治療に関する基礎実験の方向性を確立することを目標としていたが、これまでの研究成果は疾患に関する基礎的な発生学的な知見を得ることが主となっている。最終目的のための知見を得るため、これまでの結果をさらに進展させると同時に具体的な検討を開始する予定である。来年度においては、平成23年度に得られた結果から疾患における新たな知見を見出すことで、本研究課題の最終目的である細胞移植治療に関する基礎実験の方向性を確立する。また迅速に研究を進める為に、同時にその基礎実験のための条件検討なども開始する予定である。研究計画に大幅な変更はない為、次年度においても予定通り動物維持費、試薬の購入等に使用する予定である。