hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
蛋白工学的に新規作製したHGF-MSPキメラ(MF1)を用いた肝再生治療法の開発

目的:HGF-MSPキメラ(Metron Factor-1,MF1)の肝組織修復における有効性と安全性について検討した。方法:HGFとMSP遺伝子をリンカーでつなぎMF1遺伝子を作成、さらにレンチウイルスベクターシステムを用いてMF1蛋白を得た。In vitroの解析として、マウス肝細胞を用いて、MF1,HGFを培養液に添加し、増殖活性、抗アポトーシス作用を解析した。浸潤能の解析は肝癌細胞株HepG2、Huh-1を用いてmatrigelinvasion assayを行った。in vivoの実験としてマウス急性四塩化炭素モデルにMF1,HGFを投与し、経時的に肝臓を採取し肝細胞増殖能、アポトーシスを検討した。さらにMF1,HGFを遺伝子導入したマウス肝癌細胞株(CBO cell)を肝臓に局注して肝内転移モデルを作製し転移数を検討した。結果:in vitroではMF1の肝細胞増殖活性は、HGFに比べ若干弱いながらも強い活性が認められた。また抗アポトーシス作用はMF1でHGFとほぼ同様の効果を示した。また肝癌細胞はHGFで浸潤能が増強されたがMF1は対照と同等であり、MF1は浸潤能を誘導しないことが確認された。In vivoで急性肝障害モデルでMF1投与によりALTの低下、肝障害の軽減が認められ、効果はHGF群とほぼ同様であった。また肝細胞分裂像はHGF群と同様MF1投与で増加しTUNEL陽性細胞は優位に低下しておりin vitroを反映した結果であった。肝癌肝内転移モデルではHGF群が高率に転移を起こすのに対してMF1は対照群とほぼ同様であった。またHGF群では肝臓は腫瘍のため壊死や虚血性変化を示すのに対してMF1群では対照群と同様であった。結論:HGF-MSPキメラ、MF1は肝臓に対して増殖能、抗アポトーシス作用を有し、一方肝癌細胞の転移能は示さなかったことから安全かつ有用な組織修復因子となりうる可能性が示された。MF-1 cDNAを第3世代レンチウイルスで発現させる目的でCSII-CMV-MF-1 constructを、対照としてCSII-CMV-HGFを作成、また導入効率を検討するためCSII-CMV-GFPを作成し約80%の導入効率を確認した。マウス肝細胞初代培養系にLenti-MF-1、Lenti-HGFを感染させてMF-1、HGFの発現をwestern blotにて確認した。感染後3日目の肝細胞の細胞増殖能をBrDU-ELISA,^3H-Thymidine取り込み能により検討し、MF-1の肝細胞増殖活性はHGFと比較しほぼ同等であることを確認した。今後細胞内増殖シグナルの解析をWestern Blotで検討する予定である。1.癌細胞における浸潤・転移能---in vitroにおける安全性の確認ヒト肝癌細胞株HepG2,胆管細胞株HuCC-T1を用いてLenti-MF-1、Lenti-HGFを感染させて発現を確認後、トランスウエルを用いて遊走能、浸潤能を解析した。その結果、MF-1は対照群に比較して遊走能、浸潤能ともにほとんど認めなかった。2.肝癌モデル、転移性肝癌モデルにおけるMF-1の影響の検討---in vivoにおける安全性確認CBO140C12肝癌細胞株の皮下腫瘍片を同種マウス肝臓に移植し肝癌モデルを作成し1週後よりlenti-MF-1を遺伝子導入した。現在その移植腫瘍と肝内転移巣の経過を検討中である。MF-1の機能をさらに詳細に解析する目的で現在MF-

1 transgenic ratを作成中である。作成した時点で種々の臓器の再生能、腫瘍の転移能を検討する予定である。肝細胞増殖因子(Hepatocyte growth factor, HGF)は種々の組織や器官の再生に働く生体修復因子でありその機能は多岐にわたるが、癌細胞の浸潤・転移を促進するという報告がなされており、組織修復にとって有用な細胞増殖、血管新生などの機能のみ有する安全なHGFの開発が望まれる。一方、HGFファミリーであるMacrophage-stimulating protein(MSP)はHGFと同様な機能、つまり生体修復因子であると共に浸潤、転移を促進することが近年明らかにされている。HGFとMSPのクリングルドメイン同士をつないだキメラ蛋白、Metron factor-1(MF1)が強力な細胞増殖作用、器官形成作用をもつが癌細胞の浸潤・転移能を持たない(Michieli P et al. Nature Biotech 2002)ことが示されており、本研究では、肝再生におけるMF1の有効性と安全性を検討し、肝再生不全をはじめとした難治性再生不全疾患への臨床応用への足がかりとする。肝細胞初代培養系における細胞増殖能を^3H-thymidine取り込み能で検討した結果、MF-1は対照に比し約2.5倍の増殖活性を持つことが確認された(HGF,3.5倍)。またstaurosporin誘起アポトーシスに対する抗アポトーシス作用はHGFと同等であった。Cre ricombinase存在下で発現するMF-1トランスジェニックラットを作成した。遺伝子導入群、対照群で急性四塩化炭素障害モデルを作成し、それぞれで経時的な生存率、肝機能、肝重量、肝増殖マーカー(PCNA, Ki67)、抗アポトーシス作用を現在解析中である。目的:HGF-MSPキメラ(MF1)の肝組織修復における有効性と安全性について検討した。方法:HGFとMSP遺伝子をリンカーでつなぎMF1遺伝子を作成、さらにレンチウイルスベクターシステムを用いてMF1蛋白を得た。In vitroの解析として、マウス肝細胞を用いて、MF1, HGFを培養液に添加し、増殖活性、抗アポトーシス作用を解析した。浸潤能の解析は肝癌細胞株HepG2、Huh-1を用いてmatrigelinvasion assayを行った。in vivoの実験として急性四塩化炭素モデルにMF1, HGFを投与し、経時的に肝臓を採取し肝細胞増殖能、アポトーシスを検討した。さらにMF-1, HGF遺伝子導入した肝癌細胞の転移モデルを用い癌転移数を検討した。結果:in vitroではMF1の肝細胞増殖活性は、HGFに比べ若干弱いながらも強い活性が認められた。また抗アポトーシス作用はMF1でHGFとほぼ同様の効果を示した。また肝癌細胞はHGFで浸潤能が増強されたがMF-1は対照と同等であり、MF1は浸潤能を誘導しないことが確認された。In vivoで急性肝障害モデルでMF1投与によりALTの低下、肝障害の軽減が認められ、効果はHGF群とほぼ同様であった。また肝細胞分裂能はMF1投与で増加しTUNEL陽性細胞は優位に低下しておりin vitroを反映した結果であった。
建築環境評価のための拡張AMeDAS気象データの開発

ここにいう拡張アメダス気象データとは,気象庁のAMeDASに欠測データと湿度,日射量、大気放射量を補充した建築環境評価のための時刻別気象データである。これまで,全国842地点における1980年1995年までの15年間の拡張AMeDASを作成してきた。本基盤研究では,この拡張AMeDAS気象データの信頼性,付加価値を更に高め,一般ユーザにデータを公開することを目的として,以下の研究を行った。1.拡張AMeDASのクオリティーチェック全国約840地点の,1981年95年における,8要素(気温,水蒸気圧,全天日射量,風向,風速,大気放射量,降水量,日照時間)の時刻別気象データCD-ROMに対して,気象庁のAQC(自動品質管理)テーブルに基づくチェックや論理チェックを行い,データに修正を加えて,拡張AMeDAS気象データの信頼性を向上させた。2.標準年気象データの作成空気調和・衛生工学会方式の標準気象データの作成方法に必要な修正を加え,拡張AMeDAS気象データに基づく全国842地点の標準年気象データを作成した。3.データ検索および2次データ計算プログラムの開発CD-ROMから必要なデータを検索し,ユーザのディスクに格納する検索プログラムを作成した。また,CD-ROMの気象データから計算モデルを通して2次的に得られるデータ,すなわち,汎用性の高い斜面日射量,地中温度等の計算プログラムを開発し,拡張AMeDASの応用性を高めた。4.拡張AMeDAS気象データの公開拡張AMeDAS気象データ(1981年95年)をCD-ROM4枚、標準年気象データをCD-ROM1枚,各種データ処理プログラム(データ検索,斜面日射量計算,地中温度計算)や基礎統計値(PDF形式)をCD-ROM1枚に収録し,これら計6枚のCD-ROMに解説書を添付し,日本建築学会を通して一般ユーザにデータを公開した。AMeDAS気象データを利用して建築環境評価のための気象データを開発し、データの信頼性、応用性、付加価値を高めてユーザにデータを提供することを目的として、14の研究を行った。1. CD-ROMに収録した全国約840地点の1981年95年における、8要素(気温,水蒸気圧,全天日射量,風向風速,大気放射量,降水量,日照時間)の時刻別気象データのチェックを行った。気象庁のAQC(自動品質管理テーブルに基づくデータチェックに加え可能な幾つかの論理チェックを行い、異常データを検出した。検出した時刻別の気温、風速、降水量に含まれていた異常値を修正して、データの信頼性を高めた。2. AMeDASの全天日射量に適用できる適切な日射直散分離法と合成方法について検討した。国内数都市の日射量観測値を利用して、近年に国内外で提案された数種の日射直散分離モデル、および日射合成モデルの推定誤差を比較した。その結果、Perezの直散分離モデルおよびPerezの日射合成モデルが、全国的に見て分離精度および合成精度が優れていることを示し、AMeDASの日射量に適用する分離・合成モデルとして採用した。3.標準的気象データの選択方法について検討した。国外における選択法も考慮に入れ、空気調和・衛生工学会方式の標準気象データの作成方法を修正した方法を考案した。今後は、修正法による標準気象データを建築環境シミュレーションに適用し、シミュレーション結果の妥当性を検証する。さらに、修正法を用いて拡張AMeDAS気象データに基づく標準的気象データを全国約840地点について作成する。4. CD-ROMの拡張

AMeDAS気象データからユーザが必要とするデータを抽出し、ユーザのディスクに格納するプログラムを作成した。また、抽出したデータを使って2次的に得られる斜面日射量、地中温度のデータを造成し、日本地図上にデータを可視化するプログラムを作成した。ここにいう拡張AMeDASとは、気象庁のAMeDASに欠測データと湿度、目射量、大気放射量を補充した建築環境評価のための時刻別気象データである。これまでに、1980年から1995年までの15年間の拡張AMeDASを作成してきた。本年度は、これまでの研究を引継いで、拡張AMeDAS気象データを完成させ、一般ユーザに公開することを目的として、次の研究を行った。1.拡張AMeDASのクオリティーチェック全国約840地点の、1981年95年における、8要素(気温,水蒸気圧,全天日射量,風向,風速,大気放射量,降水量,日照時間)の時刻別気象データCD-ROMに対して、気象庁のAQC(自動品質管理)テーブルに基づくチェックや論理チェックを行い、データに修正を加えて、拡張AMeDAS気象データの信頼性を向上させた。2.標準年気象データの作成空気調和・衛生工学会方式の標準気象データの作成方法に必要な修正を加え、拡張AMeDAS気象データに基づく全国842地点の標準年気象データを作成した。3.データ検索および2次データ計算プログラムの開発CD-ROMから必要なデータを検索し、ユーザのディスクに格納する検索プログラムを作成した。また、CD-ROMの気象データから計算モデルを通して2次的に得られるデータ、すなわち、汎用性の高い斜面目射量,地中温度等の計算プログラムを開発し、拡張AMeDASの応用性を高めた。4.拡張AMeDAS気象データの公開拡張AMeDAS気象データ(1981年95年)をCD一ROM4枚,標準年気象データをCD-ROM1枚、各種データ処理プログラム(データ検索,斜面日射量計算,地中温度計算)や基礎統計値(PDF形式)をCD-ROM1枚に収録し、これら計6枚のCD-ROMに解説書を添付し、日本建築学会を通して一般ユーザにデータを公開した。
脊髄後角GABAA受容体δサブユニットの神経障害性疼痛における役割

GABAA受容体は抑制系の受容体であり、数種類のサブユニットが存在し、サブユニットの組み合わせによってその役割が異なる。過去の研究により、脊髄後角において痛みの伝達経路の中で重要な役割を果たす脊髄後角SG細胞においてGABAA受容体は抑制性の電流、tonic電流の発生に寄与し、痛みの軽減に貢献していることが明らかになった。我々がウエスタンブロッティングで確認したところ、GABAA受容体のサブユニットの中でδサブユニットが減少していることが明らかになった。CCIマウスは片方の座骨神経を結紮した神経障害性疼痛のモデルマウスである。CCIマウスは熱・機械刺激に対してアロディニアを呈することが知られており、我々の検証実験でも人間の神経障害性疼痛に近いアロディニアを呈した。我々の過去の実験において、神経障害性疼痛モデルマウス(CCIマウス)の脊髄後角度においてGABAA受容体のδサブユニット蛋白が減っていることから、CCIマウスの脊髄後角SG細胞においてはGABAA受容体のδサブユニットが減少し、tonic電流の発生が抑制されることで神経障害性疼痛が生じると仮定した。この仮説を検証するためにCCIマウスの髄腔内にδサブユニット選択的特異的アゴニストを投与し、神経障害性疼痛が改善するか否かを検証した。さらに、リアルタイムPCR法にてδサブユニットのmRNA量の定量と経時的変化を確認した。その結果、CCIマウスの脊髄後角においてGABAA受容体δサブユニットのmRNAが熱刺激への閾値と同じ経時的経過で低下していることが判明した。またδサブユニット選択的特異的アゴニストの髄腔内投与により、神経障害性疼痛の熱刺激の閾値低下が改善した。当研究は今後、神経障害性疼痛の治療に貢献する可能性がある。上記までの結果は2018年1月に雑誌Journal of Pain and Reliefに採択された。本来は追加で免疫学的実験を行う予定であったが、施設の異動に伴い、免疫学的実験の施行が困難であった。施設環境が整ったため、今後はCCIマウスの脊髄後角においてGABAA受容体のδサブユニットの局在を調べるために、免疫学的実験を行う可能性がある。さらにGABAA受容体選択的特異的アゴニストの髄腔内投与によってtonic電流が発生することを明らかにする為、電気生理学的実験も行うことを視野に入れている。GABAA受容体は抑制系の受容体であり、様々な鎮痛薬や睡眠薬の標的となっている。GABAA受容体には数種類のサブユニットが存在し、サブユニットの組み合わせによってGABAA受容体自体の役割が異なる。CCIマウスはddYマウスの片方の座骨神経を結紮した神経障害性疼痛のモデルマウスである。また、δサブユニット選択的特異的アゴニストの髄腔内投与によって、神経障害性疼痛の、熱刺激の閾値低下が改善した。行動学的実験と分子生物核実験において仮説通りの結果を得られたので、本研究は概ね順調に進行している。GABAA受容体を介した抑制性電流には、シナプス後膜のGABAA受容体に高濃度GABA(数μM)が結合することにより一過性にチャネルが開いて発生するphasic電流と、シナプス間隙に漏出した低濃度GABA(数nM)が、シナプス周囲に存在するGABAに非常に親和性の高いGABAA受容体に結合し持続的にチャネルが開いて発生するtonic電流の二種類がある。中枢神経細胞におけるtonic電流はアルコールや麻酔作用メカニズムに重要な役割を果たしていることが明らかになっている。一方、痛み伝達に重要である脊髄後角神経細胞にもtonic電流の存在が明らかになっているが、その生理学意義の詳細は明らかになっていない。これまでに我々は、神経障害性疼痛モデルマウスであるChronic cuff Injury(CCI)マウスで、tonic電流を有する脊髄後角度膠様質(substantia gelatinosa: SG)細胞が減少していることを明らかにした。また、SG細胞におけるGABAA受容体δサブユニットの蛋白発現量の減少も判明した。

本研究では、δサブユニットを介するtonic電流の減少とCCIマウスの疼痛についてのより詳細な検証を目的とし、δサブユニットの経時的な発現の変化をリアルタイムPCR法を用いて検証した。また、δサブユニット特異的アゴニスト4,5,6,7-tetrahydroisoxazolo(5,4-c)pyridine-3-ol (THIP)のCCIマウス神経障害性疼痛に対する効果を行動学実験により検証した。術後7、14日目において、CCIマウスSG細胞におけるGABAA受容体δサブユニットのmRNAの発現は有意に低下していた。この発現量の低下は、CCIマウスの熱への知覚過敏が消失する術後21日目から回復し、28日後にはNa&iuml;veマウスと同程度の発現量になった。術後7日後にδサブユニット特異的アゴニストであるTHIPを髄腔内投与したところ、CCIマウスでは熱刺激に対する疼痛閾値の改善を認めた。一方、Na&iuml;veマウスの熱刺激に対する逃避時間には変化を及ぼさなかった。CCIマウスが熱刺激に対する知覚過敏を呈する期間と、SG細胞におけるGABAA受容体δサブユニットmRNAの発現量の低下時期に相関性が見られたことから、CCIマウスの熱知覚過敏は、SG細胞におけるδサブユニット介在性tonic電流の減少が関与している可能性が高いと考えられた。またTHIPは、熱刺激に対する知覚過敏の鎮痛に有効であったことから、神経障害性疼痛の治療に貢献する可能性があることが示唆された。GABAA受容体は抑制系の受容体であり、数種類のサブユニットが存在し、サブユニットの組み合わせによってその役割が異なる。過去の研究により、脊髄後角において痛みの伝達経路の中で重要な役割を果たす脊髄後角SG細胞においてGABAA受容体は抑制性の電流、tonic電流の発生に寄与し、痛みの軽減に貢献していることが明らかになった。我々がウエスタンブロッティングで確認したところ、GABAA受容体のサブユニットの中でδサブユニットが減少していることが明らかになった。CCIマウスは片方の座骨神経を結紮した神経障害性疼痛のモデルマウスである。CCIマウスは熱・機械刺激に対してアロディニアを呈することが知られており、我々の検証実験でも人間の神経障害性疼痛に近いアロディニアを呈した。我々の過去の実験において、神経障害性疼痛モデルマウス(CCIマウス)の脊髄後角度においてGABAA受容体のδサブユニット蛋白が減っていることから、CCIマウスの脊髄後角SG細胞においてはGABAA受容体のδサブユニットが減少し、tonic電流の発生が抑制されることで神経障害性疼痛が生じると仮定した。この仮説を検証するためにCCIマウスの髄腔内にδサブユニット選択的特異的アゴニストを投与し、神経障害性疼痛が改善するか否かを検証した。さらに、リアルタイムPCR法にてδサブユニットのmRNA量の定量と経時的変化を確認した。その結果、CCIマウスの脊髄後角においてGABAA受容体δサブユニットのmRNAが熱刺激への閾値と同じ経時的経過で低下していることが判明した。またδサブユニット選択的特異的アゴニストの髄腔内投与により、神経障害性疼痛の熱刺激の閾値低下が改善した。当研究は今後、神経障害性疼痛の治療に貢献する可能性がある。
頭頸部癌におけるエピゲノムリプログラミング調節機構の解明

研究初年度、2年度は、頭頸部癌細胞株から頭頸部初期化癌細胞を作成のため、頭頸部癌で高発現している転写因子SALL4遺伝子のノックダウンを行った。細胞は形態変化を起こし細胞増殖能は顕著に低下した。現在この細胞からのmRNAを次世代シークエンサーにて網羅的メチル化解析・mRNA発現解析を行っている。脱分化させた細胞と脱分化前の細胞との間のメチル化パターンの違いについて解析している。今のところ、SALL4遺伝子のノックダウンによって、DNAメチル化酵素DNMT3A,DNMT3Bが低下し、脱メチル化酵素のTET1、TET2、TET3の発現が一部上昇することを確認している。何かしらのエピジェネティックな変化が生じ細胞初期化現象がおこっているものと推察された。また頭頸部癌の臨床検体を使った解析で、SALL4遺伝子は癌部で有意に高発現し、SALL4遺伝子高発現群は有意に予後不良であった。また、主要ながん抑制遺伝子である10遺伝子のメチル化解析でSALL4高発現群は有意に高メチル化を認めた。以上の結果から、SALL4遺伝子は頭頸部癌においてエピジェネティックリプログラミングを起こす因子である可能性を示した。研究最終年度は、EZH2の頭頸部癌での働きを調べた。EZH2は癌幹細胞マーカーであり、またヒストン修飾酵素でもある。EZH2は、多く癌細胞で高発現していて頭頸部癌でも高発現していることを確認した。その働きとして、組織多様性に関連していることが注目されている。EZH2阻害剤DZnepを使っての頭頸部癌細胞株への治療効果をin vitroで調べた。細胞増殖は良くされて、頭頸部癌への治療の応用の可能性を伺わる良好な結果を得られた。研究初年度は、頭頸部癌細胞株から頭頸部初期化癌細胞を作成のため、頭頸部癌で高発現している転写因子SALL4遺伝子のノックダウンを行った。現在この細胞からのmRNAを次世代シークエンサーを使った網羅的メチル化解析・mRNA発現解析を行っている。今のところ、SALL4遺伝子のノックダウンによって、DNAメチル化酵素DNMT3A, DNMT3Bが低下し、脱メチル化酵素のTET1、TET2、TET3の発現が一部上昇することを確認している。何かしらのエピジェネティックな変化が起こり細胞初期化がおこっているものと推察された。以上の結果から、SALL4遺伝子は頭頸部癌においてエピジェネティックな変化をコントロールし細胞の初期化状態に関連していると推察された。初年度の実験計画は予定通り終了した。研究初年度から、頭頸部癌細胞株から頭頸部初期化癌細胞を作成のため、頭頸部癌で高発現している転写因子SALL4遺伝子のノックダウンを行った。来年度は、SALL4阻害剤の頭頸部癌での効果を細胞株を使って確認する予定である。EZH2は、多く癌細胞で高発現していて頭頸部癌でも高発現していることを我々は調べている。組織多様性をもった腫瘍は治療標的が絞りにくく難治性であることが多い。EZH2阻害剤の開発競争は激しく、新しい薬剤が次々と開発されている。EZH2阻害剤の新薬を我々の作製する癌幹細胞への治療効果をin vitroで調べる。研究2年目の実験計画は予定通り終了した。

今のところ、SALL4遺伝子のノックダウンによって、DNAメチル化酵素DNMT3A,DNMT3Bが低下し、脱メチル化酵素のTET1、TET2、TET3の発現が一部上昇することを確認している。何かしらのエピジェネティックな変化が生じ細胞初期化現象がおこっているものと推察された。また頭頸部癌の臨床検体を使った解析で、SALL4遺伝子は癌部で有意に高発現し、SALL4遺伝子高発現群は有意に予後不良であった。また、主要ながん抑制遺伝子である10遺伝子のメチル化解析でSALL4高発現群は有意に高メチル化を認めた。以上の結果から、SALL4遺伝子は頭頸部癌においてエピジェネティックリプログラミングを起こす因子である可能性を示した。研究最終年度は、EZH2の頭頸部癌での働きを調べた。EZH2は癌幹細胞マーカーであり、またヒストン修飾酵素でもある。EZH2は、多く癌細胞で高発現していて頭頸部癌でも高発現していることを確認した。その働きとして、組織多様性に関連していることが注目されている。EZH2阻害剤DZnepを使っての頭頸部癌細胞株への治療効果をin vitroで調べた。細胞増殖は良くされて、頭頸部癌への治療の応用の可能性を伺わる良好な結果を得られた。次年度の実験計画を履行していく。最終年度の実験計画を履行していく。研究計画は順調に進行されているが、次世代シークエンサー解析が進行中でありこの経費は本年度に計上されていない。そのため次年度での使用になると思われる。おおむね予算の実行を行えた。研究経過は概ね順調に進行している。次年度も研究計画どおりすすめていく予定である。
戦後改革期における地域女性団体の設立に関する研究

本研究について以下のような成果と問題点を指摘できる。1.大阪府婦人団体連絡協議会(府婦協)の実態を把握した。大阪では戦前からの女性運動家が中心となって1945年11月9日に新日本婦人会が結成され、翌46年6月5日には日本主婦の会が創設された。主婦の会などを含む53団体で'48年には大阪婦人団体協議会がつくられ、'50年2月4日に府婦協が結成された。府婦協の加盟地域女性団体は、'52年度301団体(約18万人)、'54年466団体(約24万人)であった。2.元大阪市社会教育課婦人教育係長水木モリエ氏の聞きとりをおこない、次のことがわかった。GHQが自主的地域婦人団体の育成を指示し、50人以上の団体ではいけない、旧国防婦人会の役員をいれない(実質的には新団体の役員にしない)という条件もあり苦心したが、PTAの女性役員に呼びかけ、自主的グループが結成されていった。'49年にはリーダー養成講座を実施した。地域によっては、自主的婦人会と日赤奉仕団婦人部との対立がみられた。3.第1回全国婦人教員研究協議会(婦研協)との関係を知ることができた。日本教職員組合主催の第1回婦研協が'52年3月に大阪で開催されたが、これは大阪教職員組合の婦人部が提案したもので、水木モリエ氏が助言していた。婦研協は後に母と女教師の会を呼びかけた。4.戦後初期の地域女性団体の会員は、その後の移動などもあり、アンケート調査は思うようにはかどらなかった。中心的に活動していた人については何人か聞きとりをおこなったが、層として把握して分析するにはいたらなかった。以上のことについて、史料紹介をおこなう予定で、投稿を準備中である。
下顎骨の形態とクレンチングに関する筋電図学的研究

我々はさきにクレンチンク時の咀嚼筋活動と歯牙接触様式との関係に注目し、Groupfunctioned occlusionを有するGFグループとCuspid protectedocclusionを有するCPグループとでは筋放電パターンが異なることを前年度報告した。そこで今回、CPグループの側方咬合時の歯牙接触様式を実験的に変化させた場合、その変化が咀嚼筋の筋放電にどのような影響を及ぼすかについて調べるため以下の実験を行なった。被験者は顎口腔系に異常の認められない2431歳の成人男子5名で、全員側方咬合時での歯牙接触部位は上下の作業側犬歯である。これらの被験者の上顎左右小臼歯,大臼歯に白金加金によるメタルシーネを装着し、側方咬合時での歯牙接触部位が犬歯を含む側方歯群全歯となるようにして、Cuspidprotected occlusionを有する被験者を実験的にGroup functioned occlusionになるように変え、咬頭嵌合位,左右側方位、前方位,後方位にて最大かみしめを行なわせた。被験筋は左右咬筋浅部及び側頭筋前,後腹部の6筋であり、これらの筋担当部から表面電極によって導出した筋電図アナログ信号をA/Dコンバータでデジタル信号に変換して、コンピュータにより積分値を求め自動解析を行なった。結果の概要は以下のごとくである。1.シーネ装着の有無にかかわらず総筋活動量は咬頭嵌合位が最大であった。2.シーネ装着により左右側方位での総筋活動量は増加するがそのIP比の値(咬頭嵌合位における筋活動を1とした時の各顎位における筋活動量の比率)はGFグループの値ほど大きくなかった。3.シーネ装着後の左右側方位におけるIP比の経時的変化についてはCP型に戻るものとGF型に近くなるものとがいた。今後はシーネ装着後の経時的変化とシーネ撤去後の変化について詳細な検討を加えてみたい。
フレンドウイルス感染抵抗性遺伝子Rfv-3の分子クローニングと機能解析

レトロウイルス感染の成立と疾患発症には、複数の宿主遺伝因子が重要な役割を果たす。マウスのフイレンド白血病レトロウイルス感染抵抗性遺伝子の一つであるRfv3は、第15染色体上のヒト第22染色体と相同な領域に存在し、T細胞依存的な免疫反応を通じてウイルス中和抗体産生能を制御している。しかし、その分子実態はいまだ不明である。本年度は、先ず候補遺伝子の一つで、中和抗体産生能を欠くA/WySnマウスで変異があることが知られいるBAFF-R遺伝子を、フレンドウイルス抵抗性であるC57BL/6系統から感受性のA/WySn系統に導入したトランスジェニック(TG)マウスを作成した。得られたTGマウスでは、A/WySnマウスで減少している脾臓の成熟B細胞数に回復傾向が見られたが、A/WySnマウスの持つ変異型遺伝子のdominant negative効果を打ち消すことができず、表現型に期待する変化は起きなかった。一方、BAFF-R遺伝子はRfv3マッピング領域からやや外れているため、候補遺伝子存在領域の中央にあり、抵抗性のC57BL/6,C57BL/10系統と感受性のA/WySn系統で発現量に差があるAPOBEC3遺伝子に注目した。APOBEC3は、これまでそれが発現する動物種に生理的に存在するレトロウイルスに対しては複製抑制能を示さないとされていた。今年度は、C57BL系統で選択的に発現するAPOBEC3アイソフォームの安定発現細胞株を樹立し、これにフレンドウイルスを感染させて、上清に産生されたウイルスの感染価を測定した。その結果、これまでの報告に反して、C57BL系マウスのAPOBEC3は強いフレンドウイルス複製抑制能を示した。更に、APOBEC3を標的遺伝子破壊したノックアウトマウスでは、骨髄におけるフレンドウイルスの感染価が100倍ほど上昇した。フレンドウイルスの感染の成立には宿主側の遺伝的背景が非常に重要な因子として考えられている。Rfv-3遺伝子は、第15番染色体上に存在することが知られており、感染後15日目の中和抗体価を指標にマッピングを行ってきた。その結果、第15番染色体上のD15Mit1からD15Mit118の約3Mbの領域に存在することを突きとめた。この領域には92の遺伝子が存在し、Rfv-3遺伝子型の感受性系統と抵抗性型系統の間でのこれらの遺伝子発現の比較や、ゲノムの一次配列の比較から、候補遺伝子を決定し、フレンドウイルス抵抗性であるB10.A系統由来の候補遺伝子をAWySn/J系統マウスに導入したトランスジェニックマウスを作成した。この候補遺伝子は、B細胞特異的な表面受容体遺伝子で、膜貫通部位にレトロポゾンの挿入が見られ、そのため、AWySn/J系統マウスは成熟B細胞の数が少ないことがわかっている。本年度は、繁殖交配したトランスジェニックマウスの解析を主に行った。Rfv-3候補遺伝子の導入により、成熟B細胞の数が、Rfv-3候補遺伝子座の遺伝子型が同じである(AWySn/JxB10.A)F1系統マウスと同じになると期待されたが、実際は、わずかに上昇したのみであった。導入したRfv-3候補遺伝子の発現を見ると、(AWySn/JxB10.A)F1と比較して低いため、感受性型候補遺伝子のdominant Negative効果を打ち消せないと考えられた。そこで、発現系より強固な発現の期待できるベクターを使用し、新規のトランスジェニックマウスの作成を試みるとともに、骨髄細胞への導入も計画し、予備実験を続けている。
癌細胞の代謝変化においてニューロピリン１陽性マクロファージが果たす役割の解明

癌細胞はミトコンドリア機能を低下させ解糖系代謝を亢進させることなどにより、低酸素という過酷な環境下でも活発に細胞増殖を行うことができる。さらに、癌細胞は微小環境における様々なストレスに応じて転移・増殖に有利となるよう代謝経路を多様に変化させることも知られている(リプログラミング)。本研究の目的は、この癌細胞代謝リプログラミングにおいて免疫細胞がどのような役割を果たすのかを明らかにすることである。特に、抗腫瘍免疫のコントロールにおいて重要な役割を果たすことが知られるニューロピリン1陽性マクロファージに着目し、癌細胞代謝リプログラミングのメカニズムを解明していく予定である。今年度は、これまでの実験結果の考察から、免疫細胞の存在下では乳癌細胞株4T1のミトコンドリア機能に変化が生じることや、薬剤感受性が変化する可能性があること、さらに特定の免疫細胞との共培養において特徴的なミトコンドリア機能低下をおこす可能性があることなどを国際学会で発表した(Cell Symposium: Translational Immunometabolism, 2018)。また現在までに、様々な環境において癌細胞のミトコンドリアが形態的・機能的にどのように変化するかを観察する目的で、ミトコンドリア内のピルビン酸脱水素酵素複合体を蛍光標識により可視化する実験系の確立を行ってきた。今後は様々な培養環境下での検討をすすめ、とくに免疫細胞との共培養によって癌細胞ミトコンドリアがどのように変化するかを観察することで、代謝リプログラミングの実態を解明しメカニズムの追求を行っていく予定である。本年度は癌細胞代謝リプログラミングの実態および免疫細胞の影響について検討し、国際学会で発表を行った。また、すでに癌細胞ミトコンドリアの蛍光標識にも成功しており、今後様々な培養条件における比較検討を行うことでさらにミトコンドリアの機能的・形態的変化の実態を解明し、同時に分子学的なメカニズム解明へのアプローチも行うことができると期待している。一方、現状では未だ特定の免疫細胞および分子に特化した癌代謝リプログラミングへの影響に関して検討を進められておらず、今後の課題である。まずは癌細胞ミトコンドリアの蛍光標識を用いた実験系を確立させ、様々な培養条件におけるミトコンドリアの形態的・機能的変化の実態を把握する。同時に、それらの実験により捉えられた変化のメカニズムについて分子学的考察をすすめる。さらに、特定の免疫細胞において癌細胞代謝リプログラミングに特徴的な変化が生じる可能性を評価しin vivoでの実験にむけて準備をすすめる。癌細胞はミトコンドリア機能を低下させ解糖系代謝を亢進させることにより、低酸素などの過酷な環境下でも活発に増殖することができる。さらに、癌細胞は微小環境における様々なストレスに応じて転移・増殖に有利となるよう代謝経路を多様に変化させることも知られている。本研究の目的は、この癌細胞の代謝シフトにおいて免疫細胞がどのような役割を果たすのかを明らかにすることである。今年度は、まず癌細胞代謝リプログラミングの詳細を解明する目的で乳癌細胞株4T1とBALB/cマウス由来脾細胞の共培養を行い、その前後の癌細胞ミトコンドリア機能の比較を行った。その結果、共培養後に癌細胞のミトコンドリア機能が低下する可能性が示唆された。さらにCD11b陽性免疫細胞との共培養においてミトコンドリア膜電位が特徴的に低下することを確認した。また、ミトコンドリア阻害薬であるメトホルミンに対する腫瘍細胞の感受性を共培養前後で比較したところ、共培養後に感受性が低下する(薬剤耐性を獲得する)可能性も示唆された。メトホルミン以外の薬剤に対する感受性変化も現在検討中である。今後は、ニューロピリン1陽性マクロファージの抽出やそのノックダウンなどを用いた実験系を確立させ、in vitro、in vivo双方で癌細胞代謝シフトにおけるニューロピリン1陽性マクロファージの役割を解明していく予定である。申請者はこの一年間、癌細胞代謝シフトにおける免疫細胞の役割について研究を進めた。免疫細胞の存在下では癌細胞のミトコンドリア機能が低下することやミトコンドリア膜電位に変化が生じることをin vitroで示すことに成功した。また、免疫細胞の影響により癌細胞が薬剤耐性を獲得する可能性も示唆された。しかしニューロピリン1陽性マクロファージに特化した実験系が確立できておらず、本研究の主目的である「癌代謝シフトにおけるニューロピリン1陽性マクロファージの役割」に関しては今後in vivo、in vitro双方で研究を進めていく予定である。

今年度は、これまでの実験結果の考察から、免疫細胞の存在下では乳癌細胞株4T1のミトコンドリア機能に変化が生じることや、薬剤感受性が変化する可能性があること、さらに特定の免疫細胞との共培養において特徴的なミトコンドリア機能低下をおこす可能性があることなどを国際学会で発表した(Cell Symposium: Translational Immunometabolism, 2018)。また現在までに、様々な環境において癌細胞のミトコンドリアが形態的・機能的にどのように変化するかを観察する目的で、ミトコンドリア内のピルビン酸脱水素酵素複合体を蛍光標識により可視化する実験系の確立を行ってきた。今後は様々な培養環境下での検討をすすめ、とくに免疫細胞との共培養によって癌細胞ミトコンドリアがどのように変化するかを観察することで、代謝リプログラミングの実態を解明しメカニズムの追求を行っていく予定である。本年度は癌細胞代謝リプログラミングの実態および免疫細胞の影響について検討し、国際学会で発表を行った。また、すでに癌細胞ミトコンドリアの蛍光標識にも成功しており、今後様々な培養条件における比較検討を行うことでさらにミトコンドリアの機能的・形態的変化の実態を解明し、同時に分子学的なメカニズム解明へのアプローチも行うことができると期待している。一方、現状では未だ特定の免疫細胞および分子に特化した癌代謝リプログラミングへの影響に関して検討を進められておらず、今後の課題である。我々はこれまでに、癌細胞の代謝シフトの詳細を解明する目的で乳癌細胞株4T1とBALB/cマウス由来脾細胞の共培養を行いその前後におけるミトコンドリア機能を比較することで、共培養後に癌細胞のミトコンドリア機能が低下する可能性を見出した。さらに、特定の免疫細胞との共培養においてミトコンドリア膜電位が特徴的に低下することも確認した。今年度は、まずMagnetic cell sorting (MACS)法やフローサイトメトリー法により様々な免疫細胞を分離採取し、共培養に用いる免疫細胞群を変化させることで癌細胞代謝シフトにどのような変化が生じるかを観察する予定である。また、特定の免疫細胞群において特徴的な代謝シフトが認められた場合には、ニューロピリン1の発現量変化を調査し、詳細なミトコンドリアの質的・量的評価もすすめていく。つぎにミトコンドリア阻害作用を持つ複数の薬剤を用いて薬剤感受性試験をin vitroで行い、免疫細胞との共培養前後で腫瘍細胞の薬剤感受性がどのように変化するかの検討を行う。本実験系においても共培養に用いる免疫細胞群を変化させて癌細胞の薬剤感受性を比較し、代謝シフトと薬剤感受性の相関を評価する。さらに、ニューロピリン1陽性マクロファージを抽出しニューロピリン1をノックダウンすることで、共培養による癌細胞の代謝リプログラミングにどのような変化が生じるかを観察し、癌細胞代謝リプログラミングにおけるニューロピリン1陽性マクロファージの役割を解明していく予定である。まずは癌細胞ミトコンドリアの蛍光標識を用いた実験系を確立させ、様々な培養条件におけるミトコンドリアの形態的・機能的変化の実態を把握する。同時に、それらの実験により捉えられた変化のメカニズムについて分子学的考察をすすめる。
細胞傷害性T細胞の疲弊化における，転写因子Eomesoderminの役割の解明

抗腫瘍免疫反応においてしばしば問題となるT細胞の疲弊化の機序には未だ不明な点が多く,詳細解明は急務である。我々はCD8陽性の疲弊T細胞中に高発現する転写因子Eomesの機能を解析するためにEomes-Tgマウスを作成した。このEomes-Tgマウス内のT細胞では疲弊化T細胞の特徴の一部の表出が見られ,EomesがT細胞疲弊化に重要であることが示唆された。これらの結果を踏まえて本研究計画ではEomes-Tgマウス内のT細胞の反応性,発現遺伝子等を詳細に解析することにより,T細胞疲弊化におけるEomesの役割を解明し,新規治療法における標的分子としてのEomesの可能性を検討したい。
広視野・高分解能の宇宙線望遠鏡による高エネルギー天体の観測的研究

本年度において最優先の研究活動は、昨年度までに開発が終了した各ハードウェアの統合と、全体試験後の観測開始であった。本研究員は、本年度前半に観測サイトのあるアメリカ合衆国ハワイ州と日本を4往復した。まず、検出器を国内で統合試験した後、空路運搬した。ハワイ大学での再チェック後、観測サイトであるマウナロア山に運び最終調整を行った。さらに望遠鏡への設置後、調整・試験・望遠鏡全体での動作確認を行い、観測に備えた。この成果を9月の日本物理学会で発表した。また、並行して、学術会議シンポジウムに登壇し、超高エネルギーニュートリノ観測の将来性について発表した。本年度後半は、観測・取得データの解析・論文化が最重要であった。1011月にニュートリノ天体を狙った天文観測を行った。12月に観測を共同研究者に引き継いで帰国し、取得データの解析と博士論文の執筆を行った。この頃カンマ線バーストGRB081203Aが視野内で発生した。閃光現象は観測できなかったものの、可視光での明るさの上限をつけることに成功した。この結果とニュートリノ観測の速報を合わせ、GRB Coordinate Networkに投稿した。また他にも取得データを解析し、複数のカンマ線バーストや活動銀河核からの超高エネルギーニュートリノ放射について、流量の上限値をつけた。この成果を博士論文にまとめ、12月下旬に提出した。その後は、検出器の理解を深めるため、2009年1月まで渡航して宇宙線の観測を行った。同月末、博士論文の審査継続が決まり、引き続き論文化を続けることとなった。観測取得データの解析を含め、3月の日本物理学会で発表した。本年度完了予定であった博士論文執筆については、来年度の早い時期に完了予定である。本年度において最も重要度の高かった研究活動は、観測地であるアメリカ合衆国ハワイ州ハワイ島、マウナロア山山頂付近に、望遠鏡格納庫と望遠鏡本体を複数台建設し、光学要素を設置し、その調整を行う作業であった。これは、望遠鏡の撮像部やデータ取得部の構築などの作業とは異なり、日本から観測地へ多くの人材を一度に派遣する必要を伴う。そこで本研究員は、年度開始時の計画通り、本年度のほぼ半分の期間を観測地で過ごし、共同研究者とともに望遠鏡の建設・光学系の調整に携わった。結果、計6台の望遠鏡を光学系まで完成させ、全天のほぼ半分をカバーすることができるようになった。これを受け、平成19年4月現在、定常観測の開始に向けた観測地の準備が共同研究者の手によって着々と進んでいる。この観点において、平成18年度の研究目的は達成されたと言える。一方、大気チェレンコフ光の撮像によるTeVガンマ線・超高エネルギーニュートリノの観測という物理成果を現実のものとするためには、望遠鏡撮像部の各部品を統合する前の段階で、コンピューターシミュレーションが必要不可欠である。この研究要素は、当初の研究計画では来年度に行う予定であったが、上記のように撮像部の統合・組立の前に行う必要が出てきたため、本年度、これを前倒しで行った。結果、まだ概算ではあるが、超高エネルギーニュートリノの観測における望遠鏡の感度などの、物理成果に直接関わる量を見積もることができるようになった。これは、3年間で物理成果を得るためには不可欠な研究要素であり、研究が進んだことの意味は大きい。本研究員は、平成18年度中、このシミュレーションの概念・実装法とその結果について、国際学会と国内研究会でそれぞれ1回ずつ発表を行った。平成18年度の最後には、前述の撮像部の統合へ向けた研究を開始しており、平成19年度にはこの研究の成果が期待される。本年度において最も重要度の高かった研究活動は、昨年度から残っていた望遠鏡の建設作業と、撮像部のハードウェアの統合・構築である。まず本年度の初頭には、昨年度に前倒しで行っていたコンピューターシミュレーションを受けて、実際の撮像に用いるハードウェアに直結したソフトウェアの開発を行った。この開発を共同研究者に引き継いだのちに、本研究員は、観測地のあるアメリカ合衆国ハワイ州ハワイ島に渡航し、約2ケ月半の期間、残っていた建設作業に従事した。共同研究者との建設作業の結果、残っていた全ての望遠鏡の建設を完了した。この結果は、共同研究者によって、ICRCで発表された。一方で、建設作業の合間に、本研究員は、観測法の物理に関するシミュレーションを行った。この内容と、本年度初頭に行ったソフトウェア開発が、9月の国際研究会・国内学会で発表した内容である。その後、本研究員は国内にとどまり、撮像部ハードウェアに関する開発を行った。この開発は、撮像部ハードウェアの統合・構築に不可欠かつ非常に重要である。また並行して、平成20年になってからは、主に共同研究者の手によって、実際の観測による撮像部の試験・評価を行うべく準備が進められてきた。平成20年度内には、部分的に撮像部の設置が完了した。今後順次、撮像部の試験と評価を行っていく。このシステムは、GRB可視閃光の長期定常観測に供し、平成20年度初頭には、物理成果が期待される。今後は、撮像部を完全に統合・設置する。また、観測によるデータ量の増加など、コンピュータ環境を整備する必要が高まる。よって、今までのようなハードウェア開発中心の研究体制から、ソフトウェア中心へ移行していき、最終的なニュートリノ観測という目的を達成する予定である。

本研究員は、本年度前半に観測サイトのあるアメリカ合衆国ハワイ州と日本を4往復した。まず、検出器を国内で統合試験した後、空路運搬した。ハワイ大学での再チェック後、観測サイトであるマウナロア山に運び最終調整を行った。さらに望遠鏡への設置後、調整・試験・望遠鏡全体での動作確認を行い、観測に備えた。この成果を9月の日本物理学会で発表した。また、並行して、学術会議シンポジウムに登壇し、超高エネルギーニュートリノ観測の将来性について発表した。本年度後半は、観測・取得データの解析・論文化が最重要であった。1011月にニュートリノ天体を狙った天文観測を行った。12月に観測を共同研究者に引き継いで帰国し、取得データの解析と博士論文の執筆を行った。この頃カンマ線バーストGRB081203Aが視野内で発生した。閃光現象は観測できなかったものの、可視光での明るさの上限をつけることに成功した。この結果とニュートリノ観測の速報を合わせ、GRB Coordinate Networkに投稿した。また他にも取得データを解析し、複数のカンマ線バーストや活動銀河核からの超高エネルギーニュートリノ放射について、流量の上限値をつけた。この成果を博士論文にまとめ、12月下旬に提出した。その後は、検出器の理解を深めるため、2009年1月まで渡航して宇宙線の観測を行った。同月末、博士論文の審査継続が決まり、引き続き論文化を続けることとなった。観測取得データの解析を含め、3月の日本物理学会で発表した。本年度完了予定であった博士論文執筆については、来年度の早い時期に完了予定である。
ニホンカモシカ保全の基礎としての食物条件の解析

青森県下北半島で下記の結果を得た.3.は下北半島と山形県朝日の比較調査である。1.採食行動の直接観察により,年間を通しての食性を明らかにした.カモシカは114種の植物と菌類1種を食した.落葉広葉樹の葉や枝先を最も多く食し,採食割合は54.8-58.3%(秋)から94.5-95.0%(冬)を占めた.次いで,春秋に広葉草本を多く食した(16.539.1%).2.各季節の食物および糞中の窒素(タンパク質)含有率を測定し,栄養摂取レベルの季節変動を明らかにした.春秋の食物タンパク質含有率は15.820.9%,冬は7.8%であった.このタンパク質摂取レベルは,春秋は野生反芻類における最大成長要求量を,冬には体維持要求量を,それぞれ満たしていた.3.食物条件と採食効率を明らかにするため,冬期の単位移動距離当たりの食物供給量(低木類の根本断面積)と採食量(枝先の食痕数)を調査した.成獣メスの平均なわばりサイズは,下北で10.5ha,朝日で30.9haと朝日で大きい一方,朝日の食物供給量は下北の66.1%であった.すなわち,なわばりサイズと食物量には逆相関関係が認められた.ただし,両地域間で糞中窒素含有率に示される栄養摂取レベルに差異は認められなかった.4.過去24年間のなわばり個体の動向をとりまとめた.なわばりサイズと成獣密度は逆相関関係にあり,3.の結果と合わせ,食物量がなわばりサイズに影響を与えることによって成獣密度を規定していることが強く示唆された.5.森林植生に対するカモシカの採食圧を明らかにするため,試験区(2×2mの柵試験区と同面積の無柵試験区を5組)を設定した.2年間の調査によれば,カモシカの採食圧の影響は,オオバクロモジの伸長生長,冬芽総数,冬芽の層別構造において認められた.青森県下北半島で下記の結果を得た.3.は下北半島と山形県朝日の比較調査である。1.採食行動の直接観察により,年間を通しての食性を明らかにした.カモシカは114種の植物と菌類1種を食した.落葉広葉樹の葉や枝先を最も多く食し,採食割合は54.8-58.3%(秋)から94.5-95.0%(冬)を占めた.次いで,春秋に広葉草本を多く食した(16.539.1%).2.各季節の食物および糞中の窒素(タンパク質)含有率を測定し,栄養摂取レベルの季節変動を明らかにした.春秋の食物タンパク質含有率は15.820.9%,冬は7.8%であった.このタンパク質摂取レベルは,春秋は野生反芻類における最大成長要求量を,冬には体維持要求量を,それぞれ満たしていた.3.食物条件と採食効率を明らかにするため,冬期の単位移動距離当たりの食物供給量(低木類の根本断面積)と採食量(枝先の食痕数)を調査した.成獣メスの平均なわばりサイズは,下北で10.5ha,朝日で30.9haと朝日で大きい一方,朝日の食物供給量は下北の66.1%であった.すなわち,なわばりサイズと食物量には逆相関関係が認められた.ただし,両地域間で糞中窒素含有率に示される栄養摂取レベルに差異は認められなかった.4.過去24年間のなわばり個体の動向をとりまとめた.なわばりサイズと成獣密度は逆相関関係にあり,3.の結果と合わせ,食物量がなわばりサイズに影響を与えることによって成獣密度を規定していることが強く示唆された.5.森林植生に対するカモシカの採食圧を明らかにするため,試験区(2×2mの柵試験区と同面積の無柵試験区を5組)を設定した.2年間の調査によれば,カモシカの採食圧の影響は,オオバクロモジの伸長生長,冬芽総数,冬芽の層別構造において認められた.ニホンカモシカの個体群動態に及ぼず食物条件の影響を解析するため、青森県下北半島の脇野沢村において下記の3項目の調査を実施した。1)識別個体の直接観察によりなわばり面積を明らかにした。なわばり面積は、成メスでは10.9±1.6ha(n=5)成オスでは19.2±9.8ha(n=3)であった。2)森林植生に対するカモシカの採食圧を明らかにするため、2×2mの相試験区と同面積の無相試験区(対照区)を5組設置した。試験区内に出現した低木類は15種573本であった。すべての低木にナンバーテープを付け、樹高、根本直径、冬芽数、枝先の食痕数を毎木調査した。今後、追跡調査を行い、相区と無相区の低木類の成長状況を比較していく予定である。3)食物条件及び採食効率を明らかにするため、雪上の足跡をたどり、単位移動距離当たりの食物供給量(低木類の根本断面積)と採食量(枝先の食痕数)を調査した。足跡10mを1単位(本)とし、40本の足跡について調査した結果、34種の低木類が出現し、そのうち28種が採食されていた。

m^2当たりの低木類の本数、根本断面稙食痕数は、それぞれ4.1本、219.5mm^2、5.9個(いずれも平均値)であった。来年度以降の調査では、なわばりサイズや生息密度の異なる山形県朝日山地や長野県上高地で同様の調査を行い、今年度の結果と比較検討する予定である。ニホンカモシカの個体群動態に及ぼす食物条件の影響を解析するため、青森県下北半島と山形県朝日においてレンジサイズと食物量についての調査を実施し、下記1.2の結果を得た。これらの結果より、レンジサイズの小さい下北半島はレンジサイズの大きい朝日と比較して、食物条件がより好適であることが示唆された。1.識別個体のこれまでの観察資料に基づき、両地域における年間のレンジサイズを明らかにした。下北半島では、成メスが10.5±3.6ha(n=22)、成オスが16.6±6.2ha、朝日では成メスが29.8±13.7ha(n=5)、成オスが45.0±15.6ha(n=5)であり(いずれも平均値±SD)、レンジサイズは下北半島の方が小さかった。2.食物条件及び採食効率を明らかにするため、雪上の足跡をたどり、単位移動距離当たりの食物供給量(低木類の根本断面積)と採食量(枝先の食痕数)を調査した。調査は足跡10mを1単位(本)とし、両地域において各40本実施した。下北半島と朝日における10m^2当たりの低木類の本数は35.7±16.6本と14.4±6.1本、根本断面積合計は1871.4±1260.4mm^2と1236.2±670.3mm^2食痕数は59.1±36.6個と38.2±33.9個であり(いずれも平均値±SD)、朝日よりも下北半島の方が食物条件がよかった。ニホンカモシカの個体群動態に及ぼす食物条件の影響を解析するため、青森県下北半島の脇野沢村において下記の2項目の調査を実施した。1)森林植生に対するカモシカの採食圧を明らかにするために初年度(1998年)に設定した試験区(2×2mの柵試験区と同面積の無柵試験区(対照区)5組)において、柵設置2年後の追跡調査を行った。調査は、樹高と冬芽数を毎木調査した。データは現在、とりまとめ中である。2)1976年から継続観察している識別個体の繁殖成功率をとりまとめ、各個体のなわばりの質という観点より、繁殖率と生息環境の関係を検討した。その結果、繁殖成功率はなわばりの位置によって差異が認められ、メスカモシカの繁殖成功はその個体が保持しているなわばりの質によって左右されていると考えられた。裏付け資料として、主要食物である低木類の量を、繁殖成功率が最も高かったなわばりと最も低かったなわばりとで比較したところ、採食対象全種の単位面積当たりの食物量では2.0倍の、採食主要5種の食物量では同じく3.9倍の違いがあった。また、各メスの糞中窒素量とその個体がなわばりを保持しているエリアの平均繁殖成功率との間に相関関係が認められた。青森県下北半島脇野沢村の研究フィールドにおける過去24年間のなわばり個体の動向をとりまとめた.成獣のうち,非なわばり個体は2%にすぎず,雌雄ともにほとんどの成獣がなわばりを保持していた.成獣の平均なわばり保持期間は,メスで11.7年,オスで12.4年であり,性差はなかった.なわばりサイズは,成メスで10.5±3.6ha,成オスで16.6±6.2haであった.成獣密度と,なわばりサイズ,なわばりの重複度合い,なわばりとしての非占有地率の3者との相関関係をそれぞれ検討したところ,成獣密度となわばりサイズの間でのみ有意な逆相関関係が認められた.これまでの研究代表者らによる研究では,植生・食物条件の変化に応じてカモシカの密度変化が生じたこと,およびなわばりサイズと食物供給量との間に逆相関関係が認められたことが明らかにされている.これらの結果と今回の結果を合わせで考察すると,カモシカでは食物量がなわばりサイズに影響を与えることによって成獣密度を規定していることが強く示唆された.