hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
車椅子ロードレースが身体障害者に与える栄養学的影響-非運動群との比較-

平成18年度では、車いすロードレースランナーと比較するための、健常者中・長距離ランナーのエネルギーバランスについて、ハートレートモニターによる心拍数法からまとめた結果を論文として報告することができた。また、運動習慣のない車いす利用者の調査(安静時代謝量の測定、身体状況調査)を実施することもできた。その結果、これまで調査してきた運動習慣のある対象者は、傷病原因が事故による脊髄損傷といった外傷性のものであり、受傷年齢は比較的若く、自立した生活を送ることができていたが、運動習慣のない車いす利用者の車椅子を利用する原因となった傷病名は脳梗塞や脳出血など脳血管疾患による麻痺、骨折等の整形疾患など、加齢に伴う疾患が中心であることが明らかとなった。また、運動習慣のない車いす利用者の、体重あたりの基礎代謝量は、男性21.0±5.5(11.831.9)kcal/kgBW、女性は18.6±3.0(14.422.7)kcal/kgBWとかなりばらつきがみられた。本結果については、2006年度の日本栄養改善学会学術総会で発表済みであり、現在投稿準備を進めている。今回の調査では対象者を車いす利用者と範囲を広げて、各個人の同意のもとでデータを得ることができたが、障害の状況や性、年齢がさまざまとなり、平均値を得て状況を把握するためには、より多くの対象者が必要である。また、新規の運動習慣のある対象者(特に車いすランナー)を得るため、これまでとは異なる大会にも着目し見学や研究打ち合わせを行ったが、競技者の意識が「娯楽」としてのスポーツと「競技」としてのスポーツに大きく分かれるため、結果として対象者の母数が減り、データを得にくい状況となった。しかしながら運動習慣のある車いす利用者の、身体づくりに対する意識は高く、今後も障害者スポーツと、その基礎となる栄養に着目し、研究を行っていきたい。平成16年度では、以前より実施していた車いすロードレースランナーの安静時代謝量および栄養摂取状況調査、身体状況調査を継続して実施した。例数を増やすことで、年代ごとの比較などこれまでより詳しい解析を実施することを試みることが可能となった。また、併せて車いすバスケットボールを行う車いす利用者にも調査依頼をすることが可能となり、車いすロードレースランナーと同様に安静時代謝量の測定、栄養摂取状況調査、身体状況調査を実施することができた。現在の調査段階では、競技特性について比較してみると、ロードレースランナーの方が年齢層が幅広く、バスケットボールをしている利用者の方が皮脂厚が少ない、そして肉・魚介類の摂取量はランナーの方が少ない等の結果が得られている。今後も、協力の得られる対象者に対してはハートレイトモニタリング等を実施し、更なる情報を得たい。一方、車いす利用者の状況を把握するための指標として、健常者における早朝空腹時安静時代謝量と特異動的作用の影響についても検討を行った。その結果、朝食摂取の有無により、起床後の代謝量の上昇に顕著な差があらわれ、朝食の有用性と特異動的作用の影響しない安静時代謝量測定の方法を明らかにすることができた。現在は、これらの結果をまとめ、学会発表や論文発表を行うと同時に、運動習慣のない車いす利用者に対する調査を計画し、運動習慣のある利用者に対しても詳細な検討を行うべく取り組んでいる。平成17年度では、前年度と同様車いすロードレースランナーの安静時代謝量および栄養摂取状況調査、身体状況調査を実施した。新規の対象者をあまり得られなかったが、同一対象者において再度調査を実施できたので、前回の数値と比較し、個々人の変化について明らかにしたいと考えている。現在の調査段階では、得られた対象者を年代ごとに分類し、安静時代謝や食事摂取状況について比較を行っている。今後、さらに新規対象者を増やし、協力の得られる対象者に対してはハートレイトモニタリング等を実施し、安静時代謝量や日常生活行動パターンなどの詳細な情報を得たい。一方、運動習慣のない車いす利用者への調査依頼が少し延期となってしまったが、平成18年度前半に安静時代謝量の測定、栄養摂取状況調査、身体状況調査を実施する予定である。本テーマは車いすロードレースランナーと非運動群との比較を中心に考えている。しかしながら、近年車いすスポーツはますます活発になり、多種多様な競技性と選手の身体状況を把握し栄養状態を把握することが重要であると思われる。現在は、まだまとめられていないデータを整理して、学会発表や論文発表を行うと同時に、運動習慣のある車いす利用者と運動習慣のない車いす利用者への調査依頼を行い、両者の違いをより明らかにし、改善点の検討を行うべく取り組んでいる。

本結果については、2006年度の日本栄養改善学会学術総会で発表済みであり、現在投稿準備を進めている。今回の調査では対象者を車いす利用者と範囲を広げて、各個人の同意のもとでデータを得ることができたが、障害の状況や性、年齢がさまざまとなり、平均値を得て状況を把握するためには、より多くの対象者が必要である。また、新規の運動習慣のある対象者(特に車いすランナー)を得るため、これまでとは異なる大会にも着目し見学や研究打ち合わせを行ったが、競技者の意識が「娯楽」としてのスポーツと「競技」としてのスポーツに大きく分かれるため、結果として対象者の母数が減り、データを得にくい状況となった。しかしながら運動習慣のある車いす利用者の、身体づくりに対する意識は高く、今後も障害者スポーツと、その基礎となる栄養に着目し、研究を行っていきたい。
超小型無拘束心拍数、体温、歩数、身体活動量記録装置の開発

心拍数、体温、歩数、および身体活動量を同時に34時間にわたって、1分ごと連続的に測定し記録できる小型(9.2cm×6.0cm×2.5cm)で携帯式の装置を開発した。心拍数は胸部に貼付した電極から心電図を誘導し、歩数は加速度センサを用いて身体重心の鉛直方向の加速度を検出し、身体活動量はこの波形を全波整流し積分することによって求めた。体温については、サーミスタの抵抗値を周波数に変換する外付け回路の出力を取り込む端子を設け、必要に応じて接続できるようにした。心電図は、クワッドOPアンプ(MC14573)の3/4を用い、4次バンドパスフィルタを兼ねたインスツルメンテーションアンプによって、加速度はOPアンプの残り1/4を用い、センサ(ADXL150)の出力を、2次ローパスフィルタを兼ねた反転増幅回路によって増幅した。これらの信号とアナロググラウンドの電位をA-Dコンバータ内蔵シングルチップ・マイクロコンピュータ(PIC16C711)に入力し、ソフトウェアによって心拍数、体温、歩数、および身体活動量を求め、1分ごとにシリアルEEPROM(24LC65)に書き込ませるようにした。以上、アナログ部分はクワッドOPアンプ1個とその周辺回路のみとして極力ソフトウェアにゆだね、またシリアルEEPROMを用いることにより、全体としてきわめて簡素な回路となった。データ読み出し用インタフェースは、赤外線を用いて記録装置と通信させ、ホストコンピュータには、シリアルポートを介して接続した。また、1日のエネルギー消費量を、心拍数、体温、歩数、および身体活動量のうち、2種類以上の変数を同時に用いて推定する方法について検討し、高精度な結果の得られる方式を見いだした。近年、生活環境全般にわたる機械化のため、一般に身体活動量が低下し「運動不足病」などの弊害が現われ、また、心筋梗塞、糖尿病をはじめ、種々の疾患について、運動療法の効果が重視されてきている。ここにおいて、的確な運動処方の提示が望まれるが、そのためにはまず個々人の日常生活における運動強度と身体活動量の測定が必要であり、処方された結果についての測定もまた必要である。これには、心拍数または歩数だけの測定からエネルギー消費量等を推定する方法も考えられるが、両者に加え、体温、身体活動量(物理的仕事量)を同時に測定することにより、さらに精度の高い数値が得られる。そこで、さきに本研究代表者の開発した心拍数、体温、歩数記録装置をさらに改良し、心拍数、体温、歩数、身体活動量を同時に34時間にわたって1分ごと連続的に測定し記録することのできる携帯式の装置を試作した。心拍数は、胸部より心電図を誘導し、アクティブフィルタによってR波のみを選択的に増幅し、コンパレータとモノステーブルマルチバイブレータを用いてこれをパルスに変換し、体温は、サーミスタの抵抗値を周波数に変換し、歩数は、身体の上下動に起因する衝撃センサの出力を、アクティブフィルタ、コンパレータおよびモノステーブルマルチバイブレータに入力してこれをパルスに変換し、並行してこのセンサによる出力を、整流回路、ついで積分回路に入力し、身体活動量をも測定できるようにした。パルスに変換されたデータをカウントしメモリICに記録するために、シングルチップ・マイクロコンピュータ(NEC μPD78P014)を搭載することによって、デジタル回路が従来の方式と比較しきわめて簡素化され、超小型で安価な装置となった。近年、生活環境全般にわたる機械化のため運動不足などの弊害が現われ、また一方、種々の疾患について、運動療法の効果が重視されてきている。ここにおいて的確な運動処方の提示が望まれるが、そのためにはまず個々人の日常生活における運動強度と身体活動量の測定が必要であり、処方された結果についての測定もまた必要である。

そこで、さきに本研究代表者の開発した心拍数、体温、歩数記録装置をさらに改良し、心拍数、体温、歩数、身体活動量を同時に34時間にわたって1分ごと連続的に測定し記録することのできる携帯式の装置を試作した。心拍数は、胸部より心電図を誘導し、アクティブフィルタによってR波のみを選択的に増幅し、コンパレータとモノステーブルマルチバイブレータを用いてこれをパルスに変換し、体温は、サーミスタの抵抗値を周波数に変換し、歩数は、身体の上下動に起因する衝撃センサの出力を、アクティブフィルタ、コンパレータおよびモノステーブルマルチバイブレータに入力してこれをパルスに変換し、並行してこのセンサによる出力を、整流回路、ついで積分回路に入力し、身体活動量をも測定できるようにした。パルスに変換されたデータをカウントしメモリICに記録するために、マイクロコンピュータを搭載することによって、デジタル回路が簡素化され超小型で安価な装置となった。この装置の開発により、エネルギー消費量を従来の方法によるよりも高精度に求めることができるようになった。
児童期における家族との分離経験が成人後の社会的行動に及ぼす影響について-太平洋戦下の学童集団疎開経験の成人後の社会行動への影響-

太平洋戦争(第二次世界大戦)中に行なわれた小学校児童の集団疎開の経験を、家族との分離経験ととらえ、その経験が成長後の行動、とくに現時点における社会的な行動とどのように関係しているかを、学童集団疎朗の非経験者との比較によって検討しようとした。年齢の最頻値がともに66歳の、学童集団疎開経験者男女合わせて45名と、非経験者男女合わせて106名を対象とした調査の結果、学童集団疎開経験者は、非経験者にくらべて、引退後の今後の生活の楽しみに「他者との交際、人間閧係」を挙げているものが、著しく少数であることが明らかになった。また、戦時中の学校生活で、今日「いじめ」とされる原因の不明な攻撃を受けた経験があることを見出し、「いじめ」が必ずしも現代的な現象でないことを指摘し、「いじめ」発生の機制を同一性形成の危機という視点から考察した。平成9年度は、児童期の分離経験として心理的影響をもつ可能性のある学童集団疎開経験の内容の洗い出しのための準備作業を行った。まず、公刊されている経験者の回想を含む諸記録の内容の分析と、東京都内の小学校(国民学校)在校時に学童集団疎開経験をもった者への面接調査を試み、また集団疎開学童の受入れ側である寺社,旅館、行政関係(教育委員会等)の記録の中から当時の疎開学童の生活の実態、集団疎開児童に関する諸記録の収集を行い、基本的な作業仮説の構築を試みた。対照群としては、学童集団疎開経験をもたない人々の自伝的回想録をもとに、児童期の人間関係に係わる経験のもつ意義の考察のための資料の収集を試みた。すべて事例研究的に考察されるべき性質の資料であるとともに、各地に散らばっている経験者の面接に多大の時間を要し、当初から4年計画で行われているが、現段階では中間的な報告にとどまる。しかし、これまでのところ、学童集団疎開時に今日の「いじめ」に近似した現象が見られること、その「いじめ」発生の機制には、児童が集団的な日常生活において、超個人的相互依存的役割を分担せざるを得なかったか否かが多分に影響していること、また「いじめ」の経験は、「いじめ」られるよりも「いじめ」た経験が一層深刻な経験として想起され、それが成人後も当時の人間関係のネットワークへの参加を抑制する要因となっている可能性があること等が示唆された。これが、家族との分離経験と如何に交絡しているか、また、成人後の行動にいかなる影響を及ぼしているかは、さらに多くの事例の収集をまって検討する予定である。平成10年度は、以下の諸項に関する資料の収集と分析、今後の準備を行なった。1)前年度に続けて、戦時下に児童期をすごした世代で都市部から農山村部に疎開した経験をもつ者の日記、絵画等の作品、地方史誌など文書の収集および、当時の関係者である受け入れ側の責任者で健在である人々、当時の児童からの聞き取り調査。2)対照資料として、他の時期に児童期を過ごした人々の自伝的資料の収集と内容分析。3)学校単位のアンケート調査実施のための対象校選定資料の収集とアンケート調査実施の諸準備(名簿の収集、郵送のための印刷等諸準備)とアンケート内容案の検討。これまでに得られた結果としては、1)学童集団疎開児童の間での「いじめ」現象は、今日のそれと現象的にはほとんど変わらないこと、2)その背景に、児童が日常生活にいて、発達段階に対応した集合的同一性が確認できる条件が存在したか否かということがあると思われること、3)「いじめ」は、いじめた側にとっても大きな精神的外傷となる可能性があること、4)以上のことから、児童期の人間関係のあり方、それに関係するその時期の集合的社会組織(家族、地域共同体など)との一体感の形成が、成人後の人間関係の形成に大きな影響をもつ可能性があること、5)従来比較的検討されることの少なかった児竜期の同一性の確立に係わる要因、確立の影響の研究が重要であること、6)学童集団疎開は、都市文化と農山村文化との交流の契機となった可能性があるにも係わらず、疎開児童と地元児童との交流はほとんど生じていないこと、である。平成11年度は、第一に、東京都内の3小学校(当時国民学校)に対象を絞り、当該学校保存の諸記録調査および当時の在籍児童、さらにそれらの学校が集団疎開を行なった栃木県佐野市、長野県松本市・塩尻市、山梨県甲府市等の受入小学校の当時の関係者(教員、生徒)に可能な範囲で面接聞き取り調査を実施した。

その結果、1)2つの小学校の当時の在籍児童の現住所等現況について極めて不完全ではあるが名簿を作成することができ、2)家族との分離経験の具体的な内容としてどのような現象をとらえ、さらに成人後の社会的行動の指標として、現在既に60歳の半ばを越える人々を対象とすることも考慮した簡潔で容易に回答し得る質問紙法による調査として、具体的な経験内容、それに伴う感情、現在の対人関係の構成の仕方を指標とする社会行動の特質を測定する簡潔な尺度の構成が可能であろうとの予想が得られた。これに基づき、平成12年2月から2つの小学校の当時の在籍児童約700名への郵送による所在の確認と郵送調査への協力の可否の照会を行なった。その結果、住所変更による所在不明者、物故者も少なくなく、また調査への回答に応じられないとの返信もあり、平成12年3月上旬現在で約130名からの調査応諾の返信を得た。現在、これらの人々を対象とした郵送による質問紙法による調査を実施中である。また、さらなる調査対象の拡大を図っており、資料数の増加を可能な限り図り、平成12年度に資料の解析を行ない、結果のまとめを行なう予定である。第二に、前年度に続き対照群として、戦時下ではない時期に児童期を過ごした人々の自伝資料の内容分析を行なった。この研究は、太平洋戦争中の学童集団疎開を児童期の家族との分離経験ととらえ、成人後の社会性等への影響を明らかにしようと試みたものである。平成12年度は、東京都内の国民学校2校に昭和16年以降に在籍していた者で住所の手掛かりのある者を対象に郵送による調査を実施した。あわせて、昭和初期、中期に小学生時代を過ごした幅広い世代を含む者を対象とした生活の回想を聞き取りによって収集した。なお、郵送調査は関係有志によって個人的に作成されていた同窓生名簿を借用したため住所の再確認などに時間を要し、現在も可能な限り資料数を増加させる努力を行なっている。これまでに一部分析が進行したものから暫定的なまとめであるが、(1)学童集団疎開時にも現在言われている「いじめ」の現象があり、「いじめ」の発生の機序の理解のためには児童相互の関係の背景にある生活の状況を考慮する必要があることが示唆されるとともに、「いじめられた経験」と「いじめ経験」が成長後への影響を考える場合、いじめ経験が予想以上に本人のこころの重荷になる可能性があること、(2)これまでの発達研究ではほとんど論議されていない問題として、児童期の経験は予想以上に成人後の対人態度等に影響を及ぼしている可能性があることなどが示唆されている。
走査型TRAXS(全反射角X線分光法)の開発と,それによる表面動的過程の研究

昨年度製作した走査型TRAXS-SEM-SREM装置を用いて、様々な測定を行い、表面元素分析法であるTRAXSをSEM-SREM装置と組み合わせることによって、ミクロな領域の構造観察と同時にミクロな領域の元素分析および2次元元素マッピングが可能となり、新しい表面分析法として有効であることを示すことができた。(1)エレクトロマイグレ=ションの表面構造依存性の観察:Si(111)表面上にあらかじめ所定の量の金原子層を吸着させて各種の表面超構造を準備し、その上に銀原子層をパッチ上に蒸着し、その状態でシリコン結晶に直流電流を流して銀原子のエレクトロマイグレーションをSEM-TRAXS法で観察した。その結果、銀原子のマイグレーション速度が、基板の表面構造に敏感に依存して異なることが分かった。これらの現象のメカニズムについて検討した。(2)走査型TRAXSの検出感度:Si(111)表面上に1原子層以上の銀原子を蒸着して3次元島をつくり、その元素分布の2次元マッピングを走査型TRAXS法を用いて行い。走査TRAXS法の検出感度を調べた。(3)Si(111)-√<3>×√<3>-Ag表面上にさらに1原子層未満の金原子を蒸着した場合に形成される各種表面合金相をSEM-TRAXS法で観察し、その形成条件を相図として明らかにした。本研究の目的である、走査型TRAXS装置の完成のため、今年度は以下の研究を行った。(1)現有の超高真空走査反射電子顕微鏡(SREM)に、エネルギー分散型X線検出装置(EMAX)を取り付けるため、ベリリウム窓付きゴニオステージ機構を設計・製作して取り付けた。(2)当科研費で購入したEMAXを上記ゴニオステージ機構に取り付け、SREM装置と結合させた。(3)上記SREM/EMAX結合装置を動作させ、走査電子線を標準試料に照射し、そこから励起・放射されたX線を実際に検出できることを確認し、所期の性能を達成した。このように、今年度は、当初予定していた装置を完成させることができた。来年度は、これを利用して、表面動的過程の研究を行う予定である。昨年度製作した走査型TRAXS-SEM-SREM装置を用いて、様々な測定を行い、表面元素分析法であるTRAXSをSEM-SREM装置と組み合わせることによって、ミクロな領域の構造観察と同時にミクロな領域の元素分析および2次元元素マッピングが可能となり、新しい表面分析手法として有効であることを示すことができた。(1)エレクトロマイグレ=ションの表面構造依存性の観察:Si(111)表面上にあらかじめ所定の量の金原子層を吸着させて各種の表面超構造を準備し、その上に銀原子層をパッチ状に蒸着し、その状態でシリコン結晶に直流電流を流して銀原子のエレクトロマイグレーションをSEM-TRAXS法で観察した。(2)走査型TRAXSの検出感度:Si(111)表面上に1原子層以上の銀原子を蒸着して3次元島をつくり、その元素分布の2次元マッピングを走査型TRAXS法を用いて行い、走査TRAXS法の検出感度を調べた。(3)Si(111)-√<3>×√<3>-Ag表面上でさらに1原子層未満の金原子を蒸着した場合に形成される各種表面合金相をSEM-TRAXS法で観察し、その形成条件を相図として明らかにした。
薬科大学女子学生における月経関連症状と生殖的健康について

医療技術の高度化、医薬分業の進展などに対応するため、薬剤師教育の充実を目的として6年制となった。薬学生は高度な講義や実習のため予想以上に心身への負担を伴い、薬学部では半数以上を女性が占めているため女性特有の生殖機能への配慮も必要となってきた。また、晩婚化に伴い、結婚、出産および育児などへの新しい対応が求められている。従って、在学中から生殖機能への意識を自覚し将来へのリプロダクティブヘルスのライフプランを考えることは重要である。さらに不妊の原因となる卵巣機能低下や、性感染症予防などの教育を充実させる必要がある。本研究では女子大学生の生殖教育に必要な情報を明確にし、ライフプランを考える一助となる教育を目指すことを目的とした。定期健康診断時に月経随伴症状とその対処法、月経に関する知識について問診を行った。月経痛などの随伴症状に対して鎮痛剤を服用する学生は半数に止まり、中には生活に支障をきたしている学生も見られた。80%の学生は生殖適齢期を知っていたが、無排卵であっても月経があれば妊娠は可能という誤解が約60%にみられ、更なる正しい情報の提供が必要と思われた。次に書面説明後に同意を得た学生に対して、3ヵ月間の基礎体温測定と自覚症状の記入を求め、共同研究者の産婦人科医師がこれを評価した。基礎体温が正常型の学生は少なかった。これらの成績は定期的面談時に説明された。基礎体温測定は自分の身体の機能を把握し、更に女性としての意識や将来のライフプランなども考える動機となっていた。しかし一部にみられた婦人科受診の必要な者の中には詳細に追跡できず、今後は更なる婦人科医の介入、生殖的教育や性感染症に関する教育が必要と思われた。
ヒト口腔・顔面領域における神経因性疼痛発症動向の解明に向けた前向き研究

歯科では、治療の過程で末梢神経の損傷を伴う処置が多く、組織の障害とは関係なく痛みを自覚する神経因性疼痛が生じてしまうことがある。本研究では、インプラント手術前後の痛みの変化を詳しく調べ、その結果、手術した部位だけではなく、その近くの神経支配部位や、反対側にまで痛みやすい状態が生じていることを明らかにした。この検査方法は神経因性疼痛の適切な診断に有用であることから、研究結果を、歯が原因の痛みと誤診されることによる患者さんの不利益を少なくするために役立てたい。これまで、ヒトにおいては主に神経因性落痛の症例報告や、罹患患者に対する薬物療法等の報告が中心に行われてきましたが、その発病率や罹患率については全く報告されていないのが現状です。神経損傷を伴う処置が多い歯科治療において、多くの歯科医師はこれらの処置にどのような危険が伴うのかを理解し、患者に対し適切な情報を提供することが求められています。また、患者のQOLの向上のためにも、臨床的な見地から調査を行い、神経因性疼痛の発病率、罹患率、発症動向などを明らかにすることが期待されます。痛みとはそれを有する個人の不快な感覚や情動体験の表現です。神経因性疼痛が歯科においてあまりなじみがないと考えられているのは、逆に、「痛み」として認識されるほどの病態ではないために見過ごされている可能性が高いと考える方が妥当です。本研究では、前向き研究として、抜髄や抜歯といった明らかに神経を損傷する治療前後における三叉神経各枝ならびに頸神経支配領域の神経選択的刺激に対する知覚閾値ならびに痛覚域値の測定を行い、治療介入後から一定の期間、同領域の知覚閾値ならびに痛覚域値の変動を計測することにより、歯科治療に伴ってヒト三叉神経支配領域に生じる神経因性疼痛の発現につながると考えられる閾値の低下などの発症動向、ならびに、三叉神経第III枝への損傷が、どのような範囲に影響を及ぼすのか、を明らかにしたいと考えています。本年度は、研究に必要な質問表を含めたデータベースと分析プロトコールの作成を行い、三叉神経の各枝ならびに第一頸神経支配領域皮膚表面における温刺激に対する知覚閾値ならびに痛覚閾値の測定を行い、測定プロトコールを作成しました。また、予備的実験として、クレンチング後の疼痛閾値の変化を男女別に検討し、本実験システムの有用性の検討を行いました。これまで、ヒトにおいては主に神経因性疼痛の症例報告や、罹患患者に対する薬物療法等の報告が中心に行われてきましたが、その発病率や罹患率については全く報告されていないのが現状です。本年度は、昨年度に作成した質問表を含めたデータベースと分析プロトコールを用い、インプラント埋入手術前後1における三叉神経の各枝ならびに第一頸神経支配領域皮膚表面の温刺激に対する知覚閾値ならびに痛覚閾値の測定を行い、神経損傷の可能性のある手術による疼痛閾値への影響について予備的検討を進めました。また、クレンチング後の疼痛閾値の変化を男女別に検討し、潜在的な鎮痛療法の効果についても引き続き検討を行いました。

また、患者のQOLの向上のためにも、臨床的な見地から調査を行い、神経因性疼痛の発病率、罹患率、発症動向などを明らかにすることが期待されます。痛みとはそれを有する個人の不快な感覚や情動体験の表現です。神経因性疼痛が歯科においてあまりなじみがないと考えられているのは、逆に、「痛み」として認識されるほどの病態ではないために見過ごされている可能性が高いと考える方が妥当です。本研究では、前向き研究として、明らかに神経を損傷する手術前後における三叉神経各枝ならびに頸神経支配領域の神経選択的刺激に対する知覚閾値ならびに痛覚域値の測定を行い、治療介入後から一定の期間、同領域の知覚閾値ならびに痛覚域値の変動を計測することにより、歯科治療に伴ってヒト三叉神経支配領域に生じる神経因性疼痛の発現につながると考えられる閾値の低下などの発症動向、ならびに、三叉神経第III枝への損傷が、どのような範囲に影響を及ぼすのか、を明らかにしたいと考えています。その結果、患者の訴えの有無にかかわらず、術直後にはかなりの頻度で疼痛閾値の低下が生じており、インプラント埋入手術により末梢神経の一時的な過敏化が生じていることが示唆されました。疼痛閾値の低下は、手術部位の神経支配領域のみでなく、近接する神経支配領域にも生じていることが明らかにまりました。症例によっては手術部位の対側においても疼痛閾値の低下が認められ、中枢における痛覚の感受性が変化する可能性も推測されました。今後さらに研究を進めることにより、歯原性の疼痛とは異なる機序で発生する神経因性疼痛の啓発や、神経損傷を伴う処置を行う際のリスクマネジメントの質の向上につなげたいと考えております。
マウス大脳皮質神経細胞産生とショウジョウバエ神経細胞産生における相同性

大脳新皮質神経細胞は興奮性神経細胞と抑制性神経細胞により構成されていて、興奮性神経細胞は、胎児期大脳新皮質の脳室帯の放射所グリアに由来する。我々は放射状グリアの娘細胞の中には、さらに繰り返し分裂を続けるものがあることが明らかにした(Wu et al., PNAS 2005)。放射状グリアを一次前駆細胞(幹細胞)とすると、娘細胞の二次前駆細胞は、非対称分裂で二次前駆細胞それ自身と三次前駆細胞を生み出し、対称分裂では二つの二次前駆細胞を生み出した。さらに三次前駆細胞は対称分裂をして対の錐体細胞を産み出した。その細胞系譜は、これまでに知られているショウジョウバエのNeuroblastcellのものに似ている。文献調査で、ショウジョウバエの他のNeuroblastcellの細胞系譜にはinterneuronとprineural gliaを生み出すものがあることを知り、マウスの神経細胞産生過程と対応比較して、大脳皮質GABA神経細胞とoligodendrocyteの関係を調べた。終脳胞のGABA神経細胞とoligodendrocyteその全て乃至は一部は大脳基底核原基に由来し、前駆細胞を共有している可能性がある。現に幾つかの論文は、oligodendrocyte markerとして使われるNG2陽性のGABA神経前駆細胞の存在を、免疫組織で報告しているが、まだ広く認められていない。我々は、GAD67-GFPknock-in mouse E18胎児大脳皮質の単一GFP陽性細胞を顕微鏡下で採取し、single-cell RT-PCRを行った。その結果、単一GFP陽性神経細胞でGAD67 mRNAとCSPG2(NG2) mRNAは共存することがあることが分かった。また我々が独自に開発したsingle-cell microarray analysis法を、GAD67-GFP陽性細胞7つに応用したところ、CSPG2, myelin basic protein, S100betaなどが優位に発現している物が見つかった。更に、PDGFreceptor alphaもシグナルが強いものもあった。何れも残存するのは蛋白でなく、mRNAがGABA神経前駆細胞から検出されていることからも、マウス大脳皮質ではGABA神経細胞とoligodendrocyteは近い関係にあると考えられた。放射状グリアは分裂して放射状グリアと神経細胞を作るとされたが、最近、神経細胞に運命付けられた娘細胞はもう一度分裂をすることがあることが報告された(Noctor et al.,2004;Miyata et al.,2004;Huttner et al.,2004)。これらの報告は、人工の培養液を使ったin vitroでの観察結果であった。しかし我々がin vitroでもconditioned mediumを使った場合や、in vivoでレトロウイルスを大脳皮質興奮性神経細胞のマーカーとして使えるNEX/Math2陽性細胞特異的に感染させて細胞分裂の回数と運命を追跡したところ、放射状グリアの娘細胞の中には、さらに繰り返し分裂を続るものがあることが明らかになった(Wu et al.,2005)。放射状グリアを一次前駆細胞(幹細胞)とすると、娘細胞である二次前駆細胞は非対称分裂では二次前駆細胞それ自身と三次前駆細胞を生み出し、対称分裂では二つの二次前駆細胞を生み出した。

さらに三次前駆細胞は対称分裂をして対の錐体細胞を産み出した。マウス大脳新皮質の神経細胞産生の細胞系譜と、ショウジョウバエの神経細胞産生の細胞系譜を比較してみると、マウスの二次、三次前駆細胞は、ショウジョウバエの中枢神経系を作るNeuroblast CellとGanglion Mother Cellに酷似する挙動をとることが明らかとなった。二次前駆細胞の対称分裂の回数は、最終の神経細胞産生数に大きく反映される。それゆえ二次前駆細胞の対称分裂を促進する分子機構が明らかになれば、望む特定のサブタイプの神経細胞を純粋かつ大量に増やせる可能性がある。大脳新皮質神経細胞は興奮性神経細胞と抑制性神経細胞により構成されていて、興奮性神経細胞は、胎児期大脳新皮質の脳室帯の放射所グリアに由来する。我々は放射状グリアの娘細胞の中には、さらに繰り返し分裂を続けるものがあることが明らかにした(Wu et al., PNAS 2005)。放射状グリアを一次前駆細胞(幹細胞)とすると、娘細胞の二次前駆細胞は、非対称分裂で二次前駆細胞それ自身と三次前駆細胞を生み出し、対称分裂では二つの二次前駆細胞を生み出した。その細胞系譜は、これまでに知られているショウジョウバエのNeuroblastcellのものに似ている。文献調査で、ショウジョウバエの他のNeuroblastcellの細胞系譜にはinterneuronとprineural gliaを生み出すものがあることを知り、マウスの神経細胞産生過程と対応比較して、大脳皮質GABA神経細胞とoligodendrocyteの関係を調べた。終脳胞のGABA神経細胞とoligodendrocyteその全て乃至は一部は大脳基底核原基に由来し、前駆細胞を共有している可能性がある。現に幾つかの論文は、oligodendrocyte markerとして使われるNG2陽性のGABA神経前駆細胞の存在を、免疫組織で報告しているが、まだ広く認められていない。我々は、GAD67-GFP knock-in mouse E18胎児大脳皮質の単一GFP陽性細胞を顕微鏡下で採取し、single-cell RT-PCRを行った。その結果、単一GFP陽性神経細胞でGAD67 mRNAとCSPG2(NG2) mRNAは共存することがあることが分かった。また我々が独自に開発したsingle-cell microarray analysis法を、GAD67-GFP陽性細胞7つに応用したところ、CSPG2, myelin basic protein, S100betaなどが優位に発現している物が見つかった。更に、PDGFreceptor alphaもシグナルが強いものもあった。何れも残存するのは蛋白でなく、mRNAがGABA
メチシリン耐性菌抑制効果による凍結保存組織移植における抗感染性メカニズムの解明

凍結保存同種心臓弁・大動脈組織(ホモグラフト)は、感染性心内膜炎・感染性大動脈瘤に用いた場合に人工弁・人工血管よりも治療成績が著明に良好であるが、そのメカニズムに関する基礎的研究は我々の知る限りで過去に報告を認めない。本研究では、ホモグラフトの抗感染性について、特に移植免疫の観点からTrp代謝酵素Indoleamine 2,3-dioxygenase(IDO)に着目し、同種移植後グラフト内におけるIDOの発現とグラフト抗感染性との関連性についてMRSAを用いて検討することを目的とる。また、in vivo実験としてラットを用いIDO抑制剤1-Methyl-Tryptophan(1-MT)を用いIDOの失活に伴う抗菌作用消失の有無を確認する。ラットにおける胸部大動脈-皮下移植モデルを用いる。ドナーはLewis ratを、レシピエントはLewis rat (syngeneic transplantastion)またはBrown Norway rat(BN)を用いる。移植用グラフトは、凍結保存(CP)グラフトとして移植に用いる。凍結保存方法はヒト心臓弁・血管組織の処理と同様の方法すなわちprogrammed freezing methodにて行う。大動脈移植術は、全身麻酔下に腹部皮下にポケットを作成し、その内部に移植する。移植後7日目及び14日目に全身麻酔下にてグラフトを摘出しサンプルとする。移植後摘出血管をMRSAと共に混合培養し、培養開始後2時間毎にMRSAのcolony数をカウントし増殖曲線を作成した。なお、この検討ではIDO陽性群として同種移植群を、IDO陰性群として未移植群を用いた。培養開始後8時間までは両群ともにMRSAの増殖を認めなかったが、10時間を超えた頃より増殖速度に明らかな差を認めた。培養開始後12時間ではおよそ未移植群では同種移植群よりも約10倍程のMRSA増殖を認めた。
ツチガエル卵巣決定候補遺伝子の機能解析

性決定機構がZZ/ZW型のツチガエルに着目し、性決定の分子機構の解明を目的として、W染色体上に存在する卵巣決定候補遺伝子(A2W3)の機能解析を行った。機能獲得実験として、受精卵に目的の遺伝子を導入するトランスジェネシスに取り組んだ。前年度の実験の結果、CMVプロモーターはツチガエルでは発現誘導が局所的で弱いことから、本年度は、アフリカツメガエルのEF1αプロモーターの下流にA2W3遺伝子を接続し、メダカトランスポゾン(Tol2)RNAと一緒にツチガエル受精卵へ導入した。その結果、受精後36日まで生存した22匹のZZ幼生のうち、6個体で染色体への組み込みが見られ、そのうち、3個体で発現を確認した。この3個体の生殖腺はすべて精巣構造を示したが、1個体では生殖細胞がなく、他の一個体では中央部に卵巣腔に似た生殖腔が確認された。完全な性転換は誘導されなかったが、A2W3遺伝子による卵巣決定機能の可能性が残された結果となった。一方、ツチガエルにおいて、性分化関連遺伝子SOX3の性連鎖が判明し、しかも、この遺伝子は受精後15日目がら、遺伝的ZW雌幼生の未分化生殖腺で高い発現を示すことがわかった。また、ツチガエルにはXX/XY型性決定機構を有する別の集団が存在し、この集団でSox3の発現を調べたところ、生殖腺の性分化開始後まもなくの間、今度は逆に雄の生殖腺で高いことがわかった。SRYの元祖遺伝子であるSOX3が、ツチガエルでは雌雄それぞれの性の決定に関与している可能性が示された。オスとメスの性が遺伝的に決定される仕組みには、大きく分けてXX/XY型とZZ/ZW型の2つのタイプがある。本研究では、両者の相互変換が生じだツチガエルを用いて、性決定機能の進化の仕組みの解明を目的とする。本年度は、ツチガエルで見つかった卵巣決定候補遺伝子A2W3の機能解析のため、トランスジェネシスの確立と生殖腺の器宮培養による機能阻害の実験に取組んだ。非キデル動物ツチガエルにおけるトランスジェネシスの確立をめざし、GFP遺伝子をCMVプロモーターの下流に接続したコンストラクトを用いて、受精卵へmeganuclease I Sec-Iとの共導入法を試みた。その結果、導入胚の生存率は8.9%、そのうち、約半分でGFPの蛍光が観察できた。特に、蛍光が胚全俸に見られたのは5.7%で、最終的に遺伝子の導入を確認できためは、0.9%であった。次に、A2W3遺伝子をCMVしたに配置したコンストラクトを導入、0.1%の導入個体を得た。現在飼育中である。2)生殖腺の器官培養による機能阻害1受精後2週間の幼生から生殖腺を取り出し、30日間器官培養を行い、卵巣決定候補遺伝子A2W3がコードする新規タンパク質に対する抗体を作用させて、機能阻害を試みた。無血清培地では精巣は正常に分化するが、卵巣は初期の未分化段階で停止することがわかった。そこに、精製した抗A2W3抗体を作用させると、遺伝的雌の生殖腺は分化発生を進め、精巣様の構造を呈した。このことから、A2W3タンパクは精巣分化を阻害することで生殖腺の性分化を卵巣へと誘導していることが示唆された。本年度の実験では、器官培養の結果からA2W3の卵巣決定機能が示唆された。しかし、トランスジェネシスの導入効率が低く、さらに、CMVのプロモーターでは成体の筋肉、賢臓、生殖腺、臭脳など発現が局部的であった。来年度は、EF1αのプロモータとトランスッポゾンTo12を用いたトランスジェネシスを行い、高い導入効率と発現誘導を目指し、A2W3の機能を明らかにする。
衝撃波管を用いてのノルマルブタンとイソブタンの高温熱分解反応

衝撃波管を使用して,ノルマルブタンとイソブタンを1000K-1700Kの高温に加熱し,高温熱分解反応の研究を行い,次の結果を得た.1.ノルマルブタンの熱分解反応における主生成物はメタン,エタン,エチレン,アセチレン,プロピレンであったが,その内,特にエチレンの生成量は多く, 1500Kでノルマルブタンの初濃度の120%であった.アセチレンの生成量は高温になるにつれて増大し, 1700Kでノルマルブタンの初濃度の90%に達した.微量生成物はアレン,プロピン,プロパン,ビニルアセチレン, 1.3-ブタジエン,トランスー2-ブチン, 1-ブテンであった.イソブタンの熱分解反応における主生成物はメタン,エタン,エチレン,アセチレン,プロピレン,プロピン,イソブテンであったが,エチレンの生成量はノルマルブタンでのそれに比べてほぼ半分であった.その反面プロピレンそしてプロピン生成量はノルマルブタンでのそれに比べてそれぞれ約二倍,四倍であった.又微量生成物はアレン,ビニルアセチレン, 1.3-ブタジエンであった.3.両炭化水素の高温熱分解過程及び反応終了後の反応物濃度・生成物濃度を説明出来るノルマルブタンの高温熱分解反応機構(140個の素反応からなる)と,イソブタンの高温熱分解反応機構(109個の素反応からなる)を決定した.衝撃波管を使用して,ノルマルブタンとイソブタンを1000K-1700Kの高温に加熱し,高温熱分解反応の研究を行い,次の結果を得た.1.ノルマルブタンの熱分解反応における主生成物はメタン,エタン,エチレン,アセチレン,プロピレンであったが,その内,特にエチレンの生成量は多く, 1500Kでノルマルブタンの初濃度の120%であった.アセチレンの生成量は高温になるにつれて増大し, 1700Kでノルマルブタンの初濃度の90%に達した.微量生成物はアレン,プロピン,プロパン,ビニルアセチレン, 1.3-ブタジエン,トランスー2-ブチン, 1-ブテンであった.イソブタンの熱分解反応における主生成物はメタン,エタン,エチレン,アセチレン,プロピレン,プロピン,イソブテンであったが,エチレンの生成量はノルマルブタンでのそれに比べてほぼ半分であった.その反面プロピレンそしてプロピン生成量はノルマルブタンでのそれに比べてそれぞれ約二倍,四倍であった.又微量生成物はアレン,ビニルアセチレン, 1.3-ブタジエンであった.3.両炭化水素の高温熱分解過程及び反応終了後の反応物濃度・生成物濃度を説明出来るノルマルブタンの高温熱分解反応機構(140個の素反応からなる)と,イソブタンの高温熱分解反応機構(109個の素反応からなる)を決定した.
ヒトパピローマウイルスによる発がん機構の解析

1.種々の細胞の不死化と不死化機構の解析これまで不死化機構の解析に用いてきたヒト正常乳腺上皮細胞に加え種々のヒト初代正常細胞の不死化あるいは長期延命に成功している。これまでに約20種類の正常細胞と1種類の腫瘍細胞の不死化を試み、そのうち2種類の細胞を除いて長期延命(多くは実質上不死化している)に成功している。これらの不死化細胞はこれまで対応する細胞株がなく困難であった種々の実験に利用されている。正常細胞の継代に伴うp16^<INK4a>,p21^<WAF1>などのCDKインヒビターの増加と各細胞種において不死化に必要だった導入遺伝子群との関係を検討している。多くの細胞ではp16^<INK4a>の増加はテロメアの短小化とは独立に起こることが明らかとなった。また継代に伴うp16^<INK4a>の増加は細胞によってはp21^<WAF1>の増加を伴い上皮細胞、内皮細胞、中皮細胞、リンパ球で共通にみられた。また、線維芽細胞においても皮膚由来の線維芽細胞を除いてp16^<INK4a>の増加が観察された。2.E6の標的蛋白の同定とテロメラーゼ活性化および細胞トランスフォーメーション機構の解析E6によるトランスフォーメーションにはE6のC末にあるPDZドメイン結合モチーフおよびE6APとの結合能の両者が必要である。HPV16とHPV33のE6のC末端アミノ酸はLeuであるが、HPV18などその他の子宮頸がんに関連するHPVではValである。PDZドメインでE6と結合する標的蛋白質はhDLG,hScrib,MUPP1,MUGI1が報告されているが2つの群のE6の間でその結合並びに分解促進能が異なることが明らかとなった。さらに新たにPSD95が良い標的であることを見つけた。E6のトランスフォーメーション活性と標的とする蛋白質の特異性から、真の標的の同定とトランスフォーメーション機構の解析をすすめている。1.E6蛋白質による細胞トランスフォーメーション機構の解析E6によるトランスフォーメーションにはE6のC末にあるPDZドメイン結合モチーフおよひE6APとの結合能の両者が必要であり、HPV18のE6を発現した細胞ではE6/E6APとhDLGの3者複合体形成により、hDLGの分解を促進していることが示唆された。同時にHPV型によるC末モチーフの多様性により標的蛋白質が単一でない可能性も示唆された。2.E6蛋白質によるテロメラーゼ活性化機構の解析E6によるTERTの転写活性化には、E6APとの結合が必要である。E6/E6AP複合体と結合する未知の標的蛋白質をコードするcDNAを分離した。このcDNAはRINGフィンガーモチーフを持つ未知の蛋白質をコード可能であり、この標的蛋白質の分解により、MycがTERTのプロモーターにアクセスできるようになるという仮説を中心に検討を進めている。3.ヒト初代培養細胞の不死化E6とE7の替わりに、bmi-1とTERTによりヒト正常乳腺上皮細胞が不死化できることが示された。また、ヒト食道上皮細胞の培養と不死化に成功し、その増殖と不死化様式はこれまで比較的特殊だと考えられていた2つの増殖停止期を示す乳腺上皮細胞と同一であることが分かった。これらの細胞で見られるp16INK4aの増加によるsenescence(M0期)はテロメアの短縮とは独立に起こり、上皮細胞に共通な現象であるという仮説を立て検証をすすめている。p16INK4aの転写制御にはプロモーターのメチル化、Bmi-1による抑制の他、ras、MAPキナーゼ経路、14-3-3σが関与しており、転写因子としてはJunBやEts-1,-2が正の、Id-1が負の制御に関わっていることが明らかになった。これらがM0期におけるp16INK4aの発現にどう関わっているか検討を進めている。

HPV16とHPV33のE6のC末端アミノ酸はLeuであるが、HPV18などその他の子宮頸がんに関連するHPVではValである。PDZドメインでE6と結合する標的蛋白質はhDLG,hScrib,MUPP1,MUGI1が報告されているが2つの群のE6の間でその結合並びに分解促進能が異なることが明らかとなった。さらに新たにPSD95が良い標的であることを見つけた。E6のトランスフォーメーション活性と標的とする蛋白質の特異性から、真の標的の同定とトランスフォーメーション機構の解析をすすめている。
アクリル酸生産関連遺伝子の分子機能解析とアクリル酸生産バイオプロセスへの展開

アクリル酸生産株Megasphaera elsdeniiJCM1772由来アクリル酸生産関連遺伝子(pct(プロピオン酸-CoA転移酵素遺伝子)およびlcdCAB(ラクチル-CoA脱水酵素遺伝子))を発現ベクターpETDuet-1にクローニングしpETDuet-pct-lcdCABを得た。これを用いて大腸菌E. coli JW0885を形質転換した。SDS-PAGEにより、得られた形質転換体にてPctおよびLcdCABの発現を確認した。得られた形質転換体をを用いて、パントテン酸添加M9培地にて嫌気的に18h培養した。経時的に培養液上清をサンプリングしアクリル酸量、乳酸量、培養液濁度、残存グルコース量を測定した結果、アクリル酸生産量の増加および乳酸量,残存グルコース量の減少を確認した。培養終了後のアクリル酸生産量は0.17mMであった。次に、GC-MSを用いて培養液上清を分析したところ、アクリル酸と一致するピークパターンが得られた。よって、作製した形質転換体はアクリル酸を生産していることを確認した。さらに、NICEsystemによる発現系を用いて、乳酸菌におけるPctおよびLcdCABの発現を試みた。具体的には、pctおよびlcdCABを乳酸菌用発現ベクターpNZ8048にクローニングしpNZ-pct-lcdCABを得た。これを用いて乳酸菌Lactococcus lactis NZ9000を形質転換した。また、デンプンからのアクリル酸直接発酵生産を目的として、Bacillus amyloliquefaciensを由来とするアミラーゼを発現ベクターpVUB3を用いて大腸菌表層に発現させた。本発現ベクターを用いることでデンプンを唯一炭素源として大腸菌を培養することに成功した。アクリル酸生産株Megasphaera elsdenii JCM1772由来アクリル酸生産関連遺伝子(pctプロピオン酸-CoA転移酵素遺伝子)およびlcdCAB(ラクチル-CoA脱水酵素遺伝子))を発現ベクターpETDuet-1に黒ニングしpETDuet-pct-lcdCABを得た。得られた形質転換体を用いて、パントテン酸添加M9培地にて嫌気条件下で18h培養した。経時的に培養液上清をサンプリングしアクリル酸量、乳酸量、培養液濁度、残存グルコース濃度をHPLCおよび市販キットを用いて測定した。その結果、18h時間培養後のアクリル酸量は0.17mMであった。次に、GC-MSを用いて培養液上清を分析したところ、アクリル酸と一致するピークを得たことから、形質転換体はアクリル酸を生産していることを確認した。同様の実験をLactococcus lactisを用いて行った。具体的には、Lactobacillus delbrueckii由来のD-乳酸脱水素酵素遺伝子D-ldhをL. lactis NZ9000株のL-ldhと置き換え、D-乳酸生産NZ9000株を作成した。これにpctおよびlcdCABをNICEsystemを用いて導入し発現させた。しかし、明瞭なアクリル酸の生産は確認できなかった。その理由として、PctおよびLcdCABの発現量が十分でないことが考えられた。応用微生物学当初計画においては、アクリル酸生産経路の乳酸高生産菌への付与とバイオマス資化能の強化を行うことを目的としている。アクリル酸生産関連遺伝子の乳酸高生産菌への導入においては、NICEsystemを用いて乳酸菌を形質転換し、PctとLcdCABの高発現を確認した。また、バイオマス資化酵素の細胞表層ディスプレイにおいては、種々のアミラーゼの大腸菌の表層発現とこれを用いたデンプンを唯一炭素源とした培養に成功した。このように、当初計画と比較しておおむね順調に進展しているといえる。当初の計画では、1pctおよびlcdAB遺伝子の機能解析、2PctおよびLcdAB酵素の機能解析、3アクリル酸-CoA転移酵素とアクリル酸トランスポーターの同定を達成する予定であった。このうち、1については、Megasphaera elsdenii JCM1772のゲノムシーケンスからpctおよびlcdAB遺伝子を同定し相同解析することである程度達成できた。2については、大腸菌でのPctおよびLcdCABの発現量が低く、実施に至っていない。3については、Pctがアクリル酸-CoA転移酵素として機能している可能性が示された一方で、アクリル酸トランスポーターの同定には至らなかった。更なるアクリル酸高生産株の取得とアクリル酸発酵生産システムの開発を目指す。具体的には、Lactobacillus delbrueckiiなどのD-乳酸高生産菌へのアクリル酸生産関連遺伝子の導入を行う。次に、アクリル酸生産のための至適培養条件(培地、温度など)の検討を行う。その後、ジャーファーメンターを用いたスケールアップ培養により、アクリル酸の高生産連続培養を行う。大腸菌でのPctおよびLcdCABの発現法を改良し発現量を増加させることでPctおよびLcdCABの機能解析を行うとともに、Megasphaera elsdenii JCM1772にTn変異を導入しアクリル酸トランスポーターの同定を行うことで、今年度に達成できなかった課題を解決する。

また、今年度は当初の予定通り、アクリル酸生産関連遺伝子の乳酸高生産菌への導入と、バイオマス資化酵素の細胞表層ディスプレイを行い、アクリル酸生産性を高めるとともに、バイオマスからの直接発酵生産法の確立を行う。一部の消耗品に関して、キャンペーン価格の商品があり、当初見積もりよりも安く購入することができたため。当該研究費は次年度に必要なアクリル酸高生産発酵瀬システムの開発のための培地の購入費に充てる。ほぼ計画通りに研究費を使用できた。しかし、一部の消耗品に関して、キャンペーン価格の商品があり、当初見積もりよりも安く購入することができたため、当該研究費が生じた。当該研究費は次年度に必要な大腸菌でのPctおよびLcdCABの発現量を高めるための新たな発現用ベクターの購入費に充てる。