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道元の思想とその近代、とくに京都学派における受容

京都学派よる仏教の受容の仕方を解釈し、さらにその解釈の方法論を見つけ確立するための道筋を作ることが本年度の研究目的であった。共同研究を通して、次の二点において、さらに考察を発展させることができるということが明らかになった。1明治初期に仏教を自らの哲学に受容した井上円了に着目し、彼の仏教解釈から哲学の理解がどのようになされたかを探る。2鎌倉仏教を翻訳の視点から読み解く。この二点を通して考察することは、京都学派の仏教受容という課題に応えるためにも十分意義あるものであった。研究成果(主要口頭発表のみ)は、以下のような具体的な形で結実した。26年度が最終年度であるため、記入しない。本年度は、とくに西谷啓治が『正法眼蔵講話』のなかで行った道元解釈の特徴と意義についての考察を行った。西谷による道元の『正法眼蔵』解釈の特徴は、仏教独自の用語の語学的解釈に止まらず、道元の思想的なモチーフやテーマを重視する点にある。そうした哲学的な考察を通して、西谷は仏教独自の教義や用語を解釈し、その意義を解明している。この西谷の道元解釈は、単なる仏教学的、あるいは宗学的な解釈の枠を超えて、哲学的な観点から仏教思想の意義を考察する一つ模範的なモデルになりうるものである。何故なら、西谷が道元の内に見いだしているモチーフは、カール・ヤスパースの用語で云えば、人間の生命・生活に含まれている限界経験であり、それは現代哲学においても重要な問題の一つとなっているからである。とりわけ死という限界経験は仏教においても、またG.W.Fヘーゲル以来の西洋哲学においても主要なテーマであり、仏教と哲学とが共有する重要な問題である。西谷の『正法眼蔵講話』の解釈を通して、西谷が現代の哲学者として前近代の仏教思想をどのように理解し、受容しているか、その具体的な有りようを知ることができた。西谷による道元受容は、龍樹受容と同様、ある時期の仏教解釈という枠に止まらない、一般的・普遍的な問題に通じるものであり、その点できわめて大きな可能性と重要性を持っている。従来、哲学史のなかで取り扱われて来た概念は西洋哲学史のそれに限られていたが、西谷の仏教解釈は、西洋哲学の歴史以外にも哲学史として認めることべき豊富な内容があることを示している。そしてそのような事例の発掘を通して、哲学の内容をいっそう豊かにすることが現在求められていると言うことができるであろう。本研究を通して、その点を明らかにすることができたし、仏教思想と現代の哲学とのあいだを架橋することができたと考えている。これまで主に、京都学派における道元思想の受容、とくに西谷啓治の道元解釈を分析してきた。というのも、西田や西谷ら、京都学派の哲学者たちの解釈は厳密であるのみならず、前近代思想を現代の哲学的な観点からどのように受容すべきかということを考えたとき、その模範的なモデルになりうるものであるからである。そのための基礎作業として西谷啓治の『正法眼蔵講話』の翻訳に取り組んできた。西谷のこの領域での貢献は、龍樹の受容と同様、ある時期の仏教解釈という枠に止まらない。むしろ一般的・普遍的な問題に通じるものであり、その点できわめて大きな可能性と重要性とをもっている。従来、哲学史のなかで取り扱われて来た概念は西洋哲学史のそれに限られていたが、西谷の仏教解釈は、西洋哲学の歴史以外にも哲学史として認めるべき豊富な内容があることを示したものとして高く評価される。本研究はその点を明らかにし、仏教思想と現代の哲学との架け橋となることを目ざしている。本研究では、とくに西谷の道元解釈の体系的側面に注目したいと考えている。なぜならそれは、仏教独自の用語の語学的解釈に止まらず、道元の思想的なモチーフやテーマを重視するものであるからである。西谷が道元の内に見いだしたモチーフは、カール・ヤスパースの用語で言えば、人間の生命・生活に含まれている限界経験であり、それは現代哲学においても重要な問題の一つとなっている。仏教と哲学とが共有する問題であり、課題であると言うことができる。本年の研究では、以上のような点に注目して、西谷の著作の翻訳を行い、考察を行ってきた。本年度はまず、西谷啓治をはじめとする日本の哲学者たちの道元解釈、仏教理解に関する基本資料と二次資料を収集した。データーベースを形成するによってその資料の蓄積をはかった。それとともに西谷啓治の『正法眼蔵講話』の、道元『正法眼蔵』「現成公案」の巻の翻訳作業を進めた。

このような基礎作業を踏まえて、西谷の主な道元解釈の特徴と意義について考察した。とくに『正法眼蔵』の「現成公案」、および「辨道話」と「仏性」の巻についての西谷の解釈の独自性と意義を明らかにすることができた。計画通りに、西谷啓治の『正法眼蔵講話』の翻訳と解釈を完了し、現代哲学の立場から前近代の思想を研究するための方法論的な基盤の確立を行った。特に、H・G・ガダマーが解釈学の立場から確立した影響作用史を基礎とし、・またH・R・ヤウスの「受容史」を踏まえて、その方法論的な基盤を確立した。それを基礎として、上記の翻訳および解釈を行った。次年度は、西谷啓治の『正法眼蔵講話』の翻訳と解釈を完了し、現代哲学の立場から前近代の思想を研究するための方法論的な基盤の確立を行いたいと考えている。特に、現代の立場から明治以前の仏教思想・哲学を取り扱う可能性について、原理的かつ歴史的な研究を行う予定にしている。その課題の一つはH.G.ガダマーの解釈学を西洋哲学史を超えて発展させることである。それを基礎にして、西谷を中心とした京都学派の哲学者たちの仏教受容を解釈する方法を確立し、京都学派における道元受容という枠を超えて、それが持つ哲学的な意味を一般的な観点から考察したいと考えている。次年度は、これまで行ってきた西谷啓治の『正法眼蔵講話』の翻訳と解釈を踏まえて、また、現代哲学の立場から前近代の思想を研究するための方法論的な基盤の確立を踏まえて、西谷をはじめとする京都学派の哲学者たちの仏教解釈の特徴と意義について考察を行いたいと考えている。それは、道元受容という枠を超えるものであるし、また仏教解釈という枠を超えた普遍的な、また哲学的な意義をもつものである。そのような観点から考察を進めていきたいと考えている。
双曲的曲線の内在的ホッジ理論

この研究を始めた二三年前は暗中模索の状態だったが、平成10年度になってTheta関数による新しい視点を導入し、研究が急展開を見せ始めた。とりあえずの目標である、楕円曲線の、複素数体やp進体上の比較定理の「Arakelov版」ともいうべき結果を得て、その証明を書く作業に着手し、現時点では200頁を越す論文が、後二三カ月程で完成する見込みである。この結果の証明では、p進ホッジ理論を含む整数論と、古典的な調和解析(=様々な幾何に於けるLaplacianの固有関数や固有値の理論)の様々な側面が非常に有機的につながっていて、一つの「大域的な比較定理」を形成していることは特に興味深い。尚、Theta群というものが、モチーフ的な対象として、etale位相的な実現から、調和解析的な実現まで、様々な形で理論に現れていて、証明の「重要なテーマ」の一つになっていることも面白い。また、Theta群が統制している「対称性」の当然な帰結とはいえ、非可換幾何を連想させるところも現れていて、今までの研究の主要テーマだった双曲的曲線の数論的基本群とも関係がありそうな気配が漂っている。最終的には、この理論をDiophantus幾何に応用することを想定しているが、現時点では、まだ理論の基礎の構築だけでも精一杯で、応用は直ちには期待出来そうな状況ではないが、平成10年度までは、理論すら全くなかったことを考えると、大きな進歩を遂げたといっていいと思う。平成9年度には私の研究は主に三つの方面において進展を見ました:1.双曲的曲線の内在的ホッジ理論のArakelov版について:これまでにp進体上で様々な発展をみてきた「双曲的曲線の内在的ホッジ理論」をArakelov幾何の領域に拡張することは本研究課題の主な目標であるが、まだ研究の初期の段階にある現時点においては、試行錯誤を繰り返す以外にアプローチは思い付かない。そこで、昨年の4月から12月にかけて、Gelfond-Schneiderの超越性定理の手法に的を絞り、同様な手法を用いた最近のChudnovskyやAndreの仕事を勉強し、その手法にGrothendieck流の抽象的数論幾何を組み合わせることによって所望の理論が作れないか検討したが、成功には至らなかった。2.グロタンディーク予想関係:p進局所体上のいわゆる「セクション予想」を証明するにあたって、様々な技術的進展はみられたが、まだ予想そのものを証明するには至っていない。ただし、その技術的進展の面白い副産物として、双曲的曲線の「反復的な族」として生じる「双曲的多重曲線」の標準的なコンパクト化の理論を構成することができ、それをテーマの二つの論文を書いた(まだプレプリントの状態)。その理論の系の一つとして、de Jong alterationsの定理の非常に自然な証明ができ、その証明に議論を更に精密化することによって、de Jongの定理のもっと強いversionを証明できる可能性すら出てきた。3.一般化通常理論:双曲的曲線のモジュライのp進的一意化理論を一般化するこの理論だが、以前はプレプリントのままだったこの理論に関する二つの論文を、一冊の(恐らく400頁位の)本にまとめることに関連した様々な作業を行った。
神経活動の正規化と発振現象を統一的に説明する異種感覚統合モデルの構築

(大脳皮質体性感覚野における触覚刺激の情報処理)高等動物は触覚を介して、ものの形、大きさ、運動、手触りなどの複合的な知覚を得ている。これらの複合的な知覚が脳の中でどのように処理されているかについて調べるために、任意の触覚パターンの刺激を与えられるとともに、それに対する脳の神経細胞応答を同時計測できるラットモデルを八尾寛名誉教授らの研究グループと共同開発した。まず遺伝子操作によって青色光に応答するチャネルロドプシン遺伝子をラットの頬ヒゲの根元にある感覚神経において発現するようにした。そしてコンピュータ制御下で青色光をヒゲの根元に局所照射することで、複数のヒゲ触覚を任意の時空間パターンで作り出すことに成功した。多重触覚刺激に対する大脳皮質浅層の神経細胞の入力応答特性を統計解析した結果、神経細胞は水平方向のゾーン選択的なパターンに瞬時に反応するとともに、ゾーン周囲への同時刺激によって反応が抑制されることが明らかなった。つまり刺激入力に対する空間的コントラストを脳が積極的に強調しているという情報処理の存在を明らかにした。さらに今回見つかった活動抑制のパターンは神経活動正規化モデルが予測する様式に合致することから、神経活動正規化は異種感覚統合時だけでなく、知覚受容の最初期段階である第一次知覚野でも見られる普遍的な現象であるということが確認された。本研究課題では、異種感覚統合における神経活動の非線形性と振動現象に着目してサル及びラットを用いた研究を行っている。まず、米国ロチェスター大学のG.C.DeAngelis教授との共同研究により、視覚と平衡感覚の感覚統合についてのモデリングとそこから予想される新たな神経活動の非線形性について、サルの頭頂葉において実際に神経活動を記録し、その予想を裏付ける結果を得た。この結果については神経科学系雑誌に論文を投稿中であり現在2度目のrevisionを受けている。次にラットの大脳皮質において超低周波(約0.1Hz)の神経律動を見出し、それを28年度の日本生理学会(札幌)、日本神経科学会(横浜)にて報告した。29年度の生理学会(3/2730,アクトシティー浜松)においては、その超低周波神経律動が実は脳血管の周期的な振動を反映し、視床下部からそのリズムがコントロールされていることを口頭発表した。又、この神経律動は視覚や体性感覚といった異種の感覚刺激によっても惹き起こされることを示し、異種感覚統合の優れた研究対象になることを報告した。群馬大学の柳川右千代教授との共同研究においては、抑制性神経伝達物質であるGABAの合成酵素の欠失変異体ラットにおけるてんかん発作時の異常な神経興奮と神経律動について電気生理学的な解析を進めている。欠失変異体ラットには小型電極を大脳に埋め込み、抗てんかん薬の投与によりてんかん発作をコントロールしながら、長時間に渡って神経記録を行うシステムを開発中である。また、神経活動の正規化モデルに従えばこれら変異体ラットにおいて異種感覚統合が異常になっていることが予想されるので、この予想を確認すべく視覚体性感覚連合野大脳皮質の電気生理学的解析も進めている。長年共同研究を行っているG.C.DeAngelis教授との共著の論文をようやくジャーナルへ投稿するとこまで至ることができた。厳しい批評に対して現在2回目のrevisionであるが、複数のrevisionを経て内容は著しく向上していると考えている。ラットを用いた超低周波の神経律動の研究では、その発見も偶然であったし、視床下部がそのリズムの形成に重要であるという事実も全く予想外の事であった。この現象に関わる神経伝達物質も同定し終えており、この研究についてはかなり進展していると考えている。柳川右千代教授との共同研究では、抗てんかん薬の投与によりうまくてんかん発作をコントロールできることを見出し、変異体ラットの取り扱い、解析が非常に容易となった。電気生理学的研究も今後さらに順調に進むと期待される。(サル頭頂葉における多感覚統合)多感覚統合に関する神経活動正規化モデル(大城ら、2011年)によると、脳の多感覚領域の神経細胞は全く同一の感覚刺激入力であっても、同時に入力する別の感覚刺激の提示条件に応じて興奮性に作用したり、逆に抑制性に作用することがありえる事が予想される。米国ロチェスター大学のGregory C. DeAngelis教授との共同研究により、視覚情報と平衡感覚情報が統合されるサル頭頂葉の電気生理学的実験を行い、この予想を確かめた。研究成果は2017年夏に米神経科学雑誌Neuronに掲載された。(ラットにおける神経活動律動現象)大脳において機能している主な抑制性神経伝達物質であるGABAの合成酵素(GAD65)のノックアウトラットは、癲癇を高頻度に発症する極めて有用なモデルラットである。群馬大学の柳川右千代教授との共同研究により、このラットでの睡眠時の脳波、癲癇発作時の異常脳波を解析している。脳波を測定する際に用いる小型電極ガイドを京セラ社と共同で開発し、産学共同特許の出願を行った。この小型電極の優れた周波数特性とノックアウトラットの脳波の解析結果に関してH29年度日本てんかん学会(京都)において発表を行った。(神経活動正規化と神経活動律動現象を結び付けるイメージング研究)麻酔中ラット脳のイメージング研究から、脳活動には非常に低速(0.1Hz)な律動成分が含まれていることを見出した。その律動は単一感覚入力によって惹起された神経活動によって開始することが明らかとなり、現在、視覚刺激と体性感覚刺激からなる多感覚刺激によって律動成分がどのように変化するかについて解析を行っている。

またこの低速律動は大脳における血管の自発運動に由来することを明らかにし、日本神経科学会(幕張メッセ千葉)、日本生理学会(サンポート高松香川)にて口頭発表を行った。米国ロチェスター大学のGregory C. DeAngelis教授との共同研究により行ったサル頭頂葉における多感覚統合の研究結果は、米神経科学雑誌Neuronに掲載された(Ohshiro et al., 2017)。柳川右千代教授との共同研究では、GAD65ラットでの癲癇発作時の脳波を安定して計測できるよう研究環境が整った。得られた結果は現在専門誌に投稿準備中である。また別のGABA合成酵素、GAD67のノックアウトラットについても脳波解析を始めたところである。大脳皮質における低周波神経律動現象に関わる神経伝達物質の候補のひとつとしてヒスタミンを同定した。現在、ヒスタミン合成酵素や受容体遺伝子のノックアウトマウスを入手し、解析を開始したところである。(大脳皮質体性感覚野における触覚刺激の情報処理)高等動物は触覚を介して、ものの形、大きさ、運動、手触りなどの複合的な知覚を得ている。これらの複合的な知覚が脳の中でどのように処理されているかについて調べるために、任意の触覚パターンの刺激を与えられるとともに、それに対する脳の神経細胞応答を同時計測できるラットモデルを八尾寛名誉教授らの研究グループと共同開発した。まず遺伝子操作によって青色光に応答するチャネルロドプシン遺伝子をラットの頬ヒゲの根元にある感覚神経において発現するようにした。そしてコンピュータ制御下で青色光をヒゲの根元に局所照射することで、複数のヒゲ触覚を任意の時空間パターンで作り出すことに成功した。多重触覚刺激に対する大脳皮質浅層の神経細胞の入力応答特性を統計解析した結果、神経細胞は水平方向のゾーン選択的なパターンに瞬時に反応するとともに、ゾーン周囲への同時刺激によって反応が抑制されることが明らかなった。つまり刺激入力に対する空間的コントラストを脳が積極的に強調しているという情報処理の存在を明らかにした。さらに今回見つかった活動抑制のパターンは神経活動正規化モデルが予測する様式に合致することから、神経活動正規化は異種感覚統合時だけでなく、知覚受容の最初期段階である第一次知覚野でも見られる普遍的な現象であるということが確認された。ラットを用いた超低周波の神経律動の研究では、この現象に関わる神経伝達物質(既知のものであった)を同定し終えている。今後はこの神経伝達物質の複数存在する受容体のうちどれが関わっているかを同定したい。最終的には同定された受容体遺伝子のノックアウト動物を入手または作成し、超低周波神経律動現象の生物学的役割についてさらに追求したいと考えている。京セラ社と共同で開発した小型電極に関しては最大16個までラット脳に埋め込み、脳波同時記録を目指す。視覚刺激と体性感覚刺激からなる多感覚刺激によってどのような脳波成分が大脳表面上に分布するか解析を行う予定である。
中枢性体液調節機構を中心としたがん悪液質の病態解明と新規治療法に向けた総合的解析

がん末期の病態において合併してみられる悪液質(カヘキシア)は、患者の生活の質や予後を悪化させる重篤な病態である。しかしながら、この病因については十分に解明されていないのが現状であり、対応は急務である。がん悪液質では、食思不振、炎症、腹水などにより全身の水分バランスが変化し、中枢の体液調節系ががんの病態で変化している可能性があると考えられる。私たちは中枢神経系の水分調節機構に注目して、がん悪液質モデルラットを使用し、電気生理学的手法を用いて研究を行った。この結果、がん悪液質では、中枢神経系において浸透圧や飲水に関するペプチドへの感受性が減弱している可能性を見出した。24年度は、23年度に引き続き、がん悪液質モデルラットを用いたがん悪液質状態での中枢性体液調節機構の変化についての研究継続と、がん悪液質の病態発現に関連があると思われる物質の正常状態での中枢性体液調節機構への作用について重点的に検討を行った。がん悪液質について関連がある物質については、キスペプチンに焦点をあてた。キスペプチンが体液調節に重要な役割をもつバゾプレッシンを産生する視索上核大細胞性神経分泌ニューロンにどのような反応を引き起こすかを正常ラットの脳スライスを作成し、ホールセルパッチクランプ法を用いて電気生理学的に検討した。結果として、キスペプチンは濃度依存性に興奮性シナプス入力を増強させること、この反応はキスペプチンタイプ1型受容体の阻害薬投与で減弱することがわかった。これらの事から、キスペプチンは視索上核大細胞神経分泌ニューロンのシナプス入力に関して、キスペプチンタイプ1型受容体を介して興奮性シナプス入力の増強作用を引き起こすことが示唆された。がん治療では、手術治療等も行われるが、その際に使用される薬剤についての検討も行った。セボフルレンは手術麻酔でよく使用される吸入麻酔薬であるが、この薬剤が中枢の水分調節機構にどの様に影響を与えるか正常ラット脳スライスを用いて検討した。結果として、セボフルレンは臨床で使用される濃度では、濃度依存性に抑制性のシナプス入力を増加させることがわかった。がん悪液質モデルラットを用いた検討は、昨年度、がん悪液質状態では中枢の浸透圧等への反応が減弱していることを報告したが、この作用が腫瘍細胞を移植してどのあたりから症状が発現するか検討し、移植後2週頃には発現することを改めて見出した。これらの結果はこれまで報告された事のない新たな発見であり、正常状態との違いを見つけることで、がん悪液質の病態解明や治療方針等に貢献できると思われる。研究最終年度は、がん悪液質の中枢性体液調節機構に影響を与える因子の検討を引き続き行った。これまで、がんの転移などに関連するキスぺプチンに焦点を当て、キスぺプチンが水分調節を主に司るバゾプレッシンの分泌動態にどのような機序で影響を与えるのか検討し、正常ラット脳スライス標本にホールセルパッチクランプ法を用いて、電気生理学的に解析を行い、キスぺプチンがキスぺプチン受容体(Kiss1r)を介して、濃度依存性に興奮性シナプス入力を頻度を増加させることを解明してきた。25年度はさらに細胞内情報伝達系まで詳しく検討を行った。キスぺプチンによる興奮性シナプス入力増強は、PKC阻害薬前投与で減弱したことから、キスぺプチンはKiss1r-PLC-DAG-PKCを介して、プレシナプスに作用して興奮性シナプス入力を増強させることで体液調節に関与する可能性が示唆された。がん悪液質モデルラットを用いた検討も継続して実施した。がん悪液質モデルラットでは、体重増加、摂食量、飲水量が正常ラットに比べて有意に減少し、摂食を促進するペプチドであるグレリンへの反応性が低下していることが、行動生理学的検討で明らかとなった。がん悪液質モデルラットの脳スライスを用いたバゾプレッシン産生細胞に対する電気生理学的検討においても、正常ラットで興奮性シナプス入力を増強させる濃度のグレリンを投与しても反応は鈍く、グレリンへの反応性が正常とは異なることが示唆された。がん治療に用いる、鎮痛薬や麻酔薬の作用についても継続的に検討を行った。今年度は、吸入麻酔薬のセボフルレンの体液調節機構に与える影響をラット脳スライス標本を用いてパッチクランプ法にて検討した。この結果、セボフルレンは抑制性シナプス入力に作用することが示唆された。これらの結果は、これまで報告されたことがなく、がん悪液質状態の改善に向けて更なる発展が期待できる。

がんモデル動物を用いて、がんの種類や病期における全身的な病態の変化、とくにがん悪液質状態における中枢性体液調節機構の感受性変化について発生機序を電気生理学的・行動生理学的解析などを用い、分子レベルから解明し、症状改善への治療法へと結びつけることを目的として研究を開始した。23年度は正常ラットモデル、がん悪液質モデルの脳スライス標本をパッチクランプ法を用いた電気生理学的検討を中心に研究を実施した。この中で、がん悪液質モデルラットでは、がん細胞移植1週目から体重・摂食量・飲水量が正常モデルラットに比べ有意に低下していること認めた。生体の水分バランスの恒常性は抗利尿ホルモンとして知られるバゾプレッシンによって調節され、バゾプレッシンは視床下部視索上核および室傍核に局在する大細胞性神経分泌ニューロンの細胞体で産生され、下垂体後葉に投射した軸索終末から血中に分泌される。この分泌調節は、血漿浸透圧や飲水惹起を引き起こすペプチドであるアンジオテンシンIIなどの液性因子および細胞体へのシナプス入力によって調節されている。脳スライスを用いた電気生理学的検討で、がん悪液質モデルでは高浸透圧刺激時、アンジオテンシンII投与時の興奮性シナプス入力が正常モデルラットに比べて優位に減衰している傾向を見出した。こられの結果は、がん悪液質状態で引き起こされる水分バランスの異常の原因には、中枢の体液調節系が、がん病態で変化している可能性があることを示唆していることをはじめて報告するものであり、大変意義のある成果と思われる。痛みセンサーとして知られるチャネルの中に、浸透圧調節に関係するチャネルがあり、疼痛緩和はがん悪液質状態改善にも効果があると考え、麻酔薬や鎮痛薬がどのチャネルを介しているかについても検討した。麻酔薬のセボフルレンは高濃度で電位依存性のナトリウムチャネルの一部を抑制することも見出した。今回の研究は、ヒト胃がん細胞由来の細胞を使用した、がん悪液質モデルラットを用いて、電気生理学的な検討を主として研究を進めている。これまでに、がん悪液質状態では、浸透圧やアンジオテンシンIIなどの水分調節に関係する因子への反応が正常モデルとは異なっていることを見出した。また、がん悪液質状態に関係している可能性がある因子がこれまでに幾つか報告されていたが、これらの因子が正常な状態で、バゾプレッシンを中心とする中枢の水分保持機構にどのような影響を与えるか報告された事がなかった。今回の研究では、このうち、キスペプチンの中枢性水分調節機構に与える影響について興味ある結果を導き出すことが出来た。現在は、これらを論文等の成果物への作業とともに、がん悪液質モデルラットにおけるグレリン等の摂食関連ペプチドへの反応やキスペプチンへの反応について検討を進めており、研究は概ね順調に進んでいると判断している。研究実施計画において平成23年度に行う予定であった、正常モデルラットおよびがん悪液質モデルラットの脳スライス標本を用いた電気生理学的な検討において、がん悪液質モデルラットでは中枢性の体液調節機構に変化が生じている可能性があるという結果がではじめているため。がん悪液質に病態発現に重要な役割を果たしている可能性のある物質や、がんの治療などで使用されている薬剤等が、正常状態で中枢の水分調節機構にどのような作用を及ぼしているか分からなければ、がん悪液質での状態での反応か見極めることができないため、24年度は正常状態での反応実験の割合が多くなってしまった。25年度は、24年度の研究で正常な状態で中枢性水分調節機構に影響を及ぼすかわかったキスペプチンをはじめとし、摂食関連ペプチドであるグレリンなどをがん悪液質モデルラットの脳スライス標本に投与して、電気生理学的方法を用いた検討を行う。
ラット抗ヒトレトロウイルス阻害因子と感染モデル

ラットにおけるHTLV-1とHIV-1の増殖を抑えている因子を、トランスジェニックラットを用いてinvivo/ex vivoで検討した。HTLV-1の増殖を抑えている1因子としてCD8T細胞を同定した。しかし、他の因子の存在も示唆された。HIV-1の増殖が悪い1因として,ラットCyclinT1とCRM1にある事が分かった。ヒトCyclinT1とCRM1 double Tgラット由来のT細胞とマクロファージにおいてヒト細胞の1/10-1/3量の感染性HIV-1が生産された。近交系が確立され、遺伝子操作が可能なラットにHIVやHTLV-1が感染できるならば、治療法と予防法の開発に大いに役立つ.ウイルスの増殖に必要なヒト因子の要求性と抑制因子を検討し、同定された因子を発現又はノックアウトするトランスジェニック(Tg)ラットを作成することを最終目的とした。既に、HTLV-1のヒトーラット種間バリアーとして我々はCRM1を同定し、ヒトCRM1を発現するTgラットを既に作成している.又、HIV-1のバリアーとしてCyclinT1を同定したのでCyclinT1 Tgラットを作製した。そこで、今年度はTgラットを用いて、HTLV-1/HIV-1の増殖をin vivo/ex vivoで調べた。そして、以下の結果を得た.1、ラットの免疫系を回避して、HTLV-1を効率よく感染させるために、新生児への感染と経口感染を試みた.hCRM1 Tgラットでは感染46週迄はWtラットよりも体内ウイルス量が高かったが、その後差がなくなった.このことは、ラットの免疫系がHTLV-1の増殖を抑えている事を示唆している.2、hCRRM1/hCyclinT1のダブルTgラットのprimary T細胞とマクロファージでは、ヒト細胞に近いHIV-1の増殖が認められた.特に、マクロファージでは感染性のHIV-1が作られた.3、ラットのT細胞株では感染性の低いHIV-1が生産される.その原因としてウイルス粒子上にEnvタンパクが少なく、生産量が低いか不安定である事が示唆された.近交系が確立され、遺伝子操作が可能なラットにHIVやHTLV-1が感染できるならは、治療法と予防法の開発に大いに役立つ.ウイルスの増殖に必要なヒト因子の要求性と抑制因子を検討し、同定された因子を発現又はノックアウトするトランスジェニック(Tg)ラットを作成することを最終目的としたし既に、HTLV-1のヒト-ラット種間バリアーとして我々はCRM1を同定し、ヒトCRM1を発現するTgフットを既に作成している.又、ヒトCyclinT1/CRM1ダブルTgラットを作成している。そこで、今年度はヒトCD4/CCR5/CXCR4/CyclinT1/CRMITgラットを作成し、HTLV-1/HIV-1の増殖をin vivo/ex vivoで調べた。その結果、以下の事が明らかになった。HIV-1感染について1.ヒトCD4/CCR5/CXCR4/CyclinT1/CRMITgラットの作成に成功した。この5種のヒト遺伝子はマクロファージとCD4T細胞で発現しており、HIV感染モデルの要件を満たしていた。2.マクロファージ、T細胞ともに感染性HTV-1を産生した。3.マクロファージには効率良くHIV-1が感染した。4. T細胞には感染阻害因子が存在する。HTLV-1感染について1.ラットCD8+T細胞はHTLV-1のin vivoにおけるメジャーな増殖抑制因子ではない。2.経口感染、新生児感染によっても体内ウイルス量は上昇しなかった。
運動障害と認知障害を分離するパーキンソン病のサーキットパソロジー

本研究では、独自に開発した逆行性感染型レンチウイルスベクター(逆行性LVベクター)とアデノ随伴ウイルスベクター(AAVベクター)を用いて、黒質ドーパミンニューロンに細胞死や興奮抑制を誘導するような機能分子を発現させ、ドーパミン神経路をその機能局在性に基づいて選択的に除去あるいは活動阻害することにより、運動障害と認知障害を分離することができるパーキンソン病の霊長類モデルを作出し、そのサーキットパソロジーを明らかにすることを目的としている。平成26年度は、以下の2つの研究計画を実施した。(1)運動機能と認知機能の評価を切り分けておこなうことができる新たな行動課題である迷路課題を考案し、この課題をサルにトレーニングした。(2)マカクザル脳におけるアルファシヌクレイン発現ニューロンの加齢による分布変化を、特に中脳ドーパミン神経系に着目して免疫組織化学的に解析した。本研究には、10歳から31歳(ヒトでは約30歳から93歳に相当)の健康なマカクザル(ニホンザル、カニクイザル、アカゲザル)を使用した。アルファシヌクレインの沈着は、黒質や腹側被蓋野のニューロンですでに10歳時からみとめられ、ドーパミン神経路に従って、その後、線条体と側坐核のニューロンにおいて亢進することが観察された。また、中脳皮質ドーパミン神経系におけるアルファシヌクレイン発現ニューロンは前頭前野領域、特に前部帯状皮質、前頭眼窩野、背外側前頭前野で加齢に伴って顕著になり、次第に運動関連領野へと波及した。本研究で用いたすべての個体において、パーキンソン病様の運動障害などの臨床症状を呈したものはなく、また、レビー小体様の凝集体形成も同定されなかった。本研究の結果から、老齢マカクザルはパーキンソン病だけでなく、びまん性レビー小体型認知症などのレビー小体に関連した精神・神経疾患の発症前モデルとして有用である可能性が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。1.片側の線条体(被殻および尾状核)にCreリコンビナーゼを発現する逆行性LVベクター(LV-Cre)を、両側の黒質(外側部および内側部)にドーパミンニューロン変性を誘導するα-synuclein遺伝子(A53T変異)を組み込んだloxP配列搭載AAVベクター(AAV-LSL/FLEX-α-syn)を注入し、パーキンソン病モデルザル(α-synucleinモデル)を開発した。このようなα-synucleinモデルでは、LV-Cre注入側に対応する上下肢にパーキンソン病様の行動障害が誘発され、手の使用頻度の低下などが観察された。また、ドーパミン合成に関わるチロシン水酸化酵素(TH)の免疫染色をおこなった結果、LV-Creを注入した半球の線条体および黒質においてTHレベルの減弱が確認されるとともに、残存している線条体のTH陽性線維の中にリン酸化α-synucleinの凝集体が検出された。本研究の結果はα-synucleinの過剰発現によるドーパミンニューロンの変性・脱落をサーキット選択的に誘導できることを示している。2.逆行性感染型レンチウイルスベクターとテトラサイクリン誘導性転写制御システムを組み合わせて、神経路選択的にドーパミン神経伝達を抑制したモデルザルの作製に成功した。本実験系では、導入遺伝子としてテトラサイクリン応答プロモータの下流にテタヌストキシン軽鎖遺伝子を挿入した逆行性感染型レンチウイルスベクターを線条体に、テトラサイクリン応答因子を発現するアデノ随伴ウイルスベクターを黒質に注入した。このようなサルにおける行動変化を採餌タスクなどの行動学的指標を用いて解析した結果、ドキシサイクリン誘導的かつ可逆的にパーキンソン病様の運動障害が誘発されることを確認した。このような運動障害は緩徐に進行し、また、ドキシサイクリンの投与期間中に機能回復は観察されなかった。

本研究で用いたすべての個体において、パーキンソン病様の運動障害などの臨床症状を呈したものはなく、また、レビー小体様の凝集体形成も同定されなかった。本研究の結果から、老齢マカクザルはパーキンソン病だけでなく、びまん性レビー小体型認知症などのレビー小体に関連した精神・神経疾患の発症前モデルとして有用である可能性が示唆された。26年度が最終年度であるため、記入しない。Cre-loxPシステムを利用したパーキンソン病モデルザルの作出およびTet-Onシステムを利用したパーキンソン病モデルザルの作出は、平成25年度における研究実施計画の主要項目であり、それぞれ「研究実績の概要」の1と2に記載したとおり当初の目標を達成することができたため。今後は、「研究実績の概要」に記載した結果を発展させて、ドーパミン神経路選択的な活動阻害と運動・認知障害の発現との関係を詳細に解析し、パーキンソン病のサーキットパソロジーの解明を目指した研究を進める予定である。具体的には、飼育ケージ内で運動機能と認知機能を分離して評価できるような行動課題(3X3採餌選択課題)を訓練したサルにおいて、「研究実績の概要」の1,2と同様のベクター注入をおこない、黒質の外側部から被殻の後方部に投射するドーパミン神経路と、黒質の内側部から被殻の前方部や尾状核に投射するドーパミン神経路をそれぞれ選択的に除去したα-synucleinモデルを作出し、運動機能と認知機能の障害の程度を行動学的に解析する予定である。
虐待による高齢者の死亡事例等と検証に関する調査研究

本研究の目的は、高齢者の虐待による死亡事例とともに、それのみならず、死亡に至らないが重篤な事例および被虐待者の自殺や死亡による終結事例等、より緊急性、優先性の高い事例について分析するとともに、「検証」について、その実態を把握した上で、その理論と方法の研究開発を行うことである。2015年、2016年度においては、それまでの成果を踏まえ、全国の都道府県(悉皆調査)、政令市(悉皆調査)、市区町村(悉皆調査)の高齢者虐待防止主管課および、全国の地域包括支援センター2000カ所に、質問紙による郵送調査を実施した。また、県内の事例検証を実施し内部報告書を策定した神奈川県の取り組み関わった。「高齢者虐待防止法」が2006年4月より、実施となり、国による大規模調査や自治体を経由した実態把握も厚生労働省によって毎年行われ、虐待の概要はある程度明らかにされた。一方、実践現場での支えとなる方法論も筆者もかかわった日本社会福祉士会による「高齢者虐待対応ソーシャルワークモデル」が構築され、一定の成果をあげた。そのような中、研究代表者山田祐子は、科学研究費補助金で2011年に全国市町村および地域包括支援センターへの質問紙調査を実施し、高齢者虐待の死亡事例の把握を行い発表した。その結果、死亡事例のみならず、死亡には至らないが重篤な事例および被虐待者の自殺や死亡による終結事例等、より緊急性、優先性が高い事例が全国に存在することが示唆されたので、2012年、再び、市町村および地域包括支援センターに全国調査を実施し、死亡事例としてすら把握されていない非常に痛ましい事例が存在することを明らかにした(平成2225年度「格差社会における高齢者虐待ソーシャルワークの理論と実践の体系化に関する調査研究」、基盤研究(C)課題22530625)。そこで、次にくる課題として学術的貢献が求められている課題の一つは、「検証」であり、その理論と方法の開発が急務であるとし、「高齢者虐待の死亡事例等」の検証に焦点」を当て、その理論と方法の研究開発をテーマとした。今年度は、文献調査と資料収集を行い、1本テーマに関する内外の資料を国内において収集、2各地方自治体が作成したマニュアルや行政資料等に関する資料収集、をした。その結果の一部と高齢者の権利擁護をめぐる状況についてまとめ、発表した。また、2012年に行った全国調査における、市町村や地域包括支援センターにおける検証の実態に関する質問項目について、分析を行い、発表した。予備調査については、先駆的な都道府県の最新の情報を収集した。2014年度は、2013年度に引き続き、2015年度に調査実施の準備のための情報収集に充てた。調査実施のための予備調査等については、本研究テーマに関する既存調査とともに、「検証」に関する自治体の動向についての情報収集を行った。昨年度、研究代表者が、死亡事例の検証の意義について、前回の科学研究費補助金による研究(研究代表者:山田祐子「格差社会における高齢者虐待ソーシャルワークの理論と実践の体系化に関する調査研究」基盤研究((C))、課題番号22530625)において自身が実施した全国調査の結果、虐待による高齢者の死亡等の痛ましい事例についての発表をすることをとおして、情報提供を行い、検証を推進するよう働きかけたところ、研究代表者が関わる自治体の中で、虐待に関する先駆的な施策を実施する地域は、検証実施に向けた動きを見せ始めていた。2014年度においては、研究代表者が関わる中で、A県において本件について、その重要性について県および県内において担当者の認識するところとなり、更なる進展をみせ、実際に「検証」システムに関する具体的な試みを行う計画を立案するところまで展開している。本研究テーマを、科学研究費補助金において継続的に実施ししていった結果、実践の推進に影響を与えることができ、事例研究や実践研究の実現可能性もみえてきたので、2015年度において、調査計画の実施について、有意義な知見を得ることができた。2013年度、2014年度は、2015年度に調査実施の準備のための情報収集に充てた。本研究テーマに関する既存調査とともに、「検証」に関する自治体の動向についての情報収集も行った。その結果、研究代表者が高齢者防止施策に関わるA県において、その重要性について県および県内において担当者の認識するところとなり「検証」に関する具体的な試みを行う計画を立案していたが、2015年度においても、制度立案の可能性について引き続き検討を行い、施策実現に向けその課題について、洗い出しを行っているところである。そこから、本研究テーマに関する事例研究や、方法の研究開発の可能性を得られることができた。また2015年度においては、それまでの成果を踏まえ、全国の都道府県(悉皆調査)、政令市(悉皆調査)、市区町村(悉皆調査)の高齢者虐待防止主管課および、全国の地域包括支援センター2000カ所に、質問紙による郵送調査を実施した。できる限り

最新のデータを入手するため、調査期間を2016年1月20日から同年2月末までとしたが、回収率が低い等の理由から、調査期間を延長し、2016年3月末までに延期した。なお、締め切りの末尾が、年度末となるため、自治体からの要望により、次年度の2016年4月の返信も受付ることとしたため、科学研究費補助事業の本研究期間を1年間延長することを申請し、認められ、2017年3月まで、研究期間を延長することとなった。2015年度は、質問紙による郵送調査の調査期間を延長すること等に伴い、科学研究費補助事業の本研究期間を1年間延長することとなったが、適切な対応であったと思われる。なぜなら、調査期間延長の理由について、回収率の向上や、最新の情報を収集することのみではなく、良質で時機を得た最新の情報を収集することに非常に寄与すると判断したからである。2015年度後半から年度末にかけて、死亡事例のメディアによる報道が増加し、特に川崎市の有料老人ホームの職員による殺人事件を受けて(2016年2月職員逮捕)、本研究テーマのめぐる日本政府、自治体の対応の動向に変化が見えたことから、2016年2月末の回収締切を、2016年3月末時までに延長し、かつ4月も受け付けるとともに、再度の調査依頼をかける検討をしたことは、本研究テーマに関わる非常に重要な知見を得る可能性を得て、学術的意義が高まるだけでなく、更なる人権福祉の向上に寄与するものと思われる。本研究の目的は、高齢者の虐待による死亡事例とともに、それのみならず、死亡に至らないが重篤な事例および被虐待者の自殺や死亡による終結事例等、より緊急性、優先性の高い事例について分析するとともに、「検証」について、その実態を把握した上で、その理論と方法の研究開発を行うことである。2013年度、2014年度は、調査実施の準備のための情報収集に充て、本研究テーマに関する既存調査と、「検証」に関する自治体の動向についての情報収集を行った。その結果、2014年度は研究代表者が高齢者防止施策に関わるA県において、その重要性について県および県内において担当者の認識するところとなり「検証」に関する具体的な試みを行う計画を立案し、2015年度には、制度立案の可能性と施策実現に向けその課題についての洗い出しを行い、2016年度は、A県が実施主体となり県内の事例検証を実施し報告書を策定したことから、本研究に関する事例研究や、方法の研究開発の可能性を得られることができた。また2015年度においては、それまでの成果を踏まえ、全国の都道府県(悉皆調査)、政令市(悉皆調査)、市区町村(悉皆調査)の高齢者虐待防止主管課および、全国の地域包括支援センター2000カ所に、質問紙による郵送調査を実施した。できる限り最新のデータを入手するため、調査期間を2016年1月20日から同年2月末までとしたが、3月末までに延期した。なお締め切りの末尾が年度末となるため、自治体からの要望により、次年度の2016年4月の返信も受付けることとしたため、本研究期間を1年間延長することを申請し認められた。2016年度は、回収状況を検討した結果、都道府県・政令市の回答のない自治体に対して再度調査票を発送して依頼し、2016年7月末まで調査期間を延長し、調査結果について集計・分析を行った。その結果を成果物としてまとめる予定である。
非コードゲノム領域の強制転写技術を利用した革新的DNAメチル化制御技術の開発

本研究はゲノム上の特定領域のDNAメチル化状態のみを特異的に制御できる技術の確立を目的としている。DNA脱メチル化に関わるタンパク質に翻訳されない200塩基以上の長鎖非コードRNAの強制転写を用いた方法については期待した効果は得られなかった。一方で、任意のDNA配列を認識するDNA結合ドメインとDNAメチル化制御酵素ドメインを融合させた人工融合遺伝子を用いた手法ではゲノム上の特定領域のDNAメチル化状態を非常に高い効率で制御可能であることが明らかになった。本研究で開発された技術は、基礎から臨床研究までの幅広い分野に渡るDNAメチル化研究を大きく前進させることが期待される。本年度は、人為的なDNAメチル化制御の達成の為に必要な、DNAメチル化制御タンパク質とDNA切断酵素を不活性化したdead Cas9タンパク質との融合タンパク質発現ウイルスベクターの作製とそのDNAメチル化活性の検証を行った。実験計画書に記入した全てのDNAメチル化制御タンパク質について、過去の文献データにもとづき酵素活性に最低限必要なドメインのみをクローニングし、Cas9タンパク質の3'末端に融合させた融合タンパク質発現ウイルスベクターを作製完了している。その後、これらの改変dCas9を薬剤依存的に発現させることが可能なマウス神経幹細胞を作成し、特定領域のDNAメチル化状態の制御が可能かどうかをバイサルファイトパイシーケンス法により検証した。その結果、DNAメチル化状態はわずかに変化したもの、DNAメチル化変換効率は低かった。加えて、薬剤によって発現させた改変dCas9の細胞内局在を免疫染色法によって調べたところ、改変dCas9は多くが細胞質に存在していた。これらより、さらなるDNAメチル化変換効率の上昇のためには、核への局在効率を高める必要があると考えられた。現在、文献を元に、dCas9を効率的に核内局在させる位置に核移行シグナルを付加した新たなコンストラクトを作製している。また、改変Cas9をターゲット領域に誘致するのに必要なガイドRNAについても、より効率的にdCas9をターゲット領域に誘致可能な構造をとるガイドRNAに変更し、核への局在効率を高めると共に、非特異的なDNAメチル化変化を減らすようにした。初年度の期間は短かったが、実験計画書に記入した全てのDNAメチル化制御タンパク質を融合させた改変dCas9の発現ベクターの作製が完了している。さらに、薬剤依存的な改変dCas9発現システムが正常に働いていることが判明した上で、配列特異的なDNAメチル化制御ができているかどうかまでを検証できている。一方で、改変dCas9のDNAメチル化変換効率が低かった事が、問題点として挙げられる。この点に関しては、改変dCas9発現ベクターを導入できた細胞は薬剤選択により選別できている事から、障害となっているステップを特定できており、ベクターの導入効率ではなく、改変dCas9の核局在効率の低さであることが判明している。また、核局在効率の低いという問題についても、文献を元に確からしい解決方法がみつかっており、改善可能であると考えられるため、研究は概ね順調に進展していると判断した。前年度に作成したDNAメチル化制御タンパク質とDNA切断酵素を不活性化したdead Cas9タンパク質との融合タンパク質発現ウイルスべクターを用いて、DNAメチル化変化をDNA配列特異的を誘導できるか検証を行った結果、DNAメチル化変換効率が高くなかったため。本年度は、核移行シグナルの付加によって、変換効率の上昇がみられるのかバイサルファイトパイロシーケンス法により検証した。その結果、変換効率の上昇は確認できたものの、実験結果が安定せず、十分な再現性が得られなかった。問題点を検証するうち、dCas9-DNAメチル化酵素融合タンパクと薬剤選択マーカー、ドキシサイクリンを同時発現させた場合、レンチベクターコンストラクトの大きさが原因となり、細胞内に導入されたコンストラクトが十全に機能していないこと可能性が示唆された。そのため、コンストラクトサイズの縮小とさらなる変換効率の上昇を図るため、群馬大学の畑田研究室と共同研究を行い、畑田研究室で構築されているdCas9と微小ペプチド抗体(Suntagシステム)を用いたエピゲノム編集技術を申請者のシステムを組合せ、DNAメチル化酵素タンパクとdCas9タンパクを別々のレンチウイルスベクターに再構築しなおし、検証を行った結果、エピゲノム変換を効率よくひきおこすことができることを確認した。さらに分割することにより、レンチウィルス感染効率が大きく上昇し、実験ツールとしての利便性を大きく上昇させることに成功した。今後は、DNAメチル化変換効率の低さの原因とかんがえられる、核局在効率を改善するための改変dCas9発現ベクターの作製を行い、HEK細胞に遺伝子導入し、実際に核局在効率が改善できているのかを免疫染色法により検証する。その後、DNAメチル化変換効率が改善しているのかどうかを、バイサルファイトパイロシーケンス法によって検証する。配列特異的なDNAメチル化制御が可能である事を確認した後、研究計画書に記載した通り、インプリント領域のDNAメチル化制御を行い、それらがDNAの高次構造、遺伝子発現、クロマチン動態に与える影響について、分子生物学的手法によって精査していく。
GINSPARG-WILSON関係式にもとづく標準模型の非摂動的な構成とε'/ε

今年度、我々は、素粒子の標準模型を与えるSU(3)_C×SU(2)_L×U(1)_Yカイラルゲージ理論のGinsparg-Wilson関係式にもとづく非摂動的な構成と(数値的)解析に関する研究を押し進めた。第一に、SU(2)_L×U(1)_Y電弱ゲージ理論におけるゲージアノマリーの相殺に関する研究を行い、格子上の電弱ゲージ理論においても、ハイパーチャージについての条件Σ_rrY_r=0およびΣ_rY^3_r=0が満されていれば、ゲージアノマリーが厳密に相殺することを示した。この研究ではLuscherの与えた6次元のトポロジカルな場のコホモロジーによる分類を行った。この6次元のトポロジカルな場は、一般に、SU(2)_L×U(1)_Yすべでのゲージ場に関してトポロジカルな性質をもつ。これをU(1)_Yについてのトポロジカルな場とみなし、コホモロジーの議論をもちいることで、U(1)_Yゲージ場の依存性を限定できた。これより、上記のハイパーチャージについての条件とSU(2)_Lの擬実性をもちいることにより、SU(2)_L×U(1)_Yの混合ゲージアノマリーの厳密な相殺の証明が可能になった。第二に、Kメソンの弱い相互作用による崩壊の確率振幅を、格子ゲージ理論を用いて数値的に計算する方法に関する研究をおこなった。Kメソンの崩壊振幅は、標準模型におけるCP不変性の破れをあたえる物理量、ε'/ε等、の計算に不可欠である。しがし、Euclid空間で定式化される格子ゲージ理論からは、直接、確率振幅を得ることはできないため、計算方法が確立していなかった。この問題に対して、最近、2つのπメソンからなる系のエネルギー固有値に現れる有限体積効果を用いると、Kメソンの崩壊振幅の計算が可能になることが明らかになった。この研究では、この方法が、2つのπメソンがゼロでない全運動量を持っている状態からなる部分空間に拡張できることを示した。この部分状態空間では、基底状態のエネルギーが有限体積効果をしめすため、エネルギー固有値から確率振幅を計算する際に、系統的な誤差をより小さくできると期待される。現在、理論的な検討がほぼ終わった段階であり、今後、格子ゲージ理論を用いた数値的な研究に進む計画である。
加齢黄斑変性の病態解明-光ストレスによる脂質酸化と自然免疫の関与

本研究は、難治性眼疾患である加齢黄斑変性の病態解明を進め、根治療法を開発することを目的としている。青色光を低照度で長期間照射することにより、ヒト加齢黄斑変性に近い動物モデル作成に成功した。低照度光照射により網膜における酸化脂質が上昇し、慢性炎症が惹起されることがわかった。加齢黄斑変性発生に自然免疫が関与しているかを検討した結果、少量の菌体成分を投与することで、脈絡膜新生血管が抑制されること、その作用メカニズムにIL-10の発現上昇が重要な役割を担っていることを見出した。加齢黄斑変性の実際の病態に類似した動物モデルを確立するため、低照度長期間光照射により網膜下脈絡膜新生血管(CNV)が誘導されるかを検討した結果、有色マウスでCNVの発生を蛍光眼底造影、および、組織学的、免疫組織化学的に確認した。電子顕微鏡による評価では低照度長期光照射で網膜下腔およびブルッフ膜下へのマクロファージの集積とブルッフ膜の肥厚が生じることが判明した。また酸化ストレスが蓄積し易いSODノックアウトマウスではより若齢の個体に短期間の照射でCNVが誘発可能であることが分かった。同様の光酸化ストレスを与えたMCP-1-/-およびccr-2-/-マウスではCNVの発生が見られなかったことより、その発症機序に酸化ストレスにより惹起される慢性炎症が関与していることが確認できた。また、MCP-1を加齢黄斑変性の発症誘因候補の1つとして絞ることができ、来年度以降に薬物によるCNV発症抑制効果の検討を行う予定である。汎用性の高い動物モデル作成のため、硝子体内酸化リン脂質投与による脈絡膜新生血管誘導を試みたが、過度の眼内炎症や白内障などの合併症のため、評価が困難であった。加齢黄斑変性の発症に自然免疫が関与しているかを検討するためにToll-like receptor関連分子や他の免疫系分子のノックアウトマウスを入手したが、生育が不良のため、実験結果を得られるに足る個体数が得られておらず、来年度以降に検討を行う予定である。レーザー誘導CNVモデルを用いた自然免疫の関与の検討に関しては、誘導前にLPS刺激を行うことで、CNVのサイズが有意に抑制されることを見出し、不顕性感染などを介した自然免疫不活化が発症に抑制的に関与している可能性が示された。これまでの研究で開発してきた低照度長期間光照射による加齢黄斑変性動物モデルを更に改良するため、低照度青色光の照射条件を変化させて、マウス網膜における変化を比較検討した。その結果、長期の連続照射では高度の網膜障害をきたすが、周期的な低照度長期光照射では網膜障害は余り見られず、網膜内および網膜下腔へのマイクログリアの集積を誘発し、慢性炎症を惹起することが判明した。そこで、2日毎の低照度光照射を3ヶ月間継続したマウスを用い、ブルッフ膜と脈絡膜毛細血管板の変化を検討している。これまでの結果では、ブルッフ膜の肥厚と血管内に貪食細胞の変化を認めることが判明した。現在、細胞種の同定と誘導因子の検出を進めている。また、これまでの研究でMCP-1を加齢黄斑変性の発症誘因候補の1つとして絞ることができたので、薬物によるCNV発症抑制効果の検討を行った。MCP-1受容体阻害薬を加齢黄斑変性動物モデルに投与し、脈絡膜新生血管(CNV)の抑制効果があるかを検討したところ、対照群に比べ44%抑制することに成功した。抑制の分子メカニズムを現在解明中である。加齢黄斑変性の発症における自然免疫が関与の検討に関し、免疫系分子のノックアウトマウスを用いた実験は、生育不良のため断念した。しかし、グラム陰性菌の菌体外毒素であるリポポリサッカライド(LPS)の腹腔内投与でモデル動物でのCNVのサイズが有意に抑制されることから、不顕性感染などを介した自然免疫不活化が発症に抑制的に関与している可能性を見出した。本年度はその分子メカニズムとして、IL-10が関与していることを突き止めた。本研究は、難治性眼疾患である加齢黄斑変性に対し、実際の病態に類似した低照度長期間光照射による動物モデルを確立し、薬剤による治療の可能性、新規薬剤開発について検討する。また、発症の決定に自然免疫が関与している可能性に関し検討をおこなった。光ストレス動物モデルの作成・解析を行なったところ、光照射でマイクログリアが誘導され、慢性炎症を惹起することがわかった。照射条件としては、連続照射は低照度でも1ヶ月で組織損傷が見られ、3ヶ月で高度となった。13日の交互照射では、大差はなかったが、2日毎のパターンが最も酸化ストレス誘導から慢性炎症を惹起していた。

CCL-2(MCP-1)とそのレセプターCCR-2のノックアウトマウスでは脈絡膜新生血管の発生が抑えられたことより、発症機序に慢性炎症が関与していることを確認した。また、治療法開発として、Ccr-2阻害薬(INCB3344)硝子体内に投与による、網膜下脈絡膜新生血管抑制効果を証明した。Ccr-2,MCP-1の発現を阻害するオリゴヌクレオチドを作成し、培養網膜色素上皮に導入を試みたが、現在のところ、うまく導入ができていないので、細胞種や薬剤デザインの変更などの調整をおこなった。脈絡膜新生血管発生における自然免疫の関与を検討し、細菌の主要菌体成分であるLPSを低用量全身投与することで、脈絡膜新生血管が抑制されること、その作用メカニズムに腹腔マクロファージにおけるIL-10の発現上昇が重要な役割を担っていることを見出した。