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米ソ冷戦と音楽　ソ連からの視点

冷戦のさなか、米ソを軸とする東西両陣営は、音楽の領域でも戦いの火花を散らしていた。ソ連では、西側の前衛性は退廃として非難され、調性音楽に象徴される東側の保守性は文化統制の象徴として酷評され続けた。しかし、雪どけ期以降、両陣営は、対立し続けながら、交流を行った。そこでみられる対立は、古典的な芸術に対して敬意を払う、共通の価値観を基礎としたものだった。本年度は主として、前史として1920年代から第二次世界大戦時の状況について検討した。いわゆる冷戦期以前からソ連と西側との対立は生じていると見るべきであり、その観点から、第一次および第二次世界大戦の間の戦間期・戦中期から検討する必要があるからである。具体的には、ロシアの作曲家ストラヴィンスキー、ラフマニノフ、プロコフィエフの文献、およびアメリカの作曲家コープランド、バーンスタインらの文献を収集するとともに、ソ連共産党の文書収集に着手した。ロシアから移住・亡命した作曲家たちを比較検討するなかで、作曲家メートネルにも注意を向ける必要性が浮かび上がってきた。プロコフィエフ同様に一時帰国して演奏旅行を行ったメートネルに、一度も帰国していないラフマニノフを加えると、ソ連を代表する作曲家を確保するために作曲家にアプローチしていたソ連側の思惑との関係で、作曲家側の異なる姿勢が鮮明になるからである。他方、コープランドやバースタインらの左翼的メンタリティについては、いわゆるニューヨーク知識人らの動向とともにその位置づけを慎重に検討する必要があることを再認識した。なお、現時点での簡潔な報告を、スラブ研究センター共同研究報告会にて、「冷戦と音楽:米ソ対立と文化交流の実態について」として行っている(7月6日)。平成26年度は、主として冷戦初期、すなわち、ソ連でいうスターリン時代末期の状況について主として検討した。ソ連では文化政策が硬直したいわゆるジダーノフ批判に当たる。研究代表者の梅津は、すでにこのジダーノフ批判について詳細な分析を行い、一定の成果を得ているが、2010年にロシアで出版されたヴラーソフの新たな文献などを消化した上で、さらに考察を深めた。また、1949年のニューヨークでの平和擁護会議の検討のために、ショスタコーヴィチ(1906-75)やニコラス・ナボコフ(1903-78)の関係文献を収集し、アーサー・ミラー(1915-2005)などその他の参加者の資料や当時の新聞・雑誌の記事を収集した。また、平成25年度に引き続き、ロシア連邦モスクワ市にて資料収集を行い、ロシア国立図書館を利用し、ロシア国立文学芸術文書館などのアーカイヴでの調査を行った。冷戦初期の時期はスターリンとまったく同じ日に没した作曲家プロコフィエフ(1891-1953)の晩年でもある。プロコフィエフの本格的な検討を前提として自伝と日記を読み進め、「作曲家の自叙:プロコフィエフの自伝と日記を中心に」と題して、研究プロジェクト「近代ロシア文化の自叙の研究:自伝的散文と回想を中心に」第1回研究会(2014年11月29日、早稲田大学)で報告した他、「作曲家にとっての自叙:冷戦前のプロコフィエフの日記と自伝」と題して、研究プロジェクト「20世紀ロシア音楽再考:社会主義経験の意義を問いなおすために」第1回研究会(2015年2月1日、札幌大谷大学)でも発表して、出席者の批判的な意見を拝聴した。また、ジダーノフ批判のその後をめぐって、論文「雪どけ期のソ連音楽政策の転換過程中央委員会文化部文書に見るその実態」(『ロシア語ロシア文学』第46号(日本ロシア文学会)2014年10月、111130頁)を発表している。平成27年度は主として雪どけ期に活発化した文化交流の実態の分析を行った。第1回チャイコフスキー・コンクール(1958)はその象徴である。米国人ピアニスト、ヴァン・クライバーンのピアノ部門優勝に終わったこのコンクールを通して、近代ヨーロッパ文化を基礎とした教養主義的な基盤を共有した上で、米ソ両国が文化的にも競争を行っていたことが鮮明に浮かび上がってきた。19世紀の文化を擁護するのか、あるいは前衛芸術への展開を重視するかで両国の公的な立場は異なっていたが、両者の競争が成り立っていたのは教養主義的な基盤を共有していたからであった。他方、ストラヴィンスキーの1962年のソ連訪問は、ソ連の音楽政策の転換を鮮明に印象付ける事件であった。恐らくはフルシチョフの承認のもと、作曲家同盟第一書記のフレンニコフらがロサンジェルスの音楽祭でストラヴィンスキーの楽屋を訪れ、そして彼の自宅を訪問した際に訪ソを打診したことを発端とし、党中央が正式に許可した上で、ヒューロックの媒介のもとで実現された。訪ソの際のストラヴィンスキーの言動は、彼が米ソ両国を客観的なまなざしで観察していたことを明らかにする。すなわち、米ソ両国の輸出物はともにオーケストラやバレエ、オペラのような古典的なパフォーミング・アーツであり、保護の仕方にその差異が認められるということである。このように、米ソ両国はただ単に対立していたのではなく、共通の基盤のもとに、価値観を共有しながら競争していたことがこの時期の様々な事件において鮮明に観察できるのである。また、同年度にはスターリン賞・レーニン賞の研究にも着手し、ソ連における芸術文化の奨励の実態や多民族国家としての独自性を浮き彫りにすることができた。なお、以上の研究の中でソ連=教養主義国家という視点が浮かび上がってきたことが平成27年度の収穫の一つである。

アメリカでの文献調査が遅れているとはいえ、雪どけ期の文化交流の重要な側面についての分析を進めることができ、その内容の一部について、いくつかの研究発表や論文を通して、発表することができている。最終年度となる平成28年度は、雪どけ期に続いて、ソ連の「停滞の時代」に即して研究を進めた。ブレジネフらの「老人支配」時代のソ連は、一面では「停滞」していたが、芸術音楽の分野においては、シュニトケやペルト、グバイドゥーリナら、新たな世代の独創的な作品群が徐々に非公式領域から公式領域へと浮上し、認知を拡大していく時代だった。その過程で12音技法が容認され、事実上禁じられている技法は消滅するが、「推奨されていない」として口頭での検閲が執拗に行われ続ける。ソルジェニーツィンの国外追放やロストロポーヴィチ夫妻の市民権剥奪が物議を醸し、相次ぐ亡命者が不条理な管理と不自由を訴えることで、ソ連文化に対する否定的イメージが強まり、同時代的関心は低下する。その最中にヴォルコフ編『ショスタコーヴィチの証言』が出現し、ソ連文化に対する関心は活性化される。こうした状況について、ソ連のコスコンツェルト(国立演奏会組織)や作曲家同盟などの史料収集に努め、既存のニ次資料を読み直し、新たな文献や過去3年の研究と比較検討して、鮮明に浮かび上がらせることを試みた。得られた知見を元に、様々な研究発表を行った。米ソの共通性にも着目しながら、教養主義国家としてのソ連の有り様を芸術音楽から考察したのが「芸術音楽から見たソ連:雪どけ期のショスタコーヴィチを中心に」(4月23日、東京大学)である。冷戦の中でのソ連の音楽界の状況については、「後期ソ連の音楽界のいくつかの特質をめぐって」(9月6日、東京藝術大学)、「後期ソ連の前衛的芸術音楽にみる普遍性と個別性:アルヴォ・ペルトを中心に」(1月29日、「ポスト・クリョーヒン・スタディーズ」)、および「ストラヴィンスキー訪ソ(1962)とその周辺」(3月16日、東京藝術大学)において取り上げた。それらについては、今後論文などの形で公表していく所存である。冷戦のさなか、米ソを軸とする東西両陣営は、音楽の領域でも戦いの火花を散らしていた。ソ連では、西側の前衛性は退廃として非難され、調性音楽に象徴される東側の保守性は文化統制の象徴として酷評され続けた。しかし、雪どけ期以降、両陣営は、対立し続けながら、交流を行った。そこでみられる対立は、古典的な芸術に対して敬意を払う、共通の価値観を基礎としたものだった。予定していた資料収集はおおむね進んでいる。ただ、研究発表に反映できていない側面があるため、平成27年度の課題としたい。本年度は予定通り、「停滞の時代」の研究を実施する。ただし、これまでの研究から、「停滞の時代」はソ連音楽界に関しては必ずしも「停滞」の時代ではないことが明らかになっている。このため、時代区分は変えないとしても、その名称については変更の余地がある。適切な名称を模索しながら、研究を進めていきたい。他方、昨年出版されたニコラス・ナボコフの評伝は、今後の研究の基礎となりうるもので、特にアメリカでの調査の方法を考えるうえで重要と判断している(Vincent Giroud, Nicolas
結核菌由来ヒトT細胞エピトープの同定とマルチエピトープDNAワクチンの開発

1)H2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスの作製日本人に多いHLA-A^*2402を発現するH2クラスI KO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスを作製中である。HLA-A^*2402発現プラスミドをβ2-ミクログロブリンKOマウス胚に導入し、PCR法によりHLA-A^*2402トランスジェニックマウスのスクリーニングをし、遺伝子の導入を確認した1系統を維持している。そのマウスに現在MPT51遺伝子を免疫している。2)MPT51CTLエピトープの検索MPT51については、HLA-A^*0201トランスジェニックマウスへのMPT51 DNAワクチン投与により、MPT51 p51-60ペプチド特異的IFN-γ産生を認め、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CTLエピトープである可能性を示した。このことは、この実験系がCTLエピトープの同定に有効であることを示すものである。3)HLA-A^*0201陽性の健常者末梢血中のMPT51 p51-60ペプチド特異的T細胞の検出そこで、BCG接種履歴のあるHLA-A^*0201陽性の健常者末梢血中のMPT51 p51-60ペプチド特異的メモリーT細胞の検出を試みた。その結果、2人のHLA-A^*0201陽性健常者末梢血を1週間このペプチドで刺激した後、MPT51 p51-60ペプチド/HLA-A^*0201テトラマー陽性CD8^+T細胞の増殖を認めた。また、1人のHLA-A^*0201陽性健常者末梢血をこのペプチドで刺激したところ、高いIFN-γの産生を認めた。これらのことは、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CD8^+T細胞エピトープであることを示している。1)DNAワクチン用プラスミドの構築結核菌由来Ag85A,Ag85B,MPT51,ESAT-6,HSP65遺伝子を入手または結核菌ゲノムよりPCR法により単離した。これらの遺伝子を用いてDNAワクチン用発現プラスミドを構築した。2)H2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスの作製H2クラスIKO/HLA-A^*0201トランスジェニックマウスは入手済みであり、日本人に多いHLA-A^*2402を発現するH2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスは作製中である。HLA-A^*2402発現プラスミドをβ2-ミクログロブリンKOマウス胚に導入し、PCR法によりH2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスのスクリーニングをしたところ5系統のマウスで遺伝子の導入を確認した。MPT51については、H:LA-A^*0201トランスジェニックマウスへのMPT51DNAワクチン投与により、MPT51p51-60ペプチド特異的IFN-γ産生を認め、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CTLエピトープである可能性を示した。

このことは、この実験系がCTLエピトープの同定に有効であることを示すものである。4)MPT51p51-60ペプチドの解析i)細胞傷害試験MPT51DNAワクチン免疫脾細胞をエフェクター細胞、ペプチドパルスT2細胞(HLA-A^*0201)を標的細胞としてクロミウム遊離法で細胞傷害試験を検討中である。ii)ペプチド結合試験MPT51p51-60ペプチドが実際にHLA-A^*0201分子に結合することを、ヒト由来のTAP欠損培養細胞であるT2細胞を用い検討中である。iii)HLA-A^*0201陽性の結核患者末梢血中のMPT51p51-60ペプチド特異的T細胞の検出さらに国立天竜病院の協力のもとに、HLA-A^*0201陽性の結核患者末梢血を採取しペプチド特異的なIFN-γ産生があるかどうか検討中である。1)H2クラスI KO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスの作製日本人に多いHLA-A^*2402を発現するH2クラスI KO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスを作製中である。HLA-A^*2402発現プラスミドをβ2-ミクログロブリンKOマウス胚に導入し、PCR法によりHLA-A^*2402トランスジェニックマウスのスクリーニングをし、遺伝子の導入を確認した1系統を維持している。そのマウスに現在MPT51遺伝子を免疫している。MPT51については、HLA-A^*0201トランスジェニックマウスへのMPT51 DNAワクチン投与により、MPT51 p51-60ペプチド特異的IFN-γ産生を認め、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CTLエピトープである可能性を示した。3)HLA-A^*0201陽性の結核患者末梢血中のMPT51 p51-60ペプチド特異的T細胞の検出さらに国立天竜病院の協力のもとに、HLA-A^*0201陽性の結核患者末梢血を採取しペプチド特異的なIFN-γ産生があるかどうか検討した。しかし、結核患者末梢血では、明らかなMPT51 p51-60ペプチド特異的メモリーT細胞の検出はできなかった。これは、結核患者末梢血では十分な新鮮血を採取するのが困難であること、老齢者が多いこと等の理由が考えられた。4)HLA-A^*0201陽性の健常者末梢血中のMPT51 p51-60ペプチド特異的T細胞の検出そこで、BCG接種履歴のあるHLA-A^*0201陽性の健常者末梢血中のMPT51 p51-60ペプチド特異的メモリーT細胞の検出を試みた。その結果、2人のHLA-A^*0201陽性健常者末梢血を1週間このペプチドで刺激した後、MPT51 p51-60ペプチド/HLA-A^*0201テトラマー陽性CD8^+T細胞の増殖を認めた。また、1人のHLA-A^*0201陽性健常者末梢血をこのペプチドで刺激したところ、高いIFN-γの産生を認めた。これらのことは、このペプチドがHLA-A^*0201拘束性CD8^+T細胞エピトープであることを示している。1)H2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスの作製日本人に多いHLA-A^*2402を発現するH2クラスIKO/HLA-A^*2402トランスジェニックマウスを作製を試みた。HLA-A^*2402
閉経女性における過食肥満の誘発，脂肪性肝炎の発症と肝発癌のリスク増大の病態解明

p62:Nrf2遺伝子二重欠損(DKO)マウスはヒトNASHに類似した表現型を呈する.DKOマウスにおけるNASHの表現型に関する性差を検討した.8週齢では♂,♀ともに正常な組織像であった.30週齢のDKO♂マウスでは脂肪沈着,線維化が生じていたのに対し,♀マウスでは脂肪沈着は♂と比較し軽度であり,線維化は認められなかった.50週齢では♀においても大滴性の脂肪沈着を認めたが,炎症・線維化は♂と比較し軽度であった.DKO♀マウスにおけるNASH肝病変は♂マウスと比較し軽度であった.これには女性ホルモンによる過食肥満の抑制,LPSによる肝炎症応答の抑制が重要であると考えられた.非アルコール性脂肪性肝疾患(NAFLD)は,明らかな飲酒歴がないが肝臓に脂肪が沈着し,進展した病態として炎症,線維化,発癌を伴う疾患である.NAFLDの罹患頻度には性差があり,これには女性ホルモンの作用低下が関係していると考えられている.本研究で用いたp62遺伝子欠損(p62-KO)マウスは,過食肥満やNAFLDなどのヒトメタボリック症候群に類似した表現型を呈する.p62-KOマウスの体重増加,摂餌量には性差があり,オスでは野生型(WT)マウスに比べ若齢時より体重と摂餌量が著明に増加するのに対し,メスでは25週齢以降の高齢時になってから体重増加が見られる.しかし,p62-KOマウスの表現型の性差に着目したNAFLDに関する解析は行われていない.本研究では,メスp62-KOマウスのNAFLD病態に着目し,NAFLDに対する女性ホルモンの抑制効果について検討することを目的とした.まず,25,35,50週齢時のメスp62-KOマウスにおける血中エストラジオール(E2)濃度を測定した.次に肝病理組織所見の性差について解析した.さらに,卵巣を摘出(OVX)したp62-KOマウスの肝病理組織所見,摂餌量,体重,血液生化学項目を測定した.また,インスリン感受性,耐糖能について評価した.メスp62-KOマウスにおける血中E2濃度は25週齢時に比べ,35週齢以降で有意に低下していた.また,オスマウスに比べ,メスp62-KOマウスでNAFLD進展が抑制されていた.p62-KO-OVX群では,25週齢で偽手術群に比べ体重が著明に増加し,肝脂肪化,炎症が進行していた.さらに,35週齢のp62-KO-OVX群ではインスリン抵抗性及び耐糖能異常が認められた.これらの結果より,p62-KOマウスにおけるNAFLD病態の発症はヒトと同様に性差があり,女性ホルモンにより抑制されることが強く示唆された.本研究の研究実績について,国内の学会に加えて国際学会(APASL2016)にても口演にて発表した.非アルコール性脂肪性肝炎(Non-alcoholic steatohepatitis : NASH)は肝硬変や肝癌に至ることもあり、予防や早期治療が重要である。さらに、女性は閉経後にNASHの罹患率が急増することが分かっている。これには女性ホルモンの分泌低下が関わっているとされているが、その詳細な機序は明らかではない。p62:Nrf2遺伝子二重欠損(DKO)マウスは、通常食飼育下で過食による肥満、インスリン抵抗性、2型糖尿病、高レプチン血症を背景にNASHを自然発症するモデルマウスである。DKOマウスのNASH発症には、Kupffer細胞,腸管上皮の各異常とそれらの連関によるLPSに対する生体の防御機構の脆弱化と炎症反応の増幅が重要な因子であることが、♂マウスを用いた解析で明らかになっているが、♀マウスの病態については解析が行われていなかった。そこで本研究では、DKOマウスのNASH病態の性差を解析し、女性ホルモンの果たす役割について検討した。体重、摂餌量,体組成の結果より、DKO♂マウスでは過食肥満が若齢時から徐々に進行するのに対し、♀マウスでは30週齢以降急激に進行した。肝臓の病理組織所見より、30週齢時点でのDKO♀マウスの脂肪沈着、炎症性細胞浸潤、線維化は♂と比べ軽度であった。肝臓の炎症性サイトカインに関して、TNFα、IL-1βの発現量は、8週齢時点で♀マウスで低値であった。一方、耐糖能、腸管透過性、血清、糞便中LPS量に関しては性差が認められなかった。以上より、DKO♀マウスのNASH病態はオスと比較し軽度であることが明らかとなった。その機序として、女性ホルモンが過食抑制や炎症抑制に働くことが考えられた。本モデルマウスはヒトと同様な性差が見られる優れたモデル動物である。性差が生じるメカニズムを解明することで、NASHの新しい治療法の開発に繋がる可能性がある。非アルコール性脂肪性肝炎の発症に関して,DKO♀マウスは、♂マウスと比べ過食による肥満、肝臓の脂肪沈着、炎症性細胞浸潤、線維化が軽度であった。その背景には、女性ホルモンが過食抑制作用を介した肥満発症の抑制や、腸管から流入するLPSが惹起する炎症の抑制に関わっていることが推測された。女性ホルモンの病態に与える影響が解明されてきた.女性は閉経後に非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)の罹患率が増加する。これには女性ホルモンの分泌低下が関与するとされる。

我々の作成したp62:Nrf2遺伝子二重欠損(DKO)マウスは、過食肥満とインスリン抵抗性を呈し、脂肪沈着,炎症,線維化を伴う肝病変を形成し、ヒトNASHに類似した表現型を呈する。DKOマウスにおけるNASHの表現型に関する性差を検討し、さらに女性ホルモンの効果について検討した。DKOマウスの8、30、50週齢にて、体重、体組成、摂餌量、肝病理組織、肝炎症性サイトカイン、腸管透過性、血液生化学,血清レプチン濃度、血液・糞便中LPS量を測定した。摂餌量、体重、内臓脂肪量:DKO♂マウスは若齢時から徐々に増加するのに対し、♀マウスは若齢時では野生型と同程度であり、30週齢以降に急激に増加した。レプチン濃度:8週齢時点ではDKO♀は♂と比較し有意に低値であったが、30週齢時点では♂と同程度になった。肝病理組織所見:8週齢では♂、♀ともに正常な組織像であった。30週齢のDKO♂マウスでは脂肪沈着、線維化が生じていたのに対し、♀マウスでは脂肪沈着は♂と比較し軽度であり、線維化は認められなかった。50週齢では♀においても大滴性の脂肪沈着を認めたが、炎症・線維化は♂と比較し軽度であった。肝機能検査:DKO♂では30週齢においてAST、ALPが高値であり、肝細胞障害の悪化が示唆された。腸管透過性:8週齢にて♂、♀ともに亢進しており、血清・糞便中LPS量も♂と♀で差は認めなかった。肝炎症性サイトカイン: TNFalpha、IL-1betaのmRNA発現量はDKO♂は8週齢で増加していた。♀は8週齢では野生型と同程度であり、30週齢以降に増加を認めた。DKO♀マウスにおけるNASH肝病変は♂マウスと比較し軽度であった。この背景には女性ホルモンによる過食肥満の抑制、LPSによる肝炎症応答の抑制が重要であると考えられた。p62:Nrf2遺伝子二重欠損(DKO)マウスはヒトNASHに類似した表現型を呈する.DKOマウスにおけるNASHの表現型に関する性差を検討した.8週齢では♂,♀ともに正常な組織像であった.30週齢のDKO♂マウスでは脂肪沈着,線維化が生じていたのに対し,♀マウスでは脂肪沈着は♂と比較し軽度であり,線維化は認められなかった.50週齢では♀においても大滴性の脂肪沈着を認めたが,炎症・線維化は♂と比較し軽度であった.DKO♀マウスにおけるNASH肝病変は♂マウスと比較し軽度であった.これには女性ホルモンによる過食肥満の抑制,LPSによる肝炎症応答の抑制が重要であると考えられた.本年度において,p62-KOマウスにおけるNAFLD病態の発症はヒトと同様に性差があり,女性ホルモンにより抑制されることが強く示唆された.メスp62-KOマウスは閉経後の女性におけるNAFLD病態解明に有用なモデルであると考えられた.今後においては,エストラジオールの有するNAFLD病態の発症と進展における抑止効果の分子メカニズムを解明していく.p62:Nrf2遺伝子二重欠損(DKO)マウスに関するNrf2ノックインマウスを作製し,女性ホルモンが有するNrf2の賦活化作用とそれによる病態改善効果について検証して行く.29年度が最終年度であるため、記入しない。肝臓外科学29年度が最終年度であるため、記入しない。
遅延制約のあるサービスシステムの待ち行列モデルを用いた性能解析

本課題では,利用者の待ち時間に制約のあるサービスシステムについて,待ち行列モデルを用いた性能解析を行い,待ち時間制約がシステム性能に及ぼす影響の解明を目的としている.2011年度は主に,待ち行列モデルの漸近解析を行うことにより,利用客のサービスを受け始めるまでの待ち時間分布に対する理論的な近似式を導いた.2012年度は,待ち客の退去率に対するマルコフ的な近似を行うことにより,システム性能の近似的な評価方法を考案した.本研究では,利用者の遅延制約があるサービスシステムについて,待ち行列モデルを用いた性能解析を行い,遅延制約がシステム性能に及ぼす影響を解明した。さらに,数値的に扱いやすい近似モデルを構築することにより,システム性能の近似的な評価方法を提案した.最終年度の成果は以下の通りである.(1)単一窓口モデルにおける系内数分布の導出:M/G/1+G待ち行列モデルの系内数分布について,ポアソン確率関数と仮待ち時間分布の畳み込み表現によって得られることを証明した.このために,仮待ち時間と実待ち時間が分布の意味で一致することを,サンプルパスの比較により示した.ここで先行研究においては,本研究のように仮待ち時間分布と実待ち時間分布の同一性については着目されてこなかった.そのために本結果は,これまでに待ち人数分布の導出が難しいとされてきた多くのモデルへ適用可能であることを示唆している.(2)複数窓口モデルの近似解析:PH/PH/c+G待ち行列モデルについて,途中退去過程のマルコフ近似を行い,数値的に扱いやすい近似モデルを構築した.ここでは,近似モデルが状態依存型の準出生死滅過程であることを利用し,性能評価量の数値計算アルゴリズムを導いた。また,提案したモデルの近似精度をシミュレーションとの比較実験により数値的に確認した.ここでは,待ち客がサービスを受け始めるまで待つことのできる時間の分布の裾が軽い場合には,近似モデルの精度は高く,裾が重い場合には精度が望めないことが示された.本課題では,利用者の待ち時間に制約のあるサービスシステムについて,待ち行列モデルを用いた性能解析を行い,待ち時間制約がシステム性能に及ぼす影響の解明を目的としている.2011年度は主に,待ち行列モデルの漸近解析を行うことにより,利用客のサービスを受け始めるまでの待ち時間分布に対する理論的な近似式を導いた.2012年度は,待ち客の退去率に対するマルコフ的な近似を行うことにより,システム性能の近似的な評価方法を考案した.利用客の待ち時間に対する制約がサービスシステムの性能へ与える影響について、理論研究を行った。このようなシステムに対する基本的な待ち行列モデルでさえ、確率モデルとして各利用者の待ち時間に関する情報を必要とし、モデルの推移構造は複雑である。そのため、システムの性能評価量を解析的に扱いやすい表現により導出することは困難である。そこで、以下の3点について研究を進め、成果を挙げた。(1)単一待ちスペースをもつ待ち行列モデルの漸近解析を行うことにより、利用者の待ち時間分布について理論的な近似式を導いた。ここで得られた近似式は、解析的に扱いやすい形であることが確認されただけでなく、数値的な近似精度の保証が確認された。(2)時間制約に起因する待ち客の退去過程に対して、任意時間の退去率のマルコフ的な近似を行った。特に、本手法を複数待ちスペースをもつ待ち行列モデルへの適用を行い、近似モデルの精度の高さを数値的に示した。さらに、この近似モデルが実際の生産システムへ応用可能であることを述べた。(3)時間制約のみならずサービス窓口に休暇があるモデルの性能解析を行った。窓口の休暇があるモデルは、ポーリングシステムや窓口故障のあるシステムを表すことができ、モデルとしての汎用性は高い。ここでは、モデルの定常分布を導出しただけでなく、時間制約や休暇がない通常の待ち行列モデルと比較して、モデルの確率的振る舞いが定常分布の裾確率の意味で大きく異なることを示した。研究計画に挙げた項目の内、およそ5割については結果が得られていることから、進捗状況は順調であるといえる。(1)遅延制約のある待ち行列モデルにおける途中退去確率の定性的特性について理論解析を行う。このためには、モデルのサンプルパスの比較によるアプローチが有効であると予想される。よって、この手法に精通しているNational Dong Hwa大学のWang教授と協力し研究を進める。(2)待ち客の途中退去率に対するマルコフ近似について、より一般的な確率的仮定の下での適用を試みる。この近似モデルの精度を検証するため、シミュレーションとの数値比較実験を実施する。(3)本研究で対象とする待ち行列モデルは全て状態に依存した推移をもつ。そこで本研究を通して、状態依存型推移をもつマルコフ過程の解析方法について試行的研究を行う。研究成果を発表するため、国内および国外の会議にそれぞれ2回出席する計画を立てている。そのための旅費として研究費を使用する予定である。また、研究を進める上で必要な書籍の購入、論文の印刷などについても研究費を使用する。
抗腫瘍性アルカロイドおよび脳機能改善を志向した先導化合物の合成-活性発現機構解明へのアプローチ-

I.抗腫瘍性アルカロイド、マンザミンAの合成1.シロキシジエンとジヒドロピリジノン類をジエノフィルとするDiels-Alder反応を基本戦略とした、位置および立体選択的な多置換ヒドロイソキノリン環の合成法を確立した。2.上記で開発した方法を用いてマンザミンA合成の重要鍵中間体であるヒドロイソキノリン誘導体、三環性化合物3を合成した。更に四環性中間体5の合成に成功した。II.抗腫瘍性アルカロイド、ダイナミシンAの合成上記で開発した合成法の発展系として新規な構造と強力な抗腫瘍性を有するダイナミシンAの鍵中間体、イソキノリン環部4の合成法を確立した。即ち2と6のDiels-Alder反応(EtAlCl_2触媒)で7を合成、続く過酸酸化、加熱によって4を高収率で得た。またこの反応に及ぼす置換基効果はPM3等による分子軌道エネルギー計算からも支持されることが確かめられた。更に数段階の官能基変換、保護基の選択、エンジイン基の導入等を検討し、8および9の合成を達成した。I抗腫瘍性アルカロイド、マンザミンAの合成1)シロキシジエンとジヒドロピリジノン類をジエノフィルとするDiels-Alder(D-A)反応を基本戦略とした、位置および立体選択的な多置換ヒドロイソキノリン環の合成法を確立した。即ち、Danishefsky Diene 2(R^2=OMe,R^3=H)と【chemical formula】の加熱により高収率でDA付加体が得られることが判った。2)上記で開発した方法を用いてマンザミンA合成の重要鍵中間体であるヒドロイソキノリン誘導体、三環性化合物3を合成した。II抗腫瘍性アルカロイド、ダイナミシンAの合成上記で開発した合成法の発展系として新奇な構造と強力な抗腫瘍活性を有するダイナミシンAの鍵中間体、イソキノリン環部4の合成法を確立した。即ち、2(R^2=R^3=H)と5(R=H)をEtAlCl_2触媒下に反応させると6(R=H)が、また2(R^2=Me,R^3=H)と5(R=MeO)を反応させると6(R=MeO)が得られた。6を過酸(MCPBA)で酸化後、加熱すると4が高収率で得られることが判った。I.マンザミンA全合成に向けて1.前年度シロキシジエンとジヒドロピリジノンのDiels-Aldar反応によるヒドロイソキノリン型3環性中間体4の合成に成功したので、これより増環した4環性中間体3の構築を検討し目的を達した。更にL-セリンよりキラルなジエノフィル7の合成法を2つのルート、即ち1)有機金属試薬9を用いるカップリング反応と2)保護基を有するセリンアルデヒドとピペリドンのアルドール反応による合成法を検討し、7を得るルートを確立した。一方、C_1ユニットを有するシロキシジェンの合成を種々検討した。2.マンザミンC、トランス異性体、5,6,7,8,11員環を有する類縁体、更にα位メチルおよびエチル置換誘導体の合成を行い、各種の癌細胞に対する細胞毒性を検討した。P-388に対してはこれら合成品がマンザミンCとほぼ同程度の活性を示すことが明らかとなった。II.ダイナミシンAの合成に向けて前年度ダイナミシンAの鍵中間体であるイソキノリン環部の構築法を確立した。今年度はエンジイン基の導入を種々検討し成功したが環化には到らなかった。
生物学的世界観とドイツ文芸クライス-ヘッケル「一元論」の射程-

ロシアを除くヨーロッパで、ドイツほど自然科学と精神科学の境界が曖昧な国はない。ドイツ人が合理と非合理、啓蒙と蒙昧、光と闇の識閾を容易に越境してしまうのはなぜか。本研究はこの問題に「一元論」という補助線を引き、このような現象に一つの解答を与えようとした。本研究では具体的には、生物学者で、ドイツにおけるダーウィン進化論の熱烈な支持者であったエルンスト・ヘッケルの自然哲学、「一元論」が吟味され、その影響を受けた文学運動ならびにその他の諸運動の思想と行動を分析された。二元論を否定してそれを一つの原理に統一する場合、そこには二つの可能性がある。つまり、二元論的対立の一方の側にのみ立つ立場と、両対立を止揚した立場に立つ場合である。前者の場合は唯物論(物質を唯一の実体とした場合)ないし唯心論(精神を唯一の実体とした場合)へ収斂し、後者の場合は例えばエルンスト・マッハにおけるように、実体を形而上学であるとして退け、存在論的固定を拒否して認識論のみに限定するような一元論を考えることができる。しかし一元論の究極的な特徴は、その形而上学への反転にある点を指摘したことが、本研究で最も重要な成果といえる。「精神と物質」が一元論的にとらえられるならば、精神が物質化されるという実証的自然科学の裏面には、必ず物質が精神化される、あるいは物質に霊魂が吹き込まれるという賦霊論が存在し、また「心と身体」が一元論的にとらえられるならば、そこには心身合一論が、つまり精神は肉体であるという実証的自然科学の裏面に、肉体は精神であるという、一種の身体文化(Korperkultur)への、肉体の魂化への、SeeleとKorperの未分という領域への扉が開かれているのである。一元論はすなわち、特に自然救済論を機軸とするネオ・ロマン主義的な神秘主義と親和性があると言わなくてはならないのである。1.「一元論」の系譜をたどる古代エレア学派のパルメニデス、その弟子のゼノンからデモクリトスの唯物論的一元論を経てエピクロスにいたる系譜と、エピクロスに対抗するストア派の議論、またグノーシス派の一元論を経たプロティノスの思想をたどった。中世期に関しては擬ディオニュシオス・アレオパギテースからヤーコプ・ベーメ、そしてジョルダーノ・ブルーノ、近世のスピノザ、ライプニッツ、さらにドイツ観念論のシェリングにいたる一元論的思考を概観した。2.エルンスト・ヘッケルの「一元論」の考察スピノザ主義者ゲーテの形態学がヘッケルの主著『生物の一般形態学』に及ぼした深甚な影響を分析し、ゲーテとダーウィンの統合としてのヘッケル「一元論」の骨格が明らかになった。またヘッケル晩年の講演や論文における、理性宗教としての「一元論」に注目し、ゲーテの汎神論との類似性が明確になった。なお申請者は、その著書『「青年の国」ドイツとトーマス・マン』(2005年11月30日発行)において、ヴァンダーフォーゲルを始めとする「ドイツ青年運動」における自然回帰とその非合理性への衝動の背景にあるヘッケルの一元論的思想に言及し、「ドイツ青年運動」の思想的指導者たちである教育者のグスタフ・ヴィネケンやルートヴィヒ・グルリット、出版者オイゲン・ディーデリヒスや保守的な文化サークルである「デューラー同盟」の主催者フェルディナント・アヴェナリウスらが、ことごとくヘッケルの信奉者であったことを解明した。

3.「フリードリヒスハーゲン・クライス」と「新しい村」「フリードリヒスハーゲン・クライス」に集った文筆家のなかで最も影響力の大きかったヴィルヘルム・ベルシェは、ヘッケルの愛弟子と言えるが、ベルシェとゲルハルト・ハウプトマンの交流、またベルシェの著作が「徹底自然主義」の作家ヨハネス・シュラーフやアルノー・ホルツに与えた影響などを跡付けることができた。さらにハルト兄弟を中心とするボヘミアン集団としての「フリードリヒスハーゲン・クライス」が「新しい村」を創生する過程を、当時の文献から探ることができた。これらの知見は来年度に相次いで活字化する予定である。前年度はヘッケルの一元論が同時代の思想や文学、あるいは造形芸術に与えた影響に焦点を当てたが、当該今年度はヘッケルの思想の由来に注目し、なかんずくスピノザとゲーテの自然観がヘッケルに及ぼした決定的なインパクトについて研究をすすめた。またヘッケルがゲーテをラマルク、ダーウィンに通じる進化論の先駆者と位置づけていることの是非について考察し、ヘッケルがゲーテの原植物・原動物の理説を誤読していることを論じた。次にヘッケルの最も多くの読者を獲得した著書である『宇宙の謎』を分析し、その実証主義自然科学に裏打ちされた唯物論的世界観と、反形而上学、なかんずくキリスト教からの離反の様相を観察した。しかし興味深いのは、ヘッケルがキリスト教的な人格神を徹底的に否定する一方で、ある種の自然神性論を要請しているという事実である。今年度後半は特にこの逆説的な神の要請に注目し、このように自然にある種の救済機能を負わせる傾向がドイツの思想的伝統においては決して異端ではないことを、口頭発表において論じた。最後に、ヘッケルの薫陶を受け、通俗自然科学作家として成功したヴィルヘルム・ベルシェの綱領的な論文「ポエジーの自然科学的基盤」を分析し、唯物論的な生物学的世界解釈がポエジーの領域へどのように浸透し得るのかを考察した。アルノー・ホルツやヨハネス・シュラーフ、ゲルハルト・ハウプトマンやグスタフ・ランダウアー、ルー・アンドレアス・ザロメらの名を挙げねばならない、自然主義とリアリズムを巡るこの議論に関しては、その端緒となる部分について、同じく口頭で発表した。1.ヘッケルの「生物学的一元論」と同時代に、他の原理を用いて世界を一元的に解釈する方法を提示したのが物理学者のエルンスト・マッハである。本年度はマッハの「要素一元論」を検討しながら、本来世界を一元的に解釈しようとする一元論が複数存在する事実を指摘し、「一元論に一元論はありえない」という原理的茅盾を指摘した。また、20世紀の世界がますます多元化、多極化、複雑化する中で、その重荷から開放されるために一元論が求められたのではないか、という分析を行った。2.ヘッケル一元論の影響が文学にどのような影響を及ぼしたのかについて、フリードリヒスハーゲン文芸クライスの中心人物の一人であるヴィルヘルム・ベルシェの綱領的論文「ポエジーの自然科学的基盤」を詳細に分析し、ベルシェの言う自然科学的ポエジーとは何を意味するのかを考察した。べルシェはフランス自然主義のゾラを意識しながらも、病的なものが重視されるフランス自然主義とは違う道を模索しようとしていた。楽観的な進化論に基づいた「健康なリアリズム」を求めるベルシェの理論はしかし、単なる机上のものにとどまるのではないか。少なくともベルシェ自身に彼の理論を体現したポエジー作品は見当たらない。「健康なリアリズム」に高いポエジーの質を求めることがはたして生産的かどうか、深い疑義を呈してベルシェを批判した。3.ヘッケルではなくマッハ一元論は、のちのヴィーナー・モデルネの作家たちに深甚な影響を及ぼした。
造血幹細胞に特異的に発現し機能する新規核因子NFREDの機能解析

造血幹細胞は高い再生活性を持つため白血病の治療に用いられているが、生体外で造血幹細胞を、その再生活性を保持したまま維持する事は困難であり、特殊な分裂制御機構の存在が示唆される。これまでに申請者は、NFREDは造血幹細胞で発現し、その分裂に必須である事を明らかにしてきた。本研究では造血幹細胞の分裂機構におけるNFREDの機能を解析する目的で、(1)NFREDによる遺伝子発現の調節機構の解明、(2)NFREDの可視化、(3)NFREDによる造血幹細胞分裂の誘導を目標にした。(1)β1インテグリン遺伝子のプロモーター内のNFRED応答領域の同定β1インテグリン遺伝子のプロモーター領域の遺伝子断片をNFRED蛋白と混合し、NFREDと共沈したDNA断片の配列を解析したが、解析した50の配列中にコンセンサス配列は見出せなかった。従って、NFRED単独では特異的なDNA配列を認識していない事が示唆された。(2)NFRED遺伝子のプロモーターの同定NFRED遺伝子の上流18kbpのゲノム断片をレポータープラスミドに組換えて、そのプロモーター活性を解析したところ、5kbpのゲノム領域に強い転写活性を検出した。この領域をGFP発現プラスミドに組換えた遺伝子を血液細胞に遺伝子導入した。'その結果、この組換えプラスミドのレポーター活性が、造血幹細胞以外の成熟血液でも検出され、幹細胞特異的な遺伝子発現にはさらに未同定の転写抑制領域が必要である事が示唆された。(3)NFREDの強制発現が造血幹細胞の自己複製に及ぼす影響の解析NFREDとこれを安定化させるNFRED-binding Protein 1を造血幹細胞にレトロウイルスベクター系で遺伝子導入したが、造血幹細胞の自己複製に有意な影響は観察されなかった。内因性のNFREDは大部分が細胞核に局在するが、強制発現させたNFREDのほとんどが細胞質に存在しており、この結果からNFREDを細胞核で機能させるためにはNFRED-binding protein 1以外の未同定の因子が必要であることが示唆された。造血幹細胞は高い再生活性を持つため白血病の治療に用いられているが、生体外で造血幹細胞を、その再生活性を保持させたまま維持する事は困難であり、特殊な分裂制御機構の存在が示唆される。これまでに申請者はNFREDは造血幹細胞で発現し、その分裂に必須であることを明らかにしてきた。本研究では造血幹細胞の分裂機構におけるNFREDの機能を解析する目的で、(1)NFREDによる遺伝子発現の調節機構の解明、(2)NFREDの可視化、(3)NFREDによる造血幹細胞分裂の誘導を目標にしている。・β1インテグリン遺伝子のプロモーター内のNFRED応答領域の同定ゲノムライブラリーからβ1インテグリン遺伝子のプロモーターを単離し、様々な遺伝子長のプロモーターをレポーター遺伝子の上流に組み換えたプラスミドを作成した。これらを造血幹細胞に遺伝子導入しプロモーター活性を測定した。その結果、約5kbp上流のプロモーター領域に転写活性があることを明らかとした。しかし、その活性は低く、さらに上流の領域が必要だと思われる。来年度はこの点を改善し、β1インテグリン遺伝子のプロモーター領域中のNFRED結合領域を同定する。・NFRED遺伝子のプロモーターの同定NFRED遺伝子のプロモーター領域はBACクローンから同定した。前述と同様にレポータープラスミドを作製し、ES細胞に遺伝子導入し、各々のプロモーター活性を測定した。その結果、約5kbp上流のプロモーター領域が幹細胞で特異的に転写活性がある事を明らかにした。(3)NFREDの強制発現が造血幹細胞の自己複製に及ぼす影響の解析NFREDとこれを安定化させるNFRED-binding protein 1を造血幹細胞に遺伝子導入したが、造血幹細胞の分裂能に差は見られなかった。遺伝導入効率が低いため、効果が検出されない可能性があるので、来年度は遺伝子導入方法を変えて再度試みる。(3)NFREDの強制発現が造血幹細胞の自己複製に及ぼす影響の解析

NFREDとこれを安定化させるNFRED-binding Protein 1を造血幹細胞にレトロウイルスベクター系で遺伝子導入したが、造血幹細胞の自己複製に有意な影響は観察されなかった。内因性のNFREDは大部分が細胞核に局在するが、強制発現させたNFREDのほとんどが細胞質に存在しており、この結果からNFREDを細胞核で機能させるためにはNFRED-binding protein 1以外の未同定の因子が必要であることが示唆された。
Er:YAGレーザー併用によるサイトカイン療法の象牙質および歯周組織再生効果

hPDL細胞においてEr:YAGレーザー照射により組織再生に関わる細胞増殖や分化を制御する重要なサイトカインであるTGF-βが活性化された。しかしながら,直接活性化はされず,その活性化にはMMP-2,MMP-3,MMP-8の遺伝子発現が関与し,HSP90αの関与も示唆された。ブタ歯髄組織に対するEr:YAGレーザー照射はALP活性を上昇させる効果を有し,53,45,40 kDaのMMP活性や33 kDaのnon-MMP活性が認められた。ブタ歯髄組織由来の不死化細胞(PPU-7細胞)に対するレーザー照射では,MMP-2遺伝子発現の増強が認められ,TGF-β活性への関与が考えられた。ヒト歯根膜由来培養細胞(hPDL細胞)を用い, Er:YAGレーザー(レーザー)未照射・照射群に対して象牙質タンパク質,エナメルタンパク質及びトランスフォーミング成長因子β(TGF-β)を添加後,培養を行いアルカリフォスファターゼ(ALP)活性を測定してレーザー照射がhPDL細胞に与える作用を確認した。また, TGF-βI型受容体の阻害剤であるSB431542(SB)を未添加または添加したhPDL細胞にレーザー照射を行い培養後, ALP活性の測定及びMTSアッセイを行ってレーザー照射に対するTGF-β活性の影響及び細胞増殖能を評価した。さらに,レーザー照射によるTGF-βの活性化について調べるため, latent TGF-βにレーザーを照射後hPDL細胞に添加し,培養後にALP活性の測定を行った。その結果,レーザーをhPDL細胞に対し照射することによりALP活性が上昇することから硬組織形成能が促進する可能性が示唆されたが,レーザー照射が直接的に細胞内に存在するlatent TGF-βを活性化しないことが示唆された。一方,歯髄組織においては,ブタ歯髄組織にレーザーを照射後タンパク質を抽出した。レーザー未照射群及び照射群のタンパク質試料をhPDL細胞に添加後, ALP活性を測定してレーザー照射の有無による歯髄組織中のTGF-β活性を評価した。また,抽出タンパク質の変化やマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)活性をSDS電気泳動及びザイモグラフィーで比較検討した。その結果,歯髄組織に対するレーザー照射はTGF-β及びプロテアーゼの活性化をもたらすことが示唆された。平成27年度の研究実施計画に従いブタ永久歯歯胚から象牙質タンパク質及びエナメルタンパク質の抽出,分離,精製を行った。ヒト歯根膜由来培養細胞(hPDL細胞)を用い, Er:YAGレーザー(レーザー)未照射・照射群に対して象牙質タンパク質,エナメルタンパク質及びトランスフォーミング成長因子β(TGF-β)を添加後,培養を行いアルカリフォスファターゼ(ALP)活性を測定し,レーザー照射がhPDL細胞に与える作用を確認した。歯根膜細胞や歯髄組織に対するレーザー照射はTGF-βを活性化する作用があり,硬組織形成能を促進する作用があることを確認でき,その作用は各種MMPが深く関わっていることが判明した。以上のことから,おおむね順調に進展していると考える。歯根膜細胞(hPDL細胞)においてEr:YAGレーザー照射後にトランスフォーミング成長因子β(TGF-β)受容体阻害剤であるSB431542(SB)を加えることによりALP活性が低下したことからその作用がTGF-βによるものであることが示唆されたが,レーザー照射が直接細胞内に存在するlatent TGF-βを活性化しないことからlatent TGF-βの活性化に関わり合いの深いマトリックスメタロプロテアーゼ(MMP)のレーザー照射による活性化について調べた。Er:YAGレーザー照射によるMMPの活性化についてはザイモグラフィーを,遺伝子発現状態についてはリアルタイムRT-PCRにより実験を行った。その結果, MMP-2, MMP-3, MMP-8はレーザー照射により直接活性化されることはなかったが, hPDL細胞においてレーザー照射後3日目に未照射群に比べてそれぞれのMMP遺伝子発現が有意に認められた。一方,歯髄細胞(組織)においてEr:YAGレーザー照射は歯髄組織に含まれる内在性のTGF-βを活性化させる効果を示した。SDS-PAGEでは55 kDaのタンパク質バンドの増加が認められ,ゲラチンザイモグラフィーでは61,53,45,40 kDaのMMP活性が顕著に増加し,カゼインザイモグラフィーでは33 kDaのnon-MMPが活性化された。ヘパリン・クロマトグラフィーにおいて,この33 kDaプロテアーゼはヘパリンとの結合親和性を示した。さらに,ブタ歯髄組織由来の不死化細胞(PI細胞)に対するEr:YAGレーザー照射は,細胞の増殖能およびTGF-βの活性化に影響を及ぼすことが示唆された。

平成27年度の研究成果からhPDL細胞に対するEr:YAGレーザー照射はTGF-βを活性化する作用があり,硬組織形成能を促進する作用があることを確認できた。しかしながら,その作用はレーザー照射により直接的にlatent TGF-βを活性化するものではなく,各種MMPが深く関わっていることが考えられた。一方,レーザー照射後の生理活性物質添加によるALP活性に顕著な差が認められなかったことから予定していた動物実験の実施は検討中であり, ALP活性がTGF-βによるものであることが確定でき,その作用機序解明のため平成28年度はレーザー照射によるMMPの活性化についてザイモグラフィーを,遺伝子発現状態についてリアルタイムRT-PCRにより分子生化学的な実験を行った。その結果, MMP-2, MMP-3, MMP-8はレーザー照射により直接活性化されることはなかったが,レーザー照射後3日目に未照射群に比べてMMP遺伝子発現が有意に認められた。このことから, TGF-β活性にはMMPが作用していることが考えられた。また,歯髄細胞(組織)においてEr:YAGレーザー照射は歯髄組織に含まれる内在性のTGF-βを活性化させる効果を示した。SDS-PAGEでは55 kDaのタンパク質バンドの増加が認められ,ゲラチンザイモグラフィーでは61,53,45,40 kDaのMMP活性が顕著に増加し,カゼインザイモグラフィーでは33 kDaのnon-MMPが活性化された。ヘパリン・クロマトグラフィーにおいて,この33 kDaプロテアーゼはヘパリンとの結合親和性を示した。さらに, PI細胞に対するEr:YAGレーザー照射は,細胞の増殖能およびTGF-βの活性化に影響を及ぼすことが示唆された。以上のことから,おおむね順調に進展していると考えられる。hPDL細胞においてEr:YAGレーザー照射後にTGF-β受容体阻害剤を加えることによりALP活性が低下したことから,その作用がTGF-βによるものであることが示唆された。しかしながら,レーザー照射が直接TGF-βを活性化しないことからTGF-βの活性化に関与しているMMPのレーザー照射による活性を調べた。MMP-2,MMP-3,MMP-8はレーザー照射により直接活性化はされなかったが,照射後3日目に未照射群と比べて遺伝子発現の有意な増加が認められた。以上のことが前年度までに明らかとなり,本年度は,TGF-βの活性化に関わるプラスミン活性を調べた。レーザー照射による活性は認められず,TGF-βの活性化にはMMPの遺伝子発現が深く関わっていることが考えられ,MMPの活性化に関与するHSP90α遺伝子発現についてqPCRを行って解析した。HSP90α遺伝子発現は,レーザー照射後1日目に未照射群と比較して有意な増加が認められ,MMPの活性化にはHSP90α遺伝子発現の関与が示唆された。ブタ歯髄組織に対するEr:YAGレーザー照射はALP活性を上昇させる効果を有し,ゲラチンザイモグラフィーでは53,45,40 kDaのMMP活性が,カゼインザイモグラフィーでは33 kDaのnon-MMP活性が認められた。ブタ歯髄組織
インターフェロン遺伝子転写調節因子と制御配列DNAの分子認識に関する構造学的研究

本研究ではマウス・インターフェロン遺伝子転写調節因子-2(IRF-2)DNA結合ドメイン,マウスOct-3POU-h omeoドメインなどのDNA結合性の転写因子の溶液中での立体構造を核磁気共鳴法で決定し、DNAと複合体の解析も進めることによって、DNA塩基配列の認識機構を立体構造に基づいて明らかにすることを目的とした。まずマウス・インターフェロン遺伝子転写調節因子-2(IRF-2)DNA結合ドメインについては、主鎖の殆ど全てと側鎖のかなりの部分の水素核、窒素核、炭素核のNMRシグナルの帰属を終了し、水素原子間の距離情報や、主鎖の2面角の角度情報などを収集して2次構造を決定した。その結果、このドメインは3本のヘリックス構造と4本のβストランドからなる反平行βシート構造を持つことが判った。興味深いことにアミノ酸配列のレベルでは殆ど相同性を示さなかったにも関わらず、IRF-2DNA結合ドメインは幾つかあるループ様構造を除けば大腸菌cAMP受容対蛋白質(CRP)、HNF-3、klaHSPなどと似通った2次構造パターンを示す。従って、IRF-2DNA結合ドメインはwinged helix DNA結合モチーフを持つ可能性があることが判明した。マウスOct-3 POU-homeoドメインについては、主鎖・側鎖とも殆ど全ての水素核、窒素核、炭素核のNMRシグナルの帰属を終了し、水素原子間の距離情報や、主鎖の2面角の角度情報などを収集して立体構造を決定した。精度については主鎖の原子核についてR.M.S.D.で0.44オングストロームまで精密に決定することができた。その結果、疎水性残基のクラスターによってコンパクトに折り畳まれた3本のαヘリックス構造を持つことが判った。得られた構造はショウジョウバエEngr ailedやAnnt enapedi aなどの典型的なhomeoドメインと良く似ている。但し、DNAと直接相互作用する3番目のヘリックスのC末端部分は、POU-homeoではdi sor derした構造になっていた。