hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
蜘蛛類毒腺の生理活性ペプチドの探索・解析および新規ペプチド創製の試み

タランチュラ毒腺のcDNAライブラリーの中から約4000個の制限酵素切断パターンに基づき約1500個のクローンを選択しDNA配列の解析を行い869個の高い品質の配列データを得た。このうち284個(=32.7%)が毒様の配列を示していた。これは他種のクモで報告されている30.6%や32.5%とほぼ同等の値であり本研究の妥当性が示された。更にPCRクローニングにより34個の毒様配列を得た。これらから重複無く48個の独立した新規の毒様配列を得、GTx1GTx7, GTx-TCTP, GTx-CRISPの9つタランチュラ毒腺のcDNAライブラリーの中から約4000個の制限酵素切断パターンに基づき約1500個のクローンを選択しDNA配列の解析を行い869個の高い品質の配列データを得た。これらから重複無く48個の独立した新規の毒様配列を得、GTx1GTx7, GTx-TCTP, GTx-CRISPの9つ毒産生生物の毒液は、進化生態学でいう軍拡競争に基づく加速進化により様々なペプチド性毒が含まれているケミカルライブラリーと考えることができる。我々はこれまでに南米産タランチュラ毒腺のcDNAライブラリーを構築、約9000個のクローンを得、そのうち約900個のクローンのDNA配列を決定し30個以上の新規生理活性ペプチドを発見している。今年度の研究計画では、更に約2000個のクローンの解析を進めることを目標とした。約9000個のクローンの制限酵素切断パターンを解析したデータを元に、先に決定した約900個のクローンとはできるだけパターンの異なるクローンを選択しPCRによりインサートを増幅、DNA配列を決定した。約700個のクローンの配列を決定したところで雇用していた実験補助者が体調不良により辞職したためcDNAライブラリーの解析を中断した。そこで毒腺で発現しているmRNAの次世代シーケンサーによる網羅的解析をblastXによるアノテーション解析も含めて外注することとし、毒腺の総RNAを抽出し解析受託会社へ提供した。平成23年3月下旬にGS FLX Titanium Chemistryによる次世代シーケンシング解析によるデータを元にしたblastX解析結果を得たところである。今回の解析ではランダムプライム法による均一化全長cDNAライブラリーを解析対象として総解析塩基数156Mbのシーケンシングを行った。MIRA Assembler Version 2.9.45xlを用いたアセンブル解析では、1Kb以上かつ5read以上で定義されるLarge Contigが867個得られている。現在、詳細な解析を進めているところである。平行してペプチド遺伝子を枯草菌Brevibacillus発現系用のpNCMO2およびpNY326ベクターに組み込みBrevibacillusでのペプチド発現の検討を行った。強力なプロモーターを用いたベクターpNCMO2に組み込んだ場合、細胞毒性が高いためか細胞増殖が悪く、またペプチドの発現も認められなかった。弱いプロモーターを用いたベクターpNY326に組込むと一部のペプチドの発現を確認することができた。今年度の研究計画では、まず第一に、H22年度に得たシーケンスデータとこれまでに得ていたデータを元に、「クモ毒腺のトランスクリプトーム解析」の論文を作成することを目標とした。これまでにタランチュラ毒腺のcDNAライブラリーの中から制限酵素切断パターンに基づき約1500個のクローンを選択しDNA配列の解析を行い869個の高い品質の配列データを得た。これらから重複無く48個の独立した新規の毒様配列を得、GTx1GTx7,GTx-TCTP,GTx-CRISPの9つのグループに分類した。この中で特にGTx3系のペプチドは哺乳類のMIT1やBv8,Prokineticinsに加え無脊椎動物のastakinesにも相同性が認められたことからその生理活性の一部は造血能である可能性について予想をした。これらついてまとめた論文を出版した。第二の目標としていた大量発現系については、枯草菌Brevibacillus発現系に組込みペプチドの発現を確認していたクモTCTPおよびCRISPの凍結保存菌が震災の影響で解凍し発現能を失っていたのでこれを中止した。一方、生理活性ペプチドの大腸菌を用いたペリプラズム発現や細胞外分泌発現の系を構築し、大量発現を試みたところ両者ともに発現を確認できた。これらの方法はスケールアップが比較的簡易に行えることから今後とも工夫しながらスケールアップを行っていく予定である。次世代シーケンサーでゲノム配列の解析を開始するために、本研究に使用しているローズヘアータランチュラのゲノムを抽出し、ゲノム配列のde novo解析を進めている。これまでに約39億塩基のデータを得た。先行研究としてマニュアルでゲノム解析をしたデータでは、ICKモチーフ毒であるHanatoxinとVSTx1のゲノム配列を得ており、同じICKモチーフ毒であるもののHanatoxinは3つのエクソン、VSTx1は2つのエクソンからなることが明らかとなっている。

今後も継続的にゲノム配列のde novo解析を推進する予定である。タランチュラ毒腺のトランスクリプトーム解析の論文を出版した。24年度が最終年度であるため、記入しない。立体構造解析に利用する予定であったNMR装置が震災により破損、使用不能となった。また、これまでのトランスクリプトーム解析では新規スキャフォールドは発見できておらず、次世代シーケンサーの詳細なデータ解析を進めているところである。以上のことからNMRによる立体構造解析は延期とし、代わりに次世代シーケンサーで得たデータを補強する意味も含め、当該タランチュラのゲノム解析を開始する予定である。また、新規生理活性ペプチドの創製については試みる予定である。
慢性副鼻腔炎難治化におけるマクロライド耐性ブドウ球菌の関与

鼻副鼻腔炎は日常する疾患であるが、通常ペニシリン系抗菌薬やマクロライド系抗菌薬の投与により改善することが多い疾患である。特に本邦において慢性鼻副鼻腔炎に対してマクロライド系抗菌薬の少量長期に投与することにより、改善する場合が多い。一方、このような治療法により改善しない場合も認められ、これらが難治性として言われる場合が多い。特に近年難病指定になった、好酸球性副鼻腔炎はブドウ球菌の関与があると言われている。そこで、我々はマクロライド耐性化した形態変化を及ぼしている病態が難治化の一因を担っているのではないかと研究を遂行した。現在慢性副鼻腔炎は難治化しており、その中に好酸球性副鼻腔炎など長期的な炎症が引き金になっていると報告されている部分もある。そこで我々はマクロライド耐性ブドウ球菌が細胞壁の肥厚化し、形態的特徴を有しているを指摘した。その形態異常が臨床的にどのような因子があるのかを引き続き検討を行っている。まず当院における手術症例の中でどのくらい難治性副鼻腔炎かを検討するために、術前の症状によりこれらを推測できるかも含め検討したところ、術前に嗅覚障害の主訴にある場合、また気管支喘息、そして好酸球増加している場合が当院における難治化の要因であることが分かった。これらを耳鼻咽喉科臨床学会にて報告した。またもう一つの難治化の要因であるのはアレルギー性鼻炎の影響である。スギ花粉症時期に副鼻腔炎になる場合、スギ花粉飛散時期に症状軽快させる必要があり、スギ花粉免疫療法における効果も合わせて検討を行った。そして、細菌学的観点から難治化の因子としてバイオフィルムの形成の有無が指摘をされている。これに関しては現在研究を遂行中であるが、当院由来の臨床分離検体に対して薬剤感受性とバイオフィルム形成能を確認する。やはり諸家の報告通り、黄色ブドウ球菌よりも表皮ブドウ球菌の方がバイオフィルム形成率は高い。また黄色ブドウ球菌においては薬剤感受性と形成能についての差はなかった。今後バイオフィルムが形成された菌株とされていない菌株を用い表現型の違いや動物実験などにより難治化の要因になっているのかどうかを検討する。マクロライド耐性ブドウ球菌が細胞壁肥厚するという形態的特徴を有していることを報告した。これをもとに現在同菌の細菌学的性状を追求している状況である。現段階ではもっとも臨床現場で難治化とされるバイオフィルム形成能を確認するに当たり、バイオフォルム産生標準株を購入し、バイオフィルム形成に関する実験系を確立をしている。またわれわれは耳感染症に対して臨床的に有効とされているブロー液に対する基礎実験を遂行しており、これらはML耐性ブドウ球菌にも有効とされている。バイオフィルム陽性菌とブロー液の効果を追求すると、完成したバイオフィルムにはブロー液は有効性は認められないが、ブロー液でバイオフィルム形成前に処理をするとバイオフォルムが形成しないことが分かった。こ現段階ではマクロライド耐性菌ブドウ球菌が形態的変化以外の細菌学的特性はあまり明確になっていないが、これらはバイオフィルム形成菌と共同して鼻内に慢性炎症を作り出すことにより、慢性副鼻腔炎の難治化を形成していく可能性があることから実験を遂行したいと考える。従来は菌の特性のみを行っていたが、今回バイオフィルム陽性菌と共培養することによる効果も検討を行うことにしたため、バイオフォルム陽性株の購入、また新たな系の立ち上げに関して時間を要した。慢性鼻副鼻腔炎は難治化し、従来の細菌感染症による好中球性副鼻腔炎とベースにアレルギーの関与を示唆する好酸球性副鼻腔炎など多彩な原因による疾患である。なかでも慢性鼻副鼻腔炎には本邦から発信されたマクロライド系抗菌薬を利用した治療法が確立をされている。我々は以前から薬剤耐性菌と形態的変化を追求し、マクロライド耐性ブドウ球菌は細胞壁肥厚という形態的特徴を有することが分かった。それをもとにして、当院中央検査部から譲渡された、表皮ブドウ球菌においても同様の検討を行ったところ、同じように細胞壁肥厚という形態的特徴を有していた。さらに、既存のマクロライド耐性遺伝子の所持を検索したところ、既知のマクロライド耐性遺伝子の所持をしていない菌株が多数あることが分かり、マクロライド耐性化には未発見の遺伝子があることも示唆されている。また黄色ブドウ球菌にはProtein Aを所持しており、それによりIgG抗体の関与する免疫反応を有する系は施行することが困難であったが、我々はProtein Aを欠損した黄色ブドウ球菌を所持しており、これからマクロライド耐性黄色ブドウ菌を分化誘導することができた。これをもとにして、表層の変化であることから、LTAの局在、ATLの所有量、ペプチドグリカン量の測定や臨床的にはバイオフィルム形成能の有無についての検証を行いマクロライド耐性化することにより難治化をひきおこす可能性が高いことを導けるように実験を遂行する予定である。バイオフィルム形成能を評価する実験系の立ち上げに時間を要してしまった。平成28年度には完成したことから平成29年度で実験を遂行したいと考えている。鼻副鼻腔炎は日常的に遭遇する疾患であり、感冒後やアレルギー性鼻炎の増悪により、症状を呈する場合がある。我々は抗菌薬にて治療することが多いが、中でもマクロライド系抗菌薬を頻用し、それにより改善する症例としない症例がある。以前から原因菌としてブドウ球菌に注目し、マクロライド系抗菌薬により耐性化した菌種の形態異常を起こし、これがもとなり副鼻腔炎の難治化を起こすことを報告してきた。

近年難病指定になった副鼻腔炎に好酸球性副鼻腔炎が報告され、この病態の原因は様々であるが、一因にブドウ球菌の関与が指摘されている。この菌種の菌体成分によりアレルギー反応が起こり、鼻内炎症が繰り広げられると報告されている。一方、耳鼻咽喉科外来で頻用されている局所療法にネブライザー療法(エアロゾル療法)がある。薬剤をエアロゾル粒子に変換し、経気道的に鼻・副鼻腔に薬剤を投与する。局所療法である。全身投与よりも高濃度の薬剤を局所に投与することができるので、抗菌効果や抗炎症効果が高いといわれている。その治療方法を用いることにより鼻副鼻腔内に存在する耐性ブドウ球菌を除菌することにより難治性副鼻腔炎の改善がみられるのではないかと考え、まず現状把握の目的で様々な施設でネブライザー療法に用いられている薬剤がどのようなものかを把握する目的で実態調査を行ったところ、マクロライド系は使われておらず、セフェム系ならびにアミノグリコシド系抗菌薬とステロイドを合剤にして投与していることが分かった。今回の研究では時間的余裕がなかったが、この薬剤濃度などを検証することにより、難治性副鼻腔炎のブドウ球菌の関与を除菌することによりマクロライド耐性ブドウ球菌の影響を防ぐことができると考えられた。鼻副鼻腔炎は日常する疾患であるが、通常ペニシリン系抗菌薬やマクロライド系抗菌薬の投与により改善することが多い疾患である。特に本邦において慢性鼻副鼻腔炎に対してマクロライド系抗菌薬の少量長期に投与することにより、改善する場合が多い。一方、このような治療法により改善しない場合も認められ、これらが難治性として言われる場合が多い。特に近年難病指定になった、好酸球性副鼻腔炎はブドウ球菌の関与があると言われている。そこで、我々はマクロライド耐性化した形態変化を及ぼしている病態が難治化の一因を担っているのではないかと研究を遂行した。現段階では臨床分離株の検討を終了している予定であったが、菌株採取は終わっているが、基礎実験に関して遂行している段階である。マウスに対して感染実験を予定しており、これにより同菌種がI型アレルギーの誘発に関してもどのようなかかわりを持っているのかも含め追及するために、実験系を立ち上げている。マクロライド耐性菌とそれ以外での細菌学的評価の遂行を行う予定である。具体的にはバイオフィルム形成能や、電子顕微鏡を用いたATLの局在についての検証を行う。またマウスにおいても感染実験を行い、これによりさらにアレルギー因子も悪くなるかどうかも検証する。鼻科学臨床分離株にてバイオフィルム形成する菌株が認められ、その後動物実験において確認を行う。海外輸入により新たな菌株を購入するのに時間を要したために、実験全体が滞った。新たな実験系(バイオフォルム形成能とアレルギー感作モデル)に時間を要してしまった。この系の立ちあげは昨年度完成したために、これをもとにして実験を遂行したいと考える。臨床分離株の菌株採取に手間取り、基礎実験の開始が遅れたため。現在上記菌株も入手できているために、今年度は継続的に実験を行うことが可能であると考える。
中国大陸中部の地質構造,とくに秦嶺構造帯と揚子卓状地に関する地質学的研究

西太平洋と中国大陸の関係は,地球のテクトニクスの課題の中で残された最も大きな問題である.本海外調査の目的は,この興味ある課題に関して重要な鍵となる地域を選び,日本列島との関係を考えながら,予備調査の結果を念頭において,揚子卓状地とその北に沿う秦嶺構造帯の現地調査を行い中国大陸東部の地体解析を試みるものである.本年度はこの海外学術調査の本調査として揚子卓状地およびその北の秦嶺構造帯の地質調査を行った.得られた成果の概要は以下の通りである.(1)揚子卓状地本体には,古くから知られているように先カンブリア代の変成岩を基盤として古生代中生代の堆積岩類が整然と堆積しているが,今回の調査で,卓状地北縁部には低角の衝上断層帯が発達しており,その地域が地体構造上は北米大陸のロッキー山脈タイプの地帯であることがわかった.(2)揚子卓状地北縁部は岩石としては先カンブリア代のものが分布しており,共同研究者である南京大学のグループの最近の研究によれば,先カンブリア代の末期に,次々と揚子卓状地に付加したテレーンであると解釈される.今回我々はその地域の調査を行い,中生代の付加過程によってできた日本列島と構造を比較し,時代による付加の違いについて検討を加えた.(3)秦嶺構造帯自体の形成は最近の地球科学界の大きな問題の1つで,多くの学者の注目を集めているが,その形成時期については,大きくみて,古生代とするものと,中生代とするものがある.我々の今回の調査では,それに対する明確な回答は得られなかったものの,中生代に主要な形成が行われ,その後現在に至るまで活動を続けている,大陸内部にある山脈としてはめずらしい地域であることがわかった.これはインド亜大陸とユーラシア大陸との衝突に関係があるものであろう.今後の研究の方向としては,(1)正確な化石層序にもとづいた秦嶺構造体の形成年代の確定,(2)南北中国の地塊の古地磁気の測定,(3)中国大陸の地体構造図の作成,(4)およびその生成過程の解明があげられる.西太平洋と中国大陸の関係は,地球のテクトニクスの課題の中で残された最も大きな問題である.本海外調査の目的は,この興味ある課題に関して重要な鍵となる地域を選び,日本列島との関係を考えながら,予備調査の結果を念頭において,揚子卓状地とその北に沿う秦嶺構造帯の現地調査を行い中国大陸東部の地体解析を試みるものである.本年度はこの海外学術調査の本調査として揚子卓状地およびその北の秦嶺構造帯の地質調査を行った.得られた成果の概要は以下の通りである.(1)揚子卓状地本体には,古くから知られているように先カンブリア代の変成岩を基盤として古生代中生代の堆積岩類が整然と堆積しているが,今回の調査で,卓状地北縁部には低角の衝上断層帯が発達しており,その地域が地体構造上は北米大陸のロッキー山脈タイプの地帯であることがわかった.(2)揚子卓状地北縁部は岩石としては先カンブリア代のものが分布しており,共同研究者である南京大学のグループの最近の研究によれば,先カンブリア代の末期に,次々と揚子卓状地に付加したテレーンであると解釈される.今回我々はその地域の調査を行い,中生代の付加過程によってできた日本列島と構造を比較し,時代による付加の違いについて検討を加えた.(3)秦嶺構造帯自体の形成は最近の地球科学界の大きな問題の1つで,多くの学者の注目を集めているが,その形成時期については,大きくみて,古生代とするものと,中生代とするものがある.我々の今回の調査では,それに対する明確な回答は得られなかったものの,中生代に主要な形成が行われ,その後現在に至るまで活動を続けている,大陸内部にある山脈としてはめずらしい地域であることがわかった.これはインド亜大陸とユーラシア大陸との衝突に関係があるものであろう.今後の研究の方向としては,(1)正確な化石層序にもとづいた秦嶺構造体の形成年代の確定,(2)南北中国の地塊の古地磁気の測定,(3)中国大陸の地体構造図の作成,(4)およびその生成過程の解明があげられる.
インド亜大陸における雑穀栽培とそれをめぐる農牧複合の研究(第二次調査)

インド亜大陸における雑穀の遺伝的変異を調査・収集し,変異の地理的分布を明らかにする.同時に雑穀畑の随伴雑草を調べ,雑穀一雑草複合の実態を明らかにする.また創穀の農法,民俗分類ならびに利用法を比較し,その類型を把握するとともに各類型の分布を明らかにする.さらに牧畜民の家畜飼育も視圏に入れて,雑穀をめぐる農牧複合を明らかにする.(1)インド亜大陸における雑穀の遺伝的変異とその分布の調査には,隊員の阪本と研究協力者の河瀬が,パキスタン農業研究センター植物遺伝資源部長R.アンワール博士の参加を得て,パキスタン北部カラユラム山系の山村で主にアワとキビの調査・収集をおこなった.また小林と木俣は,全インド雑穀改良計画のA.シーサラム博士とインド国立植物遺伝資源局のM.N.コーパー博士の協力を得て,マハラシュトラ,アンドラ・プラディシュ,オリッサの各州において,アワ,キビ,インドビエ,コド,サマイなどとそれらの近縁種ならびに随伴雑草の調査と収集をおこなうとともに,栽培法,収穫法,利用法などについて聞き込み調査をおこなった.この調査の後半には,阪本と河瀬も参加した.またインド東部についても予備的調査をおこなった.これらの収集植物は圃場に栽培し,くわしい調査をおこなう予定である.(2)インド亜大陸における雑穀栽培の農法(栽培技術,農具,民俗分類,利用法など)の比較研究の調査には,隊員の応地がパキスタンのスワット,シンド州とインドのデカン高原北部と南東部において詳細な聞き込み調査と観察をおこなった.また隊員の松井は雑穀栽培の西端部に近いパキスタン西南部マクラン州の農牧民の調査を第一次調査にひきつづきおこなうとともに,インド西部のグジャラートおよびラジャスタン2州の農牧民についても調査を進めた.これらの資料は昭和60年度第一次調査でえられたデータと比較分析をおこなう.(3)インド亜大陸における雑穀栽培と家畜飼育の有機的結合と人間との関わりを調べるために,隊員の谷と棚瀬が第一次調査をさらに深めるために,カシミール山地およびラジャスタン州において農牧民の家畜管理,農牧複合と食生活の関係について調査をおこなった.これらの資料は今までおこなったユーラシア西南部でのデーターと比較分析する予定である.インド亜大陸における雑穀の遺伝的変異を調査・収集し,変異の地理的分布を明らかにする.同時に雑穀畑の随伴雑草を調べ,雑穀一雑草複合の実態を明らかにする.また創穀の農法,民俗分類ならびに利用法を比較し,その類型を把握するとともに各類型の分布を明らかにする.さらに牧畜民の家畜飼育も視圏に入れて,雑穀をめぐる農牧複合を明らかにする.(1)インド亜大陸における雑穀の遺伝的変異とその分布の調査には,隊員の阪本と研究協力者の河瀬が,パキスタン農業研究センター植物遺伝資源部長R.アンワール博士の参加を得て,パキスタン北部カラユラム山系の山村で主にアワとキビの調査・収集をおこなった.また小林と木俣は,全インド雑穀改良計画のA.シーサラム博士とインド国立植物遺伝資源局のM.N.コーパー博士の協力を得て,マハラシュトラ,アンドラ・プラディシュ,オリッサの各州において,アワ,キビ,インドビエ,コド,サマイなどとそれらの近縁種ならびに随伴雑草の調査と収集をおこなうとともに,栽培法,収穫法,利用法などについて聞き込み調査をおこなった.この調査の後半には,阪本と河瀬も参加した.またインド東部についても予備的調査をおこなった.これらの収集植物は圃場に栽培し,くわしい調査をおこなう予定である.(2)インド亜大陸における雑穀栽培の農法(栽培技術,農具,民俗分類,利用法など)の比較研究の調査には,隊員の応地がパキスタンのスワット,シンド州とインドのデカン高原北部と南東部において詳細な聞き込み調査と観察をおこなった.また隊員の松井は雑穀栽培の西端部に近いパキスタン西南部マクラン州の農牧民の調査を第一次調査にひきつづきおこなうとともに,インド西部のグジャラートおよびラジャスタン2州の農牧民についても調査を進めた.これらの資料は昭和60年度第一次調査でえられたデータと比較分析をおこなう.(3)インド亜大陸における雑穀栽培と家畜飼育の有機的結合と人間との関わりを調べるために,隊員の谷と棚瀬が第一次調査をさらに深めるために,カシミール山地およびラジャスタン州において農牧民の家畜管理,農牧複合と食生活の関係について調査をおこなった.これらの資料は今までおこなったユーラシア西南部でのデーターと比較分析する予定である.
完全子会社化とコーポレートガバナンスに関する実証研究

完全子会社は、コーポレートガバナンスについて二つの顕著な特徴をもっている。第一に、株式所有権構造の大幅な変化という点で、子会社の株主構造を急激に変化させる。完全子会社化では、少数派株主は完全に排除され、所有権構造上、子会社は親会社の完全な支配化に置かれる。したがって、完全子会社化の研究によって、少数派株主の存在がもっている企業パフォーマンスに対する経済的含意について明らかにできる。第二に、子会社の非公開化によって株式市場を通じたガバナンスは消滅する。株主構成と並んで、株式市場そのものがもつモニタリング効果がある。つまり、潜在的株式投資家に対するアカウンタビリティや市場株価への配慮といった要素が、公開株式会社には伴う。完全子会社化は、子会社に対する株式市場からのモニタリングを排除するというガバナンス上の大きな効果をもつ。本年度は、先行研究のサーベイを行うとともに、データの収集・整理を行った。また上記二つのガバナンス上の特徴が、企業パフォーマンスとくに株主利益(株価)に与える影響を実証的に検討するための準備として、イベントスタディによる株価パフォーマンスの計測を実施した。
腎尿細管アミノ酸尿症の責任遺伝子解明と治療法の確立

本研究は、アミノ酸のベクトル輸送を可能にするトランスポーター分子の局在機構を解明し、頂上膜に欠損したアミノ酸輸送系を基底膜よりリクルートすることでアミノ酸のベクトル輸送を可能にする基礎実験を通して、アミノ酸尿症の治療法を確立する。II型膜糖蛋白質(rBAT,4F2hc)は一部のアミノ酸トランスポーターの頂上膜への発現に必須な分子であり、これらと共存することで、トランスポーター本体は頂上膜へと移動することができる。rBATは腎管腔側へ、4F2hcは血管側へとトランスポーターの発現極性を決定する。これら分子の細胞外ドメインは相互作用するトランスポーターの選択に重要であり、細胞内ドメインは細胞膜極性(方向性)に関わると考えた。そこでアミノ酸トランスポーター分子の局在機構(方向性)を解明する目的でrBAT、4F2hcの細胞内外を交換したchimera cloneを作製し検討した。極性のない細胞(Xenopus卵母細胞)においては細胞膜極性(方向性)に関わる細胞内ドメインを交換してもトランスポーターの選択に必要な細胞外ドメインが残っていることで、細胞膜に発現し、それぞれのトランスポーターの機能特性を示す輸送活性が確認された。極性のある細胞である腎近位尿細管細胞であるMDCK細胞においては細胞膜極性(方向性)に関わる細胞内ドメインを交換すると、通常管腔側に発現するトランスポーターが血管側に発現し、rBAT、4F2hcの細胞内ドメインは相互作用するトランスポーターの発現の方向性を決定する事が示唆された。これら分子の細胞内ドメインには方向性を決定するシグナル配列が存在し、未同定の蛋白が結合することで細胞膜へ向かう細胞内小胞に含まれ移動することが考えられるため、今後yeast two hybrid systemを用いてrBAT、4F2hcの細胞内ドメインに結合する分子を同定する予定である。腎上皮組織は個体内外の間にバリアーを形成し体内循環を保護すると共に、選択的にイオン、水、アミノ酸などを極性を持って輸送し、吸収分泌を行っている。これらには、様々な機能蛋白が管腔側及び血管側の細胞膜の各ドメインに特異的に局在し、お互いが協力して小分子のベクトル輸送を行っている。このうちアミノ酸は数多くの輸送システムが存在し、シスチン尿症、リジン尿性蛋白不耐症、ハートナップ病、シスチノーシス、青いおむつ病など多くのアミノ酸輸送に関連した疾患の原因遺伝子解明が残されている。本研究においては未同定のハートナップ病原因遺伝子の解明及びアミノ酸のベクトル輸送を可能にする分子局在機構を解明し、頂上膜に欠損したアミノ酸輸送系を基底膜よりリクルートすることでアミノ酸のベクトル輸送を可能にする基礎実験を通してアミノ酸尿症の治療法を確立する。ハートナップ病が関与すると考えられているアミノ酸輸送系システムB^0の分子実体を明らかにする目的でラット小腸を用いて発現クローニングを行った。ラット小腸よりpoly(A)^+RNAを精製し、サイズ分画(80画分)を行った。各分画をプールしXenopus卵母細胞へ発現させ輸送系システムB^0の基質である中性アミノ酸の輸送活性を測定したところピーク活性が観察された(画分20-23)。この画分から発現プラスミドライブラリーを作製しXenopus卵母細胞に発現させアミノ酸の取り込みを指標とし14,000個のクローンをスクリーニングしたが高い輸送活性を示すcDNAプールは検出できなかった。我々は以前に補助因子を必要とするアミノ酸トランスポーターのファミリーの同定を行い、アミノ酸尿症の原因遺伝子解明を行った。アミノ酸輸送系システムB^0の分子も単独ではなく補助因子の必要性が考えられる。今後新たに補助因子と予想される各種蛋白質との共発現による発現クローニングを行う予定である。
破骨細胞Ca2+活性化K+チャネルの骨吸収シグナル制御分子としての機能解明

破骨細胞に発現するCa2+活性化K+チャネル(Kca)の骨吸収における役割を検討した。成熟破骨細胞は複数のKCaを発現し、中でもKCa3.1の発現が高かった。Kca3.1のチャネル機能を抑制するとアクチンリングが消失し、骨吸収活性が抑制された。また、成熟破骨細胞にはTRPM7を含む複数の非選択的陽イオンチャネルが発現し、これらのチャネル機能を阻害しても骨吸収活性が抑制された。以上の結果より、成熟破骨細胞に発現するKca3.1は非選択的陽イオンチャネルを介したCa2+流入のレギュレーターとして細胞内Ca2+濃度を調節し、骨吸収に必須のアクチンリングの形成維持に関与することが明らかとなった。本年度は、成熟破骨細胞におけるCa2+活性化K+チャネルと非選択性陽イオンチャネルの発現を機能的に捉えるとともに骨吸収への関与を検討した。マウス骨髄細胞をM-CSFとRANKLで刺激して酒石酸耐性酸性ホスファターゼ(TRAP)陽性多核の成熟破骨細胞を誘導した。この成熟破骨細胞にWhole-cell patch clamp法を適用して膜電流を記録すると、外向き整流性K+電流と非選択性陽イオン電流を検出した。外向き整流性K+電流は細胞内Ca2+濃度上昇により強く活性化され、電流活性化に伴って膜は過分極した。外向き整流性K+電流はCa2+活性化K+チャネル(KCaチャネル)阻害剤および電位依存性K+チャネル(Kvチャネル)阻害剤により抑制された。また、非選択的性陽イオン電流はruthenium red感受性を持つTRPV様電流とMg2+感受性を持つTRPM7様電流であることが解った。成熟破骨細胞の骨吸収活性に対するこれらの阻害剤の効果を検討するため、リン酸カルシウムコートした培養プレート上で成熟破骨細胞を培養し、形成された吸収窩の面積を計測した。その結果、KCaとKv両チャネルの阻害剤は骨吸収を強く抑制したが、KCaチャネル阻害作用のないKvチャネル選択的阻害剤の抑制作用は弱かった。また、ruthenium redも骨吸収を抑制した。一方、アクチンリングを有するTRAP陽性多核細胞の数は、これらのK+チャネル阻害剤およびruthenium redにより減少する傾向を示したが、阻害剤を加えないcontrol群と比べて有意差は認められなかった。以上の結果より、成熟破骨細胞には、KCaチャネル、Kvチャネルおよび非選択性陽イオンチャネルが発現しイオン輸送体として機能していることが明らかになった。また、これらのチャネルは骨吸収を支持する重要な役割を担っていることが示唆された。本年度は、マウス骨髄細胞から誘導した成熟破骨細胞に発現するCa2+活性化K+チャネル(KCaチャネル)の発現と非選択性陽イオンチャネル(TRPチャネル)の発現を免疫染色およびウエスタンブロット解析により検討した。マウス成熟破骨細胞におけるKCaチャネルの発現については、高コンダクタンス型のKCa1.1と中コンダクタンス型のKCa3.1を免疫染色により調べた。その結果、KCa1.1はほとんど検出されなかったが、KCa3.1は発現している細胞と発現していない細胞とが認められた。TRPチャネルについては、免疫染色にてTRPM7の発現を認めた。しかし、これらの結果はウエスタンブロット解析の結果と一致しなかった。特に、TRPM7はウエスタンブロット解析ではほとんど検出されなかった。この矛盾については、再検討する余地がある。また、KCa3.1は多核の成熟破骨細胞よりも分化過程にある細胞の方が高発現を示した。そこで、破骨細胞形成におよぼすKCaチャネル阻害剤および電位依存性K+チャネル(Kvチャネル)阻害剤、TRPチャネル阻害剤の効果についても検討した。アクチンリングを有するTRAP陽性多核細胞の数を指標に破骨細胞形成を評価した。KCa1.1の阻害剤(iberiotoxin)は、破骨細胞形成にほとんど影響しなかった。一方、KCa1.1、KCa1.2、Kv1.3の阻害剤(charybdotoxin)は破骨細胞形成を抑制した。Kv1.3の阻害剤でKCaチャネルには影響しない阻害剤(margatoxin)は、破骨細胞形成に対して弱い抑制を示した。また、TRPチャネル阻害剤(ruthenium red)は破骨細胞形成を強く抑制した。以上の結果より、成熟破骨細胞による骨吸収には、新たな分子としてKCa3.1とTRPM7が関与していると考えられた。また、破骨細胞の形成にはKCa3.1とKvチャネルの関与が示唆された。初年度において、マウス骨髄細胞から誘導した破骨細胞にはCa2+活性化K+チャネル(Kca)と非選択的陽イオンチャネル(TRP)が存在することを機能的に証明し、骨吸収に関与することを明らかにした。翌年度には、これらのチャネルの分子種の同定を試み、Kca3.1とTRPM7が候補に上がったが、免疫染色とウエスタンブロット解析の結果に矛盾を認めた。本年度はこれらの状況を鑑み、先ずKca3.1の発現をウエスタンブロット解析にて再検討した。その結果、骨髄マクロファージをRANKLで分化誘導刺激すると、Kca3.1の発現が高まり、昨年度の結果に反して、Kca3.1の発現は多核の成熟破骨細胞においても依然高く保たれていた。また、Kca3.1の選択的阻害剤は、破骨細胞分化を抑制するだけでなく成熟破骨細胞においては骨吸収に必須のアクチンリング形成を抑制して骨吸収活性を低下させた。

一方、TRPM7の発現は成熟破骨細胞では低かったが、TRPM7の活性化を機能的に捉えることができた。選択的阻害剤によるKca3.1の機能抑制が膜電位変化に及ぼす影響を調べたところ、過分極した成熟破骨細胞では阻害剤投与により脱分極が誘発された。shRNAによるKca3.1の発現抑制は十分な効果が得られず、Kca3.1発現と膜電位との関係は検討できなかった。カルシトニン、ビスフォスフォネートは成熟破骨細胞のKca3.1及びTRP活性に影響しなかった。また、RANKLは一部の成熟破骨細胞のK+チャネルを一過性に活性化したが、Kca3.1の活性化を示す証拠は得られなかった。本研究により、成熟破骨細胞に発現するKca3.1はTRP群を介したCa2+流入のレギュレーターとして細胞内Ca2+濃度を調節し、骨吸収に必須のアクチンリング形成に関与することが判明した。Kca3.1は骨代謝調節の新規標的分子になり得る可能性が示唆された。破骨細胞に発現するCa2+活性化K+チャネル(Kca)の骨吸収における役割を検討した。成熟破骨細胞は複数のKCaを発現し、中でもKCa3.1の発現が高かった。Kca3.1のチャネル機能を抑制するとアクチンリングが消失し、骨吸収活性が抑制された。また、成熟破骨細胞にはTRPM7を含む複数の非選択的陽イオンチャネルが発現し、これらのチャネル機能を阻害しても骨吸収活性が抑制された。以上の結果より、成熟破骨細胞に発現するKca3.1は非選択的陽イオンチャネルを介したCa2+流入のレギュレーターとして細胞内Ca2+濃度を調節し、骨吸収に必須のアクチンリングの形成維持に関与することが明らかとなった。昨年度は成熟破骨細胞にはCa2+活性化K+チャネル(KCaチャネル)、電位依存性K+チャネル(Kvチャネル)および非選択性陽イオンチャネル(TRPチャネル)が存在することを機能的に証明した。このことはKCaチャネルの活性化が膜を過分極させ、TRPチャネルからのCa2+流入を促進する状況証拠として重要な知見であり、細胞内Ca2+ストアからのCa2+放出がさらなる細胞内Ca2+濃度([Ca2+]i)上昇を引き起こす(正帰還[Ca2+]i制御)機構の存在を強く示唆する。また、KCaチャネルが骨吸収に関与している可能性についても明らかにしてきた。本年度はさらに、成熟破骨細胞に発現するKCaチャネルとTRPチャネルの分子種を調べ、KCaチャネルではKCa3.1、TRPチャネルではTRPM7の存在を明らかにした。さらに、破骨細胞形成においてもKCa3.1やKvチャネル群およびTRPチャネル群が関与している可能性を掴んだ。以上の成果は本研究計画の約60%を達成するものであり、本研究課題はおおむね順調に進行していると考える。口腔生理学昨年度、成熟破骨細胞にはCa2+活性化K+チャネル(KCaチャネル)とTRPチャネルが存在することを機能的に証明し、これらのチャネルの骨吸収への関与を明らかにした。本年度は、これらのチャネルの分子種について免疫染色法およびウエスタンブロット解析法を用いて検討し、KCa3.1をはじめいくつかの候補分子を突きとめた。
マイクロ放電加工における3次元振動付加ならびに加工状態のモニタリングに関する研究

安定な状態にてマイクロ放電加工を行うためには,切りくずの排出を的確に行い,短絡を防止することが必要である.このため,本研究では加工中に工具電極を圧電素子により振動させることにより,短絡を防止し,加工時間の飛躍的な短縮を達成した.また,放電パルス数カウントによる新しいモニタリング手法を開発し,放電パルス数と全放電加工エネルギーが金属除去量ならびに工具電極消耗量と良い相関を示すことを確認した.安定な状態にてマイクロ放電加工を行うためには,切りくずの排出を的確に行い,短絡を防止することが必要である.このため,本研究では加工中に工具電極を圧電素子により振動させることにより,短絡を防止し,加工時間の飛躍的な短縮を達成した.また,放電パルス数カウントによる新しいモニタリング手法を開発し,放電パルス数と全放電加工エネルギーが金属除去量ならびに工具電極消耗量と良い相関を示すことを確認した.(1)3次元振動付加装置の試作マイクロ放電加工における従来の振動付加装置では,工具電極を振動させるために使用している圧電素子ドライブアンプの性能の制約により,振動数1kHz,振幅1.5μmまでしか実験を行っていなかった.振動数をより高くし,振動振幅を大きくすることにより,加工時間をさらに短縮できる可能性が大きい.このため,より大電流を流せる圧電素子ドライブアンプを用いることを前提に,高振動数大振幅領域での振動付加放電加工実験用の振動付加装置を試作した.加振振動数の上限を5kHz,加振振幅を2μm程度とすることを目標とした.振動方向と加工速度との関係を明らかにするため,振動方向を3方向とし,圧電素子3個と平行ばね機構とから装置を構成した.基本特性を明らかにするための実験を行い,ほぼ設計通りの性能を有することを明らかにした.(2)金属除去量と放電パルス数との関連についての実験放電電流パルス数をカウントしながら放電加工を行うことで,パルス数と加工量の間に良い相関関係があることを確認し,パルス数カウントにより加工の進捗状況を予測することが可能なことを明らかにした.放電パルス数と金属除去量の関係は,ほぼ線形関係にあるが,放電電流パルスの幅と高さは常に均一なものではなく,各放電毎に異なる.すなわち,放電加工に関連する放電エネルギーは均一なものではない.このため,パルスカウンターにより一定の閾値以上のパルスをカウントする方法では電気的なノイズをも1発の放電パルスとしてカウントしてしまい,金属除去量を放電パルス数により予測する際の誤差となるので,本年度においては,多数回の実験により得られたパルスの幅と高さを統計的に分析することにより,平均放電エネルギーを算出し,放電パルス1発あたりの平均加工エネルギーを求めることに成功した本年度の研究では,放電パルス数カウントによる新しいマイクロ放電加工のモニタリング手法を開発し,放電パルス数と全放電加工エネルギーが金属除去量ならびに工具電極消耗量と良い相関を示すことを確認した.1.工具電極消耗量は,工具電極と被削材の組合せや加工条件により異なるので,加工量を推定するためには工具電極消耗量を正確に推定する必要があるが,本モニタリング手法により電極消耗量の推定が可能となり,その結果精度の高い加工が行えるようになった.2.材料除去量が増加すると当然,放電加工パルス数と全放電エネルギーは増加するが,同一の加工条件であれば,平均放電エネルギーは一定である.3.工具電極消耗量を正確に推定することは,棒状の単純形状の工具電極を使用して加工を行う創成マイクロ放電加工において特に重要である.4.従来,放電加工の容易性を判断する基準として,被削材の熱伝導率(λ)と融点(θ)の積,λ・θ積が提案されていたが,本研究では,これに被削材の電気抵抗ρを加えたλ・θ・ρ積を提案した.λ・θ積では,放電加工の容易性は加工時間を尺度に論じられてきたが,加工時間は,工具電極と被削材の溶着による電気的な短絡,キャビテーションなどに大きく依存するため,加工時間を放電加工の容易性の尺度とすることは適切ではない.例えば,λ・θ・ρ積によるとアルミニウムは,最も放電加工が容易な材料と判定されるが,その加工時間は他の材料よりも長い.これは,工具電極と被削材の溶着などが影響するためである。放電パルスカウントによるモニタリングを試みた結果,同一の加工量の場合,アルミニウムは最も少ない放電パルス数で加工することができた.これにより,λ・θ・ρ積が,放電加工の容易性を判断する指標として有効なことが示された.
In　vitro口腔発がんモデルを用いた新規分子標的治療法の開発

研究代表者らが樹立したヒト正常舌角化細胞(Human Tongue Keratinocyte: HTK)を用いたin vitro口腔発癌モデルを利用して転移関連遺伝子・がん幹細胞関連遺伝子を探索し、これらをターゲットにした新規分子標的薬開発の端緒をつけた。その結果、ヒトパピローマウイルス由来の口腔癌細胞やin vitro発癌モデルでは現状の化学療法に対する耐性は獲得できず、Non-human papilloma virus由来の悪性腫瘍にのみ耐性が生じ、それがAKTやPI3Kによるものであることを明らかにした。今後はAKTやPI3Kに対する標的治療は重要であると考えられた。HTK-HPV陰性モデルにRAS遺伝子もしくはEGFR遺伝子(野生型、変異型)とMYC遺伝子(iPS細胞のいわゆるYamanaka gene)を導入した場合のほうが、HTK-HPV陽性モデルに同じ組み合わせの遺伝子を追加導入した場合に比べて、ヌードマウス皮下で早く腫瘍形成をみとめた。またヌードマウス舌への同所性移植においてもHTK-HPV陰性モデルでは舌腫瘍形成の後、頸部リンパ節転移の頻度が高かった。研究代表者らが樹立したヒト正常舌角化細胞(Human Tongue Keratinocyte: HTK)を用いたin vitro口腔発癌モデルを利用し、分子標的薬、放射線療法などの抗腫瘍効果を検討する。その結果をふまえ、口腔癌における転移関連遺伝子・がん幹細胞関連遺伝子など、新た棚分子標的候補を検索し、それらを標的とした治療法の開発を目指している。また、従来の報告通り、放射線感受性はHPV positiveの口腔癌培養細胞はHPV negativeのものと比較して明らかに感受性を示した。研究の時間的制約があり、動物実験などは取りかかれていない。ただしin vitroについては順調に研究を進めている。研究代表者らが樹立したヒト正常舌角化細胞(Human Tongue Keratinocyte: HTK)を用いたin vitro口腔発癌モデルを利用し、分子標的薬、放射線治療などの抗腫瘍効果を検討する。その結果を踏まえ、口腔がんにおける転移関連遺伝子・がん幹細胞関連遺伝子など新たに分子標的候補を検索し、それらを標的とした治療法の開発を目指している。Human papillomavirus(HPV)感染陽性のHTK細胞及びHPV陰性のHTK細胞、さらに従来よりin vitroで研究が進んでいるHSC-3およびリンパ節転移株であるHSC-3M(いずれもHPV陰性)、SCCKN(HPV陰性)、SCC25(HPV陰性)、UPCA-SCC090((HPV陽性)を用いて頭頸部がんにおいて第一選択薬であるシスプラチン、および頭頸部がんで唯一使用可能なセツキシマブへの感受性及び放射線感受性を検討した。その結果、HPV陰性培養細胞は、HPV陽性培養細胞と比べてIC50は高く、放射線も閾値は高かった。これはがん化学療法における耐性につながるものであると考えた。さらにこれらの細胞のEGFRの遺伝子変異を次世代シークエンサーを用いて解析すると、EGFRの遺伝子変異の部位・個数には耐性は影響しないことが確認された。現在のところ、EGFRのコピー数の変化は確認できていないので結論は出ないが、EGFRにおける遺伝子変異が耐性獲得に関与する可能性は低いと思われた。また、CDDP, Cmab、放射線すべてに耐性傾向をしめすSCCKNのEGFRよりも下流のシグナルを検索するとPI3Kに変異が存在することが確認され、抗がん剤耐性獲得においてはPI3K-AktシグナルやMAPK経路など、より下流のシグナル遺伝子の変異が強く影響する可能性を見出した。上記細胞株の遺伝子変化をcDNAマイクロアレイで比較検討し、EGFR、RASがん遺伝子の下流で変化する因子の同定を試みる。上記細胞株の遺伝子変化をcDNAマイクロアレイで比較検討し、薬剤耐性機構、転移関連する重要な遺伝子の同定を目指す。特にEGFR遺伝子異常がない腫瘍への有効な分子標的治療について検討していく。新しいWHOの口腔・咽頭癌のTNM分類においてわれわれは以前より解析していたようにHPV(Human Papillomavirus)の感染の有無により治療方針が異なることが提唱されている。われわれの実験系でも放射線感受性に違いを確認している。今後は更なる解析を検討する。口腔癌実験の消耗品の使用が予測より下回った。本年度は研究時間やin vitroの研究に時間がかかったことから、実験動物の費用が残金となっている。ひきつづきin vitro実験の消耗品等に用いる。次年度の動物実験の費用に使用予定である。
15-16世紀のフェッラーラにおける美術活動に関する調査研究

本研究は、ルネサンス期にエステ家の支配したフェッラーラにおける美術活動に関して、君主の世代間、複数の画家間、ジャンル間等、多様な関係性という新たな観点からの総合的理解を目指した。とりわけ複数の君主の治世にわたって制作が継続された美術プロジェクト、複数の世代の画家たちによって受け継がれた要素、大壁画と板絵や写本彩飾画との相互的な関連、祝祭・演劇と美術活動の関連といった、様々な関係性の網目から、エステ宮廷の美術の特徴を新たに抽出した。ルネサンス期フェッラーラにおける美術事情に関する資料を集成したA. Franceschini, Artisti a Ferrara in eta' umanistica e rinascimentale. Testimonianze archivistiche, 2 vols(1995)を道しるべとし、君主のパトロネイジという観点からの示唆に富む歴史家W.グンダーシャイマー、C.ローゼンバーグらのエステ宮廷研究も参照しつつ、エステ宮廷における美術活動について、テクストと図像双方の一次資料の収集と整理をおこなった。ついでベルフィオーレ宮殿のストゥディオーロ(書斎)の装飾板絵連作に関する調査研究として、リオネッロ・デステの時代に、ストゥディオーロのムーサ連作の図像に関してリオネッロに示唆を与えた宮廷学者グアリーノ・ダ・ヴェローナの書簡が示す当初の構想から、ボルソ・デステの時代に同プロジェクトが引き継がれた際に、図像がどのように変化したのか、そしてそれはボルソの意向を含めいかなる力学によるものであったのかを探究した。S.キャンベルやJ.マンカは連作のうちコスメ・トゥーラが担当した作品に関してのみ分析をおこなっているが、同様の作業を各地に所蔵される、その他のムーサたちを描く板絵に関しても実施した。上記研究実績の概要に示したように、当初の研究計画に従い、おおむね順調に研究目的が達成された。エステ宮廷における美術活動において、テクストと図像双方の一次資料の収集と整理が進行した。ベルフィオーレ宮殿のストゥディオーロ連作に関しては、本務校における半年間の講義において取り扱い、考察を深めることができた。ただし論文執筆には及ばず、それは次年度に持ち越さざるを得なかった。資料調査に関しては、アメリカ合衆国や国内の図書館や研究機関等に所蔵されるものを中心におこなった。昨年度に引き続き、エステ宮廷における美術活動について、テクストと図像双方の一次資料の収集と整理をおこなった。ついで15-16世紀のフェッラーラにおける祭壇画に関する調査研究として、フェッラーラ派が生み出した祭壇画における特徴的な要素の中で、継続的に採用され続けた、高い基壇に乗り、建築的に複雑な形状をした玉座の描かれた祭壇画(代表的な作例としては、コスメ・トゥーラのロヴェレッラ祭壇画とサン・ラッザーロ祭壇画、エルコレ・デ・ロベルティのポルトゥエンセ祭壇画等が挙げられる)に関して、画像および関連史料を収集することにより、その継承の実態を正確に跡付けるともに、そのことの持つ意味について考察を試みた。祭壇画の場合、その注文主は必ずしもエステ家のみとは限らないが、同家が教会や修道院と関わりを持つ事例も含まれるため、注文の経緯等に関しても、資料を精査した。16世紀のエステ家宮廷画家ドッソ・ドッシと15世紀フェッラーラ派絵画との関係に関する研究に関しては、G.フィオレンツァが先鞭をつけた課題であるが、その示唆を受けつつ、研究を発展させた。特に、ドッソ・ドッシの代表作の一つ《魔女図》(ローマ、ボルゲーゼ美術館)と昨年度に研究を行ったベルフィオーレ宮殿のムーサイ連作との類似は、そのいずれもが、制作過程において描き直しを経験しているという点からも興味深いものであり、その点から問題を展開させるように試みた。15-16世紀のフェッラーラにおける複雑な建築的構造を有する玉座の描かれた祭壇画の系譜に関する研究に関しても当該作品群のデータ収集および分析が進んだ。16世紀のエステ家宮廷画家ドッソ・ドッシと15世紀フェッラーラ派絵画との関係に関する研究については作品調査および文献資料収集を推進した。資料調査に関しては、イタリア共和国や国内の図書館や研究機関等に所蔵されるものを中心におこなった。個々の論点について論文執筆には至っていないが、研究実績を踏まえたうえで、中央公論新社の『西洋美術の歴史』シリーズの一巻『ルネサンス1』に、フェッラーラ派に関する項を執筆することができた。本研究は、ルネサンス期にエステ家による高度な宮廷文化が開花したフェッラーラにおける美術活動に関して、個々の画家や個別の作品研究ではなく、君主の世代間、複数の画家間、ジャンル間等、多様な関係性という新たな観点からの総合的理解を目的とするものである。とりわけ複数の君主の治世にわたって制作が継続された美術プロジェクト、複数の世代の画家たちによって受け継がれた要素、大壁画と板絵や写本彩飾画との相互的な関連、フェッラーラ宮廷を特徴づける祝祭・演劇と美術活動の関連といった、様々な関係性の網目から、エステ宮廷の美術の特徴を新たに抽出することを目指した。本年度は昨年度に引き続き、エステ宮廷における美術活動について、テクストと図像双方の一次資料の収集と整理をおこなった。ついでスキファノイア宮殿「12カ月の間」装飾壁画と板絵、写本装飾画の相互関係に関する研究をおこなった。

モチーフ、構図等の相互的な引用関係の事例の調査からは、スキファノイア壁画の下段の構図をそのまま利用した写本彩飾や、上段や中段のモチーフを部分的に引用した板絵、版画、写本彩飾画の存在が確認された。併せて、それらの関係のフェッラーラ派の文脈における意義についても検討した。ついで、フェッラーラ宮廷における祝祭・演劇と美術の関係に関する研究をおこなった。エルコレ・デ・ロベルディ作品における舞台美術との関係を扱ったJ.マンカの先駆的な研究を参照しつつ、フェッラーラにおける演劇実践や宮廷祝祭の状況が、どのような形で美術作品と相互関係を作りだしたのかについて、一次資料を用いながら分析した。現実の祝祭を飾った凱旋門や凱旋車、活人画といった要素がいかに美術作品に取り入れられているかについても考察した。本研究は、ルネサンス期にエステ家の支配したフェッラーラにおける美術活動に関して、君主の世代間、複数の画家間、ジャンル間等、多様な関係性という新たな観点からの総合的理解を目指した。とりわけ複数の君主の治世にわたって制作が継続された美術プロジェクト、複数の世代の画家たちによって受け継がれた要素、大壁画と板絵や写本彩飾画との相互的な関連、祝祭・演劇と美術活動の関連といった、様々な関係性の網目から、エステ宮廷の美術の特徴を新たに抽出した。当初の研究計画に記載した、15-16世紀のフェッラーラにおける複雑な建築的構造を有する玉座の描かれた祭壇画の系譜に関する研究、および16世紀のエステ家宮廷画家ドッソ・ドッシと15世紀フェッラーラ派絵画との関係についての研究にかかわる調査等を、海外の図書館における調査や国内研究機関の調査等により推進する。当初の研究計画に記載した、フェッラーラ派に関する文献および画像データの収集およびそれに基づくデータ・ベースの構築、およびスキファノイア宮殿「12カ月の間」装飾壁画と板絵・写本装飾画の相互関係に関する調査研究を、ヨーロッパおよび国内の主要図書館における資料調査、およびヨーロッパの美術館や教会における作品調査によって推進する予定である。西洋美術史