hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
特発性間質性肺炎の病態修飾因子及び予後因子としてのKL-6の意義に関する研究

平成16年度には,KL-6が特発性間質性肺炎患者や肺癌患者の臨床的予後因子として如何なる意義を有しているかに関する検討および細胞機能へKL-6が及ぼす影響を検討した。特発性間質性肺炎患者の臨床的予後因子としての検討としては,数年来継続してきた全国の呼吸器疾患専門診療施設数施設による共同研究として,血清KL-6値が特発性間質性肺炎の予後因子として臨床的意義があるかどうかについて成績の集計を行い,投稿した。MUC1の細胞外ドメインには60bpの繰り返し配列(tandem repeat)があり、多型が存在する。そこで、担癌患者の白血球からMUC1のtandem repeatの長さを測定し、予後との相関を検討した。肺癌患者と非担癌者と検討した結果、肺腺癌患者は非担癌者と比較してMUC1の長さが長く,MUC1の長い腺癌患者程有意に予後不良であった。系統発生学的研究としては,肺の発生過程におけるKL-6の出現時期、分布などを免疫組織学的に調査した。KL-6を含めた7つの抗MUC1抗体で免疫染色(ABC法)を用いて胎児肺を調べたところ、陽性細胞の出現時期、分布に差を見出した。胎生期の全期間を通じて広範囲に大量に存在するMUC1は,KL-6、NCL-MUC1で、発生過程全期間にわたる必須のMUC1と推測された。HMFG2、H9は発生初期の気道の先端部に陽性となり、さらにこの部分が肺胞へ分化し肺胞が完成された時期には肺胞上皮のみに陽性であった。霊長類において、どの霊長類で血清KL-6が産生されたかを調べることは、肺の進化を考える上で重要な課題と考えられる。そこで,12種類の霊長類で血清中のKL-6値を測定した。ニホンザルには存在せず,オランウータン,チンパンジーのみにKL-6が存在していることがわかった。KL-6は進化の過程で獲得され、ヒトに存在していることがわかった。私達が発見し、現在医療保険で間質性肺炎の診断と疾患活動性の血清マーカーとして承認されているKL-6が特発性間質性肺炎の予後因子としてどの程度有用であるかどうかを検証するための臨床研究を開始した.具体的には,まず,広島大学医学部附属病院第2内科の関連病院20施設に間質性肺炎の診療状況をアンケート調査した.その結果,13施設がかなりの数の特発性間質性肺炎患者を診療中であり,後向き研究に協力の意向であった.更に,中国四国地方にある大学病院呼吸器内科教室に,本研究への参加の有無を問いかけている.これらの施設でまず,後向き研究を行う.その後,これらの施設の中から,予後因子としての血清KL-6値の意義に関する研究を開始するスケジュールである.また,KL-6分子の細胞生物学的意義の研究に関しては,本年度は,KL-6の発現調節に関する検討を行った.肺癌細胞株ABC-1細胞に対して,サイトカイン(IFN-g,TNF-a,IL-4,IL-5,IL-13,HGF,IL-2)を添加し,KL-6分子の培養上清中への産生を検討した.ABC-1細胞に対しては,TNF-aのみが発現の増強作用を示した.また,その他の肺癌細胞株6種に対しても上記サイトカインのKL-

6産生刺激作用を検討したが,ABC-1,RERF-LC-OK,VMRC-LCD,VMRC-LCP,A549,PC9細胞はいずれも単独のサイトカインでは産生増強作用を示さなかった.現在,正常肺の器官培養系の作成を行っており,生体内での粗織を保持したままの臓器内でKL-6の産生に及ぼす各種サイトカイン及びサイトカイン混合液の影響を検討中である.更に,本年度購入した凍結乾燥機とHPLCカラムを使用して,精製KL-6分子を採取したので,この精製分子の各種細胞へ対する細胞学的影響を検討中である.我々が発見したKL-6は間質性肺炎の診断、また活動性の血清マーカーとして承認され使用されている。このKL-6が特発性肺線維症の予後因子としてどの程度有用であるかを検証するために、以下の臨床研究を行った。特発性肺線維症(IPF)において血清KL-6を含めた複数の因子で、いずれが最も優れたIPFの長期予後の推定因子になり得るかを、複数施設で検討を行った。対象は発症推定時期を決定でき、さらに発症から3年以内に初めて測定したKL-6を初期値とし、その後3年間の経過観察が可能であった症例でおこなった。予後因子の比較は、KL-6初期値とその時点における年齢、また同時に測定されたCRP、LDH、ESR、呼吸機能検査、動脈血液ガス分析、SPO_2などで比較検討した。その結果、最も優れたIPFの予後推定因子はKL-6であることがわかった。さらに、血清KL-6と予後との関係に関して、前向き研究も行っている。また、肺線維症の病態とKL-6の関係を検討するため、特発性肺線維症と強い線維化病変がみられるパラコート肺について検討をおこなった。この結果、特に増生する肺胞II型上皮の数が血清KL-6値に強く影響することがわかった。さらに、KL-6の産生機序の解明の一端として、胎児肺におけるKL-6、またKL-6以外のMUC1の産生状況の検討も現在行う予定にしている。また、ProteaseとKL-6の関係を検討するため、E-64d、CA-074、Chymostatin、Z-Leu-Leu-H、E-64c、Z-Asp-CH2-DcBなどのプロテアーゼインヒビターを用いて、培養ABC1細胞からのKL-6の分泌量の変化を検討している。平成16年度には,特発性間質性肺炎患者や肺癌患者の臨床的予後因子としての検討および細胞機能への影響を検討するために系統発生学的研究を行った。特発性間質性肺炎患者の臨床的予後因子としての検討としては,数年来継続してきた全国の呼吸器疾患専門診療施設数施設による共同研究として,血清KL-6値が特発性間質性肺炎の予後因子として臨床的意義があるかどうかについて成績の集計を行い,投稿中である。現在,新たに胸部CT画像と血清KL-6値の変動の間にいかなる相関があるかあらたなプロジェクトを立ち上げている。MUC1の細胞外ドメインには20bpの繰り返し配列(tandem repeat)があり、この繰り返し配列の数は遺伝的に決定されており多型が存在する。そこで、担癌患者の白血球からMUC1のtandem repeatの長さを測定し、予後との相関を検討した。肺癌癌者と非担癌者と検討した結果、肺腺癌患者は非担癌者と比較してMUC1の長さが長く,MUC1の長い腺癌患者程有意に予後不良であった。系統発生学的研究としては,肺の発生過程におけるKL-6の出現時期、分布などを免疫組織学的に調査した。KL-6を含めた7つのMUC1抗体(KL-6、NCL-MUC1、HMFG1、HMFG2、DF3、NCL-MUC1-
政権交代と政官関係の変容―政策形成過程をめぐる比較歴史研究

本研究は、現代日本に訪れた政権交代を考えるうえで、近代日本における政権交代と政官関係の関係を比較歴史研究の手法を用いて行った。同時代政治が民主党政権から自民党政権へと再交代したことで、政官関係の変化を見るうえでも貴重な示唆が得られた。具体的には政権交代が進むことで行政を把握する必要性がいずれの政権与党においても深く認識され、「政治主導」の方途として、政権の志向する政策と省庁の状況を合わせていることが考慮されることとなった。とりわけ、研究代表者が民主主義の方途と考える行政官のオープンドア政策については、現状においても大きな変化が進んでいる。今後も比較の視点から推移を検討していきたい。政権交代に伴う政官関係と政策形成過程の変化を歴史的な比較軸に立って明らかにしようとする本研究のうち、2年目となる当該年度は、これまでの研究蓄積を生かしつつ、大正政変から第二次護憲運動に至る10年間を第二期と捉えて研究を進めた。2013年1月、官僚との協働を持って作られた政党政治が分裂により再編していく状況を捉え「立憲政友会の分裂と政党支持構造の変化ー一党優位制の崩壊と二大政党制の端緒ー」(坂本・五百旗頭編『日本政治史の新地平』吉田書店)として発表した。そこで着目した中央土地方、学問と現実政治の距離への検討を深め、同年2月には「吉野作造と大正の公論空間ー地域メディアでの口述筆記からー」(『近代日本研究』29号)を発表し、政治史のみならず、現代政治の研究者からも多くの示唆を得た。とりわけ前者はJapanese Political Developmentの取り組みのひとつとして評価を得た。現代との比較歴史研究についても考察を進め、その一部を2012年7月に「日本政治史から見た課題」(経団連21世紀政策研究所編刊『政権交代時代の政府と政党のガバナンス』)として発表した。同論文に対しては、内外から多くのコメントを得ることができた。同論文の作成過程において、政権交代後の政策形成過程に関するヒヤリング、資料調査も進めた。その後、特に官僚制の部分について研究、調査を進め、その成果をより広く一般に向けて問うべく、新書として刊行する作業を進めている。これまで研究論文として積み重ねてきた部分を大幅にリビジョンし、本研究を通じて得た視野から大きく切り直し、比較歴史研究の視点を入れた議論を展開することで、現在の日本政治にも通用する視角を提示することができればと考えている。最終年度となった3年目は、これまでの研究内容をまとめたものとして『近代日本の官僚ー維新官僚から学歴エリートへ』(中公新書、356p)を刊行することができた。幸いにも日本政治史のみならず、現代政治の研究者からも好評を得ることができた。その後、本書を中心とした議論を多くの研究者、官僚をはじめとする実務家と展開することができている。国際比較も本格的に着手することができた。延世大学校、国民大学校の研究者とのディスカッションをはじめ、韓国、台湾、ドイツの研究者と議論を進めた。この比較研究は以後も継続し、ひとつの研究としてまとめていきたいと考えている。政権交代に伴う政官関係と政策形成過程の変化を歴史的な比較軸に立って明らかにしようとする本研究のうち、初年度は、これまでの研究蓄積を生かしつつ、藩閥政権から初の政党内閣、さらに山県、伊藤内閣を経て桂園時代に至るまでの20年を第一期と捉えて研究を進めた。まず2011年4月、政官関係の歴史的展開から政党ガバナンスが構築されていく過程を長期的かつ俯瞰的にまとめた「政治主導と官僚主導」(『レヴァイアサン』48号)を発表した。制度研究者を主な読者とする同誌に発表したことで、これまでとは異なる反応を得ることができたのは、比較制度分析を行う本研究にとって有益であった。ついで5月には日本選挙学会にて「政界再編と政権交代」と題し、政党中央におけるガバナンスの形成と構造の再構成を論じた。このセッションにも多くの現代政治研究者に来場して頂き示唆を得た。夏以降は、European Association of Japanese Studiesにおいて、"From Conflict to Compromise: The Changing Relations of Party Politics and Ministerial Bureaucracy in Interwar Japan"と題して比較制度分析の手法を用いて当該期を論じた。欧州の日本研究者が集まる同会での報告により、イギリス、ドイツ、イタリアとの同時代的比較の観点を得ることができた。政権交代後の政策形成過程に関するヒヤリング、資料調査も進め、その成果として夏に「危機與改革中的日本政治」と題する論文を『國際關係研究月刊』(香港)に寄稿、秋に台湾政治大学における日本研究研討会にて「岐路をゆく日本政治」と題して、冬の日台フォーラムで「政権交代後の日本政治」と題して発表した。同フォーラムには中国、韓国、アメリカの研究者も出席しており多くの示唆を得た。

政権交代に伴う政官関係と政策形成過程の変化を歴史的な比較軸に立って明らかにしようとする本研究のうち、2年目となる当該年度は、これまでの研究蓄積を生かしつつ、大正政変から第二次護憲運動に至る10年間を第二期と捉えて研究を進めること、前年に引きつづき政権交代後における政官関係の変化について、ヒヤリングと文書資料の収集を進めることを設定した。前者については、比較歴史制度分析の観点から研究をすすめ、その結果、上記のとおり2本の学術論文を公表することができた。おおむね順調に進んでいると考えている。資料収集についても、東京近郊の資料館をはじめ、松山、京都、盛岡、神奈川の資料館、個人宅において貴重な資料を得ることができ、次年度への準備も進んでいる。後者については比較制度分析の観点から研究をすすめ、その結果、上記のとおり1本の論文を公表することができた。資料収集についても、政権関係者、現役官僚、官僚OBへのヒヤリング、文書資料の公開請求による資料収集を順調に行うことができており、次年度への準備も進んでいる。以上の状況から、現在、本研究は順調に進展していると判断している。初年度は、これまでの研究蓄積を生かしつつ、藩閥政権から初の政党内閣、さらに山県、伊藤内閣を経て桂園時代に至るまでの20年を第一期と捉えて研究を進めること、政権交代後における政官関係の変化について、ヒヤリングと文書資料の収集を進めることを設定した。前者については、比較歴史制度分析の観点から研究をすすめ、その結果、上記のとおり1本の学術論文を公表し、2回の学会報告(国内1回、国際1回)を行うことができた。資料収集についても、東京近郊の資料館をはじめ、栃木、千葉、埼玉、神奈川の資料館、個人宅において貴重な資料を得ることができ、次年度への準備も進んでいる。後者については比較制度分析の観点から研究をすすめ、その結果、上記のとおり1本の論文を国際学術誌に公表し、2回の国際学会報告を行うことができた。本研究は政権交代に伴う政官関係と政策形成過程の変化を歴史的な比較軸に立って明らかにしようしている。とりわけ、これまで制度改正と意識変化から説明されてきた変化を、ブラックボックスとして扱われてきた政策形成過程の変化まで深めることにより、戦前日本における政権交代の経験知を用いて現代日本の政権交代との比較歴史制度分析を行い、戦前日本の政権交代をより実体的に捉えると共に、現代日本の政権交代に伴う諸問題に対する本質的な理解を得ることを目的としている。前項に記載したとおり、研究は計画にそって順調に進展している。
酵素免疫側定法の食品添加物分析への応用-天然抗菌剤の分析法の開発-

天然抗菌剤として使用量が多く分析法の開発されていないしらこ蛋白について、その主成分であるプロタミンに対するマウスモノクロナール抗体を作製し、測定法の確立を試みた。まず、市販されているプロタミンの純度をSuperose6カラム(1x30cm)によるゲルろ過法を用いて測定し、ほぼ単一のピークを持つシグマ製プロタミン(さけ)を免疫原に選んだ。BALB/c(♀)マウスに、上記のプロタミン(2mg/mL)と等量の完全フロインドアジュバントのエマルジョンを腹腔内に注射した。さらに約6カ月後プロタミンのみで免疫し、3日後、マウスの脾臓細胞を取り出し、ポリエチレングリコールを用いてミエローマ細胞と細胞融合させた。次に5%炭酸ガスインキュベータ-中でHAT培地を用いてハイブリドーマのみを選択的に培養した。約2週間後、培養上清中(588ウエル)の抗プロタミン抗体をELISA法を用いて測定し、抗体産生融合細胞を選別した。さらに限界希釈法を繰り返し、19個のモノクローン性細胞株を樹立した。プロタミンの測定に適したモノクロナール抗体を見つけるために、プロタミン存在下でELISAを行い、結合抑制の観察されるモノクナ-ル抗体を選び出した。現在、測定系の最適条件の検討を行っている。測定系の確立後、食品からの抽出条件を検討し、添加回収実験を行って、市販食品へのプロタミンの使用状況を調査する計画である。
乳児放射線検査における線量と画質の最適化手法の確立

医療施設においてX線を用いた検査は必要不可欠なものとなっている。特に胸部単純一般撮影は頻繁に実施される検査であり、それに伴い患者の被ばくが生じる。小児は放射線感受性が成人と比較して高く、検査の際には撮影条件を適切に設定するとともに被ばく線量を評価する必要である。臓器吸収線量を評価する方法として物理ファントムを用いてガラス線量計で測定する方法があるが、ガラス線量計の読み取りにはアニーリング処理などの手間がかかる。そこで本研究では数値ファントムを開発し、モンテカルロシミュレーションにより臓器吸収線量を評価することを考えた。臨床で得られた小児CT(Computed Tomography)画像から胸部領域の臓器・組織を抽出し3次元表示した後、多数の四面体から成るテトラファントムを作成した。作成したテトラファントムをモンテカルロコードPHITSに読み込み、左右の肺、心臓、肋骨、胸骨、軟部組織の臓器吸収線量を計算した。一昨年度の段階でファントム作成方法について検討し、本年度は、最適な作成条件について、ポリゴン数、計算時間、データ容量、臓器線量、ファントム内の線量分布をパラメータとして検討を進めた。結果として、ポリゴン数を64倍変化させても臓器線量やプロファイルに大きな影響はないことが明らかになった。ただし計算時間の変化は2分の1程度であり、ポリゴン数の減少による計算時間の効率化に大きな効果はみられなかった。このことから、ポリゴン数の設定について、各臓器形状を構成するのに必要以上に極端に減少させる意義や効果は少ないことが明らかになった。さらに臓器線量の実測及びX線画像の画質検証のため、テトラファントムから3Dプリンタにより実際のファントムの作成方法について検討し、適切な印刷条件を明らかにした。医療施設において放射線を利用した診療は必要不可欠なものとなっている。小児においては放射線感受性が成人と比較して高いものが多く、一般撮影やX線CT (Computed Tomography)等の放射線被ばくを伴う検査では撮影条件の最適化が重要となる。本研究では小児の胸部一般撮影による被ばくに注目し、臓器吸収線量を評価するためのコンピュータファントムを作成した。作成したファントムは多数の四面体から構成されるテトラファントムであり、四面体の数による計算時間を比較し、適切な計算条件を検討した。2歳女児のCT画像ボリュームデータを用いて胸部領域の臓器(肺、心臓、肋骨、脊柱および体輪郭)をセグメンテーションし、3次元で表示した後ポリゴンデータとして臓器形状や表面を処理した。ポリゴンデータはフリーのソフトを用いて連続四面体に変換した。また、このソフトを用いて四面体の数を変化させ、それぞれモンテカルロコードに取り込んだ。使用したモンテカルロコードはPHITS (Particle and Heavy Ion Transport code System)で、四面体の数の違いに対して肺の吸収線量、計算時間、データ容量を比較した。連続四面体から構成されるテトラファントムを作成した。四面体の数による計算時間には大きな差はみられなかった。テトラファントムについて、CTデータから作成する過程で臓器、組織の形状に平滑化処理を加えるため厳密に元のデータに基づいたものが再現されているとはいえない。しかし、放射線防護の観点から吸収線量を評価すという目的においては大きな問題ではないと考える。コンピュータにかかる負荷や計算時間を考慮すると、計算時間に大きな差がない場合には四面体の数は臓器等の形状を大きく変化させない程度に削減することが有効と考えられる。研究に必要とする小児2歳から10歳の男女のCTボリュームデータを、研究実施施設の倫理委員会に申請した上で取得し、3Dプリンタで出力可能なstlフォーマットで3D連続四面体のデジタルファントムを作成した。作成にあたり連続四面体数の最適化を検討することで、効率化を図った。またこのファントムを用いてモンテカルロシミュレーションにより胸部X線撮影における線量計算が実施可能なことを確認した。ファントム作成時のパラメータを調整し、計算効率の良い条件を導き出すことで、今後の研究を進めるベースができた。

本年度は2歳女児のCT画像ボリュームデータを用いて胸部領域の臓器(肺、心臓、肋骨、脊柱および体輪郭)をセグメンテーションし、3次元で表示した後ポリゴンデータとして臓器形状や表面を処理した。ポリゴンデータはフリーのソフトを用いて連続四面体に変換した。また、このソフトを用いて四面体の数を変化させ、それぞれモンテカルロコードに取り込んだ。四面体の数の違いに対して相対吸収線量とシミュレーションの計算時間及び線量プロファイル,データ量の違いを比較した.結果,データ量が減少すると計算時間は直線的に減少したが,吸収線量に大きな差は見られなかった.線量プロファイルについてはポリゴン数の増減により端部で差は生じるものの,全体としてはいずれも強い相関を示した.ファントム間で線量プロファイルに大きな差が生じたのは,この位置がファントムと空気の境界面付近に相当し,各ファントムで微妙に臓器の形状が変化して、ファントムにより組成や密度が異なり、同じ座標での吸収線量が変化してしまったことが原因と考えられる.一方でポリゴン数が8倍や1/8倍に増減しても強い相関を示したことから,計算時間や臓器線量を考慮すると1/8倍ポリゴンを利用することは有効と考えられる.今回の検討ではポリゴン数を変化させることで臓器のボリュームが変化してしまったことから、課題としてボリューム及び形状を極力変化させずにポリゴン数のみ変化させて比較することが挙げられる。医療施設においてX線を用いた検査は必要不可欠なものとなっている。特に胸部単純一般撮影は頻繁に実施される検査であり、それに伴い患者の被ばくが生じる。小児は放射線感受性が成人と比較して高く、検査の際には撮影条件を適切に設定するとともに被ばく線量を評価する必要である。臓器吸収線量を評価する方法として物理ファントムを用いてガラス線量計で測定する方法があるが、ガラス線量計の読み取りにはアニーリング処理などの手間がかかる。そこで本研究では数値ファントムを開発し、モンテカルロシミュレーションにより臓器吸収線量を評価することを考えた。臨床で得られた小児CT(Computed Tomography)画像から胸部領域の臓器・組織を抽出し3次元表示した後、多数の四面体から成るテトラファントムを作成した。作成したテトラファントムをモンテカルロコードPHITSに読み込み、左右の肺、心臓、肋骨、胸骨、軟部組織の臓器吸収線量を計算した。一昨年度の段階でファントム作成方法について検討し、本年度は、最適な作成条件について、ポリゴン数、計算時間、データ容量、臓器線量、ファントム内の線量分布をパラメータとして検討を進めた。結果として、ポリゴン数を64倍変化させても臓器線量やプロファイルに大きな影響はないことが明らかになった。ただし計算時間の変化は2分の1程度であり、ポリゴン数の減少による計算時間の効率化に大きな効果はみられなかった。
平滑筋臓器kit機能の細胞生物学的意義

自動運動能を有する平滑筋臓器におけるKitシグナルの役割を解明するために,c-Kit(レセプター型チロシンキナーゼ)発現ペースメーカー細胞の分布と機能について免疫組織化学的,電顕的に検討した.抗c-Kit中和抗体(ACK2)を出生直後から8日目まで腹腔内投与したBALB/cマウスを用いて調べた結果,消化管組織内でネットワークを形成するc-Kit発現細胞(Cajal間質細胞)は,ペースメーカーとしての役割だけでなく,腸管神経系から平滑筋へのシグナル伝達の調節も行っていることが示唆された.また,c-Kit発現細胞と消化管平滑筋細胞は同じc-Kit陽性の前駆細胞から発達しており,どちらの細胞に分化するかはKitシグナル伝達に依存していた.さらに,消化管平滑筋収縮機能の発達と細胞内Ca^<2+>シグナル系に対するc-Kitの役割について電気生理学的,薬理学的に検討した.パッチクランプ法により,膜電位固定下のc-Kit発現細胞において律動性のCa^<2+>依存性Cl^-電流が観察された.平滑筋細胞において,自発振動性及びcaffeine惹起のCa^<2+>依存性K^+電流が観察された.ACK2処置によりc-Kit発現細胞の欠落と自動運動障害をおこしている消化管では,bradykinin, acetylcholine, prostaglandinF_<2α>を含む薬物に対する収縮応答が異常に増大した.この異常な収縮応答は,律動性収縮の障害を伴っており,低温(25°C)の標本槽溶液で潅流したときの効果に類似していた.これらの結果から,c-Kit発現細胞からの律動性の電気的入力にtriggerされて平滑筋細胞の興奮性放電が律動的におこり,さらにその律動的な放電によって薬物に誘導される収縮の強さが調節されていると示唆される.自動運動能を有する平滑筋臓器におけるKitシグナルの役割を解明するために,c-Kit(レセプター型チロシンキナーゼ)発現ペースメーカー細胞の分布と機能について免疫組織化学的,電顕的に検討した.抗c-Kit中和抗体(ACK2)を出生直後から8日目まで腹腔内投与したBALB/cマウスを用いて調べた結果,消化管組織内でネットワークを形成するc-Kit発現細胞(Cajal間質細胞)は,ペースメーカーとしての役割だけでなく,腸管神経系から平滑筋へのシグナル伝達の調節も行っていることが示唆された.また,c-Kit発現細胞と消化管平滑筋細胞は同じc-Kit陽性の前駆細胞から発達しており,どちらの細胞に分化するかはKitシグナル伝達に依存していた.さらに,消化管平滑筋収縮機能の発達と細胞内Ca^<2+>シグナル系に対するc-Kitの役割について電気生理学的,薬理学的に検討した.パッチクランプ法により,膜電位固定下のc-Kit発現細胞において律動性のCa^<2+>依存性Cl^-電流が観察された.平滑筋細胞において,自発振動性及びcaffeine惹起のCa^<2+>依存性K^+電流が観察された.ACK2処置によりc-Kit発現細胞の欠落と自動運動障害をおこしている消化管では,bradykinin, acetylcholine, prostaglandinF_<2α>を含む薬物に対する収縮応答が異常に増大した.この異常な収縮応答は,律動性収縮の障害を伴っており,低温(25°C)の標本槽溶液で潅流したときの効果に類似していた.これらの結果から,c-Kit発現細胞からの律動性の電気的入力にtriggerされて平滑筋細胞の興奮性放電が律動的におこり,さらにその律動的な放電によって薬物に誘導される収縮の強さが調節されていると示唆される.自動運動能を有する平滑筋臓器におけるKitシグナルの役割を解明するために,c-Kit(レセプター型チロシンキナーゼ)発現ペースメーカー細胞の分布と機能について免疫組織化学的,電顕的に検討した.抗c-Kit中和抗体(ACK2)を出生直後から8日目まで腹腔内投与したBALB/cマウスを用いて調べた結果,消化管組織内でネットワークを形成するc-Kit発現細胞(Cajal間質細胞)は,ペースメーカーとしての役割だけでなく,腸管神経系から平滑筋へのシグナル伝達の調節も行っていることが示唆された.また,c-Kit発現細胞と消化管平滑筋細胞は同じc-Kit陽性の前駆細胞から発達しており,どちらの細胞に分化するかはKitシグナル伝達に依存していた.さらに,消化管平滑筋収縮機能の発達と細胞内Ca^<2+>シグナル系に対するc-Kitの役割について電気生理学的,薬理学的に検討した.パッチクランプ法により,膜電位固定下のc-Kit発現細胞において調律性のCa^<2+>依存性Cl^-電流が観察された.平滑筋細胞において,自発振動性及びcafferine惹起のCa^<2+>依存性K^+電流が観察された.ACK2処置によりc-Kit発現細胞の欠落と自動運動障害をおこしている消化管の平滑筋細胞では,Ca^<2+>貯蔵部位へのCa^<2+>再取り込み機能の低下が示唆された.正常マウス消化管平滑筋切片の等尺性張力測定において,高K^+脱分極或いはcarbacholで前収縮させた条件下で,caffeineによる弛緩が著しく加速されたことから,Ca^<2+>貯蔵部位内のCa^<2+>

含有量が収縮機能の維持において重要であり,その調節分子としてc-Kitも寄与することが示唆された.自動運動能を有する平滑筋臓器におけるKitシグナルの役割を解明するために,c-Kit(レセプター型チロシンキナーゼ)発現ペースメーカー細胞の分布と機能について免疫組織化学的,電顕的に検討した.抗c-Kit中和抗体(ACK2)を出生直後から8日目まで腹腔内投与したBALB/cマウスを用いて調べた結果,消化管組織内でネットワークを形成するc-Kit発現細胞(Cajal間質細胞)は,ペースメーカーとしての役割だけでなく,腸管神経系から平滑筋へのシグナル伝達の調節も行っていることが示唆された.また,c-Kit発現細胞と消化管平滑筋細胞は同じc-Kit陽性の前駆細胞から発達しており,どちらの細胞に分化するかはKitシグナル伝達に依存していた.さらに,消化管平滑筋収縮機能の発達と細胞内Ca^<2+>シグナル系に対するc-Kitの役割について電気生理学的,薬理学的に検討した.パッチクランプ法により,膜電位固定下のc-Kit発現細胞において律動性のCa^<2+>依存性Cl^-電流が観察された.平滑筋細胞において,自発振動性及びcaffeine惹起のCa^<2+>依存性K^+電流が観察された.ACK2処置によりc-Kit発現細胞の欠落と自動運動障害をおこしている消化管では,bradykinin, acetylcboline, prostagland in F_<2α>を含む薬物に対する収縮応答が異常に増大した.この異常な収縮応答は,律動性収縮の障害を伴っており,低温(25°C)の標本槽溶液で潅流したときの効果に類似していた.、これらの結果から,c-Kit発現細胞からの律動性の電気的入力にtriggerされて平滑筋細胞の興奮性放電が律動的におこり,さらにその律動的な放電によって薬物に誘導される収縮の強さが調節されていると示唆される.
流体構造連成解析を用いたくも膜下出血発症時の重症度予測

脳動脈瘤破裂によるくも膜下出血は,高い死亡率を有する疾患である.今回,数値流体力学解析を用いてくも膜下出血発症時の重症度を予測することを試みた.くも膜下出血発症の内頚動脈瘤のうち,破裂点を同定した16例を対象とし,軽症群(10例)と重症群(6例)に分類した.動脈瘤内に流線を表示し,瘤内の血液の流れと破裂点との位置関係を評価した.早い血流が直接破裂点にあたるものをタイプ1,血流がうっ滞した部分に破裂点があるものをタイプ2,早い血流とは直交する部位に破裂点がある場合をタイプ3とし,重症化しやすいタイプを評価した.タイプ1,2が重症群と,タイプ3が軽症群と関連していた.脳動脈瘤破裂によるくも膜下出血発症時の重症度予測を確立し,未破裂脳動脈瘤に対する治療適応の新たな判断因子を同定するために研究を進めている.脳血管に弾性をもたせ,より生体に近いシュミレーションと考えられる流体構造連成(fluid structure interaction: FSI)解析を用いることを考えているが,まずは前段階として50例の破裂脳動脈瘤に対して数値流体(computational fluid dynamics: CFD)解析を行った.「破裂孔が小さく出血量が少ないものが軽症,破裂孔が大きく出血量が大きいものが重症になる」との仮説のもと,脳動脈瘤破裂部位の様々な血行力学的指標(血流速度(velocity),圧力(pressure),壁面せん断応力(wall shear stress),壁面せん断応力ベクトルの変化の度合い(oscillatory shear index),エネルギー損失(energy loss)など)を測定している.特に破裂部位にどのように血流が衝突しているか,破裂部位にどの程度の圧力がかかっているかという点に注目している.なぜなら,破裂部位に強い血流が衝突している場合は,破裂部位の止血が困難となるのではないかと考えているためである.これら種々のパラメーターと重症度との相関関係を検討している.また,開頭手術を行った症例では,動脈瘤壁や破裂部位の性状(壁の厚さや薄い部分の面積)を顕微鏡下で観察し,CFD解析から得られる血行力学的指標との関連性を検討した.今後は血管に弾性を持たせたFSI解析を行い,破裂部位にかかる血行力学的指標をCFDで測定された値と比較検討する.両解析において異なる部分を評価し,どちらがより予測因子として妥当であるかを検討する予定である.くも膜下出血50症例に対してCFD解析を行い,破裂部位の血行力学的因子を検討した.おおむね順調に進んでいるが,今後FSI解析を行っていく必要がある.脳動脈瘤破裂によるくも膜下出血は,高い死亡率と後遺症発現率を有する疾患である.これまで多くの破裂に関わる因子が形態学・数値流体力学(Computational fluid dynamics: CFD)を用いて検討され,それらの因子をもとに未破裂脳動脈瘤の治療が行われている.今回,我々はくも膜下出血発症時の重症度を予測することが,未破裂脳動脈瘤の治療適応の決断の一助になると考え,CFD解析を用いて検証した.くも膜下出血発症の内頚動脈瘤のうち,破裂点を同定しえた16例を対象とした.入院時WFNS grade 1-3を軽症群(n=10),grade 4-5を重症群(n=6)とし,拍動流によるCFD解析を行った.動脈瘤内にstream lineを表示し,破裂点と瘤内のflow patternを評価した.早い血流が直接破裂点にあたるものをタイプ1,血流がうっ滞した部分に破裂点があるものをタイプ2,早い血流とは直交する部位に破裂点がある場合をタイプ3とし,重症化しやすいタイプを評価した.また,それぞれのタイプの破裂点における血行力学的指標(wall shear stress ,pressure difference)を評価した.重症群ではtype1,2,3がそれぞれ4例,2例,0例であり,軽症群ではそれぞれ2例,0例,8例であった.Type 2の動脈瘤における破裂点ではwall shear stressが有意に低く,type 1ではpressure differenceが高い傾向にあった.Type 1, 2のflow patternを示す動脈瘤は破裂時に重症化し,type 3のflow patternは重症化する確率が低い可能性がある.未破裂脳動脈瘤の治療適応の判断因子の1つとして有用である可能性が示唆された.脳動脈瘤破裂によるくも膜下出血は,高い死亡率を有する疾患である.今回,数値流体力学解析を用いてくも膜下出血発症時の重症度を予測することを試みた.くも膜下出血発症の内頚動脈瘤のうち,破裂点を同定した16例を対象とし,軽症群(10例)と重症群(6例)に分類した.動脈瘤内に流線を表示し,瘤内の血液の流れと破裂点との位置関係を評価した.早い血流が直接破裂点にあたるものをタイプ1,血流がうっ滞した部分に破裂点があるものをタイプ2,早い血流とは直交する部位に破裂点がある場合をタイプ3とし,重症化しやすいタイプを評価した.タイプ1,2が重症群と,タイプ3が軽症群と関連していた.さらに症例数を増やし,解析を進める.また,構造解析を行うためのソフトウェアを導入し,CFD解析を行った症例に対してFSI解析を行う予定である.脳神経外科平成28年度に構造解析を行うソフトウェアを購入予定であったが,数値流体解析後に使用する方針としたため,それに伴う経費は繰り越しとした.構造解析を行うソフトウェアを購入予定である.
ケア包摂型コミュニティのダイナミズムと開発主体アソシエーションに関する臨床研究

2018年度の研究実績は下記の通りである。主要には、ケア・コミュニティのダイナミズムの抽出とそのコミュニティ開発の主体と措定した家族介護者組織の実態把握に努めてきた。具体的には、「(公社)認知症の人と家族の会」と共同で、全国の家族介護者団体のリスト作りを行い、約300団体の所在を確認しリスト化してきた。ただ、同会からの情報は都道府県の偏りがあり、全国的な動向把握という本研究目的からすればまだ課題を残しているために引き続き情報収集の作業が必要となった。また、介護する夫や息子を主たる構成メンバーとする介護者組織の実態把握では、150団体のリスト化を行い、その活動状況は本研究のカウンターパートである「男性介護者と支援者の全国ネットワーク」の諸会議にて報告し、随時その情報を補強してきた。ネットワーク組織の発足10周年記念事業(2019年3月910日、於:京都市)を、本研究代表者が主催する研究会(立命館大学人間科学研究所男性介護研究会)と共同で実施してきた。特に記念事業2日目のシンポジウムにおいて男性の家族介護者組織の現状と課題をジェンダーや支援者、当事者の視点からその課題を探ってきた。研究成果は次年度に、同ネットワークのブックレットとして公刊する予定になっている。また2017年4月に日本(京都市)において開催され第32回国際アルツハイマー病協会(ADI)国際会議にて関わりを持った認知症に関係する全国レベルの当事者団体(認知症の人と家族の会・全国若年認知症家族会・支援者連絡会議・レビー小体型認知症サポートネットワーク)との共同行動を継続して行い、家族介護者組織の実態把握の調査研究フィールドとしてきた。主要な理由は、高齢者を介護する当事者団体の現状と課題に関わる海外関連組織の実態調査が、当該の研究者・機関との調整が不調に終わり、再調整が必要となったために、今年度内で実施が出来ず、次年度までに持ち越されたためである。具体的には、調査チームを組織し、「caresUK」(英国)を中心に2019年1月2月にかけて渡航計画を立て予算化したが、双方の都合で調整不調に終わったために事業執行が叶わなかったためである。以上のことから、年度内での実施が難しく、そのために本研究の期間延長を申し出て承認されている。本年度の主要な研究課題は、前年度に実施出来なかった「caresUK」を中心とした海外関連組織の調査研究を中心に組み立てている。そこでの研究成果を、日本の家族介護者組織の形成過程の研究との比較研究を行いつつ、本研究の総括としてケア・コミュニティのダイナミズム把握及びその開発主体の課題析出に取り組んでいく。また、これまでにリスト化してきた日本の家族介護者団体の状況把握についても、47都道府県くまなくその状況把握の調査を続けていくことが課題となったことから、各団体へのヒアリングやアンケート調査等も新たに実施しながら最新情報に更新していく予定である。本研究計画の初年次においては次の通り家族介護者組織の資料収集や関係者との意見交換、聞取調査や当該団体が主催する各種研修活動への参加での実績を積みあげてきた。まず、「ケア/ケアラー」アソシエーション関連の1次資料の収集に関しては、わが国で最も早くに組織化がなされた認知症の人と家族の会(1980年発足)や各地に組織される家族介護者の会等にかかわる関係資料の収集とデータベース化の作業を行ってきた。これらの家族介護者のアソシエーションやそこで形成されるコミュニティの全容は膨大な資料量になると考えられるが、多くは予想通り未整理のままにあった。その意味でも初年時に着手した1次資料のデータベース化が完成すれば、この分野での貴重な基礎的研究基盤になるはずである。その研究成果の一部は、大阪府介護者(家族)の会全体活動交流会(2017年1月)、兵庫県若年性認知症家族介護者連絡会研修会(2016年11月30日、2017年3月1日)、男性介護研究会/介護者組織研究会(2017年1月25日)、認知症関連団体での各種イベントにおいて報告し社会還元してきた。また、本研究の主要なカウンターパートである男性介護者と支援者の全国ネットワークとその関連団体については100団体を超える男性をターゲットとしたアソシエーションについて一定のリスト化を終え、その実態把握のための調査(アンケートおよびインタビュー調査)を次年度の早期に実施する手筈が整った。さらに2017年4月に京都で開催予定のADI(国際アルツハイマー病協会)国際会議のプレイベントとして日本の認知症関連当事者団体5団体が主催した「日本の当事者団体・あつまる」(京都2016年9月19日、東京2016年10月8日)で、本研究代表者は全体コーディネーターとして参加し、新たな研究と実践のネットワーク構築にも成果があった。「やや遅れ」ているという今次の自己点検評価は以下の理由による。一つは、本研究計画では初年度に、家族介護者組織(ケア/ケアラー・アソシエーション)の第1次リスト化を目指したが、予想以上に難航し、認知症関連の全国組織とそこへの参加団体の把握にとどまって、都道府県・市区町村という全体把握にまでは至らなかったことがある。逆に言えば、この分野の研究の基礎的基盤整備という課題が広範に残されているという状況の反映でもあり、本研究の意義の再確認ともなった。継続して第1次資料の収集と分析に尽力していきたい。

「やや遅れ」評価理由の第2は、海外での資料集約の遅れについてである。これは当初予定したADI(国際アルツハイマー病協会)の第31回大会(2016年4月、ハンガリー・ブダべスト)への参加が、開催都市の治安不安によって参加を見送ったことがある。幸い、ADI第32回大会(2017年4月)はこ日本・京都で開催されるために、各国各地域のアルツハイマー病協会の関する資料等々が大量に展示されるはずであり、この機会を活用し補いたいと考えている。初年次の研究作業に第1次資料の所在の確認と収集そして一定の分析に多くを要したという感は否めず、次年度以降の研究マネジメントの課題となった。今年度の研究実績として、まず第1に「家族介護者団体(ケア/ケアラー・アソシエーション)」のリスト化作業とその分析及び社会還元に力点を置いて行ってきた。このリスト作りとデータベース化は、この分野での基礎的な研究資料となるものである。今年度には全国各地で活動する介護する夫や息子、及びその支援者の会や集いのリスト化を行った。本研究のカウンターパートである「男性介護者と支援者の全国ネットワーク」と交流のある団体を中心に151団体のリスト作成を終え、その一部は同ネットワークのHPにて情報発信することが出来た。さらに、全国の認知症の人と家族を中心とする家族介護者団体の全国的な把握を「認知症の人と家族の会」及び「男性介護者と支援者の全国ネットワーク」との共同研究として次年度6月に実施することとなっている。このリスト作りとデータベース化が実現すればこの分野で始めての大規模な家族介護者団体の基礎資料になるはずである。第2の研究実績としては、ケアのコミュニティに係る国際研究に関与したことである。一つは、2017年4月に日本(京都)で開催された第32回ADI(国際アルツハイマー病協会)国際会議で、日本の認知症介護に係る家族等当事者5団体のワークショップを開催し、日本の男性介護者のコミュニティ(会や集い)に関する実践・研究の報告を行ったことである。二つには、2017年10月にオーストラリア(アデレード)にて開催された第7回世界介護者会議に本研究の連携研究者である斎藤真緒氏が「日本の男性介護者」の研究報告を行い、各国の関係者とのネットワークを広げてきたことである。三つには、こうした経緯を踏まえて、2018年3月には、「東アジアの介護実態と男性介護者」をテーマに、台湾・韓国の研究者(3人)を招聘して国際シンポジウムを主催し、研究ネットワークの構築を図ってきたことである。研究実績の概要でも記した通り、幾つかの重要な研究成果を収めてきている。一つは、介護する夫や息子という男性介護者の会や集いのリスト作成(151団体)である。次年度には全国の認知症の人と家族を中心とする家族介護者団体の把握を「認知症の人と家族の会」及び「男性介護者と支援者の全国ネットワーク」と共同研究として次年度6月に実施する運びとなっており、この分野での初めての全国的大規模な家族介護者団体の把握という基礎的研究資料になると思われる。もうひとつは、ADI(国際アルツハイマー病協会)国際会議や世界介護者会議、そして「家族主義」という福祉レジームを共通とする日本・台湾・韓国等東アジアでの男性介護者や家族介護者支援に関する国際共同研究のネットワークづくりへの道をつけたことである。これらの研究成果の幾つかは論文等々として発信し社会還元してきた。2018年度の研究実績は下記の通りである。
口腔扁平苔癬におけるDNAメチル化の研究

口腔扁平苔癬のDNAプロモーター領域のメチル化が,慢性炎症の継続や癌化に関与するのではないかの推測のもと研究を行った。炎症細胞が放出するサイトカインをネガティブフィードバック機構により抑制することで炎症を抑制し,また,細胞増殖と関連する因子のSOCS3 (suppressor of cytokine signaling 3)のDNAメチル化が口腔扁平苔癬では高率に見られ,mRNAの発現量が低下した。口腔扁平苔癬では,SOCS3のDNAプロモーター領域のメチル化により,サイトカイン発現の抑制機能が働かず,サイトカイン発現量が増加することで,慢性炎症の持続や癌化に関与することが示唆された。【目的】口腔扁平苔癬(oral lichen planus; OLP)は,口腔粘膜に角化異常を伴う慢性炎症性疾患であり,基底膜直下へのT細胞を主体としたリンパ球浸潤を特徴とする。また,OLPは数%で癌化が見られ,WHOでは口腔前癌状態に分類されている。近年,加齢や慢性炎症がDNAメチル化異常の誘発に関与し,癌化を引き起こしているとも考えられている。本研究の目的は,OLPにおける,DNAメチル化異常を検索し,OLPのDNAメチル化異常の癌化への関与と予測因子になりうるかを検討する。【結果】OLP26例,白板症5例,扁平上皮癌6例,OLP由来の扁平上皮癌1例について,IL-5, IL-6, INF-γのプロモーター領域について検索を終了した。IL-8, IL-10, IL-13については,検索途中である。MS-PCR結果は,OLP 26例ではIL-5はメチル化・非メチル化が22例・4例,IL-6は,19例・7例,IFN-γは1例・25例,白板症5例ではIL-5は5例・0例,IL-6は,1例・4例,IFN-γは0例・5例,扁平上皮癌6例では,IL-5は6例・0例,IL-6とINF-γはいずれもすべて非メチル化であった。OLP由来の扁平上皮癌1例は,IL-5, IL-6が部分メチル化で,IFN-γは非メチル化であった。【結論と考察】口腔扁平苔癬では,IL-5, IL-6のメチル化が高率に見られた。IL-5は扁平上皮癌で全例に見られ,癌化に寄与している可能性がある。また,IL-6のメチル化は扁平上皮癌では低率であり,炎症発生寄与している可能性がある。口腔扁平苔癬症例についてMS-PCR法による検索は,IL-10についてはPCRの反応を検出することが困難であり,プライマーを再作成し,再検索を行っている。メチル化と蛋白発現について検討しており,現在上記サイトカインについてreal-time PCRを行い,蛋白発現の検索を行っている。【目的】口腔扁平苔癬(oral lichen planus; OLP)は、口腔粘膜に角化異常を伴う慢性炎症性疾患であり、基底膜直下へのT細胞を主体としたリンパ球浸潤を特徴とする。OLPは数%で癌化が見られ、WHOでは口腔前癌状態に分類されている。近年、加齢や慢性炎症がDNAメチル化異常の誘発に関与し、癌化を引き起こしていると考えられている。本研究の目的は、OLPにおける、DNAメチル化異常を検索し、OLPのDNAメチル化異常の癌化への関与と予測因子になりうるかを検討する。【対象と方法】OLP、口腔上皮内腫瘍(上皮性異形成、上皮内癌)、扁平上皮癌、扁平上皮過形成のパラフィン切片よりDNAとRNAを抽出した。DNAにbisulfite処理を行いIL-6、INF-γサイトカインのプロモーター領域から作成したプライマーでmethylation-specific PCR (MS-PCR)を行った。total RNAを抽出し、cDNAへ変換し、各サイトカインプライマー(IL-6、INF-γ)について、real-time PCR法により発現を定量した。上記サイトカインのプロモーター領域について、有意な結果が得られなかったため、サイトカイン発現に関与しているサイトカインシグナル抑制因子であるSOCS-1(Suppressor of cytokine signaling-1)について、メチル化の検索を行った。【結果】OLP、口腔上皮内腫瘍(上皮性異形成、上皮内癌)、扁平上皮癌、扁平上皮過形成の間で、IL-6、INF-γのメチル化と発現量に有意な差は見られなかった。SOCS-1 DNAメチル化はOLP 28例中20例(71.4%)、口腔上皮内腫瘍24例中4例(28.6%)、扁平上皮癌は扁平上皮過形成9例中2例(22.2%)、扁平上皮癌10例中8例(80.0%)であった。サイトカインIL-6、INF-γのプロモーター領域についてのメチル化とreal-time PCR法により昨年より検体数を増し、検索を行ったが口腔扁平苔癬と扁平上皮癌との間に優位に差が見られなかった。サイトカインの発現に関与するSOCS1についてプロモーター領域のメチル化検索を行い、OLPと扁平上皮癌でではメチル化が高率に起こっているが、上皮内腫瘍ではメチル化が低率であった。現在この理由について、他の因子との兼ね合いがないか検討中である。口腔扁平苔癬(oral lichen planus: OLP)は,Tリンパ球の関与する慢性炎症性疾患でかつ口腔潜在性悪性疾患に分類されている。OLPはとくにヘルパーT細胞と関与した種々のサイトカインを発現する。

JAK/STAT経路を通じサイトカインをネガティブフィードバック機構により抑制し,炎症の抑制や細胞増殖に関わっているSOCS (suppressor of cytokine signaling)ファミリーのSOCS1とSOCS3についてプロモーター領域のメチル化およびmRNA量の検索を行った。対象はOLP29例,口腔扁平上皮癌(OSCC)15例,正常粘膜(頬粘膜からの擦過細胞診検体)10例をパラフィン包埋切片と擦過細胞からDNAとtotal RNAを抽出した。DNAは亜硫酸処理後,MSP法によりメチル化の検索を行った。SOCS1のメチル化はOLPで14/29例(48.3%),OSCC7/15例(46.7%),正常粘膜0/10例(0%),SOCS3のメチル化はOLPで25/29例(86.2%),OSCC11/15例(73.3%),正常粘膜0/10例(0%)に認められた。mRNA発現量は,OLPとOSCCともにSOCS1メチル化群の発現量が非メチル化群よりも増加し,メチル化とmRNA発現量での相関がなかった。SOCS3メチル化症例では,OLPとOSCCのいずれも,メチル化群が非メチル化群のmRNAの発現量よりも減少し,メチル化とmRNA発現量との間に関連が見られた。OLPは,SOCS3のDNAプロモーター領域のメチル化により,サイトカイン発現の抑制機能が働かず,サイトカイン発現量が増加することで,慢性炎症の持続や癌化に関与することが示唆された。上記結果について,研究協力者が論文発表を行い,受理された。口腔扁平苔癬のDNAプロモーター領域のメチル化が,慢性炎症の継続や癌化に関与するのではないかの推測のもと研究を行った。炎症細胞が放出するサイトカインをネガティブフィードバック機構により抑制することで炎症を抑制し,また,細胞増殖と関連する因子のSOCS3 (suppressor of cytokine signaling 3)のDNAメチル化が口腔扁平苔癬では高率に見られ,mRNAの発現量が低下した。口腔扁平苔癬では,SOCS3のDNAプロモーター領域のメチル化により,サイトカイン発現の抑制機能が働かず,サイトカイン発現量が増加することで,慢性炎症の持続や癌化に関与することが示唆された。口腔扁平苔癬のサイトカイン発現量を定量し,DNAメチル化との相関をみていく。DNA, RNAの精製精度をあげていく。SOCS1のDNAメチル化がOLPと扁平上皮癌で高率に見られ、上皮内腫瘍で低率であったため、その理由について現在検索中である。DNAの検出の精度をあげ、さらなる検討を行う予定である。口腔病理
LED照射によるバラ花弁成長への影響および切り花品質向上技術への応用

バラ切り花は蕾の状態で収穫されるが、切り前(収穫時の開花ステージ)の違いによってその後の蕾の開花程度や切り花の日持ち性が大きく異なる。本研究では、通常の切り前より早く収穫したバラ切り花の蕾を用いて、切り花の品質改善を目的に切り花保管条件の検討を行った。まず、バラ切り花に白色光、赤色光および暗所処理を2日間連続して行い、異なる光条件が切り花の品質に及ぼす影響について調査した。白色光処理および赤色光処理では暗所処理より花弁の展開が促進されたが、新鮮重の増加には有意な差がみられなかった。蒸散量は白色光処理が最も高く、暗所処理が最も低い値を示した。白色光処理区および赤色光処理区では暗所処理区に比べ、葉のスクロース含量は5倍から10倍程度増加していたが、花弁での増加量はどの糖においても多くて2倍程度であった。次に、葉から花弁への糖転流を促すため、シンク力を向上させると考えられているIAAを花弁に浸漬処理し、2日間連続で赤色光を照射した。しかし、2日後の花弁の糖含有量は、IAA処理の有無による有意な差はみられなかった。以上のことから、切り花は収穫後に白色光や赤色光で光合成を促進させることは確認できたが、葉から花弁への転流促進には今回のIAA処理方法では不十分であることが明らかとなった。本年度は糖代謝と光照射波長との関係についての調査が中心となり、当初予定していたエクスパンシンやXTHなどの細胞壁の緩みに関する遺伝子の解析ができなかった。これらの解析については引き続き次年度に対応する予定である。平成30年度4月に所属機関を異動したため、実験に用いる切り花の状態や切り花処理時の光環境の違いにより、実験が思うように進まなかった。本年度後半からは実験環境を整備することができ実験を軌道に乗せることができた。最終年度である次年度は当初の予定通り研究を遂行できるものと思われる。本年度積み残した実験について次年度の前半に取り組むよう研究を計画している。当初の予定通り研究を遂行するためには実験サンプルである切り花の確保が重要となるが、新たな切り花供給先を確保できたため、実験のペースを上げることが可能となった。本研究は、バラ切り花の開花現象について光刺激および植物体内リズムとの観点から明らかにしようとするものである。バラの開花に伴う花弁成長現象は、植物体内時計によるリズムと光刺激によって制御されていることが我々の以前の研究で明らかになっている。本研究では、このリズム成長の分子機構の解明を通して光による切り花品質保持技術や開花促進技術を開発することを目的としている。平成29年度は、様々な光波長をLEDを用いて切り花に照射し、花弁成長リズムの詳細と吸水量や蒸散量などについて調査した。その結果、赤色光と青色光とではバラ切り花の感受性が異なり、開花速度や花弁からの蒸散量も変化することが明らかとなった。さらに、光照射と合わせてオーキシン処理を行い、光照射時に合成された同化産物の速やかな転流を促す仕組みについて検討した。植物ホルモンのひとつであるオーキシンは花弁などのシンク器官においてインベルターゼを活性化させることによりシンク力を強めることが知られている。光による開花リズムの制御と合わせ、オーキシンにより大きく開花させる可能性を検討している。オーキシンの処理方法については、当初生け水への添加により茎の切り口から吸わせていたが、葉に対する影響が大きく表れたため、花弁のみへの効果的な処理方法について現在検討を進めている。遺伝子発現解析については、当初予定していた細胞壁のゆるみに関するタンパク質だけでなく、水チャネルについても併せて検討し、現在も引き続き解析を進めている。平成30年3月31日付で中部大学を退職し、同年4月1日付で岐阜大学に異動した。平成29年度途中からは中部大学退職に向け研究室の撤収や実験備品試薬等整理の必要に迫られ、納得いくまでの研究ができなかったため。