hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
環境ゲノムからのバイオナノマグネタイト合成遺伝子群の探索

環境中に存在する細胞数の少ない磁性細菌からもゲノム情報を獲得することを目的として、全ゲノム情報の明らかにされている磁性細菌Magnetospirillum magneticum AMB-1株を用いて、MDAによるゲノム増幅の検討を行った。フローサイトメトリーによって細胞数を正確に分取したサンプルについてMDAを行った。得られたMDA産物に対する増幅について、qRT-PCRを用いた各遺伝子のコピー数から定量的に評価を行ったところ、ゲノムワイドに分布する8個の遺伝子(mms6,mms7,mms13,mms24, mamJ,argK,mpsA,magA)のコピー数の相対比から、各遺伝子が均一にMDAによって増幅されていることがわかった。そこで、多様な細菌が観察された環境サンプルを使用してMDAを行い、増幅産物のshearingによる断片化処理後、BACベクターにクローニングを行った。得られたライブラリーの平均インサートサイズは、約7.5 kbであった。次に、バイオナノマグネタイト合成に関与する遺伝子群の探索を行った。その結果、結晶形成に関与するタンパク質をコードする遺伝子mms6と相同性を持つ新規遺伝子が同定され、Mms6のN末端領域に相当する遺伝子配列において塩基置換が確認された。一方で、C末端領域には塩基置換は見られず、本領域の高い保存性が確認された。同様に、mms7に相同性を持つ遺伝子も得られた。さらに、16S rDNAに基づいた分子系統解析を行ったところ、顕微鏡観察結果と一致するMagnetospirillum属、及びMagnetococcus属の細菌が同定された他、新規と考えられる磁性細菌の存在が確認された。また、Magnetococcus属は大きく4つのクラスターに分類されることが新たに明らかにされた。湧水などのよく循環した水系の泥から多くの磁性細菌が観察され、球状、桿状、螺旋状、ビブリオ状などの多様が確認された。また、透過型電子顕微鏡観察からそれぞれの合成するバイオナノマグネタイトの形態にも、球状、長形、弾丸状などの多様性が認められた。多様な磁性細菌群を持っサンプルから、磁気的に細菌を誘導・分離する手法であるRace track法によって磁性細菌の分離を行ったところ、一回の分離実験において約105cellsが回収された。次に、磁性細菌の形態における多様性が確認されたサンプルから、ゲノム抽出を行った。分子系統学的な多様性を確認するため、16S rRNAをターゲットとしたPCRを行い、分子系統樹を作成した結果、これまでに純粋培養が達成されているα-Proteobacteriaに属するMagnetospirillum属やMagnetococcusの磁性細菌と高い相同性を有する配列のほか、未培養の磁性細菌と高い相同性を有する配列が得られた。次に、MDAを用いたゲノムライブラリーの構築を行った。はじめに全ゲノム配列が明らかにされているM.magneticum AMB-1をモデルとして、MDA反応の条件検討を行った。反応に利用する細胞数を検討した結果、10-10^5 cellsにおいて遺伝子の増幅が確認された。また、シークエンスの結果、得られた遺伝子領域はAMB-1のゲノム上において散在しており、増幅に偏りがないことが示された。次に、環境から得られた磁性細菌に対して本手法を適用し、ゲノムライブラリーの構築を行った。得られた20μgの増幅DNAを物理的に断片化した後、BACベクターにクローニングし、ライブラリーを構築した。ライブラリーに含まれる平均インサート長は約10kbpであり、合計約5Gbpからなるライブラリーが構築された。
マイタケ中に含まれる生物活性物質の糖尿病改善作用と体重増加抑制作用について

平成11年度はストレプトゾトシン誘発糖尿病ラットにマイタケ及びマイタケから水抽出した抽出物を投与した時の糖尿病の諸症状に対する効果を100日間にわたり観察した。前年度まではコントロール食に乾燥マイタケを付加する形で投与していたが、マイタケの添加量が多い為、その他の栄養素が希釈する恐れがあった。また乾燥マイタケは繊維が多く、その繊維が糖の吸収を阻害して血糖値が低下した可能性もあった。そこで今回はマイタケ中の成分を分析してマイタケを添加する場合はその分を餌から除去して栄養素量は各群等しくなるように調節した。その結果、マイタケを投与した(20M群)時、コントロール食を投与した(OC群)時に比べて、初期では体重増加量は抑えられていたが、OC群は糖尿病の悪化に伴い体重増加の伸びがなくなり、100日目には20M群とほぼ同量の体重増加量であった。耐糖能試験は13週目においてOC群に比べて明らかに20M群、20W群は血糖値抑制効果が見られた。摂食量は11週目においてOC群が他の2群よりも低値を示した。インスリン量は空腹時では大差は見られなかったが、糖負荷後30分ではマイタケ投与群で有意な高値を示した。このことよりマイタケの繊維成分が多い為に血糖値が低下したのではなく、マイタケ中の他の成分がなんらかの形で膵臓β細胞に働いて血糖値を低下させたのではないかと思われた。これは前年に実験した2型モデルであるOLETFラットではあまり改善効果が見られなかったことからもマイタケがβ細胞になんらかの影響を及ぼしたと考えられた。平成10年度は主にOLETF糖尿病ラットにマイタケ及びマイタケから水抽出した抽出物を投与した時の糖尿病の諸症状に対する効果を150日間にわたり観察した。マイタケを投与した(OM群:n=11)時、コントロール食を投与した(OC群:n=6)時に比べて、約120g体重が抑制されていた。摂食量は投与後20週目においてもほとんど2群間に差はなかった。飲水量、尿量、尿糖はOC群よりも少なかった。糖能試験は18週目において空腹時で約30mg/dl、60分値で約65mg/dlほどOM群の方が低値を示した。一方、マイタケの水抽出した群(OW群:n=12)は、体重増加量でOM群よりやや高い値を取ったが、120日目以降体重が減少する傾向にあった。摂食量はOC群と同じ位であったか、尿量、飲水量はOC群よりも高い傾向にあり、尿糖は明らかに高い傾向を示した。しかし耐糖能はOC群よりやや低値であった。OW群のラットはばらつきか多かった為に有意な差は見られなかったか全般に糖尿病を改善する効果は観察されなかった。また実験期間をもう少し延長したらOC群にも顕著な糖尿病症状を呈し、OW群と同じ症状が現れたものと思われた。一方OM群には糖尿病の諸症状を改善する効果が観察されたが、ストレプトゾトシン投与ラットのような顕著な改善効果は見られなかったことから、マイタケはβ細胞には働き、インスリン分泌を促すが、末梢のインスリン抵抗性の改善には効果が低いかもしれないと思われた。また水抽出部分には糖尿病の諸症状を改善する効果は低いものと思われた。今後は熱水抽出物等で改善効果があるかどうかを試験してみたい。
慢性関節リウマチ滑膜表層細胞に発現されたEBウイルスの単離とその制御

RAのT細胞でそのmRNAの発現が低い事を報告したEBV特異的細胞傷害性T細胞やNK細胞を制御する遺伝子(Signaling lymphocytic activation molecule associated protein:SAP)のpromotor領域の配列の解読を試みた。cDNA領域には変異や欠失はなかったが、promotor領域と思われる5'上流に存在するCAATボックス近傍に単遺伝子変異が存在する可能性を見出し、SAPmRNAの発現の低下に影響をしているか現在検討中である。また、RA患者末梢血より樹立したEBV陽性単クローン性B細胞株のEBウイルス全長のDNA配列の決定を目的として、PCR産物を利用したダイレクトシークエンス法を用いてPE3700DNAシークエンサーで解析を行った。EBNA3c領域の繰り返し構造中に変異がある可能性があり、RA患者野生株のEBウイルスに同様の変化があるかを特定するため、唾液中の野生株のEBNA3c部のDNA配列の決定を試みている。我々は、PMA添加によりRA患者滑膜細胞を培養し、新たな細胞株を樹立した。その細胞表面マーカーは、TCR,HLA-DR,CD19,CD20陰性,かつCD21,CD54,CD56,CD58が陽性であり、繊維芽細胞様タイプB細胞由来である事が示唆された。しかも、B細胞の混入は、Ig遺伝子(H鎖)の再構性の有無をサザンブロツテイングで検討することにより否定され、モノクローナルな細胞株が樹立された。PCR法によりこの細胞株は、EBV-DNA陰性であることがわかっており、今回この細胞にEBVが感染するかどうかを薬剤耐性遺伝子を導入したEBVでの感染実験を繰返しているが現在まで成功していない。Fluorescent Differential Display(FDD)を用いて我々の樹立したRA患者滑膜細胞由来の繊維芽細胞様細胞株をTGFbで刺激する群と無刺激の群とでの発現されるmRNAの差異を検討する事により、RA関連新規遺伝子又はRA特異的新規遺伝子の検出を試みた。現在まで約30コのTag(遺伝子断片)を見いだした。今後FDDを繰返し再現性の高いものにつきシークエンスまでもっていきたいと考えている。蛍光differential display法で検出した新規遺伝子Tag(遺伝子断片)のうちヒト内在性レトロウイルスに相同性を持つ遺伝子のRT-PCR法による半定量を行った。現在、Perkin Ermer社製real time PCR定量の機器(PE7700)を使用し確定的な発現遺伝子の定量を行う予定で条件の設定を終了した。RA骨髄より樹立されたEBウイルス産生株(セタ3)より得られたEBウイルスとB95-8のEBウイルスで芽球化したPCRとEBV抗体マイナスのドナーより得られたB細胞株を使用し、affymetrix社製geneチップを利用しEBVのRA株、B95-8株によるB細胞での遺伝子発現の相違を検討している。geneチップの条件設定を終了し解析を行っている。さらに、EBウイルス特異的抑制性T細胞誘導遺伝子(SAP:signaling lymphocyte activating molecule associated protein)のmRNA発現がRAの末梢T細胞で低下する事実を発見し、その遺伝子のcDNA領域には変異の無いことをH11年日本リウマチ学会シンポジウムで報告した。また、RA患者末梢血より樹立したEBV陽性単クローン性B細胞株のEBウイルス全長のDNA配列の決定を目的として、PCR産物を利用したダイレクトシークエンス法を用いてPE 3700DNAシークエンサーで解析を行った。
地方自治体の効率的な教育予算編成と教体財政管理に関する比較研究-日本,アメリカ,イギリスを中心に-

この間,財政の合理化,縮減という状況の下,教育財政の領域においても公教育費の合理化とともに教育の質向上に対する要請が高まり,経費に見合う学校教育の成果と責任性を問うアカウンタビリティの要求が強まってきた。先進各国ではそれらの要請に応えるため,教星の質向上に寄与する効率的な教育予算編成や教育財政管理に関わる諸改革を試みてきている。本研究では,それらの改革動向に注目し,特に著しい特微のみられるアメリカ,イギリスの改革と日本の問題状況を検討した。これらの検討から次のような教育財政改革の特微を見い出すことができた。(1)教育行政システムの基礎的政策決定単位として個々の学校を位置づけ直していること(米...学校単位の教育管理,英...1988年法による自律的学校経営,など)(2)教育予算を含む権限の多くを学校に委譲し,又父母の学校経営参加を促か試み(東京都中野区の教育予算枠配分方式・学校フレーム予算,米...学校単位の教育予算編成・父母審議会などの父母参加機関の設置,英...地方教育当局から学校,学校理事会への権限委譲など)(3)それ以外に,アメリカ・イギリスでは,部分的なヴァウチャー制度や自由入学制度(open enrollment),教員給与の実績に応じた傾斜配分など親の教育選択権の拡大や学校,教員の自己努力と責任を促か改革も試みられていること(4)中央-地方行政機関,及び行政機関と学校との間の権限再編と行政機関の機能の変化が見られること本研究においては,上記のなかでも主に(1)(2)を中心に研究作業が進められ,(3)(4)については今後への課題を残した。教育の質向上に連なる教育改革にとって教育財政はいかなる役割と可能性を有しているのかを明らかにすることが一層求められているが,(3)(4)はそれに必要な課題である。今年度は、日本の事例研究とアメリカの「学校単位の経営管理」(schoolーbasedーmanagement,SBM),「学校単位の予算編成」(schoolーbasedーbudgeting,SBB)を中心に研究を進めた。日本の事例研究では、教育予算編成と執行において独自の試みを進めている東京都中野区の調査研究を行った。中野区で昭55年度から導入された教育委員会予算の枠配分方式は、地教行法第29条の「教育委員会の意見聴取」規定にもとづく運用としておこなわれているものであり、教育予算の基本的経費について教育委員会に予算編成上の調整を委ねるものである。この方式は、教育委員会の自主的判断と裁量権限をより十全に機能させるために予算編成の側面から配慮したものであると同時に、教育予算編成への住民参加、統制の一形態=教育財政民主主義を担保しつつ、教育予算の見直し=スクラップ&ビルドを含めて教育政策の年次・中期計画と予算執行の効率的な運用を図るうえで有効であるように思われる。また、この方式を学校レベルに適用した学校予算フレ-ム方式も、幾つかの問題を抱えながらも学校の自主的で効率的な予算執行をすすめるうえで示唆に富む。これらの予算編成・執行の方式は、中野区だけでなく他の自治体でも試みられているようであり、次年度は調査対象を広げて研究をすすめていきたい。前記の教育委員会及び学校に教育予算編成・執行に関わる一定の裁量郎を付与して、効率的な予算執行を図るという試みは、アメリカのSBM,SBBにも共通にみられるものである。これらは、教育予算等の基礎的政策決定の単位として個々の学校を位置づけることで、組織体としての学校の能力・機能を高めて学校の一層の効率性をつくりだそうとするものである。

今年度は、SBM,SBBが関心を集めてきた背景・理由、各州・学区での取り組みとその実態、問題を州法や各種の報告書を中心に分析・整理した。その総体的評価は今後の研究課題である。本年度は、アメリカとイギリスの教育財政改革に関って作業をすすめた。アメリカについては、いわゆる教育改革の「第2の波」の時期における連邦補助金政策の展開と州教育財政改革の動向に焦点を定めた。その理由は、地方学区レベルでの教育予算や教育財政管理の諸改革が、国や州全体のいかなる政策動向や改革戦略から促されてきたものであるのかを明らかにし、その評価を見定めなければならないと考えたからである。連邦補助金に関しては、1981年の総合予算調整法-教育統合改善法の制定の意味とそれが及ぼした影響を検討し都市学区財政の悪化を生起させていることを明らかにした。そして、そうした背景をもって1980年代に再び活発化した州レベルの教育財政改革訴訟の展開とその内容を吟味した。アメリカの教育財政改革訴訟は、1970年代以降今日まで続いているが、それはその特徴から3つの時期に区分できる。本研究が分析した第3期(1989年以降)は、従来とはことなる新しい内容の判決と財政改革を生みだした。それは、州が現代社会において必要な「適切な教育水準」を設定しそれを全ての子どもに保障すること、都市学区・学校のハンディ(都市過重負担)を補償すること、学校の教育改善努力を支援し促す諸方策を図っていくことなどを州政府に求めるものであった。教育財政改革が、納税者の負担の平等化にとどまらず教育の質向上の課題と深く関連づけられて展開されはじめている。教育の質向上と教育財政改革の課題は、イギリスでも同様に検討され模索されている。その一つの動向として、1988年に導入を図られたLocal Management of Schoolの内容とその実態、それをめぐる問題状況を分析した。地方教育当局(LEA)へのアンケート調査も行ない(回答率45.7%)その実状把握にも努めた。LMSの導入によりLEAと学校理事会との間で権限の再編が進行しているが、今後の展開を含めその評価については検討すべき課題として残された。
2次イオン質量分析計(Shirmp II)を用いた地球年代学

全地球史解読は、物質科学的なあらゆる観測結果を統合して初めて成しうる研究テーマである。我々のグループでは、高感度2次イオン質量分析計(SHRIMPII)を用い、主にU-Pb年代測定という立場から研究を遂行した。具体的には、以下の3点が挙げられる。(1)まず、オーストラリア国立大学SHRIMPグループで分析済みのジルコンを広島のSHRIMPにて再測定を行い、U-Pb分析のキャリブレーションを行った。これにより個々のジルコン粒について精度よく年代決定できるようにした。(3)これらの手法を用い、実際にカナダ北西部ACASTA地方の片麻岩中のジルコン及びアパタイトのU-Pb分析を行った。その結果、個々のジルコンの示す年代は、4006Maのcrystallization年代と1921Maのmetamorphic年代のMixingで説明できることがわかった。一方、アパタイトの^<238>U/^<204>Pb-^<206>Pb年代、^<207>Pb/^<204>Pb-^<206>Pb/^<204>Pb年代は、1908Maおよび1930Ma年代を示し、ジルコンのmetamorphic年代の結果と調和的であった。ここで、ジルコン及びアパタイトの閉鎖温度をそれぞれ700°C、590°Cと仮定し、同地方のhornblendeやbiotiteのアルゴン年代の文献値と比較すると、metamorphicイベント後のcooling rateは1.8°C/Maと異常に遅く、Proterozoic Wopmay造山運動の影響を示唆することがわかった。
寛容概念史におけるヴォルテールの再定位：懐疑主義・宗教・学問

本年度は、前年度に引き続き懐疑主義の問題を検討することから始めた。ヴォルテールが寛容論を論じる際に用いた歴史の検討(とりわけローマやギリシアといった古代の歴史)における懐疑の作用と、18世紀のいわゆる歴史懐疑主義との関係を検討する方がよいのではないかと考え、試みにギリシアとローマの宗教に対してヴォルテールが如何なる態度を示したかを研究した。この延長上で、彼の歴史叙述についてその方法論と内容を検討するにつれて、ヴォルテールが普遍史(世界史)を描く中でそれぞれの国家・国民に対して明確に異なる態度を示していることに気がついた。ヴォルテールは歴史を描く上でジャック=ベニーニュ・ボシュエの『普遍史』との連続性と断絶との双方を意識しており、その視角から歴史叙述の検討へと進んだ。これは、彼の寛容論を特徴付ける「普遍性」が、しかし他方で各国の「特殊性」という現実と、如何にして両立しているのかしていないのか、ということを検討することに他ならない。とりわけ18世紀の生物学の発展による人種的差異に基づく民族の区別や、気候風土に基づく人間の性向の差異といった議論と結びつくなど、様々な同時代の問題と結びついていることを研究した。こうして宗教的寛容、歴史叙述、普遍/特殊といった問題を検討するなかで、これが政治体制の問題と如何に結びつくのか、とりわけ「共和国」との関係を考えた。そこで、ポーランド・リトアニア共和国に対するヴォルテールの思想へと研究を進めた。ポーランドは18世紀ヨーロッパ研究において見逃されがちだが、当時のヨーロッパにおける大国の一つであって、言論空間を同じくしていた。ヴォルテールはかの国の宗教的寛容を高く評価していた一方で、歴史叙述においてはその弱体と後進性を問題視し、特殊の相で捉えている。この研究に着手した。申請時には、本年度までに懐疑主義と宗教の問題を扱い、次年度には文芸共和国の位置付けの検討を行う予定であったが、上記研究概要で示した通り、もともとの予定にはなかったポーランド共和国をめぐる諸問題の検討が重要であるとわかったため、学問の問題へと進むことはできていない。しかし、寛容論・普遍性・国民意識など、様々なテーマを孕んだ新たな研究領域の発見に到ることができたため、予定とは異なるものの、順調に新調していると考えている。まず、ヴォルテールによるポーランドに関する書簡を含む著作を精読する。また当時のポーランドの政治状況の正確な把握や当時のフランスにおけるポーランド像を形成した各種旅行記を渉猟する他、ヴォルテールのポーランド像の形成に重要な役割を果たしたと考えられるフリードリヒ大王やエカチェリーナ、ポーランド王スタニスワフ・レシチニスキ、ポニャトフスキらの著作の検討を行う。さらに、ジャン=ジャック・ルソーやアベ・マブリらのポーランド統治論を検討する。本年度は、大きく分けて三つの方向で研究を進めた。第一は、これまでの研究につき、発表する場を確保して再検討を行った。とりわけ研究課題に直接つながるものである修士論文の再検討を行い、それを10月に東京大学政治理論研究会において報告した。それによりヴォルテールの理想とした政治体制が如何なるものであったか再考を迫られたが、この問いに十全に応えるためには、ヴォルテールにとり寛容概念が如何なるものであるか、また懐疑という所作についてヨリ根本的な理解が不可欠であると再認識した。第二に、上記検討に端を発し、「懐疑と権威」というヨリ大きく理論的な考察を行った。即ち、時間的な世界における政治にとって、決定・決断を行うことは極めて重要である。しかし懐疑という所作はー熟議民主主義に対する典型的な批判でもあるがー決定を必ず遅らせる。限られた時間の中で決定を下すには、何か信頼を寄せることができる権威が求められるであろう。如何なる権威に対し如何なる仕方で信頼を寄せることが正当化されうるのか。このことこそ、懐疑主義者が現実社会と積極的な結びつきを有するならば、問われねばならない。そして寛容が懐疑主義の現実の相の一つであるとすれば、如何なる権威を容認できるのか。この大問題を一つの軸に据えて検討した。第三に、18世紀フランスにおける懐疑主義の位置づけを検討した。当時懐疑主義の代名詞となったピュロン主義が現状追認の傾向を有することはつとに指摘されてきた通り、18世紀フランス啓蒙思想家にとりピュロン主義は寧ろ政治体制変革への歯止めとして機能するものでもあり得た。さらに16世紀第四四半期にセクストゥス・エンペイリコスのピュロン主義に関する著作がラテン語訳され、モンテーニュらがそれを受容したときと比較すれば、宗教的権威の持つ意義も全く異なっている。そこで、フランスにおける懐疑主義の受容のあり方を検討してきた。申請時には、本年度に懐疑主義研究を進め、次年度に宗教研究へ移行する予定であった。しかし上記研究概要で示した通り現在も懐疑主義研究の道半ばにあるだけでなく、懐疑主義の検討を行うにつれ、哲学的議論としての懐疑主義が如何に宗教思想や現実世界に適用されたかという問題にこそ重要性があるという認識に至った。従って懐疑主義研究を離れることはできず、その意味では予定通り進んではいない。しかし、懐疑主義と宗教思想との密接な結びつきを意識する必要性の認識に基づいてこれから宗教研究へと軸足を移すことは可能であり、実際その予定である。その点では予定通り、あるいは当初よりも深い認識で研究を進めることができるという点では計画以上に進展しているとも言える。とりわけ権威についての考察を含みうることは、研究全体の大きな指針になる重要な進捗として自己評価している。

ヴォルテールが寛容論を論じる際に用いた歴史の検討(とりわけローマやギリシアといった古代の歴史)における懐疑の作用と、18世紀のいわゆる歴史懐疑主義との関係を検討する方がよいのではないかと考え、試みにギリシアとローマの宗教に対してヴォルテールが如何なる態度を示したかを研究した。この延長上で、彼の歴史叙述についてその方法論と内容を検討するにつれて、ヴォルテールが普遍史(世界史)を描く中でそれぞれの国家・国民に対して明確に異なる態度を示していることに気がついた。ヴォルテールは歴史を描く上でジャック=ベニーニュ・ボシュエの『普遍史』との連続性と断絶との双方を意識しており、その視角から歴史叙述の検討へと進んだ。これは、彼の寛容論を特徴付ける「普遍性」が、しかし他方で各国の「特殊性」という現実と、如何にして両立しているのかしていないのか、ということを検討することに他ならない。とりわけ18世紀の生物学の発展による人種的差異に基づく民族の区別や、気候風土に基づく人間の性向の差異といった議論と結びつくなど、様々な同時代の問題と結びついていることを研究した。こうして宗教的寛容、歴史叙述、普遍/特殊といった問題を検討するなかで、これが政治体制の問題と如何に結びつくのか、とりわけ「共和国」との関係を考えた。そこで、ポーランド・リトアニア共和国に対するヴォルテールの思想へと研究を進めた。ポーランドは18世紀ヨーロッパ研究において見逃されがちだが、当時のヨーロッパにおける大国の一つであって、言論空間を同じくしていた。ヴォルテールはかの国の宗教的寛容を高く評価していた一方で、歴史叙述においてはその弱体と後進性を問題視し、特殊の相で捉えている。この研究に着手した。申請時には、本年度までに懐疑主義と宗教の問題を扱い、次年度には文芸共和国の位置付けの検討を行う予定であったが、上記研究概要で示した通り、もともとの予定にはなかったポーランド共和国をめぐる諸問題の検討が重要であるとわかったため、学問の問題へと進むことはできていない。しかし、寛容論・普遍性・国民意識など、様々なテーマを孕んだ新たな研究領域の発見に到ることができたため、予定とは異なるものの、順調に新調していると考えている。本年度の懐疑主義に関する研究に区切りがつけたのち、上記の通り、宗教研究も行っていく。まずヨーロッパ(ないしアジア)に当時存在している(又はかつて存在した)、とりわけヴォルテールが言及している諸々の宗派について、その典型的議論を懐疑と信頼(権威)という視角で整理することから始める。それによって、ヴォルテールが各宗派を肯定的ないし否定的に評価する際に如何なる点を重要視しているかが明らかになることが期待される。同時に、各宗派が懐疑主義の再来以降に如何なる対抗関係を問題としていたのかを理解するよう努める。この宗派研究を行う際、各宗派の地理的な分布と各地域における政治状況の把握が重要となるため、同時並行的に当時の政治状況にヨリ正確な把握に努める。まず、ヴォルテールによるポーランドに関する書簡を含む著作を精読する。
機械的刺激を加えたヒト歯根膜細胞のプラスミン活性化機構について

矯正治療時、移動歯周囲の歯根膜には活発なリモデリングが起こっており、歯根膜の細胞外マトリックスの主成分であるコラーゲン代謝は歯の移動と密接に関連していると考えられる。コレゲナーゼはコラーゲンを特異的に分解すると同時に、plasminogen activator(PA)により活性化されることが知られておりコラーゲン代謝の主役をなすと考えられる。そこで本研究ではコラーゲンの分解に重要な役割を演じると考えられるPAに着目し、機械的外力を培養ヒト歯根膜由来細胞に加えたときのPA活性を検討した。その結果、ヒト歯根膜由来細胞に周期的伸展力(18%)を3及び5日間加えると対照群に比べPA活性は約2倍に増大し、その増大は経日的であった。異なった伸展力(9、18%)を加えたところ、18%の伸展力を加えた時のPA活性は9%の伸展力の1.4倍に増大した。この増大したPA活性を培養上清を用いたWesternblot分析で検討すると、伸展力により増大するPA活性は70kDaのtissue type PA(tPA)であることがわかった。一方、urokinase type PA(uPA)のバンドは実験群及び対照群共に認められなかった。さらに、PAを遺伝子発現レベルで検討するためにtPA,uPAおよびこれらのinhibitorであるPA inhibitor-1(PAI-1)についてRT-PCR分析を行った。その結果、対照群に比べて伸展力を加えた実験群ではtPA遺伝子の発現が増大していたが、対照群、実験群共にuPA遺伝子の発現は認められず、PAI-1においてはその発現に変化はなかった。以上のことからヒト歯根膜細胞は周期的伸展力に対して経日的および伸展力に依存的にPA活性を増大し、その増大はtPAによるものであることがタンパク質合成および遺伝子発現レベルで確認された。
卵巣明細胞腺癌の抗癌剤耐性克服を目的としたアネキシンA4阻害による癌治療法の開発

申請者は卵巣明細胞腺癌においてAnnexin A4が高発現し、カルボプラチン抵抗性を示すことを報告してきた。今回申請者は、卵巣明細胞腺癌のRMG-I株においてAnnexin A4のノックダウン株を樹立し、卵巣癌治療に用いられる薬剤の感受性が改善するかを検討した。Annexin A4ノックダウン株はコントロールに比べ、シスプラチンおよびカルボプラチンへの薬剤感受性が約2倍改善し、エピルビシンおよびパクリタキセルに対する感受性の改善も認めた。また薬剤感受性に一致して、薬剤誘導性のp53の発現も増加した。Annexin A4の抑制によりシスプラチンの感受性はin vivoでも有意に改善した。これらの結果はAnnexin A4が卵巣明細胞癌における多剤薬剤耐性因子であり、治療標的因子となる可能性があることを示している。研究代表者は、卵巣明細胞腺癌細胞株を用いた研究において、非明細胞腺癌と比べてアネキシンA4が高発現を認めること、またアネキシンA4が卵巣明細胞腺癌における抗癌剤(シスプラチン)耐性に関わることを見い出した。当該年度(平成22年度-23年度)はさらに子宮体部腺癌においても、アネキシンA4の強制発現株では薬剤耐性が増大することをin vitro, in vivoで確認した。現在、アネキシンA4が薬剤耐性に関わる上で必須となる遺伝子部位を調べるため、アネキシンA4遺伝子の変異欠損株(Deletion mutation)を作成することで、アネキシンA4の薬剤耐性機序における機能解析を進めている。具体的には、アネキシンA4の発現していない卵巣癌細胞株OVSAHOに作成した3種類のアネキシンA4変異欠損遺伝子および全長遺伝子を導入、安定発現株を樹立し、コントロールベクター安定発現株と比較して薬剤耐性を調べる実験を進めている。各変異欠損遺伝子および全長遺伝子安定発現株間において、薬剤耐性に差を認めれば、薬剤耐性に関与する遺伝子部位を同定することになり、アネキシンA4の発現もしくは機能を抑制し薬剤感受性を効果的に高める化合物の同定など、創薬を目標としうる。このことは、臨床的に抗癌剤耐性で予後不良型とされる卵巣明細胞腺癌における新規治療法の開発につながり、非常に臨床的意義が高いと考える。研究代表者は、卵巣明細胞腺癌細胞株では非明細胞腺癌細胞株と比べてアネキシンA4が高発現を認めること、またアネキシンA4が卵巣明細胞腺癌における抗癌剤(シスプラチン)耐性に関わることを見い出した。平成23年度では子宮体部腺癌においてもアネキシンA4の強制発現株では薬剤耐性が増大することをin vitro,in vivoで確認した。アネキシンA4を阻害することが薬剤耐性を改善することを明らかにするため、卵巣明細胞腺癌細胞株(RMG-I)を用いて、アネキシンA4のshRNAを安定発現させることで、アネキシンA4の発現を恒常的に抑制させた株(RMG-I-AnxA4shRNA)を樹立した。コントロールベクター導入株と比較し、アネキシンA4の発現を恒常的に抑制させた株ではin vitroにおいてシスプラチン、カルボプラチンに対するIC50が低下し、抗癌剤感受性が改善した。さらに、パクリタキセルやアドリアマイシンに対する感受性も改善を示した。ヌードマウスの皮下にRMG-I-AnxA4shRNA、および、RMG-I-control vectorを皮下移植↓、シスプラチン、PBSを投与し、腫瘍の増殖を解析した結果、アネキシンA4の発現を恒常的に抑制させたRMG-I-AnxA4では有意に腫瘍増殖が抑制され、抗癌剤感受性がin vivoでも改善していた。これらの結果は、臨床的に抗癌剤耐性で予後不良型とされる卵巣明細胞腺癌において、アネキシンA4を標的とした新規治療法が有望であることを意味しており、非常に臨床的意義が高いと考える。
HDLの量的、質(機能)的、遺伝的解析の統合から動脈硬化抑制のパターンを決定する

虚血性心臓病を中心にHDLの量的、質(機能)的、遺伝的解析から、どのような場合に動脈硬化の危険度がどれだけ上昇するかを検討した。【研究1】(LDL)及び(VLDL)除去後血清でのコレステロールエステル比率(FERHDL)と冠動脈硬化(CA)との関係を検討した。【対象】冠動脈造影を行った患者でCA(+)(75%以上狭窄,n=184、年齢62.2【plus-minus】7.9才)とCA(-)群(狭窄なし、n=74、年齢62.1【plus-minus】7.2才)。【結果】CA(+)群ではCA(-)群と比し、喫煙者が多く、年齢と性別で補正したHDL-Cの平均値が有意に(p<0.05)低く、FERHDLの平均値が有意に(p<0.05)高かった。CA(+)群及びCA(-)群において、HDL-CとFERHDLが強く負相関したが、多変量回帰分析によると両群間の回帰係数が有意に異なった。FERHDL/HDL-Cの上昇に従ってOdds比も高くなった。相対危険率、FERHDLとHDL-Cの三次元分析の結果では、FERHDL/HDL-Cが一番高値である、低HDL-Cと高FERHDLを持つ患者のOdds比がFERHDL/HDL-Cが一番低値である、高HDL-Cと高FERHDLを持つ患者の12.6倍だった。【総括】FERHDL/HDL-CまたはHDL-Cが低値の場合のFERHDLがCAの有利な診断指標【研究2】虚血性心臓病患者におけるアポAI、アポAIV、アポCIII遺伝子に関する研究【対象】上記同様の患者、正常者を用いた。【方法】対象者末梢血(BDTA採血)500ulより抽出したDNAをPCR法を用いて増幅後、各種制限酵素を用い解析した【結果】アポAIV/MspI多型(allele 1,2頻度)は正常群で0.887,0.113,患者群で0.884,0.116とほぼ同率だった。アポAI、アポCIII遺伝子多型(アポAI/5'-promoter、アポCIII/3'SstI)と今回のアポAIV/MspI多型分布を同時に解析した結果、それぞれgenotype 1/1、2/2、1/1の連鎖が患者群に多くみられた。【総括】アポAI、アポAIV、アポCIIIの遺伝子多型が冠動脈硬化発症に関与する可能性がある。

(2)質(機能)的解析-HDL機能的解析としては、VLDLとLDLを沈澱した後の血清(HDL分画)をFrohlichらの方法により^3H-FCとincubateし、FCとCEをTLCで分画させ、それぞれのカウントから、コレステロースエステル化率(FER_<HDL>)を算出した。【結果】FER_<HDL>値は患者群の方が正常群に比べ有意に高値を示した(13.3±3.7%-hr vs. 12.2±3.4%-hr, P<0.05)。FER_<HDL>は、患者群及び正常者群共に血清HDL-C値及びHDL2-C値と逆相関があった。FER_<HDL>レベルが高くなると冠動脈硬化の危険率は高値を示した。FER_<HDL>低値の場合、低HDL-Cの高HDL-Cに対する冠動脈硬化の相対危険率は1.8倍だったが、FER_<HDL>高値の場合、低HDL-Cの高HDL-Cに対する冠動脈硬化相対危険率は、3.8倍だった。(3)遺伝的解析-【対象】冠動脈造影により有意狭窄を有する虚血性心臓病患者85例及び正常冠動脈86例を用いた。【方法】対象者末梢血(EDTA採血)500ulより抽出したDNAをPCR法を用い増幅、Msplを用い遺伝子多型を検討した。【結果】新しいアポAI-Msplの正常者でのallele 1,2の頻度はそれぞれ0.968, 0.032,患者群では0.929, 0.071とやや患者群にallele 2頻度が大であった。またgenotype 1/1, 1/2, 2/2で血清脂質、リポ蛋白値に有意差はなかった。アポAL(A to G)多型のallele 1,2の頻度は正常群で0.863, 0.137,患者群で0.818, 0.182と2群間に差がなかった。アポAI-Mspl及び(A to G)多型の分析からそれぞれ1/2, 1/1のgen otypeの共存が患者群に多くみられた。虚血性心臓病を中心にHDLの量的、質(機能)的、遺伝的解析から、どのような場合に動脈硬化の危険度がどれだけ上昇するかを検討した。【研究1】(LDL)及び(VLDL)除去後血清でのコレステロールエステル化率(FERHDL)と冠動脈硬化(CA)との関係を検討した。【対象】冠動脈造影を行った患者でCA(+)(75%以上狭窄、n=184、年齢62.2±7.9才)とCA(-)群(狭窄なし、n=74、年齢62.1±7.2才)。【結果】CA(+)群ではCA(-)群と比し、喫煙者が多く、年齢と性別で補正したHDL-Cの平均値が有意に(p<0.05)低く、FERHDLの平均値が有意に(p<0.05)高かった。CA(+)群及びCA(-)群において、HDL-CとFERHDLが強く負相関したが、多変量回帰分析によると両群間の回帰係数が有意に異なった。FERHDL/HDL-Cの上昇に従ってodds比も高くなった。相対危険率、FERHDLとHDL-Cの三次元分析の結果では、FERHDL/HDL-Cが一番高値である、低HDL-Cと高FERHDLを持つ患者のodds比がFERHDL/HDL-Cが一番低値である、高HDL-Cと高FERHDLを持つ患者の12.6倍だった。【総括】FERHDL/HDL-CまたはHDL-Cが低値の場合のFERHDLがCAの有利な診断指標になる。【研究2】虚血性心臓病患者におけるアポAI、アポAIV、アポCIII遺伝子に関する研究【対象】上記同様の患者、正常者を用いた。【方法】対象者末梢血(EDTA採血)500ulより抽出したDNAをPCR法を用いて増幅後、各種制限酵素を用い解析した【結果】アポAIV/Mspl多型(allele 1,2頻度)は正常群で0.887,0.113,患者群で0.884,0.116とほぼ同率だった。アポAI、アポCIII
量子ビームを駆使した固体内イオン拡散挙動の解明と電気化学素子への応用

固体内のイオン拡散は、電池を含む多くの電気化学素子の基本動作原理である。しかし、この分野は固体物理・固体化学・電気化学の境界分野であり、多くの物質系では、拡散係数の支配要因どころか、信頼性のある拡散係数の値も不明だった。そこで、我々はスピン偏極プローブであるミュオン素粒子を用いて、各種電池材料内のLiとNaイオンの拡散係数の計測を試みた。その結果、正極のみならず負極や固体電解質等の材料や粉末・シート・薄膜等の形状によらず、Dを見積もることに成功した。量子ビームの一種である表面ミュオンビームを用いて、種々のイオン拡散材料とその候補材料について、高温イオン拡散挙動と低温磁性を調べた。実験には、J-PARC(東海村)、ISIS(英国、理研RALを含む)、TRIUMF(カナダ)、PSI(スイス)を利用した。ミュオンビームの時間構造を考えて、前2者では主に拡散を、後2者では磁性を測定した。特に現行のLiイオン電池に次ぐNa電池用正極材料の磁性と拡散を調べた。例えば、100°C以上でも安定なオリビン系のNa0.7FePO4において、世界で初めてその低温での磁気構造と高温でのNa拡散係数を求めた(論文2,国際会議招待講演1、講演2)。同様にNa電池の正極材料として研究されているNa0.5VO2については、巨視的な磁化率測定で13Kに磁気転移が予想されていたが、ミュオン測定により実際の転移は1.9Kであることを明らかにした(論文1,講演1)。拡散測定は今後の課題であるが、VO2の作る2次元3角格子上での磁気秩序の発現は、競合系の磁性の観点から興味深い。さらに類縁構造のNa0.7CoO2中のNa拡散挙動を中性子準弾性散乱で調べ、従来のミュオン測定結果と矛盾しない結果を得た(論文1,講演1)。Liイオンの拡散挙動については、現行材料としてLix(Co1/3Ni1/3Mn1/3)O2(論文1、講演1)とLixNiO2系を調べた。従来の結果を支持する結果となり、ミュオン・スピン回転緩和法によるイオン拡散測定の妥当性が再確認された(招待講演2)。量子ビームである表面ミュオンビームを用いて、引き続き各種の電池材料中のイオン拡散を調べた。また低温磁性との相関も調査した。特に、Li電池用の負極材料である、Li4Ti5O12とLiTi2O4スピネル中のLi拡散挙動をミュオンと8Liによるβ-NMR法により調べた。両者の結果は極めて良く対応しており、Liの自己拡散を捉えていることが明らかとなった(論文1,国際会議招待講演1、一般講演2)。電気化学合成したNaxCoO2については、x=0.5-0.75の範囲の試料の測定を行ない、従来の固相反応で合成した試料とはかなり異なる結果を得た(一般講演1)。従来の酸化物に捕われず、セレン化物とリン化物についても、主に低温磁性から調べ始めた(論文2,一般講演2)。特にCrSe2は、Li電池正極材料LiCoO2からLiが全欠損した構造で、Crの作る2次元3角格子上の磁気基底状態の解明が望まれていた。ミュオン測定と解析の結果、格子非整合なスピン密度波の形成が示唆された。この点については、さらに考察を重ねてまとめる予定である。同様にリン化物、Sr1-xCaxCo2P2に於も圧力下でのミュオン測定により、Co2P2の面間隔と磁性の相関を調べ始めた。順調にビームタイムを獲得し、予定した材料および新たな材料系の実験を行なっているから。量子ビームである表面ミュオンビーム・崩壊ミュオンビームと8Liビームを用いて、以下の物質系のイオン拡散と磁性を調べた。【1】層状構造の複合酸化物・硫化物とグラファイト中のLi拡散を調べた(論文1、国際会議招待講演3、国内会議招待講演5、一般講演1)。特に安定なミュオンサイトが無いように思われるC6LiやC12Li中でも、μSRはLi-NMRと矛盾しない拡散係数を与えた。予備的な電子状態計算によると、グラファイト中のミュオンはパイ電子を介して安定な結合を作るらしい。これが事実であれば、現在開発中の深さ分解能のあるミュオンビームを用いて、非破壊で電池内の正極と負極中のLi拡散やLi濃度を調べられるかもしれない。【2】電気化学反応でNaを引き抜いた層状構造NaxCoO2の状態図の作成を継続した。また高温でのNa拡散測定を開始した。【3】固体中の酸素拡散とヒドリド(負の水素イオン)拡散についても予備検討を開始した(学会発表1)。また水素貯蔵材料中の水素拡散挙動をレビュー論文としてまとめた(論文1)。同時に、高温での水素脱離反応中にガス圧とμSRを同時測定できるようになった。今後の多くの材料開発に役立つと期待している。【4】競合系のセレン化物とテルル化物について、LiとNaの導入による基底状態の磁性の変化を調べた。またSr1-xCaxCo2P2とK2Cr8O16について、圧力下での磁気基底状態の変化を崩壊ミュオンビームを用いて調べた(論文2、学会発表1)。得られた結果については公表した。

また、順調にビームタイムを獲得し、予定した材料系について実験を進めているから。量子ビームである正の表面ミュオンビーム・正と負の崩壊ミュオンビームと8Liビームを用いて、以下の物質系のイオン拡散と磁性を調べ、学会での発表および論文として投稿・公表を通して成果を公開した。【1】全固体リチウムイオン電池の電極と電解質の界面では、両者におけるLiイオンの化学ポテンシャルの相違により、Liイオン濃度が変化した「空間欠乏層」が存在し、これが界面抵抗となることが計算予測された。これを確認するために、電極LiCoO2と電解質Li3PO4の多層膜を作成し、界面近傍でのLiイオン分布の変化を、8Li-β-NMRで調べた。その結果、電解質側に約30nm厚で分布異常が観測され、空間電荷層の存在を示唆した。(国際会議論文1)【2】K伝導体として期待される1次元トンネル構造を有するK2Cr8O16について、高圧下での内部磁場をミュオンスピン回転緩和(μSR)で調べた。常圧側での強磁性が、高圧側でフェリか反強磁性に変化した。(国際会議論文1)【3】Aサイトが秩序化したCr系ペロブスカイトは金属伝導を示す。しかしながら反強磁性磁気秩序の形成を、μSR測定で確認した。(論文1、国際会議論文1)【4】負ミュオンを用いたμSRにより、MgH2中の核磁場を世界で初めて検出した。負ミュオンは原子核位値に止まるので、より精密なイオン拡散測定手法として期待される。【5】2017年6月25日-30日の間、第14回国際μSR学会を札幌で主催し、ミュオン科学の現状把握・普及・発展を図った。同会議にて、上記成果を含めて15件を発表し、さらに国際会議論文として公表した。固体内のイオン拡散は、電池を含む多くの電気化学素子の基本動作原理である。しかし、この分野は固体物理・固体化学・電気化学の境界分野であり、多くの物質系では、拡散係数の支配要因どころか、信頼性のある拡散係数の値も不明だった。そこで、我々はスピン偏極プローブであるミュオン素粒子を用いて、各種電池材料内のLiとNaイオンの拡散係数の計測を試みた。その結果、正極のみならず負極や固体電解質等の材料や粉末・シート・薄膜等の形状によらず、Dを見積もることに成功した。Li拡散材料、Na拡散材料、それらの候補材料について、ミュオン・スピン回転緩和測定と中性子準弾性散乱測定を実施した。各々の高温イオン拡散挙動と低温磁性を明らかにし、論文10、講演16(含む招待講演3)を公表したから。Li電池の固体電解質材料、Li電池の正負極材量、Na電池の電極材料、全固体薄膜電池等を対象にして、広くイオン拡散と構造・磁性の相関を調べ、固体内イオン拡散の決定要因を明らかにする。LiTi2O4とLi4Ti5O12の結果については、論文としてまとめる。電気化学合成したNaxCoO2については、さらに広いx範囲での測定を行い、全領域での磁気状態図を決定する。また高温でのNa拡散測定により、磁性とNa拡散の相関を調べる。Sr2-xCaxCo2P2については、圧力依存性測定を完了させ、結果をまとめる。CrSe2系については、LiやNaをインターカレートさせた材料を合成し、低温磁性と高温イオン拡散を調べる。2017年6月に第14回ミュオンスピン回転緩和共鳴国際会議(μSR2017、札幌)を主催するので、以下の実験結果を報告する。
表皮止血防御機構としてのケラチノサイト組織因子の病理生化学的研究

組織因子(第三因子、組織トロンボプラスチン)は外因系凝固系開始起点となる凝固系における最重要な因子の一つである。皮膚は常に外界と接する臓器で外傷による出血凝固の最も主たる役割を担う部位であり、この点から凝固系因子の存在が予測されるが、皮膚の外因系凝固系との関連は全く明かにされていなかった。申請者らは正常皮膚における組織因子の分布、機能、発現を明かにすると共に皮膚疾患での発現を検討した。正常皮膚において組織因子は表皮内トロンボモジュリンの消失する表皮有棘層内の上層および顆粒層下部にかけて発現が見られた。培養表皮を用いた検討では未分化正常培養表皮細胞には組織因子は認められず、分化表皮細胞株であるSV40変異表皮細胞株や扁平上皮癌細胞株において発現が認められた。さらに未分化正常培養表皮細胞の力ルシウムによる分化誘導により組織因子の発現を誘導できた。これら組織因子は免疫学的検索のみならず、生物活性をも有していた。さらに、この発現はPCRを用いた検索においてmRNAの発現を確認した。臨床標本を用いた検索では、組織因子は表皮障害部の周辺表皮細胞に創部を取り囲むように速やかに発現し、同部位ではフィブリンの沈着がみられ、表皮における凝固機転の開始を担っていることが証明された。
鼓膜癒着症における中耳腔ガス換気能と中耳粘膜における血流動態に関する研究

鼓膜癒着症において鼓膜の陥凹、癒着の生じる成因についてこれまで検討を行ってきた。鼓膜陥凹の成因の一つとして耳管の機能不全、特に陰圧解除の不能が以前より指摘されている。我々が行った臨床的検討からも同様に鼓膜癒着症における鼓室の陰圧解除の不能が確認されている。一方動物実験より鼓膜を損傷しないように中耳粘膜を除去することにより鼓摸癒着症が形成されたことから、鼓膜陥凹や癒着の成因として中耳粘膜による中耳含気腔の保持機能の破綻が関与していることが確認された。本研究では鼓膜癒着症における鼓膜の陥凹の成因の一つと考えられる中耳粘膜のガス換気の障害につき中耳含気腔圧、中耳粘膜血流を中心として検討を行ってきた。家兎の耳管よりインフルエンザ死菌を注入後、閉鎖し、実験的中耳炎モデルを作製した。未処置例と中耳炎例につき中耳含気腔圧と中耳粘膜血流を測定したところ、未処置群に比較し中耳炎例では有意に中耳粘膜血流の減少と中耳腔全圧の但下が認められた。次に家兎を用いて、鼓膜を揖傷しないように中耳粘膜を可及的に除去すると鼓膜癒着症が作製できる。同様にしてこの鼓膜癒着症モデルを用いて、中耳含気腔圧、中耳腔酸素分圧、中耳粘膜血流について測定を行なった。鼓膜癒着症の中耳腔全圧のピーク圧は未処置群、中耳炎群のいずれと比較しても有意に低下していた。また粘膜血流についても同様に抑制されていた。このことより鼓膜癒着症における中耳腔のガス換気能は中耳炎よりもさらに低下しており、その原因の一つとして中耳粘膜における血流の低下が関係しており、鼓膜の陥凹、癒着にいたる一因となっていることが示唆された。一方動物実験より鼓膜を損傷しないように中耳粘膜を除去することにより鼓膜癒着症が形成されたことから、鼓膜陥凹や癒着の成因として中耳粘膜による中耳含気腔の保持機能の破綻が関与していることが確認された。本研究では鼓膜癒着症における鼓膜の陥凹の成因と考えられる中耳粘膜のガス換気の障害につき中耳含気腔圧、中耳粘膜血流を中心として検討を行っている。未処置例と中耳炎例につき中耳含気腔庄と中耳粘膜血流を測定したところ、未処置群に比較し中耳炎例では有意に中耳粘膜血流の減少と中耳腔全圧の低下が認められた(日耳鼻2002)。またこの中耳炎モデルの鼓室の粘膜上皮下組織を炎症の程度によって分類したところ、炎症の程度が強くなるに従って、血流量は有意に減少し、中耳腔全圧ピーク値は低下する傾向があった(耳科2002)。以前からの臨床的、基礎的研究およびこれらのことより鼓室粘膜とくに上皮下組織の炎症により中耳粘膜の血流量の減少を招き、中耳含気腔圧の低下をきたすことが示唆された。家兎を用いて、鼓膜を損傷しないように中耳粘膜を可及的に除去すると鼓膜癒着症が作製できる。この鼓膜癒着症モデルを用いて、中耳含気腔圧、中耳腔酸素分圧、中耳粘膜血流について今後測定を行なう予定である。先のことを踏まえてこれらの結果を解析することにより中耳炎の終末的状態である鼓膜癒着症における中耳腔のガス換気能と血流状態を把握し、鼓膜癒着にいたる病態生理を解明する。

鼓膜癒着症の中耳腔全圧のピーク圧は未処置群、中耳炎群のいずれと比較しても有意に低下していた。また粘膜血流についても同様に抑制されていた。このことより鼓膜癒着症における中耳腔のガス換気能は中耳炎よりもさらに低下しており、その原因の一つとして中耳粘膜における血流の低下が関係しており、鼓膜の陥凹、癒着にいたる一因となっていることが示唆された。
血管作動物質による血管平滑筋細胞のイオン交換系賦活と細胞内情報伝達機構

本研究では、Na^+/K^+-ATPase阻害剤(ウワバイン)とインスリンで前処置した血管平滑筋細胞(VSMC)を用いて、Myelin Basic Protein(MBP)のリン酸化を指標にしてMitogen-activated protein kinase(MAP)キナーゼを測定し、アルギニン・バゾプレシン(AVP)とアンジオテンシンII(AII)によるMAPキト-ゼ賦活化に対するウワバインとインスリンの効果を検討した。細胞内蛍光色素法により、細胞内遊離Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)と細胞内pH(pHi)を測定し、ウワバインとインスリンの効果の細胞内機序を解明した。(1)1mMウワバインでVSMCを数分間前処置すると、AVPとAIIによるMAPキナーゼ賦活化は増強された。また、同処置はCa^<2+>ionophore(ionomycin)とprotein kinase C(PKC)賦活剤(PMA)によるMAPキナーゼ活性化も増強された。1mMウワバインは、AVPとAII受容体には影響を与えなかったが、細胞内Na濃度([Na^+]i)の上昇による細胞膜電位の上昇とAVPとAIIによる脱分極を促進した。AVPとAIIによる[Ca^<2+>]i増員もウワバインは増大した。(2)1μMインスリンで24時間前処置すると、基礎値とAVPそしてAIIによるMAPキナーゼ賦活化が増強された。AVPのV_1受容体の親和性はインスリンにより増大し、AVPとAIIによる[Ca^<2+>]i増員もインスリン前処置により増強された。また、インスリンは、細胞内pHの基礎値を上昇させた。以上により、本能性高血圧症と糖尿病の動脈硬化の進展機序に血管収縮物質が関与することが示唆された。