hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
内在性遺伝子ターゲッティング法を用いた肝癌におけるp53アイソフォームの機能解析

今年度は本研究課題であるp53スプライシングアイソフォームの機能解析範囲を昨年度までに解析した△40p53α、Δ133p53αだけでなく、p53のC末が欠失したアイソフォーム(p53β)まで広げて解析をおこなった。EGFPを含有する全長のwild type p53(EGFP-FL-p53α)と全長のp53β(EGFP-FL-p53β)および各種アイソフォームのコントラスト(EGFP-△40p53α、EGFP-△133p53α)などを作成し、p53-/-内在性遺伝子破壊肝細胞株やTP53-/-である293T細胞、TP53wildであるHEK293細胞などを用いてβ型愛氏フォームの機能やアイソフォーム同士の相互作用を解析した。その結果、蛋白質レベルでp53α同士は結合しあうが、p53αとp53βは結合しないことが明らかとなった。さらにルシフェラーゼ・アッセイによりp53βはp53のDNA結合領域に結合する活性が高く、転写活性を介した増殖抑制効果を示すことが示唆された。子の活性にp53αの存在や結合は必要としなかった。一方、△40p53αや△133p53αは典型的なp53のDNA結合領域に結合することなく増殖抑制効果を発揮する可能性が示唆された。p53アイソフォームのin vivoでの機能を検証するためにWBN/Kobラット、Wisterラットと線維化抑制剤を用いて肝がん発症の母体となる肝線維化や肝脂肪化とp53アイソフォームの関連を解析した。肝線維化や脂肪肝の程度は事件前の予想よりも強く発現しなかったが、現在も解析を継続中である。本年度の研究計画に基づいて以下の研究を実施した。1.p53スプライシングアイソフォームの機能を解析するためにCRSPR/Cas9システムを用いた遺伝子ターゲッティング法によりp53アイソフォームである△40p53および△133p53の内在性遺伝子改変肝細胞株を樹立した(p53 △40/△40、p53 △133/△133)。これらの内在性遺伝子改変肝細胞株はHepG2細胞株を用いて△40p53および△133p53の内在性遺伝子をhomoに破壊した肝癌細胞株である。2.上記の2つのp53アイソフォームのうち、まず△40p53の機能を明らかにするためにp53 △40/△40、p53 △133/△133に加え、我々がこれまでに構築したp53 -/-、p53+/△40内在性遺伝子破壊肝細胞株、p53 wild type肝細胞株(親株)とp53のhot spotに点変異を導入したnegative strandvectorおよびsiRNA法を用いて標的遺伝子(△40p53)をノックダウンした外来性遺伝子導入により△40p53機能を1細胞増殖能、2細胞周期、3アポトーシスに関して解析した。3.これらの解析により△40p53は、肝癌細胞において細胞増殖を抑制し、細胞老化を誘導することを世界で初めて明らかにし、J Cell Sci.で発表した。(J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.)1.平成28年度の計画通りにCRSPR/Cas9システムを用いた遺伝子ターゲッティング法によりp53アイソフォームである△40p53および△133p53の内在性遺伝子改変肝細胞株を樹立することができた。2.△40p53の機能解析に関しては、計画通りに解析が進み、肝細胞癌における△40p53の機能を世界で初めて明らかにすることができ、論文発表をすることができた。(J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.)3.△133p53の機能解析も△40p53の解析と同様に進行中である。本研究計画に基づいて以下の研究を実施している。本研究課題であるp53スプライシングアイソフォームの機能解析として平成28年度にCRSPR/Cas9システムを用いた遺伝子ターゲッティング法により△40p53αおよび△133p53αの内在性遺伝子改変肝癌細胞株を作成し、1細胞増殖能、2細胞周期、3アポトーシスに関して解析することで、肝癌細胞における△40p53αの機能を世界で初めて解明し、その成果をJ. Cell Sciに発表した(J Cell Sci. 2017; 130(3):614-625)。今年度は△133p53αの機能解析およびスプライシングアイソフォーム同士の相互作用の解析を中心に行なった。その結果、△133p53は、△40p53と同様に肝癌細胞において細胞増殖を抑制し、細胞老化を誘導することが明らかとなった。また、スプライシングアイソフォーム同士の相互作用の解析を目的に新たな発現ベクターを作成し、現在、研究が進行中である。さらに、in vivo実験系におけるp53スプライシングアイソフォームの機能解析をするためにWBN/Kobラット、Wisterラットを用いた実験を行ない、sacrificeによる検体採取が継続中である。

1.平成29年度研究のために、平成28年度にすでに作成したTP53の内在性遺伝子をExon3から破壊したp53-/-内在性遺伝子破壊肝癌細胞株に加え、Exon4から破壊したp53-/-内在性遺伝子破壊肝癌細胞株を新たに作成した。また、N末の構造が同じp53アイソフォームだがC末の構造が異なるfull length p53α、full length p53β、△40p53α、△40p53βおよび△133p53αの相互作用を検討するために、EGFPまたはFLAG tagを挿入したfull length p53α、full length p53β、△40p53α、△40p53β、△133p53α、△133p53βを外因性に発現するvectorを作成した。これらを用いて解析した結果として△133p53αと△133p53βも△40p53と同様に肝癌細胞において細胞増殖を抑制し、細胞老化を誘導することが明らかとなった。各々のアイソフォーム間の相互作用に関しては、現在も解析中である。2.p53スプライシングアイソフォームのin vivoにおける機能解析として、WBN/Kobラット、Wisterラットおよび線維化抑制剤を用いて実験を開始した。現在は、まだ全てのsacrificeによる検体採取が終了していないため、検体の解析はすべてのsacrificeが終了してから施行する予定である。今年度は本研究課題であるp53スプライシングアイソフォームの機能解析範囲を昨年度までに解析した△40p53α、Δ133p53αだけでなく、p53のC末が欠失したアイソフォーム(p53β)まで広げて解析をおこなった。EGFPを含有する全長のwild type p53(EGFP-FL-p53α)と全長のp53β(EGFP-FL-p53β)および各種アイソフォームのコントラスト(EGFP-△40p53α、EGFP-△133p53α)などを作成し、p53-/-内在性遺伝子破壊肝細胞株やTP53-/-である293T細胞、TP53wildであるHEK293細胞などを用いてβ型愛氏フォームの機能やアイソフォーム同士の相互作用を解析した。その結果、蛋白質レベルでp53α同士は結合しあうが、p53αとp53βは結合しないことが明らかとなった。さらにルシフェラーゼ・アッセイによりp53βはp53のDNA結合領域に結合する活性が高く、転写活性を介した増殖抑制効果を示すことが示唆された。子の活性にp53αの存在や結合は必要としなかった。一方、△40p53αや△133p53αは典型的なp53のDNA結合領域に結合することなく増殖抑制効果を発揮する可能性が示唆された。p53アイソフォームのin vivoでの機能を検証するためにWBN/Kobラット、Wisterラットと線維化抑制剤を用いて肝がん発症の母体となる肝線維化や肝脂肪化とp53アイソフォームの関連を解析した。肝線維化や脂肪肝の程度は事件前の予想よりも強く発現しなかったが、現在も解析を継続中である。平成29年度の研究計画に基づき、△40p53および△133p53の機能と関連分子を探求するため、DNAマイクロアレイによる網羅的解析を行なう予定である。p53 △40/△40、p53 △133/△133に加え、p53野生型であるHuh1細胞株およびp53をノックアウトさせたHuh1細胞株においてUVによるinductionを加えたものと加えないものを検体として解析する予定である。2.in vivo実験において採取した検体を解析し、p53スプライシングアイソフォームのin vivoにおける機能を検証する。3.本課題における研究成果を国内・外の学会および英語論文にて発表する。当該研究にかかわる論文(J Cell Sci. 2017 ;130(3):614-625.)の掲載費用の支払いが平成28年度の残金では不足したので研究者本人が立て替えて支払った。
高温超伝導体探索に向けた2次元光電子分光法によるイリジウム酸化物の原子軌道解析

Sr2IrO4は、層状ぺロブスカイト型(K2NiF4型)構造を持つが、これは銅酸化物高温超伝導体の母物質の一つであるLa2CuO4と同じ結晶構造である。La2CuO4とは、結晶構造の他に電子構造や磁気構造など、複数の類似点を持つことから、Sr2IrO4にキャリアをドープすることで高温超伝導体になる可能性があると期待されている。本研究実施者は、世界的に未だ報告のない最高の電子ドープ量のイリジウム酸化物単結晶Sr1.88La0.12IrO4の育成に成功した。そこで、本研究では、価電子帯バンドからの光電子の角度分布を2次元的に一度に測定できる世界唯一の2次元表示型光電子分光器と直線偏光放射光を用いて、今まで明らかになっていなかった単結晶Sr1.88La0.12IrO4の2次元バンド分散とフェルミ面付近のバンドを構成する原子軌道の解析を行う。そして、さらにLaのドープ量を増やしたSr2xLaxIrO4単結晶を育成し、Laドープ量の違いにおける2次元バンド分散の変化や高温超伝導発現に関わるフェルミ面直下のバンドを構成する原子軌道の違いを直接観測により明らかにすることで、Sr2IrO4の電子ドープによる超伝導体探索の手がかりを得ることを目的としている。本年度は、新しい高濃度ドープの方法を模索しつつ、いくつかの単結晶を育成した。Laの仕込み濃度15 %、大きさ1 mm×2 mmの単結晶を育成して光電子分光の試料とした。光電子分光の測定は、表面数層の電子状態を観測するため、表面に大気中の水などが付かないよう、超高真空中で、試料に接着させたCu棒を倒すことで劈開し、清浄な表面を出して実験した。劈開後、LEEDの測定を行って、清浄面を確認し、光電子分光測定の第一歩となる試料のスペクトル測定に成功した。光電子スペクトルには、角度分解光電子分光の先行研究と一致する結合エネルギー付近にsバンドのピークと思われる目立つピークを観測できた。従って、試料であるSr1.85La0.15IrO4を観測できたと考えている。しかし、2次元光電子分光を測定したところ、上下に2本の筋が入り、バンド分散の広がりが測定できなかった。再度、測定に挑戦した後、本研究独自の装置である2次元表示型光電子分光器の中の、分解能を左右する障害リングの電源が故障したことが判明した。このため、原子軌道解析が可能なデータがまだ得られておらず、若干遅れ気味である。装置の修理には、すでに取り掛かっており、現時点では最終確認の段階に入っている。今後は、標準試料であるグラファイトで測定されるパターンをチェックし、修理の完了を目指している。修理自体は可能であるので、67月を目処に再測定の準備に入りたいと考えている。立命館大学SRセンターBL7に設置している2次元分光分析器(DIANA)は、一度に±50度の広い取込角度で測定できるため、光電子分光測定時に原子軌道解析を可能にする遷移行列要素の影響を含む光電子放出角度分布を次元パターンとして得ることが可能である画期的な装置である。こちらの装置の特色を最大限に活かすべく、まずは、徹底的に装置の分解能を左右する障害リングの修理を行う。万が一、装置の修理がうまく行かなかった時には、大変時間のかかる測定になってしまうが、広島HISORにある岡山大学のビームラインや施設の偏光光電子分光ステーションを使うことも考え、今年度中に成果が出せるように努力する。また、光電子分光の実験を行いやすく、確実に試料を測定をするために、単結晶試料のサイズを大きく育成することも試みる。Ptるつぼに入れる試料の総量を多くすること、溶融させてから再結晶させるまでの冷却時間を長くとること、などを行うことで、単結晶サイズを大きく作製することが可能であると考えている。Laドープ濃度が濃いと、単結晶サイズが小さくなる傾向にあることが、今までの実験からわかっているので、単結晶サイズの大きな結晶を作製するためには、La濃度10 %程のやや低い濃度の結晶育成も試み、単結晶サイズが最大になる実験条件を見出し、光電子分光の実験に用いることも検討する。

そして、さらにLaのドープ量を増やしたSr2xLaxIrO4単結晶を育成し、Laドープ量の違いにおける2次元バンド分散の変化や高温超伝導発現に関わるフェルミ面直下のバンドを構成する原子軌道の違いを直接観測により明らかにすることで、Sr2IrO4の電子ドープによる超伝導体探索の手がかりを得ることを目的としている。本年度は、新しい高濃度ドープの方法を模索しつつ、いくつかの単結晶を育成した。Laの仕込み濃度15 %、大きさ1 mm×2 mmの単結晶を育成して光電子分光の試料とした。光電子分光の測定は、表面数層の電子状態を観測するため、表面に大気中の水などが付かないよう、超高真空中で、試料に接着させたCu棒を倒すことで劈開し、清浄な表面を出して実験した。劈開後、LEEDの測定を行って、清浄面を確認し、光電子分光測定の第一歩となる試料のスペクトル測定に成功した。光電子スペクトルには、角度分解光電子分光の先行研究と一致する結合エネルギー付近にsバンドのピークと思われる目立つピークを観測できた。従って、試料であるSr1.85La0.15IrO4を観測できたと考えている。しかし、2次元光電子分光を測定したところ、上下に2本の筋が入り、バンド分散の広がりが測定できなかった。再度、測定に挑戦した後、本研究独自の装置である2次元表示型光電子分光器の中の、分解能を左右する障害リングの電源が故障したことが判明した。このため、原子軌道解析が可能なデータがまだ得られておらず、若干遅れ気味である。装置の修理には、すでに取り掛かっており、現時点では最終確認の段階に入っている。今後は、標準試料であるグラファイトで測定されるパターンをチェックし、修理の完了を目指している。修理自体は可能であるので、67月を目処に再測定の準備に入りたいと考えている。立命館大学SRセンターBL7に設置している2次元分光分析器(DIANA)は、一度に±50度の広い取込角度で測定できるため、光電子分光測定時に原子軌道解析を可能にする遷移行列要素の影響を含む光電子放出角度分布を次元パターンとして得ることが可能である画期的な装置である。こちらの装置の特色を最大限に活かすべく、まずは、徹底的に装置の分解能を左右する障害リングの修理を行う。万が一、装置の修理がうまく行かなかった時には、大変時間のかかる測定になってしまうが、広島HISORにある岡山大学のビームラインや施設の偏光光電子分光ステーションを使うことも考え、今年度中に成果が出せるように努力する。また、光電子分光の実験を行いやすく、確実に試料を測定をするために、単結晶試料のサイズを大きく育成することも試みる。Ptるつぼに入れる試料の総量を多くすること、溶融させてから再結晶させるまでの冷却時間を長くとること、などを行うことで、単結晶サイズを大きく作製することが可能であると考えている。Laドープ濃度が濃いと、単結晶サイズが小さくなる傾向にあることが、今までの実験からわかっているので、単結晶サイズの大きな結晶を作製するためには、La濃度10 %程のやや低い濃度の結晶育成も試み、単結晶サイズが最大になる実験条件を見出し、光電子分光の実験に用いることも検討する。購入した白金るつぼが予定額より低価格で購入できたため、次年度使用額が生じた。こちらは、本研究に関する光電子分光実験のための旅費、学会発表のための旅費に使用することを計画している。
多様なソフトウェア資産の収集・分析・評価と効果的な利活用の研究

昨年度から引き続いて、ソフトウェア資産の分析ならびに効果的な利活用に関する研究課題に対して、主に以下のような成果を得た。本課題を遂行するにあたり、国内はもとより国外の研究者とも積極的な情報交換を行い、国内外で積極的な成果発表を行った。ソフトウェア開発の効率を向上させるため、ライブラリなどのAPIが利用されている。一方で、巨大化・複雑化したAPIの利用は必ずしも容易ではない。そこでAPIの理解を支援するコード検索手法を提案した。本手法は「変数のデータフロー」を指定し、APIの理解に有益なコード例を検索でき、検索対象となるソースコードを既存のコード検索エンジンから取得することで多様なAPIの検索に対応し、有限オートマトンを利用した軽量なアルゴリズムを用いることでウェブアプリケーションとしての実装を実現している点が特徴的である。評価実験では、提案手法がAPIの理解を有効に支援する場合があることや、検索クエリの記述が比較的容易であること、検索時間が実用的な範囲に収まることを確認した。ソースコードの解析対象中にはしばしば自動生成ファイルが含まれるため、それらは通常前処理段階で除外される。自動生成ファイルは特有のコメント文を含むことが多いため、文字列検索を用いて特定されるが、コメント文が消された場合に対応できない。またソースファイルが自動生成ファイルであるかを目視で特定するコストは大きすぎる。そこで、機械学習を用いて任意の自動生成ファイルを自動的に特定する手法を提案した。本手法はソースファイルの構文情報を学習することで自動生成ファイルであるかどうかを判定する。4つの自動生成プログラムから生成された自動生成ファイル群を対象に評価実験を行った結果、90%以上の高い精度で自動生成ファイルを特定できることを確認した。平成29年度が最終年度であるため、記入しない。本年は、ソフトウェア資産の分析や効果的な利活用の研究課題を明確に確立するための研究に取り組み、主に次の成果を得た。ソースコード中の重複する部分を特定するコードクローン検出手法は、ソースコード自体を理解しにくくする難読化手法が適用されたソースコードに対して用いる場合、重複する部分を特定しにくくなってしまう。このため、コードクローン技術を剽窃行為の発見に用いることが困難となってしまっていた。そこで、難読化手法でも変化しにくいプログラムの実行履歴を分析することにより、動作が類似しているクラス対やメソッド対を検出する手法を提案した。本手法を実際のアプリケーション群へ適用し、難読化前と難読化後の双方で同一コンポーネントであるものを正しく同一であると検出可能であることを確認した。大規模プログラムにプログラムスライシング技術を適用する際用いられるThin Slicing技術は、結果を小さくしてプログラム理解に用いやすいとされている。しかしながらが、Thin Slicing技術が具体的にどの程度小さいスライシング結果を導出できるかについては確認されていなかった。複数のプログラムを対象にThin Slicingを求めて、その大きさについて統計的評価を行った。その結果、Thin Slicingによるスライシング結果は平均で元のプログラムサイズの2.1%、さらに6080%の結果については元のプログラムサイズの0.1%以下となり、十分小さいことを確認した。昨年に引き続き、ソフトウェア資産の分析や効果的な利活用に関する研究課題に対して積極的に取り組み、主に以下のような成果を得た。ソフトウェアライセンスの変更や矛盾を分析するために、まずそれらを5つの種類に整理した上で、ソフトウェアがどの種類であるか検出する手法を定めた。本手法をDebian 7.5に含まれるソフトウェアに対して適用した結果、現状多くの矛盾したライセンスを含むソフトウェアが存在することが分かった。さらにその矛盾を引き起こした理由について考察を行い、矛盾が起きた際に開発者へのフィードバックが必要であることや、一般的なライセンス矛盾の分析の困難さを明らかにした。ソフトウェアシステム全体のモデル化を行うSoftware Universe Graph(SUG)を定義し、それをMavenリポジトリに含まれる6000以上のソフトウェアに適用して、ソフトウェアの信頼性に関する分析を行った。その結果、82%のシステムが最新のライブラリを用いてシステム構築を行っていることを示した。また、Mavenが最新ないし信頼されるライブラリの適用に際しどのような影響を与えているかを明白にした。Javaソースコードの大規模リポジトリを対象として、メソッドの機能が同種のものを自動的に抽出する手法について提案を行い、手法を適用した結果について分析を行った。その結果、メソッド名が必ずしもメソッド自体の機能を表しているとは限らないこと、ファイルやブロック単位などを対象とした既存クローン検出手法が、コピーペーストによってプロジェクト間の複製が行われた際に、同一機能であることを見逃してしまいやすいことなどといった、コードクローン検出だけでは判断できない側面があることを明らかにした。既存のソフトウェアの高度な利活用を行う際に基盤として使われるソフトウェアエコシステムに関し、統合的なモデルの構築を行うことができた。これにより、普段使われるソフトウェア全体を対象として、それを俯瞰することができ、多様な分析の基盤として用いることができるようになった。今後はモデルの利用やその改善について進めていきたい。各サブテーマについてはそれぞれ分析手法の開発やそのツールないしシステムの試作等を行ってきており、ほぼ順調に進捗できていると考えられる。また、国内数多くの研究者との連携を行い、また招聘や雇用などを通じて、研究チームの国際化も進展しており、今後の課題についても国際的な視点で活性化すると考えている。昨年度から引き続き、ソフトウェア資産の分析や効果的な利活用に関する研究課題に対して、主に以下のような成果を得た。

研究を遂行するにあたり、国外の研究者と積極的な情報交換を行いつつ研究を遂行し、国内はもとより国外でも積極的は成果発表を行った。Software Bertillonageは与えられたソフトウェア資産の中に特定のコンポーネントの複製を含むかどうかテストする技術であるが、得られた候補結果の中から人間の手によってさらなる確認作業が必要であった。そこで、複製する際は複製元の一部ではなく全部を複製する傾向にあるという性質を利用して、含まれるコンポーネントの複製を自動的に特定する手法を確立した。ランダムに1000個のライブラリを混成した1つのJava JARファイルを対象に実験を行い、適合率0.998で再現率0.997と極めて高い確率で、混成元のライブラリを自動的に特定することに成功した。複数のライブラリが相互に非互換性を持つことがあるため、ライブラリを組み合わせて利用する際には、利用するバージョンの組み合わせも併せて考慮する必要があるが、どの組み合わせであれば問題がないかは経験的にしか知ることができず、利用先ライブラリの知識に乏しい初期利用時には判断が困難であった。そこで、既存の多くのソフトウェアが実際にどのライブラリのどのバージョンを組み合わせて利用しているかを調査し、その結果を可視化することによって、どのライブラリの組み合わせが一番多く利用されているかを直感的に理解するためのシステムを構築した。4000アプリケーションを対象に分析した結果を用いて実利用を想定したテストケースを通じ、システムの有効性を確認した。ソフトウェア資産の利活用を行う際の支援となる、現資産の収集・整理・分析並びにその視覚化に関して、着実な成果を得ることができた。従来は最終的に人の手による分析が必要となっていた点を、高確率で自動的に分析する手法の確立によって、多種多様なオープンソースソフトウェアに対して幅広い分析を効率よく行うことができるため、世界中のソフトウェアの動向を具体的に把握できるようになると考えられる。また、ライブラリの利用状況の可視化によって、集合知による確実なソフトウェア利用を推進できるようになってきている。今後はシステム等を広く利用してもらうことにより、さらなる知見の収集も進めていきたい。各サブテーマに関しても、分析手法の開発やツール等の作成など、順調に成果が出ており、結果は論文や国際会議等でも発表している。国際研究などをさらに推進して、広い視野に立った研究を今後も進めていけると考えている。昨年度から引き続いて、ソフトウェア資産の分析ならびに効果的な利活用に関する研究課題に対して、主に以下のような成果を得た。本課題を遂行するにあたり、国内はもとより国外の研究者とも積極的な情報交換を行い、国内外で積極的な成果発表を行った。
Condida albicansの義歯用高分子材料内への侵入機構の解析

近年、高齢化社会を迎え、軟質裏装材は組織調整、暫間裏装あるいは動的印象などに応用され、補綴診療には不可欠となっている。一方、本材料は、Candida albicansを主体とするデンチャープラークによって汚染されやすく、真菌の温床となることが報告されており、臨床使用上の重要な問題となっている。しかし、この一方で我々はこれまで、本材料にはその成分に基づく抗菌作用があることを報告している。本研究ではことのようなインヴィヴォとインヴィトロの知見の相違の一因がペリクルであると仮定し検討を加えた結果、ペリクルの存在によって以下のようなメカニズムによりCandida albicansの定着が促進されることを明らかにした。1.ペリクルの存在によって材料自体の抗真菌作用が有意に減弱された。2.ペリクルの存在によってCandida albicansのバイオフィルム形成が有意に促進され、その形成量は無コートのものの数10100倍に及んだ。3.ペリクルの存在によって、Candida albicansの歯糸形成が促進され、材料内への侵入が認められるようになった。4.これらに加え、Candida albicansの酵母型の材料内への埋入が認められた。
日米比較研究による公法解釈方法と公法教育方法論の架橋の試み

本研究は,「日米比較研究による公法解釈方法と公法教育方法論の架橋の試み」と題するものである。法曹養成がロースクールにより担われるようになって10年余,学生を真の法律家に育て挙げるためには判例のケースメソッド教育のみならず,その影に隠れた制定法解釈方法論の教育が必要である。日本がモデルとしたアメリカのロースクールでは,現在,制定法と行政法の融合教育が進んでおり,日本での公法カリキュラム改革に参考になる。更に,これを導く新たな解釈理論の存在も意識されなくてはならない。本研究は公法解釈方法と公法教育論に焦点を絞り,日本での現況と問題点の所在分析を踏まえ,比較法としてアメリカを措定し,日米比較研究によって我が国公法学での解釈方法論の思想と今後の発展可能性を考えつつ,この分析を踏まえて公法教育の改善点の視座をも得ることを目途とする。具体的には第一に,わが国の裁判実務における立法経緯を利用した解釈動向を,膨大な判例分析を元にしてその起源あるいは傾向変化の時点を特定した上で,その要因をまずは探索すること,第二に,アメリカでの行政法教育論の動向分析,第三に,比較の視座を得るために,アメリカでの行政法解釈論の動向分析を行うものである。初年度は,第一の,わが国の裁判実務における立法経緯を利用した解釈動向を探索することに傾注した。特に東京地判平成29年4月21日判時2349号3頁,及び最判平成29年12月18日民集71巻10号2364頁について研究報告をする機会を得て,研究会にて報告を行い,参加者からの知見も得ることができた。この業績については,近々,自治研究及び判例時報にて公刊の予定である。初年度は,わが国の裁判実務における立法経緯を利用した解釈動向を,膨大な判例分析を元にしてその起源あるいは傾向変化の時点を特定した上で,その要因をまずは探索することに傾注した。特に二つの判例・裁判例について分析を行い,研究会にて報告を行い,参加者からの知見も得ることができた。この業績については,近々,公刊の予定である。第二に,アメリカでの行政法解釈論の動向分析である。論文及び書籍から1800年代初期から文献収集につとめ,概ね,動向把握をすることができた。次年度は,それを元に研究の方向性について着想を得る予定である。アメリカでの行政法解釈論の動向分析を継続する。秋期に研究報告,年度末に研究論文の公刊を開始する予定である。購入した外国法書籍の納入が間に合わず,2296円の使い残しが生じた。翌年度に経費にあてる予定である。
NSAIDsの抗癌作用機構の解明とDDSを用いた創薬

多くの新しい抗癌剤が予想外の副作用のため、臨床試験の途中で開発が中止されている現状から、別の疾患治療薬として使用されている既存薬を抗癌剤として応用する研究が注目されている。疫学調査から、アスピリンに代表される非ステロイド系抗炎症薬(NSAIDs)の長期服用により、癌の発症リスクが大きく低下することが知られているが、そのメカニズムはほとんど理解されていない。本研究で我々は、癌細胞において、NSAIDsによる各クロージン(全部で24種)の発現変化を検討した。その結果、NSAIDsがクロージン2の発現を抑制することを見出し、その分子メカニズムを検討した。その結果、βカテニンの分解が重要な役割を果たしていることを見出した。また、過剰発現プラスミドなどを用いて、その発現変化がNSAIDsの抗癌作用(運動性抑制、増殖抑制、アポトーシス誘導、浸潤抑制など)に寄与しているかを調べた。その結果、この発現変化が、NSAIDによる浸潤抑制において重要な役割を果たしていることを見出した。一方、NSAIPsによるアポトーシス誘導機構において、CHOPとミトコンドリアを繋ぐ因子の検索を行い、その全体像の解明を目指した。またさらにヒトの全遺伝子を含むDNAチップを用いて、NSAIDsが誘導する遺伝子の大規模な網羅的同定を行い、多くの興味深い遺伝子発現変化を見出した。今後は本研究から明らかになったNSAlDsの抗癌作用機構を基に、NSAIDs化合物ライブラリー(現在700種ほどである)から、抗癌作用が強いと予想されるNSAIDsを選択する。最近我々は、NSAIDsが細胞内へのカルシウム流入依存的にクロージン4を誘導すること(Mima et al. Cancer Res 2005)、及びβカテニンの分解依存的にクロージン2の発現を抑制することを見出した。そこで他のクロージンに関してもNSAIDsにより誘導されるかをリアルタイムPCR法で調べた。さらに抗体が入手可能なものに関しては、ウェスタンブロット法によりタンパク質レベルでも発現変化を確認した。その結果、クロージン1、5、7が、NSAIDsにより誘導されることを見いだした。次にそれぞれのクロージンに関して、NSAIDsによる発現変化メカニズムを検討した。細胞内へのカルシウム流入依存的であるかは、BAPIA-AM(細胞内のカルシウムをキレートしその効果をなくす薬物)によりその発現変化が消失するかで検討した。βカテニンの分解依存的であるかは、活性型βカテニンの過剰発現によりその発現変化が消失するかで検討した。またCOX依存的であるかは、培地中にPGを加えることによりその発現変化が消失するかで検討した。その結果、これらの遺伝子発現変化は、βカテニンの分解依存的であることを見いだした。我々はクロージン4の過剰発現により、癌細胞の浸潤性、運動性、足場非依存的な増殖が抑制されることを見出し、NSAIDsによるクロージン4誘導がNSAIDsの抗癌作用に寄与していることを見出した。そこで同様の解析を他のクロージンに関しても行い、NSAIDsによる各クロージンの発現変化が、癌細胞の浸潤性、運動性、足場非依存的な増殖にどのような影響を与えるかを検討している。
ARB法を利用したバルクメカニカルアロイングによる非平衡相の形成機構の解明

本研究では、ARB法を用いてバルク板材のメカニカルアロイングを試みた。これにより、一定のプロセス条件(温度、ひずみ速度など)の元、種々の塑性ひずみを受けたバルク試料の作成が可能となり、組織と相遷移の様子を、段階的に観察することができるようになった。そして得られた材料の構造・組成を、研究分担者の協力も得て、ミクロからナノまでマルチスケールで解析した。本研究では、Cu/ZrとFe/Alという2種類の異なる純金属接合体に対するARBを行なった.Cu-Zr系は、アモルファス形成系としてよく知られた系であり、凝固法だけでなく、粉末のメカニカルミリング法でもアモルファス形成の報告がある.一方、Fe-Al系は、互いにほとんど固溶せず、通常はアモルファスも形成しないと言われている系である.Cu-Zr系の場合、6サイクル以上のARBで両金属がミクロ組織レベルで混合し、また原子レベルでも混合して固溶体が形成されていることが明らかとなった.さらに、CuとZrの界面近傍で、アモルファス相が形成されていることが明らかとなった.ARBによる強加工は室温で行なわれていることから、これは驚くべき結果である.ナノラメラ組織のナノビームEDS解析により、アモルファス化にはある程度以上の固溶が必要であることが示唆された.また、ARB材に熱処理を施すと、solid state amorphizationが進行し、体積の大部分がアモルファス相に変化することも明らかとなった。一方、Fe-Al系の場合にも、ARBによる強加工に伴い、合金化が進行して過飽和固溶体が形成されることが明らかとなった.しかしこの系の場合には、アモルファスかはほとんど認められなかった.ただし、界面近傍の限られた領域では、金属間化合物を経由してアモルファス相の形成が認められた.本研究の結果は、バルクメカニカルアロイングの可能性を初めて示したことに加え、メカニカルアロイングにおよぼす塑性変形と、異相界面の重要性を明らかにした。Fe/Al積層体に対して、ARB法により対数相当ひずみ16に達する巨大ひずみ加工(バルクメカニカルアロイング)を室温にて行なった。相当ひずみ16とは、厚さ7.7kmもの巨大な金属の塊を、厚さ1mmまで圧延する事に相当する。変形能の異なる2種の金属の積層体のため、圧延中に塑性不安定が生じ、多数の剪断帯が発生して、積層構造を破壊した。しかしながら、特に剪断帯内部においては、大きな塑性ひずみが集中し、FeとAlの混合が行なわれた。巨大ひずみ加工材において、主にAl中にFe原子が強制固溶した事が、FE-SEM/EDSにより定性的に、そしてFe-TEM/EDSにより定量的に確かめられた。検出されたFeの固溶量は、状態図における平衡固溶量を遥かに上回っていた。そして試料中には、部分的にFeとAlの混合した組成を有するアモルファス相が観察された。アモルファス相は、過飽和固溶体が一旦金属間化合物Al5Fe2となり、それがさらに強加工を受ける事によって生成したものと考えられた。Al-Fe系は、融液からの急冷凝固法ではアモルファスが得られない系であり、バルクメカニカルアロイングによる固相プロセスが、得る事の困難な非平衡相を創製するための有用な方法である事が確認された。

異種金属積層体に対し、ARBプロセスによる強ひずみ加工を施すことによって、バルク体の状態でメカニカルアロイングが生じ、過飽和固溶体やナノ結晶、場合によってはアモルファスが形成されることが明らかとなった.例えばCu/Zrの組み合わせの場合、異種金属の界面近傍で原子の混合が起こり、アモルファス化が優先的に進行する.室温で巨大ひずみ加工を行なっているにも関わらず、原子レベルの混合がマトリクス部でも大きく進行する.そのメカニズムは、単に拡散だけによるものとは考えにくく、塑性変形あるいは転位運動の寄与を考慮した新しい機構を考察する必要がある.ARB材に対して適当な温度で熱処理を行なうと、thermally activated amorphizationが進行し、アモルファスの体積率が増加する結果、硬質なアモルファス層と軟質な金属結晶相よりなるナノコンポジットが形成される.異種金属接合体に対し、より大きな塑性ひずみを与えることのできるHPTプロセスによる強ひずみ加工を適用すると、試料全面の均一な過飽和固溶体化や、アモルファス単相化が生じることが、Cu/Ni,Cu/Ag,Cu/Zrなどの組み合わせで明らかとなった.本研究により、与えた塑性ひずみ量とメカニカルアロイングの進行の関係が初めて明らかになるとともに、様々なナノ解析により、局所的な組織と組成の変化が定量的にとらえられた.こうした結果により、これまで粉末材にしか適用できなかったメカニカルアロイングのバルク材への適用可能性が開拓されるとともに、非平衡相の形成機構に関する基礎的知見が大きく前進した.
身体的自立度を保持・向上させる高齢者向けエクササイズ・プログラムの作成

本研究では、高齢者向けに開発したSquare-stepping exercise(SSE)の効果をウォーキングと比較することを目的とした。65-74歳の高齢者63名を実験群(SSE群、32名)、対照群(ウォーキング群、31名)のいずれかに無作為配置した。各群に3ケ月間の運動介入を施した。介入前後に転倒リスクファクタ(脚パワーやバランス、敏しょう性、ウォーキングスピード、柔軟性)、心理的項目(転倒恐怖感や運動の楽しさ、自覚的健康度)を測定し、さらに転倒リスク(介入終了後8ケ月間の転倒回数とつまずき回数)も測定した。介入内容にはスクエアステップあるいはウォーキングを用いた。SSE群は週2回、70分、ウォーキングは週1回、70分の運動教室にそれぞれ参加した。SSEは簡単なパターンからはじめ、徐々に複雑なパターンのエクササイズを積むことで脚パワーや反射能力、神経-筋機能の向上、重心移動の円滑化などの効果を企図した。ウォーキング群には自宅での歩数を増加させるように指示した。介入後、膝伸展パワー、タンデムウォーキングスピード、通常ウォーキングスピード、反応時間、心理的項目が両群において有意に改善した。その改善量はSSE群の方が大きかった。椅子からの立ち上がり回数やファンクショナルリーチ、起立時間は両群ともに有意に改善し、改善量に差はなかった。8ケ月間のフォローアップ中における転倒率(1人年あたりの割合)はSSE群で23.4%、ウォーキング群で33.3%であり、その差は有意でなかった。以上のことから、SSEは転倒リスクファクタ、あるいは転倒リスクに効果をもたらすと見なすことができることから、高齢者の身体的自立度を保持・向上させる健康増進エクササイズとして提案できる。(1)目的本研究では「つまずき後の転倒回避能力を向上させるSquare stepping exercise(SSE)」を高齢者向けのエクササイズ・プログラムの一つとして確立することである。そこでSSEの転倒リスクおよび転倒リスクファクタへの効果を筋力&バランスエクササイズ(SB)の効果と比較した。(2)方法◆対象者三重県津市河芸町に在住する6574歳の高齢者(2,104名)の中から300名を無作為に抽出し、研究参加を呼びかけるダイレクトメイルを送付した。呼びかけに応じた39名を研究対象者とし、SSE群(20名)とSB群(19名)に無作為配置した。◆アウトカム(1)転倒リスクファクタ:脚パワー、バランス、敏捷性、歩行スピード、柔軟性。(2)心理的項目:転倒恐怖感、運動の楽しさ、自覚的健康度への効果。(3)転倒リスク:介入終了後12ヶ月にわたる転倒回数とつまずき回数。◆介入(1)SSE:介入を週2回、1回70分(15分間のアップ、40分間のステップ、15分間のダウン)、3ヶ月間おこなった。(2)SB:ステップの代わりに自重によるスクワット、フロントランジ、カーフレイズ、ヒップアブダクション、タンデムウォーキング、片膝立ちによるバランス保持をおこなった。介入期間や頻度、時間は両群で同じにした。(3)結果介入前後においてSSE群で閉眼片足立ちが有意に改善した。ファンクショナルリーチはSB群においてのみ有意に改善した。その他の項目は両群とも有意に改善した。介入後12ヶ月間における転倒者率に有意差は認められなかったが、つまずき回数に対する転倒回数の割合はSSE群(14.6%)、SB群(33.3%)と有意に異なっており、SSE群がつまずき後の動作を適切におこない、転倒を回避していることが示唆された。
癌免疫応答と免疫病態の機能的二光子イメージング

胚中心はウイルスや細菌などから身を守る抗体の産生や、免疫記憶の形成に重要な免疫応答の場である。本研究はBリンパ球が胚中心Bリンパ球へと分化する組織内微小環境を特定し、転写因子Bcl6がBリンパ球の胚中心への移動に重要な役割を果たすことをライブイメージングにより明らかにした。また胚中心反応に必須のTリンパ球が、スフィンゴシンー1ーリン酸の受容体の一つであるS1PR2によって胚中心に留められていることライブイメージングを用いて突き止めた。さらに、腫瘍免疫において重要な細胞傷害性Tリンパ球の形成・分化に、重要な役割を果たす樹状細胞サブセットをライブイメージングにより特定した。平成22年度は、癌特異的なCD8陽性T細胞の細胞増殖状態の生体内イメージングを行うために、宮脇らのグループによって開発された細胞周期蛍光タンパク質プローブと、特定抗原特異的T細胞受容体をCD8陽性T細胞が発現するトランスジェニックマウスを作成した。このマウスからCD8陽性T細胞を単離・移植して、免疫応答中のCD8陽性T細胞の細胞周期を二光子イメージングで可視化することを試みた。細胞周期G1期のプローブと、S/G2/M期のプローブの二光子励起顕微鏡による同時可視化は、2台の超短パルスレーザーによって、約900nmと約1000nmの励起波長を同時に用いることにより効率的に達成されることが分かった。リンパ節内の癌細胞由来抗原を提示する樹状細胞や、移植腫瘍内の腫瘍細胞と、CD8陽性T細胞との動的相互作用および、CD8陽性T細胞の細胞周期の同時解析が可能になった。効率的なT細胞による癌の退縮が起こる免疫条件と、T細胞の活性化は効率的に起こすが、癌の退縮効果の弱い免疫条件において、癌特異的T細胞の細胞周期と細胞間相互作用がどのように異なっているかを解析している。樹状細胞サブセットを特異的にイメージングするレポーターマウスと組み合わせることにより、抗腫瘍効果の高い免疫条件において、どの樹状細胞サブセットと癌特異的T細胞が相互作用することで、活性化・増殖しているかをイメージングにより明らかにすることが可能となった。前年度に引き続き、細胞周期蛍光タンパク質プローブと特定抗原特異的T細胞受容体を発現する、CD8陽性T細胞を用いた解析を行った。その結果、CD8陽性T細胞による効率的な癌の退縮が起こる条件においては、これらのT細胞はエフェクターメモリー細胞に分化しリンパ節から移出した後、腫瘍組織内において最も活発に増殖していることが分かった。また樹状細胞サブセットを選択的に可視化する遺伝子改変マウスを用い、生きたマウスの腫瘍組織内のイメージングを行ったところ、腫瘍組織内に浸潤した抗原特異的エフェクターメモリーT細胞は、腫瘍内で増殖を再開する直前に、腫瘍内の辺縁部に存在する樹状細胞サブセットに、抗原特異的な接合を行うことが見いだされた。そのため、エフェクターメモリーT細胞と腫瘍組織の樹状細胞の、相互作用の意義を調べるための実験系の構築を開始した。イメージング技術向上の点においては、本年度はオプティカルパラメトリックオシレーターを用いたチタン・サファイアレーザーの波長変換を導入し、橙色または赤色蛍光タンパク質の長波長2光子励起能が向上したため、免疫組織・腫瘍組織のイメージングの多色性を向上することが出来た。また、本年度は液性免疫応答を担うヘルパーT細胞のサブセットのイメージングプロジェクトも開始した。その結果、スフィンゴシン1リン酸の受容体の一つが、これらのヘルパーT細胞サブセットが液性免疫反応場に留まるために、重要な役割を果たしていることが示唆された。この結果は、抗腫瘍抗体作製などにおいても重要な、液性免疫応答の促進メカニズムの解明につながるものと期待される。前年度までの研究により、転写因子(仮称Lztx)が細胞障害性T細胞(CTL)のメモリー細胞形成に非常に重要な役割を果たしていることが示唆されていた。今年度は、CD8陽性T細胞が活性化しCTLが誘導される際の、Lztxの発現ダイナミクスと、そのCTL形成における役割を調べた。その結果、CD8陽性T細胞は活性化したのち急速にLztxの発現を低下させ、その後エフェクター細胞になるものではLztxの発現を低下させたままでいるのに対し、メモリー細胞になるものは徐々にLztxの発現を回復していくことが分かった。この活性化後に急速に起こるLztxの発現低下の意義を調べるために、LztxトランスジェニックCD8陽性T細胞を作成して解析したところ、Lztx発現低下が十分に起こらないCD8陽性T細胞では、細胞分裂が十分に起こらず、またCTL形成が阻害されていた。このことはCTLによる腫瘍退縮作用を調べた実験でも確認された。

一方、Lztx遺伝子欠損T細胞を用いた実験から、一旦低下したLztx発現がその後回復していかなければ、形成されたCTLの細胞死が亢進して、その結果メモリー細胞形成が出来ないことが示唆された。また、一昨年度から開始していた、液性免疫応答を担うヘルパーT細胞のサブセットに関する研究では、イメージング実験からスフィンゴシン1リン酸の受容体の一つ(S1PR2)が、これらのヘルパーT細胞サブセットが液性免疫反応場に留まるために、重要な役割を果たしていることが示唆されていた。今年度の実験から、S1PR2はケモカイン受容体CXCR5と協調的に働き、これら両方の受容体を欠損したヘルパーT細胞では、長期液性免疫応答を促進することが出来ないことが明らかとなった。感染などに対する免疫応答の結果、皮膚や粘膜の上皮組織中に移入して長期間滞在するタイプのCD8陽性のメモリーT細胞が形成され、迅速な二次免疫応答に重要な役割を担うことが明らかとなってきている。しかしながらこのメモリーT細胞がどのように上皮組織に浸潤してくるかについては不明な部分が多い。平成26年度は、皮膚表皮内へのCD8陽性メモリーT細胞の浸潤過程についてイメージンング解析を行った。特に前年度までに確立してきた、複数の樹状細胞サブセットを同時に可視化するレポーターマウスを用いて、樹状細胞との相互作用の観点から解析を行った。リンパ節で一度活性化したCD8陽性細胞は、抗原が投与された部位の皮膚において、まず血中から真皮に浸潤し、次いで表皮内に浸潤してくる。また抗原が投与された部位の皮膚には、真皮の樹状細胞が集って塊を形成するようになる。ライブイメージングによって、真皮に浸潤してきたCD8陽性T細胞は、樹状細胞の塊の周りに群れるようにして、表皮まで登ってくることが観察された。通常真皮に存在する樹状細胞が塊を形成すると、塊の上端に位置する樹状細胞は表皮の下層部分にくい込むようになることも観察された。興味深いことに塊の上端部分には、CD8陽性T細胞に抗原刺激を与えることに特化したCD103陽性の樹状細胞が、特に多く存在することが明らかとなった。これらの結果から、塊の上端部分に位置するCD103陽性樹状細胞が、CD8陽性メモリーT細胞の表皮内への浸潤もしくは表皮内での再活性化において、重要な役割を担うことが示唆された。平成24年度は、転写因子Bcl6やその他の転写因子のエフェクターCTLやメモリーCTLの分化における役割を、レポーターマウスや遺伝子欠損マウスを用いて解析した。予備的な結果ながら、これまで提唱されてきた事と異なり、メモリーCTLにおけるBcl6の発現や役割はあまり顕著ではないという結果が得られ、一方でこれまでCTLにおいて解析されていなかった他の転写因子(仮称Lztx)がメモリーCTLの形成に非常に重要な役割を果たしていることが示唆された。野生型マウスに養子移植したLztx欠損CTLの抗原特異的応答の解析おいては、メモリーCTLが減少しているのに対し、エフェクターCTLの数は野生型CTLの場合と比較してむしろ増加していると結果が得られた。このことはLztxの発現ダイナミクスがエフェクター対メモリーCTLのバランス形成に重要な役割を果たしている可能性を示唆している。
ストレスが摂食行動に及ぼす効果に関する行動学的および内分泌学的研究

ラットを用い、重力ストレスによる摂食行動の変化およびコルチコステロンとレプチン量を調べた。重力の強弱:成体期の雄(39-69日齢)は+0.6,+1.0,+1.4G負荷により重力強度に依存し体重増加が有意に減少した。実験終了時のコルチコステロン値がG負荷で高値となった。重力の強度は体重増加、体重当たりの飼料摂取量に反映した。胎生期、幼若期ストレスの影響:1)胎生期(妊娠14日目-出産前日まで母体に+0.5、+1Gまたは金網拘束負荷)の雄は成長がストレス負荷により異なり、特に金網拘束は離乳期から成長期で体重増加が抑制された。雌の成長はG負荷で促進され、特に+1Gは有意な飼料効率高値に由来する成体期の体重増加となった。2)幼若期(前期:1-14日齢,後期:15-28日齢に+1または+2G負荷)の雄は体重あたりの飼料摂取量で前期G負荷が対照と後期G負荷に比べ有意に異なったのみである。雌は差がなかった。胎生期のストレスが仔の成長や飼料効率に影響を及ぼすが生後直後から離乳期のストレスは影響が少なかった。性差:53日齢の雄雌に1):精巣摘出、2):卵巣摘出を施し、対照にintactを用いた。63-92日齢まで+1G負荷を行った。1)は対照に比べ摘出直後から体重が有意に減少した。G負荷により対照、摘出共に有意な体重抑制となり、摘出の方が早期に減少した。体重あたりの餌摂取量はG負荷により有意に低下し、その有意頻度は摘出で倍であった。G負荷により対照、摘出共に有意なコルチコステロン値となった。2)摘出群は摘出14日目から対照に比べ体重が有意に増大した。G負荷の体重への影響は対照ではなく、摘出は雄と類似する抑制となった。体重あたりの餌摂取量、飼料効率は摘出で摘出後11-20日で有意に増大した。性ホルモンはストレスに対して抵抗的に働き、特に女性ホルモンはストレス抵抗性を高めていることが示唆された。雌は差がなかった。ウィスター系ラットを用い、ストレス負荷を胎児期(妊娠14日目-出産前日まで母体に+0.5または+1.0Gの重力負荷あるいは金網拘束)と幼若期(前期:1-14日齢、あるいは後期:15-28日齢に+1.0または+2.0G)で行った。ストレス負荷は1日1回10分間とし、対照群として無負荷を設けた。食行動変化を餌摂取量、体重当たりの餌摂取量、体重変化で解析した。終了時の血中コルチコステロン、レプチン、ソマトスタチン、コレシストキニン、グレリンの内分泌物質値を測定した。胎児期:雄ではストレス負荷による影響は摂食期間(22-65日齢)の餌摂取量、体重当たりの餌摂取量にはなかった。体重増加の成長曲線でストレス負荷群が有意に異なり、特に金網拘束された母体の仔は離乳期から成体期前まで体重が減少した。重力負荷群のソマトスタチン値が有意に低く、コレシストキニン値は+0.5G群が有意に低かった。雌では重力負荷の影響は餌摂取量にはなかったが、体重当たりの餌摂取量は+1.0G群、拘束群が有意に異なった。

成長曲線は重力負荷群が有意に増加し、特に+1.0G負荷を受けた母体の仔は成体期以降で他群より増加した。ストレス負荷群は飼料効率が有意に高く、特に+1.0G群が離乳直後の2週間で高値となった。内分泌物質値では差はなかった。幼若期:雄では重力負荷の影響は摂食期間(23-79日齢)の餌摂取量、体重当たりの餌摂取量にはなかった。体重当たりの餌摂取量は前期重力負荷群が対照群、後期重力負荷群に比べ有意に高かった。成長曲線、飼料効率、内分泌物質値では差はなかった。雌では差はなかった。以上のことより重力曝露、金網拘束をされた親から生まれた仔の成長曲線はストレスを受けなかった親の仔のそれと有意に異なり、特に親が+1.0Gの重力に曝露された雌の仔は成体期以降に体重が増大し、それは離乳直後の飼料効率が高くなったことに起因すると推察される。ラットを用い,重力ストレスの効果に関して行動学的手法により摂食行動を,内分泌学的手法によりコルチコステロンとレプチン量の変動を調べた。重力の強弱:成体期雄(39-69日齢)において+0.6,+1.0,+1.4G負荷により重力強度に依存した体重加の有意な減少が見られた。体重当たりの餌摂取量は+1.0,+1.4G負荷で有意に減少した。飼料効率も重力曝露群で有意に低下した。実験終了時のコルチコステロン値は重力負荷では有意に高かった。すなわち,重力強度は体重増加,体重当たりの飼料摂取量に反映することが示唆された。性差:53日齢の雄雌を用い1):精巣摘出,2):卵巣摘出を施し,対照にintactを用いた。30日間(63-92日齢)+1.0G負荷を行った。1)は対照に比べ摘出直後より体重が有意に減少し,終了時のその差は拡大した。G負荷により対照,摘出群ともに有意な体重増加抑制となったが,摘出群の方が早期の減少となった。体重あたりの餌摂取量の有意な低下がG負荷により見られたが,その有意頻度は摘出群で倍であった。飼料効率はG負荷により低下したが有意差はなかった。実験終了時のコルチコステロン値は対照,摘出群共にG負荷では有意に高値であったが,レプチンには差はなかった。2)は摘出14日目から摘出群は対照群に比べ体重が有意に増大し,終了時のその差は雄より拡大した。G負荷による体重増加抑制は対照群では見られず,摘出群では雄と同時期から有意な抑制となった。体重あたりの餌摂取量は対照群に比べ摘出郡は摘出直後に有意に減少したが,摘出12日から21日迄有意に増大した。飼料効率では摘出群は対照群に比べ摘出11日から20日迄の10日間で有意に増大した。内分泌物質値には差はなかった。以上のことからストレス受容において性ホルモンはストレス抵抗的に働くが,特に女性ホルモンはストレス抵抗性を高めていることが判明した。
半導体製造装置やフッ酸を使わない教育用シリコン太陽電池製作に関する研究

半導体デバイスの製作実習は、半導体製造装置やドラフトチャンバ等の設備が完備された環境でないと学生実験実習は困難となる。そこで、これらの半導体製造装置等をほとんど備えていなくても、通常の実験室のような環境において製作実習を実施する方法について研究してきた。その結果,半導体製造装置やフッ酸などを使わないシリコン太陽電池の製作方法を考案した。本研究では製作条件と太陽電池の性能との関係について調べ,最適な製作条件を見出す予定である。また、製作方法を改良し更に簡単にシリコン太陽電池が製作できる方法を確立する。