hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
アトピー性皮膚炎とそのモデルマウスにおけるNK細胞の解析

アトピー性皮膚炎(AD)患者27例と健常人17例より採取した末梢血を採取し、フローサイトメーターによって、NK細胞表面上の活性化・不活性化マーカー(CD8,CDI6,CD27,CD56,CD57,CD94,CD95)発現に関して、2重染色解析を行った。その結果、AD患者ではNK細胞上の不活性化マーカーであるCD57の発現レベルと発現率が低下し、活性マーカーであるCD27の発現率が上昇している傾向が見られたが、統計学的な有意差は認めなかった。その他の各活性化・不活性化マーカーに関しては、AD患者と対照との間に差を認めなかった。次に、棚動物モデルとされる慢性接触皮膚炎モデルにおけるNK細胞に関する解析を試みた。繰り返しハプテンを塗布する慢性接触皮膚炎モデルでは、遅延型反応から即時型反応へのシフトに伴って、病変局所のサイトカイン環境がTh 1パターンからTh2パターンへと変化することが明らかにされている。そこで、今回、野生型マウスを用いた慢性接触皮膚炎モデルにおいて、2種の実験を行った。(1)マウスの末梢血を採取し、フローサイトメーターによって、NK細胞表面上の活性化・不活性化マーカー発現に関しての2重染色解析を行った。その結果、全てのマーカーに関して、多少のばらつきは認めたものの、モデルマウスと対照との間に有意差は認めなかった。(2)慢性接触皮膚炎モデルの誘発相において、7日おきに2回、マウス尾静脈より抗NK 1.1抗体を投与し、NK細胞機能をブロックした。それによって、Th2への偏位が抑制されるかどうかに関して検討する目的で、マウス末梢血中のIL-5およびIFN-γ濃度を測定したが、モデルマウスと対照との間に有意差は認めなかった。アトピー性皮膚炎(AD)患者54例と健常人18例より採取した末梢血を用いて、磁気細胞分離法によりNK細胞を単離し、一定濃度に調整した。PMAとIonomycin存在下で24時間培養した後、培養上清を回収し、モノクローナル抗体(R&D社)を用いたELISA法によって上清中のIFN-γ、IL-5、IL-10、およびIL-13濃度を測定した。その結果、AD患者ではIFN-γの上清中濃度は対照より有意に低下していた(73.31±11.86VS 167.2±15.02ng/ml,p<0.05)。IL-5、IL-13、およびIL-10に関しては、AD患者と対照との間に有意差を認めなかった。次に、AD患者の詳細なデータベースをもとに、重症度、各検査異常、合併症、および治療などと各サイトカイン測定値との関連について解析を行った。その結果、培養上清中IFN-γ濃度は、重症例では中等症、軽症例よりも有意に低値を示し、各患者末梢血中の総IgE濃度や好酸球数との間に有意な負の相関を認めた。以上より、NK細胞によって産生されるIFN-γが、ADの病態形成に何らかの役割を果たしていることが示唆され、ADにおいてNK細胞の量的・機能的異常が起点となって、高度なTh2への偏位が生じている可能性が考えられた。現在、フローサイトメーターを用いて、NK細胞表面上の活性化・不活性化マーカー発現に関する2重染色解析や、NK細胞内サイトカイン量に関する3重染色解析を行っており、今後は、Real time PCR法によるNK細胞内のIL-5、IL-10、IL-13、IFN-γのmRNA発現量の定量や、ADモデルマウスにおけるNK細胞の解析を予定している。アトピー性皮膚炎(AD)患者15例と健常人13例より採取した末梢血を採取し、フローサイトメーターによって、NK細胞表面上の活性化・不活性化マーカー(CD8,CD16,CD27,CD56,CD57,CD94,CD95)発現に関して、2重染色解析を行った。その結果、AD患者ではNK細胞上の不活性化マーカーであるCD57の発現レベルと発現率が有意に低下していた(発現レベル:580.2±223.8 VS 909.2±152.5,p<0.05,発現率:53.3±8.8 VS 65.7±3.8%,p<0.05)。また、活性マーカーであるCD27の発現率が有意に上昇していた(23.0±8.6 VS 15.5±3.1%,p<0.05)。その他のマーカーに関しては、AD患者と対照との間に有意差を認めなかった。次に、末梢血の一部にPMA、Ionomycin、Brefeldin Aを含むRPMI培養液を加え、37°Cで4時間培養した。培養後、細胞をFITC標識抗ヒトCD56抗体で染色し、溶血処理と白血球細胞膜透過性を高める処置を行った後、細胞をPE標識抗IFN-γ抗体、PE標識抗IL-13抗体で染色した。固定後、フローサイトメーターを用いて、細胞内サイトカインに関する3重染色解析を行った。その結果、AD患者ではNK細胞内のIFN-γ陽性率が有意に低下していた(47.8±15.8 VS 64.0±13.2%,p<0.05)。IL-5、IL-13、およびIL-10に関しては、全体に発現率が低く、AD患者と対照との間に有意差を認めなかった。

NK細胞を単離培養した上清中のIFN-γ濃度は、重症例では中等症、軽症例よりも有意に低値を示し、各患者末梢血中の総IgE濃度や好酸球数との間に有意な負の相関を認めたという前年度の研究結果も合わせて考察すると、ADにおいてNK細胞の量的・機能的異常が起点となって、ADにおける高度なTh2への偏位が生じている可能性が考えられた。今後は、Real time PCR法によるNK細胞内のIL-5、IL-10、IL-13、IFN-γのmRNA発現量の定量や、ADモデルマウスにおけるNK細胞の解析を予定している。アトピー性皮膚炎(AD)患者27例と健常人17例より採取した末梢血を採取し、フローサイトメーターによって、NK細胞表面上の活性化・不活性化マーカー(CD8,CDI6,CD27,CD56,CD57,CD94,CD95)発現に関して、2重染色解析を行った。その結果、AD患者ではNK細胞上の不活性化マーカーであるCD57の発現レベルと発現率が低下し、活性マーカーであるCD27の発現率が上昇している傾向が見られたが、統計学的な有意差は認めなかった。その他の各活性化・不活性化マーカーに関しては、AD患者と対照との間に差を認めなかった。次に、棚動物モデルとされる慢性接触皮膚炎モデルにおけるNK細胞に関する解析を試みた。繰り返しハプテンを塗布する慢性接触皮膚炎モデルでは、遅延型反応から即時型反応へのシフトに伴って、病変局所のサイトカイン環境がTh 1パターンからTh2パターンへと変化することが明らかにされている。そこで、今回、野生型マウスを用いた慢性接触皮膚炎モデルにおいて、2種の実験を行った。(1)マウスの末梢血を採取し、フローサイトメーターによって、NK細胞表面上の活性化・不活性化マーカー発現に関しての2重染色解析を行った。その結果、全てのマーカーに関して、多少のばらつきは認めたものの、モデルマウスと対照との間に有意差は認めなかった。(2)慢性接触皮膚炎モデルの誘発相において、7日おきに2回、マウス尾静脈より抗NK 1.1抗体を投与し、NK細胞機能をブロックした。それによって、Th2への偏位が抑制されるかどうかに関して検討する目的で、マウス末梢血中のIL-5およびIFN-γ濃度を測定したが、モデルマウスと対照との間に有意差は認めなかった。
非デカルト的実体二元論への〈人〉の現象学からのアプローチ

本研究は、現代哲学における非デカルト的実体二元論の基礎について、現象学の立場からの貢献を目的としたものである。より具体的には、私たちの知覚的経験と意志的経験・行為の経験の現象学的分析に着目することで、「私たちは私たちの身体とはなんらかの意味で異なる〈人〉である」という非デカルト的実体二元論の中心的主張をより明確化するための予備作業を行なった。本研究の成果は(1)20世紀初頭に活躍した古典的な現象学者たちが私たちの知覚的経験や意志的経験・行為の経験に関して残した分析をいまなお参照に値するものとして再構成し、(2)それを現代の研究にどのように生かすのかについて概略を示した点に集約される。本年度は、「初期現象学における感覚経験の関係説」というテーマの研究を行い、その成果を日本現象学会第36回研究大会における個人研究発表「現象学的実在論と感覚の関係説」として発信した。具体的には、感覚経験に関するインガルデンの見解を、その影響源である初期現象学における議論をたどり直して再構成することで、一つの哲学的な立場として提出することができた。また、本発表は同学会が編集する査読付きの学術誌『現象学年報』次号(第31号)への掲載が決定している(ただし最終版原稿は未提出)。そのため、感覚経験の関係説というこれまで知られていなかった立場が少なくとも選択肢の一つであるということは、現象学の専門家のあいだで認められたといってよいように思われる。本年度は、(1)前年度に掲載が確定していた査読付き論文「現象学的実在論と感覚の関係説」の最終盤原稿の作成、(2)「知覚経験の行為者性」というテーマの研究を行ったほか、三・四年次に行われるはずだった予定を前倒しして、(3)「意志経験における〈人〉の役割:意志の包括的な現象学を打ち立てる」というテーマの研究も開始した。(1)について。初期現象学における感覚論が〈人〉の存在論にどのような含意を持つのかの指摘を含め、前年度の研究の成果を簡潔かつ過不足のないかたちで発信することができた。(2)について。この研究の中心的なアイディアは、知覚経験を瞬間的な出来事の集積として捉えるのではなく、本質的に時間の幅を持つプロセスとして捉える点にある。この点を説得的に示すために、知覚の恒常性(perceptual constancy)に着目して、この現象を瞬間的な出来事の集積として分析する立場を批判する発表を、北欧現象学会にて行った。その成果を発信する論文は現在準備中である(この点については「現在までの進捗状況」および「今後の研究の推進方策等」で後述する)。(3)について。KU Leuven(ベルギー)のフッサール文庫を訪問し、フッサールが意志の現象学および行為論を論じた草稿群に関するの約一週間の文献調査を行ったほか、同草稿群の全集版の編者であるトーマス・フォンゲーア博士と本研究計画に関連するディスカッションを行った。また、LMU Munichでの行為の現象学に関する国際学会、University College Corkでの講演、University Collegeでの志向性と規範性に関する国際学会のそれぞれで、プフェンダーの動機づけ論、フッサールの意志の現象学、シュタインの動機づけ論についての研究発表を行った。また、フッサールの行為の現象学に関して展望を示す日本語論文(「行為と行為すること」、査読なし)も発信した。上述の(2)の研究については、当初の予定であった論文の投稿を年度内に達成できなかったため、やや遅れをとっていると判断せざるをえない。これは、北欧現象学会での研究発表およびその際に持つことができた欧州の専門家とのディスカッションを通じて、同研究の成果を説得的な論文にするためには相当量の追加作業が必要であることが明らかになったためである。上述の(3)の研究を前倒しした理由も、いま述べた追加作業のなかに意志に関する研究が含まれていたことによる。こちらの研究に関しては、国際学会および国外の大学での招待講演でその成果を発信するなど、すでに多くの成果を上げることができた。したがって研究の進捗状況を全体としてみた場合には、おおむね順調に進展していると判断して差し支えないように思われる。本年度の研究実績は、以下の三つに区分できる。(1)現象学的な知覚論に関する論文の作成・投稿、(2)「意志経験における〈人〉の役割:意志の包括的な現象学を打ち立てる」に関する研究、(3)意志との類比性を踏まえた感情の現象学に関する基礎的研究。(3)について。これまでの研究を通じて、感情の現象学の成果を意志の現象学に応用するという着想にいたり、感情の志向的対象に関する研究を行った。昨年の報告書の「今後の研究の推進方策」において述べた通りの研究をおおよそ実行し、研究計画の遅れを取り戻した。また、「意志経験における〈人〉の役割:意志の包括的な現象学を打ち立てる」については、研究計画上は予定されていなかったは論文の作成を行った。これらに加え、意志経験と感情経験の平行性を、志向的対象に着目することで考察という、当初には予想していなかった方向性の研究を着想し、それに着手することができた。以上の三点より、本年度の研究は当初の計画以上に進展していると判断した。本年度の研究の中心は、意志と行為の現象学を論じる際の重要人物の一人である、アレクサンダー・プフェンダーの議論の検討にあった。それに加え、初期現象学における意志と行為の現象学や〈人〉の現象学に関して、より広い範囲に弥研究を行なった。その成果は以下のようにまとめられる。

(2)また、昨年から開始した、意志と行為と深い関係にある感情に関する研究の一環として、プフェンダーの感情の現象学に取り組み、八重樫徹氏(広島工業大学)と共著で英語論文を作成した。同論文は、The Routledge Handbook of Phenomenology of Agencyに所収される予定である。(3)ゲルダ・ヴァルターによる社会的作用および共同行為の現象学についての研究も行った。その成果としては、社会的作用に関するヴァルターの見解がライナッハのみならずフッサールからも大きな影響を受けていることを示す英語論文(Alessandro Salice氏(University College Cork)との共著)を作成したほか、日本現象学会のシンポジウムにおける共同行為の現象学に関する提題がある(2018年度にこの提題に基づく論文が出版予定)。(4)〈人〉の現象学をまた別の角度から追跡する研究として、コンラート=マルチウスによる感覚の現象学と実在論の擁護に関する研究も行い、その成果をメルロ=ポンティ・サークル研究大会のシンポジウムで発信した(同じ内容の論文が2018年度に出版した)。(5)以上の研究の基礎をなすものとして、フッサール現象学に関する研究を行ない、その成果を論文として発信した。本研究は、現代哲学における非デカルト的実体二元論の基礎について、現象学の立場からの貢献を目的としたものである。より具体的には、私たちの知覚的経験と意志的経験・行為の経験の現象学的分析に着目することで、「私たちは私たちの身体とはなんらかの意味で異なる〈人〉である」という非デカルト的実体二元論の中心的主張をより明確化するための予備作業を行なった。本研究の成果は(1)20世紀初頭に活躍した古典的な現象学者たちが私たちの知覚的経験や意志的経験・行為の経験に関して残した分析をいまなお参照に値するものとして再構成し、(2)それを現代の研究にどのように生かすのかについて概略を示した点に集約される。「研究実績の概要」に記載した研究発表「初期現象学における感覚経験の関係説」の内容は、交付申請書に記した研究目的や計画に大筋でしたがうものであり、本年度に達成すべきことはすべて達成されたとみなすことができる。たしかに本発表に即した研究論文は掲載が決定しているとはいえ最終版原稿が提出されていないという段階にあるが、これは『現象学年報』誌の編集方針およびスケジュールによるものであり、研究の遅れを示すものと解釈する必要はないように思われる。以上に加え、本研究に関連する問題について研究報告を行うことができたという事情に鑑みて、本年度の研究は当初の計画以上に進展していると判断した。上述の(3)の研究について。ミュンヘンでの学会発表にもとづく論文集の企画が同学会の主催者によって進められており、研究代表者もプフェンダーのの動機づけ論に関する英語論文をに寄稿することになっている。また、シュタインの動機づけ論についても、Alessandro Salice博士との英語の共著論文を作成する計画が進行中である。第三年次は、これら2編の論文の執筆に加え、フッサールの行為論に関する英語の論文の準備を進めたい。上述の(2)の研究についても、関連する追加作業を進め、今年度中の論文投稿を目指す。
魚類における組織適合性抗原の雌雄差および性判別への応用に関する研究

前年度はギンブナC'G7604系統の人為的性転換雄に移植免疫学的特異抗原が誘導されたこと、また電気泳動法により数種の性特異タンパクが捉えられることを示した。本年度はそれらの抗原タンパクの精製、抗体作製に先立ち、当研究室の所有する他のギンブナ8系統を材料として、当該タンパクと性との関連性について再度吟味した。1.鱗移植実験の再検討:系統によっては雌間の移植でも拒絶が起こり、また自然性転換雄の出現する系統の雌雄間では拒絶が起きないことが分かり、移植免疫学的に性特異抗原を検出することは不適当と判断された。2.アイソザイム・パタ-ンの系統内均一性の検討:染色体間の乗換えなどで、諸臓器の泳動像に同腹仔内でも最高1.5%の変異が新たに生ずることが分かり、性特異タンパクの同定には注意を要すると考えられた。3.未熟生殖腺中の雄特異抗原:C′G7604系統の性転換雄に出現した数種のタンパクは、いずれも、(a)他の全雌系統で、雌生殖腺にも見られるもの、(b)雄出現系統の雄生殖腺に見られないもの、のどちらかであった。従って、この中には目的とする雄特異抗原はないものと推定された。そこで分析システムの改良により検出感度を高めたところ、C'G7604系統において、性転換雄のみに見られる微量タンパクを新たに見いだしたので、現在その中から、他系統の雌には見られず、自然性転換雄に共通して見られるものを検索中である。4.性転換雄精子に対する抗体の作製:性転換雄の精子を凝集させる同系統雌の抗精子血清は、キンギョ精子を凝集させないことから、近縁種間でも性特異抗原はかなり異なる可能性が示唆された。以上、性特異抗原は組織適合性抗原とは必ずしも一致せず、その同定や抗体の作製には、超微量タンパクの分離・分析手法や組織中のmRNAの単離に始まる一連の遺伝子工学的手法の導入が将来は不可欠と思われる。本年度は現在当研究室で継代飼育している雌性発生クローンギンブナ9系統のうち、CG'7604系統の2年魚を用いた。まず、性ステロイドにより雌性発生ギンブナ(すべて雌)の人為性転換を図る場合の適性処理条件が判明し、性転換雄は大量作出が可能となった。無処理雌の卵巣には、精巣もしくは間性的構造は全く認められず、一方、性転換雄2年魚の生殖腺は精子を充満した多数の小葉構造から成っており、完全な性転換に成功したものと思われる。そこで、雌間および雌と雄との間で鱗、皮膚、鰓蓋片等の交換移植を行ったところ、鱗移植による場合、雌間では正着するが、雄から雌への移植には弱い拒絶反応が認められた。本年度申請・購入した二次元電気泳動装置で、未熟生殖腺中の全タンパク質分子を雌雄間で比較検討したところ、明らかに性特異的な数数のタンパク質(抗原)分子が見出された。次に雄の精子を雌の腹腔に反復注射したところ、雌の血清中に精子を凝集(ロゼット形成)させる活性が現れた。抗体価の上昇も一応認められた。以上の結果から、少なくとも雄に特異的な抗原が存在し、雌の体内でそれに対する免疫応答が起こったものと推定された。以上の結果から、雄特異抗原の存在(タンパク質分子)は明らかになったが、その生化学的性状や生理的機能、特に性分化に果たす役割を解明するため、次年度の課題として以下の項目を実施する。(1)性特異抗原に対する抗体の効率的作製法の検討。【○!1】クローンギンブナ雌雄間における鱗移植法または精子注入法の改良。【○!2】性特異タンパク質分子の部分的精製法と、モノクローナル抗体作製法の検討。(2)雌雄生殖腺のMoscona型再集合実験の実施と、性特異抗原の性分化誘導能についての吟味。(3)性特異抗原の分布や発現時期の免疫組織化学的検討。そこで分析システムの改良により検出感度を高めたところ、C'G7604

系統において、性転換雄のみに見られる微量タンパクを新たに見いだしたので、現在その中から、他系統の雌には見られず、自然性転換雄に共通して見られるものを検索中である。4.性転換雄精子に対する抗体の作製:性転換雄の精子を凝集させる同系統雌の抗精子血清は、キンギョ精子を凝集させないことから、近縁種間でも性特異抗原はかなり異なる可能性が示唆された。以上、性特異抗原は組織適合性抗原とは必ずしも一致せず、その同定や抗体の作製には、超微量タンパクの分離・分析手法や組織中のmRNAの単離に始まる一連の遺伝子工学的手法の導入が将来は不可欠と思われる。
遅筋線維、速筋線維の分化・維持にかかわる遺伝子群の検索

骨格筋を構成する遅筋線維と速筋線維の分化と維持に関与する遺伝子群を明らかにするために、ラット、マウスの全骨格筋における遅筋線維と速筋線維の分布を検索した。齧歯類では、下肢に分布する7つの骨格筋だけが遅筋線維を30%以上含み、遅筋線維における遺伝子発現を検討する上で重要なサンプルになることが分かった。筋線維の割合が明らかとなった15種類のラット骨格筋からcDNAを調整し、ラット骨格筋パネルとした。次に8週令のSDラット骨格筋より標識cDNAを調製しDNAアレイ解析を行った。その結果、骨格筋間で500程度の遺伝子でmRNA発現量に差異が認められた。mRNA発現量の差異は、約70の代謝酵素遺伝子、45の構造タンパク質遺伝子の他に、約80の転写因子、シグナル伝達因子で観察された。この他に機能が知られていない遺伝子が250程度含まれていた。さらに、支配神経切断によるラット下肢骨格筋萎縮モデルから萎縮骨格筋サンプルを調製し、正常骨格筋と萎縮骨格筋間でDNAアレイ解析を行った。従来、萎縮骨格筋では、筋線維の分化が失われて遅筋線維と速筋線維の遺伝子発現パターンが近似すると考えられていた。しかし、萎縮した遅筋線維と速筋線維では、必ずしも遺伝子発現パターンが一致していなかった。以上の結果は、支配神経を失った場合でも筋線維の分化形質がある程度保存されることを示唆する。支配神経による筋線維分化誘導後に一部の遺伝子発現パターンが不可逆的に固定される可能性が考えられた。その結果、齧歯類の骨格筋において、遅筋線維を30%以上含む骨格筋は、下肢に分布する7つの骨格筋だけであった。特に、ラット大腿方形筋、小内転筋、ヒラメ筋では、遅筋線維の割合が80%以上であり、遅筋線維における遺伝子発現を検討する上で重要なサンプルになることが分かった(Comp.Biochem.Physiol.B,140:45-50,2004)。そこで、筋線維の割合が明らかとなった15種類のラット骨格筋からcDNAを調整し、ラット骨格筋パネルとした。次に8週令のSDラットより速筋線維で構成される前脛骨筋と遅筋線維を95%以上含むヒラメ筋より標識cDNAを調製しDNAアレイ解析に用いた。その結果、両骨格筋間で500程度の遺伝子でmRNA発現量に差異が認められた。これらの遺伝子から約20遺伝子をランダムに選び、ラット骨格筋cDNAパネルを用いてRT-PCRを行ったところ、アレイ解析の結果は、骨格筋に含まれる遅筋線維と速筋線維の割合とよく一致していた。mRNA発現量の差異は、約70の代謝酵素遺伝子、45の構造タンパク質遺伝子の他に、約80の転写因子、シグナル伝達因子で観祭された。現在、支配神経切断によるラット下肢骨格筋萎縮モデルから萎縮骨格筋サンプルを調製し、正常骨格筋と萎縮骨格筋間でDNAアレイ解析を進めている。これらの情報を合わせ、遅筋線維と速筋線維の分化と維持に関与する遺伝子群を効率よく抽出できると考えている。齧歯類では、下肢に分布する7つの骨格筋だけが遅筋線維を30%以上含むことがわかった。特に、ラット大腿方形筋、ヒラメ筋では、遅筋線維の割合が90%と高く、遅筋線維における遺伝子発現を検討する上で重要なサンプルになることが分かった。

これらの骨格筋は、解剖学的に腰、膝、足関節における中性肢位の保持に重要なグループを構成していると考え報告した(Comp.Biochem.Physiol.B,140:45-50,2004)。筋線維の割合が明らかとなった15種類のラット骨格筋からcDNAを調整し、ラット骨格筋パネルとした。次に8週令のSDラットより速筋線維で構成される前脛骨筋と遅筋線維を95%以上含むヒラメ筋より標識cDNAを調製しDNAアレイ解析に用いた。その結果、両骨格筋間で500程度の遺伝子でmRNA発現量に差異が認められた。mRNA発現量の差異は、約70の代謝酵素遺伝子、45の構造タンパク質遺伝子の他に、約80の転写因子、シグナル伝達因子で観察された。この他に機能が知られていない遺伝子が250程度含まれていた。さらに、支配神経切断によるラット下肢骨格筋萎縮モデルから萎縮骨格筋サンプルを調製し、正常骨格筋と萎縮骨格筋間でDNAアレイ解析を行った。従来、萎縮骨格筋では、筋線維の分化が失われて遅筋線維と速筋線維の遺伝子発現パターンが近似すると考えられていた。しかし、萎縮した遅筋線維と速筋線維では、必ずしも遺伝子発現パターンが一致していなかった。シグナル伝達関連因子について論文を投稿準備中である。
真空紫外円二色性と直線二色性法による膜結合蛋白質の精密構造解析

水溶性蛋白質の生体膜との相互作用は,細胞間のシグナル伝達や膜内への薬物輸送など様々な生命現象の発現の起点になると考えられ,これらの発現メカニズムの理解には,膜に結合した蛋白質構造の解析が重要となる。本研究では,蛋白質の分子構造の解析に有効な放射光円二色性分光法に,膜内の配向構造が解析できる直線二色性を導入し,いくつかの膜結合蛋白質の構造研究を展開すると共に,構造と機能との関係性について明確にする。これにより,円二色性法による水溶液中における膜結合蛋白質の構造・機能解析法を構築する。
新しい血清コレステロール低減化ペンタペプチドの作用発現機構

研究代表者・長岡は、牛乳の乳清タンパク質のβ-ラクトグロブリンのトリプシン加水分解物が血清コレステロール低下作用を発現することを見出し、ヒト腸由来細胞Caco-2におけるコレステロール吸収実験から吸収抑制作用を有するペプチドを4種類同定し、報告した。そのうちのIIAEKは、in vivoでもコレステロール代謝改善作用を発揮することが明らかにされている(Biochem. Biophys. Res. Commun.,281,11-17(2001))。しかし、IIAEKなどのペプチドがどのような機構で、コレステロール代謝改善作用を発揮するかは、充分には解明されていない。そこで、IIAEKのコレステロール代謝改善作用について、マウスやHepG2培養細胞を用いて分子・遺伝子レベルで解明することを試みた。検討の結果、IIAEKは、マウスでは胆汁酸生合成の律速酵素であるコレステロール7α-水酸化酵素(CYP7A1)のmRNAを低下した。また、コレステロール合成の律速酵素であるHMG-CoA還元酵素mRNAやLDL受容体mRNAも低下した。HepG2細胞では、CYP7A1 mRNAは上昇した。CYP7A1のプロモーターにルシフェラーゼ(Luc)遺伝子を連結したLucプラスミドを構築し、ルシフェラーゼ分析を行った結果では、IIAEKがCYP7A1の転写の活性化によりCYP7A1のmRNAを上昇させることを発見した。HepG2細胞において、IIAEKは、胆汁酸生成の律速酵素であるCYP7A1の転写活性化により、コレステロールの分解を促進する可能性が示唆された。以上の成果は極めて新規性の高いものである。研究代表者・長岡は、牛乳の乳清タンパク質のβ-ラクトグロブリンのトリプシン加水分解物が血清コレステロール低下作用を発現することを見出し、小腸上皮細胞の機能を発現するヒト結腸ガン由来株化細胞Caco-2におけるコレステロール吸収実験から吸収抑制作用を有するペプチドを4種類同定し、報告した。そこで今回は、IIAEKのコレステロール代謝改善作用について、特に分子・遺伝子レベルで解明することをマウスによる動物実験を用いて試みた。検討の結果、IIAEKは、血清コレステロールとともに、肝臓コレステロールも対照群と比較して、有意に低下させた。つまり、コレステロールプール(肝臓コレステロール+血清コレステロール)も有意に低下した。また、IIAEKペプチドを構成するアミノ酸の混合物は、IIAEKペプチドの作用を再現しなかった。IIAEKは、胆汁酸生合成の律速酵素であるコレステロール7α-水酸化酵素のmRNAを抑制し、コレステロール吸収を抑制するとともに、コレステロールの体外排泄に関わるコレステロール輸送担体であるABCA1などのmRNAを増加させ、コレステロールの吸収排泄を促進することにより、コレステロール代謝改善作用を発揮することを明らかにした。以上の成果は極めて新規性の高いものであり、高く評価できる。そのうちのIIAEKは、in vivoでもコレステロール代謝改善作用を発揮することが明らかにされでいる(Biochem.Biophys.Res.Commun., 281, 11-17 (2001))。そこで今回は、IIAEKのコレステロール代謝改善作用について、特に分子・遺伝子レベルで解明することをHepG2による培養実験を用いて試みた。

検討の結果、IIAEKは、胆汁酸生合成の律速酵素であるコレステロール7α-水酸化酵素(CYP7A1)のmRNAを上昇させ、コレステロール合成の律速酵素であるHMG-CoA還元酵素mRNAやLDL受容体mRNAは変化させなかった。CYP7A1のプロモーターにルシフェラーゼ(Luc)遺伝子を連結したLucプラスミドを構築し、ルシフェラーゼ分析を行った結果では、IIAEKがCYP7A1の転写の活性化によりCYP7A1のmRNAを上昇させることを発見した。さらに、IIAEKは、放射性コレステロールから放射性胆汁酸の生成を促進させた。HepG2細胞において、IIAEKは、胆汁酸生成の律速酵素であるCYP7A1の転写活性化により、コレステロールの分解を促進する可能性が示唆された。以上の成果は極めて新規性の高いものであり、高く評価できる。
糸状菌の紫外線センシング：紫外線受容体の解明に向けた多面的アプローチ

植物病原糸状菌の紫外線センシングに関与する紫外線受容体の実体解明に向けた基礎的研究基盤の確立を目的として研究を行なった。イネごま葉枯病菌の近紫外線誘導遺伝子は、青色光受容体と未知の近紫外線受容体によって制御されるグループに大別できることを明らかにした。また、メラニン合成に関与するT4HN還元酵素遺伝子を同定し、他のメラニン合成酵素遺伝子と同様に、近紫外線照射による転写制御を受けることが明らかとなった。紫外線LEDを用いた解析から、一部の近紫外線誘導遺伝子と分生胞子形成には、紫外線UVB受容体が関与していることが示唆された。光とは縁がないと考えられている糸状菌類(カビ)においても、胞子形成や色素合成等の光形態形成が、紫外線や青色光によって調節される現象が知られており、菌類特有の青色光受容体に加えて、植物の赤色光受容体(フィトクロム)・青色光受容体(クリプトクロム)や動物のオプシンに類似した光受容体の存在が明らかになっている。一方、イネの病原菌であるイネごま葉枯病菌の分生胞子形成は紫外線によって誘導され、青色光によって阻害される。また、黒色色素メラニンの合成系遺伝子の発現は紫外線によって増加する。本研究では、イネごま葉枯病菌を用いて、紫外線受容体の実体解明のための基礎的研究基盤を確立したい。ゲノム情報からのアプローチとして、植物の紫外線受容体UVR8と相同性が認められる遺伝子(RCC1)をイネごま葉枯病菌からクローニングした。今後、RCC1遺伝子破壊株を作出し、機能解析を行なう予定である。作用スペクトルからのアプローチとして、紫外線UVB(波長310nm)と紫外線UVA(波長340nm)のLED照射における分生胞子形成を調査した。その結果、紫外線UVB(波長310nm)の方が効果的であり、UVB受容体の存在が示唆された。光受容体からのアプローチとして、フィトクロム様遺伝子破壊株の光応答について解析を行なった。その結果、フィトクロム様遺伝子破壊株では、赤色光照射下において分生胞子形成が見られたことから、赤色光はイネごま葉枯病菌の分生胞子形成に抑制的に働いていることが推察されたが、さらに、今後、詳細に解析を行なっていく予定である。また、紫外線によって発現が増加する遺伝子の解析を引き続き行ない、46遺伝子の発現解析及び塩基配列の解析を行ない、日本DNAデータバンク(DDBJ)に登録を行なった。糸状菌類において、胞子形成や色素合成等の光形態形成が、紫外線、青色光、及び、赤色光によって調節される現象が知られている。これら光形態形成の光受容体として、糸状菌類に特有の青色光受容体に加えて、植物の赤色光受容体(フィトクロム)、青色光受容体(クリプトクロム)や動物のオプシンに類似した光受容体の存在が明らかになっている。一方、イネごま葉枯病菌の分生胞子形成は、紫外線によって誘導され、青色光によって阻害される。また、イネごま葉枯病菌の黒色色素メラニンの合成系遺伝子の発現は、紫外線によって増加する。本研究では、イネごま葉枯病菌を用いて、紫外線受容体の実態解明のための基礎的研究基盤を確立することを目的としている。植物では、紫外線受容体としてUVR8が知られている。UVR8には、アミノ酸配列において特徴的なモチーフがあるため、このUVR8と相同性が認められる遺伝子をイネごま葉枯病菌からクローニングし、遺伝子破壊による機能解析を行ったが、紫外線に対する反応の低下といった形質は認められなかった。また、この候補遺伝子の発現解析を行ったが、紫外線に対する発現量の差異は認められなかった。一方、これまで、イネごま葉枯病菌のメラニン合成系に関与する遺伝子を明らかにしてきたが、メラニン合成系に関与すると考えられるTHR2遺伝子の機能が不明であった。そこで、メラニン合成阻害剤を用いて解析を行った結果、THR2遺伝子は、1,3,6,8-テトラヒドロキシナフタレン還元酵素をコードしていることが示唆されたことから、本遺伝子をT4HR1遺伝子とした。T4HR1遺伝子の発現は、他のメラニン合成系遺伝子と同様に、近紫外線照射によって有意に増加することが明らかになった。糸状菌類において、胞子形成や色素合成等の光形態形成が、青色光や赤色光によって調節される現象が広く知られている。糸状菌における光形態形成の光受容体として、糸状菌に特有の青色光受容体、植物の赤色光受容体(フィトクロム)、植物の青色光受容体(クリプトクロム)、動物の光受容体(オプシン)に類似した光受容体の存在が明らかになっている。一方、イネの病原糸状菌であるイネごま葉枯病菌の分生胞子形成やメラニン合成は紫外線によって誘導・促進されることから、紫外線受容体の存在が示唆されてきた。本研究では、イネごま葉枯病菌を用いて、糸状菌で未知の紫外線受容体の実態解明に向けた基礎的研究基盤を確立することを目的とした。前年に引き続き、植物の紫外線受容体UVR8に特徴的なアミノ酸モチーフと相同性のある遺伝子をイネごま葉枯病菌のゲノムデータベースから検索し、機能解析を行ったが、紫外線受容体を示唆する結果は得られなかった。一方、イネごま葉枯病菌の分生胞子に紫外線を照射して、突然変異体を作出する方法の検討を行った。寒天培地上での生育遅延や色素変異といった変異株が得られたものの、その性質は不安定であり、作出した変異株の中から紫外線受容体が関与すると考えられる変異体をスクリーニングするのは困難であると判断した。

これまで、紫外線の照射源として用いていた、ブラックライトブルー蛍光灯は、紫外線UVAとUVBを両方含む近紫外線(波長300-400nm)を放射するため、それぞれの紫外線の効果を区別するのが難しかった。そこで、LEDを用いて、紫外線UVA(波長ピーク340nm)と紫外線UVB(波長ピーク310nm)を別々に照射する実験系を確立した。分生胞子形成やメラニン合成は、紫外線UVBによる効果が高かったことから、イネごま葉枯病菌には、紫外線UVBを吸収する紫外線受容体が存在することが示唆された。植物病原糸状菌の紫外線センシングに関与する紫外線受容体の実体解明に向けた基礎的研究基盤の確立を目的として研究を行なった。イネごま葉枯病菌の近紫外線誘導遺伝子は、青色光受容体と未知の近紫外線受容体によって制御されるグループに大別できることを明らかにした。また、メラニン合成に関与するT4HN還元酵素遺伝子を同定し、他のメラニン合成酵素遺伝子と同様に、近紫外線照射による転写制御を受けることが明らかとなった。紫外線LEDを用いた解析から、一部の近紫外線誘導遺伝子と分生胞子形成には、紫外線UVB受容体が関与していることが示唆された。紫外線受容体を欠損したと考えられる変異体の作出を試みているが、現在までのところ、変異体が得られていない。植物病理学・光生物学・糸状菌分子生物学イネごま葉枯病菌のゲノム情報を利用して、紫外線受容体の候補となる遺伝子を複数選抜し、機能解析を行なう。紫外線受容体を欠損した変異株の作出を目指したが、今年度はあまり進まなかった。各種遺伝子破壊株を作出するために、イネごま葉枯病菌を形質転換を行なったが、形質転換効率が低く、改善する必要がある。紫外線LEDを照射した菌体における発現解析が遅れているため、次年度に重点的に実験を行なう。期待していた研究成果が十分に得られなかったため、実験試薬等の購入、及び、学会発表を保留にした。植物の紫外線受容体UVR8と相同性が認められる遺伝子(RCC1)の遺伝子破壊株を早急に作出し、紫外線受容体との関連について調査する。紫外線UVB(波長310nm)と紫外線UVA(波長340nm)のLED照射における各種遺伝子の発現解析を効率よく進めるため、予備実験を行ない、照射条件を絞りたい。紫外線受容体の欠損株のスクリーニングについて検討を行なう。遺伝子破壊ベクターの構築を推進するため、Seamless Cloningの使用を検討する。問題点を早期に解決し、研究の効率化を進めるとともに、これまで取り組んでこなかった視点からの研究を推進する。研究成果が不十分な部分があり、予定していた学会発表を取りやめた。発現解析や遺伝子破壊株の解析が予定していたよりも進まなかったため、試薬の購入を保留にした。不調のある実験機器を新規に更新するかどうかの判断ができなかったため、次年度に予算を一部繰り越した。研究成果をとりまとめ、学会発表を行なう予定である。発現解析や遺伝子破壊株の解析に関して、問題点を早期に解決し、実験を推進していく予定である。不調のある実験機器の新規更新も検討する。
搬送スケジューリングのオンライン最適化に関する基礎研究

本年度も昨年度に引き続き,オンライン最適化の基礎理論のより一層の充実を図るため,まず,ビークル・スケジューリングのオフライン最適化に対する近似解法の性能改善,および,搬送システムと工作機械の動きを同時に考慮したロボティクセル・スケジューリングの問題を扱った.前者では,特に,生産現場でしばしば用いられている直動型搬送システムのモデルを取り上げ,これまでに知られていた多項式時間近似解法の理論的な最悪相対誤差を50%改善することに成功した.また,その近似解法を評価するために導入した新しい下界値は,任意の形状の搬送経路に対しても用いることができることが分かった.一方,後者では,過去に研究例がほとんどない2機械ジョブショップ型ロボティクセルを扱い,多項式時間で動作するGREEDYな近似解法を提案した.そして,この手法がテストした殆どの問題例に対して最適なスケジュールを与えることを数値実験により示した.また,本年度は研究期間の最終年度であるので,搬送システムと生産ラインが有機的に結合された組立工場における部品搬送スケジューリング問題の第三レベル,すなわち,オンライン最適化についても検討した.この問題は,よく知られているロード・バランシングのオンライン最適化問題と似ているようにも思えるが,納入レーン数制約がスケジュールの実行可能性に極めて強い影響力を及ぼす点が大きな違いである.したがって,もしロード・バランシング問題と同様にモデル化しようとするならば,アルゴリズムにスケジュールの実行可能性をチェックする機能を付加するのがよいのではないかという結論に達した.このような手法の有効性は,数値例の段階ではあるが既に確認されている.対象とした搬送スケジューリング問題では,工場内を周回する搬送車によって,多種多数の部品を納入エリアから部品棚へと運ぶ際に,搬送車の各周回における部品搬送作業を標準化することが求められている.そのため,納入エリアは複数の納入レーンによって構成されており,それぞれの部品はいずれかの納入レーンへと振り分けられる.ここでは,この振り分けをよりよく行うことが,効率の良い部品の搬送スケジュールを得ることに直接つながる.搬送スケジューリングの最適化には,それぞれの部品の納入エリアへの到着時刻があらかじめ分かっている場合,それぞれの到着時刻は未知であるが到着分布は分かっていると考えてよい場合,および,未来の情報については全く知ることが出来ない場合という代表的な3つのレベルが存在する.第一のレベルはいわゆるオフライン最適化モデル,第三のレベルはオンライン最適化モデル,そして,第二のものはそれらの中間的なモデルといえる.オンライン最適化の効果を検証するためには,オフライン最適化の結果が必要になるので,まず,オフライン最適化問題を定式化し,メタ・ヒューリスティックスに基づいた近似解法を構築した.近似解法の性能は計算機実験によって確認された.次に,実行可能な部品搬送スケジュールを得るために必要な最小限の納入レーン数について検討した.その結果,オフライン最適化モデルでは,部品の到着時刻から必要納入レーン数の下界値が計算できることを示した.さらに,部品の到着分布が分かっている第二のレベルのモデルに対しても,それが必要納入レーン数の一つの推定値として有用であることを確かめた.これらの結果がオンライン最適化モデルに対してどの程度利用可能かを調べることが今後の課題である.なお,これに関連して,ロボティク生産セルを対象とし,搬送を考慮したスケジューリング問題の定式化や,近似解法と厳密解法の構築も行った。本年度も昨年度に引き続き,オンライン最適化の基礎理論のより一層の充実を図るため,まず,ビークル・スケジューリングのオフライン最適化に対する近似解法の性能改善,および,搬送システムと工作機械の動きを同時に考慮したロボティクセル・スケジューリングの問題を扱った.前者では,特に,生産現場でしばしば用いられている直動型搬送システムのモデルを取り上げ,これまでに知られていた多項式時間近似解法の理論的な最悪相対誤差を50%改善することに成功した.また,その近似解法を評価するために導入した新しい下界値は,任意の形状の搬送経路に対しても用いることができることが分かった.一方,後者では,過去に研究例がほとんどない2機械ジョブショップ型ロボティクセルを扱い,多項式時間で動作するGREEDYな近似解法を提案した.そして,この手法がテストした殆どの問題例に対して最適なスケジュールを与えることを数値実験により示した.また,本年度は研究期間の最終年度であるので,搬送システムと生産ラインが有機的に結合された組立工場における部品搬送スケジューリング問題の第三レベル,すなわち,オンライン最適化についても検討した.この問題は,よく知られているロード・バランシングのオンライン最適化問題と似ているようにも思えるが,納入レーン数制約がスケジュールの実行可能性に極めて強い影響力を及ぼす点が大きな違いである.したがって,もしロード・バランシング問題と同様にモデル化しようとするならば,アルゴリズムにスケジュールの実行可能性をチェックする機能を付加するのがよいのではないかという結論に達した.このような手法の有効性は,数値例の段階ではあるが既に確認されている.
ソジウムセスキカーボネート法による出土鉄製品の脱塩処理過程における変色の研究

ソジウムセスキカーボネート法によって、研究対象の鉄地銀象嵌刀装具一式を脱塩処理した。脱塩処理の過程において、研究対象の表面に変色を認めなかった。脱塩処理の前に、研究対象に露出した象嵌線を多数認め、露出した象嵌線のほとんどは黒色を呈しており、一部は白色を呈していた。脱塩処理の後、研究対象から鉄の錆瘤が剥落して象嵌線が新たに露出した。新たに露出した象嵌線表面は灰色を呈していた。銀と塩素が化学反応を起こして銀が腐食すると塩化銀が生成されること、塩化銀は灰色を呈することから、象嵌線表面の灰色部分は塩化銀であると推定した。象嵌線の腐食に対する塩素の関与について詳細に検討するため、機器分析を実施した。研究対象の小破片のクロスセクションに対して、電子線プローブマイクロアナライザーを用いて元素分析を実施した結果、鉄の錆瘤および象嵌線から塩素を検出した。また、塩素の分布箇所からカリウムも検出した。この塩素は脱塩処理によって除去しきれなかった残留塩素であると考える。保存修復において、象嵌の表出の際に、グラインダーに取り付けた砥石で錆瘤を削り落とすが、象嵌線の表面を意図的に削ることはしない。したがって、脱塩処理の後に象嵌線に残留した塩素は、象嵌の表出の過程で除去されることなく残り、象嵌線と鉄地金の腐食を促進させる可能性があると考察する。目視および実体顕微鏡では灰色に観察された象嵌線の小破片2点を、エネルギー分散型蛍光エックス線装置で元素分析した結果、2点のどちらからも銀、塩素、カリウムを検出した。エックス線回折装置を用いて結晶構造分析を実施した結果、一方からは塩化銀、もう一方からは塩化銀と金属銀を検出した。この分析結果から、灰色の象嵌線は腐食によって塩化銀に化学変化していること、腐食の進行度は不均一であることを考察した。
社会改革に基因する文化変容過程に関する生活文化論的研究ー中欧の多文化社会に関する実証研究ー

本研究は、少数民族問題について、長い間さまざまな対応をせまられてきたチェコ・スロバキア(以下「CSFR」と略称する)国を対象とし、この国が現在直面している社会変容のなかで、あらたにうまれつつある状況について、どのような対応をすすめているのがを実証的に調査し、究極的には、中欧における多文化社会の実態を、比較文化論的に考察することを目指したものである。結論的にいえば、前者については、十分な研究成果を得ることができたし、後者についてもまた、ある程度の足掛かりを掴むことができた、といえる。本研究は、CSFR国立科学アカデミ-所属民族・民俗学研究所(以下「研究所」と略称する)との国際共同研究であり、研究所との本格的な共同の中で、調査を進めることができた。調査研究にあたっては、日本側と研究所側とが慎重に討議を重ねた結果、つぎの三つの実態調査と一つの関連調査を計画・実施した。B.CSFRにおけるドイツ人少数民族の生活文化とその歴史的過程、その生活実態と政治的施策に関する研究C.ウクライナ在住チェコ人の本国再移民実態にかんする実証調査この内、A,B,Dについては、調査を完了した。Cについては、ウクライナ在住チェコ人の本国再移民がいまも続いているが、当初意図した少数民族問題についての知見は、この段階で十分に得ることができた。それぞれの計画の実施経過は、つぎのとおりであった。第一段階1991年46月研究調査準備手紙・FAX・国際電話により、研究所と情報を交換し、研究所がそれまでに収集した資料や研究成果について、東京で研究会を三回開催した。第二段階1991年79月共同調査実施松平誠・阿南透がCSFRに出張し、上記ADについて、本格的な共同調査を実施した。この内、Cについては、阿南が主として取り組み、その他については、松平が主として担当した。この間、Cについてさらに十分な調査が必要であると判断し、第四段階として、約10日間の短期補足調査を追加することとした。このための費用としては、使用費目転用許容範囲内で「現地参加旅費」「雑役労務費」等を削減し、これを充当することとした。第三段階1991年101992年2月調査内容検討集約日本側・CSFR側の検討分担を決め、それぞれが調査内容を検討、集約した。東京では、それまでに収集した資料や調査成果をもとに、研究会を三回開催した。第四段階1992年3月短期補足調査実施阿南透がCSFRに出張し、上記Cの課題について、両国共同で、短期補足調査を実施した。この結果、Cについても再移民の時間的経過を観察することができ、成果を一層充実することができた。第五段階1992年3月報告書作成本研究によって、日本が当面しつつある多民族・多文化的状況について、その本質的な知見が得られ、いわゆる民族問題のもつ基本的性格があきらかになった。今後学術論文として逐次発表の予定である。第四段階1992年3月短期補足調査実施

阿南透がCSFRに出張し、上記Cの課題について、両国共同で、短期補足調査を実施した。この結果、Cについても再移民の時間的経過を観察することができ、成果を一層充実することができた。第五段階1992年3月報告書作成本研究によって、日本が当面しつつある多民族・多文化的状況について、その本質的な知見が得られ、いわゆる民族問題のもつ基本的性格があきらかになった。今後学術論文として逐次発表の予定である。
マッサージの症状緩和効果に関する研究

疼痛等の苦痛症状・ストレスの緩和、リラクセーションの促進を目的に、相補療法としてマッサージを中心とした看護介入を実施し、その効果を客観的・主観的両面から検証した。結果、がん患者が有する苦痛症状のひとつであるリンパ浮腫に対しては、マッサージの効果として浮腫量の軽減のみならず、ストレスを軽減し交感神経刺激を抑制する効果があることが明らかになった。さらに、がん患者への下肢マッサージは精神的ストレスを緩和し、口腔内免疫を強化する効果があることが明らかになった。疼痛やその他の苦痛症状の緩和を目的とした看護介入の効果を検証するために以下の研究を実施。(1)健康女性25名を対象に背部マッサージ(軽擦法、オイル使用)を行い前後でSTAI、バイタルサイン、唾液バイオマーカーを測定した。結果、心拍数およびSTAIは有意に減少、唾液中α-amylaseおよびcortisolは変化なく、唾液中chromogranin-Aは有意に上昇した。以上から、マッサージは免疫的に有益な効果をもたらす可能性があることが推測された。(2)本学医学部附属病院麻酔科外来にがん性疼痛等の症状コントロール目的で受診しているリンパ浮腫を有する患者6名に複合的理学療法(CDP)を施行し、経時的に周径値計測を含む評価を行った。結果、平均患肢容積は7614±1075mlから6485±669mlに有意に減少し(p<.05)、平均容積変化量は-1129±751ml、平均浮腫減少率は14.2土7.8%であった。片側性リンパ浮腫患者では平均患肢-健肢容積差は2636±883mlから1508土754mlに減少し、進行がん患者のリンパ浮腫に対するCDPの有効性が示唆された。(3)がん治療およびがん性疼痛等の症状コントロール目的で入院している患者にマッサージ(軽擦法、オイル使用)を施行し、前後でSTAI、バイタルサイン、唾液バイオマーカー(唾液中α-アミラーゼ濃度、唾液中クロモグラニンA濃度、コルチゾール濃度、唾液中IgA)を測定。現在も継続中である。以下の研究より、がん患者に対するマッサージの効果として、リンパ浮腫の浮腫量の軽減やリラクセーション効果、免疫力促進効果が証明された。(1)リンパ浮腫を有する進行がん患者への複合的理学療法(徒手リンパマッサージを含む)の効果を検証:平均患肢容積は7614±1075mlから6485±669mlに有意に減少(p<.05)、平均容積変化量は-1129±751ml、平均浮腫減少率は14.2±7.8%であった。片側性リンパ浮腫患者では平均患肢-健肢容積差は2636±883mlから1508±754mlに減少した。(2)がん患者のリンパ浮腫に対するマッサージのリラクセーション効果の検討:リンパ浮腫に対する徒手リンパマッサージ前後で、100mmVASストレス程度は11.8±9.3から2.4±5.8へ(p<.001)、収縮期血圧は123.8±13.9から116.1±12.5mmHgへ(p<.01)、心拍数は65.1±6.3から62.1±5.5回/分へ(p<.001)、唾液中α-Amylaseは204.19±110.59から167.48±71.58U/mlへ(p<.01)、それぞれ有意に減少した。唾液中CgAおよびCortisol濃度、拡張期血圧は差がなかった。(3)がん患者へのマッサージの効果を検討:軽擦法中心の下肢マッサージ前後で、収縮期血圧、拡張期血圧、心拍数は有意な変化はみられなかった。ストレス程度は38.2±30.0から24.4±22.6(p<.01)へ、STAI-sは44.1±11.3から37.3±9.3(p<.001)へ有意に減少した。唾液中CgA濃度は6.16±6.73から8.29±8.51pmol/mg proteinへ、唾液中sIgA濃度は17506±104.4から233.8±151.2μg/mlへ有意に上昇した(p<.05)。唾液中α-AmylaseとCortisol濃度は有意な変化がなかった。