hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
CFOのパーソナリティと企業の投資・財務戦略－国際的アンケート調査から－

これは、日本企業にとって、経済の先行きの不透明性への対処として、予備的な現金保有が必要であることを示しており、日本企業の特徴である保守性を顕著に表している。また、現金の取り崩しを行っている日本企業は、設備投資、従業員の賃上げにも積極的であることが判明した。米国大統領選挙の直前の経済動向調査では、全世界的に雇用水準が低く、企業の資本支出も消極的であることが判明した。これは米国大統領選挙の不透明性に起因する政治的不安が、世界的に景気に悪影響を及ぼしていることを示している。本研究では2012年12月から2017年3月まで、毎四半期において、世界各国の財務担当取締役(Chief Executive Officers : CFO)に対して、それぞれの時点で自国の経済情勢、自社の財務状況をどう評価しているかについて、アンケート調査を行った。これにより、世界のCFOの考え方の変化が、企業の投資戦略・財務戦略に及ぼす影響、ならびにCFOの考え方と各国の経済情勢との関係を明らかにした。本研究プロジェクトを開始してから、すでに10回のアンケート調査を行い、データの蓄積が進んでおり、プロジェクトメンバーによる学会発表、論文発表も順調に進んでいる。本年度は本科研の最終年度であるので、これまでに蓄積したデータの分析を進めるとともに、研究成果を国内外の学会で発表するとともに、これまでに作成したワークキング・ペーパーの学術雑誌への投稿を行う。28年度が最終年度であるため、記入しない。行動経済学アンケート調査によって蓄積したデータの分析をさらに進めて、積極的に学会発表、論文発表を行う。平成25年度においても、下記のように、世界規模で4回のアンケート調査を実施した。各回の調査に共通のテーマはCFOの楽観度であり、各回の個別のテーマは次に示すとおりである。平成25年6月調査:余剰資金の利用、企業不正のビジネスへの影響、企業の社会的責任と持続可能性平成25年9月調査:従業員の雇用形態、企業の長期借入平成25年12月調査:慈善事業、来年の経済状況平成26年3月調査:FAB量的金融緩和政策の縮小の影響、企業文化これら4回のアンケート調査によりデータを蓄積し、今後の研究に利用する準備が整っている。・Global Business Outlook Surveyとは別に、本年度は研究分担者である井上がM&Aに関するアンケート調査を行った。調査費支出を予定していたが、この調査については協力機関であるKPMGが負担した。・研究分担者が体調不良のため、予定していた海外出張を中止した。郵送によって行うアンケート調査が次年度に繰越となったため。
空中写真を用いた湮滅古墳の復元的研究

本研究では湮滅古墳の全国集成とそれらが撮影された空中写真の収集をおこない、収集した空中写真を航空写真実体鏡とシービーエス社のMap MatrixおよびFeature Matrixをもちいた分析、図化によって、約50基の湮滅した前方後円墳について復元していった。湮滅古墳の集成は湮滅、半壊した336古墳(古墳群)、一部損壊したものを204古墳(古墳群)リストアップし、これらについて関連文献と該当する空中写真を収集し、データベース化していった。4年間で収集した空中写真は約700古墳(古墳群)分で約1500枚である。入手した空中写真は航空写真実体鏡で観察したのち撮影状況、条件の良いものを選定してデジタルアーカイブ化し、デジタル化した空中写真をシービーエス社のMap MatrixおよびFeature Matrixをもちいて分析し、墳丘形態の観察、図化を試みた。これらのソフトは2009年度から導入し、本格的な稼働が2010年度からであったが、約50基の古墳、古墳群について自動図化し、古墳の平面形態、規模を復元した。ただし、段築成や墳端など微細な墳丘形態に関しては実体観察し得るものの、自動図化では十分に反映されず課題を残した。さらに資料の一部で手動による図化を試みたが熟練技術が必要で量産し得ないことが了解された。とはいえ、これらの作業をとおして新たな資料の掘り起こしに成功し、首長墓系列の再検討に見通しを得た。首長墓系列の再検討は、2009年度までに測量調査した成果を中心に美作地方でおこなったほか、2010年度の分析、図化成果をもとに各地の前方後円墳の築造状況を見直し、古代国家形成過程における前方後円墳の役割について検討を加えた。このように本研究ではデータベースの作成、空中写真の分析、図化を中心に研究作業を進め、その成果をもとに各地の首長墓系列の再検討、さらに前方後円墳築造の論理を追究し、一部に課題を残したものの、所期の目的に対し一定の成果を得ることができた。急速な経済成長に伴う国土開発は多くの遺跡をなきものとし、埋蔵文化財保護システムの確立以前には記録の無いままに損傷、湮滅していった古墳も少なくない。あるいは調査が実施された古墳でも埋葬施設の解明に力点が置かれ、墳丘に関して今日的な資料精度を保つものがなく、墳丘形態の比較研究に支障をきたしている。本研究はこのような資料不在の状況を打破し、再検討の可能性を確保するために、湮滅する前に残された記録のうち、1945年より列島各地を撮り続けている空中写真を用いて前方後円墳築造企画の復元を以下の点を踏まえて目指している。(1)湮滅古墳のデータベース作成。(2)湮滅古墳の撮影された空中写真の検索、データベース作成。(3)空中写真の収集。(4)空中写真の実体観察、湮滅古墳の墳丘形形態の復元、図化。図化方法の確立。(5)復元、図化した資料の精度確認(現存する古墳での空中写真による復元等高線図と現地での測量調査による測量図との比較によるチェック)。(6)湮滅古墳の網羅的な図化。(7)図化資料の考古学的検討(首長墓系列の再検討)。今年度は湮滅古墳のリストアップ(約500基)とそのデータベース化、またリストアップした湮滅古墳のうち東北地方、中部地方、九州地方と関東地方の一部について空中写真を購入し、空中写真データベースの作成をおこなった。

空中写真データベースはこれまでに入手していたものもあわせ約1000枚を古墳、古墳群(約200カ所)ごとに整理し、検索できるようにした。また、あわせて空中写真の実体視をおこなって撮影状況の把握に努め、観察の可否の判別を空中写真データベースに記載した。なお撮影状況が良好で墳丘形態の復元に耐えられる資料は現状で3割程度であったが、大阪府花岡山古墳や百舌鳥大塚古墳など、これまで築造時期の位置づけが困難であった古墳で墳丘形態の復元が可能であることが明らかになるなど、一定の成果を得ている。また、現在する美作地方の20m級の小円墳(殿田1号墳)と畿内地方の200m級前方後円墳(メスリ山古墳の一部)の測量調査を実施し、これらの規模の古墳が空中写真の観察によってどの程度復元し得るのか、比較検討をおこなった。このほか実地踏査を空中写真による復元研究がおこなわれている富山県氷見市朝日長山古墳と、長持形石棺の出土が知られている山形県鶴岡市菱津古墳とでおこない、その正確な位置や旧状について聞き取り調査をおこなった。これらの古墳も空中写真を入手し、実体視して墳丘の復元に努めた。このように19年度の研究は湮滅古墳、空中写真のデータベース化を優先的にすすめ、一部資料の分析に取り掛かかり、その資料の妥当性の検証に努めるなど基礎的作業を中心にすすめた。撮影状況によって観察可能なものは現時点で3割程度であったが、墳丘形態の復元が可能なものは確実に含まれており、本研究の最終的な目標でもある首長墓系列の再検討に一定の手応えがあった。平成20年度は湮滅古墳の全国集成の補足をおこない、基本的な湮滅古墳データベースを作成した。そして、そのなかから本年度は関東、中部、中国、四国地方の湮滅古墳について関連文献と該当する空中写真を収集した。また、ここでも個々の古墳にどのような空中写真と関連文献が存在しているのかを検索し、入手したものをデータベース化した。なお20年度までに収集した空中写真は約260古墳(古墳群)で約1200枚となった。つぎの作業として収集した空中写真のなかから撮影状況、条件の良いものを選定し、空中写真判読機をもちいて墳丘形態の図化を試みるが、本年度はその予備作業として写真判読による図化精度を確認するために、美作地方に現存する90m級(植月寺山古墳)、55m級(岡大塚古墳)、40m級(鴻ノ池2号墳)の規模の異なる前方後円(方)墳測量調査を実施し、測量成果と判読図化結果とを比較することにした。また判読図化も精度をあげるために必要な図化ソフトの選別作業をおこない、シービーエス社が販売するMapMatrixを最適なソフトとして見いだした。これは21年度から導入する予定で、空中写真の本格的な判読図化作業は21年度から実施することにした。このように20年度はデータベースの作成、判読図化精度の確認を中心に研究作業を進めたが、測量調査成果から美作地方の首長墓系列の再検討を試み、二系列で展開する大王墓と同様に美作地方の首長墳も二系列あることが判明した。とはいえ調査の実施が21年3月にずれ込んだこともあり、両者の墳丘形態の変遷が連動する史的背景については、21年度以降に検討することとした。平成21年度は湮滅古墳の全国集成の補足をおこないつつ、シービーエス社MapMatrixをもちいて空中写真の分析、図化を試行的に開始した。また初年度に測量調査した殿田1号墳の調査研究報告書を作成し、公表した。
メタゲノム解析に基づく菌類ウイルス叢の解明と有効利用に関する研究

菌類ウイルスの同定はウイルスの多様性や進化の理解に大きく寄与するが,うどんこ病菌(子嚢菌類)やさび病菌(担子菌類)のような活物寄生菌ではウイルスの存在は長らく不明であった。本課題では、赤クローバーうどんこ病菌から二本鎖RNAを取得し,次世代シークエンサーによりウイルス叢解析を行った。その結果,赤クローバーうどんこ病菌に9種以上の新規トティウイルスの存在が明らかになった。さらに,類似するトティウイルス様配列をマメ科のさび病菌の転写物ライブラリーに見いだした.これらの成果は,トティウイルスがうどんこ病菌とさび病菌の間を嘗て水平伝搬し,それぞれの宿主と共進化したとことを示唆している.本研究では、次世代シークエンサー(NGS)による網羅解析により、植物病原糸状菌に感染する菌類ウイルス叢の一端を解明することを目的としている。特に研究が遅れている絶対寄生菌のウイルスに注目し、分離菌系統や特定のフィールド単位で菌類ウイルスの探索を行い、新奇ウイルスのリファレンス配列の取得と多様性の理解を目指している。本年度の主な実績は以下の通り。【課題1】-次世代シークエンサーによる絶対寄生菌のウイルス叢の解読:岡山大植物研圃場で発生するクローバーうどんこ病菌の菌体を回収し、そのdsRNA画分をNGS解析に供した。【課題2】-うどんこ病菌ウイルスの性状解析:課題1で取得したクローバーうどんこ病菌のウイルス様配列データのうち、優占種と考えられるトティウイルス(CPとRdRp遺伝子をコードする単一のdsRNAゲノムをもつ)に関して詳細な解析を行った。その結果、クローバーうどんこ病菌の圃場サンプルには少なくとも9種の新規トティウイルス種由来のコンティグ(4.2-6.0kbp)の存在が確認され、そのうち5種については完全長のゲノム配列を解読した。【課題3】-菌類核ゲノムを用いたウイルス化石配列の探索:課題2のクローバーうどんこ病菌由来のトティウイルスをクエリとし、NCBIサイトでBLAST検索を行った。その結果、酵母ゲノムに存在する既知のウイルス様配列以外に、海草ゲノム上にもトティウイルス様配列の存在を確認した。さらに、菌類、植物や昆虫類の転写物(TSA)データベースから、複数のトティウイルス様配列が見いだされた。トティウイルスはこれまで主に酵母やごく一部の植物病原菌類でのみ知られていた。しかし、本研究で一圃場由来のうどんこ病菌試料から、既知の配列多様性を凌駕するトティウイルス群が見いだされた。あわせて、トティウイルスが多様な宿主に感染している(していた)可能性を示唆した。当初の計画に従い、圃場由来の絶対寄生菌(うどんこ病菌)の次世代シーケンサー解析によるウイルス叢の解読を進め、多様なトティウイルス群の存在を明らかにした。さらに、次年度の計画を前倒しして、それらトティウイルスの特徴付け(全長ゲノム配列の決定や分子系統解析)を行った。得られた成果の一部は、ウイルス専門誌に掲載される予定である。なお、本年度は圃場由来のクローバーうどんこ病菌のトティウイルスの配列解析を優先したため、クローバーうどんこ病菌単離系統を用いたウイルスのNGS解析は次年度に行うこととした。本研究では、次世代シークエンサーによる網羅的塩基配列解析(NGS)により、植物病原糸状菌に感染する菌類ウイルス叢の一端を解明することを目的としている。特に研究が遅れている活物寄生菌のウイルスを中心に、分離菌系統や特定のフィールド単位で菌類ウイルスの探索を行い、新奇ウイルスのリファレンス配列の取得と多様性の理解を目指している。【課題1】-次世代シークエンサーによる絶対寄生菌のウイルス叢の解読:前年度、岡山大植物研圃場で発生したアカクローバーうどんこ病菌のバイローム解析で少なくとも9種のトティウイルス様配列の存在を確認している。そこで、同一圃場より同菌を分離したところ、その実験室内系統においてもウイルス様dsRNAの存在が確認できた。そこで、その分生子の全RNA画分を取得しNGS解析を行った結果、圃場で見いだされた新規トティウイルスに加え、さらに13種の異なるトティティウイルス様配列がみいだされた。また、エンドウのうどんこ病菌系統のウイルス叢を解析する目的で、NGS解析によるは配列取得を行った。トティウイルス群以外にも新規ウイルスの配列がみいだされ、RT-PCRによりウイルス由来であることが確認された。【課題2】-菌類ウイルス由来siRNAの次世代シークエンス解析:課題1で取得したアカクローバーうどんこ病菌系統の分生子由来全RNAを材料として、その低分子RNA配列の網羅的な取得を行った。現在、その解析を進めている。【課題3】アカクローバーうどんこ病菌のトティウイルスの粒子精製方法を検討した。【課題4】-未解明の菌類マイナス鎖RNAウイルスのゲノム解析(前年度から継続):先行研究で発見した,芝類の重要病害であるダラースポット病菌とチューリップ褐色斑点病菌に感染する新規マイナス鎖RNAウイルスのゲノム塩基配列を決定するため、両者の配列解析を進めた。当初の計画と一部前後したが、次世代シーケンサー解析によるアカクローバーうどんこ病菌実験室系統のウイルス叢の解読を進めることができた。トティウイルス属は酵母やごく一部の植物病原菌類でのみ知られていたが、本菌株に既知の配列多様性を凌駕する多様なトティウイルス(少なくとも21種)の感染が示唆された。

さらに、エンドウうどんこ病菌系統のウイルス叢解析のための配列取得も完了することができた。なお、トティウイルス粒子の精製方法については現在も検討中である。本研究では、次世代シークエンサーによる網羅的塩基配列解析(NGS)により、植物病原糸状菌に感染する菌類ウイルス叢の一端を解明することを目的とした。特に研究が遅れている絶対寄生菌のウイルスを中心に、分離菌系統や特定のフィールド単位で菌類ウイルスの探索を行い、新奇ウイルスのリファレンス配列の取得とその多様性の理解を目指した。本年度の主な実績は以下の通り。【課題1】-次世代シークエンサーによる絶対寄生菌のウイルス叢の解読:これまでにアカクローバーおよびエンドウのうどんこ病菌系統ウイルス叢のNGS解析で見いだされたトティウイルス群について、RACE法により全長配列の決定を行い、さらにそれらの詳細な分子系統解析を進めた。同時に見いだされた新規ウイルス様配列についても、RT-PCRにより配列の確認とそれらの分子系統学的位置づけを検討した。【課題2】-菌類ウイルス由来siRNAの次世代シークエンス解析:うどんこ病菌系統の分生子由来の低分子RNA配列データの解析を行った。対象の配列は得られたが、比較に用いた他の糸状菌ウイルスの低分子RNAプロファイルとは異なる傾向が認められた。その原因は不明であるが、サンプル調整を含め再検討が必要であると考えられた。【課題3】トティウイルスの粒子精製方法を検討し、異種モデル宿主系への導入実験を検討したが、トランスフェクションは成功できなかった。【課題4】-未解明の菌類マイナス鎖RNAウイルスのゲノム解析:NGSで見いだされてきたチューリップ褐色斑点病菌およびフザリウム(国際共同研究として遂行)に感染する新規マイナス鎖RNAウイルスのゲノム塩基全長配列を決定し、あわせてそれらの分子進化学的な解析を進めた。菌類ウイルスの同定はウイルスの多様性や進化の理解に大きく寄与するが,うどんこ病菌(子嚢菌類)やさび病菌(担子菌類)のような活物寄生菌ではウイルスの存在は長らく不明であった。本課題では、赤クローバーうどんこ病菌から二本鎖RNAを取得し,次世代シークエンサーによりウイルス叢解析を行った。その結果,赤クローバーうどんこ病菌に9種以上の新規トティウイルスの存在が明らかになった。さらに,類似するトティウイルス様配列をマメ科のさび病菌の転写物ライブラリーに見いだした.これらの成果は,トティウイルスがうどんこ病菌とさび病菌の間を嘗て水平伝搬し,それぞれの宿主と共進化したとことを示唆している.当初の計画どおり、エンドウのうどんこ病菌系統のdsRNAを鋳型としてNGS解析によりそのウイルス叢を解明する。さらに、前年度から変更した圃場より単離したクローバーうどんこ病菌系統のNGS解析も併せて行う。特に、これまでの解析によりうどんこ病菌にはトティウイルス群以外にも新規ウイルス種の存在も示唆されている。そこで、それらのウイルスの特徴付け(全長ゲノム配列の決定や分子系統解析)を進める予定である。さらに、うどんこ病菌のトティウイルスについては、粒子の精製方法を検討し、異種モデル宿主系(クリ胴枯病菌)への導入実験を進める予定である。おおむね当初の計画どおり推進する予定である。
がん患者が「最期まで自分らしく生きる」を支える日本型ACP看護支援モデルの評価

将来の意思決定能力の低下に備えて、医療専門職が患者やそのご家族と、医療やケア全体の目標や、価値観、具体的な治療・療養の希望について話し合う過程は、アドバンス・ケア・プランニング(ACP)と呼ばれる。本研究では、進行がん患者を対象に、日本の文化的背景を配慮した「日本型ACP看護支援モデル」を用いたACP支援を評価する。今年度は、評価のための尺度として、ACP engagement scale (Sudore, 2017)を翻訳し、ACP engagement scale日本語版の信頼性及び妥当性の検討を行った。本尺度の翻訳にあたっては、尺度原著者であるSudore氏に許可を得た。尺度翻訳においては、まず日本語を母国語とし、英語に堪能な翻訳者2名が独立して順翻訳を行った。次に、この翻訳案について、ACPに関する専門的知識を有する研究協力者により、翻訳の明確さ、一般的な言葉の使用、概念の等価性について検討した。その後、英語を母国語とし日本語に堪能な翻訳者2名が独立して逆翻訳を行い、逆翻訳を原著者に報告し、日本語版案について了承を得た。このようにな翻訳のプロセスを経た本尺度の日本語版案の妥当性・信頼性について統計学的に検証した。現在日本において多数のACP支援に関連する研究が実施されているが、その支援を評価する有用な尺度の一つとして、本尺度の信頼性および妥当性が検証されたことは意義深い。同時に、進行がん患者のACP支援に携わる看護師を対象に、「日本型ACP看護支援モデル」を教育し、研究対象者への介入の質を担保する方策について、研究協力者と検討を重ねた。共同研究者、研究協力者とともに研究計画について検討を重たことにより、円滑な実施について協力を得られたため。本研究課題の計画通り、「日本型ACP看護支援モデル」の有効性について、量的・質的研究における分析結果を混合研究法を用いて多角的に検討することで、看護師が本モデルに基づいたACPを支援することにより、患者の人生の最終段階における医療に関する決定プロセスが円滑に進展し、Quality of Life(QOL)の維持・向上に寄与するか評価する。本年度は、共同研究者の体調不良等の事由にて、予定していた一部の予算執行が行われず、次年度使用額が生じた。翌年度分として請求した助成金と合わせて、本年度得られた成果報告、論文執筆、量的介入研究および質的調査の資金として使用する。
スピノーダル相分離構造を有する湿式太陽電池用チタニア薄膜電極の作製

本研究では、TiO2ゾルとモノマーの共存した薄膜を作製し、紫外線の照射により光重合誘起相分離(PIPS)が生じ、自己組織的にTiO2薄膜を作製した。出発原料としてチタンイソプロポキシド(Ti(OC_3H^i_7)_4)、アクリルアミド、ジペンタエリスリトールペンタアクリレート(PM)、ジメチルホルムアミド、エタノール、硝酸を用いた。ディップコーティング法により薄膜を作製し、高圧水銀ランプ(λ=350nm^450nm,30mw/cm^2)と低圧水銀ランプ(λ=256nm,0.19mw/cm^2)を照射することにより、光重合誘起相分離によるTiO2-ポリマー共存膜を得た。得られた膜を500°Cで熱処理した。TiO2のゲル化が相分離よりも遅い場合に、相分離由来の構造が現れることがわかった。ゲル化を支配する溶媒の蒸発を抑制すると、相分離由来の構造が得られる。PVPを用いることにより、蒸発速度を抑えることができ、膜構造を制御することに成功した。アクリルアミドを出発原料として用いた場合、2次元的なスピノーダル相分離構造が得られることがわかった。SEM観察によりドメインサイズは7μm、AFM観察により360nmの空孔が存在することがわかった。一方、PMを出発原料として用いた場合、3次元的な相分離構造が得られることがわかった。これらの構造は比表面積が大きいことから、光触媒への応用が期待され、現在検討を始めている。
視床下部及び甲状腺を標的としたビオチンのエネルギー代謝亢進作用と肥満改善への応用

これまでに申請者らは、ビオチンによる2型糖尿病改善を報告している。新たな作用機序として、摂食抑制とエネルギー代謝亢進(交感神経系・甲状腺ホルモン)による肥満(臓器内脂肪蓄積)改善が想定される。本研究では、視床下部(副内側核VMH・室傍核PVN)と甲状腺を標的臓器として2つの視点からビオチンの効果と作用機序を検討し、ビオチンによる肥満改善を介した2型糖尿病予防への応用を目指す。共通する機序として、ビオチンによるエピゲノム制御(ヒストン修飾)と細胞内シグナル伝達系の亢進(Gキナーゼ活性化)を介した関連遺伝子の発現調節と情報伝達物質の分泌促進が推察される。
大脳皮質局所回路研究のプラットフォームとなるラットの作成とその解析

多様な大脳皮質GABA作働性ニューロンの構成・シナプス結合ルールに関して統一的な理解を進めるために、どのGABA細胞からも容易に生理的記録ができるモデル動物の開発を目指してきた。これまでに、vesicular GABAtransporter遺伝子を含むbacterial artificial chromosomeを使って、黄緑色の蛍光蛋白質VenusでGABA細胞が選択的に標識されたWistarラット(VGAT-Venus rat)を作成した。これまでに、このラットの大脳皮質で蛍光免疫組織化学を用いて、GABA細胞サブタイプの同定に使われている6種類の化学的マーカーの発現を確認するとともに、GABA細胞での化学的サブタイプの定量的構成を明らかにした。今年度は、Venus陽性皮質ニューロンの生理的性質のサブタイプごとの分化を確認するとともに、分子発現との相関や化学的サブタイプの中での多様性について検討した。これまでに特異的発現する分子が知られていない新皮質ニューログリアフォーム細胞について、late-spiking patternの発火様式を確認する同時に、化学的マーカーとの関係を検索したところ、アクチン結合蛋白質であるalpha-actinin-2を選択的に発現していることがわかった。多様な形態のGABA細胞を直視下で同定できるVGAT-Venus ratの利点を活かして、parvalbuminを発現するfast spiking cell(FS細胞)の多様性を検討した。その結果、FS細胞の大きさは多様であり、細胞体が大きいものほど樹状突起の垂直方向への伸長が大きいことがわかった。一方、電気的性質や水平方向への樹状突起の拡がりには差はあまりみられなかった。これらにより、VGAT-Venus ratのGABA作働性ニューロンや大脳皮質回路解析における有用性を示すことができた。多様な大脳皮質介在ニューロンの構成・シナプス結合ルールに関して統一的な理解を進めるために、どの細胞からも容易に生理的記録ができるモデル動物の開発を目指した。本年度は、群馬大学の柳川教授と共同でbacterial artificial chromosome (BAC)ライブラリを使い、vesicular GABAtransporter(VGAT)遺伝子を含むBACを用意し、これをもとにVenus標識ラット作成を試みた。約400個のラット受精卵にlinearized BAC DNAを注入し、生存胚を移植出産させた。生まれた仔がVenusを発現しているかどうかPCRで調べたところ、2匹で発現していた。これらを繁殖させて二系統のVenus-VGAT(VVGAT)トランスジェニックラット(A系統、B系統)を得ることができ、それらの受精卵・精子を凍結保存した。PCRで発現を確認したラットを潅流固定し切片作成し、Venusの発現パターン及びそれらでのGABA発現を免疫組織化学で調べた。脳の領域によって、両系統ともGABA細胞に選択的にVenusを発現している場合、片方の系統だけが、選択的に陽性で、もう一方が非選択的に非GABA性細胞にも出ている場合があった。大脳皮質ではA系統でGABA陽性細胞とVenus陽性細胞がほぼ完全に一致しており、B系統では、GABA細胞のほぼ95%近くがVenus陽性であった。線条体のGABA作働性ニューロンのほとんどが両系統で陽性であった。海馬ではA系統でGABA性と考えられる非錐体細胞が選択的に染まっているのに対して、B系統ではそれらに加えて、CA1の錐体細胞が陽性であった。視床ではB系統でGABA性の網様核だけが特異的に発色していたが、A系統では中継核の細胞も陽性であった。小脳皮質のGABA介在ニューロンはどちらの系統でも陽性であった。多様な大脳皮質GABA作働性介在ニューロンの構成・シナプス結合ルールに関して統一的な理解を進めるために、どのGABA細胞からも容易に生理的記録ができるモデル動物の開発を目指している。昨年度、群馬大学の柳川教授と共同で、vesicular GABA transporter遺伝子を含むbacterial artificial chromosomeを使って、黄緑色の蛍光蛋白質VenusでGABA細胞が選択的に標識されたWistarラットを二系統(A系統、B系統)作成することができた。本年度は、この遺伝子改変ラットの大脳皮質で、GABA細胞の選択的マーカーが野生型と同じく発現しているかどうか、また、このラットの利点を生かして、特異的マーカーを発現するサブタイプのGABA細胞全体における割合を求めた。そこで、パルブアルブミン、ソマトスタチン、VIP、コレシストキニン、カルレチニン、アルファーアクチニン-2という、GABA細胞に対する化学的マーカー6種類の発現様式を定量的に調べた。A系統では6種類すべてでマーカーを強く発現する細胞はVenus陽性であったのに対してB系統ではVIP、コレシストキニン、カルレチニン、アルファ-アクチニン-2のごく一部の細胞が、Venusを発現していなかった。これは、A系統ではほぼ完全にVenus陽性細胞とGABA陽性細胞が重なっていたのに対して、B系統ではGABA細胞のうち約95%がVenusを発現していたことに一致する。以前に解析したアルファ-アクチニン-2を除く5種類のマーカーの共存関係と、今回新たに調べたアルファ-アクチニン-2との共存関係を考慮に入れ、A系統でのVenus陽性細胞の中での各サブタイプの発現割合をみると、この6種類のマーカーで1層、2・3層、5層では9割以上、6層では9割近くのGABA細胞をカバーできることがわかった。

これまでに、vesicular GABAtransporter遺伝子を含むbacterial artificial chromosomeを使って、黄緑色の蛍光蛋白質VenusでGABA細胞が選択的に標識されたWistarラット(VGAT-Venus rat)を作成した。これまでに、このラットの大脳皮質で蛍光免疫組織化学を用いて、GABA細胞サブタイプの同定に使われている6種類の化学的マーカーの発現を確認するとともに、GABA細胞での化学的サブタイプの定量的構成を明らかにした。今年度は、Venus陽性皮質ニューロンの生理的性質のサブタイプごとの分化を確認するとともに、分子発現との相関や化学的サブタイプの中での多様性について検討した。これまでに特異的発現する分子が知られていない新皮質ニューログリアフォーム細胞について、late-spiking patternの発火様式を確認する同時に、化学的マーカーとの関係を検索したところ、アクチン結合蛋白質であるalpha-actinin-2を選択的に発現していることがわかった。多様な形態のGABA細胞を直視下で同定できるVGAT-Venus ratの利点を活かして、parvalbuminを発現するfast spiking cell(FS細胞)の多様性を検討した。その結果、FS細胞の大きさは多様であり、細胞体が大きいものほど樹状突起の垂直方向への伸長が大きいことがわかった。一方、電気的性質や水平方向への樹状突起の拡がりには差はあまりみられなかった。これらにより、VGAT-Venus ratのGABA作働性ニューロンや大脳皮質回路解析における有用性を示すことができた。
朝鮮李朝の「倭劒」に関する文献研究

「倭劒」をめぐる日本から中国・朝鮮半島への日本剣術伝播の動態の一端を講演や発表を通して海外に公表することができた。また、用語「倭劒」の来歴の一端を考察することができた。加えて、伝播した日本剣術が文化変容する様相の一端について論じた。さらに、『古事記』の武道用語分析を通して、日本から朝鮮半島への武技伝播に関わる足掛かりを作ることができた。最後に、用語「倭劒」を『韓國文集叢刊』の中に探り、そこで抽出された用語の解釈を通して、用語「倭劒」の朝鮮社会における位置づけの一端について考察の方向性を捉えた。以上が、本研究の期間内における成果である。韓国伝統武藝の基本的文献として『武藝圖譜通志』(1790年刊)、『武藝諸譜飜譯續集』(1610年刊)、『武藝諸譜』(1598年)があるが、それらの中に刀剣に関する技法が掲載され、日本剣術との関連が確認されている。中でも『武藝圖譜通志』や『武藝諸譜飜譯續集』に登場する「倭劒譜」という刀剣技法は、日本の剣術技法が伝播受容された具体的事例として注目に値する。本研究課題は、そういった朝鮮武芸書をはじめ、その他の朝鮮李朝期文献に散在する名辞「倭劒」を抽出解釈し、その意味内容を整理することを通して、朝鮮李朝社会における「倭劒」の意義を明らかにすることを目的とする。この目的を達成するにあたり、平成25年度においては、以下のように研究を進めた。まず、7月には、「倭劒」に関するこれまでの研究成果の一端を、海外において発表した。この発表は、「剣道の国際化ー東アジアの事情」と題した武道文化講演(第21回国際ハンガリー剣道杯セミナー、2013年7月、ハンガリーブダペスト)でなされ、朝鮮武芸書やその他の朝鮮文献の中に「倭劒」という用語が登場している状況について解説した。また、9月に開催された日本武道学会第46回大会では、『武藝諸譜飜譯續集』にみられる用語「倭劒」が、先立って刊行された『武藝諸譜』、さらに遡って刊行された『紀效新書』から継承されてきた用語ではないことを踏まえ、その用語の由来について検討することを課題とした。そして、朝鮮李朝期(1392年1910年)の編年体記録である『朝鮮王朝實録』のなかに「倭劒」の用語を探っていった。加えて、朝鮮李朝期以前の文献『高麗史』の中にみられる用語「倭劒」の用例も取り上げて考察した。これらを通して、用語「倭劒」をめぐる周辺事項について、その一端を明らかにした。韓国伝統武芸の基本史料として『武藝圖譜通志』(1790年刊)、『武藝諸譜飜譯續集』(1610年)『武藝諸譜』(1598年)があり、そこでは多様な武器を利用した武技の技法が絵図や漢文を用いつつ解説されている。刀剣に関する技法に着目すると、絵図からうかがわれる技法の様相や「倭」の漢字の利用などから、日本剣術との関連が確認される。特に「倭劒譜」という刀剣技法は、日本の剣術技法が伝播受容された具体的事例として注目に値する。ここで登場する用語「倭劒」は、前述の武芸書以外の朝鮮李朝期文献にもしばしば登場することから、本研究は、用語「倭劒」を朝鮮文献から抽出し、その用例を整理解釈することを通して、朝鮮李朝社会における「倭劒」の意義を明らかにしようとするものである。平成26年度においては、「倭劒」という用語が「剣」という武器に関する用語を含むことに関連して、朝鮮文献からは離れるが、我が国の最古の文献でもある『古事記』における武道用語の整理分析に関する研究も進めた(身体運動文化研究20号印刷中)。その研究においては、古代日本において「剣」の用語がどのように用いられているのかを明らかにすることができ、この成果を朝鮮文献における「倭劒」用語の出現に絡めて検討する足掛かりを得ることができた。また、26年度末には、月刊雑誌「武道」において、「倭劒」に関する研究成果の一端を発表した。韓国伝統武芸の基本史料として『武藝圖譜通志』(1790年刊)、『武藝諸譜飜譯續集』(1610年刊)、『武藝諸譜』(1598年刊)があり、そこでは多様な武器を利用した武技の技法が絵図や漢文を用いつつ解説されている。

平成27年度においては、翻訳した韓国語論文を研究成果として発表する予定であったが、平成27年11月に韓国武道学会において英語で学会発表したが、これに多くの時間を費やすこととなり、成果のとりまとめと発表まで辿りつかなかったため。朝鮮伝統武芸の基本的文献として『武藝圖譜通志』(1790年刊)、『武藝諸譜飜譯續集』(1610年刊)、『武藝諸譜』(1598年刊)があるが、それらの中に刀剣に関する技法が掲載され、日本剣術との関連が確認されている。その中でも『武藝圖譜通志』や『武藝諸譜飜譯續集』に登場する「倭劒譜」という刀剣技法は、日本の剣術技法が伝播受容された具体的事例として注目に値する。特に用語としての「倭劒」は、最初の朝鮮武芸書と位置付けられる『武藝諸譜』の中には見られず、後に刊行された書籍に登場してくる。また、朝鮮武芸書以外の文献中に「倭劒」の用語の散在が確認されている。本研究においては、朝鮮李朝期文献に散在する名辞「倭劒」とその周辺事項を解釈し、朝鮮社会における「倭劒」の意義を探求するとともに、伝播した日本剣術が異郷の地で何をもたらしたのかについて明らかにすることを目的としている。歴史的事象の解釈は、現在事象の理解の一助となることから本研究は、単なる歴史学の研究にとどまらず、現代剣道の海外伝播状況の理解につながるものであり、身体教育・スポーツ科学分野における学術的な意味は少なくない。研究成果としては、朝鮮武芸書の用語「倭劒」の来歴の一端を考察発表した。また、「倭劒」をめぐる日本から中国・朝鮮半島への日本剣術伝播の動態の一端を講演や発表を通して海外に公表した。加えて、雑誌「武道」で、伝播した日本剣術が文化変容する様相の一端を論じた。さらに、日朝間の交流が盛んであった古代期日本の武技について、『古事記』の用語分析を通して明らかにし、日本から朝鮮半島への武技伝播に関わる分析の足掛かりを作った。最終年度には、韓国文集叢刊ににみられる用語「倭劒」の考察を通して、朝鮮社会において「倭劒」文化がもたらした影響について、考察の方向性を見据えることができた。以上が、本研究の期間内における成果である。「倭劒」をめぐる日本から中国・朝鮮半島への日本剣術伝播の動態の一端を講演や発表を通して海外に公表することができた。また、用語「倭劒」の来歴の一端を考察することができた。加えて、伝播した日本剣術が文化変容する様相の一端について論じた。さらに、『古事記』の武道用語分析を通して、日本から朝鮮半島への武技伝播に関わる足掛かりを作ることができた。最後に、用語「倭劒」を『韓國文集叢刊』の中に探り、そこで抽出された用語の解釈を通して、用語「倭劒」の朝鮮社会における位置づけの一端について考察の方向性を捉えた。本研究では、韓国において韓国学基礎資料整理事業の一環として(財)民族文化推進會が編修事業を行った民族文化推進委員会編『韓国文集叢刊』景仁文化社に所収されている史料から名辞「倭劒」抽出を行うことが目的の一つであるが、韓国古典情報データベース(http://db.itkc.or.kr/index.jsp?bizName=MM)も援用しつつ、「倭劒」用語の抽出を進めている。また、平成25年度に購入した『韓国文集叢刊解題』110巻の他、『韓国文集叢刊』41巻60巻、241巻280巻までを購入することができた。加えて、朝鮮文化研究の基本史料である『朝鮮史』東京大学出版会を全巻そろえることもできた。「倭劒」関係先行研究の情報も数は少ないが入手でき、一部について翻訳解読を進めているところである。最終年度に補助事業期間を延長することで、韓国語で執筆された「倭劒」関係先行研究の下訳をブラッシュアップする。並びに平成25年度に日本武道学会で発表した「朝鮮文献にみられる『倭劒』に関する一考察」を原著論文として完成させたい。これにより、当初の目的より更に発展することができるため。武道史、武道論、武道海外伝播論引き続き、『韓国文集叢刊』の購入を勧め、研究環境を整えていくとともに、抽出した「倭劒」用語の整理分析を進めていきたい。
電機企業における国内生産体系の再編と地域変容

本研究の目的はわが国電気機械工業の複数立地企業を中心に、地域的生産体系の再編とそれにともなう地域変容を考察することであった。この研究目的を達成するために、第1段階としてわが国電気機械工業分野の中から複数の複数立地企業に関して各会社史、有価証券報告書などを活用することにより企業組織、生産体系の時系列的変化について分析を行った。当初、生産体系の再編過程を既存の工場などの再編成により捉える予定であった。そのため、各複数立地企業に対して聞き取り調査を行う予定であったが、近年のわが国の経済状況の悪化のため、聞き取り調査に応じていただけない企業も少なくなく、補助資料を中心として研究を進めた。このようにデータの収集に問題が生じたため、研究目的を一部変更する事を余儀なくされ、地域的生産体系の再編成を捉える前に、各複数立地企業の地域評価に研究の比重を置いた。そのため、研究の第2段階においては、各複数立地企業の本社に対し地域評価に関するアンケート調査を行い、既存の所有施設と地域の評価との関連を中心に一次データを入手した。これらのデータを分析する事により、わが国電気機械工業の複数立地企業の多くは、既存の施設の有無により地域評価を行う傾向を捉えることができた。また、地域的にみて三大都市圏の評価はいまだ高く、地方分散化を念頭に置いた生産体系の再編は困難な状況であることの推察を得た。これらの知見をもとに今後、当初の研究目的である複数立地企業の生産体系の再編と地域変容に関する研究を、研究方法を再検討した上で、遂行したいと考える。
ノックアウトマウスを用いたIL-1の免疫反応及びストレス応答における機能解析

IL-1の機能の全体像を明らかにする目的で,IL-1αIL-1β,IL-1RaKOマウス及びIL-1α/βダブルKOマウスを作製して,免疫系や神経系でのIL-1の機能について研究を行い,以下のような結果を得た。(1)IL-1βはテルピンによる発熱やグルココルチコイドの分泌に重要な役割を果たしているが,IL-1αはこれらの炎症反応にはあまり関与しないことを明らかにした。(2)アポトーシスを誘導するFasは,IL-1の作用を介して炎症反応を誘導することを明らかにした。(3)BALB/c背景のIL-1RaKOマウスは,ヒトの関節リウマチに類似した自己免疫性の関節炎を自然発症することを明らかとした。(4)HIV-1遺伝子の発現にIL-1とTNF-αが関与することを明らかにし,HIV-1発症にIL-1が関与する可能性が示唆された。5)他の研究室との共同研究により,脳虚血時の神経細胞のアポトーシスやCaspase-2が引き起こす生殖細胞のアポトーシスにIL-1がメディエーターとして作用していることを明らかとした。(6)IL-1βはT細胞依存性の抗体産生に重要な働きをしていることを明らかにした。IL-1βはT細胞上のCD40リガンドとOX40の発現を制御することによって,抗原提示細胞によるT細胞のプライミングを誘導していることが示唆された。一方,IL-αは抗体産生には関与しないことを明らかに。した。(7)IL-1αは接触過敏症反応の誘導に重要な役割を果たしており,特に,感作期において抗原特異的なT細胞の増殖を制御していることを明らかとした。一方,IL-1βはこの反応には関与しないことがわかった。(8)HTLV-1のトランスジェニックやコラーゲン誘導関節炎のモデルマウスにおいて,IL-1を欠損させると,関節炎の発症が抑制されることを明らかにした。本年度は我々の作製したIL-1関連遺伝子群KOマウスを用いて、炎症反応と抗体産生におけるIL-1の役割について解析した。LPSによるエンドトキシンショックに対する感受性を調べたところ、致死量のLPSに対してIL-1KOマウスは野生型と差がないのに対して、IL-1raKOマウスが高感受性を示し、II-1raは防御的な役割を果たしていることがわかった。またP.acnesで感作して低力価のLPSで劇症肝炎を引き起こす系ではIL-1KO及びIL-1raKOマウス共に高感受性を示した。更にzymosanによる皮膚炎やConA誘導肝炎においてもIL-1KOマウスではその発症が抑制されたことから、これらの炎症反応にもIL-1が重要な役割を果たしていることがわかった。次に通常飼育条件下での血中の免疫グロブリン濃度を調べたところIL-1KOマウスでは低下し、IL-1受容体アンタゴニスト(ra)KOマウスでは亢進していることが見られ、胸腺依存性抗原であるSRBCで免疫した場合も、IL-1KOマウスではIgMとIgGの抗体産生が抑制され、IL-1raKOマウスでは亢進していることがわかった。このことからIL-1とIL-1raが抗体産生を調整していることが明らかとなった。マイトジェンや抗IgM刺激に対するTやB細胞の反応性には異常がなかったが、抗原特異的なT細胞増殖応答には差が認められたので、T細胞とB細胞や抗原提示細胞との相互作用にIL-1が重要な役割を果たしていることが示唆された。IL-1raKOマウスをBALB/c背景にすると、高率に関節炎を自然発症することがわかった。関節の病理像はヒトの関節リウマチとよくにており、リウマチ因子や抗コラーゲン抗体、抗DNA抗体の産生も認められ、新しいリウマチのモデル動物を作製することができた。した。(7)IL-

1αは接触過敏症反応の誘導に重要な役割を果たしており,特に,感作期において抗原特異的なT細胞の増殖を制御していることを明らかとした。一方,IL-1βはこの反応には関与しないことがわかった。(8)HTLV-1のトランスジェニックやコラーゲン誘導関節炎のモデルマウスにおいて,IL-1を欠損させると,関節炎の発症が抑制されることを明らかにした。抗体産生においてIL-1が調節因子として機能していることを見い出したので、本年度はそのメカニズムを解析した。IL-1 KOマウスのT細胞やB細胞の基本的な増殖応答並びに抗原提示細胞であるマクロファージの貪食能や抗原分子のプロセッシングは正常であったが、IL-1 KOマウスのT細胞は抗原特異的な増殖応答が抑制されていた。したがって、IL-1はT細胞と抗原提示細胞との相互作用に重要な役割を果たしていることが明かとなった。細菌誘導性肝炎のモデルであるP.acnesで感作して低力価のLPSで劇症肝炎を引き起こす系では、IL-1 KO及びIL-1raKOマウス共に野生型マウスより高い致死率を示すことを見い出したが、両KOマウスともP.acnesの投与による肉芽腫形成の亢進が高い致死率の原因であることが示唆され、特にIL-1 KOマウスではTNF-αの産生が亢進していたことが高い致死率の原因と考えられた。一方、テレピン油を投与した時の発熱にIL-1が必須であることを明らかにしたが、発熱中枢の存在する間脳においてIL-1依存性に誘導される新規ストレス蛋白質を検索する目的で、IL-1 KOマウスと野生型マウスの間でディファレンシャル・ディスプレイを行った。テレピン油を投与した時にIL-1 KOマウスでは変化がないが、野生型マウスの間脳では誘導されてくるものとして、9本のバンドを同定した。それらの塩基配列を決定したところいくつかの既知遺伝子に加えて、脳特異的に発現している新規遺伝子の単離にも成功した。今後はこの遺伝子のストレス応答における脳内での機能を解析していく。抗体産生においてIL-1が調節因子として働くこと,特にIL-1は抗原提示細胞(APC)による抗原特異的なT細胞のプライミングに重要であることを明らかにしてきたが,本年度はIL-1はどのような分子を制御することによって抗体産生に関与するのかを明らかにした。APCがT細胞にシグナルを入れる際には,CD28とCD80/CD86を介した副シグナルが重要であることが知られているが,これらの分子の発現はIL-1KOマウスでも正常であった。また,このシグナルの阻害剤であるCTLA-4を加えても,IL-1KOマウス由来のAPCによる抗原特異的なT細胞の増殖は依然障害を受けていた。以上のことから,IL-1KOマウスではCD28-CD80/CD86副シグナルは正常と考えられた。次に,CD40-CD40L及びOX40-OX40Lを介したシグナルについて解析した。IL-1KOマウス由来のAPCで抗原特異的にT細胞を刺激した場合,T細胞上のCD40LとOX40の発現がコントロールより減少していた。また,この発現減少は培地にIL-1を加えることにより回復した。更に,抗CD40抗体による刺激により,IL-1KOマウスにおける抗体産生の減少が回復した。以上の結果から,IL-1はT細胞のCD40LやOX40の発現を調節することによって,抗体産生を制御していることが示唆された。IL-1が関与する
m7GTP capを介した新規翻訳制御機構の解明

mRNAの5'末端にあるm7GTP capは、翻訳や輸送といったmRNA代謝に必須な化学修飾構造である。これまで酸化ストレス下でのm7GTP capの役割は全く知られていない。申請者はmRNAのm7GTP capに酸化ストレス依存性に結合するタンパク質としてGEMIN4を同定した。GEMIN4の生体内結合RNAの次世代シークエンス解析を行ったところ、酸化ストレス依存性に数千を超える遺伝子mRNAのm7GTP capに結合していた。本課題では、GEMIN4-m7GTP cap結合がどの様に翻訳を制御するか、解析を行い、新たな翻訳制御機構の提唱を目指す。
血管壁レニン・アンジオテンシン系の神経筋伝達促進機構の電気生理学的解明

アンジオテンシンII(Ang II)の交感神経終末での神経筋伝達促進作用を興奮性接合電位(EJP)を指標としてモルモット腸間膜動脈を用いて検討した。Ang II受容体はAT_1,AT_2Kの二種類に分類されるが、Ang IIの神経筋伝達に対する作用はAT_1受容体拮抗薬で消失したが、AT2拮抗薬拮抗薬では影響を受けず、Ang IIは神経終末に存在するAT1受容体を介してその作用を呈することが明らかとなった。またアンジオテンシンI(Ang I)もAng IIと同様な作用を呈したが、この作用はアンジオテンシン変換酵素(ACE)阻害薬やAT_1受容体拮抗薬で抑制された。しかるにAng Iは血管壁局所でACEによりAng IIに変換されその作用を呈すると考えられ、神経筋伝達調節における局所レニン・アンジオテンシン系の重要性が示唆された。血管壁ではACEは内皮細胞に豊富に局在するとされているが、Ang Iの作用は内皮除去標本でも同様に観察され、少なくとも神経筋伝達に作用するAng IIの局所産生には内皮細胞は必須ではないと考えられた。以上、Ang IIがAT_1受容体を介して神経筋伝達促進作用を呈すること、および局所レニン・アンジオテンシン系もかかる神経筋伝達調節に関与しうることが示唆された。本検討の成果は高血圧などの心血管系疾患の病態の解明や、ACE阻害薬や開発中のAT_1拮抗薬の作用機序を検討する上で重要な知見と考えられる。
GLUT4の比較分子生物学―鳥類における高血糖維持機構―

本研究では高血糖およびインスリン抵抗性を特徴とする鶏の特異的な血糖維持機構を解明する観点で、グルコースの取り込みを担うインスリン感受性グルコーストランスポーター(GLUT4)の分子生物学的追究を行った。これまで鶏(鳥類全体)においてGLUT4の存在が予測されてきたが、存在の確証は得られていない。(1)ノーザンブロットによる検索:鶏のほとんど全ての組織(19部位)に対し、ラットGLUT4 cDNAプローブを用いたノーザンブロットを、非常に弱い条件(40-60%の相同性を持つ配列に結合)で行ったが、鶏の全ての組織においてシグナルは検出されなかった。(2)RT-PCRによる検索これまでラット、マウス、ウシおよびヒトでGLUT4がクローニングされている。GLUT4は種を超えて非常に高い相同性があり、また保存されている領域も多い。そこでGLUT4遺伝子の全ての共通配列部分からオリゴヌクレオチドを設計し、骨格筋、心筋、脂肪組織および肝臓を対象としてRT-PCRを行った。得られたPCR産物全てにおいてシーケンスを行ったが、他種動物のGLUT4と相同性のあるものは得られなかった。(3)サザンブロットによる検索鶏肝臓から抽出したゲノムDNAにおいてラットGLUT4 cDNAプローブを用いたサザンブロットを行った。ノーザンブロットと同様に非常に弱い条件で行ったが、鶏ゲノムにおいてシグナルは検出されなかった。(4)他鳥類におけるGLUT4のクローニングカモ、ウズラの組織のノーザンブロット、サザンプロットおよびRT-PCRを行ったが、いずれの組織においても他種動物のGLUT4と相同性のあるものは得られなかった。以上の結果から、鶏においてインスリン感受性のGLUT4は存在しない可能性が強く示された。このように、鶏の高血糖や高インスリン抵抗性の根拠を分子生物学的に提示した。鶏には3つのアイソタイプのGlucosetransporter(GLUT)が存在しているがその機能や組織分布はほとんど明らかにされていない。そこで、鳥類の血糖維持機構におけるGLUTの関与を探求するために鶏GLUT(未だ鳥類でその存在が報告されていないGLUT4を含む)の組織分布を検討した。鶏GLUTの組織分布を明らかにするためにGLUTに特異的に結合するCytochalasinBを用いたbinding assayを行った。その結果、肝臓、骨格筋、脂肪組織、小腸、心筋、腎臓、膵臓、脳、脾臓においてCytochalasinBとの結合が見られ、これらの組織にGLUTが存在していることが明らかとなった。また、ScatchardplotよりKd値を求めたところ骨格筋と脂肪組織では高い値を示し、反対に心筋と腎臓では低い値を示した。(2)鶏GLUT1-3mRNA発現およびGLUT4タンパク質発現の組織分布1)鶏GLUT1-3mRNA発現の検討:肝臓、骨格筋、脂肪組織、腎臓、肝臓、小腸、心筋、脳、脾臓、精巣よりmRNAを精製し、ノーザンブロッティングおよびRT-PCRを行い、鶏GLUT1-3mRNAの組織分布を検討した。その結果、GLUT1およびGLUT2は実験に用いたすべての組織で発現が認められた。またGLUT3は膵臓を除くすべての組織でその発現が認められた。2)GLUT4タンパク質発現の可能性:同様の組織から細胞膜を調製し、抗ラットGLUT4抗体を用いてウエスタンブロッティングを行いGLUT4タンパク質の組織分布を検討した。その結果、肝臓、脂肪、骨格筋、心筋、腎臓、膵臓において42kDaの位置にバンドが得られ、それらの組織にGLUT4が発現している可能性が示された。以上の結果から、鶏においてGLUT1-3が各組織に広く存在することは、鶏における血糖維持機構の特異性に大きく関与している可能性がある。また、これまで確認されていない鶏GLUT4が存在している可能性も示された。

以上の結果から、鶏においてインスリン感受性のGLUT4は存在しない可能性が強く示された。このように、鶏の高血糖や高インスリン抵抗性の根拠を分子生物学的に提示した。
Mesp1,Mesp2遺伝子エンハンサー特異的欠損マウスの作成と解析

まず我々はMesP1および、MesP2が機能的に同等であるかどうか調べるため、それぞれの遺伝子を入れ替えたマウスを作成した。その結果、それぞれの遺伝子の機能がもう一方の遺伝子によりレスキューできることが個体レベルで証明できた。したがって、これらの遺伝子両者を体節形成過程でノックアウトすることが解析を行う上に重要であることを再確認した。今年度はトランスジェニックシステムの立ち上げに時間を要し、エンハンサーの同定にまでは至っていない。しかし、少なくとも、MeSp1遺伝子の上流6kb以内には体節形成のエンハンサーは存在せず、Mesp2の上流1.6kb以内に体節における発現を制御するエンハンサーが存在していることが明らかになった。一方、cre-loxを用いたシステムに関しては、かなり進展があった。我々はMesp1,Mesp2をそれぞれ単独にノックアウトしたES細胞を、すでに有していたので、これらの細胞に第二の変異をpuromycinを選択マーカーとして利用し導入した。まず、Mesp2(+/-)細胞のMesp1 locusに2つのloxではさんだMesp1遺伝子を導入し、creが発現したときにMesp1遺伝子が失われるように構築した。また、Mesp1(+/-)細胞のMesp2 locusにはcre rccombinaseをノックインの形で導入した。なお、Mesp1,MeSp2遺伝子は同じ染色体にとなりあって存在しているため、2つの変異は同じ染色体におこっていることが必須である。これは、neo,puromycin2つのプローブを用いたFISH解析により確認した。これらの細胞から得られたマウスをかけあわせることにより、Mesp2遺伝子が発現する体節形成過程でのみ、cre recombinaseが発現し、同じ細胞で発現する、Mesp1遺伝子が失われる。すなわち体節形成過程でのみ、両方の遺伝子が欠損したマウスが得られる予定である。現在これらのES細胞由来のキメラマウスが多数得られており、germline transmissionも確認したところである。6まず我々はMesP1および、MesP2が機能的に同等であるかどうか調べるため、それぞれの遺伝子を入れ替えたマウスを作成した。6