hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ヒト胎盤トロフォブラスト合胞体化機序の解析:妊娠高血圧症候群発症病態の解明

胎盤トロフォブラストの合胞体化のモデルであるBeWo細胞(forskolin添加により細胞内cyclicAMPレベルを上昇させると合胞体化が誘導される)を用いて、アミノ酸輸送担体を構成する蛋白であるCD98およびヒト内因性レトロウイルスのエンベロープ蛋白のひとつであるHERV-Wenv(syncytin)とその受容体として同定されたタイプDレトロウイルスレセプターであるASCT2がトロフォブラストの合胞体化に関与していることを証明した胎盤トロフォブラストの合胞体化のモデルであるBeWo細胞(forskolin添加により細胞内cyclicAMPレベルを上昇させると合胞体化が誘導される)を用いて、アミノ酸輸送担体を構成する蛋白であるCD98およびヒト内因性レトロウイルスのエンベロープ蛋白のひとつであるHERV-Wenv(syncytin)とその受容体として同定されたタイプDレトロウイルスレセプターであるASCT2がトロフォブラストの合胞体化に関与していることを証明した今年度支給された科学研究費補助金によりマルチガスインキュベーターを購入した。トロフォブラストのシンシチウム化のモデルであるBeWo細胞(forskolin添加により細胞内cyclicAMPレベルを上昇させるとシンシチウム化が誘導される)を低酸素状態(酸素濃度;2%)で培養し、シンシチウム化およびシンシチウム化に関与していると考えられている分子(シンサイチン)の発現に及ぼす影響を検討した。その結果、1)低酸素状態ではBeWo細胞のシンシチウム化(研究者らが開発したフローサイトメーターを用いたシンシチウム化の定量的側定系を用いて測定)は抑制された。2)シンシチウム化に関与していると考えられている分子であるシンサイチンの発現は、低酸素状態では遺伝子レベル(RT-PCR法)およびタンパクレベル(ウエスタンブロット法)ともに低下していた。すなわち、低酸素状態ではシンサイチンの発現が低下することによって、トロフォブラストのシンシチウム化が抑制されていることが推測できる。胎盤トロフォブラストのシンシチウム化のモデルであるヒト絨毛がん由来のBeWo細胞(forskolin添加により細胞内cyclicAMPレベルを上昇させるとシンシチウム化が誘導される)を用いて、ヒト内因性レトロウイルスのエンベロープ蛋白のひとつであるHERV-Wenv (syncytin)がトロフォブラストのシンシチウム化に関与しているかどうかをRNA干渉法により検討した。その結果、1) syncytinに対するsiRNAをBeWo細胞に導入すると、syncytinの発現がRNAレベル(RT-PCR法で測定)および蛋白レベル(ウエスタンブロット法で測定)共に低下した。2) syncytinの発現レベルが低下した状態では、BeWo細胞のシンシチウム化(研究者らが開発したフローサイトメーターを用いたシンシチウム化の定量的測定系を用いて測定)は抑制された。また、トロフォブラストのシンシチウム化のマーカーであるhCGの分泌(エンザイムイムノアッセイ法で測定)も抑制された。以上の結果より、syncytinがトロフォブラストのシンシチウム化に関与していることが証明された。また、妊娠高血圧症候群の胎盤においては、トロフォブラストのシンシチウム化の障害とsyncytin発現の低下が報告されている。すなわち、妊娠高血圧症候群の胎盤では、syncytinの発現が何らかの機序により低下することによりトロフォブラストのシンシチウム化が障害されていると推測できる。syncytinの発現が低下する機序としては胎盤の低酸素状態が関与していると仮定して、低酸素状態におけるsyncytinの発現の動態を解析する予定である。胎盤トロフォブラストのシンシチウム化のモデルであるヒト絨毛がん由来のBeWo細胞(forskolin添加により細胞内cyclicAMPレベルを上昇させるとシンシチウム化が誘導される)を用いて、ヒト内因性レトロウイルスのエンベロープ蛋白のひとつであるHERV-W env(syncytin)とその受容体として同定されたタイプDレトロウイルスレセプターであるASCT2がトロフォブラストのシンシチウム化に関与しているかどうかをRNA干渉法により検討した。その結果、1) syncytinおよびASCT2に対するsiRNAをBeWo細胞に導入すると、いずれの分子の発現がRNAレベル(RT-PCR法で測定)および蛋白レベル(ウエスタンブロット法で測定)共に低下した。以上の結果より、syncytinおよびその受容体であるASCT2がトロフォブラストのシンシチウム化に関与していることが証明された。syncytinの発現が低下する機序としては胎盤の低酸素状態が関与していると仮定して、低酸素状態におけるsyncytinおよびASCT2の発現の動態を解析する予定である。
β-アミラーゼのタンパク質工学

β-アミラーゼのタンパク質工学についての研究基盤を構築するために、ダイズβ-アミラーゼのSH基修飾酵素のX線結晶構造解析を行い、大腸菌を利用する本酵素の大量発現について検討した。1.SH修飾酵素-基質アナログ複合体のX線結晶構造解析β-アミラーゼのSH基(S-S基)の役割を検討するためダイズとBacillus cereusのβ-アミラーゼの化学修飾を行った。ダイズβ-アミラーゼの活性部位近傍に存在し、SH試薬による失活の原因となる2個のSH(Cys95とCys343)をメルカプトエタノールによって修飾した酵素及び、Cys343のみを修飾した酵素についてマルトース、グルコースとの複合体のX線結晶構造解析を行い、これらのCys残基修飾の影響について検討した。それぞれ2.0Å分解能までの回折データを測定し、2.1Å分解能までのデータを用いてプログラムXPLORおよびTNTによって構造の精密化を行った結果、最終的なR値は16%程度まで低下した。マルトース複合体では2個のSH基を修飾した酵素は未修飾酵素の場合と同様に2個のマルトースが連続して、サブサイト1-4に結合するが、サイブサイト1-2に結合しているマルトースの温度因子は上昇していた。Cys95が修飾されている酵素では残基番号96から103のフレキシブルループの電子密度は消失していた。これらの結果からCys95の修飾により、フレキシブルループの動きが妨げられ、サブサイト1、2の基質とのアフィニティーが著しく減少することが判明した。一方、Cys343の修飾はサブサイト3,4の基質の結合には大きく影響しないが、基質の結合により修飾置換基の影響によりThr342周辺の主鎖の構造が変化し、この結果、触媒作用を阻害している可能性が示唆された。2.β-アミラーゼ遺伝子のクローニングと発現ベクターの作成ダイズ登熱期種子より調製したmRNAライブラリーからβ-アミラーゼのcDNAをスクリーニングし、全コード領域を含む完全鎖長(1768bp)のcDNAを得た。このcDNAを用い組換えβ-アミラーゼの発現条件を検討した結果、pkk233-2ベクターを用い、全菌体タンパク質の10%という高レベルでの発現に成功した。この組換え型酵素を菌体抽出液より精製して、その酵素的性質を天然型のものと比較した結果、N末端のブロックの有無と等電点以外の性質は全て一致した。組換え型酵素の結晶化条件を検討した結果、蒸気拡散法により、構造解析に適した結晶を得ることができ、その結晶学的は天然型三方晶のものとほぼ一致した。現在、組換え型酵素の結晶のX線結晶構造解析を進めている。ダイズβ-

アミラーゼのSH基修飾の本酵素の活性発現における影響を明らかにするため、SH基が修飾されたダイズβ-アミラーゼの三方晶結晶を調製し、そのX線結晶構造解析を行った。また、本酵素の大腸菌での大量発現系を構築するための準備を行った。1.SH基修飾結晶のX線結晶構造解析既に調製したダイズβ-アミラーゼ三方晶の保存中に2-メルカプトエタノールが存在すると、空気酸化によりSH基が酸化され、2-メルカプトエタノールとのmixed disulfideを形成することを見いだした。そこで長期保存中であったダイズβ-アミラーゼ三方晶に本酵素の生成物であるマルトースを導入し、マルトース複合体を形成させ、その結晶データを2次元検出器により2.0Åまで収集し、その構造の精密化を行った。最終的に2.1Åまでのデータを用いR=0.17まで精密化したモデルには485残基のアミノ酸と2分子のマルトースおよび約200の水分子が含まれている。解析の結果、活性部位近くに存在するCys95とCys343はいずれも2-メルカプトエタノールによって修飾されているにもかかわらず2分子のマルトースはサブサイト1-4に結合しているのが判明した。しかし、Cys95から延びるGly96-Ile103のフレキシブルループは未修飾酵素の場合と異なり「閉じた構造」をとれずその電子密度は観察されなかった。このことはCys95の修飾置換基によりループ部分が「閉じた構造」をとれず、その構造が不安定になっていることを示している。一方、Cys343は本酵素のサブサイト4の近くに存在し、その修飾置換基は結合グルコース残基との衝突を避ける方向に延びているのが認められた。このことより、Cys343の置換基による触媒部位の局所構造変化が酵素の失活の原因となると推定された。2.ダイズβ-アミラーゼのクローニング本酵素のアミノ酸配列よりプローブを作成し、mRNAライブラリーよりcDNAの大腸菌でのクローニングを試みている。【1. SH修飾酵素-基質アナログ複合体のX線結晶構造解析】ダイズβ-アミラーゼの活性部位近傍に存在し、SH試薬による失活の原因となる2個のSH(Cys95とCys343)をメルカプトエタノールによって修飾した酵素とマルトースおよびマルトテトラオースとの複合体のX線結晶構造解析を行い、これらのCys残基修飾の影響について検討した。両システイン残基が修飾された酵素の結晶に200mMマルトースあるいは50mMマルトトリオースを浸析し、その2.0Å分解能までの回折データを測定し、2.1Å分解能までのデータを用いてプログラムXPLORおよびTNTによって構造の精密化を行った結果、最終的なR値はそれぞれ15.9および16.5%まで低下した。マルトース複合体では未修飾酵素の場合と同様に2個のマルトースが連続して、サブサイト1-4に結合するが、サブサイト1-2に結合しているマルトースの温度因子は上昇していた。一方、マルトトリオースは主にサブサイト3-5に結合しているのが認められた。いずれの場合も残基番号96から103のフレキシブルループの電子密度は消失していた。これらの結果からCys95の修飾により、フレキシブルループの動きが妨げられ、サブサイト1、2の基質とのアフィニティーが著しく減少することが判明した。
狂牛病問題下における牛肉安全性保証の地域システムの確立に関する研究

平成15年度は、法制化がなされたばかりの牛肉のトレーサビリティ制度に焦点をあて、北海道十勝地方と岩手県を対象に、牛肉の生産・と畜・流通に関する地域システムが牛個体情報の伝達を介していかに再編されていくのかを明らかにすることを試みた。牛の出生からと畜までの個体情報の管理を義務づける牛肉トレーサビリティ法の施行(平成15年12月)は、産地食肉センターを核とする個体識別番号の伝達システムの構築を促した。岩手県では平成14年2月から独自に「いわて牛TBCシステム」を立ち上げ、岩手県畜産流通センターで処理される3千頭分の牛の生産履歴情報を消費者に開示してきた。平成15年12月以降は同システムの対象を県外出荷牛を含む全県産牛3万7千頭に拡充することによって、20近くに及ぶ銘柄牛肉の多様な販売ルートは維持したまま、情報管理は生産地域の行政機関に一元化しようとしている。一方、北海道清水町産の「十勝清水牛」のように、一農協と生協との取引契約にもとづき消費者に生産履歴情報が開示されている例もみられる。北海道においては肉牛生産が少数の大規模経営に集約されており牛個体情報の遡及が容易である点、産地での加工比率が高く部分肉出荷が一般的である点などから、既存の産直事業を軸にしたトレーサビリティが志向されている。しかし平成16年12月以後に義務づけられる牛肉流通段階における牛個体情報の表示および記録・保存に関しては、具体的な実施方法がいまだ不透明である。また生産情報公表JAS規格の適用に対しては、生産段階での投薬情報の公表を前提とすることから、肉牛生産者のあいだでは消費者の誤認にもとづく産地の選別が助長されかねないことへの懸念が広がっている。平成14年度は、日本最大の肉用牛飼養地域である北海道を対象に、牛肉の生産・加工・流通の実態とBSE対策事業の実施状況を把握することにつとめた。日本で確認されたBSE感染牛はすべて酪農家の廃用牛であったこと、またBSE感染牛7頭中5頭が北海道で出生した牛であったことは、道内の肉用牛生産者・食肉流通業者の経営を大いに圧迫した。折から雪印食品の牛肉偽装事件も重なり、消費者の牛肉不信に危機感をつのらせた行政や畜産・食肉業界の各団体は、道産牛肉の安全性確保と消費者への情報公開に向けて独自の活動に取り組んだ。全道の肉用牛の38%を飼養する十勝支庁管内においては、肉用牛生産は100頭から2000頭規模の大規模農家によって担われており、乳用種・交雑種・黒毛和種のうち2種類以上を組み合わせた経営も多い。管内の肉用牛の大半は、日本第2位のと畜処理能力を有し、独自の脊髄除去法を採用している十勝総合食肉流通センター、ないし2農協が所有する食肉加工センターでと畜・加工されている。管内での食肉加工率が高く、従来から銘柄牛肉の産直が行われていたことは、十勝産牛肉のトレーサビリティの構築に有利に作用している。農協単独でも、BSE発生後いち早く消費地のスーパーでの販売促進を行ったり、Web上で牛肉生産履歴情報を公開するなどの活動が見られる。また十勝管内独自の取組みとしては、行政、農業団体、食肉流通業者の3者からなる「十勝牛肉PR実行委員会」が、首都圏の食肉流通業者や消費者に対して積極的に安全性のPR活動を行っていることが挙げられる。現状では国が目指すトレーサビリティシステムと、畜産・食肉業界にとって合理的な個体管理法の間にはかなりの隔たりがあり、牛の個体情報を流通の各段階でどう共有し、消費者にいかに開示するかいまだ試行錯誤の段階にある。
高酸素分圧下で生育できる水素酸化細菌のヒドロゲナーゼの精製とその水素生産への利用

ヒドロゲナーゼによる水素生産では、酸素や熱に対して安定な酵素が求められている。海水より単離されたHydrogenovibrio marinusは水素酸化細菌としては極めて酸素耐性が強く、pO_240%という高酸素分圧下においても良好に生育するため、本菌のヒドロゲナーゼの耐酸素性の高さが期待された。本菌をH_2/O_2/CO_2の培養ガスで培養後、無細胞抽出液を調製して本酵素の諸性質を検討した。水素酸化活性はメチルビオローゲン(MV)を電子受容体として、水素気相下における吸光度の上昇速度から求めた。水素発生活性は還元型MVを電子供与体として、水素発生速度を溶存水素電極またはGCを用いて測定した。本酵素は同じ好気性水素酸化細菌であるAlcaligenes eutrophusの酵素と比較してもかなり安定性が高く、air中でH.marinusの酵素は12h経過後も87%、28h経過後も60%の活性を示したのに対し、A.eutrophusでは2h後には36%の活性となった。またO_2中ではH.marinusでは12h経過後も23%の活性を保持したが、A.eutrophusは5hで活性を失った。本菌は中温菌であるが、驚くべきことにヒドロゲナーゼの至適温度は90°Cであった。またair中で70°C,50min処理しても90%程度の活性を保持し、さらにH_2気相下で熱安定性は顕著に増大し、90°C,80min加熱後も100%の活性を保持するなど、100°C以上に生育至適温度をもつ超好熱菌の酵素にも匹敵する程の熱安定性を示した。従って本酵素の研究によりヒドロゲナーゼの酸素耐性や熱安定性に関する新知見が得られることが期待された。本酵素は水素酸化反応と水素発生反応の至適pH(それぞれpH9.0とpH5.5)が大きく異なるため、pHにより反応平衡をコントロールできると考えられた。pH5.5における水素発生活性/水素酸化活性の比は25.1と極めて高く、水素生産に適していることが示された。
小児期の気管支喘息における気道炎症と大気中微小粒子の影響に関する疫学的研究

小児期の気管支喘息における気道炎症と大気中微小粒子の影響を疫学的に評価するための指標として以下の検討を行った。1.呼気中一酸化窒素濃度を測定するため、一定の圧・流速で呼気を捕集することが可能なサンプリング管を作成したところ、呼気採取から6時間以内であれば再現性のあるデータが得られた。しかし、一定の圧力で呼気を捕集することは小児では難しいこと、年長児でも一人あたり5分程度要すること、気道炎症のほかに食事や飲水などの影響が認められること、大気汚染物質については急性影響が認められ、慢性影響の評価には問題があることなどから、現時点では小児集団を対象とした疫学調査で実施することは困難であると判断された。2.気管支喘息児が毎日測定しているピークフロー値と大気中微小粒子の濃度との関係を検討した。大気中微小粒子濃度の上昇により男子の起床時のピークフロー値は有意に低下したが、女子では有意な関連はみられなかった。観察されたピークフロー値の変化量は、微小粒子濃度50μg/m^3増加あたり-4.69L/minと大きくはなかった。3.大気汚染濃度の異なる3地域の小学生を対象として、血清高感度CRP濃度を測定した。低学年児で高く、成長とともに低下する傾向が認められ、喘鳴または喘息症状のある児童で高値であった。血清高感度CRP濃度が高値のものは、大気中浮遊粒子状物質濃度が高い地域ほど高率であった。二酸化窒素濃度との関係は有意ではなかった。以上のように、大気中の粒子状物質の増加と小児の気管支喘息におけるピークフロー値の低下、血清高感度CRP濃度の増加との関係が認められた。これらは大気中粒子状物質が小児の気道炎症を引き起こすことを示唆する所見である。しかし、観察された影響はいずれも軽微であり、その病態生理学的役割についてはさらに検討することが必要である。小児の気管支喘息に関する疫学調査で使用することが可能な気道炎症の指標として,呼気中一酸化窒素(NO)濃度と血清C-反応性蛋白(CRP)値の意義について検討した。呼気NO濃度については,一定の圧・流速で呼気を捕集することが可能なサンプリング管を作製し,測定方法についての基礎的検討を行った。健常志願者を対象として,作製したサンプリング管を用いて様々な条件下でバッグ中に呼気を捕集し,窒素酸化物自動測定装置により呼気中NO濃度を測定した。圧1.5KPa,流速7.9L/secの一定条件下で繰り返し測定したところ,気道症状のない場合には呼気中NO濃度はほぼ一定の値であることが明らかとなった。死腔分を約300ml廃棄することにより大気中のNO濃度の影響は排除できると考えられた。また,捕集後24時間まではバッグ内の呼気中NO濃度に大きな変化は認められなかった。一方,千葉県市川市及び君津市の6小学校の児童を対象として,呼吸器症状質問票調査を行い,同意の得られたものは採血を実施し,血清CRP値を測定した。質問票は2,965名,採血は2,107名の協力が得られた。このうち喘息様症状が認められたものは市川市6.2%,君津市6.3%,喘鳴症状はそれぞれ13.7%,11.7%であり,いずれも都市間に有意な差は認められなかった。血清CRPの幾何平均値は,喘息様症状あるもの0.033mg/dl,ないもの0.030mg/dl,喘鳴症状のあるもの0.034mg/dl,ないもの

0.029mg/dlであり,いずれも症状のあるものが高値であった。喘鳴症状の有無による差は有意であった(p=0.015)は,喘息様症状の有無による差は有意ではなかった。以上より,小児の気管支喘息における気道炎症を評価する指標として,呼気NOおよび血清CRP値は有用であると考えられた。今後,これらに影響する諸条件について検討を進める予定である。小児の気管支喘息に関する疫学調査で使用するための気道炎症の指標に関する検討を行った。呼気中一酸化窒素濃度は,アレルギー性疾患の既往があるものは既往のないものよりも高値であり,気道炎症の非侵襲的な指標となりうることが示された。しかし,一定の圧・流速条件で呼気を採取することが低年齢児には難しいこと,採取には一人当たり数分間要することなどから,小児を対象とした疫学調査での使用には方法の改善が必要であると判断された。一方,前年に引き続き千葉県市川市及び君津市の小学校の児童を対象に,呼吸器症状質問票調査とともに,同意の得られたものの採血を実施し,血清高感度C-反応性蛋白(CRP)値を測定した。2年間続けて呼吸器症状調査の結果が得られたものは1,508名であり,このうち2年ともに喘鳴症状があったものは107名,1年目になく2年目に発症したもの47名,1年目にあり2年目に寛解していたもの64名,2年ともになかったもの1,290名であった。初年度の血清高感度CRP幾何平均値は,喘鳴症状が持続したもの0.045mg/dl,発症したもの0.046mg/dl,寛解したもの0.037mg/dl,なかったもの0.035mg/dlであり,2年目はそれぞれ0.033mg/dl,0.034mg/dl,0.027mg/dl,0.028mg/dlであった。また,初年度の血清高感度CRP値が0.2mg/dl以上のものの割合はそれぞれ13.2%,12.2%,8.0%,6.8%,2年目はそれぞれ10.8%,7.9%,4.4%,6.2%あり,いずれも喘鳴症状が持続または発症したものが有意に高値であった。以上より,血清高感度CRP値は小児の喘鳴症状を評価する客観的指標としては有用であると考えられ,喘鳴症状の予後を予測しうる可能性が示唆された。呼気中一酸化窒素濃度は,喘息の既往があるものは既往のないものよりも高値であったが,(1)大気汚染物質濃度の増加が短期的に影響すること,(2)呼気の採取は一定の圧・流速条件で行わねばならず,低年齢児での実施は難しいこと,(3)年長児でも採取には一人当たり数分間要することから,現時点では小児集団を対象とした疫学調査で用いることは困難であると判断された。一方,千葉県市川市及び君津市の小学校の児童を対象に3年間にわたって呼吸器症状質問票調査とともに,同意の得られたものの採血を実施し,血清高感度C-反応性蛋白(CRP)値を測定した。3年間ともに呼吸器症状調査の有効な結果が得られたものは1,184名,このうち1年目に血液検査を受診したものは1,007名であった。3年間を通じて喘鳴症状がなかったものは955名,3年間に喘鳴症状が1回のみあったもの108名,2回あったもの48名,3回あったもの73名であった。初年度の血清CRP幾何平均値は,それぞれ0.036mg/dl,0.045mg/dl,0.045mg/dl,0.049mg/dlであり,喘鳴回数が多いほど高値であった。
特異磁場をもつパウリおよびディラック作用素のスペクトルの研究

3次元空間におけるトーラス内に台をもつ磁場をもつシュレディンガー作用素が,トーラスの厚みを薄くしたときに,磁場のベクトルポテンシャルをうまく選ぶことにより,特異性をもつ磁場をもつシュレディンガー作用素のフリードリックス拡張で定まる自己共役作用素にノルムレゾルベントの意味で収束することを示した。研究代表者は,ポワソン型のランダムなポテンシャルをもつシュレディンガー作用素のスペクトルが,空間次元が2でない場合に,確率1で,実数全体あるいは正の実軸全体のどちらかとなることを示した。また2次元の場合にはスペクトルのギャップは高々一つであることを示した。田村英男は,指数積公式によるシュレディンガー半群の積分核および熱核に対する近似とその収束誤差評価を行った。また2つの2次元ソレノイド磁場による散乱に対する準古典問題を通して,量子力学からのアハラノブ・ポーム量子効果と古典力学からのtrapping現象がいかに関係するかを明らかにした。峯拓矢は,δ型の磁場を持つシュレディンガー作用素のスペクトルについての研究を行った。特にδ磁場の強さ・位置が周期的な場合,あるいはポワソン・アンダーソン型のランダムネスを持つ場合を研究した。山田修宣は,光速を無限大に近づけた場合のディラック作用素の非相対論的極限の研究およびKerr-Newman距離におけるディラック作用素のスペクトルの研究などを行った。これらの研究成果を発表あるいは情報収集するために,研究代表者および峯拓矢等は,プラハで2006年9月に開催された国際研究集会「Operator Theory in Quantum Physics」に出席した。また研究代表者は2006年7月に研究集会「夏の作用素論シンポジウム」(沖縄)を主催して開催し,あるいは国内で開催されたいくつかの研究集会に研究分担者および国内の関連分野の研究者とともに参加し情報交換・研究打合せを行った。研究代表者は,3次元空間におけるトーラス内に台をもつ磁場をもつシュレディンガー作用素がトーラスの幅を縮めたときに特異性をもつ磁場をもつシュレディンガー作用素にレゾルベント収束することを示し,現在論文を執筆中である。田村英男は,2つの2次元ソレノイド磁場による散乱に対する準古典問題を通して,量子力学からのアハラノフ・ボーム量子効果と古典力学からのtrapping現象がいかに関係するかを明らかにした。峯拓矢はランダムなアハラノフ・ボーム型磁場を持つシュレディンガー作用素についての研究を行った。特に,定数磁場下でのランダウ準位の多重度を調べ,スペクトルの下端におけるリフシッツ・テイルを証明した。山田修宣はディラック作用素のスペクトル理論、特に、ポテンシャルが遠方で発散する場合の非相対論的極限とスペクトル集中の関係、ブラックホール理論に現れるKerr-Newman計量におけるディラック作用素のスペクトル理論などについて研究した。これらの研究成果を発表あるいは情報収集するために,研究代表者および峯拓矢は,ルーマニアで2007年9月に開催された国際研究集会「10th Quantum Mathematics International Conference」に出席した。また研究代表者は2007年9月に研究集会「夏の作用素論シンポジウム」(青森)を主催して開催し,あるいは国内で開催されたいくつかの研究集会に研究分担者および国内の関連分野の研究者とともに参加し情報交換・研究打合せを行った。
新素子ファイバ・グレーティングを用いたロボット眼の開発研究

本報告は、パターン投影素子にファイバーグレーティングを用いた3次元形状計測システムの試作研究に関するものである。本研究で採用した手法は、被検体に2次元の輝点アレイを投影して撮像し、各輝点の位置ずれを測定することによって被検体の3次元形状を決定するというもので、能動ステレオ法に分類されるが、パターン投影素子にファイバーグレーティングを用い、撮像伝送部に画像伝送用ファイバ束を用いることによって、従来のこの種の装置に比べ視覚センサ部の極端な小型軽量化をはかることに成功しているのが特徴である。初年度は、まずファイバーグレーティング、レンズ等の光学系部分を定盤上にバラック構成して基礎実験を行い、提案した手法の妥当性を確認するとともに、試作システムの製作上要求される基礎的データの収集とシステムの仕様を決定した。また本年度は、はじめ前年度に得られたデータを基に本手法の問題点を明確化し、その改善法について検討した。そして、一回の画像入力で得られる各輝点の位置情報から各スポットの次数認識を行う手法を考案し、システムに実装した。次に、パターン投影部および受像部における光学的収差や、ファイバ束および撮像素子の分解能限界に依存した測定精度劣下要因について検討し、改善法を確立して改善アルゴリズムをシステムに実装した。さらに、最後に本システムをロボットアームに取り付け、実際に視覚システムとして使用する試みを行った。すなわち本システムを付けたロボットの手先の空間的位置を移動し、対象とする被検体を複数の方向から計測することによって、非凸形状の3次元物体を非接触で測定することが可能となることを検証した。
転写因子ISGF3γのサブユニット会合ドメインの立体構造の研究

生体防御という重要な役割を担うインターフェロン(IFN)システムにおいて、転写活性化因子Interferon-stimulated-gene factor 3 (ISGF3)が、IFNの生産(IFN遺伝子の活性化)とIFNの作用(IFN誘導遺伝子群の活性化)の両者に共通に中心的な役割を果たしている事を明らかにしてきた。ISGF3は、DNA結合サブユニットであるISGF3γと制御サブユニットであるISGF3αとの複合体であり、ISGF3γにおけるISGF3αとの相互作用をするドメイン構造は蛋白質のC末端側の約200アミノ酸からなる部分が最小単位であることが明らかとなっている。この最小ドメインを大腸菌において大量発現、精製を行った。基礎的なNMR解析の結果、調製した標品は一定の立体構造をとっていると考えられた。しかし収量においてマウスISGF3γはやや低いので、ヒト遺伝子由来の同様部分を調製している。これまでのところ収率は良好であり、安定同位体で標識したサンプルを調製しつつある。また、ISGF3とは別の、IRFファミリーに属する遺伝子産物において、細胞質極在を規定する配列(Nuclear Export Signal)と考えられるものを有し、別のドメインの燐酸化によって核移行する分子を同定した。この転写因子は核内でコアクティベータ-と相互作用するためのドメインも有している。これらのドメイン構造はこれまで報告されておらず、これらに関しても解析を進めている。
電子回路網による空間カオスの実験

OPアンプを用いて負性抵抗と等価な回路を作り、これを使ってvan der Pol方程式と同形の自励振動を行う振動回路を作成し、これを1つの振動子とした。2個、4個、9個の振動子を次々と結合させ、結合電子回路網を構築した。ここでは9個の結合系についてのみ、実験結果を述べることにする。結合の仕方として1次元系と2次元系の2つの場合について行った。両者の結果に関して、定性的な違いは見られなかった。単体の振動子では1つの振動状態しか起こらないものが、結合数を多くすると異なる振動波形をもつ状態が数多く出現する。ここでそれらをA,B,C,D・・・と書くことにする。これらは、振動子の位置によってさまざまな状態をとる。同じ測定条件であっても、微小な初期条件の違いにより、最終的に出現するパターンが数多く存在する。例えば、ある1つの条件に対して1番から9番までの振動子の状態を上に示したA,B,C,D,・・・を用いて表すと、CAAACAAACであったり、CBABABABCやCADAAADAC・・・等のパターンが得られる。この様子はガラス状態に対応するものであって、多様な空間構造は空間間欠性や時空カオスと深く関係していることを示している。今回の実験では、最終パターンへの緩和過程まで調べることができなかったが、緩和時間の分布や過渡的状態を調べることが今後の課題として重要である。今回はまた、van der Pol型結合回路網の他に、PLL-ICの結合系についても実験を行った。これは単体でもカオスを発生する回路であり、今回は2結合系のみの実験を行うまでにしか至らなかったが、オンオフ間欠性カオスに似た現象が見つかり、今後はこれらの回路網を作って実験を行いたい。
ＡＢＣＡ１の分解機構を創薬標的とする新規動脈硬化治療法の開発

コレステロール(Ch)は生体膜を構成する、細胞の機能維持に必須の生体分子である。細胞は細胞内Chの枯渇を防ぐため、Chセンサーとして働くSCAP-SREBP2経路を有する。過去の報告から、本経路以外にも細胞内Ch量を感知し、LDLRの転写制御に働く機構の存在が推察されるが、その分子実体は明らかになっていない。申請者はHECT type E3 ubiquitin ligaseの一種であるITCHと、ABCA1をはじめとしたCh関連遺伝子の関係性について研究を進めている。その過程において、ITCHの発現抑制下において、SREBP2非依存的にLDLRの発現が誘導される可能性を見出した。本知見を活用し、申請者はSREBP2非依存的なLDLR発現制御機構の同定を目指した研究を実施した。in silico解析、in vitro解析を駆使し、当該機構の詳細を検証した結果、SCAP-SREBP2経路とは異なるLDLRの転写制御機構としてITCH-JUN経路の存在が示唆された。細胞内脂質量依存的にJUNはLDLRのエンハンサー領域に結合し、LDLRの発現量を調節していると考えられる。今後は本経路の生理学的意義を検証すべく、組織特異的JUN欠損マウスやLDLR遺伝子編集細胞を用いた解析を実施する予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。ATP bindingcassette transporter A1(ABCA1)は、生体内においてhigh density lipoprotein(HDL)生合成や、マクロファージの泡沫細胞化の制御を介し、動脈硬化症に対して抑制的に働いているトランスポーターであり、本疾患の創薬標的として注目されている。本研究では、ABCA1のリソソーム分解経路(Ubiquitin(Ub)-Lysosome分解経路)を制御することでABCA1の発現量、機能上昇を達成し、動脈硬化症の治療を目指す。当研究室ではこれまでに、本経路がABCA1の発現量維持に寄与し、ABCA1の抗動脈硬化機能とリンクすることが明らかにしてきた。しかし、本経路の制御を担う分子機構に関する知見は現状ほとんど存在しない。申請者は、本機構の制御因子として、新たにPim-1 kinaseを見出した。Pim-1 kinaseによるABCA1のリン酸化により、細胞膜に発現するABCA1のリソソーム分解が有意に抑制されることをin vitro実験により見出した。また、Pim-1 kinase機能欠損マウスの肝臓では、ABCA1の細胞膜発現量の低下が確認された。本研究成果は、米国心臓協会の学会誌に掲載された(Katsube A, ATVB. 2016)。また申請者は現在、ABCA1のリソソーム分解の制御を実現すべく、本分解経路に関わるPim-1以外の分子群についても探索を進めている。申請者は、細胞膜に発現するABCA1のリソソーム分解の抑制により、ABCA1の機能活性化が個体レベルにおいて実現することを示唆する結果を得ている。本知見に基づき、当該機構の制御による新規創薬戦略の創出を目指して研究を行っている。ABCA1のUb-Lysosome分解経路は、核内受容体LXRβが細胞膜に局在するABCA1(csABCA1)と直接結合することにより抑制されている。申請者は本相互作用の増強により、Ub-Lysosome分解経路の制御が可能になると考え、本相互作用の制御因子の探索を行った。タンパク質間相互作用に、タンパクのリン酸化が関与する例が報告されていることから、キナーゼに着目した探索を実施し、Pim-1 kinase(Pim-1)を本相互作用の制御因子候補として見出した。細胞、個体を用いてより詳細な解析を実施したところ、Pim-1L- ABCA1経路は細胞レベルだけでなく、個体レベルにおいても保存されている経路であることが示唆された。ABCA1は、細胞膜でUb化を受けて内在化した後、初期エンドソームにおいて、脱ユビキチン化、あるいはESCRT complexによるリソソームへの選別輸送を受ける(Mizuno T , Hepatology. 2011)。脱ユビキチン化を受けたABCA1は細胞膜へとリサイクリングされると考えられるが、初期エンドソームでのABCA1の脱ユビキチン化機構、ならびに脱ユビキチン化されたABCA1の細胞膜へのリサイクリングに関わる分子群に関しては不明である。現在、当該機構に関わる可能性のある分子を複数同定しており、今後は本分子群の創薬標的としての可能性を検証すべく、さらに詳細な解析を進めていく予定である。in silico解析、in vitro解析を駆使し、当該機構の詳細を検証した結果、SCAP-SREBP

2経路とは異なるLDLRの転写制御機構としてITCH-JUN経路の存在が示唆された。細胞内脂質量依存的にJUNはLDLRのエンハンサー領域に結合し、LDLRの発現量を調節していると考えられる。今後は本経路の生理学的意義を検証すべく、組織特異的JUN欠損マウスやLDLR遺伝子編集細胞を用いた解析を実施する予定である。申請者はこれまでに、初期エンドソームでのABCA1の脱ユビキチン化機構、ならびに脱ユビキチン化されたABCA1の細胞膜へのリサイクリングに関わる可能性のある分子を複数同定している。これら候補分子が、実際にABCA1の細胞膜発現、機能制御に働くことをHepG2細胞、Mφを用いて検証する。次に当該分子群がABCA1に及ぼす作用をin vivoで評価すべく、アデノウィルスや阻害剤を用いたin vivo試験を行い、ABCA1の生体内機能の指標となる、血中HDLコレステロール産生、高脂肪食負荷時における動脈硬化損傷部位面積の変化などを評価する予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。
全身健康に影響する口腔機能パラメーターの探求に関する疫学研究

これまで口膣の機能(function)と全身の健康状態との関連に焦点をあてた研究は少ない。口腔の機能には咀嚼機能をはじめ、摂食嚥下機能、舌の運動機能などが含まれる。本研究の目的は健常な口腔機能を有する高齢者は全身的にも健康であり、病気の発症率が低く、長寿ではないかと仮説をたてた。コホート調査が可能であった697名について、咀嚼能力と4年間の死亡との関係を性別、喫煙習慣、血圧、血清データといった様々な交絡因子で補正したコックス比例ハザード回帰モデルを用いて、死亡率のハザード比を算出した。その結果、咀嚼能力が高い者を基準とすると、中くらいの者で1.2倍、咀嚼能力が低い者で2.6倍死亡するリスクが高かった。さらに最も噛みやすい食材について解析した場合、それらを全て噛める場合を基準とすると、全て噛めない者では2.7倍死亡するリスクが高いことがわかった。次に咀嚼習慣により分類した場合、BMIおよびウェスト長においてグループ間で有意差がみられた。男女別にアディポネクチンとグループ間の関連をみたところ、男性において補正後に有意差がみられたのはグループIとVの間であった。またBMIが23以上の群でみると、グループIにおいて最も高値を示し、他の全てのグループとの間に有意差がみられた。女性では標準BMIにおいてグループIIとIVの間に有意差がみられた。次に男女別にみたレプチンとグループ間の関連をみたところ、男性において補正後に有意差がみられたのはグループIIとVの間であった。女性では標準BMIにおいてグループIが最も高値を示し、補正後も他のグループとの間に有意差がみられた。以上から咀嚼機能が高い者ほど長寿であり、咀嚼習慣が早食いであるほどメタボリックシンドロームになりやすい傾向が示唆された。近年口腔疾患の疾病構造の変化に伴い、口腔乾燥や舌痛を訴える患者が増加している。一般に口腔乾燥症の病態は、唾液量の低下、口腔乾燥感および唾液の質的変化に分けられることが知られている。口腔乾燥症は高齢者で、とくに女性に多く認められることから性ホルモン量やストレスホルモンとの関連が示唆されている。しかし、唾液中ホルモンの変化についてはほとんど明らかにされていない。そこで今回我々は、福岡県に在住する高齢者を対象に唾液流出量、口腔の自覚症状および唾液中ストレスホルモンcortisol、chromogranin A(CgA)、およびdehydroepiandrosterone(DHEA)の関連を調べた。唾液中CgAやDHEA濃度は性別、唾液流出量(刺激時)および口腔乾燥感や舌痛との間に有意な相関関係が認められた。対象者140名を唾液流出量(刺激時)と口腔の自覚症状である口腔乾燥感、舌痛(以下、OSC)の有無を基に4つのグループに分類した。すなわち、グループI:唾液流出量<0.7ml/minおよびOSC有、グループII:唾液流出量<0.7ml/minおよびOSC無、グループIII:唾液流出量≧0.7ml/minおよびOSC有、グループIV:唾液流出量≧0.7ml/minおよびOSC無、の4グループである。唾液中DHEAおよびCgAはグループIにおいて最も高く、グループIVとの間に有意差が認められた。一方、cortisol濃度は群間に有意差は認められなかった。さらに判別分析の結果、唾液中DHEAおよびCgAはグループ間を識別する有意な因子であることが示唆された。

以上の結果は、唾液中DHEAおよびCgAが口腔乾燥症・舌痛症を評価するバイオマーカーのひとつとして有用である可能性を示唆している。近年の高齢化社会や生活習慣病の増加に伴い、口腔疾患の疾病構造が変化しており、口腔乾燥や舌痛などを訴える高齢者が増加している。こうした患者では日常生活の満足度が十分得られず、ストレスの多い生活になる。また、口腔乾燥症や舌痛症は高齢者に多い疾患であることから、加齢に伴うホルモンの変動と関連している可能性も考えられる。そこで、本研究では地域在住の高齢者を対象にストレスおよび加齢に関連したホルモンであるコルチゾル、クロモグラニンAおよびDHEA (Dehydroepiandrosterone)の唾液中レベルの検出を行い、口腔乾燥症および舌痛症との関連を疫学的に検討した。口腔の自覚症状に関する問診の結果から、対象者172名をグループ1:自覚症状なし;グループII:口腔乾燥感のみ;グループIII:複数の訴えあり、の3つのグループに分けた。その結果、年齢、糖尿病治療の有無、喫煙歴、唾液流出量(刺激時)および現在歯数においてグループ問に有意差は認められなかった。一方、口腔乾燥感などの自覚症状を有する者では高血圧症による治療を受けている者が有意に多かった(P=0.003)。各グループにおける唾液中バイオマーカーを比較したところ、DHEA濃度においてグループIIIが最も高く、グループ間に有意差が認められた(ANOVA、P<0.05)。一方、コルチゾル、クロモグラニンAおよび総タンパク濃度についてはグループ間で有意差は認められなかった。そこで、口腔乾燥感を含む複数の自覚症状の有無を判別する唾液中DHEAのカットオフ値をROC曲線から算出したところ、至適カットオフ値は4555pg/mlあたりと考えられた。次に多重ロジスティック回帰分析を用いて、唾液中DHEAのカットオフ値と口腔乾燥感を含む複数の自覚症状との関連を検討した。唾液中DHEA濃度を45pg/m1に設定した場合、口腔乾燥感を含む複数の訴えを有するオッズ比は2.1倍であった(P=0.03)。これらの結果は、エイジング因子とされる唾液中DHEAと口腔乾燥症や舌痛症の重症度との関連性を示しており、口腔乾燥症や舌痛症の病態がホルモンの変動と連動している可能性を示唆している。これまで口腔と全身の健康状態との関連については欧米やわが国の研究者を中心に行われてきた。とりわけ歯周病と全身の健康との関連については活発な研究がなされてきたといえる。しかし、その一方で口腔の機能(function)に焦点をあてた研究は少ない。口腔の機能には咀嚼機能をはじめ、摂食嚥下機能、舌の運動機能などが含まれる。本研究の目的は健常な口腔機能を有する高齢者は全身的にも健康であり、病気の発症率が低く、長寿ではないかと仮説をたてた。これまでのところ、以下に示す結果が得られている。調査対象は、福岡県下9市町村(行橋市、築城町、勝山町、豊津町、新吉富町、豊前町、苅田町、戸畑区、宗像市)に在住する1917年生まれの697名(男277名、女420名)とした。80歳の住民697名のうち672名について、山本式咀嚼能率判定表を用いて咀嚼能力の評価を行った。15個の食材のうちいくつ咀嚼可能かで評価した。この咀嚼能力と4年間の死亡との関係を性別、喫煙習慣、血圧、血清データといった様々な交絡因子で補正したコックス比例ハザード回帰モデルを用いて、死亡率のハザード比を算出した。
携帯電話から遠隔計算機を操作するためのビジュアルプログラミング技法

携帯電話から遠隔計算機を操作するためのビジュアルプログラミング技法の実現のために、以下の研究を行った。1.図形の構造解析の高速化ビジュアルプログラミングにおいて、ユーザによって入力されるプログラムは図形の組み合わせである。本研究では、入力される図形の構造解析を行うアルゴリズムに関して研究を行った。平成1516年度の期間に実現したアルゴリズムでは、開発者が与えた文法記述(入力として正しい図形の組み合わせ方をシステムに教えるための規則の集合)を予め解析する。これによって、図形が入力される度に、いずれかの規則を満たすか否かを場当たり的に解析するよりも、高速な解析が可能となった。2.ビジュアルプログラミングの仕様定義を容易にするインタフェースビジュアルプログラミングでは、ユーザによって入力される図形の構造解析を行い、その解析結果に応じた動作を行う。本研究では、「入力図形とそれに対する動作」を対にした規則の集合を与えることによって、ビジュアルプログラミングシステムを構築できるようなコンパイラ・コンパイラとしての特色を持つ。平成16年度では、この規則を、図形を画面に描くのみで、定義することを可能とするインタフェースを構築した。開発者は、ひとつの規則を定義するために1)入力図形を描く、2)その図形に対して行うべき動作を図式表現で示す、という2段階の作業を行えば良い。本研究では、このシステムを実現し、幾つかのビジュアルプログラミングの仕様定義が可能であることを確かめた。携帯電話から遠隔計算機を操作するためのビジュアルプログラミング技法のために、以下の研究を行った。1.ビジュアルなプログラミング言語の開発基盤に関する研究ビジュアルなプログラミング言語を入力するエディタを開発するために、言語の文法の記述から、プログラムとして入力される図形の編集を行うことが容易にできる図形言語エディタを自動生成するシステムを提供している。平成15年度では、手書き操作を主体とした図形言語エディタを自動生成する枠組みについて研究を行った。手書きされる図形要素を含んだ入力を解析する文法記述を可能とした。特に、文法記述として、複数の解釈を取り得る図形を一意に決定し暖昧性を除去するルールを与えることを可能とした。これによって、ペン型デバイスを用いてタブレットに図形を描くことによってプログラムの構成要素である図形を入力する図形言語エディタの開発が容易になった。2.遠隔計算機を操作するための枠組みに関する研究遠隔に存在する計算機を操作するために、ネットワーク経由でその操作を容易にするための枠組みについて研究を行った。本枠組みでは、デスクトップ型の計算機に携帯電話等の遠隔計算機の画面を転送することによって、そのデスクトップ型計算機から遠隔操作を行うことが可能とする。ビジュアルプログラミングの技法はポインティングデバイスを用いた複雑な操作を多用するが、入力デバイスが十数個のボタンのみという制約を持つ携帯電話では、この操作は困難であった。本枠組みによって、デスクトップ型計算機から携帯電話においてビジュアルプログラミングが可能となる。
ヒト白血病細胞の無蛋白培養による白血病細胞自己増殖因子の分離と分子構造の解析

我々はヒト悪性腫瘍の増殖機構の解明を目的とし、種々のヒト由来癌細胞の無血清蛋白培養株を樹立してきた。今回は、そのうちヒト白血病細胞株Kー562T1が産生する細胞増殖因子の分離及びその構造と機能について報告する。無血清無蛋白培地にて増殖するKー562T1株を大量培養し、この培養上清を細胞増殖因子分離の材料とした。培養上清は、Hollow Fiberにて濃縮し、2種の異なった作用をもつ細胞増殖因子を分離した。これらの増殖因子の活性は、ヒト白血病細胞株及び線維芽細胞に対する増殖促進作用により評価した。Kー562T1細胞の培養上清中には少くとも2種の異なる細胞増殖因子が存在することが確認された。一つは白血病細胞の増殖を促進するが、線維芽細胞には作用しない因子でLeukemiaーderivedgrowthfactorー1(LGFーI)と名づけた。他方は逆に線維芽細胞の増殖を促進するが、白血病細胞の増殖には無効な因子でLGFーIIと命名した。LGFーIは、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、およびFPLCにより精製され、SDS電気泳動で単一のバンドとして純化され、分子量は約20,000と推定された。LGFーIアミノ酸配列は既知の細胞増殖因子や発癌遺伝子の産物とのhomologyは認められず、新規な細胞増殖因子と考えられた。一方、LGFーIIは部分純化され、熱及び酸に安定な蛋白でジチオスレイトールにより失活することより、分子内disulfide bondが活性発現に必要であると考えられた。(諸言)我々はヒト悪性腫瘍の増殖機構の解明を目的とし、種々のヒト由来癌細胞の無血清無蛋白培養株を樹立してきた。今回は、そのうちヒト白血病細胞株K-562T1が産生する細胞増殖因子の分離及び構造と機能について報告する。(方法)無血清無蛋白培地にて増殖するK-562株を大量培養し、この培養上清を細胞増殖因子分離の材料とした。これらの増殖因子は、ヒト白血病細胞株及び線維芽細胞に対する増殖促進作用により評価した。(結果)K-562T1細胞の培養上清中には少くとも2種の異なる細胞増殖因子が存在することが確認された。一つは白血病細胞の増殖を促進するが線維芽細胞には作用しない因子でLeukemid-derivedgrowth factor-1(LGF-1)と名づけた。他方は逆に線維芽細胞の増殖を促進するが、白血病細胞の増殖には無効な因子でLGF-【II】、と命名した。LGF-【I】は、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過、およびFPLCにより精製され、SDS電気泳動で単一のバンドとして純化され、分子量は約20,000と推定された。LGF-1のアミノ酸配列は既知の細胞増殖因子や発癌遺伝子の産物とのhomologyは認められず、新規な細胞増殖因子と考えられた。一方LGF-【II】は、部分純化され、熱及び酸に安定な蛋白で、ジチオストレトールにより失活することより、分子内disulfide bondが活性発現に必要であると考えられた。我々はヒト悪性腫瘍の増殖機構の解明を目的とし,種々のヒト由来癌細胞の無血清無蛋白培養株を樹立してきた.そのうちヒト白血病細胞株にKー562TIが産生する細胞増殖因子の分離およびその構造分析について報告してきた.今回は,更に白血病以外の癌細胞が同種の増殖因子を産生するか否か検討した.白血病以外の癌細胞としては,膀胱癌および肺癌を用いた.これらの培養株は,無血清無蛋白質培地にて,長期に継代されており,増殖速度ももとの培養株とほとんど変わっていない.

これらの培養株の培養上清をホローファイバーで約100倍に濃縮した後,濃縮物を1%酢酸にて透析後,凍結乾燥した.増殖因子の測定系としては,以前よりBーリンパ球系細胞株ナマルハと骨髄性白血病由来の細胞株HLー60を用いていたが,今回はHLー60を無血清培養し,これに増殖因子を加えることによってその細胞数の増加を測定した.コントロールとしてKー562TI由来のLeukemiaーderived growthfactorー1(LGFー1)を用いた.興味深いことに膀胱癌および肺癌の培養上清中にはLGFー1と同種の活性が認められた.すなわち,これらの増殖因子を加えることにより, HLー60細胞は無血清で長期に増殖可能であることが判明した.このことより, LGFー1は単に白血病細胞の増殖因子ではなく,多くの癌細胞の増殖に重要な役割を果たしているAutocrine Growth factorである可能性が示唆された.K-562T1細胞の培養上清120lより約3ugのLGF-Iを得たので、これを気相のアミノ酸配列決定装置を用いて、アミノ末端より約30個のアミノ酸配列が決定された。このアミノ酸配列は既存の細胞増殖因子や癌遺伝子の産物とはhomologyは認められなかったが、興味深いことにユビキチン(分子量8,500)のN端アミノ酸配列と同一であった。ユビキチンは、1976年Goldsteinによって胸腺から分離され、当初胸腺細胞の増殖分化を誘導するとされたが、その後否定された。現在ではユビキチンはATP依存性の蛋白分離過程に関与していること、および核内でヒストン2Aと結合し、またクレオソームのユニット(A24蛋白)を形成することなどが知られている。また最近ではリンパ球のhoming receptorがユビキチン結合蛋白であることが報告されている。LGF-Iがユビキチン結合蛋白であるのか、またはユビキチン分子を含んだ別の蛋白であるのかはLGF-Iの_CDNAの構造解析の結果を待つ必要がある。ユビキチン分子を含んだ別の蛋白の存在は、1984年にたまたまsomatomedin-Cの_CDNAのクローニング中に発見さえており、このような蛋白は他にも存在する可能性は大きい。もう一つの可能性はユビキチンが別の蛋白と結合しLGF-I分子を形成することであろう。ユビキチンはC端がブリッジを形成して他の蛋白と結合するので、この場合この分子のN端はユビキチンのN端以外にもう一つN端をもっていることになる。我々の分析ではLGF-IのN端はユビキチンのN端のみであった。しかし、このことのみでユビキチン以外のN端の存在は否定できない。すなわちもう一つのN端がアセチル化などによりブロックされている場合がしばしばあるからである。ただわれわれの予備的な検討では、LGF-Iはどうやらユビキチン結合物でなくて、一つの_CDNAによってコードされている蛋白である可能性が大きい。