hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
酸化・還元ストレスの時間的変動に基づいたがん悪性進展解明

2EGFR-TKIを処理すると親株のリン酸化Akt発現は抑制される一方で、耐性株のリン酸化Akt発現は維持された。3耐性株はEGFR-TKIとは異なる別経路のチロシンキナーゼ阻害剤に随伴感受性を示し、耐性株のリン酸化Akt発現が特異的に抑制されることを見出した。4RNAマイクロアレイ解析の結果、耐性株特異的な糖タンパクXの発現上昇を観察した。また、糖タンパクXが耐性株のEGFR-TKI耐性機序で重要な役割を担っていることを明らかとした。これらの研究成果は計画通りの結果を示しており、経過は順調である。酸化・還元ストレスにより誘導される細胞死機序として“フェロトーシス"が提唱され、近年着目されている。さらに、フェロトーシスは薬剤耐性がん細胞株に対し特異的な細胞死を誘導することも報告されている。しかしながら、この酸化・還元ストレスによる細胞死機序は、未だ不明な点が多く、「細胞株間の感受性差の原因」と「細胞死の実行因子」に関して、統一的な見解が得られていない。そこで本年度は、新しい細胞死形態であるフェロトーシスに着目し、細胞間における細胞死機序の感受性差の解明を目的とした。非小細胞肺癌の細胞株であるA549は、同じく非小細胞肺癌由来のCalu-1と比較して、フェロトーシス誘導剤であるRSL-3に対し約600倍耐性を示す。そこで、非小細胞肺癌の細胞株4株の比較検討より、感受性差の原因を解明することとした。フェロトーシスによる細胞死は、脂質過酸化反応が必須である。A549とCalu-1に関して、脂質過酸化反応の惹起とそれに関する因子はフェロトーシス感受性に影響を与えなかった。一方、脂質過酸化物の基質であるリン脂質の構成をLCMSにて測定したところ、その量比は細胞株間で異なっていた。そこで、このリン脂質構成を司るリゾリン脂質アシル転移酵素を検討したところ、その発現量はRSL-3感受性との相関することを見出した。以上より、フェロトーシスの感受性には、リン脂質構成およびその制御が重要であると考えられる。本年度の研究では非小細胞肺癌細胞株を用いて、フェロトーシスへの感受性差におけるリン脂質構成の重要性を見出した。本研究では非小細胞肺癌4株の比較検討より、以下の内容を明らかにしている。1脂質過酸化反応の惹起に関与する因子であるGPX4(Glutathione Peroxidase 4)および15-LOX(15-Lipoxigenase)は、RSL-3感受性差に関わらずフェロトーシス誘導に必須の因子であった。2脂肪酸添加によるリン脂質構成の変動は、RSL-3に対する脆弱性および耐性を誘導した。リン脂質構成の制御を司るリゾリン脂質アシル転移酵素に関して、3脆弱性に関与した酵素の発現量はRSL-3感受性と相関しない。一方、4耐性に関与した酵素の発現量とRSL-3感受性は相関することを見出した。また、この相関性はCancer cell line encyclopediaデータベースにおいても確認され、耐性に関与するリゾリン脂質アシル転移酵素がRSL-3感受性を説明しうる可能性を見出した。
土の強度・変形特性に基づいた締固め施工管理に関する研究

締固めた土の長期的挙動を考慮した締固め施工管理手法を確立するため、締固めた不飽和土の水浸による体積変化、強度低下について次の手順により研究を行った。1.不飽和土と飽和土の示す挙動の違いがサクションに起因すると考え、球状体モデルにより不飽和土の圧縮・強度特性の説明を行った。この結果に基づき、不飽和土が水浸を受けるとサクションが消滅し飽和土の挙動を示すという仮定を立て、水浸後の土の体積変化、強度低下を予測する手法を考案した。2.1で考案した水浸に伴う不飽和土の体積変化量の予測手法を検討するため、標準圧密試験装置と既設の締固め用モールドを改良した装置を用い、1次元の水浸実験を行った。その結果、締固めた不飽和土は初期密度、水浸時上載圧により膨張と圧縮という異った挙動を示すこと、ならびにこのときの膨張量あるいは圧縮量は、1で考案した方法により予測できることが確認された。3.1で考案した水浸による強度低下の予測手法を検討するため、水浸装置のついた一面せん断箱を製作し、水浸時強度の測定を行った。この結果、水浸時強度は水浸後の間げき比と上載圧によりほぼ決まり、水浸前の間げき比、含水比によらないこと、ならびに1で考案した予測手法により水浸時の強度低下を定量的に予測し得ることが明らかになった。以上の結果を基に、水浸時の体積変化が少く、かつ水浸による強度低下後も所定の強度を保つような水浸前の土の間げき比の決定方法を考案し、この考え方に基づいた施工管理基準について検討を行った。さらに現場で簡単に土の強度を測定することができる試験方法を考案し、その適用性について、室内実験により検討を行った。
「過去の差別の現在の効果」に関する比較法的研究

各国において、差別禁止法は、「行為」としての差別を主な対象としている。既に歴史的な経緯から存在している、「状態」としての差別は、差別禁止法施行以後の作為が介在しないものも多く、差別禁止法の直接の射程に入り難いため、是正が困難である。上記のような「状態」としての差別の是正手段として、1賃金制度等自体を賃金差別とみる構成、2差別的状態を生じさせた行為を継続的行為とみることによる出訴期間制限の回避、3間接差別法理、4ポジティブ・アクション等がみられる。本研究は、過去に適法とされていた差別が、その差別が禁止された現在になって、被差別者に不利益な影響をもたらすという場合(『過去の差別の現在の効果』)に生じる法的紛争やその処理方法について、日本法と諸外国との比較を中心に立法・判例・学説の調査・研究を行い、当該問題に対する望ましい解釈論及び立法論を探求することを目的としており、具体的な目標としては、日本法、アメリカ法・ドイツ法を題材に、1各法制の差別禁止法制の概要(差別禁止事由、差別類型、差別が正当化される場合等)、2差別禁止法施行時の経過措置・差別行為への出訴期間等の規定内容、3差別禁止法施行前の差別が施行後に影響する場合の法的処理(過去の差別の是正措置等)、4差別禁止法の施行時点での使用者の差別是正義務のあり方等について、立法・判例・学説を調査し、各法制の処理の特徴とその背景、各法制のメリット・デメリットを明らかにし、日本の社会や法制度・差別禁止法制の特徴、日本が直面している問題状況に照らして、有効な示唆を与え得る立法政策論・解釈論を示すことを目標としている。平成24年度には、主としてドイツ法の文献調査を行い、前年度にデータベースにより文献の所在等を確認したものに基づき、データベースから収集できる文献等及び書籍の形で刊行されている解説書・コンメンタール等を中心に収集した。また、アメリカ法については、データベース化されていないものを中心に収集する予定であり、また新しい差別禁止の手法の実施としていわゆるアファーマティブ・アクションに関する文献等を購読したところであるが、さらに2009年のLedbetter事件判決に対する学説の反応(論文)が新たに出されているため、これをも収集した。本研究は、過去の差別が現在の効果を有する場合の法的紛争やその処理方法について、日本法と諸外国との比較を中止に立法・判例・学説の調査・研究を行い、当該問題に対する望ましい解釈論及び立法論を探求することを目的としており、具体的な目標としては、日本法、アメリカ法・ドイツ法を題材に、1各法制の差別禁止法制の概要(差別禁止事由、差別類型、差別が正当化される場合等)、2差別禁止法施行時の経過措置・差別行為への出訴期間等の規定内容、3差別禁止法施行前の差別が施工後に影響した場合の法的処理(過去の差別の是正措置等)、4差別禁止法の施行辞典での使用者の差別是正義務の在り方等について、立法・判例・学説を調査し・検討するものである。平成25年度については、引き続きドイツ法・アメリカ法の文献調査を行うとともに、日本法における新たな差別禁止規定に関する調査を行った。日本法に関しては、障害差別に関して新たに差別禁止規定が設けられたことに関連するものである。すなわち、障害者差別禁止条約の批准に伴う国内法の整備の一環として、平成25年に改正された障害者雇用促進法34条・35条は、障害者差別を採用段階・採用後の段階について禁止する規定を置き、また同36条の2・36条の3において、いわゆる合理的配慮の措置義務を使用者に課している。これらの条文における「障害」そして「合理的配慮」の内容自体が一つの問題であり、またこれらの条文の施行・制定により、過去の差別的措置や合理的配慮に欠ける措置について使用者がどのような措置を採らなければならないかという問題がある。今年度は、障害者雇用促進法の差別禁止・合理的配慮について、差別禁止法上の位置づけを図るとともに、その内容について検討し、発表した。23年度は、日本法及びアメリカ法での「過去の差別」に関する立法・判例・学説の補足的調査と、欧州法(ドイツ法)の調査を行った。(1)外国法データベース(Westlaw, Beck Online, Juris Online)等で関係する立法、判例、論文等を収集した。今年度はアメリカ法については、妊娠差別関係を、ドイツ法については、賃金差別関係(同一(価値)労働同一賃金関係)を中心に検索・収集した。また、日本法については、性差別禁止に関する文献を整理し、これをもとに研究会で報告を行った(下記(2)の(3))。各国法について、今年度中の収集に基づき、さらに未収集資料が判明したため、これについて引き続き24年度も調査を行うこととする。(2)出張による情報収集として、下記(1)(3)の活動を行った。(1)神戸労働法研究会(2011年7月30日、神戸大学):差別禁止法上の差別(不利益取扱い)の判断に関連すると思われる裁判例(ノースアジア大学事件)の判例報告があったため、情報収集を行った。

(2)日本労働法学会(2011年10月16日(日)、立教大学):労働組合差別の禁止関係の報告があり、性差別禁止と同様の問題状況があると思われることから、出席して情報収集を行った。(3)文献研究会(2011年10月8日(土)、神戸大学主宰):「性差別禁止:労基法4条と均等法を中心に」のタイトルで、本研究に関連して収集した文献等に基づき、日本の性差別禁止法理に関する学説の展開について報告を行った。(3)その他、古書を中心に日本法・アメリカ法・ドイツ法の文献を購入した。研究期間において、日本法・ドイツ法・アメリカ法を主な題材として、過去の差別が現在に効果をもたらしている場合の是正の法理について研究を行った。各国において、差別禁止法は「行為」としての差別(作為)を主な対象として想定している。これに対し、既に歴史的な経緯から存在に至っている、「状態」としての差別(過去の差別)は、作為が介在しないもの(不作為)も多く、意識されない、差別禁止法の直接の射程に入り難い等の理由から、是正が困難である。上記のような「状態」としての差別の典型的な例は、たとえば、過去、差別が適法だったときに形成された職務慣行(男性労働者に適した長時間労働等)、職位(男性労働者等の多数派が管理職等のポジションを占有)、それらの職位の相違や過去の査定に基づく賃金差別などである。これらの過去の差別の是正手段として、賃金差別やセクシュアル・ハラスメント等の「状態」を射程とできる差別としての構成、間接差別法理、ポジティブ・アクション等がみられる。社会法「研究実績の概要」に記入のとおり、平成24年度には、所定のドイツ法・アメリカ法の文献調査・収集を行った。ドイツ法・アメリカ法についても、これで完全ではなく、また新たな法的状態の変動(新たな下級審判決や論文等)があるため、継続調査の必要があるものの、以下のとおり、おおむね当初の予定に沿った文献収集を行った。まず、ドイツ法についてはおおむね当初の予定に沿った文献収集を行うことができた。ただし、本研究の目的が差別禁止法の施行時の使用者・社会の対応の在り方を探求するものであるところ、2006年の一般平等取扱法の制定・施行により、新たな差別類型として、セクシュアル・ハラスメント、人種等を理由とするハラスメント、差別の指示等が禁止されたところであるが、これらの禁止の実態については、まだ一般平等取扱法の施行から年数を経過していないこともあり、裁判等で問題化した事例も少ないため、なお補足調査の必要性がある。次に、アメリカ法については、前年度を補足する形で、データベース化されていない文献等を収集し、特に新しい差別禁止の手法の事例としていわゆるアファーマティブ・アクション(ポジティブ・アクション)に関する文献等に加えて、それ以外に、2009年のLedbetter事件判決と同判決に対する立法的対応であるLily Ledbetter Fair Pay Act(LLFPA)に対する学説の論文を収集した。これらの判決・立法の影響についてはまだ未知数のところが多く、下級審の裁判例も漸くデータベース等に登載されはじめたばかりであるため、同法施行後の裁判例についてはなお継続調査の必要性が高い。「研究実績の概要」に記入したとおり、平成25年度については、当初予定していたドイツ法・アメリカ法の文献調査を続行した。
心筋リプログラミング促進化合物の同定と薬理作用の解明

心臓は再生能力を有さない臓器であり、心臓障害後に心筋は再生せず線維化して心不全に至る(Ieda et al, Dev Cell 2009)。心疾患による死亡は依然多く、心不全に対する新しい治療法として再生医療が期待されている。心臓再生法として幹細胞から心筋細胞を作製して移植する方法があるが、心筋細胞作製工程が煩雑で長期間かかる、幹細胞混入による腫瘍形成の可能性、移植心筋の生着が困難などの課題が指摘されている。これに対して我々は細胞移植を必要としない次世代の心臓再生法として、心臓内の線維芽細胞をその場で直接心筋に分化転換する心筋リプログラミング法を開発した。我々はこれまでに世界に先駆けて線維芽細胞をiPS細胞を経由せず直接心筋に転換する遺伝子を発見し、さらに生体内心筋リプログラミングにより心筋梗塞マウスの心臓再生に成功している(Ieda et al, Cell 2010)。本研究では化合物ライブラリーを用いて、新規心筋リプログラミング促進化合物を同定し、さらに薬理作用を明らかにする。これにより安全で効率的な心筋リプログラミング法を確立でき、心臓再生医療の実現が大きく前進する。これまでに化合物ライブラリーを用いた心筋リプログラミング促進化合物のスクリーニングを行った。心筋誘導を促進する新規化合物を同定するため、10000種類の化合物ライブラリー用いてCell image analyzerによるハイスループットスクリーニングを行った。これまでの実験によりその中で6化合物により心筋リプログラミングが顕著に改善することを見出した。心筋リプログラミング促進化合物のスクリーニングシステムの構築に成功した。さらにこれまでの実験で6化合物で心筋リプログラミングが顕著に改善することを見出した。また化合物を用いて作製する誘導心筋細胞の分子生物学的および生理機能的解析を行った。今後は他の化合物による心筋リプログラミング促進の分子機構解明や臨床につながるヒト細胞での検討を行っていく。化合物ライブラリーを用いた心筋リプログラミング促進化合物のスクリーニングを行う。方法として心筋誘導化合物のスクリーニングは、心筋リプログラミング因子を同定した時に使用したMHC-GFPトランスジェニックマウス線維芽細胞を用いて行った。マウス線維芽細胞から心筋細胞誘導を促進する化合物を同定するため、連携研究者の東京医科歯科大学の清水重臣教授から供与される8400種類の化合物ライブラリーを用いて網羅的にスクリーニングした。具体的には心筋細胞のみGFPを発現するMHC-GFPトランスジェニックマウスの線維芽細胞にGata4/Mef2c/Tbx5を遺伝子導入して、翌日から無血清培地に化合物を添加し、心筋レポーターの発現をCell image analyzerで測定した。ヒットした化合物に関しては4週後に拍動心筋の数を計測して、機能的に成熟した心筋細胞の誘導を定量的に計測する。これまでの実験で8400化合物をスクリーニングし、6化合物で心筋リプログラミングが顕著に改善することを見出した。次にヒット化合物を用いて得られる誘導心筋細胞を分子生物学的および生理機能的に解析して、真に機能的な心筋細胞を誘導する化合物を選定した。これまでの実験で化合物を用いて誘導した心筋細胞で、様々な心筋特異的遺伝子の発現や横紋筋構造の形成をQRT-PCRや免疫染色で確認した。さらにその他の心筋蛋白の発現や心筋特異的蛋白の発現をFACSで定量的に解析した。心筋に特徴的な生理機能として細胞内カルシウム濃度の変化をRhod-3を用いて解析、活動電位の測定など詳細な生理機能の解析を行い、血清培地で誘導した心筋細胞と比較した。これまでに真に生理機能を有する心筋細胞の作製に成功している。さらにこれまでの実験で8400化合物をスクリーニングし、6化合物で心筋リプログラミングが顕著に改善することを見出した。

また化合物を用いて作製する誘導心筋細胞の分子生物学的および生理機能的解析を行った。今後は化合物による心筋リプログラミング促進の分子機構解明や臨床につながるヒト細胞での検討を行っていく。今後は他の化合物による心筋リプログラミング促進の分子機構解明や臨床につながるヒト細胞での検討を行っていく。理由心筋誘導化合物のスクリーニングで複数の新規心筋誘導化合物の同定に成功した。そのため、それぞれの機能を測定するため、来年度は新規心筋誘導化合物で作製した心筋細胞の遺伝子発現プロファイル、生理的機能の検討などを行う。使用計画心筋リプログラミングを促進する新規心筋誘導化合物を同定する検討を行った。その結果、複数の新規心筋誘導化合物を同定した。そのためこれら新規心筋誘導化合物が心筋リプログラミングに関与するか検討するため、マイクロアレイ解析や生理的機能解析を追加で行う。そのため新規化合物の機能を解析するため、来年度は新規心筋誘導化合物で作製した心筋細胞の機能、分子生物学的解析の検討などを行う。使用計画新規心筋誘導化合物で作製した心筋細胞の解析のために、マイクロアレイやパッチクランプを追加で行う。
線条体入力ニューロンとレセプターサブユニットの解析

1.VGluT1, VGluT2を指標にした大脳皮質および視床由来の線条体グルタミン酸終末の同定大脳基底核は線条体・淡蒼球・視床下核・黒質など大脳皮質下諸核の連合体で大脳皮質および視床からグルタミン酸をトランスミッターとする興奮性入力を受けている.我々は、グルタミン酸神経終末のシナプス小胞性トランスポーターであるVGluT1とVGluT2の抗体をモルモットとウサギとで作製・精製し、この両者が大脳皮質において大脳皮質由来および視床由来ののグルタミン酸終末とで使い分けられていることを論文発表し(Fujiyama et al., J.Comp.Neurol., 2001)、これはトレーサー実験でも証明した(Fujiyama et al., Eur.J.Neurosci., 2004)。光顕的に観察すると、線条体はVGluT1, VGluT2ともに免疫陽性終末が見られた。さらに2重免疫電顕を行うと、大脳皮質由来の神経終末の70%近くはmedium spiny neuronのspine headに、視床由来の神経終末は60%がdendritc shaftにシナプスしていること、視床由来の神経終末は皮質由来のものより大型であることが観察された(Fujiyama et.al., submitted)。2.VGluT1, VGluT2を指標にした線条体における大脳皮質および視床由来のグルタミン酸入力とグルタミン酸レセプターとの関係:イオンチャンネル型グルタミン酸レセプターであるNMDA1, GluR1, GluR2/3はいずれもVGluT1, VGluT2両者とシナプス形成が認められたが、VGluT1および2陽性シナプスにおいて30%にpresynaptic siteに存在するGluR2/3が見られた.大脳皮質においてはこのような所見は得られなかった。線条体におけるpresynapticAMPA receptorは線条体のup and down stateを形態学的に説明する基盤を与えるものと考えられる(Fujiyama et al., Eur.J.Neurosci., 2004)。1,VGluT1,VGluT2を指標にした大脳皮質および視床由来の線条体グルタミン酸終末の同定大脳基底核は線条体・淡蒼球・視床下核・黒質など大脳皮質下諸核の連合体で大脳皮質および視床からグルタミン酸をトランスミッターとする興奮性入力を受けている.我々は、グルタミン酸神経終末のシナプス小胞性トランスポーターであるVGluT1とVGluT2の抗体をモルモットとウサギとで作製・精製し、この両者が大脳皮質において大脳皮質由来および視床由来のグルタミン酸終末とで使い分けられていることを論文発表し(Fujiyama et al.,J.Comp.Neurol.,2001)、これはトレーサー実験でも証明した。光顕的に観察すると、線条体はVGluT1,VGluT2ともに免疫陽性終末が見られた。さらに2重免疫電顕を行うと、大脳皮質由来の神経終末の70%近くはmedium spiny neuronのspine headに、視床由来の神経終末は60%がdendritc shaftにシナプスしていること、視床由来の神経終末は皮質由来のものより大型であることが観察された。2.VGluT1,VGluT2を指標にした線条体における大脳皮質および視床由来のグルタミン酸入力とグルタミン酸レセプターとの関係:

グルタミン酸レセプターのサブユニットコンフォメーションに対してpresynaptic terminalの違いがどのような影響を与えうるのかを、同じグルタミン酸入力であるVGluT1,VGluT2とグルタミン酸レセプターとの2重免疫電顕にて調べた。イオンチャンネル型グルタミン酸レセプターであるNMDA1,GluR1,GluR2/3はいずれもVGluT1,VGluT2両者とシナプス形成が認められたが、VGluT1および2陽性シナプスにおいて30%にpresynaptic siteに存在するGluR2/3が見られた.大脳皮質においてはこのような所見は得られなかった。線条体におけるpresynapticAMPA receptorは線条体のup and down stateを形態学的に説明する基盤を与えるものと考えられる。1,VGluT1,VGluT2を指標にした大脳皮質および視床由来の線条体グルタミン酸終末の同定大脳基底核は線条体・淡蒼球・視床下核・黒質など大脳皮質下諸核の連合体で大脳皮質および視床からグルタミン酸をトランスミッターとする興奮性入力を受けている.我々は、グルタミン酸神経終末のシナプス小胞性トランスポーターであるVGluT1とVGluT2の抗体をモルモットとウサギとで作製・精製し、この両者が大脳皮質において大脳皮質由来および視床由来ののグルタミン酸終末とで使い分けられていることを論文発表し(Fujiyama et al., J.Comp.Neurol.,2001)、これはトレーサー実験でも証明した(Fujiyama et al., Eur.J.Neurosci.,2004)。光顕的に観察すると、線条体はVGluT1,VGluT2ともに免疫陽性終末が見られた。さらに2重免疫電顕を行うと、大脳皮質由来の神経終末の70%近くはmedium spiny neuronのspine headに、視床由来の神経終末は60%がdendritcshaftにシナプスしていること、視床由来の神経終末は皮質由来のものより大型であることが観察された(Fujiyama et al., submitted)。2.VGluT1,VGluT2を指標にした線条体における大脳皮質および視床由来のグルタミン酸入力とグルタミン酸レセプターとの関係:イオンチャンネル型グルタミン酸レセプターであるNMDA1,GluR1,GluR2/3はいずれもVGluT1,VGluT2両者とシナプス形成が認められたが、VGluT1および2陽性シナプスにおいて30%にpresynaptic siteに存在するGluR2/3が見られた.大脳皮質においてはこのような所見は得られなかった。線条体におけるpresynapticAMPA receptorは線条体のupand down stateを形態学的に説明する基盤を与えるものと考えられる(Fujiyama et al., Eur.J.Neurosci.,2004)。
東アジアにおける儒教の基礎的研究

本研究は、東アジアにおける儒教を考える際に、その原点と末端、中心と周縁の双方に注意を払うことによって、中国・日本における儒教の展開と伝播を考察し、その本質を究明することを目指したものである。まず、東アジア儒教の原点・中心研究では、日本中国学会大会の発表等において、董仲舒の対策文書に関する福井重雅氏の考証の方法に対する疑義を提起した。また、董仲舒対策第三策の「六藝之科・孔子之術」に対する新たな解釈を提示し、対策が当時の朝野にいかなる影響を与え、またこれがいかに漢代思想史に位置づけられるのかについても卑見を提示した。次に「周縁的研究」では、清朝文化の日本への東伝という文化交渉の現象の中でも、とりわけ特徴的な一例である清朝の木活字出版「聚珍版」の東伝が日本の近世木活字の盛行をもたらした可能性について考え、清朝で生み出された木活字による出版を「雅馴」と見なす観念が、近世日本にも受容されていたことを確認し、中国を源流とする儒教思想が日本の社会へ受容されていったことと密接な関連があることが確かめられた。また2010年からは、大阪を代表する漢学塾であった泊園書院に関する研究も行ってきた。その第一弾として、藤澤南岳の蒐書思想を自筆稿本『名士九命草』の「藏書」を中心に解き明かすことを通じて、近代日本における民間の儒学・儒者の実態を明らかにすることを試みた。次に、これまで全く手付かずであった藤澤東〓・南岳・黄鵲・黄坡先生の自筆稿本の目録の整理を行い、「関西大学泊園文庫蔵自筆稿本目録稿-その(1)-」を提出した。以後自筆稿本目録完成まで順次発表していく予定である。本研究は、儒教が国教化された前漢代の儒教研究を「中心的原点的研究」とし、儒教が社会の様々な方面に影響を与えていた清代の儒教や江戸期の日本儒教の研究を「周縁的研究」と見なして、「内」と「外」、「本」と「末」の双方より実証的に検討を重ね、東アジアにおける儒教を体系的に捉え直そうとするものである。その過程において、中国及び日本の文化に儒教が如何に影響を与ええたのか、ひいては、儒教とは何かを解明するための一助としていきたいと考えている。まず、「中心的原点的研究」の「前漢代における儒教国教化の研究」では、董仲舒対策と前漢代における経学理論の形成の検討を終了し、すでにそれぞれを報告にまとめあげた。これらは、近日中に何らかの形で公開する予定である。次に「周縁的研究」では、清朝文化の日本への東伝という文化交渉の現象の中でも、とりわけ特徴的な一例である清朝の木活字出版「聚珍版」の東伝が日本の近世木活字の盛行をもたらした可能性について考えた。清朝で形作られた「聚珍版」の「雅馴」という独自の観念が我が国に伝えられ、受容されたことは、すでに定説となっているが、それがどの程度、どのような形で受容されたかについては、いまだ議論をされたことがない。そこで、本報告「「聚珍版」の東伝と我が国の近世木活字出版文化の形成」では、我が国に伝存する近世木活字の版本や江戸時代末期の文章より「聚珍版」の用例とその観念を直接確認した結果、「聚珍版」に関する多数の用例が発見され、清朝で生み出された木活字による出版を「雅馴」と見なす観念が、近世日本にも受容されていたことが理解されたのである。こうした事例は、中国を源流とする儒教思想が日本の社会へ受容されていったことと密接な関連があり、今後注意を要することであろう。

本研究は、東アジアにおける儒教を考える際に、その原点と末端、中心と周縁の双方に注意を払うことによって、中国・日本における儒教の展開と伝播を考察し、その本質を究明することを目指したものである。まず、東アジア儒教の原点・中心研究では、日本中国学会・第六十二回大会において、「董仲舒対策の真偽説の再検討」と題する発表を行った。本発表では、董仲舒の対策文書に関する福井重雅氏の考証の方法について検討を行い、漢代思想史における董仲舒対策の位置付けについても言及した。また、本年度の三月、日本中国学会第一回若手シンポジウム「中国学の新局面」において、「董仲舒対策とその周辺」と題する発表を行なった。董仲舒によって対策が行われた時期の周辺状況を、諸博士や五経博士の実態と武帝即位直後の今文・古文学派と諸子の情況を考察することを通じて、董仲舒対策第三策の「六藝之科・孔子之術」に対する新たな解釈を提示し、対策が当時の朝野にいかなる影響を与えたかについて検討を加えている。次に、東アジア儒教の末端・周縁研究においても、研究成果の一部を発表している。まず、「関西大学泊園文庫蔵自筆稿本目録稿-その(1)-」を提出した。筆者は、これまで全く手付かずであった藤澤東〓・南岳・黄鵲・黄坡先生の手稿の整理に着手しており、本稿はその第一弾で、以後自筆稿本目録完成まで順次発表していく予定である。また、「明治初期における泊園書院の学術-自筆稿本資料を中心に-」と題する発表も行った。江戸末期から大正までの激動の時代を駆け抜けた藤澤南岳は、大阪の学問の顔であり、その実力は、東京帝国大学の教官に招聘されるほどであった。しかし、今日の藤澤南岳に対する研究はまことに寂寞たるものである。本発表では、藤澤南岳の蔵書思想を自筆稿本『名士九命草』の「藏書」を中心に解き明かすことを通じて、近代日本における民間の儒学・儒者の実態を明らかにすることを試みたのである。
新しい免疫抑制因子リポコルチン-1による腫瘍局所の免疫能調節機構の解明

本研究において、人担癌状態におけるリポコルチン-1(LC1)の発現及び免疫反応に対する効果について解析をすすめてきたが、その研究成果を以下に述べる。1.免疫組織染色により腫瘍間質内の炎症性細胞(主にマクロファージ)の胞体にLC1の染色性が得られた。2.FACSを用いた解析により、末梢血単核球中のLewM3、LC1両者陽性細胞の比率は健常人の約5%に対して癌患者は約20%と増加を認めた。(n=4)3.SDS-PAGEおよびWestern blotの結果、胃癌患者の腹水中から分子量37KDa、35KDaのLC1蛋白が検出された。4.健常人末梢血中から分離したリンパ球(2×10^5個/well)をMitogen刺激する培養系に、リコンビナントマウスLC1(r-LC1)を0.2、2.0、20μg/mlの各濃度で添加すると、そのDNA合成能はcontrolに比べ10%、90%、99%とr-LC1濃度依存性に抑制された。また、癌患者より採取した腹水や脾細胞培養上清をr-LC1の代わりに添加しても同様の抑制効果を認めた。5.この培養系にLC1抗ウサギ血清を添加すると、濃度依存性に抑制効果は解除された。6.進行胃癌患者末梢血中リンパ球のMitogen反応は健常人に比べ約30%低下していたが、nylon woolカラム処理でadherent cellを除去することにより健常人レベルまで回復した。以上からヒトの担癌状態においてもLC1が産生されることが明らかになった。また、Mitogen反応に対しLC1特異的な抑制効果を示すことから、LC1は癌患者の免疫抑制に深く関与している可能性が示唆された。癌進行に従いLC1はより強く発現されると推測され、癌進行度とLC1発現との関連ならびに血中LC1蛋白の定性について検討する予定である。担癌宿主の免疫能低下の機序については不明な点が多い。最近,マウスの担癌モデルにおいて脾臓内にリポコルチン-1を産生するマクロファージが出現し,免疫抑制的に働くことが発見された。いわゆるサプレッサーマクロファージの一つと考えられるが,人癌におけるリポコルチン-1産生マクロファージの存在あるいは各種免疫反応に対するリポコルチン-1の効果についてはほとんど知られていない。本研究は担癌患者におけるリポコルチン-1産生マクロファージの同定と生物学的意義の解明を目指すものである。本年度の研究成果を以下に述べる。1.腫瘍局所におけるリポコルチン-1の発現を酵素抗体間接法による免疫組織染色にて検討した。胃癌,大腸癌の腫瘍間質内に局在するマクロファージ系細胞の一部に染色性が認められ,リポコルチン-1産生マクロファージの存在が示唆された。しかし染色性は強いものではなく,染色方法の改善あるいはin situ hybridizationによる検出が必要と思われる。また,リポコルチン-1陽性細胞の性状を明らかにするために,2重染色法によって細胞表面マーカーの解析を進めている。2.人の免疫反応に対するリポコルチン-1の影響については健常人と担癌患者の末梢血リンパ球の幼若化反応について検討した。ConA,PHA,PWM,IL-2添加培養系にリポコルチン-1を各種濃度で加えたところ,DNA合成能はリポコルチン-1の用量依存性に抑制され,最大40%の抑制率を示した。

一方,この培養系に抗リポコルチン-1抗体を添加したところ抑制解除の傾向を認め,リポコルチン-1特異的な抑制機構であることが示された。以上から人癌においてもリポコルチン-1産生マクロファージによる免疫抑制機構が存在する可能性は極めて高いものと推察された。本研究において、人担癌状態におけるリポコルチン-1(LC1)の発現及び免疫反応に対する効果について解析をすすめてきたが、その研究成果を以下に述べる。1.免疫組織染色により腫瘍間質内の炎症性細胞(主にマクロファージ)の胞体にLC1の染色性が得られた。2.FACSを用いた解析により、末梢血単核球中のLewM3、LC1両者陽性細胞の比率は健常人の約5%に対して癌患者は約20%と増加を認めた。(n=4)3.SDS-PAGEおよびWestern blotの結果、胃癌患者の腹水中から分子量37KDa、35KDaのLC1蛋白が検出された。4.健常人末梢血中から分離したリンパ球(2×10^5個/well)をMitogen刺激する培養系に、リコンビナントマウスLC1(r-LC1)を0.2、2.0、20μg/mlの各濃度で添加すると、そのDNA合成能はcontrolに比べ10%、90%、99%とr-LC1濃度依存性に抑制された。また、癌患者より採取した腹水や脾細胞培養上清をr-LC1の代わりに添加しても同様の抑制効果を認めた。5.この培養系にLC1抗ウサギ血清を添加すると、濃度依存性に抑制効果は解除された。6.進行胃癌患者末梢血中リンパ球のMitogen反応は健常人に比べ約30%低下していたが、nylon woolカラム処理でadherent cellを除去することにより健常人レベルまで回復した。以上からヒトの担癌状態においてもLC1が産生されることが明らかになった。また、Mitogen反応に対しLC1特異的な抑制効果を示すことから、LC1は癌患者の免疫抑制に深く関与している可能性が示唆された。癌進行に従いLC1はより強く発現されると推測され、癌進行度とLC1発現との関連ならびに血中LC1蛋白の定性について検討する予定である。
腹膜播種はなぜ治療困難なのか？‐マイクロRNAとエクソソームに焦点を当てた解析

「なぜ腹膜播種した癌細胞は治療不可能なのか?」その原因がマイクロRNA (miRNA)およびがん細胞が分泌するエクソソームによるものではないかを検討することを目的とした。まず、卵巣がん細胞に抗がん剤であるパクリタキセル(PTX)持続暴露を行い、発現変動したmiRNAの網羅的解析を通じて、いわゆる「腹膜播種関連miRNA」を同定し、その役割を検討した。親株と比べて、発現が減少しているmiRNAを見出し、その中でも、miR-194はPTX耐性に関与していることを証明した。さらに、卵巣がん細胞が分泌するエクソソームが腹膜中皮細胞に作用して、がんが浸潤しやすい環境を整えていることを証明した。まずは低酸素刺激による変動するマイクロRNAの網羅的解析を行った。卵巣がん細胞株CaOV3およびRMUG-Sに低酸素刺激(1% O2, 48時間)を与えた上で、RNAを抽出し、そのmiRNAの発現を正酸素状態(20% O2)を対照としてTaqman miRNA microarray (Applied Biosystem)を用いて、網羅的に解析し、その両細胞で低酸素刺激によって発現が変動するmiRNAのリストを作成した。4種のmiRNAの発現が低下し、5種のmiRNAの発現が増加していることが判明した。それら候補miRNAが制御する可能性がある分子をTargetScanやDiana-Tといったアルゴリズムソフトを用いてin silicoに検討し、hsa-mir199a-3p (以下miR-199a-3p)がチロシン受容体キナーゼの一つであるc-Metの発現を制御することわかった。続いて、卵巣癌細胞株におけるmiR-199a-3pの発現量とc-Metの発現量の検討を行い、両者が逆相関の関係にあることを見出した。さらにmiR-199a-3pの強制導入および阻害剤導入によるc-Metの発現変動を解析し、miR-199a-3pの卵巣癌細胞株に導入することにより、c-Metの発現が減少し、さらに癌細胞の接着能、浸潤能が有意に抑制されることが判明した。最後にmiR-199a-3pの導入により卵巣癌腹膜播種を抑制できるかの検討を実験動物マウスで検討した。卵巣がん細胞株SKOV3にmiR-199a-3pの配列を含んだレンチウィルスベクター(miRNA Lentivectors, Biosettia社)を導入し、miRNA安定発現株を作成、それを腹腔内投与することにより形成される腹膜播種がコントロールと比べて抑制されるかの検討を行った。miR-199a-3pの遺伝子導入により、播種病変、腹水形成が著明に抑制された。これらの成果をOncotargetに投稿し、Acceptされた。癌が腹膜播種として再発した場合、外科切除はまず不可能であり、多くの場合、頼みの綱である抗がん剤治療も一時的にしか奏功しない。「なぜ腹膜播種した癌細胞は治療不可能なのか?」、その原因がマイクロRNA (miRNA)によるepigenicな刺激によるものではないかを検討することが本研究の主目的である。具体的には、癌細胞に1低酸素刺激、2抗がん剤持続暴露を行い、発現変動したmiRNAの網羅的解析を通じて、いわゆる&#8223;腹膜播種関連miRNA"を同定し、その役割を検討し、かつ、それを標的とした新しい分子治療の可能性を提示したいと考えている。平成27年度は前年度よりのIn Vitro実験、In vivo実験および卵巣癌組織検体におけるmiRNAプールの作成を引き続いて行った。具体的にはパクリタキセル(PTX)耐性卵巣癌細胞株を作成した。卵巣癌細胞株SKOV3ip1とHeyA-8に対して、PTX 10nMと低濃度から培養を開始、3か月かけて徐々にPTXの濃度を挙げて継続培養し、300nMでも細胞死が誘導されないPTX耐性株を作成した。これらの作成した細胞株を用いて、PTX耐性化により変動するmiRNAの網羅的解析をTaqman miRNAmicroarrayを用いて行い、親株と比べて、発現が有意に減少しているmiRNAをいくつか見いだした。その中でも、miR-194に焦点をあてて、さらなる解析を進めた。miR-194の強制導入により、In vitro cell proliferation assayでパクリタキセル耐性株における耐性が一部解除されることを確認した。さらにin silico解析を行い、miR-194の標的として、MDM-2 (Mouse double minute 2 homolog)を抽出した。MDM-2は癌抑制作用を有するp53の活動を抑制的に調整する。すなわち、パクリタキセルの持続暴露により、miR-194の発現が減少した結果、MDM-2の発現が増強し、p53の発現が抑制され、パクリタキセルに対する耐性を獲得するという新しい耐性化のメカニズムを見出した。平成26年度に立案した通りに、パクリタキセルの耐性に関わるmiRNAを同定し、その一つについては役割解明に至っている。今後、論文投稿予定である。現時点では、実験は計画通りに進行している。平成28年度は卵巣癌細胞が分泌するエクソソームに焦点をあてた。漿液性卵巣癌細胞株HeyA-8およびTYK-nuそしてコントロールとして不死化した正常卵巣上皮細胞(IOSE)を用いてエクソソームを抽出し、エクソソームを蛍光色素で標識し、エクソソームの腹膜中皮細胞への取り込みを確認した。さらに細胞の形態を観察したところ、もともと敷石上の腹膜中皮細胞が、紡錘状に変化していた。

そこで詳細な解析を加え、エクソソームにCD44が含まれること、腹膜中皮細胞にそのCD44が伝達されること、それにより、腹膜中皮細胞の上皮間葉移行が起こっていることを確認した。さらにエクソソーム中に含まれるmiRNAに焦点を当てた。マイクロアレイ解析を行い、卵巣癌細胞エクソソームに特異的に高発現している候補マイクロRNAを検討し、miR-99aを抽出した。58名の卵巣癌患者、26名の卵巣良性腫瘍患者および12名の健常女性より採取した血清中において、miR-99aの発現を検証し、バイオマーカーとしての可能性を検討した。卵巣癌患者の血清中において、miR-99a-5pの発現は健常者と比べて有意に上昇していた(3.55倍)。ROC曲線ではAUC 0.82で、カットオフ値1.57(健常女性の平均を1とした場合)とすると、感度60%、特異度84%であった。I期卵巣癌(n=26)での発現が2.64であったのに対して、II-IV期卵巣癌(n=32)での発現は4.55であり、有意差はなかったものの、その発現は病勢をある程度反映していた。術前・術後の血清中miR-99aの発現を比較すると(n = 19)、術後に有意な減少を認め(p=0.04)、miR-99aの発現が腫瘍由来である可能性が示唆された。すなわち、血清miR-99aの発現は卵巣癌の病勢を反映しており、新たなバイオマーカーとなりうる可能性が示唆された。「なぜ腹膜播種した癌細胞は治療不可能なのか?」その原因がマイクロRNA (miRNA)およびがん細胞が分泌するエクソソームによるものではないかを検討することを目的とした。まず、卵巣がん細胞に抗がん剤であるパクリタキセル(PTX)持続暴露を行い、発現変動したmiRNAの網羅的解析を通じて、いわゆる「腹膜播種関連miRNA」を同定し、その役割を検討した。親株と比べて、発現が減少しているmiRNAを見出し、その中でも、miR-194はPTX耐性に関与していることを証明した。さらに、卵巣がん細胞が分泌するエクソソームが腹膜中皮細胞に作用して、がんが浸潤しやすい環境を整えていることを証明した。上述した通り、計画通り実験は進行している。今回のTaqman miRNAmicroarrayでいくつかの候補miRNAを抽出している。引き続いて、それらのmiRNAの機能解析を行っていく。また、当初の計画通り、何故、腹膜播種の過程で卵巣癌細胞において、miRNAのgainまたはlossが起こるのかに関して、腹水中に存在する骨髄由来細胞が放出するエクソソームに焦点をあてた解析を行う。まず、多量の腹水を有する進行卵巣癌から腹水を採取し、骨髄球のマーカーであるCD11b抗原を標識として、マグネットビーズを用いて、骨髄由来細胞を回収し、その細胞の培養上清よりエクソソームを抽出する。現在、卵巣癌細胞株HeyA-8を用いて、高純度エクソソーム抽出のプロトコール作成に成功している。抽出したエクソソームよりRNAを抽出し、Taqman miRNAmicroarrayで“腹膜播種関連miRNA"の発現を検討する。コントロールにはSV-40を導入して不死化させた卵巣上皮細胞を用いる。
双対性が示唆する幾何学の研究

箙(quiver)とその変異(mutation)は,クラスター代数とともに,可積分系・低次元トポロジー・表現論・代数幾何学・WKB解析などさまざまな分野に共通して現れる構造として注目を集めている.特に,箙の変異列(mutation sequence)から系統的にゲージ理論や3次元双曲多様体を構成する方法が提唱され,その不変量を数学的に厳密に解析する手段の開発が必要となった.加藤は寺嶋郁二氏(東京工業大学)との共同研究において、与えられた箙変異の列γ(quiver mutation loop =クラスター代数のexchange graph上のループに相当)に対し、分配q級数Z(γ)と呼ばれる母関数を定義したがこの考え方は、quiver mutation loopのような周期境界条件ではなく、初期条件のみを指定した有限区間(quiver mutation sequence)に対しても適用可能である。この場合は終状態に対する自由端条件を表すために、c-vectorで次数付けされた非可換トーラスに値を持つ関数として考えるのが自然である。加藤は、寺嶋郁二氏と水野勇磨氏(ともに東京工業大学)との共同研究において、Boltzmann weightをq二項係数とする分配関数(partition function)を導入し、その性質を調べた。この分配関数は、実は引数の異なる2つの分配q級数の比として書けることが証明できる。その結果、分配関数もまた分配q級数が持つ様々な良い性質を引き継いでいる。たとえば、q二項係数が満たすStanleyの関係式は、分配q級数がペンタゴン関係式を満たすことの帰結として導くことができる。ずっと健康であった母親が重い病にかかっていることが判明し、通院、介護、入退院、葬儀、各種手続きなどに追われた。授業や各種委員の業務など代理を頼めない最低限の仕事をこなすのに精一杯で、時間的にも精神的にも、研究に専念できる状況ではなかった。しばらくして、ようやく日常生活を取り戻せるかと思ったが、今度は父が体調を崩し、再び介護や通院に時間を割かざるを得なくなった。分配q級数や分配関数は組合せ論的データのみから定義され、箙が表す数学的対象の詳細には依らないので、双対性の背後にある共通の性質や量子化の機構を追究する上で役立つと期待される。引き続き、圏論的なモノドロミー問題との関わりを追究してゆく。特に、3次元双曲多様体の不変量としての意味付けについて見通しがついてきたので、ぜひ追究したい。共同研究者の協力もあって、辛うじて一編のプレプリントを上梓することができたが、残念ながら、研究が予定通りには進んでいない。

この分配関数は、実は引数の異なる2つの分配q級数の比として書けることが証明できる。その結果、分配関数もまた分配q級数が持つ様々な良い性質を引き継いでいる。たとえば、q二項係数が満たすStanleyの関係式は、分配q級数がペンタゴン関係式を満たすことの帰結として導くことができる。最近母親を看取ったが、その精神的ダメージからようやく回復できるかと思われた矢先、今度は父が体調を崩して緊急入院するなど、通院、介護、入退院、各種手続きなどに再び忙殺されることとなった。授業や各種委員の業務など代理を頼めない最低限の仕事をこなすのに精一杯で、時間的にも精神的にも、なかなか研究に専念することができない。残念ながら、研究は予定通りには進んでいない。箙(quiver)とその変異(mutation)は,クラスター代数とともに,可積分系・低次元トポロジー・表現論・代数幾何学・WKB解析などさまざまな分野に共通して現れる構造として注目を集めている.特に,箙の変異列(mutation sequence)から系統的にゲージ理論や3次元双曲多様体を構成する方法が提唱され,その不変量を数学的に厳密に解析する手段の開発が必要となった.加藤は寺嶋郁二氏(東京工業大学)との共同研究において、与えられた箙変異の列γ(quiver mutation loop =クラスター代数のexchange graph上のループに相当)に対し、分配q級数Z(γ)と呼ばれる母関数を定義したがこの考え方は、quiver mutation loopのような周期境界条件ではなく、初期条件のみを指定した有限区間(quiver mutation sequence)に対しても適用可能である。この場合は終状態に対する自由端条件を表すために、c-vectorで次数付けされた非可換トーラスに値を持つ関数として考えるのが自然である。加藤は、寺嶋郁二氏と水野勇磨氏(ともに東京工業大学)との共同研究において、Boltzmann weightをq二項係数とする分配関数(partition function)を導入し、その性質を調べた。ずっと健康であった母親が重い病にかかっていることが判明し、通院、介護、入退院、葬儀、各種手続きなどに追われた。授業や各種委員の業務など代理を頼めない最低限の仕事をこなすのに精一杯で、時間的にも精神的にも、研究に専念できる状況ではなかった。しばらくして、ようやく日常生活を取り戻せるかと思ったが、今度は父が体調を崩し、再び介護や通院に時間を割かざるを得なくなった。
セイヨウナタネにおける自家和合性原因の解明

自家不和合性遺伝子座にはSRK、SP11が座乗し、他数の自家不和合性対立遺伝子を集団中に持つ。これらの対立遺伝子間には優劣性が存在する。B. napus5は基本ゲノム種由来の自家不和合性遺伝子座を2つ持つ。各3品種の2つの自家不和合性遺伝子座は、それぞれ優劣関係のあるS対立遺伝子を持っていた。優性側の自家不和合性遺伝子が機能を失っていた。優性側の遺伝子が機能を失い、さらに劣性側の遺伝子発現を抑えることで、B. napusが自家和合性になると示された。他の倍数体種であるB. juncea、B. carinataについても解析を行った。これら2種は、それぞれB. rapaとB. nigra B. oleraceaとB. nigraを基本ゲノム種としている。両種は、B. napusと同様の原因で自家和合性になった可能性が示唆された。異質倍数体種は、基本ゲノム種の集団が交わる領域で成立したと考えられている。しかし、種間不和合性や雑種胚致死など生殖的障壁、染色体の倍加の必要性など、異質倍数体が生じる可能性は低く、集団内での個体数は少ないと考えられる。個体数が少ないときは、自家和合性の適応度が高いと考えられている。優劣関係を持ったS対立遺伝子の組み合わせでは、優性側に機能を失う突然変異が存在するだけで、即座に自家和合性を獲得できる。優劣関係のあるS対立遺伝子遺伝子の組み合わせは、異質倍数体種が成立するためには重要であったと推察される。自家和合性を示すセイヨウナタネ(Brassica napus)のWestar品種を実験材料として用いた。ノーザンブロット分析の結果、花粉側の認識分子SP11の転写が、class I, class IIともに起こっていないことを明らかにした。BnSP11-1,BnSP11-13を含むファージゲノムクローンを単離し塩基配列を決定した結果、BnSP11-1には翻訳開始コドンから108bp上流に3604bpの塩基配列の挿入と第1イントロンに、21bpの欠失を見いだした。挿入していた配列には、BamHIとMboIの認識サイトが繰返し存在する領域が存在した。また、BnSP11-13は3',5'-non cording領域それぞれ1kbpを含む範囲で、BoSP11-15と比較して完全に保存されていた。SP11はclass Iとclass II間に優劣関係が存在し、class IIはclass Iに対し、常に劣性を示す。この劣性はSP11の転写抑制によるものであり、エピジェネティックに制御されていることが示されている(Shiba et al,2002)。人為的に様々な組合わせでclass I, class IIの種間雑種を作成したところ、RT-PCRによってclass IIの転写が確認できなかった。BnSP11-13はBnSP11-1によって転写が抑制されたと考えられるが、class IIの転写抑制には、かならずしもclass Iの転写が必要でないこと、対立遺伝子座間ではなくB.napusの様な異質倍数体の同祖染色体間でも関係が維持される点が興味深い。Sハプロタイプを同定した51品種のうち、約半分がBnS-1,BnS-13の組合わせであった。由来の異なるこれらの品種を用い、SP11のノーザンブロット分析を行なうと、Westar同様にSP11の転写が抑制されていた。サザンブロット分析の結果、これらすべてのBnSP11-1に3.6kbpの挿入を確認した。異なるSハプロタイプを有する品種Bronowskiでは柱頭側のSRKが機能していないことを明らかにした。セイヨウナタネ(Brassica napus)は自家和合性である。自家不和合性成を持つB.rapaとB.oleraceaから成立した、複二倍体種である。人為的に複二倍体を作成すると、自家不和合性を示す。自家和合性B.napus品種Wentarの原因は、優劣性による花粉側因子の転写抑制とゲノム構造の変化によるSP11の機能喪失であった。自家和合性品種のBronowskiでは柱頭側の認識分子であるSRKが機能していないことを示した。ゲノムライブラリーからクローンを単離し、塩基配列を決定したところ、第1エキソンに欠失がみられた。このことによるフレームシフトが原因で、機能を失ったことが考えられた。また第7エキソンに360bpの挿入がみられた。同様に、異なるSハプロタイプを有するN344系統でもSRKに7塩基の欠失がみられ、そのことによって機能を失い、自家和合性になったと考えられた。B.napus51品種のうち、多くは花粉側で優性を示すClassIと劣性のclassIIの組合せであった。しかし、10系統はclass IIどうしの組合せであり、B.oleracea S-15とB.rapa S-29の組合せであった。ノーザンブロット分析の結果、B.oleracea S-15 SP11が優性となり転写していることを示した。セイヨウナタネ(B.napus)はB.rapaとB.oleraceaの複二倍体種である。禹の三角形を構成するB.nigraとの複二倍体種であるB.junceaとB.carinataのSハプロタイプを同定した。

これらの種においてもB.napusと同様に、class Iとclass IIの組合せであった。複二倍体種が自家和合性になるには優劣関係のあるSハプロタイプの組合せが必要であると結論づけた。自家不和合性遺伝子座にはSRK、SP11が座乗し、他数の自家不和合性対立遺伝子を集団中に持つ。これらの対立遺伝子間には優劣性が存在する。B. napus5は基本ゲノム種由来の自家不和合性遺伝子座を2つ持つ。各3品種の2つの自家不和合性遺伝子座は、それぞれ優劣関係のあるS対立遺伝子を持っていた。優性側の自家不和合性遺伝子が機能を失っていた。優性側の遺伝子が機能を失い、さらに劣性側の遺伝子発現を抑えることで、B. napusが自家和合性になると示された。他の倍数体種であるB. juncea、B. carinataについても解析を行った。これら2種は、それぞれB. rapaとB. nigra B. oleraceaとB. nigraを基本ゲノム種としている。両種は、B. napusと同様の原因で自家和合性になった可能性が示唆された。異質倍数体種は、基本ゲノム種の集団が交わる領域で成立したと考えられている。しかし、種間不和合性や雑種胚致死など生殖的障壁、染色体の倍加の必要性など、異質倍数体が生じる可能性は低く、集団内での個体数は少ないと考えられる。個体数が少ないときは、自家和合性の適応度が高いと考えられている。優劣関係を持ったS対立遺伝子の組み合わせでは、優性側に機能を失う突然変異が存在するだけで、即座に自家和合性を獲得できる。優劣関係のあるS対立遺伝子遺伝子の組み合わせは、異質倍数体種が成立するためには重要であったと推察される。