hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
輪作体系に基づくトウモロコシへのアーバスキュラー菌根群集の貢献度の推定

現在までにAM菌のリン吸収能と作付体系を活用しリン利用効率を分子生物学視点から検証し,AM菌のリン利用効率に関連する要因を検討した報告は少ない。もしAM菌を活用した栽培体系の実用化ができれば様々なAM菌種を,栽培する作物や利用する環境に応じて使い分けることも将来的には可能になると予想される。また日本の畑に生息する様々なAM菌種を「遺伝資源」として収集することで,これらの菌種がどのような植物種にどのような環境下で効果を発揮できるのか検討できる。本研究課題では日本国内の作物栽培においてAM菌をリン肥料の代替として定期的に利用するための条件整理の基盤形成を行うことを本研究は位置づけている。
人工相分離組織を有する非平衡層状物質の組織変化とパターン形成

1.広い2相領域(Ge+Cu_3Ge)を有するCu-Ge合金系2層膜をSiO_2基板上に作製し,2相領域内でアニールした際の組織変化について,走査型電子顕微鏡法(SEM),オージェ電子分光法(AES),透過型電子顕微鏡法(TEM),X線回折(XRD)により調べた結果,次の事柄が明らかとなった。(1)作製法の違い(スパッターか真空蒸着か),作製条件の違い(基板の温度,層の厚さの違い)により、得られる2層膜の構造は,Cu/非晶質(a-)Ge/SiO_2,Cu/結晶質(c-)Ge/SiO_2,Cu_3Ge/a-Ge/SiO_2となる。(3) Cu/c-Ge/SiO_2の2層膜をアニールしても,表面にパターンは現れない。2.相分離組織が形成されるAl/Ge,Al/SiおよびFe/Mo合金系の2層膜をSiO_2基板上に作製し,相分離領域内でアニールした際の組織変化をSEM,ABS,TEM,XRDにより調べた結果,次の事柄が明らかとなった。(2) c-Geクラスターの示すパターンの種類(フラクタル,デンドライトなど)およびクラスターの成長速度は,作製法の違いにより異なる。(4) Fe/Mo/SiO_2の2層膜に形成される準安定相の形態は,アニール温度の違いにより異なる。
ブルーリ潰瘍と他のskin NTDsに対する簡易遺伝子診断法の開発

本研究はLAMP法またはRPA法とDNAクロマトグラフィを組み合わせた、非結核性抗酸菌皮膚感染症であるブルーリ潰瘍と、皮膚病変を呈する顧みられない熱帯病を同時に診断するmultiplexな皮膚感染症簡易遺伝子診断法の確立を目的として行われる。本法の確立により、誰でも実施可能な、簡便・正確な診断が可能になることで、これらの皮膚感染症に対する疾病対策が進展することが期待される。
甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性とp21,Rb蛋白発現との関係

1,p21およびRB蛋白の免疫組織学的検討乳頭癌38例、濾胞腺腫12例、非腫瘍性組織36例をPFA固定の後凍結切片を作製し、microwave処理を行った。SABC法にて染色した(一次抗体:抗ヒトp21マウスモノクローナル抗体,抗ヒトRBマウスモノクローナル抗体)。p21の陽性率は乳頭癌47%,濾胞腺腫33%,非腫瘍性組織14%であった。乳頭癌が非腫瘍性組織より有意に陽性率が高かった(p<0.01)。乳頭癌におけるp21陽性率と臨床所見(腫瘍径,甲状腺外浸潤,リンパ節転移)では、p21陽性例の9.4%にリンパ節転移を認めたが、p21陽性例のリンパ節転移は50%しか認められなかった(p<0.01)。RB蛋白の陽性率は乳頭癌26%,濾胞腺腫33%,非腫瘍性組織11%であった。腫瘍性病変(乳頭癌+濾胞腺腫)が非腫瘍性組織より陽性率が高い傾向を示した(p=0.06)。乳頭癌におけるRB陽性率と臨床所見を検討したが、有意な関係は認められなかった。乳頭癌におけるp21とRB蛋白の発現の関係を検討したが、両者間に相関はなく各々独立した因子と考えられた。2,甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性甲状腺腫瘍をhomogenizeし16000g遠心分離し、上清をsampleとして使用した。また継代培養された細胞株を陽性controlとした。sampleをRNase処理しかつ85°C10分反応させたものを陰性controlとした。TS primerをγ^<32>P-ATPでラベルし、CX primer,dNTP,Taq,TRAP buffer,Sampleを加えPCRを施行した。その後12%PAで電気泳動を行い、ladderの有無でテロメラーゼ活性を判定した。PCRのアニーリング温度を55°C,58°C,59°Cと行ったが、陰性controlにも非特異的ladderがみられ、60°Cでは陽性controlにのみladderが見られた。甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性が弱いために高感度でなければ測定できないのか、実験系に問題があって甲状腺腫瘍のテロメラーゼ活性が測定できないのか検討中である。
住民組織のネットワーク力を測定するための尺度開発

本研究では、地域住民の健康増進活動や健康課題解決に取り組む住民組織活動の一つであり、行政育成型住民組織活動である健康推進員(以下、推進員)活動に注目した。組織のネットワーク力を考えるに際し、まず組織の構成員の活動に対する意欲やモチベーションを高める必要があり、これが高まれば、組織のマネジメント力、問題解決能力、構成員同士の信頼関係の構築能力等、すなわちネットワーク力が高まるのではないかと考え、前年度は活動満足感尺度と活動負担感尺度を開発した。本年度は、尺度の利用可能性を高めるため、経験年数別でのこれらへの関連要因を探索した。S県A市、B市の健康推進員604名を対象に、郵送法による無記名自記式の質問紙調査を行った。調査項目は、活動満足感尺度9項目、活動負担感尺度14項目の他に、活動へのソーシャルサポートとして、「家族」、「推進員仲間(以下、仲間)」、「行政支援者(以下、行政)」、「地域住民」からのサポート項目を作成し、尋ねた。対象者には、調査の趣旨、調査への協力は任意であり、匿名性を保持することなどを記した調査依頼書を調査票に添付し、調査票の返送をもって調査への同意とみなした。経験年数別に関連要因を検討した結果、活動満足感においては、13年群では行政、地域住民からのサポート、48年群では地域住民からのサポート、9年以上群では家族、推進員仲間、行政からのサポート、が高いほど「活動満足」が高かった。また、どの群でも推進員仲間からのサポート、48年群、9年以上群で行政からのサポート、が高いほど「自己利益」が高かった。また、活動負担感においては、13年群、48年群で推進員仲間からのサポートが高いほど「日常生活負担」が低く、13年群で推進員仲間、地域住民からのサポートが高いほど「精神的負担」が低かった。さらに、48年群で推進員仲間からのサポートが高いほど「活動量負担」が低かった。以上より、活動満足感を高め、活動負担感を軽減するような介入の手がかりが示され、今後、開発した尺度の利用可能性が広がったと考えられる。本研究では、地域住民の健康増進活動や健康課題解決に取り組む住民組織活動の一つであり、行政育成型住民組織活動である健康推進員活動に注目した。組織のネットワーク力を考えるに際し、まず組織の構成員の活動に対する意欲やモチベーションを高める必要があり、これが高まれば、組織のマネジメント力、問題解決能力、構成員同士の信頼関係の構築能力等、すなわちネットワーク力が高まるのではないかと考えた。そこで、健康推進員(以下、推進員)が活動する上で感じる満足と負担、すなわち活動満足感、活動負担感の尺度を開発し、活動の評価指標とすることを目的に調査を行った。平成17年9月、S県A市、B市の健康推進員604名を対象に、郵送法による無記名自記式の質問紙調査を行った。予備調査として行ったインタビューの結果を参考に、活動満足感10項目、活動負担感14項目を作成し、調査項目とした。活動満足感、活動負担感それぞれについて因子分析を行ったところ、活動満足感は「活動満足」5項目、「自己利益」4項目の2因子、活動負担感は「日常生活負担」5項目、「精神的負担」6項目、「活動量負担」3項目の3因子の尺度が得られ、尺度の信頼性、妥当性も概ね確認された。
ＣＣＲ５を軸とした悪性黒色腫の進展メカニズムの研究

当科の過去10年の手術例を検討したところ、CCR5発現の有無と明らかな予後の差、無病生存の差は得ることができなかった。また、臨床病型、腫瘍のサイズ、深達度においても一定の傾向はなく、原発巣におけるCCR5発現と悪性黒色腫の増悪、ないしCCR5発現が予後因子になりうるか、という点においては今回明らかにはできなかった。CCR5発現を増強させる生体側の因子の検索目的に、患者血清中のIL-17A, TNF-αなどの炎症性サイトカインの濃度を確認した。ステージ3までの患者においては有意な差はなく、ステージ4の患者において血清IL-17Aが高い傾向にあったものの、その他には一定の傾向がみられなかった。腫瘍細胞の転移機構にはケモカインとケモカイン受容体の相互作用が重要になるが,それぞれの意義については完全に知られてはいない。癌種によってはケモカイン受容体が増殖能や抑制性サイトカインの分泌などを介して腫瘍の進展に役割を果たしていることが証明されている。請者らは一部の悪性黒色腫の腫瘍細胞でCCR5が強く発現していることを発見した。CCR5を軸とした腫瘍細胞からの抑制性サイトカインの産生,抑制性分子の発現,増殖能など腫瘍の進展に関わる事象を網羅的に調査し,それを阻害することで将来的な臨床応用に向けた取り組みができないか検討することを目的とした。当科にて施行された手術標本において,CCR5発現についてその強度,頻度を腫瘍細胞で確認するとともに,臨床病期や経過との関連を調べたところ,Stage3の悪性黒色腫患者においては,CCR5発現がみられた病変は全標本の45%で,CCR5陽性細胞が見られた群においては有意に予後不良であった。また,悪性黒色腫の既知の治療に抵抗性が強いとされるcancer stem cellマーカーとして知られているCD133分子についても検討した。腫瘍細胞をsingle cellに分離し,CD133の発現がある細胞とそうでない細胞をマグネティックビーズにて分離してCCR5の発現を調べた。CD133陽性群ではCCR5陽性細胞を高率に認めた。このことより,CCR5発現とCD133発現に何らかの関連が示唆された。今回までの結果により,CCR5発現は化学療法への抵抗性などと関連し,予後不良因子になる可能性が考えられた。解析を追加し,CCR5が予後因子になるか検討する。当科にて施行された手術標本において、CCR5発現についてその強度、頻度を腫瘍細胞で確認するとともに、臨床病期や経過とどのように相関するか、パイロット的に10数例で検討したところCCR5発現が強い例が予後が短い傾向にあった。当科の過去10年における手術例を同様に検討したところ、明らかな予後の差、無病生存の差は得ることができなかった。複数回の検討ができた例において腫瘍の増悪、進展とともにCCR5発現が増強してきた例が数例確認できた。そのため、CCR5発現を増強させる生体側の因子があるか否かを検討することとし、患者血清中のIL-17A, TNF-αなどの炎症性サイトカインの濃度との相関をみるため、ELISA法にて確認した。本年度においてはよい結果が得られなかったが今後の方針としては各転移巣での検討、転移能の有無にフォーカスをあて検討していく予定。悪性黒色腫腫瘍へのCCR5発現の意義を見いだすことができた。臨床的に意義を見いだすため,統計解析を詳細に追加し,CCR5発現が独立した予後因子であるかどうかを検討する。海外出張が無く旅費が少なかった。当初計画通りに研究を行う。
ショウジョウバエ神経筋結合を用いたシナプス形成過程の分子解剖学的解析

シナプス結合の標的特異性は神経回路形成の最も重要な基盤をなす。本研究はシナプス形成期の神経系でシナプス結合の特異性がどのような機構によって成り立つのか明らかにすることを最終目的とした。モデル系として、比較的単純な神経回路であるために細胞レベルの解析が容易なショウジョウバエ胚の体壁筋系の神経筋結合を用いた'。神経軸索成長円錐が標的筋細胞に近づく時期を詳細に形態解析したところ、軸索成長円錐は初め標的領域に存在する筋細胞から伸びる糸状仮足(myopodia)と盛んに接触活動を繰りかえすが、やがて標的筋細胞上の決まった場所にmyopodiaと軸索糸状仮足(nuerofilopodia)が絡み合ってクラスターを形成することがわかった。また、Ezrin-DNによるクラスター形成阻害実験から、クラスター形成がシナプス形成の初期に必須の過程であることを示す結果を得た。私達は、糸状仮足のクラスターにシナプスの機能蛋白質が集積することが、次のイベントとして重要であると考え、シナプスの機能蛋白質を結合する足場蛋白質であるPSD95/Dlgの機能解析を行った。その結果、PSD-95/Dlgがクラスター形成の初期にこの部分へ集積し、その後のシナプス形成に必須の役割を果たしていることがわかった。次に、このような糸状仮足のクラスター形成を制御し標的特異的シナプス形成を制御する細胞表面蛋白質を探索する目的で、ショウジョウバエ細胞表面蛋白質遺伝子のスクリーニングを筋肉における異所発現系を用いて行った。これまでに1次スクリーニングを終え、約40の候補遺伝子を得た。今後はこれらの遺伝子の産物蛋白質について機能解析を行う予定である。本研究は、ショウジョウバエ胚体壁筋系の神経筋結合をモデル系とし、シナプス結合の形成過程で発現する様々な機能分子の時空間的な位置関係を免疫細胞化学法や遺伝子工学による標識法を駆使して解析し、これらの分子の発現様式が機能発現のうえでどのような意義を持つのかという点を遺伝子突然変異や異所発現体の解析から明らかにすることを目的としている。本年度は、特に我々が発見した筋細胞から伸びる糸状突起(マイオポディア)と神経突起との相互作用に注目し、高分解能の免疫電子顕微鏡法(透過型電子顕微鏡及び走査型電子顕微鏡法)と標識細胞の光学顕微鏡観察との組み合わせにより細胞の微少領域での機能分子の発現様式と意義を明らかにする事を目標とした。これまで、マイオポディアの観察は標識細胞の蛍光顕微鏡法を用いた観察により解析してきたが、この方法では標識部位しか観察できず、また蛍光強度の微弱なものでは解像度の低い観察しかできなかった。これに対し、本年度に行った走査型電子顕微鏡を用いた観察法では、標識部位と非標識部位を同時に区別して観察でき、しかも数nmの解像度で糸状突起を立体観察できた。その結果、神経成長円錐の糸状突起と標的筋細胞のマイオポディアとが複雑に絡み合い、やがて束をなしていくことがわかった。また、マイオポディアはシナプス形成部位だけではなく、軸索の束が通る道筋にも存在し、神経突起と接触を繰り返していることがわかった。透過型電子顕微鏡でも、これらの軸索とマイオポディアとの相互作用を観察することができた。標的認識分子の分布については、現在電子顕微鏡レベルの解析が可能な抗体を光学顕微鏡レベルで検討しているところである。本研究はシナプス形成期の神経系でシナプス結合の特異性がどのような機構によって成り立つのか明らかにすることを最終目的としている。研究材料としては比較的単純な神経回路であるために細胞レベルの解析が容易なショウジョウバエ胚の体壁筋系の神経筋結合を用いている。これまでに、特定の神経突起と標的細胞又は非標的細胞を標識して光学顕微鏡および電子顕微鏡レベルで観察するシステムを確立した。

この方法により、シナプスの標的認識過程において軸索成長円錐と標的筋細胞との密接な相互作用を細胞微細形態レベルで観察することができた。その結果、成長円錐ばかりでなく、標的筋細胞も盛んに糸状突起を伸ばして成長円錐の糸状突起と絡み合い、次第に互いの接着面積を広げるようにその形態を変化させることがわかった。しかもこの過程は標的細胞特異的であった。また、この過程をFasIIIやTollといった、細胞膜蛋白質が制御していることもわかった。さらに、シナプス形成に関わる蛋白質(Dlg等)は糸状突起の形態変化とともに集合してくることから、この時期からシナプスの成熟過程が始まっていることが示唆された。また、軸索のシャフト部分からも糸状突起が周囲に伸びて、神経経路の周囲に存在する筋細胞から伸びている糸状突起と絡み合っていることもわかった。この結果から、軸索経路の周囲の細胞は軸索の伸長を誘導するばかりでなく、軸索経路を保持する役割をもつことが示唆された。シナプス結合の標的特異性は神経回路形成の最も重要な基盤をなす。本研究はシナプス形成期の神経系でシナプス結合の特異性がどのような機構によって成り立つのか明らかにすることを最終目的としている。研究材料としては比較的単純な神経回路であるために細胞レベルの解析が容易なショウジョウバエ胚の体壁筋系の神経筋結合を用いている。これまでに、我々はシナプス標的認識の過程で、シナプス前細胞とシナプス後細胞が互いに糸状突起で接触を繰り返し、正しい相手との接触があった時に糸状突起がクラスターを形成することを明らかにした。本年度はこのクラスター形成がシナプス結合の確立にどのような役割を果たしているのかという点に注目した。糸状突起の形成や運動に関与すると考えられているEzrinのドミナントネガティブ型蛋白質をGal4/UASsystemを用いて単一の筋肉で発現させたところ、その筋肉では糸状突起のクラスターは形成されず、数本の糸状突起が神経軸索の糸状突起と散在性の接触部位を形成することがわかった、さらに発生が進むと軸索突起はシナプスを作らずに筋肉上を任意の方向に伸びていくことがわかった。このことから、糸状突起のクラスター形成がシナプス形成に必要であることがわかった。次に、シナプス形成の初期にシナプス部に集合することがわかっているPSD95/Dlgのドミナントネガティブ型を特定の筋肉で発現させたところ、この蛋白質を発現している筋肉でも糸状突起のクラスターが形成され、軸索と標的筋肉の接着がしばらく保たれることがわかった。ところがその後この接着は不安定になり、軸索はいったん退縮した後再び伸長して別の筋肉に異所性シナプスを形成した。このことから、PDS95/Dlgはクラスター形成後のシナプス構造蛋白質の保持に重要であることが示唆された。
耐性機序を克服する新規抗癌剤ニュージェムシタビンの開発

現時点で膵癌の化学療法はGemcitabine(以下GEMと略記)が最も有効であるが、獲得耐性が問題となる。耐性克服のための方策を検討するため、耐性株を複数樹立し、分子生物学的に検討したところ、deoxycytidine kinase(DCK)が高頻度に不活性化されていること、親株でDCKを不活性化させると耐性が生じ、耐性株にDCKを導入すると感受性が復活することを明らかにした。DCKの不活性化がGEMに対する獲得耐性の重要な原因であると考えられる結果である。Gemcitabine(GEM)の使用により膵癌の治療成績は改善したが、なかなか長期生存には至らず、生存期間の延長の域を出ないのが現状である。膵癌細胞株や膵癌組織を用いたゲノム解析、プロテオミクス解析などからGEMの薬剤耐性機序が解明されつつあり、治療効果の予測などが次第に可能となってきた。本研究では、2010年度には、抗癌剤耐性機構の理解のため、3株の異なるGEM感受性(感受性が比較的高いもの、中等度のもの、比較的低いもの)の膵癌細胞株を親株として用い、いずれの細胞株からもGEM耐性の細胞株を樹立できた。並行して10種類の異なるシスプラチン(CDDP)感受性の頭頚部扁平上皮癌(HNSCC)細胞株を親株としてCDDP耐性の細胞株を樹立できたが、さらに発現アレイ、マイクロRNAアレイ解析と遺伝子導入、ノックダウン等を行い、IGF2遺伝子の高発現がCDDP耐性の原因となる場合があることを明らかにした。また、膵癌では発現アレイ、マイクロRNAアレイ、質量分析解析を行い、細胞内外のGEMとその代謝産物の濃度を調べたところ、耐性機構が複数あることが判明した。機序の重要な一つはトランスポーターの発現であるが、代謝にかかわる分子の発現が重要であることも判明した。耐性機構打破に向けたニューGEMのプロジェクトでは、候補薬物の開発を進めており、有効性の判定を行い、候補分子の絞り込み作業を進めているところである。Gemcitabine(GEM)により膵癌治療成績は改善したが、長期生存例を生み出すまでには至っていない。これまでのゲノム解析・プロテオミクス解析などにより、GEMの薬剤耐性機序としてトランスポーターが重要である可能性が示唆されてきた。そこで、トランスポーターに影響を受けずに癌細胞内へ移行でき、癌細胞内で容易に活性型となる特徴を有する。New-GEMの試作を試みた。モデルケースとして、GEM耐性の膵癌細胞株3種類(GEM感受性が高いもの、中等度のもの、低いもの)から耐性細胞株を樹立し、New-GEMを試みたが、いずれも有効ではなかった。耐性の分子機構を解析するため、GEMの細胞内取り込み、細胞外への代謝産物の排出を質量分析で調べたところ、両者とも極めて迅速であったが、細胞内で活性化させる際のKey enzymeであるdeoxycytidine kinase(DCK)の不活性化変異がすべての耐性株で見られた。さらに3つの耐性株を樹立して調べたところ、DCKの不活性化変異が2株で見られ、最終的に5/6(83%)の耐性株においてDCKの不活性化が関わっていることが判明した。膵癌の早期診断のためにメタボローム解析を行い、いくつかのバイオマーカーとなりうる分子を特定することができた。パイロット的に少人数の患者検体データでは、これらの中にきわめて有望と思われる分子があった。今後、多数の患者検体を用いたvalidateが必要である。膵がんの化学療法ではGemcitabine(以下GEMと略記)に勝るものは現時点では報告されていない。本薬剤の登場により、膵癌患者の治療成績は改善したが、それでも長期生存例を生み出すには至っていない。New-GEMの試作を試みたが、薬効的にはあまり良いものを作り出すことができなかった。同時に、GEMによる治療を困難にする原因として重要な獲得耐性について検討を加えた。その第一歩として、GEM耐性の膵癌細胞株3種類(GEM感受性が高いもの、中等度のもの、低いもの)、ならびに胃癌、大腸癌、胆管癌細胞株一つずつの合計6細胞株から耐性細胞株を樹立し、耐性の分子機構を解析した。質量分析ではGEMの細胞内取り込み、細胞外への代謝産物の排出は極めて迅速であったが、細胞内で活性化させる際のkey enzymeであるdeoxycytidine kinase(DCK)の不活性化変異が5/6(83%)の耐性株においてDCKの不活性化が関わっていることが判明した。S100A4の発現とGEM投与による予後との相関が報告されているため、S100A4について解析したところ、強制発現させると運動能の亢進が見られた。臨床検体で調べると、特に神経浸潤と高発現が相関を示した。

しかし、薬剤感受性との関連は見られなかった。New-GEMの試作物は樹立したGEM耐性細胞株には有効ではなかったが、重要な耐性の分子機構を明らかにすることに成功した。当初の予想と大きく異なる事実が判明したが、それに対抗する方策へのヒントが得られたため、おおむね順調に進展していると判断する。24年度が最終年度であるため、記入しない。GEM耐性の分子機構としてトランスポーターによるものもあるであろうが、DCKの不活性化によるものも重要であることが判明した。したがって、今後の研究の方向性としては、以下の項目が重要となる。(1)DCKを介さない抗がん剤の併用による膵癌治療(2)DCKを利用しないNew-GEMの開発。次年度はこれらに力点を置いて研究を進める。
ツェツェバエに由来するトリパノソーマの昆虫型分化誘導物質の同定

トリパノソーマ(Trypanosoma spp.)が哺乳類の血液に感染することで引き起こされるアフリカ睡眠病の制御には、感染時に起こる昆虫型への細胞分化の機構を理解しなければならない。本研究ではその細胞分化を誘導する遺伝子候補としてGlossina serine protease 1(Gsp1)を単離し,それがセリンプロテアーゼドメインを有することを示した。先行研究を考慮すると、多重化した消化酵素遺伝子の一部が昆虫型分化誘導を担う新奇のドメインを独立に獲得し、Gpl遺伝子が進化したと示唆された。トリパノソーマの発現する表面変異糖タンパク質(VSG : Variable Surface Glycoprotein)がアフリカトリパノソーマ症の制圧を困難にしている。しかし、宿主血流内でVSGを発現しているトリパノソーマ(Trypanosoma vivax)の血流型は媒介昆虫であるツェツェバエ(Glossina morsitans)に感染するとVSGを発現しない昆虫型へ分化する。このような昆虫型への分化はツェツェバエ以外の昆虫種による吸血時には誘導されない。また近縁種であるTrypanosoma bruceiについては、培養条件下での昆虫型分化誘導方法が幾つか開発されており、その1つとしてウシ由来のトリプシンを加えた培地中での培養が知られている。本研究では、昆虫種間でのプロテアーゼ活性の違いが昆虫型分化誘導能の違いを担うという仮説を検証するため、ツェツェバエとその他の吸血性双翅目昆虫からセリンプロテアーゼ(トリプシン・キモトリプシン)遺伝子を単離し、それらの組換えタンパク質についてトリパノソーマ昆虫型分化誘導能を比較する。現在までにツェツェバエとサシバエ・ノサシバエそれぞれからトリプシン遺伝子とキモトリプシン遺伝子の部分配列(約500bp)を単離した。キモトリプシンについて予想されるアミノ酸配列を比較すると、サシバエとノサシバエの配列は互いに80%以上が一致するのに対し、ツェツェバエの配列とは約50%しか一致しなかった。またトリプシンの予想アミノ酸配列については、各種間で50%程度しか一致しなかった。このような配列の違いが各プロテーアーゼで活性に影響し、トリパノソーマ昆虫型の分化誘導能の違いを生み出していることが予想される。哺乳類の血液に寄生してアフリカ睡眠病を引き起こすトリパノソーマ(Trypanosoma spp.)は、ツェツェバエによってのみ伝播され、その際に血流型から昆虫型へと細胞分化を起こす。従って、その昆虫型分化を誘導する物質がツェツェバエの体内に存在すると予想され、その作用機序を理解することが本感染症の制圧に貢献すると期待される。現在までに、ツェツェバエの1種G.fuscipesに由来するGlossina proteolytic lectin(Gpl,消化酵素遺伝子)の組換えタンパク質について、昆虫型分化誘導能が確認されている。本研究ではまずG.morsitans及び、非媒介性でツェツェバエの近縁種であるサシバエStomoxys calcitransよりGpl相同遺伝子の部分配列の単離を試みた。その結果、ツェツェバエ及びサシバエから、それぞれ3つ及び5つののGpl類似配列が得られ、両種における遺伝子重複の可能性が示唆された。続いてそれらの中から最もGplに類似した配列をそれぞれ選び、RACE法によって各遺伝子の全長配列を得た。ツェツェバエからは既知のGpl相同遺伝子であるGlossina serine protease 1(Gsp1)が、サシバエからは新規のStomoxys serine protease x(Sspx)が得られた。Gplと予想アミノ酸配列を比較すると、Gsp1(92%)の方がSspx(78%)よりも高い類似度を示した。しかしながら、ともに同一のセリンプロテアーゼドメインを有することから,同様の酵素活性が予想された。一般に吸血昆虫では消化酵素遺伝子が多重化しやすく、その一部が独立に新奇の機能を獲得することが起こりうる。従ってツェツェバエにおいても、多重化した消化酵素遺伝子の一部が昆虫型分化誘導を担う新奇のドメインを独立に獲得し、Gpl遺伝子が進化したと示唆された。今後はその新奇ドメインを明らかにし、両遺伝子の作用機序の違いを理解することが期待される。
制御性T細胞による免疫制御メカニズムの解明

制御性T細胞(Treg)は病的な免疫応答の抑制に重要である。Tregは遺伝子発現を変化させて炎症環境・組織環境に適応して免疫応答を制御しているが、この"適応性"の分子基盤は不明である。我々は、自己免疫疾患IPEX症候群患者に同定されているFoxp3変異を持ったマウスモデルを作製し、A384T変異が特定の非リンパ組織へのTregの集積を障害して炎症を惹起することを見いだした。そして、転写因子BATF発現の抑制がこの変異マウスにおけるTregの適応性障害の一因であることを明らかにした。本研究により、BATFがTregの適応性を制御する重要な役割を担うことが明らかになった。我々は、ヒト自己免疫疾患IPEXにおいて同定されているFoxp3遺伝子変異(A384T)が非リンパ組織における制御性T細胞(Treg)の恒常性と機能を特異的に障害して自己免疫疾患を惹起することを見いだし、A384T Tregの組織環境における適応破綻はAP-1転写因子BATFの発現制御異常に起因することを明らかにした。本研究は、この発見を手がかりとして、Foxp3とBATFが組織環境、炎症環境におけるTregの適応性を制御する内因的メカニズムを明らかにし、組織環境がTregの適応性を制御する外因的メカニズムを解明することを目的とし、本年度は以下の研究項目につき研究を進めた。1. A384T変異によるBATF発現制御障害メカニズム:我々は、A384T変異が他のforkhead (FKH)転写因子様のDNA結合特性を示すgain-of-function変異であり、A384T変異体がBatfプロモーター中のFKHモチーフ依存的にプロモーター活性を抑制することを見いだした。そのメカニズムとして、A384T変異体が他のFKH転写因子のDNA結合を阻害する可能性が考えられ、WT Treg, A384T Tregを用いてFoxo1のChIP-seq解析を行ったが、A384T変異体によってFoxo1のBatf等の標的遺伝子への結合は阻害されなかった。2. Treg特異的BATF欠損マウスを作製し、致死性の自己免疫疾患を発症することを見いだした。3. BATF欠損Tregと野生型TregのRNA-seq解析を行った。BATF欠損により一部のTreg signature genesの発現が障害され、それらは細胞移動に関わるパスウェイに属する遺伝子を有意に多く含んでいた。また、TregにおけるFoxp3およびBATF ChIP-seq解析を行い、それぞれの結合領域を全ゲノムレベルで同定した。Foxp3およびBATFは細胞移動に関わる遺伝子群に協調的に結合することを見いだした。4.樹状細胞特異的IRF4欠損マウスを作製し、Tregの表現型を解析し、肺においてTh2型の表現型を示すGATA3highサブセットがTreg、Tconv(通常型T細胞)両方において選択的に減少していた。ほぼすべての研究項目について、当初計画していた通り順調に進展している。A384T変異体によるBatf発現制御メカニズム異常の解析に関しては、当初予想していた仮説(A384T変異体による他のFKH転写因子の結合障害)を支持する結果は得られなかったため、仮説の再検討が必要になっている。我々は、ヒト自己免疫疾患IPEXにおいて同定されているFoxp3遺伝子変異(A384T)が非リンパ組織における制御性T細胞(Treg)の恒常性と機能を特異的に障害して自己免疫疾患を惹起することを見いだし、A384T Tregの組織環境における適応破綻は転写因子BATFの発現抑制に起因することを明らかにした。本研究は、Foxp3とBATFが組織環境、炎症環境におけるTregの適応性を制御する内因的、外因的メカニズムを解明することを目的とし、本年度は主に以下の研究項目につき研究を進めた。1. A384T変異体によるBATF発現抑制メカニズムとその意義:レポーターアッセイにおいてA384TによるBatfプロモーター活性の抑制に必要なforkhead認識サイト2カ所を同定した。そして、それらサイトの変異マウスをCRISPR/Cas9システムにより作製し、founderマウスを得た。また、ROSA26-STOP-BATFマウスを作製し、Foxp3-iCre BACトランスジェニックマウスと交配させてTreg特異的にBATFを発現させるマウスを得た。野生型マウスにおいてエフェクター・メモリー型Tregが増加することがわかった。2. TregにおけるBATFの生理的意義:Treg特異的BATF欠損マウスが致死性の自己免疫疾患を発症し、組織にTh1とTh2細胞が選択的に蓄積すること、エフェクター・メモリー型Tregが選択的に欠損することがわかった。3. TregサブセットにおけるFoxp3結合サイトの解析:Tregをナイーヴ型とエフェクター・メモリー型サブセットに分けてFoxp3 ChIP-seq解析を行った結果、それぞれのサブセットに特異的な結合サイトが同定された。そして、ナイーブ型特異的結合サイトにはFoxp1の共局在が、エフェクター・メモリー型特異的結合サイトにはIRF4の共局在が見られたことから、Foxp3は両者においてpartnerを変えることによりゲノム上異なった場所に結合してそれぞれの遺伝子発現を制御すると考えられた。A384

T変異体によるBatf発現抑制メカニズムの解析に関しては、当初予想していた仮説(A384T変異体による他のFKH転写因子の結合障害)を支持する結果は得られなかったため、仮説の再検討が必要であったが、その点については今後の検討課題である。我々は、ヒト自己免疫疾患IPEXにおいて同定されているFoxp3遺伝子変異(A384T)が非リンパ組織における制御性T細胞(Treg)の恒常性と機能を特異的に障害して自己免疫疾患を惹起することを見いだし、A384T Tregの組織環境における適応破綻はAP-1転写因子BATFの発現制御異常に起因することを明らかにした。本研究は、この発見を手がかりとしてFoxp3とBATFが組織環境、炎症環境におけるTregの適応性を制御する内因的・外因的メカニズムを解明することを目的とし、以下の研究項目につき研究を進めた。1. A384T変異体によるBATF発現抑制メカニズム: A384T変異体によるBatf発現抑制に重要と考えられたforkhead認識サイト2カ所を変異させたマウスをCRISPR/Cas9システムにより作製し、A384T変異マウスと交配させた。その結果、A384T TregにおいてBATF発現の脱抑制が見られたことから、これらのサイトがA384T変異体によるBatf発現抑制に必須であることを明らかにした。2. Treg特異的BATF欠損マウスの表現型解析:様々な組織においてエフェクター型サブセットであるTbet+, Gata3high, RORgt+ Treg全てが著しく減少していることがわかった。また、これらの組織においてTh1, Th2, Th17全てのヘルパーT細胞サブセットが増殖・蓄積していた。3. BATFによるエフェクター型Treg分化制御メカニズム:BATF ChIP-seq解析データを解析し、Treg選択的なBATF結合領域が存在すること、それらの領域はTreg選択的にオープンクロマチン構造をとること、Treg選択的オープンクロマチン領域はBATF欠損Tregでは失われることを見いだした。以上の結果から、BATFはTreg選択的オープンクロマチン形成に関わる可能性が示唆された。制御性T細胞(Treg)は病的な免疫応答の抑制に重要である。Tregは遺伝子発現を変化させて炎症環境・組織環境に適応して免疫応答を制御しているが、この"適応性"の分子基盤は不明である。我々は、自己免疫疾患IPEX症候群患者に同定されているFoxp3変異を持ったマウスモデルを作製し、A384T変異が特定の非リンパ組織へのTregの集積を障害して炎症を惹起することを見いだした。そして、転写因子BATF発現の抑制がこの変異マウスにおけるTregの適応性障害の一因であることを明らかにした。本研究により、BATFがTregの適応性を制御する重要な役割を担うことが明らかになった。A384T変異体によるBatf発現制御メカニズム異常の解析に関しては、当初とは別の仮説を考える必要が出てきた。
位相理論と叙述構造に関する共時的・通時的研究

当該年度に実績については、研究実施計画に沿って概ね以下の3つに大別し、それぞれ実施してきた。1.ミニマリスト・プログラムにおける理論装置の分析とその妥当性の検証:最新の生成文法理論、ミニマリスト・プログラムに関して、その基本的概念、理論装置の仕組みを理解し、言語事実への適用における利点と問題点を、先行研究を検証しながら分析した。2.現代英語のデータの収集・分類・検証、先行研究の整理:1)調査対象となる構文である小節や二次述語など関連する構文の言語データを収集した。これまで独自に収集してきたデータに加え、未読の論文(ミニマリスト理論に基づいているか否かに関わらず、また統語論的な観点からのアプローチ以外で分析している論文も含める)、書籍、既存のコーパスなどを利用し、新たなデータの収集を試みた。2)小節や二次述語以外の叙述一般に関する知識や情報について、関連書籍や論文等から収集を試みた。3.先行文献・データの検証:1)叙述構造に関して、自身のこれまでの分析について再検討をした。2)収集したデータからは得られないものについては、例文を作成し、英語の母語話者による判断を基準に、より精緻なデータベースの作成を試みた。そのために語法や文法に関する実験を行った。3)2)での例文の調査から、描写述語に関して、先行研究の問題点を指摘しその統語的特性や意味的特性について整理と分析を行い、統語構造を提案した。申請者のこれまでの分析について、予定とは別の検討課題が出たため、分析の再検討をするのに時間がかかっている。また、データの収集に関して、コーパスからは得られないものについては、例文を作成し、英語の母語話者による判断をまとめているが、調査したい例文に関して母語話者により判断が大きく分かれ、その結果データの集計や分析に至るまでの過程で、予定よりも時間がかかっている。予定とは別の検討課題が出たが、分析の再検討を引き続き行う予定である。扱えそうなより多くの例文が欲しいため、コーパス調査や母語話者による判断を増やしていく必要があり、その時間を確保したい。調査したい例文の多くは、判断が微妙なもののため、コーパスではなかなか手に入らないものもあり、その場合は母語話者による判断チェックの機会を増やすという方法でデータを手に入れなければならない。研究計画が予定よりも少し遅れているために、当初使用予定であった用途(出張、コーパス購入、書籍購入)への経費使用を実行しなかったため。
流動床による二相嫌気性消化法の効率化と菌体付着能の増大に関する研究

酢酸単一基質あるいは酢酸、プロピオン酸、n-酪酸から成る混合酸に少量の酵母エキスを添加した基質および前途の混合酸に少量のグルコースを添加した基質を用い、流入COD負荷2・510gCOD・l^<+1>・d^<-1>の範囲で、流入負荷の影響に関する実験を活性炭を担体とする流動床型反応槽を用いて行ったところ、次のような結果が得られた。1.酢酸単一基質を処理するより、少量の有機物を添加するほうが基質除去が改善される。これは、メタン菌とアセトジェニック菌および酸生成菌が共生することにより、メタン生成が促進するためであると考えられる。2.生物膜形成において、酢酸単一基質を用いるよりも、酵母エキスを添加した混合酸基質を用いたほうが、生物膜形成が促進された。3.流動床における菌体保持形態としては、生物膜形成という形以外にも活性炭床部によりフィルター効果による菌体捕捉があり、後者の形態によっても十分高い菌体濃度が維持できる。4.実験を行った流入負荷の範囲において、酢酢単一基質では基質除去率は98.5%以上酵母エキスを添加した混合酸基質では98.8%、グルコースを添加した混合酸基質では99.5%以上の高い基質除去率が得られた。5.最大比COD除去速度は、酢酸単一基質を用いた場合に0.7mgCODmg^<-1>VSS・d^<-1>、酵母エキスを添加した混合酸基質では0.4mgCODmg^<-1>VSS・d^<-1>程度であった。COD負荷に対する床内タンパク質濃度の関係を合わせて考えると、グルコースを添加した混合酸基質では、菌体中での活性のあるメタン菌の占める割合が低いと思われる。嫌気性微生物の担体への付着について、微生物の親水性および疎水性をn-hexadecaneを添加し、菌の分離の様子を観察することにより、酸生成相およびメタン生成相汚混を用いて検討した。今年度は内径10cm高さ120cmのアクリル製の円筒形膨張床型リアクターを用いて,基質除去特性および菌体付着能に及ぼす流入負荷および基質組成の影響を検討した.担体としては粒径0.27cmの粒状活性炭を用い,膨張床内の温度は35°Cに保持し,投入基質は(1)酢酸量-基質(500mg-COD/e), (2)酢酸,プロピオン酸,酪酸の混合有機酸(混合比はCOD換算で2:1:1,濃度は500mg-COD/e)に酵母エキスを300mg/eに添加した混合基質,および(3)混合有機酸(5000mg-COD/e)にグルコースを200mg/eに添加した混合基質の三種類を用いた.流入負荷は水理学的滞留時間(HRT)を1日から0.5日まで段階的に変えることにより変動させた.今年度で得られた結果は以下のようにまとめられる.1.基質除去特性:COD負荷2.511.0g-COD/e, dayの条件でグルコースの添加系ではいずれの負荷でも基質除去率99.8%を越えている.一方,酵母エキス添加の系の除去率はほとんどの負荷で約99.0%,酢酸単一基質の系では98.5%程度であり,グルコース添加の系が最も高い除去率を示している.この結果より膨張床方式は負荷の変動に対して極めて安定した高い基質除去率を有する処理方式であることがわかる.更に,酢酸単一基質を処理するより少量のグルコースや酵母エキスを添加した混合酸を処理した方がよい基質除去性能が得られることも分かった.2.菌体の付着特性:同じCOD負荷に対する床内タンパク濃度

(菌体濃度の指標)はグルコース添加の系が15000mg/e以上と高くて,酢酸単一基質の系や酵母エキス添加の系より1.5倍以上大きくなっており,膨張床方式は高い菌体保持能を有することが分る.更に床内タンパク質濃度に加え,電子顕微鏡による観察から混合有機酸を用いることにより菌体の付着特性が大きく改善されることも分った.酢酸、プロピオン酸、n酪酸から成る混合酸に少量のグルコースを添加した基質を用い、一定負荷の下、流入基質濃度を変化させる実験を行い、基質濃度が基質除去特性や床内菌体量にどのような影響を及ぼすかについて、反応槽として内径10cm、高さ120cm(上気層部15cm)のアクリル製二重円筒を用い、担体として粒径0.27mmの粒状活性炭を用いて検討した。その結果、流出水中の全有機酸濃度は2050mg/lと極めて低く保たれ、流出水のグルコース濃度は実験期間を通じて数mg/l程度であり、グルコース無添加の系との差異が見られず、グルコースはほぼ完全に分解している。流入基質濃度の増大に対して、床内タンパク質濃度は増大し、床内に菌体が蓄積するが、比COD除去速度は低下する。これは菌体中における活性のある部分の割合が減少することを示している。すなわち、流入基質濃度の増大にともない、増大した床内タンパク質の多くは、不活性な余剰菌体であることが知られる。また、嫌気性細菌の付着について検討を行うために、様々な基質で培養した嫌気性消化混合液に、疎水性物質である炭化水素(n-hexadecane)を加え、n-hexadecaneへの細菌類の吸着の様子を観察することにより、細菌の疎水性を調べ、嫌気性細菌の付着機構を解明しようとした。実験に用いた試料は、デンプンを気質とするメタン生成相汚泥、蟻酸を単一基質とする酸生成相汚泥、混合酸を基質とするメタン生成相汚泥、酢酸を単一基質とするメタン生成相汚泥、下水試験法による硫酸還元菌用培地で培養した硫酸還元菌集積汚泥、ベビーミルクを基質とする嫌気性消化汚泥およびセルロースを基質とする嫌気性消化汚泥の7種類であった。実験は3回行ったが、実験結果にかなり変動があり明確な見解は得られなかった。しかし、嫌気性細菌の疎水性を調べることにより、担体への付着機構の解明もある程度可能になると思われる。
脊椎動物の神経分化に関わるRNA結合タンパク質のホヤ胚での役割

musashi遺伝子およびHu遺伝子はショウジョウバエや脊椎動物において神経分化に関わる重要なRNA結合タンパク質をコードする遺伝子である。これまでに,musashiおよびHuのホモログ(CiMsiおよびCiHu)をホヤ胚より単離した。CiMsiは予定神経管細胞で発現し,CiMsiの過剰発現胚において異所的な神経分化が起こるのに対し,CiHuは間充織細胞でのみ強く発現している。ホヤ胚での遺伝子機能破壊や細胞追跡,さらに哺乳類の培養細胞系を用いた実験を行いCiMsiおよびCiHuの機能解析を行った。・CiMsiのモロフォリノオリゴを卵内に顕微注入したところ,明確な形態異常は見られず,筋肉,神経,および神経管それぞれのマーカー遺伝子の発現が見られ,細胞分化は正常に起こっていることがわかった。しかし,予定神経管細胞のマーキングを行い追跡したところ,神経管細胞の正常な細胞移動が阻害され,管状の神経管の形成が起こらないことが分かった。・CiHuのホヤ胚内での機能を検討したが,明確な機能を証明できるには至っていない。そこで,ラット褐色腫細胞株PC-12を用いた神経誘導活性のアッセイ系において,哺乳類のHuの機能をCiHuが代用できるかどうかを検討した。マウスHuDが細胞質に局在することで神経分化誘導能があるのに対し,全長のCiHuでは核に局在して神経分化誘導能を示さないことが分かった。ところが,CiHuのNLS(Nuclear Localization Signal)と思われる配列を除いたdeletion CiHuでは,細胞質に局在し,神経分化能を示した。これは,細胞内局在を調節することで機能を大きく変えることができることを示しており,分子構造の変化と発生メカニズムの変化を結びつける重要な糸口になると考えている。Musashi遺伝子およびHu遺伝子はショウジョウバエや脊椎動物において神経分化に関わる重要なRNA結合タンパク質をコードする遺伝子である。CiMsiは予定神経管細胞で発現し,CiMsiの過剰発現胚において異所的な神経分化が起こるのに対し,CiHuは間充織細胞でのみ強く発現しており,CiHuの過剰発現では神経分化が抑制されることが分かった。本年度の研究では,これらホヤでの分子メカニズムがどのようなものか,また脊椎動物のそれとどれほどの共通性があるのかを確かめようとした。・CiMsiのモロフォリノオリゴを卵内に顕微注入したところ,神経胚以降,明確な発生遅延が生じた。それらの胚では,神経管の分化マーカーであるCiNutの発現が起こるにもかかわらず,その予定神経管細胞の正常な細胞移動が阻害され,管状の神経管の形成が起こらないことが分かった。現在,他の分化マーカーを用いた解析や特定の細胞を標識した形態形成運動の解析などにより,より詳細に影響を調べている。・CiHuのモロフォリノオリゴを卵内に顕微注入したところ,CiNutの発現が消失した。この結果はこれまでの結果と矛盾するが,追試を含め,現在その理由を明らかにする手がかりを捜している。その一方,CiHuをほ乳類の培養細胞内で発現させ,CiHuがヒトやマウスのHuの機能を模倣出来るかどうかを検討した。その結果,CiHuは核に局在し,細胞質に局在するHuとの違いが明らかになった。また,CiHuには神経分化誘導能が無いことがわかった。現在,この2点の変化がどのようなアミノ酸配列の変化によるものかを明らかにするため,いくつかの変異導入CiHuを用いて同様の実験を行っている。

musashi遺伝子およびHu遺伝子はショウジョウバエや脊椎動物において神経分化に関わる重要なRNA結合タンパク質をコードする遺伝子である。これまでに,musashiおよびHuのホモログ(CiMsiおよびCiHu)をホヤ胚より単離した。CiMsiは予定神経管細胞で発現し,CiMsiの過剰発現胚において異所的な神経分化が起こるのに対し,CiHuは間充織細胞でのみ強く発現している。昨年度までの機能解析では不明確な点も多かったので,本年度の研究では,細胞追跡を行うなど,実験系を大幅に見直して機能解析を続けた。・CiMsiのモロフォリノオリゴを卵内に顕微注入したところ,明確な形態異常は見られず,筋肉,神経,および神経管それぞれのマーカー遺伝子の発現が見られ,細胞分化は正常に起こっていることがわかった。しかし,予定神経管細胞のマーキングを行い追跡したところ,神経管細胞の正常な細胞移動が阻害され,管状の神経管の形成が起こらないことが分かった。・CiHuのホヤ胚内での機能を検討したが,明確な機能を証明できるには至っていない。そこで,ラット褐色腫細胞株PC-12を用いた神経誘導活性のアッセイ系において,哺乳類のHuの機能をCiHuが代用できるかどうかを検討した。マウスHuDが細胞質に局在することで神経分化誘導能があるのに対し,全長のCiHuでは核に局在して神経分化誘導能を示さないことが分かった。ところが,CiHuのNLS(Nuclcar Localization Signal)と思われる配列を除いたdcletion CiHuでは,細胞質に局在し,神経分化能を示した。これは,細胞内局在を調節することで機能を大きく変えることができることを示しており,分子構造の変化と発生メカニズムの変化を結びつける重要な糸口になると考えている。
神経筋難病患者の薬物動態変動に及ぼす筋肉量減少の影響の定量的解明

神経筋疾患患者においては、患者個別の薬物投与が根拠に基づいて適切に行われているとは言えない。そこで本研究では、神経筋疾患患者の適切な薬物治療法確立のために、神経筋難病診療施設の協力を得て、新たに開発された臥床状態でも筋肉量が測定可能な機器を駆使し、筋萎縮病態の異なる筋萎縮性側索硬化症および筋ジストロフィー患者の原疾患別に筋肉量の減少と筋肉細胞の変化による薬物動態の変動を定量的に明らかする。更に、それぞれの疾患動物モデルを用いて薬物動態影響因子を解明する。そして、筋肉量減少と薬物動態の関係を再構築し、薬物の筋肉組織分布の変化と体内動態の関係を定量的に明らかにし臨床上の評価と対処方法を提示する。
夏目漱石初期・中期作品における表現の視覚性

夏目漱石の小説作品における「表現の視覚性」について、造形表現から漱石が言語表現に取り入れた要素を中心に、その性質を明らかにした。漱石の蔵書における美術関連書籍の書入れから、主にラファエル前派についての関心を分析するとともに、「草枕」から「三四郎」に至る時期の〈画〉と〈詩〉概念および「断面的文学」の変遷と、作品内容との関連について、その発表媒体や作家としての立場の変化を含めて、多角的に考察した。1、漱石著作本の装丁・挿画に関する調査を行い、主に『漾虚集』『草枕』『虞美人草』『三四郎』について、視覚的表現と作品内容・文体の関係についての検証を行った。またこれら初版本の経年による損傷や閲覧困難等を考慮し、日本近代文学館刊行の名著復刻シリーズなどを主とする複製本を収集し、参考資料とした。またJ. Ruskin “Modern Painters"を中心に、19世紀における英国の美術論と漱石作品における絵画的要素の影響について、『三四郎』テキストの精読を交えつつ、詳細な検証を行った。また東京藝術大学美術館他主催の『夏目漱石の美術世界展』、テート美術館・森アーツセンター他主催の『ラファエル前派展』での展示・解題を参照しつつ、19世紀イギリス絵画における表現・主題が漱石の美術・文学双方に与えた影響についても合わせて考察した。これらの成果を元に、論文の草稿を作成した。来年度以降の公的発表に向け準備を進めている。2、日本比較文学会第75回全国大会、日本近代文学会春季大会・秋季大会に出席し、研究発表・質疑応答を聴講した。前者では19世紀イギリス思想と漱石文学の関連等を始め、比較文学研究の最新の成果について有意義な知見を得た。また後者では、近代の小説ジャンルの編成とエクリチュールなどを中心に、日本近代文学研究の最新の成果について有意義な知見を得た。3、また明治初期の思想・小説・詩歌について、演劇・音楽などの観点から見た文学作品の視覚性について分析し、伝統文学の近代化に関わる問題点や、主にアメリカ・ヨーロッパを中心とした外国文学・演劇・音楽と明治初期文学の影響関係について検証した。それらの成果を元に概説として整理し、書籍『日本の芸術史文学上演編II近世から開化期の芸能と文学』(矢内賢二編、幻冬舎刊、2014)に掲載した。4、上記までの成果をもとに、著書刊行に向けて原稿執筆を行った。1、19世紀における英国の美術論と漱石作品における絵画的要素の関係について、英国ロンドンにおいて実地調査を行い、『漾虚集』から『三四郎』までの作品に見られる「視覚性」についての分析と検討を進めた。具体的には、The National Gallery、Tate Britain、The Wallace Collectionに所蔵されるDelaroche、Waterhouse、Millais、Greuzeらの絵画作品と、作品内記述の比較検証、The Towers of London、National trust Carlyle's House、倫敦漱石記念館の所蔵品、所蔵カタログと漱石手沢本書き入れとの照合などを行った。またこれらの調査結果をもとに『倫敦塔』『カーライル博物館』『草枕』『三四郎』に関する論文草稿の再検討を行い、合わせて注記などの充実を計った。2、日本比較文学会第76回全国大会、日本近代文学会例会・秋季大会に出席し、研究発表・質疑応答を聴講した。ドイツ文学と漱石作品の関連等を始め、比較文学研究の最新の成果について、また近代における文学リテラシーの普及状況、「愛国」観の表現などを中心に日本近代文学研究の最新の成果についても、有意義な知見を得た。またミレイの絵画「オフィーリア」の受容状況など、日本近代文学の視覚性に関する研究についても、有益な知見を得た。3、また明治初期文学における「恋愛」概念の表現方法などを分析し、京都造形芸術大学における公開講座内で2014年8月に講演を行うとともに、図版を交えた視覚性の影響などを合わせて分析しなおし、概説を執筆した。書籍『明治、このフシギな時代』(新典社、2015年9月刊行予定、共著)に掲載予定である(現在、入稿済み)。4、上記の調査をもとに、書籍『漱石「文学」の黎明』(単著)を完成させ、2015年1月に青簡舎より刊行した。2、日本近代文学会秋季大会に出席し、研究発表・質疑応答を聴講した。漱石の漢詩と俳句的小説の関連をはじめとする、明治文学研究の最新の成果について有意義な知見を得た。また書物の装丁・挿絵に関する分析など、日本近代文学の視覚性に関する研究についても、有益な知見を得た。3、またこれらの成果をもとに、『漱石大事典』(翰林書房、2016年刊行予定、共著)の項目「絵/画/絵画」「ミレイ」他執筆のための準備等を行った。また明治初期文学における「恋愛」概念の表現方法などを分析した昨年度の成果をもとに、概説「恋人たちの明治文学史」を書籍『明治、このフシギな時代』(新典社、2016年1月刊行、共著)に掲載、発表した。4、今年度までの研究成果をふまえ、漱石中期作品における「断面的文学」の変容と、絵画的要素から着想を得た表現論の関連について、論文による公的発表をめざし、執筆準備を進めている。また書籍の装丁・挿画を含めた、言語表現における視覚性のあり方について、論文による公的発表をめざし、執筆準備を進めている。