hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
平安時代山岳寺院伽藍の調査研究-如意寺跡を中心として-

この埋め立てた土砂の中に,10世紀前半の灰釉陶器をはじめ,縁釉陶器などが大量に出土している。このような工法であったことは,今までの外観だけの調査では想像することもできなかった。今年度の調査から,如意寺は10世紀前半に現在の講堂よりも高い位置に造営されていたと推定できた。この創建の建物が廃絶した後,現在の講堂跡基壇とみている位置に講堂が再建された。それが『園城寺境内古図』に描かれている如意寺講堂の建物で鎌倉時代初期と考えられる。この調査の成果から,今後山岳寺院の調査をどのように進めて行くかという問題点を提示したこととなった。本年度調査を実施した地区は,如意寺跡の中で最も西端の宝厳院を中心とした地域で,東西400m,南北200mの範囲であった。この地区の遺跡で最も特徴的と言えるのは,園城寺(三井寺)の『園城寺境内古図』の下左,即ち如意寺の全域で言えば西端の位置に描かれている『楼門の滝』である。かつて川勝政太郎博士などが如意寺後を調査された時には,この滝を手掛かりにして『古図』の伽藍と現在の地形を対比して考えようとされた。この滝は,現在の位置でいえば,京都市の東方,『大文字』山の一つ南側の尾根にある鹿ケ谷にあって,今日でも『古図』に描かれた滝と同じ状況が見られる。更に『古図』で滝の左側,即ち北側には石段とその上に,この宝厳院の西門に当たる『月の輪門』が描かれているがこの石段も現在でも完全に残っていることが確認できた(『研究成果報告書』図版十三)。地形測量に先立って測量業者(日開設計コンサルタント及び測器舎)に依頼して,京都大学図書館屋上で人工衛星観測(GPS)をし,京都市左京区の養生住宅屋上の測量基準点と鹿ケ谷の二点を結んで基準点杭を設置し,25cmの等高線で地形測量を実施した。この測量には,帝塚山大学で開発したコンピューター測量のGIOVIEWを利用することによって作業のスピード化と精確さが向上した。なおこの地区の測量については,夏季には草木が繁茂し,滝に流れる桜谷川の水量が多く,東方部分において測量できなかった部分があったが,冬季には落葉して見通しもよく,滝は凍結していたため広範囲に実施できた。
教示行為による知識・技能の伝達過程の発達と障害:健常幼児と発達障害児の比較から

本研究の目的は,教示行為の観点からみた知識・技能の伝達過程を明らかにすることであった。小学校・特別支援学級で継続的に観察を行いった。また7か所の保育園・障害者作業所で実践検討を行った。その結果,(1)発達的に2歳代の自閉症児においても,他児に対して教示行為を行うことが明らかになった。また,(2)成人期障害者どうしにおいても教示行為を通して技術が伝達されることが明らかになった。本年度は,小学校特別支援学級に在籍する自閉症児4名の相互作用について,縦断的な観察を1年間・計10回おこなった。その結果,以下の事実が明らかになった。(1)年長者の自閉症児(小6)が,年少者の自閉症児(小2)に,自発的に学習を教える行為がみられたこと,(2)その際,年長の自閉症児が解き方を実際に見せるだけでなく,言語でヒントを出したり,ほめたりするなど言語レベルでのより高次な教示行為がみられたこと,(3)ただし,このような教示行為の頻度は,毎時間の授業でみられるわけではないこと,(4)年少の自閉症児(小2・小3)は,年長の自閉症児(小6, 2名)の授業中にみられる特定の発話や身振りを自発的に模倣し,それが子ども全員に「ブーム」として定着することが9月以降みられるようになった。以上のことから,自閉症児同士においても,教示行為は成立するが,知識・技能の伝達まで至るほど量的には多いわけではなく,自発的に年長者の行為を模倣することでクラス内での知識・技能が定着することが明らかになった。以上の結果について,来年度以降の学会で発表し,論文としてまとめる予定である。本年度は,大きくは以下の2つの点について研究を行った。1つは,健常児(定型発達児)の教示行為が日常のなかで,どのようにみられるのか,とくに子どもどうしでどのようにみられるのかについて,観察および保育者への聞き取りを行った。その結果,1歳児クラスから萌芽的に教示行為はみられるものの,1歳児クラスにおいては,頻度はそれほど多くないことがわかった。以上を踏まえて,2011年度は,保育園・幼稚園に在籍する子どもをもつ保護者を対象に教示行為についての発達過程に関する質問紙調査を実施する予定にしている。また,2点目として,発達障害児における教示行為の生起や障害について,小学校に出かけて観察を行った。計12時間の観察を行った。その結果,発達障害児が他者に対して教える行動は,状況によっては十分見られることが明らかになった。以上を踏まえて2010年度は、発達障害児、とくに自閉症児を対象とした実験的な研究を行う予定である。本年度は,教育実践のなかで,発達障害児同士がどのように教示行為を行うのか,そして,教示行為を引き出すには,どのような支援が求められるのかについて,縦断的に観察したビデオをもとに分析・執筆を行った。観察対象児は,小学校・特別支援学級に在籍する知的障害のある自閉症児童4名であった。観察期間は,2年間であった。分析の結果,次の2点が明らかになった。1つは,社会性に障害があるとされる自閉症児においても,教示行為が見られることであった。とくに発達的に2歳代の自閉症児においても,情報提供的な側面が中心ではあるが,教示行為が生起した。2つは,ただし,自閉症児の教示行為を引き出すには,意図的な支援が必要であることも明らかになった。具体的には,子ども同士で「教える-教えられる」関係が生起するように,授業内容をパターン化したり,子どもが他の子どもに教えやすいように教材・教具を工夫したりするなどの支援が重要であった。これらの知見を含めた研究成果を,観察対象であった特別支援学級の担任(村上公也氏)と共同で,『キミヤーズの教材・教具:知的好奇心を引き出す(DVD付)』(クリエイツかもがわ)という本を出版した。
HTLV-1関連脊髄症(HAM)におけるウイルス感染マクロファージの果たす役割

ヒトマクロファージ細胞株であるTHP-1細胞をマイトマイシン処理のHTLV-I感染リンパ球(MT-2細胞)と混合培養し,HTLV-IをTHP-1細胞に感染させた。感染初期においては、ウイルスメッセージの推移から、自己拘束性の溶解感染である可能性が示唆された。感染2カ月後、ウイルスメッセージは消失したが、ウイルスゲノムのシグナルは保たれており、感染細胞の割合は1,000個に1個であった。その後、それ以上の感染の拡大は認められなかったので、限界希釈法により感染細胞のクローニングを行い、最終的に4つのクローンが得られた。この4つのクローンは制限酵素による消化パターンが全く同じであり、同一起源の細胞と推定された。またPstI消化によって検出されるはずのenv領域2.4Kbのフラグメントが検出できなかったが、これは3'末端のPstI部位の点変異であることが分かった。また少なくとも未刺激の状態では、このクローンはウイルスメッセージの発現もウイルス蛋白の発現が認められなかった。さらにこの感染THP-1細胞において、サイトカインの動向を検討したところ、LPSによって細胞を刺激することにより、IL-6のメッセージ発現および分泌が亢進した。この事象はHAMの病因を考える意味で興味深い。しかしHTLV-I pxのメッセージが全く動いていない等、まだ問題点が残っており、今後さらに詳細な検討が求められる。ヒトマクロファージ細胞株であるTHP-1細胞をマイトマイシン処理のHTLV-l感染リンパ球(MT-2細胞)と混合培養し、HTLV-lをTHP-1細胞に感染させた。感染2カ月後,ウイルスメッセージは消失したが、ウイルスゲノムのシグナルは保たれており、感染細胞の割合は1,000個に1個であった。またPstl消化によって検出されるはずのenv領域2.4Kbのフラグメントが検出できなかったが、これは3′未満のPstl部位の点異変であることが分かった。また少なくとも未刺激の状態では、このクローンはウイルスメッセージの発現もウイルス蛋白の発現が認められなかった(Brain Pathology,4,1994)。以上、HTLV-l感染マクロファージクローンが得られたので、今後、活性・分化によりウイルス産生やサイトカイン分泌がどのように変化するかを調べると同時に、こえらクローンによってラットに神経病変を誘導できるかどうかを検索することが可能となった。昨年度、ヒトマクロファージ細胞(THP-1)とHTLV-1感染リンパ球(MT-2)を混合培養することにより、HTLV-1感染THP-1細胞ヒトマクロファージ細胞(TM-12)を樹立した。本年度はこの細胞におけるサイトカインの動向を検討した。親株THP-1および感染株TM-12から、型通りRNAを抽出した。さらに各細胞をフォールボールエステル(8mg/ml,48時間)、LSP(1μg/ml,24時間)で刺激し、同じようにRNAを抽出した。各RNA1μgからcDNAを作製し、階段希釈した後、TNF-α、1L-1、1L-6、INF-_Yに関してPCRを行い、特異的バンドが検出できる最終濃度によって、mRNAを半定量したところ、TNF-α、1L-1、INF-_Yのメッセージについては、非刺激、刺激、両者において、有意な差は認められなかった。しかしIL-6においては、非刺激状態では有意な差は認められなかったものの、刺激状態ではTM-12のメッセージ量はTHP-1の4-64倍であった。ついで非刺激、刺激状態のTM-12の上清中の培養上清の1L-6量をELISAにて測定したところ、非刺激状態では有意な差は認められなかったものの、刺激状態では約2-10倍の上昇を認めた。すなわちHTLV-
CPとT対称性の破れとフレーバーの物理

素粒子の標準模型は実験的な検証を受け、ほぼ確立したものと考えられる。しかしながら、クオーク・レプトンの質量生成機構やCP対称性の破れの起源などについては、標準模型の枠内で説明することはできない。本研究の目的は、標準模型の背後にある、より基本的な素粒子模型を探索し、それを検証する実験的方法を提案することにある。この目標に向けて、次の二つの課題を設定し研究を遂行した:(1)クオークの質量生成機構、(2)CP対称性の破れの起源。(1)クオークの質量生成機構質量生成の機構を場の量子論に基づいて解明するために、非摂動的な方法を用いて、有限温度や重力場の下での動的カイラル対称性の破れの研究を行い、動的質量生成機構に対する解析的な結果を得た。本研究により、クォークやレプトンの質量が、宇宙初期の状態でどのようにして生成されたかを調べる手がかりが得られた。他方、なぜトップクオークの質量だけが電弱対称性の破れのスケール(100-200GEV程度)にあり、他のクオーク・レプトンがそれよりずっと軽いのかという疑問に対して、標準模型は答えを与えていない。本研究では、Left-Right模型を用いてこの問題に取り組んだ。この模型には、シーソー機構が自然にくみこまれ、電弱対称性の破れのスケールより軽いクオーク・レプトンの質量を説明するのに適している。トップクオークの発見により、1つのクオークだけが電弱対称性の破れのスケールにあることがわかり、シーソー機構に基づくクオーク質量公式を用いる本模型は、一時顧みられなかった。本研究の結果、トップクオークに対して、シーソー機構が働かないようにすることができ、その質量を電弱対称性の破れのスケールに留まらせることができることがわかった。従って、標準模型の背後にある理論に候補として、この模型が充分考慮に値するものであることが明らかとなった。(2)CP対称性の破れの起源Left-Right模型を用いて、小林一益川行列がどのように導かれるかを解明した。標準模型との違いとしてこの模型では、小林一益川行列のユニタリー性はわずかであるが破れることがわかった。その結果、ツリーレベルの中性カレントが生じる。この大きさを理論的に評価し現在の実験の制限に比べて充分抑制されることも示した。ただ、近い将来稼働する予定のBファクトリーでこの模型を検証するのは、簡単ではないことがわかった。模型の検証をK中間子やニュートリノの物理にひろげて研究することは今後の課題である。今年度は、クオーク質量階層性とフレーバー混合の起源に関して、標準理論を越える理論に基づいて研究を行った。研究の目的は、標準模型に比べてクオーク質量階層性を自然に導く模型を考え、その模型におけるフレーバー混合とCP対称性の破れの起源を研究することにある。

具体的には、クオーク質量のうちトップクオークを除く5つのクオークが電弱相互作用の破れのスケール(約10GeV)より軽いことに注目し、これを自然に導く機構としてシ-ソ-機構に注目した。この機構によると、軽いクオークの質量の起源は、もともと質量が零のクオークが中間状態にある重いクオークと混合することで、重いクオークの質量の逆数に比例する小さな質量をもつと説明される。シ-ソ-機構が働くには、標準模型をさらに拡張したゲージ対称性ヒッグス、フェルミオンセクターを持つ理論を考察する必要がある。我々は、SU(2)_L×SU(2)_R×U(1)のゲージ群に、シ-ソ-機構を働かせるために必要な重いクオークとSU(2)_Rの対称性を破るのに必要な新たなヒッグズ粒子を加えた理論に基づいて、トップクオークも含む6つのクオークの質量階層性とフレーバー混合を解析し、・軽いクオークだけでなくトップクオークもこの理論で統一して扱えること、・フレーバー混合があっても質量階層性が得られること、を示した。関連する研究として、重いパリオンの崩壊のダイナミックスをBS方程式に基づいて調べ、その機構を解明した。これらの研究の今後の課題は、次の通りである。1.この模型の現象論、特にトップクオーク対生成やFCNCプロセスにおいて模型の兆候が見える可能性があるのでこれらを統一的に調べる。2.1と関連してこの模型におけるフレーバー混合=小林、益川角の特色、特に、CP対称性の破れとしての位相の起源の研究を行う。3.統一理論(ゲージ群及びクオーク、レプトンの統一)および、複合ヒッグス理論の枠組で模型を展開し、それに基づいて、バリオン数生成問題の検討を行う。素粒子の標準模型は実験的に検証されつつあり、ほぼ確立したものと考えられる。しかしながら、クオーク・レプトンの質量生成機構やCP対称性の破れの起源などについては、標準模型の枠内で説明することはできない。本研究の目的は、標準模型の背後にある、より基本的な素粒子模型を探索し、それを検証する実験的方法を提案することにあった。この目標に向けて、次の二つの課題を設定し研究を遂行した:(1)クオークの質量生成機構、(2)CP対称性の破れの起源(1)クオークの質量生成機構なぜトップクオークの質量だけが電弱対称性の破れのスケール(100-200GEV程度)にあり、他のクオーク・レプトンがそれよりずっと軽いのかという疑問に対して、標準模型は答えを与えていない。本研究では、Left-Right模型を用いてこの問題に取り組んだ。この模型には、シ-ソ-機構が自然にくみこまれ、電弱対称性の破れのスケールより軽いクオーク・レプトンの質量を説明するのに適している。トップクオークの発見により、1つのクオークだけが電弱対称性の破れのスケールにあることがわかり、シ-ソ-機構に基づくクオーク質量公式を用いる本模型は、一時顧みられなかった。本研究の結果、トップクオークに対して、シ-ソ-機構が働かないようにすることができ、その質量を電弱対称性の破れのスケールに留まらせることができることがわかった。従って、標準模型の背後にある理論の候補として、この模型が充分考慮に値するものであることが明らかとなった。また、質量生成の機構を場の理論的に基礎づけるために、非摂動的な方法により、有限温度や重力場の下での動的カイラル対称性の破れの研究を行い、質量生成機構に対する解析的な結果を得た。
マルチピエゾの領域開拓：発光と圧電のシナジー効果

申請者は僅かな機械応力を加えることで「目に見える」光を放出する特異構造の無機結晶応力発光体を発見し、開拓者としてこの分野の研究を牽引してきた。直近では新規に圧電性の強い結晶系の応力発光体の合成に初めて成功している。このような強い応力発光性と圧電性を同時に発現させる革新的な機能を我々はマルチピエゾと名付けている。しかし、応力発光性と圧電性の相関メカニズムはまだ解明されておらず、なぜ極微力に対しても繰り返し発光するか、現状理論では説明できない。本研究では、今までのポテンシャル蓄積と新規発見を足場に、マルチピエゾ材料の物性・機能を解明することで、多元変換の本質を明らかにする。応力発光と圧電性が同時に発現するマルチピエゾ材料の物性と機能を解明し、電気-力-光の多元変換の本質を明らかにすることで、マルチピエゾ領域の開拓を目指す研究である。応力発光と圧電性が同時に発現するマルチピエゾ材料の物性と機能を解明し、マルチピエゾ領域の開拓を目的としており、研究の独自性と創造性が認められる。本研究に密接に関係する新規材料を既に発見しているが、これを凌駕する性能を有する新たな材料探索が期待される。
介入研究による齲蝕予防効果の評価

1.はじめに:本研究は、むし歯予防に対する「砂糖摂取の制限」「徹底した歯磨き」の教育効果の評価を行うことを目的とする、幼児健診における歯科検診と指導の機会を利用しての介入研究である。当該年度では、1歳6か月健診時、3歳児診断時における各群間の齲蝕有病率の検討を行った。2.対象:石川県輪島保健所管内の輪島市と岩手県久慈保健所管内の久慈市の平成3年1月から12月の1年間に1歳6か月健診を受ける幼児とした。3.方法:1歳6か月児健診において、受診月ごとに被検者を「従来の教育方法+砂糖制限」群、「従来の教育方法+歯磨き教育」群、「従来の教育方法」群の3群に分け、健診時の指導をはじめ、その後家庭訪問や手紙などによる教育を行い、3歳児健診時に判定を行った。解析では、研究期間における一人平均乳歯齲蝕経験歯数(dmft指数)の増量を用い、全顎、上顎左右中切歯、上下顎左右第一乳臼歯および上下顎左右第二乳臼歯の4項目について3群間での差を比較した。4.結果:解析対象は「従来の教育方法」群95、「歯磨き教育」群57、「砂糖制限教育」群44で、合計196であった。解析の結果は表に示すとおり、いずれの項目についても、3群間で有為な差は確認できなかった。5.考察:これまでの観察的研究では、乳児の齲蝕予防には、砂糖の制限がより有効であることが示されている。そこで、砂糖の制限と歯磨きとについて、強力な介入を行うことにより、その効果を確認する調査を行ったが、明確な関連を明らかにすることはできなかった。対象となった母親の感想として、実行の困難さが出されており、今回の結果を生活習慣の実際の改善と関連づけて検討する必要がある。概要1歳6か月から3歳の幼児における、むし歯予防に対する「砂糖摂取の制限」「徹底した歯磨き」の教育効果の評価を行うことを目的とした、幼児健診における歯科検診と指導の機会を利用した比較対照研究である。当該年度においては、研究計画を作成し、それに基づいて、対象地区や対象者の選定、調査表の作成、対象者への指導基準の作成などを行うと共に、対象地区の幼児健診において、介入前の調査を開始した。対象石川県輪島保健所管内の輪島市と岩手県久慈保健所管内の久慈市の平成3年1月から12月の1年間に1歳6か月健診を受ける幼児とした。方法1歳6か月児健診において、「従来の教育方法+砂糖制限」群、「従来の教育方法+歯磨き教育」群、「従来の教育方法群」の3群に分け、健診時の指導を始め、その後家庭訪問や手紙などによるた教育を行い、3歳児建診時に判定を行う。効果判定は、齲歯の発病者率、有病者率、一人平均齲歯数、OABC分類などによって行うこととし、当該年度において、1歳6か月時の調査を開始し、指導基準に基づいた教育を開始した。概要目的は、1歳6カ月から3歳の幼児における、齲蝕予防に対する「砂糖摂取の制限」「徹底した歯磨き」の教育効果の評価を行うことである。幼児健診における歯科健診と指導の機会を利用した比較対照研究である。初年度において、対象地区や対象者の選定、調査表の作成、対象者への指導基準の作成と、事前調査を開始した。当該年では、対象児に対して、歯科健診と介入前の調査を行い、その後の教育を継続した。次年度の3歳児健診を利用して、介入後の調査を行に教育効果の判定を行う。対象石川県輪島保健所管内の輪島市と岩手県久慈保健所管内の久慈市において、平成3年1月から12月の1年間に1歳6か月児健診を受ける幼児とした。方法1歳6か月児健診において、「従来の教育方法」群、「従来の教育方法+砂糖制限教育」群、「従来の教育方法+歯磨き教育」の3群に分け、健診時の指導を始め、その後家庭訪問や手紙などによる教育を実施し、3歳児健診児に判定を行う。効果の判定は、齲歯の発病者率、有病者率、一人平均齲歯数、OABC分類などによって行う。当該年では、対象児に対して、歯科健診と介入前の調査を行い、その後の教育として、手紙の配布、訪問などを継続し、経過途中での砂糖制限や歯磨きの実施状況を調査した。

解析では、研究期間における一人平均乳歯齲蝕経験歯数(dmft指数)の増量を用い、全顎、上顎左右中切歯、上下顎左右第一乳臼歯および上下顎左右第二乳臼歯の4項目について3群間での差を比較した。4.結果:解析対象は「従来の教育方法」群95、「歯磨き教育」群57、「砂糖制限教育」群44で、合計196であった。解析の結果は表に示すとおり、いずれの項目についても、3群間で有為な差は確認できなかった。5.考察:これまでの観察的研究では、乳児の齲蝕予防には、砂糖の制限がより有効であることが示されている。そこで、砂糖の制限と歯磨きとについて、強力な介入を行うことにより、その効果を確認する調査を行ったが、明確な関連を明らかにすることはできなかった。対象となった母親の感想として、実行の困難さが出されており、今回の結果を生活習慣の実際の改善と関連づけて検討する必要がある。
ヒラメ地域集団の生理生態的分化と遺伝的分化に関する研究

ミトコンドリアDNA調節領域の塩基配列分析を昨年度の定点に加え,これまで分析個体数の少なかった北海道,データの欠けていた宮崎・高知・三重,さらには朝鮮半島南部及び中国青島南部海域より入手したヒラメについて実施した.新潟県佐渡島産ヒラメのデータ(Fujii and Nishida,1997)を含め,これまでに得られた全データ(15ヶ所)についてmtDNAハプロタイプ組成を調べるとともに,Fstによる地域的な異質性に検討を加えた.その結果,日本周辺の採集点間には有意な遺伝的異質性は認められなかったが,佐渡島と他の多くの地点間には微妙な差異が確認され,また,青島産ヒラメのみハプロタイプ組成が異なった.これらの結果は,北西太平洋海域に分布するヒラメは全体としては遺伝的に均質な大集団を形成しているとみなされるが,局所的には遺伝的分化が生じている可能性も示唆している.一方,朝鮮半島南部で採集されたヒラメのmtDNA塩基配列は個体間でほとんど差異がなく,人工種苗に由来する個体が大部分と考えられた.飼育実験により地域個体群間の仔稚魚期の成長に検討を加えた.岩手県宮古湾産及び熊本県天草産のヒラメをそれぞれ北方冷水性個体群及び南方暖水性個体群の代表に選び,それらの受精卵を京大水産実験所(舞鶴市)に輸送し,ふ化から変態完了まで14,18,22°Cの水温条件下で閉鎖循環式水槽を用いて飼育した.その結果,宮古産ヒラメ仔魚の成長は14°C区では熊本産より高い傾向が認められた.さらに,18°Cで変態完了まで飼育したヒラメ稚魚を10,14,18,22,26,30°Cの水温下で体調50mmになるまで飼育を行った結果,稚魚期においても低水温区では宮古湾産ヒラメの成長が熊本産の成長を上回った.これらの結果は,遺伝的に均質な日本周辺のヒラメの中にも,地域の環境に適応して生理生態的には異なった特徴を持つ可能性を示唆している.ミトコンドリアDNA調節領域の塩基配列分析を昨年度の定点に加え,これまで分析個体数の少なかった北海道,データの欠けていた宮崎・高知・三重,さらには朝鮮半島南部及び中国青島南部海域より入手したヒラメについて実施した.新潟県佐渡島産ヒラメのデータ(Fujii and Nishida,1997)を含め,これまでに得られた全データ(15ヶ所)についてmtDNAハプロタイプ組成を調べるとともに,Fstによる地域的な異質性に検討を加えた.その結果,日本周辺の採集点間には有意な遺伝的異質性は認められなかったが,佐渡島と他の多くの地点間には微妙な差異が確認され,また,青島産ヒラメのみハプロタイプ組成が異なった.これらの結果は,北西太平洋海域に分布するヒラメは全体としては遺伝的に均質な大集団を形成しているとみなされるが,局所的には遺伝的分化が生じている可能性も示唆している.一方,朝鮮半島南部で採集されたヒラメのmtDNA塩基配列は個体間でほとんど差異がなく,人工種苗に由来する個体が大部分と考えられた.飼育実験により地域個体群間の仔稚魚期の成長に検討を加えた.岩手県宮古湾産及び熊本県天草産のヒラメをそれぞれ北方冷水性個体群及び南方暖水性個体群の代表に選び,それらの受精卵を京大水産実験所(舞鶴市)に輸送し,ふ化から変態完了まで14,18,22°Cの水温条件下で閉鎖循環式水槽を用いて飼育した.その結果,宮古産ヒラメ仔魚の成長は14°C区では熊本産より高い傾向が認められた.さらに,18°Cで変態完了まで飼育したヒラメ稚魚を10,14,18,22,26,30°Cの水温下で体調50mmになるまで飼育を行った結果,稚魚期においても低水温区では宮古湾産ヒラメの成長が熊本産の成長を上回った.これらの結果は,遺伝的に均質な日本周辺のヒラメの中にも,地域の環境に適応して生理生態的には異なった特徴を持つ可能性を示唆している.これまで試料を集積してきた日本海沿岸に加え,高知県青森県に至る太平洋沿岸域でヒラメ稚魚の採集を行った.和歌山県沿岸,宮城県女川湾及び岩手県宮古湾など局所的には比較的稚魚密度の高い海域も認められたが,全体として日本海沿岸,特にその西部海域に比べて太平洋沿岸域のヒラメ稚魚密度は著しく低いことが明らかとなった.得られた稚魚は耳石によるふ化日,着底日ならびに稚魚期の成長,鰭条数の計数,mtDNA調節領域の塩基配列等の分析に用いた.熊本県天草産のヒラメ親魚より得た卵を用い,14,18,22°Cの水温下で飼育を行い,仔魚期の成長速度や鰭条数と水温の関係を調べている.18°Cで飼育した仔魚は,着底後10,14,18,22,26,30°Cの水温区に移し,全長50mmまで飼育を行い,水温と稚魚期初期の成長速度ならびに性比の関係の解析を進めている.全く同様の実験を北海道石狩湾産の親魚より得る卵を用いて行い,地理的変異の解析を行う.ミトコンドリアDNAならびにマイクロサテライトDNAを用いたヒラメの遺伝的集団構造の解析は,佐渡島や北海道にやや異質な集団が存在する可能性を示すものの,日本周辺のヒラメは遺伝的にほぼ均質な集団を形成していることが明らかになりつつある.

これまでに予測されつつある生理生態的な地理的異変性を精密な飼育実験を通じて明らかにし,DNA情報より得られた遺伝的集団構造との関係を分析する.本年度後半から次年度前半には当課題の柱と考えられる飼育実験を引き続き進めるとともに,アロマターゼmRNA分析による性判別法を用い,日本周辺海域より集めた天然ヒラメ稚魚の性比の地理的変異を解析する.ミトコンドリアDNA調節領域の塩基配列分析を昨年度の定点に加え,これまで分析個体数の少なかった北海道,データの欠けていた宮崎・高知・三重,さらには朝鮮半島南部及び中国青島南部海域より入手したヒラメについて実施した.新潟県佐渡島産ヒラメのデータ(Fujii and Nishida,1997)を含め,これまでに得られた全データ(15ヶ所)についてmtDNAハプロタイプ組成を調べるとともに,Fstによる地域的な異質性に検討を加えた.その結果,中国産ヒラメを含め採集点間に有意な遺伝的異質性は認められなかったが,佐渡島と他の多くの地点間には微妙な差異が確認された.これらの結果は,北西太平洋海域に分布するヒラメは全体としては遺伝的に均質な大集団を形成しているとみなされるが,局所的には微妙な遺伝的分化が生じている可能性も示唆している.一方,朝鮮半島南部で採集されたヒラメのmtDNA塩基配列は個体間でほとんど差異がなく,人工種苗に由来する個体が大部分と考えられた.飼育実験により地域個体群間の仔稚魚期の成長ポテンシャルに検討を加えた.岩手県宮古湾産及び熊本県天草産のヒラメをそれぞれ北方冷水性個体群及び南方暖水性個体群の代表に選び,それらの受精卵を京都大学附属水産実験所(舞鶴市)に輸送し,ふ化から変態完了まで14,18,22°Cの水温条件下で閉鎖循環式水槽を用いて飼育した.その結果,宮古産ヒラメ仔魚の成長は14°C区では熊本産より高い傾向が認められた.さらに,18°Cで変態完了まで飼育したヒラメ稚魚を10,14,18,22,26,30°Cの水温下で体長50mmになるまで飼育を行った結果,稚魚期においても低水温区では宮古湾産のヒラメの成長が熊本産の成長を上回った.これらの結果は,遺伝的に均質な日本周辺のヒラメの中にも,地域の環境に適応して生理生態的には異なった特徴を持つ可能性を示唆している.
ドラッグデリバリーシステムを用いたレプチンの局所投与による骨折治癒促進効果の検討

1)骨折治癒部位に対するレプチンの局所投与の効果(レプチン欠損マウスにおいて)われわれは、以前の研究において、ob/obマウス(レプチン欠損マウス)では正常マウスに比較して12週間の骨折治癒の遅延が認められることを確認している。今回は、ob/obマウスにレプチンを添加することにより、その骨折治癒の改善がはかれることを確認するために研究を行った。生後5週齢のob/obマウス(雄性)の右側第8肋骨を骨折させ、レプチン含有生分解性ポリマー(平成17年度に作成済み)を骨折部位に留置した。またネガティブコントロールとしてレプチンを含まない生分解性ポリマーを用いた。骨折後0、4、7、14、21および28日目に組織学的変化を観察した。レプチン含有群では骨折後21日目には軟骨内に血管新生が生じ、28日目には軟骨から骨への置換が完全に終了し、骨折治癒がほぼ終了していた。ネガティブコントロール群では、骨折の治癒は進行するものの、28日目においては、少数の血管新生を認めるのみで、骨折治癒の遅延が認められた。また、摘出骨をマイクロCTを用いて検索することにより、組織学的検索同様、レプチンを添加したob/obマウスではネガティブコントロール群と比較して早期に骨梁の形成が認められた。2)正常マウスにおける骨折治癒の検討正常マウス(ICR;雄性)の右側第8肋骨を骨折させ、レプチン含有生分解性ポリマーを骨折部位に留置した。レプチン含有群では骨折後14日目には軟骨内に血管新生が生じ、21日目には軟骨から骨への置換がほぼ終了していた。ネガティブコントロール群では、骨折の治癒は約1週間程度遅れていた。<結論>レプチン投与により骨折治癒が促進することが確認できた。局所増殖因子としてのレプチンの役割を検討するために、本年度はレプチンのドラックデリバリーシステムの開発を第1の目的として、研究を行った。今後のシステムを骨折部位に投与し、その治癒促進を謀ることも視野に入れ、骨折マウスへの皮内注射による骨折治癒部位の変化も検討した。1)レプチン投与の担体として生分解性ポリマー(ラクタイド、グリコライドおよびカプロラクトンの3種類の環状モノマーを重合・共重合することによりポリマーを合成したもの)へのレプチン吸着1%、2%、5%の50/50PLGAに10μg/100μlのレプチンを溶かしてディスクを作成した。2)レプチン含有生分解性ポリマーからのレプチンの徐放速度の測定上記で作成したディスクをPBS500μlに浸漬し、経時的(1日、3日、5日、7日、14日、21日、28日)にPBS中のレプチン濃度の測定をELISA法にて行った。測定は、R&D system社のQuantikine human leptinを用いて行った。レプチンモノクローナル1次抗体にてコーティングされた96穴プレートに、サンプルおよびスタンダードを各wellに加え、室温で2時間インキュベートした。Wash bufferにて洗浄後、HRP標識抗レプチン抗体を加えて室温で1時間インキュベートした。Wash bufferにて洗浄後、発色基質を加え、遮光下室温で30分インキュベートした。Stop solutionを加え、発色を停止した後、マイクロプレートリーダーを用いて450nmの吸光度を測定し、スタンダード曲線からレプチン量を計算した。1%、2%、5%いずれの濃度においても、測定期間内に数十pg800pgのレプチンの放出が認められた。3)骨折マウスに対するレプチンの皮下投与雄性ICR5週齢マウスの第8肋骨を骨折させ、その後、隔日にて30μg/0.3mLSaline/匹レプチンを投与。対照群(生理食塩液のみ投与)と比較して、レプチン投与群にて、骨折治癒の促進が観察された。2)正常マウスにおける骨折治癒の検討正常マウス(ICR;雄性)の右側

第8肋骨を骨折させ、レプチン含有生分解性ポリマーを骨折部位に留置した。またネガティブコントロールとしてレプチンを含まない生分解性ポリマーを用いた。骨折後0、4、7、14、21および28日目に組織学的変化を観察した。レプチン含有群では骨折後14日目には軟骨内に血管新生が生じ、21日目には軟骨から骨への置換がほぼ終了していた。ネガティブコントロール群では、骨折の治癒は約1週間程度遅れていた。<結論>レプチン投与により骨折治癒が促進することが確認できた。
不変体の有理性問題

ガロア逆問題の構成的研究を主眼とし,有限群の作用による不変体の有理性問題の研究を行った.有理性問題の研究に重要となる不分岐ブラウアー群という不変量を群の位数が奇素数pの5乗の場合に完全に決定した.不分岐ブラウアー群を一般化した不分岐コホモロジー群についても,位数が奇素数pの9乗の場合に非消滅性を示した.ネーター問題の研究,関連する作用による不変体の有理性問題の研究を行い,新たな知見をいくつも得た.Ming-chang Kang氏(国立台湾大学)、北山秀隆氏(和歌山大学)との共同研究として、有限群の有理関数体への半単項式作用による不変体の有理性問題の研究を行った。半単項式作用による不変体の有理性問題は、これまで従来行われていた単項式作用による有理性問題及び代数的トーラスの有理性問題を一般化したものである。まず、1次元、2次元の場合に、不変体が有理的であるための必要十分条件を2次ノルム剰余記号(ヒルベルト記号)を用いて与えた。さらに、ガロア理論における埋め込み問題との対応関係を明らかにした。特に、有理的でない場合には、さらに強く、安定有理性、レトラクト有理性、単有理性のいずれもが成立しないことを示した。続いて、1次元、2次元における結果を高次元の場合に応用し、不変体の有理性問題への結果を得た。まず、3次元及び4次元の直可約表現に付随する不変体の有理性を示した。次に、5次元のいくつかの場合にも低次元で得られた結果を応用し、不変体の有理性・非有理性をそれぞれの場合に示した。特に、この場合の非有理性の証明は、不分岐ブラウアー群が非自明であることに帰着され、これより、代数閉体上の非有理性及び安定有理性、レトラクト有理性のいずれもが成り立たないことが示された。以上の結果は、Journal of Algebra (2014)から発表された。さらにこの研究を発展させるため、Ming-chang Kang氏、北山秀隆氏と共同研究を行い、いくつかの成果を得た。これらの結果は順次論文としてまとめ、発表していきたい。Ming-chang Kang氏(国立台湾大学)、山崎愛一氏(京都大学)との共同研究として二面体群についてのrelation moduleの研究、及び3次不分岐ブラウアー群の研究を行った。前者については、relation moduleの直和分解の様子や直既約性を調べ、それを不変体の有理性問題に応用した。後者については、Emmanuel Peyre氏による先行結果、位数がpの12乗である有限群が存在し、その群作用による不変体に対する3次不分岐ブラウアーは非自明となる、を改善することを試み、実際、位数がpの9乗の有限群への改善に成功した。これらの結果はプレプリントとしてまとめられ、arXivから公開された。素数位数の巡回群に対する有理数体上のネーター問題を、コンピューターを使って20000以下の素数に関して、いくつかの未解決の場合を除いて検証することに成功した。この結果は日本学士院紀要から論文として発表された。また、北山秀隆氏(和歌山大学)との共同研究として、有限群の有理関数体への半単項式作用による不変体の有理性問題の研究を行った。この研究は、これまで従来行われていた単項式作用による有理性問題や代数的トーラスの有理性問題を一般化したものである。3次元で作用が純単項式と呼ばれる場合に、同問題をいくつかの例外を除いて解決した。この結果はプレプリントとしてまとめられ、arXivから公開された。これら以外にも、いくつかの研究成果が得られており、順次論文としてまとめ発表していきたい。Huah Chu氏(国立台湾大学)、Shou-Jen Hu氏(淡江大学)、Ming-chang Kang氏(国立台湾大学)との共同研究として、位数243の群に対するネーター問題を考察し、7番目と10番目の同質族を除き、対応する不変体の有理性を示した。この結果は、Hoshi-Kang-Kunyavskii (2013, Asian J. Math.)による「位数がp (p:奇素数)の5乗の群に対する不変体の不分岐ブラウアー群の決定」をより精密化したものにあたる。これにより、有理性が未解決なものは7番目の同質族のみとなった。以上は、Journal of Algebra (2015)から発表された。位数128の群に対する不変体の不分岐ブラウアー群はMoravec (2012, Amer. J. Math.)によって決定されている。これを精密化し、不分岐ブラウアー群が非自明な場合に、各不変体が安定双有理同値かどうかを調べ、該当する220個の位数128の群に対して、不変体は高々3種類しかないことを示した。以上は、Journal of Algebra (2016)から発表された。Ming-chang Kang氏、山崎愛一氏(京都大学)との共同研究として、3次の不分岐コホモロジー群の研究を行った。先行研究であるE. Peyre氏のpの12乗の群に対する不変体の3次不分岐コホモロジー群が非自明となる例の構成(2008, Invent. Math.)をpの9乗に改善した。以上は、Journal of Algebra (2016)から電子出版された。

単独研究として、位数128の群に対する不変体の安定双有理同値に関する結果を発表したほか、Huah Chu氏(国立台湾大学)、Shou-Jen Hu氏(淡江大学)、Ming-chang Kang氏(国立台湾大学)との位数243の群のネーター問題に関する共同研究、Ming-chang Kang氏、山崎愛一氏(京都大学)との3次不分岐コホモロジーに関する共同研究の成果も発表した。これ以外にも北山秀隆氏(和歌山大学)との共同研究もすすんでいる。さらに進んだ研究成果がいくつも既に得られており、当初の計画以上の成果を得ている。順次論文としてまとめ、発表していきたい。本研究の成果を以下に挙げる。(1)有限群の有理関数体への半単項式作用による不変体の有理性問題の研究。2次元以下の場合、不変体が有理的であるための必要十分条件をノルム剰余記号(ヒルベルト記号)で与え、埋め込み問題との対応を明らかにした。特に、非有理的な場合、安定有理性、レトラクト有理性、単有理性のいずれも成り立たないことを示した。また、5次元以下の直可約表現に付随する不変体の有理性問題に応用した。別の論文では、3次元純単項式作用の同問題を例外を除いて解決した。(2)二面体群についてのrelation moduleの研究。relation moduleの直和分解の様子や直既約性を調べ、不変体の有理性問題に応用した。(3) 3次不分岐コホモロジーの研究。Peyre氏による先行結果、ある位数がpの12乗である有限群の作用による不変体に対する3次不分岐コホモロジーは非自明となる、を位数がpの9乗に改善した。(4)素数位数の巡回群に対する有理数体上のネーター問題の研究。コンピューターを使って20000以下の素数に対し、いくつかの場合を除いて検証した。(5)位数243の群に対するネーター問題の研究。7番目と10番目の同質族を除き、対応する不変体の有理性を示した。これは、Hoshi-Kang-Kunyavskii (2013)による「位数がp (p:奇素数)の5乗の群に対する不変体の不分岐ブラウアー群の決定」の精密化にあたる。(6)位数128の群に対する不変体の不分岐ブラウアー群の研究。Moravec氏(2012)による結果を精密化し、不分岐ブラウアー群が非自明な場合に、各不変体が安定双有理同値かどうかを調べ、該当する220個の場合、不変体は高々3種類しかないことを示した。(7)代数的トーラスの有理性問題の研究。代数的トーラスの4次元と5次元の安定有理性問題を解決した。ガロア逆問題の構成的研究を主眼とし,有限群の作用による不変体の有理性問題の研究を行った.有理性問題の研究に重要となる不分岐ブラウアー群という不変量を群の位数が奇素数pの5乗の場合に完全に決定した.不分岐ブラウアー群を一般化した不分岐コホモロジー群についても,位数が奇素数pの9乗の場合に非消滅性を示した.ネーター問題の研究,関連する作用による不変体の有理性問題の研究を行い,新たな知見をいくつも得た.単独研究として、素数位数の巡回群に対する有理数体上のネーター問題に関する結果を論文として発表したほか、Ming-chang Kang氏(国立台湾大学)、山崎愛一氏(京都大学)との共同研究として、二面体群についてのrelation module、3次不分岐ブラウアー群に関する結果を得た。北山秀隆氏(和歌山大学)との共同研究も順調に進んだ。
末期網膜色素変性症患者の網膜電気刺激による視機能獲得の試み

中間透光体に混濁のない網膜色素変性症患者9例、男性5例、女性4例、年齢3449歳に、患者の同意を得てEER検査、ゴールドマン視野検査、single-flashERG検査およびflashVEP検査を行い結果を比較した。ゴールドマン視野検査で周辺視野が狭窄するにしたがい、EERのいき値の上昇および振幅または波形が異常になる傾向が認められた。EERとERGを比較すると、ERGのb波の振幅の低下にともないEERが異常を示す割合が増加する傾向を認めた。しかし、ERGがnon-recordableでもEERの反応がよいものも2例に認められた。VEPとの比較ではVEPのいき値上昇が軽度のものではEERは良好であったが、VEPのいき値上昇が大きいものでは、VEPのいき値が上昇するに従いEERのいき値も上昇した。このことよりEERの起源と思われる網膜神経節細胞の維持には、網膜色素上皮が正常であることが必要であると思われた。[2]家兎におけるEERの記録正常白色家兎3匹にコンタクト角膜電極を装着し眼球に電気刺激を行い、頭蓋を開き硬膜上においた電極より誘発電位を記録した結果、右側後頭葉よりEERが得られた。同時にVEPとERGも記録した。次に1-ornithine hydrochloride 0.5M溶液0.03mlを毛様体偏平部より硝子体中央部に注入し(3眼)、実験的網膜色素変性症を作成した。注入7日後および1ヶ月後にEER、VEP、ERGを記録したところ、VEP、ERGは消退したがEERは正常で、実際の患者の場合と異なる結果を得た。今後はさらに長期の経過および網膜神経節細胞の萎縮課程を形態学的にとらえる予定である。
アンジオテンシンIIー食塩高血圧ラットにおけるカルシウムの降圧効果

カルシウム(Ca)の降圧作用は昔から報告があるが、最近食塩高血圧との関係が知られるようになってきた。食塩高血圧の発症維持構には交感神経系が重要な役割を果たしているので、Caの降圧作用にも交感神経系が重要な役割を果たしているか否かを検討する目的で以下の実験を行った。〔方法〕浸透圧ミニポンプでアンジオテンシンII(AII)を125ng/minの速度で腹腔内投与したSpragneーDawley雄ラットに普通食・3、15%ナトリウム(Na)食・4.07%Ca食およびNaーCa食を12日間投与し血圧・血中電解質および活性型ビタミンD(1.25ー(OH)_2D_3)・血漿カテコラミン濃度を測定した。〔結果〕コントロ-ルラット(108±2mmHg)に比較してAII投与のみでも軽度の昇圧を生じた(131±4mmHg)。これに食塩を負荷すると著明な血圧上昇をきたした(161±4mmHg)。AIIーNaラットにCaを負荷すると食塩負荷時の昇圧は抑制された(126±4mmHg)。しかし、AIIラットにCaを負荷しても有意の降圧は生じなかった。この時の血清電解質の変化を見るとAIIーCaラットで血清Ca上昇・リン(P)低下を認めたが降圧をきたしたAIIーNaーCaラットではこれらに有意の変化はなかった。血漿1.25(OH)_2D_3はいずれのラットでも有意の変化はなかった。血漿ノルエピネフリンはコントロ-ルラット(106±7pg/ml)に比べてAllーNaラットで有意の上昇を示した(174±22pg/ml)。これに対してAIIーNaーCaラットでは低下傾向を認めた(114±7pg/ml)。血漿総カテコラミンもAIIーNaラットで上昇し(176±5vs276±30pg/ml)、AIIーNaーNaラットで低下した(182±13pg/ml)。〔考察〕Ca負荷は食塩負荷時の血圧上昇を抑制することがAIIー食塩ラットにおいても証明された。また、血漿カテコラミンの成績からCaの降圧機序に交感神経系が重要な役割を果たしていることが示唆された。しかし、血中Caレベルからこれらの関与は示唆されなかった。
多発性硬化症モデルにおける脂質のダイナミクス

多発性硬化症は中枢神経系を侵す炎症性脱髄疾患である。欧米諸国における有病率は高いが、日本では稀な疾患のため特定疾患に指定されている。多発性硬化症の発症原因には不明な点が残されており、現時点では根治療法はない。多発性硬化症のマウスモデルと考えられている実験的アレルギー性脳脊髄炎の研究から、CD4陽性T細胞がこの疾患で重要な役割を担っていることが示唆されている。近年、細胞質型ホスホリパーゼA2が実験的アレルギー性脳脊髄炎において重要な働きをしていることが報告された[Neuron 41,323&J.Exp.Med.202,841]。これらの報告から、細胞質型ホスホリパーゼA2によって産生される種々の脂質メディエーター(プロスタグランジン類、ロイコトリエン類、リン脂質類など)がこの疾患に深く関与していることが考えられるが、これらの脂質メディエーターのうちどの分子がどのように関与しているかを網羅的に解析した研究はほとんどない。そこで、本研究では実験的アレルギー性脳脊髄炎の病巣部における脂質メディエーターを前駆体および代謝産物と併せて網羅的に定量し、加えて脂質メディエーター代謝関連酵素及び受容体のmRNA含量も定量した。病態の推移に伴い、脂質プロファイルはダイナミックに変化していることが明らかとなった。さらに、代謝酵素または受容体の欠損マウスを用いて、病態の推移及びT細胞の免疫応答などの解析を行い、複数の脂質メディエーターが複雑にこの疾患を調節していることが明らかとなった。四肢の麻痺や視力障害などを主徴とし、再発と寛解を繰り返す。現在、治療に用いられているインターフェロンβは長期予後を改善するものの、副作用などの問題点も残されており、新たな治療法の開発は発症原因の解明とともに重要な課題である。ボスホリパーゼA2は細胞を構成する脂質二重膜に作用し、遊離脂肪酸とリゾリン脂質を産生する酵素である。これらの代謝産物は細胞内シグナル伝達物質としてのみならず、炎症などの疾患における細胞間シグナル伝達物質として機能することが知られている。近年、細胞質型ホスホリパーゼA2が実験的アレルギー性脳脊髄炎において重要な働きをしていることが報告された[Neuron41,323&J.Exp.Med.202,841]。
なぜ海馬裂の脳境界バリア構造は正常マウスで消失しリーラーマウスで遺残するのか？

正常マウス、リーリン欠損マウス(リーラー)、Dab1欠損マウス(ヨタリ)成体の嗅内野にBDAを注入し、海馬貫通線維を標識したところ、リーラー・ヨタリのBDA標識線維は海馬裂を貫通しない。正常マウスおよびリーラー・ヨタリの海馬貫通線維の生後発育をDiIにより調べたところ、リーラー/ヨタリではP4を超えて海馬裂を貫通する線維はない。さらにリーラー・ヨタリではGFAP陽性アストログリアは海馬裂に沿って蓄積する。このような像は正常マウスでは認められない。以上より、リーリンシグナル伝達系分子の欠損により海馬裂の両側を挟む皮質最表層のグリア増殖により海馬貫通線維の経路変更が起こることが証明された。本研究は、海馬裂を挟む脳の境界領域の構造が正常で消失し、リーリンシグナル伝達系のタンパク質の欠損マウスで遺残するメカニズムの研究である。今までリーリン欠損マウスのリーラーとDab1欠損マウスのヨタリの海馬貫通線維系について研究したが、昨年度は海馬裂を挟む歯状回分子層と海馬網状分子層間のアストログリアの分布についてグリア性線維性タンパク質GFAP抗体を用いて免疫組織化学的に検討した。生後0日(P0)からP1日では、正常マウスとリーラー・ヨタリ間でGFAP免疫陽性アストログリアの分布に異常は認められなかった。この事実は、カルボシアニン蛍光色素で標識した海馬貫通線維が、P1でリーラー・ヨタリでは正常マウスと同様に海馬裂を横断できることを支持する。一方、P2以降では正常マウスではGFAP陽性アストログリアの数は減少するが、リーラーとヨタリの海馬裂に沿ってアストログリアが集積していた。このような傾向はP6でも確認できた。この事実は、同期間内に標識海馬貫通線維が正常マウスで増加し、リーラー・ヨタリで減少することに合致する。また成体のリーラーとヨタリでは海馬裂に沿って豊富なアストログリアが分布していて、これがグリア性瘢痕として海馬貫通線維の進入を挟んでいるものと想像された。次にラミニン抗体を用いて成体リーラー、ヨタリ、対照マウスの海馬裂の血管構築について検討したところ、ラミニン陽性産物は主に血管基底膜と軟膜に分布し、特に正常マウスとリーラー・ヨタリマウス間で差を認めなかった。ニューロフィラメント抗体を用いて神経線維の分布を調べたところ、正常マウスではニューロフィラメント抗体陽性の線維束が海馬台を斜走して海馬の網状・分裂層に進入し、海馬裂を横断して歯状回分子層に至るが、リーラー、ヨタリでは海馬裂を横断するニューロフィラメント陽性線維はなく、海馬裂にそって狭い裂隙が存在した。本研究は,リーリンを欠損するリーラーマウスおよびリーリンの下流で制御されるDab1を欠損するヨタリマウスの海馬裂のバリヤ構造の維持とアストログリアの増殖を形態学的に明らかにし,細胞生物学的手法によりその発症のメカニズムを明らかにすることを目的とした。既にリーラーマウスおよびリーリン欠損SRKラットでは海馬裂の異常と貫通線維の経路異常について部分的であるが証明済みである。そこでリーリンの下流で機能するDab1を欠損するヨタリマウスで,同様のフェノタイプがあるかどうか調べた。生後6週令の正常とヨタリマウスを麻酔下で脳定位装置に頭蓋を固定した。ビオチンデキストランアミン(BDA)を嗅内野に微量注入した。5日後にパラホルムアルデヒドとグルタールアルデヒドの混合液にて還流固定した。脳を取り出し、凍結切片を作成し、アビジン-ビオチンHRPに浸漬し、DAB反応にて発色した。正常マウスの嗅内野外側皮注入例ではBDA標識線維はCA1とCA2の網状分子層に終わるが、一部は海馬裂を横断し、歯状回に侵入し、分子層の表層に終止した。一方、ヨタリマウスの嗅内野外側部皮質注入例では、BDA標識線維はCA1とCA2に終わるものの、その終止する層は不明瞭であった。標識線維は、海馬裂を貫通することなく、海馬裂に沿ってその最深層を迂回し、歯状回の分子層の最表層に終止した。以上より、リーラーマウスと同様にヨタリマウスにおいても海馬貫通線維は海馬裂を迂回し、最終的な標的である歯状回分子層の最表層に終末することが明らかになった。海馬貫通線維の生後発生を調べる目的で、生後0日(P0)からP6までの正常マウスとヨタリマウスをホルマリンにて還流固定し、嗅内野にDiIの微小結晶を置いて、貫通線維を標識した。ヨタリマウスではDiI標識貫通線維が海馬裂を貫通せずに、これを迂回することが明らかとなった。

リーリンを欠損するShaking Rat Kawasaki(SRKラット)とリーラーマウスでは海馬裂を貫通する嗅内野海馬線維(貫通線維)が走行異常を呈する。本研究はリーリンの下流で機能するDab1を欠損するヨタリマウスの貫通線維の発生を調べることにより、リーリンシグナル伝達系分子が海馬裂形成にいかなる関与を呈しているかを明らかにすることがである。初年度は成体ヨタリマウスの嗅内野にBDAを注入し、貫通線維を順行性に標識した。その結果、BDA標識線維は海馬裂を貫通せずに海馬裂の最深部を迂回し、海馬CA1, CA2の網状分子層および歯状回分子層に投射した。次にP0からP6までのヨタリマウスのホルマリン固定脳の嗅内野にDiIの微小結晶を置き、貫通線維を標識した(postmortem labeling法)。その結果、DiI標識貫通線維が海馬裂を貫通できないことが明らかになった。第2年度は、海馬裂を挟む歯状回分子層と海馬網状分子層の表層に配列するアストログリアをGFAP抗体を用いて調べたところ、ヨタリではSRKラット、リーラーと同様にアストログリアの増殖があることが判明した。ラミニン抗体を用いて海馬裂の血管組織を調べたところ、とくに正常マウスと差は認めなかった。最終年度は、成体ヨタリの心臓から希釈したDiI溶液を含有する固定液で還流し、海馬裂の血管組織を調べたところ、毛細血管網の構築がヨタリで優位に発達していることが明らかになった。また正常マウス胎生14.5日(E14.5)胚にエレクトロポレション法によりdab1遺伝子の各種フラグメントとEGFPを側脳室の脳室帯に遺伝子導入を図り、生後に動物をサクリファイスして、標識貫通線維の走行異常の有無を調べた。現在、データを取得中である。リーラーマウス、ヨタリマウスの海馬貫通線維が、生後直後は海馬裂に進入できるが、P2以後は次第に進入できなくなること、そして成体では海馬裂を迂回してその標的である歯状回分子層に至ることを明らかにした。さらにリーラーやヨタリでは、海馬裂を挟んだ領域にアストログリアの増殖が起こることが判明した。以上からリーリンシグナル伝達系の異常により、海馬裂を挟む領域にグリアの増殖が起こり、これが瘢痕性組織となって海馬貫通線維の進入を阻害することが明らかとなった。以上より、研究の進展はおおむね順調であると判断した。Reelin-Dab1シグナル伝達系の海馬裂形成を調べる目的で、Dab1を欠損するヨタリマウスの嗅内野にBDAあるいはDiIを注入し、海馬貫通線維を順行性に標識したところ、リーラーマウスと同様に、海馬貫通線維が海馬裂を貫通せずに、これを迂回することを証明した。(1)COS細胞に電気穿孔法によりリーリン全長を包含するplasmidを導入し、リーラーマウス海馬裂をはさむ組織片を三次元ゲル・スライスカルチュアーを行い,COS細胞あるいはCOS細胞培養液中に分泌されるリーリンタンパクを培養上清に加える。クリオスタットを用いて海馬裂を含む組織片の連続切片を作成し,GFAP抗体やラミニン抗体を用いた免疫組織化学を行い,海馬裂をはさむ領域でのアストログリオーシスが抑制され,かつ基底膜の破壊が促進されているかどうか確認する。(2)胎生14日リーラーホモ胎児に対して子宮内電気穿孔法を用いてリーリンcDNAの全長を側脳室神経上皮細胞に遺伝子導入を行い,リーリンタンパクの異所性産生を促す。導入後、胎生期および出生時における最終的な皮質構築を組織学的、神経回路標識法により調べ、組織構築が正常化するか否かを免疫組織化学および神経回路標識法用いて調べる。