hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
女性の性行動に対する個人差に関する内分泌学的背景の検討

1、繁殖戦略(短期的配偶戦略への指向性)と対人コミュニケーション上の特徴(セルフ・モニタリング)間に、性別や性的指向(異性愛か同性愛か)に関わらず安定した関連があることを欧米人以外の参加者を用いてはじめて示した。一方、家庭環境や自尊感情は繁殖戦略とほとんど関連を示さなかった。2、男性の唾液中テストステロン濃度が、婚姻状況のみならず、定期的な性行動があること自体によって低下することを示した。これらの影響は、ある程度の年数を経たカップルにおいて朝のサンプルにおいて最も顕著に見られ、定期的性行動の有無のテストステロン濃度への影響が婚姻状況の影響よりも大きかった。3、20歳前後の女性の唾液中性ホルモン濃度(主に、テストステロンとエストラジオール)を性周期・季節を通じて測定した。テストステロン濃度には顕著な季節変動が見られ、本研究対象においては冬の濃度が高かった。冬期における排卵期前後のテストステロンピーク濃度は、攻撃性や性行動の特徴と一貫した関連性を示した。夏・秋期のテストステロン濃度は行動特性と有意な関連性を示さなかった。エストラジオール濃度は行動特性とほとんど関連を示さなかった。胎児期の性ホルモン濃度比を示す代替指標とされる人差し指・薬指の長さ比は、唾液中性ホルモン濃度と一貫した関連を示さず、また行動指標とほとんど関連を示さなかった。テストステロンの季節変動と濃度の個人差を説明する要因として、副腎由来の男性ホルモンであるDHEA(デヒドロエピアンドロステロン)の濃度変動を想定し、テストステロン濃度との関連を検討中である。物理的性質を利用して物質の微量定量を可能にする液体クロマトグラフィー・タンデム型質量分析(LC-MS/MS)を利用し,ヒト唾液中の各種ホルモン濃度を正確に測定する方法を確立した.また唾液中ホルモンの生理的意義を明確にし,唾液を用いて測定された各種ホルモンの日本における基準値を確立した【研究項目1】.このようにして得られた測定値と、心理特性・心身の健康との関連を検討した【研究項目2】.1.10代90代の幅広い年齢層の健常男性を対象に血液・唾液採取を行い,これらの試料をもとに以下のホルモンの唾液を用いた測定法とその生理的意義を検討した.(2)Cortisol:副腎性ストレスホルモン2.20代中心の男性の唾液を用いて測定されたTestosterone, Cortisolと,質問紙法により測定された以下の心理・行動特性との関連について日内変動を考慮して検討した.(1)特定の異性パートナーの有無および,配偶戦略との関連が示唆されている心理特性(2)攻撃・怒り特性および,報酬刺激・罰刺激への感受性(BIS・BAS)(3)不安・抑うつ傾向・タイプA性格および,生活の規則性と睡眠時間(1),(2)については動物行動学会において発表を行った.【1】昨年度の研究成果である、男性の唾液中のTestosterone(男性ホルモン)・Cortisol(ストレスホルモン)濃度の個人差と、配偶戦略と関係すると考えられる対人関係の状態および行動特性との関連についての知見を国内外の学会において発表した。またそれらの知見を複数の論文にまとめ、現在投稿中である。【2】液体クロマトグラフィー・タンデム型質量分析法により、女性唾液中の複数の男性ホルモン(Testosterone・Androstenedione・DHEA)および女性ホルモン(Estradiol・Estrone・Progesterone)を同時測定する方法を検討した。この方法により、Testosterone濃度が排卵前にEstradiolと同様の上昇を見せること、また健康な女性においてはAndrostenedioneと平行して変動することを観察した。さらに、これらのホルモン濃度の個人差と心身の健康状態・ライフイベントの経験率との関連について現在、データ収集および分析中である。(株式会社帝国臓器製薬メディカルとの共同研究)【3】性別および性的指向(異性愛か、同性愛か)が、さまざまな社会的文脈におけるパートナー選択の好み、および心身の健康状態・ライフイベントの経験率とどのような関連をもっているかについて大規模な調査を実施した。現在までの分析では、男性同性愛者は極端に男性的な男性の顔を好む特徴があること、および女性同性愛者は中性的な男性の顔を好む特徴があることが示された。(立教大学上田研究室との共同研究)1、繁殖戦略(短期的配偶戦略への指向性)と対人コミュニケーション上の特徴(セルフ・モニタリング)間に、性別や性的指向(異性愛か同性愛か)に関わらず安定した関連があることを欧米人以外の参加者を用いてはじめて示した。

胎児期の性ホルモン濃度比を示す代替指標とされる人差し指・薬指の長さ比は、唾液中性ホルモン濃度と一貫した関連を示さず、また行動指標とほとんど関連を示さなかった。テストステロンの季節変動と濃度の個人差を説明する要因として、副腎由来の男性ホルモンであるDHEA(デヒドロエピアンドロステロン)の濃度変動を想定し、テストステロン濃度との関連を検討中である。
血圧測定による内皮機能低下現象の解明と新たな動脈硬化診断法への応用

血圧測定時の上腕動脈の圧平により血管内皮機能が低下することを見出した.市販の血圧計で血圧測定しつつ内皮機能をFMD法で評価したところ,5回連続計測するとFMD値が有意に低下した.また,収縮期血圧+50mmHgの圧をカフに加え10秒間圧平する操作を3回繰り返しても同様に低下したことから,FMDの低下は血管内腔面同士が強く密着させられることで生じる可能性が示された.また,家兎総頸動脈でFMD再現系を確立した.圧平によりFMDが低下した血管では内皮細胞密度減少,糖鎖体積も減少している傾向が確認できた.血圧計測時の圧平が血管壁に与える影響を調べるために,2年間にわたる研究を進めている.研究初年の本年度は,まず,ヒト上腕動脈に関して,現有するFMD/PMC計測装置を用い,内皮機能の指標としてFMD値,平滑筋機能の指標としてPMC値を,血圧測定による血管圧平の前後で計測した.具体的には,まず,FMD計測として,上腕にFMD/PMC計測用密閉容器を装着してから前腕部をカフで5分間駆血,血流を再開した後の上腕動脈の径拡張量を測定した.次にPMC計測として,容器内に陰圧をステップ状に負荷して上腕動脈を拡張させた後,上腕動脈の径収縮量を計測した.この後,一旦,容器を取り外し,市販の血圧計で血圧を1,3,または5回計測した.その後,再び,容器を装着してFMD計測とPMC計測を行った.その結果,血圧を1または3回計測してもFMD値,PMC値ともに有意な変化は現れなかったが,5回連続で計測するとFMD値が有意に低下した.これより通常の血圧測定を5回繰り返すと内皮機能が低下する可能性が示された.家兎総頸動脈を用いたin situのFMD再現系の確立については,血管周囲を希薄ノルアドレナリン添加生理食塩水で満たし,温度を37°Cに保つことで,FMD現象を生じさせることが1/2程度の確率でできるようになった.しかし,FMD応答が出現しない場合もあり,原因を探る必要がある.また,血管圧平後にFMDが低下する傾向も確認することができた.FMDが低下した総頸動脈の内面をSEM観察したところ,内皮細胞が剥がれ,細胞密度が低下していること,細胞形態が丸くなっていることなどを確かめた.血圧計測時の圧平が血管壁に与える影響を調べるために,2年間にわたる研究を進めている.研究後半の本年度は,まず,カフによる血管圧平後のFMDの低下が,カフ圧波形のどの部分により生じるのか明らかにするために,血管を収縮期血圧+50mmHgで10秒間圧平後,収縮期血圧と拡張期血圧の中間の圧力で10心拍分保つ操作を3回行ったところ,FMDは有意に低下した.次に,収縮期血圧+50mmHgで10秒間圧平するだけの操作を3回,また,収縮期血圧と拡張期血圧の中間の圧力で10心拍分保つだけ操作を3回繰り返したところ,前者ではFMDが有意に低下したものの,後者ではFMDの低下は見られなかった.このことより,FMDの低下は,当初予想したように血管内腔面同士の繰返し衝突に原因があるというよりは,血管内腔面同士が強く密着させられることによる可能性が明らかとなった.次に,血管圧平後のFMDの低下がどのくらいの時間スケールで回復するのか,調べたところ,回復速度と年齢との間に有意な負の相関が見られた.内皮細胞の機能回復力は年齢とともに低下する可能性が示された.家兎総頸動脈によるin situのFMD再現系の確立については,FMDの出現割合に変化は見られなかったが,血管圧平後にFMDが低下した血管において,正常血管と比べて糖鎖体積が減少している傾向が確認できた.一方,糖鎖密度に関してはそのような変化は見られなかった.昨年得られた,FMD低下血管における細胞密度の低下と考えあわせると,圧平によるFMDの低下現象は,内皮細胞の剥離と内皮細胞上の糖鎖層の厚みの減少の両方の要因により発生している可能性が示された.血圧測定時の上腕動脈の圧平により血管内皮機能が低下することを見出した.市販の血圧計で血圧測定しつつ内皮機能をFMD法で評価したところ,5回連続計測するとFMD値が有意に低下した.また,収縮期血圧+50mmHgの圧をカフに加え10秒間圧平する操作を3回繰り返しても同様に低下したことから,FMDの低下は血管内腔面同士が強く密着させられることで生じる可能性が示された.また,家兎総頸動脈でFMD再現系を確立した.圧平によりFMDが低下した血管では内皮細胞密度減少,糖鎖体積も減少している傾向が確認できた.当初の予定通り,ヒトでの上腕動脈圧平前後でのFMD/PMC値変化の計測データを蓄積することができ,血圧測定により,FMDが有意に低下するものの,PMCは低下しないことを確認することができたから.また,家兎総頸動脈を用いたFMD再現実験も概ね順調に進んでいるから.バイオメカニクスヒト上腕動脈圧平前後でのFMD/PMC値の変化に関し,データの蓄積を計る.特に,血圧測定波形のどの成分がFMD低下に関係しているのか,明らかにする.

家兎総頸動脈におけるFMD応答の再現実験に関しては,歩留まりの低い原因を調べる.また,血管の圧平により糖鎖がどのように変化するのか,調べる.家兎総頸動脈を用いたin situのFMD再現系の確立について,再現性のある実験条件の確立に手間取っており,様々な条件を試しているために,実験プロトコルを定めて集中して実験を繰り返し,データ蓄積をする段階に至っていないため.次年度のなるべく早い時期に家兎総頸動脈を用いたin situのFMD再現系についてプロトコルを確立し,動物実験を集中して進めるようにする.次年度への繰越約86万円と次年度の請求額140万円のうち,ヒトでの計測実験に必要な費用,旅費,人件費・謝金などで必要となる金額,概ね100万円を除いた約125万円程度を動物実験関係の物品費として使用する.
新たなシェーグレン症候群疾病因子の解明に向けた唾液腺の病態特異的タンパク質の解析

抗菌タンパク質BPIFB1は肺における発現が報告されているが,シェーグレン症候群モデル動物である非肥満型糖尿病(NOD)マウスにおいては耳下腺に極めて高い発現が認められた。BPIFB1はコントロール(C57BL/6およびICR)マウス成獣においては肺の他の器官では発現が低かったが,幼若期(5週齢)の耳下腺において一過性で高発現しており,また胎生後期(15,17days)においても一過性に高発現していた。NODマウス耳下腺腺房細胞においてBPIFB1は分泌顆粒内に存在しており,唾液中に分泌されていた。ヒト唾液でも高度にBPIFB1を発現する例があった。その発現意義は今後検討する必要がある。今年度の計画は1.NODマウス耳下腺腺胞細胞にBpifb1タンパク質とmRNAが発現していることを証明すること,2.被験者から唾液を採取して凍結保存することであった。1.糖尿病の有無に関わらず,553週齢のNOD(NOD/ShiJcl)マウス耳下腺でBpifb1 mRNAの発現は非常に高かった。しかし,コントロールマウス(C57BL/6 ;C57BL/6JJcl)耳下腺において,8週齢以降ではBpifb1の発現は低レベルを維持していたが,5週齢までの幼若マウス耳下腺腺胞細胞および胎生後期においては高発現を示していた。このことから,Bpifb1は発達過程においても何らかの役割を持つと考えられる。この結果は学会発表し(第57回歯科基礎医学会),学術雑誌に掲載された(Oral Dis 22:46-52, 2016)。一方,Bpifb1タンパク質はNODマウス耳下腺ホモジネートではWestern blottingで確認されなかったが,iTRAQによる網羅的解析により存在が確認された。また,マウス唾液のWestern blottingにより,Bpifb1抗体陽性の2つのバンドがNODマウスに,1つのバンドがコントロールマウスに検出された。二次元電気泳動により,NODマウスには糖鎖が結合した2つのBpifb1が存在することがわかったが,アミラーゼもこの抗体に反応することがわかり,コントロールマウス唾液の抗体陽性バンドはアミラーゼであること,NODマウス唾液の1つのBpifb1バンドがWestern blottingではアミラーゼと重なって検出されたことがわかった(第89回日本生化学会発表)。NODマウス耳下腺の細胞分画から,Bpifb1は分泌顆粒に存在することがわかり,この結果からも唾液中への分泌が示唆された(現在投稿中)。2については,研究分担者により順調に行われている。NODマウス耳下腺におけるBpifbのmRNA発現上昇については,確証が得られ,論文にまとめることができた。この過程において,このタンパク質mRNAが,正常マウス後期胎生期から幼若時においても一過的に発現すること,および耳下腺では発現しなくなる10週齢以降で,胸腺で発現が継続することが観察され,Bpifb1の新たな役割が示唆された。タンパク質発現については,これまで明瞭な結果が得られなかったことから,発現に疑問が生じていたが,iTRAQによる網羅的プロテオーム解析によりNODマウス耳下腺におけるタンパク質発現が証明された。細胞分画により得られた画分のWesternblottingから,分泌顆粒にBpifb1が存在することがわかった。このことは,免疫組織染色像の結果を裏付けることになった。さらにBpifb1がNODマウス唾液中から検出され,NODマウス耳下腺におけるBpifb1タンパク質は分泌顆粒に局在し唾液中に分泌されることが確認された。二次元電気泳動によりNODマウス唾液中に2つのBpifb1スポットが検出され,これらはAleuria aurantiaレクチン結合性糖鎖を含んでいることが分かった。この糖鎖の影響については今後検討したい。一方,昨年までのcDNAマイクロアレイ解析結果を用いて,NODマウス耳下腺でBpifb1と同様に発現上昇するmRNAの検索を行った。Bpifb1と同様に発現上昇するものにScgb3a1があり,これについてPCRを行いコントロールマウスでは低発現だが,NODマウスでは高発現することが検証された。平成27年度はNODマウス耳下腺においてBpifb1遺伝子の発現が著しく上昇することを証明したが,タンパク質(BPIFB1)の発現上昇を報告していなかったので,平成28年度はBPIFB1発現証明のための実験を行い,論文にまとめて投稿した。NODマウス耳下腺腺房細胞において,BPIFB1の発現はC57BL6マウスと比較して著しく高いことを免疫染色法で確認した。また,BPIFB1は耳下腺腺房細胞の分泌顆粒内に存在し,細胞質にはほとんど存在しないことがわかった。このことからBPIFB1はアミラーゼと同様の分泌経路を取り,唾液に分泌されると予想された。NODマウス唾液からWestern blottingによりBPIFB1が検出された。唾液中,および分泌顆粒中のBPIFB1はWestern blottingにおいて2つのタンパク質バンドとして検出された。二次元電気泳動によりこれらは分子量と等電点がわずかに異なり,グリコシダーゼ処理でやや低い分子量の1つのスポットとなったことから,2つのスポットは糖鎖を有するBPIFB1によるものと考えられた。

数種のレクチンに対する結合性を調べたところ,2つのスポットはAleuria aurantiaレクチンと結合したことからFucα1-6GlcNAcあるいはFucα1-3GalNAcを持つと予想された。一方コントロールマウス(C57BL/6)では,BPIFB1は免疫染色およびWestern blottingで耳下腺腺房細胞にも唾液中にもほとんど検出されなかった。この総括として第58回歯科基礎医学会学術大会で報告し,論文投稿した(投稿中)。BPIFB1は病態体質を表す可能性があると考えられるものの,ヒト唾液における発現には個体差があり,この相違についてはまだわかっていない。BPIFB1の発現の確証は,最適な1次抗体が無いことから非常に困難であった。最も反応性が高かったマウスモノクローナル抗体には非特異的反応があり,特異的反応によるバンドを見極めることは困難であったことから,二次元電気泳動を行った。これにより,BPIFB1を分離・検出することができた。グリコシダーゼ処理およびレクチンによる糖鎖検出等の方法により,BPIFB1が独特の糖鎖を持つ可能性があることが分かった。このように,BPIFB1の発現確認が困難であったことが,予定よりやや遅れることになった一番の原因である。一方,臨床応用として計画していた口腔乾燥症患者およびコントロール被験者から唾液を採取して保存する作業は進んでいる。この中から,典型的な口腔乾燥患者の唾液について,分担・共同研究者がプロテオーム解析を行っている。この結果はまだ解析中であるが終わりしだいマウスを用いた本研究に応用する予定である。また,唾液からmRNAを抽出する方法を確立することも予定していたが,新規に確立して論文として報告する必要があることがわかり,さらに追加実験が必要なため,予定よりやや遅れることになった。Bpifb1と同様にcDNAマイクロアレイでNODマウスの方がC57BL/6より著しく高発現を示したものに,Scgb3A1がある。この二つについて,マウス(C57BL/6)の遺伝子上流における転写因子結合部位の検索を行ったところ,いずれにもNF-kappaB結合部位が存在しており,その証明については現在検討中である。一方,ヒト唾液からWestern blottingによりBPIFB1の検出を試みた。BPIFB1抗体はアミラーゼとも弱く反応するものの,わずかな泳動位置の相違からBPIFB1の同定は可能であった。そこで,口腔乾燥症患者群および対照正常被験者(各23名)の唾液について,Western blottingによりBPIFB1および既知成分としてCystatinSの発現を調べた。得られたバンドの画像から濃度を定量したところ,口腔乾燥症患者群ではBPIFB1;1.725±0.492,CystatinS;3.167±0.379であったが,対照群ではBPIFB1;1.214±0.301,CystatinS;3.981±0.376(平均±標準誤差)であった。タンパク質濃度が有意に患者群の方が高いこと,およびCystatinSレベルが患者群の方が低いことはこれまでの報告と同じ傾向であった。一方BPIFB1については,いずれの群にも非常に高度に発現している個体が12例あったものの,平均値は患者群の方が高かった。しかし有意差は認められず,さらに検体数を増加させる必要があり,現在口腔乾燥症患者および小児における検討が行われている。
インドネシア語における日本語起源の語彙の研究

報告者は、平成1719年度の研究期間内に、インドネシアにおける小学校の社会科の教科書と中学校の歴史の教科書およびインドネシア語の主要な辞書に見られる、日本語起源の語彙の比較研究を行った。同期間中に、ジャカルタ、ジョクジャカルタ、バンドゥン、デンパサール、メダンなどのインドネシア各地に出張して、上記の研究に必要な資料の蒐集を行った。またジャカルタのインドネシア大学および国立言語研究所、ジョクジャカルタのガジャ・マダ大学、バンドゥンのパジャジャラン大学、デンパサールのウダヤナ大学等で、それぞれの研究者と会い、インドネシア語学、インドネシア語教育、日本語を含めた外国語起源の語彙などの研究状況について有益な意見の交換、貴重な資料の提供などを受けた。帰国後、それらの資料を分析・検討して、日本インドネシア学会で研究発表した上で、同学会の学会誌『インドネシア''言語と文化』(第1214号)に論文を発表した。本研究成果をまとめた拙報告書により、日本とインドネシアとの緊密な歴史的関係(第二次世界大戦中、特に1942年3月から45年8月までインドネシアを軍事占領した日本軍政期)の影響による語彙と戦後の日本文化の影響によって海外に進出した日本語起源の語彙の研究を通じて、日本語研究に新たな視点からの先駆的知見を加えることができた。これにより、国内外の学界にも大いに貢献でき、今後のインドネシア語の語彙研究にも多大な寄与ができるものと推察される。本年度の研究目的に基づいて、2005年8月23日から9月8日まで、インドネシアのデンパサール、ジョグジャカルタ、バンドゥン、ジャカルタに出張し、2004年に初等・中等教育のカリキュラムが大幅に改定された、インドネシアにおける中学校と高校の歴史の教科書を中心に貴重な資料を蒐集した。また各地で研究者たちとインドネシア語学、日本語を含めた外国語起源の語彙などの研究状況について、有益な意見の交換をし、貴重な資料の提供などを受けた。特に、ジャカルタでは国民教育省で、教科書検定担当官のA・ブホリ氏から2004年度から実施されている教科書の大幅改定の意図、実施方法などについて有益な情報を入手した。帰国後、入手した歴史教科書の中で教えられている日本語起源の語彙を調査・分類して、その特徴を詳しく分析した。次に前カリキュラム(1984年と94年に改定)に基づいた歴史の教科書における日本語起源の語彙との比較研究を行い、同国の国民教育省が次世代を担う生徒たちに、いかなる日本語起源の語彙を教育しようとしているのかを検討した。その結果、1984年から2005年までの77種類の中学校の歴史教科書には、159語の日本語起源の語彙が載せられていることが明らかになった。その研究成果の一部を、2005年11月26日に行われた、第36回日本インドネシア学会(於:神奈川県箱根町)で「インドネシアの中学校の歴史教科書に見られる日本語起源の語彙の比較研究」という題目で研究発表した(次年度の秋までには、その成果が論文の形で刊行される予定である)。今後の研究計画としては、(1)インドネシアの小学校と高校の歴史の教科書に見られる日本語起源の語彙の研究、(2)インドネシア語の辞書に見られる日本語起源の語彙の研究を予定している。本年度の研究目的に基づいて、報告者がこれまでに蒐集した「インドネシア語-英語辞典」、「インドネシア語-日本語辞典」などの主要な「インドネシア語-外国語辞典」に掲載されている日本語起源の語彙を分析・研究した。また2006年8月23日から9月4日まで、インドネシアのメダン、ジョクジャカルタ、ジャカルタおよびシンガポールに出張し、貴重な資料の蒐集を行うとともに、各地の主要な大学でインドネシア語学・言語学などの研究者たちとインドネシア語学およびインドネシア語における(日本語を含む)外国語起源の語彙などの研究状況について、重要かつ有益な意見・知見の交換をした。帰国後、これまでに入手した「インドネシア語-英語辞典」、「インドネシア語-中国語辞典」、「インドネシア語-フランス語辞典」、「インドネシア語-オランダ語辞典」などの主要な「インドネシア語-外国語辞典」の中に掲載されている日本語起源の語彙を調査・分類して、その説明内容を詳しく分析・考察した。

その研究成果の一部を、2006年11月11日に行われた、第37回日本インドネシア学会(於:滋賀県大津市)で「インドネシア語の主要な辞書に見られる日本語起源の語彙について」という題目で研究発表した(次年度の秋までには、その成果が論文の形で刊行される予定である)。今後の研究計画としては、(1)インドネシアの小学校の社会科と高校の歴史の教科書に見られる日本語起源の語彙の研究、(2)インドネシア語の百科事典等に見られる日本語起源の語彙の研究を予定している。本年度の研究目的に基づいて、2007年9月4日から9月13日まで、インドネシアのジャカルタ、ジョクジャカルタ、デンパサールに出張し、インドネシアにおける小学校の社会科の教科書を中心に貴重な資料を蒐集した。またジャカルタのインドネシア国立言語研究所、ジョクジャカルタのガジャ・マダ大学、デンパサールのウダヤナ大学のインドネシア語教育センターでそれぞれの研究者と会い、インドネシア語学、インドネシア語教育、日本語を含めた外国語起源の語彙などの研究状況について有益な意見の交換をし、貴重な資料の提供などを受けた。帰国後、小学校の社会科の教科書の中で教えられている日本語起源の語彙を調査・分析して、その特徴を詳しく検討した。次に以前のカリキュラム(1984年と94年に大幅に改訂)に基づいた社会科の教科書における日本語起源の語彙との比較研究を行い、同国の国民教育省が次世代を担う児童たちに、いかなる日本語起源の語彙を教育しようとしているのかを検討した。その結果、1975年から2007年までの112種類の小学校の社会科の教科書には、98語の日本語起源の語彙が合計2,026回載せられていることを明らかにすることによって新たな知見を加えることができた。その研究成果を、2007年11月11日に行われた、第38回日本インドネシア学会(於:南山大学)で「インドネシアの小学校の教科書に見られる日本語起源の語彙の比較研究」という題目で研究発表した(次年度の夏までには、その研究成果を論文の形で刊行する予定である)。
ユビキチン化、SUMO-1化によるp53の活性制御機構

癌抑制遺伝子p53は半減期が20分から30分と非常に短いタンパク質である。DNA損傷を与える外来からの刺激に対する細胞の防御機構の一つとして、この刺激に呼応して、細胞内p53タンパク質含量を増加させる機構が存在する。細胞のp53蛋白質量の調節は蛋白質の分解系、主にユビキチンープロテオソーム系によると考えられる。我々は転写因子としてのp53蛋白質によって転写活性化される癌遺伝子MDM2がこれまで知られていたp53蛋白質に結合し、転写因子の機能を阻害するだけではなくユビキチンリガーゼ、E3活性を持ち、UbcH5存在下、p53蛋白質をユビキチン化することを明らかにした。本研究ではさらにMDM2のユビキチンリガーゼ(E3)の活性制御機構を明らかにすることを目的とした。癌抑制遺伝子産物p53のユビキチンリガーゼであるMDM2はC末端にリングフィンガードメイン構造を持つタンパク質であり、このドメインが活性に必須であることがあきらかとなった。さらに数種のリングフィンガードメインを持つユビキチンリガーゼに共通な、ドメイン内にある446番目のリシン残基が自己ポリユビキチン化におけるユビキチン結合部位と考えられた。しかし、この変異体は依然としてp53に対するユビキチンリガーゼ活性は保持していたことからMDM2の自己ユビキチン化は基質p53のユビキチン化には直接関係しないことが明かとなった。またMDM2はユビキチン様タンパク質SUMO-1により修飾されるが、この修飾による活性制御機構については未だ明らかでない。
磁性ナノ粒子内包CNT複合体の創製とラジオ波ハイパーサーミアへの展開

CNTに、磁性ナノ粒子(MRI造影剤として臨床応用されているガドリニウムや酸化鉄など)を内包させることでラジオ波吸収効率を高める高機能化を行った。短尺化CNTの使用や高沸点溶媒の使用により高い内包率を持つ鉄内包CNTの作製に成功した。収率向上に課題が残った。体内導入のために、ラジオ波応答性CNT複合体へ生体親和性を付与する必要がある。そこでSWNTを溶液中に均一に分散させるために、CNTを分散した界面活性剤ミセル内部空間を利用して重合を行うことにより、表面が強固なポリマーネットワーク構造で被覆された新規CNT複合体作製法の開発を行った。1.ラジオ波応答性CNT複合体のデザイン・開発。一般的にナノ粒子内包CNTは、水溶液中で粒子前駆体として金属イオンを内包させ、ろ過による回収・洗浄の後、ナノ粒子前駆体内包CNTの高温加熱処理を行うことで得ることができる。しかし、この方法では粒子前駆体量に制限があるため、(1)粒子が低密度でしか内包されない、(2)内包粒子のサイズが不均一といった問題がある。そこで、高沸点溶媒を使用し、保護剤存在下in situでCNT内でのナノ粒子合成及び内包を試みた。その結果、外壁に担持されたナノ粒子は見られず、サイズ6 -8 nmの鉄ナノ粒子がCNTに内包されている様子が観察された。今後、内包率は向上の余地がある。今後反応条件や試薬を最適化する必要がある。2、ラジオ波応答性CNT複合体への生体親和性基の修飾。官能基を共有結合で導入する化学修飾法はCNTの表面構造に欠陥形成を伴い、その特性を劣化させるため、物理修飾法がより好ましい。しかし物理修飾法では、生体内のように他の吸着物質が大量に存在する環境では分散剤が表面から脱離し、CNTの再凝集が起こることがある。そこで、ミセル内部空間を重合場として架橋高分子を合成する手法に取り組んだ。その結果、SWNTを包み込むように架橋高分子の重合に成功し、脱離せずに高い被覆安定性の付与が達成した。3、ラジオ波照射装置の開発。本研究では医療用周波数である13.8 MHzを発振するラジオ波照射装置を開発した。カーボンブラックを分散したエタノール溶液(50mg/mL)では瞬時に沸騰される様子が観察され、物質発熱能力を有することが確認された。今後、大希釈条件下での実験に取り組む。ステップ1ラジオ波応答性CNT複合体のデザイン・開発CNTに、磁性ナノ粒子(MRI造影剤として臨床応用されているガドリニウムや酸化鉄など)を内包させることでラジオ波吸収効率を高める高機能化を行った。ステップ2ラジオ波応答性CNT複合体への生体親和性基の修飾体内導入のために、ラジオ波応答性CNT複合体へ生体親和性を付与する必要がある。CNTは互いに強い相互作用が働くため溶媒に溶けず、その利用が制限されているという問題がある。そこでSWNTを溶液中に均一に分散させるために、様々なポリマーとの複合体を形成する方法が多く研究されている。これまでの分散剤は弱い物理的相互作用で安定化されているために、何らかの刺激や、夾雑物の影響で脱離することが知られていた。そこで、CNTを分散した界面活性剤ミセル内部空間を利用して重合を行うことにより、表面が強固なポリマーネットワーク構造で被覆された新規CNT複合体作製法の開発を行った。得られたCNT複合体は極めて高い被覆安定性を示した。また生体親和性のあるポリエチレングリコール基を導入することにも成功し、ステップ1で作製した鉄内包CNTに複合化することで生体親和性鉄内包CNTの作製が期待できる。高分子材料これまでに、研究の素材となる金属内包カーボンナノチューブ作成技術およびカーボンナノチューブ被覆技術、ラジオ波照射装置の作成まで達成している。今後は、これらの技術を集約し、実際のラジオ波照射実験を行う。ラジオ波応答実験の準備として、溶液温度のモニター方法の確立を進める必要がある。また、金属内包CNTの内包率を向上させる必要もあり、条件見当が必要である。
大型液体キセノン検出器における効率的バックグラウンド削減の為の充填液体の研究

次期またはそれ以降の液体キセノンを用いた暗黒物質探索実験において、感度向上のための手法を用意しておきたい。手法の一つとして、暗黒物質探索検出器表面付近を液体の充填液体によって満たし、暗黒物質からの事象の反応する液体キセノン領域と分ける。これにより検出器表面で発生するバックグラウンド事象を、有効体積内事象として間違われるのを防ぎ、暗黒物資探索の感度が上がることが期待される。この充填液体は、真空紫外光を透過することと、液体キセノン温度(-100°C)において液体であること、耐物性、低バックグラウンドなのが要求される。この充填液体の選定と、性能を評価する為に、真空紫外光源と、高感度分光器を組み合わせた透過率測定装置を新たに開発した。この測定装置には、充填液体の循環と、真空紫外光を吸収する不純物除去の為のフィルターが組みこまれている。これにより、純化の度合いによった透過率を測定できるようにした。本研究の発信としては、暗黒物質探索検出器表面で発生するバックグラウンド事象の理解について、日本物理学会等で発表をした。また、透過率測定の進捗について、日本大学学部連携ポスターセッションで発表をした。液体キセノンは低バックグラウンド実験において、シンチレーターとして、暗黒物質探索だけでなく、太陽ニュートリノ観測、0νββ探索にも大変有望なものであり、将来における大型化が必要不可欠である。よって、“想定外"のバックグラウンド事象をコントロールしつつ、大型化のための必要技術の一つとして本研究を進めていく。次期またはそれ以降のXMASS実験における暗黒物質探索において、感度向上のための手法を用意しておきたい。手法の一つとして、検出器表面付近を液体の充填液体によって満たし、暗黒物質からの事象の反応する液体キセノン領域と分ける。これにより検出器表面からのバックグラウンド事象を、有効体積内事象として間違われるのを防ぎ、暗黒物資探索の感度が上がることが期待される。本研究はこの充填液体の選定と、性能の評価を実施する。液体キセノンは低バックグラウンド実験において、シンチレータとして、暗黒物質探索だけでなく、ニュートリノ観測等にも大変有望であり、将来における検出器の大型化における性能の向上のためにも、本研究は重要であると考える。平成28年度における本研究として大きく2つの進捗があった。まず1つは充填液体の候補として、フロリナートを選定した。この液体は-100°Cの低温における使用実績がある無色透明の液体である。もう1つは真空紫外光透過試験用チェンバーの製作が開始されたことである。比較的安価なスターリング冷凍機や、石英セル等が購入された。真空チェンバーの設計も進んでおり、本年度中に製作の予定している。また、充填液体を検出器表面に入れることで暗黒物質探索感度がどれほど向上するかの検証を実施する予定である。そのための検出器シミュレーションを製作中である。平成28年度計画では液体キセノン+充填液体によるテストチェンバーの設計及び製作を実施する予定であった。設計及び物品購入の一部は順調に実際されているが、製作には至らなかった。平成29年度に早速製作を実施する予定である。この充填液体は、真空紫外光を透過することと、液体キセノン温度(-100°C)において液体であること等が要求される。平成29年度における本研究の進捗を述べる。前年度に選定された充填液体の真空紫外光の透過度を測定するために、真空紫外領域に感度のある分光器及び、光源の購入を実施した。分光器は、オーシャンフォトニクス社製MAYA2000PRO高感度分光器であり、真空紫外光が機器自身で吸収されるのを防ぐために、窒素パージが可能なようにカスタマイズをしている。150nm以上の波長光源を波長ごとに観測できる。光波長として光源は、浜松ホトニクス社製VUV光源L10366となっており、光波長分布が160nmにピークを持つ連続成分となっている。これらの組み合わせで、真空紫外領域の透過率を波長ごとに観測が可能となった。また、検出器シミュレーションを用いて、現在のXMASS検出器における検出器表面からのバックグラウンドと、内部バックグラウンドの評価の結果、検出器表面からのバックグラウンドが、内部バックグラウンドの10倍あることが明らかになった。このバックグラウンド評価は、XMASS検出器における暗黒物質探索の解析に使われた。その結果は、国際会議、学会で公表された。また、Preprint arXiv:1804.02180にまとめられ、Phys.Lett.Bにsubmitされている。実際の透過率測定用のチェンバーの組み付けが未完成となっている。H30年早期に光源+分光器を組み合わせた測定チェンバーを完成させ、速やかに透過率を測定する予定である。

手法の一つとして、暗黒物質探索検出器表面付近を液体の充填液体によって満たし、暗黒物質からの事象の反応する液体キセノン領域と分ける。これにより検出器表面で発生するバックグラウンド事象を、有効体積内事象として間違われるのを防ぎ、暗黒物資探索の感度が上がることが期待される。この充填液体は、真空紫外光を透過することと、液体キセノン温度(-100°C)において液体であること、耐物性、低バックグラウンドなのが要求される。この充填液体の選定と、性能を評価する為に、真空紫外光源と、高感度分光器を組み合わせた透過率測定装置を新たに開発した。この測定装置には、充填液体の循環と、真空紫外光を吸収する不純物除去の為のフィルターが組みこまれている。これにより、純化の度合いによった透過率を測定できるようにした。本研究の発信としては、暗黒物質探索検出器表面で発生するバックグラウンド事象の理解について、日本物理学会等で発表をした。また、透過率測定の進捗について、日本大学学部連携ポスターセッションで発表をした。液体キセノンは低バックグラウンド実験において、シンチレーターとして、暗黒物質探索だけでなく、太陽ニュートリノ観測、0νββ探索にも大変有望なものであり、将来における大型化が必要不可欠である。よって、“想定外"のバックグラウンド事象をコントロールしつつ、大型化のための必要技術の一つとして本研究を進めていく。平成29年度にテストチェンバーの製作を早速実施する予定である。その後、真空紫外光透過試験を実施する。充填液体について、いきなり真空紫外光透過試験を実施するのではなく、まずは、200nm以上の領域における透過度を吸光光度計で測定する実験を挟む予定である。充填液の純化システムの製作を実施する。純化用カラムとしてはモリキュラーシーブス5A,及び活性炭となる。ダイヤフラムポンプ等、純化システムの製作を実施する。また、充填液をゲルマニウム検出器による放射性不純物測定も合わせて実施する。同時に、検出器シミュレーションによる暗黒物質感度向上を見積もる予定である。H30年早期に光源+分光器を組み合わせた測定チェンバーを完成させ、速やかに透過率を測定する予定である。また、充填液体の純化システムの製作を実施する。純化用カラムとしてはモリキュラーシーブス5Aを考えている。循環用ダイヤフラムポンプも用意する。これらの測定、セットアップによって、有望な充填液体を見つける。平成28年度はテストチェンバーの製作には至らず、その製作費の未使用が生じた。テストチェンバーおよび純化システムがまだ完成していない。これらに使用予定である。平成29年度においてはテストチェンバーの製作とともに、純化システムの製作を実施することで、次年度使用額を含めた予算を、適切に使用する予定である。
高強度セラミックスの接着におけるユニバーサルプロトコルの確立

酸化ジルコニウム(以下ジルコニア)は高い機械的強度と優れた生体親和性を有することから,補綴装置のフレーム材料として臨床応用されている。本研究では,ジルコニアに対する機械化学的表面処理の違いがレジンとの接着耐久性におよぼす影響を検討し,最適な表面処理方法を探索することを目的とした。機械化学的表面処理がジルコニアとMMA-TBBレジンとのせん断接着強さにおよぼす影響について検討した。ジルコニアに対して,アルミナブラスト処理またはシリカコーティング後に,機能性モノマーとしてリン酸エステル系モノマーとシランを含有するプライマーを塗布する表面処理方法が接着耐久性において最も優れていた。平成26年度の研究として,申請者が過去の報告で明らかにした,酸化ジルコニウムの接着に有効なリン酸エステル系モノマー(MDP)に着目し,リン酸エステル系モノマー(MDP)とシランカップリング剤(γ-MPTS)との相互作用および接着耐久性に及ぼす影響について検討を行った。この研究の背景としては,現在の歯科における化学的表面処理剤(プライマー)の流れにおいて,歯科臨床において簡便化を図るために,数種類の機能性モノマーを含有することにより数種の被着体に対して接着促進効果を持つとされる製品の発売が相次いでいることがあげられる。簡便化によりテクニックインシビティーを少なくすることでエラーを少なくできる可能性はあるが,複数の機能性モノマーを配合することにより,予期しない相互作用が生じる可能性も考えられる。MDPおよびγ-MPTSともに単体での接着促進効果については明らかにされているが,それぞれの相互作用については明らかにされていないのが現状である。そこで,MDPを主体とするプライマー,γ-MPTSを主体とするプライマー及び両者を含むプライマーを用いることで相互作用について検討を行った。今後の展望としては,シランカップリング剤に着目して研究を行う予定である。γ-MPTSは1967年にPaffenbarger GCらが,陶材に対する接着促進効果を明らかにして以降,現在に至るまで歯科において用いられるシランカップリング剤として使用されている。しかしながら,化学構造を鑑みると,どの程度の疎水性を示すか疑問が残る。口腔内にて補綴装置は常に湿潤状態にさらされることになるため,いかに接着界面における加水分解を防ぐかが重要である。そこで,γ-MPTSと比較し,中間鎖が長く,より高い疎水性を示すρ-MBSを用いることでより高い接着耐久性が期待できると考えている。1ジルコニアに対する物理的および化学的表面処理が接着耐久性に及ぼす影響ジルコニアを被着体とし,アルミナサンドブラスト処理およびトライボケミカル処理を行い,プライマーとしてリン酸エステル系モノマー(MDP)およびシランカップリング剤(γ-MPTS)を用い,ジルコニアに対する物理的および化学的表面処理が接着耐久性に及ぼす影響について比較検討を行った。その結果,トライボケミカル処理によりジルコニア表面にγ-MPTSに有効かつMDPの効果を阻害するシリカ層が形成されていることが示唆された。本研究の結果は現在,論文投稿中である。2シランカップリング剤が二酸化ケイ素とアクリルレジンの接着耐久性に及ぼす影響γ-MPTSは1967年にPaffenbarger GCらが,陶材に対する接着促進効果を明らかにして以降,現在に至るまで歯科において用いられるシランカップリング剤として使用されている。しかしながら,化学構造を鑑みると,中間鎖が短く,疎水性に劣ると考えられる。そこでγ-MPTSと比較し,中間鎖が長く,より高い疎水性を示すρ-MBSを用い,接着耐久性に及ぼす影響について比較検討を行った。その結果,γ-MPTSと比較し,ρ-MBSが接着耐久性の向上に有効であることが示唆された。現在は、接着界面の分析を行っており,その結果を踏まえて論文の作成投稿を行う予定である。3半透明ジルコニアに対する有効な表面処理の検討ジルコニアは高い機械的強度と化学的安定性から,補綴装置として臨床応用されているが,従来の歯科用陶材と比較すると光透過性に劣る。そのため,近年、酸化イットリウムの含有量を増やし,透明性を高めた半透明ジルコニアが開発されている。しかしながら,半透明ジルコニアの接着に有効な表面処理に関する報告は少ない。そのため,半透明ジルコニアに有効な表面処理を明らかにすることを目的とし,現在実験を遂行中である。平成26年度の計研究画として高強度セラミックスの接着に機能性モノマーがおよぼす影響を明らかにすることを計画した。高強度セラミックス(酸化ジルコニウム)に対してリン酸エステル系モノマー(MDP)及びシランカップリング剤(γ-MPTS)を用いることで相互作用について新たな考察を得ることができた。また,試作プライマーを用いての研究も現在遂行中であり,一定の実験結果を得ている。医歯薬学

平成27年度の研究計画として機能性モノマーと装着材料の組み合わせが高強度セラミックスの接着耐久性に及ぼす影響を明らかにすることを計画した。この研究に関して計画通りに遂行する予定ではあるが,平成26年度に計画した研究により新たな考察を得ることができたため,その考察に関してもより深める研究を行いたいと考えている。具体的には現在歯科領域にて使用されているシランカップリング剤(γ-MPTS)ではなく,より疎水性の高いρ-MBSを用いることで接着耐久性の向上を期待できると考え,新たな研究計画を立案している。消耗品購入時に割引きがなされたことにより繰越金が発生したため。消耗品として購入予定であるプライマー、セメント、被着体試料等の購入費用として使用する予定である。
原始惑星系円盤から太陽系へ：有機分子の化学進化

大型電波干渉計アルマなどによる、惑星形成の母胎である原始惑星系円盤の観測の進展、および太陽系内天体探査による太陽系内物質の理解の進歩を背景に、本研究では、研究代表者らのこれまでの研究を発展させ、ガス散逸期における円盤中での有機分子生成モデルの構築と、アルマおよび「はやぶさ2」の観測との比較によるモデルの検証により、原始惑星系円盤から太陽系に至る物理的・化学的進化過程を明らかにし、太陽系内物質の起源を解明する。
皮膚の再生機構の解明:ヒアルロン酸合成酵素遺伝子導入による胎児創傷治癒機構モデルの開発

2、各発現ベクターを培養ヒト皮膚線維芽細胞のcell lineにDOTAP法によって導入した。数日ごとにNeomycinでselectionを行って、最終的にすべての細胞の染色体にHAS遺伝子がstableに組み込まれたものになるまで細胞培養を繰り返した。3、得られた各細胞の培地を回収し、培地中に分泌されるヒアルロン酸量をカルバゾール硫酸法およびセルロースアセテート膜電気泳動等により解析した。その結果、HAS-1,-2,-3遺伝子の挿入された細胞の培地中に非常に高レベルなヒアルロン酸分泌量の上昇を確認した。4、各HAS遺伝子がstableに導入された細胞および導入されていない細胞からそれぞれmRNAを抽出し、cDNAを調整した後、各細胞における遺伝子の発現動態をSerial analysis gene expression (SAGE)法によって解析した。すなわち、制限酵素消化,リンカーライゲーション及びPCR法によって,発現するすべての遺伝子の3'末端11bpを調製し、これらをライゲーションによって互いに結合させ,autosequencerを用いてその塩基配列を決定した。その結果、HAS遺伝子が導入された細胞で顕著に発現する,或いは抑制する遺伝子として29種類の遺伝子が確認された。現在、その遺伝子が皮膚再生のマスター遺伝子かどうか検討中である。5、また同時に、今回確認された29種類の遺伝子をさらにpCY4B-NEOベクターにサブクローニングしnaked DNA法を用いてヌードマウスの瘢痕部に導入する準備をすすめている。1)培養ヒト皮膚線維芽細胞からmRNAを抽出し,発現しているヒアルロン酸合成酵素(HAS(HAS1,HAS2,HAS3))の各遺伝子full-length cDNAを調整した。これをBluescript vectorにサブクローニングして,大量に調整し,これを用いて,その塩基配列をautosequencorで解読した。次に各cDNAをBluescript vectorから再度切り出し,Neomycin耐性遺伝子の挿入されたpCY4Bタンパク質発現ベクター(pCY4B-Neo)(大阪大学宮崎純一教授より分与)に組み込み,HASの発現ベクターであるHAS(-1,-2,3)-pCY4B-Neoを調整した。2)各発現ベクターを,ヒト皮膚線維芽細胞のcell lineにDOTAP法によって導入した。数日ごとにNeomycinでselectionを行って,最終的にすべての細胞の染色体に,HAS遺伝子がstableに組み込まれたものになるまで細胞培養を繰り返した。3)得た各細胞の培地を回収。培地中に分泌されるヒアルロン酸量を,カルバゾール硫酸法及びセルロースアセテート膜電気泳動等により解析した。その結果,HAS-1,-2,-3遺伝子の挿入された細胞の培地中には非常に高レベルでヒアルロン酸分泌量の上昇を確めた。
骨折治癒メカニズムを応用した歯科インプラントにおける新規骨誘導法の開発

本研究では、骨折治癒過程に集積する骨芽細胞に分化が決定付けられた細胞(骨折誘導性骨芽細胞前駆細胞FOPC)に着目し、FOPCを応用した新規骨増生法の可能性を探索した。骨原性細胞の動態について、ラットモデルを用い、Thy-1 (CD90)をマーカーとして免疫組織化学的に検討した結果、骨髄中に存在するThy-1陽性細胞が、骨折の刺激により同部位に集積、増殖し、骨折の修復過程に関与することが示唆された。超高齢社会を迎えた我が国において、歯周疾患等に伴う歯の喪失に対する機能回復の手段として、歯科用インプラントの需要は年々増加している。にもかかわらず、インプラント体の埋入に必要な歯槽骨量の不足により適応が制限される場合も少なくない。この問題を解決するためには、歯槽骨の再生療法が必須であり、現在までに多くの基礎研究が行われ、様々な治療法が試みられている。しかし、予知性の高い方法は未だ確立されていない。近年、幹細胞研究の進歩に伴い、幹細胞を応用した組織再生療法が実際の臨床の場でも応用されつつある。骨組織再生の分野においては、現在、最も有望視されているのが骨髄間葉幹細胞である。しかし、単一組織の再生を考えた場合、多分化能を有する幹細胞の応用はかえって非効率的であり、骨組織再生に特化した細胞の優位性が推測される。従来の研究から、「インプラント埋入時のオッセオインテグレーションの獲得が、骨折時の創傷治癒に準ずる」ことが明らかにされている。本研究では骨折治癒過程に集積する骨芽細胞に分化が決定付けられた細胞(骨折誘導性骨芽細胞前駆細胞FOPC)に着目し、FOPCを応用した新規骨増生法の可能性を探索した。ラット骨折モデルの作成8週齢、オス、Wistarラット大腿骨中央部に、歯科用ラウンドバーを用い、皮質骨を貫通し、骨髄のほぼ全層に渡る組織欠損を形成した。同部位を経時的に組織学的観察を行った結果、術後1日目に血腫形成、3日目に肉芽組織線維組織形成、57日目にかけて新生骨の形成が認められた。本モデルは、皮質骨の連続性を失わせないため、固定等の操作なしに骨折類似の病態を再現することができ、かつ、ヒトの場合、通常1ヶ月以上要する治癒過程を1週間程度で観察できる非常に有用な動物モデルである。1.ラット骨折モデルの作成8週齢、オス、Wistarラット大腿骨中央部に、歯科用ラウンドバーを用い、皮質骨を貫通し、骨髄のほぼ全層に渡る組織欠損を形成した。2.骨折修復過程における骨原性細胞の動態骨折修復過程における骨原性細胞の動態について、上記1で作成した動物モデルを用い、Thy-1(CD90)をマーカーとして免疫組織化学的に検討した。その結果、術後3日目に形成される肉芽組織、および線維組織中に見られる線維芽細胞様細胞の多くがThy-1陽性であった。また、術後57日目にみられる新生骨形成の過程では、骨芽細胞周囲の線維芽細胞様細胞に強いThy-1陽性反応が認められた一方、骨芽細胞は弱陽性陰性であった。また、新生骨中の骨細胞はThy-1陰性であった。近年の研究成果から、「インプラント埋入時のオッセオインテグレーションの獲得が、骨折時の創傷治癒に準ずる」ことが明らかにされている。

同部位を経時的に組織学的観察を行った結果、術後1日目に血腫形成、3日目に肉芽組織線維組織形成、57日目にかけて新生骨の形成が認められた。本モデルは、皮質骨の連続性を失わせないため、固定等の操作なしに骨折類似の病態を再現することができ、かつ、ヒトの場合、通常1ヶ月以上要する治癒過程を1週間程度で観察できる非常に有用な動物モデルである。2.骨折修復過程における骨原性細胞の動態骨折修復過程における骨原性細胞の動態について、上記1で作成した動物モデルを用い、Thy-1 (CD90)をマーカーとして免疫組織化学的に検討した。その結果、術後3日目に形成される肉芽組織、および線維組織中に見られる線維芽細胞様細胞の多くがThy-1陽性であった。また、術後57日目にみられる新生骨形成の過程では、骨芽細胞周囲の線維芽細胞様細胞に強いThy-1陽性反応が認められた一方、骨芽細胞は弱陽性陰性であった。また、新生骨中の骨細胞はThy-1陰性であった。以上の所見から、骨髄中に存在するThy-1陽性細胞が、骨折の刺激により同部位に集積、増殖し、骨折の修復過程に関与することが示唆された。得られた結果等を含めて、学会発表による公表を行うことは達成できたが、論文にまとめるだけのデータがまだ十分とは言えず、今回は"やや遅れている"の評価とした。24年度が最終年度であるため、記入しない。上記の研究業績の概要で述べたように、骨髄中に存在するThy-1陽性細胞が、骨折の刺激により同部位に集積、増殖し、骨折の修復過程に関与することが示唆された。しかし、Thy-1陽性が直接、骨芽細胞に分化するか否かについては不明であり、今後の検討課題としたい。
先天性横隔膜ヘルニアモデルマウス低形成肺に対する脱落乳歯歯髄幹細胞の有用性の検討

本研究は、新生児期に肺高血圧や呼吸障害をきたし、現在も予後不良な疾患とされる先天性横隔膜ヘルニアに対して、長期予後、呼吸機能の改善を目指し、出生前診断のついた患者に対しての、間葉系幹細胞による胎児治療の有効性を検討することを目的としている。マウスを用いた先天性横隔膜ヘルニアモデルを作成するための実験計画申請を行い、まずはニトロフェンを用いた疾患モデル作成方法の確立を目指した。ニトロフェンを妊娠日齢8.5のマウスに経口的に投与することで、横隔膜ヘルニアの胎仔を得ることができた。当初、経口投与自体も手技的な慣れを要し、経口的な投与のみで母獣の死亡例も認めたが、2回目以降は死亡例なく投与できた。胎仔の横隔膜ヘルニアの発生率は30%程度と見積もっていたが、実際には発生率が非常に低く(10%程度であり、胎仔数も減少した)、評価には多数のマウスを要する上に、安定性に欠くと判断した。マウスの種類を変更して同様の実験を行ったが、横隔膜ヘルニア胎仔を得ることができなかった。疾患モデル作成を確立できなかったため、母獣への間葉系幹細胞の投与に移行することができなかった。モデルマウス作成の困難さから、マウス胎仔肺の発生学的評価に変更し、横隔膜ヘルニアの有無にかかわらず、ニトロフェン投与マウス胎仔の肺は低形成であることを前提として評価を行うこととした。現在正常胎仔マウスの各妊娠日齢におけるコントロールの肺切片を作成している段階である。ニトロフェンを用いた横隔膜ヘルニアモデルマウス作成を企画、施行したが、横隔膜ヘルニアの発生率が非常に低い状況であった(20%程度)。解析しうるnを確保するためのマウスの犠死亡数を考慮し、マウスの種類を変更し再度モデルマウス作成を試みたが、妊娠マウス作成の時点で困難であった。横隔膜ヘルニアモデルマウスではなく、肺低形成マウスとして用いてマウス肺の発生学的経過を解明することを目的とし、胎児マウスの日齢ごとの肺切片を病理学的に評価していくことで、間接的に横隔膜ヘルニアの治療に寄与しうると思われる。本研究は、新生児期に肺高血圧や呼吸障害をきたす先天性横隔膜ヘルニアに対して、長期予後の改善を目指し、出生前診断のついた患者に対して間葉系幹細胞による胎児治療の有効性を検討することを目的としている。マウスを用いた先天性横隔膜ヘルニアモデルを作成するための実験計画申請を行い、ニトロフェンを用いた疾患モデル作成方法の確立を目指している。ニトロフェンを妊娠マウスに経口的に投与することで、横隔膜ヘルニアの胎仔を得ることができたが、その発生率が非常に低かった。今後、疾患モデル作成方法を確立し、発生率の問題を解消でき次第、間葉系幹細胞の投与に移行する予定である。既報されている先天性横隔膜ヘルニアモデルマウス作成方法をもとに、ニトロフェンを用いた疾患モデル動物作成に取り組んだが、ニトロフェン投与の手技習得に時間を要した。また、手技獲得後にモデルマウス作成を試みたが作成率が低く、間葉系幹細胞の投与には至っていない。ニトロフェン以外に報告されている薬剤の使用や、マウス種の変更を検討する必要がある。モデル動物作成方法を確立のうえで、間葉系幹細胞の投与を開始する。