hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Dicer蛋白質の機能ドメイン分析とその機能分化の進化的解析

RNAサイレンシングは、ほとんどの真核生物に広く保存されている配列特異的な遺伝子発現抑制機構である。Dicer蛋白質はそのRNAサイレンシング経路の鍵酵素であり、塩基配列特異的な情報を伝達するための20-26bp程度のsiRNAと呼ばれる小さなRNAの生成を担う機能を持っている。本研究では、糸状菌であるイネいもち病菌ゲノムに存在する二つのDicer様蛋白質MDL1とMDL2の機能分化の解析とその進化的な保存性について調査することを目的としている。これまでにいもち病菌ではMDL2がRNAサイレンシング経路に関与することが示されたが、MDL1およびMDL2の菌糸におけるmRNA蓄積量をリアルタイムPCRを用いて調査した所、MDL2 mRNAは、MDL1 mRNAの約15倍蓄積していることが示された。また、RNAサイレンシング能を失っているMDL2破壊株でMDL1 cDNAを強発現させると効率は低いものの部分的にRNAサイレンシングを相補することが明らかとなり、いもち病菌におけるMDL1とMDL2の機能分化には、蛋白質自体の分化と共に転写コントロールが重要な働きを持っていることが示された。また、多くの種でゲノムが解読されつっある糸状菌において、Dicer遺伝子の分子系統解析を行った所、MDL1とMDL2は、子のう菌や担子菌といった糸状菌門が分かれる以前に分化していることが示唆された。このことから、これらパラログは、進化的に古くから存在し、基本的には異なった機能を持つものの、なお互いに相補できる余地は残しているものと考えられた。RNAサイレンシングは、ほとんどの真核生物に広く保存されている配列特異的な遺伝子発現抑制機構であり、比較的最近その機構が明らかとなり、現在の生命科学分野で最も注目を集めている現象の一つといえる。本研究では、糸状菌であるイネいもち病菌ゲノムに存在する二つのDicer様蛋白質MDL1とMDL2の機能分化の解析と他の生物由来のDicer蛋白質がいもち病菌で機能するかという進化的な保存性を調査することを目的とした。いもち病菌では、ゲノム遺伝子の破壊実験によりMDL2のみがRNAサイレンシング経路に関与していることが示されているが、MDL2破壊株でMDL1 cDNAを強発現させると効率は低いものの部分的にRNAサイレンシングを相補することが明らかとなった。このことからMDL2で内在性のMDL1がRNAサイレンシングを相補できないことは、何らかの抑制的な機構が働いていることが示唆された。MDL1の転写産物を調査した所、通常の栄養成長状態ではMDL1の第一イントロンがスプライシングされておらず途中で終止コドンが生じる転写産物が主要なmRNAとして生産されていることが明らかとなった。このintron保持機構がMDL1が通常MDL2の機能を相補できない理由と考えられた。また、MDL2破壊株に、アラビドプシスのDicer様蛋白質であるDCL1およびDCL3、またショウジョウバエ由来のDCR1,DCR2を強発現させたが、いずれの形質転換体もサイレンシングが回復せず、これらの蛋白質は進化的に離れており、直接的な相補はしないものと考えられた。今後、Dicer蛋白質間の組換え体などを作製し、どのドメインが種の特異性を決定しているのか調査する予定である。
新生ラット摘出脳幹-脊髄標本の呼吸活動における青斑核の役割

本研究は、新生ラット摘出脳幹一脊髄標本において、その構成ニューロンの膜電位が呼吸関連活動を示し、かつ高炭酸ガス性アシドーシスに対して興奮性応答が呈することが明らかにされた橋背側に存在するノルアドレナリン作動性神経核である青斑核(Locus coeruleus:LC)が、同標本において脳神経や脊髄神経前根から記録される呼吸性神経活動の中枢性調節機構の中で果たす役割を検討するものである。具体的には、fast Na^+ channel blockerであるtetrodotoxin(TTX)110μMを含む、あるいは含まない微量(30nl)の溶液をmicroinjectorを用いてLCに注入し、呼吸性神経活動の発火頻度(呼吸頻度)の変化を観察する。注入溶液には5% toruidineblueを溶解する。Microinjection前後で呼吸性神経活動の発火頻度を測定した後、標本を4%ホルムアルデヒドで固定し、脳幹の横断切片を作成する。切片をcresyl violetで染色した後、光学顕微鏡で観察し、microinjectionが正しくLCに対して行われていたことを確認する。現在までのところ、TTXを含む溶液の注入は、TTXを含まない溶液の注入に比べて、有意に呼吸頻度を減少させる(TTX:3.3±1.5min^<-1>から2.5±1.1min^<-1>/Control:3.3±1.5min^<-1>から2.9±1.2min^<-1>)ことが明らかとなった(第41回日本呼吸器学会総会/American Thoracic Society Annual Meeting 2001で発表予定)。引き続き、呼吸頻度のpH/Pco2の変化に対する反応性に及ぼす影響を検討する予定である。本研究は、新生ラット摘出脳幹-脊髄標本において、その構成ニューロンの膜電位が呼吸関連活動を示し、かつ高炭酸ガス性アシドーシスに対して興奮性応答を呈することが明らかにされた橋背側に存在するノルアドレナリン作動性神経核である青斑核(Locus coeruleus:LC)が、同標本において脳神経や脊髄神経前根から記録される呼吸性神経活動の中枢性調節機構の中で果たす役割を検討するものである。具体的には、tetrodotoxin、kainic acidといった神経毒を含んだ微量の溶液をmicroinjectorを用いて青斑核に注入し、呼吸性神経活動の頻度および振幅の変化を観察する。現在は、注入する上記薬物の濃度、および組織学的な確認のために同時に注入する組織染色液toruidineblueの至適濃度を検討している段階であり、具体的な結果は未だ出ていない。しかしながら、その前段階として、新生ラット摘出脳幹-脊髄標本における呼吸活動の形成に対して橋が抑制的に作用していることを、橋の切断前後での呼吸頻度の変化を検討することによってあらためて確認した(日本呼吸器学会雑誌38:160,2000)。同様の検討は1989年から1991年にかけてErrchidiらによって成されているが、彼らの検討ではLCの存在に充分注意が払われていたとは思えない。その意味で、LCがより完全に保たれた状態で、呼吸リズムの形成に対する橋の抑制作用が確認されたことは重要な意味を持つ。今後はLCの薬物的lesioningが呼吸リズムに及ぼす影響のみならず、呼吸リズムのpH/Pco_2の変化に対する反応性に及ぼす影響も検討する予定である。
哺乳類概日リズム制御機構における視交叉上核の領域特異性の解明

哺乳類概日リズム制御機構における視交叉上核の領域特異性の解明のため、まず、体内時計の中枢である視交叉上核と末梢器官の一つである肝臓の両方で遺伝子発現に概日リズムが見られる遺伝子の機能解析を行った。その一つであるId2のノックアウトマウスを用いた実験の結果、Id2^<-/->マウスの恒明条件での行動量の減少はId2が時計遺伝子のPer1の抑制因子として働き、その抑制因子が欠失したため引き起こされたという結論に至った。次に、機能未知の遺伝子の機能スクリーニングに重要な系の確立をするため、in vitro細胞系においてmiR RNAiを用いた機能抑制実験を行った。Per2プロモーターに1uciferaseが繋がったモニターベクターを内在したC6細胞において、安定的にRNAiを発現する細胞株を用いてluciferaseの発光リズムを経時的に測定した。その結果、ある遺伝子の機能抑制により、発光リズムが完全に抑制することが明らかとなった。これらの結果より、調べた遺伝子が少なくともPer2の発現に非常に重要な役割を示すだけでなく、一過性発現よりRNAiの発現量が劣る安定発現株でもその効果を確認することができた。このことはmiR RNAi発現系を移植した遺伝子改変マウスを用いた実験においても効果を発揮する可能性が高く、今後領域特異的に機能解析を可能にする非常に有効な方法であると考えられる。体内時計の中枢である視交叉上核と末梢器官の一つである肝臓の両方で遺伝子発現に概日リズムが見られる遺伝子の中の一つであるId2に関する研究を行った。この遺伝子はHLH型転写因子に結合し、転写を抑制することが知られている。概日リズム分子制御機構において転写促進因子であるBmal1とClockは共にbHLHドメインを持ち、両者は結合しE-Boxを介してmPer1等の転写を促進する。そのため、Id2がその機能を抑制し、概日リズム制御機構に関与していると予想し、Id2のKOマウスの行動リズム解析を行った。これまでの研究より、KOマウスは光周期の位相を後退させた時に再同調に遅延が見られる事が明らかとなった。そのため、その原因を検討するため、光照射による時計遺伝子の発現、及び位相変位を調べたが遺伝型による差は見られなかった。しかし、明暗条件から、恒明条件にすると、行動リズムの開始時刻の遅延が見られ、さらに行動量の減少が見られた。そのため、恒明条件下で視交叉上核における時計遺伝子mPer1を調べた結果、KOのmPer1発現量は野生型と比べ有意に上昇した。さらに、同条件下でId2の変動を調べたところ、Id2の発現は明暗条件と比べ有意に上昇している事が明らかとなった。mPer1は視交叉上核において、明期のシグナルを示すと考えられており、行動開始時刻の遅延や行動量の減少はId2の欠損によりmPer1発現の上昇が原因と考えられる。以上の事から、Id2はmPer1の発現を抑制してきに制御する事により、視交叉上核の分子制御機構に関与する事が明らかとなった。
サクセスフル・エイジングへの影響要因

「サクセスフル・エイジング」の心理的側面である「主観的幸福感」の様相、およびこれを高く保つ要件について研究を行った。高齢期に主観的幸福感の低下が起こるが、家族・親族内で何らかの役割を持つことや、心理的な発達課題を達成していることは主観的幸福感と概ね肯定的な方向で関連することが示唆された。他方、身内の「介護」の役割を担うことや、特に女性が否定的な体験をすること(大きなケガや病気の経験、対人的な葛藤など)が主観的幸福感の低下に関連しやすいことが示唆された。この研究は,「国立長寿医療センター、老化に関する長期縦断疫学研究(NILS-LSA)」の長期縦断調査データを用いて,サクセスフル・エイジングの心理的側面である「主観的幸福感」を高く保つための要件を解明するものである。1.データ収集:NILS-LSAでは4080歳代の地域住民(性・年代ごとに層化無作為抽出)を対象に約2年ごとに縦断的に調査を実施している。今年度もその第5次調査において自記式調査票および面接調査により,主観的幸福感,社会経済的地位,家族の有無,生活活動能力.対人関係,社会参加状況,認知機能,ライフイベントなどのデータの収集を行った。このデータは次年度の縦断的解析に用いる予定である。2.成果:NILS-LSAの第3次調査・第4次調査のデータを用い,高齢者の主観的幸福感の増加/低下に直接影響する要因として経済状態満足度,対人関係,ライフイベント,死に対する態度を取り上げ,それぞれ解析を行った。その結果,従来示されているとおり,経済状態への満足度が主観的幸福感に正方向で影響することが確認された。他方,新たに対人関係の肯定的側面と否定的側面がそれぞれ主観的幸福感に影響するが,特に男性では肯定的側面,女性では否定的側面が影響する可能性や,死別経験や自身の病気などのネガティブなライフイベントは女性の主観的幸福感の低下と関連することなど,性差の存在が示唆された。さらに,死に対する態度が主観的幸福感と関連性を持つことが示唆された。これらの知見は,高齢者が自らの「幸福な老い」を作り上げるための実践可能な対処法,および家族や社会が実践できるサポートを考える際に,重要な手掛かりとなると考えられる。この研究は、「国立長寿医療センター・老化に関する長期縦断疫学研究(NILS-LSA)」の長期縦断調査データを用いて、サクセスフル・エイジングの心理的側面である「主観的幸福感」を高く保つための要件を解明するものである。1.データ収集: NILS-LSAでは4080歳代の地域住民(性・年代ごとに層化無作為抽出)を対象に約2年ごとに縦断的に調査を実施している。今年度もその第5次調査(H20.7.18終了)・第6次調査(H20.7.23開始)において自記式調査票および面接調査により、主観的幸福感、社会経済的地位、家族の有無、生活活動能力、対人関係、社会参加状況、認知機能、ライフイベントなどのデータの収集を行った。2.成果: NILS-LSAの第1次調査・第4次調査のデータを用い、主観的幸福感の6年間の縦断的変化について検討した。年齢差の有無の検討も意図して40歳代・50歳代・60歳代・70歳代に群わけし解析した結果、40歳代・50歳代において維持されている主観的幸福感が、60歳代以降において加齢に伴い低下することが示唆された。また、主観的幸福感の増加/低下に直接影響する要因として「家族・親族内での役割」を取り上げ、NILS-LSAの第5次調査のデータを用いて解析を行った。その結果、家族・親族内で何らかの役割、特に「相談相手」や「まとめ役」といった役割を担うことは、高齢者の主観的幸福感に肯定的な方向で作用することが示唆された。他方、介護者としての役割を持つことに関しては低い主観的幸福感と関連することが示された。これらの知見は、高齢者が自らの「幸福な老い」を作り上げるための実践可能な対処法、および家族や社会が実践できるサポートを考える際に、重要な手掛かりとなると考えられる。
骨形成因子を用いた広範な骨欠損部に対する新しい再建方法の開発

平成5年度に続いて、マウス骨肉腫200g、ヌードマウス移植ヒト骨肉腫200gより、4M塩酸グアニジン抽出、アセトン分画イオン交換カラム、ゲルろ過、HPLCカラムにより骨形成因子を抽出精製した。コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸などの生体材料に、酵素処理や種々の薬品による処理を行ない、抗原性が低く組織親和性があり、骨形成因子との結合が容易な生体材料の開発をさらに進めた。骨形成因子結合各種生体材料をマウスの大腿部筋肉内に移植し、骨形成能、病理反応などを検討し、いかなる生体材料が最適であるかを検討した。その結果、マウスではポリ乳酸-ポリエチレングリコール共重合体が、骨形成因子の担体として適当であることが明らかとなったので、これの担体と合成骨形成因子を用いて、ラビット脛骨骨幹部に約2cmの骨欠損を作成し、骨形成実験を行なった。その結果、ハイドロキシアパタイト/ポリ乳酸-ポリエチレングリコール/骨形成因子の複合移植材により、約12週で良好な骨欠損の修復が観察された。さらに合成ヒト骨形成因子をハイドロキシアパタイト/牛皮コラーゲンに含浸させ、サル筋肉内に移植し、再現性よく骨形成が誘導できた。本年度の研究における反省としては、サル骨欠損部の修復実験が時間的制限のため施行できなかった点である。可移植性マウスDunn骨肉腫をC_3Hマウス約100匹の背部に移植し、3週後に腫瘍を回収した。ヌードマウスにて継代移植中のヒト骨肉腫をヌードマウス約100匹の背部に移植し、3週後に腫瘍を回収した。マウス骨肉腫200g、ヌードマウス移植ヒト骨肉腫200gより、4M塩酸グアニジン抽出、アセトン分画、イオン交換カラム、ゲルろ過、HPLCカラムにより骨形成因子を抽出精製した。コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸などの生体材料にペプシン等の酵素処理や、塩酸、酢酸等の薬品による処理を行い、抗原性が低く、組織親和性があり、骨形成因子との結合が容易な生体材料を開発した。これらの生体材料に対し、0.01N塩酸溶液中で精製骨形成因子2mgを各々加え、凍結乾燥した。骨形成因子結合各種生体材料を、マウスの大腿部筋肉内に移植し、骨形成能、病理反応などを検討し、いかなる生体材料が最適であるかを検討した。その結果、マウスでは牛皮ペプシン消化コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸(分子量600)が、骨形成因子の担体として適当であることが明らかとなった。本年度の研究における反省としては、以下の点が挙げられる。マウス骨肉腫500gを集める予定であったが、腫瘍の増殖が不良で200gのみが集められた。ヌードマウス骨肉腫500gを集める予定であったが、マウス感染率が高く、200gのみが集められた。骨形成因子の精製分画250mgを得る予定であったが、腫瘍の回収が悪く、100mgのみに終った。その結果、骨形成実験はマウスのみで行い、ラット、ラビット、犬では行えなかった。マウス骨肉腫300g、ヌードマウス移殖ヒト骨肉腫300gより、4M塩酸グアニジン抽出、アセトン分画イオン交換カラム、ゲルろ過、HPLCカラムにより骨形成因子を抽出精製した。コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸などの生体材料に、酵素処理や種々の薬品による処理を行い、抗原性が低く組織親和性があり、骨形成因子との結合が容易な生体材料を開発した。骨形成因子結合各種生体材料をマウスの大腿部筋肉内に移殖し、骨形成能、病理反応などを検討し、いかなる生体材料が最適であるかを検討した。その結果、マウスではハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸(分子量600)、ポリ乳酸-ポリエチレングリコール共重合体が、骨形成因子の担体として適当であることが明らかとなった。これらの担体と合成骨形成因子を用いて、ラビット脛骨骨膜下において良好な骨形成の誘導に成功した。

企業より入手した合成ヒト骨形成因子を用いて、サルの筋肉内及び脛骨骨下において良好な骨形成の誘導に成功した。本年度の研究における反省としては、以下の点が挙げられる。マウス骨肉腫500gを集める予定であったが、腫瘍の増殖が不良で300gのみが集められた。また、ヌードマウス骨肉腫500gを集める予定であったが、マウス感染率が高く、300gのみが集められた。その結果、骨形成因子の精製分画500mgを得る予定であったが、腫瘍の回収が悪く、200mgのみに終わった。その結果、精製分画を用いた骨形成実験はマウスのみで行ない、ラビット、サルに対しては、合成ヒト骨形成因子を用いた。平成5年度に続いて、マウス骨肉腫200g、ヌードマウス移植ヒト骨肉腫200gより、4M塩酸グアニジン抽出、アセトン分画イオン交換カラム、ゲルろ過、HPLCカラムにより骨形成因子を抽出精製した。コラーゲン、ハイドロキシアパタイト、ポリ乳酸などの生体材料に、酵素処理や種々の薬品による処理を行ない、抗原性が低く組織親和性があり、骨形成因子との結合が容易な生体材料の開発をさらに進めた。骨形成因子結合各種生体材料をマウスの大腿部筋肉内に移植し、骨形成能、病理反応などを検討し、いかなる生体材料が最適であるかを検討した。その結果、マウスではポリ乳酸-ポリエチレングリコール共重合体が、骨形成因子の担体として適当であることが明らかとなったので、これらの担体と合成骨形成因子を用いて、ラビット脛骨骨幹部に約2cmの骨欠損を作成し、骨形成実験を行なった。その結果、ハイドロキシアパタイト/ポリ乳酸-ポリエチレングリコール/骨形成因子の複合移植材により、約12週で良好な骨欠損の修復が観察された。さらに合成ヒト骨形成因子をハイドロキシアパタイト/牛皮コラーゲンに含浸させ、サル筋肉内に移植し、再現性よく骨形成が誘導できた。本年度の研究における反省としては、サル骨欠損部の修復実験が時間的制限のための施行できなかった点である。
培養胚性未分化細胞を用いる内在遺伝子機能を欠損するモデル動物作成法の開発

マウス受精卵へのDNA注入によるトランスジェニックマウス作成法の確立により,哺乳動物でも特定遺伝子の個体レベルでの機能を探り,また優性ヒト遺伝病のモデル動物を作成することが出来るようになった.しかし多くのヒト遺伝病は遺伝子機能の欠損により起こり劣性で,また一般にある遺伝子の働きを知るためにはこの遺伝子を余分に働かせることよりは欠損させることによって得られる情報の方が多い.マウス受精卵へのDNA注入によるトランスジェニックマウス作成法によって現在の所内在遺伝子機能を欠損させることには著しい困難がある.これに対し培養胚性未分化細胞(ES細胞)を用いる形質転換動物作成法には,培養下では選別が出来るなど遺伝子機能を欠損するモデル動物作成の目的には多くの利点がある.しかしこの方法は主としてES細胞の培養の困難さの故から未だトランスジェニックマウス作成法として確立していない.そこで4日胚からの胚性未分化細胞の培養とその長期培養及びキメラマウス・子孫マウスの作成を検討した.一般の正常体細胞は培養器内でその分裂能は限られておりaging→crisisの現象を示す.この現象がもし胚性未分化細胞においても本質的属性であるとすると,この細胞う用いる形質転換動物作成はそもそも成立しない. ES細胞を長期培養し約260回分裂させた後も効率よくキメラマウスが作成出来,また子孫マウスの得られることが確認さ, 4日胚由来の胚性未分化細胞はimmortalであると結論される.しかし長期培養の間ES細胞の核型は不安定であり,この不安定さが子孫マウスの得られる頻度の低いことと関連していると考えられる.核型の不安定さは特に用いる栄養細胞の種類によって著明であり, ES細胞の安定な培養に適した栄養細胞の開発を引き続き検討中である.マウス受精卵へのDNA注入によるトランスジェニックマウス作成法の確立により,哺乳動物でも特定遺伝子の個体レベルでの機能を探り,また優性ヒト遺伝病のモデル動物を作成することが出来るようになった.しかし多くのヒト遺伝病は遺伝子機能の欠損により起こり劣性で,また一般にある遺伝子の働きを知るためにはこの遺伝子を余分に働かせることよりは欠損させることによって得られる情報の方が多い.マウス受精卵へのDNA注入によるトランスジェニックマウス作成法によって現在の所内在遺伝子機能を欠損させることには著しい困難がある.これに対し培養胚性未分化細胞(ES細胞)を用いる形質転換動物作成法には,培養下では選別が出来るなど遺伝子機能を欠損するモデル動物作成の目的には多くの利点がある.しかしこの方法は主としてES細胞の培養の困難さの故から未だトランスジェニックマウス作成法として確立していない.そこで4日胚からの胚性未分化細胞の培養とその長期培養及びキメラマウス・子孫マウスの作成を検討した.一般の正常体細胞は培養器内でその分裂能は限られておりaging→crisisの現象を示す.この現象がもし胚性未分化細胞においても本質的属性であるとすると,この細胞う用いる形質転換動物作成はそもそも成立しない. ES細胞を長期培養し約260回分裂させた後も効率よくキメラマウスが作成出来,また子孫マウスの得られることが確認さ, 4日胚由来の胚性未分化細胞はimmortalであると結論される.しかし長期培養の間ES細胞の核型は不安定であり,この不安定さが子孫マウスの得られる頻度の低いことと関連していると考えられる.核型の不安定さは特に用いる栄養細胞の種類によって著明であり, ES細胞の安定な培養に適した栄養細胞の開発を引き続き検討中である.
色属性情報利用による環境認識の高速化に関する研究

人間の色に対する属性を定量的に表した知覚情報「色相(H)、彩度(S)、明度(I)」をRGB情報の代わりに使用し、人間と機械との情報の共有を容易にし、かつ、情報処理を高速化するための研究を行った。全てが光強度という物理量であるRGB情報の組合せによって、明るさや鮮やかさの異なる同一色を認識するのが困難である。一方、知覚情報である色相・彩度・明度を扱うHSI情報は、人間の視覚によって判断する色測定や比色などについては極めて優れているが、既存の映像機器の内部信号としては不向きである。そこで、映像機器の内部信号として有効なRGB情報を、実時間で人間の知覚情報であるHSI情報に変換し、新たな情報出力を有する色測定処理システムを構築した。提案する手法は、民生機器の高性能化に伴って比色法・分光法・吸光度法などと同等に使用可能なことが予想されることから、他の計測分野への応用を試み良好な結果を得た。これによって、人間の視覚がマシンビジョンより優れている対外界照明変化特性の実用化、人間から機械への色情報伝達の簡素化、色画像処理の高速化を図ることが可能になり、色属性情報を応用した環境認識システムが実現可能となった。具体例環境認識センサとして、特別な特徴付けを行わないステレオ・レンジファインダーや人間の色感覚のデータベース化などに応用した。色感覚のデータベースは、サービスロボットなど人間とのコミュニケーションを必要とする機器に目標値を与える際に必要な人間の負担を軽減した軽快なヒューマン・マシン・インタフェースの構築に有効であると考える。また、介護支援において重要な技術となり得る「在宅保健モニターシステム」の基本要素として、尿試験紙などにおける色票との色比較による段階的判定を定量測定へとすることを可能とし,ホーム・ケア・テクノロジーとして実用性を示し,新しい計測法としての有効性を示した.人間の色に対する属性を定量的に表した知覚情報「色相(H)、彩度(S)、明度(I)」をRGB情報の代わりに使用し、人間と機械との情報の共有を容易にし、かつ、情報処理を高速化するための研究を行った。また、介護支援において重要な技術となり得る「在宅保健モニターシステム」の基本要素として、尿試験紙などにおける色票との色比較による段階的判定を定量測定へとすることを可能とし,ホーム・ケア・テクノロジーとして実用性を示し,新しい計測法としての有効性を示した.カラーカメラから出力されるRGB画像は、それぞれ「赤」、「緑」、「青」の色バンドパスフィルタを通して得られた濃淡画像であると考えられる。そのため、従来のRGB画像を用いた色画像処理では、白黒画像処理を3枚の濃淡画像に施した後、得られた結果を各画素においての論理演算により融合する処理が必要となる。その結果、長い処理時間に見合った結果が得られる場合が少なく、色画像処理が実用的段階にあるとは言い難い。本研究では、色画像処理の一手法として、従来のRGB画像処理の簡略化と高速化を目指した融合色情報による画像処理を行った。色の表現をRGBに代えて、「色相」、「クロマ(彩度)」、「明度」の色に関する3属性を用いた。さらに、これら3属性を一括して取り扱うことを可能とし、また、演算プロセッサの整数演算機能を有効に活用して高速演算が可能となるようにするため、3属性を融合して16ビットの新しい信号を定義した。それぞれの色属性の重要性を左右するビット配置は、画像処理の対象となる局所画像の色属性値の統計的分布により決定し、画像処理結果の精度向上を図った。提案手法を、(1)移動ロボットの視覚センサを目指したカラー・レンジ・ファインダの開発、(2)超広角視覚センサによるランドマーク認識、(3)カラーCCDカメラを分光計として応用した二酸化炭素ガス濃度計測システム、に適用して有効性の確認を行った。高速化を図るために試作したRGBからの変換用電子回路には、信号変換の安定性やノイズの抑制など改良すべき点が多く実用性について十分に評価できないが、基礎技術としての有効性は確認できた。これらの技術をさらに改良することにより、実時間処理が可能な実用的色画像処理が可能になると期待される。
難聴遺伝子変異マウスへのiPS細胞移植による難聴レスキュウー

本研究では難聴遺伝子変異マウス内耳へのiPS細胞の効果的な細胞導入法を開発するため以下の成果が得ている。1.遺伝子変異マウスの作製:我々は細胞移植治療の対象とする遺伝性難聴モデルマウスとして、ヒト遺伝性難聴において世界で最も高頻度に変異が検出されるConnexin26(Cx26)のコンディショナルノックアウトを新規に作成した。まず新規に作成したCx26遺伝子のfloxedマウスにP0プロモーターの制御下で内耳を含む神経系全域でCre遺伝子を発現するトランスジェニックマウスであるP0-Creマウスを交配し、floxed Cx26アレルがホモ接合体であり、Cre遺伝子が陽性となる個体(Cx26コンディショナルKO)を選抜し、同腹仔とともに移植実験に供した。2.経半規管細胞移植法の検討:まず既に移植効果の確認されている骨髄間葉系幹細胞(MSC)により検討した。半規管に小孔をあけ、2×10^5cellsを還流し、小孔の修復のためにMSCの無接着培養により作成した細胞塊(cell sphere)を小孔部に挿入することにより術後のリンパ液の漏出を抑えた。挿入された移植細胞塊は術後2週間においても半規管組織内において維持、さらには進展していることが確認されている。3.移植細胞の検出:経半規管移植後の組織を抗GFP抗体での免疫蛍光染色により移植細胞の組織進入を解析したところ、前庭線維細胞組織内、蝸牛ラセン板縁組織内に移植細胞の生着を確認した。移植後の聴力を術後8週間までモニタリングしたが、手術による聴力低下は正常動物でも難聴モデルにおいても見られなかった。4.iPS細胞の調整:マウスiPS細胞は理研バイオリソースセンターからの供与を受けSNLフィーダー細胞存在下で培養を行っている。内耳前駆細胞への分化を即し前述の方法で難聴モデル動物へ導入する予定である。本研究では難聴遺伝子変異マウス内耳へのiPS細胞の効果的な細胞導入法を開発するため以下の実験を行い、成果が得られている。遺伝子変異マウスの作製我々は細胞移植治療の対象とする遺伝性難聴モデルマウスとして、ヒト遺伝性難聴において世界で最も高頻度に変異が検出されるConnexin26(Cx26)のコンディショナルノックアウトを新規に作成した。まず新規に作成したCx26遺伝子のfloxedマウスにPOプロモーターの制御下で内耳を含む神経系全域でCre遺伝子を発現するトランスジェニックマウスであるPO-Creマウスを交配し、floxed Cx26アレルがホモ接合体であり、Cre遺伝子が陽性となる個体(Cx26コンディショナルKO)を選抜し、同腹仔とともに移植実験に供した。経半規管細胞移植法の検討移植法の検討としてまずは既に移植効果の確認されている骨髄間葉系幹細胞(MSC)を使用した。後半規管および外側半規管に小孔をあけ、後半規管より2×10^5cellsを還流し、小孔の修復のためにMSCの無接着培養により作成した細胞塊(cell sphere)を小孔部に挿入することにより術後のリンパ液の漏出を抑えた。同方法により挿入された移植細胞塊は術後2週間においても半規管組織内において維持、さらには進展していることが確認されている。移植細胞の検出経半規管移植後の組織を抗GFP抗体での免疫蛍光染色により移植細胞の組織進入を解析したところ、前庭線維細胞組織内、蝸牛ラセン板縁組織内に移植細胞の生着を確認した。
マウスにおけるリーシュマニア感染防御に果たすケモカインの役割

リーシュマニア症は広く世界に蔓延している疾患であり社会経済的に重要な問題となっている。また同症の病原体の一つであるLeismania majorを用いた感染実験はTh1・Th2タイプの免疫応答を解析する上で非常に有用なモデルである。大量(1x10^5以上)のL.majorに感染した際、感受性であるBALB/cマウスはTh2タイプの免疫応答(液性免疫、IL-4を産生)を示し最終的に死に至る。一方、少量(1x10^3以下)のL.majorに感染したBALB/cマウスはTh1タイプの免疫応答を示して一次感染を乗り切り、更に二次感染に対する防御免疫を獲得する。本研究では1)L.major少量及び大量感染マウスの所属リンパ節において、各種ケモカイン(MCP1-4,MIP-1α,MIP-1β,MIP-3α,SLC, TARC, IP-10,MIG,など)の発現を経時的に解析した。大量感染マウスの所属リンパ節では上記サイトカインが感染早期より高発現していたのに対して、少量感染マウスでは感染早期での発現は低レベルだった。また、少量感染マウスでは感染後経時的に上記サイトカインの一部に発現増強が認められた。2)一方、我々はIL-12受容体β鎖に相同性が高い、リガンドが不明の新規受容体WSX-1を同定した。このWSX-1分子の機能を解析したところ、この新規受容体を介する経路がIFN-Y産生を介して感染抵抗性に関与していることが判明した。また、この新規受容体(およびそのリガンド)を介する経路はIL-12経路よりも上流でTh1/Th2分化を方向付ける重要なものである可能性が示唆された(Yoshida H, Hamano S,他. Immunity, 2001; 15(4):569-578)。現在、このWSX-1受容体を介する経路が各種ケモカイン発現に果たす役割を検討中である。また同症の病原体の一つであるLeishmania majorを用いた感染実験はTh1・Th2タイプの免疫応答を解析する上で非常に有用なモデルである。一方、少量(1x10^3以下)のL.majorに感染したBALB/cマウスはTh1タイプの免疫応答を示して一次感染を乗り切り、更に二次感染に対する防御免疫を獲得することが明らかとなった(Hamano et al.,1998)。次いで、L.major少量感染時に防御免疫が獲得される過程を解析する目的で、少量および大量感染マウスの間で免疫応答を比較をした。すると少量感染マウスの局所リンパ節では、大量感染時に認められるCD62L+CD4+T細胞(IL-4産生細胞)の集積が欠けており、早期IL-4の発現も認められなかった(Hamano et al.,1998)。上記結果から、L.major少量および大量感染時に質的に異なる免疫応答(Th1 or Th2)が誘導される原因として、CD62L+CD4+T細胞(IL-4産生細胞)の集積に関わるようなケモカインの量的・質的差異を考えている。今回L.major少量及び大量感染マウスの所属リンパ節において、各種ケモカイン(MCP1-4,MIP-1α,MIP-1β,MIP-3α,SLC,TARC,IP-10,MIG,など)の発現を経時的に解析した。今後、大量感染マウスで強く発現するケモカインに着目して解析を深める。

このWSX-1分子の機能を解析したところ、この新規受容体を介する経路がIFN-Y産生を介して感染抵抗性に関与していることが判明した。また、この新規受容体(およびそのリガンド)を介する経路はIL-12経路よりも上流でTh1/Th2分化を方向付ける重要なものである可能性が示唆された(Yoshida H, Hamano S,他. Immunity, 2001; 15(4):569-578)。現在、このWSX-1受容体を介する経路が各種ケモカイン発現に果たす役割を検討中である。
細胞分裂酵素・蛋白質系の解析と再構成

最も単純な細胞に於て、生物の基本的な営みである細胞分裂の機構を解明し、細胞増殖の系を再構成することを目的として、以下の研究を行った。1。大腸菌の細胞生長と分裂に関与する<mra>___ー遺伝子群の解析。大腸菌染色体地図上2分に位置する20キロベ-ス<mra>___ー領域の完全な遺伝子解析をほヾ終了した。<mra>___ー領域の5^1ー末端に近い所に存在する330塩基対のオ-プンリ-ディングフレ-ム中に細胞生長と分裂のそれぞれを欠損させる変異があることを明らかにし、また<mraY>___ー、<murG>___ー遺伝子がペプチドグリカン生合成におけるリピド中間体生成の2つの酵素をコ-ドすることを明らかにした。3。黄色ブドウ球菌のβーラクタム高度耐性菌(MRSAと略称され、病院感染の大きな問題になっている)の耐性原因と考えられる遺伝子、<mecA>___ーと、その発現を制御すると考えられる<mecB>___ー遺伝子の解析を1960年以降に世界で分離されている様々なMRSA株について行った。4。マウスの半数体細胞系列を分離する目的で,半数体未受精卵を発生させ、これより遺伝子導入其他の方法で安定に自己増殖する半数体培養細胞を育成することを試み、有用なデ-タ-を得た。5。細胞骨格系蛋白質乃至細胞骨格様蛋白質の分離と解析をすゝめた。1.大腸菌の細胞生長・分裂に関与する遺伝子群の局在する染色体上のmra領域の遺伝子解析とDNA配列決定を行い、細胞分裂に関する新しい遺伝子ftsWを発見しそのDNA配列を明らかにした所、この遺伝子は枯草菌の胞子形成遺伝子の一つspoVEと極めてよく似ていることがわかった。また恐らく一つの遺伝子に存在すると思われる二つの表現形質の異る変異、すなわち細胞分裂変異fts-36と細胞生長変異its-33を見出した。2.メチシリン耐性ブドウ球菌の耐性原因と考えられるペニシリン結合蛋白質MRSA-PBPの遺伝子mecAをクローン化して感受性ブドウ球菌に導入してこれをメチシリン耐性にかえ、このようにしてmecA遺伝子すなわちMRSA-PBPがブドウ球菌のメチシリン耐性の原因であることを明らかにした。3.大腸菌の細胞生長に機能するペニシリン結合蛋白質の精製と結晶化をすすめ、無定形のアグリゲートを伴わない単一の結晶を作る条件を明らかにした。更に結晶した蛋白質のN-末端構造を明らかにした。4.細胞分裂と拮抗して細胞の生長をプログラム通りに行い、大腸菌細胞の捍菌形態を決定する遺伝子mreBのDNA配列を決定し、更にこの遺伝子の機能の詳細を明らかにする情報を得た。5.大腸菌及び酵母から、細胞複製に関与する構造的蛋白質の分離・精製を進めた。6.マウス初期胚発生の実験を進め、未受精卵及び未受精卵と受精卵とのキメラより半数体細胞を培養し、半数体細胞株樹立のための条件検討を行った。1.大腸菌の細胞分裂・生長に関与するmra遺伝子群の解析。大腸菌染色体地図上2分に位置する十数キロベ-スのmra領域の完全な遺伝子地図の作成とDNA塩基配列決定を行った。この領域に属する遺伝子のうち、細胞分裂遺伝子として同定されたftsWは、その遺伝子産物であるFtsW蛋白質の一次構造が大腸菌の形態形成に関与するRodA蛋白質、枯草菌の胞子形成に関与するSpoVE蛋白質と極めて類似しており、これらが夫々のペニシリン結合蛋白質と対応して細胞分裂、形態形成及び胞子形成を行っていることが予測された。また大腸菌染色体地図上71分に位置するmre領域の遺伝子群mreB、C、Dを同定し、DNA塩基配列決定を行った。これらの遺伝子群はみなそれぞれ細胞分裂を抑制し、細胞の長軸方向への伸長に働くことを明らかにし、細胞の分裂と生長をスイッチオン・オフする極めて重要な機能をもつことを示唆した。2.黄色ブドウ球菌のβーラクタム高度耐性菌(メチシリン耐性ブドウ球菌)の耐性原因と考えられるペニシリン結合蛋白質の遺伝子を感受性黄色ブドウ球菌に導入してβーラクタム高度耐性にすることに成功し、本ペニシリン結合蛋白質が黄色ブドウ球菌のβーラクタム高度耐性の原因であることを明らかにした。3.マウスの半数体未受精卵を発生させ、8細胞期で通常の2倍体細胞と集合させることにより半数体細胞由来の細胞を含むキメラ個体まで発生させたが、九日胚以降の段階で半数体細胞はすべて倍数化して2倍体細胞になっていた。しかしそれ以前で半数体細胞は胎児及び胎盤等のほとんどあらゆる所に分化し得ることがわかった。1。<mra>___ー領域の5^1ー末端に近い所に存在する330塩基対のオ-プンリ-

ディングフレ-ム中に細胞生長と分裂のそれぞれを欠損させる変異があることを明らかにし、また<mraY>___ー、<murG>___ー遺伝子がペプチドグリカン生合成におけるリピド中間体生成の2つの酵素をコ-ドすることを明らかにした。3。黄色ブドウ球菌のβーラクタム高度耐性菌(MRSAと略称され、病院感染の大きな問題になっている)の耐性原因と考えられる遺伝子、<mecA>___ーと、その発現を制御すると考えられる<mecB>___ー遺伝子の解析を1960年以降に世界で分離されている様々なMRSA株について行った。4。マウスの半数体細胞系列を分離する目的で,半数体未受精卵を発生させ、これより遺伝子導入其他の方法で安定に自己増殖する半数体培養細胞を育成することを試み、有用なデ-タ-を得た。5。細胞骨格系蛋白質乃至細胞骨格様蛋白質の分離と解析をすゝめた。
気分障害の原因となる視床室傍核特異的ミトコンドリア障害におけるMAOBの意義

Maobノックアウトマウス、およびMaob flox/floxマウス(Creを発現する細胞のみでMaobがノックアウトされるマウス)をCRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を用いて作成した。現在、Maob遺伝子の大規模欠損マウス、およびloxP配列が挿入されたMaob flox/floxマウスが作出できた。生化学的な実験、および、ノックアウトの確認実験のため、繁殖させている状況である。Maobノックアウトマウスにおいて、ドーパミン、セロトニン、ノルアドレナリンなどのモノアミン、およびその代謝物の変化を観察するため、サンプリング方法を検討した。目的とする神経核はMAObを多く発現する縫線核、視床室傍核、および、それらの投射核である、側坐核、島皮質である。これらの領域について、同体積、かつ、より正確に神経核の摘出を行うため、マイクロウエーブ固定した脳を1-2 mm厚でスライスし、生体パンチにより摘出した。視床室傍核は、1匹当たり直径1 mmのパンチ1個分に相当し、その組織重量は約1mgであった。他のモノアミンが約20 ng/mgであるのに比べ、MAObの基質であるフェニルエチルアミンは20 pg/mg程度であり、非常に濃度が薄いことから、通常、モノアミンを測定する電気化学検出による高速液体クロマトグラフィーでは、感度が不十分である可能性が考えられた。よって、より感度良く測定可能な質量分析法を用いて、標品によるカラムの選定、測定条件を検討した。将来的には、Maob flox/floxマウスを用いて、視床室傍核特異的にMaobをノックアウトする予定である。そのため、まず、GFP遺伝子を導入したウイルスベクターを作成し、適切な投与量、濃度、期間、注入方法について検討し、最適化した。加齢に伴う酸化ストレスの変化を免疫組織化学的解析により検討するための条件検討を行った。計画段階では、Maob flox/floxマウスを購入の予定であったが、個体での入手ができず、時間がかかることから、CRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を用いて作成することとなった。にもかかわらず、順調に大規模欠失マウス、およびMaob flox/floxマウスを作出できた。また、脳内モノアミン測定についても測定法やサンプリング法の検討を行うことができた。ウイルスベクターの作成についても、試薬、装置の準備が整い、コントロールとして、GFP遺伝子による方法の検討を行うことができたことから、おおむね順調に進展していると判断した。来年度は、Maobノックアウトマウス、Maob flox/floxマウスをさらに繁殖させ、以下の実験を計画している。1)MaobノックアウトマウスにおけるMAOb遺伝子発現量の確認:大脳皮質、線条体、海馬、小脳、脳幹、腎臓より、Trizolを用いてRNAを抽出し、逆転写によりcDNAを合成し、リアルタイムPCR法で定量的解析を行う。ベータアクチン、または18s rRNAなどのハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的定量を行う。、3)Maobノックアウトマウスにおける脳内モノアミン量の定量:質量分析法で測定可能であれば、質量分析法を使用する。モノアミン類とその代謝物では、化合物の性質が全く異なるため、同じ方法で測定できない可能性がある。また、脳組織を用いたときには、標品での測定感度より低下する可能性が高いことから、電気化学検出による高速液体クロマトグラフィーによる方法での検討も行う。脳組織に各標品を注入して測定する回収実験の結果により、最終的な測定方法を決定する。4)視床室傍核特異的なノックアウトを行うための実験系の確立: Maob flox/floxマウスにウイルスベクターを投与した後の確認方法の検討を行う。視床室傍核は吻側から尾側まで広く存在する神経核である。免疫組織化学的な方法で、Maobの存在を確認する。灌流固定後の脳組織より切片を作成し、Maob抗体による染色を行い、野生型との比較によって、視床室傍核では陽性細胞数が低下し、縫線核においては陽性細胞が維持されていることを確認する。大規模欠失マウスにおいても、Maob抗体を用いた免疫組織化学的染色を行い、その違いを確認する。

よって、より感度良く測定可能な質量分析法を用いて、標品によるカラムの選定、測定条件を検討した。将来的には、Maob flox/floxマウスを用いて、視床室傍核特異的にMaobをノックアウトする予定である。そのため、まず、GFP遺伝子を導入したウイルスベクターを作成し、適切な投与量、濃度、期間、注入方法について検討し、最適化した。加齢に伴う酸化ストレスの変化を免疫組織化学的解析により検討するための条件検討を行った。計画段階では、Maob flox/floxマウスを購入の予定であったが、個体での入手ができず、時間がかかることから、CRISPR/Cas9によるゲノム編集技術を用いて作成することとなった。にもかかわらず、順調に大規模欠失マウス、およびMaob flox/floxマウスを作出できた。また、脳内モノアミン測定についても測定法やサンプリング法の検討を行うことができた。ウイルスベクターの作成についても、試薬、装置の準備が整い、コントロールとして、GFP遺伝子による方法の検討を行うことができたことから、おおむね順調に進展していると判断した。来年度は、Maobノックアウトマウス、Maob flox/floxマウスをさらに繁殖させ、以下の実験を計画している。1)MaobノックアウトマウスにおけるMAOb遺伝子発現量の確認:大脳皮質、線条体、海馬、小脳、脳幹、腎臓より、Trizolを用いてRNAを抽出し、逆転写によりcDNAを合成し、リアルタイムPCR法で定量的解析を行う。ベータアクチン、または18s rRNAなどのハウスキーピング遺伝子の発現量に対する相対的定量を行う。、3)Maobノックアウトマウスにおける脳内モノアミン量の定量:質量分析法で測定可能であれば、質量分析法を使用する。モノアミン類とその代謝物では、化合物の性質が全く異なるため、同じ方法で測定できない可能性がある。また、脳組織を用いたときには、標品での測定感度より低下する可能性が高いことから、電気化学検出による高速液体クロマトグラフィーによる方法での検討も行う。脳組織に各標品を注入して測定する回収実験の結果により、最終的な測定方法を決定する。4)視床室傍核特異的なノックアウトを行うための実験系の確立: Maob flox/floxマウスにウイルスベクターを投与した後の確認方法の検討を行う。視床室傍核は吻側から尾側まで広く存在する神経核である。免疫組織化学的な方法で、Maobの存在を確認する。灌流固定後の脳組織より切片を作成し、Maob抗体による染色を行い、野生型との比較によって、視床室傍核では陽性細胞数が低下し、縫線核においては陽性細胞が維持されていることを確認する。大規模欠失マウスにおいても、Maob抗体を用いた免疫組織化学的染色を行い、その違いを確認する。
学校教育の”周縁”の現代的可能性に関する複合的研究

本研究の目的は三つの「周縁」ー学習内容、属性、地域ーから職業に関わる教育学的研究、学校から社会への移行に関する研究、青年期教育研究の再構築を図り若者の就学・就職困難に関わる諸問題の解決に資することにあった。北海道・東北、九州地方の専門学校関係データの収集・整理・分析である。北海道のデータ収集・整理・分析は一昨年度にほぼ終え、その結果を公表した。また、「就職進学/進学就職」の実態に関わる概念整理に着手している。女性専門職については初職の正規雇用率や継続して働いているものの比率が相対的に高い一方、将来が見通せないとするものも多く、課題が浮き彫りとなった。本年度は、延べ10回にわたる研究会・打ち合わせを行い、研究の推進を図った。その上で、資料収集・調査を行い以下の成果を挙げた。1.北海道の専門学校のデータ整理・分析(北海道の14振興局ごとの進学率の変化、専門学校数の推移、専門学校進学者数や属性の変化、都市部と地方中核都市、地方圏の相違に関する分析、地方中核都市における専門学校の位置づけの高さに関わる諸事情について)。以上はじゅうらい充分に分析されておらず、特に専門学校の配置や進学動向については発見が多かった。2.九州の専門学校に関する資料収集(九州各県のデータの整理)。九州の場合、北海道とは異なってデータの公表状況がそれぞれの県によって大きく異なっているため、基準となるデータを収集することに相当時間と労力を費やした。3.保専生制度(X社就職進学制度)に関する事例調査(制度の概要、学習と労働の現状に関する調査、卒業生に対するパイロット調査)。事例の質的な特徴に関して先行して実施されている調査であり、学びながら働く現代的な事例として注目される。4.北海道及び九州の公共職業訓練政策に関する情報収集。5.企業内教育の近年の動向に関する資料収集。なお、以上の成果の一部に関しては日本教育学会及び北海道教育学会で報告を行った(辻智子「『働きつつ学ぶ』多様な形態と若者の生活・労働・教育(その1)」、日本教育会第74回大会」、上原慎一「北海道における専門学校進学の諸相」北海道教育学会第603回大会)。研究組織が北海道と九州に別れているが、10回にわたる研究会や打ち合わせで絶えず目的や進捗状況を確認しつつ、資料収集・調査を遂行した。近年の宿泊事情の悪化により充分な参加者を確保できないこともあったが、代表がほぼすべてに参加して状況の確認を行った。本研究の目的は、三つの「周縁」から職業に関わる教育学的研究、学校から社会への以降に関する研究、青年期教育研究の再構築を図り、現代大きな課題となっている若者の就学・就職困難に関わる諸問題の解決に資することである。第一は教育機関・学習内容の「周縁」性であり、普通教育中心の中等教育体系及びそれを前提とした中等後教育に対し、専門学校や職業教育・職業訓練施設等における職業能力形成の歴史を明らかにすることである。第二は労働者の属性(雇用形態・性別)の「周縁」性であり、非正規化されつつある専門職や女性に対する職業教育の歴史的、現代的意義を考察する。第三は地域の「周縁」性である。大都市圏ではなく、東北・北海道地方、九州地方のそれぞれの特徴や課題について、資料収集・調査を行う。今年度は6回にわたる研究会、打ち合わせ及び資料収集、調査を経て以下の成果を挙げた。第一は北海道及び九州の専門学校関係データの収集・整理・分析である。中卒後や高卒後、教育訓練機関、専修学校に進学した層の推移や受け入れ先である専門学校の分布や編成について分析を行った。第二は繊維女工に対する教育制度に関する資料収集及び東北地方における「進学就職」に関わる進路指導の歴史に関する調査である。東北地方を給源とする東海地方の繊維メーカーの進学や入職後の就労や生活の状況に関する資料収集を行った。第三は女性専門職(保育士、栄養士)の就労と離転職に関するアンケート調査である。東海地方と九州地方の二つの短大・大学の卒業生の現状について詳細なアンケート調査を行い、現在分析中である。当初計画していた進学・就職、専門学校関連統計データや繊維関係の地域資料の収集・分析について概ね順調に推進し、成果を発表しつつある。また、学校における進路指導や受け入れ企業の関係者への聞き取り調査も順調に行われている。専門職に関するアンケート調査についてもすでに配布・回収、データ入力を終えており、詳細な分析を鋭意遂行中である。本研究の目的は三つの「周縁」ー学習内容、属性、地域ーから職業に関わる教育学的研究、学校から社会への移行に関する研究、青年期教育研究の再構築を図り、現代大きな課題となっている若者の就学・就職困難に関わる諸問題の解決に資することにあった。昨年度は4回にわたる研究会、打ち合わせを行い、更なる資料収集、調査結果の分析等を行ってきた。第一は北海道・東北、九州地方の専門学校関係データの収集・整理・分析である。九州についても福岡県、長崎県、鹿児島県に関わるデータの収集・整理を終え、現在その結果の分析について関係者で議論をしながら最終報告にいたる途上である。東北地方については現在収拾中である。第二の課題については収集した資料を取りまとめながら、「就職進学/進学就職」の実態に関わる概念整理に着手している。第三の課題については分析を終え、以下のような結果を得た。大学時代の学習や実習に関しては半数以上の卒業生が現在の仕事に生かされていると回答している。サークル活動やボランティアの有効性に関する評価が相対的に低い。

他方友人関係やアルバイト経験を肯定的に評価するものが圧倒的に多かった。初職の正規雇用率や継続して働いているものの比率が相対的に高い一方、将来が見通せないとするものも多く、課題が浮き彫りとなった。以上、地域別の異同については分析途上であるものの、特に女性の職業と職業教育の歴史と現状について、かなり詳細に明らかに出来たと考えている。なお、以上の成果については紙媒体で報告書を作成したことを付記しておく。本研究の目的は三つの「周縁」ー学習内容、属性、地域ーから職業に関わる教育学的研究、学校から社会への移行に関する研究、青年期教育研究の再構築を図り若者の就学・就職困難に関わる諸問題の解決に資することにあった。北海道・東北、九州地方の専門学校関係データの収集・整理・分析である。北海道のデータ収集・整理・分析は一昨年度にほぼ終え、その結果を公表した。また、「就職進学/進学就職」の実態に関わる概念整理に着手している。女性専門職については初職の正規雇用率や継続して働いているものの比率が相対的に高い一方、将来が見通せないとするものも多く、課題が浮き彫りとなった。今年度は昨年度の実績を踏まえて、更に具体的な事例やデータの分析に取り組む予定である。具体的には以下のとおり。1.北海道の専門学校に関するデータの更なる分析及び北海道内の地域的特徴に関する事例調査2.東北地方の専門学校に関するデータ収集3.九州・沖縄地方のセン学校に関するデータの分析及び地域的特徴に関する事例調査4.複数の地域における女性専門職のキャリア展開に関するアンケート調査以上の課題についてそれぞれ担当者が資料収集・調査を行う。今年度も昨年度同様、複数回の研究会を開催し、研究の推進状況をかっく人すると共に、」地域や対象の際と共通性に関する議論を行い、資料集・調査に方らしい視点を提供する可能性を追求する。今年度は、上記のそれぞれの領域について引き続き必要な資料収集や聞き取り調査、とりわけ複数の事例についてのインテンシブな調査を行いながら、すでに集めたデータの分析結果について学会発表、論文等で順次発表・公開していく。具体的には日本社会教育学会、日本産業教育学会での発表、それぞれの所属する研究機関で発行されている紀要等に論文として投稿する予定である。また、取りまとめのための理論的な枠組みについて集団的に検討するとともに、最終的には本研究の総括として報告書を発行する予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。教育学29年度が最終年度であるため、記入しない。