hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多能性歯髄幹細胞を用いた筋系譜細胞への分化転換に関する基礎的研究

歯髄中の組織幹細胞の特性を明らかにするために、筋分化誘導と歯髄幹細胞の純化を行った。間葉系幹細胞などで報告のある骨格筋分化誘導系のうち、5-aza-2'-deoxycytidineを用いることで、筋管形成とMyosin Heavy Chainの発現が見られた。また、FACS解析により、間葉系幹細胞マーカーであるSca-1とPDGFRを共に発現する細胞が歯髄に存在し、脂肪、骨といった多分化能を示すことが明らかとなった。歯髄細胞が持つとされる多分化能を検討する目的で、歯髄細胞の骨格筋分化を試みた。具体的にはこれまでに報告のある間葉系細胞からの骨格筋分化誘導法を試みることにより歯髄細胞における筋分化に必要な培養条件の検討を行い、筋分化マーカーであるMyoD-1等の発現を指標とした検討を行った。ラットより回収した歯髄細胞を3ng/ml IGF-1、2%ウマ血清を含む培地により1、2、3週間の分化誘導を行い、それぞれの細胞よりtotal RNAを回収しReal time PCRによってMyoD-1、Alkaline phosphatase、BMP-4の発現を解析した。MyoD-1の発現は分化誘導により上昇することが確認されたが、一方で骨分化を誘導するサイトカインであるBMP-4の発現は高いままであった。そこでBMP受容体に拮抗的に結合しBMPシグナルを抑制するNogginを分化誘導培地に添加し同様の分化誘導を行ったところ、通常の筋分化条件より効率良く歯髄細胞を筋系譜細胞へと分化誘導できる傾向にある可能性を見出した。さらに、一筋分化に重要とされる転写因子を歯髄細胞に導入するため、MyoD-1をコードするcDNAを持つ発現コンストラクトの作成を行った。前年度に引き続き、歯髄細胞をin vitroで骨格筋分化誘導を試み、RT-PCR及び免疫染色により骨格筋特異的遺伝子の発現を調べた。無血清培地による筋分化誘導においてはMyoDの発現は分化誘導前に比べ増加傾向にあったが、筋管形成などの形態的変化は確認されなかった。MyoD-1をコードするcDNAを持つ発現コンストラクトによるMyoDの強制発現系においては無血清培地による誘導同様、筋管形成などの形態的変化は見られなかったが、Myogeninの発現誘導が見られた。さらに5-aza-2'-deoxycytidine (5-aza)を用いたDNAの脱メチル化による筋分化促進を試みたところ、骨格筋特有の筋管形成とMyosin Heavy Chainの発現が見られた。以上の結果から、歯髄細胞からの骨格筋分化にはクロマチン凝集の低下による筋特異的遺伝子発現の必要性が示唆された。しかし、筋分化の効率はきわめて低く、より分化誘導を効率よくするために歯髄幹細胞を純化することが考えられたため歯髄幹細胞の特性を明らかにし、歯髄幹細胞を純化する目的で、マウス切歯の歯髄より採取した細胞における組織幹細胞マーカーの発現をFCMにより解析した。その結果間葉系幹細胞マーカーであるSca-1とPDGFRを共に発現する細胞が歯髄に存在し、高い増殖能と脂肪、骨といった間葉系細胞への分化能を示すことが明らかとなった。以上の結果より、歯髄細胞における筋分化能は歯髄中に存在する高い分化能を持つ間葉系幹細胞の分化可塑性による可能性が考えられた。
実践的に制御理論を学ぶための教材とカリキュラム開発

従来,LEGO MINDSTORMS EV3を利用した制御工学の教材開発には,XLモータにLEGO用エンコーダGlideWheel-Mを組み合わせたものを使用されていたが,現在,入手困難な状況である.そこで,小型で高速・高トルクなpololu社のメタルギヤモータを利用することを検討した.このモータは専用ブラケットで簡単にLEGOパーツに取り付けることが可能であるが,EV3で正常に認識させることができない.本研究では,EV3とメタルギヤモータの間にシュミットトリガと分圧用抵抗で構成される回路を挿入し,この問題に対処した.また, 2軸ヘリコプタの簡易モデルを教材として検討し,ピッチ角とヨー角の制御が可能であることを確認した.一方,EV3は汎用センサの利用が困難であり,拡張性に問題がある.そこで,Arduino互換ボードMinSegMEGAで代用することを検討した.MinSegMEGAはEV3と同様,MATLAB/Simulinkの使用がサポートされており,LEGOモータ/センサの利用も可能である.この環境下でLEGOモータのPID制御を学習するコンテンツの作成を行い,技術者を対象としたセミナーで利用した.受講後にアンケートを行った結果(5点満点),テキストの満足度は4.5点,進め方の満足度は4.4点であり,高評価であった.しかし,同時に内容が多すぎるとの指摘もあり,コンテンツの改善点が確認できた.さらに,自動制御を効果的に体感するために,MinSegMEGAで駆動する二輪スケートボードを開発した.この実験装置は,PD制御により搭乗者のバランスアシストを行うパーソナルビークルである.舞鶴高専での「制御工学」の授業の1回目で搭乗体験を行ったところ,受講者の72%が「自動制御の興味が高くなった」,28%が「自動制御の興味が少し高くなった」という好意的なアンケート結果が得られた.当初,LEGO MINDSTORMSEV3を利用した制御工学の教材開発には,LEGO PowerFunctionsシリーズのXLモータおよびサードパーティのLEGO用エンコーダの使用を予定していたが,これらの製品が入手困難あるいは製造中止となり,急遽,代替品の選定を行う必要が生じた.そのため,EV3を利用した教材開発が遅れている.ただし,代替品としての汎用モータの使用に目処がたったため,今後,研究が進むものと考えている.一方,Arduino互換ボードMinSegMEGAを利用したPID制御の教育コンテンツの初版を完成させた.また,実際に技術者向けセミナーにおいて,その効果が確認でき,同時に改善点も知ることができた.さらに,自動制御を体感するための二輪スケートボードを開発し,教育効果が高いことを確認できた.Arduino互換ボードを利用した制御工学の教材開発については,順調に進んでいる.Arduino互換ボードMinSegMEGAを利用したPID制御の教育コンテンツについてであるが,2019年度中にMinSegMEGAのバージョンが新しくなる予定である.そこで,新型に対応させ,同時に2018年度に実施したアンケート結果をもとにコンテンツの改善を行い,プレゼン資料やMATLAB/SimulinkのファイルをWeb上で広く公開する予定である.また,現代制御の学習を想定して,LEGOパーツで簡単に製作可能な倒立振子などの教材を,LEGO MINDSTORMS EV3およびMinSegMEGAをベースとして開発する.そして,開発した教材に対して,教育コンテンツを構築する.さらに,MATLAB/Simulinkの使用例を含む「制御工学」の一般書籍を出版する.従来,LEGO MINDSTORMS EV3を利用した制御工学の教材開発には,XLモータにLEGO用エンコーダGlideWheel-Mを組み合わせたものを使用されていたが,現在,入手困難な状況である.そこで,小型で高速・高トルクなpololu社のメタルギヤモータを利用することを検討した.このモータは専用ブラケットで簡単にLEGOパーツに取り付けることが可能であるが,EV3で正常に認識させることができない.本研究では,EV3とメタルギヤモータの間にシュミットトリガと分圧用抵抗で構成される回路を挿入し,この問題に対処した.また, 2軸ヘリコプタの簡易モデルを教材として検討し,ピッチ角とヨー角の制御が可能であることを確認した.一方,EV3は汎用センサの利用が困難であり,拡張性に問題がある.そこで,Arduino互換ボードMinSegMEGAで代用することを検討した.MinSegMEGAはEV3と同様,MATLAB/Simulinkの使用がサポートされており,LEGOモータ/センサの利用も可能である.この環境下でLEGOモータのPID制御を学習するコンテンツの作成を行い,技術者を対象としたセミナーで利用した.受講後にアンケートを行った結果(5点満点),テキストの満足度は4.5点,進め方の満足度は4.4点であり,高評価であった.しかし,同時に内容が多すぎるとの指摘もあり,コンテンツの改善点が確認できた.さらに,自動制御を効果的に体感するために,MinSegMEGAで駆動する二輪スケートボードを開発した.この実験装置は,PD制御により搭乗者のバランスアシストを行うパーソナルビークルである.舞鶴高専での「制御工学」の授業の1回目で搭乗体験を行ったところ,受講者の72%が「自動制御の興味が高くなった」,28%が「自動制御の興味が少し高くなった」という好意的なアンケート結果が得られた.当初,LEGO MINDSTORMSEV3を利用した制御工学の教材開発には,LEGO PowerFunctionsシリーズのXLモータおよびサードパーティのLEGO用エンコーダの使用を予定していたが,これらの製品が入手困難あるいは製造中止となり,急遽,代替品の選定を行う必要が生じた.そのため,EV3を利用した教材開発が遅れている.

ただし,代替品としての汎用モータの使用に目処がたったため,今後,研究が進むものと考えている.一方,Arduino互換ボードMinSegMEGAを利用したPID制御の教育コンテンツの初版を完成させた.また,実際に技術者向けセミナーにおいて,その効果が確認でき,同時に改善点も知ることができた.さらに,自動制御を体感するための二輪スケートボードを開発し,教育効果が高いことを確認できた.Arduino互換ボードを利用した制御工学の教材開発については,順調に進んでいる.Arduino互換ボードMinSegMEGAを利用したPID制御の教育コンテンツについてであるが,2019年度中にMinSegMEGAのバージョンが新しくなる予定である.そこで,新型に対応させ,同時に2018年度に実施したアンケート結果をもとにコンテンツの改善を行い,プレゼン資料やMATLAB/SimulinkのファイルをWeb上で広く公開する予定である.また,現代制御の学習を想定して,LEGOパーツで簡単に製作可能な倒立振子などの教材を,LEGO MINDSTORMS EV3およびMinSegMEGAをベースとして開発する.そして,開発した教材に対して,教育コンテンツを構築する.さらに,MATLAB/Simulinkの使用例を含む「制御工学」の一般書籍を出版する.当初予定していた機器の購入を見送ったためである.具体的には,Arduino互換ボードが2019年度にバージョンアップ予定であったため,2018年度は購入しなかった.また,使用予定であったLEGO用モータやセンサも在庫不足あるいは製造中止となり,新たに使用機器の選定を行うことが必要となったため,動作確認用の最小限の購入に留めた.2019年度はこれらの機器を購入すると同時に,LEGO MINDSTORMS EV3の購入も行い,教材の試作を進めていく予定である.
海洋堆積層のS波速度解析に基づく南海トラフ巨大地震による長周期地震動予測の高度化

海域で発生した地震についての長周期地震動を予測するためには、海洋堆積層におけるS波速度構造を精度よく推定する必要がある。本研究では、P波からS波に変換されたPS変換波の走時および波形解析や常時微動解析などの、主にS波に着目した複数の解析手法を駆使して、南海トラフ域の海洋堆積層におけるS波速度構造を明らかにする。構築したS波速度構造を基に地震波動場を計算し、南海トラフ巨大地震の陸海域における長周期地震動の予測精度や震源解析精度の向上のために貢献する。
サンゴ－褐虫藻の細胞内共生関係成立・崩壊に関わる遺伝子の解析

昨年度、褐虫藻培養株(CCMP2556 (clade D)とCCMP2466 (clade C1))共生させたサンゴを高温強光ストレスに暴露し、サンゴのストレス応答性を比較した。今年度はそのストレス暴露したサンゴのRNA-seq解析を主に実施した。また、それに加え、初年度から進めてきたサンゴ-褐虫藻共生体において共生開始時期に発現変動する遺伝子についての解析、まとめ作業をしてきた。ストレス環境下では、褐虫藻clade C1が共生したサンゴでは多くの遺伝子が発現変動していたのに対し、cladeDが共生したサンゴでは、発現変動する遺伝子が少ない傾向が見られた。クレードDタイプの褐虫藻は高温強光につよく、光阻害を起こしにくいことが知られているが、遺伝子発現応答からみても、クレードCよりもストレスに対する反応が緩やかであることが明らかになった。発現変動する遺伝子を用いてGO enrichment解析を実施したところ、ストレス暴露して白化した際に発現減少する遺伝子として、骨格形成に関与する遺伝子群、代謝や成長に関与する遺伝子群が多数同定された。また、ストレス暴露時に発現上昇する遺伝子として、免疫応答に関与する遺伝子群が同定された。現在サンゴ体内に共生する褐虫藻の方のストレス応答遺伝子も同様に解析している。また、初年度から実施している細胞内共生成立初期に発現変動する遺伝子の解析については、RNA-seqで同定した遺伝子の発現量をリアルタイムPCRで確認した。特に発現変動の大きい遺伝子十数個を対象に実施したが、それら遺伝子のRNA-seqにより検出された発現パターンが、リアルタイムPCRの結果と概ね一致することを確認している。28年度が最終年度であるため、記入しない。造礁性サンゴは共生する褐虫藻の種類によりそのストレス耐性が変化することが分かっている。通常の成体サンゴにはクレードCというタイプの褐虫藻が共生するが、高温時に生存するサンゴにはクレードDが共生することが報告されている。そのため、褐虫藻クレードDはストレスに強い特徴を持つと考えられていた。申請者は過去の実験で褐虫藻クレードCとDそれぞれ共生した稚サンゴを作成することに成功しているため、これらのサンゴを用いてサンゴ-褐虫藻の共生の仕組みとサンゴの白化現象の分子メカニズムを明らかにすることを目的に実験を行った。造礁性サンゴであるウスエダミドリイシのプラヌラ幼生を採集し、ポリプに変態させた後、褐虫藻培養株(CCMP2556 (clade D)とCCMP2466 (clade C1))を海水中に混入しサンゴに共生させた。そして、褐虫藻導入後10日目、20日目のサンゴを遺伝子発現解析(RNA-seq)用に固定した。現在、RNA-seq解析によりサンゴと褐虫藻の細胞内共生に関与する遺伝子(褐虫藻の共生で発現変動する遺伝子)の単離を試みている。これまでclade Cの褐虫藻の共生で変化する遺伝子が10日目のサンゴで1650個、20日目のサンゴでは215個検出された。また、clade D共生では共生10日目に6425個の遺伝子、20日目には15711個の遺伝子が発現変動する遺伝子として検出された。現在、各遺伝子のデータベース検索を行い、それぞれの遺伝子がどのようなタンパク質をコードし、どのような機能を持つのか解析中である。これまでの実験の続きとして、サンゴに共生藻が共生する過程で発現変動する遺伝子の解析を行った。RNA-seq解析により、共生藻獲得で発現変動する複数のサンゴ遺伝子と褐虫藻遺伝子が得られ、どのような遺伝子が発現変動しているか詳細を調べてきた。現在論文としてまとめている最中である。これまでの結果から、サンゴと褐虫藻の代謝関連の遺伝子が大規模に発現変動し、細胞内共生の初期段階では、褐虫藻の物質合成や代謝に関わる遺伝子群の発現が多く見られた。そして、細胞内共生が進む(共生藻の数が増える)につれて代謝関連の遺伝子群の発現が抑制される傾向が見られた。また、共生が進むにつれて、サンゴの免疫システム関連の遺伝子群の発現量が低下することがわかった。白化現象を起こしたサンゴをRNA laterに固定し白化中のサンゴで発現変動する遺伝子を比較するため、現在RNA-seq解析を行っている。白化中に発現変動する遺伝子を同定し、サンゴのストレス応答や白化現象がどういう仕組みで起きているかを明らかにしていく予定である。1年目にはサンゴと褐虫藻の細胞内共生に関与する遺伝子を単離するための実験を行い、2年目にあたる27年度はその解析法を確立して共生に関与する遺伝子を多数単離することができた。申請書の2年目の計画通り、造礁性サンゴの白化ストレス応答に関与する遺伝子の同定を行なうため、サンゴの白化ストレス実験を行った。予定通り、サンゴを実験的に白化させることに成功し、その際の遺伝子を単離して、現在RNA-seqにより白化ストレス応答に関与する遺伝子の同定を試みている。今後さらにデータ解析を行うことで、白化現象の遺伝子が複数同定されることが見込まれる。

また、それに加え、初年度から進めてきたサンゴ-褐虫藻共生体において共生開始時期に発現変動する遺伝子についての解析、まとめ作業をしてきた。ストレス環境下では、褐虫藻clade C1が共生したサンゴでは多くの遺伝子が発現変動していたのに対し、cladeDが共生したサンゴでは、発現変動する遺伝子が少ない傾向が見られた。クレードDタイプの褐虫藻は高温強光につよく、光阻害を起こしにくいことが知られているが、遺伝子発現応答からみても、クレードCよりもストレスに対する反応が緩やかであることが明らかになった。発現変動する遺伝子を用いてGO enrichment解析を実施したところ、ストレス暴露して白化した際に発現減少する遺伝子として、骨格形成に関与する遺伝子群、代謝や成長に関与する遺伝子群が多数同定された。また、ストレス暴露時に発現上昇する遺伝子として、免疫応答に関与する遺伝子群が同定された。現在サンゴ体内に共生する褐虫藻の方のストレス応答遺伝子も同様に解析している。また、初年度から実施している細胞内共生成立初期に発現変動する遺伝子の解析については、RNA-seqで同定した遺伝子の発現量をリアルタイムPCRで確認した。特に発現変動の大きい遺伝子十数個を対象に実施したが、それら遺伝子のRNA-seqにより検出された発現パターンが、リアルタイムPCRの結果と概ね一致することを確認している。国立遺伝学研究所にて、実際に実験に使用できる造礁性サンゴの維持に成功し、褐虫藻を共生させることができている。また、それらのサンゴを使って、RNA-seq解析を実施し、実際に共生状態と非共生状態のサンゴで発現変動している遺伝子の同定ができた。造礁性サンゴの維持は難しく、実験的に飼育維持することが困難であるが、新しく設置した実験環境で飼育に成功し目的とする実験ができたことは大きな進展であるといえる。国立遺伝学研究所に所属し、他研究者と意見を交換することで、より効率的にサンゴの遺伝子発現解析を行う技術を確立し、今後の研究発展の基盤造りができた。28年度はRNA-seq解析の結果をまとめることを中心に行う。この2年間で解析が進み、細胞内共生初期で発現変動する遺伝子や、白化ストレスに応答性の遺伝子については徐々に結果をまとめられつつある。今後はさらにreal-timePCRを行い、RNA-seqのデータの正確性を検証する。また、これまでは稚サンゴを用いて実験を行ってきたが、今年度は成体のサンゴを使って同じストレス暴露実験を行う。稚サンゴで得られたストレス応答性の遺伝子が、成体のサンゴでも発現変動するのかを調べ、稚サンゴで得られた結果がどれだけ成体に適用可能かを明らかにする。28年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度は造礁性サンゴの白化やストレス応答に関与する遺伝子の同定を行う。ウスエダミドリイシのプラヌラ幼生を採取し、人為的にポリプ(稚サンゴ)に変態させる。この稚サンゴにクレードCとDの褐虫藻株をそれぞれ共生させる。共生藻を混入して約4ヶ月後にクレードCとDそれぞれが高密度に共生することがわかっている。そのため、褐虫藻混入後約4ヶ月目のサンゴを使用してストレス暴露実験を行う。海水を32度まで段階的(0.5°C/day)に上げ、サンゴの白化の程度を観察する。
ホスファチジルエタノールアミン生合成系酵素の構造機能解析

ホスファチジルエタノールアミン生合成系に属するEKI、ECT、EPTの3つの酵素について、酵素間の相互作用解析をおこなうことを目指して研究を進めた。【酵素EKIと酵素ECTの相互作用解析】酵素EKIは平成19年度に確立した大腸菌を宿主とする発現系を用いて大量に発現させ、高純度の精製タンパク質を調製することに成功しか。本研究課題以前に確立した発現・精製系を用いてECTの精製サンプルを調製し、EKIとの相互作用解析を行った。その結果、EKIとECTの間には分子間相互作用が存在しないことが強く示唆された。【酵素EPTと酵素ECTの相互作用解析】メタノール資化酵母Pichia pastorisを宿主とする膜タンパク質EPTの発現系構築を目指したが目的の発現系を得ることができなかった。そこで、大腸菌を宿主とするEPTの発現系を用いて精製EPTの調製を試みた。EPTのN末端側に付加したアフィニティー精製タグを利用した精製によりEPTの純度を上げることができたが、EPTは非常に不安定であることが分かった。精製EPTを用いてECTとの相互作用解析を行ったが、EPTとECTの間には分子間相互作用が存在しないことが強く示唆された。ホスファチジルエタノールアミン生合成系に属するEKI,ECT,EPTの相互作用解析をおこなうために、3つの酵素の調製法を確立することを中心に研究を進めてきた。ECTは既に大量調製系が確立されているため、EKIとEPTの発現系構築から研究を開始した。【酵素EKIの発現系構築】培養条件を検討することによって、構造解析に十分な収量を得ることに成功し、精製条件を確立した。EKIが時間とともに劣化することが明らかとなった。なお、結晶構造が機能研究に有益な情報をもたらすと考えられるため、調製したEKIを用いて結晶化実験もおこなったが、現在までに結晶は得られていない。【酵素EPTの発現系構築】膜タンパク質であるEPTの発現系構築は、大腸菌を宿主とする系での条件検討を進めてきた。C末端に付加した蛍光タンパク質GFPによってEPTの発現を確認したが、発現量は極微量であり、構造解析をおこなうには不十分であると結論づけた。発現したEPTが大腸菌の細胞膜へ挿入する過程がうまく進まなかったか、あるいは挿入後のコンポメーションがEPTを安定に保持することができなかったと考えている。【酵素EKIとECTの相互作用解析】EKIとECTの相互作用解析をおこなった結果、溶液条件によってはEKIとECTが何らかの相互作用をする可能性が示唆された。しかし、相互作用解析の過程で精製EKIが劣化することが判明したことや、EKIとECTの間の相互作用は非常に弱いと予想されたことにより、今後も相互作用解析を続けていく必要があると分かった。
フラックスコンセントレータ型高磁場ソレノイドの横方向磁場成分補正の研究

フラックスコンセントレータ型ソレノイドの横方向磁場成分を補正する方法について研究するために、プロトタイプマグネットを用いて磁場分布を測定するためのピックアップコイルと可動ステージのシステムを開発した。磁場分布の詳細な測定により、外周シールド部との距離が大きな影響を及ぼすことがわかった。本研究ではフラックスコンセントレータ型高磁場ソレノイドにおいて必然的に発生する横方向磁場成分を補正する方法について検討するのが主眼であるが、試験用プロトタイプの設計を進めるに当たり、フラックスコンセントレータに関して精力的に開発を行っているロシアのBINP研究所を平成19年9月10月に訪問して情報収集及び議論を行った。まず、かれら低電力用試作機と高電力用試作機の磁場分布の測定データの比較より、中心部コイルと外周部の磁気シールドのすきま寸法の小さな変化が横方向磁場成分に大きな影響を与えることが判明した。かれらは、すきまの大きさをなるべく小さくするような形状変更を行ったプロトタイプ次号機を製作する予定であるとのことであったので、その完成と磁場測定結果を待って我々のプロトタイプの設計に反映させることになった。また、引き続いてロシアのトムスク工科大学を訪問し、陽電子生成及び収束に関するビームシミュレーションの手法について情報収集及び議論を行った。その結果、当初構想していた極座標系を用いた誘導電流及び磁場分布のシミュレーションプログラム作成には困難があることが分かり、当面、直交座標系でのシミュレーションを行うこととした。直交座標系でのシミュレーションであれば、市販のプログラムElectromagnetic Studioが利用できるのでこれを用いて簡単なモデル形状のフラックスコンセントレータを想定して横方向磁場成分の評価を行った。平成20年度の研究成果として、フラックスコンセントレータの横方向磁場成分の大きさは、中心部コイルと外周部の磁気シールドのすきま寸法、形状に敏感であることが分かったので、ロシアのBINP研究所で製作されるプロトタイプ次号機の結果を参考とすることとした。そして平成20年5月に彼研究所を訪問し、このプロトタイプ次号機の磁場分布測定結果について議論を行った。結果として、このすきまを極力小さくすることにより横方向磁場成分を3分の2程度に軽減することができることがわかった。しかしながら、機能上コイルと外周部は絶縁されている必要があるために、このすきまを無くすることはできない。このため、それ以外の部分の形状等の工夫により横方向磁場成分を減らす必要があることがわかった。また、磁場分布の詳細なシミュレーションを行うためには、実機或いは同等のプロトタイプの詳細な磁場分布測定を行うことが重要であることがわかった。この結果については平成20年6月に広島で行われた国際会議Posipol-2008ワークショップにおいて、フラックスコンセントレータ開発の現状として報告を行った。また、ロシア製のフラックスコンセントレータのプロトタイプを借用することができることになったので、それをサンプルとして磁場分布の測定を自動で行うための可動ステージのシステム、時間的に変動する磁場の強さに応じて起電力を発するピックアップコイルの開発を行った。
先端ゲノムによる家族性神経疾患遺伝子の発見と新しい家系解析方法論の開発

既知遺伝子による遺伝性疾患と未知遺伝子による遺伝性疾患の2つの遺伝性疾患が共在する患者がいる家系についてエクソーム解読を行った。Hiseq2500で超高速シークエンスを行い、BWAソフトウェアでヒトゲノム参照配列へのマッピング、GATKにてSNV (Single nucleotide variation)のコールを行った。エクソームシークエンスの平均depthはx108-121であった。遺伝性疾患共在情報に着目し、既知遺伝子周辺領域を探索。絞込みを行うことにより、2-3個の新規疾患遺伝子変異の候補を抽出した。疾患共在情報は原因変異の絞込みに有用であった。本研究では、臨床情報(疾患共在情報・特異な症状など)を活用し、連鎖領域や疾患遺伝子の推測に役立てる、先端ゲノム解析による家系遺伝解析の新たな方法論を開発する。家族性に疾患をもつ家系に対し、次世代シークエンサー等の先端ゲノムと、連鎖解析やCNV解析を用いて、効果的に疾患遺伝子を同定する。新たな家系発掘と、家族性疾患遺伝子の発見を目指す。本年度は、他の遺伝性疾患が共在する、パーキンソニズムと統合失調症の2家系について、全エクソン塩基配列決定(エクソーム解読)をおこなった。平均coverageは>x100であり、全エクソン配列の96%の塩基が解読できた。本研究では、臨床情報を活用し、連鎖解析や疾患遺伝子の推測に役立てる、先端ゲノム解析による家系遺伝解析の新たな方法論を開発する。家族性に疾患をもつ家系に対し、次世代シークエンサー等の先端ゲノムと、連鎖解析から、効果的に疾患遺伝子を同定する。本年度は、希少神経疾患のエクソーム解読実験を行った。さらに、エクソーム解読実験データ等について、マッピングやSNV抽出など行い、疾患候補となるSNVを抽出した。神経内科学おおむね予定通り進捗しているため。今後は、本年度得られたゲノムデータをもとに連鎖解析を行う。他疾患の共在情報を活用し、疾患遺伝子同定をめざす。アレイ実験せずに、エクソーム実験のみで、疾患遺伝子を発見できる可能性があり、まずはエクソーム実験のみで研究をすすめたため。今後、アレイ実験が必要になった際に、アレイ実験を追加する。もしアレイ実験不要であった際には、他の家系検体についての実験解析に使用する。
生体酵素系に生成する感応性化学種の同定と機能解明

ペルオキレドキシン(Prx)は活性中心にCys残基を有し、過酸化水素を水に還元する過程で、超原子価硫黄を含むS-OH中間体を経る。S原子上にあるH原子の存在を中性子解析で実証する目的で、3種の超好熱古細菌由来Prx(ApPrx, PhPrx, TkPrx)について大型結晶の育成に取り組んだが、いずれもH原子の存在を実証できる高分解能データの収集には至らなかった。しかし、PhPrxにも同様の中間体が存在し、一般性が実証された。一方、活性種を研究する手法としてX線自由電子レーザーを用い、亜硝酸還元酵素NIRの完全酸化型の基質の結合様式から酸化還元に伴う構造変化に関する知見を得た。超好熱性古細菌A. pernixK1由来ペルオキシレドキシン(ApPrx)やA. pernixK1由来の金属酵素スーパーオキシドディスムターゼ(ApeSOD)の反応中間体の中性子線構造解析や、低温トラップ法による時分割X線構造解析により詳細な反応機構の解明を目指す。中性子構造解析のための結晶化には1 mm角を超える高品質結晶が必要であり、24年度に続きこれら酵素の大量精製、ミクロ種結晶化法、マクロ種結晶化法を駆使した種結晶化を繰り返し、大型結晶育成のための結晶化実験に取り組んた。しかし、いずれも多結晶化のため中性子線回折実験には至っていない。一方、時分割構造解析の可能性を秘めたSACLAのX線自由電子レーザーを用いたX線構造解析(文科省重点戦略研究課題【代表:岩田想】との共同研究)を進め、チロシナーゼ、Mb、FABP3、NIRの結晶構造を解析した。その結果、MbのFeイオンの酸化によるヘムの構造変化や、NIRの世界初の完全酸化型構造を観察するなどの成果が得られ、上記2つの標的酵素の反応中間体の構造解析の可能性について検討することができた。また、エキシマ発光で構造変化が検出可能なピレン修飾アデニル酸キナーゼの構造基盤を構築するために、本修飾酵素の構造解析を行い、Py-Adk内での修飾ピレンのエキシマ形成の様子が原子レベルで明らかとなった。生体系では、酵素触媒反応の過程で一過的に感応性化学種が生成し、特異な機能を発揮することがある。本研究では、チオレドキシンペルオキシダーゼ中のチオール残基が過酸化水素と反応する際に生成する、超原子価硫黄原子を含むS-OH中間体の構造を中性子回折法でも直接観測し、その機能を解明するとともに、スーパーオキシドディスムターゼ(SOD)で生成する一過的な金属配位構造も同定する。平成26年度は、超好熱性古細菌A. pernix K1由来ペルオキシレドキシン(ApPrx)やA. pernix K1由来の金属酵素スーパーオキシドディスムターゼ(ApeS OD)の反応中間体の中性子線構造解析や、低温トラップ法による時分割X線構造解析により詳細な反応機構の解明を目指し、中性子構造解析のための1 mm角を超える高品質結晶の結晶化を試みたものの、いずれも多結晶化のため中性子線回折実験には至っていない。一方、時分割構造解析の可能性を秘めたSACLAのX線自由電子レーザーを用いたX線構造解析(文科省重点戦略研究課題【代表:岩田想】との共同研究)も昨年度と同様に推進し、NIRの結晶構造解析を引き続き行い、昨年度成功していたアポ型のNIRの完全酸化型構造に加え、基質複合体のX線構造解析を推進し、反応機構の解明が大きく進展した。平成27年度は、超好熱性古細菌A. pernix K1由来ペルオキシレドキシン(ApPrx)やA. pernix K1由来の金属酵素スーパーオキシドディスムターゼ(ApeS OD)の反応中間体の中性子線構造解析や、低温トラップ法による時分割X線構造解析により詳細な反応機構の解明を目指し、H26年度に続いて中性子構造解析のための1 mm角を超える高品質結晶の結晶化を試みたが、a軸方向のモザイク性が極めて高く、その方向に対する結晶の劈開性の為に大型化が困難であり、種結晶化法も極めて困難であることが判った。いずれも多結晶化のため中性子線回折の実験には至らなかった。一方、時分割構造解析の可能性を秘めたSACLAのX線自由電子レーザーを用いたX線構造解析(文科省重点戦略研究課題【代表:岩田想】との共同研究)も昨年度と同様に推進し、亜硝酸還元酵素NIRの結晶構造解析を行い、基質複合体の無損傷X線構造解析に成功し、反応機構の詳細が明らかとなった(米国科学アカデミー紀要(Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America(略称PNAS)に掲載され、各種メディアからも報道された)。中性子構造解析のため1 mm角を超える大型の高品質結晶の取得を目指し、大量精製されたApTPxの結晶化を行った。

0.20.4mmのサイズの結晶を得て後、これを細かく砕いて種とするミクロ種結晶化法や、そのまま次のバッチの中に浸漬するマクロ種結晶化法などを駆使し、何度も種結晶化を試した。しかし、マクロ種結晶の段階で結晶が劈開すると共に、モザイク性が上昇し、良質結晶の取得には至らず、中性子回折実験には着手できなかった。結晶形の変化を期待してMutation実験を試みたが、今のところパッキングを変化させる変異体の作製には至っていない。一方、由来の異なる超好熱始原菌(Pyrococcus horikoshi)由来TPxについても同様にS-OH中間体を経て反応が進行するものと考え、結晶構造解析を行ったところ、過酸化水素の添加に伴うS-OH中間体の生成を直接捉えるには至らなかったものの、本中間体を経て反応が進行したと思われる痕跡状態を構造解析によって明らかとし、以前と同様の反応機構で還元反応が進行することが判った。そこでP. horikoshi由来のTPxについても大型結晶の調製を試みているが、未だ中性子線解析に適した大型結晶を得るには至っていない。一方、SACLAにおけるX線自由電子レーザー(文科省重点戦略研究課題【代表:岩田想】との共同研究)こそが、S-OH中間体の反応性や酵素の詳細な反応機構の解明に向けた重要技術となると考え、その技術の積極導入に注力している。その結果、別の酵素ではあるが、亜硝酸還元酵素のNIRを用いた場合に、世界初で無損傷状態の構造解析に成功し、反応前の初期構造を詳細に解析するに至っている(Fukuda Y. et al., PNAS, 113(11), 2928-2933, 2016)。本手法を用いれば、将来的にはS-OH中間体からの構造変化などを詳細に解析できると期待している。生体系では、酵素反応の過程で一過的に感応性化学種が生成し、特異な機能を発揮する場合がある。以前、超好熱性古細菌A. pernix K1由来ペルオキレドキシン(ApPrx)の反応中間体に超原子価硫黄原子種を含むS-OH中間体が活性種として存在することをX線回折法を用いて明らかとしたが、超原子価のS原子上の水素原子の直接観測には至っていなかった。本研究課題では、S-OH中間体の詳細な構造を実験的に解析すると共に、その一般性を明らかとすることを目的とした。超好熱性古細菌であるP. horikoshii (PhPrx)の結晶の、H2O2添加直後のX線構造は、ApPrxと同様、S-OH中間体をとり、超原子硫黄の原子状態が広く一般的に生体内に存在することが判明した。また、S-OH中間体のS原子上の水素原子の直接観察のため、中性子回折法よる構造解析を目的とした大型結晶の作製に取り組んだ。2 mmを超える大型結晶が得られたものの、モザイク性も高く、3.5Å分解能のデータしか得られなかった。そこで、それぞれ10量体、12量体で存在するApPrxおよびPhPrxの結晶形を変更する目的で、会合体の境界面にアミノ酸の変異を導入した。ApPrxでは空間群がP1からP21に変わったものの、1軸が170.8Aと長くなり、国内の施設では中性子線回折のデータ収集が不可能であった。そこで、12量体をとる超高熱古細菌T. kodakaraensis由来Prx(TkPrx)についても結晶化を行ったところ、空間群がP622に属する新たな結晶が得られ、現在、中性子線回折実験のための大型化に取り組んでいる。一方、亜硝酸還元酵素NIRの変異体作製による人工酵素の作製を進め、別の酵素機能に酵素の骨格構造の構築には成功した。
アルミニウム固溶体の超塑性と粒界すべりの役割

超塑性発現の一つの目安としてしばしば歪速度感受性指数m≧0.3が挙げられる.微細結晶粒材料では粒界すべり(m=0.5)が主要な高温変形機構となるため,この条件が満たされ,超塑性が発現することは周知の通りである.他方,高温変形がsolute dragにより支配されるいわゆるClassl型(クリープの応力指数n=3)の合金に関するAl-Mg固溶体やAl-Cu固溶体では,結晶粒径-歪速度で表した変形機構図に見るように,結晶粒が微細でなくても(極端な場合単結晶でも)m=1/n=0.33>0.3となるので,実際の金属成形で期待される300%以上の伸びが得られるのではないか.このような観点から,本研究では比較的高濃度の溶質原子を含み,かつ粒界すべりの寄与を無視し得るほどの粗大な結晶粒からなるAl-Cu合金について,超塑性発現の可能性を検討した.その結果,ClassI型挙動が現れる変形条件下で400%を超える超塑性伸びを示すことが判明したので,以下にその特徴と変形機構について考察した結果を報告する.供試材は99.99%Alおよび99.9%Cu地金より溶製されたAl-4.5mass%Cu合金で,化学組成はCu4.54,Si0.016,Fe0.010,Mg0.004,Zn0.004,残部Alである(単位mass%).引張試験片の製造工程は,地金溶解→水平加熱鋳型式連続鋳造(いわゆるOCC法)→均質化処理(833,7.2ks)→切削加工(ゲージ部長さ10mm,太さ4m,R部付き)→ゲージ部の歪取り電解研磨である.これらをインストロン型試験機による定速引張試験に供した.温度範囲は673821K(0.730.90Tm),歪速度範囲は1.0×10^<-1>1.0×10^<-4>s^<-1>である.組織観察は光学顕微鏡と走査型顕微鏡によった.供試材の結晶粒は軸方向に異常に長いため,粒界に働くせん断応力は事実上0である.結果は以下のように要約される.(1)773K上の温度域で超塑性が認められる.公称応力一公称歪曲線は初期のピークを経て単調に減少し,針状に尖って破談に至る.しかし,真応力はほぼ一定値を示した.(2)最大伸びは,α単相域の833Kで460%,,821Kで444%,803Kで321%である.しかし,(α+θ)共存域の673Kでは14%に激減した.(3)m値は単相域で0.30.4である.温度とともに漸増傾向がある.(4)超塑性変形域ではすべり変形が一様でSEMでもすべり帯は観察されない.(5)粒界すべりの痕跡は認められない.(6)粒内変形の寄与の大きさを示す先在ボイドの伸張が認められた.超塑性発現の一つの目安としてしばしば歪速度感受性指数m≧0.3が挙げられる.微細結晶粒材料では粒界すべり(m=0.5)が主要な高温変形機構となるため,この条件が満たされ,超塑性が発現することは周知の通りである.他方,高温変形がsolute dragにより支配されるいわゆるClassl型(クリープの応力指数n=3)の合金に関するAl-Mg固溶体やAl-Cu固溶体では,結晶粒径-歪速度で表した変形機構図に見るように,結晶粒が微細でなくても(極端な場合単結晶でも)m=1/n=0.33>0.3となるので,実際の金属成形で期待される300%以上の伸びが得られるのではないか.このような観点から,本研究では比較的高濃度の溶質原子を含み,かつ粒界すべりの寄与を無視し得るほどの粗大な結晶粒からなるAl-Cu合金について,超塑性発現の可能性を検討した.その結果,ClassI型挙動が現れる変形条件下で400%を超える超塑性伸びを示すことが判明したので,以下にその特徴と変形機構について考察した結果を報告する.供試材は99.99%Alおよび99.9%Cu地金より溶製されたAl-4.5mass%Cu合金で,化学組成はCu4.54,Si0.016,Fe0.010,Mg0.004,Zn0.004,残部Alである(単位mass%).引張試験片の製造工程は,地金溶解→水平加熱鋳型式連続鋳造(いわゆるOCC法)→均質化処理(833,7.2ks)→切削加工(ゲージ部長さ10mm,太さ4m,R部付き)→ゲージ部の歪取り電解研磨である.これらをインストロン型試験機による定速引張試験に供した.温度範囲は673821K(0.730.90Tm),歪速度範囲は1.0×10^<-1>1.0×10^<-4>s^<-1>である.組織観察は光学顕微鏡と走査型顕微鏡によった.供試材の結晶粒は軸方向に異常に長いため,粒界に働くせん断応力は事実上0である.

結果は以下のように要約される.(1)773K上の温度域で超塑性が認められる.公称応力一公称歪曲線は初期のピークを経て単調に減少し,針状に尖って破談に至る.しかし,真応力はほぼ一定値を示した.(2)最大伸びは,α単相域の833Kで460%,,821Kで444%,803Kで321%である.しかし,(α+θ)共存域の673Kでは14%に激減した.(3)m値は単相域で0.30.4である.温度とともに漸増傾向がある.(4)超塑性変形域ではすべり変形が一様でSEMでもすべり帯は観察されない.(5)粒界すべりの痕跡は認められない.(6)粒内変形の寄与の大きさを示す先在ボイドの伸張が認められた.
孤立森林に生息するアカネズミ個体群の維持機構の解明

○研究目的福井平野に点在する孤立森林の小型哺乳類相調査(内藤・石田、2008)により、孤立森林における小型哺乳類の多様性は山地に比べて低いことがわかったが、都市部における生物多様性保全の観点からいえば、そのような孤立森林で維持されている小型哺乳類の個体群の保全は重要な課題となる。そこで本研究では、孤立森林に生息するアカネズミの個体群について、マイクロサテライトマーカーを用いた集団遺伝学的解析をおこない、その個体群の維持メカニズムを解明することを目的とする。○研究方法孤立森林10カ所と対照区となる連続した山地3カ所にてアカネズミの捕獲調査を実施し、サンプル数が不〓した2地点を除いた11地点で-地点あたり819個体、計143個体分のDNAサンプルを得た。なお、個体群への影響を最小限にするため、サンプル収集後の放逐を可能な限り行った。分析には4つのマイクロサテライト遺伝子座を用い、得られた各個体群の遺伝子頻度から個体群間の遺伝距離(Fst)を算出し、個体群構造の有無や各個体群間の遺伝的距離と地理的距離の相関関係から距離による隔離(isolation by distance)が見られるかどうか調べた。○研究成果解析した11個体群では有意な遺伝的分化があり、調査地域内ではアカネズミの移動が制限されていると考えられた。各個体群間の遺伝的距離と地理的距離の相関関係(y=-0.0126x+0.1774、R^2=0.0412)には有意な関係がなく(Manteltest、p=0.927)、距離による隔離がみられなかったことから、地理的距離以外の要因が孤立森林に生息するアカネズミの遺伝的な個体群構造に影響していることが示唆された。
生殖補助医療規制の構築における「子どもを持ちたいという欲望」の評価

規制づくりにおいて子どもを持ちたいという欲望は重視されてきた。この欲望は生殖補助医療を受ける際の前提として1988の生命倫理法草案ですでに言及されていた。2011年改正時に、男女のカップルの子どもへの欲望が満たされない場合に医療技術を用いて応えるというそれまでの考え方が修正された。同性カップルなど様々な人々の子どもを持ちたいという欲望が認識されるようになり、一方で多様な人々のこの欲望を認め、他方で男女のカップルのこの欲望が満たされない場合にだけ生殖補助医療で対応することが困難になったのである。その結果、生殖補助医療が医学的治療であるとされ、子どもを持ちたいという欲望からは切り離されたのである。本研究の目的は、フランスにおける生殖補助医療を利用できる人の範囲がどのように構築されているか、そこに「子どもを持ちたいという欲望」がどのように関わっているかを明らかにすることである。生殖補助医療を規制する生命倫理法(1994年、2004年、2011年)および2013年の同性婚法をめぐる議会での議論を主な研究対象とする。これらの議論において「子どもを持ちたいという欲望」がどのように扱われているのか、フランス社会における「医療技術を用いて子どもを作ること」が許される人と許されない人の線引きがどのようになされ、社会の変化によりどのようにゆらいでいるのかを明らかにすることをめざす。平成26年度はフランス・デンマークにおける調査および議会資料を中心とする文献調査、生命倫理学会での口頭報告をおこなった。フランス調査では、法学者、医学者との研究交流および文献収集を行った。デンマーク調査では、生殖補助医療の国境を超える利用と家族関係の研究グループであるKINTRAプロジェクトにてセミナーを実施した。文献調査では、生命倫理法・同性婚法の法案・報告書・審議記録などから「子どもを持ちたいという欲望」について言及されている箇所を抽出し分析した。1988の生命倫理法草案において男女のカップルの欲望については言及されており、生命倫理法2011年改正時に同性カップルを含めた「万人の子どもを持ちたいという欲望」について議論され、法文の修正を導いた。生殖補助医療の規制は、男女のカップルの子どもへの欲望が満たされない場合に医療技術を用いて応えるという構造であったが、独身者や同性カップルといった幅広い人々の社会的不妊への対応が求められる現状への対応として、子への欲望と、医学的不妊に対する治療である生殖補助医療を切り離したといえることがわかった。生殖補助医療を規制する生命倫理法(1994年、2004年、2011年)および2013年の同性婚法をめぐる議会での議論を主な研究対象とした。これらの議論において「子どもを持ちたいという欲望」がどのように扱われているのか、フランス社会における「医療技術を用いて子どもを作ること」が許される人と許されない人の線引きがどのようになされているのかを検討した。平成27年度は、26年度に引き続き議会資料を中心とする文献調査、生命倫理学会での口頭報告をおこなった。男女のカップルが子どもを持ちたいという欲望を持つことについては、1988の生命倫理法草案においてすでに言及されていた。生命倫理法2011年改正時には、生命倫理全国国民会議などを契機として、同性カップルや独身者といった、それまで生殖補助医療の利用者として想定されてこなかった人々をふくめた「万人の子どもを持ちたいという欲望」について議論され、2011年まで生殖補助医療の目的とされていた「生殖補助医療とは親になりたいというカップルの要求に応えるためのものである」という一文が削除された。生殖補助医療の規制は、男女のカップルの子どもへの欲望が満たされない場合に医療技術を用いて応えるという構造が修正されたのである。独身者や同性カップルといった幅広い人々の子どもを持ちたいという欲望が認識されるようになり、医学的理由ではないが医学的な補助なしでは生殖できない社会的不妊への対応が求められる現状への対応として、生殖補助医療が医学的不妊に対する治療であり、子どもを持ちたいという欲望からは切り離したといえることがわかった。文献調査、現地調査ともにほぼ予定通りに進めることができたと考えている。フランスでは、生命倫理法に関する議会審議が行われる際には、法案提出に先立ち国家倫理諮問委員会や議会科学技術評価局、国務院、上院・下院の特別委員会などが聴聞を行い、報告書を作成する。これらの報告書についてはオンライン、現地での文献収集により網羅することができた。また、同性婚についても、オンラインおよび現地調査により関連資料を入手できている。これらの成果として、平成26年度に予定していた中間報告として、生命倫理学会での報告を行うことができた。

こういった状況から、順調であると判断した。生命倫理学2年目となる平成27年度は、26年度末に実施した現地調査の取りまとめおよび文献調査を続行し、成果報告を行う予定である。26年の成果により「子どもを持ちたいという欲望」の扱われ方について示唆が得られたので、それをもとに、フランス社会における「医療技術を用いて子どもを作ること」が許される人と許されない人の線引きが、社会の変化によりどのようにゆらいでいるのかについての考察を深める。所属先におけるエフォート管理の関係で、海外調査を短期間にせざるをえなかったため、旅費分が当初予定していた額よりも低くなっている。平成27年度には、日本国内の研究者との意見交換を予定しているよりも頻繁に行う予定である。
中国東北部における韓国系独立運動関連史跡の観光地化に関する研究

1992年中韓国交正常化の後、中韓の歴史学者を中心に中国内にある韓国系独立運動関連史跡に関する調査が行われた。その後、中韓関係の緊密化により、それらの中の重要なものが韓国系資本によって整備・復元された。特に中国東北部には数多くの関連史跡が存在し、それらは今や多くの韓国人旅行者たちが訪れる有名な観光地となっている。またこの地域は、高句麗の帰属をめぐって中韓間で歴史認識論争が行われている場所でもある。本研究では、中韓間で先鋭化している歴史認識論争や中国内の朝鮮族コミュニティーの動向と関連づけながら、中国東北部において観光地化が進んでいる韓国系独立運動関連史跡の実態について明らかにした。平成25年度は、主に中国の延辺朝鮮族自治州内にある抗日独立運動関連史跡と遼寧省・吉林省内にある高句麗・渤海関連史跡に関する調査を行った。朝鮮の抗日民族独立運動の中で最も激しい武装闘争が行われた地域が、かつて「間島」と呼ばれた豆満江以北の中朝国境付近地帯であった。この地は、現在、延辺朝鮮族自治州となっている。この地域は、白頭山(中国名は長白山)登山や世界遺産である高句麗遺蹟巡りが行える場所でもあり、同地にある韓国系の独立運動関連史跡が次々と観光地化されている。中国政府も、経済開発と地域振興のために、韓国人対象の重要な観光産業地である同地での史跡開発に対して許可を与えている。本年度は特に青山里戦闘跡地と尹東柱生家について現地調査を行った。1920年10月に青山里(吉林省和龍県内)付近で展開された戦闘は、朝鮮独立軍が正規の日本軍に勝利した抗日独立運動史上最大の戦果を収めた戦闘と評価されている。2001年には韓国の光復会により同跡地に抗日大捷戦勝記念碑が建立された。今回の調査により、この記念碑の管理が粗雑化し、韓国人の観光コースから外れつつあることを確認した。また、植民地期に朝鮮語で詩を書いた抵抗詩人・尹東柱の生家については、地元の朝鮮族コミュニティーの支援を受けて大々的な施設整備が行われ、かつての大成学校内に設けられた尹東柱記念館とともに、韓国人ツアー旅行の一般巡回コースとなっていることを確認した。一方、中国側は「東北工程」プロジェクト(20027年)を推進し、特に高句麗や渤海の歴史を中国史に編入しようとする動きを見せ、韓国側はこれに対して反発を強めている。今回は、延辺朝鮮族自治州内にある渤海遺跡、吉林省集安市の高句麗史跡群、遼寧省満族自治県内の高句麗遺跡(五女山城)の現地調査を通じて、中韓間の歴史(古代史)認識の差異が観光開発にどのような影響を及ぼしているのか考察した。平成26年度は、主に中国の黒龍江省内にある韓国系独立運動関連史跡と韓国内にある金佐鎮関連史跡に関する現地調査を行った。2015年7月から8月にかけて十日間にわたり、中国黒龍江省内の海林市にある韓中友誼公園、山市の金佐鎮関連史跡、寧安市の大イ宗教総本司跡地と渤海関連史跡、牡丹江市の旧掖河監獄跡地を調査した後、ハルビン市内において、侵華日軍731部隊罪証陳列館、ハルビン駅構内の安重根義士記念館、黒龍江省博物館、東北烈士記念館などの調査を行った。また、2015年11月に韓国忠清南道洪城郡において、金佐鎮将軍関連史跡(生家、祠廟、記念館、銅像、記念碑)に関する調査を行った。このような現地調査を行うと同時に、植民地期において間島地方で展開された青山里戦闘に関する文献調査を行い、その成果として、朝鮮史研究会関西部会2014年度7月例会において、「朝鮮近代史における<忘れられた>記憶ー青山里戦闘における大イ宗教徒・徐一と金佐鎮の活動をめぐって」という題目の研究報告を行った。また、韓国の圓光大学校で開催された「グローバル時代韓国的価値と文明研究」第4次国際学術大会において、「趙素昴の大同思想とアナーキズムー『六聖教』の構想と『韓薩任』の結成を中心に」という研究報告を行った。この報告において、中国領内における朝鮮民族独立運動の展開過程において、右派民族主義系列の抗日独立運動が左派系の抗日パルチザン闘争へと変化し、さらに中国と朝鮮の抗日独立運動家たちを連結する接点としてアナーキズム思想が重要な役割を果たした事実を明らかにした。平成27年度は、主に中国吉林省内にある旧満洲国関連史跡の調査を行った。1932年3月中国東北部に日本の傀儡国家として満洲国が建国されると、同地域における抗日独立運動は著しく困難な状況におかれた。本年度は、長春市と吉林市にある旧満州国関連史跡の現地調査を行いながら、1930年代以降、中国東北部において満洲国がとった朝鮮民族独立運動に対する弾圧・懐柔政策に関する研究を行った。また、その成果を国際学会で発表し、学術論文としてまとめた。その他、本年度は1930年代以降における右派民族主義系統の抗日独立運動の様相を調べるために上海市と西安市にある大韓民国臨時政府関連史跡に関する調査を行った。1932年4月に上海の虹口公園で行われた天長節祝賀式典会場に爆弾が投げこまれ、陸軍大将白川義則ら多数の日本人が死傷する事件が起こった。