hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
嗅覚受容体の勾い分子認識に関する研究

嗅覚受容体は、Gタンパク質共役型受容体ファミリーに分類されるが、これまで受容体のどの領域でGタンパク質と相互作用しているか明らかではなかった。嗅覚受容体のキメラ受容体、欠損受容体を作製することにより、受容体のカルボキシ末端がG・sタンパク質との相互作用に関わることを示した。(Journal of Neurochemistry)(3)嗅覚受容体のリガンド結合部位の解明嗅覚受容体のリガンド結合部位を、部位特異的変異体の匂い応答性解析、受容体の三次元モデル構築、匂いリガンドのドッキングシュミレーション、二つのアプローチから解析した。その結果匂いは、嗅覚受容体の膜貫通領域3、5、6番目のヘリックスで形成される空間内で認識されることが明らかとなった。(Journal of Neuroscience)(4)嗅覚受容体ジーンターゲティングマウスの作製これまで、嗅覚受容体の匂い分子認識に関して、分子レベルで解析を行ってきた。今後、より高次のレベルで嗅覚の匂い認識機構を解析するため、嗅覚受容体のジーンターゲティングマウス、トランスジェニックマウスを作製した。現在までに、あるひとつの嗅覚受容体発現嗅神経細胞の軸策投射パターンを可視化することに成功している。嗅覚受容体のリガンド結合部位の解明研究代表者は、最近明らかとなったロドプシンの結晶構造を基に、マウス嗅覚受容体mOR-EGの三次元モデル構築を行い、匂いリガンドの結合様式をコンピューターシミュレーションした。その結果、匂い物質は受容体の膜貫通領域3、5、6番目のヘリックスで形成される空間内に結合することが明らかとなった。また、リガンドとの相互作用が予想されたアミノ酸全てに部位特異的変異を導入し、複数のリガンドに対する構造活性相関を調べた結果、匂い物質が結合している配位状態の構造を決定することができた。その結果、嗅覚受容体とリガンド間に形成される水素結合の数はわずかであり、主に複数のアミノ酸残基による疎水的な相互作用によって、匂いリガンド全体の構造を認識していることが明らかとなった。(今年度、Journal of Neuroscienceに発表した)単一の嗅覚受容体を発現する細胞を選択的に可視化した遺伝子改変マウスの作製これまで、研究代表者は嗅覚受容体の匂い分子認識機構に関して、主に培養細胞を用いて分子レベルで解析を行ってきた。今後、個体レベルで匂い認識機構を解析するため、また嗅覚の高次中枢における匂い情報処理機構を解析するため、特定の嗅覚受容体を発現する嗅神経細胞のみを選択的に可視化した遺伝子改変マウスの作製を試みた。研究代表者らがこれまで培養細胞系において分子レベルで解析を行ったマウス嗅覚受容体、mOR-EGを発現する嗅神経細胞を緑色蛍光タンパク質を用いて可視化したトランスジェニックマウス、およびβ-ガラクトシダーゼ遺伝子の共発現により標識したノックインマウスの作製に成功した。染色の結果、mOR-EGを発現する嗅神経細胞の軸索は左右2対の糸球体に収束することが明らかとなった。
X線その場観察法によるマントル鉱物の状態方程式の決定

出発物質Mg_2SiO_4オリビンやMg_3Al_2Si_3O_<12>-MgSiO_3固溶体組成のガラスを合成し、それらを高温高圧で処理し、高圧鉱物スピネルMg_2SiO_4およびメ-ジャライトガ-ネットを合成した。これらを出発物質として、高温高圧X線回析実験を行いオリビン、スピネル、変形スピネル、Mg_2SiO_4及びメ-ジャライトガ-ネットの圧縮率と熱膨張率の精密決定を行った。オリビンに関しては5GPaから12GPa、25°Cから1000°Cまで、変形スピネルに関しては12GPaから17.5GPa、25°Cから1100°C、スピネルに関しては実験は18GPaから24GPa、25°Cから800°Cの圧力温度範囲で行った。また、メ-ジャライトガ-ネットについては、6GPa-23GPa、20-500°Cの温度圧力範囲において実験を行った。これらの実験結果を総合して、上部マントルとマントル遷移層の重要な構成鉱物の状態方程式を明らかにすることができた。以上の実験により決定した状態方程式にもとづいて、地温勾配に沿った上部マントルとマントル遷移層でのマントル構成鉱物の密度を計算し、地震学情報と比較した。その結果、パイロライト組成で期待される上部マントルとマントル遷移層を分ける410kmの地震波不連続の密度ジャンプは、地震波速度分布(PREM)から期待される値より小さく、観測値を説明するためには、マントル遷移層の上部のオリビンの量がパイロライトよりも大量に存在する必要があることが明らかになった。本研究は、焼結ダイヤモンド製のアンビルを使用したマルチアンビル高圧装置と放射光を用いて、マントル構成鉱物の圧縮率と熱膨張率を高温高圧で測定し、マントル鉱物の状態方程式に基づいて、マントル遷移層の化学的不均質性と構造を明らかにすることを目的としている。本年度においては、備品として電気炉を新たに導入し、これを用いて出発物質を合成し主として、オリビン、変形スピネルの高温高圧下での格子常数決定を4-15GPa、約1000°Cまでの条件で行った。それらの実験データーにもとづいて、これらの鉱物の状態方程式のパラメーターの精密決定を行った。そしてマントル遷移層上部(400km地震波不連続面)の条件13GPa,1400°Cでのオリビンから変形スピネルへの相転移にともなう密度増加の程度を見積もった。上部マントルとマントル遷移層の化学組成や鉱物組成の違いを明らかにするためには、さらにメ-ジャライトガ-ネットの高温高圧下での状態方程式を精密化し、この鉱物の密度への寄与を定量的に見積もる必要がある。本年度においては、前年度に導入した高温合成炉を用いて、出発物質Mg_2SiO_4オリビンやMg_3Al_2SiO_3O_<12>-MgSiO_3固液体組成のガラスを合成し、それらを高温高圧で処理し、高圧鉱物スピネルMg_2SiO_4およびメ-ジャライトガ-ネットを合成した。これらを出発物質として、高温高圧X線回折実験を行いスピネルMg_2SiO_4及びメ-ジャライトガ-ネットの圧縮率と熱膨張率の精密決定を行った。スピネルに関しては実験は18GPaから24GPa、25°Cから800°Cの温度圧力範囲で行った。前年度の研究成果を含めると、上部マントルとマントル遷移層の重要な構成鉱物の状態方程式を明らかにすることができた。

その結果、パイロライト組成で期待される上部マントルとマントル遷移層を分ける410kmの地震波不連続の密度ジャンプは、地震波速度分布(PREM)から期待される値より小さく、観測値を説明するためには、マントル遷移層の上部のオリビンの量がパイロライトよりも大量に存在する必要があることが明らかになった。
ベルギー文化のアイデンティティ―ナショナリズムからコスモポリタニズムへ―

現在取り組んでいるヨーロッパ・フランス語圏地域研究をさらに補い発展させる中で、ベルギーを中心的な対象としてその複合的文化の歴史の全体像を捕らえることが課題であった。今回は特に、ロマン主義的国家主義、アカデミー設立、そして前世紀から今世紀初めにかけて他国にも大きな影響力を持った象徴主義の時代に焦点を当てた。当時急増し文化の重要な影響力となってきた文学・芸術雑誌の検討し、またフランスとの比較により文化・芸術のあり方の変遷を「中心」と「周縁」の視点から追った。その過程で、現在世界的な規模でみなおされつつある地域主義/文化、民族主義/文化の問題や、国家覇権主義に発する植民地主義・ポスト植民地主義問題も取り上げることになった。19世紀において、隣大国フランス同様、小国ベルギーもそれに匹敵する広大な植民地をアフリカに所有し、その影響や処理問題は現在に至るまであとを引いているのである。最終的には、19世紀の「向心性段階」から両大戦間における大国への「遠心性段階」を経て、1970年代からの地域主義による「弁証法的段階」へと至る文化活動の変遷をたどり、この国の文化状況の特殊性と意義を見い出すことを目標とした。19世紀のロマン主義から世紀末象徴主義にいたる芸術文化活動の流れをひととおり追うことができ、さらに現在のベルギー文化の状況についても舞台芸術政策についての調査を通して考察を深めつつある。これからベルギーにおいてさらに時間をかけて現状調査と文献収集を行なう予定もある。これらの成果を整理し、独立以来のベルギー文化アイデンティティの問題について全体としてまとめるつもりである。現在取り組んでいるヨーロッパ・フランス語圏地域研究をさらに補い発展させる中で、複合的文化を有するベルギーの、特にロマン主義から象徴主義の時代にいたる19世紀に焦点を当て、文化の「中心」「周縁」概念の考察を課題として研究を進めた。今年度の成果は、以下のようなものである。1フランス国立図書館において主にベルギー世紀末の雑誌や植民地文学に関する文献収集を行い、またフランス人研究者たちとの意見交換も行なった。2 1830年独立前後のナショナリズム高揚期におけるベルギーの<ロマン主義運動>をヨーロッパ諸大国の動向との比較から考察し、フランスとゲルマンの狭間での特殊性を明らかにした。また民族意識高揚のために意図的に「国民神話」を創出しようとした作家ド・コステルのテクスト分析と作品映画化の顛末などをもとにして「神話」の実態、他文化圏での影響や誤解を解明した。3ベルギーの旧植民地コンゴに関する世紀末のいわゆる「植民地文学」を分析・検討し、小国ベルギーの「帝国意識」のあり方を明らかにした。4ベルギー象徴派の3大文芸雑誌の一つと言える『現代芸術』誌(他の2雑誌は検討済み)の、ベルギー文芸ルネサンスに対する重要性とともに、知識人たちの文化的中心主義指向も指摘した。現在取り組んでいるヨーロッパの仏語圏地域研究をさらに補い発展させる中で、複合的文化を有するベルギー文化の「中心」「周縁」概念の考察を課題とした。前年度に続き、ベルギー19世紀のロマン主義時代および象徴主義時代を中心に、フランス語・オランダ語による文学・芸術(演劇・音楽・美術)に関する文献資料を収集し、分析・検討・整理した。今年度の成果は具体的には以下のようなものである。1ベルギーの旧植民地コンゴに関する世紀末のいわゆる「植民地文学」を分析・検討を続け、小国ベルギーの「帝国意識」のあり方を明らかにした。2世紀末ベルギー象徴派を代表し、フランス語を用いてゲルマン・北方精神を追及した作家メーテルランクの戯曲『ペレアスとメリザンド』を資料とし、フランス人作曲家ドビュッシーによるオペラ化の過程でのテクストの変更や時代背景の分析をもとに、ベルギー人民族意識の在り方を浮き彫りにした。3外国旅費により、ブリュッセル大学P.アロン教授と、申請者の研究に関する意見交換を行った。またベルギーの舞台芸術、特にその文化政策の現状について、フランス語圏文化共同体政府の芸術文化(演劇)担当者、ベルギー王立モネ劇場・国立フィルハーモニー協会・国立劇場・その他ブリュッセルの諸劇場の支配人や広報・経営担当者に会見し、聞き取り調査及び資料収集を行った。

これによって多言語国家ベルギーの芸術文化環境の特徴を明らかにすべく、現在報告書をまとめている。1前年度にブリュッセルの文化省や劇場において行なったベルギーの舞台芸術政策の現状についての聞き取り調査の結果を整理・検討し、それを神戸大学国際文化学会公開シンポジウム「世界の芸術文化環境と地域社会」において報告した。また、「芸術文化政策の国際比較研究」の一環として論文にまとめ発表した。2連邦体制におけるベルギーの言語法について調査・検討し、その部を翻訳紹介・解説することで、多言語国家の言語文化的アイデンティティを探る一助とした。3メーテルランクの戯曲と並んで、世紀末ベルギー象徴派を代表する小説『死都ブリュージュ』を書いた作家ローデンバックについて、資料の検討やテクスト分析を行ない、またこの小説をもとに創作されたオーストリア人作曲家コルンゴルトのオペラ『死の都』や、映画、文学作品、絵画などとの比較も通して、フランドル民族意識の特質の解明を試みた。4 19世紀のロマン主義から世紀末象徴主義にいたる芸術文化活動の流れをひととおり追うことができ、また他の研究プロジェクトの一環としてではあるが、現在のベルギー文化の状況についても舞台芸術政策についての調査を通して考察を深めつつある。平成14年2月と3月にはブリュッセルにおいてさらに時間をかけて現状調査と文献収集を行なう予定でもある。これらの成果を整理し、独立以来のベルギー文化アイデンティティの問題について全体としてまとめる。
気球搭載望遠鏡による惑星大気・プラズマの研究

惑星大気・プラズマの光学的リモートセンシングを目的とした気球搭載望遠鏡システムを開発した。アルミ角材で構成されるゴンドラを設計・製作した。望遠鏡、太陽電池パネル、PC及び高圧電源を収納する気密容器、ジャイロ(CMG)を収納する防水容器、デカップリング機構がゴンドラに取り付けられる。CMGとデカップリング機構の制御によって、目標精度である約0.2°でゴンドラの姿勢を制御できることが確認された。望遠鏡の光路を波長帯で分け、中心波長400nm及び900nmのバンドパスフィルターを通して別々のCCDビデオカメラで撮像する。経緯台制御によって星像を約0.01°の精度で追尾できることを実験で確認した。望遠鏡視野に天体を捉えたのちは、星像位置検出用光電子増倍管からの出力をフィードバックして2軸可動ミラーマウントを制御することで、星像を視野中心に安定化できることを確認した。追尾性能向上のため、サンセンサーの視野をやや広くし、ガイド鏡の視野をやや狭くする改良を施した。ゴンドラ重量は約300kgとなった。電源は太陽電池から約250Wを供給するが、ニッケル水素充電池でノミナル消費電力を2時間まで供給することが可能である。ニッケル水素充電池の低温特性を測定し、性能に問題ないことを確認した。太陽電池と組み合わせた充放電回路を設計・製作した。熱真空試験を実施し、成層圏環境下で問題なく動作することを確認した。将来、北極で本格的な実験を実施するための調査として、ESRANGEの気球実験担当者と打ち合わせた。10月には実際にスウェーデン・キルナにある気球実験フィールドを視察した。これまでの開発成果を国際学会や国内学会・シンポジウムで発表した。また成果をまとめてAdv.Geosci.誌に投稿し受理された。今年度は気球搭載望遠鏡システムの要素試験を完了し、フライト用システムの設計・製作に着手した。アルミ角材で構成されるゴンドラを設計した。搭載機器の発生熱による大気揺らぎを避けるため、望遠鏡はゴンドラ最下層に搭載した。太陽電池パネルが望遠鏡の日除けの役割をする。PC及び高圧電源を収納する気密容器を製作した。ジャイロ(CMG)は防水容器に収納される。鉛直軸周りの慣性モーメントの削減と動バランスのため、搭載機器は可能な限りゴンドラ中心軸上に配置した。ゴンドラ方位角制御の要素試験の結果、デカップリング機構にアンローディング制御を付加することでCMGのジンバル角をほぼ0°付近に保ちつつ、目標精度である約0.2°でゴンドラの姿勢を制御できることが確認された。その間の波長領域の光はマルチアノード光電子増倍管で検出される。望遠鏡視野に天体を捉えたのちは、光電子増倍管からの出力をフィードバックして2軸可動ミラーマウントを制御することで、星像を視野中心に安定化できることを確認した。CCDカメラが成層圏の気圧及び温度下で正常に動作することが実験によって確認された。アップリンクはシリアルコマンド1系統とPCリセット用の接点コマンド2系統を用意する。ダウンリンクはシリアル1系統で各種ステータスを、アナログビデオ2系統でモニター用映像データを降ろす。ビデオデータはオンボードでデジタル記録される。電源系を製作した。まず、前年度に購入したニッケル水素充電池の低温特性試験を実施した。容量が-30°Cで常温の60%くらいまで低下するが、性能に問題ないことを確認した。

太陽電池と組み合わせた充放電回路を設計・製作した。引き続き地上での追尾試験を実施した。太陽捕捉からゴンドラ方位角安定化をシーケンシャルに実行することを確認した。シリウスや土星を目標天体として、望遠鏡経緯台と2軸可動ミラーを同時に動作させて、アクティブに天体を追尾できることを確認した。追尾性能向上のため、サンセンサーの視野をやや広くし、ガイド鏡の視野をやや狭くする改良を施した。その他、フライト用ワイヤーハーネスを製作した。2台搭載する科学データ取得用CCDカメラのうち1台をデジタル化した。デジタル化したCCDカメラからの映像は搭載PCに記録される。アナログCCDカメラからの映像信号はテレメータで地上に降ろし、リアルタイムでの取得データ確認に使用される。3月5日から宇宙科学研究本部の真空恒温槽を利用して熱真空試験を実施すべく準備していたが、実験前の準備段階で、気密容器フランジ、モーター制御用マイコンに不具合が見つかった。部品を交換し、4月に再度実験を行う。将来、北極で本格的な実験を実施するための調査として、6月にESRANGEの気球実験担当者と打ち合わせた。10月には実際にスウェーデン・キルナにある気球実験フィールドを視察し、将来の惑星望遠鏡実験について打ち合わせた。
食習慣による味覚感受性および唾液バイオマーカーへの影響

近年、若者では生活スタイルの変化に伴い、夜型の生活習慣や朝食欠食が問題となっている。本研究では、大学生において朝型・夜型の生活リズムと食習慣の関連について調査し、さらに朝食習慣による味覚感受性や唾液バイオマーカーへの影響を検討した。朝型・夜型の生活リズムによって、朝食習慣、食品群別摂取量および栄養素摂取量に違いがみられ、夜型タイプの学生は、朝食の頻度や食欲が低下し、1日のミネラル類やビタミン類、食物繊維などの摂取量が少なかった。朝食習慣の有無により、味覚感受性、唾液バイオマーカー(コルチゾル、免疫グロブリンA)の日内リズムに影響がみられた。生活習慣調査(睡眠覚醒リズム、食習慣、運動習慣、メンタルヘルス、その他喫煙、服薬状況)、朝型夜型質問紙(Horne & Ostbergの19項目)、食物摂取頻度調査(FFQg)により、朝型夜型タイプの生活習慣は朝食摂取の頻度および各種栄養素摂取量と関連が見られた。食習慣に着目し、朝食欠食の習慣が唾液バイオマーカーの日内リズムに及ぼす影響を検討し、朝食欠食習慣のある群では起床時のコルチゾル分泌量は低く、朝食欠食習慣のない群とは唾液中コルチゾル分泌の日内リズムに相違点が見られた。また、朝食欠食習慣のある群は、朝食欠食習慣のない群と比べて甘味、酸味、塩味の味覚感受性が低く、特に午後に低値を示す傾向が見られた。朝食の食事量、食事内容(食事組成)によるエネルギー代謝への影響を検討し、高たんぱく質を運動後に摂取すると脂質の燃焼を促進するとともに熱産生量も増加する可能性が示唆された。高脂質食では中鎖脂肪酸を含有した食事を運動後に摂取すると長鎖脂肪酸摂取時に比べて速やかに代謝され、食事誘発性体熱産生の亢進が見られた。大学生の食習慣を含む生活習慣と健康状況の関連について調査し、女性はホルモン等の影響で男性よりも便秘になりやすく、男性の方は食事や生活リズムなどの生活習慣の影響で便秘が生じる傾向が示唆された。朝食欠食を含めた不規則な食習慣による生体への影響について、昨年度までと同様に食事調査、味覚感受性、唾液バイオマーカーの視点からn数を増やして評価し、以下の結果が得られた。1女子大学生を対象とし、朝食を毎日摂取する習慣のあるグループ(朝食摂取群)とないグループ(朝食欠食群)に分け、唾液中のコルチゾール濃度および分泌速度の日内リズムについて検討した。その結果、朝食摂取群ではコルチゾール分泌速度が起床時に高値を示す典型的な日内リズムが認められたが、一方欠食群では認められなかった。2女子大学生を対象とし、それぞれ1日6回の甘味、酸味、塩味の味覚検査を行って、味覚感受性、嗜好性に及ぼす朝食の影響について検討した。朝食欠食群では味覚感受性が鈍くなる傾向が見られた。3朝食習慣と生体リズムの関連を見るために大学生男女563名(男性192名、女性371名)を対象として、男女別に朝型夜型タイプの生活習慣と朝食摂取状況および食欲、食物摂取頻度調査による1日の栄養素摂取量および食品摂取量との関連を調べた。夜型では、男女ともに朝食欠食や食欲低下が見られた。夜型の男性では、朝型に比べてたんぱく質、ミネラル類、ビタミン類、食物繊維、穀類、野菜類、海藻類、豆類、果物類、砂糖類が低値であった。夜型の女性では、朝型に比べてビタミン類、野菜類、海藻類、豆類、果物類、砂糖が低値で、嗜好飲料やスナック菓子が高値であった。大学生の男女ともに、朝型夜型タイプの生活習慣と朝食の摂取頻度、食欲、1日の栄養素と食品摂取量に関連が見られた。4女子大学生を対象とした朝型夜型の生活習慣と健康状態について、便秘評価尺度の観点からも分析を行った。様々な生活習慣因子による複合的な関連が見られた。以上のことから、朝食欠食を含めた不規則な食習慣は夜型の生活習慣と関連があり、味覚感受性や唾液バイオマーカーにも影響していることが示唆された。朝食欠食を含めた不規則な食習慣による生体への影響について、食事調査、味覚感受性、唾液バイオマーカーにより評価し、以下の成果が得られた。(1)女子大学生を対象とし、朝食を毎日摂取する習慣のあるグループとないグループに分け、唾液中コルチゾールおよび分泌型免疫グロブリンA(sIgA)の日内リズムについて検討した。朝食欠食習慣はsIgA分泌速度には影響は見られず、朝食摂食群と朝食欠食群ともに同様の日内リズムが認められた。一方、コルチゾール分泌速度は、朝食摂食群では起床時に高値を示す典型的な日内リズムが見られたが、朝食欠食群では朝食摂食群に比べて起床時の値が有意に低く、同様の日内リズムは見られなかったため、朝食欠食習慣はsIgAにまで影響する可能性は低いが、コルチゾール分泌の日内リズムを乱す可能性が示唆された。

(2)女子大学生を対象とし、1日6回の甘味・酸味・塩味の味覚・嗜好検査を行って、朝食摂取及び欠食習慣が、味覚感受性・嗜好性に及ぼす影響を検討した。3基本味における味覚感受性は朝食摂食群の方が高く、特に甘味感受性においては午前から夜にかけて感受性が低くなる日内変動があることが示唆された。また、甘味嗜好性においては、欠食群が濃い味を好むことが示唆された。(3)朝食の習慣は生活リズムが影響していることが多いため、大学生男女478名を対象とし、朝型夜型タイプの生活習慣と朝食の摂取状況および食欲、1日の栄養素と食品摂取量との関連について調査を行った。大学生の男女ともに、朝型夜型タイプの生活習慣と朝食の摂取頻度および食欲、1日の栄養素と食品摂取量に関連が認められた。(4)大学生の生活習慣と健康状態について、便秘に焦点をあて検討した。便秘評価尺度(CAS)の高得点男子の特徴は、エネルギー摂取が低い、活力が低い、就寝・起床時刻が遅い、睡眠時間の変動が大きいという4点が明らかとなった。朝食摂取習慣が生体リズムに与える影響を、唾液分泌型免疫グロブリンA(sIgA)、唾液コルチゾル(CS)、体温、気分プロフィール検査(POMS)、甘味、塩味、酸味の感受性・嗜好性の観点から検討した。さらに、朝型・夜型の生活リズムと食習慣の関連について検討を行った。1女子大学生で、朝食摂取習慣のある者(摂食群)47名、朝食欠食習慣のある者(欠食群)22名を対象とした。摂食群は朝食摂食日、欠食群は朝食欠食日に、計6回の唾液採取と口腔内温度の測定を行った。sIgAはサンドイッチELISA法、CSはSALIMETRICS社のELISAキットで測定した。POMSは、午前に1回実施した。味覚・嗜好検査は甘味、塩味、酸味について各2種類の濃度の溶液を使用しVAS (Visual Analogue Scale)法により1日6回、味覚閾値検査は甘味、塩味、酸味それぞれ10段階の濃度に調製した溶液を使用して全口腔法により1日2回行った。習慣的な朝食欠食は唾液バイオマーカーの日内リズムに影響を及ぼすとともに、味覚感受性を低下させることが示唆され、特に夕方から就寝前にかけて味覚感受性が鈍くなることが認められた。2大学生を対象に、朝型・夜型質問紙(MEQ)、食物摂取頻度調査(FFQg)、食習慣に関するアンケート調査を行った。有効回答数は1146名(男性411名、女性735名)であった。MEQにより朝型・夜型タイプを判定し、食習慣、食品群別摂取量及びエネルギー・栄養素摂取量について男女別に解析を行った。朝型・夜型の生活リズムによって、朝食摂取習慣、食品群別摂取量及び栄養素摂取量に違いがみられた。夜型タイプの学生は、朝食の頻度や食欲が低下しており、食事時間が不規則であった。また、1日のミネラル類やビタミン類、食物繊維などの摂取量が低く、食習慣に問題があることが示唆された。食生活本研究では、生活習慣調査(睡眠覚醒リズム、食習慣、運動習慣、メンタルヘルス、その他喫煙、服薬状況)、朝型夜型質問紙(Horne & Ostbergの19項目)、食物摂取頻度調査(FFQg)について、23年度同様に行い、データを増やして再現性およびデータの分布を確認することができた。朝食の食事量や食事内容(組成)による体温への影響についてはまだ結果が得られていないが、エネルギー代謝への影響については成果が得られた。
インドネシアにおけるトウガラシ属の資源植物学的研究

Capsicum pubescensはアンデス山脈の中・高標高地を原産地、C. chinenseはアンデス山脈東側の低地を原産地とするトウガラシ属の栽培種だが、東南アジアにおける分布は全く知られていなかった。調査結果から1C. pubescensおよびC. chinenseがインドネシアに分布すること、2標本調査から2種とも100年以上前にインドネシアへ伝播していた可能性が高いこと、3C. pubescensはジャワ島・スマトラ島・スラウェシ島の高地で栽培されていること、4C. chinenseは果形の異なる系統が複数存在し、それらがインドネシアに幅広く分布することが明らかとなった。インドネシアにおけるC. chinenseの分布を明らかにするために、標本調査およびジャワ島・スマトラ島・カリマンタン島・スラウェシ島において現地調査をおこなった。ボゴール植物標本館にはC. chinenseの液体標本は8点あり、1982年から1983年にボゴール植物園またはチボダス植物園で栽培された植物体で、一部cabai belimbing(cabai=唐辛子、belimbing=五歛子)という名称で保管されていた。C. chinenseとして所蔵されている乾燥標本は1点もなかった。ただし、Capsicum sp.として保管されていた標本は、茎葉の形態からC. chinenseまたはC. frutescensと見受けられたが、蕾や花がほとんどなく、また果実がなかったので同定できなかった。この標本はcabai belimbingという名称で採集されており、C. chinenseの可能性が高い。南スラウェシのRantepaoではC. chinenseの果実が香辛料として市場で販売されていた。販売者によると、MakasarとRantepaoの間に位置するEnrekangがC. chinenseの生産地で、毎日1-2トンの果実がRantepaoの市場に運び込まれているとのことだった。ジャカルタ特別州でも近代的な設備を持つ商店でC. chinenseの果実が販売されていたが、多くの地域ではC. chinenseは観賞植物として利用されていた。C. chinenseはジャワ島・スマトラ島・スラウェシ島と幅広く分布しており、また果形の異なる系統が複数確認された。インドネシアには旧大陸では非常に稀なC. pubescensも分布しており、東南アジアの中でインドネシアはトウガラシ属の遺伝的多様性が高い地域といえる。インドネシアのジャワ島・バリ島・カリムンジャワ島においてトウガラシ属の遺伝資源・文化資源の調査をおこなった。Capsicum pubescensはトウガラシ属の栽培種の一つで、アンデス山脈の中・高標高地を原産地とし、黒い種子や毛深い茎葉といった他の栽培種とは大きく異なる形態的特徴を持つ。現在はアンデス山脈をはじめ中央アメリカの高地でも栽培されているが、他地域における栽培例はほとんど知られていない。標本調査の結果から、C. pubescensは約100年前すでにインドネシアへ伝播していたことが明らかとなった。また、西ジャワおよび中央ジャワの高地(高度約1,500m以上)においてC. pubescensの栽培を確認することができた。栽培地付近の市場だけではなく、ジャカルタなどの一部低地でもC. pubescensは販売されていた。バンドゥンがC. pubescensの集積地・流通拠点の一つであることがわかった。カリムンジャワ諸島およびバリ島ではC. pubescensの栽培・分布ともに確認することができなかった。C. pubescensの花弁は通常紫色だが(基部に白色の斑点が入る場合もある)、3地点の畑において花弁が完全に白色である植物体を発見した。他の形態は紫花系統とほとんど異ならず、種子も黒かったため、C. pubescensの変種だと思われた。箒の先に唐辛子をつけて立てかけ雨が降らないように祈る、箒の先に唐辛子・シャロット・ウコンをつけて子供のベッドの下におく(生後35日間、悪霊をさけるため)、三角に整形した御飯の先に唐辛子をつけて魔除けとする、などの文化資源に関する情報が得られた。トウガラシ属に関するMaterial Transfer Agreement(MTA)をインドネシア科学院生物研究センターと締結した。26年度第1四半期は、The 14th Congress of the International Society of Ethnobiologyにおいて成果発表を行った、またTropical Agriculture and Developmentに原著論文が掲載された。第2四半期は2014年次日本島嶼学会およびThe 6th Asia-Pacific Forum on Ethnobotanyにおいて成果発表を行った。第3四半期はインドネシアのスラウェシ島北部、第4四半期はスマトラ島北部においてトウガラシ属の遺伝資源に関する追加調査をおこなった。3年間の調査結果から以下のことが明らかとなった。

まずC. pubescensについては、1約100年前すでにインドネシアへ伝播していた、2現在は少なくともジャワ島・スマトラ島・スラウェシ島の高地に分布する、3特に西ジャワのバンドン周辺や中央ジャワのディエン高原における栽培が非常に盛んである、4オランダ統治時代にキナノキ属植物や他の亜熱帯性植物とともにC. pubescensは西ジャワへ新規作物として導入された、そしてまずバンドン近郊で栽培・利用が盛んになり、その後インドネシアの他の高地部へ導入されたと考えられる。次にC. chinenseについては、1ジャワ島・スマトラ島・スラウェシ島と幅広く分布している、2標本調査および文献調査から第二次世界大戦より前にインドネシアへ伝播していた可能性が高い、3南アジアへの伝播経路とは別の経路でインドネシアに伝播した可能性が高い、4インドネシアには果形の異なる系統が複数存在することを考慮すると、C. chinenseは異なる場所から異なる時期に幾度にもわたってインドネシアへ伝播したと思われる。東南アジア島嶼部におけるトウガラシ属の研究が評価され、2014年9月5日に第1回日本島嶼学会研究奨励賞を受賞した。民族植物学栽培植物起源学熱帯農業生態学当初の予定通り現地調査が進んでいる。また国内外で学会発表、および国際雑誌に論文が掲載されており、おおむね順調に進展しているといえる。当初の予定通りに現地調査が進んでいる。また国内外で成果発表をおこなっており、おおむね順調といえる。26年度第1四半期・第2四半期は、トウガラシ属の遺伝・文化資源に関する文献調査・情報収集をおこなう。2年間の結果を受けて、まだ現地調査が必要であると判断し、スマトラ島の北部およびスラウェシ島の北部においてトウガラシ属の調査をおこなう。調査項目は、これまでに台湾・バタン諸島・カンボジアなどで調査してきた項目を踏襲し、トウガラシ属の呼称、食文化(香辛料、果実以外の利用の有無、系統による味・辛味・嗜好性の違いなど)、酒文化、薬用、儀礼、禁忌、麹のつくり方などとする。2014年6月ブータンで開催される「the 14th Congress of the International Society of Ethnobiology」において、また2014年11月ペルーで開催される「the 22nd International Pepper Conference」において、2年間の調査結果を発表する。また調査結果を整理し、『Tropical Agriculture and Development』に投稿する。25年度第1四半期・第2四半期は、トウガラシ属の遺伝・文化資源に関する文献調査・情報収集をおこなう。2013年8月にインドネシアのボゴールで開催されるNinth International Flora MalesianaSymposiumにおいて前年度の調査結果を発表する。また調査結果を整理し、Economic Botanyに投稿する。
行動毒性学的手法の開発

行動毒性学は、物質の毒性を行動を指標として評価するものである。その目的とするところは、従来の方法によっては検知することができない微量の化学物質の悪影響が、行動上の機能低下や異常となって生じていると捉え、物質への接触あるは摂取と行動の異常との関係を明確にすることにある。本試験研究の意義は、行動を指標として毒性を評価するために必要なシステムおよび行動評価の方法を開発することである。初年度には、2段式動物実験用オペラント実験装置、実験制御システム、曝露システムを構築し、この装置を用いて、フリーオペラントでのレバ-押し行動の形成、反応の時間的分布、位置記憶課題での反応形成過程を見た。2段式オペラント実験装置において24時間連続してレバ-押し反応を観察した結果、レバ-押し反応は一日の狭い範囲に分布することがわかった。毒性物質の慢性曝露を行いながらオペラント行動を観察する実験装置として適当であることがわかった。また、レバ-押し反応によってエタノール蒸気が曝露される急性曝露実験を行い、反応の回数及び分布を見た。レバ-押し反応は中断されることなく、非曝露条件と同様に安定した反応分布が得られた。これにより曝露条件を、動物の反応によって統制し、急性曝露の効果を測定することができることがわかった。2つのレバ-を交互に押すという位置記憶課題では、反応頻度の安定している急性曝露条件下で交代に乱れが生じ、いわゆる正確さに問題が生じることが示された。しかし、慢性暴露条件下では、反応の分布が拡散するが、特に正確さに影響することはなく、ゆっくりと正確に交代反応が行われた。今後、フリーオペラントの行動観察により、行動毒性を測定するテストバッテリ-を発展させることが必要である。本年度は、動物実験用オペラント箱、実験制御システム、メタノール暴露システムを構築し、当初の計画通りフリーオペラントでのレバー押し行動の形成、位置記憶課題での反応形成過程を見た。居住型のオペラント箱において24時間連続してレバー押し反応を観察した結果、レバー押し反応は一日の内の狭い範囲に分布することがわかった。反応は、実験箱内部が照明される頃から2、3時間続き、その時間以外での反応はほとんどなく、毒性物質の慢性暴露を行いながらオペラント行動を観察する実験装置として適当であることがわかった。また、レバー押し反応によってエタノール蒸気が暴露される急性暴露実験を行い、反応の回数及び分布を見たところ、レバー押し反応は中断されることなく、非暴露条件と同様に安定した反応分布が得られ、この方法により暴露条件を統制し、急性暴露の効果を測定することができることがわかった。位置記憶は2つのレバーを交互に押すという課題を用いて観察したが、暴露条件下で交代に乱れが生じることがわかった。24時間実験における問題点のひとつであるデータの自動処理は、ミニコンによるバッチ処理と、ネットワークを通じてパソコンによるファイルの加工を組み合わせて使用できるようにした。メタノール暴露を行うためのシステムは、メタノールを入れた洗浄瓶を恒温水槽に入れ、ガラス管及びテフロンのニードルパルプ及びテフロンソレノイドバルブで構成した。この装置によって正確に暴露量を制御できることがわかった。前年度にシステムを完成させた動物実験用オペラント箱、実験制御システム、エタノール暴露システムを使用し、フリーオペラントでのレバー押し行動の形成、位置記憶課題での反応形成過程を見るとともに、エタノールガスの暴露条件下での反応の変化を重点的に調べた。居住型のオペラント箱で,ランダムな順序で24時間連続してエタノールガスを暴露し、レバー押し反応の変化を観察した結果、レバー押し反応は、暴露条件下では日内分布が広く分散するが、通常実験装置内での反応は比較的安定しており、被験体に触れることなく装置内でさまざまな反応を得られることがわかった。

今年度は、活動量および行動パターンを調べるため、被験体の移動経路上にフォトセルを設置するとともに、水と固形飼料が被験体のオペラント反応によって得られるように実験システムを改良して、エタノールガスの暴露と反応の変化を調べた。暴露条件下で活動量は低下し、固形飼料と水を強化子として用いた位置記憶では、暴露条件下で顕著な成績の低下が生じることがわかった。今年度もデータの自動処理を、ミニコンによるバッチ処理と、ネットワークを通じてパソコンによるファイルの加工を組み合わせて使用したが、パソコンでのファイル加工がより容易になり、実験の監視、反応に応じた実験スケジュールの変更がたやすく行えるようになった。本年度は,前年度に引き続いて、動物実験用オペラント箱、実験制御システム、メタノール暴露システムの改良と、当初の計画通りフリーオペラントでのレバ-押し行動の形成、位置記憶課題での反応形成過程を見た。居住型のオペラント箱における24時間連続レバ-押し反応が、実験箱内部が照明される頃から2、3時間の一日の狭い範囲に分布することを前年度に調べたが、。反応の分布は、毒性物質の慢性暴露によって拡散する傾向があるこがわかった。しかし、毒性があると考えられるエタノール蒸気の急性暴露では、レバ-押し反応の回数及び分布は、非暴露条件と同様に安定しており、条件づけられた反応が、低濃度の毒性物質の暴露によって影響されないことがわかった。2つのレバ-を交互に押すという位置記憶課題では、反応頻度の安定している急性暴露条件下で交代に乱れが生じ、いわゆる正確さに問題が生じることが示された。しかし、慢性暴露条件下では、反応の分布が拡散するが、特に正確さに影響することはなく、ゆっくりと正確に交代反応が行われた。今後、急性暴露においては、清浄空気を暴露するベースライン条件との差を明確にするため、濃度条件をより細かく設定して調べる予定である。また、慢性暴露条件でも、同一個体での長期の暴露条件の交代を行い、ベースラインと差を明確にする予定である。
ドーパミンD1シグナルを抑制して薬物乱用を制御する治療法開発

薬物乱用、薬物依存は大きな社会問題であり社会的損失である。しかし、薬物乱用者、薬物依存者への治療は、精神療法、自助グループへの参加が主体であり、特効薬的治療薬は存在しない。本申請研究では、生理活性を持つ脂質、スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)に着目して中枢神経作用を基礎実験にて解析を行っている。S1Pは、細胞増殖・分化、炎症、免疫、神経機能などを調節する分子として知られている。我々は、S1Pアナログ分子でS1P受容体作動薬、フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がドーパミン作動性神経細胞内のドーパミンD1シグナル情報伝達を抑制する作用を見出した。FTY720はこの薬理作用が、ドーパミン賦活作用による依存性違法薬物(アンフェタミン、コカイン等)に拮抗する作用を持つと考えた。FTY720を前投与したマウス群は、その30分後のコカイン投与に依る自発運動亢進が、生理食塩水前投与マウス群に対し有意に自発運動が抑制されていた結果を得ている。FTY720は再発性多発性硬化症治療薬として市販されている薬剤で、血液脳関門を通過し中枢へ移行することは既に報告されている。モデル動物の実験で、ハンチントン病の改善、アルツハイマー病の改善の報告がある。現在組んでいる、マウスにコカイン連続投与した依存モデルでの検討や、蛋白レベルで、リン酸化を指標としたドーパミンD1シグナル抑制メカニズムを明らかにする実験では、コカインや覚醒剤などの薬物依存が治療可能であるかを検討している。将来的には、ドーパミンシグナルに関する疾病への応用も期待ができる。特に、パーキンソン病治療薬の副作用で、ジスキネジアが出現するが、FTY720がジスキネジアを抑制、緩和する可能性が期待できる。ドーパミンD1受容体に対する治療薬が今のところ存在しないことから、本申請研究は有用であると考えられる。フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がコカインで惹起される自発運動亢進を抑制する行動実験データが得られ、そのメカニズムも脳スライスでの線条体ドーパミンD1シグナル抑制である実験データは得られている。当初の予定を概ね達成していると考えられる。S1P受容体を強発現するウイルスベクターの構築も順調に進行しており、ウイルスベクターをマウス線条体に麻酔下に注入してin vivoで行動解析実験で、S1P受容体を強発現したマウスで、FTY720による自発運動抑制効果が増強される結果が得られた。現在は、S1P受容体が、ドーパミンD1発現神経細胞で欠損するトランスジェニックマウスを用いて行動解析を継続している。フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】は、再発性多発性硬化症治療薬として既に販売されている。現段階では、動物実験レベルであるが、実際に、ドーパミン賦活作用を持つ依存性薬物(覚醒剤、コカイン等)に対する依存症治療薬になり得る場合は、既にヒトへの投薬がなされている薬剤であるため臨床導入の可能性が高い。本申請研究は、今年度中に論文発表を行う予定である。本申請研究者らは、S1Pアナログ分子でS1P受容体作動薬、フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がドーパミン作動性神経細胞内のドーパミンD1シグナル情報伝達を抑制する作用を見出した。このFTY720の薬理作用は、ドーパミン賦活作用による依存性違法薬物(アンフェタミン、コカイン等)に拮抗する作用を持つと考えた。FTY720を前投与したマウス群は、その30分後のコカイン投与による自発運動亢進が、生理食塩水を前投した与マウス群に対し有意に自発運動が抑制されていた結果を得ている。本研究申請者らは、現在、マウスにコカイン連続投与した依存モデルでの検討や、蛋白レベルで、リン酸化を指標としたドーパミンD1シグナル抑制メカニズムを明らかにする実験に取り組んでいる。現象として、フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がコカインで惹起される自発運動亢進を抑制する行動実験データが得られ、そのメカニズムも脳スライス線条体でドーパミンD1シグナル抑制である実験データは得られている。S1P受容体を強発現するウイルスベクターの構築も順調に進行しており、ウイルスベクターをマウス線条体に麻酔下に注入してin vivoで行動解析実験を行う計画である。薬物依存の治療法の確立を目指して、本研究を遂行している。本研究代表者は、精神科医療に従事する臨床医でもあるが、薬物乱用者、薬物依存者への治療は、確立されたものはなく、特効薬的治療薬も存在しない。

本申請研究では、生理活性を持つ脂質、スフィンゴシン-1-リン酸(S1P)に着目して中枢神経作用を基礎実験にて解析を行っている。本研究申請者らは、S1Pアナログ分子でS1P受容体作動薬、フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がドーパミン作動性神経細胞内のドーパミンD1シグナル情報伝達を抑制する作用をマウス線条体スライスを用いた実験系データで統計学的有意差が得られた。このFTY720の薬理作用は、ドーパミン賦活作用による依存性違法薬物(アンフェタミン、コカイン等)に拮抗する作用を持つと考え、マウス行動実験で、FTY720を前投与したマウス群は、その30分後のコカイン投与による自発運動亢進が、生理食塩水を前投した与マウス群に対し有意に自発運動が抑制されていた結果が得られている。中枢での作用を確定するため、ドーパミンD1creマウスに、DIO配列を持つAAVでS1P1受容体をドーパミンD1を発現する神経細胞で強制発現させ、FTY720前投与によるドーパミン賦活剤の作用を検証、また、S1P1-loxPマウスをD1creマウスと交配させることで、D1でS1P1受容体がノックダウンされたマウスでも同様の実験を予定している。現象として、フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がコカインで惹起される自発運動亢進を抑制する行動実験データが得られ、そのメカニズムも脳スライス線条体でドーパミンD1シグナル抑制である実験データは得られている。S1P受容体を強発現するウイルスベクターの構築は完成して、AAVへのパッケージも完成した。D1creマウスへのAAV脳内注入実験ではウイルスベクターをマウス線条体に麻酔下に注入してin vivoで行動解析実験を行った。結果、予測される有意なデータが得られている。実験データは、国際学会で発表、有意義な討論がなされた。実験は順調に進行していると考えている。薬物乱用、薬物依存は大きな社会問題であり社会的損失である。しかし、薬物乱用者、薬物依存者への治療は、精神療法、自助グループへの参加が主体であり、特効薬的治療薬は存在しない。S1Pは、細胞増殖・分化、炎症、免疫、神経機能などを調節する分子として知られている。我々は、S1Pアナログ分子でS1P受容体作動薬、フィンゴリモド塩酸塩【FTY720】がドーパミン作動性神経細胞内のドーパミンD1シグナル情報伝達を抑制する作用を見出した。FTY720はこの薬理作用が、ドーパミン賦活作用による依存性違法薬物(アンフェタミン、コカイン等)に拮抗する作用を持つと考えた。FTY720を前投与したマウス群は、その30分後のコカイン投与に依る自発運動亢進が、生理食塩水前投与マウス群に対し有意に自発運動が抑制されていた結果を得ている。FTY720は再発性多発性硬化症治療薬として市販されている薬剤で、血液脳関門を通過し中枢へ移行することは既に報告されている。モデル動物の実験で、ハンチントン病の改善、アルツハイマー病の改善の報告がある。現在組んでいる、マウスにコカイン連続投与した依存モデルでの検討や、蛋白レベルで、リン酸化を指標としたドーパミンD1シグナル抑制メカニズムを明らかにする実験では、コカインや覚醒剤などの薬物依存が治療可能であるかを検討している。将来的には、ドーパミンシグナルに関する疾病への応用も期待ができる。特に、パーキンソン病治療薬の副作用で、ジスキネジアが出現するが、FTY720がジスキネジアを抑制、緩和する可能性が期待できる。
実験的I型ヘルペス網膜炎における免疫動態の研究:サイトカインmRNAの多角的解析

BALB/cマウスの右眼前房に1型ヘルペスウイルス(KOS株)を接種し、8日目以降に対眼(左眼)に網膜炎を発生した固体を選定し、解析を加えた。左眼の炎症は接種後1114日目にピークを迎え、その後消炎するので、ウイルス接種後9、11、14、21、35日目を選び、経時的な変動を観察した。1.眼内のサイトカインmRNA産生検討を加えるサイトカインとして、γIFN、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、IL-12、TNF-α、TGF-β2、i-NOSを選んだ。各実験日に47匹のマウスから眼球を摘出してここからmRNAを抽出し、実験終了まで-80°Cに保存した。実験終了後、RT-PCRを行って、各サイトカインmRNA量を半定量的に測定し、各サイトカインmRNA量の経時的変化を調べた。その結果、γIFN、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-10、ITNF-α、i-NOSについては、炎症の変化とほぼ同機して、ウイルス接種後11もしくは14日目にmRNA量がピークを迎えた。これに対して、IL-12、TGF-β2は、網膜炎発症前からmRNAが検出され、網膜炎の極期で最も低い価となった。2.眼内サイトカイン産生のELISAによる検討実際のサイトカイン蛋白産生の経時的変化を調べるために、眼内から細胞を採集して培養し、培養液中のサイトカイン濃度をELISAで測定した。γIFN、IL-2、IL-4、IL-10について行ったが、IL-2とIL-4は検出限界以下の測定値であった。これに対して、IL-10とγIFNは、ウイルス接種後11および14日目に、いずれも5001000pg/mlという高濃度が検出された。また、ウイルス接種後21日目(炎症寛解期)の培養液からは、ほとんど検出されなかった。1.1型単純ヘルペスKOS株の5x104PFUをBALB/cマウスの片眼前房に接種して,対側眼内にヘルペス網膜炎を惹起した.網膜炎は発症後2週間で沈静するが,その経時変化の背景にある炎症性サイトカインの動態について,RT-PCRを用いた半定量を行い,検討した.マウス眼球からmRNAを抽出し,インターフェロンガンマ(1FNγ),インターロイキン(lL)1β,2,4,10,12およびTNFα,TGFβ,iNOSについて,RT-PCRを行った.その結果,IFNγ,IL-2,-4,-10,TNFα,iNOSについては,網膜炎の極期である,ウイルス接種後11日目もしくは14日目で最大のmRNA発現量となっていた.これに対して,TGFβとIL12では同時期に最低となっていた.炎症性サイトカインやリンパ球由来のサイトカインと眼内由来サイトカインでは,分泌量の経時的変化に差異のあることが判明した.2.網膜炎を発症した眼内のサイトカイン動態を検討するうえで,サイトカインのタンパク質レベルでの産生を確認する必要があると考えた.しかし,マウス眼内から採集できる液体成分は10μl/眼程度であり,これを用いてサイトカイン濃度を定量することは不可能であった.そこで,眼内細胞を採集し,これを250μlの培養液中で12もしくは24時間培養した.上澄を用い,IL-2,-4,-10およびIFNγについて,ELISAにてサイトカイン濃度を測定した.IL-2およびIL-4については,検出限界以下であったが、IL-10とIFNγはウイルス接種後11日目に濃度が最大となり,網膜炎の活動性と一致していた.BALB/cマウスの右眼前房に1型ヘルペスウイルス(KOS株)を接種し、8日目以降に対眼(左眼)に網膜炎を発生した固体を選定し、解析を加えた。

γIFN、IL-2、IL-4、IL-10について行ったが、IL-2とIL-4は検出限界以下の測定値であった。これに対して、IL-10とγIFNは、ウイルス接種後11および14日目に、いずれも5001000pg/mlという高濃度が検出された。また、ウイルス接種後21日目(炎症寛解期)の培養液からは、ほとんど検出されなかった。
薬物誘発性歯肉増殖症の遺伝子リスクファクターの検索

薬物誘発性歯肉増殖症は、カルシウム拮抗剤、抗てんかん剤あるいは免疫抑制剤の服用者の一部に認められる副作用である。いくつかの疾患においてその発症に関与する遺伝的素因として一塩基多型が知られている。私たちは以前、α2インテグリン+807C/T遺伝子多型が歯肉増殖症と関連することを示したが、この遺伝子多型はアミノ酸変異を生じないため発症との直接関与は考えられず、+807近傍の他の一塩基多型との協調関与の可能性が考えられた。そこで本研究では、歯肉増殖症の発症と+807遺伝子多型と連鎖不平衡の関係にあるα2インテグリン+1648G/A遺伝子多型との関連について検討を行った。被験者はカルシウム拮抗剤、フェニトインあるいはサイクロスポリン服用患者98名を対象とし、増殖症患者48名(増殖症群)と非増殖症患者50名(対照群)から採血を行った。その結果、α2インテグリン+1648G/Aの遺伝子分布は、GGが増殖症群と対照群でそれぞれ95.6%と88.7%と著しく高く、GAはそれぞれ4.4%と9.4%、そしてAAは対照群の1例のみであった。また、アレル頻度については+1646Gアレルが増殖症群と対照群でそれぞれ98.8%と94.7%で、+1648Aアレルがそれぞれ2.2%と5.3%であり、両群間に有意な差は認められなかった。これらの結果は、薬物誘発性歯肉増殖症の発症はヒトα2インテグリン+1648G/A遺伝子多型と相関しないことを示している。しかしながら、歯肉増殖症はα2インテグリン+807C/T遺伝子多型と+1648G/A以外のその他の遺伝子多型との協調を介して発症することも考えられる。申請者の所属講座では薬物誘発性歯肉増殖症の発症機構の研究を行っており、これまでに動物モデルを用いて歯肉増殖症が、カルシウム拮抗剤などの薬物による歯肉線維芽細胞上のα2インテグリン発現の抑制によって生じることを見出した。そこで、α2インテグリンを薬物誘発性歯肉増殖症の疾患候補遺伝子と考え、その遺伝子のエクソン7上に存在するα2インテグリン+807T/Cの一塩基多型(SNP)と歯肉増殖症の発症との関連を調べ、+807Cアレルが歯肉増殖症の遺伝的リスクファクターの一つであることを示した。しかしながら、+807T/C変異ではアミノ酸変異は起こらず、他のSNPと連鎖している可能性が考えられた。そこでさらに、本研究においてアミノ酸変異を引起こす多型である+1648A/Gについて歯肉増殖症の発症との関連を検討した。被験者は徳島大学病院および新潟大学病院に通院中の136名の歯肉増殖症誘発薬剤服用患者とした。患者からの末梢血の採取は各大学のヒトゲノム・遺伝子解析研究倫理審査委員会の承認を得た後、患者の同意を得て行った。なお、歯肉増殖症の判定はMacGawらの基準に従い診断した。被験者より採取した血液よりDNA extraction kitを用いてゲノムDNAを抽出した。α2インテグリン+1648A/GのSNPを含む領域に特異的なオリゴヌクレオチドプライマーを設計し、各被験者のゲノムDNAをテンプレートにしてPCRを行いDNAを増幅し、精製した。DNAシークエンスはキャピラリー型シークエンサーを用いて行った。