hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
母親の高脂肪食摂取が胎児の神経発生と行動に及ぼす影響：発達障害のモデルとして

さらに妊娠6日目から出産まで高脂肪餌を与えた場合と、妊娠6日目から14日目まで高脂肪餌を与えた場合を比較すると、後者の方が自発運動量の増加が著しかったことから、妊娠中期の栄養環境が重要であると思われる。今年度は、オレイン酸を豊富に含むオリーブ油を添加した高脂肪餌を妊娠中期に与えたところ、仔マウス21匹中10匹(48%)において自発運動量が著明に増加した。ラードによる50%高脂肪餌を与えた母親マウスから妊娠14.5日の胎児を取り出し、神経新生亢進の有無について検討すると、大脳皮質においてTbr2陽性細胞の増加が認められた。ウェスタンブロット法により、HFD群の胎仔大脳皮質においてヒストンH3タンパク質のアセチル化が亢進していることがわかった。RNA-seqによる網羅的遺伝子発現解析を行ったところ、HFD群においてはHippoシグナル関連遺伝子の発現に変化が認められた。ウェスタンブロット法によりHippoシグナルの中心的役割を担うYAP1のリン酸化の亢進が認められ、Hippoシグナルが不活性化されていることが分かった。HFDによる神経新生の亢進に、ヒストンアセチル化によるエピジェネティクス修飾だけでなく、Hippoシグナル伝達系の不活性化も関与することがわかった。さらに、母仔分離による超音波発声(USV)の解析により、マウスの高次脳機能について検討したところ、HFD群ではharmonicsに分類される複雑な波形が多く認められ、メスよりもオスでより顕著であった。神経解剖学、神経科学今年度は、昨年度の成果を踏まえてさらに詳細な検討を行い、妊娠期のどの時期に高脂肪食を与えると仔の自発活動量が最も増えるか、脂肪の中でどのような脂肪酸が最も自発活動量の増加に影響を与えるか、ということについて興味深い結果を得ることができた。時期については、妊娠中期に高脂肪食を与えた場合に自発運動量が増加したことから,妊娠中期の高脂肪食摂取が影響を与えると考えられる。マウスの場合,妊娠14日目から胎児の神経分化が活発になり,17日目頃には神経分化はほぼ完了する。妊娠中期は14日目からの神経分化の準備期といえる。妊娠中期に母親が高脂肪食を摂取することで胎盤を通して脂肪成分が胎児の血液中に移動し、多量の脂肪に暴露された結果胎児環境が変化し、神経分化に影響を与えたと考えられる。また、脂肪の組成については、これまでの我々の研究において、妊娠中期以降にラードを主成分とした脂肪エネルギー比率50%の高脂肪食を与えた母親から生まれた仔において、オレキシン神経細胞数が増加し、さらに自発運動量も増加するということを明らかにした。ラード100g中には飽和脂肪酸40g、一価不飽和脂肪酸45g、多価不飽和脂肪酸11gが含まれている。そこで本研究では飽和脂肪酸と不飽和脂肪酸のうち,どの脂肪酸が自発運動量や多動の発現を引き起こしているかを検討する目的で,、飽和脂肪酸からはC16:0のパルミチン酸を、一価不飽和脂肪酸からはC18:1のオレイン酸を選んで餌を調合し妊娠マウスに与えた。その結果、飽和脂肪酸ではなく一価不飽和脂肪酸が影響していることがわかった。一般的には、不飽和脂肪酸の摂取が動脈硬化予防などの観点から推奨されているが、不飽和脂肪酸の方が胎児脳の形成に関しては影響を与えやすいことがわかり、社会的な影響も大きいと思われる。Orexinニューロンと過活動、生後発達と超音波発声を指標にした社会性の発達、胎生期におけるneurogenesisという3つの観点から検討を進め、興味深い結果を得ている。
硝子体細胞-血管細胞連関による網膜血管環境安定化機構と糖尿病網膜症治療法開発

網膜血管の状態を保護、安定化、または病態の悪循環による悪化を促進しうるシステムとして、網膜血管内皮-硝子体細胞連関について分子レベルで明らかにし、その破綻した病的状態としての糖尿病網膜症の病態を分子レベルで検討し治療薬開発の新しい分子ターゲットを明らかにする。また、薬物治療開発推進ため治療薬開発段階で薬物の有効性、安全性を検討するスクリーニングシステムの開発を目指す。網膜血管内皮細胞と硝子体由来細胞の共培養系を樹立した。この共培養系にIL-1α、IL-1β、IL6,TNFα、VEGFFを作用させ、さらに抗VEGF抗体、ステロイド薬を作用させた。各サイトカインのうちTNFαを除くサイトカインで血管内皮細胞は増殖が促進され、VEGFの効果のみが抗VEGF抗体で抑制された。ステロイド薬は上記のサイトカインのうち、TNFαを除くサイトカインの作用を抑制した。これらの血管内皮細胞への直接作用は硝子体由来細胞の共培養により減弱され、生体内での薬物動態は生体内での検討が重要とかんがえられた。抗炎症作用が糖尿病黄斑浮腫(ME)治療薬として有効か調べた。以上の所見をもとに糖尿病全身コントロールに抵触しない新しいステロイド点眼薬のdifluprednateophthalmic emulsion0.05%をDMEに対する治療として検討した。本剤はemulsionであるため、後眼部へ移行しやすい特徴をもつ。点眼薬という投与法のメリットとして、非観血的治療であり安全である。軽症のDMEや汎網膜光凝固中にDMEが発症した症例も適応となり、網膜厚の有意な減少が認められた。また、硝子体手術後に残存する重症のDMEに対して硝子体内注射は薬物クリアランスの点から有効性が低いと考えられるが、点眼治療は網膜厚が有意に減少した。糖尿病黄斑浮腫(DME)の病態を明らかにする目的で網膜-硝子体界面を3次元的に観察した。山形大学医学部附属病院眼科で治療をおこなったDME16例18眼。3次元観察は術前後にFD-OCTを用いて黄斑部断層像とセグメンテーション解析による観察を行った。硝子体手術では内境界膜(ILM)、黄斑上膜(ERM)を除去し、一部を病理組織学的に観察した。術前の網膜表面のOCT所見は3群に分類できた。I群:断層像では平滑で3次元的観察で微細な趨壁(fine fold)を認めるもの8眼(44%)。II群:断層像で明らかに凹凸、ERMが検出されるもの7眼(39%)。III群:断層像、3次元的観察で平滑なもの3眼(17%)。術後3か月で平均網膜厚減少率は1群35%、2群53%、3群50%だった。I群では術後fine foldが消失し組織学的にILM上に細胞付着像がみられた。II群ではERM、fine fold消失を認めILM剥離非施行例でfine foldは残存した。ILMへの細胞付着と硝子体皮質様組織がみられた。ILM上の細胞の起源に関しては、硝子体細胞、網膜グリアなどの可能性があり、その作用を細胞生物学的に検討する実験系をセットアップしつつある。III群の所見は変化しなかった。網膜表面の微細な趨壁をセグメンテーション解析による3次元的観察で捉えられた。硝子体手術後においても網膜厚が減少せず治療効果が検出できない症例が6ヵ月以降36ヵ月までで40%みられる(生命表法による)。

このような難治性DMEに対して、血管内皮細胞の保護作用があり、網膜血管の透過性亢進を抑制することから浮腫の治療効果を期待してステロイド点眼液による治療法を開発した。点眼群では平均網膜厚は2か月後に有意に減少し、治療期間中の網膜厚改善の割合は73%であった。この治療成果を特許申請した。今後、治療薬として臨床で使えるようにする臨床研究を推進する予定である。(740文字)網膜血管の状態を保護、安定化、または病態の悪循環による悪化を促進しうるシステムとして、網膜血管内皮-硝子体細胞連関及び神経膠細胞連関について分子レベルで明らかにし、その破綻した病的状態としての糖尿病網膜症の病態を分子レベルで検討し治療薬開発の新しい分子ターゲットを明らかにする。また、薬物治療開発推進ため治療薬開発段階で薬物の有効性、安全性を検討するスクリーニングシステムの開発を目指す。網膜血管内皮細胞と硝子体由来細胞の共培養系を樹立した。この共培養系にIL-1α、IL-1β、IL-6,TNF-α、VEGFを作用させ、さらに抗VEGF抗体、ステロイド薬を作用させた。各サイトカインのうちTNFαを除くサイトカインで血管内皮細胞は増殖が促進され、VEGFの効果のみが抗VEGF抗体で抑制された。ステロイド薬は上記のサイトカインのうち、TNFαを除くサイトカインの作用を抑制した。これらの血管内皮細胞への直接作用は硝子体由来細胞の共培養により減弱され、生体内での薬物動態は生体内での検討が重要とかんがえられた。糖尿病黄斑浮腫(DME)に対するステロイドによる治療効果を検討した。あらたに開発されたステロイド点眼治療の効果について検討した。対象は3か月間治療歴がなく点眼治療を行った25例36眼(男性11例19眼、女性14例17眼)で、1か月間は1目4回、以後2か月間は1日2回点眼し、3か月間で終了とした。長期経過をlogMAR視力、光干渉断層計による中心窩網膜厚について検討した。平均logMAR視力は点眼開始時0.55→終了時0.53(p=0.75)、平均中心窩網膜厚は点眼開始時515.5μm、点眼→終了時322.1(p<0.01)であった。点眼終了時に有効であった眼の後9眼が再発した。生命表法を用いた検討では10か月後まで40%で有効性が維持された。生体眼内での治療効果はステロイドが有効であることを明らかにした。1)細胞研究:血管バリアー機能障害の分子メカニズムで、硝子体細胞が、バリアー機能不全を引き起こす炎症性のサイトカインとどのように関連しているかを検討し、次のステップである治療法開発へとつなげる研究をおこなった。ビアルロン酸(HA)は、グリコサミノグリカンであり細胞外マトリックスの主要成分であり、細胞遊走、細胞増殖、分化、抗炎症において重要な役割を担っている。眼増殖性疾患時に硝子体に放出されるIL-1の硝子体細胞HA産生の制御機構、HAのIL-1誘導炎症反応制御を検討した。当講座で樹立したブタ硝子体由来細胞(PH細胞)を用いた。IL-1α、βをPH細胞に投与後、細胞増殖、HA産生レベル、HA合成酵素(HAS)1、2、3ならびにHA分解酵素(Hyal)1、2、3のmRNA発現レベルを、それぞれMTTアッセイ、HA結合アッセイ、RT-PCR法で観察した。HAを過剰発現させたPH細胞に対して、IL-1を投与し、IL-6、VEGF mRNA発現レベルを観察した。
照葉樹林の自然性および種多様性の復元に関する基礎的研究

照葉自然林の復元に向けた取り組みを促進するために、照葉自然林に偏在する種を地域ごとに明らかにすると共に、これらの種の生態的特性を把握することを研究の目的とした。小笠原諸島(父島、母島)において照葉自然林と照葉二次林の調査を実施し、両者の種組成の相違を明らかにした。また、兵庫県西宮市において照葉人工林(社叢として保全されている林齢数百年のクスノキ林)の調査を実施し、そのデータを照葉自然林の既存データと比較することで、両者の種組成の相違を明らかにした。さらに、屋久島に分布する照葉自然林、照葉二次林、スギ人工林(照葉樹林化が進行している林分)の比較検討を行い、三者の種組成の相違を明らかにした。わずかな面積しか残されていない「自然性の高い照葉樹林(照葉自然林)」の復元を図る上で最も効率的かつ効果的な取り組みは、照葉自然林に偏在する多くの種を照葉二次林に導入し(苗を移植)、照葉二次林の自然性および種多様性を積極的に向上させることである。しかし、このような取り組みの実行にあたっては様々な課題を解決する必要がある。最も重要な課題は、照葉二次林に導入すべき種(導入種)を地域ごとに明らかにし、そのリストを作成することである。本研究は、照葉二次林の主要分布地域の多くをカバーする包括的な導入種リストを作成することによって照葉自然林の復元に向けた取り組みを大きく前進させることを目指している。導入種リストの作成を意図した調査がまだ行われていない地域としては、東京都小笠原諸島、四国地方、近畿地方(兵庫県以外)などが挙げられる。多地域での調査を1年間で行うことは大変困難なので、平成25年度はまず、導入種リストの早期整備が必要と考えられる小笠原諸島の父島・母島を調査対象とし、これらの島に分布する照葉二次林と照葉自然林に100平米(10m×10m)の調査区を合計35個設置して植生調査と毎木調査を行った。得られたデータを解析した結果、両森林タイプの構造と種組成は明らかに異なっており、複数の種(シマホルトノキ、オガサワラグワ、ウドノキ、ツルキジノオなど)が自然林に偏在する傾向が認められた。逆に、二次林に偏在する種としてムニンヒメツバキ、アカギ、タコヅルなどがみられた。わずかな面積しか残されていない「自然性の高い照葉樹林(照葉自然林)」の復元を図る上で最も効率的かつ効果的な取り組みは、照葉自然林に偏在する多くの種を「自然性の低い照葉樹林」に導入し(苗の移植や播種)、「自然性の低い照葉樹林」の自然性および種多様性を積極的に向上させることである。最も重要な課題は、「自然性の低い照葉樹林」に導入すべき種(導入種)を地域ごとに明らかにすることである。本研究は、このような導入種のリストを作成することによって照葉自然林の復元に向けた取り組みを大きく前進させることを目指している。多地域での調査を1年間で行うことは大変困難なので、平成26年度は平成25年度に引き続き、導入種リストの早期整備が必要と考えられる小笠原諸島の父島・母島を調査対象とし、これらの島に分布する照葉二次林と照葉自然林に100平米(10m×10m)の調査区を複数設置して植生調査と毎木調査を行った。また、高知県、徳島県、三重県、鹿児島県において照葉樹林の分布調査を実施し、平成27年度の調査地の選定をおこなった。さらに、兵庫県において照葉自然林と照葉人工林(社叢として保全されている林齢数百年のクスノキ林)の調査を実施し、両者の構造、種組成、種多様性の相違を明らかにすると同時に、この研究結果を論文にまとめて学術雑誌に投稿した。また、照葉樹林に関する既存データの整理も進めた。わずかな面積しか残されていない「自然性の高い照葉樹林(照葉自然林)」の復元を図る上で最も効率的かつ効果的な取り組みは、照葉自然林に偏在する多くの種を他の樹林(自然性の低い照葉樹林など)に導入(苗の移植や播種)し、その樹林の自然性および種多様性を積極的に向上させることである。最も重要な課題は、照葉自然林に偏在する種を具体的に明らかにすることである。本研究は、このような課題の解決を図り、照葉自然林の復元に向けた取り組みを前進させることを目的とした。主な研究実績は下記のとおりである。小笠原諸島の父島・母島および口永良部島において照葉自然林と照葉二次林の調査を実施し、両者の種組成、種多様性の相違を明らかにした。また、兵庫県西宮市において照葉人工林(社叢として保全されている林齢数百年のクスノキ林)の調査を実施し、そのデータを照葉自然林の既存データと比較することで、両者の種組成、種多様性の相違を明らかにした。

さらに、屋久島に分布する照葉自然林、照葉二次林、スギ人工林(管理が行われておらず照葉樹林化が進行している林分)の比較検討を行い、三者の種組成、種多様性の相違を明らかにした。また、宮崎市の平和台公園で各種の調査を行い、孤立化した照葉二次林の種組成、種多様性の特徴を把握したほか、絶滅危惧種に指定されているオオバヤドリギの生育状況やその寄生が樹木に与える影響などを明らかにした。さらに、日本植生誌や論文などの既存文献をもとに照葉自然林と照葉二次林の植生調査資料を整理し、そのデータベース化を進めた。照葉自然林の復元に向けた取り組みを促進するために、照葉自然林に偏在する種を地域ごとに明らかにすると共に、これらの種の生態的特性を把握することを研究の目的とした。小笠原諸島(父島、母島)において照葉自然林と照葉二次林の調査を実施し、両者の種組成の相違を明らかにした。また、兵庫県西宮市において照葉人工林(社叢として保全されている林齢数百年のクスノキ林)の調査を実施し、そのデータを照葉自然林の既存データと比較することで、両者の種組成の相違を明らかにした。さらに、屋久島に分布する照葉自然林、照葉二次林、スギ人工林(照葉樹林化が進行している林分)の比較検討を行い、三者の種組成の相違を明らかにした。平成26年度中に小笠原諸島での調査を完了させる予定であったが、調査日数の不足により、予定していたすべての場所での調査ができなかった。このため、平成27年度に補足調査を行うことにした。他地域での調査や既存データの整理などはほぼ当初計画どおりに進めることができた。論文作成もほぼ当初計画どおりに進んでおり、現在、2本の論文を投稿中である。研究期間中にさらに数本の論文を作成・投稿したいと考えている。植生学、保全生態学平成27年度は小笠原諸島で補足調査を行うと共に、四国地方、近畿地方、九州地方での調査もできるだけ進めていく方針である。小笠原諸島の調査結果の発表は急務であることから、平成27年度中に調査結果を論文にまとめて学術雑誌に投稿したいと考えている。他地域の調査結果についてもできるだけ早く論文にまとめて公表する方針である。平成25年度中に小笠原諸島での調査を完了させる予定であったが、悪天候などにより予定していた場所での調査ができなかった。ただし、平成25年度の調査で小笠原諸島の全体像を把握することができ、予想どおりの傾向も認められた。未調査の場所は限られていることから、平成26年度の追加調査により同島での調査を完了させることができると予想している。物品の購入を予定していたが、勤務先にある物品で代用することができ、その購入が不要になったから。また、データ整理のアルバイトを雇用する予定であったが、別予算で雇用することになったから。小笠原諸島で追加調査を行うと共に、四国地方、近畿地方、九州地方での調査もできるだけ進めていく方針である。また、既存データの整理を行い、新規データとの統合に向けた準備を進める。小笠原諸島の研究結果の発表は急務であると思われるので、平成27年度中に研究結果を論文にまとめて学会誌に投稿したいと考えている。現地調査のための旅費やレンタカー代、謝金、消耗品の購入費などとして使用する。現地調査のための旅費や研究補助者に支払う謝金、レンタカー代、消耗品の購入費などとして使用する。
皮膚疾患および病態における核移行シグナルの役割

核移行シグナルであるkaryopherin α2(KPNA2)が細胞増殖に関して果たす役割について、HaCaT細胞おいてTAP (tandem affinity purification) methodおよびmass spectrometryを行い、KPNA2が結合し核移行を行っているタンパク群を特定、解析。また、乾癬や有棘細胞癌をはじめとする皮膚悪性腫瘍でのKPNA2の発現を免疫染色にて確認し、表皮細胞の増殖との関連を検討。皮膚における核移行シグナルの役割を検討するため、各皮膚疾患の病理組織標本の免疫染色を行った。KPNA1, 2, 3, 4, 5およびCRM1, KPNBの抗体を用いて正常皮膚、尋常性乾癬、基底細胞癌、有棘細胞癌、悪性黒色腫、ボーエン病、メルケル細胞癌、菌状息肉症、脂漏性角化症のパラフィン切片の免疫染色を行った。その結果、KPNA2において特徴的な所見を得た。正常表皮細胞でもKPNA2は核および細胞質に軽度発現を認めたが、尋常性乾癬では基底層にKPNA2の発現が増強している細胞が増加しており、また上記各疾患における悪性腫瘍細胞ではいずれも核および細胞質に著明な発現の増強が認められた。KPNA5はその発現が免疫染色レベルでは確認出来なかった。その他KPNA1, 3, 4, CRM1, KPNBに関しては明らかな疾患特異性はなかった。これらの結果において、特にKPNA2は細胞増殖と密接に関わるのではないかと考え、HaCaT培養細胞にEGF刺激を行い細胞増殖との関連を調べることにした。EGF刺激したHaCaT細胞で細胞増殖のマーカーであるPCNAとKPNA2の抗体を用いて二重染色し、共焦点顕微鏡で観察したところ、特にM期においてPCNA、KPNA2の発現増強があり、co-localozeしていることが明らかになった。近年KPNA2が乳癌などの悪性腫瘍において発現増強が予後因子として関わっている可能性があるという報告があり、現在皮膚悪性腫瘍領域における予後因子としての有用性を検討するため、当科にて手術を行った悪性黒色腫および有棘細胞癌の原発巣、リンパ節の組織標本をKPNA2にて免疫染色し、予後との相関について統計的に検討を加えている。これまでの研究結果により、KPNA2が乾癬において基底層付近で発現が上昇しており、有棘細胞癌や悪性黒色腫などの皮膚悪性腫瘍においてもKPNA2の発現上昇が確認された。そこで細胞増殖における核移行シグナルの果たす役割について検討を行った。細胞増殖の際にKPNA2の発現が上昇する詳細なメカニズムを調べるため、HaCaT細胞を培養し、細胞増殖を促進させるサイトカインであるEGF, HGF, TGF-αをそれぞれ培地に添加して24時間後に細胞を回収した。EGF, TGF-α刺激ではKIINA2の発現量に変化は見られなかったが、HGF刺激において細胞増殖のマーカーであるPCNAの増加とともにKPNA2の発現量増加が確認された。そこで、HGF刺激によって起こる一連のシグナル伝達系がKPNA2発現に大きく関与しているのではないかと考え、現在KPNA2のプロモーター領域についてデータベースをもとに解析し、KPNA2発現をコントロールしている転写因子の検討を加えている。今後はKPNA2プロモーターのdeletion vectorを作成し、細胞増殖時にKPNA2発現を上昇させるメカニズムの特定を行う予定である。また、細胞増殖が活性化している状態において、どのような転写因子がKPNA2の働きによって実際に核へ移行し増殖を維持させているのかについて、細胞内でのタンパク結合を解析することから明らかにするため、TAP(tandem affinity purification)methodを用いてHaCaT細胞内でKPNA2と結合するタンパクを分離・精製した。HaCaT細胞におけるstably expressing KPNA2 witha C-terminal TAP-epitopetag(KPNA2-TAP)の作成を行い、コントロール用として、HaCaT細胞におけるGFP-TAP stabel cell lineを作成した。これらを細胞数1×10^8培養しTAP methodを用いてKPNA2と結合するタンパクを回収し、SDS-PAGEで展開した後銀染色を行い、特異的結合と考えられるバンドを切り出し、mass spectrometryを行いターゲットタンパクを同定した。現在同定タンパクの解析をさらに追加して行っている。これらの結果を元に、皮膚科領域における乾癬や皮膚悪性腫瘍の増殖に関する詳細なメカニズムが明らかになっていくと考えられる。
軌道モデルによる分子クラスターの動的過程の記述

本研究では、アルゴン原子等小さな分子クラスターの融解現象を幾つかの新しい視点から整理し、融解現象の本質を突き止めると同時に、このような凝縮系独特の動的過程を見通し良く記述する方法論を開発する事を目的としていた。そしてこのための研究手段として、振動や回転で原子核の運動を記述する従来の考え方を止め、電子状態理論で広く成功をおさめている平均場近似に基づく"軌道"による概念を原子核の運動に持ち込み、このような方法で凝縮系の動的過程を記述する可能性を検討した。このような考え方を推し進めるに当った背景には、分子クラスター等の凝縮系では運動の自由度が著しく多く、その結果孤立系の原子分子の運動や反応に通常使われている振動や回転による解析があまり見通しの良い結果を与えないと言う経験事実があった。しかしながら軌道と言う概念による記述は、双極子-(誘起)双極子相互作用のように2体の相互作用ポテンシャルの和で形成されている分子クラスターには、中心力場の中を割合に自由に運動している電子の場合とは違い本質的にかなり難しい問題設定であり、実際の研究内容は当初の研究目的にはほど遠い基礎データの収拾と解析に終始した。その結果解った事は、分子クラスターの動的過程の理解には(1)座標空間だけでなく位相空間による解析が不可欠な事、(2)さらにはダイナミカルボトルネックの存在を考えに入れる必要のある事、(3)通常の化学反応理論の前提となっているRRKM的な描像が成り立たない事等が解った。(これらの内容の内容についての論文は現在準備中)本研究では、アルゴン原子等小さな分子クラスターの融解現象を幾つかの新しい視点から整理し、融解現象の本質を突き止めると同時に、このような凝縮系独特の動的過程を見通し良く記述する方法論を開発する事を目的としていた。(これらの内容の内容についての論文は現在準備中)
繊維材混合流動化処理土の埋戻し材としての実用化に関する研究

本研究では,繊維材を混合した流動化処理土を実務で埋戻し材として用いるには,どのような課題があるのかを検討するという着想のもと,現場養生供試体と室内養生供試体に対して圧密非排水三軸圧縮試験を行い,強度・変形断特性に及ぼす養生日数,養生環境,および泥水密度の影響について比較,検討を行った。また,モデル地盤において小型FWD試験を実施し,地盤の非一様性の程度を検討するとともに,繊維材混合流動化処理土を原地盤へ適用するための実用化について検討した。その結果,埋戻し材として繊維材混合流動化処理土を適用することは,流動化処理土の適用に比べ高品質な埋戻し地盤が造成できることが明らかとなった。本研究では,繊維材をそれぞれ,0,10,20 kg/m3で添加した繊維材混合流動化処理土を大学構内に作製したピットに埋戻し,そこからサンプリングされた供試体と現場打設試料と同じバッチで室内養生された供試体に対し,養生日数を28,90,120,150日として,98 kPaの等方応力条件下で圧密非排水三軸圧縮試験(CUB試験)を行い,繊維材混合流動化処理土の室内・原位置作製供試体の三軸せん断特性に及ぼす養生日数の影響について比較,検討を行った.その結果,以下の知見を得た.1)繊維材混合流動化処理土のqεa関係において室内養生供試体に比べ現場養生供試体のほうが,最大軸差応力qmaxが,概ね,大きくなる傾向にある.また,現場養生供試体においても,繊維材を混合するとピーク後の脆性的性質が改善されることが分かった.2)初期変形係数E0は,室内・現場養生供試体ともに,養生日数120日まで増加傾向を示すが,その後減少傾向を示した.これは,養生環境による含水比低下の影響に起因すると考えられるが,今後,さらなる検討が必要である.3)Eeq/E0q/qmax関係から,繊維材量に依らず,養生日数120日までは,qεa関係の非線形性が,概ね,減少する傾向が見られた.4)せん断に伴う損傷程度は,養生環境やサンプリング時あるいは脱型時の乱れの影響に依存すると考えられるが,概ね,養生日数の増加とともに,損傷程度は小さくなる傾向にあると考えられる.昨年度の研究成果から,養生環境により,試験結果および試料の品質状態に影響を及ぼしていると考えられたため,本研究では,繊維材をそれぞれ,0,10 kg/m3で添加した繊維材混合流動化処理土を大学構内に作製したピットに埋戻し,そこからサンプリングされた供試体と現場打設試料と同じバッチで室内養生された供試体に対し,養生日数を28,56日として,98 kPaの等方応力条件下で圧密非排水三軸圧縮試験(CUB試験)を行い,繊維材混合流動化処理土の室内・原位置作製供試体の強度・変形特性に及ぼす養生環境の影響,特に,屋外における養生温度の影響について比較,検討を行った.その結果,得られた主な知見は以下の通りである.1)現場養生供試体の最大軸差応力qmaxに及ぼす養生温度の影響として,養生初期においては,養生温度の低下によってqmaxが低下する可能性があるが,養生日数が進むにつれて温度変化の影響を受けにくくなると考えられる.また,現場養生供試体においても,繊維材を混合するとピーク後の脆性的性質が改善されることが確認された.2)初期変形係数E0は,養生初期では,地盤内養生温度の影響を受ける可能性があるが,養生日数が増加するとともに,養生温度による影響は受けにくくなると考えられる.3)Eeq/E0q/qmax関係から,繊維材混合流動化処理土のせん断に伴う損傷程度は,養生温度による影響はあまり受けないことがわかった.また,養生日数の増加と共に,損傷程度は小さくなる傾向にあると考えられる.本研究では,都市域の掘削地盤における埋戻し材として,地盤の耐震補強が期待できる繊維材混合流動化処理土を用いた場合,どの程度の補強効果が期待できるものかを実際のモデル地盤において検討するという着想のもと,大学構内のピットにおいてモデル地盤を作製し,ブロックサンプリングによる乱さない試料に対する非排水三軸試験,およびモデル地盤を対象とした小型FWD試験を実施することによって,繊維材混合による地盤の補強効果と地盤の非一様性の程度を詳細に検討するとともに,力学特性に及ぼす養生日数の影響を明らかにすることを目的とした研究である.当該年度においては,当初の計画通り,大学構内ピットに繊維材混合流動化処理土の埋戻しモデル地盤を作製し,そこからサンプリングされた供試体と現場打設試料と同じバッチで室内養生された供試体に対し,養生日数を28,56日として,98 kPaの等方応力条件下で圧密非排水三軸圧縮試験(CUB試験)を行い,繊維材混合流動化処理土の室内・原位置作製供試体の強度・変形特性に及ぼす養生環境の影響,特に,屋外における養生温度の影響について比較,検討を行った.さらに,作製した埋戻しモデル地盤において小型FWD試験を実施し,原地盤の剛性評価を行うとともに,小型FWD試験(原位置試験)から得られるK値と三軸圧縮試験(室内試験)から得られる変形係数の比較検討から,小型FWD試験から得られるK値の妥当性を検討した.以上より,研究は計画通り進展しているが,地盤の非一様性については,養生温度に影響されることが明らかにされたが,作製された繊維材混合流動化処理土の密度の影響を検討するまでには至らなかったことから,「概ね順調に進展している」と判断した.これまでの研究成果から,流動化処理

土の実用化については,適切な泥水密度とすることが重要であることが判明したが,実際には,適切な泥水密度より小さい値で打設されることがある。最近では,流動化処理土による土被り圧の軽減を目的として,強度低下を考慮しつつ,適切な泥水密度を用いずに低い泥水密度で作製した流動化処理土が利用されることが想定されている.本研究では,流動化処理土の脆性的な性質を改善することを目的として,繊維材として綿状にした古紙を混合させた繊維材混合流動化処理土に対する一連の研究を実施してきた.その結果,繊維材を混合すると,その補強効果によりピーク後の脆性的性質が改善されることを明らかにしているが,土被り圧軽減のために泥水密度を低減させた流動化処理土については未解明な部分が多く,また,その流動化処理土に繊維材を混合させた場合の力学特性についても未解明な部分が多い.そこで,本研究では,泥水密度1.280g/cm3を100%とした場合と95%とした場合の2種類の泥水を用いて,繊維材をそれぞれ,0, 10kg/m3で添加した繊維材混合流動化処理土を養生日数28日として,98 kPaの等方応力条件下で圧密非排水三軸圧縮試験(CUB試験)を行い,繊維材混合流動化処理土の室内作製供試体の三軸せん断特性に及ぼす泥水密度の影響について比較,検討を行った.その結果,得られた主な知見は以下の通りである。1)設計配合図で得られた適切な泥水密度から,わずかに泥水密度を減少させるとqmaxは顕著に減少するが,低泥水密度の場合でも,繊維材による補強効果が作用すると考えられる.2)泥水密度を低下させると,軸差応力&#12316;軸ひずみ関係の非線形性が増加する傾向が見られた.3)せん断に伴う損傷程度に及ぼす泥水密度の影響は大きいが,繊維材の添加によって損傷程度は小さくなる傾向にあると考えられる.本研究では,繊維材を混合した流動化処理土を実務で埋戻し材として用いるには,どのような課題があるのかを検討するという着想のもと,現場養生供試体と室内養生供試体に対して圧密非排水三軸圧縮試験を行い,強度・変形断特性に及ぼす養生日数,養生環境,および泥水密度の影響について比較,検討を行った。また,モデル地盤において小型FWD試験を実施し,地盤の非一様性の程度を検討するとともに,繊維材混合流動化処理土を原地盤へ適用するための実用化について検討した。その結果,埋戻し材として繊維材混合流動化処理土を適用することは,流動化処理土の適用に比べ高品質な埋戻し地盤が造成できることが明らかとなった。
ネットワーク最適化問題に対する並列型確率的近似アルゴリズムの開発及び性能評価

本研究では,2年間にわたり、ネットワーク最適化問題,とくに最小カット問題に対する新しい並列型確率的近似解法を構築することを試みてきた。最近,最小カット問題に対して並列アルゴリズムや確率アルゴリズムの研究が進んで来ているが,本研究ではとくに最小カット問題を含むより広いクラスの問題に対して有効な,単純かつ効率のよいアルゴリズムの開発に主眼をおいて研究をおこなった。また、最小k-クラスタリング問題に対しても同様の研究をおこない,とくに分散最小化基準でのクラスタリングについて新しい理論的成果を得ることができた。本研究では,まず最大格差最小カット問題を解くO(m+nlogn)時間のアルゴリズムを開発した(nは節点数,mは枝数)。最大格差最小カット問題とは,重みつき無向グラフにおいて,カットの最大格差(カットに属する枝の重みのなかで,最大重みと最小重みの差)を最小にするカットを求める問題である。つぎに,このアルゴリズムにもとづく最小カットが求める並列型確率的近似アルゴリズムを開発し,最小カットが求まる確立はKargerの方法のそれよりも小さくはないことを示した。以上の理論的成果を踏まえて,開発したアルゴリズムの実用性を検証するために広範な計算実験をはおこなった。その結果,従来手法よりも高速で,かつ厳密解に非常に近い最小カットを求めることが確かめられた。さらに,この手法を最小k-カット問題に拡張し,その有効性を計算機実験によって確かめた。最小k-クラスタリング問題とは、d次元空間のn点を類似度が大きいk個の部分集合に分割する問題である。本研究では,とくにコンピュータグラフィックスにおけるカラー量子化への応用に焦点を当てて,この応用に適した最適化基準のもとでの最適分割を求めるいくつかの確率的近似アルゴリズムを提案した。本年度はとくに最小カットの確率的近似アルゴリズムを中心に開発し、その性能評価を計算機実験によって行った。確率的近似アルゴリズムとしては、最大格差最小カットアルゴリズムに基づくアルゴリズムを開発し、精力的に計算実験をおこなった。近似アルゴリズムの基本的アイデアは次の通りである。いま、グラフの辺の容量がすべて1としよう。そして、グラフの各辺に[0,1]の一様乱数を与え、最大格差最小カットを求める。このとき、カットに含まれる枝の本数が少ないと、そのカットの格差も平均的に小さいという事実に基づいて、近似アルゴリズムが構成されている。近似アルゴリズムは、各枝に一様乱数を与えて最大格差最小カットを求めるという操作を繰り返すことによって、最小カットの近似解を求めている。実験で取り扱った問題としては、グラフの辺の容量がすべて1の場合、正の実数値の場合、両端点が指定されたカットを考える場合(すなわち、s-t最小カット問題)、両端点が指定されていない場合、の4種類について実験をおこなった。グラフは3種類のnetwork generatorを用いて生成した。いずれのgeneratorに対しても、最大格差最小カットアルゴリズムをlog n回程度繰り返すことにより、最小カット、またはそれに非常に近い解を求めることができた。また、グラフをk個の成分に分割するk-カット問題も同様のアイデアで計算実験を行った。さらに、これらの近似アルゴリズムと最近Kargerによって開発された最小カットを求める確率的近似アルゴリズムの理論的評価もおこない、Kargerの解析結果よりもより実験結果に近い理論的評価式を得た。本研究では,2年間にわたり,ネットワーク最適化問題,とくに最小カット問題に対する新しい並列型確率的近似解法を構築することを試みてきた。また,最小κ-クラスタリング問題に対しても同様の研究をおこない,とくに分散最小化基準でのクラスタリングについて新しい理論的成果を得ることができた。

最大格差最小カット問題とは,重みつき無向グラフにおいて,カットの最大格差(カットに属する枝の重みのなかで,最大重みと最小重みの差)を最小にするカットを求める問題である。つぎに,このアルゴリズムにもとづく最小カットを求める並列型確率的近似アルゴリズムを開発し,最小カットが求まる確率はKargerの方法のそれよりも小さくはないことを示した。以上の理論的成果を踏まえて.開発したアルゴリズムの実用性を検証するために広範な計算実験をおこなった。その結果,従来手法よりも高速で,かつ厳密解に非常に近い最小カットを求めることが確かめられた。さらに,この手法を最小κ-カット問題に拡張し,その有効性を計算機実験によって確かめた。最小κ-クラスタリング問題とは,d次元空間のn点を類似度が大きいκ個の部分集合に分割する問題である。本研究では,とくにコンピュータグラフィックスにおけるカラー量子化への応用に焦点を当てて,この応用に適した最適化基準のもとで最適分割を求めるいくつかの確率的近似アルゴリズムを提案した。
乾草およびサイレージ利用システムにおける牧草細胞壁のダイナミック解析

寒地型イネ科牧草(イタリアンライグラス),寒地型マメ科牧草(アルファルファ)および暖地型イネ科牧草(ローズグラスおよびギニアグラス)を用い,細胞壁分解酵素の添加がサイレージの発酵特性ならびにルーメン内消化動態に及ぼす影響について検討した.各牧草を予乾した後,酵素を50mg/kgの割合で添加してサイレージを調製した.45日間嫌気的に貯蔵した後,凍結乾燥試料をヤギのルーメン内でin situ培養して細胞壁成分の消化動態を測定した.得られた結果は以下のとおりである.サイレージの貯蔵性は細胞壁分解酵素の使用によって向上したが,その程度は牧草種によって異なり,寒地型イネ科牧草に比べマメ科牧草および暖地型牧草で改善効果が大きかった.暖地型牧草サイレージでは,酸素を添加しなくても貯蔵日数の延長にともなって細胞壁成分が減少する傾向が認められ,サイレージ発酵の基質として細胞壁成分が利用されていることが示唆された.ルーメン内における細胞壁成分の消化速度はマメ科牧草サイレージが大きな値を示したが,酵素を添加するとその値は有意に低下した.この酵素添加にともなう消化速度の低下はイネ科牧草サイレージでは認められず,細胞壁成分の潜在的な消化・分解性はイネ料牧草とマメ科牧草では大きく異なることが示された.暖地型牧草サイレージでは,貯蔵中にその一部が分解されたにも係わらず消化速度が低下しなかったことから,乾草よりもサイレージ化する方が飼料全体の利用性を高めるうえで有利と考えられた.イタリアンライグラスを用い、天日乾草、無予乾サイレージおよび予乾サイレージを調製するとともに、無予乾材料にギ酸、セルラーゼおよびクロラムフェニコールを添加して、牧草中および微生物由来の細胞壁分解酵素を両方あるいは一方だけ失活させたサイレージを調製した。これらの試料を凍結乾燥して分析に供し、可溶性糖類および細胞壁成分をHPLCおよび比色法により測定した。また、乾燥試料をin vitroで培養してルーメン内微生物の細胞壁分解酵素活性(Avicelase、XylanaseおよびCarboxymethylcellualase)を測定し、細胞壁構成糖類の変化と消化性変動の関連について検討した。得られた結果は以下のとおりである。サイレージ発酵は予乾、ギ酸添加およびクロラムフェニコール添加によって抑制され、セルラーゼの使用によって著しく促進された。これら発酵の強弱によって牧草細胞壁の総量は変動し、発酵が抑制されたものでは細胞壁成分の残存量が多かった。しかし、特異的に変化した構成糖類はなくサイレージ発酵に伴う細胞壁の分解は選択的ではないことが示唆された。また、n vitro培養時の細胞壁分解酵素活性は細胞壁成分の残存量が多いものほど高い傾向にあり、サイレージ貯蔵に伴う細胞壁成分の減少は、残存部分のエネルギー価を低下させることが示された。寒地型イネ科牧草(イタリアンライグラス),寒地型マメ科牧草(アルファルファ)および暖地型イネ科牧草(ローズグラスおよびギニアグラス)を用い,細胞壁分解酵素の添加がサイレージの発酵特性ならびにルーメン内消化動態に及ぼす影響について検討した.各牧草を予乾した後,酵素を50mg/kgの割合で添加してサイレージを調製した.45日間嫌気的に貯蔵した後,凍結乾燥試料をヤギのルーメン内でin situ培養して細胞壁成分の消化動態を測定した.得られた結果は以下のとおりである.サイレージの貯蔵性は細胞壁分解酵素の使用によって向上したが,その程度は牧草種によって異なり,寒地型イネ科牧草に比べマメ科牧草および暖地型牧草で改善効果が大きかった.暖地型牧草サイレージでは,酸素を添加しなくても貯蔵日数の延長にともなって細胞壁成分が減少する傾向が認められ,サイレージ発酵の基質として細胞壁成分が利用されていることが示唆された.ルーメン内における細胞壁成分の消化速度はマメ科牧草サイレージが大きな値を示したが,酵素を添加するとその値は有意に低下した.この酵素添加にともなう消化速度の低下はイネ科牧草サイレージでは認められず,細胞壁成分の潜在的な消化・分解性はイネ料牧草とマメ科牧草では大きく異なることが示された.暖地型牧草サイレージでは,貯蔵中にその一部が分解されたにも係わらず消化速度が低下しなかったことから,乾草よりもサイレージ化する方が飼料全体の利用性を高めるうえで有利と考えられた.
極長鎖脂肪酸産生の分子メカニズムと病態，生理機能の解明

炭素数20を超える脂肪酸である極長鎖脂肪酸の細胞内量は長鎖脂肪酸(C11-C20)よりも少ないものの,長鎖脂肪酸では代替できない特長的な生理機能を有し,様々な疾患と関連する。本研究課題において我々はノックアウトマウスや培養細胞を用いた生理学的・細胞生物学的な解析,精製した極長鎖脂肪酸合成酵素を用いた生化学的な解析,酵母を用いた遺伝学的な解析により,極長鎖脂肪酸の皮膚バリアにおける役割,病態との関連(副腎白質ジストロフィー,ミオパチー,精神遅滞),セラミド合成酵素による調節機構,エンドソームを介した小胞輸送での働きを明らかにした。1.in vitroでの極長鎖脂肪酸脱水酵素測定に向けて,極長鎖脂肪酸縮合酵素ELOVL7を用いてプロテオリポソーム再構成系の確立を目指した。HEK 293T細胞中で過剰発現させたELOVL7をTriton Xで可溶化後,精製し,ホスファチジルコリンからなるリポソームへ再構成することで,可溶化状態では測定できなかった活性を測定することに成功した。さらにこの系を用いてアシルCoA基質に対するKm,Vmaxを算出した。2.Elovl1ノックアウトマウスを作成した,生後間もなく死亡するという表現型を明らかにした。このマウスでは皮膚のバリア機能が低下しており,体内からの過度の水分蒸散が死亡の原因であった。Hacd1ノックアウトマウスに関しては最近ホモノックアウトマウスが得られたので,今後解析していく。3.極長鎖脂肪酸産生が低下した酵母は高温において生育ができない。このことを利用して生育をレスキューするマルチコピーサプレッサーの単離を試み,VPS21遺伝子を同定した。Vps21はRab GTPaseであり,後期エンドソーム/マルチベシキュラーボディ(MVB)を介した小胞輸送において機能する。極長鎖脂肪酸伸長を行なう脂肪酸縮合酵素SUR4遺伝子はVPS21遺伝子を含むいくつかのVPS遺伝子と遺伝学的な相互作用を示した。我々はこれらの解析を通じて,極長鎖脂肪酸が後期エンドソーム/MVBを介した小胞輸送で働くことを明らかにした。極長鎖脂肪酸は長い脂肪酸鎖長により脂質二重層の両層にまたがっており,小胞輸送過程に形成される極率の高い膜構造を安定化する役割があると考えられる。炭素数20を超える極長鎖脂肪酸は固有の生理機能を持ち,様々な病態と関連している。我々はこれまで極長鎖脂肪酸伸長サイクルの1段階目を触媒する脂肪酸縮合酵素Elovl1のノックアウトマウスを作成し,炭素数26以上の極長鎖セラミドの減少を伴った皮膚バリア機能不全を示すことを明らかにしてきた。我々は本年度,Elovl1がセラミド合成酵素CerS3と協調して働く時のみ炭素数26脂肪酸を産生するという極長鎖脂肪酸産生の新たな制御機構を見いだした。また,我々は皮膚だけにElovl1が発現するトランスジェニックマウスとElovl1ノックアウトマウスを交配させ,皮膚バリア機能をレスキューしたマウスを作成することに成功した。このマウスに関しては現在解析中である。さらに,極長鎖脂肪酸が蓄積することで発症する副腎白質ジストロフィーに効果があるとされるロレンツォオイルがELOVL1を阻害することを明らかにした。極長鎖脂肪酸伸長サイクルの3段階目を触媒するHacd1の基質特異性については不明であったが,Hacd1ノックアウトマウスの筋肉の脂質組成の分析の結果,多価不飽和脂肪酸含有脂質の量が減少していることを明らかにした。このことからHacd1が多価不飽和3-ヒドロキシアシルCoAを基質とすることが示唆された。極長鎖脂肪酸伸長サイクルの4段階目を触媒するTERの182番目のプロリンをロイシンに置換する変異(P182L変異)が,近年非症候性精神遅滞を引き起こすことが報告された。我々は,この変異がタンパク質の安定性と活性を低下させ,極長鎖脂肪酸伸長サイクルの3段階目と4段階目に影響を与え,炭素数24の極長鎖スフィンゴ脂質の細胞内量を低下させることを示した。これらの結果から,P182L変異による精神遅滞発症の分子機構と極長鎖脂肪酸伸長サイクルにおける新たな調節機構が示唆された。極長鎖脂肪酸とは炭素数が20よりも大きい脂肪酸のことを指し,生体に多く存在する長鎖脂肪酸では代替できない固有の役割を持つ。極長鎖脂肪酸は4つのステップを1サイクルとする伸長反応を経て,脂肪酸が炭素数2ずつ増加することで産生される。本課題では1段階目の反応を触媒する縮合酵素ELOVL1と3段階目の反応を触媒するHACD1-4の解析を行なった。ELOVL1のノックアウトマウスは出生後,皮膚バリア機能の異常によりすぐに死亡した。このマウスの角質層の脂質ラメラ形成及び顆粒層の層板顆粒の形成は著しく損なわれていた。

質量分析器を用いた脂質解析により,皮膚バリアに重要なセラミドの量がノックアウトマウスでは野生型マウスの約半分にまで低下しており,特に炭素数26以上のセラミドが著しく減少していることを明らかにした。これらのことからELOVL1が炭素数26以上の脂肪酸伸長において重要な役割を果たすことが明らかとなった。脱水酵素HACD1-4の基質特異性の違いについてはこれまで不明であったが,我々はHACD1とHACD2が長鎖から極長鎖飽和脂肪酸に高い活性を示すのに対して,HACD3とHACD4は長鎖飽和脂肪酸に弱い活性を示すものの,極長鎖脂肪酸にはほとんど活性を示さないことを明らかにした。また,HACD1ノックアウトマウスを作成し,筋肉の発達異常,筋力低下,筋繊維の萎縮が見られることを明らかにした。一方で,筋肉における脂質組成に関しては今のところ,野生型とノックアウトマウスで顕著な違いは見られておらず,さらなる解析が必要である。さらにヒトにおいてミオパチー症状を示すHACD1変異遺伝子の遺伝子産物に対する酵素学的な解析を行なった。この変異タンパク質では最後の膜貫通領域が欠けており,活性を持たないことを明らかにした。また,野生型タンパク質では見られない糖鎖修飾を受けていることも見いだした。1に関しては,プロテオリポソームへの再構成系の条件検討に時間がかかり,第一段階を触媒する縮合酵素の活性測定に留まっている。2に関しては順調にノックアウトマウスの作成が終了した。3に関しては当初の予定よりも進行し,既に論文に投稿するまでに至った。25年度が最終年度であるため、記入しない。交付申請書に記載の項目については研究実績の概要に示した通り,殆ど全て達成することができた。ただし,ELOVL1の皮膚特異的発現を可能としたトランスジェニックマウスに関しては,受精卵への遺伝子のインジェクションを3回行ったが,最初の2回のインジェクションでは得られなかった。現在,3回目のインジェクションによりマウスが得られているので,ELOVL1の皮膚での発現を確認するところである。極長鎖脂肪酸伸長サイクルの2段階目を触媒するKAR,3段階目を触媒するHACD1-4についても精製し,今回確立したプロテオリポソームの系を用いて活性測定を行なう。HACD1-4については基質特異性が不明なので,明らかにしていく。Elovl1のノックアウトマウスの皮膚バリア機能の損失に関しては,組織染色,脂質組成解析を行ない,その原因を探る。また,皮膚以外でのElovl1ノックアウトの影響についても解析し,明らかにしていく。概ね順調に進展しており,研究実施計画通りに推進していく予定である。研究の変更点や問題となっている点はない。皮膚特異的ELOVL1発現トランスジェニックマウスが得られれば,ELOVL1ノックアウトマウスと掛け合わせることにより,皮膚バリア異常のみをレスキューしたELOVL1ノックアウトマウスが完成する。このマウスの様々な組織を調べることにより,極長鎖脂肪酸の皮膚以外の役割についても明らかにする。HACD1ノックアウトマウスから筋芽細胞を調製し,分化前での脂質組成にHACD
思春期の子どもの性に関する発達課題や諸問題に対応できる子育て支援システムの構築

思春期の性に関する子育て支援システムの構築に向け、母親が求める支援、養護教諭・教諭や助産師・医師の親への支援に対する考えを明らかにした。母親は男子の心理や子どもを取り巻く性の現状、子どもへの教え方を知りたいと思っていた。養護教諭らは、子どもを通して親を支援するという考えで、授業参観などを活用していた。しかし、専門家との連携不足が支援を困難にしていた。助産師らは、親子の信頼関係を築き、思春期に子どもと向き合うための準備ができるような支援が必要であると考え、学校と連携しようとしていた。以上の成果から、子育て支援システムとして、養護教諭と助産師の2職種間連携を主軸とした支援モデルが考えられた。そして、子育て支援プログラムとして、中学生の母親を対象とした座談会を実施して評価した。座談会は高評であり、参加した母親は子育てを見直す機会になり、専門的知識や情報を得て、これからの子育てに役立つと考えていた。思春期の性に関する子育て支援システムの構築に向けた支援モデルの構成要素の内、親が求めている支援を明らかにすることを目的に、アンケート調査並びに座談会形式のグループインタビューを実施した。アンケート調査は、母親が子どもに行う性教育として最も多い月経教育に着目し、高校生の母親1000名を対象とした。結果、分析対象220名中28.6%が困難感を感じており、その理由としては「学校でどこまで教えているかわからない」や「知識に自信がない」が多かった。また、母親は自分の知識や経験だけでは答えられないことに困難感をもち、「月経時の鎮痛薬服用について」専門家の話を聴きたいと思っていた。グループインタビューは、小中高校生の子どもをもつ母親を対象に、60分程度の座談会形式で、思春期の性に関する子育てで困っていること、悩んでいること、希望する子育て支援の内容や時期などについての話し合いを、56名の構成人数で2グループ実施した。結果、母親自身が性に関する知識不足であり、子どもを取り巻く性の現状(性感染症やケータイ電話を通じた性犯罪についてなど)を把握していなかった。性に関する話を子どもにすることに抵抗感をもつ親もおり、性教育の実施状況には家庭差があり、良く話題にしている家庭とほとんど話さない家庭があった。専門家の話は聴きたいと思うが、子どもが中高生くらいになると仕事を再開する親が増えることなどから、講演会は子どもが小学生の頃が一番聴きやすいことがわかった。また、少人数の座談会形式なら中高校生の子どもをもつ母親も集まりやすく、皆で話し合いながら知識を深め、情報交換することに興味を持っていた。以上より、具体的な支援システムの構築に向けて、親が求めている支援や支援の時期、方法などを検討する上での重要な結果が得られた。思春期の性に関する子育て支援システムの構築に向けた支援モデルの構成要素の内、親が求めている支援を明らかにする目的で昨年実施したグループインタビューを追加し3グループで再分析した。結果、母親は子どもの現状、具体的な性に関する知識、親としての対応の仕方について知りたいと思っていた。ママ友達や先輩ママに相談する一方で、専門的な知識を持っている人に相談できるとよい、思春期の子育て相談があるとよいと思っていた。また、母親同士の情報交換の場があればよいと思っており、少人数での情報交換を希望し、得た情報は友達や家族に話したいと思っていた。以上の結果を基にアンケート調査を実施し、思春期の子どもの母親220名を分析した結果、母親が知りたい思春期の子どもに関する知識では「男子の心理」が最も多く62.3%、次いで「子どもを取り巻く性の現状(具体的な事例)」61.8%であった。性に関する知識では「出会い系サイトなど有害サイト」40.9%、「子宮頸がん(予防ワクチンなど)」38.2%、「エイズ以外の性感染症」33.6%の順であった。希望するサポートでは「学校で行っている性教育の内容を教えてほしい」71.4%、「子どもへの教え方」81.4%、「困ったときに相談できる電話相談」70.5%の順であった。助産師に期待するサポートは「子どもに性教育を行ってほしい」62.3%、「子ども向けの性教育の教材を作ってほしい」38.2%、「保護者にアドバイスしてほしい」35.9%であった。座談会に参加したいと思うものは32.7%であった。また、学校関係者や医療関係者の支援に対する考えを明らかにする目的で、性教育に関わっている養護教諭4名、教諭1名、助産師6名、医師1名に60分程度のインタビューを実施し分析中である。