hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
リアルタイム感性評価システムの活用による中学校における情報モラル指導方法の研究

1研究目的中学校における情報モラルを高めるための学習に感性評価システム(以下:「ERICA」)を活用し、その可能性を探る。2研究方法実験参加者:田川中学校3年生(28名)刺激材料:情報モラルに関連した動画実験参加者(以下、生徒)は、ERICAを使用して情報モラルの学習をする。学習の流れ情報モラルアンケート1→動画を使用した情報モラルの学習(誹謗中傷)→情報モラルアンケート2→ERICAを使用した情報モラルの学習(ネット詐欺)→情報モラルアンケート3情報モラルアンケート1→ERICAを使用した情報モラルの学習(誹謗中傷)→情報モラルアンケート2→動画を使用した情報モラルの学習(ネット詐欺)→情報モラルアンケート33研究成果情報モラルアンケートから、ERICAを使用した学習の方が動画を使用した情報モラルの学習よりも情報モラルが高まったことが確認できる。情報モラルアンケート2の誹謗中傷に関する項目の結果平均は、A群が3.69、B群が3.42で.あり、情報モラルアンケート3のネット詐欺に関する項目の結果平均は、A群が3.83、B群が3.87であった。どちらの項目に関しても、ERICAを使用した情報モラルの学習の方が、高い数値を示している。
内耳におけるグルタミン酸代謝の解明と遺伝性難聴に関する研究

内耳(聴覚系・末梢前庭系)には様々な神経伝達物質が分布しており、聴覚・平衡覚の維持に重要な働きをしていると考えられている。特に求心系ではグルタミン酸が主たる神経伝達物質と考えられており、内耳においても感覚細胞と支持細胞間に中枢と類似した「グルタミン酸-グルタミンサイクル」が存在している可能性が推測されている。しかし、内耳に関しては、グルタミントランスポーターに関しては現在までに報告がなく、グルタミン酸-グルタミンサイクルの全容は未だ解明されていない。本研究では、グルタミントランスポーターであるSAT1、SAT2グルタミントランスポーターの局在について詳細に検討を行った。その結果、内耳においても中枢と同様のメカニズムが機能していることを明らかにした。特に求心系ではグルタミン酸が主たる神経伝達物質と考えられており、当教室からの報告も含め過去に多く報告されている。中枢神経系においては、グルタミン酸作動性神経の神経終末と周囲のグリア細胞の間で効率的にグルタミン酸代謝を行うための「グルタミン酸-グルタミンサイクル」が存在していることがよく知られており、内耳においても感覚細胞と支持細胞間に中枢と類似した「グルタミン酸-グルタミンサイクル」が存在している可能性が推測されている。内耳に関しては、グルタミン、グルタミン酸の存在、グルタミン酸トランスポーター、グルタミン酸レセプター、各種酵素などの存在は報告されているが、グルタミントランスポーターに関しては現在までに報告がなく、グルタミン酸-グルタミンサイクルの全容は未だ解明されていない。平成22年度は、グルタミントランスポーターであるSAT1、SAT2に特異的な抗体およびプライマーを用いてラット内耳におけるグルタミントランスポーターの局在について検討を行った。またSAT1,SAT2の内耳内の存在について、それぞれに特異的なプライマーを用いてreal-time PCRを行った。その結果では蝸牛、前庭それぞれにおいてSAT1、SAT2の存在が確認することができた。またSAT1、SAT2に特異的な抗体およびラット内耳切片を用いて行った免疫染色では、SAT1、SAT2共に蝸牛では内有毛細胞に認められ、前庭では感覚細胞層に認められた。これらの所見からは、内耳においても感覚細胞においてSAT1、SAT2にて支持細胞から放出されると考えられるグルタミンの取り込み、また神経伝達物質としてグルタミン酸を放出していることが推測することができた。平成23年度は、グルタミントランスポーターであるSAT1、SAT2グルタミントランスポーターの局在について継続して検討を行った。免疫染色では、SAT1、SAT2共に蝸牛では内有毛細胞に、前庭では感覚細胞層に認められたことより、内耳においても神経伝達物質としてグルタミン酸を放出しており、感覚細胞においてSAT1、SAT2にて支持細胞から放出されるグルタミンの取り込みメカニズムが脳のグリア細胞と同様に存在することが推測することができた。またリアルタイムPCRを用いて、内耳におけるVGULT3、SINSの発現を確認した。得られた成果を取りまとめて論文として投稿を行った。特に求心系ではグルタミン酸が主たる神経伝達物質と考えられている。

中枢神経系においては、グルタミン酸作動性神経の神経終末と周囲のグリア細胞の間で効率的にグルタミン酸代謝を行うための「グルタミン酸ーグルタミンサイクル」が存在していることがよく知られており、内耳においても感覚細胞と支持細胞間に中枢と類似した「グルタミン酸ーグルタミンサイクル」が存在している可能性が推測されている。内耳に関しては、グルタミン、グルタミン酸の存在、グルタミン酸トランスポーター、グルタミン酸レセプター、各種酵素などの存在は報告されているが、グルタミントランスポーターに関しては現在までに報告がなく、グルタミン酸ーグルタミンサイクルの全容は未だ解明されていない状況であった。本研究では、グルタミントランスポーターであるSAT1、SAT2グルタミントランスポーターの存在およびその局在について組織免疫染色法および金コロイド付加抗体を用いた電子顕微鏡観察により検討を行った。その結果、SAT1、SAT2共に蝸牛では内有毛細胞に、前庭では感覚細胞層に認められることが明らかとなり、内耳においても神経伝達物質としてグルタミン酸を放出し、SAT1、SAT2にて支持細胞からグルタミンの取り込みメカニズムが存在することを明らかにした。またリアルタイムPCRを用いて、内耳におけるVGULT3、SINSの発現を確認した。このように、内耳および前庭においても、中枢と同様に効率的にグルタミン酸代謝を行うための「グルタミン酸ーグルタミンサイクル」が存在することを明らかにした。当該タンパクの局在を免疫染色で確認するとともに、リアルタイムPCRを用いる事で内耳における発現を確認することが出来ており、内耳でも中枢と同様にグルタミン・グルタミン酸サイクルが機能している事を明らかに出来た。24年度が最終年度であるため、記入しない。前年までに発現が確認された各遺伝子に関してその詳細な局在を免疫電顕で確認するとともに、遺伝性難聴の原因となっている可能性に関して検討を行う。
ランダム変異を用いたリゾチームのフォルディング情報の解析

蛋白質のフォルディングの情報を解読する目的で以下の実験を行った。(1)巻き戻り現象を明確に把握するために、巻き戻しの基本的方法論を確立した。(2)ランダム変異体を能率良く確実に選び出すために、ストレプトマイシン依存性の菌を用いて100%リゾチーム遺伝子が入った大腸菌のみをポジディイブ選択できる系を確立した。(3)リゾチームをいくつかの領域に分けて平均1個の変異が入るようなランダムオリゴヌクレオチドを張り付けてランダム変異体を作製する。酵母の分泌系でリゾチームを分泌しないもをまずは選び出す。第一選択はリゾチーム活性による溶菌斑を示さないものを選ぶ。次いで少量培養後、ELISAでリゾチームが全く分泌されないものに絞り込む。この段階でDNA配列を解析する。さらにこのリゾチーム遺伝子を大腸菌の発現系に移して発現させ、巻き戻り効率を検討する。以上の解析系を確立した。(4)リゾチームの約1/3の領域について5000個以上の変異体の選択を完了した。現在のところ目的の変異体としては、2個以上の変異が入ったものしか捕まっていない。単一変換体に戻して、これら1個ずつの変換の重要性を検討している。一方、巻き戻りに関して決定的と思われる変換を意図的に施して解析することにより、情報を増やす研究も強力に押し進めている。
肺腺癌に対する免疫チェックポイント阻害薬の治療効果予測バイオマーカーの探索研究

[目的]昨年度、肺腺癌で行ったCap Analysis of Gene Expression(CAGE)法による免疫関連分子の包括的遺伝子発現解析を非小細胞肺癌全体にひろげて行い、腫瘍組織局所免疫状態と予後との相関について組織型による相違点を明らかにする。[結論]肺腺癌と肺扁平上皮癌では、生物学的悪性度に関与する腫瘍免疫関連分子が異なり、腫瘍組織局所免疫状態が予後に与える影響も異なっていた。本課題の目的は、喫煙歴、ドライバー遺伝子変異の有無、PD-1やPD-L1の発現、Microsatellite instability (MSI)など、過去の報告から想定される免疫チェックポイント阻害薬の治療効果予測因子について包括的に解析を行って、相互の関連を明らかにするとともに、肺腺癌における免疫チェックポイント阻害薬の至適治療選択規準を確立することである。本年度は、MSIについて肺腺癌切除例341例を対象に解析を行った。341例にはドライバー遺伝子異常陽性例141例(EGFR 50例、KRAS 50例、ALK 21例、ROS1 10例、RET 10例)とドライバー遺伝子異常陰性例200例(重喫煙者100例、非喫煙・軽喫煙者100例)が含まれている。過去の報告では肺癌におけるMSIの頻度については、研究ごとに異なるMicrosatellite markerが用いられていたため、これまで一定の見解が得られていなかった。そこで、本研究ではLynch症候群の日常診断に用いられているPromega panelを用いてMSIの解析を行った。MSIは341例中1例(0.3%)のみに認められた。同症例は64歳、男性の重喫煙者で、腫瘍にはドライバー遺伝子変異が認められず、WESでMLH1の点突然変異が検出された。smoking (C>A)とDNA MMR deficiency (C>T)のmutationsignatureの変異数が多かった。免疫染色では腫瘍細胞は、MLH1、PD-L1ともに陰性であった。MSIは肺腺癌においては希な異常であり、免疫チェックポイント阻害薬のバイオマーカーとしての有用性は低いことが明らかになった。当初の計画通り順調に経過し、本年度の成果については国内外の学会で発表し、英文雑誌に投稿した(Lung Cancer, in revise)。[目的]肺腺癌における免疫関連分子の包括的遺伝子発現解析を行い、腫瘍組織局所免疫状態について明らかにする。さらに免疫関連分子の発現と臨床病理学的因子、ドライバー遺伝子変異の有無、予後との相関を明らかにする。本年度は、当初の計画通り、CAGE法を用いて、肺腺癌における免疫関連分子の包括的遺伝子発現解析を遂行でき、一定の成果が得られた。さらに症例を増やし腺癌1000例、扁平上皮癌300例を対象に、以下の解析を行う予定である。(1)ドライバー遺伝子異常を有する非小細胞肺癌における下流分子の発現とPD-L1の発現との相関。CAGE法は遺伝子の転写開始点をゲノムワイドに同定しその活性を定量できる。この手法を用いて、ドライバー遺伝子の下流分子とPD-L1のRNAレベルでの発現を解析し、これらの相関について検討する。(2)腫瘍組織局所免疫状態の評価。上記と同じ症例の腫瘍切除標本のホルマリン固定標本から作成した組織マイクロアレイを用いて、リンパ球表面マーカ(CD4、CD8、CD25等)やリンパ球転写因子(FoxP3、Gata3、Tbet、RORgt),チェックポイント関連蛋白(CTLA-4、PD-1、PD-L1等)、マクロファージマーカー(CD68、CD204等)、さらには癌細胞の形質発現(MLH1、MSH2、HLA class I等)について免疫染色を行って、腫瘍組織局所免疫状態を評価する。(1)肺扁平上皮癌における免疫関連分子の包括的遺伝子発現解析本年度と同様の解析を肺扁平上皮癌に対して行い、腫瘍組織局所免疫状態について明らかにし、肺腺癌との対比を行う。(2)多重免疫染色による腫瘍組織局所免疫状態の評価組織マイクロアレイ(肺癌切除例1000例)を用いて、リンパ球表面マーカー(CD4, CD8, CD25等)やリンパ球転写因子(FoxP3, Gata3, Tbet, RORgt),チェックポイント関連蛋白(CTLA-4、PD-1、PD-L1等)、マクロファージマーカー(CD68、CD204等)、癌細胞の形質発現(MLH1、MSH2、HLA class I等)について多重免疫染色を行って、タンパクレベルでの腫瘍組織局所免疫状態を評価する。試薬などの実験経費が抑えられたたため。
フラーレン生成に及ぼす温度場の影響

フラーレンの生成機構に関しては未知の部分が多く,より効率の良い合成方法,金属元素を内包するフラーレンや大きなフラーレンの合成は手探りで試みられているのが現状である.代表的なフラーレン大量生成法であるアーク放電法での生成率は緩衝ガラスの圧力,流量,炭素電極の送り速度などの種々のパラメーターに強く依存することが分かってきているものの,これらの依存性に関して物理的解釈は得られていない.そこで,フラーレンの生成を支配する主要因がアーク放電雰囲気の温度分布であると考え,装置内部の温度場を測定することによってフラーレンの生成が温度場にどのように影響されるかを実験的に検討した.既存のフラーレン生成実験装置を改造し,容器内にタングステン・レニウム熱電対を5点配置して,フラーレン生成時の空間的な温度分布を計測した.また,生成を行った後で,容器内のススとフラーレンの混合物を採取し,これをトルエンに溶かしススをフィルターで取り除いたうえで,高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)によってフラーレンの成分を分離し,C_<60>の生成割合とより大きなフラーレン(C_<70>やC_<76>)の生成割合を測定した.ヘリウムガスの圧力を変えて温度分布を比較すると,ちょうどフラーレン生成率がピークを持つ圧力以上の圧力ではかなり自然対流の影響を強く受けた温度分布となることが分かった.また,アーク放電部分より上方4cm程度の位置での平均温度とフラーレンの生成率が強い相関を示すことが明らかとなった.このことから,フラーレンの生成はアーク放電部分に加えてその外側のおよそ600°C程度までの冷却のプロセスによって強く影響されることが示唆された.フラーレンの生成機構に関しては未知の部分が多く,より効率の良い合成方法,金属元素を内包するフラーレンや大きなフラーレンの合成は手探りで試みられているのが現状である.代表的なフラーレン大量生成法であるアーク放電法での生成率は緩衝ガラスの圧力,流量,炭素電極の送り速度などの種々のパラメーターに強く依存することが分かってきているものの,これらの依存性に関して物理的解釈は得られていない.そこで,フラーレンの生成を支配する主要因がアーク放電雰囲気の温度分布であると考え,装置内部の温度場を測定することによってフラーレンの生成が温度場にどのように影響されるかを実験的に検討した.既存のフラーレン生成実験装置を改造し,容器内にタングステン・レニウム熱電対を5点配置して,フラーレン生成時の空間的な温度分布を計測した.また,生成を行った後で,容器内のススとフラーレンの混合物を採取し,これをトルエンに溶かしススをフィルターで取り除いたうえで,高性能液体クロマトグラフィー(HPLC)によってフラーレンの成分を分離し,C_<60>の生成割合とより大きなフラーレン(C_<70>やC_<76>)の生成割合を測定した.ヘリウムガスの圧力を変えて温度分布を比較すると,ちょうどフラーレン生成率がピークを持つ圧力以上の圧力ではかなり自然対流の影響を強く受けた温度分布となることが分かった.また,アーク放電部分より上方4cm程度の位置での平均温度とフラーレンの生成率が強い相関を示すことが明らかとなった.このことから,フラーレンの生成はアーク放電部分に加えてその外側のおよそ600°C程度までの冷却のプロセスによって強く影響されることが示唆された.
筋の力発生に不可欠な分子運動と構造変化

力発生は筋収縮蛋白の構造変化や分子運動の結果として生じるので、蛋白の構造変化に由来するいろいろなX線反射の強度変化は必ず力発生に先行する。このX線強度変化と力発生の時間的“ずれ"は筋肉内で収縮開始の構造変化が生じてから実際にactinとmyosin分子が結合して力発生するまでに必要な分子の構造変化や運動の時間と考えられる。この構造変化や時間の具体的な内容について研究した。適当な温度と刺激間隔を選んで、最初の刺激によって発生した張力がまだ残っている状態で次の収縮が起きるように筋を連続収縮させると、2回目またはそれ以降の刺激で発生する張力が加重現象によって1回目よりも大きくなる。また、2回目以降の収縮では刺激から発生張力のピークに達するまでの時間が短くなる。これらの筋の力学的な性質を利用して、筋がその構造変化から力発生までの時間が最短となるようにし、筋収縮のelementary stepについて以下のような結論に達した。actinfilamentに収縮開始の構造変化が生じてから実際にactinとmyosin分子が結合して力発生するまでの分子の構造変化や運動の時間のなかで、myosin分子のS2部分の伸び縮み、myosin分子のactinfilament側への移動、sarcomere内に含まれる直列弾性要素の伸び縮み、sarcomere以外に含まれる直列弾性要素の伸び縮み等に要する時間は筋収縮のelementary stepと考えなくてもよい。しかしながら、actinおよびmyosin filamentの構造変化、myosin分子内での一連の化学反応等については具体的にどのような構造変化が起こっているのかについては多くの不明な部分が残った。このX線強度変化と力発生の時間的"ずれ"はCaイオンがトロポニンに結合し、アクチンフィラメントに収縮開始の構造変化が生じてから実際にアクチンとミオシン分子が結合して力発生するまで分子の構造変化や運動の時間と考えられる。適当な温度(13°C)と刺激間隔(80msec)を選ぶことによって、最初の刺激によって発生した張力がまだ残っている状態で次の収縮が起きるように筋を収縮させる(連続刺激)。その結果、a)2回目の刺激で発生する張力は加重現象によって1回目よりも大きい。b)2回目の収縮では刺激から発生張力のピークに達するまでの時間が短くなる。これらa)およびb)の現象は最初の刺激によって生じた構造変化や運動がまだ残っている状態で次の収縮へと移行したためと考えられる。この連続刺激をさらに繰り返すと、a)およびb)の現象は増強されるが、やがて3回目ぐらいで飽和する。したがって、適当な刺激間隔で3回連続刺激をすると筋はその構造変化から力発生までの時間が最短となるようになり、この時間が省略のできない筋収縮のelementary stepと考えられる。これらの力学およびX線のデータから(1)アクチンおよびミオシンフィラメントの構造変化、(2)ミオシン分子内での一連の化学反応、(3)ミオシン分子のS2部分の伸び縮み、(4)ミオシン分子のアクチンフィラメント側への移動、(5)サルコメア内外に含まれる直列弾性要素の伸び縮みなどに要する時間について検討した。このX線強度変化と力発生の時間的"ずれ"は筋肉内で収縮開始の構造変化が生じてから実際にactinとmyosin分子が結合して力発生するまでに必要な分子の構造変化や運動の時間と考えられる。

また、2回目以降の収縮では刺激から発生張力のピークに達するまでの時間が短くなる。これらの筋の力学的な性質を利用して、筋がその構造変化から力発生までの時間が最短となるようにし、筋収縮のelementary stepについて以下のような結論に達した。actinfilamentに収縮開始の構造変化が生じてから実際にactinとmyosin分子が結合して力発生するまで分子の構造変化や運動の時間のなかで、myosinのS2部分の伸び縮み、myosin分子のactinfilament側への移動、sarcomere内に含まれる直列弾性要素の伸び縮み、sarcomere以外に含まれる直列弾性要素の伸び縮み等に要する時間は筋収縮のelementary stepと考えなくてもよい。しかしながら、actinおよびmyosin filamentの構造変化、myosin分子内での一連の化学反応等については具体的にどのような構造変化が起こっているのかについては多くの不明な部分が残った。
担子菌による家畜排泄物の食飼料資源としての再生利用に関する基礎的研究

肉牛生産の過程で得られる使用済み木質敷料、ツクリタケ生産用の小麦わら、化学肥料からなる合成堆肥、馬きゅう肥におけるツクリタケ栽培を実施し、子実体の生産性、培地の利用性(分解率)などを調査した。栽培期間、約1ヶ月では、木質肉牛敷料では最大15%、合成堆肥では63%、馬きゅう肥では50%の培地が分解された。いっぽう子実体の発生量は、馬きゅう肥では低いものとなったが、合成堆肥、木質肉牛敷料では、高く、差がみられなった。これらのことから、肉牛木質敷料では合成堆肥などに比較し、より持続した生産が行える可能性があり、畜産環境の浄化と、資源の再生利用に貢献できるものと考えられる。具体的な資源としての評価、すなわち、飼料、食料としての学容価、分解の特性については調査中である。1.使用ずみ家畜敷料の好気醗酵処理のモニタリング肉牛飼育から得られた木材を含む使用ずみ敷料を、1m×1m×1mの実験用木枠に堆積し、好気醗酵させた。発熱の終了までの気温および堆積物中の3箇所の温度分布を連続的にデータロガー付温度計で記録し、収集したデータをパソコンにより集積記録した上、解析した。通常のツクリタケ栽培において使用するイナワラを主体とする合成堆肥と比較すると、肉眼的に観察される菌類種は少なく、体積、状態など外観的な変化が明瞭でなかった。したがって、外気の影響を受けにくい中心温度の測定により切り返しの時期を迅速に把握し、効率的な醗酵処理を行うこと、さらに担子菌の接種に必要な醗酵の段階を簡易に把持することは、非常に有効であると考えられた。2.担子菌の増殖適正試験ツクリタケ(Agaricus bisporus)を含む腐生的な担子菌を、醗酵処理使用ずみ敷料に接種し、殺菌条件と無殺菌条件(醗酵)での増殖能を調査した。ツクリタケの増殖は良好であり、肉牛飼育から得られた木材を含む使用ずみ敷料が、通常のツクリタケ栽培において使用するイナワラを主体とする合成堆肥にかわりうる、有望な培地となることが考えられた。また、コムラサキシメジ(Lepista sordida)など土壌中の有機物の分解に関わっている担子菌の数種は、殺菌条件だけでなく無殺菌条件でも良好な増殖を示し、これらの菌類の栽培培地としても広く利用可能なことが示された。ただし、増殖状態には、反復実験間で差が見られ、接種時の醗酵状態において、さらに微細な要因が存在していると考えられ、さらに検討が必要である。1.木質敷料における担子菌の大量増殖試験切り返しによる自然発酵,さらに補助熱による二次発酵により発酵熱を放出させ温度変化,pH変化をパラメータとしてその安定した段階を把握することにより,再現性のある担子菌処理素材としての発酵発酵木質敷料を調製した.初年度のスクリーニーングの結果,発酵木質敷料において増殖が可能と判断された菌種のうちツクリタケの大量増殖試験を行った.対照として稲わらと化学肥料からなる合成堆肥を実験用木製栽培箱に積めたものを用意した.発酵木質敷料は実験用木製栽培箱あるいは床面積の等しいポリエチレン製の容器の2種の容器に同量詰めた.これらはそれぞれ15箱用意し,市販のツクリタケ(Agaricus bisporus)穀粒種菌を接種した.発酵木質敷料における初期増殖は,伸長速度,菌そうの厚さなどにおいて合成堆肥における増殖に劣るものであったが,時間の経過とともにその差は小さくなり,子実体形成においては,良好な栽培成績を示した.また,初期増殖はポリエチレン製の容器が優れていた.木質敷料における大量増殖には,基本的にツクリタケ栽培の方法の適用が可能であるが,その物性の特殊性にもとずく,予想されなかった様々な要因が含まれており,木質敷料における最適の培養条件をさらに詳細に明らかにする必要がある.2.担子菌による木質敷料の分解,栄養学的変化初年度のスクリーニングと同様に生態的地位の異なる30種の担子菌を殺菌,無殺菌条件で発酵木質敷料に接種し,木質敷料の分解を調査した.また使用した木質敷料は針葉樹であったので,広葉樹木質片をumekomukoto殺菌条件ではトキイロヒラタケ(Pleurotus salmoneostramineus)など木材腐朽菌の中に高い分解率を示すものが多く,コムラサキシメジ(Lepista sordida),ツクリタケ(Agaricus bisporus),ササクレヒトヨタケ(Coprinus comatus)など土壌生の担子菌の分解率は高いものでなかった.しかし,これらの土壌生の担子菌は無殺菌の木質敷料においても増殖を示したことから,木質敷料への強い基質(栄養的)依存性を示すことは明らかであった.その意義を明らかにするため構造性炭水化物の分解および窒素の資化の特性について化学分析により調査中である.肉牛生産の過程で得られる使用済み木質敷料、ツクリタケ生産用の小麦わら、化学肥料からなる合成堆肥、馬きゅう肥におけるツクリタケ栽培を実施し、子実体の生産性、培地の利用性(分解率)などを調査した。

これらのことから、肉牛木質敷料では合成堆肥などに比較し、より持続した生産が行える可能性があり、畜産環境の浄化と、資源の再生利用に貢献できるものと考えられる。具体的な資源としての評価、すなわち、飼料、食料としての学容価、分解の特性については調査中である。
江戸時代における通俗仏教書出版の書誌学的研究

本研究の研究対象は、江戸時代に刊行された通俗的な仏教書である。研究の目的は、それらの資料が、いつ頃・誰(版元)が発行したのかを調査することである。通俗仏書は、江戸時代の小説一般、怪異小説の形成に深い関連性を有し、仏教書の研究は、江戸時代の文学研究を進める上で、必要不可欠な研究活動である。上記の目的を達成するために、以下の研究活動を行った。1.多数の仏教書を所蔵する図書館の図書目録から、必要とする資料を抽出して、研究用の目録台帳を作成した。パソコンを使用して、所蔵者・資料名など、さまざまな基準でデータの並べ替えをできるようにした。2.1.で作成した目録台帳に従って、書誌学的な資料調査を行った。3.文献資料の調査において採取したデータカードを、パソコンに入力して、整理を行った。4.調査が進展するにつれて、庶民的な仏教書は、僧侶を対象として発行された専門的な学術書と深く連携することが明らかになり、仏教の学術書の調査も行った。5.こうした活動によって得られたデータを出版年表の形式へ整理を行った。6.ただし、江戸時代の初期の出版物は、学術的に貴重な資料であると判断されたので、個別のデータを丁寧に整理することに心がけた。近世期に刊行された通俗仏教書の刊行年表を作成し、刊行書肆ごとに分類整理することを目的とする。そのため、研究者の利用可能な、大学付属図書館・特殊文庫等の冊子体目録から通俗仏教書を抜き出し、パソコンに入力して、データの整理を行い、随時原本の書誌調査を行っている。今年度リストアップおよびデータ整理を行ったのは、下記の通りである。1.佛教大学付属図書館(「浄土宗学関係書目録稿」)2.龍国大学付属大宮図書館(「龍国大学和漢書分類目録真宗之部」)(「龍国大学和漢書分類目録仏教之部」)3.東洋大学付属図書館哲学堂文庫(「新編哲学堂文庫目録」)4.京都大学付属図書館日蔵本(図書館のカードボックスを転記)5.そのほか(「仏教解説大辞典」)本研究は、近世期に刊行された通俗仏教書の刊行年表を作成し、書肆名(出版業者名)ごとに分類整理することを目的とする。ただし、出版件数の面では、在家対象の通俗仏書より、僧侶や学者一般を対象とする専門的な仏学・宗学書の方が多い。さらに、近世の各時期(前期・中期・後期)には、各宗派の学問・政治の双方にわたり、各々に異なった特色が見られる。そうした諸事情は、専門的な仏学・宗学書の出版状況に、極めて強い影響を及ぼしている。今年度、本研究の経過において、通俗仏書の出版状況にもまた、件の専門的な仏学・宗学書の動向が、無視しがたい影響力を有することが、新たな問題点として浮上してきた。そこで、本研究において作成する通俗仏書の刊行年表にも、内容・書誌事項の双方に、より具体性を伴った変遷過程を表示すべく、専門的な仏学・宗学書を視野に入れたデータ作成が急務となった。前記の経緯により、今年度の研究活動は、通俗・非通俗を問わず、幅広く近世期における仏書の刊行状況を見渡すため、各大学の附属図書館を含む資料保存機関の所蔵目録及び『仏書解説大辞典』『新纂禅籍目録』に登載される仏書刊本を、新たにパソコン入力し、年表化及び内容分類を行う作業を活動の中心に据えた。これにより、今年度は出版業者名の採集には、やや消極的な活動とならざるを得なかったが、近世の各時期における通俗仏書の内容面の変遷と、近世仏教の各時期ごとの特色とを、より具体的に連携させる余地を新たに開拓する方向及びその方法を獲得することができた。近世期に刊行された通俗仏教書の書誌データの蓄積を主目的とし、併せて仏教書(仏教学書)の書誌データの採集をも行った。その結果、書誌的側面においては通俗仏教書よりも仏教学書の方が、求版・覆刻・刊記の偽造等の書誌的事情が錯綜していることが判明した。

ことに刊記の偽造は商業出版機構における商品としての仏教書の位相を推し量るバロメーターとなるため、積極的にその濫觴を求めるべく、個別・具体的な調査を行った。結果、如上の現象は、寛永初年に遡り得ることが確認でき、なおかつ今年度の調査範囲では、その嚆矢を寛文六年杉田勘兵衛尉刊本『大原談義聞書抄』を現存最古の偽刊記の事例として確定することができた。一方、通俗仏書に関する研究においては、当代刊行の和刻本仏書と通俗仏書の関係を探るため、個別的な作品に限定して典拠研究を行った。そのサンプルとして選んだ作品は、浅井了意作の仏教説話集『法林樵談』(元禄四年刊)である。その研究の具体は和刻本として『法苑珠林』の寛文九年村上平楽寺刊本を選び、当該の刊本の訓点等との比較を試みた。また、非和刻本の利用頻度・利用態度の実態を探るため、『太平広記』等との比較を併せて試みた。本研究は、近世期に刊行された通俗仏教書の書誌データの蓄積を主目的とし、併せて仏教書(仏教学書)の書誌データの採取をも行った。既に前年度において、通俗仏教書よりも仏教学書の方に書誌的な問題点が錯綜することが判明している。そこで、今年度はそれに引き続き、各種仏教学書の書誌データの拡充に努めた。また今年度は、本研究の最終年度に当たるため、期間内に調査し得た書誌データの整理に努め、様々な観点から検討・考察を重ねてその整理方法について模索した。当初の予定では宗派の別をも考慮することを目指したが、各宗共用の書物も多数存在し、ことに近世初期・前期においては、むしろ不自然な形態にならざるを得ないことが判明した。そこで、データの整理にあたっては、書誌学的な観点を機軸として、数例のサンプルの作成を試みたところ、この整理方法に拠るデータ管理がむしろ誤謬も少なく、さらには諸方面の利用に際して応用がきくため、便宜が大きいことが判明した。さらに今年度は、全冊撮影を許可された各種刊本資料の内容をも検討し、通俗仏教書とその影響下にある通俗文芸との思想的な乖離の調査にも関心を及ぼした。その結果、仮名草子の内でもことに浅井了意作の怪異小説(『伽婢子』など)には、当代における宗教・民俗的な禁忌観を見事に指弾する性格が浮き彫りにされていることに加えて、仏教書の様式では表現することの難しい領域を「草子作家」独特の手法によって描かれていることが判明した。
植物幹細胞の生殖生長相転換とエピゲノムの相互作用

生長相転換に伴うトランスポゾンのサイレンシングのメカニズムについて理解を深めるために、野生型イネの栄養生長メリステムと生殖生長メリステムのDNAメチローム解析を実施した。その結果、CHH配列(HはC以外の塩基)におけるシトシンのメチル化が生殖生長期においてゲノム全体で上昇することが分かった。Small RNA-seq, RNA-seq,プロテオミクスを組み合わせて解析した結果、この制御がRNAiのシステムを介していることが分かった。27年度が最終年度であるため、記入しない。イネにおいて、栄養成長期から生殖生長期への転換は長距離移動性の情報伝達分子フロリゲン(正体はHd3aタンパク質)に完全に依存している。Hd3aとそのパラログRFT1を欠損するイネは生殖生長期へ移行できず、数年経過しても栄養生長期のまま維持される。生長相転換の際の遺伝子発現変化を網羅的に捉えるために、野生型イネとHd3a/RFT1二重RNAiイネの茎頂メリステムを単離してRNA-seqによる遺伝子発現の解析を実施した。その結果、フロリゲンによって発現誘導される遺伝子を約170個、発現抑制される遺伝子を約700個同定した。興味深いことに、発現抑制される遺伝子のうち500個以上がトランスポゾンであった。また、茎頂メリステムでどの程度のトランスポゾンが発現しているかを調査した結果、アノテーションの付与された長いトランスポゾン(平均3kb)のうち約60%で転写を確認することができた。したがってメリステムはトランスポゾンが活発に転写されており、生殖生長期の開始に伴ってこれらの一部がサイレンシングさせることが分かった。フロリゲンがトランスポゾンのサイレンシングを誘導する機能を持つことを発見した。この発見は当初の予想を上回る成果である。生長相転換に伴うトランスポゾンのサイレンシングのメカニズムについて理解を深めるために、野生型イネの栄養生長メリステムと生殖生長メリステムのDNAメチローム解析を実施し、情報解析を進める。
ナシ属における史前帰化植物と自生植物との交雑・野生化に関する研究

マイクロサテライト遺伝子座の解析により、北上山地に分布する絶滅危惧植物であるミチノクナシ(イワテヤマナシ)と史前帰化植物であるヤマナシが浸透交雑した結果、雑種個体が自然的環境にも広く生育する一方で、遺伝的に真の自生と推定される植物は個体数がごく限られることが判明した。しかし一方では、真の自生植物の本来の遺伝子型、分布域及び生育環境を推定することもできたため、今後の保全対策の指標となりうる。岩手県北上山地におけるミチノクナシとニホンナシの浸透交雑の実体を明らかにするため、同山地の広範囲な地域で野外調査を行った。その結果、遠野市から葛巻町にかけての広い地域にナシ属植物が分布していた。立地については、従来より知られている放牧地や人里周辺のものが多いが、これまでの想定とは異なる立地である谷間の渓畔林で多くの個体が生育する場所も発見した。調査個体からは花や果実を採取し、形態的な解析を行ったところ、花径、花柄長、果実径など、ミチノクナシとニホンナシで差のある形質において大きな変異が見られ、浸透交雑を支持するデータが得られた。次年度はマイクロサテライト解析を行い、遺伝的構造について解析を行う。また、ミチノクナシの研究によって、マイクロサテライト解析によって遺伝的構造を推定することより、ナシ属の栽培植物の遺伝的起源を推定しうることが明らかになっているので、この手法をネパール産のナシ属の栽培植物に応用し、東アジアノナシ属栽培植物との比較を行った。ネパール及び周辺地域には、ナシ属植物としてまPyrus pashiaが自生する他、この種とは別のナシ属植物が栽培されている。ナシ属植物は形態的変異に乏しいため、標本調査などの手法ではこの植物の正体を解明できていなかったが、マイクロサテライト解析の結果、東アジアで栽培されるPyrus pyrifoliaの一部のものと同一の遺伝的構造を持つことが判明した。こちらについては、次年度に分子系統地理学的手法を用いての解析を検討する。連携研究者らによるナシゲノム研究で開発されたマイクロサテライトマーカーを利用し、北東北地方のミチノクナシ野生個体や栽培・逸出個体をアジア大陸のナシ属植物についての集団遺伝学的解析を行い、ミチノクナシのデータと比較した。形態的分類では、Pyrus ussuriensis、P.bretsch-neideri、及びP.pyrifoliaに区分される東アジアの栽培品種は互いに遺伝的に極めて近縁であり、生物学的に種を分けるほどは分化していないと推定された。一方、形態的分類ではP.ussuriensisに属する植物のうち、日本のミチノクナシとアオナシの野生個体およびアジア大陸の野生個体は遺伝的に大きく分化しており、ナシ属全体の中でもミチノクナシ野生個体は分化した存在であると推定された。昨年度のマイクロサテライト解析の結果東アジアで栽培されるPyrus pyrifoliaの一部のものと同一の遺伝的構造を持つことが判明したネパールの栽培ナシは、葉緑体DNAデータの解析においても、P.pyrifoliaと差異はないことが判明し、この植物は東アジアから人為的に伝播したと言う推定が支持された。ミチノクナシ野生個体の自生環境については、立地についての予備的な調査を行い、渓畔林と推定される箇所が自然に成立した可能性の再検討を行った。さらに、集団遺伝学的解析から推定される類縁関係を、伝統的分類や命名へ反映させるため、東アジアのナシ属植物の基準標本等の調査を行った。特にWilson,Rehder等により前世紀初めに行われた日本や東アジアの調査標本を再検討したところ、彼らの調査ではミチノクナシ野生個体群は発見されていなかったことが判明した。北東北地方のミチノクナシ野生個体や栽培・逸出個体およびアジア大陸のナシ属植物について、昨年までの集団遺伝学的解析に続いて葉緑体塩基配列による分子系統地理的解析を行った。形態的分類及び集団遺伝学的解析では、従来Pyrus ussuriensis、P.bretschneideri及びP.pyrifoliaの3種に区分されてきた東アジアの栽培品種は、互いに遺伝的に極めて近縁であり生物学的に種を分けるほどは分化していない一方で、ミチノクナシとアオナシの野生個体およびアジア大陸の野生個体は遺伝的に大きく分化していることが判明しているが、葉緑体塩基配列のデータもこれを裏付ける結果が得られた。ミチノクナシ野生個体の生育環境については、昨年に引き続いて生態学的な調査を行った。現在の生育地は、牧草地や林年など人的攪乱環境下の個体も多いが、本来の自生環境はサワグルミ、ハルニレなどが優占する渓畔林ではないかと推定した。さらに、外来種としてのナシ属植物の侵入性について検討した。近年米国においてP.calleryanaが外来種として問題になりつつあることや、近縁属のPyracanthaやCragaegusには侵入性の高い種があることを考慮すると、ナシ属についても、侵入性が全くないとは言えないと推定した。

また、集団遺伝学的解析から推定される類縁関係を伝統的分類や命名へ反映させるため、昨年に引き続き東アジアのナシ属植物の基準標本等の調査を行った。本年はウィーン自然史博物館およびウィーン大学に所蔵されている、SchneiderやHandel-Mazettiらによる日本や東アジアの標本を調査した。特にアジア大陸のP.ussuriensisについて多くの新たな標本資料を検討することができた。
緑膿菌性肺感染症の新しい制御戦略-抗原刺激成熟樹状細胞の移入によるワクチン開発

緑膿菌性肺感染症に対する新たな予防法として、緑膿菌線毛蛋白やその合成ペプチドを抗原とする樹状細胞を介したワクチンの可能性に関して検討を行った。線毛蛋白に混入したLPS除去の過程で線毛蛋白を多く喪失し、十分量の線毛蛋白が得られなかった。線毛蛋白のN末端からのアミノ酸残基94-143残基に相当するペプチド(Pili 303)を合成した。合成ペプチドにて刺激したマウス樹状細胞と、マウス脾臓由来のナイーブT細胞との混合培養を行ったところ、ペプチドpili303刺激群においてIFN-gamma、IL-10の産生亢進の傾向を認め、特異的免疫反応が誘導される可能性が示唆された。これまでの検討(基盤(C)平成2325年度「新たな緑膿菌感染症の予防戦略-線毛の断片化ペプチドによるワクチンの開発」)で用いていたマウス骨髄由来樹状細胞(JawsII細胞)に代わり、本研究ではマウスの大腿骨から採取した骨髄細胞を顆粒球マクロファージコロニー刺激因子で刺激し、樹状細胞を得ることとしている。現在、Balb/cマウスの大腿骨から骨髄細胞を採取し、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子と共に培養することで、樹状細胞へと分化させる実験の準備を行っている。さらに従来から使用していたJawsII細胞を用いて、in vitroで緑膿菌線毛蛋白や線毛蛋白ペプチド刺激後のマウスへの細胞投与実験を同時に行うため、新たにJawsII細胞を購入し、培養を行った。また以前の検討で緑膿菌線毛蛋白ペプチド6(TFQTGTSSPKNATKVITLNR)は、JawsII細胞からの炎症性サイトカイン産生を誘導し、同ペプチドで刺激したJawsII細胞とマウス脾臓より分離したナイーブT細胞との共培養で、ナイーブT細胞の活性化を認めていた。この緑膿菌線毛蛋白ペプチド6を樹状細胞抗原刺激物質として用いるため、その合成を行った。陽性コントロールとして用いる緑膿菌線毛蛋白の精製を行っているが、ショ糖濃度勾配超遠心やSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い精製しても、少量の緑膿菌のLPSが混入してしまうため、エンドトキシン除去カラムを用いてLPSの除去を行っている。このカラムを通すことで、LPSは著しく減少し、ほぼ検出限界以下の濃度となるが、線毛蛋白の喪失も多く、in vitroでの樹状細胞刺激に用いる線毛蛋白量を確保すべく精製を進めている。昨年度十分に検討できなかったマウス大腿骨骨髄細胞からの樹状細胞作成を行った。Balb/cマウスの大腿骨をphosphate-buffered salineでフラッシュし、骨髄液を採取し、その中に存在する骨髄細胞を得る実験を実施した。目標としていた2 x 106個/mlの骨髄細胞が得られず、マウスの個体数を増やして検討を行っている。マウス数を増加することで骨髄細胞数を予定の細胞数確保できる見込みである。また得られた骨髄細胞を20ng/mlの顆粒球マクロファージコロニー刺激因子(GM-CSF)で10日間培養し、細胞を回収してフローサイトメトリを用いてCD11c陽性細胞であることの確認実験を行っている。得られた細胞の90%以上がCD11c陽性細胞であることを想定していたが、CD11c陽性細胞は全細胞の90%までには達成していなかった。細胞の分化をより高効率とするために培養液中のGM-CSFの濃度や培養日数の変更などの修正を行っている。得られた細胞のなかのCD11c陽性細胞の割合が低いため、緑膿菌経気道感染による急性肺炎マウスモデルへの緑膿菌線毛ペプチドや精製線毛蛋白刺激樹状細胞の移入実験が実施できていない。前年度緑膿菌線毛蛋白の精製に問題が生じていたが、精製過程の透析時間が長くなりすぎると線毛が分解され、その精製量が大幅に低下することが明らかとなった。現在は安定して線毛の精製が出来るようになっており、線毛の精製および精製線毛蛋白に混入しているLPSの除去をエンドトキシン除去カラムによって行っている。樹状細胞に対する抗原刺激実験には大量の緑膿菌線毛蛋白を用意する必要があるため、平成27年度もショ糖濃度勾配超遠心法やSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動を昨年度に引き続き行って線毛蛋白の精製を行った。精製線毛蛋白を得ることが出来れば、大腿骨骨髄細胞からの樹状細胞を用いた移入による動物実験が迅速に行えるようになるものと考えている。緑膿菌線毛蛋白のアミノ酸配列の一部であるペプチド(TFQTGTSSPKNATKVITLNR)及び精製線毛蛋白刺激樹状細胞投与による急性緑膿菌肺炎マウスモデルを用いた感染抑制効果の検討について平成27年度に実施予定であった。しかしながら大腿骨骨髄液からの樹状細胞が十分に得られず、マウスへの投与による感染制御効果の実験が十分に行われていない。また緑膿菌慢性気道感染症マウスモデルに対する樹状細胞投与効果の検証も行えていないため、「やや遅れている」と評価した。Balb/cマウスの大腿骨をPBSでフラッシュし、骨髄液を採取し、骨髄細胞を得る実験を実施した。当初は目標としていた2000000個/mLの骨髄細胞が十分に得られなかったが、手技の習熟により効率化、時間短縮することで、骨髄細胞を予定の細胞数確保することが可能となった。得られた骨髄細胞をGM-CSFで培養し、細胞を回収してフローサイトメトリを用いてCD11c陽性細胞であることの確認実験を昨年度に引き続き行った。

細胞の分化が高効率となる条件を探るために、培養液中のGM-CSFの濃度と培養日数を変更し検討したところ、GM-CSFの濃度は20ng/mL、培養日数は8日間が最も良好であったが、この条件下で得られた細胞はCD11c陽性細胞が50-60%程度と目標とする90%以上には至っていない。平成28年度もショ糖濃度勾配超遠心法およびSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動により、線毛蛋白の精製を行った。線毛蛋白に少量混入しているLPSを除去するために、エンドトキシン除去カラムを用いてLPSの除去を行っているが、線毛蛋白を蒸留水に溶解したものをエンドトキシン除去カラムに通した場合、線毛蛋白の喪失が非常に多いことが問題となった。その原因として、ポリミキシンBと線毛蛋白とにイオン的な非特異的結合が生じている可能性を疑い、溶媒に炭酸水素アンモニウム溶液や塩化ナトリウム溶液を用いたが、線毛蛋白の喪失は依然多かった。このことから、線毛蛋白とLPSとが強固に結合している可能性が考えられた。この結合の解除を目的に、線毛蛋白の溶媒として界面活性剤であるデオキシコール酸ナトリウム溶液を溶媒として用いて検討を行った。デオキシコール酸ナトリウム溶液の濃度を調整して検討すると、0.5%の濃度において、線毛蛋白の回収率とLPSの除去効率が良好であった。マウス大腿骨骨髄細胞から、当初想定していた効率でCD11c陽性細胞が得られていない。またエンドトキシン除去カラムを用いた緑膿菌線毛蛋白からのLPSの除去が難航したため、LPS除去済みの緑膿菌線毛蛋白の精製が遅れている。緑膿菌線毛蛋白のアミノ酸配列の一部であるペプチド6(TFQTGTSSPKNATKVITLNR)および精製線毛蛋白刺激樹状細胞投与による急性緑膿菌肺炎マウスモデルを用いた感染抑制効果の検討について平成28年度に実施予定であった。しかしながらCD11c陽性細胞の樹立やLPS除去済みの緑膿菌線毛蛋白の精製が遅れたこともあり、マウスへの抗原刺激した樹状細胞の投与による感染制御効果の実験が十分に行われていない。さらに緑膿菌慢性気道感染症マウスモデルに対する樹状細胞投与効果の検証も行えていないため、「遅れている」と評価した。昨年度に引き続き、Balb/cマウス大腿骨より採取した骨髄細胞をGM-CSFで培養し、骨髄由来樹状細胞を樹立する実験を行った。得られた細胞を回収してフローサイトメトリを用いてCD11c陽性細胞であることの確認を行ったが、CD11c陽性細胞は約60%と目標とする90%以上には至らなかった。平成29年度もショ糖濃度勾配超遠心法やSDSポリアクリルアミドゲル電気泳動により、線毛蛋白の精製を行った。エンドトキシン除去カラムを用い、線毛蛋白に混入しているLPSの吸着除去を試みた。線毛蛋白とLPSとが強固に結合している可能性が考えられ、溶媒としてデオキシコール酸ナトリウム溶液を用いた。デオキシコール酸ナトリウム溶液の濃度を0.5%とした際に、線毛蛋白の回収率とLPSの除去効率が最も良好であったが、この条件においても線毛蛋白の回収率は510%程度と低値であった。今年度、143のアミノ酸残基よりなる緑膿菌PAO-1株の線毛蛋白のN末端からのアミノ酸残基101-120に相当するペプチド(pili6)に加え、アミノ酸残基1-50(pili301)、51-82(pili302)、94-143(pili303)、26-75(pili304)、76-125(pili305)に相当する新たなペプチド5種類を合成した。
アフリカ霊長類の比較行動・生態学的研究

本研究はギニア国南東部のボッソウにおける野生チンパンジーを中心に、異なる環境に生息する霊長類の行動と生態を明らかにするべく調査を重ねてきた。ボッソウでは多くの道具使用行動が発見・観察され、野外実験もふくめて詳細な分析的記録収集に入るとともに(1-4)、約10km離れた近隣チンパンジー生息地のニンバ山との地域間関係追跡にも調査の手を広げてきた(5)。ボッソウでは道具使用行動にとどまらず、個体の成長と行動発達(1)、生息地の環境把握と採食生態学的研究をも進めてきた(6)。所期の目的である異なる環境に生息する霊長類の行動生態の比較は、霊長類の生息環境としては両極端であるコートジボアールのタイの熱帯多雨林でグエノン類(7)、カメルーンのカラマルエの乾燥疎開林でパタスザル(8)というオナガザル科の数種を対象にして、それぞれの特徴的行動と生態を環境との関係において明らかにしてきた。以下に成果の概要を示す。1.台石の上に歯では割れない堅い木の実をおいて、もう一つの石で叩いて割るハンマー使用行動は、ボッソウにおいて本研究代表者によって初めて観察されたが、前計画によって個体による完全な利き手のあることが示された。さらに本計画では、ハンマー使用の効果的技術が10歳を過ぎてやっと完成し、利き手もこの過程の中で完成することを明らかにした。叩き割り技術の個体発達過程はVTR記録の分析によって、現在進行中である。2.攻撃的なサファリアリを直接手や口で捕らえずに棒に這いあがらせて大量に捕獲する技術は他地域でも観察されていたが、60本の採取棒を収集した段階でこの行動の季節性、棒の種(species)、特徴、使用者の性年齢、ニンバ山やその他の地域におけるアリ釣り棒との比較を行った。また、1例において堀り棒と釣り棒の複合使用が発見された。3.木の窪みにたまった水を飲むのに葉を口の中でくしゃくしゃにしてスポンジのように水を滲み込ませ、飲む行動について、使用する葉の種類、季節性、使用者の性年齢、行動の詳細等の特徴を明らかにした。4.チンパンジーがアブラヤシの樹頂で堅く長い葉柄を縦杵として使い、樹頂に深さ30cm以上の穴をあけて滲み出た樹液を飲む、新しい道具使用行動を発見した。樹液を飲む際に繊維を集めてスポンジにすることがあるので、これも単一の目的に複数の道具を使う複合道具使用である。5.ニンバ山のコートジボアール側のイアレではCoula edulisの実をハンマーで割るが、この樹種のないボッソウにて試したところ、成雌1頭のみが躊躇なく割り、他の個体は試しもしなかった。やがて未成熟個体がCoula割りを習得したが、この雌のみがCoulaのある地域から移入してきたのだとの仮設をたて、同型の木塊で試したところ、この雌は向きもせず、新しく習得した未成熟個体は躊躇なく割ろうとした。これにより、地域間文化伝播と学習による行動対象の拡大に実験的検証を得た。なお、イアレ地区ではチンパンジーが大量の地上巣を作ることを発見し、この点からも近隣生息地間の行動習性の比較が始まった。6.ボッソウ地域の植物相を完成し、人とチンパンジーの利用種と部位、利用目的をリストアップした。さらに、主たる食物樹の生産量とチンパンジーの採食量を明らかにして、環境許容量と現存量との関係を明らかにする努力を始めた。7.Closedで食物の豊富なタイ(コートジボアール)の熱帯多雨林における樹上性サル類は積極的な異種混群をつくり、異種個体間でラウドコールを鳴き交わして親和的コミュニケーションをとっていることを発見した。さらに異種集団の社会構造の解明に進みつつある。8.Openで食物の乏しいカラマルエ(カメルーン)の乾燥疎開林におけるパタスザルは単雄複雌群をつくり群れ外雄による雌集団の乗っ取りがあるが、子殺しは見られない。食物の乏しい土地で広域に散開した雌たちは群れ外雄と交尾して雄の繁殖独占が成功していないことを、DNA finger printingによって明らかにした。

さらに本計画では、ハンマー使用の効果的技術が10歳を過ぎてやっと完成し、利き手もこの過程の中で完成することを明らかにした。叩き割り技術の個体発達過程はVTR記録の分析によって、現在進行中である。2.攻撃的なサファリアリを直接手や口で捕らえずに棒に這いあがらせて大量に捕獲する技術は他地域でも観察されていたが、60本の採取棒を収集した段階でこの行動の季節性、棒の種(species)、特徴、使用者の性年齢、ニンバ山やその他の地域におけるアリ釣り棒との比較を行った。また、1例において堀り棒と釣り棒の複合使用が発見された。3.木の窪みにたまった水を飲むのに葉を口の中でくしゃくしゃにしてスポンジのように水を滲み込ませ、飲む行動について、使用する葉の種類、季節性、使用者の性年齢、行動の詳細等の特徴を明らかにした。4.チンパンジーがアブラヤシの樹頂で堅く長い葉柄を縦杵として使い、樹頂に深さ30cm以上の穴をあけて滲み出た樹液を飲む、新しい道具使用行動を発見した。樹液を飲む際に繊維を集めてスポンジにすることがあるので、これも単一の目的に複数の道具を使う複合道具使用である。5.ニンバ山のコートジボアール側のイアレではCoula edulisの実をハンマーで割るが、この樹種のないボッソウにて試したところ、成雌1頭のみが躊躇なく割り、他の個体は試しもしなかった。やがて未成熟個体がCoula割りを習得したが、この雌のみがCoulaのある地域から移入してきたのだとの仮設をたて、同型の木塊で試したところ、この雌は向きもせず、新しく習得した未成熟個体は躊躇なく割ろうとした。これにより、地域間文化伝播と学習による行動対象の拡大に実験的検証を得た。なお、イアレ地区ではチンパンジーが大量の地上巣を作ることを発見し、この点からも近隣生息地間の行動習性の比較が始まった。6.ボッソウ地域の植物相を完成し、人とチンパンジーの利用種と部位、利用目的をリストアップした。さらに、主たる食物樹の生産量とチンパンジーの採食量を明らかにして、環境許容量と現存量との関係を明らかにする努力を始めた。7.Closedで食物の豊富なタイ(コートジボアール)の熱帯多雨林における樹上性サル類は積極的な異種混群をつくり、異種個体間でラウドコールを鳴き交わして親和的コミュニケーションをとっていることを発見した。さらに異種集団の社会構造の解明に進みつつある。8.Openで食物の乏しいカラマルエ(カメルーン)の乾燥疎開林におけるパタスザルは単雄複雌群をつくり群れ外雄による雌集団の乗っ取りがあるが、子殺しは見られない。食物の乏しい土地で広域に散開した雌たちは群れ外雄と交尾して雄の繁殖独占が成功していないことを、DNA finger printingによって明らかにした。1.ギニアのボッソウでは、野生チンパンジーの接近観察とVTR記録によって、アブラヤシの種子を割るハンマー使用行動の詳細を明らかにしてきた。今年度は、ハンマー使用技術の個体発達過程を継続的に追跡記録すると同時に、以下の諸点を明らかにした。3.隣接チンパンジー生息地であるニンバ山脈のコートジボアール側(イェアラ)は高層森林であり、ここでは、ボッソウとは異なる木の実を対象にハンマー使用を確認した。この実をボッソウに持ち帰りチンパンジー観察場に置いたところ、1頭だけが躊躇なくハンマー使用によって割り、他の個体はまったく関心を示さなかった。このことから、両生息地間の交流と文化の伝播過程の探求に新たな可能性を見出した。4.葉をくしゃくしゃにして狭い木の窪みにたまった水に浸し、水分を吸い取る行動(葉っぱスポンジ)はすでに確認していた。