hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
光遺伝学的アプローチによる疼痛受容機構の解明および疼痛制御法の開発

c-fos-eGFPトランスジェニックラットとc-fos-ChR2-eGFPトランスジェニックラットを使用し、急性疼痛負荷時の疼痛受容機構の可視化および疼痛受容にかかわるFos-ChR2発現ニューロンの光照射による操作を試みることを目的とした。その結果、急性疼痛ストレス時の視床下部、脊髄、下垂体前葉、および副腎皮質におけるc-fos-eGFP発現をin vitroもしくはex vivoで可視化できた。また、Fos-ChR2発現ニューロンにおけるChR2の細胞膜での発現をeGFPを指標に可視化することができた。初年度(H24年度)に得られた結果をもとに、本年度(平成25年度)は以下の実験を行った。c-fos-eGFPトランスジェニックラットを用いで、急性疼痛ストレスとして5%ホルマリン液をラットの後肢に無麻酔下にて皮下注射した。皮下注射90分後にラットを素早く断頭し、脊髄を採取し、HEPRSSバッファー液中に浸した。下肢からの疼痛刺激を受容する第4ー5腰髄(L4-5)レベルの脊髄後角を、スライサーを用いて300μmの脊髄スライス切片を作成し、生細胞の状態で蛍光顕微鏡(DS-Qi1Mc; Nikon)を用いて蛍光発現を観察した。コントロールは、生理食塩水をc-fos-eGFPトランスジェニックラットの後肢に皮下投与した。その結果は、コントロール群では観察した脊髄後角にはeGFP蛍光発現がほとんど見られなかった、一方ホルマリン注射群ではL4-5の脊髄後角laminaI-II層にeGFP蛍光の増加が観察された。したがって、急性疼痛ストレスを負荷後のc-fos-eGFPトランスジェニックラットにおいて、Fosタンパクの発現動態が、脊髄スライス標本ではあるが、生細胞でもeGFPの蛍光タンパクの発現によって可視化できることが明らかになり、本トランスジェニックラットが生細胞でも蛍光発現を観察できる有用なモデルであることを確認できた。遺伝子改変動物(c-fos-eGFPトランスジェニックラット)を用いて、急性疼痛ストレス負荷後に、eGFP蛍光の発現を、ニューロン活動の指標として汎用されるc-fos遺伝子産物であるFosタンパクの発現を、脊髄、視床下部、下垂体ならびに副腎皮質において観察可能かどうかを検討した。今回得られた結果は、以下の通りである。急性疼痛ストレスとして5%ホルマリン液をc-fos-eGFPトランスジェニックラットの両側後肢に皮下注射した。その結果(1)下肢からの疼痛刺激を受容する第4腰髄レベルの脊髄後角において、eGFP蛍光を定量的に観察できた。副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン(CRH)を産生する視床下部室傍核の小細胞領域ならびに下垂体後葉ホルモンを産生する大細胞領域、副腎皮質刺激ホルモン(ACTH)を産生する下垂体前葉およびコルチコステロンを産生する副腎皮質束状帯において、eGFP蛍光を認めた。以上の結果から、急性疼痛ストレスを負荷されたc-fos-eGFPトランスジェニックラットにおいて、Fosタンパクの発現動態が、eGFP蛍光タンパクの発現によって可視化されていることが明らかになった。これまでFosタンパク発現の有無を組織内において確認するには免疫組織化学的染色法を必要としていたが、c-fos-eGFPトランスジェニックラットを使用することで、eGFP緑色蛍光として検出することに成功した。最終年度の本年度(平成26年度)は、c-fos遺伝子にチャネルロドプシン2(ChR2)遺伝子を挿入した融合遺伝子を用いたトランスジェニックラットの作出を昨年度より継続して行っている。このトランスジェニックラットでは、活性化した神経活動の指標として汎用されているc-fos遺伝子の発現とともにChR2が発現することを期待した。c-fos-ChR2-eGFP融合遺伝子が10コピー挿入されたファウンダーを雄1匹得ることができた。このファウンダーから複数のF1個体を得ることができた。ファウンダーにも軽度の皮膚症状が見られたが、F1個体ではヘテロ体にもかかわらず成長するにつれて原因不明の皮膚症状(脱毛など)が頸部体幹部に強く見られた。皮膚生検を行い、組織像を確認したところ、皮膚の構造自体には異常はなく、角質の肥厚と毛包の一部に角化の亢進が見られた。同一個体から生まれた融合遺伝子陰性の個体は正常に発育することから、挿入された融合遺伝子が何らかの影響を及ぼしていると考えられた。F1個体を用いて、浸透圧負荷を行ったところ、脳内の浸透圧感受性部位のニューロン群の一部にc-fos-ChR2-eGFP融合遺伝子の発現を示すeGFP蛍光の発現が観察されたが、個体差(ばらつき)が大きかった。現在、急性疼痛ストレス負荷後の視床下部および脊髄でのChR2-eGFP発現について検討中である。

今後、急性・慢性疼痛刺激後に活性化、つまりc-fos遺伝子発現とともにChR2が発現した脊髄および視床下部のニューロンに青色光を照射することにより、そのニューロンの神経活動を光操作することを予定している。そのための照射装置として、少なくともin vitroの状態(例えば脊髄スライス標本)ではすでにセットアップを終えている。医歯薬学計画2年次においては、c-fos-eGFPトランスジェニックラットに急性疼痛ストレスを負荷し、脊髄スライス標本の生細胞でeGFP蛍光タンパクの発現を指標にFosタンパクの発現を観察した。本年度の実験で、c-fos-eGFPトランスジェニックラットを使用することで、生細胞でも急性疼痛ストレスに対する脊髄細胞での活動ニューロンを同定することが可能となった。以上の実験については、おおむね順調に進展している。当初は目的としていたIn vivoでのeGFP蛍光の観察については、標的とする部位が表面から浅層ではないため、現在の顕微鏡技術では困難であり、一旦研究の方向性を転換する必要があると考えている。以上より、「研究の目的」の達成度については、やや遅れていると考えている。計画1年次においては、c-fos-eGFPトランスジェニックラットに急性疼痛ストレスを負荷し、eGFP蛍光タンパクの発現を指標にFosタンパクの発現を観察した。今回の実験で、疼痛ストレスに対するeGFP蛍光タンパクの発現には定量性があり、c-fos-eGFPトランスジェニックラットを使用することで、eGFPの緑色蛍光としてニューロン活動を評価することが可能となった。当初計画していたin vivoでの実験の応用については、現段階では伸展していない。原因として、蛍光・共焦点顕微鏡では、可視化できる撮影範囲(深層)のレベルに限界があることが挙げられる。これまでの実験ではラットを灌流固定後、摘出した標本を30μmの厚さの切片にして蛍光観察をしてきたが、In vivoで可視化するには、標的とする部位が表面から浅層である必要がある。今後観察する際に、可視化条件を検討・工夫が必要である。計画3年次においては、前年度に引き続きc-fos-eGFPトランスジェニックラットを用い、急性疼痛ストレスモデルにおいて、活性化した細胞群(脊髄後角・視床下部・下垂体前葉・副腎でのeGFP蛍光タンパクを発現する細胞群)において、これまで詳細な作用機序が不明である疼痛関連伝達物質について検討を行う予定である。具体的には、5%ホルマリン液をc-fos-eGFPトランスジェニックラットの後肢に皮下注射し、ラットを素早く断頭し脳・脊髄を採取、生細胞での300μmスライス切片を作成する。疼痛刺激に反応した生細胞のeGFP蛍光の発現強度を指標にし、各部位での疼痛経路の作用機序が未だに不明である生理的伝達物質・試薬を使用することで、eGFP蛍光陽性細胞と疼痛関連伝達物質が作用する細胞が同部位に局在しているかどうかを検討する。当初計画していた光遺伝的的アプローチについて、c-fos遺伝子に感受性(光興奮)タンパク遺伝子を挿入した融合遺伝子の作成を終え、トランスジェニックラット動物作出準備が整ったところである。
急性壊死性脳症と痙攣重積型急性脳症の病因・病理・病態

急性壊死性脳症(ANE)と痙攣重積型急性脳症(AESD)の病因を解明するため、遺伝子解析を行った。全国的な共同研究により日本人患者の末梢血検体を集積し、候補遺伝子の変異・多型を調べた。AESDの発症にミトコンドリア酵素CPT2多型とアデノシン受容体ADORA2A多型、ANEの発症にHLA型が関与することが明らかになり、病態の鍵となる分子が同定された。日本人の孤発性ANEは、欧米の家族性ANEと異なり、RANBP2遺伝子変異が病因でないことが判った。(1)病因に関する研究急性壊死性脳症および痙攣重積型急性脳症の症例の末梢血DNA検体を全国の小児医療施設から入手し、候補遺伝子の解析を行う。a.遺伝子多型:CPT-II(ミトコンドリア脂質代謝酵素)、ADORA2A(アデノシン受容体)遺伝子を中心にSNP解析を行い、症例と日本人対照例(健康成人200人)との間で遺伝子型の頻度を比較、検討する。b.遺伝子変異:RANBP2(家族性再発性急性壊死性脳症の原因遺伝子)およびSCN1A、SCN2A(電位依存性Naチャネルサブユニット)を中心に、症例の遺伝子解析を行う。(2)病理に関する研究急性壊死性脳症および痙攣重積型急性脳症の剖検例脳標本を全国の共同研究施設から入手し、免疫病理学に病態を探索する。急性脳症のリスクファクターとして示唆されている遺伝子群の中でカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ(CPT II)と、アデノシンA2a受容体(ADORA2a)の遺伝子多型を解析した。1.CPTIIについで急性壊死性脳症10例、痙攣重積型脳症19例(年齢7ヶ月8才5ヶ月、男19人女10人)の計29例のCPTIIのジェノタイピングを行った。有意差検定はFisher's exact testを用いた。SNPによって患者、対照ともにFVM,FIM,CIMのアリルの組み合わせを示した。CIMを少なくとも1本持つ頻度、CIMのアリル数、FV,FI,CIのアリル頻度の比較ではp値がそれぞれ0.038,0.029および0.027で有意差が認められた。CIMアリルはFIM,FVMと比較し37°Cにおいてもミトコンドリアへ脂肪酸を取り込むCPT II活性が約1/3(Chenら)であり、このアリルを少なくとも1本持つ事は急性脳症のリスクファクターのひとつである可能性が示唆された。けいれん重積型急性脳症3例、けいれん重積2例においてADORAA2aの4箇所のSNP遺伝子型で5例中4例は一致し、すべてヘテロ接合を示した。対照50例でこの遺伝子型頻度は26%であった。3つのSNPはヘテロ接合を中間として一方のホモ接合で最も弱く、他方のホモ接合で最も高いカフェイン感受性を示す。患者1例は3つのSNPともすべて感受性の高いホモ接合を有していた。さらにrs2298383は転写因子の結合部位の可能性が示唆されており、対照では最も感受性の低いT/Tが48%を占めるが患者5例にはT/Tは見いだされなかった。痙攣重積型急性脳症の患者32例についてアデノシンA2a受容体(ADORA2a)の遺伝子多型を解析した。32例の男女比は男19例、女13例で年齢は7ヶ月から6才1ヶ月に分布した。60%の症例は2才以下であった。先行感染としてはHHV6が最も多く次いでインフルエンザ、RSウイルス、アデノウイルスが検出された。対照として60例の正常日本人B細胞由来DNAを用いた。ADORAA2aの4箇所のSNP[rs5751876(1976T>C),rs2298383,rs35320474,rs4822492]について遺伝子型を直接シークエンス、RELPで解析した。4箇所のSNPから予想される16種のハプロタイプのうち、患者および正常対照は2つのハプロタイプ(T-C-(-)-CおよびC-T-T-G)のみを有し,完全連鎖を示した。個々のSNPのアレル頻度は患者でT、C、(-)、Cが対照群と比し有意に高かった(P=0.018)。患者群ではT-C-(-)-Cのホモ接合型頻度が32.4%、正常群では15.0%であった。C-T-T-Gホモ接合型は患者での頻度が14.7%で正常群では35%であった。T-C-(-)-CおよびC-T-T-Gのヘテロ接合型は患者群、正常群でそれぞれ47.1、50%であった。以上の3つの接合型の分布において患者、正常群間で有意差(P=0.045)が示された。

従ってADORAA2aのSNPは痙攣重積型急性脳症発症の遺伝子的背景のひとつと思われる。rs5751876(1976T>C)は転写プロモーター位置にあり、rs35320474は3'-UTRに存在し、いずれも遺伝子発現量に関与することが示唆されている。アデノシン受容体はA2a受容体の他に3種類ある。それぞれが中枢神経系で部位特異的に発現し神経細胞の興奮を相互に調節しているため、A2a受容体発現量がSNPにより変化した場合、痙攣重積を助長する可能性が考えられる。現在、各遺伝子型によるADORA2a発現量の解析を計画している。痙攣重積型急性脳症(AESD)約70例、急性壊死性脳症(ANE)約20例の末梢血由来DNA検体(一部はcDNAも)を対象として、候補遺伝子解析を行った。(1)CPT-II:近年、カルニチンパルミトイルトランスフェラーゼII(CPT-II)遺伝子多型がインフルエンザ脳症の死亡例・重症例に関与すると報告された。われわれは本研究で、種々の先行感染症にともなう急性脳症症例におけるCPT-II遺伝子型を調べた。対象は、AESDまたはANEの29日本人症例である。CPT-II遺伝子エキソン4のF352C多型の頻度は、対照群より症例群で有意に高かった。F352CのCアレルを持つ患者は全例、V368IのIアレルとM647VのMアレルを有した。このCIMハプロタイプはCPT-II活性をFIMないしFVMハプロタイプの3分の1に落とす。CIMハプロタイプの頻度は、症例と対照の間で有意差があったが,AESDとANEの間では差がなかった。この結果はCIMアレルを少なくとも1つ有する事が、先行感染の種類に関わらず、急性脳症発症の危険因子であることを示した。(2)RANBP2:RANBP2は欧米の家族性再発性ANEの原因遺伝子である。われわれが日本人ANEの全症例(兄妹例、再発例を含め)を検索したところ、RANBP2遺伝子のエクソン1014およびエクソン20に変異はなかった。(3)アデノシン受容体:昨年度今年度のわれわれの研究により、アデノシン受容体2A(ADORA2A)遺伝子多型が、AESDの危険因子である可能性を強く疑わせる結果が集積された。平成23年度にかけて発現解析・機能解析を行うとともに、熱性けいれん患者における遺伝子頻度も調べる予定である。(4)SCN1A:急性脳症の90症例について各種のイオンチャネル遺伝子変異・多型を検討したところ、3例にSCN1A遺伝子変異を検出した。臨床病型は3例とも異なっていることから、本遺伝子変異が複数の病型の危険因子となりうることが示唆された。急性脳症は小児に多く、ウイルス感染症を契機として急激に発症する。本研究は急性脳症のうち、死亡や神経学的後遺症をもたらす例が特に多い急性壊死性脳症(ANE)と痙攣重積型急性脳症(AESD)に重点を置き、発症の遺伝的背景を探索した。平成23年度の研究では日本人ANE症例でRANBP2解析を引き続き行い、ほぼすべてのエクソンのシークエンシングを終了した。またAESDに関しては、ADORA2A遺伝子多型の機能解析を完了した。さらに従来の研究で熱性けいれんとの関連が指摘されているサイトカイン関連遺伝子(IL1B、IL1RN, TLR4)多型について、AESD群、熱性けいれん群、正常対照群を対象に遺伝子解析を行った。またテオフィリン脳症(全例がAESD)を対象にCPT2、ADORA2A、SCN2Aなど多数の責任遺伝子・候補遺伝子について多型、変異を解析した。AESD群(76症例)ではIL1B遺伝子(interleukin-1βをコードする)のー511C/T多型の頻度が熱性けいれん群や対照群に比し、有意に高かった。
CCR-4を枢軸とした鼻粘膜アレルギー反応とその制御に関する分子生物学的研究

CCR-3は、好酸球、好塩基球、一部Th2型リンパ球に発現し、そのリガンドは主としてeotaxin, RANTESである。一方、CCR-4は、リンパ球のうちTh2型リンパ球に選択的に発現し、TARC、MDCをリガンドとしている。これまでの研究から、鼻腔洗浄液中に含まれる各種好酸球遊走因子のうち、eotaxinが最も好酸球数との強い相関を示すこと、各種好酸球遊走因子の好酸球の血管内皮細胞間隙通過に与える影響を検討すると、効果の強い順にeotaxin>MCP-4,RANTES>IL-5>PAF>LTB4,IL-16であること、また、抗CCR-3抗体を用いて好酸球を処理しておくと、鼻粘膜ホモジネートによって誘導される好酸球の血管内皮細胞間隙通過は約35%抑制されることが明らかとなった。一方、鼻アレルギー症例の鼻粘膜におけるTh2細胞の選択的浸潤に関与するTARCの主たる産生細胞は上皮細胞であり、その刺激因子としてはIL-4,IL-13,TNF-αであることを明らかにした。フローサイトメーターを用いた解析ではCCR-4陽性細胞はCD4,CD45RO陽性分画に最も多く存在しており、重症鼻アレルギー患者単核球では健常人と比較してCCR-4陽性率が亢進していた。また、スギ花粉症患者の単核球にけるCCR-4陽性率はスギ花粉飛散後期に増加していた。さらに末梢血単核球をCCR-4陽性細胞とCCR-4陰性細胞とに分離し、特異抗原で刺激したのち培養上清中各種サイトカインを測定すると、特異抗原刺激によるIL-5産生はCCR-4を除去することによりほぼ完全に抑制された。一方、IFN-γ産生量には明らかな変化がみられなかった。以上より、CCR-4やそのリガンドであるTARC、MDCを制御することにより従来とは異なる作用機作をもつ治療薬を開発できる可能性を示した。これらのリガンドや、細胞はいずれも鼻アレルギーの病態成立に重要であり、逆にこれらを制御することは新しい治療法の開発につながる。これまでの研究から、鼻腔洗浄液中に含まれる各種好酸球遊走因子のうち、eotaxinが最も好酸球数との強い相関を示すこと、各種好酸球遊走因子の好酸球の血管内皮細胞間隙通過に与える影響を検討すると、効果の強い順にeotaxin> MCP-4, RANTES>IL-5>PAF>LTB4, IL-16であること、また、抗CCR-3抗体を用いて好酸球を処理しておくと、鼻粘膜ホモジネートによって誘導される好酸球の血管内皮細胞間隙通過は約35%抑制されることが明らかとなった。抗CCR-4、抗CD4、CD45RO抗体とフローサイトメーターを用いた解析では、CCR-4陽性細胞はCD4,CD45RO陽性分画にもっとも多く存在しており、重症鼻アレルギー患者

単核球では健常人と比較してCCR-4陽性率が亢進していた。また、スギ花粉症患者の単核球にけるCCR-4陽性率はスギ花粉飛散後期に増加していた。さらに末梢血単核球をCCR-4陽性細胞とCCR-4陰性細胞とに分離し、特異抗原で刺激したのち培養上清中各種サイトカインを測定すると、特異抗原刺激によるIL-5産生はCCR-4を除去することによりほぼ完全に抑制された。一方、IFN-γ産生量には明らかな変化がみられなかった。CCR-3は、好酸球、好塩基球、一部Th2型リンパ球に発現し、そのリガンドは主としてeotaxin, RANTESである。一方、CCR-4は、リンパ球のうちTh2型リンパ球に選択的に発現し、TARC、MDCをリガンドとしている。これまでの研究から、鼻腔洗浄液中に含まれる各種好酸球遊走因子のうち、eotaxinが最も好酸球数との強い相関を示すこと、各種好酸球遊走因子の好酸球の血管内皮細胞間隙通過に与える影響を検討すると、効果の強い順にeotaxin>MCP-4,RANTES>IL-5>PAF>LTB4,IL-16であること、また、抗CCR-3抗体を用いて好酸球を処理しておくと、鼻粘膜ホモジネートによって誘導される好酸球の血管内皮細胞間隙通過は約35%抑制されることが明らかとなった。一方、鼻アレルギー症例の鼻粘膜におけるTh2細胞の選択的浸潤に関与するTARCの主たる産生細胞は上皮細胞であり、その刺激因子としてはIL-4,IL-13,TNF-αであることを明らかにした。フローサイトメーターを用いた解析ではCCR-4陽性細胞はCD4,CD45RO陽性分画に最も多く存在しており、重症鼻アレルギー患者単核球では健常人と比較してCCR-4陽性率が亢進していた。以上より、CCR-4やそのリガンドであるTARC、MDCを制御することにより従来とは異なる作用機作をもつ治療薬を開発できる可能性を示した。
ヘプシジンを介した心不全における貧血と鉄欠乏の機序の解明と新たな治療の検証

心不全の症例は、貧血や鉄欠乏になることが知られている。しかし、その機序はよくわかっていない。一方、最近ヘプシジンという肝臓から分泌されるホルモンが鉄の代謝に対して重要な役割を持つことがわかってきた。心不全になると、肝臓ではうっ血が起こる。我々は心不全で肝うっ血がおこり、このためにヘプシジンの分泌に影響がおよび、鉄欠乏、貧血をきたすのではないかと推測した。そこでラットで肝うっ血をきたすモデルを作成し、ヘプシジンの産生、貧血、鉄欠乏について調べたところ、ヘプシジンの不適切な過剰分泌が生じて、貧血、鉄欠乏に関係することが示され、一部のヒトの貧血をもつ心不全症例でもその機序が示唆された。心不全では貧血、鉄欠乏が高頻度に合併し、それが予後に大きく関わることが報告されている。我々は、肝うっ血が心不全の貧血、鉄欠乏の一つの大きな要因ではないかと考え、特に鉄代謝の中心的ホルモンであるヘプシジンが重要な役割を演じるのではないかと仮説を立てた。そこで、ラットの下大静脈を手術によって狭窄させ、肝うっ血モデルを作成し、貧血、鉄欠乏の有無、ヘプシジンの動態、ヘプシジンの発現に関わる諸因子を調べた。肝うっ血モデルでは、出血、溶血モデルと異なり、貧血になってもヘプシジンの発現が抑制されず、血清鉄、トランスフェリン飽和度が持続的に低下し、貧血が慢性期まで継続した。ヘプシジンの不適切な発現は、肝細胞内の鉄濃度の上昇によるBMP-6の誘導、肝臓内の炎症によるIL-6の誘導により生じるのではないかと考えられた。またこのIL-6の誘導は、デンジャーシグナルとしてのヘムやヘモグロビンによるTLR-4を介した反応と考えられた。以上の結果は、J Cardiac Fail 2014に報告した。次に臨床的に高頻度に肝うっ血が生じる心疾患として肺高血圧症があることから、モノクロタリン肺高血圧モデルで貧血、鉄欠乏の有無、ヘプシジンの動態を調べた。現在までの検討では、急性期には貧血が進行し、ヘプシジンの不適切な発現がみられている。また、臨床例で当科に心不全で入院した症例の貧血、鉄動態、ヘプシジンの血中濃度を測定し、肝うっ血との関係を調べた。現在までの検討では、炎症、腫瘍のない症例で、貧血がみられる場合には肝うっ血のある症例で肝うっ血がない症例よりもヘプシジンの濃度が高い傾向がみられている。以上の結果は、第78回日本循環器学会学術集会で報告した。心不全では、貧血が多くみられ、貧血でなくとも鉄欠乏が生じることが知られている。しかし、その原因として様々な要因が考えられているが、その詳細はわかっていない。一方、鉄代謝の主要ホルモンとして、主に肝臓で産生されるヘプシジンが注目されている。我々は心不全でみられる肝うっ血が、ヘプシジンを介して貧血、鉄欠乏に関わっているのではないかとの仮説に基づき、今回いくつかの検討をした。はじめに肝うっ血モデルを作成し検討したところ、慢性期まで貧血、鉄欠乏が継続することが明らかになった。この機序としては、肝うっ血によって、肝内のヘモグロビンやフリーのヘムがデンジャーシグナルとなり、TLR-4を介して炎症性サイトカイン(IL-6など)を産生し、これがヘプシジンを不適切に産生する機序が考えられた。また、肝内鉄の上昇によって、BMP-6を介して同様にヘプシジンが不適切に産生される機序も推測された。これらのヘプシジンの不適切な産生は、心不全における貧血や鉄欠乏の要因になりうると考えられた。さらに、炎症や癌のない心不全症例の血中ヘプシジン濃度を測定したところ、肝うっ血のある症例で有意にヘプシジンの値が高く、一部の心不全症例の肝うっ血が貧血、鉄欠乏の要因となることが臨床例でも考えられた。右心不全から肝うっ血をきたす肺動脈性肺高血圧モデルであるモノクロタリン肺高血圧ラットでも貧血がみられ、右心不全の肝うっ血でも実験的に貧血が起こりうることが確認された。しかし、心不全によって引き起こされる可能性のある低酸素血症は、むしろヘプシジンの産生低下を引き起こすことから、心不全のヘプシジンの産生は、いくつかの要因によって影響されることも推測された。以上の結果は、J Cardiac Fail 2014, Tohoku J Exp Med 2015および日本心不全学会に報告した。心不全では、貧血が多くみられ、貧血でなくとも鉄欠乏が生じることが知られているが、その詳細はわかっていない。一方、鋏代謝の主要ホルモンとして、主に肝臓で産生されるヘブシジンが注目されている。我々は心不全でみられる肝うっ血が、ヘプシジンを介して貧血、鉄欠乏に関わっているのではないかとの仮脱に基づき、今回いくつかの検討をした。はじめに肝うっ血モデルを作成し、検討したところ、慢性期まで貧血、鉄欠乏が継続することが明らかになった。また、肝内鉄の上昇によってBMP-6を介して同様にヘブシジンが不適切に産生される機序も推測された。

さらに、炎症や癌のない心不全症例の血中ヘプシジン濃度を測定したところ、肝うっ血のある症例で有意にヘプシジンの値が高く、一部の心不全症例の肝うっ血が貧血、鋏欠乏の要因となることが臨床例でも考えられた。右心不全から肝うっ血をきたす肺動脈性肺高血圧モデルであるモノクロタリン肺高血圧ラットでも貧血がみられ、右心不全の肝うっ血でも実験的に貧血が起こりうることが確認された。しかし、心不全によって引き起こされる可能性のある低酸素血症は、むしろヘプシジンの産生低下を引き起こすことから、心不全のヘプシジン産生は、いくつかの要因によって影響されることも推測された。また、心臓自体でも各種心不全モデルで、様々にヘプシジンの発現が変化することが示された。以上の結果は、J Cardiac Fail 2014, Tohoku J Exp Med 2015および日本心不全学会、日本循環器学会で報告した。心不全の症例は、貧血や鉄欠乏になることが知られている。しかし、その機序はよくわかっていない。一方、最近ヘプシジンという肝臓から分泌されるホルモンが鉄の代謝に対して重要な役割を持つことがわかってきた。心不全になると、肝臓ではうっ血が起こる。我々は心不全で肝うっ血がおこり、このためにヘプシジンの分泌に影響がおよび、鉄欠乏、貧血をきたすのではないかと推測した。そこでラットで肝うっ血をきたすモデルを作成し、ヘプシジンの産生、貧血、鉄欠乏について調べたところ、ヘプシジンの不適切な過剰分泌が生じて、貧血、鉄欠乏に関係することが示され、一部のヒトの貧血をもつ心不全症例でもその機序が示唆された。肝静脈狭窄肝うっ血モデルおよび右心不全による肝うっ血モデルにおいて、貧血、鉄欠乏になりうることが証明できた。また臨床の心不全症例でもヘプシジンの不適切な産生が生じることを明らかにできた。心不全でみられる肝うっ血が貧血、鉄欠乏の要因になる可能性を証明できたと考える。循環器内科今回の臨床症例は少数例での検討であった。さらに症例数を増やしてヘプシジンと貧血、鉄欠乏の関係を検討する予定である。また、鉄の投与よりもヘプシジンの産生低下を引き起こす薬剤が、このような貧血や鉄欠乏症例には有効と考えられる。その一つとして、エリスロフェロンが考えられており、これを産生するベクターを作成し、治療実験をしていきたいと考えている。肝うっ血が、ヘプシジンを介して貧血、鉄欠乏を引き起こすことについて、ラットの肝うっ血モデルを用いて証明し、科学雑誌に報告できた。現在は、心疾患モデルで肝うっ血が生じるモノクロタリンラットモデルおよび当科に入院した心不全貧血症例でそれらを解析中であり、現段階では肝うっ血が貧血に関わっていることを示唆する所見が出つつある。追加臨床例での血液検査のための物品、試薬の購入、新たなベクター作成のための物品、試薬の購入、動物実験のための動物購入代および飼育費、情報収集と成果の公表のための学会参加のための旅費と参加費のため。モノクロタリン肺高血圧ラットでの更なる検討によってその再現性を調べると伴に、臨床症例をさらに追加して調べることによって、心疾患による貧血の要因としての肝うっ血の重要性、ヘプシジンの重要性を証明していく予定である。また、左心不全によって生じてくる低酸素血症が、ヘプシジン産生にどのような影響を及ぼすかを検討し、肝うっ血だけでない心不全に生じる様々な要因が、ヘプシジンの産生、貧血、鉄動態にどのような影響を及ぼすかを検討する予定である。
ダウン症造血異常の責任遺伝子同定を目指した疾患iPS細胞ライブラリーの樹立

ダウン症候群では21番染色体上にコードされる遺伝子の量効果(gene dosage effects)によってさまざまな合併症が引き起こされる。しかし病態責任遺伝子がどこにあるのかは分からない。そこで本研究においては、ゲノム編集技術をもちいて、ヒトXIST遺伝子をテトラサイクリン誘導システム下に制御することのできる21トリソミー部分不活化iPS細胞ライブラリーの樹立を目指す。この方法は以下の通りとなる。昨年度までにヒトiPS細胞に導入するためのXISTベクターの作成と、Tet制御システムをもちいたすべてのコンストラクトを作製することができた。本年度はこれらのiPS細胞への挿入を行った。まずCRISPR/Cas9による相同組換えを利用し、Tet-On 3Gコンストラクトを19番染色体AAVS1領域へと挿入した。つぎに21トリソミーiPS細胞の21番染色体上へloxP/lox5171挿入カセットを導入した。さらにloxP/lox5171を利用して挿入カセットとの交換によりPTRE3G-XISTコンストラクトの挿入を行った。これによりすべてのiPS細胞を樹立することができた。さらに核型解析を行い、これらの核型に異常が生じていないことも確認した。想定通り、ゲノム編集技術をもちいてコンストラクトをiPS細胞へと挿入することができた。作製したiPS細胞に対してDox投与を行い、XISTによる遺伝子サイレンシングが起こるか確認する。今年度はまずヒトiPS細胞に導入するためのXISTベクターの作成を行った。XISTは可逆的な発現誘導をかけるため、Tetシステムをもちいることとした。まずTetトランスアクチベーター配列として、Tet-On 3Gコンストラクトを作成した。これはEF1aプロモーター下にTet-ON 2Gを、PGKプロモーター下にNeoをつなげたダブルプロモーター配列としたものである。つぎにTet応答因子配列として、まずEF1aプロモーター下にPuroΔTK配列がつながったものをloxP/lox5171に挟んだ挿入カセットを作成した。これは最初に21番染色体上に挿入するための挿入カセットとなる。つぎにTRE3Gプロモーター下にhuman XISTをつないだものを、やはりloxP/lox5171にはさまれたコンストラクトを作成した。ヒトXIST cDNAについては7つのフラグメントになったものを入手し、それらをつなぎあわせることで作成した。完全長のXISTを作成するのは容易でなく、その完成に難渋したが、Gibson Assembly法をもちいることで完成することができた。最終的には塩基配列を読み、これらの配列が正常であることを確認した。このようにしてすべてのコンストラクトを作成することができた。XISTの配列は17kbと大きいため、フラグメントをつなぎ合わせることは容易ではなかったが、gibson assemblyをもちいることで乗り越えることができた。年度内に目的のコンストラクト作成を完成させることができた。次年度はiPS細胞への導入を行う。まずTetトランスアクチベーター配列をヒトsafe harbor領域である19番染色体AASV1領域へ導入する。つぎにTet応答配列を21番染色体上に誘導する。ゲノム編集をもちいたヒトiPS細胞への遺伝子導入に多くの費用がかかるはずであったが、今年度はコンストラクトの完成のみにとどまった。来年度に使用する予定である。予定していた実験計画に必要な試料の調達に時間がかかり、正確な解析を行うためには十分な準備のうえ次年度に行うことが必要と思われたため。
老化マウスklothoにおける肺気腫および肺発生の分子機序の解明

肺に気腫化などの形態学的変化を来たしていないことが確認されている2週齢のKL-/-マウスと同週齢の野生型マウスの肺組織を摘出し、まずはoligo(dT)磁性ビーズを用いて選択的にmRNAを抽出し、さらに逆転写反応とPCRを行いながらビオチン標識cDNAを調製する。その後プローブをスポットしたメンブランにビオチン標識cDNAをハイブリダイゼーションさせた後、ビオチンーアビジン系の検出システムを用いて化学発光による検出を行い、2週齢の野生型マウスの肺組織と比較し、KL-/-マウスの肺にその発現が有意に増加している遺伝子をcDNA Array解析ソフトArray-ProTM Analyzerを使用して検出している。現在候補遺伝子について、野生型マウスおよびKL-/-マウスの肺における発現の相違の再現性をNorthern blot法にて確認中である。KL-/-マウスの肺に肺気腫などの形態学的変化を来たしていない2週齢において既に有意に増加してくる遺伝子は、その後に生じてくる肺気腫の発症に深く関与している可能性があり、肺気腫の発症機序の新たな解明に通じるものと考え、現在さらなる検討を進めている状況である。肺に肺気腫などの形態学的変化を来たしていない時点で、既に有意に増加してくる遺伝子は、その後に生じる肺気腫の発症に深く関与していると考えられる。そこで肺気腫が生じる以前の2週齢のklotho遺伝子ホモ欠損(KL-/-)マウスの肺における遺伝子発現を、同週齢の野生型マウスの肺におけるそれとAtlas Nylon Membraneを用いたハイブリダイゼーションにて比較検討し、肺気腫の病変形成に関与する遺伝子群の検討を行った。また、2週齢のKL-/-においてその発現の低下を認めた遺伝子のうち代表的なものには、serine protease inhibitor 2(spot intensity : KL-/-38,野生型66)といったプロテアーゼインヒビター遺伝子であった。klothoマウスにおいてみられる肺気腫の成因として、肺の構成細胞のアポトーシスや発生に関与する遺伝子群の異常、さらには肺を傷害より保護するためのプロテアーゼインヒビターの低下などが推察される。
次世代口腔がん検診システム・アルゴリズムの開発

2012年より国内初の「口腔がん検診ナビシステム」を導入した。今回は、最新の「口腔がん検診ナビシステム」について報告する。「口腔がん検診ナビシステム」は一般開業歯科医院から個別検診において寄せられた質問に東京歯科大学口腔外科学講座がコントロールセンターとして回答するものである。精査の必要性や高次医療機関への紹介をサポートする役割のほか、チェアサイドで専門医の意見が聞ける点が特徴であり、このシステムを全国に普及させ口腔がん検診の標準化を構築していきたい。口腔がんにおいて死亡率の減少と機能障害の軽減のために他の臓器同様に早期発見・早期治療が必要と考え、地域住民に対する口腔がんおよび口腔粘膜疾患の認知度を高める啓発活動の一環として対策型(集団)検診を千葉県中心に行ってきた。しかし、一度の対策型(集団)検診では、多くても受診者が200名程度であり検診事業としては十分とはいえなかった。そこで、診療所での任意型(個別)検診を行う事が、早期口腔がんの発見につながり、口腔がんによる死亡率を減少させる一助となることが考えこのシステムを考案した。口腔は他の臓器と異なり直視直達が可能であることが大きな特徴の一つである。これは歯科治療を受ける機会自体が口腔がんのスクリーニングになり得ることを意味する。そこで、各診療所での診療時に口腔粘膜および舌や頬粘膜へも目を向けてもらい、何らかの病変があった際には「口腔がん検診ナビシステム」を活用してもらうことにより受診者を精査検討し高次医療機関への紹介をサポートするものである。日本国民のがん予防と健康維持・増進のため口腔がん検診事業をさらに推進していきたいと考えている。この、口腔がん検診ナビシステムは、一般開業歯科医院から個別検診において寄せられた質問に対し東京歯科大学口腔外科講座(口腔外科学会認定専門医)がコントロールセンターとして回答するもので、精査の必要性や高次医療機関への紹介をサポートする役割のほか、チェアサイドで専門医の意見が聞ける点が特徴である(https://www.oral-cancer-navi.jp)。基幹病院まで距離があり本当に受診させるべきか否か迷うような症例の相談に特に有用性があると考えられる。今後、口腔がん対策の新たな手法としてこのシステムを全国に普及を目指す。検診には集団(対策型)検診と個別(任意型)検診があるが、口腔がんは費用対効果、検診対象者のコンプライアンスを向上の点から、集団検診よりも各診療室での個別検診が望ましい。一般にがん検診では精度管理が求められ、特に個別検診では高い感度を維持して検診医のレベル維持が重要である。我が国には、現在約10万人の歯科医師がおり、その約85%が一般開業医と言われている。しかし、偽陽性・偽陰性の問題、医療連携の不慣れなどから積極的に個別検診に協力する開業医が少ないのも現状である。今回、一般開業医が一口腔単位で管理し個別検診が可能となる歯科医師養成を目的に、チェアサイドで口外専門医の意見を随意に聞き、診察のサジェスションを得ることができるサポー・システムを考案した。平成24年度中におおむねナビシステムソフトの開発は終了し、平成25年2月1日3月15日までの間、あらかじめ当教室で行った講習会を開催した。そこに参加していただいた某歯科医師会会員(東京歯科大学倫理委員会の規程に基づいた文書に同意を得た会員)30人の協力を得て、上記期間内に、来院された口腔粘膜に病変部位を認めた患者の中で、本研究に同意いただけた患者を対象に、当ナビシステムを試験的に運用を行った。今回の試験運用では、1日に多くて10件近くの利用があった。患者の内訳は、(男性43名、女性33名、合計76名,最低年齢:5歳、最高年齢:91歳、平均年齢:59.9歳)と幅広い年齢層であった。症例の内訳は、白板症が最も多く11例、次いでアフタ性口内炎7例、ウイルス感染症・色素沈着が4例と続いた。システム自体に大きなトラブルも無く、試験運用は終了することが出来た。検診には集団(対策型)検診と個別(任意型)検診があり、口腔がんは費用対効果、検診対象者のコンプライアンスを向上の点から、集団検診よりも各診療室での個別検診が望ましい。口腔は他臓器と異なり直視直達が可能であることが大きな特徴の一つである。2012年より稼働した「口腔がん検診ナビシステム」は一般開業歯科医院から個別検診において寄せられた質問に東京歯科大学口腔外科学講座がコントロールセンターとして回答するものであるが、精査の必要性や高次医療機関への紹介をサポートする役割のほか、チェアサイドで専門医の意見が聞ける点が特徴であり、このシステムを全国に普及させ口腔がん検診の標準化を構築してきた。各診療所での診療時に歯科医師が口腔粘膜および舌や頬粘膜へも目を向け、何らかの病変があった際には「口腔がん検診ナビシステム」を活用してもらう。

一般開業医をサポートすることで任意型(個別)検診を安心して行うことが出えきるようになり、国民の口腔がんの早期発見・早期治療に寄与することが我々の責務と考える。「口腔がん検診ナビシステム」にて、実際に、ナビシステムにて相談依頼があり基幹病院に照会し、口腔がんが発見され患者が一命を取り留めた症例も一例あり、今後さらなる普及につとめたい。また、学会では、平成26年1月24日に札幌コンベンションセンターで行われた第32回日本口腔腫瘍学会総会・学術大会で発表し、優秀ポスター賞を受賞したほか、日本口腔科学会が発行している、OralScience in Japan 2014にも掲載された。口腔外科学(理由)平成25年度中におおむねナビシステムソフトの開発は終了し、某歯科医師会会員(東京歯科大学倫理委員会の規程に基づいた文書に同意を得た会員)220人以上の協力を得て、上記期間内に、来院された口腔粘膜に病変部位を認めた患者の中で、本研究に同意いただけた患者を対象に、当ナビシステム運用を行うに至った。また平成26年1月23日(木)・24日(金)に札幌コンベンションセンターにて開催された第32回日本口腔腫瘍学会総会・学術大会において「口腔がん検診ナビシステム」と題した示説発表を行い、優秀ポスター賞も受賞した。平成24年度中におおむねナビシステムソフトの開発は終了し、平成25年2月1日3月15日までの間、あらかじめ当教室で行った講習会を開催した。そこに参加していただいた某歯科医師会会員(東京歯科大学倫理委員会の規程に基づいた文書に同意を得た会員)30人の協力を得て、上記期間内に、来院された口腔粘膜に病変部位を認めた患者の中で、本研究に同意いただけた患者を対象に、当ナビシステムを試験的に運用を行うに至った。また、歯科新聞や新聞QUINT、ザ・クインテッセンス等の歯科関係雑誌に掲載も行うことができた。また、次世代口腔がん検診ナビシステムの開発という演題で、第67回NPO法人日本口腔科学会学術集会・栃木県総合文化センターで発表予定である。平成25年度中におおむねナビシステムソフトの開発は終了した。現在は実際に、某歯科医師会会員(東京歯科大学倫理委員会の規程に基づいた文書に同意を得た会員)220人以上の協力歯科医師の登録を得、来院された口腔粘膜に病変部位を認めた患者の中で、本研究に同意いただけた患者を対象に、当ナビシステムを運用することが出来ている。次年度は、登録歯科医師の数をさらに増やし、症例を一例でも多く診察し、初期の口腔がんを発見することを目指すと共に、この口腔がんナビシステムについての論文をまとめる。そこに参加していただいた某歯科医師会会員(東京歯科大学倫理委員会の規程に基づいた文書に同意を得た会員)30人の協力を得て、上記期間内に、来院された口腔粘膜に病変部位を認めた患者の中で、本研究に同意いただけた患者を対象に、当ナビシステムを試験的に運用することが出来た。さらに提携歯科医師会を増やし、実際の症例を増やしてゆきたい。また、ソフトウエアの改良を加えることによって、より迅速に診断、アドバイスが出来る環境整備を行っていきたい。
B型肝炎ウイルスの宿主DNAへの組込みと肝癌発生

B型慢性肝炎の肝細胞ではHBV DNAの組込みは多くないと考えられるものの、HBs抗原陽性肝細胞癌では、きわめて高率にHBV DNAが宿主DNAに組込まれていた。この宿主DNAにおける組込み部位は、サザン法、組込まれた領域のクローン解析、染色体解析からrandomである可能性が示唆された。また組込まれたHBV DNAの周辺には既知のoncogeneは検出されなかった。これまでにクローン化された組込みHBV DNAの構造解析では、保存されて組込まれている特定の部位はなく、Region XからC geneにかけての領域が欠損していることが多かった。この部位において宿主DNAに接続している例が多く、その解析からHBVの組込みの様式が示唆された。組込まれたHBV DNAは周囲の宿主DNAとともに、欠損や反復などの再編成を伴っており、さらに染色体レベルにおいても、欠損や転座を生じることが示された。これらはHBV DNAが組込まれた後に宿主DNAを含めて再編成を生じた例であると考えられた。HBV DNAが組込まれた肝癌DNAをNIH 3T3細胞にtransfectしこれまで知られていないTransforming geneが検出されたがHBV DNAの組込みとの関連は明らかではなかった。4種のHBVを含む類似のウイルス(Hepadna virus)では宿主における肝癌の発生率が異なっているためこれらの構造解析を行なった。Ground squirrel hepatitis virusとWoodchuck hepatitis virus(WHV)はよく似た構造を示しながら、発癌性は異なっているなど、その構造との関連は明らかではなかった。Duck hepatitis B virusを用いての感染実験の系が確立され、またダック肝癌にもviral DNAの組込みが認められた。ウッドチャック肝癌でもWHV陽性例では高率にWHV DNAが組込まれていることが示された。ウッドチャック肝癌由来培養細胞株に組込まれているWHV DNAのクローニングが行なわれた。その結果WHVでもHBVと同様にRegion XからC geneにかけての部位が組込まれておらず同部位から宿主DNAに接続していた。
脳血管ペリサイトのストレス応答における細胞内情報伝達機構に関する研究

具体的内容脳血管ペリサイトは血管新生、血液脳関門、微小循環調節に重要な役割を果たしている。本研究は、脳血管ペリサイトにおいて細胞外環境の変化が惹起する細胞応答、細胞機能について検討した。意義、重要性脳毛細血管の成熟、血管新生には脳血管ペリサイトの存在が不可欠である。また、神経再生に必須なniche微小環境の重要な構成細胞と考えられる。近年、神経活動に応じた血流の制御も行っていることや、脳血管ペリサイトには間葉系幹細胞に類似した多能性多能性を有していることも示唆されている。本研究は、脳血管ペリサイトにおけるシグナル伝達機構を明らかにした。本研究の成果は、脳血管ペリサイトの制御を介した、新規の中枢神経疾患治療法の開発に寄与すると考えられる。【具体的内容】脳血管ペリサイトは血管新生、血液脳関門、微小循環調節に重要な役割を果たしている。本研究は、細胞外環境の変化が脳血管ペリサイトにおいて惹起する細胞応答、細胞機能について検討した。【意義、重要性】脳毛細血管の成熟、脳内の血管新生に脳血管ペリサイトの存在が不可欠である。また、神経再生に必須なniche(微小環境)の重要な構成細胞と考えられる。近年、神経活動に応じた血流の制御も行っていることが示されている。脳血管ペリサイトには間葉系幹細胞に類似した多能性多能性も示唆されており、中枢神経疾患の病態生理に果たす重要な役割が注目されるようになった。本研究は、脳血管ペリサイトの細胞外の環境に応じた細胞応答及び細胞機能の変化を明らかにした。本研究の成果は、脳血管ペリサイトの機能制御を介した中枢神経疾患に対する新規治療法の開発に応用できる。脳血管ペリサイトは血管新生、血液脳関門、微小循環調節に重要な役割を果たしている。本研究は、脳血管ペリサイトにおけるシグナル伝達機構の一端を明らかにした。脳毛細血管の成熟、血管新生には脳血管ペリサイトの存在が不可欠である。本研究の成果は、脳血管ペリサイトの制御を介した新規の中枢神経疾患治療法の開発に寄与すると考えられる。
Fontan患者の日常運動の量と質が、臓器障害とFontan循環に与える影響

Fontan手術は、単心室形態あるいは二心室修復が困難な先天性心疾患に対する最終の機能的修復術である。Fontan循環は肺に駆出する心室を有さないため、循環の予備が乏しい。安静時に高い中心静脈圧は運動時にはさらに上昇するため、過度な運動はFontan手術後の遠隔期合併症につながる可能性がある。反対に、安定した慢性心不全に対する運動療法は、心血管機能、筋、神経液性因子、QOLに対する効果があり、推奨されている。これまで、Fontanの至適な日常運動量の知見はない。我々は、加速度計を用いた日常運動の量と質測定と静脈圧・静脈血管床評価を含む詳細な外来Fontan循環評価システムを作成した。本研究では、汎用運動量計を一年中携行することにより、年間を通じたすべての運動量、歩数を明らかにする。これらの経時フォローにより、個々のFontan患者の日常運動の量と質、パターンが、中期的なFontan循環や臓器障害進展にどのような影響を及ぼすかを明らかにする。これまで、11名の終日または夜間在宅酸素療法を施行中のFontan術後で一年中の計測を目標に運藤量を持続計測している。実際には装着のし忘れが生じる症例があり、装着率はおよそ7-10割であった。1例の重症児を除くと活動は良好・活発で、一日平均歩数の中央値は、厚労省の推奨の一日8000歩とほぼ同等であった。日曜日に平日と同様以上の活動がみられる児と、十分に休息できている児が存在した。循環や神経液性因子の評価は定期的に施行している。活動量計のバッテリーと記憶容量が約1か月であるため、まずは毎月来院する在宅酸素施行中の患者で計測を開始している。さらに、生体維持に重要な役割を果たし、循環の良否を反映する毛細血管の状態への影響も含めて明らかにするための、毛細血管可視化システム(CASシステム)を導入した。今後、運動量の年間測定、循環や神経液性因子の定期評価を継続し、個々のFontan患者の日常運動の量と質、パターンが、中期的なFontan循環や臓器障害進展にどのような影響を及ぼすかを明らかにする。毛細血管可視化システム(CASシステム)を用い、アウトカム評価として毛細血管および末梢循環の非侵襲的定量評価を追加する。心機能・血行動態指標だけでなく、生体維持に重要な役割を果たし、循環の良否を反映する毛細血管の状態への影響も含めて明らかにする。活動量計が予定より値引きが大きく購入することができたために残額が生じた。活動量計をより多く購入するために使用予定である。
企業の潜在的財務指標の推定とそのモデルの検証

2006年の研究では,企業の潜在的財務指標の理論モデルの構築,そのモデルの検証について分析した.まず第1に,次の2つの論文がジャーナルに掲載された(一つは掲載決定).一つはKyoto Economic Reviewに掲載された論文であり,企業の収益率を正規過程から平均回帰過程に従うモデルに拡張し,投資プロジェクト評価モデルを構築した研究である.もう一つはEuropean Journal of Operational Researchに掲載が決定した論文であり,情報の非完備性を仮定した上で企業の投資プロジェクト評価モデルを構築した研究である.なお,この研究を簡略した内容は,シグマベイスキャピタル社から2006年10月に刊行された書籍「リアルオプションと経営戦略」の第6章に掲載されている.第2に,2005年度の研究から引き続き,次の2つの研究をすすめている.一つは,企業の無形資産評価について,首都大学・木島教授および明治大学・乾助教授と共同で研究をすすめており,アイスランド・レイキャビックで開催された欧州オペレーションリサーチ学会にてその研究内容を発表した.もう一つは,企業内のエージェンシー問題(所有者と経営者の利害対立)を考慮した投資プロジェクト評価モデルの構築であり,オーストラリア・シドニーで開催されたQuantitative Methods in Finance Conferenceにてその研究内容を発表した.第3に,企業の財務データを用いて,当該モデルのパラメータを推定,企業の潜在的財務指標を推定した.結論としては,構築された当該モデルは,企業の投資戦略を考察する上で有益な指標を提供するモデルと考えられる.この内容については,さらなる研究をすすめ,来年度中に論文として纏める予定である.最後に,2年間における当該研究内容とその成果を,海外の3つの大学に短期滞在して,それぞれの専門研究者と議論した.具体的には,2006年7月にスウェーデン・ストックホルム経済大学に1週間滞在しビヨルク(Bjork)教授,2007年8月にスコットランド・スターリング大学に1週間滞在しタブナー(Tabner)講師,2007年3月に中国・香港科技大学に1週間滞在し郭(Kwok)教授と当該研究内容に関して意見交換・議論をした.さらに,郭(Kwok)教授とは共同研究を開始している.2005年度の研究では,企業が直面するリスク(不確実性に起因する損失)を考慮した企業の潜在的財務指標を推定するための理論モデルを構築した.まず第1に,次の2つの論文をジャーナルで発表した.KERで発表した論文では,企業が経済活動を行う市場が寡占市場である場合,企業間の相互依存関係から生じるリスクを考慮に入れた企業の投資プロジェクト評価モデルを構築した.エコノミアで発表した論文では,企業が経済活動における市場の情報を完全には観測できない場合,情報の不確実性から生じるリスクを考慮にいれた企業の投資プロジェクト評価モデルを構築した.第2に,企業内のエージェンシー問題(所有者と経営者の利害対立)を考慮した企業の投資プロジェクト評価モデルの研究を進めており,既存研究を拡張した理論モデルを構築し,現在は数値計算を行っている.なお,この論文を,カナダ・オタワで開催されたINFORMS Applied Probability conference,オーストラリア・シドニーで開催されたQuantitative Methods in Finance Conferenceで発表した.発表において頂いたコメントを考慮した上で,来年度中にワーキング・ペーパーとして発表し,海外ジャーナルに投稿する予定である.2006年の研究では,企業の潜在的財務指標の理論モデルの構築,そのモデルの検証について分析した.まず第1に,次の2つの論文がジャーナルに掲載された(一つは掲載決定).一つはKyoto Economic Reviewに掲載された論文であり,企業の収益率を正規過程から平均回帰過程に従うモデルに拡張し,投資プロジェクト評価モデルを構築した研究である.もう一つはEuropean Journal of Operational Researchに掲載が決定した論文であり,情報の非完備性を仮定した上で企業の投資プロジェクト評価モデルを構築した研究である.なお,この研究を簡略した内容は,シグマベイスキャピタル社から2006年10月に刊行された書籍「リアルオプションと経営戦略」の第6章に掲載されている.第2に,2005年度の研究から引き続き,次の2つの研究をすすめている.一つは,企業の無形資産評価について,首都大学・木島教授および明治大学・乾助教授と共同で研究をすすめており,アイスランド・レイキャビックで開催された欧州オペレーションリサーチ学会にてその研究内容を発表した.もう一つは,企業内のエージェンシー問題(所有者と経営者の利害対立)を考慮した投資プロジェクト評価モデルの構築であり,オーストラリア・シドニーで開催されたQuantitative Methods in Finance Conferenceにてその研究内容を発表した.第3に,企業の財務データを用いて,当該モデルのパラメータを推定,企業の潜在的財務指標を推定した.結論としては,構築された当該モデルは,企業の投資戦略を考察する上で有益な指標を提供するモデルと考えられる.この内容については,さらなる研究をすすめ,来年度中に論文として纏める予定である.最後に,2年間における当該研究内容とその成果を,海外の3つの大学に短期滞在して,それぞれの専門研究者と議論した.具体的には,2006年7月にスウェーデン・ストックホルム経済大学に1週間滞在しビヨルク(Bjork)教授,2007年8月にスコットランド・スターリング大学に1週間滞在しタブナー(Tabner)講師,2007年3月に中国・香港科技大学に1週間滞在し郭(Kwok)教授と当該研究内容に関して意見交換・議論をした.さらに,郭(Kwok)教授とは共同研究を開始している.