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ポスト冷戦期における国際秩序観とロシアのユーラシア・アイデンティティ

研究推進の結果、2017年度に獲得した中国やブラジルといった新興国間の比較の視点から、ロシアにおける「ネオ・ユーラシア主義」と呼ばれる思想には、従来強調されてきたアイデンティティの模索という要素以外にも、新自由主義批判との親和性が高い側面があることが明らかになった。また、同時代の同地域における地政学の(再)流行現象が、同根の問題意識から派生し、両者の間に接点があることが判明した。自由主義・資本主義的国際秩序が挑戦を受けていると感じる(とりわけ冷戦期の旧「西側」に属する)人々にとって、ネオ・ユーラシア主義が脅威と映る理由も、ここから一定の説明が可能になる。この成果は、一橋大学・京都大学共催のワークショップで報告され、大きな反響を得た。現在、ワーキングペーパーとして公開する準備を進めている。2018年12月に参加したアメリカでの国際学会において、これまでネオ・ユーラシア主義とロシアの対中央アジア政策の間の「ミッシング・リンク」とされてきた一次資料が発見されたという情報を得た。この資料の内容によっては、これまでの検証結果に影響を与える可能性があるため、最終年度に予定していた成果公開は、期間を延長し、より精度の高い公開ができるよう確認・検討を進めている。当該研究計画の最初の2年間に順調に収集してきた二次資料が想像以上に多く、読み込みに時間がかかっているため。また、ネオ・ユーラシア主義とロシアの外交政策との「ミッシング・リンク」とされてきた一次資料が新たに見付かったという情報を、12月に参加した国際学会で得、それを確認・検討する必要が生じたため。新しい一次資料発見を受けて、研究期間を延長し、検証内容の公開については予定を遅らせた。暫定的な結論部を含む再検証の成果は、2019年6月の国際学会で発表する予定である。また、当初の予想を超えるテーマの広がりが生じたため、個別論文に留まらず、字数制限の緩やかな単著のかたちを取って成果を公開することを視野に入れてまとめていく。初年度前半はまず、当該テーマの中核となるアレクサンドル・パナーリンの思想に関する二次資料の収集、彼の元同僚であり研究上の指導を受けた研究者のインタビュー調査を行った。これらの資料の読み込み、問題点の整理は現在に至るまで続行中である。上記過程で得られた知見をもとに、調査対象となるグループを3つに分け、分析を進める方針を策定した。「現代のユーラシア主義」と呼ばれる思想、イデオロギーの担い手には、【1】政界とのパイプを持つ「極右」思想家のグループ、【2】【1】のグループと類似した思想を紡ぎ出しつつも、政治からは距離を保ち、学界からも一定の敬意を受けている思想家・哲学者のグループ、【3】外交理念構築や政策立案に携わることもある実務家、専門家のグループ、という3つのグループがあると考えらえる。従来の研究は【1】に集中しており、思想的影響力、学界でのリスペクトという点からすれば、本格的な分析対象となってしかるべき【2】のグループへの着目が弱いといえる。また、思想・哲学界の動向がロシア政治・外交に反映されているという指摘はかねてから一部の研究者の間にあったが、この仮説を検証するべく、思想界と外交政策立案の接点となる実務家グループに関する調査も必要だという結論に達した。当初の研究計画の中心は【2】であったが、同時に【3】に関する調査も開始した。この調査、分析の現段階での成果をまとめたものを現在学会誌に投稿中である。また、この調査過程で、関連したテーマで研究に取り組む研究者との共同研究についての計画が立ち上がった。資料調査を目的とした出張については、滞在費を節約するために現地アシスタントとしてロシア人学生の協力を得た。今回は優れたアシスタントのおかげで想定以上の効率化が可能となり、資料収集やインタビューも順調に進んだ。謝金支出の有効性も証明されたといえる。ただ、分析対象を3つに分ける(増やす)という研究計画変更が生じたため、分析と成果発表には当初の予想以上の時間がかかっている。古典的ユーラシア主義とも「ネオ・ユーラシア主義」とも異なり、政策決定過程にも一定の影響を及ぼし得る(と推測される)実務家・専門家集団が唱えるプラグマティックな「ユーラシア・アイデンティティ」が、アジア諸国、特に中国との対話の可能性を切り開く理念として意味を持つこと、その形成と展開の過程は国際関係論におけるコンストラクティヴィズム的理解にも貢献し得るという説に到達し、学会誌に発表した。そこでは同時に、国際関係論と思想史研究の「相互乗り入れ」的アプローチの有効性も示すことができたと思う。また、現代のユーラシア主義の性格を明確化、相対化するために、新興国(中国、ブラジル)で顕在化している「欧米先進国が主導する国際秩序への異議・対抗」の理念や、ポーランドやトルコで再び問われている「ヨーロッパ性」との関係についても考察の範囲を広げた。その結果、従来多くの研究でなされていたような、単なる「ロシア・ナショナリズム」や「反アメリカ主義」という性格付けでは、この思想潮流は説明できないのではないかという仮説を持つに至り、本格的な検証に入った。この過程では、研究対象であるロシアや、これまで交流を行ってきた英語圏の研究者のみならず、ポーランドやブラジルの研究者との研究交流が重要なインパクトを持っており、国際研究交流の一つの成果であるといえる。2017年度は、ロシア革命から100周年の節目の年であり、現代の観点からロシア革命の意義を問い直す企画がいくつもあった。

革命によって亡命者となったユーラシア主義者の目から見たロシア革命をテーマとする依頼原稿、研究会への参加もあり、上記のような現代の文脈と100年前の歴史的文脈の間の往復運動を繰り返したが、時代と地域の要請における意外な共通性を見出す結果に至った。現在、ロシア語による論文執筆を進めている。平成28年度、29年度に進めた資料調査の結果、当初の予測を超える数の二次資料が収集できたこと、途中から調査対象を広げたことから、資料の読み込み作業が予期していたよりも遅れており、したがって学会での成果報告もずれ込んだ。この二次資料の豊富さは、ロシア社会における当該テーマについての関心の高さを反映しているというだけでなく、関心のあり方が多岐にわたることも特徴的で、単なる先行研究の整理にとどまらない慎重な類型化を必要とする。研究推進の結果、2017年度に獲得した中国やブラジルといった新興国間の比較の視点から、ロシアにおける「ネオ・ユーラシア主義」と呼ばれる思想には、従来強調されてきたアイデンティティの模索という要素以外にも、新自由主義批判との親和性が高い側面があることが明らかになった。また、同時代の同地域における地政学の(再)流行現象が、同根の問題意識から派生し、両者の間に接点があることが判明した。自由主義・資本主義的国際秩序が挑戦を受けていると感じる(とりわけ冷戦期の旧「西側」に属する)人々にとって、ネオ・ユーラシア主義が脅威と映る理由も、ここから一定の説明が可能になる。この成果は、一橋大学・京都大学共催のワークショップで報告され、大きな反響を得た。現在、ワーキングペーパーとして公開する準備を進めている。2018年12月に参加したアメリカでの国際学会において、これまでネオ・ユーラシア主義とロシアの対中央アジア政策の間の「ミッシング・リンク」とされてきた一次資料が発見されたという情報を得た。この資料の内容によっては、これまでの検証結果に影響を与える可能性があるため、最終年度に予定していた成果公開は、期間を延長し、より精度の高い公開ができるよう確認・検討を進めている。当該研究計画の最初の2年間に順調に収集してきた二次資料が想像以上に多く、読み込みに時間がかかっているため。また、ネオ・ユーラシア主義とロシアの外交政策との「ミッシング・リンク」とされてきた一次資料が新たに見付かったという情報を、12月に参加した国際学会で得、それを確認・検討する必要が生じたため。2年目には、初年度にインタビュー調査等を通じて知り合ったロシアの研究者とのネットワーク構築・強化のために、ロシア語での論文執筆と発表を行う。同時に、調査の過程で立案に至った国際共同研究のための準備を進める。資料収集が順調に進んだため、当初計画していた補完的な調査出張は行わず、初年度に収集することのできた資料の読み込みに時間を費やす予定である。幸いにも想像以上の量の資料が収集できたが、それらを読み、消化する時間が足りないことが危惧される。また、成果報告は論文やワーキングペーパーの形式で段階ごとに行うとしても、全体像を提示するには字数や紙幅に限界があるため、単著のかたちでまとめていくことも視野に入れて考えている。新しい一次資料発見を受けて、研究期間を延長し、検証内容の公開については予定を遅らせた。
細胞骨格制御系の多様なタンパク質分子認識と機能制御の構造的基礎

細胞骨格タンパク質であるERMタンパク質は細胞膜とアクチンフィラメントを連結するリンカーの役目を果たしている。このERMタンパク質はN末端にあるFERMドメインを介して接着分子など複数のタンパク質と複合体を形成し、シグナル伝達の足場を形成する。本研究では、ERM(ezrin/radixin/moesin)タンパク質のうち、ラデキシンFERMドメインと接着分子間における相互作用に着目し、FERMドメインと接着分子PSGL-1、CD43間の相互作用を定量的に解析すると共に、複合体結晶構造解析を通じて接着分子のFERMドメイン認識機構を原子レベルで明らかにした。また、構造解析から得られた情報をもとに、変異体を用いた結合実験による解析も行い、接着分子のFERMドメイン結合モチーフを提唱した。上記のERMタンパク質の研究に加えて、細胞における微小管ネットワークの構築の制御機構の解明を目的として、微小管プラス端に局在するタンパク質群の相互作用解析も進めている。微小管の挙動を制御する分子として、がん抑制遺伝子産物であるAPC(adenomatous polyposis coli)、EB1(endbinding protein 1)、CHP-170(cytoplasmic linker protein 170)などがある。これらの分子が微小管構成成分であるチューブリンヘテロダイマーを含めてどのように相互作用しているかについて研究を進めた。発現系の構築、精製法の確立に成功し、親和性レジンを用いた結合実験やBIACOREによる解析から、相互作用の関係を明らかにした。また、各分子間の相互作用の詳細を明らかにするために、複合体での結晶化条件の検索を幅広く行った。細胞膜とアクチンフィラメントをつなぐ架橋タンパク質であるERMタンパク質のFERMドメインと、接着分子との分子認識機構の解明をめざし相互作用解析を行った。本研究ではRadixin FERMドメインとシアロムチンファミリーに属する2つの接着分子CD43、PSGL-1それぞれの細胞質ドメインとの相互作用を解析するとともに、各組の複合体での結晶化を試みた。まず、124残基からなるCD43細胞質ドメインのどの部位でFERMドメインとの相互作用がみられるか検討するために、8種類のC末端欠損体、7種類のN末端欠損体を作成し、プルダウンアッセイによる結合実験を試みた。その結果、CD43は細胞膜直下に位置する細胞質領域の20残基が必要であることがわかった。次にその20残基をペプチド合成し、Biacore(表面プラズモン共鳴)により解離定数を測定した。一方、PSGL-1は膜直下の30残基程度が必要であることが報告されていたため、18残基と32残基のペプチドを合成し、同様にBiacoreによる解離定数の測定を行い、18残基でも結合能が変わらないことを確認した。以上の結果からCD43は20残基、PSGL-1は18残基の合成ペプチドを用いてRadixin FERMドメインとの共結晶化を試みた。どちらもポリエチレングリコールを主な沈殿剤とする条件下で結晶が得られ、大型放射光施設SPring-8でのX線回折データ収集に成功した。また、CD43細胞質ドメイン全長においては、ゲルろ過、動的光散乱、円偏光二色性スペクトル、分析超遠心、NMRなどを用いて物性測定を行い、特定の2次構造を持たない非常に伸びきった構造をとっていることを明らかにした。接着分子は全てFERMサブドメインCの同じ部位で逆平行βシートを形成する相互作用をしていたが、接着分子の配列の違いから異なるアミノ酸残基を認識している部分も認められた。微小管の挙動を制御する分子として、がん抑制遺伝子産物であるAPC(adenomatous polyposis coli)、EB1(end binding protein 1)、CLIP-170(cytoplasmic linker protein 170)などがある。これらの分子が微小管構成成分であるチューブリンヘテロダイマーを含めてどのように相互作用しているかについて研究を進めている。最終的にはAPCとEB1複合体結晶構造解析を目指しているが、これまでのところ解析に用いるドメインコンストラクトの作成、発現系の構築、精製法の確立に成功し、親和性レジンを用いた結合実験やBIACOREによる相互作用解析を重点的に行った。

また、構造解析から得られた情報をもとに、変異体を用いた結合実験による解析も行い、接着分子のFERMドメイン結合モチーフを提唱した。上記のERMタンパク質の研究に加えて、細胞における微小管ネットワークの構築の制御機構の解明を目的として、微小管プラス端に局在するタンパク質群の相互作用解析も進めている。微小管の挙動を制御する分子として、がん抑制遺伝子産物であるAPC(adenomatous polyposis coli)、EB1(endbinding protein 1)、CHP-170(cytoplasmic linker protein 170)などがある。これらの分子が微小管構成成分であるチューブリンヘテロダイマーを含めてどのように相互作用しているかについて研究を進めた。発現系の構築、精製法の確立に成功し、親和性レジンを用いた結合実験やBIACOREによる解析から、相互作用の関係を明らかにした。また、各分子間の相互作用の詳細を明らかにするために、複合体での結晶化条件の検索を幅広く行った。
真菌類感染性ウイルス“マイコウイルス”を利用した「菌類ウイルス育種学」の創設

真菌類に感染するウイルス,マイコウイルスの未知の多様性と機能を明らかにすることを目的とし,主に木材腐朽菌から検出されたマイコウイルス由来と考えられる二本鎖RNAの塩基配列の解読を行った.結果,2菌株に由来する二本鎖RNAからマイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の部分配列が得られた.これらの全配列を決定するため,RACE法による末端配列の解読を行ったが良好な結果が得られなかった.そこで,従来法よりもより高性能な網羅的RNAウイルス検出技術であるFLDS法による配列解読を試みている.マイコウイルスの未知の多様性と機能を明らかにすることを目的とし,研究を行っている.平成26年度は,マイコウイルス研究のフロンティアである木材腐朽菌を対象とし,菌株の収集とウイルス検出,ウイルスのゲノム解読に関する研究を進めた.前年度に取り組んだ2つの課題,1木材腐朽菌のマイコウイルス相,2ウイルスのゲノム配列と機能遺伝子,に関する成果について以下に報告する.1木材腐朽菌のマイコウイルス相国内の様々な場所から木材腐朽性担子菌類(きのこ類)を中心に約400菌株を収集した.このうち,63菌株について,セルロースカラム抽出(二本鎖RNAを抽出・精製する方法)と電気泳動によるマイコウイルス(二本鎖RNAウイルス)の検出を試みた.その結果,10菌株が何らかのウイルスに感染していることが確認された(感染率は約16%).今後は,菌株収集を継続するとともに,さらに多くの菌株を用いたウイルス検出を試みる予定である.2ウイルスのゲノム配列と機能遺伝子マイコウイルスのゲノム配列を決定するには,大量のウイルス核酸を得る必要がある.そのため,ウイルス感染菌株の液体培地を用いた大量培養を行っている.現在,感染が認められた株10菌株のうち6菌株で十分な培養菌糸(5グラム以上)が得られている.今後は,これらの培養菌糸からウイルスゲノム(二本鎖RNA)を抽出し,DNAクローニング法にてゲノム配列を決定する予定である.マイコウイルスの未知の多様性と機能を明らかにすることを目的とし,主に木材腐朽菌から検出されたマイコウイルス由来と考えられる二本鎖RNAの精製と塩基配列の解読を行った.マイコウイルス由来と考えられる二本鎖RNAが検出された10菌株から,再度,カラム精製法にて二本鎖RNAを抽出・精製し,これを鋳型としてcDNA合成を試みた.結果,カラム精製法によって得られた二本鎖RNAの精製産物ではcDNA合成に失敗した.そこで,カラム精製法により得られた二本鎖RNAをさらにアガロースゲル電気泳動し,ゲル抽出を行うことにより二本鎖RNAの精製を試みた.その結果,4菌株に由来する二本鎖RNAの精製産物が得られ,これらを鋳型とすることでcDNA合成に成功した.合成されたcDNA産物を用い,次世代シーケンサーにて塩基配列を解読したところ,2菌株に由来する二本鎖RNAにおいて,RdRp領域の部分配列を得ることができた.今後は得られたRdRp領域の部分配列をもとにプライマー設計を行い,サンガー法にてRdRp領域の全配列を決定していく予定である.カラム精製法により得られた二本鎖RNAを鋳型としたcDNA合成に失敗し,別の精製法などを検討していたために,当初の予定よりも研究の進展に遅れが生じた.精製法の検討の結果,カラム精製法にて得られた二本鎖RNAを,さらにアガロースゲル電気泳動にかけた上でゲル抽出を行うことで,cDNA合成が可能な二本鎖RNAの精製産物が得られることが分かった.真菌類に感染するウイルス,マイコウイルスの未知の多様性と機能を明らかにすることを目的とし,主に木材腐朽菌から検出されたマイコウイルス由来と考えられる二本鎖RNAの塩基配列の解読を行った.10菌株より精製した二本鎖RNAを鋳型として合成したcDNAを用い,次世代シーケンサーにて塩基配列を解読したところ,2菌株に由来する二本鎖RNAからマイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の配列が得られた.これらの領域を対象としたプライマーを設計し,PCR後,サンガー法にてRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の内部配列を決定した.サンガー法にて決定されたこれらの内部配列は次世代シーケンサーにて得られた配列と両末端を除きほぼ一致していた.これらの領域の全配列を決定するため,RACE法による末端配列の解読を行った.それぞれの領域の両末端150bp200bpを対象としたプライマーを設計し,RACE法およびDNAクローニングにより末端配列の解読を試みたが,目的の配列を得ることができなかった.この原因特定のためBLAST検索の結果を参照したところ,様々な生物や遺伝子由来と考えられる配列が得られていたことが分かった.このことから,おそらく,RACE用に設計したプライマー配列が適切ではなかったことが原因と考えられる.現在は新たなプライマーを設計し,反応条件を検討しなおした上で,再度RACE法による末端配列の解読を試みている.マイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の末端配列を決定するためRACE法を試みているが,おそらくプライマー配列が適切でなかったため,目的の配列(両末端配列)を決定することができなかった.真菌類に感染するウイルス,マイコウイルスの未知の多様性と機能を明らかにすることを目的とし,主に木材腐朽菌から検出されたマイコウイルス

由来と考えられる二本鎖RNAの塩基配列の解読を行った.結果,2菌株に由来する二本鎖RNAからマイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の部分配列が得られた.これらの全配列を決定するため,RACE法による末端配列の解読を行ったが良好な結果が得られなかった.そこで,従来法よりもより高性能な網羅的RNAウイルス検出技術であるFLDS法による配列解読を試みている.平成26年度は300菌株の収集を目指していたが,これを大きく上回る400菌株を収集することができた.菌株からのウイルスの検出についても既に63菌株が終了しており,順調に進んでいる.RdRp領域の部分配列が得られている2菌株由来の二本鎖RNAを対象に,これらのRdRp領域の全配列を決定する.得られている部分配列をもとにプライマーを設計し,PCRとサンガー法によって配列解読を行う.得られた配列情報を用いて系統推定を行い,検出されたマイコウイルスの系統的位置づけを推定する.新たなプライマーを設計し再度RACE法を行うことで,マイコウイルス由来と考えられるRdRp領域および未知のタンパク質をコードする領域の全長配列を決定する.得られた配列情報を用いて系統推定および機能解析を行い,検出されたマイコウイルスの系統的位置づけと機能を推定する.菌類多様性生物学今後は,菌株収集を継続するとともに,さらに多くの菌株を対象としたウイルス検出を試みる予定である.また,これらの培養菌糸からウイルスゲノム(二本鎖RNA)を抽出し,DNAクローニング法にてゲノム配列を決定する.得られた配列データをもとにウイルスの系統的位置づけを推定するとともに,機能遺伝子についても調べていく予定である.二本鎖RNAの精製とcDNA合成が当初の計画通り進まず,予定されていた実験を行えなかったため,次年度使用額が生じた.RACE法が当初の計画通り進まず,予定されていた実験を行えなかったため,次年度使用額が生じた.物品が予定より安く購入できたため,次年度使用額が若干生じた.二本鎖RNAの精製とcDNA合成,塩基配列決定に必要な試薬の購入や機器の使用料に充てる.RACE法と塩基配列決定に必要な試薬や消耗品の購入に充てる.培地など消耗品の購入に充てる.本研究で得た成果について発表したセミナーなどの情報を掲載.
伸長流動下と剪断流動下における高分子ダイナミクスの統一的理解

高分子量の絡み合いポリスチレン(PS)メルト系では,鎖の伸長・配向に伴って局所摩擦が減少し,伸長粘度は低下することが知られている。しかし, (1)この摩擦減少は絡み合いの有無や高分子の化学構造に依らない普遍的現象なのか,(2)鎖の伸長に加えて回転も誘起する剪断場でも同様に摩擦が減少するのか,などの重要事項は不明であった。本研究ではPSも含めた多種の高分子の非絡み合いおよび絡み合い系に対する伸長および剪断流動実験と理論解析を行い,問い(1)および(2)に関する完全な知見を確立する。
無臭ガスの情報コード化と知覚画像化（無臭ガス用カメラ）

無臭ガスの情報化を目指し、無臭ガス成分である過酸化水素、乳酸、コリンについて、各酸化還元酵素を利用したガスセンサを開発した。3種のガスセンサは互いにクロストークすることなく、過酸化水素、乳酸、コリンの選択的なガス計測が可能で、インクジェットプリンタにより印刷した3成分のガス情報コード(3ビット、8パターン)の認識に成功し、過酸化水素ガスの可視化も実現し、新規な情報システムの可能性を示した。本研究の目的は、「無色・無臭の化学成分」と「その成分を認識する酵素」を実験にて検討し、次に高感度な無臭ガス計測へと展開する。さらにインクジェットプリンタを用い、無臭ガス成分での情報コード印刷を進め、無臭ガスを生化学的に発光や蛍光へと誘導し、高感度カメラで撮影することで、知覚画像化する。つまり無臭ガスを使った秘匿性の高い、化学的な情報コードシステムを構築すると共に、人では知覚できない無色無臭ガスを知覚化することで「新たな情報化社会」を創生することである。初年度(27年度)には無臭成分バイオ測定について、無臭情報コードのための無臭ガス成分について、認識酵素の選出を実施した。本課題ではまず乳酸、過酸化水素の2種の揮発性を有する成分について、それぞれを触媒する酵素として、乳酸酸化酵素(LOD)とカタラーゼ(catalase)について、そのセンシング利用が可能か検討した。LODは酸素を電子受容体として、「乳酸」を酸化することで、ピルビン酸をそれぞれ生成する。この酸素濃度の減少を酸素分析装置で測定したところ、無色無臭成分である乳酸の検出が可能であった。一方、カタラーゼは「過酸化水素」を基質として、水と酸素を生成することから、酸素濃度の増加を酸素分析装置で測定した結果、カタラーゼにて無臭の過酸化水素の検出が可能であることがわかった。医療用バイオセンサの技術は、僅かな化学成分を特異的に検出できることから、申請者がこの技術を利用し、開発してきた生化学式のガスセンサ(バイオスニファ)は混合ガス中でも、対象とするガス成分だけを検知できる。また、本センサ技術は嗅覚ではなく、体内での薬物代謝で機能する酵素を利用することから、人の嗅覚では知覚できないような無臭ガス成分を対象としたガスセンサの構築も可能である。そこで27年度には、まず乳酸やコリン、過酸化水素、ウルソル酸、バルプロ酸、安息香酸などは人の嗅覚で認識できず、知覚することができない成分のなかで、無臭情報コードのための無臭ガス成分および認識酵素の選出を実施することである。これに対して本課題では、まず乳酸、過酸化水素の2種の揮発性を有する成分について、それぞれを触媒する酵素として、乳酸酸化酵素(LOD)とカタラーゼ(catalase)について、そのセンシング利用が可能か検討した。その結果、LODを用いることで酸素濃度の減少を酸素分析装置で測定し、無色無臭の乳酸ガスの検出が可能であった。またカタラーゼを認識素子とすることで「過酸化水素」を基質として、生成される酸素濃度の増加を酸素分析装置で測定し、カタラーゼにて無色無臭の過酸化水素の検出であることを示した。現在、同様な手法にて無臭成分であるコリンについての実験を実施している。また光計測の可能性についても検討を進めている。つまり無臭ガスを使った秘匿性の高い、化学的な情報コードシステムを構築すると共に、人では知覚できない無臭ガスを知覚化することで「新たな情報化社会」を創生することである。28年度には前年度の結果を踏まえ、他の無臭成分(コリンなど)及び酵素の選択を実施し、混合ガスでの相互作用を調べると共に、インクジェットプリンタを導入し、複数の無臭成分にて無臭情報コードの印刷を行った。前年度に無臭ガス成分である乳酸と乳酸酸化酵素の組み合わせ、また過酸化水素とカタラーゼの組み合わせを確認しており、同様な手法にて無臭成分であるコリンについて、コリン酸化酵素を利用した無臭ガス計測の可能性を調べた。また無臭ガスのコード化では、互いのガス成分が他のセンサに影響をしないことが重要である。各酵素はその立体構造で基質成分を構造認識することから、高い基質特異性が有するが、基質以外の成分が影響を示すかを実際の無臭ガス(複数種)とガスセンサ(複数種)を用いたところ、互いにクロストークをしないことを確認した。また、無臭情報コードを媒体に印刷するためにインクジェットプリンタにて、無臭ガス成分の印刷を実施した。実験では、複数の無臭ガス成分の溶液を対象にカートリッジ内に装填して、PC制御を行うことで、無臭ガスコードの印刷が可能であった。酵素を用いたバイオセンサの技術は、化学成分を特異的に検出できることから、申請者がこの技術を利用し、開発してきた生化学式のガスセンサ(バイオスニファ)は混合ガス中でも、対象とするガス成分だけを検知できる。

そこで27年度には、乳酸、過酸化水素の2種の揮発性成分について、乳酸酸化酵素(LOD)とカタラーゼについて、それぞれ無色無臭の乳酸ガスと、過酸化水素をそれぞれ検出できることを示した。この結果を踏まえ、28年度には同様な手法にて無臭成分であるコリンについて、コリン酸化酵素を利用したセンサにおいて無臭ガス計測の可能性を調べた。その結果、コリン酸化酵素を利用したセンサにて無色無臭のコリンの測定が可能であった。次に、無臭ガスのコード化では、ガス成分が互いに他のセンサに影響をしないことが重要であることから、基質以外の成分が影響を示すかを実際の無臭ガス(複数種)とガスセンサ(複数種)を用いたところ、互いに影響せずクロストークせず、選択的に検知できることを確認した。これは各酵素がその立体構造で基質成分を構造認識することに基づく高い基質特異性、つまり選択性を以って対象ガスを検出したことを意味する。他方、無臭情報コードを媒体に印刷するためにインクジェットプリンタにて、無臭ガス成分の印刷を実施したところ、複数の無臭ガス成分の溶液を利用して無臭ガスコードの印刷が可能であった。今後は無臭コード印刷したガス情報コードの認識(スキャニング)を確認し、無臭ガスの知覚画像化(可視化)へと展開する。本研究の目的は、「無色・無臭の化学成分」と「その成分を認識する酵素」を実験にて検討し、次に高感度な無臭ガス計測へと展開する。さらにインクジェットプリンタを用い、無臭ガス成分での情報コード印刷を進め、無臭ガスを生化学的に発光や蛍光へと誘導し、高感度カメラで撮影することで、知覚画像化する。つまり無臭ガスを使った秘匿性の高い、化学的な情報コードシステムを構築すると共に、人では知覚できない無臭ガスを知覚化することで「新たな情報化社会」を創生することである。29年度ではこれまでの結果をもとに、複数の無臭ガス(乳酸、コリン、過酸化水素)のセンサを構築し、インクジェットプリンタで印刷作製した無臭情報コードについて、ガス情報コードの認識を実施した。実験では、3種の無臭ガスを検出できるように、センサプローブを複数購入し、3種の無臭ガスを検知できる酵素センサをそれぞれ準備した。そして予め、3種の無臭ガスを印刷した紙片(8パターン)を作製し十分に気化させ、ガス検知を実施した。実験の結果、3種の無臭ガスを選択的に検知し、それぞれがクロストークすることなく、8パターン(3ビット)を読み取ることができた。また無臭ガスの知覚画像化として、無臭成分である過酸化水素をペルオキシダーゼの触媒反応にてルミノール発光を発生させ、高感度CCDカメラを用いて撮影した。実験では、酵素メッシュをルミノール溶液に浸漬した後に、高感度カメラの前面に設置し、過酸化水素のミストおよびガスに負荷したところ、発光現象を撮像し、無臭ガスの可視化が可能であった。しかしながら、乳酸とコリンについてはガス濃度が低く、可視化には至らなかった。無臭ガスの情報化を目指し、無臭ガス成分である過酸化水素、乳酸、コリンについて、各酸化還元酵素を利用したガスセンサを開発した。3種のガスセンサは互いにクロストークすることなく、過酸化水素、乳酸、コリンの選択的なガス計測が可能で、インクジェットプリンタにより印刷した3成分のガス情報コード(3ビット、8パターン)の認識に成功し、過酸化水素ガスの可視化も実現し、新規な情報システムの可能性を示した。
発汗閾値および代謝閾値からみた温熱環境適応能の個体差とその影響要因の解明

本研究では、発汗開始および代謝上昇時の閾値体温間の幅への影響要因を明確に見いだせなかったが、発汗開始までの耐暑反応および代謝亢進までの耐寒反応には、最大酸素摂取量、日常活動量、血管機能が、深く関わっていることが明らかとなった。また、耐寒反応に関わる要因の一つである基礎代謝量に食物摂取量と日常暴露気温が関連しており、これら2要因は基礎代謝量の変化を通じて寒冷曝露時の代謝上昇までの時間に関連することが示された。本研究は、寒冷時の代謝亢進の身体深部体温閾値および暑熱時の発汗開始の深部体温閾値からみた温熱環境適応能に影響を及ぼす要因について、血管機能、自律神経機能および生活習慣、生活環境要因から検討し、耐寒性、耐暑性の個体差を評価すること目的とした。本年度は成人男性12名(21.3±1.7歳)を対象に、暑熱曝露中の発汗開始時の体温(体温閾値)と生活習慣、持久的運動能力および血管柔軟性の関係について実験的に検証した。方法:(1)下肢温浴実験:被験者は室温25°Cに設定した人工気候室内で十分な椅座位安静を保った後、水温42°Cに設定した浴槽に下腿部を浸漬し30分間保持した。このときの発汗量、直腸温、皮膚温、皮膚血流量、酸素摂取量、心電図、血圧を測定し、発汗開始時の状態を評価した。(2)血管機能検査:血管内皮機能と血管硬化度を指標として行った。血管内皮機能は、前腕部反応性充血時の前腕部血流量を測定し、その変化量から評価した。血管の硬化度の指標として、指先から加速度脈波を測定し、APGIで評価した。(3)持久的運動能力検査:自転車エルゴメーターによる漸増負荷運動を実施し、疲憊時の酸素摂取量(VO2max)を指標とした。(4)その他:生活習慣・生活時間のアンケート調査、日常活動量・実生活空間の温湿度の測定を行った。結果:VO2maxと日常活動量、APGI、発汗開始時の平均皮膚温の間で正の相関が、日常活動量と下肢温浴曝露終了時の大腿部発汗量との間で負の相関が示された。これらの結果は、日常活動量が多い人ほど血管の柔軟性が向上し、その結果暑熱負荷時の皮膚血管拡張反応の増大および皮膚血流の増加をもたらしたことを示しており、生活習慣、特に運動習慣が発汗によらない熱放散能力を高める可能性が示唆された。本研究は、寒冷時の代謝亢進の体温閾値および暑熱時の発汗開始の体温閾値からみた温熱環境適応能に影響を及ぼす要因について、血管機能、自律神経機能および生活習慣、生活環境要因から検討し、耐寒性、耐暑性の個体差を評価すること目的とした。昨年度は冬季の暑熱暴露実験を実施し、血管柔軟性が発汗によらない非蒸発性熱放散と関連する結果を得た。本年度は、夏季に昨年冬季と同じプロトコルで水温42°Cに設定した浴槽への下肢温浴実験、反応性充血時の血流量および加速度脈波からみた血管機能検査、持久的運動能力検査、生活習慣調査(食物摂取頻度、活動量、実生活空間の温熱環境測定)を行い、夏季における発汗開始体温閾値の個体差の検討を行った。夏季実験の結果、血管柔軟性の指標である加速度脈波指数と発汗開始時の皮膚血流量との間に有意な相関関係が認められた。また、持久的運動能力の指標である最大酸素摂取量と発汗開始時の皮膚温および加速度脈波指数との間にも有意な相関関係が認められた。さらに日常の活動量と発汗開始時における平均皮膚温との間にも有意な相関関係が得られた。これらの結果は、昨年度得られた冬季での結果と同様に、生活習慣、特に運動習慣が発汗によらない熱放散能力を高める可能性が示唆するものであった。また、寒冷曝露時の代謝亢進開始時の体温(代謝亢進体温閾値)とその個人差の評価、ならびに代謝亢進体温閾値に影響を及ぼす要因を検討するために、健康な成人男性10名を対象に、冬季に寒冷曝露実験、血管機能検査、持久的運動能力試験、生活習慣・環境調査を実施した。寒冷曝露実験は、室温約28°Cの人工気候室にて十分に安静後、90分間で約5°Cまで室温を低下させた時の直腸温、皮膚温、皮膚血流量、酸素摂取量、心電図、血圧を測定し、代謝亢進時の状態を評価した。データは現在解析中である。

本年度は、過去2年間に実施した下肢温浴実験、寒冷曝露実験、持久的運動能力試験、血管機能検査、自律神経機能検査、生活習慣調査(食物摂取量、日常活動量、被験者周囲の温熱華僑要因)を追加実施し、被験者例数を増やし、温熱環境要因や日常の生活習慣が寒冷時の代謝亢進の身体深部体温閾値および暑熱時の発汗開始の深部体温閾値からみた体温調節機能への影響の検討を行った。血管機能、最大酸素摂取量、日常活動量、自律神経機能、食物摂取量、被験者周囲の温熱環境要因と発汗閾値体温および代謝閾値体温間の明確な関係は得られなかった。しかし、暑熱負荷時および寒冷曝露時の体温調節反応のいくつかの指標との間に以下に示すような相関関係が得られた。血管柔軟性の指標である加速度脈波指数及びd/aと発汗開始時皮膚血流量及び皮膚温の間に正相関が認められ、加速度脈波指数と代謝上昇時の皮膚血流量の間に負の相関が認められた。最大酸素摂取量及び日常活動量と発汗開始時の皮膚温の間に正相関が認められ、日常活動量と寒冷曝露時の前腕部皮膚温の間に負の相関が得られた。また、日常活動量と代謝亢進までの時間の間に正相関が認められた。最大酸素摂取量と加速度脈波指数の間にも有意な相関関係が得られた。食物摂取量と基礎代謝量に正の相関が認められ、冬季の昼間の被験者周囲気温と基礎代謝量との間に負の相関が得られた。以上のことから、発汗閾値および代謝閾値体温からみた体温ニュートラルゾーンへの影響要因は見いだせなかったが、発汗開始までの耐暑反応には最大酸素摂取量、日常活動量、血管機能が大きく関わっており、代謝亢進までの耐寒反応には最大酸素摂取量、日常活動量、血管機能が深く関わっていることが示唆された。また、耐寒反応に関わる要因の一つである基礎代謝量に食物摂取量と日常暴露気温が関連しており、これら2要因は寒冷曝露時の代謝上昇までの時間に関連することが示唆された。
光熱ナノ粒子周りの熱流動現象を利用した高度ナノ物質濃縮

環境,生化学を始めとした様々な分野において,センシング対象の微小化が進み,ナノ物質計測の重要性は増している.本研究は,分析対象であるナノ物質を高度に濃縮することによってセンシングの高感度化を実現することに着目する.本課題では,プローブとしての金属ナノ粒子をプラズモニクスを用いて局所加熱して極めて微小な温度分布を形成し,温度分布に起因した複数の輸送現象を体系化することで,ナノ物質センシングを高度化させるための物質操作技術の確立を目指す.環境,生化学を始めとした様々な分野において,センシング対象の微小化が進み,ナノ物質計測の重要性は増している.本研究は,分析対象であるナノ物質を高度に濃縮することによってセンシングの高感度化を実現することに着目する.本課題では,プローブとしての金属ナノ粒子をプラズモニクスを用いて局所加熱して極めて微小な温度分布を形成し,温度分布に起因した複数の輸送現象を体系化することで,ナノ物質センシングを高度化させるための物質操作技術の確立を目指す.
上皮性皮膚腫瘍の腫瘍化に関わる分子細胞遺伝学的解析

有棘細胞癌11例(T1,2N0M0の初期病変)(男6例、女5例)、ボーエン病10例(男7例、女3例)の検体の解析を詳岬に行うとともに、症例数を増すために新たなサンプルの収集を行った。CGH法よる解析の結果、ボーエン病と有棘細胞癌とに共通してみられる異常として3q,8qのgainおよび17pのlossが見つかったため、この領域に上皮性皮膚腫瘍の発症に共通して関与する遺伝子が存在する可能性が高いと考え、DNAマイクロアレイを用いてスクリーニングに取りかかっているところである。その一方で、2q21.1-q24.3(p<0.004)のlossはボーエン病のみに認められ、3pter-p21.2(p<0.001)のlossは有棘細胞癌のみに認められた。その他の領域にもボーエン病と有棘細胞癌の初期病変とではゲノムの一次構造のレベルにおいて種々の違いがあるという結果を得た。これは、ボーエン病と有棘細胞癌の初期病変では遺伝的に異なることを示唆しており、ボーエン病の疾患概念に新たな一石を投じる重要な結果であると考える。さらに、ボーエン病、有棘細胞癌それぞれに特異的に関与する遺伝子の同定にも取り組み始めている。有棘細胞癌11例(男6例、女5例)、ボーエン病10例(男7例、女3例)の検体の解析を行った。有棘細胞癌に関しては、ボーエン病と比較検討するために全例ともT1,2NOMOの初期病変を対象とした。解析を行った全例にDNAコピー数の変化が認められた。有棘細胞癌でのDNAコピー数のgainは3q(6例)、8q(5例)、20q(5例)で高率に認められた。そのうち、3qの5例、8qの5例、20qの4例ではamplificationとして認められた。ボーエン病でのDNAコピー数のgainは1p(8例)、1q(9例)、7q(6例)、20p(7例)、20q(6例)で認められ、5qの3例、20pの3例でamplificationとして認められた。またDNAコピー数のlossは有棘細胞癌では3q(7例)、5q(5例)、8p(5例)、17p(5例)で認められ、ボーエン病では5q(5例)、16q(5例)、17p(7例)、17q(5例)、で高率に認められた。コピー数の異常はボーエン病の方が有棘細胞癌よりも多数の症例、および多数の染色体で認められたが、コピー数のamplificationは有棘細胞癌の方が高率に認められた。以上の結果を基に,DNAマイクロアレイを用いて各候補遺伝子領域のスクリーニングを行い,発癌に関与する原因遺伝子の同定を目指す予定である。
近赤外・可視光による遠方銀河団の観測

私は、赤方偏移1.1のクェーサーQ1335.8+2834の天域についてR、I、Kの3色で測光観測し、得られた画像の詳細な解析を行った。その結果、可視光に比べて近赤外線で明るい天体がクェーサーの周辺に多数クラスタリングしていることを発見した。これらの天体の色、等級は、大まかには古い楕円銀河が赤方偏移1.1にあるとした場合の予想と符号する。赤方偏移1.1を越える銀河団は最近になって他に1例報告されているのみであるので、今回の結果は大変貴重である。また、深い近赤外線による撮像、及び非常に深い可視光での撮像を組み合わせることが、遠方の銀河団の検出に大きな威力を発揮することが証明された。観測された銀河サンプルの色、光度分布から、古い銀河の形成時期のばらつきの大きさや、星形成を行っている銀河の割合などについて、この銀河団における銀河種族の構成が近傍や中間赤方偏移の銀河団中の銀河とはかなり異なる部分もあることは注目に値する。今後さらに詳細な観測、解析を発展させたいと考えている。今回の観測データの解析は本科研費で購入したワークステーションなどを用いて行った。主要な研究結果については現在論文を投稿準備中であるが、関連する研究成果の報告は日本天文学会平成9年度春期年会や平成8年9月にスペインで行われたQuasar Hostsに関する研究会などで報告済み、または報告予定である。
インド中世前期におけるシヴァ教文学―一般信徒向け文献を中心として―

インド中世前期のシヴァ教研究は、この数十年の間に新資料の発見が相次ぎ大きく進展している。本研究者はそうした新資料の中から、一般信徒向けにシヴァ神話を初めて体系化した『スカンダプラーナ』の校訂研究を行う共同プロジェクトに参加してきたが、本研究課題ではその成果として第3169章の校訂研究を第2B巻(共著)と第3巻(単著)として刊行し、成立年代等の基礎的研究をほぼ完了した。また、同文献に言及される北インドのシヴァ教聖地の現地調査を行い、文献成立時のシヴァ教の広がりを遺跡等の歴史資料で跡付けた。加えて、長編詩『カッピナ王の興隆』においてシヴァ教優位の下に仏教との共存が提唱されていることを解明した。1.国際共同プロジェクトとして行われている『スカンダプラーナ』の校訂研究のうち、単著である第3巻については最終作業を終え、現在タイプセッティング中である。共著となる第2B巻については、担当部部分の校訂をすべて終了し、8月に2週間、3月に1週間Groningen大学にて行われたプロジェクトのセッションにおいて他のメンバーの担当部分とともに集中的に討議し改訂版を作成した。また謝金を用いて、12世紀以降に著された同名の『スカンダプラーナ』の中で上記の原作ともっとも関係が深いと思われるAvantya巻の電子テキスト作成に取りかかった。3. 6月にカシュミール(インド)のSrinagarにて中世の寺院遺跡・写本の調査を行ったが、現地のやむをえない状況のため、大学図書館が閉鎖し写本の収集にまでは至らなかった。4.パーシュパタ・ヨーガ儀軌については、ヨーガによる自死(utkranti)を扱う章の分析を行い、初期のマントラ道文献との類似点と相違点を解明した。5. 1月にカンボジアのアンコールで開催された国際集中サンスクリット合宿に参加し、アンコール遺跡中のシヴァ教関係のサンスクリット碑刻文・遺跡を調査し、Goodall博士等のフランス極東学院の専門家とともにいくつかの碑刻文を講読する機会を得た。1.スカンダプラーナの国際共同プロジェクトについては、単著である第3巻について新たに手に入ったネパール写本のカラー写真を使って最終校合を行った。第2B巻についてはテキストに使われる特異な韻律について調査しその成果を共同執筆した序章に含めた。序章の内容は6月にGroningen大学にて行われたプロジェクトの会合において集中的に討議した。8月には第2B巻の校訂テキストの最終責任者として、すべての章についてBodlean図書館(Oxford大学)に所蔵される写本とロトグラフとの校合を行い最終校を作成した。2.『スカンダプラーナ』第4巻について、Bakker教授の引退に伴いBisschop教授(Leiden大学)と本研究者が中核となってプロジェクトを継続することを決定し、Torzsok博士(Lille大学)を共著者に加え校訂研究を開始した。本研究者は第72章のスカンダ誕生神話を担当、3月末にフランス極東学院にて開催されたシヴァ教史のWorkshopにおいてその最初の成果を報告した。4.『スカンダプラーナ』と『ヴィシュヌプラーナ』の比較検討を行った。その結果5世紀におけるグプタ朝の崩壊に伴うヴィシュヌ教からシヴァ教への宗教文化の変化にとって、この2作品の比較が重要な視点を与えることが判明した。その最初の成果は9月末にLeiden大学にて開催されたシンポジウムにて報告した。5.『Kapphinabhyudaya』にみられるタントラの教理・儀礼への言及を収集し8月の印度学仏教学会にて報告した。2013年度後半には、高度な詩的技巧を駆使しているため十分な校訂がなされていない第6章の解読を開始した。1.本研究の柱の一つであり、国際共同プロジェクトとして行われる『スカンダプラーナ』校訂研究については、本研究者が担当する31, 34章および海外研究協力者のBisschop(ライデン大学教授)と共同校訂となる32章の校訂を終え、8月後半にグロニンゲン大学(オランダ)で行われたスカンダプラーナ・プロジェクトの集会にて討議し、最終版を完成した。10月以降は引き続き3841章の校訂を行っており、これは2012年8月後半に行われる同プロジェクトの集会にて討議する予定である。2.同プロジェクトのメンバー7名にて、1月に北インドでスカンダプラーナに関わるシヴァ教遺跡・碑文の現地調査を行った。主な調査地域はHardwar, Kalinjar, Barbar, Mundeshvariである。特にMundeshvariでは同文献中のMandalesvaraをこの地と同定する強い証拠を得た。またKalinjarでは912世紀にかけてのパーシュパタ派及びタントラ系のシヴァ教の影響を示す豊富な資料を見出すことができた。

3.本研究のもう一つの柱であるシヴァ信仰を示す詩については、9世紀カシュミールで著された長編詩『カッピナ王の興隆』が、従来考えられていた仏教詩ではなくシヴァ教詩であり、仏陀がシヴァの下位の顕現の一つとみなされていることを解明し、9月の日本印度学仏教学会と1月にデリーで開催された国際サンスクリット学会にて発表した。成果は印度学仏教学研究に論文として掲載した。4. 8月に中部ジャワで行われた国際夏季集中サンスクリット合宿に参加して、東南アジアのサンスクリット碑文の専門家であるGriffiths博士(フランス極東学院ジャカルタ支部長)とともに、612世紀における王権によるシヴァ教の庇護を示すいくつかの碑文を読む機会を得た。Griffiths博士とは研究情報の交換を続けている。1.スカンダプラーナの国際共同研究については、第3巻を単著として、第2B巻を共著として出版し、当該文献全体のほぼ3分の1の校訂テキストとシノプシスを公刊することができた。特に第3巻の序は、当該文献の写本の相互関係に関する詳しい分析とそれに基づく文献の年代考察を含んでおり、当該文献の今後の研究の基礎となるものである。またこれによって、プラーナ文献の校訂研究のあるべきモデルを学界に提供した。平成25年度後半には、次の第4巻のための共同研究チームを発足させ、最終年度には、第4巻(第7095章)に含まれる章のうち、第7274、8081章の校訂とシノプシスを作成し、9月と3月のライデン大学における集中検討会において検討した。2.上記の国際共同研究のもう一つの成果として、NWO(オランダ学術機構)研究費によるスカンダプラーナ・プロジェクト主宰者Hans Bakkerの単著として『The World of the Skandapurana』を刊行した。この著作は単著ではあるが、本研究者も参加している共同研究(一部は当該研究課題との共同)の最終成果であり、合同で行った現地調査の成果でもある。特に本研究者は`Goddess from the East'の章に執筆協力者として協力し、当該章にてKotivarsa-Mahatmyaの校訂テキストを公刊した。3.プラーナ文献中のシヴァ神話については、最終年度にリンガ、マツィヤ、クールマ、ヴァーマナ各々のプラーナ中のシヴァ神話の構成を分析し、スカンダプラーナと比較した結果、どの文献にもスカンダプラーナの影響はみられるが、特にマツィヤとヴァーマナの神話構成には顕著な影響がみられることが判明した。4.『Kapphinabhyudaya』の作品中の宗教政策を当時のカシュミールの政治状況と比較・考察し、2月にウィーンで開催された会議にて報告した。サンスクリット文献学、古代・中世ヒンドゥー教1.本研究課題の中核である『スカンダプラーナ』校訂研究については、当初の計画以上に進展し、26年度に完了する計画であった第2B巻について25年度中に完成、出版できる見込みがついたのは最大の成果である。しかしこちらの校訂研究に時間をとられたために、すでに研究を終え24年度中にその結果を論文にまとめ刊行する予定であった同文献の構成分析については、まだ論文にまとめきれていない。またカシュミールのシヴァ教詩『Kapphinabhyudaya』についても、そのもとで作者が活躍した王が建立したシヴァ寺院遺跡などをSrinagarで調査できたのは収穫であるが、予定していた写本の校合はあまり勧めることができなかった。
臨床応用をめざした培養角膜内皮シートの開発

羊膜をキャリアーとして用いた培養ヒト角膜内皮細胞(C-HCEC)シートを作成し、その形態および生体での機能を検討した。継代したC-HCEC(47歳、P5)を用い、上皮剥離した羊膜上に6.0×10^3cells/mm^2のC-HCEC浮遊液を播種し、37°C5%CO_2で2週間培養した。作成されたC-HCECシートは光学および電子顕微鏡にて形態を調べた。また、白色家兎を用いこのC-HCECシートの移植を行った。コントロールとして上皮剥離した羊膜のみを移植し、術後より前眼部所見の観察、角膜厚の測定を行った。羊膜上の角膜内皮細胞は3340cells/mm^2の細胞密度で扁平かつ多角形で、互いに密に連続する角膜内皮層を形成していた。生体への移植実験では、コントロール群では著名な角膜浮腫が認められたが、C-HCECシート移植群では浮腫は認められず、角膜の透明性も保っており、角膜厚も著明に薄かった(p<0.05、術後7日、C-HCEC群:974.0±26.1μm、コントロール群460.7±117.7μm)。羊膜をキャリアーとして実際の角膜に近い細胞密度、形態のC-HCECシートを作成した。このシートを用い、生体内に移植した角膜内皮細胞は機能していることが示唆された。角膜内皮疾患に対するC-HCEC移植の可能性、そのキャリアーとしての羊膜の可能性が今回の検討によって示唆された。
神経膠腫におけるミトコンドリア透過性遷移とBcl-2ファミリー蛋白発現の解析

本研究の目的は膠芽腫細胞株においてアポトーシスに関与する種々の遺伝子異常を系統的に明らかにして,それら細胞株について低O_2耐性が各種腫瘍抑制遺伝子の状態に依存するものであるか,そしてそれがミトコンドリア透過性遷移とどう関係するのかをBcl-2ファミリー蛋白発現の状態と関連づけ明らかにすることである.本研究にて以下のような研究結果が得られている.3)膠芽腫の一部ではEGFR増幅とPTEN変異によりAkt活性が極端に上昇しており,これがBadを介してapoptosisを強力に抑制していることが明らかになった.4)また一部ではp53変異によりp53依存性apotosis経路がブロックされていることが判明した.5)これら細胞株におけるミトコンドリア透過性遷移自体は種々の負荷に対して明らかには低下はしていないという結果を得た.すなわち,アポトーシスはミトコンドリアの上流経路でブロックされている.これら結果をまとめ近く誌上発表の予定である.本研究の目的は膠芽腫細胞株においてアポトーシスに関与する種々の遺伝子異常を系統的に明らかにして,それら細胞株について低O_2耐性が各種腫瘍柳制遺伝子の状態に依存するものであるか,そしてそれがミトコンドリア透過性遷移とどう関係するのかをBcl-2ファミリー蛋白発現の状態と関連づけ明らかにすることである.本年度においては以下のような研究結果が得られている.2)これら細胞株におけるミトコンドリア透過性遷移自体はCa++,低O_2負荷に対して他の細胞に比べ明らかには低下はしていないという結果を得た.3)Bcl-2の発現はp53の変異株では上昇しており,Baxの発現はp53変異株で低下していたが,ミトコンドリア透過性遷移の状態とは明らかな関連を認めなかった.これらの結果から,膠芽腫細胞でのアポトーシス誘導が起こりずらい原因として,ミトコンドリア透過性遷移の後に起こるcytochrome Cやapoptosis inducing factor(AIF)の遊離に対し,膠芽腫細胞では不応性となる何らかの原因があると推定された.これを受け,次年度においてはAIFの異変が膠芽腫細胞に存在するかどうかを検討するとともに,AIFを膠芽腫細胞に誘導発現してアポトーシスが惹起されるかどうかを検討する予定である.本研究の目的は膠芽腫細胞株においてアポトーシスに関与する種々の遺伝子異常を系統的に明らかにして,それら細胞株について低O_2耐性が各種腫瘍抑制遺伝子の状態に依存するものであるか,そしてそれがミトコンドリア透過性遷移とどう関係するのかをBcl-2ファミリー蛋白発現の状態と関連づけ明らかにすることである.本研究にて以下のような研究結果が得られている.3)膠芽腫の一部ではEGFR増幅とPTEN変異によりAkt活性が極端に上昇しており,これがBadを介してapoptosisを強力に抑制していることが明らかになった.4)また一部ではp53変異によりp53依存性apotosis経路がブロックされていることが判明した.5)これら細胞株におけるミトコンドリア透過性遷移自体は種々の負荷に対して明らかには低下はしていないという結果を得た.すなわち,アポトーシスはミトコンドリアの上流経路でブロックされている.これら結果をまとめ近く誌上発表の予定である.