hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ラオス・タイを中心としたメコン流域の途上国における青少年の発達資産と健康

ラオスとバングラデシュの青少年の健康的発達に資する心理社会的資源(発達資産)を探索し、尺度開発することである。ラオスとバングラデシュの教員養成系大学でインタビューなどによる質的研究を行い、構成概念を抽出した。それをもとに質問項目を作成し、10代後半から20代前半の若者を対象に調査を実施し、尺度開発を行った。その結果、支援的社会環境、安全な環境、魅力的な人間関係、規範と参加、積極的学習態度、肯定的価値観、社会的スキル、自己肯定感、文化的価値と行動、を測定する尺度が作成できた。これらは、幸福感、主観的健康、コントロール感と関連があり、若者の健康的発達に貢献する心理社会的資源であると考えられる。ラオス、タイにおける青少年の発達資産の質問紙を作成するに当たり、まずラオスにおいてルアンプラバンとビエンチャンにある国立大学の学生と教員を対象に、インタビュー調査とオープン・クエッションによる自記式調査を行った。発達資産を直接質問するのは困難であるため、まず「ラオス人にてとって良い大人とはどのような特徴がありますか」と良い大人の特性を明確にした上で、そのような大人になるために子どもや青少年に必要な経験や資質は何ですか」と質問をした。その後、さらにサヴァナケートの国立大学で教員養成の学生を対象に、自記式の質問紙調査を実施し、回答を翻訳中である。また、タイにおいては、マヒドン大学の教授を研究協力者に得て、国内での状況を調査中である。【目的】ラオス人民共和国、バングラデシュの青少年のDAPを探索し、ラオスやバングラデシュで使用可能な発達資産の調査票を開発すること。【方法】ラオスの調査は、2012年、2013年にルアンプラバン教員養成大学における教員(3名)と学生(20名)、ビエンチャン市にあるラオス国立大学附属小学校教員(9名)、同中学校教員(9名)、大学近郊の保健センター職員(3名)、住民(7名)を対象にインタビュー調査、自由記述式の調査とフォーカスグループディスカッションを併用した調査を行い、質的データを得た。さらに、2014年パクセの教員養成大学でも同様の調査を行った。バングラデシュでは、2014年に北部のロングプール県Teacher's Training Collegeにおいて各クラスより代表の11人(男5人、女6人)と教員3人(男)を対象に調査した。ラオスとバングラデシュにおいて、グループ調査は、発達資産に関する質問事項を事前に渡して各自の考えを書いておいてもらい、調査日には他の参加者の回答を聞きながら、順に新しい観点について発表していった。【結果と考察】ラオスとバングラデシュの質的データを内容分析し分類すると、支援(支援することと支援される環境)、安全(平和で安全だと感じる環境)、社会的信頼(国や政治への信頼、愛国心)、規範(ルールを守ることと規範・道徳心のある社会)、自国文化・伝統の尊重(文化を伝える、誇りを持つ、年長者を敬う)、建設的な時間の使用(適切に時間を使う)、社会参加(家庭、学校、地域での活動への参加)、積極的学習態度(学習への参加意欲、学校に行く)、肯定的価値観(好ましい価値観を持つ、連帯、公正・人権意識)、社会的能力(適切な言葉つかい、変化への適応力、感情のコントロール)、自己肯定(自信、勇気、ポジティブ)、スピリチュアリティ(宗教的態度、倫理)の観点が生成された。目的は、ラオスを中心とした東南アジア、南アジアで青少年の健康に資する心理社会的リソースである、発達資産(developmental assets)を測定するためのチェックリストを作成することである。そこで、ラオスの教員養成大学とバングラデシュの教員養成大学において、まず学生と教員を対象にインタビュー調査を行い、両国で調査可能な質問票を作成した。具体的には、ラオスの調査では、2012年、2013年にルアンパパーン教員養成大学における教員(3名)と学生(20名)、ビエンチャン市にあるラオス国立大学附属小学校教員(9名)、同中学校教員(9名)、大学近郊の保健センター職員(3名)、住民(7名)を対象にインタビュー調査、自由記述式の調査とフォーカスグループディスカッションを併用した調査を行い、質的データを得た。さらに、2014年パクセーの教員養成大学でも同様の調査を行った。バングラデシュでは、2014年に北部のロングプール県教員養成大学において各クラスより代表の11人(男5人、女6人)と教員3人(男)を対象に調査した。ラオスとバングラデシュにおいて、グループ調査では、質問を事前に渡し各自の考えを書いておいてもらい、調査日には他の参加者の回答を聞きながら、順に新しい観点について発表していった。その成果は、教育保健学会において「開発途上国の青少年が“良い"大人に成長するための条件とは:ラオス・バングラデシュにおける発達資産調査から」というタイトルで報告した。質的研究を基に、52項目からなるチェックリストを英語版で作成し、専門家に依頼しラオス語とベンガル語に翻訳をした。調査は、ラオスのルアンパパーン教員養成大学の学生245名、バングラデシュでは、マイメイシン県ショドール郡の3校で9年生と10年生の計280名を対象に行った。このデータにもとづき尺度開発を行った。

その結果、支援的社会環境、安全な環境、魅力的な人間関係、規範と参加、積極的学習態度、肯定的価値観、社会的スキル、自己肯定感、文化的価値と行動、を測定する尺度が作成できた。これらは、幸福感、主観的健康、コントロール感と関連があり、若者の健康的発達に貢献する心理社会的資源であると考えられる。ラオスやバングラデシュの調査協力者に発達資産の概念を伝えるのが、難しい点であり、適切な質問を探るために、インタビュー調査を繰り返す必要があった。また、ラオス語やバングラデシュ語を日本語に翻訳してもらうのに時間を要した。しかし、このような文化的な障壁にもかかわらず、回答は比較的共通性の高い概念が得られた。それぞれの文化の概要を理解した上で、特殊性を探索しようとして、さらに時間を要した。健康社会学ラオスを中心に、タイなど隣国を調査する計画であったが、まずラオスの教員養成大学の学生や附属学校の中高生を対象にした調査票の開発と実施を行う。そのためには、基本版は英語で作成するので、それをラオス人に可能な文脈に変換して翻訳を行う。調査は、ラオス国立大学と東京学芸大学と協定を締結する申請が進んでいるので、教育学部およびその関連が強い教員養成大学で調査が可能である。ラオスにおいて、発達資産という概念を理解してもらうことが、難しく、適切な回答を得るまで試行錯誤したこと。ラオス語による調査であるため、英語に翻訳する必要がある。しかし、十分な英語の能力を持つラオス人が少なく、マンパワーが限られている。この用に予備調査に時間を要した。タイでは、調査を行うには、研究倫理審査の申請を行わなければならず、その準備が必要であるのと、研究協力者が多忙であり、年度末は打ち合わせできる時間を確保できなかった。発達資産の概念を理解可能な説明にするのに手間取り、様々な対象者にインタビュー調査を行い、確認する必要があり、時間を要した。また、宗教意識や政治意識との関連がインタビューで抽出されたため、仏教圏以外のバンクラデシュでの調査を行った。渡航期間が限られる中、複数の調査国でインタビューを行ったため、想定以外の時間を要した。現在翻訳中のラオスの自記式調査の分析を行い、昨年度に整理した枠組みと照合し、質問項目の作成を行う。それにより、ビエンチャン、ルアンプラバン、サバナケートの中学校、高等学校で調査を実施する。タイでは、まず倫理申請を行い承認を得る。その後、ラオスの予備調査をもとに、研究協力者と検討し、タイ語版の調査票を作成する。バンコク市内の中学校、高等学校を中心に調査を実施する。まず、英語版からラオス語版の翻訳を行い、ラオス国立大学教育学部の学生、教員養成大学の学生を対象に、調査を行う。そのための渡航費用と調査費用に用いる。ラオスの教員用成系大学の学生を対象に行った自由記述式の発達資産に関する質問紙調査の翻訳が進んでおらず、翻訳者にラオス語から英語への翻訳料として謝金が支払えなかったため。現在翻訳を行っており、完成した場合に、翻訳者にラオス語から英語への翻訳料を支払う。
卵巣癌のパクリタキセル耐性機序に関わる候補遺伝子の同定と遺伝子治療への応用

担癌ヌードマウスにパクリタキセルを反復投与することで樹立したin vivo樹立耐性卵巣癌株とin vivoで樹立した対照群との間でcDNAマイクロアレイを行い,発現の異なる遺伝子を解析することでパクリタキセル耐性候補遺伝子の同定を試みた。(1)培養中のin vivo樹立パクリタキセル耐性株および対照株よりtotal RNAを抽出し、また(2)耐性株および対照株をマウスに皮下移植して作成した腫瘍塊(OM1TX6TおよびOM1P6T)からもtotal RNAを抽出した。cDNAを精製後、cDNAマイクロアレイ法により癌関連遺伝子の発現プロファイルを、解析(1)、解析(2)のそれぞれについて耐性株および対照株の2群間で比較検討し、耐性株に特異的に発現が亢進または低下している遺伝子の同定を試みた。解析(1)に用いた遺伝子数は9,063であり、耐性株での発現が対象株の2倍以上であった遺伝子数は298であった。また解析(2)に用いた遺伝子数は8,660であり、OM1TX6Tの発現がOM1P6Tの2倍以上であった遺伝子数も同じく298であった。現在、これらの遺伝子の中から実際にパクリタキセル耐性と関連する遺伝子の抽出を進めている。一方、タキサン製剤の耐性機序として特にβ-チュブリンアイソタイプのうちのクラスIIIβ-チュブリンの過剰発現との関係が注目されている。卵巣癌摘出標本におけるβ-チュブリンのアイソタイプであるクラスI、II、III、IV(IVa+IVb)の蛋白発現量を免疫組織化学的染色法にて評価して、タキサン製剤を含む化学療法に対する反応性と比較検討した。この結果、タキサンによる化学療法を行った群ではクラスIIIの高発現はprogression free survivalが短い傾向(p=0.081)が認められた一方、タキサン以外の化学療法が行われた群ではこの傾向は認められなかった。これらのことから、タキサンを用いた化学療法群ではクラスIIIの高発現は早期の再発と関連していることが示唆された。パクタキセルを主剤とした化学療法後に再発する卵巣癌のより忠実なモデルを確立するため、担癌マウスにパクリタキセルを反復投与することで、ヒト卵巣癌細胞株(OVMG1)からin vivoパクリタキセル耐性株(OM1/Tvivo)を樹立し、その生物学的特徴(染色体分析、増殖・浸潤・転移能の評価、in vivoおよびin vitroにおける薬剤感受性試験と薬物動態)をin vitroで樹立した薬剤耐性株(OM1/Tvitro)と比較した。In vivo樹立の両株はGバンド法による染色体分析でヒト由来の細胞であることを確認した。培養時の細胞増殖率は同程度であった。In vivoでの腫瘍増殖に関しては、OM1/TvivoはOM1/Cvivoに比し腫瘍増殖能が亢進していたが、OM1/Tvitroは造腫瘍能を失っていた。OM1/TvivoとOM1/Cvivoは、親株のOVMG1と同様に浸潤病巣も転移病巣も作り得なかった。OM1/Cvivoに比べOM1/Tvivoは腫瘍形成時にはマウスへのパクリタキセル投与後の安定した薬剤耐性と低い腫瘍内薬剤到達性を示したが、培養時にはOM1/Tvivo細胞はその双方を消失した。一方、in vitroにおける異常に高い薬剤耐性能と低い細胞内薬剤到達性はOM1/Tvitro細胞にのみ認めた。これらの結果より従来のin vitro樹立パクリタキセル耐性株よりむしろin vivo樹立バクリタキセル耐性株の方が臨床の再発癌に認める亢進した悪性度を反映した、より適切で忠実なモデルであることが示唆された。

このin vivoで特異的に発現する薬剤耐性機構には、腫瘍細胞自身の感受性の変化のみならず腫瘍と宿主間質組織間の相互作用が関与していると思われた。パクリタキセル耐性候補遺伝子の同定の目的で、(1)培養中のin vivo樹立パクリタキセル耐性株(OM1TX6)および対照株(OMIP6)よりtotal RNAを抽出し、また(2)耐性株および対照株をマウスに皮下移植して作成した腫瘍塊(OM1TX6TおよびOM1P6T)からもtotal RNAを抽出した。cDNAを精製後、cDNAマイクロアレイ法により癌関連遺伝子の発現プロファイルを、解析(1)、解析(2)のそれぞれについて耐性株および対照株の2群間で比較検討し、耐性株に特異的に発現が冗進または低下している遺伝子の同定を試みた。なおcDNAマイクロアレイ法はAffymetrix社のMotolora Codelink Bioarrays (Human)を用いて行い、結果の解析にはCode Link^<TM> System Software version 2.2.25を用いた。解析(1)に用いた遺伝子数は9,063であり、OM1TX6の発現がOM1P6の2倍以上であった遺伝子数は298であった。また解析(2)に用いた遺伝子数は8,660であり、OM1TX6Tの発現がOM1P6Tの2倍以上であった遺伝子数も同じく298であった。これまでの実験により、(1)in vivo耐性株のパクリタキセル耐性能はin vivo環境下でしか発揮されなかったがこれには少なくとも腫瘍内パクリタキセル濃度の差が関与していること、(2)in vivo耐性株は対照株に比しin vivo環境下でのみ腫瘍増殖能が亢進していることが判明しているので、今後は抽出された遺伝子群についてこのような機能と対応させて解析を進める予定である。タキサン製剤の耐性機序としては、P糖タンパクの過剰発現、細胞内グルタチオンの低下、α-チュブリンの増加・アセチル化、βチュブリンの変異、特異的βチュブリンアイソタイプの発現変化、など種々の機構が報告されているが、近年では特にβ-チュブリンアイソタイプのうちのクラスIIIβ-チュブリンの過剰発現との関係が注目されている。また、mRNA発現量と蛋白発現量とは必ずしも相関しないので、蛋白発現量の解析が重要であるといわれている。そこで、卵巣癌摘出標本におけるβ-チュブリンのアイソタイプであるクラスI、クラスII、クラスIII、クラスIV(IVa+IVb)の蛋白発現量を免疫組織化学的染色法にて評価し、予後とくにタキサン製剤を含む化学療法に対する反応性と比較検討するプロジェクトを形態機能病理学教室の研究協力者と共に行っている。この検討に拠れば、卵巣癌ではクラスIならびにクラスIVアイソタイプが高発現を示す一方、クラスIIアイソタイプは微量発現、クラスIIIは中等度発現を示したとの結果が得られている。さらに臨床病理学的因子ならびに予後との関連を検討中である。タキサン製剤の耐性機序としては、P糖タンパクの過剰発現、細胞内グルタチオンの低下、α-チュブリンの増加
中世アンダル-アにおける大土地所有

本研究はアンダルシーアの特徴的な土地所有である大土地所有に分析を加えることを目的としているが、特に中世におけるその形成に焦点をあてて検討した。これについては13世紀の再征服後のレパルティミエントを重視する伝統的見解があるが、最近この見解を批判する傾向が強まってきている。かかる動向を受けて、本研究では大土地所有を(1)個人所有と(2)団体所有に分けて検討を加え以下の結論を得た。(1)大土地所有は一度の土地取得では完結しておらず、レパルティミエントで得られた土地が中世末まで変化せずに存続したのではない。(1)では購入、横領によって、(2)では恵与・寄進によって土地取得がなされ、複雑に変化している。(2)大土地所有の形成はかかる複雑な変化の結果はじめて実現したのではなく、最初の土地取得、あるいはかなり早い時期に実現している。したがってその後の変化は大土地所有の増殖・肥大化の過程である。(3)13世紀に起源を有する大土地所有がかなり見られる。最近の動向は14-15世紀を重視するが、これは世俗所領を対象にした見解である。世俗所領は土地所有を含まない裁判領主所領が多かったので、この見解は再検討の必要がある。以上の結果を踏まえて、土地所有と所有者の社会的地位との関係について考えると、土地所有が所有者の社会的地位の上昇に繋がり、今度はその上昇した地位が領主権を背景にした横領、国王からの恵与といった土地獲得手段の増大をもたらしたというように、相互に因果関係を結んでいた。またこのような個人所有地は寄進や相続によって、教会や修道院の所有地に転化し、これによって団体所有地の増大をもたらした。アンダルシーアの大土地所有の形成に関して13世紀の再征服後のレパルティミエントを重視する伝統的見解を批判する最近の動向を受けて、大土地所有を(1)個人所有と(2)団体所有に分けて検討を加え以下の結論を得た。(1)大土地所有は一度土地取得では完成しておらず、レパルティミエントで得られた土地が中世末まで変化せずに存続したのではない。(1)では購入、横領によって、(2)では恵与・寄進によって土地取得がなされ、複雑な過程を経ている。(2)しかしこの過程の結果はじめて大土地所有が形成されたのではなく、過程の最初か、かなり早い段階で大土地所有の規模に達している。したがってその後は大土地所有の増殖・肥大化の過程である。(3)13世紀の起源を有する大土地所有がかなり見られる。14-15世紀を重視する最近の動向は世俗所領の生成・発展に注目しているが、これは土地所有を含まない裁判領主所領が多かったので再検討の必要がある。以上の結果を踏まえて、土地所有の所有者の社会的地位との関係について考えると、土地所有が所有者の社会的地位の上昇に繋がり、今後はその上昇した地位が領主権を背景にした横領、国王からの恵与といった土地獲得手段の増大をもたらしたというように、相互に因果関係を結んでいた。またこのような個人所得地は寄進や相続によって、教会や修道院の所有地に転化し、これによって団体所有地の増大をもたらした。団体の所有地は直接経営されることは少なく、小作に出されていたが、その大規模借地人として都市寡頭支配層が現れる。このように個人所得と団体所得は互いに無関係に存立したのではなく、相互に依存しあって存在していたのである。前年度までの研究で、以下のような結果を得た。

(2)しかしこの過程の結果はじめて大土地所有が形成されたのではなく、過程の最初か、かなり早い段階で大土地所有の規模に達している。したがってその後は大土地所有の増殖・肥大化の過程である。(3)13世紀に起源を有する大土地所有がかなり見られる。14-15世紀を重視する最近の動向は世俗所領の生成・発展に注目しているが、これは土地所有を含まない裁判領主所領が多かったので再検討の必要がある。以上の結果を踏まえて、今年度はこれを論文の形で公表することに努め、先頃雑誌に掲載された。したがって、詳細はそれに論じられているわけであるが、ここではその中でも要点として次の点を指摘しておきたい。それは、土地所有と所有者の社会的地位との関係について考えると、土地所有が所有者の社会的地位の上昇に繋がり、今度はその上昇した地位が土地の取得を有利にするというように、相互に因果関係を結んでいたという点であり、これは再征服後のアンダルシーア社会の構造を考える点で重要な視点を与えるものと考えられる。
オキサニッケラサイクルへのトランスメタル化を利用したヘテロ環の合成

我々はこれまで3置換基オレフィンの合成について検討を加えてきた。更にその反応を利用してerythrocarineの合成にも成功した。それと並行して4置換オレフィンの合成にも検討を加えてきた。4置換オレフィンを合成するにあたっては位置選択性が非常に大きな問題となる。我々は末端にMe_3Si基をもつアルキンに対して本反応を検討することにした。末端にTMS基を持つアルキンを量論量のNi(cod)_2および2当量のDBUとともに常圧のCO_2雰囲気下撹拌し、その後亜鉛試薬を加えることによって4置換アルケンを合成することが出来る。その結果TMS基の影響でオキサニッケラサイクルの形成にかなり位置選択性が出ることが分かった。この反応の研究途上、本反応を触媒化することに成功した。我々は量論量のニッケル錯体を用いてきたが機構的にはニッケルは零化に戻るので触媒反応は成立すると思われてきた。しかし触媒量のニッケル錯体を用いて本反応を行うとほとんど反応は進行しない。種々考察した結果ニッケル錯体の配位子としてDBUを用いてきたが、DBUは亜鉛試薬にも配位するためではないかと思われた。そこで大過剰のDBU存在下10mol%のNi(cod)_2を用いたところ比較的良い収率で目的とする4置換オレフィンを合成することが出来た。更に興味深いことに用いた生成物を精査した結果、量論反応と触媒反応では異なる機構によって反応が進行しているように見えることである。この機構を解明すべく癌剤研究を行っている。本反応の適用範囲について検討を加え、早急にまとめて論文にしたい。1.ジルコナサイクル中間体を利用したエナンチオ場選択的不斉合成の開発我々はこれまでジルコナサイクル中間体を利用してエナンチオ面選択的な不斉環化反応の開発に成功し既に報告している.この反応をエナンチ場選択的な不斉環化へと展開し,光学活性な環状化合物の合成を検討した.即ち環内に二つの対照なオレフィンと,側鎖にオレフィンをあわせ持つ化合物を光学活性なZr錯体と大過剰のBuMgBrを反応させた.種々条件を検討したところ最終的に75% eeを持つ2環式化合物が51%の収率で得られた.現在他の基質についても検討を加えている.2.ローダサイクル中間体を経由する新規環化反応の開発研究ローダサイクル中間体をいかにして効率よく生成できるかについて検討を行い,π-アリル錯体の形成によるローダサイクル中間体の安定化を期待し共役ジエン構造を持つアルデヒドについて検討することにした.ジエンを持つアルデヒドと10mol %の[Rh(dppe)]ClO_4を用いてClCH_2CH_2Cl中加熱還流させたところ,興味深いことにシクロペンタノンはほとんど得られず7員環構造を持つ化合物が収率良く得られた.本結果は予想通り6員環あるいは8員環ローダサイクル中間体を形成し,8員環のローダサイクルから還元的脱離によって得られたものと思われる.種々のジエンを持つオレフィンについて検討を加えた.又ジエンの幾何異性体や置換基の有無についても検討を加えた.その結果はAngew. Chem. Inter. Ed. 2002に投稿し採用された(in press),現在ローダサイクルheの多重結合の挿入反応について検討を加えている.我々はCO_2が有機金属錯体に容易に配位する事を利用し,アルキンとCO_2から導かれるオキサニッケラサイクルを有機亜鉛試薬とトランスメタル化させ3置換α,β-不飽和カルボン酸の合成を検討し既に報告した.^1そこで本反応をヘテロ環の合成に利用する事を企画した.側鎖にヘテロ原子をもつ末端アルキンをCO_2雰囲気下Ni(O)と反応させ,オキサニッケルとし,その後亜鉛試薬とトランスメタル化させるとα,β-不飽和酸が得られるはずである.分子内のヘテロ原子がα,β-不飽和酸にMichael型の付加をするならばヘテロ環が得られるものと思われる.この考えのもとに4級炭素を持つベンゾフラン,ベンゾピラン,イソインドール,イソキノリン等のヘテロ環の合成に成功した.本反応の特徴は用いる亜鉛試薬によって様々な4級炭素を持つヘテロ環を合成出来る事である.次に本反応を利用してErythrina alkaloidoの一つであるErythrocalineの合成を試みた.ピペロナールを出発原料としてα,β-不飽和エステルに導きアルキニル亜鉛試薬を反応させその後キノリン誘導体を得た.その後ジェニンに導き,Ru触媒を用いたヂエニンメタセシスを鍵段階としてerythrocalineの合成に成功した。

我々は量論量のニッケル錯体を用いてきたが機構的にはニッケルは零化に戻るので触媒反応は成立すると思われてきた。しかし触媒量のニッケル錯体を用いて本反応を行うとほとんど反応は進行しない。種々考察した結果ニッケル錯体の配位子としてDBUを用いてきたが、DBUは亜鉛試薬にも配位するためではないかと思われた。そこで大過剰のDBU存在下10mol%のNi(cod)_2を用いたところ比較的良い収率で目的とする4置換オレフィンを合成することが出来た。更に興味深いことに用いた生成物を精査した結果、量論反応と触媒反応では異なる機構によって反応が進行しているように見えることである。この機構を解明すべく癌剤研究を行っている。本反応の適用範囲について検討を加え、早急にまとめて論文にしたい。
核磁気共鳴を利用した放射線誘発アポトーシス生体内検出の基礎的研究

最初に,我々の教室で継代培養しており,経験が豊富なC3H/HeNマウス乳癌由来のFM3A細胞を用いることとし,同細胞を同型雄性マウス大腿部に移植し,実験用の6.3TNMR装置で31P-magnetic Resonancespectroscopy(以下MRS)を測定した.このとき,通常放射線照射による分裂死が起こるとされる24時間に達するかなり前にあたる照射後8時間でMRSの測定を行い各ピーク値の強度を測定したところ,20Gy照射時ではPi/β-NTPratio,PME/β-NTPratioの一過的な変動が観測されたが,個体間でばらつきが大きく,一定の傾向としてまとめることはできなかった.また40Gy照射後でも同じような変化が観測された.この現象は間期死であるアポトーシスによる変化である可能性と推測したが,この細胞系は放射線感受性が比較的低く,アポトーシスのモデルとしては不適当であったのではないかと考え,続いて放射線誘発アポトーシスを起こしやすいことが知られているヒト白血病由来Molt-4細胞を使用して実験を行うこととした.この細胞を1,2,4Gy照射したあとエリスロシンBで染色し,Dieexclusion testでアポトーシス細胞の計測した.やく8時間で2040%の細胞が死ぬことが確認された.これはMRSで変化が観測された時間と近い値である.続いて同細胞をマウスに移植してMRSを測定しようとしたが,この細胞系はヒト由来であり,ヌードマウスでも移植が思うように行かず,MRSの測定までいたらなかった.今後の研究としては,単離細胞のままMRSを測定する工夫をこらすか,あるいはFM3A細胞に抗ガン剤などのModulatorを併用してアポトーシスを起こしやすくするなどの方法が考えられ,研究を継続する予定である.最初に,我々の教室で継代培養しており,経験が豊富なC3H/HeNマウス乳癌由来のFM3A細胞を用いることとし,同細胞を同型雄性マウス大腿部に移植し,実験用の6.3TNMR装置で31P-magnetic Resonancespectroscopy(以下MRS)を測定した.このとき,通常放射線照射による分裂死が起こるとされる24時間に達するかなり前にあたる照射後8時間でMRSの測定を行い各ピーク値の強度を測定したところ,20Gy照射時ではPi/β-NTPratio,PME/β-NTPratioの一過的な変動が観測されたが,個体間でばらつきが大きく,一定の傾向としてまとめることはできなかった.また40Gy照射後でも同じような変化が観測された.この現象は間期死であるアポトーシスによる変化である可能性と推測したが,この細胞系は放射線感受性が比較的低く,アポトーシスのモデルとしては不適当であったのではないかと考え,続いて放射線誘発アポトーシスを起こしやすいことが知られているヒト白血病由来Molt-4細胞を使用して実験を行うこととした.この細胞を1,2,4Gy照射したあとエリスロシンBで染色し,Dieexclusion testでアポトーシス細胞の計測した.やく8時間で2040%の細胞が死ぬことが確認された.これはMRSで変化が観測された時間と近い値である.続いて同細胞をマウスに移植してMRSを測定しようとしたが,この細胞系はヒト由来であり,ヌードマウスでも移植が思うように行かず,MRSの測定までいたらなかった.今後の研究としては,単離細胞のままMRSを測定する工夫をこらすか,あるいはFM3A細胞に抗ガン剤などのModulatorを併用してアポトーシスを起こしやすくするなどの方法が考えられ,研究を継続する予定である.
遺伝子改変動物の可逆的繁殖阻止に対する高プロラクチン血症動物の応用

本年度は、昨年度に作製したCMV/βactin promoterによってプロラクチンを発現する雄トランスジェニックマウス(CW/βactin-rPRLマウス)から、体外受精(IVF)および胚移植(ET)によって作製されたF1マウスでのライン選別および変異プリオンマウス(h129M-Tgマウス)との複合化を行い、ヒトおよび自然環境への生物災害をもたらす可能性のある遺伝子改変マウスの繁殖阻止シミュレーション実験を行い、外界での繁殖阻止のための媒体にCHV/βactin-rPRLマウスが有効であることを示した。当初、ポリオウィルスレセプターを有するPVR/IQIマウスを用いる予定であったが、PVR/IQIマウスの民間企業への移管により、h129M-Tgマウスの使用に変更した。DNAインジェクションによって作製されたCMV/βactin-rPRLファウンダーマウスは雄が1匹、雌が12匹得られたが、雌は性行動を行わず雄を全く受け入れなかったため、F1の作製ができなかった。雄CMV/βactin-rPRLマウスでも、自然交配では次世代が得られず、IVF-ETにてF1を作製することが出来た。CMV/βactin-rPRLマウスのF1では、ファウンダーからのトランスジーンの伝達により、rPRL発現の低い個体が見られたため、トランスジーンによるrPRLをELISAにより測定し、rPRL濃度が高く(400ng/ml)、不妊を呈した個体を選抜した。選抜された雄CMV/βactin-rPRLマウスはファウンダーと同様に自然交配させても、雌を妊孕させるには至らなかった。以上、ファウンダー、F1およびrPRL-Tg(Tg/+),h129M-Tg(Tg/+)マウス、3世代の結果から、生物災害をもたらす可能性のある遺伝子改変マウスの外界での繁殖阻止のための媒体にCMV/βactin-rPRLマウスが有効であることが示された。本年度は2種類のDNAコンストラクション、すなわち肝臓で発現するMt-1 promoterおよびCMV-βactin promoterの下流にプロラクチン(PRL)の遺伝子を繋げ、マウスの前核期卵へマイクロインジェクションを行った。その結果、Mt-1 promoter-PRLを持つマウス(Mt-1-PRLマウス)においてトランスジーンによる血中PRL濃度は2ng/mlであり、雌雄共に繁殖行動および妊娠、妊孕が見られ、繁殖不全には至らなかった。一方、CMV-βactin promoter-PRLを持つマウス(CMV-βactin promoter-PRLマウス)は雌雄共に、トランスジーンにより19ng/mlの血中プロラクチンを示し、繁殖不全に陥らせることに成功した。以上のようにCMV-βactin promoter-PRLマウスは不妊状態に陥ったため、bromocriptine 400μg/headを皮下投与により内因性のPRLを抑制し、交配を試みた。その結果、雌はbromocriptineを投与しても全く性行動を示さず、妊娠に至らなかった。一方、雄は交尾行動を再開し、雌へのプラグも確認したが、現時点で妊孕に至っていない。トランスジーンからのPRLの曝露が精子の受精能に影響しているのか、あるいは他の要因による不妊であるか現在のところ不明であるが、IVFにより受精能力の検討を行うと共に、匹数を増やしその原因を解明する。また、Mt-1 promoterの上流にCMV enhancerを付加し、610ng/mlのPRL放出を持つ動物を作製する。
Fischer型カルベンルテニウム錯体の触媒機能に関する研究

昨年度の当核研究において、一連の16元素をもつFischer型カルベンルテニウム錯体RuCl_2(=CHER)-(PCy_3)_2(E=O, S, Se, Te ; R=アルキル基,アリール基)が鍵活性種として働く高選択的オレフィンメタセシス反応を見出した.今年度は、その反応制御原理を深く理解することを目的に、上記の錯体をそれぞれ合成・単離し、構造および反応性について詳しく調べた.まず、ベンジリデン錯体RuCl_2(=CHPh)(PCy_3)_2とビニルカルコゲニドH_2C=CHEPhによるFischer型カルベン錯体生成反応を比較検討したところ、カルコゲン元素の周期順(O<S<Se<Te)にその速度が向上することが分かった。また、同じ順序でFischer型カルベン錯体のメタセシス活性が向上すること、ならびにその差異が主にホスフィン配位子の解離能に依存していることを併せて見出した.これらの結果は、触媒反応における錯体(活性種)の挙動を理解する上で重要な知見となった.カルコゲン元素の影響については依然不透明な部分が残されており、引き続き群細な検討が必要である。さらに今年度は、昨年度に見出した触媒反応を機能性高分子の合成へ応用した.環状オレフィンの開環メタセシス重合を種々のビニルカルコゲニドの存在下で行ったところ、それらが優れた連鎖移動剤として働き、両末端が高選択的に官能基化されたポリマーが得られることが分かった.また、重合開始基をもつ連鎖移動剤を適用して末端反応性マクロ開始剤を合成するとともに、それらを用いたAB型ブロック共重合体の精密合成に成功した.以上の成果は、異なる重合機構を組み合わせて共重合体を合成する新しい方法論を提示しており、今後益々重要となる新規高分子材料の開発研究にとって有用な指針を与えるであろう.遷移金属カルベン錯体は,アルキリデン配位子をもつSchrock型と,酸素や窒素などのヘテロ元素で置換されたカルベン配位子をもつFischer型に大別される.一般に前者は,有機合成化学的に重要なオレフィンメタセシス反応を効率的に触媒することで知られている.一方後者が同反応の触媒として機能することはこれまでほとんど知られていなかった.本研究では,一連の16族元素(Y=O,S,Se,Te)をもつRuCl_2(=CHYR)(PCy_3)_2(R=アルキル基,アリール基など)型錯体が優れたオレフィンメタセシス活性を示すこと,およびこれらを触媒中間体として利用することによって,従来困難であった歪んだ環状オレフィンの開環クロスメタセシス反応が高選択的に進行することを見出した.例えば,ノルボルネンとフェニル(ビニル)セレニドの等量混合物の塩化メチレン溶液に触媒としてRuCl_2(=CHSePh)(PCy_3)_2を2mol%添加し,室温で2時間反応させると,開環クロスメタセシス生成物である非対称ジエンが単離収率92%で得られた.環状オレフィンとしてはノルボルネンのほかに7-オキサノルボルネン誘導体や5,6-二置換ノルボルネン誘導体が適用可能であり,いずれの場合も高収率で目的生成物が得られた.さらに,本触媒反応の各素反応について錯体化学的に詳しく検討した結果,Fischer型カルベン錯体の高い熱力学的安定性が,触媒反応における基質選択性を制御する支配因子であることを明らかにした.以上の成果は,触媒的オレフィンメタセシス反応の基質選択性に新しい制御概念を提供したこと,ならびにFischer型カルベン錯体の新しい触媒機能を開拓した点で重要である.昨年度の当核研究において、一連の16元素をもつFischer型カルベンルテニウム錯体RuCl_2(=CHER)-(PCy_3)_2(E=O, S, Se, Te ; R=アルキル基,アリール基)が鍵活性種として働く高選択的オレフィンメタセシス反応を見出した.今年度は、その反応制御原理を深く理解することを目的に、上記の錯体をそれぞれ合成・単離し、構造および反応性について詳しく調べた.まず、ベンジリデン錯体RuCl_2(=CHPh)(PCy_3)_2とビニルカルコゲニドH_2C=CHEPhによるFischer型カルベン錯体生成反応を比較検討したところ、カルコゲン元素の周期順(O<S<Se<Te)にその速度が向上することが分かった。さらに今年度は、昨年度に見出した触媒反応を機能性高分子の合成へ応用した.環状オレフィンの開環メタセシス重合を種々のビニルカルコゲニドの存在下で行ったところ、それらが優れた連鎖移動剤として働き、両末端が高選択的に官能基化されたポリマーが得られることが分かった.また、重合開始基をもつ連鎖移動剤を適用して末端反応性マクロ開始剤を合成するとともに、それらを用いたAB型ブロック共重合体の精密合成に成功した.以上の成果は、異なる重合機構を組み合わせて共重合体を合成する新しい方法論を提示しており、今後益々重要となる新規高分子材料の開発研究にとって有用な指針を与えるであろう.
複素解析的葉層構造の特異点の研究

研究代表者を中心に、主として、複素解析的特異葉層構造の不変部分多様体に関する留数についての研究、及びそこでも用いられたCech-Rhamコホモロジー群およびstratifyされた空間上の積分理論の応用について研究を行った。前者については、フランスのD.Lehmannとの共同研究において、複素2次元正則ベクトル場の非特異不変曲線に関する、Camacho-Sadの指数の一般化を考察し、複素解析的特異葉層構造の不変部分多様体に関する留数について、不変部分多様体が特異点を持つ場合にも留数を定義し、留数定理を証明した。またこの留数の計算法を求め、これが、いわば“相対的Grothendieck留数"で表わされることを示した。これらの結果は共著論文としてまとめられ、Journal of Differential Geometryに掲載される予定である。後者に関しては、Cech-de Rhamコホモロジー群およびstratifyされた空間上の積分理論がを用いて代数的位相幾何学(ホモロジー理論,PoincareおよびAlexander-Lefschetzの双対性等)を記述し、代数幾何学,複素解析幾何学における基本的諸事実(特に、交点理論、分岐理論、特性類に関するもの、例えば、Thom類の特徴付け、因子の交点理論、Poincare-Hopfの定理、Milnor数の公式、Riemann-Hurwitzの公的、埋め込みに対するGrothendieck-Riemann-Rochの定理等)を特性類の留数の立場から統一的に証明し、さらにこれらを精密化、一般化した。この方法の特徴的なことは、(1)種々の公式が特異点集合に局所化された形で得られること、(2)Hardな解析を用いずに自然に計算が出来ること等である。
飼育下におけるカタクチイワシ仔稚魚の行動特性の個体発生

カタクチイワシを受精卵から飼育し,仔稚魚の生活史特性を他の多獲性魚類であるマアジおよびマサバと比較した.カタクチイワシは瞬発遊泳速度・巡航遊泳速度とも,マサバおよびマアジに比べて遅いこと,また体長20mmを越えるまでミズクラゲに容易に捕食されることが明らかとなった.骨形成の完了する体長21mmに達するまでに約30日を要することから,これまでの期間,本種はクラゲ類の強い捕食圧を受けるものと推察された.カタクチイワシを受精卵から飼育し,仔稚魚の生活史特性を他の多獲性魚類であるマアジおよびマサバと比較した.カタクチイワシは瞬発遊泳速度・巡航遊泳速度とも,マサバおよびマアジに比べて遅いこと,また体長20mmを越えるまでミズクラゲに容易に捕食されることが明らかとなった.骨形成の完了する体長21mmに達するまでに約30日を要することから,これまでの期間,本種はクラゲ類の強い捕食圧を受けるものと推察された.京都府舞鶴市の千歳定置網および田井定置網に入網したカタクチイワシ親魚約200個体を親魚として,自然産卵により受精卵を得て,以下の飼育実験を行った.1.水温別飼育実験カタクチイワシを18,22および26°Cの3水温で飼育した.50日齢時点で,18°C区と22°C区の平均体長はそれぞれ16.8mmおよび23.0mmとなった.26°C区は50日齢に達する以前に全滅した.本種は春から秋までの長期にわたって産卵するものの,少なくとも春季産卵群では最適な水温のレンジは狭いものと考えられた.2.クラゲによる被食実験ミズクラゲを3個体収容した水槽にカタクチイワシを1個体ずつ収容し,捕食されるまでの時間を観察した.その結果,体長10mmを越えても3分程度で捕食される個体が見られた.同様の実験をマアジおよびマサバで行ったところ,6mmを越えた仔魚が捕食されることは希であった.3.ミズクラゲ胃内容物の観察若狭湾沿岸で採集されるミズクラゲの胃内容物を観察したところ,魚類ではカタクチイワシ,マアジ,マダイ,およびアナハゼ類の仔魚が見つかった.個体数はカタクチイワシが圧倒的に多く,また体長10mmを越えた被食個体の出現する魚種はカタクチイワシのみであった.一連の実験から,カタクチイワシはクラゲ類の食害を極めて被りやすいことが明らかとなった.本種のこうした特性は,透明で見えにくい構造に依存したシラス型仔魚の対捕食者戦略に起因すると考えられる.クラゲ類の発生が近年続くにも関わらず,本種の資源が比較的安定しているメカニズムについて,対捕食者行動・成長および繁殖戦略の側面から解明してゆくことが今後の課題である.1.親魚の養成舞鶴市田井の定置網より入手したカタクチイワシ成魚400個体を,直径4mの水槽2面に分けて収容し,異なる海水温で飼育した.いずれの水槽でも,水温が20度を越えた時点で自然産卵を開始した.得られた受精卵をもとに以下の飼育実験を行った.2.遊泳速度の個体発生ふ化後10-50日齢,平均体長6-36mmのカタクチイワシ仔稚魚を材料として,瞬発および巡航遊泳速度の測定を行った.巡航速度は仔魚期には体長の1-2倍/秒,体長25mmの変態期以降には体長の4倍/秒程度であり,これはマアジよりは速いものの,マサバよりは遅かった.また瞬発速度は,仔魚期には体長の5-9倍/秒,変態期には20倍程度であり,マサバとほぼ同程度で,マアジよりは遅かった.3.群れ行動の個体発生飼育水槽中における群れの形成過程を,頭位交角,個体間距離,および乖離遊泳指数を指標として解析した.その結果,本種では体長20mm前後の仔魚期後期から群れ行動が発現することが明らかとなった.4.ミズクラゲによる捕食ふ化後10-40日齢,体長6-27mmのカタクチイワシ仔魚を材料として,ミズクラゲに対する被食の程度を検討した.その結果,本種の仔魚では体長20mmを越えても捕食される個体がおり,体長6mmを越えたら捕食されないマアジやマサバでの結果とは大きく異なることがわかった.一連の結果から,本種の仔魚は透明で見えにくいことに依存した対捕食者戦略をとっていることが予想された.今後は濁りを与えた水槽で,魚類またはクラゲ類の捕食者と遭遇した際の被食について,実験により調べる予定である.また,天然海域でのクラゲによる被食の程度についても検討する.昨年度と同様、舞鶴市田井の定置網でカタクチイワシの親魚の入手を試みたが、漁獲が少なく、入手できなかった。そこで、カタクチイワシと同様にシラス型の形態を持っアユの仔魚を主な材料として、1.濁度が被食に与える影響、2.濁度が群れに与える影響、3.天然海域での被食について検討した。まず、カオリン濃度0、50または300ppmの環境下において、視覚捕食者(マアジ幼魚)または接触捕食者(ミズクラゲ)による被食を比較した。その結果、マアジの捕食に対する生残は、濁度が高いほど向上するのに対し、ミズクラゲに対する生残は、濁りの有無による差異は見られなかった。

上記の実験をマダイ仔魚についても試みたところ、ほぼ同様の傾向が見られたものの、マダイ仔魚はマアジに捕食されやすく、ミズクラゲには捕食されにくい傾向が認められた。以上のことから、シラス型仔魚はクラゲ類の被食を強く受ける可能性が示唆された。続いて、濁度と群れの関係について検討した。アユ仔魚を0、50または300ppmカオリン濃度の海水に収容したところ、個体間距離は濁度の高い環境で狭く、濁った水中で本種仔魚がコンパクトな群れを作ることが示唆された。一方、2008年10月から2009年1月にかけて、若狭湾沖でネットを曳き、3030個体のミズクラゲを採集し胃内容物を確認したところ、コペポーダ、甲殻類幼生、およびムラソイ仔魚が確認された。
新規frizzledタンパク質結合分子、fzip、の機能解析

Wntシグナルは生物種を越えて良く保存された情報伝達経路である。frizzledはWnt受容体として機能していることが明らかにされているが、その情報伝達機構あるいはfrizzled自身の細胞内局在制御は明らかにされていない。そこでfrizzled結合分子の検索を行い、新規遺伝子fzip-1を同定した。fzip-1は、2つのcoiled-coil motifと1つのPDZ domainを有し、このPDZ domainがfrizzledのカルボキシル末端に存在するS/T-X-C-COOH motifとの結合に重要な役割を果たしている。また培養細胞を用いた細胞内局在の検討からfzip-1は、ゴルジ体に局在していることが明らかになり、このゴルジ体への局在にはcoiled-coil motifが重要であることが示された。さらにfrizzledとfzip-1との共発現実験から、fzip-1がfrizzledの細胞膜への輸送に関与している可能性が示唆された。fzip-1の哺乳動物個体における機能解析を目的として、fzip-1ノックアウトマウスを作製した。fzip-1遺伝子欠損マウスは、外見上顕著な異常を認めなかったが、交配実験により雄のホモ接合体が不妊であることが明らかとなった。精巣における初期の精子形成過程に顕著な異常は認めなかったが、精巣上体の精子には明らかな頭部形態異常を認め、すべての精子は先体を欠失していた。fzip-1は、精子細胞ではゴルジ体に存在しており、これらの異常はゴルジ体から先体への物質輸送障害に起因すると考えられた。これらの結果から、本研究で同定されたfzip-1は、ゴルジ体からの物質輸送に関与していると考えられ、fzip-1のfrizzledの細胞膜輸送における役割に興味が持たれる。1.fzipタンパク質の生化学的解析fzipの培養細胞内での結合をトランスフェクション法を用いて検討した結果、fzipはfrizzled8およびfrizzled5に効率よく結合することが示された。またin vitro pull-down解析よりfzipはそのPDZdomainを介してfrizzled8のS-Q-V-COOH配列と直接結合することが示された。fzipの細胞内局在を抗fzip抗体およびタグを付加したfzipを細胞に導入し検討したところ、fzipはゴルジ体に蓄積し、さらにfrizzledタンパク質が発現しているときには細胞膜にも局在することが示された。これらの結果は、fzipが細胞膜でfrizzledの下流分子として情報伝達に関与している可能性とともに、ゴルジ体においてfrizzledタンパク質の細胞内局在を制御している可能性を示唆している。実際にbrefeldin Aを用いた解析ではfrizzledの細胞膜への局在には正常なゴルジ体の構造が必要であることが示された。2.ノックアウトマウスの作製・解析fzip遺伝子の染色体DNAの単離・解析を行いfzip遺伝子のターゲティングベクターを作製し、定法に従いリコンビナントES細胞を得、さらにキメラマウスの作製を経て、fzip遺伝子ノックアウトマウスの作製に成功した。現在そのマウスの詳細な解析を進めている。我々が、新規frizzled結合タンパク質として同定したfzipは、455アミノ酸からなり、2つのcoiled-coil motifと1つのPDZ domainを有する。各種培養細胞において、fzipはゴルジ体に存在し、またfrizzledとの共発現などの一連の実験からfzipは、ゴルジ体からの物質輸送に関与していることが示唆された。マウスにおいて、fzipは普遍的に発現していたが、精巣で特に高い発現を観察した。興味深いことに、脳においては24bpの挿入によるスプライシングバリアントのみが発現していた。

fzipの生体内での機能を解析する目的で、fzipノックアウトマウスを作成した。F1のヘテロ接合体同士での掛け合わせでは、ほぼメンデル則に従いF2マウスが生まれ、fzip欠損マウスに特に顕著な異常は観察されなかった。しかし一連の交配実験により、fzip欠損マウスの雄は不妊であることが明らかとなった。精巣上体から得た精子の観察により明らかな頭部形態異常が認められ、さらに電子顕微鏡による詳細な観察から、先体形成不全、核の形態異常およびミトコンドリアの配列異常が明らかとなった。精巣の解析結果からは、先体形成不全はゴルジ体からの物質輸送障害によると考えられた。fzipの精巣における局在は、精母細胞では主に細胞質に、精子細胞ではゴルジ体と思われる核周囲の構造物への局在が観察された。これらの結果は、fzipが複数の分子のゴルジ体からの物質輸送に関与している可能性を示唆している。一方、細胞極性制御においてfrizzledの細胞内局在は重要であると考えられており、fzip-1欠損マウスにおけるfrizzledの局在には興味が持たれる。
ＣａＭＫＫ－ＣａＭＫＩカスケードを介した神経細胞移動制御

まず背景として、採用者らの先行研究によりCa2+/CaM-CaMKK-CaMKIカスケードを介した幼弱錐体細胞移動の制御モデルが想定されていた。こうした作業仮説に基づき、本研究は幼弱錐体細胞移動の背景にCa2+依存的制御機構があること示し、一連の分子実体を明らかにすることを目的としている。平成26年度の具体的な研究実績は以下である。本研究では昨年度までに、Ca2+プローブを用いたスライスイメージングの実験系を用いて、細胞内Ca2+動態と細胞移動速度との相関解析を行うことに既に成功していた。本年度はこれまで得られた実験結果に対し、定量的・統計的解析を行い、細胞内Ca2+動態と細胞移動速度との間にある全く新しい関係性を見出した。更に本年度は、移動中神経細胞を対象とした薬理学的・遺伝学的操作により、細胞内Ca2+上昇とその下流で活性化するCaMKIの神経細胞移動における機能的意義をそれぞれ検討し、新たな知見を得た。以上の様に本年度はCa2+/CaM-CaMKK-CaMKIカスケードを介した神経細胞移動の制御メカニズムについて多角的な検討に成功しており、得られた研究実績に基づく投稿論文の執筆を既に開始している。また本研究成果は既に東京大学大学院博士審査会にて報告し、博士号(医学)授与にふさわしいとの評価を受けた。26年度が最終年度であるため、記入しない。まず背景として、研究代表者らの先行研究によりCaMKK-CaMKIカスケードを介した幼弱錐体細胞移動の制御機構モデルが想定されていた。研究計画に基づき行った、以下2項目の検討について、平成24年度の研究成果を報告する。1:移動中錐体細胞におけるCa^<2+>動態の評価と内在性リガンドの同定計画通り、移動中錐体細胞を対象とした、遺伝子コード型Ca^<2+>プローブを用いた脳スライスライブイメージングの実験系確立を達成することができた。具体的な実施内容としては、実験に適した遺伝子コード型Ca^<2+>プローブの検討と選定、そして実験サンプルの撮像に用いる器具や撮像条件の最適化を行った。12時間以上の長期にわたり移動中細胞内のCa^<2+>変動を経時的に可視化し、得られたデータを基に、幼弱錐体細胞の移動と細胞内Ca^<2+>動態の関係を現在定量的に解析している。2:神経細胞移動を制御する新規Ca2+依存性カスケードの特定計画通り、CaMKIαconditional KOマウス系統の樹立が完了し、一部計画を前倒しにして、幼弱錐体細胞の移動過程における細胞自律的なCaMKIα機能の解明にも取組み始めた。CaMKIαconditional KOマウスにおいて、幼弱錐体細胞特異意的にCaMKIαをノックアウトし、細胞移動の有無の定量を進めている。この結果を今後、予備的データとして得ていたCaMKIαノックダウンの表現型と比較検討する予定である。まず背景として、採用者らの先行研究によりCaMKK-CaMKIカスケードを介した幼弱錐体細胞移動の制御機構モデルが想定されていた。こうした作業仮説に基づき、本研究は幼弱錐体細胞移動の背景にCa^<2+>依存的制御機構があること示し、一連の分子実体を明らかにすることを目的としている。平成25年度の具体的な研究実績は以下である。計画通りに、平成25年度の目標としてあった「Ca^<2+>プローブを用いたスライスイメージングの実験系を用いて、細胞内Ca^<2+>動態と細胞移動速度との相関解析を行う」ことに成功した。これは1年次に達成した「長時間イメージングのために、遺伝子コード型C^<2+>プローブを用いたスライスイメージングの実験系を確立」に基づき成されたものである。更には、薬理学的・遺伝学的手法により細胞内Ca^<2+>上昇におけるCa^<2+>ソースと、種々のカルシウムエフェクターの効果をそれぞれ検討した。以上の研究実績ではCaMKK-CaMKIカスケードを介した神経細胞移動制御についての多角的な検討に成功しており、得られた実績に基づく論文の執筆を既に開始している。

以上の様に本年度はCa2+/CaM-CaMKK-CaMKIカスケードを介した神経細胞移動の制御メカニズムについて多角的な検討に成功しており、得られた研究実績に基づく投稿論文の執筆を既に開始している。また本研究成果は既に東京大学大学院博士審査会にて報告し、博士号(医学)授与にふさわしいとの評価を受けた。26年度が最終年度であるため、記入しない。CaMKIαconditional KOマウスを用い、幼弱錐体細胞の移動過程における細胞自律的なCa1MKIα機能の解析を計画年次に先立って開始することができた。得られたデータは本研究の基幹となるものであり、早期に得られたことは計画を進める上で大きな意義がある。「研究実績の概要」欄で薬理学的手法により細胞内Ca^<2+>上昇におけるCa^<2+>ソースの検討を行ったことを述べたが、これは当初予定していたよりも多くの薬剤種での実験を行い、そのそれぞれで結果を得ることができた。また遺伝学的手法による検討では、当初予定していた項目に加え、より詳細な検討を実施し結果を得ることができた。計画通りに進捗しているので、当初計画に従い、「移動中錐体細胞を対象とした、遺伝子コード型Ca^<2+>プローブを用いた脳スライスライブイメージングの実験系」を用いた更なるデータ取得とデータの定量的解析を行うことで、幼弱錐体細胞の移動と細胞内Ca^<2+>動態の関係を明らかにする予定である。計画通りに進捗しているので、当初計画に従い、3年次は論文の執筆を進めていく。それと並行して追加実験を進めサンプル数を増やし、それに基づく統計的解析を更に進める。