hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
神経系を有するiPS細胞由来ヒト型高次肝組織の生体内での再構築

これまでに、ヒトiPS細胞由来の肝前駆細胞(hiPS-HE)、血管内皮細胞(hiPS-EC)、間葉系幹細胞(hiPS-STM)を共培養しvitroで作成した肝芽をマウス内に移植して、障害肝マウスの生存率を向上させるほどの、アルブミン等の合成や代謝機能を有する微小肝組織を作成する事に成功している。今回、さらにhiPS細胞から誘導した神経幹細胞を加え、これまでできていなかった胆汁分泌可能な胆管、および動静脈、神経からなる門脈域を有する微小肝組織構築を試みた。本年度は、これまで通り微小肝組織は構築できるものの、まだ、門脈域を構築するまでには至っていない。培養上清中やマウス血中アルブミン値を、微小肝組織の機能の目安としているが、神経幹細胞をhiPS-STMと同程度加えたところ、かえって機能の低下が認められた。また、hiPS-STMを減量したところ、類洞の形成が明瞭になったが、生存持続時間が減少した。現在、各細胞の割合を変えながらプロトコルの改良中である。また、神経幹細胞の数のみならず、加えるタイミングや、混入法を検討するために、生体肝組織内での門脈域の構築過程を胎生期のマウスから生後早期のマウスを用い組織標本と胆管や血管のマーカーに対する免疫染色を行うことにより再検討してみた。マウスではductal plate内で微小胆管が構築されるのは生まれる直前E17.5で、生後もしばらく門脈域の再構築は続いていき、ほぼ4週に安定することが確認できた。これに加え神経系の構築を神経マーカーPGP9.5の免疫染色で観察した。その結果、胎生期には肝組織内に神経細胞は確認できなかった。E15.5の標本で肝門部胆管周囲に神経線維を確認することができ、生後徐々に肝門近傍の肝実質内に構築された門脈域から末梢に向かって神経線維の密度が上昇していくことが観察された。本研究では最終的に動静脈、胆管、神経構造から成る門脈域を有し、胆汁分泌能を持つヒト型高次肝組織の構築を目指している。そのために、これまで肝芽を構築するために用いた細胞ソース、hiPS-HE、hiPS-EC、hiPS-STM以外に神経幹細胞を共培養することを計画した。これまでにhiPSから神経幹細胞を誘導することは可能であったが、これまで報告されているいくつかの分化誘導法でも効率よく増殖性の高い神経幹細胞を分化誘導することが困難であった。しかし、これを改善するためには、論文に記載されていない細かな諸条件などを最適化しながら効率は向上している。また、マウスの実験や文献よりこれまで明らかでなかった肝発生時の肝内神経系の構築過程が徐々に明らかになり、肝門近傍から門脈域が末梢に向けて徐々に構築されていく過程が予測でき、ヒト型高次肝組織の構築の達成に向けて、神経幹細胞の数のみならず、混入のタイミングや、混入方法を検討するきっかけができ順調な進捗であると考えられる。動静脈や、門脈、胆汁分泌が可能な胆管構造を有するヒト型高次肝組織の構築を目指す為に、予定通りhiPS細胞より神経幹細胞の誘導構築を達成する。特にhiPS細胞からの内皮細胞の分化誘導プロトコルにおける課題解決を目指し、クローンの変更、細かな諸条件の検討、他の文献のプロトコルの検討などを実施する。さらにヒトの再生医療への利用を目指すため、改良したプロトコルを基盤に肝芽形成実験を行う。マウス胎生期、および、生後早期の肝を用いた観察から神経線維の肝外から肝門部胆管周囲を経由して肝実質内への侵入が生後の門脈域の構築に関与する可能性が示唆された。しかし、ヒトのabortionの検体を用いたこれまでの文献では胎生期にすでに神経線維が存在している報告もある。これらを踏まえて、今後、肝芽作成時の細胞数の比率を変えて検討するだけでなく、神経幹細胞のシート上に肝芽を植えて神経細胞の肝芽内への迷入をクラニアルウィンドウ内で可視化して観察する実験が必要と考えている。その後に、構築できた微小肝組織でのタンパク質合成機能などの肝機能評価も検討している。

また、神経幹細胞の数のみならず、加えるタイミングや、混入法を検討するために、生体肝組織内での門脈域の構築過程を胎生期のマウスから生後早期のマウスを用い組織標本と胆管や血管のマーカーに対する免疫染色を行うことにより再検討してみた。マウスではductal plate内で微小胆管が構築されるのは生まれる直前E17.5で、生後もしばらく門脈域の再構築は続いていき、ほぼ4週に安定することが確認できた。これに加え神経系の構築を神経マーカーPGP9.5の免疫染色で観察した。その結果、胎生期には肝組織内に神経細胞は確認できなかった。E15.5の標本で肝門部胆管周囲に神経線維を確認することができ、生後徐々に肝門近傍の肝実質内に構築された門脈域から末梢に向かって神経線維の密度が上昇していくことが観察された。本研究では最終的に動静脈、胆管、神経構造から成る門脈域を有し、胆汁分泌能を持つヒト型高次肝組織の構築を目指している。そのために、これまで肝芽を構築するために用いた細胞ソース、hiPS-HE、hiPS-EC、hiPS-STM以外に神経幹細胞を共培養することを計画した。これまでにhiPSから神経幹細胞を誘導することは可能であったが、これまで報告されているいくつかの分化誘導法でも効率よく増殖性の高い神経幹細胞を分化誘導することが困難であった。しかし、これを改善するためには、論文に記載されていない細かな諸条件などを最適化しながら効率は向上している。また、マウスの実験や文献よりこれまで明らかでなかった肝発生時の肝内神経系の構築過程が徐々に明らかになり、肝門近傍から門脈域が末梢に向けて徐々に構築されていく過程が予測でき、ヒト型高次肝組織の構築の達成に向けて、神経幹細胞の数のみならず、混入のタイミングや、混入方法を検討するきっかけができ順調な進捗であると考えられる。動静脈や、門脈、胆汁分泌が可能な胆管構造を有するヒト型高次肝組織の構築を目指す為に、予定通りhiPS細胞より神経幹細胞の誘導構築を達成する。特にhiPS細胞からの内皮細胞の分化誘導プロトコルにおける課題解決を目指し、クローンの変更、細かな諸条件の検討、他の文献のプロトコルの検討などを実施する。さらにヒトの再生医療への利用を目指すため、改良したプロトコルを基盤に肝芽形成実験を行う。マウス胎生期、および、生後早期の肝を用いた観察から神経線維の肝外から肝門部胆管周囲を経由して肝実質内への侵入が生後の門脈域の構築に関与する可能性が示唆された。しかし、ヒトのabortionの検体を用いたこれまでの文献では胎生期にすでに神経線維が存在している報告もある。これらを踏まえて、今後、肝芽作成時の細胞数の比率を変えて検討するだけでなく、神経幹細胞のシート上に肝芽を植えて神経細胞の肝芽内への迷入をクラニアルウィンドウ内で可視化して観察する実験が必要と考えている。その後に、構築できた微小肝組織でのタンパク質合成機能などの肝機能評価も検討している。
リンパ球活性化マーカーTFLの免疫制御システムの解明

我々は、新規のがん抑制遺伝子TFLを同定し報告してきた。TFL遺伝子欠損マウスの脾臓のTリンパ球を刺激するとIL-2などのサイトカインが増加しており、実験的自己免疫性脳脊髄炎においてTFLマウスが野生型のコントロールマウスに比べて脳炎発症が遷延していることが明らかとなった。さらに脳内に浸潤しているCD4陽性Tリンパ球はTh17に多く偏りが認められ、TFLはIL-17サイトカインのRNAレベルで分解制御していることも明らかにした。我々は、B細胞性リンパ腫の患者検体より、新規のがん抑制遺伝子TFL(別名ZC3H12D)を同定し報告してきた(Br J Haematol. 139(1):161-3, 2007)。この分子は正常の人の末梢血Tリンパ球およびBリンパ球に特異的に発症し、白血病細胞株の増殖を抑えるがん抑制遺伝子としての機能を持つことを報告した。さらに、TFLは細胞質のRNAを制御すると近年注目を浴びているプロッセッシングボディ(P-body)に局在しその機能を発揮していることも明らかにした(Mol Cancer Res. 7(6):880-9. 2009.)。次にTFL遺伝子欠損マウスを作製しその解析に取り掛かった。TFL遺伝子欠損マウスは上記のMCPIP遺伝子欠損マウスと異なり、長期にわたり生存したが、脾臓のTリンパ球を刺激するとIL-2などのサイトカインが増加していることがわかった。TFLの発現は獲得免疫の中心を担うリンパ球に多く発現していることより、TFLが自己免疫疾患に何らかの役割を果たしているのではと考えいくつかの実験を行ったところ、ヒトの多発性硬化症のモデルマウスとしてよく知られている実験的自己免疫性脳脊髄炎(Experimental autoimmune encephalitis: EAE)においてTFLマウスが野生型のコントロールマウスに比べて脳炎発症(四肢麻痺の程度)が遷延していることが明らかとなった。さらに脳内に浸潤しているCD4陽性Tリンパ球はThサブセットのTh17に多く偏りが認められ、Th17細胞を脳内で多く維持することにより麻痺の遷延が起こっていることが予想された。また、TFLはIL-17サイトカインのRNAレベルで分解制御していることも突き止めた(論文投稿中)。我々の同定したTFLはサイトカインなどの分子をRNAレベルで転写後調節することによりリンパ球の増殖やアポトーシスを制御し、TFLKOマウスでは実験的自己免疫脳脊髄炎が強く発症する。これらの分子メカニズムを明らかとすることを目的に研究を行い、以下の成果を得た。【炎症性疾患モデルを用いたTFLの免疫制御のメカニズムの探策】EAE誘導されたマウスより取り出したCNS、リンパ節、脾臓の細胞を抗原(MOGペプチド)で再刺激することにより産生されるTh1/2/17のサイトカイン産生量について調べたところ脾臓やリンパ節のサイトカインは変化ないものの、CNSに浸潤するリンパ球においてはTFL欠失マウスでは有意にTh17が誘導された。この効果はEAE発症後期において顕著に認められることから、TFLはサイトカインの分解フィードバック制御に寄与していることが予想された。同時に制御性T細胞の割合も検証すべく、脾臓細胞における制御性T細胞への誘導を検討したが差は認められなかった。症状をひき起こすサイトカインのRNAの制御にTFLが関与していると考え、IL17の3'UTRコンストラクトを用いてルシフェラーゼアッセイを行ったところ、TFLベクターは野生型と比して有意にIL17の分解を促進した。抗原提示細胞側の免疫制御異常によるEAE発症の可能性も考えられる。我々は、TLRの刺激によりマクロファージにおけるTFLが誘導されることを見出した。また、TFLが脱ユビキチン化に寄与し炎症の調節を行うことも報告した。しかしながら、EAEの系においてはこれらの関与は認められなかった。誘導されるTFLが存在しないことにより抗原提示細胞としてのBリンパ球のサイトカインプロファイルについては今後の検討課題である。上述のように、研究計画通りにおおむね順調に進行している。リンパ腫におけるTFL発現プロファイリングについては、現在進行中であり、来年度までにはおおむね成果を出せる見込みである。【EAE以外のモデルマウスでのTFL関与の検討】EAEの他に同様のTh17依存の系として遅延型過敏症モデルも検討する。また、移植片対宿主病(GvHD)の系を用いてTFLKOマウスのTリンパ球を移植したマウスのGvHD重症度を評価したい。GvHDの発症はホストの抗原提示細胞に依存しているため、この実験系ではTリンパ球の機能をみるのに適しておりTFLがTリンパ球でのサイトカイン産生にどのような制御を行っているかがを明らになると思われる。近年Th17の影響がGvHDや関節炎の発症初期に重要な役割を担っていると考えられている。

TFLKOマウスのリンパ球でTh17が活性化しているならばそれぞれのモデルマウスでの表現型によりTh17の役割を検証できるモデルマウスとなる可能性がある。【リンパ腫におけるTFL発現プロファイリング】TFLのFISHにより15.9%のリンパ腫にTFLの遺伝子領域が欠失していることが分かった。そこで、作成したモノクローナル抗体を利用して、免疫染色やフローサイトメトリー解析によりTFL発現の強弱がリンパ腫病型と相関しているか検討する。すでに採取された検体を用いて臨床研究に基づきTFLの発現の有無がリンパ腫の予後や化学療法感受性に影響を及ぼすか調べる。【TFLの新規標的分子の同定】TFLの標的分子はサイトカインなどのRNA以外にもマイクロRNAなど数多くあると推測される。事実、TFLのファミリー分子はマイクロRNA制御にかかわることが報告された。そこでTFL抗体を用いてIPを行い、共役沈降されたRNA/miRNAアレイを用いて網羅的解析する。このような手法でTFL関連RNAおよびマイクロRNAを同定していきたい。研究費の多くは試薬などの消耗品に使用される。また一部は動物実験施設にかかる費用に使用する。また。旅費や論文投稿にかかわる費用なども研究費より使用する。
DNA複製異常による成人T細胞白血病発症機構の解明

成人T細胞白血病(ATL)は、CD4陽性T細胞の腫瘍性増殖を特徴とする疾患であり、ヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)の感染により引き起こされる。約60年という長い年月をかけて白血病細胞に数多くの遺伝子変異が蓄積しATLを発症するが、その機序は未だ不明である。本研究では、HTLV-1がコードするトランスフォーミングタンパクTax1がDNA複製および修復機構に与える影響を解析した。休止期に誘導したT細胞株Kit 225にTax1を発現させ、DNA複製および修復関連遺伝子の発現についてRNAシークエンスを用いて解析した。その結果、Tax1はDNA複製関連遺伝子群の発現を誘導した。また、DNA二重鎖切断修復機構に関わる遺伝子群について解析したところ、Tax1は相同組換え(HR)修復関連遺伝子群の発現を誘導したのに対し、非相同末端結合(NHEJ)修復関連遺伝子群の発現に影響を与えなかった。HR修復関連遺伝子の発現上昇は、Tax1の発現によりDNA二重鎖切断が起こっている可能性を示唆している。本研究より、Tax1はDNA複製時にDNA二重鎖切断を引き起こし、遺伝子変異を誘導する可能性が示唆された。DNA複製異常は細胞に遺伝子変異を蓄積させ、がん化へと導く。ヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-1)の感染により引き起こされる成人T細胞白血病(ATL)の場合も、数多くの遺伝子変異が白血病細胞に蓄積し発症するが、その機序は未だ不明である。HTLV-1がコードするトランスフォーミングタンパクTax1は、NF-κB経路を活性化し、様々な増殖因子の発現を誘導することで細胞のがん化に寄与すると考えられている。近年我々は、これまで細胞増殖に関わると考えられてきたTax1が、増殖期のT細胞においてNF-κBのコンポーネントであるRelAを介して増殖抑制およびアポトーシスを誘導することを報告した。Tax1により増殖抑制された細胞は、細胞周期がS期に集積し、異常なDNA含量を示した。本研究では、Tax1がいかにして増殖抑制およびアポトーシスを誘導するのか、その分子機序の解明を試みている。Tax1を発現させた増殖期ヒトT細胞株Kit 225にDNA複製ストレス関連分子であるAtaxia telangiectasiamutated (ATM)の阻害剤を作用させると、著しくアポトーシス分画が増加した。このことより、Tax1による増殖抑制は、複製ストレスが関与していることが示された。また、増殖期または休止期に誘導したKit 225細胞に野生型Tax1およびNF-κB活性化能を欠く変異体TaxM22、これまでATL発症の報告がないHTLV-2 Taxを発現させ、RNAシークエンスを行った。DNA複製および修復関連遺伝子に着目し、現在解析を進めている。Tax1発現細胞におけるRelAのDNA結合領域を解析する予定であったが、所属先の変更等があり、解析まで至らなかった。現在、実験環境も整い、今後は速やかに実験に着手可能である。増殖期Tax1発現細胞におけるRelAのDNA結合領域およびDNA複製開始領域を同定し、それらの領域がATL細胞における遺伝子変異配列に相当するか解析する。補助事業期間の初年度(平成29年度)に申請者所属先の変更が決定した。そのため平成29年度は、実験に使用する試薬類を異動先へ持ち出さずに済むように実験を計画し、物品の購入を控えながら実験を行った。平成30年度は、実験環境も整ったため、平成29年度計画の未遂行の実験と、平成30年度に計画している実験を同時に進め、予定期間内に研究目的達成を目指す。
大腸がんにおける遺伝子発現異常の分子機構と意義

我々はこれまでに、細胞のがん化に伴い遺伝子発現パターンに劇的な変化が生じる機構と意義を解析し、ヒト大腸癌細胞はEHFを高発現することにより、p53依存性のアポトーシスを回避していることを見出した。本研究では、EHFが大腸癌で高発現する分子機構、p53の機能を抑制する分子機構を明らかにすることを目的としている。まず、EHFの発現を制御する因子を探索するために、転写因子を中心としたRNAiライブラリーを用いて、網羅的なRNAiスクリーニングを行った。結果、大腸がん細胞において、転写因子であるFOSL1やヒストンメチル化に関与するMLL2やASH2LなどがEHFの発現を制御していることが明らかとなった。さらに、ChIP法を用いて、EHFプロモーターへの直接結合を確認したところ、FOSL1がEHFのプロモーター上に直接結合していることが明らかとなった。今後、MLL2とASH2LのEHFプロモーターへの結合をそれぞれ確認すると共に、ヒストンメチル化によるEHFの発現制御機構の解明を行いたいと考えている。次に、EHFの発現抑制によるアポトーシス誘導機構の解明を行うために、p53発現について検討したところ、EHFの発現抑制によってp53タンパク質が安定化することが明らかとなった。さらに、EHFの発現を抑制することによってMDM2の発現量が減少すること、EHFを強制発現するとMDM2の発現量が劇的に増加することが明らかとなった。このとき、EHFの発現抑制、及び強制発現によって、MDM2のmRNAレベルは変化しないことが明らかとなった。これまでの研究により、MDM2はユビキチンライゲースであり、p53タンパク質の安定化に寄与していることが明らかとなっている。そこで我々は、EHFはMDM2を介してp53タンパク質の安定化に寄与し、大腸がん細胞におけるアポトーシスの制御を行っていると考え、EHFとMDM2の免疫沈降実験を行った。その結果、EHFとMDM2は直接結合することが明らかとなった。今後は、EHFによるMDM2タンパク質の安定化機構の解明を行うことにより、EHFがp53の機能を抑制する分子機構を明らかにする。
咀嚼による前頭前野機能改善システムの開発

立体認知とは、視覚器や聴覚器からの入力情報を用いずに、触圧覚情報と深部感覚情報のみによって対象物の三次元的構造を認知する能力のことである。これまで、立体認知と脳活動に関する研究は数多く報告されているが、口腔立体認知に関するものは少ない。また口腔立体認知能力とは、食片の大きさや性状、位置を認識する能力であり、咀嚼過程においは欠かすことができない。そこで本研究では、自然な環境下で、かつ完全無侵襲的に高次脳機能の動態イメージングが可能な近赤外線光トポグラフィー装置(日立メディコ製)を用いて、口腔立体認知と前頭前野機能の関係について調べた。ここでいう自然な検査環境とは、狭い空間に閉じ込められない、ある程度動くことができる、騒音がない、などの点てある。プローブは左右の前頭前部をカバーするよう固定し、サンプリング間隔は0.1秒とした。立体認知に用いるテストピースはアクリルレジンにて製作し、その大きさは20×20×10mm以内とした。その結果、口腔立体認知時に前頭部の酸化型ヘモグロビン上昇が確認された。次いで、fMRI(functional magnetic resonance imaging)を用いて口腔と手による立体認知時の脳活動を比較検討した。撮像にはGE社Signa-LX 1.5TMRスキャナーを用い、体動の影響を防ぐためスパース撮像法にて行った。解析にはSPMを使用し、時間連続的EPI画像についての解析を行った。解析の結果、一次体性感覚野、頭頂連合野、前運動野、前頭前野背外側部に共通して口腔及び手による立体認知に関わる大脳皮質領域として描出された。以上の結果から、さまざまな食品を咀嚼し口腔内で認知することが、前頭前野を活性化させることに繋がることが示唆された。咀嚼中の口腔内では常に食片の大きさや性状、位置などが認識されており、この能力は口腔内立体認知能力といわれている。これは、食物を咀嚼するのに欠かすことのできない能力であると考えられており、そのため口腔機能の評価判定に用いるための試みとしてテストピースの形態、材質、検査法などに関する研究が盛んに行われている。しかしながら、口腔内立体認知と脳活動に関する研究は少ない。プローブは左右の前頭部をカバーするよう固定し、サンプリング間隔は0.1秒とした。課題は、探索用試料であるレジン製のテストピース(様々な形態)を、被験者の口腔内にいれ、どのような形態のものであるかを探索させた。30秒間の安静状態を記録後、課題を遂行した。課題は、30秒間の課題遂行、30秒間の安静をそれぞれ2回行うことを1セットとし、2セット行った。分析は、得られたデータを加算平均処理した結果について行った。このことから、口腔内における食片の大きさや形状、位置を認識すること、つまり様々な食品を咀嚼することで、前頭前野を賦活させることができることがわかった。
大規模グラフィカルユーザーインターフェースのための軽量制約プログラミング技術

大規模なグラフィカルユーザーインターフェースの制約プログラミングによる効率的な実現を可能にするための要素技術として,制約解消の軽量化に関する研究を行った.今年度の成果は,(1)制約プログラミング手法の効率向上によるさらなる軽量化と,(2)グラフィカルユーザーインターフェースへの適用による提案手法の実証的評価である.研究成果(1)は,不等式を含む線形制約の系を解消する,昨年度提案した制約プログラミング手法の効率をさらに向上したというものである.昨年度の手法は,数千個の制約からなる系を実時間に解消することはできたが,これは不等式制約の個数が少ないという条件のもとでの結果であった.今年度はこの条件を緩和することを目標の1つとし,不等式制約処理方式の改善を試みた.その結果,制約系内のほとんどの変数がその領域に関する不等式制約を持つような極めて不等式制約が多い状況でも,数千個の制約からなる系を実時間で解消することが可能となった.研究成果(2)は,本研究で提案した制約プログラミング手法を用いて制約解消系を実装し,さらにそれをグラフィカルユーザーインターフェースに適用することで,本研究の提案手法の応用性の実証と性能の評価をしたというものである.その結果,本研究の提案手法によって,大規模なグラフィカルユーザーインターフェースを実際に構築可能であり,また従来手法に比べても十分に高速であることが確認された.大規模なグラフィカルユーザーインターフェースの制約プログラミングによる効率的な実現を可能にするための要素技術として,制約解消の軽量化に関する研究を行った.その内容は,(1)制約解消の高速化による時間的軽量化,(2)制約解消に要する記憶領域の削減による空間的軽量化という,2つの研究に分けることができる.研究(1)は,不等式を含む線形制約の系を高速に解消するアルゴリズムに関するものである.このアルゴリズムは,階層的な優先度を伴った線形の等式および不等式制約の系をインクリメンタルに処理することで,制約の個数が数千個の場合でも,数十ミリ秒程度の時間で実行を完了できるという特徴を持つ.本研究課題の開始以前に,研究代表者は,階層的な線形等式制約の系を効率的に解消する手法を提案していたが,今年度さらに研究を発展することで,線形不等式制約をサポートできるようにし,その実用性をより向上した.研究(2)は,制約解消系のモジュール化を実現するソフトウェア構成法に関するものである.この手法は,制約解消系ソフトウェアを,制約の評価や,解候補の最適化などの機能単位のモジュールに分解するもので,制約の表現に必要なコードやデータを特定のモジュールに集中することができる.これによって,実行時の制約解消系の記憶領域のサイズを削減することが可能になった.これらの研究の成果は,すでに複数の国際会議や学術雑誌において発表または採録済みである.大規模なグラフィカルユーザーインターフェースの制約プログラミングによる効率的な実現を可能にするための要素技術として,制約解消の軽量化に関する研究を行った.今年度の成果は,(1)制約プログラミング手法の効率向上によるさらなる軽量化と,(2)グラフィカルユーザーインターフェースへの適用による提案手法の実証的評価である.研究成果(1)は,不等式を含む線形制約の系を解消する,昨年度提案した制約プログラミング手法の効率をさらに向上したというものである.昨年度の手法は,数千個の制約からなる系を実時間に解消することはできたが,これは不等式制約の個数が少ないという条件のもとでの結果であった.今年度はこの条件を緩和することを目標の1つとし,不等式制約処理方式の改善を試みた.その結果,制約系内のほとんどの変数がその領域に関する不等式制約を持つような極めて不等式制約が多い状況でも,数千個の制約からなる系を実時間で解消することが可能となった.研究成果(2)は,本研究で提案した制約プログラミング手法を用いて制約解消系を実装し,さらにそれをグラフィカルユーザーインターフェースに適用することで,本研究の提案手法の応用性の実証と性能の評価をしたというものである.その結果,本研究の提案手法によって,大規模なグラフィカルユーザーインターフェースを実際に構築可能であり,また従来手法に比べても十分に高速であることが確認された.
波浪中を航行する肥大船周りの非定常流場・波動場に関する研究

波浪中で航航する船舶の推進性能を理解するためには、プロペラ面伴流分布の波による変化を知る必要があり、それを詳細に計測するためステレオPIV装置を導入した。初期の調整のあと最終年度に波の位相位置ごとに平均する手法を開発し、位相平均プロペラ面流場を計測できた。このような計測結果は今までなく、波浪中推進性能の改良に今後用いることができるとともに進んだCFD計算結果の検証用データとして使うことが可能である。本年度は、波浪中を航行する肥大船の平水中抵抗からの抵抗増加のメカニズム解明及びCFD計算結果の検証するためのデータを取得するために以下の具体的な研究を行った。1.世界中の数多い研究機関において平水中実験が行われているKVLCC2模型を作成し、比較試験を行った。これにより水槽の精度を確認し、前後揺、上下揺、縦回転揺れが自由な状況での抵抗増加の計測を行った。3つの波長船長比にて詳細な計測を行った。このデータについては2010年12月にスェーデンで開催される、CFDワークショップのデータとして採用されることになり、2010年1月の実行委員会にて報告を行った。2.の実験から詳細な流場を計測する実験条件を3つの波長船長比に決定した。3. PIVシステムについてラビジョン社のシステムをもとに大阪大学水槽にて撹乱を少なくして計測可能なシステムを設計して発注した。年度末に導入されたが、試験的に翼端渦の計測を行ったところ、非常に高密度で精度のよい計測結果が得られることが分かった。またカメラシステムを別に導入して3次元システムに拡張し計測可能であることを確認した。これを用いて次年度主には大型肥大船が実海域において遭遇する短波長域と運動による抵抗増加が大きくなる波長が船長と同程度の領域かにおいて詳細な流れ場を計測する。4.自由表面形状を面的に計測するシステムについて検討を行い、規則波で検討を行った。カメラを複数台並べることにより大きな領域が計測可能であることが明らかになった。数値流体力学の進歩は著しく、波浪中の模型周りの流れ場や直接運動推定計算も行われるようになってきた。しかしこのような計算の結果が実現象を表現しているかどうか検証するための計測した例はまだ少なく、質の良い詳細な計測データが望まれている。本研究では、波浪中で前進する肥大船型周りの流体力および流れを計測し現象を理解するとともにCFD計算結果と比較しその改良に資するデータを取得する手法を開発している。初年度に製作したKVLCC2模型を前後揺、上下揺、縦回転揺れが自由な状況での抵抗増加の計測を行った後、3つの波長船長比にて詳細な計測を行った。このデータを詳細な比較が可能な形に本年度解析しなおし2010年12月にスェーデンで開催される、CFDワークショップのデータとして提出した。このデータは他の波浪中データと比較し詳細な時系列までそろった形で提出され、いくつかの研究機関がこのテストケースに対し計算を行い比較検討した。この結果は会議録として公表されている。またPIVシステムについては初年度に導入したラビジョン社のシステムを用い、校正手法を確立した。また曳航水槽においてシーディングを行う装置を作成し粒子の密度等を調査し改良を行った結果十分な計測睦度が得られるようになった。この後模型船周りの兵水中での流場計測を行い、平均流や乱流特性を得るための画像枚数などについて調査した。結果を他機関でのピトー管計測と比較し妥当な結果が得られていることを確認した。そのほか単純船型周りの流れ計測により表面状態と流れ場の変化を計測できることも確認した。最終年度である平成23年度にはステレオPIV装置を用いて、波浪中で航行する船舶の位相平均のプロペラ面流速3方向成分を計測した。このような流れ場はこれまでに計測されたことがなく波浪中における推力や馬力の変動を考える上の重要な知見が得られた。具体的な成果は以下のとおりである。1.サージフリーの抵抗増加測定装置を用いてPIV計測を行う場合、弱いばねによる長い周期の運動が大きくなり計測断面が変化してしまうが、これをできるだけ小さくするように数多くの予備実験を行い、バイアス荷重の調整とリリース方法を検討しPIV計測が可能な程度に長周期のサージを減少させることができた。2.波浪中で3自由度(ヒーブ、ピッチ、サージ)が出会い周期で運動する模型の位相平均流場を計測するために運動の所定の位置でPIVのダブルパルスレーザー光を発光し画像が取れる装置を開発した。これにより所定の位相での流速分布が計測できた。3.肥大船の波浪中運動中の船体周りの流場をPIV計測を行い6-12の運動位相のプロペラ面の流速を計測できた。波長の短い運動の小さな時も波の影響で流速場は大きく変動することが明らかになった。また運動が大きい場合は縦渦の位置や強さも大きく変動することが明らかになった。4.非定常周期的流場のCFD計算を行い、ステレオPIV計測結果と比較した。

CFDはかなり良く特徴をとらえているが詳細な部分での違いもありさらなる高精度化が望まれることがわかった。このようにこれまで世界中でみても計測されていなかった波浪中を航行する船体周りの位相平均流場が計測され新たな知見が得られた。公表は遅れているが、ApHydro等のシンポジウムには採択されている。
CRISPR/Cas9を用いた精子無力症モデルマウスの作製と解析

不妊症の約半分は男性に起因し、その原因の約20%は精子運動能の低下(精子無力症)であると言われている。本研究では、精子無力症の原因遺伝子の同定を目指し、CRISPR/Cas9システムを用いて、精子運動能に関わると示唆されている遺伝子のノックアウト(KO)マウスを作製した。その結果、精子の運動能低下や鞭毛形成不全のために生殖能力が低下するKOマウスを8ライン作製することができた。これら遺伝子のうち、Ppp3r2とCabyrについて詳細な解析を行った。他のKOマウスについても引き続き解析を行っていく予定である。日本を含む先進諸国では10組に1組のカップルが不妊に悩んでいるとされる。男性(雄)に見られる不妊原因の1つとして精子運動能の低下(精子無力症)が挙げられるが、その発症機構はまだほとんど分かっていない。その理由として精子鞭毛運動に関わる遺伝子の機能を個体レベルで解析した例が少ないという点が挙げられる。本研究では、CRISPR/Cas9システムを用いて精子運動能に関わる遺伝子の網羅的なノックアウト(KO)マウス作製を行い、精子無力症の原因遺伝子の同定と精子無力症モデルマウスの作製を目指す。平成26年度はダイニンやラジアルスポークを構成する因子を含む13遺伝子のKOマウス作製を行った。このうちの9遺伝子のKO雄マウスを野生型の雌マウスと交配させたところ、5遺伝子のKO雄マウスが不妊、1遺伝子のKO雄マウスが妊孕性の低下を示した。残りの3遺伝子のKO雄マウスの妊孕性に問題はなかった。精子の形態と運動能の解析を行うと、鞭毛形成不全(3遺伝子)と運動能低下(3遺伝子)が原因で不妊または妊孕性の低下となっていることが分かった。また免疫染色や精子を頭部と鞭毛に分画したウェウタンブロッティングを行うことにより、妊孕性に問題のあった4遺伝子が実際に精子鞭毛に局在していることを確認した。今後はこれらKO雄マウスの表現型解析を通じて精子無力症の発症機構を明らかにするとともに、精子運動能に関係する遺伝子のKOマウス作製を引き続き行っていく予定である。平成27年度は、精子運動能に関与している可能性のある8遺伝子のKOマウスを作製した。平成26年度に作製したが解析できなかったKOマウスと合わせて、今年度は5遺伝子のKO雄マウスの妊孕性を確認した。結果は、2遺伝子のKO雄マウスが、精子運動能の低下のために不妊であった。一方、残りの3遺伝子のKO雄マウスは不妊ではなかった。今後はこれら不妊マウスの詳細な解析を行っていく予定である。また、平成26年度に作製した、Ppp3r2・KOマウスの解析を行った。このKOマウスは精子尾部の一部分(中片部)が屈曲できないために不妊になった。PPP3R2はカルシウム依存性の脱リン酸化酵素であるカルシニューリンの調節サブユニットであるが、触媒サブユニットであるPPP3CCと結合すると考えられている。そこで、精子を用いて免疫ブロット法を行うと、Ppp3r2・KO精子ではPPP3R2に加えてPPP3CCも検出されなかった。よって、PPP3CCとPPP3R2が結合して互いに安定化していることを確認できた。カルシニューリン阻害剤であるシクロスポリンAとFK506は免疫抑制剤として汎用されているが、これら薬剤を2週間、野生型の雄マウスに投与すると、Ppp3r2・KOマウスと同じように精子中片部が屈曲せずに、雄マウスは不妊になった。投与を中止すると1週間で妊孕性が回復したことから、PPP3CC/PPP3R2を特異的に阻害できれば、短期間で効果があり可逆的な男性避妊薬の開発に繋がる可能性がある。また、outer dynein arm docking complexの構成因子であるCCDC63のKOマウスについては、鞭毛が正常に形成されず短くなるために、精子が運動能を示さず不妊になることが分かった。おおむね計画通り8遺伝子のKOマウスを作製することができた。このうち2遺伝子では、精子運動能の低下のためにKOマウスが不妊になった。よって目標であった精子無力症のモデルマウスとなりうる。さらにPPP3CCとPPPP3R2で構成されるカルシニューリンが短期間で効果のある男性避妊薬の標的となりうることを示せた。平成28年度は、精子運動能に関与している可能性のある6遺伝子のKOマウスを作製した。前年度に作製したが解析できなかったKOマウスと合わせて、平成28年度は7遺伝子のKO雄マウスの生殖能力を確認した。結果は、どのKO雄マウスも不妊ではなかった。また、平成26年度に作製したCabyr・KOマウスの解析を行った。Cabyr・KO雄マウスを野生型の雌マウスと交配させたところ、17回の交尾が確認されたが、そのうちの1回でしか子供(1匹)は生まれなかった。体外受精の系を用いて解析を行ったところ、KO精子は卵子の周りにある細胞外マトリックスである透明帯を通過することができなかった。KO精子を光学顕微鏡で観察してみると、明らかな形態異常は認められなかったが、精子の運動率が50%ほど低下し、運動速度の平均も約40%低下していた。そこで透過型電子顕微鏡で微細構造を観察してみると、精子尾部に存在する繊維鞘と呼ばれる構造に異常が見つかった。

さらに、運動装置である微小管が繊維鞘の外側など異所で観察された。CABYRは繊維鞘に存在するため、CABYRは繊維鞘の正常な形成に必須であり、KOされて繊維鞘の構造が異常になると微小管の構造にも問題が生じると考えられる。ヒトでも繊維鞘の形態異常と微小管の異所局在を示す不妊患者の報告があり、Cabyrがその原因遺伝子の可能性がある。本研究は平成28年度が最終年度となるが、今後は本研究で作製したKOマウスを材料に、精子運動能の調節機構に関わる遺伝子の機能解析を行い、精子無力症の発症機構の解明を目指す。不妊症の約半分は男性に起因し、その原因の約20%は精子運動能の低下(精子無力症)であると言われている。本研究では、精子無力症の原因遺伝子の同定を目指し、CRISPR/Cas9システムを用いて、精子運動能に関わると示唆されている遺伝子のノックアウト(KO)マウスを作製した。その結果、精子の運動能低下や鞭毛形成不全のために生殖能力が低下するKOマウスを8ライン作製することができた。これら遺伝子のうち、Ppp3r2とCabyrについて詳細な解析を行った。他のKOマウスについても引き続き解析を行っていく予定である。おおむね計画通り13遺伝子のKOマウスを作製することができた。そのうちの6遺伝子では雄性不妊の表現型が見られている。また3遺伝子では精子運動能の低下が起こっており、目標であった精子無力症のモデルマウスとなりうる。不妊の傾向を示したが、まだ解析が終了していない6遺伝子のKOマウスの表現系解析を行う予定である。また精子運動能に関与すると考えられる遺伝子のKOマウス作製を引き続き行う。来年度も10遺伝子ほどのKOマウス作製を計画している。生殖生理不妊の傾向を示した6遺伝子のKOマウスについて更なる表現型解析を行っていく予定である。また鞭毛運動に関係する遺伝子のKOマウス作製を引き続き行う。各年度で10遺伝子ほどのKOマウス作製を計画している。
磁性金属ナノワイヤ伝導の構造依存性に関する解明

超高真空透過型電子顕微鏡に組み込める液体窒素冷却が可能な走査型トンネル顕微鏡(STM)ホルダーの開発を開発した。このホルダーを用いて、収束イオンビーム照射によるミリングで、ナノメートルレベルのギャップを作製し、マイクロ蒸着源によりギャップ近傍に高純度の磁性金属を蒸着し、透過型電子顕微鏡を用いながら液体窒素冷却下において、その構造を直接観察しながら伝導特性のその場計測を行った。磁性金属ナノワイヤ伝導現象の解明は、応用上、重要なテーマである。これまでに、機械的制御による破断(MCBJ)法やSTM法などによって、計測されてきたが、測定結果にばらつきが見られるため問題となっていた。磁性金属ナノワイヤの伝導には、s電子のみならずp, d電子も関与していることを考えると、ナノワイヤの原子配列に依存した伝導現象が予想される。本研究では、磁性金属ナノワイヤの形状や構造を槻察しながら、そのコンダクタンス計測を行うことを目的としている。本年度は、この目的を遂行するため、超高真空透過型電子顕微鏡に組み込める液体窒素冷却が可能な走査型トンネル顕微鏡(STM)ホルダーの開発を主に行った。STMホルダーは、(1)超高真空チャンバーにて、その中央に収束したイオンビーム照射によるミリングで、ナノメートルレベルのギャップを作製できること、(2)超高真空チャンバーに取り付けたマイクロ蒸着源を用いて、このギャップで別れた2つの金電極表面に高純度の磁性金属を蒸着できること、(3)液体窒素で試料である金属ナノワイヤを冷却できることを目指して、設計・製作した。ホルダー本体は、おおむね完成し、ナノ接点の作製を試している。また、超高真空チャンバー内に、作製したマイクロ蒸着源を設置し、STMホルダーの2つの電極間(間隔2mm)に架橋された金属ワイヤの中心部、およそφ0.5-1mmにのみ磁性金属が蒸着されるように、首の長いガイドを取り付ける工夫を行った。磁性金属は、るつぼに置き、通電加熱により蒸発させる。さらに、本年度は、このホルダーを制御するのに必要なTEM-STM計測プログラムをLabViewによって開発した。磁性金属ナノワイヤの伝導には、s電子のみならずp,d電子も関与していることを考えると、ナノワイヤの原子配列に依存した伝導現象が予想される。本研究では、磁性金属ナノワイヤの形状や構造を観察しながら、そのコンダクタンス計測を行うことを目的としている。本年度は、昨年度までに開発した超高真空透過型電子顕微鏡に組み込める液体窒素冷却が可能な走査型トンネル顕微鏡(STM)ホルダーを用いてニッケルや鉄ナノワイヤの作製とその観察を試みた。これらのナノワイヤは、以下の通りに作製した。はじめに、真空チャンバーにてあらかじめ両電極間に架橋された金ナノワイヤをアルゴンイオンスパッタにより細くしてナノギャップを形成する。次に、そのナノギャップにニッケルや鉄を蒸着させ、ピエゾ素子でコンタクトさせる。このホルダーを透過型電子顕微鏡に挿入し、ニッケルや鉄ナノワイヤの構造観察やコンダクタンス計測を行った。しかしながら、電子線入射方位に対しニッケルや鉄の晶帯軸を合わせることが難しく、なかなか格子像を得ることが出来なかった。金ナノワイヤの場合、ワイヤ軸の結晶方位に依存してコンダクタンスの振る舞いが異なっていることを明らかにしているが、そのようなワイヤ軸の結晶方位とコンダクタンスの振る舞いの関係については結論を得ることができなかった。本年度は、開発した超高真空透過型電子顕微鏡に組み込める液体窒素冷却が可能な走査型トンネル顕微鏡(STM)ホルダーの性能を調べるため、金接点の構造とコンダクタンスの同時計測を行った。

透過型電子顕微鏡観察において、電子線入射方位に対しニッケルや鉄の晶帯軸を合わせることが難しく、なかなか格子像を得ることが出来なかったことにより、結晶方位とコンダクタンスの関係を明らかにできなかった。24年度が最終年度であるため、記入しない。高精度定電流電源の購入や配線の工夫により、ニッケルや鉄ナノワイヤをアニールできるようにすることで、電子線照射下において入射方位に対しニッケルや鉄の晶帯軸を合わせることを試みる。
強非線形ランダム結合振動子系における複雑な情報ダイナミクスに関する研究

動物の神経系では,多様で複雑な非線形振動が観測されている.本研究においては,新しい機能を有する情報処理システム構築を目指すための基礎的研究として,単純な振動モデルにおいて,系の非線形性が十分強いときに観測されうるカオス的振動や,ノイズの系の振舞への影響を系統的に調べた。用いたモデルはPLL(位相同期グループ)回路を用いて構成したFM(周波数変調)復調回路である.この系を記述する方程式は,周期的外力下にある振り子や,超伝導Josephson系のそれと同一のものであり,様々な非線形的振舞を呈する.ここでは,周期的刺激とノイズを同時にこの系に印加し,それに対する応答を調べた.この回路は1つ,あるいは,いくつかの神経細胞集団を単純化したモデルであるとみなすことができる.このとき,周期的刺激は,ある,注目している他の神経細胞からの入力であり,ノイズは,その他の多くの神経細胞集団からの無相関の入力を代表していると考えることができる.結果として,ノイズによる復調回復現象という,ノイズ共鳴類似の現象が観測された.これは,非線形系特有のノイズの相乗性による分岐点の移動によるものであることが1つの可能性として考えられる.動物の神経系では,多様で複雑な非線形振動が観測されている.本研究においては,新しい機能を有する情報処理システム構築を目指すための基礎的研究として,単純な振動モデルにおいて,系の非線形性が十分強いときに観測されうるカオス的振動や,ノイズの系の振舞への影響を系統的に調べた。用いたモデルはPLL(位相同期グループ)回路を用いて構成したFM(周波数変調)復調回路である.この系を記述する方程式は,周期的外力下にある振り子や,超伝導Josephson系のそれと同一のものであり,様々な非線形的振舞を呈する.ここでは,周期的刺激とノイズを同時にこの系に印加し,それに対する応答を調べた.この回路は1つ,あるいは,いくつかの神経細胞集団を単純化したモデルであるとみなすことができる.このとき,周期的刺激は,ある,注目している他の神経細胞からの入力であり,ノイズは,その他の多くの神経細胞集団からの無相関の入力を代表していると考えることができる.結果として,ノイズによる復調回復現象という,ノイズ共鳴類似の現象が観測された.これは,非線形系特有のノイズの相乗性による分岐点の移動によるものであることが1つの可能性として考えられる.
宗教と移民のアイデンティティ・共生：　南アジア系ディアスポラを事例として

本研究は,トリニダッド・トバゴ(以下,トリニダッド)および南フロリダの南アジア系移民及びディアスポラが,どのように宗教「伝統」を再構築しているか,またその再構築された宗教が彼らの社会関係資本形成にどのような影響を及ぼしているかを参与観察と聞取り,古文書調査を通して,通時的・教示的に明らかにすることができた。トリニダッドでは19世紀から続くヒンドゥー教徒とカトリック教徒による同一マリア像の共/分有信仰について,先行研究では見落とされてきた複雑な集団間関係を明らかにした。また南フロリダでの調査は,北米における南アジア系移民と宗教に関する既存の研究に批判的な比較事例を提供した。【第1四半期(46月)】予定通り、博士論文執筆時には未出版であった文献の収集と検討を通じて、フィールドワーク実施に向けた仮説・問いの再検討を行った。うち先行研究の一つについて書評を執筆、査読学術雑誌Religion and Genderに投稿し、2012年2月に出版された。加えて、今回、初めて科研費を受けて調査・研究を行うこともあり、4月に東京外国語大学で開催されたフォーラムへ出席して科研費の運用に関する知識を得るとともに、他の研究者との交流に努めた。【第2四半期(79月)】同期に予定していたフィールドワークは延期し、前年の調査で既に入手していたデータの整理と分析を継続した。また、同期には、本プロジェクト申請時に既に提出していた書籍(分担執筆)の原稿を、その後入手可能となった2010年米国国勢調査の結果を加えて加筆修正した。なお、本業績は、1990年代以降米国で急速に増加している移民に焦点を当てた書籍の一章として執筆した"Trinidadian and Tobagonian Americans"であり、2011年9月に出版された。【第3四半期(1012月)】英国オックスフォード大学およびロンドン大学が開催したトリニダッド・トバゴ初代首相エウック・ウィリアムズによる開発、文化政策の再検討に関する学会にて論文発表した。論題は"Villaging the Nation:Eric Williams and the Engineering of National Culture"でウィリアムズによる「国民文化」形成がもたらした問題について、当時南アジア系ディアスポラの3分の2以上が居住していた村落に焦点を当てて論じた。また、予定通り、来年度アメリカ人類学会発表のためのプロポーザルを作成した。【第4四半期(13月)】1月13日を以て、科研運用機関が前所属の関西学院大学から現在の国立民族学博物館に移行した。また、その後、米国セント・ルイス大学商文化研究センター(Saint Louis University,Center for Intercultural Studies)から客員研究員として招聘されたため、現在同センターにて本科研プロジェクトを遂行している。2月17日には、同センター主催のワークショップにて本研究プロジェクトの成果の一つとして南アジア系ディアスポラの宗教の変容と他集団との関係について発表を行った。【第1四半期(46月)】4月及び5月にトリニダッドにおけるフィールドワークを2度実施し、カトリック教会へのヒンドゥー教徒による巡礼について、参与観察と聞き取り調査を行うと同時に、当地大学、ナショナルアーカイブスおよび大司教古文書館にて史料収集を行った。【第2四半期(79月)】セント・ルイス大学Center for Intercultural Studiesにおいて前年度および本年度第1四半期までに収集したデータの分析を進め、その結果を基に、9月末までに査読学術雑誌American Ethnologistに論文を投稿した。同期に予定していた南フロリダでのフィールドワークは、トリニダッドの事例研究の進捗状況に鑑み中止したが、その代わりに前年度の予備調査の結果をまとめ、プロポーザルをを作成してアメリカ宗教学会に提出した。【第3四半期(1012月)】前年度から纏めてきた書籍出版計画書が完成し、11月半ばのアメリカ人類学会においていくつかの出版社に査読のため提出した。また、同月には先に提出したプロポーザルが受け入れられたため、アメリカ宗教学会の特別セッション(北米におけるヒンドゥー教)において、南フロリダにおける予備調査の結果について発表を行うととともに、研究関心を共有する研究者とのネットワーク構築に努めた。【第4四半期(13月)】9月末に提出した学術論文が査読の結果、掲載が見送られることとなり、査読者の示唆を参考に論文の書き直しを行うとともに、さらにデータの分析を継続した。併せて、2月28日、3月1日の両日、研究支援を受けているセント・ルイス大学Center for Intercultural Studies主催の国際学会が開催され、論文発表を行った。2.2014年9月23日10月2日に,Florida Hindu Organization Shiva Mandir (Oakland Park, FL)で執り行われたNavaratriへの参与観察と宗教指導者,参列者への聞き取り調査を実施した。同寺院の指導者Pdt. BimalMaharajは,トリニダッド島にも世襲した寺院を運営しており,同氏とともに今回のNavratriを執り行った指導者の大半がトリニダッドからの訪問者であった。今後は,南フロリダとトリニダッドを移動する指導者に寄り添って調査を継続する。

3.12月3日7日,米国ワシントンDCにて開催されたアメリカ人類学会総会に出席し,研究成果発表を行った。論題は,“Dressing the Statue: Spirituality and Sociality of the Blessed Virgin"で,これまで調査を行ってきたトリニダッド島南部の町シパリアでのカトリック教徒およびヒンドゥー教徒による単一マリア像の分有信仰について,像の衣装および儀礼的着替えの意味について考察した。2014年10月3日2015年3月7日,トリニダッド・トバゴにある西インド諸島大学(The University of the West Indies,UWI)から,本研究課題の成果を共有・還元することを条件として,図書館蔵書や同大学所属の研究者との交流など支援的支援を受けながら、現地調査の継続と書籍ならびに学術雑誌論文の原稿執筆を実施した。1.現地調査:トリニダッドの事例については,同大学West Indiana Collectionおよび首都大司教区公文書館にて史料収集と,参与観察を行っている南部の町シパリアのカトリック教会関係者およびヒンドゥー教徒への聞き取り調査を継続した。また,南フロリダの事例において調査対象としているヒンドゥー寺院の指導者がトリニダッド・トバゴにおいて祭礼を執り行う際に参与観察および信者への聞き取り調査を実施した。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究課題の最終目標である書籍出版計画の執筆は予定通り進んでいるが,学術雑誌論文は執筆・寄稿を続けているものの,査読を通らず,当初予定通りに出版できていない。また、トリニダッド・トバゴの事例については予定通り進んでいるものの,膨大な古文書・史料分析に引き続き時間を要し,その分南フロリダの民族誌調査と,収集したデータの分析,論文の執筆が当初の予定通りに進んでいないのが現状である。文化人類学・民俗学・社会学南フロリダの事例研究については,(1)参与観察・聞き取り調査の継続,(2)これまでの調査を基にした研究ノートなどの執筆,(3)国際学会での発表などの早期実現を目指す。トリニダッド・トバゴの事例については,(1)書籍原稿執筆,(2)国際学術雑誌に寄稿する論文原稿の執筆,(3)必要に応じた書籍出版計画書の推敲など出版契約に向けた努力を継続する。予定していたフィールドワークは実施出来なかったが、それに代えて、前年までに収集したデータの分析が進行したこと、重要な国際学会において発表の機会を得たことによって、今後のフィールドワーク、論文執筆を有効に進める準備が整った。