hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ゲノムマッピングと候補遺伝子による日本人2型糖尿病原因遺伝子の同定とその機能解析

罹患同胞対法を利用した全ゲノムマッピングによって日本人2型糖尿病感受性遺伝子座を計9箇所の染色体領域にマップし、染色体3番の領域(3q26-q27)については脂肪細胞から分泌されインスリン感受性ホルモンであるアディポネクチンが、日本人における主要な2型糖尿病感受性遺伝子であることを明らかにしている。染色体20番の領域(20q12-q13)は複数の民族で2型糖尿病との連鎖が一致して報告されており、若年発症の糖尿病患者が同一家系内に多発する糖尿病の一亜型MODY(maturity onset diabetes of the young)の原因遺伝子HNF-4α遺伝子が存在する。そこでHNF-4α遺伝子のSNPによる相関解析を行ったところ、膵特異的プロモーターに存在するSNPの組み合わせによるハプロタイプが有意に2型糖尿病と相関を示した。個々のSNPと2型糖尿病との相関は認めなかったことから、本領域に糖尿病感受性を真に規定する未知の機能的SNPが存在するか、ハプロタイプを構成するSNPが協調的に働いて2型糖尿病の疾患感受性に影響を与えていることが示唆された。染色体1番(1p36-p32)の領域についてはAMPキナーゼα2サブユニット(PRKAA2)のSNP(rs2051040)がインスリン抵抗性と有意に相関し、更にrs2051040を含むハプロタイプが有意に2型糖尿病と相関することからインスリン抵抗性を介する2型糖尿病感受性遺伝子であることが示唆された。また、我々が初めて単離・同定し、2型糖尿病鍵分子であることを明らかとしたアディポネクチン受容体(AdipoR1,2)についてもSNPを利用した患者対照解析を行って日本人2型糖尿病感受性遺伝子としての意義を検討したが、インスリン抵抗性・2型糖尿病と有意に相関するSNPは認められなかった。(1)ゲノム解析による生活習慣病遺伝的素因の全体像の解明:日本人の2型糖尿病感受性遺伝子座の同定に関して、229組の罹患同胞体について全染色体上の約400のマイクロサテライトマーカーについて遺伝子型を決定し染色体1番、2番、3番、6番、7番、9番、11番、15番、20番上に2型糖尿病との連鎖の可能性がある領域を認めた(Diabetes 51:536-540,2002)。その中で染色体3番の領域にある脂肪細胞特異的アディポネクチン遺伝子のイントロン2内に存在するSNP276G/G遺伝子型保持者は、T/T型保持者に比して血清アディポネクチン値が低値で、インスリン抵抗性指標が高値を示し2型糖尿病のリスクの上昇を認めた。アディポネクチン遺伝子SNP276は血中アディポネクチン低値を介してインスリン抵抗性を惹起し2型糖尿病の発症リスクを高めると考えられた(Diabetes 51:536-540,2002)。これと平行して褐色脂肪細胞や骨格筋で寒冷刺激による熱産生、肝臓で糖新生に重要な役割を担っているPGC-1(peroxisome proliferator-activated receptor-g coactivator-1)のGly482Ser多型がインスリン抵抗性と相関し、ハプロタイプ解析により2型糖尿病感受性遺伝子であることを明らかにした(Diabetologia 45:740-743,2002)。(2)遺伝子改変動物の作製による生活習慣病の発症機序・進展の全体像の解明:

種々の転写因子について共通の転写共役因子であるCBP(cAMP response element binding protein (CREB) binding protein)のヘテロ欠損マウスにおいて高脂肪食下での脂肪細胞の肥大化やインスリン抵抗性の惹起の抑制がPPARγヘテロ欠損マウスに比しても顕著であった。このことより、脂肪細胞の肥大化にはPPARγに依存した経路とPPARγに依存しない経路の2つの経路があることを明らかにした(Nature Genetics 30:221-226,2002)。(3)生活習慣病の遺伝的素因を標的とした治療法・薬剤の開発:既にアディポネクチンがインスリン感受性物質であることを明らかにしているが、そのアディポネクチンはAMPキナーゼ(5'-AMP-activated protein kinase)を活性化することによって、骨格筋においては脂肪酸燃焼と糖の取り込みを、肝臓では糖新生を抑制しインスリン抵抗性を改善することを明らかにした(Nature Medicine 8:1288-1295,2002)。更に動脈硬化のモデル動物であるApoE欠損マウスとアディポネクチン過剰発現マウスを掛け合わせることによってアディポネクチンが直接動脈硬化を抑制する作用があることを個体レベルで明らかにし(J.Biol.Chem.278:2461-2468,2003)、アディポネクチン作用を増強する薬剤が糖尿病・動脈硬化の根本的治療法となりうることを明らかにした。日本人の罹患同胞対を利用した全ゲノムスキャンにより計9箇所の染色体領域(1p36-p32,2q34,3q26-q28,6p23,7p22-p21,9p,11p13-p12、15q13-q21と20q12-q13)に2型糖尿病感受性遺伝子座をマプした。先にアディポネクチン遺伝子が感受性遺伝子であることを明らかにした3q26-q28以外の領域について候補遺伝子内に存在するSNP(single nucleotide polymorphism)を最長でも10kbの間隔で検出し、患者対照相関解析を行って2型糖尿病感受性遺伝子としての意義を検討した。特に1番染色体の領域1p36-p32には、最近単離・同定したインスリン感受性ホルモン・アディポネクチンの受容体AdipoR1(Nature423:762-769,2003)、アディポネクチンの作用をmediateするAMPキナーゼαサブユニット遺伝子(PRKAA2)が位置しておりdense SNPについて糖尿病患者384名ならびに糖代謝正常者384名についてタイピングを行い感受性遺伝子としての意義について検討した。11p13-p12領域についてはpaied box gene 6(PAX6)、15q13-q21領域についてはCalpain3(CAPN3)、20q12-q13領域についてはhepatocyte nuclear factor 4α遺伝子(HNF4A)について相関解析を行ったが少なくとも日本人においては2型糖尿病の易罹患性に大きな影響を与えるSNPは検出されなかった。また、ヒトゲノム・遺伝子解析において収集される遺伝子型などの個人情報が外部に漏洩することを防止するため、独自開発したサンプルシールと2重匿名化を組み合わせた個人情報匿名化システムを構築し、実際の研究に使用している(J Hum Genet 48:323-330,2003)。(1)日本人2型糖尿病遺伝素因の解明:我々が既に同定した計9箇所の日本人2型糖尿病原因遺伝子座(1p36-p32,2q34,3q26-q28,6p23,7p22-p21,9p,11p13-p12、15q13-q21と20
気道上皮糖鎖修飾を標的とした難治性喘息新規治療機軸の開発

気管支喘息は気道を場とした慢性アレルギー性炎症であり、好酸球性炎症、種々の刺激に対する気道過敏性、並びに粘液過剰分泌により特徴づけられる。この粘液の中にはムチンを始めとしたさまざまな糖蛋白質がふくまれ、また気道上皮細胞も複雑な糖鎖修飾が誘導されることが知られている。しかし、これらの糖鎖修飾が気管支喘息の病態において、如何なる働きを持つかは依然として不明である。本研究ではアレルギー性気道炎症によって誘導される気道上皮糖鎖修飾を明らかにし、その病態における働きを解明することを目的とした。マウスにチリダニ抗原(HDM)を系気管支的に投与しアレルギー性気道炎症を惹起し、その気道上皮をレーザーマイクロダイセクション法により採取し、レクチンアレイを用いて解析した。その結果、HDM誘発性アレルギー性炎症によって気道上皮細胞にフコシル化が誘導されることが明らかになった。このフコシル化は気道上皮細胞に発現するフコース転移酵素(Fut)によって介在され、Th2細胞などが産生するIL-13によりFutは気道上皮細胞に誘導されることが明らかとなった。さらにFut欠損マウスでは気道上皮フコシル化が欠損するとともに、アレルギー性気道炎症が有意に減弱していた。さらに、HDMに対するTh2型免疫応答とともに、Th17型免疫応答が減弱していた。以上の結果から気道上皮細胞に発現するFutは気道上皮細胞フコシル化を介してアレルギー性気道炎症を増悪させることが明らかとなった。上記のように本研究はアレルギー性気道炎症により誘導される糖鎖修飾を明らかにし、その病態における働きを解明することを目的としている。当初の目的のように、我々はレクチンアレイによる解析によってアレルギー性気道炎症により気道上皮細胞にフコシル化が誘導されることを見出し、さらにその誘導に関わる分子機構を解明した。また、フコシル化がアレルギー性気道炎症の増悪に関わることも示すなど、当初の目的を達成しおおむね順調に進展していると考えられる。我々は気道上皮フコシル化がアレルギー性気道炎症の増悪に寄与することを明らかにした。今後はその分子機構を解明するためフコシル化蛋白質の同定を試みる。また、フコシル化を受けた気道上皮細胞に特異的に発現する遺伝子を同定するため、Fut欠損マウス気道上皮細胞におけるRNAシークエンス解析を予定している。また、得られた結果を英文専門誌へ投稿するため論文準備を進めている。気管支喘息は気道を場としたアレルギー性炎症であり、好酸球、リンパ球浸潤、気道粘液過剰産生、気道過敏性により特徴づけられる。これらの病態は主に抗原特異的Th2細胞、およびTh2サイトカインにより惹起されることが知られているが、近年ではT細胞のみならず起動上皮細胞が重要な役割を果たすことが明らかとなった。この気道上皮細胞は糖蛋白質から構成される粘液を産生するのみならず、発現蛋白も複雑な糖鎖修飾を受けることが知られている。本研究ではアレルギー性気道炎症で如何なる糖鎖修飾が気道上皮細胞に引き起こされるか、さらにその糖鎖修飾がアレルギー性気道炎症に如何なる働きを持つか明らかにすることを目的とした。まずマウス気道へチリダニ抗原(HDM)を頻回に投与しHDM誘発性アレルギー性気道炎症を誘導し、その気道上皮細胞をレクチンアレイに解析した。その結果、アレルギー性気道炎症によりフコシル化が誘導されることが明らかとなった。哺乳類はフコシル化を介在する酵素を8種持つが、気道上皮細胞はフコース転移酵素2(Fut2)を発現しており、Fut2欠損マウスでは気道上皮細胞フコシル化が欠損することから、アレルギー性気道炎症による気道上皮細胞フコシル化はFut2により介在されることが明らかとなった。気道上皮フコシル化が誘導されるメカニズムを明らかにするため、STAT6欠損マウス、T-bet欠損マウス、IL-22欠損マウスにHDM誘導性アレルギー性気道炎症を惹起し、気道上皮フコシル化の有無を検討した。その結果、アレルギー性気道炎症による気道上皮細胞フコシル化はIL-13/STAT6経路により引き起こされることが明らかとなった。アレルギー性気道炎症により誘導される気道上皮細胞糖鎖修飾の解析、およびその糖鎖修飾を介在する酵素の同定、さらに糖鎖修飾の誘導機構の解析と当初の予定通りおおむね順調に進展していると考える。Fut2欠損マウスを用いて気道上皮細胞フコシル化のアレルギー性気道炎症における働きを解析する予定であったが、Fut2欠損マウスの導入、コロニーの拡大に時間がかかり、この解析は現在進行中である。

その結果、HDM誘発性アレルギー性炎症によって気道上皮細胞にフコシル化が誘導されることが明らかになった。このフコシル化は気道上皮細胞に発現するフコース転移酵素(Fut)によって介在され、Th2細胞などが産生するIL-13によりFutは気道上皮細胞に誘導されることが明らかとなった。さらにFut欠損マウスでは気道上皮フコシル化が欠損するとともに、アレルギー性気道炎症が有意に減弱していた。さらに、HDMに対するTh2型免疫応答とともに、Th17型免疫応答が減弱していた。以上の結果から気道上皮細胞に発現するFutは気道上皮細胞フコシル化を介してアレルギー性気道炎症を増悪させることが明らかとなった。上記のように本研究はアレルギー性気道炎症により誘導される糖鎖修飾を明らかにし、その病態における働きを解明することを目的としている。当初の目的のように、我々はレクチンアレイによる解析によってアレルギー性気道炎症により気道上皮細胞にフコシル化が誘導されることを見出し、さらにその誘導に関わる分子機構を解明した。また、フコシル化がアレルギー性気道炎症の増悪に関わることも示すなど、当初の目的を達成しおおむね順調に進展していると考えられる。Fut2欠損マウスのコロニーも実験に使用できる状態となっており、今後は気道上皮細胞フコシル化を欠損するFut2欠損マウスを用いて、アレルギー性気道炎症における気道上皮細胞フコシル化の働きを解析する予定である。また、プロテオーム解析を用いて気道上皮細胞に発現するフコシル化蛋白を網羅的に同定することを試みる。我々は気道上皮フコシル化がアレルギー性気道炎症の増悪に寄与することを明らかにした。今後はその分子機構を解明するためフコシル化蛋白質の同定を試みる。また、フコシル化を受けた気道上皮細胞に特異的に発現する遺伝子を同定するため、Fut欠損マウス気道上皮細胞におけるRNAシークエンス解析を予定している。また、得られた結果を英文専門誌へ投稿するため論文準備を進めている。前述のように今年度に予定していたFut2欠損マウスの解析を来年度に行うこととした。このため次年度使用額が生じ、解析に必要な抗体、ELISA kitの購入に充てる予定である。当初はフコシル化蛋白質同定のために行うプロテオーム解析を2018年度に予定していたが、フコシル化蛋白を特異的に認識するレクチンの納入が遅れたため同実験を2019年度に繰り越ししたため、次年度使用額が生じた。
DNA損傷を介して起こる酸化ストレス誘導性細胞死とHDAC阻害剤による抑制

平成25年度では、酸化ストレスによるゲノムDNA損傷応答(DDR)が細胞死を誘導し、HDAC阻害剤はその核内で起こるDDRそのものを抑え、酸化ストレスによる細胞死シグナルの発動を抑制していることを明らかにした。平成26年度は特に以下の2点について解析を行った。1.メタボローム解析:網羅的メタボローム解析により、酸化ストレス処理群では核酸のプール量や一部のアミノ酸のレベルが著明に低下していることを明らかにしていた。平成26年度は主に解糖系の代謝物の量的変化を経時的に観察した。その結果、酸化ストレス処理群では解糖系のフローが著しく低下し、HDAC阻害剤存在下では、これらの低下を解除していることが明らかとなった。また、酸化ストレス処理群では、著しいNAD量の低下が見られるが、こちらもHDAC阻害剤により、解除されていた。酸化ストレスによるDDRを介した細胞死は培地に過剰にピルビン酸を添加すると緩和される事実からも、解糖系のフローの低下が細胞死の原因であり、HDAC阻害剤は解糖系のフローの低下を抑えることにより、DDRに依存した細胞死を抑制していると考えられた。2.酵母遺伝学を用いたHDAC阻害剤作用点の同定:哺乳類培養細胞と同様に、酵母の系においても、HDAC阻害剤が、酸化ストレスによる増殖抑制を解除できるかどうか検討した。その結果、HDAC阻害剤が酵母の系においてもヒストンをはじめとするHDACターゲット分子の高アセチル化を誘導し、酸化ストレス刺激による増殖抑制を緩和することを確認した。現在、出芽酵母遺伝子破壊株ライブラリーを用い、HDAC阻害剤非感受性変異体をスクリーニング中である。HDAC阻害剤は、個体レベルで様々な神経変性を抑制するという多くのデータが蓄積しつつあり、今回、我々の行った研究成果が、臨床応用するための基盤確立の一助になるものと考える。26年度が最終年度であるため、記入しない。酸化ストレスにより引き起こるDNA損傷とHDAC阻害剤による抑制をつかさどる分子メカニズムを解明するために平成25年度は下記の2点に焦点を当て、研究を遂行した。1.酸化ストレスによるゲノムDNA損傷応答酸化ストレスによって誘導されるゲノムDNA二重鎖切断に始まる一連のDNA損傷応答(DDR)が、HDAC阻害剤により阻害され、その下流で引き起こる細胞死も完全に抑制することを明らかにした。さらに、HDAC阻害剤が抗酸化剤として機能して、DDRを介した細胞死を抑制することも予想できたために、入念にその可能性について検討し、HDAC阻害は抗酸化剤としてではなく、核内で起こるDDRそのものを抑えていることを突き止めた。これらのことから酸化ストレスによる細胞死シグナルの発動には核内でおこるDDRそのものが原因であることを示した。2.メタボローム解析ストレスを受けた細胞の代謝産物の量は劇的に変化し、その変化を網羅的に解析することにより細胞内でどのようなことが起きているかをある程度予想することが可能となる。質量分析計を用いた解析の結果、酸化ストレス処理では多くの細胞内代謝物の変化が認められ、特に核酸のプール量や一部のアミノ酸のレベルの低下が著明であった。一方、HDAC阻害剤存在下では、これらの変化は、一旦は観察されるものの徐々に回復し、細胞に対し決定的なダメージが入らずに細胞を救済できることが明らかとなった。さらに、HDAC阻害剤によるDDRを介した細胞死の抑制は培地中のグルコースやピルビン酸に依存していることも突き止め、DDRや細胞死とのクロストークは不明であるが、間接的に細胞内の代謝状態がHDAC阻害剤による酸化ストレス誘導性細胞死の抑制に関与していることを明らかにした。

酸化ストレス細胞死のシグナル伝達系やHDAC阻害剤の作用点を明らかにする準備として、核内のゲノムDNA損傷応答に焦点を絞ることができ、その分子メカニズムを探る上でその検索範囲を狭めることができた。また、代謝物の解析結果により、細胞内の状態をより詳細に知ることができ、今後の実験をどのように推進するか決定する上で良き判断材料を得られ、今後の研究に役立つと考えられた。平成25年度に明らかにできたことも基に、さらに、その分子メカニズムを明らかにするために次の3つの方策に絞り、解析を進める。1.代謝フラックス解析:前年度の解析により、酸化ストレスを受けた細胞は、解糖が抑制され、細胞内のdNTPや多くのアミノ酸のプール量が低下し、一方、HDAC阻害剤存在下では、速やかに代謝が回復することを確認している。酸化ストレスの代謝抑制の作用点とHDAC阻害剤による代謝回復過程を可視化するために安定同位体(13C)を含むグルコースを用い代謝フラックス解析を実施する。2.酸化的DNA損傷: HDAC阻害剤により、DNAの二重差切断が抑制されていることを確認している。8-ヒドロキシ-dGを検出、もしくは、その損傷応答過程にHDAC阻害剤がどのように機能するか解析することにより、酸化的DNA損傷とHDAC阻害剤との関係について明らかにする。3.出芽酵母(S. cerevisiae)を使用したHDAC阻害剤非感受性変異体のスクリーニング:酵母においても、HDAC阻害剤が、ヒストンをはじめとするHDACターゲット分子の高アセチル化を誘導し、DNA損傷応答やストレス刺激による増殖抑制を緩和することが知られている。酵母の系において、HDAC阻害剤の効果を再現できる系を構築し、HDAC阻害剤非感受性変異体をスクリーニングし、HDAC阻害剤の下流で機能する遺伝子の同定を目指す。
皮膚線維芽細胞と悪性黒色腫細胞との相互作用の検討

当研究は、皮膚悪性黒色腫の癌微小環境に着目し。癌微小環境に含まれる皮膚線維芽細胞が産生する悪性黒色腫の増殖因子を解析・同定し、その阻害剤を用いた悪性黒色腫の新しい治療薬を開発することを目的としている。平成30年度は昨年までの研究実績を踏まえて、以下の通り研究を進めた。1.昨年度の時点で絞り込んだ候補物質について、悪性黒色腫への影響を追試した。昨年度の研究ではこの物質により悪性黒色腫の増殖能抑制効果を認めていたが、追試では有意差のある変化は確認できなかった。2.候補物質の絞り込みに難渋した事から、悪性黒色腫への影響についてこれまで増殖能・浸潤能・遊走能の3点から調べていたものを増殖能へ限定し研究系統を単純化させた。これまでの実験結果を振り返ると、癌関連線維芽細胞の培養上清により悪性黒色腫増殖能は有意に増殖している点は一貫していたが、線維芽細胞の細胞株毎の反応は実験時期により変化していた。経時的に線維芽細胞の性情が変化している可能性が考えられたことから、cytokine arrayとなるべく近い時期の増殖能検討の結果を併せて検討を行うと、これまでとは異なる候補物質が浮かび上がってきた。3.文献的にも検討を行った結果、2種類のサイトカインを候補物質として選出した。これらのサイトカインの添加条件で悪性黒色腫の増殖能を検討したところ有意な促進効果が認められ、追試でも同様の結果を得た。4.サイトカインによる腫瘍増殖能促進効果を証明するためには、癌関連線維芽細胞の培養上清において、サイトカインを中和した条件下で培養を行い、上清添加で認められた増殖能促進効果が消退・減衰することを確認する必要がある。現在、上記証明のためのプロトコールを進行中である。当研究は、皮膚悪性黒色腫の微小環境に着目し、皮膚線維芽細胞が産生する悪性黒色腫の増殖因子を同定し、その阻害剤を用いた悪性黒色腫の新しい治療薬を開発することを目的としている。平成28年度は、1.皮膚悪性腫瘍由来の癌関連線維芽細胞株の樹立、2.癌関連線維芽細胞の培養上清を用いて、皮膚悪性黒色腫に対する影響を検討した。1.皮膚悪性腫瘍由来の癌関連線維芽細胞株はすでにいくつかの系統を樹立しているが、サンプルの充実を図るために、数系統の培養株を樹立させた。当科にて切除を行った皮膚悪意性腫瘍患者のうち、本研究についての同意を得られた患者を対象として切除標本の一部を採取、これを培養して癌関連線維芽細胞の培養株を樹立した。2.癌関連線維芽細胞を継代培養し、得られた培養上清をヒト悪性黒色腫細胞へ添加し、細胞増殖能や遊走能、浸潤能への影響を検討した。細胞増殖能はMTT assayと細胞数計算を行った。いずれも対照群と比較して、癌関連線維芽細胞上清を添加することで有意に増殖能の増加を認めた。細胞遊走能はwound healing assayで、細胞浸潤能はinvasion assayで評価した。細胞遊走能および浸潤能については対照群と上清添加群との間に有意差は証明できなかったものの、両者ともに上清添加により増加する傾向が見られた。この結果から、癌関連線維芽細胞の培養上清に含まれるサイトカインが悪性黒色腫細胞の増殖能などに作用していると推測されたため、cytokine arrayを行い含まれるサイトカインを網羅的に同定した。この結果を正常線維芽細胞の培養上清に対して行ったcytokine arrayの結果を比較することでいくつかの候補物質を導き出した。細胞遊走能・浸潤能に有意差が証明できなかったことから実験継続が必要ではあるが、概ね当初の実験計画通りに進展している。当研究は、皮膚悪性黒色腫の微小環境に着目し、癌微小環境に含まれる皮膚線維芽細胞が産生する悪性黒色腫の増殖因子を解析・同定し、その阻害剤を用いた悪性黒色腫の新しい治療薬を開発することを目的としている。平成29年度は昨年の研究実績を踏まえて、以下の通り研究を進めた。1.昨年度は皮膚癌関連線維芽細胞の培養上清から、いくつかのサイトカインを悪性黒色腫細胞の増殖を促す候補物質として同定した。これらの物質を添加した条件下で悪性黒色腫細胞の進展能について検討を行ったが、候補物質のほぼすべてで増殖能、遊走能および浸潤能のいずれにおいても有意な変化は確認できず、新たな候補物質の検討が必要となった。2.そこで改めて癌関連線維芽細胞から得た培養上清による悪性黒色腫細胞の反応を検討したところ、特定の線維芽細胞株の上清で増殖能が著しく増加することが確認できた。すでにCytokine assayは前年度に行っていることから、増殖能への影響を認めた細胞株と反応性の乏しい細胞株で上清中のサイトカインを比較検討したところ、増殖能の増加を示す細胞上清で分泌量が明らかに減少している物質が複数種あり、その結果から3種類の候補物質を新たに同定した。これらの物質を添加した条件下で悪性黒色腫細胞の増殖能を検討した結果、1種類のサイトカインで悪性黒色腫の増殖を抑制する結果が得られた。現在、この物質に焦点を当てて、増殖能に及ぼす影響をさらに検討中である。昨年度は候補物質の絞り込みを進めたが、同物質を用いた検討では悪性黒色腫への有意な変化は確認できなかった。

そのため再度昨年度の同実験を行う必要があり、そちらに実験時間を割くこととなった。結果として悪性黒色腫細胞の増殖能に影響を及ぼす可能性が考えられる物質を同定できたことから再検討は有用なものであったが、研究の進捗については予定よりやや遅れることとなった。当研究は、皮膚悪性黒色腫の癌微小環境に着目し。癌微小環境に含まれる皮膚線維芽細胞が産生する悪性黒色腫の増殖因子を解析・同定し、その阻害剤を用いた悪性黒色腫の新しい治療薬を開発することを目的としている。平成30年度は昨年までの研究実績を踏まえて、以下の通り研究を進めた。1.昨年度の時点で絞り込んだ候補物質について、悪性黒色腫への影響を追試した。昨年度の研究ではこの物質により悪性黒色腫の増殖能抑制効果を認めていたが、追試では有意差のある変化は確認できなかった。2.候補物質の絞り込みに難渋した事から、悪性黒色腫への影響についてこれまで増殖能・浸潤能・遊走能の3点から調べていたものを増殖能へ限定し研究系統を単純化させた。これまでの実験結果を振り返ると、癌関連線維芽細胞の培養上清により悪性黒色腫増殖能は有意に増殖している点は一貫していたが、線維芽細胞の細胞株毎の反応は実験時期により変化していた。経時的に線維芽細胞の性情が変化している可能性が考えられたことから、cytokine arrayとなるべく近い時期の増殖能検討の結果を併せて検討を行うと、これまでとは異なる候補物質が浮かび上がってきた。3.文献的にも検討を行った結果、2種類のサイトカインを候補物質として選出した。これらのサイトカインの添加条件で悪性黒色腫の増殖能を検討したところ有意な促進効果が認められ、追試でも同様の結果を得た。4.サイトカインによる腫瘍増殖能促進効果を証明するためには、癌関連線維芽細胞の培養上清において、サイトカインを中和した条件下で培養を行い、上清添加で認められた増殖能促進効果が消退・減衰することを確認する必要がある。現在、上記証明のためのプロトコールを進行中である。ヌードマウスと用いて、in vivoでの癌関連線維芽細胞による悪性黒色腫細胞への影響を検討する。また同定したサイトカインの中和抗体を用いて、悪性黒色腫細胞の増殖能や遊走能への抑制効果の確認を行う。当初の計画では悪性黒色腫細胞の進展について多角的に評価するため、増殖能・浸潤能・遊走能の3点を評価する研究を進めていた。しかし本年度の結果から悪性黒色腫細胞への影響は主に増殖能に限られているため、今後は増殖能を中心として研究を進めていく。候補物質の直接添加による変化はすでに確認できていることから、線維芽細胞上清へ同物質の中和抗体を添加した条件で悪性黒色腫の増殖能を検討し逆説的にその効果を検討する。また並行して他の候補物質の同定も引き続き継続していく。平成28年度は細胞実験が主であったこと、また実験系に使用する機器・物品の多くが既存のもので賄えたことから、当初計画で見込んだものよりも物品の使用が少なく済んだため(理由)当初、サイトカインや中和抗体などの試薬を購入予定であったが、本年度初期に候補物質の再検討を行うこととなったため、想定していたものより上記試薬の使用機会がほとんど無く、結果として物品購入が少なくなったため。(使用計画)本年度は候補物質をはじめとして各種サイトカイン及びその中和抗体、受容体リガンドなど種々の試薬を購入予定である。
シロクローバ・エコタイプにおける含有サポニンと生成条件

1.シロクローバ含有サポニンのTLCによる測定条件の検討を行い、大豆のそれと比較すると、シロクローバではサポニンの組成および含有量が大豆と異なることが確認された。2.TLCではシロクローバ地上部には数本のサポニン様配糖体のバンドが検出され、それらの含有量および組成はエコタイプ間で異なることが明らかとなった。またいずれのシロクローバでも5月末7月にかけてサポニン様配糖体含有量は高く、秋季には低下した。3.シロクローバ・クローン(フィア)をポット栽培し、窒素3段階(N:0,0.13,0.39g/pot)と庇陰3段階(相対照度:100,60,40%)処理で、植物の生育、窒素固定活性、サポニンの生成を調べた。1).庇陰度が増すにつれて、地上部の積算再生量は大きくなり、また地上部重・根重は共に減少するが、施肥窒素量とはいずれも特定の関係は見られなかった。2).窒素固定活性は無庇陰のN:0区が最も高く、窒素施用や庇陰により著しく低下した。3).サポニン様配糖体についてTLCの分離条件をさらに改良し、またTLCの各ピークをHPLCで分析の結果、シロクローバからバンド(1)(8)の配糖体が検出された。そのうち(1)(4)はサポニン、(6)(8)はサポゲニン等サポニン様物質とみなされ、(5)は不明であった。4).サポニン様配糖体は、N:0区はバンド(3)および(4)が他にくらべ含有率が高く、また相対照度:100%区で(1)(4)(6)が他処理区にくらべ高かった。4.羊の採食試験では、シロクローバの嗜好性は給与直後は著しく高いが、飽食を待たずして減少し、サポニンなどによる採食抑制の可能性が示唆された。またシロクローバ採食でルーメン液の起泡性は著しく高まった。5.シロクローバ・エコタイプ間では施肥窒素の利用性は、窒素施用による窒素固定活性阻害の小さい株で大きい。本年度は、シロクローバの含有サポニン、タンニンの定量法の確立、アイソザイム変異によるシロクローバ・エコタイプ判定の酵素の再検討、シロクローバ株の補充採集と増殖・一般形質・窒素固定活性等の測定が計画された。1.シロクローバの含有サポニンの定量法については、薄層クロマトグラフィー(TLC)法の分離条件は、検討の結果プレートはSilica Gel 60 F254で酢酸エチル:酢酸:水(7:2:2)の溶媒が最も良い分離を示すことが確認され、分析の結果シロクローバに含まれるサポニンの種類および量は、大豆に含まれるものとは異なり、さらにシロクローバ・エコタイプ間でサポニンの量および存在割合に、かなり違いがあることが判明した。タンニンについては、現在まだ分析法の検討の階段でエコタイプ間の比較には至っていない。2.シロクローバ・エコタイプ判定の酵素は、パーオキシダーゼのアイソザイム変異の測定が行われており、その他エステラーゼ、ホスホグルコースイソメラーゼなどについて測定条件の検討がなされ、試料の準備も済んでいるがまだ結果が得られていない。3.既に一般形質、窒素固定能などの検討済みのシロクローバ・エコタイプについて、重窒素・水耕栽培により窒素の利用性が検討された。

一般に施肥窒素の利用性は、窒素施用による窒素固定活性阻害の小さい株で大きいことがわかった。またNH_4よりNO_3の利用性が高かった。4.シロクローバ・エコタイプの採集は、三重、兵庫の西日本のほか計画にはなかったが採集株の枯死などがあり青森、北海道、福島などすでに採集された地域についても補足的に採集を実施した。5.次年度の羊を用いた採食試験に備え、シロクローバ、アルファルファ、バーズフット、ルーピンの栽培を開始した。本年度はシロクローバの含有サポニンのシロクローバ・エコタイプ間での組成の相違、またシロクローバの緬羊による採食試験とルーメン内性状の変化などについて検討した。1.シロクローバでは56本のサポニンバンドが検出され、含量および組成はエコタイプ間で異なった。またいずれのシロクローバにでも5月末7月初めに高含有で秋季には低下した。2.代謝ケージ中でシロクローバとオーチャードグラスを同時給与した緬羊の採食試験では、シロクローバの嗜好性は高く、特に給与直後は殆どシロクローバのみを採食した。しかしその後飽食を待たずしてシロクローバとオーチャードグラスを交互に採食するようになる。したがってこの採食抑制はシロクローバの含有成分が関係するものと考えられた。3.シロクローバ単一とシロクローバ+オーチャードグラス給与緬羊のルーメン液の起泡性は前者で著しく高かったがpHや伝導度では両者に差は生じなかった。オーチャードグラスとの同時給与でシロクローバによるルーメン液の起泡性の増大は著しく抑制された。4.給与シロクローバではサポニンが存在するが、ルーメン液では検出されずサポゲニンと思われるバンドが検出された。ルーメンに取り込まれたサポニンは、ルーメンバクテリアにより急速に糖鎖が切断されることが確認された。5.シロクローバ・エコタイプ判定では、パーオキシダーゼのアイソザイム変異が用いられたが、その他エステラーゼについても変異が確認された。6.島根県隠岐島の放牧自然草地に由来の明確でないシロクローバが自生するとの情報を得、本年の予定以外であったが採集を行った。本年度は最終年にあたるので,データの整理に重点をおいたが,これまでの計画で実施出来ていなかった,シロクローバ栽培環境とサポニンの生成についての実験を行った.環境条件としては,特にイネ科草との混生栽培で生ずる光環境と土壌窒素環境に焦点をしぼった.1.圃場栽培のシロクローバ(フィア)の1株より増殖したものの5個体ずつを1/5000aワグネルポットに植え,窒素3段階(N:0,0.13,0.39g/pot)と庇陰3段階(相対照度:100,60,40%)の処理で栽培し,植物の生育,窒素固定活性,サポニンの生成を調べた.2.地上部の積算再生量は,庇陰度が高まるにつれて大きくなる傾向を示す,が施肥窒素量とは何れの庇陰度においても特定の関係は見られなかった.地上部重・根重は共に庇陰度が増すにつれて減少するが,施肥窒素とについては,地上部積算再生量とほぼ同様な関係を示した.3.窒素固定活性は無比陰のN:0区が最も高く,窒素の施用や庇陰処理により著しく低下した.4.シロクローバ地上部の70%エタノール抽出画分よりTLCクロマトグラフィーで8つの配糖体が検出された.そのうちバンド(1)(4)はサポニン,(6)(8)はサポゲニン等のサポニン様物質,(5)は不明とみなされた.5.TLCバンドを窒素施肥レベル間で比較すると,N:0区はバンド(3)および(4)が他にくらべ含有率が高かった.庇陰処理間で見ると,相対照度:100%区でバンド(1)(4)(6)が他処理区にくらべ高かった.6.TLCの各バンドはHPLCの分析に共され,同様な結果が確認された.
理科及び数学に対する生徒の意識や態度の変容に関する追跡調査研究

本研究は、学習指導要領改訂の際に重要な知見となる児童生徒の成績や態度に対する教育課程の移行による影響や社会的な影響を把握するため、平成元年度より実施している追跡調査の継続研究である。2006(平成18)年度は5地域の公立高等学校第2学年の生徒、2007(平成19)年度は同じ5地域の公立中学校第2学年の生徒を対象に調査を実施した。高等学校2年生を対象とした調査では、1995年度に実施した同一8校での調査と比較して以下のような結果が見いだされた。理科問題については、今回の正答率が55%と95年度調査の正答率と同じであった。95年度調査と5%ポイント以上の差がある問題は20題中6題で、正答率が上がった問題が2題、下がった問題が4題であった。数学問題については、今回の正答率が62%と95年度調査の正答率と同じであった。95年度調査と5%ポイント以上の差がある問題は20題中4題で、正答率が上がった問題が2題、下がった問題が2題であった。中学校2年生を対象とした調査では、1992、2003年度に実施した同一地域14校での調査と比較して理数問題では以下のような結果が見いだされた。理科問題の正答率は、92年度59%、03年度53%、今回53%であった。03年度と5%ポイント以上の差がある問題は20題中2題で、正答率が上がった問題と下がった問題が各1題であった。数学問題の正答率は、92年度57%、03年度54%、今回55%と変化なかった。03年度と5%ポイント以上の差がある問題は20題中3題で、正答率が上がった問題が2題、下がった問題が1題であった。本調査では、5地域の公立小・中・高等学校の児童生徒及びその卒業生を対象に調査を実施している。今年度は高等学校第2学年の生徒を対象とした調査を実施した。今回の調査では、1995年度に実施した同一8校での調査と比較して以下のような結果が見いだされた。理科の授業では、生徒の考えや希望を受け入れたり、科学と生活との関連を説明したりする頻度が増え、また、生徒自身や教師による実験・観察活動が増えていた。さらに、興味深い授業をしてくれる頻度も増えていた。数学の授業では、問題を振り返り見直す機会や意見を出し合うなど話し合いの機会が次第に出てきた。生活との関連についても少しずつ増えていた。理数に関する児童生徒の意識については、理科が面白いとする生徒の割合はやや増えていたが、数学を面白いとする生徒の割合は95年度と変化なかった。野外観察では楽しいとする生徒の割合が減少した。科学の発展は国の発展に重要とする認識はいくらか増えたが、国が科学のためにお金を費やすことに関しては肯定的な意識が減っていた。理科を学習する理由については、科学が役立つからが3割で変化ないが、考え方を知ることがやや減り、入試に必要がやや増えた。

数学を学習する理由では、数学が役立つからが3割で変化ないが、入試に役立つからがやや増えた。数学の勉強ではコンピュータを使わない方向への回答が増えていた。本研究は、学習指導要領改訂の際に重要な知見となる児童生徒の成績や態度に対する教育課程の移行による影響や社会的な影響を把握するため、平成元年度より実施している追跡調査の継続研究である。中学校2年生を対象とした今年度の調査では、1992、2003年度に実施した同一地域14校(1992年度は13校、生徒数の増加により1校新設)での調査と比較して以下のような結果が見いだされた。理科問題の正答率は、92年度59%、03年度53%、今回53%であった。03年度と5%ポイント以上の差がある問題は20題中2題で、正答率が上がった問題と下がった問題が各1題であった。数学問題の正答率は、92年度57%、03年度54%、今回55%と変化なかった。03年度と5%ポイント以上の差がある問題は20題中3題で、正答率が上がった問題が2題、下がった問題が1題であった。理科の授業では、科学と生活との関連を説明する授業や実験・観察を行う授業が増えていた。また、興味深い授業をしてくれる頻度も少しずつ増えていた。数学の授業では、生活との関連を説明する授業が増えていた。コンピュータを使った授業頻度はわずかに変化しているが、約9割がほとんどないと回答していた。理数に関する生徒の意識については、数学を面白いとする生徒の割合は92年度と変化がなく、理科が面白いとする生徒の割合はわずかに増えていた。野外観察では楽しいとする割合は減少した。科学の発展は国の発展に重要とする認識や、科学のためにお金を費やすことの価値を認める割合が増えていた。科学の職業に対する意識は03年度と変化なかった。理科を学習する理由については、03年度から考え方を知るがやや減り、考える力がつくがやや増えた。科学研究の主要な目的では、幸福な生活の手段が徐々に減っている。数学学習の理由では、社会のいろいろな面で役立つからが半数以上を占めている。
石膏地のセッコ壁画の保存修復材料と手法の開発

本年度については、石膏をベースにしたモルタルを作成し、硬化までの時間の遅延性、モルタルの増粘性、軽量化のための添加剤、フィラーを検討した結果を踏まえ、硬化時間、かさ比重の差異、離水率などを比較した。その結果から、また配合材料や比率を検討した。ここで作成した各種石膏に各種の添加剤を加え、出来上がったモルタルを評価した。評価については、おもにグラウティングに用いる際の注入方法および固化後の状態評価を主眼として行った。評価、試験法については、工業試験法ではなく基本的に壁画の保存修復試験に用いられているイギリス、スイスで用いている手法を応用した(流動性、離水性、作業性、収縮率、重量、界面接着評価、強度、固化時間、剥離しやすさなど)。その結果、工業用の二水石膏ではなく、歯科用の二水石膏とエタノール・水の混和溶液を用いることで、エジプトの古王国の壁画修復に実践的に使用し、成功裡に修復作業を進めることができた。混和材として、シラス台地のシラスマイクロバルーンを利用することで、軽量化を達成することができた。また、粒子が球形ではないために、作業性が高いことも確認した。この作業の結果、使用したモルタルは、塩類風化などの問題を引き起こすこともなかった。なお、石膏を用いたエジプト、古王国時代の壁画研究については、JICAを通して調査した。スネフェル・イニ・イシェテフとセセムネフェルの壁画を調査対象とした。マルチスペクトル、紫外線、赤外線を用いた光学調査、蛍光エックス線を用いた材質調査と順調に進めることができた。研究実績の概要で示したように、予定していたモルタルの作成、評価を終え、実際の修復現場での使用までたどり着いたことから、おおむね順調に進捗していると判断した。中央アジアにおいて実際には無水石膏が使用されたケースがないことが明らかになってきた。従来の報告の間違いである可能性がある。石膏の性質の改良にさらにつとめ、より安定して使いやすい材料とすることを目指す。パーライトの混和など、体積を増量した場合の改良方法にもつとめる。また、実際に修復材料として使用したあとの評価についても、経時的に行う予定である。石膏をもちいた壁画に関する文献調査等を行った。日本で市販されている石膏の多くは、化学的にカルシウム、硫黄を用いて合成したものであり、伝統的な岩石から焼成したものではない。西アジアや中央アジアの石膏生産に関する考古学的な事例から、原石や焼成炉についてまとめた。原石は、おそらくselenite (CaSO4.2H2O)、anhydrite (CaSO4)、alabasterと考えられるが、産出地など地域的な特性や不純物等による分類、使い分けとの関連を把握した。石膏モルタルの左官材料や、歯科材料としての使用方法や物性の評価については、工業界や歯科材料の分野に多くのスタンダード(ASTM、ENなど)が知られている。石膏を水と反応させることによって生じる凝結硬化反応は、伝統的には水硬性石膏、珪酸ナトリウム、デキストリン、接着剤、リンゴ酸やクエン酸などの有機酸塩を用いて遅延させることが行われる一方で、ミョウバン、硫酸亜鉛、珪酸カリウム、ゼラチン、ニベ(魚膠)などを硬化剤として加えることもおこなわれてきた。石膏への添加材料は、分散効果(レシチンなど)、固相と液相の界面の親和性を高める効果(オレイン酸など)、増粘性(シリカ系コロイドなど)、沈降防止剤(ベントナイトなど)、消泡材(オクタノール)を利用することが知られるが、ここでは、グラウトモルタルなど注入モルタルとしての性質が求められることから、主に遅延性、増粘性、軽量化のための添加剤、フィラーを検討した。カビなど生物被害を受けない材料を選択した。また、石膏モルタルは液水に微溶であるため、離水をできる限り抑制する材料を検討した。特性のパラメータと添加剤の関係を精査した。現在までに、石膏をもちいた壁画に関する文献調査等を行った。原石は、おそらくselenite (CaSO4.2H2O)、anhydrite (CaSO4)、alabasterと考え、産出地など地域的な特性や不純物等による分類、使い分けとの関連を把握した。当初予定していた石膏を用いた壁画に関する文献調査および石膏モルタルの使用方法に対する再評価について、順調に実施できていることから、おおむね順調に進展していると判断した。

混和材として、シラス台地のシラスマイクロバルーンを利用することで、軽量化を達成することができた。また、粒子が球形ではないために、作業性が高いことも確認した。この作業の結果、使用したモルタルは、塩類風化などの問題を引き起こすこともなかった。なお、石膏を用いたエジプト、古王国時代の壁画研究については、JICAを通して調査した。スネフェル・イニ・イシェテフとセセムネフェルの壁画を調査対象とした。マルチスペクトル、紫外線、赤外線を用いた光学調査、蛍光エックス線を用いた材質調査と順調に進めることができた。研究実績の概要で示したように、予定していたモルタルの作成、評価を終え、実際の修復現場での使用までたどり着いたことから、おおむね順調に進捗していると判断した。各種報告書、ジャーナルに掲載されている事例から、石膏プラスターを用いた壁画、建造物装飾の事例を集成する。地域、時代ごとに分類する。北アフリカ、ユーラシア大陸全般を広く対象とする。筑波大学所蔵の西アジア資料を中心に、ほかにも国内所蔵の資料で分析可能なものであれば、可搬型蛍光X線装置やX線回折装置等を用いて、分析事例の増加につとめる。そこから、石膏(二水・半水・無水)の地域的・時期的な広がりをまずまとめる。また、壁画や建造物装飾の位置と、石膏原料産地との関係をマッピングして明らかにする。石膏の使用、種類の差異を、年代と地域とのかかわりからまとめる。石膏地の差異と広がりに関して、集成したデータを基に論文化し成果の公表を行う。平成29年度、遅延性、増粘性、軽量化のための添加剤、フィラーを検討した結果を踏まえ、硬化時間、かさ比重の差異、せん断強度などを比較し、その結果からまた配合材料や比率を検討する。作成した各種石膏に対する添加剤を加え、出来上がったモルタルを評価する。評価については、おもにグラウティングに用いる際の注入方法および固化後の状態評価を主眼として行う。評価、試験法については、工業試験法ではなく基本的に壁画の保存修復試験に用いられているイギリス、スイスで用いている手法を応用する(流動性、離水性、作業性、収縮率、重量、界面接着評価、強度、固化時間、剥離しやすさなど)。また、透水性、吸水性、微小結晶構造等についても、ラボでの試験や走査型電子顕微鏡等を用いて比較する。手法は、シュウ酸アンモニウムを用いた石灰岩の表面処理に関する評価方法と同様とする。中央アジアにおいて実際には無水石膏が使用されたケースがないことが明らかになってきた。従来の報告の間違いである可能性がある。石膏の性質の改良にさらにつとめ、より安定して使いやすい材料とすることを目指す。パーライトの混和など、体積を増量した場合の改良方法にもつとめる。また、実際に修復材料として使用したあとの評価についても、経時的に行う予定である。図書に計上していた予算が充分に利用しきれなかった。次年度、不足の図書資料等の購入に充てたい。また、石膏グラウトの利用として東南アジアの石造文化財での応用事例などについても調査する必要が生じたため、旅費として利用することを予定している。なお、石膏を用いたエジプト、古王国時代の壁画研究については、JICAを通して調査を予定している。スネフェル・イニ・イシュテフとセセムネフェルの壁画を調査対象としている。
近世天皇家の葬送儀礼・先祖祭祀をめぐる基礎的研究

本研究では、日本近世の天皇家の葬送儀礼・先祖祭祀について、皇室の菩提寺泉涌寺や宮内庁書陵部に所蔵される膨大な史料を収集・分析し、その実態と展開を解明しようとしたものである。朝廷の長たる天皇(院)の死は、朝廷とそれをとりまく都市京都に大きな影響を与えた。朝廷では、関白・武家伝奏・議奏などの運営機構と、天皇の死に際して任命される凶事奉行が葬送を取り仕切った。最も盛大に行われたのは、近世天皇家の祖ともいうべき後水尾院と、その后で徳川家から嫁した東福門院であったが、女院は100回忌を最後に朝廷の公的な法会は行われなかった。泉涌寺での法事には、女官の代拝もみられ、近代以降も形を変えて引き継がれていく。平成26年度は、主として宮内庁書陵部・国立公文書館が所蔵する公家記録・日記から江戸時代の天皇や主要皇族の葬送儀礼・先祖祭祀に関する史料を収集した。とりわけ、『凶事記』『凶事留』など、一連の葬送儀礼が記録された基本的史料を収集・分析することで、通時的な見通しを得ることに努めた。これによって、次年度以降のさらなる史料収集・分析の見通しを立てている。また、江戸時代の天皇・女院が葬られた泉涌寺(京都市東山区)が所蔵する古文書調査を継続的に実施した。特に、「御一会資料」と呼ばれる葬送・回忌法要関係の膨大な文書は、旧来は本格的な研究が行われてこなかった。26年度はこの予備的調査を実施し、今後の効率的な調査・分析のための準備を進めた。また、「御一会資料」中に幕末期の光格・仁孝・孝明天皇とその后妃の「御凶事式」と題する記録が含まれている。これは近代に作成されたものながら、彩色の図が多数掲載され、天皇・后妃の葬送の様相をリアルに復元できるものである。「御凶事式」を次年度の分析の主軸とし、天皇・后妃の葬送・祭祀を詳細に復元することで、その国家的・社会的意味を解明しうると想定している。なお、平成26年度は泉涌寺での調査で得られた史料をもとに、研究代表者のこれまでの幕末維新期の陵墓研究とも関連させながら、泉涌寺による都市民衆への権威分与を解明した「陵墓と朝廷権威ー幕末維新期の泉涌寺御陵衛士の検討からー」(『歴史評論』771号、2014年7月)を成稿・公表した。また、北陸史学会2015年度大会(2014年11月23日、於金沢大学サテライトプラザ)で、泉涌寺を含む天皇家の先祖祭祀の内実の変容について「幕末明治前期の陵墓祭祀とその特質」を口頭報告した。これは今後成稿する予定である。平成27年度は、宮内庁書陵部が所蔵する公家日記・記録から、江戸時代の天皇・皇族の葬送・法事に関する史料を引き続き収集した。宮内庁書陵部には膨大な公家日記が所蔵されており、その中の関係史料の抽出は今後の課題であるが、「凶事記」「凶事留」のような一件記録類は概ね収集することができた。次年度以降、日記の抽出作業を進め、上記の一件記録を補完し、分析を深めていく予定である。一方、江戸時代の天皇・女院を葬った泉涌寺(京都市東山区)の所蔵文書についても調査・収集を進めた。27年度は、特に後水尾院・東福門院など近世前期の事例から悉皆的な撮影を行い、相当の史料を収集できた。次年度前半には、残りのほとんどを収集し、より分析を深めていきたい。なお、27年度には、泉涌寺塔頭の雲龍院文書も新たに公開され、閲覧できた。ここにも皇族の葬送・法事関係史料が豊富に含まれている。泉涌寺・雲龍院の文書からは、幕府・朝廷・泉涌寺の三者で、葬送・法事について認識の齟齬や、相互の駆け引きも垣間見られ、政治史的な論点を提起できる見通しである。また、泉涌寺領地村々や町人との関係が分かる史料も見いだしており、葬送・法事の社会的位置づけを明確化しうるものと予想している。次年度も引き続いて調査を進め、近世天皇・皇族の葬送・法事の展開について通時的で体系的な像を描き出していく。かかる研究成果をふまえ、27年度は、泉涌寺を含む陵墓の変容を解明した「陵墓を「発見」した人々ー考証家と陵墓治定の実態ー」を執筆し、共著『古代史研究の最前線天皇陵』(洋泉社、2016年1月)に掲載された。さらに同様の問題について、世界遺産との関わりを検討した「だれが陵墓を決めたのか?幕末・明治期の陵墓考証の実態ー」を執筆し、『世界遺産と陵墓を考える』(思文閣出版、2016年)に掲載される予定である。宮内庁書陵部の所蔵史料の収集に努め、一件記録にまとめられた葬送・法事関係の史料は概ね閲覧し、次年度でほぼ全てを収集可能である。同部所蔵の公家日記に含まれる関係記事の抽出も進めることで、朝廷側からみた天皇葬送・法事に関するアウトラインは把握が可能となると見通している。次年度も、引き続き、膨大な史料を効率的に収集できるよう計画している。

並行して進めている近世天皇家の菩提寺泉涌寺の文書のうち、天皇・女院の葬送・法事に関する文書は予想以上に収集できた。次年度前半には、残りの部分のほとんどを収集し終え、分析を行っていきたい。また、泉涌寺塔頭の雲龍院の新たに公開された文書も膨大で、その収集・分析でより豊かな成果が見込まれる。それらの調査・収集によって、これまであまり研究がみられなかった天皇・皇族の葬送・法事の実態について、次年度以降に論文化できる見通しを得ることができた。平成28年度は、主として国立公文書館が所蔵する公家日記・記録から東福門院をはじめとする主要皇族や天皇の葬送・年忌法要に関する史料を収集した。一方、前年度までに撮影・収集した泉涌寺(京都市東山区)の所蔵文書のデータ整理と、同じくこれまでマイクロ撮影で収集した宮内庁書陵部所蔵資料のデータ化・整理を進めた。3年間の調査を通じて、泉涌寺文書については、数千点におよび近世天皇の葬送・法事関係文書は全て撮影を終え、后妃関係の収集にもとりかかっている。なお、調査中に泉涌寺塔頭雲龍院から、近世の皇子・皇女の葬送・法事関係文書や日記類が大量に発見され、一部を撮影・収集した。今後これらも合わせて調査・分析することで、近世天皇家の先祖祭祀についてより体系的・総合的な研究が可能となると見通している。また、宮内庁書陵部所蔵の記録類も概ね撮影・収集を終えた。なお、平成28年度は、泉涌寺や宮内庁書陵部宮内公文書館が所蔵する史料などをもとに、「だれが陵墓を決めたのか?ー幕末・明治期の陵墓考証の実態ー」(『世界遺産と天皇陵古墳を問う』思文閣出版、2017年1月)を公表した。また、京都大学人文科学研究所研究班「近代天皇制と社会」での報告(2016年12月17日)をもとに、幕末以来の陵墓祭祀の展開を踏まえて、明治以降の皇霊・陵墓祭祀の展開過程を解明した「明治前期の陵墓・皇霊祭祀の特質」を執筆し、29年度中には高木博志編『近代天皇制と社会』(思文閣出版)に掲載・刊行されることが決定している。引き続き、収集・整理した史料の分析を進め、近世天皇・皇族の葬送儀礼・先祖祭祀の実態を変容を解明した論文を公表する予定である。本研究では、日本近世の天皇家の葬送儀礼・先祖祭祀について、皇室の菩提寺泉涌寺や宮内庁書陵部に所蔵される膨大な史料を収集・分析し、その実態と展開を解明しようとしたものである。朝廷の長たる天皇(院)の死は、朝廷とそれをとりまく都市京都に大きな影響を与えた。朝廷では、関白・武家伝奏・議奏などの運営機構と、天皇の死に際して任命される凶事奉行が葬送を取り仕切った。最も盛大に行われたのは、近世天皇家の祖ともいうべき後水尾院と、その后で徳川家から嫁した東福門院であったが、女院は100回忌を最後に朝廷の公的な法会は行われなかった。泉涌寺での法事には、女官の代拝もみられ、近代以降も形を変えて引き継がれていく。宮内庁書陵部などの東京の史料所蔵機関の所蔵史料を収集したが、その中で想定以上に膨大な史料が存在することが明らかになった。その網羅的収集・分析は容易ではないが、次年度以降の効率的な収集によって、より豊かな分析が可能になることをも示している。次年度以降の調査・分析によって、計画以上の成果につながるものと予想している。また、平行して進めた近世天皇家の菩提寺泉涌寺の文書調査でも、新たに膨大で豊かな関係史料を発見することができ、予備的調査で次年度以降の研究見通しを十分に立てることができた。平成28年度は、引き続き、宮内庁書陵部・泉涌寺の史料調査・収集を進め、近世天皇・皇族の葬送・法事について、体系的な分析を可能とするだけの基礎的調査を完了したい。平成27年度の達成度にも記した通り、最も基本となる宮内庁書陵部と泉涌寺での調査・分析では予想以上の成果を得たが、都市京都や京郊村々側の史料の収集・分析は不十分であった。従って、そうした側面からの調査・分析を進めることで、より多面的な補強を行っていく。