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寒冷域の介形虫(甲殻類)の多種性変化ー化石が示すその起源、繁栄と絶滅

本研究の目的は、北西太平洋縁に分布する、好冷性介形虫類(甲殼類)の3科(Hemicythere, Cytherura, Eucythere科)について、中新世(1000万年前)以降の進化・絶滅の歴史(多様性の変遷過程)と海洋環境との関連を、詳細に解明することである。そのためには、まず現在の種分布と生息環境を詳しく知る必要がある。そこで、現生の種分布が未調査であった、オホーツク海南部・知床半島沖の陸棚・陸棚斜面で採取した、表層堆積物15試料(水深481500m)を検討した。得られた結果を、前年度に得た隣接域のデータと総合し、オホーツク海に生息する種の生物地理学的な位置づけや、種分布と海洋環境との関連を考察した。これらの成果は、本年度9月にドイツで開催された、国際介形虫シンポジウム(ISO2005)における講演と、論文(Ozawa & Kamiya,2005a)等により、公表された。また、私の従来の研究により、日本海と周辺における、3科の14種の生息環境は、水温・塩分範囲の違いに基づき、3グループ;「日本/外洋-内湾型(9種)」、「日本-アラスカ/外洋型(1種)」、「日本/外洋型(4種)」に区分されている。この結果に、この数年間の研究で得られた、化石種と現生種の分布データを総合し、好冷性種と日本海の海洋環境変動との関連を、200万年前から現在までについて総括した。これらの成果は、2つの論文(Ozawa & Kamiya,2005b;小沢,2006,印刷中)、で公表された。さらに、日本列島での3科の種の初出年代データも、起源や進化の歴史を知る上で重要である。本年度は、3科の化石の産出が期待される、宮城県中部の竜ノ口層(鮮新世)から、20個の岩石試料を採取した。これらの試料については、長野県北部の柵層(鮮新世)の40個の岩石試料とともに、分析を行い、多様化の時期を探っている段階である。本研究の目的は、北西太平洋縁(日本海周辺)の好冷性介形虫3科(Hemicythere,Cytherura,Eucythere科)について、中新世(1000万年前)以降の進化の歴史(多様性変遷史)と海洋環境の関連を知ることである。そのためまずは現在の種分布と生息環境を詳しく知る必要がある。そこで現生介形虫の種分布が未調査である、オホーツク海南部網走沖の陸棚上部陸棚斜面で得た表層堆積物16試料(水深491558m)を検討した。その結果、13試料より計40属69種が摘出され、日本海との共通種が多いことが明らかになった。全種の分布データと多産種の電子顕微鏡写真を、Ozawa et al.(印刷中)で初め公表した。この海域の3科の種の水深分布を基に、海上保安庁JODCの水温・塩分データベースを用いて夏と冬の生息環境条件を特定した。既知の日本海の生息水塊特性と総合した結果、14種の生息場が水温・塩分範囲等の違いで3タイプ;日本/外洋・内湾型(9種)、日本・アラスカ/外洋型(1種)、日本/外洋型(4種)に区分された。この結果から、これらの種は生息可能な水温・塩分範囲が広く、より深い水深やより広範囲の外洋浅海へ進出できたこと、低塩分の内湾域にも分布できたために、更新世以降の日本海・周辺海洋の激しい環境変動を生き延びたことが判明した。この成果は、論文で公表する予定である。また日本列島での3科の種の初出時代も、多様性変遷を知る際に重要である。そこで冷水域の貝化石を含み、好冷性介形虫の産出が期待できる中新世・.鮮新世の地層を対象とした。本年度は北海道の幌加尾白利加層・滝川層・秩父別層・茂築別層(中新世・鮮新世)の地質調査を行い、60個の岩石試料を採取した。これらは現在処理中である。また富山県の東別所層(中新世)の50個の試料から介形虫を摘出し、種の鑑定を進めている。本研究の目的は北西太平洋縁の好冷性介形虫3科(Hemicythere, Cytherura, Eucythere科)について、中新世(1000万年前)以降の進化の歴史(多様性変遷史)と海洋環境との関連を詳細に解明することである。そのためには現在の種分布と生息環境を詳しく知る必要がある。そこで現生介形虫の種分布が未調査である、オホーツク海南部網走沖の陸棚と陸棚斜面で得た表層堆積物16試料(水深49-1558m)を検討した。その結果、69種が摘出され、種分布データと多産種の写真をOzawa et al.(2004b)で初めて公表した。またこれらの種の生物地理学的な位置づけ、海洋環境と種分布の関連を考察し、Ozawa(2004)で公表した。さらなるデータ蓄積のため、本年度もオホーツク海網走沖で堆積物30試料を採取し、現在分析中である。またオホーツク海の3科の種の水深分布を基に、海上保安庁(JODC)の水温・塩分データベースを用いて夏と冬の生息環境条件を特定した。

既知の日本周辺の生息水塊特性も総合した結果、14種の生息場は水温・塩分範囲の違いから3タイプ;日本/外洋・内湾型:9種、日本・アラスカ/外洋型:1種、日本/外洋型:4種に区分された。この結果から、1)これらの種は生息可能な水温・塩分範囲が広いため、より深い水深や、広範囲の外洋浅海へ進出できた;2)低塩分の内湾域にも分布できたので、更新世以降の日本海・周辺海洋の激しい環境変動を生き延びたことが判明し、Ozawa et al.(2004a)で公表した。さらに日本列島での3科の種の初出年代データも進化の歴史を知る上で重要である。本年度は3科の種の産出が期待される長野県北部の小川層・柵層(中新世・鮮新世)で40個の岩石試料を採取し、富山県中部の東別所層(中新世)の50試料とともに現在分析している。本研究の目的は、北西太平洋縁に分布する、好冷性介形虫類(甲殼類)の3科(Hemicythere, Cytherura, Eucythere科)について、中新世(1000万年前)以降の進化・絶滅の歴史(多様性の変遷過程)と海洋環境との関連を、詳細に解明することである。そのためには、まず現在の種分布と生息環境を詳しく知る必要がある。そこで、現生の種分布が未調査であった、オホーツク海南部・知床半島沖の陸棚・陸棚斜面で採取した、表層堆積物15試料(水深481500m)を検討した。得られた結果を、前年度に得た隣接域のデータと総合し、オホーツク海に生息する種の生物地理学的な位置づけや、種分布と海洋環境との関連を考察した。これらの成果は、本年度9月にドイツで開催された、国際介形虫シンポジウム(ISO2005)における講演と、論文(Ozawa & Kamiya,2005a)等により、公表された。また、私の従来の研究により、日本海と周辺における、3科の14種の生息環境は、水温・塩分範囲の違いに基づき、3グループ;「日本/外洋-内湾型(9種)」、「日本-アラスカ/外洋型(1種)」、「日本/外洋型(4種)」に区分されている。この結果に、この数年間の研究で得られた、化石種と現生種の分布データを総合し、好冷性種と日本海の海洋環境変動との関連を、200万年前から現在までについて総括した。これらの成果は、2つの論文(Ozawa & Kamiya,2005b;小沢,2006,印刷中)、で公表された。さらに、日本列島での3科の種の初出年代データも、起源や進化の歴史を知る上で重要である。本年度は、3科の化石の産出が期待される、宮城県中部の竜ノ口層(鮮新世)から、20個の岩石試料を採取した。これらの試料については、長野県北部の柵層(鮮新世)の40個の岩石試料とともに、分析を行い、多様化の時期を探っている段階である。
構造情報を基盤とした蛋白性抗原と抗体間相互作用の精密解析

本研究ではニワトリリゾチーム(HEL)とHELに対するモノクローナル抗体HyHEL-10を例に、抗原抗体相互作用における特異性、親和性を決定する因子を明らかにすることを目的とする。1、抗原抗体相互作用における抗体重鎖(H鎖)Tyr残基の役割の解明HyHEL-10ではH鎖の抗原結合部位に4つのTyr残基(33位、50位、53位、58位)が存在し、相互作用に大きく寄与していると考えられる。ここではTyr33とTyr53に関する変異体(HY33AY53A、HY53A)についてHELとの複合体構造の精密化を行い、HY53Aについては相互作用の熱力学的解析を行った。この結果Tyr33の芳香環は相互作用の際にHELの誘導適合、CDR-H2ループの安定化など、相互作用に重要な役割を果たしていることが明らかになった。またTyr53は多くのファンデルワースル相互作用によりエンタルピーを獲得するが、同時に周辺構造を固くすることでエントロピー的に損していることが分かった。2、抗原抗体相互作用における界面の水分子を介した水素結合の役割の解明HyHEL10-HEL相互作用においては、軽鎖(L鎖)とHELの界面に多くの水分子が存在する。ここでは水分子を介した水素結合に関与するL鎖のTyr50、Ser91、Ser93について変異体(LY50F、LS91A、LS93A)を作製し、熱力学的解析およびHELとの複合体の結晶構造解析を行った。これらの変異体では獲得エンタルピーの大きな減少が見られたが、好ましいエントロピー変化により相殺されていた。またHELとの複合体構造は水分子の配置も含めて野生型とほぼ同じ構造であった。このことから界面の水分子を介した水素結合はエンタルピー的に寄与しているが、同時にエントロピー損失を伴う相互作用であることが明らかになった。これらの水素結合は複合体構造を局所的に固くしていると考えられる。
造血幹細胞移植後の免疫システムにおけるGas6の役割

同種造血幹細胞移植に関連する移植片対宿主病(GVHD)の分子機構の詳細は不明な点が多い.これまでの我々の予備実験では,急性GVHDの好発時期に血清Gas6は有意に増加していた。しかも, gradeII以上のGVHD症例に有意に高値である興味深い結果を得た.さらに,我々は血清Gas6はFCMによってドナーTリンパ球及び単球から分泌される可能性を見出した.また,血清Gas6は凝固/線溶関連マーカーや各種ケモカインと相関関係を示す興味深い結果を得た.また,病理組織学的検討では、腸管GVHD病変組織にGas6及びTAM受容体Merが高発現することを明らかにした.培養血管内皮細胞を用いたin vitro実験では, rGas6及びgradeIIIのGVHD患者血清が血管内皮障害(ICAM-1及びICAM-1発現増加)を誘導し、Mer阻害剤はそれらの蛋白発現変化を抑えた.さらに, rGas6及びGVHD患者血清は内皮細胞のアポトーシスを誘導したが, Mer阻害剤はそのアポトーシス誘導を抑えた。これらの結果は, GVHDの重要な病態である血管内皮障害の分子機序に, Gas6-Merシグナルが重要な役割を担うことを示す.さらに, GVHDを誘導させた同種移植マウスを用いたin vivo実験で, GVHD誘導マウスの血清Gas6は有意に増加した.病理組織学的検討では肝GVHDの病変組織でGas6とMer発現増加を認めた.さらに, GVHD誘導マウスにMer阻害剤を静脈内投与すると, GVHD病変が著明に改善した.本研究はGVHDの病態解明に寄与するとともに, Gas6-Merシグナルが新たな治療標的候補や新規バイオマーカーとなることを証明した.我々の研究成果は新たな創薬や検査法の開発に大きく貢献できる可能性を秘めている。これらの研究結果は2018年10月日本血液学会総会(大阪)、2018年12月米国血液学会学術集会(サンディエゴ)にて発表した。当研究内容は現在米国雑誌blood advancesに投稿され追加実験中である。1)内皮障害を起因としたGVHDの分子機序におけるGas6/TAM systemの役割rGas6,サイトカインにより誘導された内皮障害マーカー(TM, PAI-1,VCAM-1,eNOS等)の発現変化をRT-PCR及びWestern blottingにて検証する.詳細な分子機序の解明のため, MAP kinase、NF-kappaB活性、低分子GTPase活性を検証する.それら発現や活性化に対する選択的TAM阻害薬(UNC2250, TP-0903, BGB324),抗Gas6中和抗体の効果を検証する.ドナーB6.SJL-PtprcaPEP3b/BoyJマウス,レシピエントBALB/Cマウスを用いたHSCTマウスを作成する.A)マウスに選択的TAM阻害剤を投与し、GVHD病変(肝,腎,皮膚,消化管)に対する効果を検証する.対照群と阻害剤投与群との生存率を比較検討する.B)マウス血中のFOXP3+Tregを含む免疫担当細胞, CD123+樹状細胞の動態をFCMで測定する.それら細胞動態に対する選択的TAM阻害剤,抗Gas6中和抗体の効果を検証する.本研究はGas6/TAM systemがTA-TMAの病態において重要な役割を演じることを証明し, GVHDに対する新たな創薬や検査法の開発に貢献できる可能性を秘めており,血液診療の向上に貢献する.同種造血幹細胞移植(HSCT)症例の血清growtharrest-specific gene 6(Gas6)は急性移植片対宿主病(GVHD)や移植関連血栓性微小血管障害症(TMA)発症の好発時期3-5週に増加した。血清Gas6はドナーTリンパ球及び単球から分泌された。腸GVHD組織の免疫染色でGas6及びGas6の受容体であるTAM受容体MerTKが高発現していた。また、血清Gas6はDダイマー及びPIC増加と相関し、TAM受容体阻害剤は血小板凝集惹起物質で誘導される血小板凝集を著明に抑制した。このことはGas6-TAMシグナルが血栓形成及び凝固異常に関与することを示唆する。培養内皮細胞を用いたin vitro実験で、Gas6、HSCT血清添加は内皮機能障害(抗凝固因子トロンボモジュリン発現低下、内皮型一酸化窒素(NO)合成酵素発現低下、プラスミノーゲン活性化抑制因子-1(PAI-1)、接着分子ICAM-1及びICAM-1発現増加)を誘導し、TAM受容体阻害剤はそれら内皮機能障害を抑制した。さらに、Gas6、HSCT血清添加は内皮細胞アポトーシスを誘導し、TAM受容体阻害剤はそのアポトーシス誘導を抑制した。これらの結果より、Gas6-TAMシグナルの阻害はGVHD及びTMAの共通病態、発症トリガーである内皮障害を抑制することを示唆する。同種移植マウス実験では、肝GVHD病変と肝腎TMA病変がTAM受容体阻害剤で抑制され、生存率が改善される。さらに、TAM受容体阻害剤はマウスモデルのドナーTリンパ球活性化及びTreg数低下を抑制することが証明される。本研究はGVHD及びTMA病態の一端を解明し、Gas6-TAMシグナルが画期的な治療標的の開発や新たな検査法開発に寄与する可能性がある。第79回日本血液学会学術集会の学会発表などで研究成果を報告している。

また、本年度の日本血液学会学術集会及び米国血液学会への研究成果を報告する準備は順調に進展している。学会発表賞与認定公益信託日本白血病研究基金平成29年度研究賞大河原浩福島県医科大学血液内科学講座GVHD及びTMAの病態におけるGas6関連シグナルの役割を解明し、Gas6関連シグナルがGVHD及びTMAにおける新たな治療戦.略候補やバイオマーカーとなりえることを明らかにする同種造血幹細胞移植に関連する移植片対宿主病(GVHD)の分子機構の詳細は不明な点が多い.これまでの我々の予備実験では,急性GVHDの好発時期に血清Gas6は有意に増加していた。しかも, gradeII以上のGVHD症例に有意に高値である興味深い結果を得た.さらに,我々は血清Gas6はFCMによってドナーTリンパ球及び単球から分泌される可能性を見出した.また,血清Gas6は凝固/線溶関連マーカーや各種ケモカインと相関関係を示す興味深い結果を得た.また,病理組織学的検討では、腸管GVHD病変組織にGas6及びTAM受容体Merが高発現することを明らかにした.培養血管内皮細胞を用いたin vitro実験では, rGas6及びgradeIIIのGVHD患者血清が血管内皮障害(ICAM-1及びICAM-1発現増加)を誘導し、Mer阻害剤はそれらの蛋白発現変化を抑えた.さらに, rGas6及びGVHD患者血清は内皮細胞のアポトーシスを誘導したが, Mer阻害剤はそのアポトーシス誘導を抑えた。これらの結果は, GVHDの重要な病態である血管内皮障害の分子機序に, Gas6-Merシグナルが重要な役割を担うことを示す.さらに, GVHDを誘導させた同種移植マウスを用いたin vivo実験で, GVHD誘導マウスの血清Gas6は有意に増加した.病理組織学的検討では肝GVHDの病変組織でGas6とMer発現増加を認めた.さらに, GVHD誘導マウスにMer阻害剤を静脈内投与すると, GVHD病変が著明に改善した.本研究はGVHDの病態解明に寄与するとともに, Gas6-Merシグナルが新たな治療標的候補や新規バイオマーカーとなることを証明した.我々の研究成果は新たな創薬や検査法の開発に大きく貢献できる可能性を秘めている。これらの研究結果は2018年10月日本血液学会総会(大阪)、2018年12月米国血液学会学術集会(サンディエゴ)にて発表した。当研究内容は現在米国雑誌blood advancesに投稿され追加実験中である。1. HSCT症例の血清Gas6濃度とGVHD指標(障害臓器、最高grade、IL-2R等)及びTMA指標(凝固/線溶関連マーカー、LDH等)との関連を明らかにする。2. Gas6、HSCT症例血清を培養血管内皮細胞に添加し、トロンボモジュリン、eNOS、組織因子、PAI-1、接着分子ICAM-1、VCAM-1発現を検討する。また、同時にMAPキナーゼ、カスパーゼ、NF-κB活性を誘導するか否かを検証する、さらに、それら反応に対するTAM受容体阻害剤(UNC2250)及びsiRNAの効果を検証する。以上の結果はGVHD及びTMAの共通病態である内皮機能障害の分子機構の一端を明らかにする。3.ドナーB6.SJL-PtprcaPEP3b/BoyJマウス、レシピエントBALB/Cマウスを用いた同種移植マウスを作成する。
死後脳研究のための死にゆく脳の縦断的定量的解析

死後脳解析は脳内で実際に起きている微小な病変を見出すために非常に有効な手法で、精神疾患の病態や治療を考える上で重要である。死後脳保存処理には、迅速な固定処理を行う動物実験とは異なり、数時間以上の安置期間がある。そのため、死後脳解析により見出した変化が生前の脳を反映しているのか、死後の時間経過により生じた副次的変化であるのかを判断する事は困難であった。本研究では、同一神経細胞を継続的に観察できる2光子励起顕微鏡を用いたin vivoイメージング法を用いて、マウス脳の神経細胞を生前から安楽死後を通して観察し、死後脳サンプルで維持されやすい、又は維持されにくい構造や分子が何であるかを明らかにする。
日常生活強度の違いが中高年女性の最大脚筋力と骨塩量に及ぼす影響

本研究は、日常生活における各個人の脚筋活動を質的、量的に特徴づけ、それらの脚筋活動を一定期間維持した場合に、各人の骨塩量がどの程度維持されるのかを調べるという方法を用いて、骨塩量と脚筋力維持に必要な身体活動の質と量について明らかにすることを目的としている。現在までに、・日常生活の中で行なう様々な身体活動場面(歩行、自転車駆動、軽スポーツ、階段昇降など)における脚筋の筋放電を筋電図によって取り出し、その放電を質と量の両面から分類することによって各個人の脚筋活動の特徴を把握する作業、・最大脚伸展力および足関節背屈筋力の測定、および・大腿骨骨塩量の2回の測定等を終了した。これまでの測定値は、骨塩量が必ずしも日常生活における総歩行数とは直線的関係がなく、階段などの立体移動の頻度、個人の体重などに依存していることを示している。また、被験者に対する問診によって得た病歴、運動歴と今回の様々な測定値との総合評価を各人に対して行ったところ、65歳以上の女性であっても日常的な生活強度を上げることである程度までは骨塩量回復が可能であるという結果が得られた。これらの結果をもとに、現在論文を執筆中であり、またこの内容については平成11年9月の体力医学会で発表予定である。今回骨塩量測定に用いている機械は最新鋭のものであるが、1%程度の測定誤差が含まれている。そのため、目的とする関係を導くには更に2年間程度の継続測定が必要であると考えられる。2回目の骨塩量測定が終了し、本研究課題が対象とする研究期間は終了したが、現在も万歩計を使った日常生活強度の測定は継続中である。今回の被験者に対して今後も同様の測定を少なくとも3年間継続し、年に1度、骨塩量および脚筋力測定を実施する予定である。本年度は、日常生活において特に運動習慣をもたない者、週に一日だけ軽スポーツを行っている者、週に3日間定期的なラケットスポーツ等を行ない更にそれ以外の日には1日1万歩の歩行を心がけて実践している者など、様々な身体活動量を有する49才から77才までの女性20名に実験協力を得て、更に研究を継続中である。現在までに、I.日常生活の中で行なう様々な身体活動場面(歩行、自転車駆動、軽スポーツ、階段昇降など)における脚筋の筋放電を筋電図によって取り出し、その放電を質と量の両面から分類することによって各個人の脚筋活動の特徴を把握する作業、II.最大脚伸展力の測定、III.大腿骨骨塩量の第一回目の測定、の三項目を終了した。更に、IV.年間を通した脚筋作業量を概算のための様々な身体活動場面ごとの歩数記録作業については継続実施中である。ここまでの測定では、平均的な1日の総歩行数は6684歩(最大9700歩、最小4100歩)であり、そのうち抗重力運動が1670歩、また階段の昇り下りが1日に約6階分(最大14階分、最小0.8階分)、自転車駆動時間が11分であるなど、生活の中における身体活動の内容に大きな個人差があることが分かり、各被験者ごとのこのような値と骨塩量との関係には高い相関傾向を得ている。本研究は、各個人の脚筋活動を質的、量的に特徴づけ、それらの脚筋活動を一定期間維持した場合に、それぞれどの程度骨塩量が維持されるかを調べるという方法を用いて、骨塩量維持にはどのような内容の身体活動がどれだけ必要かということを明らかにすることを目的としている。そのため、今後も万歩計を使った日常生活強度の測定をこのまま継続し、脚の筋力発揮の内容と1年(2年、5年、10年)後の骨塩量および最大脚伸展力との関係等を明らかにすることを予定している。
癌患者家族の抗がん剤曝露による健康被害防止を目的とする生活環境と曝露要因の調査

本研究では、抗がん剤治療を行う患者と生活を共にする患者家族及びその生活環境への抗がん剤による汚染状況を調査し、曝露による影響を十分に考慮にいれた抗がん剤曝露対策を検討していく上での解決策を提案することを目的とし、今回揮発性により曝露が大きな社会問題となっている抗がん剤シクロホスファミドの汚染状況を調査した。研究方法として、当初同意を得られた患者及び患者家族よりアンケート調査、尿検体の採取および環境調査のための家庭内の拭き取り調査を行う予定であったが患者の都合により同意が取得できた、拭き取り調査1例のみをおこなった。拭き取り調査は、玄関ドアノブ、廊下、トイレの便器、洗濯槽、台所床(食卓の床)、気になる所(冷蔵庫のドア)の6ヵ所をおこなった。その結果台所床(2.99×10^<-1>ng/cm2)及び冷蔵庫ドア(1.80ng/cm2)よりシクロホスファミドが検出された。それぞれより検出された濃度は(独)労働安全衛生総合研究所より報告されたシクロホスファミド汚染に対する評価と対策から判断すると台所は、「低減対策が必要」、冷蔵庫のドアは「直ちに低減対策が必要」と非常に高レベルな汚染状況が明らかとなり早急な対策を必要とする結果が得られた。ただ、この拭き取り方法は、拭き取り方(丁寧さ・力の加減等)が測定値に影響を与え、曝露量の正確な値がわからないことがあるといわれる方法である。従って正確なシクロホスファミドの汚染量の把握にはさらなる調査が必要である。本研究により家庭内にはっきりと汚染が広がっていることが確認された。今後、この研究を元にさらにシクロホスファミドばかりでなく、他の抗がん剤の汚染状況についても明確にしていき、わかりやすい抗がん剤の曝露対策を行っていきたいと考えている。
国家と地域統合に関する総合的比較研究

本研究グループは、地域統合の問題を理論的側面と現実的側面の二つのレベルにおいて共同研究を進めてきた。従来の地域統合理論では、ヨーロッパ以外に地域における統合の動きを分析しえず、アフリカやアジア・太平洋地域における統合の動きや、さらに1989年以降のヨーロッパにおける統合をめぐる激しい変化に対応できなくなり、新たな地域統合理論が必要であった。平成4年度は、研究最終年度であることから、平成3年度に行った従来の理論研究の再検討、およびそれを踏まえて構築した基本的フレームワークをもとに、各研究者が個別研究を行い、共同研究の総括をした。個別研究は下記の内容についてそれぞれ論文にまとめた。ハラルド・クラインシュミット東アフリカにおける国家建設と地域統合岩崎美紀子アンチ・ダンビング領域における統合の形態早坂(高橋)和チェコスロバキアの連邦制竹沢泰子アメリカ合衆国における民族集団の統合化波多野澄雄近現代日本における地域統合論とアジア・太平洋秋野豊東欧における地域協力ーカルパチア協力をめぐってー大島美穂北欧会議とEC統合山田直志EC統合と日本企業の海外進出これら個別研究の成果は、平成3年度に行った理論研究の成果とともに、同文館から『地域統合論のフロンティア』として出版される。本研究グル-プは、地域統合の問題を理論的側面と現実的側面の二つのレベルから取り組んできた。平成三年度は、理論においては「地域」などの基本概念の定義について地域統合の文脈から検討した。現実面においては、各地域の地域統合について事例研究を行い、旧ソ連(秋野)、北米(岩崎)、ECと北欧(大島)、東アフリカのコミュニティ(クラインシュミット)、チェコスロヴァキアと中東欧(早坂)について研究報告が行われた。さらに異なった観点から、アメリカにおけるエスニシティ-(竹沢)、歴史的観点からは、中世ヨ-ロッパの地域統合(クラインシュミット)についての研究報告があった。本研究グル-プの研究成果は、現在の過渡的段階では、以下の三つを指摘し得る。まだ第一に、現在進行中の地域統合は、かつての統合がエリ-トによって行われてきたのに比べて、より民主的正当性を持ち、広範な住民の支持を必要とする政治過程である。第二に、現代の政治統合には、制度面の統合が地域統合の前提となるという従来の理論では説明のつかない現象が見られる。第三に、現在の急速に変化している国際関係のもとでは様々な形態の地域協力が見られる。また、地域に対するアイデンティティはグロ-バルな関心と共存しており、そうした意味で、地域統合は現在の世界的規模での国際政治経済秩序の変動の中でより重要なファクタ-となり得る。従来の地域統合理論では、ヨーロッパ以外の地域における統合の動きを分析しえず、アフリカやアジア・太平洋地域における統合の動きや、さらに1989年以降のヨーロッパにおける統合をめぐる激しい変化に対応できなくなり、新たな地域統合理論が必要であった。ハラルド・クラインシュミット東アフリカにおける国家建設と地域統合岩崎美紀子アンチ・ダンピング領域における統合の形態早坂(高橋)和チェコスロバキアの連邦制竹沢泰子アメリカ合衆国における民族集団の統合化波多野澄雄近現代日本における地域統合論とアジア・太平洋秋野豊東欧における地域協力ーカルパチア協力をめぐってー大島美穂北欧会議とEC統合山田直志EC統合と日本企業の海外進出これら個別研究の成果は、平成3年度に行った理論研究の成果とともに、同文館から『地域統合論のフロンティア』として出版される。
酸性雨の生態系に及ぼす影響とその評価及び制御に関する研究

本研究は酸性雨の降雨特性を地域的な気象特性との関係で、その実態を把握する事、植物に対する直接的な影響と土壌系の変質を介しての間接的な影響と資源植物の酸性耐性の遺伝学的研究、さらに酸性化された土壌や湖沼底質の保全、制御に関する解析と評価を行う事を目的とする。ここではそれらの研究の一部について報告する。1.酸性雨の化学的特性と浮遊状物質濃度の経年変化研究所に連続雨水採取装置及びアンダ-センサンプラ-を設置して、雨水、浮遊状物質を採取して分析した。倉敷地区の雨のpHは3.5ー6.5の範囲に及び、1990年の平均値は4.2で全国平均値と比べても低い値であった。pHは雨の降り始めから終りまでほとんど変化がなかった。硫酸や硝酸イオンは降り始めに高い濃度が検出された。浮遊状物質の経年変化については穏やかな周期性がみられた。2.酸性雨の植物生育特性に及ぼす影響評界植物は雨を受ける事によって乾物生産、気孔の状態変化、葉の伸長阻害、クロロフィル含量の減少、萎凋現象、気孔状態変化、葉の伸長阻害、クロロフィル含量の減少、萎凋現象、異常葉の発性等が起こり、また雨水の付着量が部位になって異なり、葉画ワックス溶出が起こった。3.土壌の酸性化で溶解するアルミニウム(Al)による植物の生理障害細胞の機能に及ぼすちlの影響を調べた。Al処理により、ミクロソ-ム画分のMgーATPaseの活性が明白低下した。またATPaseの至適pHは、コントロ-ル区では6をピ-クにpHの増減により低減により低下がみられた。4.酸性雨が根圏環境と微量養分吸収に与える影響評価オオムギ切断根を用いMultiーCompartment Transport Boxを用い、吸収溶液のpHを3ー7の間で変え、微量金属元素の吸収と移行について検討した。鉄の吸収と移行はpH3が最も大きく、Mn、Zn、Cd、NiではpH3で吸収、移行が阻害され、pH5ー7で増加した。
ＥＳ細胞におけるＤＮＡメチル化と脱メチル化の細胞周期依存的連続変換現象の機構解明

本研究では、分化した細胞核が再度多能性を獲得し、幹細胞化するプロセスであるエピジェネティックリプログラミングの機構解明を目指した。DNAメチル化の正確な制御は、哺乳類の正常胚発生や細胞分化に必須である。DNAメチル化酵素には、新規付加型のDnmt3aとDnmt3b、維持型のDnmt1がある。この全ての活性を欠損したDnmt1/3a/3b TKO ESCsは、分化能を持たず、分化誘導を行うと細胞死を起こす。一方、Dnmt3a/3b欠損(DKO) ESCsは、ある程度分化可能である。このことは、DKO ESCsに残るDnmt1が、分化を制御できることを示唆している。Dnmt1酵素は、in vitroで非メチル化DNAを基質としてメチル化できることから、Dnmt1の新規メチル化活性については長く議論されてきた。しかし、胚発生過程におけるDnmt1の新規メチル化活性の存在や機能については、いまだ不明な点が多い。これまでに、Dnmt1の新規付加活性は未分化なESCsでは検出感度以下であるが、分化依存的に増加することを見出した。また、TGFbシグナルの活性化剤ActivinA、Tet酵素やヒストンH3K9の脱メチル化酵素を活性化するビタミンC、ヒストン脱アセチル化阻害剤などのクロマチンを活性化する薬剤を用いて培養をするとDnmt1による新規メチル化が亢進した。以上から、Dnmt1の新規メチル化活性にはクロマチン活性化が必要であると考えられる。また、DNAのメチル化レベルの低いDnmts欠損ESCsでは、分化早期に中内胚葉や始原生殖細胞(PGCs)マーカーの発現上昇が見られた。よって、クロマチン緩和を伴うリプロフラミング時には、その脱分化プロセスを負に調節する機構が必要であり、Dnmt1の新規メチル化活性がDnmt3a/3bの働きを補強することで正常発生を制御している可能性が考えられる。28年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、DNAシトシンのメチル化(5mC)から5ヒドロキシメチルシトシン(5hmC)への連続変換現象におけるDNAメチル化酵素(Dnmts)の役割を解明すること、PGC分化過程におけるリプログラミング時のクロマチン変化と、5hmC変換との相互関係を明らかにすることを目指している。研究計画で設定した3つの研究目的に則して、現在の研究実施状況を報告する。目的1どのDnmt酵素がES細胞における5hmC変換の対象となるゲノムワイドなメチル化を行っているか再検討する。新規付加型Dnmt3a/3bを欠損したES細胞(DKO)と維持型Dnmt1を欠損したES細胞(Dnmt1 KO)を用いて、染色体上の5hmC局在性変化を解析した。DKO ES細胞では、5hmC変換領域がほぼ存在しない状態であった。よって、マウスES細胞における5hmC変換の対象となるメチル化は、多くはDnmt3a/3bが行っていると考えられる。しかし、Dnmt1欠損ES細胞でも5hmC変換領域の変化が見られたことから、Dnmt1も5hmC変換の対象となる領域のメチル化に関与していることが示唆された。目的2ES細胞における、5hmC変換を介した脱メチル化後の再メチル化が、細胞周期のどの時点で起きるのか明らかにする。Dnmt1 KO ES細胞での染色体上の5hmC局在性を解析すると、特異的に姉妹染色分体の片側のみが5hmC陽性の細胞が50%存在した。このことから、DNA複製(S期)後におけるDnmt3a/3bの働きがDnmt1の欠損によって阻害されている可能性を見出した。目的3ES細胞のPGC分化誘導系を用い動原体近傍の5hmC化を引き起こすクロマチン変化を明らかにする。ES細胞からPGC分化誘導する場合は、一旦エピブラストを経由し分化誘導を行う必要がある。まず、ES細胞からエピブラスト様細胞(EpiLC)への分化誘導法の確立を行った。WT ES細胞では、エピブラストマーカー遺伝子Fgf5の発現が上昇していた。一方、Dnmt欠損ES細胞ではPGC様の遺伝子発現プロファイルを示した。マウス初期胚や始原生殖細胞(PGC)で起こる、エピジェネティックリプログラミング機構を解明するため、リプログラミング活性をもつマウスES細胞を用いて研究を行ってきた。これまでに私達は、マウスES細胞におけるゲノム全体のDNAシトシンのメチル化(5mC)状態は、Dnmt酵素による5mC化およびTet酵素による5ヒドロキシメチルシトシン(5hmC)化を起因とした脱メチル化が連続的に繰り返されていることで規定されることを見いだした。また、Tet酵素による5hmC変換領域はヒストン修飾の状態によって制御されていることを見いだした。本研究では、5mCから5hmCへの連続変換現象におけるDNAメチルトランスフェラーゼ(Dnmt)それぞれの役割を解明することを目指している。また、PGC分化過程におけるリプログラミング時のクロマチン状態の変化と、5hmC変換との相互関係を明らかにすることを目指している。これまでに、Dnmt3a/3b欠損ES細胞(DKO ESC)において5hmCが著しく減少していたことから、5hmC変換の対象となる再メチル化はDnmt3a/3bによって行われることを明らかにした。

また、Dnmt1/3a/3b TKO ES細胞(TKO ESC)にDnmt1をレスキューしたTKO+Dnmt1 ES細胞(TKO+Dnmt1 ESC)を用いた、エピブラスト様細胞(EpiLC)への分化誘導において、維持型のDnmt1しか残っていないにも関わらず、分化に伴い5mCレベルが上昇しており、Dnmt1に新規メチル化付加能があることを示唆する結果が得られた。平成26年度の研究から、Dnmt3a/3b欠損ES細胞(DKO ESC)からエピブラスト様細胞(EpiLC)への分化誘導において、5mCから5hmCへの変換が亢進していることがわかった。このことは、DKO ESC由来の分化細胞では、維持型のDnmt1しか残っていないにも関わらず、分化に伴い5mCレベルが上昇しており、Dnmt1に新規メチル化付加能があることを示唆することになる。DKO ESCではDnmt3a/3b欠損樹立よりも前の段階で付加されたヘテロクロマチン領域の5mCはTet酵素の変換の対象とならず、Dnmt1によって維持されている可能性がある。そこで、新たにDnmt1/3a/3b TKO ES細胞(TKO ESC)にDnmt1をレスキューしたTKO+Dnmt1 ES細胞(TKO+Dnmt1 ESC)を用いてDnmt1の新規メチル化付加能について解析を行った。未分化状態でのTKO+Dnmt1 ESCの5mCと5hmCの定量解析および染色体上の局在性の解析を行った。すると、未分化TKO+Dnmt1 ESCではほとんど5mCと5hmCは存在しないことがわかった。ES細胞はもともと低メチル化状態に保たれているため5mCが増加しなかったと考えられる。そこで、TKO+Dnmt1 ESCをゲノム全体のメチル化レベルが増加するEpiLCへと分化誘導を行うと、驚くべきことに分化4日目で5mCが増加しており、このことから、Dnmt1の新機能として、新規メチル化付加能があることが明らかとなった。この結果を、以下に示すよう研究成果を発表した:国際学会1件、国内学会・研究会3件、受賞1件。また、学会では、専門分野および共同研究者との情報交換や議論を行うこともできた。本研究では、分化した細胞核が再度多能性を獲得し、幹細胞化するプロセスであるエピジェネティックリプログラミングの機構解明を目指した。DNAメチル化の正確な制御は、哺乳類の正常胚発生や細胞分化に必須である。DNAメチル化酵素には、新規付加型のDnmt3aとDnmt3b、維持型のDnmt1がある。この全ての活性を欠損したDnmt1/3a/3b TKO ESCsは、分化能を持たず、分化誘導を行うと細胞死を起こす。一方、Dnmt3a/3b欠損(DKO) ESCsは、ある程度分化可能である。このことは、DKO ESCsに残るDnmt1が、分化を制御できることを示唆している。Dnmt1酵素は、in vitroで非メチル化DNAを基質としてメチル化できることから、Dnmt1の新規メチル化活性については長く議論されてきた。しかし、胚発生過程におけるDnmt1の新規メチル化活性の存在や機能については、いまだ不明な点が多い。これまでに、Dnmt1の新規付加活性は未分化なESCsでは検出感度以下であるが、分化依存的に増加することを見出した。また、TGFbシグナルの活性化剤ActivinA、Tet酵素やヒストンH3K9の脱
ゴルフ・パッティング能力を改良するためのランダム性トレーニングシステムの開発

本研究では、ランダムな物理のリアルタイム計算システムと、3次元のバーチャル環境で物理的に現実的なボール・ロールでゴルフ・パットのトレーニングシステムを開発した。ニュージーランドのオタゴ大学とアメリカのナイキ・ゴルフ社の研究協力者とともに、上記トレーニングシステムで実際のゴルフ・パッティングの改良ができるかを検定した。物理的なランダム性によって被験者のゴルフ・パッティング成功率が高くなり、ランダムな結果への運動学的な反応・変更が小さくなったことを明らかにした。上記システムの詳細を28年度の世界ゴルフ科学学会で発表した、上記結果に関する熟達者を対象とした実験が行なっている最中である。本研究の1年目の前半は、ランダムな物理のリアルタイム計算システムをニュージーランドの研究協力者と開発してから、本人と精密に制御したボールロール実験で実際のゴルフ・グリーンのランダム性を定量化し、上記ランダムな物理システムに統合した。その結果、現実的な環境ランダム性をリアルタイムでシミュレーションできるシステムの開発ができた。1年目の後半は、上記ランダムな物理システムを用いて、バーチャル・ゴルフ・パットのトレーニングシステムを開発した。3次元環境の中でリアルタイムで現実的なボール・ロールのパッティングゲームになった。2年目の後半は、ナイキ・ゴルフ(米国)の研究協力者とともに、ゴルフの上級者のアマチュアを対象とした予備実験を行い、上記バーチャル・システムのトレーニング期間・回数や、トレーニング前後の実際のパッティングの実験方法を確率した。その結果を2016年の第7回世界ゴルフ科学会議で発表した。その後、信州大学で初級者を対象とした本実験を行い、その結果を論文で報告し、現在国際学術誌で査読中である。一般的な結果として、物理的なランダム性によってゴルフ・パッティングの成功率が微妙に高くなったが、それより明らかにしたのが、被験者毎に早く(1日以内)バーチャルのランダム性に慣れ、実際のパッティングのランダムな結果への運動学的な反応・変更を小さくした。それは、バーチャルのランダム性トレーニングが進めば進むほど、制御できない外部ランダム性を深く理解し、外部ランダム性への反応を小さくするため、長期的なパフォーマンスを改良できる予想になる。それを明らかにするため、今後の長期間実験を研究協力者と計画している。スポーツ・バイオメカニクスwebページが作成中
コミュニティ・スペシフィックを志向するアーティストによる地域創造力の開発

本研究では、「コミュニティ・スペシフィック」という概念を提示することで、芸術活動を通した地域創造について実践に基づく考察を行った。研究計画最終年度となる平成30年度は、以下の3つのアクションリサーチを軸に展開した。第一に、3年間を通して継続的に実施してきた茨城県水戸市におけるアクションリサーチでは、概ね当初の計画に基づく成果を上げることができた。研究協力者の北澤潤氏との協働のもとに公立小学校で行ってきた「放課後の学校クラブ」では、アーティスト主導から地域主導へとプロジェクトの主体が移行しつつある。研究協力者の矢口克信氏との協働のもとに展開してきた「ワシントン現代藝術センター」では、平成28年度に実施したアートプロジェクト「祭後のバーゲンセール」の記録集を発行した。第二に、岩手県胆沢郡金ケ崎町の重要伝統的建造物群保存地区において、地区内の保存物件を芸術活動の拠点として活用する実践研究に取り組んだ。当該物件を「金ケ崎芸術大学校」と名付け、地域住民との協働のもとに「藍の時間」や「お庭の時間」などの講座やワークショップを開催する枠組みを構築した。この背景には岩手県出身の宮澤賢治が用いるところの「農民藝術」概念の現代的解釈に基づく理念がある。次年度以降、新たなアートプロジェクトとして「城内農民芸術祭」を開催する予定である。第三に、東北芸術工科大学の主催によるアートプロジェクト「山形ビエンナーレ2018みちのおくの芸術祭」に伴うアクションリサーチに取り組んだ。特に、地域住民との協働の場を生み出すことを目的に「山のようなヤタイ祭り」を実践した。ここでの成果を踏まえ、研究成果報告書として『まちまち2019』を発行した。上記の研究を通して、地域住民の創造性を引き出す「コミュニティ・スペシフィック」な芸術実践を展開していく上での「場所」の果たす重要性を導き出すことができた。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。研究課題として掲げた「コミュニティ・スペシフィック」概念に関する論点整理と実践研究を実施した。当初の研究計画では、平成28年度に実施された「茨城県北芸術祭」と連動したアクションリサーチを行う予定であったが、当該事業が継続性を前提としないイベント型の芸術祭として展開されたため、研究計画を一部変更して遂行した。本研究における「コミュニティ・スペシフィック」は、従来のパブリック・アートで重視されてきた「サイト・スペシフィック」に対して、近隣住民や興味関心を共有する人々の参加を通じて達成される芸術実践から抽出される概念である。この術語は、美術史家のミウォン・クォンが『One Place After Anothe』の中でアーティストのクリストファー・スペランディオの言葉を引用する形で提示されたものであり、そこでも「サイト」から「コミュニティ」への転回が論じられている。こうした考え方を日本の現代美術の評価軸に援用していくことが本研究の主たる目的となる。この背景には、各地で開催されているアートプロジェクトや芸術祭が「住民の主体性」や「地域文化の多様性」を掲げながら、一方で一過性のイベントとして文化芸術を消費していることに対する批判がある。初年度の具体的な成果としては以下の二点が挙げられる。12011年より水戸市内の小学校で実施してきた《放課後の学校クラブ》を踏まえ、放課後子ども教室事業に創造的な活動を取り入れる「放課後アート活動」を水戸市総合教育研究所との協働により推進した。2研究協力者の矢口克信氏とともに、水戸市内の空き家を拠点に「ワシントン現代藝術センター」を設立し、解体されるファッションビルを舞台とする《祭後のバーゲンセール》やワシントン藝術大学校等の企画を通して「地に足の着いたアート」について議論する場を設けた。以上の活動を通して、日常と芸術との関係について研究を進めている。研究実績の概要においても言及した通り、当初の研究計画で想定していた「茨城県北芸術祭」におけるアクションリサーチは行わなかったが、本研究課題を遂行する上で重要な制度設計と拠点整備ができたため、おおむね順調に進展していると判断した。制度設計については、水戸市総合教育研究所との協働により、水戸市内の小学校で実施されている放課後子ども教室事業に創造的な活動を取り入れる「放課後アート活動」が始まり、28年度は計4校で事業が実施された。拠点整備については、研究協力者の矢口克信氏によって「ワシントン現代藝術センター」の環境整備を行い、8月15日に実施した《祭後のバーゲンセール》では、かつての水戸の若者文化の中心地であったファッションビル「サントピア」の解体に際して、往時のバーゲンセールの行列を再現するアートプロジェクトを実施し、200名あまりの参列者を得た。上記の仕組みや拠点におけるアクションリサーチをもとに、論文発表及び口頭発表を行った。本研究は、今日の芸術あるいはアーティストに求められる職能として「コミュニティ・スペシフィック」という評価軸を設定し、その社会的な有効性を検証することを目的とするものである。なお、本研究における「コミュニティ・スペシフィック」とは、従来のパブリック・アートに対して用いられていた「サイト・スペシフィック」に対して、積極的に地域社会と関わりながら、地域住民との協働を通して達成される芸術実践を念頭に置いている。この目的に鑑み、1平成29年度は海外における事例調査、2国内におけるアクションリサーチ、3これらの研究成果に基づく国際学会での発表を実施した。1平成29年は5年に1度開催される「ドクメンタ」(ドイツ・カッセル)と10年毎に開催される「ミュンスター彫刻プロジェクト」(ドイツ・ミュンスター)の実施年にあたるため、両事例を通して地域社会と芸術との関わり方について実地調査を行った。

これらの成果については、平成29年11月24日に東北芸術工科大学において報告会を実施し、平成30年度に開催される「山形ビエンナーレ2018」に向けての応用可能性について検証を行った。2茨城県水戸市を舞台に展開されている「ワシントン現代藝術センター」の取り組みを事例にアクションリサーチを実施した。地域と芸術に関するテーマを中心にアーティストやギャラリストを招いて「ワシントン藝術大学校」と称するプログラムを実施することで、一連の活動を客観的に把握する機会とした。3上記の研究成果をもとに、平成29年8月に韓国の大邱で開催された国際美術教育学会(InSEA2018)において、日本における「コミュニティ・スペシフィック」な芸術実践について、地域に根差した芸術教育(Community-Based Art Education)の観点から考察する学会発表を行い、各国の研究者との情報共有を図った。当初の研究計画に沿って、1海外の事例調査、2国内におけるアクションリサーチの進展、3国際美術教育学会における研究発表を滞りなく実施することができた。とりわけ、平成28年度に環境整備を行った「ワシントン現代藝術センター」については、平成29年度にフランス・パリで開催された写真専門のアートフェア「パリ・フォト」のプリズム・セクションにおいて展示された。平成30年には、スイスのバーゼルで開催されるリステにおいても展示がなされるため、日本の地域社会における芸術実践に対する国際的な評価を検証する機会となることが期待される。これらの当初の研究計画に加えて、平成29年度より研究機関が東北芸術工科大学(山形県山形市)に異動したため、東北地域における実践研究の方法についても検討を進めてきた。その中で、岩手県胆沢郡金ケ崎町において、重要伝統的建造物群保存地区内の保存物件を地域住民との協働で管理する機会を得たため、今後はこれまでに蓄積してきた研究方法に基づき、新たなアクションリサーチの場をつくりだすことを想定している。本研究では、「コミュニティ・スペシフィック」という概念を提示することで、芸術活動を通した地域創造について実践に基づく考察を行った。研究計画最終年度となる平成30年度は、以下の3つのアクションリサーチを軸に展開した。第一に、3年間を通して継続的に実施してきた茨城県水戸市におけるアクションリサーチでは、概ね当初の計画に基づく成果を上げることができた。研究協力者の北澤潤氏との協働のもとに公立小学校で行ってきた「放課後の学校クラブ」では、アーティスト主導から地域主導へとプロジェクトの主体が移行しつつある。研究協力者の矢口克信氏との協働のもとに展開してきた「ワシントン現代藝術センター」では、平成28年度に実施したアートプロジェクト「祭後のバーゲンセール」の記録集を発行した。第二に、岩手県胆沢郡金ケ崎町の重要伝統的建造物群保存地区において、地区内の保存物件を芸術活動の拠点として活用する実践研究に取り組んだ。
口腔マイコプラズマにより誘導される免疫担当細胞のアポトーシス

口腔マイコプラズマは、マウス脾臓T細胞に対してポリクローナルなマイトゲン活性を有していた。マウス脾臓T細胞のコンカナバリンAによる活性化の濃度依存性を調べたところ、ある濃度までは活性化されたが、それ以上では活性化ではなく、アポトーシスが誘導された。その実験系に口腔マイコプラズマを共存させたところ、マウス脾臓T細胞のコンカナバリンAによるアポトーシスの誘導時期が顕著に早められた。また、そのアポトーシス加速活性にはTNFαが重要な役割を有していた。口腔マイコプラズマは歯肉線維芽細胞にIL-6ならびにIL-8を誘導し、その誘導に関わる物質の性状を明らかにした。IL-6ならびにIL-8は炎症性サイトカインとして、歯周疾患あるいは関節炎において注目されている。したがって、本研究成果は口腔マイコプラズマの歯周疾患における病因的役割の一端を示唆しているものと思われる。代表的な口腔マイコプラズマであるM.salivariumのPCR法による検出法を確立した。本方法を用いることによって、小量のサンプルから迅速に本マイコプラズマを検出できるようになった。口腔ならびにエイズ関連マイコプラズマがマウス脾臓由来T細胞に対してmitogen活性を示した。なお、マウス脾臓由来T細胞はナイロンウ-ルを用いて調製したもので、その純度は約80%であった。また、これらのマイコプラズマはコンカナバリンAによって誘導されるT細胞のアポトーシスを加速し、また,本活性にはTNF-αが重要な役割を果たしていた。マグネチックセルソーター(MACS)で高度(97%)に精製したT細胞を用いて同様の実験を行ったところ、mitogen活性は検出されなかったが、アポトーシス促進活性は検出された。また、MACSで高度に精製したT細胞を口腔ならびにエイズ関連マイコプラズマで刺激し、TNF-αのmRNAの発現をRT-PCR法で調べたところ、発現はみられなかった。したがって、TNF-αを産生した細胞はT細胞画分に混在しているT細胞以外の細胞から産生されたものと考えられる。しかしながら、高度(97%)に精製したT細胞を用いた場合にも、アポトーシス促進活性は検出されたことから、本活性にはTNF-αを介さない経路も存在するのではないかと考えられる。現在、そのメカニズムについて検討中である。平成8年度では、以下のことを明らかにした。1.口腔マイコプラズマがマウス脾臓T細胞に対してポリクローナルなマイトゲン活性を有している。2.口腔マイコプラズマがコンカナバリンAにより誘導されたマウス脾臓T細胞アポトーシスを加速する。また、そのアポトーシス加速活性にはTNFαが重要な役割を有している。今年度は、本研究の本筋からややそれるけれども、口腔マイコプラズマの口腔疾患における病因的役割を明らかにする上で、重要と思われる以下のことを明らかにした。1.口腔マイコプラズマが歯肉線維芽細胞に、炎症性サイトカインとして注目されているIL-6ならびにIL-8を誘導する。さらに、その誘導に関わる物質の性状を一部明らかにした。2.代表的な口腔マイコプラズマであるM.salivariumのPCR法による検出法を確立した。本方法を用いることによって、少量のサンプルから迅速に本マイコプラズマを検出できるようになった。