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アフリカ音文化における伝統の形成と変容:その社会的要因の研究

伝統的な王宮の音楽にどのようにして大衆音楽の要素が取り入れられたのかを調査していく過程で、独立後の民族主義的な文化教育政策、新たな伝統文化の復興を目指す芸能集団の誕生、マスメディアの発達による聴衆の音楽嗜好の変化など、フォントンフロムの新しい様式の成立にはさまざまな「ポストコロニアル」な社会状況が関わっていることが判明した。池谷は、アンゴラ北東部でのチョクエ社会で音文化の中核をなす親指ピアノについて調査し、次の点を明らかにした。1.チョクエの親指ピアノは5種類とされてきたが、アフリカの一社会内でおそらく最大数の7種類を確認した。2.採録した43曲はすべて男性の独奏で、歌詞がある。内容は、(1)生業活動、(2)男女・親子関係、(3)日常の出来事、(4)実用的教訓、(5)村の事件、(6)割礼儀礼、(7)植民地時代のこと、など。3.割礼儀礼ムカンダで、太鼓と共に親指ピアノの演奏が不可欠だったが、現在では太鼓のみだ。変化の要因は検討中だが、チョクエの音文化のでの親指ピアノの役割が変わってきたことを示している。平成13年度は、12年度に引き続き、研究課題を現地調査によって探求し、前年度の調査で不十分だった点を補い、あるいは更に深化させる研究を行った。川田は西アフリカ内陸部社会の部に特有の父系継承名(バンバラ語のjamu、モシ語のsondre)が公の場で先祖の名を引いて人を誉める、弦楽器付きの声の芸およびその職能集団(griotなど)の形成・変容とどのように関わっているかを、この問題がとくに重要なブルキナファソとマリで、キー・インフォーマントからの聞き取りによって調査した。この種の継承名のない近隣社会との対比を行う基礎資料が得られた。塚田はガーナのファンティ宮廷音楽フォントムフロムへの、ガーナ独立初期の文化政策の影響、とくに当時流行したハイライフによる変容に焦点を合わせて調査し、その実態を解明する手がかりを得た。池谷は一貫して続けているアンゴラを中心とする、大衆楽器親指ピアノに合わせた民謡の社会的背景の分析を、近接するボツワナにも対象を広げて調査した。この調査結果に基づき、これまでの研究成果をより広いコンテキストで考察することが可能になった。鈴木もこれまでの研究の延長として、ギニアの首都コナクリと内陸都市カンカンで、内婚的芸能集団ダリオ一族の伝統的活動と現代のとくに都市的状況での活動の関係を調べた。以上4名の研究分担者が今年度に行った調査も、前年度と同じく、従来まったくなされていなかったアフリカ研究の重要な側面であり、平成14年度の、調査結果の総合検討と報告書のまとめに向かって、全員意欲を燃やしている。平成14年度は、3年計画の研究課題「アフリカ音文化における伝統の形成と変容:その社会的要因の研究」の最終年度にあたり、総括と報告書作成を行なった。文化における「伝統」は古来不変ではなく、歴史的状況と社会的要因のもとに「形成」され、その状況や要因の変化に伴って「変容」して来たものである。「伝統」のそのような認識に立って、「音文化」も捉えようと試みた。その際巨視的な次元で問題にされるものと、微視的な次元でのものとがある。前者は、アフリカ全体の文化史的な比較の視野の中での、要素間の関連の必然性や可能性に基づいて、歴史的な前後関係因果関係を問題にする。この方法は、音文化のように長期的持続が問題になる事象、とくにサハラ以南アフリカの無文字社会では不可避でもある。巨視的研究に当たる川田の「音文化と歴史認識・歴史表象形成の相互関係、およびその変容」で、川田は西アフリカ内陸社会で社会的諸制度と結びついて発達した「ほめる芸」が、社会的状況の変化に対応して歴史認識
前立腺平滑筋細胞でのカルシウムイオン情報伝達解析を利用した治療システムの確立

前立腺平滑筋細胞における細胞内伝達系の相関を明らかにするため、ゴールデンハムスターを用いて加齢に伴うα受容体およびプリン受容体における細胞内カルシウム濃度([Ca2+]i)上昇機序をリアルタイム共焦点レーザー顕微鏡にて検討した。反応パターンの解析より細胞外からのカルシウム流入により、前立腺平滑筋細胞の収縮が明らかとなった。蛍光免疫組織化学法によりα1受容体の局在について検討したところ平滑筋細胞においてははっきりとした受容体の局在は認められなかった。前立腺平滑筋細胞における細胞内伝達系の相関を明らかにするため、細胞内カルシウム濃度([Ca^<2+>]_i)変動をモニターし、反応機構を解析する実験をはじめた。標本系の作成に手間取り、表記の研究に関する研究成果はまだ論文発表に至っていないが、現在までに完了したことを列挙すると、1.前立腺平滑筋細胞の[Ca^<2+>]_i、変動をイメージングできる標本を作製した。動物種としてはマウスよりゴールデンハムスターの方が観察しやすい標本を作製でき、今後この種を用いて実験を行う計画とした。2.1で作成した標本周囲を、NorAdrenalin(NAd)、ATP及び各種試薬を用いて灌流し、収縮機構の違いについてリアルタイム共焦点レーザー顕微鏡(ニコンRCM/Ab)を用いて検討した。NAdもしくはATP刺激によって前立腺平滑筋細胞の[Ca^<2+>]_i変動を認めた。この[Ca^<2+>]_i上昇のパターンは両者で異なっており、NAd刺激では一過性の[Ca^<2+>]_i上昇を認めたのに対し、ATP刺激では[C^<2+>]_iの律動的変動を認めた。細胞外Ca^<2+>がない条件下では、NAd誘発性の[Ca^<2+>]_i上昇は部分的に抑制されたのに対し,ATP誘発性の[Ca^<2+>]_i上昇は完全に阻害された。3.α1受容体antagonistのTamslosin(TAM)を存在下でのNAdおよびATPによる刺激では、NAd誘発性の[Ca^<2+>]_i、上昇は完全に阻害されたのに対し,ATP誘発性の[Ca^<2+>]_i上昇は阻害されなかった。これらのことから、NAdとATPでは異なった細胞内情報伝達経路を持つ可能性が示唆された。今後更なる受容体の反応性の相違を検討する予定である。前立腺平滑筋細胞における加齢に伴う細胞内伝達系の相関を明らかにするため、細胞内カルシウム濃度([Ca^<2+>]_i)変動指標として反応機構の解析をすすめた。また、蛍光免疫法により、受容体の局在について明らかにした。表記の研究に関する研究成果はまだ論文発表に至っていないが、現在までに完了したことを列挙すると、1.ゴールデンハムスターを用いて加齢に伴う前立腺平滑筋細胞におけるa受容体およびP2×受容体における反応の違いについて検討した。2. 7or8週齢(Young)と50週齢経過(Old)したゴールデンハムスターで作製した標本の周囲を、Nor Adrenalin (NAd)及びAdenosine Tri Phosphate(ATP)を用いて灌流し、収縮機構の違いについてリアルタイム共焦点レーザー顕微鏡(ニコンRCM/Ab)を用いて検討した。NAd刺激によってYoung及びOldとも前立腺平滑筋細胞の[Ca^<2+>]_i変動を認めた。しかしながら、Youngの場合Oldの10倍濃度の刺激によって反応を示しており、加齢に伴ってNAdに対する感受性の違いがみられた。ATP刺激によってYoung及びOldとも同様の反応を示しており、前立腺平滑筋細胞の肥大にa受容体が関与していることが示唆された。3. 2においてNAd刺激による反応性の違いがみられたことから、蛍光免疫法により、Youngとoldにおけるa1受容体の局在について検討した。YoungとOldともに基底膜部分において発現が認められているもの,平滑筋細胞への発現ははっきりしないことから、さらに検討を加える予定である。受容体数については大きな違いは認められずむしろa受容体における感受性の違い等が示唆された。前立腺平滑筋細胞における細胞内伝達系の相関を明らかにするため、ゴールデンハムスターを用いて加齢に伴うα受容体およびプリン受容体における細胞内カルシウム濃度([Ca^<2+>]_1)[Ca^<2+>]_1上昇機序を検討した。表記の研究に関する研究成果はまだ論文発表に至っていないが、現在までに完了したことを列挙すると、1.前立腺平滑筋細胞の標本周囲を、ノルアドレナリン(NAd)、ATP及び各種試薬を用いて灌流し、収縮機構の違いについてリアルタイム共焦点レーザー顕微鏡(ニコンRCM/Ab)を用いて検討した。NAdもしくはATP刺激によって前立腺平滑筋細胞の[Ca^<2+>]_1変動を認めた。この[Ca^<2+>]_1上昇のパターンは両者で異なっており、腿Ad刺激では一過性の[Ca^<2+>]_1上昇を認めたのに対し、ATP刺激では[Ca^<2+>]

_1の律動的変動を認めた。細胞外Ca^<2+>がない条件下では、NAd誘発性の[Ca^<2+>]_1上昇は部分的に抑制されたのに対し,ATP勝発性の[Ca^<2+>]_1上昇は完全に阻害された。2.前立腺肥大のモデルとして50週齢と100週齢経過したゴールデンハムスターを用いて上記と同様に実験し比較検討した。NAd刺激によって双方とも前立腺平滑筋細胞の[Ca211変動を認めた。その上昇反応は50週齢よりも100週齢の方が強い傾向があった。ATP刺激については双方で差異を認めなかった。反応パターンの解析より細胞外からのカルシウム流入により、前立腺平滑筋細胞の収縮が明らかとなった。3. 100週齢経過したゴールデンハムスターを用いた楳本での蛍光免疫組織化学法によりα1受容体の局在について検討した。50週齢同様に基底膜部分においては発現が認められたが、平滑筋細胞においてははっきりとした受容体の局在は認められなかった。このことから加齢に伴いα受容体における感受性が高まることは示唆されるが、前立腺肥大と関係があると考えられる平滑筋細胞にα受容体が存在するかどうかははっきりとしたことは言えず、他の特異的な検査が必要であることが示唆された。
超流動ヘリウムの機能性流体としての医療分野への応用とマイクロ熱流動機構の解明

超流動ヘリウム冷却の医療分野への応用に関する検討を行った。凍結外科用クライオプローブを模擬した同心二重円管流路を作成し、伝熱特性を明らかにした。実験は、二重円管流路の外管壁面に取り付けた温度センサおよび圧力センサを用いて、熱侵入を模擬したヒータを加熱し、液体窒素が流動する際の温度・圧力変動を計測した。温度測定により、熱伝達率と流量の関係を明らかにすることができた。管内の流動状態の変化により熱伝達特性が変わることを確認できた。また、圧力測定より、約200 Hzにピーク周波数をもつ振動を伴って流動していることが分かった。凍結外科療法で用いるクライオプローブは、プローブ先端の径が微小なものほど、施術の成功率も上昇し、様々な位置・形状の患部への適用も可能となる。機器の小型化のためには、プローブ内のサブミリオーダの狭小流路(マイクロチャネル)内の流体挙動の把握・制御が重要となる。さらに、プローブに断熱槽を設ける必要もあるため、小型化のための画期的な構造を考案する必要もある。本研究では、サブミクロンオーダの狭小流路も流動できる超流動ヘリウム(He II)を用い、He IIの持つ熱機械効果を利用した効率的な医療用伝熱機器の機構を開発する。今年度はクライオプローブを模擬した、マイクロチャネルの製作を行い、マイクロチャネルにおける極低温流体の伝熱特性を明らかにした。極低温流体として、液体窒素を用いての実験を実施した。チャネルは二重円管構造とし、プローブへの熱侵入を模擬するために、断熱材に埋め込んだ銅ブロックヒータを用いた。二重円間の内管の内径はφ1.75、外管の内径はφ5、φ10、φ15とした。液体窒素の流動については、断熱を施した耐圧容器に液体窒素を充填し、耐圧容器を昇圧することで圧送する方式を用いた。今回製作した内径の流路では、液体窒素が問題なく流動することが確認できた。計測は、流路内の3点の温度計測と、外管の管壁近傍における圧力変動の計測を行った。計測結果より、流路内に温度分布が発生していることが分かった。また、圧力変動に関しては、液体窒素の流量の条件によっては、流動状態が間欠的になり、それに対応した圧力変動も計測された。得られた温度計測結果から、熱伝達率を算出したところ、流量の増加とともに熱伝達率は上昇するが、気液二相状態になると、熱伝達率の傾向が変わることが確認できた。平成26年度は、クライオプローブを模擬した、同心二重円管構造の流路を用いて、液体窒素を流動させた場合の伝熱・流動特性を明らかにした。特に、流路の断面積が狭小となった場合に発生する、周期的な圧力変動と伝熱特性との関係について考察を行った。当初、つくば市の高エネルギー加速器研究機構内で、液体ヘリウムによる実験を計画していたが、実験期間の調整が難しかったため、秋田高専内での、液体窒素を用いた実験に焦点を当て、極低温流体が狭小流路を流動する際の、伝熱・流動特性を明らかにした。本実験装置では、液体窒素流動時に、圧力変動測定を実施した。その圧力データに高速フーリエ変換(FFT)解析を行い、液体窒素流動時の圧力振動について明らかにした。結果としては、流量が比較的低く、流路内の状態が気液二相流の場合は、約180 Hzに圧力振動のピークが観測された。一方、流量が高くなり、液体窒素単相の流れになると、気液二相流で観測された圧力振動のピークは消失した。よって、この180 Hzの振動は、気泡の発生に起因するものであることが分かった。これらの圧力振動の結果と熱伝達率の傾向を比較すると、圧力変動のピークの有無と熱伝達率の変化に相関があることを確認できた。また、外部からの熱侵入の有無による変化については、熱侵入を模擬した場合では、圧力変動が断続的に大きくなる時間が長くなることが分かった。流路に侵入した熱が液体窒素を蒸発させ、その際の挙動が圧力変動の計測結果に表れたことが確認できた。低温工学マイクロチャネルの製作は実施し、液体窒素が流動する際の伝熱特性を計測することはできた。しかし、本研究の目的は、超流動ヘリウムが流動する場合の伝熱特性を明らかにすることにあるので、初年度に予定していた、超流動ヘリウムによる実験は、次年度に持ち越すことになった。今後は、超流動ヘリウムを用いて実験を実施する予定である。また、今年度製作したチャネルでは、液体窒素が問題なく流動することを確認できたので、次年度は、より内径を小さくした流路を用意して、同様の実験を実施する予定である。また、人体からの発熱量を模擬した加熱条件で計測を行い、実用の熱負荷に対応できるかの検討も行う。多孔質材を用いる影響については、液体窒素中でも毛細管効果による伝熱特性の促進が期待できる。

液体窒素等の通常の粘性流体と超流動ヘリウムの伝熱特性の相違について、多孔質材を設置した場合の影響について明らかにする予定である。
非線形シグマ模型による量子スピン系の研究

反強磁性的量子スピン系では,強い量子ゆらぎがはたらくとき,スピン秩序が形成されず基底状態が無秩序状態となることがある.このときスピンの励起には有限のエネルギー,すなわちスピン・ギャップが必要となる.どのような量子スピン系においてどのような無秩序状態が実現するかを,新しい非線形シグマ模型の方法を定式化することによって研究した.特に,正方格子上の量子ハイゼンベルク模型(J1-J2模型)に対して非線形シグマ模型の方法の定式化を完成させた.この定式化は,古典解が反強磁性秩序を持つ量子スピン系であれば他の2次元格子の場合にも,拡張によって基本的には適用可能である.正方格子に近い異方的な三角格子に対して定式化をおこなって,無秩序相の性格を調べた.異方的三角格子ではパラメータの値によって異なった無秩序相が形成される可能性があり,これらを判別できるか,正方格子に生ずる無秩序相と同じ性格のものかどうかが問題である.ここでは,あるパラメータ領域の無秩序相が,正方格子の場合の無秩序相と連続しており,基本的には同じものであることが解った.一方,異方性のない三角格子などのようにフラストレーションが強く,古典解が120度構造などであるような2次元量子スピン系への拡張は容易ではない.古典解が反強磁性秩序とは限らない一般的な2次元系にも適用できるように,非線形シグマ模型を定式化することを目指した.そのため,これまでの定式化を詳細に検討し,問題点の抽出と分析を行った。一般的な定式化に向けていくつかの試みを行った.1次元量子スピン系に対する非線形シグマ模型の方法に関しては,側鎖がある場合に定式化を拡張した.側鎖によってハルデイン・ギャップが生じる条件が影響を受けることが解った.反強磁性的量子スピン系では,強い量子ゆらぎがはたらくとき,スピン秩序が形成されず基底状態が無秩序状態となることがある.このときスピンの励起には有限のエネルギー,すなわちスピン・ギャップが必要となる.どのような量子スピン系においてどのような無秩序状態が実現するかを,新しい非線形シグマ模型の方法を定式化することによって研究した.特に,正方格子上の量子ハイゼンベルク模型(J1-J2模型)に対して非線形シグマ模型の方法の定式化を完成させた.この定式化は,古典解が反強磁性秩序を持つ量子スピン系であれば他の2次元格子の場合にも,拡張によって基本的には適用可能である.正方格子に近い異方的な三角格子に対して定式化をおこなって,無秩序相の性格を調べた.異方的三角格子ではパラメータの値によって異なった無秩序相が形成される可能性があり,これらを判別できるか,正方格子に生ずる無秩序相と同じ性格のものかどうかが問題である.ここでは,あるパラメータ領域の無秩序相が,正方格子の場合の無秩序相と連続しており,基本的には同じものであることが解った.一方,異方性のない三角格子などのようにフラストレーションが強く,古典解が120度構造などであるような2次元量子スピン系への拡張は容易ではない.古典解が反強磁性秩序とは限らない一般的な2次元系にも適用できるように,非線形シグマ模型を定式化することを目指した.そのため,これまでの定式化を詳細に検討し,問題点の抽出と分析を行った。一般的な定式化に向けていくつかの試みを行った.1次元量子スピン系に対する非線形シグマ模型の方法に関しては,側鎖がある場合に定式化を拡張した.側鎖によってハルデイン・ギャップが生じる条件が影響を受けることが解った.量子スピン系の無秩序状態はどのような条件のときに実現するのか.いろいろな無秩序状態はどのように異なるのか.無秩序状態からのスピン励起の種類と性質はどうか.これらの疑問に答えて,量子スピン系における無秩序状態の統一的な理解を得ることを目的として,非線形シグマ模型の方法を改良・発展させ,広い範囲の量子スピン系に適用できるように研究を開始した.まず,従来の1次元と2次元の場合の非線形シグマ模型の方法を分析して再検討を行った.この方法の適用限界と拡張の端緒を明確にするためである.1次元量子スピン系に対する非線形シグマ模型に関しては,すでに著者による改良と一般化がなされている.しかし,それでもいくつかの制限が付いていたが,これをどの程度ゆるめることができるか,あるいは撤廃することができるかを検討した.また,より一般的な1次元系への拡張可能性も検討した.2次元量子スピン系に関しては,旧来の非線形シグマ模型の手法しかなかったが,これをを詳しく分析して,問題点を明確にした.これより具体的な改良点を見いだして,新しい2次元の非線形シグマ模型の方法の定式化が可能であるという結論を得た.具体的な改良と定式化は,1次元よりも2次元の非線形シグマ模型の方法に関して先行して実行した.この定式化によってフラストレーションとプラケット型のひずみを同時に考慮して,両者があるときの相図を解析的に求めることができた.これより,両者による無秩序状態の違いを検討できるようになった.反強磁性的量子スピン系では,強い量子ゆらぎがはたらくとき,スピン秩序が形成されず基底状態が無秩序状態となることがある.このときスピンの励起には有限のエネルギー,すなわちスピン・ギャップが必要となる.どのような量子スピン系においてどのような無秩序状態が実現するかを解明することが本研究の主要なテーマである.

本年度は主に正方格子上で次近接まで交換相互作用のある量子スピン系を表すJ1-J2模型の無秩序状態の特徴を解析した.この模型の無秩序状態の起源は最近接相互作用と次近接相互作用の間のフラストレーションによって量子ゆらぎが増強されることにある.したがって,フラストレーションがなく交換相互作用の空間的な疎密によって形成される無秩序状態と同種のものなのかが問題である.従来から開発してきた量子スピン系に対する非線形シグマ模型の方法を,J1-J2模型に適用できるように発展させることができ,これを用いてその無秩序状態の特徴を解明した.この非線形シグマ模型の方法の定式化は従来と異なり,低エネルギーのすべての自由度を取り込んでいることを保証する.この定式化によってフラストレーションとブラケット型のひずみを同時に考慮して,両者があるときの相図を解析的に求めた.この結果,J1-J2模型におけるフラストレーションに起因する無秩序状態は,フラストレーションなしの格子ひずみによる無秩序状態と連続的につながるブラケット状態であることが明らかになった.さらに,非線形シグマ模型の方法を三角格子上のスピン系にも適用できるよう,拡張の試みを行った.反強磁性的相互作用を持つ量子スピン系における無秩序状態の研究を継続して行った.昨年度は2次元正方格子上の量子ハイゼンベルク模型(J1-J2模型)に対する非線形シグマ模型の方法の定式化を完成させた.この定式化は,古典解が反強磁性秩序を持つ量子スピン系であれば他の2次元格子の場合にも,拡張によって基本的には適用可能である.本年度は,正方格子に近い異方的な三角格子に対して定式化をおこなって,無秩序相の性格を調べた.異方的三角格子ではパラメータの値によって異なった無秩序相が形成される可能性があり,これらを判別できるか,正方格子に生ずる無秩序相と同じ性格のものかどうかが問題である.ここでは,あるパラメータ領域の無秩序相が,正方格子の場合の無秩序相と連続しており,基本的には同じものであることが解った.一方,異方性のない三角格子などのようにフラストレーションが強く,古典解が120度構造などであるような2次元量子スピン系への拡張は容易ではない.本年度は,古典解が反強磁性秩序とは限らない一般的な2次元系にも適用できるように,非線形シグマ模型を定式化することを目指した.そのため,これまでの定式化を詳細に検討し,問題点の抽出と分析を行った.その結果,一般的な定式化に向けての道筋をほぼ明らかにすることができた.1次元量子スピン系に対する非線形シグマ模型の方法に関しては,側鎖がある場合に定式化を拡張した.側鎖によってハルデイン・ギャップが生じる条件が影響を受けることが解った.
T細胞受容体シグナル伝達に関わる新規シグナル伝達アダプター分子 "STAM" の役割

本研究では、我々がすでにサイトカイン共通受容体γC鎖に会合するJak3チロシンキナーゼによってリン酸化を受ける新規分子として同定単離した「STAM」の機能について解析した。STAMはJak3やJak2チロシンキナーゼに直接会合し、IL-2やGM-CSFによる細胞増殖ならびにc-myc発現誘導への細胞内ジグナル伝達において重要な役割を担っていることが分かった。さらに、STAMはTCRシグナル伝達に必須な分子であるSLP-76にも会合することを証明した。さらに、STAMには新規分子であるAMSHが会合し、AMSHにはGrb2ファミリーの新たな分子であるGrf40が会合することが分かった。Grf40もまたSLP-76やLATに会合し、TCRシグナル伝達に重要に関わっていることが示唆された。これらの結果は、STAMを介するシグナル伝達経路におけるサイトカインとTCRのクロストークの存在を示唆ものである。T細胞活性化には特異的抗原によるT細胞受容体(TCR)を介したシグナル伝達およびCD28等のT細胞表面抗原を介するシグナル伝達が必須である。これらの各シグナル伝達にはチロシンキナーゼが関与することが明らかとなっているが、その基質となり細胞増殖にいたる経路には不明な点も多い。我々はチロシンキナーゼの基質となり、IL-2,GM-CSFを初めとするサイトカインシグナル伝達に関与し、c-myc誘導および細胞増殖に必須な新規アダプター分子STAMを同定した。本研究ではTCRを介するシグナル伝達におけるSTAMの関与を検討した。ヒトT細胞株Jurkatを抗CD3単クロン抗体OKT3でインキュベートしたのち、2次抗体で架橋刺激を行い刺激前後の細胞を可溶化した後、抗STAM単クロン抗体TUS-1で免疫沈降しチロシンリン酸化を検討した。その結果、TCR刺激後STAMの強いチロシンリン酸化が観察された。STAMのチロシンリン酸化の経時的変化では少なくとも5分後からリン酸化が認められた。すでにJak3とJak2がSTAMに会合することが明らかとなっており、TCR刺激後これらのキナーゼがチロシンリン酸化することがわかった。さらに、COS7細胞を用いた強制発現系では、過剰発現下ではSrcファミリーおよびZAP-70によってもSTAMがチロシンリン酸化することが示唆された。一方でTCR刺激によるIL-2プロモーターの活性化にSTAMがどのように関与するかを、野生型およびSTAMの変異体を強制発現させた系で解析したところ、野生型STAMはIL-2プロモーターの強い活性化を示したが、SH3領域欠損STAMはこの反応が認められなかった。以上より、TCRを介したシグナル伝達にSTAMが関与し、シグナル伝達にはSH3領域が必須であることが分かった。我々はサイトカイン受容体の下流において、Jak2やJak3チロシンキナーゼによってリン酸化を受け、細胞内シグナル伝達に関与する機能分子“STAM"を単離していたが、このSTAM分子がT細胞受容体を介する細胞内シグナル伝達にも関与する可能性を指摘した。すなわち、野生株STAMを強制発現するとTCR刺激によるIL-2発現が亢進し、SH3領域欠損STAM変異体では亢進がみられないことを明らかにした。今回、STAMのSH3領域に会合する新たな分子“AMSH"を単離し、さらにAMSHに会合する新たなGrb2ファミリー分子を単離した。この分子は分子量40kDaで、Grb2と同様にSLP76やLATと会合することからGrf40と名付けた。Grf40はGrb2よりも強くSLP76やLATに会合し、SH2領域欠損Grf40分子を過剰発現すると、TCRによるIL-2発現が抑制された。この抑制はSH2領域欠損Grb2分子よりも強いことが分かった。SLP76やLATは共に、TCRシグナル伝達に必須な機能分子であることが知られている。従来、これらの分子はGrb2と会合することによって、機能すると考えられていたが、本研究から、Grb2よりもGrf40がより重要である可能性が示唆された。
PPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物給与による肉質制御技術の創成

筋線維には速筋タイプと遅筋タイプが存在し、その組成比は肉質にも影響を与える。核内受容体PPARδの活性化は遅筋タイプを増加することが知られていたため、PPARδの活性化を通して遅筋タイプを増加する技術が開発できると着想した。我々はキノコの一種のユキレイタケおよびその菌床に強いPPARδアゴニスト活性を見出した。ユキレイタケ菌床を飼料に添加した結果、マウスで骨格筋PPARδ活性化が誘導され、ブタでも似た傾向が観察された。これらのエタノール抽出物は腹腔内投与では活性が認められたが、経口投与では活性が失われた。従って消化・吸収で活性が低下する成分であるということが示唆された。本研究ではPPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物(食用にされない葉や花などの廃棄部位)給与によってブタの肉質の向上が可能か、細胞実験とモデル動物で検討した後、最終的にブタを用いて検証することを目的とする。PPARδ活性化は遅筋タイプ筋線維の増加を誘導することが知られ、遅筋タイプが多い食肉は優れた栄養特性、理化学的特性、食味性を有すると言われる。従って、PPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物をブタに与えれば、骨格筋の遅筋タイプが増加し、食肉の栄養特性と食味性を改善することができると着想した。平成26年度は高PPARδアゴニスト活性素材の探索を中心に検討を行い、結果、ヤマブシタケ人工栽培後の廃菌床、ユキレイタケ人工栽培後の廃菌床、ミカン柱頭、ミカン花弁、トマト葉の各エタノール抽出物にPPARδアゴニスト活性が見出だされた。次に、材料の入手が容易であったユキレイタケ菌床に着目し、検討を進めた。ユキレイタケ菌床5%添加食を24時間与えたマウス長趾伸筋では、PPARδ標的遺伝子であるPDK4およびUCP3のmRNA発現量が有意に増加した。ユキレイタケ菌床1%もしくは10%添加食を24時間与えたブタ胸最長筋においては、PDK4およびUCP3の増加傾向が見られた。これらの結果からマウスおよびブタでは、ユキレイタケ菌床の摂取は骨格筋のPPARδを活性化させることが示唆された。以上の結果から、ユキレイタケ菌床を家畜飼料に添加すれば骨格筋のPPARδを活性化でき、遅筋タイプを増加させることが期待される。平成27年度は高PPARδアゴニスト活性素材候補であるユキレイタケおよびその人工栽培菌床に着目し、検討を進めた。まずはユキレイタケ菌床のマウスにおける長期投与試験を実施した。5%ユキレイタケ菌床添加食を8週間マウスに与え、骨格筋の筋線維タイプに関わる因子の解析を実施した。しかしながら、5%ユキレイタケ菌床添加食によって、マウスの筋線維タイプに関わる因子に有意な変化は見られなかった。この素材には至適な投与量があると予測し、マウスを用いて、極低濃度から高濃度までのユキレイタケ菌床配合食の24時間自由摂食後、および種々の濃度の菌床エタノール抽出物を、経口投与6時間後に長趾伸筋を摘出し、PPARδ標的遺伝子であるPDK4, UCP3, ANGPTL4のmRNA発現量の増加を調べた。その結果、発現量の増加ピークは特定の濃度で観察されたが、高濃度ではこれら遺伝子の発現増加は抑制されることが分かった。今後は活性成分の抽出と同定を行い、精製化合物投与による影響を検討予定でいる。PPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物であるユキレイタケ菌床の解析がかなり進展したため。平成28年度は高PPARδアゴニスト活性素材候補であるユキレイタケおよびその人工栽培菌床に着目し、さらに検討を進めた。まず分画物のPPARδアゴニスト活性を効率的に測定するために、PPAR応答配列の下流にルシフェラーゼ遺伝子が発現する組換えプラスミドをC2C12筋芽細胞に導入し、ルシフェラーゼの発光強度から活性を測定できる系を確立した。

さらに78週齢の雄性C57BL/6Jマウスにユキレイタケおよびその人工栽培菌床のエタノール抽出物を401000 mg/kg体重の範囲で腹腔内投与あるいは経口投与を行い、6時間後に長趾伸筋およびヒラメ筋を摘出し、PPARδ標的遺伝子(PDK4、UCP3、Angptl4)の発現量を調べた。抽出物の腹腔内投与においてはPPARδ標的遺伝子の発現増加が見られたが、経口投与においてはその増加は見られなかった。以上より、ユキレイタケの子実体および菌床にはPPARδ活性化成分が存在し、その成分は生体内でも作用するが、生物が消化・吸収を行う過程で構造が変化し、活性が低下するということが示唆された。農業系副産物であるユキレイタケの子実体および菌床のPPARδアゴニスト活性を確認できたとともに、その活性が投与経路で異なる事を見出したため。本研究ではPPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物(食用にされない葉や花などの廃棄部位)給与によってブタの肉質の向上が可能か、細胞実験とモデル動物で検討した後、最終的にブタを用いて検証することを目的とする。PPARδ活性化は遅筋タイプ筋線維の増加を誘導することが知られ、遅筋タイプが多い食肉は優れた栄養特性、理化学的特性、食味性を有すると言われる。従って、PPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物をブタに与えれば、骨格筋の遅筋タイプが増加し、食肉の栄養特性と食味性を改善することができると着想した。平成28年度までの検討でユキレイタケの子実体および菌床にはPPARδ活性化成分が存在するが、消化・吸収過程で失活することが分かった。そこで平成29年度は別の別の候補素材を集め、凍結乾燥まで行った。一方、運動はPPARδの活性化を誘導し、遅筋タイプ筋線維の増加を誘導する事が分かっているため、運動(放牧飼育)がブタの遅筋タイプの増加と肉質の変化を生じさせるか検討を行った。大ヨークシャー種の豚を放牧区と安静区に分け、放牧区は出荷前の32日間、毎日6時間の放牧飼育を行った。心拍数から算出した運動強度は安静区で約35%HRmax、運動区の放牧中は約50%HRmaxで、放牧は低強度の持久的な運動に相当すると考えられた。運動区の胸最長筋では遅筋タイプのMyHC1が有意に増加し、速筋タイプのMyHC2(2A+2X)が有意に減少した。運動区の胸最長筋で肉組織の遠心保水性が増加傾向を示した。また運動区の胸最長筋で加熱後の剪断力価が有意に増加した。官能試験の結果、放牧区のロース肉では「肉の味の強さ」「口の中の香り」の項目で有意な高値を示した。以上より、ブタで低強度の運動を出荷前に1か月間負荷すると遅筋タイプの筋線維割合が増加し、硬さが増すものの、保水性や食味性が向上することが示唆された。筋線維には速筋タイプと遅筋タイプが存在し、その組成比は肉質にも影響を与える。核内受容体PPARδの活性化は遅筋タイプを増加することが知られていたため、PPARδの活性化を通して遅筋タイプを増加する技術が開発できると着想した。我々はキノコの一種のユキレイタケおよびその菌床に強いPPARδアゴニスト活性を見出した。ユキレイタケ菌床を飼料に添加した結果、マウスで骨格筋PPARδ活性化が誘導され、ブタでも似た傾向が観察された。これらのエタノール抽出物は腹腔内投与では活性が認められたが、経口投与では活性が失われた。従って消化・吸収で活性が低下する成分であるということが示唆された。PPARδアゴニスト活性を有する農業系副産物のスクリーニングの結果、キノコの一種ユキレイタケおよびその廃菌床から高い活性を見いだすことに成功をしたから。
ナチュラルキラー細胞の分化におけるFcR,KAR,gp49の役割に関する研究

ナチュラルキラー(NK)細胞の分化と機能獲得に関してはその多くが未だ謎に包まれている.NK細胞はヒト末梢血中に5%程度存在し,前感作なしに異種細胞や自己の異常細胞を破壊する,いわゆる自然免疫の一翼を担う細胞である.本研究の目的は,KARの活性化シグナル伝達を司るKARAP分子の欠損マウス,機能未知なgp49分子欠損マウス,そしてFcRg鎖欠損マウスにおけるNK細胞の分化状態および標的細胞破壊機能を調査し,KAR分子群,FcR分子群,gp49分子群とNK細胞の分化との関係を解明する.本年度はgp49B欠損マウス,KARAP欠損マウスの作製を完了し,解析を開始した.また各種FcR欠損マウスにおける胎児胸腺中のNK細胞とT細胞の分化について,胎児胸腺培養系を構築し,FcRに対する抗体を添加した際のNK細胞とT細胞の分化の変化を追跡できるようになった.FcRがNK細胞の分化に影響を及ぼしていることを示唆するデータが得られた.gp49B欠損マウスについてもこの培養系を応用し,興味深い知見を得た.ナチュラルキラー(NK)細胞の分化と機能獲得に関してはその多くが未だ謎に包まれている.NK細胞はヒト末梢血中に5%程度存在し,前感作なしに異種細胞や自己の異常細胞を破壊する,いわゆる自然免疫の一翼を担う細胞である.本研究の目的は,KARの活性化シグナル伝達を司るKARAP分子の欠損マウス,機能未知なgp49分子欠損マウス,そしてFcRg鎖欠損マウスにおけるNK細胞の分化状態および標的細胞破壊機能を調査し,KAR分子群,FcR分子群,gp49分子群とNK細胞の分化との関係を解明する.本年度はgp49B欠損マウス,KARAP欠損マウスの作製を完了し,解析を開始した.また各種FcR欠損マウスにおける胎児胸腺中のNK細胞とT細胞の分化について,胎児胸腺培養系を構築し,FcRに対する抗体を添加した際のNK細胞とT細胞の分化の変化を追跡できるようになった.FcRがNK細胞の分化に影響を及ぼしていることを示唆するデータが得られた.gp49B欠損マウスについてもこの培養系を応用し,興味深い知見を得た.
低濃度フッ化物による間葉系幹細胞老化の分子機構の解明

3ヶ月齢および加齢モデルの15ヶ月齢の老化促進モデルマウス(senescence accelerated mouse, SAM)マウスを使用し、トータルRNAを大腿骨組織から分離した。それらの遺伝子発現およびmiRNA発現所見は、GeneSpringおよびIngenuity Pathways Analysisと組み合わせ、DNAマイクロアレイおよびmiRNAアレイを用いて解析した。遺伝子オントロジー(GO)分析は、miRNAを標的とした遺伝子の極めて重要な転写関連プロセスと細胞内シグナル伝達を組み込んでいることを明らかにした。シグナル経路で、cAMP媒介シグナル、上皮接着結合シグナル、タイトジャンクションシグナル、ギャップジャンクションシグナル、カルシウムシグナル、およびサーチュインシグナルが骨老化に関与していることも明らかにした。RT-qPCRによりさらに解析したところ、加齢の制御転写因子が、miR-223-3p、miR-744-5p、miR-3103-5p、miR-4723-5pおよびmiR-6825-5pの制御に関与していることを示した。多数の組み合わせが識別されたmRNAとmiRNAの網羅的解析は、miRNAの異常発現は骨加齢において重要であることを示唆した。そして、その機能は関連シグナル上の特定遺伝子の転写を通して誘導されることが考えられた。低濃度Fを添加した増殖中の細胞はトリプシン処理し分離され、DNAと細胞周期の解析はFACS解析にて評価した。間葉系幹細胞の細胞老化の評価にはSA-βgal染色を用いた。倒立顕微鏡にて間葉系幹細胞を確認した。低濃度Fを添加した増殖中の間葉系幹細胞と老化間葉系幹細胞からRNA画分を回収し、GeneSpring GX softwareを用いてデータ解析を行なった。マイクロアレイデータ分析の促進や、特異遺伝子の発現量の変化を関連づけるIPA解析を行なった。計画書に沿った進行を行っているが、対象となる低濃度Fを添加した増殖中の間葉系幹細胞と老化間葉系幹細胞の作成やその系の立ち上げ等に時間を要しているため、計画書以上の進展はない。これら問題点は、これまでの各種検討により徐々に解決されていくと考えられるため、今後は更なる研究の進展が期待される。また、並行して進めている老化関連β-Galactosidase(SA-βgal)染色による間葉系幹細胞老化の評価においても、系の立ち上げ、検討に大きく時間を要しているが、こちらもこれまで検討を基に、今後研究が進展すると期待されている。以上のことから、現在までの進捗状況は、計画書を大きく超えて進展するものではないものの、おおむね順調に進展しているものと判断している。本年度は、低濃度フッ化物の骨芽細胞および破骨細胞における分化誘導や活性化に及ぼす影響の検討を行うことが目標であった。マウスの大腿骨から採取した骨髄細胞を、低濃度フッ化物添加の有無による影響を解析した。骨芽細胞の活性化は、1型コラーゲン、Alkaline Phosphatase等の分化マーカーにて、また、破骨細胞分化制御因子としてmacrophage colony-stimulating factor等発現をリアルタイムPCR法より評価できた。また、破骨細胞活性化はウェスタンブロッティング法より評価し、低濃度フッ化物の骨芽細胞および破骨細胞における分化誘導や活性化に及ぼす影響を明らかにできた。低濃度フッ化物の骨芽細胞および破骨細胞における分化誘導や活性化に及ぼす影響の検討今後は低濃度フッ化物摂取の骨質に及ぼす影響の検討を行う。実験動物より得られた歯槽骨における骨質の解析は、原子吸光法、Fイオン電極法を用いたミネラル(Ca、F)の定量分析を行う。またマイクロCTによる骨形態計測学的パラメーター(骨梁幅、骨梁間距離、骨梁数、骨量)を評価する予定である。
ベージアンネットワークを用いた肥満関連因子の解析と肥満予防の教育プログラムの開発

体型に影響を与える因子を検討した。近畿圏内の大学教職員と高齢者33名を対象とし、肥満関連遺伝子は成人期の体形に影響を与えていないことを示した。次に近畿圏内の幼稚園の保護者170名を対象とし、子どものやせの原因を親のやせの認識や親の心理面から因果関係解析を用いて明らかにした。ベイジアンネットワークによる因果関係解析の結果、子どものカウプ指数の原因は子供の体型を親がやせていると思う強さや、親の食べ物に対する常習性の強さであった。子供の体型を親がやせていると思う強さの原因は親自身のボディーイメージであった。子どものカウプ指数は子どもの体型を親がやせていると思う強さとの間に負の相関関係が認められ、食べ物に対する常習性の強さとの間には正の相関関係が認められた。親自身のボディーイメージでの原因は公的自己意識であり、その原因は醜形恐怖であった。相関の結果を合わせると、子どものやせの原因は、親自身のボディーイメージ、食べ物に対する常習性が弱いこと、公的自己意識が高いこと、醜形恐怖が高いことであると推測できる。親に対して認知行動療法によって公的自己意識と醜形恐怖を低くすること、あるいは健康な体型に関する教育によって理想のBMIを上昇させることで、子どものやせを防ぐ可能性がある。幼児期のやせは子供の成人期の肥満を増やし、将来の生活習慣病の罹患率を上昇させると指摘されている。子どものやせを防ぐことにより、将来の生活習慣病の罹患率を減少させることが可能となる。課題初年度である平成28年度には、肥満関連遺伝子が体形に与える影響を評価し、その上で肥満関連遺伝子と食嗜好や食行動との間の関係も明らかにすることを目的とした。また、幼児期の食嗜好や食行動が成人期の食嗜好や食行動を制御している可能性がこれまでの研究から示唆されている。そこで、食嗜好や食行動の各項目が幼児期と成人期との間に相関があるかを明らかにすることも目的とした。近畿圏内の大学教職員22名と高齢者11名の計33名を対象とした。食嗜好・生活習慣については自記式質問調査を行なった。肥満関連遺伝子については遺伝子検査キット(株式会社タカラバイオ)を用いた。食事調査にはFFQg(建帛社)を用い、身体測定はInbody(Biospace社製)を用いた。BMIと体重については、肥満関連遺伝子による影響は認められなかった(p>0.1)。β3アドレナリン受容体の多型を有していると、幼児期に嗜好飲料あるいはファストフードの嗜好が低下した(p<0.05)。また、これらの多型を有していると、成人期に摂取エネルギー量あるいは油脂類の摂取量が低下した(p<0.03)。油っこいもの、麺類、ファストフード、スナック菓子、嗜好飲料、肉、魚に対する嗜好については幼児期と成人期の間で正の相関が認められた(p<0.05、偏相関)。早食いとよく噛む習慣についても幼児期と成人期の間で正の相関が認められた(p<0.05)。β3アドレナリン受容体等の肥満関連遺伝子は成人期の体形に影響を与えていないことが示された。その原因は、幼児期に嗜好飲料あるいはファストフードの嗜好が低く、成人期に摂取エネルギー量が低いことが原因である可能性がある。相関の結果から、油っこいもの、麺類、ファストフード、スナック菓子、嗜好飲料、肉、魚に対する嗜好および、早食いとよく噛む習慣については、幼児期に教育することが重要である可能性が示唆された。幼児期の食習慣は、成人期以降の食習慣および食嗜好を強力に制御しているため、幼児期の食習慣が肥満に与える影響が大きいと考えている。しかし、肥満になる要因は、遺伝子型や、心理状態、養育環境が関わっている可能性も指摘されている。平成28年度はβ3アドレナリン受容体等の肥満関連遺伝子は成人期の体形に影響を与えていないことを示した。その原因は、幼児期の食嗜好や成人期に摂取エネルギー量が原因である可能性がある。尚、幼児期の食嗜好の成人期のBMIに対する影響について完遂し投稿予定である。平成28年度は肥満関連遺伝子は成人期の体形に影響を与えていないことを成人を対象とした調査で示した(堀内、未発表)。その原因はβ3アドレナリン受容体の多型では、幼児期の嗜好飲料とファストフードの嗜好、成人期の肉の嗜好、成人期の摂取エネルギーや油脂類の摂取量が減少したことによると考えられた。また、脱共タンパク質の多型で、幼児期の食事の時の噛む回数、成人期の1食の咀嚼時間が減少したことによると考えられた。一方で、人の持つボディーイメージとそれに伴うウェイト・マネージメント行動は肉体的、精神的な健康状態を把握するために重要な因子と考えられている。そのため、H29年は親自身のボディーイメージや親の心理的要因がその子どもの体形に及ぼす影響を検討した。近畿圏内の幼稚園の保護者170名を対象とし、自記式質問票調査を行った。子どもの今の体型の認識、今の体型の認識、食べ物への執着、醜形恐怖、体重制限に関わる拘束指標は現-理想カウプ指数に影響を与えた。親の現在と理想のBMIの差は子どもの今の体型の認識に影響を与えた。一方で、親が思う子どもの今の体型の認識は子どものカウプ指数と現在と理想のカウプ指数の差に影響を与えた。また親の食べ物への執着は子どものカウプ指数に影響を与えた。

教育歴、等価所得、親の現在と理想のBMIの差はBMIに影響を与えた。親の食べ物への執着心が子どもの体型に影響を及ぼすことが推測される。親のボディーイメージや親の心理的要因が子どもの体型に影響を及ぼすことが示唆された。平成28年度は肥満関連遺伝子は成人期の体形に影響を与えていないことを成人を対象とした昨年の調査で示した(堀内、未発表)。体型に対する認識が介在し、エネルギー摂取を調節した可能性が示唆された。平成29年度は研究では幼児を対象にボディーイメージと心理的要因が体形に及ぼす影響を及ぼすことを明らかにした。平成30年度は成人を対象として行う予定である。体型に影響を与える因子を検討した。近畿圏内の大学教職員と高齢者33名を対象とし、肥満関連遺伝子は成人期の体形に影響を与えていないことを示した。次に近畿圏内の幼稚園の保護者170名を対象とし、子どものやせの原因を親のやせの認識や親の心理面から因果関係解析を用いて明らかにした。ベイジアンネットワークによる因果関係解析の結果、子どものカウプ指数の原因は子供の体型を親がやせていると思う強さや、親の食べ物に対する常習性の強さであった。子供の体型を親がやせていると思う強さの原因は親自身のボディーイメージであった。子どものカウプ指数は子どもの体型を親がやせていると思う強さとの間に負の相関関係が認められ、食べ物に対する常習性の強さとの間には正の相関関係が認められた。親自身のボディーイメージでの原因は公的自己意識であり、その原因は醜形恐怖であった。相関の結果を合わせると、子どものやせの原因は、親自身のボディーイメージ、食べ物に対する常習性が弱いこと、公的自己意識が高いこと、醜形恐怖が高いことであると推測できる。親に対して認知行動療法によって公的自己意識と醜形恐怖を低くすること、あるいは健康な体型に関する教育によって理想のBMIを上昇させることで、子どものやせを防ぐ可能性がある。幼児期のやせは子供の成人期の肥満を増やし、将来の生活習慣病の罹患率を上昇させると指摘されている。子どものやせを防ぐことにより、将来の生活習慣病の罹患率を減少させることが可能となる。β3アドレナリン受容体多型が食嗜好や食行動に影響する要因については不明である。体形に対する認識が介在し、エネルギー摂取を調節する可能性がある。そこで体形に対する認識を明らかにするための調査について倫理審査を受けている最中である。平成30年度は成人を対象にボディーイメージや心理的要因が体形に及ぼす影響を及ぼすことを明らかにすることを目的とする。さらに無理なく体型をコントロールする方法を検討する。平成28年度予定していた調査対象者は50名であったが、実際は33名となったことにより、予定していた遺伝子調査、被験者謝金などの支出が減少した。調査校のご協力により、調査の事前準備が不要となり、結果報告も郵送になったことにより、旅費の支出が減少した。(理由)平成28年度に実施した遺伝子調査の結果より、平成29年度予定していた遺伝子調査が不要となり、遺伝子調査や被験者謝金などの支出が減少した。研究費で補ったため旅費の支出が減少した。(使用計画)平成30年度、当初の予算計画に追加し、結果の解析に必要な統計ソフトを購入予定である。今年度、当初の予算計画に追加し、結果の解析に必要な統計ソフトを購入予定である。
言語性幻聴を示す精神分裂病患者における背景音声言語の自動的処理過程の研究

MMN(ミスマッチ陰性電位)は、前注意的脳情報処理に関連する記憶過程を反映する。また統合失調症の前注意的処理障害はMMNに関連している。本研究では、時間統合窓Temporal Window of Integrationに反映される感覚記憶内部の逸脱検出感度の変化を明らかにし(2001,2002,2004)、その時間変化も明らかにした(2005)。時間統合と音凝効果との関係も報告した(2001,2003)。MMNに反映される知覚的認知反応は、ガンマ帯域脳反応に反映される認知反応とは異なる神経基盤を有することも示した(印刷中)。CNV(随伴陰性変動)も、覚醒水準などを反映する事象関連電位の重要な脳反応成分であるが、これらの半球間非対称性(2002)、注意散乱効果なども報告した(2004)。ヒバ油芳香暴露下におけるCNVとMMNを比較し、MMNが安定した脳反応であることを示した(2002,2001)。MMNには側頭部と前頭部の成分分離を報告してきたが(2000)、統合失調症では側頭部MMNが急性期で減衰し寛解期で回復し、前頭部MMNは病相に関わらず低振幅である事を見出した(2002,2002)。以上の発生源に関する所見をまとめ(2003)、言語性MMNに反映される知覚の相違を報告した(2003)。その上、N1,MMN,P3a成分ならびにRTを指標として、統合失調症における注意メカニズム障害を明らかにした(2003)。一方で、周波数統合と時間統合機能を統一する所見および概念を報告した(2003)。以上を踏まえて、統合失調症患者における背景音声言語の自動的処理過程の検討を行った結果、統合失調症患者においてはMMNの基盤にある感覚記憶の時間統合機能障害が存在することを報告した(2003)。以上の研究をまとめ、MMN研究の歴史も合わせて振り返った総説も発表した(2004,2003)。従って、現時点において本研究独自の成果の公表はできない。従って、現時点において本研究独自の成果の公表は行わない。今後、上記所見を踏まえてMMNを指標とした言語性幻聴を持つ統合失調症患者の研究報告を行っていく予定である。
慢性関節リウマチ関連HLAの新たな病因的役割の研究

国外の研究協力者の手を借りて、ヒトHLADRB^*0401を持つDR4トランスジェニックマウスを作成した。DR4は、いわゆるシェアード・エピトープを持ち、慢性関節リウマチ患者に多いHLAであるが、このマウスに、関節炎を含め特に病的な形質は認められなかった。このマウスの末梢T細胞リセプター(TCR)遺伝子レパトワの検討したところ、もとのバックグラウンドマウスと比べてTCRBVレパトワ、TCRBJレパトワともに異なっていた。そこで、レパトワ形成にシェアード・エピトープが重要な役割を果たしていることがわかった。次に、このマウスをHLADB4シェアード・エピトープ由来のペプチドで免疫したところ、当該ペプチドに対する抗体産生が認められ、シェアード・エピトープを持つ個体でも、シェアード・エピトープ由来ペプチドに対する寛容が成立していないことが見出された。さらに、この研究を発展させて、この末梢T細胞リセプターレパトワがいかなる遺伝因子によって決定されているかを検討するために、ヒト胸腺細胞のTCRレパトワ解析を行った。同一人から胸腺CD4-CD8-T細胞、胸腺CD4T細胞、胸腺CD8T細胞、末梢CD4T細胞、末梢CD8T細胞を分取し、それらのT細胞のTCRレパトワを比較した結果、レパトワ形成には、遺伝子再構成が重要な役割を演じるとともに、胸腺および末梢での抗原刺激がこれを修飾することが明らかとなった。今年度は、マウスαβT細胞TCRレパトワ解析法の開発した。すなわち、はじめにマウス末梢リンパ球からRNAを抽出しcDNAに変換し、cDNAの3'末端をオリゴdGテーリングした。そしてTCR遺伝子cDNAを5'末端をビオチン化したTCRBC領域特異的アンチセンス鎖プライマーとオリゴdGと相補的なアンカー・センス鎖プライマーないしBV特異的プライマーで増幅、このPCR産物をアビジンを共有結合させたELISAプレートのウエルに固相化した。プレートをアルカリで洗浄して、ビオチン化されたPCR産物アンチセンス鎖のみをプレート上に残し、標識TCRBVないしBJ遺伝子特異的なオリゴヌクレオチドプローブでハイブリダイゼーションを行い、洗浄後、peroxidase標識抗ディゴキシジェニン抗体と基質を加えて発色させた。得られたOD値をもとに各遺伝子の使用頻度を求めたところ、極めて再現性のよい解析法が確立された。次に、各種の近交系マウスを用いて、末梢TCRレパトワを比較した。近交系マウスとして用いたものは、MHC遺伝子のみが異なるマウスとMHC遺伝子のみが同じでその他の遺伝子は同じマウスである。この結果、1)遺伝的に同一のマウスは、極めて均一なレパトワを持ち、レパトワが強い遺伝支配の下にあることが証明された。さらに、2)各種の近交系マウスのレパトワの比較の結果、MHCの非MHCの遺伝支配があることが明らかにされた。
筋層非浸潤性膀胱癌の進展リスク予測と進展予防への糖鎖バイオロジカルアプローチ

当教室での糖鎖研究の結果、早期に転移を来す腎癌に発現する糖鎖抗原としてDSGb5を同定した。ついで特異的モノクローナル抗体5F3(抗DSGb5抗体)の作成に成功し、糖鎖抗原DSGb5は正常腎組織、腎癌組織のほかに膀胱、尿管でも発現していることを報告した。さらに臨床検体を用いたホルマリン固定パラフィン切片上でDSGb5を検出する免疫染色法を確立し、前立腺癌組織及び腎癌組織での糖鎖抗原DSGb5発現が脈管侵襲と相関することを突き止め、特に前立腺癌においてはGleason Gradeとは独立して予後不良な前立腺癌で発現が強く認められることを報告した。In vitroでの解析では、DSGb5がNK細胞の細胞障害活性にブレーキをかけて、免疫系を介して腎癌の悪性化に関与している知見を得、さらにDSGb5高発現状態では、細胞運動能が亢進していることが確認された。すなわち糖鎖抗原DSGb5は癌種を越えて運動・浸潤に関与していると推察された。本研究の目的は糖鎖生物学的観点から非筋層浸潤膀胱癌の進展メカニズムの解明、進展リスクを反映する糖鎖マーカーの確立である。当教室に保管してある300例を超える非筋層浸潤膀胱癌組織での糖鎖抗原DSGb5発現と臨床病理学的因子との関連性を詳細に解析し、膀胱癌の様々な状態によって糖鎖発現が異なっているのか、あるいは病勢の進行によって発現が変化するのか糖鎖発現の意義を検討し明らかにすべく検討中である表在性膀胱癌患者の臨床病理学的因子、再発、予後についてのデータベースを整備するのに時間を要している。膀胱癌に発現する糖鎖抗原DSGb5に対するモノクローナル抗体5F3を用いて、表在性膀胱癌のホルマリン固定パラフィンブロック切片に対する免疫染色行い、安定した再現性のある染色方法を検討中である。経尿道的膀胱腫瘍切除術を施行した、多数例の膀胱癌患者を対象として、DSGb5の発現と病理学的パラメーターとの関連や、再発、浸潤癌への進展など臨床像との関連について、詳細に検討していく。データベースの整備など費用負担が少なく、当初の予定使用額よりも使用額が少ないために次年度使用額が生じた。