hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
piRNA生合成に関わる細胞質構造体Yb body及びFlam bodyの解析

本研究では、piRNA生合成の場であるYb bodyとFlam bodyに局在するタンパク質の機能を解明することを目的として行った。その結果、Yb body構成因子であるVretとsoYbタンパク質は直接相互作用することで、相互にタンパク質の安定化を促していること、一方、Armiという別の因子については、Vretとの相互作用にRNAを必要とすることが分かった。さらに、Yb bodyで生合成されたpiRNAはその場でPiwiと結合し、その後核内輸送因子であるImportinαと結合することで核内へ輸送されることも明らかにした。piRNAは、生殖組織特異的に発現する小分子RNAで、PIWIタンパク質と結合してRISCを形成し、トランスポゾン等の遺伝子発現を抑制している。生殖組織におけるトランスポゾンの転移はゲノムの損傷を引き起こし、卵・精子形成不全や不稔を導く。piRNAは、一次経路と二次経路により産生される。本研究において使用したショウジョウバエ卵巣由来体細胞株OSCは、PIWIタンパク質の一つであるPiwiが関与する一次経路のみが発現している。OSCにおける一次経路では、Ybというタンパク質が中核となる細胞質顆粒体Yb bodyがpiRNAの生合成の場であることが分かっており、Yb bodyには、ArmiやVret、SoYbといったタンパク質が局在することが報告されている。しかし、VretやSoYb等の個々のタンパク質の詳細な機能は明らかとなっていない。当研究室において作成した抗Vretモノクローナル抗体を用いて免疫沈降を行うと、YbやArmi、Piwi、SoYbといった、既知のYb body構成因子が同定される。その為、Vretに着目し、Yb body構成因子同士の相互作用解析を行なった。まず抗Vret抗体を用いた免疫沈降を行なう際に、RNaseを処理することにより、前述のタンパク質間相互作用がRNAを介しているかどうかを確認した。その結果、VretとSoYbは、タンパク質同士で相互作用をしており、VretとArmiやYbはRNAを介していることが確認された。また、Vretをノックダウンした細胞において、SoYbが不安定化し、SoYbをノックダウンした細胞において、Vretが不安定化することも分かった。この結果により、SoYbとVretはお互いの安定性を高めることで、協調して機能していることが明らかとなった。当研究室において作成した抗Vretモノクローナル抗体を用いて免疫沈降を行うと、既知のYb body構成因子が同定されることが明らかとなっていた為、Vretに着目してYb body構成因子同士の相互作用を調べた。RNaseを用いた免疫沈降の結果、VretとSoYbは、タンパク質同士で相互作用をしている一方、VretとArmiやYbはRNAを介していることが分かった。また、VretやSoYbのノックダウン実験により、この2つのタンパク質は相互にタンパク質の安定化をしあっていることも明らかとなった。今後、VretとSoYbの更なる機能を解析することにより、本研究の目的であるpiRNAの生合成経路の解明に近づけると考える。しかし、もう一つの細胞質顆粒体であるFlam bodyの構成因子の探索については未だ不明なままである。その為、おおむね順調に進展していると評価した。piRNAは、生殖組織特異的に発現する小分子RNAで、PIWIタンパク質と結合することで、トランスポゾン等の遺伝子発現を抑制している。生殖組織におけるトランスポゾンの転移はゲノムの損傷を引き起こし、卵・精子形成不全や不稔を導くことが分かっている。piRNAは、一次経路とPing-pongとよばれる二次経路により、産生される。昨年度までの当研究室の研究により、VretとSoYbはタンパク質同士直接結合することで、相互に安定化していること、一方、VretとArmi、YbはRNAを介して相互作用していることを報告した。今年度は、VretとSoYb等のYb body構成因子の細胞内局在を免疫染色により確認することで、昨年度の結果と一致する結果を得た。さらに、YbやSoYbの持つドメインに着目し、ドメイン毎の変異体を作成することで、YbやSoYbがほかの因子と結合するのに必要なドメインを特定することができた。また、Yb bodyにより生合成されたpiRNAは、Yb bodyに局在する空のPiwiと結合し、piRNA-Piwi複合体を形成し、その後核内輸送因子であるImportinαと結合することで、核内へ移行することも明らかにした。

本年度の研究により、Yb bodyの構成因子であるVretとSoYbがお互いに安定化しあいながら協調して働いていることが明らかとなった。そのため、この2つの因子のさらなる機能を明らかにしていくことで、一次経路における新たな知見を得ることができると考えられる。VretとSoYbはともにTudor domainを持つことが分かっている。VretとSoYbの結合部位の解析やそれぞれのタンパク質に結合する新規結合因子を探すことにより、さらなる機能を明らかにすると考えられる。また、SoYbについては、Tudor domainに加えて、Helicase domainを有している。そのため、SoYbは何らかのRNAと結合していると考えられる。そこで、当研究室で作成した抗SoYbモノクローナル抗体を用いたCLIPを行い、SoYbに結合している、RNAを明らかにしていく。さらに、Flam body構成因子の探索も行う。piRNA生成に必須なヌクレアーゼであるZucをノックダウンした条件下では、Yb bodyとFlam bodyが重なる。この条件下では、Flam body構成因子とYb body構成因子の相互作用が凍結されている可能性が考えられる。そこで、Zucをノックダウンした状態で、抗Vret抗体を用いて免疫沈降を行なうことにより、Yb bodyの構成因子と共にFlam body構成因子を精製することを試みる。得られた新規タンパク質は質量分析に供し、同定する。Yb bodyとFlam bodyの構成因子を明らかにすることで、piRNA前駆体からどの様に成熟型piRNAが産生されるかを理解することを目標とする。分子生物学
電子活性部位を有する新規硫黄共重合体の創製に基づいた高性能硫黄二次電池の開発

本研究では、酸化還元活性かつ高伝導性を有する小分子により硫黄鎖を架橋するという応募者独自の発想に基づき、機能性と安定性を兼ね備えた新規硫黄系高分子材料(硫黄共重合体)の創製を行い、これを正極に用いることで、硫黄単体の理論容量に迫る実容量と高いサイクル安定性を有する二次電池を実現する。さらに、各種物理化学計測法を用いて、その電気化学反応挙動を明らかにし、硫黄共重合体のサイエンスを深化させる。
血管内視鏡を用いた心拍動下心房中隔欠損症手術法の基礎的研究

心房中隔欠損症の手術は胸骨正中切開または右開胸により、人工心肺装置を用いて心停止下または心室細動下に行われているのが一般的である。心房中隔欠損症の手術は比較的安全に行われているが、人工心肺装置を用いたことによる合併症も含めて手術危険率はゼロではない。また、他の心奇形等を合併し全身状態の不良な症例に対し、人工心肺装置を用いることは危険である。我々は人工心肺装置を用いずに心拍動下で心房中隔欠損症の手術を行うために、心臓内視鏡の開発、動物実験での応用を行った。1.血管内視鏡の改良血管内視鏡はバルーンで血流を一時的に遮断し、生理食塩水を注入することにより血管内を観察するものであるが、それを直接心臓内に挿入したところで血液により何も観察できないばかりか、生理食塩水の大量注入は心不全をひき起こすのみであった。そこで、従来の硬性鏡の先端にアダプターを付けることにより、他に特別な操作なしで心臓内を観察できるように改良した。2.心臓内の観察ビーグル犬を用いて、実際に心臓内を観察した。先ず、前胸壁に小切開を加え、心膜を切開すると右心房が観察される。右心耳に巾着縫合をかけ、同部より改良型内視鏡を挿入し、心臓内を観察した。心房中隔、卵円孔、冠静脈洞、三尖弁、腱索など右心系の構造が観察可能であった。また、この操作中に血行動態の変動は認められなかった。3.心房中隔欠損孔の閉鎖当初、カテーテルを利用して、心房中隔欠損孔の閉鎖を行うべく試みたが、カテーテルの開発に困難を極めた。そこで、クリップを用いることとした。実際の正常ビーグル大では心房中隔欠損孔は無く、そこで先ず、卵円孔の閉鎖をこのクリップを用いて試みたところ成功した。以上より、この改良型心内視鏡を用いることにより、侵襲を与えることなく右心系を観察することができた。ビーグル犬を用いた実験で、この改良型内視鏡による心腔内観察下で卵円孔を閉鎖することできたが、心房中隔欠損孔の閉鎖には、欠損孔の大きさや形態に個人差がること、時に脆弱な組織であることを考慮するならば、安全に容易にかつ確実に閉鎖できる手法の開発が必要である。2.心臓内の観察ビ-グル犬を用いて、実際に心臓内を観察した。以上より、現在まての成果としては、この改良型心内視鏡を用いることにより、侵襲を与えることなく右心系を観察することが実証された。今後は、この改良型心内視鏡を用いて、心房中隔欠損症における欠損孔閉鎖手術を試みる予定である。

以上より、この改良型心内視鏡を用いることにより、侵襲を与えることなく右心系を観察することができた。ビーグル犬を用いた実験で、この改良型内視鏡による心腔内観察下で卵円孔を閉鎖することできたが、心房中隔欠損孔の閉鎖には、欠損孔の大きさや形態に個人差がること、時に脆弱な組織であることを考慮するならば、安全に容易にかつ確実に閉鎖できる手法の開発が必要である。心房中隔欠損症の手術は胸骨正中切開または右開胸により、人工心肺装置を用いて心停止下または心室細動下に行われているのが一般的である。心房中隔欠損症の手術は比較的安全に行われているが、人工心肺装置を用いたことによる合併症も含めて手術危険率はゼロではない。また、他の心奇形等を合併し全身状態の不良な症例に対し、人工心肺装置を用いることは危険である。我々は人工心肺装置を用いずに心拍動下で心房中隔欠損症の手術を行うために、心臓内視鏡の開発、動物実験での応用を行った。1.血管内視鏡の改良血管内視鏡はバルーンで血流を一時的に遮断し、生理食塩水を注入することにより血管内を観察するものであるが、それを直接心臓内に挿入したところで血液により何も観察できないばかりか、生理食塩水の大量注入は心不全をひき起こすのみであった。そこで、従来の硬性鏡の先端にアダプターを付けることにより、他に特別な操作なしで心臓内を観察できるように改良した。2.心臓内の観察ビーグル犬を用いて、実際に心臓内を観察した。先ず、前胸壁に小切開を加え、心膜を切開すると右心房が観察される。右心耳に巾着縫合をかけ、同部より改良型内視鏡を挿入し、心臓内を観察した。心房中隔、卵円孔、冠静脈洞、三尖弁、腱索など右心系の構造が観察可能であった。また、この操作中に血行動態の変動は認められなかった。3.心房中隔欠損孔の閉鎖当初、カテーテルを利用して、心房中隔欠損孔の閉鎖を行うべく試みたが、カテーテルの開発に困難を極めた。そこで、クリップを用いることとした。実際の正常ビーグル犬では心房中隔欠損孔は無く、そこで先ず、卵円孔の閉鎖をこのクリップを用いて試みたところ成功した。ビーグル犬を用いた実験で、この改良型内視鏡による心腔内観察下で卵円孔を閉鎖することができたが、心房中隔欠損孔の閉鎖には、欠損孔の大きさや形態に個人差があること、時に脆弱な組織であることを考慮するならば、安全に容易にかつ確実に閉鎖できる手法の開発が必要である。
計算機シミュレーションによる剛体球系の固液界面の微視的構造および結晶成長の研究

剛体球系における固液相転移(アルダー転移)が、計算機シミュレーションによって示されたのは1957年のことである。しかし、アルダー転移に関して、未解決のことが多い。引力相互作用の存在しない剛体球系においては、界面は安定に存在しないのではないかという疑いもあった。他の系では、固液共存状態(平衡)や結晶成長(非平衡)の分子動力学(MD)シミュレーションが行われているが、剛体球系でそれらが行われ始めたのは、ごく最近のことである。特に、結晶成長に関してのMDシミュレーションは、研究代表者が行っているだけである。固液共存状態については、剛体球ポテンシャルの特異性にも関わらず、固液界面のプロファイルは、他の系と同様な滑らかなものが得られている。また、アルダー転移の存在自体は疑わなくとも、引力相互作用が存在しないため、凝集が起こらず、従って結晶成長のような現象は起こり得ないのではないかという直感的な見方もあった。今回の研究で、粒子が融液側から界面に流れ込むことによって結晶化が起こり、逆に、粒子が界面から融液側に流れ出すことにより融解が起こる様子が、明確に観察された。気液相転移には、引力相互作用が本質的であり、固液相転移には斥力相互作用が本質的であることは、従来から指摘されていた。斥力のみの系における固相・液相の存在だけでなく、固液相転移の動的性質までも再現することができた。非平衡共存状態の解析方法は確立さておらず、従って、購入した二台のコンピュータによってグラフィック表示を行い、それに基づいてMDの結果の解析を行った。
省エネ型・高効率内燃機関用噴射ノズルの実用開発と燃焼特性の改善

開発した多噴孔微粒化促進ノズルは、噴霧の拡がりがかなり大きく(約50°)、分裂長さが短く、噴霧粒径(ザウタ平均粒径)はかなり小さくなり(約10μm)、噴霧の微粒化特性が改善された。また、噴射流量が大幅に増加し(同一噴射差圧において約2.5倍)、流量特性が改善された。常温・高圧雰囲気下(300K,1.6Mpa)において、噴霧先端到達距離は短いが、噴霧の拡がりは格段に大きくなり(これまでの約3倍)、高分散噴霧が得られた。さらに、液体の動粘度によらず、噴霧の拡がりはかなり大きくなり、噴霧液滴は小さくなる良好な噴霧が得られた。実機ノズルの噴孔径を約10倍に拡大したノズルを製作し、大気圧雰囲気下に定常噴射し、噴射流量の増加と、噴霧の微粒化特性の向上に効果的なノズルの幾何学形状・寸法を決定した。(1)ノズルの噴孔入口部に曲率を設ける、(2)これまでに開発した微粒化促進ノズルの特徴である噴孔部とノズルサック室を結ぶ連絡孔(バイパス)の本数を増やすことで噴射流量が大幅に増加し、流量特性が改善できた。また、液柱の長さが短く、噴霧の広がりが大きい高分散噴霧が得られ、噴霧の微粒化特性と流量特性を同時に改善することができた。これらの結果に基づき、実機寸法ノズルを設計すると、従来よりも低い噴射圧(省エネ)で噴霧特性と流量特性を大幅に改善できる可能性があり、実用化が可能である。また、大気圧雰囲気下であるが、実機ディーゼルインジェクタに開発したノズルを装着し、間欠噴射時の噴霧の微粒化(分散)状態、噴霧先端到達距離(貫徹力)を調べた結果、定常噴射時で良好な噴霧特性が得られた幾何学形状・寸法のノズルは、間欠噴射時においてもほぼ同じ結果が得られた。また、噴霧先端到達距離は従来のディーゼルノズルよりも短く、高貫徹力噴霧は得られないが、噴霧の広がりは大きく、高分散噴霧が得られた。このように、開発したノズルは、間欠噴射時において従来のノズルよりも高分散噴霧が得られることから、実機と同じ高圧雰囲気下においても同様の成果が期待できる。これまで、噴孔が1本の単噴孔ノズルを用いてきたが、噴孔が複数本の多噴孔ノズルを用いると、噴孔数と噴孔の配置にもよるが、低い噴射圧において単噴孔ノズルよりも噴霧の広がりがかなり大きくなり、噴霧の微粒化特性を大幅に改善できた。したがって、この多噴孔ノズルを実機ディーゼルインジェクタに装着し、間欠噴射させると、単噴孔ノズルと同様に、さらに高分散噴霧が得られるものと思われ、燃焼特性と排出ガス特性の改善、さらには燃費の改善に役立つものと思われる。これまでに開発した低圧噴射で高圧噴射時に匹敵する良好な噴霧特性が得られる微粒化促進ノズルを実機ディーゼルインジェクタ(ランドクルーザー用インジェクタ)に装着し、実機と同じ高圧雰囲気下(常温293K、高圧1.6MPa)において、噴霧の分散、噴霧の貫徹力に及ぼす影響を調べ、実機条件により近い状況において実用可能性を調べた。その結果、噴霧先端到達距離は従来のディーゼルノズルよりも短く、高貫徹力噴霧は得られないが、噴霧の広がりはかなり大きくなり、高分散噴霧が得られた。また、大気圧雰囲気下における間欠噴射実験の結果から、同一噴射圧において、単噴孔ノズルよりも噴霧の拡がりがはるかに大きくなる多噴孔ノズル(特願:2007-215513)を実機ディーゼルインジェクタに装着し、高圧雰囲気下に間欠噴射させると、さらに高分散噴霧が得られるものと思われ、間欠噴射実験を行っていたが、燃料噴射装置、もしくはインジェクタの不調により、途中で中断している。代替実験として、多噴孔ノズルの幾何学寸法を種々に変化させて、最良の噴霧特性が得られるノズル寸法を確定し、噴孔径によらず、同一形状・寸法のノズルを用いると、高分散噴霧、ザウタ平均粒径が約10μmの微細な噴霧粒径が得られるノズルを開発した。この成果は、実機において燃焼特性と排出ガス特性の改善、さらには燃費の改善に役立つものと期待できる。なお、噴霧特性の中で最も重要なザウタ平均粒径(噴霧粒径)は、本課題申請書の実験構想で挙げたように、所属機関の特別予算の採択により実験設備を導入し、測定、計測を行った。さらに、平成21年度の実機における燃焼実験、エンジン性能特性等を調べるために、他機関よりディーゼルエンジンと動力計の譲渡を受け、エンジンのシリンダーヘッドの加工、計測装置の準備を行った。

直噴式ディーゼル機関の小型・軽量化、燃費の低減を目指し、従来よりも低い噴射圧で噴霧特性を大幅に改善できる噴射ノズルの開発、実機への適用性について検討を行った。1.低圧噴射時における流量特性、噴霧特性の改善実機よりも低い噴射圧において良好な噴霧特性が得られた場合でも、実機のような高圧噴射時における噴射量よりも少なくなると、出力低下を招くことが考えられる。一般に、流量特性を向上させるために、噴孔入口部にR面取りを施すが、噴霧の微粒化状態は極端に悪くなる。しかし、開発した微粒化促進ノズルは、噴孔の一部にR面取りを施した場合、流量特性の改善と、噴霧の微粒化特性のさらなる改善ができた。2.実機と同じ高圧雰囲気下における適用性これまでに開発した単噴孔微粒化促進ノズルの構造に基づき、新たに噴孔数を複数本設けた多噴孔微粒化促進ノズルを設計した。雰囲気温度以外は実機とほぼ同じ、常温・高圧雰囲気下(293K、1.6MPa)において、間欠噴射した場合、多噴孔ノズルの噴霧先端到達距離は、単噴孔ノズルと比較して短く、貫徹力は弱いが、噴霧の拡がりは格段に大きくなり(約3倍)、高分散噴霧が得られた。また、実機ディーゼル機関を整備し、燃料消費率、出力、トルク、熱発生率等のエンジン性能特性を測定する装置の構築を行った。3.高粘度液体への適用性ディーゼル機関のみならず、ボイラー用燃焼器、温室効果ガス排出量の低減のための石油代替燃料である水素を燃料とする機関など、高粘度液体燃料、高粘度気体燃料の使用も社会的に視野に入れる必要がある。高粘度液体を使用時、開発した微粒化促進ノズルの噴霧特性を調べた結果、従来のノズルの場合、噴流は全く微粒化しないが、本研究で開発した微粒化促進ノズルは、低粘度液体とほぼ同じ噴霧の拡がり、噴霧特性が得られ、高粘度液体への適用の可能性を示した。
高度好塩性古細菌に由来する耐塩性金属タンパク質の構造と機能

Haloarcula japonicaは三角形平板状の形態を有する高度好塩性古細菌である.本研究では,H.japonicaに由来するフェレドキシン(Fd)の構造と機能ならびに耐塩性に関する知見を得ることを目的として,H.japonica Fdの精製と性質検討,さらには遺伝子クローニングと大腸菌での発現を行った.菌体抽出物から,脱塩・陰イオン交換クロマトグラフィー・ゲルろ過の操作により,H.japonica Fdを精製した.H.japonica FdのN末端30アミノ酸の配列を決定した.また,電子スペクトルおよびESRスペクトル解析より,H.japonica Fdは2鉄型クラスターを持つことがわかった.H.japonica FdのN末端アミノ酸配列ならびに類縁菌Fdのアミノ酸配列相同性に基づくプライマーを用い,H.japonica染色体DNAを鋳型とするPCRを行い,H.japonica Fd遺伝子の一部を増幅した.そして,このPCR産物をプローブとするコロニーハイブリダイゼーションにより,H.japonica部分染色体ライブラリーの中からFd遺伝子をクローニングした。H.japonica Fd遺伝子は387ntのオープンリーディングフレームからなり,129アミノ酸をコードしていた.また,H.japonica Fdは類縁菌Fdとアミノ酸レベルで87%98%の高い相同性を有していたものの,植物型Fdの代表であるほうれん草Fdとは43%の相同性しか示さなかった.H.japonica Fdは,他の高度好塩性古細菌Fdと同様,N末端ならびにC末端がほうれん草Fdより長く伸びており,この領域が耐塩性に関与している可能性が示唆された.次に,大腸菌におけるH.japonica Fd遺伝子の発現を試み,N末端にT7tagもしくはグルタチオンS-トランスフェラーゼを結合させた形での融合発現に成功した.これら2種の融合タンパク質の精製を行ったところ,いずれにおいてもクラスターが組み込まれていないことがわかった.Haloarcula japonicaは三角形平板状の形態を有する高度好塩性古細菌である.本研究では,H.japonicaに由来するフェレドキシン(Fd)の構造と機能ならびに耐塩性に関する知見を得ることを目的として,H.japonica Fdの精製と性質検討,さらには遺伝子クローニングと大腸菌での発現を行った.菌体抽出物から,脱塩・陰イオン交換クロマトグラフィー・ゲルろ過の操作により,H.japonica Fdを精製した.H.japonica FdのN末端30アミノ酸の配列を決定した.また,電子スペクトルおよびESRスペクトル解析より,H.japonica Fdは2鉄型クラスターを持つことがわかった.H.japonica FdのN末端アミノ酸配列ならびに類縁菌Fdのアミノ酸配列相同性に基づくプライマーを用い,H.japonica染色体DNAを鋳型とするPCRを行い,H.japonica Fd遺伝子の一部を増幅した.そして,このPCR産物をプローブとするコロニーハイブリダイゼーションにより,H.japonica部分染色体ライブラリーの中からFd遺伝子をクローニングした。H.japonica Fd遺伝子は387ntのオープンリーディングフレームからなり,129アミノ酸をコードしていた.また,H.japonica Fdは類縁菌Fdとアミノ酸レベルで87%98%の高い相同性を有していたものの,植物型Fdの代表であるほうれん草Fdとは43%の相同性しか示さなかった.H.japonica Fdは,他の高度好塩性古細菌Fdと同様,N末端ならびにC末端がほうれん草Fdより長く伸びており,この領域が耐塩性に関与している可能性が示唆された.次に,大腸菌におけるH.japonica Fd遺伝子の発現を試み,N末端にT7tagもしくはグルタチオンS-トランスフェラーゼを結合させた形での融合発現に成功した.これら2種の融合タンパク質の精製を行ったところ,いずれにおいてもクラスターが組み込まれていないことがわかった.Haloarcula japonica TR-1株は石川県塩田土壌から分離された高度好塩性古細菌であり,三角形平板状の特徴的な形態を有している.一般に,高度好塩性古細菌に由来するタンパク質は,高度の耐塩性を有している.本研究では,Ha.japonicaに由来するFdの構造と機能ならびに耐塩性に関する知見を得ることを目的として,Fdの精製と性質検討,さらにはFd遺伝子のPCR増幅を行った.超音波破砕により得られた菌体抽出物を出発材料とし,脱塩,陰イオン交換クロマトグラフィーおよびゲルろ過により,Ha.japonica Fdを精製した.アミノ酸組成分析の結果から,本菌Fdは類縁菌Fdと同様に非常に多くの酸性アミノ酸を含むことがわかった.本菌FdのN末端30アミノ酸の配列は,H_2N-PTVEYLNYEVVDDNGGDMYDDDVFAEASRMと決定された.本菌Fd(酸化型および還元型)の電子スペクトルは,他の[2Fe-2S]型Fdのものとほぼ一致した.また,還元型FdのESRスペクトル測定を行ったところ,[2Fe-2S]型クラスターに基づくシグナルが観察された.以上より,本菌Fdは[2Fe-2S]型クラスターを持つものと推察された.Ha.japonica FdのN未満アミノ酸配列に基づき,PCRセンスプライマーを合成した.また,類縁菌Halobacterium salinariumおよびHaloarcula marismortuiに由来するFd間の相同性をもとに,アンチセンスプライマーを合成した.これらのプライマーを用い,Ha.japonica染色体DNAを鋳型とするPCRを行ったところ,約160bpのDNA断片が増幅された.塩基

配列解析の結果,このPCR産物はHa.japonica Fd遺伝子の一部と考えられた.Haloarcula japonjca TR-1株は石川県塩田土壌から分離された高度好塩性古細菌であり,三角形平板状の特徴的な形態を有している.一般に,高度好塩性古細菌に由来するタンパク質は,高度の耐塩性を有している.本研究では,Ha.japonicaに由来するFdの構造と機能ならびに耐塩性に関する知見を得ることを目的として,Fd遺伝子のクローニングと大腸菌における発現を行った.Ha.japonica FdのN末端アミノ酸配列に基づくセンスプライマーと,類縁の高度好塩性古細菌Fdのアミノ酸配列相同性に基づくアンチセンスプライマーを用い,Ha.japonica染色体DNAを鋳型とするPCRを行うことにより,Ha.japonica Fd遺伝子の一部を増幅した.そして,このPCR産物をプローブとするコロニーハイブリダイゼーションにより,Ha.japonica部分染色体ライブラリーの中からFd遺伝子をクローニングした。Ha.japonica Fd遺伝子は387ntのオープンリーディングフレームからなり,129アミノ酸をコードしていた.また,Ha.japonica Fdは類縁菌Fdとアミノ酸レベルで87%98%の高い相同性を有していたものの,植物型Fdの代表であるほうれん草Fdとは43%の相同性しか示さなかった.Ha.japonica Fdは,他の高度好塩性古細菌Fdと同様,N末端ならびにC末端がほうれん草Fdより長く伸びており,この領域が耐塩性に関与している可能性が示唆された.次に,大腸菌におけるHa.japonica Fd遺伝子の直接発現ならびに融合発現を試みた.直接発現は不成功であったが,N末端にT7tagもしくはグルタチオンS-トランスフェラーゼを結合させた形での融合発現には成功した.これら2種の融合タンパク質の精製を行ったところ,いずれにおいてもクラスターが組み込まれていないことがわかった.
多形性腺腫における石灰化発現遺伝子の局在について

多形性腺腫は、口腔ないにおいてもっとも多く見られる唾液腺の腫瘍であるが、その組織像は極めて多彩であり、特徴として間質は線維性、粘液腫性、軟骨組織などが見られ、ごくまれに骨組織の形成が見られる。われわれは、病理組織学的に多形性腺腫と診断され軟骨の認められた標本を用いて、コラーゲンタイプI、II、Xの局在を調べ、それらコラーゲンが多形性腺腫の組織内に存在するかを調べてきた。これらは、コラーゲンが軟骨細胞様細胞の分化とともに発現が変化し、軟骨の石灰化、あるいは骨化に深く関与していると推測された。そこでさらにコラーゲンの局在部位の細胞がそれらコラーゲンを産生しているかを調べるために、コラーゲンタイプI、II、およびXのm RNAの発現について比較検討した。その結果、コラーゲンタイプI m RNAの局在では軟骨細胞は、ほとんど染色されなっかった。コラーゲンタイプII m RNAの局在では軟骨細胞に染色性が強く発現が認められた。コラーゲンタイプX m RNAの局在では軟骨細胞に染色性を示し発現が認められた。以上の結果から、多形性腺腫に見られる軟骨細胞が遺伝子(m RNA)を発現することが確認できた。これらは、軟骨細胞の石灰化および骨化に関与していると思われ、それらの重要な因子であることが示唆された。また軟骨組織の形成には、コラーゲン以外にも多くの基質蛋白あるいは分化、増殖因子が存在する。その中でもフィブロネクチンは、コラーゲンと細胞との接着に関与しているといわれている。今後さらにフィブロネクチンとコラーゲンの関与について検討し、多形性腺腫における軟骨形成機序を明らかにしたいと考える。
少数名繰返し評価と訓練に基づくにおい評価に要するパネル数低減化に関する研究

室内のにおい環境評価には嗅覚を用いることが多いが、感覚の個人差が大きいために、評価にあたって多人数パネル(被験者)が必要とされてきた。これを少人数パネルの複数回評価で代用するために、個人間の評価差と同一パネルが繰返し評価を行う際の評価の変動(個人内変動)との評価の取扱いの重み付けを決める基礎資料を提示した。また、パネルの精度向上のために評価訓練を実施した場合の、評価への影響についても検討し、訓練に用いた臭気への訓練効果は確認された一方で、異なる臭気評価には訓練効果が十分に発揮されない可能性を示した。非容認率(においを評価する際に非許容と回答するパネルを全パネル数で除した割合)の測定には60名のパネルが必要とされるなど、においの測定に要するパネル数が現状多いことに対して、訓練や同一パネルの繰返し評価を活用する可能性について検討を行った。評価訓練を採用しているISO/DIS 16000-30の公開が前年度にあったため、当初計画では平成25年度に行う予定であった、評価訓練により見込まれる評価精度向上の検討を平成24年度に前倒しして行った。この検討にあたっては、既往研究の非訓練パネルのデータを訓練されたパネルの評価との比較のために利用したことから、新規で非訓練パネルの多数名評価を本年度に得る実験は行わず、非訓練パネルの繰返し評価実験による個人内変動と個人間差に関する検討を実施した。実験では、前年度までの評価データの蓄積があるn-butanolについて、11名に21回の繰返し評価を実施し、そのうち11回を抽出して11名の11回評価に対して標準誤差の比較を行った。また、この実験では、対象臭気の評価のみに意識が集中しないように、他に4種の臭気をダミーとして順不同に評価させた。個人間差にあたる11名のパネル評価の標準誤差は、個人内変動にあたる同一パネルの11回繰返し評価の標準誤差の6.87倍であった。以上のことから、訓練による必要パネル数の削減としては、測定対象の臭気を用いた臭気強度評価訓練であれば、平均値やばらつきを矯正できる可能性があり、少数パネルによって一般性の高い評価を得られる可能性は示された。一方で、訓練臭気以外への訓練効果には疑問が示された。また、個人内変動は、個人間差よりかなり大きいことが定量的に示され、少数パネルの複数回評価は、評価の一般性を保持したパネル数削減に活用するには難しい可能性が示された。におい環境評価で主流である、嗅覚を用いたにおい評価で重要指標とされる非容認率(においの許容の可否評価で、不許容パネル(被験者)数を全パネル数で除した割合)の評価には60名が必要とされる等、必要パネル数が多いことが、現在もにおい環境評価が十分に普及しない一因であると考える。そこで、本研究では、多数パネル評価の少数化を目標とした検討を行う。評価訓練を採用しているISO/DIS 16000-30の公開があったため、当初計画では平成25年度に行う予定であった、評価訓練により見込まれる評価精度向上の検討を平成24年度に前倒しして行った。実験では、2種の臭気を各5段階の濃度条件に調製した評価試料を、6名のパネルに提示して評価させた。1日3セットの実験を27日の間隔で延べ10日間(延べ30セット)繰返したが、各日の2、3セット目の前には、臭気強度評価訓練を行った。その結果、臭気強度平均値に関しては、訓練にも用いた臭気、n-butanolでは、1回訓練を行った以降、訓練に用いた「臭気の濃度と臭気強度評価の関係」に非常に近くなることが確認できた。一方で、訓練試料とは異なる臭気、α-pineneでは、訓練による平均値への影響が不明瞭であったことから、訓練臭気以外の評価への訓練の影響は小さい可能性が示された。すなわち、ISOで採用されている1種の臭気に関する訓練で多種の臭気評価を較正することは妥当でない可能性がある。また、訓練直後の評価と、訓練から27日経過後の評価とには差異が見られず、訓練の影響は、最低でも1週間程度は保証されることがわかった。評価の標準偏差に関しては、臭気種や濃度ごとに繰返し回数に伴う傾向は様々だったが、総じて低濃度の評価時の評価のばらつきが大きく、高濃度では非常に小さい傾向が見られた。また、臭気強度評価訓練による、においの快・不快度評価への影響はほぼ見られなかった。当初平成25年度に行う予定の内容を、平成24年度に前倒しして実験を実施し、新たな知見を得ることができた。一方で、当初平成24年度に予定した内容(平成25年度に実施予定)については未実施であるため。

当初平成25年度に実施予定であった内容を平成24年度に実施したことで、臭気強度評価訓練による評価への影響が明らかにできたので、平成25年度は、非訓練パネルによる評価実験を中心に実施し、研究の目的である臭気評価の個人内変動と個人間差の検討を行う。具体的には、複数名パネルに複数回の繰返し実験を課し、その人数と繰返し数をパラメータに、評価の標準偏差を指標とした評価傾向の比較を行う。また、平成24年度の研究結果との比較によって、訓練パネルと非訓練パネルの評価傾向を比較する。次年度に使用する予定の研究費が生じた理由については、平成25年度の内容を前倒しして実施した影響で、平成24年度に予定していた実験実施回数よりも実施済回数が減少し、そのため、各種消耗品類(試料採取袋、注射器類、測定器具類など)の使用数が減少したことが大きい。一方で、平成25年度は、当初平成24年度に実施予定の実験を実施するため、これらの使用数が当初の平成25年度計画より大きく増加する予定であるため、これらに充てる予定である。
近代中国における経済学の受容と日本知識人

本研究の考察対象である福田徳三について、2018年6月に東京大学でおこなわれた経済学史学会第82回大会で、福田徳三研究会のメンバーとセッションを組み、「福田徳三と黎明会」と題して報告をおこなった。福田徳三研究会では現在、新しい『福田徳三著作集』(信山社)を編纂・刊行中である。研究代表者は福田の黎明会における活動が収められた『福田徳三著作集』第15巻と第16巻の編集・解説を担当した。本報告は、その過程でえられた新たな知見にもとづくものであり、多くの反響をえることができた。また、2018年7月には、早稲田大学の大隈講堂で開かれた「没後70年記念シンポジウム朝河貫一ー人文学の形成とその遺産」で、「朝河貫一と近代中国」と題して報告をおこなった。イェール大学初の日本人教師となった朝河のもとには、同じアジア人として多くの中国人留学生が集った。そのうちの一人に、『新人口論』で知られる経済学者の馬寅初がいる。本報告では、これまでまったく触れられてこなかった朝河と馬寅初の交流について、イェール大学や福島県立図書館に所蔵されている資料をもとに明らかにした。本シンポジウムでは、参加したイェール大学の研究者とも、有意義な意見交換を交わすことができた。この報告内容については、2019年2月に刊行された論文集『朝河貫一と人文学の形成』(吉川弘文館)に寄稿した論文「朝河貫一と近代中国」で活字化した。2018年11月に中国、2019年23月に韓国でそれぞれ資料調査・収集を実施した。本研究のテーマの一つである日本の経済思想が海外におよぼした影響について、新たな知見をえることができた。現時点でとくに大きなトラブルもなく、研究計画通りに研究を進めている。海外における資料調査・収集も、おおむね問題なく実行できている。2019年度は最終年度であるので、これまで進めてきた研究のとりまとめをおこないたい。具体的には、考察対象の一人である河上肇と中国知識人に関する論文を、『吉野作造研究』に掲載する予定である。また、本研究の成果を『「大正デモクラット」の精神史』と題した学術書として刊行する計画で、執筆を進めている。2017年度は、研究課題である近代日本における経済学の受容と日本知識人について、2017年6月10日におこなわれた日本経済思想史学会第28回大会の基調講演で、報告をおこなった。報告タイトルは、「堀江帰一と吉野作造ー中国との関わりを中心に」である。金融、財政から貿易、労働組合、女性労働まで、経済全般をはばひろく縦横に論じた堀江帰一(1876-1927)。堀江の業績を調べてみると、彼が2度目の欧米留学から帰国した1910年から亡くなるまでの間、新聞や総合雑誌、紀要に寄稿した論説、書きおろしの単行本など、膨大な量にのぼることが分かる。単著も51年の生涯で40冊あまりにのぼる。堀江の名は当時、日本の社会科学的知見に関心をはらっていた中国のアカデミズムでもひろく知られていた。たとえば、高希聖ら編『社会科学大詞典』(1929)では、堀江は福田徳三、土方成美とならぶ、「日本三大資産階級経済学家」として位置づけられている。とくに、『銀行論』は多くの版を重ね、当時の中国における代表的な銀行学関連書の1つと目されている。「民本主義」を基礎とした吉野作造の政治的主張も、中国人留学生らの注目をあつめ、多くの著作が中国語に翻訳、紹介された。この大報告では、このように大正デモクラットとして連携しあった堀江と吉野の関係を、おもに中国との関わりから検討をおこなったものである。本年度はまた、2017年9月16日に中国の山東師範大学でおこなわれた国際シンポジウム「第五届日本学高端論壇」にて、「論中日両国“商戦"論的淵源」というタイトルで、日本と中国の商業観について報告をおこなった。さらに、1917年11月24日に台湾の高雄大学でおこなわれた国際シンポジウム「第五屆東亜語文社会国際研討会」にて、「論近代中日両国商業教育的理念」というタイトルで、日中両国の商業教育について比較検討をおこなった。2017年度の「研究計画」として、「福田徳三が説いた経済学説や時事評論が、中国人にどのように解釈、翻訳され、その後の中国における経済学の展開に影響をおよぼしたのかを考察する」というテーマをかかげたが、これまで順調に進展していると考える。日本経済思想史学会大会でおこなった報告では、堀江帰一の経済学説が中国人におよぼした影響について考察した。この堀江は、福田徳三と慶應義塾での同僚であった。二人のもとで、多くの中国人留学生が学んでいる。たとえば、民国期の中国銀行業界の領袖である張公権は、堀江と福田を指導教授とし、銀行・金融について学んでいた。報告はあくまで堀江がメインであったが、福田についてもほりさげて分析をおこなった。山東師範大学と高雄大学でおこなった中国語での報告でも、福田徳三が関わった商業教育と中国との関わりについて比較検討をおこない、現地の研究者とも活発な意見交換を交わした。これらの学会講演、国際シンポジウムでの報告を通じ、「研究の目的」は十分に達せられたと考える。

本研究の考察対象である福田徳三について、2018年6月に東京大学でおこなわれた経済学史学会第82回大会で、福田徳三研究会のメンバーとセッションを組み、「福田徳三と黎明会」と題して報告をおこなった。福田徳三研究会では現在、新しい『福田徳三著作集』(信山社)を編纂・刊行中である。研究代表者は福田の黎明会における活動が収められた『福田徳三著作集』第15巻と第16巻の編集・解説を担当した。本報告は、その過程でえられた新たな知見にもとづくものであり、多くの反響をえることができた。また、2018年7月には、早稲田大学の大隈講堂で開かれた「没後70年記念シンポジウム朝河貫一ー人文学の形成とその遺産」で、「朝河貫一と近代中国」と題して報告をおこなった。イェール大学初の日本人教師となった朝河のもとには、同じアジア人として多くの中国人留学生が集った。そのうちの一人に、『新人口論』で知られる経済学者の馬寅初がいる。本報告では、これまでまったく触れられてこなかった朝河と馬寅初の交流について、イェール大学や福島県立図書館に所蔵されている資料をもとに明らかにした。本シンポジウムでは、参加したイェール大学の研究者とも、有意義な意見交換を交わすことができた。この報告内容については、2019年2月に刊行された論文集『朝河貫一と人文学の形成』(吉川弘文館)に寄稿した論文「朝河貫一と近代中国」で活字化した。2018年11月に中国、2019年23月に韓国でそれぞれ資料調査・収集を実施した。本研究のテーマの一つである日本の経済思想が海外におよぼした影響について、新たな知見をえることができた。現時点でとくに大きなトラブルもなく、研究計画通りに研究を進めている。海外における資料調査・収集も、おおむね問題なく実行できている。2018年度は、「研究計画」に示したとおりに、『新約聖書』にみられる絶対的利他主義に向き合った河上肇の著作が、李大釗をはじめとする中国人にどのようにうけとめられ、解釈されていったかを考察してゆく。また、2017年に学会および国際シンポジウムで報告した内容を、論文にまとめ、学術誌に投稿したい。河上の生涯にわたる著作としては、1980年代に岩波書店から刊行された『河上肇全集』(全36巻)がある。この別巻には、詳細な年譜、著作年表も付されている。だが、申請者によるこれまでの調査でも、見落とされた河上の中国語訳記事や、河上の主張を明らかに参考としたと考えられる中国人の論説が確認できる。そこでまず、河上のもとで学んだ中国人留学生を中心に、彼らの著作を読みなおしたりし、河上の著作が中国に受容された全体像を浮かび上がらせる。「人もし汝の右の頬をうたば、左をも向けよ」。河上がこの『新約聖書』の一節に衝撃をうけ、社会的にどう実践してゆくかという課題に終生とりくんだのに対し、李大釗は同じ箇所にふれ、帝国主義国家が自らの支配を甘受させるためのデマゴギーにすぎないと批判していた。当然ながら、キリスト教を基礎とした河上の問題意識は、彼の著作を通じてマルクス主義を受容した李大釗に、そのままうけつがれなかったと考えられる。この問題について、李大釗の著作を改めて精査し、河上の主張のいかなる部分がうけいれられ、あるいは無視されたのかを考察する予定である。2019年度は最終年度であるので、これまで進めてきた研究のとりまとめをおこないたい。具体的には、考察対象の一人である河上肇と中国知識人に関する論文を、『吉野作造研究』に掲載する予定である。また、本研究の成果を『「大正デモクラット」の精神史』と題した学術書として刊行する計画で、執筆を進めている。
トポロジカル磁性体のダイナミクスに関する理論的研究

スキルミオンをはじめとするトポロジカルなスピン構造が様々な磁性体において発見され、その相図構造が調べられている。一方、トポロジカルに異なる相の間の変化はダイナミクスの問題となり、より高度な理論的解析を必要とする。従来は、ポテンシャル障壁によって遷移確率が決まるとされるが、エントロピーに対応する経路の数を考慮に入れることが必要となる。本研究では、スキルミオンが強磁性状態などのトポロジカルに自明な状態へと崩壊する寿命を、これらの因子を取り入れて精度よく理論的に計算する手法を確立し、数値シミュレーション結果と併用することでトポロジカルな相変化の全貌を明らかにする。
明治期の文学理論に対するE.V.ハルトマンの影響-森鴎外のハルトマン受容とその意義を中心に-

鴎外がハルトマンを知ったのは、かつて、留学時代とされていたが、神田孝夫氏の研究により、少なくとも帰朝以後であることがあきらかにされたが、本格的にハルトマンを読みだしたのは帰朝以後であるにしても、鴎外がハルトマンの美学を知ったのは、それ以前であることが、旧鴎外所蔵本の書き入れ調査で確実となった。鴎外がハルトマンから学んだものは多岐にわたっているが、そのうちで我国の文壇に大きな影響を及ぼしたのは、具象理想美学とも言うべきものである。これは一口に言って、芸術作品を現れている「イデー」の段階によって、「類想」、「個想」、「小天地想」の三つの段階に分けて考えるもので、「類想」から「小天地想」に進むにしたがって、抽象的な美から、より具象的な美が現れているとするものである。これは逍遙との没理想論争がなされた当時にあっては、逍遙が「没理想」とする作品は「小天地想」が現れているのであって、決して、「理想」が存在しないわけではないという批判に応用されたものであるが、日清戦争後の文壇にあっては、当時流行の観念小説批判の合い言葉となった。すなわち、鏡花など、いわゆる観念小説を描いている作家の作品に現れているのは、抽象的な「類想」なのであって、これではいけない。これからは「具象理想」が現れた作品が求められるべきである、という批判である。田山花袋の自然主義文学論も、このような「具象理想」の論の影響によって成り立っており、鴎外の紹介したハルトマン美学の影響は、これまで考えられていたよりも、はるかに大きい。ドイツの哲学者E.V.ハルトマンの思想は、明治23年頃より森〓外によって紹介され、逍遙との没理想論争において、〓外が自論の美学的より所としたことによって、わが国では広く知られるようになった。以上がこれまでの一般的理解である。ところが、実際に当時の学術雑誌・文学雑誌等を調査を調査してみると、ハルトマンはすでに明治20年頃には紹介されていたことがわかった。ただし、それは美学というより、彼の哲学の紹介であり、もっぱらショーペンハウエルと並んでの、厭世哲学の思想家としての紹介にとどまっていた。これに対して〓外は、ハルトマンの厭世哲学者としての側面にはあまり注意を払わず、「無意識の哲学」に基くところの美学に着目し、この紹介を熱心に行なったのである。〓外が何ゆえにこのような受容を行なったのかは興味ある問題である。ところで、当時の雑誌調査を通して同時代の状況を見ると、没理想論争は、これまでの定説に反して、当時のそしてそれ以後の文学思潮に大きな影響を与えて居り、このことに明治20年代の禅の大流行が大きく関与していたことが確実になった。〓外自身、仏教、とりわけ禅には大きな興味を示して居り、〓外におけるハルトマンと仏教の関係は極めて重要であると思われる。おそらくは、ハルトマンのいう「無意識」なるものが仏教の求める本来の自己の姿といった意味あいを伴って理解され、それが当時の禅の流行と結びついたのだろうが、詳細については調査中である。
フォ-クロア作品を通してみるロシア人の抗争と民族約パトスに関する実証的研究

本研究は、いわゆる民族問題・ナショナリズムをめぐる問題が現在のロシアのみならず現代世界全体にとって最大の難問であることを踏まえながら、この問題が発生してきたル-ツをさぐるべく、ロシアのフォ-クロアという、民族性の存在を前提とする表現形式を手掛りとして、その問題の意味と構造を歴史的かつ実証的に解明しようとしたものであった。言い換えれば、現在のロシア文化の基本的枠組みとカテゴリ-をとらえる上で不可欠な「ロシア的」「ロシア民族性」の生成過程を、ロシア的パトスの典型的表現とされてきたフォ-クロアを素材として考察することを目的とするものである。このことから今年度は、時代として18世紀後半のロシアをとりあげ、フォ-クロアとそれにたいする、当時のロシア社会にはじめて登場したひとつの階層としてのインテリゲンツィヤの態度、その両者をつつむ時代と社会との関わりをフォロ-した。具体的には、18世紀後半に輩出したインテリたちによる民族学的・民俗学的・博物学的な数多くの「辺境」調査の全体像を明らかにした。そして、これらにより、当時のインテリたちが「異文化」としのロシアを「発見」していったプロセスを再構成した。すなわち、18世紀後半において、ロシア・インテリゲンツィヤの空間移動により「ロシア的なるもの」が作り出されていったのである。そして、この空間的な発見ばかりでなく、「歴史的記述」の開始に見られる時間的なロシア発見とも相俟って「ロシア」という言説と神話が19世紀初頭から前半にかけての時期に創出させていったことを実証的にフォロ-したのである。こうした作業と並行する形で、古来からフォ-クロアに描かれた抗争・戦さがこの18世紀後半を境にしてどのようにその表現の形式と内容を変えていったかを考察しようとしたが、この点に関しては十分なる時間がなかったため、今後の課題としたい。
歯周組織における加齢メカニズムの解明と抗加齢医療への試み

bFGFおよび分子量の異なるヒアルロン酸(HA)が、宿主年齢の歯肉組織に対する影響を検討した。その結果、bFGFは細胞密度により作用が異なり、創傷治癒過程における増殖期では細胞増殖能および基質産生能を亢進し、再構築期ではアポトーシス誘導能を亢進することにより組織の再生修復を促進した。また、HAoligoもアポトーシス誘導能を有することが明らかとなり、bFGFと併用することにより相加的作用が認められた。これらの作用は年齢の若い方がより顕著であった。歯肉組織の良質な創傷治癒には、適切な細胞増殖と細胞外基質の産生による組織の再構築が重要となる。bFGFは、線維芽細胞の増殖や分化を制御する因子として知られており、歯肉組織を構成する主要な細胞外基質であるヒアルロン酸(HA)と共に、歯肉組織の代謝および創傷治癒に深く関与していると推察される。本研究では、暦齢の異なるヒトあるいはラットから採取した歯肉由来線維芽細胞(GF)を用いて、bFGFによる細胞代謝およびアポトーシス誘導能について検討を行った。(1) 6および12週齢のラット口蓋臼歯部の粘膜骨膜を切除し、口蓋創傷形成モデルを作製した。施術5日後にbFGF水溶液を手術部位の左右に各10μlずつ注入した。術後10日経過した時点でのbFGF注入群の口蓋創傷形成部の治癒過程におけるアポトーシス誘導能について組織学的観察によりPBS注入群と比較した。6および12週齢いずれのラット創傷モデルにおいても、bFGF注入群において創傷部の早期治癒が観察された。さらに、若年ラットの方が創傷部位の治癒が早かった。また、若年ラットのbFGF注入群において強いアポトーシス反応が確認された。(2)若年者(10歳以下)と成人(26歳以上)の歯肉組織よりGFを単離、培養した。bFGFによる刺激下でtype-Icollagen、fibronectin-1、HAS-2, -3の遺伝子発現を明らかにするとともに、若年群と成人群間の比較検討を行った。bFGFの添加により、type-Icollagen、HAS-2,-3遺伝子発現は亢進したが、fibronectin-1遺伝子発現については変化がなかった。また、type-I collagen遺伝子発現は、成人より若年者の方が有意に高かった。以上のことより、歯肉組織へのbFGFの投与は、アポトーシスを誘導し、軟組織の創傷治癒に関与していることが示唆された。H20年度では、創傷部にbFGFを注入することにより治癒が促進され、それにはアポトーシス反応が関与していることが明らかとなった。また、年齢の違いによりアポトーシス活性による治癒促進能力は違いがあることが分かった。一方、加齢により歯肉組織を構成するヒアルロン酸(HA)の低分子化がおこることが知られている。本年度では、宿主年齢の異なる歯肉由来線維芽細胞を用いて、bFGFあるいは分子量の異なるHAによる細胞代謝およびアポトーシス誘導能の検討を行うとともに、その相加効果についても検討を行った。(1) HAの分子量の違いがアポトーシス活性に及ぼす影響について若年または成人の歯肉から歯肉由来線維芽細胞を単離、培養する。コンフルエント後、HAの分子量がアポトーシス活性に及ぼす影響を検討するため、HAoligo、高分子量HA、HA分解酵素を添加し、アポトーシス活性に対する影響について検討を行った。その結果、高分子量HA、HA分解酵素添加によりアポトーシス活性の変化は認められなかったが、HAoligoの添加により成人と比較し若年者において有意に大きい値が認められた。また、bFGF添加によりアポトーシス活性の有意な亢進が認められた。(2) bFGFのアポトーシス活性に対する分子量の異なるHAの相加効果について若年または成人の歯肉線維芽細胞を培養、コンフルエントに達した後、HAoligo、高分子量HA、HA分解酵素により12時間前処置後洗浄を行い、bFGFを添加した。その結果、HAoligo前処置を行うことにより、bFGFのアポトーシス活性を相加的に亢進させたが、高分子量HA、HA分解酵素の前処置では変化は認められなかった。以上のことより、HAoligoはアポトーシス誘導能を有することが明らかとなり、bFGFと併用することにより相加的効果があることが分かった。