hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
軟骨細胞に対する荷重ストレスの影響に関する研究

軟骨に対する荷重ストレスは、軟骨代謝に重要な影響を与えている。すなわち、適度のストレスは、基質の産生、維持に必須であり、適度のストレスは変形性関節症の誘因となりうる。本研究では、軟骨細胞に対する荷重ストレスの影響を検討するために、ヒト軟骨細胞様細胞株HCS2/8に対し、静水圧負荷を行ない、HSP70および、各種サイトカイン発現を検索した。1.HSP70mRNAはNotheyn blot analysisでは50Mpaの非生理的圧力を30分以上負荷すると、速やかに亢進し、少なくとも8時間以上亢進が持続した。また、110Mpaの生理的な圧力においても時間経過でHSP70mRNAが圧力依存性に軽度亢進していた。一方、Western blot analysis細胞内HSP70蓄積が圧力依存性に亢進していることを確認した。2.TGFbeta1mRNAがNotheyn blot analysisで510Mpaの圧力負荷後、4時間8時間出亢進することを確認した。一方、HSP70mRNAが速やかに誘導される50Mpaの非生理的圧力負荷後は逆にTGFbeta1mRNAはcontrol群よりも発現が抑制された。3.RT-PCRにより、IGF-I、bFGF、IL-8mRNAの発現が圧力により影響をうけることを確認した。しかし、TNFa、IL-1beta、IL-6mRNA発現については負荷後8時間まででは圧力の影響が認められなかった。以上、現在までの研究で、適度の荷重ストレスが軟骨基質代謝を亢進させるサイトカインの発現を介して軟骨組織の維持に働いている可能性が示された。また、適度の荷重ストレスは変形性関節症で発現が亢進しているHSP70を誘導し、軟骨基質代謝を亢進させるサイトカインの発現を抑制することを明らかにした。
揮発性麻酔薬による培養心筋細胞モデルでの心筋保護効果の解析

本研究にはラット培養心筋細胞モデルを使用した。生後2日から4日のWistar系ラットの新生仔をい、心室筋を採取し、酵素・遠沈法で心筋単離細胞を得た。得られた心筋細胞を一定密度となるよにCO_2インキュベータ-中で培養した。培養にはフィブロネクチンをコーティングした容器に、MCDB 107にinsulin、transferin、2%FCSを加えた培地を用いた。培養4日の拍動数が100bpm以上で、拍動状態が安定した細胞シートを検体として用い、常温保存群(N群;37°C:5%CO_2+95%air)、中等温保存群(M群;20°C:5%CO_2+95%air)、低温保存群(L群;4°C:100%air)の3群に大別した。各群は対照グループ、揮発性麻酔薬として1%enflurane添加グループ、5%enflurane添加グループで比較検討を行った。N群では対照グループの1時間、4時間保存の細胞シート拍動回復率は100%であった。1%enflurane添加グループの1時間保存では細胞シート拍動がirregularとなり、拍動回復率は9095%に減少た。しかし、4時間後には各々細胞シート拍動は以前と同じくregularとなり、拍動回復率は100%となった。5%enflurane添加グループでは1時間後も4時間後も細胞シート拍動は認めなかった。またM群、L群については対照グループのデータのばらつきが多く、enflurane添加グループとの比較検討は不可能であった。以上の結果から培養心筋細胞モデルでの揮発性麻酔薬の作用は、低濃度であれば細胞拍動を抑制ることで心筋細胞の酸素エネルギー消費を減少させる可能性があり、心筋保護効果との関連性が示された。しかし、揮発性麻酔薬が高濃度であれば心筋細胞の拍動を不可逆的に抑制するものと考えれた。
狭衣物語の研究

本年度は、本研究課題の最終年度にあたることから、これまでの研究成果を総括することに努めた。主な研究実績は次のとおりである。(1)現存する「狭衣物語歌集」の調査を継続するとともに、その成果を総体的にまとめた。(2)狭衣物語の秘説として伝授されてきた「狭衣三箇秘訣切紙」を考究した。(3)狭衣物語の古筆切を収集、分析を行った。(4)狭衣物語受容の諸相を総合的に考察した。以上の成果は、適宜、論文や学会発表として公開した。狭衣物語とは、それじたいで成り立つような、また、固定化されたものではありえない。時代や享受者に応じて、異なる姿を見せるものであり、それらが総体となって、ひとつの狭衣物語なるものを形成していると考えられる。その狭衣物語のありようを総合的に究明するためには、やはり、個々の様態を慎重に見つめていくことにしか、その方法を見いだすことはできないはずである。本研究課題においては、狭衣物語にかかわる個々の資料をとりあげて検討し、その性質を明らかにしようと取り組んできた。狭衣物語が読み継がれてきた過程を具体的に示し、背景を明らかにすることによって、狭衣物語なるものに迫ろうとしてきたのである。狭衣物語と併記されることもある源氏物語と比較すれば、狭衣物語の受容資料は極めて限られているものの、それでも、検討に値する多くの資料が残されていることは事実である。現存資料の発見や調査が、如何に狭衣物語を考究するうえで重要な論点を提起するかを示し、狭衣物語受容の考究によって、この物語の文学史上の位置づけがいっそう明確なものとなることを明らかにした。本年度は、現存する狭衣物語写本を比較することによって、それぞれの写本がもつ特徴から、受容層や享受のあり方、読みの諸相を明らかにすることに努めた。(1)京都大学文学研究科に所蔵される狭衣物語写本を調査した。(2)東海大学図書館桃園文庫に所蔵される狭衣物語写本を調査した。(3)国文学研究資料館所蔵の狭衣物語関連のマイクロフィルムを調査した。(4)諸資料に記載された狭衣物語に関する記事を抜き出し、時代や場ごとの受容の諸相を調査した。(5)立命館大学図書館西園寺文庫に所蔵される源氏物語写本を調査した。上記(1)の成果を中心にして、学会誌に論文を発表した。京都大学文学研究科が所蔵する五冊本の『狭衣物語』に見られる異文を端緒にして、異なる本文が発生していく過程を探ったものである。そこでは、『狭衣物語』を通観する視点・解釈をもった上で改変された異文を見いだすことができ、異文もまた、『狭衣物語』の読みの諸相を伝えるものであることを明らかにした。上記(2)から(3)の成果も、論文として公刊した。『狭衣物語』巻四に見える飛鳥井女君の詠んだ二首が、諸本によって大きく異なって示される要因を考え、狭衣物語受容の一端を明らかにした。この二首は、諸本により所収されていたり、あるいは所収されていなかったりするが、そのいずれにおいても、然るべき要因のもとでなされていることを解き明かした。上記(4)は、この調査をもとに学会発表を行った。そのうち、特に、鎌倉期から南北朝期の連歌を対象とし、『狭衣物語』がどのように用いられていたかを明らかにした。また、調査の過程で新たに見いだした古筆切・断簡をもとに、そこから表出する受容の諸相にも言及した。さらに、申請者が所属する狭衣物語研究会が主体となって刊行した『狭衣物語空間/移動』の合評会も行われ、その書評も担当した。

狭衣物語の写本に見られる叙述から、読みの諸相をうかがうことができることを明らかにできた。狭衣物語には多くの写本が現存し、本研究でとりあげきれていないものも複数存在するが、おおむね、本研究の目的である狭衣物語受容の一端を解明できたと考える。狭衣物語の写本を対象とした研究が中心となったが、今後は、写本以外の享受資料も包括しながら調査を進めていく必要がある。とりわけて、本研究が目的とする受容層や享受のあり方を明らかにするためには、現存する資料を可能な限り活用していかなければならない。あわせて、新資料の紹介も順次行っていく予定である。
悪性黒色腫の浸潤転移機構におけるNFE2L2の役割の解析

悪性黒色腫の浸潤抑制は、治療上の大きな課題である。申請者は、これまでの研究より、恒常活性化型NFE2L2遺伝子を強制発現すると、形質転換メラノサイトの浸潤が抑制されるという結果を得ているが、その機序は不明である。そこで今年度は、活性化NFE2L2が、インテグリン制御に深く関わるPGC1alphaに対して促進的に働き、腫瘍細胞の足場形成に関与することで浸潤制御する可能を検討した。具体的には、PGC1alphaを介したインテグリン制御系におけるNFE2L2の関与、さらに、NFE2L2-PGC1alpha経路を活性化することで浸潤・転移を抑制できるかについて、主に培養細胞を用い検討した。その結果、現段階で以下について明らかとなっている。(1)ヒト悪性黒色腫細胞株において、抗腫瘍薬であるベムラフェニブはPGC1alphaの発現を誘導することで浸潤を抑制することが知られている。そこで、ベムラフェニブによるPGC1alphaの発現誘導効果に対して、NFE2L2活性化がどのような影響を与えるかを、NFE2L2活性化剤であるスルフォラファン処理により検討した。その結果、ベムラフェニブによるPGC1alpha-mRNAの誘導はNFE2L2活性化によって強く抑制されることが明らかとなった。これは、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、当初予想したPGC1apha経路以外の経路が関与することを意味する。(2)悪性黒色腫細胞株において、無刺激状態で、レドックス遺伝子の活性化を伴わない低レベルのNFE2L2活性化がみとめられた。これは、NFE2L2の機能発現には閾値が存在することが示唆する。今後は、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、新たな機構を検討する(「今後の研究の推進方策等」を参照)。「研究実績の概要」に示した背景をもとに、NFE2L2による浸潤抑制機序として、PGC1alpha-ID2-TCF4経路によるインテグリン生成機構へのNFE2L2の関与について、悪性黒色腫培養細胞株を用い分子生物学的な検討をおこなった。具体的には、NFE2L2活性化剤であるスルフォラファン処理をした細胞を用いて、ウェスタンブロット法と定量PCR法により、タンパク質、mRNAの発現変動量を解析した。その結果、ベムラフェニブによるPGC1alpha-mRNAの誘導はNFE2L2活性化によって50%程度抑制されることが明らかとなった。また、NFE2L2経路を活性化することで、メラノーマの転移を抑制できるか、培養細胞レベル(ベムラフェニブ耐性メラノーマ細胞株や形質転換メラノサイト細胞株)での基礎的知見を得るこために、悪性黒色腫細胞株にNFE2L2活性化剤であるスルフォラファンを作用させ、マトリゲル法を用い浸潤能を解析した。その結果、活性化型NFE2L2遺伝子を強制発現した場合と同様に、強い浸潤抑制がみとめられた。現在までの研究結果から、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、当初予想したPGC1apha経路以外の経路が関与することが示唆された。また、悪性黒色腫細胞株において、無刺激状態でレドックス遺伝子の活性化を伴わない低レベルのNFE2L2活性化がみとめられることから、NFE2L2の機能発現には閾値が存在し、低発現状態のNFE2L2はレドックス制御以外に機能する可能性も示唆された。近年、NFE2L2はオートファジー経路を活性化することが示されており(Jena KK. et al., EMBO J. 2018)、また、オートファジーの活性化は浸潤抑制につながることが示されている(Mowers EE. et al., Oncogene 2017)。そこで今後は、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、低発現状態のNFE2L2がオートファジー経路の活性化を介して、浸潤を制御している可能性を検討することを計画している。具体的には、(1)悪性黒色腫細胞株において、オートファジー経路が定常状態でどの程度活性化しているか、また、それが浸潤能にどの程度関係しているかを確認したあとに、(2)定常状態での低レベルNFE2L2をsiRNA法によりノックダウンした場合に、オートファジー経路にどの程度影響を及ぼすかを、それぞれ悪性黒色腫培養細胞株を用いて、ウェスタンブロット法や定量PCR法など生化学的・分子生物学的手法により解析する。これらを本年度の主要な研究計画とする。

そこで、ベムラフェニブによるPGC1alphaの発現誘導効果に対して、NFE2L2活性化がどのような影響を与えるかを、NFE2L2活性化剤であるスルフォラファン処理により検討した。その結果、ベムラフェニブによるPGC1alpha-mRNAの誘導はNFE2L2活性化によって強く抑制されることが明らかとなった。これは、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、当初予想したPGC1apha経路以外の経路が関与することを意味する。(2)悪性黒色腫細胞株において、無刺激状態で、レドックス遺伝子の活性化を伴わない低レベルのNFE2L2活性化がみとめられた。これは、NFE2L2の機能発現には閾値が存在することが示唆する。今後は、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、新たな機構を検討する(「今後の研究の推進方策等」を参照)。「研究実績の概要」に示した背景をもとに、NFE2L2による浸潤抑制機序として、PGC1alpha-ID2-TCF4経路によるインテグリン生成機構へのNFE2L2の関与について、悪性黒色腫培養細胞株を用い分子生物学的な検討をおこなった。具体的には、NFE2L2活性化剤であるスルフォラファン処理をした細胞を用いて、ウェスタンブロット法と定量PCR法により、タンパク質、mRNAの発現変動量を解析した。その結果、ベムラフェニブによるPGC1alpha-mRNAの誘導はNFE2L2活性化によって50%程度抑制されることが明らかとなった。また、NFE2L2経路を活性化することで、メラノーマの転移を抑制できるか、培養細胞レベル(ベムラフェニブ耐性メラノーマ細胞株や形質転換メラノサイト細胞株)での基礎的知見を得るこために、悪性黒色腫細胞株にNFE2L2活性化剤であるスルフォラファンを作用させ、マトリゲル法を用い浸潤能を解析した。その結果、活性化型NFE2L2遺伝子を強制発現した場合と同様に、強い浸潤抑制がみとめられた。現在までの研究結果から、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、当初予想したPGC1apha経路以外の経路が関与することが示唆された。また、悪性黒色腫細胞株において、無刺激状態でレドックス遺伝子の活性化を伴わない低レベルのNFE2L2活性化がみとめられることから、NFE2L2の機能発現には閾値が存在し、低発現状態のNFE2L2はレドックス制御以外に機能する可能性も示唆された。近年、NFE2L2はオートファジー経路を活性化することが示されており(Jena KK. et al., EMBO J. 2018)、また、オートファジーの活性化は浸潤抑制につながることが示されている(Mowers EE. et al., Oncogene 2017)。そこで今後は、NFE2L2活性化による浸潤抑制機構として、低発現状態のNFE2L2がオートファジー経路の活性化を介して、浸潤を制御している可能性を検討することを計画している。具体的には、(1)悪性黒色腫細胞株において、オートファジー経路が定常状態でどの程度活性化しているか、また、それが浸潤能にどの程度関係しているかを確認したあとに、(2)定常状態での低レベルNFE2L2をsiRNA法によりノックダウンした場合に、オートファジー経路にどの程度影響を及ぼすかを、それぞれ悪性黒色腫培養細胞株を用いて、ウェスタンブロット法や定量PCR法など生化学的・分子生物学的手法により解析する。これらを本年度の主要な研究計画とする。研究内容変更を必要とする実験結果が得られたため、1ヶ月ほど実験作業を中断しその精査を行った。それにより使用残額が生じた。
ストレッチングによる伸張部位の探索的研究：医学的測定と工学的測定を併用した試み

関節可動域制限は主に関節周囲の軟部組織の伸張性や弾性の低下に起因して生じ,臨床場面ではこれに対してストレッチングが有効な介入方法として広く用いられている。しかしながら,ストレッチングがどの部位(組織)の伸張性を改善しているのか,またその伸張部位はストレッチング方法により異なるかどうかは未だ明らかではない。そこで,本研究では,近年工学分野で発展している三次元変形・変位測定を,従来ストレッチングの効果判定に用いられてきた等速性運動機器および超音波エコーと併用することで,ストレッチング後の組織別の伸張性または弾性係数の変化をそれぞれ確認すること,ならびにストレッチング方法の違いによる伸張部位の違いを確認することを目的としている。本研究結果は,可動域の制限組織別に最善のストレッチング方法を提案するための基礎的資料となりうる。スタティックまたはダイナミック・ストレッチングによる伸張部位の検討を行った実験では,1)どちらのストレッチング方法においても,実施後に関節可動域および痛みが生じる直前の受動トルクが有意に増加し,受動スティフネス,腓腹筋内側頭における筋腹および腱膜の剪断弾性係数が有意に低下すること,2)スタティック・ストレッチング実施後でのみ,腓腹筋内側頭における筋腱移行部の変位量が有意に増加すること,3)スタティック・ストレッチング実施後の腓腹筋内側頭における腱膜の剪断弾性係数の低下率は,ダイナミック・ストレッチング実施後よりも有意に大きいこと,4)スタティック・ストレッチング後の皮膚のひずみ量は1%未満であることを明らかにした。今後は,ダイナミック・ストレッチング後の皮膚のひずみ量についても検証するとともに,スタティック・ストレッチングおよびダイナミック・ストレッチングの併用が各評価指標に与える影響についても併せて検証を進めていく。本研究は,近年工学分野で発展している三次元変形・変位測定を,従来ストレッチングの効果判定に用いられてきた等速性運動機器および超音波エコーと併用することで,ストレッチング後の組織別の伸張性または弾性係数の変化をそれぞれ確認すること,ならびにストレッチング方法の違いによる伸張部位の違いを確認することを目的としている。2018年度においては,スタティックまたはダイナミック・ストレッチングによる伸張部位の検討を行った。結果,どちらのストレッチング方法においても,実施後に関節可動域および痛みが生じる直前の受動トルクが有意に増加し,受動スティフネス,腓腹筋内側頭における筋腹および腱膜の剪断弾性係数が有意に低下すること,スタティック・ストレッチング実施後でのみ,腓腹筋内側頭における筋腱移行部の変位量が有意に増加すること,スタティック・ストレッチング実施後の腓腹筋内側頭における腱膜の剪断弾性係数の低下率は,ダイナミック・ストレッチング実施後よりも有意に大きいこと,スタティック・ストレッチング後の皮膚のひずみ量は1%未満であることを明らかにした。以上の結果より,腱膜のスティフネスおよび筋の伸展性を改善するためには,ダイナミック・ストレッチングよりもスタティック・ストレッチングがより効果的であることが示唆された。このことは,関節可動域の制限組織別に最善のストレッチング方法を提案するための基礎的資料となりうる。2018年度に行ったスタティックまたはダイナミック・ストレッチングによる伸張部位を検証した実験では,どちらのストレッチング方法においても,関節可動域,痛みが生じる直前の受動トルクおよび受動スティフネスといった柔軟性指標が改善すること,一方で腱膜のスティフネスの指標として用いた腓腹筋内側頭における腱膜の剪断弾性係数および筋の伸展性の指標として用いた筋腱移行部の変位量は,ダイナミック・ストレッチング実施後と比較してスタティック・ストレッチング実施後により大きく改善することなどを確認した。これらの結果を基に,スタティックおよびダイナミック・ストレッチング実施後の皮膚のひずみ量について更に詳細に検討するとともに,2019年度はスタティック・ストレッチングおよびダイナミック・ストレッチングの併用が各評価指標に与える影響について検証し,2018年度に得られた結果と比較・検討することで,関節可動域の制限組織別に最善のストレッチング方法を提案するための基礎的データを構築する。

今後は,ダイナミック・ストレッチング後の皮膚のひずみ量についても検証するとともに,スタティック・ストレッチングおよびダイナミック・ストレッチングの併用が各評価指標に与える影響についても併せて検証を進めていく。本研究は,近年工学分野で発展している三次元変形・変位測定を,従来ストレッチングの効果判定に用いられてきた等速性運動機器および超音波エコーと併用することで,ストレッチング後の組織別の伸張性または弾性係数の変化をそれぞれ確認すること,ならびにストレッチング方法の違いによる伸張部位の違いを確認することを目的としている。2018年度においては,スタティックまたはダイナミック・ストレッチングによる伸張部位の検討を行った。結果,どちらのストレッチング方法においても,実施後に関節可動域および痛みが生じる直前の受動トルクが有意に増加し,受動スティフネス,腓腹筋内側頭における筋腹および腱膜の剪断弾性係数が有意に低下すること,スタティック・ストレッチング実施後でのみ,腓腹筋内側頭における筋腱移行部の変位量が有意に増加すること,スタティック・ストレッチング実施後の腓腹筋内側頭における腱膜の剪断弾性係数の低下率は,ダイナミック・ストレッチング実施後よりも有意に大きいこと,スタティック・ストレッチング後の皮膚のひずみ量は1%未満であることを明らかにした。以上の結果より,腱膜のスティフネスおよび筋の伸展性を改善するためには,ダイナミック・ストレッチングよりもスタティック・ストレッチングがより効果的であることが示唆された。このことは,関節可動域の制限組織別に最善のストレッチング方法を提案するための基礎的資料となりうる。2018年度に行ったスタティックまたはダイナミック・ストレッチングによる伸張部位を検証した実験では,どちらのストレッチング方法においても,関節可動域,痛みが生じる直前の受動トルクおよび受動スティフネスといった柔軟性指標が改善すること,一方で腱膜のスティフネスの指標として用いた腓腹筋内側頭における腱膜の剪断弾性係数および筋の伸展性の指標として用いた筋腱移行部の変位量は,ダイナミック・ストレッチング実施後と比較してスタティック・ストレッチング実施後により大きく改善することなどを確認した。これらの結果を基に,スタティックおよびダイナミック・ストレッチング実施後の皮膚のひずみ量について更に詳細に検討するとともに,2019年度はスタティック・ストレッチングおよびダイナミック・ストレッチングの併用が各評価指標に与える影響について検証し,2018年度に得られた結果と比較・検討することで,関節可動域の制限組織別に最善のストレッチング方法を提案するための基礎的データを構築する。
iPS細胞技術を応用した統合失調症の疾患特異的幹細胞の作出とその機能解析

本研究の目的は、統合失調症患者の皮膚検体から線維芽細胞を採取して継代培養したのち多能性幹細胞へと誘導し、統合失調症特異的幹細胞を作出すること、そして、神経幹細胞やドパミン神経へと分化させ、その動態を調査することで統合失調症の『神経幹細胞機能不全仮説』を検証することにある。平成22年度における進捗を以下に示す。【対象の選定】DSM-IV-TRの診断基準に基づき統合失調症と診断され、浜松医科大学附属病院精神神経科外来を受診中の成人患者を対象に、研究の目的と方法、予想される結果について患者本人及び保護者に書面を用いて説明し研究への協力を求めた。平成22年3月末の時点でも、患者本人と保護者の両者から同意が得られたケースがなく、残念ながら皮膚検体採取に至っていない。今後、引き続き研究への協力を募る予定である。【iPS細胞からセロトニン神経への誘導】統合失調症の病態生理にあずかるセロトニン神経系の関与とその分子基盤を明らかにするためには、統合失調症患者由来iPS細胞よりセロトニン神経を調製し、その機能障害を検討することが一つの方法として考えられる。しかし、iPS細胞または胚性幹細胞からセロトニン神経へと分化させる技術はいまだ確立されていない。そこで、平成22年度は、マウス線維芽細胞よりiPS細胞を得た後に、それをセロトニン神経に分化させる方法を検討した。BALB/cマウス胎仔脳軟膜由来の線維芽細胞に、常法によりOct3/4、Sox2、Klf4をそれぞれ発現するよう調製したレトロウイルスを感染させ、LIF添加培地においてiPS細胞を樹立した。ついで、マウスiPS細胞を独自の間質細胞上に播種し、その2週間後に得られた神経幹細胞塊を分離、さらに、ShhとFGF8添加培地中で1週間培養を続けたものに、リポフェクション法によりLmxlbを強制発現させたところ、セロトニンの産生が認められ、セロトニン神経への分化が確認された。本研究の結果から、マウスiPS細胞からセロトニン神経への分化誘導が十分可能であることが示唆される。この技術をヒトiPS細胞で試みることにより、統合失調症患者皮膚由来のiPS細胞からのセロトニン神経作製が可能となることが推測される。今後、セロトニン神経の一層効率的な分化誘導を行うために、セロトニン神経のマーカーであるPet1の発現をさらに高める方法を検討する必要があると考えられた。平成21年度における進捗を以下に示す。平成21年3月末の時点で患者本人と保護者の両者から同意が得られたケースがなく、残念ながら皮膚検体採取に至っていない。平成22年度で引き続き研究への協力を募る予定である。【皮膚試料採取と線維芽細胞培養】統合失調症患者からの検体採取が遅れていることから、健常ボランティアを募り、計4名の健常成人の皮膚検体を採取した。対象者の前腕内側より真皮を含む皮膚片を採取し細切、トリプシン処理後、ペニシリンとストレプトマイシンを含む10%ウシ胎児血清添加DMEMで培養し線維芽細胞を得、-80°Cに保存中である。平成22年度に患者の検体が得られた後、患者と健常者の線維芽細胞を並行してiPS化していく予定である。【成体海馬神経新生に果たすドパミンの役割に関する基礎的研究】統合失調症の『神経幹細胞機能不全仮説』を考える上で、ドパミンと神経幹細胞・前駆細胞との関連性を明らかにすることは重要である。そこで、海馬へ投射するドパミン神経の破壊が、成体海馬に観察される神経新生にどのように影響するかを、ラットを用いて検討した。その結果、ドパミン神経を破壊すると海馬の神経新生が低下し、抗うつ薬はその低下を回復させることが明らかになった(PloS One誌に公表)。【iPS細胞からセロトニン神経への誘導】統合

失調症の病態生理にあずかるセロトニン神経系の関与とその分子基盤を明らかにするためには、統合失調症患者由来iPS細胞よりセロトニン神経を調製し、その機能障害を検討することが一つの方法として考えられる。しかし、iPS細胞または胚性幹細胞からセロトニン神経へと分化させる技術はいまだ確立されていない。そこで、平成22年度は、マウス線維芽細胞よりiPS細胞を得た後に、それをセロトニン神経に分化させる方法を検討した。BALB/cマウス胎仔脳軟膜由来の線維芽細胞に、常法によりOct3/4、Sox2、Klf4をそれぞれ発現するよう調製したレトロウイルスを感染させ、LIF添加培地においてiPS細胞を樹立した。ついで、マウスiPS細胞を独自の間質細胞上に播種し、その2週間後に得られた神経幹細胞塊を分離、さらに、ShhとFGF8添加培地中で1週間培養を続けたものに、リポフェクション法によりLmxlbを強制発現させたところ、セロトニンの産生が認められ、セロトニン神経への分化が確認された。本研究の結果から、マウスiPS細胞からセロトニン神経への分化誘導が十分可能であることが示唆される。この技術をヒトiPS細胞で試みることにより、統合失調症患者皮膚由来のiPS細胞からのセロトニン神経作製が可能となることが推測される。今後、セロトニン神経の一層効率的な分化誘導を行うために、セロトニン神経のマーカーであるPet1の発現をさらに高める方法を検討する必要があると考えられた。
膵癌におけるマイクロRNAの発現と機能解析

microRNAはmRNAの発現を制御することにより様々な生体機能に関与する。最近、microRNAの発現異常が発癌や癌の進展に寄与することがわかってきた。そこで私達は膵癌におけるmicroRNAの発現異常に着目し、microRNAをターゲットとした新規診断法・治療法の開発を目的として研究を進めてきた。まず、膵管上皮細胞、膵癌前駆病変、浸潤性膵癌、膵癌細胞株のmicroRNAの発現レベルをマイクロアレイを用いて網羅的に解析することで、膵発癌や膵癌の増殖・浸潤に関わる複数の新規microRNAを同定した。さらにそのmicroRNAの標的RNAを同定し、蛋白発現への影響も検証した。microRNAの発現を抑制することで標的RNAの発現が増加し、癌の増殖・浸潤が低減できることを発見した。さらに、膵癌はしばしば抗癌剤に耐性を示し膵癌治療難治性の一因となっているが、あるmicroRNAの発現を抑制することで抗ガン剤耐性を低減できることを発見した。また、膵癌患者の予後や臨床病理学的所見と相関する複数のmicroRNAも同定しており、膵液や膵腫瘍細胞診により得られたサンプルを用いた膵がん診断・治療に応用できる可能性を示した。現在も臨床応用を視野に入れたトランスレーショナルリサーチを続行中である。膵癌は、現在国内で癌死の第5位を占めるほどの主要な癌でありながら、最近30年間でほとんど予後改善(5年生存率がわずか3%のまま)が認められない。本研究では、マイクロアレイによる網羅的な解析と、定量摘リアルタイムPCR法により、多数のかつ微量な臨床サンプルであるホルマリン包埋組織並びに膵液のmicroRNA発現解析を実施し、膵癌の浸潤・転移能、膵癌患者の予後を左右する膵癌microRNAを同定する。また膵癌凍結切片からはマイクロダイセクションによって膵発癌過程にある細胞群を選択的に抽出し、発癌のどの段階においてmicroRNAの機能が関与しているかを明らかにする。平成19年度は、膵癌細胞のマイクロアレイによるmiRNAの網羅的な解析を行い、膵癌特異的なmiRNAを複数同定し、定量的real-time RT-PCRによりその結果を確認した。さらに特定のmicroRNAを選択し、その発現レベルに応じて膵癌細胞のphenotypeが変化するという所見が得られた。現在、そのmiRNAのターゲットとなる遺伝子群を選択し、その中からさらにそのphenotypeの変化に関連する分子を同定する作業を進めている。今後は、さらに、マイクロアレイの結果から膵癌診断に有望なものを選択し、膵液を用いた膵癌診断への臨床応用を検討する。また、上記の以外の本解析により同定されるmicroRNAにおいても、そのターゲットとなる分子が数多くあると予想され、その中から新規の膵癌に特異的に関与する分子の同定をすすめ、microRNAだけでなくその下流に位置する分子群が膵癌の診断、治療のまったく新しい標的分子となりうるか検討を加えていく。本研究では、Bioarrayによる網羅的な解析と、定量的リアルタイムRT-PCR法により、多数のかつ微量な臨床サンプルであるホルマリン包埋組織(FFPEサンプル)並びに膵液のmicroRNA(miRNA)発現解析を実施し、膵癌の浸潤・転移能、膵癌患者の予後を左右する膵癌miRNAを同定する。また膵癌凍結切片からはマイクロダイセクションによって膵発癌過程にある細胞群を選択的に抽出し、発癌のどの段階においてmiRNAの機能が関与しているかを明らかにする。平成20年度は、前年に行った膵癌細胞のアレイによるmiRNAの網羅的解析の結果を受け、膵癌特異的なmiRNAを複数同定し、定量的リアルタイムRT-PCRを行ってその結果を確認した。さらに特定のmiRNAを選択し、その発現レベルに応じて膵癌細胞のphenotypeが変化するという所見が得られた。現在、そのmiRNAのターゲットとなる遺伝子群を選択し、その中からさらにそのphenotypeの変化に関連する分子を同定する作業を進めた。また、臨床サンプル(FFPEサンプル)を用いた検討で、膵癌の浸潤・転移能、膵癌患者の予後を左右する膵癌miRNAの同定に成功し、標的遺伝子との関係も明らかにした。

また、マイクロダイセクションを行って膵発癌過程とmiRNA(miR-17-5pなど)の関与について検討を行い、一定の成果が得られた。さらに、膵癌診断に有望なmiRNAを選択して、膵液を用いた膵癌診断への臨床応用を試みた。また、上記以外の解析により同定されたmiRNA(miR-21など)においても発現増強・または抑制による機能解析を行い、miRNAが膵癌の進展(細胞増殖・浸潤)に影響を及ぼすことを明らかにした。
家畜悪性感染症における免疫破綻の分子機序の解明および新規制御法の開発

マダニ媒介性感染症を含む悪性伝染病罹患家畜より採材を敢行し、免疫状態と免疫抑制関連因子の発現解析を行う。すなわち、感染動物由来リンパ球に免疫回避機構を標的とした抗体医薬等を添加し、免疫再活性化が誘導されるかを試験管レベル(in vitro試験)および生体試験で検証する。一方、海外共同研究者と行ってきたマダニ網羅的発現遺伝子解析情報から病原体伝播促進因子やマダニ種間で共通な抗マダニワクチン候補分子を同定する。
現代インドのヒンドゥー・ナショナリズムの宗教学的研究

平成15年度において私は、1980年代から90年代にかけてのヒンドゥー・ナショナリスト・イデオロギーの歴史的、構造的分析をおこなった。用いた一次資料は、これまでの数年間インドやイギリスへと赴むことで、私が現地で直接収集したものばかりである。ほとんどが英語、一部ヒンディー語のものが含まれる。また、現地においておこなった主要イデオローグたちとのインタヴューの記録も用いた。分析の視点としては、彼らのイデオローグたちが、その言説戦略を通じて、ヒンドゥー教をどのようなものとして構想し、またそれをナショナリズムと暴力へとどのように接続するかという問いを掲げた。この分析によって明らかになったのは、第一に80年代から90年代にかけて彼らのイデオロギーは通時的、共時的にかなり安定した構造を保っていたこと、第二に、宗教とナショナリズムを接続するのは「文化」という範疇であること、そして第三に、彼らの語りが有する物語や形而上学の形式が大衆の神話的想像力を強く刺激し、動員促進に大きな役割を果たしていることなどである。また、上記イデオロギー分析の成果をもとに、ヒンドゥー・ナショナリズムという運動ないしは現象が、現代世界における「宗教復興」の一例としてどのように史的に位置づけられるかという点についても研究をおこなった。そこから導き出された結論は、第一に、現代甚だしく混用されている原理主義と宗教ナショナリズムという二つの概念の区別が必要であること、第二に、反近代、反世俗、反西洋などの機制をこれら諸現象/運動のなかにあまり強く読み込むべきではないこと、そして第三に、比較宗教的な現代宗教論は文明論のような地政学的な分類学と比較研究をおこなうべきではない、ということであった。1)ヒンドゥー・ナショナリスト運動が1980年代半ば以降、インド連邦レベルでの民主議会政治において台頭した背景を考察した。第一に、ヒンドゥー・ナショナリスト政党であるインド人民党の成長を説明するには、宗教的熱狂と排他的民族意識の高揚という条件が支配的であった93年以前の時期と、独立インド政治の制度疲労にともなう有権者の不平不満の表出という条件が支配的である95年以降の時期とのあいだで区別を設けることが必要であることを明らかにした。第二に、これらの傾向がとくにインド中間層の政治文化の展開と並行していることを論じた。すなわち、中間層の多様な志向や欲望が、ヒンドゥー・ナショナリスト・イデオロギーにおいて明確に表出されているとともに、彼(女)らこそがこの運動を支える最も重要な支持基盤であることをイデオロギー分析の手法によって明らかにした。2)ヒンドゥー・ナショナリスト運動の政治的成功を、現代世界における「宗教復興」現象の一事例として解釈する理論枠組みについて考察をおこなった。第一に、本研究は、現在流布している多くの「宗教復興」論に意義を唱えるかたちで、世俗化/近代化/西洋化に対する単なる反動として「宗教復興」現象をとらえるべきではなく、そこにおいて追求されている世俗的・西洋近代的理想についても十分な理解が必要であることを論じた。第二に、現代宗教論においては、原理主義と宗教ナショナリズムを概念として混淆させるべきではないことを論じた。ヒンドゥー・ナショナリズムを原理主義と呼ぶことは、多くの誤解をうむことになるだろう。そして第三に、「宗教復興」現象における暴力の様態について比較研究をおこなうことの必要性を論じた。そこでは、ミクロとマクロのレベル設定を施し、とくにマクロ・レベルにおいては直接的暴力の陰に隠れてしまいがちな構造的暴力に焦点を当てるべきことを明らかにした。
炭素-炭素π単結合化合物の構築

炭素-炭素π単結合が存在するかどうかを調べるために、種々の置換基をもつビシクロ[1.1.0]ブタンの理論計算を行い、最適化構造と分子軌道を求めた。その結果、橋頭位にアルコキシ基などの電子供与基が結合し、ビシクロ[1.1.0]ブタン環の2,4位にフッ素などの電子求引基が結合すると、ビシクロ[1.1.0]ブタンは平面構造をとり、橋頭位に炭素-炭素π単結合が形成されることがわかった。橋頭位に電子供与基が結合し、2,4位に電子求引基が結合したビシクロ[1.1.0]ブタンの合成を次のような方法で検討した。まず、電子供与基が結合したアルキンにジフルオロカルベンやジクロロカルベンを付加させて、シクロプロペン誘導体を合成し、これにジフルオロカルベンやジクロロカルベンをもう一つ付加させて、目的化合物の合成を行うことにした。ジフルオロカルベンはブロモジフルオロ酢酸ナトリウムをジグリム中で加熱して発生させ、ジクロロカルベンはクロロホルムにカリウムtert-ブトキシドを作用させて発生させた。アルキン上の置換基としては、フェニル基、ジフェニルホスフィニル基、ジフェニルチオホスフィニル基、ジエチルアミノ基を用いた。その結果、ジフルオロカルベンやジクロロカルベンはアルキンに対して1分子が付加してシクロプロペン誘導体が生成するが、もう1分子の付加は進行しにくいことがわかった。そのため、別のルートの合成法として、現在、1,3-ジハロシクロブタンの還元によってビシクロ[1.1.0]ブタン骨格を形成することを検討している。
日華植物区系要素のアジア島嶼環境に対する適応進化

本研究では国内の島嶼として、宮島(厳島)、金華山島、鹿島、屋久島、種子島、口永良部島、石垣島、与那国島を、また海外の調査地としてジャワ島、バリ島、ボルネオ島(サバおよびカリマンタン)、台湾、済州島の各島嶼の調査を行なった。それぞれの地域において、固有の環境適応形質として、特に矮小化の問題を取り上げ(総説として塚谷,2003)、解析を進めた結果、ツルアリドオシ、ネジバナ、オオバコにおける矮小形質の詳細が初めて明らかになり、それぞれの矮小型について、分子系統学的な見地からの分類上の扱いが整理され、アジア地域におけるネジバナ、オオバコの植物地理の問題も解明された(Yokoyama et al.,2003;Tsukaya,2005;Ishikawa et al.,submitted)。また南西諸島を中心に、アリドオシにおける倍数性と花柱2型性の関連性も見いだされた(Naiki and Nagamasu,2004)。さらに、ジャンルをこえた研究者集団を構成して、上記の現地調査を行なった結果、ムラサキシキブ属における浸透交雑が、国内で想像以上に広く認められる事実(Tsukaya et al.,2003)や、日本におけるヤブガラシの種内倍数性の存在(Okada et al.,2003)、東南アジアを含めたヤブガラシ属の核型の詳細(Okada and Tsukaya,2003;Okada et al.,submitted)、熱帯多雨林林床型植物の葉の構造的斑入りの未記載の構造的特性(Tsukaya et al.,2004)、ジャワ島山地帯におけるツリフネソウ属の自然交雑集団の存在(Tsukaya,2004)、台湾産ギンリョウソウ属の菌根菌がギンリョウソウのそれと大きく異なる事実の発見(Yokoyama et al.,2005)、奄美諸島におけるクロタキカズラ科の新種植物の発見(Nagamasu and Kato 2004)など、多面的な成果を上げることができた。また本研究課題で中心的解析手法となった分子系統学的解析の、本研究のようなフィールド調査とのカップリングにおける最適化を図った結果、FTAカードを用いたDNAサンプリングが最も効率的であることを見いだし、新技術として公表した(Tsukaya,2003;Tsukaya et al.,2005)ほか、本手法を用いた関連研究の展望について提言をまとめた(Tsukaya, in press)。本年度はフィールド調査として国内は広島県厳島、宮城県金華山、鹿児島県屋久島、愛知県鳳来寺山、三重県御在所岳、愛媛県鹿島周辺を選び、それぞれ矮小化現象を中心に現地調査を行なった。また京都大学および東京大学標本庫を中心に、ハーバリウム調査も行ない、国内での他産地での標本との比較検討も行なった。その結果、島喚域で知られてきた矮小化現象の一部は、島嶼環境よりはむしろ、鹿食害や地理的クラインの影響が大きいことが示唆された。

採集された植物は、それぞれの研究室で栽培下におき、形質の安定性を確認中である。オオバコなど一部の植物に関しては、世代を重ねての形質の安定性の確認がとれた。また屋久島から報告されていた矮小変種ヒメツルアリドオシに関しては、変種とみなすほどの遺伝的分化をとげていないこと、形態的にも日本各地でのサイズ変異の中に含まれることから、品種とみなすべきであることが判明した。一部成果は、すでに論文にまとめ、投稿中である。また海外調査地としては、調査許可の得られたインドネシア・ジャワ島で調査を行ない、熱帯高山帯における日華植物区系要素の分布、形質について調査、また系統学的に中国、日本、ネパール等、起源地域に近い近縁種との相違について分子系統学的解析に着手した。東アジアの島嶼、特に比較的標高の高い地域において、本来その周辺地域には見られない他の植物区系に属する植物要素がrefugeeとして残されていることがある。また一方、海洋島の中には、自生する植物に著しい矮小化の認められる島も少なくない。しかし、いかなる環境要因が、そのような島嶼域独特の植物の形態的適応や隔離分布を実現しているのかは、ほとんど未解明のままである。また、熱帯東南アジアにおけるシノーヒマラヤ要素の進出に関する植物地理学的・分子系統学的解析も、ほとんど進んでいない。そこで本研究2年目の平成15年度においては、昨年度、全体像がほぼ明らかとなった国内及び標的の概略が明らかとなった東南アジア地域について、より詳細に解析すべきフィールド地域の調査をそれぞれ、短期集中的に遂行した。具体的には、日本国内については宮城県金華山島、鹿児島県屋久島及び南西諸島の各所について、特定の矮小化植物について、現地での調査と研究室内での解析に取りかかった。また昨年度の内に収集したツルアリドオシ、オオバコ、イヌムラサキシキブ、ヤブガラシ等について、細胞遺伝学的、発生学的、分子遺伝学的解析を進めると共に、それぞれの近縁集団との間の遺伝的同一度について、分子系統学的解析を行なった(Okada et al.2003;Yokoyama et al.2003;Tsukaya et al.2003;Okada and Tsukaya 2003)。また東アジア・東南アジアに関しては、インドネシア・ジャワ島の2地点及びマレーシア領サバ州キナバル山において、それぞれ予備現地調査を行ない、日華植物区系の中でもPrimula, Potentillaなどのシノーヒマラヤ要素の隔離分布分類群を中心に、島嶼環境下の高山帯において適応を遂げたと考えられる植物種のサンプリングを実施した。これらについては、近縁種との間の分子系統学的解析及び発生学的解析を行なっている。またオオバコ属に関しては日本産のもの、特に屋久島矮小型等との比較を行ない、従来の分類体系に齟齬のあることを見いだした。本研究計画は、従来の分類学者が中心となったフィールド調査とは異なり、専門ジャンルごとに系統的に解析の分担を割り振ることで、3年間の短期集中的に、目標とする研究を達成しようと計画したものである。そのことを踏まえ、最終年度の平成16年度においては、国内については、屋久島及び屋久島と類似した倭小化変異が認められる島嶼を重点的に対象として、最終的な解析を進めてきた。そのため、特に日華植物区系要素との関連をこれまで2年間にわたって調べてきた東南アジア地域については、日本との地理的連関から、間をつなぐ台湾及び済州島の調査を行なった。
歯髄炎に起因した異所性異常疼痛に対する三叉神経節細胞間機能連関の分子機構解明

申請者のこれまでの研究により,歯髄炎が発症するとHsp70が歯髄組織に発現し,三叉神経節細胞体に軸索輸送され、歯髄を支配しているTG神経細胞体から細胞外分泌され,舌を支配しているTG神経細胞のTLR4と結合し,このTG神経細胞の興奮性を増強することを報告してきた。今回の結果から、1)興奮性を増したTG神経細胞では、NFkB及びMAPk経路を介してTRPV1受容体合成が亢進する可能性が明らかになった。また、2)M1歯髄と舌を二重支配するTG細胞の存在も確認されており,この細胞が歯髄炎によって興奮することによっても、舌に痛覚過敏が引き起こされると考えられる。歯髄炎に起因する口腔顔面の異所性疼痛がどの様なメカニズムで引き起こされるかについては不明な点が多く残されている。これまで、歯髄炎が引き起こされると、炎症歯髄を支配する三叉神経節細胞活動が著しく亢進することにより三叉神経節細胞にToll-like Receptor 4(TLR4)が発現し、舌に異所性異常疼痛が発症することを報告した。それだけでなく、三叉神経節細胞からはHSP70だけでなく、種々の神経ペプチドや一酸化窒素なども放出され、周辺部に存在する三叉神経節細胞の活動性を増強させることも明らかにした。このような結果から、TLR4を介した三叉神経節細胞どうしの機能的な相互作用が異所性異常疼痛の発症に対して重要な役割を成している可能性が示された。最近の報告では、TLR4を介する情報伝達系にはNFkBを介する系とマップキナーゼ(MAPk)を介する系が存在することが報告され、申請者らが解明したTLR4を介した三叉神経節内における情報伝達に対してこれらの系が関係する可能性が強いと考えられる。臨床では歯髄に慢性的な炎症が引き起こされると、歯髄以外の部位(顔面皮膚、顎関節、歯根膜、舌あるいは口腔粘膜)に異所性異常疼痛として症状が生じる場合があるが、口腔顔面痛を熟知していない歯科医師は、このような異常疼痛を口腔や顔面痛による疾患と誤認し、誤った治療を行ってしまうことがある。歯髄炎に起因する口腔顔面領域の異所性異常痛覚は症状が多岐にわたるため、疾患箇所以外に異所性異常疼痛という形で全く異なる部位に慢性の痛みを引き起こす。そのため、正確な審査・診断を困難にし、臨床上非常に大きな問題を引き起こすことがある。歯髄炎に伴う異所性異常疼痛を解明することは、原因不明の口腔顔面痛により苦しんでいる患者に適切な治療を施し、不適切な歯科治療から患者を救うことに役立つと考えられる。歯髄炎モデルを作製し、舌異常疼痛が発症しているラットの三叉神経節において、舌を支配する三叉神経節細胞にNFkBおよびMAPkのファミリーである、リン酸化ERK、リン酸化p38およびリン酸化JNKの発現亢進があるかどうかを明らかにし、また同時にTLR4の阻害薬を三叉神経節内に投与し、三叉神経節細胞における各ターゲット分子の発現変化、および舌の機械的および熱刺激に対する行動薬理学的解析も行う予定であったが、免疫組織学手法におけるデータ収集に時間を割いており、行動薬理学的解析およびWestern Blot法を用いた定量的解析に遅れを生じている。本プロジェクトではTLR4の発現からTRPV1合成に至る一連の情報伝達経路を形態学的、生化学的および電気生理学的手法を用いて総合的に解明することによって、歯髄炎に起因する舌の異所性異常疼痛発症に関して、三叉神経節細胞内における分子メカニズムの解明を目的とした。2014年にJournal of Neuroinflammation (Ohara et al.)で報告したモデル動物を用い、舌を支配しているTG神経細胞の興奮性を増強する経路について形態学的および生化学的手法を用いて、それぞれの分子の発現変化について定量解析を行い、各分子が炎症のない正常な舌を支配する三叉神経節細胞において発現増加があるかの解析を行った。さらに、これらの発現に対するTLR4ブロックの効果についても、同様の手法を用いて定量的な解析を加え、TLR4を介する経路がNFkBおよびMAPkの経路の活性化に関与するか否かを明らかにし、TLR4を介したNFkBおよびMAPkの経路が舌を支配する三叉神経節細胞において、TRPV1合成の亢進に関与するか否かについて形態学的および生化学的に解析を行った。今回の成果より、歯髄炎発症後、三叉神経節細胞体に軸索輸送され、歯髄を支配しているTG神経細胞体から細胞外分泌されたHSP70は舌を支配しているTG神経細胞のTLR4と結合し、舌を支配しているTG神経細胞の興奮性をNFkBおよびMAPk経路を介して増強する可能性が考えられている。興奮性を増したTG神経細胞では、TRPV1受容体の合成も増加している可能性が明らかになった。また,少数ではあるが、M1歯髄および舌を二重支配するTG細胞の存在も確認されており,この細胞が歯髄炎によって興奮性が増加すると、舌の感覚も担っていることから、舌の痛覚亢進にも直接的に関与する可能性が考えられる。

今回の結果から、1)興奮性を増したTG神経細胞では、NFkB及びMAPk経路を介してTRPV1受容体合成が亢進する可能性が明らかになった。また、2)M1歯髄と舌を二重支配するTG細胞の存在も確認されており,この細胞が歯髄炎によって興奮することによっても、舌に痛覚過敏が引き起こされると考えられる。今後の研究の推進方策として、28年度の計画であったNFkBおよびMAPkのファミリーである、リン酸化ERK、リン酸化p38およびリン酸化JNKの発現亢進があるかどうかを明らかにすることを継続して行っていく予定である。また、三叉神経節細胞内に発現するNFkBおよびリン酸化MAPkとTRPV1との関係の解析として、各種阻害薬の三叉神経節内連続投与により機械または熱痛覚に変化がおこるかを検索する。さらに、各阻害薬を三叉神経節内に連続投与したラットを用い、TRPV1およびリン酸化TRPV1の発現解析を免疫組織学的手法およびWestern blot法を用いて行い、NFkBおよびリン酸化MAPkがTRPV1の合成に関与するか否かを明らかにする。また、FGを舌に投与したナイーブラットの三叉神経節内にNF-kB acceleratorまたはpERK acceleratorを投与し、TRPV1の発現増加が誘導されるか否かについても、免疫組織学的手法およびWestern blot法により検証していく予定である。歯内療法学平成28年度の実験計画の進行状況がやや遅れており、本来購入する予定であった抗体および実験器具等をまだ購入していないため。また、実験計画の進行状況の遅れにより、本年度参加する予定であった学会で発表する機会が延期になってしまったため。実験計画の進行がやや遅れているために、本来購入する予定であった抗体および実験器具等の消耗品費に充当し、実験を進めていく予定である。また、データ収集および解析の遅れによる影響で、学会での発表が平成29年度に延期になってしまったため、平成29年度に報告を行えるように平成29年度助成金とあわせて旅費および学会参加費としても使用する。データ採取及び解析を行うために適正な使用を行いたいと考えている。
5〜18MeV陽子に対する気体(O_2,N_2,NO,N_2O等)の阻止能の精密測定

新しく開拓したガスの阻止能測定用装置を用いてガスの阻止能を1%以下の精度(最高の精度)で測定することを目的とする。そのためにまず2つのガスチェンバー即ちガスをつめるチェンバーとつめない真空のチェンバーのgeometry及び測定器系の左右対称性を確立しなければならない。これをチェックするために,この2つのチェンバーのうち一方の窓にMoの薄膜をはり,他方の窓には何もはらない。これによってMoの阻止能をはかることができる。かようにして今回得られた結果を以前に測定した結果と比較したところ,ほゞconsistentな値を得ることができた。しかし全体としてノイズが大きく,電子回路系及び検出器に少々問題があることが判明した。これを克服すれば,ガスの圧力・温度の0.2%以内の絶対測定ができる見通はすでについているので,1%以下のガスの阻止能測定ができるはずである。かようにして平成6年度中には(少ないマシンタイムではあるけれども),1%以下の最高の精度でもってガスの阻止能のデータを提供することができるであろう。
単語認知における文脈効果のメカニズム

単語の認知が文脈により促進されることは、すでに多くの実験的研究から明らかになっている。言うまでもなく、単語は文章などの文脈中で用いられるので、これらの研究から得られた知見は日常の「読み」を強く反映していると考えられる。本研究の目的は、単語認知のどの段階で文脈が作用するのかを多義語を用いて明らかにすることである。例えば、「頭」には、身体の一部としての頭もあれば、知能という意味での頭や、ものの初めという意味もある。どの意味で用いられているかは、文脈がないと解らない。これが文脈中で用いられた場合、まず、「頭」を表すべての意味がアクセスされた後、文脈による意味の制限が行われるのか、それともアクセス前からすでに文脈により意味が制限され、適切な意味にしかアクセスされないのかということである。実験の実施にあたっては、事前に刺激に用いる単語についてその単語のもついくつかの意味の親近性を質問紙調査した。刺激として用いられる多義語は、その第1の意味と第2の意味の親近性の差ができるだけ少ないものを用いた。実験では、視覚的に提示される多義語(例えば、頭)を含んだ文の提示時間中に、その文脈に適合する意味を持つ多義語の関連語(例えば、成績)を適切・関連条件のターゲット語として提示する。文の提示開始からターゲット語の提示開始までの時間およびプライム語とターゲット語の関係を独立変数とし、ターゲット語に対する語彙判断時間を従属変数とした。ターゲット語としてはこのほか、不適切・関連条件(例えば、帽子)や、無関連条件(例えば、机)の単語を用いた。その結果提示時間の遅延とともに不適切・関連条件に抑制効果が傾向として認めらた。