hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
馬尾・神経根の障害様式解明に関する実験的研究

In vitro実験と組み合わせて形態観察を進めることにより、障害神経根の修復過程解析も本格的に開始できる準備状態が達成された。本年度においては“神経根障害における痛みの発現機序とその増悪・緩解要素の解析"に焦点をおいて研究を行った。実験動物として主に成猫、成犬を用いた。麻酔下に腰椎を椎弓切除した後、神経節を含めて腰部脊髄後根(L6,7)を採取した。95%O_2と5%CO_2で飽和した人工脳脊髄液を満たしたchamber中に維持した。神経根の中枢側を5ー10本に細分してそれぞれの電気的活動を双極白金線電極を用いて導出・記録した。この状態では神経の自発活動は認めなかった。micromanupilatorに装着した圧迫子により神経節の部分に20g程度の圧迫を5秒間加えると直後より著明な神経活動が発生し、圧迫終了後も20ー60秒間持続した。一方神経節部以外の神経根を同様に圧迫した場合にはごく僅かの活動が瞬時的に発現したのみであった。この現象はきわめて再現性が高く、神経根において神経節部が物理的因子に対してきわめて感受性が高いことが明らかにされた。さらに神経根の化学感受性を検討するため神経伝達物質とされるものを含めて様々な化学物質を作用させ、引き起こされる神経活動の特性を解析した。これまでの所、substanceーP等一部のペプチドやcapsaicinのような発痛物質の一部により自発活動の明らかな増大を認めていることから、特に神経節部分の化学受容器存在に基づく化学的環境因子と神経性疼痛の発現が強く関連しているであろうことが強く示唆された。一般に血流障害の際に発生しうる酸生濃度低下や炭酸ガス濃度の増大はこれまで解析に用いた物理的・化学的因子により発現する神経根の活動を増強する傾向が認められた。また慢性圧迫状態にあった神経根の場合にも同様に感受性が増強されていることが分かった。本年得られたこれらの成績は脊椎疾患において発生する神経根性の疼痛に関してきわめて重要な知見を提供したとともに、今後疼痛抑制因子を客観的に検討する理想的な実験モデルであることが検証されたと言える。腰部神経根障害における痛みやしびれ感などの症状発現過程には、神経根に作用する機械的圧迫のみならず化学環境要因が深く関わっている可能性が示された。本研究では、成犬より採取した知覚神経節付神経根を95%酸素と5%二酸化炭素で飽和した人工脳脊髄液中で維持し、異所性発火発現様式を解析した。神経根の機械的圧迫によりしばしばリズム性を有する高頻度発射が誘発されたが、その閾値は神経節部で有意の低かった。低酸素負荷は神経節由来の異所性発火活動を誘発し、さらに機械的圧迫に対する感受性を増大させた。その他化学的作用のみで異所性発火を誘発する物質としてサブスタンスP、コンドロイチン硫酸、ヒトより採取した変性髄核抽出物質などが同定された。この際得られたスパイク伝導速度解析から、このように誘発された異常活動が痛みやしびれ感ときわめて関連深いものと推察された。通常は未梢受容器に作用を有する化学浸害系のブラジキニンやプロスタグランディンは神経根レベルでは明かな作用を有しないことが判明した。一方、低酸素負荷等に誘発された発火に対してメチルB12や塩酸エペリゾンは抑制効果を有し治療に有効であることが客観的に示されたが、副腎皮質ホルモンは明かな影響を与えなかった。慢性圧迫により神経根線維部においても機的的刺激や低酸素負荷などに対する感受性が増大する傾大を認めた。組織学的には一般的に慢性絞厄神経
変異型α-tubulinが悪性腫瘍のprogressionに果たす役割の解明

申請者らは、科研費交付期間内に(1)Y-49の認識する変異型α-tubulinが悪性リンパ腫以外のどの悪性腫瘍で発現するかを更に詳細に検討する。(2)変異型α-tubulinの細胞周期制御における役割と意義を検討する。(3)変異型α-tubulinが細胞増殖において他の癌関連蛋白とどのような共同作業をするかを検討する。(4)変異型α-tubulinの高発現が悪性リンパ腫において独立した予後不良因子であることの細胞生物学的機構を解明する、などを目標とした。申請者らは、平成15,16年度内に(1)免疫組織化学検討の結果、悪性リンパ腫以外にも胃癌、舌癌、卵巣癌症例で変異型α-tubulinの高発現が独立した予後不良因子であることを確認した。(2)悪性リンパ腫、胃癌、卵巣癌の培養細胞株を用いた分子病理学的検討の結果、変異型α-tubulinの発現は細胞増殖に深く関与しており、細胞周期のG1/SとG2/Mに高発現することを確認した。申請者らは、この2年間の成果に基づき、変異型α-tubulin発現が悪性腫瘍の進展と細胞増殖に関与する細胞生物学的機構を分子病理学的に解析する予定である。申請者らは、科研費交付期間内に(1)Y-49の認識する変異型α-tubulinの各種悪性腫瘍での発現を更に検討する。(2)変異型α-tubulinが高発現する悪性腫瘍では細胞周期のどのphaseで高発現するかなどの変異型α-tubulinの細胞生物学的個性を検討する(3)変異型α-tubulinが細胞殖において他の癌関連蛋白、特にsurvivin、とどのような共同作業をするかを検討する。(4)変異型α-tubulinの高発現が悪性腫瘍の予後不良因子であることの細胞生物学的機構を解明する、などを目標とした。申請者らは、平成15年度内には(1)各種悪性腫瘍における変異型α-tubulinの発現をY-49を用いた免疫組織化学にて検討した結果、悪性リンパ腫、胃癌、卵巣癌で変異型α-tubulinの高発現が独立した予後不良因子であることを確認した。(2)flow cytometry, Western blotting等の分子病理学的手法を使用して変異型α-tubulinが高発現する悪性腫瘍を調査した結果、悪性リンパ腫、胃癌、卵巣癌で変異型α-tubulinが高発現することを確認した。3)悪性リンパ腫、胃癌、卵巣癌の培養細胞株を用いて変異型α-tubulinが細胞周期のどのphaseで高発現するかなどを検討した結果、G1/SとG2/Mに高発現することを確認した。申請者らは、平成16年内にこの1年間の研究成果に基づき、(1)変異型α-tubulinが細胞増殖において他の癌関連蛋白、特にsurvivin、とどのような共同作業をするかを分子病理学的手法を用いて検討する。(2)変異型α-tubulinの高発現が悪性腫瘍の予後不良因子であることの細胞生物学的機構を解明する、などを行う予定である。申請者らは、科研費交付期間内に1.Y-49の認識する変異型α-tubulinが悪性リンパ腫以外のどの悪性腫瘍で発現するかを更に詳細に検討する。2.変異型α-tubulinの細胞周期制御における役割と意義を検討する。3.変異型α-tubulinが細胞増殖において他の癌関連蛋白とどのような共同作業をするかを検討する。4.変異型α-tubulinの高発現が悪性リンパ腫において独立した予後不良因子であることの細胞生物学的機構を解明する、などを目標とした。申請者らは、平成16年度内に1.免疫組織化学的検討の結果、悪性リンパ腫以外にも胃癌、舌癌、卵巣癌症例で変異型α-tubulinの高発現が独立した予後不良因子であることを確認した。2.悪性リンパ腫、胃癌、卵巣癌の培養細胞株を用いた分子病理学的検討の結果、変異型α-tubulinの発現は細胞増殖に深く関与しており、細胞周期のG1/SとG2/Mに高発現することを確認した。3.免疫沈降法により変異型α-tubulinがp53、PCNAと結合していることが確認されたが、その共同作業についての解明は今後の検討課題となった。

4.各種悪性腫瘍において変異型α-tubulin高発現が独立した予後不良因子であったが、その機構解析の結果、変異型α-tubulinの発現と腫瘍細胞の増殖能とが密な正の相関関係にあることが確認されたのみであった。この細胞生物学的機構は細胞増殖能の他に腫瘍細胞の悪性進展の関わりが予想され、この問題について今後の検討課題とした。申請者らは、この2年間の成果に基づき、変異型α-tubulin発現が悪性腫瘍の進展と細胞増殖に関与する細胞生物学的機構を分子病理学的に解析する予定である。
日本語話者による英語発音コーパスの収集構築と記述的研究

本プロジェクトで新たに使用する音声データの収録とラベリングが遅れているため、当面できることとして、前回の科研費プロジェクトで使用していた単音ラベリングデータ(ERJ Phonetic Corpus)を用いて研究を進めた。研究成果としては、このデータの一部にプロソディー表記を加えたものを用いてプロソディーの特徴を調べた"Prosodic patterns in English Read by Japanese Phonetic Corpus: An interim report"を、アメリカで行われた第10回第二言語発音学習教育会議で口頭発表した。ここで暫定的に明らかになったこととしては、日本語話者による英語発音において、音節数とリズム拍数の比率が、全般的に評価された各話者の英語発音スコア(元のERJ speech databaseにおいて収集)と逆比例の関係にあり、発音がうまいと評価されている話者の方がリズム拍数が少ない(=いわゆる強勢拍リズムを持つ)傾向にあることが分かった。これは理論的予測と一致する。他方、日本語話者の方が狭くなることが理論的に予測されるピッチ変動の幅については、今回のデータの範囲では違いが見いだされなかった。このERJ Phonetic Corpusのプロソディーのラベリングについては、当初計画では、新規に収集するデータで完全版を作るために棚上げする予定であったが、その方針を変更して全体のラベリングを進めることとした。それを用いてプロソディーと分節音の音韻過程の関係を分析する研究発表の準備を進めている。当初の研究計画においては、今年度は、1日本語と英語の中間言語的プロソディーの表記法の精緻化2予備的に収集した英語音声へのラベリング付加(但しプロソディーを優先)3前項で作成したラベリングデータによる、話者の日本語発音と英語発音の関係の調査研究4収録のための文セットの作成と改良、を行うこととなっていた。このうち2については、筆者が参加している別プロジェクトで収集している音声データを使用する予定であったが、そこでの収録が遅れており、必然的にラベリングも遅れている。このため3には着手できていない。4についても進行中であるが、2を睨みながら様子を見ていたため、完成には至っていない。1はほとんど完成しているが、研究成果の発表には至っていない。別プロジェクトにおける音声データの収録がスピードアップするかどうかは不透明であるため、これを待つことなく、本プロジェクト独自の音声収集を進めることにしたい。そのためには、収録用の文セットを夏初秋までに完成させ、秋翌春にかけて収録できるように準備する。すなわち、本プロジェクト1年目の計画を棚上げしたまま2年目の計画を進めることとする。本来の計画に比べると、プロソディーの表記体系および日本語と英語の音声の関係の記述についての研究の予備的段階を省略することになるが、表記体系に関しては、本格データのラベリング中にもフィードバックは可能であるため、進行に時間が多少余計にかかることになる程度で大きな問題はない。日本語の発音と英語の発音との関係についても、予備的段階を省略することで問題は生じないと思われる。

本来の計画に比べると、プロソディーの表記体系および日本語と英語の音声の関係の記述についての研究の予備的段階を省略することになるが、表記体系に関しては、本格データのラベリング中にもフィードバックは可能であるため、進行に時間が多少余計にかかることになる程度で大きな問題はない。日本語の発音と英語の発音との関係についても、予備的段階を省略することで問題は生じないと思われる。当初計画よりも研究成果の発表回数が少なくなったために、予定よりも支出が少なくなった。これは翌年度の研究成果発表の回数を1回増やすことに使用する予定である。
アワノメイガの超音波種内交信における発音の機能とメカニズムの解析

平成20年度は,研究目的であるアワノメイガの雌雄間の音響交信における発音の機能の解明について,研究実施計画に沿って研究を遂行した.得られた実績を下記に示す.1.アワノメイガのメスによる音刺激に対する認識能の有無を明らかにするため,聴受容細胞の応答特性と運動神経への出力を調査した.本種の腹部にある聴受容細胞の出力を一点で測定するため,聴受容細胞と一次中枢である胸部神経節との間でタングステン・フック電極にて細胞外記録を行った.本年度においては,配偶者であるオスの発する超音波の時間構造およびコウモリの発する超音波の時間構造を有す合成音を適刺激として実験を行ったが,現在のところはまだ予備調査の段階であり,実験技術の習得中である.聴受容細胞の応答特性の解明は今後継続して行う予定である.次に,飛翔時の飛翔筋電位の音刺激に対する変化を測定した.各種音刺激(オスの超音波,コウモリの超音波)に対する応答の違いを調査した結果,飛翔中にコウモリの超音波を受容すると特徴的な捕食者(コウモリ)回避行動として螺旋飛翔や地面へのダイブなどの反応を示した.しかしながら,この行動反応は配偶者であるオスの超音波に対しても同様に引き起こされることが確認された.したがって,本種のメスはオスとコウモリの発するそれぞれ時間構造の異なる超音波を聞き分けていないことが示された.このことは,ガの音響交信がコウモリによる捕食を回避する行動反応により進化したことを裏付ける.2.アワノメイガのように微弱な超音波を配偶行動に利用することは,他の生物による盗聴を回避できるなど適応的である.したがって,他の様々なガにおいても微弱な超音波を利用している可能性がある.そこで,多岐の分類群に渡る13種のガの配偶行動を観察し,発音の有無を検討した,その結果,調査した種の7割にあたる9種で微弱な超音波の発音が確認された.これまで,ガの音響交信は稀有な事例とされてきたが,実際には多くの種で音響交信していることが示唆された.3.アワノメイガ以外のガにおいても上記1.と同様の実験を行った.その結果,キマエホソバと言うがでは,オスとコウモリの超音波を聞き分けていることが明らかになった.この時,オスの超音波に対しては交尾行動を,コウモリの超音波に対してはみずから発音し,コウモリのソナーを妨害するなどの捕食者回避行動を示すことが分かった.ガの聴受容細胞は極めて少数であることから,音の時間構造に基づいて音の種類を認識する脳内情報処理メカニズムが発達していることが示唆される.このようなメカニズムは,例えば自動車に搭載されうる障害物回避システムに将来応用できる可能性を持つ.アワノメイガの発音メカニズムの解明ならびに発音の機能の解析を行った.発音メカニズムについて:アワノメイガのオスは前翅と背部にある鱗粉を擦り合わせることで高い摩擦エネルギーを生み出し、翅の鱗粉の下に有す膜状の器官によって高周波の音を放射することを明らかにした.ハイスピードカメラやレーザー変位計を利用することにより、ガ類は高周波音を発生させることの出来る振動特性を保持していることが分かった.鱗粉を利用した発音の実証は本研究が初めてである.発音の機能について:まず、オスの超音波が種認識に寄与する可能性について検討した.しかし、様々な合成音を用いた行動実験は、メスの交尾受入れ行動が本種の超音波のみならず捕食者であるコウモリの超音波に対しても引き起こされることを示した.一方、オスの超音波によってメスの交尾時の逃避行動が抑制されることが明らかになった.このことは、アワノメイガの発音が単純な性的アピールではないことを示唆した.そこで、アワノメイガのオスの超音波と種々のコウモリの超音波に対するメスの行動を詳細に比較したところ、メスはオスの超音波だけでなくコウモリの超音波に対しても逃避行動を抑制することが分かった.さらに、メスの腹部末端にある性フェロモン腺の露出行動の中止に関する反応性を調査したところ、コウモリの超音波とオスの超音波に対する反応性は同程度であった.つまり、メスは交尾の際にオスの発する超音波をコウモリの超音波と認識することが考えられた.そのため、コウモリによる捕食を回避する目的でメスはオスの超音波を受容すると逃避行動を抑制するものと思われた.これらの研究結果は、生物の配偶行動におけるシグナルの進化的起源を探る上で重要である.すなわち、ガ類がコウモリの超音波を検出するために獲得した聴覚器官を二次的に利用して種内音響交信を発達させたことを裏付ける.平成20年度は,研究目的であるアワノメイガの雌雄間の音響交信における発音の機能の解明について,研究実施計画に沿って研究を遂行した.得られた実績を下記に示す.1.アワノメイガのメスによる音刺激に対する認識能の有無を明らかにするため,聴受容細胞の応答特性と運動神経への出力を調査した.本種の腹部にある聴受容細胞の出力を一点で測定するため,聴受容細胞と一次中枢である胸部神経節との間でタングステン・フック電極にて細胞外記録を行った.本年度においては,配偶者であるオスの発する超音波の時間構造およびコウモリの発する超音波の時間構造を有す合成音を適刺激として実験を行ったが,現在のところはまだ予備調査の段階であり,実験技術の習得中である.聴受容細胞の応答特性の解明は今後継続して行う予定である.

次に,飛翔時の飛翔筋電位の音刺激に対する変化を測定した.各種音刺激(オスの超音波,コウモリの超音波)に対する応答の違いを調査した結果,飛翔中にコウモリの超音波を受容すると特徴的な捕食者(コウモリ)回避行動として螺旋飛翔や地面へのダイブなどの反応を示した.しかしながら,この行動反応は配偶者であるオスの超音波に対しても同様に引き起こされることが確認された.したがって,本種のメスはオスとコウモリの発するそれぞれ時間構造の異なる超音波を聞き分けていないことが示された.このことは,ガの音響交信がコウモリによる捕食を回避する行動反応により進化したことを裏付ける.2.アワノメイガのように微弱な超音波を配偶行動に利用することは,他の生物による盗聴を回避できるなど適応的である.したがって,他の様々なガにおいても微弱な超音波を利用している可能性がある.そこで,多岐の分類群に渡る13種のガの配偶行動を観察し,発音の有無を検討した,その結果,調査した種の7割にあたる9種で微弱な超音波の発音が確認された.これまで,ガの音響交信は稀有な事例とされてきたが,実際には多くの種で音響交信していることが示唆された.3.アワノメイガ以外のガにおいても上記1.と同様の実験を行った.その結果,キマエホソバと言うがでは,オスとコウモリの超音波を聞き分けていることが明らかになった.この時,オスの超音波に対しては交尾行動を,コウモリの超音波に対してはみずから発音し,コウモリのソナーを妨害するなどの捕食者回避行動を示すことが分かった.ガの聴受容細胞は極めて少数であることから,音の時間構造に基づいて音の種類を認識する脳内情報処理メカニズムが発達していることが示唆される.このようなメカニズムは,例えば自動車に搭載されうる障害物回避システムに将来応用できる可能性を持つ.
IoT用電磁波エネルギーハーベスティングのための高効率昇圧整流回路の開発研究

本研究では周辺の弱い電磁波から高効率で電気エネルギーを得るための新しいレクテナ(ダイオード整流器付アンテナ)、特に弱い電力でも高効率で所望電圧を発生できるレクテナ整流回路の研究開発を行なう。世界的には弱い電力でも所望の電圧を得ることが出来るCharge Pump整流回路の研究開発が進んでいる。しかし、Charge Pump整流回路は多数のダイオードとキャパシタで構成され、整流と昇圧を同時に行なうために、所望電圧はその回路段数を増やすことで用意に得られるが、損失が段数に比例して大きくなり、高い効率を得ることが出来ない。効率が低いと電力システムとしては不適であるといわざるを得ない。そこで、本研究ではこれまで申請者が研究開発を行なってきたSingle Shunt整流回路とCharge Pump整流回路をマージした新しい整流回路を考案し、その研究を行なっている。昨年度はCharge Pump整流回路にF級共振回路を取り付け、Single Shunt整流回路と1段のCharge Pump整流回路をマージした形の新しい整流回路の開発を行い、最適負荷1300 ohmにおいて最高変換効率約71%を実現した。今年度最終年度は実測結果とシミュレーション結果の差の分析と対策を行い、ダイオードと線路特性インピーダンスの整合条件について検討した結果、異なる特性インピーダンスを持つ先端線路は回路全体の反射成分に強い影響を及ぼすことが分かった。この結果を踏まえ、2段チャージポンプ整流回路の設計も行い、45%の変換効率を実験で実現した。本研究は、マイクロ波等の電磁波エネルギーを電気(直流)エネルギーに変換する受電整流アンテナ・レクテナの高効率化に関する研究である。これまで申請者はマイクロ波を用いたワイヤレス給電の研究を行っており、様々なレクテナを開発してきた。その知見に基づき、本研究では周辺の弱い電磁波から高効率で電気エネルギーを得るための新しいレクテナ(ダイオード整流器付アンテナ)、特に整流回路の研究開発を行なう。この目的のために必須なのが弱い電力でも高効率で所望電圧を発生できるレクテナ整流回路である。今年度は、Charge Pump整流回路の要素回路であるダイオード2つを用いた半波倍電圧整流回路に着目し、その動作解析と損失に関する理論解析、シミュレーション、及び試作評価を行なった。その結果、1) Single Shunt整流回路とCharge Pump整流回路の変換効率を理論的解析し、同じ変換効率になることを証明、2)実験結果とシミュレーション結果の差について分析、3)多段Charge Pump整流回路では、ダイオードによる損失は一段整流回路と同じとなることを証明、した。本研究の当初提案通りの進展をしている。当初2年間でIoTサンサー用ハーベスティング回路の研究開発を行い、最終年度にシステムとして組み上げる計画であり、1年目の回路開発研究としては順調に研究が進んでいる。本研究成果は国際論文としてもすでに採録されており、国際的にも認められている。昨年度は、Charge Pump整流回路とSingle Shunt整流回路との比較研究を主に行い、それぞれの回路の特失を明らかにした。今年度はCharge Pump整流回路にF級共振回路を取り付け、Single Shunt整流回路と1段のCharge Pump整流回路をマージした形の新しい整流回路の開発を行った。実験結果として、最適負荷1300 ohmにおいて最高変換効率約71%を実現し、マイクロ波反射率はシミュレーション結果とほぼ一致した。しかし,最適負荷近傍において,実測結果とシミュレーション結果の差がやや異なり、その理由として回路の2つのダイオードから見た線路の特性インピーダンスは異なっていたために、完全な2倍昇圧できなかたためと分析した。これは政策誤差にも起因する問題であるため、今後対処する予定である。本研究はおおむね順調であるが、当初提案にやや遅れて進展をしている。当初2年間でIoTサンサー用ハーベスティング回路の研究開発を行い、最終年度にシステムとして組み上げる計画であったが、F級共振回路付高調波処理型多段Charge Pump整流回路の開発が遅れている。

しかし、その開発のための知見はすでに十分得ており、今後研究目標に対しキャッチアップする予定である。本研究では周辺の弱い電磁波から高効率で電気エネルギーを得るための新しいレクテナ(ダイオード整流器付アンテナ)、特に弱い電力でも高効率で所望電圧を発生できるレクテナ整流回路の研究開発を行なう。世界的には弱い電力でも所望の電圧を得ることが出来るCharge Pump整流回路の研究開発が進んでいる。しかし、Charge Pump整流回路は多数のダイオードとキャパシタで構成され、整流と昇圧を同時に行なうために、所望電圧はその回路段数を増やすことで用意に得られるが、損失が段数に比例して大きくなり、高い効率を得ることが出来ない。効率が低いと電力システムとしては不適であるといわざるを得ない。そこで、本研究ではこれまで申請者が研究開発を行なってきたSingle Shunt整流回路とCharge Pump整流回路をマージした新しい整流回路を考案し、その研究を行なっている。昨年度はCharge Pump整流回路にF級共振回路を取り付け、Single Shunt整流回路と1段のCharge Pump整流回路をマージした形の新しい整流回路の開発を行い、最適負荷1300 ohmにおいて最高変換効率約71%を実現した。今年度最終年度は実測結果とシミュレーション結果の差の分析と対策を行い、ダイオードと線路特性インピーダンスの整合条件について検討した結果、異なる特性インピーダンスを持つ先端線路は回路全体の反射成分に強い影響を及ぼすことが分かった。この結果を踏まえ、2段チャージポンプ整流回路の設計も行い、45%の変換効率を実験で実現した。2年目はsingle shunt整流回路とcharge pump整流回路を組み合わせた高調波処理型多段charge pump整流回路の開発と高効率化である。さらにハーべスティングを目指した周波数の広帯域化にも取り組みたい。3年目は高調波処理型多段charge pump整流回路の開発と高効率化を至急完成させ、さらにハーべスティングを目指した周波数の広帯域化にも取り組む。そして最終的にIoTサンサー用ハーベスティングシステムに関する実験を行い、研究成果をまとめる予定である。
グローバルに発信する日本の伝統・文化を生かした教育モデル－身体表現コアプログラム

本年度は、グローバルに発信する日本の伝統・文化に関して、文化理解の観点から検討を試みた。具体的には、初年度に収集した「日本の伝統・文化」、「身体表現」やそれらの教育に関して研究資料等を整理し、新たに追加した研究資料についても検討を試みた。総合的な学習の時間における国際理解に関する研究を概観すると、様々なアプローチがなされているが、2017年の学習指導要領の改訂を機に、これらの論文をレビューする必要があると考えた。具体的には、CiNii登録論文(本文掲載を有する論文)を対象に、国際理解教育をフリーワードとして論文検索し、それら論文名について、テキストマイニングによる検討を試みた。その結果、抽出語としては、英語、社会等が数多くみられた。しかし、身体に関しては、ごく僅かしかみられなかった。身体に関わる論文をみると、横田は、国際理解教育について、「からだそのもの」に根ざした理解のあり方に注目し、野口三千三の身体観を手がかりとして、文化を流体としてとらえる視点から論じている。しかし、具体的な野口体操の実践については、記されていない。身体表現に関連して、世界に知られる日本文化をみると、伝統文化(能、狂言、歌舞伎、日本舞踊等)に加え、現代の日本独自の前衛的な身体芸術として、Butoh(舞踏)があげられる。ButohダンサーのKasaiは、西洋的な身体表現技法とは異なる野口体操のコンセプトについて言及している。しかしながら、教育現場における野口体操の実践は、三上らの報告がみられるものの、数少ないようである今回、この野口体操に関する貴重な実践資料(野口三千三氏に師事した指導者が実施した身体表現の授業における受講者の回答)の提供が得られた。そこで本年度は、その野口体操実践における質問紙回答について分析し、その結果を2018AIESEP World Congressにおいて発表した。研究2年目として、交付申請書に記載した研究目的を大きく変更することはなかったが、当初予定していた実践資料などの収集整理・分析などが、やや遅れている。本研究課題の今後の推進については、現段階で研究計画にやや遅れがあるものの、大きな変更の予定はなく、おおむね交付申請書に記載した研究計画通りに推進する予定である。日本の伝統や文化の価値を理解し尊重する教育は、現代社会における教育の課題を視野に、これまでにも増してより重要となっている。そして、日本から伝統・文化を世界に発信する教育は、社会的なニーズや教育改革の展望を背景に、火急となってくる。そこで、本研究では、グローバルに発信する日本の伝統・文化を生かした身体表現の教育モデルを検討することを目的としている。平成29年度は、まず初年度として、「日本の伝統・文化」や「身体表現」とその教育に関する研究等について、国内・国外で発表された研究論文など資料を収集することを計画した。幼稚園から高等学校における身体表現の学習経験の有無に関する調査をみると、小学校での「表現運動」の授業において、振付けられたものやYOSAKOIソーラン系によるものが多かったという報告がみられた。このような授業内容等に関しては、別の機会に詳細な検討を要するかと思われるが、YOSAKOIソーランに関しては、運動会や海外との国際交流の場面においても実施されており、広く教育現場でも普及していることが示唆された。YOSAKOIソーランは、高知県の「よさこい祭り」をルーツとし、北海道の民謡「ソーラン節」がミックスされ、「鳴子」と音楽に「ソーラン節」のフレーズを入れる演舞である。地域おこしのイベントとして、1992年に開催されたYOSAKOIソーラン祭りから、全国、そして世界へと広がっていった。そこで、初年度は、YOSAKOIソーランに着目した資料を中心に収集を行った。これらの研究結果については、学会において発表した。初年度として、当初予定していた資料などをおおむね収集することができ、交付申請書に記載した研究目的をおおむね達成している。

そこで本年度は、その野口体操実践における質問紙回答について分析し、その結果を2018AIESEP World Congressにおいて発表した。研究2年目として、交付申請書に記載した研究目的を大きく変更することはなかったが、当初予定していた実践資料などの収集整理・分析などが、やや遅れている。本研究課題の今後の推進について、現段階では研究計画について大きな変更の予定はなく、おおむね交付申請書に記載した研究計画通りに進行する予定である。本研究課題の今後の推進については、現段階で研究計画にやや遅れがあるものの、大きな変更の予定はなく、おおむね交付申請書に記載した研究計画通りに推進する予定である。平成29年度に予定していた資料収集の出張等について、スケジュールの都合上等で取りやめたり、データの収集が完遂まで至らなかったりしたため、一部予算が次年度に繰り越すこととなった。その繰越分については、次年度に追加の資料収集等の出張等や物品の購入を予定しており、そこに充当する計画である。それ以外の次年度の研究費使用計画に関しては、おおむね当初の研究計画通りである。平成29年度(2017年度)に予定していた資料収集の出張等について、スケジュールの都合等で取りやめたり、データの収集整理が完遂まで至らなかったりしたため、一部予算が平成30年度(2018年度)に繰り越すこととなった。その経費は平成30年度の経費と合算となったが、その中で平成29年度の経費については使用済みとなった。そして、当初の平成30年度年度経費は、データの収集整理・分析等にやや遅れが生じたため、繰り越すこととなった。令和元年度(2019年度)は、これまでの繰り越し分を含め、追加資料の整理・分析のための物品購入や人件費、研究成果発表の旅費等を予定しており、そこに充当する計画である。それ以外の研究費使用計画に関しては、おおむね当初の研究計画通りである。
哺乳動物CPEBホモログによるmRNA情報の時空間的発現制御機構の解析

哺乳動物雄性生殖細胞細胞質特異的に存在するポリ(A)ポリメラーゼTPAPは,精子形態形成に必須である。しかしながら,その標的mRNAやポリ(A)鎖伸長機構については不明な点が多い。申請者は,卵形成過程における母性mRNAの細胞質でのポリ(A)鎖伸長を制御するシス配列であるCPE配列(cytoplasmic polyadenylation element, UUUUU/AAU)とその結合タンパク質CPEBあるいはそのホモログが,TPAPによる球状精細胞特異的なポリ(A)鎖伸長に関与しているのではないかと考え解析を行っている。これまでに同定されているTPAPの標的mRNAは,基本転写関連因子であるTrf2やTFIIAγおよびTAF10などであり,それらの3'非翻訳領域(3'UTR)中にはCPE様配列が存在した。そこでCPE配列をセンスプライマーに用いた3'RACE法により,CPE配列を有するmRNAのいくつかをマウス精巣cDNAライブラリーよりクローニングした。それぞれについて,野生型とTPAP欠損マウス精巣でのmRNAサイズを比較した結果,Nut2などいくつかの転写関連因子がTPAPの標的mRNAであることが明らかとなり,CPE様配列がシス制御配列の一つであることが支持された。しかしながら,CPE様配列を有していてもポリ(A)鎖伸長を受けないものも存在することから,CPE配列は必要条件の一つではあるが,十分条件ではないことが示唆された。一方,CPEBの標的mRNAであるSCP1とSCP3のmRNAのポリ(A)鎖長は,TPAP欠損マウスのパキテン期精母細胞でも野生型と同じであることや,CPEBとTPAPの発現時期は同調していないことから,CPEBはTPAPによるポリ(A)鎖伸長には関与していないことが推測された。そこで,データベース上に存在するほかの3つのCPEBホモログについて発現解析を行った結果,そのうちの一つが精巣で高発現しており,かつTPAPの発現と同調していた。このCPEBホモログに対する特異的抗体が得られたので,タンパク質レベルでの発現・局在を明らかにするとともに,免疫沈降されるmRNAの同定を行うことにより,TPAPによる球状精細胞特異的なポリ(A)鎖伸長への関与について検討している。今後はこのCPEBホモログの解析を進めるとともに,標的mRNAの3'UTRに結合するような制御因子の探索・同定を行うことにより,TPAPによる球状精細胞細胞質特異的な特定のmRNAのポリ(A)鎖伸長制御機構についてさらに解析していく予定である。
弾性体力学の高精度衝撃波捕獲粒子的計算法による固体惑星の衝突破壊・合体過程の研究

今年度はSmoothed Particle Hydrodynamics法による衝突計算コードを用いて,直径100kmのターゲット小惑星ヘの衝突を様々な衝突条件によって再現し,形成される小惑星形状を包括的に調べた.その結果,衝突2天体の質量が近くなおかつ破壊的ではない低速衝突では極めて平たい形状を含む様々な形状が形成されることがわかった.またターゲット小惑星が粉々になるような高速で破壊的な衝突では,丸い形状と頭が2つあるような形状は形成されるが,平たい形状の形成は難しいことがわかった.前者の衝突は主に惑星形成期の太陽系で,後者の衝突は主に現在の太陽系で起きるため,小惑星の平たい形状は惑星形成期の環境で形成されやすいことが予想される.そこで直径100km以上の実際の小惑星の形状を,最近の衝突破壊の影響を受けている小惑星族に含まれているものと,族に含まれていないものに分けて調べた.その結果,族に含まれている小惑星は基本的に丸い形状をしているが,族に含まれていない小惑星には極めて平たい形状をした小惑星が存在することがわかった.このことは,破壊的な衝突では丸い形状ができやすく,平たい形状の形成は難しいという数値計算の結果と整合的である.また以上の検討より,直径100km以上で平たい形状をしている小惑星は,惑星形成期における近い質量同士の低速な小惑星衝突で形成され,破壊的な衝突の影響を受けることなく現在まで生き残ってきたものであることが示唆された.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本年度はSmoothed Particle Hydrodynamics法に岩石の破壊及び破壊後の摩擦の効果を導入した数値計算コードを用いて小惑星の衝突破壊を再現し,形成される天体の形状を調べた.特に形状が効率よく変化すると期待される等質量衝突の計算を主に実行した.衝突させる小惑星の半径は典型的なものである50kmに固定し,小惑星の物性は玄武岩のものを使用した.衝突速度を2体脱出速度(約60m/s)程度からその10倍程度まで,衝突角度を正面衝突に近いものから45度まで変化させた数値計算を様々に実行し,形成された最大天体の形状を調べた.その結果,等質量衝突では衝突速度・角度に応じて球形状・頭が二つある形状・平たい形状・細長い形状・半球形状が形成されることがわかった.また条件によっては中間軸/長軸比が0.2程度の極めて細長い形状や,短軸/長軸比が0.5を下回るほど平たい形状も形成された.現在の小惑星帯の衝突速度は平均5km/s程度であるが,この速度は半径50kmの小惑星の2体脱出速度よりも十分に大きく,この速度の等質量衝突は大規模破壊を引き起こす.しかしながら我々の大規模破壊のシミュレーションでは球形状か頭が二つあるような形状しか形成されなかった.一方で衝突天体が十分に小さい場合には大規模破壊にならないが,同時に小惑星の一部分しか破壊されないため,大きな形状変形は伴わない.従って,軸比が0.5を下回るほどいびつな形状は2体脱出速度程度の等質量衝突でできた可能性が高い.そのような衝突条件は木星形成前の力学的に冷たい環境ならば実現される.従って,軸比が0.5を下回るほどいびつな形状を持つ小惑星は始原的である可能性が高いと考えられる.今年度は小惑星の衝突によって形成される形状を,等質量衝突に限ってはいるが網羅的に調べることに成功した.さらにこの研究結果については論文にまとめ,すでにAstronomy and Astrophysics誌に投稿済みである.今年度はSmoothed Particle Hydrodynamics法による衝突計算コードを用いて,直径100kmのターゲット小惑星ヘの衝突を様々な衝突条件によって再現し,形成される小惑星形状を包括的に調べた.その結果,衝突2天体の質量が近くなおかつ破壊的ではない低速衝突では極めて平たい形状を含む様々な形状が形成されることがわかった.またターゲット小惑星が粉々になるような高速で破壊的な衝突では,丸い形状と頭が2つあるような形状は形成されるが,平たい形状の形成は難しいことがわかった.前者の衝突は主に惑星形成期の太陽系で,後者の衝突は主に現在の太陽系で起きるため,小惑星の平たい形状は惑星形成期の環境で形成されやすいことが予想される.そこで直径100km以上の実際の小惑星の形状を,最近の衝突破壊の影響を受けている小惑星族に含まれているものと,族に含まれていないものに分けて調べた.その結果,族に含まれている小惑星は基本的に丸い形状をしているが,族に含まれていない小惑星には極めて平たい形状をした小惑星が存在することがわかった.このことは,破壊的な衝突では丸い形状ができやすく,平たい形状の形成は難しいという数値計算の結果と整合的である.また以上の検討より,直径100km以上で平たい形状をしている小惑星は,惑星形成期における近い質量同士の低速な小惑星衝突で形成され,破壊的な衝突の影響を受けることなく現在まで生き残ってきたものであることが示唆された.本年度は小惑星の等質量衝突による形状形成を主に調べた.今後は衝突天体がより小さく質量差がある衝突によって形成される形状についても調べていく.衝突天体の質量は衝突される天体の質量から少しずつ変化させ,等質量衝突の結果と質量差が大きい衝突の結果を滑らかに繋ぐように調べ上げていく.同時に大規模破壊の高解像度シミュレーションも実行し,形成される形状の分布だけではなく,質量分布や自転速度分布,さらにはそれら分布の衝突条件依存性も明らかにしていく.上記の課題には大規模なパラメータサーチ及び高解像度シミュレーションが必要である.

このような計算は国立天文台天文シミュレーションプロジェクトのスーパーコンピュータであるXC50システムを使用して実行する.私はすでにXC50システムの上位の利用カテゴリであるカテゴリAを取得しており,パラメータサーチや高解像度シミュレーションを実行することが可能な状況になっている.平成30年度が最終年度であるため、記入しない。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
アポトーシス促進因子baxを用いたPTCA後再狭窄に対する遺伝子治療の可能性-バルーン障害後の内膜平滑筋細胞増殖に伴うintimal hyperplasiaの予防-

平成11年度はラット培養平滑筋細胞およびマクロファージにbax遺伝子を導入し、アポトーシスが誘導出来るか否かを検討した。ラット培養平滑筋細胞(SMC)よりRNAを抽出し、RT-PCR法にてbax mRNAに相補的な塩基配列を持つbax cDNAを合成し、大腸菌内で増幅し、精製した。このbax cDNAをアデリウイルスに組み込み、bax遺伝子発現ベクターを作成した。このbax遺伝子をラット培養SMCおよびマクロファージに導入した。まず、bax mRNAおよびBax蛋白が増大することをノーザンブロット法およびウエスターン法で確認した。bax遺伝子導入SMCおよびマクロファージではコントロールとしての非導入SMCやマクロファージに比較し、SMCおよびマクロファージの死が有意に増大した。このSMC死のメカニズムかアポトーシスかネクローシスかを鑑別するためにアポトーシスのマーカーであるTUNEL、DNA ladder、Taq-polymerasebased in situ ligation法および電顕にて観察した。その結果、TUNEL陽性&Taq-polymerasebased in situ ligation陽性のSMCやマクロファージの増大、DNA ladderの陽性化および電顕的にアポトーシスの所見(核クロマチンの半月状または三日月状の凝集、細胞のschrinkage、アポトーシス小体)が見られた。ネクローシスのマーカーであるPfu染色はコントロールのSMC&マクロファージと同様であった。これらは培養中のartifactと思われた。以上よりbax mRNA導入はSMCのアポトーシスを誘導することが明らかになった。次に上記bax mRNA導入によるアポトーシスSMCモデルにTNF-αを添加したところ、SMCのアポトーシスの増大が見られた。すなわちTNF-αはSMCのアポトーシスに対し相乗効果を示した。平成12年度はラット頚動脈バルーン障害内膜増殖モデルを作成し、bax遺伝子導入を行い、intimal hyperplasiaの予防が可能かを検討した。遺伝子導入はアデノウィルスベクターを用いて行い、バルーン障害後、1日、5日、14日、30日で屠殺し、ノーザンブロッティング法およびウエスターンブロッティング法により、bax mRNAおよびBax蛋白の経時的発現量を検討した。バルーン障害頚動脈組織標本を対象に内膜肥厚の程度はelastic van Gieson染色、抗アクチン抗体、抗マクロファージ抗体による免疫染色を行い、イメージアナライザーで検討した。アポトーシスはTUNEL法にて、増殖はPCNAにて検討した。その結果、以下のことが明らかになった。1)遺伝子導入しなかったコントロールと比較し、bax遺伝子の導入群ではバルーン障害頚動脈組織にbax mRNAおよびBax蛋白の発現増強がみられた。2)遺伝子導入しなかったコントロールと比較し、遺伝子の導入群ではintimal hyperplasia組織平滑筋細胞におけるTUNEL陽性細胞は増大したが、PCNA陽性細胞には変化がなかった。3)遺伝子導入しなかったコントロールと比較し、遺伝子の導入群でのintimal hyperplasiaの程度は改善傾向がみられたが、有意の所見は得られなかった。以上よりラット頚動脈バルーン障害に対するbax遺伝子の導入はintimal hyperplasia組織平滑筋細胞のアポトーシスを促進する。しかし、バルーン障害後の再狭窄予防効果があるか否かについては明瞭な結論が得られなかった。

その結果、以下のことが明らかになった。1)遺伝子導入しなかったコントロールと比較し、bax遺伝子の導入群ではバルーン障害頚動脈組織にbax mRNAおよびBax蛋白の発現増強がみられた。2)遺伝子導入しなかったコントロールと比較し、遺伝子の導入群ではintimal hyperplasia組織平滑筋細胞におけるTUNEL陽性細胞は増大したが、PCNA陽性細胞には変化がなかった。3)遺伝子導入しなかったコントロールと比較し、遺伝子の導入群でのintimal hyperplasiaの程度は改善傾向がみられたが、有意の所見は得られなかった。以上よりラット頚動脈バルーン障害に対するbax遺伝子の導入はintimal hyperplasia組織平滑筋細胞のアポトーシスを促進する。しかし、バルーン障害後の再狭窄予防効果があるか否かについては明瞭な結論が得られなかった。本年度はラット培養平滑筋細胞およびマクロファージにbax遺伝子を導入し、アポトーシスが誘導出来るか否かを検討した。ラット培養平滑筋細胞(SMC)よりRNAを抽出し、RT-PCR法にてbax mRNAに相補的な塩基配列を持つbax cDNAを合成し、大腸菌内で増幅し、精製した。このbax cDNAをアデリウイルスに組み込み、bax遺伝子発現ベクターを作成した。このbax遺伝子をラット培養SMCおよびマクロファージに導入した。まず、bax mRNAおよびBax蛋白が増大することをノーザンブロット法およびウエスターン法で確認した。Bax遺伝子導入SMCおよびマクロファージではコントロールとしての非導入SMCやマクロファージに比較し、SMCおよびマクロファージの死が有意に増大した。このSMC死のメカニズムかアポトーシスかネクローシスかを鑑別するためにアポトーシスのマーカーであるTUNEL,DNA ladder,Taq-polymerasebased in situligation法および電顕にて観察した。その結果、TUNEL陽性&Taq-polymerasebased in situ ligation陽性のSMCやマクロファージの増大、DNA ladderの陽性化および電顕的にアポトーシスの所見(核クロマチンの半月状または三日月状の凝集、細胞のschrinkage、アポトーシス小体)が見られた。ネクローシスのマーカーであるPfu染色はコントロールのSMC&マクロファージと同様であった。これらは培養中のartifactと思われた。
脳代謝モニタリング・網羅的脳代謝解析に基づく心肺停止蘇生後に病態及び治療の研究

VFによる突然の心停止患者の一部は低体温療法により生存退院率が改善することが示されているが、蘇生後早期に転帰を予測できるような有効な指標、モニタリング法が存在しないため、どの施設においてもガイドラインに則った画一的な治療を行った後に、転帰がどうなるかを結果から判断するしかないのが現状である。我々は蘇生後早期に転帰を予想可能な指標を見出すために、蘇生後脳症4例に対してマイクロデアリシス(MD)法を用いて検討を行った。年齢は10歳から82歳で全て男性であった。心停止時間は28分から55分で、転帰はgood recovery(GR)2例、vegetative state(VS)2例であった。なお、MD施行に際しては院内倫理員会の承認を得た。GRではMD施行時から細胞膜障害の指標であるグリセオールは400μMを超えることはなく、経時的に順調に低下した。また、興奮性アミノ酸のグルタミン酸濃度も16μMを超えことはなかった。一方、VSではグリセオール、グルタミン酸濃度は当初から高値で、経時的にもGR群に比較して高値で推移した。また、乳酸/ピルビン線比も常時30以上で推移した。蘇生後脳症に対するMDは神経細胞の虚血状態を把握することが可能で、転帰の判定に有用である可能性が示唆された。心肺停止患者の社会復帰率向上を目指し、I.直接的脳代謝モニタリングおよびメタボロミクス(網羅的脳代謝物解析)に基づく蘇生後脳症の病態解明、II.虚血再潅流後の脳組織に低体温療法の及ぼす影響および予後規定因子の究明、さらにはIII.予後規定因子測定を含む脳代謝モニタリングに基づいた脳低体温療法の構築することを目的とする。目的1:(基礎研究)平成21-22年にラット全脳虚血再灌流障害に対する予後規定因子を検討するラットに全身麻酔下で顕微鏡を用いて椎骨動脈を凝固、切離する。ドリルで頭蓋骨に穴を開け、マイクロダイアリシスプローベ(CMA,膜長3mm、Dialysis membrane, molecular cut off 20kDa)を前頭葉に挿入・留置する。プローベ内には注入ポンプを介して透析液(Ringer液)を0.3μL/minの速度で灌流させる。マイクロダイアリシスの測定準備を整えた後、両側総頚動脈に遮断クリップを用いて全脳虚血とする。異なる虚血時間(15,30,45分)に対する脳虚血再灌流障害の評価を行う。。出血させないように手技を行うことが、データ蓄積上重要であり、昨年度は、この手技の安定化を行った。当初の半分程度の時間でモデルができるようになった。今後、データの蓄積、解析を行う予定である。目的2:CPA蘇生後脳症に対する予後規定因子の解明低体温療法の適応の場合、早期にマイクロダイアリシスのプローベを脳実質内に留置する。脳室ドレナージ、ICPセンサーの留置などと同様の手技で行われる。マイクロダイアリシスのプローベをポンプに接続しリンゲル液を0.3μl/minで還流する。30分毎に透析液の回収を行う。昨年度は4例の症例が合併症なく集まった。今後、症例の蓄積とデータ解析を行う。心肺停止患者の社会復帰率向上を目指し、I.直接的脳代謝モニタリングに基づく蘇生後脳症の病態解明、II.虚血再潅流後の脳組織に低体温療法の及ぼす影響および予後規定因子の究明、さらにはIII.予後規定因子測定を含む脳代謝モニタリングに基づいた脳低体温療法の構築することを目的とする。目的1:(基礎研究)平成21-23年度にラット全脳虚血再灌流障害に対する予後規定因子を検討するラットに全身麻酔下で顕微鏡を用いて椎骨動脈を凝固、切離する。ドリルで頭蓋骨に穴を開け、マイクロダイアリシスプローベ(CMA,膜長3mm、Dialysis membrane,molecular cut off 20kDa)を前頭葉に挿入-留置する。

マイクロダイアリシスの測定準備を整えた後、両側総頚動脈に遮断クリップを用いて全脳虚血とする。異なる虚血時間(15,30,45分)に対する脳虚血再灌流障害の評価を行う。出血させないように手技を行うことが、データ蓄積上重要であり、昨年度および今年度は、この手技の安定化を行った。当初の半分程度の時間でモデルができるようになった。今後、データの蓄積、解析を行う予定である。目的2:CPA蘇生後脳症に対する予後規定因子の解明低体温療法の適応の場合、早期にマイクロダイアリシスのプローベを脳実質内に留置する。脳室ドレナージ、ICPセンサーの留置などと同様の手技で行われる。マイクロダイアリシスのプローベをポンプに接続しリンゲル液を0.3μ1/minで還流する。30分毎に透析液の回収を行う。昨年度は4例の症例が合併症なく集まった。今後、症例の蓄積とデータ解析を行う。心肺停止患者の社会復帰率向上を目指し、I.直接的脳代謝モニタリングに基づく蘇生後脳症の病態解明、II.虚血再潅流後の脳組織に低体温療法の及ぼす影響および予後規定因子の究明、さらにはIII.予後規定因子測定を含む脳代謝モニタリングに基づいた脳低体温療法の構築することを目的とする。目的1:(基礎研究)平成21-23年度にラット全脳虚血再灌流障害に対する予後規定因子を検討するマイクロダイアリシスの測定準備を整えた後、両側総頚動脈に遮断クリップを用いて全脳虚血とする。マイクロダイアリシスのプローベをポンプに接続しリンゲル液を0.3μl/minで還流する。一昨年度は4例の症例が合併症なく集まった。平成23年度は2例の臨床症例を集積した。ここまでの経過を学会で発表した。また、動物実験モデルでは、8例のデータを集積した。今後、症例および実験動物での症例蓄積とデータ解析を行う。心肺停止患者の社会復帰率向上を目指し、直接的脳代謝モニタリングに基づく蘇生後脳症の病態解明、虚血再潅流後の脳組織に低体温療法の及ぼす影響および予後規定因子の究明、さらには予後規定因子測定を含む脳代謝モニタリングに基づいた脳低体温療法の構築することを目的とする。平成21-24年度にラット全脳虚血再灌流障害に対する予後規定因子の検討について、ラットに全身麻酔下で顕微鏡を用いて椎骨動脈を凝固、切離し、ドリルで頭蓋骨に穴を開け、マイクロダイアリシスプローベ(CMA,膜長3mm、Dialysis membrane ,molecular cut off 20kDa)を前頭葉に挿入・留置する。プローベ内には注入ポンプを介して透析液(Ringer液)を0.3μL/minの速度で灌流させる。