hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
クロック同期全光フリップ・フロップを用いたデジタル光集積回路

本研究の今年度の成果として,まず上記ハーフリッジ型PCの断面構造の最適化を数値計算によって行った.ハーフリッジ構造のリッジ側にウェットエッチングによって作製できる(lll)結晶面の傾斜を導入することにより, TE/TM変換率が90%以上となるような幅方向のトレランス(許容誤差)を従来の100nm程度から210nmまで増加できることを示した.本成果を国際学会OECC-PS2013 (2013年7月,京都)において発表し, Best Student Awardを受賞した.また,本内容を含めた発表を電子情報通信学会2013年ソサイエティ大会(依頼講演)にて行い, 2013年度の同学会エレクトロニクスソサイエティ学生奨励賞を受賞した.次に,ハーフリッジ型PCがモノリシック集積に適合することを示すため,能動光素子であるInP半導体光アンプ(semiconductor optical amplifier : SOA)とのモノリシック集積を実証した,オフセット量子井戸法を用いてSOAとPCを同一基板に集積する形で作製し,特性評価を行った.通常では量子井戸構造を用いたSOAはTEモードにしか光利得をもたないが, TEモードで増幅された光をPCによってTMモードへと変換することで,出力としてTMモードの強度がSOAの注入電流に比例する,すなわち見かけ上ではTMモードが増幅されたような特性を得ることに成功した.同時に,同一チップ内でPCを有していない導波路からはTEモードが増幅されており, PCを用いて1枚のチップからTE・TM両モードを出力することに成功した.この結果から,偏波多重PICの実現において最大の課題であったPCと光能動素子とのモノリシック集積を, InP材料系において初めて実証した.本結果の報告は国際学会ECIO-MOC2014 (2014年6月開催予定)の招待講演において報告する予定である.さらに,ハーフリッジ型PCを導波路型位相変調器と組み合わせた偏波変調器の提案を行った-従来の研究ではTE光をTM光に変換することだけが着目されてきたが, PIC内部で任意の偏波へと自由に変調ができようになれば, PICに偏波制御という新たな機能を付加することができ, PICの応用可能性の拡大が期待できる.電気光学(electro-optic : EO)効果を用いた位相変調器を用いてTE/TM間の位相差を電気的に変調することで,導波路内で偏波の電気的変調が可能であることを示した.(抄録なし)本研究では,偏波多重光通信用PICの実現にむけ,他光素子と容易に集積できる偏波変換器(Polarization converter : PC)を提案し,素子を試作して動作実証を行った.提案したPCは導波路の片側がリッジ型,逆側がハイメサ型をした非対称構造(ハーフリッジ構造)を有する.本構造は通常InP系光集積回路と非常によく整合するため,従来の問題点であった導波路の結合損失を低減でき,容易に集積できる素子となっている.数値計算により,PC長さ180umで97%のTE/TM変換率が得られ,挿入損失は0.4dBとなることを確認した.この素子を試作し,リッジ側のコア厚さがおよそ0.20umのハーフリッジ構造を作製することに成功した.また本素子のもうひとつの特徴である斜め蒸着法を用いたセルフアラインプロセスによって,精密な位置合わせを必要としない簡単な作製プロセスで本素子が作製できることを実証した.作製した素子を測定し,幅1.1um,長さ150umの素子で98%のT£/TM変換率を達成し,またPC長さに対して偏波がTE->円偏波->TMと理論通りに推移していることを実験的に確認した.また素子のチップ内損失は測定誤差を含め1.0dB以下であり,低損失であることを実証した.得られた実験値は数値計算による結果とよく一致した.以上の成果を電子情報通信学会ソサイエティ大会(2012年9月,富山大学)における依頼講演,同会光エレクトロニクス(OPE)研究会,および国際学会Optical Fiber Communication(OFC2013)にて発表を行った.特に,OPE研究会での発表が評価され,同会学生優秀研究賞を受賞した.また,光通信分野において高いインパクトファクター(3.71, Optics分野で第2位)を持つ論文誌Optics Expressへ受理・掲載された.本研究の今年度の成果として,まず上記ハーフリッジ型PCの断面構造の最適化を数値計算によって行った.ハーフリッジ構造のリッジ側にウェットエッチングによって作製できる(lll)結晶面の傾斜を導入することにより, TE/TM変換率が90%以上となるような幅方向のトレランス(許容誤差)を従来の100nm程度から210nmまで増加できることを示した.本成果を国際学会OECC-PS2013 (2013年7月,京都)において発表し, Best Student Awardを受賞した.また,本内容を含めた発表を電子情報通信学会2013年ソサイエティ大会(依頼講演)にて行い, 2013年度の同学会エレクトロニクスソサイエティ学生奨励賞を受賞した.次に,ハーフリッジ型PCがモノリシック集積に適合することを示すため,能動光素子であるInP半導体光アンプ(semiconductor optical amplifier : SOA)とのモノリシック集積を実証した,オフセット量子井戸法を用いてSOAとPCを同一基板に集積する形で作製し,特性評価を行った.

通常では量子井戸構造を用いたSOAはTEモードにしか光利得をもたないが, TEモードで増幅された光をPCによってTMモードへと変換することで,出力としてTMモードの強度がSOAの注入電流に比例する,すなわち見かけ上ではTMモードが増幅されたような特性を得ることに成功した.同時に,同一チップ内でPCを有していない導波路からはTEモードが増幅されており, PCを用いて1枚のチップからTE・TM両モードを出力することに成功した.この結果から,偏波多重PICの実現において最大の課題であったPCと光能動素子とのモノリシック集積を, InP材料系において初めて実証した.本結果の報告は国際学会ECIO-MOC2014 (2014年6月開催予定)の招待講演において報告する予定である.さらに,ハーフリッジ型PCを導波路型位相変調器と組み合わせた偏波変調器の提案を行った-従来の研究ではTE光をTM光に変換することだけが着目されてきたが, PIC内部で任意の偏波へと自由に変調ができようになれば, PICに偏波制御という新たな機能を付加することができ, PICの応用可能性の拡大が期待できる.電気光学(electro-optic : EO)効果を用いた位相変調器を用いてTE/TM間の位相差を電気的に変調することで,導波路内で偏波の電気的変調が可能であることを示した.本研究の今年度の成果目標として,学術会議での発表を国内2件,海外1件程度想定しており,これを達成するための研究成果を出し,目標どおりの発表を行うことができた.また,本研究の属する分野で権威を持つ論文誌に成果を掲載することができた.さらに,国内学会発表において優秀論文賞を受賞することができ,当初の予定以上の成果を上げることができたといえる.今年度の研究成果で,素子単体の実証を十分に行うことができ,一定の成果を上げることができた.これを踏まえ,今後は本研究で提案する偏波変換器が実際に光集積回路に適用できることを示すために,能動素子である半導体レーザとのモノリシック集積を実証する予定である.また,より実用性の高い素子の実現をめざし,作製誤差に対して素子特性の変動が少ない構造を新たに提案する.そして,従来の化合物半導体の変調器の原理を適用し,偏波変調機能の可能性についても検討を行っていく.(抄録なし)
胸膜中皮腫に対する新しい腫瘍抗原の探索と診断および治療への応用

悪性胸膜申皮腫は早期発見が困難であり、かつ標準的治療法の確立がなされておらず、予後不良の疾患である。そのため、抗癌剤、放射線治療を含めた集学的治療および免疫療法などの新しい治療法の確立が重要であり、血清診断の補助となるマーカーの開発も望まれる。本研究では、悪性胸膜中皮腫における腫瘍内浸潤B細胞の液性免疫応答の解析を行い、診断や治療に有用な抗原を選定することを目的としている。5症例の胸膜中皮腫患者を対象に解析を行い、11種類の腫瘍関連遺伝子を同定した。そのうち7つの遺伝子が機能既知の遺伝子で、細胞周期や細胞分化を制御する機能に関与する抗原遺伝子が含まれており、残りの4つの遺伝子はゲノムプロジェクトなどで登録はされているが機能未知の遺伝子であった。また5症例の中で2症例より胸膜中皮腫の細胞株を樹立し、遺伝子の発現解析やcDNA libraryの作成に用いた。胸膜中皮腫組織と正常組織におけるmRNAの発現をRT-PCR法で調べたところ、6つの遺伝子は胸膜中皮腫組織で過剰発現しており、腫瘍関連抗原と考えられた。その6つの腫瘍関連抗原のうちThrombospondin-2と機能不明の遺伝子であるGene-Xは、他家の胸膜中皮腫患者血清中にも抗体を検出することができたため、血清学的な診断のためのマーカーとしての応用の可能性を検討した。悪性胸膜中皮腫患者12名と健常人19名の血清を200倍から25000倍まで希釈し、Phage plaque assayにて抗原抗体反応を評価した。Gene-Xでは、5000倍希釈の血清で判定したところ、胸膜中皮腫患者で12例中7例(58.3%)に抗体を検出でき、健常人では19例全例で抗体検出ができなかった。またthrombospondin-2は1000倍希釈で判定したところ、胸膜中皮腫患者で12例中11例(91.7%)、健常人で19例中1例に抗体を検出した。次に肺癌患者での血清抗体価を測定したが、Gene-Xでは、47例中全例で抗原抗体反応の検出ができず、thrombospondin-2は47例中1例にのみ抗体を検出した。この二つの遺伝子に対する抗体は健常人および肺癌患者に比べ胸膜中皮腫患者血清にて有意に高い頻度で検出することができ、腫瘍マーカーとしての応用が可能であると考えた。今後は、これらの腫瘍関連抗原遺伝子が、免疫療法の標的として利用することが可能か検討する予定である。悪性胸膜中皮腫は予後不良の悪性疾患であり、その大半は石綿暴露で発生すると言われている。早期発見が困難であり、血清診断の補助となるマーカーの開発が望まれる。また、悪性胸膜中皮腫に対する標準的治療法は確立されていないため、手術のみならず、抗癌剤、放射線治療を含めた集学的治療及び免疫療法などの新しい治療法の確立が重要である。

本研究では、悪性胸膜中皮腫における腫瘍内浸潤B細胞に由来する抗体の認識する腫瘍抗原の同定を試み、診断や治療に有用な抗原を選定することを目的としている。平成18年度は悪性胸膜中皮腫症例5症例の手術時に切除した腫瘍をSCID mouseの皮下に移植し、マウスより血清を採取した。腫瘍を移植した全てのSCID mouse血清中に腫瘍内浸潤B細胞が産生するヒト型IgG抗体を検出した。外科切除した胸膜中皮腫の腫瘍組織及び当科で樹立した悪性胸膜中皮腫の細胞株(K921MSO)よりcDNA libraryを作成し、SEREX法にてスクリーニングを行った。現在までに11の抗原遺伝子を同定しており、その中には細胞周期や細胞分化を制御する機能に関与する抗原遺伝子が含まれている。そのうち7つは機能既知の遺伝子であり、4つはゲノムプロジェクトなどで報告はされているが機能が未知の遺伝子であった。胸膜中皮腫組織と正常細胞におけるmRNAの発現をRT-PCR法で調べたところ6つは中皮腫組織のみに過剰発現しており、腫瘍関連抗原と考えられた。平成19年度は悪性中皮腫組織におけるこれらの抗原の発現の定量化や、ELISA法を用いた患者血清中におけるこれらの抗原に対する抗体検出の定量化を行い、これらの抗原の発現量や抗体価と悪性中皮腫の臨床像との相関等について検討する予定である。本研究では,悪性胸膜中皮腫における腫瘍内浸潤B細胞に由来する抗体の認識する腫瘍抗原の同定を試み,診断や治療に有用な抗原を選定することを目的としている。平成18年度は,5症例の胸膜中皮腫患者を対象に解析を行い,11種類の腫瘍関連遺伝子を同定した。また5症例の中で2症例より胸膜中皮腫の細胞株を樹立した。平成19年度は,単離したこれらの遺伝子の胸膜中皮腫における発現解析や,患者血清中の抗体価の測定を行った。すなわち,胸膜中皮腫組織と正常組織におけるmRNAの発現をRT-PCR法で調べたところ,6つの遺伝子は胸膜中皮腫組織で過剰発現しており,腫瘍関連抗原と考えられた。その6つの腫瘍関連抗原のうち,4つは自己血清にしか抗原反応を認めなかったが,しかしThrombospondin-2と機能不明の遺伝子であるGene-Xは,他家の胸膜中皮腫患者の血清中にも抗体を検出することができた。悪性胸膜中皮腫患者12名と健常人19名の血清を200倍から25000倍まで希釈し,Phage plaque assayにて抗原抗体反応を判定し,血清抗体価を評価した。Gene-Xでは,5000倍希釈の血清で判定したところ,胸膜中皮腫患者で12例中7例(58.3%)に抗体を検出でき,健常人では19例全例で抗体検出ができなかった。またthrombospondin-2は1000倍希釈で判定したところ,胸膜中皮腫患者で12例中11例(91.7%),健常人で19例中1例に抗体を検出した。次に肺癌患者での血清抗体価を測定したが,Gene-Xでは,47例中全例で抗原抗体反応の検出ができず,thrombospondin-2は47例中1例にのみ抗体を検出した。この二つの遺伝子に対する抗体は,健常人および肺癌患者に比べ胸膜中皮腫患者血清にて有意に高い抗体価を検出することができ,血清学的な診断のためマーカーとしての応用が可能であると考えられた。今後は,これらの腫瘍関連抗原遺伝子が,免疫療法の標的として利用することが可能か検討する予定である。
気道上皮細胞イオントランスポートにおけるbeta_3アドレノセプター依存性制御機構

1.気道上皮細胞機能に対するβ_3アドレノセプターアゴニストの効果:犬気管および家兎気管上皮の培養細胞を用い、それぞれ短絡電流(Isc)、細胞間電位差(PD)、細胞コンダクタンス(G)、線も運動周波数(CBF)に対するBRL37344(β_3アドレノセプター選択的アゴニスト)の影響を検討した。Vlotage clump法を用いたUssing′s short-circuit法による検討では、BRL37344は上皮細胞のIsc,PDおよびGを用量依存性に増加させた。また以上の効果は、Clチャネルブロッカーであるdiphenylamine-2-carboxylate,NA-K-2Clコトランスポート阻害薬であるブメタナイド、あるいはClを除去し、lodieleで置換したメディウムで著明に抑制されたが、Naチャネルブロッカーであるアミロライドによる影響は受けなかった。したがって、BRL37344による電気的特性の変化は、Clチャネルに依存するものと考えられた。すなわち、上皮細胞の管腔側粘膜に局在するClチャネルの開口がβ_3アドレノセプターとcoupleしており、二次的な水分分泌の増加に関与する可能性が示唆された。線毛運動についても同様であり、BRL37344はCBFを増加させ、β_3アドレノセプターに依存する線毛運動制御系の存在が窺われた。2.パッチクランプ法による検討:上記の成績は、パッチクランプ法により、Clチャネルの開口現象として直接同定され、以上の仮説の妥当性が解明された。1.気道上皮細胞の培養:犬気管を摘出し、剥離した気道粘膜をユラゲナーゼ処理を行うことにより上皮細胞を採取した。これをマイクロポアフィルター上でエアーインターフェース法により10日間培養し、高度に分化した上皮細胞のモノレイヤーが得られた。2.電気的特性の評価:培養上皮細胞をウッシングチェンバーに固定し、膜電位固定法を用いその電気的特性の評価を行った。各種のカテコラミンは、いずれも上皮細胞の短絡電流を濃度依存性に増加させ、その効力比は、BRL37344(] SY.gtoreq. [)サルブタモール>ノルエピネフリンであった。サルブタモールの効果は、B_2アドレノセプター拮抗薬であるICI118551により著明に抑制されたが、BRL37344の作用は影響を受けなかった。シアノピンドロールは、BRL37344、サルブタモールいずれの作用も濃度依存性に抑制したが、シルドプロット解析より求めたPA_2値は、2薬剤間で有意差が認められた。したがって、気道上皮細胞にはB_3アドレノセプターが存在する可能性が示唆された。さらに、BRL37344による短絡電流の増加の随伴して、細胞間電位差および細胞コンダクタンスの上昇が認められた。また、以上の効果は、Naチャネルブロッカーであるアミロライド処理による影響は受けなかったが、Clトランスポート阻害薬であるブメタナイドやClチャネルブロッカーであるDPCの前投与により消失した。よって、B_3アドレノセプター刺激による上皮細胞電気的特性の変化は、細胞の漿膜側から管腔側へ向かうClトランスポートの増加に起因するものと考えられ、本受容体の活性化は気道における粘液線毛輸送系を改善する可能性が窺われた。
心磁図を用いた胎児の自律神経活動の評価

妊娠2837週の正常妊娠例(n=33)、妊娠2737週のIUGR例(n=15)を対象とし、磁気シールドルーム内で64チャンネルMCGを記録しFMCGを抽出した。加算平均波形より、心拍数、QRS間隔を求め、R波トリガーでRR間隔変動を作成して、時間領域指標Coefficient of variance(CV_<R-R>)および周波数領域指標(LF/HF比率)を算出した。1.正常妊娠群およびIUGR群のQRS間隔は週数との間に正の相関(y=0.58x+40.0,y=0.4x+44.4)を示した。正常妊娠群のCV_<RR>は妊娠32週-35週以前では一定の傾向を認めなかったが、妊娠32週-35週以降では妊娠週数との間に正の相関(y=0.0041x^3-0.378x^2+11.5x-111)を認めた。IUGR群のCV_<RR>値は妊娠週数に従って軽度上昇傾向(y=0.153x-1.2)を認めた。正常妊娠群およびIUGR群のLF/HF ratioは妊娠週数との間に正の相関(y=-0.0001x^3+0.0142x^2-0.4409x+5.6,y=0.03x+0.5)を認めた。FMCGを用いた胎児心拍変動の時間領域解析および周波数領域解析より、正常およびIUGR胎児の自律神経活動はともに妊娠週数に従って活性化していくことが明らかとなった。しかしながら副交感神経活動の発達(CV_<RR>値)は正常群とIUGR群との間に相異を認めた。本年度は正常胎児期における自律神経活動の発達過程の解析を以下のごとく実施した。目的:妊娠2840週の正常妊娠例(n=23)、妊娠3237週の子宮内胎児発育遅延(IUGR)例(n=15)における自律神経活動の発達の評価を行った。我々は胎児心磁図(fetal magnetocardiography ; F MCG)を用いてRR間隔変動の時間領域解析および周波数領域解析を行った。方法:F MCG測定は磁気シールドルーム内に設置された64-channel magnetocardiographyによって行われた。胎児の子宮内における位置は超音波断層装置によって確認した。結果:QRS間隔(m sec)は正常妊娠群において週数および児体重との間に正の相関(y=32.5+0.86x;r^2=0.40,y=48.2+0.007x;r^2=0.57)を示した。IUGR群もほぼ同様の傾向を示したが、一部に妊娠週数および児体重に比較して低値の症例を認めた。正常妊娠群のCoeffcient of variance(CV_<R-R>%)は妊娠32週未満では一定の傾向を認めなかったが妊娠32週以降では妊娠週数との間に正の相関(y=-6.43+0.34x;r^2=0.59)を認めた。またIUGR群の中には妊娠週数にかかわらず低値の症例を認めた。正常妊娠群のlow frequencyband/high frequency band ratioは妊娠32週未満では一定の傾向を認めなかったが妊娠32週以降では妊娠週数との間に正の相関(y=-5.14+0.19x;r^2=0.61)を認めた。結論:FMCGを用いた胎児心拍変動の時間領域解析および周波数領域解析より胎児の自律神経活動は妊娠32週以降活性化していくことが明らかとなった。またIUGR症例の中には正常群と異なった自律神経活動を示す症例を認めた。【今年度の研究成果の概要】

Methods妊娠2837週の正常妊娠例(n=33)、妊娠2737週のIUGR例(n=15)を対象とし、磁気シールドルーム内で64チャンネルMCGを記録しFMCGを抽出した。加算平均波形より、心拍数、QRS間隔を求め、R波トリガーでRR間隔変動を作成して、時間領域指標Coefficient of variance(CV_<R-R>)および周波数領域指標(LF/HF比率)を算出した。Results1.正常妊娠群およびIUGR群のQRS間隔は週数との間に正の相関(y=0.58x+40.0,y=0.4x+44.4)を示した。正常妊娠群のCV_<RR>は妊娠32週-35週以前では一定の傾向を認めなかったが、妊娠32週-35週以降では妊娠週数との間に正の相関(y=0.0041x^3-0.378x^2+11.5x-111)を認めた。IUGR群のCV_<RR>値は妊娠週数に従って軽度上昇傾向(y=0.153x-1.2)を認めた。正常妊娠群およびIUGR群のLF/HF ratioは妊娠週数との間に正の相関(y=-0.0001x^3+0.0142x^2-0.4409x+5.6,y=0.03x+0.5)を認めた。
沖縄産ハマダラカ属3種の系統確立とネズミマラリアに対する感受性に関する研究

室内におけるマラリア研究には種々のマラリア原虫に感受性の高い媒介蚊・ハマダラカ属の蚊の系統保持コロニゼーションが必要である。我々の教室でもネズミマラリアPlasmodium yoeliiの実験室媒介蚊An.stephensiが累代飼育されている。本種は飼育が容易で、種々のマラリア原虫に感受性があり、優れた実験媒介蚊であるが、インド起源の系統で、コロニーが消滅すると入手が困難であり、又飼育中脱出し、野外で一時的にでも繁殖することは好ましくない。本研究の目的はコガタハマダラカ(以下コガタと略す)、シナハマダラカ(シナ)およびオオハマハマダラカ(オオハマ)の室内系統保持を確立すること、又これら3種蚊のP.y.nigerienseの感受性などを感染実験により明らかにし、媒介蚊としての有用性を検討することである。マラリア媒介蚊コガタ、シナおよびオオハマを野外から採集し、バイオトロン(日長15h、薄明薄暮1h、25°C)でコロニゼーションを試み、飼育が困難であったコガタ、オオハマが静置法及び当教室で考案した滴下法を用いることで飼育ができるようになった。コガタ幼虫への最適餌量は1令には25mg、2令に50mg、3令に100mg,4令に150mgを1日に2回、また、オオハマにはコガタの半分量が適当量であった。コガタ、オオハマ共に容器当り100200個体の飼育が適当であった。成虫は大型ケージを用い、自然交尾で行った。コガタの交尾・吸血率、産卵共に良い結果を得たが、オオハマの交尾・吸血は低率であった。P.y.nigerienseの媒介能力について検討した結果、オオハマが他の2種コガタ、シナに比べてオーシストおよびスポロゾイトを持つ蚊の割合が高く、P.y.nigerienseに対して沖縄産の中では最も高い親和性を持っていた。また、本種はAn.stephensiよりもスポロゾイトの形成能力は、やや劣っていたが、P.y.nigeriense感染ネズミを吸血した後の生存日数が長く、生存率も高かった。
好中球NADPHオキシダーゼの解析と活性酸素生成機構-慢性肉芽腫症の遺伝子治療の基礎的解析-

慢性肉芽腫症の基礎的解析を行い、その遺伝子治療の基礎的データを蓄積するために本研究は行われた。そのために、スクリプス研究所Babior博士より慢性肉芽腫症患者由来のB細胞をEBウィルスの株化した細胞の提供をうけた。本細胞はNADPHオキシダーゼコンポーネントの細胞性成分であるp47phoxが欠損していることが明らかにされている。このB細胞は正常のものと違い、ホルボールで刺激してもNADPHオキシダーゼの活性化は全く観察されなかった。また欠損しているp47phoxを過剰発現させるために発現ベクターとしてEBOpLPPにp47phoxのcDNAを組み込み、この細胞に導入したところ、活性の回復が観察され、発現されたp47phoxのC末端領域の11個のセリンがリン酸化にされていることが示された。この実験結果はp47phoxはNADPHオキシダーゼ活性化に必須のものであり、p47phoxがリン酸化されることでNADPHオキシダーゼが活性化の引き金であることが明らかにされた。以上のことからリン酸化の重要性をさらに確かめるために、303と304の位置の2個のセリン残基をアラニン残基に変異を起こさせたcDNAを発現ベクターに組み込んで発現させると活性は全く見られなくなった。さらにセリンがリン酸化させたものと類似の荷電を持つグルタミン酸やアスパラギン酸残基にこの303+304を置き換えてやると、B細胞のNADPHオキシダーゼの活性は回復することが示された。以上のことから、リン酸化が活性の獲得に必須のものであることが明らかとなった。
リポ蛋白質の質的変化に着目した食成分の新たな生理活性の探索

近年、動脈硬化症などの疾患発症リスクとの関連から、リポ蛋白質の「量(血液中濃度)」に加えて、「質(生理活性の強さ)」の重要性が明らかとなりつつある。また、リポ蛋白質が様々な食成分(栄養素や薬物)を包含し、それらの運搬体として機能することも見出されている。本研究は、食成分のリポ蛋白質への分布に着目し、食成分がリポ蛋白質の「質」に及ぼす影響を明らかにすべく企画された。得られる成果は、食成分の新たな生理活性や毒性の発見に繋がるとともに、リポ蛋白質の「質」の改善をねらう全く新しい食事療法や創薬コンセプトの提唱にも繋がり、生活習慣病の治療や予防に大きく貢献することが期待される。
タブレット型情報端末を活用した日本紹介3Dアウトリーチ教材の開発

3D画像は、その画像を回転させることで360゚の角度からモノを観察できるため、学習者にとって非常に理解しやすいという利点がある。本研究ではまず、風鈴・剣玉・秋国の曲げわっぱ・アイヌの民芸品・ランドセル・新幹線の模型など日本文化紹介につながる資料の3Dコンテンツの作成を行った。なお、実践の過程で3Dスキャナを用いるより廉価で汎用性のある3D作成ソフトウェアが販売されたため、本研究では3D画像の作成にそれらのソフトウェアを用いることとした。完成した3D画像に合わせて実際にモノを使用している動画と解説ラベルとなる文章を作成し、デジタルコンテンツとして完成した。完成したコンテンツは、別に作成した電子書籍内に取り入れ、タブレット端末(以下iPadと記す)で閲覧できる日本文化紹介アウトリーチ教材として完成させた。3D画像作成以外の作業は全てiPadを用い、生徒数名単位で行った。iPadを机の中央に配置し、誰もが手を伸ばして操作しながらの作業は、ひとりひとりがパソコンを使用しての作業より活発なディスカッションの場が生まれより良いものができた。アンケートによる意識調査でも生徒の満足度は高かった。製作したアウトリーチ教材は研究協力者により奈良県葛城市立磐城小学校、韓国の「九一(guil)小学校」及び勤務校の研修旅行先である(筆者も生徒の引率業務により随行)ニュージーランド「waitoki school」において実践を行い「子どもたちにとって非常に楽しくわかりやすい」と高い評価をいただいた。実践事後の生徒や国内外の評価者に対するアンケート結果から、iPadを用いた協同学習による作品制作は、パソコンを用いた単独作業より、完成度の高いものができるばかりでなく生徒の達成感や満足度も高まることがわかった。また、3D画像を電子書籍の中に取り入れたアウトリーチ教材は、単なる写真を用いただけのものより、非常に閲覧者(特に小学生)の興味を引き関心を高めることも明らかとなった。
脱分化と分裂組織形成に関わる遺伝子SRD2の解析

SRD2によるsnRNA転写活性化機構に関して、U2 snRNAプロモーターに存在するシス因子、USE内に変異を導入した変異型プロモーター::レポーター遺伝子(LUC)を作製し、野生型、srd2変異体のカルスでの一過的発現解析を行った。その結果、USE内に変異が入るとレポーター活性が著しく低下し、野生型プロモーター::LUCで見られるsrd2変異による温度感受性も無くなった。これはSRD2がUSEに直接的に作用して機能していることを示唆している。根断片から側根を誘導し、側根分裂組織形成におけるsnRNA蓄積量の変化とそれに対するsrd2変異の影響を、抗TMG抗体(snRNAのトリメチルグアノシンキャップ構造に対する抗体)を使った免疫組織学法で調べた。野生型では側根原基の形成に伴ってsnRNA量が増大し、一旦その蓄積量が減少した後、再び原基の付け根付近からsnRNA量が増加して、最終的には根端分裂組織での強いシグナルが検出されるというパターンを示した。これに対して、制限温度下で形成されるsrd2の(正常な分裂組織を欠いた)異常瘤状側根では、snRNA量の2回目の増大が見られなかった。以上は、SRD2によるsnRNA転写活性化が側根の分裂組織形成において重要な役割を担っていることを意味している。また、RD2遺伝子座にT-DNAが挿入された形質転換体2ラインについて解析を行った。いずれのラインにおいても、T-DNA挿入に関するホモ個体は存在せず、SRD2遺伝子機能がシロイヌナズナの生育に必須であることが確かめられた。野生型との交配実験の結果、SRD2遺伝子座へのT-DNA挿入は配偶体致死と思しき分離比を示し、特に雌性配偶体への影響が大きいことが分かった。このことから、SRD2機能は配偶体形成に必須であると考えられる。胚軸の脱分化過程におけるsnRNAレベルの変動に関してRNAゲルブロット解析を行い、胚軸外植片のカルス誘導培地(CIM)での培養1日目、2日目にsnRNA蓄積量が増大すること、この増大はsrd2変異によって抑制されることを明らかにした。リアルタイムRT-PCRによる詳細な解析の結果、SRD2 mRNAはCIM培養24時間目をピークとして一過的に発現が誘導されており、発現量はオーキシンとサイトカイニンが両方存在する場合に最も高くなることが示された。以上より、SRD2はsnRNA転写活性化を担っており、snRNAレベルの上昇は脱分化の進行上極めて重要な素過程であると推測される。また、SRD2プロモーター::レポーター遺伝子を組み込んだ形質転換植物体の解析から、カルスからの発根誘導、シュート再生誘導に際して、早い段階にSRD2 mRNAの発現が誘導されることが分かった。予備的ながら、これらの過程でもsnRNA蓄積量が上昇する傾向が示されており、器官再生の初期においてもSRD2によるsnRNA転写活性化が起こることが予想される。さらにSRD2-GFP融合タンパク質をタマネギ表皮細胞にて一過的に発現させ、SRD2タンパク質の細胞内局在を調べた。融合タンパク質の蛍光は核に局在しており、SRD2タンパク質は少なくとも間期の細胞では核に存在することが示唆された。このことはSRD2がsnRNA転写活性化を担う因子であるとの予測に矛盾しない結果である。srd2ノックアウト変異体に関しては、公開されているいくつかのT-DNAタグラインのデータベースを探索した。また、かずさDNA研究所からT-DNAタグラインのDNAプールの提供を受け、探索を行った。現在、得られた候補ラインの種を取り寄せている。培養組織片を材料にした一過的発現実験を行い、SRD2タンパク質の分子機能について解析を行った。野生型、srd2変異体の胚軸由来カルスを発根誘導培地に置床し、U2.3snRNAのプロモーターにレポーター遺伝子を繋いだキメラ遺伝子を一過的に導入したところ、srd2変異体カルスではU2.3プロモーター活性が温度感受性を示すことが明らかとなった。この温度感受性は野生型SRD2 cDNAの同時導入によって回復した。以上から、SRD2タンパク質の一次機能がsnRNA転写活性化であることが示された。さらに、U2 snRNAのようなUSE-TATA型プロモーターを持たず、クラスターを成した形でゲノムにコードされているsnRNAについて、脱分化過程におけるレベル変動をRNAゲルブロット解析で調べた。この結果、クラスター型snRNAのレベル変動はsrd2変異の影響を受けないことが分かり、SRD2はUSE-TATA型プロモーターに作用して機能することが示唆される。また、snRNAのトリメチルグアノシン(TMG)キャップ構造に対する抗体を用いたRNAゲルブロット解析の結果から、根は胚軸に比べてsnRNA蓄積量が高いことが示された。さらにU2.3プロモーターにGUS遺伝子を繋いだキメラ遺伝子をもつ形質転換植物体においても、根では胚軸に比べてより高いGUS活性が観察された。これらは、これまでに考えてきた、根は胚軸よりも細胞増殖能が高く、増殖能の分子的実体はsnRNAであるという仮説を支持するものである。srd2ノックアウト変異体に関しては、SRD2遺伝子座にT-DNA挿入をもつタグラインを購入し、解析を始めている。これまでに得た結果から、T-DNA挿入をホモで持つ個体は、胚発生の段階で致死である可能性が高い。

SRD2によるsnRNA転写活性化機構に関して、U2 snRNAプロモーターに存在するシス因子、USE内に変異を導入した変異型プロモーター::レポーター遺伝子(LUC)を作製し、野生型、srd2変異体のカルスでの一過的発現解析を行った。その結果、USE内に変異が入るとレポーター活性が著しく低下し、野生型プロモーター::LUCで見られるsrd2変異による温度感受性も無くなった。これはSRD2がUSEに直接的に作用して機能していることを示唆している。根断片から側根を誘導し、側根分裂組織形成におけるsnRNA蓄積量の変化とそれに対するsrd2変異の影響を、抗TMG抗体(snRNAのトリメチルグアノシンキャップ構造に対する抗体)を使った免疫組織学法で調べた。野生型では側根原基の形成に伴ってsnRNA量が増大し、一旦その蓄積量が減少した後、再び原基の付け根付近からsnRNA量が増加して、最終的には根端分裂組織での強いシグナルが検出されるというパターンを示した。これに対して、制限温度下で形成されるsrd2の(正常な分裂組織を欠いた)異常瘤状側根では、snRNA量の2回目の増大が見られなかった。以上は、SRD2によるsnRNA転写活性化が側根の分裂組織形成において重要な役割を担っていることを意味している。また、RD2遺伝子座にT-DNAが挿入された形質転換体2ラインについて解析を行った。いずれのラインにおいても、T-DNA挿入に関するホモ個体は存在せず、SRD2遺伝子機能がシロイヌナズナの生育に必須であることが確かめられた。野生型との交配実験の結果、SRD2遺伝子座へのT-DNA挿入は配偶体致死と思しき分離比を示し、特に雌性配偶体への影響が大きいことが分かった。このことから、SRD2機能は配偶体形成に必須であると考えられる。
医療型重症心身障害児入所施設における保育士の職務継続支援や教育プログラムの検討

医療型重症心身障害児入所施設の人員基準をみると、保育士は1名以上とされており、少数配置で運営が可能である。また、医療型重症心身障害児入所施設のように医療職が多い中では、少数の保育士のための教育プログラムを導入している施設は少ない。そこで、医療型重症心身障害児入所施設で勤務する保育士に調査し、その結果から、医療型重症心身障害児入所施設の保育士に対する職務継続支援の方法や教育プログラムの内容を検討する。
方位のメタファー -ウィリアム・ブレイクの「時」-

ブレイクの「時間」は、永遠相(時に、円、球、太陽等で表わされる)から現象相(時に方形、方体、絵の枠自体等で表わされる)への展開の一様相であるとみることができるが、その抽象イメージが、三角形の二辺に、また、その具象イメージが、コンパス、火箸、ハンマー、絡み合う二本の木、蛇、屋根の稜線)などに託されている。現象相(時間相)は、また、永遠相を起源に持ち、不完全ながら、その諸特性を投影したものであることから、永遠相に因んで、円、球、太陽等で表わされることがある。それらの様々な動き、即ち、回転、振幅、螺旋、及び方位を指標とする動き等が、「時間」の「拍動(パルス)」を構成し、永遠相、時間相双方の象徴となりうる太陽(心臓)の拍動と捉えられている。尚、以上の解明により、ブレイクにおけるコンパスが単に誤れる理性を象徴するという、従来の一面的な解釈では、説明に無理があり、謎とされてきた、「十字架上に眠るキリスト」「大工の家の少年キリスト」「ヤコブの夢」等におけるコンパスの意味が明らかになった。特に方位について、現象相では、東→南→北→西、或いはその逆方向の8の字ベクトルが見られ、また、永遠相及び擬永遠相では、北→南→西→東、或いはその逆の8の字ベクトルが見られる。西方位は、特別に、永遠相への通路、転換点であるという特質を持つ事から、独自に、東→南→西→北(或いはその逆)のベクトルを持っている。これらのひと巡りとしてのパルスが、“divide & unite at will",“folding & unfolding",“according to their will"等の反復的動きを暗示する詩句に、多彩に言語化されている。この方位と時間との関わりは、奇しくも中国の易経と相通ずる。又、南北の軸は「構成」、東西の軸は「通路」を象徴する事も判明した。
スフインゴシン, セレブロサイド類の合成

1.スフインゴシン類の合成-不飽和アルデヒド2__とニトロエタノールから1, 2付加体4__とアセトナイド5__を経由するアミノジオール体6__の新規合成法を開発し,その応用としてスフインゴシン1__の合成に成功した.更にこの方法の発展として, 7__で代表される種々のセラミド類を合成した.一方これらセラミドをイミデート法によりグリコシル化を行うと8__で代表されるセレブロサイド類を得ることに成功した.2.セレブロサイドB1b10__の合成次に上記の結果を利用して2E, 6Z-hexadecadienal 9__よりaminoacetamide(±)-11に導き, R-12と縮合し,光学活性なセラミドを分離した後,グリコシル化し保護基をはずすとセレブロサイドB_<1b>が得られ天然品と同定した.更に合成中間体をD-C(+)-エリスロスフインゴシン由来の誘導体と一致させることにより10__の2位と3位の絶対配置がD-erythro型であることを決定した.3.α+ヒドロキシ脂肪酸16__の不斉合成-Evansらの開発した不斉素子13__をパルミトイル化した後,エノレートとし【*KA*】で酸化後,加水分解すると光学活性なα-hydr〓〓ypalmitic acid16__を得ることに成功した.1.スフインゴシン類の合成-不飽和アルデヒド2__とニトロエタノールから1, 2付加体4__とアセトナイド5__を経由するアミノジオール体6__の新規合成法を開発し,その応用としてスフインゴシン1__の合成に成功した.更にこの方法の発展として, 7__で代表される種々のセラミド類を合成した.一方これらセラミドをイミデート法によりグリコシル化を行うと8__で代表されるセレブロサイド類を得ることに成功した.2.セレブロサイドB1b10__の合成次に上記の結果を利用して2E, 6Z-hexadecadienal 9__よりaminoacetamide(±)-11に導き, R-12と縮合し,光学活性なセラミドを分離した後,グリコシル化し保護基をはずすとセレブロサイドB_<1b>が得られ天然品と同定した.更に合成中間体をD-C(+)-エリスロスフインゴシン由来の誘導体と一致させることにより10__の2位と3位の絶対配置がD-erythro型であることを決定した.3.α+ヒドロキシ脂肪酸16__の不斉合成-Evansらの開発した不斉素子13__をパルミトイル化した後,エノレートとし【*KA*】で酸化後,加水分解すると光学活性なα-hydr〓〓ypalmitic acid16__を得ることに成功した.1.スフインゴシン類の合成-ミリスチルアルコールから下記に示されるように9行程で(±)-スフインゴシンを合成する方法を開発した。この合成法を利用すれば更に種々のセラミド類の合成が可能となった。2.セラミド【4!】の合成-アミン【1!】を種々のカルボン酸と脱水縮合しアミドとした後にアセトナイドを加水分解するとセラミドが得られることが判った。例えば塩化パルミトイル【3!】を【1!】と縮合した後、トシル酸触媒で加水分解すると、セラミド【4!】が得られた。他の酸との縮合も同様に進行し、対応するセラミドが得られた。3.セレブロサイド【B_1】を合成するためにζ-ブチルラクトールと〔【CH_3】【(CH-2)-9】P【Ph_3】〕ByとのWittig反応を種々の条件で検討し【CH_3】【(CH-2)-8】=^^OHの合成条件を確立した。
Si単結晶マイクロ構造体の動的環境強度マップの構築

本研究では,シリコン単結晶などのマイクロマシン用材料に注目して,破壊特性について検討し,信頼性があり,寿命予測の可能なマイクロエレメントやMEMS設計のための強度マップを構築するための基礎データを得ることを目的とする。本研究ではシリコン単結晶微小機械要素,ポリシリコン微小試験片,および高純度石英ガラスファイバを対象とした。本研究では新たに微小機械要素用の引張試験機を開発するとともに,引張試験のためのジグを開発し,引張試験が十分な精度で実施できることを確認し,ポリシリコン薄膜では,幅10μmでは引張強度は約0.9GPa,幅5μmでは約3.7GPaと極めて高い強度特性を有していることを示した。さらに,シリコン単結晶微小機械要素では,空気中においてはSCC破壊や疲労破壊を示さないが,強度特性には極めて水環境の影響が大きく,動的な変動荷重と水環境の相乗効果により強度低下が生じることが明らかとなった。この低下は,水環境と動的変動応力によって,微小なき裂が発生,進展し,そのき裂が応力集中を起こして,強度低下を生じさせることを明らかにした。また一方,石英ガラス微小機械要素の環境強度に及ぼす水環境・水浸漬時間の影響について検討し,純度を極めて高めることにより,水環境の影響を受けず,環境ぜい化感受性が低下することを示し,今後の耐環境性のあるマイクロマテリアルの設計指針を得た。本研究では,種々の結晶方位を有するSi単結晶マイクロ構造体に注目して,破壊と強度特性に及ぼす水環境と動的変動荷重の影響について検討して,信頼性があり寿命予測の可能なマイクロエレメントやMEMS設計のための強度マップを構築するための基礎データを得ることを目的とする。本年度は,厚さ50μmのSi単結晶ウェハを用いて,マイクロ引張試験片を作成するための製造条件および引張試験方法について検討を加えた。すなわち,任意の方位を有する引張試験片を加工するために,ICP装置を用いたプラズマエッチング(プロセスガス:SF_6+C_xF_y)により,任意の方位の引張試験片が加工できることを確認した。この時,精度良い試験片を加工するためには,プラズマエッチングの加工パラメータのうち,エッチング時の試験片の冷却がシリコンとレジストのエッチング比を最適な値に保つ上で極めて重要であるこをが明らかとなった。さらに,微小荷重を負荷できる微小材料動的引張試験機を導入するとともに,微小試験片の引張試験を行うための種々のチャッキング方法のうち,今年度は微小試験片と引張ジグを接着により固定して引張試験を行う方法を採用し,引張試験片の軸あわせや曲げが負荷されないようにチャッキングを行うためのジグを開発した。これらを用いて,シリコン微小引張試験片の引張試験が行えることを確認した。この結果,<111>方向の引張試験片は,引張軸方位に対して垂直方向の[111]面で破壊し,また破面上にはへき開段が見られることなどが明らかとなった。さらに,破壊特性に及ぼす動的応力・環境・微小切欠きの影響に関して現在検討を進めつつある。本研究では,Si単結晶などのマイクロマシン用材料に注目して,破壊特性について検討し,信頼性があり,寿命予測の可能なマイクロエレメントやMEMS設計のための強度マップを構築するための基礎データを得ることを目的とする。本年度は,微小機械要素の引張・疲労試験を実施するために,新たにポリシリコン微小引張試験片を新たに創製した。すなわち,CVD法によりSiウェハ上にポリシリコンを成膜後,反応性イオンエッチングによりパターン化した後,PSG犠牲層を除去することにより幅が5-10μm,厚さ3.5μm,ゲージ長さ100-200μmの引張誠験片を作成した。

さらに,ピエゾ素子による移動機構を用いたステージと微小ロードセル等を用いて,薄膜用動的引張・疲労試験機を新たに開発するとともに,昨年度開発した試験片チャッキング方法を用いて,引張試験が十分な精度で実施できることを確認し,幅10μmでは引張強度は約0.9GPa,幅5μmでは約3.7GPaと極めて高い強度特性を有していることを示した。さらに薄膜そのもののひずみを測定するために2視野顕微鏡援用変位測定システムを設計し,イオンビーム支援CVD法による標点を用いることにより薄膜のひずみそのものを測定できることを確認し,現在,ポリシリコンの強度特性に及ぼす試験片幅,ひずみ速度・環境の影響について検討している。さらに,シリコン単結晶曲げ微小試験片を対象として,水環境の影響について検討し,微小材料においては,mmオーダのバルク材では環境の影響が生じない場合も,動的応力と水環境,さらに微小構造物特有の高負荷荷重の影響を受けて,強度特性が低下することを明らかにした。併せて,高純度SiO_2微小機械要素の環境強度に及ぼす水環境・水浸漬時間の影響について検討し,純度を極めて高めることにより,水環境の影響を受けず,環境ぜい化感受性が低下することを示し,今後の耐環境性のあるマイクロマテリアルの設計指針を得た。
血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度に及ぼす麻酔薬の影響

血管内皮細胞にはアセチルコリンなどの血管拡張物質の受容体が存在する.これらの受容体の刺激により,血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度が上昇し,一酸化窒素合成酵素(NOS)が活性化され,遊離した一酸化窒素(NO)が血管平滑筋を弛緩する。一方,多くの麻酔薬は血管拡張作用を有しているが,血管内皮細胞におけるNO産生にどのような影響を及ぼしているのか不明である.われわれは,血管内皮細胞のNO量の変化の指標として,血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度の変化を測定し,ケタミンの血管内皮細胞におけるNO産生に及ぼす影響を推定した.膜透過性Ca^<2+>感受性蛍光色素(Fluo 3 AM)を負荷したウシ頚動脈経代培養血管内皮細胞を,共焦点レーザー顕微鏡下に観察しながら,数々の濃度(10^<-8>10^<-3>M)のケタミンを負荷することにより,ケタミンの血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度に及ぼす影響を直視下にとらえた.結果,10^<-6>10^<-3>Mの濃度で,ケタミンは用量依存的に血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度を増加した.ケタミンによる麻酔の導入は,通常2mg・kg^<-1>のケタミンを投与した場合,血漿中のケタミンの濃度は,投与1分後に1.1×10^<-4>Mに達し,5分後には約6×10^<-5>Mとなる.本研究結果は,ケタミンが臨床使用濃度で血管内皮細胞におけるNO遊離と血管平滑筋の弛緩を惹き起こして可能性を示している.血管内皮細胞にはアセチルコリンなどの血管拡張物質の受容体が存在する.これらの受容体の刺激により,血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度が上昇し,一酸化窒素合成酵素(NOS)が活性化され,遊離した一酸化窒素(NO)が血管平滑筋を弛緩する。一方,多くの麻酔薬は血管拡張作用を有しているが,血管内皮細胞におけるNO産生にどのような影響を及ぼしているのか不明である.われわれは,血管内皮細胞のNO量の変化の指標として,血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度の変化を測定し,ケタミンの血管内皮細胞におけるNO産生に及ぼす影響を推定した.膜透過性Ca^<2+>感受性蛍光色素(Fluo 3 AM)を負荷したウシ頚動脈経代培養血管内皮細胞を,共焦点レーザー顕微鏡下に観察しながら,数々の濃度(10^<-8>10^<-3>M)のケタミンを負荷することにより,ケタミンの血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度に及ぼす影響を直視下にとらえた.結果,10^<-6>10^<-3>Mの濃度で,ケタミンは用量依存的に血管内皮細胞内Ca^<2+>濃度を増加した.ケタミンによる麻酔の導入は,通常2mg・kg^<-1>のケタミンを投与した場合,血漿中のケタミンの濃度は,投与1分後に1.1×10^<-4>Mに達し,5分後には約6×10^<-5>Mとなる.本研究結果は,ケタミンが臨床使用濃度で血管内皮細胞におけるNO遊離と血管平滑筋の弛緩を惹き起こして可能性を示している.
MDSにおけるG-CSFのシグナル伝達異常とその白血病発症機構に関する研究

1 MDS患者骨髄単核球のサイトカインに対する反応性の検討MDS計13例(RA 3例,RAEB 7例,overt leukemia 3例)においてメチルセルロース法によるコロニーアッセイを用いてG-CSF,GM-CSF,IL-3に対する反応性を検討した.MDS患者サンプルでは正常コントロールに比し反応性が低下する傾向を示したが,病期との関連は明らかではなかった.2例(RAEB 1例,overt leukemia 1例)においてG-CSFに対してのみ選択的に濃度依存性にコロニーの増殖を示す症例が得られ,またovert leukemia 1例の末梢血より得られた白血病細胞の上記サイトカインに対する増殖反応性をMTT-assayにて検討し,この症例においてもG-CSFに対して選択的な濃度依存性増殖を呈した.2 MDS患者骨髄単核球におけるG-CSFRの解析MDSの病態および病型移行の分子機構の一端を明らかにするためG-CSFRの細胞内領域についてダイデオキシ法による塩基配列の決定を,G-CSFに対して増殖反応性を示した3例および反応低下を示した1例を中心に行ったが,明らかな変異・異常は見出せなかった.今後さらにG-CSF反応性と白血病発症との関連を検討中である.3 (6;9)転座とG-CSFのシグナル伝達機構の検討末梢血白血病細胞G-CSFに対して選択的な濃度依存性増殖を示した上記1例は(6;9)転座を有しており,PCR法にてDEK-CANキメラ遺伝子の存在を確認している(血中G-CSF濃度は正常).この遺伝子にコードされる蛋白の転写活性因子としての機能を検索し,G-CSFR以下のシグナル伝達に関与していると考えられている蛋白(Jak,Stat等)の転写調節への関与を検討している.1 MDS患者骨髄単核球のサイトカインに対する反応性の検討MDS計13例(RA 3例,RAEB 7例,overt leukemia 3例)においてメチルセルロース法によるコロニーアッセイを用いてG-CSF,GM-CSF,IL-3に対する反応性を検討した.MDS患者サンプルでは正常コントロールに比し反応性が低下する傾向を示したが,病期との関連は明らかではなかった.2例(RAEB 1例,overt leukemia 1例)においてG-CSFに対してのみ選択的に濃度依存性にコロニーの増殖を示す症例が得られ,またovert leukemia 1例の末梢血より得られた白血病細胞の上記サイトカインに対する増殖反応性をMTT-assayにて検討し,この症例においてもG-CSFに対して選択的な濃度依存性増殖を呈した.2 MDS患者骨髄単核球におけるG-CSFRの解析MDSの病態および病型移行の分子機構の一端を明らかにするためG-CSFRの細胞内領域についてダイデオキシ法による塩基配列の決定を,G-CSFに対して増殖反応性を示した3例および反応低下を示した1例を中心に行ったが,明らかな変異・異常は見出せなかった.今後さらにG-CSF反応性と白血病発症との関連を検討中である.3 (6;9)転座とG-CSFのシグナル伝達機構の検討末梢血白血病細胞G-CSFに対して選択的な濃度依存性増殖を示した上記1例は(6;9)転座を有しており,PCR法にてDEK-CANキメラ遺伝子の存在を確認している(血中G-CSF濃度は正常).この遺伝子にコードされる蛋白の転写活性因子としての機能を検索し,G-CSFR以下のシグナル伝達に関与していると考えられている蛋白(Jak,Stat等)の転写調節への関与を検討している.