hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
乳癌の初期段階における浸潤・転移の分子機序の解明

上皮由来の癌が浸潤形質を獲得する際、上皮-間葉形質転換(EMT)に類似した現象を伴う。本研究において、EMT様進行過程にGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化が重要であること、また、変異p53による代謝経路の活性化がArf6の活性化に関わっていることを見いだした。さらに、ヒト乳癌の臨床標本及びデータベース解析から、GEP100-Arf6-AMAP1経路の発現と放射線治療後の再発に相関があること、変異p53とシグナル因子群の発現は予後不良との相関が見られたことから、p53遺伝子変異を伴うArf6経路の活性化はEMT様進行過程、並びに乳癌の悪性度進行に深く関わっていることが示された。前癌段階あるいは初期段階の乳癌に誘導される浸潤・転移形質獲得及び、微小転移形成過程におけるGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化・不活性化の分子機序を明らかにするために、乳癌の浸潤・転移形質獲得に重要なTGFβ1、EGF及びHGFなどのreceptor tyrosine kinases (RTKs)からの刺激による活性化分子機序の解析を行った。これまでに、EMT誘導可能な乳腺上皮細胞NMuMG及び乳癌細胞MDA-MB-231においてTGFβ1、EGF及びHGF刺激によりGEP100-Arf6-AMAP1経路が活性化されることを明らかにしてきた。興味深いことに、その活性化にgain-of-function型のp53変異による特定の細胞内代謝経路の変化が関与していることを見いだした。また、TGFβ1刺激によって発現が上昇するEPB41L5はAMAP1と結合し、浸潤仮足形成に関与している知見を得た。さらに、gain-of-function型のp53変異とGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化との関連を解析した結果、gain-of-function型のp53変異の発現がAMAP1やEPB41L5のmRNA及び蛋白質の発現上昇に関与していること、それらの発現上昇に特定のmiRNAが関与していることが分かった。ヒト乳癌の臨床標本の免疫染色解析から、GEP100-Arf6-AMAP1シグナル因子群の発現は放射線治療後の再発と相関すること、また、乳癌モデルマウスMMTV-PyMTの肺の転移部において、GEP100、AMAP1の発現が高くなっていることがわかった。これらの結果から、GEP100-Arf6-AMAP1経路はgain-of-function型のp53変異と連関して、乳癌の浸潤・転移形質及び微小転移形成過程に関与していると考えられる。本研究は、初期段階の乳癌に誘導される浸潤・転移形質獲得及び微小転移形成過程におけるGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化・不活性化の分子機序を明らかにすることを目的とし、以下の結果を得た。上皮由来の癌が浸潤形質を獲得する過程において、上皮-間葉形質転換(EMT)に類似した現象を伴うことが推察されており、EMT様進行過程にGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化が重要な役割を担っていること、そのシグナルの活性化にp53遺伝子の変異が必須であることを見いだした。その分子機序として、TGFβ1刺激からc-Met/HGFレセプターの活性化を介していること、その際、GEP100がアダプター分子Gab1を介してc-Metに相互作用する新たな分子機序を見いだした。さらに、p53遺伝子変異はコレステロール代謝経路であるmevalonate pathway関連遺伝子の発現を上昇することが知られており、その中間産物がArf6の活性化に関わっている興味深い知見を得た。また、乳癌幹細胞マーカーであるCD44+/CD24-の発現を示すMDA-MB-231などの高浸潤性乳癌細胞群において、Arf6やAMAP1の蛋白質発現量が亢進しており、癌幹細胞様形質の誘導にGEP100-Arf6-AMAP1シグナルが関与していることが考えられる。ヒト乳癌の臨床標本の免疫染色及びデータベース解析から、GEP100-Arf6-AMAP1シグナル因子群の発現は放射線治療後の再発及び予後不良との相関が見られ、再発及び予後不良因子になる可能性が示唆される。以上の結果は、GEP100-Arf6-AMAP1経路とp53遺伝子変異が連関して、初期段階の乳癌に誘導される浸潤・転移形質獲得及び微小転移形成過程に関与していることを示しており、新たな経路を標的とした診断方法の開発に繋がる可能性を提示している。

本研究は、前癌段階あるいは初期段階の乳癌に誘導される浸潤・転移形質獲得及び、微小転移形成過程におけるGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化・不活性化の分子機序を明らかにすることを目的とし、乳癌の浸潤・転移形質獲得に重要なTGFβ1刺激による解析を行った。EMT誘導可能な乳腺上皮細胞NMuMGをTGFβ1で刺激するとArf6が活性化され、Arf6の発現抑制はTGFβ1刺激による形態変化を抑制する知見を得た。乳癌細胞MDA-MB-231細胞においても、TGFβ1刺激によりArf6が活性化され、また、GEP100、Arf6、AMAP1の発現抑制は浸潤能が抑制されることが分かった。さらに興味深いことに、TGFβ1刺激依存的Arf6活性化の経時的変化に相関して、HGFレセプター/c-Metが活性化される知見を得た。その分子機序の解析から、GEP100はアダプター分子Gab1と結合し、間接的にc-Metに相互作用する新たな作用機序を見出した。Gab1の発現抑制の解析から、Gab1もTGFβ1刺激依存的EMT進行に関与していることが分かった。乳腺上皮細胞HMECを不死化したHMLE細胞は、TGFβ1によるEMT誘導により、浸潤形質及び幹細胞様形質が誘導される。前癌段階の乳癌におけるEMT進行に焦点をあてるために、HMLE細胞を用いて解析を行った結果、TGFβ1刺激によるEMT進行においてArf6が活性化される結果を得た。さらに、乳癌幹細胞マーカーであるCD44+/CD24-の発現を示すMDA-MB-231などの高浸潤性乳癌細胞群において、Arf6やAMAP1の蛋白質発現量が亢進している知見を得た。これらの結果は、EMT様の変化によって誘導される浸潤形質及び癌幹細胞様形質の誘導にGEP100-Arf6-AMAP1シグナルが関与していることを示唆しているものと考えられる。前癌段階あるいは初期段階の乳癌に誘導される浸潤・転移形質獲得及び、微小転移形成過程におけるGEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化・不活性化の分子機序として、gain-of-function型のp53変異との関連及び特定の細胞内代謝経路の変化が関与していることを新たに見いだした。さらに、gain-of-function型のp53変異がAMAP1及びmesenchymal proteinであるEPB41L5のmRNA及び蛋白質発現の上昇に関与している知見を得ている。現在、mRNA及び蛋白質発現制御に関わるmiRNAに関して、解析を進めている。このように、GEP100-Arf6-AMAP1経路の活性化の分子機序の解析は順次結果が出てきている。しかしながら、GEP100-Arf6-AMAP1シグナルの不活性化とMET誘導との関連に関しては、遅れがある。活性化機序を明らかにした後、不活性化とMET誘導との関連について解析を行う予定である。また、ヒト乳癌の臨床標本の免疫染色解析も行い、GEP100-Arf6-AMAP1シグナル因子群の発現と放射線治療後の再発と相関することを見いだした。病理学的解析は研究計画の予定通り進めている。乳癌マウスモデルを用いた浸潤/転移活性とGEP100-Arf6-AMAP1シグナルとの関連に関して、順次進めてはいるが解析に関して遅れがある。原因として、十分な匹数が揃っていないことが起因する。匹数を増やして、解析を行っていく予定である。研究結果は順次出ているが、分子機序の解析に関して遅れがある。
社会生物学における規範概念に対するデイヴィドソン的見地からの分析

本研究は社会生物学、進化心理学、動物行動学、ほか近接学問分野を、ドナルド・デイヴィドソンによって提案された非法則的一元論の観点から分析するものである。本研究の分析が最終的に結論するのは、社会生物学に見られる「社会」「言語」「文化」などの用語は恣意的かつ一貫性を欠いて使われており、そのゆえに生物学的概念に還元することはできないということである。この研究結果は2012年日本科学哲学会の年次大会、および2015年科学基礎論学会の年次講演会において発表された。本研究の目的は、社会生物学界、動物行動学界における規範概念のとらえ方に注目し、それを精査し、その概念使用に対して、哲学者ドナルド・デイヴィドソンによる非法則的一元論の見地から分析することである。今年度は本プロジェクトの二年目にあたる年度である。初年度は当初の予定を変更し、二年目以降に予定していた、動物行動学界、特に類人猿の言語研究を中心に分析を進めた。二年目であった本年度は、初年度に予定していた、動物行動研究や、E・ウィルソンらを中心とした社会生物学、進化心理学界の資料収集、資料読解を中心に進めた。具体的には、ウィルソン、W・D・ハミルトン、ドーキンス、の規範概念を表す用語の使い方を観察しおおまかな見取り図をとった。。その際にはそれぞれの研究者の個々の概念使用の変遷にも注目している。ウィルソンの社会生物学(『社会生物学』、またConsilience, 1998,邦訳『知の挑戦』角川書店, 2002,他)やウィルソンに大きな影響を与えたハミルトンの著作(The Evolution of altruistic behaviour, 1963, The American Naturalist ,他)と、たとえばR・ドーキンスでは、社会生物学批判を展開する多くの生物学者からは、同じく「社会生物学」というくくりでまとめられながら、規範の面から分析すると全く異なる。文化の内部に自己複製子的な働きを見出し、遺伝子とは区別したレベルで論じているドーキンスの研究(『利己的な遺伝子』、またUnwearing The Rainbow, 1998,邦訳『虹の解体』,早川書房, 2001,他)を規範概念においての差異を明確にした上で、それがそれぞれの社会生物学理論をどのようにことなったものにするかの分析を進めている。本研究の目的は、社会生物学、動物行動学界における規範概念の捉え方を精査し、哲学者ドナルド・デイヴィドソンによる非法則的一元論の観点から分析する事である。初年度は、社会生物学、動物行動学、進化心理学の資料収集、学会活動に関する情報収集、生物学の哲学に関するさまざまな研究会への出席の他に、研究計画書に於いては二年目以降に着手する予定であった、類人猿の言語研究分析を中心に研究を進めた。研究の順番が入れ替わったのは、社会生物学の文献を読み進めていくうちに、その多くが類人猿研究にヒントを得ていることに気づき、類人猿研究から分析することが有益と考えたためである。類人猿研究の中でも、類人猿の言語使用の研究(もしくは当初は言語使用の研究として始められた研究)を分析対象の中心とした。本研究の分析では、類人猿の言語研究が困難であったのは、これまで言われていたように類人猿が当初期待されていた能力を持っていなかったためではなく、何をもって「言語能力」とみなすべきなのかが研究者の中でもはっきりしておらず、また「科学」のデータとして何をどのように示せば「言語能力」の存在を示すことができるのか、それは原理的に可能であるのかが示されていないためである。このように、類人猿の言語研究が困難であることを、類人猿の能力の側ではなく、われわれの規範概念の物理学的な科学への還元不可能性から分析する研究は管見のかぎり無く、本研究の意義と言える。上記の分析は「類人猿の言語研究はなぜ困難であったのか」という標題でまとめられ、2012年度日本科学哲学会(宮崎大学)で発表された。当該年度においては、社会生物学や進化心理学の「自然観」について探求すべく、自然種概念について基礎的な側面から探究した。その結果は千葉大学人文社会科学研究科研究プロジェクト報告書『哲学的自然主義の諸相の展開』にて、「クワインの自然種概念とパトナムの自然種の意味ー外在主義における観点の問題ー」として発表した。また、その過程で真の自然主義とは何かを考え、ドナルド・デイヴィドソンの他者への解釈の方法に注目し、解釈における、その場限りで発案される理論である当座理論とは何かを考えた。その結果は千葉大学人文社会科学研究科『人文社会科学研究』第30号にて、「当座理論とは何か」として発表した。本プロジェクトは社会生物学や進化心理学が、これまでおもに人文科学が取り扱ってきた「こころ」や「ことば」をどのようにハードな科学に還元しているのかを分析することを目的としてきた。今年度は進化心理学はどのように「ことば」を科学的に取り扱おうとしているのかを考察するため、進化心理学が「統語論」「意味論」という概念をどのようにとらえているかを中心に分析した。その結果の一部は「言語は本能であるのだろうか」というタイトルで科学基礎論学会にて発表された。

本研究の分析が最終的に結論するのは、社会生物学に見られる「社会」「言語」「文化」などの用語は恣意的かつ一貫性を欠いて使われており、そのゆえに生物学的概念に還元することはできないということである。この研究結果は2012年日本科学哲学会の年次大会、および2015年科学基礎論学会の年次講演会において発表された。社会生物学や進化心理学の「自然観」について、基礎的な面から見直したため、当初の計画より奥行きのある研究となったが、基礎的な面が固まったため、今後は当初予定通りに進展するものと予想される。哲学今後は進化心理学がどのように「言語」ということばを使っているのかを観察し、そこから進化心理学が「言語」についてどのようなことをいっているのかの混乱を指摘していきたい。その結果は2015年6月の科学基礎論学会において発表する予定である。また関連の社会学や生命倫理学などの国際学会に積極的に出席し、最新の資料収集に努める.本年度は、資料収集、資料読解、並びに各資料間の関連付け等に重点的に従事した。本プロジェクト従事者は、哲学研究者として、ドナルド・デイヴィドソンを中心に研究してきたが、本プロジェクトにおいて分析対象とする分野に関しては、専門的に進めるには知識不足、理解不足が危惧されたためである。資料収集、資料読解は時間を割くべき過程であり、具体的業績に結び受けるにはまだ至っていないが、慎重かつ厚みのある研究とするための過程であった。初年度は、社会生物学、動物行動学、進化心理学の資料収集、学会活動に関する情報収集、生物学の哲学に関するさまざまな研究会への出席を予定していたが、その多くを研究計画通りに実行した。だが、本発表が本年度取り組んだ内容は当初計画に書かれた初年度の研究計画とは一部異なる内容であった。当初の計画では初年度は社会生物学の中心的著作に関する分析から始める予定であった。しかしながら、研究の順番を入れ替え、二年目以降に進めるはずであった類人猿研究の分析を初年度に進めた。これは、社会生物学の文献を読み進めていくうちに、その多くが類人猿研究にヒントを得ていることに気づき、類人猿研究から分析することが有益と考えたためであり、研究の達成度を予定に比べて損なうものではない。類人猿の言語研究に対する分析は、一定の方向性を得て、「類人猿の言語研究はなぜ困難であったのか」という標題でまとめられ、2012年度日本科学哲学会(宮崎大学)で発表された。現在哲学系学会誌に応募すべく論文として推敲段階に入っている。当該年度は海外の学会出席を複数予定していたが、当該年度は研究対象の自然観というという概念の基礎的研究にあてたため、海外学会での発表にいたらず、旅費を消化することができなかった。今後は、分析対象である分野の全体に関して、資料収集、資料読解を進めつつも、特に特定の論争に焦点をしぼって、その論争においての概念使用の実際を分析し、学会発表をしていく。また、昨年科学哲学会において発表した「類人猿の言語研究はなぜ困難であったのか」(宮崎大学・2012年11月)を論文としてまとめ、投稿していく。今後も基本的には、これまでと同じように研究を進めていく。その内容は、社会生物学、動物行動学、進化心理学の資料収集、学会活動に関する情報収集、生物学の哲学に関するさまざまな研究会への出席の他に、社会生物学、動物行動学、進化心理学の資料分析を中心に研究を進めることである。そしてその分析結果を学会発表し、論文にまとめていく。
ミュータンス歯面接着受容体と相同性を有する歯特異的マトリックス分子の機能解析

歯に特異的な細胞外マトリックスの一つであるアメロブラスチンは、エナメル質形成に必須の分子であることが明らかになり、N末端側のプロリンリッチ領域は、ハイドロキシアパタイトとの結合能を有することを明らかにした(平成15年度)。このプロリンリッチな領域は、ミュータンスの抗原I/IIと相同性を示すとともに、アメロジェニンとも比較的高い相同性を示すことが判明した。このことから、アメロブラスチンは、in vitroでハイドロキシアパタイトと結合するとともに、in vivoにおいても形成中のエナメル質と積極的に結合する可能性が示唆された。一方C末端側、3カ所のヘパリン結合領域の同定を行い、これらの領域がアメロブラスチンの細胞接着能に重要であることを明らかにした。また、アメロブラスチンの細胞吸着活性は、外来性に添加したヘパリン、ヘパラン硫酸プロテオグリカンによって阻害された。したがって、同部位と相互作用を示す分子の候補として、ヘパラン硫酸プロテオグリカンが考えられた。そこで、エナメル芽細胞に特異的に発現を示すヘパラン硫酸プロテオグリカンに関して、細胞接着活性を有することから、受容体タイプであるシンデカン、グリピカンファミリーに着目し、検索を進めた。その結果、グリピカン1が分化したエナメル芽細胞に特異的に発現し、アメロブラスチンと組織内での局在が一致すること、またリコンビナントアメロブラスチン蛋白が、in vitroで結合することが明らかになった。以上の結果から、アメロブラスチン受容体の候補分子の一つとして、グリピカン1が重要であることが明らかとなった。アメロブラスチンは外来性に添加することで、歯原性上皮細胞の細胞増殖を抑制し、さらにアメロブラスチンノックアウトマウスは、歯原性腫瘍を形成することから、このアメロブラスチンとグリピカン1の相互作用の解明は、これら腫瘍形成の分子メカニズムの解明のみならず、腫瘍増殖抑制を目的とした分子治療へと応用可能な知見となりうる。我々は、齲蝕原性細菌の歯面付着に必須であると考えられている抗原I/IIと、高い相同性を示すエナメルマトリックス蛋白が存在することを明らかにした。これは、アメロブラスチンと呼ばれるO型糖鎖結合タンパク質であり、本分子のN末端側のプロリンリッテ領域と、ミュータンスの抗原I/IIと高い相同性を示した。ミュータンスの抗原I/IIは、ハイドロキシアパタイトや、細胞外マトリックスであるコラーゲンとの結合を示し、初期の歯面への付着や、象牙質内侵入に重要であると考えられている。実際、アメロブラスチン蛋白がこの領域を利用して、ハイドロキシアパタイトとの結合能を有しているかを検討するために、各種ドメインを欠損したリコンビナント蛋白と真核細胞発現ベクターを作製し、その結合能に関して検討を行なった。その結果、N末端側のプロリンリッチ領域は、ハイドロキシアパタイトとの結合能を有し、逆にC末端側は細胞接着に重要な領域であることが明らかとなった。つまり、アメロブラスチン蛋白は、形成されたハイドロキシアパタイト結晶と、エナメル芽細胞との結合を行ない、エナメル芽細胞を形成中のエナメル表面に維持するのに重要であることが示唆された。また、アメロブラスチン蛋白のC末端側にはカルシウムイオン結合領域であるEF-handモチーフを有する。N末端側のハイドロキシアパタイト結合能には、このEF-handモチーフの存在が重要であることが明らかになった。我々の結合実験では、EF-handが存在する場合、カルシウム濃度依存的にハイドロキシアパタイト結合能が変化することが明らかになった。以上の結果から、エナメル表面への結合に関して、エナメル芽細胞とミュータンスとは、共通のシステムを利用して行なっていることが示唆された。現在、アメロブラスチン蛋白とコラーゲン等の細胞外マトリックスとの相互作用について、また、その結合に必須のアミノ酸配列に関して検討を行っている。

アメロブラスチンは外来性に添加することで、歯原性上皮細胞の細胞増殖を抑制し、さらにアメロブラスチンノックアウトマウスは、歯原性腫瘍を形成することから、このアメロブラスチンとグリピカン1の相互作用の解明は、これら腫瘍形成の分子メカニズムの解明のみならず、腫瘍増殖抑制を目的とした分子治療へと応用可能な知見となりうる。
インドネシア森林燃焼による煙害の環境科学的調査

研究はほぼ当初計画通り実行された。インドネシア、シンガポール等における気象観測、大気光学観測、大気化学観測、森林生態学的観測が実施され、1997年の森林火災の気候学的、環境学的実態が明らかになってきた。気象データの解析によると、乾期の始まりが早まるほど、乾期の終りが遅くなる傾向が見られ、それが乾期の期間を長くするために、火災の規模とも高い相関を持つことが明らかになった。しかし、ジャワでは雨量の顕著な季節変動が出る一方、スマトラ、カリマンタンではそれはどはっきり季節変化が無く、火災につながる気象条件には強い地域差があることも明らかになったので、今後、地域ごとのきめ細かい解析を行う必要があると思われる。今回の火災による煙粒子発生量は、0.3Tg/年程度であり、過去の同地城の火災の数倍規模、全球的な発生量の数%にも及ぶ大規模なものであることが明らかになった。この火災は、森林と同時に泥炭層が燃える地中火であったために、倒木が多く見られ、発生する煙の光学的特性は、アマゾンやアフリカの火災によるものに比べて、光吸収能が小さく、また、粒子径も小さいことが明らかになった。同時に、対流圏全層にわったってオゾン量が数倍に増加しており、このような粒子とガス環境の変化が地域のエネルギー収支と大気安定度に大きな影響を与えていることが示された。その総合的な効果が地球・大気系を冷却するか、加熱するかを明らかにするには、収集したデータをさらに解析する必要がある。インドネシア、シンガポール等における気象観測、大気光学観測、大気化学観測、森林生態学的観測が実施され、1997年の森林火災の気候学系、環境学系実態が明らかになってきた。気象データの解析によると、乾期の始まりが早まるほど、乾期の終りが遅くなる傾向がみられ、それが乾期の期間を長くするために、火災の規模とも高い相関を持つことが明らかになった。今回の火災による煙粒子発生量は、0.3Tg/年程度であり、過去の同地域の火災の数倍規模、全球的な発生量の数%にも及ぶ大規模なものであることが明らかになった。この火災は、森林と同時に泥炭層が燃える地中火であったために、倒木が多く見られ、発生する煙の光学的特性は、アマゾンやアフリカの火災によるものに比べて、光吸収能が小さく、また、粒子径も小さいことが明らかになた。
マサバをモデルとした卵数法による資源量直接推定法における問題点の克服と適用

卵数法によるマサバの資源量推定法の精度向上を目的として、現在、実施上問題となっている課題を解決するための方法を開発するために以下の研究を実施した。1)ホルマリン固定卵巣標本を透明化する新規透徹剤の開発、2)排卵後濾胞(POF)の簡易判別法の開発および天然群における産卵頻度の推定、3)卵原細胞および卵母細胞の分裂周期の解析に基づく総産卵数決定様式の解明、および4)ミトコンドリアDNAを用いた母子判定に基づく各個体の産卵評価。本研究では、DEPM(Daily Egg Production Method)によるマサバの資源量推定法を確立することを目的とし、併せて、新たに開発された技術を、マイワシ等他の浮魚資源におけるDEPMの適用に際し汎用化することを目的とする。平成20年度は以下の研究計画をたて、実施した。1)ホルマリン固定卵巣標本の透明化法の開発ベンジルアルコールと安息香酸ベンジル液を組み合わせた透徹剤を開発し、ギムザ法およびズダン法を併用することにより、ホルマリン固定卵巣標本を透明化し、核の有無や位置を検便に判定できるようになった。2)排卵後濾胞(POF)の簡易判別法の開発Periodic acid&Shiff(PAS)染色は濾胞細胞層の基底膜と卵細胞の卵膜外層を選択的に赤紫色に染色することを見出し、従来用いられてきたHE染色と比較してPAS染色を用いることにより、POFの判別が容易になるとともに、退行卵(atresia)との識別が容易になった。3)卵原細胞および卵母細胞の分裂周期に基づくマサバにおけるAEPMの適用の検討増殖する細胞を特異的に標識する5-ブロモ・2'・デオキシウリジン(BrdU)をマサバ親魚に投与し、免疫組織化学的解析を行った。その結果、マサバの卵巣における生殖細胞の増殖は産卵期の前後を通して全ての時期に起こっていることが証明された。特に、産卵期間中に増殖する生殖細胞は卵黄形成初期の卵母細胞まで発達していたことから、マサバの総産卵数決定様式はdeterminantではなくindeterminantであることが明らかとなり、マサバの資源量推定においてAEPM(Annual Egg Production Method)は適用できないことが明らかとなった。本研究では,DEPM(Daily Egg Production Method)によるマサバの資源量推定法を確立することを目的とし,併せて,新たに開発された技術を,マイワシ等他の浮魚資源におけるDEPMの適用に際し汎用化することを目的とする。平成21年度は,母系遺伝するミトコンドリアを母子判定マーカーとして用い,マサバ雌親魚の各個体における産卵回数,産卵量を評価することを試みた。満2歳の親魚(♀4尾,♂4尾)にGnRHa(400μg/kg)を投与し,3トン水槽に収容した。産卵はGnRHa投与の翌日から始まり,33日間にわたり25回観察された。このうち,前半の19日間における15回の産卵のうち,産卵数の多かった11回の産卵から得られた受精卵を対象にして,産卵日ごとに無作為抽出した30個の受精卵とメス親魚からDNAを抽出し,ミトコンドリアDNAのD-loop領域に含まれる700塩基を対象としたPCR-RFLP法による個体識別を行った。11回の産卵中,♀1♀4が産卵した回数はそれぞれ4,2,4,9回で,連日産卵する個体も認められた。また,産卵期間中の総受精卵数478,300個に対する♀1♀4の寄与率はそれぞれ,13,6,21,60%であった。このように,マサバは連日産卵が可能であるが,同年齢,同サイズの親魚でも,再生産に関与する割合は個体により大きく異なることが明らかとなった。また,マサバのGnRH分子種の同定を行い,GnRH産生細胞の脳内局在を解析することにより,本種の性成熟を制御するGnRHを明らかにすることを試みた。すなわち,HPLCおよび遺伝子クローニングにより,マサバのGnRH分子種を同定するとともに特異抗体を用いて脳内における各種GnRH産生細胞および神経軸索の分布を調べた。その結果マサバはsbGnRH,cIIGnRH,sGnRHの3種をもち,このうち,視索前野の細胞体の分布するsbGnRHが脳下垂体のGtH細胞に軸索を投射していることから,マサバではsbGnRHが性成熟を制御していることが示唆された。平成22年度はマサバの産卵特性や仔稚魚成長に及ぼす水温影響の評価,マサバ生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン(GnRH)の上流制御因子であるキスペプチン(KiSS)などの発現動態解析を行った。(1)2歳のマサバ親魚群(♂♀各36尾のペアー)に対してGnRHaを投与し,飽食条件において各群の産卵終了までの産卵量,卵径,油球径などを毎日モニタリングした。

その結果,マサバの油球体積と卵黄体積の関係は産卵水温によって変化し,水温上昇に伴い油球体積および卵黄体積が小さくなった。また一般化線型モデル(GLM)の解析結果から,産卵水温が低いほど卵に占める油球の割合が高くなることが示された。(2)GnRHa投与によりマサバ満2歳親魚群から得られた受精卵を17°C,20°C,23°Cの一定水温区へ収容し,無給餌条件における卵仔魚の生残率を調べるとともに,孵化仔魚の体サイズ,卵黄体積,摂餌開始までの成長率などを調べた。その結果,孵化時に卵黄量が多い個体ほど成長率が高く,一定の卵黄量であれば高水温の個体ほど成長が良くなることが示された。孵化後25日目の体サイズは水温によって異なり,20°C区と23°C区は17°C区に比べて体長で約6,9倍,体重で約65,213倍の差違が認められた。(3)マサバKissの遺伝子クローニングを行った。次に,マサバのKiSS-1およびKiSS-2抗体を作製し神経分泌細胞の脳内局在を調べるとともに,生殖周期に伴う雌雄の脳内における2種KissのmRNA発現量を調べた。その結果,KiSS-1細胞は脳内に広く分布しているのに対し,KiSS-2細胞は視床下部にのみ存在することが明らかとなった。さらに,生殖周期に伴う雌の脳内における2種KissのmRNA発現量を調べた結果,KiSS-2発現量は成熟に伴い減少し,産卵期後に最も低くなったが,KiSS-1の発現量は生殖周期を通して一定であった。以上,マサバではKiss-2がBPG-axisの最上流で性成熟を制御していることが示唆された。
小学校におけるＩＣＴ活用の促進を目的とした効率的な情報共有システムの開発・評価

【目的】小学校現場におけるICT化がさけばれて久しい.しかし,授業でICTを活用した実践はなかなか進展していない現状が見られる.また, Web上には,授業で活用できる有益な学習コンテンツや情報が数多くあるが,これらが適切に活用されているとも言い難い.この原因として, Web上にある学習コンテンツ等の情報が授業者の授業実践と結び付いていないのではないか,と筆者は考えた.そこで,本研究では,小学校現場におけるICT活用の促進を目的としたパーソナライズされた情報共有システムの開発を進め,その効果を測定することを主たる目的とした.また, ICTを授業で活用する場合に,そのテクノロジーがこれまでの教授方略にどのような影響を与えるかを示す尺度(スケール)について検討した.【方法】以下の方法で研究を進めた.情報共有システムの設計・開発・評価, ICT活用の分類尺度の検討,研究のまとめ【成果】開発したシステムは,ユーザニーズの分析や既存システムの分析から設計の着眼を得ることができ,ユーザの授業進度に沿って学習コンテンツ等をマッピングしたプラットフォーム及びその情報を配信するためのリマインドメールの機能を備えることができた.小学校教員や管理職による評価の結果から,開発したシステムが小学校教員のニーズに合致し,教員が授業進度に合わせて学習コンテンツ等に関する情報を入手するのに有効なシステムとなり得る可能性を確認した.また, ICTを授業で活用する場合に,そのテクノロジーがこれまでの教授方略にどのような影響を与えるかを示す尺度について検討した結果,「SAMRモデル」に基づいて事例を分類,整理することが可能であり,授業のなかでICTがどのような影響を与えるかを考える上でSAMRモデルが有益な指標となる可能性を示唆できた.【目的】小学校現場におけるICT化がさけばれて久しい.しかし,授業でICTを活用した実践はなかなか進展していない現状が見られる.また, Web上には,授業で活用できる有益な学習コンテンツや情報が数多くあるが,これらが適切に活用されているとも言い難い.この原因として, Web上にある学習コンテンツ等の情報が授業者の授業実践と結び付いていないのではないか,と筆者は考えた.そこで,本研究では,小学校現場におけるICT活用の促進を目的としたパーソナライズされた情報共有システムの開発を進め,その効果を測定することを主たる目的とした.また, ICTを授業で活用する場合に,そのテクノロジーがこれまでの教授方略にどのような影響を与えるかを示す尺度(スケール)について検討した.【方法】以下の方法で研究を進めた.情報共有システムの設計・開発・評価, ICT活用の分類尺度の検討,研究のまとめ【成果】開発したシステムは,ユーザニーズの分析や既存システムの分析から設計の着眼を得ることができ,ユーザの授業進度に沿って学習コンテンツ等をマッピングしたプラットフォーム及びその情報を配信するためのリマインドメールの機能を備えることができた.小学校教員や管理職による評価の結果から,開発したシステムが小学校教員のニーズに合致し,教員が授業進度に合わせて学習コンテンツ等に関する情報を入手するのに有効なシステムとなり得る可能性を確認した.また, ICTを授業で活用する場合に,そのテクノロジーがこれまでの教授方略にどのような影響を与えるかを示す尺度について検討した結果,「SAMRモデル」に基づいて事例を分類,整理することが可能であり,授業のなかでICTがどのような影響を与えるかを考える上でSAMRモデルが有益な指標となる可能性を示唆できた.
抑制性アダプターGab2によるTCRシグナル制御のinvivoにおける役割

Gab2のT細胞分化(ポジティブセレクション、ネガティブセレクション)への影響MHC class II拘束性にOVAを認識するTCRを発現するOT-II TCR TgマウスとGab2 Tgを交配した結果、Gab2をTgで発現させることによって、CD4^+ single positive細胞へのT細胞分化が約半分程度にまで抑制されることが判明した。同様に雄抗原を認識するH-Y TCR Tgマウスを用いたところ、雌で見られるCD8^+ single positiveT細胞への分化(ポジティブセレクション)がやはり半分程度にまで抑制されることが明らかとなった。また、H-Y TCR Tgの雄で見られるnegative selectionに関しても、Gab2 Tgにおいて有意に抑制され、DN細胞の割合が有意に低下していることが明らかとなった。これらのポジティブセレクション、ネガティブセレクションに対する抑制効果はGrb2/Gads結合領域であるPxxxRモチーフを欠損させたGab2.ΔPxxxR Tgマウスでは認められなかった。成熟T細胞において我々はatypical Grb2 SH3結合領域PxxxRモチーフを介した結合によるGrb2/Gads-Gab2複合体がT細胞活性化に伴ってリン酸化LATにリクルートされ、抑制機構を発揮するモデルを提唱している。PxxxRモチーフはT細胞におけるpositive regulator、SLP-76にも同様に認められ、Gadsとの結合に必須であることが示されている。今回の結果から、胸腺未成熟T細胞においても、T細胞における正と負のシグナルの制御が、raftにリクルートされる正と負のアダプター分子によって調節されていることが示唆された。
ディスクール分析によるムージル文学の再検証-データ・ベース化された遺稿をふまえて

ディスクール分析は、ある時代の文学をア・プリオリに規定しているディスクールがどのようなものであり、それがいかに成立したかを問う。そうした観点で見ると19世紀は、レアールなものを象徴的なものに、象徴的なものをイマギネールなものに還元するというシステムと呼応す形で、文学という制度が確立した時代である。その三位一体に亀裂が入る20世紀において文学は、言語の象徴性を徹底させるか、レアールなものの表現可能性を追求するかの二方向に向かう。ムージルのテクストは後者であって、言語の権力性・恣意性を、厳密な論理によって穿ち、その裂目からのぞくレアールなものに目を開かせる。イマギネールな像を結ばせるはずの比喩を駆使しながら、そのような像を決して結ばせないことで、像によって成り立つ現実に回収されえないものを指し示し続ける。それは端的には、言葉の他者である音(ざわめき)という形であらわれる。それが最も顕著に示されているのが、短篇小説集『合一』である。一方『特性のない男』においてはで言語というメディアに回収されないものを言語化しようという(それ自体パラキシカルな)試みは、ウルリヒとアガーテの愛の試みに収斂していく。けれども、それは最終的には一種の「静物画」に凝固してしまう。そのことは、言語の他者との通路を持つが故に狂気に陥るクラリッセとモッスブルッガーが、次第にこのテクストの背後に退いてしまうこととパラレルである。だがウルリヒとアガーテが果てしない対話を紡ぎ続けるほかはなく(特に最晩年の6章の遺稿)、従ってこの膨大な小説も未完たらざるを得なかったことは、まさにそういう形でしか存在しえない言語のあり方のひとつの極致を示している。ム-ジルの『特性のない男』(以下"MoE"と略記)の登場人物の一人であるクラリセに焦点をあて、その人物像の変遷から"MoE"を考察することに今年の研究の重点を置いた.そのための準備作業として、(1)遺稿を手がかりに、クラリセ像がどのように生成されてきたかを辿り、(2)1920年代半ばに書かれたかなりまとまった遺稿(Sテキストとよぶ)のクラリセと"MoE"のそれとの違いを確認した.その結果以下のことが明らかになった."MoE"においては多くの登場人物の一人にすぎないクラリセは、ごく初期の段階から中心的な役割を果す人物であり、とくにSテキストにおいては、主人公ウルリヒと対をなすアガ-テと同等の役割を与えられている.その際特徴的なのは、"MoE"においてはクラリセから冷たい距離を置いているウルリヒが、Sテキストにおいてはクラリセの言動に深くつき従うということである.Sテキストにおいては狂気は認識の問題、生の不確実性の問題であり、それゆえウルリヒはクラリセの狂気に深く関わることになったと言える.しかし"MoE"においては、ム-ジルはSテキストのような形で狂気を描くこと、そのような形で生の不確実さの認識を狂気にひきわたしてしまうことを拒否したというべきであろう.それはクラリセの描き方にも表れていて、Sテキストにおいてはひたすら狂気に身を委ねたクラリセは、"MoE"においては一種の歴史性とユートピア性を獲得している.ム-ジルのテキストは、象徴的な言語の権力性、恣意性を厳密な論理、冷静な風刺によって穿ち、その裂目からのぞく不可能な状態に目を開かせ、耳を傾けさせる.しかしその際ム-ジルのテキストは、ディスクール分析的見地からは、レアールなものへの下降ではなく、イマギネ-ルなものへの回帰を指向する.草稿のクラリセと"MoE"のクラリセの違いにも、それがうかがえると言える.

なお研究成果を論文にまとめた(3月末発表予定).ディスクール分析は、ある時代の文学をア・プリオリに規定しているディスクールがどのようなものであり、それがいかに成立したかを問う。そうした観点で見ると19世紀は、レアールなものを象徴的なものに、象徴的なものをイマギネ-ルなものに還元するというシステムと呼応する形で、文学という制度が確立した時代である。その三位一体に亀裂が入る20世紀において文学は、言語の象徴性を徹底させるか、レアールなものの表現可能性を追求するかの二方向に向かう。ム-ジルのテクストは後者であって、言語の権力性・恣意性を、厳密な論理によって穿ち、その裂目からのぞくレアールなものに目を開かせる。イマギネ-ルな像を結ばせるはずの比喩を駆使しながら、そのような像を決して結ばせないことで、像によって成り立つ現実に回収されえないものを指し示し続ける。それは端的には、言葉の他者である音(ざわめき)という形であらわれる。それが最も顕著に示されているのが、短篇小説集「合一」である。一方「特性のない男」においては、言語というメディアに回収されないものを言語化しよという(それ自体パラキシカルな)試みは、ウルリヒとアガ-テの愛の試みに収斂していく。けれども、それは最終的には一種の「静物面」に凝固してしまう。そのことは、言語の他者との通路を持つが故に狂気に陥るクラリッセとモッスブルッガ-が、次第にこのテクストの背後に退いてしまうこととパラレルである。それはまた、破棄された遺稿においては、この二人がより重要な役割を担っていることによっても裏付けられる。ム-ジルにおいて「ざわめき」は最終的には浄化され、そこに新しい言語空間が開かれるのである。
細胞膜融合過程におけるCD9の機能

我々はこれまでに膜四回貫通型タンパク質・CD9のホモ変異体マウスを作成し、その雌マウスがきわめて重度の不妊であることを報告した。CD9ホモ変異体マウスの卵は体外受精においてもほとんど受精しないことから卵細胞膜上のCD9は精子との融合に重要な機能を担っていると考えられる。しかし、CD9がどのように精子と卵の細胞膜融合過程に関与しているのかは明らかとなっていない。我々は未成熟卵にpoly(A)付加したmRNAを微量注入することで外来性のタンパク質を高発現させることに成功し、ヒトCD9やCD9と同じファミリーに属する他の膜四回貫通型タンパク質・マウスCD81がCD9ホモ変異体マウスの卵の受精能を回復し得ることを明らかとした。しかしながら同じファミリーに属するヒトCD53ではCD9の機能を補うことは出来ず、すべてのファミリーのメンバーが細胞膜融合に寄与出来るわけではないことが明らかとなった。今後これらのタンパク質のアミノ酸配列、構造の違いから膜融合に必須の領域が解明されることが期待される。また、抗CD9抗体を付加した微小なビーズを野生型卵に添加し培養すると卵に接着したビーズが卵細胞に沈んでいくことが走査電子顕微鏡による観察で明らかとなったこの現象は卵に発現している接着分子α6インテグリンに対する抗体では見られなかったことから受精におけるCD9の特異的な機能を反映したものであると考えられる。さらにCD9は卵細胞表面に存在する微絨毛に局在しているが、マウス繊維芽細胞株L cellにおいてもCD9を発現させると微絨毛と類似した糸状仮足様の構造が伸展し、そこにCD9が強く局在することが明らかとなった。この現象にはCD9の細胞膜貫通領域が重要であることが明らかとなったので今後、この領域が受精において果たす機能を解析することで新たな研究の進展が期待される。
4族メタラサイクル化合物の選択的官能基化反応

近年ジルコニウム等4族金属上での不飽和化合物のカップリングを伴うメタラサイクル化合物の合成が多く報告されている。それらのメタラサイクル上の有機炭素鎖部分を官能基化する反応がいくつか報告されているが、二つの金属-炭素結合に同じ官能基を導入している例が殆どである。本研究では、メタラサイクルの単官能基化、あるいは異なる二種の官能基を選択的に導入する反応の検討を行なった。以下に結果の概要を報告する。1.ジルコナシクロペンテン錯体を1当量のヨウ素で処理したところ選択的に一方の金属-炭素結合のみがヨウ素化されることを見いだした。その選択性はアルケニル炭素の置換基の種類に大きく依存する。2.さらに、高選択的にアルキル炭素をハロゲン化する試薬としてCBr_4,CCl_3Brが有効であることを見いだした。このハロゲン化試剤は通常のBr_2,NBS等の通常の試薬と異なる選択性を示し、また官能基に依存しないのでより一般性を有する。3.また、ジルコナシクロペンテン錯体をトリアルキルスズクロリドで処理したところ、やはり高選択的に金属-アルキル炭素結合が活性化されスズ化合物を与ええることが分かった。4.さらに金属-炭素結合への挿入反応としてCO、イソニトリルとの反応を試みたところこれも高選択的に金属-アルキル結合に挿入することが分かった。
CGH法を用いた乳児神経芽腫における予後に関連した遺伝子異常の解析

神経芽腫は自然退縮するものから致死的経過をとるものまで、様々な腫瘍動態をしめす。特に乳児神経芽腫では分子遺伝学的に、乳児期以降例とは異なる独自の予後不良あるいは良好因子が存在するのではないか、また、自然退縮するような乳児神経芽腫には分化やアポトーシスに関与する特徴的な染色体異常があるのではないかと考え、乳児例に特徴的な染色体異常の検索を行った。神経芽腫の乳児例35例に対してCGH法を用いて、染色体異常の検索を行った。最も多く見られた染色体異常は17番染色体で、全体の43%に見られた。全17番染色体のgainは23%に、17q gainは20%に、1plossと2p gainがそれぞれ17%に見られた。11q lossと14q lossはそれぞれ6%と3%にしか見られなかった。17q gainはaneuploidに比べてdiploidの症例に多く見られた(P=0.006)。さらに、全17番染色体のgainはdiploidの症例やMYCN増幅のあるような予後不良症例には認められなかった。病理所見で自然退縮像は検索した17例中9例に見られ、これらの自然退縮症例には長腕、短腕の部分的な異常(例えば17q gain,1p loss,2p gain,11q loss,14q loss)は見られなかった。17q染色体には神経芽腫の進展に関する遺伝子が存在する可能性が示唆された。これらの結果は過去に報告されている、年長児神経芽腫例の結果とは、若干異なる結果であり、乳児例の特異性が示された。乳児神経芽腫では分子遺伝学的に、乳児期以降例とは異なる独自の予後不良あるいは良好因子が存在するのではないか、また、自然退縮するような乳児神経芽腫には神経芽腫細胞の分化やアポトーシスに関与する特徴的な染色体異常があるのではないかと考え、乳児例に特徴的な染色体異常の検索を行った。全17番染色体のgainは23%に、17q gainは20%に、1p lossと2p gainがそれぞれ17%に見られた。17q gainはaneuploidに比べてdiploidの症例に多く見られた(p=0.009)。病理所見で自然退縮像は検索した17例中9例に見られ、これらの自然退縮症例には長腕、短腕の部分的な異常は見られなかった。1p、2p、17qの内、二つ以上の異常を有する症例は進行例に多く見られた。これらの染色体の異常は神経芽腫の進行や増殖に関与している可能性が示唆された。これらの結果は過去に報告されている、年長児神経芽腫例の結果とは、若干異なる結果であり、乳児例の特異性が示唆された。
副腎髄質細胞におけるGABAA受容体サブユニットの構成の分子機序

モルモット副腎髄質(AM)においてGABAは濃度依存性にCl電流を誘発した。このGABA濃度応答関係は、allopregnanoloneにより最大値及びHill係数を変えることなく左に並行移動した。GABA誘発性電流は、Znイオンにより抑制され、flunitrazepamにより促進された。α3様及びγ2様免疫反応物がAM細胞の細胞膜に認められた。副腎髄質においてGABAは、神経終末に存在するのでなく、副腎髄質細胞に存在し、パラクリンとして機能していると考えられる。そこで、このGABAの機能の詳細を明らかにするために、ラット副腎の灌流実験を行った。ラット副腎静脈にカニューレを挿入して逆行性に灌流し、Ca蛍光色素を副腎髄質(AM)細胞に取り込ませて、AM細胞の膜興奮性を蛍光画像を用いて検討した。GABAを投与するとCa蛍光の増加がAM細胞の41%で観察された。このGABAの作用はカテコールアミン(CA)分泌を伴っており、GABAは分泌の刺激前よりCA分泌を4倍増加させた。GABAにより促進されたCA分泌中のアドレナリン量は70%で、静止時の分泌のアドレナリンの割合85%より有意に小さかった。一方、GABA_B受容体のアゴニストのバクロフェンはまったくAM細胞の興奮性に影響を及ぼさなかった。これらのことは、ラットAM細胞にはGABA_A受容体が発現しており、GABA_B受容体は存在しないこと、さらにGABA_A受容体はアドレナリン細胞よりノルアドレナリン細胞に多いことを示唆する。単離AM細胞から穿孔パッチクランプ法により膜電位固定下で全細胞電流を記録した。GABAはCl電流を誘発したが、バクロフェンはまったく電流を誘発しなかった。GABA誘発性Cl電流は、δサブユニットを含むGABA_A受容体を抑制することが知られている10μM Zn^<2+>イオンによって有意に抑制された。この機能解析はAM細胞のGABA_A受容体がδサブユニットを含むことを示唆する。実際にラット副腎髄質のホモジェネートを抗β抗体で免疫沈降させた複合体の中にα1、α3そしてδサブユニットが含まれていた。逆に抗δ抗体で得られた免疫沈降物の中にはα1、α3およびβ2/3サブユニットが含まれていた。GABAはラット副腎髄質(AM)細胞の34%においてGABA_A受容体を介してCl電流を誘発したが、モルモットAM細胞においては調べたすべての細胞において電流を誘発した。モルモットAM細胞におけるGABAの誘発電流のピーク値の用量反応関係は、Hill係数1.43、EC_<50>32.3μMのHill式で近似できた。内因性neurosteroidの一つであるallopregnanolone(allo)0.1μMの投与は、このGABA用量反応曲線を最大値及びHill係数を変えることなく左方に並行移動させ、EC50を約1/20に小さくさせた。allo存在下では0.1μM GABAでも電流が誘発されるようになった。さらに、alloはGABA誘発性電流の脱活性化過程を有意に遷延させた。δサブユニットを含むGABA_A受容体の選択的アゴニストであるTHIP10μMは、allo非存在下では全く電流を誘発しなかったが、allo存在下では10μM GABA誘発性電流の70%の電流を誘発した。Znイオンは10μM GABA誘発性電流を濃度依存的に抑制し、そのIC_<50>は19μMであった。一方、一般的にδ含有GABA_A受容体の機能を促進すると言われているエタノール60mMは、10μMGABA誘発性電流に対して全く影響を及ぼさなかった。副腎皮質からneurosteroidが分泌されることを考えると、上述の結果はGABAが十分にAM細胞においてparacrineとして機能し得ることを示している。さらに、このparacrineの機能の一部はδ含有GABA_A受容体が関与していることが考えられる。これまでの研究によりモルモット副腎髄質(AM)細胞におけるGABA誘発性電流の性質は、必ずしもδ含有GABA_A受容体のものとは一致しなかった。そこで、さらにその薬理学的性質を検討した。GABA誘発性電流は10μMLaイオンにより全く影響を受けず、100μMlaイオンによりその電流は約40%増加した。0.3μMflunitrazepamは10μMGABAによる電流を400%増加させた。内因性neurosteroidの1つであるallopregnanolone(Allo)は0.01μMで有意にGABA誘発性電流を増加させた。(1)GABA誘発電流の用量反応関係のEC_<50>は32.3μMであること、(2)flunitrazepamにより著明に促進されるが、ethanolによる促進がないこと、(3)低濃度のAlloにより促進されること、

(4)Zaイオンにより用量依存的に抑制されるが、Laイオンはかえって促進作用を持つこと、これらの4つの性質は、モルモットAM細胞のGABA_A受容体のおもなサブユニット構成が、ラットAM細胞で考えられた構成とは異なり、δを含まないαβγの可能性がもっとも高いことを示している。特に、flunitrazepamによる著明な促進と32μMのEC_<50>の値は、αの主なisoformは、α1でなく、α3であることを示唆する。GABA誘発性電流は、すべてのモルモットAM細胞で観察され、誘発される電流の大きさもラットAM細胞のものより著明に大きかった。このことはモルモットAM細胞でのGABAA受容体の発現がラットに比べて多いことを示している。そこで、AM細胞由来のPC12細胞を種々の条件で培養して、GABA_A受容体サブユニットの発現の変化をイムノブロットにより検討した。α1及びα3サブユニットの発現量は、NGFやdexamethasone存在下で1週間培養しても変化しなかった。
あいまい性理解の発達に影響を与える要因についての研究

本研究は、「あいまいな表現をあいまいなまま理解する」といった「あいまい性の理解」の発達課程を明らかにするために、認識のモダリティ表現の持つあいまい性がどのように理解されるようになるのかについて、以下の2つの調査を行うことを目的としている。(1)幼児・児童を対象に「あいまい性の理解」の発達について調査し、3つのメタ言語的理解がいつ頃から獲得され、これらの理解がどのようにあいまい性理解に影響を与えているかについて明らかにする(2)調査結果をもとに言語発達のアセスメントツールとしての「あいまい性理解課題」の開発を目指す。
ヒト歯周組織由来の歯根膜線維芽細胞および歯槽骨骨芽細胞の細胞生化学的研究

歯周組織の中でも歯根膜は機械的外力を間歇的に受け、歯と歯槽骨を連結する強靱な結合組織である。歯根膜における機械的外力(mechanical stress)に対する細胞の応答は興味深いことであり、線維芽細胞は歯質表層及びシャピ-線維を構成する細胞外基質成分に接着・伸展する過程について機械的外力下でどう応答しているかを明らかにしなければならない。ヒト歯根膜線維芽細胞(HPLF)、ヒト歯槽骨骨芽細胞(HABC)、ヒト歯肉線維芽細胞(HGF)の培養系の確立に際し、材料は1012才の矯正治療を理由とし抜去した健全歯でしかも完全に萌出した第1小臼歯の歯根中央部1/3の歯根膜、歯頸部に付着した歯肉、歯槽形成時に採取した歯槽骨をコラゲナ-ゼ処理した組織片を用いた。各細胞はexplant法により組織片からmigrateした細胞を初代培養細胞として、実験には継代を繰り返し、58代目の細胞を用いた。歯周組織由来細胞中でもHPLFについての特徴を検索しており、その一つとして、骨組織のマ-カ-酵素であるアルカリフォスファタ-ゼ(ALPase)活性について酵素化学的に検討したところHPLFは皮膚・歯肉を代表する線維芽細胞ではなく、骨芽細胞の特徴を持つことから、骨芽細胞様繊維芽細胞(Osteoblastic Fibroblase)と提唱したい。HPLFに機械的外力を加えるとALPase活性は上昇、TGF-β様活性物質または細胞伸展性因子の分泌し、ストレッチングによりこれらの因子の分泌がenhanceされた。さらにHPLFの細胞伸展性因子の分離を行なうために、無血清培地をもちいて、confluent細胞のCMを集め、分画し、再びHPLFで細胞接着・伸展実権を行なった。その結果、CM中の伸展因子は、GPCの溶出位置から培地に含まれるインシュリンとも異なり、分子量は約10Kと推定され、疎水性のwellに親和性を示すことから、疎水性基を持つ物質と考えられる。CM中の物質は細胞接着因子としてばかりでなく増殖因子としても新たな物質の可能性が示唆された。I目的:ヒト歯根膜線維芽細胞(HPLF)さらにヒト歯槽骨骨芽細胞(HABC)のin vitro細胞培養系は,歯周疾患病因の解析さらに咬合力の変化および矯正力等による歯周組織の改造現象の解析に有効な手段と考えられる.そこで細胞培養の試みさらにHPLFおよびHABCの特徴について検索した.II方法:矯正治療時抜去によって得たヒト第1小白歯から歯根膜を剥離し,一方,歯槽骨をcolagenaseで処理しexplantのoutgrowthによってprimary cellとしてHPLFおよびHABCを培養し,比較検討のためGinー1を用いた.さらに継代後1×10^5細胞に対してALPaseの性質について検討した.すなわち, 8mM pーnitroーphenylphosphateを基質としてKm値およびVmaxの測定,さらに熱安定性および阻害剤によるALPaseの活性変化を測定した.