hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
眼球運動時における網膜での視覚情報の符号化

生体の眼は、固視微動と急速運動(サッカード)を繰り返すため、網膜に投影される外界像は常に揺動している。本研究は、網膜が、揺動する網膜像をどのように処理するのか、明らかにすることを目的とした。(1)キンギョ網膜神経節細胞のタイプ分類脳へと軸索を投射する神経節細胞は、応答特性、形態、遺伝的背景の相違から複数のタイプが存在する。本研究では、受容野特徴について主成分分析を行い、時間過程(Fast x Medium x Slow)と持続時間(transient x sustained)によって6タイプに分類されることを示した。(2)眼球運動様刺激に選好性を持つ細胞タイプの発見キンギョの眼球運動を模した動画像を提示し、多点電極を用いて神経節細胞群の応答を解析した。結果、特定の細胞タイプは、眼球運動の特徴(速度/方向依存性)に依存して発火特徴が変化した。特に、Fast transient(Ft)型細胞は、従来の眼球運動を考慮しない条件と比べ、より大きな受容野を持ち、強い応答を示すことが分かった。つまり、特定の細胞タイプ群は、眼球運動様の揺動に調節性を持ち、受容野特徴を変化させていた。Ft型細胞からホールセル・クランプ記録を行った結果、受容野特徴の変化には興奮性経路の修飾が寄与することが分かった。また、情報伝送様式の数理的解析から、Ft型細胞が、Medium sustained型、Slow sustained型細胞と協同して情報を符号化することを見出した。さらに、これらの処理について、Mb1型双極細胞群による電気的連絡網と抑制性介在神経細胞(アマクリン細胞)が媒介する回路モデルを提起した。これらの成果の一部は、2017年4月発行のProc. Jpn. Acad., Ser. B, Phys. Biol. Sci.誌(Matsumoto and Tachibana, 2017)に掲載された。28年度が最終年度であるため、記入しない。○固視微動様刺激下におけるサブタイプ依存的な受容野特性の変化逆相関法によって推定した受容野の時間特徴について主成分分析を行い、キンギョ網膜の神経節細胞をサブタイプへと分類した。分類したタイプごとに、固視微動様の刺激下での応答修飾について、線型ー非線型モデルを用いて解析した。結果、細胞タイプ依存的に受容野の時空間特性が変化していた。Fast-transient(Ft)型、Slow-sustained(Ss)型細胞では、入力統合の時間過程の短縮と受容野の拡大がみられ、またFt型、Ss型、Medium-sustained型細胞では、発火閾値の低下が生じた。これらの結果は、神経節細胞が広域な微動刺激に順応することで、入出力特性が動的に変化し、効率的な発火に寄与する可能性を示唆している。実際に、固視微動様刺激後のサッカード様急速運動刺激に対し、これらのサブタイプは、速い発火潜時、高い発火率での応答を示しており、サッカード時の特徴的な応答修飾を説明すると考えられる。○電気シナプスとGABA受容体が応答修飾を媒介する上述の応答修飾は、広域な刺激入力への順応過程による可能性がある。網膜での広域な情報処理に関与する電気シナプス(connexin 36/50)を阻害した結果、発火統計量の変化が消失した。また、網膜内網状層において、GABA作動性のwide-field型アマクリン細胞が、側方向の修飾を担うとされるが、実際に、応答修飾は、GABA受容体の阻害剤に対しても感受性があった。従って、眼球運動様刺激による応答修飾は、電気シナプスとGABA受容体に媒介されるといえる。キンギョ網膜ではconnexin 36を介するMb1型双極細胞ネットワークが、広域な修飾経路を駆動することが示されており、眼球運動様刺激下においては、GABA作動性wide-filed型アマクリン細胞を駆動したと考えられる。実験データの蓄積、解析の進捗を含め、当初の研究計画の通りに進展している。現象を説明するための新たな実験デザイン、解析方法の導入を行ったことは、当初の計画以上に進展している。特に、広域な固視微動様刺激下における細胞応答の入出力特性の解析を行い、細胞サブタイプ依存的な受容野の時空間特性の修飾への寄与を部分的にでも説明できたことは、大きな進展であった。一方で、昨年から投稿している論文が、未だ出版に至っていないことは、当初の計画からは遅れている。これらの経過を総合的に鑑みて、本研究課題は、おおむね順調に進展していると考えている。

特に、Fast transient(Ft)型細胞は、従来の眼球運動を考慮しない条件と比べ、より大きな受容野を持ち、強い応答を示すことが分かった。つまり、特定の細胞タイプ群は、眼球運動様の揺動に調節性を持ち、受容野特徴を変化させていた。Ft型細胞からホールセル・クランプ記録を行った結果、受容野特徴の変化には興奮性経路の修飾が寄与することが分かった。また、情報伝送様式の数理的解析から、Ft型細胞が、Medium sustained型、Slow sustained型細胞と協同して情報を符号化することを見出した。さらに、これらの処理について、Mb1型双極細胞群による電気的連絡網と抑制性介在神経細胞(アマクリン細胞)が媒介する回路モデルを提起した。これらの成果の一部は、2017年4月発行のProc. Jpn. Acad., Ser. B, Phys. Biol. Sci.誌(Matsumoto and Tachibana, 2017)に掲載された。(1)ホールセル・クランプ法による複数の神経節細胞の同時記録これまでの研究結果から、眼球運動様の刺激下において、神経節細胞の受容野、発火特性が修飾を受けることを示した。しかし、細胞タイプ依存的な相関性の形成の背後にある機構については分かっていない。そこで、ホールセル・クランプ記録を複数の神経節細胞から同時に行い、膜電位と膜電流変動を解析することで、(a)閾値下の膜電位変動に相関性があるか、(b)どのようなシナプス入力が相関性の形成に寄与するか、調べる。また、(b)に関連し、(c)ノイズ刺激を利用して興奮性/抑制性シナプス後電流の受容野マップを可視化し、入力系の刺激依存的な変化を解析することで、相関性に寄与するシナプス入力の時空間的過程を検討する。(2)眼球運動様刺激下での動的な応答特性の変化の背後にある神経回路の検討これまでの研究結果、また(1)で得られた知見から、眼球運動様の刺激下での応答修飾を担う神経回路について、検討を行う。既に、網膜のconnexin 36/50とGABA作動性シナプスを媒介することを示しているが、どのような細胞が担っているのか、明らかではない。興奮性シナプス入力が修飾を受けるため、双極細胞での影響が考えられるが、特に、connexin 36/50への感受性から、Mb1型双極細胞の関与が示唆される。そこで、Mb1型双極細胞からホールセル・クランプ記録を行い、刺激パターン依存的な応答特性の変化について解析を行う。さらに、GABA受容体のサブタイプに応じて、局所/広域の修飾経路での寄与が異なる可能性が示唆されているので、各受容体サブタイプの選択的阻害の効果について検討を行う。以上の実験によって得られた結果を総合し、眼球運動時における網膜の動的な状態変化を実現する神経回路モデルについて、考察する。28年度が最終年度であるため、記入しない。
「三項関係感情」の実態とその発生メカニズムに関する探索的研究

従来の感情研究は、「事象(e)」と「事象の直接経験者(x)」とのいわば二項関係の性質によって(xの)感情生起の有無および感情の種類が規定されるという側面に主たる関心を払ってきた。しかし、今回特に問題にしようとする感情は、「事象(e)」「事象の直接経験者(x)」、そしてその「事象には直接関係しない第三者(y)」という、いわば三項関係の中で生じるものである。すなわち、eがxに降りかかったことによって生じるyの感情経験に焦点を当てようとするのである。その意味で、こうした感情を仮にここでは(e-x-yからなる)「三項関係感情」と呼んでおくことにしたい。理論的に想定される代表的な「三項関係感情」としては、ポジティヴな事象が他者に生起した際の共感的喜びあるいは妬み、およびネガティヴな事象が他者に生じた際の共感的苦痛あるいはシャーデンフロイデ(schadenfreude:いい気味)を挙げることができる。最終年度に当たる今年度は特に、他者(x)にネガティヴな事象が生起した際の共感的苦痛とシャーデンフロイデ(いい気味)を分け得る要因およびそれらの細かな質や強度を規定し得る要因を探るべく、またこれら二つの感情と他者にポジティヴな事象が生じた際の共感的喜びと妬みとの間にいかなる関係があるのかを知るべく、大学生・大学院生46名を対象とする一対一の半構造化面接を行った。結果として、他者との立場関係、自他の幸福状態のバランス、さらには他者に起こった出来事が自己にとって持つ意味といった状況的要因の関与が明らかになった。しかし、特に妬みを経験しやすい他者にはシャーデンフロイデを、また共感的喜びを経験しやすい他者には共感的苦痛を経験しやすいといった、感情経験の対称性は認められなかった。従来の感情研究の多くは、ある特定事象に遭遇した当事者が直接経験する感情を問題にしてきた。しかし、我々は、ある事象が他者にふりかかった場合でも、自らは本来、非当事者であるにも関わらず、強く感情的に反応することがある。例えば他者に宝くじが当たったのを知り喜び、時に妬み、あるいはまた他者が不幸な事象に接した時にそれに共感的苦痛を覚え、時にいい気味という感情を経験したりする。こうした感情経験はきわめて日常的なものでありながら、これまで十分に、その性質や発生機序などが理論的・実証的に検討されてきたとは言い難い。そこで本研究では、こうした感情を「事象」-「他者」-「自己」という三項関係の中で生じる複雑な感情であるという意味で「三項関係感情」と呼び、その実態と発生メカニズムを吟味することにした。本年度は特に「共感的喜び」と「妬み」に焦点を絞り、それらが日常、いかなる場面でいかなる他者に対してどのように経験されているのか、またいかなる要因がそれらの発生に関与している可能性があるかを、自由記述を中心とする質問紙調査を通して探索的に明らかにすることを目的とした。18-25歳の348名(男172、女176)からデータを収集し、同様の事象でもそれが「共感的喜び」の生起に通じたり、逆に「妬み」の生起に通じる場合があること、また例えば他者が目上で親しく、あるいはまた出来事の生起以前に回答者が他者よりも幸福な状態にある場合や、出来事が回答者に生じたとしてもあまり重要な意味を持たない場合に「共感的喜び」がより経験されやすいなど、他者との立場関係や親しさ、出来事が起こる以前の他者および自己それぞれの幸福状態やそのバランス、さらには他者に起こった出来事が自己にとって持つ意味といった、種々の状況的要因が感情の質を大きく分けることが推察された。従来の感情研究は、「事象(e)亅と「事象の直接経験者(x)」とのいわば二項関係の性質によって(xの)感情生起の有無および感情の種類が規定されるという側面に主たる関心を払ってきた。理論的に想定される代表的な「三項関係感情」としては、ポジティヴな事象が他者に生起した際の共感的喜び(empathic joy)あるいは妬み(envy)、およびネガティヴな事象が他者に生じた際の共感的苦痛(empathic distress)あるいはシャーデンフロイデ(schadenfreude:いい気味)を挙げることができるだろう。昨年度は特に共感的喜びと妬みの経験を分け得る要因について実証的検討を行ったが、今年度はそれらの知見との比較対照を図りつつ、特に他者(x)にネガティヴな事象が生起した際の、共感的苦痛とシャーデンフロイデ(いい気味)を分け得る要因およびそれらの細かな質や強度を規定し得る要因について自由記述式質問紙による探索的検討を行った。結果として、他者との立場関係や親しさ、出来事が起こる以前の他者および自己それぞれの幸福状態やそのバランス、さらには他者に起こった出来事が自己にとって持つ意味といった状況的要因の関与が明らかになったが、特に妬みを経験しやすい他者にはシャーデンフロイデを、また共感的喜びを経験しやすい他者には共感的苦痛を経験しやすいといった、感情経験の対称性は認められなかった。

従来の感情研究は、「事象(e)」と「事象の直接経験者(x)」とのいわば二項関係の性質によって(xの)感情生起の有無および感情の種類が規定されるという側面に主たる関心を払ってきた。しかし、今回特に問題にしようとする感情は、「事象(e)」「事象の直接経験者(x)」、そしてその「事象には直接関係しない第三者(y)」という、いわば三項関係の中で生じるものである。すなわち、eがxに降りかかったことによって生じるyの感情経験に焦点を当てようとするのである。その意味で、こうした感情を仮にここでは(e-x-yからなる)「三項関係感情」と呼んでおくことにしたい。理論的に想定される代表的な「三項関係感情」としては、ポジティヴな事象が他者に生起した際の共感的喜びあるいは妬み、およびネガティヴな事象が他者に生じた際の共感的苦痛あるいはシャーデンフロイデ(schadenfreude:いい気味)を挙げることができる。最終年度に当たる今年度は特に、他者(x)にネガティヴな事象が生起した際の共感的苦痛とシャーデンフロイデ(いい気味)を分け得る要因およびそれらの細かな質や強度を規定し得る要因を探るべく、またこれら二つの感情と他者にポジティヴな事象が生じた際の共感的喜びと妬みとの間にいかなる関係があるのかを知るべく、大学生・大学院生46名を対象とする一対一の半構造化面接を行った。結果として、他者との立場関係、自他の幸福状態のバランス、さらには他者に起こった出来事が自己にとって持つ意味といった状況的要因の関与が明らかになった。しかし、特に妬みを経験しやすい他者にはシャーデンフロイデを、また共感的喜びを経験しやすい他者には共感的苦痛を経験しやすいといった、感情経験の対称性は認められなかった。
損傷DNAの修復とそのDNA多型の検出

計画通りに40年経過したヒト血痕と口腔上皮細胞を採取して試料の収集、DNAの精製、損傷DNAの確認及びこれらの損傷DNAよりSTR多型検出の検討などを行った。本研究に計画されている法科学試料として2種類があり、採取した口腔上皮細胞をUVランプ(波長254nm)で照射してDNA損傷の状況を対照とした。UVCによるDNAの損傷は短時間で遺伝子の機能障害が見られると報告され、STRに対す影響は現在ではまだはっきりしていない状態である。血痕よるDNAの抽出は上述した試料からそれぞれQIAamp DNA Mini Kitを用いて添付されているマニュアルに従って丁寧にDNAの抽出を行った。ND-1000スペクトロフォトメーターにより抽出されたDNAの濃度を測定し、全ての試料のDNA濃度を100ng/ulまで調節した。1.2%アガロースゲルを作成し、DNAサイズマーカーと一緒に電気泳動して損傷DNAの分子サイズを確認したところ、損傷DNAの電気泳動バンドが薄くなることが確認した。室温で40年経過した血痕及びUV照射した(254nmと312nm)上皮細胞などダメージを受けた試料のDNA損傷について加水分解アルデヒド反応性プローブ(ARP)を用い、損傷DNAの脱塩基部位(apurinic/apyrimidinic sites)を測定した。メトキシアミがAP部位のアルデヒド基とほぼ1:1に反応することでAP部位を安定化するためにこの反応を利用して定量法はマイクロプレートにAP部位を持つDNA(AP-DNA)を固相化し、ARPを反応させた後、アビジン・ビオチン・ペルオキシダーゼ複合体を加えてから酵素基質溶液の吸光度の変化を測定した。標準検量線のもとで各試料のAP sites数を求め、血痕のAP変化とSTR検出について検討を行った。UV照射試料では3ヶ月後から変化と半年後の変化及びSTR検出についても検討を行った。AP sitesは一定のレベルになって34種類のSTRローカスの検出が困難となり、APE1(APエンドヌクレアーゼ)、Endo III(エンドヌクレアーゼIII)、Endo IV(エンドヌクレアーゼIV)、Endo V(エンドヌクレアーゼV)、Endo VIII(エンドヌクレアーゼVIII)、T4PDG(ピリミジンダイマーグリコシラーゼ)、Fpg(ホルムアミドピリミジン[fapy]-DNAグリコシラーゼ)、h OGG1(αアイソフォーム)、T7Endo I(T7エンドヌクレアーゼI)およびAfu UDG(E coliウラシル-DNAグリコシラーゼ)などを用い、DNA修復が可能であった。修復後のAP値はUV試料では照射前のレベルにならなくて2種類波長のUV照射によるSTR検出の明確の差がなかった。今後、照射日数を増やして、これらの変化を更に観察する必要があると考えている。室温に保存された陳旧のヒト血痕及び人工紫外線照射血痕を用い、DNA損傷について加水分解アルデヒド反応性プローブ(ARP)により、損傷DNAの脱塩基部位を測定した。損傷DNAについてAPE1、EndoIII、EndoIV、EndoV、EndoVIII、T4PDG、Fpg、hOGG1、T7EndoIおよびAfu UDGなどを用い、修復を行ったところ、陳旧血痕及び波長312nmの紫外線(エネルギーは870kJ/cm一定)による照射した血痕においては効果がみられ、3ヶ月で照射した試料から15ローカスSTRの検出ができた。波長254nmの紫外線照射により3ケ月経過した血痕では修復してもSTR型の検出が困難であることが分かった。これはAP部位が多く生じて、修復がきわめて難しいことによると考えられ、幸いに自然光の中に波長254nmの紫外線がほとんど入っていないので、自然界で発見される血痕試料は修復酵素により損傷DNAの修復後にSTR検査が可能で、現在の法医学鑑定の技術では十分にこれらの試料より個人識別ができると考えられる。
都市熱環境緩和と都市空間構造に関する数値解析

太平洋側沿岸部大都市の典型として名古屋を中心とした濃尾平野を対象に、当該地域の気候特性を活かした建物の空間分布、道路、植生、水田、水面分布等を調べることを目的とした研究を行った。手順としては、1.詳細な土地利用分布データの作成、2.空間3次元キャノピーモデルの改造、3.解析対象領域における真夏日、熱帯夜の温度空間分布の再現、4.省エネルギー都市空間構造に関するシナリオ作成及びモデルシミュレーションによる考察、の順に研究を進めた。1.については、(1)GISソフトウェア、(2)詳細な土地利用分布の基となるデータ、をそれぞれ導入し、当該データを作成した。2.ついては、並列計算機能を備えたあらゆる科学技術演算用サーバに対応可能なモデルソースコードへの改良を、計算時間の短縮に最も有効な支配方程式系およびキャノピー層内の熱収支計算について行った。3.については、(1)都市熱環境の広域性、(2)熱環境と都市空間構造の空間1次元性、(3)熱環境と都市空間構造の空間3次元性に対する知見を、それぞれ、研究発表として取りまとめた。例えば、(2)については、観測結果との比較によりモデルの有効性を確認すると共に、晴天で空間1次元性がなりたつ気象状況の場合、日中低層の建物が密集している地域がより高温になること、夜間高層の建物が密集している地域で気温が低下しにくいこと、等の結果を得た。4.については、3.(3)について更に研究をすすめ、極端な乾燥状態、湿潤状態等、様々な初期条件に対するモデルの感度解析を行いモデル細部のチューニングを行うと共に、3次元気象現象に対するモデルの有効性を検討した。今後、1.の詳細な土地利用分布データを入力とした、3次元モデルシミュレーション結果に基づく、省エネルギー都市空間構造に関するシナリオ研究を最終成果として取りまとめる予定である。本研究は、太平洋側沿岸部の大都市域の典型例として名古屋を中心とした濃尾平野を対象に、当該地域の気候特性を活かした建物の空間分布、道路、植生、水田、水面等の分布を調べることを目的としている。初年度は、1.詳細な土地利用分布データの作成、2.空間3次元キャノピーモデルの改造、3.対象領域における真夏日、熱帯夜の温度空間分布の再現、の3点について研究を進める予定であった。1.については、(1)GISソフトウェア、(2)詳細な土地利用分布の基となるデータ、が必要である。申請者の職場の異動に伴い、(1)を共同利用ではなく、申請者の研究室内に導入しなければならない事情ができた。これらは大変高額なため、本年度は(1)のみを導入した。次年度に(2)を購入する予定である。但し、モデル開発自体は妥当な仮定による代替データにより継続しているため、研究への深刻な支障はない。2.については、並列計算機能を備えたあらゆる科学技術演算用サーバに対応可能なモデルソースコードへの改良を段階的に進めているところである。計算時間の短縮に最も有効な支配方程式系の部分の改良については完了した。3.については、最終的な成果報告に必要となる、(1)都市熱環境の広域性、(2)熱環境と都市空間構造の空間1次元性、(3)熱環境と都市空間構造の空間3次元性に対する知見を、それぞれ、本報告書の研究発表に記載した順に取りまとめた。次年度は、3.(3)について更に研究をすすめると共に、省エネルギー都市空間構造に関するシナリオ作成及びモデルシミュレーションによる考察を行う予定である。
「母」として生きること－北インドの巡礼空間における女性修行者の日常的ケアを中心に

本研究の目的は、北インドの巡礼地で暮らすヒンドゥー女性修行者が、どのように生きる場と自己を再構築していきうるか、フィールドワークと民族誌記述を通じて明らかにすることである。これまでの調査で、女性修行者がパートナーや師弟関係、支援者、地域社会の人びとなど他者との相互作用を通じてさまざまな「家族」の関係性を形成し、それに依拠して生活基盤や自己アイデンティティをつくりだしていることを明らかにしてきた。本年度は、特に師弟関係の伝統に基づく儀礼的「家族」関係と女性修行者のかかわりを明らかにすることを目的に、前年度から継続している長期フィールドワークを引き続き実施した。具体的には、(1)シヴァ派ダシュナーミー・サンニャーシン系統ジュナー・アカーラー派のグルのもとに弟子入りし、アーシュラム(修行道場)での修行生活やジェンダー関係について参与観察調査及び聞き取り調査を実施。(2)同派の女性修行者が多く暮らすハリドワール郊外の村落で引き続きフィールドワークを実施、乞食=施食実践について調査。(3)クンブ・メーラー祭で、師弟関係のネットワークやアカーラーの組織構造、女性修行者の連帯などを調査した。それによって、儀礼的「家族」関係という「制度」における女性の地位や差別の現状などとともに、地域で暮らす女性修行者が、そうした伝統や制度をどのように活用して生きているかが、明らかとなってきた。クンブ・メーラー祭では、アラババード大学及び巡礼学会主催の国際セミナーで、2010年のハリドワールでの調査データをもとに、口頭発表を行った。そこでの発表原稿に、本年度のクンブ・メーラー祭の調査データを含めて加筆修正したものが、今回のセミナーのプロシーディングをもとに論文集として編集しなおしたうえで、出版される予定である。本年度は、これまでの研究成果をまとめた投稿論文の執筆、セミナーや学会での発表、及び今後の長期フィールドワークに向けての文献調査やビザ取得などの事務手続き・準備を行った。ひとつめの論文(研究ノート)では、先行研究レビューを綿密に行ったうえで問題を提起し、フィールド調査で得られた事例を考察することで、女性出家者サードヴィーをめぐる師弟関係が、奉仕実践を通じていかに形成されるかを検討した。現在投稿済み査読中の論文では、女性出家者の母性をテーマに、研究ノートで素描した女性出家者をめぐる多様な社会関係の生成過程について、「母と子」の関係性により焦点を当てて考察を深めた。これらによって、今後の民族誌・博士論文執筆のための理論的基盤を構築するとともに、学術会に向けて問題提起をすることができた。2011年2月から3月にかけての渡航では、調査地選定のための予備調査を行い、本調査に向けての準備を行った。今後は、投稿論文の英語版の執筆・投稿、博士論文構想の作成、及び7月から北インド・ウッタラーカンド州アルモーラー地区を拠点として、女性出家者の民族誌作成に向けてフィールドワークを実施する予定である。本年度は、4月から7月までフィールドワークに向けての調査準備・文献調査をすすめ、8月から北インド・ウッタラーカンド州アルモーラー地区で調査を開始した。当初、ヒマーラヤの村落や巡礼地で暮らす女性修行者たちを対象に調査を実施する予定だったが、当該地域には女性修行者の数が少なくそれぞれ離散しているため調査が困難であることがわかり、巡礼都市ハリドワール郊外に拠点を移した。その後、数か月間アーシュラム(修行道場)での参与観察調査、当該地域におけるアーシュラムのサーベイ調査、アーシュラムとその近辺に暮らす女性修行者を対象に聞き取り調査などを行ってきた。それによって、郊外の地域社会における急激な社会変容の過程やそこでの修行者・弱者を対象とする新たな施食システムのありよう、女性修行者の移動と定住の過程、彼女たちの修行と家庭生活、ジェンダー関係などが明らかとなってきた。現在、博士予備論文の成果及びこれまでの調査で得られたデータをもとに、女性修行者の母性とフェミニズムについて論文を執筆、投稿の準備をすすめている。

そこでの発表原稿に、本年度のクンブ・メーラー祭の調査データを含めて加筆修正したものが、今回のセミナーのプロシーディングをもとに論文集として編集しなおしたうえで、出版される予定である。当初予定していたとおり、語学の習得、調査地域の文化社会のありようの把握、女性修行者との関係づくり、アーシュラムでの参与観察調査の実施など、フィールドワークはおおむね順調に進展しているといえる。これまで女性修行者の家庭生活や地域社会での共生のありかたに注目してきたが、今後は日々の修行実践や師弟関係・修行者社会とのかかわり方、及び社会奉仕活動と女性運動の結び付きなどに着目し、女性修行者の生き方を明らかにしていきたい。また、論文やワーキングペーパーの作成をすすめ、博士論文執筆に向けて準備をすすめていく。
10^<15>-10^<17>eVのハドロン相互作用研究の新実験討画の検討

エネルギー・フロンティア10^<15>-10^<17>eV領域のハドロン相互作用研究のための新実験計画作成をテーマに,宇宙線実験,加速器実験をふくめて現在までの成果と素粒子物理学における意義についての理解を深め,新実験計画の焦点とすべき点を明らかにすることを研究の目的とした。とくに上のエネルギーフロンティアのハドロン物理学の理解の重要な手がかりと考えられる宇宙線実験のケンタウロス型特異相互作用について最近提唱されている新しい理論的試みについて,またFNAL加速器実験による追認の可能性を検討すると同時に、アメリカで進められているSSC計画のうち,とくに関連の深いFAD提案との関連について,アメリカにおける数回のWORK SHOPえの出席もふくめて,十分な討論を行うことが出来た。宇宙線特異事象の理解のための理論の新しい試みとして検討されたのは′′カラー六重項クォーク仮説′′′′カイラル真空のゆがみ′′Diftractive創成での相転移′′などであるが,それらはいづれも特異事象の一面をとらえているが,それだけでは宇宙線特異事象の多様性を説明するには足りず,新しい要因の導入を屯須とすることが結論される。さらに宇宙線実験では,異常現象の2次粒子が,通常のハドロンと異った振舞いをし,未知のハドロンの新状態の出現を強く指唆していて,新しい理論えの展開は,この性質のより統計の良い確認がきめてとなることが結論である。宇宙線特異現象が相互作用の最前方のDittractive領域に出現することを考えると現在実験中のFNALコライダー型実験での研究はむつかしく,エネルギーが高く積度もよく統計も十分に期待される高山エマルション・チェンバーによる実験が最適との結論を得て,国際協力によるチャカルタヤ,パミール高原でのエマルション・チェンバー実験計画を平成5年度から5年間の計画として作成し,科研費特別推進に申請を行った。
第三者の関与を伴う高度生殖医療に対応する看護の探求

本研究は、第三者が関与する、いわば倫理的問題を含む高度生殖医療におけるケアについて、日本とタイの看護者の意見を集約し、必要な支援と看護教育への指針を得ることを目的としている。延長申請し4年目となる2019年度は最終年度として、不妊治療における制約が比較的少ないタイ国と国内での制約が多いために海外に治療を求めてツーリズムを行う不妊カップルが増えている日本、この二国間において看護教育への示唆を得るための量的調査を実施した。方法は無記名自記式質問紙調査であり、看護学生のART (assisted reproductive technology)に対する考え方、倫理観をたずねた。日本の看護学生454名、タイの看護学生816名から回答が得られた。結果、ARTの将来的な利用についてはタイの学生のほうが利用を希望するものが多く、日本の学生は「わからない」と答えたものが半数で最も多かった。また第三者が関与するARTについては、看護者の立場として容認する者の割合は日本の方が多かった(p<.001)。看護教育の中で第三者が関与するARTやその看護について学んだ経験は、タイの学生のほうが「あり」と答えた者が多かった(p<.001)。しかし、不妊看護や第三者が関与するARTの看護について現状よりもっと必要であると考えている学生はタイでは8割以上、日本では9割以上であった。道徳的感受性については、タイより日本の学生のほうが低かった(p<.001)。以上のことより、進化するARTに対応し、また第三者が関与するARTについても看護教育内容を充実させるとともに、学生らの道徳的感受性を高めるような倫理教育を検討する必要があると考えられた。生殖医療の技術的革新により、これまで想像もしなかった倫理的問題を伴う現象、第三者の生殖機能を使用した生殖補助技術の実施数は増加している。国内ではガイドラインを遵守した実施制限があるため、生殖サービスの提供を求めて渡航する日本人は増えているといわれる。このような現実がある中で、看護職者自身の価値観が対象者と異なり、進化する高度生殖医療の現状と看護職者との意識上に摩擦が起こっている可能性があるが、現状は定かでなく、また倫理的教育を実施する看護教育現場でも準備状況は一様でない。そこで本研究は、第三者が関与する、いわば倫理的問題を含む高度生殖医療におけるケアについて、日本とタイの看護職者や教育者の意見を集約し、看護職者が体験するジレンマを検証するとともに必要な支援を考察し、看護教育への指針を得ることを目的とした。取り組みの初年度である平成27年度は、具体的に次のことを実施した。1.予備調査およびウェブアンケート実施に際しての研究倫理審査申請-----学内の研究倫理審査委員会において承認を得た。2.日本の医療職者(医師、看護師、助産師)の意識調査(予備調査としての質的分析)-----機縁法により第三者が関与する高度生殖医療に携わった経験のある6名の対象者へのインタビューを実施した。分析および対象者拡大のための活動を続けている。3.タイ国における量的調査のためのフィールド確保および研究協力者との打ち合わせ-----タイの看護職者および看護学生への量的調査実施のためのフィールドの確保に至った。今後は量的調査内容の検討とタイの協力大学における研究倫理審査のための準備に取りかかる。4.高度生殖医療体験者へのウェブアンケート準備-----調査項目についての文献的検討、研究者間での協議に時間を要し、調査実施には至らなかったが、次年度に実施する準備を整えた。研究計画申請時に予定していたフィールドでの調査が不能となり、新たにフィールド確保をするための時間を要した。本研究は、第三者が関与する、いわば倫理的問題を含む高度生殖医療におけるケアについて、日本とタイの看護職者や教育者の意見を集約し、看護職者が体験するジレンマを検証するとともに必要な支援を考察し、看護教育への指針を得ることを目的としている。2年目となる平成28年度は、具体的に次のことを実施した。1.日本の看護職者(看護師、助産師)への意識調査の分析(予備調査としての質的分析):機縁法により第三者が関与する高度生殖医療に携わった経験のある5名の対象者へのインタビューデータの分析を行った。内容分析の結果、6つのカテゴリーが抽出された。看護職者らは[子どもの成長と家族関係の構築に対するネガティブ感情]、[母性を尊重する態度]、[女性の権利と子どもの福祉の間での葛藤]、[自分の思いとは切り離し、職業的倫理観を保つ]、[特殊なケースをケアすることにより生ずる思いやストレス]、[一人の女性としての不妊症への思い]を抱き、複雑な感情とストレスを抱えながら看護を実践していることが明らかになった。2.高度生殖医療体験者へのウェブ調査実施:日本のウェブ調査会社に登録している会員を対象として、インターネットを利用した調査を実施した。対象者の条件を日本に在住する30歳から49歳の男女のうち不妊治療経験のある者(男性は、パートナーが不妊治療経験のある者を含む)とし、男女618名から回答を得た。男女の構成比は1:1である。質問内容は、海外での不妊治療経験、第三者の関与を伴う不妊治療やケアに対する意見などをたずねた。第三者の関与を伴うARTに対して倫理的問題はあるが、それを選択する患者は少数ではあるが存在する。偏見なく看護を提供することが重要であり、また不妊治療経験者の多くは精神的ケアを望んでいることがわかった。今後、さらに分析を深めていく。

3.タイにおける量的調査のための研究協力者との打ち合わせ実施研究計画申請時に予定していたエフォート通りに研究時間を確保できなかったため。本研究は、第三者が関与する、いわば倫理的問題を含む高度生殖医療におけるケアについて、日本とタイの看護職者の意見を集約し、看護職者が体験するジレンマを検証するとともに必要な支援を考察し、看護教育への指針を得ることを目的としている。3年目となる平成29年度は最終年度として、不妊治療における制約が比較的少ないタイ国と国内での制約が多いために海外に治療を求めて不妊カップルがツーリズムを行う日本、この2国間において看護教育への示唆を得るための量的調査を予定していた。しかしながら、タイの研究者との連絡調整に時間を要し、調査原案を作成するに留まった。調査原案は、タイの研究協力者とともに検討し、ほぼ内容を確定した。両国間において研究倫理審査申請の必要があり、プレテストおよび本調査を平成29年度中に実施することが困難であると判断し、本研究の延長申請を行い、量的調査は次年度(平成30年度)に実施する運びとなった。調査では、2国間において看護学生のART (assisted reproductive technology)に対する考え方、倫理観を明らかにし、それぞれの国における不妊看護のための教育への指針を考察する。方法は無記名自記式質問紙調査であり、日本における看護学生約500人、タイにおける看護学生約400人を対象として実施する予定で準備を進めている。タイと日本との国際比較調査を予定していたが、タイの研究協力者との連絡調整に予想を上回る時間を要したため本研究は、第三者が関与する、いわば倫理的問題を含む高度生殖医療におけるケアについて、日本とタイの看護者の意見を集約し、必要な支援と看護教育への指針を得ることを目的としている。延長申請し4年目となる2019年度は最終年度として、不妊治療における制約が比較的少ないタイ国と国内での制約が多いために海外に治療を求めてツーリズムを行う不妊カップルが増えている日本、この二国間において看護教育への示唆を得るための量的調査を実施した。方法は無記名自記式質問紙調査であり、看護学生のART (assisted reproductive technology)に対する考え方、倫理観をたずねた。日本の看護学生454名、タイの看護学生816名から回答が得られた。結果、ARTの将来的な利用についてはタイの学生のほうが利用を希望するものが多く、日本の学生は「わからない」と答えたものが半数で最も多かった。また第三者が関与するARTについては、看護者の立場として容認する者の割合は日本の方が多かった(p<.001)。看護教育の中で第三者が関与するARTやその看護について学んだ経験は、タイの学生のほうが「あり」と答えた者が多かった(p<.001)。しかし、不妊看護や第三者が関与するARTの看護について現状よりもっと必要であると考えている学生はタイでは8割以上、日本では9割以上であった。道徳的感受性については、タイより日本の学生のほうが低かった(p<.001)。以上のことより、進化するARTに対応し、また第三者が関与するARTについても看護教育内容を充実させるとともに、学生らの道徳的感受性を高めるような倫理教育を検討する必要があると考えられた。
口腔癌におけるHOX遺伝子群の発現状態と癌関連遺伝子への影響・制御の検討

本研究では、転写因子であるHOX familyとその関連遺伝子の、口腔扁平上皮癌との潜在的関係性を検討した。リアルタイムPCRにてHOX遺伝子群の口腔扁平上皮癌由来細胞株におけるmRNAの発現状態を確認した結果、多くのHOX遺伝子群の中で、HOXA1および関連遺伝子の発現が亢進していた。また、臨床検体においてもmRNAおよびタンパクレベルで発現の亢進を認めた。さらに、siRNAを用いたHOXA1発現抑制実験を行ったところ、細胞増殖能の抑制効果を認めた。以上よりHOXA1および関連遺伝子は口腔扁平上皮癌と密接に関係し、特にHOXA1は腫瘍の進展に重要な役割を果たす可能性があることが示唆された。目的は転写因子であるHOXfamilyとその関連遺伝子が口腔癌に及ぼす影響を明らかにすることである。まずマイクロアレイ、パスウェイ解析により口腔癌でのHOX family発現と関連遺伝子のネットワークを明らかにした。次に口腔癌で高発現している正常口腔扁平上皮由来初代培養細胞株と口腔癌細胞株10種類を用い、HOX familyおよび関連遺伝子の発現状態をRT-PCR法で評価した。HOXA1、HOXB7、HOXC9、HOXD11、HOXA10で高発現が確認され、パスウェイ解析によってHOX familyと関連があると考えられたDkk1、Wnt7A、GRB2、MEK1、Bcl-2の各遺伝子についても同様に有意な発現亢進を認めた。次に、機能解析のため、siRNAを用いて口腔癌細胞株(HSC-3、Sa3)のHOXA1をサイレンシングし、細胞増殖能試験、浸潤能試験、創傷治癒試験を行った。細胞増殖能試験において、正常口腔扁平上皮と比べ有意な細胞増殖の抑制が認められ、免疫組織学的染色で得られたIHCスコアからタンパク発現と臨床指標との相関を検討したところ、サイレンシングの結果を裏付けるように、primary tumor sizeにおいて口腔癌組織と正常組織間で有意差が認められた。しかしながらHOXA1のサイレンシングとDkk1、Wnt7A、GRB2、MEK1、Bcl-2各遺伝子の相関は明らかではなかった。HOX遺伝子群には口腔癌で高発現を示す遺伝子が存在し、特に腫瘍増殖に深く関わっている可能性が示唆された。ホメオティック遺伝子群は異なる染色体上に位置する4つのクラスターからなり、約40のHox遺伝子が知られている。核内転写因子であるHOX遺伝子familyは発生初期における形態形成や分化さらに癌化に深く関係している。本研究は、口腔癌におけるHOX遺伝子familyとその関連遺伝子群の口腔癌における役割を解析することを目的とする。本年度は以下の実験を行った。マイクロアレイ(Affymetrix社)解析と標識2次元電気泳動法と質量解析法による口腔悪性腫瘍プロテオーム解析により、4種類の口腔癌由来細胞株(H1、Sa3、HSC2、HSC3)と3症例の臨床サンプルで共通に発現増強しているHOX遺伝子として、HOX A10、HOX A1、HOX B7、HOX C6、HOX C9、HOX D11遺伝子を同定した。これらの遺伝子の発現状態をReal time PCR法とWestern blot法により口腔癌細胞6株(HSC2, HSC3, HSC4, OK92, H1, Sa3)を用いてmRNAレベルとタンパクレベルで確認したところ、全ての細胞株で共通に発現増強を確認できた遺伝子はHOX A10であった。これらの遺伝子発現状態をIngenuity Pathway Analysis softを用いてパスウエイ解析を行ない、BCAT1、COPA、CHERP、PRG3、SLC1A4、RNMTなどの遺伝子が同定された。今後、これらの遺伝子に関して、多数の臨床サンプルを用いた遺伝子機能解析を行い、関連のあった臨床諸指標に関して、増殖曲線の作成、発現ベクター導入による遺伝子強制発現細胞作成、shRNA導入による遺伝子発現抑制細胞作成、これらの細胞を用いたinvasion assay, wound healing assay,マウス癌転移実験などを行なう予定である。HOX遺伝子群とその関連遺伝子の発現解析が終了し、実験は予定通りに進行している。今後、遺伝子機能解析作業に入る。今後の実験に用いる多数の臨床サンプルはすでに確保した。これまでに絞り込んだ遺伝子に関して、多数の臨床サンプルを用いてReal time PCR法と免疫染色法によりmRNAレベルとタンパクレベルで発現状態を調べ、臨床諸指標との関連性を調べることにより遺伝子機能解析を行う。関連のあった性質に関して、増殖曲線の作成、発現ベクター導入による遺伝子強制発現細胞作成、shRNA導入による遺伝子発現抑制細胞作成、これらの細胞を用いたinvasion assay, wound healing assay,マウス癌転移実験などを行なう予定である。

このため、PCR用試薬、各種プライマー、各種抗体、免疫染色キット、細胞培養試薬、発現ベクター構築経費、shRNA設計・作成経費、遺伝子導入試薬、invasion assayキット、wound healing assayキット、マウス購入・飼育経費などが必要である。
STIM1機能異常と高血圧：遺伝子改変SHRSPによる検討

我々は、脳卒中易発症高血圧自然発症ラット(SHRSP)における高血圧原因遺伝子候補としてStromal interaction molecule-1 (Stim1)を同定した。本研究の目的は、SHRSPのStim1遺伝子配列上のナンセンス変異を、CRISPR/Cas9で修復した「Stim1ノックインSHRSP」を作製し、STIM1機能異常の高血圧発症への寄与を個体レベルで検証することであった。昨年度、順調に計画は進行したが、我々が予想したストレス負荷への過剰な交感神経活性亢進に対する抑制的な効果は観察されなかった。この理由の一つとして、高血圧は多因子性疾患であり、STIM1以外の他の遺伝子との協調的作用が必要であることが考えられる。本年度は、STIM1と協調的に働く遺伝子の同定も想定して、SHRSPよりも早期に脳卒中を自然発症するコンジェニック系統(SPrch1.71)の解析を行った。この系統は、我々がStim1を同定する過程で作製した系統の一つである(Ferdaus et al. PLoS ONE 2014)。脳(大脳皮質・脳幹)、心臓、腎臓、副腎、脾臓をターゲット臓器として、コンジェニック領域の遺伝子発現量をSHRSPと比較した。SPrch1.71では、副腎の葉酸受容体(Folr1)が低発現、心臓・腎臓・脾臓のArt2bが高発現であった。まず、Folr1を有力候補として各種解析を行った。副腎におけるFOLR1の局在を免疫組織化学染色で調べたところ、球状帯(グルココルチコイド合成)、束状帯(アルドステロン合成)の領域において陽性染色を認めた。コルチコステロン、アルドステロン、ホモシステインの血清濃度を2系統間で比較したが、いずれも有意差は認められなかった。複数の臓器をターゲットとする遺伝子発現解析により、SPrch1.71における脳卒中早期発症の原因遺伝子候補を同定したことに加え、血清学的解析等によりその推定されるメカニズムについて検討を重ねたが、原因遺伝子の同定には至っておらず、かつ、仮説としたSTIM1との協調的作用については全くの未知であるため。SPrch1.71を用いた高血圧・脳卒中原因遺伝子の探索を引き続き行う。同定された候補遺伝子の中には、特にT細胞系でSTIM1と機能相互することが想定される遺伝子が存在することから、FACSによる細胞分画解析などを行うことで、その分子機序の検討を行う。ヒト本態性高血圧モデルである脳卒中易発症高血圧自然発症ラット(SHRSP)の高血圧成因の一つとして、交感神経系の過剰な活性亢進による神経性機序が指摘されている。我々は、SHRSPにストレス負荷を与えた際に、過剰な交感神経活性の亢進と昇圧を引き起こす原因遺伝子候補として、小胞体カルシウム貯蔵センサーSTIM1を同定した。本研究では、SHRSPにおけるSTIM1機能異常の原因となるナンセンス変異を、新規遺伝子改変技術であるCRISPR/Cas9システムにより正常型に置換した「Stim1ノックインSHRSP」を作成し、その表現型を評価した。本年度は、京都大学で作成された後に本学に搬入されたヘテロ雌をSHRSP/Izmと交配し、これにより得られたヘテロの雌雄ペアを交配することでStim1の両アレルが正常型配列に置換されたホモ個体を確立した。DNAシーケンシングによりoff-target変異が見られないことを確認した。アストロサイトを単離培養してカルシウムイメージングによりストア作動性カルシウム流入(SOCE)活性を評価し、ノックインSHRSPではSHRSPよりも有意に高いSOCE活性が見られることを確認した。SHRSP/Izmを対照として12、16、20週齢でのベースライン血圧を比較したところ、有意差は見られなかった。冷温・拘束ストレス負荷下における尿中カテコールアミン排泄量および血圧変動(テレメトリーシステムによる)をストレス感受性の指標として評価したところ、2系統間で有意差は見られなかった。これまでの解析結果からは、STIM1の機能異常とSHRSPの過剰な交感神経活性の亢進との関連は低いと考えられた。SHRSPをベースにStim1遺伝子変異を正常型に置換したStim1ノックインSHRSPを確立し、個体レベルでの表現型解析を計画通りに実施できたため。

SPrch1.71では、副腎の葉酸受容体(Folr1)が低発現、心臓・腎臓・脾臓のArt2bが高発現であった。まず、Folr1を有力候補として各種解析を行った。副腎におけるFOLR1の局在を免疫組織化学染色で調べたところ、球状帯(グルココルチコイド合成)、束状帯(アルドステロン合成)の領域において陽性染色を認めた。コルチコステロン、アルドステロン、ホモシステインの血清濃度を2系統間で比較したが、いずれも有意差は認められなかった。複数の臓器をターゲットとする遺伝子発現解析により、SPrch1.71における脳卒中早期発症の原因遺伝子候補を同定したことに加え、血清学的解析等によりその推定されるメカニズムについて検討を重ねたが、原因遺伝子の同定には至っておらず、かつ、仮説としたSTIM1との協調的作用については全くの未知であるため。研究は計画通り順調に進んだが、これまでの解析結果から判断すると、我々の予想に反してStim1はSHRSPにおいて過剰なストレス応答を引き起こす原因遺伝子ではないと考えられた。ただし、Stim1と協調的に働く因子が存在し、STIM1単独の機能回復では生体レベルでは十分な効果が見られなかった可能性がある。あるいは、我々が過去の報告(Ferdaus et al.2014 PLoS One)で見出した別の候補遺伝子の中に、本当の原因遺伝子が存在する可能性も否定できないため、その点についても検討を行う予定である。また、個々の組織や細胞レベルであれば、STIM1と高血圧発症との関連性を見出させるかもしれないので、当初計画に挙げていた血管収縮・弛緩反応への影響についても予定通り検討を行う予定である。SPrch1.71を用いた高血圧・脳卒中原因遺伝子の探索を引き続き行う。同定された候補遺伝子の中には、特にT細胞系でSTIM1と機能相互することが想定される遺伝子が存在することから、FACSによる細胞分画解析などを行うことで、その分子機序の検討を行う。テレメトリー送信機の再充電を行うことなく実験を実施できたこと、ラット個体での表現型解析の結果に基づき培養細胞実験を一部実施しなかったことなどから、繰越金が生じた。交感神経系の制御に着目したSHRSPの高血圧病態解明のため、本研究でターゲットとしたStim1以外の分子についても検討を行う必要性が生じたため、それらの解析に使用する。予想に反して、新たに作製したStim1ノックインSHRSPにおいて高血圧症に対する抑制効果が見られなかったため、計画を検討し直す必要性が生じた。次年度使用額が生じた理由は、これに起因する。Stim1を候補遺伝子として同定するにあたって作製されてきたコンジェニック系統の表現型解析に立ち返って、STIM1機能との相関についても考察しながら新たな視点での解析を実施中であり、次年度の研究経費はその目的のために使用する。
アネキシンA8の脱メチル化を指標とした膵癌発生・進展促進因子の網羅的探索

膵癌細胞株においてAnnexin A8(ANXA8)の機能解析を行ったところ、ANXA8は、膵癌における増殖能、浸潤能、低酸素・低栄養環境への適応応答に寄与している可能性が示唆された。ANXA8は、直接低酸素誘導因子(HIF-1α)の発現を誘導し膵癌の悪性度を決定する重要な遺伝子であることが明らかになった。ANXA8プロモーター制御下にルシフェラーゼ遺伝子を発現させるためのコンストラクトを作製し、ANXA8の脱メチル化促進因子を網羅的に探索した。これらは、ANXA8の発現を誘導し、膵癌の進展を促進する可能性が示唆された。膵癌は、最難治癌の1つである。膵癌患者の予後改善には、早期診断法と新規治療法の開発が必須である。本研究は、新規癌促進遺伝子Annexin A8(ANXA8)のエピジェネティクス制御機構の破綻を指標として、膵癌発生・進展促進因子の網羅的探索を行うことで、将来の膵癌発癌予防、早期発見、予後改善につなげることを目的とする。研究期間を通して、膵癌の悪性化におけるANXA8の機能解析を進めた。ANXA8の高発現株である膵癌細胞株(BxPC-3)にANXA8に対するsiRNAをトランスフェクションした後、MTT assay、Invasion assayを行ったところ、Caspase-3/-7の活性が上昇し、細胞増殖能、遊走能、浸潤能が有意に減少した。また、ANXA8の発現と低酸素誘導因子(HIF-1α)の発現に関連があった。これらの結果から、ANXA8が膵癌の1)増殖能、2)浸潤能、3)低栄養・低酸素環境への適応応答に寄与している可能性が示唆され、ANXA8は膵癌の悪性度を決定する重要な遺伝子であることが明らかになった。H24年度(最終年度)には、これらの結果を海外雑誌で発表した(Hata H, et al. Mol.Carcinog. in press)。ANXA8プロモーター領域の脱メチル化作用を有する(ANXA8を発現誘導する)物質を網羅的に探索するため、内在性ANXA8プロモーターの制御下にレポーター遺伝子(Luciferase)を発現させるためのコンストラクトを作製した(H23年度)。これをANXA8の低発現株である膵癌細胞株(PANC-1)の染色体に組み込み、恒常的発現細胞株を作製した後、脱メチル化促進因子を網羅的に探索した(H24年度)。本研究は、新規癌促進遺伝子Annexin A8のエピジェネティクス制御機構の破綻を指標として、膵癌発生・進展促進因子の網羅的探索を行うことで、将来の膵癌発癌予防、早期発見、予後改善につなげることを目的とする。1、内在性プロモーター制御下のレポーター遺伝子発現系の構築Annexin A8プロモーター領域の脱メチル化作用を有する物質を網羅的に探索するため、内在性Annexin A8プロモーターの制御下にレポーター遺伝子(Luciferase)を発現させるためのコンストラクトを作成した。2、膵癌モデルマウス作製(恒常活性変異型KrasG12D発現+p53ノックアウト)のため、変異型KrasG12D発現マウスの購入手続きを進めている。p53ノックアウトマウスは、繁殖に失敗し、体外受精からやり直している。代替的に、発がん物質の投与により皮下腫瘍を作成し、肝・肺転移時における膵臓でのAnnexin A8の発現変化を検討した。3、膵癌におけるAnnexin A8の機能、その発現調節機構に関する研究成果(H21-22年度若手B交付内容も含む)の論文を投稿した。膵癌におけるAnnexin A8の機能、その発現調節機構に関する研究成果(H21-22年度若手B交付内容も含む)の論文投稿に時間を要しているため。現在、投稿中(リバイス中)。今後は、まずin vivoにおいて、膵発癌・悪性化とAnnexin A8の発現・メチル化パターンとの関連を示していく必要がある。将来的には、臨床検体を用いて評価していくことが必要とされる。また、Annexin A8の機能は未だ不明な点が多く残されているため、解析を進める。このことが、将来、膵癌の早期診断、予後予測、新規治療法の開発につながると考える。1、膵癌モデルマウスにおける段階的発癌・進展過程とAnnexin A8のメチル化パターンの相関性評価を進める。膵癌モデルマウスの作成は、課題申請時に想定した以上の高度な技術・知識が必要であった。熟練に時間を要すると予想される。変異型KrasG12D発現マウスの購入手続きを進める。p53ノックアウトマウスは、繁殖を進める。

2、膵癌の悪性化におけるAnnexin A8の機能解析を評価する。これまで得られた結果から、膵癌細胞が低酸素、低栄養環境に適応するためにはAnnexin A8が必要であると予想される。このため、Annexin A8の機能解析をさらに進めることが膵癌の悪性化のメカニズム解明に貢献すると予想される。3、平成23年度に作製した内在性Annexin A8プロモーター制御下のレポーター遺伝子発現用コンストラクトを用いて、恒常的発現細胞株を作製し、脱メチル化促進因子を網羅的に探索する。