hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
フォトクロミック分子架橋型金属ナノロッドを用いた光応答性キラル組織体の創製

フォトクロミック分子を導入した異方性金属ナノロッドの光応答性及びタンパク質を不斉源としたキラル金属ナノロッド組織体の創製について検討した。チオール基修飾光異性化分子を金属ナノロッドコロイド分散液に添加して光照射を行ったところ、ネットワーク状の組織体が確認された。これは光応答性を有する金属ナノロッド組織体が形成されたことを意味する。また、金属ナノロッドコロイド分散液へ天然不斉源の一種として働くタンパク質を添加した結果、大きな異方性因子を示すキラル組織体の構築が明らかとなった。以上より、光異性化分子導入や不斉分子との相互作用よってキラル金属ナノロッド組織体が創出できることが示唆された。本研究課題では、異方性を有する金属ナノロッドへ光学活性な光異性化分子(フォトクロミック分子)を導入して、光応答性を示すキラル組織体を創出し、光コントロールすることが目的である。平成26年度に実施した研究成果の概要は以下の通りである。・Auナノロッド界面に導入可能な光学活性フォトクロミック分子の設計・合成金属ナノロッドの金属種として、ロッド状ナノ構造体の形成が知られている中で金(Au)を選択することを考慮し、両末端にチオール基を持ったアゾベンゼン誘導体を分子設計した。チオール基は硫黄ーAu結合によってAu界面に親和性を有し、アゾベンゼン部位は光照射によってシスートランス異性化が可能である。実際にはチオール基とキラル炭素を有するアミノ酸の一種であるシステインを採用し、アゾベンゼン両端にアミド結合を介して修飾した。この目的物は、保護ー脱保護過程等の多段階合成で得られ、各ステップ生成物はNMR, IR等により同定した。水ーアセトニトリル溶液中で、得られたジシステイン修飾アゾベンゼンに紫外光及び可視光を交互に照射することで、可逆的な異性化挙動が分光学的手法により確認できた。・Auナノロッドへのジシステイン修飾アゾベンゼンの導入シード成長法によって調製したAuナノロッドコロイド分散液にジシステイン修飾アゾベンゼン溶液を混合することで、Au界面への導入に成功した。様々な導入条件を検討した結果、水ーアセトニトリル溶液中で、15時間程度で導入反応が飽和することを見出した。この際、近赤外光波長域に極大吸収波長が現れるAuナノロッドの局在表面プラズモン共鳴由来の吸収帯が明らかに長波長シフトした。このことは、Auナノロッドの短軸同士が連なったend-to-end型組織体の形成を意味し、ワイヤー状のキラル組織体が伸長に関して意義深い。また電子顕微鏡観察や電気化学測定からも組織体形成が立証できた。本研究課題では、異方性を有する金属ナノロッドに光学活性なフォトクロミック分子を導入して、光応答性を示す金属ナノロッド組織体を創製する事が目的である。平成26年度までに可逆的光異性化が可能なジシステイン修飾アゾベンゼン(CysAZOCys)を導入した金(Au)ナノロッド組織体の形成に成功した。この事を踏まえて平成27年度に実施した研究成果の概要は以下の通りである。1.CysAZOCys導入Auナノロッド組織体の光応答性CysAZOCysによるAuナノロッド組織化では、局在表面プラズモン共鳴由来の吸収帯の長波長シフトを示すend-to-end型組織体が構築されたことが分かった。この事は電子顕微鏡観察からも支持された。このend-to-end型組織体に紫外光を照射したところ、吸収スペクトルでは300-400nm付近のアゾベンゼン部位の吸収域で変化が観測できたが、円二色性スペクトルには変化が見られなかった。次にCysAZOCysに紫外光を照射してシス化した後に組織化を行った結果、非照射(トランス体)の場合と比較して組織体形成速度の減少が観測できたが、各組織体の円二色性スペクトルには明確な差異が確認できなかった。これはキラル情報の光制御は観測できないが、組織体の光応答性は可能であることを意味する。そこで、フォトクロミック骨格を下記2.のようなスピロピランで分子設計する事とした。2.リポ酸修飾スピロピラン誘導体の設計・合成Auと親和性を有する硫黄原子を有するスピロピラン誘導体を合成する為に、アルファ-リポ酸を利用して設計した。これは環状のジスルフィド、及びキラル炭素を併せ持つ。またスピロピランは光照射によってスピロピラン型ーメロシアニン型の異性化が可能である。具体的には、2,3,3-トリメチルインドレニンから水酸基を持ったスピロピランを合成し、エステル化によりアルファ-リポ酸を修飾した。ここで得られたリポ酸修飾スピロピランを用いてAuナノロッドの組織化を行う。平成27年度に実施した研究成果では計画した通り、まず、ジシステイン修飾アゾベンゼンを用いたAuナノロッド組織体の配列形態の解析を行い、ワイヤー状構造を有していることを立証でき、また、このAuナノロッド組織体の光応答性を分光学的手法によって証明した。更に、組織体のキラル情報の光コントロールを目指して、Auに親和性を持つ新たなスピロピラン誘導体の合成ルートの確立にも成功しているため、現在までに本研究課題はおおむね順調に進展している。本研究課題では重要な2つのプロセスとして粒子界面へのフォトクロミック分子の導入と、金(Au)ナノロッドと光学活性物質との相互作用によるキラル組織体の形成である。

平成27年度までにフォトクロミック架橋分子としてリポ酸修飾スピロピラン誘導体の合成に成功した。これらの事を踏まえて、平成28年度に実施した研究成果の概要は以下の通りである。1.リポ酸修飾スピロピラン誘導体のAuナノロッドへの導入とその光応答性組織体リポ酸修飾スピロピラン誘導体(SP1)溶液とAuナノロッド溶液とを室温で1時間静置させることで、粒子界面への導入が吸収スペクトルによって確認できた。この際、スピロピラン導入Auナノロッドは分散状態であった。その後、紫外光を照射した結果、Auナノロッドの長軸側に関する表面プラズモン共鳴(LSPR)に起因する吸収帯の長波長シフトが観測された。更に、電子顕微鏡観察によってend-to-end型組織体が構築されていることが分かった。これはスピロピラン導入Auナノロッド組織体が光応答性を有する事を意味する。2.タンパク質を利用したキラルなAuナノロッド組織体の形成Auナノロッド溶液に多様性を有するタンパク質を添加した所、表面プラズモン共鳴に起因する吸収帯の明らかな変化が観測された。特に、アルブミンタンパク質の場合においてLSPRピークの短波長シフトが見られた。この短波長シフトはAuナノロッドのside-by-side型組織化を意味し、電子顕微鏡観察結果もこれを支持した。ヒト血清アルブミンを添加した時の円二色性(CD)スペクトルは最も大きな光学活性を示した。用いたAuナノロッドはカチオン性界面活性剤によって保護されている為に、この組織化には静電的相互作用が1つの要因であると示唆された。この結果からタンパク質によるキラルなAuナノロッド組織体の形成が可能である事が明らかとなった。フォトクロミック分子を導入した異方性金属ナノロッドの光応答性及びタンパク質を不斉源としたキラル金属ナノロッド組織体の創製について検討した。チオール基修飾光異性化分子を金属ナノロッドコロイド分散液に添加して光照射を行ったところ、ネットワーク状の組織体が確認された。これは光応答性を有する金属ナノロッド組織体が形成されたことを意味する。また、金属ナノロッドコロイド分散液へ天然不斉源の一種として働くタンパク質を添加した結果、大きな異方性因子を示すキラル組織体の構築が明らかとなった。以上より、光異性化分子導入や不斉分子との相互作用よってキラル金属ナノロッド組織体が創出できることが示唆された。平成26年度に実施した研究成果では計画した通り、まず、Auナノロッド界面への光学活性なフォトクロミック導入剤であるジシステイン修飾アゾベンゼンの合成ルートの確立に成功した。このジシステイン修飾アゾベンゼンがシスートランス光異性化可能であることを確認した上で、Auナノロッドへの導入方法も確立できた。また、この際、Auナノロッド組織体の形成を立証できているため、現在までに本研究課題はおおむね順調に進展している。今後は、まずリポ酸修飾スピロピラン誘導体のAuナノロッド界面への導入法の最適条件を検討し、得られるAuナノロッド組織体の配列形態、及びアルファ-リポ酸由来のキラリティーの影響を検証する。この際、紫外可視分光法による光学分析や電子顕微鏡観察、電気化学測定等により、配列形態を調査する。また、粒子径分布測定を行い、組織化による平均サイズ変化の確認と分散程度を定量的に評価する。
小児がん経験者の疾患認知に着目した就労支援プログラムの開発

1.実施概要:小児がん経験者の疾患認知が就労状況・職務パフォーマンスに関連するかを明らかにすること、小児がん経験者の就労状況・職務パフォーマンスといった社会参加・活動を向上する上で、疾患認知に着目した就労支援プログラムを検討することを目的とした。平成30年度は、小児がん経験者の疾患認知として心的外傷後成長Posttraumatic Growthに着目し、一般の大学生を対象とした心的外傷後成長に関する測定尺度の開発、および心的外傷後成長と社会参加・活動の質の関連を検証した。2.実施内容:心的外傷後成長を測定する尺度として、Posttraumatic Growth Inventory-X(PTGI-X)が適当であると考えられ、PTGI-X日本語版の妥当性・信頼性の検証を行った。平成30年6月12月に、関東・九州・近畿地方に居住している大学生を対象とし、PTGI-Xおよび社会参加・活動に関するアンケート調査を行った。大学生252名からデータを収集し、250名のデータを最終的に分析した。解析の結果、PTGI-Xは日本人を対象とした調査においても十分な信頼性・妥当性を確保できると考えられた。また、同じデータを用いて、心的外傷後成長と社会参加・活動の関連を検討した。解析の結果、PTGI-Xのうち、精神的変容Spiritual Changeのドメインは社会参加・活動と関連していた。このため、社会参加・活動の質を向上する上で、心的外傷後成長における精神的変容Spiritual Changeに着目する重要性が示唆された。日本人を対象として、心的外傷後成長を測定できるツールであるPosttraumatic Growth Inventory-Expanded(PTGI-X)を開発し、その信頼性・妥当性を検証した。また、PTGI-Xを用いて、心的外傷後成長が職務パフォーマンスや就労状況などの社会参加・社会活動に影響するかを検証した。今後、心的外傷後成長を測定できるツールであるPTGI-Xや社会参加・社会活動との関連における知見の精緻化を行っていく。平成30年6月12月まで、一般集団を対象としたPTGI-Xおよび就労状況・職務パフォーマンスに関する調査を行い、データ入力を終了した。統計解析ソフト(SPSS、R、AMOS)を用いて、就労状況・職務パフォーマンスと心的外傷後成長の関連を検討した。今後、PTGI-Xの信頼性・妥当性および就労状況・職務パフォーマンスと心的外傷後成長の関連についての知見を精緻化するために追加調査を行い、論文執筆・英文雑誌投稿、学会発表により成果発表する予定である。1.実施概要:小児がん経験者の疾患認知が就労状況・職務パフォーマンスに関連するかを明らかにし、小児がん経験者の就労状況・職務パフォーマンスに対して、疾患認知に着目した就労支援プログラムを開発することを目的に、平成27年度は、研究協力施設である大学病院・小児専門病院におけるフィールド調査に向けた、研究協力施設での倫理審査およびフィールド調整、追加の文献レビュー、これらに基づいた研究プロトコルの改訂を行った。2.実施計画:1)研究協力施設での倫理審査:平成28年7月9月に、先行研究の知見と専門家からの聞き取りを行い、研究プロトコルや質問紙、倫理審査関連書類等を作成し、倫理審査を行った。しかし、研究協力施設における倫理審査に時間を要した。2)研究協力施設とのフィールド調整:調査を予定していた研究協力施設との調整において、想定していた対象者数より少ないことが判明し、新たな研究協力施設との交渉が必要であった。このため、九州地方の大学病院に新たに研究協力の打診およびフィールド調整を行った。3)追加の文献レビュー、これらに基づいた研究プロトコルの改訂:研究協力施設の医師・看護師より研究プロトコルに対する意見があり、追加の文献レビューが必要となった。これらに基づいた研究プロトコルの改訂を行った。4)研究協力施設における横断的観察調査の実施:2017年4月6月から関東地方および九州地方の大学病院・小児専門病院で、成人期小児がん経験者を対象とした横断的観察調査を予定しており、現在、フィールドとの最終的な調整中である。当初の2016年度の計画では、2016年11月よりフィールド調査を介する予定であった。しかし、急きょ、フィールド調査を予定していた研究協力施設の事情(対象者数が少ない等)により、研究協力施設との調整および新たな研究協力施設との交渉に時間がかかる結果となった。また、フィールド交渉の中で質問紙の内容など研究計画の変更も必要であった。現在、2017年度4月6月の調査開始に向けた最終調整中である。よって、当初の計画よりやや遅れていると考える。1.実施概要:小児がん経験者の疾患認知が就労状況・職務パフォーマンスに関連するかを明らかにし、小児がん経験者の就労状況・職務パフォーマンスに対して、疾患認知に着目した就労支援プログラムを検討することを目的とした。平成29年度は、疾患認知として心的外傷後成長Posttraumatic Growth(PTG)に着目し、まず一般の大学生・社会人を対象としたPTGに関する測定尺度の開発を行った。2.実施計画:小児がん患者・経験者の疾患認知に関する幅広いレビューを行い、疾患認知としてPTGに着目することとした。PTGを測定する尺度として、Posttraumatic Growth Inventory-X(PTGI-X)が適当であると考えられたが、日本語版の妥当性・信頼性が検証されていなかった。このため、1平成29年1月4月に大学生を対象としたアンケート調査、2平成29年11月平成30年2月にかけて、大学生・社会人を対象としたアンケート調査を行った。1は、関東地方に居住している大学生を対象とし、PTGI-Xの項目内容に関するアンケート調査を行った。

大学生257名からデータを収集し、PTGI-Xの項目内容の捉え方およびその性差を分析した。解析の結果、PTGに対する日本人特有の考え方を明らかにした。2は、1の結果を踏まえ、PTGI-Xの妥当性・信頼性を検証するために、関東地方および九州地方に居住している20歳以上の大学生・社会人を対象としたアンケート調査を行った。平成30年3月にデータ入力を終了した。現在、データの分析を行っており、PTGI-Xの妥当性・信頼性を検証する。当初の計画とは異なり、小児がん患者・経験者にとって重要と考えられる疾患認知としてPTGに着目したため、新たに文献レビューが必要となった。また、PTGは比較的新しい概念であり、複数の調査を踏まえた上でPTGI-X日本語版の開発を行う必要性があり、時間を要した。よって、当初の計画よりやや遅れていると考える。1.実施概要:小児がん経験者の疾患認知が就労状況・職務パフォーマンスに関連するかを明らかにすること、小児がん経験者の就労状況・職務パフォーマンスといった社会参加・活動を向上する上で、疾患認知に着目した就労支援プログラムを検討することを目的とした。平成30年度は、小児がん経験者の疾患認知として心的外傷後成長Posttraumatic Growthに着目し、一般の大学生を対象とした心的外傷後成長に関する測定尺度の開発、および心的外傷後成長と社会参加・活動の質の関連を検証した。2.実施内容:心的外傷後成長を測定する尺度として、Posttraumatic Growth Inventory-X(PTGI-X)が適当であると考えられ、PTGI-X日本語版の妥当性・信頼性の検証を行った。平成30年6月12月に、関東・九州・近畿地方に居住している大学生を対象とし、PTGI-Xおよび社会参加・活動に関するアンケート調査を行った。大学生252名からデータを収集し、250名のデータを最終的に分析した。解析の結果、PTGI-Xは日本人を対象とした調査においても十分な信頼性・妥当性を確保できると考えられた。また、同じデータを用いて、心的外傷後成長と社会参加・活動の関連を検討した。解析の結果、PTGI-Xのうち、精神的変容Spiritual Changeのドメインは社会参加・活動と関連していた。このため、社会参加・活動の質を向上する上で、心的外傷後成長における精神的変容Spiritual Changeに着目する重要性が示唆された。日本人を対象として、心的外傷後成長を測定できるツールであるPosttraumatic Growth Inventory-Expanded(PTGI-X)を開発し、その信頼性・妥当性を検証した。また、PTGI-Xを用いて、心的外傷後成長が職務パフォーマンスや就労状況などの社会参加・社会活動に影響するかを検証した。今後、心的外傷後成長を測定できるツールであるPTGI-Xや社会参加・社会活動との関連における知見の精緻化を行っていく。
超高輝度高分解能ビームラインの研究

本研究成果の概要は次の通り。・実験標的上でビーム粒子位置と運動量に強い相関を持たせた運動量分散型のビーム光学系を設計をした。研究会を通して反陽子を用いた物理の可能性について議論し、必要なビームラインについて検討した。・J-PARCハドロン実験施設の2次ビームライン建設を通してこの問題に取り組んだ。標的の直下流の電磁石を真空中で運転することにより、さまざまな熱的放射線的困難を解決した。・K中間子を分離抽出するための静電分離装置を開発した。K1.8BRにおける2次ビームの調整で、π中間子と陽子の分離が確認された。超高輝度高分解能ビームラインでも同じコンセプトで必要な性能が期待できることがわかった。・2次ビームによるプラスチックシンチレータからのシンチレーション光をイメージインテンシファイア管(IIT)付き撮像管カメラで撮影することによりビームプロファイルの観測を試みた。1.1MBqの^<90>Srベータ線源による蛍光像の撮影に成功した。我々の研究目的はこれまでにない超高輝度高分解能2次ビームラインの開発研究を行うことである。本年度の研究実績はつぎのとおりである。(1)ビームラインの設計ビームラインの光学設計を進め、高輝度高分解能2次ビームラインの基本的な光学パラメータを得、期待されるビーム強度、分解能、純度を明らかにした。とくに、ビームラインと散乱スペクトロメータの運動量分散を整合させる手法を検討し、高分解能分光研究に有効であることを明らかにした。今後さらに改良する。(2)2次ビーム取り出し部の設計耐熱耐放射線電磁石とコリメータについて、仕様に対する検討を進めた。J-PARCのK1.8ビームラインに建設される機器、特にK1.8ビームライン最上流部の大型真空槽内に設置される電磁石の仕様や配置の設計および中間像スリットの設計に反映された。(3)ビームの高純度化必要な静電分離装置の仕様とスリット・コリメータの材料および形状について光学設計と連携しながら検討を進めた。材料としてタングステン合金が優れていることがわかった。(4)ビームモニターの開発2次ビームラインに特化したビームプロファイルモニターについて検討した。J-PARCのK1.8ビームラインの中間像スリットにおけるプロファイルモニターの設計に反映された。(1)ビームラインの設計前年度に得られた高輝度高分解能2次ビームラインの光学パラメータの改良を行い、基本設計を完成させた。また、既存の電磁石の再利用の可能性も検討した。(2)2次ビーム取り出し部の設計耐熱耐放射線電磁石とコリメータについて設計を詰め、J-PARCのK1.8BR用の機器製作に反映させ、実機として設置運転した。(3)ビームの高純度化前年度に進めた必要な静電分離装置の仕様とスリット・コリメータについてJ-PARC1.8BR用の機器製作に反映させ、実機として設置運転した。(4)ビームモニターの開発2次ビームラインに特化したビームプロファイルモニターについて開発をおこなった。とくに、(一次ビームに比較して)弱いビームによるシンチレーション光を観測し2次元プロファイルが観測可能なことを確認した。
STR多型マーカーに見られたde novo変異の塩基配列解析

STRの一つであるvWF locusにおいて親に変異が生じて子に遺伝し、その変異はいずれの親由来であるかは判定出来なかった例が存在した。そこで、同じイントロン内に存在する別の2種のSTRを含む領域を父、子、母の3人についてPCR増幅し、その産物をクローニングした後に塩基配列を調べた結果、父親の長い方のアレルの反復数が1回増えたことが分かった。さらに日本人278人についてvWFのタイピングを行ったところ、8種の対立遺伝子(アレル)と25の遺伝子型が観察された。アレル14を除いたアレル15からアレル21までの7種のアレルは5′-flanking retion-TCTA(TCTG)4(TCTA)nTCCA TCTA T-3′flanking regionの構造を持ち、nの値が10回16回まで繰り返していた。アレル14はTCTA,TCTG,TCCAの4塩基からなる3種の組み合わせで構成された複雑な塩基構成であった。このアレル14にはTからCへのトランジションが存在した。親子鑑定肯定例95例についてvWFのタイピングを行ったが、親子で矛盾するアレルは観察されなかった。現在、突然変異であることを証明する手段がない。今後は、single uncleotide polymorphismsを用いたハプロタイプでの突然変異の証明が必要であると考えられる。Short tandem repeat(STR)多型のなかのvWF locusにおいて親に変異が生じ、その変異は父親由来であることを明らかにしたが、父親の2本のアレルの内のいずれのアレルが子に遺伝したかについては判定出来なかった。そこで、同じイントロン内に存在する別の2種のSTRを含む約800bPの領域を父、子、母の3人についてPCR増幅し、その産物をクローニングした後に塩基配列を調べた。その結果、父親の2本のアレルのうち、塩基数の多いアレルの反復数が1回増加して子のde noνoのアレルを生じたことが判明した。変異を起こした父親のアレルの遺伝子頻度について、日本人278人をタイピングし算出したところ、0.0917であった。このアレルの頻度はvWFで観察された8アレルのなかで5番目の値を示し、3番目に多い塩基数を持つアレルであることが明らかになった。このアレルはシークエンスの結果から5'フランキング領域TCTA(TCTG)_4(TCTA)_<14>TCCATCTAT3'プライマー領域から構成されてた。vWFで観察された8アレルの塩基配列を調べたところ、塩基数の1番少ないアレルで5'ランキング領域TCTATCTGTCTA(TCTG)_4(TCTA)_3TCCA(TCTA)_3TCCATCCAT3'プライマー領域の塩基配列を示し、3'フランキング領域におけるTCTA→TCCAへのトランジションを新たに確認した。しかし、変異を起こした父親のアレルでは、この現象は見られなかった。また、親子鑑定肯定例95例についてvWFのタイピングを行ったが、親子で矛盾するアレルは観察されなかった。今後の研究に関する計画としては、セルソーターを用いて成人男性の精子を1個に分離し、Primer Extension Preamplification(PEP)法を用いてPCR増幅してからSTR多型のタイピングを行い、変異率と変異の生じる機構について解析を行うとともに、アレルを構成している塩基配列についても検討する考えである。Short tandem repeats(STR)を用いた親子鑑定は有力な検査法である。STR多型を用いる場合には突然変異についての検討が必要であると考えられたので、親子鑑定の肯定例43例に9種(CSF1PO,TPOX,TH01,F13A,FES,vWA,D16S539,D7S820,D13S317)のSTRの型判定を行った。いずれの例でも両親と子で矛盾する例は存在しなかった。

しかし、vWAとD7S820の2つのSTRにおいて市販のアレリックラダーよりも塩基数が多い領域にバンドが検出された1例(vWA)と少ない領域に検出された1例(D7S820)が存在し、それらのバンドはいずれも母から子へと遺伝していた。そこでそれぞれの塩基配列の解析を行ったところ、vWAで見られたアレリックラダー(アレル1320)よりも塩基数が多いアレルの塩基配列は5'FR-TCTA(TCTG)_4(TCTA)_<16>TCCATCTC T-3'FRであり、下線部分のTCTAの反復回数の違いによるアレル21であることが分かった。このアレルの出現頻度を調べたところ、0.0036(n=278)であり、アレル21を持つ3人の塩基配列はTCTAの16回繰り返し配列であった。アレル21の日本人での頻度は0.0010.002と報告されていることから、きわめて稀なアレルであると考えられる。一方、D7S820で見られたアレリックラダー(アレル614)よりも塩基数が少ないアレルは、その移動度からアレル5と考えられた。しかし、このアレルの塩基配列については現在までのところ明らかにできてはいない。このアレルについての出現頻度や塩基配列に関する報告はないので、このアレルも頻度が低いと考えられる。
バイリンガルの認知機能

バイリンガルの記憶表象については、2つの言語がそれぞれ独立した記憶表象をもっていると考える説と、言語に依存しない共通の概念システムが存在すると考える説がある。この2つの説を検討するにあたって、本研究では、バイリンガルの熟達度の指標として一番適切なものを選択するために、ストループ干渉量・言語/色彩値・単語読み時間・絵画命名時間などの認知的な指標と、滞在年数・現在の言語環境・被験者自身による自己評定・第二言語の学習方法などの言語的背景との関連を検討する。また干渉パターンの結果から記憶表像の構造についても示唆を得る。<方法>被験者:日本語と中国語のバイリンガルである中国人留学生10人。刺激材料:石王(1990)で用いられた線画と日本語の聴覚単語。単語と絵の組み合わせによって5種類の一致度がつくられた。実験計画:反応言語(2)×SOA(2)×一致度(5)の3要因計画法で、すべて被験者内要因。手続き:個別実験。最初に線画の日本語(中国語)の名辞が確認された。その後刺激提示の概要が説明され、提示された絵の名前をできるだけ速く日本語(中国語)で答えるように教示がされ、答えるまでの反応時間(RT)が測定された。被験者の言語的背景を調べるための質問紙が、実験後に行われた。<結果と考察>両言語において有意な干渉がみられ、言語間干渉がみられることからは、2つの言語の記憶表像は共通のものだということが推察される。反応言語による違いでは、SS条件(線画と単語は同一)が日本語では促進を示しているのに中国語では大きな干渉を示している。これは聴覚提示の単語が日本語であるので、絵と同じ単語を言われると思わず日本語を言ってしまいそうになるためだと考えられる。また、日本語では意味関連の程度によって干渉量が異なって現れたが、中国語ではそれが見られない。中国語で答える際には、日本語の単語の意味は関わらないことになる。この結果からは、それぞれの言語にそれぞれの記憶表象があるという可能性が考えられる。ただ、被験者の言語的背景と干渉量との関係については一定の結果が得られず、今後さらに検討することが必要である。手続き:個別実験。
平均場を越えたアプローチによる中重核の励起メカニズムの探求

本研究では様々な理論により中重核領域の原子核構造について研究を行い、次のような研究成果を得た。(1)2核子コア結合模型を用い、質量数130領域の奇奇核のダブレットバンドを調査した。波動関数を解析することで、これらの状態のレベルスキームは中性子1個と陽子1個の角運動量の箸配位と偶偶核のコアの四重極励起が弱く結合したことにより生じることを見出した。(2)中性子過剰なSe、As、Ge、Gaアイソトープに対して殻模型計算を行い、計算で得られたエネルギーレベルと電磁遷移を実験値と比較した。殻模型の結果の解析から、高スピン領域では0g_<9/2>軌道にある中性子2個の整列が現れることを確認した。(3)遷移核の構造を調べるため、生成座標法による計算の新しいアルゴリズムを開発した。この理論のSe、Ge偶偶核への適用により質量数80領域の三軸非対称変形の重要性を示した。本研究では,質量数130領域の奇奇核に現れるダブレットバンドに対して新たな枠組みにより計算を行い,原子核の励起メカニズムを明らかにした。中重核領域の奇奇核の数値解析はこれまでに核子対殻模型により行われてきたが,計算で得られた波動関数は非常に複雑になるため,一部の励起状態の構造は解明されていなかった。研究代表者等は2核子コア結合模型という枠組みを構築し,質量数130領域のダブレットバンドの数値解析を実行し,幅広い核種のエネルギー準位や電磁遷移の実験値を再現した。計算で得られた波動関数を解析したところ,核子対殻模型計算によって示された原子核の新しい励起メカニズムの起源を再確認すると共に,未解明であった励起状態の構造を明らかにした。この研究は, The European Physical Journal A誌に発表した。また,研究代表者等は殻模型を用い,質量数80領域の偶偶核の精密計算を行った。この領域の核子間にはたらく相互作用の研究は現在まであまり行われてこなかったため,本研究では現象論的な有効相互作用を用いた。計算で得られた波動関数を核子対殻模型により解析し,質量数80領域に現れる偶偶核の集団運動と単一粒子運動のメカニズムを明らかにした。この研究は, Physical Review C誌に発表している。さらに,平均場を用いた生成座標法の理論体系の整備している。この枠組みで単一軌道を用いた予備的な計算を行い,殻模型計算のエネルギー準位を再現できることを確認した。今後,この理論体系を整備し,幅広い核種領域の原子核構造を明らかにする予定である。本研究の成果は,質量数80領域の偶偶核・奇核について殻模型により精密計算を行い,原子核の励起メカニズムを明らかにしたことである。この領域の核子間にはたらく相互作用の研究は現在まであまり行われてこなかったため,本研究では現象論的な有効相互作用を用いて数値解析を実行し,幅広い核種のエネルギー準位や電磁遷移の実験値を再現した。殻模型による結果を核子対殻模型により解析したところ,質量数80領域に現れる偶偶核の低エネルギー状態は主に集団運動核子対で作られており,高スピン状態は0g_<9/2>軌道にある中性子2個の整列の寄与が大きいことを確認した。また本研究では,質量数100領域の奇奇核に現れるダブレットバンドに対し2核子コア結合模型を適用し,幅広い核種のエネルギー準位や電磁遷移の実験値を再現することに成功した。計算で得られた波動関数を解析したところ,質量数100領域のダブレットバンドは,中性子1個と陽子1個の角運動量の箸運動と偶偶核のコアの励起により生じることを明らかにすると共に,この励起メカニズムは質量数130領域で解明されている構造と同じであることを確認した。この研究は, Progress of Theoretical Physics誌に発表した。さらに,平均場を用いた生成座標法の理論体系を整備している。この枠組みで開放殻の予備的な計算を行い,殻模型計算のエネルギー準位を再現できることを確認した。今後,この理論体系を質量数80領域の原子核に適用し,この領域の原子核構造を明らかにする予定である。本研究の成果は,質量数80領域の偶偶核に対して生成座標法により数値解析を行い,三軸非対称変形の重要性を明らかにしたことである。研究代表者等は,この領域の偶偶核・奇核に対して現象論的な有効相互作用を用いた殻模型計算を行っている。本研究では殻模型の研究と同じ相互作用を用い,幅広い核種のエネルギー準位や電磁遷移の実験値を再現した。

波動関数を解析することにより,原子核の軸対称変形の効果を取り入れることで質量数80領域の偶偶核のイラストバンドを再現できること,三軸非対称変形の効果を取り入れなければガンマバンドを再現できないことを確認した。また,質量数130領域の原子核に対してシッフモーメントを計算すると共に,^<129>Xe原子の電気双極子モーメントを評価した。中重核領域のシッフモーメントの計算は,これまで平均場模型でしか行われてこなかったが,本研究では平均場を超えた枠組みである核子対殻模型により数値解析を実行した。原子核の波動関数は現象論的な有効相互作用を用い,幅広い核種のエネルギー準位や電磁遷移の実験値を再現するものを用意した。この計算結果により,質量数130領域のシッフモーメントは中性子の波動関数の寄与が陽子のよりも大きくなり,さらに原子核の集団運動の効果を考慮しなければならないことを明らかにした。さらに本研究では,質量数100領域の奇奇核に現れるダブレットバンドに対し2核子コア結合模型を適用し,幅広い核種のエネルギー準位や電磁遷移の実験値を再現している。計算で得られた波動関数を解析したところ,中性子1個と陽子1個の相互作用は四重極相互作用の効果が大きいことを明らかにすると共に,集団運動の効果はガンマバンドと呼ばれる状態の効果が小さいことを確認した。
変異抑制性新規ストレス応答反応を媒介するシャペロンHSP27とプロテアーゼ複合体

本研究の目標は、ヒト細胞にUV照射した直後、HSP27と共にプロテアーゼが媒介する新規のストレス応答反応を明らかにすることである。これまでのデータから、新規のストレス応答に関わると思われるプロテアーゼ活性が、HSP27自身にあるか、またはHSP27と結合した分子にあると考えられた。そこで、本研究では、まずHSP27自身のプロテアーゼ活性について検証をおこなった後、HSP27と相互作用する分子の検索からプロテアーゼを探索・同定を試みた。HSP27をGST(グルタチオンSトランスフェラーゼ)との融合タンパク質として、大腸菌の系で精製し、精製標品にプロテアーゼ活性が見いだされるか検証した。GSTアフィニティークロマトグラフィーで精製したHSP27には、弱いながらも一部のペプチドを分解する活性が見いだされたが、その後のゲル濾過や陰イオン交換カラムによる精製段階でその活性はHSP27から分離することがわかり、HSP27自身にプロテアーゼ活性は見いだせなかった。次に、GSTタグを利用してHSP27を結合したカラムに、ヒト細胞の抽出液を通し、カラム(つまりHSP27)と結合した分子をGST-HSP27とともにカラムから溶出して、HSP27と相互作用する分子の検索をおこなった。GST-HSP27とともに溶出された画分について、プロテアーゼ活性の有無を調べたところ弱いながらも活性が確認され、HSP27に結合するプロテアーゼの存在が示唆された。また、SDS-PAGEでHSP27に結合したタンパク質と思われるバンドについて、ゲルから切り出した後MS/MSシークエンシングで同定をおこなった。同定された分子中にプロテアーゼはなかったものの、いくつか興味深い分子が存在した。そのうちの一つは、HSP27と協調して熱ショック時にタンパク質合成停止にかかわる重要な働きをすることが考えられた。
フラビン酵素における選択的触媒機能の発現機構

当研究により得られた成果の概要を以下にまとめる。1.アドレノドキシン還元酵素C-13標識したFADを用いて、本酵素のC-13NMRスペクトルを測定した。得られたスペクトルから、NADPの結合に伴いFADの4a位の炭素の電子密度が特に低下することが示唆された。この結果は、本酵素にNADPHが結合することにより、フラビンの4a位の電子密度を低下させ、NADPHからFADへの電子移動の促進をはかることを示唆するものと思われる。2.旧黄色酵素この酵素の活性部位を検索するため、8-フルオロ-FMN(8FFMN)で再構成し、=-キモトリプシンで限定加水分解した。その結果14Kと34Kとに限定加水分解され、14KドメインのN末端ロイシンと8FFMNが反応し、共有結合型フラビンタンパク質となった。この結果は、旧黄色酵素の14Kドメインにフラビン結合部位が存在し、FMNのキシレン部分が14KドメインのN末端近くに存在することを示している。3.中鎖アシルC_0A脱火素酵素C-13やN-15標識したFADを用いて、本酵素のC-13、N-15NMR測定を行なった。アセトアセチルC_0Aとの複合体形成により、フラビンの5位の窒素の電子密度に顕著な変化が観測された。また、共鳴ラマンスペクトルから、このアセトアセチルC_0Aとの複合体やオクタノイルC_0Aとの反応で生じる紫色複合体において、結合しているリガンドは、エノレート型で1位の水酸基が解離した陰イオンとなっていることが明らかとなった。これらの結果から、アシルC_0Aの2位のプロトン引き抜きが容易になっていることがよく説明された。旧黄色酵素(OYE)は、フラボドキシンと同様にFMNを補酵素とするフラビン酵素である。この両フラビン酵素の活性域近傍には、ともに酸性アミノ酸残基が多く存在することや、補酵素であるFMNのキシレン部分がタンパク質表面に露出していることなど類似した部分が存在することを明らかにしてきた。これらの結果をもとに、OYEとシトクロムCの相互作用を、フラボドキシンとシトクロムCの複合体と対比して、8位のメチル基をフッ素で置換した8FーFMNやCー13で標識したFMNで再構成したOYEを用いて調べた。8FーFMNで再構成したOYEの8位のフッ素のNMR信号は、シトクロムCとの結合に伴い、2.0ppm高磁場側に移動した。また、4,4a,10a位のCー13NMR信号は、複合体形成によりそれぞれ0.1,0.3,0.5ppm低磁場側に移動し、2位のCー13NMR信号は、0.2ppm高磁場側に移動した。これらの変化に対するシトクロムCの滴定曲線から、複合体の解離定数は0.3mMと求められた。複合体形成に伴うNMR信号の移動は、複合体でのOYEのフラビン環のウラシル部分の電子密度の低下と、キシレン部分の電子密度の上昇によるものと解釈される。以上の結果とフラボドキシンからシトクロムCへの電子伝達がフラビン環のキシレン部分のメチル基を介して行なわれることを示唆する結果から、次のような電子伝達促進の仮説が考えられる。すなわち、OYEに電子受容体であるシトクロムCが結合することにより、フラビン環の電子密度分布がウラシル部分からキシレン部分に移動し、この複合体形成がキシレン部分から電子受容体への電子伝達を容易にしている。

ブタ腎臓より精製した中鎖アシルCoA脱水素酵素の酸化型、還元型における補酵素FADの電子状態、ならびに基質アナログであるアセトアセチルCoAとの複合体やオクタノイルCoAとの反応で生じる紫色中間体について、核磁気共鳴法と共鳴ラマン分光法などを用いて調べた。その結果、以下に示すフラビン酵素の触媒機能の調節制御に関する貴重な知見を得ることができた。酸化型については、C-13およびN-15NMRの測定結果から、FADの2位と4位のカルボニル基および1位と5位の窒素原子がタンパク質部分と水素結合しており、特に4位のカルボニル基と5位の窒素原子の水素結合が強いことが示唆された。還元型では、補酵素FADが中性型ではなく陰イオン型還元フラビンであることが明らかとなった。また、4a位の炭素上の電子密度が、酸化型、還元型をとわず、極めて低くなっていることも明らかとなった。この結果は、中鎖アシルCoA脱水素酵素と分子状酸素との反応が抑制され、酸化酵素としての働きを阻害していることをよく示しており、触媒機能の調整作用を示すものである。アセトアセチルCoAとの複合体については、FADは酸化型でありアセトアセチルCoAはエノレート型で1位の水酸基の解離した陰イオン型となっていることが明らかとなった。また、紫色中間体は、オクタノイルCoAとの反応で生じた還元型FADと基質のオクタノイルCoAとの複合体であることが明らかとなった。この複合体においても、オクタノイルCoAはエノレート型で1位の水酸基の解離した陰イオン型になっていることが示された。これらの結果から、この酵素の反応初期におこるアシルCoAの2位のプロトン引き抜きが、エノール型陰イオンをとることにより容易になっていることが示された。
水痘帯状疱疹ウイルスタンパクIE62に対する免疫応答が起こす痛覚増強機序の解明

帯状疱疹痛および帯状疱疹後神経痛は難治性の神経因性疼痛疾患である。疼痛のメカニズムは未だ不明であり,また既存の鎮痛薬に抵抗性を示すため,新規鎮痛薬の開発が急務となっている。申請者はこれまでの研究で,当該疾患の原因ウイルスである水痘・帯状疱疹ウイルスのタンパクIE62に対する免疫応答が,BDNFの生物活性を上昇すること,末梢神経損傷モデルマウスの疼痛反応を増強することを見出した。本研究の成果より,帯状疱疹痛モデルマウスの疼痛反応をIE62抗体が増強すること,帯状疱疹後神経痛への移行率を増大させることを明らかにした。また,網羅的遺伝子発現解析の結果,Galectin-3の遺伝子発現が脊髄後角において増大し,この分子が疼痛に密接にかかわっていることを明らかにした。しかしながら,抗IE62抗体による痛覚増強機序にはGalectin-3が関与していないことが明らかとなった。帯状庖疹痛および帯状庖疹後神経痛は難治性の神経因性疼痛疾患である。疹痛のメカニズムは未だ不明であり,また既存の鎮痛薬に抵抗性を示すため,新規鎮痛薬の開発が急務となっている。研究代表者はこれまでの研究で,当該疾患の原因ウイルスである水痘・帯状庖疹ウイルス(VZV)のタンパクIE62に対する抗体が,BDNFの活性を上昇させ,末梢神経損傷による神経因性塔痛モデルマウスの疼痛反応を増強することを見出した。本研究では,帯状庖疹痛と帯状庖疹後神経痛のメカニズムの解明を目指し,抗IE62抗体による痛覚増強メカニズムに関して解析を行なった。研究代表者がすでに確立している単純ヘルペスウイルス1型(HSV-1)感染による,マウス帯状庖疹痛を抗IE62抗体が増強するかどうか検討したところ,抗IE62抗体投与群では,コントロールとして用いたNormal IgG投与群と比較して,疼痛反応の増強効果が見られた。HSV-1感染マウスは,ヒト帯状庖疹様の皮膚病変を発症し,皮疹が治癒しても一部のマウスにおいては疼痛反応が残存することから,帯状庖疹後神経痛のモデルマウスとして研究代表者は確立している。そこで帯状庖疹後神経痛への発症率を調べたところ,抗IE62投与群ではコントロールと比較して有意に発症率が増大していた。以上の結果から,ヒト帯状庖疹および帯状庖疹後神経痛患者において,VZVが産生するIE62タンパクに対する抗体が体内で産生され,この抗体(抗IE62抗体)が疼痛の発症に強く関与していることが示唆された。帯状疱疹痛および帯状疱疹後神経痛は難治性の神経因性疹痛疾患である。痙痛のメカニズムは未だ不明であり,また既存の鎮痛薬に抵抗性を示すため,新規鎮痛薬の開発が急務となっている。研究代表者はこれまでの研究で,当該疾患の原因ウイルスである水痘・帯状疱疹ウイルス(VZV)のタンパクIE62に対する抗体が,BDNFの活性を上昇させ,末梢神経損傷による神経因性疾痛モデルマウスの痙痛反応を増強することを見出した。平成21年度の研究において,研究代表者がすでに確立している単純ヘルペスウイルス1型(HSV-1)感染によるマウス帯状疱疹痛を,抗IE62抗体が増強することを見出した。また,帯状疱疹後神経痛への移行率もIE62抗体投与群で増大することを見出した。平成22年度の研究においては,これらの疾痛増強メカニズムを解明する目的で,研究を遂行した。脊髄後角においてHSV-1感染により変動する遺伝子をGeneChipシステムを用いて網羅的に解析した。その結果,139個の遺伝子がHSV-1感染により発現上昇することが分かった。中でも,17倍に増大したgalectin-3(Gal-3)についての詳細な解析を行った。Gal-3は,脊髄後角表層のマクロファージ/マイクログリアに発現しており,神経細胞,アストロサイト,T-細胞には認められなかった。Gal-3欠損マウスにおいてHSV-1誘発の痺痛反応は減弱し,Gal-3リコンビナントタンパクを脊髄くも膜下腔内に投与すると,アロディニアを誘発した。以上の結果は,Gal-3がHSV-1誘発の痺痛反応に関与することを示すものである。IE62抗体を投与したマウスの脊髄後角におけるGal-

3発現量は,NormalIgG投与群と比較して有意な差は認められなかった。以上の結果より,帯状疱疹痛には脊髄後角におけるGal-3が関与していることが示唆されたが,IE62抗体による痛覚増強メカニズムにはGal-3は関与しない可能性が示唆された。
恐怖記憶を抑制する神経回路の同定と同回路におけるAMPA受容体の役割解明

経験によって獲得される恐怖や嫌悪の記憶を場合に応じて弱めることは、ヒトを含めた動物の生存に有用である。そのための脳機能のひとつとして「経験性恐怖記憶を弱める学習」が知られている。この学習は、海馬、扁桃体、前頭前野の3つの脳部位の連携により行われる。我々は、主に前頭前野に作用してこの学習を促進する物質を見いだし、その特徴付けを行った。このような物質はPTSD等の不安関連障害に対する治療薬開発に役立つ可能性がある。パブロウ型条件性恐怖記憶は主に扁桃体における連合学習により形成されると考えられている。この連合とは、恐怖刺激を被った場所(文脈)や感覚情報(音や匂い)等、普段は恐怖感を覚えない中性の刺激(条件刺激)と、具体的に身体的・精神的な苦痛を伴う「嫌悪刺激」との連合を指す。この連合が成立した動物は、もはや嫌悪刺激なしで条件刺激に対して「恐怖応答」を示すようになる。このようにして恐怖記憶を獲得した動物を繰り返し条件刺激のみに再暴露した場合、その動物の恐怖応答が徐々に減弱していく現象、Fear extinction、が知られている。Fear extinctionは恐怖記憶の消去ではなく、獲得された連合学習に対する抑制性の学習であり、この抑制性学習の固定や想起に主要な役割を果たす神経回路のひとつとして前頭前野(主にmedial prefrontal cortex, mPFC)から扁桃体への投射が考えられている。Fear extinctionは、PTSD、パニック障害、強迫性障害等の不安関連障害に対する治療法である「認知行動療法」の基礎プロセスと考えられており、その詳細の研究は同療法を進歩させる上で重要である。我々はこれまでに、独自開発してきたFlop型AMPA受容体趣向性同受容体増強薬PEPAを用いることにより、mPFCの活性化がFear extinctionに重要であることを報告した。本研究ではこの成果基盤の上に、マウスを用いてFear extinctionの回路について更に検討を加えた。平成19年度の成果として、Fear extinctionにおけるmPFCの役割が、恐怖記憶の新旧により全く異なることを見いだした(論文投稿中)。また、ニューロペプチドのひとつニューロテンシンがその1型受容体活性化→ドーパミン受容体抑制→NMDA受容体活性低下というシグナルの流れを介して、扁桃体内シナプス可塑性を抑制性に制御すること(当該分野専門誌Neuropsychopharmaoologyに2008年3月発表済み)、そしてその受容体ノックアウトマウスでは恐怖記憶の減衰が弱まっていることを見いだした(論文執筆中)。以上の結果はFear extinction回路の詳細な理解、ひいては新たな認知行動療法アシスト薬開発の一助になると考える。条件性恐怖記憶は主に扁桃体における連合学習により形成されると考えられている。この連合とは、恐怖刺激を被った場所(文脈)や感覚情報(音や匂い)等、普般は恐怖感を覚えない中性の刺激(「条件刺激」)と、具体的に身体的・精神的な苦痛を伴う「嫌悪刺激」との連合を指す。Fear extinctionは恐怖記憶を「忘れる」のではなく、獲得された連合に対して新たな抑制性の学習を形成することであり、この抑制性学習の固定や想起に主要な役割を果たす神経回路のひとつとして内側前頭前野(media prefrontal cortex,mPFC)から扁桃体への投射が考えられている。Fear extinctionは、PTSD、パニック障害、強迫性障害等の不安関連障害に対する治療法である「暴露型認知行動療法」の基礎プロセスと考えられており、その詳細の研究は同療法を進歩させる上で重要である。我々は平成19年に、それまで独自開発してきたFlop型AMPA受容体趣向性同受容体増強薬PEPAが主にmPFCを活性化することにより、Fear extinctionを強く促進することを報告した(J.Neurosci.,27:158-66,2007)。本研究ではこの成果基盤の上に、マウスを用いてFear extinctionを司る神経回路について更に検討を加えた。平成20年度の成果のひとつとして、上述のPEPAが恐怖記憶の再固定には全く作用しないことを見いだした(第1回日本不安障害学会学術大会で発表及び論文投稿中)。この成果は恐怖記憶の再固定とExtinctionを司る神経回路の違いを薬理学的に明確にするものである。再固定には作用せずExtinctionを促進する薬物の発見は新たな暴露型認知行動療法アシスト薬開発の一助になると考える。
質量分析法を用いた細胞内ニトロキシルの高感度検出法の開発

本研究では、質量分析法(MS)を用いて特異的かつ高感度にニトロキシル(HNO)を検出する分析手法の開発を目的とした。MSにおける高感度化のために塩基性骨格を有し、水溶性のチオール化合物を合成した。チオール化合物とHNOの反応生成物であるスルフィンアミドを特異的に検出するため、MRM法による検出法を確立し、スルフィンアミドがHNOのマーカーとして有用である可能性を示唆できた。本研究は近年注目されつつある活性窒素種の一つであるニトロキシル(分子式:HNO)を、質量分析法を用いて特異的かつ高感度に検出するために必要な"HNO特異的高感度検出プローブ"の開発を行うことである。平成22年度は塩基性あるいは蛍光性を有するチオール(R-SH)4種類を合成した。また、細胞内移行性が向上することを期待し、ジスルフィド(R-SS-R)4種類を合成した。これらの中で高い水溶性を有するチオールを用い、HNO放出化合物との反応条件検討などを行った。まず、ESI-MSを用いて反応生成物を解析した結果、チオールとHNOの反応生成物であるスルフィンアミド(R-SONH2)に相当するシグナルを確認することができた。しかしながら、副生成物であるジスルフィドに相当するシグナルも同時に検出されることがわかった。次に、これらのシグナルに対してLC-ESI-MS/MSで定量するためのMRM法および前処理法を確立した。確立した方法を用いることにより、細胞培養液を反応溶媒として用いた場合でも反応生成物を検出できることが分かった。そこで、平成23年度は培養細胞に化合物を投与し、HNOとの反応生成物を検出できるかを前処理も含めて検討していく予定である。その場合、化合物の細胞内局在を確認する必要があるため水溶性を有する蛍光化合物の開発も同時に進めていく。また、副生成物であるジスルフィドが生成しないような化合物の設計および合成も引き続き行う。本研究は活性窒素種の一つであるニトロキシル(HNO)を、質量分析法(MS)を用いて特異的かつ高感度に検出するために必要な"HNO特異的高感度検出プローブ"の開発を行うことである。平成23年度の研究実績概要は以下の通りである。1.HNO検出プローブとしてMSにおける高感度化、および培養細胞への応用が期待できる水溶性を有するチオール化合物(RSH)を用いることとした。HPLCの分離条件、MRM法の条件などを再検討し、RSHおよびそのジスルフィド体(RSSR)を用いて検量線を作成した。その結果、MRM法では0.1-100pmolの範囲で良好な直線性が得られ、検出限界は数十fmolであることがわかった。RSHとHNO放出化合物の反応生成物をMRM法で定量した結果、一等量以上のHNO放出化合物存在下ではRSHは消失し、RSSRが収率約30%で生成することが分かった。これらの結果より、HNOマーカーである反応生成物スルフィンアミド(R-SONH2)の収率は約70%と考えられる。2.RSONH2がHNO特異的マーカーになり得るかを検討するため、RSHとNO放出化合物などとの反応生成物をMRM法で定量分析した。その結果、HNO放出化合物以外ではRSOMI2のピークはほとんど検出されなかった。よって、RSONH2はHNO特異的マーカーになり得ることが示唆された。しかしながら、HNO放出化合物の場合と同様、NO放出化合物などの存在下でもRSSRが生成すること、また、その他の副生成物が生成することも高分解能質量分析により明らかとなった。本研究はMSを用いてHNO特異的マーカーの定量法を開発したという点が特徴である。今後の研究によりさらに高感度でHNOに特異的なプローブを開発出来れば、生物学的環境下におけるHNO検出のツールとして利用され、HNOの役割の解明に貢献できるものと期待される。