hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
牛の遺伝性横隔膜筋症の病理発生機序に関する免疫化学的・蛋白化学的探索

さらに、遺伝性横隔膜筋症の原因蛋白の探索の目的で、発症牛と対照牛の横隔膜筋組織全量に対する抗体をそれぞれ作製し、免疫ブロット法をにて検索を行った。発症牛筋組織に対する抗体での免疫ブロット法では、横隔膜筋症例で約55kD、65kDに特異的に蛋白の増量がみられた。一方、対照牛筋組織に対する抗体では横隔膜筋症例で約85kDに蛋白の欠損がみられた。現在までのところこれら蛋白の同定はできていないが、これら蛋白が横隔膜筋症発症に何らかの関与をしている可能性が考えられた。今後これら蛋白の同定・解析を行う予定である。初年度では遺伝性横隔膜筋症の保因牛の検索と侵淫情況を調査した.さらに,本疾患の原因蛋白の探索のために、発症牛と対照牛の横隔膜筋に対する抗体をそれぞれ作製し,異常蛋白の検出を行った.今年度は作製した抗体を用いて蛋白の精製を行った.また,同じホルスタイン牛に発生している遺伝性心筋症について病理学的・遺伝学的背景について検索した.保因牛の検索のためにホルスタイン牛213頭を検索した.このうち49頭に本疾患に特徴的なコア様構造が観察された.49頭はいずれも本疾患の家系に含まれ,保因牛の特徴であるコア様構造は病理学的に横隔膜筋症でみられるそれに一致したことから,横隔膜や心筋にコア様構造を有する症例は横隔膜筋症の保因牛であることが示唆され,広く北海道十勝に侵淫していることが明らかとなった.横隔膜筋症の原因蛋白の探索の目的で,発症牛と対照牛の横隔膜筋組織全量に対する抗体をそれぞれ作製・検索を行った.発症牛筋組織に対する抗体での免疫ブロット法では,横隔膜筋症例で約55kD,65kDに特異的に蛋白の増量がみられた.対照牛筋組織に対する抗体では横隔膜筋症例で約85kDに蛋白の欠損がみられた.これら蛋白を免疫沈降法および二次元電気泳動法により回収し,アミノ酸配列解析をエドマン分解法により行った.現在までのところこの解析は完了しておらず,蛋白の同定はできていない.一方,本疾患の本態解明の一助として同じホルスタイン牛に発生している遺伝性心筋症について病理学的,遺伝学的な調査を行った.心筋は心筋繊維の肥大と空胞変性を特徴とし,肥大した心筋繊維では筋繊維の枝分かれ像(fiber splitting)がみられた.遺伝学的に心筋症例の両親はいずれも,横隔膜筋症発症牛の共通祖先である一頭の種牛に遡れることが明らかとなった.このことから両疾患は遺伝的に重なり合う,表現型の異なる疾患である可能性が示唆された.
尿酸生成酵素阻害薬の至適投与設計法の確立

本研究では高尿酸血症患者においてフェブキソスタット薬物動態の個人間変動を確認した.アシルグルクロン酸抱合体は前処理により分解したため,代謝過程における体内動態変動の評価を行うことができなかった.本研究での用いたキサンチン酸化酵素活性に基づくフェブキソスタットの薬効評価は有用となる可能性が考えられた.今後は,上記体内動態変動と薬力学的指標であるキサンチン酸化酵素活性との関係について検討を行う予定である.本研究では、新規の尿酸生成酵素阻害薬フェブキソスタットについて、1高尿酸血症患者におけるフェブキソスタットとその代謝物の体内動態の変動性およびその変動因子を探索し、2赤血球中キサンチン酸化酵素活性および血清尿酸値との関係を明らかにするとともに、3特異性の高いフェブキソスタットの投与設計指標を確立することを目的とする。本研究ではキサンチン酸化酵素を対象に臨床研究と基礎研究を経年的に実施する。臨床研究では高尿酸血症患者において、フェブキソスタット濃度とキサンチン酸化酵素活性、尿酸値との関係について評価を行う。最終的に、フェブキソスタットとその代謝物の体内動態の変動要因を明らかにする。また、それら体内動態とキサンチン酸化酵素活性および血清尿酸値との関係についても検証し、フェブキソスタットの至適投与設計法を確立する。基礎研究ではヒト末梢血由来細胞を用いてフェブキソスタット長期投与によるキサンチン酸化酵素の誘導可能性について明らかにする。ラットを用いてキサンチン酸化酵素の生体内分布について明らかにする。これらの結果を用いて、臨床研究において確立した投与設計法の妥当性を検証する。現在の所、ヒト血漿中フェブキソスタットの濃度測定法とキサンチン酸化酵素活性測定法を確立している。基礎研究として計画していたヒト末梢血由来CCRF-CEM細胞と高尿酸血症モデルラットを用いたキサンチン酸化酵素の特性に関する研究は未実施である。血漿中薬物濃度の測定並びに酵素活性の評価法については確立できている。研究開始前の時点よりもフェブキソスタットの使用患者数が増えてきているため、目標検体数の検体収集に際しても円滑に実施可能と考えられる。本研究では、新規の尿酸生成酵素阻害薬フェブキソスタットについて、1高尿酸血症患者におけるフェブキソスタットとその代謝物の体内動態の変動性およびその変動因子を探索し、2赤血球中キサンチン酸化酵素活性および血清尿酸値との関係を明らかにするとともに、3特異性の高いフェブキソスタットの投与設計指標を確立することを目的とし、研究を実施している。現在までにフェブキソスタットの血清中および尿中濃度評価法を確立している。昨年度は研究対象患者より研究参加についての同意取得・検体収集を行った。本邦における高尿酸血症患者数は増加傾向にある。新規キサンチン酸化酵素阻害薬であるフェブキソスタットについて、その薬物動態学的および薬力学的な個人間変動は小さいと考えられてきた。本研究では高尿酸血漿患者を対象にフェブキソスタットとその主要代謝物であるアシルグルクロン酸抱合体の体内動態およびキサンチン酸化酵素活性の個人間変動について評価を行った。前年度までの検証により、LC-MS/MS法によるヒト血中フェブキソスタット濃度測定法とHPLC-UV法を用いたキサンチン酸化酵素活性評価法を確立している。最終年度の検証として、フェブキソスタット錠を継続して同一用量で服用している高尿酸血症患者を対象に上記の変動性について評価した。26名の高尿酸血症患者においてフェブキソスタットの薬物動態における個人間変動を確認した。また、フェブキソスタットの体内動態には腎機能の関与が認められた。アシルグルクロン酸抱合体は前処理により分解したため、フェブキソスタットの代謝過程における体内動態変動の評価を行うことができなかった。本研究で用いたHPLC-UV法では患者試料においてもヒポキサンチン、キサンチンおよび尿酸の分離は可能であった。本研究で用いたキサンチン酸化酵素活性に基づくフェブキソスタットの薬効評価は有用となる可能性が考えられた。今後は、上記体内動態変動と薬力学的指標であるキサンチン酸化酵素活性との関係について検討を重ねる予定である。本研究では高尿酸血症患者においてフェブキソスタット薬物動態の個人間変動を確認した.アシルグルクロン酸抱合体は前処理により分解したため,代謝過程における体内動態変動の評価を行うことができなかった.本研究での用いたキサンチン酸化酵素活性に基づくフェブキソスタットの薬効評価は有用となる可能性が考えられた.今後は,上記体内動態変動と薬力学的指標であるキサンチン酸化酵素活性との関係について検討を行う予定である.計画通り実施する。今年度も研究対象患者からの同意取得・検体収集を継続する。薬物動態学当初購入予定であったキサンチン酸化酵素活性測定のための機器および試薬を購入していないため。消耗品の一部である酵素活性測定用の試薬を購入していないため。酵素測定測定系を確立し次第、機器および試薬を購入する。今後同意取得患者数の増加に伴い、消耗品の使用量は増加する見込みである。
幸せな死の在り方に関する倫理思想の構築―『葉隠』の思想的検討から―

本研究は、人生の究極的課題であり、現代の日本社会において喫緊の課題ともされている人間の幸せな死の在り方について、日本倫理思想史の重要文献『葉隠』を素材とした新たな倫理思想を生み出すことにある。『葉隠』解釈史の構築と『葉隠』成立過程の検証という二つの基礎作業を踏まえて『葉隠』の武士が己のあるべき死をいかにして見出し成し遂げようとしたのかという点を明らかにし、そこから幸せな死の在り方を考える。とりわけ、人間の生を問い直すために、あえて「いかに死ぬか」という問題視角から出発し、日本思想に立脚して幸せに死ぬことを正面から捉える新たな倫理思想の構築を目指す。
多極化する現象学の新世代拠点形成と連動した間文化現象学の研究

諸文化は、研究者自身が自文化に属するかぎり、外部から客観的に捉えられない。だが、自文化自体が純粋でなく異文化とのハイブリッドであり、両者の間が問題になる。この間で自文化が異文化に開き/閉じることで、間自体が脈動・開閉する。この運動を、新世代の研究者の拠点を形成しつつ、言語離合(遭遇)共存精神時間の5側面から現象学的に問い、文化が間文化的に文化する条件を解明した。現在グローバル化の進展とともに、文化と文化の関係が問い直されている。しかし、われわれの問題設定は、たとえば文化人類学の研究者が異文化に出向いてそれを観察するような類のものではない。むしろ、上記の進展とともに、われわれ自身の生活・経験の内部で起きている(ある意味では古来の、しかし別の意味では、近年急加速的に現れてきている)現象である。そこには「普遍性と特殊性」、「求心性(参入)と遠心性(排斥)」、「自閉性と開放性」、「規律性と許容性」、「生起性と沈殿性」などといった複雑な事象連関が生じている。こうした現象の本質とそこに生じている諸問題を現象学的方法によって解明する。そのため、5つの重点領域(「言語」、「遭遇(離合)」、「精神」、「共存」、「時間」)を設定する。他方で、研究者を世代的に配置する(「拠点」、「中核」、「新世代」)。この研究分担と相互討議によって研究の統合をはかる。これと連動して、新世代の研究者の組織を間文化的に形成して、この研究運動全体の歴史的な展開をはかる。まず、初年度として基礎的な「研究基盤の構築」が必要であったため、講読会を組織して、基礎固めを行った。これは年間をつうじて行われた。11月には、メルロ=ポンティ生誕記念に重ねて、サントベール(フランス国立科学研究センター)、カルボーネ(ミラノ大学)、ロゴザンスキー(ストラスブール大学)の各氏を招き、「国際シンポジウム」を開催した。2月には、リー氏(ソウル大学)を招き、亀井・神田両氏(立命館大学)とともに「第一回間文化現象学シンポジウム」を開いた。さらに、チェン氏(香港中文大学)を招き、「第一回間文化現象学セミナー」を開き、同時に若手研究者のチェン氏の講演を行った。3月にはテンゲイ氏(ヴッパタール大学)を招いて、「講演会」を開いた。これらは、いずれも先端的研究者の「最新の研究の報告」を受けるとともに、多くの参加者を得て、従来にない「新たな視野」が開かれた。間文化現象学セミナーは新たな試みであったが、大きな成功を見た。とりわけ、漢字文化のなかでの事象分析は、今後の展開可能性を開いた。また、代表者は、学外研究の機を活かして、連携する海外拠点の代表者と今後の「学術交流の打ち合わせ」を行い、さらに「新たな研究者との関係構築」を進めることができた。これは今後の研究展開においてきわめて有益に作用すると思われる。メンバーの一部は、すでに初年度から「内外での研究発表」を行うことができた。このように、大きな第一歩を記すことができた初年度であった。2年目となる本年度の研究の重点は、文化と文化の「離合」--翻訳においてよりわかりやすくするため「遭遇」の語も用いた--であった。本年度は、この研究プロジェクトと連携する「間文化現象学研究センター」が立命館大学に創設されたこともあり、大きな成果を挙げることができた。研究実施に関しては、平成21年10月には、本プロジェクトの研究協力者である木村敏、新田義弘の両氏による講演会を行った。11月には、ベルンハルト・ヴァルデンフェルス、クラウス・ヘルトの両氏を招いて講演会を行った。これらの講演会においては、内外の碩学によって間文化現象学の課題や可能性が示され、多くの聴衆にその重要性が示されるとともに、これに基づいて研究の土台が確保され、進展の方向性が示された。22年1月には「間文化現象学ワークショップ」および「間文化現象学シンポジウム」を開催した。ワークショップにおいては、カレル・ノヴォトニー氏が提題を行った。またシンポジウムにおいては、同氏のほかに、リャンカン・ニー、アンソニー・スタインボック、ローズマリー・ラーナーの各氏の提題、また本プロジェクトのメンバー(田口茂、青柳雅文、谷徹)の提題に基づく活発な討議と研究交流によって、間文化的遭遇における相互理解と相互排除の事実と構造(の一端)が明らかになった(これへの参加が予定されていたミヒャエル・シュタウディグル氏は事情により平成22年5月に雷にすることになった)。その成果の一部は『現代思想』(青土社)平成21年12月号、そして同平成22年5月号(業績記載は次年度となる)において公表された。これらを支える基礎的研究も蓄積され、研究者による海外出張も予定どおり行われ、また従来の「間文化現象学研究会」も定期的に継続された。

各研究者の個別的な研究も順調に蓄積された。過年度の研究の蓄積の上に立って、本年度は主に重点研究領域「精神」--これは臨床現象学とも関連する--をめぐる研究が進められた。このテーマと研究目的に従って下記の企画が実施された。5月14日には、間文化現象学研究センターとの共催により、5月14日にオーストリアからミヒャエル・シュタウディグル氏を招待し、本プロジェクトメンバーおよび学内関係者とともに間文化現象学ワークショップを開き、翌15日には氏による間文化現象学講演会を開いた。6月28日には、間文化現象学研究センターおよび「暴力からの人間存在の回復研究会」との連携により、アメリカのロディー・リード、リサ・ブルームの両氏を招き間文化現象学講演会を開いた。本学研究推進政策による「映画『哲学への権利』上映会・討論会」を2011年2月25日に開催したが、本プロジェクトはこれに大きく協力した。同様の国際シンポジウム「間文化性と人文学」にも本プロジェクトは大きく協力した。他方、昨年度段階で計画されていたアレッサンドロ・サリーチェ氏の11月の講演会は、本人の職場移動によって中止となった。また、2011年3月24日に予定されていた第三回間文化現象学シンポジウムは、東日本大震災の影響により、海外招待研究者および国内の被災地の研究者に参加困難が生じ、中止・延期を余儀なくされた。これについては、状況の推移を見つつ、2011年度の第四回間文化現象学シンポジウムとともに開催したいと考えている。また、2011年度に招聘できなかったナタリー・ドゥプラズ氏についても同様である。継続的研究として、間文化現象学研究会を42回開催し、またメンバーを海外派遣した。成果については、5月に刊行された『現代思想』誌に「間文化現象学特集」が組まれ、その一部が公刊されたことが特筆されるが、それ以外の多くの機会でもメンバーの研究は公表された。本年度の重点研究テーマは「共存」であり、これの可能性を間文化現象学の視座から解明することが試みられた。この課題をめぐって、56月にリトアニアのGidere Smitiene氏、7月に台湾の廖欽彬氏をそれぞれ招き、前者に関して和辻哲郎の哲学を中心に、後者に関しては田辺元の哲学を中心にして、間文化性の構造を解明するためのワークショップを開催した。9月には、メンバーの3名(谷、青柳、小林)がスペイン・セゴヴィアで開催された現象学に関する国際会議に参加し、それぞれ基調講演、研究発表を行った。これらは、海外の研究者との、まさに間文化的な交流をさらに促進することにもなった。10月には、武内大氏(東洋大学)を招き、講演会を開催した。11月には、3月に予定されていながら震災によって延期された「精神」を重点研究テーマとするシンポジウムと、本年度の重点研究テーマ「共存」のシンポジウムを合同させ、「第3回&第4回間文化現象学シンポジウム」として開催した。香港の劉国英氏、アメリカのLanai Rodemeyer氏、オーストリアのGeorg Stenger氏を招待し、メンバーの発表者とともに、研究討議を行い、交流を進めた。多くの成果が得られたが、とりわけStenger氏の提唱した、諸文化の「共-創造性」の概念は今後の研究展開のための大きな貢献となった。さらに、このシンポジウムで十分に展開されなかった諸問題に光を当てるべく、翌年3月に間文化現象学ワークショップを開催し、5名のメンバーが研究発表を行い、他のメンバーならびに一般参加者と研究討議を繰り広げた。
シナジーとリズムに基づく歩行の数理

平成30年度も昨年度に引き続いて、ヒトやサル、ラットなどの歩行計測を行い、計測したデータの解析や神経筋骨格系の数理モデルを用いた動力学解析から、それぞれの歩行運動に内在するシナジー構造やその形成メカニズムの解明を目指した。特に、筋シナジーに基づく脳神経系の制御モデルとヒトの筋骨格モデルを統合した動力学シミュレーションを実施してヒトの計測結果と比較した結果、運動制御における少数の制御パラメータを変えるだけで、歩くことも走ることもできることを数理的に明らかにした。この成果はScientific Reportsに採択され、プレスリリースを行いその成果を公表した。また、左右に分離された二つのベルトを持つ特殊なトレッドミル上を後肢で歩行するラットを対象に、筋シナジーに基づく脳神経系の制御モデルとラットの筋骨格モデルを統合した動力学シミュレーションを実施し、シミュレーション結果をラットの計測結果と比較した。その結果、感覚情報に基づいて筋シナジーを制御することで、左右のベルト速度の変化に対して適応的な歩行を実現できることを明らかにした。この成果もScientific Reportsに採択された。さらに、同じ速度領域でヒトの歩行と走行が共存するメカニズムを理解するために、ハイブリッドな力学系を有するシンプルな数理モデルを用いて解析した。現在、歩行と走行、そして転倒の形成原理が、ハイブリッド特有の数理構造より説明できることが明らかになりつつある。交付申請書に記載した研究実施計画のように、ヒトやサル、ラットなど様々な動物の歩行における低次元シナジー構造の解析から、その特徴が明らかになりつつあり、シンプルモデルを用いた力学系の解析など数理的手法より、歩行の支配原理が明らかになりつつあるため。歩行と走行、そして転倒の形成原理を説明するハイブリッド特有の数理構造を明らかにしつつ、これまでの成果を取りまとめ、学会発表や学術論文として発表していく。平成27年度は,ヒトやサル,ラットの歩行計測を行い,計測データの解析から,それぞれの歩行運動に内在する低次元シナジー構造の解明を目指した.特に,トレッドミル上での様々な速度におけるヒトの歩行と走行を計測し,これまでに確立した特異値分解に基づく低次元構造の抽出とその時空間パターンの分解手法を用いて,運動学シナジーの低次元構造を解析し,それぞれの歩容に共通もしくは特異な性質を調べた.具体的には,8名の健常者を対象に,体幹,左右の大腿,下腿,足の7つの運動を計測し,1周期ずつの運動学データに正規化して特異値分解を施した.その結果,歩行や走行によらず,どの速度でも第3モードまでで累積寄与率が95%を超え,それぞれ3つのモードで運動が構成されていることが示唆された.更に速度変化に対しては,特異値は有意な変化を示したが,時間・空間パターンには有意な変化は見られなかった.また,歩行と走行の共通性と特異性を確認するために空間,時間パターンの相関を調べた結果,時間・空間パターン共に歩行と走行の同じモード同士の相関が高いことがわかった.すなわち,速度変化や歩容に応じて,時間・空間パターンは変えず,それぞれのモードの比率を調整することで運動が形成されていることが示唆された.この研究成果は,IEEE International Symposium on Micro-NanoMechatronics and Human Science (MHS2015)において口頭発表を行った.交付申請書に記載した平成27年度の研究実施計画のように,ヒトや動物の様々な歩行における低次元シナジー構造を解析し,その特徴が明らかになりつつあるため.平成28年度も昨年度に引き続き、ヒトやサル、ラットの歩行計測を行い、計測データの解析から、それぞれの歩行運動に内在する低次元シナジー構造の解明を目指した。特に、トレッドミル上を無拘束で四足歩行、二足歩行するニホンザルの筋電図を計測し、筋シナジーを形成する時空間パターンを調べた。その結果、それぞれの歩容に共通するパターンや、歩容に特異なパターンなど特徴的な性質が見られている。更に、この解析に基づいて神経制御系のモデルを構築し、解剖学的に詳細な筋骨格モデルと統合して、ニホンザルの神経筋骨格系の数理モデルを構築した。このモデルを用いて動力学シミュレーションを行った結果、四足歩行と二足歩行が再現でき、ニホンザルの歩行中の計測データと比較して、二足歩行における垂直床反力に見られる一峰性など、同じような傾向が得られている。更に、位相縮約理論に基づいてヒトのトレッドミル上での歩行運動における計測データを解析し、ベルト速度の急激な変化など外乱に対するリズム制御メカニズムを明らかにした。その成果はPLoSComputational Biologyに採録された。また、歩行を説明するハイブリッド力学系に従うシンプルな力学モデルと力学系理論に基づく解析より、サドルの安定・不安定多様体や力学系の切り替えに伴う写像などを利用して、幾何学的に特徴的な引き込み領域を形成するメカニズムを明らかにし、その成果はProceedings of the Royal Society Aに採録された。交付申請書に記載した研究実施計画のように、ヒトやサル、ラットなど様々な動物の歩行における低次元シナジー構造の解析から、その特徴が明らかになりつつあり、位相縮約理論などの数理的手法より、歩行におけるリズム調整メカニズムが明らかになりつつあるため。平成29年度も昨年度に引き続いて、ヒトやサル、ラットなどの歩行計測を行い、計測したデータの解析から、それぞれの歩行運動に内在する低次元シナジー構造の解明を目指した。特に、トレッドミル上を無拘束で四足歩行、二足歩行するニホンザルから計測した下肢、上肢、体幹筋を含む片側9筋の筋電図に対して、非負値行列因子分解を用いて筋シナジー解析を行い、それぞれの歩容間で共通、もしくは特異な筋シナジーの時空間構造を調べた。

その結果、個体や歩容に関わらず4つの時空間パターンの組合せで筋電図のほとんどが説明されること、そのうちの3つは下肢が大きく寄与し、歩容に共通、もしくは特有な構造が見られること、また歩容に依存して、体幹と下肢、もしくは上肢と下肢が協調していることなどが明らかとなった。さらに、ヒトの歩行と走行、そして転倒を説明する力学原理を明らかにするために、一次元の運動(相空間は二次元)に単純化したハイブリッドな力学系を有するシンプルな数理モデルを構築し、周期解の存在と安定性に関する力学解析を行った。その結果、モデルの物理パラメータに依存してそれぞれの歩容が存在し、特に中速度領域において歩行と走行が共存することが明らかとなった。さらに、パラメータに依存した歩容変化においてヒステリシスが見られ、そのヒステリシスを説明する力学構造として、従来のサドルノード分岐で説明されるものとは異なる、転倒も関連した新たな分岐構造が見受けられた。交付申請書に記載した研究実施計画のように、ヒトやサル、ラットなど様々な動物の歩行における低次元シナジー構造の解析から、その特徴が明らかになりつつあり、シンプルモデルを用いた力学系の解析など数理的手法より、歩行の支配原理が明らかになりつつあるため。平成30年度も昨年度に引き続いて、ヒトやサル、ラットなどの歩行計測を行い、計測したデータの解析や神経筋骨格系の数理モデルを用いた動力学解析から、それぞれの歩行運動に内在するシナジー構造やその形成メカニズムの解明を目指した。特に、筋シナジーに基づく脳神経系の制御モデルとヒトの筋骨格モデルを統合した動力学シミュレーションを実施してヒトの計測結果と比較した結果、運動制御における少数の制御パラメータを変えるだけで、歩くことも走ることもできることを数理的に明らかにした。この成果はScientific Reportsに採択され、プレスリリースを行いその成果を公表した。また、左右に分離された二つのベルトを持つ特殊なトレッドミル上を後肢で歩行するラットを対象に、筋シナジーに基づく脳神経系の制御モデルとラットの筋骨格モデルを統合した動力学シミュレーションを実施し、シミュレーション結果をラットの計測結果と比較した。その結果、感覚情報に基づいて筋シナジーを制御することで、左右のベルト速度の変化に対して適応的な歩行を実現できることを明らかにした。この成果もScientific Reportsに採択された。さらに、同じ速度領域でヒトの歩行と走行が共存するメカニズムを理解するために、ハイブリッドな力学系を有するシンプルな数理モデルを用いて解析した。現在、歩行と走行、そして転倒の形成原理が、ハイブリッド特有の数理構造より説明できることが明らかになりつつある。
ヒト膵発癌を再現する遺伝子改変マウスを用いた早期膵癌マーカーの探索と治療法の開発

本研究課題では慢性膵炎モデルマウスを樹立し、慢性炎症から癌に移行する過程でどのような現象が起きているのかを明らかにする。(方法)慢性膵炎モデルマウスの樹立にはSpink3+/-マウスを用いた。まずCAGプロモーター下にヒトSPINK1遺伝子をつなぎ(SP1)、マウスES細胞のX染色体に置換してマウスを樹立した。このマウスとSpink3+/-を交配した。(結果)出生直後のSpink3-/-; X ; SP1/+では正常な腺房細胞と著しい変性を生じた腺房細胞がモザイク状に混在していた。このマウスは膵全体の萎縮、腺房細胞の脱落、膵実質の線維化が顕著であり、ヒト慢性膵炎を再現していた。さらに拡張した膵管の上皮に過形成が見られ、ヒト膵癌の前癌病変と酷似していた。膵発癌のinitiationに必須とされるEgfr、Her2、Rasの異常発現も確認された。(目的)膵癌の早期診断方法や治療法開発のためのツールとして、発癌過程を忠実に再現したモデルマウスの解析が重要である。(方法)慢性膵炎モデルマウスの樹立にはSpink3欠損マウス(Spink3-/-)を用いた。このマウスは膵腺房細胞に過剰なオートファジーが誘導され、出生後一斉に細胞死が起きて、膵外分泌機能不全によって死亡する。まずCAGプロモーター下にヒトSPINK1 (Spink3のホモログ)遺伝子をつなぎ(CAG-SP1)、マウスES細胞のX染色体に置換してマウスを樹立した(雌ではX染色体不活性化によって、約半数の細胞でのみSPINK1遺伝子がonとなる)。このマウスとSpink3-/-を交配した。(結果)Spink3-/- ; YX ; CAG-SP1(雄)およびSpink3-/- ;X ; CAG-SP1/CAG-SP1マウス(雌で両方のX染色体にCAG-SP1が挿入)は野生型と差が見られなかった。出生直後のSpink3-/- ;X ; CAG-SP1/+では正常な腺房細胞と著しい変性を生じた腺房細胞がモザイク状に混在しており、CAG-SPINK1がon/offの細胞が混在していることが確認された。このマウスは軽度の成長障害を示し、膵全体の萎縮、腺房細胞の脱落、膵実質の繊維化、膵管の拡張が顕著であり、ヒト慢性膵炎を再現していた。(まとめ)ヒト慢性膵炎のモデルマウスの樹立を行い、拡張した膵管の上皮は過形成(前癌病変)で、慢性炎症から前癌病変への移行を再現したモデルマウスの樹立に成功した。(方法)慢性膵炎モデルマウスの樹立にはSerine protease inhibitor Kazal type 3 ; Spink3欠損マウス(Spink3+/-)を用いた。まずCAGプロモーター下にヒトSPINK1(Spink3のヒトホモログ)遺伝子をつなぎ(SPI)、マウスES細胞のX染色体に置換してマウスを樹立した(雌ではX染色体不活性化によって、約半数の細胞でのみSPINK1遺伝子がonとなる)。(結果)Spink3-/-;YX;SP1(雄)およびSpink3-/-;X;SP1/SP1マウス(雌で両方のX染色体にSP1が挿入)は野生型と差が見られなかった。出生直後のSpink3-/-;X;SP1/+では正常な腺房細胞と著しい変性を生じた腺房細胞がモザイク状に混在しており、SPINK1遺伝子の発現がon/offの細胞が混在していることをISH法でも確認した。

このマウスは軽度の成長障害を示し、2ヶ月齢において膵全体の萎縮、腺房細胞の脱落、膵実質の線維化、膵管の拡張が顕著であり、ヒト慢性膵炎を再現していた。さらに拡張した膵管の上皮に過形成が見られ、ヒト膵癌の前癌病変と酷似していた。膵発癌のinitiationに必須とされるEgfr、Her2、Rasの異常発現も確認された。(まとめ)ヒト慢性膵炎のモデルマウスの樹立を行い、拡張した膵管の上皮は過形成(前癌病変)で、慢性炎症から前癌病変への移行を再現したモデルマウスの樹立に成功した。
ピアサポートを活用した若年乳がん患者の療養生活を支援するサポートプログラムの開発

本研究では、若年乳がん患者が治療を継続しながら日常生活を送る中でいかなる困難を抱え、どのようなサポートを必要としているのか、また、地域で乳がん患者支援を行う乳がんピア・サポーターが、ピア・サポートを行う中でどのような困難や問題を抱えているのかを質的帰納的に明らかにすることにより、治療を継続しながら日常生活を送る若年乳がん患者を支援するためのピア・サポートプログラムを開発することを目的としている。今年度の目標は以下の2点とした。1.乳がん患者のピア・サポートに関する国内外の研究論文をもとにしたピア・サポートの問題点や今後のピア・サポートのあり方の検討乳がん患者のピア・サポートに関する国内外の研究論文より、ピア・サポートの問題点や今後のピア・サポートのあり方について明らかにする目的で実施した。「乳がん患者」、「ピア・サポート」または「ピア・サポーター」をキーワードに含む国内外の原著論文を検索し、分析を行った結果、ピア・サポートの相談システムやピア・サポーターの学習の機会の充実などについて検討することの必要性が示唆された。2.若年乳がん患者が、治療を継続しながら日常生活を送る中で抱える困難や求める支援ニーズの調査若年乳がん患者が治療を継続しながら日常生活を送る中で抱える困難や求める支援内容を明らかにすることにより、プログラム案の構成要素を抽出する目的で実施する。現在は、39歳以下で乳がんと診断され、術後補助化学療法を行っている女性に面接調査を実施する準備を進めている。面接調査に先駆け、ピア・サポートの問題点や今後のピア・サポートのあり方について明らかにする目的で文献検討を実施し、現在論文化を進めている。また、治療を受けながら在宅で日常生活を送る若年乳がん患者に対する面接調査を実施するため、現在、準備を進めている。今年度は面接調査までに至らなかったために、一部経費が次年度へと持ち越しになった。現在、面接調査の準備を進めているが、対象者の確保については困難が予測されるため、共同研究者及び研究協力者と共にリクルート方法等を十分に検討し、倫理審査を受審・承認後、速やかに面接調査を実施できるようにする。今年度は参加を予定していた学会に都合により参加できなかったこと、文献検討において国外論文の入手に時間を要したこと、また、面接調査までに至らなかったことにより、旅費や謝金、インタビューデータの反訳費等の経費が次年度に持ち越しとなった。現在、面接調査を開始するための準備を進めており、調査を開始した際には、調査のための旅費や謝金、インタビューデータの反訳費等に活用する予定である。また、本研究のテーマに関連する国内外の学会に参加し、がん患者のピア・サポートに関する最新の知見を収集する予定である。
日本語発話の音調機能の網羅及びそれらの関係性の解明と評価付き音調独習アプリの開発

日本政府は、労働力として外国人を受け入れる方向へ大きく舵を切りました。日本語学習環境を整えなければなりません。ちょっとした発音の誤りが事故の原因となることがあります。そして、深刻なのが、感情的な誤解です。この研究では、日本語のアクセント、イントネーションすべてを洗い出し、情報のやり取りから感情表現まで、スマートフォンでいつでも、どこでも、利用者が楽しく、楽に学べる独習アプリをつくります。
エリスロポイエチンと骨髄細胞移植を用いた急性心筋梗塞への血管新生治療

まず基礎的検討として、マウス胎仔由来培養心筋細胞を用いた高グルコース下の7時間低酸素刺激でHoe33258及びdesmin二重染色にて評価した心筋細胞のアポトーシスが有意に誘導された。エリスロポイエチン(EPO:0.5or10U/ml)は心筋細胞のcell survival pathwayの一つであるPI3/Akt pathwayを活性化し、有意に抗アポトーシス作用を示した。またエリスロポイエチン(3000unit/kg)はマウスの左冠動脈前下行枝を結紮した急性心筋梗塞モデルにおいて梗塞境界域の心筋細胞のアポトーシスを有意に抑制し、梗塞サイズの縮小と心機能の改善作用をもたらした。申請者らの基礎的検討、大動物実験(Circulation 2001;104:1046,ATVB 2002;22:1804)の成績やEPOの抗心筋アポトーシス作用の基礎研究成績を背景に、急性心筋梗塞症例への骨髄あるいは末梢血単核球細胞の冠動脈内注入による血管新生治療を検証する多施設臨床試験を開始した。急性心筋梗塞では発症早期(2-7日)に血漿中のVEGF、G-CSF、EPOなどの血管新生因子や造血系サイトカインが増加していた。我々はまずST上昇型の左冠動脈前下行枝閉塞による急性心筋梗塞で発症24時間以内に経皮的冠動脈形成術を施行され、TIMI分類IIIの開通に成功した症例を対象に、末梢血単核球細胞(7-8x10^9個)を梗塞発症5日以内に責任冠動脈より経カテーテル的に移植した。移植によるCKの上昇、催不整脈作用などの副作用は認めなかった。PCI単独治療群では急性期に比較して6ヶ月後の左室駆出率が5.6%の増加に留まったのに対して、末梢血単核球細胞移植群では6ヶ月後の左室駆出率が12.9%増加した。我々は今後、骨髄単核球細胞移植群を行うとともにEPOを併用することでさらに心機能の改善がみられることを検証していく予定である。マウス胎仔由来培養心筋細胞を用いた高グルコース下の7時間低酸素刺激でHoe33258及びdesmin二重染色にて評価した心筋細胞のアポトーシスが有意に誘導された。エリスロポイエチン(EPO:0.5 or 10U/ml)は心筋細胞のcell survival pathwayの一つであるPI3/Akt pathwayを活性化し、有意に抗アポトーシス作用を示した。申請者らの大動物実験(Circulation 2001;104:1046,ATVB 2002;22:1804)の成績やEPOの抗心筋アポトーシス作用の基礎研究成績を背景に、急性心筋梗塞症例への骨髄あるいは末梢血単核球細胞の冠動脈内注入による血管新生治療を検証する多施設臨床試験を開始した。急性心筋梗塞では発症早期(37日)に血漿中のVEGF、G-CSF、EPOなどの血管新生因子や造血系サイトカインが増加していた。我々はまずST上昇型の左冠動脈前下行枝

閉塞による急性心筋梗塞で発症24時間以内に経皮的冠動脈形成術を施行され、TIMI分類IIIの開通に成功した症例を対象に、末梢血単核球細胞(78x10^9個)を梗塞発症5日以内に責任冠動脈より経カテーテル的に移植した。移植によるCKの上昇、催不整脈作用などの副作用は認めなかった。PCI単独治療群では急性期に比較して6ヶ月後の左室駆出率が5.6%の増加に留まったのに対して、末梢血単核球細胞移植群では6ヶ月後の左室駆出率が12.9%増加した。我々は今後、骨髄単核球細胞移植群を行うとともにEPOを併用することでさらに心機能の改善がみられることを検証していく予定である。急性心筋梗塞患者を対象とした多施設臨床試験による血管再生医療の実施申請者らによる大動物実験の成績やエリスロポイエチン(EPO)の抗心筋アポトーシス作用の基礎研究成績を背景に急性心筋梗塞症例への骨髄あるいは末梢血単核球の冠動脈内注入による心筋保護効果を臨床的に検証した。1)対象はST上昇型の左冠動脈前下行枝閉塞による急性心筋梗塞で発症24時間以内に経皮的冠動脈形成術を施行され、TIMI分類IIIの開通に成功した症例である。2)細胞移植はバルーンカテーテルを狭窄部位末梢に留置し、低圧にて拡張し末梢血単核球をカテ先より3ml、3分間かけて3回注入した。症例を末梢血細胞移植群、PCI単独群に分け、評価項目として移植後6カ月後の心機能をLVG、MRI、心エコーで評価した。移植細胞のFACS解析ではCD34またはCD34/KDR-positive cellが健常人に比し多い傾向がみられ、またこれらの細胞はacLDL/Lectine-positiveなEPCを含んでいた。Primary Endpointである左室駆出率(EF)は6ヶ月間でコントロール群では48.8%から56.3%に増加し、細胞移植群では43.8%から57.2%に増加した。ゆえにΔEFはコントロール群で7.4%、細胞移植群で13.4%と移植群で有意に増加した。両群ともEnd-diastolic volume index(EDVI)に有意な変化はみられなかったが、End-systolic volume index(ESVI)は有意に低下した。梗塞域の局所壁運動(Regional EF)は両群とも有意に増加したが、ΔRegional EFは細胞移植群でやや増加する傾向がみらた。細胞移植による心エコーでのwall motion score index(WMSI)は低下し、ホルター心電図での不整脈の増悪はなく、心筋血流シンチでのdefect scoreは有意に低下した。心機能(ΔEF)に及ぼす急性期のbaseline EF、peak CK、再灌流時間、移植細胞数についての影響を検討したが、細胞移植の治療効果は早期に再灌流され急性期の心機能が低下した症例で大きいことが示された。症例の集積に時間がかかり、今後骨髄単核球細胞移植、さらにEPOを併用することの心筋保護効果を検討していきたいと考えている。
クロモグラニンの構造変化における精神神経疾患との関連

本研究は、精神神経疾患に関与するクロモグラニンB(CHGB)の機能について、病態にどのように関与しているかを解明するため、ヒト高次脳レベル、マウス個体レベルの解析により進めている。CHGBの遺伝子変異が、統合失調症に有意に関連することを大規模なサンプルを用いて確認した。さらに、血中のCHGBタンパク濃度が、統合失調症患者において高値であること、さらにヒトのストレス反応の重症度と相関することを見いだした。本研究は、機能性精神疾患に関与するクロモグラニンB(CHGB)の機能の解明を目的とする。(1)CHGB調節領域に位置する多型と統合失調症との関連解析:CHGBのプロモーター領域であり、転写因子SRYとYY1の結合モチーフ内に位置する、A-296C多型とA-261T多型について、統合失調症患者との関連解析を行った。その結果、両多型共に男性統合失調症患者特異的に有意な関連がみられ、さらに転写活性の高いハプロタイプが男性統合失調症患者において有意に関連した。このことから、A-261T多型によるSRYを介するCHGBの発現変化が、男性における統合失調症の発症に関与していることが考えられた。今後、統合失調症患者の死後脳や株化Bリンパ球を用いてCHGBの発現量と遺伝子型との関連を検討する。(2)Chgb欠損マウスの作製:EUCOMMよりchgb遺伝子改変ES胚の供与を受け、キメラマウスの作製を行った。次年度chgb-KO個体の作製を行い、次の実験を行う。(3)Chgb欠損マウスの精神神経行動学的解析:Chgb欠損マウスの行動解析を行い、同遺伝子の精神疾患に対する関与を評価する。行う解析は、運動協調性を見るRota-rodtest、新規探索テスト、社会性行動テスト、自発的活動量の測定、プレパルスインヒビションテスト等である。これに統合失調症、気分障害の薬理学的モデルを加える。(4)異常タンパク病としての神経変性疾患におけるCHGBの役割の検討:ALSモデルマウスの一つであるG93A型変異SOD1トランスジェニックマウスにおいて、変異型SOD1がchgbと結合し、細胞外分泌を介した神経毒性により神経細胞死に至ることが報告されたが、このALSモデルマウスを導入し、Chgb欠損マウスと交配することにより、ALS症状が改善されるかを検討する。1)chgbKOマウスの精神神経行動学的解析:chgbKOマウスを作製するべく、昨年度遺伝子変異導入ES胚の譲渡を受け、本学にてキメラマウスの作製を行った。キメラマウスより、生殖細胞系列に変異を伝達された個体を得て、Creドライバーマウスとの交配後、全身chgbKO個体を得る予定であったが、キメラマウスより、生殖細胞系列に変異を伝達された個体を得ることができなかった。(キメラマウスに精巣奇形があったため)。そこで、chgb KOマウスを有する研究機関より、KOマウスの精子を輸入し、KO個体の発生を進めている。2)異常タンパク病としての神経変性疾患におけるCHGBの役割の検討:ALSモデルマウスとして確立されているヒト変異型SOD1 Tgマウスとchgb KOマウスとの交配実験を行い、SOD1 Tg×chgbKO遺伝子型個体について組織や行動の変化を解析し、ALS症状が改善されるかを検討する。本年度は、ALSモデルマウスとして、B6,Cg-Tg(SOD1*G93A)1Gur/Jの♂ヘミ個体を導入し繁殖を行っている。本年度は、実験テーマ1)、2)とも実験動物の準備に大半を費やしたため、ヒト統合失調症患者サンプルを用いた大規模関連解析、疾患と血漿CHGB濃度との検討、および血漿CHGB濃度と精神症状スコアとの関連の検討を行った。統合失調症患者2413名と健常者2852名を対象に、CHGB遺伝子領域とその上流・下流それぞれ2kbについて、Haploviewプログラムを用い8つのTag-SNPを選出し、遺伝子型を決定した。rs236141において、男性統合失調症患者と男性健常者の間でP=0.001という有意差を得た。この遺伝子型と血漿CHGBの間には関連は認められなかったが、血漿CHGB濃度は統合失調症患者群において有意に高かった。また、HSCL(Hopkins Symptom Checklist)によるストレス反応評価において、心身症状・対人関係過敏症・抑うつ症状の重症度とCHGB濃度は有意に相関していた。今後は、chgb KO個体が得られ次第、実験テーマ1)、2)に取り組んでいく予定である。
発展途上国の下痢症アウトブレイク関連大腸菌からの新規下痢因子解明

我が国を含む先進諸国では積極的な衛生環境の整備によって自国由来の細菌性下痢症の発生予防が進んでいる。一方で下痢症は、世界規模では5歳未満の小児の死亡原因の第2位となっている現実があり、毎年5歳未満の小児では52万5千人が命を落とす重大疾患である。私は、2009年12月にケニアで発生、流行した原因不明の下痢症の原因について検討してきた。発生地区の地理的要因と社会的、そして、政治的背景から患者、及び、発生地区の健常者の採取糞便検体数が制限され、ライフライン、特に電力供給が非常に不安定な現地研究施設で、日本側共同研究者と現地研究者の協力のもと腸管凝集性付着大腸菌(EAEC)耐熱性エンテロトキシン(astA)遺伝子を有する大腸菌、EASTECが高頻度に分離されることを明らかにした。また、患者、及び、健常者から分離されるEASTEC菌株における制限酵素断片長多型解析を行ったところ、健常者由来のEASTEC菌株では多様性が認められるのに対して、下痢症アウトブレイク患者由来のEASTEC菌株間では同一の分離パターンが認められ、下痢症患者から分離されるEASTEC菌株は同一菌株であることが判明した。そこで、患者由来EASTEC菌株中のastA遺伝子の塩基配列をEAEC標準菌株であるO42株のそれと比較した。その結果、それらastA遺伝子配列においては同一配列であることが明らかになった。次に、患者由来EASTECのastA遺伝子をpET発現ベクターにサブクローニングし、組み換えEAST1の発現を試みたが、発現量が極めて少量であった。私は、これまで下痢症多発地域のインドネシア、ケニア、ブラジルで細菌性下痢症の疫学、そして、その原因菌の分子疫学的検査を行い、下痢症の発生状況と原因菌の動向を調査してきた。これら疫学調査の途中、2009年12月、ケニアのマンデラ東県ラフェー地区で住民の間で下痢症が発生した。この年は、ケニア全土でコレラが流行していたため、ケニア公衆衛生省は、マンデラにおいてもコレラの発生を疑った。しかしながら、実施された下痢症サーベイランスではコレラ菌を含む主要な下痢原因微生物は検出されず、原因菌は不明であった。1ヶ月の間、同地区で小児、成人を問わず、下痢症が蔓延して2名の死者を含む324名が下痢を発症し、ケニアでも大きな規模の下痢症アウトブレイクとなった。この下痢症アウトブレイクに対し、ケニア公衆衛生省から詳細な調査要請を受けた長崎大学熱帯医学研究所ケニアプロジェクト拠点の研究者と共に原因菌の分離を行い、下痢原因菌の特徴について検討を行った。下痢症アウトブレイクの発生したケニアは、日本国内の研究室とは地理的に遠距離に存在するが、長崎大学熱帯医学研究所ケニアプロジェクト拠点の共同研究者の協力で疫学的現地調査、特に、試料の採取、そして、試料の保管等、当初困難な点の予想されたことが、大きなトラブルもなく、順調に進んだ。先進国では衛生状態の改善で細菌性下痢症が急激に減少したが、近年の工業技術の発展と国際化による人や物の移動量の劇的な増加によって渡航者下痢症という形で増加してきた。一方、発展途上国では衛生水準が低く、依然として細菌性下痢症が頻発している。私は、ケニアで発生した原因菌が不明な感染性下痢症患者の糞便から腸管凝集性付着大腸菌耐熱性エンテロトキシン(astA)遺伝子を有するEASTECが高頻度に分離されることを明らかにした。EASTECは、健常人からも単離されることなどから、現在でも下痢厳正大腸菌のカテゴリーには含まれていない。私は、ケニアのマンデラ地方で下痢症アウトブレイク発生時に同地区の健常人から採取された糞便試料においてEASTECの検出を行ったところ、検出頻度は低いが、健常人の糞便からもEASTECが検出されることが明らかになった。そこで、同地区、同時期に由来するEASTECのアウトブレイク菌株と健常人由来菌株のDNAを制限酵素(Xba I)処理したDNAプラグに対して、パルスフィールドゲル電気泳動(PFGE)を行って消化断片を展開した。その結果、マンデラアウトブレイク菌株では異なる患者糞便由来の菌株においても一致した消化断片の泳動パターンが検出されるのに対して、健常人由来菌株ではアウトブレイク菌株とは大きく異なる泳動パターンを示すうえ、菌株間でも明らかに異なる泳動パターンを示した。このことから、アウトブレイク菌株と健常人由来菌株は分子疫学的に全く異なる菌株であることが明らかになった。研究調査の対象国であるケニアでは42の部族が存在するといわれるが、キクユ、ルヒア、カレンジン族などの大きな部族間での衝突が後を絶たない。また、近隣諸国、特に、ソマリアのイスラム勢力との間でも襲撃や報復などの衝突が発生する状況で、大小を問わなければ、国内の部族間衝突と隣国間衝突の多発する状況にあり、治安安定とは考えにくい。しかしながら、長崎大学熱帯医学研究所ケニアプロジェクト拠点の共同研究者の協力で聞き取り調査を含む疫学的現地調査、そして、試料採取や試料保管も問題なく行えている。また、保管試料からのEASTECの検出、単離が成功し、アウトブレイク菌株との分子疫学的比較解析も順調に進んだ。毎年17億人もの小児が発症する下痢症は、5歳未満の小児においては死亡原因が第2位となる重大疾患である。

先進国では国や自治体の積極的な取り組みによる衛生状態の改善、また、近年の社会的な衛生意識の向上も寄与する形で自国由来の細菌性下痢症が減少したが、工業技術の発展と国際化による人や物の移動量の劇的増加によって渡航者下痢症という形で増加してきた。一方、発展途上国では衛生水準が低く、依然として細菌性下痢症が頻発し、前述の小児患者数、死亡数の大半を占める。私は、ケニアで発生した原因菌が不明な感染性下痢症患者の糞便から腸管凝集性付着大腸菌耐熱性エンテロトキシン(astA)遺伝子を有するEASTECが高頻度に分離されることを明らかにした。EASTECは、健常人からも単離されることなどから、現在でも下痢厳正大腸菌のカテゴリーには含まれていない。そこで、ケニアのマンデラ地方の下痢症アウトブレイク発生時のEASTECについて、共同研究者の長崎大学熱帯医学研究所ケニア拠点研究者と現地研究者による調査チームの協力によって採取された検体試料を調べた。マンデラ地方の健常人から採取された糞便試料においてEASTECの検出を行ったところ、検出頻度は低いが、健常人の糞便からもEASTECが検出されることが明らかになった。しかしながら、これら健常人由来のEASTEC株をパルスフィールドゲル(PFGE)のフィンガープリント法で分析すると、菌株間で多様なパターンを示し、非同一株であることが判明した。また、これら健常人由来菌株のパターンと患者由来菌株のパターンは大きく異なることから、全く異なる菌株であると考えられた。一方、患者由来EASTEC株の病原因子の候補とされるastA産物の生物活性を調べるため、astAを発現ベクターにクローニングした。研究代表者の異動のため、所属機関の変更により研究環境が大きく変わり、研究課題の遂行のために研究環境の構築が必要となった。研究代表者は新たな所属機関での研究実施場所の確保や整備に時間を費やし、当初の計画で予定していた塩基配列解析、及び、組換えタンパク質の発現解析に遅延が生じている。これら解析を実施し、本研究課題遂行のため補助事業期間の延長を申請した。一方、疫学的調査地のケニアでは2017年に大統領選挙が行われ、選挙前後では部族間の衝突が激化、11月28日ケニヤッタ大統領就任(再任)後も大統領選挙の結果を巡り与野党支持者の間でナイロビを含む各地で散発的に衝突が発生し、国内情勢が不安定化している。しかしながら、共同研究者の協力のお陰で疫学調査、及び、試料の保管、検査では影響はあるももの阻止をされることなく行えた。我が国を含む先進諸国では積極的な衛生環境の整備によって自国由来の細菌性下痢症の発生予防が進んでいる。一方で下痢症は、世界規模では5歳未満の小児の死亡原因の第2位となっている現実があり、毎年5歳未満の小児では52万5千人が命を落とす重大疾患である。私は、2009年12月にケニアで発生、流行した原因不明の下痢症の原因について検討してきた。発生地区の地理的要因と社会的、そして、政治的背景から患者、及び、発生地区の健常者の採取糞便検体数が制限され、ライフライン、特に電力供給が非常に不安定な現地研究施設で、日本側共同研究者と現地研究者の協力のもと腸管凝集性付着大腸菌(EAEC)耐熱性エンテロトキシン(astA)遺伝子を有する大腸菌、EASTECが高頻度に分離されることを明らかにした。また、患者、及び、健常者から分離されるEASTEC菌株における制限酵素断片長多型解析を行ったところ、健常者由来のEASTEC菌株では多様性が認められるのに対して、下痢症アウトブレイク患者
味細胞における亜鉛の生理的役割の解明

味覚機能において『亜鉛Zn』は味細胞の分化・増殖に必須の分子であることが示されているものの、味蕾において、亜鉛が味覚情報伝達に関与するか否かは不明である。本研究では、亜鉛の味覚情報伝達への関与を精査するため、亜鉛バイオセンサーを用いて味刺激に対する味細胞からの亜鉛放出性の検討を行う。さらに、亜鉛トランスポーターの発現局在についても解析する。本年度は、味細胞単離法の確立並びに亜鉛バイオセンサーとしてhuman transient receptor potential ankyrin 1 (hTRPA1)安定発現細胞の作製を行い、味物質によって刺激された味細胞から亜鉛が放出されるか否かについて検討を行った。その結果、単離味蕾において、味細胞マーカー及びZnt3のmRNAレベルでの発現が認められ、味蕾の単離法が確立できていること、また、その単離味蕾においてZnt3が発現していることが示された。また、hTRPA1安定発現細胞にTRPA1アゴニストであるallyl isothiocyanate (AITC)又はZnCl2を作用させると、細胞内Ca2+レベルが上昇したことから、hTRPA1安定発現細胞においてTRPA1が機能的に発現していること、また、亜鉛バイオセンサーとして機能する可能性が示された。当該年度の研究は計画に基づき順調に進めることができた。これらの成果を基に、次年度は味細胞からの亜鉛放出性を検討する予定である。現在のところ、計画に基づき味細胞の単離およびバイオセンサーの確立まで順調に進んでいるため。当該年度で得られた研究成果を基に、次年度は単離味細胞からの亜鉛放出性を検討する予定である。また、免疫電子顕微鏡解析によるZnT3の発現局在も実施する予定である。免疫電子顕微鏡解析のための進捗状況が遅れたため、残額が発生したが、翌年度分と合わせて使用する予定である。
近代中国東北部(旧満州)文化に関する総合研究

中国の東北部、つまり旧「満州」は日本の近代史においてきわめて重要な場所である。なぜならば、日清戦争はさることながら、その後の日露戦争、日中戦争、さらに日米戦争に至るまで、いわば日本の運命を決めた戦争という戦争は、究極のところ、全部この地域の権益をめぐって起こされたものであり、ある意味において、日本の近代はまさに「満州」を中心に展開されたとさえ認識できるからである。しかし、近代日本の進路を大きく左右したこの旧「満州」について、これまではけっして十分に研究したとは言い難い。むろん、旧「満州」、とりわけ「満鉄」に関する歴史学的なアプローチに長い蓄積があり、多くの課題においてかなりの成果を挙げている。だが、よく調べてみれば、そのほとんどがいずれも政治、経済、あるいは軍事史に偏っており、いわゆる当時の人々の精神活動、あるいは行動原理に深く影響を与えた社会や文化などについての考察が意外にも少数しか存在していない。本研究は、いわば従来あまり重視されなかった旧「満州」の社会や文化などの諸問題を取り上げ、関連史実等の追跡を行う一方、とりわけその成立と展開に大きく関わっていた「在満日本人」の活動を中心に、できるかぎりその全体像を整理、解明しようとした。そして三年間の研究を通して、主に以下のような成果を得ることができた。1.これまで重視されなかった旧「満州」の社会や文化などの問題について比較的総合かつ多角的に追及し、多く史実(都市空間、公娼制度、秘密結社、文芸活動など)を解明した。2.海外共同研究者の協力を得て、多くの史料、とりわけいわゆる在満日本人の発行した各分野の現地雑誌を発掘し、その一部(「満州浪曼」、「芸文」)を復刻、またはその関連作業に取り組み始めた。3.従来、難しかった現地研究者との交流を実現させ、三回の国際研究集会を通じて、多くの中国や韓国研究者とさまざまな問題について意見を交換した。以上のように、この三年間は、現地調査などを通して、多くの貴重な史料を入手したばかりでなく、現地研究者との間に比較的親密な協力関係も築いたため、今後もこれらの成果を生かすことにより、一層の研究上の進展が得られるだろうと思われる。今年度は、年次計画通り、まず、各担当者が具体的な研究対象を選定し、それぞれのテーマにそって文献を収集しながら、既存資料と先行研究を整理した。具体的には、鈴木貞美と劉建輝が海外研究協力者である呂元明氏(中国東北師範大学教授)の協力を得て、旧満州の新京(長春)で発刊された日本語文芸雑誌『満州浪曼』を発掘し、その全八巻に収録されている小説、評論、詩歌に注釈を施しながら、作者像を含む雑誌そのものの全容解明も進めている。また稲賀繁美、竹村民郎、上垣外憲一、劉岸偉、孫江がこちらも海外研究協力者である厳安生氏(中国北京日本学研究センター教授)の協力を得て、大連図書館(前身の一つが旧満鉄図書館)、天津図書館(前身の一つが旧天津日本人図書館)等の海外図書館と一部の国内図書館を調査し、それぞれの分担課題に即した多くの一次資料を取得した。中でも稲賀繁美、竹村民郎、孫江がすでにその一部を論文作成に使用し、別紙のように研究成果を公刊している。次に、各担当者及び海外研究協力者間の連携と情報交換をはかるために、今年度はまた二回の国内研究集会と一回の国際研究集会を開催した。