hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
多様体の幾何学とその上の解析的及び代数的分野の研究

今年度の研究項目は1.変換群及び特異点の位相幾何学的諸性質,2.多様体上の力学系の諸性質,3.代数群とホップ代数及び代数的K群と数論,4.代数多様体と表現論,の4項目であった.1について:大池は内田によって発見された球面上に実解析的に働く非コンパクトリ-群の作用(これをtwisted linear actionと名付けた)が複素グラスマン多様体に対しても,球面,複素射影空間,四元数射影空間の場合と同様に義気出来ることを示し,その作用について研究した.内田は(2nー1)次元連結閉多様体上のSL(n,C)の滑らかな作用の分類について考察し,この分類がある種の力学系の分類問題に帰着出来ることを示した.両者の研究成果は発表のため目下印刷中である.佐伯は他の2人と共にト-ラス結び目の結び目解消数について過去に知られている結果の改良を行い,それを使って,一部の型のト-ラス結び目についてはミルナ-予想が正しいことを示した.結果は印刷発表している.2について:河村は位相力学系に付随する作用素環の構造について,特にその作用素環の非可換性と力学系の複雑さとの関連を考察し,結果を印刷発表した.中里はリ-環の包絡代数における正元について研究し,結果は雑誌に発表のため,投稿中である.3について:阿部は可換環上のシュバレイ群の自己同型の型を決定し,結果を1991年8月にロシアのBarnaulで開催された「代数に関する国際会議」において発表した.4について:渡辺は旗多様体上の微分作用子環とその加群についてその代数的構造を決定し,結果を1991年10月に北海道大学で開催された日本数学会の「秋季総合分科会」において発表した.今年度の研究項目は1.変換群及び特異点の位相幾何学的諸性質,2.多様体上の力学系の諸性質,3.代数群とホップ代数及び代数的K群と数論,4.代数多様体と表現論,の4項目であった.1について:大池は内田によって発見された球面上に実解析的に働く非コンパクトリ-群の作用(これをtwisted linear actionと名付けた)が複素グラスマン多様体に対しても,球面,複素射影空間,四元数射影空間の場合と同様に義気出来ることを示し,その作用について研究した.内田は(2nー1)次元連結閉多様体上のSL(n,C)の滑らかな作用の分類について考察し,この分類がある種の力学系の分類問題に帰着出来ることを示した.両者の研究成果は発表のため目下印刷中である.佐伯は他の2人と共にト-ラス結び目の結び目解消数について過去に知られている結果の改良を行い,それを使って,一部の型のト-ラス結び目についてはミルナ-予想が正しいことを示した.結果は印刷発表している.2について:河村は位相力学系に付随する作用素環の構造について,特にその作用素環の非可換性と力学系の複雑さとの関連を考察し,結果を印刷発表した.中里はリ-環の包絡代数における正元について研究し,結果は雑誌に発表のため,投稿中である.3について:阿部は可換環上のシュバレイ群の自己同型の型を決定し,結果を1991年8月にロシアのBarnaulで開催された「代数に関する国際会議」において発表した.4について:渡辺は旗多様体上の微分作用子環とその加群についてその代数的構造を決定し,結果を1991年10月に北海道大学で開催された日本数学会の「秋季総合分科会」において発表した.
オールアラウンドレーザフォーカシング法による機能性金属構造体創製に関する研究

機能性金属構造体創製とは、金属材料の組織、形態を含めた構造を形成・制御することによって新機能を発現させる構造体創製を意味する。ファイバーレーザを用いた「オールアラウンドレーザフォーカシング(全周囲レーザ集光)法」による局所加熱によって、金属材料の微小領域の溶融を実現し、機能性金属構造体創製の要素技術の一つである微小領域における金属間化合物の合成を試みる。また、微小金属溶融滴の積層による微小(マイクロメータースケール)三次元造形についても試みる。本年度は、主に金属溶融滴生成のためのオールアラウンドレーザフォーカシングシステムの設計・製作を行った。当システムはレーザ照射系及びレーザ照射時間制御系から構成される。昨年度設計・製作したレーザー照射装置を用い、金属細線溶融および金属間化合物合成のための照射・加熱実験を行った。先端が溶融する条件をレーザー出力(レーザ照射系)および照射時間(レーザ照射時間制御系)を変化させて明らかにした。溶融滴の落下については、溶融部が微小なために表面張力が重力に勝り容易ではない。そこで、ナノ秒レーザーを細線の溶融部に照射し、溶融滴を容易に落下させるシステムを構築した。オールアラウンド集光位置に金属微粒子を供給できるように細管を光軸と同軸上に配置し、金属微粒子を加熱溶融可能なシステムを設計製作した。ナノ秒レーザー照射によりファイバーレーザー加熱により溶融した細線先端から溶融滴を切り離し、3次元造形の基本技術である基板上への溶融滴の堆積に成功した。1.レーザ照射系の設計・製作ファイバーレーザを用いた中心軸抜きレーザビームを形成及び金属細線あるい拝金属微粒子ビーム導入のための穴あきプリズムの設計・製作を行った。中心軸抜きレーザビームの集光及び金属細線あるいは金属微粒子ビーム導入りための穴あき凸レンズを設計・製作した。金属細線導入機構(構造)についても設計・製作を行い本レーザ照射系に付加した。2.レーザ照射時間制御系の設計・製作金属材料への投入エネルギーを高度に制御するためにメカニカルシャッターを光軸にセットし、開口時間を制御することでレーザ照射時間制御を行えるようにした。金属基板上の目的とする位置に必要な時間、レーザを照射あるいは金属溶融滴を落下させるために、メカニカルシャッターと同期させるXYZステージを導入した。
オーファン受容体リガンドの新しい高感度アッセイ法による探索

本研究は、独自のGPCRリガンドライブラリー作製と新しいアッセイ方法を導入し、新規生理活性ペプチドリガンドを探索することを目的とする。平成15年度は、(1)ゲノム構造Bankに登録されたDNA構造を用いて、1)独自のコンピューター「検索プログラム」により、ゲノム情報からG蛋白質共役受容体(GPCR)のリガンドとなる生理活性ペプチド候補を網羅的に抽出し、(2)994個の活性ペプチド候補をすべて化学合成し、(3)多数のGPCRを内在的に発現する細胞(組織)に作用させて特異的及び非特異的活性測定による新規GPCRリガンドのスクリーニングを行った。このGPCRペプチド性リガンド候補の化学合成は、生体内に微量しか存在しない生理活性ペプチドを大量に合成して、従来のGPCR刺激後の細胞内の下流シグナルを増幅するのど対照的な受容体上流の増幅を試みるものであり、強度のシグナルを生じ、精度よくGPCRリガンドを同定することが可能である(ペプチドゲノミクス解析の試み)。非特異的活性測定法として、オーファンGPCRを発現させた細胞や約20種類の種々の細胞に蛍光指示薬fura-2/AMを取り込ませ、ペプチドリガンド候補による細胞内Ca濃度変化を蛍光細胞内Caシグナル測定装置により96個同時に測定した.また、血管平滑筋、輸精管、回腸平滑筋などの組織をマグヌス管法にて種々の濃度のペプチドの収縮・弛緩を測定した。その結果、ゲノム構造から予測したリガンド候補994個の合成ペプチドより、総計34種類の既知ペプチドを検出した。一方、新規活性ペプチド3種類を検出した。現在、その新規活性ペプチドの遺伝子を取得し、生体内組織分布の解析および機能解析を行っている。本研究は、独自の新しいアッセイ方法を導入し、リバース薬理学的方法により、新規生理活性ペプチドを探索し、構造決定することを目的とする。平成14年度は、(1)3T3細胞は細胞内カルシウム測定において、刺激を受けると強いシグナルを発生する特徴を持つので、オーファンボンベシン受容体遺伝子BRS3を安定発現する2種の3T3細胞の調製を行った。BRS3を安定発現する3T3細胞(BRS3-3T3)および高感度化を可能にするGqを安定発現する3T3にBRS3遺伝子を導入した細胞(BRS3-Gq-3T3)を作製した。(2)上記2種のBRS3発現細胞は、ボンベシン受容体に対して非特異的な合成BRS3リガンドを用いると、細胞内Ca濃度変化によるアッセイでは共にEC50値が約1nMであり、100pMでも検出可能となり非常に高感度であった。また、合成BRS3リガンドのみに特異的なクローン細胞とニューロメジンB/ニューロメジンC/合成BRS3リガンドのすべて応答する非特異的クローン細胞を樹立した。(3)リガンド探索用のペプチドライブラリーとして、脳、視床下部、胃、心臓の抽出物を作製した。(4)96サンプルを同時に測定可能なハイスループットスクリーニング装置(浜松ホトニクス:FDSS3000)を用いて、HPLCによる分離と細胞内カルシウム濃度アッセイ法によるリガンドスクリーニングを組み合わせて、現在、新規リガンドを探索中である。これまでにNMC、NMB、GRPを単離した。
肝癌由来増殖因子の血管新生と肝癌増殖における役割の検討

本検討では臨床で使用可能な薬剤であるインターフェロンがSorafenibの抗腫瘍効果を増強する可能性を示すことができた。またHDGFの発現抑制が、肝癌細胞増殖と血管新生の両者を阻害することで肝癌増殖制御につながることを見出すことができた。またHDGFはVEGFの制御を受ける下流の遺伝子ではなく、逆にHDGFはVEGFの発現を誘導する因子と考えられる結果が得られた。以上の結果は肝癌増殖・血管新生の機序に関して、HDGFの役割を含む新たな知見であり、HDGFの制御による肝癌増殖治療の開発につながることが期待できる。1. SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vitro):H24年度の検討からSorafenibおよびIFNの投与に加えてHDGFの発現抑制を行うことで、より強い抗腫瘍効果が得られる可能性が考えられた。我々の樹立したHDGFをノックダウンした肝癌細胞にSorafenibあるいはIFNを作用させ、肝癌細胞の増殖抑制効果が増強されることが確認された。HDGFの抑制による癌細胞増殖抑制の治療への検討に重要である。2. SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vivo): H24年度に引き続きヒト肝癌細胞株を免疫不全マウスの皮下に移植するXenograft modelを用い、Sorafenib(経口投与)とIFN(腫瘍近傍へ注入)の併用による抗腫瘍効果増強を確認し、特に腫瘍血管を含む腫瘍間質細胞への作用が重要であることを明らかにした。肝癌への新たな治療法にもつながる知見と考えられる。3. SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vitro):H24年度に引き続き肝癌細胞に対するSorafenibおよびIFN投与によって生じる、HDGF以外の遺伝子の変化についてDNAチップによる解析で変動遺伝子を同定した。4. SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vivo):SorafenibおよびIFN投与によって生じるHDGF以外の遺伝子の変化について、上記2.のXenograft modelで得られた腫瘍サンプルに対してもDNAチップによる検討を行った。Pathway解析により、SorafenibへのIFN併用はアポトーシス誘導と細胞増殖抑制をもたらすことが明らかとなった。肝癌の新規治療にもつながる知見と考えられる。1. SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vitro):SorafenibとIFNをin vitroで肝癌細胞株に投与してReal-time PCRによってHDGFの発現変化を検討した。Hep3B細胞による検討では、SorafenibおよびIFNはHDGFの発現抑制効果をもたらしたが、変化は軽度でかつ変化に時間を要することからHDGFがこれらの薬剤の直接的な標的遺伝子とは考え難い結果であった。2. SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vivo):ヒト肝癌細胞株を免疫不全マウスの皮下に移植するXenograft modelを用い、移植後にSorafenib(経口投与)あるいはIFN(腫瘍近傍へ注入)を単剤または併用投与してその抗腫瘍効果を検討した。SorafenibとIFNと併用によって抗腫瘍効果が増強することが確認されたため、肝癌に対する新たな治療の開発につながる重要な知見を得ることができたと考えられる。3. SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vitro):肝癌細胞に対してin vitroでSorafenibおよびIFNを投与してtotal RNAを抽出した。SorafenibおよびIFN投与によって生じる、HDGF以外の遺伝子の変化についてもDNAチップによる解析を現在行っている。4. SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vivo):SorafenibおよびIFN投与によって生じるHDGF以外の遺伝子の変化について、上記2のin vivo modelで得られた腫瘍サンプルに対してもDNAチップによりスクリーニングを行っている。1. SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vitro):H25年度までの結果より、肝癌細胞に対するSorafenibあるいはIFNの抗腫瘍効果が、HDGFの発現抑制によって増強することが判明した。本年度は実験する細胞株の種類を増やして結果を確認した。HDGFの制御による肝癌治療の開発に有用と思われる。3. SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vitro):H25年までのDNAチップの検討によってIFNはアポトーシスシグナルの増強、あるいはVEGFシグナルやMAPKシグナルの減弱によってSorafenibの抗腫瘍効果を増強させることを示唆する結果を得た。本年度はFACSを用いた解析によって、IFNによる肝癌細胞のアポトーシス誘導効果を確認した。4. SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vivo):上記のSorafenibおよびIFN投与によって発現が変化した因子について、過剰発現および発現抑制を行う細胞株を樹立した。今後肝癌細胞増殖への効果についてのin vitroおよびin vivoでの検討を行う予定である。1. SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vitro):これまで主にHep3B細胞を用いてIFNによる肝癌増殖抑制効果を検討したが、更にHepG2細胞への増殖抑制効果が時間・容量に依存して生じることを確認した。肝癌増殖の機序解明と治療開発に重要である。2.SorafenibとIFNの併用療法についての検討(in vivo):平成26年度までに引き続き、Xenograft modelを用いての検討を実施した。

SorafenibとIFNと併用による抗腫瘍効果の機序として、肝癌細胞へのアポトーシス誘導に加え、血管新生抑制を含む間質細胞への作用が重要であることを明らかとした。肝癌増殖制御における有用な知見と考えられる。3.SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vitro):これまでの検討からHDGFはVEGFの制御を受ける下流の遺伝子ではないという結果を得ている。一方HDGFの発現抑制株を用いた検討から、逆にHDGFはVEGFの発現を誘導する因子であることが明らかとなった。HDGFによる肝癌増殖・血管新生の機序解明にあたって重要である。4.SorafenibおよびIFNの標的遺伝子の同定と、その肝癌細胞増殖促進効果の検討(in vivo):H26年までの検討から、SorafenibおよびIFN投与によってVEGFのシグナルが抑制されることを明らかとした。HDGFの発現抑制株を用いた検討を上記のin vitroの実験に加えて、xenograft modelを用いてin vivoでも行った。その結果HDGFの抑制によってVEGFの発現は抑制され、更に血管新生の抑制と抗腫瘍効果を生じることを明らかにした。HDGFの制御による血管新生抑制と肝癌治療の開発を進めるにあたり重要である。本検討では臨床で使用可能な薬剤であるインターフェロンがSorafenibの抗腫瘍効果を増強する可能性を示すことができた。またHDGFの発現抑制が、肝癌細胞増殖と血管新生の両者を阻害することで肝癌増殖制御につながることを見出すことができた。またHDGFはVEGFの制御を受ける下流の遺伝子ではなく、逆にHDGFはVEGFの発現を誘導する因子と考えられる結果が得られた。以上の結果は肝癌増殖・血管新生の機序に関して、HDGFの役割を含む新たな知見であり、HDGFの制御による肝癌増殖治療の開発につながることが期待できる。HDGFをノックダウンした肝癌細胞にSorafenibあるいはIFNを作用させ、肝癌細胞の増殖抑制効果が増強されることを複数細胞で確認することができた。またSorafenibとIFNの抗腫瘍効果が増強されることに加え、IFNの種類による抗腫瘍効果の違いを明らかにして臨床応用につながる知見が得られた。一方昨年度のDNAチップによる遺伝子解析によりIFNの抗腫瘍機序に関連するPathwayを絞り込み、本年度はその確認を行うことができた。しかしながら昨年までに同定したIFN治療の標的候補遺伝子については、発現量を調整した細胞株を樹立に留まり、十分な機能解析まではできていない。以上からやや予定より遅れていると考えている。消化器病学
生命科学における分子生物学の将来像に関する調査研究

本研究班は分子生物学を高い学術水準に保つことが生命科学の諸研究領域の発展に大きな波及効果をもたらすことを考慮し、分子生物学の展開のあるべき姿を研究者の立場から検討するために編成されたものである。従って日本分子生物学会(会長:内田久雄)の評議員および幹事を分担研究者として本研究班は構成されたが、各人は学会の利益代表としてではなく、自由な立場より本研究に参加した。また必要に応じ班員外の専門研究者からも意見を求め、討議を行なった。検討結果はとりまとめて記録として印刷したが、以下の諸点が問題となった。これらについては引続き検討が行なわれ、しかるべく対処されることが期待されている。まず、DNA研究を中心とした分子生物学の將来像として、遺伝子の構造解析を基として、細胞の分子生物学、さらにより高次な生命現象の解析へ、と云う流れが当分続くと考えられる。しかし、わが国では遺伝子構造の解明研究が非常に増加している一方、遺伝子の働らき、調節機構の研究が未だ数少ない。他方、モデル系としての原核生物の研究はむしろ低下していることは問題である。第二に、分子生物学への期待が広がるにつれ、専門分野間のコオーディネイションの未熟が問題となり、これは教育体係の改革を必要とする。第三には分子生物学への社会的期待がプロジェクト研究の推進という形で表現されることには問題がある。しかし乍ら、プロジェクト研究が取上げられたために、一般の研究が圧迫されると考える必要はない、など多くの問題点が指摘された。
超高集積化した磁性メモリセル

新世代の情報記憶デバイスであるMRAM(Magnetic Random Access Memory)における磁性薄膜メモリセルについての検討を行った。本研究では、情報記録層の静磁エネルギーを低減する新積層構造を提案し、4Gbit級のMRAMに用いられるメモリセルの基本構造を構築することを目的とした。(1)走査型プローブ顕微鏡を用いたメモリセルの材料構造観察、磁気構造観察を行った。検討は主に、0.5μm×0.5μmから2μm×2μmのサイズの正方形メモリセルに関して行った。従来型の厚さ10nmのNi-20at%Fe単層膜情報記憶磁性層は、面内還流磁区構造となり情報を失うのに対して、本研究で提案した基本構造であるNi-Fe(10nm)/Hf(2nm)/Ni-Fe(10nm)積層膜情報記憶磁性層は、面内方向には還流磁区構造とならずに情報を安定に保持することができることを明らかにした。また、長方形メモリセルについても同様の結果を得た。(2)Ni-Fe(10nm)/Hf(2nm)/Ni-Fe(tnm)積層膜情報記憶磁性層における下部磁性層の厚さtを薄くし、厚さ5nm以下にすると、上下の磁性層の磁化のバランスが崩れ、面内還流磁区構造となり情報を失うことを明らかにした。(3)超高集積化が可能であると予想している閉磁路構造を有するリング型メモリセルについての検討を行い、上記リング型メモリセルでは漏洩磁界がなく、隣接するメモリセルの記録情報に与える影響がないことを明らかにした。新世代の情報記憶メモリであるMRAM(Magnetic Random Access Memory)の記憶容量を大きくするためのブレークスルーを発見することを目的として,サブミクロンオーダー以下の大きさを有するメモリセルの電気的特性および磁気的特性について評価を行った.(1)種々の構造を有するメモリセルの微細加工方法についての基礎検討を行った.粒子の直進性の優れたイオンビームスパッタリング法と微細加工に適した電子線リソグラフィ法を組み合わせることにより,100nm以下の大きさのメモリセルを形成する技術を確立した.(2)サブミクロンオーダー以下の大きさを有するメモリセルに対して,走査型トンネル顕微鏡および原子間力顕微鏡を用いた詳細な構造評価を行った.電子線リソグラフィ法で用いるレジストの側面に付着する蒸着粒子の存在がメモリセルの微細な構造に影響を及ぼすことが明らかになった.(3)8μm×1μmの大きさを有するメモリセル内の情報記憶磁性層の磁区構造に関する検討を行っtた.その結果,従来型の単層膜情報記憶磁性層は,膜面内で磁束が還流する磁区構造となり情報を失うのに対して,本研究で提案した基本構造である積層膜情報記憶磁性層では,膜厚方向で磁束が環流し,情報を安定に保持することができることを明らかにした.(4)超高真空対応のスピン依存トンネル効果評価<装置を設計製作した.また,従来の方法により,磁界中のメモリセルの電気的な特性により,磁界中のメモリセルの電気的な特性についての検討を行った.0.5μm×0.5μmの大きさを有する各種の積層構造のメモリセルの磁界による電気抵抗の変化を測定し,その結果から各磁性層の磁化状態の情報を取り出す技術を確立し,超高真空対応の評価装置の基礎的知見を得た.新世代の情報記憶デバイスであるMRAM(Magnetic Random Access Memory)における磁性薄膜メモリセルについての検討を行った。
大腸癌のサブクラス分類に対応するマウスモデルとオルガノイドの確立とその臨床応用

私共は、これまで大腸上皮細胞特異的Apcノックアウトマウス及び、Apcと別のドライバー遺伝子変異(Kras, TgfbRII, Ptenなど)を持つ複合的遺伝子改変マウスを作製し、CMS分類の各サブタイプに一致する自然発生の大腸浸潤癌を持つマウスモデルを確立してきた。本研究では、これらのマウスモデルで発生する腫瘍から、CMS分類の各サブタイプに対応したマウス腫瘍のオルガノイドを作製し、その遺伝子発現プロファイルを網羅的に解析しCMS分類の各サブタイプに特徴的な分子マーカーを同定、確認をした上で、抗がん剤のスクリーニングをin vitro実験系で行うシステムを構築し、CMS分類サブタイプ別に行う個別化医療に必要な動物実験モデルにおける基盤的研究の確立をめざしている。これまでに確立した大腸癌マウスモデルとして、粘液癌が発生するApc+TgfbRII欠損マウス(CMS1)、高分化型腺癌が発生するCPC-APCマウス(CMS2)、胃型大腸癌が発生するApc+Cdx2欠損マウス(CMS3)、高度浸潤癌が発生するApc+Pten欠損マウスまたはApc+変異型Krasモデル(CMS4)が対応する。(1)CMSマウスモデルの作製:既にCMS1, CMS2, CMS4のモデルを作製すみである。現在Apc+Cdx2欠損マウス(CMS3)を作製準備中である。これら4種類のCMSマウスモデルから腫瘍細胞を回収して転写産物、病理検体、オルガノイドを作製する。(2)CMS分類の分子マーカーの同定:腫瘍の継時的な形態変化の前後で発現量が変化する転写産物を網羅的に解析し、CMSの各サブタイプに関連する分子マーカーの同定を試みる。(3)オルガノイドの作製と評価:オルガノイドの形態の観察ならびに分子マーカーの発現解析をin vitro実験系で行う。抗がん剤のスクリーニングに応用可能かどうかも検証する。遺伝子改変により高分化型(CMS2),高度浸潤型(CMS4), MSI-粘膜癌型(CMS1)の形態をもつマウスモデルを確立した。これらの腫瘍細胞から転写産物、病理検体、オルガノイドを作製中であり、現在Apc+Cdx2欠損マウス(CMS3)を作製中である。これら4種類のCMSマウスモデルから腫瘍細胞を回収して転写産物、病理検体、オルガノイドを作製している。CMS分類の分子マーカーの同定:CMS1, CMS2, CMS4のマウスの腫瘍で、Apc単独変異マウスをコントロールとして転写産物を網羅的に解析し、CMSの各サブタイプに関連する分子マーカーの同定を試みた。オルガノイドの作製と評価についても、オルガノイドの形態の観察ならびに分子マーカーの発現解析をin vitro実験系で行っている。抗がん剤のスクリーニングに応用可能かどうかも検証の準備を進めている。回収した転写産物の発現プロファイルの比較を網羅的遺伝子発現解析用のDNAチップ(affymetrixのMouse Gene 1.0 ST Array、28,853 gene)6-10枚を用いて解析した。CMS分類の各サブタイプのマウスで、形態変化をもたらす可能性のある分子マーカーの候補遺伝子(約10-20個前後)を50個前後in silico解析で選択し、さらにquantitative PCR法で20個前後まで絞り込み、既製の抗体があるものについては、Western blot法や免疫組織染色で分子の局在と形態変化の相関を検証し、最終的には分子マーカーの候補遺伝子を各サブタイプごとに10個程度まで絞り込んでいる。動物実験が困難な研究室でも形態変化についての三次元細胞培養ができるようCMS分類の各サブタイプにおけるオルガノイド・ライブラリーを作製する。転写産物、蛋白質を回収し、元の癌組織の発現プロファイルを再現していることをquantitative PCR法ならびにWestern blot法で確認する。続いてオルガノイドを使って、CMS分類の各サブタイプで薬剤スクリーニングのモデルを確立する。オルガノイドの作製は、連携研究者の坂本直也が、手技を確立しており、既にヒトやマウスの大腸癌からオルガノイドの作製に成功しており、順次作成後、解析を進める。研究体制については、研究代表として研究を統括している檜井孝夫が、呉医療センター・中国がんセンター臨床研究部分子腫瘍研究室長・外科医長から、2019年4月付けで広島大学病院遺伝子診療部特任教授に着任し、現在、広島大学病院でも研究体制を確立中である。広島大学の大学院生である)河内雅年(動物実験全般担当)、佐田春樹(遺伝子組換え実験担当)が研究を推進する。遺伝子改変マウスの作製・維持には、外丸祐介(広島大学自然科学研究支援開発センター動物実験部、教授)が担当し、得られた腫瘍の病理学的解析とオルガノイドの作製は坂本直也(広島大学分子病理学教室、助教)が担当する。遺伝子解析結果の検討は、池上恒雄(東京大学医科学研究所臨床ゲノム腫瘍学分野、准教授)が担当予定である。

本研究では、これらのマウスモデルで発生する腫瘍から、CMS分類の各サブタイプに対応したマウス腫瘍のオルガノイドを作製し、その遺伝子発現プロファイルを網羅的に解析しCMS分類の各サブタイプに特徴的な分子マーカーを同定、確認をした上で、抗がん剤のスクリーニングをin vitro実験系で行うシステムを構築し、CMS分類サブタイプ別に行う個別化医療に必要な動物実験モデルにおける基盤的研究の確立をめざしている。これまでに確立した大腸癌マウスモデルとして、粘液癌が発生するApc+TgfbRII欠損マウス(CMS1)、高分化型腺癌が発生するCPC-APCマウス(CMS2)、胃型大腸癌が発生するApc+Cdx2欠損マウス(CMS3)、高度浸潤癌が発生するApc+Pten欠損マウスまたはApc+変異型Krasモデル(CMS4)が対応する。(1)CMSマウスモデルの作製:既にCMS1, CMS2, CMS4のモデルを作製すみである。現在Apc+Cdx2欠損マウス(CMS3)を作製準備中である。これら4種類のCMSマウスモデルから腫瘍細胞を回収して転写産物、病理検体、オルガノイドを作製する。(2)CMS分類の分子マーカーの同定:腫瘍の継時的な形態変化の前後で発現量が変化する転写産物を網羅的に解析し、CMSの各サブタイプに関連する分子マーカーの同定を試みる。(3)オルガノイドの作製と評価:オルガノイドの形態の観察ならびに分子マーカーの発現解析をin vitro実験系で行う。抗がん剤のスクリーニングに応用可能かどうかも検証する。遺伝子改変により高分化型(CMS2),高度浸潤型(CMS4), MSI-粘膜癌型(CMS1)の形態をもつマウスモデルを確立した。これらの腫瘍細胞から転写産物、病理検体、オルガノイドを作製中であり、現在Apc+Cdx2欠損マウス(CMS3)を作製中である。これら4種類のCMSマウスモデルから腫瘍細胞を回収して転写産物、病理検体、オルガノイドを作製している。CMS分類の分子マーカーの同定:CMS1, CMS2, CMS4のマウスの腫瘍で、Apc単独変異マウスをコントロールとして転写産物を網羅的に解析し、CMSの各サブタイプに関連する分子マーカーの同定を試みた。オルガノイドの作製と評価についても、オルガノイドの形態の観察ならびに分子マーカーの発現解析をin vitro実験系で行っている。抗がん剤のスクリーニングに応用可能かどうかも検証の準備を進めている。回収した転写産物の発現プロファイルの比較を網羅的遺伝子発現解析用のDNAチップ(affymetrixのMouse Gene 1.0 ST Array、28,853 gene)6-10枚を用いて解析した。CMS分類の各サブタイプのマウスで、形態変化をもたらす可能性のある分子マーカーの候補遺伝子(約10-20個前後)を50個前後in silico解析で選択し、さらにquantitative PCR法で20個前後まで絞り込み、既製の抗体があるものについては、Western blot法や免疫組織染色で分子の局在と形態変化の相関を検証し、最終的には分子マーカーの候補遺伝子を各サブタイプごとに10個程度まで絞り込んでいる。動物実験が困難な研究室でも形態変化についての三次元細胞培養ができるようCMS分類の各サブタイプにおけるオルガノイド・ライブラリーを作製する。転写産物、蛋白質を回収し、元の癌組織の発現プロファイルを再現していることをquantitative PCR法ならびにWestern blot法で確認する。
体外受精系を利用したウシ精子の染色体分析法の確立とX,Y精子分離法への応用

1.Ca-Ionophore A23187(IA)処理精子による受精条件の検討:0.1μMIAを用いて、3060秒間ウシ精子を処理し、透明帯除去ハムスタ-卵子との受精率を調べた結果、カフェイン添加培地では種雄牛による差異が認められたが、テオフィリン(15mM)添加培地では、80%以上の安定した受精率が得られ、また、媒精時の精子濃度は25×10^7個/mlが適当であることが判明した。2.染色体標本作製条件の検討:精子を0.5μMIAで処理し0.51.0時間媒精した結果、受精率は8090%であったが、性判別率は2535%であった。侵入精子数が増加すると、中期核板まで発育する精子の割合は減少したが、中期核板の総数は、単精子侵入(57.9%)よりも、2個の精子が侵入した場合の方が高く(70.6%)、13個の精子が侵入する条件で媒精することにより染色体の検出率が向上することが示唆された。3.ウシにおけるY精子の判定法とPercoll密度勾配遠心によるX,Y精子分離法の検討:キナクリンマスタ-ドによりウシの精子とリンパ球を蛍光染色したが、F-bodyは検出されなかった。Percoll密度勾配の層の数と密度、遠心時間および遠心力を変えて、各層から回収した精子について異種間体外受精を実施しているが、回収した精子の活力や濃度が異なるために、安定した受精率が得られず、現在、実験を継続中である。4.ウシ精子の染色体異常の検査:ハムスタ-卵子とウシ精子の異種間体外受精を実施したところ、1頭の種雄牛の精子から、高数性の染色体異常(31,Y)を示す分裂中期核板が1例観察された。このことから、異種間体外受精法を用いて、種雄牛における精子の染色体異常の研究が可能であることが示された。現在は、牛の例数を増やして、多数の種雄牛における精子の染色体異常発現率を調査中である。(1) 0.1μMのCa-Ionophore A23187を用いて3060秒間精子を処理し、カフェインとテオフィリンの添加効果を比較した結果、カフェイン添加培地では種雄牛によって受精率に大きな差異が認められだが、テオフィリン(15mM)添加培地を使用した場合には、いずれの種雄牛精子でも80%以上の安定した受精率が得られるようになった。(2)媒精時の精子濃度と媒精時間を検討した結果、媒精濃度は、25×10^7、媒精時間は12時間が適当であることが判明した。しかし、2×10^7で受精率に大きな差異が認められ、種雄牛による差異の原因を明らかにするとともに、できるかぎり同一条件ですべての種雄牛精子に適応できる媒精方法を継続検討中である。2.染色体標本作成条件の検討(1)受精卵子をTCM199を用いて812時間培養し、さらに分裂阻害剤としてビンブラスチンおよびポドフィロトキシンを添加して12時間以上培養した結果、受精卵子の60%以上に精子染色体が観察された。媒精直後の培養時間は8時間よりも12時間前後の方が高い染色体検出率が得られた。

(2)当初、染色体検出率は媒精卵子の10%前後に過ぎなかったが、斬進固定と空気乾燥法により、現在は40%程度に向上し、その6070%に分析可能な染色体像を得られるようになった。しかし、染色体分析が可能になるまでの受精卵子の培養時間にはバラつきが認められ、できるかぎり一定時間に染色体標本を作成でき、染色体分析可能な卵子の割合も媒精卵子の50%以上になるように継続検討中である。1.ウシにおけるY精子の判定法とPercoll密度勾配遠心によるX,Y精子分離法の検討キナクリンマスタ-ドによりヒトとウシの精子およびリンパ球を蛍光染色し、F-bodyの検出を試みた結果、ヒト精子では、45.4%にF-bodyが認められた。ヒトのリンパ球のF-bodyは、女性では認められなかったが、男性では、検出率が92.7%であり、さらに分裂中期核板中に、強い蛍光を示す染色体が1個検出された。しかし、ウシの精子とリンパ球では、F-bodyは傑出されなかったことから、ウシ精子の性別判定のためには、F-bodyの検査は不適であり、異種間あるいは同種間体外受精系を使用するのが最も確実な方法であることが判明した。次にヒト精子で用いられている密度勾配遠心によるX,Y精子分離法のウシ精子への適用性を調べるため、Percoll密度勾配の層の数と密度、遠心時間および遠心力を変えて、各層から回収した精子について異種間体外受精を実施しているが、回収した精子の活力や濃度が異なるために、安定した受精率が得られず、現在、実験を継続中である。2.ウシ精子の染色体異常の検査ハムスタ-卵子とウシ精子の異種間体外受精を実施したところ、1頭の種雄牛の精子から、高数性の染色体異常(31,Y)を示す分裂中期核板が1例観察された。このことから、異種間体外受精法を用いて、種雄牛における精子の染色体異常の研究が可能であることが示された。また、ハムスタ-卵子との異種間体外受精を水牛の精子に応用したところ、精子の侵入が認められたので、水牛においても精子の染色体検査実施の可能性が示唆された。現在は、牛の例数を増やして、多数の種雄牛における精子の染色体異常発現率を調査中である。
高分子微粒子中への界面活性剤の吸蔵化現象解明及び吸蔵化を用いた機能性微粒子の創製

乳化重合は古くから広範に用いられており,近年では環境面への配慮から水系で行われる乳化重合に対する注目が一層高まっている。本研究は,乳化重合により作製された高分子微粒子中に,重合時に使用したノニオン性界面活性剤が取り込まれる(以下,吸蔵化と呼ぶ)現象についての検討である。乳化重合において重合の場を提供し,生成粒子の安定化を担うべく添加されている界面活性剤の吸蔵化現象は,合成時の問題だけでなく,フィルム形成時の物性低下などを招くことから,非常に重要な関心事である。また,これまでになされてきたノニオン性界面活性剤を用いた乳化重合に関する検討に対して再検討の必要性を投げかけるものであり,吸蔵化現象の解明は学術的にも工業的にも非常に有益である。検討の結果,ポリオキシエチレン系ノニオン性界面活性剤Emulgen911を用いたスチレンとメタクリル酸の乳化共重合系において,仕込みメタクリル酸濃度の増加に伴い,粒子中への界面活性剤の吸蔵最が増加することを明らかにした。また,以前の^1H NMRと比べ,より簡便なGPCによる吸蔵量の直接的な定量法を確立した。これら2つの測定法により求められた吸蔵量は良い一致を示し,このことから重合時における各種ラジカルの界面活性剤への連鎖移動反応は無視できることが明らかとなった。さらには,メタクリル酸濃度が低い場合に見られていた副生微粒子の発生が,メタクリル酸濃度の増加に伴って抑制されることを見出し,吸蔵化か乳化重合の重合機構にも大きな影響を及ぼすことを明らかにした。これまでにノニオン性界面活性剤が吸蔵された粒子をシード粒子として用いてシード乳化重合を行うことで,従来法で必要であったアルカリや酸・有機溶剤を全く使用しない簡便な中空粒子の合成に成功しているが,この時,シード乳化重合時の温度が中空構造の形成に大きな影響を及ぼすことを明らかにした。スチレン及びメタクリレート系モノマー[メタクリル酸メチル(MMA),メタクリル酸エチル(EMA),メタクリル酸イソブチル(i-BMA)]について,ノニオン性界面活性剤を用いた乳化重合を行い,生成高分子微粒子中に吸蔵された界面活性剤の定量を行った。その結果,初めてノニオン性界面活性剤の吸蔵化現象が見出されたスチレン-メタクリル酸乳化共重合系と同様に,上記の系においても界面活性剤の吸蔵を確認し,乳化重合に関する新たな知見である吸蔵化現象の一般性を示した。さらに,乳化重合において最も基本的であり,盛んに検討が行われているスチレン系において,吸蔵化現象についての詳細な検討を行った。オキシエチレン鎖長の異なる,つまり親水性の異なる2種類の界面活性剤を用いて重合を行ったところ,親水性の低い方が粒子中に吸蔵されやすいことがわかった。この結果は,無乳化剤乳化重合により作製した粒子をモノマーで膨潤させた後,界面活性剤を後添加し,膨潤粒子中に分配された界面活性剤を定量した結果と同様の傾向を示した。これらのことから,界面活性剤の吸蔵化には,重合中に粒子が吸収しているモノマーへの界面活性剤の分配が重要であることが推察される。この推察を基に,界面活性剤とモノマーの親和性が小さい低温での重合,あるいは重合中の粒子がモノマーで膨潤されないようにモノマーフィード法を用いた重合を行うことで界面活性剤の吸蔵化を抑制することに成功した。また,メタクリレート系モノマーにおいて,界面活性剤の吸蔵量はi-BMA, EMA, MMAの順に多くなった。この際の各系間での吸蔵量の差は,界面活性剤のモノマーへの分配のみでは説明し難い部分があり,界面活性剤とポリマーの相溶性が吸蔵化に及ぼす影響に関する検討の必要性を提起するものであった。乳化重合は古くから広範に用いられており,工業的に行われているラジカル重合の4050%を占めている。また,近年では環境面への配慮から,水系で行われる乳化重合に対する注目が一層高まっている。乳化重合において重合の場を提供し,生成粒子の安定化を担うべく添加されている界面活性剤の吸蔵化現象は,合成時の問題だけでなく,フィルム形成時の物性低下などを招くことになるためにその解明は非常に重要である。これまでの検討より,ノニオン性界面活性剤のモノマー相への分配が吸蔵化と密接に関わっていることを明らかにしているが,その分配状態に影響を及ぼす因子として,まず重合時の撹拌状態に着目して検討を行った。その結果,撹拌効率が低く,モノマーがあまり滴化されていない場合には,単分散な粒子が得られ,添加した界面活性剤の約70%が吸蔵された。一方,撹拌効率が高く,モノマーが微細な滴として存在する場合には,得られた粒子の粒子径分布は広く,副生微粒子が観察された。加えて,撹拌効率が低い場合と比較し,副生微粒子表面への界面活性剤の吸着に基づくと考えられる吸蔵量の減少が起こった。

また,ノニオン性界面活性剤を用いてスチレン-メタクリル酸乳化共重合を行う際,界面活性剤の親水性-疎水性バランスが,得られた粒子中のメタクリル酸の分布状態,粒子径分布,及び吸蔵量に大きく影響を及ぼすことを明らかにした。さらに,この界面活性剤の吸蔵化を利用することで,乳化重合により作製した粒子を熱処理するのみという非常に簡便な方法により,代表的な機能性高分子微粒子である(多)中空粒子の作製に成功した。乳化重合は古くから広範に用いられており,近年では環境面への配慮から水系で行われる乳化重合に対する注目が一層高まっている。本研究は,乳化重合により作製された高分子微粒子中に,重合時に使用したノニオン性界面活性剤が取り込まれる(以下,吸蔵化と呼ぶ)現象についての検討である。乳化重合において重合の場を提供し,生成粒子の安定化を担うべく添加されている界面活性剤の吸蔵化現象は,合成時の問題だけでなく,フィルム形成時の物性低下などを招くことから,非常に重要な関心事である。また,これまでになされてきたノニオン性界面活性剤を用いた乳化重合に関する検討に対して再検討の必要性を投げかけるものであり,吸蔵化現象の解明は学術的にも工業的にも非常に有益である。検討の結果,ポリオキシエチレン系ノニオン性界面活性剤Emulgen911を用いたスチレンとメタクリル酸の乳化共重合系において,仕込みメタクリル酸濃度の増加に伴い,粒子中への界面活性剤の吸蔵最が増加することを明らかにした。また,以前の^1H NMRと比べ,より簡便なGPCによる吸蔵量の直接的な定量法を確立した。これら2つの測定法により求められた吸蔵量は良い一致を示し,このことから重合時における各種ラジカルの界面活性剤への連鎖移動反応は無視できることが明らかとなった。さらには,メタクリル酸濃度が低い場合に見られていた副生微粒子の発生が,メタクリル酸濃度の増加に伴って抑制されることを見出し,吸蔵化か乳化重合の重合機構にも大きな影響を及ぼすことを明らかにした。これまでにノニオン性界面活性剤が吸蔵された粒子をシード粒子として用いてシード乳化重合を行うことで,従来法で必要であったアルカリや酸・有機溶剤を全く使用しない簡便な中空粒子の合成に成功しているが,この時,シード乳化重合時の温度が中空構造の形成に大きな影響を及ぼすことを明らかにした。
乳幼児のRSウィルス感染症の病態におけるサイトカインおよびアポトーシスの関与

乳幼児期のRSV感染の病態形成における種々の炎症性,免疫調節性サイトカインの関与,およびその誘導の機序について検討した.1)発病数日以内のRSVの感染局所(鼻咽腔分泌物)に,かなり高いIL-6,TNF-α活性を検出できたが,このことはそれらが,病態形成あるいは回復過程に関与していることを示唆している.また,乳児期前半とそれ以降の児とでは,IL-6活性の消長に違いが見られたことから,その誘導の機序は一様ではないと考えられた.IL-6のIgA分泌の促進作用は,今回,RSV特異IgA抗体との関係では明らかにできなかった.2)新生児の単球-マクロファージ系細胞にRSVを感染させる系を作成し,サイトカイン誘導の機序について更に検討した.新生児の細胞においても,RSV感染に際し成人の細胞と同様に,良好にIL-6やTNF-αの分泌がなされることを確認できたが,新生児の細胞においては,感染が早く進行すること,そのためにIL-6の産生も早期に終了した.また,不活化RSVに対するIL-6の産生も成人に比して低かった.これらは,乳児期のマクロファージの機能の未熟性を示すと考えられた.3)続いてIL-1β,IL-12,IFN-γなど他の免疫調節性サイトカインの誘導についても同様に検討した.IL-12,IFN-γなどは,RSV刺激により、mRNAの発現増強が明らかなのにかかわらず,サイトカイン蛋白の産生はほとんどおきておらず,メッセージの翻訳以後の問題と考えられた.いずれにしても,IL-6,TNF-αなどの炎症性サイトカインが速やかに誘導されること,また,IL-12,IFN-γなどの免疫調節性サイトカインの誘導が不完全であることが示されたが,このことが乳児期早期のRSV感染の病像形成に関係している可能性がある.乳幼児期のRSV感染の病態形成における種々の炎症性,免疫調節性サイトカインの関与,およびその誘導の機序について検討した.1)発病数日以内のRSVの感染局所(鼻咽腔分泌物)に,かなり高いIL-6,TNF-α活性を検出できたが,このことはそれらが,病態形成あるいは回復過程に関与していることを示唆している.また,乳児期前半とそれ以降の児とでは,IL-6活性の消長に違いが見られたことから,その誘導の機序は一様ではないと考えられた.IL-6のIgA分泌の促進作用は,今回,RSV特異IgA抗体との関係では明らかにできなかった.2)新生児の単球-マクロファージ系細胞にRSVを感染させる系を作成し,サイトカイン誘導の機序について更に検討した.新生児の細胞においても,RSV感染に際し成人の細胞と同様に,良好にIL-6やTNF-αの分泌がなされることを確認できたが,新生児の細胞においては,感染が早く進行すること,そのためにIL-6の産生も早期に終了した.また,不活化RSVに対するIL-6の産生も成人に比して低かった.これらは,乳児期のマクロファージの機能の未熟性を示すと考えられた.3)続いてIL-1β,IL-12,IFN-γなど他の免疫調節性サイトカインの誘導についても同様に検討した.IL-12,IFN-γなどは,RSV刺激により、mRNAの発現増強が明らかなのにかかわらず,サイトカイン蛋白の産生はほとんどおきておらず,メッセージの翻訳以後の問題と考えられた.いずれにしても,IL-6,TNF-αなどの炎症性サイトカインが速やかに誘導されること,また,IL-12,IFN-γなどの免疫調節性サイトカインの誘導が不完全であることが示されたが,このことが乳児期早期のRSV感染の病像形成に関係している可能性がある.現在まで保存されている,RSウイルス感染乳幼児のNPS中のIL1β,IL-6,IL-12,TNF-α,IFN-γなどのサイトカイン活性について酵素抗体法(ELISA)法にて測定した.IL-1β,IL-6,TNF-αなどは急性期に有意な活性が検出され,回復期には低下する傾向が明かであり,その病態,回復の過程における何らかの関与が推測された.一方,IL-12やIFN-γ活性は検出されなかった.NPS中のIL-6活性と,RSウイルス特異的IgA,IgG抗体活性との関係について検討したが,いずれも有意な相関関係は見いだせなかった.臍帯血より得た単球を数日間培養することでマクロファージ化したものに,RSウイルスを感染させた場合,有効に感染し,感染性ウイルスを作り出すことが明かとなったが,その培養条件,感染実験条件などを確立した.続いてこの系に,RSウイルス特異的単クローン抗体(抗fusion protein,抗large glycoprotein,抗nucleoprotein抗体など)と反応させたウイルス(免疫複合体)を作用させた場合のサイトカイン誘導について検討したが,一定の結果を得る事ができなかった.それで平成8年度は,この系を用い,感染性ウイルスと,紫外線不活化ウイルスを作用させた際の,サイトカイン活性と,細胞中のmRNAの出現の動態について明らかにしていくことにする.

新生児,早期乳児におけるRSウイルス(RSV)感染の病態の解明のために,平成7年度の研究において,臍帯血より得た単球を数日間培養することでマクロファージ化したもの(Monocyte-deribed macrophage:MDM)に,RSVを感染させる系を確立したが,平成8年度は,その系を用いRSV感染の際に誘導される種々サイトカインについてmRNAと,サイトカイン蛋白両方の面から検討した.また,健康成人末梢血単球を同様に用い,臍帯血単球と比較した.培養上清中に分泌されるIL-6,TNF-α活性をELISA法で測定した.また,それらmRNAの発現を細胞よりRNAを抽出した後,RT-PCRを用いて検索した.新生児MDMはウイルス感染刺激により,成人MDMと同様に,感染24時間以内に良好に両サイトカインを産生することが示されたが,IL-6の誘導については両者で2,3の違いが見られた.つまり,新生児MDMにおける産生は,感染24時間以内にほとんど終了し,また不活性ウイルスによってはほとんど誘導されないが,成人MDMにおいては,生ウイルス感染による産生は24時間以降も続き,また,不活化ウイルスによっても生ウイルスの半分程のIL-6産生がなされた.これらIL-6活性の消長は,mRNAの消長と概ね一致しており,これらはmRNAのレベルで規定されていると考えられた.一方,培養上清中のウイルス価の検討より,新生児MDMにおいては,成人MDMより,RSV感染が早く進み,早期に終了することが示されたが,それが,IL-6の産生が早期に終了する事と関連していると考えられた.不活化RSVに対するIL-6の産生が低いことは貧食能とそれに続くサイトカイン誘導の能力が劣っていることを示すと考えられた.これらの事は新生児期のマクロファージの脆弱性や未熟性に起因するものと考えられるが、幼弱乳児においてRSVに対する免疫反応が弱く不完全であることと関係があるかも知れない.
平成1013年の4年間で,北海道の白亜系-第三系(K/T)境界付近の地層として,中頓別,天塩中川,稚内,夕張,穂別地域に分布する蝦夷累層群最上部の函淵層群およびその相当層を対象として,堆積相解析,大型化石層序,化石相解析,花粉層序解析を実施した.また蝦夷層群との比較のため、同時代層である根室層群,那珂湊層群についても概要調査を行った.これらの成果の一覧や印刷済の論文別刷は成果報告書に収録した.特に中頓別地域については,数年来にわたる精密な野外調査の結果,本邦の陸上露頭における白亜系カンパニアンマストリヒシアン階で最も精度の高い層序区分を確立できた.その成果は地質学雑誌に報告(安藤ほか,2001)し,続報を国際集会(白亜紀のアジアの炭素循環と生物多様性:中国ラサ)でも発表し,現在その論文集原稿を準備中である.天塩中川地域では,中頓別地域よりも西方海岸側の浅海相の分布を高精度で把握し,上方に粗粒化・浅海化する5層のパラシーケンス(PS)を追跡することができた(高松・安藤,2001口頭発表).中川の北方延長に相当する稚内地域でも,単調な浅海砂岩相中に少なくとも4層のPSを確認できた(安藤・安藤,2002印刷中).中頓別地域の化石層序との比較により,中川地域の函淵層群はカンパニアン上部を主体としマストリヒシアンが認められない.一方,稚内ではカンパニアン上部に加え,マストリヒシアン上部までが存在することが判明した.中頓別で確認されたマストリヒシアン最上部や暁新統は,両地域とも不整合によって浸食されてしまっており,K/T境界付近の地層はまったく保存されていない.さらに,穂別地域は従来よりマストリヒシアン上部が確認されている地域であるが,マストリヒシアン最上部や暁新統の存在はまだ十分に立証できておらず,夕張地域の大夕張ダムにおけるボーリング・コアから発見された暁新統の連続性は不明である.現在,その鍵となる花粉化石処理を継続中で,かなり保存の良い試料が得られており,成果の報告は次年度以降になるが進展が期待される.平成1013年の4年間で,北海道の白亜系-第三系(K/T)境界付近の地層として,中頓別,天塩中川,稚内,夕張,穂別地域に分布する蝦夷累層群最上部の函淵層群およびその相当層を対象として,堆積相解析,大型化石層序,化石相解析,花粉層序解析を実施した.また蝦夷層群との比較のため、同時代層である根室層群,那珂湊層群についても概要調査を行った.これらの成果の一覧や印刷済の論文別刷は成果報告書に収録した.特に中頓別地域については,数年来にわたる精密な野外調査の結果,本邦の陸上露頭における白亜系カンパニアンマストリヒシアン階で最も精度の高い層序区分を確立できた.その成果は地質学雑誌に報告(安藤ほか,2001)し,続報を国際集会(白亜紀のアジアの炭素循環と生物多様性:中国ラサ)でも発表し,現在その論文集原稿を準備中である.天塩中川地域では,中頓別地域よりも西方海岸側の浅海相の分布を高精度で把握し,上方に粗粒化・浅海化する5層のパラシーケンス(PS)を追跡することができた(高松・安藤,2001口頭発表).中川の北方延長に相当する稚内地域でも,単調な浅海砂岩相中に少なくとも4層のPSを確認できた(安藤・安藤,2002印刷中).中頓別地域の化石層序との比較により,中川地域の函淵層群はカンパニアン上部を主体としマストリヒシアンが認められない.一方,稚内ではカンパニアン上部に加え,マストリヒシアン上部までが存在することが判明した.中頓別で確認されたマストリヒシアン最上部や暁新統は,両地域とも不整合によって浸食されてしまっており,K/T境界付近の地層はまったく保存されていない.さらに,穂別地域は従来よりマストリヒシアン上部が確認されている地域であるが,マストリヒシアン最上部や暁新統の存在はまだ十分に立証できておらず,夕張地域の大夕張ダムにおけるボーリング・コアから発見された暁新統の連続性は不明である.現在,その鍵となる花粉化石処理を継続中で,かなり保存の良い試料が得られており,成果の報告は次年度以降になるが進展が期待される.北海道の白亜系-第三系(K-T)境界付近の地層として,蝦夷累層群最上部の函淵層群,根室層群を対象として,堆積相解析,大型化石層序,化石相解析の基礎となる野外地質調査を8月に集中的に行った.北海道北部の中頓別地域を特に重点的に南部の穂別地域,北海道東部の厚岸地域は短期で実施した.中頓別地域の函淵層群については,従来よりK-T境界の存在が知られているが,岩相層序,大型化石層序,微化石層序,古地磁気層序を統合するものはまだない.今回は広域な岩相層序,化石層序とその分布の追跡を目的とした.その結果,少なくとも2層準に厚い下部外浜内側陸棚の浅海成相の存在が確認でき,この地域のよい鍵層として追跡され,大きな複向斜構造に支配されて盆状に分布することがわかった.したがって,2つもしくは3つの堆積シーケンスがあることになる.