hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
流動性ショックが証券市場に与える影響

本研究では、私募増資を実施した東京証券取引所上場会社の破綻回避率について調べた。分析の結果、MSCB発行会社については所属部・発行市場・応募者利回り、第三者割当増資実施会社については所属部・増資実施回数・割当先投資者数・希薄化率・ディスカウント率が、破綻回避率と関係することが示された。これらの結果は、上場所属部や資金調達の履歴、証券デザインなどが破綻回避率を推定する情報となり得ることを示唆する。1.理論研究"A Welfare Analysis of Predatory Trading"をまとめた。本研究では市場参加者全てがrationalであるとき、情報トレーダーに市場操作をするインセンティブがあるのか、また市場操作の可能性に対するどのような規制が社会厚生を高めるのか、考察した。論文は、2008年3月に京都大学にて開催されたDaiwa Young Researchers' International Workshop on Financeという国際会議で報告した。本論文は東京証券取引所においてMSCB発行前後に市場操作が行われた可能性があるのか、市場操作が行われた可能性がある市であれば、東証はどのような規制をすべきなのか示唆を与える点で、科研費による研究「流動性ショックが証券市場に与える影響」の一部をなす。2.東京証券取引所から全上場銘柄のティックデークを取得し、本データの基本統計量を算出するプログラムー組んだ。20年度より先行研究を参考に、本格的な分析を進めて生きたい。3.2007年9月に英国University of Essexにて開催されたNew Trends in Comptational Finance and Economicsに参加した。ティックデークがどのように実際の投資に活かされているしか、実務家から話を聴くことができ、有意義であった。科研費にて購入したデータを分析したところ、2003年から2007年までにMSCBを発行した東証上場企業のうち、2008年末まで上場を維持した会社の割合はおよそ90%であることが分かった。上場持率に影響を与えていると思われる要因は以下の通りである。・所属部:東証一部上場会社の上場維持率が最も高く、続いて二部、マザーズの順となった・発行回数:一度だけMSCBを発行した会社の上場維持率は、複数回発行した会社に比べ高かった・発行市場:欧州圏で発行した会社の上場維持率が最も高く、続いて日本、アジアの順となった・アップ率:当初転換価額が直近の市場価格を上回るMSCBを発行した会社の上場維持率は、アップ率が0のMSCBを発行した会社の上場維持率よりも高かった・償還請求権:償還請求権付のMSCBを発行した会社の上場維持率は、付与しないMSCBを発行した会社の上場維持率よりも高かった。とりわけプットオプションを付したMSCBを発行した会社の上場維持率が高かったこれらの分析結果を日本のMSCBについて(仮題)にまとめた。また研究を進める過程で渉猟した既存研究の流れをPIPEsの理論(仮題)としてまとめる作業を進めている。これらについては21年度に発表したいと考えている.21年度の研究計画に基づき、1.MSCB発行会社の破綻回避率2.第三者割当増資実施会社の破綻回避率3.企業金融の理論-多様な証券、公募と私募-、の3稿を執筆した。このうち、先の2稿は実証研究であり、後の1稿は理論研究である。先2稿の実証研究における「破綻回避率」とは、私募増資を実施した東京証券取引所上場会社のうち、一定期間内に破綻しなかった会社の割合を意味する。MSCB発行会社については、所属部、発行市場、アップ率が、破綻回避率と統計学上有意な関係を持つことが示された。一方、第三者割当増資実施会社については、所属部、第三者割当増資の実施回数、割当先投資者数、希薄化率、ディスカウント率が、破綻回避率と統計学上有意な関係を持つことが示された。これらの結果は、投資者にとって会社の上場所属部や資金調達の履歴、証券デザインなどが破綻回避率を推定する重要な情報となり得ることを示唆する。証券取引所には、私募増資を計画する会社がこれらの情報を投資者に提示するよう求めることが望まれる。この点、東京証券取引所上場制度整備懇談会『安心して投資できる市場環境等の整備に向けて』に示される方向性は興味深い。後1稿の理論研究においては、会社が多様な証券を複数の応募形式で発行する理由を、先行研究に求めた。調査の結果、証券のデザインを選択する際に考慮すべき事柄に、流動性、契約の不完備性、税率、情報収集の費用、証券発行会社の倒産確率、発行会社と投資者の間に存在する情報の非対称性などがあることが分かった。また、応募形式を私募にするか公募にするか選択する際に考慮すべき事柄には、過少投資問題、over-monitoringの問題などがあることが分かった。
<翻訳>の拓く批評可能性-ローベルト・ヴァルザーの作品の英・仏・日本語訳に即して

「長編小説」の枠からはみ出し、最終的には、掌大の紙片数百枚に鉛筆書きの極小文字で書きつけられるまでに至るローベルト・ヴァルザーの散文作品は、現代ドイツ語文学屈指の、高度な複雑性を抱えた、過激な文学実験となっている。本研究においては、ヴァルザーのテクストに潜在している批評可能性を、英・仏・日本語の翻訳テクストの比較分析、諸言語への翻訳者との討論、さらには、これまで未邦訳であった作品の日本語への翻訳実践を通じて明らかにしている。2007年9月末に追加採択が決定して以来、今年度後半は、ローベルト・ヴァルザーの散文小品群の既刊英訳アンソロジー3冊、既刊日本語訳アンソロジー2冊の構成・翻訳方法の分析を研究課題とした。準備作業として、英語、日本語における翻訳研究書を中心に書籍を購入し、さらにメールその他による研究進捗状況報告、打ち合わせを行った後、津田塾大学および山口大学における2度の研究会において、研究代表者および研究分担者が研究成果を報告し、討議を重ねた。その結果、英語圏におけるヴァルザー作品の翻訳受容は、戯曲、一人称体、三人称体、動物寓話、論説体、さらには手紙までも含め、後期ヴァルザーの文体の多様性を伝えることを意識したアンソロジーから始まり、それに続いて、ヴァルザー研究において新たに詩学的重要性が指摘されるようになった作品を中心にさらなるアンソロジーが編まれる、という形ですすめられていることが明らかになった。それに対して日本語訳アンソロジーにおいては、一定の「作家像」を提示する意図がうかがえ、作品選択のレベルにおいて、英語圏の受容とは異なったバイアスがかかっていることが確認された。(両言語におけるアンソロジーをならべてみると、重なっている作品はきわめて少ない。)他方、構造、歴史の点において、ドイツ語とより親近性をもっているはずの英語への翻訳において、テクストの複雑性を縮減させ「読み易く」するための「合理化」がかなり施されている点も指摘された。この成果をもとに、いかなる翻訳方法、作品構成であれば、英訳においては「合理化」ゆえに消去されている原文テクストの可能性に光をあてることができ、同時に、既存の日本語訳においては前面におしだされた「作家イメージ」の陰に隠れてしまっている原文テクストのレトリックに十二分に配慮したものとなりうるか、来るべき日本語訳アンソロジーにあり方について、具体的な方向が打ち出された。今年度は、19年度における研究会での発表を基盤に、研究代表者である新本史斉が、微小文字で書かれたヴァルザー晩年の遺稿テクスト(ミクログラム)の内包する<表象の可能性/不可能性>をめぐる問題を『津田塾大学紀要41号』掲載の論文、『ローベルト・ヴァルザーの「ミクログラム」論考I--長編小説「盗賊」における自己言及構造について--』で論じた。そこでは、まさに英訳・仏訳において(再)表象されそこなっている箇所こそ、ヴァルザーのテクストの批評可能性の核心に関わる部分であることが明らかにされている。また、今年度、三月の研究会では、ヴァルザー最初の長編小説『タンナー兄弟(Geschwister Tanner)』の日本語訳(試訳)および仏訳に照らし合わせつつドイツ語原文を読むことで、一見、平易に見える原文がいかなる複雑性を抱え込んだテクストであるかを確認し、その上で、その複雑性を日本語訳文において再演するには、いかなる方法が考えられるかについて議論を行った。この議論に基づいて、翌21年度には、一方では翻訳実践の形で、『タンナー兄弟』の日本語訳を刊行し、もう一方では、翻訳論の形で、翻訳比較を通じた当該小説の分析を発表し、実践と分析の両面からこの作品に潜在している可能性を可視化することを予定している。また、三月の研究会では、翻訳論の分野における最近刊の好著のひとつである"Anders gesagt-autrement dit - in other words"(Peter Utz著、2007年刊)を取り上げ合評した。この合評を基盤に、翌21年度には、研究分担者ヒンターエーダー=エムデ、フランツによる当該書の書評が『ドイツ文学』に掲載される予定である。平成21年度、勤務先の海外研修制度によりローザンヌ大学に滞在した研究代表者新本は、11月12日-19日チューリヒのローレン翻訳センターにおいて英語、フランス語、ヘブライ語、オランダ語、カタルーニャ語、日本語へのR・ヴァルザー翻訳者による翻訳ワークショップに参加し、日本語への翻訳において可視化するヴァルザーの作品の批評可能性について報告を行った。また、新本は、11月15日には、バーゼル国際書籍見本市において、ヴァルザーの長編小説Geschwister Tannerが(もっともドイツ語に近い言語の一つである)英語と(もっともドイツ語から遠い言語の一つである)日本語に訳されるときに、それぞれもたらされる新たな読みの可能性が、いかに相反し、同時にいかに補完し合うものであるかについて、英訳者Susan Bernofskyと対談を行った。

これらの活動を通じて、スイスにおいてヴァルザーの日本語訳の意義についての理解も得られ、2010年から2013年にかけて、新本および研究分担者ヒンターエーダー=エムデ・フランツを中心とした翻訳プロジェクト『ローベルト・ヴァルザー作品集』(全5巻、鳥影社)に対してスイスの文化財団Pro Helvetiaより財政支援が得られることとなった。2010年4月現在、校正作業中の第一巻『タンナー兄弟姉妹』は、2010年夏に刊行予定である。この作品の解釈可能性については、下記、津田塾大学紀要掲載の論文『「母の言葉」の喪失から生まれる「微笑む言葉」、「舞い落ちる」散文』において詳細に論じている。また、ヒンターエーダー=エムデ氏が『ドイツ文学』に書評を寄せた翻訳論Peter Utz : Andersgesagt-autrement dit-in other words.についても、新本による日本語訳がすすめられ、残念ながら研究プロジェクト期間に完成できなかったものの2011年に鳥影社より刊行予定となっている。並行して、ヒンターエーダー=エムデ氏は、博士論文以来の関係テーマである漱石作品のドイツ語訳の可能性について講演を行った。また、新本も、ローザンヌ大学における研究会において、ヨーロッパ文学における「自然主義」が日本に「輸入された」際に生じた翻訳上のねじれの問題について発表を行った。
生体小腸由来3次元scaffoldを用いた移植可能人工小腸作製

小腸不全に対する唯一の根本的治療は小腸移植であるがその成績は不良であり、新たな治療戦略の探求が必要とされる。本研究は脱細胞化技術を用いて作製した小腸3次元構造を鋳型として小腸グラフトを作製し、生体内に移植して小腸を再生することを目的としている。ラットから小腸を摘出し、血管から薬液を灌流することで脱細胞化小腸を作製した。得られた脱細胞化小腸をラット生体に移植し組織を観察すると、移植した脱細胞化小腸グラフトが足場となり、移植された生体からの血管新生に加え、腸管粘膜上皮や平滑筋細胞の浸潤が認められた。脱細胞化小腸グラフトは生体の小腸成分が浸潤する足場として小腸再生を促進する可能性が示唆された。本研究は脱細胞化技術を用いて作製した小腸3次元構造を鋳型として、消化・吸収といった腸管上皮機能を有する小腸グラフトを作製すること、および作製した小腸グラフトを体内に移植し機能を維持させることを目的とする。初年度はまず脱細胞化小腸を作製することから着手した。我々のグループから報告したラット肝臓の脱細胞化技術を応用し、Triton X-100/EGTA溶液を灌流することにより脱細胞化小腸を作製することができた。組織標本において核や細胞質の成分が認められないことを確認し、再現性を伴って安定的に脱細胞化小腸の3次元スキャフォールドを得ることができるようになった。次に作製した脱細胞化小腸を使用した移植手技確立と生体における許容性評価のため、生体ラット腸管への移植を試みた。3cmの脱細胞化小腸グラフトを作製後、ラット近位小腸を切離し端々吻合にて吻合した。ラットは脱細胞化小腸グラフト移植後長期生存することを確認し、移植後6週の時点で開腹して観察したところ吻合部小腸からの明らかな腸管内容漏出を認めないことを確認した。今後は、作製した脱細胞化小腸において、遺残DNAの解析や電子顕微鏡による詳細な構造の評価、免疫染色による細胞外マトリックスの成分解析を行うと共に、生体に移植された脱細胞化小腸グラフトのより詳細な組織評価を行う予定である。ラット脱細胞化小腸腸管全層の吻合が困難であることや縫合不全などの問題により、ラット脱細胞化小腸を生体に安全に移植することにやや時間を要したが、ステントの使用やパッチを作製することなどにより問題は解決されつつある。本研究は脱細胞化技術を用いて作製した小腸グラフトを生体内に移植し、消化・吸収・輸送といった腸管機能を有する小腸を再生することが目的である。ラットの全小腸を摘出後、Triton X-100/EGTA溶液を灌流することにより脱細胞化小腸は再現性を伴って作製することができた。作製した脱細胞化小腸グラフトをラットの腸管欠損部に移植するにあたり縫合不全が課題となっていたが、パッチグラフトやステントを使用することで問題は解決され、生体内に移植した脱細胞化小腸グラフトの組織像を長期的に観察できるようになった。移植後1週間の脱細胞化小腸グラフト内には血管新生が豊富に認められた。移植後6週間においては粘膜成分の浸潤に加え、抗平滑筋抗体による免疫染色により平滑筋細胞の浸潤が確認できた。移植後12週間まで観察を行うと粘膜成分は腸管欠損部を覆う程度まで浸潤が持続しており、平滑筋細胞の浸潤も持続的に認められた。今後は神経成分の浸潤を評価するため抗S100抗体による免疫染色を行い、抗Ki-67抗体による増殖能の評価や抗Lgr5抗体による幹細胞マーカー発現の検証も行う予定である。移植した脱細胞化小腸グラフトが足場となり、レシピエント生体からの血管新生に加え、腸管粘膜上皮や平滑筋細胞の浸潤が認められた。今年度の組織学的評価により、脱細胞化小腸グラフトは生体の小腸成分が浸潤する足場として小腸再生を促進する可能性が示唆された。本研究は脱細胞化小腸スキャフォールドの作製、脱細胞化小腸の再細胞化、再細胞化小腸の生体への移植という段階から成る。脱細胞化小腸スキャフォールドは安定して得られ、ラット生体への移植も徐々に安全に施行できるようにはなってきた。
硫黄の高温高圧相転移

本研究課題では,これまで全宇宙における元素の存在比が多いにもかかわらず,不明な点が多かった硫黄単体の高温高圧挙動をDIA型と呼ばれるマルチアンビル型高圧装置と放射光を用いたX線その場観察法で調べた。なお,焼結ダイヤモンドを素材としたアンビルを利用する高温高圧発生技術の改良することで,17GPa,900°C程度までの条件を問題なく発生し,その条件でのその場観察が可能となった。この圧力温度範囲の研究で以下のことが明らかになった。1.この圧力温度範囲で,常圧相と液相以外に3種類の高圧相がある事が明らかになった。これら3種類の高圧相は,大気圧条件下には凍結されず,従来の凍結法による研究手法では,これらの高圧相の発見が不可能であったことが明かとなった.2.これらの3種類の高圧相は,得られた粉末X線回折パターンの解析から,高圧相1は3回の螺旋構造を有する六方晶の結晶構造を,高圧相2は6員環状分子構造を有する六方晶の結晶構造を,そして高圧相3は4回の螺旋構造を有する結晶構造を有していることが明らかになった.3.これら3種類の高圧相と常圧相の室温における圧縮挙動を調べたところ,高圧相2の場合,六方晶のc軸が異方的に圧縮されることが明らかになった。これは,高圧相2が6員環状分子からなっており,それがc軸方向に積層しており,分子間の圧縮率が大きいためと考えられる。4.これら3種類の高圧相と常圧相および液相の安定域を確定した。硫黄の室温高圧挙動は、その場観察法による研究で明になってきている。一方、硫黄の高温高圧挙動に関しては、従来から回収実験法により多くの研究がなされているにも関わらず、互いの実験結果にあまり整合性がなく、その概要すら解っていない。このように、元素単体の高温高圧挙動が未だに不明な例はあまり多くない。特に、26番の鉄より軽元素でかつ偶数番の兀素で、ここまで高温高圧挙動が木明な元素はほとんどない。そこで本研究では、放射光X線を用い硫黄の高温高圧挙動をT<900°C,P<17GPaの範囲でその場観察した。その結果、この温度圧力範囲で、常圧相と融体の他に3種類の高圧相を見い出し、それぞれの安定域を確定した。各高圧相に関して現在までに明らかになっていることを以下にまとめる。圧力3-7GPaの条件で昇温した場合、高圧相1が出現した。観測された粉末X線パターンから、この構造は六方晶に属し、単位格子中に9個の硫黄原子が含まれることがわかった。圧力領域7-14GPaで昇温すると、高圧相2が見い出された。この高圧相2はS_6環状分子からなる六方晶硫黄として説明できた。常圧相と高圧相2の分子構造から明らかなように、この相転移に伴い、S_8環状分子は開環反応を起こしS_6環状分子に組み変わっている。また減圧時の測定から、六方晶のc軸方向が圧縮されやすいという異方的圧縮挙動も明らかとなっている。15GPa以上の圧力領域で昇温した場合さらに別の相が観察された。この高圧相3の回折パターンは正方晶で説明可能ではあるが、詳細は不明である。これまで、DIA型と呼ばれる高温高圧実験装置による放射光実験の定常的な圧力発生限界は、約15GPaであり、それ以上の高圧条件発生は、実験の成功率が極端に低下して、再現性のある実験を行うのは難しい状況にあった。そこで、従来の実験技術の問題点を洗い出し、次にアンビルの素材としての焼結ダイヤモンドを数種類比較し、さらに加圧および減圧速度等の最適化を行う事で、定常的に17GPaまでの加圧実験を可能にした。この実験技術の改良により、17GPa、900°Cまでの温度圧力条件における再現性のある実験が可能となった。

そこで、この実験を技術を用い、硫黄の高温高圧下における相平衡実験が可能となり、常圧相と液相および3種類の高圧相の安定域を確定できた。また、従来、不明な点が多かった高圧相3が、そでに報告されている室温誘起の正方晶の高圧相と同じもであることが明らかになった。これらの結果と,すでに明かとなっている常圧相と高圧相1および2の結晶構造とを考えあわせると、硫黄は、圧力上昇と共に、環状分子構造と螺旋鎖状構造が交互にあらわれるといった特異的な挙動を示すことが明かとなった。今回の結果は、各構造相転移において、必ず硫黄の開環および閉環反応が起こる必要があることを意味している。これは、15GPaまでの相転移が必ず300°C以上の高温条件が必須である事と調和的である。また、今回の実験技術の改良で、常圧相および3種類の室温における圧縮挙動を15GPaまで調べることが可能になった。その結果、すでに明らかになっていた高圧相2の異方的な圧縮挙動が、特異的な現象であることが明らかになった。
心房細動関連遺伝子NEURLのタンパク質品質管理機構に関する解析研究

既報のGWASで使用された全てのSNVのP値、染色体上の位置情報、オッズ比のファイルを作成する。MATLAB(R2018)をプラットフォームとするコンピューティング言語でプログラムされたMAGENTAにより解析したところ、CTCF経路とmTOR経路が同定された。CTCF経路とmTOR経路の関与を確認するために、本学心臓外科で採取した既存試料(僧帽弁膜症症例)11検体を用いて、マイクロアレイ解析を実施した。心房細動患者と非心房細動患者で2つの経路の関与を調べたところ、心房細動患者から採取された心房筋においてはmTOR経路が抑制されていることが示された。現在、本データに基づいた論文をInternational Journal of Cardiologyへ出版申請中である。次に同定されたユビキチン・リガーゼNEURLのmTOR経路への作用を調べるために、mTORC1複合体に含まれる分子およびmTORC2に含まれる分子のタンパク・リン酸化レベルの変化を調べた。HL-1細胞をsiNEURL, siCtrlでノックダウン処理をして、PRAS40を調べたところ、いずれも遺伝子発現抑制は認められなかった。こちらは論文を作成中である。臨床研究では既存試料を用いた研究を用いてベイジアン・ネットワーク解析を通して心房細動の一種である上大静脈由来の異所性興奮の原因の予測解析を行い、IJC Heart&Vasculature誌に出版された。また大阪大学との共同研究において、徐脈性不整脈と心房細動の関連を示した論文がCirculation誌から出版された。MATLAB(R2018a)をプラットフォームとするコンピューティング言語でプログラムされたMAGENTAにより解析したところ、CTCF経路とmTOR経路が同定された。CTCF経路とmTOR経路の関与を確認するために、本学心臓外科で採取した既存試料(僧帽弁膜症症例)11検体を用いて、Microarray解析を実施した。臨床研究では既存試料を用いた研究を用いてベイジアン・ネットワーク解析を通して心房細動の一種である上大静脈由来の異所性興奮の原因の予測解析を行い出版された。また大阪大学との共同研究が論文出版された。続いて、NEURLの機能解析を更に進め、Autophagyとのかかわりを調べることとする。また、GWASの結果からPolygenic risk score解析などを行う。

HL-1細胞をsiNEURL, siCtrlでノックダウン処理をして、PRAS40を調べたところ、いずれも遺伝子発現抑制は認められなかった。こちらは論文を作成中である。臨床研究では既存試料を用いた研究を用いてベイジアン・ネットワーク解析を通して心房細動の一種である上大静脈由来の異所性興奮の原因の予測解析を行い、IJC Heart&Vasculature誌に出版された。また大阪大学との共同研究において、徐脈性不整脈と心房細動の関連を示した論文がCirculation誌から出版された。既報のGWASで使用された全てのSNVのP値、染色体上の位置情報、オッズ比のファイルを作成する。MATLAB(R2018a)をプラットフォームとするコンピューティング言語でプログラムされたMAGENTAにより解析したところ、CTCF経路とmTOR経路が同定された。CTCF経路とmTOR経路の関与を確認するために、本学心臓外科で採取した既存試料(僧帽弁膜症症例)11検体を用いて、Microarray解析を実施した。心房細動患者と非心房細動患者で2つの経路の関与を調べたところ、心房細動患者から採取された心房筋においてはmTOR経路が抑制されていることが示された。現在、本データに基づいた論文をInternational Journal of Cardiologyへ出版申請中である。次に同定されたユビキチン・リガーゼNEURLのmTOR経路への作用を調べるために、mTORC1複合体に含まれる分子およびmTORC2に含まれる分子のタンパク・リン酸化レベルの変化を調べた。臨床研究では既存試料を用いた研究を用いてベイジアン・ネットワーク解析を通して心房細動の一種である上大静脈由来の異所性興奮の原因の予測解析を行い出版された。また大阪大学との共同研究が論文出版された。次に同定されたユビキチン・リガーゼNEURLのmTOR
オオムギ糊粉層細胞表層におけるジベレリン酸受容体の検索

澱粉性穀物植物はその種子発芽の際、植物ホルモンであるジベレリン酸(GA)を合成・分泌し貯蔵物質の分解利用に関与する加水分解酵素群の合成を誘導することが知られている。本研究ではこの種子発芽に関わる生理現象に着目し、植物ホルモンの作用機序を明らかにすることを目的とした。GAの受容体はその作用組織である澱粉層細胞の原形質膜上に存在することが、微量注入法を用いた実験などにより示唆されている。そこで本研究ではオオムギ澱粉層細胞表層を認識する組換えファージ抗体発現ライブラリーを構築し、発現抗体とGA受容体が相互作用することにより示される生理活性の変化を指標としてGA受容体を免疫分子細胞学的に同定することを試みた。実験材料としてオオムギ澱粉層細胞より原形質膜画分を大量かつ高純度に単離することが必要であり、これには水性2層分配法とショ糖密度匂配分離法を併用することにより比較的純度の高い原形質膜画分を得ることができた。この原形質膜画分より調製したアジュバントをマウスに対して免疫操作を施し、常法に従いファージ抗体発現ライブラリーを作成した。このライブラリーより調製した一価性抗体は対照区に比べて著しくGAの効果を抑制することが確認されたため、GA受容体を認識する抗体を発現する組換えファージがライブラリー中に存在することが予想される。現在、このGA受容体を認識する抗体を発現する組換えファージを単離するための実験手法を模索している。この実験と並行してGA応答性遺伝子の発見制御機構に関する研究も進めており、研究成果の一部は国際的学術雑誌であるMolecular Gene Genetics誌に受理され掲載準備中となっており、また日本植物生理学会は1997年度年会にて研究成果の概要を口頭発表した。
神経系におけるＡＭＰＫ新規機能の解明━概日時計及び感覚受容への関与

概日時計とは一日周期の体内時計であり、その中枢は脳の視交叉上核に存在する。本研究では、AMP-activated protein kinase (AMPK)が、概日時計のリズム形成に深く関与する可能性について検討を行った。マウス視交叉上核を培養し、AMPKの活性化剤を投与しその効果について解析を行った結果、時計遺伝子発現リズムの周期は延長することを明らかにした。この結果から、AMPKが視交叉上核において概日リズムの形成に関与している可能性が示唆された。次に、視交叉上核について、免疫組織化学的解析を行ったところ、AMPKの基質分子が、視交叉上核の腹側部分に局在していることが明らかになった。本研究においては、AMP-activated protein kinase (AMPK)が、中枢および感覚器官における概日時計のリズム形成に深く関与する可能性について検討を行っている。昨年度はAMPKの活性化剤投与の効果について、時計遺伝子発現リズムの周期は延長し、振幅については一時的な増大の後、減衰がみられることを明らかにした。今年度は、それらの成果を論文としてまとめる作業を中心に行い、結果の解釈をめぐり難しい議論が続いたが、投稿直前まで至っている。本研究は、北海道大学の設備を有効に利用することにより大きく進めてきたが、さらに研究のスピードをアップさせるため、実験の大部分を代表者の所属する電気通信大学において行うことを可能にするために、様々な手続き、機器、装置類の準備、さらには遺伝子改変動物の導入などを行った。遺伝子改変動物の繁殖を続けており、実験動物を様々な光環境下で飼育する装置もほぼ完成した。最も重要な発光リズム測定装置については、25年度早々に導入されることになっており、研究の効率が格段に進むと考えられる。概日時計機構における、AMPKの関与する情報伝達メカニズムの様々な上流・下流分子について、薬理学的解析のほかに組織学的解析を行う準備を行った。時計蛋白質であるPeriod2に対する抗体を用いた染色を行い、他の分子の解析を行っていくための準備を整えた。本年度は、電通大において概日リズム測定を可能にするために、かなりの予算を機器購入に充てた。まだ完全に立ち上げには至っていないが、26年度のはじめには完了する予定である。これにより、これまで、北海道大学において行なっていた測定が電通大でもできるようになり、飛躍的に研究が進むことになる。また、嗅球と肝臓のAMPKβサブユニット1および2について、細胞質と核内への局在の時間変化を解析した。その結果、一部に日周変動が見られたが、嗅球と肝臓において、時間変化について位相の違いが見られた。これは、それぞれの組織において、概日時計の位相が異なっていることに由来すると考えられる。しかし、位相以外の発現様式にも違いが見られ、さらに、β1、2との間、核と細胞質との間にも違いが見られた。AMPKの概日時計システムにおける役割として、時計蛋白質をリン酸化し分解に導くことがあげられているが、その役割と本研究結果では、必ずしも整合性がとれない部分もあり、今後はαサブユニット1および2についても解析を進めること等により確かめていきたい。さらに、中枢時計であるSCNについても同様の解析を進めたいとも考えている。嗅覚における、AMPKの機能を明らかにするため、まず、嗅上皮におけるリン酸化AMPKαサブユニットの局在を、免疫組織化学的解析により調べた。その結果、明確な局在は見られなかった。今後染色条件を含めた条件検討を行い、結果の再現性を確認する。AMP-activated protein kinase (AMPK)が、概日時計のリズム形成に深く関与する可能性について検討を行った。本研究開始までに、すでに、AMPKの阻害剤の投与により、マウス視床下部の視交叉上核(SCN)における時計遺伝子の発現リズムに影響がみられることを明らかにしていた。今年度は、活性化剤投与の効果について、更なる解析を行った。その結果、時計遺伝子発現リズムの周期は延長し、位相は前進し、振幅については一時的な増大の後、減衰がみられることを明らかにした。先行研究より、末梢時計におけるAMPKの役割として、体内の栄養状態を感知し、その情報を概日時計に伝えることが示唆されている。さらにその際に、時計タンパク質であるPeriodあるいはCryをリン酸化することが示されている。中枢時計であるSCNの概日時計は、栄養状態の影響を受けないことから、AMPKがSCNの概日時計機能に関与しない可能性も考えられた。しかし、本年度の結果は、AMPKがSCNにおいても概日リズムの形成に関与しさらに入力機構にも関わっている可能性を示唆するものであり、概日時計機構に普遍的に関わる重要な分子であることが示唆された。さらに、そのメカニズムとして、SCNにおいてもAMPKは時計タンパク質をリン酸化していることが考えられた。さらに本研究では、AMPKが感覚器官の末梢時計において、独自の重要な働きをしている可能性を想定し、マウス嗅上皮、および味蕾の培養系でのリズム測定を試みた。その結果、それぞれの器官において、時計遺伝子の発現リズムを観察することができ、またSCNとは異なり独自の位相を持っていることが示された。培養によるリズム測定が可能になったことにより、AMPKの感覚器官における役割解明へ向けて、解析を行う準備が整った。本年度は、電通大においてようやく概日リズム測定が可能となった。視交叉上核、肝臓、嗅上皮の3つの部位について、培養条件下でリズム測定を行った。嗅上皮については、培養下で匂い刺激を与えたところ、概日リズムに大きな影響が見られた。

中枢神経系と末梢組織において、AMPKの概日時計への関与を明らかにするために、嗅球と肝臓のAMPKαサブユニットの活性化について、核画分と細胞質画分に分けて解析した。その結果、肝臓の細胞質画分については、夜の時間帯に活性が高いことがわかった。一方、肝臓の核画分については顕著な日周変動は見られなかった。嗅球については肝臓の結果と大きく異なり、細胞質画分ではAMPKαサブユニットの活性について日周変動は見られなかった。一方、核画分については、昼の時間帯に活性が高いという結果が得られた。AMPKの基質の一つとして、時計蛋白質の一つであるクリプトクロムが知られており、AMPKがクリプトクロムをリン酸化し分解に導くと考えられている。しかし、今回の結果では、嗅球と肝臓でのAMPKの活性化様式は大きく異なっており、両組織での概日時計システムに違いがある可能性が考えられる。今後クリプトクロムを含めた解析をさらに進めることにより、AMPKの概日時計における働きを明らかにしたい。AMPKの細胞内局在の変化を明らかにするため、概日時計中枢の視交叉上核について、免疫組織化学的解析を行ったが、条件検討を重ねたにもかかわらず、AMPKの陽性像を得ることは出来なかった。概日時計とは一日周期の体内時計であり、その中枢は脳の視交叉上核に存在する。本研究では、AMP-activated protein kinase (AMPK)が、概日時計のリズム形成に深く関与する可能性について検討を行った。マウス視交叉上核を培養し、AMPKの活性化剤を投与しその効果について解析を行った結果、時計遺伝子発現リズムの周期は延長し、位相は前進し、振幅については一時的な増大の後、減衰がみられることを明らかにした。これらの結果は、AMPKが視交叉上核において概日リズムの形成に関与し、さらに入力機構にも関わっている可能性が示唆された。次に、視交叉上核について、免疫組織化学的解析を行ったところ、AMPKの基質分子が、視交叉上核の腹側部分に局在していることが明らかになった。この部分は、網膜からの入力がある部分のため、上記の入力機構との関連と整合性のある結果が得られたといえる。マウス視交叉上核を培養し、AMPKの活性化剤を投与しその効果について解析を行った結果、時計遺伝子発現リズムの周期は延長することを明らかにした。この結果から、AMPKが視交叉上核において概日リズムの形成に関与している可能性が示唆された。
推論的な言語理解の概念的枠組みを提示する学際的理論の構築

本年度は,推論的言語理解の理論的枠組みと,その学際的な応用可能性を提示した。第一に,日本語話者が発話を非字義的に理解することを経験的に示すための準備として,80名の日本語母語者にアンケート調査を実施した。その結果,本研究の前年度までの成果である,先行理論で予測不可能な非字義的意味の種類が存在するという仮説が正しいことが証明された。第二に,先行理論で説明不可能な非字義的意味の種類を分類・分析した。その結果,日本語の日常会話における,すべての種類の非字義的意味理解の理論には,合理性の概念が必要不可欠であることが明らかになった。この合理性とは,聞き手が話し手の発話を「理にかなったものである」と前提して理解するということである。第三に,すべての種類の非字義的意味を説明可能にする理論的枠組みを構築し,以下の4点を明らかにした。(1)従来理論的に必要であると考えられてきた「話し手の意図」という概念は,実際の発話理解においては必ずしも必要ない。(2)従来の理論では,「話し手がどのように発話を行うか」という点が重視されてきたが,非字義的意味理解においては,「聞き手がどのように発話を理解するか」という点がより重要である。(3)聞き手は,常に,話し手の発話を「理にかなったもの」,すなわち,合理的に理解可能なものであるという予測のもと,推論を開始する。聞き手がどのような理解を「理にかなったもの」であると考えるかという点は,聞き手(の認知的状態)に依存する。したがって,推論的言語理解の理論では,非字義的意味理解は聞き手に帰属され,推論を駆動する原理の遵守基準は聞き手によって決定される。(4)推論的言語理解の理論をより経験的な研究に応用するためには,パラメトリックに処理可能な文脈情報をリストアップすることよりも,聞き手がどのような発話を理解可能なものとして受容できるかという点を解明することが重要である。推論的言語理解の概念的枠組みを理論的に整理する準備として、予定どおり、人間の日常会話における言語理解に根拠を与える合理性の精緻化を行った。具体的には、合理性を基礎付けている「理由」概念の考察をすすめ、日常会話において受容される理由と受容されない理由があることを明らかにした。つまり、日常会話における聞き手は、たとえば、「発話者はであるので、・・・と発話した」と解釈し、部分を発話の理由、あるいは、発話の言外の意味(会話の含み)の内容として理解する。このような場合、理由は単独である発話を理解する理由として受け入れられることが可能であり、その理由は発話内容の言外の意味(会話の含み)として理解される。しかしながら、理由として受け入れられることが困難であるような、ある種の理由も存在する。後者の理由は、場合によっては受け入れ可能な場合もあるが、それは発話内容としてのみ受け入れ可能であり、発話解釈の理由としては不十分であることも予想された。この知見に基づき、現在は、以下の2点を研究中である。すなわち、前者と後者の理由の違いを何らかの形で形式化すること、そして、後者がさらに2つのカテゴリーに明確に区分されるべきかという問題に解答を与えることである。なお、以上の知見を得るために、ヨーロッパおよび国内の学会・研究会に出席し、最新の研究成果を知るとともに、本研究で得られた理論的予想が妥当なものであるかどうか、非公式に意見を求めた。その結果、研究の方向性は妥当であることが明らかとなり、本研究の意義が再確認された。前年度に引き続き、日常言語における推論的言語理解において重要な役割を果たしている合理性の概念について研究を進め、グライス理論における協調原理が日常言語理解における合理性に深い関連があること、および、協調原理が十分明確な形で定義されていないことを指摘した。そのうえで、日常言語で聞き手によって行われる4つの理解の段階を整理し、協調原理が2つの段階で役割を果たしていることを示し、明示されていなかった協調原理の隠れた役割の特徴づけを行った。同時に、従来扱われてこなかった聞き手による誤解および理解の失敗について、グライスの会話の含みの理論に基づいて特徴づけを行った。これらの成果を、日本科学哲学会第38回大会にて発表した。一方、ポルトガルで行われた自然言語にかんする学際的なワークショップに参加し、今年度までの本研究における理論的な帰結を実際の会話データを用いて検証するための情報収集を行った。ここで得た欧米における会話データ研究の知見に基づき、既存の日本語会話データを収集・分析し、以下の点が明らかとなった。(1)日本語での2者以上による(特定の課題や状況を設定しない)自然対話では、会話の含みはあまり観察されない。とくに、欧米の言語において従来主な研究対象とされてきたグライス的な会話の含みは、日本語の自然会話で観察されることはまれである。(2)しかし、グライス的な会話の含みは、日本語話者にとって理解不可能なほど非日常的ではない。外交的交渉やいわゆる「お笑い」の場面においては、グライス的な会話の含みの典型例が数例観察された。以上の2点から、会話の含みが日本語話者にとって(データにあらわれにくいものの)理解可能であることを実験的に示す必要があることがわかった。現在はこの点を示すための実験を計画中であり、その実験結果をふまえて日常言語における推論的言語理解の一般理論を構築する予定である。

本年度は,推論的言語理解の理論的枠組みと,その学際的な応用可能性を提示した。第一に,日本語話者が発話を非字義的に理解することを経験的に示すための準備として,80名の日本語母語者にアンケート調査を実施した。その結果,本研究の前年度までの成果である,先行理論で予測不可能な非字義的意味の種類が存在するという仮説が正しいことが証明された。第二に,先行理論で説明不可能な非字義的意味の種類を分類・分析した。その結果,日本語の日常会話における,すべての種類の非字義的意味理解の理論には,合理性の概念が必要不可欠であることが明らかになった。この合理性とは,聞き手が話し手の発話を「理にかなったものである」と前提して理解するということである。第三に,すべての種類の非字義的意味を説明可能にする理論的枠組みを構築し,以下の4点を明らかにした。(1)従来理論的に必要であると考えられてきた「話し手の意図」という概念は,実際の発話理解においては必ずしも必要ない。(2)従来の理論では,「話し手がどのように発話を行うか」という点が重視されてきたが,非字義的意味理解においては,「聞き手がどのように発話を理解するか」という点がより重要である。(3)聞き手は,常に,話し手の発話を「理にかなったもの」,すなわち,合理的に理解可能なものであるという予測のもと,推論を開始する。聞き手がどのような理解を「理にかなったもの」であると考えるかという点は,聞き手(の認知的状態)に依存する。したがって,推論的言語理解の理論では,非字義的意味理解は聞き手に帰属され,推論を駆動する原理の遵守基準は聞き手によって決定される。(4)推論的言語理解の理論をより経験的な研究に応用するためには,パラメトリックに処理可能な文脈情報をリストアップすることよりも,聞き手がどのような発話を理解可能なものとして受容できるかという点を解明することが重要である。
蛍光顕微法を用いた有機半導体薄膜結晶粒間の位相欠陥イメージング

有機半導体の良質な大粒径薄膜結晶をエピタキシャル成長法で実現するための基礎研究として,薄膜結晶中の位相欠陥やドメイン構造の可視化を下記の2つの手法で試みた.1.蛍光顕微法を用いた有機半導体薄膜中の位相欠陥の観察:平成16年度の研究で,蛍光プローブ分子と化学構造が似た有機薄膜間の相互作用により効率的な蛍光発光を得ることが困難であることが予想された.そのため,市販の蛍光試薬中でもっとも蛍光強度が強いローダミン(tetramethylrhodamine-5-isothiocyanate)をトルエン中に溶解させ,グラファイト上に蒸着した銅フタロシアニンおよびC60薄膜をその中に浸積し,薄膜表面上でのローダミンの発光挙動を全反射型蛍光顕微鏡を用いて直接観察した.その結果,溶液中で拡散しているローダミン分子からの蛍光は観察されたが,ローダミンが有機薄膜に化学吸着すると蛍光強度が低下し個々のローダミン分子が識別できないことが分かった.そのため,2.の手法での観察に移行した.2.低速電子顕微法(LEEM)を用いた有機半導体薄膜中のドメイン構造の観察:試料が有機物であっても,薄膜試料に電子線を意図的に斜入射することで,薄膜中の2次元単位格子の向きに応じた異なるコントラストを得ることができるため,多結晶中のドメイン構造を可視化できることを明らかにした.さらに本手法を応用し,水素終端Si(111)基板表面上でのペンタセン(Pn)薄膜の成長過程をその場観察したところ,1つの孤立した樹枝状結晶粒が実は多結晶であり,エピタキシャル構造に応じた3種類のドメイン構造が規則正しく配列して構成されていることを見出した.また,この樹枝状多結晶のドメイン構造とその時間発展が,2次元単位格子の結晶学的方位に応じた成長速度の異方性と,基板表面上でのPn分子の濃度勾配によって決定されることを見出した.無機基板結晶上でエピタキシャル成長させた有機半導体薄膜結晶粒間に存在すると考えられている位相欠陥を可視化するために,蛍光ラベル化試薬ローダミンを銅フタロシアニンと反応させた.しかしながら,反応による生成物と未反応の反応物の分離が困難であり,未だ位相欠陥の可視化実験に必要と考えられる数mgオーダーの生成物が得られていない.そこで,結晶粒の良質化メカニズムを明らかにする目的で,アニーリングによるオストワルド成長過程の観察実験と,低速電子顕微鏡(LEEM)による薄膜結晶粒成長過程のその場観察実験を並行して進めた.1)アニーリングによるオストワルド成長過程の観察実験:銅フタロシアニンの薄膜結晶をグラファイト基板上に分子線エピタキシャル成長させた後,真空チャンバー内で薄膜結晶を150°Cと200°Cで所定時間アニーリングした.得られた薄膜結晶の粒径分布と高さを原子間力顕微鏡で観察した結果,アニーリングにより結晶粒のオストワルド成長が表面拡散を介して進行していることが強く示唆された.さらに,アスペクト比の小さな層状の結晶粒を得るには,より低温でのアニーリングが有効であることを見いだした.2)低速電子顕微鏡(LEEM)によるその場観察実験:水素終端(H-)Si(111)基板上でのペンタセン(Pn)の樹枝状薄膜結晶の成長過程をLEEMでその場観察した.まず,低速電子線回折(LEED)像より,PnがH-Si(111)表面上では6方位でエピタキシャル成長することを見出し,その構造を決定した.また,LEED像よりこれまで単結晶であると考えられてきた樹枝状結晶が実は多結晶であること,およびLEEM像より1つの樹枝状結晶はPn分子の配向角度が異なる3つのドメイン構造を有することを見出した.さらに,樹枝状結晶が枝分かれする際のドメイン構造の継承機構を明らかにした.有機半導体の良質な大粒径薄膜結晶をエピタキシャル成長法で実現するための基礎研究として,薄膜結晶中の位相欠陥やドメイン構造の可視化を下記の2つの手法で試みた.1.蛍光顕微法を用いた有機半導体薄膜中の位相欠陥の観察:平成16年度の研究で,蛍光プローブ分子と化学構造が似た有機薄膜間の相互作用により効率的な蛍光発光を得ることが困難であることが予想された.そのため,市販の蛍光試薬中でもっとも蛍光強度が強いローダミン(tetramethylrhodamine-5-isothiocyanate)をトルエン中に溶解させ,グラファイト上に蒸着した銅フタロシアニンおよびC60薄膜をその中に浸積し,薄膜表面上でのローダミンの発光挙動を全反射型蛍光顕微鏡を用いて直接観察した.その結果,溶液中で拡散しているローダミン分子からの蛍光は観察されたが,ローダミンが有機薄膜に化学吸着すると蛍光強度が低下し個々のローダミン分子が識別できないことが分かった.そのため,2.の手法での観察に移行した.2.低速電子顕微法(LEEM)を用いた有機半導体薄膜中のドメイン構造の観察:試料が有機物であっても,薄膜試料に電子線を意図的に斜入射することで,薄膜中の2次元単位格子の向きに応じた異なるコントラストを得ることができるため,多結晶中のドメイン構造を可視化できることを明らかにした.

さらに本手法を応用し,水素終端Si(111)基板表面上でのペンタセン(Pn)薄膜の成長過程をその場観察したところ,1つの孤立した樹枝状結晶粒が実は多結晶であり,エピタキシャル構造に応じた3種類のドメイン構造が規則正しく配列して構成されていることを見出した.また,この樹枝状多結晶のドメイン構造とその時間発展が,2次元単位格子の結晶学的方位に応じた成長速度の異方性と,基板表面上でのPn分子の濃度勾配によって決定されることを見出した.
ピリドチアジン中間体を経由する橋頭窒素複素環化合物の合成と反応性に関する研究

本研究の最大の目的であるチエノ[2,3ーb]インドリジン誘導体への重要な中間体であり、且つ反芳香族16パイ電子系を有する分子、ピリド[2,1ーc]チエノ[3,2ーe]チアジン誘導体の構造証明は、元素分析、各種スペクトル解析によって行っただけでなく、2つの化合物の単結晶X線構造解析によって明確に行うことが出来た。そして、この構造解析によって判明したことは、この分子内のピリジン環とチオフェン環はその構造デ-タから明らかに芳香族であるのに対し、その1,4ーチアジン環は1つの炭素ー硫黄単結合が伸びて非平面に成っており、この位置で共役系が切断されているという事実である。このことは共役系が見かけ上反芳香族16パイ電子を有していても、分子が非平面を取ることによって反芳香族的な不安定化を免れていることを意味する。従来反芳香族分子が不安定で様々な興味深い反応を行うことが知られているが、X線構造解析によりその構造デ-タが示されたことは殆ど無いので、これらの知見は特に重要であると思われる。又今回これらの化合物の熱的な反応において、それぞれ転位あるいち脱硫したチエノ[2,3ーb]インドリジン誘導体が初めて得られ、それらの反応に及ぼす置換基効果が以前得られた結果と同じであることが確認された。さらに多官能化されたインドリジン誘導体の1、3位の置換基の反応性の順序を決めるための実験として3位にシアノ基を有するインドリジン誘導体が合成され、それらの3ーアミノチエノ[2,3ーb]インドリジン誘導体に方換することにより、その高い反応性を証明することが出来た。そのほか、ヘテロ環を縮合したインドリジン誘導体の構造解析の一環として、ピラノ[2,3ーb]インドリジン誘導体の単結晶X線構造解析を行った。これらの成果は、印刷中1報、投稿中1報、投稿準備中1報である。
ノシスタチン結合タンパク質標的分子ＴＲＰＶ６の品質管理に基づく疼痛制御の解明

我々は、疼痛制御ペプチドノシスタチンの結合タンパク質(Nocistatin binding protein, NSP1)を同定した。NSP1は分子シャペロンHSP60と選択的Ca2+チャネルTRPV6と会合した。NSP1とHSP60の相互作用は、中枢神経系ではなく腎臓において見られた。一方、TRPV6は腎臓以外に脳や脊髄にも発現していること、中枢神経系特異的に発現するTRPV6スプライスバリアントが存在することを示した。NSP1はTRPV6の細胞膜への移行を抑制することによりチャネル活性を抑制した。NSP1とTRPV6バリアントは炎症性疼痛に伴う発現変動が認められた。申請者らは、痛覚制御ペプチドとしてノシスタチンを発見し、その結合分子としてノシスタチン結合タンパク質(Nocistatin binding protein 1, NSP1)を同定した。NSP1遺伝子欠損マウスの作製により、NSP1の疼痛制御への関与を認めた。一方、NSP1はTransient receptor potential V6 (TRPV6)と複合体を形成し、その細胞内へのCa2+透過性を抑制した。さらに、NSP1結合分子として分子シャペロンHSP60を同定した。本研究では、TRPV6、NSP1、HSP60による機能的相互作用、TRPV6タンパク質の品質管理、疼痛制御への関与に焦点をあて、膜タンパク質の品質管理に基づく疼痛制御機構を解明する。本年度は、脊髄や脳の疼痛伝導路に発現する中枢型TRPV6の解析およびTRPV6とNSP1の相互作用とTRPV6の細胞膜への移行に焦点を絞り解析を行い以下の知見を得た。1.前年度、腎臓や小腸に発現する末梢型TRPV6の他に、脳や脊髄に特異的に発現するTRPV6スプライスバリアント(中枢型TRPV6)の存在を明らかにした。今年度、中枢型TRPV6の全長cDNAの解析により、少なくとも4種類のスプライスバリアントを見いだした。末梢型TRPV6は6回膜貫通領域を有するのに対し、これらのスプライスバリアントはC末端が欠損し、1番目から4番目の膜貫通領域しかもたず、チャネル構造を保持していなかった。2.TRPV6の細胞膜への移行を細胞表面ビオチン標識法によって検討した結果、NSP1共発現細胞においてTRPV6の膜移行は抑制された。また、Cos7細胞にて部位欠損型のTRPV6とNSP1変異体よる相互作用を免疫沈降で検討した結果、TRPV6のN末端細胞内領域とNSP1のN末端領域が相互作用を示すことが明らかになった。本研究では、TRPV6、NSP1、HSP60による(1)機能的相互作用、(2)タンパク質の品質管理、(3)疼痛制御への関与に焦点をあて、膜タンパク質の品質管理に基づく疼痛制御機構を解明する。本年度は、細胞培養発現系におけるTRPV6の品質管理に対するNSP1とHSP60の相互作用の影響、相互作用の特異性、疼痛との関連に焦点を絞り以下の知見を得た。Cos7細胞においてTRPV6とNSP1の共発現細胞系では、NSP1はTRPV6の細胞膜への移行を抑制したが、HSP60の発現では有意な変化なかった。他のTRPVファミリー分子との相互作用を解析した結果、NSP1はTRPV6の他にTRPV2と相互作用することを見いだした。結合ドメインを解析したところ、TRPV2およびTRPV6ともにN末端細胞内領域とNSP1のN末端領域が相互作用した。NSP1遺伝子欠損マウスでは、アロディニアのみならず急性や慢性の炎症性疼痛の増強作用が見られた。後根神経節細胞では炎症性疼痛に伴ってTRPV6やTRPV2の発現には変動はなかったが、NSP1は炎症の初期では発現上昇が、慢性炎症では発現が減少した。NSP1の発現変動が炎症性疼痛の制御を担っている可能性が示唆された。

一方、NSP1はTransient receptor potential V6 (TRPV6)と複合体を形成し、その細胞内へのCa2+透過性を抑制した。さらに、NSP1結合分子として分子シャペロンHSP60を同定した。本研究では、TRPV6、NSP1、HSP60による(1)機能的相互作用、(2)タンパク質の品質管理、(3)疼痛制御への関与に焦点をあて、膜タンパク質の品質管理に基づく疼痛制御機構を解明する。本年度は、TRPV6、NSP1、HSP60の相互作用の関係とTRPV6の疼痛への関与に焦点を絞り解析を行い以下の知見を得た。1.NSP1とHSP60との相互作用には細胞特異性が認められた。腎臓由来Cos7細胞ではNSP1とHSP60との相互作用が認められたが、神経系株細胞NG108-15、N115、PC12細胞では認められなかった。GST融合NSP1を用いたマウス脊髄シナプス膜可溶化画分からの精製においても相互作用は認めなかった。また、免疫染色により、Cos7細胞に発現させたNSP1とHSP60の共存はミトコンドリアで生じていた。一方、NSP1とTRPV6はミトコンドリアと細胞膜に共存していた。2.腎臓や小腸に発現する末梢型TRPV6の他に、脳や脊髄に特異的に発現するTRPV6スプライスバリアント(中枢型TRPV6)の存在を明らかにした。神経因性疼痛や炎症性疼痛に伴い中枢型TRPV6の発現が上昇した。本年度は、(1) NSP1の膜型コシャペロンとしての機能、(2) TRPV6の疼痛への関与、(3) NSP1-HSP60の相互作用によるTRPV6の品質管理について実験を計画していた。(1)に関しては、遅れているが、(2)には新しい展開があり、(3)に関してはおおむね順調に進展している。以下に、それぞれの達成度を記す。(1)天然構造のみで蛍光を発する緑色蛍光タンパク質GFPを酸変性したのち希釈し、NSP1およびHSP60タンパク質を添加することによりフォールディングに伴うGFPの発光を蛍光分光光度計で測定する予定であった。しかし、NSP1が大腸菌でのタンパク質発現系において凝集体となったため、可溶化の条件およびリフォールディングの条件を検討したが、NSP1は量的および質的にGFPを用いたシャペロン活性測定に用いるには不十分であった。(2)疼痛制御にかかわる脳、脊髄には中枢型TRPV6が特異的に発現していることから、マウス脊髄cDNAライブラリーより中枢型TRPV6の全長cDNAの解析を行った。4種類のcDNAを単離し、DNA配列の決定、構造解析を行った。また、TRPV6の部位特異的抗体を作製し、中枢型TRPV6のタンパク質の発現を確認している。(3)細胞表面標識ビオチン法によるTRPV6の膜移行の検出系を確立し、NSP1によるTRPV6の膜移行制御について明らかにした。また、部位欠損型変異体を作製しNSP1とTRPV6の相互作用に必要なドメインを決定した。本年度は、(1)NSP1の膜型コシャペロンとしての機能、(2)TRPV6-NSP1-HSP60の相互作用と局在、(3)TRPV
パラジウム錯形成に駆動される自己組織化パラジウムナノ構造固体触媒の開発

炭素ー炭素カップリング反応において、反応性に優れるとともに、水系で繰り返し利用可能な難溶性の新たな不均一系固定化パラジウム触媒の開発を目的とする。パラジウムを溶出させないために強力な親和性でパラジウムと錯形成できるテオフィリンを有するダブルキレート分子を設計し、パラジウムとテオフィリンとの錯形成を駆動力とした自己組織化によって、パラジウムをナノサイズで自己集合体内部に自発的に固定化できるナノ構造固体触媒を提案する。本触媒の性能評価と物性評価を詳細に行い、繰り返し利用の主要因をつきとめ提唱する。