hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
メンタルヘルスとメタボリックシンドロームとの関連-血清BDNFと身体活動の役割

目的:勤労者におけるメンタルヘルスとメタボリックシンドローム(以下「MetS」という)との関連性を脳由来神経栄養因子(BDNF)の役割も含めて検証することを目的する。研究方法:C企業社員20歳以上の約400人を対象とし、平成21年1月平成23年2月の間に行われた健康診査(年1回)時に、(1)基礎プロフィール(2)血液一般検査(3)インスリン濃度HOMA-R(4)血清アディポネクチン、(5)血清BDNF検査、血中コルチゾール検査、(6)メンタル検査:CES-D、睡眠調査、GHQ心理検査(初回年度のみ)、職業性簡易ストレス尺度検査等を実施した。結果:初年度においては347人、2年目381人、最終年度371人の参加者数であった。初年度におけるMSリスク因子を2つ以上持つものは、これまでの研究成果と同様、男性で37.6%、女性6%、HOMA-R、血清BDNFレベル、血清アディポネクチンレベルに顕著な男女差が認められた。また、MetSとメンタルヘルスとの関連性において、睡眠障害とMetS因子数2つ以上は双方に約2倍リスクであることが観察され、MetSと睡眠障害の関連性が示唆された。また、女性は男性に比較して血清BDNFが有意に低い傾向が観察された。さらに、女性の血清BDNFは、PSQIスコアと弱い正の相関関係(p<0.01)が認めら。さらに、女性の睡眠障害のある者がない者に比較して、血清BDNFが有意に低かった(p<0.001)。さらに、女性の低血清BDNFレベルは高レベルに比較して、年齢、うつ傾向を調整した睡眠障害のリスクは、4.18(95%CI:1.88-9.31)が観察された。一方、男性には有意な差は認められなかった。2年目も初年度と全体の傾向は殆ど変化がなかった。結論:最終年度における詳細な結果については分析中(健康診査、検査終了が年度末になるため)であるため、最終的な結論には至っていないが、MetSと睡眠障害、睡眠障害と血清BDNFとの関連性が示唆された。特に、女性においては男性より血清BDNFが低い傾向があり、睡眠障害において低血清BDNFのリスクが高い。今回の研究結果は、睡眠障害の有病率の性差に関連があるかもしれない。
耐隣接操作性を満足する社会的選択関数の設計可能性に関する研究

社会的選択において,各個人が選好に関する虚偽の情報を申告するインセンティブを与えないようなルールの設計可能性はミクロ経済学の主要課題のうちの一つである.本研究は「耐隣接操作性」という,選好の虚偽申告を防止するための,ルールに関する新たな性質を提示し,既存研究において主要な役割を果たしてきた「耐戦略性」という概念との間の論理的関係を明らかにした.社会的選択において,各個人が選好に関する虚偽の情報を申告するインセンティブを与えないようなルールの設計可能性はミクロ経済学の主要課題のうちの一つである.本研究は「耐隣接操作性」という,選好の虚偽申告を防止するための,ルールに関する新たな性質を提示し,既存研究において主要な役割を果たしてきた「耐戦略性」という概念との間の論理的関係を明らかにした.社会的選択の際に虚偽の選好を表明することによって社会的選択結果を自分にとってより望ましいものにできる場合があることはよく知られている.このように社会的選択が「操作」されることによって歪められてしまうことは大きな問題である.平成22年度は,社会的選択規則の操作不可能性に関する新たな概念を提示し,それに関連する理論研究に従事した.具体的には「耐隣接操作性」という概念を提示し,その概念を導入することについて説得力のある根拠を与えた.また,「耐隣接操作性」と「耐戦略性」の同値性のための十分条件として,平成21年度に発表したディスカッションペーパーよりも弱い条件を発見した.さらに「耐隣接操作性」と「耐戦略性」の同値性のための必要条件も発見した,これらの結果は,個人の持ち得る選好として線形順序を想定しているが,弱順序を想定した場合の理論分析も行った.そこでは,線形順序を想定した場合に得られる結果が弱順序を想定した場合には得られないことを示した.そこで,「耐隣接操作性」よりも一般的な条件(D(k)-proofness)を導入し,弱順序全体の集合上でD(k)-proofnessが「耐戦略性」と同値になるためのkに関する必要十分条件を発見した.本研究は,社会的選択において選好に関する虚偽の情報を申告するインセンティブを個人に与えない社会的選択規則の設計可能性についての理論研究である.特に,既存の文献で中心的な役割を演じている「耐戦略性」(strategy-proofness)とは異なる,新しいアイデアに基づいた。耐隣接操作性」という概念を提示し,「耐戦略性」との間の理論的関係を明らかにした.「耐隣接操作性」は,真の選好の「隣の」選好しか虚偽申告の候補としない個人を想定した場合の操作不可能性を表現する概念である.したがって,どのような選好も虚偽申告の候補となりえる「耐戦略性」よりも一般には弱い条件である.しかし,個人の持ち得る選好の集合がある性質を満たしている場合には「耐戦略性」と「耐隣接操作性」は論理的には同値な条件であることを示した.そしてそのような場合には真の選好の「隣の」選好を虚偽申告の候補に含むようなどのような操作不可能性の概念も「耐戦略性」と論理的に同値になる.平成23年度は研究成果の報告を海外の学会で行い,そこで得られたコメントを基にして論文の改訂が順調に進んだ.結果として,成果をまとめた2本の論文のうち1本は国際的な学術誌であるSocial Choice and Welfareに掲載が決定した.この点において,インセンティブに関する新たな基準を提示し,耐戦略性との間の理論的関係を明らかにするという目的は達成できた.
貧困層子弟の社会的自立と貧困の世代的継承に関する基礎研究

(1)、研究課題を検討するにあたって、我々はなんらかの事情によって家庭で児童の養育ができなくなった「養護問題」をかかえる家庭を対象とした。なぜならば、このような家族の家庭生活の多くは低所得=貧困であるばかりでなく、家族関係が崩壊の危機に瀕しており、児童の養育に深刻な影響をおよぼしていると考えたからである。(2)わたしたちはこのような状態におちいる原因の究明と、家庭以外の場である養護施設で育った児童の社会的自立の現実を明らかにすること、この2つの課題にとりくんだ。(3)、養護問題をかかえる家庭を対象とした研究では、その家族が属する社会階層と家族の形態、ライフ・ステージ毎の居住地域を主な指標にしてその変動と関連を分析した。その結果、家族の解体と地域移動は密接な関連があること、一見個別的・特殊的な原因によって家族解体や児童養護問題がひきおこされているようにみえながら、家族が形成された時点でどのような社会階層に所属していたかということが極めて重要であることが明らかになった。(4)養護施設児童の社会的自立を対象とした研究では、卒業した後の労働・消費生活、家族・親族との関係、新らしくつくり出していく社会的ネットワークや生活構造の内容を分析検討した。その結果、本来社会的ネットワークとして重要な役割を担うべき家族・親族との関係は消極的なものにとどまり、労働を契機とした人間関係や社会的諸サービスのネットワークがそれにかわるものであることが明らかになった。しかし相対的に低い学歴水準や家族関係におけるハンディキャップ等の影響で、不安定で低い所得の職業への就労が広くみられ、貧弱な社会化にとどまっている。総じて養護問題家族の現状からすれば、雇用・住居の保障を含む社会保障・社会福祉が有効な手だてを欠くならば、貧困は世代的に継承されると考えられる。今年度は研究課題に関する主として英国における研究動向の検討と,貧困の世代継承を検証するための基礎資料の収集をおこなった.1.貧困層における貧困の世代的継承に関する議論は, 1970年代以降Deprivationをめぐる研究において深められ,貧困文化論的視点と社会構造論的視点の論争として展開されてきており,これらの検討をつうじて,作業仮説を得ることができた.2.北海道における貧困の性格は,低所得にくわえて階層移動にともなう地域移動のはげしさ,家族関係の不安定化といった「不安定・流動化」の側面が強いことを,諸統計の再集計により明らかにし,こうした事態の深化は,その子弟の養育および教育に深刻な影響を与えるであろうという,作業仮説の妥当性を裏づけることができた.3.以上の基礎的検討と並行して資料収集につとめた.貧困層子弟の社会化(socialization)をめぐる課題を明らかにしていく上で児童相談所の相談ケースはきわめて多様な性格を有していることに着目し,道内2都市の機関の協力を得て,相談ケースのききとり調査を行なった.ききとり調査は対象ケースに面接調査を行うことには制約があり,担当者をつうじて,生活史,子供の問題行動ないし状況,両親の行為・態度などの項目について聴取した.その際,親および子供の社会的自立に関連すると思われる社会関係・社会資源のネットワークがどのように構築されているのか, (もしくはいないのか)という点に注意を払って資料収集を行なった.4.来年度は収集した資料分析とできれば,生活保護世帯の子供の社会化に関するききとり調査を行ない,報告書の作成を行なう予定である.今年度は、昨年度集収した釧路児童相談所における「養護相談」ケースの事例分析と、養護施設出身者の生活構造分析に関する調査を行なった。1.「養護相談」ケースの事例分析では、家族の解体の類型化を行ない、養護問題形成のメカニズムの解明を行なった。

その際家族形成時点における生計中心者の属する社会階層を起点として、その移動と地域移動に注目して児童の養護問題の発生がどのような条件で起るのかを事例分析した。2.その結果、「養護問題」は単に養育者を欠く状態で起るのではなく、家族解体の過程で起ること、および個別的、特殊的原因でこのような状態がひき起されるようにみえながら、家族形成時の社会階層に強く規定されていることが明らかになった。3.養護施設出身者の生活構造分析は、貧困階層子弟の社会的自立の過程分析に様々な示唆を与えるものと考えられる。貧困階層子弟がその出身階層から脱し、新たな生活の枠組をもち得るか否かが、自立にとって決定的に重要であるからである。しかしその際家族・親族のネットワークに依存することはほとんど困難な状況であるために、労働に結びついた社会的ネットワークの構築が不可欠であるが、低い学歴水準と住居の確保におわれるために、窮迫的就労の傾向が強く貧弱なネットワークの形成にとどまる事例が多いことが明らかになった。社会的諸サービスの系統的な充足なしには、貧困の世代的継承を有効に阻止することはむずかしいと考えられる。
68Ga標識オクトレオタイドを用いたPET/CT検査に関する研究

神経内分泌腫瘍患者に対して、ポジトロン核種Ga-68で標識したオクトレオタイド(DOTATOC)を投与し、臨床研究としてPET/CT検査を施行した。ヨーロッパの先行データと同様、本検査は他の画像診断に情報を追加し、治療方針に影響を及ぼした症例が多数経験された。特に神経内分泌腫瘍の術後にホルモン値上昇で再発が疑われている際に有用と考えられた。通常のFDG-PET検査で行われている遅延撮像は、DOTATOC-PET検査の場合にはほとんど診断精度に影響を与えず、わずかに確信度を向上させる程度であった。DOTATOCの生理的集積として、膵鉤部付近の集積は画像診断上の留意点と考えられた。Ga-68を溶出するためのGa/Ge generatorを秋に更新し、現在は水曜日と木曜日にそれぞれ1枠ずつ臨床研究としての68Ga-DOTATOC-PET/CT検査を施行している。神経内分泌腫瘍は多血性の腫瘍が多い特徴を有することから、通常の低線量の単純CTに加えて、PET検査後に体位をかえずに造影CTを施行し、動脈相と平衡相の形態画像を得ることもあり、DOTATOCの集積部位を診断用の造影CTと融合させることで、他の画像診断法では明らかでなかった病変を明瞭に描出できることがある。平成25年度は、77例の新規登録例があり、特にトラブルなく検査が施行され、臨床研究としての画像診断をおこなってきている。臨床的に神経内分泌腫瘍が疑われ、従来の画像診断で不明な状況において、当該臨床研究のDOTATOC-PET/CT検査がどの程度の診断精度を有するのかを検討した。平成24年度までの症例も含めての解析では、全32人のうち、転移巣から神経内分泌腫瘍が証明された場合の11人中7人(64%)で有所見が得られ、そのうち3人で病理学的な裏付けが得られた。神経内分泌腫瘍の術後の転移・再発巣検索にて、ホルモン値上昇などで再発が疑われた7人では、6人(86%)で有所見が得られ、治療法の決定に役立った。一方、ホルモン値の上昇などにより、神経内分泌腫瘍が疑われている14人では責任病巣の同定につながった症例は1人もいなかった。病理学的な神経内分泌腫瘍の術後に転移・再発が疑われ、FDG-PET/CT検査を含む他の画像診断法で不明な場合には、DOTATOC-PET/CT検査は有効な画像診断法のひとつであることが示唆された。平成26年度は113人の患者に対してDOTATOC-PET/CT検査を行った。2014年10月の68Ge/68Gagenerator更新後に最終生成物の収率が増加したため、1回の合成で2人分の検査が可能となり、現在は水曜日と木曜日に2件ずつ施行し、検査依頼の需要に応えている。検査は神経内分泌腫瘍(NET)の術前病期診断、術後再発診断をはじめ、ヨーロッパで内照射療法のひとつPRRT(Peptide Receptor Radionuclide Therapy)を受けた後の治療効果判定など様々な目的で行われている。明らかにすべきひとつのテーマである、転移巣が組織学的にNETと証明されたが原発巣が不明な場合、あるいはホルモン値の上昇などがあってNETが疑われているがCT, MR, FDG-PET/CTなど他の画像診断法で病巣が不明な場合にどの程度臨床的に有用な情報が追加されるかについて調査した。転移巣がNETと病理診断され原発巣が不明なA群、NETの術後にホルモン値が上昇し再発巣が不明なB群、NETの既往歴はなく、ホルモン値上昇でNETが疑われたC群と3つのグループに分けたところ、A群では14人中8人、B群では7人中6人で有用な情報が得られたのに対して、C群では25人中1人しか情報は追加されず、検査前の状況に応じて期待される結果が異なることが示された。詳細に関しては現在論文投稿中である。その他、1NETの診断においてDOTATOC-PET/CT検査の遅延撮像が臨床的有用性をもたらすか、2腫瘍性骨軟化症の責任病巣検索におけるDOTATOC-PET/CT検査の診断精度、3サルコイドーシスに対するDOTATOC-PET/CT検査の有用性を従来のガリウムシンチグラフィと比較してどの程度の診断精度があるのか、についてはそれぞれ12について論文作成中、3について症例蓄積中である。DOTATOC-PET/CT検査を受けた100人の患者について、PET/CT画像を振り返り、生理的集積を定量的に解析した。生理的集積をみとめる部位におけるSUVmaxの平均±標準偏差、最小値、最大値は以下のとおりである。すなわち、下垂体(8.7±3.6, 2.7, 20.9)、甲状腺(2.5±0.9, 0.7, 5.9)、膵臓(鉤部-頭部)(6.3±3.6, 1.8, 21.7)、膵臓(体部-尾部)(3.8±1.1, 1.9, 7.4)、肝臓(7.7±2.4, 2.9, 19.0)、脾臓(25.4±8.6, 4.8, 50.5)、副腎(13.4±4.6, 2.6, 26.1)、腎皮質(19.7±6.5, 5.5, 39.8)、胃(5.9±2.3, 1.6, 11.7)、腸管(4.9±1.6, 1.0, 12.1)であった。

また下垂体の生理的集積は男性7.8±3.3、女性9.3±3.7,腎臓では、男性21.6±6.3、女性16.9±5.7を示し、有意な性差をみとめたが、その他の臓器にはあきらかな性差を認めなかった。ホルモンレベルがDOTATOCの生理的集積に影響を与えた可能性がないかを調査するために、ACTH高値の9人、ガストリン高値の32人、インスリン高値の11人、グルカゴン高値の5人、FGF-23高値の10人を抽出し、それぞれのホルモン値が正常範囲の129人の患者と比較検討した。結果、下垂体の集積は、ホルモン値異常なし群(8.4±3.3)に対してACTH高値群で低く(6.1±4.8, p=0.029)、グルカゴン高値群で高かった(11.6±2.6, p=0.025)。また副腎の集積も、ホルモン値異常なし群(13.8±4.8),に対してACTH高値群で低く(11.4±4.8, p=0.042)、グルカゴン高値群で高かった(17.9±2.3, p=0.017)。また肝臓、膵臓、脾臓の生理的集積に対するホルモンレベルの影響は見られなかった。ACTHやグルカゴンなどのホルモンが生理的にソマトスタチン受容体の発現に影響を与えている可能性が示唆された。神経内分泌腫瘍患者に対して、ポジトロン核種Ga-68で標識したオクトレオタイド(DOTATOC)を投与し、臨床研究としてPET/CT検査を施行した。ヨーロッパの先行データと同様、本検査は他の画像診断に情報を追加し、治療方針に影響を及ぼした症例が多数経験された。特に神経内分泌腫瘍の術後にホルモン値上昇で再発が疑われている際に有用と考えられた。通常のFDG-PET検査で行われている遅延撮像は、DOTATOC-PET検査の場合にはほとんど診断精度に影響を与えず、わずかに確信度を向上させる程度であった。DOTATOCの生理的集積として、膵鉤部付近の集積は画像診断上の留意点と考えられた。1当施設で行われているソマトスタチン受容体シンチグラフィ、DOTATOC-PET/CT検査が他施設のこの領域を専門とする医師が認識するようになり、全国の様々な施設からの依頼が増加している。In-111製剤のオクトレオスキャンが上梓され、γカメラを有する施設でソマトスタチン受容体シンチグラフィが施行される日も近いと推測されるが、SPECT製剤のために画質には限界がある。診断精度、確信度に勝る本検査法の依頼は、今後も増加していくものと期待される。画像診断学2015年4月より2台目の複合型PET/CT装置が稼働を開始する。この装置の特徴として空間分解能などはこれまでの機種と変わらないが、画像再構成法の進歩などにより、従来と同じ信号雑音比を得るために要する時間、投与量が少なくて良いという性質を有する。この特長は半減期が68分と短く、投与量も基本的に少ないDOTATOC-PET/CT検査では有利に働くと期待され、1回合成で3人の検査を行っても、これまでと同様の画像が得られる可能性がある。また何分間のデータ収集で診断に十分な信号雑音比が得られるのかは検討すべきと考えている。さらに患者の対象として、ある種の腎細胞癌でもDOTATOCの集積が見られることが知られており、通常の造影CTやFDG-PET/CTで不明な転移巣を明瞭に描出することがある。腎細胞癌におけるDOTATOC-PET/CTの診断精度に関する知見も少ないため、症例を蓄積して検討する必要がある。DOTATOC-PET/CT検査は神経内分泌腫瘍や腫瘍性骨軟化症など、比較的まれな疾患が対象となり、1施設からの紹介には限りがある。これらの疾患を扱う消化器内科、肝胆膵移植外科、内分泌代謝内科の当施設以外の医師に認知されるようになったため、依頼件数は確実に増加している。
上皮細胞の増殖・運動性を制御するHGFとTGF-betaの相互作用の解析

胃ガン細胞株MKN74細胞は、肝細胞増殖因子(HGF)によって、その増殖が強く促進された。この増殖促進効果は、本来は、上皮細胞の増殖を抑制する因子であるtransforming growthfactor-beta(TGF-beta)によって、さらに増強された。また、HGFはMKN74細胞に対してscattering活性を示し、その作用もTGF-betaによって増強された。そこで、TGF-betaによるHGFの作用増強の機構を分子レベルで明らかにするため、以下の2点について実験を行なった。(1)HGF受容体のチロシンリン酸化について、受容体を免疫沈降することにより検討した。その結果、HGF刺激5分後に、濃度依存的に、顕著なチロシンリン酸化の亢進が見られた。HGF刺激に伴うチロシンリン酸化がTGF-betaにより変化するか、また、それによってチロシンキナーゼ活性が修飾されているかについて、現在、検討を続けている。(2)細胞間接着において重要な役割を担っているカドヘリン・カテニン複合体について、それが、HGF刺激によって量的質的に変化していないかを検討した。まず初めに、カドヘリンとカテニンの発現量はHGF刺激によるscatteringの前後で変化がないことを確認した。次に、複合体としての量の変化について検討したところ、複合体の量、ならびに各成分の量比には変化がなかった。それに対して、カテニンのひとつであるbeta-カテニンのチロシンリン酸化レベルがscatteringした細胞では高くなっていた。増殖因子の刺激にともないscatteringが起こる際、beta-カテニンのチロシンのリン酸化レベルが亢進することを初めて示した。この結果は、リン酸化により、細胞間の接着が制御されている可能性を強く示唆するものであると考える。そこで、TGF-betaによってscatteringが促進されるとき、beta-カテニンのチロシンリン酸化レベルがさらに亢進しているのか、あるいは異なる機構による制御であるかについて、現在、検討を進めている。
ペプチド作動性血管拡張神経伝達におよぼす内因性昇圧物質の影響

抵抗血管に存在するカルシトニン遺伝子関連ペプチド(CGRP)を伝達物質とするペプチド作動性血管拡張性神経の循環調節における役割を調べる目的で、内因性血管収縮物質Angiotensin II(AII)およびNeuropeptide Y(NPY)のCGRP神経伝達機構におよぼす影響を検討した。抵抗血管標本としてラット腸間膜動脈血管床の潅流標本を作製した。標本をKrebs液で定流量(5ml/min)で潅流し、その潅流圧を抵抗血管の収縮張力をして圧transducerで測定し、以下の実験を行った。(1)交感神経の反応を抑制するためguanethidine(5μM)と血管収縮物質のmethoxamine(7μM)を加えたKrebs液で潅流し、血管を収縮物質のmethoxamine(7μM)を加えたKrebs液で潅流し、血管を収縮させて潅流圧を一定のレベルまで上昇させた。潅流圧が一定したとき動脈周井神経を経壁電気刺激(PNS:1,2,4,8Hz)すると、刺激頻度依存性の潅流圧減少すなわち血管拡張反応が出現した。この反応はNPY(130nM)およびAII(10100nM)の潅流によって用量依存的に抑制された。また、AIIの前駆ペプチドAIもAIIと同様にこの反応を抑制した。同一標本にて、NPYあるいはAI,AII存在下に伝達物質のCGRPを直接潅流液中に注入して出現する血管拡張作用はNPYによって抑制されなかったが、AIおよびAIIはこの反応を抑制した。AIおよびAIIによる神経性ならびにCGRPによる拡張反応の抑制はAII受容体遮断薬存在下ではみられなかった。2)guanethidineを含むKrebs液で潅流した標本で、潅流液中のCGRPをRIA法にて測定すると、PNS(4および8Hz)によってCGRPの遊離が増加した。この神経性CGRP遊離増加はNPYによって著明に抑制された。以上の結果から、内因性昇圧物質はCGRP神経性拡張反応を抑制的に調節していることが証明された。また、抑制作用機序も異なり、NPYはCGRP神経終末に作用してCGRP遊離を抑制することによって、AIIはCGRP自身の血管拡張反応を抑制することによってCGRP神経伝達を抑制していると考えられる。
心の理論の発達と言語発達：音韻・統語の両面から

本研究では、心の理論課題と言語課題を幼児に対して実施し、「心の理論の発達」と「言語能力の発達」の詳細を調査するとともに、それらの相関を明らかにすることを目的としている。平成30年度に行った研究とその成果は、下記の通りである。(1)平成29年度の2-3歳児を対象とした音象徴に関する実験結果を学会で発表した(日本音韻論学会、MAPLLxTCPxTLxTaLK (MT3))。本実験では、2-3歳児及び6歳児と大人被験者に幾何学図形の画像を提示し、阻害音や共鳴音と図形との音象徴的な結びつきが見られるかを調べ、すでに2-3歳児において「阻害音=角張った形」「共鳴音=丸まった形」という結びつきが見られることが示された。学会発表で得られた知見をもとにさらなる考察を進め、論文にまとめた(慶應義塾大学言語文化研究所紀要第50号)。(2)平成29年度の受身文理解に関する実験結果を学会で発表した(MAPLLxTCPxTLxTaLK (MT3))。本実験では、受身文に対応する動画と、動作主と非動作主が入れ替わった動画を同時に提示し、それぞれの注視時間を計測したところ、大人と6歳児が受身文に対応する動画を長く注視したのに対し、2-3歳児にはそのような傾向はみられなかった。本結果のデータをより詳細に分析し、2-3歳児の受け身文理解の過程に関する見解をまとめ、次年度国際学会で発表する予定である。(3)平成29年度に実施した、幼児による架空キャラクターへの名付けに関する実験結果を学会、ジャーナルで発表した(日本言語学会、Journal of the Phonetic Society of Japan)。本実験では、就学前の6歳児が、架空キャラクターへの名付けにおいて、大きく強いキャラクターに濁音及び[a]を含む名前を好んで付けるという結果を得た。このことから、6歳児も大人と同様の音象徴に関する知識を有すると結論付けた。平成30年度は、平成29年度の実験結果を学会・論文等で発表し、さらなる分析・考察を加えた。次年度には新たな学会発表が予定されており、また、音声・統語実験および心の理論実験の実施の計画も始めている。したがって、本研究は概ね順調に進展していると言える。平成29年度の実験及び平成30年度の再分析・考察を踏まえ、さらなる実験を音声・統語の両側面において実施することで、残された問題点を明らかにして行く。また、幼児の言語獲得における音声的側面と統語的側面の関係、心の理論の発達の関係に関しても引続き、考察していく。平成29年度に行った研究とその成果は、下記の通りである。(1)2-3歳児を対象に、言語実験(発話課題・音象徴課題・受身文理解課題)と心の理論の実験を実施した。言語実験における発話課題では、絵カードを用いて物の名前を発音させることで2-3歳児が聞き手の状況に応じた返答ができるかを調査した。音象徴課題では、幾何学図形の画像を提示し、阻害音や共鳴音と図形との音象徴的な結びつきが2-3歳児にも見られるかを、視線計測装置を用いて調査した。同様の音象徴課題を6歳児と大人にも行い、2-3歳児の結果と比較したところ、「阻害音=角張った形」「共鳴音=丸まった形」という音象徴的な結びつきがすでに2-3歳児において観察されることが示された。受身文理解課題では、受身文に対応する動画と、動作主と非動作主が入れ替わった動画を同時に提示し、受身文と一致した画像の注視時間を視線計測装置で計測した。6歳児や大人は受身文と一致した動画をより長く注視したが、2-3歳児にはそのような傾向はみられなかった。心の理論の実験では「サリーアン課題」を実施した。(2)架空のキャラクターに名前を付ける遊びを通して、未就学の6歳児の音象徴に関する知識を調査した。体長が大きく強いキャラクターに対して濁音を含む名前および[a]を含む名前が好まれたことから、音象徴に関する知識を有していることが示された。初年度である平成29年度は、実験・分析を行うことを主としており、予定通り、複数の実験と各々の分析を実施した。現在、多数の学会での発表が予定され、論文も掲載予定であり、概ね順調に進展していると言える。

本実験では、受身文に対応する動画と、動作主と非動作主が入れ替わった動画を同時に提示し、それぞれの注視時間を計測したところ、大人と6歳児が受身文に対応する動画を長く注視したのに対し、2-3歳児にはそのような傾向はみられなかった。本結果のデータをより詳細に分析し、2-3歳児の受け身文理解の過程に関する見解をまとめ、次年度国際学会で発表する予定である。(3)平成29年度に実施した、幼児による架空キャラクターへの名付けに関する実験結果を学会、ジャーナルで発表した(日本言語学会、Journal of the Phonetic Society of Japan)。本実験では、就学前の6歳児が、架空キャラクターへの名付けにおいて、大きく強いキャラクターに濁音及び[a]を含む名前を好んで付けるという結果を得た。このことから、6歳児も大人と同様の音象徴に関する知識を有すると結論付けた。平成30年度は、平成29年度の実験結果を学会・論文等で発表し、さらなる分析・考察を加えた。次年度には新たな学会発表が予定されており、また、音声・統語実験および心の理論実験の実施の計画も始めている。したがって、本研究は概ね順調に進展していると言える。まず、平成29年度に行った実験のデータ分析をさらに詳細に行う。また、平成29年度の研究実績を踏まえ、今後は、幼児の言語獲得に関して、音声・統語の両側面から更なる追実験を行い、分析を進めていく。その成果を国際学会等で発表し、論文にまとめる。また、「心の理論の発達」と「言語能力の発達」の相関に関しても引き続き考察・検討を進める。平成29年度の実験及び平成30年度の再分析・考察を踏まえ、さらなる実験を音声・統語の両側面において実施することで、残された問題点を明らかにして行く。また、幼児の言語獲得における音声的側面と統語的側面の関係、心の理論の発達の関係に関しても引続き、考察していく。平成29年度中に国内外で行われる学会での発表を目指していたが、論文の執筆や実験データの分析、および年度末に実施した実験の準備のため、これを見合わせた。平成30年度に、国内外旅費、新たに実験を実施するための経費(謝金・物品費)、文献調査のための書籍等の購入経費として使用予定である。平成31年度に、国内外旅費、新たに実験を実施するための経費(謝金・物品費)、文献調査のための書籍等の購入経費として使用予定のため、平成30年度での使用を見合わせた。
生体ナノ空間としての基底膜による細胞剥離機能に関するナノバイオテクノロジー

電子線重合法により種々のモノマー濃度で温度応答性高分子のナノ構造体をガラス表面に固定化し、そのナノ構造体の特性をXPS、AFMや新たに開発したラマン分光イメージングを用いて詳細に調べるとともに、構造体の特性が細胞接着および脱着に与える影響についても調べた。その結果、ナノ構造体の厚みが薄ければ薄いほど、再表面の高分子鎖は脱水和され細胞接着性を示すのに対し、厚い構造体の場合は相転移以上の温度でも水和しやすく細胞非接着性を示すことを見出した。平成17年度の研究実績の概要本年度では、全反射顕微鏡を使い温度応答性表面から接着細胞が剥離する過程を観察する温度応答性表面を作製するために、シラン化処理を行ったガラス表面に温度応答性高分子を電子線照射によりグラフトする(PIAPAm-glass)ことを検討し、PIPAAm-glassの細胞接着性(ウシ血管内皮細胞)を評価した。N-isopropylacrylamide(NIPAAm)の仕込みモノマー量を変化させることで、ポリマーグラフト量、グラフト層の厚みを変化させることができた。液中で測定したPIPAAm-glassの温度変化に伴う表面濡れ性の変化からグラフトしたPIAPAmが20°Cでは水和し、37°Cでは脱水和を起こし、温度応答性を示すことが示唆された。PIPAAm-glass表面に対する細胞接着性は、ポリマーグラフト量、グラフト層の厚みと細胞接着性に相関があることを見いだした。具体的には、グラフト層が5nm以下のPIPAAm-glassでは、37°Cで細胞は表面に接着し、20°Cで低温処理を行うと剥離する。4nm程度の厚みを有するPIPAAm-glassから細胞をシート状で回収ができた。しかし、5nm以上のグラフト層の場合、細胞はPIPAAm-glass表面には接着しにくくなり、8nm程度のポリマーグラフト層の表面は細胞非接着性を示した。液中で測定した表面濡れ性もこの傾向を支持した。これらの結果から、PIPAAm-glassは温度応答性培養皿と同等な性能を有することが示唆された。今後、温度変化により細胞接着、脱着が制御可能なPIPAAm-glassを使い全反射顕微鏡による培養細胞と表面との相互作用について評価を行う予定である。本研究では、従来の電子線重合に比し微細なパターン化が可能と考えられる光開始イニファータ重合法に着目した。イニファータ重合法は、光照射部位の制御により特定部位にのみポリマーを固定化できる。そこで、イニファータ重合開始剤を固定化したガラス表面上IPAAmのイニファータ重合を行い、PIPAAm修飾表面の特性を解析するとともに細胞の接着・脱着挙動を観察した。1)PIPAAm表面特性の解析XPSによる各表面の元素分析から、BDC表面ではN/C=0.024だったのに対しIP7.4ではN/C=0.14となり、PIPAAmの化学構造から算出されるN/C=0.17に近い値を示した。このことから、ガラス表面にPIPAAmが固定化されたことが示された。静的接触角測定により、PIPAAm固定化表面は、高温側で大きな接触角を示し、低温側では比較的小さな接触角を示したことから表面に温度応答性をもっことが示された。次に、PIPAAm固定化表面の一部にArFエキシマレーザーを照射しポリマー層を蒸散させた部位をAFM観察しポリマー層厚みを見積もった。あわせてATR/FT-IR測定からPIPAAmのグラフト量を決定した。仕込みモノマー濃度の上昇とともに、PIPAAm層厚み、グラフト量ともに増加することが明らかとなった。2)PIPAAm修飾表面への細胞の接着挙動種々表面に1.0×10^4cells/cm^2でECを播種し、経時的に細胞接着挙動を観察するとともに、24h後に20°Cでの脱着挙動を2h解析した。TCPS、BDC、IP7.4上では良好に細胞が接着したのに対し、IP20、IP35では細胞接着が少なかった。一方、IP7.4では20°Cで2h経過後も3割程度の細胞しか剥離しなかったのに対し、IP20、IP35では30分後すべての細胞が剥離した。この結果は、PIPAAmのグラフト量の違いによるものと考えられる^<3)>。これらの結果から、IP20、IP35は、温度変化にともなう細胞の接着・脱着を制御できる表面であると考察した。そこで、細胞接着の多かったIP20表面上でECをコンフレントになるまで培養後(34日)、1h低温処理を行ったところ、増殖した細胞をシート状組織として回収できた。次年度では、多孔性金属マスクを用い温度応答性パターン化表面を調製し、この表面上での温度変化に応答した細胞の接着挙動ついて解析を行う。本年度の研究計画にしたがい、昨年度、作製した温度応答性ガラス表面と全反射顕微鏡を利用し、細胞接着および剥離挙動に関するデーター収集を行った。

細胞膜上に存在するインテグリンを予め蛍光抗体分子でラベル化し、細胞剥離における細胞接着斑について観察した。37°Cの培養条件において、培養細胞(ヒト血管内皮細胞)はフォーカルアドヒージョン(FA)を形成し、温度応答性培養皿に接着した。20°Cの低温処理により、接着した細胞は一部、FAを残しながら剥離する挙動を示した。残存した形状はファイバー状であった。すなわち、細胞剥離後、蛍光ラベル化したインテグリン分子がファイバー状に残存することを確認した。一方、本プロジェクトで新しく開発した新規イメージング顕微鏡の基礎的な評価を行った。脂質二重層を測定した結果では、これまで、捕らえることが困難であった脂質二重層の電子密度の分布をノンラベリングで観察することに成功した。また、温度応答性高分子をグラフトしたガラス表面についても評価を行った。低温側(20°C付近)では、シャープなスペクトルを示したが、高温側(37°C)では、ブロードなスペクトルを示した。この結果は、温度変化により高分子鎖周囲の環境が大きく変化することを示唆している。現在、スペクトルの詳細な解析を行っている。さらに、相転移温度を32°Cよりも低温側に有する温度応答性培養皿表面の開発を行う、昆虫細胞培養への応用を展開した(本研究テーマは東京農工大の森島先生との共同研究である)。昨年度から引き続き、(1)温度応答性高分子修飾ガラス表面を細胞培養表面とし全反射顕微鏡(TIRFM)を用いて細胞剥離挙動について観察および評価、(2)イメージング顕微鏡の最適化、新たに(3)昆虫細胞に適した温度応答性培養表面の開発を行った。TIRFMによりインテグリン分子以外にも細胞膜由来の分子が表面に残存し、インテグリン分子に細胞膜が結合していることを示唆している。ラマンイメージング顕微鏡を用いて脂質二重層膜の外圧による変化、形成過程への影響について観察を行い、膜端領域の分子密度が膜中央領域と異なることを見いだした。この結果は膜端の分子環境あるいは分子自身の集合状態が膜中央と大きく異なることを示唆している。昆虫細胞シートを作成すべく、25°C付近で相転移温度と有する温度応答性培養表面を開発し、昆虫細胞培養への応用を行った。通常PIPAAmのみで温度応答性培養表面は作製されるが、本研究ではt-butylacrylamide(tBA)を加えたものを作製した。作製した温度応答性培養皿は添加tBAの増加と共に相転移温度が低温側シフトした。昆虫細胞の接着、剥離にも成功し、目的の表面開発に成功した。AFMを用いて、温度応答性超薄膜の膜厚変化について評価を行った。その結果、20°Cで膜厚は大きな増加を示したが、大気中と液中、37°Cの環境下で膜厚の大きな変化は確認できなかった。この結果より。超薄膜温度応答性高分子膜は液中、37°Cにおいて大気中と同等に脱水和、凝集する特性を有することが示唆された。温度応答性高分子ナノ構造体の特性について知見を得るため、ガラス表面上にpoly(N-isopropylacrylamide)(NIPAAm)のナノ構造体を構築し、この構造体の細胞接着性、タンパク質吸着挙動、大気中および液中におけるナノ構造体の温度変化に対する動的挙動を評価し、ナノ構造体の厚みに依存によってこれらの性質が影響を受けることを示した。
融体・金属ガラスの局所原子構造のその場観察

本年度は、当特定領域研究の最終年度に相当するため、本グループの目標とする(1)「過冷却液体・金属ガラスの局所構造・中範囲構造と相安定性の関連の解明」の研究、さらにこれを基にした(2)「新規バルク金属ガラス創製に必要となるガラス相安定化機構を確立」についての研究のまとめを実行した。(1)については、FeCoSiNbB,FeCrMoCBTm, PdNiP、ZrNiCuAI等のガラス安定性の高い合金系における結晶化挙動を透過型電子顕微鏡で調べ、いずれの系においてもガラス相から直接単位胞の大きい複雑構造の析出が見出されたが、急冷状態で存在する2nm程度に拡がっだ中範囲規則領域の構造は析出相に比べ極めて不完全な構造であり、直接結晶核とはなりえず、結晶核形成において複雑な構造変化を必要とすることが明らかとなった。この過程が結晶化を遅らせ、ガラスの高い安定性に寄与するものと結論した。(2)については、昨年度に構築したPdNiCuP金属ガラスの微視的構造モデルを多角的に検証した.まず,X線非弾性散乱実験によるフォノンエネルギーからnm波長の音速を求め,超音波によるmm波長の音速と比較したところ,前者の方が音速が大きいことが明らかとなった.また,同金属ガラスを殆どのダイナミクスが凍結される極低温領域まで弾性共鳴周波数を測定し,その内部摩擦と振動数の温度依存性を計測することにより,速い緩和挙動が存在しないことも明らかにした.すなわち,nm波長の速い音速は時間依存ではないことを意味しており,空間不均一性によるものと結論した.また,同様の実験をストロング液体であるZr系のバルク金属ガラスにも適用した結果,速い音速は観測されないことを見出した.これは,Zr系ガラスの方がより均質性が高いことを意味しており,このことから,フラジリティの程度により構造不均質性の程度が異なることが明らかとなった。弘津グループでは、電子線構造解析手法を応用する際に重要となる、(1)多重散乱効果、(2)非弾性散乱効果の解析精度への影響について検討した。アモルファスFe_<70>Nb_<10>B_<20>試料について、異なる試料厚さ領域からの電子線回折強度を得ると同時に、試料厚さ確認のため同一領域からの電子線エネルギー損失分光スペクトルを得た。強度解析の結果、約20nm厚さ以下では同様な強度プロファイルが得られ、2体分布関数も全く同じであった。一方で、厚さが30nm以上になると、高角度散乱強度は急に減衰し、2体分布関数の第一ピーク高さが減少する。以上より、多重散乱は、Fe系金属ガラスでは、厚さ約20nm以下でほぼ避けることができることが判明した。一方、エネルギーフィルター装置を用いた実験の結果、プラズモン励起による非弾性散乱波の除去は、電子線構造解析精度、特に配位数精度向上に大きく寄与することが判明した。一方、松原グループでは、(1)金属ガラス、アモルファスの局所構造と(2)超音波などの外場によるガラス転移点近傍での結晶化挙動を調べた。1番目の課題では、放射光高エネルギーX線、精密X線回折などを用いてFe元素を80at.%以上含むFeNbBの局所構造解析を行い、B濃度の減少と鉄濃度の増加に伴って局所構造がFe_6Bの3角プリズム構造からBCC的な構造へと変化すること、晶出する初期準安定結晶相の構造もFe_<23>B_6からαマンガン、α鉄に変化すること明らかにした。2番目の課題では、金属ガラスのガラス転移の性質およびガラス相の熱的安定性を調べるため、Pd_<40>Ni_<40>P_<20>およびZr_<55>Al_<10>Ni_5Cu_<30>の弾性・擬弾性測定の高温その場測定を行った。共鳴周波数および内部摩擦の温度変化測定を行ったところ、ガラス転移温度近傍あるいは直上で急激な弾性定数の増加を示し、その急激な変化に伴いλ形状の内部摩擦ピークが出現した。これはガラス転移温度近傍で結晶化が起こったことを示している。弘津グループでは、電子線構造解析手法により金属ガラスの局所構造を調べ、ガラス形成能との相関を検討した。具体的には、ガラス転移を示さないFe_<80>B_<20>と明瞭なガラス転移を示すFe_<70>Nb_<10>B_<20>について電子線回折強度を測定し、動径分布解析を行った。さらにリバースモンテカルロシミュレーションにより,得られた干渉関数を再現する構造モデルを作成した。その結果、どちらの構造においてもBを中心としたプリズムクラスター、Feを中心としたbccおよび20面体的クラスターが、ボロノイ解析により多く見出された。特に、Fe_<70>Nb_<10>B_<20>において20面体的クラスターは比較的多く存在し、その中に結合長の短いFe-Fe原子対を多く含むことも明らかとなった。また、Nbを中心とするクラスターは1416の大ぎい配位数を持つことも示された。松原グループでは、Fe84Nb7B9アモルファス合金のアモルファス構造を、放射光高エネルギーX線回折法を用いて調べ、その局所構造とナノ結晶化過程について調べた。

また、Pd基金属ガラスにおいて、サブMHz領域の超音波をガラス転移近傍で照射した場合結晶化が著しく促進されることに注目し、金属ガラスの中でも極めて安定で知られている4元系PdNiCuP金属ガラスとそれより不安定な金属ガラスであるPdNiP金属ガラスを対象に、超音波下での結晶化挙動、析出する結晶相などについて詳しく調べ、比較検討し、マクロ構造モデルを構築して、それに基づいて結晶化誘起のメカニズムと金属ガラスの構造安定性のメカニズム解明のための研究を展開した。さらに、これらの研究で考察した研究結果を踏まえ、弘津グループの電子顕微鏡手法による組織や原子構造の直接観察結果と照合することで、提唱した構造モデルの改善と、原子レベルでの理解を現在共同で進めている。平成17年度は、これまでの研究成果を踏まえ以下のような研究成果を挙げることができた。(1)Fe系合金(FeNbB)の原子構造と熱安定性、ナノ結晶化機構の解明:放射光X線回折、電子回折による多面的な構造解析をFe_<70>Nb_<10>B_<20>、Fe_<84>Nb_7B_9などのFe系金属ガラスおよびアモルファスに適用し、精密なボロノイ解析により、Fe系では3角プリズム主体の構造であることを確認した。また、B組成の増加に従ってFe-B相関が強まり、局所構造としてのFe-B三角プリズム構造の割合が増加し、一方で、Fe組成の増加に従ってbcc-Feクラスターの割合が増加することが判明した。さらに、Fe-Nb, Fe-Fe, Fe-B距離、Nb, Fe, Bを配位構造からの考察により、Fe-Nb-B系では三角プリズムクラスターの相互連結にはNbが介在し、サイズ効果によりプリズムを歪ませ、スムーズな連結を阻害することによりアモルファス構造を安定化することを提案した。C2)Zr系合金(ZrCu, ZrM, ZrNiAl〕の多面的構造解析に基づく構造モデル構築と構造安定性機構の解明:放射光X線回折、電子回折、A02班福永グループによる中性子回折を用いて、多面的に構造解析を展開し、Zr_<66.7>N_<33.3>,Zr_<66.7>Cu_<33.3>,Zr_<60>Ni_<25>Al_<15>構造について詳細に調べ、ガラス相安定化に寄与する局所構造がZr系では20面体クラスターが主体であることを見出した。また、構造安定化と共にこれら20面体クラスター構造の領域が増加することも明らかにした。(3)超音波振動下でのPd系合金(PdNip, PdNiCuP)の金属ガラス近傍での構造緩和挙動、結晶化挙動の解析:超音波振動下でのガラス近傍での構造緩和挙動の定量解析と、誘起結晶化によって晶出する結晶の構造解析に基づいて、マクロ構造モデルを構築し、結晶化誘起のメカニズムと金属ガラスの構造安定性のメカニズム解明した。さらに、PdNiP金属ガラスについて、球面収差補正電顕による超高分解能観察を行い、(PdNiP)-fccクラスターとNiP化合物クラスターがアモルファス母相中に共存し、ナノスケールでの一種の相分離構造を形成し、局所的構造安定化(PdNiP金属ガラス相安定化)が起きていることを示した。弘津グループでは、電子線構造解析手法により金属ガラスの局所構造と結晶化過程を調べ、ガラス形成能との相関を検討した。具体的には、ガラス形成能の高いZr-Ni-Al、Pd-Ni-P、Fe-Co-B-Si-Nb金属ガラスについて、ナノビーム電子回折を用いたガラス相の局所構造観察と結晶化過程の解析を行なった。いずれの金属ガラスにおいても、ガラス相から得られたナノビーム回折パターン中に中範囲規則構造の存在を示す回折斑点が観察され、初期に析出する結晶相(化合物相)のパターンとは異なる特徴を有することを、計算機シミュレーションを併用して明らかにした。
好酸球性炎症における新しいプログラム細胞死と関連分子を標的とした治療法の開発

新しい疾患概念である好酸球性副鼻腔炎や好酸球性中耳炎などの好酸球性炎症は、難治性で重症気管支喘息の合併や聾などの高度難聴の原因となり耳鼻咽喉科臨床上大きな問題である。近年炎症の遷延化の機序としてアポトーシスと異なる新しいプログラム細胞死であるEosinophilic Extracellular DNA trap cell death(EEtosis)が注目されている。難治性好酸球性炎症疾患の病態はまだ不明な点が多い。炎症の重症化と遷延化にはEEtosisとペリオスチン分子が関与していると推測されるが、十分な検討はなされていない。好酸球性炎症疾患における炎症の重症化と遷延化の病態の解明、難治化を予測するバイオマーカーの確立と関連する新規分子を標的とした治療方法の開発が本研究の目的で極めて重要である。上気道難治性好酸球性炎症(好酸球性副鼻腔炎や好酸球性中耳炎)患者から得られた組織標本のEEtosisについて測定した。EEtosisはDNAを染色し、共焦点顕微鏡にてその局在と核崩壊の程度を評価し、好酸球性炎症疾患の疾患活動性とEEtosisとの関連性について検討を行った。その結果、好酸球性副鼻腔炎症例で特に薬物抵抗性かつ術後に早期に再発を来した症例から得られた鼻粘膜組織中のEEtosisの様式や好酸球性炎症が中耳から内耳へ進展した症例の中耳組織のEEtosisの程度と難聴の程度との関連性があることが示された。EEtosisが好酸球性副鼻腔炎の再発あるいは好酸球性中耳炎の内耳障害のバイオマーカーとなる可能性についても現在検討である。研究結果の一部は既にAllergoo. Int.2018に報告しており、順調に進展している。上気道難治性好酸球性炎症(好酸球性副鼻腔炎や好酸球性中耳炎)患者から得られた組織標本のEEtosisについて測定し、鼻粘膜組織中のEEtosisの様式や好酸球性炎症が中耳から内耳へ進展した症例の中耳組織のEEtosisの程度と難聴の程度との関連性があることが示された。EEtosisが好酸球性副鼻腔炎の再発あるいは好酸球性中耳炎の内耳障害のバイオマーカーとなる可能性について今後検討する予定である。好酸球性中耳炎や好酸球性副鼻腔炎は、気管支喘息の合併や嗅覚障害や聴覚障害を引き起こし患者のQOLを著しく低下させる疾患である。近年、炎症組織で認められる好酸球の脱顆粒を伴う細胞死の本態が、Extracellular trap cell death(ETosis)という新しいプログラム細胞死であることが報告されている。しかし、ETosisの好酸球性副鼻腔炎などの好酸球性炎症における役割についてはまだ十分な検討がなされておらず、この点を明らかにすることが本研究の目的である。極めて粘調性の高い貯留液は、好酸球由来のDNAの塊と考えられる。これらの点を踏まえて、好酸球性副鼻腔炎患者から得られた血液、鼻腔粘液および耳漏のEEtosisの程度と臨床的な重症度との関連性を検討した結果、好酸球性副鼻腔炎および好酸球性中耳炎の鼻腔粘液と中耳潮流駅ではEEtosisが確認された。EEtosisを誘導する因子としてぺリオスチンが関与している可能性が示唆された。炎症の遷延化の機序としてアポトーシスと異なる新しいプログラム細胞死であるEEtosisが注目されている。プログラム細胞死の一つであるアポトーシスでは、細胞膜は保たれ、核の濃縮があり、表面にEat meサインが発現されていることから貪食細胞に捕捉され炎症は速やかに終息する。一方、新しいプログラム細胞死であるEEtosisでは、好酸球は刺激によって活性化され、細胞膜は破れ、核の崩壊が生じてDNAと組織障害性蛋白であるECPなどが細胞外に放出される。EEtosisではEat meサインは発現されず、組織障害性蛋白を含めた細胞の貪食が進まないため好酸球性炎症の遷延化と重症化が生じるものと推測される。治療サンプルは順調に得られており、検討した結果は複数の学会及び論文に報告している。

その結果、好酸球性副鼻腔炎症例で特に薬物抵抗性かつ術後に早期に再発を来した症例から得られた鼻粘膜組織中のEEtosisの様式や好酸球性炎症が中耳から内耳へ進展した症例の中耳組織のEEtosisの程度と難聴の程度との関連性があることが示された。EEtosisが好酸球性副鼻腔炎の再発あるいは好酸球性中耳炎の内耳障害のバイオマーカーとなる可能性についても現在検討である。研究結果の一部は既にAllergoo. Int.2018に報告しており、順調に進展している。難治性である好酸球性中耳炎及び好酸球性副鼻腔炎から得られた分泌物を用いて、ETosisとの関連を明確にすることが本研究の目的である。また、ETosisを誘導・増悪する分子を同定することも重要なテーマであり、ETosisによって生じるDNA trapsの好酸球性炎症疾患における存在や、その性状について検討を加える予定である。ETosisに関与する分子を明確にすることで、関与する分子を標的とした治療方法の独創的で新規性のある治療戦略の展開が期待される。好酸球性炎症の病態におけるETosisの役割を明らかにし関与する分子を標的とする治療方法を確立することは、好酸球性副鼻腔炎だけでなく難治性気管支喘息などの致死的な疾患の病態の解明と新しい治療方法への波及効果が期待される。上気道難治性好酸球性炎症(好酸球性副鼻腔炎や好酸球性中耳炎)患者から得られた組織標本のEEtosisについて測定し、鼻粘膜組織中のEEtosisの様式や好酸球性炎症が中耳から内耳へ進展した症例の中耳組織のEEtosisの程度と難聴の程度との関連性があることが示された。EEtosisが好酸球性副鼻腔炎の再発あるいは好酸球性中耳炎の内耳障害のバイオマーカーとなる可能性について今後検討する予定である。使用する抗体の購入が次年度にずれ込んだため次年度使用が生じている。今年度に使用する計画である。使用する予定の抗体の海外からの入手に時間を要したため、翌年度分として請求した助成金と合わせて使用を計画いたしております。
哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼの分子遺伝・生化学的研究

DNA複製という細胞増殖の基本的過程が進行するためには、二本鎖DNAが巻きもどされて一本鎖になることが必要である。この過程は二本鎖DNA巻きもどし酵素(DNAヘリカーゼ)により進行される。哺乳類細胞のDNA複製機構やその開始機構を分子レベルで理解するためにはDNA複製に関与するDNAヘリカーゼを同定することが必須である。本研究ではDNAヘリカーゼがDNA依存性ATPase活性をもつことからDNA依存性ATPase活性を指標に、哺乳類細胞のDNA合成の温度感受性変異株を用いて、DNAヘリカーゼの変異株をスクリーニングし、以下のような結果を得た。(2)この株ではヘリカーゼBが変異蛋白の本体であり、ヘリカーゼBが細胞増殖に必須であることが示唆された。(3)tsFT848細胞では非許容温度で細胞周期の進行が停止し、その主な停止点はS期初期であった。(4)非許容温度下で培養したtsFT848細胞では、DNA合成の低下と、DNAヘリカーゼBの活性の低下との間に相関がみられた。(5)DNAファイバーオートラジオグラフィーによる解析の結果、tsFT848細胞の非許容温度下でのDNA合成の低下はレプリコンレベルでのDNA複製開始頻度の低下によることが明らかになった。以上から、DNAヘリカーゼBが哺乳類細胞のDNA複製に関与するDNAヘリカーゼであることが強く示唆された。(1)マウスFM3A細胞のDNA合成の温度感受性変異株をスクリーニングし、tsFT848株では非許容温度でDNAヘリカーゼBの活性が低下することを見出した。