hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
クロロホルム・トリクロルエタン等の生体に及ぼす影響

イヌを用いて、気管内に挿管したカニューレの先端を飽和濃度のクロロホルムの入った51入りのプラスチックバッグに接続し、クロロホルムを吸引させたところ、呼吸運動は吸入開始直後、ないし、10秒後位から大きくなり、1.01.5分で停止した。血圧はクロロホルム吸引開始後10秒位から低下し、呼吸停止時にはほとんど0となった。飽和濃度のクロロホルムを4050秒吸入させた後、空気を呼吸させたイヌは、その後回復したが、刺激に対する反応はクロロホルム吸入停止後1015分位は見られなかった。これらのことから、クロロホルム吸引時の死因は、呼吸中枢と心臓に対する抑制作用であり、クロロホルムを浸したタオルなどを鼻口部に4050秒押し当てると、その後、少なくとも1015分は、被害者は無抵抗状態になることが示唆された。次に同様して飽和濃度のトリクロルエタンを吸入させたところクロロホルムよりは呼吸中枢及び心臓に対する抑制は稍弱いものの、クロロホルムとほぼ同様の作用を示し、4050秒の吸入で、少なくとも10分位は無抵抗状態になることが示唆された。クロロホルム及びトリクロルエタン吸入で死亡したイヌで、それらの血中及び脳、肝臓、腎臓中の濃度を測定したところ、これまでのヒトでの中毒死例で報告されている値の上限にあったことは、クロロホルムやトリクロルエタンの血中及び臓器濃度が高い値のものは、吸入中、又は吸入直後に死亡したことを示唆するものと考えられた。イヌをネンブタール麻酔下の下に背位に固定し、挿管した。血圧モニター用動脈ラインを左大腿動脈に留置し、食道内に胸腔内圧測定用カニューレを胸腔中央の高さまで挿入した。心電図は第2誘導で、また脳波は頭皮から誘導して記録した。イヌが完全に麻酔から醒めた後、気管内に挿管したカニューレの先端に各種濃度のクロロホルムの入った41入りプラスチックバックに接続し、クロロホルムを吸引させた。高濃度のクロロホルム(60%以上)ではクロロホルム吸引後、12分ほど呼吸困難が続き停止した。少数例では短い呼吸停止期の後、終末呼吸が見られた。より高濃度のものでは呼吸困難の時期が短い傾向があった。血圧は、クロロホルム吸入後から低下し始め呼吸停止の直後に0となった。脳波は、吸入後10秒位で大きくなり、20秒位続き、以後徐々に小さくなって、終末呼吸の終わりと共に平坦となった。これに対し、4050%のクロロホルムの吸入では、吸入後10秒位して呼吸は大きくなり、血圧も低下し始めるが、1分30秒位から回復し始め、プラスチックバックをはずすと5分前後には完全に元の状態に回復するのが認められた。角膜反射は5分前後で回復するのが見られた。以上のことから、クロロホルム致死濃度は5060%と考えられ、4050%では死亡するに至らず、5分前後の麻酔期間が得られることが判明した。イヌをネンブタール麻酔下に背位に固定し、挿管した。イヌが完全に麻酔から醒めた後、気管内に挿管したカニューレの先端を飽和濃度のクロロホルムの入った51入りのプラスチックバッグに接続し、クロロホルムを吸引させた。呼吸運動は吸入開始直後、ないし、10秒後位から大きくなり、1.01.5分で停止した。飽和濃度のクロロホルムを4050秒吸入させたイヌは、その後回復したが、刺激に対する反応はクロロホルム吸入停止後1015分位は見られなかった。このことから、クロロホルム吸引時の死因は、呼吸中枢と心臓に対する抑制作用で、クロロホルムを浸したタオルなどを鼻口部に4050秒押し当てると、その後、少なくとも1015分は、被害者は無抵抗状態になることが示唆された。

トリクロルエタンはクロロホルムよりは呼吸中枢及び心臓に対する抑制は稍弱いものの、クロロホルムとほぼ同様の作用を示し、4050秒の呼吸で少なくとも10分位は無抵抗状態になることが示唆された。クロロホルム及びトリクロルエタン吸入で死亡したイヌで、それらの血中及び脳、肝臓、腎臓中の濃度は、これまでのヒトでの中毒死例での値の上限にあったことは、クロロホルムやトリクロルエタンの血中及び臓器濃度が高い値のものは、吸入中又は吸入直後に死亡したことを示唆するものと考えられた。
近接施工が複合基礎構造物の支持特性と耐震性能に与える影響評価

本課題では,複合基礎構造物の支持機構,とりわけ近接施工による影響を調査し,それを定量的に評価する方法について研究を行った.【得られた成果】(1)小型落とし戸土槽を利用し,ラフト・矢板からなる模型複合基礎構造物の挙動を観測した.その結果,近接施工が引き起こす基礎構造物の変位・変形に起因する幾何非線形(例えばpーδ効果)が荷重条件を悪化させることを示唆する結果が得られた.これは近接施工による変位や緩みを抑制することが本質的に重要であることを意味する.(2)浅い基礎の支持力評価に利用される剛塑性解析法を複合基礎の支持力評価に応用するため,剛塑性有限要素法の改良と拡張を行い,解析の3次元化,適用可能な材料モデルの追加,および補強材・杭の強度異方性を考慮した剛塑性モデル化について新たに定式化を行い,汎用最適化ソフトにこれらを新たに実装した数値解析コードを開発した.また,検証計算を行い開発コードの妥当性をチェックした.(3)石英粒子とスクロース水溶液を組合せた屈折率マッチングによる透過模型地盤作成法を応用し,地中埋設物と周辺地盤の挙動を可視光線で3次元的に観察できる実験法を開発した.フリップアンカー引抜き実験によって,アンカーヘッドの展開と周辺地盤の挙動を3次元的に観察した.従来困難とされてきた基礎構造物と周辺地盤の3次元的な相互作用を可視光線で観察可能となった.【残された課題】模型実験手法としての難しさと影響因子の数が多いことから,鉛直・水平・モーメントの組合せ荷重下でのパイルドラフト基礎の荷重分担率に着目し,近接施工の影響を把握することについて未解明な点が多い.また実験にあたっては,事前に剛塑性解析法による系統的な数値実験によって,影響因子の重みづけを行う必要があると考える.飽和化した都市域においては,仮設・本設を問わず既存基礎構造物に近接した施工が行われることが多い.開削やトンネル建設では地盤の応力状態を緩めることが懸念されるため,基礎構造物の支持性能を維持するためには,これらの施工と既存基礎構造物の相互作用を把握する必要がある.解析手法の高度化と基本的な模型実験を推進するための基礎的検討として以下を実施した.1基礎構造物の極限支持力を評価するために必要となる数値解析法について,2次錐計画問題に基づく剛塑性有限要素法のプログラム開発を新たに行った.最適化エンジンには主双対内点法を用いる商用コードGurobiを利用した. Drucker-Pragerモデルおよび修正Cam-clayモデルを破壊規準に用いた解析コードを作成し,要素挙動を対象にしたプログラムの検証を行った.2地盤内可視化実験実施のための情報収集および基礎的検討を行い,石英粉末とミネラルオイルの組合せによって安価かつ安全に地盤内可視化が行えることを確認した.現状では,粒子形状が細かくなるなるほど,模型地盤を完全に飽和させることが難しいため,引き続き実験手順の改良が必要である.3可視化実験において地盤内部の変形場を計測する準備として,画像を利用した変形計測の基礎的検討を行った.標点粒子を追跡するpythonベースのフリープログラムを利用して,半自動的に標点粒子を追跡する方法の手順を整理した.通常の地盤模型実験で透明な土槽壁面から観察された粒子挙動について,本手順を適用してその妥当性を検討した.当初計画では,平成28年度に近接施工の影響を考慮した基礎構造物の支持特性を評価するための小型模型実験を実施する予定であったが実施できていないため.(1)基礎構造物の極限支持力を評価するために必要となる数値解析法について,昨年度に引き続いて2次錐計画に基づく剛塑性有限要素法の開発を進め,支持力解析や斜面安定解析への適用性,数値解析上の留意点,プリポスト処理などについてノウハウを蓄積した.本研究で開発している混合法の空間離散化,速度場は3次元1次要素:四面体による空間離散化,応力場は四面体の各面(2次元1次要素:三角形)ごとに離散化する要素においても,従来の変位法に基づくメッシュ分割と同様に,特異点周辺の空間分割を細かくすれば解の精度が上がることを確認した.(2)小型土槽底部の落とし戸による近接施工を模擬した2次元土槽模型実験を行い,パイルドラフト基礎の杭体(矢板)ひずみ分布の変化や基礎構造物周辺地盤の変形場を画像解析により計測した.落とし戸降下に伴って地盤内には緩み域が進展していくが,それに伴って矢板内に曲げモーメントが発生することを確認した.これは基礎の支持機構にも影響を及ぼすことを示唆するものである.(3)石英粒子・スクロース水溶液系による地盤内可視化実験法について,模型地盤作製のノウハウを蓄積し,実験手法を確立した.液体としてミネラルオイルあるいはシリコンオイルを利用する方法では,土壌に油分が付着することにより,実験室内の環境維持や実験後の廃棄物処理に問題があった.そこで高濃度スクロース(ショ糖)水溶液を利用した透過地盤作成法について検討した.スクロース水溶液は安価かつ安全な材料であるが,高粘性であるために模型地盤を飽和させるために工夫を要する.いったん水による飽和模型地盤を作成した後,密度の大きなスクロース水溶液を土槽底部から注入し,上向き浸透流によってゆっくり間隙流体を置換する水中置換法により,安定的にスクロース水溶液による透過地盤作成が可能となった.模型実験については,砂質材料を用いた落とし戸実験,および透過地盤材料を用いた3次元可視化実験のいずれについても,予備的な実験を実施し,実験手法としての実現可能性を確認した.

とくに透過地盤材料については,実験室環境や実験後の廃棄物処理の観点でより環境負荷の小さな手法を開発できた.数値解析手法については,引き続きプログラムコードの開発を行っているが,最適化エンジンとして汎用最適化ソフトGUROBIを利用しているため,モデルの開発や問題記述手法の改良に専念できるために開発効率がよい.これらの理由から,上記の判断に至った.本課題では,複合基礎構造物の支持機構,とりわけ近接施工による影響を調査し,それを定量的に評価する方法について研究を行った.【得られた成果】(1)小型落とし戸土槽を利用し,ラフト・矢板からなる模型複合基礎構造物の挙動を観測した.その結果,近接施工が引き起こす基礎構造物の変位・変形に起因する幾何非線形(例えばpーδ効果)が荷重条件を悪化させることを示唆する結果が得られた.これは近接施工による変位や緩みを抑制することが本質的に重要であることを意味する.(2)浅い基礎の支持力評価に利用される剛塑性解析法を複合基礎の支持力評価に応用するため,剛塑性有限要素法の改良と拡張を行い,解析の3次元化,適用可能な材料モデルの追加,および補強材・杭の強度異方性を考慮した剛塑性モデル化について新たに定式化を行い,汎用最適化ソフトにこれらを新たに実装した数値解析コードを開発した.また,検証計算を行い開発コードの妥当性をチェックした.(3)石英粒子とスクロース水溶液を組合せた屈折率マッチングによる透過模型地盤作成法を応用し,地中埋設物と周辺地盤の挙動を可視光線で3次元的に観察できる実験法を開発した.フリップアンカー引抜き実験によって,アンカーヘッドの展開と周辺地盤の挙動を3次元的に観察した.従来困難とされてきた基礎構造物と周辺地盤の3次元的な相互作用を可視光線で観察可能となった.【残された課題】模型実験手法としての難しさと影響因子の数が多いことから,鉛直・水平・モーメントの組合せ荷重下でのパイルドラフト基礎の荷重分担率に着目し,近接施工の影響を把握することについて未解明な点が多い.また実験にあたっては,事前に剛塑性解析法による系統的な数値実験によって,影響因子の重みづけを行う必要があると考える.1.数値解析法の開発及び高度化については一般的な幾何学形状,境界条件が与えられる3次元剛塑性境界値問題について適用できるように,引き続きコード開発を行う.2.可視化実験については,専用の小型模型土槽を作成し,基礎構造物の支持力変形を対象にした基礎的な実験を実施する.また,その際には,通常の実験では地盤内部で見えない部分の挙動:内部地盤の挙動や基礎構造物の埋設部の挙動を定量的に把握するため,画像を利用した変形場計測手法を使用し,その適用性と課題を整理する.3.近接施工の影響を考慮した基礎構造物の小型模型実験については,当面の対象をトンネル掘削に対する影響調査に絞り,既存の降下床付き土槽を用いた模型実験を実施する.(1)数値解析手法の開発及び高度化については,引き続き開発を継続する.主たる課題としては,問題を記述するための簡潔な書式や3次元メッシュ作成法の効率化を図ることである.(2)落とし戸模型実験については,基礎構造物に作用する荷重レベルと近接施工の影響性を明らかにする必要がある.
分裂酵母の減数分裂特異的に発現される新規多重RNA群の機能解析

分裂酵母において窒素源枯渇で発現が誘導される遺伝子群をサブトラクション法を用いて、新たにクローニングした結果、RNAの機能の視点から種々の奇妙な現象が見つかってきた。まず減数分裂特異的に転写誘導される31種類のmeu(meiotic expression upregulated)遺伝子群の単離を行ったが、これらのうち幾つか(meu3+,meu11+,meu16+,meu19+,meu20+)の転写産物は著明なORFを持たずRNAとして機能していると思われた。さらに、これらの遺伝子産物ではpoly Aの付加位置に多彩なバリエーションが認められた。一方、5種のeta(enhanced transcript after nitrogen starvation)と名付けた遺伝子群では減数分裂特異的に同じ遺伝子領域から重複して多種類の両方向性mRNAが転写されており、そのうちの多くはやはり著明なORFを持たなかった。そのうちの一つを解析していくなかで、窒素源枯渇後にサイズと発現時期の異なる転写産物がいくつか発現している約5kbにわたるゲノム領域を見出した。ノーザン解析により、3種類の転写産物が互いに重なって発現していることが示唆された。それぞれの転写産物に相当するcDNAを減数分裂特異的なcDNAライブラリーよりクローニングし、配列を比較すると、これらのcDNAは予想通り、重なった領域を持っていた。この現象を我々は多重転写(multiplex transcription)と銘々し、これらの転写産物に相当するcDNAをplx(multiplex)と呼んだ。そのうちの一つであるplx1+遺伝子について破壊株を作成したところ、胞子に異常が観察された。このことから、plx1+は分裂酵母の胞子形成過程に機能していると考えられた。
接着性鋳造修復におけるレジンセメントの被膜厚さが保持力並びに辺縁漏洩に及ぼす影響

牛歯に規格I級窩洞を形成し、金銀パラジウム合金により寸法の微妙に異なるインレー体を調製し、各種の接着性セメントで合着した。セメント被膜厚さを両者の寸法差から算出し、その範囲は数10μmから400μmであった。まず、被膜厚さがインレー体の保持力に及ぼす影響を検討した。ついで、熱刺激負荷後の保持力と併せて、辺縁漏洩を判定した。その結果、次の知見が得られた。セメント被膜厚さの保持力に及ぼす影響:1.今回用いたコンポジットタイプならびにMMAタイプのものについては、明瞭には観察されなかった。2.計算によるセメント被膜厚さは、実測値よりも小さく、両者の比率は85%であった。3.MMAタイプのセメント(全試片平均32kg)の方がコンポジットタイプ(同20kg)のものより高い保持力を示したが、これは象牙質に対する接着強さの差異によるものと考えられた。4.窩洞内での引っ張り試験の測定値を接着強さに換算すると,それぞれ10および6MMPaであり、一般に報告されている歯牙平坦面での試験値に比べて低かった。セメント被膜厚さの保持力ならびに辺縁漏洩に及ぼす影響の熱刺激下での検討:上記二種のセメントに加え、レジン添加型グラスアイオノマータイプを加えて行った。1.三種のセメントとも、被膜厚さの差異の保持力ならびに辺縁漏洩に及ぼす影響はほとんど認められなかった。2.熱刺激の負荷回数の増加に伴って、辺縁漏洩は増大したが、保持力はほとんど影響を受けなかった。3.保持力と辺縁漏洩との関連については,MMAタイプのセメントにおいて、保持力の増加に伴って辺縁漏洩も減少する傾向が認められたが、他の二種のセメントではかような傾向は認められなかった。平坦にした牛歯唇面にダイアモンドポイント(テーパー2/10)を用いてI級規格窩洞(径3.8mm、深さ2mm)を形成し、窩洞径を測定顕微鏡により測定した。窩洞と同一のテーパーを有し、径の異なる数個の金型を用いて蝋型を作製し、金パラジウム合金によりI級インレーを作製した。サンドブラスト後、インレー体の頭径を窩洞の場合と同様に測定し、窩洞との寸法差をセメント被膜厚さとした。コンポジットタイプとMMAタイプの2種の接着性レジンセメントを用い、各々の金属用プライマーで処理した後、指示書にしたがって接着操作を行った。水中一日保管後、インレー体スプルー部に付与したフックを利用して、万能試験機により引っ張り試験を行った。ついで、新たに作製した試片を切断し、実際のセメント被膜厚さを計測して、計算によるそれを対比させた。1.従来型の無機セメントで言われている傾向とは異なり、今回用いた2種の接着性レジンセメントでは、セメント被膜厚さと鋳造体の保持力の間には明瞭な関連性は観察されなかった。すなわち、接着性レジンセメントにおいては、被膜厚さの差異は鋳造体の保持力に影響を及ぼさないことが示された。2.計算によるセメント被膜厚さは実測値よりも小さく、両者の比率は85%であった。3.MMAタイプのセメント(全試料平均32kg)の方がコンポジットタイプ(同20kg)のものより、高い保持力を示した。これは、象牙質に対する接着強さの差異によるものと考えられた。

4.窩洞内での引っ張り試験の測定値を窩洞の表面積で除した値は各々10及び6Mpであり、歯牙平坦面での接着試験のそれと比べると低かった。5.接着性レジンセメントも、被膜厚さが薄い(100μm以下)場合には、鋳造体の浮き上がりが観察された。平坦にした牛歯唇面にダイアモンドポイント(テーパー2/10)を用いてI級規格窩洞(径3.8mm、深さ2mm)を形成し、窩洞径を測定顕微鏡により測定した。窩洞と同一のテーパーを有し、径の異なる数個の金型を用いて蝋型を作製し、金パラジウム合金によりI級インレーを調製した。サンドブラスト後、インレー体の頭径を窩洞の場合と同様に測定し、窩洞との寸法差をセメント被膜厚さとした。準備されたセメント被膜厚さは、数十μmから四OOμmの範囲であった。コンポジットタイプ、MMAタイプのレジン系およびレジン含有グラスアイオノマー系の三種のセメントを用い、指示書に従って接着操作を行った。水中一日保管後、辺縁部の仕上げを行い、460°Cのサーマルストレスを千回ないしは一万回負荷した。ついで、色素液に一日浸漬し辺縁漏洩を明示した後、引っ張り試験を行った。その後、歯牙を四分割し、切断面に明示された色素侵入の長さを、実態頭微鏡下で判定した。その結果、次の知見が得られた。三種のセメントとも、被膜厚さの差異の保持力ならびに辺縁漏洩に及ぼす影響はほとんど認められなかった。しかし、熱刺激の負荷回数の増加に伴って、辺縁漏洩は増大したが、保持力はほとんど影響を受けなかった。なお、保持力と辺縁漏洩との関連については,MMAタイプのセメントにおいて、保持力の増加に伴って辺縁漏洩も減少する傾向が認められたが、他の二種のセメントではかような傾向は認められなかった。
性ホルモン依存性がんの発生機構

性ホルモン依存性癌である前立腺癌、乳癌、内膜癌の日本における発生率は欧米の5-10%と低い。しかし、日本における食事と体格の欧米化とともに増加している。したがって、将来は欧米の様に、日本でもこれらが男・女の代表的な癌になると考えられる。以上のことから、食事と体格の欧米化→ホルモン環境の変化→癌発生の増加の相関を明らかにし、性ホルモン依存性癌増加への対策をたてる。1.前立腺癌の発生を促進する因子を明らかにするためには、まずよい前立腺々癌の発癌モデルを作る必要がある。本年は、女性ホルモンを反復投与しその間にdimethyl aminobiphenylを投与する方法(女性ホルモンで前立腺を萎縮させ、中止して増殖する時に発癌剤を投与)で、小さい前立腺癌を70%のラットに発生させることに成功した。本法を用い、進行前立腺癌を発生させる因子を検索できる様な体制になった...伊東。2.男性ホルモン依存性のマウスシオノギ癌を用いる無血清培地の細胞培養の実験で、その作用は癌細胞が分泌する成長因子を介することが示された。本実験系で、性ホルモン誘導性の増殖因子を明らかにして癌発生との相関にせまる...松本、佐藤、寺田。3.ラット化学発癌乳癌、マウス乳癌の発生は、プロラクチンとエストロゲンで促進されるが、プロゲステロン、成長ホルモンで0軽度に促進された...吉田、長沢、福田、田口。4.肥満者では、閉経後の乳癌の相対危検率が約2倍であった。本年は、子宮体癌・対照研究を行い、肥満群の体癌発生の相対危検率は30-70才代の全ての年令で2以上であることを明らかにした。肥満は女性ホルモンの増加等をおこし、乳癌、内膜癌の発生を促進すると考えられる...坂元。
モレキュラーインプリンティングによる農薬分解人工ポリマー酵素の創製

本研究では,ナノ三次元空間反応場をモレキュラーインプリンティングの手法を用いて構築することで、トリアジン系除草剤が特異的に結合・分解し、無毒化するための人工材料を開発することを目的とする。1.自動ポリマー合成・評価装置を用いたコンビナトリアル手法を利用して、カルボキシル基などの弱い酸をもつ結合部位形成のための結合用モノマーと,スルホン酸基やリン酸基など強い酸性基をもつ触媒反応のための触媒活性モノマーの混合比を変化させたところ、2対6の比で、スルフォエチルメタクリレート(SEMA)とメタクリル酸(MAA)を混合したとき、最も選択性よく触媒活性発現することを見出した。2.テンプレート(アトラジン)、機能性モノマー(SEMA、MAA)、架橋剤(エチレングリコールジメタクリレート)、重合開始剤、溶媒を混合し、UV照射して重合させた。得られたポリマーを硫酸/メタノール溶液で洗浄し、テンプレートを除去した後、農薬に対する保持時間を計測する事によってインプリントポリマーの選択性を評価した。その結果、トリアジン系除草剤に対しては高い結合力を示し、トリアジン系以外の農薬に対してはほとんど結合していない事から、ポリマーがトリアジン系除草剤と選択的に作用している事が示された。3.ポリマーに様々な濃度のアトラジシ、シマジン、プロパジン、テルブチラジン溶液(メタノール/クロロホルム,1/9,v/v)を分注し、22°Cで一定時間インキュベーションを行い、分解生成物の生成速度と基質濃度の関係を調べ、インプリントポリマーの触媒括性能を評価した。その結果、インプリントポリマーによるトリアジン系除草剤の分解生成物はそれらのCl基をCH_3O基に置換した化合物であることが確認され、アトラジン、シマジン、プロパジン、またはテルブチラジンはインプリントポリマーによって分解されている事が示された。1)水素結合,静電的相互作用,配位結合,疎水結合などにより,アトラジンの6位の位置(塩素原子)付近に強い酸性基をもつ触媒活性モノマー,2位と4位のアミノ基付近に結合部位形成用モノマーがうまく空間的に配置されるような相互作用をモノマーと形成することのできる鋳型分子(アトラジンおよびその類似体)を経験および計算化学の手法を用いて検討したところ,6位にジスルフィド結合をもつアトラジン誘導体が鋳型分子として期待できることを見出した。2)市販の分子シミュレーションソフトウェアを改良した新しい2分子ドッキングシミュレーションプログラムを開発し、コンピュータによるバーチャルコンビナトリアルライブラリの構築についての基礎検討を行った。3)自動ポリマー合成・評価装置を用いたコンビナトリアル手法を利用して、カルボキシル基などの弱い酸をもつ結合部位形成のための結合用モノマーと,スルホン酸基やリン酸基など強い酸性基をもつ触媒反応のための触媒活性モノマーの混合比を変化させたところ,2対6の比で、スルフォエチルメタクリレートとメタクリル酸を混合したとき、最も選択性よく触媒活性発言することを見出した。また、このポリマーの触媒活性を評価したところ,均一形の触媒活性に比べて約10倍の触媒活性の向上が見られた。トリアジン系除草剤分解ポリマーの合成と選択性評価テンプレート(atrazine),機能性モノマー(methacrylic acid,2-sulfoethyl methacrylate),架橋剤(ethylene glycol dimethacrylate),重合開始剤(2,2' -azobis-isobutyronitrile),溶媒(chloroform)を混合し、UV照射して重合させた。

得られたポリマーを硫酸/メタノール溶液で洗浄し、テンプレートを除去した後、農薬に対する保持時間を計測する事によってインプリントポリマーの選択性を評価した。その結果、トリアジン系除草剤に対しては高い結合力を示し、トリアジン系以外の農薬に対してはほとんど結合していない事から、ポリマーがトリアジン系除草剤と選択的に作用している事が示された。トリアジン系除草剤に対する触媒活性評価ポリマー3mgに様々な濃度のシマジン、プロパジン、テルブチラジン溶液(メタノール/クロロホルム,1/9,v/v)を分注し、22°Cで一定時間インキュベーションを行い、分解生成物の生成速度と基質濃度の関係を調べ、それより反応速度定数k_<cat>を求めて各農薬に対するインプリントポリマーの触媒活性能を評価した。その結果、インプリントポリマーによるトリアジン系除草剤の分解生成物はそれらのC1基をCH_3O基に置換した化合物であることが確認され、シマジン、プロパジン、またはテルブチラジンはインプリントポリマーによって1.0×10^<-5>(M/min)前後で分解されている事が示された。本研究では,ナノ三次元空間反応場をモレキュラーインプリンティングの手法を用いて構築することで、トリアジン系除草剤が特異的に結合・分解し、無毒化するための人工材料を開発することを目的とする。本年度は、ジスルフィド(S-S)結合によりアトラジンとアリル基を連結させた新規な鋳型分子を設計・合成した。この分子を用いてインプリントポリマーを合成し、S-S結合をSH基に還元してアトラジン骨格をポリマーから除いて結合部位を形成させた後、ポストインプリント処理として酸化反応を行いSH基をSO_3H基に変換することで、アトラジンが結合した際、SO_3H基がアトラジンの6位の近傍に来るようにSO_3H基を配置させた結合部位を持つ新規アトラジン分解ポリマーの合成を試みた。【実験・結果】1)鋳型分子の合成:3段階の反応を経て、アトラジンから鋳型分子を合成した。2)インプリントポリマーの合成:鋳型分子、メタクリル酸、架橋剤および重合開始剤をクロロホルムに溶解させ、20°CでUVを照射し60°Cで加熱することによって合成した。3)鋳型分子の除去(S-S結合の還元):IPをメタノールに浸し、NaBH_4を加えて室温で12h撹拌した。S-S結合をメルカプト基(-SH)に還元することで鋳型分子の切り出しを行った。4)ポストインプリント処理:インプリントポリマーをH_2O_2/AcOH溶液に浸し室温で12h撹拌することで、SO_3H基への変換を行った。5)今後、このポリマーを用いてアトラジンの吸着・分解能の実証試験を行う。6)同じように内分泌撹乱物質であるビスフェノールAについてもその特異的吸着・分解材料の基礎検討を行った。
糖鎖リガンド複合体アナログの合成

生物有機化学的手法で、糖とタンパク質間の分子認識機構を解明する一環として、糖関連酵素の基質アナログおよび糖鎖を認識するタンパク質の人工リガンドの合成を行った。糖転移酵素の1つであるβ-1,4-ガラクトシルトランスフェラーゼ(GalTase)の供与体であるUDP-ガラクトースと受容体であるN-アセチル-β-グルコサミニドをメチレンで架橋した二基質複合体アナログを設計し、その合成を完成した。また、そのものが非常に強いGalTase阻害活性(Ki=1.3μM)を示すという、興味ある事実を見い出した。このことによりGalTaseによる糖転移の際の両基質の空間的配置に関する情報とともに、GalTaseの活性部位を探るための基質アナログを設計するための知見も得られた。高次の糖鎖構造認識を検証するプローブとして、血液型関連抗原であるH type2およびLe^X三糖のフコース残基を5-チオフコースに置換した三糖アナログを、共通の合成中間体である1,6-アンヒドロ-2-アジド-2-デオキシ-4-O-(β-ガラクトシル)グルコース誘導体を経由して合成した。剛性したH type2三糖アナログは、H type2三糖を認識するレクチンには認識されず抗体に強く認識されるという、その普遍性に関して今後の検討に興味のもたれる事実を見い出した。
神経回路の新しい興奮性/抑制性バランス制御機構に着目した精神神経疾患治療薬の探索

精神神経疾患は誰もが罹患しうるコモンディジーズであり、その克服は重要な課題である。我々は膜タンパク質MDGAの欠失が、各種精神神経疾患に通底する分子病態であるシナプス形成バランス異常を引き起こすことを明らかにしている。本研究ではMDGAの高次脳機能統御における役割を明らかにするするとともに、こうした異常を改善する薬剤を探索することにより、精神神経疾患の新たな創薬シーズを獲得することを目的とする。
皮膚感覚装置グリア細胞におけるATP誘発性信号局在化の形態・分子基盤

皮膚感覚装置グリア細胞は複数の薄板突起で異なる軸索終末を被い,各突起が神経伝達物質ATPの刺激に対し自身のCa^2+信号を生成する。本研究は,このグリア信号系と細胞膜の微小区域カベオラとの関連をラットの頬ひげ動き受容器槍型終末分離標本の免疫組織化学とCa^2+画像解析で検討し,ATP受容体P2Y_2とその共役分子G_q/11のカベオラ依存的なグリア薄板への局在が信号の細胞内区域化に欠かせないことを示した。皮膚感覚装置のグリア細胞は,複数の薄板突起を異なる軸索終末にのばした特異な形態を示す。私はこれまでに,毛の動き受容器槍型終末の分離標本を用いた実験で,神経伝達物質ATPの刺激に対するこの細胞の応答が,常に各薄板突起固有の信号生成焦点から突起全長に速やかに広がる,局所的Ca^<2+>濃度上昇に始まることを明らかにし,感覚装置のグリア薄板を,自身のCa^<2+>信号に基づいて伴行軸索に効果を及ぼす,機能区域と特徴づけた。ところで,この末梢グリアは,コレステロールとCa^<2+>信号系分子群に富む膜の小陥凹,カベオラを多数示すことが,以前から知られる。今回は,Ca^<2+>信号のグリア薄板内区域化とカベオラの関連を明らかにすることを目的とし,ラット洞毛槍型終末グリア細胞におけるカベオラの分布を,通常の電顕観察とカベオラ蛋白caveolin-1免疫組織化学によって,また,膜のコレステロール除去剤methyl-ss-cyclodextrinでカベオラを除去したときのATP誘発性信号の変化を,Ca^<2+>感受性蛍光色素fluo-4を用いた高速共焦点顕微鏡画像の解析によって調べた.電顕でみたグリア細胞の薄板突起上には,多数のカベオラが約20nmの間隔で密に並ぶのに対し,それ以外の細胞部位には単独または小集団のカベオラが散在するだけだった。これに一致して,caveolin免疫染色で,グリア薄板に限局する強い陽性反応が検出された。グリア信号のCa^<2+>画像解析では,methyl-ss-cyclodextrinでカベオラを消失させると,薄板固有の信号の生成遅延・伝播範囲の縮小と同時に,細胞全体に分布する異所性信号生成焦点の賦活化が起こり,区域化信号系が損なわれることが示された。これは,グリアのCa^<2+>信号系において,細胞局所に集積するカベオラが機能的に独立した細胞内小区域を構成することを示す,最初の報告である.細胞膜の小陥凹,カベオラは,膜蛋白カベオリン1とコレステロールの足場にG蛋白共役型受容体と関連Ca^<2+>信号系分子を集める小器官として知られる。皮膚感覚装置のグリア細胞は,カベオラに富む薄板突起を多数のばして異なる軸索終末を包む点を特徴とし,カベオラ膜には,足場蛋白力ベオリンの強い免疫組織化学的活性が証明される。私はこれまでに,毛の動き受容器,槍型終末の分離標本を用いた生理実験で,この末梢性グリア細胞が神経伝達物質ATPのG蛋白共役型受容体P2Y_2を発現していること,各軸索終末を覆うグリア薄板が,局所ATP刺激に対し独自のCa^<2+>信号を生成し得る,細胞内機能区域と見なされること,膜のコレステロール除去剤methyl-β-cyclo-dextrinでカベオラを壌すと,薄板固有の信号の生成遅延・伝播範囲縮小を招き,この区域化信号系が損なわれることを明らかにした。今回は,ラット頬ひげ毛包からコラゲナーゼで分離した槍型終末を用い,グリア応答の責任受容体P2Y_2とその関連G蛋白であるG_<q11>の細胞内分布,それらとカベオリン1との共存を,蛍光抗体法間接法による免疫染色で調べた。正常培養液で維持した後にホルマリン固定した槍型終末グリア細胞では,P2Y_2とG_<q11>の強い免疫反応が,カベオリン1と同様に,薄板突起に限局して検出された。一方,methyl-β-cyclodextrinでカベオラを除去してから固定したグリア細胞では,上記3種の蛋白いずれの免疫染色も弱まり,細胞全体に均一に広がっていた。これらの観察結果から,皮膚感覚装置グリア細胞では,P2Y_2とG_<q11>のカベオラ依存的な集積が,ATP誘発性信号の軸索周囲突起への局在化に欠かせないと考えられる。皮膚感覚装置のグリア細胞は,細胞膜の小陥凹カベオラに富む薄板突起を多数のばして異なる軸索終末を包むことが知られる。私は21-22年度の研究でラツト頬ひげの動き受容器槍型神経終末の分離標本にカベオラ除去剤

メチルベーダシクロデキストリンを作用させる実験を行い,グリアの薄板突起に神経伝達物質ATPの受容体P2Y2とその特異的共役分子Gq11がカベオラを足場として集積すること,これに基づき各薄板が局所ATP刺激に対し自身のカルシウム信号を生成できる細胞内機能区域を構成することを明らかにした。ところで,P2Y2などG蛋白共役型受容体を介した細胞応答は,二次信号物質イノシトール三リン酸が小胞体内貯蔵カルシウムイオンの細胞質への放出を促すことがきっかけとなって形成される。しかし,感覚装置グリア薄板は膜性小器官に極めて乏しいことが報告されている。そこで本年度は,グリア薄板内カルシウムイオン貯蔵所の形態特徴を明らかにするため,ラット槍型終末を材料として,四酸化オスミウム処理(Tanaka & Mitsushima, 1984)で露出した細胞膜成分の走査電顕観察と,常法に従って作成した超薄切片の透過電顕観察を行なった。その結果,槍型軸索終末に伴行する薄板突起の細胞質全体に,網状に連絡しあう細管からなる典型的な滑面小胞体が広がっているのが見出された。滑面小胞体細管の内腔は時折細胞表面近くで大きさ約400nmの槽状に拡張し,各槽は3-6個のカベオラ底の細胞膜と接触して両者の膜コンパートメント間の分子相互作用を可能にしていた。
原子層の量子物性測定と新規物性探索

不活性な六方晶窒化ホウ素基板支持による原子層の飛躍的高品質化、走査透過電子顕微鏡や角度分解光電子分光装置の高性能化により、グラフェンや新奇原子層・複合原子層の画期的に高度かつ精緻な実験が可能になった。その結果、2層グラフェンにおけるバレーホール効果の実証、FeSe原子層における50K級高温超伝導の発見、高移動度グラフェン中の実空間電子軌道の直接観測、原子層半導体黒リンの電子構造の解明、多層グラフェンの電子構造の解明、グラフェン面内成長のその場観察、傾斜SiC基板上エピタキシャルグラフェンにおける量子伝導の観測など、原子層科学の拡がりにつながる顕著な成果を得た。初年度は各メンバー毎に今後の基礎となる技術・手法の開発(原子層転写技術、高スピン分解能ARPESなど)を行うと共に、以下のような研究成果を得た。(長田)量子ホール状態にある単層グラフェンと2層グラフェンの接合境界でのエッジ伝導から、量子ホール相境界におけるバルク・エッジ対応を異種物質間で初めて確認した。(町田)量子ホール状態にあるグラフェン/h-BNにおいて、サイクロトロン吸収に起因する光起電力効果を観測した。実用的な低温域において超高感度中赤外光検出器を実現できる可能性を示した。(山本)グラフェン-超伝導接合において超伝導体中のクーパー対を空間的に分離することを目的として、試料の設計及び作製を行った。また、バレーの自由度を利用したクーパー対分離を提案し、電流の注入によってバレーの流れを生成するバレーホール効果を観測した。(八木)多層グラフェンの電子構造と、表面修飾したグラフェンの電子構造の特殊性を示すために、高品質なグラフェン素子の作製技術を開発した。(劉)グラフェンを使ったデバイスの作製に必要となる原子配列を決定する手法を開発し、グラフェンのマクロ物性と原子構造の関連付けを行う。単原子空孔、二原子空孔、5員環、7員環、添加原子(ケイ素、窒素)などの格子欠陥の検出・同定する。(菅原)高分解能スピン分解光電子分光装置の建設を行い、原子層物質グラフェン関連物質の特異電子状態(エッジ局在状態等)の起源解明を行う。(遠藤)微傾斜SiC基板上に成長したエピタクシャル・グラフェンでは量子ホール効果が異方的に出現することを見出し、これがSiC基板の平行伝導の異方性から理解出来ることを明らかにした。平成26年度はA02班は研究費の重点配分を受け、大型装置の導入などの研究環境の整備を行った。またこれらを用いた本格的研究を開始して以下の成果を得た。(長田)新規原子層物質を開拓するため、原子層半導体フォスフォレンの電子構造をLCAO法で議論し、伝導特性におけるエッジ状態の重要性を指摘した。また強相関モット絶縁体原子層膜へのキャリア注入に成功した。(町田)グラフェンおよび遷移金属ダイカルコゲナイドの接合を作製し、電界効果形トランジスタとして電流のゲート電圧によるON/OFF制御を実現した。(山本)超伝導体と2つのグラフェン量子ドットの接合系においてドットの帯電エネルギーを利用して超伝導体中のクーパー対を別々の量子ドットへと分離することに成功した(分離効率:60%強)。またバレーホール効果についても詳細な解析を行った。(八木)h-BN上の高品質グラフェン作製技術を確立した。多細孔構造をもつ高品質グラフェンで、電子のカオス運動および規則運動が磁場によって制御される様子を明確にとらえた。また3,5,7,9層の多層グラフェンの電子構造を実験により決定した。(劉)単原子層膜、特にナノリボンのエッジ構造は物理的特性に大きく影響する。高分解能電子顕微鏡を用いて、グラフェン、h-BN等の単原子層膜のエッジ構造とその熱処理によるエッジ構造変化を原子レベルで解析した。(菅原)高分解能スピン分解光電子分光装置の建設・改良による世界最高のエネルギー分解能を目指し、スピン偏極電子状態の直接観測から原子層物質やグラフェン関連物質の特異物性の起源解明を行った。(遠藤)微傾斜SiC基板上に成長させたエピタクシャルグラフェンの磁気抵抗測定を行った。ほぼ周期的に配列した基板ステップがつくる超格子により生成される「開いた軌道」の幾何学共鳴による磁気抵抗振動を観測した。本年度は研究設備の整備を終えて研究を本格的させた。各メンバーの成果は以下のとおりである。(長田)h-BN基板を用いて高品質化したグラフェン単層/2層ヘテロ接合で量子ホール伝導の実験を行った結果、異なるバンド構造上の量子ホール状態間の接続状態を明らかにした。(町田)高移動度グラフェン/h-BNにおけるバリスティック伝導に起因するキャリアフォーカス効果を空間分布検出技術により明らかにした。様々な組み合わせのファンデルワールス接合における量子輸送現象を明らかにした。(山本)グラフェンクーパー対スプリッターにおけるクーパー対の分離効率を上げるべく試料の改善を行い、分離効率をより正当に評価する電流雑音測定系の構築に取りかかった。また、グラフェンジョセフソン接合における超伝導臨界電流の特性を詳細に調べた。(八木)7層までの多層グラフェンの磁気抵抗測定で電子構造の層数に関する偶奇性を明確に観測した。奇数層では質量を持つバンド以外に質量ゼロのバンドが1つあるのに対し、偶数層では質量ゼロのバンドが存在しないことを確認した。(劉)異なるバンドギャップを有するグラフェンとh-BNのヘテロ

複合材料において、電子顕微鏡を用いてヘテロ複合原子層膜の原子構造および電子構造を解明するとともに、電子顕微鏡中でのヘテロ複合原子層膜のin-situ熱処理による構造変化を研究した。(菅原)整備・改良した高分解能スピン分解光電子分光装置を用いて、原子層グラフェン関連物質のスピン物性に関係した特異物性の起源を、スピン偏極電子状態の直接観測により解明した。(遠藤:連携研究者)単層領域・2層領域が混在するSiC上エピタクシャルグラフェンの磁気抵抗、ホール抵抗を測定した。これらが半古典的な2キャリアモデルで説明でき、解析から得られる両領域の面積比が原子間力顕微鏡での観察結果と良く一致することを示した。以下のようにメンバー毎に若干の進捗状況の違いはあるが、全体としては概ね順調あるいは計画以上に進展していると判断できる。(長田)概ね順調:グラフェン単層/2層接合を用いた量子ホールヘテロ接合の問題を解決するとともに、空気中で不安定な新規原子層のためのグローブボックス中原子層転写積層装置を概ね完成できたため。(町田)計画以上:グラフェン/h-BNのみならず、NbSe2やFeTaS2を含めた様々な組み合わせのファンデルワールス接合における量子輸送現象を明らかにできたため。(山本)計画以上:グラフェンにおけるバレー流を観測したことに加え、グラフェン-超伝導接合系の物理に関しても大きな進展があった。(八木)概ね順調:技術的課題であったグラフェンの高移動度化は、すでに達成できた。多層グラフェン電子構造は系統的に明らかになっている。解析のための電子構造計算のため論文発表はやや遅れているが、順次執筆中であり、おおむね順調である。(劉)概ね順調:電子顕微鏡の中でh-BN/grapheneヘテロ複合原子層膜を熱処理し、h-BNのエッジからグラフェンが面内成長すること、h-BNとグラフェンの結合がN-Cボンドがメインであることを解明した。またEELS分析により、垂直にスタックしたヘテロ複合原子層膜の誘電性能には、グラフェンとh-BNの複合作用による効果が認められることを明らかにした。(菅原)概ね順調:本年度は、高感度スピン検出器用ターゲット薄膜作製装置を用いて4ヶ月以上ターゲットの寿命が延びた高品質強磁性Fe薄膜を製作することに成功し、スピン分解時のエネルギー分解能5meV、シャーマン関数0.14を達成した。(遠藤:連携研究者)やや遅れ:磁気抵抗測定のための主力の測定装置である希釈冷凍機が再度故障し(今回は制御部)、その修理・復帰に4ヶ月以上要したため。(長田)h-BN結晶で挟んで表裏を保護した黒リン超薄膜FETにおいて、正孔系・電子系の高移動度化を確認し、伝導帯第2サブバンドが高電場下で伝導に寄与することを低温磁気抵抗の量子振動により示した。(町田)強磁場中の三層グラフェンにおいて量子ホール効果測定を行い、グラフェンに平行な磁場の印加に起因するランダウ準位間の結合と、それに伴うランダウ準位反交差を実験的に観測した。(山本)
発話運動の神経機構を考慮した吃音の発話訓練方法の開発

自己ペースによる発話の脳の機能的結合モデルを作成する際に、発話時に結合している脳部位の仮説を必要とする。そのために、まず吃音のある成人およびない成人が自己ペースで発話した際に活動する脳部位を調べるための予備実験を行った。被験者は、吃音のある成人被験者6名(男性3名、女性3名)および吃音のない成人被験者3名(全て男性)とし、発話課題中の脳活動をMRIを用いて計測した(この中、吃音のある成人の計測は前年度に実施)。被験者には、画面に表示された固視点を見ながら4秒間の間に「あいうえお」を2回繰り返し発話させる課題および、画面の固視点を見ているだけの課題の2種類を行わせ、課題の順序は疑似ランダム順とした。また、発話中のMRI撮像音の影響や、MRI撮像中の発話によるアーチファクトを避けるため、発話中はMRI撮像を行わず、発話後に2.5s間MRI撮像を行う、スパースサンプリング撮像法を用いて脳活動の計測を行った。計測した画像に対して、吃音のあるグループおよび無いグループそれぞれに対して、固定効果解析を実施した。その結果、発話中に有意(p<0.05, corrected)に活動した部位として、吃音の無いグループでは、左:中心前回、中心後回、縁上回、Heschl回、補足運動野、右:中心前回、Heschl回、上側頭回が示された。一方、吃音のあるグループでは、左:中心後回、中心前回、補足運動野、ローランド弁蓋部、Heshl回、上側頭回、右:中心後回、中心前回、補足運動野、ローランド弁蓋部、Heshl回、上側頭回が示され、吃音の有無により一部異なる部位が示された。勤務地の変更により、他の業務に時間を割く必要が生じたため。固定効果解析においてみられた自己ペースによる発話に関連する脳部位が、変量効果解析においてもみられるか、被験者の人数を増やし調べる。さらに、変量効果解析において確認された脳部位に基づき、自己ペースによる発話における機能的結合のモデル化を目指す。被験者として内部被験者を用いたことにより、謝金が必要なくなったため。また、予定していた脳活動計測実験の回数が減少したため。
墓制の変遷からみた家族とコミュニティの変容に関する研究

本研究は、現代家族が直面しつつある墳墓の継承問題と、そうした継承を支えてきた寺院・檀家を中心にしたコミュニティの変質と家族のメンタリティを探求するものである。質的調査であるインタビュー調査と量的調査であるアンケート調査を用いた結果、寺院・檀家との関係は、その結びつきが墓制の変化とともに家族から個人へと変化する傾向があり、墓制の変容は日本型近代家族そのものの変化と関係性があり、この変化が墳墓の継承問題に顕在化していると推測される。研究目的の一つとして、名古屋市における墓地の郊外化・集合化の実態調査のために、市内の複数寺院において聞き取り調査を実施した。それによれば、墓地の集合化は一律のものではなく、主に深刻な戦災にあった市域の寺院を対象に、郊外の東部丘陵地帯に寺院ごとの区画を設け、一括して集合移転が実施された。一方、例えば中村区のように、旧市街の中心地から離れた市域の寺院では、そうした移転は実施されず、現在も寺院内に墓地を保有している。また、同調査に際して、家族の変容に伴う墓制観の変化を捉えることを目的に、寺院と檀家との関係性についても聞き取り調査を行った。その結果、構成員の小規模化や居住地の流動化が進む現代家族においては、寺院との関係にも変化が現れ、それに対応して、寺院側もその在り方を再考すべき時期に来ており、寺院側もそれを強く意識していることがわかった。寺院が従来型の墓石の形式を守りながらも、新しいニーズに対応した納骨堂の新設、本堂内のロッカー式納骨施設の整備など、新形式の永代供養型墓制を模索していることは、こうした意識の反映とみなすことができる。しかし反面、それは、寺院と檀家集団との関係の希薄化を促すものでもあり、それが今日の寺院の課題になっていることも調査から推測された。墓制の変化と家族構造との関係については、継承者の有無が重要な要因になると仮定し、墳墓をもちながら、子どもがいない中年以降の夫婦に対し、聞き取り調査を実施した。その結果、墳墓の継承問題は、単なる子どもの有無というよりも、彼ら以前の世代がどのような形で家族を築いたのかという点が重要になっていることがわかった。これまであまり指摘されることはなかったが、特に当該世代というよりも、その前の世代が居住地の「流動化」の中で家族を構成した場合、墳墓の継承問題は、いっそう複雑な形で問題化することが明らかになりつつある。本研究では墓地の継承に着目し、団塊の世代以前、いわゆる「多産少死」の世代が高度経済成長期に出身地を離れ、都市部で新たに核家族を形成していったその流動性の中に問題点を見出した。団塊の世代におけるお墓の問題は、将来における後続世代の家族の形態やあり方を推測して行く上でも、重要な意味をもっており、彼らの墓制に対する選択が「脱継承墓」ではなく、従来の伝統的で直系家族的な墓制を選択することも十分に考えられる。その一方で、今だ継承者が定まらないお墓が出身地にはある可能性も否めない。そこで、23年度は、名古屋市内の少々はずれにある天白区の大坪学区の住民に対し、かれらの「流動性」に注視しアンケート調査を実施した。本調査は大坪学区の2,100世帯に対しアンケート票を学区の町内会を介して配布し、郵送で回収を行った。2か月ほどの回収期間を設け、838の回答を回収した。調査の主たる目的は「多産多死」世代の流動性を検証することとし、3世代の住居移動を調査した。質問項目において回答者の一世代前の出身地、本人の出身地を尋ねることにより、現在の住居地である天白区の3地点を結び、その移動の実態を明らかにすることとした。この「流動性」は、同時に家族とコミュニティとの結びつきという視点とも連動する。世代を跨いで一つの地域に住み続けていれば、コミュニティとの関係性も強いであろうし、流動的に世代が動いていれば、それは薄れることになると仮定できる。23年度はこの調査の実施、回収した質問票の整理、データ入力、そしてそのデータの概要を把握し、分析のための下準備が完了した。本研究は、現代家族が直面しつつある墳墓の継承問題、およびかつてそうした継承を支えてきた寺院等を中心にしたコミュニティの変質に注目した視点で、質的調査と量的調査を実施し、それらのデータを分析することで現代家族における墓制の在り方を探求するものである。質的調査として、2つのテーマでインタビューを実施した。一つは、名古屋市内の寺院の住職ないし寺院関係者を対象にしたもので、ロッカー式納骨施設の普及という昨今の現象を糸口にして、今日の家族における墳墓の継承問題やそれらに対する家族の具体的な対応策と、寺院側の観点から、それらをどのように捉えているのか、また、檀家との関係や寺院を取り巻くコミュニティである檀家組織の変質に関して、その実態を聴取した。

結果、寺院との結びつきが家族から個人へと変化していることが推測されるが、これは「子どもたちに迷惑をかけたくない」という意識と共に、日本型近代家族そのものが変化しようとしている兆候と関係があるようだ。二つ目は、将来、墳墓の継承問題が懸念される子どものいない夫婦を対象に実施した。結果、自分たちが親たちの墓を守れなくなった時に、同族や親族が共通の墓として世話をしてくれるのではないか、という希望があり、それが絆によって結ばれた共同墓としての新しい墓制となるのかもしれない。量的調査としては、名古屋市天白区の一部住民(2,100)を対象に、アンケート調査を実施した。質問項目は、お墓に関する全般的な考え方、世代間の流動性、墳墓の継承などで構成した。結果、「流動化」「少子化」「個人化」する現代家族は、「定住性」「伝統性」「継続性」を重んじてきた墓制と、折り合いをつけながらも、マスコミ等で紹介されるインターネットによるお墓参り、散骨・樹木葬などの形態が新しい墓制として認知されるまでにはメンタリティの変化が必要であり、それには、今しばらくの時間が必要であろう。22年度には寺院への聞き取り調査と子どものいない中年以降の夫婦に対しての聞き取り調査を終了し、23年度には名古屋市天白区大坪学区の住民に対するアンケート調査(2,100部配布)も終了し、予定していた調査は完了することができた。24年度が最終年度であるため、記入しない。予定していた家族と墓制に関する調査が終了したため、今年度はこれらの調査結果を分析し、報告書としてまとめる。
環境シグナルによるウェルシュ菌遺伝子発現調節の解析

ウェルシュ菌の病原性発現誘導に関与する宿主側因子の解析では、ヒト血清をウェルシュ菌に加えると、病原因子であるシアリダーゼを含む多数の遺伝子の発現が変化することがマイクロアレイ解析により明らかになり、またこの血清中の誘導因子は分子量10万以上でタンパク性のものと推測された。現在、血清を分画して誘導因子の同定を試みている。さらに、すでに作製した28の二成分制御系遺伝子破壊株すべてに対して血清による刺激を行ったところ、4種の二成分制御系欠損においてシアリダーゼ遺伝子発現の誘導が減弱していたことから、これらの二成分制御系が血清中の誘導因子を感知するものと思われ、現在さらに詳しく解析を進めている。さらに、今までに様々な条件下にて行ったDNAマイクロアレイ実験のデータを情報解析し、常に同じ発現変化のパターンを示す遺伝子群(オペロンなど)を抽出したところ、常に同じ発現パターンを示す遺伝子群(レギュロン)が同定された。このうち転写調節RMAであるvirXによって様々な遺伝子群が調節されていることが示唆された。これら遺伝子群の発現に対するvirXの影響をノザン解析により調べたところ、シアリダーゼ、ヒアルロニダーゼ、プラスミド上の遺伝子群、さらに芽胞(胞子)形成に関与する遺伝子群の発現をvirXが転写レベルで強く抑制していることが明らかになり、virXがよりグローバルにさまざまな遺伝子の発現を負に調節し、芽胞形成制御にも関与していることが示唆された。今後、ウェルシュ菌の芽胞形成とvirXとの関係について精力的に解析を進めていく予定である。現在、血清を分画して誘導因子の固定を試みている。さらに、すでに作製した28の二成分制御系遺伝子破壊株すべてに対して血清による刺激を行ったところ、4種の二成分制御系欠根株においてシアリダーゼ遺伝子発現の誘導が減弱していたことから、これらの二成分制御系が血清中の誘導因子を感知するものと思われ、現在さらに詳しく解析を進めている。さらに、今までに様々な条件下にて行った250枚のDNAマイクロアレイ実験のデータを情報解析し、様々な実験条件においても常に同じ発現変化のパターンを示す遺伝子群(オベロンなど)を抽出したところ、ゲノム上の位置は離れているものの常に同じ発現パターンを示す遺伝子群(レギュロン)がはっきりと同定されることがわかった。このうちの1つの遺伝子群を調べたところ、以前に我々が同定した転写調節RMAであるvirXによって様々な遺伝子群が調節されていることが示唆された。これら遺伝子群の発現に対するvirXの影響をノザン解析により調べたところ、シアリダーゼ、3種のヒアルロニダーゼ、プラスミド上のhypothetical遺伝子群、さらに芽胞(胞子)形成に関与する遺伝子群(spoOA, sigF, sigE, sigG, sporulation proteinsなど)の発現をvirXが転写レベルで強く抑制していることが明らかになった。このことは、従来主要な毒素遺伝子の転写を正に制御すると考えられていたvirXがよりグローバルにさまざまな遺伝子の発現を負に調節していることを示し、特にこれまで不明であったウェルシュ菌の芽胞形成制御にも関与していることが示唆された。さらにウェルシュ菌の芽胞形成は本菌の腸管毒素産生を誘導することが知られており、virXが芽胞形成を通じて食中毒の原因である腸管毒素の産生調節にも関与している可能性も考えられる。現在、ウェルシュ菌の芽胞形成とvirXとの関係について精力的に解析を進めており、ウェルシュ菌の病原性を制御ずる様々な因子(VAP,血清因子、二成分制御系、virXなど)が構築する病原性発現調節ネットワータを解明し、治療・予防への応用を目指している。