hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
吃音の流暢性促進プログラム開発：神経科学的理解のセラピー法との融合

各話者群についてそれぞれ数十名のデータが得られたが、これまでのところ結論まで至っておらず、今後解析法や実験方法について再検討が必要である。その他、メトロノーム法を用いた8週間の流暢性促進練習における脳活動の変化について国際誌に投稿し掲載された(NeuroImage, 2015)。脳波計測についてパイロット実験をスタートした。発吃から数年以内における流暢性促進法や環境の調整などの対応の有無が、生涯の吃症状に大きな影響を与えることを考えると、まず小児期における吃音の有症率を具体的数値として把握することが重要と考える。本年度、比較的人口の出入りが少ない離島地区において先方の協力を得て調査を行った。このデータと以前別の地域で得たデータの違いについて比較する予定である。本研究は吃音に関する行動データ・脳計測データを多角的に取得し,吃音のメカニズムを明らかにすることで,将来的には吃音の流暢性促進法の考案・より良い選択につながる成果を目指している.吃音話者が異性の知らない他者と擬似的に対面会話する際のfMRI実験のデータについて,別の視点で解析したところ,情動に関わる脳領域の活動について興味深い結果が得られ,論文投稿の準備を進めてきた.まもなく国際誌へ投稿する予定である.遅延聴覚フィードバックの発話への影響について,1年間に渡り脳波(事象関連電位)の実験を継続し,吃音話者と非吃音話者の合計40名程度から協力を得てデータを取得してきた.現在解析中であり,現時点では結論は得られていないが,28年度の学会で発表したいと考えている.新たに取得した離島地区における3歳時点有症率(発症率)のデータを解析し,学会において発表した.また,3歳児健康診査に従事する言語聴覚士・保健師を対象として,吃音と判定する閾値に関する調査を行い,有症率との関連を調べ,学会において発表した.また,すでに一昨年までに発表済みの内陸地区の調査結果について,英語論文化の作業を共同研究者と進めてきた.情動は発吃の主な原因ではないものの,多くの成人話者では緊張によって発話流暢性が変動する.また,長年吃音を有することにより,日常的に不安感をもつ場合もある.従って,吃音話者に対する心理的・身体的サポートも重要である.そこで本研究では,新たな実験課題として,吃音話者に対するリラクゼーションの効果に関する脳計測の準備と予備実験を進めてきた.様々な視点で研究・実験を継続して進めている.脳機能計測実験を通じて,吃音のメカニズムに関する新たな仮説を得ている.論文化の作業には非常に時間がかかっているが,将来的には多くの研究成果が得られると考える.情動は発吃の原因ではないものの,成人の吃音話者の多くは情動によって発話流暢性が変動することが知られている.また,吃音を有することにより,社交不安等を併発するケースが多い.従って,発話生成そのものだけではなく,情動性にも着目して研究を進めてきた.MRI装置内で知らない異性の他者と擬似対面しながら会話する際に取得したfMRIデータについて再解析を続けたところ,吃音の頻度と辺縁系の活動が関連したことを示唆する結果が得られ,まとめる作業を進めてきた.遅延聴覚フィードバック条件下による発話の乱れと,聴覚フィードバック音に対する聴覚誘発電位の関係について,吃音話者と非吃音話者のデータを取得してきた.解析が続いており,結論はまだ得られていないが,何かしらの結果が出たらまとめる作業に入りたい.マインドフルネスは近年着目されているストレス低減法の一つであるが,吃音とマインドフルネスの関係はこれまで不明である.また,マインドフルネスは気づきを高める方法であるが,吃音話者の感覚フィードバックに特異性が知られており,応用が可能かもしれない.吃音を表出させる情動面にも何かしらの効果がある可能性がある.
英語のスピーチアクトの表現の特定と英語教育への応用

24年には私たちは米国のテレビコメディーの「モダーンファミリー」の最初の3シーズンを使用した。謝罪によく使用される“sorry,"“excuse," “apologize,"“forgive,"と“pardon"の5キーワードを使用して、コーパス内の謝罪を特定して、分析した。25年度はこの研究の吟味をして、謝罪に対して応じる言い方を研究した。まず以前の研究で謝罪にどのように応じたかや発話行為のデータを集める種々の問題を吟味する。米国のシチュエーション・コメディの「モダーン・ファミリー」の72エピソードの字幕のコーパスから抽出した320の謝罪を分析した。謝罪の応答を9つのカテゴリーに分類した。それらは、応答なし、相手のしたことを最小限にすること、したことに焦点をしぼること、謝罪の説明や理由に答えること、明らかにすることを求めること、謝罪で返答すこと、音の発生、不信感を示すこととその他。私たちはそのどのカテゴリーの返答が使用されるか、それらはどの様な状況で使用されるかを研究した。謝罪の9つの応答は私どものオリジナルのカテゴリーである。私どもは、コーパスから謝罪の仕方の例を収集して、データドリブンの教材を試しに作成した。私どもは謝罪のスピーチアクトで、謝罪以外の意味に使用される場合の分析もしたが、これをした例は今までに見当たらない。謝罪に関する研究成果は2つの論文と5つの国際学会の発表で公表した。その他にこの研究成果を英語教育に応用する方法も手掛けた。25年度に研究した内容を検証する。学習者コーパスを利用して、日本人学習者が英語で謝罪する方法が母語話者とどのように異なるかを分析する。特に日本人学習者の英語レベルにより、謝罪の仕方がどのように異なり、この間違いを体系化する。この学習者コーパスには英語母語話者の発話も含まれているので、直接同じ状況での謝罪の方法などが比較できる。この間違いと英語のレベルを基に、どのレベルで、どの謝罪方法と応答方法が妥当かを決定する。これに基づいて、英語教育のシラバスと教材、教授法を考案する。本年は少なくとも3つの国際学会で成果を発表する予定。適正に使用したが、端数が残った。本年度の研究に組み込んで使用する。
鉛ビスマス二相流の詳細構造に関する研究

液体金属二相流の詳細構造を計測するために、中性子ラジオグラフィとプローブ法の二つの手法の高度化を行った。中性子ラジオグラフィでは高速度撮像法を用いて、気泡の動態を観察するとともに、4センサー法を用いた計測法を発展させ、気泡速度および気泡径を求めるアルゴリズムを導出し、数値実験および可視化実験から計測誤差を明らかにした。さらに本研究では、界面曲率が計測誤差に与える影響を幾何学的に考察し、曲率による誤差を補正するアルゴリズムを導出し、数値実験を用いた検証を行った。本研究では、3年間の研究期間において鉛ビスマス気液二相流の流動特性に関する実験データを蓄積するとともに、液体金属を用いた原子力システムに適用可能なモデルを導き出すことを目的としている。計測方法としては、これまでに申請者らが開発した液体金属用電気抵抗式マルチセンサープローブ法及び高分解能中性子ラジオグラフィなどを用いて、液体金属二相流のボイド率分布、気液界面積濃度、液相速度および乱流強度分布などを計測し、鉛ビスマス二相流の界面輸送機構及び乱流特性などを明らかにする。平成20年度には、以下の内容で研究をおこなった。1.鉛ビスマスループ実験現有の鉛ビスマスループに設置してある試験部の長さは1mであるが、これは流れ方向の二相流の発達過程を精度良く計測するには不十分であり、装置の改造を行い、試験部及びダウンカマーの長さを延長し、直径2.5cmおよび5cmの試験部を製作して実験を行った。2.中性子ラジオグラフィ実験また、日本原子力研究開発機構の研究炉JRR-3Mにおいて、中性子ラジオグラフィを用いて液体金属中を上昇する気泡の可視化計測を行った。得られた画像から、回転楕円体を仮定した気泡形状の計測方法を開発し、計測精度を評価した。計測方法には液体金属用電気抵抗式マルチセンサープローブ法及び高分解能中性子ラジオグラフィを用いて、ボイド率分布、気液界面積濃度、液相速度および乱流強度分布などを計測し、鉛ビスマス二相流の界面輸送機構及び乱流特性などを明らかにする。平成21年度には、以下の内容で研究をおこなった。1.水ループ実験およびモンテカルロ法を用いた信号処理法の開発新たに開発した4センサープローブの信号処理法をモンテカルロ法および水ループを用いた実験により検証を行った。2.鉛ビスマスループ実験鉛ビスマスループを用いて4センサープローブの作動テストを行い、酸化物による信号劣化の影響を調べた。3.中性子ラジオグラフィ実験日本原子力研究開発機構の研究炉JRR-3Mにおいて、中性子ラジオグラフィを用いて液体金属中を上昇する気泡の可視化計測を行った。本研究では、3年間の研究期間において鉛ビスマス気液二相流の流動特性に関する実験データを蓄積するとともに、液体金属を用いた原子力システムに適用可能なモデルを導き出すことを目的とした。平成20年度には、鉛ビスマスループに設置する試験部の長さを1m延長し、二相流の高さ方向への発達過程を計測できるように改造を行った。また、平成20年度から平成21年度にかけて、申請者らが開発した電気抵抗式マルチセンサープローブを用いた気泡形状および気泡速度計測法の開発を行った。計測法の妥当性はモンテカルロシミュレーションおよび空気-水二相流を用いて、検証した。平成22年度は、平成20年度に改良した鉛ビスマスループを用いて実験を行った。ボイド率及び気液界面積濃度の計測には、申請者らが開発した電気抵抗式マルチセンサープローブを用い、液相速度には電磁流速計を用いた。ボイド率の計測結果から、ドリフトフラックスモデルを摘要した場合、計測値はドリフト速度を従来の傘状気泡の式を用いて表せることがわかった。また、気液界面積濃度は空気水系に対する相関式では、過小評価することがわかった。これは、試験部入り口では気泡の合一が支配的で、変形気泡の割合が増え、球形あるいは楕円気泡の割合が少なくなったためと考えられる。
低酸素によるがん疼痛に関する研究

ダイノルフィンA (1-17)[Dyn A (1-17)]のN末端領域とC末端領域はそれぞれオピオイド受容体とNMDA受容体に親和性が高い。ペプチダーゼによるDyn A (1-17)のC末端分解産物はNMDA受容体を介する神経毒性を誘導することが報告されている。3種のペプチダーゼ阻害剤(アマスタチン、カプトプリル、ホスホラミドン)はDyn A (1-17)のC末端分解産物量を減少させることによりその毒性を軽減し、鎮痛効果を増強することが示唆された。がん性疼痛時にはオピオイド分解機構に変調変調を来し、Dyn分解が抑制されその結果神経毒性が生じるのではないかと考えられた。がん細胞の増殖速度と腫瘍血管の形成速度とのアンバランスから悪性腫瘍の内部には、十分な酸素が供給されない低酸素領域が生じる(慢性低酸素)。がん組織では低酸素環境の存在により、低酸素誘導因子(Hypoxia-inducible factor-1α、HIFー1α)の発現が亢進している。近年、糖尿病神経症に伴う疼痛発症の細胞内分子メカニズムとして、末梢組織の低酸素状態によりHIF-1αが活性化され、タンパク質リン酸化酵素(PKC)の活性化を介してカプサイシン受容体(TRPV1)機能亢進することが明らかになった。本研究では、溶骨性がんモデル動物を用いて疼痛発症時におけるHIF-1αの活性化、TRPV1受容体機能亢進、疼痛の連関を明らかにすることを目指した。本年度は溶骨性がんモデル動物、HIF-1αノックダウンマウス(HIF-KD)、TRPV1ノックダウンマウス(TRPV1-KD)を用いて、がん性疼痛と神経細胞のHIF-1α活性、TRPV1受容体機能との関連について分子病態解析などにより明らかにすることが目標であった。しかし、溶骨性がんモデル動物の作成の予備実験で終了した。本研究では、がんモデル動物を用いて疼痛発症時におけるHIF-1αの活性化、TRPV1受容体機能亢進、疼痛の連関を明らかにすることを目指した。溶骨性がんモデル動物、HIF-1αノックダウンマウス(HIF-KD)、TRPV1ノックダウンマウス(TRPV1-KD)を用いて、がん性疼痛と神経細胞のHIF-1α活性、TRPV1受容体機能との関連について分子病態解析などにより明らかにすることが目標であった。しかし、溶骨性がんモデル動物の作成が困難であった。そこで、がん性疼痛時に脳内で放出され中脳辺縁ドパミン神経に作用し、その働きを抑制的に調節することが知られる内因性オピオイドの一種であるダイノルフィンの脳内代謝メカニズムとがん性疼痛メカニズムに関して検討を行った。その結果、脳室内に多量のダイノルフィン投与により神経毒性が生じるが、少量では鎮痛作用を示すことが明らかとなった。鎮痛本年度は溶骨性がんモデル動物、HIF-1αノックダウンマウス(HIF-KD)、TRPV1ノックダウンマウス(TRPV1-KD)を用いて、がん性疼痛と神経細胞のHIF-1α活性、TRPV1受容体機能との関連について分子病態解析などにより明らかにすることが目標であった。溶骨性がんモデル動物の作成を平成26年度中に完成し、疼痛発症時に末梢神経細胞のHIF-1α活性化、TRPV1受容体機能亢進、疼痛の連関を明らかにし、がん疼痛に特異的な疼痛機序の解明を目指す。予定していた骨がんモデル作成の進捗が遅れたため。平成26年度中に骨がんモデル作成を作成し、予定していた疼痛発症時に末梢神経細胞のHIF-1α活性化、TRPV1受容体機能亢進、疼痛の連関を明らかにし、がん疼痛に特異的な疼痛機序の解明を目指す。
擬縮退電子系を持つ不安定分子および分子集団の量子モンテカルロ計算

本研究は擬縮重電子系を持つ不安定分子及び分子集団の量子モンテカルロ計算手法を機能材料の分子設計に応用するための基礎研究を行った.特に高温超伝導酸化物の化学結合の特質をモンテカルロシュミュレーション手法により解明するための基礎データを得るためにab inutio MO計算を行った.まず,金属酸化物における金属一酸素結合の特性を表現するパラメータ(t,V)を決定するために, M-O-M系の有効交換積分(Jad)をab inutio MO法により決定し,その変化領域を決定した.この結果はJpn,J,Appl,Physに発表した.次に金属ハロゲン化物等の磁性体と酸化物の電子状態を比較することにより,磁性と超伝導の関係にいて検討した.そのため,金属ハロゲン化物のab inutio MO計算を行い, (t,V)領域の相異を明らかにした.この結果もJpn,J,Appl,Physに発表し,物理方向の研究者に公表した.これらのdataをもとにextended Hubbardモデルにおけるパラメータセットを設定出来た.次に量子モンテカルロ計算と解析的な解の結果を比較するために,少数クラスターのハバードモデルの厳密解を求めた.これと種々の解との比較を行った.この点についてもJpn,J,Appl,Physに発表した.さらに,サイト数が11個のクラスターのextendeel Hubbardモデル系の計算を行い,酸化物超伝導体のキャリアーをになうホールが格子定数の数倍にわたって拡がっていることを明らかにした.これらの結果は超伝導のメカニズムの解明に大変重要であると考えられるので, Jpn,J,Appl,Physに投〓し受理された.光機能材料の分子設計は今後大変重要となると考えられている.そこで,特に非線形光学材料に的をしぼって文献調査を実行し,その問題点を明らかにした.この成果は化学誌上に総説として発表した.本研究は擬縮重電子系を持つ不安定分子及び分子集団の量子モンテカルロ計算手法を機能材料の分子設計に応用するための基礎研究を行った.特に高温超伝導酸化物の化学結合の特質をモンテカルロシュミュレーション手法により解明するための基礎データを得るためにab inutio MO計算を行った.まず,金属酸化物における金属一酸素結合の特性を表現するパラメータ(t,V)を決定するために, M-O-M系の有効交換積分(Jad)をab inutio MO法により決定し,その変化領域を決定した.この結果はJpn,J,Appl,Physに発表した.次に金属ハロゲン化物等の磁性体と酸化物の電子状態を比較することにより,磁性と超伝導の関係にいて検討した.そのため,金属ハロゲン化物のab inutio MO計算を行い, (t,V)領域の相異を明らかにした.この結果もJpn,J,Appl,Physに発表し,物理方向の研究者に公表した.これらのdataをもとにextended Hubbardモデルにおけるパラメータセットを設定出来た.次に量子モンテカルロ計算と解析的な解の結果を比較するために,少数クラスターのハバードモデルの厳密解を求めた.これと種々の解との比較を行った.この点についてもJpn,J,Appl,Physに発表した.さらに,サイト数が11個のクラスターのextendeel Hubbardモデル系の計算を行い,酸化物超伝導体のキャリアーをになうホールが格子定数の数倍にわたって拡がっていることを明らかにした.これらの結果は超伝導のメカニズムの解明に大変重要であると考えられるので, Jpn,J,Appl,Physに投〓し受理された.光機能材料の分子設計は今後大変重要となると考えられている.そこで,特に非線形光学材料に的をしぼって文献調査を実行し,その問題点を明らかにした.この成果は化学誌上に総説として発表した.
光エネルギー駆動型の補酵素再生系を組み込んだ微生物を用いる生体光触媒の創製

常温常圧条件下で高効率な反応を触媒する酵素や微生物等の生体触媒を活用した工業プロセスの実用化は、持続可能な開発の実現という社会の要請に応える。一方、NADHやNADPH等の補酵素や電子伝達体からのエネルギー供給を必要とする酵素を用いるプロセスの実用化には、高価な補酵素や還元力をどのように反応系に供給し続けるかという課題を解決する必要がある。本研究は、微生物に対して光エネルギーを化学エネルギーへと変換する能力を付与すること、具体的には分子光触媒として機能するポルフィリン色素を微生物に生合成させ、その色素による光触媒的な補酵素再生系を構築することでこの課題の解決を目指す。2018年度は検討予定としていた「1大腸菌でのポルフィリン生合成系の強化と生合成されたポルフィリンによる光触媒的補酵素再生の実証」を行った。この項目の内容は、(1)分子光触媒として機能するポルフィリン誘導体の遺伝子工学的な改変を加えた組換え大腸菌を用いた大量生産、(2)大量に合成されたポルフィリン誘導体の精製方法の確立および種類の同定、(3)生合成されたポルフィリン誘導体による光触媒的な補酵素、あるいは酵素に電子を伝達する電子メディエーター分子の還元の検証、であった。予定通り、大腸菌に対するポルフィリン色素合成系の強化を施すことによって培養液および細胞内に著量のポルフィリン誘導体が蓄積することを見出し、さらに培養液組成や培養時間の検討により生産量の増大に成功した。またイオン交換樹脂を用いた色素の精製方法およびHPLCによる分析により、主要に蓄積する色素がZn-ウロポルフィリンIIIであることを明らかにした。さらに精製したポルフィリン色素を用いて、種々の酸化還元酵素における人工的な補酵素として利用可能な電子メディエーターであるメチルビオローゲンの光触媒的な還元が可能であることを確認した。本年度の予定としていた内容はおおむね達成した。次年度は、組換え大腸菌に生合成させたポルフィリン色素による電子メディエーターの光触媒的還元反応を、実際に物質生産反応を共役させることで、光エネルギー駆動型の生体触媒反応の構築を行っていく予定である。
古代鉄製品年代測定に関する基礎的研究 -古代製鉄復元実験による^<14>C年代測定原理の検証と確立-

木炭を使用した製鉄法により造られた鉄製品は、その成分中に木炭の成分である炭素を含んでいる。したがって、鉄製品中の炭素の年代は、製鉄時に使用した木炭の年代に由来していると考えられ、この前提条件を用いて鉄製品の^<14>C年代測定法が利用されている。しかし、その前提条件が正しいかどうかの検証は行われていないのが実状である。この前提条件を検証するために、まず、製鉄実験を通して、加速器質量分析計による^<14>C年代測定法を利用し、製鉄実験(製錬)により得られた鉄塊等から炭素を汚染させることなく効率よく高純度で回収し、^<14>C年代測定を行った。その測定結果は、使用前の木炭とほぼ同一の年代を示し、炭素の履歴は、製鉄の際に用いられた木炭に由来することを検証した。次に、出土した須恵器から遺跡の年代を決めることの可能な製鉄遺跡出土鉄塊を用いて検証を行った。その結果、鉄塊とその錆中の木炭の年代は、ほぼ同一の年代を示し、遺跡出土資料からも、^<14>C年代測定法の根拠となる前提条件の有効性を認めることができた。以上のことから、製錬された鉄塊中の炭素の年代は、製鉄時に使用した木材の年輪形成時期に由来していると考えられる。つまり、製錬過程で使用された木炭の原料である樹木の育成年代を明らかにすることで、鉄製品の製錬年代を与えることが可能であった。同様に鍛冶遺跡出土の鉄塊や製品についても検証を行ったところ、測定年代に測定誤差を越えたばらつきが見られた。これらのばらつきは、鉄製品の製作工程における鍛冶工程の時間差や空間差、各製作工程に用いる材料、更には、鉄製品の再利用等に起因するのではないかと考えらる。今後の課題として、加速器質量分析計による^<14>C年代測定法を有効的に用いてこれらの原因を解明して行くことが必要である。したがって、鉄製品中の炭素の年代は、製鉄時に使用した木炭の年代に由来していると考えられ、この前提条件を用いて鉄製品の年代測定法法として^<14>C年代測定法が利用されている。しかし、その前提条件が正しいかどうかの検証はおこなわれていないのが実状である。本年度の研究では、その根拠となる前提条件の有効性を検証する目的で古代の製鉄方法(砂鉄精錬法)による製鉄実験を行い、その際、使用した木炭(未使用品)と製鉄実験により得られた鉄滓、銑鉄、木炭(使用品)の^<14>C年代測定結果の相関関係を求め、前提条件の有効性について検証を行った。製鉄実験は、熊本県荒尾市在住の刀匠松永氏の協力を得て1997年10月に行った。製鉄方法は砂鉄精錬法で行い、製鉄炉には粘土製の高炉を製作し使用した。砂鉄は、菊池川上流産山砂鉄を使用し、年代の履歴となると推定されている木炭は、岩手県産の10年から30年ものの松材を1996年に製炭したものを使用した。その年代幅約20年と出来るだけ揃った木炭を使用した。年代測定用試料は、未使用木炭3点、使用木炭3点、鉄滓3点、磁性のある鉄塊1点(ここから3点サンプル採取)を採取し、^<14>C年代測定を行っている。

加速器質量分析法による^<14>C年代測定は現在進行中であり、1998年5月頃には測定結果が得られる予定である。また、製鉄実験で得られた鉄塊で鍛造した刀の一部をサンプルとして分析を行っている。次年度は分析結果を解析したのち、その結果を基に古代の鉄製品での^<14>C年代測定による検証実験及び、適切なサンプリング法法の確立を目指して研究を進めて行く予定である。木炭を使用した製鉄法により造られた鉄製品は、その成分中に木炭の成分である炭素を含んでいる。したがって、鉄製品中の炭素の年代は、製鉄時に使用した木炭の年代に由来していると考えられ、この前提条件を用いて鉄製品の年代測定方法として^<14>C年代測定法が利用されている。昨年度の製鉄実験においては、その前提条件の有効性を認めることができたので、本年度の研究では、出土した須恵器から遺跡の年代を決めることの可能な製鉄遺跡出土鉄塊を用いて検証を行った。年代測定用試料は、遺跡出土鉄塊(埋没中に表面がかなり錆化していたため、土壌等による炭素汚染の影響を考慮し、鉄塊中心部の金属鉄が完全に残っている部分を測定試料とした。)とその鉄塊中の錆に巻き込まれていた木炭片(製鉄時に使用したと考えられる。)を用いた。それらの結果、鉄塊とその錆中の木炭の年代は、ほぼ同一の年代を示した。また若干、暦年代の幅があるが、これらの年代と出土須恵器の形式からの年代とも大きく矛盾のない結果が得られ、遺跡出土資料からも、^<14>C年代測定法の根拠となる前提条件の有効性を認めることができた。同様に鍛冶遺跡出土の鉄塊や製品についても検証を行ったところ、測定年代に測定誤差を越えたばらつきが見られた。これらのばらつきは、鉄製品の製作工程における鍛冶工程の時間差や空間差、各製作工程に用いる材料、更には、鉄製品の再利用等に起因するのではないかと考えらる。今後の課題として、加速器質量分析法による^<14>C年代測定法を有効的に用いてこれらの原因を解明して行くことが必要である。
股関節深部筋機能の解明―回旋筋群に着目して―

本研究では,股関節深部に位置する小殿筋および梨状筋にワイヤ電極を刺入し,基本動作および股関節周囲筋エクササイズを行った際の筋活動を測定することにより,股関節深部筋を強化する有効なエクササイズ方法を明らかにすることを目的とした.被験者は健常成人男性12名とし,超音波画像ガイド下にて小殿筋前部線維,小殿筋後部線維,梨状筋にワイヤ電極を刺入した.大殿筋,中殿筋,大腿筋膜張筋,内腹斜筋,脊柱起立筋,多裂筋,外腹斜筋,腹直筋,大腿二頭筋,大腿直筋には表面電極を貼付した.反射マーカーを各ランドマークに貼付し,筋電図と同期処理を行った上で,実験試技の動作を三次元動作解析装置にて測定した.実験試技は,1股関節外転,2股関節伸展,3股関節外旋,4股関節内旋,(14の股関節運動は股関節角度を変えた様々なポジションで実施)5Back bridge,6四つ這い上下肢挙上(Hand-knee exercise),7歩行,8片脚立位,9スクワット,10ジャンプ&着地動作,などを行い,それぞれの試技を行った際の動作解析および筋活動測定を行った.現在,被験者12名中7名の解析を終えており,1股関節外転,2股関節伸展試技の結果をまとめたもの以下に示す.小殿筋(特に後部線維)の筋活動量は,股関節内旋位での股関節外転運動で他の股関節外転試技よりも大きくなる傾向を示し,中殿筋も同様の傾向を示した.一方,大腿筋膜張筋は股関節外旋位での股関節外転運動で筋活動量が大きくなり,小殿筋後部線維と拮抗関係にある可能性が示された.また,股関節伸展試技では,腹部引き込み(Draw-in)を伴った股関節伸展運動で梨状筋,小殿筋(後部線維),大殿筋の活動量が大きくなり,腹横筋と殿筋群は股関節伸展時に共働作用を持つ可能性が示唆された.本年度では,12名の被験者のデータを収集し,股関節外転および股関節伸展運動の試技において7名までの筋活動量データを解析することができた.今後,統計学的なパワー解析によって,被験者数が必要になればデータを追加する可能性があるが,おおむね必要なデータを収集することができた.さらに,一部のデータを利用して,今後の学会演題登録をすることができる状況であり,進捗状況はおおむね順調と言える.今後は収集したデータを解析し,各エクササイズの小殿筋および梨状筋の筋活動量を算出することで,股関節深部筋強化に有効な運動療法を考案する.さらに,現在は筋活動量の比較だけを行っているが,今後は筋反応時間(onset)の算出や他の筋との協調性を表す筋シナジー解析を行い,より詳細に股関節深部筋機能の解明を行う予定である.解析における今後の課題として,本実験では動作および筋電データを同期して測定しているが,両者をより詳細に解析できるソフトや筋シナジー解析を行うことが可能なソフトが必要となる.次年度の予算にてその解析ソフトを購入し,股関節深部筋活動と動作・アライメントとの関連を検証していく予定である.本結果は,国際筋電生理学会や日本臨床スポーツ医学会など国内外の学会にて発表をし,随時投稿論文を執筆する予定である.本研究では,股関節深部に位置する小殿筋および梨状筋にワイヤ電極を刺入し,基本動作および股関節周囲筋エクササイズを行った際の筋活動を測定することにより,股関節深部筋を強化する有効なエクササイズ方法を明らかにすることを目的とした.被験者は健常成人男性3名とし,超音波画像ガイド下にて小殿筋前部線維,小殿筋後部線維,梨状筋にワイヤ電極を刺入した.大殿筋,中殿筋,大腿筋膜張筋,内腹斜筋,脊柱起立筋,多裂筋,外腹斜筋,腹直筋,大腿二頭筋,大腿直筋には表面電極を貼付した.反射マーカーを各ランドマークに貼付し,筋電図と同期処理を行った上で,実験試技の動作を三次元動作解析装置にて測定した.実験試技は,1股関節外転,2股関節伸展,3股関節外旋,4股関節内旋,(14の股関節運動は股関節角度を変えた様々なポジションで実施)5Back bridge,6四つ這い上下肢挙上(Hand-knee exercise),7歩行,8片脚立位,9スクワット,10ジャンプ&着地動作,などを行い,それぞれの試技を行った際の動作解析および筋活動測定を行った.その結果,小殿筋の筋活動量は,前部および後部線維ともに股関節伸展位での股関節外転運動で大きくなる傾向を示した.また,股関節内旋位での股関節伸展運動で,小殿筋前部線維の活動量が大きくなるのに対し,小殿筋後部線維は股関節外旋運動を伴ったBack bridgeで活動量が大きくなる傾向を示した.以上から,小殿筋は前部線維と後部線維で異なった活動様式を呈することが示唆され,今後さらに詳細な検証を行っていく予定である.本研究では,股関節深部筋(小殿筋,梨状筋)にワイヤ電極を刺入し筋活動測定を行うが,股関節深部筋の筋活動を測定した先行研究は非常に少なく,ワイヤ電極の刺入法や刺入部位の決定など,実験手法の確立にやや時間を要した.ただ,電極の設置方法は概ね確立することができたため,次年度は対象者数を増やしてデータを収集することができる予定である.

本研究では,股関節深部に位置する小殿筋および梨状筋にワイヤ電極を刺入し,基本動作および股関節周囲筋エクササイズを行った際の筋活動を測定することにより,股関節深部筋を強化する有効なエクササイズ方法を明らかにすることを目的とした.被験者は健常成人男性12名とし,超音波画像ガイド下にて小殿筋前部線維,小殿筋後部線維,梨状筋にワイヤ電極を刺入した.大殿筋,中殿筋,大腿筋膜張筋,内腹斜筋,脊柱起立筋,多裂筋,外腹斜筋,腹直筋,大腿二頭筋,大腿直筋には表面電極を貼付した.反射マーカーを各ランドマークに貼付し,筋電図と同期処理を行った上で,実験試技の動作を三次元動作解析装置にて測定した.実験試技は,1股関節外転,2股関節伸展,3股関節外旋,4股関節内旋,(14の股関節運動は股関節角度を変えた様々なポジションで実施)5Back bridge,6四つ這い上下肢挙上(Hand-knee exercise),7歩行,8片脚立位,9スクワット,10ジャンプ&着地動作,などを行い,それぞれの試技を行った際の動作解析および筋活動測定を行った.現在,被験者12名中7名の解析を終えており,1股関節外転,2股関節伸展試技の結果をまとめたもの以下に示す.小殿筋(特に後部線維)の筋活動量は,股関節内旋位での股関節外転運動で他の股関節外転試技よりも大きくなる傾向を示し,中殿筋も同様の傾向を示した.一方,大腿筋膜張筋は股関節外旋位での股関節外転運動で筋活動量が大きくなり,小殿筋後部線維と拮抗関係にある可能性が示された.また,股関節伸展試技では,腹部引き込み(Draw-in)を伴った股関節伸展運動で梨状筋,小殿筋(後部線維),大殿筋の活動量が大きくなり,腹横筋と殿筋群は股関節伸展時に共働作用を持つ可能性が示唆された.本年度では,12名の被験者のデータを収集し,股関節外転および股関節伸展運動の試技において7名までの筋活動量データを解析することができた.今後,統計学的なパワー解析によって,被験者数が必要になればデータを追加する可能性があるが,おおむね必要なデータを収集することができた.さらに,一部のデータを利用して,今後の学会演題登録をすることができる状況であり,進捗状況はおおむね順調と言える.今後は対象者を増やしてデータを収集し,股関節深部筋の筋活動様式を明らかにし,股関節深部筋の強化に有効な運動療法を考案する.今後の課題として,本実験では動作および筋電図データを同期して測定しているが,両者をより詳細に解析できるソフトが必要になる.次年度の予算にてその解析ソフトを購入し,股関節深部筋活動と動作・アライメントとの関連を検証していく予定である.本実験結果は,国際腰椎学会や日本臨床スポーツ医学会など国内外の学会にて発表をし,随時投稿論文を執筆する予定である.今後は収集したデータを解析し,各エクササイズの小殿筋および梨状筋の筋活動量を算出することで,股関節深部筋強化に有効な運動療法を考案する.さらに,現在は筋活動量の比較だけを行っているが,今後は筋反応時間(onset)の算出や他の筋との協調性を表す筋シナジー解析を行い,より詳細に股関節深部筋機能の解明を行う予定である.解析における今後の課題として,本実験では動作および筋電データを同期して測定しているが,両者をより詳細に解析できるソフトや筋シナジー解析を行うことが可能なソフトが必要となる.次年度の予算にてその解析ソフトを購入し,股関節深部筋活動と動作・アライメントとの関連を検証していく予定である.本結果は,国際筋電生理学会や日本臨床スポーツ医学会など国内外の学会にて発表をし,随時投稿論文を執筆する予定である.実験手法の確立に時間を要し,十分な回数の本実験を行うことができなかったため.また,それに伴いデータ解析を行うことができず,データ解析用に組んでいた予算を使用することができなかったため.本年度はおもにデータ収集に時間を要し,詳細なデータ解析を行うことができず,解析用ソフトの購入が遅れたため.次年度の予算にて必要な解析をソフトを購入し,データ解析をおよび研究結果のまとめを行う予定である.
観客論的視点から見た英国エリザベス朝・ジェイムズ朝演劇のダブル・プロットの研究

本研究の目的は、英国エリザベス朝・ジェイムズ朝演劇における「ダブル・プロット構造」の審美的意義を、演劇と観客の相互作用の観点から実証的に解明することである。この研究目的に沿って、平成8年度は、英国エリザベス朝・ジェイムズ朝演劇に顕著に見られる複数のプロットの共存現象を、観客の演劇受容意識という枠組みを設定して分析する、という本研究の新しい見方を正当化するために必要な諸前提を、おもにこれまでの研究史を視野に入れながら検証した。本年度の研究によって新しく示された、あるいは確認された知見は、1,英国エリザベス朝・ジェイムズ朝演劇の「マルティプル・プロット構造」の審美的意匠としての正当性に対する近代批評の非難の歴史は、その原因が、演劇のプロットを構成する出来事の次元における因果論的整合性の欠如にあった、ということ、2,この出来事の次元における因果論的整合性の欠如はたしかに事実として存在し、この欠如の事態はわれわれの近代演劇的受容意識の観点からしても確かに異常な事態である、ということ、3,英国エリザベス朝・ジェイムズ朝演劇の観客には、演劇のプロットを構成する出来事の因果論的整合性の次元、あるいはさらに一般的には、演劇で起こる出来事のリアリズム(Realism)あるはミメ-シス(Mimesis)の次元とは異なる、作者の意識的アート(Art)の次元に反応しようとする受容意識があらかじめ備わっていて、まず第一に作者の側のアートに反応しようとするこのような受容意識意識は、近代演劇の受容意識とはかなり異質な受容意識である、ということ、以上の3点である。
哺乳期子牛における固形飼料の早期摂取が糞および尿中水分排泄に及ぼす影響とその原因

本研究は、人工哺育期の子牛において固形飼料の給与が水分出納および糞水分含量に及ぼす影響と、その原因を明らかにする目的で実施された。1.哺乳期間中の固形飼料(濃厚飼料とチモシー乾草)の給与は、給与後2週間以内に尿量の減少と、見かけの水分保持良(AWR)と糞中水分排泄量の増加、および糞水分含量の増加をもたらす。[実験1]2尿量の減少とAWRの増加は、主として尿細管における水の再吸収が促進されるためである。[実験2]3尿細管における水の再吸収の増加は、代用乳の給与量と固形飼料の摂取により抗利尿ホルモン(ADH)の分泌が促進されるためである。血漿中のADH濃度と酢酸および総ケトン体濃度との間には正の相関が存在する。[実験3]4.AWRと糞中水分排泄量は濃厚飼料の不断給与によって増加するが、粗飼料源である稲ワラには認められなかった[実験4]5.AWRの変化と糞水分含量の上昇は代用乳に加え、スターターとチモシー乾草を給与した場合の方が最も大きかった。水分保持量は可消化DMI、糞水分排泄量は糞DMとの間に高い相関が認められる[実験5]6.不断給与下での水分出納と糞水分含量はスターターと乾草の影響を受ける。制限給水下での代用乳と固形飼料給与蒔の尿量は、代用乳単独よりも減少する。しかしながら、不断給水下で固形飼料を給与した場合、尿量は代用乳単独と同程度であった。糞水分排泄量は糞DMよりはむしろ水分保持量との間に高い相関が存在する。以上の結果、ルーメン発酵がAWRと糞水分含量に影響を及ぼす主要因であることが示唆された。[実験6]7.しかし、酪酸のルーメン内注入は血漿ケトン体とADH濃度を増加させたが、ケトン体の静脈内注入では血漿ADH濃度を増加しなかった。[実験7,8]本研究は、人工哺育期の子牛において固形飼料の給与が水分出納および糞水分含量に及ぼす影響と、その原因を明らかにする目的で実施された。[実験7,8]試験1:約1週齢のホルスタイン種雄子牛20頭を体重と血漿γ-グロブリン濃度の平均値がほぼ等しくなるよう4区(LM-S1,LM-S3,HM-Sl,HM-S3)に分けた。LMおよびHMは代用乳200gl日または500g/日を半量ずつ1.8Lの温湯に懸濁して08:30時と16:30時にバケツから与えたことを意味し、S1およびS3は固形飼料(チモシー乾草と市販スターター)を1週目または3週目から不断給与したことを意味する。その結果、固形飼料摂取量が少ない1週目は代用乳給与量のみが水分出納に影響し、両HM区において尿量の減少と、糞中水分排泄および見かけの水分保持量AWRの増加が認められた。しかし糞水分含量は代用乳給与量の増加と固形飼料摂取の両方の要因により増加した。2週目はS′1区における固形飼料摂取量の増加により水分出納と糞水分含量は固形飼料の影響を強く受け、代用乳給与量の影響はAWRにのみ認められた。4週目は固形飼料のみが水分出納に影響したが、糞水分含量には両方の影響とも認められなくなった。試験2:1週齢子牛20頭を試験1と同様の4区に分け、2週目に糸球体濾過量(GFR)、尿細管からの水の再吸収率(RAWW)、およびEvans blueを指標として循環血漿量(CPV)を測定した。

なお、2週目はS3区には固形飼料が給与されていなかった。その結果、1日の尿量はLM-S3区:56.8mL/kg.HM-S3区:55.4mL/kgに対してLM-S1区:35.0mL/kg.HM-Sl区:38.9mL/kgと著しく減少した。代用乳給与量の増加と固形飼料摂取は共にGFRとCPVを増加させたが、RAWは固形飼料の摂取によってのみ右音に増加した(P<0.001).実験1:1週齢から代用乳(MR)を200g/日のみ給与したホルスタイン種雄子牛5頭と、1週齢からMR500g/日に加えて固形飼料(スターターと稲ワラ)を不断給与した子牛5頭を用い、2週目の後半5日間に両区1頭ずつ血漿浸透と血漿ADH、グルコース、尿素N、ケトン体、および酢酸濃度を経時的に測定した。その結果、血漿ADH濃度と血漿浸透圧、血漿グルコース、および血漿N濃度との間には有意な相関が認められなかったが、ADH濃度とケトン体および酢酸濃度との間には有意な正の相関が認められ(それぞれr=0.829およびr=0.740;P<・0.001)、ADH分泌とルーメン発酵との関連が示唆された。実験2:1週齢からMR500g/日のみを給与した子牛5頭、同量のMRに加えて濃厚飼料(スターター)を不断給与した5頭濃厚飼料とともに稲ワラを不断給与した5頭、および濃厚飼料とスーダングラス乾草を不断給与した5頭について、2週目の水分出納および糞水分含量を測定した。なお、MRの調製2用いた温湯以外の飲水は給与しなかった。その結果、水分出納の変化(尿量減少、水分保持と糞中水分排泄の増加)および糞水分含量の上昇はMR単独給与区に比べて濃厚飼料と乾草を給与した区で最も著しく、他の2区は両者の中間であった。糞中水分排泄量と糞乾物量との間には正の相関があった。実験3:1週齢からMR500g/日のみを給与し、飲水は与えなかった子牛6頭、同量のMRに加えて濃厚飼料とスーダングラス乾草を不断給与し、飲水は与えなかった子牛6頭と、飲水を自由に与えた6頭について比較した。その結果、飲水を与えない場合は尿量が減少する代わりに水分保持量や糞中水分排泄が増加したが、飲水を与えた場合は尿量の減少なしに水分保持量や糞中水分排泄が増加した。糞中水分排泄量は、糞乾物量よりむしろ水分保持量との相関が高く、細胞外液量との関連を示唆した。実験6:1週齢で導入し、朝夕代用乳のみを給与したホルスタイン種雄子牛5頭を用いて4週目に実施した(平均体重50.1kg)。試験前日の夕方は代用乳を給与せず、試験日の朝8:30時に代用乳350gを温湯2Lに懸濁して与え、給与後8hまで経時的に頚静脈血を採取した。血漿浸透圧は270281mmmol/kgの範囲内で、その変動傾向は血漿電解質(Na^+,Cl^-,K^+)、グルコース、および尿素濃度から推定した浸透圧の変動傾向とよく一致していた。実験7:1週齢で導入後、代用乳以外に濃厚飼料と稲ワラを不断給与したホルスタイン種雄子牛5頭を用いて4週目に実施した(平均体重62.7kg)。試験前日の夕刻は代用乳も固形飼料も与えず、試験日の朝8:30時に濃厚飼料のみ30分間与え、給与後8hまで頚静脈血および第一胃汁を採取した。血漿浸透圧は264299mmmol/kgと大きく変動し、その傾向は電解質、グルコース、および尿素濃度から推定した浸透圧の変動傾向と一致せず、特に飼料給与後2h以内は実測浸透圧が低かった。第一胃内VFA濃度は0.5および2.5hで最大となり、血漿総ケトン体濃度は0hにおける0.33mmol/Lをピークとして急激に減少した。実験8:1週齢で導入後、代用乳以外に濃厚飼料と稲ワラを不断給与したホルスタイン種雄子牛15頭を用い、4週目に5頭ずつ3区に分けて実施した(平均体重64.2kg)。
下垂体細胞・腺腫における分泌顆粒放出の分子機構に関する基礎的研究

Rab familyは低分子量GTP結合蛋白質であり、その中でもRab3は神経細胞や内分泌細胞に発現し、特に下垂体前葉細胞においては分泌顆粒の開口分泌に関与していると考えられている。今回我々は、正常ヒト下垂体および下垂体腺腫におけるRab3蛋白の発現を免疫組織化学(IHC)を用いて検討し、そのisoformであるRab3A,B,C,Dの中で特に下垂体細胞での発現が確認されているRab3A,Bに関してはRT-PCR法を用いて、そのmRNAの発現を検討した。平成10年度は主に、剖検にて得られた正常ヒト下垂体5例および下垂体腺腫114例を対象に、抗Rab3抗体用いIHCを施行した。また下垂体腺腫においては、免疫電顕(post-embedding法)にて細胞内局在もあわせて検討した。正常ヒト下垂体前葉細胞においてRab3は細胞質に顆粒状に陽性を示した。下垂体腺腫におけるRab3陽性例はGH産生腺腫22/22(100%)、PRL産生腺腫7/21(33.3%)、ACTH産生腺腫10/14(71.4%)、TSH産生腺腫4/7(57.1%)、非機能性腺腫28/50(56.0%)〔うちGonadotropin陽性例10/20(50.0%)〕であった。Rab3陽性を示した症例は免疫電顕において分泌顆粒の限界膜近傍での局在が確認された。以上よりヒト下垂体前葉細胞にRab3の発現が確認され、下垂体腺腫においては一般的に分泌顆粒の多いGH産生腺腫に高率に陽性を示し、免疫電顕の結果もふまえ分泌顆粒を介してのホルモン分泌制御に関与していることが示唆された(Mod Pathol 9(5):627-34,1999.)。平成11年度はこれらの症例を対象にRT-PCR法を用いてRab3A,B mRNAの発現を検討したが、GH産生腺腫においてはRab3Aが、Gonadotropin産生腺腫においては、Rab3B mRNAの発現が優位に認められ、腺腫の機能別にRab 3 isonformの発現に差異が認められた。【目的】Rab familyは低分子量GTP結合蛋白質であり、その中でもRab3は神経細胞や内分泌細胞に発現し、特に下垂体前葉細胞においては分泌顆粒の開口分泌に関与していると考えられている。今回我々は、正常ヒト下垂体および下垂体腺腫におけるRab3蛋白の発現を免疫組織化学(IHC)を用いて検討した。【方法】剖検にて得られた正常ヒト下垂体5例および下垂体腺腫114例に対し抗Rab3抗体用いIHCを施行した。【結果】正常ヒト下垂体前葉細胞においてRab3は細胞質に顆粒状に陽性を示した。【結論】ヒト下垂体前葉細胞にRab3の発現が確認された。下垂体腺腫においては一般的に分泌顆粒の多いGH産生腺腫に高率に陽性を示し、免疫電顕の結果もふまえ分泌顆粒を介してのホルモン分泌制御に関与していることが示唆された(以上の内容はMordern Pathologyに掲載予定である)。現在、Rab3にはRab3A,3B,3C,3Dという4種類のisoformが知られており、Rab3A,3Bの下垂体における発現が確認されている。今後それぞれのtypeの下垂体細胞・腺腫によってRab3 isoformの発現に差異が見られるかをRT-PCR、in situ hybridization法などを用いて検討する予定である。下垂体腺腫におけるRab

3陽性例はGH産生腺腫22/22(100%)、PRL産生腺腫7/21(33.3%)、ACTH産生腺腫10/14(71.4%)、TSH産生腺腫4/7(57.1%)、非機能性腺腫28/50(56.0%)〔うちGonadotropin陽性例10/20(50.0%)〕であった。Rab3陽性を示した症例は免疫電顕において分泌顆粒の限界膜近傍での局在が確認された。以上よりヒト下垂体前葉細胞にRab3の発現が確認され、下垂体腺腫においては一般的に分泌顆粒の多いGH産生腺腫に高率に陽性を示し、免疫電顕の結果もふまえ分泌顆粒を介してのホルモン分泌制御に関与していることが示唆された(Mod Pathol 9(5):627-34,1999.)。平成11年度はこれらの症例を対象にRT-PCR法を用いてRab3A,B mRNAの発現を検討したが、GH産生腺腫においてはRab3Aが、Gonadotropin産生腺腫においては、Rab3B mRNAの発現が優位に認められ、腺腫の機能別にRab 3 isonformの発現に差異が認められた。
保型表現の研究

Weil表現と概均質ベクトル空間の理論は,共に興味深い。それらは,いまだformalismとして完成していないというだけでなく,それらは,互に深く関連し合っていると思われるのである。正定値二次形式に附随するtheta級教はSiegel保型形式となるが,そのMaassのDirichlet級数は,Koecherのzeta関数である。ここで,二次形式のtheta級数は,rednctivedual pairとtheta核による保型形式のliftingの最も簡単な場合である。一方,Koecherのzeta関数は,概均質ベクトル空間に附随するzeta関数とみるのが自然である。このような現象は,一般のrednctive dual pairに対して成り立つ。そこで,次のクロスワ-ドパズルが解ける可能性がある;Weil表現?Fourier変換概均質ベクトル空間Weil表現と概均質ベクトル空間の理論は,共に興味深い。そこで,次のクロスワ-ドパズルが解ける可能性がある;Weil表現?Fourier変換概均質ベクトル空間
革新的肝硬変治療法の開発に向けた新規肝再生促進因子の作用機序解明

本研究は、所属研究室が独自に見出した新規の線維肝再生促進因子Opioid growthfactor receptor- like 1 (OGFRL1)について、申請者がこれまでに培ってきた細胞周期・増殖制御の研究に細胞分化の観点を加えた機能解析を行う。最終的には、相互作用因子やシグナル伝達系を明らかにすることで、OGFRL1による線維化改善と再生促進機序を解明し、次世代型肝硬変治療法の開発に向けた分子基盤の確立を目的としている。2年目の今年度は、主に以下の2点について達成した。1)複数系統のOGFRL1ノックアウトマウスを樹立した。マウスOgfrl1は7つのエクソンからなり、CRISPR/Cas9を用いて、第1エクソンと第6エクソンそれぞれに終止コドンが出現するようゲノム編集を行った。第1エクソン以降を欠損すると、Ogfrl1の保存領域も含めてほぼすべてのOGFRL1タンパク質が産生できなくなると予想された。一方、第6エクソン以降を欠損するとOgfrl1の保存領域までは転写・翻訳され、C末端側のアミノ酸を欠損することになり、より詳細な機能解析を行える可能性がある。第1エクソン、第6エクソン以降の欠損ともに複数系統のノックアウトマウスが得られ、現在は繁殖率の検討や表現型の観察を行っている。2)マウスOGFRL1をエクソソームに高効率に内包させるプラスミドを作製した。これをHEK293細胞に導入してOGFRL1を産生させた結果、cell lysate並びに培養上清中に分泌されたOGFRL1は、マウス血中に分泌される内因性のOGFRL1とサイズが異なることが明らかとなった。これは、内因性のOGFRL1が何らかの修飾を受けていることを示唆しており、次年度以降に内因性OGFRL1と相互作用するタンパク質の探索やリン酸化、糖鎖などの修飾についてMS解析などを予定している。H30年度の達成目標の1つであった、最新のゲノム編集技術であるEasi-CRISPR法を用いたOGFRL1ノックアウトマウスを樹立することが出来た。発生における機能や肝その他の臓器の傷害時におけるの機能解析のため、異なる編集を受けてOGFRL1がノックアウトされた複数系統を繁殖中である。順次、表現型の観察を行っている。また、マウスOGFRL1の培養細胞における産生系を確立し、既に作製していた抗マウスOGFRL1抗体の反応性をウェスタンブロット等により検証できた。今後も、in vivoとin vitroの両面から解析を進める。H29年度に樹立できたOGFRL1ノックアウトマウスを用いて、まずは個体における表現型を解析する。具体的には、繁殖率、胎仔の発生過程、肝傷害時などにおいて、野生型と比べてどのような差異があるか詳細に表現型を観察する。並行して、H29年度に確立したOGFRL1過剰産生系を用いてOGFRL1タンパク質を産生ならびに回収し、共免疫沈降法やGST pull-down法、質量分析法などを用いてOGFRL1と相互作用する因子の探索やOGFRL1自身の修飾の解析を行う。個体の表現型解析と種々の生化学的手法の組合わせにより、OGFRL1の肝再生における機能や作用機序を明らかにする。

順次、表現型の観察を行っている。また、マウスOGFRL1の培養細胞における産生系を確立し、既に作製していた抗マウスOGFRL1抗体の反応性をウェスタンブロット等により検証できた。本研究は、所属研究室が独自に見出した新規の線維肝再生促進因子Opioid growthfactor receptor- like 1 (OGFRL1)について、申請者がこれまでに培ってきた細胞周期・増殖制御の研究に細胞分化の観点を加えた機能解析を行う。最終的には、相互作用因子やシグナル伝達系を明らかにすることで、OGFRL1による線維化改善と再生促進機序を解明し、次世代型肝硬変治療法の開発に向けた分子基盤の確立を目的としている。初年度は、主に以下の2点について達成した。1)急性ならびに慢性傷害肝におけるOGFRL1の発現動態を明らかにした。まず、野生型マウスに四塩化炭素を単回投与した急性肝傷害モデル、6回投与した亜急性肝傷害モデル、30回反復投与した慢性肝傷害モデルを作製した。これらの肝組織からmRNAを抽出し、リアルタイムPCRによりOgfrl1のmRNA発現量を正常肝と比較したところ、急性、亜急性、慢性傷害肝ともに正常肝の50-70%程度まで発現量が低下していた。また、慢性障害肝に対して70%部分肝切除を行うと、Ogfrl1のmRNA発現量は更に低下することが明らかとなった。2)申請者らが作製した抗OGFRL1抗体を用いて前述の傷害肝組織に対して免疫組織染色を行い、肝組織内あるいは肝細胞内でのOGFRL1の局在を明らかにした。急性傷害肝では、壊死した中心静脈付近の細胞を取り囲む領域の肝実質細胞の細胞質内に、特徴的なドット状の局在が観察された。慢性障害肝では、線維束に沿った肝実質細胞の細胞質に、同様の特徴的なドット状の局在を認めた。更に、単回投与から48時間後の肝組織では分裂中の細胞の染色体上にOGFRL1が観察されたことから、染色体の複製または分配など細胞周期の進行に寄与する可能性が示唆された。生理的状態下ならびに線維化の進展や線維肝の再生に伴う肝組織中のOGFRL1の発現動態を、リアルタイムPCRや免疫組織染色により明らかにした。またこれらと並行して、2年目以降の解析に使用できるよう、最新のゲノム編集技術であるEasi-CRISPR法を用いた複数系統のOGFRL1ノックアウトマウスの樹立も進めている。今後も、in vivoとin vitroの両面から解析を進める。H29年度に樹立できたOGFRL1ノックアウトマウスを用いて、まずは個体における表現型を解析する。具体的には、繁殖率、胎仔の発生過程、肝傷害時などにおいて、野生型と比べてどのような差異があるか詳細に表現型を観察する。並行して、H29年度に確立したOGFRL1過剰産生系を用いてOGFRL1タンパク質を産生ならびに回収し、共免疫沈降法やGST pull-down法、質量分析法などを用いてOGFRL1と相互作用する因子の探索やOGFRL1自身の修飾の解析を行う。個体の表現型解析と種々の生化学的手法の組合わせにより、OGFRL1の肝再生における機能や作用機序を明らかにする。