hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
固形腫瘍の早期発見・増殖能診断を目的としたσ-2受容体イメージング剤の開発研究

シグマ(σ)-2受容体は,乳がんや膵がんなど多種の固形腫瘍細胞において発現が見られ,特に増殖期では静止期と比べ,最大10倍のσ-2受容体が過剰発現していることが明らかにされている.即ち,σ-2受容体は増殖期の固形腫瘍細胞の重要なバイオマーカーであり,σ-2受容体イメージングは,がんの早期発見や増殖能診断に有効な手段となる可能性を意味している.本研究において開発した[125I]PIDVは,in vitro及びin vivoにおいて優れたσ-2受容体集積能を示し、また[123I]PIDVをヒト乳腺癌細胞MCF-7担癌マウスに投与し、SPECTによるσ-2受容体イメージングに成功した。固形腫瘍の早期発見・増殖能診断の手法を構築することを目的として、SPECT並びにPET用の新規放射性σ-2受容体イメージング剤の開発研究に取り組んでいる。本研究で最も重要な鍵となるのは、高親和性や高選択性を有する新規σ-2受容体リガンドの創製である。本採択課題までに、新規vesamicol類縁体p-iodo-trans-decalinvesamicol (PIDV)を合成し、in vitroにおいて、PIDVがσ-2受容体に対して高い親和性と選択性を示すことを明らかにしている。本年度は、放射性ヨウ素標識したPIDVと腫瘍細胞を用いて、in vitro及びin vivoにおけるPIDVの評価を行った。放射性ヨウ素標識は、o-trimethylstannyl-trans-decalinvesamicol(OTDV)を前駆体に用いて、一般的なスズ-ヨウ素交換反応による125I標識合成に成功した。次に、乳腺癌細胞MCF-7、及びヒト悪性黒色腫細胞A375を用いて、[125I]PIDVの細胞内取込実験を行った。その結果、MCF-7及びA375のいずれの腫瘍細胞においても、control群は高い[125I]PIDV細胞内取込量を示し、また、阻害剤haloperidolによって強く阻害されることが明らかになった。また、in vivo体内分布実験では、MCF-7及びA375のいずれの腫瘍細胞においても、腫瘍細胞に高い集積を示した。従って、放射性ヨウ素標識したPIDVが、σ-2受容体イメージング剤として高い可能性を有することを明らかにした。昨年度までに、新規vesamicol類縁体p-iodo-trans-decalinvesamicol (PIDV)がin vitro及びin vivoにおいて高いσ-2受容体親和性・選択性を有することを明らかにした。今年度は、σ-2受容体に対する親和性・選択性の向上を目的として、各種双環性構造を有する新規vesamicol類縁体群を合成し、in vitro評価を行った。PIDVをリード化合物として、4-フェニルピペリジン部とシクロヘキサン部から成るvesamicol骨格を堅持し、パラ位にハロゲンを有する立体配置が各々異なるbicyclo[4.1.0]/[4.2.0]/[4.3.0]骨格を有する12種のvesamicol類縁体群をデザインし、有機合成を行った。合成した新規化合物を阻害剤(10種の濃度)として用い、標的部位とラジオリガンドの結合に対する阻害効果を調べるin vitro薬物阻害実験を行った。VAChTに対する親和性は、ラット脳ホモジネートと(-)-[3H]vesamicolを、またσ受容体(σ-1/σ-2)に対する親和性は、ラット脳/肝ホモジネートと(+)-[3H]pentazocine/[3H]DTGを用いた。In vitro薬物阻害実験の結果、ベンゼン環上パラ位にブロモ基を有するvesamicol類縁体群はいずれも高いσ-2受容体親和性を示し、中でもbicyclo[4.2.0]骨格を有するPBcOVがvesamicolと比べて40倍以上の高いσ-2受容体親和性を示した。一方、双環性構造が大きくなるに従ってσ-1受容体親和性が下がる傾向が見られ、双環性構造の脂溶性・サイズの選択がσ-2受容体選択性向上において重要であることが明らかとなった。PIDVをリード化合物とした12種の高選択的σ-2受容体リガンドの合成を行ったことで、研究の選択肢が大幅に多くなった。また、in vitro評価の結果により、これまで全く情報がなかったσ-2受容体における構造活性相関の傾向が分かってきたのは、非常に大きな成果だと考えられる。また、σ-2受容体に対する親和性・選択性の向上を目的として、各種双環性構造を有する新規vesamicol類縁体群を合成し、in vitro評価を行った結果、PIDVのσ-2受容体親和性・選択性が最も高いことが分かった。最終年度である今年度は、1)パラ位にブロモを有し、vesamicolの6員環部を58員環に変換したvesamicol類縁体群を有機合成し、それらを阻害剤(10種の濃度)として用いたin vitro薬物阻害実験、及び2) SPECT用核種123Iで標識した[123I]PIDVを担癌マウスに投与し、SPECT-CTで撮像するσ-2受容体イメージング実験を行った。

1)In vitro薬物阻害実験の結果、58員環及びベンゼン環上パラ位にブロモを有するvesamicol類縁体群はいずれもvesamicolと比べて416倍高いσ-2受容体親和性を示した一方、σ-1受容体親和性も高く、選択性が全く現れないことが分かった。2)ヒト乳腺癌細胞MCF-7をヌードマウスに移植し、担癌マウスを作成した。また、OTDVを前駆体に用いて一般的なスズ-ヨウ素交換反応による123Iによる標識合成を行い、[123I]PIDVを得た。[123I]PIDVをヌードマウスに投与4時間後、腫瘍細胞へのトレーサー集積が認められ、[123I]PIDVのσ-2受容体イメージング剤としての可能性が示されたと考えている。シグマ(σ)-2受容体は,乳がんや膵がんなど多種の固形腫瘍細胞において発現が見られ,特に増殖期では静止期と比べ,最大10倍のσ-2受容体が過剰発現していることが明らかにされている.即ち,σ-2受容体は増殖期の固形腫瘍細胞の重要なバイオマーカーであり,σ-2受容体イメージングは,がんの早期発見や増殖能診断に有効な手段となる可能性を意味している.本研究において開発した[125I]PIDVは,in vitro及びin vivoにおいて優れたσ-2受容体集積能を示し、また[123I]PIDVをヒト乳腺癌細胞MCF-7担癌マウスに投与し、SPECTによるσ-2受容体イメージングに成功した。本研究の土台となるべきリード化合物PIDVのσ-2受容体イメージング剤としての可能性を明らかにしたことは非常に重要である。この知見を基にして、今後の研究を発展させることが可能になったので、研究の第一段階での成果は順調に得られていると判断している。放射性ヨウ素標識したPIDVのσ-2受容体イメージング剤としての評価を更に進める。また、これまでに分かってきた構造活性相関の傾向を基にして、σ-2受容体親和性・選択性の更なる向上を目的とし、PIDVの化学構造を基にした構造最適化を検討していく。分子イメージングσ-2受容体親和性・選択性の更なる向上を目的とし、PIDVの化学構造を基にした構造最適化を検討していく。新規デザイン化合物群を有機合成した後、それらのin vitroスクリーニングを行う。その結果に基づき、腫瘍細胞を用いた評価を行うか、もしくは更なる化合物構造の最適化を検討するかを判断する。腫瘍細胞の培養や担癌マウスの作成に必要な器具や消耗品の使用期限の管理を理由として、購入時期が次年度になった為。細胞培養等実験に必要な器具や消耗品の使用期限の管理を理由として、それらの購入時期が次年度になった為。腫瘍細胞の培養や担癌マウスの作成、新たなσ-2受容体イメージング剤候補化合物群の合成に必要な動物、器具、試薬、アイソトープ試薬、消耗品の購入を予定している。また、研究成果の発表や情報収集を目的にした学会出張による旅費や、学術論文の準備に必要な経費の支出も予定している。担癌マウスの準備などin vivo評価に必要な動物や腫瘍細胞、器具、消耗品などの購入や、有機合成に要する試薬の購入を計画している。
止水性種からみたボルネオ産両生類多様性の起源

止水産卵性種からみたボルネオ産両生類多様性の起源を探るため、ボルネオ島と、その周辺地域についての野外調査・標本調査を行い、形態・音声・分子に基づく系統分類学的な解析を行った結果、アオガエル科、ヒメアマガエル科の一部で高度の固有性が認められたものの、総体的にはボルネオ産の止水性両生類種は流水性種ほどの分化を示さないことが分かった。これはボルネオ島が本来、山地森林に被われていて、低地性の止水性種の生息に適した範囲が限られたためであろう。数少ない固有種は古い時代の侵入者と思われるが、それらの近縁種はスマトラ-ジャワに見られることから、大陸からスンダ地域へ古い時期の進出には2経路あったと推定される。ヒメアマガエル亜科Microhylinaeの大多数の属と種についてミトコンドリアDNAの塩基配列情報を用いて分子系統学的な調査を行った。その結果、ヒメアマガエル亜科はチョボグチガエル亜科Kalophryninaeと大きく異なるものの、その単系統性は支持されず、系統関係が不明で分化が進んだ4群が認められた。また、PhrynellaはMetaphrynellaと姉妹群をなすこと、Gastrophrynoidesはパプアーオーストラリア区のパプアヒメアマガエル亜科Asterophryinaeに含まれることが明らかになった。ヒメアマガエル属Microhylaは多系統で、多くの未記載種を含むことも分かった。最近マレーシア領サラワク州から新種記載されたヒメアマガエル属の一種M.nepenthicolaがM.borneensisのジュニアシノニムであることを示すとともに、従来M.borneensisと考えられて来た種が未記載種であることを総合的な手法によって解明し、新種記載した。また、チョボグチガエル属Kalophrynusでは、ボルネオ島のマレーシア領サラワク州と、マレー半島の南部とから、それぞれ1種の未記載種の存在を音声学的、遺伝学的、形態学的に証明し、それぞれを新種として記載発表した。次に、コノハガエル科Megophryidaeでは、ボルネオ島産ウデナガガエル属Leptobrachiumの2種L.montanumとL.abbottiについて、ミトコンドリアDNAの塩基配列の比較を行い、従来、両種の識別形質とされていた腹部の斑紋の有無は有効ではないことを分子遺伝学的に示した。その結果、模様のパターンでは識別されない複数の隠蔽種が両種内に含まれていることが明らかになり、ボルネオ島における本属の分類は大きく見直されるべきことが分かった。ボルネオ固有のヒメアマガエルの調査過程で、それとの関連性が示唆されていたインドネシアのバリ島産のヒメアマガエルを新種記載した。これらの近縁種はマレー半島に分布し、スマトラ、ジャワにも分布するらしい。このことから、半島起源の系統が一部はボルネオへ、もう一部はスマトラ、ジャワ経由でバリに至り、それぞれの地域で分化したと推定される。アオガエル科については昨年度に研究を終えたトビガエルを新種記載したが、この種と同時に採集された小型のアオガエルは、遺伝的解析からハイイロモリガエル属であることが判明した。この属はアフリカとアジアに分断分布するが、アジアではこれまで大陸部のみから報告され、島嶼部の記録はなかった。詳細な形態比較の結果、これも独立種であることが判明したので、新種記載した。この種のボルネオ島での分布はきわめて限定的であると同時に、この属は大陸でもマレー半島部にはほとんど分布しない、これらの事実から、ボルネオ産は遺存的分布と推定される。昨年度までの調査から、カブトシロアゴガエルはシロアゴガエル類の系統の根幹部に位置し、ボルネオ島に古くから定着した要素と考えられた。そこで近隣のスマトラ島産を調査したところ、ボルネオ産との間に大きな遺伝的、形態的差異が認められたので新種記載した。新種はジャワにも分布するので、カブトシロアゴガエル類はヒメアマガエルと同様の経路で分化した可能性がある。ボルネオ産両生類のなかで、止水産卵性のものは流水性産卵性にくらべて多様性が著しく低く、とくに他所で多様化しているアカガエル科では固有種はおらず、周辺地域産との遺伝的分化の程度も低い。一方、ヒメアマガエル科とアオガエル科では固有種が見られ、ボルネオ産止水性種の進化を知るうえで重要な要素であることが分かった。シロアゴガエルはボルネオをはじめ、東南アジアのほぼ全域から知られるが、その内部での分類、系統には定説がなかった。そこで、分布域の大半から得られた多数個体について、ミトコンドリアおよび核DNAの遺伝解析をし、系統関係を明らかにし、その結果に基づいて分類についても示唆した。

ボルネオ産は1種のみから成るが、近隣地域産と遺伝的に近く、たぶん人為分散も加わった結果、遺伝的に若干異なる数系統を含むことが分かった。近隣地域産との遺伝的分化の程度からみて、本種は止水性種の中では新しくボルネオに侵入した要素といえる。一方、同時に調査されたカブトシロアゴガエルは、シロアゴガエル類の系統中、根幹部に位置し、ボルネオ島に古くから定着した要素と考えられた。一方、トビガエルのうち、ボルネオ産はジャワ産と同一種とされていた。しかし、形態を詳細に調査し、ミトコンドリアDNAの遺伝解析をした結果、ベトナム産やマレー半島産で、近年ジャワ産から独立種として分離された数種同様にジャワ産から離れていることが判明したので、これを別種と判断した。このトビガエルはボルネオ島固有の要素であるが、遺伝的分化程度から見た場合、シロアゴガエルとカブトシロアゴガエルの中間の年代に周辺地域産から分化したと推定される。ボルネオ産の止水産卵性両生類相の成立を考えるとき、マレー半島との間に位置するスマトラの両生類相も鍵となる。スマトラから発見されたアカガエル科の1種は、ボルネオに分布するバラムガエルやオオイボガエルに近いが、形態的にも遺伝的にもまったく異なることを見出し、新種記載した。また、シロアゴガエル同様に、東南アジア産のヌマガエルは未だに広範な地域内での分類が確立していない。分類解明の一環として分布域最西部のインド北東部産を調べ、形態学的、音声学的に特異な独立種として新種記載した。多くの未解決の分類学的な問題を抱えていた東南アジアのヒメアマガエル科の系統関係を、ボルネオを中心とした多くの材料を用いて調査したことの成果は大きい。特にGastrophrynoidesがパプアーオーストラリア区のパプアヒメアマガエル亜科に含まれることは予期されなかった事実で、生物地理学的にも興味深い結果である。ボルネオとその周辺の両生類の生物地理や多様性形成史を考える上で大変重要な成果となったと言える。またヒメアマガエル属が単系統にならず、かつ多くの未記載種を含む可能性があることを示したことは、今後の本属の分類の見直しや、ボルネオを含む東南・東アジアにおける生物地理を考える上でも非常に重要な結果であると考えられる。25年度が最終年度であるため、記入しない。古くから研究されていたにも関わらず、多くの未解決の分類学的な問題を抱えていたシロアゴガエルについて一定の結論を得たことの意義は大きい。同じボルネオ島内に生息する3種のシロアゴガエル属のなかで、カブトシロアゴガエル、クロミミシロアゴガエル、シロアゴガエルは分布パターンが異なるが、遺伝的種内分化の程度と、それから推定される分化年代が大きく異なること、シロアゴガエルでは現在の分布に人為分散が影響していることなど、本研究によって、ボルネオ産止水産卵性両生類の進化を考えるうえで重要な系統生物地理学的知見が得られたと考える。一方、ボルネオ産両生類のなかで、これまで近隣地域産と同種とされてきた両生類はすべて再検討の必要がある。この観点からトビガエルを調査したところ、ボルネオ産はジャワ産と別の独立種であることが分かった。この結果は近年目覚ましい勢いで報告されている隠蔽種の発見であり、多様とされてきたボルネオ島の両生類相の解明が未だ不十分であることを示すものとなった。なお、この研究に用いた標本は、かつて科学研究費による調査の際に採集され、現地サバ州の大学に保管されているもので、今回短期滞在することによって調査が可能になった。
乳幼児突然死症候群の成因に関する遺伝的、分子病理学的研究

乳幼児突然死症候群(SIDS)は生後2から4ヶ月に好発し、睡眠中に起こる。その原因は未だに不明であるが、睡眠中の呼吸循環の神経性調節機構の発達における異常や未熟性などが発生機序として考えられている。本邦でも、SIDSの登録が開始され、全国各地からSIDS脳が送られてくるようになってきた。今まで、脳幹における呼吸中枢の発達と異常を検討し、脳幹に反応性アストロサイトが多いこと、シナプスの発達が遅れていること、サブスタンスPが増加していること、およびカテコラミン作動性神経細胞が減少していることを報告してきた。カテコラミン作動性神経細胞の線維は基底核でも低下した症例が有意に多く、SIDSの素因となっていると考えられた。また、SIDS患児では、セロトニン作動性神経細胞も中脳から延髄の脳幹の呼吸関連中枢で減少していたが、セロトニン受容体は延髄呼吸中枢では減少し、上位中枢の中脳灰白質では増加ししていることが多く、カテコラミン異常に加えて、セロトニンによる発達的呼吸循環調節異常が示唆された。特に、中脳の中心灰白質では、セロトニン作動性神経細胞の減少とセロトニン受容体の増加という異常所見は特異的であった。一方、共同研究を遂行するために、シドニー大学を訪問し、SIDS脳の研究標本作成を見学し、分子病理学的な共同研究の具体案を作成した。シドニー大学のパンフレット教授を招へいし、うつぶせねに際しての頚部屈曲時の椎骨動脈の狭小化による脳幹血流減少と脳幹グリオーシスには関係があることを検討した。また、カナダのトロントと米国のヒューストンでは、今までの研究成果を討論し、小児神経学会で成果発表を行った。乳幼児突然死症候群(SIDS)は生後2から4ヵ月に好発し、睡眠中に起きる。今まで、脳幹における呼吸中枢の発達と異常を検討し、脳幹に反応性アストロサイトが多いこと、シナプスの発達が遅れていること、サブスタンスPが増加していること、およびカテコラミン作動性神経細胞が減少していることを報告したきた。今回、SIDS患児脳の基底核・間脳において、カテコラミン作働性神経の発現を免疫組織化学的に検討した。SIDS患児脳の基底核・間脳において、カテコラミン作働性神経の発現を免疫組織化学的方法を用いて検討した。Tyrosine hydroxylase(TH)陽性細胞・線維は基底核、線状体黒質・淡蒼球黒質線維に認められ、淡蒼球では新生児期にすでに陽性線維を認め、2カ月で強陽性が見られ始め、4カ月より全例陽性、強陽性線維が認められた。SIDSでは、淡蒼球と線条体では新生児期にすでに軽度陽性に認められたが、2カ月以後も弱陽性のものが多く、統計的に有意であった。SIDSでは、脳幹のみならず基底核にも、カテコラミン作動性神経の発現低下があり、SIDS発生の素因となっていると考えられた。一方、シドニー大学を訪問し、SIDS脳の標本作製を見学し、分子病理学的な共同研究の具体案を作製した。シドニー大学のパンフレット教授を招へいし、うつ伏せ寝に際しての頸部屈曲時の椎骨動脈の狭小化による脳幹血流減少と脳幹グリオーシスには関係があることを討論した。

本邦でも、SIDSの登録が開始され、全国各地からSIDS脳が送られてくるようになってきた。今まで、脳幹における呼吸中枢の発達と異常を検討し、脳幹に反応性アストロサイトが多いこと、シナプスの発達が遅れていること、サブスタンスPが増加していること、およびカテコラミン作動性神経細胞が減少していることを報告してきた。カテコラミン作動性神経細胞の線維は基底核でも低下した症例が有意に多く、SIDSの素因となっていると考えられた。また、SIDS患児では、セロトニン作動性神経細胞も中脳から延髄の脳幹の呼吸関連中枢で減少していたが、セロトニン受容体は延髄呼吸中枢では減少し、上位中枢の中脳灰白質では増加ししていることが多く、カテコラミン異常に加えて、セロトニンによる発達的呼吸循環調節異常が示唆された。特に、中脳の中心灰白質では、セロトニン作動性神経細胞の減少とセロトニン受容体の増加という異常所見は特異的であった。一方、共同研究を遂行するために、シドニー大学を訪問し、SIDS脳の研究標本作成を見学し、分子病理学的な共同研究の具体案を作成した。シドニー大学のパンフレット教授を招へいし、うつぶせねに際しての頚部屈曲時の椎骨動脈の狭小化による脳幹血流減少と脳幹グリオーシスには関係があることを検討した。また、カナダのトロントと米国のヒューストンでは、今までの研究成果を討論し、小児神経学会で成果発表を行った。
マイクロ角度センサアレイを用いた微小癌触診用小型硬さ分布測定プローブの開発

本研究は,大腸等の管状器官に挿入,あるいは内視鏡と共に生体内に送り込み,管内壁や内臓器官に存在するサブmmから数mmオーダの微小癌検出を簡単かつ確実に行うため,ゴム膜を膨らませたバルーン型プローブを生体軟組織に押し込み,その変形を光学的に捉えることで面内の硬さ分布を測定し,微小癌等を検出する手法を提案するものである.今年度の研究成果は以下の通りである1.硬度変化部の検出感度を上げるため,押し込み方向に対してCCDカメラを傾けて設置することによりマイクロセンサアレイを実現する方法を提案した.実験により,提案手法によって異物の大きさや固さの大小関係を判別できると同時に,従来の押し込み方向から観察する手法に比べ感度が向上することを示した.また,このプローブによるXY方向測定範囲,深さ方向の測定可能範囲等の基礎特性を実験により明らかにした.2.CCDカメラにビデオ出力ができるものを用い,押し込み過程における変位を連続的に取得できるようにシステムおよびプログラムを改良した.これにより埋め込み物の深さ情報に関連があると考えられる押し込み時の過渡状態の取得を可能とした.3.ゴム膜上のパターンパターン無しに,7×7個のマルチビーム生成プロジェクターヘッドと光三角法を用いることにより,当初の目的であるマルチビームによる多点の同時変位検出および硬度変化部検出実験を行った.その結果,各ビームスポット軸上の多点のプローブ変位を同時に取得でき,校正によりZ軸方向の絶対移動量検出が可能であることを示した.また,本手法は従来の押し込み方向から印刷パターン変位を観察する方法に比べてZ軸方向変位検出分解能が向上することを示した.本研究は,大腸等の管状器官に挿入,あるいは内視鏡と共に生体内に送り込み,管内壁や内臓器官に存在する存在するサブmmから数mmオーダの微小癌検出を簡単かつ確実に行うため,ゴム膜を膨らませたバルーン型プローブを生体軟組織に押し込み,その変形を光学的に捉えることで面内の硬さ分布を測定し,微小癌等を検出する手法を提案するものである.今年度の研究成果は以下の通りである(1)平面状の試料測定のため,ゴム膜に移動量検出用の格子状のパターンを描き,エアで半球状に膨らませるバルーン型プローブの設計・試作を行った.(2)角度センサアレイ出力から反射光を追跡するためのプログラムの前段階として,CCDカメラの出力画像からプローブ上に描かれた格子点の移動を追跡するプログラムを作成した.(3)スポンジ中に直径5mm程度のスチール球やスポンジゴム球などを埋め込み,生体内に硬度の異なる部分が存在する状態を模した試料を作成し,硬度分布測定実験を行った.その結果,バルーン型プローブを押し込んだ際の変形を光学的に捉える手法により模擬試料中の異物の存在を検出できることを示した.また,埋め込み異物の直径の違い,異物の深さまたは硬さを検出できることを示した.(4)スポンジゴム中に直径2mmのスチール球を複数埋め込んだ生体模擬試料を作成し,バルーン型プローブによる異物の検出実験を行ったところ,測定面内の複数異物を独立して同時に検出できること,およびその配置を正確に把握できることを確認した.(5)角度センサアレイ製作の準備として,多素子型フォトダイオードの設計と試作を行った.本研究は,大腸等の管状器官に挿入,あるいは内視鏡と共に生体内に送り込み,管内壁や内臓器官に存在するサブmmから数mmオーダの微小癌検出を簡単かつ確実に行うため,ゴム膜を膨らませたバルーン型プローブを生体軟組織に押し込み,その変形を光学的に捉えることで面内の硬さ分布を測定し,微小癌等を検出する手法を提案するものである.今年度の研究成果は以下の通りである1.硬度変化部の検出感度を上げるため,押し込み方向に対してCCDカメラを傾けて設置することによりマイクロセンサアレイを実現する方法を提案した.実験により,提案手法によって異物の大きさや固さの大小関係を判別できると同時に,従来の押し込み方向から観察する手法に比べ感度が向上することを示した.また,このプローブによるXY方向測定範囲,深さ方向の測定可能範囲等の基礎特性を実験により明らかにした.2.CCDカメラにビデオ出力ができるものを用い,押し込み過程における変位を連続的に取得できるようにシステムおよびプログラムを改良した.これにより埋め込み物の深さ情報に関連があると考えられる押し込み時の過渡状態の取得を可能とした.3.ゴム膜上のパターンパターン無しに,7×7個のマルチビーム生成プロジェクターヘッドと光三角法を用いることにより,当初の目的であるマルチビームによる多点の同時変位検出および硬度変化部検出実験を行った.その結果,各ビームスポット軸上の多点のプローブ変位を同時に取得でき,校正によりZ軸方向の絶対移動量検出が可能であることを示した.また,本手法は従来の押し込み方向から印刷パターン変位を観察する方法に比べてZ軸方向変位検出分解能が向上することを示した.
機能的磁気共鳴画像に基づく嗜好の解読と社会的要因操作

本研究課題「機能的磁気共鳴画像に基づく嗜好の解読と社会的要因操作」では,権威のある他者集団による批判的意見などの社会的要因が,特定個人の選好に与える影響を明らかにすることを目的とした.ここで,批判的意見を異性集団による反対意見とし,男性被験者を対象として,女性集団意見や男性集団意見を与えた時の反応について調査することとした.ネガティブな集団意見の際,権威的な他者集団意見と権威のない他者集団意見の脳の賦活部位の調査により,前頭極皮質の脳の活動パターンが,他者集団意見の権威の度合いに対する評価を反映している可能性があることが示唆された.本研究課題においては,機能的磁気共鳴画像によりヒトの脳を走査し,選好時の嗜好に関わる脳部位を特定し,その脳情報を分析することが目的です.さらに,嗜好の操作が可能であるか検証を行うため,社会的な要因を導入し,これを操作することによる脳活動の変化を調査することを目的としています.特に,1年目には,基礎的な検討として,画像を被験者に提示し,その画像コンテンツに対する嗜好(快・不快・中立)の程度について調査することを目標としていました.この際,前述の社会的要因は当初からまだ導入しない予定でした.画像コンテンツ群としては,研究用の画像データベース(IAPS)を利用しました.被験者15名(男性8名,女性7名)に対して,感情刺激画像コンテンツを提示した際の機能的磁気共鳴画像データを収集し,統計的に分析を行いました.ここで,次年度に他者の意見などの社会的要因を操作することによる嗜好の変化について検証することを想定し,前段階の基礎データとして,感情刺激画像の背景色を変更した場合の嗜好の変化について詳細に調査しました.その結果,嗜好に関する脳部位を特定し,また,背景色により嗜好に関する脳部位の賦活において有意差が見られ,嗜好が背景色に影響を受け,操作できる可能性が示唆されました.ただし,得られたのは脳機能における有意差であり,画像に対するアンケート結果については背景色を変更してもなんら変化は現れなかったため,今後十分な考察が必要と考えられます.また,当初の予定では,嗜好の種類,つまり画像から快・不快感情のいずれを持ったかについて,脳情報から判別することを検討していましたが,この分析までにはまだ至っていないため,今後の研究の進展が望まれます.現時点で,研究進捗はやや遅れていると考えられます.理由としては,脳情報を用いた嗜好の判別に関する解析ができなかったことが挙げられます.その他,画像提示実験の実施,その解析などの進捗については,おおむね予定通りであり,2年目の研究において十分に計画を遂行したい考えです.一方で,背景色を変更することによる嗜好の変化については,実験を前倒しして実施しており,予定外ですが進捗のあった点となります.近年,機能的磁気共鳴画像法により消費者を想定したヒトの脳全体を走査し,選好時の嗜好に関わる脳部位を特定,脳情報を解読する研究成果が待たれている.本研究課題「機能的磁気共鳴画像に基づく嗜好の解読と社会的要因操作」では,ヒトが見た画像に対する嗜好性を脳情報から解読する技術を確立することを目指すこととした.特に他者集団による批判的意見などの社会的要因が,特定個人の選好に与える影響を明らかにすることを目的とした.実験では,3T-fMRIを用いてヒトの選好結果に対する他者集団の意見の提示時の社会的要因の操作によって,その後の嗜好性に変化が起こり得ることについて実証することを試みた.多種の商品画像刺激提示時の複数の被験者の全頭を走査し,得られたfMRIデータに基づき,好き嫌いを判断するなどの選好時の脳の活動部位を,統計的手法を用いて特定した.特に男性被験者を対象として,女性集団からの意見(社会的要因)によって,男性が自分自身の選好を変えるかどうかについて確認したところ,一部の被験者において,社会的要因による選好の操作が可能であることが明らかとなった.またその際の脳の賦活部位は前頭極皮質(FPC)であることが特定できた.これよりFPCにおいては,自分自身の意見の再評価に関わっていると考えられる.しかしながら被験者数が少ないという問題が残っているため,今後の実験によってより多くの被験者データでの分析が必要となっている.一方で脳波・視線を同時に計測可能なシステムの構築については,これを試みたものの,機器の連続故障や得られたデータのノイズの除去が困難であったため,実現しなかった.また,多次元ボクセルパターン解析については実装段階であり,研究期間内には実現していないことについても併せて報告しておきたい.以上の成果については,本執筆現在,IEEE国際会議の論文として投稿済みである.本研究課題「機能的磁気共鳴画像に基づく嗜好の解読と社会的要因操作」では,権威のある他者集団による批判的意見などの社会的要因が,特定個人の選好に与える影響を明らかにすることを目的とした.ここで,批判的意見を異性集団による反対意見とし,男性被験者を対象として,女性集団意見や男性集団意見を与えた時の反応について調査することとした.ネガティブな集団意見の際,権威的な他者集団意見と権威のない他者集団意見の脳の賦活部位の調査により,前頭極皮質の脳の活動パターンが,他者集団意見の権威の度合いに対する評価を反映している可能性があることが示唆された.今後の研究においては,計画通り2年目において社会的要因の導入を行います.具体的には他者個人の意見や集団の意見の提示により,被験者の嗜好が変化するか,その際の脳機能計測結果について詳細に論じる予定です.また,1年目の計画に盛り込んでいた脳情報の判別も行い,ニューロマーケティング分野に資する研究成果を得ることも引き続き目標とします.生体情報工学

おもな理由は,当初予定よりも実験回数が少なくなったことが挙げられます.この要因として,解析手法の確立に時間を要したこと,さらに一部機器の故障による修理の必要性が出たことなどです.次年度使用額については,その金額を機器の修理費に充当するべく繰越をいたしました.上記のように,機器の修理費用に充当し,実験環境を整備した上で研究を継続します.2017年5月現在,修理が完了しており,研究の推進には問題はありません.また,その他の予算については,計画通り旅費や被験者謝金として支払うことに利用します.
戦時・戦後復興期の民営鉄道－経営の多様性－

本研究の課題は、戦時体制期から戦後復興期にかけての日本の民営鉄道(私鉄)について、新資料の発掘・利用をともなった実証的考察を行い、これまで国有鉄道(国鉄)中心の概説にとどまりがちであったこの時期の鉄道史に、新たな視点を提起することにある。当該期における民営鉄道事業者の行動と論理を丹念に読み解き、より幅広い視野から日本における鉄道業の戦時と戦後をつなぐダイナミズムを明らかにすることを目的としている。今年度は対象となる史料がほぼ絞り込めたことを受け、調査ならびに収集作業をさらに本格化させた。基本史料となる鉄道博物館所蔵の鉄道省文書、国立公文書館所蔵の旧運輸省所蔵文書、長崎県立長崎図書館所蔵の植木家文書、そして継続的に取り組んでいる青梅市郷土博物館所蔵の青梅電気鉄道文書がその中心となった。同文書については、年間を通じて月に12回のペースで調査・収集を行ったが、膨大なコレクションであり、取扱いにも慎重を要する保存状態でもあるため、史料の中身を1点ずつ確認して撮影していく地道な作業を続けている。2017年10月に政治経済学・経済史学会秋季学術大会で発表した「復興期における戦時買収私鉄払下げ運動ー青梅電気鉄道の事例ー」の内容をさらにブラッシュアップさせる史料についても補足調査や追加収集を実施した。元帳あるいは原票の形態をとる一次史料のため、整理のためのデータ入力・確認が不可欠であり、文字の読解、記載情報の仕分けやその判断などに専門性を要するため、かなりの時間と労力を投入している。次年度においても引き続き取り組むこととしたい。アウトプットとしては、年度内にまとめた研究成果に関する学会報告を2019年7月に予定している。また、関連する業績として鉄道史学会第36回大会(駒澤大学)における共通論題報告(報告者4名、コメンテーター2名)を企画・組織し、問題提起ならびにコーディネーターを務めた。前年度に進められた史料情報の入手・検討を生かし、本格的な史料の調査・収集に着手できた。収集された史料の整理・分析についても、その一部を年度半ばの全国学会大会で報告するなど、比較的順調に進展している。研究計画の最終年度を迎えるため、史料の調査・収集という本研究課題の基本的方針を堅持しつつも、その分析作業について時間と労力をこれまで以上に傾注させたい。研究成果のアウトプットについても積極的に取り組み、学会等における口頭発表、学術雑誌等における論文発表などの実績をさらに充実させる予定である。本研究の課題は、戦時体制期から戦後復興期にかけての日本の民営鉄道(私鉄)について、新たな資料の発掘・利用をともなった実証的考察を行い、これまで国有鉄道(国鉄)中心の概説にとどまりがちであったこの時期の鉄道史に、新たな視点を提起することにある。当該期における民営鉄道事業者の行動と論理を丹念に読み解き、より幅広い視野から日本における鉄道業の戦時と戦後をつなぐダイナミズムを明らかにしたい。研究期間の初年度にあたる本年度は、現時点で出来うるかぎりの史料情報を入手・検討し、今後の調査・研究のための基盤をしっかり固めるところから出発した。対象となる史料は多岐にわたるが、最も基礎的な史料である国立公文書館、交通博物館が所蔵する鉄道監督官庁作成の公文書、都道府県立の公文書館・図書館等が所蔵する鉄道関係公文書の調査から着手した。個別の民営鉄道史料については、1944年の戦時国有化政策によって国鉄に買収された22私鉄のうちの1つである旧青梅電気鉄道(現・JR青梅線)の経営史料の調査・収集を、ほぼ年間を通じて行った。この史料は簿冊単位でも2万点を超える膨大なものであり、次年度以降も継続してその調査・収集に取り組む予定である。このほか、日本国有鉄道の第3代総裁を務めたことでも知られる長崎惣之助が、鉄道省運輸局長・鉄道次官などに在任していた日中戦争期から太平洋戦争期にかけての業務史料類である長崎惣之助文書(鉄道博物館所蔵)、山口県立文書館、栃木県立文書館が所蔵する鉄道関係公文書についても、調査および収集を行った。以上の作業を基盤としつつ、当該期における民営鉄道政策の展開、個別の民営鉄道に関する経営実態などについても分析が進められつつある。前述した通り、初年度は、史料情報の入手・検討ならびに個別民営鉄道史料の調査・収集に着手することを計画していたが、そのいずれについてもほぼ予定通りに進展している。収集された史料の整理・分析についても比較的順調に進められている。当該期における民営鉄道事業者の行動と論理を丹念に読み解き、より幅広い視野から日本における鉄道業の戦時と戦後をつなぐダイナミズムを明らかにする。研究期間の2年目となる本年度は、昨年度において集めた所在調査情報をもとに、具体的な史料の調査・収集作業を本格化させた。具体的には、鉄道博物館所蔵の鉄道省文書、国立公文書館所蔵の旧運輸省所蔵文書、そして昨年度に引き続き取り組んでいる青梅市郷土博物館所蔵の青梅電気鉄道文書がその中心となった。とりわけ青梅電気鉄道文書については、年間を通じて定期的に調査・収集を行ったが、簿冊単位でも2万点を超える膨大な史料点数であるため、今後の課題となる部分を多く残す結果となった。この点については次年度においても優先的に取り組むべき課題である。

その一方、今年度は研究成果のアウトプットにも着手し、2017年10月には、政治経済学・経済史学会秋季学術大会(大阪商業大学)にて、「復興期における戦時買収私鉄払下げ運動ー青梅電気鉄道の事例ー」を発表した。アジア太平洋戦争末期の1943年から44年にかけて、戦時輸送力の増強を目的として国有化された私鉄の一つである青梅電気鉄道を事例として、国有化に至るまでの経緯、国有化後の状況、そして戦後における払下げ運動への関与など、従来の研究が実証的に解明できなかった一連の過程を明らかにした(より詳しい内容については、同学会発行の「報告要旨」1819頁を参照)。前年度に進められた史料情報の入手・検討を生かし、本格的な史料の調査・収集に着手できた。収集された史料の整理・分析についても、その一部を年度半ばの全国学会大会で報告するなど、比較的順調に進展している。本研究の課題は、戦時体制期から戦後復興期にかけての日本の民営鉄道(私鉄)について、新資料の発掘・利用をともなった実証的考察を行い、これまで国有鉄道(国鉄)中心の概説にとどまりがちであったこの時期の鉄道史に、新たな視点を提起することにある。当該期における民営鉄道事業者の行動と論理を丹念に読み解き、より幅広い視野から日本における鉄道業の戦時と戦後をつなぐダイナミズムを明らかにすることを目的としている。今年度は対象となる史料がほぼ絞り込めたことを受け、調査ならびに収集作業をさらに本格化させた。基本史料となる鉄道博物館所蔵の鉄道省文書、国立公文書館所蔵の旧運輸省所蔵文書、長崎県立長崎図書館所蔵の植木家文書、そして継続的に取り組んでいる青梅市郷土博物館所蔵の青梅電気鉄道文書がその中心となった。同文書については、年間を通じて月に12回のペースで調査・収集を行ったが、膨大なコレクションであり、取扱いにも慎重を要する保存状態でもあるため、史料の中身を1点ずつ確認して撮影していく地道な作業を続けている。2017年10月に政治経済学・経済史学会秋季学術大会で発表した「復興期における戦時買収私鉄払下げ運動ー青梅電気鉄道の事例ー」の内容をさらにブラッシュアップさせる史料についても補足調査や追加収集を実施した。元帳あるいは原票の形態をとる一次史料のため、整理のためのデータ入力・確認が不可欠であり、文字の読解、記載情報の仕分けやその判断などに専門性を要するため、かなりの時間と労力を投入している。次年度においても引き続き取り組むこととしたい。アウトプットとしては、年度内にまとめた研究成果に関する学会報告を2019年7月に予定している。また、関連する業績として鉄道史学会第36回大会(駒澤大学)における共通論題報告(報告者4名、コメンテーター2名)を企画・組織し、問題提起ならびにコーディネーターを務めた。史料情報の入手とその調査・収集という本研究課題の基本的方針は変わらないが、2年目以降はその対象範囲をさらに拡張させていきたい。また、初年度に分析作業に着手した事例研究については、学会・研究会発表等の形でとりまとめるなど、順次その成果を公表していくことに務めたい。
自己免疫性溶血性貧血における自己抗原の特定とエピトープ解析

自己免疫性溶血性貧血(AIHA)における自己抗体の特異性を同定し,抗原分子のエピトープを決定することは,臓器特異的自己免疫性疾患における特定の生体構成成分に対する免疫寛容の破綻機序を探るために重要なアプローチである。そこで,申請者らは,自己抗原の特異性を特定する目的で,リコンビナントRhcEならびにRhD発現細胞を作成し,これらを用いて,フローサイトメトリーで抗赤血球自己抗体の特異性解析を試みた。解析した21例の自己抗体中9例はRhcEとも反応した。3例の自己抗体はRhDとの反応が認められたが,2例はRhcEとも反応した。また,3例のCoombs陰性AIHAのうち1例において,RhcEパネルセルとの反応性が認められた。さらに,アルドメットによる薬剤性AIHAと診断された症例の自己抗体もRhcEと特異的に反応した。21例中10例(47.6%)の自己抗体にRhポリペプチドとの反応性が認められたことになり,温式AIHAの主要自己抗原としてRhポリペプチド,とりわけRhcEポリペプチドが重要な役割を演じていることが明らかになった。また,他のRh抗原発現細胞を加えた解析の結果,これらの自己抗体の認識エピトープは,Rh抗原特異的エピトープではなく,Rhポリペプチドに共通するエピトープであることが示唆された。温式自己免疫性溶血性貧血(AIHA)における抗赤血球自己抗体の特異性に関しては、最近、Leddyらにより、抗Rh抗体が主要な自己抗体の一つであることが示されたが、その詳細については依然として不明のままである。そこで、申請者らは、Rhポリペプチドが自己抗原である可能性について検討することとした。まず、レトロウィルスベクターを用いて4種類のRh cCNA(D、ce、cE、CE)をKU812E細胞に導入し、細胞膜上に各々に対応するRhポリペプチドを発現させた。次いで、これら4種類の発現細胞をパネルセルとして、AIHA患者赤血球膜から解離して得られた8種類の抗赤血球自己抗体の特異性についてフローサイトメトリー法により解析した。その結果、解析した8例中2例に、抗Rhe特異性が同定された。さらに、2例は、Rhce、RhcE、RhCE抗原発現細胞のいずれとも反応したことより、これらの抗原をコードするRhC(c)E(e)ポリペプチドに共通のエピトープを認識しているものと推定された。残りの4例は、いずれのパネルセルとも反応しなかった。今回の抗赤血球自己抗体の解析により、4種類のRhポリペプチドを発現させたKU812E細胞が自己抗体のスクリーニング用パネルセルとして有用であることが確認されるとともに、RhC(c)E(e)ポリペプチドがAIHAにおける主要自己抗原の一つであることが強く示唆された。そこで,申請者らは自己抗原の特異性を特定する目的で,リコンビナントRhcEならびにRhD発現細胞を作成し,これらを用いて,フローサイトメトリーで抗赤血球自己抗体の特異性解析を試みた。解析した21例の自己抗体中9例はRhcEと明らかに反応した。
流体の状態に適応する魚型推進方法を模擬した流路内柔軟推進体の制御手法の確立

ヒルは,流体の粘度に対して,うねり泳動の波長を増減させる適応運動を見せる.昨年度は数値解析モデルにより,この適応運動が筋負担を一定に保つ役割を有することを示した.次に,ヒルの適応運動を再現させる位相方程式を探索した.本年度は,ヒルの適応運動を表現する分散制御則(位相方程式)を実験モデルに実装し,関節負荷が低減できることの確認を行った.まず,SMAアクチュエータによる小型推進体を製作する前段階として,出力に余裕のあるサーボモータを用いた推進体モデルを製作中し,アクチュエータの負担を安定化できるかを評価した.提案した制御則を実装した推進体(外径100mm)において,150[mm]の流路幅の流路を通過したときの関節に作用する負荷トルクを計測し評価を行った.この結果,提案手法により,制御がない場合より関節負荷が低減されることを確認した.また,流路通過時に各アクチュエータ間の駆動の信号の位相差が拡大し,うねり運動の波長が減少することを確認した.波長の減少は,流路から推進体の関節への反力トルクの増大に由来するものと考えられる.以上の実験結果は,提案手法により,狭い流路通過時の推進体のアクチュエータへの負荷が低減され,アクチュエータの破損の防止に繋がることを示したと考えられる.提案手法は,推進体の関節数だけ変数を持つ位相方程式を時間発展させることで,適応制御の実現が可能であり,マイクロコントローラのような非力な計算機でも実装可能であることを実験で示した.28年度が最終年度であるため、記入しない。28年度が最終年度であるため、記入しない。1.ヒルの泳動運動を観測するための観測水槽を製作し,様々な流速の条件下(平均流速:0.09-0.25 [m])でハイスピードカメラにより挙動を取得した.計測データからは,魚類の泳動とは異なりヒルの泳動周波数は流速に依存せずほぼ一定値を保つことが確認された.これより,ヒルは推進速度の変化に対して適応を見せないと考えられる.2.先行研究で粘性に対して泳動形態を変化させることが報告されているが,その力学的な意味は明らかにされていない.本研究では,数値解析モデルにより力学的な意味の解明を試みた.知覚フィードバックが有効な条件では,流体の粘性が1[cp]と100[cp]の異なる条件下でも最大筋張力が一定になっていることが確認された.ヒルの適応運動は筋負担を一定に保つことに貢献している可能性がある.3.上記2の結果を踏まえ,ヒルの適応メカニズムを推進体の制御手法へ適用する方法の構築を試みた.まず,ヒルの適応運動メカニズムを,結合振動子の位相に関するダイナミクスで表現する.この位相のダイナミクスの振る舞いに一致するように自励振動子間の結合を設計することで,ヒルの適応運動を再現させることに成功した.提案手法を推進機構への制御手法として採用した場合,アクチュエータへの最大負荷が一定に保たれることが期待できる.当初の予想ではヒルの運動は推進速度に応じて変化するものだと想定していたが,実験結果ではほとんど変化は見られなかった.しかしながら,数値解析モデルによる分析で,うねり運動の波長の変化を伴うヒルの適応運動により,様々な粘度の流体中においても筋負担が一定になることが確認でき,ヒルの適応運動の意義を解明できたと考える.さらに,いくつかの自励振動子の例でヒルの適応運動を再現させる設計手法を構築し,数値解析で有効性を確認できた.これにより,推進体の実験モデルに適応制御則を実装する基礎が構築されたと考える.ヒルは,流体の粘度に対して,うねり泳動の波長を増減させる適応運動を見せる.昨年度は数値解析モデルにより,この適応運動が筋負担を一定に保つ役割を有することを示した.次に,ヒルの適応運動を再現させる位相方程式を探索した.本年度は,ヒルの適応運動を表現する分散制御則(位相方程式)を実験モデルに実装し,関節負荷が低減できることの確認を行った.まず,SMAアクチュエータによる小型推進体を製作する前段階として,出力に余裕のあるサーボモータを用いた推進体モデルを製作中し,アクチュエータの負担を安定化できるかを評価した.提案した制御則を実装した推進体(外径100mm)において,150[mm]の流路幅の流路を通過したときの関節に作用する負荷トルクを計測し評価を行った.この結果,提案手法により,制御がない場合より関節負荷が低減されることを確認した.また,流路通過時に各アクチュエータ間の駆動の信号の位相差が拡大し,うねり運動の波長が減少することを確認した.波長の減少は,流路から推進体の関節への反力トルクの増大に由来するものと考えられる.以上の実験結果は,提案手法により,狭い流路通過時の推進体のアクチュエータへの負荷が低減され,アクチュエータの破損の防止に繋がることを示したと考えられる.提案手法は,推進体の関節数だけ変数を持つ位相方程式を時間発展させることで,適応制御の実現が可能であり,マイクロコントローラのような非力な計算機でも実装可能であることを実験で示した.昨年度構築した適応分散制御則をもとに,以前提案した自励駆動法を再設計し,形状記憶合金(SMA)アクチュエータの温度制御とアクチュエータの負荷制御を両立した制御則を構築する.次に,SMAアクチュエータで駆動される配管内小型推進体の実験モデルを製作し,提案した制御手法を実装する.この実験モデルを様々な粘度の流体内で駆動させ,アクチュエータに作用する負荷・泳道運動における波長・推進速度等を計測する.

この結果より,様々な粘性の元で泳動形態がどのように変化するかとアクチュエータの負荷が一定に保たれるかを評価する.28年度が最終年度であるため、記入しない。28年度が最終年度であるため、記入しない。
川崎病の病態におけるサイトカインとそのシグナル伝達の関与の解析

1)川崎病急性期および回復期の血清中のサイトカインの検討を目的に、川崎病急性期の患者から得た血清を、赤血球病細胞株(TF1)に添加し検討した。その結果、川崎病急性期ならびに回復期の血清を添加しても、顕微鏡下で観察した範囲では、細胞形態変化は認められず、また3ないし5日間の培養にても、細胞増殖反応を来さなかった。次に、GM-CFS存在下に一定の血清を添加し、GM-CSFの希釈系列に対する影響を検討した。川崎病急性期の血清を添加したものでは、細胞増殖は、回復期の血清添加した系列より有意に増加していた。この結果は、川崎病急性期血清中にGM-CSFを増強する因子が含まれる可能性を示唆している。一方、川崎病急性期の血清を添加して刺激された培養細胞において、サイトカインの細胞内シグナル伝達因子の活性化を解析するために、チロシンリン酸化をウェスターンブロッティング法にて検出を試みたが確認できなかった。2)ヒト臍帯静脈上皮細胞(HUVEC)におけるICAM-1ならびにFasの発現に及ぼす川崎病患者血清の影響を検討した。フローサイトメーターによる川崎病急性期の患者血清では、HUVECによるICAM-1の発現は有意に上昇したが、Fasの産生はみられなかった。一方、患者血清中のTNF-αは、回復期の患者血清中より有意に高く、それによりICAM-1の発現が生じた可能性が示唆された。川崎病急性期および回復期の血清中のサイトカインの検討を目的に、川崎病急性期の患者から得た血清を、多種類のサイトカインに応答性の赤白血病細胞株(TF1)に添加することにより、種々の細胞応答を検討し、川崎病回復期の患者血清あるいは健常小児より得た血清を添加した群と比較した。方法は、細胞応答のパラメータとして、細胞形態の変化ならびに細胞増殖能を用いた。細胞形態の変化は、サイトスピンにて細胞を固定後、ギムザ染色法にて染色後、顕微鏡下で観測した。細胞像職能の測定には、細胞増殖キットを用い、核分裂期に取り込まれた標識されたBrdUを検出する方法も用い定量化した。そのため、GM-CSF存在下で、細胞増殖の検討を行った。すなわち、GM-CSFの希釈系列に一定の血清を添加し、希釈系列に対する影響を検討した。今後、再現性、ならびにその因子の同定について検討する。川崎病急性期の血清を添加して刺激された培養細胞において、サイトカインの細胞内シグナル伝達因子であるJAK/STAT分子の活性化を解析するために、JAK/STAT分子のチロシンリン酸化をウェスターンブロッティング法にて検出を試みているが、現在までにSTAT分子のどのアイソフォームが活性化しているかは確認できていない。1.川崎病急性期および回復期の血清中のサイトカインの検討を目的に、川崎病急性期の患者から得た血清を、赤白血病細胞株(TF1)に添加し検討した。次に、GM-CSF存在下に一定の血清を添加し、GM-CSFの希釈系列に対する影響を検討した。

2.ヒト臍帯静脈上皮細胞(HUVEC)におけるICAM-1ならびにFasの発現に及ぼす川崎病患者血清の影響を検討した。フローサイトメーターによる川崎病急性期の患者血清では、HUVECによるICAM-1の発現は有意に上昇したが、Fasの発現はみられなかった。一方、患者血清中のTNF-αは、回復期の患者血清中より有意に高く、それによりICAM-1の発現が生じた可能性が示唆された。