hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
教師自身の自殺予防のための心理教育プログラムの開発的研究

以上の点をふまえ、平成27年度に、3校(小・中・高、各1校)において、教師を直接対象とするプログラムと児童生徒を対象とするプログラムとを含んだ包括的な自殺予防プログラムを校内研修において試行的に実施した。その過程で、教師を直接対象とするプログラムよりも、児童生徒を対象とする自殺予防プログラムの方が、教師集団の抵抗も少なく、間接的に教師の自殺の抑止効果をもつことが示唆された。そこで、平成28年度には、児童生徒を対象とする自殺予防教育の前提となる教師を対象とする校内研修プログラムとして、「教師自身の自殺予防のための心理教育プログラム」の作成と効果検証を進める予定である。「教師自身の自殺予防のための心理教育プログラム」を作成し、校内研修等で試行的に実施してきたが、受講者の校種や経験の違い等から、複数のタイプのプログラムを用意することの必要性が確認された。また、受講者の心理的安全面への一層の配慮が求められることも明らかになった。そのため、上記の観点から、国内外の先進的取り組みをあらためて調査したうえでプログラムの再検討をし、その効果検証を行う予定である。効果測定の指標の確定と、多様な研修実施先の確保が進んでいないことが課題である平成25年度に教師の自殺念慮とバーンアウト、ソーシャルサポート及びレジリエンスとの関連について調査(中学校教師135名対象)を実施した結果、バーンアウトと自殺念慮との相関、及びソーシャルサポートとレジリエンスが抑止要因となることが確認された。また、自殺をめぐる問題は時間軸を伴うプロセスの現象である点を考慮し、教師の危機と自殺のプロセスを解明するために、ライフヒストリー研究の手法に依拠し、平成26年度に心理的危機を背景に離職した2名の元教師(離職時期は20代と50代)に、平成27年度には教職の危機に陥った経験を持つ3名の教師(新人・中堅・ベテラン)に、半構造化面接を行った。その結果、自殺念慮の抑止要因として、職場の教師集団が自助グループ的な機能を果たすことが示唆された。その点から、職場における教職員間の同僚性を高め、相互サポートシステムの構築を可能にするようなプログラム開発が目指された。以上をふまえ、平成27年度に3校(小・中・高各1校)において、教師を直接対象とするプログラムを含む包括的な自殺予防プログラムを実施した。その過程で、教師を直接対象とするよりも、児童生徒を対象とするプログラムを実施する前提として教職員研修を行う方が、抵抗も少なく、間接的に教師自身の自殺への抑止効果を持つことが示唆された。そこで、平成28年度に、「教師自身の自殺予防のための心理教育プログラム」を作成・実施し、効果検証を行った。プログラムは、1「教員のメンタルヘルスについて考えるー燃え尽きる前にどう支え合うかー」(90分)、2「教師が知っておきたい子どもの自殺予防」(90分)、3「学校危機への対応ー自殺のポストベンションー」(90分)から構成される。実施後のアンケートからは、自殺予防に関する正しい知識が獲得されるとともに、教師自身の心の危機理解と援助希求的態度が促進される予防効果が確認された。教師の自殺の背景に,促進要因としてのバーンアウト(teacher burnout)と,抑止要因としてのソーシャルサポート(social support)及びレジリエンス(resilience)があることをふまえ,援助希求性とレジリエンスの向上,及びバーンアウト傾向と自殺親和性の低減を図る心理教育的プログラムを開発することが本研究の目的である。
プエラリンC-配糖体代謝酵素群の大腸菌での発現系の構築とC-C結合開裂機構の解明

生薬「カッコン」には、イソフラボンCー配糖体のプエラリンが多く含まれている。我々は、プエラリンをダイゼインに代謝する腸内細菌株strain PUEを用いて研究を行い、本菌株が産生するプエラリンCー配糖体代謝酵素群の大腸菌での発現系を構築した。大腸菌に発現させた組換え酵素タンパク質を用いて酵素反応を行った結果、プエラリンからダイゼインへのCー配糖体代謝反応が進行した。本研究の目的は、腸内細菌strain PUEが産生するプエラリンCー配糖体代謝酵素群の機能を解析し、Cー配糖体の代謝機構を解明することである。これまでの研究から、プエラリン代謝反応は中間体(プエラリン糖3位酸化物)を経る多段階の反応であること、及び、本反応には複数の酵素タンパク質が関与することを明らかにしている。2015年度は、1.プエラリンを中間体に代謝する酵素(プエラリン酸化酵素)の発現と機能解析、2.中間体をダイゼインに代謝する酵素の精製とN末端アミノ酸配列の解析を行った。1. PCRで増幅した酸化酵素遺伝子をpET-21a(+)ベクターにライゲーションし、得られたベクターを大腸菌に導入した。組換え大腸菌を培養後、IPTGを添加し、超音波破砕を行い、可溶部に目的の酸化酵素を得た。精製した酸化酵素を用い、プエラリンを基質に種々の条件で酵素反応を行った。その結果、反応溶液にジヒドロキシアセトンリン酸を添加すると、プエラリン糖3位の酸化反応が進行することを見出した。また、酸化酵素はイソフラボンC-配糖体のプエラリンだけでなく、キサントンC-配糖体のマンギフェリンも酸化した。2.腸内細菌の粗酵素液を各種カラムクロマトグラフィーにかけ、中間体(プエラリン糖3位酸化物)をダイゼインに代謝する酵素を精製した。プロテインシーケンサーを用い、精製酵素のN末端アミノ酸配列を解析した。得られた部分アミノ酸配列情報を基に、今後、代謝酵素遺伝子のクローニングを行う予定である。当初の計画通り、プエラリン酸化酵素の大腸菌での発現系を構築した。また、プエラリン酸化物をダイゼインに代謝する酵素の部分アミノ酸配列を決定したことにより、遺伝子クローニングの目処が立ったことから、本研究はおおむね順調に進展していると判断した。生薬・漢方薬には様々なCー配糖体が含まれており、腸内細菌による配糖体の代謝は、漢方薬の薬効発現と密接に関わっていると考えられている。本研究は、生薬「カッコン」に含まれるCー配糖体「プエラリン」を用い、腸内細菌由来Cー配糖体代謝酵素群の同定とCー配糖体代謝酵素の機能解析を目的とした。プエラリンからダイゼインへの代謝は、中間体(プエラリン糖3位酸化物)を経る数段階の代謝反応であり、複数の酵素がプエラリン代謝に関与することを明らかにしている。2015年度は、プエラリンをプエラリン糖3位酸化物に代謝する酵素(プエラリン酸化酵素)の大腸菌発現系の構築と酵素の機能解析を行った。そこで2016年度は、プエラリン糖3位酸化物をダイゼインに代謝する酵素(プエラリン酸化物代謝酵素)について、大腸菌発現系の構築と酵素の機能解析を行った。具体的には、プエラリン酸化物代謝酵素の部分アミノ酸配列情報を基にプライマーを設計し、PCRによる遺伝子の増幅、ベクターへのライゲーション、得られたベクターの大腸菌への導入により、プエラリン酸化物代謝酵素の大腸菌発現系を構築した。大腸菌に発現させたプエラリン酸化物代謝酵素を精製し、プエラリンまたはプエラリン糖3位酸化物を基質に酵素反応を行った。その結果、プエラリン糖3位酸化物はアグリコンのダイゼインに代謝されたが、プエラリンは代謝を受けなかった。そこで、プエラリン酸化酵素とプエラリン酸化物代謝酵素の混合物を用い、プエラリンを基質に酵素反応を行った結果、プエラリンはダイゼインに代謝された。本研究では、プエラリン酸化酵素、プエラリン酸化物代謝酵素の大腸菌発現系をそれぞれ構築した。また、プエラリン酸化酵素、プエラリン酸化物代謝酵素の組合せにより、プエラリンCー配糖体代謝反応が進行することを明らかにした。2016年度は、プエラリン酸化物をダイゼインに代謝する酵素の遺伝子クローニングを行い、本酵素の大腸菌での発現系を構築する。さらに、各種C-配糖体やO-配糖体、プエラリン誘導体を基質に酵素反応を行い、代謝物を分析することにより、酵素の機能を解析する予定である。天然物化学当初想定額よりも安く、酵素反応代謝物の分析装置を購入出来たため、次年度繰越金が生じた。研究試薬、プラスチック器具などの消耗品費として次年度繰越金を使用することにより、研究をさらに進展させたい。
リボソーム生合成と小胞輸送の連携

リボソーム生合成調節と他の細胞内システムとの連携について解明する目的で、リボソーム生合成調節タンパク質Rrs1とEbp2の機能について詳細に検討した。Rrs1とEbp2が核小体以外に核膜辺縁部にも局在することを見出し、リボソーム生合成のみならず、テロメアの恒常性維持にも機能することを示した。また、Rrs1とEbp2が関与する小胞輸送経路からのシグナル伝達において、GSK3が本シグナルにおけるリン酸化カスケードの一部であることを見出した。私たちは、小胞体ストレスによってリボソーム生合成が転写レベルで制御されることを示し、さらに、このシグナル伝達に重要な機能をもつ因子としてリボソーム生合成調節タンパク質Rrs1を同定している。また、Rrs1がリボソームタンパク質L5およびL11をリボソームサブユニット前駆体に組込む役割を担っていることを示した。しかし、Rrs1がどのようにシグナル伝達にかかわるかについてはまったく不明である。私たちは最近、Rrs1が核小体以外に核膜辺縁にも局在することを見出している(論文投稿中)。本研究ではRrs1の核膜における機能を解析することによって、リボソーム生合成と小胞輸送の連携の分子機構を解明することを目的とする。本年度は、Rrs1と相互作用する核内膜のタンパク質を同定し、そのタンパク質とRrs1とを融合させたタンパク質を核膜に発現させる系を確立した。この発現によって、温度感受性rrs1変異株における2つの欠陥-リボソーム生合成と核膜における機能-のうち、核小体におけるRrs1の機能を回復させないで、核膜における機能のみを回復することができると期待される。この系を用いることによって、Rrs1の2つの機能をより明確に解析することが可能となったと考えている。私たちは、分泌経路の遮断によってリボソーム生合成が転写レベルで制御されることを示し、さらに、このシグナル伝達に重要な機能をもつ因子としてリボソーム生合成調節タンパク質Rrs1とEbp2を同定している。しかし、これらのタンパク質がどのようにシグナル伝達にかかわるかについては不明な点が多い。私たちは最近、Rrs1とEbp2が核小体以外に核膜辺縁にも局在することを見出した。本研究ではRrs1とEbp2の核膜における機能を解析することによって、リボソーム生合成と小胞輸送の連携の分子機構を解明することを目的とする。本年度は、Rrs1とEbp2が核膜において核形態の維持およびテロメアのクラスター形成・サイレンシングに機能を持つことを示し、論文発表した(EMBO J 2011)。rrs1/ebp2変異株における2つの欠陥-リボソーム生合成と核膜における機能-のうち、核小体におけるRrs1/Ebp2の機能を回復させないで核膜における機能のみを回復する系を確立した。この系を用いて、小胞体ストレスによるシグナル伝達に、核膜に局在するRrs1とEbp2が必要なのかどうかについて現在検討中である。また、Ebp2のリボソーム生合成における機能を詳細に解析し、論文発表した(Nucleic Acids Res 2012)。本年度は、EBP2と機能的に関連する遺伝子を探索した。温度感受性ebp2変異株と条件的な合成致死を示す変異株を2株取得し、解析した。原因遺伝子はN(alpha)-acetyltransferaseの1つであるNatAの触媒サブユニットと調節サブユニットをそれぞれコードするARD1とNAT1であった。この結果は、NatAがEbp2と密接に関わりながらリボソーム生合成に機能していることを示唆している。また、リボソームタンパク質L36をコードする遺伝子の過剰発現により、ebp2変異株の温度感受性が抑圧されることを見出した。NatAの標的タンパク質として、Ebp2, L36およびEbp2と機能的に関連してリボソーム生合成に必須な機能をもつBrx1に絞り、N末端のメチオニンの隣のアミノ酸残基をアセチル化されないプロリンに改変して解析した。その結果、Ebp2とL36の改変はどちらもebp2変異株の生育に影響を及ぼさなかったが、Brx1の改変はebp2変異と合成致死を示した。以上の結果から、Ebp2がリボソーム生合成において正常に機能するためには、Brx1のN末端のアセチル化が必要である可能性がある。また、小胞輸送遮断時のシグナル伝達にはアクチンと微小管の制御系が必要であることを示唆する結果を得ており、今後の研究の方向性を決めることができた。核小体と核膜におけるRrs1とEbp2の機能-リボソーム生合成とテロメアの恒常性維持-を明確に区別することができ、その成果を論文に発表することができた。

また、来年度に向けて、核膜に局在するRrs1とEbp2が小胞体ストレスによるシグナル伝達に必要なのかどうかについて調べる系を確立した。24年度が最終年度であるため、記入しない。核膜に強制的にRrs1またはEbp2を発現させる系と、逆にRrs1とEbp2を核膜から遊離させる系を確立した。それぞれのの小胞体ストレスによるシグナル伝達を調べることによって、小胞体ストレスによるシグナル伝達に、核膜に局在するRrs1とEbp2が必要なのかどうかについて明確な結論を出せる予定である。
強相関リュードベリ電子波束で探る量子多体ダイナミクス

我たちは「極低温まで冷却された強相関リュードベリ原子集団」と「アト秒精度のコヒーレント制御技術」という2つの独自ツールを用いて強相関系の量子多体問題に取り組んできた。リュードベリ状態の励起光源にピコ秒パルスレーザーを用いるという独自手法によって強相関原子集団を生成し、それが示す量子多体ダイナミクスを観測・制御することに成功している。本研究課題では、この研究成果を数100nmというマクロなサイズに渡って振動運動するリュードベリ電子波束に応用し、強相関系における量子多体効果をより良く理解する計画である。昨年度中に、私たちが開発してきたコヒーレント制御技術が、対称性の破れという重要な課題に応用可能であることが判明した。昨年度に引き続き、この対称性の破れに関する研究を行った。光トラップ中に準備した冷却ルビジウム原子の電子構造の対称性をレーザーパルスの照射によって破った後、アト秒精度で照射時刻を制御した別のレーザーパルスによって破れた対称性を高いコントラストで回復することに成功した。この成果はPhysical ReviewLetters誌に掲載された。私たちの研究では基底状態とリュードベリ状態の2状態を擬似スピンとして扱う。上述の対称性の破れとその回復という制御技術はスピン操作そのものであり、今後の量子多体問題の研究に有用であることが判明した。しかし、リュードベリ状態のポピュレーションが10%にも満たないという問題があった。本研究の課題である原子間相互作用強度の新奇制御手法の確立において、100%近くまでポピュレーションを上げることが重要である。共同研究者と詳細な検討を行い、これを達成するためのパルス条件を求めた。また、光トラップ中では原子の乱雑分布により相互作用効果が平均化されるため、光格子中でモット絶縁体を実現し規則配列した原子集団を使って量子多体効果を観測する実験を進めた。私たちはこれまで「極低温まで冷却された強相関リュードベリ原子集団」と「アト秒精度のコヒーレント制御技術」という2つの独自ツールを用いて強相関系の量子多体問題に取り組んできた。リュードベリ状態の励起光源にピコ秒パルスレーザーを用いるという独自の手法によって強相関原子集団を生成し、それが示す量子多体ダイナミクスを観測・制御することに成功している。本研究課題では、この研究成果を数100nmというマクロなサイズに渡って振動運動するリュードベリ電子波束に応用し、強相関リュードベリ原子集団における量子多体効果をより良く理解する計画である。本年度は、私たちが開発した極低温リュードベリ原子集団に対するアト秒精度のコヒーレント制御技術が、対称性の破れという物理学において極めて重要な研究の一つに適用可能であることが判明したため、実験装置の制御性改善を行うと同時に関連研究としてこの実験を行った。ある種の原子分子の基底状態の電子構造は高い対称性を持つ。これにレーザーパルスを照射して対称性の異なる励起状態との重ね合わせ状態を生成すると電子構造の対称性が破れる。その結果、原子分子内を電子がフェムト秒程度の周期で超高速運動する。適切なタイミングで2発目のレーザーパルスを照射すると、その超高速電子運動を止め初めの対称性の高い基底状態に戻すことが出来る。これを対称性の回復という。私たちは光トラップ中に準備した基底状態のルビジウム原子をピコ秒パルスレーザーでリュードベリ状態へと励起し電子構造の対称性が破れた電子波束を生成した。この電子波束は周期1フェムト秒ほどの超高速振動運動を開始する。2発目のレーザーパルスの照射タイミングを掃引しながらラムゼー干渉信号を測定し約0.94という高いコントラストを得た。これによって、適切なタイミングにおいて対称性が回復していることを実証した。この成果を論文にまとめ投稿した。ルビジウム原子の基底状態(S状態)の電子構造は高い対称性をもつ。このルビジウム原子集団を光双極子トラップ中に捕捉し、これをピコ秒パルスレーザーでリュードベリ状態(D状態)へと励起し電子構造の対称性が破れた電子波束を生成した。この実験においては各原子を孤立系として扱う必要があった。そのために、光双極子トラップ中の原子集団について、その原子数および原子数密度を精密に制御する技術を確立した。また、励起パルス光強度の最適化を図り、この実験に要求される実験パラメータを詳細に検証した。その結果、遅延時間50ピコ秒付近において周期約1フェムト秒のラムゼー干渉信号を測ったところ、約0.94という高いコントラストを得た。このラムゼー干渉に用いた2発の位相ロックされたレーザーパルス対の安定性は約3アト秒であった。これによって、アト秒精度でパルス制御を行い、かつ適切なタイミングにおいて対称性が回復していることを実証した。本年度確立した光双極子トラップ中の原子集団の制御、およびアト秒精度の光パルス制御は当初の目的である強相関リュードベリ原子集団における量子多体ダイナミクスのより深い理解に繋がるものである。

本研究課題では、この研究成果を数100nmというマクロなサイズに渡って振動運動するリュードベリ電子波束に応用し、強相関系における量子多体効果をより良く理解する計画である。昨年度中に、私たちが開発してきたコヒーレント制御技術が、対称性の破れという重要な課題に応用可能であることが判明した。昨年度に引き続き、この対称性の破れに関する研究を行った。光トラップ中に準備した冷却ルビジウム原子の電子構造の対称性をレーザーパルスの照射によって破った後、アト秒精度で照射時刻を制御した別のレーザーパルスによって破れた対称性を高いコントラストで回復することに成功した。この成果はPhysical ReviewLetters誌に掲載された。私たちの研究では基底状態とリュードベリ状態の2状態を擬似スピンとして扱う。上述の対称性の破れとその回復という制御技術はスピン操作そのものであり、今後の量子多体問題の研究に有用であることが判明した。しかし、リュードベリ状態のポピュレーションが10%にも満たないという問題があった。本研究の課題である原子間相互作用強度の新奇制御手法の確立において、100%近くまでポピュレーションを上げることが重要である。共同研究者と詳細な検討を行い、これを達成するためのパルス条件を求めた。また、光トラップ中では原子の乱雑分布により相互作用効果が平均化されるため、光格子中でモット絶縁体を実現し規則配列した原子集団を使って量子多体効果を観測する実験を進めた。今後は、当初の目的どおり私たちがこれまでに開発してきた強相関リュードベリ原子集団の励起、および観測・制御手法を数100nmというマクロなサイズに渡って振動運動する複数のリュードベリ状態からなる電子波束に応用する計画である。具体的には、以下の(a)および(b)の研究を行う。(a)複数のリュードベリ状態からなる電子波束を生成し、原子間の多体相互作用の影響下において、波束のダイナミクスを観測・制御する手法を確立する。これまで励起パルスは理論解析の簡便さから、そのスペクトル幅をカットし単一のリュードベリ状態を励起していた。実際にはこのスペクトル幅は自在に制御することができ、波束に含まれるリュードベリ状態の数を調節することができる。このようにして生成した波束について、励起状態の主量子数や原子数密度・ポピュレーションを調節しながら詳細に測定を行い、波束ダイナミクスを観測・制御する手法を確立する。(b)これまでに発展させた理論解析手法(C. Sommer, N. Takei et al., Phys. Rev. A 94, 053607 (2016))を応用し、上記(a)の実験結果について新たな理論モデルを構築して強相関リュードベリ原子集団における量子多体効果をより良く理解する。これまでの理論モデルは単一のリュードベリ状態しか扱うことが出来なかった。これを複数のリュードベリ状態を含んだ波束の場合に展開し、実験結果の詳細な検証を試みる。
確率場の変分に関する研究と計算理論への応用

研究期間(平成12年度、平成13年度)における研究内容は確率場およびその解析に必要な計算理論であった。得られた主な結果は次のようであるが、いずれもinnovation(新生過程)に基づく方法であり、それが極めて有効であることがわかった。1.ガウス型確率場についてガウス型の確率場で、曲線や曲面をパラメータとするときは、その変分からinnovationが求まる。それはホワイトノイズで、それによって元の確率場を積分表現することができる。これが標準表現となる。その表現の積分核の解析的性質により確率場の確率論的特性、例えば種々の従属性など、を明らかにすることができた。また、曲線や曲面の包含関係を過去と未来との関係にして、共形変換により可逆性、非可逆性を論ずることができた。2.一般(非ガウス型)の場合ホワイトノイズの斉次多項式で表される確率場については非線型演算によるinnovationの求め方を具体的に示すことができて、ガウス型以外に最良予測が求まる良い例となった。また、一般の加法過程の線形変換となる確率過程についてはinnovationが非線形的に得られ、その構造も明らかになりjump findingの計算可能性の問題に一つの回答を与えた。3.応用として。加法過程の従属操作を扱った応用例としてブラック・ホール候補からのX線データの解析を進めてきたが、その数学的モデルの作成には特性汎関数の方法が有効であることを発見した。宇宙科学者との共同でモデルの妥当な候補をみつけた。再度データとの比較も行っている。3.応用として。本年度における主な研究は確率場に関するものであったが関連に予測の問題や具体的な統計的データの解析を行った。1.ガウス型研究場についてパラメターが曲線や、曲面のとき、ガウス型の確率場についての標準表現の理論を発展させ表現の核が標準的であるための条件を求めた。ついで、同じくガウス型の場合に確率場の従属性を表す概念として、多重マルコフ性を定義し、その特長づけを行った。なお、確率場はランダムに変化する量であり過去を加えて未来を予測する。標準表現の理論の応用として,この問題を論じ、若干の結果を得た。2.非ガウス型の場合ガウス型ではないがホモジアニスの場合innovationを非線型演算によって取り出すことを考え、これを用いて元の確率場を表現し,予測の問題などに成果を得た。ここでイタリア、ローマ大学のAccardi教授の協力を得ることができた。3.白鳥座にある星Cyg-X1から放射されるX線のデータの解析は確率過程の有意義な例になることがわかった。情報源についてのいろいろな可能性を探しているが,このデータのスペクトルでは不十分で特性反関数の形で見ることが一つの有効な方法であることが分かった。宇宙理学の研究者と共同研究を続けている。

また、一般の加法過程の線形変換となる確率過程についてはinnovationが非線形的に得られ、その構造も明らかになりjump findingの計算可能性の問題に一つの回答を与えた。3.応用として。加法過程の従属操作を扱った応用例としてブラック・ホール候補からのX線データの解析を進めてきたが、その数学的モデルの作成には特性汎関数の方法が有効であることを発見した。宇宙科学者との共同でモデルの妥当な候補をみつけた。再度データとの比較も行っている。
Piers Plowman A, B, C, Zテキストにおける頭韻構造の装飾性

1.古英詩と同様にaa. Axの音韻を中心に構成されているが、aaa. Axやaax. Axなどの拡大長行の使用が頻繁に行われるようになった。2.古英詩の音韻語の品詞が名詞・形容詞・動詞などの内容語であったが、PPLになるとhe, meなどの代名詞やwith, forなどの前置詞といった機能語も音韻に加わる。4.古フランス語が頭韻に参加する例は古英詩ではまれであったが、PPLではcounselle, court, frereなどの宗教用語を中心に使用されている。5.Oakden(1968 : 179)の中英語の「頭韻が一層装飾的になり、構造的ではなくなった」という指摘がPPLに当てはまることを確認した。
力学概念指標の系統的誤差研究に基づく妥当性評価のための新しい聞き取り調査法の開発

学習者の力学概念を測定するための指標としてForce Concept Inventory(以下,FCI)が国際的に広く使われている。本研究では,FCIの系統的誤差の精確な値を推定すること,およびその系統的誤差が平均規格化ゲインやCohen's d等の効果量に与える影響を評価することを研究目的の一部としている。これらの目的に関して,本研究グループは2018年度に以下のような実績をあげた。FCIの偽誤答に起因する系統的誤差を調べるため,2018年4月に国内の5大学において追加調査を実施し,667名の学生から回答を得た(前回調査と合算し,回答者数は1446名となった)。今年度は新たな分析として,FCI問13,18,26,27に着目し,偽誤答に起因する個々の設問の系統的誤差を個別に分析した。第1の分析では,FCI問13,18,26,27の偽誤答に起因する系統的誤差の大きさを比較した。その結果,いずれの設問においても偽誤答に起因する系統的誤差の値は同程度の大きさであり,一部の設問について大きな値を示す,偽正答に起因する系統的誤差よりも十分に小さいことが明らかになった。第2の分析では,偽正答および偽誤答に起因する系統的誤差を合算し,それが効果量に与える影響を評価した。シミュレーションを用いた分析の結果,系統的誤差によって平均得点が約11%減少する場合,平均規格化ゲインは約8%減少するが,Cohen's dは1%未満しか変わらないことが明らかになった。このことから,系統的誤差の影響を受けづらい効果量として,Cohen's dが推奨されることが示唆された。学習成果を精確に評価するために,国際的な力学概念指標であるForce Concept Inventory(以下,FCI)等について様々な観点から妥当性評価が行われている。研究代表者らは前研究において,部分設問群を用いてFCIの妥当性を評価し,偽正答の寄与のみを含む系統的誤差を算出した。本研究では,新たに偽誤答の寄与等を分析するための調査を行うことにより,FCIの系統的誤差の精確な値を算出すること,また,同様の調査を米国でも行うことにより,FCIの系統的誤差の国際的な一般性を確かめることを研究目的の一部としている。これらの目的に関して,本研究グループは今年度に下記のような実績をあげた。(1)偽誤答を調べる調査票を開発し,2016年4月に国内の5大学(国立大1,私立大4)において,FCIの偽誤答に起因する系統的誤差を調べるための調査を実施し,777名の学生から回答を得た(有効回答数は680)。前研究および本調査で得られたデータを用いて,FCIの偽正答と偽誤答の両方の寄与を含めた系統的誤差の値を算出したところ,FCIの系統的誤差はFCIの得点の50%に達する場合があることが明らかになった。この成果については,物理教育世界会議(World Conference on Physics Education) 2016において,口頭発表で報告を行った。(2) FCI数問のみを対象にした調査結果からFCI全体の系統的誤差を概算する方法を改善した。具体的には,これまでは単純な線形回帰分析を用いて概算を行っていたが,より精確な方法として,ロジスティック線形回帰分析の方法を用いて概算を行う手法を採用した。(3)ウェイン州立大学のMichael Hull氏の協力を得て,FCIの偽正答に起因する系統的誤差を調べるための調査を米国の2大学で実施し,150名の学生から回答を得た。本研究の計画では,平成28年度から平成29年度前半までに,1)偽誤答を調べる調査票の開発,予備調査による調査票の改善,2)日米両国で計1千名以上の学生を対象に質問紙調査を実施,3)概算法の洗練,系統的誤差の算出,国際的一般性の評価等を行う計画を立てていた。本研究グループは,平成28年度中に,偽誤答を調べる調査票の開発,予備調査による調査票の改善,日米両国で900名を超える学生を対象とした質問紙調査の実施,概算法の洗練,系統的誤差の算出を達成したことから,本研究課題はおおむね順調に進展していると言える。本研究では,FCIの系統的誤差の精確な値を推定すること,および本分析結果の国際的な一般性を高めることを研究目的の一部としている。2017年4月に国内の4大学において,FCIの偽正答に起因する系統的誤差を調べるための追加調査を実施し,632名の学生から回答を得た(前回調査と合算し,回答者数は1145名となった)。今年度は新たな分析として,FCI問5,6,7,16に着目し,偽正答に起因する個々の設問の系統的誤差を個別に分析した。同4問において,問6,7,16は以前の聞き取り調査で学生が明らかに誤った理由で正答することが見出された設問であるが,問5はそれが見出されていない設問である。第1の分析では,問6,7,16と問5の偽正答に起因する系統的誤差の大きさを比較した。

その結果,スコア中位の学習者集団については,問6,7,16の系統的誤差が問5の系統的誤差に比べ非常に大きいことが明らかになった。第2の分析では,問5,6,7,16の偽正答に起因する系統的誤差の和を求め,FCI30問の系統的誤差について最小限の値を推定した。その結果,スコア中位の集団については,偽正答に起因する系統的誤差の大きさが少なくとも生スコアの10%に達することが明らかになった。この成果は,Physical Review Physics Education Research誌に掲載された。本研究の計画では,平成29年度末までに,1)FCIの偽誤答を調べる調査票の開発,2)日米両国で計1000名以上の学生を対象にした質問紙調査の実施,3)FCIの系統的誤差を概算・推定する分析方法の洗練,4)算出した系統的誤差の国際的一般性の評価等を行う計画を立てていた。本研究グループは,平成29年度末までに,偽誤答を調べる調査票の開発,日米両国で計1500名を超える学生への質問紙調査の実施,FCIの系統的誤差を概算・推定する分析方法の洗練を達成している。本研究の成果は,米国で開催されたPhysics Education Research Conference 2017で報告し,査読付きのPERC Proceedings誌に掲載されたほか,物理教育分野で最もインパクトファクターの高い論文誌の1つであるPhysical Review Physics Education Research誌にも掲載された。以上のことから,本研究課題はおおむね順調に進展していると言える。学習者の力学概念を測定するための指標としてForce Concept Inventory(以下,FCI)が国際的に広く使われている。本研究では,FCIの系統的誤差の精確な値を推定すること,およびその系統的誤差が平均規格化ゲインやCohen's d等の効果量に与える影響を評価することを研究目的の一部としている。これらの目的に関して,本研究グループは2018年度に以下のような実績をあげた。FCIの偽誤答に起因する系統的誤差を調べるため,2018年4月に国内の5大学において追加調査を実施し,667名の学生から回答を得た(前回調査と合算し,回答者数は1446名となった)。今年度は新たな分析として,FCI問13,18,26,27に着目し,偽誤答に起因する個々の設問の系統的誤差を個別に分析した。第1の分析では,FCI問13,18,26,27の偽誤答に起因する系統的誤差の大きさを比較した。その結果,いずれの設問においても偽誤答に起因する系統的誤差の値は同程度の大きさであり,一部の設問について大きな値を示す,偽正答に起因する系統的誤差よりも十分に小さいことが明らかになった。第2の分析では,偽正答および偽誤答に起因する系統的誤差を合算し,それが効果量に与える影響を評価した。シミュレーションを用いた分析の結果,系統的誤差によって平均得点が約11%減少する場合,平均規格化ゲインは約8%減少するが,Cohen's dは1%未満しか変わらないことが明らかになった。このことから,系統的誤差の影響を受けづらい効果量として,Cohen's dが推奨されることが示唆された。当初の計画通り,FCIの系統的誤差の精確な値を算出するための質問紙調査を引き続き実施する。特に米国での調査をさらに実施し,日米両国で目標通り計1千名以上の学生を対象に質問紙調査を実施することを目指す。これらの調査で得られたデータに基づき,FCIの系統的誤差の国際的な一般性を確かめる。さらに今年度の後半からは,本研究課題のもう一つの目的である,様々な物理概念指標の妥当性評価で用いることのできる新しい聞き取り調査法の開発に取りかかる。
リボソーム蛋白質を分子標的とした消化器癌の診断と治療への応用

近年,特定のリボソーム蛋白質が,リボソーム以外の揚所で翻訳とは独立した役割,extraribosomal functionを持っていることが明らかになってきた.申請者はこれまでにリボソーム蛋白質L13がDNA損傷などのストレスによって活性化されることを報告した.さらにL13がヒト胃癌,大腸癌,肝癌症例において高率に発現上昇しており,その発現レベルが抗癌剤感受性と逆相関することを明らかにした.本研究は癌の悪性度および化学療法効果に関与する候補分子としてのリボソーム蛋白質に着目し,消化器癌における新しい診断・治療予測システムを開発しようとするものであり,以下の成果をあげた(1)消化器癌細胞株における全79種のリボソーム蛋白質の遺伝子発現解析いくつかの消化器癌細胞株について,さまざまな増殖状態(対数増殖期,無血清による増殖停止期など),あるいはストレスに暴露した際(DNA損傷,低酸素)のRNAを抽出し,全79種類のリボソーム蛋白質と4種類のリボソームRNAの発現を定量解析した.その結果,細胞増殖の程度,細胞死にともなってさまざまなリボソーム蛋白質の遺伝子発現が変化していた.特にリボソーム蛋白質L5,L11が細胞増殖に反比例して,L13が細胞増殖に比例して発現することを見いだした.(2)消化器癌組織におけるリボソーム蛋白質の発現解析申請者が同定したp53蛋白の分解を促進するリボソーム蛋白質L13と他の研究者が安定させることを報告したL5,L11,L23,L26について,消化器癌組織おける遺伝子発現を定量的RT-PCRで,蛋白発現を免疫染色で解析した.その結果,L13の遺伝子,および蛋白発現が高率に上昇しており,その発現レベルが癌の進行度,予後不良と相関していることを明らかにした.また,L11の発現低下が癌の進行度と相関していることを見いだした.近年,特定のリボソーム蛋白質が,リボソーム以外の揚所で翻訳とは独立した役割,extraribosomal functionを持っていることが明らかになってきた.申請者はこれまでにリボソーム蛋白質L13がDNA損傷などのストレスによって活性化されることを報告した.さらにL13がヒト胃癌,大腸癌,肝癌症例において高率に発現上昇しており,その発現レベルが抗癌剤感受性と逆相関することを明らかにした.本研究は癌の悪性度および化学療法効果に関与する候補分子としてのリボソーム蛋白質に着目し,消化器癌における新しい診断・治療予測システムを開発しようとするものであり,以下の成果をあげた(1)消化器癌細胞株における全79種のリボソーム蛋白質の遺伝子発現解析いくつかの消化器癌細胞株について,さまざまな増殖状態(対数増殖期,無血清による増殖停止期など),あるいはストレスに暴露した際(DNA損傷,低酸素)のRNAを抽出し,全79種類のリボソーム蛋白質と4種類のリボソームRNAの発現を定量解析した.その結果,細胞増殖の程度,細胞死にともなってさまざまなリボソーム蛋白質の遺伝子発現が変化していた.特にリボソーム蛋白質L5,L11が細胞増殖に反比例して,L13が細胞増殖に比例して発現することを見いだした.(2)消化器癌組織におけるリボソーム蛋白質の発現解析申請者が同定したp53蛋白の分解を促進するリボソーム蛋白質L13と他の研究者が安定させることを報告したL5,L11,L23,L26について,消化器癌組織おける遺伝子発現を定量的RT-PCRで,蛋白発現を免疫染色で解析した.その結果,L13の遺伝子,および蛋白発現が高率に上昇しており,その発現レベルが癌の進行度,予後不良と相関していることを明らかにした.また,L11の発現低下が癌の進行度と相関していることを見いだした.近年,特定のリボソーム蛋白質が,リボソーム以外の場所で翻訳とは独立した役割,extraribosomal functionを持っていることが明らかになってきた.申請者はこれまでにリボソーム蛋白質L13がDNA損傷などのストレスによって活性化されることを報告した.さらにL13がヒト胃癌,大腸癌,肝癌症例において高率に発現上昇しており,その発現レベルが抗癌剤感受性と逆相関することを明らかにした.本研究は癌の悪性度および化学療法効果に関与する候補分子としてのリボソーム蛋白質に着目し,消化器癌組織における全79種類のリボソーム蛋白質の発現プロファイルをもとに従来の評価法を補完する新しい診断・治療予測システムを開発しようとするものであり,以下の成果をあげた(1)消化器癌細胞株における全79種のリボソーム蛋白質の遺伝子発現解析いくつかの消化器癌細胞株について,さまざまな増殖状態(対数増殖期,無血清による増殖停止期など),あるいはストレスに暴露した際(DNA損傷低酸素)のINAを抽出し,同様に全79種類のリボソーム蛋白質と4種類のリボソームRNAの発現を定量解析した.その結果,細胞増殖の程度,細胞死にともなってさまざまなリボソーム蛋白質遺伝子の発現が変化することを見いだした.(2)p53の機能を調節するリボソーム蛋白質の解析申請者が同定したp53蛋白の分解を促進するリボソーム蛋白質L13と他の研究者が安定させることを報告したL5,L11,L23,L26について,それらの発現レベルと細胞増殖,抗癌剤感受性との関連性をsiRNAを用いた抑制実験で解析した.その結果,L13がp53蛋白の発現を抑制することで細胞増殖を促進し,抗癌剤抵抗性に関わっていることを明らかにした.また,L13に対するポリクローナル抗体を作成し,DNA損傷に応答してL13が核に集積することを見いだした.

近年,特定のリボソーム蛋白質が,リボソーム以外の場所で翻訳とは独立した役割,extraribosomal functionを持っていることが明らかになってきた.申請者はこれまでにリボソーム蛋白質L13がDNA損傷などのストレスによって活性化されることを報告した.さらにL13がヒト胃癌,大腸癌,肝癌症例において高率に発現上昇しており,その発現レベルが抗癌剤感受性と逆相関することを明らかにした.本研究は癌の悪性度および化学療法効果に関与する候補分子としてのリボソーム蛋白質に着目し,消化器癌における新しい診断・治療予測システムを開発しようとするものであり,以下の成果をあげた(1)消化器癌細胞株における全79種のリボソーム蛋白質の遺伝子発現解析いくつかの消化器癌細胞株について,さまざまな増殖状態(対数増殖期,無血清による増殖停止期など),あるいはストレスに暴露した際(DNA損傷,低酸素)のRNAを抽出し,全79種類のリボソーム蛋白質と4種類のリボソームRNAの発現を定量解析した.その結果,細胞増殖の程度,細胞死にともなってさまざまなリボソーム蛋白質の遺伝子発現が変化していた.特にリボソーム蛋白質L5,L11が細胞増殖に反比例して,L13が細胞増殖に比例して発現することを見いだした.(2)消化器癌組織におけるリボソーム蛋白質の発現解析申請者が同定したp53蛋白の分解を促進するリボソーム蛋白質L13と他の研究者が安定させることを報告したL5,L11,L23,L26について,消化器癌組織おける遺伝子発現を定量的RT-PCRで,蛋白発現を免疫染色で解析した.その結果,L13の遺伝子,および蛋白発現が高率に上昇しており,その発現レベルが癌の進行度,予後不良と相関していることを明らかにした.また,L11の発現低下が癌の進行度と相関していることを見いだした.
超音波タグ蛍光断層画像計測・診断装置の開発

生体の機能やがんなどの病巣を診断するため,生体内に投与した蛍光ラベル剤からの蛍光を,体外から断層画像計測する技術の研究を行った。蛍光励起のためのレーザー光と同時に超音波を照射し,生体内で発生した蛍光に発生源を知らせる超音波タグ(超音波による光変調)を付加しそれを高感度検出することで,生体内部の蛍光画像情報を得る技術を開発し,深さ30mm程度の生体内に局在する蛍光物質の位置を数mm程度の分解能で画像化することに成功した。本研究は,生体内に投与した各種蛍光ラベル剤からの蛍光分布を断層画像として計測することにより,生体生理機能やがんなどの病態を非侵襲診断する技術を開発することを目的とする。そのための手段として,励起レーザー光と同時に集束超音波を生体に照射し,音響光学効果により光を強度変調することにより発生した変調蛍光信号を高感度検出し,光散乱媒質中での蛍光強度の空間分布情報を獲得する超音波タグ蛍光断層画像計測技術の確立を目指す。平成19年度では,これまでの検討から推定されていた単一超音波発振素子による蛍光検出可能到達深度について,実際の生体試料を用いて実験を行い,近赤外光を用いて深さ30mmに埋設した直径3mmの蛍光体を数mmの分解能で検出することが可能であることを実験的に示した。また,本手法をアレイ型超音波発振素子を用いて実現するための,フォーカススキャニング制御機構についてコンピュータシミュレーションを行った。これは単一素子を用いた場合機械的走査が必要なのに対し,アレイ型超音波発振素子を用いることにより電子走査が可能になり,診断を目的とした実用的プローブ化を目指す上で不可欠な技術となる。シミュレーションおよび回路設計に必要な基礎実験を経て,駆動回路およびソフトウエア設計を行い,超音波タグ蛍光検出用プローブ駆動装置の試作を行った。現状において,試作回路の評価実験を行うとともに,アレイ型素子を用い,変調蛍光の検出が可能であることを実験的に確認した。現在,アレイ型素子駆動プログラムの開発を行っており,平成20年度以降,光学系を組み合わせたプローブ化の研究を行い,本課題の最終ターゲットである医用診断装置プロトタイプ機としての,センチネルリンパ節蛍光断層画像計測装置の開発を目指す。これまでの検討では蛍光検出可能到達深度について,実際の生体試料を用いた実験から,近赤外光を用いて深さ30mmに埋設した直径3mmの蛍光体の検出が可能であることを実験的に示した。しかしこの手法を生体診断へ適用するためには,超音波焦点を電子的に走査する機構が必要があり,そのための1次元アレイ超音波発振素子を用いた位相制御による超音波フォーカシング並びにスキャニング機構を試作した。平成20年度はシミュレーション結果に基づいて機構,制御回路の改良と制御プログラムを試作し,蛍光変調計測実験を行った。その結果,液体散乱媒質内に設置した直径3mmの蛍光体試料を画像計測することができた。同時に,固定焦点型超音波発振素子との比較により検出感度と位置精度に関する課題を抽出することができた。また,実用化のためには生体に接触させて測定を行う必要があることから,診断用音響光学プローブについての検討も行った。それらの結果に基づき,今後は最終ターゲットである医用診断装置プロトタイプ機としての,センチネルリンパ節蛍光断層画像計測装置の開発を目指す。本研究は,生体内に投与した各種蛍光ラベル剤からの蛍光分布を断層画像として計測することにより,生体生理機能やがんなどの病態を非侵襲診断する技術の開発を目的とする。そのための手段として,励起レーザー光と同時に集束超音波を生体に照射し,音響光学効果により発生した変調蛍光信号を高感度検出することで,光散乱媒質中での蛍光画像情報を得る,超音波タグ蛍光断層画像計測法の開発とその実用化研究を行った。目標とした仕様は深さ30mm程度の生体内に局在する蛍光物質の位置情報を数mm程度の空間分解能で検出することであり,ヒト診断に適用可能な装置化技術の開発をめざした。これまでの研究期間において,超音波焦点を電子的に走査するアレイ素子を用いた蛍光変調法や固定焦点型単一超音波発振素子を機械走査して画像化する方法の両面から検討を行ってきた。平成20年度にはアレイ素子の位相制御により形成した超音波焦点での蛍光変調,およびその画像化実験の結果から,その可能性と問題点をについて整理した。

その結果を踏まえ平成21年度は,固定焦点形素子を機械走査する方法を採用し,これまで超音波媒質として水を用い,測定試料を水中に設置して行っていた計測方法に対し,専用プローブを直接被対象物に接触させて使用することのできるプローブ機構を考案しその試作検討を行った。実際に生体模擬試料による計測実験を行った結果,測定対象物がヒトのように大型であっても,そのサイズによらず接触させて使用することができることを確認し,生体内蛍光画像計測用音響光学プローブとして,診断装置に利用可能な性能を有すると判断された。目標としたセンチネルリンパ節蛍光断層画像計測装置として,ヒトに適用するための臨床試験を開始するには,今後動物実験等による更なる検討が必要であるが,今年度までの研究期間において,そのためのプロトタイプ機の開発に成功したといえる。
抗体産生不全症原因遺伝子同定によるヒト抗体産生機構の解明

原発性免疫不全症(PID)の半数を占める抗体産生不全症の中で最も患者数の多い分類不能免疫不全症(CVID)は、記憶B細胞あるいは形質細胞の分化障害と考えられるが、未だ90%の症例で原因遺伝子が不明である。本研究では、世界で初めて同定したTNFSF13/APRIL完全欠損症によるIgA欠損と形質細胞分化障害を伴うCVIDの機能解析を行うことで、ヒト免疫系、とくにIgA産生と粘膜免疫系における、APRIL/BAFF-BCMA/TACI/BAFFR系の役割と単球系細胞群を明らかにすることを目的とする。今年度は、患者単球由来樹状細胞を樹立し、健常B細胞と共培養を行ったが、短期的な形質細胞分化は差がなかった。また、Igクラススイッチ、Ig体細胞突然変異、レパトアについてもNGSを用いて検討を行ったが、大きな差は見られなかった。現在、さらに長期培養による長期生存形質細胞を誘導するために、患者iPS細胞の樹立を行い、検討を予定している。以上のような内容を国際学会で発表した。また、当科に紹介のあった、抗体産生不全症の一部で、Exome解析も行い、複数の候補遺伝子異常について現在検討中である。フランスの共同研究先でAPRIL異常症が1例同定されたため、その機能異常について、検討中である。次年度は、今年度までの結果を論文として発表し、Igクラススイッチのメカニズムについてさらに検討をすること、単球系樹状細胞による形質細胞分化誘導のしくみについて、検討すること、新規遺伝子異常症を発見することを目標としたい。1) APRIL変異患者におけるIgA欠損症・形質細胞分化障害の病態生理ナイーブB細胞では、BAFFRのみ発現しており、メモリーB細胞では、BAFFRに加え、TACIが発現しており、形質細胞では、BCMAのみ発現していた。発現状態は、患者でも違いがなかった。患者単球由来樹状細胞を樹立したが、FACSパターンは健常者と差がなかった。患者培養上清には、BAFFは検出されたが、APRILは検出されなかった。そこで、健常B細胞と共培養を行ったが、健常者、患者ともに、形質芽細胞、形質細胞への誘導は可能であった。現在、さらに長期培養による長期生存形質細胞を誘導するために、患者iPS細胞の樹立を行い、検討を予定している2)APRIL変異患者におけるIgクラススイッチ(CSR)・体細胞突然変異(SHM)・レパトアPBMC中のCSRjunction解析についてNGSを用いて行ったが、末梢血中のクラススイッチについては、健常者と差がなかった。in vitroでのCSR実験を予定しているが、やはり形質細胞への分化障害が主原因の可能性も示唆された。また、BCRのレパトアおよびIg-SHMの検討もNGSを用いて、行ったが、健常人と差がなかった。3)抗体産生不全患者の亜分類とBA-BTB系遺伝子変異当科に紹介のあった抗体産生不全症約200例について、記憶B細胞、形質細胞、IgAを用いた分類、保存血漿中のAPRIL, BAFFの測定などについて解析中である。原因不明の抗体産生不全症患者については、順次Exome解析を行い、こうした患者における原因遺伝子を明らかにすることを試みている。また、フランスの共同研究者の施設で、APRIL異常が疑われている患者が発見されたため、その遺伝子型のタンパク機能に与える影響について検討中である。3.抗IgM抗体、TLR刺激、IFNα刺激を加えた時の変化についても検討する。4.患者単球系培養細胞への正常APRIL遺伝子導入により、抗体産生能・形質細胞分化能が回復するかどうか検討する。5.引き続き、抗体産生不全症の臨床症状・検査所見による亜分類、新規遺伝子探索、新規候補遺伝子異常症の機能解析等行う事とする。1) APRIL

変異患者におけるIgA欠損症・形質細胞分化障害の病態生理ナイーブB細胞では、BAFFRのみ発現しており、メモリーB細胞では、BAFFRに加え、TACIが発現しており、形質細胞では、BCMAのみ発現していた。発現状態は、患者でも違いがなかった。患者単球由来樹状細胞を樹立したが、FACSパターンは健常者と差がなかった。患者培養上清には、BAFFは検出されたが、APRILは検出されなかった。そこで、健常B細胞と共培養を行ったが、健常者、患者ともに、形質芽細胞、形質細胞への誘導は可能であった。現在、さらに長期培養による長期生存形質細胞を誘導するために、患者iPS細胞の樹立を行い、検討を予定している2)APRIL変異患者におけるIgクラススイッチ(CSR)・体細胞突然変異(SHM)・レパトアPBMC中のCSRjunction解析についてNGSを用いて行ったが、末梢血中のクラススイッチについては、健常者と差がなかった。in vitroでのCSR実験を予定しているが、やはり形質細胞への分化障害が主原因の可能性も示唆された。また、BCRのレパトアおよびIg-SHMの検討もNGSを用いて、行ったが、健常人と差がなかった。3)抗体産生不全患者の亜分類とBA-BTB系遺伝子変異当科に紹介のあった抗体産生不全症約200例について、記憶B細胞、形質細胞、IgAを用いた分類、保存血漿中のAPRIL, BAFFの測定などについて解析中である。原因不明の抗体産生不全症患者については、順次Exome解析を行い、こうした患者における原因遺伝子を明らかにすることを試みている。また、フランスの共同研究者の施設で、APRIL異常が疑われている患者が発見されたため、その遺伝子型のタンパク機能に与える影響について検討中である。3.抗IgM抗体、TLR刺激、IFNα刺激を加えた時の変化についても検討する。4.患者単球系培養細胞への正常APRIL遺伝子導入により、抗体産生能・形質細胞分化能が回復するかどうか検討する。5.引き続き、抗体産生不全症の臨床症状・検査所見による亜分類、新規遺伝子探索、新規候補遺伝子異常症の機能解析等行う事とする。
脂肪組織炎症におけるマクロファージトラフィッキングの分子機序解明

脂肪組織は肥満によって活発な炎症を生じる。この時、マクロファージの性質が大きく変動する。このマクロファージ変動の機序として、マクロファージのトラフィッキングを検討した。脂肪組織におけるマクロファージの集積と退出をフローサイトメトリーで追跡する手法を確立した。また、退出の刺激を同定した。マクロファージの移動にS100蛋白が重要であることを見いだした。肥満内臓脂肪組織では炎症が惹起され、インスリン抵抗性や心血管疾患の基盤病態となる。肥満により、常在するM2型脂肪組織マクロファージは減少し、M1型炎症性マクロファージが増加(マクロファージ極性の変化)する。その結果、脂肪組織炎症が引き起こされる。しかしながら、この極性の変化がどのように制御されているかはほとんど分かっていない。本研究計画では、M2型組織マクロファージの退出(egression)とM1型マクロファージの集積という両面について検討する。マクロファージを蛍光染色することによりマクロファージの移動を追跡する実験法の可能性を検討した。特に、脂肪組織に存在するマクロファージの移動を、この蛍光染色で解析するとともに、脂肪移植実験等を用いて、フローサイトメトリーでも解析した。2M1マクロファージの集積機構の解析我々はこれまでに、肥満脂肪細胞でS100A8発現が増加することを見いだしている。また、腎臓においてS100A8が炎症性単球のリクルートメントとM1マクロファージへの活性化に重要なことを見いだした。そこで、S100A8のM1マクロファージ集積への寄与を検討する。脂肪細胞特異的S100A8トランスジェニックマウスを作製し、マクロファージ集積への作用を検討した。また、脂肪細胞特異的ノックアウトマウスも作製した。S100A8がマクロファージに作用する新規アディポカインである結果を得た。