hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マウス初期胚発生に伴うヘテロクロマチン形成の分子基盤

受精数日後、マウス胚が子宮に着床した直後の時期にゲノム(染色体)上の広範囲にヘテロクロマチンが形成されることが先行研究により示唆された(ヘテロクロマチン=遺伝子発現が不活性化されて染色体が凝縮した領域)。本研究ではこの現象を司る遺伝子を同定し、その意義を解明しようと試みた。候補遺伝子をリストアップし、それらの機能阻害によりヘテロクロマチン形成への関与を調べた所、強い活性を示す未知の遺伝子を4つ見出すことに成功した。大きな研究目的は、マウス初期胚発生時の着床後エピブラストに相当する時期に起きるヘテロクロマチン形成の分子基盤の解明である。これまでの研究からこの時期に常染色体上に広く形成される条件的へテロクロマチンはその形成時期及び様式が雌X染色体不活性化と類似しており、両者の分子基盤が一部重複する可能性が示唆された。X染色体不活性化は検出の簡便性が大きな利点である。そこでまず、(1)X染色体不活性化に関与する遺伝子群の網羅的スクリーニングを試み、(2)1で得られた遺伝子リストから常染色体のヘテロクロマチン化にも関与する因子を同定することを目指した。材料には、不活性X染色体を形成して間もない発生段階のよいモデルと判断した雌EC細胞株MC12を用いた。まず分化細胞で高発現する候補遺伝子をリストアップした。次にsiRNAスクリーニングを行った。第一の指標として不活性X上のHprt遺伝子の再活性化を、次に不活性Xの後期複製解除を指標としてスクリーニングを行った所、不活性X染色体維持に関わる4つの候補遺伝子を得た。スクリーニングの系の妥当性が確認できたため、さらにCellecta社のマウス・レンチウイルスshRNAライブラリーを用いて大規模スクリーニングを行った。次世代シークエンサーによる大規模配列解析により、Hprt遺伝子再活性化を促す候補遺伝子を多数得た。現在これらの解析を進めている。一方、先に挙げた4つの候補について、これらのsiRNAによって常染色体上の条件的へテロクロマチンが解除されるか否かを検討した。常染色体上の条件的ヘテロクロマチンドメインの核内配置を調べた所、驚くべきことにMC12へのsiRNA導入によってドメインは核膜周辺から核内部へと移行した。この結果はsiRNAによる条件的ヘテロクロマチン解除を示唆しており、不活性X染色体と常染色体の一部が協調制御されるとする仮説を支持した。本研究の目的は、マウス初期胚発生時の着床後エピブラストに相当する時期に起きるヘテロクロマチン形成の分子基盤の解明である。これまでの解析より、この時期に常染色体上に点在して形成される条件的へテロクロマチンはその形成時期および様式を雌X染色体不活性化と同じくすることから、両者の分子基盤の少なくとも一部は重複する可能性があると考えた。これを踏まえ、戦略としてまず、(1)簡便に検出可能な雌X染色体不活性化に関与する遺伝子群の網羅的スクリーニングを試み、次に、(2)(1)で得られた遺伝子リストから常染色体のヘテロクロマチン化にも関与する因子を同定することを目指した。材料には雌EC(Embryonic Carcinoma)細胞株MC12を採用した。MC12は多能性を持つ細胞でありながら不活性X染色体を持つ点で三胚葉に分岐する直前のEpiSC細胞によく似ており、不活性X染色体を形成して間もない発生段階のよいモデルとなり得るし、その不活性Xにのみ存在するHprt+アレルのお陰でX染色体不活性化状態を指標とした薬剤選択が可能だからである。昨年度は、前述(1)の網羅的スクリーニング実験系の最適化を行った。具体的には、レンチウイルスのゲノムワイドshRNAライブラリーを用いて、ウイルス調整から感染およびスクリーニングの系の最適化を行った。一方、薬剤選択の利点を生かして不活性Xが維持されたMC12クローンおよび解除されたクローンを複数得て、遺伝子発現解析を行い、不活性X染色体を持つMC12特異的に発現の高い遺伝子をリストアップした。これらを条件的ヘテロクロマチン形成に関与する候補と見立て、siRNAノックダウンによる表現型を観察中である。また、MC12のゲノムワイドDNA複製タイミング解析を行って階層的クラスター分析した結果、実際にMC12がEpiSC細胞に非常に近い細胞状態であることを見出した。当初の計画を一部変更してゲノムワイドshRNAライブラリーの会社を変えたことで最適化に時間を要したものの、全体としては当初の計画に近い形で研究は進行しており、まもなく実際のshRNAスクリーニングに入る。今後はまずは計画通りにゲノムワイドshRNAライブラリーを用いたスクリーニングに入る。HATによる薬剤選択によって生存する(=不活性Xが再活性化された)細胞に導入されたshRNA配列を同定するわけだが、想定される問題としては生存細胞数が非常に多いか非常に少ない、という大きく2つの可能性がある。前者の場合は次世代シークエンサーを用いたハイスループットな方法を採用し、後者の場合は個別の細胞クローンを調べていく。

候補遺伝子群が得られれば、当初の計画通り順次個別の遺伝子の機能解析に入る。当初の計画を一部変更してゲノムワイドshRNAライブラリーの会社を変えたことで最適化に時間を要したため、初年度の支出が交付申請書に記載の額よりも少なくなったが、全体としては当初の計画に近い形で研究は進行しており、まもなく実際のshRNAスクリーニング実験に入るため、次年度使用額はこれに当てる。
高移動度・層状MoS2チャネルトランジスタの基礎的研究

将来ヒューマンインターフェース用トランジスタのチャネルとして、比較的移動度が高い、原子2次元層状二硫化モリブデン(MoS2)半導体について、第一原理計算も用いて研究した。バンド構造計算より、アルカリ金属汚染でピニング現象が発生し、MoS2膜が高濃度n型化することを確認した。他機関キャリヤ濃度1021 cm-3と合致している。そこでクリーンプロセスとして、スパッタ法によりMoS2膜を成膜することで、1017 cm-3程度まで低減できることを確認した。次にMoS2の下地SiO2膜の表面平坦性向上により、1016 cm-3に低減でき、従来7倍である27 cm2/V-s (Hall移動度)を達成した。将来のLSIモジュール用トランジスタのチャネル材料として、原子レベルで層状の2次元構造をもち、シリコンと同程度に移動度が高い二硫化モリブデン(MoS2)半導体について、第一原理計算を用いて研究を行った。特に、二硫化モリブデン成膜技術の確立を目指して、二硫化モリブデンのバンド構造について計算し、バンド構造の結晶性(格子間モリブデン、格子間硫黄、格子欠損等)依存性を調べた。また、結晶性の評価に用いるRaman分光について、得られた結果を評価するための理想的な分光特性についても検討した。さらに、二硫化モリブデン半導体特性の下層膜依存性を改善することを目指して、汚染物質を想定したバンド構造の変化についても調べ、例えば、ナトリウムによって、ピニング現象が発生してしまい、二硫化モリブデン膜が高濃度n型半導体としてしか振る舞うことがないことを確認した。これまでの他機関の発表において、主に剥離プロセスを用いて二硫化モリブデン薄膜を形成している実験結果の殆どが高濃度n型特性しか得られていないことと合致している。これは、シリコン半導体のクリーン化プロセスにより、二硫化モリブデン膜を成膜することが非常に重要であることを示している。これらを基礎として、二硫化モリブデン膜の移動度をより向上させる指針を得た。以上の結果について、今後、少なくともレターを2編程度投稿する予定である。将来のヒューマンインターフェース及びMonolithic LSI用トランジスタのチャネル材料として、原子レベルで層状の2次元構造をもち、シリコンと同程度に移動度が高い二硫化モリブデン(MoS2)半導体について、第一原理計算を用いて研究を行った。昨年度に得られた二硫化モリブデンのバンド構造、バンド構造の結晶性(格子間モリブデン、格子間硫黄、格子欠損等)依存性、理想的な分光特性Raman分光特性、ナトリウム汚染によるバンド構造の変化を基礎として、今年度はまず、アルカリ金属汚染により、ピニング現象が発生し、二硫化モリブデン半導体膜が高濃度n型化することを確認した。これまでの他機関の発表においてアルカリ金属汚染が発生していると考えられる他機関の実験結果(キャリア濃度10^21 cm^-3)と合致している。これを基礎に、シリコンLSIで用いられるクリーン化プロセスであるスパッタ法により二硫化モリブデン膜を成膜することで、キャリア濃度を10^17 cm^-3程度にまで低減できることを確認した。また、トランジスタ設計に向けて、pおよびn型化する不純物ドーピング技術について、モリブデン置換と硫黄置換を想定して検討した。イオン化エネルギーと熱的安定性を示す形成エネルギーに関する計算結果より、p型化にはモリブデン置換のバナジウムとニオブ、n型化するには、モリブデン置換のレニウムが有望であることを明らかにした。26年度が最終年度であるため、記入しない。工学、電子デバイス26年度が最終年度であるため、記入しない。H25年度の計画に比較して、まず、二硫化モリブデン成膜技術の確立について、二硫化モリブデンのバンド構造について計算し、バンド構造の結晶性依存性を調べた。さらに、結晶性の評価に用いるRaman分光について、得られた結果を評価するための理想的な分光特性についても検討した。次に、二硫化モリブデン半導体特性の下層膜依存性を改善することを目指して、汚染物質を想定したバンド構造の変化についても調べ、例えば、ナトリウムによって、ピニング現象が発生してしまい、二硫化モリブデン膜が高濃度n型半導体としてしか振る舞うことがないことを確認した。今後、少なくともレターを2編程度投稿する予定であり、概ね順調に進展している。今後、トランジスタの性能向上のため、第一原理計算を用いて、ドーパントの評価を行う。特に、Mo置換とS置換それぞれについて、それらの隣接族を中心に不純物準位の評価を行う。さらに、同様に原子レベルで層状の2次元構造を持つタングステンダイセレナイド(WSe2)等の他の遷移金属ダイカルコゲナイド半導体についても結晶欠陥や汚染物質、ドーパントの検討を行い、二硫化モリブデンとの比較をすることで、原子レベル層状2次元半導体の高性能化を実現する。
ガングリオシドを特異的に認識するタンパク質の探索

私は,ガングリオシドを特異的に認識するタンパク質を探索する戦略として,ガングリオシド結合性ペプチドの同定を目指している.本研究は,ランダムペプチドライブラリーを利用した特定ガングリオシド結合性ペプチドのスクリーニング法の可否を証明することを第一の目標とし,ガンの転移に深く関わっていることが示唆されているガングリオシドGD1aに焦点を絞り,GD1a結合性ペプチドの同定を行った.ガングリオシドGD1aをオクチルセファロースに吸着させ,GD1aアフィニティーカラムを作製した.このカラムにランダムペプチドライブラリー(様々な15アミノ酸配列をファージ上に発現させたもの)を添加し,結合したファージをGD1aで選択的に回収した.回収したファージを大腸菌へ感染させ増幅し,再度アフィニティーカラムで選択する操作を4回繰り返すことで,GD1aと結合するファージ群の濃縮に成功した.GD1a結合性ファージをクローン化して結合特異性を確認したところ,酸性リン脂質とは結合せず,GD3結合性及び非結合性のクローンが存在した.これらのファージからDNAを単離し,塩基配列を決定した結果,GD1a結合性ファージは,主に3種のファージクローンから由来していることが明かとなった.これらのファージが発現するペプチドは,疎水性アミノ酸残基と親水性アミノ酸残基(主に塩基性)が混在する特徴的な配列をしていた.現在,これらのペプチドを化学合成し,サイズ排除クロマトグラフィーによるガングリオシドとの結合解析を進めている.本研究によって,ランダムペプチドライブラリーがガングリオシド結合性ペプチドの探索において,極めて有効な手法であることが確認された.一方,本研究手法の限界を克服する新しい手法へと発展させる手掛かりも得られ,これを踏まえた予備実験において良好な結果が得られており,次年度の課題となった.私は,ガングリオシドを特異的に認識するタンパク質を探索する戦略として,ガングリオシド結合性ペプチドの同定を目指している.本研究は,ランダムペプチドライブラリーを利用した特定ガングリオシド結合性ペプチドのスクリーニング法の可否を証明することを第一の目標とし,ガンの転移に深く関わっていることが示唆されているガングリオシドGD1aに焦点を絞り,GD1a結合性ペプチドの同定を行った.ガングリオシドGD1aをオクチルセファロースに吸着させ,GD1aアフィニティーカラムを作製した.このカラムにランダムペプチドライブラリー(様々な15アミノ酸配列をファージ上に発現させたもの)を添加し,結合したファージをGD1aで選択的に回収した.回収したファージを大腸菌へ感染させ増幅し,再度アフィニティーカラムで選択する操作を4回繰り返すことで,GD1aと結合するファージ群の濃縮に成功した.GD1a結合性ファージをクローン化して結合特異性を確認したところ,酸性リン脂質とは結合せず,GD3結合性及び非結合性のクローンが存在した.これらのファージからDNAを単離し,塩基配列を決定した結果,GD1a結合性ファージは,主に3種のファージクローンから由来していることが明かとなった.これらのファージが発現するペプチドは,疎水性アミノ酸残基と親水性アミノ酸残基(主に塩基性)が混在する特徴的な配列をしていた.現在,これらのペプチドを化学合成し,サイズ排除クロマトグラフィーによるガングリオシドとの結合解析を進めている.本研究によって,ランダムペプチドライブラリーがガングリオシド結合性ペプチドの探索において,極めて有効な手法であることが確認された.一方,本研究手法の限界を克服する新しい手法へと発展させる手掛かりも得られ,これを踏まえた予備実験において良好な結果が得られており,次年度の課題となった.
ヒト神経系病変の定量形態学的研究-二次元画像処理システムを用いた研究法の開発-

神経系の病変を研究する場合に、定性的研究と定量的研究があるが、後者に関しては主としてDIGIPLANなどを用いた手動によるものが多く用いられてきた。しかし、これでは多数のものを計測するのに時間がかかりすぎる。一方、QUANTIMETなどを用いた自動的なものは濃度のみで構造を識別するので正確はでない。結局、肉眼による補正が必要になり、能率的でない。また、そのためにモノクロ標本を作らねばならない。そこで染色した組織標本そのものを用い、その色調により構造を自動的に判別させ、変化を容易に定量する方法があると便利である。本研究はこのための画像処理システムを用いて以下の解析の方法を開発した。この研究の基本システムとして、二次元画像処理システムにnexus6400が現在最適である。nexus6400はNASAの宇宙開発技術あるいはスパイ衛生ランドサットでの技術のために用いられた画像開発システムであり、これを生物資料の解析に応用した。本機は、パイプライン型のプロセッサーを搭載し、カラー画像をテレビカメラよりリアルタイムに取り込み、かつ高速に画像処理・演算を行うことの出来るイメージプロセッサーで画像解析に役に立つ粒子解析およびパックを備えており、本研究の目的に十分対応出来る能力を備えている。目的とする構造は、神経細胞の数、大きさ、神経突起のひろがり、グリアの数、髄鞘の容積、神経線維の数・径・面積、筋線維の数・面積・径などである。染色は髄鞘染色(KB染色)、ヘマトキシリン・エオジン染色(HE染色)、免疫組織化学、酵素組織化学、ゴルジ染色などである。これらにつき、標本の標準化をはかり、既存のプログラムがないのでこれをそれぞれの目的に応じて開発した。目的:画像解析装置を用いての本年度の研究目標は、腓腹神経生検における有髄線維の髄鞘径,軸索径,有髄線維密度の計測を自動的に行わせることである。方法:組織スライドを光学的顕微鏡よりビデオカメラ(Ikegami ITM370)に入力してデジタル化の上、nexus 6400にて解析した。まず手動で計測できるプログラムを作成し、計測データを蓄積した。その上で、自動的に末梢神経の有髄線維軸索径,髄鞘径,線維密度を算出するプログラムを作成し、両者の値を比較検討した。軸索径,髄鞘径としては、楕円変換後の最短径、同一面積を有する円の直径(円相当径)を測定し、正円率(周長2×円周率×円相当径)、軸索径・髄鞘径の相関を同時に出せるようにした。また自動で認識して二値化処理をしたあと、視覚的に修正できるように、プログラムを組んだ。その場合、原画像を背景に残しておき、かつカラーモニター(日立HM-2719B-C-11)をnexusのmanitorと並列に配置し、誤りが起きないように十分に注意しながら修正した。結果:末梢神経10例につき前述の方法で行い、両者を比較検討した。一般に末梢神経の有髄線維は、9um程度の大径有髄線維と、3um程度の小径有髄線維とからなるが、大径線維については手動でも自動でもほとんど変化はなかった。小径線維については瓢箪型や三日月型の変形を起こしているものが多い結果、手動のデータにより自動のデータの方が大きく算出する結果となった。ただこれについては正円率を同時にパラメーターとして検出すれば解決可能と考えられた。考察及び反省:自動計測プログラムの完成が2月末であったため症例数を十分増やせなかった。しかしこれまで12時間を要した1症例の計測が、60分で済むことの意味は非常に大きいと思われる。現在この自動計測値を用いた末梢神経生検の症例報告を、神経内科(東京)に投稿中である。

NASAの宇宙開発技術あるいはスパイ衛生ランドサットでの技術のために開発された画像処理システムであるnexus6400を用いて、病理組織標本での定量的解析のためのノウハウの開発を行ってきたが、今年度はゴルジ標本を用いたヒト小脳プルキンエ細胞の加齢に伴う変化の定量的な計測を試みた。検索対象は、老年痴呆4例(平均年令83.3才)、若年正常例6例(平均年令49.7才)、高令正常例3例(平均年令81.6才)である。方法は、歯状核をとうる矢状断面の小脳皮質をゴルジ染色し、厚さ100μmの連続切片(24ー42枚)を作成してプルキンエ細胞を観察した、細胞体および樹状突起が比較的明瞭に染まっているプルキンエ細胞のうち、細胞体から出ている樹状突起が一本しかないものを各例症で50個ずつ選び、計測プログラムを作成し、細胞体の断面積A(μm^2)、樹状突起近位部の最小径D(μm)、細胞体から樹状突起第一分岐部までの長さL(μm)、細胞密度CD(個/μm)を測定した。CDは各症例10ケ所(フォリアの山5ケ所谷5ケ所)で測定した。その結果、A値は老年痴呆群で高令、若年正常群に比して低値を示したが、若年群に対しては有意の差がみられた。D値については、老年痴呆群が高令正常群より低値であったが有意ではなかった。L値には一定の傾向がなかった。CD値は加令とともに減少する傾向(r=-0.81.P<0.01)を示し、これは山の部分で著明であった。老年痴呆では、高令正常群とは差がなかったが、若年正常群より有意に低値を示した。このようにこの装置を用いて、ゴルジ標本での定量的解析が可能になった。
光スイッチ能を有するDNA結合性分子の開発

遺伝子を人工的に制御することは,人類の福祉の貢献に役立つものと考えられる.制御法の中で特に光を用いる系は,光治療などの例を見るように重要である.しかしながら,従来知られているDNA結合性薬剤は,天然から得られたものの類縁体に限られている.本研究では,より効率の高い遺伝子光制御分子の開発を目的とする.著者らは次の様なシステムを開発すべく検討を加えた.すなわちDNAの溝に対して粘着性の末端を有するエチレン誘導体のシス,トランス変換によるDNA結合の制御系である.例えばトランス体では,特定遺伝子に結合するが,シスで出来なければ,これによってその遺伝子の発現能を制御できる.DNA結合性薬剤は,これまで副作用が高かった.これは,これらの薬剤がDNA配列に対して特異性が低いためであった.そこで選択性の向上の限界を打破するために光とカップルしたシステムを考案したのである.これによって光照射部のみの反応により選択性を取得できる.これらの基礎的検討は,息詰まっていたDNA試薬の今後の展開を約束するものであり極めて重要である.当該年度では,光異性可能を有するDNA結合性分子を合成し,DNAとの相互作用を光照射果または非照射下での検討を行い,上記過程が実現可能なことを証明できた.遺伝子を人工的に制御することは,人類の福祉の貢献に役立つものと考えられる.制御法の中で特に光を用いる系は,光治療などの例を見るように重要である.しかしながら,従来知られているDNA結合性薬剤は,天然から得られたものの類縁体に限られている.本研究では,より効率の高い遺伝子光制御分子の開発を目的とする.著者らは次の様なシステムを開発すべく検討を加えた.すなわちDNAの溝に対して粘着性の末端を有するエチレン誘導体のシス,トランス変換によるDNA結合の制御系である.例えばトランス体では,特定遺伝子に結合するが,シスで出来なければ,これによってその遺伝子の発現能を制御できる.DNA結合性薬剤は,これまで副作用が高かった.これは,これらの薬剤がDNA配列に対して特異性が低いためであった.そこで選択性の向上の限界を打破するために光とカップルしたシステムを考案したのである.これによって光照射部のみの反応により選択性を取得できる.これらの基礎的検討は,息詰まっていたDNA試薬の今後の展開を約束するものであり極めて重要である.当該年度では,光異性可能を有するDNA結合性分子を合成し,DNAとの相互作用を光照射果または非照射下での検討を行い,上記過程が実現可能なことを証明できた.
DNAマイクロアレイによる遺伝子解析を用いた胆道閉鎖症予後予測の研究

研究の目的は、胆道閉鎖症の原因および病態をさらに究明することであり、遺伝子マイクロアレイを用いて胆道閉鎖症の肝組織における遺伝子発現の変化を網羅的・統合的に分析した。胆道閉鎖症患者から手術で採取された肝組織を対象として、他疾患で得られた肝組織を対照として用いた。肝組織からRNAを抽出してマイクロアレイを行った。遺伝子発現プロファイルから、胆道閉鎖症においては60遺伝子がupregulateし、39遺伝子がdown-regulateしていた。GO解析により、免疫及び炎症応答に関連するいくつかの生物学的経路が胆道閉鎖症の発症に関与している可能性が示唆された。胆道閉鎖症(以下、本症)は、葛西手術が成功し胆汁が排泄されるようになっても、やがて肝硬変や肝不全の病態に陥ることが少なくない。この肝線維化と肝硬変の進行が大きな予後因子と考えられている。自己肝での成績は、未だ満足できるものではなく、長期的には約半数の患児達は肝移植を受けざるを得ないのが現状である。本研究の目的は本症における肝線維化、肝硬変の進行におけるメカニズムについて検討することである。本研究では、本症における血漿および肝組織を用いた研究を行う予定であり、当施設における倫理委員会の承認を得ているところであるが、本年度はこれまでのところ本症での検体が得られていない。胆道閉鎖症は、葛西手術が成功し胆汁が排泄されるようになっても、やがて肝硬変や肝不全の病態に陥ることが少なくない。将来的には約半分の症例で肝移植が必要となる指定難病である。本疾患の原因として、ウイルス感染、胆汁酸代謝異常、血行障害、ductal malromationなどの諸説があるが依然不明のままである。本研究の目的は、胆道閉鎖症の原因を究明すること、また予後のと関係が明確にすることである。平成26年度には、本研究の生命倫理委員会の承認後、胆道閉鎖症患児の血液を採取し、検体の収集を行い、DNA抽出キット(アジレントSureselctXT Reagents)を用いてライブラリを作製している。また、初回手術例においては、血液だけでなく肝組織、肝門部索状物の検体収集を行っている。今後作製したDNAライブラリから、DNAのシークエンシングを行い塩基配列を解析する予定である。特に胆道閉鎖症と遺伝的背景の関連があるか解析を行い、また予後との関連を調べるため移植例および自己肝生存例との間の塩基配列の差について解析する。胆道閉鎖症は葛西手術が成功し胆汁が排泄されるようになっても、やがて肝硬変や肝不全と呼ばれる病態に陥ることが少なくない。本症は上行性胆管炎や肝の線維化、肝硬変の進行が大きな予後因子とされている。自己肝での成績は未だ満足できるものではなく、長期的に約半数の患児達は肝移植を受けざるを得ないのが現状で、指定難病ともなっている。本疾患原因として、ウイルス感染、胆汁酸代謝異常、血行異常、ductal plate malformationなどの諸説があるが依然として不明のままである。本研究の目的は、胆道閉鎖症の原因を究明すること、また予後との関係を明確にすることである。我々は、これまで予後因子の一つである上行性胆管炎に関連して、本症生体肝移植例の肝臓を検討し、胆管炎の繰り返すことによりbile lakeが形成されることを病理学的に証明し、その形成例が予後が不良であることを発表してきた。この結果を踏まえて、もう一つの大きな予後因子である肝の線維化、肝硬変の進行におけるメカニズムについて検討することも当該研究計画の目的としている。生命倫理委員会の承認後、胆道閉鎖症患児から採取した検体を用いてDNAを抽出しライブラリを作製する。作製したライブラリからDNAのシークエンシングを行い塩基配列を解析する。特に胆道閉鎖症と胆道閉鎖症の原因について、さらに遺伝的背景の関連があるかについても解析を行い、また予後との関連を調べる。代表研究者の異動に伴い新たな施設での検体収集が必要とな。現在DNAの抽出を行っている。胆道閉鎖症は、新生児期に発生する胆汁うっ滞性疾患である。現在行われている手術治療は、肝門部から微小胆管から胆汁を排泄させるようにすること(葛西手術)であるが、全例が根治できるものではない。また、手術治療が成功し胆汁が排泄されるようになっても、やがて肝硬変や肝不全と呼ばれる病態に陥ることが少なくない。本疾患の原因として、ウイルス感染、胆汁酸代謝異常、血行異常、ductal plate malformationなどの諸説があるが依然として不明のままである。そのために胆道閉鎖症の発生機序の解明が必要であり、さらなる研究が望まれているところである。胆道閉鎖症においては、遺伝的要素が胆道閉鎖症の発症に関与している可能性があるが、明らかとなっていない。ここ数年にわたって胆道閉鎖に関する研究が進められており、いくつかの有望な遺伝子が同定されつつある。事前に文書で同意の得られた胆道閉鎖症患者から手術で採取された肝組織を対象として、他疾患の患児で合併切除がなされた肝組織標本を文書で同意が得られた上で対照として用いた。

得られた肝組織からRNAを抽出してマイクロアレイを行った。得られたデータから胆道閉鎖症群と対照群とを比較する組み合わせでFoldchangeを算出した。遺伝子発現プロファイルから、胆道閉鎖症においては60遺伝子がup-regulateし(10倍以上)、39遺伝子がdown-regulateしていた(0.1倍以下)。GSEA解析を行った結果、免疫及び炎症応答に関連するいくつかの生物学的経路や細胞膜channel活性の変化が胆道閉鎖症の発症に関与している可能性が示唆された。研究の目的は、胆道閉鎖症の原因および病態をさらに究明することであり、遺伝子マイクロアレイを用いて胆道閉鎖症の肝組織における遺伝子発現の変化を網羅的・統合的に分析した。胆道閉鎖症患者から手術で採取された肝組織を対象として、他疾患で得られた肝組織を対照として用いた。肝組織からRNAを抽出してマイクロアレイを行った。遺伝子発現プロファイルから、胆道閉鎖症においては60遺伝子がupregulateし、39遺伝子がdown-regulateしていた。GO解析により、免疫及び炎症応答に関連するいくつかの生物学的経路が胆道閉鎖症の発症に関与している可能性が示唆された。平成26年度は、代表研究者の異動に伴い、新たに当施設での患児からの検体の収集を行うこととし、現在DNAの抽出を行っていることである。DNAの抽出後、シークエンシングを行う予定としている。平成28年度は、検体の収集を継続していく。症例は40例程度を見込んでいる。検体からDNAの抽出後ライブラリーを作製し、DNAのシークエンシングを行い塩基配列を解析する。予後との関連についても解析する。小児外科学平成27年度は、さらに症例の集積を継続していく。症例は40例を見込んでいる。血液からDNAの抽出後ライブラリーを作製、DNAのシークエンシングを行い塩基配列を解析する。胆道閉鎖症は予後が様々であり、その関連を調べるため移植例と自己肝生存例での塩基配列の差について解析する。当初の計画においては、対象を本症の新患患児にしており、当施設における承認とインフォームドコンセントを取得した上で、本症患者の血漿を用いたTGF-β1測定と肝組織中のTGF-β1の測定とDNAマイクロアレイ分析による遺伝子の発現解析を中心に行う予定であった。しかしながら、本研究の開始後、これまでのところ本症患児がおらず、研究に必要な血漿や肝組織が得られていない。本研究に必要な検体が得られないことは、非常に重大な課題と考えており、以下に示すような方策を現在検討しているところである。本年度はDNA抽出までとなったため、次年度使用額が生じた。本年度はDNA抽出にとどまったため、次年度使用額が生じた。次年度にDNAのシークエンシング解析を行う予定である。今後も本症患児の検体を得ることの困難が予想されるため、現在近隣の他施設の協力を要請しているところである。新患患児に限らず、フォロー中の患児も場合によっては対象にすることも考えている。また、他施設の臨床検体を用いることが倫理上困難な場合には、対象を動物モデル(本症に類似したモデルを新たに作成)に変更するなどして、本研究を進めていきたいと考えている。次年度にシーケンシングを行う予定である。
視床下部における細胞外cAMPの作用とその機序の解析

プリン誘導体の一つであるcAMPは、種々の受容体刺激によって細胞内で生成される細胞内情報伝達物質であり,その一部が細胞外へ排出・流出されることが広く知られている。しかしながら、放出されて細胞外に存在するcAMPが、生体においてどのような機能をはたしているのかは殆ど知られていない。本研究は,細胞外cAMPが視床下部視索上核(SON)の神経分泌ニューロンに及ぼす生理的機能について検討することを目的としている。ラットSONニューロン単離細胞標本およびスライス標本を作成し、ホールセル・パッチクランプ法を用いて、シナプス後膜および、前膜での作用について検討した結果、以下のことが明らかとなった。シナプス後膜細胞外cAMPは、細胞膜表面のエクト型酵素群により代謝されてアデノシンとなり、アデノシンA1受容体を介してG蛋白βγサブユニットが直接Ca^<2+>チャネルに結合して電流を抑制したことが示唆された。内因性細胞外cAMPの起源としては、SON神経分泌ニューロンからのcAMPの細胞外への事故分泌による経路は存在しないことが示唆された。シナプス前膜自発性シナプス後電流を測定し、シナプス前におけるグルタミン酸放出、およびGABA放出への細胞外cAMPの作用を検討した。細胞外cAMPは抑制性シナプス後電流の発生頻度を濃度依存的かつ可逆的に抑制したがその電流の振幅については変化を生じなかった。また、興奮性シナプス後電流については、電流の発生頻度、振幅とも変化を生じなかった。抑制性シナプス後電流の発生頻度の機序に関しては、細胞外cAMPは、シナプス前膜の場合とはことなり、細胞膜表面のエクト型酵素(ecto-5'-nuclotidase)により代謝されてAMPとなり、このAMPがシナプス前膜のアデノシンA1受容体を刺激して抑制反応が生じていることが示唆された。プリン誘導体の一つであるcAMPは、種々の受容体刺激によって細胞内で生成される細胞内情報伝達物質であり、その一部が細胞外へ排出・流出されることが広く知られている。本研究は細胞外cAMPが視床下部視索上核(SON)の神経分泌ニューロンに及ぼす生理的機能について検討することを目的としている。ラットSONニューロン単離細胞標本を作成し、ホールセル・パツチクランプ法を用いて、シナプス後膜での作用について検討した結果、以下のことが明かとなった。(1);細胞外cAMPは膜電位依存性Ca^<2+>電流を濃度依存性に可逆的に抑制した。(2);アデノシンA1受容体の阻害薬であるCPTによってcAMPによる抑制は解除された。(4);5'-nucleotidase阻害薬であるGMPによってcAMPによる抑制は解除された。(5);G蛋白βγサブユニットが直接Ca^<2+>チャネルに結合して電流を抑制する経路を阻害することが知られているpre-pulse刺激によって、cAMPによる抑制は解除された。(6);SONニューロン細胞内のcAMP濃度を上昇させるDMB-Forskolin刺激によっても抑制反応が起きたが、この抑制反応はA1受容体阻害薬投与ならびにPre-Pulse刺激によっては解除されなかった。以上より、細抱外cAMPは、細胞膜表面のエクト型酵素群により代謝されてアデノシンとなり、アデノシンA1受容体を介してG蛋白βγサブユニットが直接Ca^<2+>チャネルに結合して電流を抑制したことが示唆された。内因性細胞外cAMPの起源としては、cAMPの細胞外への自己分泌による経路は存在しないことが示唆された。

抑制性シナプス後電流の発生頻度の機序に関しては、細胞外cAMPは、シナプス前膜の場合とはことなり、細胞膜表面のエクト型酵素(ecto-5'-nuclotidase)により代謝されてAMPとなり、このAMPがシナプス前膜のアデノシンA1受容体を刺激して抑制反応が生じていることが示唆された。
ファジィ理論を用いた大震後の都市機能復旧計画策定のための支援システム開発

本研究で得られた成果を要約すると以下のようである。(1)1989年ロマプリエタ地震における都市ライフラインの被害について調査・分析的研究を行った。その結果,地盤の液状化が地中埋設ライフラインの破壊に及ぼした影響が顕著であったことが明らかになったので,液状化による地中埋設管の破壊に関する研究を進めた。具体的には,液状化過程における地中埋設管への力やその挙動解析を通して,管路にとって最も危検な地盤条件について考察した。(2)ライフライン系の被害波及モデルとして,既存のシステム構造解析手法であるISM(Interactive Structural Modeling)法を応用し1978年伊豆大島近海地震における伊豆半島の道路網の被害を解析した。被害箇所ならびにその程度などが判明している時点での情報の信頼性を考慮に入れながら,それらを復旧救援計画支援システムに取り込む手法を構築した。このとき,どの道路から復旧すればよいのかを本システムの中に取り組み伊豆半島におけるケ-ススタディを実施した。震後の道路間の連結性に注目した結果,被害程度の小さい道路から復旧した結果が実際の結果とよい対応を示していた。(3)2値型およびファジィ型のISM法により,震後の都市機能復旧計画策定のための諸被害に関するリスク認識の階層構造図を求めた。その結果をもとに各要因の規定力を数値化し,復旧計画の難易度の総合評価を行った。(4)大震時の復旧救援計画の検討のための消防アクセス道路の危険度評価とその機能性能からみた生活レベル低下の定量的評価を行った。特に,道路交通の時間信頼性,アクセス可能道路の選定,及び交通時間に対する満足度などを評価したことが本研究の特徴である。(5)都市全体を対象にした地域別の地震災害危険度評価法を電算機上で構築し,金沢市を対象に危険度評価に必要なデ-タベ-スを作成した。このとき,ライフライン系の被害波及モデルを提案するとともに,構造破壊による機能損失に伴う2次災害をもつ定量化するモデルを考えた。このモデルを金沢市における地震時危険度評価ならびに復旧計画に組み込むことにより,2次災害や都市機能の低下が都市全体の震災復旧計画に及ぼす影響について考察した。
動的環境要素が経路認知に及ぼす影響

本研究は、ヘッドマウントディスプレイを用いた視環境シミュレータに、CGによって作成された、人、自動車などの動的な要素を付加して表示するシステムを開発し、これを用いた経路認知(記憶と再認、および雰囲気の違いの評価)についてのシミュレーション実験を行い、これを従来の固定的環境要素のみによる実験結果と比較することによって、動的な付加的要素の効果を明らかにすることを目的として行われた。まず、CG画像を用いて、街路の動的環境要素としての歩行者の流れや滞留が経路の記憶、再認に及ぼす影響に関する実験を行った。その結果、多くの人が人の流れや滞留を経路記憶の手がかりとしていること、したがってそれらが変化することによって迷いが生じること、さらに滞留する人々の存在によってその場所の意味付けが強化され記憶されやすいことなどを明らかにした。次に、より現実感のあるシミュレーション空間を作成するため、人や車などの動的環境要素をコンピュータグラフィックスで生成し、模型空間の画像と合成する新しいシミュレーションシステムを開発した。そして、動的環境要素が街路空間の雰囲気に及ぼす影響について実験を行った結果、本装置のある程度の有効性が確認された。本研究で開発したシミュレータシステムは、先に述べた場所の雰囲気に関する実験のみならず、経路探索や緊急時の避難行動、あるいは街路や室内の快適性評価など、これまでに人や車などの動的な環境要素が存在しない設定のもとで行われてきた様々なシミュレーション実験に応用できるものと期待される。本年度は、経路認知(記憶と再認)についてのシミュレーション実験を行うための装置として、模型空間の映像に、ワークステーションで生成したCG画像をリアルタイムで合成して表示するシミュレーションシステムの構築をおこなった。すなわち、現有のシミュレーション装置は、縮尺模型の内部に挿入されたモデルスコープによって得られる像をCCDカメラを介して観察者が装着したヘッドマウントディスプレイ(HMD)に映し出すものであるが、本研究では、この模型空間の映像に、ワークステーションで生成したCG画像をリアルタイムで合成して表示するシミュレーションシステムに改良する。そのために、従来のシミュレーション装置と、CG画像生成用のワークステーションの連結、同期調整など、ハード面での調整を完了し、一方ソフト面では、あらかじめ設定されたプログラムに従った動きをする単純な形状の三次元デジタルモデル(人、車など)を試作し、それらを観察者の視点移動、視方向変化とリアルタイムでリンクさせた画像を生成している。ただし、この画像と、モデルスコープで撮影した模型の映像とを画像合成装置によりリアルタイムで合成することには成功しているが、CGによって生成された人や車などのオブジェクトが、模型で作られた建物の後ろ側に回った時に見えないようにする、CGにおけるいわゆる陰線処理にあたる技術が未完成であり、経路探索の心理実験のデータが現段階では得られず、研究成果の発表に至っていない。本研究は、模型シミュレータのヘッドマウントディスプレイに、CGによって生成された人、自動車などの動的な要素の画像を合成表示するシステムを開発し、これを用いた経路認知(記憶と再認)についてのシミュレーション実験を行い、従来の固定的環境要素のみによる実験結果と比較することによって、動的な付加的要素の効果を明らかにすることを目的として行われた。本年度は、前年度までに画像合成などの改良を行ったシミュレーション装置を用いて、街路の動的環境要素として歩行者の流れや滞留が場所の印象評価および記憶に及ぼす影響に関する実験を行った。その結果,先ず街路空間の雰囲気の変化についての印象評価については,従来の模型だけの場合に比べて人や車が介在する事によって,それらの視覚的なノイズにより建物のセットバックによる空間の広がりの変化や高低の変化があまり影響されず,また逆に模型で提示された物理的な空間構成からは変化が認められなかった場所が人の流れによって分節化されるといった,実際の場合とより近い評価が得られた。次に街路の記憶に関しては,多くの人が人の流れや滞留を経路認知の手がかりとしていること,したがってそれらが変化することによって迷いが生じること,また滞留する人々の存在によって,その場所の意味付けが強化され,記憶されやすいことなどを明らかにした。なお,これに用いた装置および前半の実験結果について、建築シミュレーションに関する国際会議(第4回EAEA、ドレスデンで1999年9月開催)において研究成果を発表した。
染色体変化の腫瘍内多様性からみたゲノム変化のtemporal analysis

腫瘍細胞がどのように進展するのかを解明するために、不可逆的かつ蓄積性に変化するゲノムレベルの変化を手がかりに、腫瘍内の多様な成分の間の系譜を明らかにしようとした。CGHはbreakpointの解析ができることから、この目的でのゲノム解析の手段として適しているが、様々な方法論上の問題点があった。初年度でそれらの問題点を踏まえた新たなプロトコールを確立し、次年度にはそれを未分化型胃癌に応用した。染色体DNAの1コピーの増減と2コピーの増減を識別するために、近4倍体のKATO-III細胞に正常細胞を種々の割合で混合し、nick translation標識によるCGHを行い、混合比に応じたG/R比の変化を検討した。その結果、DOP-PCRによる増幅の有無がG/R比のprofileや正常細胞の混合によるG/R比の変化に影響することはほとんどなかった。また、DNA-tetraploidの腫瘍では、正常細胞の混入が20%未満の条件で1コピーのgainが捉えられたが、1コピーlossを捉えることは困難であった。DOP-PCR標識はCGHに用いるとfalse positiveが出現するためCGHには適しないことが分かった。一方、未分化型胃癌23例にレーザ・マイクロダイセクションを用いて個々の腫瘍内の多数箇所からサンプリングを行い、抽出したDNAをDOP-PCRで増幅後、CGHに用いて染色体(部分)のコピー数変化を調べた。個々の腫瘍内の検索したすべてのサンプルに見られた変化をstemline変化と定義し、それらに更にsideline変化が付加していったプロセスを、多数のサンプルの結果から症例ごとに再構築した。また、早期癌に見られて進行癌に少ない変化(4q+)、逆に進行癌に多く早期癌に少ない変化(7p+、15q+、3p-など)を明らかにした。これまでに、microdissectionの比較的容易な食道扁平上皮癌を用いて、病変ごとに多数箇所サンプリングし、HUMARAによる単クローン性の証明、DOP-PCR CGHによる初期の染色体変化の抽出を行い、国際誌に発表した。しかし、DOP-PCRで増幅・標識したDNAと増幅せずnick translation(NT)で標識したDNAとの間で、CGHの結果に微妙に差がみられた。この差の原因を解明するために、まず、これまでにpainting FISHとCGHで絶対的なコピー数の明らかにした培養系を用いて、腫瘍細胞に見られるDNAのコピー数の増減が、DOP-PCRで増幅する過程、あるいは標識の過程で変化してしまわないかどうかを検討した。その結果、標識方法の影響が大きく、DOP-PCR後にNT標識をすればPCR増幅せずにNT標識をした場合とCGHの結果はほとんど変わらないがPCR標識ではartifactが増えることがわかった。また、リアルタイムPCRでPCR増幅のphase間(exponentialかplateauか)でCGHの結果を比較したところ、有意な差は見られなかった。そのために以後の検討はplateau phaseまでDOP-PCRを行いNTで標識することにした。その条件下で、培養細胞と正常細胞、またはDNA-diploidの培養細胞とDNA-tetraploidの培養細胞を種々の割合で混合してDOP-PCRで増幅したものとしなかったものとの間でCGHの結果を比較した。現在データの解析を行っている。この方法論の検討と平行して、細胞単離の困難さからこれまでほとんどデータのない、未分化型の胃癌の組織切片から、laser capture microdissectionで得られた微小組織をDOP-PCRで増幅、NTで標識してCGHを行い、最近ようやくデータが出始めた。これで、原発腫瘍に応用できる準備が整ったと考えている。この応用が平成14年度の目標である。

染色体DNAの1コピーの増減と2コピーの増減を識別するために、near-tetraploidのKATO-III細胞に正常細胞を種々の割合で混合したcontaminationmodelを作成してCGHを行い、混合比に応じたG/R比の変化がDOP-PCRによって修飾されるかどうかを検討した。その結果、CGHでは、DOP-PCRによる増幅の有無がG/R比のprofileや正常細胞の混合によるG/R比の変化に影響することはほとんどなかった。また、DNA-tetraploidの腫瘍では、理論値通り、正常細胞のcontaminationが20%未満の条件で1コピーのgainがCGHで捉えられた。染色体の1コピーlossを捉えることはCGHでは困難であったが、ゲノムDNAマイクロアレイでは1コピーlossの領域が部分的に捉えられた。この検討と平行して、Diffuse型胃癌23例にレーザ・マイクロダイセクションを用いて個々の腫瘍内の多数箇所からサンプリングを行い、抽出したDNAをDOP-PCRで増幅後、CGHに用いて染色体(部分)のコピー数変化を調べ、またゲノムマイクロアレイに用いてその変化の伽target geneを解析した。その結果から、個々の腫瘍内の検索したすべてのサンプルに見られた変化をstemline changesと定義し、進展の時間経過とともに、それらに更に変化(sideline changes)が付加していったプロセスを、多数のサンプルの結果から症例ごとに再構築した。また、検出された変化の中からearly eventsとlate eventsを抽出した。進行癌のearlyeventsが早期癌の変化とどのくらい重なるのかを検討し、早期癌に見られて進行癌に少ない変化(4q+)、逆に進行癌に多く早期癌に少ない変化(7p+、15q+、3q-など)を明らかにした。
比較の手法によるイスラ-ムの都市性の総合的研究

本研究班の目的は、アジア諸地域における多様な伝統的都市形態の実証的研究をとおして、イスラ-ムの宗教意識に表現された都市のコスモロジ-を類型的に把握し、非イスラ-ム都市との比較檢討によって、その社会史的・宗教思想史的位置づけの解明を意図していた。この目的にしたがって、初年度は主として「コスモロジ-」をめぐる定義を中心に、我が国における中世都市と聖地との密接な関連を課題に研究をすすめたが、第二年目には、視点をイスラ-ム都市に移し、都市問題へのアプロ-チの枠組を「王宮・モスク・市場」に設定して、イスラ-ム的都市景観の内部構造と、それを生みだしたイスラ-ム宗教の脱宗教儀礼性や脱聖俗二極分解性に注目し、非イスラ-ム都市との比較、イスラ-ム都市の多様性と多元的構造に隠された象徴性を解明することができた。平成二年度は、最終年度にあたるので、これまでの研究作業の成果を確認し、それを共有するための共同討議を実施し、成果の整理と公表のための計画を策定した。以下、箇條書き的に、本研究班が主催、もしくは共催した研究会および総括班主催の全体会議への参加状況を報告して研究実績の概要にかえることとする。1熊野三山信仰にかかわるシンポジュウム於天理大学平成2年11月22日24日。都市と聖地を結ぶものー初年度からの継続研究2イスラ-ムの都市性公開講演会仙台大会於宮城学院女子大11月27日ウンニ・ヴィカン博士(オスロ-大学教授)「カイロの庶民生活」、板垣雄三(東京大学教授)「湾岸危機を読み解く」3イスラ-ムの都市性全体集会於中近東文化センタ-平成2年12月12日G班より関本照夫が第4セッション、山形孝夫が第5セッションの企画立案・司会の責任者となった。(出版予定)4続都城論共同研究会於仙台ホテル一の坊平成3年1月18ー19日。
食道癌の集学的治療における個別化治療体系の確立

【集学的治療効果予測】p53 statusから見た効果予測:化学放射線療法(CRT)の67例の治療前生検組織で検討。P53wild type(WT)が48例、p53 mutant(MT)が19例であった。組織効果Grade1/2/3はWT群で16/17/15、MT群で17/2/0例であった。化学療法(CTx)の30例では、p53 WTが21例、p53 MTが9例で、臨床効果PR/NC・PDはWT群で16/5、MT群で1/8であった。p53 MT症例はCRT、CTxいずれに対しても89%の確率で治療抵抗例と予測された。【集学的治療効果判定】前治療施行の34例を対象に、治療後にもFDGの集積の遺残したSUVmax≧2.5のPET診断(+)の17例と集積の消失したSUVmax<2.5のPET診断(-)の17例で検討した。切片上の遺残腫瘍の最大断面積はPET(+)群の66.0676.0mm^2(平均287.7)に対しPET(-)群では032.6mm^2(平均10.0)であった。組織効果Grade0/1/2/3はPET(+)群では3/12/2/0、PET(-)群では0/2/10/5で、治療後PET診断(-)であれば、88%の確率で組織効果Grade2以上と予測された。1年、3年生存率は、PET(+)群の67.8%、40.7%に比し、PET(-)群は93.3%、81.7%であった(p=0.0076)。治療後PET(-)例が積極的手術適応と考えられた。【まとめ】集学的治療においてFDG-PETはその組織学的効果を予測する極めて有用な検査で、治療後にPETでFDGの集積の消失したPET(-)例が積極的な手術適応と考える。【集学的治療効果予測】<p53 statusによる効果予測>化学放射線療法の症例はp53 mutation(+)の19例は17例がGrade1の組織効果でpCR例は無かった。P53mutationと組織効果との間にはp<0.001の相関があったが、免疫染色ではp=0.071で優位な相関は認めなかった。<腫瘍血流と治療効果>Xenon CTの食道用解析ソフトの開発(安西メディカル)が担当者の退職で未定となり解析困難となったため、現在perfusion CTにて腫瘍血流と治療効果を治療前後で検討中である。現在までに、治療前6例、治療後3例測定し解析中である。【集学的治療効果判定】<FDG-PETの有用性>術前治療(-)の16例と(+)の23例で術前のSUVmaxと病理切片上の最大腫瘍断面積を比較検討した。治療の有無にかかわらず、p<0.001で両者は強い相関を示し、SUVmaxによる治療効果予測の可能性が示唆された。<FDG-PETによる組織効果予測>術前治療の23例で治療後のSUVmaxと組織学的効果及び病理切片上の遺残腫瘍断面積を比較検討した。

SUVmax≧2.5(PET集積(+))の11例は9例がGradel以下の組織効果で、遺残腫瘍断面積も72.0-676.0mm^2(median180.0mm^2)であった。一方、SUVmax<2.5(PET集積(-))の12例は11例がGrade2以上の著効例で、遺残腫瘍量は0-32.6mm^2(median7.0mm^2)であった。治療後SUVmaxにて術前に組織学的効果予測、更には遺残腫瘍量の予測が可能と考えられた。【salvage手術の適応】術後の予後と遺残腫瘍量は強い相関を示す。術前治療後手術を施行した23例で治療後のSUVmax値とその予後を比較した。SUVmax≧2.5の11例は8例が原病死、1例が他病死で、2生率16.7%に対し、SUVmax<2.5の12例は3例再発治療中も全例生存中で最長3年、中央値24ヶ月にて経過中である。治療後SUVmax<2.5がsalvage手術の積極的適応と考える。【治療効果判定】術前治療施行の食道SCC:34例を、治療後のFDGの集積の有無で、PET(+)の17例(SUVmax≧2.5)とPET(-)の17例(SUVmax<2.5)に分け検討した。切片上の最大腫瘍断面積はPET(+)群の66.0676.0mm^2(平均287.7)に対しPET(-)群では032.6mm^2(平均10.0)であった。Grade2以上組織効果はPET(+)群では2例(12%)に対し、PET(-)群では15例(88%)に認められた。治療後PET診断(-)であれば、組織効果Grade2以上と予測された。【手術適応】1年、3年生存率は、PET(+)群の67.8%、40.7%に比し、PET(-)群は93.3%、81.7%であった(p=0.0076)。治療後PET(-)例が積極的手術適応と考えられた。【個別化治療】治療後PET(-)例は積極的手術を、PET(+)例は切除可能例には手術を行うが、切除不能例も含め、次の治療を念頭にした治療戦略が肝要である。