hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低頻度モザイク変異検出技術を用いた生殖細胞モザイク変異の推定診断法開発

両親の保因者検査が陰性のde novo変異では、次子への再発率は低いが、両親のどちらかの生殖細胞モザイク変異によって、罹患児の両親における同胞の再発率は一般集団より高くなる。生殖細胞モザイク変異の頻度は疾患毎に異なるが、生殖細胞モザイク変異の正確な頻度の測定は難しく、多くの疾患では生殖細胞モザイク変異の頻度は不明である。近年解析技術の進歩によりモザイク変異の検出機会が増えており、モザイク変異の頻度は従来考えられていたよりも多いと考えられる。低頻度体細胞モザイク変異の診断法を開発し、より正確な遺伝相談に寄与する。これまでに脳形成障害とてんかん症候群を中心に小児神経疾患の原因遺伝子解析を行い、患児と両親のトリオ検体で年間200家系以上を新たに収集した。その結果、初年度は47例、昨年度53例、今年度は85例のde novo変異を同定した。モザイク変異の検出法として、次世代シーケンサーを用いたディープシーケンスのためのカスタムターゲットパネルを作成し、脳形成異常、早期発症てんかん性脳症など19例でde novo変異を同定したが、患児および両親の検体にモザイク変異を疑わせる変異アレルと野生型アレルの比率の偏りはなかった。当初はde novoと考えられたDCX変異で変異アレルを疑わせるピークが認められた母親の検体を用いて、Taqmanプローブを用いてデジタルPCR法による検証を行ったが、変異アレルは検出できなかった。本変異については、さらに手技的な見直しを行い再検証予定である。遺伝子解析の症例集積は患児と両親のトリオ検体で年間200家系以上が新たに収集されており、de novo変異の同定は順調に進んでいる。しかし、親の体細胞モザイク変異が疑われる例は少なく、まだ低頻度生殖細胞モザイク変異を同定できていない。デジタルPCRによるモザイク変異の検出を陽性コントロールを用いて確認を行ったが、上手く検出できなかった。親の生殖細胞モザイク変異の可能性があるきょうだい発症例を積極的に収集解析する。カスタムターゲットパネルを用いてディープシーケンスを行い、微量な変異アレルの検出を行うと共に、変異検出の最少限界を調べる。デジタルPCRによるモザイク変異検出技術を確立し、Sanger法では変異アレルが検出されない両親検体を解析する。dCAPS法とサイクリングプローブ法による定量PCRを行う。我々は希少な遺伝性疾患でde novo変異を同定してきたが、生殖細胞モザイク変異の可能性を否定できなかった。これまでに脳形成障害とてんかん症候群を中心に小児神経疾患の原因遺伝子解析を行い、今年度は脳形成障害5例、てんかん性脳症が主体のてんかん症候群42例、合計47例にde novo変異を同定した。各症例の両親についてシーケンスデータを詳細に見直し、de novoと考えられたDCX変異の1例の母親に変異アレルを疑わせるピークを認めた。DCXは、Xq23に位置し、男児では重症な古典型滑脳症を、女児では比較的軽症な皮質下帯状異所性灰白質をきたす。X連鎖性の遺伝形式を示し、母が保因者の場合は次子への遺伝可能性が出現する。本例におけるモザイク変異の確認のために、現在デジタルPCR法による検証を行っている。de novo変異の同定は順調に進んでいる。モザイク変異の検出法として、次世代シーケンサーを用いたディープシーケンスのためのカスタムターゲットパネルを作成した。デジタルPCRによるモザイク変異の検出を陽性コントロールを用いて確認中である。その結果、昨年度は47例、今年度53例のde novo変異を同定した。各症例の両親のシーケンスデータを詳細に見直し、当初はde novoと考えられたDCX変異の1例の母親に変異アレルを疑わせるピークが認められた。Taqmanプローブを用いてデジタルPCR法による検証を行ったが、変異アレルは検出できなかった。本変異については、現在、手技的なことも含めて再検証中である。両親の検体ではモザイク変異の頻度が少ないため、患児の血液でモザイク変異が疑われたCAMK2A変異例に関し、唾液、爪、毛根を用いたモザイク率の解析を行い、5.5-20%のモザイク率であることを明らかにした。

遺伝子解析の症例集積は患児と両親のトリオ検体で年間200家系以上が新たに収集されており、de novo変異の同定は順調に進んでいる。しかし、親の体細胞モザイク変異が疑われる例は少なく、まだ低頻度生殖細胞モザイク変異を同定できていない。モザイク変異の検出法として、次世代シーケンサーを用いたディープシーケンスのためのカスタムターゲットパネルを作成した。デジタルPCRによるモザイク変異の検出を陽性コントロールを用いて確認を行う。両親の保因者検査が陰性のde novo変異では、次子への再発率は低いが、両親のどちらかの生殖細胞モザイク変異によって、罹患児の両親における同胞の再発率は一般集団より高くなる。生殖細胞モザイク変異の頻度は疾患毎に異なるが、生殖細胞モザイク変異の正確な頻度の測定は難しく、多くの疾患では生殖細胞モザイク変異の頻度は不明である。近年解析技術の進歩によりモザイク変異の検出機会が増えており、モザイク変異の頻度は従来考えられていたよりも多いと考えられる。低頻度体細胞モザイク変異の診断法を開発し、より正確な遺伝相談に寄与する。これまでに脳形成障害とてんかん症候群を中心に小児神経疾患の原因遺伝子解析を行い、患児と両親のトリオ検体で年間200家系以上を新たに収集した。その結果、初年度は47例、昨年度53例、今年度は85例のde novo変異を同定した。モザイク変異の検出法として、次世代シーケンサーを用いたディープシーケンスのためのカスタムターゲットパネルを作成し、脳形成異常、早期発症てんかん性脳症など19例でde novo変異を同定したが、患児および両親の検体にモザイク変異を疑わせる変異アレルと野生型アレルの比率の偏りはなかった。当初はde novoと考えられたDCX変異で変異アレルを疑わせるピークが認められた母親の検体を用いて、Taqmanプローブを用いてデジタルPCR法による検証を行ったが、変異アレルは検出できなかった。本変異については、さらに手技的な見直しを行い再検証予定である。デジタルPCRによるモザイク変異の検出を陽性コントロールを用いて確認を行ったが、上手く検出できなかった。カスタムターゲットパネルを用いてディープシーケンスを行い、微量な変異アレルの検出を行うと共に、変異検出の最少限界を調べる。デジタルPCRによるモザイク変異検出技術を確立し、Sanger法では変異アレルが検出されない両親検体を解析する。dCAPS法とサイクリングプローブ法による定量PCRを行う。親の生殖細胞モザイク変異の可能性があるきょうだい発症例を積極的に収集解析する。
リンパ浮腫患者におけるスキンケアプログラムの開発

乳がん手術後の片側上肢リンパ浮腫の患者において、MRで確認された水貯留部位と皮膚性状として皮膚粘弾性との関連性を検討した。被験者は7名であった。MR(STIR画像)では、水(自由水)の貯留は前腕の特に尺側に多く認められた。この部位においては、水貯留が少なかった橈側に比較して、皮膚粘弾性が低くなった。皮膚粘弾性とは、皮膚のハリや硬さ、弾力といった自覚症状に関連しており、治療の評価としても使用できることが期待される。また、リンパ浮腫のスキンケアにおいて、前腕尺側への特別なケアを必要とすることが考えられるため、引き続き、被験者数を増やし皮膚の特徴を検証する必要があると考えている。リンパ浮腫患者の治療として有効とされる複合的治療(CDT)には、スキンケア、医療徒手リンパドレナージ(MLD)、圧迫療法、圧迫下での運動療法、生活指導の5つの手法が含まれている。しかし、それぞれのケアの根拠や個別的なケア方法については根拠が乏しいのが現状である。特に「スキンケア」については、経験的に一般的なケアとして清潔の維持、保湿等が行われているに過ぎない。リンパ浮腫の発生や悪化にも繋がりかねない、スキンケアについては、まず、リンパ浮腫患者の皮膚の現状を知り、適切なケアを提供することは重要と言える。そこで、本研究の目的は、リンパ浮腫患者の皮膚の状態を明らかにし、より具体的なスキンケア方法を開発することとした。本研究ではまず、リンパ浮腫患者の皮膚の特徴を明らかにすることから始めている。前年度は、研究者自身のリンパ浮腫セラピスト資格の取得、患者のリクルート方法の確立まで進めることが出来た。今年度は上肢リンパ浮腫を発症した患者を被験者として、上肢の皮膚について、角質水分量、皮膚pH、皮膚弾性力、皮膚血流量、皮膚の表面構造を評価項目として測定した。また、同時に被験者に対しては4週間のCDTの介入を行い、CDTの介入による皮膚の変化についても分析を行うため、測定を行った。これらの測定結果については現在、分析中である。平成26年度は、引き続き患者のリクルート及びCDTの介入、測定を行っていき、これまでの測定結果と併せて分析を続け、学会発表、論文の投稿を行うことを課題としている。なお、今年度の研究資金は、圧迫療法用の弾性包帯等の購入、国内外の学術集会への参加、分析用PCの購入に使用した。リンパ浮腫患者の治療として複合的治療(CDT)が有効であると言われているが、それぞれのケアの根拠や個別的なケア方法については根拠が乏しいのが現状である。特にCDTに含まれる「スキンケア」の根拠を明らかにする上で重要な情報である、リンパ浮腫患者の皮膚の状態については情報が乏しく、具体的なケア方法も分かっていない。本研究の目的は、リンパ浮腫患者の皮膚の状態を明らかにし、より具体的なスキンケア方法を開発することである。本研究ではまずリンパ浮腫を発症した患者の、皮膚の特徴を明らかにしようと考えている。皮膚の評価項目としては、角質水分量、皮脂量、皮膚pH、皮膚弾性力、皮膚血流量、皮膚深部温、マイクロスコープによる画像を用いた皮膚の表面構造を計画した。今年度は、研究調査環境の整備のため、機材の準備を進め、マイクロスコープDG-3Xを購入した。同時に研究者は実際にリンパ浮腫外来を開設している施設への見学や学術集会などへの参加により情報収集を行った。その結果、現在、リンパ浮腫外来を開設している多くの施設で行われているリンパ浮腫ケアは、患者は数ヶ月に1度だけ来院し、弾性着衣の処方、家庭でのセルフケアを行うことが主流となっていた。欧米では、集中的なCDTの施行がより効果的であるとされているが、日本ではあまり行われていないことがわかった。そこで本研究では、患者に4週間CDTの介入を行い、CDT介入による皮膚の変化を明らかにすることも計画した。介入に当たり、研究者はCDTの研修を受け、リンパ浮腫セラピストの資格を得た。今年度は、患者のリクルート方法の確立まで進めることができたが、患者への介入および皮膚の調査までは至っていない。介入、調査および分析は25年度以降の課題とした。リンパ浮腫患者の皮膚の実態を明らかにするため、生理解剖学的手法を用いた研究を行った。被験者は乳がん手術後に上肢リンパ浮腫を発症した患者7名であり、皮膚の性状に関しては、角質水分量、皮膚pH、皮膚粘弾性、皮膚血流量の観察を行った。また、MRIを用いて、上肢全体の水貯留状況の観察を行った。MRで確認された水貯留部位は、前腕の尺側に多いという結果が得られたため、前腕尺側と前腕橈側の皮膚の性状について比較を行った。

観察した皮膚性状について、角質水分量、皮膚pH、皮膚血流量について、明らかな違いが認められてないが、皮膚粘弾性については、水の貯留部位で低くなっていることが明らかになった。この結果については、「日本看護技術学会第13回学術集会」にて報告を行った。皮膚粘弾性とは、皮膚のハリや硬さ、弾性、粘性についての指標であり、リンパ浮腫患者の自覚症状や治療による効果を確認するための指標として用いられる可能性がある。また、この部位に特別なケアが必要となることが考えられる。今回の研究では、被験者数が少ないため、この結果だけでは明らかな示唆は得られないが、引き続き、被験者数を増やし皮膚の特徴を検証する必要があると考えている。今回の研究では、更に被験者に週2回ペースで合計8回の複合的治療(スキンケア、リンパドレナージ、圧迫療法、運動療法:以下CDTとする)を行い、前記した項目について、介入前後での比較行った。この結果については、現在、分析および考察中であるため、今後、報告していく予定である。看護学今年度は上肢リンパ浮腫患者を対象として、調査を進めることが出来た。今年度のうちに、調査に入る予定であったが調査に入ることができなかった。授業や実習の予定から、CDTを施行する研究者の研修時期が3月になってしまったことが理由である。これまでの調査は上肢のリンパ浮腫患者が中心となっていたため、来年度は下肢のリンパ浮腫患者も対象としてリクルート及び調査を行っていきたいと考えている。また、最終年度となるため、これまでの調査結果を分析し報告していきたいと考えている。今後は、患者への介入および皮膚の評価を行っていく予定である。研究結果は学術集会や論文等で発表したい。結果を得て、次の段階である、スキンケア方法の開発に関する研究を行っていきたいと考えている。また併せて、学術集会や研修への参加により情報収集を続けていく予定である。該当なし。
神経症状を伴うヒトパレコウイルス3型臨床分離株の特徴と病原性解析

ピコルナウイルス科に属するパレコウイルス(PeV)は現在19の遺伝子型が登録されている。中でもパレコウイルス3型(PeV-A3)は軽度の消化器症状や発疹症の小児患者から検出される一方、髄膜炎や敗血症様症状を呈する新生児・乳幼児、さらに近年成人の筋痛症との関連が報告される。当所では脳炎脳症の疑いをはじめ、意識障害、歩行障害等の症状が報告される患者からPeV-A3検出がある。神経症状を呈した患者由来の臨床分離株のウイルス構造蛋白領域の塩基配列について分子疫学解析を進め、神経病原性に関わる遺伝子配列およびウイルス株の特徴を解析することを目的として研究を開始した。1.発生動向調査事業等の患者検体から1999年2018年(20年間)で細胞培養法又は遺伝子検出法にてPeV-A3を94件検出した。内、臨床症状に明らかな神経症状等の記載のある症例は14例あり(8日齢14歳10か月)11例についてVero細胞又はHeLa細胞にてウイルス分離株を得た。2.ウイルス構造蛋白領域の一部(VP1領域)についてPeV-3検出株(78株)の塩基配列および推定アミノ酸配列による分子系統樹解析を行った。データベースに登録される株とも比較し神経病原性の有無によるアミノ酸配列の特徴の解析を進めている。3.人獣共通感染症の可能性を検討するため、霊長類以外の各種動物検体からのPeVの遺伝子検出及び、ウイルス分離に供する検体収集に着手した。各種動物検体の収集については、動物保護管理センターでの譲渡動物(犬、猫)から人獣共通感染症が疑われる検査の検体採取には協力できない。との回答があった。家畜や野生動物からの検体採取についても確保が難しいため、当所で凍結保存されている各種動物の糞便や血液検体を用い、PeVの遺伝子検出を試みる。平成30年度は、麻しん、風しんの流行に伴い通常業務に支障が出るほどの数の検体が搬入され、人員及び検査機器の不足により、研究業務に遅延があった。また、当研究所の建て替え移転が行われたため、事務業務の増加及び機器の移転があり、検査業務のできない期間があった。既に神経症状を示す患者からPeV-A3陽性検体を確保できており、次年度以降も各種調査事業における患者検体からPeV分離・検出を継続して行う。全ウイルス構造蛋白領域(約2.5Kb)の塩基配列について解析し、病原性に関連する共通の変異や各種培養細胞での増殖性を検討する。愛玩動物、家畜からの検索については、過去に当所で凍結保存している犬、牛、豚糞便検体等について検索する。との回答があった。
ガーナ共和国で流行する節足動物媒介性ウイルス感染症の実態解明に向けた基盤的研究

平成29年度は、これまでにガーナ各所で採集した蚊やマダニから分離あるいは検出されたウイルスについて、その詳細な配列解析を行った。平成28年度にガーナで捕集した蚊から分離されたウイルスの配列解析を行った結果、新興の節足動物媒介ウイルスとして注目されるJingmenvirusや、Permutotetravirus、Iflavirus、Tombusvirusなどと近縁な新規ウイルスの存在が確認された。また、Cell fusing agent virusやCulex flavivirusなどといったの既知ウイルスも見出された。これらの分離されたウイルスをVero細胞などへ接種し、哺乳動物細胞への感染性を検証したが、いずれのウイルスの増殖も確認されなかった。さらに、平成28年度にガーナで採集したマダニのウイルス解析も実施した。マダニ破砕液から抽出した全RNAを用いたRT-PCRによるウイルス遺伝子スクリーニングを行った結果、アクラのイヌから採集したコイタマダニ属のマダニからOdaw virus(ODWV)が検出された。ODWVは、2015年にアクラのイヌから採集したコイタマダニから検出された新規のフレボウイルスであり、本ウイルスはアクラに分布するコイタマダニにおいて安定的に維持されていることが推察された。さらには、ガーナ北部の調査地点であるJirapaのウシから採集したキララマダニ属およびイボダニ属のマダニから、ODWVとは異なる新規のマダニ媒介フレボウイルスの遺伝子も検出された。以上の解析から、本研究ではガーナ国内広範囲に生息する蚊、さらにはマダニが保有するウイルス多様なウイルスの存在を初めて明らかにし、さらには今後節足動物媒介ウイルスとして勃興する可能性のある新規ウイルスを多数見出す成果を挙げることができた。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。ガーナ共和国における節足動物媒介性ウイルス感染症の流行実態を解明するべく、病原ウイルスの主要ベクターとなる蚊およびマダニを中心にそれらの分布調査を実施した。ガーナ国内広範囲に選定した9調査地点において、現地フィールドでの調査を実施した結果、蚊においては少なくとも6属13種の蚊種が同定された。また、ほぼ全ての調査地でネッタイシマカが優占種であることが判明した。さらに、ネッタイシマカに関しては、殺虫剤抵抗性遺伝子の検出も行った。その結果、多くの調査地でピレスロイド系殺虫剤に対して抵抗性を示すナトリウムチャネル遺伝子の突然変異のアレルを持つ個体が確認されたことから、ピレスロイド系殺虫剤抵抗性のネッタイシマカは、ガーナ国内広範囲に分布することが示された。一方、マダニにおいては、調査地のイヌやウシからキララマダニ属、オウシマダニ属、イボダニ属など多様なマダニ類が採集された。ガーナ国内に生息する蚊およびマダニの保有するウイルスを調査するため、フィールドで採集した蚊成虫およびマダニを用い、それらサンプルからRT-PCRによるウイルス遺伝子検出ならびにウイルス分離を行った。また、分離されたウイルス種の同定を行うため、ウイルス分離培養上清を用いて、次世代シークエンサーによる網羅的解析を行った。その結果、蚊サンプルからはデングウイルス、チクングニアウイルスやウエストナイルウイルスなど主要な病原ウイルスは見出されなかったが、新規ウイルスを含め多数のウイルスが分離された。このことから、今回調査した地域に生息する蚊類は、多様なウイルスを保有していることが明らかとなった。2016年度は実際にガーナへ渡航して同国内広範囲でフィールド調査を実施し、現地に生息する蚊およびマダニを採集することができた。その結果、ガーナ国内のベクター昆虫類の分布状況を把握することができ、さらにウイルスベクターとして重要なネッタイシマカについては、殺虫剤抵抗性遺伝子を持つ個体の分布状況について当初の研究計画に則り実施することができた。また、それらベクター昆虫類が保有するウイルスの検出や、さらにはウイルスの分離まで行うことができ、そのうえ蚊から新規のウイルスを多数分離発見するなど、予想以上の成果を挙げることができたため、期待以上に研究を進展させることができた。

以上の解析から、本研究ではガーナ国内広範囲に生息する蚊、さらにはマダニが保有するウイルス多様なウイルスの存在を初めて明らかにし、さらには今後節足動物媒介ウイルスとして勃興する可能性のある新規ウイルスを多数見出す成果を挙げることができた。2016年度に採集した蚊については、より詳細に形態学的な同定を行い、蚊種の同定を行う。また、同定された蚊種と採集した環境の情報とを合わせて解析し、各蚊種についての生態情報などを得ることを目標とする。さらに、今回の調査で種が同定された蚊については、分子同定の遺伝子マーカーとなるミトコンドリア遺伝子などを国際的なデータベースへと登録する。ネッタイシマカの殺虫剤抵抗性遺伝子の検出に関しては、今回注目した遺伝子領域以外にも検出を試み、また、さらに多くのサンプルから殺虫剤抵抗性遺伝子の検出を行い、ガーナ国内におけるより現状を反映した殺虫剤抵抗性遺伝子の発達状況のデータを取得することを目指す。一方、分離された新規ウイルスについては、ヒトを含めた哺乳動物などへの感染性を培養細胞などを用いた実験により確認し、詳しい性状解析を行う。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。
ニワトリ胚消化管内胚葉領域化の分子機構の解明

脊椎動物内胚葉の分化,領域化に関わる分子機構は他の胚葉由来の組織に比べ,著しく情報が少ない.そこで,内胚葉領域化および内胚葉分化に関わる分子群の単離を中心に研究を進めた.内胚葉領域化に必要な分子群の探索未分化なニワトリ胚st.5の内胚葉,領域化直後と考えられるst.8-11の後腸内胚葉,st.11の前腸内胚葉を集め,microchipを用いてそれぞれの組織に発現する遺伝子を同定した.このうち各組織に特異的に発現する遺伝子を40ずつ選び,その発現をRT-PCRでチェックしたところ,そのほとんどがmicrochipを使った解析の通り,各組織に特異的に発現していた.現在これらの遺伝子の詳細な発現パターンおよび機能について解析を進めている.この研究により,初期内胚葉の領域化に関わる分子マーカーが飛躍的に増え,領域化の分子機構に大きく迫ることが期待される.内胚葉分化因子の探索脊椎動物で内胚葉分化に重要な転写因子をコードするSox17の下流因子の探索のため,次のようなスクリーニングを行った。Sox17の発現が完全に消えH.H.st.5-6のウズラ胚から内胚葉を集め,expression libraryを作製し,これをプールにわけ,そこから作製したRNAを,casanova MOと共にゼブラフィッシュ受精卵に顕微注射した.casanovaはSox17の直接の上流因子として知られ,その突然変異体は内胚葉を完全欠損するため,RNAのうち,内胚葉欠損表現形をレスキューするようなプールをスクリーニングした.レスキューしたプールをさらにわけ,同様なスクリーニングを繰り返し,クローン数が100個になった時点で全てのクローンの塩基配列を読んだところ,今までに知られた内胚葉遺伝子は含まれていなかった.現在スクリーニングを続けており,この方法によって新規の内胚葉分化関連因子がとられてくることが期待できる.内胚葉は成立後,器官形成の前に,前後軸または背腹軸に沿って,おおまかに領域化する.この内胚葉の領域化がいつ,おこるのかについての研究をおこなった.まず,後腸領域の領域化がいつ起こるのかを調べるため,様々な時期の胚の後腸予定域内胚葉をDiIで標識し,前腸予定域内胚葉に移植し,Newの培養でおよそSt.13相当まで培養して後腸内胚葉マーカーであるCdxA,前腸内胚葉マーカーであるSox2の発現を調べた.まずSt.5では,前腸予定域に移植された後腸予定内胚葉は前腸領域に組み込まれ,Sox2を発現し,CdxAを発現することはなかったことから,前腸内胚葉に分化したと考えられ,St.5では後腸の領域化はまだであると考えられる.つぎにSt.11胚を使い,同様の実験を行ったところ,移植された細胞は同様に前腸に組み込まれるものの,CdxAを発現し,Sox2は発現しなかった.このことからSt.11では予定後腸内胚葉は既に領域化され,周りの環境に関わらず,後腸に分化すると考えられる.さらにSt.8で同様の移植実験を行うと,St.11と同様に予定後腸内胚葉は既に領域化されていることがわかった.つまり,後腸内胚葉はSt.5からSt.8の間に領域化されていると考えられる.次に前腸予定内胚葉の領域化の時期を決めるため,St.8で前腸予定内胚葉を後腸予定域に移植した.すると移植した細胞は後腸に組み込まれ,CdxAを発現し,Sox2は発現しなかった.これは前腸予定内胚葉がまだ領域化されていないことを示している.そしてSt.10を使って同様の実験をおこなうと,後腸に組み込まれた移植細胞はSox2を発現し,CdxAを発現することはなかったことから,St.10では前腸も領域化されたことがわかった.脊椎動物内胚葉の分化,領域化に関わる分子機構は他の胚葉由来の組織に比べ,著しく情報が少ない.そこで,内胚葉領域化および内胚葉分化に関わる分子群の単離を中心に研究を進めた.内胚葉領域化に必要な分子群の探索未分化なニワトリ胚st.5の内胚葉,領域化直後と考えられるst.8-11の後腸内胚葉,st.11の前腸内胚葉を集め,microchipを用いてそれぞれの組織に発現する遺伝子を同定した.このうち各組織に特異的に発現する遺伝子を40ずつ選び,その発現をRT-PCRでチェックしたところ,そのほとんどがmicrochipを使った解析の通り,各組織に特異的に発現していた.現在これらの遺伝子の詳細な発現パターンおよび機能について解析を進めている.この研究により,初期内胚葉の領域化に関わる分子マーカーが飛躍的に増え,領域化の分子機構に大きく迫ることが期待される.内胚葉分化因子の探索脊椎動物で内胚葉分化に重要な転写因子をコードするSox17の下流因子の探索のため,次のようなスクリーニングを行った。

Sox17の発現が完全に消えH.H.st.5-6のウズラ胚から内胚葉を集め,expression libraryを作製し,これをプールにわけ,そこから作製したRNAを,casanova MOと共にゼブラフィッシュ受精卵に顕微注射した.casanovaはSox17の直接の上流因子として知られ,その突然変異体は内胚葉を完全欠損するため,RNAのうち,内胚葉欠損表現形をレスキューするようなプールをスクリーニングした.レスキューしたプールをさらにわけ,同様なスクリーニングを繰り返し,クローン数が100個になった時点で全てのクローンの塩基配列を読んだところ,今までに知られた内胚葉遺伝子は含まれていなかった.現在スクリーニングを続けており,この方法によって新規の内胚葉分化関連因子がとられてくることが期待できる.
機械工学(航空宇宙関連)における複雑乱流に対する計算モデルの構築

平成19年度は,平成18年度に引き続き,研究代表者の研究グループの比較的高いレイノルズ数における平行平板間乱流及び乱流熱伝達の直接数値シミュレーション(DNS)データを用いた乱流モデルの開発を行った。温度揚2方程式k_θ-ε_θモデルに対するモデルの開発としては,平行平板間乱流における温度散逸率輸送方程式のDNS計算結果を温度散逸率の既存モデル方程式と比較・検討してモデルの検証を行った。結果として,既存モデルは,壁面から離れた場所で高い予測を与えるが,壁面近傍では予測精度は必ずしも十分でなく,レイノルズ数依存性を表現する減衰関数の開発が必要であることが分かった。一方,昨年度開発した速度場2方程式非線形k-εモデルについては,航空宇宙分野の実アプリケーションレベルでの開発として,k-εモデルによる予測が非常に難しいことが知られている旋回を有した円管内乱流場に対してモデル計算を進めた。他方,計算モデルの開発で使用した研究代表者の研究グループの平行平板間乱流及び乱流熱伝達のDNSの乱流統計量のデータについては,全世界の研究者が最新の研究成果を共有できるようデータベース化を進め,研究代表者の所属機関のWEB上での公開を行った(URL:http://www.iat.jaxa.jp/db/index.html)。温度散逸率のモデル方程式の検証結果,DNSデータベースの構築について,国内・国際学会にて発表を行った。平成18年度は,航空宇宙分野のような剥離を伴う高速の流れを精度良く予測する乱流モデルの開発を吉澤徴(東京大学名誉教授)らと共同で進めた.このモデルは,乱流の強い時間的および空間的非平衡性,圧力を通しての非局所性,壁面での粘性効果の3特性を開発の主眼点としたもので,2方程式モデルの非線形型渦粘性k-εモデルに属する.モデルの開発は,主として,我々のグループで構築した高レイノルズ数平行平板間乱流のDNSデータベースとモデル計算結果を比較・検討することで進めた.同時に,既存k-εモデルのうち壁面近傍まで取り扱える乱流モデルとの性能の比較を行って開発したモデルの性能の確認を行った.また,より適用範囲の広いモデルとするために,回転を有した減衰する一様等方性乱流の実験値,一様せん断乱流のDNSの結果に対してもモデルの性能テスト及び開発を行った.以上のモデルの開発は,非圧縮性乱流に対して行われたが,航空宇宙分野で重要となる密度が変動する圧縮性流体への適用を考慮してモデルの拡張を行った.そこでは,超音速混合層や乱流境界層において実験値や経験式と比較・検討を行ってモデルの開発を進めた.圧縮性流体のモデル計算においては,非圧縮性流体において開発された乱流モデルを単に適用すると混合層の成長率の予測精度が思わしくないことが指摘されているが,開発したモデルは,この成長率をもよく再現した.開発したモデルとモデルの性能に関する結果は,国際ジャーナルに掲載されている.平成19年度は,平成18年度に引き続き,研究代表者の研究グループの比較的高いレイノルズ数における平行平板間乱流及び乱流熱伝達の直接数値シミュレーション(DNS)データを用いた乱流モデルの開発を行った。
歯周病由来SAAによる動脈硬化発症機序の分子生物学的アプローチ

歯周病と動脈硬化性疾患のメカニズムを明らかにする基礎的研究として、急性炎症マーカーである血清アミロイドA(以下SAA)に着目し、ヒト大動脈血管内皮細胞(HAEC)を用いて、SAAがHAECにどのような影響をおよぼすかを解析した。その結果、SAAは血管内皮細胞のTLR2を介して炎症性因子の産生を誘導し、その後接着分子の発現を誘導した。また、TLR2下流のMyD88の発現は著変がなかったことから、SAAが作用したTLR2の下流にMyD88非依存経路が存在する可能性が示唆された。以上より、SAAをマーカー分子として用いることにより、歯周病と動脈硬化症発症の関係を明らかにできる可能性がある。申請者は、動脈硬化易形成マウスであるApoEノックアウトマウスの腹腔内に、歯周病菌が産生する炎症性サイトカイン刺激を肝臓に与える目的で、歯周病罹患時に上昇する炎症性サイトカインであるIL-6を投与することで擬似的な歯周病を惹起させる研究を行った。その結果、ApoEノックアウトマウスの肝臓組織のmRNA、および末梢血タンパクにおいて急性炎症マーカーである血清アミロイドA(以下SAA)が上昇し、動脈硬化部位が増大することを見出した(未発表)。さらにはin vitroにおいて、このSAAのリコンビナントタンパクでヒト大動脈血管内皮細胞を刺激したところ、前述した単球接着分子のmRNA発現上昇を確認した(未発表)。現在まで、動脈硬化症発症機序、特に血管内皮細胞は多種多様な経路が報告されているため、本研究は、歯周病由来による肝臓より産生されたSAAを介して、どのように血管内皮細胞の単球接着分子に作用しているかにフォーカスを当てる、つまり歯周病由来SAAがトリガーとなる動脈硬化症発症機序を詳細に解明する。平成25年度はin vitroにおいて、このSAAのリコンビナントタンパクでヒト大動脈血管内皮細胞を刺激する際の最試適濃度を検討することを目的とした。申請者はこれまでに、動脈硬化症易形成マウスであるApoEノックアウトマウスの腹腔内に、歯周病罹患時に上昇する炎症性サイトカインであるIL-6を投与することで擬似的な歯周病を惹起させ、肝臓に炎症性サイトカインを与える研究を行った。その結果、ApoEノックアウトマウスの肝臓組織のmRNA、および末梢血タンパクにおいて急性炎症マーカーである血清アミロイドA(以下SAA)が上昇し、動脈硬化症が増大することを見出した(未発表)。現在まで、動脈硬化症発症機序、特に血管内皮細胞(HAEC)は多種多様な経路が報告されているため、本研究は、歯周病由来による肝臓より産生されたSAAが、どのように血管内皮細胞の単球接着分子に作用しているかにフォーカスを当てる、つまり歯周病由来SAAがトリガーとなる動脈硬化症発症機序を詳細に解明する。平成26年度はSAA刺激における単球接着因子の遺伝子発現と、SAAレセプターのスクリーニング、さらには接着因子のカスケードの遺伝子発現の発現を行った。前年度に指摘したHAECの細胞播種濃度は1.5x10 5個/wellに設定し直し、SAA濃度は15ug/mlとした。SAA刺激無しHAECををコントロール、刺激後6時間のHAECを実験群としatherosclerosis PCR arrayを行ったところ、SELEの発現が顕著に増加していた。またコントロール群と実験群のSAA receptorの発現を確認したところ、TLR2の発現が著名に増加していた。よって、HAECにSAAを添加することによってTLR2を介してSELEの発現が増強し、血管内皮細胞における動脈硬化症の発症に関わることが示唆された。申請者は前研究機関にて動脈硬化易形成マウスであるApoEノックアウトマウスの腹腔内に、歯周病罹患時に上昇する炎症性サイトカインであるIL-6を投与し、擬似的な歯周病を惹起させる研究を行った。さらにin vitroにおいて、このSAAのリコンビナントタンパクでヒト大動脈血管内皮細胞(以下HAEC)を刺激したところ、単球接着分子のmRNAの発現が上昇することを確認した。現在まで、内皮細胞における動脈硬化症発生機序は多種多様な経路が報告されているため、本研究は歯周病由来による肝臓より産生されたSAAがどのような経路で血管内皮細胞の単球接着分子に作用しているかにフォーカスを当てる、つまり歯周病と動脈硬化発症機序をつなぐキー分子としてSAAに着目し、HAECを用いて分子生物学的に解明することを目的とした。平成26年度まではHAECの培養条件とSAA刺激の条件を検討し、HAECにおいてSAAはTLR2を介しSELEの発現を上昇させることをPCR arrayとqPCR解析によって明らかにした。平成27年度はSAAがTLR2以下のどの経路でSELEの発現を増強するのかをqPCR、siRNAagainst TLR2にて確認した。その結果、SAA刺激はTLR2を介してMYD88非依存経路でSELEの発現を増強している可能性が示唆された。以上より、歯周病由来SAAはTLR2を介しMYD88非依存経路でHAECの接着分子の発現上昇を促して可能性がある。

HAECの培養条件とSAA刺激の条件を検討した結果、6穴プレートに播種し、ヒトリコンビナントSAAは15ug/mlの濃度で刺激することとした。total RNAを抽出後、cDNAに変換し、PCR arrayとqPCR解析を行った。PCR array解析ではHAECはSAA刺激6時間にてSELEの発現が顕著に上昇することが明らかになった。qPCR解析でSAA receptorのスクリーニングを行ったところ、SAA刺激6時間にてTLR2の発現が劇的に上昇した。この結果をふまえ、SAAがTLR2以下のどのような経路でSELEの発現を制御しているのかをqPCR、TLR2におけるsiRNAにて確認した。siRNAはトランジェントトランスフェクションにて導入し、TLR2ノックダウン効率はウエスタンブロッティング法とqPCR法にて確認した。SAA刺激後6時間のHAECでは、TLR2、NFKB1、TNF、SELEの発現は顕著に上昇していた。MYD88の発現は、著変がなかった。TLR2をノックダウンしたSAA刺激後6時間のHAECは、TLR2、NFKB1、TNF、SELEの発現は減少していた。MYD88の発現に著変はなかった。以上の結果より、HAECにおいて、SAA刺激で最も発現の上昇したTLR2は、そのシグナル伝達系が活性化されると、炎症性サイトカインの発現を増強することが知られているが、本研究では、TLR2 signaling下流のNFKB1、TNFの炎症性因子の発現が上昇していることが分かった。また、SAA刺激はTLR2を介してMYD88の発現を変化させず、つまりMYD88非依存経路でSELEの発現を上昇させ、HAEC細胞外表面にて単球を集積させている可能性が示唆された。申請者は前研究機関にて動脈硬化易形成マウスであるApoEノックアウトマウスの腹腔内に、歯周病罹患時に上昇する炎症性サイトカインであるIL-6を投与し、擬似的な歯周病を惹起させる研究を行った。その結果、ApoEノックアウトマウスの肝臓組織のmRNA、および末梢血タンパクにおいて急性炎症マーカーである血清アミロイドA(以下SAA)が上昇し、動脈硬化症が増大することを見出した(未発表)。さらにin vitroにおいて、このSAAのリコンビナントタンパクでヒト大動脈血管内皮細胞(以下human aortic endothelial cell: HAEC)を刺激したところ、単球接着分子のmRNAの発現が上昇することを確認した。現在まで、血管内皮細胞における動脈硬化症発生機序は多種多様な経路が報告されているため、本研究は歯周病由来による肝臓より産生されたSAAがどのような経路で血管内皮細胞の単球接着分子に作用しているかにフォーカスを当てる、つまり歯周病と動脈硬化発症機序をつなぐキー分子としてSAAに着目し、HAECを用いて分子生物学的に解明することを目的とした。立案した実験はほぼ計画通りに達成した。平成26年度までは、HAECの培養条件とSAA刺激の条件を検討し、HAECにおいてSAAはTLR2を介しSELEの発現を上昇させることをPCR arrayとqPCR解析によって明らかにした。平成27年度はSAAがTLR2以下のどの経路でSELEの発現を増強するのかをqPCR、siRNA
土木構造部材生にじる低サイクル疲労現象に関する基礎的研究

本研究では,土木構造部材に生じる低サイクル疲労現象解明のための基礎的検討として,鋼材に生じるひずみ履歴に着目して以下の解析的,実験的検討を行った.1.円形鋼製橋脚の地震時ひずみ履歴に関する解析的検討円形鋼製橋脚を対象に,座屈位置でのひずみ履歴を解析的に解明した.解析に当たっては,計算の効率化を目的として,疑似動的実験のコンセプトを解析に応用する手法を提案した.その結果,地震時に実鋼製橋脚に生じると考えられるひずみレベルを定量的に明らかにすることができた.さらに,解析結果に及ぼす鋼材の構成則の影響について詳細に検討し,降伏後剛性や降伏棚が地震時における変形挙動およびひずみ発生挙動にどのような影響を及ぼすかについて明らかにした.2.コンクリート充填鋼管柱に生じる鋼材ひずみの解明コンクリート充填鋼管柱は鋼とコンクリートとの力学的相互作用により座屈が極めて進展しにくく,鋼材の低サイクル疲労がより重要な破壊モードとなる部材であると考えられる.そこでコンクリート充填鋼管柱の耐荷機構および鋼管のひずみ履歴について明らかにすることを目的として,実験的,解析的検討を行った.その結果,鋼管には非常に高い2軸のひずみ場が生じることを示し,さらに鋼管とコンクリートの接触,離間による鋼材ひずみへの影響などについて定性的にではあるが明らかにすることができた.3.鉄筋コンクリート柱の鉄筋に生じるひずみ履歴の解明近年の主鉄筋の重拘束化,高強度,太径鉄筋の偉容などにより,鉄筋に大ひずみの繰返しが生じる可能性が高くなっている.そこでファイバー要素を用いた有限要素解析により,鉄筋コンクリート部材の地震時挙動を解析し,鉄筋に生じるひずみ履歴について定量的に明らかにした.その結果,通常の鉄筋を使用した場合には実地震時に鉄筋が低サイクル疲労損傷を受ける可能性は低いことなどを明らかにした.本研究では,土木構造部材に生じる低サイクル疲労現象解明のための基礎的検討として,鋼材に生じるひずみ履歴に着目して以下の解析的,実験的検討を行った.1.円形鋼製橋脚の地震時ひずみ履歴に関する解析的検討円形鋼製橋脚を対象に,座屈位置でのひずみ履歴を解析的に解明した.解析に当たっては,計算の効率化を目的として,疑似動的実験のコンセプトを解析に応用する手法を提案した.その結果,地震時に実鋼製橋脚に生じると考えられるひずみレベルを定量的に明らかにすることができた.さらに,解析結果に及ぼす鋼材の構成則の影響について詳細に検討し,降伏後剛性や降伏棚が地震時における変形挙動およびひずみ発生挙動にどのような影響を及ぼすかについて明らかにした.2.コンクリート充填鋼管柱に生じる鋼材ひずみの解明コンクリート充填鋼管柱は鋼とコンクリートとの力学的相互作用により座屈が極めて進展しにくく,鋼材の低サイクル疲労がより重要な破壊モードとなる部材であると考えられる.そこでコンクリート充填鋼管柱の耐荷機構および鋼管のひずみ履歴について明らかにすることを目的として,実験的,解析的検討を行った.その結果,鋼管には非常に高い2軸のひずみ場が生じることを示し,さらに鋼管とコンクリートの接触,離間による鋼材ひずみへの影響などについて定性的にではあるが明らかにすることができた.3.鉄筋コンクリート柱の鉄筋に生じるひずみ履歴の解明近年の主鉄筋の重拘束化,高強度,太径鉄筋の偉容などにより,鉄筋に大ひずみの繰返しが生じる可能性が高くなっている.そこでファイバー要素を用いた有限要素解析により,鉄筋コンクリート部材の地震時挙動を解析し,鉄筋に生じるひずみ履歴について定量的に明らかにした.その結果,通常の鉄筋を使用した場合には実地震時に鉄筋が低サイクル疲労損傷を受ける可能性は低いことなどを明らかにした.土木構造部材の低サイクル疲労損傷を考える上で重要となる局部的なひずみ履歴を明らかにするために解析的検討を行った.局部ひずみの解析には細かい要素を配した3次元解析が必要となり,また,大変形時の挙動をとらえるには幾何学的および材料非線形性をとりこんだ解析が必要となることから,そのままでは計算量が膨大となる.そこで解析にあたっては,疑似動的実験手法の考え方を応用した効率的な動的解析法を考案した.阪神淡路大震災において損傷を受けた鋼製円形断面橋脚を対象に,神戸海洋気象台で観測された地震波形を入力し,その地震時挙動について明らかにした.その結果,実際の損傷に近い局部座屈を再現することができ,また局部座屈は最初の大きな地震波によって生じたものであることが明らかとなった.局部的なひずみに着目した結果,座屈部付近には最初の大きな地震波によって最大約10%程度のひずみが生じ、その後の振幅は比較的小さいことや,部材軸方向だけではなくその直角方向にも極めて大きなひずみが生じており,強い多軸ひずみ場となっていたことなどが明らかとなった.また,水平方向の地震動と上下方向の地震動をともに入力して解析を行った結果,上下動によるひずみ履歴への影響は小さいことがわかった.このような解析をいくつかのモデル,地震波によって行い,土木構造部材の低サイクル疲労を考える上で想定するべきひずみの大きさ,繰り返し特性などを検討した.本研究では,土木構造部材に生じる低サイクル疲労現象解明のための基礎的検討として,鋼材に生じるひずみ履歴に着目して以下の解析的,実験的検討を行った.1.円形鋼製橋脚の地震時ひずみ履歴に関する解析的検討円形鋼製橋脚を対象に,座屈位置でのひずみ履歴を解析的に解明した.解析に当たっては,計算の効率化を目的として,疑似動的実験のコンセプトを解析に応用する手法を提案した.

その結果,地震時に実鋼製橋脚に生じると考えられるひずみレベルを定量的に明らかにすることができた.さらに,解析結果に及ぼす鋼材の構成則の影響について詳細に検討し,降伏後剛性や降伏棚が地震時における変形挙動およびひずみ発生挙動にどのような影響を及ぼすかについて明らかにした.2.コンクリート充填鋼管柱に生じる鋼材ひずみの解明コンクリート充填鋼管柱は鋼とコンクリートとの力学的相互作用により座屈が極めて進展しにくく,鋼材の低サイクル疲労がより重要な破壊モードとなる部材であると考えられる.そこでコンクリート充填鋼管柱の耐荷機構および鋼管のひずみ履歴について明らかにすることを目的として,実験的,解析的検討を行った.その結果,鋼管には非常に高い2軸のひずみ場が生じることを示し,さらに鋼管とコンクリートの接触,離間による鋼材ひずみへの影響などについて定性的にではあるが明らかにすることができた.3.鉄筋コンクリート柱の鉄筋に生じるひずみ履歴の解明近年の主鉄筋の重拘束化,高強度,太径鉄筋の利用などにより,鉄筋に大ひずみの繰返しが生じる可能性が高くなっている.そこでファイバー要素を用いた有限要素解析により,鉄筋コンクリート部材の地震時挙動を解析し,鉄筋に生じるひずみ履歴について定量的に明らかにした.その結果,通常の鉄筋を使用した場合には実地震時に鉄筋が低サイクル疲労損傷を受ける可能性は低いことなどを明らかにした.
全身のモーションと柔軟な触覚を融合したビヘイビアキャプチャスーツの研究

本研究の目的は,着ているだけで日常生活の全身の触覚と動作,環境情報を融合し,いつでもどこでも行動認識を可能とするビヘイビアキャプチャスーツを開発することである.その要素となる,全身触覚センサ,動作推定,高性能の姿勢センサを考案・製作し,統合することでビヘイビアキャプチャスーツを実現した.さらに,スーツを用いて,床の上をローリングするなどのダイナミックな動作のオンライン行動計測実験も行い,実際に計測可能であることを実証した.本研究の目的は,着ているだけで日常生活の全身の触覚と動作,環境情報を融合し,いつでもどこでも行動認識を可能とするビヘイビアキャプチャスーツを開発することである.その要素となる,全身触覚センサ,動作推定,高性能の姿勢センサを考案・製作し,統合することでビヘイビアキャプチャスーツを実現した.さらに,スーツを用いて,床の上をローリングするなどのダイナミックな動作のオンライン行動計測実験も行い,実際に計測可能であることを実証した.本研究の目的は,着ているだけで日常生活の全身の触覚と動作,環境情報を融合し,いつでもどこでも行動認識を可能とするビヘイビアキャプチャスーツを開発することである.今年度は,1.ビヘイビアキャプチャスーツのための姿勢,触覚センサの試作と2.モーション,触覚と環境情報の同時計測システムのプロトタイプ構築を行った.1.ビヘイビアキャプチャスーツのための姿勢,触覚センサの試作ビヘイビアキャプチャスーツのために,加速度,ジャイロ,地磁気を統合したコンパクトな姿勢センサを試作した.さらに,これらのセンサ情報を統合して姿勢角を計算するアルゴリズムの開発も行った.従来のモーションキャプチャシステムでは毎秒120から200の姿勢データを計測するものが一般的であるが,試作した各センサデバイスでは姿勢角を最高で毎秒500計算できることが確認できた.また,触覚センサにおいても体に貼り付けることで,貼り付けた部位の触覚情報を容易に計測できるフォトリフレクタを利用した触覚センサモジュールの試作も行った.2.モーション,触覚と環境情報の同時計測システムのプロトタイプの構築姿勢センサ,触覚センサモジュールとも通信方式にUSBを採用し,それらをハブにまとめることにより,どのような計算機でも多数の姿勢情報と触覚情報の収集を容易に可能とするシステムのプロトタイプを構築した.姿勢センサを両腕,両足,胴体の各リンクに装着し,また触覚センサモジュールを背中,両足などに付与し,全身の動作と触覚情報を計測可能なプロトタイプシステムを構築し,このシステムにより,寝転がりながら起き上がるといった,環境とのインタラクションのある動作を触覚情報と共に計測可能であることが確認できた.本年度は,モーションキャプチャスーツのハードウェアの製作のみならず,マルチモーダルのセンサ情報から,それらの関係性を高速にモデル化するアルゴリズムや,周囲の環境状態を認識するアルゴリズムの開発を行った.(1)触覚センサとモーションの融合による身体図式の獲得人の体型の正確なモデルを持たせることは非常に困難であり,また,体表面は運動により伸縮するため,センサの位置はあらかじめ決定できない.そこで,身体図式の獲得に必須である,触覚センサをモジュール化した柔軟なシートを開発し,計測すべき部位に貼り付けるだけで表面形状の伸び縮みに対応可能な全身の触覚スーツを実現した.(2)モーションと接触,環境情報の同時計測による人のモデリング,認識手法の構築人は環境や物体とのインタラクションなしでは生活できない.人と物体とがインタラクションを行うときには必ず接触を伴う.この接触はモーションを決定する拘束条件を求めるのに非常に大きな意味を持つ.そこで全身にまとった接触センサを利用することで,モーションに拘束条件をつけ,モーションを正確に推定するアルゴリズムを構築した.さらに,全身から得られる感覚情報や運動情報を構造化・モデル化を高速かつ正確に行うアルゴリズムの開発と,環境の状態を瞬時に理解するアルゴリズムの開発も行った.(3)ビヘイビアキャプチャスーツの作成上記の全身触覚センサスーツ,触覚拘束条件を利用した動作推定,新規に開発した慣性センサの統合による高性能の姿勢センサを統合することでビヘイビアキャプチャスーツを実現した.さらに,床の上をローリングするなどのダイナミックな動作のオンライン行動計測実験も行い,実際に計測可能であることを実証した.
カフカース諸語とロシア・ソヴィエト言語類型論の研究

本研究の目的はカフカース諸語の研究によって、ロシア・ソヴィエト言語類型論を解明することである。2つの課題を解明した:(1)ロシアにおける音韻論の発達と(2)ロシア・ソヴィエト言語類型論の歴史である。(1)に関して、次のことを明らかにした:P. K.ウスラールとN. K.ヤーコヴレフはモスクワ音韻学派とプラハ音韻学派の基礎を創った。(2)に関しては、ソヴィエトで発達した言語類型学と西欧で発達した言語類型学を比較しながら前者の特徴を纏めた。特に、両類型論の理論的代表者である、I. I.メッシャニーノフとR. M. W.デクソンの異なる言語類型に関するアプローチを比較した。カフカース諸語の研究を中心として、ロシア・ソヴィエト言語学の遺産である言語類型論を解明することを目的とする。具体的には2つの分野を解明する。(1)音韻論の分野:ウスラルとヤーコヴレフの音素概念はカフカース諸語研究のなかでいかに研究されたのか。(2)形態論・統語論の分野:メッシャニーノフを中心とする言語類型論者らのカフカース諸語の役割を明らかにするとともに、「段階理論」を解明する。27年度の研究実績は次のようであった。(1)音韻論の分野:ヤーコヴレフの手書きの草稿本である『カバルダ語の音声一覧表』(1923)を活字化し、これをデータベース化した。これを使って、ヤーコヴレフのカバルダ語の音声表記方法と音素確定方法を調査した。そして、意味弁別単位としての音素のヤーコヴレフの考えを解明した。恐らく、今までヤーコヴレフの上の草稿本は、その一部がロシアの『言語学の諸問題』誌に掲載されたことはあったが、これを全て活字化したことは世界で初めてだと思われる。このデータ資料を使うことによって、ロシア・ソヴィエトの音韻論の歴史解明に寄与できると思われる。(2)形態論・統語論の分野:北西カフカース諸語とナフ・ダゲスタン諸語の能格性を調査した。特に、北西カフカース諸語においては、ウビフ語を中心として格表示を中心に調査した。ナフ・ダゲスタン諸語については、ウスラルの『チェチェン語』、『アヴァール語』、『ラック語』等の資料に基づき、ウスラルが能格構文をどのように理解していたかを明らかにした。このことはロシア・ソヴィエト言語類型論の歴史において、能格性がどのように解明されてきたかを示すために重要である。当初の目的の通り、ヤーコヴレフの草稿本である『カバルダ語の音声一覧表』を活字化し、データベース化したことによる。これによって今まで歴史の中であまり触れることができなかった、ヤーコヴレフの音素論についての研究が進むことが期待できる。また、資料の入手がいままで困難であった、ウスラルのナフ・ダゲスタン諸語の著作を使っての実際の研究も、本研究を当初の目的の通りに進めている。これらの初年度の研究は次のメッシャニーノフを中心とする言語類型論者の「段階理論」を解明する鍵となろう。カフカース諸語の研究から、ロシア・ソヴィエト言語学の遺産である言語類型論を解明することを目的とする。2つの分野を解明することを目的とする。(1)音韻論の分野:P.K.ウスラルとN. F.ヤーコヴレフの音素概念はカフカース諸語研究のなかでいかに研究されたのか。(2)形態論と統語論の分野:I. I.メッシャニーノフを中心とするソヴィエト言語類型論者の研究におけるカフカース諸語の役割を明らかにし、「段階理論」を解明する。平成28年度の研究実績は以下のようである:(1)音韻論の分野:P. K.ウスラルの『アブハズ語』(1887)などのカフカース民族誌シリーズの著書によって、ウスラルの音素概念の萌芽を調査した。これと昨年度に活字化したN. F.ヤーコヴレフの『カバルダ語の音声一覧表』を使って、ヤーコヴレフの音素の確定方法を比較し、音素概念の形成過程を調査した。さらに平成28年度は現代ロシア語の音韻論の主要な学派である、「モスクワ音韻学派」の理論を調査し、これとヤーコヴレフの音素論を比較した。(2)形態論と統語論の分野:メッシャニーノフの著書『言語についての新学説:段階的類型学』(1936)と『一般言語学:語と文の発達における段階性の問題によせて』(1940)を使って、メッシャニーノフの「言語類型」の概念の変遷過程、文構造の類型の種類と言語類型の基準、言語類型の段階性の方向を調査した。これ以外に、平成28年度は現代ロシア語の文法理論にソヴィエト類型論学派の影響を調査し、それを纏めた。当初の目的の通り、P. K.ウスラルの『アブハズ語』をはじめとするカフカース民族誌シリーズの著書を用いて、音論を調査し、これとヤーコヴレフの音素論と比較することができた。ヤーコヴレフの音素論はモスクワ音韻学派との繋がりが深いので、これとの関連でロシア語の音韻論を調査し、これに関する文献を翻訳出版した。この翻訳には詳細な注を付けた(P.ギャルド著『ロシア語文法:音韻論と形態論』平成29年3月出版、ひつじ書房)。