hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ウェーブレット解析を用いた圧力波検出法による電力ケーブルの劣化診断に関する研究

部分放電劣化部から伝搬する圧力波に対してウェーブレット解析を行い,圧力波の時間周波数特性から劣化位置と劣化度合いの推定を試みた。得られた成果を要約すると以下のようになる。ポリエチレン試料を用いた実験において,成長初期段階のトリーからの圧力波と大きく成長したトリーからの圧力波に対する時間周波数解析を行った。初期トリーからの圧力波の周波数特性は,8MHzの帯域に強い強度を有するのみであった。これに対して大きく成長したトリーからの圧力波の場合,トリー先端部から周波数の高い圧力波が伝搬した後,それに続いて周波数の低い圧力波が伝搬するという時間周波数特性を示した。またこの低周波の圧力波の伝搬が異常に遅れるという傾向が認められた。この周波数の低下と伝搬遅れの増大は,トリーの形状と密接に関連していることを,トリー状トリーとブッシュ状トリーとの比較実験により証明した。ポリエチレン試料に一定電圧を印加し続けた場合,最初のうちは低周波成分の圧力波が時間の経過と共に大きくなった。ところがある時間を境に検出される信号はトリー先端からの高周波成分のみとなった。低周波成分の消滅は,トリー管の炭化により強い放電が起きなくなったためと推定された。さらにポリエチレンに若干のエチレン?エチルアクリレート共重合樹脂を混合することにより,トリー管の炭化劣化が抑制される事実を,ウェーブレット解析の結果から突き止めた。模擬ボイドのあるポリエチレン試料にパルス電圧を印加した場合の圧力波の時間周波数特性とセンサ位置との関係について調べた。センサが劣化部の真下にあるときは平板電極からの圧力波と部分放電による圧力波が交互に検出された。これに対してセンサが横方向へずれている場合,部分放電劣化部からの圧力波がセンサに直接入射しないため,時間周波数平面上の強度分布が大きく変化することを明らかにした。電力用ケーブルの劣化部位を、活線状態のままで非破壊にて推定するための手法として、ウェーブレット解析を用いた圧力波検出法を提案し、その有効性について検討してきた。本年度は、針電極の挿入されたブロック状のオレフィン系高分子絶縁材料を試料として、針先に形成されたトリー管内での部分放電により発生する圧力波を、平板電極背後に貼られた圧電素子にて計測し、その時間周波数解析結果から材料内部の劣化状態の把握を試みた。得られた成果を以下に要約する。正弦波交流電圧の印加によりトリーが徐々に成長するのに伴い、圧力波信号の時間周波数特性が次のように変化することが解析によりわかった。成長初期の微小トリーから伝搬する圧力波の周波数帯域は狭いのに対して、大きく成長したトリーの場合、比較的周波数の高い圧力波が伝搬した後、引き続いて周波数の低い圧力波が伝搬した。圧力波の伝搬時間からその発生部位を調べた結果、高周波成分はトリーの先端領域から伝搬し、低周波成分は針電極近傍のトリー後方から伝搬していることが明らかとなった。交流電圧を数時間以上印加した場合、最初のうちは圧力波の低周波成分と高周波成分ともに、それらの強度が大きくなった。しかしある程度トリーの成長が進行した時点から、低周波成分のみが消滅するという現象が認められた。このことは、トリー後方からの圧力波伝搬が止まったことを意味している。劣化した試料の断面観測の結果、低周波成分の消滅が観測された試料のトリー根元部は著しく炭化していた。この結果から、圧力波の時間周波数特性を観測することにより、内部の炭化劣化状況を把握できることが明らかとなった。さらに本手法を用いて、純粋なポリエチレンのブロック試料と、極性基としてアクリル酸エチル基が混じった試料との間で劣化の進行過程を比較した。その結果、極性基の若干量の添加により、内部の炭化が抑制されるという事実を見出した。

部分放電劣化部から伝搬する圧力波に対してウェーブレット解析を行い,圧力波の時間周波数特性から劣化位置と劣化度合いの推定を試みた。得られた成果を要約すると以下のようになる。ポリエチレン試料を用いた実験において,成長初期段階のトリーからの圧力波と大きく成長したトリーからの圧力波に対する時間周波数解析を行った。初期トリーからの圧力波の周波数特性は,8MHzの帯域に強い強度を有するのみであった。これに対して大きく成長したトリーからの圧力波の場合,トリー先端部から周波数の高い圧力波が伝搬した後,それに続いて周波数の低い圧力波が伝搬するという時間周波数特性を示した。またこの低周波の圧力波の伝搬が異常に遅れるという傾向が認められた。この周波数の低下と伝搬遅れの増大は,トリーの形状と密接に関連していることを,トリー状トリーとブッシュ状トリーとの比較実験により証明した。ポリエチレン試料に一定電圧を印加し続けた場合,最初のうちは低周波成分の圧力波が時間の経過と共に大きくなった。ところがある時間を境に検出される信号はトリー先端からの高周波成分のみとなった。低周波成分の消滅は,トリー管の炭化により強い放電が起きなくなったためと推定された。さらにポリエチレンに若干のエチレン-エチルアクリレート共重合樹脂を混合することにより,トリー管の炭化劣化が抑制される事実を,ウェーブレット解析の結果から突き止めた。模擬ボイドのあるポリエチレン試料にパルス電圧を印加した場合の圧力波の時間周波数特性とセンサ位置との関係について調べた。センサが劣化部の真下にあるときは平板電極からの圧力波と部分放電による圧力波が交互に検出された。これに対してセンサが横方向へずれている場合,部分放電劣化部からの圧力波がセンサに直接入射しないため,時間周波数平面上の強度分布が大きく変化することを明らかにした。
癌転移におけるシグナル伝達解析と転移規定分子の同定による抑制治療の開発

1)癌細胞の転移は様々なステップによって成立するが、細胞移動は重要な第一段階である。我々はC.elegansの細胞移動遺伝子cell migration gene,mig-10をターゲットとして、ヒト癌細胞よりMig-10の持つユニークなcentral domainと相同部位を持つ遺伝子の同定を試みた。2)その結果、EGF/PDGFシグナル分子ヒトGrb7をクローニングした(GenBank登録D87531)。ヒトGrb7蛋白質は532アミノ酸から成立し、N末端にはSH3結合コンセンサス配列を示すproline-rich部位を認め、中央にPHdomalnを含むcentral domainが存在し、C末端にはSH2domainを持つ細胞内分子である。Grb7 SH2 domainはEGF.レセプターと直接結合し、そのレセプター型チロシンキナーゼによりリン酸化されることから細胞内シグナル伝達分子と推測される。3)次に、食道癌臨床症例におけるGrb7の発現と臨床病理学的因子との相関を調べたところ、Grb7は癌部でのみ高発現しており、さらに癌浸潤度の規定因子になりうることを見出した(Tanaka et al.Cancer Res1997)。最近、Grb7はMig-10,Grb10,Grb14とともに新規シグナル分子ファミリーを形成していることが明らかとなっている。5)以上により細胞移動遺伝子の相同性より新たにクローニングしたGrb7は食道癌で強く発現し、臨床病理学的に癌浸潤度の規定因子となることを見出し、さらにそのシグナル伝達の抑制により、食道癌培養細胞の浸潤能が抑制されることが明らかとなった。我々はC.elegansの細胞移動遺伝子cell migration gene,mig-10をターゲットとして、ヒト癌細胞よりMig-10の持つユニークなcentral domainと相同部位を持つ遺伝子の固定を試みた。ヒトGrb7蛋白質は532アミノ酸から成立し、N末端にはSH3結合コンセンサス配列を示すproline-rich部位を認め、中央にPH domainを含むcentral domainが存在し、C末端にはSH2 domainを持つ細胞内分子である。Grb7 SH2 domainはEGFレセプターと直接結合し、そのレセプター型チロシンキナーゼによりリン酸化されることから細胞内シグナル伝達分子と推測される。3)次に、食道癌臨床症例におけるGrb7の発現と臨床病理学的因子との相関を調べたところ、Grb7は癌部でのみ高発現しており、さらに癌浸潤度の規定因子になりうることを見出した(Tanaka et al.Cancer Res 1997)。4)我々は、現在、Grb7分子と結合、相互作用する蛋白を固定し、そのシグナル伝達経路の抑制による細胞浸潤への効果を解析している。
知的可視化情報処理技術による複雑系の乱流構造に関する研究

本研究では、知的可視化画像処理とウェーブレット技術を用いた複雑系の多重スケールの乱流構造を解析した。知的画像処理技術のキーアイデアは、離散の動画像(可視化された流れの映像情報)の時間パラメータに沿って動画像の情報を古典物理の集大成であるヘルムホルツ方程式で連続系へ変換することである。すなわち、各スケールにおいて動画像のフレーム間の変化量を司るパラメータをヘルムホルツ方程式から導かれる状態遷移行列の要素として抽出する。その結果、物理系の性質、例えば線形か非線形か等の規則性を見出し、究極は因果関係を解明し法則を生成することが目的である。本研究は知的可視化画像処理とウェーブレット技術を用いて時間-空間-周波数の3次元面における噴流乱流のPIVとLIF画像を解析した。定量的に各スケール渦の生成・成長・干渉過程、乱流の組織構造および異なったスケールの運動成分間のエネルギー伝達とエネルギー散逸の機構を解明した。時間-空間-スケールにおいてビジュアル的な乱流の渦構造の形成・成長・干渉過程などが可視化された。さらに、ロブジェット混合流のPIV画像に対して知的可視化画像処理技術を用いて低時間分解能の離散化の画像から高時間分解能の連続の画像へ変換した。得られた高時間分解能の連続なPIVロブジェット混合流画像に対して3次元ステレオPIV画像解析が行われた。ロブの先端の付近で3次元のマッシュルーム状の大渦構造が明瞭的に観察された。また、ロブの付近で中小渦が分布し、強い3次元混合流を形成していることがわかった。流れの可視化技術とディジタル画像処理を駆使したPIVとLIF画像は流速の同時多点計測と全流れ場の解析を効率的に行う最新の流体計測手法として多方面で活用され始めている。それの普及と共に高精度の計測性能が求められている。PIVとLIF画像では瞬時の広域多点の速度情報と全流れ場の情報を得ることができる反面、時間分解能が低いことが問題になっている。空間-時間-周波数の3次元面から乱流構造と組織構造を解明するため、知的可視化情報処理技術を提案し、高時間分解能の画像解析法と画像流速計測技術を開発した。本研究では、蛍光物質を噴流の流れ場に混入し、噴流の可視化実験を行った。YAGレーザーを用い、クロスコリレーションカメラにより噴流の断面におけるLIFとPIV流れ画像を同時に撮影した。そして、知的可視化情報処理技術はPIV画像に応用し、標準PlV動画像に対してこの方法の信頼性と適用性を検討した。低時間分解能の離散化の画像から高時間分解能の連続の画像へ変換する。画像のフレーム数の増加による高時間分解能のPIV標準画像を生成する二とができた。今後、知的可視化情報処理を用いて高時間分解能の画像とPIVとLIF画像解析結果から物理現象の本質を抽出することが期待できる。本年度は、乱流構造を解明するため、知的可視化情報処理技術を用いた流れ画像とPIVを解析した。得られた結果は次の通りである。1.流れ画像の応用画像の多重解像度法は、高精細画像を、順次、細かくなる部分や成分の階層に分解することである。多重スケール乱流構造を解明するため、2次元離散ウェーブレット多重解像度解析法を用いてロブジェット混合流のLIF (Laser Induced Fluorescence)画像を解析した。五つのスケール(a=0.9615.36mm)の画像成分が得られ、これらの画像成分から各スケールの渦の構造と位置が明瞭に観察された。特に、小スケールの画像から渦の形状や特徴などを容易に抽出できた。さらに、時間-空間-スケールにおいてビジュアル的な乱流の渦構造の形成・成長・干渉過程などを解明した。2.PIVの応用

(1)ウェーブレット画像圧縮法に基づいたPIV本研究は、画像のノイズ除去と高速処理の研究目標として、ウェーブレット画像圧縮技術に基づいて流速計測技術(PIV)が提案されている。標準PIV画像に対してウェーブレット画像圧縮を行った結果は、領域法は閥値法より圧縮率と再現性が高いことがわかった。さまざまな基底関数に対して領域法を用いた標準PIV画像圧縮の結果から、高次の基底関数ほど再現性が高くなっていることがわかった。画像の圧縮率の増加に伴って算出した速度は正解値との平均相関が減少するが、高い圧縮率に対しても相関性が高い速度成分を得ることができた。(2)ベクトル多重解像度法に基づいたPIV瞬時ベクトルの解析本研究はベクトル多重解像度法がPIVの計測データに応用して、流れ構造の抽出法が提案されている。ロブジェット混合流のステレオPIV計測結果に対してベクトル多重解像度解析の結果から、ロブの先端の付近でマッシュルーム上の大渦の構造が明瞭的に観察された。また、ロブの付近で中小渦が分布し、強い混合流を形成していることがわかった。本年度は、知的可視化画像処理とウェーブレット技術を用いた複雑系の多重スケールの乱流構造を解析した。知的ウェーブレット画像処理技術のキーアイデアは、離散の動画像(可視化された流れの映像情報)の時間パラメータに沿って三次元ウェーブレット変換された多重解像度動画像の情報を古典物理の集大成であるヘルムホルツ方程式で連続系へ変換することである。すなわち、各スケールにおいて動画像のフレーム間の変化量を司るパラメータをヘルムホルツ方程式から導かれる状態遷移行列の要素として抽出する。その結果、物理系の性質、例えば線形か非線形か等の規則性を見出し、究極は因果関係を解明し法則を生成することが目的である。この技術を用いて時間-空間-周波数の3次元面における噴流乱流のLIF画像を解析した。定量的に各スケール渦の生成・成長・干渉過程、乱流の組織構造および異なったスケールの運動成分間のエネルギー伝達とエネルギー散逸の機構を解明した。時間-空間-スケールにおいてビジュアル的な乱流の渦構造の形成・成長・干渉過程などが可視化された。さらに、ロブジェット混合流のPIV画像に対して知的可視化画像処理技術を用いて低時間分解能の離散化の画像から高時間分解能の連続の画像へ変換した。得られた高時間分解能の連続なPIVロブジェット混合流画像に対して3次元ステレオPIV画像解析が行われた。ロブの先端の付近で3次元のマッシュルーム状の大渦構造が明瞭的に観察された。また、ロブの付近で中小渦が分布し、強い3次元混合流を形成していることがわかった。
金属イオンを用いるエチテン受容体のバイオアッセイの開拓とその特定化・構造決定

(1)エチレン受容体とAg^+イオンとの特異的結合.Ag^+イオンによるエチレン活性阻害作用の研究から、エチレン受容体のAg^+結合サイトには少なくともSが1コあることを提案した。今回はさらにAg^+イオン以外のCu^+,Au^+,Tl^+,Cd^<2+>,Hg^<2+>,Pd^<2+>のCl^-,CN^-,S_2O_3^<2->,thioglucoseなどの錯体について、カ-ネーションの花持ちに及ぼす影響を検討した。Pd(II)錯体およびTl(I)錯体がわずか12日ではあるが花持ちをよくする、つまりエチレン作用を阻害することを見い出した。Pd^2やTl^+に共通する性質はイオンの大きさ、電荷、電子配置ではなく、ソフトなイオンであるということである。これは我々が提案しているAg-binding siteがSを含むソフトな環境にあることを支持するものである。(2)エチレン受容体の分離.昨年はAg^+イオンをマーカーにした新規なエチレン受容体分離法について検討したが、いくつかの重要な問題点が残されていた。特にICP-MAS法で、カラム分離した画分に含まれる極微量のAg^+(ppbオーダー)を精度良く検出するには、多くの前処理の検討が必要であったが、今回マトリックアスを透析で除去することで精度良く測定できることを明らかにした。またエチレン受容体の分離には白色燈下で育てたもやしの新芽より、暗室で育てたもやしの新芽の方が適していることがわかった。暗室内で育てたもやし新芽の抽出相をCM-Sephadexカラムで分離した結果、Ag^+イオンは100109mlの画分のみに検出され、この部分に受容体が存在する可能性があることを示した点で注目される。
波長5.8μmパルスレーザーによる虫歯の選択的切削治療技術の開発

低侵襲なう蝕治療の実現を目指し、象牙質の特徴的な吸収帯である波長6μm帯のナノ秒パルスレーザーを用いてう蝕除去に関して検討を行ってきたところ、波長5.85μmが選択的なう蝕除去に適していることが示唆された。切削特性とう蝕の硬さとの関係性を評価し、選択的なう蝕除去における波長5.85μmの有効性を検討した.抜去したヒトう蝕歯に対して、平均パワー密度30 W/cm2で照射を行い、照射領域における象牙質の硬さを測定した。象牙質硬さの減少に伴う切削深さの増加が観測され、う蝕の切削特性には組織の硬さが影響していることが示された。う蝕(虫歯)の主成分であるコラーゲンやう蝕細菌の中赤外域における吸収波長6μmの中で、これまでの研究でう蝕の切削に有効であると示唆された波長5.8μm付近に注目し研究を行った。ナノ秒パルスレーザーを用いたウシ歯健全象牙質およびウシ歯脱灰象牙質に対する網羅的な照射実験から、波長5.75-5.80μm、平均パワー密度30-40 W/cm2が最適であることが分かった。本条件では5秒間同じ箇所にレーザーを照射し続けても健全部と脱灰部の境界で切削が止まることが観察され、レーザーの過照射が起きたとしても健全象牙質が切削されにくいという安全性に優れた特徴を有することも分かった。象牙質の吸収特性と切削結果からアブレーションの物理モデル(Blow-offモデル)を用いて切削の起きる閾値について評価を行ったところ、波長5.80μm付近が健全象牙質に非侵襲に脱灰象牙質を切削可能なエネルギー条件が広いことが推察され、Blow-offモデルからも波長5.80μm付近が脱灰象牙質の選択的な切削に最適であることが支持された。また、脱灰象牙質の選択的な切削が起きる条件で切削したウシ歯に対するコンポジットレジン(充填修復物)の接着強度について検討を行ったところ、従来法であるEr:YAGレーザーを用いた場合に比べて接着強度は有意に高く、波長5.80μmのナノ秒パルスレーザーによる切削技術は歯科治療にとって有用なことが分かった。歯科のミニマルインターベンション実現に向けて、健全歯に無侵襲に虫歯を選択的に除去できる技術が求められている。虫歯の有機質由来の吸収波長6μm帯に着目し研究を行ってきた結果、前年度までに波長5.8μm、平均パワー密度30 W/cm2のナノ秒パルスレーザー照射で健全象牙質に低侵襲に脱灰象牙質を選択的に除去可能なことが分かっている。平成26年度は、ヒト虫歯を対象として、虫歯を選択的に除去可能な最適条件および選択的除去が起こるメカニズムについて検討を行った。選択的除去の最適波長条件を検討した結果、平均パワー密度30 W/cm2の場合、波長5.85μmがヒト虫歯象牙質を選択的に切削可能なことが分かった。虫歯の進行度と関連する要素の1つである「硬さ(ビッカース硬さおよびカルシウム含有割合)」、「臨床歯科医による虫歯の診断(その虫歯を除去すべきか温存すべきかの判断)」と「波長5.85μmのナノ秒パルスレーザーによる切削深さ」の関係を検討したところ、硬い健全に近い象牙質は切削されず、柔らかく虫歯に近い象牙質は切削されることが分かった。また、この「切削される/されない」の関係と臨床医の「切削したい/しない」の関係に相関があることが分かり、波長5.85μmのナノ秒パルスレーザーは治療すべき虫歯を選択的に除去できるということが示された。ヒト虫歯象牙質の選択的除去が起きる条件で切削したヒト歯象牙質に対するコンポジットレジン(充填修復物)の接着強度について検討を行ったところ、従来法であるEr:YAGレーザーを用いた場合に比べて接着強度は有意に高く、波長5.85μmのナノ秒パルスレーザーによる切削技術は歯科保存治療の観点からも有用なことが分かった。レーザー医学、生体光学ウシ歯象牙質を用いた実験を完了し、平成26年度に予定していたヒト歯う蝕象牙質を用いた実験に移行できており、当初計画以上に研究が進行している。ヒト歯う蝕象牙質を用いた実験において、最適照射条件と切削深さ・切削形態との関係および最適照射条件におけるコンポジットレジン接着性の評価については計画通り実施する。選択的除去が起こるメカニズムの解明に関しては、う蝕象牙質の光学特性(吸収係数、熱緩和時間)および機械的特性(ビッカース硬さ、ヌープ硬さ、カルシウム混合率)といったパラメーターを正確に測定することが重要である。

光学特性測定に関しては、吸収係数算出の際に必要となる測定試料厚みを正確に測定することが重要で、レーザー顕微鏡を用い試料厚みの測定を行う予定である。機械的特性測定に関しては、う蝕組織という軟質な材料のビッカース硬さを正確に測定することが技術的に難しいため、材料工学が専門の研究者の指導を仰ぎ実施する予定である。平成25年度に得られた成果を英文論文としてまとめており、英文校正費として使用する予定であったが、論文が年度末で完成しなかったため、平成26年度に英文校正をするため。英文校正費として使用する。
活性酸素誘導性腸上皮イオン分泌における細胞内シグナル伝達機構に関する研究

NH_2Clの直接作用に関する研究を行った。NH_2Clが腸粘膜上皮細胞に直接作用すると細胞内SH基は低下し、また細胞外にGSHを前添加させることによりその効果を抑制することができる。また、SH基酸化剤であるダイアマイドでも同様にイオン分泌効果をもっており、NH_2Clの直接作用機序は酸化作用であると考えられる。つまり、NH_2Clが腸粘膜上皮細胞に直接作用すると、細胞内の蛋白質酸化される。(たとえば、SH基など酸化される。)これが、細胞内のセカンドメッセンジャーとなってシグナルが伝達されると考えられる。NH_2Clによるラット腸上皮イオン分泌作用はプロスタグランディンや腸粘膜に分布する神経叢によって行われる他に、直接細胞に作用する系が存在するが、この直接経路のメカニズムに関して検討するため、以下の実験を行った。アッシングチャンバーに装着したラット腸上皮粘膜の漿膜側に前もってグルタチオン(GSH)を添加するとNH_2Clを作用させてもイオン分泌を完全に抑制することが判明した。しかし、NH_2Cl添加後にGSHを作用させても、イオン分泌は抑制しなかった。つまり、NH_2Clが直接膜に作用するか、あるいは細胞内に通過し、いったん作用するとその後にGSHを添加しても、もはやイオン分泌は抑制できないほど反応は速く終了してしまうものと考えられた。また、NH_2Clにより細胞内SH基は減少することを確認している。さらにNH_2Clを作用させる前にダイアマイドを用いて細胞内GSHを減少させておくとイオン分泌開始までの潜時が短縮した。これらのことはNH_2Clが細胞内でダイアマイドと同じように酸化剤として作用していることを示している。これはテトロドトキシンにより前もって神経系を介したイオン分泌経路を遮断しておいても、イオン分泌開始までの潜時は延長するものの同様の傾向がみられている。これはイオン分泌には神経系を介した間接的な経路以外に、細胞に作用する(酸化)直接経路が存在することを示し、さらにそれがダイアマイドと同じく細胞への酸化作用として関係していること示している。これまでの研究をまとめると、1.NH_2Clによるラット腸粘膜イオンの分泌作用は腸粘膜に分布する神経叢を刺激することにより行われるが、これはCa依存性である。2.粘膜固有層に存在する線維芽細胞を刺激し、プロスタグランディン系を賦活して、cAMP濃度を上昇させ、イオン分泌を引き起こす。3.直接作用も存在する。NH_2Clの作用により細胞内SH基は低下し、また細胞外にGSHを添加させることによりその効果を抑制することができる。また、SH基酸化剤であるダイアマイドでも同様ようにイオンの分泌効果をもっており、NH_2Clの作用機序は酸化作用であると考えられる。また、細胞内ではCaの変動をともない、イノシトールリン酸代謝は関与しないことを見い出している。これらの結果を得て、現在論文作成中である。
蛋白質の立体構造安定性マップ作製のための基盤研究

近年、ヒトゲノムをはじめ多くの遺伝子配列が幾何級数的に日々明らかにされている。しかし、その膨大な遺伝子配列から蛋白質の機能構造を推定することはほとんど不可能である。あるアミノ酸に適合する既知の立体構造を探して未知蛋白質の立体構造を予測するいわゆる3D-1D法が有力視されている。しかしながら、その予測法に用いられている評価関数は経験的なもので精度の高いものではない。それは、蛋白質の個々のアミノ酸残基が立体構造上の特性との関連で、蛋白質の立体構造の安定性にどのように寄与しているか定量的に明らかにされていないことに原因している。本研究計画では、「蛋白質の個々のアミノ酸残基が立体構造上の特性との関連で、蛋白質立体構造の安定性にどのように寄与するかを明らかにすること」、つまり、「蛋白質立体構造安定性マップ」の作成を行うための基本的な問題点を明らかにし、マップ作成が可能となるように基盤を整備することを目的としている。そこで、油谷は、ヒトリゾチームをモデル蛋白質として選び、系統的・網羅的変異型を作製して、変異型の安定性変化を示差走査熱量系で構造変化をX線結晶構造解析によって調べ、「安定性/構造」データベースを構築した。それを用いて、種々の安定化因子のパラメータの算出に成功した。一方、西川らは全ての可能な一残基置換の安定性を一挙に表現する「変異型プロフィール」を作成し、そのプロフィールを改良し、3D-1D法を用いる「評価関数」の精度向上を目指している。そこで、「変異型安定性プロフィール」を「安定性/構造」データベースで検証を行い、その問題点を抽出した。またその検証のための幾つかの変異型を作製し、その結果と安定化因子のパラメータを基に、「プロフィール」の改善の方策を明らかにした。最近、ヒトゲノムを始め多くの遺伝子配列が幾何級数的に日々明らかにされている。しかし、その膨大な遺伝子配列から蛋白質の機能・構造を推定することはほとんど不可能である。あるアミノ酸配列に適合する既知の立体構造を探して未知蛋白質の立体構造を予測するいわゆる3D-1D法が有力視されている。しかしこの予測に用いられている評価関数も経験的なラフなものである。それは、蛋白質の個々のアミノ酸残基が立体構造上の特性との関連で、蛋白質立体構造の安定性にどのように寄与しているか定量的に明らかにされていないことに原因している。本研究計画では、「蛋白質の個々のアミノ酸残基が立体構造上の特性との関連で、蛋白質立体構造の安定性にどのように寄与するかを明らかにすること」、つまり、「蛋白質立体構造安定性マップ」の作製を行うための基本的な問題点を明らかにし、マップ作製が可能となるように基盤を整備することを目的としている。この解決手段の一つとして、西川らは全ての可能な一残基置換の安定性を一挙に表現する「変異型プロフィール」のテーブルを作成している。本研究では、ヒト・リゾチーム(油谷)とユビキチン(Makhataze)の種々の構造上の部位で、置換残基の特性と安定性との関連を明らかにする。ヒト・リゾチームにおいて、違った部位での同じ性質のアミノ酸置換体を系統的に作成し、それらの安定性の変化を高精度の示差走査熱量計で測定し、構造変化をX線結晶解析で求めた。分子内部、分子表面、αヘリックス、β構造、ループなどに位置している変異型約20種について調べた。それらの結果と「変異型プロフィール」からの予測値との差異を検討中である。Makhatazeはユビキチンの特定部位に焦点をあてて、一つの構造の特徴を徹底的に研究しているが、彼とは熱測定の解析法まで踏み込み得られたデータの解析と検討を共同で行っている。

ヒトゲノムをはじめ多くの遺伝子配列が幾何級数的に日々明らかにされている。しかし、その膨大な遺伝子配列から蛋白質の機能構造を推定することはほとんど不可能である。あるアミノ酸に適合する既知の立体構造を探して未知蛋白質の立体構造を予測するいわゆる3D-1D法が有力視されている。しかしながら、その予測法に用いられている評価関数は経験的なもので精度の高いものではない。それは、蛋白質の個々のアミノ酸残基が立体構造上の特性との関連で、蛋白質の立体構造の安定性にどのように寄与しているか定量的に明らかにされていないことに原因している。本研究計画では、「蛋白質の個々のアミノ酸残基が立体構造上の特性との関連で、蛋白質立体構造の安定性にどのように寄与するかを明らかにすること」、つまり、「蛋白質立体構造安定性マップ」の作成を行うための基本的な問題点を明らかにし、マップ作成が可能となるように基盤を整備することを目的としている。西川らは全ての可能な一残基置換の安定性を一挙に表現する「変異型プロフィール」を作成し、そのプロフィールを改良し、3D-1D法に用いる「評価関数」の精度向上を目指している。具体的には、既に研究されている100種以上の系統的な変異型ヒトリゾチームの安定性/構造データーベースを用いてその検証を行っている。油谷は、現状の「ヒトリゾチームの変異型プロフィール」から安定性の向上が予測される10種の変異型を作成し、それらの安定性を示差走査熱量計で、構造変化をX線結晶構造解析で求め予測の正当性を検証し、実験を基にプロフィールの改善を目指す。Makhatazeは熱測定法の解析に関わる諸問題を解決することを主目的に得られたデータの正当性についての考察を行うとともに自らもユビキチンの系統的な変異型の実験から「プロフィール」の検証を行い、その改善に寄与している。近年、ヒトゲノムをはじめ多くの遺伝子配列が幾何級数的に日々明らかにされている。そこで、油谷は、ヒトリゾチームをモデル蛋白質として選び、系統的・網羅的変異型を作製して、変異型の安定性変化を示差走査熱量計で構造変化をX線結晶構造解析によって調べ、「安定性/構造」データベースを構築した。それを用いて、種々の安定化因子のパラメータの算出に成功した。一方、西川らは全ての可能な一残基置換の安定性を一挙に表現する「変異型プロフィール」を作成し、そのプロフィールを改良し、3D-1D法に用いる「評価関数」の精度向上を目指している。そこで、「変異型安定性プロフィール」を「安定性/構造」データベースで検証を行い、その問題点を抽出した。
脳皮質層形成のダイナミクス

大脳皮質神経細胞は、最終的に配置される脳表面側の皮質板ではなく、脳室側で誕生し、中間帯を経由して、脳表面側の辺縁帯直下まで移動して最終分化する。この繰り返しにより、早生まれの細胞は皮質板の深層に、遅生まれの細胞は浅層に配置され、6層からなる将来の大脳皮質層が構築される。本研究では、まず、発生期大脳の脳室帯(神経幹細胞が存在し、分裂を繰り返して神経細胞を誕生させる主要部位)と中間帯(最終分裂を終えて新たに誕生した神経細胞が、脳表面に向かって移動する途中の部位)を含む領域を、実体顕微鏡下で切り出して、蛍光色素でラベルした後、再凝集培養を行った。その結果、次第に、強い蛍光を持った細胞(分裂しない細胞)と、弱い蛍光を持った細胞(レベル後に分裂した細胞)の二種に分かれてきた。それらは、再凝集塊の中において、初期には互いに混ざり合っていたが、次第に強い蛍光を持った細胞が中心に集まる傾向を示した。そこで、ブロモデオキシウリジンを種々の発生時期に投与して、各々の時期に最終分裂した細胞をラベルして同様の実験を行ったところ、少なくとも調べた時期(胎生14日ラベルと胎生15日ラベル)においては、早生まれの神経細胞(胎生14日生まれ)の方が、遅生まれの細胞(胎生15日ラベル)よりも凝集塊の中心近くに集まる傾向を示した。以上の結果は、脳室帯で産生された大脳皮質神経細胞は、辺縁帯直下まで移動しなくても、その誕生時期に依存して相互に接着する傾向を有する可能性を示唆する。
エナメル芽・象牙芽前駆細胞株のスフェロイド共培養による組織成熟機構の研究

本研究では、マウスエナメル芽前駆細胞株ALCと象牙芽前駆細胞株OLCを用いて歯胚形成の成熟過程を解析するための3次元培養モデルの構築を検討した。ALCとOLCのそれぞれに大きさの異なるスフェロイドを形成させた後に互いに融合させて培養する方法を開発した。その結果、スフェロイド培養において2種の前駆細胞を広範囲で接触させると組織全体が著しく石灰化すること、スフェロイドを一部分のみ接触させた場合、上皮細胞の一部が間葉組織に陥入することを見出した。この培養組織で細胞分化マーカーおよび細胞分化シグナル経路の遺伝子発現変化を解析することができた。歯胚形成には、歯胚上皮と間葉の2種の細胞の相互作用が重要であり、歯胚発生時の特異的時期に、組織の特異的部位において、特異的分子が発現していることがこれまでの研究で明らかにされたが、歯胚形成のメカニズムについては未解明な点が多く残されている。本研究では、独自に樹立したマウス上皮由来エナメル芽前駆細胞株ALCと間葉由来象牙芽前駆細胞株OLCを用いて、歯胚形成における組織の成熟を再現しその機構を明らかにすることを目的とした。「歯胚上皮ー間葉細胞の空間配置」を模倣する3次元培養組織の構築を検討し、スフェロイドーコラーゲンゲル培養による歯胚組織の形成を試みた。ALCを赤色蛍光化合物で標識し、GFPを発現するOLCと蛍光顕微鏡下で区別して観察できるようにした。次に、細胞接着性を抑えたU底培養プレートを用いてそれぞれの細胞でスフェロイドを作製した。この2つのスフェロイドを同一ウェルに入れて培養するとスフェロイド同士が融合し、上皮-間葉系相互作用が惹起されると考えられた。培養法の検討の結果、培養組織の広範囲で2種の前駆細胞を接触させると、組織全体が著しく石灰化することを見出した。また、両前駆細胞のスフェロイドを一部分のみ接触させる培養法を検討し、組織全体で石灰化が急激に起こる事を回避しながら、歯胚発生時の上皮細胞が間葉組織に陥入する現象と類似の状態を起こすことに成功した。さらに組織中に細胞外マトリックス様構造が形成されていることを確認した。次に、上記現象にともなって起きる遺伝子発現の変化を、細胞分化シグナル経路の遺伝子について集中的に解析するリアルタイムPCRアレイを用いて解析し、スフェロイドーコラーゲンゲル培養法で培養すると、組織の石灰化や骨芽細胞への分化に関与するTGFbシグナルのうちBMP経路や、TGFb経路の各遺伝子の発現が増加していることが分かった。歯胚形成過程では、時期・部位特異的に様々な分子が発現して歯胚上皮-間葉の相互作用が起きるが、その機構に未解明な点は多い。本研究では、独自に樹立したマウス上皮由来エナメル芽前駆細胞株ALCと間葉由来象牙芽前駆細胞株OLCを用いて、歯胚形成における組織の成熟を再現しその機構を明らかにすることを目的として、「歯胚上皮ー間葉細胞の空間配置」を模倣する3次元培養組織の構築を検討し、スフェロイドーコラーゲンゲル培養による歯胚組織の形成を試みた。ALCを赤色蛍光化合物で標識し、GFPを発現するOLCと蛍光顕微鏡下で区別して、細胞接着性を抑えたU底培養プレートを用いてそれぞれの細胞でスフェロイドを作製した。リアルタイムPCRで各種細胞分化マーカーおよび細胞分化シグナル経路の遺伝子変化について集中的に解析した結果、スフェロイドーコラーゲンゲル培養法で培養すると、組織の石灰化や骨芽細胞への分化に関与するTGFbシグナルのうちBMP経路や、TGFb経路の各遺伝子の発現が増加していることが分かった。歯胚は上皮組織と間葉組織の間のシグナルのやりとりにより分化が誘導され形態が形成される。しかし、そのメカニズムについては明らかにされていない。

23年度は「歯胚上皮ー間葉細胞の空間配置」を模倣するスフェロイドーコラーゲンゲル内培養の検討を計画し、スフェロイドーコラーゲンゲル培養による歯胚3次元培養組織の構築を行なった。ALCを赤色蛍光化合物で標識し、GFPを発現するOLCと蛍光顕微鏡下で区別して観察できるようにした。次に、細胞接着性を抑えたU底培養プレートを用いてそれぞれの細胞でスフェロイドを作製した。この2つのスフェロイドを同一ウェルに入れて培養するとスフェロイド同士が融合し、上皮-間葉系相互作用が惹起されると考えられた。しかし、ALCがOLCスフェロイドの表面を覆うように増殖した時に組織全体に著しい石灰化が起きてしまい歯胚組織の形成には至らなかった。そこでALCとOLCの比率を検討し、OLCをあらかじめコラーゲンゲル中に分散して培養し、細胞数とサイズを大きくしたスフェロイドを作製し、サイズの小さいALCスフェロイドと融合させた。その結果、培養5日後にはALCがOLCのスフェロイドの内部に移動している様子が観察された。組織の切片の観察から、ALCがOLCのスフェロイドの中へ移動する現象に伴って、細胞外マトリックス様の構造物が作られていることがわかった。HE染色からは明確な象牙質、エナメル質の形成までは確認できなかったが、象牙質のもととなるマトリックスが形成された可能性が考えられ、前駆細胞が象牙芽細胞へ分化した可能性が考えられた。歯胚形成過程では、歯胚上皮-間葉組織の間で時期・部位特異的に様々な分子が発現し、それにより両組織は相互に作用し合いながら段階的に成熟していく。しかし、その機構に未解明な部分は多い。本研究では、上皮ー間葉組織の歯胚形成における成熟過程を、独自に樹立したマウス歯胚由来上皮系細胞株と間葉系細胞株を用いて再現しその機構を明らかにすることを目的とした。独自に樹立したマウス上皮由来エナメル芽前駆細胞株ALCと間葉由来象牙芽前駆細胞株OLCを用いて、歯胚組織中の「歯胚上皮ー間葉細胞の空間配置」を模倣する3次元培養組織の構築を検討した。まず、細胞接着性を抑えたU底培養プレートを用いて2種の前駆細胞ALC(上皮)とOLC(間葉)それぞれの細胞でスフェロイドを作製した。この2つのスフェロイドを同一ウェルに入れて培養するとスフェロイド同士が密に融合することを見出したので、このような接触による上皮-間葉系相互作用の惹起の有無を検討した。種々の培養条件の検討の結果、培養組織の広範囲で2種の前駆細胞を接触させると、組織全体が著しく石灰化することを見出した。また、両前駆細胞のスフェロイドを一部分のみ接触させた場合、上皮細胞の一部が間葉組織に陥入するような現象を観察した。しかし、歯胚形成に類似するような形態的変化はそれ以上見出せていない。両細胞を高密度に接触させて構築した組織中に細胞外マトリックス様構造が形成されていることを観察した。細胞分化マーカーおよび細胞分化シグナル経路の遺伝子発現変化を解析した結果、ALC(上皮)では、組織の石灰化や骨芽細胞への分化に関与するTGFbシグナルのうちBMP4およびTGFb経路の遺伝子発現が増加し、一方、OLC(間葉)ではBMP4の発現は抑えられていた。また、両細胞でTGFbシグナルの制御に関与するWntシグナル経路や種々の細胞接着分子の発現が増加していた。形態系基礎歯科学歯胚3次元培養のために歯胚上皮ー間葉細胞の空間配置を模倣するスフェロイドーコラーゲンゲル培養法を検討した結果、培養組織の広範囲で2種の前駆細胞を接触させると、組織全体が著しく石灰化することを見出した。
ジアセチルポリアミンアプタマーを利用した簡便ながん診断方法の確立

ポリアミンは細胞の増殖に関与しており、その生体内の含有量はがんのバイオマーカーとしても有用であることが知られている。本研究では、ポリアミンに結合するRNAアプタマー(核酸抗体)を取得し、尿中に排泄されるポリアミン量を高感度に検出する新規検出系の開発を行なった。その結果、特定のポリアミンに対して特異的な結合活性を持つアプタマーが取得でき、さらに、このアプタマーを用いた検出系の有効性を確認できた。RNAアプタマーは、ランダムなRNAプールより結合活性を指標に単離するSELEX法により得られる機能性RNAであり、抗体よりはるかに微細な構造の差異を認識できる特徴を持ち、生体内分子の新規検出・解析ツールとして注目されている。ポリアミン量は増殖の盛んな細胞内で増加するため、がんのバイオマーカーとして有用であることが報告されている。がんの診断系の開発を目標に、各種ポリアミンを高感度で識別・検出するツールとしてのアプタマーの有効性を検証するために、まずスペルミンに結合するRNAアプタマーを作製し、解析を行った。スペルミンを標的にして取得したアプタマーは、スペルミン、ホモスペルミン、ノルスペルミンといった直鎖状で4つのアミンを持つテトラアミン類に対して強い結合活性を持ち、アミン間の炭素数に対してある程度許容をもつことが分かった。また、このテトラアミンの両端が一級アミン(-NH_2)であることが結合には重要であることを明らかにした。このアプタマーは2つのステムループ構造を持つことが予測され、この構造を基にポリアミン結合部位を調べたところ、3'側のステム構造がスペルミンに対して高い親和性を持っていた。さらに、このステム構造のG-U塩基対をG-C塩基対に換えると結合活性を失うことから、この部位の立体構造が結合活性には重要であることが示唆された。以上を踏まえ、今後さらにアプタマーの最適化を進める。アプタマーを用いたポリアミン検出系の可能性を調べるため、スペルミンアプタマーをあらかじめ結合させたスペルミン親和性カラムを用いて、溶液中のスペルミンの検出を行った。その結果、10μMから3mMのスペルミンを定量的に検出することが可能であった。さらに核酸に結合する蛍光物質であるGel Red(Biotium社)を使い、溶液中のスペルミンの検出を紫外光下で可視化することができ、アプタマーを用いたポリアミン検出系の有効性を示せた。RNAアプタマーは、ランダムなRNAライブラリーから標的分子との結合を指標に単離するSELEX法により得られる機能性RNAであり、抗体よりはるかに微細な構造の差異を認識できる特徴を持ち、生体内分子の新規検出・解析ツールとして注目されている。スペルミンを標的にして取得したアプタマーは2つのステムループ構造を持つことが予測され、この構造を基にポリアミン結合部位を調べたところ、3'側のステムループ構造がスペルミンに対して高い親和性を持っていた。このステム構造はACA/Cで形成されるbulge out構造を有しており、このbulge out構造を塩基対合させる変異を導入したところ、アプタマーの結合活性は著しく低下した。また、このbulge outはA/Cの組み合わせにおいて結合活性が高いことが分かった。さらに、このbulge out構造に隣接するA-U塩基対を他の塩基対や対合を作らない組み合わせにすると結合活性が下がった。以上のことからbulge outとこれに隣接するA-U塩基対合が結合に重要であることが分かった。ジアセチルスペルミンに結合するアプタマーの選択を行なったところ、幾つかのアプタマー候補を得ることができたが、その結合活性はスペルミンアプタマーに比べると低いものだった。他のSELEXの結果と合わせ、選択時のアセチルスペルミンのカップリング方法やRNAライブラリーのプライマーの設定方法に工夫の余地があることが分かった。この結果を踏まえて、新規のアプタマー選択方法をデザインし、次年度でその効果を検証する予定である。RNAアプタマーは、ランダムなRNAライブラリーから標的分子との結合を指標に単離するSELEX法により得られる機能性RNAであり、抗体より微細な構造の差異を認識できる特徴を持ち、生体内分子の新規検出・解析ツールとして注目されている。がんの診断系の開発を目標に、各種ポリアミンを高感度で識別・検出するツールとしてのアプタマーの有効性を検証するために、既に得られているスペルミンに結合するRNAアプタマー(スペルミンアプタマー)の解析を行い、さらにジアセチルスペルミンに結合するアプタマー(ジアセチルスペルミンアプタマー)の取得を行なった。

スペルミンアプタマーは2つのステムループ構造を持つが、特に3'側のステムループ構造がスペルミンに対して高い親和性を持つ。このステムループ構造の結合部位の解析を進めたところ、この領域内にバルジ構造を含むステム領域と、それに隣接するステム領域の双方がスペルミンの結合に関与していることが分かった。これらは単独でもスペルミンに対して弱い結合活性を持っていた。それぞれの領域内の1塩基置換が全体の結合活性の喪失につながることが分かり、この2つの領域が相互作用して高い結合活性を与えることが示唆された。またスペルミンアプタマーの結合カイネティクスを解析する方法を、蛍光ラベルしたアプタマーを用いる方法とSPR解析で行なう方法を確立し、現在、これらの方法で詳細な解析を行っている。選択方法に改良を加えジアセチルスペルミンアプタマーの取得を行なったところ、比較的結合活性の高いアプタマー候補を得ることができた。これらのうちの幾つかは、スペルミンにも高い結合活性を示した。現在、これらの結合カイネティクスや各種ポリアミンに対する結合の特異性について解析中である。スペルミン結合アプタマーを用いたパイロット研究は計画通り順調に進展しているが、ジアセチルスペルミンに強く結合するアプタマーの取得に当初の予定よりも時間が掛かっており、そのため尿サンプルを使った実験への移行が遅れている。24年度が最終年度であるため、記入しない。ジアセチルスペルミンに結合するアプタマーの取得方法を改善する。具体的にはRNAライブラリーのプライマー配列の設定、ポリアミンの担体への固定化方法の変更を考えている。前者においてはプライマー同士が塩基対号する形を取ることでランダム配列部分が自由に高次構造を取りやすくなることが今年度までの研究で明らかになってきており、それを採用する。また後者においては、担体とポリアミン間のスペーサー部分を長くして標的へのRNAのアクセシビリティを改善させることで、よりアプタマー取得の可能性が高まると考えている。
北海道北見市常呂町居住者の方言と郷里方言との相関に関する社会言語学的研究

本研究の結果,土佐方言・西美濃方言の特徴を維持させつつも北海道方言的特徴を習得していることが明らかとなった。岐阜地区の居住者の場合,アスペクトは西美濃方言の特徴が維持される傾向は強く,断定の助動詞の場合はその逆の傾向が強い。連母音の融合については維持と判断できるが,他の連母音については消失したと考えられる。土佐地区の居住者の場合,土佐方言の特徴が維持され,北海道方言的に特徴が習得されることはほとんどない。一方,北海道方言的特徴であるカ行・タ行子音の有声化,自発表現について。前者は使用が見られないことから,西美濃方言・土佐方言の維持と見なしてもよい。平成27年度は本プロジェクトを本格化させるために必要な情報を収集した。具体的には次の4つのことを行った。(1)北見市並びに常呂町の郷土史(岐阜県・高知県からの移住者)に関する情報を北見市立図書館等で収集した。同時に,双方の郷土史研究者にコンタクトを取り,市史(町史)では扱われていない情報提供を受けた。また,面接調査を実施するために,教育委員会との協力関係を構築した。(2)郷里方言に関する情報,並びに現地の郷土史に関する情報を収集すべく,岐阜県(大野町)並びに高知県(佐川町)に出かけて行き,現地の図書館,県立図書館等で郷土史,並びに北海道移住に関する情報収集を行った。現地の方言を扱った研究を把握することができたが,北海道への移住に関する情報が当初想定したほど多くはなく,文献による情報把握に限界があることを把握できた。平成28年度,29年度に実施される調査で質問項目とすることにした。(3)本プロジェクトでベースラインデータとなる調査資料(小野米一氏らが1979年に常呂町で実施した面接調査資料)のデータベース化を行った。特に録音資料について,データ全体のイメージを把握するために,調査資料のデジタル化並びに,録音目録の作成に当たった。本年度はプロジェクト全体から見て初年度であることから,現地での調査を実施するために必要な情報収集を行うことに重点を置いた。面接調査を実施する上で把握しておくべき現地の情報を把握できた。これらの点では,当初の計画は順調に進展していると判断できる。その一方で,当初予定していた北見市での情報収集,ベースラインデータの整備は一定の規模進められたが,本年度内に計画していたものを全て終了させられなかったのは課題である。平成28年度の早い段階でその整備を終了させ,次の段階に進みたい。平成28年度においては,平成27年度に開始した研究活動を本格化させるために,以下の研究活動を行なった。(2)本プロジェクトのベースラインデータとなる調査資料(音声資料)の整備を実施した。約50本のカセットテープのデジタル化を実施した。デジタル化の方法,問題点等にを整理した上で,その成果を北海道方言研究会の研究例会で発表した。(2)平成27年度に収集した文献資料を整理しつつ,北見市における言語生活に関する情報を整備した。質問項目の作成について検討を継続した。(3)北見市における言語変容を把握するため,北海道内(札幌市,釧路市,富良野市,函館市)で実施した調査結果などを踏まえた考察を継続的に行ない,その内容を北海道方言研究会で発表した。平成27年度に着手したデータベース構築を平成28年度においては本格化させることができた。また,ベースラインデータを活用した分析結果の報告,北海道内の言語変容などについても研究成果を出すことができている。ただし,北見市における面接調査を実施するために必要な質問項目の調整が十分にできなかった。本年度にその実施を行い,ベースラインデータとの比較を行いたい。本研究課題における研究は、(1)北海道北見市常呂町での聞き取り調査(2)常呂町居住者を対象とした既存の談話資料を活用した調査(3)岐阜県揖斐郡大野町における聞き取り調査(4)大野居住者を対象とした既存の談話資料を活用した調査である。これらの調査で得られる知見が北海道方言の中でどのように位置づけられるかを知るための調査を実施した。このうち(1)並びに(2)で得られたデータから5つの項目(カ行・タ行子音の有声化,アスペクト,断定詞,連母音の融合,自発表現)について分析を試みた。基本的には,程度は異なるものの,西美濃方言の特徴を維持させつつも北海道方言的特徴を習得したケースが多いことが明らかとなった。連母音の融合については,特定の連母音については維持と判断できるが,他の連母音についてはその特徴が消失したと考えた方がよい。それが現地の音声的特徴の習得とみなすのかどうかの見極めは必要である。なお、土佐地区の居住者の場合,土佐方言の特徴が維持され,北海道方言的に特徴が習得されることはほとんどないと判断できる。岐阜地区居住者と異なり,アスペクト・断定の助動詞など土佐地区の特徴が使用される傾向が強い。また,出身方言の特徴になく,北海道方言的特徴であるカ行・タ行子音の有声化,自発表現について。自発表現は岐阜地区居住者の使用が認められた。

岐阜地区の居住者の場合,アスペクトは西美濃方言の特徴が維持される傾向は強く,断定の助動詞の場合はその逆の傾向が強い。連母音の融合については維持と判断できるが,他の連母音については消失したと考えられる。土佐地区の居住者の場合,土佐方言の特徴が維持され,北海道方言的に特徴が習得されることはほとんどない。一方,北海道方言的特徴であるカ行・タ行子音の有声化,自発表現について。前者は使用が見られないことから,西美濃方言・土佐方言の維持と見なしてもよい。面接調査の準備を行い,調査を実施するのが最大の目標である。録音資料の整備を継続的に行うとともに,学会での発表を行う。本年度は本プロジェクトの最終年度である。北見市,佐川町,大野町での調査を実施し,言語変容の解明にあたる。その結果を踏まえ,本プロジェクト全体の取りまとめを行い,今後の研究課題等を整理したい。社会言語学録音資料を整備するための補助業務者の当初計画していたより作業を行えなかったこと,また,勤務先で推進している研究プロジェクトの業務との関係で北見市における調査が十分に行えなかったため。録音資料に関しては,補助業務者を確保し,作業の効率化を図る。また,平成27年度に予定していた北見市での情報収集を今年度の早い時期に実施する。