hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
赤潮プランクトン,シャットネラの活性酸素産生を司る酵素系の解析

赤潮原因植物プランクトンであるChttonellaは通常の培養条件下で常にスーパーオキサイドを産生している一方で、レクチンの一種であるコンカナバリンA(Con A)、あるいは糖特異性が異なる他のレクチン(リシン、CBH、WGA等)添加によって、著しく上昇すること、さらに興味あることに、魚鰓粘液由来高分子物質にも同様な刺激作用があることを見出している。これらの結果からChttonellaにも、哺乳類白血球同様、細胞外からの刺激に応答してスーパーオキサイド産生量を増加させる刺激応答機構あるいは酵素系(NADPH oxidase)が存在すると推定される。さらに、Chttonella細胞表層に存在する糖皮膜構造体glycocalyxを含む無細胞粗抽出液中にNADPHを添加すると、スーパーオキサイドが酵素的に産生されることを見出した。そこで、本無細胞抽出液中に存在するHADPHに応答する酵素系について、特に白血球のNADPHoxidaseとの類似性について検討した。これまでの予備実験により、レクチン添加などの化学的刺激の他、穏和な条件下での撹拌や超音波処理などの物理的刺激によってもこのglycocalyxはChttonella細胞表層から脱落することをを見出している。そこで、Chttonella細胞を超音波処理あるいは単に軽度の撹拌処理した後、細胞本体を遠心分離により除去し、上清を得た。この上清にNADPHを添加するとスーパーオキサイドが酵素的に産生されることが確認されたので、これを粗酵素としてSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動によりその構成成分をさらに細かく分離後、常法に従い免疫抗体法によりウエスタンブロットによる解析を行った。すなわち、ヒト白血球由来NADPHoxidaseと免疫学的に類似した成分が存在するか調べた結果、ヒト好中球のNADPHoxidaseの主要成分蛋白質であるチトクロームb大サブユニット(gp91 phox)に対する抗体と反応する主要バンド(110kD)が検出された。また、本蛋白質をコードするDNA断片もChttonellaのゲノムDNAから検出された。以上の実験結果により、Chttonellaは哺乳類白血球細胞膜酵素であるNADPHoxidaseに類似したスーパーオキサイド産生を司る酵素系を有していることが強く示唆された。Chattonellaのスーパーオキサイド産生がレクチンの一種であるコンカナバリンA(ConA)、あるいは糖特異性が異なる他のレクチン(リシン、CBH、WGA等)添加によって、著しく上昇すること、さらに興味あることに、魚鰓粘液由来高分子物質にも同様な刺激作用があることを見出している。これらの結果からChattonellaにも、哺乳類白血球同様、細胞外からの刺激に応答してスーパーオキサイド産生量を増加させる刺激応答機構あるいは酵素系(NADPH oxidase)が存在すると考えられる。さらに、Chattonellaの粗抽出液中にNADPHを添加すると、スーパーオキサイドが酵素的に産生されることを見出した。そこで、本年度はChattonellaの活性酸素産生に関与する酵素系、特に白血球のNADPHoxidaseとの類似性について検討した。まず、Chattonella細胞を超音波処理あるいは単に軽度の撹拌処理した後、細胞本体を遠心分離により除去し、上清を得た。

これまでの予備実験により、この様な処理によりChattonella細胞表層構造であるグリコキャリックスが細胞本体から脱落することをを見出している。この上清にNADPHを添加するとスーパーオキサイドが酵素的に産生されることが確認されたので、これを粗酵素としてSDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動によりその構成成分をさらに細かく分離後、常法に従い免疫抗体法によりウエスタンブロットによる解析を行った。すなわち、ヒト白血球由来NADPHoxidaseと免疫学的に類似した成分が存在するか調べた。その結果、ヒト好中球のNADPHoxidaseの主要成分蛋白質であるチトクロームb大サブユニットに対する抗体と反応する主要バンド(110kD)が検出された。以上の実験結果により、Chattonellaのスーパーオキサイド産生を司る酵素系は哺乳類白血球細胞膜酵素であるNADPHoxidaseに類似していることが強く示唆された。赤潮原因植物プランクトンであるChattonellaは通常の培養条件下で常にスーパーオキサイドを産生している一方で、レクチンの一種であるコンカナバリンA(Con A)、あるいは糖特異性が異なる他のレクチン(リシン、CBH、WGA等)添加によって、著しく上昇すること、さらに興味あることに、魚鰓粘液由来高分子物質にも同様な刺激作用があることを見出している。これらの結果からChattonellaにも、哺乳類白血球同様、細胞外からの刺激に応答してスーパーオキサイド産生量を増加させる刺激応答機構あるいは酵素系(NADPH oxidase)が存在すると推定される。さらに、Chattonella細胞表層に存在する糖皮膜構造体glycocalyxを含む無細胞粗抽出液中にNADPHを添加すると、スーパーオキサイドが酵素的に産生されることを見出した。そこで、本無細胞抽出液中に存在するHADPHに応答する酵素系について、特に白血球のNADPHoxidaseとの類似性について検討した。これまでの予備実験により、レクチン添加などの化学的刺激の他、穏和な条件下での撹拌や超音波処理などの物理的刺激によってもこのglycocalyxはChattonella細胞表層から脱落することをを見出している。そこで、Chattonella細胞を超音波処理あるいは単に軽度の撹拌処理した後、細胞本体を遠心分離により除去し、上清を得た。すなわち、ヒト白血球由来NADPHoxidaseと免疫学的に類似した成分が存在するか調べた結果、ヒト好中球のNADPHoxidaseの主要成分蛋白質であるチトクロームb大サブユニット(gp91 phox)に対する抗体と反応する主要バンド(110kD)が検出された。
二次嗅覚ニューロン特異的転写因子Tbx21の機能および嗅細胞依存的動態の解析

マウス嗅球僧帽・房飾細胞におけるTbx21、Tbr2の役割を明らかにすることを目的とし、遺伝子ターゲッティングマウスの解析を行った。Tbx21は僧帽・房飾細胞の発生に必須な役割を持たないが、成体で再生した嗅細胞の嗅球への軸索投射に関与することが示唆された。一方、Tbr2は僧帽・房飾細胞の分化過程において正常な遺伝子発現や樹状突起の投射、介在ニューロンとの相互作用などに必須であることが明らかとなった。このことから、Tbx21とTbr2は嗅覚神経回路形成においてそれぞれ異なる機能を担うことが示された。成体マウスの嗅上皮を人工的に除去すると、嗅球僧帽・房飾細胞で転写因子Tbx21の発現が顕著に上昇する。この発現は嗅細胞からの入力または軸索投射によって制御されていると考えられた。鼻孔閉鎖により匂い刺激を除去したマウスでは、僧帽・房飾細胞のTbx21の発現に変化は見られなかった。また、CNG(cyclic nucleotide gated)チャネルに変異を持つマウス(CNGA2+/-)では一部の糸球体で神経入力が失われるが、このマウスのCNGA2陰性の糸球体の近傍でもTbx21の発現変化は認められなかった。これらの結果より、Tbx21の発現は嗅神経からの入力ではなく軸索投射に依存して制御される可能性が高いと考えられた。また、ウェスタンブロットおよびin situハイブリダイゼーションによる解析の結果、Tbx21は嗅上皮の除去後、主に転写後レベルの制御によって発現量が上昇することが明らかとなった。次に、僧帽・房飾細胞におけるTbx21の生理学的な役割について調べるために、Tbx21ノックアウトマウスの解析を行った。Tbx21ノックアウトマウスは僧帽・房飾細胞の発生や形態、遺伝子発現等に目立った異常は認められなかった。しかし嗅上皮除去後の嗅神経の嗅球への再投射に若干の遅れが生じることが分かった。このことから、Tbx21は成体で再生した嗅細胞の軸索投射に関与している可能性が示された。Tbr2は僧帽・房飾細胞でTbx21旨とよく似た発現動態を示し、血球系細胞では重複した機能を持つことが知られている。Tbx21ノックアウトマウスで顕著な表現型が見られなかったことから、Tbx21の機能をTbr2が代償している可能性が示唆された。そこで、Cre-loxPシステムを用いて僧帽・房飾細胞特異的Tbr2コンディショナルノックアウトマウスを作製した。現在このマウスを用いて、僧帽・房飾細胞におけるTbx21とTbr2の機能的重複および差異について解析を行っている。Tbr2はTbx21と同じ遺伝子ファミリーに属し、造血細胞で重複した機能を持つことが知られている。そこで今回、僧帽・房飾細胞におけるTbr2の機能を明らかにするために、Cre-loxPシステムを用いて僧帽・房飾細胞特異的Tbr2コンディショナルノックアウトマウスを作製し解析を行った。このマウスの僧帽・房飾細胞では、Tbx21の発現に変化は認められなかったが、同じ遺伝子ファミリーの一つであるTbr1の発現が顕著に上昇していた。またそれに伴って、小胞グルタミン酸トランスポーターのサブタイプがVGluT1からVGluT2へ変化していた。野生型マウスの房飾細胞でTbr1とTbr2は異なる細胞群で発現することから、Tbr2は通常Tbr1の発現を抑制することにより房飾細胞のサブタイプの特定化に関与している可能性が示唆された。またこのマウスでは、僧帽・房飾細胞の一次樹状突起が野生型よりも細くなり、糸球体への投射パターンが乱れていた。さらに僧帽・房飾細胞に入力する抑制性介在ニューロンの数の減少が認められた。最初期遺伝子の発現を指標として僧帽・房飾細胞の神経活性をモニターしたところ、Tbr2コンディショナルノックアウトマウスは野生型マウスに比べ、同じ匂い刺激に対してより多くの僧帽・房飾細胞が活性化することが分かった。Tbr2遺伝子を欠損する僧帽・房飾細胞は樹状突起の形態に異常が生じ、抑制性介在ニューロンからの入力を正しく受けられなくなったため、僧帽・房飾細胞間の側方抑制が起こりにくくなっているのではないかと考えられた。以上の結果より、Tbr2は僧帽・房飾細胞の正常な発生と機能に重要な役割を果たすことが示された。また、機能的にも正しい匂い識別などに関与している可能性が示唆された。Tbr2コンディショナルノックアウトマウスはTbx21ノックアウトマウスと異なる表現型を示したことから、Tbx21とTbr2は僧帽・房飾細胞で少なくとも一部は異なる機能を担うと考えられた。
精子エイジングにおける次世代継承のエピジェネティクス

本研究では、ヒト加齢精子のエピゲノムの特徴と自閉症を含む精神・神経疾患との関連性について検討した。正常精子(132例)と、加齢精子(65例)のDNAメチル化について比較した。その結果、1)年齢と精子数に負の相関を認めた。精子数の減少は、喫煙や運動、食事内容との関連を示した2)乏精子症精子では、多数のインプリント遺伝子のメチル化異常を示した3)遺伝子プロモーター領域で共通のメチル化の違いを示す領域を同定した(高メチル化領域:271領域、低メチル化領域:102)。精神神経発達に関する遺伝子も変化を示した。以上より、ヒト加齢精子ではメチル化の変異が認められ、一部は神経発達の関与が示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、1.ヒト加齢精子が、自閉症を含む精神・神経疾患に関連する領域にどの程度エピゲノム変化を示すのか正確に評価すること2.加齢に伴う精子のエピゲノム変化と次世代個体の自閉症様症状との関連を明らかにすることを目的とする。平成30年度は、まず大学倫理審査の承認を得て研究を開始した。次に、患者精子の収集と登録を行った。東北大学医学部産婦人科不妊外来及び不妊症専門関連病院を受診し、精液検査を受けた患者の精子(197例の精子)を収集した。精子は、精液検査後の破棄予定の精子を用いた。さらに、患者情報の登録を行った。生活習慣等に関する記述式アンケート調査では、身長、体重、職業、既往歴、年収、学歴、喫煙率、常用薬など50項目を実施し、食物摂取頻度調査票(FFQ)を用いた食品項目の摂取頻度調査も実施した。精子形態検査は、WHOマニュアル第3版より分類し(正常群132例(>20×106/ml)、乏精子症群65例)、swim-up法にて精子細胞のみを回収し、DNAを抽出した。精子のDNAメチル化解析は、RRBS法にて網羅的なメチル化解析を行った。メチル化解析の結果は、5 reads以上カバーされた1,033,310 CpGサイトについて検討した。その結果、1.クラスター解析では、乏精子群の一部にクラスターの形成がみられた2.乏精子症では多数のインプリント遺伝子のメチル化異常を示した3.ゲノム領域ではプロモーター領域でメチル化の違いを認め、CpG領域はCpG islandでメチル化異常に有意差を認めた(PC 0.01) 4.一部の繰り返し配列(SINE, LTR)に有意差を認めた。これらの結果より、精子数の少ない乏精子症精子では、メチル化異常の頻度および程度が大きいことが示唆された。計画では特定の領域のメチル化解析を予定していたが、全ゲノムを対象としたRRBS解析を行った。それは、一部の領域のメチル化との比較では正確な評価が難しく、全体の傾向を理解する必要があると考え、その結果、加齢により増加する乏精子症の特徴を明らかにすることに成功した。本年度の計画を継続し、ヒト精子のエピゲノム変異について解析を行う。症例対照研究の手法を用い、ヒト加齢精子の自閉症を含む精神・神経疾患に関連する遺伝子のエピゲノム変化について評価する。40歳以上の男性(精子)を症例群とし、ターゲットとなる遺伝子プロモーターのDNAメチル化解析を行う。また、自閉症を含む精神・神経疾患と加齢精子との関連性評価には、比例ハザードモデルにより解析し、ハザード比を算出する。その際、栄養素、喫煙、飲酒などの交絡要因を加味し、より確実に検証する。ヒトおよびマウスでメチル化異常を示す領域が異なり、マウスを用いた検討よりヒト精子の解析を優先させ準備を進める。
プリオン関連蛋白質による神経細胞変性死へのグルタミン酸受容体の関与とその分子機構

我々はprion protein(PrP)がmetabotropic glutamate receptor type I(mGluR1)と結合ていることを見出した。さらに、この結合を通してPrPがmGluR1の活性化を調節し、細胞内Ca^<2+>の濃度調節に関与していることを明らかにした。本研究の目的はmGluRlとPrPの相互関係を明らかにすることであり、本年度はmGluRlとPrPの結合と、その結合がもたらすmGluRlの機能への影響に関して研究を行った。まず、mGluRlとPrPの結合に関しては、培養細胞を用いた強発現系において免疫沈降を行ったところ、mGluRlとPrPの結合が認められた。またマウスの小脳を用いて同様の実験を行ったところ、同じようにmGluRlとPrPの結合は確認された。これらのことから、mGluRlとPrPは結合しており、この結合は生理的なものであることが分かった。つづいてPrPとの結合がmGluR1の機能にどのような影響を与えるか検討した。mGluR1はアゴニスト刺激により小胞体からのCa^<2+>の放出を誘導し、細胞内のCa^<2+>の濃度を上昇させる。そこでCa^<2+>指示薬を用いてPrP存在下におけるmGluR1による細胞内のCa^<2+>濃度の変化を観察したところ、PrP存在下ではmGluR1によるCa^<2+>の濃度上昇が抑えられることが分かった。Ca^<2+>を介したシグナル伝達は細胞の生命活動の重要な位置を占めており、このCa^<2+>シグナリングの破たんは細胞死にもつながる。このことを本研究の成果と照らし合わせると、PrPが細胞の生命活動において重要な役割を担っており、その役割はmGluR1を介して発揮されていることが推測された。mGluR1とPrPの相関関係は本研究が初めて明らかにしたもので、PrPの正常機能の解明に新たな知見を与えるものであると考える。本研究の目的はmGluR1とPrPの相互関係を明らかにすることであり、これまでにmGluR1とPrPの結合を明らかにし、PrPがmGluR1の活性化を調節しているを見出した。本年度はPrPによるmGluR1の活性化調節を細胞単位でより詳細に検討した。その結果、PrP存在下ではリガンド刺激によって、すぐさまmGluR1が活性化し、カルシウムイオン濃度の上昇が認められ、数秒後には濃度の低下が始まり刺激前の水準までに戻った。観察したほとんどの細胞で同様な濃度変化を示した。しかし、PrP非存在下では、細胞毎にさまざまな濃度変化を示した。カルシウムイオン濃度の上昇が他の細胞より遅れるもの、一度の刺激で複数回の濃度上昇が見られるもの、さらには濃度上昇が誘導されたのち高い水準でその濃度が維持されるものなど、濃度変化が不規則なものが多く認められた。これらのことから、PrPはmGluR1の活性化の程度だけでなく、mGluR1の活性化のon/offのスイッチとして機能し、時間的な活性化制御も担っていることが考えられた。本研究の目的はmGluR1とPrPの相互関係を明らかにすることであり、これまでにmGluR1とPrPの結合を明らかにし、PrPがmGluR1の活性化を調節していることを見出した。本年度はPrPによるmGluR1の活性化調節の結果、細胞死の誘導や細胞の増殖にどのような影響を与えるか検討した。Ca^<2+>signalingは細胞死など様々な生命活動に関与していることはよく知られている。mGluR1はその活性化により細胞内のCa^<2+>の濃度を上昇させる。また、我々はPrPがmGluR1の活性化の程度だけでなく、mGluR1の活性化のon/offのスイッチとして機能し、時間的な活性化制御も担っていることを示した。このことからPrPの有無によるmGluR1の活性化の活性化制御の変化は、細胞に細胞死を含め様々な影響を与えることが予想された。しかし、flow cytometerを用いた細胞死の検出、細胞増殖の測定などを行った結果、PrPの有無による影響を認めることができなかった。今回、PrPによるmGluR1の活性化制御が細胞に対してどのような影響を与えるかを明らかにすることができなかった。

しかし、狂牛病の牛の脳では、mGluR1シグナルの下流因子でもあるPLCβなどの蛋白質の発現量などが減少していることから、PrPとmGluR1のinteractionがプリオン病における病態にも関与していることも考えられる。
脳卒中片麻痺患者が安全・快適な歩行を行うための意志入力型密着式歩行補助機の開発

本装置は,脳卒中片麻痺患者が安全・快適な歩行を行うための密着式歩行補助機の開発密着式歩行補助機を開発する.装置は,歩行補助機のフレームを汎用性の長下肢装具とし,足関節および膝関節が分離可能で耐久性のある歩行補助機にした.さらに麻痺患者に装置を装着させて歩行実験を行い,支援効果を検討した.その結果,本装置を使用することにより歩行の歩容が改善させることが明らかとなった.本装置は,脳卒中片麻痺患者が安全・快適な歩行を行うための密着式歩行補助機の開発密着式歩行補助機を開発する.装置は,歩行補助機のフレームを汎用性の長下肢装具とし,足関節および膝関節が分離可能で耐久性のある歩行補助機にした.さらに麻痺患者に装置を装着させて歩行実験を行い,支援効果を検討した.その結果,本装置を使用することにより歩行の歩容が改善させることが明らかとなった.脳卒中片麻痺患者は,麻痺のため膝に力が入らず屈曲時の自重の支持ができないことや足関節の背屈動作ができないため遊脚期において足先が上がらず地面に接触し転倒することがある.そのため片麻痺患者は,歩行動作を変え歩行を行っているが,外出を控えて寝たきりになってしまう.そこで本装置は,安全な歩行のために足関節の背屈・底屈動作および膝関節の伸展・屈曲動作を補助し,QOL向上を目指す.装置は,短下肢装具とアルミで自作した膝関節補助機を併せた歩行補助機で,関節重量の負荷を軽減するために背部に設置したDCモータの動力をフレキシブルシャフトにより関節へ伝達する機構である.しかし,装置の耐久性や剛性に不安があった.そこで,歩行補助機のフレームを汎用性の長下肢装具に変更し,足関節および膝関節が分離可能で耐久性のある歩行補助機にした.さらに麻痺患者に装置を装着させ歩行を行い,支援効果を検討した.被験者は,片麻痺患者2名であった。その麻痺患者は,“Brunstrom Stage"評価でレベル4の麻痺に該当し,足関節に麻痺の症状が現れている.また,日常生活では,短下肢装具を使用している.本実験は,患者の麻痺状態に適用した補助を行うために短下肢の装置とした.測定は,関節にマーカを付けた被験者が10mのコースを6分間歩行した.さらに歩行中に被験者の側面と正面の動画から股関節の上下幅と内外転角度を計測した.その結果,股関節の上下振れ幅は,麻痺患者の補助機装着時と非装着時の股関節上下幅を比較すると,麻痺患者は補助機装着時の方が非装着時よりも約20[%]減少した結果が得られた.また,補助機装着時と非装着時の回転角度を比較すると,麻痺患者の最大内外転角度は,約15[%]の減少傾向がみられた.この結果,本装置を使用することにより歩行の歩容が改善させることが明らかとなった.本研究は,"脳卒中片麻痺患者が安全・快適な歩行を行うための意志入力型密着式歩行補助機の開発する"ことを目的とした.脳卒中片麻痺患者は,麻痺のため膝に力が入らず屈曲時の自重の支持ができないことや足関節の背屈動作ができないため遊脚期において足先が上がらず地面に接触し転倒することがある.そのため片麻痺患者は,歩行動作を変え歩行を行っているが,外出を控えて寝たきりになってしまう.そこで本装置は,安全な歩行のために足関節の背屈・底屈動作および膝関節の伸展・屈曲動作を補助してQOL(quality of life;生活の質)向上を目指す.さらに快適な生活のために衣服の下に装着できる装置を開発することで人目に気づきにくい装置にし,日常生活で使用できる装置とする.そこで本装置は,フレキシブルシャフトを活用することで装置の骨格部分を可能な限り小型化し,その特性であるねじりばねの効果を利用して必要なタイミングで力の補助や抵抗を加える.さらに装着者が補助機に動かされているのではなく,自らの意志で日常生活に必要な動作「歩く,止まる,階段を上がる・降りる,椅子から立つ・座る」などができる歩行補助機を開発する.最終的には脳卒中片麻痺患者・リハビリ患者へ適用し,長時間歩行の実現による自立支援やQOL向上を目的とする.本年度は,昨年度までの装着者からの意見をもとに歩行の周期の変化に対応した制御方法を導入した.今までの歩行制御は,決められた歩行周期のもとに感圧センサにより,歩行位相を把握し,適度な角度制御とトルク補償を行っていた、しかし,歩行者によっては,歩行周期が違うため歩行しづらいとの意見が多かった.そこで,両足立脚期の時間を計測して歩行比から歩行周期の速度を決定する制御に変更した.装着歩行実験の結果,歩行周期が変更できるため歩行しやすくなったとの報告を受けた.本研究は,“脳卒中片麻痺患者が安全・快適な歩行を行うための意志入力型密着式歩行補助機の開発する"ことを目的とした.脳卒中片麻痺患者は,麻痺のため膝に力が入らず屈曲時の自重の支持ができないことや足関節の背屈動作ができないため遊脚期において足先が上がらず地面に接触し転倒する.そこで本装置は,安全な歩行のために足関節の背屈・底屈動作および膝関節の伸展・屈曲動作を補助してQOL(quality of life)向上を目指す.さらに快適な生活のために衣服の下に装着できる装置を開発することで人目に気づきにくい装置にし,日常生活で使用できる装置とする.そこで本装置は,装置の骨格部分を可能な限り小型化し,その特性であるねじり

ばねの効果を利用して必要なタイミングで力の補助や抵抗を加える.最終的には脳卒中片麻痺患者・リハビリ患者へ適用し,長時間歩行の実現による自立支援やQOL向上を目的とする.歩行補助機の改良を行い.装着実験を行った,24年度には片麻痺患者での装着歩行実験を行う予定である.24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は,片麻痺患者(Brunnstrom stage4-5:杖や装具を使用することにより歩行が可能.歩行中の分廻し動作や骨盤引上げ動作がみられる患者)への装着歩行実験を行う.24年度が最終年度であるため、記入しない。
赤血球集合機構の解明：架橋集合と枯渇集合二つの競合するメカニズム

赤血球は血漿中もしくはある種の高分子存在下で面と面を合わせた連銭と呼ばれる可逆的な集合体を形成する.生体内での赤血球集合の亢進は血流に大きな影響を与える。連銭の形成については,高分子が赤血球間を架橋する「架橋集合」と高分子が赤血球間から排除される「枯渇集合」の競合する二説があり,未だ解決されていない.本研究は赤血球ーフィブリノゲン間の相互作用を水晶振動子マイクロバランスを用いて直接測定し,連銭形成のメカニズム解明を目指した.赤血球とフィブリノゲン間には相互作用が認められ,架橋集合を示唆する結果が得られた.本年度の研究実施計画は1)および2)である。1)赤血球と種々の集合因子との相互作用測定:すでに集合メカニズム(架橋集合)が明らかにされているコンカナバリンA(Con A)とウマ赤血球の相互作用測定に続き、ポリエチレングリコール(PEG)およびフィブリノゲンとの相互作用を水晶振動子マイクロバランス(QCM)法を用いて測定した。実験はウマ血液を遠心分離して得られた赤血球をリン酸緩衝生理食塩水中に体積分率1%で懸濁させた。水晶振動子表面への集合因子の固定化は、PEGの場合は末端にオリゴエチレングリコールを有するHydroxy-EG6-hexanoateを用い、フィブリノゲンの場合はゲル濾過クロマトグラフィーによって精製したフィブリノゲンを末端に活性エステルを有するDitiobis (succinimidyl hexanoate)介して行った。その結果、PEGの場合は赤血球添加後の周波数変化は極めて小さく、赤血球との相互作用はほとんどないことが分かった。一方、フィブリノゲンの場合はConAとは逆に周波数の増大が観測され、赤血球ーフィブリノゲン間に比較的弱い相互作用が存在することが示唆された。2)由来の異なる赤血球とフィブリノゲンとの相互作用測定:ウマ(強い集合能)、ブタ(ヒト赤血球と同程度の集合能)、ウシ(集合能をもたない)と特徴的な集合能を有する赤血球とフィブリノゲンとの相互作用を測定した。前述と同様に振動子表面にフィブリノゲンを固定化し、赤血球を添加するといずれの赤血球も周波数の増大が観測された。周波数の増加は、ウマ赤血球で123±34 Hz、ブタ赤血球で88±27 Hz、ウシ赤血球で41±18 Hzと集合能との間に正の相関が見られた。補助事業期間における具体的な研究目標は以下1)から3)である。1)種々の集合因子を用いた実験:フィブリノゲン、ポリエチレングリコールおよびデキストランと赤血球との相互作用を測定する。2)由来が異なる赤血球を用いた実験:集合能が異なるウマ、ブタおよびウシ赤血球とフィブリノゲンとの相互作用を測定する。3)赤血球表面の物理化学的性質を変化させた実験:酵素処理、pHおよびイオン強度による赤血球表面の物理化学的性質の変化が集合能に与える影響を調べる。研究計画では本年度の達成目標は1)および2)であり、研究実績概要に記した通りおおむね順調に進展している。本年度の研究実施計画は交付申請書に記載した研究計画の3)である。<酵素(ノイラミニダーゼ,トリプシン)処理したウマおよびウシ赤血球のゼータ電位の測定>実験:ウマおよびウシ血液を遠心処理し,血漿とバフィーコートを除去し,PBSで,赤血球の洗浄後、PBSにて赤血球懸濁液を調製した.ノイラミニダーゼおよびトリプシンを赤血球懸濁液に加え3時間反応させた.その後,赤血球をPBSで洗浄し,スクロース緩衝液にて赤血球懸濁液を調製した.ZETASIZER (NANO-ZS, MALVERN)を用いて25°C,60Vにてゼータ電位を測定した.結果:[ノイラミニダーゼ処理]ウマおよびウシ赤血球ともに赤血球膜表面に存在する糖鎖末端のシアル酸が除去されることによりゼータ電位は低下した.[トリプシン処理]ウマおよびウシ赤血球ともにゼータ電位は増加した.このことから,ウシ赤血球のトリプシン処理による集合体形成の惹起は赤血球表面に存在する負電荷の影響ではないことが分かった.<水晶振動子マイクロバランス法を用いたウマおよびウシ赤血球とフィブリノゲン間の相互作用の測定>実験:9MHz水晶振動子表面にフィブリノゲンを固定化し,酵素(ノイラミニダーゼ,トリプシン)処理したウマおよびウシ赤血球を添加した後の共振周波数と共振抵抗値の時間変化をQCA922 (SEIKO EG&G)を用いて25°Cで測定した.結果:ウマおよびウシ赤血球のいずれにおいても共振周波数と共振抵抗値の増大が見られた.両者の間に強い相互作用がある場合,通常共振周波数は減少するが,弱い相互作用の場合,共振周波数は逆に増大することが知られている.従って,ウマおよびウシ赤血球とフィブリノゲン間には比較的弱い相互作用が存在することが分かった.また,ノイラミニダーゼおよびトリプシン処理による赤血球とフィブリノゲン間の相互作用への有意な影響は見られなかった.補助事業期間における具体的な研究目標は以下1)から3)である.1)種々の集合因子を用いた実験:フィブリノゲン,ポリエチレングリコールおよびデキストランと赤血球との相互作用を測定する.

2)由来が異なる赤血球を用いた実験:集合能が異なるウマ,ブタおよびウシ赤血球とフィブリノゲンとの相互作用を測定する.3)赤血球表面の物理化学的性質を変化させた実験:酵素処理,pHおよびイオン強度による赤血球表面の物理化学的性質の変化が集合能に与える影響を調べる.研究計画では本年度の達成目標は3)であり,研究実績概要に記した通りおおむね順調に進展している.本年度の研究実施計画は交付申請書に記載した研究計画3)のうち赤血球集合に与える糖鎖の影響である。<グリコシダーゼ処理した赤血球とフィブリノゲン間の相互作用測定>実験:牛および馬赤血球懸濁液にO-またはN-グリコシダーゼを添加し、37°Cで16時間インキュベートして赤血球表面の糖鎖を切除した。遊離された糖をフェノール硫酸法にて定量した。赤血球とフィブリノゲン間の相互作用は9 MHz水晶振動子表面にフィブリノゲンを固定化し、グリコシダーゼ処理した赤血球を添加した後の共振周波数の時間変化をQCA922(SEIKO EG&G)を用いて25°Cで測定した。結果:赤血球添加後の周波数はいずれの赤血球においても増加し、赤血球とフィブリノゲン間には比較的弱い相互作用があることが分かった。また、未処理赤血球と比較するとグリコシダーゼ処理によりフィブリノゲン間の相互作用が減少することが分かった。このことから、フィブリノゲン分子内には糖と特異的に相互作用部位が存在することが示唆された。<グリコシダーゼ処理が赤血球集合能に与える影響>実験:O-またはN-グリコシダーゼ処理した牛および馬赤血球をそれぞれの血漿に懸濁させ、集合体の形成の有無を顕微鏡を用いた定性的観察と赤血球沈降速度による集合能の定量的測定を行った。結果:生理的条件下で赤血球集合の無い牛赤血球では、O-およびN-グリコシダーゼ処理による集合体の形成は惹起されることはなかった。また、生理的条件下で赤血球集合を形成する馬赤血球では、顕微鏡および赤血球沈降速度の測定からグリコシダーゼ処理による赤血球集合能への影響は見られなかった。従って、赤血球表面にグリコカリックスとして存在する糖鎖は赤血球集合に直接影響を与えるものではないことが分かった。赤血球は血漿中もしくはある種の高分子存在下で面と面を合わせた連銭と呼ばれる可逆的な集合体を形成する.生体内での赤血球集合の亢進は血流に大きな影響を与える。連銭の形成については,高分子が赤血球間を架橋する「架橋集合」と高分子が赤血球間から排除される「枯渇集合」の競合する二説があり,未だ解決されていない.本研究は赤血球ーフィブリノゲン間の相互作用を水晶振動子マイクロバランスを用いて直接測定し,連銭形成のメカニズム解明を目指した.赤血球とフィブリノゲン間には相互作用が認められ,架橋集合を示唆する結果が得られた.現在のところ交付申請書に記載した研究計画に沿って順調に研究が進展している。従って、今後も当初の研究計画に沿って進めて行く予定である。次年度の具体的な研究目標は、赤血球の物理化学的性質の影響として、酵素処理を施した赤血球とフィブリノゲンとの相互作用を測定する。具体的な実験としては、酵素ノイラミニダーゼを用い赤血球表面のシアル酸を切断する。次に蛍光試薬を用いて遊離したシアル酸を定量する。負電荷をもつシアル酸が除去された赤血球のゼータ電位を測定するとともに、QCM法によりフィブリノゲン間の相互作用を調べる。現在のところ交付申請書に記載した研究計画に沿って順調に研究が進展している.従って,今後も当初の研究計画に沿って進めて行く予定である.次年度の具体的な研究目標は,赤血球表面の糖鎖全体をNーおよびOー
C型肝炎ウイルス感染による肝発癌に関与する宿主因子の同定とその作用機構

肝癌は我が国の癌死の第3位を占め、その約8割がC型肝炎ウイルス(HCV)感染に起因している。HCVコア蛋白質を発現するマウスがヒトと似た経過で脂肪肝・肝癌を発症することから、HCVコア蛋白質の宿主細胞内での機能が注目されている。本研究では、HCVコア蛋白質の成熟過程と病原性発現機構の詳細を明らかにし、宿主蛋白質を標的とした新規治療法開発の基盤確立を目的としている。1)HCVコア蛋白質による肝臓脂肪化および癌化におけるPA28γの意義PA28γ(-/-)マウス、PA28γ(+/+)コアTgマウス、PA28γ(-/-)コアTgマウスおよびPA28γ(+/+)マウスの肝臓の脂肪化について観察した。PA28γ(+/+)コアTgマウスのみで肝臓の脂肪化が確認され、PA28γ欠損あるいはコア蛋白質非発現のマウスでは肝臓の脂肪化は観察されなかった。脂肪滴の蓄積の原因はトリグリセリド・脂肪酸の蓄積が考えれられることから、脂肪合成関連遺伝子の発現を解析し、特定の転写因子の活性化がマウスおよび培養細胞でコア蛋白質およびPA28γに依存して認められた。その上流域の転写因子の活性化も、コア蛋白質およびPA28γに依存して認められた。肝細胞癌に関してもPA28γノックアウトによって軽減された。2)PA28γ遺伝子欠損・コア蛋白質発現による宿主内蛋白質発現の変化:PA28γ(+/+)コアTgマウス、PA28γ(-/-)コアTgマウスおよびPA28γ(+/+)マウス肝臓内蛋白質発現の違いを抗体アレイによって解析し、特定の蛋白質の発現に変化が認められた。1)宿主細胞内におけるコア蛋白質の成熟過程の解析:SPP切断に必須なコア蛋白質内のアミノ酸残基および小胞体局在に必須なコア蛋白質内の領域を139-144アミノ酸と176-177アミノ酸領域と同定した。2)PA28γの脂肪肝および肝癌成立過程への影響:HCVコア蛋白質トランスジェニック(コアTg)およびPA28γノックアウト(PA28γKO)マウスを交配し、PA28γKOコアTgマウスを作製した。PA28γKOマウス、コアTGマウスとPA28γKOコアTgマウスと比較し、コア蛋白質発現量および体重などには差を認められなかったが、両者の肝臓の脂肪化には著しい差が認めらた。3)SPPおよびPA28γに対するRNAiによるコア蛋白質病原性発現の調節:siRNA発現ベクターによるSPPおよびPA28γ発現抑制のために、まず培養細胞を使って、PA28γおよびSPPに対するsiRNA標的遺伝子配列をU6プロモーターで発現することによって決定し、培養細胞におけるPA28γの発現を大幅に抑制することに成功した。
液体金属-高分子コンポジットの創製とソフトロボティクス素子としての応用

柔軟でしなやかな素材を用いたデバイス関連分野(ソフトエレクトロニクス、ソフトロボティクス)は医療分野をはじめ様々な応用展開が期待され、現在、極めて重要な研究領域になっている。本研究では、液体金属と機能性高分子材料がナノ・ミクロレベルで複合化された柔らかいコンポジット材料「メタルゲル」の研究分野を新規開拓し、それを電気化学アクチュエータ素子に適用することで、ソフトロボティクス分野へと展開する。
生体応答の早期イベントに注目したナノマテリアルによるアレルギー増悪機構の解明

本研究では、ナノマテリアルを対象とし、気道上皮細胞と免疫担当細胞に注目し、生体・免疫応答の早期において、ナノマテリアルによるアレルギー増悪機構を明らかにすることを目的とした。ナノマテリアルが、気道上皮細胞の細胞活性やサイトカイン産生に及ぼす影響、抗原提示細胞に及ぼす影響を検討した。その結果、ナノマテリアルは、アレルゲン存在下において、気道上皮細胞に対しては、細胞障害性を、抗原提示細胞に対しては、異物取り込みや抗原提示に関わる分子の発現を誘導した。従って、ナノマテリアルによるアレルギーの増悪には、呼吸器系や免疫系が、特に、異物取り込み能や抗原提示能の亢進が関与している可能性が示唆された。本研究計画では、ナノマテリアルを対象とし、経気道的に侵入する環境汚染物質と呼吸器の最初の接点である気道上皮細胞と生体・免疫応答の上流に位置する免疫担当細胞(抗原提示細胞、各種T細胞、NH細胞)、及び、それらの相互作用に注目した。また、ナノマテリアルによるアレルギー性気管支喘息増悪機構を、生体・免疫応答の早期イベントに焦点を当てて解明することを目的とした。本年度は、カーボンブラック(CB)が気道上皮細胞のサイトカイン産生に及ぼす影響、並びに、抗原提示細胞の抗原取り込みから抗原提示までのプロセスに及ぼす影響を、アレルゲンである卵白アルブミン(OVA)の存在下及び非存在下において検討した。その結果、CB単独曝露、CB及びOVA複合曝露ともにアレルギー発症に関与する上皮由来サイトカインIL-33の産生には影響を及ぼさなかった。一方、CB単独曝露により、抗原提示細胞の抗原取り込みや抗原提示に関与する細胞表面分子の発現が増加し、CB及びOVA複合曝露によって、さらに、その上昇が認められた。従って、CBは、抗原提示細胞を活性化し、アレルゲンとの複合曝露によって、免疫影響を相加的に増悪する可能性が示唆された。ナノマテリアルは、100 nm以下の極微小な粒子状や構造体を有する物質であり、化粧品、家電製品、電子機器、塗料・インク等、身近な生活用品にもしばしば使用されるようになり、一般環境における皮膚や呼吸を介した曝露機会の増加が危惧されている。ナノマテリアルは、その粒径から、呼吸により気管支や肺に沈着した後、容易に体内へ侵入し、呼吸器系や免疫系、特にアレルギー性呼吸器疾患に影響を及ぼす可能性が示唆されている。一方、アレルギー疾患患者は、ナノマテリアルのような環境汚染物質の影響を受けやすい高感受性・脆弱性集団とも考えられており、早急なナノマテリアルによるアレルギー増悪機構の解明が求められている。本研究計画では、ナノマテリアルを対象とし、経気道的に侵入する環境汚染物質と呼吸器の最初の接点である気道上皮細胞と、生体・免疫応答の上流に位置する免疫担当細胞(抗原提示細胞、各種T細胞、NH細胞など)、および、それらの相互作用に注目した。ナノマテリアルが、気道上皮細胞のサイトカイン産生に及ぼす影響、抗原提示細胞、抗原提示細胞とT細胞の相互作用に及ぼす影響を試みた。その結果、ナノマテリアルは、気道上皮細胞に対しては、細胞障害性を、抗原提示細胞に対しては、異物取り込みや抗原提示に関わる分子の発現を誘導した。従って、ある種のナノマテリアルは、気道障害や抗原提示細胞の活性化を介して、アレルギーの悪化に関与しうる可能性が示唆された。本研究は「ナノマテリアルを対象とし、経気道的に侵入する環境汚染物質と呼吸器の最初の接点である気道上皮細胞と生体・免疫応答の上流に位置する免疫担当細胞(抗原提示細胞、各種T細胞、NH細胞)、及び、それらの相互作用に注目し、ナノマテリアルによるアレルギー性気管支喘息増悪機構を、生体・免疫応答の早期イベントに焦点を当てて解明すること」を目的とし、それに沿った計画を立案し、研究を進めている。当該年度までに、CBによる気道上皮細胞と抗原提示細胞への影響を評価し、CBが抗原提示細胞を活性化し、アレルゲンとの複合曝露による免疫影響の相加的増悪の可能性が存在しうることを明らかにすることができ、おおむね順調に進展していると、自己点検、評価した。環境毒性学今後は、昨年に引き続き、ナノマテリアルによるアレルギー性気管支喘息の増悪機構を明らかにする。ナノマテリアルが、抗原提示細胞におけるアレルゲンのプロセシングや、抗原提示細胞とT細胞との相互作用に及ぼす影響を中心に検討する。加えて、ナノマテリアルがNH細胞に及ぼす影響についても検討を加える予定とする。産前産後休暇および育児休暇の取得によって、一部の検討が実施できなかったため。平成26年度に実施予定であった、ナノマテリアルが抗原提示細胞におけるアレルゲンのプロセシングに及ぼす影響の検討に使用する。
下顎骨骨化点の初期石灰化における神経性調節機構の解明

骨の形成に対する神経の関与を確かめるために、iPS細胞から骨芽細胞になる過程における神経ペプチドの受容体の発現変化について調べた。マウスiPS細胞から骨を形成する骨芽細胞までの間をiPS期、胚様体期、骨芽細胞期に分けて遺伝子発現を調べた結果、未分化なiPS期と骨芽細胞期の初期にはCGRPおよびβ2アドレナリン受容体が、骨芽細胞の分化後期にはNK-1受容体が特異的に発現していることが明らかとなった。これらの結果より骨芽細胞の分化段階依存的に神経ペプチドが影響していることが示された。昨年度に引き続きマウスiPS細胞を使った実験を中心に実験を進めた。マウスiPS細胞は理化学研究所より供与された細胞を使って一定の成果得られていたが、期待する最終段階の石灰化の点で十分な成果があげられなかったので、iPS細胞をマウス歯根膜由来のiPS細胞に変え、培養に用いる血清の種類も数種類試して確実に硬組織を形成する条件の検索に前半の大分を費やした。結果、マウスiPS細胞より確実に骨芽細胞へ分化させて硬組織を形成することのできる培養条件を確定できた。現在、当初の目的である神経の骨芽細胞分化への影響を調べるために、神経ペプチドのレセプターの発現をRT-PCR法により検索を行っている。今までの所、神経ペプチドのサブスタンスPのレセプターであるニューロキニン1レセプターが骨芽細胞分化の最終段階で初めて発現する事を確認した。また、iPS細胞を使った実験以外では神経ペプチドのサブスタンスPなどをが属するタキキニンファミリーの一つであるヘモキニンについて骨代謝への影響を調べた。その結果、ヘモキニンはサブスタンスPと共通のレセプターであるニューロキニン1レセプターと結合し、神経以外の細胞、例えば骨細胞からも放出される事が明らかとなった。また、培養破骨細胞を使った実験ではヘモキニンはレセプターの競合阻害によりサブスタンスPの破骨細胞の分化や骨吸収能を阻害することが明らかとなった。また、ヘモキニンは骨芽細胞に対してもサブスタンスPと競合することにより骨形成を阻害する事が明らかとなった。つまり、ヘモキニンは神経から放出されるサブスタンスPの末梢組織での調節因子であることが明らかとなった。(和文):骨の形成に対する神経の関与を確かめるために、iPS細胞から骨芽細胞になる過程における神経ペプチドの受容体の発現変化について調べた。当初の実験計画ではマウスの胎児を経時的に取り出して下顎骨の骨化点と神経の分布について免疫組織学的手法で調べる予定であったが、予定よりも早くマウスiPS細胞が使える様になったのでマウスiPS細胞を使った実験を本年度は行った。マウスiPS細胞は理化学研究所より供与された。本年度はまずiPS細胞から骨芽細胞に分化させる手法の確立を目指すとともに、骨芽細胞分化、増殖に促進的に働くと報告されているレチノイン酸を用いて骨芽細胞への分化誘導を行った。また、一部細胞においては交感神経から分泌されるbeta-adrenalineの影響を調べた。実験はまずマウスiPS細胞をマウスフィーダー細胞(SL10)上に播種し、胚様体分化メディウムで3日間培養し胚様体を形成させた。浮遊状態の胚様体に液性因子のレチノイン酸を添加し2日間培養して、mRNAを抽出し、RT-PCRにより骨芽細胞マーカーであるRunx2の発現を調べた。その結果、レチノイン酸無添加群、レチノイン酸添加群(10-6 M, 10-8 M)では10-8 Mのレチノイン酸を加えた時がRunx2の発現上昇が最も高かった。また、beta-adrenalineの添加では骨形成の増加が認められたが、現在追加実験を進行中である。これらの結果によりiPS細胞から骨芽細胞分化にはレチノイン酸添加が有効であり、交感神経から出されるbeta-adrenalineは骨芽細胞分化を促進する事が明らかとなった。昨年同様、組織を使った実験を後で行うことにしてiPS細胞を使う実験を優先的に進めて来たが、当初使っていたiPS細胞では十分な結果が得られなかったために、本年度途中で、別のiPS細胞や培養条件で進めなくてはいけなくなったために、大幅な実験計画の遅れになってしまった。しかしながら、iPS細胞の骨芽細胞分化への最適条件が判明したためにそれからは順調に実験が進んでいる。

また、in vivoの実験では顎骨発生段階の組織を使った実験には到達していないが、研究途中であった神経ペプチド、ヘモキニンについての実験がほぼ完了したため、これから、当初の計画の顎骨発生時の組織を使った実験に進む事ができるようになった。最初の計画ではマウス胎児を使って下顎骨の骨化点と神経の関係を明らかにする予定であったが、マウスiPS細胞が予定より早く入手できたので、iPS細胞を使った実験をするように計画を変更した。変更した本年度の計画ではiPS細胞から骨芽細胞に分化させて骨を形成させる実験系を確立させ、その系における神経ペプチドのレセプターの発現と神経ペプチドの影響を調べる予定であった。現在、iPS細胞から骨芽細胞に分化する系は確立できたが、その系に対する神経ペプチドレセプターの発現や、神経ペプチドの影響についてはまだ始まったばかりで、今後の継続的な実験が必要とされる。本年度はこの研究課題の最終年度になるために、iPS細胞を使った実験では当初の計画どおりiPS細胞から骨芽細胞に分化する段階における神経ペプチドのの受容体の発現を調べ、実際にその発現する受容体を介して骨芽細胞分化に神経ペプチドがどのように関与しているかを調べる。また、顎骨発生時の組織についてもiPS細胞の実験で関与が予想される神経ペプチドに対し、in situ hybridization法等もしくは免疫染色法を使って実際に生体でどの神経ペプチドが顎骨発生に関わっているかを調べる。今年度は、iPS細胞から骨芽細胞に分化させる系を用いて知覚神経、自律神経由来の神経ペプチドのレセプターの発現とそれらの神経ペプチドの影響について調べていく。ある程度in vitroでの結果が得られたらその結果に基づいて当初の実験計画にあったマウス胎児の下顎骨の骨化点における神経および神経ペプチドの影響について調べる。本年度は、培養細胞使った実験についてはRT-PCR法およびリアルタイムPCR法を用いて遺伝子発現を調べていく。そのためには昨年同様、専用の培養液や、mRNA抽出試薬ならびにPCR用のプライマーならびにプローブが必要である。また、顎骨の骨化点における神経の関与を調べるためには妊娠マウスを購入してマウス胎児を得て、組織切片を得る必要がある。そのために、妊娠ラットの購入、in situ hybridization試薬、免疫染色用試薬に研究費を使用する計画である。次年度は、平成23年度に購入したリアルタイムPCR装置を使って遺伝子発現を調べていく。そのためには、iPS細胞を維持および分化させる、専用培養液が必要であり、mRNA抽出試薬ならびにリアルタイムPCR用のプライマーもしくはプローブが必要である。これらの実験を進めつつin vivoでは妊娠マウスを購入しマウス胎児を得て、下顎骨骨化点における神経線維や神経ペプチドの分布を調べる実験を行うので、妊娠ラット購入、免疫組織化学用に抗体および発色2次抗体の購入に研究費を使用する計画である。
英文学における「古典」の言説に関する表象文化論的考察

今年度は、昨年に行った「新旧論争」の検討を受けて、特に英国の18世紀に、「古典」の言説が如何に形成あるいは変化していったかを検証するために、ロバート・ウッドという古典研究家(ホメロス研究)に焦点を当て、その著作および現地報告の影響を主に考察した。ウッドに先立って、英国でホメロス研究の状況はどうかといえば、詩人のアレクザンダー・ポウプ(『ホメロス試論』)に代表されるような、天才ホメロス賛美の半ば神話的な言説がまかり通っていた。それに対して、ウッドは実証的な見地に立って、自ら2度ギリシャ旅行を試み、その体験に基づき『ホメロスの独創的才能に関する試論』を著し、古典作品に描かれた世界と現実の場所とを同定しようとした。この場合「独創的才能」とは、風土や地誌的情報を正確に描写することであり、時間軸を無視した模倣論を原則とする。しかし、模倣真理説原則を推し進めるうちに、吟唱詩人の口承詩伝統に遭遇することになり、この集団的創作の伝統はロマン主義的な近代の天才詩人「ホメロス」神話を打ち破ることになる。さらに、口承から書記化への経緯といった問題が登場し、テキストの成立と、それと表裏をなす「起源」への到達不可能性という本質的問題に直面することとなった。かくして、「古典」はテキストという媒介と本源への到達不可能性という言説へと変貌した。セネカ悲劇の言説について。英文学では、そのルネサンス期である15世紀中葉に、所謂「セネカ型悲劇」のモデルがヨーロッパ大陸から輸入され、その模倣が行われたとされる。それを跡付ける研究は今世紀の初頭より多くなされ、第二次大戦後も、新たな検討が続けられてきた。それらを受けて、本研究の第一年度における成果としてあげられるのは以下の2点である。(i)イギリスルネサンスにおける「セネカ悲劇」の影響研究としては、所謂「ストイシズム・リバイバル」との関係の考察が不可欠であること。(ii)そもそも「セネカ型悲劇」のモデルといった場合、それが如何なるものかが、従来の研究では手薄であったこと。後者の点は、「セネカ悲劇」のイタリア・ルネサンスにおける復活の際に、二つの流れがあったことを確認することが重要である。第一は、15世紀のローマを中心とした再興の動きであり、いまひとつは、14世紀バードヴァを中心とした復活の胎動である。そこで、本年度の実質的中心課題としては、所謂「プロト・ルネサンス」と呼ばれる14世紀パードヴァにおけるセネカ復興の代表例というべきアルベルティーノ・ムッサートの『エチェリーノの悲劇』を検討してみた。その一大特徴である、政治的イデオロギー性、主人公原理の拡散、歴史的現実との絡み、などは英国初期の「セネカ型悲劇」と類縁性をもつと考えられるが、この点に関しては更なる検討が必要とされる。

さらに、口承から書記化への経緯といった問題が登場し、テキストの成立と、それと表裏をなす「起源」への到達不可能性という本質的問題に直面することとなった。かくして、「古典」はテキストという媒介と本源への到達不可能性という言説へと変貌した。
非線形力学的手法による遷音速フラッタの非線形数学モデルの構築

1.研究対象翼模型のナビエ・ストークス数値解析コードに基づくフラッタ解析平成13年度実施の予備解析結果を再整理・吟味した。解析結果では遷音速フラッタ特有のリミット・サイクル振動(LCO)現象を捕らえているが、翼模型中央部の舵面駆動モータ内蔵部分の膨らみで急激な圧力変化を生ずる点に解析上の困難が生じ、解析結果に問題が生じていることが判明した。再解析については次の研究計画で実施する。2.数値結果に基づく数学モデルの検討数学的に誘導した非線形数学モデルに物理的考察を加えてフラッタを生ずる2モードに非線形項を導入した。この結果LCOの分岐特性が風洞実験分岐特性と大変良く一致するように改良された。この結果はデンマークの共同研究者と共同で国際会議に発表した[1]。この結果に基づいて数学モデル構築の方策についてデンマークの共同研究者と協議し、一般座標と一般空気力の非線形関係に着目する数学モデル構築方法が妥当であることが確認された。3.風洞試験模型の改修と遷音速風洞試験による成果翼模型に対して舵面支持部分の外板つなぎ部分、リブ(小骨)位置の外板部分などの亀裂を補修した。福井大学と宇宙航空研究開発機構との共同研究として、同機構の遷音速風洞を使用して翼模型によるフラッタ試験を実施した。試験では非制御状態と制御状態に対して翼模型の前縁舵面を利用して翼模型を加振し,分岐データを取得した。その結果、制御状態に対して亜臨界動圧での安定境界およびリミットサイクル振動(LCO)を実験的に確認することに成功した。非制御のフラッタ動圧を超える動圧で制御フラッタ動圧以下でもLCOが発生することを確認したのはこの試験が国際的に始めてである。また、非制御状態での亜臨界動圧で、励振された翼が加振源除去後に一時的にLCOに留まった後に振動が停止するという新たな現象が得られた。現在再解析の準備中である。2.数値結果に基づく数学モデルの検討数値解析結果を取り込む数学モデルの準備として数学的に誘導した非線形数学モデルに物理的考察を加えてフラッタを生ずる2モードに非線形項を導入した。この結果はデンマークの共同研究者と共同で国際会議に発表した。この結果に基づいて数学モデル構築の方策について研究者をデンマーク及びハンガリーへ派遣して協議した。デンマークでは共同研究者から非線形力学における最近の関連記事が紹介され、一般座標と一般空気力の非線形関係に着目する数学モデル構築の当初の方針が妥当であることが確認された。3.風洞試験模型の改修設計数値解析上の困難を生ずる翼中央部の翼厚部分を極力なくすべく、現在入手可能な高性能、小型DCモータを調査し、その換装の可能性を翼模型の製造業者へ委託して検討した。同時に翼自体の経年劣化の調査とその補修設計も委託した。その結果モータ自体は小型化されるが、減速機の小型化は図られていないために翼厚減少の程度は限られることが判明した。