hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
Spred2が肺移植の虚血再灌流障害に与える影響についての検討

本研究はマウスの肺移植モデルを用いて,移植後の虚血再灌流障害・急性拒絶反応に伴うメカニズムの解明を目的とするものであり、今回のデザインは特に移植肺の急性期虚血再灌流障害に影響すると予想されるMitogen-activated protein kinases(MAPK)系のシグナル伝達に着目し,MAPKを抑制するSprouty-related EVH1-domain-containing protein(SPRED2)のノックアウトマウス(SPRED2-/-)をドナー/レシピエントそれぞれで用いた実験系において移植肺の急性虚血再灌流傷害の影響を調べるものであった。その結果、2点の有意義な結果と考察を得ることができた。まず1点は、もともとマウスの肺門クランプモデルにおいてSPRED2-/-がWild Typeより増悪する結果を得ていたが、同様の結果を肺移植モデルにおいても得ることができたということである。これによりより実臨床に近いモデルにおいての検討が可能であることと、肺門クランプモデルと異なりドナー、レシピエントに自由にWild TypeとKnock outを適用する汎用性の高いデザイン設定が可能であることが示唆された。2点目にレシピエントだけをSPRED2-/-にした肺移植においても虚血再灌流障害の増悪を認める結果を得たことである。虚血再灌流障害のメカニズムとMAPK経路の活性化速度を考慮するとドナー側の因子が虚血再灌流障害に反映されやすいと考えやすいが、この結果からレシピエントにおけるMAPK経路の活性化も単独因子として肺の虚血再灌流障害に寄与する可能性が示唆された。これにより、レシピエントの炎症の潜在性が肺移植の危険因子となりうる可能性が考慮され、逆にMAPK経路が抑制される前治療が虚血再灌流障害を改善する可能性も考慮された。肺移植医療においてドナープール拡大の観点より心臓死ドナーからの移植が注目されている.しかしながら心臓死肺移植は虚血時間が正確に評価できないことがあるため,脳死肺移植と比較して虚血再灌流障害は移植成績に関わる,より重要な要素となる可能性が高い.本研究はマウス肺移植モデルで,移植後の虚血再灌流障害・急性拒絶反応に伴うメカニズムの解明を目的とする.特に移植肺の急性期虚血再灌流障害に影響すると予想されるMitogen-activated protein kinases(MAPK)系のシグナル伝達に着目し,MAPKを抑制するSprouty-related EVH1-domain-containing protein(Spred)2のノックアウトマウスをドナー/レシピエントそれぞれで用いた実験系において肺傷害への影響を調べる.肺移植において急性虚血再還流障害、急性拒絶反応は脅威である。本研究により虚血再灌流障害のメカニズムを解明してそれを抑制することが出来れば,現在の肺移植成績を向上させるだけではなく,将来本邦でも導入されるであろう心臓死肺移植においても大変有益であると考える.本研究移植後のドナー肺における虚血再還流障害を評価することを目的としており,肺移植モデルを使用する必要性があり、動物実験以外の方法で代替することはできない.まずはマウスの肺移植手技の習得自体が大きな課題で、2016年6月から修練を開始した。ドナー肺の摘出が安定したのは1ヶ月後で、さらに摘出肺の肺静脈、肺動脈、気管支に吻合用のカフを接続する手技の習得に1ヶ月を要した。8月末からレシピエントの手技の修練に移行。最難関は移植肺とレシピエントの脈管吻合であるが、11月に初めて成功。それ以降確率を上げながら、実験系の詳細を検討した。野生型マウスから野生型マウスへの肺移植、野生型マウスからSPRED2ノックアウトマウスへの肺移植、SPRED2ノックアウトマウスから野生型マウスへの肺移植、SPRED2ノックアウトマウスからSPRED2ノックアウトマウスへの肺移植の4通りで検討し、好中球の十分な浸潤を期待し虚血時間を24時間で設定した。解析にはHE染色標本、免疫染色標本、Real-Time PCRを用いたカスケードの産物の定量、フローサイトメトリーによる浸潤細胞の同定を行う。2017年2月より徐々にサンプルを回収すべく動き出し、現在肺移植と解析を行っている。他の文献では虚血時間の設定は一様ではないので、実験と検証を重ねて試行していく予定である。課題であったマウスの肺移植手技の確立は達成され、今年度は野生型マウスから野生型マウスへの肺移植、野生型マウスからSPRED2ノックアウトマウスへの肺移植を検討した。好中球の十分な浸潤を期待し虚血時間を24時間で設定したが、MAPK経路の賦活化時間を考慮して再灌流を4時間に設定し直し実験を行った。解析にはHE染色標本、免疫染色標本、Real-Time PCRを用いたカスケードの産物の定量、フローサイトメトリーによる浸潤細胞の同定を行った。現在N=5ずつの評価で、組織学的評価、フローサイトメトリーではノックアウトマウス群の好中球を含む炎症細胞の有意な浸潤を認め、サイトカインの定量でもノックアウト群はCCL2、CXCL2、IL1β、TNFαの有意な増加を認めた。ウェスタンブロッティングでもpERKの有意な増加を認め、SPRED2がMAPK/ERK経路に何らかの形で抑制をかけていると考えられる。今後はSPRED2ノックアウトマウスから野生型マウスへの肺移植、SPRED2ノックアウトマウスからSPRED2ノックアウトマウスへの肺移植をさらに追加検討していきたい所存ではあるが、ノックアウトマウスの繁殖に難あり、ここまでの結果を報告するにとどまる可能性もある。SPRED2-/-

マウスとWildマウスに対するsyngeneic lung transplantのischemic reperfusion injuryの比較検討は、組織所見、FACS、サイトカインのmRNA定量において有意にSPRED-/-マウスが障害を受けていることが示された。本研究はマウスの肺移植モデルを用いて,移植後の虚血再灌流障害・急性拒絶反応に伴うメカニズムの解明を目的とするものであり、今回のデザインは特に移植肺の急性期虚血再灌流障害に影響すると予想されるMitogen-activated protein kinases(MAPK)系のシグナル伝達に着目し,MAPKを抑制するSprouty-related EVH1-domain-containing protein(SPRED2)のノックアウトマウス(SPRED2-/-)をドナー/レシピエントそれぞれで用いた実験系において移植肺の急性虚血再灌流傷害の影響を調べるものであった。その結果、2点の有意義な結果と考察を得ることができた。まず1点は、もともとマウスの肺門クランプモデルにおいてSPRED2-/-がWild Typeより増悪する結果を得ていたが、同様の結果を肺移植モデルにおいても得ることができたということである。これによりより実臨床に近いモデルにおいての検討が可能であることと、肺門クランプモデルと異なりドナー、レシピエントに自由にWild TypeとKnock outを適用する汎用性の高いデザイン設定が可能であることが示唆された。2点目にレシピエントだけをSPRED2-/-にした肺移植においても虚血再灌流障害の増悪を認める結果を得たことである。虚血再灌流障害のメカニズムとMAPK経路の活性化速度を考慮するとドナー側の因子が虚血再灌流障害に反映されやすいと考えやすいが、この結果からレシピエントにおけるMAPK経路の活性化も単独因子として肺の虚血再灌流障害に寄与する可能性が示唆された。これにより、レシピエントの炎症の潜在性が肺移植の危険因子となりうる可能性が考慮され、逆にMAPK経路が抑制される前治療が虚血再灌流障害を改善する可能性も考慮された。肺移植の手技、解析の手技を洗練しつつ、実験系の検証と試行を重ねていく。年度内にサンプルを集める予定である。今後凍結標本のERK定量を行い、結論付ける予定としている。また,現在,論文作成中である.実験の成功率が予想より低かったため,ネズミの購入および飼育費用が必要だった代わりに,PCRなどの費用が要らなくなった.次年度は実験の成功率が上がることが予想されるためPCR等の費用がより必要となるため,それらに使用する計画である.
16世紀スコットランドにおける自国語文化の形成過程を探る

スコットランド国民の国家意識の形成過程を探るうえで、スコットランドの起源の物語は極めて重要である。スコットランド人の始祖の物語を扱ったThe Mar Lodge TranslationのBook 1をボエスによるラテン語の原典およびジョン・ベレンデンのスコットランド英訳版と比較・考察した。これまでThe Mar Lodge Translatorの歴史、政治や王権に対する考えは明らかにされてこなかった。それはこの翻訳者がラテン語の原典に忠実であり、自らの意見を作品の中に反映することがないと考えられてきたからである。しかし、Book 1の考察によって、この翻訳者がヒューマニズム的な王権への考えをもっていたこと、そして歴史という媒体を通してその王権に対する考えを主張していたことがわかった。その際に注目されたのは主に次の2点である。まず、この翻訳者にはラテン語の原典で一語の副詞や名詞を強調する際に、必ず2語の言葉を組み合わせるという特徴が見て取れる。そして、王権に関する叙述においては、この2語の組み合わせに一貫して使用される単語がある。その単語から、翻訳者が国内の統一を国王の責務として重視していたことがわかった。また、Book 1においてこの翻訳者には珍しいことだが、原典を大きく変更している箇所がある。これはThe Mar Lodge Translationのみにみられる変更である。当時、国王としての責務を全うしない国王を廃位するべきだという考え(resistance theory)がスコットランド国内にあったが、これを明言する人物は極めて少なかった。しかし、The Mar Lodge Translatorは歴史叙述という形を利用して、国民に有害な国王のみが非業の死をとげるという、原典とは異なる物語を提示している。ここにこの翻訳者の責務を果たさない国王への考えが読み取れる。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。1. The Mar Lodge TranslationのBook 16の転写を終わらせた。2. Book 12とBook 13において共通して使用されている単語dauntが作者の政治観を反映している事に注目し、この単語の扱われ方を中心に、ラテン語の原文、ベレンデンによる翻訳、The Mar Lodge Translationにおける翻訳を比較考察した。その結果、国王を唯一の統治者とするスコットランド国内において、国王の存在を脅かす存在である地方の豪族(原典ではtyrant)が討伐される描写に限ってこのdauntという単語が使用されている事を明らかにした。このことからThe Mar Lodge Translatorもベレンデンと同様にスコットランドを国王を中心とする帝国として捉え、国内の帝国主義政策を支持する立場にいたと結論づけた。しかし、これはあくまでBook 12及びBook 13のみに当てはまる結論であり、翻訳者の政治観の全体像を捉えるにはさらなる研究の発展が必要となる。3.ニューヨーク、ピアポント・モーガン図書館に写本の調査に行った。写本全体を詳しく調査した結果、次の2点が判明した。まず、紙の透し模様の調査より、この写本の制作時期が少なくとも1530年以降であることがわかった。次に、書き込みの調査により、この写本が1600年頃にはJames LawというFife州Dysartの麦芽製造人(麦芽業者)が所有しており、その後彼の息子の手を経て、個人的に知り合いであったと考えられるGeorge Lundieの手に渡ったことが判明した。つまり、限られた地域のサークル内のメンバーからメンバーへと回覧された写本の様子が見て取れる。今後は写本の内容などからも翻訳者の素性を探っていく。特に、Book 13にはその手がかりとなりそうな一文があるため、さらなる考察を行う。当初の予定よりもやや遅れているのは本文の分析である。Book 16の転写を終わらせたものの、その内容の分析がまだ終わっていない。これは本来ならば29年度に行う予定であったBook 12の内容分析を28年度に行ったこと、またその結果、本来は予定していなかったもののBook 12との比較考察が必要となったBook 13の内容分析に時間が取られた事による。しかし、Book 13の分析は結果的にBook 12の分析をサポートする重要な役割を果たすこととなった。さらに、なかなか原典から逸脱することがないのがこの翻訳者の特徴であるが、Book 13の中に翻訳者の解明に繋がる可能性のある原典からの逸脱を見つけることができたのも大きな成果であった。そのため、この遅れが研究そのものの遅れとは考えていない。予定以上に進んでいるのは写本の現物に関する調査である。写本調査は予定していた3月ではなく1月に行うことができたため、予定よりも調査結果の分析に時間を取ることができた。国内では書物の来歴を探るのは容易ではない。それに必要なレファレンスが決定的に不足しているからである。しかし、科研費で購入したレファレンスによって写本の過去の所有者数名の特定に至った。これは写本の来歴を探る第一歩となるため、大変意義深いことである。以上のことから、本研究は計画通りの進行方法とは言わないが、概ね計画していた程度の進捗状況と言えるだろう。Mar Lodge写本が製作された過程を調査すべく、昨年度に行った現物調査及び写本の内的証拠を考察した。まず、写本に使用された紙にある透し模様から、写本に使用された紙が生産された時期が1526年から1530年であることが判明した。写本の本文では、当時の国王の年齢に言及する際に翻訳者が原典を改変していることから、翻訳者が1531年頃にこの作品に取り組んでいたことが推測される。

これらの外的証拠と内的証拠から得られる結果の一致から、写本が1531年頃に製作されたと考えてよいであろう。これはもう一つの翻訳、ジョン・ベレンデンの『スコットランド年代記』の写本版が製作された時期と重なるため、どのような経緯で同じ作品を2人の人物が別々に翻訳することになったのか、両者の関係性をさらに考察する必要があると考える。上述の問題を考える際に重要となるのは翻訳者に関する情報である。これまでも指摘されたことがあるが、この翻訳者はGeroge Crichtonなる人物と関係が深い可能性がある。原典から滅多に逸脱することのない翻訳者が本文を改変し、この人物の名前を挿入している箇所があるからである。しかし、同様にGavin Dunbar(グラスゴーの大司教)の名前と彼を讃える言葉が原典から逸脱して挿入されている箇所が見つかっている。これらのことを踏まえ、この翻訳者の素性を解き明かしていくことが今後の課題となっている。というのも、両者とももう一人の翻訳者ジョン・ベレンデンと知り合いであった可能性が極めて高いのである。この問題を解き明かすことで、この時代のスコットランドにおける自国語文化、特に翻訳作品の製作環境が明らかになるはずである。以上のような問題については7月にグラスゴーで行われた学会で発表を行った。翻訳者に関する情報を入手するには本文を全て原典と比較する必要があり、そのような作業が思った以上に時間がかかることがわかった。この写本の転写も同時に進めていたが、転写にも時間がかかるため、転写をしてから原典との比較をするという作業に時間を取られてしまう。29年度は切迫早産のため、研究そのものができない体調となってしまったことも研究が遅延した理由である。スコットランド国民の国家意識の形成過程を探るうえで、スコットランドの起源の物語は極めて重要である。スコットランド人の始祖の物語を扱ったThe Mar Lodge TranslationのBook 1をボエスによるラテン語の原典およびジョン・ベレンデンのスコットランド英訳版と比較・考察した。これまでThe Mar Lodge Translatorの歴史、政治や王権に対する考えは明らかにされてこなかった。それはこの翻訳者がラテン語の原典に忠実であり、自らの意見を作品の中に反映することがないと考えられてきたからである。しかし、Book 1の考察によって、この翻訳者がヒューマニズム的な王権への考えをもっていたこと、そして歴史という媒体を通してその王権に対する考えを主張していたことがわかった。その際に注目されたのは主に次の2点である。まず、この翻訳者にはラテン語の原典で一語の副詞や名詞を強調する際に、必ず2語の言葉を組み合わせるという特徴が見て取れる。そして、王権に関する叙述においては、この2語の組み合わせに一貫して使用される単語がある。その単語から、翻訳者が国内の統一を国王の責務として重視していたことがわかった。
光音響システムによる変形性膝関節症の疼痛と血流・癒着の関連性の評価

近年、関節の疼痛が関節外組織の異常血管や癒着と関連しているとの報告が散見される。変形性膝関節症の疼痛と異常血管や癒着の関連を明らかにすることは、変形性膝関節症治療のブレイクスルーとなる。本研究の目的は、変形性膝関節症の疼痛と関節周囲の血流及び癒着との関連を明らかにすることである。具体的にはヒト指用アーク型光音響トランスデューサーを用い、ラット変形性膝関節症モデルの膝関節の周囲組織を経時的に観察し、得られた光音響信号及び組織の酸素飽和度と関節包・癒着部位の組織学的観察・酸素濃度の計測・遺伝子解析・免疫染色、及び疼痛の評価を行い、変形性膝関節症の疼痛と周囲組織の血流・癒着との関連を明らかにする。
オーストラリアにおけるイングリッシュ・アイデンティティ

3年間にわたる研究期間中、3回の渡航(のべ約4か月)によって収集したデータに基づき、オーストラリアにおけるイングリッシュ・アイデンティティを軸とする、ナショナル・アイデンティティの歴史的形成の問題を分析した。収集した史料が膨大であり、かなりの史料の分析が未達成であるが、現在のところの報告の概略を以下に述べる。オーストラリアにおけるアイデンティティの問題は、オーストラリア史の主要なテーマの一つになっている。それは、多文化主義を標榜するオーストラリアにとって、ナショナル・アイデンティティと民族的アイデンティティの関係が、きわめて重要な問題となっているからである。従来、白豪主義政策を採用してきたオーストラリアにとって、イングリッシュ意識とそれが発展したブリティシュ意識は、ナショナル・アィデンティティの根幹を成していたおり、それは中産階級的な階級意識と深く結合したものであった。これに対し、アイルランド系のカトリックは主要な批判者であったが、反アジア意識や、帝国主義を共有していた。オーストラリア・ナショナリズムは、イギリス系の人々にとってはブリティシュ意識と重複しており、アイルランド系の人々にとっては、反イングリッシュ意識を表明するスペースを提供した。2001年はオーストラリア連邦成立100周年であり、オーストラリアのアイデンティティに関する展示や史料の公開が大きく進展したので、2001年7月中旬から8月末まで再度史料の収集を行った。また、インターネットを通じて公開されるようになった、オーストラリア連邦形成に関する史料なども同時にすべて蓄積した。しかし、これらのデータはあまりに膨大なために、研究の分析に体系的に導入することはできなかった。今後は、このデータの分析をさらに進める予定である。18世紀の終わりから20世紀の前半まで、オーストラリアにおける最大のマイノリティ集団は、アイルランド系のカトリックであった。オーストラリアにおけるイングリッシュ・アイデンティティを歴史的に考察するためには、このアイルランド系カトリックとの関係をどうしても考察しなければならない。したがって、今年度は、オーストラリアにおけるアイルランド系カトリックのあり方と、イングランド系の人々のアイデンティティとの関係を中心に据えて、研究を進めてきた。まず史料の収集では、平成11年7月から8月にかけて、オーストラリア国立大学及びオーストラリア国立図書館で史料の収集を行い、年度の後半には東京のオーストラリア図書館で文献を入手した。また、オーストラリアの新聞、アーガス紙とシドニー・モーニング・ヘラルド紙を購入した。これらの史料は来年度以降の研究に反映させる予定である。また、実際に研究成果も生まれつつある。「オーストラリアのアイルランド系移民」は聖パトリックの日を軸にアイルランド系移民の意識を分析することで、アイルランド系移民の側からオーストラリアにおけるアイデンティティを研究した論文であり、「最もイングリッシュなもの、それは最も美しい」は、ルイーザ・アン・メレディスの作品を利用して、イングランド系の人々のアイデンティティの問題を追求した論文である。現在、これらの研究成果は、インターネットを通じて、ウェブサイト上で公開する準備をすすめている。本年度は、7月から8月にかけてのオーストラリアでの史料の調査と、その史料の整理及び分析を行った。オーストラリアでの史料調査は、主にキャンベラのオーストラリア国立図書館で行い、ゴールドラッシュの時代の新聞から関連の記事を収集した。オーストラリアのイングランド系住民のアイデンティティは、一つには先住民アボリジナルとの関係、一つにはカトリック系アイルランド人、さらに流入してきた中国人との関係を通して、複合的・立体的に把握することができる。今回の史料調査の目的は、第3の関係におけるイングランド系のアイデンティティを明らかにすることにあった。収集した記事はヴィクトリア植民地の地方都市、ビーチワース、ベンディゴ、バララットなどの地方新聞のものである。これらの新聞によって、当時の人々が抱いていた中国人に対するイメージと、日常生活における具体的な人種関係の在り方を理解することを通して、イングランド人の白人としての意識を分析しようとした。これらの分析によって、現在のところ、従来言われていたほど中国人に対する人種偏見が強くなかったことが明らかになった。中国人を同じ社会生活を共有する平等な成員として受け入れようとする流れが、オーストラリアには存在したのである。中国人を必ずしも最初から排除しようとしない態度や制度は、イングランド的なアイデンティティの一つの重要な特徴であると言えるように思われる。今後は、この点を中心にオーストラリアのイングランド系の人々の重層的アイデンティティを『アーガス』などの利用を進め、さらに分析する予定である。

本年度は最終年度にあたり、これまで収集した史料の分析とその成果の公開のための作業を中心に進めた。具体的な成果は、研究成果報告書としてまとめたので、詳しくはそちらを参照されたい。オーストラリアにおけるアイデンティティの問題は、オーストラリア史の主要なテーマの一つになっている。それは、多文化主義を標榜するオーストラリアにとって、ナショナル・アイデンティティと民族的アイデンティティの関係は、きわめて重要な問題となっているからである。従来、白豪主義政策を採用してきたオーストラリアにとって、イングリッシュ意識とそれが発展したブリティシュ意識は、ナショナル・アイデンティティの根幹を成していたが、それは中産階級的な階級意識と深く結合したものであった。これに対し、アイルランド系のカトリックは主要な批判者であったが、反アジア意識や、帝国主義を共有していた。オーストラリア・ナショナリズムは、イギリス系の人々にとってはブリティシュ意識と重複しており、アイルランド系の人々にとっては、反イングリッシュ意識を表明するスペースを提供した。2001年はオーストラリア連邦成立100周年であり、オーストラリアのアイデンティティに関する展示や史料の公開が大きく進展したので、2001年7月中旬から8月末まで再度史料の収集を行った。また、インターネットを通じて公開されるようになった、オーストラリア連邦形成に関する史料なども同時にすべて蓄積した。しかし、これらのデータはあまりに膨大なために、研究の分析に体系的に導入することはできなかった。今後は、このデータの分析を進める予定である。
逐次解析の理論的研究とその応用

1.与えられた推測問題が固定標本で解を持たないための十分条件を得ることができた.この条件を適用することにより多くの問題において固定標本での解が存在しないことがわかった.2.非対称損失関数の場合の有界リスク問題に関して固定標本での解の存在について研究した.位置尺度分布族に関しては解が存在する場合と存在しない場合があることを示した.更に解が存在しない場合は,二段階推定法を用いて解を構成した.3.κ(【greater than or equal】2)個の多変量正規母集団(分散共分散行列は未知)の平均の一次結合の値の大きさ一定の信頼区間の構成は固定標本ではできない.この問題に対し二段階推定法を適用し解を構成した.更にその方法の漸近一致性を示した.更に標本数の漸近的性質を調べた.シュミレーションによる特性の研究も行った.4.κ(【greater than or equal】2)個の多変量正規母集団(分散共分散行列は未知)の平均の一次結合の値の推定に対する有界リスク問題についての推定量の構成は固定標本ではできない.この問題に対し二段階推定法を適用し推定量を構成した.その方法は従来の方法の改良になっている.更にその方法の漸近特性について調べ,漸近有効であることを示した.5.対象とm(【greater than or equal】1)個の正規母集団(分散は未知であるが共通)の平均の差に関する長さ一定の同時信頼区間の構成を二段階推定法を用いて行った.更にその方法の漸近特性について調べた.特に,二次の有効性について調べた.シュミレーションによる特性の研究も行った.1.与えられた推測問題が固定標本で解を持たないための十分条件を得ることができた.この条件を適用することにより多くの問題において固定標本での解が存在しないことがわかった.2.非対称損失関数の場合の有界リスク問題に関して固定標本での解の存在について研究した.位置尺度分布族に関しては解が存在する場合と存在しない場合があることを示した.更に解が存在しない場合は,二段階推定法を用いて解を構成した.3.κ(【greater than or equal】2)個の多変量正規母集団(分散共分散行列は未知)の平均の一次結合の値の大きさ一定の信頼区間の構成は固定標本ではできない.この問題に対し二段階推定法を適用し解を構成した.更にその方法の漸近一致性を示した.更に標本数の漸近的性質を調べた.シュミレーションによる特性の研究も行った.4.κ(【greater than or equal】2)個の多変量正規母集団(分散共分散行列は未知)の平均の一次結合の値の推定に対する有界リスク問題についての推定量の構成は固定標本ではできない.この問題に対し二段階推定法を適用し推定量を構成した.その方法は従来の方法の改良になっている.更にその方法の漸近特性について調べ,漸近有効であることを示した.5.対象とm(【greater than or equal】1)個の正規母集団(分散は未知であるが共通)の平均の差に関する長さ一定の同時信頼区間の構成を二段階推定法を用いて行った.更にその方法の漸近特性について調べた.特に,二次の有効性について調べた.シュミレーションによる特性の研究も行った.1.対称損失関数のもとで有界リスク問題、仮説検定問題において、固定標本では解が存在しないための十分条件を分布間の距離を用いて与えた。2.同様の結果が非対称損失関数のもとで成立するかどうかについては、ある場合には固定標本で解が存在することがわかった。解が存在しない場合、二段階推定方による解の構成を行った。3.K個の多変量正規分布の平均ベリトルの一次結合に対する大きさ一定の信頼領域の構成を二段階方を用いて行いその漸近有効性を示した。同様のことを有界リスク問題について考察し、二段階方による解の構成と、その漸近有効性を示した。1.与えられた推測問題が固定標本で解を持たないための十分条件を得ることができた。この条件を適用することにより多くの問題において固定標本での解が存在しないことがわかった。2.非対称損失関数の場合の有界リスク問題に関して固定標本での解の存在について研究した。位置尺度分布族に関しては解が存在する場合と存在しない場合があることを示した。更に解が存在しない場合は、二段階推定法を用いて解を構成した。3.K(【greater than or equal】2)個の多変量正規母集団(分散共分散行列は未知)の平均の一次結合の値の大きさ一定の信頼区間の構成は固定標本ではできない。この問題に対し二段階推定法を適用し解を構成した。更にその方法の漸近一致性を示した。更に標本数の漸近的性質を調べた。シュミレーションによる特性の研究も行った。4.K(【greater than or equal】2)個の多変量正規母集団(分散共分散行列は未知)の平均の一次結合の値の推定に対する有界リスク問題についての推定量の構成は固定標本ではできない。この問題に対し二段階推定法を適用し推定量を構成した。その方法は従来の方法の改良になっている。更にその方法の漸近特性について調べた。5.対象とm(【greater than or equal】1)個の正規母集団(分散は未知であるが共通)の平均の差に関する長さ一定の同時信頼区間の構成を二段階推定法を用いて行った。
低侵襲・高深度三次元生体イメージングのための二光子励起蛍光プローブの開発

本研究の最終的な目的は、誰もが簡単に使えるフェムト秒ファイバーレーザーを光源に、1 mm程度の高深度までの三次元生体イメージングシステムが低侵襲に行えるシステムを完成させることである。平成29年度までの研究で、(1)発振波長1030 nmのフェムト秒ファイバーレーザーにより生きた細胞内で二光子励起蛍光を示す、(2)生体に有害な有機溶媒を使用することなく細胞や組織を染色するのに十分な水溶性を示す、(3)組織深部からの蛍光を低侵襲で観察することが可能な波長800 nm以上にまで蛍光帯が延びている、という条件をすべて満たした蛍光プローブを10種類以上開発することができた。また、開発した蛍光プローブの性能を最大限発揮させることができる二光子励起顕微鏡の開発も完了した。そこで、平成30年度は、当初の計画に沿って、高深度イメージングの実証に取り組んだ。開発した蛍光プローブによりゼブラフィッシュの稚魚を染色した。稚魚は染色しても数日間にわたり生き続け、有害性の低さが裏付けられた。また、厚さが1 mm近い稚魚の身体全体のイメージングも行う事ができ、当初の目的は達成できた。この研究の過程で、高感度なイメージングシステムを用いれば、ファイバーレーザーによる三光子励起過程を用いても、十分に明るいイメージングが行えることも明らかとなった。ファイバーレーザーにより三光子励起が可能な蛍光プローブは多数あるので、ファイバーレーザー励起によるイメージングが行える対象を格段に拡がることも明らかにすることができた。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の最終的な目的は、誰もが簡単に使える、低侵襲・高深度三次元生体イメージングシステムを完成させることである。平成28年度は、1.低パワーかつ低コストで取扱が容易なフェムト秒ファイバーレーザーを光源に用いた二光子励起メージングが高効率で行える近赤外発光型蛍光プローブを開発すること、2.ファイバーレーザーを光源とした二光子励起顕微鏡を自作し、29年度以降に開発されるプローブを用いた実際のイメージングへの試用を行う準備、が計画されていた。1の近赤外発光型蛍光プローブの開発は順調に進み、(1)発振波長1030 nmのファイバーレーザーにより生きた細胞内で二光子励起蛍光を示す、(2)生体に有害な有機溶媒を使用することなく細胞や組織を染色するのに十分な水溶性を示す、(3)組織深部からの蛍光を低侵襲で観察することが可能な波長800 nm以上にまで蛍光帯が延びている、という条件を満たした蛍光プローブを4種類開発することができた。これらの蛍光プローブにはミトコンドリアに局在する性質を付与し、一般的な蛍光顕微鏡で生細胞のミトコンドリアのイメージングが少なくとも3日間行い続けられることを確認した。2のファイバーレーザーを光源とした二光子励起顕微鏡も計画通り自作し、前述の新規蛍光プローブ群を用いて実際のイメージングを行った。その結果、本研究で開発した蛍光プローブは、自作した顕微鏡により二光子励起イメージングを行うのに十分な性能をもつことが確認され、非常に明るく、また、解像度の高い二光子励起イメージング像を得ることが出来た。平成28年度に計画されていた蛍光プローブの開発は、滞りなく完了することができた。また、ファイバーレーザーを光源とした二光子励起顕微鏡の自作についても、当初の計画よりも高感度な顕微鏡システムを構築することができた。平成29年度に計画していた、本研究で開発したプローブを用いた実際のイメージングへの試用も平成28年度中に前倒しで実施し、期待通りの成果を得ることが出来た。以上のように、平成29年度中期までに行う予定だった研究が平成28年度中に完了しており、当初の計画以上に進展していると判断できる。本研究の最終的な目的は、誰もが簡単に使えるフェムト秒ファイバーレーザーを光源に、1 mm程度の高深度までの三次元生体イメージングシステムを低侵襲に行えるシステムを完成させることである。平成28年度は、(1)発振波長1030 nmのファイバーレーザーにより生きた細胞内で二光子励起蛍光を示す、(2)生体に有害な有機溶媒を使用することなく細胞や組織を染色するのに十分な水溶性を示す、(3)組織深部からの蛍光を低侵襲で観察することが可能な波長800 nm以上にまで蛍光帯が延びている、という条件を満たした蛍光プローブを4種類開発することができた。平成29年度は、新しい蛍光プローブの開発をさらに進めるとともに、これらの蛍光プローブの性能を最大限発揮させることができる二光子励起顕微鏡の開発を進めた。従来の二光子励起顕微鏡とは異なり、目に見えない赤外光で励起を行うため、汎用的な光学部品で試作した顕微鏡には効率の点で問題があった。そこで、光学機器メーカーと共同で、1030 nm励起・近赤外発光検出での効率向上に特化したパーツの設計を進め、特注により製作したパーツを組み込むことで高感度な顕微鏡システムを構築した。このシステムと、前述の新規蛍光プローブ群を用いて実際のイメージングを行った結果、ファイバーレーザーの強度を100分の1に減衰して試料に入射しても、非常に明るく、また、解像度の高い二光子励起イメージング像を得ることが出来た。

以上のように、新規蛍光プローブ、および、低パワー、すなわち低侵襲で高感度にイメージングが行える顕微鏡システムはほぼ完成させることで、平成30年度には高深度イメージングの実証に計画通り着手するための準備を終えることが出来た。平成29年度も新たに3種の蛍光プローブを開発できており、当初計画以上に進行している。このことにより生じたリソースを、ファイバーレーザーを光源とした二光子励起顕微鏡の高感度化に費やすことができた。その過程で、平成30年度に高深度イメージングを行うにあたり予想される問題点の洗い出しができた。具体的には、高深度イメージングを行うためには、ワーキングディスタンスを伸長することが不可欠となるが、ワーキングディスタンスの大きなレンズで励起光を集光すると、焦点が大きくなってしまい、解像度が劣悪になるという点である。この問題の解決に、光学系の設計を機器メーカーの技術者の協力の下で取り組んだ。その結果、光学系の設計を見直し、可変焦点レンズや空間光位相変調器を光学系に組み込むことでワーキングディスタンスの大きなレンズで励起光を集光しても小さなスポットに励起光を絞り込む目処が立った。以上のように、平成30年度に実施を予定していた研究で生じる問題点に平成29年度中に気付くことができ、その解決策が見いだされているので、当初の計画以上に研究が進展していると判断できる。本研究の最終的な目的は、誰もが簡単に使えるフェムト秒ファイバーレーザーを光源に、1 mm程度の高深度までの三次元生体イメージングシステムが低侵襲に行えるシステムを完成させることである。平成29年度までの研究で、(1)発振波長1030 nmのフェムト秒ファイバーレーザーにより生きた細胞内で二光子励起蛍光を示す、(2)生体に有害な有機溶媒を使用することなく細胞や組織を染色するのに十分な水溶性を示す、(3)組織深部からの蛍光を低侵襲で観察することが可能な波長800 nm以上にまで蛍光帯が延びている、という条件をすべて満たした蛍光プローブを10種類以上開発することができた。また、開発した蛍光プローブの性能を最大限発揮させることができる二光子励起顕微鏡の開発も完了した。そこで、平成30年度は、当初の計画に沿って、高深度イメージングの実証に取り組んだ。開発した蛍光プローブによりゼブラフィッシュの稚魚を染色した。稚魚は染色しても数日間にわたり生き続け、有害性の低さが裏付けられた。また、厚さが1 mm近い稚魚の身体全体のイメージングも行う事ができ、当初の目的は達成できた。この研究の過程で、高感度なイメージングシステムを用いれば、ファイバーレーザーによる三光子励起過程を用いても、十分に明るいイメージングが行えることも明らかとなった。ファイバーレーザーにより三光子励起が可能な蛍光プローブは多数あるので、ファイバーレーザー励起によるイメージングが行える対象を格段に拡がることも明らかにすることができた。平成29年度は、高深度イメージングを実証するため、人体と同じ電気的特性をもつファントム液剤の中に細胞を埋めた実験、組織を染色した実験を実施する。また、平成28年度の研究で開発したプローブの汎用性を高めるために、任意のタンパク質に結合する能力をもつタグと呼ばれる置換基をプローブに導入する。タグとは末端にクロロ基、中間部にはポリエチレングリコール部位をもつ直鎖上の基で、様々なタンパク質と結合させることが可能である。
海の島と陸の島に棲む希少鳥類・コマドリの地域的減少が遺伝的多様性に及ぼす影響評価

コマドリは日本列島周辺地域の固有繁殖種で、山地の夏緑樹林や針広混交林と一部の離島の照葉樹林に夏鳥として渡来し繁殖する。ササ類などの下層植生がよく茂った場所を好んで繁殖するため、高密度化したニホンジカの採食による下層植生の衰退にともなって、近年は個体数の減少と生息地の縮小が各地で報告され、将来的にさらなる減少も懸念されている。本研究ではコマドリの主要な生息地を対象に、5年間にわたる野外調査によりコマドリの現在の生息状況と生息地の下層植生衰退について記録するとともに遺伝子サンプルを収集し、保全遺伝学的手法によって各地の集団の歴史と遺伝的多様性について解析してきた。最終年度は四国、中部、東北、北海道などで遺伝子サンプルの収集が不十分だった調査地点での野外調査を継続するとともに、これまでのデータの取りまとめと遺伝子サンプルの解析を行った。その結果、九州本州の生息地ではいずれも下層植生の衰退が進行し、過去の文献や聞き取り情報に比べてコマドリの生息密度の低下が顕著であることが確認された。一方、北海道の生息地では下層植生の衰退度が低く、コマドリの生息密度は高かった。ミトコンドリアDNAの解析によって得られた本土集団のハプロタイプのネットワーク樹からは、集団全体では歴史的な個体数の放散と分布の拡大による影響、屋久島の集団は隔離による影響があったと推測された。屋久島と利尻島を除く本土地域では集団間の遺伝的分化は軽微で、集団の放散時期は九州、本州で早く、北海道でやや遅く、本土の集団は最終氷期後に個体数の放散と南から北への分布拡大があった後は安定して維持されてきたことが示唆された。また、集団のハプロタイプ多様度と塩基多様度は、個体数の減少と分布の縮小が最も顕著で長期間続いている九州地域で最も低い値をとったことから、今後の変化に注意する必要があると考えられた。日本周辺地域に固有の希少鳥類・コマドリは、島状に散在する亜高山帯(山地)の森林と一部島嶼の森林にのみ局所的に分布する。下層植生の発達した森林を好むため、近年、山地の森林におけるニホンジカの生息密度上昇にともなう下層植生衰退などの影響を受けて、個体数の減少と生息地の縮小が各地で進行しつつある。本課題では全国の山地と島嶼のコマドリの主要な生息地を対象に、現在の生息状況と下層植生衰退度とを現地調査により明らかにするとともに、保全遺伝学的手法によって各地の集団の歴史と遺伝的多様性について解析し近縁種群と比較検討する。初年度には、コマドリの過去の生息状況に関する情報収集を行い、各地域のコアな生息地を特定した。そのうち、九州中央山地、紀伊山地、富士山麓、八丈島、日光連山で生息状況の現地調査を行った。その結果、八丈島を除くいずれの地域でも下層植生の衰退が認められ、コマドリの生息密度は過去の記録に比べて明らかに低下していた。特に西日本での生息地の劣化と生息密度の低下が顕著で、九州中央山地ではごく稀にしか観察する事ができず、繁殖状況の確認や捕獲ができなかった。次いで紀伊山地、富士山麓でも同様の傾向が見られ、生息密度は低かったが、幼鳥が確認されて調査対象地域で繁殖していることが確認できた。日光連山では他の地域に比べると生息密度が高めであったが、下層植生は衰退しつつあり、今後の推移に注意する必要があると考えられた。九州中央山地以外の4地域で繁殖個体または幼鳥を捕獲し、地域変異を検討するための形態計測と試料収集を行った。また、得られた試料をもとにミトコンドリアDNA分析を試験的に行い、今後の分析対象領域を検討した。コマドリは日本周辺地域に固有の種であるが、選好する生息環境が亜高山帯の森林と一部島嶼の森林に限定されるため、分布域の中でも生息地は連続せずに島状に散在している。さらに、林床に下層植生が発達した場所を好んで繁殖する種であるため、近年のニホンジカの生息密度上昇にともなって下層植生が衰退した地域では個体数の減少と生息地の縮小が懸念されている。本研究課題ではコマドリの主要な生息地を対象に、コマドリの生息状況と下層植生の状態とを5年間にわたる現地調査で明らかにするとともに、保全遺伝学的手法によって各地の集団の歴史と遺伝的多様性について解析する。当年度は、コマドリのこれまでの生息状況についての情報収集を継続するとともに、屋久島、九州中央山地、四国西部、長野県南部、岩手県北部、北海道中部および東部で生息状況の現地調査を行った。九州中央山地、四国西部、長野県南部では下層植生の衰退が著しく、コマドリの生息密度は過去の記録に比べて明らかに低下していた。屋久島、岩手県北部、北海道中部および東部でも下層植生の衰退傾向は認められたが、前述の地域に比べるとコマドリの生息密度は高かった。予備的な探索のみだった長野県南部を除く6地域において、許可を得て成鳥を捕獲し、形態の記録と遺伝子試料の採集を行った。コマドリの姉妹種で屋久島より南の琉球列島に異所的に分布するアカヒゲについても、コマドリの伊豆諸島集団の位置づけとの比較検討のために、生息状況の把握と遺伝子試料の収集のための現地調査を行った。また、これまで2年分の試料についてミトコンドリアDNAのコントロール領域およびチトクロームb領域の塩基配列を解析したところ、伊豆諸島の繁殖個体の一部で分化の程度の大きい遺伝子型が確認された。当年度計画していた過去の生息状況に関する情報収集と、北海道から屋久島までの7地域での現地調査を実施することができたので、おおむね順調に進展していると考える。

島嶼での調査では希少鳥類一般についても副次的成果があった。野外調査の日数と旅費への予算配分などを当初見込みよりも増やしたので、対象種の生息密度の低さにも関わらず遺伝子試料の収集は予定以上の達成度となった。試料の分析も問題なく進展している。コマドリは山地の森林と一部の島嶼の森林に生息する日本周辺地域に固有の種であるが、ササ類など下層植生がよく茂った場所を好んで繁殖するため、近年のニホンジカの増加にともなって下層植生が衰退した地域においては個体数の減少と生息地の縮小が懸念されている。本研究課題ではコマドリの主要な生息地を対象に、5年間にわたる野外調査によりコマドリの生息状況と下層植生衰退との関係を明らかにするとともに、保全遺伝学的手法によって各地の集団の歴史と遺伝的多様性について解析する計画である。当年度は、各地のコマドリの生息情報収集を継続するとともに、中部地方、関東地方、伊豆諸島中部、北海道中部および北部(利尻島)において生息状況調査と捕獲調査を行った。中部地方と関東地方の調査地では下層植生の衰退が顕著でコマドリの生息密度も低かったが、北海道中部では部分的に下層植生の衰退傾向は認められたもののコマドリの生息密度は比較的高く、伊豆諸島と利尻島では大型草食獣が生息せず下層植生が密でコマドリの生息密度も高いことが確認された。これら3地域の合計6ヶ所で許可を得てコマドリを捕獲し、翼長・尾長・ふしょ長など体サイズに関わる部位の計測と遺伝子試料の採集・分析を行った。これまでに収集できたデータと試料の中間的な分析では、一部に地域固有の系統群は見られたが地域間の遺伝的分化は明瞭ではなく、また、計測値の一部にも地域的な変異は認められるものの地理的な変化傾向は明らかではなかった。そのため次年度以降も全体計画に沿って野外調査を継続し、生息状況の調査範囲を広げるとともに、各地の集団でのデータを得るための捕獲調査を実施する予定である。当年度に計画していた中部地方、関東地方、伊豆諸島、北海道本土および島嶼部の各地域において、野外での生息状況調査と捕獲調査を実施することができたため、おおむね順調に進展していると考える。対象種の生息密度は低いが、調査努力量を増やすことで計画どおりに捕獲データの収集も実施できており、試料の分析も研究期間の終了時までには完了の見込みである。コマドリは日本列島の山地林と一部の離島の照葉樹林に生息する日本周辺地域の固有種であるが、ササ類など下層植生が密な場所で繁殖するため、近年のニホンジカの増加による下層植生の衰退に伴って個体数の減少と生息地の縮小が懸念されている。本研究課題ではコマドリの主要な生息地を対象に生息状況と下層植生衰退との関係を明らかにするとともに、保全遺伝学的手法によって各地の集団の歴史と遺伝的多様性について解析する計画で、当年度は九州、紀伊半島、富士山麓、北関東、伊豆諸島南部でコマドリの生息状況の調査と遺伝子試料の収集を行った。このうち、2014年と同じ場所で生息状況の調査を行った富士山北麓では下層植生の衰退が進行してコマドリが全く確認されなくなり、紀伊半島では数十%減少しており、下層植生の衰退に伴うコマドリの減少傾向が各地で継続していることが示された。これまでの捕獲調査が十分でなかった九州、北関東、伊豆諸島南部では計28羽を捕獲し、外部形態の記録と遺伝子試料の採集を行い、その分析を進めた。
組織修復に対する細胞増殖因子の臨床応用に関する基礎的研究

組織修復に対する増殖因子・受容体の役割を明らかにし、増殖因子を臨床の場に応用する目的で本研究を行い、以下の項目についてPositive dataが得られたので報告する。I.ヒトにおけるEGFレセプターの発現と増殖能:正常組織ではヒト皮膚および食道の基底細胞、傍基底細胞と肺気管支の基底層にEGFレセプターが多く発現しており、BrdUを用いて検討すると増殖能を有している細胞はこれらの組織においてはすべてEGFレセプターを有していた。皮膚の良性増殖性疾患や前癌病変ではEGFレセプターが全層にわたって存在しており、しかもpsoriasis vulgarisの患者においては非病変部位においても全層でEGFレセプターが分布し、単なる結果ではなくその原因と深い関連にあった。II.ヒト熱傷創水疱中に含まれる増殖因子:ヒト線維芽細胞由来のHF-MおよびHF-Oに10%水疱液を培養液であるDMEMに添加すると10%ヒトplasmaやserumを添加するのと同程度の増殖促進効果が認められた。更にEGFを添加するとヒトplasmaやserumでは相加作用はみられなかったが水疱液では相加作用が認められた。FGFを投与すると水疱液、plasma serumいずれの例でも相加作用がみられ、水疱液は単なるplasmaやserumの漏出液ではないこと、水疱ではEGF、FGFが相対的に不足していることが明らかにされた。III.肝再生にみられる再生初期シグナル:Mortimoreの変法によって肝灌流を行いprecirculation後、Higgins & Andersonの方法によってラット肝切除を行ったところ、60分後にC-mycの発現亢進が認められた。その程度は、単に開腹後肝切除を行った対照群とかわりがなく、肝再生初期のシグナルであるCーmycの発現亢進は体液成分や神経性因子の影響を除いても肝切除のみの刺激で惹起される可能性が示唆された。組織修復におけるEGF・レセプター系の役割を明らかにし、細胞増殖因子の創傷治癒に対する臨床応用をめざして、本年度は(【I】)EGFレセプターの各種組織における発現(【II】)EGFレセプターと増殖能との関連(【III】)皮膚欠損創におけるEGFの効果を検討した。(【I】)EGFレセプターの各種組織における発現を検討するため、手術時に得られた皮膚および肺組織と食道,胃,小腸,大腸粘膜をO.C.T compourdに包埋し、アセトンドライアイスで凍結後、-70°Cで保存した。凍結切片を作成しEGFレセプターに対するモノクローナル抗体で染色すると皮膚および食道の基底細胞,傍基底細胞と肺末梢気管支の基底細胞層のみが染色され、胃,小腸,大腸粘膜ではいずれの例でも染色性が認められなかった。(【II】)扁平上皮組織におけるEGFレセプターと増殖能の関連を検討するため手術時に得られた皮膚と食道粘膜をbroxiuridineを添加した培養液中で1時間インキュベートしたのち、70%エタノールで固定し抗BrdU抗体で染色すると両者のEGFレセプター染色パターンは同様であったにも抱らず、皮膚では主に基底細胞層に、食道粘膜では基底膜より二層目の傍基底細胞層にBrdUが取り込まれていた。以上(【I】)(【II】)の結果はEGF・レセプター系が扁平上皮組織の創傷治癒で重要な働きを有していることを示唆している。(【III】)EGFの皮膚欠損創における効果を検討するため、モルモット背側に2ケ所の笈膚欠損創を作成し、一カ所をEGF投与創他方を非投与創とした。

3日後と1週間後に創傷面の大きさを計測し、また創の組織標本を作成して投与創と非投与創について比較検討したが、両群間にはいずれの例でも有意の差を認めなかった。皮膚欠損創での創傷面の大きさは瘢痕収縮など増殖因子以外の要因が関与していると考えられた。[目的]組織修復における増殖因子・受容体の役割を明らかにするため本年度は主に以下の2つの実験系を用いて研究を行った.1.ヒト線維芽細胞由来の培養細胞を用いたヒト水疱中に存在する増殖因子の検討2.各種病態での細胞増殖と増殖因子受容体との関連[方法]1.ヒト線維芽細胞はヒト皮膚より得られた2種類の細胞株を用い, II度熱傷患者より得られた水疱液成人男性より得られた血清と血漿牛胎児血清(FCS)を加えたDMEM培養液で培養し,更にEGFを最終濃度0,1,10,100〓〓/mlとなる様に添加し,3日後に細胞数の計測を行った.2.正常ヒト皮膚,psoriasis vulgarsおよびBowen病患者より得られた病変部位の皮膚を3気圧下のBrdU添加10%FCS含有DMEM培養液中で培養し,新鮮凍結切片およびアルコール固定パラフィン切片を作成し,各々をヒトEGF受容体およびBrdUに対するモノクローナル抗体を用いたABC法で染色しEGF受容体とS期細胞の分布を検討した.[結果]1.水疱液を添加した群では細胞数は23倍に増加し増殖促進作用が認められた.その作用はFCSよりも強力でヒト血清や血漿の作用に匹敵した.外因性にEGFを投与すると水疱液では反応し,更なる増殖促進作用が認められたが,ヒト血清および血漿ではほとんど認められなかった.2.EGF受容体の分布は正常皮膚では基底および傍基底細胞に,psoriasis vulgarisおよびBowen病患者の皮膚病変部位ではほぼ全層にわたっていた. S期の細胞は正常皮膚とPsoriasis vulgarisでは基底層に,Bowen病ではほぼ全層に認められた. [結語]水疱液中には増殖因子が存在しているがEGFは相対的に不足しており外因性に投与することにより増殖作用は更に促進された.細胞増殖とEGF受容体の関連は各種病態による異っており,その病態と深く関わっていることが示唆された.組織修復における増殖因子・受容体の役割を明らかにするため本年度は主に以下の2つの課題に関する研究を行った。II.肝再生初期にみられる再生シグナル:肝切除後には再生初期のシグナルとしてc-myc、c-fosの発現上昇が認められるが、この現象が肝切除のみによるのか、何らかの体液成分によって惹起されるのかを明らかにするためMortimoreの変法によりラット肝灌流を行い、precirculation後にHiggine & Anderson法によって2/3肝切除を行った。その後経時的にサンプリングを行い、LiClを用いてRNAの抽出を行った後、c-myc、c-fosの発現をそれぞれのprobeを用いたNorthern blot analysisで検討した。internal standardとしてappbyしたRNA量を求めるためactinに対するprobeで同じくNorthern blot analysisを行った。
電力エネルギーシステムの超伝導技術による変革

本企画調査は電力エネルギーシステムの変革を超伝導技術を手段として用いて実現する為の可能性の調査と方法論に付いて調査することを目的としている。超伝導は大容量コンパクト・高校率の機器や、優れた特性・柔軟性を持つシステム構成の実現を可能とし、電力系統の諸問題の根本的な解決手段を提供するものと期待されている。現在、超伝導発電機のように実現性が近いものから超伝導電力ケーブルなどの高温超伝導応用機器のように様々な開発課題を多く包含しつつ、その可能性が追及されているものまで幅広く開発が進められている。しかしながら、このような個々の機器の開発の他に、超伝導技術を根本的開発手段として有効に機能させるためには現在の電力エネルギーシステムの設計・運用の考え方、技術的枠組を一新しなければならない場合もあり、また、超伝導技術そのものがニーズに対応できるかについても技術の基礎に立ち戻って検討する必要がある。以上の状況を踏まえ、本企画調査では、電力システムの研究者と超伝導線材、超伝導機器要素技術の研究者が共同して、現状の技術の延長や枠組で対応し得る限界に対して、これをブレイクスルーするために超伝導技術がどのような技術的枠組・手段を提供し電力エネルギーシステムを変革し得るか、また、このためにはどのような研究開発課題があるかを検討し、さらに、課題解決のための方法論について調査した。これにより、特定領域研究の申請を行った。
動物組織リゾホスオ-リパーゼのcDNAクローニングと細胞内シグナル伝達への関与

1.ラット肝臓25Kリゾホスホリパーゼの抗体を用い,ラット肝臓λgt11cDNAライブラリーのスクリーニング行ない,本酵素のcDNAクローンを得,全アミノ酸配列を決定した。その中には,セリンエステラーゼの活性中心に特徴的なGXSXG配列を含んでいた。また,DMSO刺激によりHL60細胞が好中球に分化する際,本酵素が誘導されることがWestern blotにより確認された。しかし,mRNA量には変化がみられず,調節は転写後の段階で行なわれていると推定された。2.ラット肝臓可溶性画分からDEAEセルロース,オクチルセファロース,硫安分画,ゲル濾過,ブルーセファロース,ヒドロキシアパタイト,HPLC-DEAEを使用し,60Kのリゾホスホリパーゼ/トランスアシラーゼを精製した。この均一な標品を使用してウサギを免疫し抗体を得た。現在この抗体を用い,ラット肝臓λgt11cDNAライブラリーのスクリーニング行ない,本酵素と思われるcDNAを得たところである。