hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
韓国語諸方言におけるＮ型アクセントの実態調査研究

全羅南道方言と江原道方言の予定地域に加えて隣接した地域の調査も必要だったため,多少の変更はあるものの,概ね予定通りに進んでいる。平成28年度に実施した研究は,韓国の江原道方言のうち,三陟(さむちょく)方言,旌善(じょんそん)方言,江陵(かんぬん)方言を中心にし,そのアクセントの記述を行った。三陟方言は,地理的に慶尚北道と面している遠徳(うぉんどく)邑と三陟市に近い近德(くんどく)面を実地調査した。両方言共に4つのアクセント型が対立を成しているが,具体的な音調型が異なる。旌善方言は,餘糧面を実地調査し,3つのアクセント型が対立を成していることが分かった。江陵方言は,2種類のアクセント型が対立していることが確認できたが,話者の都合で沢山の資料を集めることができなかった。単独形や助詞付のアクセント特徴から,調査したすべての方言でアクセント核と語声調の2種類のアクセントが共に存在していることが分かった。本研究は,N型アクセント体系(語声調)と分類されてきた方言のアクセント実態を明らかにしつつ,「アクセント核と語声調(狭義のアクセントと声調)が1つの体系内に共に存在しうる」という理論の一般化を図るための記述研究であった。研究期間全体を通じて,アクセント核の有無とその位置により解釈されてきた方言・語声調の種類の対立によると解釈されてきた方言が,1つのアクセント性質のみでは一概的に捉えられない現象があることが分かった。この異なる現象は,2種類のアクセントに起因するものだと解釈した。これは,姜英淑(2017)で,慶尚道諸方言が1つの体系の中にアクセント核と語声調を兼ね備えていると解明した点と一致する。よって,韓国語の諸方言は,1つの体系の中に狭義のアクセントと声調を兼ね備えており,2種類のアクセントは一つの体系内に共に存在しうるものと一般化できる。これにより,多型アクセント体系(アクセント方言)・N型アクセント体系(語声調方言)のような分類は必要なく,方言によってアクセント核と語声調の数の差があるだけと結論付ける。本研究は,韓国語のN型アクセント体系(語声調)と分類されてきた方言のアクセントの実態を明らかにしつつ,アクセント核と語声調が一つの体系内に共に存在しうるという理論の一般化を図るための記述研究であった。西部慶尚道は,河東方言を実地調査した。江原道方言は,寧越(徳邱里,九来里)・旌善・三陟方言(遠徳邑)を対象に,アクセント性質を明らかにした。全羅南道は光陽市方言を中心に実地調査を行い,その他に求禮方言及び順天方言のアクセントを実地調査をし,そのアクセント体系を解明した。方言の地域差により,予定外の地域を追加したことで,予定よりやや遅れている。全羅南道求礼では前回の調査の話者の都合により協力が得られず,話者の変更があったため,多少の時間がかかった。追加地域の話者は高齢者であり,読み上げや調査の目的を理解してもらうことが容易ではない点も多少の遅れが生じている原因の一つである。今後は,江原道の三陟・太白・旌善郡と全羅南道の光陽郡を中心にアクセント体系やその特徴を明らかにしていく予定である。アクセントの地理的な特徴にもフォーカスを置いて先行研究とは異なる地域を調査し,その実態を明らかにしたい。人文学今後は主に,江原道方言を中心にアクセント体系やその特徴の解明のため,記述研究を行って行く予定である。まずは,方言形を取り入れた語彙リストを改め,慶尚北道と面している地域を中心として方言間によるアクセント体系の違いを明らかにして行く。また,慶尚南道及び全羅南道におけるN型アクセントの特徴とどのような違いが見られるかその実態を明らかにしたい。麗水蓋島方言における世代差によるアクセント特徴の解明は予定外であり,その調査により予定よりやや遅れが出ている。
レセプトの傷病名の妥当性研究

(1)研究計画1:院内レセプトデータを使用し,心血管疾患,糖尿病,白内障などについて傷病名や処置・薬剤情報によるアルゴリズムを作成した.電子カルテ・カルテ情報の診断を真値としアルゴリズムのバリデーションを行った.1)「急性心筋梗塞」・「糖尿病」・「白内障」について,レセプトデータ(傷病コード)や診療行為レセプトデータ・医薬品コードを使った疾患定義を作成した.2)病院レセプトデータベースと電子カルテのデータを用い,抽出項目の決定およびデータ検証,データクリーニングを実施した.3)心血管疾患については,「急性心筋梗塞」に着目し,循環器内科専門医による担当医の診断のレビューを実施した.4)糖尿病の入院レセプトデータにおける「糖尿病」の傷病名の妥当性分析を行った.5)眼科受診のレセプトデータにおける「白内障」の傷病名の妥当性分析を行った.(2)研究計画2:NDB(ナショナルレセプトデータベース)を用い,高齢者における合併症構造を明らかにする.1)厚労省より平成27年7月30日審査承諾分データのうち第1期分と第2期分を受領した.2)抽出NDBデータの分析用データベースシステムを設計開発が完了した.3)上記システムを用い,第1期分のデータ抽出を実施し,SQLサーバーとSASで患者抽出と統計解析を実施した.4)60歳以上の高齢者を対象としたDPCレセプトを用い.高齢者の合併症に関する解析をし、論文作成と海外雑誌の投稿を行った。5)年間集計データとして公開されているNDBオープンデータを用い,フィジビリティスタディを実施した.疾患特定アルゴリズムに使われる診療行為レセプトの都道府県別実態調査を行い,H29年度は日本睡眠学会,日本循環器学会,日本公衆衛生学会に発表した.6)合併症の地域差に関して解析を行い、論文作成中である。レセプトデータベース整備を業者委託しているため、契約や作業時間が予定より時間がかかっている。「脳血管疾患」・「骨折」・「認知症」・入院中の死亡と骨折のアルゴリズムの作成と電子カルテデータとの妥当性検討は,研究チームのリソースに限界があり,NDB研究を優先させることにした.「骨折」イベント関連とpolypharmacyの影響について、専門医にコンサルテーションをしながら進めることにした。(1)研究計画1:院内レセプトデータを使用し、虚血性心疾患、脳血管疾患などについて傷病名や処置・薬剤情報によるアルゴリズムを作成する。電子カルテ・カルテ情報の診断を真値としアルゴリズムのバリデーションを行う。1)「心血管疾患」・「糖尿病および糖尿病性網膜症」・「白内障」について、レセプトデータ(傷病コード)や診療行為レセプトデータ・医薬品コードを使った疾患定義を作成した。2)病院レセプトデータベースと電子カルテのデータを用い、抽出項目の決定およびデータ検証、データクリーニングを実施した。3)心血管疾患については、循環器内科専門医による担当医の診断のレビューを開始した。4)糖尿病の入院レセプトデータにおける傷病名の妥当性の分析、処方実態を開始した。(2)研究計画2:NDB(ナショナルレセプトデータベース)を用い、高齢者における合併症構造を明らかにする。1)厚労省より平成27年7月30日審査承諾分データのうち第1期分を平成29年1月に受領した。2)抽出NDBデータの分析用データベースシステムを設計し、開発が完了した。3)年間集計データとして公開されているNDBオープンデータを用い、フィジビリティスタディを実施した。疾患特定アルゴリズムに使われる診療行為レセプトの都道府県別実態調査を行った。(1)研究計画1: 1)傷病名や処置・薬剤情報によるアルゴリズムの作成医療政策上重要な「心血管疾患」・「糖尿病および糖尿病性網膜症」・「白内障」について、レセプト傷病コードや診療行為レセプト・医薬品コードを使った疾患定義を作成した。「歯周病」については、厚労省の抽出作業の負荷を軽減するために、当該レセプトデータが医科等に比して電子化率そのものが不完全であることから、実施を見合わせることにした。2)レセプト傷病名の妥当性研究レセプトデータベースと電子カルテのデータを用い、抽出項目の決定およびデータの検証、データクリーニングを実施した。心血管疾患の真の病名については、循環器内科専門医による担当医の診断のレビューが進んでいる。(2)研究計画2:NDB(ナショナルレセプトデータベース)を用いた高齢者における合併症構造の解明1)厚労省から平成27年7月30日審査承諾分データのうち第1期分を平成29年1月に受領した。3)第1回NDBオープンデータを用い、フィジビリティスタディを実施した。眼科(白内障)、関節症(湿布薬処方)、循環器疾患(心筋梗塞、睡眠時無呼吸症候群)を対象に診療行為の都道府県別実態調査を行った。地域相関研究: NDBオープンデータのうち、院内、院外、入院の薬剤「外用性年齢別薬効分類別数量」を用い実施した。年齢調整および疾患による死亡率の関連に関する検討:NDBオープンデータおよびe-statを使用し、診療行為の管理料算定数を疾病の代替指標として用いた。都道府県別に年齢調整(間接法)を行い、疾患による死亡率と管理料の算定件数との関連についても検討した。相関分析およびローレンツ曲線の作成:都道府県別、診療行為数と高齢者数の相関分析やローレンツ曲線を作成し地域相関研究を実施した。(1)研究計画

1:院内レセプトデータを使用し,心血管疾患,糖尿病,白内障などについて傷病名や処置・薬剤情報によるアルゴリズムを作成した.電子カルテ・カルテ情報の診断を真値としアルゴリズムのバリデーションを行った.1)「急性心筋梗塞」・「糖尿病」・「白内障」について,レセプトデータ(傷病コード)や診療行為レセプトデータ・医薬品コードを使った疾患定義を作成した.2)病院レセプトデータベースと電子カルテのデータを用い,抽出項目の決定およびデータ検証,データクリーニングを実施した.3)心血管疾患については,「急性心筋梗塞」に着目し,循環器内科専門医による担当医の診断のレビューを実施した.4)糖尿病の入院レセプトデータにおける「糖尿病」の傷病名の妥当性分析を行った.5)眼科受診のレセプトデータにおける「白内障」の傷病名の妥当性分析を行った.(2)研究計画2:NDB(ナショナルレセプトデータベース)を用い,高齢者における合併症構造を明らかにする.1)厚労省より平成27年7月30日審査承諾分データのうち第1期分と第2期分を受領した.2)抽出NDBデータの分析用データベースシステムを設計開発が完了した.3)上記システムを用い,第1期分のデータ抽出を実施し,SQLサーバーとSASで患者抽出と統計解析を実施した.4)解析結果について,論文ドラフト作成を行った.5)年間集計データとして公開されているNDBオープンデータを用い,フィジビリティスタディを実施した.疾患特定アルゴリズムに使われる診療行為レセプトの都道府県別実態調査を行い,H29年度は日本睡眠学会,日本循環器学会,日本公衆衛生学会に発表した.(1)研究計画1: 1)傷病名や処置・薬剤情報によるアルゴリズムの作成医療政策上重要な「心血管疾患」・「糖尿病および糖尿病性網膜症」・「白内障」について、レセプト傷病コードや診療行為レセプト・医薬品コードを使った疾患定義を作成した。2)レセプト傷病名の妥当性研究レセプトデータベースと電子カルテのデータを用い、抽出項目の決定およびデータの検証、データクリーニングを実施した。心血管疾患の真の病名については、循環器内科専門医による担当医の診断のレビューが進んでいる。(2)研究計画2:NDB(ナショナルレセプトデータベース)を用いた高齢者における合併症構造の解明1)厚労省から平成27年7月30日審査承諾分データのうち第1期分と第2期分を受領した.2)抽出NDBデータの分析用データベースシステムを設計開発を行い,本システムを用い,データベース作成と患者抽出,統計解析を実施した.また,解析結果について論文ドラフトを作成した.3)第1回NDBオープンデータを用い、フィジビリティスタディを実施した。眼科(白内障)、関節症(湿布薬処方)、循環器疾患(心筋梗塞、睡眠時無呼吸症候群)を対象に診療行為の都道府県別実態調査を行った。地域相関研究: NDBオープンデータのうち、院内、院外、入院の薬剤「外用性年齢別薬効分類別数量」を用い実施した。
発作性夜間血色素尿症(PNH)における自己免疫による造血障害発生の分子機序

PNHでは再生不良性貧血と同様に自己免疫介在性の造血不全が指摘されているが、その詳細は不明である。最近、我々は白血病細胞K562がPIG-A変異をきたしGPI蛋白を欠損すれば(GPI-細胞)、NK細胞傷害を受けにくくなることを報告した(Nagakura, Blood 2002)。これは特定のGPI蛋白がNK活性化の標的になることを強く示唆する。そこで本研究は、NK活性化リガンドとなるGPI膜蛋白および対応するNKレセプターを同定し、これらのPNH造血不全に関する病的意義を確立する目的で計画した。まずGPI^-細胞のGPI^+細胞に対するNK感受性低下を確認したのち、この感受性差を生み出す責任分子を各種抗体による細胞傷害抑制試験により探索した。その結果、GPI結合型のNK活性化リガンドであるCMV糖蛋白UL-16結合蛋白(ULBP)を見出した。ULBPは感染や腫瘍化で誘導されるストレス蛋白であり、NKG2Dを受容体とする。そこで、このULBP-NKG2D受容体機構が実際の患者で造血細胞傷害に関与するか検証した。まず顆粒球のULBP膜発現を解析したところ、約6割の患者に発現していた。ULBP同様にNKG2Dを受容体とするストレス蛋白MICAも同時に検出できた。さらに、これらストレス蛋白陽性患者では、顆粒球に対し自己NKG2D陽性リンパ球(NK,CD8^+T)による細胞傷害活性が検出されたが、ストレス蛋白陰性の患者や健常人では傷害活性は検出されなかった。つまりPNH患者では何らかのストレスによりNKG2Dリガンドが造血細胞に発現誘導され、これを認識した自己NKG2D陽性リンパ球が造血細胞を攻撃すると理解できる。このように、ストレス蛋白ULBP,MICAはPNH造血不全発生に関わる重要な分子であり、広く免疫介在性造血不全の新たな臨床的指標としても期待される。PNH患者の多くは、本邦の主死因である造血不全を呈し、その発生には自己免疫による造血細胞障害機序が関与するとされる。この細胞障害から、PNHクローンは膜特性を利用して回避することで生存優位を獲得し、やがて選択的拡大から発症に至ると考えられている(生存優位説)。つまり、造血不全は、頻度の高い致死的合併症という臨床的側面のみならず、PNH発症そのものに深く関わる重要な病態と言える。この分子機序解明には、まず造血障害を引き起こすエフェクターとその標的分子の同定が必要である。以前、我々はエフェクターとしてナチュラルキラー細胞(NK)を用いた場合、GPI蛋白欠損細胞は正常対照細胞に比しNK感受性が低下していることを報告した(Nagakura, Blood 2002)。これは特定のGPI蛋白がNK活性化の標的になることを強く示唆している。そこで本研究は、NK活性化のリガンドとなる細胞膜GPI蛋白および対応するNKレセプターを同定し、これらの病的意義を実際のPNH患者で検証することを目的として企画した。今年度は、まずGPI蛋白の発現のみ異なるPIG-A変異白血病細胞株K562(GPI^-細胞)よび対照回復株(GPI^+細胞)を標的細胞として用い、GPI^-細胞のNK感受性が低下していることを確認した。この実験系を用い、各種抗体による細胞傷害抑制試験を行なったところ、GPI^+とGPI^-細胞のNK感受性の差を生み出す責任分子として、GPI結合型のNK活性化リガンドであるサイトメガロ蛋白UL-16結合蛋白(ULBP)を同定した。さらに、ULBPのNK受容体であるNKG2Dも確かにULBP発現の違いを識別して活性化シグナルの入力に差を生み出すことを証明した。

現在、ULBPの病的意義を確立するために、臨床サンプルの解析を進めているところである。PNH造血不全の分子機序解明には、まず造血障害を引き起こすエフェクターとその標的分子の同定が必要である。エフェクターとしてナチュラルキラー細胞(NK)を用いた場合、GPI蛋白欠損細胞は正常細胞に比しNK感受性が低下するという我々の知見は(Nagakura, Blood 2002)、GPI蛋白がNK活性化の標的になることを強く示唆する。そこで本研究は、NK活性化のリガンドとなる細胞膜GPI蛋白および対応するNKレセプターを同定し、これらの病的意義をPNH患者で検証することを目的とした。昨年度は、このようなNK活性化リガンドとして、ストレス誘導のサイトメガロ蛋白UL-16結合蛋白(ULBP)を同定した。そこで、今年度はULBPの病的意義を検討するため患者サンプルを用いた解析を行なった。まず17例のPNH患者顆粒球のULBP膜発現を解析したところ、59%で陽性であった。ULBPと受容体(NKG2D)を共有するストレス蛋白MICAの発現も同時に検出できた。さらに一部ではCD34陽性骨髄細胞にもこれら分子が検出できた。このようなストレス蛋白(ULBP,MICA)が果たしてNK細胞による造血細胞障害の標的となるか調べるために、患者血球に対する自己のNKG2D陽性リンパ球(NK,CD8^+T)による細胞傷害活性を測定した。予想通り、ストレス蛋白発現顆粒球を持つ患者でのみ細胞傷害活性が検出され、これを持たない患者や健常人では傷害活性は全く検出されなかった。つまりPNH患者では何らかのストレスによりNKG2Dリガンドが造血細胞に発現誘導され、これを認識した自己NKG2D陽性リンパ球が造血細胞を攻撃することが示唆される。以上よりPNHの免疫介在性造血障害にストレス蛋白ULBP,MICAが関与し、これら分子が新たな造血不全の臨床的指標なりうることが示された。
ホモアリル-ホモアリルラジカル転移反応を用いる架橋ジテルペン類の合成研究

有機化合物の合成においてラジカル反応はよく用いられる手法であり、現在数多くの方法論が提示されている。その中でアルコキシラジカルを用いるラジカル反応は、その高い反応性を利用することで水素引き抜き反応(Barton反応)による新たなラジカルの発生や、フラン環などの合成を行うことができることから近年盛んに利用されている反応のひとつである。しかしながら酸素-水素結合の高い結合エネルギーが原因で、これまで水酸基から直接アルコキシラジカルを発生させる方法はなく、水酸基を一度酸素-ヘテロ原子結合へと変換した後に結合をホモリティックに開裂させるという手法がとられてきた。今回私はラジカル転位反応を鍵反応とする生理活性天然物の合成に際し、分子内のビニルラジカルの作用によりアルコキシラジカルを水酸基から直接発生させることができるという画期的な反応を見出した。すなわちγ-ヒドロキシビニルブロミドに対しラジカル反応を行うと、水酸基の水素がビニルラジカルへと1,5-水素転位をし、生じたアルコキシラジカルがオレフィンと反応することによってテトラヒドロフラン化合物が得られるというものである。種々の側鎖を有する化合物でラジカル反応を行ってみたところ、反応の収率は置換基効果を大きく受けることが分かり、置換基が多いほど収率がよいという結果が得られた。これは生じるアルコキシラジカルの反応性が高いために、反応点の接近しにくい化合物ほど副反応が進行したためであると考えられる。一方、水酸基のβ位に電子求引基を持つような化合物からはテトラヒドロフランは得られず、アルコキシラジカルのβ開裂によって生じたと考えられるアルデヒド体が得られた。
食品中化学物質と細菌性毒素の複合暴露による生体影響とそのメカニズムの解明

黄色ブドウ球菌(No. 29株およびNo. 26a株)に8種の化学物質を暴露して37度で培養することにより、SEA遺伝子、SEAタンパク質の発現およびバイオフィルム形成に及ぼす影響を調べた。さらに、より生体内に近い条件下で病原性細菌の生体内における毒性を評価するために、黄色ブドウ球菌を血清(FBS)中で培養し、各種化学物質が病原因子関連遺伝子の発現およびβ-hemolysin活性(溶血活性)に及ぼす影響について解析した。BHI培地中における黄色ブドウ球菌の病原因子の発現に及ぼす各種化学物質の影響を検討したところ、試験に供した全ての化学物質において、SEA遺伝子の発現量が増加する傾向が認められた。また、No. 26a株においては、アクリルアミドおよびN-dimethyl-nitrosoamineの暴露により、黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成量が有意に増加した。さらに、黄色ブドウ球菌と各種化学物質をFBS中で培養し、病原因子関連遺伝子の発現量を測定した。その結果、No. 26a株においては、アクリルアミドの暴露により、黄色ブドウ球菌の病原因子を調節するsmall RNAであるRNAIIIおよびバイオフィルム関連遺伝子のicaAの発現量が有意に増加し、ヘテロサイクリックアミンの一種であるPhIPまたはMeIQxの暴露により、SEA産生量が増加した。また、FBS中でbisphenol AおよびPhIPを暴露したNo. 26a株の一部のコロニーには、溶血活性が認められた。これらの結果より、培地条件下と生体内では、黄色ブドウ球菌の病原因子の発現調節機構が異なり、菌株の種類によっても化学物質への応答機構が異なることが示唆された。現在までに、黄色ブドウ球菌と化学物質を同時暴露することにより、SEA遺伝子、SEAタンパク質の発現およびバイオフィルム形成に及ぼす影響が得られており、おおむね順調に進展している。本年度は、ICR系雄マウスにSEAおよび化学物質を同時投与し、腸内細菌叢の変動について、次世代シーケンサーを用いたメタゲノム解析を用いて評価する。さらに、化学物質が誘発する突然変異についてエームス試験で得られたコロニーを単離してDNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いて全ゲノムシーケンスを行い、複合暴露により誘発する突然変異を直接的に検出するこれまでに、化学物質および病原性細菌のヒトに対するリスク評価については、各リスク因子のエンドポイント、評価試験系の曝露期間等が異なることから同一の実験系を用いての評価は行われてこなかった。しかし、我々は、日常的に病原性細菌の影響を受けており、化学物質のリスク評価をする場合、細菌性毒素等の病原性因子の存在を考慮すべきであると考えられる。しかし、両者の同時曝露による生体影響の報告はこれまでになく、評価する実験系も構築されていない。しかし、ブドウ球菌毒素(SEA)は遺伝毒性は示さないが、細胞増殖やサイトカインの分泌を亢進させることから、遺伝毒性を有する化学物質との同時曝露により、遺伝毒性が増強する可能性が考えられる。また、化学物質の曝露により、食中毒菌の増殖や細菌性毒素の産生に対しても変動を与えることも考えられ、両リスク因子の相互作用を考慮することはヒトに対する健康リスクを考える上で重要である。そこで、本研究では、これまで未解明であった化学物質および病原性細菌の複合曝露によるリスク評価の検討およびその評価系の構築に向けた知見を得ることを目指し、様々な化学物質とSEAを同時に暴露することにより、その毒性や細菌の増殖、毒素産生等が変動するのか検討する。研究内容としては、(1)化学物質が黄色ブドウ球菌の増殖に与える影響を検討し、各種化学物質が黄色ブドウ球菌の増殖およびブドウ球菌毒素(SEA)産生能に与える影響ついて検討すること、(2)化学物質およびSEAの複合曝露による各種サイトカイン産生に及ぼす影響について、毒性影響を評価する細胞を用いた新規スクリーニング評価系を構築すること、(3)マウスに化学物質とSEAを複合曝露した際の腸内細菌叢の変動を検討することを目的とする。現在、遺伝毒性物質、内分泌攪乱化学物質、発がんプロモーター等の各種化学物質および細菌性毒素の同時暴露による細菌の増殖及び細菌性毒素の産生に対する影響について検討している。試験対象としては6種類の化学物質(アクリルアミド、MeIQX、ビスフェノールA、ノニルフェノール、N-ジメチルニトロソアミンおよび12-O-テトラデカノイルホルボール13-アセタート)を黄色ブドウ球菌S. aureus No.29 (enterotoxin A (SEA)+; No.29株)に曝露し、細菌の生育に及ぼす影響について調べ、生育を阻害しない濃度を明らかにした。次に化学物質をNo.29株の生育を阻害しない濃度で曝露し、暴露後のNo.29株におけるSEAの産生および病原性因子の発現制御に関与するRNAIII遺伝子の発現量を調べた。その結果、アクリルアミド、ノニルフェノールおよびN-ジメチルニトロソアミンをの暴露することにより、SEAおよびRNAIII遺伝子の発現量が有意に増加することが明らかになった。現在、C57/BL6Jマウスから採取した脾臓細胞に各化学物質とSEAを同時暴露させて、毒素産生量及び遺伝子発現量についてはWestern blot及びリアルタイムRT-PCRを用いて、また誘導されるDNA損傷性の変動についてはコメットアッセイを用いて評価を行っている。

さらに、より生体内に近い条件下で病原性細菌の生体内における毒性を評価するために、黄色ブドウ球菌を血清(FBS)中で培養し、各種化学物質が病原因子関連遺伝子の発現およびβ-hemolysin活性(溶血活性)に及ぼす影響について解析した。BHI培地中における黄色ブドウ球菌の病原因子の発現に及ぼす各種化学物質の影響を検討したところ、試験に供した全ての化学物質において、SEA遺伝子の発現量が増加する傾向が認められた。また、No. 26a株においては、アクリルアミドおよびN-dimethyl-nitrosoamineの暴露により、黄色ブドウ球菌のバイオフィルム形成量が有意に増加した。さらに、黄色ブドウ球菌と各種化学物質をFBS中で培養し、病原因子関連遺伝子の発現量を測定した。その結果、No. 26a株においては、アクリルアミドの暴露により、黄色ブドウ球菌の病原因子を調節するsmall RNAであるRNAIIIおよびバイオフィルム関連遺伝子のicaAの発現量が有意に増加し、ヘテロサイクリックアミンの一種であるPhIPまたはMeIQxの暴露により、SEA産生量が増加した。また、FBS中でbisphenol AおよびPhIPを暴露したNo. 26a株の一部のコロニーには、溶血活性が認められた。これらの結果より、培地条件下と生体内では、黄色ブドウ球菌の病原因子の発現調節機構が異なり、菌株の種類によっても化学物質への応答機構が異なることが示唆された。現在までに、黄色ブドウ球菌と化学物質を同時暴露することにより、SEA遺伝子、SEAタンパク質の発現およびバイオフィルム形成に及ぼす影響が得られており、おおむね順調に進展している。本研究では、これまで未解明であった化学物質および病原性細菌の複合曝露によるリスク評価の検討およびその評価系の構築に向けた知見を得ることを目指し、各種化学物質とSEAを同時に曝露することにより、それぞれの毒性発現にどのような影響を与えるか以下の内容について検討する。現在、各種化学物質が黄色ブドウ球菌の増殖に与える影響やブドウ球菌毒素(SEA)産生能に与える影響ついて検討している。平成30年度においては、各種化学物質とSEAの複合曝露による各種サイトカイン産生に及ぼす影響やDNA損傷性等の遺伝毒性の変動について検討を行う予定である。さらに、マウス等の実験動物に各化学物質を連続的に自由摂取させた後にSEAを投与し、各器官における毒性発現や腸内細菌叢における影響等についても検討する予定である。これらの実験を実施することで、これまでに報告されていない化学物質と病原性細菌との複合暴露によるリスク評価を実施することができ、国内外的にも新規の知見を報告できると確信している。本年度は、ICR系雄マウスにSEAおよび化学物質を同時投与し、腸内細菌叢の変動について、次世代シーケンサーを用いたメタゲノム解析を用いて評価する。さらに、化学物質が誘発する突然変異についてエームス試験で得られたコロニーを単離してDNAを抽出し、次世代シーケンサーを用いて全ゲノムシーケンスを行い、複合暴露により誘発する突然変異を直接的に検出する当該年度の直接経費における消耗品(一般試薬)の購入が若干少なかったことから、次年度に繰り越すことになった。
語学留学生の社会関係資本としての目標言語使用機会の獲得に関する研究

本研究ではいくつかの研究に分けられるが、その内の一つとして、数名の留学生/ESL話者を研究対象とし、それぞれが、どのようにして現地の英語母語話者と目標言語使用機会を獲得し、また、目標言語を介して現地の人々と交流を深めているのかを調べる為、長期的にインタビュー、参与観察を行なった。その結果、彼らは、自身の技能/知識が文化資産として認められる親和空間においてはactive social agentとして目標言語を介した社会的やりとりに積極的に参加できていることを明らかにすることができた。昨年度は、日本(明星大学)そしてアメリカ(カリフォルニア州、ロサンジェルス)で、本研究に関わる第一回目のデータ収集を行なった。日本でのデータ収集が困難を極め苦労したが、アメリカの受け入れ先の大学(California State University, Los Angeles)が全面的に協力してくれた為、合計114名の留学生または留学経験者からアンケートデータを収集することができ、また、その内10数名にはインタビューも実施することができた。年度末間際に全てのデータ収集を終えたため、詳細なデータ分析結果はまだ出ていないものの、多くの留学生にとって重要なのは、英語母語話者との社会的ネットワークだけでなく、彼らと同じ非英語母語話者(他の留学生を含む)とのネットワークであることが分かってきた。日本で留学経験者からデータ収集を始めた初期の段階からこのような傾向が見えてきた為、留学生・留学経験者からのデータ収集と並行して、非英語母語話者同士による英語のやりとりが頻繁におこなわれる本大学の英語教育プロジェクト、明星サマースクールプロジェクト(本プロジェクトでは、明星大学生と非英語圏の世界各国からやってきた国際ボランティアがチームを組んで、小・中学生に英語を教える.その為の準備として参加者たちは、ミーティング、教案/教材作り、リハーサル等をすべて英語で行なう。また、授業自体もほぼ英語で行なう。)でもデータ収集を開始した。ここでのデータの数はまだそれほど多くないものの、データ分析の結果、(1)他国出身の非英語母語話者は、英語学習者のNear Peer Role Model (Murphy & Arao, 2001)になりうること、(2)多くの英語学習者にとって、英語母語話者よりも非英語母語話者との方が安心して英語でコミュニケーションできること、(3)非英語母語話者同士の英語のやりとりは重要な英語学習機会であること、分かってきた。昨年度は、初年度に引き続き、アメリカ(カリフォルニア州、ロサンジェルス)でデータ収集を行なった。初年度同様、受け入れ先の大学(California State University, LosAngeles)が全面的に協力してくれた為、新たに128名の留学生からアンケートデータを収集し、その内16名にはインタビューも実施することができた(アンケートデータ合計:242;インタビューデータ合計:26)。また、昨年度は、ESLクラス内で留学生同士の英語会話を合計で10時間以上録音することにも成功した。初年度から見られた傾向であるが、昨年度も、多くの留学生から他の国からの留学生/非英語母語話者とのやりとりが、英語を話すことへの自信の強化、そして、自身の英語能力向上につながっていることを示すデータが多く得られた。昨年度からアメリカでのデータ収集と並行して始めた所属大学で実施している明星サマースクール(本プロジェクトでは、明星大学生と非英語圏の世界各国からやってきた国際ボランティアがチームを組んで、小・中学生に英語を教える。その為の準備として参加者たちは、ミーティング、教案/教材作り、リハーサル等をすべて英語で行なう。)でのデータ収集/分析の結果からも(1)他国出身の非英語母語話者は、英語学習者のNear Peer Role Model(Murphy & Arao, 2001)になりうること、(2)多くの英語学習者にとって、英語母語話者よりも非英語母語話者との方が安心して英語でコミュニケーションできること、(3)非英語母語話者同士の英語のやりとりは重要な英語学習機会であることが明らかとなり、また、非英語母語話者同士が互いにサポートし合いながら会話を進めていくプロセスも明らかにすることができた(サマースクールでのデータ収集/分析結果は、ELF4国際学会、JALT2012学会で発表し、また、JALT2012ではProceeding spaperも提出)。英語力の向上を目指し英語圏に留学する人々は依然として多いいが、留学しても目標言語使用機会が自動的に得られるわけではないことが過去の多くの研究で明らかにされている。そこで本研究では、留学生たちが、実際どのように目標言語使用機会を獲得することができているのかを調査した。本研究を開始して三年目となる24年度には、特別研究員としてハワイ大学で本研究を続ける機会を得た為、Dr. Kathy Davis指導の元、クリティカルエスノグラフィーを採用して本研究を続けた。この年度は、数名の留学生とESL話者として自分自身も研究対象とし、それぞれが、どのように現地の英語母語話者との目標言語使用機会を獲得し、また、目標言語を介して現地の人々と交流を深めているのかを調べた。

その結果、彼らは、自身の技能/知識が文化資産として認められる親和空間においては社会的主体として目標言語を介した社会的やりとりにも積極的に参加できることを明らかとなった。最終年度の25年度は、24年度に行なった研究を細分化し4度にわたって学会発表を行なった。その内、一つのポスター発表は、学会(SLAT2014、アメリカ)から第一位を授与された。また、論文については、研究対象者である一人の留学生に焦点を当てて論文を執筆し、ある学術ジャーナルに投稿した(審査中)。現在、アメリカで行なわれるもう一つの学会に発表プロポーザルを投稿しており、論文も、ESL話者としての自分自身に焦点を当て集めたデータを論文にまとめ始めた。今後は、本研究テーマでさらにもう一本の論文執筆を予定している。26年度4月からは、大学院博士過程(東京大学総合文化研究科言語情報科学専攻)に進学した為、本研究に関わるデータを国内外でさらに集め、関連する概念的・理論(の構築を目指して研究を継続していきたい。昨年度は、特別研究員としてハワイ大学に滞在し研究に専念することができた。本研究については、Dr. Kathryn Davisの元でCritical (auto)ethnographyについて学びながら、この新たな研究手法を用いてハワイの地でさらにデータ収集を行なった。数名の留学生、そして、EFL話者の一人として私自身を研究対象者とし、長期的にインタビュー、参与観察を行ない、ある程度データが収集された時点で、データ分析も同時並行で行なった。24年度に行なったこの研究では、留学生たちは、非英語母語話者だけでなく、地元の英語母語話者との社会的ネットワークをいかに拡大し、英語使用機会を獲得できているのかを調査した。本研究結果は現在まだ論文にまとめている段階であるが(特別研究員期間が終わる三月下旬にDr. Davisにfirst draftを提出)、留学生/英語学習者といっても、彼・彼女たちの社会的ネットワーク構築パターンは一様なものではなく、それぞれ、自身が持つ知識/スキル(例:韓国の伝統楽器のスキル、知識;日本語/日本文化に関する知識;Skimboardingスキル、など)がCultural capitalとして認められるSocial spaceを見つけ、その中でより主体的、積極的に英語を介したやりとりに参加していることが分かった。また、留学先であるハワイ内のどのSocial spaceに自身の身を置くかによって、また、一つのsocial space内においても、彼・彼女たちの英語会話参加における主体性/積極性、自信、性格はダイナミックに変化するものであることも明らかにすることができた。こうした結果は、科研費申請時には予定していなかった、Critical (auto)ethnographyという新たな研究手法でこの研究を行なった為に得ることができたものである。データ収集は、当初予定していたよりもはるかに多くの量のデータを収集することができている。
ヒト造血前駆細胞を標的とした新しい抗アレルギー療法の開発

1.健常人の骨髄中に存在するヒト好酸球前駆細胞(human eosinophil lineage-committed progenitor;hEoP)の純化同定に成功した.そのフェノタイプはLin^-CD34^+CD38^IL-5Rα^+-3Rα^+CD45RA^-であった.このhEoPが好酸球増加症の病態に深く関与することを明らかにするために,Hyperosinophilic syndrome(HES)の5例を含む15例の好酸球増加症例について解析を行った.15症例の末梢血好酸球数の平均値は13,800/μLで,健常人の176/μLに比べて約80倍に増加していた.骨髄CD34陽性造血前駆細胞分画中のhEoPの割合は,7例の正常骨髄で平均2.38%であったのに対し,好酸球増加症15例の平均値は7.44%と3倍以上の有意な増加を認めた(p<0.01).つまり,好酸球増加症においては前駆細胞レベルに原因がある可能性が考えられた.実際,HESの5例から分離したhEoPの遺伝子発現を健常人から分離したhEoPのそれと比較したところ,抗アポトーシス分子Bcl-Xの発現が有意に増加していることを定量的RT-PCR法で確認した.現在,両者間の遺伝子発現の差異について網羅的に検討するために,マイクロアレイを用いた解析の準備を進めている.今後,HES症例に対する治療標的分子を同定できればと期待している.2.hEoPにおける転写因子発現をqRT-PCR他のprogenitor集団と比較検討したところ,hEoPとマウスEoPの発現パターンはほぼ同様であった.つまり,顆粒球・単球分化に必須なPU.1,C/EBPαと巨核球・赤血数分化に不可欠なGATA-1,GATA-2の発現が同時に強く認められる一方,GATAのcofactorであるFOG-1の発現は認められなかった.3.ヒト好塩基球・肥満細胞前駆細胞の候補として,CD34陽性造血前駆細胞分画中のβ7インテグリン陽性CD123陽性CD203c陽性細胞を純化した.現在,その分化能についてin vitroでの検討を行うとともに,遺伝子発現解析を進めている.4.肥満細胞分化における転写調節に関して,GATA転写因子の重要性については私たちのダループを含めて多くの報告がある.今回,GATA転写因子のco-factorであるFriend of GATA-1(FOG-1)転写因子の役割について新たな知見を得た.赤芽球・巨核球分化には,GATA転写因子とFOG-1の協調作用が必須であるが,肥満細胞分化に関してはFOG-1が抑制的に働くことを明らかにした.1.健常人の骨髄中に存在するヒト好酸球前駆細胞(human eosinophil lineage-committed progenitor;hEoP)の純化同定に成功した.そのフェノタイプはLin^-CD34^+CD38^IL-5Rα^+-3Rα^+CD45RA^-であった.このhEoPが好酸球増加症の病態に深く関与することを明らかにするために,Hyperosinophilic syndrome(HES)の5例を含む15例の好酸球増加症例について解析を行った.15症例の末梢血好酸球数の平均値は13,800/μLで,健常人の176/μLに比べて約80倍に増加していた.骨髄CD34陽性造血前駆細胞分画中のhEoPの割合は,7例の正常骨髄で平均2.38%であったのに対し,好酸球増加症15例の平均値は7.44%と3倍以上の有意な増加を認めた(p<0.01).つまり,好酸球増加症においては前駆細胞レベルに原因がある可能性が考えられた.実際,HESの5例から分離したhEoPの遺伝子発現を健常人から分離したhEoPのそれと比較したところ,抗アポトーシス分子Bcl-Xの発現が有意に増加していることを定量的RT-PCR法で確認した.現在,両者間の遺伝子発現の差異について網羅的に検討するために,マイクロアレイを用いた解析の準備を進めている.今後,HES症例に対する治療標的分子を同定できればと期待している.2.hEoPにおける転写因子発現をqRT-PCR他のprogenitor集団と比較検討したところ,hEoPとマウスEoPの発現パターンはほぼ同様であった.つまり,顆粒球・単球分化に必須なPU.1,C/EBPαと巨核球・赤血数分化に不可欠なGATA-1,GATA-2の発現が同時に強く認められる一方,GATAのcofactorであるFOG-1の発現は認められなかった.3.ヒト好塩基球・肥満細胞前駆細胞の候補として,CD34陽性造血前駆細胞分画中のβ7インテグリン陽性CD123陽性CD203c陽性細胞を純化した.現在,その分化能についてin vitroでの検討を行うとともに,遺伝子発現解析を進めている.4.肥満細胞分化における転写調節に関して,GATA転写因子の重要性については私たちのダループを含めて多くの報告がある.今回,GATA転写因子のco-factorであるFriend of GATA-1(FOG-1)転写因子の役割について新たな知見を得た.赤芽球・巨核球分化には,GATA転写因子とFOG-1の協調作用が必須であるが,肥満細胞分化に関してはFOG-1が抑制的に働くことを明らかにした.

2、Hypereosinophilic syndrome (HES)の3症例を含む好酸球増多症11例の解析では,骨髄CD34湯性細胞分画に占めるhEoPの比率が健常人コントロールと比較して有意に増加しており(7.55% vs. 2.38%,p<0.01),生体内での好酸球造血に同分画が重要な役割を担っていることが示唆された.HES症例から単離したhEoPは,正常hEoPより.大きなサイズのコロニーを形成する傾向が認められ,抗apoptosis分子のひとつであるBcl-X_Lの発現が増強していた.つまり,Bcl-X_Lの高発現がHESにおける好酸球生存強化に寄与している可能性が示唆された.3、hEoPにおける転写因子・発現をqRT-PCRで他のprogenitor集団と比較検討したところ,hEoPとマウスEoPの発現パターンはほぼ同様であった.つまり,顆粒球・単球分化に必須なPU.1,C/EBPαと巨核球・赤血球分化に不可欠なGATA-1,GATA-2の発現が同時に強く認められる一方、GATAのcofactorであるFOG-1の発現は認められなかった.1.平成18年度研究では、健常人の骨髄中に存在するヒト好酸球前駆細胞(Lin^-CD34^+CD38^+IL-5Ra^+IL-3Ra^+CD45RA^-)の純化同定に成功した。このヒト好酸球前駆細胞が好酸球増加症の病態に深く関与することを明らかにするために、Hypereosinophilic syndrome(HES)の5例を含む15例の好酸球増加症例について、症例数を増やして解析を行った。15症例の末梢血好酸球の平均値は13800/μLで、健常人の176/μLに比べて約80倍に増加していた。骨髄CD34陽性造血前駆細胞分画中の好酸球前駆細胞の割合は、7例の正常骨髄で平均2.38%であってのに比べて、好酸球増加症15例の平均値は7.44%と3倍以上の有意な増加を認めた(p<0.01)。つまり、好酸球増加症においては前駆細胞レベルに原因がある可能性が考えられた。実際、HESの5例から分離した好酸球前駆細胞の遺伝子発現を健常人から分離してた好酸球前駆細胞のそれと対較したところ、抗アポートシス分子Bcl-X_Lの発現が有意に増加していることを定量的RT-PRC法で確認した。現在、両者間の遺伝子の発見の差異について網羅的に検討するために、マイクロアイレを用いた解析の準備を進めている。今後、HES症例に対する治療標的分子を同定できればと期待している。2.ヒト好塩基球・肥満細胞前駆細胞の候補として、CD34陽性造血前駆細胞分画中のβ7インテグリン陽性CD123陽性CD203c陽性細胞を純化した。現在、その分化能についてin vitroでの検討を行うとともに、遺伝子発現解析を進めている。3.肥満細胞分化における転写調節に関して、GATA転写因子の重要性については私たちのグループを含めて多くの報告がある。今回、GATA転写因子のco-factorであるFriend of GATA-1(FOG-1)転写因子の役割について新たな知見を得た。赤芽球・巨核球分化には、GATA転写因子とFOG-1の協調作用が必須であるが、肥満細胞分化に関してはFOG-1が抑制的に働くことを明らかにした。
細胞外酸性pHによる癌細胞の微小環境ストレス適応機構の解析

腫瘍組織の血管は未熟であるため、癌細胞は低栄養および低酸素からなる微小環境ストレス下で生存している。これまでに我々は、この癌細胞の生存に癌の特徴の1つである乳酸による細胞外pHの酸性化が重要な役割を果たしていることを明らかにしている。本研究では、酸性pHによって変化する分子を同定し、その機能を解析することにより、酸性pHによる癌細胞の微小環境下での生存機構の解明を試みる。本研究により癌細胞の生存に重要であることが同定された分子は癌治療薬の新たな標的になり得ると考えられる。
文化人類学における家族・親族領域を中心とするフィールド・データの処理と分析-調査ツールの開発とイメージ処理-

過去二年間の研究によって、あらためて家系図のグラフィカルな表示の困難性を認識することとなった。描点の集合であるから、写真や絵画をコンピュータ上で表示するのとは異なり、家系図の線分を描くことは困難である。また、親族空間は、経験的にはある一定の範囲で閉じている様に見えるが、実際には、恣意的に切らざるを得ない。しかし、どのあたりでその空間を限定するかは、まだこれから検討する必要がある。1000名規模の親族空間で関係が輻輳すると、どのような家系図として表示できるであろうか。現在、ア-ネムランド・アポリジニのコミュニティのデータを入力しており、それを元にして、試作版のグラフィック・ルーチンを作成中である。また、本研究では、家系図用のグラフィック・ルーチンをフィールドワーク用の統合的ツールのひとつとして位置づけたい。すなわち、フィールドノートや各種データベースと関連させて家系図用のグラフィック・ルーチンを稼働することを目的とする。本年度において検討した事項は以下の通りである。1)ディスプレイ上のグラフィックの精度についての検討。2)重ね書きされる線分に関する検討。3)家計図の描法に関する検討。4)親族データベース構造の再検討。5)テスト版のためのデータ入力。今年度はグラフィクスの専門家である濱崎修平氏(倉敷科学芸術大学)を研究協力者として報告をまとめたが、平成9年度は、氏を分担者としてアプリケーションの完成を目指す。
皮下細胞適宜採取のための極低侵襲ウェアラブルシステムの開発

表皮下の生細胞を適宜採取する極低侵襲な細胞採取デバイスを目指し、超音波照射により皮下組織を極小範囲で破砕し、極細径針を通して細胞を体外に採取するデバイスを作製した。超音波照射機構は、ランジュバン型振動子にホーンを取り付け、その先に細径の注射針を接続することで、針まで超音波を伝搬し、針先周囲の細胞に超音波を照射する構造とし、水中での超音波計測によって針先からの超音波照射を確認した。細胞吸引機構は、吸引経路の途中に細胞トラップを設けた吸引システムを用いることで、吸引した皮下細胞がすぐにトラップ内の細胞保存液に流れ込むため、ポンプへの組織の流れ込みを防止と、実験中の採取した細胞の保護を可能とした。皮下の生細胞を適宜採取する極低侵襲な細胞採取デバイスを目指し、超音波照射により皮下組織を極小範囲で破砕し、極細径針により吸引することにより細胞を体外に採取するデバイスの開発を行った。使用する超音波の周波数を30-40 kHzに決定し、凹面型の超音波素子により皮下の1点に超音波を照射する構造とホーンを用いて針に超音波を伝搬させる方法の超音波素子設計を行った。凹面型で超音波を収束させる方法では使用する超音波波長が長いため、皮下数ミリの位置に収束点を設定するのは不可能であることが設計で分かったため、ホーンを用いた方法に絞ることができた。超音波素子は複数回使用し、吸引に用いる針は使い捨てにする必要があるため、超音波ホーンと針とを脱着可能でかつ超音波伝搬効率が良い構造を検討中である。また、細胞採取動物実験の準備を行った。動物実験の際には吸引ポンプは市販のものを使用する予定であるが、複数回の実験で使用する必要があるため吸引した細胞がポンプ内に混入しない構造が必要である。ポンプに入荷した細胞が入り込むと吸引力が低下し十分な性能を得られない可能性がある。そこで、途中に細胞トラップを設けた吸引システムを提案した。本システムでは吸引ポンプと細胞採取用針とをつなぐ流路の途中にトラップを設け、吸引した皮下細胞は生理食塩水や細胞保存液にすぐに流れ込む。これにより吸引ポンプへの組織の流れ込みを防ぐだけでなく、実験中の採取した細胞の保護も可能となる。来年度は、設計した超音波照射デバイスの試作と評価および提案した吸引システムと組み合わせて実際に細胞採取実験を行い、生細胞が採取できるかどうかの検討を行う。計画では4種類のデバイスを作製してから最適なものを選択する予定であったが、設計の段階で超音波トランスデューサの構造を1種類に絞れたため、今後試作するデバイス数を最低限に抑えることができ、ほぼ計画通りに進んでいるといえる。使用する超音波の周波数を30-40 kHzに決定し、ランジュバン型振動子にホーンを取り付け、その先に細径の注射針を接続した構造とした。ランジュバン型振動子で発生させた超音波を、ホーンを通して注射針先端まで伝搬させるため、最適なホーン形状の設計を行った。超音波素子は複数回使用し、吸引に用いる針は使い捨てにする必要があるため、針を埋め込んだ冶具をホーンと同じ真鍮で作製し、超音波ホーンから脱着可能でかつ超音波伝搬効率が良い構造とした。針先を水に浸した状態でハイドロフォンにより針先からの超音波強度を計測したところ、超音波強度3.35W/cm2の超音波が発生していることを確認した。細胞採取の際により高い超音波強度が必要な場合には、ホーン構造の工夫が必要である。また、ブタの摘出皮膚に対し吸引実験を行った。実験の際には吸引ポンプに乳化した細胞が入り込むと吸引力が低下し十分な性能を得られない可能性があるため、吸引経路の途中に細胞トラップを設けた吸引システムを用いた。本システムでは、吸引した皮下細胞がトラップ内の生理食塩水や細胞保存液にすぐに流れ込むため、吸引ポンプへの組織の流れ込みを防ぐだけでなく、実験中の採取した細胞の保護も可能とした。初期実験として、超音波照射を行わずにブタ皮膚からの細胞採取を試みたが、超音波を照射しない場合は細胞の乳化は起こらないため細胞は採取されなかった。また、この実験の際に皮膚への針刺入について、皮膚を張るなどして刺入しないと十分に刺さらないことが分かった。今後は針の刺入の補助具等も検討が必要である。構造を決定した超音波振動を針に伝搬し、皮下に超音波振動を与えて皮下細胞を乳化し、吸引により皮下細胞を回収する装置の作製と評価を行う。

細胞の採取は、1本の流路から蒸留水あるいは生理食塩水を皮下に少量注入した状態で、皮下に超音波を照射し、注入した溶液と共に細胞を吸引する。(1)細胞採取機構の作製・評価:設計した圧電素子からホーンを介して細径針に伝搬させるデバイスを作製する。圧電素子は複数回使用するが、針部分は使い捨てにできるよう針のみ取り外し可能な構造とする。針の形状は、ステンレス製充実針(鍼灸針)表面に注入用と吸引用の2本の流路をポリイミドで作製した形状と、ステンレス製中空針(注射針)表面に注入用のポリイミド製流路1本のみを作製し、吸引はもともとある中空部分を用いる形状の2種類を検討する。(2)マウス皮膚からの細胞採取実験:マウス背部の剃毛した皮膚に作製したデバイスを設置し、細胞採取を行い、採取した細胞個数やマウス皮膚への影響を考慮し、最適な構造を決定する。また、皮膚へのダメージを最小限に抑え、十分な細胞量を回収できる超音波強度及び吸引力を決定する。採取した細胞の状態を評価し、生細胞が採取できているかどうかを確認する(3)吸引及び注入デバイスの開発:本デバイスを一体のシステムとするため、注入液吐出用のポンプと吸引用ポンプの小型化を図る。本ポンプは生体組織と接する可能性があるため、液が触れる部分は全て使い捨てにする必要がある。このため、採血管のような内部を真空にした吸引機構や相変化による体積変化を用いた押し出し機構のような機械的駆動部を持たない構造のポンプとする。マウスを用いた実験において決定した吸引力や注入圧を実現できる構造のデバイスを開発する。さらに、完成した注入・吸引デバイスを実際に細胞採取機構と組み合わせ、マウス皮下からの細胞採取実験を行い、本システムの有効性を確認する28年度が最終年度であるため、記入しない。医工学28年度が最終年度であるため、記入しない。