hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
糖鎖による視床下部-下垂体軸の新規調節機構の解明

成長ホルモンやプロラクチンなどの下垂体前葉ホルモンの分泌は、視床下部からの内分泌シグナルにより厳密に制御される。この視床下部による下垂体制御機構の解明は、下垂体前葉ホルモンの分泌異常により発症する難治性疾患の成因解明や治療法の開発へと繋がるため、医学薬学的に重要な課題である。本研究ではGalnt17変異体マウスなどの解析を通じて、Galnt17が中脳腹側から線条体に投射するドーパミン神経の機能維持に重要な役割を果たしていることを見出した。この視床下部による下垂体制御機構の解明は、下垂体前葉ホルモン分泌異常により発症する難治性疾患の成因解明や治療法の開発へと繋がるため、医学薬学的に重要な課題である。これまでに申請者は視床下部や海馬に発現する活性未知の糖転移酵素様遺伝子Galnt17の機能解析を通じて、Galnt17遺伝子欠損マウスが低成長ホルモン/高プロラクチン血症を呈することを見出してきた。そこで、本研究ではGalnt17の機能解析を通じて新たな視床下部-下垂体軸の制御機構の解明を目的としている。本年度はGalnt17によるエネルギー代謝能への影響を評価するため、Galnt17遺伝子欠損マウスと全身でGalnt17を過剰に発現するGalnt17過剰発現マウスに対し、脂肪組織や肝臓、筋組織の組織重量測定や骨長測定などの身体測定、血糖値や血中ホルモンの測定などの生化学検査、摂食ケージを用いた概日リズムと摂食量の測定を行った。その結果、Galnt17遺伝子欠損マウスでは同腹の野生型マウスと比較して、血中プロラクチン濃度の上昇や血中のIGF-1の低下を伴う成長の遅延が確認されたのに対し、Galnt17過剰発現マウスでは、同腹の野生型マウスと比較して、いずれの検査項目についても大きな差は認められなかった。また、繁殖能についても上記のマウスを用いて解析を行ったところ、Galnt17雌マウスでは、出産後1週までに仔マウスの育児放棄などの異常がみられたのに対し、Galnt17過剰発現マウスでは野生型マウスと同等の生殖能を有していた。これらの結果は、Galnt17による視床下部-下垂体軸の調節機能は正常な下垂体機能に必須であるものの、補助的な役割を果たしている可能性が示唆された。研究計画作成当初は、平成27年度にはGalnt17KO, Tgマウスの基礎的解析と下垂体ホルモンの網羅的な解析をする予定であったが、マウス飼育施設の移行に伴い、解析サンプル数の不足が生じ、下垂体ホルモンの網羅的な解析について十分に進捗することができていない。申請者は、これまでに活性未知の糖転移酵素様遺伝子Galnt17の遺伝子欠損マウスを作製し、それらが低成長ホルモン/高プロラクチン血症を発症することを見出した。Galnt17は下垂体前葉の調節部位である視床下部弓状核に強く発現することから、Galnt17が視床下部による下垂体の制御機構に関与する可能性が期待された。そこで本研究ではGalnt17変異体マウスなどの解析を通じて、Galnt17を介した新たな視床下部-下垂体軸の制御機構を解明することを目的としている。前年度までに、Galnt17遺伝子欠損マウスの解析を通じて、Galnt17が視床下部弓状核からのドーパミンシグナルの低下に起因していることを明らかにしていたが、本年度は、Galnt17遺伝子欠損マウスでは視床下部や線条体におけるドーパミン含量が減少していることを確認し、Galnt17が視床下部のみならず、中脳腹側から線条体に投射するドーパミン神経の機能維持に重要な役割を果たしていることを見出した。さらに、Galnt17によるドーパミン神経調節機構を解析するため、視床下部におけるGalnt17発現細胞の同定を行ったところ、視床下部腹内側核の神経細胞や第三脳室のβ1伸長上衣細胞に発現していることを明らかにした。これらの結果から、Galnt17が視床下部において脳脊髄液中のIGF-1の取り込みなどに関与している可能性が示唆された。本年度は、研究開始当初の予定通り、Galnt17遺伝子欠損マウスの視床下部ドーパミン神経系に関する解析を進行することができた。

そこで本研究ではGalnt17変異体マウスなどの解析を通じて、Galnt17を介した新たな視床下部-下垂体軸の制御機構を解明することを目的としている。前年度までに、Galnt17遺伝子欠損マウスの解析を通じて、Galnt17が視床下部弓状核からのドーパミンシグナルの低下に起因していることを明らかにしていたが、本年度は、Galnt17遺伝子欠損マウスでは視床下部や線条体におけるドーパミン含量が減少していることを確認し、Galnt17が視床下部のみならず、中脳腹側から線条体に投射するドーパミン神経の機能維持に重要な役割を果たしていることを見出した。さらに、Galnt17によるドーパミン神経調節機構を解析するため、視床下部におけるGalnt17発現細胞の同定を行ったところ、視床下部腹内側核の神経細胞や第三脳室のβ1伸長上衣細胞に発現していることを明らかにした。これらの結果から、Galnt17が視床下部において脳脊髄液中のIGF-1の取り込みなどに関与している可能性が示唆された。成長ホルモンやプロラクチンなどの下垂体前葉ホルモンの分泌は、視床下部からの内分泌シグナルにより厳密に制御される。この視床下部による下垂体制御機構の解明は、下垂体前葉ホルモンの分泌異常により発症する難治性疾患の成因解明や治療法の開発へと繋がるため、医学薬学的に重要な課題である。本研究ではGalnt17変異体マウスなどの解析を通じて、Galnt17が中脳腹側から線条体に投射するドーパミン神経の機能維持に重要な役割を果たしていることを見出した。平成27に未達成である下垂体ホルモンの網羅的な解析を行い、Galnt17により調節される下垂体ホルモンの同定を行う。引き続き、Galnt17KOマウスを用いて、ドーパミンシグナルを中心にGalnt17による視床下部-下垂体軸の調節機構の解明に取り組む。本年度の研究により、Galnt17が視床下部や中脳でのドーパミン作動性神経の分化や維持に関与している可能性が示唆された。今後は、この可能性を詳細に検証するため、ドーパミン作動性神経の発生過程を経時的に解析することで、Galnt17の作用について分子レベルで明らかにする方策である。分子生物学Galnt17Tgマウスの解析にあたり、染色体上のトランスジーン挿入位置の同定をする作業に、当初の計画よりも多くの時間が必要であったこと、また、マウス飼育施設の移行に伴い、解析サンプル数の不足が生じたことから、下垂体ホルモンの網羅的な解析について十分に進捗することが出来なかったため。マウス解析に際し、解析サンプル数の減少が生じたことから、消耗品費の減少に繋がった。本年度の研究計画のうち、計画通りに進捗できなかったGalnt17KO, Tg量遺伝しか異変マウスの下垂体ホルモン分泌量の網羅的な解析に使用する予定である。本年度に生じた、マウスの解析サンプル数の不足数を補うことを目的に使用する予定である。
色彩を含めた街路景観の定量的把握手法の開発に関する研究

本研究は、色彩を含めた街路景観の定量化を図る手法を開発し、その有効性を検証することを目的としている。H19年度は前年度の成果を受けて、街路シークエンス景観のカラー画像の定量化とゆらぎ値の算出、モノクロ画像とカラー画像のゆらぎ値の差異の検証、街路シーン景観と街路シークエンス景観のゆらぎ値の差異の検証を行った。本年度の研究成果は以下の通りである。(1)2コマ/毎秒の画像を取り込み、前年度開発した方法と同様にしてゆらぎ値の算出が可能であることを検証した。しかし、シークエンス景観のゆらぎ値を求める揚合、各コマのゆらぎ値の平均とする場合と各コマのゆらぎ値のゆらぎ値とする場合では数値が大きく異なることも明らかとなった。どちらが適切か明らかにすることが今後の課題である。(2)モノクロ画像とカラー画像のゆらぎ値を比較したところ、全体的にカラー画像のゆらぎ値の方が-1に近いこと、各画像のゆらぎ値の差が大きいこと、が明らかになった。モノクロ画像にすることで、カラー画像に比べて情報の制約と均質化が生じているといえる。したがって、ゆらぎを求める際には、カラー画像を用いることが望ましいことが明なになった。(3)街路シーン景観と街路シークエンス景観のゆらぎ値の差を求めたところ、全体的にシークエンス景観のゆらぎ値の方が低い値となった。上記(1)に述べた通り、シークエンス景観のゆらぎ値算出に課題が残されているが、シーン景観の場合、無意識のうちに1/fゆらぎに近い場所を選択して撮影していることも考えられる。(4)本研究で開発した手法を応用して、市民、観光客から親しまれている中津川の景観のゆらぎ値を求めたとところ、1/fと呼ばれる-1に近いことが明らかになった。つまり、好ましいとされる景観とゆらぎには関係性があることが伺えると共に、本研究で開発した手法が有用であるといえる。これまでの街路景観の研究では、写真やCGなどの画像を用いてSD法などの心理評価実験を行い、その景観の持つ雰囲気を言葉で表現していた。しかし、近年において、街路景観の空間的特性を定量的に把握し、数値で表現しようという研究が増えてきており、その中でも「ゆらぎ」の考え方が注目されている。本研究では街路景観を取り上げ、色彩を含めた街路景観の定量化を図る方法を開発し、その有効性を検証することを目的としている。本年度は、視点移動を伴わない街路のシーン景観カラー画像を数値化し、ゆらぎ値を用いて定量的に把握する方法を開発するとともに、SD法による心理評価実験を行い、カラー画像のゆらぎ値と心理評価との関係性を明らかにした。(1)幅員の違いによるゆらぎ値の差は見られなかったが、街路樹の樹種の違いによりゆらぎ値に差が見られた。(2)心理評価では幅員の違い、樹種の違いにより評価に影響が見られた。(3)幅員が異なる場合、ゆらぎ値と活発性、緑樹性との間にやや強い相関が見られ、幅員の差がゆらぎ値と各因子との関連性に影響を与えている。(4)ゆらぎ値と緑量との関連性について、緑量が多くなるほど「1/fゆらぎ」に近づく傾向にある。(5)ゆらぎ値が-1に近づくほど、因子得点も高まる傾向にあり、定量評価と心理評価との関連性が見られる。今年度は、ゆらぎ値と緑量に関連が見られることを明らかにすることができたが、心理評価では緑量と評価との関連が見られなかった。「1/fゆらぎは心地よいと感じる」とされているが、今年度の成果では十分に実証されたとは言い難い。また、今後の課題として、季節による差異、カラー画像によるゆらぎ値とモノクロ画像によるゆらぎ値の差異の検証が必要である。

上記(1)に述べた通り、シークエンス景観のゆらぎ値算出に課題が残されているが、シーン景観の場合、無意識のうちに1/fゆらぎに近い場所を選択して撮影していることも考えられる。(4)本研究で開発した手法を応用して、市民、観光客から親しまれている中津川の景観のゆらぎ値を求めたとところ、1/fと呼ばれる-1に近いことが明らかになった。つまり、好ましいとされる景観とゆらぎには関係性があることが伺えると共に、本研究で開発した手法が有用であるといえる。
新規アダプタータンパク質PI3KAPが甲状腺ホルモン産生調節に果たす新しい役割

甲状腺ホルモンは、動物の正常な発達・成長・成熟や基礎代謝の維持に必須なホルモンで、甲状腺刺激ホルモン(TSH)とインスリン様成長因子(IGF)が、甲状腺機能の制御、ひいては甲状腺ホルモンの血中濃度の調節に重要な役割を果たしていることが知られている。最近申請者らは、TSHとIGFによる甲状腺細胞の相乗的増殖誘導を司る新規クロストーク制御タンパク質としてPI3KAPを同定した。PI3KAPをノックアウトしたマウスの解析から、PI3KAPが甲状腺ホルモン産生を調節する可能性が明らかとなった。本研究では、PI3KAPによる甲状腺ホルモン産生の新しい調節機構を解明することを目的としている。甲状腺ホルモン産生に必須なステップのひとつとして、ホルモン前駆体であるサイログロブリンが甲状腺濾胞細胞に再吸収(エンドサイトーシス)されるステップを挙げることができる。ノックアウトマウスを用いた解析などにより、PI3KAPがこのステップに関与することが示唆されたことから、PI3KAPのエンドサイトーシス経路における役割と、その分子機構の解析を進めている。昨年度、PI3KAPに結合するタンパク質のスクリーニングを行い、モータータンパク質や細胞骨格タンパク質などが結合タンパク質の候補として同定された。そこで本年度、TSH処理を行った甲状腺細胞株FRTL-5細胞において、PI3KAPとこれらの結合タンパク質との相互作用を確認した。さらに、サイログロブリンエンドサイトーシスにおけるPI3KAPの役割を明らかにし、その分子機構を解明するため、PI3KAPをノックダウンした甲状腺細胞FRTL-5において、蛍光標識サイログロブリンの取り込み量を測定した。その結果、TSH処理で増加するサイログロブリン取り込みが、PI3KAPノックダウンにより減少することが明らかになった。最近申請者らは、TSHとIGFによる甲状腺細胞の相乗的増殖誘導を司る新規クロストーク制御タンパク質としてPI3KAPを同定したが、PI3KAPをノックアウトしたマウスの解析から、PI3KAPが甲状腺ホルモン産生を調節している可能性が明らかとなった。そこで本研究では、PI3KAPによる甲状腺ホルモン産生の新しい調節機構を解明することを目的としている。PI3KAPを甲状腺培養細胞株において機能阻害(ノックダウン)し、蛍光色素の取り込み量を指標にエンドサイトーシス経路の活性化を調べたところ、エンドサイトーシス経路の阻害が観察された。またPI3KAPが細胞骨格(アクチン骨格)と結合するアミノ酸配列を特定し、この領域がエンドサイトーシス経路の活性化に必要であることもわかった。さらに、甲状腺細胞においてサイログロブリンの取り込み量を測定できる実験系を確立した。今後、ノックアウトマウス由来の甲状腺初代培養細胞を用いた解析や、PI3KAP結合タンパク質の同定などを行い、分子機構をさらに詳細に明らかにする予定である。最終的には遺伝子改変マウスなどを用いてこの機構が甲状腺ホルモン産生に重要であることを示すことを目標としている。本研究は、PI3KAPを介したエンドサイトーシス経路の活性調節に着目し、甲状腺ホルモン産生の新しい調節機構を解明することを目的としている。甲状腺培養細胞株においてPI3KAPをノックダウンし、蛍光色素(FITCデキストラン)の取り込み量が低下したことは、PI3KAPがエンドサイトーシス経路の活性化に必須であることを示している。また遺伝子導入が容易な293細胞にPI3KAPを過剰発現するとFITCデキストラン取り込みが増加する一方で、アクチン骨格への結合配列を欠くPI3KAPではこのような効果が見られないことから、この現象の分子機構にはアクチン骨格との結合が重要であることを示した。さらに、甲状腺培養細胞株においてFITC標識したサイログロブリンを利用して、TSHに応答したサイログロブリンの取り込みの増加を観察できる実験系を確立した。このようにPI3KAPのエンドサイトーシス経路における重要性とその分子機構の一端を示すことができたと同時に、新しい甲状腺ホルモン産生機構を解明するための実験系も整いつつある。しかし、質の良い甲状腺初代培養細胞をノックアウトマウスから作製する作業が難航し、PI3KAPによるエンドサイトーシス制御と甲状腺ホルモン産生の関連について十分な証拠が得られていないという課題も残されている状況である。

ノックアウトマウスを用いた解析などにより、PI3KAPがこのステップに関与することが示唆されたことから、PI3KAPのエンドサイトーシス経路における役割と、その分子機構の解析を進めている。まず、PI3KAPを強制発現のエンドサイトーシスへの影響やエンドサイトーシス調節の分子機構解析に用いるため、FLAGタグを付加した甲状腺培養細胞株(FRTL-5細胞)の樹立を試みた。FLAG-PI3KAPを細胞に遺伝子導入した後、薬剤耐性によりクローンを選抜した結果、内在性PI3KAPと同レベルのFLAG-PI3KAPを発現する細胞株が得られた。現在、この細胞株を使って、エンドサイトーシスへの影響を解析している。また、エンドサイトーシスの分子機構解析のため、樹立したFLAG-PI3KAP発現細胞を用いてPI3KAP結合タンパク質を探索したところ、モータータンパク質や細胞骨格タンパク質などいくつかの候補タンパク質が得られた。FLAG-タグを付加したPI3KAPの過剰発現細胞株は取得でき、現在これを用いた解析を進めている。PI3KAPノックアウトマウスの甲状腺から採取した初代培養甲状腺細胞を用いた解析が遅れており、安定した結果を出せるよう種々の条件検討を進めて行く。甲状腺ホルモンは、動物の正常な発達・成長・成熟や基礎代謝の維持に必須なホルモンで、甲状腺刺激ホルモン(TSH)とインスリン様成長因子(IGF)が、甲状腺機能の制御、ひいては甲状腺ホルモンの血中濃度の調節に重要な役割を果たしていることが知られている。最近申請者らは、TSHとIGFによる甲状腺細胞の相乗的増殖誘導を司る新規クロストーク制御タンパク質としてPI3KAPを同定した。PI3KAPをノックアウトしたマウスの解析から、PI3KAPが甲状腺ホルモン産生を調節する可能性が明らかとなった。本研究では、PI3KAPによる甲状腺ホルモン産生の新しい調節機構を解明することを目的としている。甲状腺ホルモン産生に必須なステップのひとつとして、ホルモン前駆体であるサイログロブリンが甲状腺濾胞細胞に再吸収(エンドサイトーシス)されるステップを挙げることができる。昨年度、PI3KAPに結合するタンパク質のスクリーニングを行い、モータータンパク質や細胞骨格タンパク質などが結合タンパク質の候補として同定された。そこで本年度、TSH処理を行った甲状腺細胞株FRTL-5細胞において、PI3KAPとこれらの結合タンパク質との相互作用を確認した。
白血病キメラ転写因子による白血病発症機構の遺伝子発現プロファイリングによる解析

t(8;21)転座急性骨髄性白血病のAML1-MTG8キメラ転写因子は、G-CSFにより誘導される骨髄系細胞の好中球分化を阻害し、G-CSFに依存した増殖を誘導する。本研究では、DNAチップを用いた遺伝子発現プロファイリングにより、このG-CSFシグナル伝達系の異常の解明を試みた。まず、AML1-MTG8を発現させた細胞とコントロール細胞の比較から、AML1-MTG8がG-CSF receptorとMAP kinaseに対するphosphataseであるPAC-1の発現を上昇させることを見出した。また、DNAチップを用いてAML1-MTG8を発現させた細胞及びコントロール細胞においてG-CSF刺激に対して誘導される初期応答遺伝子を同定、比較し、AML1-MTG8により初期応答遺伝子の誘導が全体的に増強されるが、その増強の度合いは遺伝子間で異なることが明らかとなった。そこで、G-CSFの主要なシグナル伝達分子であるSTAT3、MEK1/2、ERK1/2のG-CSF刺激後のリン酸化レベルをリン酸化タンパク質特異的抗体を用いて調べた。その結果、コントロール細胞、AML1-MTG8発現細胞、G-CSF receptor強発現細胞の順にリン酸化は上昇するが、G-CSF receptor強発現細胞にAML1-MTG8を共発現させるとSTAT3、MEK1/2のリン酸化は変化せず、ERK1/2のリン酸化は顕著に低下することが明らかとなった。AML1-MTG8はG-CSF receptorの発現を上昇させることによりG-CSFシグナル全体を増強させるとともに、PAC-1の発現を上昇させERK1/2を脱リン酸化することによりERK1/2以降のシグナルを低下させているものと考えられた。
19世紀中国における翻訳語の研究

3年間の研究期間中に7件の学会発表、8本の論文および単著1冊を公刊することができた。うち学会発表7件全てが国際的な集まりにおける発表であり、4回は海外における成果発信であった。論文は査読誌に2本掲載された。また中国語論文により成果を海外に発信できた。単著は今回の研究成果をも反映させたものであり北京外国語大学の朱京偉氏による書評(『東方』2010年5月)が掲載されるなど反響を得た。今年度は以下のような成果を挙げた。1.意訳語に関しては第一に「聯邦」の語誌を記述した!「聯邦]は来華宣教師の創造にかかる意訳語である。この語が日本における状況とは異なり、中国においてはその政治的状況をふまえて「民主」「共和」といった翻訳語と緊密な連携を結ぶようになった様相を解明した。第二に宗教用語として「奇跡」の語誌を記述した。この語はキリスト教の基本用語の一つであり、現代生活でも常用される語であるにもかかわらずその出自は明らかになっていない。中国では「聖蹟]「靈跡]が20世紀初まで用いられていたが、1890年代に日本で定着した「奇跡」が導入されて1930年代には中国においても定着することとなった。この研究では20世紀前半における日中間の語彙交流の様相を解明し、「聖」「靈」から「奇]への変更という形態素の切り替えによるmiracle理解の日中における差異についても指摘した!2.音訳語に関してはナポレオンおよびワシントンの語形の変遷を記述し、現在の語形が定着した要因を解明した。「華盛頓」「拿破侖」という音訳語が定着した背景として、各方言における読音差の相対的な小ささが語形の定着につながったことと、彼らの伝記から見られるイメージが漢字の選択に影響した可能性を指摘した。3.上記1.2.に関しては上海および北京で開催された国際シンポジウムに参加しその研究成果を海外に発信した。詳細は雑誌論文と学会発表を参照。本年度は第一に意訳語「奇跡」をめぐる語誌を記述し発表した。キリスト教用語の研究は前年度からスタートさせているが、それを論文として一つの形にまとめたことになる。キリスト教用語の一部は現代の日常生活でも使用頻度の高い語でありながらその来歴が検証されていなかったため、本論文ではその基礎作業を行った。また、これまでの科研費等による研究成果を踏まえ単著『中国語における東西言語文化交流-近代翻訳語の創造と伝播』(東京:三省堂,2010年2月20日)を出版した。中国語学の側から翻訳語をとりあげて研究した数少ない単著である。アジアの近代は翻訳語と共に幕を開けたが、本書は従来主流であった意訳語研究だけではなく音訳語をも研究の射程に収めることにより、近代中国翻訳語の創造・伝播の諸相を浮かび上がらせようとしたものである。翻訳語研究の基礎となる来華宣教師たちの活動についても研究成果を発表した。一つは後世の翻訳語に絶大な影響を与えた『英華字典』(1866-1869)を著したロプシャイトに代表されるドイツ人宣教師についての研究であり、ボン大学におけるシンポジウムで発表した。また18世紀のフランス人来華宣教師プレマールについてもその著書である中国語文法書Notitia Linguae Sinicae (1720)をめぐる研究を関西大学におけるシンポジウムで発表した。これらを基礎とした投稿論文が印刷中(2009年3月現在)である。本年度の成果は三点にまとめられる。第一に19世紀中国語における音訳語全般の状況に関してそれを掲載したメディアとの関連を探る論文「19世紀音訳語の資料・特徴・交流-中国語の文体変容の前段階-」を発表した。ここでは19世紀中国における翻訳語の主要な特徴がメディアという基準である程度描き出せることを示した。第二に19世紀の中国人カトリック信徒郭連城によって表された洋行記『西遊筆略』について「欧行記・文化交流・翻訳語-郭連城『西遊筆略』(1863)初探-」を発表し、『西遊筆略』にみえる翻訳語を中心に分析した。洋行記にみえる翻訳語について従来の研究が『走向世界叢書』所収のものを主たる対象としていたのに対し、ここではそれ以外の文献に目を向け、通時的な語誌記述のための基礎を築いた。また中国人による意訳語創造パターンについても基礎的な検討を加えている。第三に、翻訳語研究の基礎となる来華宣教師たちの活動についても研究成果を発表した。以前に引き続き18世紀のフランス人来華宣教師プレマールについてその著書である中国語文法書Notitia Linguae Sinicae(1720)のラテン語原典からの翻訳を連載した。このまたその翻訳を基礎として、プレマールによる中国語に対する観察につきローマ大学における「"欧洲人的漢語研究歴史"国際研討会曁世界観語教育史研究学会第三届年会」で発表した。
幕末明治思想史における頼山陽の位置　－政治理論書『通議』を中心に

本課題のまとめとして、2017年度日本政治学会大会〈法政大学〉にて、分科会「実務官僚・統治者における政治思想史」を企画し、「漢学的政治学の実践実務官僚川路聖謨の思想」を発表した(発表者:木村俊道・濱野靖一郎・大久保健晴。司会:松本礼二。討論者:渡辺浩)。本企画は、従来思想家と呼ばれる人々の著作が研究の対象とされているなかで、実際に統治に預かった人々はいかなる思想を持っていたか、をテーマに開催した。とりわけ川路は、朱子学や兵学への深い造詣を持ち、荻生徂徠・新井白石のみならず頼山陽の著作からかなりの影響を受けていた。まさに、山陽の思想が幕末にいかなる影響を与えたか、という本課題にとって最も重要といえる人物である。これまでは外交官としての川路に注目が当たっていたが、奈良奉行をしていたときの日記である『寧府紀事』を主に取り上げ、裁判や学問所の運営といった内政面からその統治思想を検討した。本発表は改定を加え、日本政治学会に投稿し、日本政治学会『年報政治学』2018年I号への掲載が決定した。改定した箇所は、川路を引き立てた幕臣・羽倉簡堂をとりあげたことである。彼も幕末から明治にかけて多くの人物を引き立て、その後の学問・政治に多くの影響を与えた人物で、その思想は頼山陽からかなりの影響をうけていたことを論じた。これにより幕末の幕臣(とりわけ高級官僚)に於いて山陽の思想が受け入れられていたこと、また、それゆえに西洋の学問受容に中国朝鮮とは異なる姿勢を持っていたことを論証した。その他に『日本思想史学』49号に論文「宰相の職掌ー『周礼』に於ける王安石と太宰春台ー」を、アジア遊学『関ヶ原はいかに語られたか:いくさをめぐる記憶と言説』に論文「徳川家康ー天下太平への「放伐」」を掲載した。どちらも漢学の政治思想をめぐる論稿である。29年度が最終年度であるため、記入しない。平成27年度は論文の脱稿4本と学会・シンポジウムの発表3回が成果である。論文の多くは26年度に学会およびシンポジウムで発表したものを下敷きとしているが、本課題の一部として構想されたもので、内容は一貫したものである。内容は大きく分けて2種類となる。1つは、頼山陽の『日本外史』執筆の意図に関するものである。拙著『頼山陽の思想』でそれは既に論じていたが、それをより確たるものとすべく、拙著でも触れなかった資料を含めて論じた。それにより、本課題の前提条件である山陽自身の思想の把握が適切であることを改めて論証できた。2つめはまさしく、山陽の著作がどのように読まれたか、という、本課題そのものである。拙著では触れなかった幕臣による山陽の理解として、渋沢栄一をとりあげ、それが明らかに誤解した読解でありつつも、山陽から強い影響を受けたかを論証できた。発表については、渋沢論と、山陽の漢詩について、そして、水戸学についての発表となった。すべて依頼による発表であり、そのままその発表が本課題に適用できるわけではないが、関連する内容である。27年度は日本外史の草稿を検討するなど、山陽自身の研究はかなり進んだ。ただし、本課題はそれを前提として、山陽の著書がどのように読まれたか、即ち読者についての研究であり、それに関する成果は渋沢論1本であるため、差し引きで考えれば、予想を上回るほどの進捗とはいえない。山陽の著書の出版に関しては、先行研究を検討した結果、新たな資料等は見つからず、この方面での大きな成果は難しい可能性が出てきた。課題申請時に期待していた資料からも、期待ほどの成果は出ていない。ただし、まだ期待している資料群があり、それを点検していないので、それ次第で方向性の変更を検討していく。資料自体は本年度確認できる見通しである。本年度は書評論文を1本、投稿論文を1本書き、シンポジウム発表が1つ、学会例会発表が1つ、また、来年度の日本政治学会の分科会の企画申請をし、採択された。昨年度入稿した原稿4本が公刊された。その内、山陽自身を論じたものが「『日本外史』の執筆意図とその誤読」、「天下太平の構築・頼山陽の徳川家康観」と「徳川時代に於ける漢学者達の朝鮮観ー朝鮮出兵を軸に」の3本で、山陽の受容は、「「悲憤慷慨」の人、渋沢栄一ー「頼山陽」と武士のエートスー」である。本年度の研究では、受入研究者である小島康敬先生からの要請で、高山大毅『近世日本の「礼楽」と「修辞」荻生徂徠以後の「接人」の制度設計』(東京大学出版会、2016)の書評会を開催し、評者を務めた。同書は本年度のサントリー学芸賞も受賞した作品で、本書評は国際基督教大学アジア文化研究所紀要『アジア文化研究』43号(2017年3月)に「新たなる「典型」の誕生」と題して掲載された。また、2017年1月21日に二松学舎大学で開かれた、二松學舍大学創立140周年記念事業、二松學舍大学私立大学戦略的研究基盤形成支援事業主催シンポジウム「「論語」と「算盤」が出会う東アジアの近代渋沢栄一と三島中洲」で発表した。

人が本来の属性ではないものに憧れ、変わろうとする心性について論じ、山陽の著書が主には村人であった幕末の志士に「武士のエートス」を与えた状況について整理した。また、2017年3月11日に日本経済思想史学会例会(慶應義塾大学)で、「『周礼』における理財と統治王安石と太宰春台」と題して発表した。博論で述べた山陽と春台の財政論を再検討した結果、その前提に王安石の財政思想を検討る必要があったため、再構成したものである。本発表は改訂を加えて日本思想史学会に投稿した。本年度は昨年度入稿した論文4本を刊行したとはいえ、それは本課題採択前に既に発表していたものばかりである。また、山陽の学問が影響を受けた存在であるため、太宰春台に関する発表・投稿及び、徂徠学を研究した著書への書評と、基本的には依頼された仕事に応じることが多かった。それは本課題の可能性を豊かにしてくれるものであり、決して問題のあるものではない(近世後期漢学思想史であることは同じなのだから)。それ故、めざましい進展とするには問題はあるものの、当初の計画はより具体性を帯びていった。また、本課題の対象をかなり多くの人物にしていたが、資料を入手していくうちに、川路聖謨に絞ることでより明確な成果を上げられることに気がついた。次年度、ここで気がついたことをもとに修正していく。本課題のまとめとして、2017年度日本政治学会大会〈法政大学〉にて、分科会「実務官僚・統治者における政治思想史」を企画し、「漢学的政治学の実践実務官僚川路聖謨の思想」を発表した(発表者:木村俊道・濱野靖一郎・大久保健晴。司会:松本礼二。討論者:渡辺浩)。本企画は、従来思想家と呼ばれる人々の著作が研究の対象とされているなかで、実際に統治に預かった人々はいかなる思想を持っていたか、をテーマに開催した。とりわけ川路は、朱子学や兵学への深い造詣を持ち、荻生徂徠・新井白石のみならず頼山陽の著作からかなりの影響を受けていた。まさに、山陽の思想が幕末にいかなる影響を与えたか、という本課題にとって最も重要といえる人物である。これまでは外交官としての川路に注目が当たっていたが、奈良奉行をしていたときの日記である『寧府紀事』を主に取り上げ、裁判や学問所の運営といった内政面からその統治思想を検討した。本発表は改定を加え、日本政治学会に投稿し、日本政治学会『年報政治学』2018年I号への掲載が決定した。改定した箇所は、川路を引き立てた幕臣・羽倉簡堂をとりあげたことである。彼も幕末から明治にかけて多くの人物を引き立て、その後の学問・政治に多くの影響を与えた人物で、その思想は頼山陽からかなりの影響をうけていたことを論じた。これにより幕末の幕臣(とりわけ高級官僚)に於いて山陽の思想が受け入れられていたこと、また、それゆえに西洋の学問受容に中国朝鮮とは異なる姿勢を持っていたことを論証した。その他に『日本思想史学』49号に論文「宰相の職掌ー『周礼』に於ける王安石と太宰春台ー」を、アジア遊学『関ヶ原はいかに語られたか:いくさをめぐる記憶と言説』に論文「徳川家康ー天下太平への「放伐」」を掲載した。どちらも漢学の政治思想をめぐる論稿である。本年度は川路聖謨を中心に、有力な「読者」を確認していく。とりわけ、山内容堂や鍋島閑叟といった有力大名に山陽の愛読者がいたことは知られている。こうした政治に参画していた人物にどれだけ影響を与えていたのか。堀田正睦や阿部正弘を軸に、近世政治外交思想史を山陽を中心とした漢学の影響を検討していく。本課題の集大成として、日本政治学会(法政大学)での学会発表を予定している。
気候変動に伴う森林の影響評価に向けた樹木通水機能の干ばつからの回復機構の解明

本研究は,気候変動に伴う森林の影響評価に向けて,環境ストレス等により生育不適環境下での樹木の水分通導機能の損失とその回復機構を明らかにすることを目的とした.既往研究では樹木の水分通導機能の評価は樹体より切り出した枝や幹試料を用いて行われてきたが,破壊的な測定であるため,同一個体で継続的に水分通導機能の挙動を追跡することが困難であった.本研究では,乾燥ストレス下での樹木の通水阻害域の変化をMRIを用いて非破壊的にモニタリングした.調査にはシラカンバおよびカツラのポット苗を用い,苗への潅水を絶つことで個体に乾燥ストレスを与えた後,再度潅水を行い乾燥ストレスを解消した.定期的に樹幹木部内の通水阻害域および葉の水ポテンシャル(Ψleaf)を調査した.また,柔細胞のデンプンや糖が,木部通水阻害の解消に関与しているとの仮説を検証するため,乾燥再潅水処理を経た個体で樹幹内のデンプンと可溶性糖を定量化し,湿潤時の個体の値と比較した.その結果,両樹種ともにΨleafの低下(乾燥ストレスの進行)にともない木部で通水阻害が拡大する様子がMRIで確認された.一方,木部で通水阻害が確認された個体に再潅水を行うと,Ψleafは回復したものの,通水阻害域の減少(通水阻害の解消)は確認されなかった.貯蔵養分について,両樹種ともに乾燥再潅水処理を行うことで樹幹木部のデンプン含量は低下したが,可溶性糖含量は顕著な変化が認められなかった.従来の破壊的手法により測定された樹木の水分通導機能は樹体の乾燥解消後に回復することが多くの先行研究で報告されている一方で,本研究ではMRIによる通水阻害域の解消(空洞化した道管の再充填)が認められなかった.このことから,木部通水阻害の解消に関し,MRIで検出される道管内腔の水の存否だけでなく,水を保持していた道管の乾燥ストレス下での水分通導度の可変性の双方から検討する必要性が新たに提示された.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。
後期中新世の旧世界における長鼻類の進化

本研究ではアフリカ、アジアを中心とした旧世界において長鼻類が後期中新世という気候が急速に現代化する時代にどのような変化を起こしたのかを探るものである。そのために、アフリカおよび南、東アジアの後期中新世の長鼻類の分類学的研究をまずおこない、さらに臼歯の形態・咬耗状態から食性の変化を見た。分類学的研究の中心は咀嚼時に顎を前後に動かすゾウ科とステゴドン科の関係であった。アフリカ、アジアそれぞれで最近発掘された資料を調べその結果両者は別のクレードに属し顎を前後に動かすという特徴は別個に進化したものであったことが判った。後期中新世は世界的に陸上環境の乾燥化が進んだ時代だが、長鼻類においても乾燥化への適応として、長鼻類の各系統がgrazerへと特殊化したことが系統の再検討と咀嚼機能の推定からわかった。アフリカで起源し進化した長鼻類でゾウ科はgrazerへと進化する傾向のある長鼻類であることは良く知られている。ゴンフォテリウム類の一種であるアナンクスもアフリカでは独自にgrazerへと特殊化し、ゾウ科と同等の咀嚼機能を異なった様式で実現していたことが咬耗面の研究から分かった。東ユーラシアに特徴的なシノマストドン類の一部は歯冠の構造を複雑化させ、見かけ上はアフリカのアナンクス類と比較できるような咬耗面を発達させた。こうした面ではステゴドンはゾウ科に、シノマストドンはアナンクスに比較できる。しかし、ゾウ科とは異なり、ステゴドンはシノマストドンの絶後も極端な低歯冠状態を島に適応したもの以外では保ち続けた。同じ顎運動を示すゾウ科とは対照的な進化傾向がなぜステゴドンに見られるのかは今後の課題である。本研究は次の四つの主要なターゲットから構成される。1)テトラロフォドン類の研究、2)頭以外の骨格の研究、3)原始的なゾウ科とStegodonの歯の比較形態、4)咬耗面から食性の推定。これらのうち、3)原始的なゾウ科とStegodonの歯の比較形態を行うために、これらの標本が収蔵されているケニア国立博物館(ナイロビ、ケニア)およびエチオピア国立博物館(アジスアベバ、エチオピア)において、原始的なゾウ科とStegodonの歯の標本の観察、計測、デジタルカメラによる写真撮影を行った。その結果、ケニア国立博物館所蔵の模式標本の復元に誤りが見出されるなど、東アフリカの原始的なゾウ科の分類に関してかなり根本的な見直しが必要であることがわかった。そのため、年度の後半のほとんどはこの見直しに費やし、その結果はエチオピア、ミドルアワッシュの後期中新世哺乳動物群のモノグラフ向けの原稿としてまとめた。このモノグラフは現在編集中である。4)咬耗面から食性の推定に関しては、後期中新世アフリカのアナンカス類と初期ゾウ科の競合関係を咬耗面から推定、上記原稿中にまとめた。また、長鼻類を含めたテチテリア一般の咬耗面を知るために、日本漸新世束柱類の臼歯咬耗面を観察し、始新世初期の長鼻類それと束柱類のそれは良く類似していることを発見した。1)テトラロフォドン類の研究に関しては、タイの後期中新世産全身骨格のクリーニングを進めると同時に、東ヨーロッパのテトラロフォドン類に関してブルガリアの研究者とデータの交換をしながら共同で研究を進めた。これに関しては現在投稿準備中である。18年度は、初期ゾウ科の骨格との比較のため、タイ国産ゴンフォテリウム類の骨格化石と海外の博物館に収蔵されている長鼻類骨格化石の比較を行う予定であった。しかし、タイの中新世産長鼻類

化石のクリーニング・修復・レプリカ作成およびこれら化石のタイ国への返却にかかる輸送費が予想以上にかかったため、海外の博物館に収蔵されている化石との比較は文献情報をもとに行わざるを得なかった。タイ国産の2体の骨格標本のうちの一つはチェンマイ州Mae Soiより産出した中期中新世のゴンフォテリウム類の骨格化石であり、頭蓋、体幹、および四肢骨がそろった標本である。この骨格標本の修復および観察をした結果、椎骨の数が推定され、四肢、特に後肢のプロポーションが明かとなった。もう一つのゴンフォテリウム類の骨格化石は、Chiangmuan炭鉱の上部中新統より発掘されたものである。褐炭層に埋没していたため、骨格の大部分は著しく変形しているが、肩甲骨、舌骨、上顎第3臼歯は後期中新世のゴンフォテリウム類と比較可能であり、テトラロフォドン類に属することは明かである。またChiangmuan炭鉱の標本は臼歯からはヨーロッパ産テトラロフォドンであるTetralophodon longirostrisと区別できない。しかし、唯一のTetralophodon longirostrisの骨格であるオーストリア、Breitenfeld産の標本と比較すると、肩甲骨の形態等でChiangmuan炭鉱の標本はTetralophodon longirostrisと明瞭に区別され、別種であることが分かる。またChiangmuan炭鉱の標本にはテトラロフォドン類としては唯一舌骨が残されており、その形態は初期ゾウ科およびステゴドン科と良く類似している。この結果はテトラロフォドン類の少なくとも一部はゾウ科およびステゴドン科の姉妹群であることを示している。後期中新世は世界的に陸上環境の乾燥化が進んだ時代だが、長鼻類においても乾燥化への適応として、アフリカ、西ユーラシア、東ユーラシアでそれぞれ独自に長鼻類の各系統がgrazerへと特殊化したことが系統の再検討と咀爵機能の推定からわかった。アフリカで起源し進化した長鼻類でゾウ科はgrazerへと進化する傾向のある長鼻類であることは良く知られている。ゴンフォテリウム類の一種であるアナンクスもアフリカでは独自にgrazerへと特殊化し、ゾウ科と同等の咀嚼機能を異なった様式で実現していたことが咬耗面の研究から分かった。このことは同位体の研究からも支持され、前期鮮新世までの段階ではむしろアナンクスの方がよリgrazerとして優れていたことが示唆される。しかし、後期鮮新世以降はゾウ科がgrazerとしてより優位に立つようになったらしく、アナンクスは絶滅する。これはゾウ科で採用された顎の前後運動を伴った咀嚼様式の方がより、hearing edgeを増やす点で有利であったことを反映しているのがあろう。東ユーラシアのおける変化はアフリカにおける推移と類似しているらしい。東南アジアと中国の長鼻類を比較するために、北京の古脊椎古人類研究所を訪問した結果、シノマストドンの臼歯の進化傾向が明かとなった。後期中新世末に東アジア東南アジアにかけて広く分布していた初期のシノマストドン類は臼歯の咬耗面の構造からbrowserと推定されるが、東南アジアに分布を限定するようになった後期のシノマストドンでは咬頭が複雑化し、grazerへと特殊化している。興味深いことに、鮮新世末前期更新世においいはシノマストドンが中国のいくつかの地域ではスデゴドンより優勢である。残念ながら、同位体の研究がされていないため、支持材料に乏しいが、これはアフリカにおれるアナンクストゾウ科の競合と類似しているのかもしれない。
近代フランス地方行政システムの実質的制度化プロセス-地域間比較アプローチ

近世(ほぼブルボン朝の成立)以降のフランスは、これまで「中央集権化が順調に進んだ国」のモデルとして捉えられてきた。しかし、本研究では、中央集権化の中心をなす行政システムについて、ローカルな次元における制度化のありかたを、3県(イル・エ・ヴィレヌ、コート・ドール、エロー)について実証的に分析し、実際には、行政と政治を含めたガバナンスの正統性をめぐってさまざまな試行錯誤がなされたことを明らかにした。■平成20年度は、研究テーマである「近代フランス地方行政システムの実質的制度化プロセス」に関する先行研究を、未公刊修士論文のレベルにいたるまで、可能なかぎり収集した。それとともに、イル・エ・ヴィレヌ(Ille-et-Vilaine)県(ブルターニュ地方)文書館において、2回にわたって合計5週間の資料調査を実施した。調査の対象は、同文書館における分類系列M(一般行政)、N(会計、県議会、郡議会)、T(教育)、Z(郡庁)のうち、第二帝制(1852年1870年)にかかわるものほぼ全てカバーする合計約150箱(資料の単位)である。この資料調査から、当該テーマに関連する資料・約2万ページ分が得られた。これら資料を分析することにより、当該時期の同県における土地制度の特徴と、地方行政システムの実質的制度化のありかたを明らかにする作業を進めた。■その過程において、しばしば「中央集権化が進行した」とのみ特徴づけられる当該時期の地方行政システムのなかに、第1に、専門家からなる諮問機関の設立、第2に、行政職である市町村長の「政治家」化、という、2つの特徴を見出しえた。これら2つの特徴は、一方では相互に整合性を持ち、他方では相矛盾するという、複雑な関係を取結んでいると考えられる。今後の課題は、この関係について、他県との比較を通じて特徴を明らかにし、論理整合的な説明を与え、そのうえで、かくして得られた説明を検証することである。■平成21年度は、フラン中東部に位置するコート・ドール(Cote-d'Or)県(ブルゴーニュ地方)文書館において、研究テーマである「近代フランス地方行政システムの実質的制度化プロセス」に即して、5週間の資料調査を実施した。調査の対象は、同文書館における分類系列M(一般行政)、N(会計、県議会、郡議会)、T(教育)、Z(郡庁)のうち、第二帝制(1852年1870年)にかかわるものをカバーする合計約250箱(資料の単位)である。この資料調査から、当該テーマに関連する資料・約3万ページ分が得られた。■その過程において、これまで指摘されてこなかった当該時期の地方行政システムの特徴たる(1)専門家からなる諮問機関の設立、(2)行政職である市町村長の「政治家」化、にっいて、昨年調査したイル・エ・ヴィレヌ県との異同を見出しえた。このうち相違点については、具体的には、(1)専門家としての初等教師(instituteur)の能力に対する期待が強くみられること、(2)市町村長・助役と市町村議会の対立がしばしばみられること、が挙げられる。■今後の課題は、(1)フランス南部に位置するエロー(Herault)県について資料調査を実施すること、(2)今年度明らかになった2県の異同を念頭に置きつつ、土地制度の特徴と、地方行政システムの実質的制度化のありかたの関係について論理整合的な説明を与えること、(3)そこで得られた説明を検証すること、である。■平成22年度は、フランス南部に位置するエロー(Herault)県(ラングドック・ルション地域圏)文書館において、研究テーマである「近代フランス地方行政システムの実質的制度化プロセス」に即して、5週間の資料調査を実施した。調査の対象は、同文書館における分類系列M(一般行政)、N(会計、県議会、郡議会)、T(教育)、Z(郡庁)のうち、第二帝制(1852年1870年)にかかわるものをカバーする合計約400箱(資料の単位)である。これら資料を分析することにより、当該時期の同県における土地制度の特徴と、地方行政システムの実質的制度化プロセスを明らかにする作業を進めた。■その過程において、これまで指摘されてこなかった当該時期の地方行政システムの特徴のうち、行政職である市町村長の「政治家」化について、平成20年度に調査したイル・エ・ヴィレヌ県(ブルターニュ地域圏)および同21年度に調査したコート・ドール県(ブルゴーニュ地域圏)との異同を見出しえた。このうち相違点については、具体的には、(1)市村長・助役と市村議会の対立がしばしばみられること、(2)これら対立が生じる場合、嘆願書・上申書・告発文といったかたちで上級行政当局(場合によっては皇帝まで)がまきこまれることが多かったこと、が挙げられる。

これは、自作農の比率が高いという、同県の土地制度の特徴を反映して、市村議会議員(さらには一般の有権者)の自立意識が高かったことを意味している。■3県を比較し、土地制度のあり方と地方行政システムの実質的制度化プロセスのあいだには、市村議会議員や有権者の自律意識の程度と、その反映としての「支配の正統性」認識のあり方が介在していることがわかった。この点を中心に(最終年度にかかる)成果報告書を取りまとめた。
マイクロダイアリーシスとHPLC/ESR/MSによるフリーラジカルの代謝研究

マイクロダイアリーシスを用いて得られる透析液の量は僅かであり、in vivoではラジカルアダクトの濃度も低く、ESR法及びマススペクトル法での4-POBN/phenylラジカルアダクトの検出は困難であった。そこで申請者は検出感度を向上させるためにラジカルアダクトの電気化学検出器及び紫外吸収検出器による検出を試みた。電気化学検出器を用いるとラジカルアダクトのラジカル型のみだけでなく還元型も検出可能であった。また電気化学検出器の電極を用いてラジカルアダクトのラジカル型及び還元型を酸化し、HPLCで分析することにより、ラジカルアダクトの酸化型のHPLCピークの帰属を可能にした。また還元型及びラジカル型の酸化に伴う電流値を電気化学検出器で測定することにより、還元型及びラジカル型の定量を行い、4-POBN/phenylラジカルアダクトのラジカル型及び還元型のUV吸収のモル吸光係数を決定した。この方法によりフリーラジカルの代謝過程を定量的に追跡することが可能になった。今後その他のスピントラップ剤についても同様に電気化学検出器による検出と定量化を計画している。さらに血液を用いたin vitroでの実験及びラットを用いたin vivoでの実験について、マイクロダイアリーシスより得られた試料を電気化学検出器をもちいて分析し、生成したラジカルアダクトの検出、同定及び定量を行う。さらに電気化学検出器とESRを接続し、還元されてしまうことによりESRで検出できなかったラジカルアダクトを部分的に酸化することにより、ラジカル型に変え、ESRでの検出を可能にする。このことにより、生体中で生成していても還元されてしまいESRで検出できなかった新しいフリーラジカルの検出が可能になる。本年度はラット血液中でフリーラジカルを生成すると言われているフェニールヒドラジンの代謝についてマイクロダイアリーシス/HPLC/MS法を用いて研究を行った。まずラット血液を採取し、in vitroでマイクロダイアリーシスを行った。ラット血液中にフェニールヒドラジンと4-POBN(スピントラップ剤)を添加し、10分ごとに透析液を分取した。透析液が少量(数十マイクロリッター)であるためHPLC/ESR分析をせず、直接Continuous Flow FAB分析を行った。透析液中にはスピンアダクト以外に多くの物質が存在するので、スピンアダクトをマススペクトロメトリーのみで検出するためにMS/MS法を適用した。MS/MS法によるスピンアダクトの壊裂パターンを知るために、種々の精製スピンアダクトのMS/MS測定を行った。フェニールラジカルと4-POBNのスピンアダクトは特徴的な開裂パターンを示すことが明らかになった。この情報はin vivoでのスピンアダクトの検出に対して重要な情報である。マイクロダイアリーシスを用いて得られる透析液の量は僅かであり、検出感度の劣るESR法での検出は困難であった。検出感度を向上させるためにスピンアダクトの電気化学検出器による検出を試みた。電気化学検出器を用いるとスピンアダクトのラジカル型のみでなく還元型も検出可能であることがわかった。電気化学検出器を用いることによりスピンアダクトの生体内での代謝(酸化-還元)についての情報も得られることが示された。マイクロダイアリーシスを用いて得られる透析液の量は僅かであり、in vivoではラジカルアダクトの濃度も低く、ESR法及びマススペクトル法での4-POBN/phenylラジカルの検出は困難であった。

また還元型及びラジカル型の酸化に伴う電流値を電気化学検出器で測定することにより、還元型及びラジカル型の定量を行い、4-POBN/phenylラジカルアダクトのラジカル型及び還元型のUV吸収のモル吸光係数を決定した。この方法によりフリーラジカルの代謝過程を定量的に追跡することが可能になった。今後その他のスピントラップ剤についても同様に電気化学検出器による検出と定量化を計画している。さらに血液を用いたin vitroでの実験及びラットを用いたin vivoでの実験について、マイクロダイアリーシスより得られた試料を電気化学検出器をもちいて分析し、生成したラジカルアダクトの検出、同定及び定量を行う。さらに電気化学検出器とESRを接続し、還元されてしまうことによりESRで検出できなかったラジカルアダクトを部分的に酸化することにより、ラジカル型に変え、ESRでの検出を可能にする。このことにより、生体中で生成していても還元されてしまいESRで検出できなかった新しいフリーラジカルの検出が可能になる。
転写制御タンパク質機能ドメインの大量発現および高次構造の解析

本研究は外界からのシグナルに応じて遺伝子の発現を調節する転写制御因子の機能ドメインの高次構造と機能解析を目的とし、環境汚染物質ダイオキシンなどの多環性芳香族化合物を結合する受容体型転写因子AhR(Aryl hydrocarbon receptor)、これとへテロダイマーを組むパートナー因子Amt(AhR nucleartranslocator)に見出された新しい構造モチーフPASを取り上げた。PASはホモロジーの高い二つのサブドメインPAS-A、PAS-Bとから成る。いろいろなタンパク質のPAS領域を大腸菌で大量発現させたが大部分は不溶性タンパク質となった。そのなかで、マウスArnt2のPAS-Aが可溶性で、精製も進んだ。東京都臨床医学総合研究所・稲垣冬彦博士のご協力によるCDスペクトルや動的レーザー光散乱測定の結果、このタンパク質が稀薄溶液中ではホモダイマーとして存在し、α-helixを多く含むことを明らかにした。しかし、高濃度では高次会合体を形成する性質のためNMR高次構造解析には展開できなかった。この局面の和開のため、(1)発現領域内にある2個のシステインをセリンに置換したところ溶解性は増し、高次会合体形成は低減されたうえ、AhR-Arnt複合体のDNA結合活性を競合阻害する活性をもつ試料が得られたのでシステイン-セリン変換は有効な対策であると結論した。つぎに(2)これまでのアミノ酸配列ホモロジーと機能解析から推定したドメインはタンパク質の構造ドメインと一致していない可能性があるのでバキュロウィルスによりAhR、Arntの全長タンパク質を発現させ、プロテアーゼ消化に抵抗する構造ドメインを特定する途上にある。その領域のシステイン-セリン変異体を大量調製し、稲垣博士と協力してNMR構進解析に展開する計画である。