hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
成熟マウス大脳皮質に潜む未分化細胞の同定とその運命

研究は、脳の発達と機能維持の解明を目的とした基盤研究である。脳の初期発生から形態形成を経て高次脳機能を獲得する過程を理解することは、成熟脳における脳機能維持の解明につながる。神経成長円錐を発達時期や部位に共通の機能ユニットと仮定して、成長円錐構成膜タンパクを網羅的に分析した。その結果、脳形成期に一過性に発現し成熟と共に消失するgmp46/CAR(Growth cone Membrane Protein with a molecular mass 46kDa/Coxsakievirus Adenovirus Receptor)を発見した。ウイルス受容体としてではなくgmp46/CARの生理機能は、イムノグロブリンスーパーファミリーに属する新しい細胞接着分子としての機能である。タンパク構造の特徴としてC末にPDZ結合ドメインのSer-Ile-Val配列があり、イーストTwo-hyrid法でPDZ結合タンパクであるPSD95を見つけた。gmp46/CAR cDNAを強制発現したC6培養細胞の実験から、細胞が接着する突起や面にgmp46/CARが集積することを観察した。gmp46/CARの細胞表面の局在は、おそらくC末のSer-Ile-Valに結合したPSD95を介していると思われた。脳の形成期に一過性に発現するgmp46/CARが成熟脳においても、神経細胞新生の場所である海馬、脳室下帯、嗅脳に発現していた。個体レベルで解析するためにgmp46/CARノックアウトマウスを作出したが、初期に致死となり充分な解析ができなかった。gmp46/CARは圧倒的に脳に発現しているが、心臓、骨、腎臓にも僅かであるが存在し、これらの臓器において、実験的心筋炎モデル動物、骨折-修復モデル動物や腎炎モデル動物で、組織修復時にgmp46/CARmRNA及びタンパクが再び出現している結果を得た。脳形成にかかわり成熟と共に消失する膜蛋白を探索するため、発達時期や部位に左右されない機能ユニットである神経成長円錐の構成膜タンパクを網羅的に分析した。成長円錐構成膜タンパクのペプチド断片130種以上について部分アミノ酸配列を決定した。データベース検索で新規ペプチドに焦点を絞り、これらのペプチドに対する抗体を作製しWestern分析の結果、マウス初期胚から新生児まで急激に増加し生後は段階的に減少する膜タンパクgmp46/CAR(Growth cone Membrane Protein with a molecular mass 46 kDaはCoxsakievirus Adenovirus Receptorと同一タンパクと判明)を発見した。部分アミノ酸配列を基に全長cDNAをクローニングし、gmp46/CARは1回膜貫通型の糖タンパクであるイムノグロブリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子であることを証明した。免疫組織化学的検索の結果、gmp46/CARは圧倒的に神経系に発現し、胎生6.5日の神経管上皮細胞の膜に、神経発生が進むと突起伸長中のニューロンに繊維状に観察された。このように幼弱なニューロンに強く発現していることから顕微鏡レベルで分布を観察したところ、成体でもSubventricular Zone(SVZ)、Rostral Migratory Stream(RMS)及びDentate Gyrus(DG)の一部の細胞に発現していた。よく見ると、大脳皮質にもgmp46/CAR陽性細胞が点在していた。これらの結果を踏まえて、gmp46/CARの機能と発現局在との関連を詳細に観察するために、gmp46/CARの細胞外ドメイン、細胞内ドメイン、C末端のペプチドに対する抗体を作製した。脳形成期にかかわり成熟と共に消失する膜蛋白を探索するため、1)神経成長円錐を発達時期や部位に左右されない機能ユニットと仮定して、2)その構成膜タンパクを網羅的に分析し、3)得られたアミノ酸配列からペプチド抗体を作製し免疫組織化学的に分布を調べた。

その結果、マウス初期胚から新生児まで急激に増加し生後は段階的に減少するイムノグロブリンスーパーファミリーに属する新しい細胞接着分子であるgmp46/CAR(Growth cone Membrane Protein with a molecular mass 46 kDaはCoxsakievirus Adenovirus Receptorと同一タンパクと判明)を発見した。脳は全体が同時進行で成熟するのでは無くて、脳内では未成熟な部位と神経回路形成が完了した成熟部位が共存している。免疫組織化学的検索の結果、gmp46/CARは神経回路形成期の特定の細胞に発現していた。脳神経以外で二番目に多く発現している心臓の形成にも関与し細胞接着面にgmp46/CARを検出した。また実験的に作製した骨折モデル動物や腎炎モデル動物で、組織修復時にgmp46/CARが再び出現している結果を得た。何れの組織においても、発生の初期あるいは組織損傷後の修復期など器官を形成していく過程において、細胞接着分子として重要な機能を担っていると推測された。一方、遺伝子治療を目的として組換えアデノウイルスがベクターとして用いられているが、アデノウイルスベクターの一次受容体がgmp46/CARであり、遺伝子導入効率はgmp46/CARの発現量と細胞局在に依存する結果を得た。このベクターを利用して成熟脳に潜むgmp46/CA陽性細胞を検出することが可能となり、脳発達と成熟脳の機能維持の研究に糸口が得られそうである。本研究は、脳の発達と機能維持の解明を目的とした基盤研究である。神経管の発生から形態形成を経て高次脳機能を獲得する過程を理解することは、成熟脳における脳機能の解明につながる。その研究戦略として、脳形成期にかかわり成熟と共に消失する膜蛋白を発見し、そのタンパク機能の解析を行う。研究の戦術は、1)神経成長円錐を発達時期や部位に左右されない機能ユニットと仮定して、2)その構成膜タンパクのアミノ酸配列を網羅的に分析し新規蛋白を同定、3)このタンパクの構造解析及び相互作用するタンパクの探索、4)ペプチド抗体を作製し免疫組織化学に機能局在を証明する。その結果、マウス初期胚から新生児まで急激に増加し生後は段階的に減少するイムノグロブワンスーパーファミリーに属する新しい細胞接着分子であるgmp46/CAR(Growth cone Membrane Protein with a molecular mass 46 kDaは後日Coxsakievirus Adenovirus Receptorと同一タンパクと判明)を発見した。gmp46/CARは神経回路形成期の特定の細胞、及び成熟脳では、神経細胞新生の場所である海馬、脳室下帯、嗅脳に発現していた。gmp46/CARノックアウトマウスを作出したが、初期に致死となり充分な解析ができなかった。
アメリカ聾教育におけるトータル・コミュニケーションの展開

1.アメリカお聾教育におけるコミュニケーション方法の変遷を, 19世紀初頭から1930年代までにわたって解明した.初期の無音法,手指法から1867年のクラーク枝での口話法の台頭,その後の口話法の発展の足跡を検討した.とくに20世紀に入っての40年間は,口話法の隆盛期であることを確認した.2.1960年代末にカリフォルニア・サンタ・アナ学区とメリーランド州立聾学校で台頭したトータル・コミュニケーションの教育理念,方法論,およびその成果等について明らかにした.3.1940年代からトータル・コミュニケーション台頭までの聾教育の動向をコミュニケーションと関係づけて,教育目標,早期教育,学力,統合教育等の点から考察した.4.トータル・コミュニケーションの台頭に及ぼした要因を,一次的要因と二次的要因に分けて,分析,考察した.一次的要因として, (1)手指コミュニケーションの使用状況とその主張が存在したこと(2)ギャローデット大学の同時法やニューメキシコ校の指文字の早期導入などの試行的実践が展開したこと(3)両親聾者の聾児のコミュニケーション能力についての研究が進展したことを実証的に解明した.また二次的要因として, (1)口話法の困難性と口話教育についての不満足が存在したこと(2)手話言語への社会的,学問的関心が高揚してきたこと(3)成人聾者の団体が聾教育における手指コミュニケーションの有効性について支持する見解を表明してきたこと(4)コーネットがキュード・スピーチを開発したことなどを実証的に考察した.最近のトータル・コミュニケーションの展開の状況をさらに継続的に解明していくことが今後の課題とされた.1.アメリカお聾教育におけるコミュニケーション方法の変遷を, 19世紀初頭から1930年代までにわたって解明した.初期の無音法,手指法から1867年のクラーク枝での口話法の台頭,その後の口話法の発展の足跡を検討した.とくに20世紀に入っての40年間は,口話法の隆盛期であることを確認した.2.1960年代末にカリフォルニア・サンタ・アナ学区とメリーランド州立聾学校で台頭したトータル・コミュニケーションの教育理念,方法論,およびその成果等について明らかにした.3.1940年代からトータル・コミュニケーション台頭までの聾教育の動向をコミュニケーションと関係づけて,教育目標,早期教育,学力,統合教育等の点から考察した.4.トータル・コミュニケーションの台頭に及ぼした要因を,一次的要因と二次的要因に分けて,分析,考察した.一次的要因として, (1)手指コミュニケーションの使用状況とその主張が存在したこと(2)ギャローデット大学の同時法やニューメキシコ校の指文字の早期導入などの試行的実践が展開したこと(3)両親聾者の聾児のコミュニケーション能力についての研究が進展したことを実証的に解明した.また二次的要因として, (1)口話法の困難性と口話教育についての不満足が存在したこと(2)手話言語への社会的,学問的関心が高揚してきたこと(3)成人聾者の団体が聾教育における手指コミュニケーションの有効性について支持する見解を表明してきたこと(4)コーネットがキュード・スピーチを開発したことなどを実証的に考察した.最近のトータル・コミュニケーションの展開の状況をさらに継続的に解明していくことが今後の課題とされた.1.アメリカ聾教育におけるコミュニケーション方法の変遷を、19世紀初頭から1930年代末まで解明した。初期の無音法,手指法から1867年のクラーク校での口話法の台頭、その後の口話法の発展の足跡を検討した。2.1960年代末に、カリフォルニア,サンタ・アナ学区とメリーランド州立聾学校で台頭したトータル・コミュニケーションの教育概念,方法論,およびその成果等について明らかにした。とくに、その理念として、「すべてのコミュニケーション手段を用いてコミュニケーションを成立させること」などを確認した。3.1940年代からトータル・コミュニケーション台頭までの聾教育の動向をコミュニケーションと関係づけて、教育目標,早期教育,統合教育,重複障害児教育,学力などの点から考察した。4.トータル・コミュニケーション台頭に及ぼした要因を、一次的な要因と二次的要因に分けて、分析,検討した。一次的要因として、手指使用の実践が、併用法,同時法として存在したこと(但、口話法が優勢であったこと),手指使用の主張が高揚してきたことを、実証的に考察した。また、二次的要因として、口話法の習得困難性と指導上の問題を、検討,確認した。5.今後、台頭要因として、手指使用の新しい実践の展開,両親聾者の聾児のコミュニケーションの研究,手話言語に対する学問的,社会的関心の高揚,キュード・スピーチの提唱と開始,親の聾教育への関与について解明することが、課題とされた。
珪藻の殻形態における表現型可塑性と多様性創出過程

本研究では、表現型可塑性による多様性を創出する生物学的機構をクローナルな単細胞生物である中心珪藻Cyclotella meneghinianaを用いて明らかにすることを目的とした。本種は広塩性種で、塩濃度上昇に対して細胞集塊形成や有性生殖などの応答を行う。有性生殖のステージでは、各細胞のどのような違い(殻形態、細胞系譜、細胞間相互作用)が、環境合図への応答の仕方(卵細胞になるか、精細胞になるか、分化しないか)を決め、集団動態の違いをもたらすかを、一細胞レベルで計測することを計画した。当初計画したとおり、レーザーを用いた微細加工技術により顕微鏡下で1細胞を追跡できる実験系の開発と条件検討を行い、スライドグラス上に作成した100μ四方の微小なチャンバーに1細胞を閉じ込めて培養し分化過程を追跡することに成功した。その結果クローン細胞であっても個々の細胞のサイズや周囲の細胞密度の違いによる分化運命調節が明らかになった。各親細胞は分裂して生じた娘細胞に同じ性を配分する傾向があり、多細胞生物で報告されてきたsplit sex ratio(卵を多く産する親と精子を多く産する親に分かれる)にあたる現象が単細胞生物でもみられることがわかった。無性生殖のステージでは、淡水培地から海水培地に移すと、いくつかの殻器官の形態が変化する表現型可塑性がみられた。複数地点から確立したクローン株を、遺伝子マーカーを用いて遺伝的差異と近縁種との位置関係を確認した上で、表現型可塑性の度合い(反応基準)の違いを調べることができた。今後可塑性に関連した遺伝子発現状態の変化を調べるための基礎的なデータを得ることができたと考えている。また無性的に増殖する非感受期ステージにある細胞であっても、有性生殖の環境合図の感受期にある個体を混合すると有性生殖が誘発されることが明らかになった。本種の有性生殖/無性生殖の切り替えには、以前から知られていた環境合図に加えて、周囲の個体との相互作用が重要となることが示唆されるデータが得られた。本種は有性生殖時にクローン集団内でも、卵と精子の両方への分化が可能である。各細胞のどのような違い(殻形態、細胞系譜、細胞間相互作用)が、環境合図への応答の仕方(卵細胞になるか、精細胞になるか、分化しないか)を決め、集団動態の違いをもたらすかを、一細胞レベルで計測することを計画した。当初計画したとおり、レーザーを用いた微細加工技術により顕微鏡下で1細胞を追跡できる実験系の開発、条件検討を行い、スライドグラス上に作成した100μ四方の微小なチャンバーに1細胞を閉じ込めて培養し分化過程を追跡することに成功した。顕微鏡下で通常の淡水培地から海水培地に還流する培地を変えることにより環境変動下での一細胞ごとの応答の違いを検出できた。その結果クローン細胞であっても個々の細胞のサイズのばらつきや周囲の細胞の密度の違いにより分化運命を調節していることを明らかにした。単細胞生物の各細胞の性質と性比調節の関係は長年謎であったが、本研究によりクローン単細胞生物の性比調節要因を明らかにすることができ、多細胞生物で長年研究されてきたサイズや密度による性比調節との共通性を見いだすことができた。また各親細胞は分裂して生じた娘細胞に同じ性を配分する傾向があり、多細胞生物で報告されてきたsplit sex ratio(卵を多く産する親と精子を多く産する親に分かれる)にあたる現象が単細胞生物でもみられることがわかった。

また無性的に増殖する非感受期ステージにある細胞であっても、有性生殖の環境合図の感受期にある個体を混合すると有性生殖が誘発されることが明らかになった。本種の有性生殖/無性生殖の切り替えには、以前から知られていた環境合図に加えて、周囲の個体との相互作用が重要となることが示唆されるデータが得られた。
超高周波音波工学に関する研究

超高周波音波と光や電子との相互作用を強磁場や高圧を用いて調べ、電子-フォノン相互作用や相転移、臨界現象を解明し、薄膜、微粒子や表面波、二次元電子ガス系の研究や超音波ドメインによる構造変化などで以下に述べる成果をえた。1.浜口らは強磁場サブセンターを利用し、磁気フォノン共鳴の研究から量子井戸における二次元フォノンモードを初めて観測し、高電界下の磁気フォノン共鳴ピークがLOフォノン散乱により二つに分離することを実験で示し、理論を完成した。2.達崎らはN【H_4】Clの相転移をブリルアン散乱と超音波測定より調べ、特異な温度変化を示す三次弾性定数及び周波数分散を見出した。3.池田らはK【H_2】P【O_4】のブリルアン散乱スペクトルの圧力温度依存の測定から、分極緩和時間は圧力とともに短かくなることを見出した。低迷光散乱用高圧セルを開発し、低周波ラマンモードの圧力依存性を調べた。4.間瀬らは製作した超音波音速、減衰同時測定装置を用い、超伝導特性の起源が解明されていない酸化物超伝導体Ba【Pb_(1-x)】Bix【O_3】薄板の音速を測定し、構造不安定性とXの値の間の関係、一次構造相転移の異常時間依存性等、興味ある現象を見出した。5.山本らは高周波スパッタリングにより、種々の組成比をもつSiGe混晶膜を作製し、熱アニール時における微結晶の成長をラマン散乱により調べ、アニール温度で急激に微結晶のサイズが大きくなることを見出した。6.福井らは基本ガウス光による表面ポラリトン特性を明らかにした。角度スキャンATR信号の瞬時的観測装置を開発し、種々の金属膜成長の過程を明らかにした。7.井上らは半導体ヘテロ構造中の二次元電子とフォノンの相互作用を調べ、LOフォノン放射による分布の変化、電子による遮へい効果や電子輸送の知見をえた。8.得永らは音響ドメインによるa-【As_2】【S_3】の構造変化、サファイヤ基板の音響ドメインのエネルギー密度をブリルアン散乱で調べた。
細胞質mRNAスプライシングによる小胞体ストレス応答の制御

XBP1は、ヒトの小胞体ストレス応答を制御する転写因子である。XBP1の発現はスプライシングによって制御されており、小胞体ストレス時にのみスプライシングを受けることで活性型転写因子pXBP1(S)が産生され、小胞体ストレス応答が惹起される。小胞体ストレス応答は、アルツハイマー病など神経変成疾患と深い関連があり、その分子機構の解明はこれらの疾患の予防や診断、治療に役立つと考えられる。本研究によって、以下のことを明らかにした。1.XBP1のスプライシングが、従来知られている核スプライシングとは全く機構が異なる細胞質スプライシングによつて制御されていることを明らかにした。このことにより、高等動物でも細胞質スプライシングが起こっていることが初めて証明することができた。2.平常時に存在するスプライシングを受けていないXBP1前駆体mRNAからもタンパク質pXBP1(U)が翻訳されており、活性型転写因子pXBP1(S)の負の制御因子として働いていることを明らかにした。すなわち、小胞体ストレスの有無に応じ、翻訳の現場である細胞質でスプライシングを行うことで、正の因子pXBP1(S)と負の因子pXBP1(U)のどちらを発現するか迅速に切り替えていること、そしてこのことが小胞体ストレス応答に細胞質スプライシングという特異な機構が採用されている生物学的な理由であることが明らかとなった。以上の成果は、小胞体ストレス応答の研究にとって大きな成果であると同時に、細胞質スプライシングという新しい研究分野を拓くこととなり、RNAの分野の研究者にも大きな影響を与えている。今後は、細胞質スプライシングの分子機構の全貌を明らかにするために、スプライシング反応に関わる分子群の同定を行う計画である。細胞が小胞体ストレスを受けると、XBP1の前駆体mRNAがスプライシングされて成熟型mRNAとなり、この成熟型mRNAから活性型転写因子pXBP1(S)が翻訳されて標的遺伝子の転写を活性化することで小胞体ストレス応答が誘導される。このXBP1のスプライシングは細胞質スプライシングと呼ばれ、従来よく知られている核で起こるスプライシングとは異なる新規のスプライシング機構である。両者は分子機構が全く異なるだけでなく、その生物学的意義にも大きな違いが存在する。すなわち、オールターナティブ・スプライシングのようにスプライシングによってmRNAのコードするタンパク質の性質を変化させようとすると、核スプライシングでは細胞質に輸送したmRNAをスプライシングすることはできないので、新たにmRNAを転写してスプライシングする必要がある。一方、細胞質スプライシングであれば、細胞質で翻訳に供しているmRNAを細胞内外の状況に応じてそのままスプライシングして別のタンパク質をコードするように変化させることができるため、非常に迅速かつ無駄なく応答することが可能である。しかしながら、これまで細胞質スプライシングを受ける前の前駆体mRNAに機能のあるタンパク質がコードされている例は実際には知られていなかった。今年度の研究によって、XBP1の前駆体mRNAにコードされるタンパク質pXBP1(U)は小胞体ストレスの回復期に発現が誘導され、活性型転写因子bXBP1(S)に結合して核から細胞質へ移行し、その分解を促進することを見いだした。すなわち、前駆体mRNAには負の制御因子、成熟型mRNAには正の制御因子がコードされており、小胞体内の状況に応じて両者の発現をコントロールすることによって、小胞体ストレス応答を巧妙に制御していると考えられる。この発見によって、細胞質スプライシングを受ける前駆体mRNAが機能のあるタンパク質をコードする例が確かに存在することが明らかとなり、細胞質スプライシングの生物学的な意義が明らかとなった。

細胞が小胞体ストレスを受けると、XBP1の前駆体mRNAがスプライシングされて成熟型mRNAとなり、この成熟型mRNAから活性型転写因子pXBP1(S)が翻訳されて標的遺伝子の転写を活性化することで小胞体ストレス応答が誘導される。このXBP1のスプライシングは細胞質スプライシングと呼ばれ、従来よく知られている核で起こるスプライシングとは異なる新規のスプライシング機構である。細胞質スプライシングと核スプライシングは分子機構が全く異なるだけでなく、その生物学的意義にも大きな違いが存在する。すなわち、細胞質スプライシングであれば、細胞質で翻訳に供しているmRNAを細胞内外の状況に応じてそのままスプライシングして別のタンパク質をコードするように変化させることができるため、非常に迅速かつ無駄なく応答することが可能である。前年度の研究によって、細胞質スプライシングを受ける前の前駆体mRNAには、活性型転写因子pXBP1(S)の分解を促進する負の制御因子pXBP1(U)がコードされていることを明らかにした。今年度は、(1)pXBP1(U)が小胞体ストレス応答を制御する別の転写因子pATF6(N)の分解も促進すること、(2)XBP1前駆体mRNAが小胞体膜上に存在すること、(3)XBP1のスプライシングと促進する因子を探索することを行った。これらの成果から、pXBP1(U)が小胞体ストレス応答の2つの経路(ATF6経路とIRE1-XBP1経路)の両方の負の制御因子であること、またXBP1の細胞質スプライシングが小胞体膜上で起こることを明らかにし、更にスプライシングを促進する因子の候補CSPF1を単離することに成功した。今後は、CSPF1の作用機序を明らかにすることによって細胞質スプライシングの分子機構を明らかにしようと考えている。
独立成分分析を用いた振動源特定とシステム同定

この研究では,独立成分分析(ICA)法を用いて,動特性を考慮しながら車両の振動源の同定を行うことを提案し,数値計算と模型実験を通じてその性能を検討する。動的な混合行列を見つけるために,計測した車両加速度の積分,二重積分,微分,二重微分を求め,それらを観測信号として扱いICAを行う。信号源の分離性能を検討するため,二種類の異なる振動によって実験装置を下方から加振した。類似した周波数帯に属する二種類の異なる信号が同定され,同様の結果が数値計算からも得られた。これより,提案手法の妥当性が示された。独立成分分析法を動的な混合に適用する手法の有効性を調査した。鉄道台車の半車体モデルを作成し、台車に加速度計を2つ設置し、前輪および後輪から入力される軌道不整に起因する振動を推定することを行った。実際の鉄道と同様のパワースペクトル密度を持つ軌道不整を作成し、その上を台車単体が走行する数値計算を行った。ばね定数、質量、慣性モーメントなどの台車のパラメータが未知の状態で、台車の加速度から軌道不整の形状を推定できることを示した。また、生産技術研究所千葉実験所の鉄道試験線と鉄道台車を利用して、鉄道台車実機を用いた実験を行った。台車に取り付けられた4つの加速度計の値から、レールのつなぎ目を超える時に発生する振動を同定できることを示した。自動車の車体加速度から、路面の不整を推定することも試みた。自動車の半車体モデルも作成し、不整のある路面を走行した際に、路面不整を推定できることを数値計算により示した。自動車は、タイヤに弾性が存在するため、鉄道台車と異なり、4次遅れ系になる。伝達関数はより複雑になるが、そのような系においても、本手法が有効であることが分かった。また、研究計画と同様の方法で、自動車の模型実験を行った。半車体モデルと同等な系を作成し、前輪部および後輪部から加振器によって振動を与え、車体に相当する剛体に取り付けた2つの加速度計から、入力振動の推定を行った。実験によっても、推定が可能であることを示した。計画を少し早め、模型実験を開始することができた。1年目から本研究の最終的な目的の一部を行うことができた。ただし、まだ、実験を行った条件が少ないため、今後は、様々な条件下で実験を行い、本手法の有効性を示していく予定である。生体計測の分野で用いられている独立成分分析(Independent Component Analysis,略称ICA)と呼ばれる新しい信号処理法を自動車および鉄道車両を例にして、機械システムの振動源の推定に用いることを試みた。未知である動的システムにおいて、次数だけは既知であるという前提の下、未知の線形行列を動的に同定することを提案した。この処理により、動的な系であっても、軌道不整などの振動源を推定することができる.このような手法は振動工学の分野で行われている例は少なく,学術的にも独創的な研究である。前年度(21年度)は実際の鉄道台車を用いた実験を通じて、台車枠の4か所で計測された加速度から、レールのつなぎ目などの特徴的な軌道不整を推定することを行った。また、自動車を模擬した模型装置を作成し、路面不整を模擬した振動を与え、前後で時間差をもって入力される振動を、車体に相当する剛体の加速度から推定することができることを示した。本年度(22年度)は、フーリエ変換などの既存の信号処理法に対する独立成分分析法の有意な点を明らかにすることを重視して、研究を進めた。具体的には、前後で時間差をもって入力される路面不整を模擬した振動に、前後に同時に入力される振動を加え、それらを分離することを、模型実験および数値計算を通じて行った。また、2つの種類の振動の周波数が近い時と、離れている時で実験と数値計算を行い、周波数が近くても分離できることを示した。これにより、既存の信号処理法では困難であった、類似した周波数特性を持つ振動を分離し、振動源を推定できることを示すことができた。2年間の研究を通じて、本手法の有効性を明らかにすることができた。
山村においての森林環境に対する住民意識についての研究

森林環境を「木材生産の場」として意識している「山村地域」住民の森林意識は伝統的なものであり、里山などの森林を維持させてきた重要な基盤であった。かって「山村地域」といえば、すべての人達が農林業に従事し、森林を「生産の場」・「生活の場」として利用し、伝統的な生活様式によって生計をたてていたが、最近になると、森林に対しての経済的依存度が一般に低くなってしまって、ただ広大な森林が存在していることだけが共通なのであり、生産面だけでなく、生活の面においてもかなりの相違がみられるようになってきている。そのように山村が多様化してきたので、山村においても「森林環境に対する地域住民意識」が多様化してきていると考えて、「山村における森林環境に対する住民意識」を明らかにすることを本研究の目的とした。「具体的で、伝統的な森林意識」は、わが国の山村で、森林と共存しながら、森林を生産の場と生活の場として活用してきた人達が抱いていた森林意識である。最近になって、森林との直接的な関わりをもっている人が少なくなり、その結果として、具体的な森林から離れ、ただ観念的にのみ森林に接している人が増えてくるとともに、「情感的で、感性的な森林意識」が増えてきた。山村においても、「情感的で、感性的な森林意識」は、その地域の「森林率」や「森林密度」が低く、「人口密度」が高くなるほど、高くなる傾向を示しているし、また、「山仕事をしたことがない」・「森林へ休養に行く」・「森林を持っていない」比率が高いところでほど、高くなる傾向を示している。山村において、「具体的で、伝統的な森林意識」こそが里山などの森林を維持させてきた基盤であり、このような森林意識によって、山村住民によって森林が管理されながら森林が維持されてきただけに、「具体的で、伝統的な森林意識」の保続はきわめて必新なことである。
感染防御性免疫が誘導するNK細胞活性化とレトロウイルス感染防御機構の解明

HIV感染に対する有効な予防ワクチンは,長年の研究資源投入にもかかわらず現在でも確立しておらず,感染ごく初期の免疫応答,特に感染細胞に対するNK細胞の機能解析が,HIVをはじめとするレトロウイルス感染予防に極めて重要な因子として精力的に研究が進められている.本研究では,これまで申請者の研究グループが世界をリードしてきたマウスフレンドレトロウイルス感染モデルを活用し,感染防御性免疫が積極的にNK細胞活性化と感染細胞のNK細胞に対する高い感受性を誘導することで感染細胞が効率的に排除されることを証明し,新たな抗レトロウイルスワクチン戦略を提示する.HIV感染に対する有効な予防ワクチンは,長年の研究資源投入にもかかわらず現在でも確立しておらず,感染ごく初期の免疫応答,特に感染細胞に対するNK細胞の機能解析が,HIVをはじめとするレトロウイルス感染予防に極めて重要な因子として精力的に研究が進められている.本研究では,これまで申請者の研究グループが世界をリードしてきたマウスフレンドレトロウイルス感染モデルを活用し,感染防御性免疫が積極的にNK細胞活性化と感染細胞のNK細胞に対する高い感受性を誘導することで感染細胞が効率的に排除されることを証明し,新たな抗レトロウイルスワクチン戦略を提示する.
歯周病細菌の莢膜多糖抗原による歯槽骨吸収機構の解明

若年性歯周炎では歯周軟組織の炎症が軽微にもかかわらず著しい歯槽骨吸収が引き起こされる。この骨吸収は急激に悪化し、前歯および大臼歯が容易に動揺するようになる。これまで、我々の一連の研究の結果、若年性歯周炎の原因菌の1つと考えられいるActinobacilus actinomycetemcomitans(A.a.)由来のリポ多糖がIn vitroで強い骨吸収活性を有することを明らかにした。しかし、リポ多糖はグラム陰性桿菌全般に存在する表層成分であり、これを歯周炎に特徴的な炎症性骨吸収における特異的病原因子とするには無理がある。我々は、A.aの血清型abcの特異的莢膜多糖抗原の推定構造式を明らかにし、6-デオキヘキリースであることを報告した。細菌性多糖のなかでも、この多糖抗原の様な構造をもつものは少ない。そこで、我々は血清型bのA.a.Y4株由来の莢膜多糖抗原の骨吸収活性を骨器官培養を用いた実験系で調べたところ、明らかな活性の発現が認められた。歯周炎における炎症性骨吸収が歯周組織に限局されていることを考えると、この莢膜多糖が骨吸収を引き起こすという今回の結果は極めて興味深い。現在、歯周炎で見られる歯周組織の破壊には、宿主細胞が産生する多様な炎症性因子が関与していると考えられている。なかでもIL-1はIn vivoおよびIn vitroで骨吸収を引き起こすとともに破骨細胞の分化を誘導することが知られている。今回の研究で、Y4株由来の多糖抗原がIL-1の産生を強く誘導するとともに骨吸収を引き起こすことが明らかとなり、このIL-1により骨吸収が惹起される可能性が強く示唆された。今後、莢膜多糖抗原による骨吸収活性発現のメカニズムの解明に関して詳細な検討を加えていく予定である。
心筋細胞におけるTWIK型K+チャネルの分子生物学的同定および生理的機能

ラット胎仔・新生仔心室筋細胞に見られる持続性外向き整流性電流とTWIK型チャネルの関係について調べた。まず、電気生理学的にラット胎仔および新生仔に見られる電流をホールセル・パッチクランプ法を用いて同定した。この電流は主としてK+を透過させる電流であり、ー部Na+も透過させることが判明した。この電流は外向き整流性を示し、高い脱分極で脱活性化を示し、pH感受性であった。しかし、lto電流とは異なり、4-アミノピリジンによってブロックされなかった。この電流は成長するにしたがい、心室筋細胞には見られなくなることも明らかにした。この電流の分子的実体を明らかにするため、候補遺伝子を、持続性・pH感受性などの点においてその性質の似ているTWIK型K+チャネルに求めた。まず、既知のTWIK型K+チャネルであるTWIK,TREK,TASKなどの配列を元に、ラット心室筋のRT-PCRを行ったところ、既知のTWIKチャネル、及び、TASKに類似した未知のmRNAの発現を認めた。RNAse protection assayによればTWlKチャネルの発現量は、成長に伴ってやや増加傾向を認めたが、TASK型チャネルの発現は成長ラットには見られなかった。現在このチャネルを5'-RACE法などによりクローニシグ中であり、その後、カエル卵母細胞および哺乳類培養細胞に発現させ、その電気生理学的性質を明かにする予定である。1. nativeな持続性電流の確認まず、パッチクランプ法を用いて、ラット新生仔より心室筋細胞を分離し、持続性電流成分を同定した。この成分は、steady-state inactivationを受けない持続性の成分であり、薬理学的には、Ba^<2+>感受性で、4-AP非感受性であることを確認した。4-AP感受性の点においてヒトなどに報告されているものと違いがあった。2. RT-PCRによるTWIK型K^+チャネルの確認RT-PCRにより、TWIK,TREK,TASK型の各チャネルがラット心臓に発現しているかどうかを調べた。また、その発現を胎仔ラット、成長ラットと比較した。これらの結果は、パッチクランプ法にて見られたものと良く似た分布を示し、持続性電流が、これらの遺伝子の発現であることを示唆した。現在、PCRプロダクトのシークエンシング中である。3.発現系の準備カエル卵母細胞での発現のために、3'-RACE法を用いてフルクローニング中である。次年度には、人工発現系を用いてチャネルの性質の比較を行う予定である。
層状酸化物ナノシートを利用した新しい材料設計

層状酸化物ナノシートを用いた新し化合物の合成を試みてきたが、以下のような結果を得ることができた。1)層状酸化物ナノシートと伝導性高分子との複合化2)層状酸化物のイオン交換特性層状酸化物ナノシートの出発物質となるプロトン化した層状酸化物とのBi^<3->イオンとのイオン交換反応を試みた。その結果、プロトン化した層状酸化物の層の電荷密度が大きくなるほどBi^<3+>イオンの取り込み量が大きくなることがわかった。また、Na_<0.95>Mo_2O_4のNa^+イオンとのイオン交換を試み、プロトンとのイオン交換が可能であることを見出した。しかし、このプロトン化した層状酸化物からはナノシートは得られなかった。3)新しい層状酸化物の探査これまでに多くの層状酸化物についてナノシート化とそれを応用した研究がなされてきたが、これまdねいないナノシートを得ることを目的として新しい層状酸化物の探査を試みた。その結果、2種類の新しい層状リン酸ジルコニウム[enH_2]Zr(OH)(PO_4)(HPO_4)(en ; ethylene diamine)および[NH_4]_2Zr_2(OH)_2(PO_4)_2(HPO_4)の合成および結晶構造解析に成功した。現在、これらの新しい層状リン酸ジルコニウムのナノシート化を試みている。層状酸化物ナノシートを利用して以下のような新しい材料の合成を試みた。(1)鉄コロイドとの反応による多孔体の合成水酸化鉄は水溶液中でコロイドになることが知られているが、そのコロイドと層状酸化物ナノシートと反応させ、鉄コロイドを加熱により酸化物にしてその隙間による多孔体化を試みた。その結果導入コロイドの量により多孔体の比表面積に変化することがわかった。(2)Layer-by-Layer膜の形成とEu^<3+>導入による蛍光体薄膜の合成層状酸化物ナノシートとPDDAを石英板に交互に積層させることが可能であるが、PDDA中にEu^<3+>を導入することで蛍光体薄膜を合成することができた。(3)導電性高分子との有機-無機複合体の合成層状酸化物ナノシートとピリジン系の導電性高分子を組み合わせた有機-無機複合体を合成し、導電特性の評価を行った。(4)Bi^<3+>イオンとのイオン交換反応14種類のプロトン化した層状酸化物とBi^<3+>イオンとのイオン交換反応を試みた結果、そのイオン交換率は層状酸化物の電荷密度が高くなるほど高くなる傾向が見られた。これは、H^+イオンとBi^<3+>イオンのイオン交換反応ではBi^<3+>イオンを一個取り込むためには三個のH^+イオンが必要になることから、二次元的な電荷の広がりが小さいH^+型層状無機化合物、すなわち電荷密度が高い方がBi^<3+>イオンとイオン交換しやすかったものと考えられた。(1)水酸化鉄コロイドとの反応による多孔体の合成水酸化鉄コロイドとFe_<0.5>Nb_<1.5>O_5ナノシートと反応させて多孔体の合成を試みた。その結果導入コロイドの量により多孔体の比表面積に変化し、最大で140m^2/gの比表面積を有する多孔体を合成することができた。(2)導電性高分子との有機-無機複合体の合成Fe_xTi_<1-2x>Nb_<1+x>O_5(x=0-0.5)ナノシートとPNOEtPyBrから構成されるナノ複合体は層間距離4.6nmであり、PNOEtPyBr分子は層間で53°に傾いて2層として存在しており、ホストの組成に依存していなかった。各組成のナノ複合体およびPNOEtPyBrの交流電気伝導度の周波数依存性を調べた。

ナノ複合体の交流電気伝導度は、ホスト層のxの減少と共に増加する傾向にあった。出発物質であるHFe_xTi_<1-2x>Nb_<1+x>O_5(x=0-0.5)はxが減少すると層間がプロトンを介して水素結合を形成して水和しなくなる。このような水素結合形成能が、層間の導電性高分子の電子移動を容易にしていると考えられxの減少と共に電気伝導度が高くなったと考えられた。(3)水熱反応による再積層化ナノシートFe_xTi_<1-2x>Nb_<1+x>O_5(x=0-0.5)を水熱処理した結果、220°C以上で沈殿物が生成した。x=0およびx=0.125で得られるアナターゼ型TiO_2に類似した回折ピークは正方晶系として指数付けでき、x=0.25および0.375で得られるルチル型TiO_2に類似した回折ピークは正方晶系として指数付けできた。x=0.5では酸処理による再積層化物と類似していた。このことはx=0.5組成の出発物質であるHFe_<0.5>Nb_<1.5>O_5がHFe_xTi_<1-2x>Nb_<1+x>O_5の中でも最も層間が水和しやすいことと関係していると考えられた層状酸化物ナノシートを用いた新しい化合物の合成を試みてきたが、以下のような結果を得ることができた。1)層状酸化物ナノシートと導電性高分子との複合化2)層状酸化物のイオン交換特性層状酸化物ナノシートの出発物質となるプロトン化した層状酸化物とのBi^<3+>イオンとのイオン交換反応を試みた。その結果、プロトン化した層状酸化物の層の電荷密度が大きくなるほどBi^<3+>イオンの取り込み量が大きくなることがわかった。また、Na_<0.95>Mo_2O_4のNa^+イオンとのイオン交換を試み、プロトンとのイオン交換が可能であることを見出した。しかし、このプロトン化した層状酸化物からはナノシートは得られなかった。3)新しい層状酸化物の探査これまでに多くの層状酸化物についてナノシート化とそれを応用した研究がなされてきたが、これまでにないナノシートを得ることを目的として新しい層状酸化物の探査を試みた。その結果、2種類の新しい層状リン酸ジルコニウム[enH_2]Zr(OH)(PO_4)(HPO_4)(en ; ethylene diamine)および[NH_4]_2Zr_2(OH)_2(PO_4)_2(HPO_4)の合成および結晶構造解析に成功した。現在、これらの新しい層状リン酸ジルコニウムのナノシート化を試みている。
他者存在がストレス反応に与える影響-NIRSを用いたニューロイメージング研究

本年度は、昨年度の結果を踏まえ、他者との視線を用いたコミュニケーションの基本となる視線感受の脳内処理についてのモデルを構築するため、新たな実験を行った。本研究は,人の視線感受性と性格特性との関連を検証する実験1,性格特性における視線感受に対する脳活動差異を検証する実験2から成る。実験1では視線方向判断課題を用いた視線感受性の計測と4種類の質問紙調査を実施した。実験2の対象者は実験1への参加者から男女5名ずつ,視線感受性の高低を用いて3群に分け,光トポグラフィ装置を用いて視線刺激に対する1-back課題時の前頭葉活動を計測した。性格傾向と視線感受性との関連について自己範囲指標と脳活動信号を用いて検討した。神経症傾向が強い男性は自己範囲が狭いという特徴が示され,他者の視線が自分を向いている刺激を使った1-back課題に対し,刺激開始直後から左前頭葉よりも右前頭葉で強い活動を示した。神経症傾向が強い男性は,視線感受性が高いため,他者の視線が自分を向いているか否かを素早く精密に処理していると考えられる。また,視線刺激の1-bcak課題はワーキングメモリ課題による活動を促すため,左・右前頭葉(46野付近)で活動が観測されたが,特に左前頭葉よりも右前頭葉で強い活動が観測された。本結果は,視線感受の脳内処理には右前頭葉が関与することを示唆している。以上より,神経症傾向が強い人は,視線情報を素早く検出し処理する特徴を持っており,これは自己に対する脅威の状況を素早く判断するためであると推測する。本研究は,性格傾向と視線感受性との関連を脳活動計測により検討した最初の研究である。神経症傾向の強い男性は視線感受性が高く,右前頭葉において特異的な脳活動を示すことが明らかになった。また自己範囲を指標として個人の視線感受性が測定可能であること,視線感受性による脳活動差異を光トポグラフィにより測定可能であることが明らかになった。本研究では、他者の存在・他者の視線をキーワードとして、対人ストレスとその他のストレスとの相互関係についてニューロイメージングの技法を用いて解明することを大きな目的としている。ひとくちに対人ストレスと言っても様々あるが、その根本にあるのは"他者が身近に存在すること"である。今年度は第1課題である「"他者"とはどのようなものがどのように認知されているのかに着目し、他者認知の神経生理学的な基盤に迫る」ことを中心に据えて検討した。日立製作所基礎研究所と協同し、NIRSを用いて他者認知過程評評価、および他者の存在がさまざまな認知課題遂行に与える影響に関してニューロイメージング研究を行うために、数か月をかけてNIRSの扱いに習熟した。"他者"が意識される刺檄として"視線"を用い、ブロックデザインのプログラムを作成した。このプログラムを用い、相手が自分を"見ている"と感じるときと、"見ていない"と感じるときの脳機能の差を検討した。"見ているブロック"と"見ていないブロック"での脳機能の差を検討するために、それぞれの条件ブロックの活動から"コントロールブロック(oxボタン押し課題)"の活動を引いたものを"見ている"あるいは"見ていない"ときの活動とした。女性5名を対象にこのプログラムで予備実験を行った結果、"見ている"判断の時のみ、右脳の前頭前皮質が有意な反応を示した。つまり、人に見られていると感じているときには、右前頭前皮質の血流が有意に大きくなった。よって、この部位に"見られているか否が"の判断に関わるなんらかの機能があると考えられた。この結果を6月のHuman Brain Mappingにて発表し、国内外の研究者より多くの有益な助言を受けた。今後、大人数を対象としてデータを集めるとともに、さらに心拍・血圧、唾液などの生理的な指標、および質問紙で性格などの個人特性を測り、これら指標との関連も含めて詳細な検討を行う。

神経症傾向の強い男性は視線感受性が高く,右前頭葉において特異的な脳活動を示すことが明らかになった。また自己範囲を指標として個人の視線感受性が測定可能であること,視線感受性による脳活動差異を光トポグラフィにより測定可能であることが明らかになった。
月経周期でのエストロゲン動態に伴う顎関節症の病変部の分子メカニズムに関する研究

1.月経周期に伴う顎関節症の関節内炎症性病態の分析顎関節症状患者42名(すべて女性)の月経周期に伴うエストロゲン動態と円板後部組織の炎症性病態ならびに関節疼痛症状との関連性について検討した。関節疼痛の程度(VAS値)とMRIによる円板後部組織のガドリニウム造影効果との間には、中等度の相関性が得られた(r=0.68,p<0.001)。関節疹痛と月経周期との関係として、月経期、増殖期および分泌期におけるVAS値(mm)の平均は、それぞれ55.0±17.1、38.3±22.1、60.0±18.1で、増殖期群と分泌期群の間に統計的有意差がみられた(p<0.05)。関節疼痛群において、月経期、増殖期および分泌期での円板後部組織のsignal intensity(SI)ratio[(SIpost-SIpre)/SIpre]の平均値は、1.74±0.45、1.16±0.61、1.97±0.63で増殖期群に有意に低かった(p<0.001)。また、非症状側群では、各周期におけるSI ratioの平均値はすべて1.00以下で、しかも3群間で有意差はみられなかった。2.滑膜組織を用いた基礎的検討慢性リウマチ性関節炎患者の膝関節手術後の滑膜細胞を用いて、17β-estradiolによるpretreatmentをおこない、培養上清中の炎症性サイトカイン量を測定した結果、IL-6、IL-8、GM-CSFの産生は約1520%程度抑制された。また、Gel Shift Assayにおいて、estradiol処理によりNF-κBのbinding activityの低下が認められた。なお、滑膜細胞内のiNOS、estrogen receptor(α,β)mRNAの発現に対するエストロゲン効果については、RT-PCR法で現在検討中である。顎関節症の発症については、咬合異常や咀嚼筋の変化を指摘する研究は多く認められるが、女性ホルモンとの関係について検討した研究は見当たらない。本研究(平成12年度)では、月経周期に伴う血中エストロゲンの変化と関節疼痛症状の程度、関節円板後部組織の造影効果との関連性について評価した。結果:関節疼痛の程度と円板後部組織の造影効果との間には中等度の相関性が得られた(r=0.68,p<0.001)。関節疼痛と月経周期との関係として、月経期、増殖期および分泌期におけるVAS値(mm)の平均は、それぞれ55.0±17.1、38.3±22.1、60.0±18.1で増殖期群と分泌期群の間に統計的有意差がみられた(p<0.005)。関節疼痛群において、月経期、増殖期および分泌期での円板後部組織のsignal intensity(SI)ratio[SIpost-SIpre/SIpre]の平均値は1.74±0.45、1.16±0.61、1.97±0.63で、増殖期群に有意に低かった(p<0.001)。非症状側群では、各周期におけるSI ratioの平均値はすべて1.00以下で、3群間で有意差はみられなかった。結論:以上の結果により、体内でエストロゲン分泌が有意な増殖期では関節疼痛や円板後部組織の炎症性は軽減し、分泌が低下する分泌期で増強する傾向を示した。

平成13年度における基礎的研究のために、RA患者3名における膝関節手術後の滑膜組織を用いて、explant法ならびにcollagenase処理法によりマクロファージと線維芽細胞に分離し、細胞培養後凍結保存している。1.月経周期に伴う顎関節症の関節内炎症性病態の分析顎関節症状患者42名(すべて女性)の月経周期に伴うエストロゲン動態と円板後部組織の炎症性病態ならびに関節落痛症状との関連性について検討した。関節疼痛の程度(VAS値)とMRIによる円板後部組織のガドリニウム造影効果との間には、中等度の相関性が得られた(r=0.68,p<0.001)。関節疼痛と月経周期との関係として、月経期、増殖期および分泌期におけるVAS値(mm)の平均は、それぞれ55.0±17.1、38.3±22.1、60.0±18.1で、増殖期群ど分泌期群の間に統計的有意差がみられた(ρ<0.05)。関節疼痛群において、月経期、増殖期および分泌期での円板後部組織のsignal intensity(SI)ratio[(SIpost-SIpre]の平均値は、1.74±0.45、1.16±0.61、1.97±0.63で増殖期群に有息に低かった(p<0・001)。また、非症状側群では、各周期おけるSI ratioの平均値はすべて1.00以下で、しかも3群間で有意差はみられなかった。2.滑膜組織を用いた基礎的検討慢性リウマチ性関節炎患者の膝関節手術後の滑膜細胞を用いて、17β-estradiolによるpretreatmentをおこない、培養上清中の炎症性サイトカイン量を測定した結果、IL-6、IL-8、GM-CSFの産生は約1520%程度抑制された。また、Gel Shift Assayにおいて、estoradiol処理によりNF-κBのbinding activityの低下が認められた。
溶融塩炉の炉工学ならびに工学的安全性に関する研究

1)核分裂生成物の壁面への沈着現象の解明:ここでは、炭酸塩水溶液からの炭酸カルシウムの壁面付着現象によって、溶解度変化に基づく付着機構を検討してみた。Ca【CO_3】溶解度の溶存【CO_2】への依存性を利用し、【CO_2】ガスを吹き込むことによって過飽和度を調節した。測定部には、直径10mmのステンレス管を用い、これを外部より加熱することによって、壁面付着を起こさせた。測定は、レイノルズ数3,00010,000で行ない、下流に向って付着物の増加する傾向、レイノルズ数の増加によって付着物の減少する傾向など単純な物質移動理論では説明しきれない特徴ある結果を得ている。2)溶融塩と水の直接接触現象の解明:本年度は、蒸気爆発発生の条件、換言すれば安全上重要である発生させない条件をさぐってみた。その結果、溶融塩・水系では蒸気爆発発生の条件として両液温度の上限、下限がある。しかし、この温度範囲は、従来いわれているような自発核の生成理論ではよく説明できない。高温液温度の上限は、界面の不安定によって液液接触が生じる下限温度、低温液は過冷状態であることが、その発生条件になっていることが解った。3)トリウムを含む溶融塩の熱物性値:昨年度までは、高温における候補燃料塩の熱拡散率の測定法に改良を加え、いろいろな組成の塩に対し1,000Kまでの熱拡散率を測定してきた。しかし、溶融塩は一般にふく射透過性を持つものが多いので、より正確な測定値を得るためには、測定中におけるふく射の影響を補正する秘要がある。本年度は、この補正法の開発を行なうと共に、比熱の測定を行なって熱物性値の資料の充実に努めた。
アクティブラーニングにおける基礎的・汎用的能力の定量的評価の研究

本研究では、社会人基礎力を学生の学習過程における学習産物データを使って定量的に評価する手法の構築を目的としている。この研究の背景には、近年、アクティブラーニングが注目を浴び、従来の受動的学習体型から能動的学習体型(アクティブラーニング)への変化が起こっている。これに伴い、試験での優劣評価ではなく、主体性や課題解決能力など社会人基礎力に対する評価の変革が課題となっている。本研究ではこの点に着目し、学習過程における評価の質的改善を目指し、学生の学習過程からの産物データ(実験報告書など)を基に定量的評価を行う手法を構築し、その実験的検証を行うものである。