hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低酸素応答における細胞内酸素センサーの同定と解析

低酸素応答における低酸素コンプレックスの決定低酸素応答におけるシグナル伝達機構の解析を、プロリン水酸化酵素PHD3が形成する低酸素コンプレックスに着目して進めた。培養細胞にPHD3を外来的に発現させ、免疫沈降法によりPHD3コンプレックスを精製した。精製したコンプレックスを二次元電気泳動で展開し、質量分析法により構成タンパク質の決定を行った。一連の解析11回の試行で108のタンパク質スポットを決定した。これらのスポットの情報をデータベースと照合し、繰り返し得られるもの、異なるアプローチで同様に得られるものを指標として、三つの分子を主たる解析対象として絞り込んだ。これら三分子に関して遺伝子クローニングを行い、その発現とPHD3との結合を培養細胞の系で検証した。本研究で得られた成果の一部は、BMB2007学会(2007年12月横浜)において発表した。酸素センシング機構に働くタンパク質生物の酸素センシング機構にはPHD3低酸素コンプレックスの形成が関与していることを仮説として、ゲル濾過法を用いて、低酸素コンプレックスを分子量ごとに分画した。質量分析により得られた候補タンパク質の発現をゲル濾過分画内で確認し、低酸素コンプレックス形成への関与を示した。
哺乳動物細胞のDNA複製開始機序の解析

E2Fの過剰発現は単独で休止期の線維芽細胞にDNA合成を誘導する。従って、E2FはDNA複製開始の制御に係わる非常に重要な遺伝子の発現を制御していると予想される。我々は、酵母でDNA複製開始の制御に関わるオリジン接合複合体ORClのヒトホモローグ(HsOrcl)の発現がE2Fによって制御されていることを明らかにした。しかしHsOrclの過剰発現のみでは休止期の線維芽細胞にDNA合成を誘導し得なかった。最近、酵母でオリジン結合複合体と作用することによりオリジンの使用頻度を上げるCDC6のヒトホモローグ(HsCdc6)が同定された。そこでHsCdc6の発現制御機序を調べたところ、E2Fによって制御されていることが明らかとなった。しかし、HsCdc6の過剰発現のみでは、休止期の線維芽細胞にDNA合成を誘導し得なかった。従って、哺乳動物細胞でDNA複製開始の制御に係わる遺伝子の発現がE2Fによって制御されていること、DNA複製開始には複数のE2Fの標的遺伝子の発現誘導が必要であることが示唆された。
葉序の制御過程に関わる発生遺伝学的機構の解析

植物の地上部の形は、葉がどのように茎頂分裂組織から分化してくるかによって大きく左右される。葉の空間的分化パターンは葉序と呼ばれるが、葉序のパターンが変化する変異体(dec)をイネで同定した。DEC遺伝子の単離や、変異体の遺伝学的、生理学的解析により、DEC遺伝子はこれまで知られていなかったサイトカイニンの情報伝達経路に関わることによって、葉序のパターンを制御していることが明らかとなった。本年度はイネの葉序が異常となる変異体decussate(dec)の原因遺伝子の機能解析を通して、葉序の制御機構についての理解を深めることを目的として解析を行ない、以下の成果を得た。まずこれまで候補として考えられていた遺伝子が真にdec変異体の原因遺伝子であるかを確認するため、候補遺伝子を含むゲノム領域をdec変異体に導入した。その結果、表現型が完全に回復した。このことからこの遺伝子がDEC遺伝子であることが証明された。またdec変異体には2つの対立遺伝子が存在することが明らかとなったが、一つは終止コドンを生ずる1塩基置換、もう一つはDEC遺伝子座を完全に欠失する変異であった。両方とも表現型に大きな差は見られないことから、2つのdec変異体は機能を完全に失っていると考えられた。DEC遺伝子はこれまでに報告のない全く新しいタンパクをコードしており、保存性の高い領域は存在するものの、タンパクの生化学的機能を推察することはできなかった。次にDEC遺伝子がどのような器官特異性を示すかを明らかにするためにRT-PCRとin situ hybridizationによる発現解析を行なった。DEC遺伝子は調査したすべての器官で発現が観察され、またin situ hybridizationにおいても組織特異的な発現は認められなかった。次に班0遺伝子を構成的発現プロモーターであるアクチン遺伝子の下流に繋いだコンストラクションを作成し、野生型に導入したところ明らかな表現型は観察されなかった。これらのことから、DEC遺伝子による葉序の決定機構は、特定の組織の発生イベントに関わっているのではなく、葉序の決定に必要な発生イベントを上流から制御する因子であることが予想された。またDEC遺伝子の下流にGFPを繋いだコンストラクトをタマネギの表皮細胞に導入し、DEC融合タンパクの細胞内局在を観察したところ、細胞質に強い蛍光が認められ、DECタンパクは主に細胞質で機能することが明らかとなった。植物のシュートの形は葉の空間的な配置によって大きく影響を受ける。植物の茎に対する葉の着生パターンは葉序と呼ばれ、古くから多くの研究報告があるが、種や生育相特異的な葉序がどのように確立されているのかは未だ不明な点が多い。本研究ではイネの葉序が異常となる変異体decussate(dec)の原因遺伝子の機能解析を通して、新たな葉序の制御機構を明らかにすることを目的として解析を行った。DEC遺伝子は既知のタンパクとは相同性を示さない全く新しい因子をコードしている。DEC遺伝子は植物体において様々な器官で一様に発現しており、過剰発現体においては表現型に特に異常は認められなかった。また、DECタンパクは主に細胞質に存在することも明らかとなった。次にDEC遺伝子がどのような制御機構に関わる遺伝子であるかを推察する為に、野生型と変異体との間でマイクロアレイ解析を行った。その結果、植物ホルモンの一つであるサイトカイニンの情報伝達に関わる複数の遺伝子(Type-Aレスポンスレギュレーター)の発現が、dec変異体では低下していることが明らかとなった。また、dec変異体ではサイトカイニン添加に対する反応性が低下していることも明らかとなった。これらのことから、DEC遺伝子はサイトカイニンの情報伝達を介して、葉序パターンを制御していると考えられる。トウモロコシのType-Aレスポンスレギュレーターの機能喪失変異体としてabphyl1変異体が知られており、dec変異体と同様に葉序の転換が認められることから、イネ科ではサイトカイニンシグナリングが葉序パターンの決定に重要な役割を果たしていると考えられる。また、dec以外にも葉序が異常となり葉の左右が非対称となるleaf lateral symmetry1変異体の解析を行い、いくつかの候補遺伝子を絞り込んだ。この変異体の更なる解析は、イネにおける葉序の制御機構や葉の形態形成との関わりを明らかにしていく上で有用であると考えられた。
麻薬紛争下の集合行為：現代メキシコにおける自警団運動の比較分析

本研究は、麻薬紛争下のメキシコにおいて、武装した市民による自警団運動がなぜ発生し、大きな運動へと拡大し、そして衰退していったのか、そのメカニズムを社会運動論の知見を参照しつつ明らかにしようとするものです。凄惨な暴力を展開する麻薬犯罪組織に対抗することは、市民にとって命に関わるきわめて危険な行為であるうえ、違法行為として処罰の対象ともなりえます。そのようななかで、ミチョアカン州の自警団運動は、最大で1万人を超えるメンバーを抱えるメキシコでもっとも大きな運動へと発展しました。ミチョアカン自警団の発生、拡大、そして衰退の要因を探ることは、メキシコのような暴力が市民の暮らしに大きな影響を与える社会において、国家と市民の関係を考えるうえでとても重要です。このような問題意識にもとづき、平成30年度は、最終成果となる論文の執筆を進めました。その際、前年度までに論稿として発表し、研究会でも報告を行った、メキシコの麻薬紛争の現状や自警団運動の概要についての調査結果を下敷きとしました。研究論文は馬場(2019)として発表しました。ミチョアカン自警団に関する事例研究を論文として発表することができたため。ひとまずミチョアカンの自警団運動については、研究論文としてまとめることができたので、今後はメキシコ内での比較研究につなげていきます。特に、ミチョアカン同様に周辺的で、犯罪組織の暴力が苛烈な地域において、自警団が発生する条件とはどのようなものなのか、比較の観点から進めていく予定です。1年目は、(1)メキシコにおける麻薬密輸と全国的な治安状況の推移を概観したうえで、地方の動向と暴力のタイプへの着目から、暴力の推移と犯罪の性格の変容を明らかにすることと、(2)ミチョアカン州で出現した自警団が大きな「成果」をおさめた要因を解明することを目標に、研究を行いました。具体的に(1)については、2007年から2011年にかけての暴力の激化が2012年から2014年にかけていったん沈静化傾向にあった後、2015年から再燃傾向にあること、そして近年の暴力再燃もまた、麻薬を含む組織犯罪と密接にかかわっており、主要な麻薬犯罪組織が弱体化する一方、それらから分裂・派生した組織も含めて中小の犯罪集団が乱立する状況が、近年の暴力再燃に影響を与えている可能性を指摘しました。(2)については、麻薬紛争が激化し、市民に対する暴力被害が深刻化するなか登場した自警団に着目し、その運動が犯罪組織のコミュニティからの一掃といった成果をおさめるための条件として、運動の資源と連邦政府の戦略に着目する必要を指摘しました。また、ミチョアカン州の事例から、成果の要因が時期によって異なる可能性について検討しました。それぞれの研究成果は、(1)「ヘゲモニーの衰退と拡散する暴力ーメキシコ麻薬紛争の新局面」(『ラテンアメリカレポート』34 (2)、2018年1月刊行)と、(2)「麻薬紛争下の市民の蜂起ーミチョアカン自警団運動とその成果に関する考察ー」(未刊行)としてそれぞれ論文にまとめました。2本の論文を執筆したほか、2つの国内の研究会で成果を報告し、2つの一般向け講演会で成果の発表を行うことができたため。データの収集が難しいテーマではありますが、メキシコの研究者と連携することで自警団運動の比較分析を行う上で必要なデータの収集に努めます。海外調査渡航費を独立基盤形成支援予算から支出できたため。翌年度の使用は、海外渡航調査費にあてます。最終年度も研究調査と成果発表のため2回の海外渡航が必要となる見込みのため、一部助成金を最終年度に持ち越すこととしました。
アクチン重合阻害剤に対するテトラヒメナの耐性能獲得機構の研究

アクチンは全ての真核生物に重要な細胞骨格であるが、細胞内アクチン濃度の制御機構は不明である。我々は、アクチン重合阻害剤に対するテトラヒメナの耐性獲得現象を発見した。これには、数十種類の遺伝子転写誘導とアクチン分子の活発な合成分解が伴う。この分子機構の根底には、アクチンが細胞機能を健全に発揮できるよう、最適な量と品質を感知・制御する「細胞骨格ホメオスタシス」の存在が伺えた。本研究ではテトラヒメナのユニークなアクチン重合阻害剤耐性機構を調べることで、「細胞骨格ホメオスタシス」の実体を探る。本研究課題の核心は、「細胞がアクチンの量をどのように感知し、制御するか?」という問いに、アクチン重合阻害剤で撹乱した状態から、テトラヒメナが適切な細胞骨格機能を回復する過程を調べ、解答を得ることである。平成30年度は研究計画1「細胞が重合してないアクチンの増加を感知し、それが一群の遺伝子の転写誘導を促すのか?」で2つの成果を上げた。1ACT1あるいは、繊維化しないACT1の過剰発現で、LA処理直後からLA耐性能を示すことが分かった。この結果は、ACT1の単量体アクチン量の増加が、ACT2とLA耐性能獲得遺伝子群の発現誘導を引き起こしていることを示す。2RNA seqで、ラトランキュリンA (LA)処理時に転写量が顕著に増加する遺伝子を同定・分類し、2つの遺伝子、アクチン束化因子フィンブリンの遺伝子(FIM1)と転写因子遺伝子(LITAF)に着目した。FIM1破壊株は普段は野生株と同様に食胞を形成するが、LA耐性能を獲得できなくなった。したがって、LA耐性能獲得には多くの遺伝子の発現が不可欠であると考える。また、LITAF過剰発現株では、LA耐性能獲得が促進されることを発見した。転写因子LITAFが「細胞骨格ホメオスタシス」において重要な役割を担っていると考える。本研究では上記研究計画1では、興味深い成果を上げることができたが、そのほかの2つの研究計画では十分な成果を上げられなかった。以下に、研究計画2と研究計画3の内容を示す。研究計画2「アクチンの分解機構をユビキチン経路かあるいは選択的オートファジー経路か?」では、以下のことを企画したが、十分な成果を達成できなかった。ユビキチン経路については、LA処理細胞をプロテアソーム阻害剤で処理して、アクチン(ACT1)のユビキチン化状態について調べる。あるいは、リン酸化タンパク質の電気泳動度が大きく変化するPhos-tagゲルを用いて、アクチンのリン酸化の変動を調べる。また、我々の先行研究で同定したユビキチンリガーゼやフラグミンキナーゼの遺伝子破壊株を作成し、アクチンのタンパク質量の変化やLA耐性能の獲得に及ぼす影響を調べる。オートファジーについては、テトラヒメナのATG8の3つのアイソフォームの各遺伝子破壊を用いて、LA処理後のアクチンの状態を野生株のものと比較する。その結果、アクチンの分解経路を特定する。研究計画3「アクチン量の不足を、細胞がどのように感知して、必要なアクチン量を合成するのか?」に関しては、研究計画1で転写因子LITAFが重要であることが分かったので、この転写因子の結合配列をゲルシフトアッセイ等で特定することを試みているが、十分な成果は上げられなかった。当初の計画通り、3つの研究計画を推進する。これらの具体的な内容は下記のとおりである。研究計画1「細胞が重合してないアクチンの増加を感知し、それが一群の遺伝子の転写誘導を促すのか?」:FIM1遺伝子破壊株がLA耐性能を十分獲得できなかったので、そのメカニズムを解明するため、FIM1遺伝子破壊がアクチンの発現量に影響するか調べる。転写因子LITAFについては、YFP融合タンパク質を過剰発現し、上記の遺伝子群の転写量を増加するか定量PCRにより調べる。また、転写因子LITAFがLA処理時に核内に移行するなどの局在変化を示すか、蛍光顕微鏡観察する。その結果、細胞がアクチンの状態を核内に伝達し、遺伝子発現を誘導するしくみが理解できると考える。研究計画2「アクチンの分解機構をユビキチン経路かあるいは選択的オートファジー経路か?」:LA処理細胞をプロテアソーム阻害剤で処理して、アクチン(ACT1)のユビキチン化状態について調べる。研究計画3「アクチン量の不足を、細胞がどのように感知して、必要なアクチン量を合成するのか?」:ACT1とACT2の遺伝子の上流配列から、研究計画1で同定した転写因子LITAFの結合配列をゲルシフトアッセイ等で特定する。その結果、両遺伝子の転写調節の違いを理解する。

この分子機構の根底には、アクチンが細胞機能を健全に発揮できるよう、最適な量と品質を感知・制御する「細胞骨格ホメオスタシス」の存在が伺えた。本研究ではテトラヒメナのユニークなアクチン重合阻害剤耐性機構を調べることで、「細胞骨格ホメオスタシス」の実体を探る。本研究課題の核心は、「細胞がアクチンの量をどのように感知し、制御するか?」という問いに、アクチン重合阻害剤で撹乱した状態から、テトラヒメナが適切な細胞骨格機能を回復する過程を調べ、解答を得ることである。平成30年度は研究計画1「細胞が重合してないアクチンの増加を感知し、それが一群の遺伝子の転写誘導を促すのか?」で2つの成果を上げた。1ACT1あるいは、繊維化しないACT1の過剰発現で、LA処理直後からLA耐性能を示すことが分かった。この結果は、ACT1の単量体アクチン量の増加が、ACT2とLA耐性能獲得遺伝子群の発現誘導を引き起こしていることを示す。2RNA seqで、ラトランキュリンA (LA)処理時に転写量が顕著に増加する遺伝子を同定・分類し、2つの遺伝子、アクチン束化因子フィンブリンの遺伝子(FIM1)と転写因子遺伝子(LITAF)に着目した。FIM1破壊株は普段は野生株と同様に食胞を形成するが、LA耐性能を獲得できなくなった。したがって、LA耐性能獲得には多くの遺伝子の発現が不可欠であると考える。また、LITAF過剰発現株では、LA耐性能獲得が促進されることを発見した。転写因子LITAFが「細胞骨格ホメオスタシス」において重要な役割を担っていると考える。本研究では上記研究計画1では、興味深い成果を上げることができたが、そのほかの2つの研究計画では十分な成果を上げられなかった。以下に、研究計画2と研究計画3の内容を示す。研究計画2「アクチンの分解機構をユビキチン経路かあるいは選択的オートファジー経路か?」では、以下のことを企画したが、十分な成果を達成できなかった。ユビキチン経路については、LA処理細胞をプロテアソーム阻害剤で処理して、アクチン(ACT1)のユビキチン化状態について調べる。あるいは、リン酸化タンパク質の電気泳動度が大きく変化するPhos-tagゲルを用いて、アクチンのリン酸化の変動を調べる。また、我々の先行研究で同定したユビキチンリガーゼやフラグミンキナーゼの遺伝子破壊株を作成し、アクチンのタンパク質量の変化やLA耐性能の獲得に及ぼす影響を調べる。オートファジーについては、テトラヒメナのATG8の3つのアイソフォームの各遺伝子破壊を用いて、LA処理後のアクチンの状態を野生株のものと比較する。その結果、アクチンの分解経路を特定する。研究計画3「アクチン量の不足を、細胞がどのように感知して、必要なアクチン量を合成するのか?」に関しては、研究計画1で転写因子LITAFが重要であることが分かったので、この転写因子の結合配列をゲルシフトアッセイ等で特定することを試みているが、十分な成果は上げられなかった。当初の計画通り、3つの研究計画を推進する。これらの具体的な内容は下記のとおりである。研究計画
iPS細胞への長期的遺伝子発現を可能とするエピソーマルベクターの迅速作製法の確立

我々はこれまでに細胞核でエピソーマルに持続感染する特徴を持つボルナウイルス(BoDV)を利用したウイルスベクター、ボルナウイルスベクター(BoDVベクター)を開発した。BoDVは細胞周期を通じて複製複合体であるリボ核酸複合体(RNP)を宿主染色体に結合させながら複製するため核内で持続感染する。しかし、増殖の過程でDNAを生産せず、複製のために宿主染色体に入り込む必要がないため、宿主ゲノムに組み込まれる可能性は極めて低い。また、ウイルスの多くは増殖の過程で宿主細胞を殺してしまうが、BoDVは細胞障害性を示さずに持続感染するため、インテグレーションフリー長期遺伝子導入ツールとしての有用性が高い。iPS細胞への安定的かつ効率的な遺伝子導入法の確立は、再生医療や創薬の開発において重要な課題である。ボルナウイルスベクターは宿主ゲノムへ組み込まれることなくiPS細胞へ効率よく安定的に遺伝子導入が可能であるが、他のベクターと比べ作製効率が悪いという問題点がある。平成30年度はボルナウイルスベクターの作製効率を改善するため、1ベクター産生細胞の検討、2ベクタープラズミド導入法の改良を目的とした。平成30年度予定していた実験計画1では様々な細胞を用いてBoDVベクターの複製効率を比較し、ベクター産生効率の高い細胞を同定することができた。しかし、実験計画2で予定していたベクタープラズミド導入方法の改良を行うまでに至らなかった。平成31年度は、ベクタープラズミド導入法を改良するため、ヘルパープラズミドを発現するヘルパー細胞を作製する。さらに、改善後のプロトコールで作製したベクターの遺伝子導入効率と安全性試験をiPS細胞を用いてin vitro評価系にて行う。
地形論的統語論と自立分節韻律音韻論にもとづく日本語イントネーションの史的研究

本研究は、近年の統語理論および音声音韻研究の成果をよくふまえた上で、平家正節に代表される、平曲の語りに関する譜記を有する平家物語諸本を基幹資料とし、日本語イントネーションに関する史的研究をおこなうことを主目的としたものである。その際特に、各要素が情報構造上になう役割の違いに応じた統語論的位置を占め、音韻論的な句のまとまり形成に関し、いかなるふるまいを示していたかを中心に分析をおこなう点に特色がある。その成果は、平成27年度に岩波書店から刊行された共著書の中に反映されている。本研究は、近年の統語理論および音声音韻研究の成果をよくふまえた上で、平家正節に代表される、平曲の語りに関する譜記を有する平家物語諸本を基幹資料としてその前後の時期の文献資料と対照することにより、日本語イントネーションの史的研究を行うことを主な目的としている。その際特に、各要素がTopicやFocusといった情報構造上担う役割の違いに応じ、i)いかに異なる統語論的位置を占め、ii)音韻論的な句のまとまり形成に関し、いかに異なる振る舞いを示していたと考えられるかという点を中心にした分析を行う点に本研究の特色がある。研究2年度目にあたる平成25年度には、その分析の基礎となるデータベースの作成作業を引き続きおこなうとともに、文献調査を中心に、関連分野における研究動向を把握する活動をおこなった。具体的には前者については、青洲文庫本および尾崎家本『平家正節』を基礎資料に作成した、平家正節譜記データベースをもとに、テキスト中で出現した要素のうち、係助詞、疑問詞、一部接尾辞を含む文節相当単位について、いかなる種類のTopic、Focus要素にあたると解釈できるものか、追加アノテーション付けをおこなう作業を、平成24年度に『平家正節』前半部章段に対し実施していたが、そのうち、係助詞ハの付与された一部の単位について、認定基準の変更をおこなうのが妥当であると今年度考えるようになったため、平成24年度既入力データについて、まず修正をおこなった。その後、新たな基準に基づき、中盤部章段に対しても、追加アノテーション付け作業を実施した。また後者については、日本語史にかかわるものを中心に、ここ10年内に発表されたコーパス言語学的手法による研究の成果について、集中的に文献調査をおこなった。研究初年度にあたる平成24年度には、その分析の基礎となるデータベースの作成に力を注ぐとともに、関連分野における最新の研究動向を把握する活動をおこなった。具体的には前者については、青洲文庫本および尾崎家本『平家正節』を基礎資料に作成した、平家正節譜記データベースをもとに、テキスト中で出現した要素のうち、係助詞、疑問詞、一部接尾辞を含む文節相当単位について、いかなる種類のTopic、Focus要素にあたるものかと解釈できるものか追加アノテーションを行う作業を、『平家正節』前半部章段に対しおこなった。また後者については、国内の学会では日本語学会の研究発表大会に参加するとともに、海外学会ではETP(Expetise in Tranlation and Post-editing Research and Application)ワークショップ(於・コペンハーゲンビジネススクール翻訳研究センター)および英語歴史言語学国際会議(於・チューリヒ大学英語学科)に参加し、情報収集をおこなった。研究3年度目にあたる平成26年度には、平成25年度までに構築した平家正節譜記データベース(Topic、Focusにかかわる要素に関するアノテーション付け有り)をさらにすすめ、rule-basedでserialに音韻表示の構築をおこなっていく古典的生成音韻論の枠組みと、constraint-basedでparallelに音韻表示の構築をおこなう最適性理論の枠組みとにもとづき、データの説明をおこなうため、複数の分析を試行し、それぞれの優劣について比較検討を加えた。その際特に、各要素が情報構造上になう役割の違いに応じて統語論的位置を占め、ii)音韻論的な句のまとまり形成に関し、いかなるふるまいを示していたかという点を中心に分析をおこなう点に特徴がある。研究最終年度にあたる平成27年度には、岩波書店から刊行された共著書の中にその成果を反映させた。

そこでは、生成音韻論の流れの中で提唱された最適性理論や、音声学に基づく音韻論、調和度文法等、最適性理論と比較的かかわりの強い音韻理論、さらには、コーパス言語学のように、生成音韻論の流れとは異質な、統計学的分析手法を用い、音調を含む音声音韻の史的研究にアプローチする、比較的近年の試みをとりあげ、そのような試みを日本語に関し行う上でおさえられるべき事項のうち、重要と思われる点を記述した。また具体的文献資料として『平家正節』中の章段をとりあげ、現代語音声の音調に関する、自律分節韻律音韻論の枠組みを用いた分析や、統語・意味・情報構造とプロソディー構造との関わりに関する実験音韻論的分析から得られる知見等をふまえると、どのような視野がひらけてくるかをあらためて論述した.本研究は、近年の統語理論および音声音韻研究の成果をよくふまえた上で、平家正節に代表される、平曲の語りに関する譜記を有する平家物語諸本を基幹資料とし、日本語イントネーションに関する史的研究をおこなうことを主目的としたものである。その際特に、各要素が情報構造上になう役割の違いに応じた統語論的位置を占め、音韻論的な句のまとまり形成に関し、いかなるふるまいを示していたかを中心に分析をおこなう点に特色がある。その成果は、平成27年度に岩波書店から刊行された共著書の中に反映されている。Topic、Focusにかかわる要素のうち、係助詞ハの付与された一部の単位について、平成25年度に認定基準の変更をおこなったことに伴い、分析の基礎となるデータベースの追加アノテーション付けが遅れたことが影響している。当初は全体3年間計画の最終年度平成26年度に成果発表を集中しておこなう予定だったが、1年間研究期間を延長し、4年めの平成27年度に成果発表をおこなうことになったため。音韻論研究期間を1年延長した、研究最終年度にあたる平成27年度には、情報構造上各種Topic、Focus要素が占める統語論的位置と、音調実現のあり方とのかかわりについて、コーパス音韻論的分析の結果を発表する。研究計画2年度目にあたる平成25年度には、分析の基礎となるデータベースについて、作成を終える予定であったが、Topic、Focus要素の認定基準について見直しをおこなったため、既作成分についても再度アノテーションの修正作業が必要になり、作業に遅れが生じ、データベースを完成させることができなかったため。当初計画に沿って研究を推進してきており、おおむね順調に進展しているといえる。研究計画を一年延長し、平成27年度を当該研究の最終年度とすることにしたため、最終年度のおこない研究とその成果発表のため、予算を残したため。研究計画最終年度にあたる平成26年度には、前年度に生じた作業の遅れを取り戻すべく、分析の基礎となるデータベースをできるだけ早く完成させ、それにもとづき、情報構造上各種Topic、Focus要素が占める統語論的位置と、音調実現のあり方とのかかわりについて、実質的なコーパス音韻論的分析を加え、その成果を発表する。
活性有機14族化学種を配位子とする遷移金属錯体の合成と性質

1.メトキシ架橋ビス(シリレン)鉄錯体(η-C_5Me_5)(OC)Fe{(SiMe_2)...OMe...(SiMeOMe)}は,Fe-Si-O-Siキレート環に対してη-C_5Me_5配位子と末端OMe基がsynかantiかによって2つの幾何異性体が存在する。これらの異性体間の熱的変換反応について,温度可変NMRスペクトルを用いて研究し,2つのケイ素が2つのメトキシル基で架橋された中間体を経由する機構を提案した。2.三重項基底状態を持つ初めてのシリレン架橋鉄二核錯体Cp_2Fe_2(μ-CO)_2(μ-SiR_2)(R=かさ高いアリール基)を合成し,その構造,磁気的性質および生成機構を明らかにした。3.非対称なホスフィド架橋鉄二核錯体(η^5-C_5Me_5 )Fe_2(CO)_4(μ-CO)(μ-PPh_2)と幾つかのジヒドロシランおよびヒドロジシランとの反応によってシリレン架橋錯体が生成すること,およびその際にケイ素上の置換基の再分配が起こることを見出し,この反応に対してシリル(シリレン)錯体中間体を経由する機構を提案した。4.キレート配位子〔HMesSiCH_2CH_2PPh_2〕を含むクロロ(ヒドリド)イリジウム(III)錯体が,光定常状態では2つの幾何異性体の29:71での混合物となるが,加熱するとその少ない方の異性体に完全に異性化することを明らかにした。また,光定常状態での多い方の異性体については,X線結晶構造解析によりその構造を決定した。5.分子内塩基で安定化されたシリレン錯体[(η-C_5H_5)Fe(CO)_2=SiMe{2-(Me_2NCH_2)C_6H_4}]PF_6を,Ph_3CPF_6によるシリル基上の水素の引き抜きという新しい反応によって初めて合成し,X線結晶構造解析によりその構造を決定した。
未固結堆積物・ガウジの固化に伴う変形時の力学・水理特性の変化に関する実験的研究

熱水条件下での石英粉末の圧密・変形実験や,高温高圧高間隙圧下での岩塩の変形実験を行った.特筆すべき成果として,脆性塑性遷移域での間隙流体圧の影響に関して定説を覆す実験結果を得たが,実験結果を説明できる理論を提唱,有効応力則の理解に関する重要な進展を得た.実験技術に関し,測定した力学データから試験機の摺動部の抵抗を取り除く手法を見出した.本成果により,今後より高精度の実験データの取得が期待できる.計画実施期間中に,圧力溶解クリープの微物理モデルがオランダのグループにより提案された事を受け,彼らのモデルを高度化,地震サイクルシミュレーションに組み込む事に成功した.珪石粉末を水中で堆積させることにより人工的な堆積物を作成し、高温高圧含水環境に置き、時間依存的に進行する圧密と強化(固結)を再現する実験を行った。異なる温度条件(300°C500°C)下での圧密挙動の比較の結果、実験条件(封圧200 MPa、間隙水圧100 MPa)では活性化エネルギーが70から80 kJ/molであり、石英の溶解が律速する圧力溶解クリープが圧密挙動を支配している可能性を示唆している事がわかった。また圧密後の試料に関し3軸変形試験を行い、圧密による強度の上昇に関するデータを得た。研究結果の一部は、AOGS 11th Annual Meetingにおいてポスター発表で紹介した。計画初年度にあたる平成26年度は、サンプルアセンブリの改良を主に行った。初年度の目標であった、多孔質スペーサの改良を行った。計画開始当初はスペーサの強度不足が問題であり、固結が進んだ試料の変形実験は不可能であった。計画に記載したアルミナ半月板に関しては、試料からの排水をコントロールするのが困難であると判明した為採用しなかった。他にも各種素材を検討したが、最終的には多孔質SiC円盤を採用し、その事によってスペーサ強度に改善がなされ、比較的固結の進んだ試料に関しても変形実験が可能となった。実験の結果、試料の固結が進むにつれて変形開始時の歪強化の傾きが増加し、さらに定常状態における強度も増える傾向が確認できる様になった。また、試料の圧密挙動をリアルタイムで記録する為、海洋研究開発機構の廣瀬丈洋博士の協力でレーザー変位計を借用し、広島大学の高温高圧変形透水試験機に設置した。大地震の破壊開始点は地震発生領域の下限近くとなる事が多い[e.g., Sibson, 1982]。その領域における岩石物性に関し、「流体の影響」なる単語は業界でよく耳にするが、それが具体的にどの様な物であるかを示した例は少ない。2015年1月にGeologyに報告された[Hirth and Beeler, 2015]岩石の脆性・塑性遷移域における有効応力則(間隙流体圧の力学的影響)に関する予想を受け、今年度はアナログ物質(NaCl)を用いた摩擦実験を主なターゲットに据えて実験を行った。NaCl粉末が高温・高圧で固結し、摩擦的な挙動から流動的な挙動へ遷移する領域において、間隙流体圧の影響を実験的に測定する事に成功した。その結果、以下の事が明らかとなった。1.間隙流体圧は封圧の影響を中和する向きに働くが、その効果の係数αは脆性・塑性遷移域を通じて1である。上述の予想[Hirth and Beeler, 2015]に反する結果が得られた。2.剪断強度の有効圧力(封圧ー間隙流体圧)に対する依存関係に関しては、低温で線形の摩擦挙動から高温では依存性が無くなっていく形であり、間隙流体圧が大気圧の条件で行った過去の研究結果[Shimamoto and Noda, 2014]と矛盾しない。1.に関しては、摩擦の凝着理論[Bowden and Tabor, 1950]および真実接触近傍の個体部の変形の構成則が平均応力に寄らない事を仮定すれば理解できる。石英・粘土混合物の圧力溶解クリープを素過程として含む摩擦の微物理モデルが近年報告された[den Hartog and Spiers, 2014]。そのモデルに乗っ取った速度・状態依存摩擦構成則を定式化し、これを用いて地震サイクルの数値計算を行った。これら2件の研究は平成27年度中に国際誌に投稿、受理されすでに出版されている。これまで主に使用していた広島大学のガス圧式高温高圧変形透水試験機が平成27年8月に故障し、使用できなくなった。急遽、産業技術総合研究所の高橋博士に協力を仰ぎ、そちらの試験機を使用した。当初案からの多少の計画の変更が必要となったが、結果として実験的研究において意義のあるデータが取得でき、国際誌への出版にこぎつける事ができた。それゆえ、おおむね順調に研究が進展していると言える。本研究計画において、三軸変形試験機を用いた変形実験は中核部に位置する。現在日本で稼働中のガス圧式高温高圧三軸変形試験機の多くは、スプリットピストン機構(圧力容器内部で載荷コラム軸を分断する事により、載荷前の状態を完全に等方応力にする)を有しておらず、正確な軸力の測定が困難であった。圧力容器内部で軸力を測定する「内部荷重計」が装備されている試験機に関しても、出力が温度・封圧の変化に対してオフセットを起こすため、軸力ゼロに対応する出力を直接得る事が出来ない。

未-半固結試料や、高温下で容易に塑性流動を起こす試料など、強度の低い試料を用いて実験を行う際には、試験機の摩擦摺動部の抵抗が試料の強度に比べて無視できず、測定した力学的性質に大きな誤差が含まれる事が考えられた。この問題点は本研究計画がスタートした当初からの懸念事項であった。本研究計画中に数多くのアナログ低強度試料に関して変形実験を行ったが、その際に測定した内部・外部両荷重計からの出力の差を取る事で、試験機の摩擦摺動部の抵抗の時間変化を見積もる事ができる点を見出した。この抵抗について単純な摩擦モデルを仮定する事により、試料が支えている軸力の絶対値を見積もる事が可能となり、低強度の試料に関する力学データが大幅に改善された。本成果は英文の査読論文としてJ. Geol. Soc. Japanに発表した。本成果により、高温高圧変形実験の力学データの見直し及び新規実験の精度が向上する事が期待できる。本計画開始時に使用を予定していた広島大学のガス圧式三軸変形試験機の故障、及び申請者の異動の為、最終年度開始時に研究計画を一部変更し、京都大学において剪断変形試験用の試験機の立ち上げを計画した。本経費を用いて必要消耗品や温度調節器を購入し、試運転を行い力学データを取得できる状態となった。熱水条件下での石英粉末の圧密・変形実験や,高温高圧高間隙圧下での岩塩の変形実験を行った.特筆すべき成果として,脆性塑性遷移域での間隙流体圧の影響に関して定説を覆す実験結果を得たが,実験結果を説明できる理論を提唱,有効応力則の理解に関する重要な進展を得た.実験技術に関し,測定した力学データから試験機の摺動部の抵抗を取り除く手法を見出した.本成果により,今後より高精度の実験データの取得が期待できる.計画実施期間中に,圧力溶解クリープの微物理モデルがオランダのグループにより提案された事を受け,彼らのモデルを高度化,地震サイクルシミュレーションに組み込む事に成功した.初年度の目標はサンプルアセンブリの改良、圧密挙動のリアルタイム計測、及び論文の執筆であった。このうち第1点、2点目は上述の通り達成されたが、スペーサ素材選定に予想以上に時間がかかってしまったため、第3点目は未だに達成されていない。このため、当初の計画に比べて遅れていると言わざるを得ないが、問題点は既に克服したため、遅れは最小限であると言って良い。研究代表者は平成28年度より京都大学へ准教授として異動となり、教育・運営に関するエフォートが増加、外部へと実験の為に出張する事がこれまでよりも困難となった。また平成27年夏に故障した広島大学のガス圧試験機は現在メンテナンス中であり、本試験機を用いた実験を行う時間は削らざるを得ない。初年度に力を入れていた硅石粉末の固結時の挙動に関する実験は、試験機のメンテナンスが済み次第再開し、追加データの取得および論文への取りまとめを行う。一方で、京都大学に眠っている高圧ねじり剪断試験機を使用できる事となった。本試験機は、粉末アナログ物質の剪断時の挙動を調べるのに適している。本試験機を京都大学において立ち上げ、固結度をコントロールしたサンプルでの摩擦実験を行う。断層力学平成27年度は初年度の成果を基にした論文作成を急ぐとともに、当初の予定の通りプレカット試料に対する大剪断歪試験(摩擦試験)を行う。平成27年初頭、脆性ー塑性遷移領域における有効応力則に関し、新しい仮説[Beeler and Hirth, 2015, Geology]が出版された。
全ゲノム解析システムを用いた常染色体優性多発性のう胞腎の腎障害悪化因子の探索

常染色体優性多発性嚢胞腎(ADPKD)の腎機能悪化に関連する進展因子や予後に関わる背景、最適な治療は未だ十分な知見があると言えない。遺伝子診断に関しても未だ研究段階であり、安価で汎用性が高くかつ迅速正確な遺伝子診断を行うことは困難であり、社会的ニーズも高い。我々はすでに170名を超えるADPKD患者の前向きコホート研究を実施しており、本研究にて実施する次世代超ハイスループットヒト全ゲノム配列解析システムを用いることによって腎機能悪化因子の同定、hypomorphic変異の有無、新規に簡便なPKD遺伝子診断の確立、トルバプタン有効例と非有効例の差異などを解明しADPKDの診断治療に寄与する。
アポクリン腺の17β―ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼタイプ3の発現と活性

33歳女性の腋臭症患者の腋窩より吸引して得た組織より脂肪織、結合織を手術用顕微鏡下に除き、アポクリン腺を単離した。型のごとく燐酸バッファー(0.25M蔗糖を含む)中でホモジナイズし、遠心により核、ミトコンドリア、マイクロゾーム、サイトゾールの4つの分画を得た。これらの分画及びホモジネートを200nMの3H-アンドロステンジオン、1mMNADPHを含むバッファー中でインキュベートした。反応は前年度までの実験で活性のピークのみられたpH5.5とpH9.0で行った。(結果)pH5.5:ホモジネート88(pmol/mg/hr)、サイトゾール51.2、ミトコンドリア17.4、マイクロゾーム14.0、核33.2pH9.0:ホモジネー卜151、サイトゾール108、ミトコンドリア32.8、マイクロゾーム6.79、核77.9(考察)前回同様、17β-HSD活性は特定の細胞内分画に局在していなかった。また、ホモジネート以上の活性を示す分画もなかった。特にpH5.5が至適pHであるtype3はマイクロゾーム分画に局在するが、今回の実験では逆に最も低く、type3の存在を裏づける成績は得られなかった。その理由として、細胞分画の操作がまずく、分画相互に混入があること、分画の操作中に一部失活(すべてホモジネートより低いので)したことが考えられる。しかし、可溶性分画が高い17β-HSD活性を示すことは、同じくアポクリン腺を材料とした、1976年のHodginsらの成績と合致する。今後、各分画のマーカーとなる酵素の活性を測定することにより分画操作をチェックした上で、アポクリン腺のアイソザイムの検討を行う必要がある。腋臭症患者の腋窩皮膚より単離したアポクリン腺のホモジネートを、^3H-アンドロステンジオン200nMを基質として1mM NADPH存在下に20分インキュベートした。抽出した代謝産物のうちテストステロンを薄層クロマトグラフィー、高速液クロによる同定し、その放射活性と組織のタンパク濃度から17β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ(17β-HSD)の活性を計算した。現在までに得られた結果は次の通りである。1.予備実験として補酵素に関しては、pH5.0ではNADPH>NADPH generatingsystem>NADHの順に親和性が高かった。2.組織タンパク濃度は10-90μg/100μ1の間でタンパク量と産生されたテストステロンとの間に比例関係がみられた。3.pH5.0では30分まで反応時間に比例してテストステロンが増加した。4.この反応液の組成では特に中性領域では5α-リダクターゼ(タイプ1)によって基質の30%以上がアンドロスタンジオンに代謝されてしまうため、17β-HSD活性を正確に測定できない。そこで、5α-リダクターゼ阻害剤MK386を基質200uMに対して100nM加えたところ、17β-HSD活性は影響を受けず、且つアンドロスタンジオン産生は1/6以下に抑制されたので、中性領域においても17β-HSD活性を正確に測定できることがわかった。5.次に反応の至適pHを検討した。4の結果に基づき、pH5.511ではMK-386を100nM加えてインキュベートした。その結果、反応のピークはpH5.5と9の二ヵ所にみられた。前者はおそらく17β-HSDのタイプ3に相当すると推測される。RT-PCRでも用いた4検体すべてにタイプ3と同じ位置にバンドが得られた。以上の結果から、これまで睾丸と女性腹壁の脂肪織、大網にのみ存在が報告されているタイプ3の17HSDが、アポクリン腺にも存在することが強く示唆される。なお、pH9.0にあるかっせいのピークについてはこれまで報告がなく、いかなるアイソザイムに相当するものか不明である。

その理由として、細胞分画の操作がまずく、分画相互に混入があること、分画の操作中に一部失活(すべてホモジネートより低いので)したことが考えられる。しかし、可溶性分画が高い17β-HSD活性を示すことは、同じくアポクリン腺を材料とした、1976年のHodginsらの成績と合致する。今後、各分画のマーカーとなる酵素の活性を測定することにより分画操作をチェックした上で、アポクリン腺のアイソザイムの検討を行う必要がある。腋臭症患者の腋窩皮膚より単離したアポクリン腺を-70°Cで保存し、実験の際にはこれを5%ホモジネートとした。^3H-アンドロステンジオン200nMを基質とし1mMNADPH存在下に20分インキュベートした。抽出した代謝産物のうちテストステロンを薄層クロマトグラフィー、高速液クロにより同定し、その放射活性と組織のタンパク濃度から17β-ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ(17β-HSD)の活性を計算した。(結果)(1)昨年度報告したごとく、活性のピークは5.5と9.0の二カ所にみられた。このうちpH5.5のピークはタイプ3の至適pHと一致するが、pH9.0についてはこれまで報告された6つのアイソザイムのどれにも合致しない。そこで、確認のため再度実験を行ったが、同様の結果が得られた。(2)これら二つの活性のピークは異なるアイソザイムに相当すると考えられる。次にこれら二つの活性の細胞内局在を知る目的で、新鮮な単離されたアポクリン腺約2gをホモジナイズし、500×g、10,000×g、105,000×gの順に遠心分離して、核、可溶性、ミトコンドリア、ミクロゾーム分画を採取し、それぞれの分画についてpH5.5、pH9.0における17β-HSD活性を測定した。なお、pH9.0ではタイプ1の5α-リダクターゼによる基質の分解を抑制するため、阻害剤としてMK386100nMを加えた。その結果、いずれのpHでも17β-HSD活性は可溶性分画に最も高く、これはHodginsらのデータに一致した。しかし、他の三分画にも低いながら活性があることから、単一の分画に特定のアイソザイムが局在するという結果が得られなかった。これは細胞成分の分画操作に問題がある可能性がある。33歳女性の腋臭症患者の腋窩より吸引して得た組織より脂肪織、結合織を手術用顕微鏡下に除き、アポクリン腺を単離した。型のごとく燐酸バッファー(0.25M蔗糖を含む)中でホモジナイズし、遠心により核、ミトコンドリア、マイクロゾーム、サイトゾールの4つの分画を得た。これらの分画及びホモジネートを200nMの3H-アンドロステンジオン、1mMNADPHを含むバッファー中でインキュベートした。反応は前年度までの実験で活性のピークのみられたpH5.5とpH9.0で行った。(結果)pH5.5:ホモジネート88(pmol/mg/hr)、サイトゾール51.2、ミトコンドリア17.4、マイクロゾーム14.0、核33.2pH9.0:ホモジネート151、サイトゾール108、ミトコンドリア32.8、マイクロゾーム6.79、核77.9(考察)前回同様、17β-HSD活性は特定の細胞内分画に局在していなかった。また、ホモジネート以上の活性を示す分画もなかった。特にpH5.5が至適pHであるtype3はマイクロゾーム分画に局在するが、今回の実験では逆に最も低く、type3の存在を裏づける成績は得られなかった。
ガラスと金属との陽極接合における界面現象の解明

電子センサーやマイクロマシン等の分野でガラスと金属との封止法として注目されている陽極接合は,界面現象についての系統的な研究が非常に少なく,接合機構の詳細についてほとんど議論がなされていない.本研究は,陽極接合の機構解明のため,界面現象について金属組織学的および電気化学的検討を加えようとするもので,用いた接合用材料は,熱膨張係数のほぼ等しいホウ硅酸ガラス(陰極側)とFe-Co-Ni系コバ-ル合金(陽極側)である.走査電顕による観察の結果,接合界面近傍のガラス中では,従来より指摘されてきたNa^+イオンのみならずK^+イオンの欠乏が見い出された.このK^+欠乏層の幅はNa^+欠乏層より狭く,いずれも接合時間と共に増加した.さらに透過電顕による詳細な観察の結果,接合界面においてFe-Si-O系非晶質酸化物からなる幅約100nmの反応層を見い出した.これらの結果は,陽極接合においては,上記の陽イオン欠乏層に起因する静電引力と,界面反応とが,接合に寄与していることを示唆している.さらに界面インピーダンス法によって,接合中の界面現象に起因すると考えられる信号を検出し,界面反応の律速過程の解明や,反応層あるいは陽イオン欠乏層の特性評価と結び付けるための解析を進めている.また金属の種類による接合現象の差異について調べるため,イオンプレーティングによってコバ-ル合金表面にAl,Si,Agの被覆層を形成し,接合性への影響を調べた.その結果,ガラス中へ陽イオンとしてほとんど侵入しないAlおよびSiの被覆層は著しい接合過程促進効果を示したが,ガラス中へ大量に侵入するAg被覆層を用いた場合は,接合不可能であり,接合には陽イオン欠乏層の形成が不可欠であることが示唆された.各種金属とガラスとの陽極接合性を総合的に説明し得る接合機構を明らかにするため,以上の結果について引き続き検討を加えている.電子センサーやマイクロマシン等の分野でガラスと金属との封止法として注目されている陽極接合は,界面現象についての系統的な研究が非常に少なく,接合機構の詳細についてほとんど議論がなされていない.本研究は,陽極接合の機構解明のため,界面現象について金属組織学的および電気化学的検討を加えようとするもので,用いた接合用材料は,熱膨張係数のほぼ等しいホウ硅酸ガラス(陰極側)とFe-Co-Ni系コバ-ル合金(陽極側)である.走査電顕による観察の結果,接合界面近傍のガラス中では,従来より指摘されてきたNa^+イオンのみならずK^+イオンの欠乏が見い出された.このK^+欠乏層の幅はNa^+欠乏層より狭く,いずれも接合時間と共に増加した.さらに透過電顕による詳細な観察の結果,接合界面においてFe-Si-O系非晶質酸化物からなる幅約100nmの反応層を見い出した.これらの結果は,陽極接合においては,上記の陽イオン欠乏層に起因する静電引力と,界面反応とが,接合に寄与していることを示唆している.さらに界面インピーダンス法によって,接合中の界面現象に起因すると考えられる信号を検出し,界面反応の律速過程の解明や,反応層あるいは陽イオン欠乏層の特性評価と結び付けるための解析を進めている.また金属の種類による接合現象の差異について調べるため,イオンプレーティングによってコバ-ル合金表面にAl,Si,Agの被覆層を形成し,接合性への影響を調べた.その結果,ガラス中へ陽イオンとしてほとんど侵入しないAlおよびSiの被覆層は著しい接合過程促進効果を示したが,ガラス中へ大量に侵入するAg被覆層を用いた場合は,接合不可能であり,接合には陽イオン欠乏層の形成が不可欠であることが示唆された.各種金属とガラスとの陽極接合性を総合的に説明し得る接合機構を明らかにするため,以上の結果について引き続き検討を加えている.
臨床医の診断推論能力の測定-国際比較

【目的】医学生の診断推論能力についての日米国際比較を行った。【方法】米国と日本の医学生を比較の対象とした。医学生に胸痛の仮想症例シナリオを提示し、運動負荷心電図の感度・特異度、検査前確率、検査後確率を回答させた。シナリオは典型的狭心痛、非典型的狭心痛、非狭心痛(冠動脈疾患の検査前確率が90%、46%、5%)の3種類を作成した。文献から得られる検査前確率と検査後確率(文献値)と医学生が回答した検査前確率と検査後確率(直感的推定値)の間の隔たりを比較検討した。【結果】医学生の内訳は、日本(4年生132人、5年生79人、6年生13人、計224人)、米国(2年生78人、4年生34人、計112人)であった。典型的狭心痛シナリオでは、日米両方の医学生が検査前確率、検査後確率とも過小に推定していたが、推定値は文献値に比較的近かった。日米間で有意差は認めなかった。非狭心痛シナリオでは、日米両方とも検査前確率、検査後確率を過大に推定していた。文献値からの隔たりは日本の医学生は米国の医学生に比べて有意に大きかった。非典型的狭心痛シナリオでは、日米両方で検査前確率の推定は妥当であったが、検査後確率の変化が小さい傾向があった。【結論】日米医学生の診断推論の特徴的な相違点として、日本の医学生は検査前確率が低い症例シナリオの検査前・検査後確率を米国の医学生に比べて有意に高く推定することがあげられた。この知見から、日本の医学生では、疾患をうまく除外できずいたずらに検査を繰り返す状況に陥りやすい診断推論プロセスが形成されていることが示唆される。このような診断推論プロセスが形成される原因として、疾患を見逃さないことを重要視し、除外診断を重視しない日本の伝統的教育態度にあるのではないかと推定された。本年度は、医学生の診断推論能力について、日米国際比較を行い以下の知見を得た。【結果】医学生の内訳は、日本(4年生132人、5年生79人、6年生13人、計224人)、米国(2年生103人、4年生43人、計146人)であった。

非典型的狭心痛シナリオでは、日米両方で検査前確率の推定は妥当であったが、検査後確率の変化が小さい傾向があった。日米間で有意差は認めなかった。【結論】日米医学生の診断推論の特徴的な相違点として、日本の医学生は検査前確率が低い症例シナリオの検査前・検査後確率を米国の医学生に比べて有意に高く推定することがあげられた。この知見から、日本の医学生では、疾患をうまく除外できずいたずらに検査を繰り返す状況に陥りやすい診断推論プロセスが形成されていることが示唆される。このような診断推論プロセスが形成される原因として、疾患を見逃さないことを重要視し、除外診断を重視しない日本の伝統的教育態度にあるのではないかと推定された。【目的】医学生の診断推論能力にろいての日米国際比較を行った。【方法】米国と日本の医学生を比較の対象とした。医学生に胸痛の仮想症例シナリオを提示し、運動負荷心電図の感度・特異度、検査前確率、検査後確率を回答させた。シナリオは典型的狭心痛、非典型的狭心痛、非狭心痛(冠動脈疾患の検査前確率が90%、46%、5%)の3種類を作成した。文献から得られる検査前確率と検査後確率(文献値)と医学生が回答した検査前確率と検査後確率(直感的推定値)の間の隔たりを比較検討した。【結果】医学生の内訳は、日本(4年生132人、5年生79人、6年生13人、計224人)、米国(2年生78人、4年生34人、計112人)であった。典型的狭心痛シナリオでは、日米両方の医学生が検査前確率、検査後確率とも過小に推定していたが、推定値は文献値に比較的近かった。非狭心痛シナリオでは、日米両方とも検査前確率、検査後確率を過大に推定していた。文献値からの隔たりは日本の医学生は米国の医学生に比べて有意に大きかった。
膜タンパク質の膜貫通領域におけるシステイン残基を介したレドックス感知機構

膜タンパク質の膜貫通領域のシステインは、安定性に寄与しにくく役割は謎である。本研究では、当該システインが細胞内外のレドックスセンサーとして働く仮説を立て、実験的に検証する。このために、嫌気環境下でシステインの修飾状態を安定に制御した試料を調製し、溶液NMR法にて無侵襲に残基分解能の構造情報を取得する独自のアプローチを確立し、取扱いの難しい膜タンパク質のシステイン修飾状態を解析可能とする。このアプローチを、近年、膜貫通領域システインのレドックス修飾に基づく機能制御が報告されたアクアポリン8に適用することで、酸素と硫黄、原子1個の修飾の違いが、チャネル機能を逆方向に制御する構造機構を解明する。
Rasを介したアポトーシス抑制経路におけるBimの機能と転写調節

われわれの研究室では最近数年間、サイトカインが造血前駆細胞の生存を維持するシステムの解明と、その機能異常が白血病の発症に関与するメカニズムを検討している。当研究費では特,にBcl-2スーパーファミリーに属するBimに焦点を当てて検討を進めた。BimはBH3ドメインのみを有してアポトーシス抑制的なBcl-2ファミリーメンバーの機能を阻害する、いわゆるBH3細胞死誘導因子のメンバーであるが、IL-3依存性細胞株がサイトカイン欠乏によるアポトーシスに陥る際に転写レベルで発現が誘導ざれる。逆にいえば、造血前駆細胞がサイトカインの支持の下、生存を維持できるのはBimの発現が抑制されていることによる。われわれはサイトカイン受容体からBimのmRNA発現にいたるシグナル伝達経路の詳細を検討した。その結果Bimは古典的なRas/Raf/MAPKを経る経路と、Ras/PI3-Kを介した経路の双方の経路によって独立して制御されていることが明らかになった。PI3-Kの下流は、よく知られているAkt/Bad経路はまったく関与しておらず、mTORによるBimの発現抑制が重要な働きをしていることが明らかになった。このような経路を介してBimの発現を抑制する転写因子を同定するために、Bimの転写開始点を同定し、プロモーター領域の同定を試みた。Bim遺伝子の5'側は著しくGC配列に富んでいるため、転写開始点の同定は困難を極めたが、5'RACE法およびribonuclease protection法によりこれまで同定されていなかった非翻訳領域のみからなる第一エクソンを同定した。現在定法に基づき、上流プロモーター領域を含むレポータープラスミドを作成し、転写調節因子の結合領域の同定を試みている。