hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
口腔癌の浸潤・転移機構の解明とその悪性度診断ならびに遺伝子治療への応用

また、昨年度にPeriostin、IFITM1、Wnt5Bの過剰発現した口腔癌細胞とコントロール細胞の遺伝子発現プロファイルをマイクロアレイにより検討し、共通して発現の高い因子として細胞外マトリックスメタロプロテアーゼであるMMP10およびMMP13を同定し、MMP-10が口腔癌の浸潤に関わることを報告したが、本年度は、MMP13が、直接、血管内皮細胞に作用して、血管新生を促進することを明らかにした。また、MMP13が繊維芽細胞のVEGF-Aの分泌を促進することも明らかにし、これら機構にERKやFAKの活性化が関与することを詳細に解析した。さらに、様々な生命現象に関わることが明らかになりつつあるmicroRNAについて、口腔癌の浸潤に関わるmicroRNAを同定するため、親株とその細胞から分離した高浸潤能を有する細胞におけるmicroRNAの発現をアレイを用いて、網羅的に検討し、すでに上皮間葉移行(EMT)に関わることが報告されているmiR-200familyやその機能が未だ明らかにされていないmiR-203の発現低下が口腔癌の浸潤に関わることが明らかとなった。miR-203の標的遺伝子を検索するため、Ago-2抗体で免疫沈降したRNAをマイクロアレイで解析することにより、標的遺伝子を網羅的に検索し、そのひとつとして、E-cadherinのリプレッサーであるSlugを同定した。また、miR-203がEMTを誘導する過程で、ヒストン修飾に関与する可能性が考えられたため、現在、その詳細を検討中である。1.悪性度診断マーカーとしてのPeriostinの応用本年度は、我々が以前に口腔癌の浸潤に関わる因子として同定したPeriostinのリンパ管新生の促進という新たな機能を見出した。PeriostinはSrcやAktの活性化を介して、直接リンパ管内皮細胞の管腔形成や遊走能を促進するとともに、リンパ管新生に重要なVEGF-Cの分泌も促進することを報告した。また81例の口腔癌患者血清中に分泌されたPeriostinの発現量とVEGF-Cの発現量の関連およびそれぞれの癌の進行度、リンパ節転移の有無と比較検討したところ、血清中のPeriostinおよびVEGF-Cともに病期の進行とともに発現症例の増加が認められた。さらに、血清中のPeriostinおよびVEGF-Cを発現する症例で、リンパ節転移が認められた。従ってPeriostinは悪性度診断マーカーとして有用であると考えられた。2.口腔癌の浸潤に関わるmicroRNA、miR-203の標的遺伝子の同定癌の浸潤過程において重要な役割を演じるmicroRNAに着目し、口腔癌の浸潤に関わるmicroRNAを同定するため、高浸潤能を有する細胞におけるmicroRNAの発現をmicroRNAアレイにより網羅的に検討し、すでに上皮間葉移行に関わることが報告されているいくつかのmicroRNAの発現低下が口腔癌の浸潤に関わることを見出した。中でもmiR-203に着目し標的遺伝子を検索したところ、基質分子としてNUAK1を同定した。NUAK1の過剰発現は口腔癌細胞の浸潤能を促進し、miR-203の過剰発現によって抑制された。従ってmiR-203の発現低下はNUAK1の発現を誘導し、口腔癌の浸潤に関わる可能性を新たに見いだすことができた。
組織工学的手法による生体内で修復治癒する人工血管の開発

expanded polytetrafluoroethylene(ePTFE)人工血管は抗血栓性の良好であるが、仮性内膜形成が不良であるため、吻合部内膜過形成による狭窄や閉塞が問題となっている。本研究では抗凝固物質であるヘパリンとフィブロネクチンを同時に共有結合固定して、抗血栓性を保持したまま生体内で修復治癒する人工血管の作成を目指した。フィブロネクチンとヘパリンをそれぞれePTFE人工血管に共有結合固定する至適条件を決定することができた。ただ、フィブロネクチンとヘパリンと同時に共有結合固定するまで研究が進まず、今後設備を整えて条件を明らかにしていきたい。小口径人工血管として期待されているもののひとつとして抗血栓性の良好なePTFE人工血管がある。しかし、ePTFE人工血管は移植晩期における吻合部内膜過形成による狭窄、閉塞が問題となるが、その原因は仮性内膜形成が不良なことにある。ePTFE人工血管は小結節と微細繊維が連結されたミクロ多孔質構造となっており、平均繊維長を延長すると仮性内膜形成が良好になることが知られている。研究代表者は血性や漏水性、耐久性が低下を来さない平均繊維長の長いePTFE人工血管を開発した。研究代表者はマトリックス蛋白のひとつであるフィブロネクチンを使用してePTFE人工血管にさらに効率よく内皮細胞に覆われた血管壁を作らせる研究を行ってきた。フィブロネクチンはA鎖とB鎖がジスルフィド結合した二重鎖の多機能接着蛋白質であり、各ドメインにフィブリン、ヘパリン、コラーゲン、細胞、増殖因子などの結合部位が有するが、逆に血小板膜糖蛋白であるGPIIb/IIIa複合体の受容体と結合し、血小板凝集を起こし血栓を形成しやすい。ヘパリンはグリコサミノグリカンであるヘパラン硫酸の一種であり、β-D-グルクロン酸あるいはα-L-イズロン酸とD-グルコサミンが1,4結合により重合した500030000Daのの高分子であり、アンチトロンビンを活性化し、抗凝血作用能の賦活を通して凝固系を抑制することにより強力な血液凝固阻止作用を発揮する。本研究ではヘパリンとフィブロネクチンをモザイク状にePTFE繊維に結合させることにより、ePTFE人工血管において抗血栓性を損なわずに内皮細胞に覆われた血管壁を効率良く作成することを目的とする。本年度は過去の研究に照らし合わせて、ePTFEシート・人工血管に未分画ヘパリンを共有結合する条件を確立する作業を開始し、未分画ヘパリンもフィブロネクチンと同様に共有結合できることを確認した。本研究の目的は、内皮細胞の形成促進作用を発揮するフィブロネクチンと抗凝固作用を有するヘパリンをモザイク状に多孔質ePTFE人工血管に結合させて、抗血栓性を損なわずに内皮細胞に覆われた血管壁を効率良く作成することである。これまで、既存のePTFE人工血管を使用して、フィブネクチン(2014年度)と未分画ヘパリン(2015年度)の共有結合条件を決定してきたが、いずれも同じ条件で共有結合が可能であることが判明した。以下に得られた共有結合の手順を示す。ePTFEとフィブネクチンや未分画ヘパリンは直接結合できないので、医療材料として使用されているメタクリル酸を介して結合する。アルゴン雰囲気下において、n-ブチルリチウム溶液とヘキサメチルホスホルアミドの混合溶液を作成する。混合溶液にePTFE人工血管を浸漬する。ePTFE人工血管から反応溶液を除去し、テトラヒロドロフランで洗浄し、メタクリル酸を反応させる。混合物を蒸留水で洗浄して水溶性の不純物を除去し、エタノール、アセトンで洗浄して有機系の不純物を除去する。ポリメタクリル酸グラフト重合ePTFE人工血管に、1ーエチルー3ー(ジメチルアミノプロピル)ーカルボジイミド存在下でフィブロネクチンまたは未分画ヘパリンを反応させて、蒸留水で洗浄し、フィブロネクチンまたは未分画ヘパリン共有結合ePTFE人工血管が作成される。フィブロネクチンと未分画ヘパリンのモザイク状の固定であるが、フィブロネクチンがヘパリンと結合する部位があり、今後の検討課題である。本年度は最終年度でしたが、以下の理由で遂行状況に遅れがみられています。そのため研究期間の延長申請を行いました。基材になる人工材料・血管について株式会社ハイレックスコーポレーションより極めて多孔質なexpanded polyteterafluoroethylene (ePTFE)人工血管を入手する予定でしたが、2015年9月に医薬品医療機器総合機構より承認されたハイレックスグラフト(機械器具7内臓機能代用器高度管理医療機器非中心循環系人工血管35281003)が住友電気工業の開発品と全く異なるものと判明し、入手に支障を来しています。ハイレックスコーポレーションに確認したところ医薬品医療機器総合機構の承認範囲内の人工血管は作成できたが、住友電工の開発品を再現することができなかったということでした。研究代表者は小口径人工血管の長期開存を得るためには、移植初期に内面に安定した薄いフィブリン膜が形成され、そのフィブリン膜が速やかに器質化・内皮化することが必要であることを示してきた(北海道医学雑誌1991)。延伸ポリテトラフルオロエチレンの多孔質チューブ(ePTFEチューブ)は血流と接する面の結節間距離が60μmにすると、安定した薄いフィブリン膜が形成されることを見い出してきた。

また、組織誘導性物質や細胞増殖性物質を共有結合固定した材料がin vitroで内皮化を促進するといった報告がみられ、以前の共同研究者はePTFEチューブの孔の内壁を含む全ての表面に組織誘導性物質と細胞増殖性物質を活性を失わせずに同時に共有結合する方法を発明した(特願平8-27829など)。研究代表者は細胞接着因子であるフィブロネクチンを同方法で共有結合固定したePTFEチューブを使用して動物実験を行い、イヌの頚動脈移植モデルで良好な開存性と修復治癒を得た(Surg Today. 2000)。しかし、人間に類似した血液凝固能を有するブタの頚動脈移植モデルでは修復治癒は良好であるが、移植初期の血栓閉塞が多くみられた(J Cardiovasc Surg. 2001)。これは、フィブロネクチンは細胞接着分子としてのみならず血液凝固に関与していることが原因と考えられた。以上を基にして、抗凝固性を有するグリコサミノグリカンであるヘパリンと細胞接着因子であるフィブロネクチンを同時にePTFEチューブに共有結合固定できれば、移植初期に血栓閉塞せずに良好な修復治癒が得られると考えた。今回、ヘパリンとフィブロネクチンそれぞれの共有結合固定条件の最適化まで行ったが、その後研究棟の移転などがあって、ヘパリンとフィブロネクチンの同時共有結合固定は行うことができなかった。今後研究施設を確保して、研究を進めていく予定である。expanded polytetrafluoroethylene(ePTFE)人工血管は抗血栓性の良好であるが、仮性内膜形成が不良であるため、吻合部内膜過形成による狭窄や閉塞が問題となっている。本研究では抗凝固物質であるヘパリンとフィブロネクチンを同時に共有結合固定して、抗血栓性を保持したまま生体内で修復治癒する人工血管の作成を目指した。フィブロネクチンとヘパリンをそれぞれePTFE人工血管に共有結合固定する至適条件を決定することができた。ただ、フィブロネクチンとヘパリンと同時に共有結合固定するまで研究が進まず、今後設備を整えて条件を明らかにしていきたい。研究の基盤になる材料の入手に支障があり、研究が遅れています。1)基材になる人工材料・血管の供給について同材料は本研究提案に必要不可欠なものなので、以前の住友電気工業の共同開発者にサンプルを依頼する予定です。住友電気工業はハイレックスグラフトの製造に関わる特許をハイレックスコーポレーションに譲渡した会社であり、以前テクノグラフト(国産唯一のePTFE人工血管)を製造していました。住友電気工業は人工血管事業を終了していますが、ある程度のサンプルは所有していると思われます。2)研究施設これまでの施設が使用できなくなったことなどから、ハイレックスコーポレーションに施設の提供を依頼しています。血管外科1)基材となるePTFE (expanded polytetrafluoroethylene)シート・人工血管の供給の遅れ:当該研究では平均繊維長の長いePTFEシート・人工血管が基材として使用される予定です。
肺血管内皮細胞におけるNO産生に及ぼす低酸素血症の影響

低酸素に対する肺血管の反応は体循環系のそれとは異なり、持続性の低酸素に曝露された時には、初期の血管収縮に引き続き血管拡張が生ずる。肺血管の内皮細胞はEDRF(内皮細胞由来拡張因子)すなわちNOを産生しうる。しかし、正常の状態および肺高血圧症における、NOの肺血管緊張度に及ぼす影響に関しては明らかではない。そこで、持続性低酸素(10%O_2、20分)時の血管拡張にNO産生が関与しているのか否かを検討した。正常の肺血管では、持続性の低酸素は二相性の圧反応を引き起こした。一方、低酸素性肺高血圧症では、低酸素負荷により圧変化は認められなかった。NO合成酸素の阻害剤であるL-NAMEを投与した後、正常の肺血管では同様に二相性の反応が認められたが、圧反応は上方へ偏位した。一方、低酸素性肺高血圧症では、肺動脈圧は初期に上昇が認められ、その後の低下はほとんど認められなかった。肺血管抵抗の変化も、圧変化と同様であった。肺における誘導型のNO合成酵素のmRNA発現および蛋白発現を検討したが、共に低酸素性肺高血圧症では、正常の肺血管状態よりも発現の亢進が認められた。これらの結果は、室内気吸入の状態で、低酸素性肺高血圧症ではNO産生は亢進しており、過剰な肺動脈圧の上昇を抑えているということを示唆している。また、持続性低酸素に曝露された時、正常の肺血管の状態でも、低酸素性肺高血圧症でも、NO産生は増加して血管の拡張を引き起こすが、その程度は低酸素性肺高血圧症においてより強く作用すると考えられた。
QT延長症候群のMolecular medicine-遺伝子診断を基盤とした治療を求めて-

我々はQT延長症候群(LQTS)患者を対象にカリウム・チャネルをコードするKCNQ1(LQT1),KCNH2(LQT2)、KCNE1(LQT5)、KCNE2(LQT6)とナトリウム・チャネルをコードするSCN5A(LQT3)の機能的に重要と考えられる部分に対応する塩基配列を挟む形でPCRを行いSSCP法にてスクリーニングを行った。LQTS患者は、家族性に発症したケースのみならず、薬剤などの2次性LQTS症例も対象とした。その結果、あらたにKCNQ1の7変異、KCNH2の6変異、SCN5Aの3変異、さらに、KCNQ1の2つのSNP (single nucleotide polymorphism)を発見した。また、昨年、報告された心筋inwardrectifier K channelをコードするKCNJ2の2つの変異を見つけた。これらの2家系でのaffected memberは心室性不整脈(QT延長)と周期性麻痺が合併しており、いわゆるAndersen症候群の亜型であることが判明した。KCNQ1の2つのSNPにおいて、おなじSNP変異を遺伝子組換え法で作成し、培養細胞を用いた機能解析を行ったところ、G643S変異において軽度ではあるが、有意なIks電流の発現低下が認められ、臨床像(QT延長、2次的因子で顕著化する)との関連が示唆された。もうひとつのSNPであるP448Rについては有意な機能変化を認めなかった。このような機能解析を通して各々のチャネル遺伝子の変異により招来される機能異常の差から、臨床像を推察することができるようになって来た。また、日本人に特異的なSNPと本症候群との関連も明らかとなり、薬剤投与時のリスク回避の一助として役立つものと考えられる。我々は、これまでに比較的若年者に見られる心臓突然死の原因として近年注目されている家族性及び2次性QT延長症候群(以下LQTS)の患者を対象として、心筋イオン・チャネルにおける遺伝子変異の検索し、患者の臨床像と、同定された変異が招来するところのチャネル機能障害との相関関係について検討してきた。これまでに100以上の症例について、発端者とその家族に対して遺伝子検索を進めた結果、9家系で8つのKCNQ1遺伝子の変異を、6家系で6つのHERG遺伝子の変異を、2家系で2つのSCN5A遺伝子の変異を同定した。特に、カリウムチャネルをコードするKCNQ1とHERGの遺伝子変異についての検討において、チャネル蛋白における部位からみたとき、家族性LQTSで同定された変異は、主に機能的により重要な細胞膜貫通領域とイオンの通過する孔領域に存在する傾向が認められたのに対して、2次性LQTSで同定された変異は、細胞内リンカーやC末端領域に存在していた。それらの遺伝子変異について、イオンチャネル異常を機能解析したところ、前者の変異は、それらの導入によってチャネル機能が廃絶してしまうのに対して、後者の変異は、主に軽度の機能異常を引き起こすものであった。これらの結果は、患者の臨床的重症度に概ね対応しており、遺伝子検索の臨床的意義が示唆された。我々はQT延長症候群(LQTS)患者を対象にカリウム・チャネルをコードするKCNQ1(LQT1), KCNH2(LQT2)、KCNE1(LQT5)、KCNE2(LQT6)とナトリウム・チャネルをコードするSCN5A(LQT3)の機能的に重要と考えられる部分に対応する塩基配列を挟む形でPCRを行いSSCP法にてスクリーニングを行った。その結果、あらたにKCNQ1の7変異、KCNH2の6変異、SCN5Aの3変異、さらに、KCNQ1の2つのSNP(single nucleotide polymorphism)を発見した。また、昨年、報告された心筋inward

rectifier K channelをコードするKCNJ2の2つの変異を見つけた。これらの2家系でのaffected memberは心室性不整脈(QT延長)と周期性麻痺が合併しており、いわゆるAndersen症候群の亜型であることが判明した。KCNQ1の2つのSNPにおいて、おなじSNP変異を遺伝子組換え法で作成し、培養細胞を用いた機能解析を行ったところ、G643S変異において軽度ではあるが、有意なIK_s電流の発現低下が認められ、臨床像(QT延長、2次的因子で顕著化する)との関連が示唆された。もうひとつのSNPであるP448Rについては有意な機能変化を認めなかった。このような機能解析を通して各々のチャネル遺伝子の変異により招来される機能異常の差から、臨床像を推察することができるようになって来た。また、日本人に特異的なSNPと本症候群との関連も明らかとなり、薬剤投与時のリスク回避の一助として役立つものと考えられる。
映像データベースにおける意味情報の解析と高次インデックスの作成

本研究は、映像をデータベース化する際に「何が写っているか」「何を行おうとしているか」などの高次情報を自動抽出し、原データと対応づけてデータベースに格納するシステム作成を目指している。本研究ではまず、2台のVGAカメラによって得られたステレオ映像(2系統のフレーム列)から、あらかじめ指定した物体上の特徴点(たとえば作業者の帽子、目、手袋など)を検出し、かつ左右フレームの視差から空間座標を計算することによって動きの素データを抽出した。さらに、あらかじめわかっている物体の3次元形状(たとえば顔)と上記の特徴点の時系列および原映像(フレーム列)とのあいだでマッチングをとり、最終的には人体各部、道具、背景中の物体などが3次元空間中でどの位置でどのような運動をしているかのモデル化を目指した。実際にはサッカーの試合を複数台のカメラから取り込み、各プレーヤーの動作意図との関わり等を所定のテンプレートから類推することを試みた。そのため、まず競技場全体の中での各プレーヤーの3次元位置を画像間差分を用いて検出し、そのうちから特に重要と思われる幾人かのプレーヤーについては近視点映像を利用した姿勢解析を行い、それらの間の位置・領域変化を時間的にモデル化して、全体としてどのような意図の協調プレーが行われているかを推測した。以上から原情報のビデオ映像から意味情報を抽出することの具体的な手法を示し、かつスキーマ化してデータベースに蓄積することにより、高度の再検索の可能性を示すことができた。本研究では、映像をデータベース化する際に「何が写っているか」「何を行おうとしているか」などの高次情報を自動抽出し、原データと対応づけてデータベースに格納するシステム作成を目指している。本研究ではまず、ステレオ映像(2系統のフレーム例)から、あらかじめ指定した物体上の特徴点(たとえば作業者の帽子、目、手袋など)を検出し、かつ左右フレームの視差から空間座標を計算することによって動きの素データを抽出する。さらに、あらかじめわかっている物体の3次元形状(たとえば顔)と上記の特徴点の時系列および原映像(フレーム例)とのあいだでマッチングをとり、最終的には人体各部、道具、背景中の物体などが3次元空間中でどの位置でどのような運動をしているかをモデル化する。その上で、人間など、構造を持ったものにあてはめ、人間の動作意図との関わり等と所定のテンプレートから類似することを試みる。初年度においては特徴点のフレーム列内での自動追跡プログラム(CHASER)の開発・性能評価を行い、実用性を確認した。さらに顔の3次元形状のモデル作成および評価を行い、原映像とのマッチングにより姿勢や運動方向についての情報を抽出するのに有効であることを確認した。
レーザーと試作高分子系歯髄保護材の直接歯髄覆罩効果と創傷治癒メカニズムの解明

リン酸カルシウム塩を試作モノマー液に添加し直接歯髄覆罩剤としたものを硬化させ、SEM、EPMAおよびICP発光分析装置を用いて観察した。その結果、1)硬化物中でリン酸カルシウム塩はフィラー状に分散しCa、P、Mg元素を含む複合化合物となるが、分散は使用時の振動や撹絆操作に影響される傾向にあった。2)CaとPは一致して相対的に高い濃度を示したが、Mgはすべての試料で低く、線分析のみでわずかに検出された。3)Ca、Pの溶出がみられたが、溶出量は溶解度積(Ksp)により影響されリン酸カルシウム塩の種類により差がみられた。4)直接歯髄覆罩剤として露髄部に用いると、硬化ボンディング材中のリン酸カルシウム塩は、露髄面に近接した位置にあり、直接接触することによる石灰化促進作用、水分を介して溶出したCa、Pのイオン作用、pH変化による覆罩界面の環境変化等により修復性象牙質形成促進効果を発揮し、治癒の確実性が増し、初期修復性変化の遅延改善に役立つものと推察された。CO_2レーザー(オペレーザー^<【○!R】>)照射群で露髄面に炭化層を形成したものでは、その周囲に象牙質基質形成、炭化層直下にヘマトキシリン好染の壊死層とエオジン好染の熱変性層が認められた。また、照射条件を弱、中+LLT作用と強の3群とし、4種類のリン酸カルシウム塩添加試作ボンディング材で直接歯髄覆罩をしたものでは、統計学的有意差が認められなかったものの、レーザーの照射出力が弱いほど治癒が速く、象牙質橋の形成が良好であった。逆に照射出力が高いほど熱による影響を強く受けて治癒が遅れ、髄壁面に形成される刺激象牙質も多くなる傾向にあった。各種リン酸カルシウム塩を添加した試作ボンディング材でラット露髄面に対し直接歯髄覆罩を行うと、それを含有しないものでは修復性象牙質を形成しないのに対し、修復性象牙質の形成が認められ、各種リン酸カルシウム塩に硬組織誘導能があることが確認された。総じて、ヒドロキシアパタイト、ブルッシャイトおよびウイトロカイトを含む実験群および2%5-NMSAを添加した試作プライマー使用群に良好な成績が得られた。露髄面に対するレーザーの照射と各種グロスファクターを添加した試作接着性レジン修復システムの組合せ条件全14種による直接歯髄覆罩効果について免疫組織化学的ならびに病理組織学的観察を行った。すなわち、ラットの上顎第1臼歯近心隣接面に露髄窩洞を形成し、レーザー照射群ではCO_2レーザー(オペレーザー^<【○!R】>)を用い、照射出力0.5W、スーパーパルスモード1(SP1)で、リピートパルスモードでは(10msec照射、10msec休止)、デフォーカス、照射時間3secで照射し炭化層を形成した。コントロール群はレーザー非照射群とし、新規ならびに試作接着性レジンで直接歯髄覆罩・修復処置を行い、14日間飼育した後屠殺し、パラフィン連続切片標本を作成し、惹起される炎症性変化および修復性変化を免疫組織化学的ならびに病理組織学的に検討した。

その結果、MBボンド使用群で修復性象牙質の形成を認めなかったが、グロスファクター添加試作ボンディング材群では全て修復性象牙質の形成を認めた。しかしながらその種類と濃度によって形成状態に差が認められた。CO_2レーザー照射群では歯髄炭化層周囲に象牙質基質の形成、炭化層直下にヘマトキシリン好染の壊死層とエオジン好染の熱変性層が認められた。各群とも歯髄の組織像はほぼ正常であった。今回の結果から、試作ボンディング材MB-1+試作プライマーMP-3応用群が最適の条件として結論づけられたが、今後の検討課題としてグロスファクター、特にブルシャイトの添加量、ブルッシャイトとハイドロオキシアパタイトを一定の割合で混合した場合の配合効果およびCO_2レーザー照射条件等について覆罩直後におけるより短期的観察を詳細に実施して、検討を加える予定である。接着性レジンシステム群では、MBボンドを使用した群で修復象牙質の形成を認めなかったのに対し、修復象牙質形成促進剤添加試作ボンディング材を使用した全ての群で修復性象牙質を認めた。形成量はMB-2が最も多く、次いでMB-3、MB-1の順であったが、MB-2、MB-3が不規則な骨様象牙質が多かったのに対し、MB-1は象牙細管構造を有する真性象牙質が多く認められ、骨様象牙質は少なかった。CO_2レーザー群では、歯髄の炭化層周囲に不規則な象牙質の基質形成を認めた。照射象牙質面では、黒色の炭化層直下にヘマトキシリン好染の壊死層と、さらにエオジン好染の熱変性層が認められた。試作プライマー間の比較では、MP-3、MBプライマー、ABPの順で前者ほど炎症性変化が少ない傾向にあった。対照群では、厚い修復象牙質の形成を認めるものもあったが、試料間で形成量にばらつきがあった。TGF-β_1、の染色では、全ての群の一部の試料にわずかな陽性反応を認めたが、各群間で大きな差は認められなかった。今回の結果から、試作ボンディング材MB-1+試作プライマーMP-3応用群が、最も炎症性変化が少なく、良好な修復性変化を示したことから、直接歯髄覆罩の初期の治癒経過に極めて有効な材料であることが示唆された。なお、ラット露髄窩洞を精査する目的でソリッドファイバースコープ「Dr.カム」(デニックス)を設備備品として購入し使用する予定であったが、メーカーサイドの理由で製造・販売が中止となっていた。そこで「サージテル光ファイバーライトシステムHLT200、ヘッドマウントシステム」(オーラルケア)を代替購入して使用した。今年度は、昨年迄と比較し、より短期およびより長期の観察期間を設定し、配合する修復象牙質形成促進剤をより低濃度に調整したものを使用し、創傷の治癒形態について病理組織学的に追加検討を行った。その結果、以下の成績が得られた。全ての群で,術後初期(1日)に軽度の炎症性変化を認めたものの,それらは経時的(3,7日)に消退する傾向にあった。修復象牙質の形成が観察された群では,術後14日で明瞭となり,術後28日まで形成量は増加した。Group(1)およびGroup(2)は類似した経過を示したが,14日における修復象牙質の形成量はGroup(1)の方が多い傾向がみられた。28日ではともに完全象牙質橋を観察した。Group(3)は,14日までは修復象牙質の形成はほとんど観察されなかったが,28日では象牙質橋を認める試料があった。Group(4)は,1日で他と比較的して若干強い炎症性反応が観察されたが,時間の経過とともに消退した。
レセプトデータを用いた特定健診・保健指導の評価に関する研究

特定健診受診者の経済的要因が糖尿病発症に与える影響について評価を行った.対象は平成22年度特定健診を受診した全国健康保険協会福岡支部の男性被保険者のうち,糖尿病でない者とし,これらの5年後の糖尿病の発症状況について比較した.糖尿病の発症については,それぞれ平成22年度と27年度の健診結果よりヘモグロビンA1cが6.5%以上,またはレセプト情報より糖尿病薬を調剤されている者と定義した.経済的要因として標準報酬月額を15万未満,15-24.9万,25-34.9万,35-44.9万,45万以上の5群に分類した.これら標準報酬月額と糖尿病発症頻度について比較し,糖尿病発症を従属変数,標準報酬月額を経済的指標とし,年代,平成22年度健診受診時の高血圧の有無,脂質異常症の有無,食事スピードを他の独立要因としたロジスティック回帰分析を行った.年代は40代,50代,60歳以上の3群に,食事スピードは平成22年度特定健診質問票の回答より「速い」「普通」「ゆっくり」の3群とした.標準報酬月額が15万未満の群は398名(2.5%),15-24.9万の群は2,617名(16.5%),25-34.9万の群は4,959名(31.4%),35-44.9万の群は4,772名(30.2%),45万以上の群は3,072名(19.4%)であり、糖尿病発症頻度はそれぞれ7.8%、7.0%、5.3%,5.0%,4.9%で低所得の群で有意に高かった。単変量分析の結果,低所得,60歳以上,併存症,早食いが糖尿病発症のリスク因子として認められた.一方,多変量分析で年代,併存症の有無,食事スピードで調整した結果,低所得はリスク因子として認められなかった.これは,食事スピードが経済的要因と糖尿病発症の双方に関連しているためであると考えられる.低所得は糖尿病発症に影響を与えているが,その原因は早食いである可能性が示唆された.本研究では,特定健診の受診状況をもとに前向きコホート調査を行い,電子レセプト情報を活用した医療費分析により特定健診・保健指導の効果を検討することを目的としている.今回は,今後のデータベース作成および分析を行うための作業環境の整備と,コホート作成の基礎となるデータ抽出方法の確立を行った.具体的には,平成24年度の福岡県協会けんぽ加入者の平成24年度健診受診者において,平成24年度(2012年4月から2013年3月診療分)のレセプトデータを抽出し,データベースを作成した.なお,情報量が膨大であるため次の6つのテーブルに分けて作成した.これらは,それぞれ匿名化IDやレセプト番号をキーにすることで紐付け可能であり,平成24年度の診療歴や傷病の診断歴,医薬品処方歴などを確認することができる.(1)平成24年の健診受診者リスト,(2) (1)における医科レセプトの基本情報,(3) (2)における傷病情報,(4) (2)における診療行為情報,(5) (1)における調剤レセプトの基本情報,(6) (5)における調剤行為情報データベース作成の結果,平成24年度健診受診者は合計315,091名(男性203,830名,女性111,261名)であった.年代別内訳は,35から44歳は114,999名(36.5%),45から54歳は94,131名(29.9%),55から64歳は87,717名(27.8%),65から75歳は18,244名(5.8%)であった.また,健診受診者のうち、255,178名(受診者の約81%)(男性158,082名,女性255,178名)の受療歴を確認した.年代別内訳は,35から44歳は90,780名(35.6%),45から54歳は75,894名(29.7%),55から64歳は74,509名(29.2%),65から75歳は13,995名(5.5%)であった.データ提供が遅れているため,次年度以降にデータ分析を行う.全国健康保険協会福岡支部の保険請求データ及び健診データを用い、平成22年度に特定保健指導の動機付け保健指導、積極的保健指導の対象者となった者のうち、平成22年度に指導を受けた者と受けていない者の、医療費比較を行った。追跡機関は平成22年4月1日から平成27年3月31日までとした。医療費は、入院、入院外、調剤別で算出し、また、ICD10コードを用い、生活習慣病別(糖尿病、高血圧、高脂血症、心疾患、脳血管疾患、悪性新生物)の入院履歴と入院医療費(平成22年度4月1日時点の年代別)についても算出した。分析の結果、平成22年度に特定保健指導が必要とされた者は29,191名で、うち、指導を受けていない者は26,390名、受けた者は2,801名であった。

特定保健指導の対象となった者のうち、指導を受けた群と受けていない群で、その後の医療費を比較したところ、有意差は認められなかった。生活習慣病別入院履歴については、高血圧、心疾患、脳血管疾患では指導を受けた群の方が入院割合は低い傾向にあった。しかしながら、生活習慣病のみの入院医療費についても有意差はみられなかった。特定保健指導を受けることによる医療費への影響は少ないと考えられるが、一方で高血圧、心疾患、脳血管疾患による入院割合は指導を受けた群の方が低いことから、特定保健指導は高血圧や高血圧に関連する疾患の重症化予防になることが示唆される。しかしながら、保健指導を受けた群と受けていない群に群分けする際に、選択バイアスが生じている可能性が否定できないため、今後はマッチング等の調整が必要となると考えられる。平成26年度までのデータの提供を受け、計5年分のデータベースの構築を行い、分析することができた。特定健診受診者のうち糖尿病で要医療と判定された者について、レセプトデータから判断した受療行動の違いにより糖尿病関連疾患の発生リスクの評価を行った。対象は平成22年度に特定健診を受診した全国健康保険協会福岡支部の被保険者のうち、糖尿病について要医療となった者(ヘモグロビンA1cが6.5%以上または空腹時血糖が126mg/dl以上)とし、これらの平成23年度の糖尿病に関する入院外の受診状況を調査し、平成24年から26年までの3年間における糖尿病関連疾患による入院について比較した。受診状況は平成23年度のレセプトで把握し、糖尿病で3ヶ月に1度定期的に受診する者を「定期受診群」、それ以外を「不定期受診群」、全く受診がなかった者を「未受診群」として分類した。糖尿病関連疾患による入院は、出血性卒中、虚血性脳卒中、急性心筋梗塞、急性心筋梗塞を除く虚血性心疾患、末梢動脈性疾患、腎症、網膜症、神経障害についてICD-10により同定し、受診状況とこれら疾患による入院の発生頻度についてχ2検定を行った。また、各疾患による入院の有無を従属変数、性別、年齢、ヘモグロビンA1c、空腹時血糖、HDL-C、LDL-C、中性脂肪、質問表による服薬状況(血圧、脂質)および受診状況(定期受診、不定期受診、未受診)を独立変数とし多重ロジスティック回帰分析を行った。分析の結果、定期受診群が433名(12.1%)、不定期受診群が1,013名(28.2%)、未受診群が2,147名(59.8%)であった。平均年齢は、それぞれ、53.4±6.8歳、52.8±6.9歳、51.5±6.6歳であった。定期受診群に比べて不定期受診群において、急性心筋梗塞を除く虚血性疾患による入院の頻度が有意に多いという結果であった。他の疾患においても同様の傾向がみられ、定期受診による糖尿病合併症の発症を抑制する可能性が示唆された。昨年度までに構築した平成26年度までのデータベースから,平成22年度特定健診受診者のうち糖尿病で要医療となったものを対象とし,データを抽出し分析を進めることができた.特定健診受診者の経済的要因が糖尿病発症に与える影響について評価を行った.対象は平成22年度特定健診を受診した全国健康保険協会福岡支部の男性被保険者のうち,糖尿病でない者とし,これらの5年後の糖尿病の発症状況について比較した.糖尿病の発症については,それぞれ平成22年度と27年度の健診結果よりヘモグロビンA1cが6.5%以上,またはレセプト情報より糖尿病薬を調剤されている者と定義した.経済的要因として標準報酬月額を15万未満,15-24.9万,25-34.9万,35-44.9万,45万以上の5群に分類した.これら標準報酬月額と糖尿病発症頻度について比較し,糖尿病発症を従属変数,標準報酬月額を経済的指標とし,年代,平成22年度健診受診時の高血圧の有無,脂質異常症の有無,食事スピードを他の独立要因としたロジスティック回帰分析を行った.年代は40代,50代,60歳以上の3群に,食事スピードは平成22年度特定健診質問票の回答より「速い」「普通」「ゆっくり」の3群とした.
粒状物質から構成される不規則媒質の電気的定数イメージングに関する研究

マイクロ波やミリ波等の高周波電磁界に対する電気電子材料の電気的特性の計測及び制御技術・設計手法の開発は,新素材及び高周波デバイスの開発,設計・製作において重要な課題となっている。電気電子材料の電気的特性を制御するための一方法として,誘電体等の均質な背景媒質中に多数の粒状物質(背景媒質と値の異なる誘電体粒子や,光学異性体を含む粒子:双異方性媒質やキラル媒質,ダブルネガティブ媒質からなる粒子)を適当な密度となるよう埋め込み,混合媒質を構成する方法がある。この混合媒質の電気的性質を表す実効的な電気的定数(等価媒質定数)の算定法及びイメージングに関する研究は,物理学・化学・薬学の分野において重要かつ基礎的な問題として位置付けられ,活発に研究が行われてきた。本研究では,混合媒質を構成する粒状物質の媒質定数の大きさや形状,性質に束縛されること無く,かつ,従来法の中では最も良いとされているQCA-CP(準結晶近似法)よりも高精度で適用範囲の広い実効的な電気的定数の算定法とそのイメージング技術の開発を目的として研究を実施した。具体的には、不規則媒質を構成する粒状物質が誘電体球及び(又は)キラル球で、かつ、対(ペア)で分布している場合の実効的な電気的定数算定式について,数値計算により,提案する方法の妥当性を検証した(形状の複雑化に対する特性の変化を検証した)。次に,媒質の電気的特性に影響を与える幾つかのパラメータを変化させることにより,媒質中の実効的な電気的定数を視覚化するイメージング技術の検討を行った。また,不規則媒質を構成する粒子の電気的定数が異なる場合の不規則媒質の実効的な電気的定数算定式についても研究を進め,粒子固有の電気的特性が不規則媒質の実効的な電気的定数に与える影響についても調査・研究を行った。本研究の成果は、不規則媒質のマクロ的な電気的特性の把握に有効である。不規則媒質を構成する粒状物質が誘電体球,磁性体球,キラル球である場合の実効的な電気的定数算定法について,まず理論的立場から解析を行い,数値計算により提案する方法の妥当性を検証し,実効的な電気的定数算定法に基づいて,いくつかのパラメータを変化させることにより,媒質中の実効的な電気的定数を視覚化するイメージング技術の開発を行うための準備を行った。具体的には,粒状物質(誘電体球and/orキラル球)からなる不規則媒質の実効的な電気的定数算定式の導出を行うために,(1)背景媒質(均質誘電体または自由空間)中に多数の粒状物質が不規則に分布する不規則媒質を媒質モデルとし,媒質中を伝搬する電磁波のベクトル波動方程式をMaxwellの方程式に基づいて定式化し(南部),(2)得られたベクトル波動方程式より積分方程式を導き,電磁波多重散乱解析法(本研究で提案する方法,及び,実効界近似:EFA)を用いて,電磁波のコヒーレント成分の解析を行い(南部・三橋),(3)その結果導出された媒質中の平均ダイアディック・グリーン関数より,粒状物質の種類(誘電体,キラル)ごとに不規則媒質の実効的な電気的定数の算定式を導出し(南部),(4)導出された不規則媒質の実効的な電気的定数の算定式から数値計算を行った(南部・高比良)。

この内,不規則媒質の実効的な媒質定数である等価構成定数(等価誘電率,等価透磁率,等価キラリティ)については,詳細な数値計算を行い,論文として公開した。また,粒子の形状の影響を検討するために,2個の球体がペアになっている粒子構造が多数存在する空間をモデルとした解析にも着手し,本研究で提案する方法の結果と比較するための先行データを得るために,EFAによる解析と数値計算を行った(南部)。不規則媒質(ランダム媒質)を構成する粒状物質が誘電体球,磁性体球,キラル球である場合の実効的な電気的定数算定とそのイメージングを行うために,電磁波多重散乱理論に基づいて、まず理論的立場から解析を行い,算定結果の妥当性を検証し、視覚化について検討を行った。特に今年度は、複雑な粒子構造にも対応できるよう算定手法の適用範囲拡張を目指し、2個の球体がペアになっている粒子構造が多数存在する空間をモデルとした場合の実効的な電気的定数算定法について研究を行った。具体的には,空間中に、粒状物質(誘電体球and/orキラル球)がペアになっている粒子構造が多数存在する不規則媒質を考え、その実効的な電気的定数算定式の導出を行うために,(1)背景媒質(均質誘電体または自由空間)中に多数の粒状物質のペアが不規則に分布する不規則媒質を解析対象媒質モデルとし,媒質中を伝搬する電磁波のベクトル波動方程式をMaxwellの方程式に基づいて定式化し(南部),(2)得られたベクトル波動方程式より電磁波多重散乱解析法(実効界近似:EFA)を用いて,電磁波のコヒーレント成分の解析を行い(南部・三橋),(3)その結果導出された媒質中の平均波数(実効伝搬定数)より,粒状物質の種類(誘電体,キラル)ごとに不規則媒質の実効的な電気的定数の算定式を導出し(南部),(4)導出された不規則媒質の実効的な電気的定数の算定式から数値計算を行った(南部・高比良)。本年度は,前年度より継続して、不規則媒質を構成する粒状物質が誘電体球及び(又は)キラル球で、かつ、形状の複雑化に対する特性の変化の検証するために、球が対(ペア)で分布している場合の実効的な電気的定数(等価誘電率、等価透磁率、等価キラリティ)について,多重散乱解析法に基づく理論解析を行い,媒質のマクロ的な電気的定数の算定式の導出を行った。次に,媒質の電気的特性に影響を与える幾つかのパラメータ(球の電気的定数や体積占有率)を変化させることにより,媒質中の実効的な電気的定数を視覚化するイメージングの検討を行った。また,不規則媒質を構成する粒子のペアの各電気的定数が異なる場合についても実効的な電気的定数を算定し,粒子固有の電気的特性が不規則媒質の実効的な電気的定数に与える影響についても調査・研究を行った。具体的には,まず背景媒質(均質誘電体または自由空間)中に不規則に多数の粒状物質(球体)が2個ずつ対分布する媒質を媒質モデルとして、分布が極めて粗であるという仮定の基にEFA(フォルディ近似法)に基づいて導出された媒質中の実効的な電気的定数算定式の導出及びプログラミングを行い,また、背景媒質(均質誘電体または自由空間)中に不規則に多数の粒状物質(電気的定数の異なる球体)が2個ずつ対分布する媒質を媒質モデルとした場合について、同様に算定式の導出及びプログラミングを行い、動作を確認の後、数値計算及び結果のイメージングを行った。イメージングされた数値例の結果より、粒子の形状や電気的特性が媒質の特性全体に及ぼす影響が大きく、特性のイメージング化は、媒質中の電波伝搬の評価や高周波材料の開発に必要、かつ、有用であることがわかった。最終的に3年間の本研究により得られた研究成果をまとめ、研究成果報告書の作成を行った。
最新光子検出器とチェレンコフ放射を利用した超高分解能粒子時間速度検出器の開発

高速光電子増倍管を用いた重イオン計測用チェレンコフ飛行時間検出器を製作し、放射線医学総合研究所のHIMAC重粒子シンクロトロン施設において、ビーム粒子種やエネルギーを変えることにより、チェレンコフ放射の光子量が様々な条件での系統的なテスト測定を行った。その結果、初期の目標であった時間分解能σ≦10 psを達成することに成功した。さらに様々な改良を加えた結果、400A MeV 132Xeビームに対し、最高記録σ= 5 ps (システムの分解能込み)を達成できた。今後、検出器の大型化・汎用化のための開発とテストを目指す。初年度はまず,以下に示すように光子検出器として高速光電子増倍管を用いたチェレンコフ飛行時間検出器を製作し,高エネルギー重イオンビームによるテストを行った。チェレンコフ光ラジエーターとしてオハラ製高屈折率ガラス(n = 1.89;厚さ1mm)と金属チャネル型の時間分解能がよい浜松ホトニクス製光電子増倍管を4本用いて,重イオン飛行時間測定用チェレンコフ検出器を製作した。製作においては,ラジエーターと光電子増倍管の接着部分に注意を払い,特別に三菱ガス化学製高屈折率プラスチック(n = 1.74)のモノマーを接着剤として用いた。完成した検出器を,放射線医学総合研究所の重イオンシンクロトロンHIMACにおいて,核子当たり約500 MeVの微弱58Niビームを用いてテストしたところ,検出器全体の分解能としてσ= 8.5 psを達成することに成功した。目標とした分解能はσ≦10 psであったので,既に目標をクリアしてしまっている。本研究で得られた上記の分解能は,重イオンビームに対する時間分解能としては,世界最高記録級と言える。この結果,ビームに対する速度分解能は,飛行距離わずか2mでδβ/β0.1 %と極めて良い値が得られることになる。これにより,重イオンビームに対する核種識別能力の飛躍的な向上が期待できる。今後さらに条件を変えてテストを行い,よりいっそうの性能改善を目指す。今年度は,まず昨年度製作した全反射型チェレンコフ飛行時間検出器の改良を行った。ラジエーターである高屈折率ガラス(オハラ(株)製,n = 1.89;厚さ1mm)と高時間分解能光電子増倍管の受光面との接着の仕方に工夫を凝らした。接着剤は三菱ガス化学(株)に協力を仰ぎ,同社製の高屈折率プラスチック(n = 1.69-1.74)の重合前の液体状のものを用いて,加熱重合を行うことで固化させた。この改良した検出器に対し,今年度は昨年度に比べてさらにチェレンコフ放射の光子量の多い条件でテスト測定を行った。実験は放射線医学総合研究所の重イオンシンクロトロン施設HIMACにおいて,核子当たり420 MeVまで加速された微弱132Xeビームを用いて行った。その結果,最高時間分解能として,昨年度を大きく上回るσ= 5.4 psを達成することに成功した。初期の目標分解能がσ≦10 psであることを考えると,既に大きく目標以上の結果を記録できている。本研究で得られたこの時間分解能は,重イオンビームに対する時間分解能としては世界最高記録となる。この結果,ビームに対する速度分解能は,飛行距離わずか1mほどでδβ/β0.1 %と極めて良い値が達成できる。ただし,信号処理電子回路の設定条件などの最適化がまだ完全ではなく,さらに性能改善の余地が残されている。昨年度までに改良を重ねた検出器に対し、放射線医学総合研究所のHIMAC重粒子シンクロトロン施設において、ビーム粒子種やエネルギーを変えることにより、チェレンコフ放射の光子量が様々な条件での系統的なテスト測定を行った。その結果、前年度までで達成した時間分解能の最高記録であるσ= 5 ps (システムの分解能込み)を再現することに成功し、どのような条件下でこの超高分解能が実現できるかの情報を得た。また、発生チェレンコフ光子量と時間分解能との関係、信号しきい値と光子量・分解能との関係など、系統的な情報を得ることができた。上記の時間分解能最高記録は測定系の分解能込みの値なので、検出器自身の分解能は、なんとσ3 psと、今までの飛行時間検出器の常識を大きく越えた超高分解能を達成していると考えられる。このように、初期の目標分解能σ≦10 psであったのに対し、目標を大きく超える成果の達成に成功したことになる。以上の結果により、この検出器の実用化のための基礎固めができたこととなる。今後、これらの結果をまとめた論文を専門誌に発表するとともに、実用器の製作を進め実際の実験での実用に供したいと考えている。実用化の過程では、ラジエーターの大面積化やそれに伴うラジエーター材料の最適化が必要と可能性があるが、地道に進めていきたい。また、光子センサー自体についても、浜松ホトニクスなど光子センサーのメーカーと協力することにより、さらなる本検出器性能向上の可能性も追求していきたい。その結果、初期の目標であった時間分解能σ≦

10 psを達成することに成功した。さらに様々な改良を加えた結果、400A MeV 132Xeビームに対し、最高記録σ= 5 ps (システムの分解能込み)を達成できた。今後、検出器の大型化・汎用化のための開発とテストを目指す。屈折率の大きなラジエーターから通常のガラスでできている光電子増倍管の光入射窓へのチェレンコフ光の透過率を高めるため,いろいろな工夫と試行錯誤を重ねた。また,重イオンビームの種類や加速エネルギーは1回の実験でほぼ1種類しか選択できず,1回2晩程度の実験が年に2回だけ可能なので,問題点や調整すべき箇所の適切なフィードバックに時間がかかった。原子核物理学1.得られた世界最高記録の性能がどのような条件に依存するか,下記の点を得られているデータから抽出し,さらなる性能向上を目指す。・ビームの原子番号依存性,・ビームのエネルギー依存性,・ラジエーターの種類依存性,・光電子増倍化の種類依存性,・信号処理系の設定への依存性2.得られた結果をまとめ,論文発表を行うとともに,積極的に国際学会等で発表する。3.得られた高時間分解能を利用して,実際の粒子識別検出器として使用してみる。4.大面積化など,汎用性を高める改良・改造をすすめる。チェレンコフ・ラジエーターの屈折率が1.89と大きいため,屈折率が異なる普通のガラスでできている光電子増倍管の光入射窓入り口でチェレンコフ光が全反射され,チェレンコフ光の光電子増倍管への入射効率が極めて低くなっていることが,予備的なテストで判明した。この問題を解決するために,チェレンコフ光の伝達過程をGEANT4によるモンテカルロ・シミュレーションなどで解析した。その結果,屈折率がラジエーターと普通のガラスの中間にある接着剤を用いることが,入射効率の改善に寄与するであろうことがわかった。普通の透明接着剤の中にはそのようなものはなかなか無いが,三菱ガス化学(株)の協力により,チェレンコフ・ラジエーター候補の1つとして考えていた高屈折率プラスチックのモノマーを接着剤として利用できる可能性が生まれてきた。そして,これを用いたところ,極めて良い性能が達成できた。以上のような,問題点の克服・改善を行っていたため,研究計画はやや遅れている。しかし,当初の目標は達成できているので,今後はこの性能がどのような条件に依存するかを詳細に調べる。研究計画がやや遅れているため,光子検出器やラジエーター,関連部品などの調達が遅れている。そのため,研究成果をまとめて,学会等で発表するための旅費使用も遅れている。今後は得られた世界最高記録級の性能がどのような条件に依存するかを下記のような点で詳細に調べ,さらなる性能向上を目指す。・ラジエーターの種類,・光子検出器の種類(光電子増倍管の他の機種,MPPCなど)・詳細なビーム位置依存性,・ビームの原子番号依存性,・ビームエネルギー依存性以上のような性能向上のための基礎データを取得しつつ,実際の粒子識別検出器としても利用し,その性能を実戦で確認する。・別の種類の光電子増倍管・ラジエーターを調達する。・論文発表,学会での成果発表のための費用・旅費として使用する。・汎用化のための改造費用として使用する。上記で述べたとおり,研究計画がやや遅れているため,光子検出器やラジエーターなどの調達が遅れている。