hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高輝度放射光によるアクチンミオシン三次元分子動態と心筋心室マクロ動態の統合解析

ミオシンヘッドがまずアクチンに近づいて後、クロスブリッジが形成されて張力が発生するが、後半ではクロスブリッジが解離して後にミオシンヘッドがアクチンから離れて行くことがわかった。次に静止時のサルコメア長を変化させて、ピーク張力とミオシンからアクチンへの質量移動量の関係を調べた。最大発生張力とミオシンからアクチンへの質量移動量にはプラスの相関関係があった。この結果は、サルコメア長の増減による発生張力の増減(スターリングの心臓の法則)が、アクチン・ミオシン間に形成されるクロスブリッジ数の増減に由来することを明確に実証した極めて重要な結果である。BMDによる丸ごとの停止心にX線を照射すると心筋のアクチン・ミオシンによる(1,0)と(1,1)の赤道反射が観察された。左室自由壁から左室の中心部に向けて照射部を移動させると、最初、縦方向が多かった回折像が、やがて同心円状となり、心内膜下を照射部位とするとき横方向の回折縞中心となった。これにより心外膜下では横方向に走行する心筋繊維がやがて入り交じった走行となり、心内膜下では縦方向に走行する心筋繊維中心となることがわかる。2.[サルコメア長の計測]レーザ回折サルコメア長計測装置によりサルコメア長を計測し、アクチン・ミオシンの側方間隔と対比し分子レベルとミクロレベルの統合性を検討した。3.[実験方法]ラットの右室乳頭筋の摘出潅流標本にシンクロトロン放射X線を照射して赤道反射を得た。それの(1,0)/(1,1)比からミオシンヘッドのアクチンへの移動量を計測した。等尺性収縮でサルコメアの変化によりアクチン・ミオシン分子間の相互作用がいかに変化するかを明らかにした。また、等容性収縮を行っているランゲンドルフ灌流心の心室壁各部位にX線を照射して、X線回析像を得た。4.[結果]後負荷収縮(等張性収縮)で後負荷水準を変化させた収縮を行わせると、負荷が大きいほどミオシンヘッドのアクチンへの移動量(クロスブリッジ形成量に比例)は大きかった。しかし、後負荷水準がある量より少ないと等尺収縮時の同一張力発生時よりミオシンヘッドの移動量が少ないと言う興味ある所見が得られた。一心周期内の等容収縮心における発生圧はミオシンヘッド移動量と同一方向の変化を示した。本研究はSpring-8の放射光を用いて、摘出心筋および丸ごとの心臓におけるアクチンとミオシンの相互作用の1心周期内での経時的解析を目的とした。高輝度放射光施設(Super Photon Ring 8 GeV : SPring-8)に既設の装置を使用し、BL45XUにX線エネルギー12.4keV;波長1Åの小角散乱のセットアップを組んだ。X線回折像の記録には、X線イメージインテンシファイアと冷却CCDカメラを用いた。心室の撮影にはBL45XUよりX線エネルギーの高いBL40XUを使用した。カメラ長は3mとし、X線エネルギーは16keVとした。X線強度はフロントエンドスリットの幅により適切な水準に制御した。サルコメア長はレーザ回折サルコメア長計測装置により計測し、アクチン・ミオシンの側方間隔と対比し分子レベルとミクロレベルの統合性を検討した。ラットの右室乳頭筋の摘出潅流標本に放射光を照射して赤道反射を得た。それの(1,0)/(1,1)比からミオシンヘッドのアクチンへの移動量(クロスブリッジ形成量)を計測した。等尺性収縮および等張性収縮でサルコメア長の変化および後負荷の変化によりアクチン・ミオシン分子間の相互作用がいかに変化するかを明らかにした。
志摩三商会に着目した近代神戸の都市形成に関する研究

本研究は、最後の三田藩主・九鬼隆義及び志摩三商会の社員だった元三田藩士らに着目し、彼らが近代神戸の都市形成に与えた影響について考察することを目的とする。“神戸ホーム(現神戸女学院)"など多くの教育施設に九鬼隆義や志摩三商会の社員が関わっていたことを明らかにした。また法務局保管の旧土地台帳や字限図などを用いて、明治期に志摩三商会及びその社員らが所有していた土地や彼らが設立に関わっていた教育施設の分布図を作成した。本研究は、最後の三田藩主・九鬼隆義及び志摩三商会に関わった元三田藩士らに着目し、彼らが近代神戸の都市形成に与えた影響について考察することを目的とする。“志摩三商会"とは、1872(明治6)年に九鬼隆義が家臣であった白州退蔵や小寺泰次郎らと共に神戸に設立した輸入商社のことである。彼らは外国の医薬品等を販売する一方で不動産業も営んでおり、神戸雑居地内の土地を買い占め巨額の利を得ていた。今年度は1)近代神戸の都市形成に関する資料や志摩三商会や旧三田藩士(主に九鬼隆義、小寺泰次郎、白州退蔵)に関する資料の収集、2)1880(明治22)年頃に志摩三商会や九鬼隆義、白州退蔵が神戸雑居地(外国人と日本人の雑居が認められた地域)内に所有していた土地の情報の入手と整理を行った。1880(明治22)年頃の土地情報は、主に神戸市立中央図書館や神戸地方法務局に所蔵されている地籍図や旧土地台帳による。これら入手した土地情報を用いて、志摩三商会や九鬼隆義、白州退蔵、小寺泰次郎が1880年頃の神戸雑居地内に所有していた土地の一覧表とその分布図を作成した。この作業により、雑居地内に彼らが所有していた土地の分布状況を概ね把握することができた。志摩三商会の設立当時の所在地や九鬼隆義の居住地などが推定することができた。また、公益財団法人三井文庫所蔵の志摩三商会が関係していたといわれている加納町や栄町の土地や建物などの資料を入手した。しかし加納町と志摩三商会の関わりについては不明点も多いため、引き続きこれらの資料調査を進める。今後は神戸市立中央図書館や三井文庫に加え、神戸市立博物館や国立国会図書館などにも足を運び、志摩三商会に関する資料に加え旧三田藩関係者が関わったという神戸ホームや神戸商業講習所などに関する資料の収集も進める予定である。本研究は、最後の三田藩主・九鬼隆義及び志摩三商会に関わった元三田藩士ら(特に小寺泰次郎と白洲退蔵)に着目し、彼らが近代神戸の都市形成に与えた影響について考察することを目的としている。今年度は、志摩三商会に関する資料の収集と専門家へのヒアリング調査等を実施した。志摩三商会に関する資料収集では、特に“神戸ホーム"や“神戸商業講習所"に関する資料、志摩三商会が不動産業を成功させるきっかけとなったと言われる加納町に関する資料に焦点を絞って収集した。これらの作業を通じて、彼ら(特に九鬼隆義と白洲退蔵)が福澤諭吉の影響を大きく受けていたことが分かってきた。今後は福澤諭吉との書簡を入手し、神戸ホーム建設や土地取得などに福澤諭吉が関係していたかどうかを明らかにしていく予定である。一方、加納町における志摩三商会の所有地の分布や土地運用の実態(土地の取引には小寺泰次郎が中心だったと言われている)の把握については、裏付ける資料が乏しく難航している。ただ、今年度新たに明治10年頃の地籍図が法務局に保管されていることが判明したため、土地の所有地分布については新たな知見が得られる可能性がでてきた。また調査の過程で偶然、小寺泰次郎宛の手紙を入手することができた。その文面から小寺泰次郎が高利貸しをしていたということを少し裏付けることができた。志摩三商会が事業を展開していた時期は明治初期の頃で非常に短い期間だったこともあり、当時の状況を裏付ける資料が見つからず難航している。そのために「やや遅れている」と判断した。“志摩三商会"とは、九鬼隆義が元家臣とともに明治6年に設立した神戸初の輸入商社で、外国の食料品や薬等の販売の傍ら、開港直後の神戸の土地を多く買い占めるなど不動産業も営んでいたという。今年度は前年度に引き続き、国立国会図書館、神戸市立中央図書館、公益財団法人三井文庫などに足を運び、明治期及び大正期の神戸の歴史的資料や志摩三商会に関する資料を収集した。また、一宮神社や郷土史家への聞き取り調査と前年度の聞き取り調査により所在が明らかになった神戸地方法務局保管の地籍図(明治10年頃)の確認作業をおこなった。この明治10年頃の地籍図から志摩三商会名義の土地があったことが新たに確認できたため、明治21年頃の志摩三商会関係者の所有地分布図と比較し、特に九鬼隆義が設立に関わった神戸ホーム(現神戸女学院)及び神戸商業講習所の所有状況の変遷をおさえた。今年度は最終年度でもあるため、これまでに得られた資料の読み込み作業と整理をおこなった。そして神戸ホームや神戸商業講習所があった神戸山麓部を中心に土地所有の実態と変遷を把握し、志摩三商会関係者が当該地域の都市形成に与えた影響について考察した。

今後はこれらの成果をまとめて発表していく予定である。本研究は、最後の三田藩主・九鬼隆義及び志摩三商会の社員だった元三田藩士らに着目し、彼らが近代神戸の都市形成に与えた影響について考察することを目的とする。“神戸ホーム(現神戸女学院)"など多くの教育施設に九鬼隆義や志摩三商会の社員が関わっていたことを明らかにした。また法務局保管の旧土地台帳や字限図などを用いて、明治期に志摩三商会及びその社員らが所有していた土地や彼らが設立に関わっていた教育施設の分布図を作成した。当初予定していた関係資料の収集や九鬼隆義と小寺泰次郎の所有地の分布図の作成ができたため今後は取りまとめ作業に入る。新たに入手した明治10年の地籍図を用いて所有地分布図を作成し、昨年度作成した土地分布図と比較する。また、志摩三商会の活動実態については、白洲退蔵や九鬼隆義が福澤諭吉と交わした書簡の分析を進める。また、小寺氏の末裔の方とのコンタクトが取れたので、ヒアリングを実施予定である。最後に、これまでの成果を関連地域の住民などに発表すると同時に、地域に伝わっている当時の話の聞き取りを実施する予定である。近代都市史次年度は神戸ホームや神戸商業講習所に関する資料、志摩三商会に関わりがあった人物(福澤諭吉や加納宗七など)に関する資料を重点的に収集する。資料収集のための出張が当初予定していた回数遂行できなかったこと、予定していた関係者へのヒアリングを全て実施することができなかったこと、資料整理や図版作成などの謝金の支出が少なかったことなどによる。一部の資料収集にあたってはデジカメ撮影が許可されたため複写費がかからなかったこと、当初2回を予定していた資料収集のための東京(三井文庫や国会図書館など)出張が1回しか遂行できなかったこと、資料整理や図版作成のための謝金の支出が少なかったことなどの理由による。昨年度遂行できなかった資料収集のための出張費用や昨年度実施できなかった関係者への聞き取り調査費用にあてる予定である。また最終年度でもあるため、取りまとめ作業には学生の協力を得るため、その謝金にあてる予定である。当該研究費は今年度行くことができなかった国立国会図書館での資料収集や三井文庫での追加資料収集などにかかる経費にあてる予定である。
ナノ地球微生物学：微生物が作り出す酸化鉄ナノ粒子から探る真の元素循環プロセス

最終年度は、新規の鉄酸化菌の分離培養株の獲得を試みた。茨城県つくば市に、大規模な鉄酸化沈殿物が生じている場所を発見し、同地点を淡水域のモデル地の1つとして研究を進めた。グラジェント培養法を用いた限界希釈法によって、表層試料から淡水性鉄酸化菌を4株分離することに成功した。その内、2株はSideroxydans lithotrophicusに近縁であったが、16S rRNA遺伝子配列の相同性は98%以下であり、新種の可能性がある。顕微鏡観察の結果、螺旋状のストークは産出せず、粒子状のドレッドのみを産出することが示唆された。もう2株はThiomonas delicataに近縁であったが、16S rRNA遺伝子配列の相同性は97%以下であり、こちらも新種の可能性がある。興味深いことに、ストークやドレッドのような典型的な酸化鉄沈殿をつくらなかった。以上の成果については、論文執筆中である。鉄を含む淡水の温泉試料を元にした連続培養系のメタゲノム解析を行い、新規の鉄酸化バクテリアの存在を示唆した。この成果はMicrobes Environ.誌にて発表した。海洋性の硫化鉄鉱物のメタゲノム解析もを行い、新規の鉄還元バクテリアのゲノムの再構築に成功した(Environ. Microbiol.誌に発表)だけでなく、Zetaproteobacteriaに属する新規性の高い鉄酸化バクテリアのゲノムの再構築にも成功した。海洋性の鉄マンガン酸化物の微生物群集構造を解析し、得られた成果をMicrobes Environ.誌にて発表した。申請者が分離したFerriphaselus amnicola OYT1株のゲノムについて、全ゲノム配列決定を完了し、その成果はMicrobiol. Resour. Announc.誌に投稿し受理された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。難培養性の代表格として著名な中性pH付近で生育する微好気性鉄酸化バクテリアは、細胞外に特長的な形態の酸化鉄の構造体(BIOS)を産出することが知られている。研究代表者のこれまでの研究により、ナノサイズの酸化鉄の構造体BIOSを産出する微好気性鉄酸化バクテリアの存在が明らかになった。本研究では、サイズの小さなBIOSに着目し、その生成源や産出機構、特性を調べることで、自然界での元素循環における役割を明らかにすることを目的とした。研究初年度である平成28年度は、(1)汽水環境から研究代表者が分離したBIOSを産出する新奇汽水性鉄酸化バクテリアCP-5株、CP-8株の性状解析および全ゲノム配列決定、(2)海洋性BIOS産出鉄酸化バクテリアの存在が示唆される海底硫化物試料のメタゲノム解析、(3)サイズの小さなBIOSの特性分析に必要不可欠なバイオリアクターを用いた微好気性鉄酸化バクテリアの大量培養法の確立、を行った。(1)については、CP-5株とCP-8株はpH8を超える条件下でも生育できること、同株が産出するBIOSは比較的大きめであり(サブミクロンー数ミクロン)、他の淡水性や海水性鉄酸化バクテリアが産出するBIOSとは形態が異なること、BIOSには鉄の他にもリンを多く含むこと等が明らかになり、これまでの鉄酸化バクテリアに関する常識を覆すような予想以上の成果があがっている。全ゲノム解析によって、CP-5株とCP-8株は他の淡水性や海水性鉄酸化バクテリアと同様のBIOS産出機構を有していると推定された。(2)についても順調に進み、未培養性の海洋性BIOS産出鉄酸化バクテリアのほぼ完全長のゲノム配列の再構築に成功しており、論文執筆中である。(3)については、大量培養のためのバイオリアクターを購入できたが設置・試験までには至っていない。上記の研究実績の概要にある通り、すでにいくつかの成果が上がっており、成果の一部ついては、共著論文がGeobiology誌に受理され、残りの成果についても現在国際誌に投稿中、もしくは論文準備中である。BIOSの特性分析については、大量培養によるBIOSの大量生産が必要であるが、そのためのバイオリアクターの設置に至っておらず、やや遅れていると言わざるを得ない。研究計画全体としては「おおむね順調に進展している」と判断した。研究2年目である平成29年度は、(1)汽水環境から研究代表者が分離したBIOSを産出する新奇汽水性鉄酸化バクテリアCP-5株、CP-8株の解析結果をまとめた論文作成、(2)海洋性BIOS産出鉄酸化バクテリアの存在が示唆される海底硫化物試料のメタゲノム解析結果をまとめて論文作成、(3)サイズの小さなBIOSの特性分析に必要不可欠なバイオリアクターを用いた微好気性鉄酸化バクテリアの大量培養法の確立、(4)フローリアクターを用いた連続培養法による、陸域地下熱水中の鉄酸化バクテリアの集積培養およびそのメタゲノム解析を行った。(1)と(2)については、国際学術誌に投稿し、受理された。

(3)については、購入したバイオリアクターの設置・試運転まで行った。(4)に関しては、鉄酸化に関わると推定される遺伝子をもつ好熱性バクテリアの集積培養に成功した。化学分析およびメタゲノム解析により得られた結果をまとめて論文を作成し、国際学術誌上で発表した。以上のように、淡水、汽水、海水環境の鉄酸化バクテリアの生理生態を理解する上で重要な知見を得ることができた。上記の研究実績の概要に記した通り、成果をまとめた論文が3報も誌上発表できている。BIOSの特性分析については、大量培養によるBIOSの大量生産に必要なバイオリアクターの設置および試運転を完了した。研究計画通り進んでおり、「おおむね順調に進展している」と判断した。最終年度は、新規の鉄酸化菌の分離培養株の獲得を試みた。茨城県つくば市に、大規模な鉄酸化沈殿物が生じている場所を発見し、同地点を淡水域のモデル地の1つとして研究を進めた。グラジェント培養法を用いた限界希釈法によって、表層試料から淡水性鉄酸化菌を4株分離することに成功した。その内、2株はSideroxydans lithotrophicusに近縁であったが、16S rRNA遺伝子配列の相同性は98%以下であり、新種の可能性がある。顕微鏡観察の結果、螺旋状のストークは産出せず、粒子状のドレッドのみを産出することが示唆された。もう2株はThiomonas delicataに近縁であったが、16S rRNA遺伝子配列の相同性は97%以下であり、こちらも新種の可能性がある。興味深いことに、ストークやドレッドのような典型的な酸化鉄沈殿をつくらなかった。以上の成果については、論文執筆中である。鉄を含む淡水の温泉試料を元にした連続培養系のメタゲノム解析を行い、新規の鉄酸化バクテリアの存在を示唆した。この成果はMicrobes Environ.誌にて発表した。海洋性の硫化鉄鉱物のメタゲノム解析もを行い、新規の鉄還元バクテリアのゲノムの再構築に成功した(Environ. Microbiol.誌に発表)だけでなく、Zetaproteobacteriaに属する新規性の高い鉄酸化バクテリアのゲノムの再構築にも成功した。海洋性の鉄マンガン酸化物の微生物群集構造を解析し、得られた成果をMicrobes Environ.誌にて発表した。申請者が分離したFerriphaselus amnicola OYT1株のゲノムについて、全ゲノム配列決定を完了し、その成果はMicrobiol. Resour. Announc.誌に投稿し受理された。引き続き、モデル地とした淡水、汽水、海水環境から、BIOS産出能をもつ鉄酸化バクテリアの分離培養を試み、その産出機構や特性分析を進める。特に、バイオリアクターを用いた鉄酸化バクテリアの大量培養法およびBIOSの大量産出法の確立を重点的に行い、得られたBIOSの詳細分析により、その特性を明らかにしていく予定である。研究代表者の異動により、バイオリアクターや化学分析装置の物品資産の移管が必要となるため、速やかに行う。研究環境が整い次第、モデル地とした淡水、汽水、海水環境から、BIOS産出能をもつ鉄酸化バクテリアの分離培養を試み、その産出機構や特性分析を進める。各環境から、NanoBIOSを収集し、その性質を分析する。
リアノジン受容体における機能領域の検索

1.ウサギ骨格筋より得られたリアノジン受容体(RyR1)をコードするcDNA(全長約1万5千ベース)に、ただ一箇所でしか切断しない制限酵素部位(5'端-XbaI、677SalI、2349Bsu36I、3798BstBI、5355MluI、6822SpeI、8476BsiWI、9804AvrII、11290NdeI、12675NheI、14427ClaI、HindIII-3'端)をかつアミノ酸変異を生じないように導入して、各々の制限酵素により11個のcDNA「カセット」として切り出して利用できる「カセット構造化」を行なった。2.このカセット構造化RyR1cDNAクローン内の一部のカセットを欠損した部分欠損クローン(16種類)や、逆に一部のカセットのみをコードする部分クローン(12種類)を作製し、緑色蛍光蛋白質(GFP)との融合蛋白質として培養CHO細胞に発現させることに成功した。3.これらのRyR1変異体(計28種類)の中でカセット1、5,6,7および11を含むものは、核を除く細胞質に点在する様相で発現して、細胞膜を可透過する処理を加えても細胞質内に残存し細胞全長RyR1と同様な細胞内での発現分布様式を持っていた。4.したがって、RyR1分子の細胞内カルシウム貯蔵部位である小胞体への移行・維持に係わる分子内の複数の部位に存在し、特にRyR1蛋白質のアミノ基末端と中央部分とカルボキシル基末端部分に存在する可能性が示された。これらの部分領域は、悪性高熱症疾患を持つ患者に診られるRyR1遺伝子変異が集中する領域に相当する領域であることから、カルシウム放出チャンネルとしてのカルシウム放出機能にも深く関係すると考えられ興味が持たれる。1.ウサギ骨格筋より得られたリアノジン受容体(RyR1)をコ-ドするcDNA(全長約1万5千ベース)に、ただ一箇所でしか切断しない制限酵素部位(XbaI、677Sa1I、2349Bsu36I、3798BstBI、5355MluI、6822SpeI、8476BsiWI、9804AvrII、11290NdeI、12675NheI、14427C1aI、HindIII)をかつアミノ酸変異を生じないように導入して、「カセット構造化」を行なった。2.一部のcDNAカセット(BstBI-MluI)を切り出して、このカセット内の制限酵素SfiI認識部位にPCRで増幅した緑色蛍光蛋白質(GFP)をコードするcDNAをフレームがずれない様に挿入して、GFPと融合するRyR1をコードするcDNAとした。3.「カセット構造化した」RyR1 cDNAから、隣り合う2種類の制限酵素により約500アミノ酸をコードするカセット1個分(全長の約10分の1)を切り出し、この削除部分にフレームがずれない様に、合成オリゴヌクレオチドを挿入もしくはDNAポリメラーゼにより平滑化して後にDNAリガーゼにより連結させて部分欠損RyR1クローンとした。RyR1のcDNAの全長に渡りこの削除操作を繰り返して、約1500ベースずつ連続的に欠如した10種類の部分欠損クローンを作製できた。4.各々の部分欠損RyR1クローンを哺乳類用発現ベクターに組み込み、培養CHO細胞に遺伝子導入して強制発現させると、蛍光顕微鏡下に、核を除く細胞質に点在するGFP蛍光が観察された。この細胞のGFP蛍光は、冷メタノールにより細胞膜を可透過化しても細胞質内に残存した。

この現象は、欠損の無い全長RyR1 cDNAクローンの場合と同様であったので、すべての部分欠損クローンでも核を除く細胞質内オルガネラへの移行し維持されることが明らかとなった。1.昨年度までの改良により、比較的小さな「カセット(ほぼ等間隔で約1500塩基対)」から成る構造としたリアノジン受容体1型のcDNAを利用して、カルボキシル基末端側からアミノ酸を系統的に削除させた8種類のリアノジン受容体の部分欠損cDNAクローンを作製した。2.各リアノジン受容体のカルボキシル基末端側部分欠損cDNAクローンに緑色蛍光蛋白質(GFP)をコードするcDNAをフレームがずれない様に挿入し、GFP融合蛋白質として発現が可能なものとした。3.このGFP融合型リアノジン受容体1型のカルボキシル基末端側部分欠損cDNAクローンをテトラサイクリン応答性ベクター発現ベクター(pTREベクター)に組み込み、テトラサイクリン調節性トランス活性化因子を恒常的に発現しているCHO細胞(CHO Tet-Off)株に遺伝子導入した。48時間後に、蛍光顕微鏡下に細胞を観察したところ、全ての部分欠損クローンの発現がGFP蛍光が認められた。4.GFP蛍光の有無を確認した後、ホルマリンもしくは冷メタノール処理による細胞固定を行って各固定法間でGFP蛍光の細胞内分布を比較検討したところ、両固定法共に、核を除く細胞質に点在するGFP蛍光が観察された。この核を除く細胞質に点在するGFP蛍光が観察される結果は、(1)欠損の無い全長リアノジン受容体1型クローンの場合と同様であったこと、さらに(2)これらのGFP蛍光が冷メタノールにより細胞膜を可透過化した状態においても細胞質内に残存したことから、すべての部分欠損クローンが核を除く細胞質内オルガネラへの移行し維持されることが明らかとなった。これらの実験結果は、リアノジン受容体1型における細胞内カルシウム貯蔵部位である小胞体への移行と維持に関わるアミノ酸配列領域が、カルボキシル基末端側だけではなくアミノ基末端側にも存在することを示唆する。1.以前の改良により「カセット構造化」したリアノジン受容体1型cDNA(全長約15000塩基対)の5'末端側から系統的に各カセット毎(ほぼ等間隔に約1500塩基対のcDNA毎)に制限酵素により抜き出し、PCR法によって5'末端側にKozak配列を導入して各カセット毎の部分cDNAクローンを作製した。これらのカセット部分cDNAクローンを緑色蛍光蛋白質(GFP)をコードするcDNAとイン・フレームに挿入し、アミノ基末端側から約500アミノ酸配列ずつリアノジン受容体の部分領域をGFP融合蛋白質として発現させるための発現ベクター(6種類のクローン名:コードするアミノ酸配列番号、Cs1:1-184、Cs2:183-741、Cs3:740-1224、Cs4:1222-1743、Cs5:1742-2231、Cs6:2230-2777)を構築した。2.これらGFP融合型リアノジン受容体1型部分領域の発現ベクターをCHO細胞に遺伝子導入して、約48時間の培養後に蛍光顕微鏡下で細胞を観察したところ、全6種類(Cs16)のクローンでGFP蛍光が認められた。3.このGFP蛍光の有無を確認した後に、ホルマリンもしくは冷メタノール処理により細胞固定を行って各固定法間でGFP蛍光の細胞内分布を比較検討したところ、Cs1クローンでは両固定法で共に細胞質にGFP蛍光が観察されたが、Cs2Cs6ではホルマリン処理ではGFP蛍光が残存したが、冷メタノール処理ではGFP蛍光が著しく減弱もしくは消失した。
On-siteプロテオミクスによるIgA腎症・膜性腎症の抗原同定と発症機序解明

IgA腎症と膜性腎症は免疫複合体の形成などに深く関わっていると考えられているが、その抗原についてはまだ不明な点が多い状況である。本研究はIgA腎症・膜性腎症の症例の10μm厚さの切片を特別な前処理を行った後、レーザーマイクロダイセックション(LMD)を用いて、切片から糸球体を切り出した。当研究室で開発したOn-siteプロテオミクス法で解析し、バイオインフォマテクス解析や疾患パスウェ解析に介して、正常糸球体検体と発現差異のあるタンパク質群はIgA・膜性腎症の発生機序への関わりを探求することを試みした。本研究はこれらの腎症に関連する抗原を同定し、上記の腎症の発症機序を明らかにすることを目的とした。我々は各協力機関からIgA腎症・膜性腎症の症例サンプル(凍結標本およびホルマリン固定標本)を集めることができました。10μ厚さの切片をしたうえ、前処理を行った後、レーザーマイクロダイセックション(LMD)を用いて、切片から糸球体を切り出し、アイソレーションキャップで回収し、更に当研究室で開発したOn-siteプロテオミクス法を利用して、収集した糸球体標本からトリプシンによる消化したペプチドを直接Agilent 6300 Series Ion Trap LC-MSで質量分析を行った。正常群糸球体MS情報と病態糸球体MS情報をNonlinear社LC-Progenisisで解析し、これらのMS情報の差異を見つけ出す操作を行っていた。この差異のあるペプチドMS情報に基ついてターゲットMS解析(決めたペプチドについてMS/MS測定を行うこと)で、一部タンパク質が同定された。これらのタンパク質はIgA・膜性腎症群の病因抗原物質の可能性が高いと考えられていた。この段階の研究結果は基本的に正常群と疾患群糸球体MSおよびMS/MS測定結果である。これからIgA・膜性腎症に関わる病因抗原物質の研究を展開する基礎データになる。LMDで取れた糸球体標本からこれまでのプロテオーム解析方法と比べ、より多くのタンパク質情報を得られることができた。この情報がIgA・膜性腎症に関連する抗原の同定に欠かせないデータベースになっている。我々は既にIgA腎症・膜性腎症の症例1平方ミリの糸球体サンプル(特にホルマリン固定標本)を当研究室で開発したOn-siteプロテオミクス法で解析を行った。正常群糸球体MS情報と病態糸球体MS情報を解析し、差異のあるペプチドMS情報を基にターゲットMS解析を行い、同定された一部タンパク質はIgA・膜性腎症群の病因抗原物質である可能性が高いと考えられていた。糸球体組織におけるこれらのタンパク質の抗体反応状況を確認した。更にMS情報網羅性を高めるために、最新鋭のOrbitrap-MS器機で正常とIgA腎症糸球体からそれぞれ抽出されたペプチドを測定した。これまでの単一標本MSデータより2-3倍の情報量を得た、今まで各群のMS情報を補正し、新たに候補リストを捧げました。より豊富な情報を得たことにより、これからバイオインフォマテクス解析や疾患パスウェ解析に介して、発現差異のあるタンパク質群はIgA・膜性腎症の発生機序への関わりを明らかにすることが期待できる。これまで正常群と疾患群ヒト腎組織FFPE(フォルマリン固定パラフィン封埋)標本切片からレーザー光線を利用して切り取れた糸球体標本(1平方ミリ)をOn-siteプロテオミクス法で処理した後、精製したペプチドをそれぞれ質量分析計による解析を行った。これらの情報を独自で開発したバイオインフォマッテクス解析ツールにて、疾患群糸球体における差異のあるタンパク質情報を見たした。特にIgA・膜性腎症糸球体に有意的に発現したタンパク質について詳細に調べることにした。Human Protein Atlas (http://www.proteinatlas.org)の情報を参照しながら、一部のタンパク質に体する抗体を用いて、免疫組織学的な検証を行った。本研究には使われていた質量分析計はタンパク質を定性する目的に適応していたが、定量性は不足していたため、一部の検証結果は予想通りと外れていた。これから我々が開発していたOn-siteプロテオミクス法と定性と定量性両立のある質量分析システムとの組み合わせが出来れば、より一層有力な検証結果がでると期待しています。これまでの研究成果は日本国内および国際会議で発表していた。特にIgA・膜性腎症に関わる発症原因物質の発表内容には沢山の研究者が興味を示していた。

これまで「研究目的」の最初段階、正常とIgA腎症及び膜性腎症群における発現差異のあるタンパク質リストがMSデータを解析による見出した。一部ですが、そのタンパク質の発現は抗体反応で確認はできました。Human proteinATLASへの情報確認もできました。上記の進行状況が本研究はおおむね順調に進展していると判断した根拠である。24年度が最終年度であるため、記入しない。これまで得たMSデータを更にNatureBiotechnologyに発表した同定されたタンパク質の量的な新しい解析方法(SIN)で比較解析を行い、正常群と疾患群にそれぞれのタンパク質発現が量的な差異状況を再確認すると同時にこれまでの疾患原因候補分子のパスウェ解析を行い、IgA腎症の抗原であるかどうかを確認実験や膜性腎症の病因分子であるかどうかを確かめることは今後の推進方策と考えています。
ツツガムシ種とツツガムシ病リケッチアの血清型の関係に関する研究

2、モノクローナル抗体により、L.pallidum、L.fletcheri、L.arenicolaの3種それぞれに1血清型のRが共生していることが判明した。これは1家系、1個体に複数の型が共生するという従来の知見と相反する。3、京都府でツツガムシ各種の未吸着幼虫一個体ごとのリケッチア保有を蛍光抗体法で調べたところ、フトゲツツガムシで17.7%という極めて高い保有率を記録するとともに、アラトツツガムシに0.16%と低率ながらリケッチアの保有を確認した。4、新潟県のアラトツツガムシの未吸着幼虫よりリOt1株の分離に成功した。アラトからの分離は過去に報告が1例あるのみで、未吸着幼虫からの分離は初めてである。この分離株はかつて新潟で患者より分離された株と型特異抗原蛋白遺伝子が同一で、アラトが恙虫病の媒介者となっている可能性が示唆された。5、北海道野幌地区で野鼠よりカワムラ、アラト、ホッコクツツガムシのいずれかに共生していたと思われるリケッチア3株を分離し、この株の型特異抗原蛋白遺伝子はフトゲツツガムシから分離した株とほぼ同一であることを示した。これにより血清型(型特異抗原蛋白が決定している)を同じくするOtが2種以上のツツガムシに共生していることが明らかとなり、ツツガムシとリケッチアの血清型との関係は、単純なものではないことが示唆された。6、新たに20株の型特異抗原蛋白遺伝子の塩基配列を決定したところ、この遺伝子の変異は極めて多岐にわたること、その分布には地理的な要因があることが示唆された。これはツツガムシ種の地理的分布を反映したものと考えられた。本年度はツツガムシ、もしくは寄生ツツガムシが限定された野鼠よりリケッチアを分離することに主眼をおいて調査を行った。1、新潟県内で採集したアラトツツガムシの未吸着幼虫146匹よりリケッチアの分離を試み、Karp型のリケッチア1株の分離に成功した。日本での恙虫病の主要な媒介種とされているフトゲ、タテ、アカツツガムシの3種以外からの分離例は少なく、アラトからの分離は過去に報告が1例あるのみで、未吸着幼虫からの分離は初めてである。2、上記の主要媒介3種の棲息が確認されていない北海道野幌地区で野鼠59匹を捕獲し、その脾臓よりGilliam型のリケッチア3株を分離した。同地区にはカワムラ、アラト、ホッコクツツガムシの生息域であり、分離リケッチアはこれらのいずれかに由来するものと推測される。3、京都府岩滝で捕獲した野鼠より得た吸着中のフトゲツツガムシを再びマウスに吸着させたところ、マウスが発症し、これよりGilliam型のリケッチアを分離した。、また、同地区で捕獲した野鼠より得たフトゲの満腹幼虫を個別飼育し、産卵後その卵のリケッチア保有を蛍光抗体法で調べたところ、3個体の雌の産んだ卵にリケッチアを認めた。現在リケッチア保有のフトゲの系統を確立すべく飼育を続けている。4、富士山麓でタテツツガムシの未吸着幼虫を約8000匹採集し、それらを免疫抑制剤を投与したマウスに接種し、リケッチアの分離を試みたが不成功に終わった。上記の5分離株についてモノクローナル抗体に対する反応性、型特異的抗原蛋白遺伝子のRFLP解析を行っており、これによりツツガムシ種とそれに共生するリケッチアの血清型との関係に新たな知見が得られるものと期待する。

本年度は、京都府の患者発生地で疫学調査を行うとともに、共生ツツガムシ種が推定できたOt株の血清型特異抗原蛋白遺伝子の比較を行った。1、京都府岩滝町でツツガムシの未吸着幼虫を採集し、蛍光抗体法でOt保有率を算定したところ、フトゲツツガムシ(以下単にフトゲ)にのみ23.8%という高率の保有率を記録し、この地区でのベクターがフトゲであることを明らかにした。2、岩滝町の野鼠から分離したOt株の血清型特異抗原蛋白遺伝子の部分塩基配列は、我が国でフトゲ、及び患者から、韓国で患者から分離されたGilliam型の株と同一であり、中国で分離された株ともほぼ同一であり、近縁の株が東アジアに広く分布していることが示唆された。また、これによりGilliam型のOtがフトゲに共生することが示唆された。しかし、韓国、中国でのベクターは不明である。3、岩滝町で採集したフトゲよりOt保有の系統を確立することに成功した。この系統は我々が十年来飼育しているもう一つのKarp型Ot保有系に比べ、Otの垂直伝播率が低く、その理由を検索中である。4、フトゲが棲息しない北海道野幌地区の野鼠から分離したOt株の型特異抗原蛋白遺伝子は、上記の京都の株と1塩基の相違のみであった。よって、フトゲに共生する株と極めて近縁の株が他種のツツガムシにも共生していることが示された。フトゲにはGilliam、Karp型が共生するとされており、今回の知見もそれを支持しているが、Gilliam型はフトゲのみでなく他種のツツガムシにも共生していることが示唆された。現在、アラトツツガムシより分離したOt株などについて同様な解析を行っており、ツツガムシ種とそれに共生するOtの血清型との関係に新たな知見が得られるものと期待する。
多変数可換微分作用素系の構成と分類

可換微分作用素系に関連する研究を行い,その結果として次の成果が得られた.(1)階数2で逆2乗の有理関数ポテンシャルを持つ可換微分作用素対の特異直線の配置は,BC型サザーランド模型のポテンシャル関数の停留点によって決まること.(3)標準ウィッターカー(g,K)-加群を定義.無限小指標がgenericな場合と,群がU(n,1)で無限小指標が整の場合について,その構造を決定した.(4)q-超幾何関数のみたす三項間隣接関係式の導出とその応用.本研究では,可換微分作用素系の分類に向け,必ずしも対称性を持つとは限らない多変数可換微分作用素系を系統的に構成することを第一の目標とする.その上で更に(1)例外型Weyl群の対称性を持つ可換微分作用素系の生成元の明示的構成とポテンシャル関数の分類(2)これら可換系のq-類似(3)新たな可換系の固有関数の構成についても考察を行う.可換微分作用素系に関連する研究を行い,その結果として次の成果が得られた.(1)階数2で逆2乗の有理関数ポテンシャルを持つ可換微分作用素対の特異直線の配置は,BC型サザーランド模型のポテンシャル関数の停留点によって決まること.(3)標準ウィッターカー(g,K)-加群を定義.無限小指標がgenericな場合と,群がU(n,1)で無限小指標が整の場合について,その構造を決定した.(4)q-超幾何関数のみたす三項間隣接関係式の導出とその応用.研究代表者谷口は、階数2の有理関数ポテンシャルを持つ可換微分作用素対の特異直線の数が5以上の場合に、特異直線の配置と可換対の構成について考察を行った。その結果,結合定数がある特定の場合の特異直線配置を決定するには、BC型サザーランド模型のポテンシャル関数の停留点を求めることが必要であることがわかり、さらにペレロモフの結果を用いれば、その停留点は,ヤコビ多項式の零点として表示されることがわかった.しかし、階数2の有理関数ポテンシャルの場合については、ベレスト-ルーツェンコとチャリヒ-フェイギン-ヴェゼロフによる研究があり、今回考察した場合の特異直線配置については、彼らによってすでに知られていることがわかった。谷口は、複素簡約型リー群のカジュダン-ルスティック多項式の算出に関する研究も行った。複素簡約型リー群Gcの実型Gをとり、Gの表現のカジュダン-ルスティック多項式から、コホモロジー誘導によってGcのそれを構成することを試みた。複素群の場合、実リー群のコホモロジー放物型誘導の場合に威力を発揮した、コホモロジー消滅定理が一般には成り立たないこともあって、組成列の決定は容易ではなく、もう一工夫が必要となっている。研究分担者伊藤は、青本和彦教授の協力を得て,BCn型ジャクソン積分に付随するホロノミックq-差分方程式系に付随するロンスキー型行列式そのものがq-ガンマ関数の積の形に具体的に表示できることを示した。また伊藤は、BC1型ジャクソン積分が満たすq-差分方程式系の一般解を基本解の線形結合で表示する公式(接続公式)を、BCn型の場合に拡張して、より一般的な接続公式を証明した。この公式の応用として、伊藤と青本が証明した上記ロンスキー型行列式がq-ガンマ関数の積の形に表示できることの別証明を与えた。研究代表者谷口は,本研究の1年目に引き続き,まず2変数非対称可換微分作用素対の解析を行った.1年目はポテンシャル関数が特異性を持つ場合に興味を集中したが,2年目は特異性を持つ場合の他に,必ずしも特異性を持たない場合も考察の対象とした.しかし思うような結果は得られなかったため,本研究と関わるような,周辺の分野について研究を行った。偏微分作用素P, Qが可換ではなくても,可換に近い,例えば[P, Q]=A P (Aは微分作用素)と表されるなら,完全可積分系に近い性質を持つことが期待される.このような微分作用素系は,リー群の表現の行列成分を特徴付ける微分方程式系によく現れるので,表現論を用いて典型例を構成することには意味があるであろう.このような理由から,本年度,不定値スピノル群Spin(2n,2)の離散系列Whittaker関数に関する研究を行った。その結果,この場合のWhittaker関数はHorn系と呼ばれる超幾何偏微分方程式系によって特徴付けられることを示し,更にその解のBarnes型積分表示を得た.連携研究者伊藤はBC_n型Jackson積分に関するq^-差分方程式の研究を行い,BC_1型Jackson積分のq^-差分方程式を一階連立差分方程式系で表し,その係数行列をガウス分解の形で表示した.また真田ゆかり氏と共同で,この差分方程式の解の接続公式を,さらに一般のBC_n型の場合にも接続公式を具体的に与えた.一方,van Diejen氏と共同でG_2型Macdonald多項式を固有関数にもつ可換q^-差分作用素を具体的に構成した.研究代表者谷口は,昨年度に引き続き,可換微分作用素系に関連した話題として,リー群の表現の行列成分を特徴付けるような微分作用素系について研究を行った.

特に,半単純リー群のWhittaker関数の空間の中で,普遍包絡環の中心元の固有値,および岩沢幕単根基の指標の中心化群の表現を指定した,「標準的Whittaker模型」と呼ぶべきものを考え,その構造の解析に着手した.今年度はまず,比較的扱いやすい場合として,群がSL(2,R)とSU(2,1)の場合について詳しく調べ,「標準的Whittaker模型」の組成列を決定した.その結果,この模型と主系列表現の組成列の構造について,類似する点と大きく異なる点が明らかになり,一般の群の場合の解析へ向けて,足がかりを作ることができた.連携研究者伊藤は,メルボルン大学P.J.フォレスターとともに,セルバーグ型超幾何関数が満たす二項間隣接関係式を導出することで,その超幾何関数が満たす連立一階差分方程式系の具体形を明らかにした.その応用として,物理におけるセルバーグ型一点相関関数の新たな計算法を示した.連携研究者小池は,B型,C型ワイル群と1の幕根で生成される群(この群についてはヤング図形を用いた表現の決定等はすでに行っている)の変形である,多変数パラメータを持った「ヘッケ環」と呼ぶべきものの定義と,この間の表現論の構成を研究した.研究代表者谷口は,可換微分作用素系に関連した研究として,標準Whittaker(g,K)-加群の組成列について研究を行った.これは岩沢幕単部分群のユニタリ指標から誘導された表現空間を,自然な条件の下で細分化したもので,その組成列や組成因子の研究は表現論の問題として興味深い.本年度の研究により,大きく分けて二つの結果が得られた.第一の結果は,無限小指標がgenericなときの組成列についてである.一般の実簡約型リー群に対し,無限小指標がgenericなら標準Whittaker(g,K)-加群は完全可約であることを示した.これによってgenericなときには,加群の構造が完全に決定できた.第二の結果は,無限小指標が整のとき,つまり主系列表現が可約な場合の標準Whittaker(g,K)-加群の構造に関する結果である.今回は不定値ユニタリ群U(n,1)の場合について研究を行い,その加群の組成列を完全に決定した.この結果によれば,標準Whittaker(g,K)-加群の組成列と主系列表現の組成列との間には類似点と相違点が共にあり,今後他の一般の群の場合へ研究を広げる際の礎ができたと考えている.連携研究者伊藤はBC_n型q-超幾何関数が満たす三項間隣接関係式を導出することで,その超幾何関数が満たす連立一階q-差分方程式系の具体形を明らかにした.その応用として,Gustafsonによるq-超幾何積分の無限積表示に対して別証明を与えた.
特定健康診査の受診促進と特定保健指導の効果を高めるプログラムの社会実装の試行

本研究の目的は、申請者が開発した1特定健康診査受診促進プログラムと健診データの改善をもたらす2個別的継続運動・栄養プログラムの二種類のプログラムの社会実装の試行である。具体的方法は、特定健康診査・保健指導の担当者(保健師・栄養士・運動指導士)にプログラム実施方法の研修会を開催する。担当者がプログラムを実施し、研究者は継続的スーパーバイズを提供する。プログラムの評価は、担当者からの実施のしやすさ、プログラム利用者側からの効果というプログラム授受双方から行う。本研究により、より多くの特定健康診査等担当者が簡便に本プログラムを活用可能となり、効果的な生活習慣病予防活動の展開に貢献できると考える。
外国語学習における成功と失敗に対する台湾人大学生の原因帰属意識

本研究では,第二言語習得における原因帰属意識と文化の関係を明らかにすることを目標とし,特に台湾における英語学習者を対象にアンケート調査を行った.主にこれら三つの点,(1)台湾人学習者は何に原因帰属意識をもつのか,(2)台湾の外国語教育環境において,従来の帰属理論は有効か,(3)原因帰属意識に関する回答において,国内(公立・私立大学)での違いはあるかについて明らかにし,その結果を多国(日本・マレーシア・タイ)での調査と比較した.今年度は,これまでの日本,タイ,マレーシアでの研究を,より洗練された手法を用いて,再分析した.その結果,現行のアンケートを改善し,これまでより,外国語としての英語学習の成功・失敗に対する学生の原因帰属意識をより反映させることができるようにした.このアンケートにより,台湾の学生の実態をより正確に描き出せると思われる.それに加えて,Canadian Journal,Asian Social Sciencesに,これまでの研究結果に関する論文を発表した.これはマレーシアの都市部と地方部の原因帰属意識の差について論じたものである.具体的には都市部出身者は英語習得の成功について自己に前向きな姿勢が見られるものの,地方出身者は英語習得の失敗を自分に直接結びつける傾向があった.このデータは,台湾以外の地方出身者が対象の多数を占める本研究にとって非常に有益である.そのほか,本研究に関連する研究も実施・発表した.一つは所属教育機関の文化学部で導入したMoodleを使用した多読・多聴プログラムに対する学生の姿勢と取り組みについて,もう一つは学生と教員のデジタル機器の使用とそれらに対する姿勢についてである.これらの研究の成果はGloCALL2012(北京),EdMedia 2012(デンバー),ICALL,MCUIC(台湾)で口頭発表した.コンピュータやデジタル機器の教室内外での使用はますます増加しており,これらの二つの研究は,本研究の分析に非常に役立つ結果をもたらした.本研究では,第二言語習得における原因帰属意識と文化の関係を明らかにすることを目標とし,特に台湾における英語学習者を対象にアンケート調査を行った.主にこれら三つの点,(1)台湾人学習者は何に原因帰属意識をもつのか,(2)台湾の外国語教育環境において,従来の帰属理論は有効か,(3)原因帰属意識に関する回答において,国内(公立・私立大学)での違いはあるかについて明らかにし,その結果を多国(日本・マレーシア・タイ)での調査と比較した.これまで日本、タイおよびマレーシアの大学生を対象に、1)学習者の原因帰属は、学習の結果(成功・失敗)、原因帰属カテゴリーによって異なるのか。2)学習者の達成行動と原因帰属には相関関係があるのか。3)上の2点について、文化的な差異はあるのか。4)原因帰属理論が提唱する原因帰属要因また次元は、対象となる国の英語学習者にもあてはめることができるのかについて調査を行ってきた。その結果、調査対象となった全ての国の大学生は成功の原因を外的な要因に求めるのに対して、失敗の原因は内的な要因に求めることがわかった。しかしながら、日本の大学生は、マレーシアおよびタイの大学生よりも、努力が足りないことによって失敗したと考える傾向が強いこと、タイの大学生は、成功したのは教員やクラスのおかげであると考える傾向が強いことなど文化的な差異も見受けられた。これら調査の結果は、タイで開催されたSEAAIR国際学会において発表した。さらに、マレーシアを中心として行った調査では、英語学習体験における成功と失敗の原因を求める際、マレーシアの都市部出身の大学生と地方出身の大学生の間で、その原因帰属プロセスに違いがあるかどうかを検証した。分析の結果、どちらのグループもその大多数が全国英語検定試験で好成績をおさめているにもかかわらず、都市部出身者は、英語学習において成功をもたらした要因は自分の能力にあるとするのに対して、地方出身者は、反対に失敗の原因を自分の能力不足によると考える傾向があることがわかった。また、都市部出身者の方が、より適切な学習方法を習得し、自律した学習者であることも示唆された。この調査結果はJIRSEA journalや京都産業大学の紀要において発表した。これらの調査結果をふまえ、現在は既に収集したデータの整理や更なる分析、また台湾での質問調査の準備を行っているところである。研究計画は多少遅れているが、それは、日本と台湾の大学のスケジュールが異なることにより、第一回目の会議の開催がずれこんだためである。次年度は,日本の学生の対象に行ったアンケートを基に,台湾の研究協力者と共に,台湾の学生対象にアンケートを完成させ実施する.アンケートは二種類準備する.一つは成功の原因帰属意識について,もう一つは失敗の原因帰属意識についてである.アンケートは台湾内の6つの大学で実施し,集められたデータは因子分析を用いて,アンケートを構成する各要因について明らかにし,MANOVAを用いて分析し,グループ内・グループ間での有意な相違点について明らかにする.台湾の研究協力者との打ち合わせを引き続き行い、既に日本で実施した質問調査を基に、台湾の大学生に対する質問調査を作成する。その後、台湾において試験的に質問調査を実施する。昨年度第一回の会議が開催できなかったために、約7万円が繰り越しとなった。今年度は調査のための台湾への出張と国際学会での発表のための旅費に120,000円,分析に必要なコンピュータやアンケートの印刷,発送に250,000円使用する予定である.
血清Lp(a)濃度を規定しているアポ(a)遺伝子の個体差の解明

血清Lp(a)濃度には幅広い個体差がみられるが、健康な人ではその大部分はLp(a)の構成成分であるapolipoprotein(a)(apo(a))遺伝子の個体差によって決められている。apo(a)遺伝子の個体差のうち血清Lp(a)濃度の決定に最も大きな影響を与えているのは、遺伝子サイズの個体差である。遺伝子サイズ以外のLp(a)濃度を規定する個体差についてはほとんど不明であるが、apo(a)遺伝子の転写活性の違いがLp(a)濃度に影響を与えている可能性が強い。そこで、本研究では、apo(a)遺伝子5′非翻訳領域の塩基配列の個体差と血清Lp(a)濃度との関連を明らかにすることを目的とした。apo(a)遺伝子の5′非翻訳領域には、転写開始点の上流-1231にTTTTAリピートの繰り返し回数、-772にG→A、+93にC-T、+121にG→Aの4種類の多型が存在することがわかった。健常人257名を対象として、これら4種類の多型と血清Lp(a)濃度との関係を調べたところ、TTTTAリピートが8回のホモ接合体のLp(a)濃度(16.8±14.8mg/dl)は、9回のホモ接合体のLp(a)濃度(7.3±3.1mg/dl)に比べて有意に高く(p<0.05)、TTTTAリピートの繰り返し回数の個体差が血清Lp(a)濃度の決定に関係していることが示唆された。しかし、残りの3種類の多型の遺伝子型と血清Lp(a)濃度との間には、有意な関係はみられなかった。一方、虚血性心疾患患者294名を対象として同様の分析を行ったところ、TTTTAリピートが8回のホモ接合体のLp(a)濃度(28.1±25.4mg/dl)は、9回のホモ接合体のLp(a)濃度(10.9±9.4mg/dl)に比べて有意に高く(p<0.0001)、また+93 C→T多型のCCのホモ接合体のLp(a)濃度(27.7±22.4mg/dl)は、TTのホモ接合体のLp(a)濃度(15.6±13.1mg/dl)に比べて有意に高かった(p<0.01)。虚血性心疾患患者では健常に較べてLp(a)濃度が高値であるが、そのLP(a)濃度の差は、TTTTAリピートが8回のホモ接合体および+93 C→T多型のCCのホモ接合体において顕著であった。このことは、虚血性心疾患患者における血清Lp(a)濃度の上昇にapo(a)遺伝子の5′非翻訳領域の個体差が関係している可能性を示唆している。虚血性心疾患患者では健常に較べてLp(a)濃度が高値であるが、そのLP

(a)濃度の差は、TTTTAリピートが8回のホモ接合体および+93 C→T多型のCCのホモ接合体において顕著であった。このことは、虚血性心疾患患者における血清Lp(a)濃度の上昇にapo(a)遺伝子の5′非翻訳領域の個体差が関係している可能性を示唆している。
層状中層雲の内部構造とその変化過程の研究

層状中層雲(戸国高層雲)対象に、氷晶化過程を中心とする雲粒子の変化・発達機構の解明を目的として、地上設置のリモートセンシング機器による観測を実施した。北海道石狩市にXバンド垂直レーダーと2波長マイクロ波放射計を設置し、夏季と秋季にのべ2週間にわたり、多様な総観的気象状況の下に形成された高層雲および他の雲と共存する高層雲などについて、観測データを取得した。対象とした雲の外観とその変化の模様は、写真とデジタルビデオに記録した。観測データからは、特に高層雲から乱層雲へと変化し、さらに降雨に至る一連の過程におけるレーダーエコー、鉛直積算雲水量(LWP)の特徴が明らかにされた。また、雲が多層構造をとる場合の相互作用の存在を示唆する事例が得られた。研究の結果を要約すると、以下のようになる。(1)高層雲が厚さを増して乱層雲へ変化する場合、高層雲のLWPは0.014cm以上でレ-デ-エコーを伴う。さらに発達して、地上に降雨が達するような場合には、LWPは0.05cm以上となる。ただし、乱層雲が薄く、霧雨の場合のLWPは少なく、0.012cm程度のこともある。(2)高層雲の下に層積雲が重なり、レーダーエコーが発現して降雨が始まる場合、LWPは0.05cmを越えるが、レーダーエコーは下層のみに限られる。これは二種の雲における相互作用の存在を示唆している。(3)高層雲の上部が対流性のセル状になると、下層にレーダーエコーが発現する。(4)層積雲から薄い乱層雲に変化する場合、LWPが0.01cmを越え、下層にレーダーエコーが発現して霧雨となる。さらに、上部に高層雲または高積雲が重なると、LWPは0.02cm以上に大きくなる。今後はさらに観測データを増やすと共に、高層雲から乱層雲への内部構造の変化過程を定量化すること、多層構造を呈する雲システム相互作用を明らかにすることが必要となる。層状中層雲(特に高層雲)を対象に、内部の氷晶化過程を中心とする雲粒子の変化・発達機構の解明を目的として、地上設置のリモートセンシング機器による観測を実施した。本年度は、北海道石狩市にXバンド垂直レーダーと2波長マイクロ波放射計を設置し、夏季と秋季にのべ2週間にわたり、多様な総観的気象状況の下に形成された高層雲、高層雲と他の雲との共存時などについて、観測データを取得した。対象とした雲の外観とその変化の模様は、購入備品のビデオ収録システムを用いて記録した。本年度の観測データからは、特に高層雲から乱層雲へと変化し、さらに降雨に至る一連の過程におけるレーダーエコー、鉛直積算雲水量(LWP)の特徴が明らかにされた。得られた結果を要約すると、以下のようになる。1.高層雲が厚さを増して乱層雲へ変化する場合、高層雲のLWPは0.014cm以上でレーダーエコーを伴う。ただし、乱層雲が薄く、霧雨の場合のLWPは、0.012cm程度のこともある。2.高層雲の下に層積雲が重なり、レーダーエコーが発現して降雨が始まる場合、LWPは0.05cmを越えるが、レーダーエコーは下層のみに限られる。3.高層雲の上部が対流セル状になると、下層にレーダーエコーが発現する。