hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
中性子を用いた飛行時間法による高精度疲労損傷評価システムの開発

(1)格子ひずみから応力を求めるために必要な回折弾性定数を,種々の材料について測定し,回折強度の観点から,測定精度を明らかにした.(2)SiC粒子強化アルミニウム合金複合材料の平滑材を用いて,静的負荷下における応力測定を行った.複合材料では,各構成相の相応力を測定し,測定に適する回折強度,回折面を,信頼限界の観点から明らかにした.また,回折線幅の変化から疲労損傷の評価が可能なことを示した.(3)ステンレス鋼SUS316NGの疲労試験を行い,繰返しにともなう回折線幅の変化を検討した.初期に大きな引張残留応力が導入された場合,比較的負荷応力が大きい場合には,初期に残留応力の減少があり,その後はほぼ一定であった.これに対して低負荷応力では,変化量は小さかった.(4)溶接部の応力測定に際しては,マクロな残留応力決定時に第二種の格子ひずみが問題となる.そのため,マクロ応力を除去した微小な小片を基準とすることによって,平板突合せ溶接継ぎ手の残留応力分布の測定が可能であることを示した.(5)ECAP法によってナノオーダの結晶粒径に調整した銅では,塑性変形によって回折線幅が増加するものの,除荷時には初期の値まで減少することを示した.疲労による変化は小さいことがわかった.(6)測定領域を1mmまで限定するラジアルコリメータを試作して性能評価を行った,実測によって得られたプロファイルはシミュレーション結果とよく一致し,十分な精度で測定可能であることを示すことに成功した.(1)格子ひずみから応力を求めるために必要な回折弾性定数を,種々の材料について測定し,回折強度の観点から,測定精度を明らかにした.(2)SiC粒子強化アルミニウム合金複合材料の平滑材を用いて,静的負荷下における応力測定を行った.複合材料では,各構成相の相応力を測定し,測定に適する回折強度,回折面を,信頼限界の観点から明らかにした.また,回折線幅の変化から疲労損傷の評価が可能なことを示した.(3)ステンレス鋼SUS316NGの疲労試験を行い,繰返しにともなう回折線幅の変化を検討した.初期に大きな引張残留応力が導入された場合,比較的負荷応力が大きい場合には,初期に残留応力の減少があり,その後はほぼ一定であった.これに対して低負荷応力では,変化量は小さかった.(4)溶接部の応力測定に際しては,マクロな残留応力決定時に第二種の格子ひずみが問題となる.そのため,マクロ応力を除去した微小な小片を基準とすることによって,平板突合せ溶接継ぎ手の残留応力分布の測定が可能であることを示した.(5)ECAP法によってナノオーダの結晶粒径に調整した銅では,塑性変形によって回折線幅が増加するものの,除荷時には初期の値まで減少することを示した.疲労による変化は小さいことがわかった.(6)測定領域を1mmまで限定するラジアルコリメータを試作して性能評価を行った,実測によって得られたプロファイルはシミュレーション結果とよく一致し,十分な精度で測定可能であることを示すことに成功した.(1)一軸の引張が可能な負荷装置について,引張負荷条件下における応力もしくは荷重制御に対する制御精度を,各荷重レベルについて検討した.これにより,任意の負荷荷重に対するフィードバックゲインの関係を実験的に明らかにすることができ,応力に対して,およそ30MPa程度の精度で保持できることを確認した.(2)2つの90度バンク検出器および背面バンク検出器の同時データ採取が可能となった.また,得られた中性子回折プロファイルに対して,個々の回折面に対する回折ピークのフィッティングを可能とし,これにより,測定ひずみにおよぼす回折面依存性についての検討が可能となった.(3)格子ひずみから応力を求めるために必要な回折弾性定数を,フェライト系鉄鋼材料,アルミニウム合金,NiTi合金について測定した.荷重負荷には,上述の一軸引張負荷装置を用い,各回折プロファイルの移動量から.格子ひずみを求め,回折面依存性と,回折強度の観点から,測定精度について検討した.(4)平滑材を用いて静的な引張試験を行い,応力測定を行うとともに塑性ひずみ量と回折線幅の関係に着目し,負荷ひずみ量と半価幅,X線による回折線幅,また電子線後方散乱回折像との対応について検討し,回折パラメータの有効性について検討した.(5)SiC粒子強化アルミニウム合金複合材料(SiCp/2024-T3)の平滑材を用いて,静的負荷下における応力測定を行った.複合材料では,各構成相(アルミニウム合金相と炭化ケイ素相)の相応力を測定し,測定に適する回折強度,回折面を,信頼限界の観点から議論することに成功した.(1)ステンレス鋼SUS316NGの平滑材の疲労試験を行い,繰返しにともなう回折線幅の変化を検討した.初期に機械加工によって700MPa程度の大きな引張残留応力が導入された場合,比較的負荷応力が大きい場合には,繰返しの初期に大きな残留応力の減少があり,その後はほぼ一定であった.これに対して低負荷応力では,その減少量が小さいものの,やはり初期の減少量が大きく,その後の変化量は小さかった.(2)ステンレス鋼SUS304および炭素鋼SM570の突合せ

溶接継ぎ手の,溶接部近傍の残留応力および回折線幅をX線法にて測定した.ステンレス鋼では,回折強度のS-N比が低く,十分な信頼性を確保することは困難であったが,ほぼ残留応力分布が評価でき,次年度の中性子法による測定結果との比較の準備ができた.(3)SiC粒子分散アルミニウム合金複合材料平滑材の疲労損傷評価を行った.疲労過程での強化材のSiC粒子および母材のアルミニウム合金相の各格子ひずみと負荷応力との関係を明らかにした.弾性特性に顕著な変化は認められなかったが,回折線幅は,破断前に急増し,これより損傷評価が可能と考えられる.(4)SiC長繊維強化チタン合金複合材料平滑材の疲労損傷評価をX線法で行った.長繊維強化複合材料においては,低負荷応力では強化繊維が破断せずに母材中のみをき裂が伝ぱし,強化繊維に架橋応力が作用する.その架橋応力をX線法で測定し,遮蔽効果が説明できた.なお,中性子法では,十分な回折強度が得られず,現時点での測定は困難であることがわかった.(5)ECAP法によってナノオーダの結晶粒径に調整した銅に対して一軸引張荷重下でのその場測定を行った.ナノオーダの結晶の場合,負荷過程で増加した回折線幅は,除荷によって減少し,可逆的な変化が認められた.これは,通常材の挙動とは大きく異なり,塑性変形機構の検討に重要な情報が得られた.(1)炭化ケイ素粒子強化アルミニウム複合材料を用いて,引張変形および繰返し疲労過程における材料特性変化を中性子法を用いて検討した.引張変形挙動および疲労損傷を明確にとらえる最適な回折面を明らかにするとともに,高精度に測定する手法を提案し,実用に際しての問題点を明らかにすることから,汎用性を高めた.(2)高疲労強度達成のために産業界で広範に用いられているショットピーニング処理材の残留応力分布を高精度に測定する手法を提案した.空間分解能で0.3mmが達成可能であることが明らかになった.(3)疲労強度の向上に有効な浸炭材では表面から材料内部にかけて,炭素濃度が変化するため無ひずみ状態での格子面間隔が変化するが,無ひずみ状態の格子面間隔を評価する種々の方法を検討し,応力測定の可能性を示した.(4)ECAF法にて細粒化された純銅を用いて,応力測定および塑性変形特性を明確にとらえることが可能な回折面を明らかにした.塑性変形を伴う負荷過程においては,塑性ひずみの増加とともに,回折線幅が増加するが,この挙動を明確にとらえるためには,特定の回折面(銅においては,311回折面)に注目することが必要であることを示した.また,疲労過程中での損傷の拡大を,回折線幅の変化に注目して検討したが,応力振幅が十分大きくない場合には,検出困難であることがわかった.(5)部材中の特定の領域の応力および疲労損傷をとらえるために,入射側および検出器側に装着するスリットについて検討した.ここでは,測定領域を1mmまで限定するラジアルコリメータを試作して性能評価を行った.実測によって得られたプロファイルはシミュレーション結果とよく一致し,十分な精度で測定可能であることを示すことに成功した.
オンチップ集積化マイクロ波化学システムの提案

従来のマイクロ波加熱反応器は並列かつ逐次的な反応をフロー操作で達成するのは困難だった。反応のモニタリングも金属のキャビティ構造が邪魔となり困難である。この解決としてマイクロ波(24.15GHz)のポスト壁導波路中にマイクロチャンネル(流路)を挿入して加熱・反応させる“マイクロ波化学チップ"を提案し高速・高収率の有機合成に成功した。本研究では化学合成を連続かつ並列に実行するために複数の反応部を持つマイクロチャンネルを一つのチップに集積化したシステムを実現する。これによりフロー操作によるコンビナトリアル合成と反応のその場モニタリングが可能となる。
生体内分離冷却潅流法による肝臓特異的遺伝子導入-肝臓外科手技による遺伝子治療の可能性

本研究での第1の目的として、これまでほとんど報告のない大動物の生体内肝臓に対する遺伝子導入を可能にすること。第2の目的として代謝性疾患の遺伝子治療を念頭に置き、肝臓に導入された遺伝子により目的蛋白を産生させ、これを代謝性疾患治療モデルとすることであった。これらの目的を達成するためには大動物疾患モデルが存在するvon Willebrand disease(vWD)の肝臓に欠損するvon Willebrand factor(vWF)遺伝子を導入しvWDブタの凝固異常を是正することを具体的な目的とした。vWFは血管内皮より産生・分泌され、肝内においては類洞内皮細胞に遺伝子導入される必要がある。マーカー遺伝子を運ぶadenovirus vector(AdV)もHVJ-liposome vector(HVJ)も、培養条件下のラット及びブタの血管内皮細胞に対して効果的な遺伝子導入が可能であった。ブタにおける遺伝子導入ではラットやマウスの小動物の報告と異なり、いずれのベクターも生体内で全身静注、門脈内投与などの血流中への一回投与方法では導入遺伝子(RT-PCR法)や発現蛋白(X-gal staining)を検出することはできなかった。われわれが検討した生体内分離肝灌流法は、バイオポンプを用いて門脈血・下大静脈血を体循環に灌流し、肝臓を体循環から分離し無血下に冷保存状態ニするものである。この間に肝臓を高濃度のウイルスベクター(AdV;2x1011 pfu)と長時接触感染させ遺伝子導入効率を高めることができた。また肝内で肝細胞と肝類洞内皮の両者で蛋白発現を確認しえた。AdVに比べて遺伝子導入効率の低いRetro Virus Vectorにおいても生体内分離肝灌流法を用いることにより、ラット部分切除後の再生肝に対し高率の遺伝子導入効果を達成できた。また、同様の手技でブタの肝臓にヒトの補体抑制蛋白を導入し、これをヒト新鮮血で灌流する異種間肝移植の超急性拒絶モデルで、ヒト補体抑制蛋白の発現によるヒト補体抑制効果さらには肝内微小循環の改善効果を認めた。次に、ヒトvWFを運ぶHVJ-リポゾームベクター(アニオニック、カチオニック)を雑種ブタに投与した。同様に門脈内投与、肝動脈内投与、肝動脈内投与などの一回投与では、蛋白もmRNA(RT-PCR法)も検出できなかったが、生体内分離肝灌流法によりvWFのRNAが検出された。また、vWFをほぼ完全に欠損するvWDブタにおいても肝臓のみでなく肺や腎臓に対しても、一時的血流停止下に遺伝子導入を試みたが、遺伝子導入の証拠は得られなかった。肝移植は先天性代謝異常(α1-antitrypsin deficiency,Wilson's disease,hemochromatosis)や先天性凝固異常(von Willebrand's disease)に対しても施行されている。

本研究は欠損遺伝子をコードしたvectorを肝移植手技を応用した生体内分離肝灌流法を用い、患者自身の肝臓に高率に発現させ肝移植と同様に肝臓での欠損遺伝子の発現:補充を目的としている。現在までの研究業績として、1.ex vivo法(体外遺伝子導入法)を用いた心臓移植片へのadenovirus vectorによるマーカー遺伝子(LacZ)の導入方法の検討において、心筋細胞の1-1.5%に遺伝子導入を認め、発現は10日間持続した。ブタなどの大動物の肝臓に対する生体内での遺伝子導入を達成することは, (ブタから)ヒトへの異種移植やヒト肝臓への遺伝子治療を実現するためのステップとして極めて重要である。しかし,生体内でのブタ肝臓対する有効な遺伝子導入法は報告されていない。われわれは生体内分離冷却肝潅流法を用い,長時間,高濃度のadenovirus vectorをブタの肝臓と接触させ,さらにこれと全身免疫抑制を組み合わせることにより,adenoviral vectorによるブタ生体肝臓への高レベルの遺伝子導入に成功した。これらについては、国内外の学会発表と論文発表をおこなった。またvon Willbrand factorを運ぶ,HVJリポソーム法を用いたベクターを作製中であり,これについてもわれわれの遺伝子導入法を検討する予定である。さらに,in-vitroにおいてVon Willbrand factorの血管内皮への遺伝子導入をおこない,これを肝類洞内に定着させることによる遺伝子導入効果についても検討中である。ブタなどの大動物の肝臓を含む臓器に対する生体内での遺伝子導入の実現は(ブタから)ヒトへの異種移植やヒト臓器への遺伝子治療の安全性確立の確認のためにも重要な段階的研究である.われわれは生体内分離冷却肝灌流法を用いた外科的手技によって,ブタの肝臓とadenovirus vectorを長時間接触させ,さらにこれと全身免疫抑制剤との組み合わせにより,adenoviral vectorによるブタ生体肝臓への高レベルの遺伝子導入に成功した.(雑誌に発表)また本法を応用することにより,従来導入効率が低いとされるretrovirus vectorについても,肝切除後のラット肝臓に高レベルの遺伝子導入が可能であった(論文投稿中).retrovirusvectorの遺伝子導入効率を著しく高める可能性がある,pseudotyped retrovirus vectorを作製し,遺伝子導入を行い同様の実験を行ったところ肝臓への導入高率効果を確認した(論文発表).新たなベクターの可能性を探るために遺伝子治療用ベクターとしてHVJ-リポソーム法を用いたベクターを作製中であり,同ベクターにおける遺伝子導入法,および適切な導入対象臓器についても検討中である.これらの遺伝子導入方法を用いて,生体臓器(ラット,ブタ)の止血血栓系に重要な役割を担っているvon Willebrandfactorの遺伝子導入効果を検討する予定である。本研究での第1の目的として、これまでほとんど報告のない大動物の生体内肝臓に対する遺伝子導入を可能にすること。第2の目的として代謝性疾患の遺伝子治療を念頭に置き、肝臓に導入された遺伝子により目的蛋白を産生させ、これを代謝性疾患治療モデルとすることであった。
コケ植物におけるジャスモン酸の生合成及び生理機能の解明

ヒメツリガネゴケ(Physcomitrella patens)におけるオクタデカノイド経路中(ジャスモン酸生合成)の各種酵素の活性を調べた。その結果、いずれの酵素も高等植物と同様の酵素活性が示された。ヒメツリガネゴケの生育においては、ジャスモン酸(JA)がほとんど影響を与えなかったのに対して、その生合成中間体である12-オキソファイトジエン酸(OPDA)は生育を阻害した。オクタデカノイド経路に関わる酵素遺伝子の変異株を作製したが、それらの表現型は野生株と大きな差異は無かった。本研究の結果から、ヒメツリガネゴケではJAではなくOPDAが活性化合物として機能していることが示唆された。(1)ヒメツリガネゴケのジャスモン酸生合成酵素の一種であるアレンオキシドシンターゼ(AOS)遺伝子のクローニングおよびその酵素学的諸性質の解明ヒメツリガネゴケのゲノム情報より、ジャスモン酸生合成に関わるアレンオキシドシンターゼ遺伝子(PpAOS1及びPpAOS2)が2種存在することが推定された。そのうち、PpAOS1の組換えタンパク質の大腸菌における発現に成功した。In vitroの酵素反応で得られた反応生成物をGC-MSで確認した結果、PpAOS1はAOS活性を有することが明らかとなった。PpAOS1の至適pHは6.0であり、9-HPOTに比べ13-HPOTに対して高い基質特性を示した。また、PpAOS1とPpAOS2の遺伝子発現量を解析した結果、PpAOS1がPpAOS2に比べ発現量が多かった。また、PpAOS1の発現は高等植物と同様にジャスモン酸処理により一過的に誘導されることが明らかとなった。(2)ヒメツリガネゴケのジャスモン酸生合成酵素の一種であるアレンオキシドシクラーゼ(AOC)遺伝子のクローニングおよびその酵素学的諸性質の解明ヒメツリガネゴケのゲノム情報より、ジャスモン酸生合成に関わるアレンオキシドシクラーゼ遺伝子(PpAOC1、PpAOC2、およびPpAOC3)が3種存在することが推定された。これらすべての組換えタンパク質の大腸菌における発現に成功した。In vitroの酵素反応で得られた反応生成物をGC-MSで確認した結果、いずれもラセミ体のOPDAではなくジャスモン酸生合成中間体である天然型のOPDAを生産することが明らかとなり、AOC活性を有することが明らかとなった。また,これらの遺伝子発現量を解析した結果、PpAOC1とPpAOC3の発現量が多く、その発現は高等植物と同様にジャスモン酸処理により一過的に誘導されることが明らかとなった。しかしながら、PpAOC2の発現は、ほとんど確認されかった。(1)ヒメツリガネゴケのジャスモン酸(JA)の定量分析とその生合成誘導条件の検討これまでUPLC-MS/MSを用いたJAを含む植物ホルモンの定量には、分析機器の特性を生かし、5分間という短時間で分析を行っていたが、溶媒のアセトニトリルのグラジエントを緩やかにさせ分析時間を20分としたところ、ジャスモン酸と保持時間が近い不純物のピークをきれいに分離することが出来た。新たな分析条件で、種々の環境ストレスを与えたヒメツリガネゴケのJAを分析したが、その誘導条件を見つける事は出来なかった。(2)JA処理したヒメツリガネゴケのタンパク質のプロテオーム解析100μMのJAで処理し生育させたヒメツリガネゴケおよび無処理のヒメツリガネゴケからタンパク質を抽出し2次元電気泳動で分析し、それらのタンパク質の発現パターンを比較した。その結果、JAで処理することにより発現量が異なったタンパク質のスポットが数種確認された。(3)ジャスモン酸生合成酵素アレンオキシドシクラーゼ(PpAOC3)の機能解析PpAOC1及びPpAOC2は他の研究グループにより葉緑体局在性が確認された。我々は、これらとは異なるアレンオキシドシクラーゼであるPpAOC3を見出した。本タンパク質もAOC活性を有していた。PpAOC3のGFP融合タンパク質をヒメツリガネゴケのプロトプラストで一過的に発現させたところ、PpAOC3も他のPpAOCと同様に葉緑体局在性が明らかなった。また、PpAOC3は他のPpAOCとは異なり、ガメトフォアよりプロトネマにおいて優位に発現していた。従ってPpAOC3は他のPpAOCとは異なる機能を有することが推定された。1)ヒメツリガネゴケの12-phytodienoic acid (OPDA)還元酵素(PpOPR)のクローニングとその酵素学的諸性質の解明OPRにはジャスモン酸生合成に関与しているI型OPRとジャスモン酸生合成に関与するII型OPRの二つに大別できる。

ヒメツリガネゴケの7種のOPR遺伝子(PpOPR1PpOPR7)からアミノ酸配列を推定し比較した。それをもとに、I型OPRであるPpOPR1とII型OPRであるPpOPR3及びPpOPR6の三種のタンパク質をコードする遺伝子をクローニングし、組換えタンパク質を得た。PpOPR1はI型OPR活性を有していた。PpOPR6はII型OPR活性を示したが、PpOPR3はほとんど酵素活性を示さなかった。また、ヒメツリガネゴケのPpOPR3とPpOPR6の過剰発現株をそれぞれ作製したところ、いずれもOPDA濃度は減少しており、両遺伝子は生体内で機能していることが示された。PpOPR3過剰発現株は野生株に比べ生育が阻害されていた。PpOPR3のin vitroにおける活性は確認できなかったが生育に影響を与えていることが示唆された。2)ヒメツリガネゴケのアレンオキシドシンターゼ遺伝子(PpAOS)欠損株の作製および表現型の観察ヒメツリガネゴケにOPDAを処理したところ、その生育が阻害されたが、ジャスモン酸を処理しても大きな変化は認められなかった。そこで、PpAOS1及びPpAOS2二重欠損株を作製し、その生体内OPDA濃度を測定した結果、その濃度が著しく減少していた。しかし、本欠損株と野生株の表現型に大きな違いは無かった。OPDA処理によるPpAOS遺伝子発現の増加より、OPDAによる正のフィードバック制御機構の存在が示された。両PpAOSは高等植物のAOSと同様に葉緑体に局在することが明らかにされた。
ファブリー病末梢神経症状の発症にTRPチャネルは関与するか？

ファブリ病モデルマウスを用いたファブリ病末梢神経症状解析を行った。末梢神経症状の発症はTRP類の発現増加が関与するという既報があるが、予想に反し同モデルマウスは疼痛症状を示す事はなく高温感覚に鈍麻症状を示した。後根神経節のTrp類mRNAの発現レベルは正常マウスと同程度だった。後根神経節には多数の年輪状顆粒が観察できたが、小径神経細胞の脱落は観察できなかった。ファブリ病末梢神経症状の発生はTRP類の発現異常の関与が疑われるが、モデルマウスでは末梢神経症状を忠実に再現することが難しく、TRP類と末梢神経症状の関係性は明らかにできなかった。ファブリー病末梢神経障害の発症メカニズムの解明を目指し、ファブリー病モデルマウスやファブリー病培養神経系細胞などを用いて行動学的・分子生物学的に解析した。フォン・フレイ・フィラメント試験を用いてファブリー病モデルマウス右後足の圧痛を測定した。6週齢のファブリー病モデルマウスにおいて既に末梢神経障害が出現しており、正常マウスよりも感覚鈍麻症状を示していた。ファブリー病モデルマウスにヒトGLA遺伝子搭載アデノ随伴ウイルスベクターを尾静脈注射した後3週間飼育すると、後根神経節組織のGLA酵素活性は上昇したが脳のGLA酵素活性はほとんど上昇していなかった。さらに感覚鈍麻症状の改善傾向がみられたが正常レベルまでは戻らなかった。ファブリー病モデルマウスは6週齢より前に末梢神経障害が発症すると考えられた。そして遺伝子治療により後根神経節のGLA酵素活性が回復してもその症状が治らなかったことから、神経細胞のダメージは非可逆的に生じていると考えられる。末梢神経症状の回復は6週以前の治療開始が必要かもしれない。現在は後根神経節細胞の病理組織学的を行っている。培養シュワン細胞内のCa++挙動を観察する目的でシュワン細胞にCa++イメージング指示薬を共存させた。正常シュワン細胞もファブリー病シュワン細胞も同レベルの蛍光を発していた。今後培養ニューロンにおけるCa++イメージングを行う予定である。マウスから初代末梢神経細胞の単離技術は確立できている。しかし細胞内Ca++イメージング解析実験が停滞している。ファブリー病(Anderson-Fabry disease, FD)は遺伝子病の一つであり原因遺伝子はα-galactosidase A(GLA)遺伝子である。この遺伝子の異常によって全身の細胞にglobotriaosylceramide (Gb3)が過剰蓄積する。FDでは幼少期から手足の末端領域に感覚神経症状が発生するが、この症状は後根神経節(dorsal root ganglion, DRG)内部でのGb3過剰蓄積が関与すると考えられている。温度変化を知覚する受容体としてtransient receptor potential channel (TRP)チャネル群が知られている。FDではTRPチャネルの発現量が変化するという報告があるが、その詳しいメカニズムは解明されていない。今回FDの病態モデルマウス(ファブリーマウス)を用いて、マウス足底部の温度知覚、DRGのGb3蓄積などを解析した。ファブリーマウス(18週齢)をホットプレート(52°C)上に置きその忌避反応と反応時間(潜時・秒)を測定し正常マウスと比較したところ、ファブリーマウス群(15.40±1.74秒)は正常マウス群(10.45±0.20秒)よりも優位に潜時が上昇した。これまでにファブリーマウスは温度感覚に対して「敏感になる」という報告と、逆に「鈍感になる」という報告があり結論が分かれていた。我々の解析ではファブリーマウスは高温域で感覚鈍麻を示した。病理組織解析ではファブリーマウスDRGは神経細胞の細胞体にリソソーム顆粒を過剰に蓄積しており、Gb3の蓄積も確認できた。これらのことからDRGにおけるGb3の蓄積がファブリーマウスの温度感覚鈍麻症状に何らかの影響を及ぼしていると考えられた。しかし今回の解析ではDRGにおけるTRPチャネルの発現とリソソーム顆粒やGb3の蓄積との関係性は解明できなかった。病態モデルマウス(ファブリーマウス)を用いた感覚神経症状の解析試験に時間が掛かった。これまでに他の研究グループがファブリーマウス足底部の温度感覚解析をしていたが「敏感になる」という報告と、「鈍感になる」という報告があり結論が分かれていた。そこで我々はマウスの匹数や実験の反復回数を増やしてマウス行動試験を複数種類行った。病理組織解析でDRGにはGb3の過剰蓄積があることを示せたが定量分析までは至らなかった。また、本年度の解析ではDRGにおけるTRPチャネルとGb3蓄積の関係性を見出すまでには至らなかった。最終年度は主にファブリ病モデルマウスを用いたファブリ病末梢神経症状解析の総括を行った。ファブリ病患者は幼少期から激しい末梢神経症状(特にファブリクライシスと言われる手足末端領域の激しい灼熱痛)がみられることが多い。この症状の為に患者の学校・社会生活は著しく阻害される。この末梢神経症状の発生機序は未だ未解明である。海外研究グループからファブリ病モデルマウスもヒト患者と同様に疼痛を伴う末梢神経症状を呈するという報告と、病態モデルマウス踵皮膚下部の末梢神経末端領域に発現するTrpv1の発現増加が疼痛に関与するという報告があった。

しかし本研究における我々の解析においては、予想に反し、52°C一定温度のホットプレート試験でファブリ病モデルマウスは疼痛症状を示す事はなくむしろ高温の温度感覚に鈍麻症状を示した。交感神経細胞の細胞体が集積する後根神経節組織を用いてTrpv1を含むTrpチャネル類のmRNAの発現解析を行ったが、Trpv1の発現量は正常マウス群と有意な差は認められなかった。他研究グループではファブリ病モデルマウスは温度感覚に鈍麻症状を示すという報告も存在するので、我々の解析結果は後者グループと類似していた。病態モデルマウス後根神経節の病理組織学的解析や電子顕微鏡解析を行ったところ、細胞体内部に無数の年輪状の顆粒の蓄積が観察できた。この顆粒蓄積には極性があり軸索領域では蓄積は殆どみられなかった。ファブリ病患者では小径神経細胞の脱落が起きていると報告があるが、今回の病態モデルマウスを用いた解析では小径神経細胞の脱落の有無はわからなかった。ファブリ病患者の末梢神経症状発生機序ではTrpv1などの発現異常の関与が疑われるが、ファブリ病モデルマウスでは患者末梢神経症状を忠実に再現することが難しく、本研究ではTrpチャネル類と末梢神経症状の関係性は明らかにできなかった。ファブリ病モデルマウスを用いたファブリ病末梢神経症状解析を行った。末梢神経症状の発症はTRP類の発現増加が関与するという既報があるが、予想に反し同モデルマウスは疼痛症状を示す事はなく高温感覚に鈍麻症状を示した。後根神経節のTrp類mRNAの発現レベルは正常マウスと同程度だった。後根神経節には多数の年輪状顆粒が観察できたが、小径神経細胞の脱落は観察できなかった。ファブリ病末梢神経症状の発生はTRP類の発現異常の関与が疑われるが、モデルマウスでは末梢神経症状を忠実に再現することが難しく、TRP類と末梢神経症状の関係性は明らかにできなかった。マウスが6週齢になる前に末梢神経症状の治療を開始する。具体的には新生児マウスへの治療を検討する。後根神経節のGLA酵素活性を上げるためのウイルスベクター投与経路の検討を行う。具体的には髄液内注射を検討する。神経細胞のCa++イメージング解析実験を進める。【機器分析(HPLC-MS/MS)によるGb3の定量解析を行う】病理組織学的解析によりファブリーマウスDRGにGb3が過剰蓄積していることを明らかにできたので、今後HPLC-MS/MSを用いて定量的にGb3の蓄積量を解析する。HPLC-MS/MSは当ラボに設置・稼働済みである。神経系組織ホモジネートサンプルはタンパク質や脂質に富むと考えられるため、除タンパクなどの夾雑物の除去操作が重要となる。【TRPチャネル発現とGb3蓄積の関係性を明らかにする】Gb3の蓄積量の変化がTRPチャネルの発現量に与える影響を解析する。【研究の総括】本研究の総括を行い研究発表や論文化を目指す。先天性代謝異常症マウス初代培養神経細胞のCa++イメージング実験の進捗が遅れているために次年度使用金が出た。研究用マウスの使用数を減らしたためマウス購入代金とマウス飼育料の余剰金が出た。一部の解析を外部研究施設に委託する予定であったが、本年度委託したサンプル数は使用予定サンプル数よりも少なかったため余剰金が出た。
スピン軌道相互作用が強い磁性体に潜むトロイダルモーメントの理論的探索・制御

時間・空間反転対称性がともに破れた系に現れるトロイダルモーメントに関する微視的な理論形式の構築と、実験的にどのようにして観測・制御できるかを調べた。(1)結晶場、スピン軌道相互作用、電子相関による対称性の破れを取り入れたモデルに対して、摂動論を用いることにより、トロイダルモーメントが秩序化した際に生じる有効的なスピン軌道相互作用を導出した。(2)2次元三角格子上のスピン軌道相互作用が強い強磁性体において、非磁性不純物をドープすることで、トロイダルモーメントが不純物周りに誘起されることを明らかにした。(3)トロイダルモーメントを示す候補物質である5d電子系酸化物KOsO4に対して解析を行った。本研究の目的は、時間・空間反転対称性がともに破れた系に現れるトロイダルモーメントを、ミクロな視点から特徴づける理論形式を構築し、実験的に観測・制御するための理論を確立することである。特に本年度においては、電子のもつ電荷・スピン・軌道といった複数の自由度が複雑に絡み合った系において、磁気秩序がトロイダルモーメントを伴うかどうかを判定する基礎的な理論を構築した。具体的には、結晶場、スピン軌道相互作用、電子相関による対称性の破れを取り入れたモデルに対して、サイト間のホッピングを摂動とみなすことにより、秩序形成の元での有効的な反対称スピン軌道相互作用を導出した。その結果、得られた反対称スピン軌道相互作用の時間・空間反転対称性の有無および波数ベクトル依存性から、トロイダルモーメントの有無を判定できることを明らかにした。このスキームは、1.複雑な多バンド系に関しても適用できる、2.トロイダルモーメントがどのモデルパラメタに強く依存しているかを理解できる、3.単純な磁気秩序だけではなく、軌道自由度やバレー自由度を含んだ磁気と軌道の複合秩序や磁気四極子などの高次磁気多極子への拡張を行うことができる、という3つのメリットを有することを見出した。また上で得られた理論形式を現実物質に用いて解析を行った。ここでは交替的な反強磁性秩序相においてトロイダルモーメントが活性化している可能性のあるKOsO4に対して解析を行い、磁気モーメントの向きに応じてトロイダルモーメントの向きが変化し、それに伴って異なる電気磁気応答が得られることを明らかにした。さらに、比較のためにスピン軌道相互作用が無い系に対する解析も行い、トロイダルモーメントを伴う磁気渦結晶が遍歴磁性体において発現することを示し、その機構がフェルミ面効果に由来するものであることを明らかにした。当初の研究計画の通り、摂動論を用いた解析計算を行うことにより、スピン軌道相互作用が強い磁性体に潜むトロイダルモーメントをミクロな立場から理論的に定式化することができたため。この定式化により、トロイダルモーメントをミクロな視点から基礎づけることが可能となるため、これまでありふれた磁性体とみなされていた物質の新しい側面を開拓することが期待できる。また、トロイダルモーメントを有する候補物質であるKOsO4に対して、得られた理論形式を適用し、磁気秩序相において誘起されるトロイダルモーメントの向きやそれが外部電場に対してどのように変化するのかを明らかにしたことも理由の一つである。平成29年度は、非磁性不純物や外場を利用したトロイダルモーメントの観測・制御に関する研究を行った。具体的には、2次元正方格子および三角格子上のスピン軌道相互作用が強い強磁性体において、非磁性不純物をドープすることで、トロイダルモーメントが不純物周りに誘起されることを明らかにした。対象とした模型は最近接スピン間に強磁性相互作用および容易軸異方性をもつスピン模型である。こうした格子系においては、非磁性不純物が局所的な反転対称性の破れをもたらすことから、有効的なスピン軌道相互作用が不純物周りに局所的に誘起されるが、その際の磁気構造がトロイダルモーメントを有するような渦状のスピン構造に変調することを明らかにした。解析手法としては、強磁性体に1つの不純物をドープしたスピン模型に対して、ランチョス法を用いた厳密対角化を行い、不純物周りに局在した束縛準位を解析した。また相補的な手法として、基底状態空間を効率良く探索できるシミュレーテッド・アニーリング法を用い、スピンの最安定配置がトロイダルモーメントを有する渦状のスピン構造になることを確認した。さらに、こうした不純物周りに形成されるトロイダルモーメントが模型における微視的なパラメタにどのように依存しているかを明らかにした。こうした理解を通じて、磁気異方性や格子の対称性を考慮することでトロイダルモーメントだけではなく、磁気モノポールや磁気四極子型の磁気渦も誘起できることを理論的に明らかにした。

本年度は、平成28年度の研究を引き続き行いつつ、当初の研究計画通り、非磁性不純物や外場を利用したトロイダルモーメントの観測・制御に関する研究を推進する。特にスピン軌道相互作用が強い強磁性体に対する非磁性不純物効果を調べることにより、トロイダルモーメントを局所的に誘起する可能性を明らかにする。また、これまでに得られた結果を国内・国外の学会・研究会で成果発表するとともに、論文に取りまとめる。29年度が最終年度であるため、記入しない。物性理論29年度が最終年度であるため、記入しない。
核内受容体を介したクロストーク分子機構の解析

核内受容体型転写因子群の活性制御機構について、特にリガンド以外のシグナルや異なるクラスの転写因子依存的な転写共役因子複合体、染色体構造調節因子複合体の修飾・構成因子群の変化に関し、主に生化学的なタンパク精製の手法を用いて解析を行った。更に脂肪細胞や骨芽細胞の分化等を用いて、同定した因子群の機能について分化・増殖・恒常性維持等における核内受容体標的遺伝子の発現制御等の観点から検討を行った。その結果、脂肪酸応答性核内受容体型転写因子であり、脂肪細胞分化の鍵因子であるPPARγのリガンド依存的転写活性化能を負に制御する膜シグナルを新たに同定する事に成功した。更にこのシグナルの最下流因子にヒストン修飾因子が含まれる事から、このシグナルのクロストークがクロマチン構造を変化させる事でPPARγ活性を負に制御する事を見出した。さらに骨髄間葉系幹細胞における実験の結果、このシグナルがPPARγ依存的な脂肪細胞分化を抑制し、骨芽細胞分化を正に制御する事を見出した。また、このシグナルの遺伝子欠損ヘテロマウスにおいて大腿骨を観察した結果、20週齢前後の雄マウスにおいて脂肪細胞の増加が見られた。現在以上の結果を論文にまとめ投稿準備中である。この他、乳癌関連遺伝子BRCA1の転写活性化領域と相互作用する因子としてDNA修復関連因子MSH2,6を単離同定し、転写とDNA修復の機能重複の一端を解明する事や、核内受容体転写因子の一つで胆汁酸と結合し機能するFXRと相互作用する新たな転写共役因子の同定に成功した。
多数のケモセンサーを駆使する環境細菌の物質認識機構の革新的洞察

McpC、McpT、McpAはそれぞれRalstonia solanacearumのクエン酸、酒石酸、アミノ酸の走化性センサーである。R. solanacearumの走化性センサー遺伝子全欠損変異株にそれぞれの遺伝子を単独発現するとmcpAではアミノ酸走化性が復帰するものの、mcpCおよびmcpTは機能しない。ところがmcpC及びmcpTを同時に導入するといずれのセンサーの機能も復帰する。この現象を説明し得る仮説として、1McpCとMcpTはヘテロダイマーを形成することで機能する、2McpC及びMcpTのホモダイマーがヘテロなダイマートリマーを形成することで機能する、3mcpC及びmcpT単独発現ではセンサーアレイが形成できないため機能できない、と考え、それらを検証した。1を検証するためMcpC及びMcpTのリガンド結合部位を大腸菌で発現、精製した後、in vitroでヘテロダイマーを形成するか検討した。しかし精製標品のCDスペクトルを測定したところ、正確にフォールディングしていないことが判明した。3を検証するために全欠損変異株にmcpAとmcpC双方を導入したところ、アミノ酸走化性は復帰したがクエン酸走化性は復帰しなかった。この結果から3の仮説は棄却できることが分かった。次いでリガンド結合部位がMcpA、シグナリングドメインがMcpTのキメラセンサー遺伝子、mcpATを構築した。全欠損株におけるmcpATの単独発現、mcpATとmcpTの同時発現ではいずれの走化性も復帰しなかった。しかしmcpATとmcpCの同時発現でアミノ酸走化性が復帰した。この結果からシグナリングドメインのペアリングが重要であることが分かった。抗体によるプルダウンによりin vitroでMcpCとMcpTがヘテロダイマーを形成するか検証したかったのであるが、それぞれのリガンド結合部位が大腸菌での発現で正確にフォールディングしなかったことは、大きな誤算であった。この方法論は有効であるので、発現させる条件や菌株を検討することで今後もチャレンジしていく。また、シグナリングドメインについても同様な方法論でヘテロダイマー形成の検証を行う。このin vitroでのアプローチがうまくいかなかったことから、走化性センサー遺伝子全欠損株ならびに全欠損株の作成の過程で得られた多重破壊株シリーズを宿主とした相補試験を丁寧かつ詳細に行い、上記1、2、3の仮説の検証を行った。この中で、当初の研究計画にはなかったキメラセンサーを用いた相補試験も行った。キメラセンサーを用いたのは、相補試験においてもリガンド結合部位とシグナリングドメインのどちらがペアリングに重要なのかを区別して検証しようと考えたためである。この新規アプローチは非常にうまくいき、少なくともシグナリングドメインのペアリングが機能発現に重要であることを示すことができた。今回はMcpAとMcpCのキメラセンサーを用いたが、今後もっと多種類のキメラセンサーを構築し、相補試験等に投入していきたい。〇精製標品を用いたin vitroプルダウンアッセイはヘテロダイマー形成の可能性を検証する有効な手段である。したがって、正確にフォールディングしたペプチドを発現させることができるように、発現条件ならびに異種発現に用いる菌株の検討を行う。また2018年度はリガンド結合部位の発現・精製のみを行ったが、今後はシグナリングドメインの発現・精製も試みる。〇2018年度、McpAとMcpCのキメラセンサーが機能し得ることを見出した。これは大きな収穫である。我々が機能を特定した走化性センサーはMcpA、McpCを含め6つある。そこで2019年度はMcpATに加えて新なキメラセンサーを複数種構築し、相補試験に投入する。〇多くの細菌において、走化性センサーは細胞端に局在してセンサーアレイを形成し機能していることが示されている。走化性センサー遺伝子全欠損のバックグランドでMcpCおよびMcpTが単独で機能しないのは、細胞端に局在できていない可能性がある。McpCおよびMcpTとGFPの融合蛋白質を用いてこの可能性を検証する。この実験には、McpCおよびMcpTを同時発現させた時の局在性の確認も含む。

全欠損株におけるmcpATの単独発現、mcpATとmcpTの同時発現ではいずれの走化性も復帰しなかった。しかしmcpATとmcpCの同時発現でアミノ酸走化性が復帰した。この結果からシグナリングドメインのペアリングが重要であることが分かった。抗体によるプルダウンによりin vitroでMcpCとMcpTがヘテロダイマーを形成するか検証したかったのであるが、それぞれのリガンド結合部位が大腸菌での発現で正確にフォールディングしなかったことは、大きな誤算であった。この方法論は有効であるので、発現させる条件や菌株を検討することで今後もチャレンジしていく。また、シグナリングドメインについても同様な方法論でヘテロダイマー形成の検証を行う。このin vitroでのアプローチがうまくいかなかったことから、走化性センサー遺伝子全欠損株ならびに全欠損株の作成の過程で得られた多重破壊株シリーズを宿主とした相補試験を丁寧かつ詳細に行い、上記1、2、3の仮説の検証を行った。この中で、当初の研究計画にはなかったキメラセンサーを用いた相補試験も行った。キメラセンサーを用いたのは、相補試験においてもリガンド結合部位とシグナリングドメインのどちらがペアリングに重要なのかを区別して検証しようと考えたためである。この新規アプローチは非常にうまくいき、少なくともシグナリングドメインのペアリングが機能発現に重要であることを示すことができた。今回はMcpAとMcpCのキメラセンサーを用いたが、今後もっと多種類のキメラセンサーを構築し、相補試験等に投入していきたい。〇精製標品を用いたin vitroプルダウンアッセイはヘテロダイマー形成の可能性を検証する有効な手段である。したがって、正確にフォールディングしたペプチドを発現させることができるように、発現条件ならびに異種発現に用いる菌株の検討を行う。また2018年度はリガンド結合部位の発現・精製のみを行ったが、今後はシグナリングドメインの発現・精製も試みる。〇2018年度、McpAとMcpCのキメラセンサーが機能し得ることを見出した。これは大きな収穫である。我々が機能を特定した走化性センサーはMcpA、McpCを含め6つある。そこで2019年度はMcpATに加えて新なキメラセンサーを複数種構築し、相補試験に投入する。〇多くの細菌において、走化性センサーは細胞端に局在してセンサーアレイを形成し機能していることが示されている。走化性センサー遺伝子全欠損のバックグランドでMcpCおよびMcpTが単独で機能しないのは、細胞端に局在できていない可能性がある。McpCおよびMcpTとGFPの融合蛋白質を用いてこの可能性を検証する。この実験には、McpCおよびMcpTを同時発現させた時の局在性の確認も含む。
安居院唱導資料における注釈学的研究

安居院の唱導資料には開祖の澄憲の編纂した『釈門秘鑰』や息子の聖覚が編纂した『言泉集』などが存在する。経典の解釈である経釈を主な研究対象として取り上げたが、現存する経釈は草本であり、経典の解釈用に最低限の情報を書き留めたものに過ぎず、実際の法会の場で用いられた唱導の全体の記録ではない。『最勝王経釈』や『寿命経釈』、『薬師経釈』などをその言説の根拠となる出典を中心に検討したが、ほぼ中国天台の祖になる智〓の著作に求められた。たとえば澄憲の『最勝王経釈』は、智〓には『金光明経釈』しか存在しないが、澄憲はこの『金光明経釈』を使用する。また『薬師経釈』には、日本の善珠の『薬師経疏』の利用されるが、智〓の著作である『法華玄義』や『法華文句』の言説も多用する。よって智〓の経疏が有る場合には、それを典拠とするという基本的姿勢が明らかになった。また、東大寺図書館所蔵『法華経釈』、石山寺所蔵『法華経釈』に注目したが、前者は三論系の『法華遊意』『法華義疏』に基づいた経釈であり、後者は天台系の注釈に基づいたものであった。日本の寺院に行われた唱導の経釈は、それぞれの寺の所属する宗に制約されることを天台、三論の場合であるが、実際に確認した。また、経釈資料で頻繁に用いられる三門釈は、中国における講経の伝統から生じたものであることを指摘した。まず中国古典の「注」を淵源とし仏典に対する「注」が作成され、やがて5世紀初頭、竺道生の頃に成立したと思われる仏典の「疏」の形式がこの三門釈に繋がると考えられる。その嚆矢として道生の『法華経疏』を指摘できる。また日本の法会の場に登場する講師・読師は、中国の講師・都講の伝統を受けたものであり、特に中世の時代の読師は奈良時代の複師の伝統を混入させたものであろうと推定できた。本年度は、まず安居院の唱導資料及び唱導に関連する論議の資料の収集を行い、あわせて若干の研究成果を発表した。安居院の唱導は、法会という格式のある場で行われた記録であることが多いが、この法会に参加できる僧侶が限定されていたことなど、当時の寺院社会の実態を、良遍の『護持正法章』から明らかにした。鎌倉時代においては僧侶に貴種、良家、凡人等の区分が存在し、それらの身分階層が固定化していた。その出自によって出世の限界が存在したことなどを、スイスのローザンヌで行われた国際仏教学会(平成11年8月)で発表した。安居院の唱導資料は、金沢文庫、東大寺図書館、比叡山文庫等に所蔵されているので、実際にそれらの機関に赴き、資料の閲覧を行った。そのうち安居院の唱導資料として代表的な『釈門秘鑰』『転法輪抄』や東大寺の唱導資料と考えられる『普通唱導集』等の複写を行った。

また安居院澄憲の出仕が確認される論議資料である東大寺の宗性の手になる最勝講や法勝寺御八講の記録や、澄憲の手になると思われる資料の複写も併せて行った。唱導資料の中には表白、諷堂、経釈などが含まれる。その経釈の部分に対して仏教学からの研究が可能であることを指摘し、また説話的な要素が含まれることを大倉精神文化研究所の研究会で発表した(平成12年2月)。なお、事例として挙げられる説話的な部分は、唱導と説話との関連を考える良い材料を提供してくれると思われる。以上、本年度の研究は、資料の収集に多くの時間を割き、若干の見通しを学会等を発表した。本年度は、まず院政期から鎌倉期にかけての寺院の教学的実態がどのようなものであったのかに関し、唱導という視点からまとめ、南アフリカで開催された世界宗教学会で発表した。寺院で行われる法会において、唱導と論義の両者が重要な教学的な部分である。現存する格式の高い法会の唱導や論議の資料の紹介、およびこれらの資料から推測される当時の状況について報告し、当時の学侶たちの仏教学の実際を把握することができると発表した。次に、唱導資料と説話資料との関連性について論文をまとめた(『大倉山論集』)。院政期から登場する精神的な特徴として、遁世が注目されることを説話資料や唱導資料である表白文の文章から推測した。さらに、説話の成立そのものに唱導が深く関わると予測した。特に安居院の唱導の支持者たちは、澄憲の『作文大体』に登場する文言から想像すると、貴族階級に限定できる可能性があることを示唆した。また、安居院の唱導資料である『釈門秘鑰』に収録されている経釈の研究を行った。院政期から鎌倉時代にかけて行われた法勝寺の御八講との関連が指摘される『釈門秘鑰』巻第十七に含まれる『無量義経』の経釈を翻刻し、その教学的な理解と御八講の論義で行われた教理論争との関連性を研究し、論文集に発表した(『田賀龍彦博士古稀記念仏教思想仏教史論集』)。結論として、法勝寺御八講の唱導の部分と論議の部分とに、教学的関連性を積極的に認めることは困難であり、唱導でなされた主張に基づいて議論が展開されているとは考え難いとの一応の結論を得た。また石山寺一切経蔵にも平安時代後期の唱導資料である『法華経釈』の写本が存在することを確認した。本年度は、まず法会に関する唱導の部分と論義の部分とのうち、先に論義の部分に関する知見を学会(印度学仏教学会)で発表した。これは、安居院の澄憲も出仕したことの確認される法勝寺御八講であるが、『法勝寺御八講問答記』より議論される論題の典拠を推測することが出来た。経釈の部分は一般的な知見が披露されると推測されるが、論義はその日に説法された巻に関する題材が文短尺の場合には用いられ、義短尺は法華経学に限定されず幅広い教学の中から出題されることを発表した(『印度学仏教学研究』50-1)。次に安居院の資料である金沢文庫所蔵の『釈門秘鑰』の内『無量義経』に関する経釈の研究を行った。『無量義経』は、東大寺図書館に収蔵される鎌倉時代の論義資料である『無量義経短尺』とも関連する研究が可能のため、選定した。また石山寺に所蔵される『法華経釈』の写本を手に入れ翻刻、研究を行い、若干の知見をまとめることが出来た(渡辺宝陽先生古稀記念論集に投稿予定)。これは安居院の唱導との直接の関連を示唆することは困難であるが同じく天台系の経釈と考えられ、唱導の経釈の部分に反映される教学がどの程度のものかを示唆する点で興味深い。実際には本門・迹門など天台教学の初歩的な内容が披露されるに留まり、実際の唱導は細かい教学には踏み込まないと推定した。さらには『釈門秘鑰』に収載される『法華経』に関連する部分の読解作業を行った。また東大寺図書館に所蔵される『華厳経釈』『法華経釈』の写本を入手することが出来たので、南都に伝わるものと北嶺系に伝わるものとがそろい、経釈の実際を比較検討することが可能になった。これは今後の課題として研究を進めたい。前期には東大寺図書館所蔵の『法華経釈』及び『華厳経釈』の翻刻を行った。『法華経釈』は注釈
脳死臓器移植における日本のドナー家族の追跡調査～バイオエシックスと医療人類学から

(1).日本のドナー家族ケアの実態調査:日本におけるドナー家族ケア(脳死からの臓器提供を決断したドナー家族)の現状把握を目的とした文献研究から実態を確認した学術論文のみならず、日本移植ネットワークの取り組み、行政(各都道府県におけるドナー家族ケアの文献・資料・ネット上での公開情報や啓蒙啓発運動等も含む)。日本の生体移植ドナーの臓器提供前と臓器提供時(臓器摘出手術準備等を含む)及び臓器提供後のケアの実態調査や欧米のドナー家族ケア(脳死からの臓器提供・心停止後の臓器提供・生体ドナーを含む)についても文献研究及び渡米した際、実際にケアを行っている医療機関でドナー家族ケアの実態調査を可能な限り遂行した(ヨーロッパは文献中心・日本と北米(アメリカ・カナダ)はフィールドワーク中心)しかし、ドナー家族の高齢化が進み、追跡調査の協力を得るのはだんだん難しくなってきた。また、レシピエントも再移植待機中に死亡したインフォーマントが増加してきた。これらのことを踏まえて臨機応変にデータ収集を進めざるを得なくなってきた。(2).日本のドナー家族のインタビュー調査(追跡調査を含む)においては、新しいインフォーマントにアプローチすることよりも、ラポールを築けているインフォーマントの追跡調査に重点をおいて研究を進めた。そのためこれまで協力頂いている(2002年より)ドナー家族の追跡調査から想定外のデータ収集をすることが出きた。(3).日本におけるドナー家族に関する参与観察:第27回全国移植者スポーツ大会で総合司会を務め当事者と接触を図り、ドナー家族ケアの意識調査を行い平成30度の暫定的結論を導き、国際学会ーアメリカ人類学会(2018年11月:サンホゼ)で研究成果を発表した。(4)インフォーマントの高齢化を踏まえ、高齢者問題にも範囲を広げ、ドナー家族・レシピエントたちの介護問題へも踏み込んだ。1)平成30年度の調査進捗状況そのものは、概ね予定通りいっているが、インフォーマントの高齢化や病死など、調査を進めてゆく上て、想定外の調査結果が予想以上に多かったため研究目的に沿いながらも、調査の微調整を迫られた。しかしながら、人類学では常に想定外の知見が得られることを想定しながら調査を進めているので、おおむね順調に調査が進んでいる。とわいえ、新しい予期せぬ知見に柔軟に対応する調査計画の微調整にはそれ相当の準備が必要とされる。特にこれまでの脳死臓器移植問題に高齢化の問題を加味することは骨が折れた。2)想定外の新たな知見臓器提供に伴うドナー家族ケアの中心はドナー家族に焦点を当てて調査を進める予定であったが、移植医のドナーあるいはドナー家族への関心にはばらつきがあり、触れようとしない肝臓や腎臓の移植医の存在もある一方で、脳死ドナーに依存せざるを得ない心臓移植医のドナーケア(ドナー家族への思い)は非常に高く移植医療そのもの以上にドナー家族へ注がれていた。特に平成30年度は和田移植事件から50年という節目の年で、様々なイベントが行われたが、和田移植事件の当事者であるベテラン移植医と和田移植事件を知らない若手移植医のジェネレーションギャップがあった。しかしながら若手の移植の方がドナー家族ケアへの意識は高い傾向があり、積極的にドナー家族と交わろうと努力していた。3)当事者たちの高齢化に対応しうる研究計画移植医療は社会性の高い医療であり、ドナーの臓器提供なしには成り立たない医療であるが、ドナーやドナー家族ケアは取りこぼされてきた。特に高齢化社会を迎え、ドナー家族やレシピエントの生活が一変してくることを考慮にいれつつ「いのち」の問題としてドナー家族ケア研究は様々な遺族ケアにも対応しうる重要課題と考える。(1).日本におけるドナー家族に関する実態調査のデータ分析これまで研究してきた脳死・臓器移植問題にドナー家族の悲嘆プロセスやケア及び移植医療の特殊性を考慮に入れて、実態調査のデータ分析を行うために、移植医療の専門家の協力を得ながら確認し、ドナー家族研究がレシピエントの救命と生体ドナー及び脳死ドナーのケアと理解へと繋がることを心がけて慎重に分析を昨年に引き続き行う。(2).日本におけるドナー家族に関するナラティヴ調査のデータ分析得られたデータは、インフォーマントとドナー家族ケアの関係性によって異なるこという結果が得られたため、1ドナー家族の当事者からデータを得ることは困難を極めるが、200203年の調査及び201416年の追跡調査のフォローアップ調査という位置づけで、可能であれば、プライバシーや倫理面へ細心の注意を払って更に深める。2臓器移植の当事者から得られたデータは、グラウンデッド・セオリー・アプローチと質的調査法を組み合わせた申請者独自の分析方法だが、データの信憑性、妥当性・特異性を重視する上で必須であり、また、このように一般的な常識を超越あるいは逸脱したナラティヴの分析にこの調査方法は威力を発揮する。(3).日本におけるドナー家族に関する参与観察のデータ分析世界一深刻な臓器不足と評される日本における数少ないドナー家族と帰属するコミュニティーの文化的背景に注意を払い、参与観察で得たデータの分析を行い考察・検討する。1患者の救命あるいはQOL向上を重視した移植医療のドナーの反応を考慮に入れた検証を実施する。2日本の臓器移植への抵抗感は関東より関西の方が強いと言われているが、ドナー家族ケアにも重要であることを考慮に入れて、臓器提供の地域の理解や評価について、「臓器摘出」という行為そのものへの解釈や意味の再確認を行い、国内の地域差について更に掘り下げる。(1).日本のドナー家族ケアの実態調査