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新たな分化誘導法と足場構築を用いた、骨髄成体幹細胞からの心筋組織再生

本研究では、"心不全における心筋再生"をテーマに、医学・幹細胞生物学・生体組織工学の観点から包括的な再生研究を行うことを目指した。in vitro実験では将来の臨床応用を考慮し、ヒトに有害な分化誘導物質をできるだけ避けるため、心筋のCondition mediumによる骨髄細胞からの分化誘導実験を行った。ラット骨髄から初期培養した骨髄間葉系細胞は、調整した心筋細胞のCondition mediumによって一部心筋特異的蛋白を発現するようになった。しかしながら、自己拍動するまでの最終的な分化は得られなかった。この心筋分化には、肝細胞増殖因子が分化誘導に働くことがわかった(現在論文投稿中)。また、ドラッグデリバリーシステムとして生体吸収性のハイドロゲルを調整した。これを用いて心不全モデル動物に肝細胞増殖因子を導入したところ、単独では短時間で吸収されてしまう肝細胞増殖因子を長期間有効に作用させることができ、モデル動物の心筋リモデリングを抑制することができた。in vivoの実験では、不全心筋組織の検討を行うため、非凡な再生能力で知られるMRLマウスの心筋梗塞モデルを作った。慢性期での梗塞抑制は明らかではなかったが、修復の過程において亜急性期までに、一般マウスの心筋梗塞モデルと異なり、繊維化瘢痕組織の中から再生心筋様組織が出現することがわかった。また、この出現する心筋様組織は、過程において繊維芽細胞が筋細胞の形質を獲得することを突き止めた(第70回日本循環器学会年次学術集会発表)。本研究の最終目的は、骨髄細胞からの"心筋再生"を持って実際に心不全の新しい治療戦略を開拓することにあり、初年度である平成16年度の目標は、(1)骨髄成体幹細胞からの心筋細胞分化誘導法の確立(2)その過程における各種細胞増殖因子の解析にあった。(1)についてまず、心筋細胞の生死に関わる細胞内伝達機構について、これまでの研究代表者の研究成果をまとめ、誌上発表した(Moll Cell Biochem 2004;59(1-2):163-168)。次に、in vitroにおける骨髄成体幹細胞から心筋細胞への分化誘導を検討するため、GFP遺伝子組み換えマウス骨髄間葉系幹細胞と新生児マウス培養心筋細胞との混合培養、もしくはマウス骨髄間葉系幹細胞を心筋培養液で培養した。骨髄細胞における心筋特異的蛋白の発現を、免疫染色法やWesten blotting法で見たところ、約7日間でTroponin Iや心筋actinなどの発現を認めた。同様に、GFP遺伝子組み換えマウス骨髄間葉系幹細胞を内臓平滑筋培養液で培養すると、骨髄細胞に平滑筋特異的蛋白が発現した。以上の結果は、骨髄細胞が平滑筋や心筋の培養液によって刺激すると、各々の筋分化に向かう可能性を示し、筋培養液中の分化誘導因子の存在を示唆した。(2)の検討及び筋培養液中の分化誘導因子の同定のため、心筋特異的蛋白を発現するようになった骨髄細胞の培養液を、ELISA法を用いて細胞増殖因子の関与を調べた。各種細胞増殖因子の中では特に、肝細胞増殖因子(HGF)の関与が示唆された。さらに、HGFはマウス心筋梗塞後の心機能を改善し梗塞域を制限することが知られているが、HGFが梗塞心で細胞増殖を促進することを発見した。このことは、HGFの心再生における有効性を示唆した。以上の結果の一部は、すでに誌上発表しており(Am J Pathol.2005;166(2)565-73)、また一部は論文投稿中である。(713字)本研究では、"心不全における心筋再生"をテーマに、医学・幹細胞生物学・生体組織工学の観点から包括的な再生研究を行うことを目指した。
レニン-アンジオテンシン系阻害薬の心肥大抑制機序の分子レベルでの解明

レニン-アンジオテンシン系阻害薬の分子レベルでの心肥大抑制機序を明らかにするために、今回、アンジオテンシンII(AngII)及びイソプロテレノールを浸透圧ミニポンプにてラットに持続注入し、transforming growthfactor-beta1(TGF-beta1)及び各種細胞外マトリックスの遺伝子発現を検討した。(1)AngIIを200ng/kg/minあるいわ1000ng/kg/min持続注入した。200ng/kg/minを注入すると3日後まで血圧は正常であったが、TGF-beta1及びフイブロネクチン、コラーゲンタイプI及びIIIのmRNAはすべて有意に増加した。また、7日後に著明な心肥大を呈した。これらの遺伝子の増加及び心肥大はAngIIタイプI受容体(AT1受容体)拮抗薬の投与により完全に抑制されたが、ヒドララジンでは抑制されなかった。1000ng/kg/minでは注入開始直後から血圧上昇をきたしたが、遺伝子発現は200ng/kg/min注入の場合と同様に増加した。AT1受容体拮抗薬は上述した遺伝子の発現を完全に抑制し心肥大も抑制した。一方、ヒドララジンは血圧上昇を抑制したにもかかわらず、上述した遺伝子の発現及び心肥大を抑制しなかった。(2)イソプロテレノール(0.5mug/kg/min)を持続注入すると48時間以内に上述のmRNAはすべて有意に増加し心肥大をきたしたが、AT1受容体拮抗薬、アンジオテンシン変換酵素阻害薬投与により、一部抑制された。15EA04:以上から、レニン-アンジオテンシン系阻害薬の心肥大、心繊維化の抑制機序として、降圧作用だけでなく、TGF-beta1、フイブロネクチン、コラーゲンタイプI及びIIIの遺伝子発現を抑制することが重要であると思われる。
フラストレート格子上ボース粒子系における量子液体相の探索と励起構造の数値解析

量子モンテカルロ法のソフトウェアを開発し、(1)擬1次元格子中におけるボース粒子系の超流動相転移現象や(2)希薄ボース粒子系におけるエネルギーなどの物理量の普遍的な振る舞いを調べた。さらに、(3)ハードコアボース粒子系と等価である量子ハイゼンベルグ模型における量子液体的な励起状態について、数値解析接続法を組み合わせ、大規模精密計算により、新しい解釈を裏付ける解析結果を得ることができた。具体的には以下である。(1)擬1次元的形状のナノ多孔体中の液体ヘリウムでは非自明な超流動応答が観測されている。我々は位相スリップを防いだ周期境界条件のもと超流動密度を測定すると、液体ヘリウムが多孔体内表面に吸着して2次元的の場合はコスタリッツ・サウレス転移、多孔体内に充満し3次元的の場合は2次転移を起こすことを示した。(2)希薄ボース粒子系において、平均場近似や摂動展開を用いて理論的に示された式を定量的に評価し、ハードコアボース粒子系が固有に持つs波散乱長の大きさを見積もった。さらに摂動係数の値を数値的に求め、希薄極限位おいて物理量が模型によらず普遍的な振る舞いを示すことを裏付ける結果をえた。この結果は連続系の量子モンテカルロ法と比較することで、グラファイト状に吸着したヘリウムの量子固体相の計算への応用を期待できる。(3)確率的最適化法による数値的解析接続手法を大規模精密計算によって得た量子モンテカルロ法の結果に適用し、2次元量子スピン模型の励起ダイナミクスの計算を行った。有機銅酸化物で観測された非自明な量子現象を定量的に再現し、基底状態で長距離秩序が存在する状況下でも、特定の波数ではスピン液体的な素励起が存在しうる計算結果を示した。量子相転移を正確に理解するためにまず、申請者が開発して来た量子モンテカルロ法のための新しいアルゴリズムである並列化マルチワームアルゴリズムに有効な有限サイズスケーリング法を考案しデモンストレーションに成功した。本研究で用いる量子モンテカルロ法は、ファインマンの経路積分表示に基づく世界線モンテカルロ法であり、有限温度量子系を厳密に計算できる。世界線はワームと呼ばれる世界線の不連続点がモルコフチェーンに基づいて時空中を動き世界線配位を更新する。このアルゴリズムでは、相転移に本質的に影響する系のサイズについては並列計算によって解決できるが、並列計算のために導入されたワームが2次相転移の際に発達する相関長を断つために、従来の有限サイズスケーリングを用いることができなかった。本研究では、3次元ボース粒子系の超流動転移(2次転移)に対してワームのソース場も含めた有限サイズスケーリングを実行することで、有限サイズスケーリングを行うデモンストレーションを実現した。スケーリングは2変数のフィッティングを行うことになるため通常は困難であるが、ベイズ推定法を用いたスケーリングツールを応用することで、1変数のサイト同等に精密な相転移点の推定を行うことができた。また、本研究で用いるハードコア・ボース・ハバード模型で化学ポテンシャルがちょうどparticle-hole対称性がある場合に相当するスピン模型であるハイゼンベルグ模型で、量子モンテカルロ法と数値解析接続を組み合わせて励起状態を調べる研究を行った。この研究で用いた方法は本研究のメインテーマの1つである量子液体相の相判別に役立てられると期待できる。本研究の目標である大規模ボース粒子系の有限温度相図を書くために必要となる有限サイズスケーリング法をデモンストレーションできたとこは大きな進展であり、研究目標の達成に大きく近づいたといえる。しかし、本研究で用いる模型で量子液体相が存在するとすると、この相には自発的対称性の破れによって発現する秩序変数が存在しないため、通常の量子モンテカルロ法では相状態については間接的な情報しか得られない。しかし、数値解析接続手法を用いた励起状態を調べる方法に目処がたったため、概ね順調と判断した。(3)確率的最適化法による数値的解析接続手法を大規模精密計算によって得た量子

モンテカルロ法の結果に適用し、2次元量子スピン模型の励起ダイナミクスの計算を行った。有機銅酸化物で観測された非自明な量子現象を定量的に再現し、基底状態で長距離秩序が存在する状況下でも、特定の波数ではスピン液体的な素励起が存在しうる計算結果を示した。本研究で量子液体相の判別については、機械学習手法を応用した新しい相判別法を考案することで解決を模索する。近年機械学習手法、具体的にはニューラルネットワークなどの深層学習による画像識別法を応用して、古典スピン模型などの相判別を行い、よく知られている相転移の問題をデモンストレーションすることが実現されている。量子モンテカルロ法でも、d次元量子系はd+1次元古典系の世界線配位で描け、古典系と同様に画像解析手法を適用できると考えられる。また、我々が最近論文誌に投稿した研究の一つで、量子モンテカルロ法と確率的最適化法による数値解析接続を組み合わせて励起状態を調べたが、この方法を本研究でも用いて励起スペクトルを調べることで、秩序変数が存在しないような相でも他の相との違いを調べるのに有手段となると期待できる。スラスター計算機の購入を想定していたたが、大規模計算の方が効率的に結果を出せるとの判断に至ったため、年度を改めてスパコンの利用権購入に得てることに変更した。
国際的な産業部門別生産性の連動と長期停滞論の関係の解明

本研究では産業レベルでの生産性の変動要因を国際的な視点から行う。世界的な経済問題となっている生産性の長期的低下傾向の原因の理解にもつながり、学術的・経済政策的にも貢献のある研究課題である。また、景気や生産性の国際連動性の特徴を理解することで、経済のグローバル化(貿易や資本移動などの国際的波及経路の拡大)の連動に果たす役割の理解にも繋がる。具体的には、生産性の動きに関し、各国各部門に共通の影響を与えるグローバル要因、各国の部門毎に共通の影響を与える部門要因、国毎の各部門に一様な影響を与える国別要因を識別する。そして、国際的波及経路の変化が与える影響を実証的に解明する。
代数多様体の退化と対数的幾何学

今年度、スキームやHodge構造の退化、分岐について研究をおこない、次の成果を得た。(1)スキームの分岐について、斉藤毅氏と新しい方法を発見し、l進層のRiemann-Roch型の一般公式を得た。これは斉藤毅氏とすでに得ていたBlochの導手公式の一般化である。(2)mixed Hodge構造の退化について臼井三平氏、中山能力氏とmixed log Hodge構造の正しい定義を発見し、その分類空間の構築についても進展を得た。(3)Hodge構造の退化に関し、nilpotent orbitの空間とSL(2)-orbitの空間の局所的構造を、臼井三平氏とともに完全にあきらかにした。複素数体上の,複素トーラスやアーベル多様体の退化に関し,対数的複素トーラスの理論を中山能力氏・梶原健氏と創始し,対数Hodge構造の理論との関係やモジュライ,モデルの理論を完成し,対数的Picard多様体の解析理論も完成し論文をほぼ完成した.斎藤毅氏と,対数幾何の方法を用いる交点理論による,スキームの分岐理論を進展させ,体上の代数多様体の分岐理論については論文を完成した.臼井三平氏との対数的Hodge構造の分類空間の理論の完成を昨年度おこなったが,今年臼井三平氏中山能力氏と対数的混合Hodge構造の分類空間への理論へとそれを発展させ,Borel-Serre空間やSL(2)-軌道の空間の理論を作った.昨年度F.Trihan氏としあげた票数pの大域体のBirch Swinnerton-Dyer予想を,正標数の大域体上のモチーフの玉河数予想へと拡張する研究をおこない,成果を得た.これは対数的syntomic複体を用いた.
他者による自己の心的状態推測の認識と意思決定への利用

本研究課題を延長した本年度は、これまでの研究結果をまとめて原著論文として国際ジャーナルに投稿・掲載されること、また、学会での発表を行うことを目標とした。本研究課題が目指した、他者の「心の理論」を認識・学習して意思決定に利用する認知過程の行動・神経基盤を機能的磁気共鳴画像法(fMRI)実験により明らかにすることの主要な成果は、Scientific Reports誌に掲載された(Ogawa et al., 2018)。さらに順天堂大学よりプレスリリースを行った(www.juntendo.ac.jp/news/20180827-01.html)。発展的な内容としていた機能的結合の解析についてもHuman Brain Mapping誌に掲載された(Ogawa et al., 2018)。昨年度の実験データ解析において脳活動パターンの類似を調べるRepresentational Similarity Analysisを行い、ヒトと対戦しているときと、実験参加者の選択を学習・予測するコンピュータプログラムと対戦しているときとで、意思決定時の左側頭頭頂接合部(LTPJ)の活動が有意に類似していることを明らかにした。この結果を論文にまとめて現在国際ジャーナルに投稿中である。以上のように、本研究課題は多くの成果を出し、概ねその目標を達成したといえる。本研究(他者による自己の心的状態推測の認識と意思決定への利用)は、他者の「心の理論」を認識・学習して意思決定に利用する認知過程の行動・神経基盤を機能的磁気共鳴画像法(fMRI)実験により明らかにすることを目指している。そのために、手の読み合いが想定される二人非協力非ゼロ和ゲームにおいて、ヒトと対戦している条件、コンピュータと対戦している条件を用意し、課題中の行動と脳活動を計測することとした。初年度となる今年度は、まず、fMRI実験の予備実験となる行動実験を実施して、「他者から心を推測されることの認識」に基づく意思決定の計算モデルの妥当性を、強化学習モデルと比較して検討した。予備実験(実験参加者7ペア14名)の結果は、本研究のモデルが強化学習モデルよりもより実験参加者の行動を説明できた。この結果をうけて、本研究はfMRI実験に以降し、現在fMRI実験を行っているところである。これまでに、実験参加者15ペア30名のデータを収集し、予備実験の行動実験と同様に、本研究のモデルが強化学習モデルよりもより実験参加者の行動を説明できることを確認した。同時に、「心の理論」に関係する脳部位(例えば右側頭頭頂接合部)を同定する、機能的ローカライザーの評価を行った。計測時間5分という短時間にも関わらず安定して標的となる脳部位を個人ごとに同定することができた。関連するfMRI研究と合わせて、日本語版ToM Localizerとして雑誌論文を発表予定(小川他、in press、心理学研究)である。本研究(他者による自己の心的状態推測の認識と意思決定への利用)の初年度となる今年度は、予備実験となる行動実験、計算モデルの設定、fMRI実験の開始を予定していた。予備実験の行動実験では、二人非協力非ゼロ和ゲームにおいて、ヒトと対戦している条件、コンピュータと対戦している条件を用意し、「他者から心を推測されることの認識」に基づく意思決定の計算モデルの妥当性を検討した(N=14)。結果、強化学習モデルとくらべて本研究のモデルの方が実験参加者の行動へのフィッティングが良かった。この結果から、予備実験からfMRI実験の本実験へ移行した。fMRI実験は、予定通り、東京大学進化認知科学研究センターのMRI装置(Prisma 3T, Siemens)を使用して行った。fMRI実験の開始にあたってまず、MRIによるスキャン中に、2名に同時に刺激を呈示し、反応を記録する実験セットを構築した。この実験セットには汎用性を持たせて、本研究以外のfMRI実験でも使用できるようにした。しかし、眼球運動計測が難しい状況があり、このfMRI実験では眼球運動計測なしでスキャンを行った。fMRI実験で視線計測ができない場合に備えて、視線計測を行う行動実験を準備している。実験では、実験参加者はペアとなり、1名がMRスキャナー内、もう1名はスキャナー外で実験を行った。現在のところ、15ペア30名の参加者のデータを収集している。予備実験の行動実験と同様に、本研究のモデルが強化学習モデルよりもより実験参加者の行動を説明できることを確認した。本研究の一部として行った研究について、雑誌論文の発表(Scientific Reports、心理学研究、計2報)および学会発表(第9回人間行動進化学会、計1回)を行った。昨年度の行動実験等とデータ解析に基づいて、機能的磁気共鳴画像法(fMRI)を用いて、二人非協力非ゼロ和ゲームを行っているときの実験参加者の脳活動を計測した。ヒトと対戦しているときの脳活動、均衡解に基づく確率で選択を行うコンピュータプログラムと対戦しているときの脳活動、実験参加者の選択をパーセプトロンにより予測するコンピュータプログラムと対戦しているときの脳活動、という3条件(それぞれHUM/COM1/COM2と呼ぶ)での脳活動の比較を行った。まず、選択行動の学習と決定に関わっていると考えられる線条体の活動を解析した。結果は、ヒトと対戦しているときの選択確率の学習に線条体が関与していることを示した。つぎに、昨年度の研究実績として報告した心の理論にかかわる脳領域を特定する手法により同定した左右の側頭頭頂接合部(TPJ)の活動を解析した。その結果、左側頭頭頂接合部で、意思決定時のHUMとCOM2の脳活動パターンが似ていることがわかった。

このことは、HUMとCOM2の行動解析結果が相関していることに対応している。以上の結果は、二人非協力非ゼロ和ゲームにおいてヒトと対戦するときには、相手が自己の選択を予測してくるという認識が意思決定に利用されていることを示唆する。本研究の一部として行った研究について、雑誌論文の発表(Neuroimage、計1報)、および学会発表(第21回実験社会科学カンファレンス、行動経済学会第11回大会、脳と心のメカニズム第18回冬のシンポジウム、次世代脳プロジェクト冬のシンポジウム2017、計4回)を行った。今年度の本研究(他者による自己の心的状態推測の認識と意思決定への利用)では、fMRI実験を完了し、計算モデルを用いた行動・脳活動の解析を行い、研究成果をまとめて国際ジャーナルに論文を投稿する予定であった。さらに、アドバンスな研究内容への発展(視線計測のモデルへの組み込み)を行う予定としていた。昨年度の行動実験等とデータ解析結果に基づいて、fMRI実験を実施・完了した。そして、計算モデルを用いた行動・脳活動データの解析を行った。選択行動の学習に線条体が関わることが計算モデルをベースとした解析から明らかになった。さらに、関心領域(ROI)における脳活動パターンの相違を調べるRepresentational Similarity Analysis (RSA)を行った。ヒトと対戦しているときと、実験参加者の選択を学習・予測するコンピュータプログラムと対戦しているときとで意思決定時の左側頭頭頂接合部(LTPJ)の活動が相関していることを明らかにした。視線計測についてモデルへの組み込みについては完成までもう少しである。決定ボタンを押す前の視線情報から選択内容を予測できることを確認したが、これは視線情報を単独で用いた場合である。これを計算モデルに組み込んだときにより高い精度で実験参加者の選択を予測できるようにするためのパラメータ最適化が残っている。以上の結果をもとにして論文執筆を開始したところである。早期に完成させて国際ジャーナルへ投稿したいと考えている。本研究課題を延長した本年度は、これまでの研究結果をまとめて原著論文として国際ジャーナルに投稿・掲載されること、また、学会での発表を行うことを目標とした。本研究課題が目指した、他者の「心の理論」を認識・学習して意思決定に利用する認知過程の行動・神経基盤を機能的磁気共鳴画像法(fMRI)実験により明らかにすることの主要な成果は、Scientific Reports誌に掲載された(Ogawa et al., 2018)。さらに順天堂大学よりプレスリリースを行った(www.juntendo.ac.jp/news/20180827-01.html)。発展的な内容としていた機能的結合の解析についてもHuman Brain Mapping誌に掲載された(Ogawa et al., 2018)。
キノームの生理的基質同定に基づく細胞内シグナルパスウェイ大規模解析

国内外のゲノムワイド関連解析により、様々な疾病原因は個々の遺伝子よりもシグナルパスウェイ毎の異常に集積されており、特にガンは十数種のパスウェイに原因遺伝子が分布することがわかってきた。これらのパスウェイにはすべてリン酸化シグナルが関わっており、その異常はガンそのものの発症因子ともなり、その進行、薬剤感受性および治療予後とも深く関わる。したがって、様々なパスウェイ毎のリン酸化動態を全体として理解することが、細胞内シグナル解析には必要とされる。本研究では、(1)キナーゼ毎に生理的基質を大規模に同定する方法を確立し、(2)それを500種のキナーゼについて適用し細胞内キナーゼー基質相関を解明することにより、細胞内リン酸化ネットワークの分子基盤を明らかにし、(3)さらにこの基盤情報に基づいて、細胞内シグナルパスウェイ大規模解析法を確立することを目的としている。本年度は(2)について取り組んだ。ビオチンリガーゼ融合キナーゼ発現HEK293T細胞と野生型のHEK293T細胞を用意し、それぞれにビオチンを施した後、タンパク質抽出、ビオチン化タンパク質濃縮およびトリプシン消化を行い、LC/MS/MSにより測定した。その結果、CK2及びPKAの相互作用タンパク質として、それぞれ574種、518種のタンパク質が同定された。さらに、HEK293T細胞にCX-4945またはForskolinを施した後、細胞を回収し、タンパク質抽出、トリプシン消化、リン酸化ペプチド濃縮、およびTMT標識を行った後、LC/MS/MSによりリン酸化ペプチドを定量した。上記の、BioIDとin vivoリン酸化プロファイリング及びモチーフ配列評価の三つのフィルターにより、それぞれ約40種のCK2基質候補とPKA基質候補を抽出することに成功した。当初の計画通りに進行しており、おおむね期待通りの結果が得られているため。前年度に引き続き(1)キナーゼ阻害薬ライブラリーを用いた生理的基質大規模同定、を行う。(2)キナーゼsiRNAライブラリーを用いた生理的基質大規模同定にかえて、Bio-IDを用いたキナーゼと相互作用する基質候補タンパク質の同定を行う。また(3)外部シグナルを用いたパスウェイ毎の生理的基質大規模同定も行い、(4)キナーゼー生理的基質情報に基づくパスウェイ解析ソフトウェアの開発を行う。(4)については、タンパク質相互作用情報に加えて、細胞内局在化情報なども付加した手法の開発を行う。さらに、バリデーションのため、細胞生物学的な検証実験も行う。これらのパスウェイにはすべてリン酸化シグナルが関わっている。本年度は(1)に取り組み、キナーゼの生理的基質大規模同定法として、安定同位体標識と組換えキナーゼを用いたin vitroキナーゼ反応を、キナーゼ阻害試料に対して施すことにより、マススペクトル上で内在性リン酸化部位と区別する手法(isotope tagging motif-targeting法, iMOT法)を検討した。モデル実験として、CK2阻害薬を用いた。キナーゼ反応を行わなかった場合(すなわち通常の定量的リン酸化プロテオーム解析)、2090リン酸化ペプチドが同定され、そのうち、キナーゼ阻害により、リン酸化シグナルが2倍以上減少したものは93種であった。一方CK2によるキナーゼ反応を行った場合、1013種の18Oを含むリン酸化ペプチドが同定され、そのうちリン酸化シグナルが2倍以上増加したのは550種であった。これら550種のリン酸化ペプチドにはすべて内在性リン酸化ペプチドペアが存在しており、CK2の生理的基質同定がわずか2時間弱のLC/MS/MS測定で可能となった。当初の計画通りに進行している。

さらに、HEK293T細胞にCX-4945またはForskolinを施した後、細胞を回収し、タンパク質抽出、トリプシン消化、リン酸化ペプチド濃縮、およびTMT標識を行った後、LC/MS/MSによりリン酸化ペプチドを定量した。上記の、BioIDとin vivoリン酸化プロファイリング及びモチーフ配列評価の三つのフィルターにより、それぞれ約40種のCK2基質候補とPKA基質候補を抽出することに成功した。当初の計画通りに進行しており、おおむね期待通りの結果が得られているため。siRNA実験の代わりにCRISPR-CAS9の系の検討を開始した。また細胞内でのキナーゼー基質間相互作用をとらえるため、BioIDの系の立ち上げを開始した。前年度に引き続き(1)キナーゼ阻害薬ライブラリーを用いた生理的基質大規模同定、を行う。(2)キナーゼsiRNAライブラリーを用いた生理的基質大規模同定にかえて、Bio-IDを用いたキナーゼと相互作用する基質候補タンパク質の同定を行う。また(3)外部シグナルを用いたパスウェイ毎の生理的基質大規模同定も行い、(4)キナーゼー生理的基質情報に基づくパスウェイ解析ソフトウェアの開発を行う。(4)については、タンパク質相互作用情報に加えて、細胞内局在化情報なども付加した手法の開発を行う。さらに、バリデーションのため、細胞生物学的な検証実験も行う。
食塩を主題とした科学知識の主体的体系化を促す探求型化学実験教材の開発とWeb化

本研究課題では,"食塩水からの水の蒸発に伴う食塩結晶析出"を中心主題とした物質理解の為の新しい探究型実験教材の開発をおこなった。「食塩(塩化ナトリウム)の水への溶解現象」の本質の理解には種々の科学知識が必要である事を明示し,学習者が自らの知識体系を探究的に構築できる新規の実験教材開発を行なった。さらに,この実験教材を動画化することで,自然科学の階層的知識体系を可視化することを試みた。"食塩水滴からの水の蒸発に伴う食塩結晶析出"を中心主題とした物質理解の為の新しい探求型化学実験教材の開発・実践とそのWeb化を行う。上記主題の本質の理解には種々の科学知識が必要である事を明示し,学習者が自らの知識体系を探求的に構築できる新規実験教材を開発する。小中学校理科で「物質の溶解」を学ぶ単元では,主に飽和食塩水からの結晶析出を扱っているが,結晶が析出する過程をリアルタイムで観察・記録することはほとんど行われていない。しかし,児童・生徒にとって興味が湧くのは,むしろこの動的過程であると思われる。そこで本研究は,食塩水滴から水が蒸発し結晶が析出する際の結晶数の時間変化ならびに結晶成長速度の測定が可能なシステムにより,系の湿度と温度,さらに食塩水滴の厚みを制御しながら結晶析出過程を調べることが可能な教材を開発することを目的としておこなった。種々の濃度の食塩水38μlを,デジタルピペットを用いて洗浄済みのスライドガラス上に滴下した。このスライドガラスの水滴が接触する円形部分以外を疎水化することで,食塩水滴の厚みの制御に成功した。この水滴から水が蒸発し結晶が析出する様子を,デジタルビデオカメラを取り付けた実体顕微鏡で動画として撮影し,結晶数の時間変化と結晶成長速度を測定した。装置は,金属フレームと透明ビニルシートから自作した収納ラックに収め,系を開放する事なく,スライドガラス上に食塩水滴を滴下できるものとした。系内の湿度は,加湿器およびシリカゲルを用いてある程度制御することに成功した。ヒーターとサーミスタを用いて系の温度制御にも成功した。上記は,食塩水滴全体を撮影するシステムであるが,CCDカメラつき顕微鏡を用いて,食塩水滴の一部分に注目し1個の食塩結晶にフォーカスしてその成長の様子を動画化することにも成功した。さらに,次年度の研究の予備的検討として,飽和に対して97%の濃度の食塩水滴から水が蒸発する際の結晶析出挙動に対して,湿度と食塩水滴の厚さが与える影響を本システムにより調べた。ここで,結果に影響を与える他の因子はできるだけ一定に維持した。その結果,本実験教材は,結晶析出の本質を理解できる教材となり得ることがわかった。そこで本研究は,スライド硝子上の食塩水滴から水が蒸発し結晶が析出する際の結晶数の時間変化ならびに結晶成長速度の測定が可能な,ビデオカメラ装着実体顕微鏡を含む準閉鎖系によるシステムにより,系の湿度と温度,さらに食塩水滴の厚み(接触角)を制御しながら結晶析出過程を調べることが可能な教材を開発することを目的としておこなった。昨年度はこのシステムの開発を行ったが,今年度はそれに引き続き,結晶析出・成長の動的過程に対して湿度並びに食塩水滴接触角が与える影響を本システムを用いて調べた。ここでは,溶液の過飽和度と結晶核析出数並びに結晶成長速度との関係について考察した。結晶析出数の時間変化については,湿度が低ければ低いほど,また食塩水滴接触角が小さければ小さいほど,同時間での結晶析出数が多くなる明確な傾向を観測した。結晶析出の駆動力は,溶液中のNaC1および結晶中のNaC1の化学ポテンシャルの差で決まるが,これは,食塩水の過飽和度が大きいほど大きくなる。低湿度および食塩水の低接触角条件では,時間経過に伴い過飽和度が急激に大きくなるため析出結晶数が多くなることが考察された。一方,結晶成長速度には,湿度および接触角の影響は明確には見られなかった。これは,低湿度並びに食塩水の低接触角条件下では,結晶核が多数析出した結果,各々の結晶成長に必要な塩化ナトリウムを次第に互いに奪い合うようになるためと推測された。これらの実績については,現在,論文投稿の準備中である。また,これら内容を理解するための演示実験の開発とWeb化にも着手し,21年度も引き続き研究の継続中である。"食塩水滴からの水の蒸発に伴う食塩結晶析出"を中心主題とした物質理解の為の新しい探求型化学実験教材の開発・実践とそのWeb化を行うことが本研究の目的である。

18年度の「結晶析出に影響を与える因子の制御法の開発」, 19年度の「これら因子のうち注目する因子以外の因子は固定し,注目する因子の値を変えた場合の食塩析出過程に対する影響の調査」の成果のもと,本年度は,主に,(1)この主題理解の為の基礎的・周辺的知識の演示実験教材の開発と動画化,(2)結晶析出過程のデジタル動画化,を行った。(1)初めに,本主題を理解する為に必要な科学知識の明示とそのコンセプトマップ化を行った。このコンセプトマップは,以下の内容を配置し構造化している。(1)質量保存則に関する内容(水+食塩の質量は溶解前後で変化しない),(2)食塩の構成元素に関する内容(食塩はナトリウムと塩素からできている), (3)塩化ナトリウムの結合に関する内容(イオン結合),(4)水分子の分極に関する内容,(5)原子の内部構造に関する内容,(6)溶液の飽和の原因に関する内容(化学変化とエントロピー変化), (7)電磁波に関する内容,(8)再結晶に関する内容である。次に, (6)を除くすべてについての演示実験を開発し,その動画化をおこなった。(2)顕微鏡とハイビジョンデジタルビデオカメラを用いて,食塩水滴からの水の蒸発に伴う食塩結晶析出過程の動画化を行った。この際,温度一定の下,食塩水滴の表面積と湿度を色々な値に制御する工夫を施し,結晶析出過程に食塩水滴の表面積と湿度が与える影響を"食塩水滴中の過飽和度"をキーワードとして考察できるようにした。その上で,実験ではどうしても制御できない因子もあることも示した。昨年度までに,食塩水滴からの水の蒸発による食塩結晶析出過程の理解に必要な基礎的知識についての演示実験の開発と動画化をほぼ終えることができたが,なぜ食塩が水に溶解するのかを理解するための演示実験の開発と動画化が課題として残っていた。本年度は,「化学反応とエネルギー変化」等の観点からこの課題ゐ教材化をおこなった。この観点は何れも微視的視点を必要とするが,はじめから微視的視点を持ち込むことはこれらの内容の理解にとって逆に障害になる恐れがある。したがって,私たちの感覚で認識可能な巨視的視点に基づく力学系のエネルギー変換(重力場における位置エネルギー→運動エネルギー→熱)から出発し,これを分子系に対するアナロジー(分子中の原子間の結合距離の上昇(結合の切断)→位置エネルギーの増加→吸熱,原子間の結合の形成→位置エネルギーの低下→発熱)として使用することで,微視的視点での「化学反応におけるエネルギー変化」の理解への橋渡しとするような実験教材を開発した。具体的には,状態変化(アセトンの減圧沸騰・酢酸ナトリウム三水和物過冷却液体の凝固)化学反応(塩化水素とアシモニアの反応による塩化アンモニウム生成)に伴う発熱・吸熱の演示実験を開発し動画化したのち,ここでの発熱・吸熱の原因を理解するためのシミュレーション教材を開発した。さらに,これまでに撮影した実験映像の動画の体系的教材化をおこなった。現在,これらの成果をまとめて論文として準備中である。
日本の流通変革の経済効果に関する理論的・実証的研究

1990年代以降、日本の流通変革は、流通機能・活動の垂直・水平レベルの統合と分離を伴うかたちで進行しており、流通構造、企業間関係の急激な変化を導いている。その背景にある要因はなにか。そうした変化は企業の経営効率性とマクロ的に見た流通効率性にどのような影響を与えているのだろうか。本研究では、「水平レベルの集約化」(小売企業の水平統合の経済効果)、「垂直レベルの短絡化」(流通機能の垂直統合と分離)、「流通チャネルのオープン化」(業種別縦割型の流通チャネルの解消とフルライン化の動き)、「意思決定の統合的調製」(ECRとSCM)の4点に焦点を絞って日本の流通変革の経済効果について研究を進めた。研究実績は、(1)流通機能・活動の垂直・水平レベルの統合と分離に関する分析、(2)流通の補完的な業務の互換性に関する分析、(3)フランチャイズ契約の最適構造に関す多分析、(4)日本の流通変革:卸売段階の統合化の動向に関する実態と理論分析、(5)市場の組織構造の変化と競争政策の分析、の5つにまとめられる。日本の流通システム変革は,流通機能・活動の垂直・水平レベルの統合と分離を伴うかたちで進行しており,それが企業間関係ならびに流通構造の急激な変化を導いているが,それは個別企業の経営効率性とマクロ的に見た流通効率性にどのような影響をあたえているのだろうか?本研究は,この点への理論的・実証的解明を目的としており,1990年代以降,最近の日本の流通システム変革を理論的・実証的に総括する研究の一環をなすものである.本年度の研究として,まず,(1)「水平レベルの集約化」(企業間の水平統合の経済効果),(2)「垂直レベルの短絡化」(流通機能の統合と分離の経済性),(3)流通チャネルの「オープン化」(流通チャネルの競争分析),(4)「意思決定の統合的調整」(リンケージ効果とブロケージ効果)に関する既存研究の整理・展望をおこなった。第2に,流通経済研究所,セゾン総合研究所,経済産業省,公正取引委員会などから関係報告書の入手,担当者からのヒアリング,メーカーや流通業者へのヒアリングによって,上記4点に焦点を絞った実態調査をおこなった。研究実績は、(1)流通機能・活動の垂直・水平レベルの統合と分離に関する分析、(2)流通の補完的な業務の互換性に関する分析、(3)フランチャイズ契約の最適構造に関する分析、(4)日本の流通変革:卸売段階の統合化の動向に関する実態と理論分析、(5)市場の組織構造の変化と競争政策の分析、の5つにまとめられる。
モジュラー型自己組織化マップを用いた自律型水中ロボットの行動システムの開発

1年目の計画では、1自由度に関してmnSOMを用いた水中ロボットの運動の同定と制御システムの開発を行った.動特性の異なる運動時系列をリカレント型ニューラルネットワーク(RNN)型mnSOMを採用してシミュレーションデータを学習する事で,同時に複数の動特性を表現したRNNを得るとともに,入出力時系列間の関係を学習する事が出来た(フォワードモデル).同時に,フォワードモデル内に2つの学習した入出力時系列群の中間状態を表現したネットワークを獲得する事も出来た.フォワードモデルに対応した制御器をフォワードモデルの出力を用いて,フィードバック系のニューラルネットワークモデルとして,コントローラモデルを作成した.獲得したフォワードモデルとコントローラマップを統合した制御手法を自律型水中ロボット"Twin-Burger"を用いてその有効性を確認した.現在,確立された制御システムなどと比較検討を行っている.また,様々な水中ロボットに適応して汎用性を確かめる事が今後の課題である.以上の結果から,研究課題に対して進展があり目標とする水中ロボットへの搭載という課題は達成する事が出来た.残された課題に関して,次の研究機関で引き続き研究を進める予定である.1年目の計画では、1自由度に関してmnSOMを用いた水中ロボットの運動の同定と制御システムの開発を行った.動特性の異なる運動時系列をリカレント型ニューラルネットワーク(RNN)型mnSOMを採用してシミュレーションデータを学習する事で,同時に複数の動特性を表現したRNNを得るとともに,入出力時系列間の関係を学習する事が出来た(フォワードモデル).同時に,フォワードモデル内に2つの学習した入出力時系列群の中間状態を表現したネットワークを獲得する事も出来た.フォワードモデルに対応した制御器をフォワードモデルの出力を用いて,フィードバック系のニューラルネットワークモデルとして,コントローラモデルを作成した.獲得したフォワードモデルとコントローラマップを統合した制御手法を自律型水中ロボット"Twin-Burger"を用いてその有効性を確認した.現在,確立された制御システムなどと比較検討を行っている.また,様々な水中ロボットに適応して汎用性を確かめる事が今後の課題である.以上の結果から,研究課題に対して進展があり目標とする水中ロボットへの搭載という課題は達成する事が出来た.残された課題に関して,次の研究機関で引き続き研究を進める予定である.
水和を考慮したタンパク質の変性と他分子との相互作用に関する研究

タンパク質の熱に対する安定性やタンパク質と他の分子(基質やDNAや糖)との相互作用に関する理論的研究は、従来真空中でのみ議論されてきたが、タンパク質の水和を考慮することによって実験値と適合する値を理論的に計算できることを示してきた。即ち方法論として、タンパク質の自由エネルギ-の温度移依性をどんな実験が解っているかに応じて、次の3種類の新しい方法で予測できることを見つけ出した。A、X線によるタンパク質の立体構造とある温度での転移エンタルピ-の実験値を入力として使用する。B.X線によるタンパク質の立体構造のみを入力として使用する。この計算の中の真空中のエネルギ-の定数はタンパク質の熱変性の実験値より決定したが、さらに精度よく決定するためには、いろいろなタンパク質の熱変性実験が不可欠である。C.タンパク質を構成しているアミノ酸残基の個数のみを入力として使用する。この方法は実験的にはタンパク質のアミノ酸分析だけを行えばよいので、最も簡単で画期的な方法である。これらのタンパク質の熱変性の問題は、タンパク質と他分子との相互作用に対しても同様に適用される。即ちタンパク質の生状態がタンパク質と他分子が結合した状態に対応し、ランダム状態が両者が離れた状態に対応する。真空中の議論では両者が結合した時に生ずる実験的なエントロピ-の増加を説明できないが、水和を考慮することによって説明が可能になった。今後は水和エネルギ-のパラメ-タ-の決定、タンパク質の熱変性実験の予測、タンパク質と基質、DNA、糖等との相互作用の計算及び実験を行う。
新規光増感剤ポルフィリン誘導体によるDNA損傷機構の解明と光線力学療法への応用

光線力学療法(PDT)は、腫瘍組織に集積した光増感剤が励起光照射により活性酸素生成などを介してがん細胞死を引き起こす新しいがん治療法である。臨床ではデルタアミノレブリン酸(ALA)を用いたPDTが行われている。ALAは生体内縮合反応によりプロトポルフィリン(PP)に代謝され、光増感作用により抗腫瘍作用をもたらす。我々は、これまでポルフィリン誘導体(ポリカチオンポルフィリン誘導体;TMPyP)が一重項酸素を生成してHL-60細胞にアポトーシスを引き起こすことを明らかにした。本年度はHL-60を用いてTMPyPとALA由来PPの細胞膜透過性について、昨年度よりも生体内環境に近い条件で詳細な比較検討を行った。その結果、TMPyPは培地中においても核への集積性を示し、ALA由来PPよりも短時間で細胞に取り込まれた。さらに、TMPyPはALAよりも短時間でアポトーシスを誘導した。以上の結果から、TMPyPは実際に臨床で使用されているALAと同様に有用な光増感剤となることが期待され、今後さらにTMPyPによる腫瘍細胞死の分子機構の解析について検討を進める必要がある。またPPは、ferrochelataseによりFe(II)を取り込んでヘムとなり光増感作用がなくなるため、抗腫瘍効果を上げるためにはferrochelataseを抑制して光増感作用を保持することが重要である。ferrochelataseの抑制因子として一酸化窒素(NO)があり、腫瘍形成部位ではNO合成酵素の発現が増加することが多いことから、NO発生の指標でありDNA損傷塩基の薪規バイオマーカーである8-ニトログアニンを定量した。その結果、光増感剤ポルフィリン誘導体によるDNA損傷の腫瘍特異性にNOが関与している可能性が示唆され、腫瘍特異性について今後の詳細な硯究の必要性が明らかとなった。PDTは生体への侵襲が少なく、高齢者など全身麻酔が安全にかけられない患者に有効である。ポルフィリン類は腫瘍細胞に選択的に取り込まれることから、正常組織に対する毒性を抑えて治療することが可能となる。本年度は、前骨髄性白血病細胞HL-60における各種ポルフィリン誘導体(ポリカチオンポルフィリン誘導体TMPyP、内因性プロトポルフィリン(PP)、デルタアミノレブリン酸(ALA))のDNA損傷性とその活性種、アポトーシス誘導能、核への集積性等の検討を行った。その結果、TMPyPは実際に臨床応用されているALAよりも低濃度でHL-60細胞にアポトーシスを引き起こした。ALAは生体内でPPに代謝されることからTMPyPとPPにおける細胞膜透過性を検討した結果、等張性の緩衝液を用いた時はPPと同程度の細胞膜透過性を示した。また、TMPyPは核への集積性を示したが、ALAおよびPPについては核への集積性は認められなかった。さらに、ヒト癌関連遺伝子のDNA断片を^<32>Pでラベル化し、ポルフィリン類のDNA損傷性を検討した結果、UVA照射下においてTMPyPはPPに比べ低濃度で非常に効率よく全てのグアニン残基を損傷した。電子スピン共鳴装置を用いた結果から、一重項酸素の生成が示唆された。これらの結果から、TMPyPは一重項酸素を生成し、HL-60細胞にアポトーシスを引き起こすことが明らかになった。また、光照射によるがん細胞のアポトーシスにNitric Oxideが関与していることが報告されているので、我々が開発した炎症関連発がんの新規バイオマーカー、8-ニトログアニンの生成についても解析を行っている。
び慢性食道平滑筋腫の分子生物学的解明の試み

び慢性食道平滑筋腫の病因、平滑筋の分化増殖とIV型コラーゲンの関係を分子生物学的に解明することを目標として研究を行ってきた。1.アルポート症候群合併び慢性食道平滑筋腫(DL+AS)患者遺伝子変異解析我々はDL+AS患者においてCOL4A5/COL4A6遺伝子上流17kbに及ぶ欠失を同定し、その詳細な切断点を解析した。その結果、欠失にはトポイソメラーゼI型、II型の関与が考えられた。また、この患者は体細胞モザイクであった。この欠失は既に報告されている症例で最小のものであり、DL+ASの発症機序解明に有力な手がかりになると考えられる。2.アルポート症候群合併び慢性食道平滑筋腫(DL+AS)患者平滑筋腫の免疫組織学的解析上記DL+AS患者の食道平滑筋腫及び腎組織基底膜をIV型コラーゲンα鎖特異的モノクローナル抗体を用いて染色した。α5(IV),α6(IV)鎖は腫瘍組織の大部分において染色されなかった。このことはCOL4A5/COL4A6遺伝子の欠失した平滑筋が優位に増殖した事を意味する。3. IV型コラーゲンα6(IV)鎖(col4a6)ノックアウトマウスの表現型解析col4a6ノックアウトマウスマウスでは生後約1年後においても食道及び他の平滑筋臓器に平滑筋腫は見つかっていない。col4a6遺伝子のみの欠失ではDLが発症しない可能性を示唆している。4. AS+DLモデルマウス作製および解析:ヒトAS+DL患者のCOL4A5/COL4A6遺伝子上流欠失ゲノムクローンのトランスジェニックマウスを作製し、col4a6ノックアウトマウスと掛け合わせる実験を行った。ヒトにみられた表現型が再現できるか注目した。第2イントロン中の第3の遺伝子の存在とそのdeletionによるドミナントネガティブな影響がみられる可能性がある。5.ヒトCOL4A6第2イントロンに存在する遺伝子の検索:イントロン2をカバーするBACコンティグを作製しエキソントラップを行い新規エキソン6つを単離した。これらのクローンを用い、食道等のcDNAライブラリーのスクリーニング・ノザンプロット等を行い発現臓器の検討した。び慢性食道平滑筋腫の病因、平滑筋の分化増殖とIV型コラーゲンの関係を分子生物学的に解明することを目標として研究実施計画に基づき研究を行なってきた。1.アルポート症候群合併び慢性食道平滑筋腫(DL+AS)患者遺伝子変異解析我々はDL+AS患者においてCOL4A5/COL4A6遺伝子の上流17kbに及ぶ欠失を同定し、その詳細な切断点を解析した。2.アルポート症候群合併び慢性食堂平滑筋腫患者平滑筋腫の免疫組織学的解析上記DL+AS患者の食道

平滑筋腫摘出及び腎組織基底膜をIV型コラーゲンα鎖特異的モノクローン抗体を用いて染色した。α5(IV)鎖,α6(IV)鎖は腫瘍組織の大部分において染色されなかった。このことはCOL4A5/COL4A6遺伝子の欠失した平滑筋が優位に増殖したことを意味する。腎臓ではα3(IV)鎖,α4(IV)鎖,α5(IV)鎖,α6(IV)鎖はそれぞれ正常と比較して分節状に染色され、遺伝子の欠失がモザイクであることを支持した。以上項目1,2.の結果はAmerican Journal of Human Genetics (1998)誌に掲載予定である。3.IV型コラーゲンα6鎖(col4a6)ノックアウトマウスの表現型解析及び4.DL+ASモデルマウス作製準備col4a6ノックアウトマウスでは生後約1年後においても食道及び他の平滑筋臓器に平滑筋腫は見つかっていない。COL4A6遺伝子のみの欠失ではDLが発症しない可能性を示唆しているといえる。COL4A5/COL4A6遺伝子col4a6遺伝子第2イントロン欠失あるいはヒトDL患者の欠失部位を元にしたcol4a5/col4a6両遺伝子欠失マウス作製を検討中である。マウス組織におけるIV型コラーゲンα鎖の発現様式を調べる課程で、次のような知見を得た。ヒト膀胱及び子宮平滑筋基底膜の免疫組織化学実験の結果から、我々は平滑筋細胞周囲基底膜にはα1(IV),α2(IV),α5(IV),α6(IV)のα鎖が発現すると考えていた。消化管の平滑筋における各α鎖発現を調べたところ、マウス胃底部ではこの発現様式を示したものの、マウス胃幽門部側以下、小腸、大腸の平滑筋にはα1(IV),α2(IV)の発現しかみられなかった。血管においても、一部(大動脈など)の平滑筋にのみα5(IV),α6(IV)鎖が発現している結果となった。これらの結果を総括して考えると、物理的圧力または張力がかかる管状組織の平滑筋基底膜における特徴的なα5(IV),α6(IV)鎖の発現はその機能に関係していると推測できる。この結果はHistchem,and Cell Biol.誌(1998,110,359-366.)に掲載された。ヒトAS+DL患者のCOL4A5/COL4A6遺伝子上流欠失ゲノムクローンのトランスジェニックマウスを作製し、co14a6ノックアウトマウスと掛け合わせる実験を行った。ヒトにみられた表現型が再現できるか注目した。第2イントロン中の第3の遺伝子の存在とそのdeletionによるドミナントネガティブな影響がみられる可能性がある。ヒトCOL4A6第2イントロンに存在する遺伝子の検索イントロン2をカバーするBACコンティグを作製しエキソントラップを行い新規エキソン6つを単離した。これらのクローンを用い、食道等のcDNAライブラリーのスクリーニング・ノザンブロット等を行い発現臓器の検討した。
古代・中世王朝物語の研究

古代から中世の過渡期にあたる院政期は、歴史上の転換期であると同時に、物語史においても転換期を迎えたといえる。この時代に『源氏物語』が古典として扱われはじめ、物語が改作されるようになり、『無名草子』のような物語評論がなされたことは、物語史を考える上で看過できない重要な問題である。平成17年度執筆予定の「院政期物語論」と題する博士論文では、院政期に誕生した現存物語、『今とりかへばや』『有明けの別れ』『松浦宮物語』の三作品の読解を中心に、古代の王朝物語や近年精微になりつつある中世王朝物語を柔軟に展望しつつ、その位相を明らかにしたいと考えている。<隠れ蓑>とは、着用すると姿が見えなくなるという空想上の宝物であり、この<隠れ蓑>による隠形のモチーフは院政期において盛んにもてはやされ、『有明けの別れ』『松浦宮物語』にも天女の隠形の術として取り込まれる。その上で院政期物語は、『今とりかへばや』『有明けの別れ』の異性装や、『松浦宮物語』の分身の術といった、更なる変身の奇想をも生み出すのである。博士論文の中間報告書は今年度末に提出し、無事受理された。今年度発表の論文「鬼と隠れ蓑」や、中世文学会平成16年度春季大会で口頭発表をした「神仏の声を聞く-<隠れ蓑>から<ささやき竹>へ-」なども、博士論文の一部として扱うつもりである。他に『源氏物語』朝顔巻の鑑賞と基礎知識や第二部の光源氏の人物像に関する論文の執筆、また院政期の「永久四年六条宰相家歌合」の注釈作業にも参加した。こうした経験は、将来的に院政期物語が物語史に類をみない特異な一時代を築いたことについて多角的に論証し、『源氏物語』一辺倒の現在の物語研究に一石を投じる上で、大きな蓄積となった。古代からの中世の過渡期にあたる院政期は、歴史の転換期であると同時に、物語史においても転換期を迎えたといえる。この時代に『源氏物語』が聖典化され、物語が改作されるようになり、『無名草子』のような物語評論書が書かれたことは、物語史を考える上で看過できない重要な問題である。「隠れ蓑」とは、透明人間のように姿を隠すことのできる空想上の宝物であるが、この<隠れ蓑>モチーフは『無名草子』の物語批評において重く扱われていることは注目に価する。そこで<隠れ蓑>をめぐる物語史を展望する前提として、「鬼と隠れ蓑」と題した論文で、隠形という鬼の属性や、鬼と蓑笠との関係、そして鬼の持つ宝物は隠れ蓑・隠れ笠・打出の小槌の三種として広く世間に浸透していったことを論証した。また来年度五月の中世文学会春季大会の口頭発表において、「神仏の声を聞く-<隠れ蓑>から<ささやき竹>へ-」という題目で、<隠れ蓑>の隠形モチーフを導入した物語として、『貝合』や『ささやき竹』について検討する予定である。なお王朝物語研究の最先端であり、後の物語に大きな影響を与えた『源氏物語』の注釈書を手がけることができたのは、王朝物語研究の規範を身に付ける意味で得難い経験である、また、「鴛鴦」「阿弥陀仏」「夢枕」の三本の補助論文を執筆することで、物語内部の世界をより深く学ぶことができた。