hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
臓器移植看護における看護師の倫理的実践の変化－アクションリサーチを用いて－

本研究は、アクションリサーチ(以下AR)によって臓器移植医療の看護場面で生じる倫理的問題に対して、看護師の倫理的実践がどのように変化するかを明らかにした。研究参加者は看護師、レシピエント移植コーディネーター、大学教員の15名であった。実施期間は1年間(平成27年10月平成28年10月)であり、願いの明確化(1回)、実践を語る会(7回)、学習会(2回)を実施した。1回あたりの実施時間は約2時間。実践を語る会の記録とグループインタビューから得られた質的データをWordMiner1.5を用いて分析した。参加者はARが自己実践を見つめ直すきっかけとなり、倫理的実践への認知や行動に変化を示した。本研究の目的は、アクションリサーチによって、臓器移植医療での日常の看護場面で生じる倫理的問題に対して、看護師の倫理的実践がどのような過程を経て変化していくのかを明らかにすることである。本年度は、アクションリサーチの準備段階として、アクションリサーチの進め方について研究者間で統一するために勉強会を開催し、ガイドラインを作成した。ガイドラインでは、1研究者の立つ位置と、アクションリサーチに参加した看護師との関係性を明確にした2データ収集の内容については、研究者らが行った先行研究の結果を参考にしてインタビューガイドを作成した3倫理的問題の基準を基本的には病院組織や社会組織を対象とせずに、看護師の内的変化や倫理的場面での意識や行動の変化、およびその結果として生じる病棟の変化を追うこととした。アクションは、臓器移植看護の倫理的実践に関する学習会や事例検討会(実施した倫理的実践を語る会)であり、ネットインフラを利用するなどして遠隔地の研究者らも参加してお互いに語り合う会を計画した。倫理的問題については、何かおかしいと感じたり、苦悩や戸惑いを感じたりした場面など、対象者が必ずしも倫理的問題とは認識していない場面にも倫理的に検討すべきことは多く、こうした倫理的感受性を育むこともアクションとした。データ収集は、アクションの全プロセス、それらに参加した参加者の個々人の思いや考えを記述した記録、および研究者がどのような働きかけをしたかを記述した記録であり、その準備を行った。本研究の目的は、臓器移植医療における日常の看護場面で生じる倫理的問題に対して、看護師の倫理的実践がどのような過程を経て変化していくのかを、アクションリサーチを用いて明らかにすることである。本年度は、アクションリサーチの対象者をある一定の病棟看護師に限定するのではなく、臓器移植医療に携わっている看護師あるいは移植コーディネーターを対象に、いくつかの施設でアクションリサーチの研究グループメンバーを募集した。9名の看護職が集まり、研究代表者及び研究分担者ら計14名でアクションリサーチを開始した。まず、研究グループメンバーと研究者の立ち位置が同等の立場であることを共通認識した上で、参加者にアクションリサーチについて説明し、研究参加の同意を得た。次に、参加者に研究参加の動機や本研究に求める願いなどについてグループインタビュー形式で情報を提供しあい、アクションリサーチの重要課題である「願いの明確化」を行った。その結果、「臓器移植医療の現場の中で、潜在している倫理的問題に気づく力(倫理的感受性)、その問題に反応する力を向上させ、看護師の倫理的実践力を高めたい。」というグループでの願いが明確化された。各自の願いはそれぞれがノートに記述するようにした。アクションリサーチでは「実践を語る会」と「学習会」を織り交ぜて、毎月1回実施した。実践を語る会では、看護師が臨床の場で悩んだり、ジレンマを感じたりした場面を事例として取り上げ、事例提供者のナラティブを通して看護場面の倫理的問題を見出すように進めていった。そして、実践を語る会や学習会を通して、アクションリサーチ参加者の個々の思いや、疑問、考えをノートに記述するようにした。また、研究者はアクションリサーチでどのような働きかけをしたのかを記述するようにした。個人ノートと実践を語る会での発言をデータとして保存している。研究フィールドを特定して参加者を集めるのが困難であったため、研究開始が出遅れた。対象者選定を数箇所の施設の看護師や移植コーディネーターに拡大して募集する方法に変更したことで参加者が集まり、研究をスタートさせることができた。本研究の目的は、アクションリサーチによって、臓器移植医療での日常の看護場面で生じる倫理的問題に対して、看護師の倫理的実践がどのように変化するのかを明らかにすることである。アクションリサーチは平成27年10月平成28年10月に実施した。実施回数は11回で1回あたり2時間2時間半であった。参加者は看護師、移植コーディネーター、大学教員の15名であり、移植コーディネーター1名と大学教員4名はファシリテーター役を担った。アクションの内容は、願いの明確化(1回)、実践を語る会(7回)、学習会(2回)であり、アクションリサーチ最終日に参加者全員を対象にグループインタビューを実施した。アクションリサーチで最初に行った参加者が述べた倫理的実践に対する願いは、「異なる見方や幅を広げたい」「自分のかかわりに悩み疑問が生じる」「気づける力を身につけたい」「自分の倫理的な対応を客観視できれば」「無関心でいたくない」の5つが抽出された。事例検討会や学習会を通して、参加者は「参加することへのわくわく感」「実践したことをリフレクションでき、考えることが強化された」

「現場に生じている倫理的な問題が何かを考えることが習慣化された」など参加者自身の気持ちの変化とともに、「患者や家族の情報を共有することの重要性」「患者サイドからみた実践の振り返り」「倫理的実践を導くツールを活用することの効果を実感(情報収集の大切さと患者理解の深まり)」「自分の意見を述べることの大切さ」「悩みながら考えること」「聞くことの大切さ」などが見出された。それらは、アクションリサーチを通して、参加者の倫理的実践に対する願いが変化したことを示すものであった。本研究は、アクションリサーチ(以下AR)によって臓器移植医療の看護場面で生じる倫理的問題に対して、看護師の倫理的実践がどのように変化するかを明らかにした。研究参加者は看護師、レシピエント移植コーディネーター、大学教員の15名であった。実施期間は1年間(平成27年10月平成28年10月)であり、願いの明確化(1回)、実践を語る会(7回)、学習会(2回)を実施した。1回あたりの実施時間は約2時間。実践を語る会の記録とグループインタビューから得られた質的データをWordMiner1.5を用いて分析した。参加者はARが自己実践を見つめ直すきっかけとなり、倫理的実践への認知や行動に変化を示した。アクションリサーチのフィールドとして予定していた病棟の研究実施責任者が配置換えとなり、フィールドの交渉がなかなか進まなかったため。アクションリサーチは、現場の看護師の倫理的実践を変えたいという「願い」がなければ実施困難であるため、現在、あらたに研究フィールドを調整中である。研究グループメンバーによるアクションリサーチの研究計画(計画・実践・評価・リフレクション・計画修正)を継続する。10月までアクションリサーチを実施し、10月以降はアクション終了後のデータ収集及びアクションリサーチの全プロセスの記述の分析を実施する。成人看護学アクションリサーチを実施できる病棟との調整と、アクションリサーチに参加できる看護師の募集を実施する。看護師が数人集まれば、作成したアクションリサーチのガイドラインに沿って、研究を実施する予定である。学会発表参加のための旅費を予算化していたが、アクションリサーチの経過が長く研究発表に至らなかったため、学会発表のための旅費を使用しなかった。また、学習会の講師は研究分担者が実施したため謝金を必要としなかった。フィールドとの調整がうまくいかずにアクションリサーチが遅れているために、アクションリサーチに必要な消耗品費および人件費等を使用しなかったために使用額が少なかった。アクションリサーチの分析・まとめのための人件費、学会発表や学会参加の旅費等の使用を予定している。次年度は、アクションリサーチを実施するために、アクションリサーチに必要な消耗品費、会議費、人件費等に使用する予定である。
新しい教材情報システムの要素技術に関する研究

本研究は、主に教材情報システムの要素技術の調査および新しい技術の設計.実現にある。研究開始当初の背景として、現場の変化に対応できない等の問題があった。我々はオープンソース教材情報システムに注目し、現場の要求に柔軟に対応することができるシステムを構築するために、教材情報システムの要素技術について研究した。研究成果として、WEBサーバの実行を止めずに動的変更を実行できる技術、ビデオ閲覧履歴管理システムについて設計、実装を行い簡単な実験を行った。さらに、教材情報システムで要となるデータベースエンジンについて考察を行い、新しいeポートフォリオの構築に関する考察を行った。3年間の研究により、国際会議での発表、雑誌論文での発表を含め17編の関連論文を執筆した。本年度は、最近の教材情報システムに関する文献、資料等を調査し、教材の履歴管理方法についてプロトタイプ作成等を実施した。初期の段階でサーバを構築し、XOOPS、Drupal、Sakai等のフリーソフトウェアを利用し、自由度の高い教材情報システムを導入、調査、分析した。結果として、XOOPS、Sakai上のページの中にビデオ教材となるコンテンツを表示するベージを設け、Flashを用い履歴管理システムのプロトタイプを設計、開発した。データベース管理システムとの連携がまだ不十分な点もあるが、概ねユーザに試験的に使用してもらうことができるシステムとなった。一方で、国際会議、国内のカンファレンスに参加し、これまでの研究成果、プロトタイプについて発表を行った。教材情報システムとしては、以前より研究している有用なツールである出席管理システム等と合わせて報告した。特に、米国(ボストン)で開催されたSakaiカンファレンスにおいては、日本組織であるJa Sakaiの幹事として、本研究の一部を発表し、デモセッションにおいても発表した。昨年度より、Drupalや、既存のコンテンツマネジメントシステム(CMS)等のフリーソフトウェアについて機能向上があり、本研究では、ログイン、ホームページの設置等、基本的部分について利用することができた上に、ホームベージのカスタマイズ、アクセス履歴管理等についてもウェブ上から管理、利用することができた。今後もさらによいCMSの調査、研究も続けていく。システムを停止せずに、教材情報システムのモジュールを変更することが可能となる技術については、Javaによりプロトタイプを開発したが、性能上の問題があり、現在、さらに効率よい技術を調査、研究中である。最近の教材情報システムの機能向上により、モジュールを動的に改変する機能については概ね一般に実現されてきている。特に、PHPやRuby等スクリプト言語による教材情報システム開発が増え、モジュールを動的に改変することが簡単に実現されるようになってきた。そのため、本研究課題では、モジュールを動的に改変する機能に代えて、データベース管理部分に焦点を当て他の教材情報システムとの連携について研究を行うこととした。そのため、上記の論文を発表した。本年度は、最終年度として研究の総括を行うとともに、1)データマイニングを用いた学習者の学習履歴分析、2)教材情報システムにおいて中心となるデータベース周りの改修、3)教材情報システムとeポートフォリオとの関連について研究を行った。さらに、次年度からの継続研究に関する研究計画を作成した。
近代中国（中華民国期）のマスツーリズムに関するメディア社会文化史的研究

本研究は中華民国期の上海を中心に続々と出現した「旅行団体」の記録を対象に、近代中国におけるマスツーリズムの成立展開過程を跡づけ、メディア社会文化史の視点からその歴史的意義を明らかにしようとする基礎的研究である。具体的な成果として、(1)『申報』所載の「中国旅行社」「友声旅行団」「良友全国撮影旅行団」等の旅行社・旅行団体の関連記事目録を作成した。(2)友声旅行団の機関誌『友声』(上海図書館館蔵分の1923年1期37年21巻4期;缺号多数)の記事目録を作成した。1.『良友画報』及び『申報』を対象に中華民国期の団体旅行に関する資料収集を行った。その際、当初計画では『良友画報』『申報索引』を購入して研究を進める予定であったが、利便性を考慮して方針変更し、国内他大学所蔵の資料を利活用する方式に切り換えた。特に『申報』に関しては電子版(データベース)を利用することによって非常に効率的に検索閲覧が可能となり、同紙所載の観光関連記事の目録を作成しながら内容分析を進めている。『良友画報』についても「良友全国撮影旅行団」をはじめとする団体旅行や観光関連記事の目録を作成し内容分析を行った。2.上海図書館及び上海市档案館にて中華民国期の旅行社・旅行団体に関する資料を閲覧収集した。特に「友声旅行団」関係の文献を集中的に収集し、機関誌『友声』は上海図書館館蔵分について記事目録を作成した(1923年1期37年21巻4期;但し欠号多数)。これにより日本では閲覧機会の得られなかった友声旅行団に関する諸資料を入手でき、研究が大きく進展した。また、「中国旅行社」や「新安旅行団」「萍蹤旅行団」「経済旅行社」等に関する資料も併せて収集し、分析を進行中である。3.2014年12月富山大学人文学部で開催された公開シンポジウム「中華圏におけるモダニズムIIー近代中国の都市とリゾート」において「モダン中国・マスツーリズムの出現」と題する研究報告を行った。報告では、中国において1900年代から新式学堂の設立とともに修学の旅が始まり、1920年代に入るやミッション系の宗教団体等を中心に民間組織による団体旅行が登場、さらに30年代以降に新聞雑誌メディアに媒介されたマスツーリズムが盛行していった歴史的展開について近代中国文化史研究の専門家と議論し、ピアレヴューを受けることで今後の研究の方向性と留意点を、より明確につかむことができた。最終年度の主たる成果は、文献調査・実地調査と資料収集、未発見資料の発掘がある。具体的には、前年度に続き『申報』の電子データベースを対象に「友声旅行団」を中心とする中華民国期のマスツーリズムを推進した旅行団体に関する文献調査に加え、夏季休業期間中に上海図書館及び上海市档案館等において前年度の補充調査を実施した。特に、今回新たに台北で文献調査を行うことができたことは大きい。台北では、民国期中国のツーリズムの中核をになった中国旅行社の実質的な親会社である上海商業儲蓄銀行の「行史館」を参観し、情報収集を行うことができた。さらに台湾大学図書館等で文献調査を実施し、その結果、特に中国旅行社の戦後における台湾での活動の展開について従来ベールに包まれたままであった未発見資料を多数発掘することができたことは特筆に値する成果である。こうして収集のなった資料について調査分析を行った結果は、中間報告的に中国文学文化研究者の研究集会にて口頭発表を行った。今後(平成28年度中に)論文にまとめ、著書(共著)として成果発表を行う予定である。研究期間全体を通じての主たる成果としては、(1)『申報』所載の「中国旅行社」「友声旅行団」「良友全国撮影旅行団」等の旅行社・旅行団体の関連記事の目録を作成できたこと、(2)友声旅行団の機関誌『友声』(上海図書館館蔵分の1923年1期37年21巻4期;欠号多数)の記事目録を作成できたことがある。(3)理論的な進展としては、従来ほぼ全く注目されてこなかった「倹徳儲蓄会」の旅行活動の重要性が浮上したことが挙げられる。これは近代的大衆観光の嚆矢とされる英国トマス・クック社にも通じる、倫理道徳と旅行娯楽との一見奇妙な結びつきを示唆する事例であり、今後さらなる調査研究を進め、近代という時代におけるマスツーリズム流行の意味を問い直し、その歴史文化的構造を解明していく予定である。初年度の目標として当初計画では大きく4つ挙げた。(1)『良友画報』の調査、(2)『申報』の調査、(3)上海での「友声旅行団」「中国旅行社」を中心とする旅行社・旅行団体の調査、(4)中間的研究発表の実施である。

以上のうち(1)(3)の文献調査はほぼ予定どおりの進捗状況である。細かく言えば、当初購入を予定していた文献について購入ではなく出張による閲覧調査に方針転換するなどの変更を行ったが、結果的にはむしろ当初計画よりも効率的に調査が進んでいる。但し、上海での資料調査は、当初夏季休暇だけでなく、春期休暇中にも計画していたところ、本務多忙により華東師範大学図書館での調査は実施できなかった。(4)の中間的研究報告も、発表の場は当初計画から変更することになったが、基本的に予定どおり実施できた。観光のメディア社会文化史(東アジア)来年度(平成27年度;2015年度)は本研究課題の最終年度ともなるので、これまでおおむね順調に進展してきた調査研究の継続補強を進めながら、研究成果の取りまとめ、発表を行う。具体的には、初年度に実施できなかった華東師範大学図書館(上海)での調査を実施するとともに、関連資料収集のため北京(国家図書館等)や台北(中央研究院近代史研究所等)での文献調査も実施したい。なお、中華民国期の旅行ガイドブック集成『民國旅遊指南彙刊』が北海道大学附属図書館に架蔵されたため、今後その分析も加えられればと考えている。会計手続(支払処理期日)に関する単純な認識不足により3月上旬に購入した物品の経費の支払が翌月すなわち次年度4月に回ったため。上記の次年度使用額は実際上はすでに購入手続が全て(納品まで)完了しており、4月中に支払まで完了予定。それ以外、次年度(平成27年度;2015年度)の使用計画は基本的に当初計画どおり、主として文献調査(国内/海外旅費)に充当する予定である。
情報統合のための創発開放型情報システムの開発

情報統合のための新しい情報処理パラダイムである創発開放型情報システムの開発を研究目的として研究開発を行い、下記のような主要な研究成果を得た。(1)大規模なデータストリームであるクレジットカード利用情報を対象に、顧客行動のパターンの変化を(不正利用など)を高精度に判別するための確率的情報処理(カーネル法、非線形サポートベクターマシン、ブースティングなど)について実験・検証し、有意な結果を得た.(2)固体触媒開発のように評価に化学的実験が伴う組合わせ最適化問題を解決するための効果的な情報処理方式について研究を行い、多峰性関数最適化や抗体機能における記憶機構など免疫アルゴリズムの有効性を示した.(3)センサデータベースtinyDBにおける協調質問処理方式の開発を行い、質問処理実行時に頻繁に使用されるノード集合をネットワーク内で判断し,自動的に質問処理を効率化させるようなルーティングを行うアルゴリズムを提案した.(4)複雑ネットワークにおけるグラフマイニングとして、P2P上のユーザ間の情報共有と類似度関係の視覚化のために、各ユーザが保持する楽曲のアーティストとその曲数を特徴量とし,ユーザ間の音楽嗜好の関係構造を可視化するグラフ「Mu-line」を提案した.情報統合のための新しい情報処理パラダイムである創発開放型情報システムの開発を研究目的として研究開発を行い、下記のような主要な研究成果を得た。(1)大規模なデータストリームであるクレジットカード利用情報を対象に、顧客行動のパターンの変化を(不正利用など)を高精度に判別するための確率的情報処理(カーネル法、非線形サポートベクターマシン、ブースティングなど)について実験・検証し、有意な結果を得た.(2)固体触媒開発のように評価に化学的実験が伴う組合わせ最適化問題を解決するための効果的な情報処理方式について研究を行い、多峰性関数最適化や抗体機能における記憶機構など免疫アルゴリズムの有効性を示した.(3)センサデータベースtinyDBにおける協調質問処理方式の開発を行い、質問処理実行時に頻繁に使用されるノード集合をネットワーク内で判断し,自動的に質問処理を効率化させるようなルーティングを行うアルゴリズムを提案した.(4)複雑ネットワークにおけるグラフマイニングとして、P2P上のユーザ間の情報共有と類似度関係の視覚化のために、各ユーザが保持する楽曲のアーティストとその曲数を特徴量とし,ユーザ間の音楽嗜好の関係構造を可視化するグラフ「Mu-line」を提案した.情報統合のための新しい情報処理パラダイムである創発開放型情報システムの開発を研究目的としている。初年度(18年度)では課題1,創発による現象マイニング技術の開発、と課題2.協調データマイニングのためのエージェントベース・アプローチ、を主目標に研究を行い、各課題において、次のような研究成果を得た.課題1では、(1)大規模なクレジットカード利用情報を対象に、顧客行動のパターンの変化を(不正利用など)を高精度に判別するためのアルゴリズム(ロジスティック回帰とサポートベクターマシン)について実験・検証し、有意な結果を得た。(2)固体触媒開発のように評価に化学的実験が伴う組合わせ最適化問題を解決するための効果的な情報処理方式について研究を行い、特に触媒反応のように多峰性関数最適化に対する免疫アルゴリズムの有効性を示した.課題2では、(3)センサデータベースtinyDBにおける協調質問処理方式の開発を行い、質問処理実行時に頻繁に使用されるノード集合をネットワーク内で判断し,自動的に質問処理を効率化させるようなルーティングを行うアルゴリズムを提案した.(4)P2Pセンサデータマイニングとして、P2P上のユーザ間の情報共有と類似度関係の視覚化のために、各ユーザが保持する楽曲のアーティストとその曲数を特徴量とし,ユーザ間の音楽嗜好の関係構造を可視化するグラフ「Mu-line」を提案した.情報統合のための新しい情報処理パラダイムである創発開放型情報システムの開発を研究目的としている。初年度(18年度)では課題1.創発による現象マイニング技術の開発、と課題2.協調データマイニングのためのエージェントベース・アプローチ、を主目標に研究を行い、各課題において、次のような研究成果を得た.上記の平成18年度の研究成果を統合して,現象データマイニングとナレッジグリッドのアプローチから環境に対してロバストであり,スケラビリティを保証した創発開放型情報システムのためのナレッジ・グリッド・アーキテクチャを開発した.ナレッジ・グリッド・アーキテクチャをコンピュータ・グリッドやデータ・グリッド,マイニング・グリッドを含んだ知的情報システムのための基盤システムとして,グリッド上に分散協調センサーシステムのための予測モデル型データマイニングシステムを実装した.ナレッジ・グリッド・アーキテクチャは,マイニング・グリッドで抽出したルールやパターンを分散協調学習・ソフトコンピューティングにより抽象化し,抽象化知識共有から知識発見を行えるアーキテクチャである.抽象化には,それぞれのデータ,ルール,パターンを元にデータベースを構築し,データから現象への逆問題アプローチを用いることで,共通知識(抽象化知識)の枠組みの抽出(創発開放型)を試みた.
CTガイド分子標的疼痛治療の開発:高周波熱凝固と栄養因子修飾による可塑性制御

新しいCT透視法は、穿刺をしながらその場でほぼリアルタイムにCT画像を得ることができるため、従来のものよりはるかに迅速で安全性の高い神経ブロックをおこなえると考えられた。1回の透視で前後含め3スライスを同時に得ることができる新しいCT透視装置の導入により、ブロック針の刺入ガイドがさらに精度を上げて、ブロックがより速やかに行われるようになった。これに加えて、最新のCT装置では穿刺後にscanするとわずか数分で3Dの画像が得られるため、ブロック針の穿刺状況を短時間で立体的に評価することができるようになった。腰部交感神経ブロックの症例から得られた画像を解析し、大動脈(Ao)や下大静脈(IVC)との位置関係および危険症例ついて解析を試みた。下顎神経ブロックでは,ガントリー傾斜をつけることにより,頭蓋底における卵円孔の形状が確実に把握でき,外側アプローチにても卵円孔直下に下顎神経をより正確に穿刺する方法を工夫した.その他,陰部神経ブロック、梨状筋ブロック,仙骨脊髄神経後枝高周波熱凝固ブロックなどにもこの技法を応用した.新しいCT透視法は、穿刺をしながらその場でほぼリアルタイムにCT画像を得ることができるため、従来のものよりはるかに迅速で安全性の高い神経ブロックをおこなえると考えられた。下顎神経ブロックでは,ガントリー傾斜をつけることにより,頭蓋底における卵円孔の形状が確実に把握でき,外側アプローチにても卵円孔直下に下顎神経をより正確に穿刺する方法を工夫した.その他,陰部神経ブロック、梨状筋ブロック,仙骨脊髄神経後枝高周波熱凝固ブロックなどにもこの技法を応用した.近年、侵襲的医療の安全性に対する社会的要求はきわめて強くなっているが、神経ブロックを多用するペインクリニックの分野でも例外ではない。CT透視法(CT fluoroscopy)による経皮的針穿刺法は飛躍的に進歩してきている。われわれは超音波では描出できないような深部へ穿刺し神経破壊薬や高周波熱凝固法を用いるような侵襲性の高い神経ブロック法においてCT透視ガイドを駆使して施行する方法を開発・工夫してきた。新しいCT透視法は、穿刺をしながらその場でほぼリアルタイムにCT画像を得ることができるため、従来のものよりはるかに迅速で安全性の高い神経ブロックをおこなえると考えている。当施設では、平成15年9月よりCT透視ガイド下の神経ブロックを施行し始め、平成21年11月までの主な神経ブロックののべ施行回数は以下のとおりである。腰部交感神経節ブロック91例、三叉神経節ブロック25例、下顎神経ブロック14例、脊髄神経後枝内側枝ブロック19例、梨状筋ブロック4例、仙腸関節ブロック3例、内臓神経ブロック2例、胸部交感神経節ブロック2例、神経根ブロック2例、陰部神経ブロック1例である。また、平成16年2月より導入した、1回の透視で前後含め3スライスを同時に得ることができる新しいCT透視装置(multi-slice CT fluoroscopy)の導入により、ブロック針の刺入ガイドがさらに精度を上げて、神経ブロックがより速やかに行われるようになった。これに加えて、最新のCT装置では穿刺後にscanすると迅速に3Dの画像が得られるため、ブロック針の穿刺状況を立体的に評価することができるようになった。今回これまで施行したCT透視ガイド下神経ブロックの現状や問題点などについて、豊富な画像とともに詳細に雑誌論文、学会発表にて報告した。【背景】腰部交感神経節ブロックは、血行再建が適応とならない下肢の血流障害や交感神経が関与すると考えられるある種の慢性疹痛疾患の治療手段として用いられてきた。従来の方法ではX線透視下に施行されていたが、解剖学的変異により施行困難な症例も存在する。近年、リアルタイム・イメージを得られるCT透視下による神経ブロック法が開発され、これにより本ブロック手技をより安全かつ容易にしている。これまで本ブロックの穿刺ルートについてCT画像による詳細な解剖学的検討はほとんどなされていない。以前われわれはCT画像を解析し、主に腎臓穿刺の潜在的危険性について検討したが、今回はCT透視下に施行された本ブロックの症例から得られた画像を解析し、大動脈(Ao)や下大静脈(IVC)との位置関係および危険症例ついて解析を試みた。【方法】2006年4月より2010年3月までの44ヶ月間に施行された36症例を対象とした。それぞれL2・L3レベルの椎体の中央を含むCT画像で、ブロック針の標的からAo・IVCまでの距離を計測し・さらにAo・IVCの位置から危険領域の存在する割合を調べた。【結果】標的からIVC(右側ブロック)までの距離(mm)は、L2レベルでは10.4±3.9、L3レベルでは、7.1±3.0であった。

標的からAo(左側ブロック)までの距離は、L2レベルで12.0±4.9、L3レベルで12.8±4.7であり、L3レベルで目標からIVCまでの距離が有意に近かった。L3レベルの右側では、30%の症例でIVCが危険領域に存在した。【結論】従来の記述で推奨される手法では穿刺に危険が伴う症例もあることが示唆された。とくにL3レベル右側のブロックについては注意が必要であることが示された。CT画像により得られたこれらのデータは、腰部交感神経節ブロックを安全に施行する上で重要なものであると考えられた。新しいCT透視法は、穿刺をしながらその場でほぼリアルタイムにCT画像を得ることができるため、従来のものよりはるかに迅速で安全性の高い神経ブロックをおこなえると考えられた。1回の透視で前後含め3スライスを同時に得ることができる新しいCT透視装置の導入により、ブロック針の刺入ガイドがさらに精度を上げて、ブロックがより速やかに行われるようになった。これに加えて、最新のCT装置では穿刺後にscanするとわずか数分で3Dの画像が得られるため、ブロック針の穿刺状況を短時間で立体的に評価することができるようになった。腰部交感神経ブロックの症例から得られた画像を解析し、大動脈(Ao)や下大静脈(IVC)との位置関係および危険症例ついて解析を試みた。下顎神経ブロックでは,ガントリー傾斜をつけることにより,頭蓋底における卵円孔の形状が確実に把握でき,外側アプローチにても卵円孔直下に下顎神経をより正確に穿刺する方法を工夫した.その他,陰部神経ブロック、梨状筋ブロック,仙骨脊髄神経後枝高周波熱凝固ブロックなどにもこの技法を応用した.十分な解析のためのmaterialが不足しているため.有効な基礎実験データを集積できていない.24年度が最終年度であるため、記入しない。解剖学的解析に必要な治療対象の症例に対して,十分な評価や緻密な計画をたてる.CT画像のデータの解析方法について十分に検討する.基礎実験のために,十分な安定した時間を確保する.ラットの疼痛モデルの作成に習熟する.ラット疼痛モデルに対する高周波熱凝固の当て方を工夫する.24年度が最終年度であるため、記入しない。
プロテアーゼと質量分析を組み合わせた結晶化の為のコア構造探索システムの確立

蛋白質複合体の効率よい結晶化を目指す為には、結晶化しやすいコア構造を見出すことが早道であることは言うまでもない。コア構造を蛋白質の一次構造などからアプリオリに見出すことは困難であるが、幸いにしてプロテアーゼによる限定分解で分解されやすい部位と結晶化を妨げるフレキシブルなドメインとの間、及び分解を受けない部位と結晶化し易いコア構造との間には良い相関が見られる。本研究においては、プロテアーゼ処理とコア構造の質量分析による迅速同定法を組み合わせた、結晶化し易いコア構造の組織的探索法の開発を目的とする。本年度は、質量分析法、特にMALDI-TOFを用いた、蛋白質の迅速同定法の開発を行った。プロテアーゼ処理により得られた大量の試料の同定を行うためには、多くの試料を自動処理し、自動測定、自動解析を行うシステムが必要である。これらステップをロボットにより自動化し、測定により得られた分子量データを用いた断片の同定をコンピューター上でシークエンス情報と対応させるシステムを確立した。これらのシステムを用い、MARCKS蛋白質とカルモジュリン複合体、及び、NAP-22蛋白質とカルモジュリン複合体の結晶化に適した試料作成に応用し、結晶化に成功した。これらについては既にSpring-8の放射光を用いた構造解析が進行中である。現在、使用するプロテアーゼの種類、量、反応時間を自動制御し、効率よくコア構造を探索するシステムをロボットを用いて確立している。コア構造を蛋白質の一時構造などからアプリオリを見出すことは困難であるが、幸いにしてプロテアーゼによる限定分解で分解されやすい部位と結晶化を妨げるフレキシブルなドメインとの間、及び分解を受けない部位と結晶化し易いコア構造との間には良い相関が見られる。本研究においては、プロテアーゼ処理とコア構造の質量分析による迅速同定法を組み合わせた、結晶化しやすいコア構造の組織的探索法の開発を目的とする。プロテアーゼ処理により得られた大量の試料の同定を行うためには、多くの試料を脱塩し、さらにMALDI-TOFのターゲットにマトリックスと混合、塗布する必要がある。このステップをロボットにより自動化し、さらに測定後の得られた分子量データを用いた断片の同定をコンピューター上でシークエンス情報とたい自動的に行うシステムを確立した。分子量1万を超える断片の場合には、分子量から一義的に同定することが不可能な場合があるが、この場合にはエレクトロスプレー質量分析計を用いたタンデムマス法を併用することで、同定をより確実なものとした。今後は、使用するプロテアーゼの種類、量、反応時間を自動制御し、効率よくコア構造を探索するシステムの確立を目指す。
化学反応経路網を理解するための新しい数学技法の開発

本研究は,量子化学計算で得られた反応経路網のデータやポテンシャル曲面の構造を理解するための,数学的な裏付けのある手法を構築することを目標とするものである.一般的に量子化学計算で得られるデータは分子構造を記述する高次元空間の座標で書かれており,反応について理解するためには,何らかの方法で低次元空間に落としこむ必要がある.しかし,そのための数学的な理論はまだ未発達であり,化学者が経験や知識に基づき手動で次元縮約を行なってきた.また,一般的な手法では,ポテンシャル曲面の構造を少数の着目する変数で記述し,着目していない方向はポテンシャルの最小値を取るなどの縮約を行なっているが,非線形性が強い場合にはこの方法で正しい構造は得られない.そこで本研究では,同変モース理論やコンレイ指数理論等のトポロジーの道具,それらを計算機上に実装する計算トポロジー理論,さらにグラフの構造保存埋め込み理論などを組み合わせることにより,化学反応経路網を視覚的にも,幾何学的にもより正しく理解する技法を構築する.本年度は,特に量子化学計算の結果得られた高次元の配位空間におけるポテンシャルエネルギーの値を,低次元で可視化する技法についての研究を進めた.申請段階で得られた予備的な研究と同様に,主な道具として多次元尺度法を用いるが,いったん多次元尺度法により作成した反応経路地図を用いて,軌道を時間的に追跡する技法を新規に開発した.まだ精度に問題はあるが,従来の技法よりは自然な可視化が可能になった.また,位相幾何学的な方向では,配位空間上でモース理論・コンレイ指数理論を展開するにあたって困難となる,特異点に由来する現象の局所的な解析を進めた.多次元尺度法を用いた可視化については,新たな問題点が見つかりつつも,解決策も見出して順調に進行している.位相幾何学的な方向はいまだ局所的な解析に留まっているものの,総合的に判断して研究はおおむね順調に推移している.多次元尺度法については,より精度を上げるために,配位空間上の自然な測地的距離に基づいた距離関数を導入する.現状の手法では,量子化学計算が出力する距離は対称性によって割る前のユークリッド距離を用いており,対称性に由来する特異点の近くではゆがみが生じていると考えられるので,これを測地的距離により改善できるか試みる.また位相幾何学的な方向では,大域的な研究の手始めとして,金原子の3量体など原子数の少ない簡単な場合をtoy-modelに用いて,同変モース理論等を用いた配位空間のより数学的に自然な記述を試みる.本研究は,量子化学計算で得られた反応経路網のデータやポテンシャル曲面の構造を理解するための,数学的な裏付けのある手法を構築することを目標とするものである.一般的に量子化学計算で得られるデータは分子構造を記述する高次元空間の座標で書かれており,反応について理解するためには,何らかの方法で低次元空間に落としこむ必要がある.しかし,そのための数学的な理論はまだ未発達であり,化学者が経験や知識に基づき手動で次元縮約を行なってきた.また,一般的な手法では,ポテンシャル曲面の構造を少数の着目する変数で記述し,着目していない方向はポテンシャルの最小値を取るなどの縮約を行なっているが,非線形性が強い場合にはこの方法で正しい構造は得られない.そこで本研究では,同変モース理論やコンレイ指数理論等のトポロジーの道具,それらを計算機上に実装する計算トポロジー理論,さらにグラフの構造保存埋め込み理論などを組み合わせることにより,化学反応経路網を視覚的にも,幾何学的にもより正しく理解する技法を構築する.本年度は,特に量子化学計算の結果得られた高次元の配位空間におけるポテンシャルエネルギーの値を,低次元で可視化する技法についての研究を進めた.申請段階で得られた予備的な研究と同様に,主な道具として多次元尺度法を用いるが,いったん多次元尺度法により作成した反応経路地図を用いて,軌道を時間的に追跡する技法を新規に開発した.まだ精度に問題はあるが,従来の技法よりは自然な可視化が可能になった.また,位相幾何学的な方向では,配位空間上でモース理論・コンレイ指数理論を展開するにあたって困難となる,特異点に由来する現象の局所的な解析を進めた.多次元尺度法を用いた可視化については,新たな問題点が見つかりつつも,解決策も見出して順調に進行している.位相幾何学的な方向はいまだ局所的な解析に留まっているものの,総合的に判断して研究はおおむね順調に推移している.多次元尺度法については,より精度を上げるために,配位空間上の自然な測地的距離に基づいた距離関数を導入する.現状の手法では,量子化学計算が出力する距離は対称性によって割る前のユークリッド距離を用いており,対称性に由来する特異点の近くではゆがみが生じていると考えられるので,これを測地的距離により改善できるか試みる.また位相幾何学的な方向では,大域的な研究の手始めとして,金原子の3量体など原子数の少ない簡単な場合をtoy-modelに用いて,同変モース理論等を用いた配位空間のより数学的に自然な記述を試みる.量子化学計算ソフトへの実装を考える上で,有償のものよりも無償のものを優先させたこと,また研究補助者を雇用する時期が都合によりずれた事により,次年度使用額が生じた.量子化学計算ソフトの購入は2019年度内に,また研究補助者の雇用は2019年度の後期に計画されており,これらにより次年度使用額は使用される予定である.
比較生物学的アプローチによる消化管機能回復の鍵因子の探索と経腸栄養法への応用

本研究では、ラット・アフリカツメガエルの小腸における栄養素消化吸収関連遺伝子およびそれらの転写因子の発現は絶食により低下するが、再摂食による応答はアフリカツメガエルでは顕著に高いことが明らかとなった。アフリカツメガエルの上記の遺伝子上のヒストン修飾(アセチル化など)は絶食で亢進するが、ラットでは亢進しないことが明らかとなった。さらに、ヒト小腸様培養細胞における消化吸収関連遺伝子の発現を増大させる食事因子として、ヒストンアセチル化修飾を促進する短鎖脂肪酸および中鎖脂肪酸が有用である可能性が本研究によって示唆された。(1)アフリカツメガエルの絶食-再摂食応答アフリカツメガエルを21日間絶食させると、小腸の脂質の消化吸収関連遺伝子(L-FABP、I-FABP)およびそれらの転写因子(CDX-2, FXR)の遺伝子の発現が顕著に低下した。その一方、それらの遺伝子発現は、再摂食一日後に非絶食群と同等のレベルまで回復した。さらに、これら遺伝子上のヒストンアセチル化、ヒストンH3リジン4番目(K4)モノメチル化、ヒストンH3K36モノメチル化、ヒストンH3K36トリメチル化、PolIIおよびPolIIのリン酸化量が絶食によって顕著に増大した。さらに、これら遺伝子のPre-mRNA量/mRNA比は、絶食によって低下しなかった。以上の結果は、絶食時のアフリカツメガエルの小腸では、脂質消化吸収関連遺伝子周辺のヒストン修飾を促進させPre-mRNAの合成量を維持し、再摂食に備えていることが明らかとなった。(2)ラットの絶食-再摂食応答SDラットへ3日間の絶食刺激を与えたところ、小腸の糖消化吸収関連遺伝子(SGLT1、GLUT5ならびにSI)のmRNA量は顕著に低下した。再摂食24時間後に、GLUT5遺伝子の発現は増大したが、SGLT1は増大しなかった。SGLT1遺伝子周辺のヒストンH3アセチル化、PolII、アセチル化ヒストン結合タンパク質Brd4の結合量は、絶食-再摂食によって変化しなかったが、GLUT5遺伝子周辺では増大した。これらの結果は、ラットSGLT1遺伝子発現の再摂食による応答不全の原因として、クロマチンの応答低下が考えられた。一方、タンパク質消化吸収関与遺伝子のmRNAは、再摂食による応答は見られなかったが、Pre-mRNAの発現量は再摂食によって顕著に増大した。それゆえ、タンパク質の消化吸収関連遺伝子の再摂食後の応答不全は、mRNAの分解レベルでの調節であることが考えられた。低栄養状態に暴露された小腸の機能低下メカニズムおよびその回復メカニズムを明らかにするために、長期間絶食下に暴露され、また、消化管の再生能力が高いことで知られる無尾両生類であるXenopus laevisを用い、実験を行なった。成体のXenopus laevisを3週間絶食を行ない、再摂食させた1日後に解剖し、小腸および肝臓を採取した。その結果、小腸においては、エネルギー産生に関与する遺伝子【β酸化関連遺伝子(ACOX1)】、脂質の吸収に関与する遺伝子(CRBPII, L-FABP, I-FABP)、糖質の消化吸収に関与する遺伝子MGAM、転写因子(FXR、CREB1、Cdx-2)が、絶食によって低下もしくは、低下傾向にあった。さらに、再摂食後1日においてACOX1, ACOX2、CRBPII,L-FABP, I-FABP,CREB1、Cdx-2の遺伝子発現が顕著に増大した。これらの結果は、無尾両生類では、3週間の絶食下においても、1回の再摂食によって遺伝子発現が顕著に回復することを示唆している。さらに、本研究では、ラットにおいても絶食-再摂食の実験を行なった。3日間の絶食によって糖質の消化吸収に関与する遺伝子(SGLT1)および、タンパク質の分解・アミノ酸の吸収に関与する遺伝子(DPP4, APN, PEPT1, SLC3A1, ALC7A9, ALC16A10, SLC3A2, SLCA7)の遺伝子の多くの発現が1/5から1/10以下にまで減少するとともに、再摂食1日後においても、そのほとんどが低い状態であった。さらにSGLT1遺伝子上のヒストンのアセチル化を観察してみると、再摂食によって増大しなかった。さらに、タンパク質の分解・アミノ酸の吸収に関与する遺伝子の絶食による発現低下は、mRNAの分解によって調節されていることが明らかとなった。3T3-L1脂肪培養細胞に、Brd4-アセチル化ヒストン結合阻害剤JQ1を投与し、脂肪合成およびインスリン感受性関連遺伝子の発現が低下するかを調べた。

その結果、脂肪細胞の分化に関連遺伝子(Pparg1,Pparg2,Apm1やFabp4)、脂肪合成関連遺伝子(Acaca, Acacb, Fasn, Dgat1, Lpl)の遺伝子発現量および脂肪の蓄積量が顕著な低下およびLpl遺伝子の転写開始点下流領域のヒストンH3のアセチル化修飾およびBrd4の結合が低下を認めた。さらに、C57BL/6Jマウスにフルクトース水もしくはグルコース水を3時間おき2回投与し、最初の投与から6時間後に肝臓の脂肪合成関連遺伝子(Gpd1、Me)の発現を調べた。その結果これらの糖誘導性の発現は、JQ1の共投与によって抑制された。また、これら遺伝子発現は、Brd4ヘテロ欠損マウスではを投与したWild typeマウスと比較して顕著に低いことが明らかとなった。さらに、JQ1を含む食餌をC57BL6/6Jマウスに3週間投与すると、フルクトース食摂取誘導性の肝肥大を顕著に抑制された。インスリン抵抗性惹起物質TNF-αを脂肪3T3-L1培養細胞の投与により脂肪培養細胞内のインスリン抵抗性病態を作り出し、Brd4タンパク質の脂質蓄積関連遺伝子への結合状態を調べた。その結果、脂肪蓄積関連遺伝子Lplの転写開始点下流領域のヒストンH3のアセチル化修飾およびBrd4結合が低下した。このことより、インスリン抵抗性病態下では、脂肪蓄積関連遺伝子Lplの発現は、同遺伝子転写開始点下流域のアセチル化ヒストンの低下に伴うBrd4の結合低下が関与することが明らかとなった。以上より、2型糖尿病発症前におけるBrd4の活性化は肥満・脂肪肝を誘導すること、肥満誘導後のBrd4の活性低下はインスリン抵抗性を誘導することが明らかとなった。栄養学ラットにおける小腸消化吸収機能応答不全の原因が、クロマチン応答不全およびmRNAの分解促進であることが、アフリカツメガエルと比較することによって明らかとなった。Xenopus laevisおよびラットにおける絶食-再摂食の実験を行いその成果を得た。おおむね順調に進んでいると考えられる今後はこれらの結果を踏まえ、ヒストンアセチル化修飾やメチル化修飾を促進する薬剤をヒト小腸様培養細胞ならびにラット小腸に投与することによって、ラット・ヒトの小腸消化吸収機能を早期の回復に対する試みを行っていく予定である。今後Xenopus laevisおよびラットにおいて、小腸の栄養素消化吸収関連遺伝子のエピゲノム制御機構およびmRNA分解制御機構の差異を調べる予定である。平成26年度にChIPアッセイを多く行うために、25年度の予算を一部、26年度で使用する予定である。ChIPアッセイに使用する試薬を購入する予定である。おもに、クロマチン免疫沈降法などの抗体・ProteinGセファロース・PCR酵素などの消耗品で使用する予定である。
ダークマター探索のためのエキゾチック原子を用いた反粒子宇宙線測定器の開発

エキゾチック原子を用いた新しい検出原理に基づく反粒子宇宙線測定器の基本設計を検討し、気球実験による技術的検証を含む今後の本格的な測定器開発への道筋をつけた。本研究では、宇宙線反粒子(とりわけ反重陽子)の高感度観測によるダークマターの間接探索を目的に、エキゾチック原子の崩壊過程を利用した新しい反粒子同定手法に基づく測定器(GAPS)の開発を進めている。低エネルギー反粒子を測定器のターゲット中で捕捉し、それにより生じる励起エキゾチック原子の崩壊過程にて発生する特性X線やパイ粒子などを検出することで反粒子を同定する、という手法である。平成20年度は、測定器の基本的な設計検討を行った。特に、計算機による数値シミュレーションを用いて測定器中のX線検出器、荷電粒子用シンチレータ、ターゲット物質などに要求される性能条件を詳細に調べ、粒子測定器の構成、バックグラウンドリジェクション、探索感度、などに関する検討を行った。また、X線検出器や太陽電池電源システムに関する熱設計を行うとともに、放熱機構の候補材料を購入し、その基本特性を実験室レベルで評価検討した。また、米国の共同研究者や国内の同分野研究者との研究打合せを行い、今後の研究の進め方などに関する知見を獲得した。研究の内容や成果は学術雑誌や学会にて発表した。本研究では、宇宙線反粒子(とりわけ反重陽子)の高感度観測によるダークマターの間接探索を目的に、低エネルギー反粒子の測定器(GAPS)の開発を進めている。反粒子の同定手法は、低エネルギー反粒子を測定器のターゲット中で捕捉し、それにより生じる励起エキゾチック原子の崩壊過程にて発生する特性X線やパイ中間子などを検出することで反粒子を同定する、という全く新しい手法を導入する。平成21年度は、前年度の研究結果を踏まえ、引き続き測定器の基本設計の検討を進めた。特に、気球搭載型GAPSのペイロードのシステム設計に関する検討を重点的に行った。ペイロードの姿勢制御に必要な絶対方位角センサーを、GPSを活用して開発を進めた。GPS信号の処理システムとそれを格納するハウジングの開発も行い、気球環境への耐性を実験室レベルで評価検討した。この他、ペイロード各サブシステムの評価試験としての予備的な気球実験を立案し、その実験内容の検討も行った。米国の共同研究者とは、米国にて研究打合せを行った他、日本国内の気球実験の実験場所の調査も行った。国内の関連分野の研究者との研究打合せも重ね、今後の研究の進め方などに関する知見を獲得した。研究の内容や成果は学会にて発表した。
透析患者にみられる多嚢胞化萎縮腎の初期病変についての研究

血液透析患者は増加の一途をたどっているが、これらの患者の病腎には後天性腎嚢胞が発生し、これと関連して腎細胞癌も高率に発生することが我々の研究から分かってきた。発生機序に関しては、単層上皮を持つ嚢胞-重層化した上皮を持つ嚢胞-腺腫-腎細胞癌と一連の多段階的発生が推察される。本研究ではこのsequenceの第一段階である嚢胞発生について検討した。1.後天性腎嚢胞と尿細管との交通の有無およびその頻度の検討。透析歴19年の後、腎細胞癌を合併した32歳男性症例について、摘出腎のホルマリン標本より1,000枚の連続切片をつくり、画像解析装置上で100個の嚢胞壁をトレースし尿細管との連続性の有無をみた。検討した嚢胞は直径が150から900ミクロンで、その結果、100個のうち嚢胞と尿細管との交通のないもの30個、一本の尿細管と交通を見るもの37個、二本の尿細管と交通を見るもの33個であった。従って尿細管と交通のある後天性腎嚢胞は100個中70個と多くを占めていた。このことは腎移植の成功によって後天性腎嚢胞のほとんどが2週間という短期間に退縮するという事と関係があるのかもしれない。2.腎生検標本720例を用いての後天性腎嚢胞の検討。50歳以下の患者607例中11例、51歳以上の患者113例中10例に嚢胞を認めた。50歳以下のこの11例ではクレアチニンクリアランスは47.5±25.6ml/minと低下しており、レクチンによる免疫組織学検討を行うとtetragonolobus lotusで陽性、peanutで陰性を示し近位尿細管由来に一致していた。以上より軽度腎障害でみられた嚢胞は多嚢胞化萎縮腎の早期病変と考えられた。3.後天性腎嚢胞におけるCFTRmRNAの発現。液の分泌に関係するCFTRの発現を調べるために、試行錯誤で条件設定を検討中である。以上のように本年の研究で多嚢胞化萎縮腎の嚢胞は尿細管と交通しているものが多いこと、腎機能が二分の一に低下しても発生し始めるという新たな知見が得られた。
リン酸化プロテオーム解析による白血病細胞のリン酸化異常の解明および治療への応用

種々の病型の白血病細胞株(25種程度)およびレトロウィルス感染系を用いてBCR-ABLを導入したマウス骨髄細胞のトリプシン消化物から、HAMMOC法を用いてリン酸化ペプチドを濃縮し、LC-MS/MS法によりリン酸化タンパク質の同定ならびにリン酸化部位の同定を行った。その結果、BCR-ABL陽性細胞において4500以上のリン酸化部位を同定した。BCR-ABL陰性の白血病細胞株を並べて解析すると、BCR-ABL陽性細胞群から検出したリン酸化蛋白質はクラスターを形成することから、BCR-ABLによって特異的なリン酸化シグナル伝達ネットワークが生じることが示唆された。さらに、BCR-ABL陽性細胞にチロシンキナーゼ阻害薬であるイマチニブを添加すると、(1)Ras/MAPK経路の活性化に関与するSHC1蛋白質のリン酸化が抑制されること、(2)自身の活性化を制御する転写因子ATF-2リン酸化が抑制されることが明らかになった。種々の病型の白血病細胞株(25種程度)およびレトロウィルス感染糸を用いてBCR-ABLを導入したマウス骨髄細胞のトリプシン消化物から、hydroxy acid-modified metal oxide chromatography (HAMMOC)法を用いてリン酸化ペプチドを濃縮し、LC-MS/MS法によりリン酸化タンパク質の同定ならびにリン酸化部位の同定を行った。BCR-ABL陰性の白血病細胞株を並べて解析すると、BCR-ABL陽性細胞群から検出したリン酸化蛋白はクラスターを形成することが明らかとなり、BCR-ABLによって特異的なリン酸化シグナル伝達ネットワークが生じることが示唆された。さらに、BCR-ABL陽性細胞にチロシンキナーゼ阻害薬であるイマチニブを添加すると、(1)Ras/MAPK経路の活性化に関与するSHC1蛋白質のリン酸化が抑制されること、(2)自身の活性化を制御する転写因子ATF-2のリン酸化が抑制されることが明らかになった。BCR-ABL陽性白血病細胞においてBCR-ABLによるリン酸化シグナル伝達ネットワークを解明し、その増殖を抑制する治療薬であるイマチニブによって生じるリン酸化シグナル伝達ネットワークの変化を解析することによって、BCR-ABL陽性白血病細胞の増殖に関わる蛋白質のリン酸化を明らかにすることができる。それらの情報を蓄積することによって、イマチニブなどBCR-ABLを標的とする治療薬に耐性になったBCR-ABL陽性白血病細胞の増殖を制御する薬剤の開発へとつながることが期待される。さらに、この実験系を用いることによって、BCR-ABL陽性白血病以外の白血病の異常リン酸化を標的とした治療薬の開発にもつながることが期待される。IKZF1遺伝子欠失によって生じるシグナル伝達異常を明らかにするために、慶大小児科で保存されているB前駆細胞型急性リンパ性白血病(BCP-ALL)の69症例の白血病細胞を用いてMLPA法(Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification)によりIKZF1遺伝子欠失の有無を解析した。その結果7症例にIKZF1欠失を認めた。この結果はBCP-ALLですでに知られているIKZF1欠失の頻度と同様であった。さらに、日本白血病リンパ腫研究グループの協力を得て、フィラデルフィア染色体陽性ALL27例の白血病細胞を用いてMLPA法によりIKZF1遺伝子欠失の有無を解析したところ、約85%にIKZF1欠失を認め、この結果もフィラデルフィア染色体陽性ALLで知られているIKZF1欠失の頻度と同様であった。これらの結果をもとに、リン酸化タンパク質の同定ならびにリン酸化部位の同定を行い、IKZF1遺伝子欠失の有無によるリン酸化の変化を検討する。また、IKZF1遺伝子欠失によるリン酸化の変化を患者白血病細胞から得られた結果と比較するために、レトロウィルス感染系を用いてBリンパ球細胞株にIKZF1欠失変異体の導入を試みた実験を行っているが、まだ良い結果が得られていない。種々の病型の白血病細胞株(25種程度)およびレトロウィルス感染系を用いてBCR-ABLを導入したマウス骨髄細胞のトリプシン消化物から、hydroxy acid-modified metal oxide chromatography(HAMMOC)法を用いてリン酸化ペプチドを濃縮し、LC-MS/MS法によりリン酸化タンパク質の同定ならびにリン酸化部位の同定を行った。

BCR-ABL陰性の白血病細胞株を並べて解析すると、BCR-ABL陽性細胞群から検出したリン酸化蛋白はクラスターを形成することが明らかとなり、BCR-ABLによって特異的なリン酸化シグナル伝達ネットワークが生じることが示唆された。さらに、BCR-ABL陽性細胞にチロシンキナーゼ阻害薬であるイマチニブを添加すると、1Ras/MAPK経路の活性化に関与するSHC1蛋白質のリン酸化が抑制されること、2自身の活性化を制御する転写因子ATF-2のリン酸化が抑制されることが明らかになった。BCR-ABL陽性白血病細胞においてBCR-ABLによるリン酸化シグナル伝達ネットワークを解明し、その増殖を抑制する治療薬であるイマチニブによって生じるリン酸化シグナル伝達ネットワークの変化を解析することによって、BCR-ABL陽性白血病細胞の増殖に関わる蛋白質のリン酸化を明らかにすることができる。それらの情報を蓄積することによって、イマチニブなどBCR-ABLを標的とする治療薬に耐性になったBCR-ABL陽性白血病細胞の増殖を制御する薬剤の開発へとつながることが期待される。さらに、この実験系を用いることによって、BCR-ABL陽性白血病以外の白血病の異常リン酸化を標的とした治療薬の開発にもつながることが期待される。研究分担者および研究連携者の異動があり、解析を休止した時期があった。24年度が最終年度であるため、記入しない。研究体制が整ったため、研究計画を変更せず遅れを取り戻すことが可能である。