hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
転写因子ＮＦ－Ｙを介した新たな神経維持・変性機構の解明

NF-Yは、NF-YA, -YB, -YCの3者複合体からなる転写因子であり、プロモーター領域のCCAATモチーフに結合し、遺伝子発現を制御している。そのノックアウトマウス・繊維芽細胞を用いた解析から、NF-Yが細胞周期制御を介した細胞増殖に必須であること、その活性は非分裂細胞へと分化する際に消失することが知られている。一方で、最近我々は、NF-Yが分化した非分裂の神経細胞でも活性があること、また、神経変性疾患であるハンチントン病で、その活性が低下することを明らかとした。これらのことから、NF-Yは分化した神経細胞でも、その維持・機能になんらかの役割を担っていると期待される。本研究ではNF-YAの脳神経細胞特異的ノックアウトが、グリオーシスを伴う神経脱落を引き起こし、マウス脳重・体重減少、寿命短縮といった症状を誘発することを明らかとした。興味深いことに、変性神経細胞では、膜タンパク質の不溶化しユビキチンやp62と共に小胞体に蓄積すること、また小胞体自体も異常に増加していることが確認された。また、クロマチン免疫沈降ーDNA microarray(ChIP-chip)により、小胞体シャペロンであるGrp94等が同定され、これらが小胞体構造変化に関わっていることが示唆された。以上のことから、NF-Yが神経細胞の生存に必須であることが明らかとなると共に、その欠損が異常タンパク質の蓄積や小胞体構造異常を伴う特徴的な神経変性病態を引き起こすことが明らかとなった。25年度が最終年度であるため、記入しない。そのノックアウトマウス・繊維芽細胞を用いた解析から、NF-Yが細胞周期制御を介した細胞増殖に必須であることが示されている。このNF-Yの機能は未分化細胞の増殖・維持にも重要であるが、その活性は非分裂細胞へと分化する際に消失することが知られている。一方で、NF-Yは、分化した非分裂の神経細胞でも活性が保存されている。また、最近、我々は、神経変性疾患であるハンチントン病のモデルマウス脳で、病態進行に伴いNF-Yが変異ハンチンチンと共凝集し、その活性が低下することを明らかとした。本研究ではNF-YAのノックアウトマウスを用いて、神経細胞でのNF-Yの生理機能の解明を目指す。今年度は、脳神経細胞特異的ノックアウトマウスの解析から、NF-Yの機能破壊が、グリオーシスを伴う神経変性を引き起こし、マウス脳重・体重減少、寿命短縮といった重篤な症状を誘発することを明らかとした。変性神経細胞では、タンパク質の不溶化・蓄積が観察され、また、細胞内小器官の構造変化も見出された。一方、脳組織抽出液より、NF-Y特異抗体を用いたクロマチン免疫沈降ーDNA microarray(ChIP-chip)を行い、NF-Yの生理的ターゲット遺伝子を検索したところ、シャペロン関連因子等様々な遺伝子が同定された。よって、NF-Yは、これら遺伝子の発現を制御して神経細胞の維持・生存に重要な役割を果たしており、その機能阻害は、細胞の質的・構造的異常を伴う神経変性を誘導することが示唆された。これまでの解析から、少なくともNF-Yがマウス脳の分化した神経細胞の生存・維持に必須であることが明らかとなった。またここに関わる分子メカニズムの一端も明らかとされつつある。今後はその分子機構解析をさらに遂行すると共に、その他中枢神経細胞でのNF-Yの役割についても、運動神経やグリア特異的NF-YAノックアウトマウスを用いて解析することにより、中枢神経系全体でのNF-Yの機能解明を試みる。ChIP-chip解析により得られたNF-Yターゲット遺伝子に関して、その生理的重要性について、機能破壊マウスでの発現変化等を指標に検討する。

一方、NF-Y機能破壊マウス脳において、ユビキチン等が不溶性画分に集積することに着目し、これらと共集積するタンパク質をmass spectrometry解析により検索し、これらタンパク質の不溶化メカニズムについて検討する。最近、脊髄や小脳の神経変性を主症状とするポリグルタミン病でも、NF-Yが活性阻害されることが報告され、脳神経のみならず、その他の中枢神経系でも、NF-Yが神経細胞の維持に関わっていることが期待される。これを明らかとするため、運動神経特異的cre TGマウスを用いて、脊髄の運動神経でのNF-Yの機能破壊を行い、解析する。これまでの解析から、NF-Yの神経細胞での重要性は支持されつつある。一方、中枢神経系ではグリア細胞も神経の維持や機能に重要な役割を担っていることが見いだされている。しかし、ここでのNF-Yの機能は不明である。これを解明すべく、マイクログリア特異的cre TGマウスを用いたNF-YA CKOマウスを作製し、解析を行う。25年度が最終年度であるため、記入しない。
劣性遺伝解析による侵襲性歯周炎関連遺伝子の同定

Homozygosity mapping法およびエキソームシークエンス法を用いることによって、1家系に発症する侵襲性歯周炎の疾患関連遺伝子の候補遺伝子を4つ(ARHGF16, SLC2A7, SLC2A5, CASZ1)を同定した。しかしながら、侵襲性歯周炎の孤発例において、これらの遺伝子に新たな変異は認められなかったため、検体数を増やして調べる必要がある。親がいとこ婚である3人の兄弟(侵襲性歯周炎2名と健常者1名)の採血を行い、ゲノムDNAを抽出した。Affymetrix SNP Chip ver.6.0を用いて約90万箇所のSNPタイピングを行い、得られたデータをHomozygote Fingerprinting法を用いることによってホモ接合領域を同定した。なお2cM以上ホモ接合SNPが連続した領域を有意とした。侵襲性歯周炎2名のDNAからエキソン部分を抽出、増幅後次世代シークエンサーにてエキソームシークエンスを行った。今回の研究では、バイオインフォマティクス解析の結果、アミノ酸変異を伴うSNPとflame shiftを伴うinsertionおよびdeletionに着目した。私共の有している148名のエキソームシークエンスのデータを参照し、この家系に特異的なSNPおよびinsertion,deletionを抽出した。解析結果として、7つのSNPが得られた。insertionおよdDeletionは得られなかった。これらの遺伝子変異部7箇所に着目し、Applied Biosystems 3130sequencerを用いて遺伝子変異の検証を行ったところ、7箇所の遺伝子変異すべてが検証された。さらに7箇所の遺伝子変異が健常者192名において認められるかを調べたところ、3つの遺伝子変異は健常者において認められたため除外した。遺伝子変異の認められた4つの遺伝子はARHGEF16,SLC2A7,SLC2A5,CASZ1である。4つの遺伝子変異は本家系に発症する侵襲性歯周炎の疾患関連遺伝子の可能性があることが示唆された。しかし、侵襲性歯周炎の弧発例、および家族性侵襲性歯周炎症例あわせて100名においてもこの遺伝子変異は認められなかったため、今後、侵襲性歯周炎の検体数をさらに増やして調べる必要がある。広島大学病院歯周診療科を受診する侵襲性歯周炎患者、あるいはその親あるいは兄弟で侵襲性歯周炎の疑われる者のうち、親が血族婚である者2名および、付近では血族婚が多い僻地に居住しており、常染色体劣性遺伝の疑われる者2名をピックアップした。またコントロールとして血族婚の疑われない侵襲性歯周炎2名もピックアップした。患者に本研究の趣旨を説明し、患者の同意を得て、静脈から血液6mlを抽出した。得られた血液からgenome DNAを抽出し、Affemetrix Single nucleotide polymorphism (以下SNP)Chip version 6.0を用いて約900,000箇所のSNPをタイピングした。得られたデータをHomozygote Fingerprinting法を用いてホモ接合領域を同定した。なお、2cM以上ホモ接合領域が連続した領域を有意とした。結果、親がいとこ婚である2人の兄弟およびインタビューでは親が血族婚ではないということであったが、僻地に居住する2人の姉妹は2cM以上のホモ接合領域を持ち、常染色体劣性遺伝の可能性を持つことが分かった。コントロールの2名にはホモ接合領域は認められなかった。ホモ接合領域は、親がいとこ婚である兄弟がクロモゾーム1番と12番に、僻地に居住する姉妹がクロモゾーム2番と3番に存在した。よって親がいとこ婚である兄弟と僻地に居住する姉妹とでは侵襲性歯周炎に関与する遺伝子が異なることが考えられた。常染色体劣性遺伝の疑われる家系2つ(患者4名)のgenome DNAを抽出し、ホモ接合領域も同定できているため。得られたホモ接合領域をターゲット領域とし、Sequence Captureアレイを用いてターゲット領域を選択的に抽出し、次世代シークエンサーによって遺伝子配列を解析する。アレイおよび次世代シークエンサーでの解析のための試薬に多くの研究費を使用する予定である。
RNA転写における核骨格とDNA高次構造の役割

1.DNAル-プの超らせん構造は核骨格への付着によって維持されているが、付着のメカニズムについてはよくわかっていない。我々は核骨格付着領域DNAと特異的に結合する、従ってDNAの付着を媒介すると考えられる分子量120kDaの核骨格蛋白質を同定した。この蛋白質とDNAの相互作用を更に詳細に調べるためcDNAのクロ-ニングを試みた。ラット脳の核骨格から精製した120K蛋白質のCNBr断片のN末端アミノ酸配列を決定し、これに基づき混合オリゴヌクレオチド・プライマ-を合成し、ラット脳の全RNAを鋳型としたRTーPCRを行った。反応産物をクロ-ニングし、約1kbのcDNA断片が挿入されたクロ-ンを得た。2.ビオチン標識した超らせんDNAを用いて、核骨格の超らせんDNA結合部位を構成する核骨格蛋白質と思われる75kDaの超らせんDNA結合蛋白質を同定した。この蛋白質の転写反応に対する影響を調べるため、核骨格からの可溶化と精製を行った。75K蛋白質は核骨格画分に存在するが、分離核を直接低イオン強度下に高濃度のethidium bromideで処理すると選択的に遊離された。超らせんDNA結合活性を指標としてイオン交換(Mono Q)とゲルろ過カラム(G3000SWxl)で分画することによりほぼ均一な75K蛋白質が得られた。この蛋白質はゲルろ過では分子量約380Kとして挙動し、自己会合体を形成していると考えられた。3.ヒト細胞には異なる遺伝子にコ-ドされた少なくとも2種類(αとβ)のDNAトポイソメラ-ゼII(トポII)が存在する。我々はトポIIβとRNA合成の関連を調べるため、ラットのトポIIのcDNAクロ-ニングを行った。ハエとヒトのトポIIのアミノ酸配列を比べ、よく保存された領域に対応する混合オリゴヌクレオチドを合成し、これをプライマ-としたDNA増幅反応(RTーPCR)によりラット脳で発現しているトポIIのcDNAクロ-ンを得た。これらのクロ-ンは制限酵素パタ-ンの違いから2群に分類され、塩基配列を決定したところ、それぞれヒトのトポIIαとβに高い相同性を示した(アミノ酸レベルでそれぞれ95%および98%)。1.ビオチンで標識した超らせんDNAをプロ-ブとして用いるサウスウェスタン法を開発し、核骨格のDNA結合蛋白質として、すでに報告した分子量120KDaの蛋白質以外に、75K,34K,15Kのものを同定した。未標識DNAによる競合実験の結果、75K蛋白質は超らせんDNAに対する高い特異性を有していたが、120K蛋白質にはこの特異性がみられなかった。ペプチドマッピングを行うと、120Kと75K蛋白質の一次構造に類似性が認められた。また、超らせんDNAを弛緩させる薬剤で分離核を処理すると、75K蛋白質が選択的に抽出されることがわかった。現在、この性質を利用して75K蛋白質の精製を行っている。ラットの核骨格標品を抗原とし、ウェスタン法でスクリ-ニングすることにより、120K蛋白質に対するマウスのモノクロ-ナル抗体(IgM)を得た。

2.この抗体はDNAの120K蛋白質の結合には何の影響も与えないが、逆にDNAは120K蛋白質と抗体の反応性を著しく増強することから、120K蛋白質はDNAと結合すると何らかの構造変化を起こすと思われる。この抗体を利用した蛍光抗体法で120K蛋白質の細胞内分布を調べた結果、核の周辺部と核内のネットワ-ク状構造が強く染色され、120K蛋白質の核骨格への局在が裏づけられた。3.ゲル電気泳動で精製した120K蛋白質を用いてN末端アミノ酸配列の決定を試みたが、N末端がブロックされているらしく不成功に終わった。現在CNBr断片を作り内部配列を解析している。4.核骨格を構成要素として含むin vitro転写系の予備実験として、超らせん鋳型DNA、核骨格およびRNAポリメラ-ゼ/転写因子を含む核抽出液から成る系を作り鋳型DNAの構造変化を調べたところ、超らせんDNAは急速に弛緩型に転換された。この系で鋳型の高次構造の効果を評価するにはトポイソメラ-ゼを完全に阻害する必要がある。真核生物のRNA転写効率は転写されるクロマチン領域のDNA高次構造、特に超らせん構造によって大きな影響を受ける。核DNAは核骨格付着領域(SAR)と呼ばれる特異な塩基配列を所々にもっており、これが核骨格に結合することによって超らせん構造をとった多数のル-プに分割されている。従って、核骨格ーDNAル-プ構造は核の基本構造であると共にRNA転写の調節機構としても重要な役割をもっている。本年度は以下に述べるようにDNAの高次構造を規定している二つの主要因子について解析を行った。1.我々は転写が実際に進行する場である核骨格に、超らせんDNAを特異的に結合するDNA結合部位が存在することを見いだしている。ビオチン標識した超らせんDNAを用いて、この部位を構成する核骨格蛋白質と思われる75kDaの超らせんDNA結合蛋白質を同定した。この蛋白質の転写反応に対する影響を調べるため、核骨格からの可溶化と精製を行った。75K蛋白質は核骨格画分に存在するが、分離核を直接低イオン強度下に高濃度のethidium bromideで処理すると選択的に遊離された。超らせんDNA結合活性を指標としてイオン交換(Mono Q)とゲルろ過カラム(G3000 SW_<XL>)で分画することによりほぼ均一な75K蛋白質が得られた。この蛋白質はゲルろ過では分子量約380Kとして挙動し、自己会合体を形成していると考えられた。2.DNAル-プの超らせん構造は核骨格への付着によって維持されているが、付着のメカニズムについてはよくわかっていない。我々はSARと特異的に結合する。従ってDNAの付着を媒介すると考えられる分子量120kDaの核骨格蛋白質を同定した。この蛋白質とDNAの相互作用を更に詳細に調べるためcDNAのクロ-ニングを試みた。ラット脳の核骨格から精製した120K蛋白質のDNBr断片のN末端アミノ酸配列を決定し、これに基づき混合オリゴヌクレオチド・プライマ-を合成し、ラット脳の全RNAを鋳型としたRTーPCRを行った。反応産物をクロ-ニングし、約1kbのcDNA断片が挿入されたクロ-ンを得た。
上空・地上の複合レーダと自律航法技術による大規模自然災害の効率的な捜索手法の開発

東日本大震災のような大規模自然災害における行方不明者の工学的捜索手法を開発した。本研究では,上空からの航空機搭載レーダと地上での父中レーダにより広域の行方不明者捜索手法を提案し,実証実験として名取市閖上における東日本大震災の行方不明者捜索に適用した。この結果,数多くの物体を地中から検出し,本手法の有効性を明らかにした。東日本大震災等の大規模自然災害における行方不明者等を効率的に捜索することを目的に,航空機・人工衛星搭載レーダを用いた上空からの広域地中探査と,広域地中探査で物体が沈下している可能性が高いところを地中レーダで精査する複合レーダ技術による手法を提案し実証実験で検証した。平成27年度は,東日本大震災で大きな被害を受け現在でも40名の行方不明者がいる宮城県名取市閖上において,以下の提案手法の実証実験を実施するとともに,ボランティア団体とともに捜索活動を実施した。(1) JAXAの航空機搭載レーダPi-SAR-L2からの物体検出特性を実験するために,コーナーリフレクタを地中に埋設し,地表に設置した場合との後方散乱係数を比較した。この結果,地表と地上で5dB/m2の差で観測されることを定量的に示した。また,地中レーダによる物体検出の評価として,地中レーダの観測画像を画像処理プロセッサGPUを用いて高速にシミュレーションするFDTD法を開発し,砂場やコンクリートに空洞を設定する模擬実験と比較した結果,FDTDシミュレーションは実験とよく一致することを示した。(2)上空からの航空機・人工衛星搭載レーダで得られる観測画像から地表面物体による反射波を除去する手法として,小型無人機UAVを観測範囲上空を飛ばし,可視光画像からSfM技術により地表面形状を復元し,レーダ画像とUAV画像との比較による地表面物体抽出手法を開発した。(3) (1)(2)の成果を,捜索活動を支援するボランティア団体に提供するとともに,地中レーダを使った捜索手法を開発した。この結果,延べ463名のボランティアが捜索活動に参加し,4839m2の領域を捜索した結果,24,883個の地中物体を掘り出し,レーダによる検出確率は84%であった。平成28年度に実施予定であったUAVを用いた地表面形状復元とレーダ画像の比較による地表面物体の除去手法を平成27年度に前倒しで実施している。本研究では,上空から航空機・衛星搭載レーダで観測し反射が強い箇所を地中レーダで地上を精査する複合レーダ技術を用いた大規模自然災害時の捜索手法を開発している.(1)実際に東日本大震災で甚大な被害を受けた宮城県名取市閖上浜で2014年9月からボランティア団体とともに本手法を適用した捜索を実施している.この結果,6000 m2の領域からお骨や衣類など多くの生活物を含む約30000個の地中物体を発見しており,大規模自然災害時の地中の捜索手法として有効であることを示している.(2)Lバンド人工衛星・航空機搭載レーダによる地中物体検出を評価するために,JAXA航空機搭載レーダPi-SAR-L2と無人航空機UAV (Unmanned Aerial Vehicle)による3次元復元技術SfM (Structure from Motion)を用いた同期実験を実施し,埋設CRをPi-SAR-L2で上空から観測しUAV-SfMにより地表面を3次元復元した結果,地表面には大きな物体が存在しない箇所で比較的強い反射が確認された.今後は地中物体検出を後方散乱係数等で定量評価する.(3)捜索活動の現場でも使用している地中レーダでは,熟練技術者が画像判読により地中物体を推定しているのが現状であり,客観的で高精度な判定や計算機による自動化が求められている.本研究では,多層のニューラルネットワークであるディープラーニングによる地中物体自動識別技術として,GPUを複数台使用するGPUクラスタを用いたFDTD法による数十万個規模の学習データ生成と,畳み込みニューラルネットワークCNN (ConvolutionalNeural Network)によるレーダ画像からの地中物体の誘電率や大きさの識別手法を開発した。当初は予定していなかった深層学習による地中物体自動識別技術を開発した(1)東日本大震災の不明者捜索への適用:東日本大震災の津波で津波で甚大な被害を受けた宮城県名取市閖上で,本研究で開発した工学的捜索手法の実証実験を行った。この結果,お骨や衣類などの生活物品を含む50000個の地中物体を検出している。また,上空からの地中物体検出を評価として,Lバンド人工衛星・航空機搭載レーダによる地中物体検出を評価するために,JAXA航空機搭載レーダPi-SAR-L2と無人航空機UAV (Unmanned Aerial Vehicle)による3次元復元技術SfM (Structure from Motion)を用いた同期実験を実施し,埋設CRをPi-SAR-L2で上空から観測しUAV-SfMにより地表面を3次元復元した結果,地表面には大きな物体が存在しない箇所で比較的強い反射が確認された。(2)人工知能技術による地中レーダ画像からの物体識別:多層のニューラルネットワークであるディープラーニングによる地中物体自動識別技術として,GPUを複数台使用するGPUクラスタを用いたFDTD法による数十万個規模の学習データ生成と,畳込ニューラルネットワークによるレーダ画像からの地中物体の誘電率や大きさの識別手法を開発した。(3)自律走行地中レーダの開発:GNSS測位に基づく自律走行地中レーダのプロトタイプを開発し,指定した範囲をGNSS自律走行地中レーダにより昼夜問わず探査可能になる。(4)火山災害への応用:

阿蘇山火口付近で,地中レーダによる火山灰中の探査および火山灰の複素比誘電率の周波数特性を測定し,350/500 MHzの地中レーダで2016年に噴火した火山灰堆積を確認した。(5)海底探査への応用:宮城県山元町沖で,地中レーダによる海底がれきの探査および海水の複素誘電率の周波数特性を測定し,350MHzの地中レーダで水深10mの海底がれきを探査できることを確認した。東日本大震災のような大規模自然災害における行方不明者の工学的捜索手法を開発した。本研究では,上空からの航空機搭載レーダと地上での父中レーダにより広域の行方不明者捜索手法を提案し,実証実験として名取市閖上における東日本大震災の行方不明者捜索に適用した。この結果,数多くの物体を地中から検出し,本手法の有効性を明らかにした。今後は以下を実施する予定である。(1)上空からのレーダによる地中物体検出特性の実験的・理論的検証(2)東日本大震災で大きな被害を受けた宮城県名取市閖上における不明者捜索への適用(3)地震による土砂災害や噴火による火山灰等による大規模災害への適用(4)自律型レーダ装置の開発(5) SfM技術を適用した水中ドローンを用いた水中捜索への応用今後は,(1)東日本大震災の被災地における捜索活動現場での実証実験,(2)上空からのレーダによる地中物体抽出の定量化,(3)地中レーダ画像からの物体自動識別技術の開発と捜索現場での実証実験,(4)自律走行地中レーダの開発,(5)火山災害を想定した火山灰における地中レーダ実験,(6)本手法の海中捜索への適用を実施予定である。29年度が最終年度であるため、記入しない。電磁波工学29年度が最終年度であるため、記入しない。
視床下部走行ニューロンによる行動と代謝の協調的制御に関する研究

視床下部腹内側核(VMH)は摂食・性行動・攻撃・逃避など個体と種の維持に欠かせない本能行動の統御部位である.これら多様な行動の発現には、動機と関わらない次元で「走行運動」という共通な要素が存在しており、その制御機構の解明は、これら本能行動の一層の理解と、それらを制御する手段を開発してゆくためには欠かせない.我々はラットのVMHに、定型的な走行運動を誘起する走行ニューロンが存在することを発見した.さらに、この走行ニューロンは走行を誘起するのみならず、走行運動を支援する代謝・循環機能を同時にコマンドする機能を持つことも示されている.ラットにおいては走行ニューロンの興奮性はカイニン酸型グルタミン酸受容体を介して上昇し、γ-アミノ酪酸(GABA)受容体を介してシナプス前抑制される事が分かった.シバヤギにおいてカイニン酸とGABA受容体阻害薬をVMHに投与後、直ちに30m×30mの放牧地にはなし、CCDカメラで行動を録画、観察した結果、約5分後より柵にそって走り出し、さらに対角線上に走ったりするのが観察された.この走行運動は3-4秒の走行ののち10-30秒鳴いたり歩いたりをくり返すもので、ラットで見られるように連続した走行運動ではなかった.このことから、シバヤギにおける走行運動がより高次の脳による制御下にあり、ラットのように視床下部走行ニューロンの興奮が直接走行運動の発現には結びついていないことが示唆された.一方、代謝の変化はほぼラットと同様に観察されたことから、代謝の制御などの様に自律的な機能の制御機構は系統発生的によく保存されているものの、行動発現などのより高次な機能の制御中枢は上位脳に移行していったことが考えられた.視床下部腹内側核(VMH)は摂食・性行動・攻撃・逃避など個体と種の維持に欠かせない本能行動の統御部位である.これら多様な行動の発現には、動機と関わらない次元で「走行運動」という共通な要素が存在しており、その制御機構の解明は、これら本能行動の一層の理解と、それらを制御する手段を開発してゆくためには欠かせない.我々はラットのVMHに、定型的な走行運動を誘起する走行ニューロンが存在することを発見した.さらに、この走行ニューロンは走行を誘起するのみならず、走行運動を支援する代謝・循環機能を同時にコマンドする機能を持つことも示されている.ラットにおいては走行ニューロンの興奮性はカイニン酸型グルタミン酸受容体を介して上昇し、γ-アミノ酪酸(GABA)受容体を介してシナプス前抑制される事が分かった.シバヤギにおいてカイニン酸とGABA受容体阻害薬をVMHに投与後、直ちに30m×30mの放牧地にはなし、CCDカメラで行動を録画、観察した結果、約5分後より柵にそって走り出し、さらに対角線上に走ったりするのが観察された.この走行運動は3-4秒の走行ののち10-30秒鳴いたり歩いたりをくり返すもので、ラットで見られるように連続した走行運動ではなかった.このことから、シバヤギにおける走行運動がより高次の脳による制御下にあり、ラットのように視床下部走行ニューロンの興奮が直接走行運動の発現には結びついていないことが示唆された.一方、代謝の変化はほぼラットと同様に観察されたことから、代謝の制御などの様に自律的な機能の制御機構は系統発生的によく保存されているものの、行動発現などのより高次な機能の制御中枢は上位脳に移行していったことが考えられた.視床下部腹内側核(VMH)は摂食・性行動・攻撃・逃避など個体や種の維持に欠かせない本能行動の制御部位である。これら多様な行動の発現には、動機と関わらない次元で「走行運動」という共通な要素が存在しており、その制御機構の解明は、これらの本能行動の一層の理解と、それらを制御する手段を将来開発していくためには欠かせない。我々はラットのVMHに、定型的な走行運動を誘起する「走行ニューロン」が存在することを発見した。さらに、ラットにおいては走行ニューロンの興奮性はカイニン酸型グルタミン酸受容体を介して上昇し、γ-アミノ酪酸(GABA)受容体を介してシナプス前抑制されることを見い出した。一方、シバヤギにおいては、VMHへのカイニン酸投与は代謝性変化を惹起するが走行運動は誘起せず、走行運動の誘起のためにはさらにGABA受容体阻害薬を同時投与する必要があることを示唆する結果を得ており、走行ニューロンの制御機構あるいはその出力機構には或る程度の種差が存在することが推定されている。本研究は、哺乳動物における本ニューロンによる走行発現系の存在を普遍化すると共に、その回路解析を通じて制御可能点を摘発し、動物の行動と代謝を強調的に制御する方法論の確立に資することを目的にしている。本年度は主としてラットを用いた神経生理学的、並びに行動学的解析を行い、走行ニューロン自体がカイニン型受容体を発現していること、走行ニューロンはVMH内でシナプスを乗り換えることなく直接下位の神経機構に投射していること、走行ニューロンはVMHの背内側部に局在している可能性が高いことが示された。視床下部腹内側核(VMH)は摂食・性行動・攻撃・逃避など個体と種の維持に欠かせない本能行動の統御部位である。これら多様な行動の発現には、動機と関わらない次元で「走行運動」という共通な要素存在しており、その制御機構の解明は、これらの本能行動の一層の理解と、それらを制御する手段を開発してゆくためには欠かせない。

我々はラットのVMHに、定型的な走行運動を誘起する走行ニューロンが存在することを発見した。さらに、この走行ニューロンは走行を誘起するのみならず、走行運動を支援する代謝・循環器機能を同時にコマンドする機能を持つことも示されている。このことは、「VMHは自律神経系制御のセンターである」という従来の概念的理解が、神経科学的な実態として解析可能になったことを意味しており、この観点からも走行ニューロンの発見はきわめて大きな意義を有するのである。ラットにおいては走行ニューロンの興奮性はカイニン酸型グルタミン酸受容体を介して上昇し、γ-アミノ酪酸(GABA)受容体を介してシナプス前抑制されることがわかった。そして走行ニューロンを興奮させて走行運動と血糖値の上昇を誘起する方法として、カイニン酸あるいはGABA受容体阻害薬をVMHに直接投与している。しかし、シバヤギにおいてはラットの場合とは異なり、カイニン酸単独あるいはGABA受容体阻害薬を同時にVMHに投与した場合、血糖値上昇などの代謝性変化は両方の場合でみられたが、動物行動解析装置で測定した運動量は投与前よりは有意に増加したが走行運動は確認できなかった。さらに行動の表現にもラットの場合と比較して差が生じている。カイニン酸単独では攻撃行動は現われてはこないが、GABA受容体阻害薬を同時に投与した場合は激しい攻撃行動、さらに多量の飲水行動が現われてくる。このように走行ニューロンの制御機構あるいはその出力機構にはある程度の種差が存在することがわかった。次年度はさらに種差について研究を進める。視床下部腹内側核(VMH)は摂食・性行動・攻撃・逃避など個体と種の維持に欠かせない本能行動の統御部位である.これら多様な行動の発現には、動機と関わらない次元で「走行運動」という共通な要素が存在しており、その制御機構の解明は、これら本能行動の層の理解と、それらを制御する手段を開発してゆくためには欠かせない.我々はラットのVMHに、定型的な走行運動を誘起する走行ニューロンが存在することを発見した.さらに、この走行ニューロンは走行を誘起するのみならず、走行運動を支援する代謝・循環機能を同時にコマンドする機能を持つことも示されている.ラットにおいては走行ニューロンの興奮性はカイニン酸型グルタミン酸受容体を介して上昇し、γ-アミノ酪酸(GABA)受容体を介してシナプス前抑制される事が分かった.シバヤギにおいてカイニン酸とGABA受容体阻害薬をVMHに投与後、直ちに30mX30mの放牧地にはなし、CCDカメラで行動を録画、観察した結果、約5分後より柵にそって走り出し、さらに対角線上に走ったりするのが観察された.この走行運動は3-4秒の走行ののち10-30秒鳴いたり歩いたりをくり返すもので、ラットで見られるように連続した走行運動ではなかった.このことから、シバヤギにおける走行運動がより高次の脳による制御下にあり、ラットのように視床下部走行ニューロンの興奮が直接走行運動の発現には結びついていないことが示唆された.一方、代謝の変化はほぼラットと同様に観察されたことから、代謝の制御などの様に自律的な機能の制御機構は系統発生的によく保存されているものの、行動発現などのより高次な機能の制御中枢は上位脳に移行していったことが考えられた.
単分子磁石の創出

強磁性は1次相転移を伴う現象であり,相転移点(Tc)以下でドメイン内のすべてのスピンが揃い自発磁化を示すいわゆる磁石となる.このドメインのサイズを小さくした微粒子は比較的低い磁場で磁気飽和を示し,相転移を伴わずに粒子内のスピンがすべて揃う超常磁性となる。超常磁性をしめす分子は、バルクでは見られない、量子スピントンネル効果や分子自身が磁石として働くため分子メモリーへの応用が期待される物質群である。本申請研究では、より高いブロッキング温度を持つ単分子磁石の合成を試みた。単分子磁性体の構築にはクラスター分子が高いスピン多重度を基底状態に持ち,さらにクラスター全体で磁気異方性をもつ必要がある。ここで、金属錯体の高い基底スピン多重度は、金属イオンの磁気的軌道を直交するように分子内で並べることにより達成することができる。具体的には、金属イオンを架橋原子で90°つなぐ(架橋する)架橋配位子を設計することがキーポイントとなる。我々は、サリチルアルデヒドとアミノアルキルエタノールとの脱水縮合で合成される三座シッフ塩基配位子が種々の金属イオンを90°で架橋し、金属イオン間に強磁性的相互作用を誘起することを見出した。本申請研究では、化学修飾したこの三座シッフ塩基配位子と鉄(II)イオンとの反応により、鉄(II)4核高スピンクラスター分子を合成した。この錯体は、4つの鉄(II)イオンがアルコキソ基により架橋されたキュバン型錯体であり、鉄(II)イオンのスピンがすべて揃ったS=8の基底状態を持つ。さらに、合成したいくつかの錯体の交流磁化率は、周波数に依存した虚部のシグナルを与え、得られたデータの解析によりブロッキング温度(分子が磁石となる温度)が約1Kの単分子磁石であることが明らかとなった。単分子磁性体の構築にはクラスター分子が高いスピン多重度を基底状態に持ち,クラスター全体で磁気異方性をもつ必要がある。我々はサリチルアルデヒドとアミノエタノールとの脱水縮合で合成される三座シッフ塩基配位子が,種々の金属イオンを4つ取り込んだキュバン型4核錯体を作ることを見出した。このクラスター分子ではアルコキソ基が金属イオンを約90°で架橋することにより金属イオン間に強磁性的相互作用が働く。本申請研究では、化学修飾した新規シッフ塩基配位子をもちいることによりブロッキング温度が1.2Kの単分子磁石を合成することに成功した。
造血系転写調節因子の活性調節機構の分子構造学的研究

本研究は,プロモーターDNA上で転写制御因子がどのような作用機序によって,標的遺伝子の転写活性を調節しているのかを解明する事を目標とした。転写制御因子による転写調節においては,1)DNA上で複数の転写制御因子が相互作用することによる転写制御因子-DNA複合体の安定化,および2)DNAの変形を伴う転写制御因子高次会合体の形成の2点が,機能発現上重要であると考えられる。我々は造血細胞の分化や白血病発症に関連する転写制御因子Runx1,CBFβ,c-Myb, C/EBPβ,c-Ets1などに着目し,プロモーターDNA上で協調的に転写を調節する系について,構造化学的および生化学的側面から研究し,構造活性相関の解析を行った。1)については、すでに報告したRunx1-DNAおよびRunx1-CBFβ-DNA複合体のX線結晶構造解析から推定された、Runx1-DNA複合体のCBFβによるアロステリックな安定化機構を証明するため、核磁気共鳴法により分子の揺らぎを直接観測した。その結果、CBFβによるRunx1の安定化機構において、特定の時間スケールでのRunx1分子の揺らぎの制御が重要な役割を果していることが明らかになった。また、c-Ets1-Runx1-DNA複合体形成機構およびそれに対するc-Ets1のリン酸化の関与について、詳細な生化学的解析と転写活性化実験を行い、c-Ets1の活性制御領域の決定とプロモーターDNA上でのRunx1とc-Ets1の立体特異性、リン酸化による分子の構造の変化など多くの知見を得た。2)については、c-Myb-C/EBPβ-DNA3者複合体のX線結晶構造解析を行い、機能実験と原子間力顕微鏡による形態観察を組み合わせることによって、世界で初めて真核生物におけるDNAのループ形成と転写活性化との関連を明らかにした。さらにがん化型変異体v-MybがDNAループ形成を伴った高次会合体形成不全を引き起こすことを見出し、発がんにおける構造的基盤となる知見を得ることが出来た。1.プロモーターDNA上でのエンハンセオソーム構造形成機構の解析一般的に、転写因子は広い範囲のプロモーターDNA領域に複数結合し、さらに転写因子同士が互いに結合してエンハンセオソームと呼ばれる超分子会合体を形成し、転写を活性化する。我々はこのエンハンセオソーム構造の最も典型的な基本単位の一つと考えられる,c-Myb-C/EBP-DNA複合体の相互作用様式を原子レベルで解析している。c-MybとC/EBPは協調的に造血系の標的遺伝子を活性化するが,この転写因子間の協調活性に必要なプロモーターDNA配列を調べると,転写因子結合部位だけでなく,その周辺のDNA配列も厳密に規定されていることがわかってきた。現在,c-Myb結合部位の近傍のDNA塩基配列がエンハンセオソーム形成にどのような効果を持つかを調べるため、c-Myb結合塩基配列近傍に変異を導入したプロモーターDNAを調製し、c-Mybタンパク質の変異プロモーターへの結合をSurface Plasmon Resonance (SPR)法で詳細に解析すると共に、各変異プロモーターのエンハンセオソーム形成に与える影響を解析する目的で,原子間力顕微鏡(AFM)を用いた複合体の画像化による実験を進めているところである。2.Runx1とc-Ets-1タンパク質による協調的転写機構の解明T Cell Receptor α(TCRα)遺伝子は、転写因子Runx1とc-Ets-1によって協調的に転写が促進される。この協調性がどのような機構で起こるのか、その原子レベルでの報告は未だなされていない。

そこでこの機構を原子レベルで解明するために、TCRαプロモーターDNA, Runx1, c-Ets-1からなる複合体のX線結晶構造解析を行う準備を進めている。現在、協調性を示すそれぞれの転写因子の最小領域の決定、大量発現、精製法の確立を行っている。本研究は,プロモーターDNA上で転写制御因子がどのような作用機序によって,標的遺伝子の転写活性を調節しているのかを解明する事を目標とした。転写制御因子による転写調節においては,DNA上で複数の転写制御因子が相互作用することによる転写制御因子-DNA複合体の安定化,およびDNAの変形を伴う転写制御因子高次会合体の形成が,機能発現上重要であると考えられる。我々は造血細胞の分化や白血病発症に関連する転写制御因子Runx1,CBFβ,c-Myb, C/EBPβ,c-Ets1などに着目し,プロモーターDNA上で協調的に転写を調節する系について,構造化学的および生化学的側面から研究し,構造活性相関の解析を行った。複数の転写制御因子によるDNA複合体の安定化機構については,我々はRunx1-DNA相互作用に対するCBFβによる活性制御機構の研究からアロステリックな作用機序仮説を既に提唱している。その機構を分子の揺らぎの制御の観点から直接証明するために,核磁気共鳴法による磁気緩和測定実験を行い,Runx1の分子構造的揺らぎがDNAやCBFβとの結合によってどのように変化するかについて解析した。DNA上での多種タンパク質複合体の安定化における揺らぎの制御の役割が明らかになりつつある。DNAの変形を伴う転写制御因子高次会合体の形成機構については,造血系遺伝子のプロモーターの一つであるmim-1を用いて,DNA上に遠隔に結合したc-MybとC/EBPβなどの転写制御因子による協調的転写調節活性に関する研究を行っている。mim-1プロモーターについて様々な変異を導入して転写調節能を調べた結果,各転写制御因子の結合配列のみならず,その周辺領域や転写制御因子結合部位間の相対的配置や向きなどについても,転写調節機能を発揮する上で厳密に規定されていることが明らかになりつつある。
胃癌の発生・進展における癌組織の間質反応に関する組織学的並びに免疫組織化学的検討

切除胃癌128例の病理組織学的検討では、癌病巣先進部では、高・中分化型が低分化型に比べて有意に浸潤細胞数が多く、また前者が後者に比べて有意にリンパ球分画が低い傾向が認められ、また、癌細胞1個に対する浸潤細胞の比を求めて胃の組織形態との関係をみると浸潤細胞数、とくにリンパ球浸潤数は中・高分化型に比べて低分化型癌で有意に多かった。すなわち、癌間質浸潤細胞は、数的にみても高分化型よりも低分化型癌に著明であり、ただ前者では癌胞巣との境界部に限局的に集積してみられるので一見多く見えるものと思われる。浸潤様式も同様に低分化型癌においても一見散在性にみられるがやはり個々の癌細胞の周辺に認められ、数的にはむしろ高分化型癌よりも多いようである。切除胃癌17例の免疫組織学的検討では、癌病巣先進部に浸潤するリンパ球をT細胞およびB細胞に分けてその100分比を見ると、分化型、未分化型ともにT細胞がB細胞に比べて圧倒的に多く、両者間に差はみられず、癌組織の間質における免疫反応はT細胞を中心とした組織免疫反応が主体であり、抗体産生などによる液性免疫の反応は殆どないものと考えられた。要するに、胃癌に対する細胞性免疫反応は、対癌細胞比でみる限り胃癌の組織型によって異なり、低分化型癌ほど浸潤リンパ球の対癌細胞比は高度であり、一見散在性に見えるリンパ球あるいはT細胞の浸潤も癌胞巣を作らず散在性に浸潤する癌細胞の周囲に、対癌細胞数比的にはむしろ数多く認められた。これらの事実より、形態的に高分化型癌より低分化型癌の方が生物学的にも正常細胞からの偏奇性が高度であり、免疫性も強いものと考えられる。しかも、その免疫現象は、一般に云われるように、体液性免疫に比べて細胞性免疫が主体であると推定される。63年度の計画としては、胃癌組織の新鮮標本を用いて凍結切片を作製し、胃癌組織間質におけるリンパ球浸潤の様態を免疫組織化学的に、質的、量的に分析検討し、癌巣にみられる免疫現象を酵素抗体法を用いて検討することにあった。酵素抗体法にはLeuシリーズを用いてABC法でおこなった。現在の進行状況検体は、胃癌新鮮組織切片約20検体を凍結している。現在凍結切片を作製し酵素抗体法を用い染色を行っている段階であり、結果を分析するまでには至っていない。切除胃癌139例の胃癌組織間質で観察された各種浸潤細胞(リンパ球、形質細胞、好酸球および好中球)数で、細胞浸潤の中に占める各種浸潤細胞の分画を求め以下の結果を得た。1胃癌の組織形態と間質の細胞浸潤との関係を、浸潤細胞数ならびに各種浸潤細胞分画から検討した結果、胃癌の癌細胞-癌組織構築の分化度(分化度、浸潤度および実質間質量比)が高いものほど、浸潤細胞いずれもその数が多く、また各種浸潤細胞の分画をみてもリンパ球分画が低く、逆に形質細胞、好酸球および好中球の分画が高い傾向がみられ、胃癌の組織形態と間質の細胞浸潤の間に相関性が認められた。2胃癌組織間質における細胞浸潤の種類とその程度を、癌巣中心部と先進部で各種浸潤細胞の分画から検討した。

先進部ではリンパ球分画が高く、逆に中心部では好酸球および好中球の分画が高い傾向を示し、浸潤細胞いずれもその分画は中心部と先進部の間に明らかな差がみられた。3病巣内潰瘍の有無別に、癌巣中心部と先進部の各種浸潤細胞分画を検討した。病巣内に潰瘍がないものは、浸潤細胞いずれも中心部と先進部の間のその分画に殆ど差がない傾向がみられた。これに対して潰瘍があるものは、リンパ球分画が先進部で高い傾向がみられた。このように検索される癌巣の部位によって、胃癌組織における細胞性間質反応は明らかな差がみられ、恐らく癌細胞の変性、壊死や、癌巣に随伴する潰瘍などによる二次的反応よって、胃癌細胞-組織に対する一次的反応、即ち胃癌固有の間質反応をかなり修飾していることが伺われた。現在は、胃癌組織間質におけるリンパ球subsetの浸潤の様態を免疫組織化学的に酵素抗体法を用いて質的に、量的に分析検討し、癌巣にみられる免疫現象を検討しているところである。胃癌切除症例2T例の組織を速やかに凍結し酵素抗体法(PAP法)による染色を行った。抗体は抗Leuー2a、抗Leuー3a、抗Leuー4、抗Leuー14、抗LeuーM5、抗HLAーDR、抗ILー2R(Becton Dickinson社)を使用した。結果1胃癌組織間質における細胞浸潤の種類を見るとを、ほとんどがLeuー4陽性細胞(Tーcell)であり、Leuー14陽性細胞(Bーcell)浸潤は少なかった。3先進部のリンパ濾胞内にはLeuー14陽性細胞も認めるが、Leuー4陽性細胞の方が優勢であった。4LeuーM5陽性細胞(組織マクロファ-ジ)はリンパ濾胞、癌先進部、癌間質内および脈管周囲に認められた。5ILー2陽性細胞は、胃癌組織間質にはほとんど認めなかった。
談話とのインターフェイスに基づく統語メカニズムの実証的研究

本研究では、一見例外に思われる統語的振る舞いをする問い返し疑問文、談話連結表現、日本語の熊本方言の主格、右方移動、幼児の言語獲得現象を中心に近年のミニマリストプログラムのフェイズに照らして考察し、談話とのインターフェイス構造としてのフェイズの役割を明らかにした。そこで、話題(topic)、焦点(focus)、特定性(specificity)、メタ疑問、否定に関わる素性がいかに統語構造に反映され、統語派生のメカニズムに関与するかを示した。本研究は、以下の2点を目的とする。(i)一見例外的に思われる具体的現象の分析を通して、統語構造における談話とのインターフェイス構造を探求し、その統語的メカニズムを解明する。(ii)インターフェイス構造のフェイズとしての役割を検証し、最適の文法理論構築に貢献する。本年度は上記の目的のために、以下の実施計画に従い研究を進めた。(1)前年度の調査・研究を整理し、研究計画の再確認を行う。(2)関連構文の詳細な通言語的調査を言語学文献によって引き続き行う。(3)前年度の調査で明らかになった問題点を踏まえ、研究対象の談話現象の共通要素をつきとめ、統語構造のインターフェイス構造を提案する。(4)本研究に関連する国内外の研究者(宮川繁氏(MIT)等と意見交換を行い、研究の進捗状況の確認と軌道確認を行う。(5)研究の現段階での成果を公表する。(1)(2)は全員で行い、(3)(5)は一見例外的にみえる現象に関し、西岡が繰り返し疑問文と、熊本方言からみた日本語の統語構造分析を行い、CP構造と話題、焦点の役割を明らかにした。増冨は、談話とのインターフェイス構造を視野にいれ、特定性と談話連結表現を基にDPの内部構造を提案し、田中が右方移動の派生を焦点とフェーズ理論に照らして分析した。また、團迫が言語習得ならびにCPのカートグラフィに基づく分析を行った。4人の研究成果は、日本英文学会九州支部大会にて「談話と統語構造とのインターフェイスを求めてー例外的文法現象とフェイズ理論ー」と題するシンポジウムを行い一部を公表し刊行した。(4)に関しては、宮川氏と小渕麻菜氏(ユトレヒト大学)が九州大学来学の際にまた、大庭幸男氏(大阪大学)を訪問して助言を得て、現在の研究の方向の妥当性を確認した。今年度の研究は、研究目的の(i)(ii)に寄与するものであり、今後の研究の基盤となる点で意義深い。単文レベルで働く文法制約が、ある談話の中で用いられた場合に働かない場合がある。それは従来、例外扱いされてきた現象であるが、談話のなかであれ、文として機能している以上、何らかの統語的メカニズムが働いていないはずはない。本研究は、この直感を近年の生成文法理論に照らして実証するものである。すなわち、本研究は、以下の2点を目的とする。(1)代表者・分担者で、課題研究の準備状況と研究計画の再確認を行う。(2)生成文法における最新の理論的動向を探るとともに、談話とのインターフェイス研究の従来の分析の問題点を洗い出す。(3)これまでのtopic, focusの概念を反映した節の統語構造分析を再吟味し、フェーズ理論に照らし、新たなモデルを提示する。(4)談話連結表現の文法現象を洗い直し、その内部構造モデルを提示する。(1)(2)は全員でおこない、(3)に関しては、西岡が日本語の否定文の節構造におけるtopicとfocusの役割を重点的に研究し、その成果は海外の研究者とともに海外の学会で発表し、Miyagawa, Nishioka, Zeijlstra (2013)として公刊される。また、田中が右方移動に関して分析を進め、田中(2013)として公刊予定であり、團迫は言語習得の観点から研究を進めた。さらに(4)に関しては、増冨が名詞表現の特定性に関して研究を進め、増冨(2013)として公刊予定である。いずれの研究も研究目的の(ii)に貢献しており、今後の研究を進める上での重要な基盤となる。本研究は、以下の2点を目的とするものである。本研究の最終年度の本年度は、上記の目的のために以下のことを行った。(1)理論的進展と整合性をはかるため、言語理論に関する文献調査を行うとともに、本研究で提案した分析の妥当性を検証した。(2)研究成果を国内外の学会で発表し、公刊した。

(3)研究成果をまとめ、報告書を作成した。(1)は、全員でおこない、(2)は、代表者の西岡が繰り返し疑問文のCP分析研究と熊本方言に基づく日本語の主語位置の分析ならびに日本語の否定のスコープの問題を国内外で発表し、公刊した。また、分担者も増冨が談話連結句を含む名詞句の分析を公刊し、田中が右方移動をフェイズ理論に照らした分析を公刊し、團迫が、DPの定性制限を言語獲得の観点から分析した内容と、CP内に生じると考えられる日本語の終助詞の分析を国内外の学会で発表し、公刊した。(下記のリスト参照。)さらに、代表的論考をまとめ(3)を行い、国内の関係する国内の研究者に配布した。これらの分析はいずれも上記の(i)(ii)の目的に寄与するものであり、インタフェース構造としてのCP,vP,DPの内部構造と派生のメカニズムに関する斬新な提案である。特に、主節CPの談話構造としてメタ疑問の機能範疇の提案と日本語のtopic/focus素性と主語との一致分析、DPフェイズに談話特性を反映した機能範疇の提案、右方移動の談話特性を反映したフェイズ分析、機能範疇の獲得に関する提案は、今後のフェイズのさらなる詳細な内部構造分析への重要な手掛かりを提供するものと言える。人文学英語学・言語学統語論今年度はほぼ計画通りに研究が進み、西岡の繰り返し疑問文と熊本方言研究、増冨の談話連結、特定性と移動研究、田中の右方移動とフェーズ、團迫の言語習得とCP構造研究に研究目的に即した相応の成果があった。また、その成果をシンポジウムと公刊という形で公表できた。今年度は、当初の談話構造から節構造を探る方向での研究のやり方(外から内)を若干修正し、節構造自体の研究を並行的、あるいは重点的に行う方針で研究をすすめたが、談話連結表現、否定文におけるtopic, focusの役割、右方移動におけるfocusとphase理論などにおいて相応の成果があった。公刊が少し遅れたが来年度に発表される予定である。。今後は以下のように研究を推進する。(1)理論的進展と整合性をはかるため、言語理論に関する文献調査を行い、本研究で提案した分析の妥当性を検証する。(2)研究成果を国内外の学会で発表し、公刊する。1.研究課題に対する談話分析、意味論、語用論研究の文献、特に統語規則の例外を独自に扱うことを試みた論考を再点検して、独自のあらたな統語構造におけるインターフェイス構造ならびに文法モデルを構築する。2.前年度の調査結果を踏まえ、研究対象の談話現象の共通要素をつきとめ、統語構造のインターフェイス構造を提案する。4.研究成果を国内外の学会で発表する。物品費(特に図書)に関して当初予定より使用する必要性が減った。また、来年度海外で複数の成果発表を計画しており、そのために予算を意図的に残した。図書購入と国内外での学会での成果発表、ならびに報告書作成に使用予定である。関連構文についての文献調査を、言語学・英語学文献により行う。→このために言語学・英語学文献を備品として購入する。調査し、収集したデータの整理を行う。→このために研究補助費、消耗品、複写費等に使う。会合して研究打ち合わせを行う。
中世における仏教的春日信仰の展開をめぐる研究―中世都市奈良の一切経会を中心に―

この研究は、中世の仏教的春日信仰の諸相を明らかにするために、中世都市奈良の葬送を担った白毫寺の春日信仰に注目した。同寺を代表する儀礼である一切経会は、春日社のそれに倣いながらも、春日神による死者救済を目的とするもので、死穢を忌避しないことが特徴である。三年の研究期間における文献史料を中心とする調査で、白毫寺の葬送儀礼の次第書や、春日社一切経会における真言僧の作法書、さらに中世真言宗における春日信仰の実態を窺える史料などを発見し、複数回にわたる学会発表を行い、論文を作成した。本研究は、奈良の白毫寺という律宗寺院の「一切経会」という、春日信仰と密接に関わる死者供養儀礼を対象に、中世都市奈良における神仏習合の実相や、都市民の精神世界(死生観)の解明を目指すものである。平成27年度は、特に中世の白毫寺が葬送という宗教活動を通じて、都市民の信仰を獲得したと考えられることから、同寺で用いられた葬送・死者供養の儀礼次第書の調査・分析を行った。一つは『白毫寺経会式(仮題)』と言い、死者を供養するため『法華経』を埋納して建立した新たな五輪塔を開眼するための作法を記したテクストであり、やはり春日他の神祇信仰が看取される。白毫寺は、「一切経会」の他に『法華経』を転読する「千部経会」という死者供養儀礼でも知られていたが、新たに本資料によって、白毫寺における『法華経』信仰の一面が明らかになった。これについては、日本宗教学会第74回学術大会で報告を行い、議論を深めることができた。さらに高野山大学密教文化研究所に架蔵される『唐招提寺所蔵聖教』写真帳の内より、『無常呪願作法』『荼毘略作法』を見出した。これは共に、本来は白毫寺で用いられた葬送儀礼の次第書である。書写奥書は中世末期のものであるが、その成立は少しく遡るものと推定される。中世の葬送については、南北朝・室町期になると公家の日記に詳細な記事が確認し易くなるが、それらは儀礼の次第書そのものとは言えない。僧侶が葬送儀礼を実修するために不可欠な次第書は、中世初期の守覚法親王による『吉事次第』などが知られてはいるが、いまだ踏み込んだ研究は乏しく、それは偏に、資料の発掘・紹介が出遅れているためと言えよう。ただ本資料の十分な内容分析と学会での紹介には至らなかった。以上のように平成27年度は、白毫寺の葬送儀礼・春日信仰・経供養儀礼を窺い知ることのできる貴重な新資料を発掘し、白毫寺の宗教活動の実態に迫ることができた。本研究の進捗状況であるが、概ね順調に進展していると判断される。本研究では、新資料の発掘が重要な意味を持つ。中世宗教史研究においては、「聖教」と呼ばれる寺院資料の多くが未紹介のまま存在しており、これらを活用して既成の宗教史像を相対化してゆくことが可能なのである。既に論文にて紹介した中世都市奈良の墓寺たる白毫寺の「一切経会」関係資料は、むろん死者供養儀礼の次第書であるが、死穢を忌避する神祇信仰(春日信仰)と深く結びついており、春日神が奈良の都市民の精神世界・死生観に占める位置は決して小さくない。こうした神祇信仰と融合した形で死者供養を展開する点に白毫寺の特殊性が認められるが、平成27年度に紹介し、或は見出した資料は、こうした白毫寺の宗教活動を更に具体的に解明してゆくための格好の素材と言ってよい。先述のように、十分な内容分析に至らなかった点は存するものの、全体として本研究は当初の計画に沿って展開できている。平成28年度は、前年度の「推進方策」に示したように、一切経会そのものの研究に着手し、まず龍谷大学図書館の島田文庫に蔵される『一切経書写供養転読史』『一切経の外形的研究』『一切経供養史料』を調査した。判読の困難な箇所もあるが、一切経研究史における極めて重要な文献であって、中世の一切経会研究にも大いに資するものであることが実際に確認された。続いて上野音楽大学日本音楽史研究所蔵『春日一切経転読作法』と『住吉太神宮一切経会当日式』の調査を行った。住吉社のものは近世資料であり、また儀礼に伴う歌舞音曲の次第のごく簡略な記録に留まるが、春日社のものは弘安五年の本奥書を有し、隣接する白毫寺の一切経会への直接的な影響関係も想定可能である。残念ながら一切経会の全体的な次第書ではなく、春日社一切経会において「真言経衆」が一切経会に用いる経典を加持する際の次第書であるため、即座に儀礼の全体像を復元し得るものではない。よって「転読衆」の用いた次第書の発見が期されるが、春日社一切経会に関する儀礼次第書としては現状で確認される限り唯一の貴重な資料である。『春日一切経転読作法』については、仏教史学会大会報告の中で紹介し、興福寺は顕教が主体とされるが、奈良の密教僧も結番して儀礼に勤仕しており、顕密合行の法楽であって、中世神仏習合儀礼の実態を考察する上で興味深い事例との位置づけを与えた。