hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ジェノサイドと財産問題―財産の移転と処分の類型化

本研究は、ジェノサイドや強制移住など、大規模な人の殺害もしくは移動により生じた残置財産の処分と移転の事例を比較検証することで、これらに共通する「型」を浮き彫りにし、ここから20世紀に数多く見られた大量死や強制移住の本質に迫ることを目的とした。具体的には、ホロコーストにより生じたユダヤ人の相続人不在の財産の処分・移転と、ナチが二次大戦中に行った「民族ドイツ人」の実質的な強制移住により生じたドイツ系住民の財産のドイツ帝国への移転を比較した。この結果、国家が関与して財産を移す場合は対外債務の精算という形で処理されること、また損失の多い為替交換より、物資による支払いが好まれることが分かった。本年度は、まず研究の出発点となる、ナチ体制下での民族ドイツ人の強制移住における財産移転の形態を検証した。ナチス・ドイツとソ連(併合前のバルト諸国も含む)、イタリア、ルーマニアなどの間で結ばれた、民族ドイツ人の移住協定を検証し、出国する民族ドイツ人が国内に残す財産をいかに処分しようとしたのか、類型化を試みた。史料は主に連邦文書館の第一次資料と、刊行された外交文書を利用した。これにより、財産移転にはどの例でも共通性があることが分かった。たとえば、財産の迅速な処分を進めるために、国対国の一括売却がなされること、またその代金は可能な限り物資の輸出で支払うことなどである。こうした共通性は、強制移住を支える普遍的な要素であることがうかがえた。本年度は、ナチ時代に「民族ドイツ人」と呼ばれた東欧のドイツ系住民が、連邦共和国で被追放民、もしくは「アウスジードラー」として受け入れられる法的基盤について明らかにした。彼らへの政府による戦後の支援は、ナチ時代に移転された財産の補償の延長線上にあるものであり、受け入れの法的地位を明らかにすることで、逆に戦中の財産移転による補償状況が明らかになるのである。さらに、基本法116条にある「民族所属性」を根拠とするアウスジードラーの受け入れが、実は連邦共和国における東欧出身のユダヤ人の受け入れと連動している点が明らかとなった。研究成果は『ドイツ研究』と大内宏一編の論文集『ヨーロッパ史の中の思想』所収の論文「『ドイツ人』と『ユダヤ人』の境界ー基本法116条1項『ドイツ民族所属性』をめぐって」において発表した。また、早稲田大学の公開シンポジウムやドイツ学会シンポ、さらに日本記者クラブでの2回にわたる講演において、その成果の一部を発表した。同時に、昨年度に収集し、データとして持ち帰った史料の精読を進め、最終的な論文執筆の準備を行っている。本年度は予定していたドイツでの史料収集が様々な理由で行えなかった。したがって資料集めという点では多少の遅れは出ているが、資料の解読は進んでおり、遅れは大きなものとはなっていない。本年度の最大の成果は、単著『<和解>のリアルポリティクスードイツ人とユダヤ人』(みすず書房)の出版である。本書はホロコースト後のドイツ人とユダヤ人がいかに和解に至ったかを、ドイツとイスラエルの外交関係、ドイツ国内のユダヤ人社会の再建、記憶と想起といった観点から分析したもので、本助成よりも射程の広いテーマを扱っている。直接的に本助成研究に関係するのは、戦後のユダヤ人財産の返還とその移転、そしてこれがイスラエル国家に与えた影響を論じた第一部である。日本では困難な過去を克服するモデルとされることの多いドイツの戦後処理をリアルポリティクスという観点から評価しなおしたことにより、本書は歴史、国際政治等の分野で幅広い議論の糸口を提供した。これまでも複数の新聞や学術雑誌に書評が掲載されている。また日本記者クラブや筑波大学歴史人類学会等の場所で、本書に関連する講演を行った。これらの講演はともに会見詳録や講演記録として文字化されている。ただし本書の執筆に多大な時間が取られたことにより、本来計画していた史料収集などが行えず、結果的に助成期間を延長することとなったのも事実である。助成が終了する前に成果の一部を発表した形となった。本年度は、本研究テーマより射程の広い単著を出版したため、その執筆に時間が取られ、予定していた史料収集のための海外渡航が実施できなかった。結果的に一年研究期間を延長することとなった。したがって計画していた英語の論文の執筆や国際学会での発表等が実現していない。研究年度を一年延長した上での最終年度であり、成果をまとめるため精力的に学会報告を行い、論文を発表した。まず8月にフランスとポーランドを訪問した。フランスではパリのショアー基金の文書館を訪問する傍ら、Yahad In-Unumという、ジェノサイドの現場を調査するNGOを訪問し、ホロコースト現場の発掘調査の進展について話を聞いた。ポーランドではトレブリンカ絶滅収容所とマイダネク強制収容所を訪れ、近年進む犯罪現場の考古学的調査について最新の知見を得た。この研究出張の成果は、帰国後すぐにドイツ現代史学会で報告している。また、この報告を膨らまして論文にし、『現代史研究』に発表した。さらに、11月にはポーランド、クラクフで行われたEuropean Association for the Holocaust Studiesの大会に参加し、アウシュヴィッツの表象に関し最新の研究の流れをつかむと同時に、学会参加者らとともにアウシュヴィッツ=ビルケナウ博物館の保存・修復部門によるレクチャーを受け、当時に由来する遺物をいかに保存管理しているか学んだ。3月には3回の研究報告を行った。一つは共同研究を行っているプロジェクトの中での報告で、これは9月にドイツ現代史学会で報告した内容と同じであった。二つ目はイスラエル・パレスチナ研究会において、冷戦を背景としたドイツ=イスラエル関係の分析を行った。

三つめは西日本ドイツ現代史学会で、連邦共和国による一連のホロコースト裁判において法解釈がどのように変化してきたのか、最新の判例も分析しながら紹介した。これらは当助成研究の直接的な成果であり、助成最終年度にふさわしい実績を残すことができたと考える。本研究は、ジェノサイドや強制移住など、大規模な人の殺害もしくは移動により生じた残置財産の処分と移転の事例を比較検証することで、これらに共通する「型」を浮き彫りにし、ここから20世紀に数多く見られた大量死や強制移住の本質に迫ることを目的とした。具体的には、ホロコーストにより生じたユダヤ人の相続人不在の財産の処分・移転と、ナチが二次大戦中に行った「民族ドイツ人」の実質的な強制移住により生じたドイツ系住民の財産のドイツ帝国への移転を比較した。この結果、国家が関与して財産を移す場合は対外債務の精算という形で処理されること、また損失の多い為替交換より、物資による支払いが好まれることが分かった。まず、2014年3月に本テーマで現代史研究会で報告し、その後報告をもとにした論文を『現代史研究』に発表した。また、夏期にドイツ、ベルリンの連邦文書館で史料収集を行い、相当量の史料を入手することができた。現在、集めた史料の精読を進めている。2016年度は現地文書館で最終的な資料収集を行い、資料の精読して、論文にまとめるつもりである。また、複数の歴史学会で報告を予定している。本が出版され、ようやく本研究だけに集中できる状況になった。本年度は夏季休暇中に海外に渡航し、史料を読み込んだのち、仕上げとして英語の論文を執筆する。論文は海外の学術雑誌に投稿する。ドイツ現代史今後は、史料の収集先を広げ、多方面からの分析を試みたい。ドイツ外務省政治文書館においても史料収集を行う予定である。本年度の研究で財産移転の形態はおおよそ明らかになったので、この後は財産がドイツ国内に移転された後、いかに配分されたか、使われたかをより細かく明らかにしてゆく。本年度、予定していた現地での史料集めに出られなかったため、その分の旅費の未消化が生じた。本の執筆に時間と労力が取られ、本来計画していた海外での史料収集が実行できなかったことが、繰り越しが生じた理由である。書籍の購入で全額使い切る予定であったが、海外からの輸入であったため納入に時間がかかり、本年度の会計で処理できなかった。次年度は海外での史料集めを複数回行う予定である。これにより未使用の額は消化される。本年度は夏季休業中(もしくは来年の3月)に海外での史料収集を行う予定である。行き先は、ドイツ/フランス/ポーランドを中心にヨーロッパ諸国か、ホロコースト記念博物館の資料が閲覧できるアメリカ、ワシントンもしくはユダヤ系の文書館の多いニューヨークとなるだろう。少額であるため、図書などの物品費として使用予定である。
頭部外傷による脈絡組織損傷と下垂体茎部損傷の生成機序の解明

頭部外傷による脳損傷に関する本研究では、法医解剖例と実験動物において、脈絡組織損傷と下垂体茎部損傷の生成機序を解明することを目的としている。I.法医解剖例:頭部外傷を有する法医解剖20症例について、約2週間ホルマリン固定した脳の肉眼的検査を行い、側脳室、第III脳室及び第IV脳室の脳室壁-脈絡組織-脈絡叢、視床下部-漏斗-下垂体茎部及び脳下垂体のホルマリン固定・バラフィン切片の組織標本について、ルクソールファーストブルー/ヘマトキシリン・エオジン染色、軸索染色(modified Wielshowsky)、血管染色(azocarmine)を行った。その結果、肉眼的に脈絡叢の出血が認められた症例が2例あり、うち1例は脈絡叢の損傷が脳室内出血の原因となっそいた。現在、組織学的に脈絡叢損傷の有無を検査している。また、視床下部と下垂体頚部の損傷については、抗ニューロフィラメント抗体を用いた免疫組織化学法で神経軸索の損傷を検索している。II.動物実験:全身麻酔下のラットの頭蓋骨に歯科用ドリルで直径5mmの骨窓を開け、硬膜上に脳損傷作製装置(Fluid Percussion Device)を装着して脳損傷を作製した。その結果、脳皮質挫傷を形成することは出来たが、脈絡組織損傷と下垂体茎部損傷は形成することが出来なかった。視床下部と下垂体頚部の組織標本について抗ニューロフィラメント抗体を用いた免疫組織化学法で神経軸索の損傷を検索したが、軸索損傷は検出できなかった。現在、脳損傷作製装置による外力の作用部位と方向を検討し、どのような作用方向と強度の外力が脈絡組織損傷と下垂体茎部損傷を形成するかを調べている。法医解剖例の結果と照合して脈絡組織損傷と下垂体茎部損傷の生成機序を解明したい。I.法医解剖例:頭部外傷を有する法医解剖15症例について、約2週間ホルマリン固定した脳の肉眼的検査を行い、側脳室、第III脳室及び第IV脳室の脳室壁-脈絡組織-脈絡叢、視床下郡-漏斗-下垂体茎部及び脳下垂体のホルマリン固定・パラフィン切片の組織標本について、ルクソ-ルファーストブルー/へマトキシリン・エオジン染色、軸索染色(modified Wielshowsky)、血管染色(azocarmine)を行った。現在、頭部への外力の作用部位、作用方向、強度などの受傷機転を解析し、どの様な受傷機転の頭部外傷が脈絡組織損傷と下垂体茎部損傷を形成するのかを解明している。さらに、視床下部-漏斗-下垂体茎部と脳下垂体の各組織標本では、神経軸索の損傷を抗ニューロフィラメント抗体を用いた免疫組織化学法で検索する予定である。II.動物実験:全身麻酔下のラットの頭蓋骨に歯科用ドリルで直径5mmの骨窓を開け、硬膜上、に脳損傷作製装置(Fluid Percussion Device)を装着して脳損傷を作製した。
季節順応する意匠・構造・設備一体型サステナブル住宅の実証研究

本研究では、愛知県に所在する「気象順応型サステナブル住宅」に導入された、(1)建物ボイドスラブ基礎を利用したクール/ヒートチューブ涼房・換気システム、(2)ロールカーテンによる太陽熱換気・通風促進システム、(3)パネル裏面の通風促進に配慮した太陽光発電システムの挙動特性やエネルギー性能について実測データをもとに検討し、また、これらのシステムを含む建物全体のエネルギー性能や建物内の温熱快適性について評価した。建物全体のエネルギー分析では、対象建物が一般世帯の年間一次エネルギー消費量に比べ71%の削減効果があり、このうち太陽光発電で53%,燃料電池CGSで約5%削減されることを確認した。また、クール/ヒートチューブシステムについては、数値熱特性解析モデルを開発し、この解析結果をもとにシステム設計・性能予測チャートを提案した。本研究では、気象順応型サステナブル住宅の実証データから、下記1)3)個々のシステム性能と、これらの総合性能である建物全体の省エネルギー性能評価を行うものである。1)耐震構造のためのボイドスラブ基礎を利用したクール/ヒートチューブ涼房・換気システム2)ロールカーテンを用いた簡易ダブルスキン構造による太陽熱換気・通風促進システム3)建物デザインと一体化した太陽光発電システムの裏面通風促進による発電効率向上度平成22年度は、3年間に及ぶ継続的な計測データ取得に対する計測装置の設置を行うとともに、各種システムの運転初期性能に関する検討を行った。計測・評価項目は下記の通りである。(1)外界気象データの計測:日射量、風向風速、外気温湿度など(2)土壌・基礎部交換熱量データの計測と解析:建物直下土中温度、コンクリート基礎スラブ内温度、1階床下空間の温湿度計測、チューブ取入外気、チューブ内流路空気温度、給気温度、省エネ量(3)太陽光発電データの計測と解析:太陽光発電電力、発電効率(4)建物全体の用途別エネルギー消費量の計測と解析:電灯・コンセント、エアコン、給湯器など(5)ロールカーテンによる自然排熱換気の熱的性能実測:換気風量、吸気・排気温度、排熱量、室内温湿度、室内快適性(PMV)など(6)クールヒートチューブによる室内環境影響の計測:吹き出し気流、室内温湿度、室内PMVなど本研究は、愛知県に所在する「気象順応型サステナブル住宅」に対して得られた各種実証データから、下記1)3)の各システムに対するシステム単体の挙動特性やエネルギー性能または室内温熱快適性の評価と、これらを含む建物全体のエネルギー性能評価について検討を行うものである。1)耐震構造のためのボイドスラブ基礎を利用したクール/ヒートチューブ涼房・換気システム2)ロールカーテンを用いた簡易ダブルスキン構造による太陽熱換気・通風促進システム3)建物デザインと一体化した太陽光発電システムの裏面通風促進による発電効率向上度平成23年度は、上記の実証システムに対して前年度から継続した実測データ取得を行い、特に建物全体のエネルギー性能分析及び、上記1),3)に対する運転2年目の実性能に関して検討を行った。今年度の実測評価項目は下記の通りである。(1)建物全体の用途別エネルギー消費量の計測と分析(電力使用パターン分析と使用用途分類)(2)建物全体の年間一次エネルギー消費・CO2排出量および削減率の分析(3)クール/ヒートチューブの挙動特性把握(室内吹出空気温度、室・土壌間の熱流挙動の確認)(4)クール/ヒートチューブの運用適正化に対する性能実証(中間期運用停止の効果検証)(5)裏面痛風式太陽光発電システムの効果検証(発電効率の向上度に対する確認実験)また、クール/ヒートチューブについては、その特異な形体を簡易に表現した新たな数値解析モデルを提案し、解析プログラムのプロトタイプ版を作成した。本研究では、愛知県に所在する「気象順応型サステナブル住宅」に対して得られた各種実証データから、下記13の各システムに対するシステム単体の挙動特性やエネルギー性能または室内温熱快適性の評価と、これらを含む建物全体のエネルギー性能評価について検討を行った。1耐震構造のためのボイドスラブ基礎を利用したクール/ヒートチューブ涼房・換気システム、2ロールカーテンを用いた簡易ダブルスキン構造による太陽熱換気・通風促進システム、3建物デザインと一体化した太陽光発電システムの裏面通風促進による発電効率向上度平成24年度は、上記の実証システムに対して継続的に実測データを取得し、建物全体のエネルギー性能分析及び、上記1に対する運転3年目の実性能評価を行った。また、クール/ヒートチューブについては、中間期のファン停止および冬期のチューブ全長を53mから80mに変更して運用を行い、1年目・2年目の実測結果と熱交換特性を比較した。

さらに、特異な埋設条件となるクール/ヒートチューブの数値熱特性解析モデルを開発し、この解析結果を実測データと比較することで、開発モデルの妥当性を確認した。解析によってチューブ管長・管径・管内風速、チューブ埋設ピッチを変更したパラメトリックスタディを行って熱交換特性曲線を描き、この実験回帰式を作成して、北緯約35°の大都市圏を対象としたシステム計画・設計チャートを提案した。このチャートにより、所定の換気量、チューブ管長・管径に対して、簡易に冬期・夏期の期間熱交換量、冷暖房ピーク時間の交換熱量およびチューブ吹出温度を簡易に見積ることが可能となった。当初計画した実測データの収集、また取得データを基にした種々の分析・評価項目は、この時点で一度、全て項目に対して実施・検討を終えている。また、今年度の大きなテーマであった、クール/ヒートチューブの数値解析モデルの提案についても、解析プログラムのプロトタイプ版を作成し、次年度研究テーマへの準備を完了した。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後は、運用3年目の実証データを取得し、これまで実施した分析・評価を複数年に亘って行うことにより、評価結果の検証と信頼性向上に努める。また、ボイドスラブ基礎を利用したクール/ヒートチューブについては、その特異な形体を簡易に表現した新たな数値解析モデルを提案し、実測データと比較することでその妥当性評価するとともに、このモデルを用いて適正なシステム計画・設計を行うためのパラメトリックスタディとこれを基にした、計画・設計チャートを提案する予定である。
高機能人工骨の創製

人工骨は自家骨や他家骨に比べて機能が劣るため、臨床家は不満を抱いている。高い生体適合性と生体安全性と生体分解吸収性をもつリン酸カルシウム粉体の三次元形状を制御して人工骨の造形を行う方法と、バイオマテリアルへ生理活性物質を付与して周囲の細胞の機能を制御する方法を開発して、融合することで、機能を大幅に向上させたオーダーメード型人工骨およびテトラポッド型人工骨の2種類の新規人工骨を創製した。本研究では、生体適合性・安全性に優れたα型リン酸三カルシウムを基本素材として、骨移植を代替しうる理想的人工骨を創製することを目的とする。具体的には、期間内に以下の点を研究・解明する:(1)リン酸カルシウム造形法の研究:インクジェットプリンターによるオーダーメード型人工骨に関しては、インクヘッドの改良による造形精度の向上、分割による操作性の向上、内部構造設計による分解吸収性の向上を図る。また、後処理により力学的強度を改善する。テトラポッド型微小人工骨に関しては、既に均一なテトラポッドの形状の作製に成功しているが、後処理による力学的強度の向上、焼結温度の調節による分解吸収能の向上を図る。(2)生理活性物質の同定と付与方法の研究:バイオセンサーによる生理活性物質同定と作用機序の分子生物学的解析を行い、同定された生理活性物質について、リン酸カルシウムに付与した際の最適の送達制御法を明らかにする。(3)動物実験での検証:人工骨の試作と動物実験による安全性・有効性の証明を行った後、臨床研究へ向けての準備を行う。1.リン酸カルシウム造形法の研究【オーダーメード型人工骨】世界で初めて焼結なしに直接インプラントできる強度を持つ人工骨創製に成功しているが、造形精度を左右する硬化液の組成を検討してコンドロイチン硫酸ナトリウム4%、コハク酸ニナトリウムーコハク酸12%、生理食塩水84%pH5が最適であるごとを見いだした。操作性に関しては、下顎骨のような長い人工骨での分割を検討した。ANSYSによる強度解析を用いて最大変位量を求めたところ、分割しない場合0.05mmに対して、2分割した場合は、0.03mmとなり、分割した方が強度が高くなることが確認された。分解吸収性に関しては、マクロ連通孔を1から5本まで作成してANSYSによる強度解析を行ったところ、連通孔を増やすと連通孔にかかる応力集中が軽減されることが確認された。【テトラポッド型微小人工骨】α-TCP粉体を射出成形後に焼結して、高さ1mmのテトラポッド型微小人工骨を量産することに成功しいるが、レオメーターによる破壊荷重試験によりTCPのみでは0.56±0.03Nなのに対し、リン酸八カルシウム化表面処理により3.45±0.41Nと約7倍強度が高まることが確認された。分解吸収性に関しては、焼成温度を700度とすることで、組成を分解吸収性が高いαTCP100%とすることができた。2.生理活性物質の同定と付与方法の研究【バイオセンサーによる骨形成性生理活性物質同定と作用機序の分子生物学的解析】バイオセンサーにより同定したシグナルのうち、ヘッジホッグシグナルに着目し、その詳細な分子作用機序を明らかにした。【リン酸カルシウムに付与する際の最適な送達制御法の解明】リン酸カルシウムの強力な担持力を調節する物質として、セリン及びトレハロースが適していることを見いだした。リン酸カルシウムとこれらの物質の混合物の示査走査熱量測定、フーリエ変換赤外分光、X線光電子分光を行い、分子間に水素結合だあるととを確認した。1.リン酸カルシウム造形法の研究平成20年度に引き続き、オーダーメード型人工骨の形状、操作性、分解吸収性、強度の向上に関する研究、及びテトラポッド型微小人工骨の強度と分解吸収性の向上に関する研究を行った。具体的には、平成20年度の結果を再確認するとともに、細かいパラメーターの最適化を行った。2.生理活性物質の同定と付与方法の研究20年度に引き続き、バイオセンサーによる骨形成性生理活性物質同定と作用機序の分子生物学的解析、及びリン酸カルシウムに付与する際の最適な送達制御法の解明を行った。具体的には、平成20年度に同定された生理活性物質(特に低分子化合物)に関してより詳細な作用機序を明らかにするとともに、送達方法を最適化した。また、バイオセンサーによるスクリーニングを継続した。3.動物実験での検証高機能人工骨の試作:上記1,2の成果を総合して、高機能人工骨の作製に着手した。具体的には、インクジェットプリンターを用いて、生理活性物質であるFGF2およびBMPシグナルとRunx2シグナルを活性化するプラスミドを内包するナノミセルを望みの位置に望みの量噴霧することを試みた。動物実験による安全性・有効性の証明:C57BL/6マウス頭蓋骨臨界骨欠損(直径5mm)に埋植し、その骨誘導性、生体親和性、免疫反応について血液生化学的、組織学的、放射線学的に評価する。

埋植1、2、3週後、1、2、4、6ヶ月後に安楽殺し、血液生化学的検討と埋入部の肉眼的及び放射線学的(X線、CT)評価とともに、組織切片(脱灰及び非脱灰)を作製してHE染色、von Kossa染色、I型コラーゲン・オステオカルシン免疫染色などで骨再生を評価した。マウスでは、FGF2を用いた場合でも、プラスミドを内包するナノミセルを用いた場合でも良好な結果が得られた。これを受けて、ビーグル犬の頭蓋骨欠損(径2cm)に埋植する実験の準備を行った。オーダーメード型人工骨に関しては、連通孔を開ける位置を軟部組織の側に設けると、軟部組織の侵入によりかえって骨再生が妨げられること、連通孔は骨の断端を結ぶように作成すると良いことを明らかにした。テトラポッド型微小人工骨に関しては、欠損部に埋植した際の強度を計測し、従来の人工骨よりも初期強度が高いことを明らかにした。バイオセンサーによる骨形成性生理活性物質同定を継続し、いくつかの低分子化合物を同定した。それらの作用機序の分子生物学的解析を行い、BMP依存性の骨誘導効果があることを明らかにした。同定した薬物をリン酸カルシウム製人工骨に付与する際の最適な送達制御法に関しては、低分子化合物においては、とくにDDSを用いずとも、薬物は人工骨に担持され、1週間から1ヶ月の時間で徐放されることが明らかになった。以上の結果を踏まえて、インクジェットプリンターを用いて、生理活性物質を適切な送達システムとともに望みの位置に望みの量噴霧した人工骨の作製を試みた。作製した人工骨に関して、マウスを用いた実験による安全性・有効性の検証を継続して行った。C57BL/6マウス頭蓋骨臨界骨欠損(直径5mm)に埋植し、その骨誘導性、生体親和性、免疫反応について血液生化学的、組織学的、放射線学的に評価した。埋植1、2、3週後、1、2、4、6ヶ月後に安楽殺し、血液生化学的検討と埋入部の肉眼的及び放射線学的(X線、CT)評価とともに、組織切片(脱灰及び非脱灰)を作製してHE染色、von Kossa染色、I型コラーゲン・オステオカルシン免疫染色などで骨再生を評価したが、昨年度のパイロットと同様に、良好な骨再生誘導が見られた。そのため、ビーグル犬の頭蓋骨欠損(径2cm)を作成して人工骨を埋植したところ、途中経過では、高濃度の生理活性物質を投与した群で良好な結果が得られている。今後、実験を継続していく予定である。オーダーメード型人工骨に関しては、成長因子の一つであるFGF2を搭載した人工骨を作製し、ビーグル犬の頭蓋骨欠損(径2cm)に埋植したところ、高濃度の生理活性物質を投与した群で、放射線学的、組織学的に良好な骨形成が確認された。テトラポッド型人工骨に関しては、射出成型により製造した、均一な形状とサイズを持つ人工骨を作成した。この人工骨は、多孔体ブロックを粉砕して作った、従来用いられてきた形状もサイズも不均一な人工骨に比して、細胞や血管が侵入するのに都合の良い粒子間構造を持っていることを明らかにした。粒子間構造は、これまで直接評価されたことはなく、Mercury Porosimetryや2次元画像から間接的に推定されてきたため、実隙には細胞や血管がはいりこむことのできない構造まで過大に評価されていた。
陰イオン種認識能を有する低分子天然有機化合物の動的挙動と精密構造

生体内に存在するアミノ酸とかヌクレオチドのような陰イオン性の物質を識別する構造が生体内には存在するが、それらはいずれも高分子性の物質である。低分子物質でありながら陰イオン種と結合するためには、分子内にグアニジン基のような強塩が存在し、しかもその周辺にキラリティ-をも含む相手分子認識機能を有する官能基を備えた物質が必要である。海洋生物から発見された強い抗ガン抗エイズウイルス作用を持つPtilomycalinは陰イオン種識別に必要な官能基を備え、しかも分子内に2群の塩基性基が存在するため高度な機能を発揮することが明らかになった。この物質は硫酸のような極性の高いイオンでも有機容媒中に取り込む他に、脂肪酸、アシル化アミノ酸とも強く結合した。NMRを用いた研究の結果、芳香族アミノ酸類よりは脂肪アミノ酸の方が結合しやすい傾向が認められた。また結合した状態ではカルボン酸はグアニジン基に結合するほか、スペルミジン部分とも水素結合して分子全体としては脂溶性の構造を有していることが明らかになった。またptilomycalinはSー及びRー型アシルアミノ酸とはほぼ同程度に結合したが、イソ酪酸の2個のメチル基はNMRスペクトルで異なった挙動を示しキラリティ認識別能力を示していた。
メダカを用いたメンデル遺伝及びDNA解析による遺伝学実験の発展的な教材化の研究

昨年度行ったT5と呼ばれる5重劣性突然変異体のヒメダカの系統とHNIと呼ばれるクロメダカの系統をかけ合わせたF1を用いた遺伝学実習の改良を行った。b遺伝子座以外にlf遺伝子座を用いた二遺伝子雑種の実習の方法を改良した。lfの表現型の判定に色温度の低い落射照明(ブルーフィルターを外す)を使うことで容易に判定ができるようになった。濃度の高いアガロースゲルを用いることで簡便で迅速なアガロースゲル電気泳動で判定を可能にすることができた。さらにゲルの染色と観察にバイオセーフDNA染色液と青色トランスイルミネーターを用いることで安全に短時間で判定が可能になった。また、胚からのDNA抽出を高価なDNA抽出試薬にかえて水酸化ナトリウム溶液を使う方法でもうまくできることが明らかになった。この実習は本校以外の高校でも本校からメダカ胚を提供することで実施することができた。したがって、標準的な方法として確立できたと考えている。先日発表された新指導要領によるとメンデル遺伝と分子遺伝学を一体のものとして扱うことが求められている。メンデル遺伝と分子遺伝学を一体のものとして扱うこの実習の意義はより大きくなっていると考えている。基礎生物学研究所の協力を得てプライマーの改良を試みたが、現在使用しているものより優れたものを設計することはできなかった。今後も継続的に改良を試みたい。また、T5は5重劣性突然変異体であるため、注目していない形質に惑わされ表現型の判定を誤りやすい問題が明らかになった。そのためbとlfあるいはguの二重劣性突然変異体の作出が必要であると考え、すでに作出に着手している。これらの成果をまとめ1月の日本生物教育学会で発表した。これらの内容をまとめたHPは現在準備中である。
根尖性歯周炎の発症機構に関する免疫組織化学的・分子生物学的研究

前年に引き続き、根尖歯周組織の防御機構の解明を目的として、ラットに実験的に惹起した根尖性歯周炎のモデルにより、破骨細胞の分化誘導に関与していると考えられているRANK(Receptor Activator of NF-kB)およびそのリガンドであるRANKLの発現の動態を免疫組織化学および分子生物学的手法を用いて検索を行った。また、根尖性歯周炎の前段階としての歯髄の防御機構を解明する目的で、ラット歯髄における樹状細胞の発現の検索を行った。ラット歯髄においては、マクロファージをはじめとする多数の免疫担当細胞の存在が報告されているが、特に樹状細胞は高度な抗原提示機能を持った細胞として歯髄内の免疫応答に重要な役割を果たし、また、さまざまな分化段階あるいはサブポピュレーションに分類され、それぞれ特異的な機能を営んでいると思われる。そこで、樹状細胞の代表的な表面マーカーであるCD11cに陽性の細胞を中心に、それらのフェノタイプ発現を歯髄において免疫組織化学を用いて観察した。ラット臼歯歯髄において、CD11c陽性細胞は類円形・不整形・紡錘形・樹枝状等の形態を呈しており、歯冠歯髄を中心に歯髄全体に観察された。特に、象牙芽細胞層近傍の歯髄辺縁部では紡錘形・樹枝状の形態を呈する細胞が多く観察された。また、CD80陽性細胞は少数ではあるが歯冠歯髄全体に観察された。二重染色の結果、CD11c陽性細胞はED1陽生細胞の一部を構成しており、ほとんどのCD11c陽性細胞がOX6にも陽性であった。また、CD11c陽性細胞の一部は、抗CD80抗体にも陽性であった。ラット臼歯歯髄においては、CD11c陽性細胞が多数存在しており、そのほとんどがMHC class II抗原を発現していることから、これらの細胞が歯髄の免疫機能において重要な抗原提示細胞として機能していると思われた。また、その一部はco-stimulatory moleculeであるCD80を発現していることから、さらに高次の免疫応答に関与している可能性が示唆された。根尖性歯周組織の防御機構の解明を目的として、ラットに実験的に惹起した根尖性歯周炎のモデルにより、根尖病変内の免疫担当細胞および関連物質の動態について免疫組織化学および分子生物学的手法を用いて検索を行った。Nitric oxide (NO)の合成酵素であるinducible nitric oxide synthase (iNOS)の発現に注目したところ、これまでの結果と同様に露髄開放後1428日の病変の拡大期において、根尖周囲に限局してED1陽性マクロファージに強い発現が認められた。マクロファージにおけるNOの発現が根尖周囲における貪食および殺菌に何らかの役割をしている可能性が確認された。NO合成酵素阻害剤であるL-NAMEをラットに全身投与し、NOの合成を阻害したうえで根尖性歯周炎を誘発した際の根尖歯周組織の変化については現在検索中である。実験的に誘発したラット歯髄炎においても、iNOSの発現が認められ、NOが歯髄炎の進行に深く関与している可能性が示唆された。また、根尖病変における骨吸収の機構をさらに解明するために、破骨細胞の分化誘導に関与していると考えられているRANK(Receptor Activator of NF-kB)およびそのリガンドであるRANKLの発現の動態をRT-PCR法を用いて解析した。実験的根尖性歯周炎を誘発した実験群では根尖部に明らかなエックス線透過像が観察され、根尖周囲の骨吸収が進んでいると思われた。また、RANKおよびRANKLとも、実験群においてコントロールに比べその発現が増加していたことから、これらが破骨細胞形成を促すことにより根尖周囲の歯槽骨吸収が惹起された可能性が示唆された。

ラット臼歯歯髄においては、CD11c陽性細胞が多数存在しており、そのほとんどがMHC class II抗原を発現していることから、これらの細胞が歯髄の免疫機能において重要な抗原提示細胞として機能していると思われた。また、その一部はco-stimulatory moleculeであるCD80を発現していることから、さらに高次の免疫応答に関与している可能性が示唆された。
資源利用と管理に着目したスワヒリ海村の環境・生活影響評価と多民族共存の比較研究

歴史的に多民族が混住する東アフリカ・スワヒリ海岸のキルワ島とマフィア島(タンザニア)、ラム島とパテ島(ケニア)において、民族に応じた沿岸資源の利用と管理について比較研究した。その結果、いずれの海村においても、波風が穏やかで魚影の濃いマングローブ内海が居住空間・生業空間として重要であった。主要調査地のキルワ島では、マングローブ内海ではバントゥ漁師による採集中心漁撈、外海では主にアラブ系漁師によって刺し網中心漁撈という民族に応じた生業空間と漁獲対象の棲み分けがあった。しかし、2004年ごろから始まった環境保護政策によって、マングローブ内海での漁撈活動が制限され、漁具を没収されたバントゥ系住民は生活困窮に陥った。バントゥ系住民とアラブ系住民の経済格差の拡大は、文化的経済的にキルワ島社会の構造に変化をもたらした。文化的変化は、邪術の横行と対抗邪術としての精霊憑依儀礼の復活である。経済的変化は、家計を助けるためにバントゥ系女性が積極的に経済活動に参加し始めたことと、若者の漁撈離れ観光業嗜好である。環境保護政策にともなう伝統的な資源利用の変化が、現地の生活に、文化的経済的に与える影響について具体的に解明することができた。東アフリカ・スワヒリ海村社会の海資源の利用と管理に着目して、民族間での資源の使い分け/棲み分けを明らかにすることをつうじて、多民族共存のメカニズムを解明することが本研究の目的である。本年度は研究実施計画どおり、タンザニアのマフィア島とキルワ島において、海洋公園内に暮らす人びとの生活ついて現地調査をおこなった(45日間、うち15日間は別経費)。一般家庭への住み込み調査、漁撈活動についての直接観察および、Tanzania Marine Park Authority(マフィア島ウテンデ事務所)、WWF(キルワ・マソコ事務所)での聞き取り調査をおこなった。また別経費によりエジプトのWadi el Gamel National Park(22日間)とイエメンのソコトラ島(13日間)の海洋公園でも比較研究を目的とした現地調査をおこなった。海洋公園にともなう漁撈制限(漁場制限・漁法制限)やライセンス化(漁撈権・船所有権・商売権:一般の漁師にとっては高額)に対する漁師の不満の声を多く聞いた。また大型の資本投資にともなう生活の変化;観光化による観光客の漁場への侵入、ゴミ問題、経済格差の増大、女性の積極的な経済活動への進出(それによる社会構造の変化)なども観察することがでた。来年度に向けての多くの課題が浮き彫りにされた。本年度の研究成果は、論文・報告書(日本語×2、英語×5)と学会発表(日本語×3、英語×3)によって公開された。これらの研究成果を英文報告書としてすみやかにCOSTECH(Tanzania Commission for Science and Technology)とNCS(National Council for Science and Technology, Kenya)に提出することで、研究成果の調査国への還元をおこなう。研究成果は学術言語(英語)だけではなく、現地語(スワヒリ語)によっても公開されるべきである。そのために、スワヒリ語での研究成果のウェブサイト発信のために、研究協力者(サイト構築、翻訳)からの支援をとりつけた。来年度は、現地調査を継続するとともに、研究成果を現地の人びとと共有し、人びとの意見を研究に取り込んでゆくべく、現地語での研究成果発信に力を入れてゆく。本年度は、タンザニア・スワヒリ海村のタンガ、パンガーニ、キルワ島の三海村において沿岸環境管理と住民生活ついて現地調査をおこなった。また別経費ではあるが、スーダンの海洋研究の主要機関である紅海大学の協力を得て、紅海沿岸の海村(ドンゴナーブ、サワーキン)にて二回の現地調査。さらに、本研究の海外協力者であるPascal博士の所属するエチオピア・アジスアベバ大学での研究打ち合わせ、および内陸湖(チャモ湖、アバヤ湖、アワサ湖)での淡水漁撈の調査を実施した。

これより、スワヒリ海岸と紅海を含むインド洋西海域における沿岸環境保護と住民生活、さらに海洋沿岸漁撈民と淡水漁撈民との比較研究を行うことができた。タンザニアのキルワ沿岸でWWCにより進行中のBeach Management Unit(BMU)を軸にした沿岸環境管理計画について、キルワ・マソコWWC事務所で、その現状と困難について聞き取り調査をおこなった。BMUによる沿岸管理を受け入れる海村(多くはBMUとともにもたらされる援助金目当てであると反対海村の住民から揶揄される)もあれば、BMUに強く反対する海村もある。キルワ島もBMUに反対の海村であるが、住民に聞き取りしてみると、BMUについて正確に理解している人はほとんどいないことがわかった。プロジェクト側と現地住民とのコミュニケーション不足と、援助金をちらつかせてのプロジェクト側のやや強引な姿勢という問題点が明確化した。文化人類学者はこのようなプロジェクト側と現地住民の両サイドの問題点を同時に知ることができるゆえに、両者をつなぐパイプとしての役割・義務を担わなければいけない。東アフリカ・スワヒリ海村社会の海資源の利用と管理に着目して、民族間での資源の使い分け/棲み分けを明らかにするために、本年度は、本研究の主要調査地であるタンザニア・キルワ島において現地調査をおこなった。これまで、歴史的に多民族が混住するキルワ島とマフィア島(タンザニア)、ラム島とパテ島(ケニア)において、民族に応じた沿岸資源の利用と管理について比較研究してきた結果、いずれの海村においても、波風が穏やかで魚影の濃いマングローブ内海が居住空間・生業空間として重要であった。キルワ島では、マングローブ内海ではバントゥ漁師による採集中心漁撈、外海では主にアラブ系漁師によって刺し網中心漁撈という民族に応じた生業空間と漁獲対象の棲み分けがあった。しかし、2004年ごろから始まった環境保護政策によって、マングローブ内海での漁撈活動が制限され、漁具を没収されたバントゥ系住民は生活困窮に陥った。バントゥ系住民とアラブ系住民の経済格差の拡大は、文化的経済的にキルワ島社会の構造に変化をもたらした。文化的変化は、邪術の横行と対抗邪術としての精霊憑依儀礼の復活である。経済的変化は、家計を助けるためにバントゥ系女性が積極的に経済活動に参加し始めたことと、若者の漁撈離れ観光業嗜好である。トップダウン的な環境保護政策による伝統的な資源利用への介入が、現地の生活に文化的・経済的に与える影響について具体的に解明することができた。本研究の研究計画にもとづき、毎年度スワヒリ海村における現地調査を実施することができている。タンザニアのペンバ島、タンガ、パンガーニ、マフィア島、キルワ島においてスワヒリ海村社会の比較研究調査を進めている。研究成果も随時、学術論文と学会発表により公表することができている。また、現地住民・海外協力者・研究機関との関係も良好であり、今後も本研究への協力を得ることができると期待できる。ただしケニア北部沿岸の情勢不安(ソマリア海賊による外国人誘拐、殺害)により、ラム島とパテ島での現地調査は実現できていない。現地の友人と連絡をとりながら情勢回復を待っている。
脳梗塞遠隔部での神経細胞死とスフィンゴリピド

虚血性細胞死について以前はネクローシスと考えられていたが最近アポトーシスを証明する報告が見られる。さらにアポトーシスなどの情報伝達にスフインゴ脂質の基本骨格であるセラミドが関与していることが注目されている。そこで中大脳動脈閉塞(MCA)モデルを用いてPenumbraの大脳皮質のスフインゴ脂質を分析し、セラミドの増加やスフィンゴミエリンサイクルについて検討した。閉塞6時間よりセラミドが増加し始めた。そして増加したセラミドはGC-MSで確認したが、オキシ脂肪酸をもったセラミドはMCA群にも存在しなかった。増加するセラミドには2つの過程が考えられる。先ずバルミトイルCoAとセリンからスフインゴシンさらに脂肪酸が結合して生合成される経路とスフインゴミエリンや糖脂質(ガラクトシルセラミド.ガングリオシド)から水解される経路がある。われわれが行ったグリセロリン脂質の実験では6時間以降でリン脂質の再合成は認めず、前者の生合成が亢進していることは考え難い。一方、スフインゴミエリンは閉塞2時間より減少した。増加したセラミドと構成脂肪酸が類似しスフインゴミエリンサイクルが働いていることが示唆され糖脂質のガラクトシルセラミドはオキシ脂肪酸を含有しており増加したセラミドは直鎖脂肪酸で構成されておりガラクトシルセラミドの水解は考え難い。ガングリオシドの糖鎖とセラミド結合を直接水解する酵素は哺乳類では発見されていないことから、増加したサラミドはスフインゴミエリン由来と考えられる。次にprogrammed cell deathのひとつとして知られている砂ネズミ一過性前脳虚血後の海馬における遅発性神経細胞死に注目し、そのスフインゴミエリン量を測定した。遅発性神経細胞死を起こさない2分間虚血、及び耐性獲得後の5分間虚血ではスフインゴミエリンの変動は認めず、遅発性神経細胞死を誘導する5分虚血のみスフインゴミエリンが減少した。スフインゴミエリンサイクル虚血刺激による細胞の生死を細胞内に伝達する役割をしている可能性を示唆した。SDラット(300-350g)をフローセン麻酔下で田村の方法で経眼窩的に中大脳動脈を電気凝固して昨製した。虚血後1、2、6、24、96時間にマイクロウエーブで処理後、大脳皮質(80-100mg)を取りだし脂質抽出に用いた。1)スフィンゴミリン: Folch法で抽出した総脂質を薄層クロマトグラフィー(TLC)とガスクロマトグラフィー(GLC)を用いC21 : 0の脂質酸を内部標準にして定量した。スフィンゴミエリン量は虚血前2.28±0.17mmol/kgでステアリン酸が約77%、パルミチン酸8%、ネルボン酸7%であった。虚血2時間から1.89±0.25mmol/kgとコントロールと比較して有意に減少を示し、24時間と96時間で更に激減した。ラット中大脳動脈閉塞モデルにおける大脳皮質の神経細胞死は虚血24時間で起こり始めるが、それ以前の虚血後2時間よりスフィンゴミエリンサイクルが作動していることが解かった。2)セラミド:セラミドは総脂質をフロリジルカラでリン脂質を除去したあとTLC、GLCで同様に定量した。セラミドは虚血前370±62.8μmol/kgで脂肪酸は直鎖酸のみでステアリン酸が40%を占め、つぎにパルミチン酸25%,オレイン酸17%であった。

虚血6時間より有意に増加し96時間ではコントロールの約4.2倍まで増加した。増加したセラミド脂肪酸組成は直鎖脂肪酸のみでステアリン酸が主成分であり虚血刺激によりスフィンゴミエリナーゼが活性化され、スフィンゴミエリンがセラミドとコリンリン酸に水解されることが想定された。また虚血2時間でスフィンゴミエリンが減少しているにも拘らずセラミドの増加が認めらないことは、セラミドが更にセラミダーゼによりスフィンゴシンと脂肪酸に分解されることが推測された前年度、ラット中大脳動脈閉塞モデルの大脳皮質において6時間以降に増加したセラミドの由来についてスフィンゴミエリンの水解が考えられたが他のスフィンゴリピドのセレブロシド、ガングリオシドについて検討した。田村のラット中大脳動脈閉塞モデルを作製した0.5、1、2、6、12、24、48、96時間にマイクロウエーブで処理後、Folch法で総脂質を抽出した。セレブロシドの定量は総脂質をフロリジルカラムでクロロホルム-メタノール(2:1、v/v)で溶出しリン脂質を除去した。さらにセレブロシドの分離にはクロロホルム-メタノール-水(64:25:4、v/v/v)で薄層クロマトグラフィー(TLC)を行い、セレブロシド部分をかきとり、5%塩酸メタノールで脂肪酸メチルエステルを作りC21:0を内部標準にしてGLCで定量した。セレブロシド量はcontrolで5.73±0.76mmol/kgで直鎖酸をもつセレブロシド(GalCER-NFA)は1.45±0.18mmol/kgでネルボン酸、リグノセリン酸、ステアリン酸が主な脂肪酸組成で6時間(1.11±0.11mmol/kg)と96時間(1.29±0.33mmol/kg)で統計学的に有意に減少した。オキシ酸をもつセレブロシド(GalCER-HFA)はcontrolで4.28±0.85mmol/kg、セレブロン酸、ヒドロキシネルボン酸が主な成分で閉塞6時間(3.25±0.34mmol/kg)より有意に減少した。前年度報告した6時間以降のセラミドの増加はスフィンゴミエリンの以外に膜の崩壊に伴いセレブロシドが水解されたと考えられたが、増加したセラミドの脂肪酸組成はステアリン酸が主成分であり、セレブロシドの崩壊よりむしろ虚血6時間の間にセレブロシドの生合成が阻害された可能性が高い。ガングリオシドのはFolch分配の水層を凍結乾燥後、HPTLC(high performancethin layer chromatography)でシアル酸を比色定量したが有意な増減は認められなかった。砂ネズミの一過性前脳虚血後(5分間の総頚動脈を一過性に閉塞)、7日目の海馬CA1の神経細胞の細胞死をおこす。このメカニズムもProgramされた細胞死と考えられており、海馬の神経細胞死の認められない2分間虚血、及び耐性獲得後の5分間虚血でスフィンゴミエリンを測定した。虚血モデルの作成;雄性砂ネズミ(体重60-90g)を使用し、2%ハロセン麻酔下に両側総頚動脈を杉田のクリップで閉塞し、一過性前脳虚血モデルを作成した。閉塞時間は、5分間、2分間、および2分+5分(2回虚血;間隔48時間)の3群を作成した。5分間前脳虚血群は、再開通直後、15、30、90分後、6、24、96時間後にマイクロウェーブ処理後速やかに断頭し、大脳を摘出、両側海馬を顕微鏡下に取り出した(湿重量約5060mg)。
メタボリックシンドロームにおけるストレスとサイトカインシグナルのクロストーク

本研究ではメタボリックシンドロームにおけるストレスシグナルと炎症性サイトカインのシグナルのクロストークについて、様々なストレスで誘導されるTRB3というpseudokinaseを中心に、脂肪細胞や肝細胞、β細胞をモデルとして検討した。両シグナルとも脂肪細胞の分化や機能においてはともに強く阻害したのに対し、肝細胞では、TGFβのシグナルをTRB3は強く抑制し、β細胞では小胞体ストレスなどによる機能低下をTGFβが解除することを見出し、細胞によって、両者のシグナルのクロストークは異なった表現型を示すことを明らかにした。(1)ヒトTRB3のコンディショナル・トランスジェニックマウスの作製を行い、3系統のマウスを確立した。それぞれのマウス由来の胎児線維芽細胞(MEF)にCreリコンビナーゼを発現させると、ヒトTRB3の発現が確認され、1系統のTRB3-Tgマウスに尾静脈よりCreリコンビナーゼ発現アデノウイルスを投与すると、肝臓でヒトTRB3の発現が見られ、核の肥大や核小体の増加が見られたほか、血管周辺部において炎症像が観察された。今後このマウスを用いて、糖・脂質代謝へのTRB3の関与を検討していきたい。(2)炎症や代謝などへの関与が示されている核内受容体RORαの脂肪細胞分化に及ぼす影響について検討したところ、RORαは脂肪細胞分化のマスターレギュレーターのC/EBPβと結合することによってコ・アクチベーターとの結合を阻害し、C/EBPβの転写活性を抑制して脂肪細胞分化を阻害することを明らかにした。また、RORαは別のマスターレギュレーターであるPPARγ依存的に発現するペリリピン(脂肪滴の生成に必須)の発現を抑制し、これはペリリピンのプロモーター上にあるPPARγとRORαの結合領域がほとんど重なっており、お互い競合的に結合を阻害することにより抑制されることを見出した(Mol. Endocrinol. (2009))。(3)マウス膵β細胞株MIN6細胞は5mMグルコース条件下で小胞体ストレスをおこすと、インスリンやその発現に重要な転写因子PDX1の発現が低下するが、TGFβが共存すると小胞体ストレスが緩和され、インスリンなどの発現低下も回復した。一方、高血糖(25mM)条件ではTGFβ存在下でも小胞体ストレスの緩和は見られず、インスリン低下も回復しなかった。これらは高血糖時、TGFβのシグナル伝達が抑制されるためであることが示唆された(in preparation)。(1)ストレス誘導性pseudokinaseTRB3は多くのがんで高発現していることが知られており、TRB3の細胞周期への影響を検討するため、cyclin dependent kinase(CDK)の脱リン酸化・活性化をおこすphosphatase Cdc25Aのタンパク発現へのTRB3の影響を調べた。すると、通常の状態ではその発現をTRB3は負に制御し、DNA傷害時に不安定化するCdc25AをTRB3は逆に安定化させるという、二相性の制御をCdc25Aに対して行っていることを新たに見出した(Biol. Pharm. Bull.(2010))。また、TRB3は細胞周期依存的にそのタンパクの発現が変動することを見出し、これは細胞周期関連ユビキチンリガーゼの一つであるAPC/C^<Cdh1>が深く関与していることが明らかとし、これがCdc25Aの細胞周期依存的な発現変化を引き起こしている可能性を見出した(BBRC(2010))(2)マウス白色脂肪細胞株(HW11)、褐色脂肪細胞株(HB2)を用いて、脂肪細胞分化・成熟化に及ぼす抗炎症サイトカインTGFβの影響を調べたところ、いずれの細胞株ともその分化の抑制効果が見出された、その効果は特に白色脂肪細胞株で強く認められた。また、成熟した脂肪細胞株へのTGFβの効果を検討したところ、褐色脂肪細胞株はほとんど影響を受けなかったのに対し、白色脂肪細胞株では顕著な脂肪滴の減少が見られ、白色脂肪細胞の機能を特異的に制御可能であることが示唆された(in preparation)。(3)ヒト肝がん細胞株HepG2細胞を用いて、TGFβ依存的な細胞内情報伝達をTRB3は強く抑制することを見出した。この抑制効果は小胞体ストレスを細胞に加えても認められ、また、TRB3のノックダウンで減弱した。TGFβの情報伝達分子群であるSmadfamily分子の中で、Smad3とSmad7がTRB3と強く結合することが明らかにした。Smad7についてはこのTRB3によるTGFβシグナルの抑制機構への関与は今のところ不明であるが、Smad3についてはTRB3はリン酸化や転写活性化能には影響せず、DNAへの結合を抑制することを明らかにした(in preparation)。我々は小胞ストレスや栄養飢餓、低酸素、あるいは感染.炎症などで誘導されるTRB3という分子を見出し、その生理的機能の解明を行っている。また、DNA傷害などで誘導される、TRB3と同じファミリーのTRB1についても解析を進めている。

そこで、今回、これらストレス誘導性分子とサイトカインとしてTGFβを中心にそのシグナルや発現のクロストークについて解析を進めた。まず、白色脂肪細胞株(3T3-L1、HW11細胞など)の分化・成熟化においてストレス誘導性のTRB3は、以前の検討で、負に制御することを明らかにしている。今回、抗炎症性サイトカインの一つであるTGFβによる影響を調べたところ、脂肪細胞の成熟化を強く抑制すること、さらに、成熟化した脂肪細胞の脂肪滴がTGFβにより劇的に減少することを見出した。この脂肪滴の減少は脂肪滴形成に重要な働きをしているperilipinの発現が強く低下していることによること、またその原因としてその上流の転写因子であるPPARγの活性ではなく、発現が抑制されていることによっておこっていることが明らかとなった。TRB3もPPARγの活性を低下することから、TRFβを介したストレスシグナルとTG耶のシグナルは脂肪滴の減少に協調的に働く可能性が考えられた。一方、肝癌細胞株(HepG2)において、TRB3はSREBP-2遺伝子発現を抑制することにより、コレステロールホメオスタシスの制御に関与していることを明らかにした。さらに、HepG2においてTGFβシグナルがTRB3によって抑制され、これは、TGFβシグナル分子の一つSmad3のDNAへの結合低下に基づくことを明らかにした。さらに、TRB3は免疫増強性サイトカインのIL-2の発現を正に、TRB1は逆に負に制御していることを見出し、TRB1/TRB3の発現のバランスの免疫応答への影響の可能性が示された。