hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
慢性心理ストレス誘発の生体機能異常と骨髄由来ミクログリアの関連検索

ボックス装置を用いて5日間連続で心理ストレスを負荷(1時間/日)した結果、室傍核に集積する骨髄由来ミクログリアの近傍にバソプレッシン含有神経が存在している、2)同様の慢性心理ストレス負荷において骨髄由来ミクログリアでmRNAが増加していたILー1βがタンパクレベルでも増加する、3)この実験系で問題となるGFPキメラマウス作製時の放射線照射による脳・血液関門での透過性亢進でGFP陽性細胞の脳内への移行が起こる可能性を否定するために、頭部を鉛ブロックで保護し放射線照射して作成したGFPキメラマウスに慢性心理ストレス負荷すると、同様に骨髄由来ミクログリアが室傍核に集積する、4)慢性心理ストレスを負荷したラットでは、下部消化管運動が亢進し視床下部におけるバソプレッシンのmRNA発現が亢進する、5)バソプレッシン受容体拮抗剤脳室内投与で慢性心理ストレス誘発の下部消化管運動亢進が正常化する、6)六君子湯投与は、慢性心理ストレス誘発下部消化管運動亢進が正常化するとともに、骨髄由来ミクログリア集積の室傍核への集積が抑制されること、を発見した。以上の結果から、ストレス→脳→骨髄→骨髄由来ミクログリア→脳という、慢性心理ストレスにおける「脳・骨髄相関」は、生体のストレス反応にも関与している可能性が考えられた。当初の計画どおり、慢性心理ストレスによって視床下部・室傍核に集積した骨髄由来ミクログリアの特徴および集積機構に関与する因子を特定した。24年度が最終年度であるため、記入しない。慢性心理ストレス誘発の骨髄由来ミクログリア集積とストレス誘発生体反応(消化管運動、不安行動)の関係について検索し、治療戦略を提案する。
微分位相と信号処理による超高精度距離計測法

平成4年度には,(1)ハードウェアの開発,(2)信号処理系のコンピュータシュミレーションを行った。(1)ハードウェアの開発デジタル信号処理による位相検波回路を完成し,測定精度を検討した.受信信号と参照信号の両方を40kHzの中間周波に変換した後,高速AD変換器で波形をデジタル化して計算機に取り込み,次にこのデータをデジタル信号処理して位相と振幅を求める方式である.アナログ位相検波では,位相の測定精度は約1度であるが,デジタル信号処理では1/100度までに精度が向上すること,精度の限界は量子化雑音とタイミング系のジッタで決まることが実験的に確かめられた.また,位置が可変で調整できるモデル標的として,電磁石を利用したアクチュエータを試作した.(2)信号処理系のコンピュータシュミレーション原理的には,微分位相法により超高精度の距離計測が可能であるが,有限の信号対雑音比のもとでの測定精度をコンピュータシュミレーションにより検討した.帯域幅200KhZの水中ソナーの場合,従来方式での測定精度は不確定性原理で決まり3.75mmであるが,微分位相を用いるとS/Nが10dBの場合で約100倍測定精度が向上することを明らかにした.これは,最小自乗法による結果であるが,最尤推定アルゴリズムを用いれば,さらに精度の向上が期待できる.平成4年度には,(1)ハードウェアの開発,(2)信号処理系のコンピュータシュミレーションを行った。(1)ハードウェアの開発デジタル信号処理による位相検波回路を完成し,測定精度を検討した.受信信号と参照信号の両方を40kHzの中間周波に変換した後,高速AD変換器で波形をデジタル化して計算機に取り込み,次にこのデータをデジタル信号処理して位相と振幅を求める方式である.アナログ位相検波では,位相の測定精度は約1度であるが,デジタル信号処理では1/100度までに精度が向上すること,精度の限界は量子化雑音とタイミング系のジッタで決まることが実験的に確かめられた.また,位置が可変で調整できるモデル標的として,電磁石を利用したアクチュエータを試作した.(2)信号処理系のコンピュータシュミレーション原理的には,微分位相法により超高精度の距離計測が可能であるが,有限の信号対雑音比のもとでの測定精度をコンピュータシュミレーションにより検討した.帯域幅200KhZの水中ソナーの場合,従来方式での測定精度は不確定性原理で決まり3.75mmであるが,微分位相を用いるとS/Nが10dBの場合で約100倍測定精度が向上することを明らかにした.これは,最小自乗法による結果であるが,最尤推定アルゴリズムを用いれば,さらに精度の向上が期待できる.
ブートストラップ型ニューラルネットによる動的情報表現と記憶の形成

ニューロンが,入力の総和を計算し出力する過程を,前提二入力の総和,結論=パルスの出力とみて一種の推論過程と考える。このとき,前提→結論→前提を1サイクルとして力学系の表現を考える。この力学過程を特徴づける重要なパラメーターは時間遅れである。重荷シナプス遅延,シナプス後電位の和の計算に必要な時間,絶対不応期,さらには相対不応期が決定的である。相対不応期を力学方程式の中に組み込む。残りの時間スケールの大小関係によって二種類の方程式系が得られる。一つは通常のカイアネロ方程式(モデルCと呼応)で他の一つは関数方程式型のモデル(モデルBと呼ぶ)である。後者のネットワークをブートストラップ型ニューラルネットと呼んだ。モデルBとモデルCの相異を情報表現の立場から検討した。モデルBはCに比べ,一般に発火率が減少している。発火しているニューロンの分布は,モデルCがガウス分布であるのに対し,モデルBでは,ポアッソン的であった。これを反映して,平均発火率からのゆらぎは,モデルBの方が大きくなる。coincidence型かrate型かを調べるため,同期しているニューロンへの入力を調べた結果,モデルBでは,モデルCに比較して,抑制性ニューロンからの同期入力が多いことが分った。これは,モデルBがcoincidence型ニューラルネットであり,モデルCはrate coding型ニューラルネットであることを示唆している。この傾向は,入力から出力までの時間遅れが長くなる程顕著である。興味深いことは,モデルBとCを単一のニューロンが,入力依存的に切り替えている可能性が理論的に示唆されたことである。これは実験でみられているdual codingの機構を考える上で,今後参考にすべき点である。
新規の遺伝子網羅的解析法による肝細胞癌分子標的薬に対する薬剤耐性遺伝子の同定

各細胞株のTTCを作成した。MTT assay法により薬剤指摘濃度を確認した後に樹立したTTCを用いてソラフェニブを添加した。その結果HepG2については約10種類、PLC/PRF/5については約20種類のコロニーがピックアップされた。ゲノムDNAを抽出しソラフェニブ耐性遺伝子の候補遺伝子を同定することが可能であった。DNAを抽出し、トランスポゾンにより挿入された箇所を制限酵素処理にて切り出しDNAを増幅させ、その塩基配列を同定し、遺伝子を同定した。複数の耐性コロニーに共通して出現している遺伝子が幾つか同定され、これが投与薬剤に対する耐性遺伝子候補としてピックアップされた。1)Transposon tagged cellの確立:トランスポゾンを用いて肝癌細胞株であるHepG2、HepG3、LTRL細胞株に対して、それぞれのゲノム上のランダムな位置に、CMVのプロモータ領域と抗生剤のピューロマイシン耐性遺伝子を導入、さらにピューロマイシンによるselectionをかけることで、CMVのプロモータ領域が挿入された各種肝癌細胞群(transposon tagged cell)を樹立を確認した。2)薬剤耐性株の獲得: MTT assay法により薬剤至適濃度を確認したのちに樹立したtransposon tagged cellを用いて、ソラフェニブを添加した。その結果形成したコロニー形成に再度成功した。このコロニーはCMVプロモータ領域の導入により薬剤耐性に関与する遺伝子を過剰発現している可能性のある細胞株と考えられる。3)薬剤耐性遺伝子の同定:耐性コロニーを単離培養した後DNAを抽出し、トランスポゾンにより挿入された箇所を制限酵素処理にて切り出し、Splinkerette PCRにてDNAを増幅させ、プラスミドベクターを用いて大腸菌内でさらに増幅させた。現在確認し得たのはここまでである。この増幅したDNAの塩基配列を同定し、Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)を用いて遺伝子を同定、さらに複数の耐性コロニーから同様にDNAを抽出して発現遺伝子を解析を試みたが現在難航している。1)Transposon tagged cellの確立:トランスポゾンを用いて肝癌細胞株であるHepG2、HepG3、LTRLのそれぞれのゲノム上のランダムな位置に、CMVのプロモータ領域と抗生剤のピューロマイシン耐性遺伝子を導入した。次にピューロマイシンによるselectionをかけることで、CMVのプロモータ領域が挿入された各種肝癌細胞群を樹立した。2)薬剤耐性株の獲得:MTT assay法により薬剤至適濃度を確認した後、樹立したtransposon tagged cellを用いて、ソラフェニブを添加した。その結果コロニー形成を確認、そのコロニーはCMVプロモータ領域の導入により薬剤耐性に関与する遺伝子を過剰発現している可能性のある細胞株と考えられる。とくに我々は前述した肝癌細胞株のうちHepG2のtransposon tagged cellに対して、ソラフェニブを添加し、約10個のソラフェニブ耐性コロニー樹立に成功した。続いて、増幅したDNAの塩基配列を同定し、Basic Local Alignment Search Tool (BLAST)を用いて遺伝子を同定した。複数の耐性コロニーで共通して発現している遺伝子がいくつか同定され、これは投与薬剤に対する耐性遺伝子の候補と考えた。4)同定した薬剤耐性遺伝子の選定は、NEXTBIORESEARCH社のNextBio databasesystemを用いて行う。本システムを用いて、候補遺伝子の発現と対象薬剤を用いた臨床試験の結果を対比し、膨大な遺伝子リストから次の実験を行う遺伝子を選定する予定である様々な試料の不安定要素などで時間を要した細胞株の再選定や絞り込みののちに、ようやくソラフェニブに対する耐性遺伝子候補を複数選定するまでに至った。なお同時にソラフェニブ以外の薬剤についても検討を進めておりこれらも耐性遺伝子候補を得ている。こ予定していた肝癌細胞株の3つのうちの2つであるでるHepG2, LTRLについて、それぞれのゲノム上のランダムな位置にCMVのプロモータ領域と抗生剤のピューロマイシン耐性遺伝子を導入した(Transposon Tagged Cell).酵素であるトランスポゼースが、トランスポゾン導入に必須であることを確認するため、酵素のあり・なしでピューロマイシンによるセレクションを行った。その結果、トランスポゾンがコードされたプラスミド(pPB-SB-CMV-puro-SD)のみの導入で、酵素を導入しなかった細胞株では、ピューロマイシンにより全滅したが、トランスポゼースを同時に導入した細胞株ではコロニー形成が認められた。それぞれソラフェニブ耐性株を作成し、40種類のコロニーをピックアップし得た(HepG3ではTTC樹立に失敗、原因は不明)。これらに対してGenomeDNAを抽出しソラフェニブ耐性遺伝子の候補遺伝子を数個同定した。しかしPCR等の処理が困難であり、結果現時点で有効な遺伝子の同定に至っていない。今後もこの同定作業を継続している。また別の癌腫である食道癌細胞株であるTE-1, TE-15による放射線耐性についても同様の方法で研究を行った。これらに対するTransposon tagged cellを作成し一定量の放射線照射を施行、耐性株を作成しそこから耐性遺伝子候補としてMT-C01ノックアウトが同定された。それに基づいてMT-C01ノックアウト細胞に対して放射線照射を施行すると、アポトーシス抑制と増殖能力回復を認めた。この放射線耐性はアポトーシスに関わるCaspaseカスケードの活性阻害が原因であると解明した。

MTT assay法により薬剤指摘濃度を確認した後に樹立したTTCを用いてソラフェニブを添加した。その結果HepG2については約10種類、PLC/PRF/5については約20種類のコロニーがピックアップされた。ゲノムDNAを抽出しソラフェニブ耐性遺伝子の候補遺伝子を同定することが可能であった。DNAを抽出し、トランスポゾンにより挿入された箇所を制限酵素処理にて切り出しDNAを増幅させ、その塩基配列を同定し、遺伝子を同定した。複数の耐性コロニーに共通して出現している遺伝子が幾つか同定され、これが投与薬剤に対する耐性遺伝子候補としてピックアップされた。薬剤耐性遺伝子の同定の後に同定した薬剤耐性遺伝子の選定までを初年度の目標としていたが、現在は遺伝子同定のプロセスである。DNA処理プロセスの単純なミスから再検を繰り返していたためでありまもなく同定がなされるとかんがえる。同定次第次の選定プロセスに入る予定である。今年度に同定した薬剤耐性遺伝子の選定を予定している。選定は、NEXTBIORESEARCH社のNextBio databasesystem (http://www.nextbio.com)を用いて行う予定である。このデータベースは臨床試験におけるマイクロアレイデータを蓄積し、さらに各遺伝子の発現と臨床データを容易に対比することが可能である。本システムを用いて、候補遺伝子の発現と対象薬剤を用いた臨床試験の結果を対比し、膨大な遺伝子リストから次の実験を行う遺伝子を選定する。消化器外科薬剤耐性遺伝子の同定後に同定した耐性遺伝子の選定を行う。同定した薬剤耐性遺伝子の選定は、NEXTBIORESEARCH社のNextBio databasesystemを用いて行う。我々はNEXTBIO RESEARCH社の研究者の協力を得て、本研究を行う上でこのデータベース使用のモニター登録を行っており、フルシステムが期間限定で使用することができる。実験計画の大幅な変更は必要としないと判断している。
マイクロ・ナノ加工機の地動・直動外乱振動抑制デザイン

マイクロ・ナノ加工機においては,サブミクロンオーダの精度の高速な工具運動が必要となるため,工具端の微小振動が問題となる.問題となる振動としては,設置床からの振動である地動外乱振動と機械内部の送り運動に伴い発生する外乱による直動振動がある.本研究では,床-除振機構-加工機の力学モデルの構築を行い,このモデルによってサーボを含む工具-工作物の相対振動の解析と加工機設計や制御アルゴリズムの考案を行った.マイクロ・ナノ加工機においては,サブミクロンオーダの精度の高速な工具運動が必要となるため,工具端の微小振動が問題となる.問題となる振動としては,設置床からの振動である地動外乱振動と機械内部の送り運動に伴い発生する外乱による直動振動がある.本研究では,床-除振機構-加工機の力学モデルの構築を行い,このモデルによってサーボを含む工具-工作物の相対振動の解析と加工機設計や制御アルゴリズムの考案を行った.マイクロ・ナノ切削加工機においては,サブミクロンオーダの精度の高速な工具運動が必要となるため,工具端の微小振動が問題となる.これらの振動には,設置床からの地動外乱振動と機械内部の送り運動に伴い発生する直動外乱振動がある.これらの振動を抑制する技術は,能動制振と受動制振に分かれ,特に能動制振技術が半導体製造分野で研究がなされてきたが,切削加工機のように加工負荷がかかり,かつ加減速動作が多様な機械では,運動精度を悪化させるという問題がある.除振機能を高めようと能動制振装置のばねを柔らかくすると,ベースが柔軟に運動し,送り系のサーボケインが低下し,サーボ誤差が大きくなる.逆に,制振機能を向上しようと制振装置のばねを硬くすると,床下振動と設置床の特性の影響が顕著となる.工具-ワーク間のダイナミックスを決めるのは床加工機サーボ-送り機構工具加工プロセスの特性であり,除振機能と制振機能はトレードオフの関係がある.システム全体は変位と力を介在した力学チェーンで結ばれて,かなり複雑になっているため,個々の最適化ではトータルでの制振性能が向上しない.本研究の目的は,工具端での運動精度を向上するための設計制御方法を明らかにすることである.このために,力学チェーンをモデル化し,機械構造の持つ慣性・剛性・減衰特性を設計しながら除振・制振・サーボ系を融合する.本年度は,設置床-除振機構-加工機の力学特性を低次元のモデルで表現し,特に直動外乱の工具端振動への影響を解析的し,除振の固有振動数と機械系の固有振動数の比を参照することで剛体に近い振動モードの抑制する設計法を考案し,実験でその効果を明らかにした.マイクロナノ加工機においては,サブミクロンオーダの精度の高速な工具運動が必要となるため,工具端の微小振動が問題となる.振動の原因には設置床からの振動である地動外乱と機械内部の送り運動に伴い発生する慣性力や切削力により機械自身が加振されて発生する直動振動がある.これらの振動は床との設置条件に大きな影響を受ける.本研究では,床-除振機構(設置機構)-加工機の力学特性と制御の動的な特性を考慮して,工具端での運動精度を向上するための設計制御法を明らかにすることである.本年度は,剛体をベースにした力学モデルを用い,設計モデルの具体性を失わないレベルの解析モデルの構築法を検討した.工具-テーブルを駆動したときの工具端の運動誤差をシミュレートできるCNCサーボモデルをあわせ,除振機構と加工機ならびに床特性との連成解析を行った結果,直動外乱の影響と地動外乱の影響の両方を同一モデルで評価できるようになった.除振機の有無によって工具端での振動がどのように変化するかをシミュレーションで調べることが可能になり,具体的な高次振動モードの寄与を明らかにできた.これは前年度まで用いていた簡易2自由度モデルを用いた解析では不明な点であった.新しいモデルを用いて主要要素の減衰を変化させて工具端振動への寄与のシミュレーションスタディを行ったが,その効果についてはケースバイケースであるという結果になった.今後は,モデルの構造を理解した振動抑制の低減法について検討する.本年度の研究成果を項目毎にまとめる.(1)床と機械の接触モデルの構築:マイクロ,ナノ加工機においては固有振動数60Hz以下の減衰性の悪い低周波振動が軌跡精度や表面粗さの悪化を招き問題となっている.これは,工具やテーブルを高速で駆動すると,加減速時に発生する慣性力や駆動力により低周波の機械振動が励起されるためである.この振動の原因は主に工作機械全体のロッキング振動であり,ロッキング振動には工作機械の支持剛性が大きな影響を与える.しかし,支持剛性の決定要因が不明であるため,工作機械支持部の接触面における接触剛性が支持剛性に与える影響を調査した.具体的には接触剛性を考慮して支持点数変更時の鉛直方向並進振動モードの固有振動数の変化を求め,実験結果と比較した.次に鉛球を用いて接触面の真実接触面積を求める方法について提案し,支持部の真実接触面積を求めた.この結果,支持点数を変更しても真実接触面積の総和は一定になることがわかった.さらに実験により接触剛性を同定する方法を提案した.(2)床剛性・加工機の制御モデル検証と外乱解析:床・加工機・制御系を含む加工システム全体をモデル化し,地動外乱と直動外乱に対する加工システムの振動特性を評価した.

昨年度開発した剛体マルチボディモデルとサーボループモデルを組み合わせたモデルを用いて,地動外乱と直動外乱による工具-工作物間の鉛直方向相対変位をシミュレートした結果,除振台によって地動外乱の影響は低減できるが,直動外乱の影響が増大することが定量的に明らかになった.(3)制振のためのシンセシス:制御法として振動モデルを用いたフィードフォワード制御法を応用した.特に今まで不明であった機械特性の汎用力学モデルを構築し,制振制御法を実際の小型マシニングセンタに適用した.高速輪郭運動実験で工具-工作物の相対運動においてサブミクロンまで振動抑制が図れることを示した.
汎用性の高いウギ反応の開発と含窒素化合物の網羅的合成

Ugi反応は、カルボン酸、アミン、アルデヒドとイソニトリルを混合するだけで、一切の添加剤を必要とせずに一挙に4成分が円滑に集積する魅力的な多成分連結反応である。また、Ugi反応により得られる含窒素化合物はアミノ酸誘導体であり、ドラックライクな構造を有していることも特徴の一つである.我々は、この強力な反応に魅せられて積極的に生物活性天然物の合成に取り入れてきた。その過程で、Ugi反応集積体のイソニトリル由来のC-端のアミド結合の切断により、さらに多様な化合物合成へと展開可能なことを見出した。本年度は、Ugi反応集積体から効率的なスピロラクタム環構築を行い、TAN1251Cの全合成を行った。Ugi反応後、集積体のアミド結合の切断とDieckmann縮合によりスピロ骨格を構築した。続いて、ラクタム環上のアミノ基の導入はオキシムの亜鉛還元により行った。本反応では亜鉛がアミドカルボニルとヒドロキシルアミンに配位した中間体を経由していると考えている。この際、亜鉛が立体障害の小さなTBDPS基の反対側に配置し、ラクタムの上方向側からのプロトン化により望みの立体化学が得られた。最後に、フェノール性水酸基にプレニル基を導入後、生合成仮説に基づく分子内脱水縮合反応により全合成を達成した。29年度が最終年度であるため、記入しない。TAN1251類は、1991年武田薬品工業の研究グループにより単離されたアルカロイドで、ムスカリン受容体に対して強力な親和性を有する。また、二環性骨格の1,4-diazabicyclo[3.2.1]octane環とシクロヘキサノン環がスピロ結合したユニークな構造上の特徴も有している。我々は、Ugi反応を活用することで効率的合成が可能になると考え、本合成研究に着手した。Ugi反応では、ケトン、アミン、カルボン酸と当研究室で開発したイソニトリルを室温にて混合するのみで4成分集積反応が進行し、含窒素四置換炭素の構築とTAN1251の中心骨格構築に必要な官能基の一挙導入が可能となった。続いて、イソニトリル由来のアミド結合の切断と塩基性条件の分子内Dieckmann縮合により5員環ラクタムを構築しスピロ骨格を構築した。続いて、ラクタム上窒素原子の立体化学の制御は、オキシムあるいはエナミドの還元により立体特異的に達成した。本反応では、スピロ環側鎖の立体化学により立体化学が制御されることが明らかとなった。すなわち、エナミドの還元ではPt触媒が一級水酸基に配位することで、望みの立体化学を有する化合物が得られた。一方、オキシムの還元では亜鉛がオキシムに配位した中間体が立体障害を避けるように、βに配位した繊維状態を経由することで単一化合物が得られた。引き続き、生合成仮説に基づくアミノ基とアルデヒドとの分子内脱水縮合反応を行い1,4-diazabicyclo[3.2.1]octane環を構築した。最後に、エチレンケタールを脱保護することでTAN1251の全合成を達成した。当初、2年間にて計画していたTAN1251の全合成を単年度にて達成した。すなわち、シクロへキサノン誘導体18にウギ反応を行い含窒素スピロ環骨格の構築を行った。引き続き、ウギ集積体の塩基処理によりスピロラクタムの高徳をおこなった。さらに、スピロ環側鎖の立体化学により立体化学が制御されるエナミドとオキシムの還元反応を見出すこともできた。本年度は、固相連結型のイソニトリルを固相連結型へと展開し含窒素化合物ライブラリー構築を行う。固相合成は、精製操作(分液とカラム等)を必要としないため、ライブラリー構築の強力な手法となる。そのため、多様性指向合成として固相上でウギ反応を行う報告は多く存在するが、C-端を容易に変換可能なイソニトリルは存在しない。
ヌードマウス自然肝転移モデルとヌードラット自然肺転移モデルにおける接着分子の検討

ヒト大腸癌培養細胞KM12SMを5週齢、雄のヌードマウス(KSN/nu)及びヌードラット(KSN/N,nu/nu)の盲腸壁内に注入し、6週及び12週後に屠殺した。同時に皮下移植巣も作製し、培養細胞、皮下移植巣と盲腸移植巣の新鮮凍結標本を用いて、3種の接着分子(SLe^x,Sle^a,CD44)について免疫学的酵素抗体法で検討した。ヌードマウスの肝転移率は54.5%(12/22)で肺転移率は0%(0/22)、ヌードラットの肝転移率は0%(0/16)で肺転移率は81.3%(13/16)、皮下移植群ではマウス・ラット共に全く転移を認めなかった。接着分子発現の結果は、培養細胞ではCD44のみ発現を認めた。皮下移植巣では接着分子発現は全て40%以下で、ヌードマウスとヌードラットの間で差は認めなかった。盲腸移植巣ではSLe^xの発現率がヌードマウスで54.5%、ヌードラットでは12.5%であり、両者間で有意差を認めた(p<0.01)。またCD44の発現率がヌードマウスで22.7%、ヌードラットで93.8%であり、両者間に有意差を認めた(p<0.001)。接着分子の発現と転移との検討では、ヌードマウスにてSLe^xの発現と肝転移との間において有意差(p<0.05)を認めた。しかし他の接着分子やヌードラットにおいては明らかな有意差を認めなかった。以上の結果から、同じ培養細胞を使用しても種の違いや移植巣の違いによって、接着分子の発現が異なることを確認した。また転移と接着分子の発現に関しては、少なくともヌードマウスの肝転移に関してはSLe^xが重要な因子の一つであることが示唆された。
立体視画像処理を用いた下顎運動の3次元記録装置の試作研究

下顎運動記録装置は、ハ-ド部門の整備ならびにソフトウエアの改良の段階に至るまで試作研究が進んでいる。その成果を以下に述べる。1)下顎運動の記録に適した光学系の選定3次元座標における標点の運動を高精度に捉えるには両眼立体視原理応用に基ずき3個のLEDと2個のCCDカメラの組み合わせを選定した。また、下顎運動の頭部動揺を補正するため上顎にも、3個のLEDを設置することとした。2)専用画像処理装置ならびに測定プログラムの開発高速画像処理装置(小野測器社製GP-120)を母体として下顎運動の測定に流用すべく、プログラムを開発した。さらに、パ-ソナルコンピュ-タ-を追加し、操作性の向上ならびに表示モ-ドの充実を計っている。本装置が従来市販されている装置に比べて優れている点は以下の通りである。(1)CCDカメラと高精度のデジタル画像処理技術を用いることにより、3次元的に高精度の測定ならびに解析が可能である。(2)CCDカメラを用いることで、多点の同時計測が高速で行える。(3)検査スペ-スに応じてカメラの位置を自由に選択できるように、カメラ間の距離変化に対する自動較正を行えるようにした。(4)頭部X線規格写真を併用することで患者の任意点の下顎運動軌跡の演算計測を行うことができ、さらの経年的な追跡も可能である。(5)下顎運動の計測方向にかかわらず、運動軌跡の表示は、任意の基準平面上に投影できる。(6)表示能力として多種の3次元の画像表示が可能となった。なお、下顎運動記録装置の評価試験を行い、臨床試験へと発展させ、操作性の向上、再現性の確認、キャリブレ-ションのシステム化等を完成させる。
転写因子群導入による脂肪由来間葉系幹細胞の唾液腺分化誘導法の開発

唾液腺の機能回復を狙った様々な研究が盛んに行われているが、治療法にまで到達できていないのが現状である。我々は唾液腺機能回復のため、脂肪幹細胞にGibberellic acidを使用した細胞でマイクロアレイ解析を行い、発現亢進を認めた6つの転写因子を同定した。ヒト胎児線維芽細胞に6因子導入し分化培地で培養したところアミラーゼの発現とF-actinに変化を認めたため、本結果は今後の唾液腺の機能回復治療にとって非常に有益なデータと考えられる。加齢、自己免疫疾患、癌放射線療法などの原因により引き起こされる唾液分泌量の低下は、口腔環境の悪化に強く影響を与え、患者のQOLを著しく低下させてしまう。以前より唾液腺の機能回復を狙った様々な研究が盛んに行われているが、未だ治療法にまで到達できていないのが現状である。近年、唾液腺が発生する過程で様々な転写因子が機能していることが解明されてきており、それらが唾液腺形成に重要な役割を果たしていることが分かってきている。そのため、我々は唾液腺形成に必要な外因性因子を調整することで新規の唾液腺再生治療法の開発を目的として実験を行う。既に、我々は、口腔内から採取した頬脂肪体由来の間葉系幹細胞(ASCs)に、植物ホルモンであるGibberellic acidを分化誘導因子として用いることにより、アミラーゼ産生細胞に分化させることに成功した。このモデルは唾液分泌細胞の分化発生のモデルになると考えられるため、このアミラーゼ産生細胞を用いてAffymetrix社のGeneChip Human Genome U133 Plus 2.0 Arrayにて網羅的マイクロアレイ解析を行った。網羅的マイクロアレイ解析の結果2倍以上の発現亢進を認めた15遺伝子、0.5倍以下の発現減弱を認めた13遺伝子を同定した。さらに、IPA (Ingenuity Pathways Analysis)をもちいてネットワーク解析を行い、さらに、文献的考察を行うことにより、唾液腺分化に関与すると考えられる5つの遺伝子(TP63、Snai2、Pitx1、Six1、Pax6)を選定した。次に、これらの5つの遺伝子を様々な組み合わせで強制的に発現させるため、Life technologies社のGatewayシステムを用いて、遺伝子発現ベクターを構築した。今後、遺伝子強制発現実験を行っていく予定である。唾液腺萎縮による唾液分泌量の低下は様々な障害の原因となり、唾液分泌量は患者のQOLを左右する重要な因子の一つとされている。近年、唾液腺が発生する過程で様々な転写因子が機能していることが徐々に解明されてきた。それら転写因子のノックアウトモデルでは唾液腺形成不全が見られるため、我々は外因性に遺伝子発現を調節することが、困難とされている唾液腺再生療法開発の糸口になると考えた。唾液腺発生過程に関与する5つの転写因子を候補としてAffymetrix®社製GeneChip®Human Genome U133 Plus 2.0 Arrayにて発現解析を行い、その結果をトミーデジタルバイオロジー社のインジェヌイティーパスウェイアナリシス(IPA)を用い解析した。その結果、morphology, developmentのpathwayにおいてGibberellic acidの併用をした細胞で発現が2倍以上の亢進を認めた15遺伝子の中から6つの転写因子(PITX1, TP63, SNAI2, PAX6, SIX1, KLF4)に注目した。Gateway system®を用いて6種類の転写因子を搭載したレンチウイルスベクターを構築し、ヒト線維芽細胞に導入し、感染後のセレクションマーカーとしてVenus (EYFPのVariant)を使用しFlow cytometryを用いてVenus陽性細胞のセレクションを行った。6遺伝子を強制発現させ、分化誘導培地にて培養した細胞は細胞骨格に変化を認め、さらに唾液腺のマーカーであるアミラーゼの発現が亢進した。以上の結果から、6つの転写因子(PITX1, TP63, SNAI2, PAX6, SIX1, KLF4)は唾液腺再生医療開発において重要な役割を果たす因子である可能性が示唆された。医歯薬学当初の計画通り進行しているため。1.遺伝子導入実験により唾液腺細胞分化に必要な転写因子の組み合わせを明らかにする。2.転写因子導入による分化誘導法の細胞障害性の有無の確認3.唾液腺マーカーの発現量の確認4.唾液腺分化誘導細胞の形態の確認
特発性間質性肺炎の発症メカニズムの解明とバイオマーカーの探索II

間質性肺炎は、肺胞隔壁、小葉間間質および胸膜近傍に炎症をきたす疾患であり、間質性肺炎の6割を原因不明の特発性間質性肺炎が占める。特にまだらな線維化が特徴である特発性肺線維症は緩徐に進行する予後不良の疾患であり、病因の解明が望まれる。発症機序については肺胞上皮細胞もしくは毛細血管内皮細胞の障害と考えられており、隔壁の肥厚、結合組織成分の増加により拡散障害をきたし拘束性障害を呈する。現在特発性間質性肺炎のバイオマーカーとして血中KL-6濃度測定があるが、疾患特異性が十分ではない。したがって、肺線維化が進行する前に非侵襲的な特異的検査法が必要である。疾患特異的バイオマーカーの開発には病態解明が必須であると考え、信州大学医学部附属病院臨床検査部では特発性肺線維症について病理学的研究を行ってきた。これらの研究および関連する研究により、特発性肺線維症の発症初期に、微生物やマクロファージなどに由来するシアリダーゼが活性化され、II型肺胞細胞表面のシアル酸が脱離して糖鎖抗原であるThomsen-Friedenreich抗原(Gal β1-3 Gal NAc-0-Ser/Thr)が出現し、自然抗体として血中に存在する抗TF抗体や補体と免疫複合体を形成して細胞が傷害されることが一因と成りうると仮説を立てた。これに基づき平成23年度は細胞生物学的解析を主なテーマに掲げ研究を進めてきた。まずTF抗原を発現している培養細胞株の検索を行った。細胞はCHO細胞の糖鎖変異株であるLec2培養細胞株を用いた。Lec2細胞はシアリルTF抗原を豊富に発現していると報告されている。昨年度までに構築した細胞障害実験系をもとに、最終段階である細胞障害検出試薬をより高感度かつ細胞数の影響を補正可能な試薬に変更して実験を行った。Lec2細胞にシアリダーゼを作用させてTF抗原を露出後、抗TF抗体と補体により起こる細胞障害の検出を試みたところ、シアル酸が除去されること自体が細胞の生存及び機能に何らかの影響を及ぼしている可能性があることが実験的に示唆された。今後はシアリダーゼによる障害の詳細について引き続き細胞を用いた実験を行い、その由来(外因性、内因性)、疾患による気管支肺胞洗浄液中のシアリダーゼ活性の差異を検討していきたいと考えている。
金属-有機化合物複雑混合系での有機金属化合物の生成機構並びに環境と制御

金属有機化合物複雑混合系での有機金属化合物の生成機構並びに循環と制御の研究を行う為には,まず,複雑混合系での正確を水銀の分析法が必要である.しかし,水銀の還元気化原子吸光分析法では,ヨウ化物イオンが存在すると,水銀が検出出来ない.この原因をASV法を用いた疑似ポーラログラフ法によりヨウ化物イオン共存下等での希薄水銀化合物の酸化還元電位を測定により解析した.得られた半波電位とヨウ化カリウム濃度の関係より, Sin(II)では,ヨウ化物イオン濃度が0.01mM以上で水銀が還元されなくなるのが解かった.この結果は公定法におけるヨウ化物イオンの干渉の測定結果と良い一致が得られている.又, Sn(II)に水素化ホウ素ナトリウムを添加すると,還元力が極めて強くなるのが解かった.この結果を基に酸性下での精密分析法として硫酸酸性下でSn(II)と水素化ホウ素ナトリウムを併用する水銀の還元気化原子吸光を開発した.本法は操作が非常に簡便であり,再現性が良く,迅速な分析が可能であるという特徴を有する.本法を大学の研究室から排出された廃液及び構内排水など実試料に適用し,公定法及びアルカリ法との比較を行った.その結果,多量のヨウ化物イオンが存在していても妨害なく定量が出来ることがわかった.又,環境中での有機水銀化合物の循環解析へ応用することを目的として,流通式水銀連続計測装置の試作を行った.本装置は,公定法に比べ強い水銀の還元条件の使用,流通式による酸化還元電位と反応時間の精密制御,並びに還元気化により発生した水銀蒸気分離に多孔質テフロン細管から成る二重管を用いていることが特徴である.又,検出器としては,水銀ランプを光源とした原子吸光光度計を用いた.検出感度は1μg/1が容易に得られた.この感度はバッチ式の水銀分析装置と同じであり,十分環境水中の水銀の定量が出来る.金属有機化合物複雑混合系での有機金属化合物の生成機構並びに循環と制御の研究を行う為には,まず,複雑混合系での正確を水銀の分析法が必要である.しかし,水銀の還元気化原子吸光分析法では,ヨウ化物イオンが存在すると,水銀が検出出来ない.この原因をASV法を用いた疑似ポーラログラフ法によりヨウ化物イオン共存下等での希薄水銀化合物の酸化還元電位を測定により解析した.得られた半波電位とヨウ化カリウム濃度の関係より, Sin(II)では,ヨウ化物イオン濃度が0.01mM以上で水銀が還元されなくなるのが解かった.この結果は公定法におけるヨウ化物イオンの干渉の測定結果と良い一致が得られている.又, Sn(II)に水素化ホウ素ナトリウムを添加すると,還元力が極めて強くなるのが解かった.この結果を基に酸性下での精密分析法として硫酸酸性下でSn(II)と水素化ホウ素ナトリウムを併用する水銀の還元気化原子吸光を開発した.本法は操作が非常に簡便であり,再現性が良く,迅速な分析が可能であるという特徴を有する.本法を大学の研究室から排出された廃液及び構内排水など実試料に適用し,公定法及びアルカリ法との比較を行った.その結果,多量のヨウ化物イオンが存在していても妨害なく定量が出来ることがわかった.又,環境中での有機水銀化合物の循環解析へ応用することを目的として,流通式水銀連続計測装置の試作を行った.本装置は,公定法に比べ強い水銀の還元条件の使用,流通式による酸化還元電位と反応時間の精密制御,並びに還元気化により発生した水銀蒸気分離に多孔質テフロン細管から成る二重管を用いていることが特徴である.又,検出器としては,水銀ランプを光源とした原子吸光光度計を用いた.検出感度は1μg/1が容易に得られた.この感度はバッチ式の水銀分析装置と同じであり,十分環境水中の水銀の定量が出来る.
在静岡資料の調査を基盤とした近世和学に関する基礎研究

本年度は、前年度同様に、静岡県を中心に各地に伝存する資料を調査し、写真撮影及び複写を行うとともに、それらを用いて遠州和学者たちの伝記事項を明らかにし、年譜作成に着手した。調査に赴いた機関は、嵐牛俳諧資料館、賀茂真淵記念館(以上、静岡県)、国文学研究資料館、国立国会図書館、国立公文書館、宮内庁書陵部(以上、東京都)、天理大学附属天理図書館(奈良県)などである。これらの調査で見出すことができた書簡や写本などの資料を分析することを通し、これまで知られなかった賀茂真淵や栗田土満、石川依平らの和学者たちの伝記的事実を明らかにすることができたほか、遠州地域における、あるいは遠州地域と他地域の和学者たちの交流についても新事実を知ることができた。特に、従来古典注釈や歌学、思想などに関する多大な蓄積があった賀茂真淵について、彼の装束研究の実態を明らかにできたこと、石川依平の家集『柳園詠草』の稿本によって彼の詠歌と伝記に関する情報が得られたことは大きな成果であった。これらの成果の一部については、石川依平の紀行『宇津の山越』から窺える遠州和学者たちの交流を分析した「栗田土満最晩年の旅ー石川依平『宇津の山越』翻印ー」、嵐牛俳諧資料館が所蔵する本居宣長書簡を紹介した「増田嘉伸氏ご所蔵の栗田土満宛本居宣長書簡について」として論文発表を行ったほか、賀茂真淵の装束研究の実態を明らかにした「賀茂真淵の装束研究」として口頭発表を行った。本年度は、新たな資料を複数見出し得たことに加え、来年度から本格的に行う遠州和学者の伝記作成などにも部分的に着手することができたことから、おおむね順調に進展していると判断した。今後は、引き続き静岡県内をはじめとする各所蔵機関で真淵学関連資料の調査・収集を行うとともに、賀茂真淵の伝記的事実と思想の研究、及び近世後期の遠州で指導者的立場にあった石川依平の家集『柳園詠藻』(稿本)の翻印と分析を進め、公開に向けた準備に着手するとともに、依平年譜の作成を行う。なお、本年度および次年度における研究成果の公表は、学会発表、研究論文、公開講座などの形で公表し、社会に還元していく予定である。本年度は、本研究全体の基盤を固めることを目的とし、静岡県内(特に遠州地域)に伝存する資料(特に賀茂真淵とその門流に関する資料)の調査と分析、および内容把握に焦点を絞って研究を行った。調査に赴いた所蔵機関は、内山真龍資料館、嵐牛俳諧資料館、賀茂真淵記念館(以上、静岡県)、神宮文庫(三重県)、国文学研究資料館、国立国会図書館(以上、東京都)、関西大学図書館、大坂天満宮、大阪府立中之島図書館(以上、大阪府)、西尾市岩瀬文庫、名古屋市蓬左文庫(以上、愛知県)、洲本市立洲本図書館(兵庫県)などである。また、遠州地域には個人が所蔵している資料も多いため、和学者や俳人の子孫宅にも訪れ、資料調査を行い、必要に応じて写真撮影や複写を行った。これらの調査によって、賀茂真淵や本居宣長、石川依平などに関する新たな資料(書簡、写本、書入本など)を見出すことができたほか、内山真龍の詠歌と伝記事項に関する資料も精査することができ、遠州地域における真淵学の享受の具体が浮かび上がってくるとともに、近世後期の遠州和学者たちの新たな足跡も明らかとなってきた。さらに、上記の調査を踏まえ、主に真龍の詠歌に対する真淵の添削内容を分析した論考「賀茂真淵と内山真龍ー『内山真龍翁関係手帖横巻』を中心にー」や、新たに見出すことのできた資料(「嵐牛俳諧資料館所蔵の本居宣長書簡」「増田嘉伸氏ご所蔵の石川依平詠草について」)の報告ができたことも本年度の基礎研究の着実な成果であった。

本年度は、新たな資料を複数見出し得たことに加え、来年度から本格的に行う遠州和学者の伝記作成などにも部分的に着手することができたことから、おおむね順調に進展していると判断した。引き続き静岡県内をはじめとする各所蔵機関で真淵学関連資料の調査・収集を行い、真淵学の内実と伝播の様相、門流の活動を考察していく。とくに門人300人を抱え、近世後期の遠州で指導者的立場にあった石川依平の家集『柳園詠藻』稿本の分析を通し、遠州の和学者たちの足跡を明らかにすることを目指す。なお、本年度および次年度における研究成果の公表は、学会発表、論文、講演、公開講座などの形で公表し、社会に還元していく予定である。今後は、引き続き静岡県内をはじめとする各所蔵機関で真淵学関連資料の調査・収集を行うとともに、賀茂真淵の伝記的事実と思想の研究、及び近世後期の遠州で指導者的立場にあった石川依平の家集『柳園詠藻』(稿本)の翻印と分析を進め、公開に向けた準備に着手するとともに、依平年譜の作成を行う。なお、本年度および次年度における研究成果の公表は、学会発表、研究論文、公開講座などの形で公表し、社会に還元していく予定である。年度末予定していた調査を本年度に延期せざるを得ないことになったためである。繰越金額は、研究の進捗状況に鑑みて適切に使用してゆく。賀茂真淵記念館の2018年度記念館アカデミー「賀茂真淵と田安宗武」(全3回)において研究成果を社会に還元した。賀茂真淵記念館の2017年度記念館カレッジ(全3回)において研究成果を社会に還元した。
心筋Ca誘発性Ca遊離機構のリアノジン受容体側からの電気生理学的評価

2年にわたる本助成研究「心筋Ca誘発性Ca遊離機構のリアノジン受容体側からの電気生理学的評価」の計画書にしたがって実験を進めた結果、以下の成果を得た。(1)リアノジン受容体を標的とするもうひとつの生理学的修飾物質として、燐酸化酵素Aを選んだ。同燐酸化酵素により、リアノジン受容体チャネルは活性化される。また、その活性化は、細胞内Mgリガンドの感受性の低下によることが判明した。この仕事は、Pflugers Archiv(In press)に受理された(小冊子参照)(2)リアノジン受容体を標的とする病態生理学的修飾物質として、スフィンゴリン脂質を選んだ。同物質によるリアノジン受容体チャネル活性の修飾機序を検討する。この仕事は論文にまとめ、plugers Archiv(In preparatin,小冊子参照)に既に投稿した。(3)リン脂質2重膜内のリアノジン受容体細胞質側へ、ピエゾ濃度固定法を用い、Caをパフ状に瞬間投与し、同チャネルに活性化電流を生じさせた。(4)リアノジン受容体のチャネル電流には、特徴的な不活性過程が見られる。この過程に注目し、そのCa依存性や電位依存性を調べながら、Ca誘発性Ca遊離機構における不活性過程の果たす役割を検討した。なお、(3)と(4)については、現在、論文にまとめているところである。これらの実験により、心筋収縮の仕組みを支える興奮収縮機構の要であるCa誘発性Ca遊離の調節に関して、幾つかの新しい生理学的、病態生理学的機序が明らかにされたものと考える。平成12年度の実験計画に沿って、以下の実験を行った。リン脂質2重膜内のリアノジン受容体細胞質側へCaを、心筋弛緩収縮サイクル中に生じる生理学的濃度変動域において瞬間投与し、同チャネルに活性化電流を生じさせる。このことにより、Ca誘発性Ca遊離機構について、リアノジン受容体側からの直接評価を行った。Ca投与数m秒以内の活性化電流を捕らえた。その活性化機構に関する単一チャネル電流諸性質を記載した。細胞質側Ca依存性と電位依存性については、詳細に検討した。この実験は、現在継続中である。また、リアノジン受容体の生理学的修飾物質として、スフィンゴリン脂質を選び、同物質によるCa遊離機構の修飾機序を調べた。リアノジン受容体電流は、スフィンゴリン脂質の細胞質投与によってのみ、特有な効果を及ぼされる。今回は、同物質がチャネル閉口状態に優先的に結合する機構に注目した。新しく出現するブロッキング状態には、強い電位依存性が見られた。現在、本結果は論文準備中である。心筋細胞の興奮収縮連関の要であるCa誘発性Ca遊離機構の解明を目指し、形質膜のL-Caチャネルではなく、小胞体のリアノジン受容体側からの直接的評価を行った。具体的には、リアノジン受容体チャネル蛋白分子を人工膜に埋め込む方法を駆使し、同チャネル単一チャネル電流を記録し、Caその他の生理活性物質によるチャネル活性の制御の仕組みを明らかにする形で進めた。予定していた研究実施計画に基づいて実験を進めた結果、研究実績として以下の2つの論文をまとめた。この報告書をもって2カ年計画の本研究を終了する。(1)リアノジン受容体の生理学的修飾物質として、燐酸化酵素Aを選んだ。燐酸化によるCa誘発性Ca遊離機構の修飾機構を検討する。これはPflugers Arch,2002に発表した。(2)リアノジン受容体の生理活性物質として、昨年に引き続き、スフィンゴリン脂質によるCa誘発性Ca遊離機構の修飾機序の検討を更に進めた(論文投稿中)。
中近世芸備地域の文芸とその社会的基盤に関する基礎的研究

関ヶ原戦役後、毛利氏の支配を離れた芸備地域では毛利氏の文化遺産を継承していた。戦国毛利氏の後継である江戸期の萩藩も毛利氏の文化遺産の顕彰を行っていた。毛利元就・隆元・輝元時代の文芸資料は各地に伝播し、芸備では厳島関連の文芸資料、芸備以外では毛利元就関連の資料に特徴がある。江戸期の防長二国や芸備各藩では戦国毛利氏の文化政策を継承した収書活動が確認できた。戦国毛利氏の存在は、以後の芸備地域の文芸活動に大きな影響を与えたといえる。中世末から近世初期にかけての芸備地域における文芸活動について、政治・経済・信仰・流通などの社会的基盤に着目し、毛利氏の役割とその影響を明らかにする。中国地方を統一支配した毛利氏政権時代、政権の拠点であった芸備地域では、大内氏の文化遺産を継承し、京の文化を摂取するなど、活発な文芸活動が行われた。交通の要所であり経済的に恵まれた地域なので、豊富な財力が文化に向けられたことで、中世末期には相当の文化的蓄積があった。芸備地域は毛利氏時代の文化的蓄積をどのように継承し、新たな文化をどのように摂取・消化したのだろうか。芸備地域に関わる文化遺産を、毛利氏の文化政策と関連付けて考察する。1.大日本古文書所収「毛利家文書」から文化政策に関わる記述の抽出作業を行い、終了した。次に、山口県文書館毛利家文庫所蔵文書より、同様の抽出作業を現在継続中である。2.広島県史所収「厳島文書編」から文化政策に関わる記述の抽出作業を行い、厳島野坂家分については終了した。現在、野坂家分について継続中である。3.広島県竹原市吉井家所蔵典籍について書写・伝来事情を調査した。広島県安芸太田町井上家所蔵典籍について、現在調査を継続中である。4.樹下と秋山及び研究協力者の西本寮子は、各種学会で研究者と芸備地域の文芸資料についての情報交換を行う他、研究機関、文庫・図書館及び個人蔵書家を訪問し、情報提供をお願いした。5.芸備地域の社寺縁起のうち、「厳島縁起」について、山口大学付属図書館本、広島某家本の2種の伝本を見出し、精査した。現在、ほぼ翻刻作業を終了した。6.芸備地域で流布したと思われる毛利家関連資料のうち、「元就記」の伝本を探索し、新たに2種の関連資料を見出した。7.樹下は、「永禄四年雄高山日記」を手がかりに、この時期に文化的な職能者を家臣団に組み込んだと推論し、学会で発表した。また、毛利氏が室町幕府重臣渋川氏を厚遇し、室町幕府の文化事業に関与した大和宮内の子孫が毛利家に仕えた事実を突きとめた。彼らが毛利氏の文化政策に与えた影響を、現在調査中である。8.江戸期に浅野長晟が浅野氏の故地、近江で神社を造営したこと、戦国武将の家が、所領を替えられながらも室町写本を今まで保持している例を知り、毛利氏はもちろん、近江・紀州に関わった浅野氏、後に下総結城に移った備後福山藩水野家、武蔵忍に移った福山藩松平家など、関係地域にも芸備関連資料のある可能性に気づいた。今後、こうした大名家の移動先にも注意を払っていきたい。1、毛利家文書中の藩校明倫館関係資料、諸家文書等から、毛利氏領内における文化政策に関わる記述の抽出作業を行った。2、厳島文書等の芸備地域に関係する文書類から、文化政策に関わる記述の抽出作業を行った。また、毛利輝元時代の御嶋廻に関する新史料や『房顕記』の新伝本を発見・紹介した。3、広島県安芸太田町井上家所蔵典籍について典籍略目録を作成した。書写・伝来事情を精査した後、発表する予定である。続いて三原市立中央図書館所蔵文書群について、現在調査を継続中である。4、翻刻を終えた井上家旧蔵『厳島縁起』を『宮島学センター年報』に紹介した。同系統伝本についての研究をほぼ終えていたが、新たな伝本が広島大学蔵本として紹介された(『厳島研究』6号)ので、それとの比較対象を行うことにしたい。また、別系統の伝本として、すでに翻刻を終えている山口大学蔵本と同系統伝本との比較作業を並行して行っている。5、新たな『元就記』の写本を発見した。現在、翻刻作業を終えて島原松平文庫本、山口県文書館本等の諸伝本との比較作業を行っている。6、保田家文書を中心に、城下町広島における町人の文化活動を継続して調査している。その結果、上方の文化人と交流を示す多くの資料を発見した。7、浅野家済美録を精査し、広島藩の文化行政に関する記述の抽出作業を行っている。すでに長政・幸長・長晟については調査を終え、寛永19年以降を継続して調査している。

8、すでに二年目を終え、『厳島縁起』『元就記』、連歌資料、能楽資料について、研究の見通しが立った。また、芸北、芸南の資料を視野に入れることができた。周防・長門・安芸・備後については、研究終了年度までに一通りの調査をできる見通しである。昨年度に引き続き、『浅野家済美録』を東京大学史料編纂所の紙焼写真によって精読し、広島藩の文化行政に関する記述の抽出を継続して行い、天和年間まで進むことができた。同じく三原市立中央図書館所蔵文書群の調査においては、広島藩家老上田家の文書や寄託中の御調八幡宮文書等を精査した。また、備後庄原地区に伝存する大山供養田関係資料の調査を行うとともに、供養田研究文献を収集した。厳島については、大願寺所蔵中世近世文書の調査を開始し、特に近世文書にまだ紹介されていない文化活動に関する資料を見出すことができた。三原市立中央図書館所蔵上田家文書については、仮目録を作成することができたので、今後は上田和風堂所蔵文書と比較して上田家文書の全容を解明したい。また、三原市立中央図書館所蔵の室町期写『啓迪集』を調査する機会を得たので、次年度に『啓迪集』諸伝本との比較作業を行いたい。御調八幡宮文書の調査においては、近世後期における芸備の信仰や年中行事に附属する芸能文化、藩主参詣に伴う文化活動について新たな知見を得た。以上、諸機関での調査の結果、芸備地域の古文書・古典籍の伝来状況について、現時点でのリストアップをほぼ終了することができた。また、厳島における能楽、舞楽、連歌等の文化活動について、新たな知見を得ることができた。最終年度の報告書作成に向けて、強化すべき分野、地域の絞り込み作業を行い、今年度の成果の一部を研究実施者各自が紀要等に発表した。昨年度に引き続き、毛利氏関係文書から文化政策に関わる記述の抽出作業、芸備地域に伝存する文書類の精査、芸備地域での伝来が確認できる資料の探索・調査を行い、それらに関連して伝本の調査・研究や、毛利氏の文化政策についての調査を行った。その結果、研究成果に示したように、研究実施者各自がそれぞれ得た知見を公表した。最終年度に当たる今年度は、芸備地域の古文書・古典籍の伝来状況についてリストアップした各種データの点検作業を実施し、全体を統合するための作業を行った。また、山口大学図書館本『厳島縁起』、島原松平文庫本『元就記』、岩国徴古館蔵『鳥類八百首』等の解読作業を行った。研究成果報告書としては、現在制作中の芸備地域の古文書・古典籍リストの暫定版と、各自の研究成果から特に資料紹介に関わるものを選んで掲載することとする。本研究の目的である芸備地域における文芸活動に毛利氏の果たした役割とその意義については、特に厳島の文芸活動に関して相当の知見を得ることができた。また、大内時代からの遺産の継承と毛利氏時代における中央文化の摂取とについて、一定の知見を得ることもできた。毛利氏独自の文芸活動は、実質的には大内文化の洗礼を受けた毛利隆元に始まり、永禄四年にはその兆候が確認でき、輝元の時には相当の蓄積があった。防長二カ国に押し込められた関ヶ原以降、近世毛利氏も新たな文芸活動を展開していくが、毛利氏支配から外れた芸備地域においても、毛利氏の文化遺産は少なからず存続していたことを突き止めることができた。今後は、芸備地域に残る毛利氏の文化遺産のさらなる発掘と毛利氏の文化遺産継承に、福島、浅野、水野氏がどのように関与したのかを検証していきたい。