hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
心筋βアドレナリン受容体情報伝達機構における脱感作発現に関する研究

1.Westernblottingに用いるアデニル酸シクラーゼ(AC)抗体を作製した。AC(Type V,VI)のアミノ酸配列のうち,5種類を合成し,ウサギに静注しポリクロナール抗体を作製した。抗体の力値はELISA法で確認したが,平均10-3程度であった。2.作製したAC抗体と市販のC kinase抗体を用いて,monocrotaline右室肥大・不全心の心筋粗膜分画の蛋白量を定量化した(Western blotting)。AC抗体では,多くのbandが出現したが,ACの蛋白量が極めて少ないか,または作製した抗体が非特異的であるためではないかと考えている。110KDa付近のACと思われるbandは各心室でcontrol群,monocrotaline群の間で差はなかった。C kinaseの蛋白量も右室肥大・不全心でも,control群と比べて大きな変動はなかった。平成5年度までの研究経過1.Westernblottingやimmunoprecipitationに用いるアデニル酸シクラーゼ(AC)抗体を作製中である。既報のAC(Type V,VI)のアミノ酸配列のうち,既存の抗体と共通性のない部分をそれぞれ2種類づつ計4種合成し,keyhole limpet hemocyanin(KLH)と結合させて抗原性を高めて,ウサギに静注しポリクロナール抗体を作製した。抗体の力値はELISA法で確認しているが,その力値はやや低く,平成6年度にも抗原を追加してその力値を高める。2.monocrotaline(40mg/kg)を1回SDラットに筋注することで,2週目より肺高血圧ができ,3週目より右室肥大・不全心になる。それらの右室・心室中隔・左室を分け,Jones法によって心筋粗膜分画を作製した。3.それぞれの膜分画を,AC抗体と市販のC kinase I(γ),II(β),III(α)抗体を用いて,右室肥大・不全心の心筋粗膜分画のそれぞれの蛋白量を定量した(Western blotting)。ACのポリクロナール抗体では,鮮明な画像はまだ得られていない。C kinaseの量は右室肥大・不全心となっても,コントロールと比べて大きな変動は見られず,C kinaseの蛋白量は肥大・不全心では変化していないと思われた。1.Westernblottingやimmunoprecipitationに用いるアデニル酸シクラーゼ(AC)抗体を作製した:AC(Type V,VI)の部分とくに平成5年度に作製したアミノ酸配列のC,N端末側に近いところのペプチド抗体の力価が低かったので,AC(Type V,VI)のアミノ酸配列の中間部分でかつ親水性,共通抗原性のない部分のアミノ酸配列を合成し,ウサギに静注,ポリクロナール抗体を作製した。抗体の力値はELISA法で確認したが,その力値は10-3までした上昇しなかった。3.右室肥大・不全心の心筋粗膜分画のAC蛋白量をAC抗体を用いてwestern blotting法で試みた。多くのbandが出現したが,110KDa付近のACと思われるbandは右室・心室中隔・左室でcontrol群,monocrotaline群の間で差はないようであり,定量化できないのはACの蛋白量が極めて少ないか,または作製した抗体が非特異的であるためではないかと考えられた。
小氷期最寒冷期と巨大噴火・津波がアイヌ民族へ与えた影響

2018年度における調査研究の結果、以下の(1)(4)のことが明らかとなった。(1)チセ(住居)跡の一部の可能性がある1640年1663年の柱穴を新たに発見し、その周辺から磁器と漆膜が出土した。これによって、16401663年の23年間に限定される住居や村の様子についての新たなデータが得られた。(2)チセ跡の建築学的検討の結果、上部が桁受の又木柱を地中深く打ち込むために何らかの工夫が必要であったことや、緩い屋根勾配(低い屋根)の方が保温効果に適していることが確認された。(3)植物珪酸体分析の結果、一部のデータは17世紀中頃がそれ以前の時代よりも積雪量が少なかった可能性を示した。(4)豊浦町小幌洞穴遺跡から出土したラッコ骨についてAMS法による14C年代測定を行った結果、較正年代は紀元前84世紀を示し、一部は寒冷期と重なった。寒冷期(小氷期)の影響でラッコの生息域の南限が南下していた可能性を、あらためて小氷期の標本で検討する必要性へつながった。以上の成果は、調査期間中においては洞爺湖有珠山ジオパークと連携してバス見学会を実施し、発掘現場に一般市民を招いて説明会を行った。年度末には、北海道博物館研究紀要で報告するとともに、伊達市において一般向け成果報告会を実施し、さらに、小学生向けの地質調査体験事業(地層からアイヌ時代の巨大津波を探る)も行い、一般市民に広く還元した。これらについてはNHK、北海道新聞社、朝日新聞社、読売新聞社、室蘭民報にて放送、掲載された。なお、4年間の研究成果の総括として遺跡発掘報告書も刊行した。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。アイヌ文化期は、小氷期と大部分の時代が一致する上、特に寒冷であった17世紀は北海道では巨大噴火・津波が頻発していた。文字を持たないアイヌ民族に関しては、それらの影響について古文書から読み取ることができない。そこで我々は、これらに被災した伊達市カムイタプコプ下遺跡を発掘し遺構や遺物の科学分析から自然災害を含む当時の環境を復元して、アイヌ民族へ与えた影響を学際的に明らかにする研究をスタートさせた。過去に実施したカムイタプコプ下遺跡の発掘調査では住居趾、畑跡、貝塚、墓などを確認しているが、小氷期最寒冷期(17世紀中頃)にあたる貝塚は未確認であった。そこで、今年度の野外調査では、津波堆積物とUs-bとの層位関係から、16401663年に限定することができる貝塚を発見することを最重要課題とした。調査手法としては、できるだけ多くの貝塚を発見するため、大口径の検土杖を用いることとし、鍵層となる津波堆積物が明瞭に分布することが判明している遺跡の北側において2方向の側線を設定した。58地点を調査し、6地点において17世紀中頃の貝塚と推定される貝殻片や動物骨片を確認した。これにより次年度の遺跡発掘調査の際に、より効果的に研究目的を達成するための発掘エリアを絞り込むことが可能となった。また、同時期に形成された畑跡である可能性を示す人為的な堆積の乱れも確認した。畑跡も本研究課題においては重要な研究対象であり、作物痕の可能性がある痕跡からデンプン粒の検出が増えれば、例えばダイコンやカブのように花が咲く前に収穫される作物で畑跡から花粉が検出しづらい作物であっても、栽培種を推定できる可能性がある。これにより、人々が当時の寒冷環境に対応してどのような作物を栽培していたかが判明する可能性がある。以上のように、今年度の調査では、来年度から行う遺跡発掘調査のエリアを決めるための重要なデータを入手した。平成27年5月、研究代表者の息子(知的障害児・療育手帳B)の世話をしてくれていた義父が急死し、代わりの世話人を用意しなければ出張(野外調査)が不可能となったため、6月以降に予定していた計画を延期する必要が生じた。直ちに新しい世話人を用意したが息子との信頼関係を築くのに時間を要した。幸い、平成28年1月には息子の世話を任せられる状況となったため、同月末から野外調査を開始することができた。このように、平成27年度に予定していた研究計画のうち、野外調査に関する部分の計画が遅れた。これにともなって未使用となった研究費については、「調整金」を利用した次年度使用の申請を行う予定である。今年度の調査ではカムイタプコプ下遺跡を発掘し、1600年前後1640年頃の貝塚、1640年1663年の畑跡を確認し、畑跡からは、根菜類や球根類の可能性をもつデンプン粒を検出することができた。貝塚については、チセ址(15世紀後半。ただし、1617世紀前半まで使用されていた可能性有)と一部同時期に存在した可能性があることから、小氷期における人々の活動を明らかにする上で貴重な発見となった。今後は送り場としての貝塚の確認と集落構造の把握が課題となってくる。また、貝塚から出土したサイズの大きなウバガイとウチムラサキガイについては安定同位体および微細成長縞分析を進めている。これまで16401663年の貝塚から出土したアサリを用いた同分析では、当時は現在より貝類の成長速度が遅く、夏が短く低海水温だった可能性が高いことが示されている(添田ほか2014)。

今回、より長寿命なサイズの大きいウバガイとウチムラサキガイの分析によって、小氷期の中でも特に寒冷であった17世紀の古環境が詳細に復元されることが期待される。さらに、来年度の調査では16401663年の貝塚の確認も試みる計画である。来年度の発掘調査では、今回発掘した南側の畑跡よりも時期が新しく畝の保存状態も良い、1663年のUs-b降灰直前まで使用されていた可能性が高い北側の畑跡を調査するため、作物痕と推定される痕跡のさらなる確認が期待できる。新たなサンプルが追加されれば、今回の調査で検出した残存デンプン粒の由来する植物を解明できる可能性がある。これによって、当時の人々が寒冷環境に対応してどのような作物を栽培していたかなど、生活の状況も明らかになるだろう。以上の成果については、北海道考古学会で報告するとともに、伊達市において市民向けの成果報告会も実施し、さらに北海道博物館のの研究紀要などに調査報告も掲載した。遺跡の発掘調査および周辺域の地質調査を予定通り実施することができ、分析に必要な試料も十分採取できた。これらによって次年度には、より効果的な調査研究を実施できることになった。さらに、一般向けの成果報告会を実施し、北海道博物館の研究紀要などにも掲載するなど、成果の公表も予定通り実施できた。2017年度における調査研究の結果、以下の(1)(5)のことが明らかとなった。(1)カムイタプコプ下遺跡の1640年1663年の畑跡では作痕跡の可能性がある20の痕跡を確認し、さらに同時期の貝塚とチセの一部の可能性がある柱穴を新たに発見した。これによって、16401663年の23年間に限定される村の様子の把握が可能となってきた。(2)1663年の有珠山噴火の際、有珠地区は火砕サージに襲われていた可能性が判明した。このことは、1640年駒ヶ岳噴火・津波と1663年有珠山噴火の大きな2つの自然災害を経て、時期ごとに集落構造がどのように変化していったのかを明らかにする上で、極めて重要な成果となった。(3)植物珪酸体分析の結果、1663年頃は、それ以前の時代よりも積雪量が少なかった可能性が推定された。これは、当時、対馬暖流の流入が弱まっていたことと関係があると考えられる。(4)伊達市オヤコツ遺跡から出土したラッコ骨についてAMS法による14C年代測定を行った結果、較正年代は13世紀から15世紀初頭を示した。これは太陽活動のウォルフ極小期に重なった。今後は、寒冷期のピークがラッコの生息域の南限を南下させていた可能性について、他の遺跡から出土したラッコ骨の年代測定や同位体分析も行う。(5)北海道内のチセ(住居)跡の先行事例と比較すると、カムイタプコプ下遺跡のチセは、面積は50m2前後の事例に近いが、柱穴が細く打込深さがやや浅いことや、柱の間隔が不規則で広い(最大の間隔約4.5m)など、他地域では見られない特徴が判明した。以上の成果は、年度末に北海道博物館研究紀要などで報告するとともに、一般向けの成果報告会を北海道大学で実施した。成果報告会については北海道大学アイヌ・先住民研究センターや北海道考古学会の後援で開催し一般市民に広く還元した。また、北海道新聞でも連載で取り上げられた。本研究では6つの課題を設定し、期間内の達成を目指している。このうち課題5「噴火湾沿岸を中心とする近世貝塚出土の冷水系哺乳類骨(ラッコ)の年代測定を行い、小氷期および千島海流強勢期との関係を調べ、猟への影響を探る」については、標本の所在先の事情で遅れているが、ほかの5つの課題は順調に進んでいるため。
オートファジー制御による高品質なウシ体外胚生産系の開発

マウスにおける先行研究によって発生能との関係が示されているオートファジーについて、それらを時期特異的に阻害または誘導することで発生能にどのような影響があるのかについて明らかにするとともに、最終的には発生能を向上させるための処理条件を決定することを目的とした。Rapamycin添加によりオートファジーを誘導した場合、胚盤胞期までの発生率が上昇した。一方で、Wortmannin添加によりオートファジー阻害を行った場合、濃度依存的に分割率および胚盤胞期までの発生率が低下した。次に、オートファジー阻害処理の時期および期間が胚発生能に及ぼす影響について検討を行った結果、発生培養開始から72時間までのオートファジー阻害が発生能を低下させることが明らかとなった。前年度に得られた結果では、この時期の発生ステージにあるウシ胚で、オートファジーの活性が高くなることが明らかとなっており、この時期のオートファジーの胚発生における重要性が示唆された。さらに、この時期のウシ胚は胚ゲノムの活性化が起こる時期ということが知られており、それに新規のタンパク質合成の材料の供給等でオートファジーが何らかの役割を担っているのかもしれない。以上の結果から、マウス同様、ウシ胚においてもオートファジーと発生能との関係が示された。また、特に受精後からごく初期の期間でのオートファジーがその後の発生能に大きく関与することが示唆された。今後は、オートファジー制御方法や検出方法についても更なる改良を加えつつ、これらの知見を利用したウシ体外生産胚の品質向上について検討を行う。計画通り研究を推進できたとともに、計画では次年度開始を予定していた実験にもすでに着手することができている。今後はこれまでに得られた知見をもとに、体外生産胚の品質向上を検討する。特に、ガラス化保存後の生存性や移植後の受胎率を中心にオートファジー制御による移植用体外生産胚の品質向上の可能性について検討する。ウシ卵母細胞の成熟および胚発生過程におけるオートファジー動態について、免疫染色および遺伝子発現解析により検討を行った。GV期、MII期、1細胞期胚盤胞期までの卵母細胞または胚のすべてのステージにおいてオートファジー小胞が観察されたが、特に、MII期卵子、9-16細胞期胚、胚盤胞期胚においてオートファジー活性が顕著に高かった。これらの結果のうち、受精後からオートファジー活性が上昇し、初期分割胚でその活性が高まるという点においてはマウスでの報告と一致するものであった。また、発生が遅延している初期分割胚でオートファジー活性の低下が確認されたことから、ウシ胚においてもマウス胚と同様にこの時期のオートファジーの活性化がその後の発生に関与している可能性が示された。一方で、マウスを使った報告では、MII期でオートファイジーが検出されないことから、体外成熟培養の影響や種間での違いを示唆した結果といえる。さらに、ウシでは胚盤胞期胚においても高いオートファジー活性が見られたこともマウスでの報告とは異なる結果であった。ウシでは、透明体脱出後、反芻動物特有の現象である胚の伸張が起こるが、そのような発生過程やその後の着床様式の違いがこのオートファジー動態の違いを生み出している可能性が考えられる。以上の結果から、今年度はほとんど未解明であったウシ初期胚発生過程におけるオートファジー動態を明らかにし、今後の研究推進のための基礎的知見の集積を行うことができた。今後はこれらの知見をもとに、時期特異的なオートファジー阻害および促進を行うことで、これらの意義について明らかにしていく予定である。前年度得られた知見をもとに、オートファジーを時期特異的に阻害または誘導することでどのような影響があるのかについて明らかにするとともに、最終的には発生能を向上させるための処理条件を決定することを目的とする。
木材の誘目性が視覚ストレスに及ぼす影響の究明

木材および木質内装壁面の外観的特徴が観察者の心理的および生理的状態に及ぼす影響を客観的に把握するために,実験室内に組み上げた実大木質壁面やコンピュータ・グラフィックスで表現された木目模様を被験者に観察させる実験を行った.刺激観察中の被験者の脳波,血液循環調節に関わる自律神経応答,刺激の見た目の印象などを測定した.その結果,木材表面の装飾的な凹凸の有無,壁面に占める木材の量および木材の向きなど,比較的単純なデザイン要素によって,観察者の心身の状態変化が生じることがわかった.また,木材の見た目の特徴を画像特徴量として抽出し,観察者の心理量と対応づけることが可能であることを示した.木材および木質内装壁面の外観的特徴が観察者の心理的および生理的状態に及ぼす影響を客観的に把握するために,実験室内に組み上げた実大木質壁面やコンピュータ・グラフィックスで表現された木目模様を被験者に観察させる実験を行った.刺激観察中の被験者の脳波,血液循環調節に関わる自律神経応答,刺激の見た目の印象などを測定した.その結果,木材表面の装飾的な凹凸の有無,壁面に占める木材の量および木材の向きなど,比較的単純なデザイン要素によって,観察者の心身の状態変化が生じることがわかった.また,木材の見た目の特徴を画像特徴量として抽出し,観察者の心理量と対応づけることが可能であることを示した.木材の誘目性が視覚ストレスに及ぼす影響を定量的に評価するために,本年度は以下のような実験と解析を行った.a)視覚刺激の調製:大学の標準的な実験室の白い壁面に100mm幅のスギ板目材で組まれた960mm角パネル3枚を横並びに貼った.その際,「パネルの配置(貼る高さ)」および「パネルの向き(繊維方向)」を変えて3種類のデザインを設定した.さらに,板目面に等間隔の溝(スリット)があるものとないものも設定し,計6種類の実大木質内装を視覚刺激として調製した.b)被験者実験:上記の木質内装室に男女学生19名を1名ずつ誘導し,2500mmの距離から壁面を観察させた.このときの被験者の自律神経系反応(脈拍数,血圧,心拍変動),視線の動き(認知反応)を経時的に測定した.約9分間の滞在時間の最後に,壁面の見た目の快適感などについてアンケートを行った(主観評価).さらに,木質内装室滞在前後に感情プロフィール検査(POMS検査),および,ストレスレベル測定(唾液アミラーゼ活性)も行った.スリットの無いパネルを目の高さに横貼りした壁面は他のデザインよりも快適感が強く,逆にスリットのあるパネルを腰壁様に横貼りした壁面は,不快ではないが快適感が最も弱かった.これら2つの意匠を観察する際,被験者の拡張期血圧には有意な変化が現れなかったが,これら以外の内装室では観察初期に血圧が有意に低下する傾向が見出された.また,目の高さに横貼りされた壁面および縦貼りされた壁面を観察する際,被験者の視線の垂直移動は横貼りの方が縦貼りよりも小刻みになった.木材の量は一定であっても,その配置や向きによって,心理反応はもちろん,自律神経系反応や認知反応が影響されることを今回の結果は示している.木質内装のデザインがヒトに及ぼす影響はこれまで経験的に言及されるに過ぎず,実大実験によるこのような実証データは非常に重要である.木材の誘目性が視覚ストレスに及ぼす影響を定量的に評価するために,本年度は木材による単純な壁面デザインを施した実大木質内装の観察実験と結果の解析を行った.2.4m×2.4mの白色の壁面に,長さ2.5m,幅10cmの7本のスギ平角材を,材幅と隙間の比を1:0,1:1,1:2と変えて,縦向きあるいは横向きに貼った(6種類).壁面に占める木材の割合はいずれも30%である.この木質内装室に30名の男女学生を1名ずつ誘導し,2850mmの距離から壁面を観察させた.このときの被験者の自律神経活動(脈拍数,血圧,心拍変動),中枢神経系反応(脳波)を経時的に測定し,また,壁面の見た目の快適感や主観的木材量などに関する官能評価を実施した.さらに,木内装室滞在前後に感情プロフィール検査(POMS検査)およびストレスレベル(唾液アミラーゼ活性)の測定も行った.脳波の解析に用いたのは眼球停留関連電位(EFRP)を指標に用いる新規な手法で,壁面デザインに対する被験者の注意や興味を客観的に評価できることが期待される.今回は被験者の後頭野からEFRPに特有のラムダ反応を各刺激から検出することができ,しかも,横貼りよりも縦貼りの方が反応の振幅が大きいことなどを確認できた.自律神経活動においても,壁面に使用されている木材量が一定であるにもかかわらず,材の向きおよび配置の違いによって反応に差異が認められた.主観的木材率は材と材との間に隙間が開いたときに過剰評価される傾向が見出され,壁面に占める正味の木材量を見積もる被験者と,壁面における木材の広がりを評価する被験者の存在が示唆された.木材の量は一定であるにもかかわらず,デザインが主観評価はもちろん,自律神経系反応および中枢神経系反応に影響を及ぼしうることを,昨年度に引き続き実大内装実験によって示すことができた.本研究では新規な脳波測定手法として注目される眼球停留関連電位(EFRP)計測によって木材の誘目性を把握しようとしている.

この手法の有効性を確認するために,昨年度の実大実験に供試した7種類の壁面の写真を大型液晶モニタに表示し,これを観察する14名の被験者の後頭野EFRPを測定した.得られたEFRP波形には実大実験と同様のラムダ反応(観察対象に対する関心や注意の程度を反映するとされる)が現れ,また,壁面デザインによる反応強度の大小も実大実験の場合と同様であり,ラムダ反応の恒常性が示唆された.木材量およびデザインの差異が観察者に及ぼす影響を確認するために,材面の凹凸形状(平板,波形,角溝)の異なる無塗装スギ集成材で木材量が異なる8種類の実大木質壁面(2.4m×2.4m)を構築し,24名の被験者に観察させた.観察中の被験者のEFRP,血圧,心拍を連続的に測定し,また,各壁面の見た目の印象や観察中の被験者の気分状態を調べた.壁面間でラムダ反応に統計的有意差は認められなかったが,木材量が多いほど,また,表面加飾が施されている壁面に対して,より多くの注意資源が割かれていることが示唆された.自律神経活動においては,木材量が増えるほど,また,表面加飾が施されている壁面が,鎮静的な作用をもたらし得ることが示唆された.さらに,木材の外観的特徴の影響を把握するために,スギ材ラミナの画像をコンピュータ中で並べて無節および有節の壁面パターンを生成,これを大型液晶モニタに等倍表示して28名の被験者に観察させ,EFRPと視線の動きを測定した.有節パターンを見たときの方が無節のものよりもラムダ反応が大きいと予想したが,節の有無による差はなく,むしろラミナの向きや継ぎ目の水平線など,幾何学的な特徴による差の方が大きかった.また,女性の方が男性よりもラムダ反応が大きくなる傾向が認められた.26年度が最終年度であるため、記入しない。26年度が最終年度であるため、記入しない。木質内装を観察することで中枢神経系に生じる変化を眼球停留関連電位(EFRP)計測によって抽出することを当初予定していたが,当該年度に実施した被験者実験までに安定的に脳波を検出するに至らなかった.この点以外は概ね予定通りに実験計画は進行しており,主観評価のためのツールであるウェブVASシステムが構築されるなど,実験実施環境が予想以上に整う側面もあった.本年度は,木質内装を観察することで被験者の中枢神経系反応(脳波)に生じる変化を,眼球停留関連電位(EFRP)計測によって抽出することに傾注し,評価ツールとしての有効性を確認できた.EFRP以外の測定項目は昨年度と同様であり,また,主観評価のためのツールであるウェブVASシステムも安定的に運用でき,全体として円滑に実験を行えた.この種の実験としては多めの被験者数(30名)を確保できたため,例えば主観評価の傾向に応じて被験者を分けて生理応答データを集計することが可能となった.これは官能検査法に準じた主観評価(心理量)と生理応答評価指標(生理量)を有機的に結びつけて,木材の外観的特徴(物理量)が人に及ぼす影響をより精緻に解析することにつながるものと考えている.26年度が最終年度であるため、記入しない。実験室内に施工された実大内装空間に被験者を誘導し,認知反応測定,中枢神経系反応測定(EFRP測定),自律神経系反応測定,心理応答測定を行い,実大木質内装空間に曝露された被験者のストレスレベルを多面的に測定する.中でも当該年度中に実測に至らなかったEFRP測定はこれまで木材分野で試みられたことのない中枢神経系反応の測定手法であり,次年度は特にここに傾注する.過去2年間の研究により,実大木質内装が視覚情報処理系を刺激することによって被験者に生じる心身の状態変化を抽出するための道具立てが揃った.
速乾性擦式手指消毒薬の消毒効果を低下させないための使用方法の検討

研究代表者の研究で、手洗い直後に速乾性擦式手指消毒薬を使用した場合、消毒効果が低下し、手指から多数の細菌が検出されることが多いが、クロルヘキシジングルコン酸塩が0.5g/100ml添加された手術時ウォーターレス法用の消毒薬は、手洗い後に使用しても細菌の検出数が少ないことがわかってきた。しかし、消毒薬によっては検出数の多い場合もあるため、手洗い後の使用に適している消毒薬の条件についてさらに検討する。また、頻回に手洗い・手指消毒が実施される場合は、手洗いから時間をおかずに、速乾性擦式手指消毒薬による消毒が行われる可能性があるため、手洗いによる消毒効果の低下がどの程度の時間持続するかを明らかにする。
新しいマラリア原虫検出法の開発:完全自動化システムおよび簡易システムの確立

本研究は、われわれが独自に開発した溶血剤を用い、主に研究室レベルで実用可能で、新薬やワクチンの効果判定に有効な、flow cytometryでマラリア原虫を高感度に検出する完全自動化システムの確立を目的とする。また、解析力を高めるためにこのシステムを改良し、マラリア原虫のステージ別、および種別分類を可能にするシステムとして発展させる。さらに、可能であれば、より簡便て安価なマラリア原虫検出システムを考案するこよにより、経済状況の非常に悪いマラリア流行地での診断目的にも実用可能なシステムとして確立することも目標とする研究である。平成10年度平成11年度の研究成果を以下に示す。1、培養マラリア原虫を用い原虫のnow cytometry上の描出区画を決定し、検出限界を求めた。培養マラリア原虫の検出限界はparasitemia0.00010.0002%で、parasitemia0.01%以上で、本法による原虫測定数とparasitemiaとの間に安定した正の相関が得られた。2、同調培養した原虫を調整し顕微鏡的観察の結果と比較したところ、マラリア原虫をflow cytometry上でステージ別に分離して描出することが出来た。3、抗マラリア薬の効果判定法として本システムの適用の可能性を検討し、適用可能であることを示した。4、測定の手順を非常に簡略化することのより測定開始から解析終了まで約30秒の完全自動化が可能なシステムとして確立した。5、画像装置付きflow cytometryの開発により、種別分類の可能なマラリア原虫検出システムの開発への可能性を示した。6、より簡便で安価なマラリア原虫検出システムヘの改良または新たな開発を試みたが、これについては、現時点で、これまでのシステムを超えるものを確立することはできず今後の課題となった。本研究は、独自に開発した溶血剤を用い、主に研究室レベルで実用可能で、新薬やワクチンの効果判定に有効な、flow cytometryでマラリア原虫を高感度に検出する完全自動化システムの確立を目的とする。さらに、より簡便で安価なマラリア原虫検出システムを考案するこよにより、経済状況の非常に悪いマラリア流行地での診断目的にも実用可能なシステムとして確立することも目標とする研究である。今年度は以下のような成果が得られた。3、既存の抗マラリア薬の効果の判定を本システムを用いて行ったところ、従来法(塗抹標本による顕微鏡的観察や[^3H]Hypoxanthineの取り込による薬剤効果の判定法)の結果とほぼ同様の結果を得た。4、測定の手順を非常に簡略化し、測定開始から解析終了まで約30秒で完全自動化が可能なシステムとして確立できた。さらに、可能であれば、より簡便で安価なマラリア原虫検出システムを考案することにより、経済状況の非常に悪いマラリア流行地での診断目的にも実用可能なシステムとして確立することも目標とする研究である。平成11年度は以下のような成果が得られた。1、感度の改善をめざし、溶血剤の組成や、溶血時間、溶血後の処置などを中心に検討を加えた。

最終的に、0.00010.0002%程度の検出限界を得ることができた。2、種別分類の可能なマラリア原虫検出システムの開発をめざし、本システムに画像装置付きflow cytometryを適用することに関して検討を加えた。まず、熱帯熱マラリア原虫の雌雄生殖母体を調整し、雌雄生殖母体のscattergram上の抽出区画を決定し、その区画に抽出されるdotの画像を検討したところ、比較的、明瞭にとらえることができた。他のステージの原虫についても同様の検討を加えた。画像の解析力はまだ十分とは言えないもののそれぞれのステージの画像をとらえることが可能であった。したがって、さらに画像解析能のある画像装置付きflow cytometryの開発により、種別分類の可能なマラリア原虫検出システムの開発への可能性を示すことができた。3、より簡便で安価なマラリア原虫検出システムへの改良または新たな開発を試みたが、これについては、現時点で、これまでのシステムを超えるものを確立することはできず今後の課題となった。
組換えBCG菌の開発と抗酸菌の抗原性蛋白質の遺伝子構造と活性の研究

この研究の目的は、生菌ワクチンとして世界中で広く用いられてきたBCG菌に様々な難病(エイズ、マラリア等)の抗原タンパク質遺伝子を移入し、新しい有用な組換えBCGワクチンを開発することである。既に、M.Kansasiiの分泌タンパク質の一種であるα・抗原遺伝子に、エイズgagタンパク質p17のエピトープ部分をつないでBCG菌に入れ融合タンパク質を産生させることに成功している。日和見感染菌としてエイズ患者から検出されるM.aviumから、多くの抗酸菌に共通なα・抗原の遺伝子を分離した。その遺伝子の抗原性部分を調べ、少なくとも六ヶ所にB・cellエプトープ部分があることを明らかにした(Infection & Immunity, 1993)。より効率的な発現系を開発するため、BCG菌Tokyo株において大量に分泌されるMPB70の遺伝子発現機構を解明することにした。MPB70を殆ど分泌しないBCG菌Pasteur株を対照として用い、両者にMPB70遺伝子が保持されているかどうかを調べた。その結果、両者共遺伝子のN末端もC末端も共に有することが明らかになった(Biomedical Letters, 1993)。次にMPB70遺伝子のプロモーターとシグナルペプチド部位に焦点を当て、MPB70の遺伝子発現と分泌の機構を調べる目的で、上流域を含む1.6kbのDNA断片を得、MPB70遺伝子が発現していることを確認した。現在さらに短くした断片を作製中である。エイズに続いてマラリアの抗原タンパク質遺伝子を導入した組換えBCG菌を作るため、マラリアCSタンパク質のcytotoxic Tcellエピトープのアミノ酸配列からDNA断片を合成した。これをMPB64遺伝子に繋いだ後、BCG菌を形質転換し、菌体内での発現を確認した。この組換えBCG菌をマウスに接種し、T・cellの活性化を調べたところ賦活化は見られなかった。現在その原因を追及している。この研究の目的は、世界中で広く用いられてきたBCG生ワクチンに様々な難病の抗原タンパク質遺伝子を入れ新しい有用なワクチンを開発することである。既にM.kansasiiの菌体外分泌タンパク質の一種であるα-抗原遺伝子にエイズgagタンパク質p17のエピトープを繋いでBCG菌に入れ発現させることに成功した。より効率的な発現系を開発するため、BCG菌Tokyo株において大量に分泌されるMPB70遺伝子の発現機構を解明することにした。MPB70は同じBCG菌でも株間において発現の仕方が異なる。この違いの原因を明らかにするためMPB70を殆ど分秘しないBCG菌Pasteur株を対照として用い、両者にMPB70遺伝子が保持されているか否かをサザーンハイブリダイゼイション法で調べた。その結果、両者共遺伝子のN末端もC末端も共に有していることが明らかになった(投稿中)。次いでこの遺伝子のプロモーター部位とシグナルペプチド部位に焦点を当て、MPB70遺伝子の発現と分泌のしくみを明らかにしていきたいと考えている。M.aviumは日和見感染菌としてエイズ患者から検出されることでよく知られている。この菌のα-抗原遺伝子をクローニングした。M.aviumのα-抗原遺伝子の塩基配列は他の抗酸菌とよく似ていることが確かめられた。この遺伝子を細分割して発現させその抗原性を調べたところ、少なくとも二ケ所にB-cellエピトープ活性があることが明らかになった(Infection and Immunity印刷中)。

この研究の目的は、世界中で広く用いられてきたBCG生ワクチンに様々な難病(エイズ、マラリア等)の抗原タンパク質遺伝子を入れ新しい有用なワクチンを開発することであるalpha既にM.kansasiiの菌体外分泌タンパク質の一種である。抗原遺伝子にエイズgagタンパク質p17のエピトープを繁いでBCG菌に入れ発現させることに成功した。同様に、マラリアCSタンパク質のT-cellエピトープをスメグマ菌に入れて発現させる実験を行っている。より効率的な発現系を開発するため、BCG菌Tokyo株において大量に分泌されるMPB70遺伝子の発現機構を解明することにした。MPB70は同じBCG菌でも株間において発現の仕方が異なる。この違いの原因を明らかにするためMPB70を殆んど分泌しないBCG菌Pasteur株を対照として用い、両者にMPB70遺伝子が保持されているか否かをサザーンハイブリダイゼイション法で調べた。その結果、両者共遺伝子のN末端もC末端も共に有していることが明らかになった(Biomedical Letters 48,1993;発表)。次いでこの遺伝子のプロモーター部位に焦点を当て、MPB70遺伝子の発現と分泌のしくみを明らかにしていきたいと考えている。また迅速な結核診断法を開発するため、結核菌やBCG菌に特有なMPT63タンパク質に注目し、その遺伝子をクローニングすることにした。まず、結核菌の培養上清を二次元電気詠動にかけMPT63タンパク質のスポツトを得た。次にこのスポツトからN末端のアミノ酸配列を決定した。適当なコドンを用いて、そのアミノ酸配列を翻訳し、プローブとなるオリゴヌクレオチドを合成した。現在、シングルプローブ法にてMPT63遺伝子のクローニングを行っている。本研究は、世界中で広く用いられてきたBCG生ワクチンに様々な難病の抗原タンパク質遺伝子を移入し、新しい有用な組換えBCGワクチンを開発することを目的としている。既にM.kansasiiの菌体外分泌タンパク質であるα-抗原の遺伝子に、エイズgagタンパク質p17のエピトープを繋いでBCG菌に入れ発現させることに成功している。エイズに続いてマラリアの抗原タンパク質遺伝子を含む組換えBCG菌を作るため、マラリアCSタンパク質のcytotoxic Tcellエピトープのアミノ酸配列から短いDNA断片を合成した。これをMPB64タンパク質遺伝子のC末端につなぎBCG菌に移入した。このように構築された遺伝子がBCG菌内で発現していることを、培養上清を調べfusionproteinの存在を明らかにすることによって確認した。更に、この組換えBVG菌をマウスに接種し,T-cellの活性化を調べたところ賦活化は見られなかった。現在その原因を追究しているところである。より効率的な発現系を開発するため,BCG菌Tokyo株において大量に分泌されるMPB70遺伝子の発現機構を解明している.MPB70をよく発現するBCGTokyo株のMPB70遺伝子の上流域を調べる目的で、制限酵素KpnIを処理して上流域1.6kbを含むDNA断片を得た。これを1
超短パルス光励起スピン流による電流レス磁化反転

本年度はCo/Pt,Fe/Pt,Fe/Au等の遷移金属/非磁性積層膜に超短パルス光を照射しそれにより生じるスピン流による磁化歳差運動の変化を観測するとともに,超短パルス光誘起スピン流磁化反転を観測するため,既存の時間分解磁気光学効果(TRMOKE)の測定系を改造し,透過モードで磁化歳差運動を測定できるようにした.スピン流による磁化歳差運動の変化についてまず,Co(0.30.6 nm)/PtおよびFe(0.30.6 nm)/PtなどのPt上のCo,Fe超薄膜を検討した.磁性層厚を薄くすることで有効ダンピング定数の増加が観測され,磁性層から非磁性層にスピン流が流入していることが確認された.磁性層厚減少による有効ダンピング定数の増加はFe/Au系においても観測されたが,Fe(0.41.0 nm)/Au(20 nm)積層膜ではFe/Pt系などに比べ有効ダンピング定数が1/5程度と小さいことがわかった.これは貴金属層に流入したスピン流がAu (20 nm)で緩和されず,Fe層にスピン流が戻っていることを示唆しており,スピン流伝送層として,Auが有望であることが示された.超短パルス光誘起スピン流磁化反転については,現時点において確認されておらず,膜構造の最適化など今後も引き続き検討を行う必要があることが分かった.本年度はGdFeCo,GdFeCo/TbFe,Co/Pt,Co/Pdなど垂直磁気異方性を示す材料系において,その膜構成の変化によるスピンダイナミクスの変化を調べた.GdFeCo膜は補償組成付近でg係数の増大と有効ダンピング定数の増大が観測された.GdFeCoに1 nm以下程度の膜厚のTbFeを隣接させることで,ダンピング定数が増加し,GdFeCo (10 nm)で0.05程度であった値がGdFeCo (9 nm) / TbFe (1 nm)では0.2程度と4倍程度に増加することが分かった.なお,この増加は磁気異方性の分散によるものではなく,Gilbertダンピング定数の増加に起因することも確認している.Co/Pt系積層膜ではCo層厚の増加,Pt層厚の減少によりダンピング定数が減少することが分かった.また,Co/Pd積層膜ではCo/Pt積層膜に比べダンピング定数が小さい傾向も得られた.以上からCo/貴金属積層膜のダンピング定数は貴金属層でのスピン緩和に支配されることが考えられる.本研究で検討する超短パルス光誘起スピン流磁化反転を観測するためには,これまでの時間分解磁気光学効果の測定系を改造する必要がある.本年度,この改造のため新たに電磁石を購入し,光学系の改造を行っている.平成29年度において,超短パルス光誘起スピン流磁化反転を観測を行うための時間分解磁気光学効果測定系の改造を行い,透過モードでのpump光照射による磁化歳差運動の変化を観測する予定であった.しかしながら,透過モード測定の重要な部品である電磁石の小型化と磁界印加角度を広げるための設計変更により,その作製が遅れ,計画全体が3ヶ月程度遅れた.なお,現在はこの新しい電磁石を用いた光学系の構築を行っており,計画の遅れは十分取り戻せるものと考えられる.本年度はCo/Pt,Fe/Pt,Fe/Au等の遷移金属/非磁性積層膜に超短パルス光を照射しそれにより生じるスピン流による磁化歳差運動の変化を観測するとともに,超短パルス光誘起スピン流磁化反転を観測するため,既存の時間分解磁気光学効果(TRMOKE)の測定系を改造し,透過モードで磁化歳差運動を測定できるようにした.スピン流による磁化歳差運動の変化についてまず,Co(0.30.6 nm)/PtおよびFe(0.30.6 nm)/PtなどのPt上のCo,Fe超薄膜を検討した.磁性層厚を薄くすることで有効ダンピング定数の増加が観測され,磁性層から非磁性層にスピン流が流入していることが確認された.磁性層厚減少による有効ダンピング定数の増加はFe/Au系においても観測されたが,Fe(0.41.0 nm)/Au(20 nm)積層膜ではFe/Pt系などに比べ有効ダンピング定数が1/5程度と小さいことがわかった.これは貴金属層に流入したスピン流がAu (20 nm)で緩和されず,Fe層にスピン流が戻っていることを示唆しており,スピン流伝送層として,Auが有望であることが示された.超短パルス光誘起スピン流磁化反転については,現時点において確認されておらず,膜構造の最適化など今後も引き続き検討を行う必要があることが分かった.本年度は強磁性/非磁性/強磁性積層構造への超短パルス光を照射し,それにより生じるスピン流による磁化歳差運動の変化および磁化反転を観測する.これまでの検討でGdFeCo膜は5 nm以上の膜厚で垂直磁気異方性の大きな膜が得られることが分かっており,本検討においてはGdFeCo層厚が薄い方が良いと考えられる.そこで,GdFeCo (5 nm) / Cu (30 - 50 nm) / Ni (5 nm)といった膜構成を作製し,光誘起スピン流による磁化反転の可能性を調べる.さらに,パルスピッカーを用いて単一光パルスを生成し,単一パルス照射による電流レススピン流磁化反転の可能性を調べる.
リンゴの自家不和合性反応における花粉側因子の機能解析と自他認識機構の解明

近年、多数のリンゴ自家不和合性花粉側S遺伝子候補SFBB (Slocus F-box brothers)が同定された。しかしこれら全てのSFBBが真の花粉側S遺伝子として機能するかどうかについては、現時点で不明である。本研究では、SFBBの生物学的機能解析と生化学的機能解析を行い、全てのSFBBが真の花粉S遺伝子であるかどうかを明らかにする事を目的とした。〈リンゴ形質転換体を用いたSFBBの生物学的機能解析〉SFBB遺伝子を、アグロバクテリウム法を用いてリンゴの栽培品種『きたろう』に導入した。得られた複数の再分化個体についてサザンプロットを行った結果、1から数コピーの導入遺伝子が確認された。〈組換えタンパク質を用いたSFBBの生化学的機能解析〉ナス科Petunia inflataにおいて、SBP1 (S-RNase binding protein 1)やSSK1 (SLF-interacting Skp1-like proteiin 1)はCullin1 (CUL1)や、花粉側S因子であるSLFとともにE3複合体を構成することが報告されている。リンゴSFBBが真の花粉側S因子であるならば、SBP1もしくはSSK1、CUL1とともにE3複合体を構成することが予想される。リンゴ概要ゲノム情報をもとにリンゴSSK1ホモログ(MdSSK1)を花粉RNAから単離した。大腸菌で発現させたMdSBP1およびMdSSK1は、MdSFBB1と相互作用することがpull down assayにより示された。一方、大腸菌で発現させたMdSSK1は無細胞発現系を用いて発現させたMdCUL1と相互作用する事が明らかとなった。(抄録なし)近年、多数のリンゴ自家不和合性花粉側S因子(花粉S遺伝子)候補SFBB (S locus F-box brothers)が同定された。しかしこれら全てのSFBBが真の花粉側因子として機能するかどうかについては、現時点で不明である。本研究では、AFBBの生物学的機能解析と生化学的機能解析を行い、全てのAFBBが真の花粉S遺伝子であるかどうかを明らかにする事を目的とした。<リンゴ形質転換体を用いたSFBBの生物学的機能解析>AFBB遺伝子を、アグロバクテリウム法を用いてリンゴの栽培品種『きたろう』に導入した。バラ科果樹の形質転換は可能だが効率は高くないので、一度に1000以上の葉切片にアグロバクテリウムを感染させる大規模な実験を反復して行った。その結果、数系統の形質転換体を獲得することができた。<組換えタンパク質を用いた相互作用解析>SFBBが真の花粉側のS因子であるならばSBPI (S-RNase binding protein 1)やCUL1 (Cullin 1)と共にE3複合体を構成し、非自己S-RNaseのポリユビキチン化に関わることが示唆される。リンゴ概要ゲノム情報をもとにリンゴSBP1 (MdSBP1)とリンゴCUL1 (MdCUL1)を花粉RNAから単離し、pull down assay用に組換えタンパク質を作出した。MdSBP1とS-RNase、MdCUL1については相互作用を確認することができた。S-RNase bindingprotein1(SBP1)はナス科において自家峯和合性への関与が示唆されていたが、ナス科以外の植物種で機能解析の報轡はなかった。今年度、リンゴ(バラ科)で初めてSBP1ホモログ(MdSBP1)を単離・解析し、ナス科のものと同様にS-RNase結合能も持つことも見出し、投稿論文にまとめることができた(Minamikawa et al.,印刷中)。現時点で、SFBBとS-RNase、MdSBP1の相互作用は確認出来ていない。

SFBBは大腸菌で作出した組換えタンパク質であるため、本来の立体構造を有していない可能性が考えられる。今後はコムギ胚芽を利用した無細胞発現や、SFBBを導入した形質転換体を作出することで、より本来の立体構造に近づくようなタンパク質を作出してpulldown assayを行う。(抄録なし)
日本語教育における実習生と学習者の認知的・情意的変容の研究

本研究の目的は,日本語教育実習において,互いの異文化要因が実習生と学習者にどのように影響し合うかを,各々の認知的・情意的変容を探ることを通して解明することにある。平成7年度には,東北大学での夏季と秋季の日本語教育実習を利用しでデータ収集し,韓国人日本語学習者の授業観・教師観について,個人別態度構造分析により考察を加えて,日本社会心理学会,日本語教育学会大会等で発表した。それと同時に,何通りかのデータ収集法を採用し,方法についての吟味・検討を行った・その結果,授業ビデオを見ながら行う刺激回想法では,学習者に相当訓練を積ませないと意味あるデータが収集できないことが明らかになった。よって,8年度は質問紙と個人別態度構造分析を中心に,実習授業観察,ジャーナルの記録等によりデータを収集することとした。平成8年度には,学習者よりも実習生に焦点を当てた。7年度の大学院レベルの実習生について夏季実習半年後,海外実習2週間後の追跡調査を行うと共に,学部レベルの実習生のデータに重点を置いて実習体験の与える教授行動や,情意面の変化,言語学習ビリ-フの変化等を探った。その結果,実習経験のない実習生の場合,教授技術に目が向く度合いが高く,教えることにのみ意識が集中しがちであること,教室活動を通しての初級学習者との接触では,学習者の持つ文化背景や視点から何らかの刺激を得るようなコミュニケーションは行えないことが多いが,それでも,日本語の実習授業に際して漠然と持っていた,日本語を中心手段とした異文化コミュニケーション場面への不安が実習を通して解消されることが明らかになった。また,実習経験がある場合もない場合も,言語学習ビリ-フは実習前後で大きくは変わらず,保持される傾向が窺えた。本研究の目的は,日本語教育実習において,互いの異文化要因が実習生と学習者にどのように影響し合うかを,各々の認知的・情意的変容を探ることを通して解明することである。今年度は,東北大学での夏期と秋期の日本語教育実習を利用してデータ収集法を吟味・検討し,個人別態度構造分析・言語学習観調査・実習授業観察・刺激回想法・ジャーナル分析など多様なデータを得,目下分析中である。刺激回想法については,授業ビデオを刺激として自由に口頭で回想する方法と質問紙に記入する方法を比較し,学習者の授業活動の受け止めを見るには後者が有効に機能する可能性が高いことを確認した。また,平成6年度と7年度に行った個人別態度構造分析に基づき,韓国人日本語学習者と日本人実習生の日本語教師観や日本語授業観の変容について,知見の一部を東北大学日本語学科論集に発表し,日本社会心理学会・日本語教育学会大会で口頭発表した。研究全体として,ほぼ計画通りに進捗している中で,遅れている点が二つある。一つは,予算上の制約から統計分析ソフトウェア購入が8年度にずれこんだための統計的解析の遅れで,これは8年度に挽回できよう。今一つは,学習者の日本語能力の初期値を測るための日本語テストバッテリ-の開発で,これに関しては,8年度もパイロットテストの段階にしか達しないと予測される。前年度に,東北大学での夏季と秋季の日本語教育実習を利用してデータ収集法を吟味・検討した結果を踏まえ,平成8年度は,個人別態度構造分析と質問紙による言語学習観調査・実習授業観察,ジャーナルの記録を中心に,主として学部レベルの実習生に焦点をあててデータを収集した。また,7年度の夏季実習で,実習の前と直後と11週間後の3回の個人別態度構造分析を行ったのに加え,実習終了後6ヶ月以上経た時点でのデータも採って,時間の経過と体験の内在比,言語学習ビリ-フの変化を探った。

今年度のデータ収集において中心的役割を担った個人別態度構造分析法は,前年度までの実施ではインタビュー手順が,オリジナルな方法とは多少異なっていたのだが,平成8年度は,これをオリジナルに近づけ,7年度のインタビューに比べて,もっと被験者からのイメージの引き出しをたっぷり行うよう試みた。結果として,実習経験のない実習生の場合,教授技術に目が向く度合いが高く,教えることにのみ意識が集中しがちであること,言語学習ビリ-フは実習前後で変わらず保持されること,教室活動を通しての初級学習者との接触では,学習者の持つ文化背景や視点から何らかの刺激を得るようなコミュニケーションは行えないことが多いが,それでも,日本語の実習授業に際して漠然と持っていた,日本語を中心手段とした異文化コミュニケーション場面への不安が実習を通して解消されることが明らかになった。
SUMOコードの解読:修飾制御と認識機序の解析

多細胞生物において、細胞の個性はそれぞれの細胞の持つ遺伝子挙現パターンとして記憶され、その記憶の維持はクロマチン修飾により厳密に制御されている。本研究では、SUMO修飾によるメチル化DNA特異的結合タンパク質MBD1とヒストンメチル化酵素複合体SETDB1-MCAF1に着目し、これらタンパク質のSUMO修飾によるクロマチン構造の調節機構を解析した。その結果、これらの因子に加え、DNA複製に必須のヒストンシャペロンCAF-1p150がSUMO修飾とクロマチンの制御に重要な因子であることを明らかにした。メンブラントラフィック経路の多くは、ユビキチンを中心とした分子修飾によるタンパク質品質管理と密接に関わる。その破綻はタンパク質変性と異常集積を亢進し、細胞疾患、ひいては個体レベルの疾患を引き起こす。本研究では、核膜孔タンパク質RanBP2/Nup358のSUMO E3リガーゼ活性に着目し、SUMO修飾と核輸送の関連性について解析を行った。この結果、SUMO化が細胞の核膜孔付近で活発に行われていることが明らかになり、核輸送においてSUMO修飾が重要な役割を果たすことが明らかとなった。近年の生化学あるいは分子遺伝学の研究から、SUMO修飾、あるいはSUMOとユビキチン修飾のコンビネーションによるタンパク質の機能変換が細胞核内における分子輸送や核構造の構築の制御に重要なことが明らかになりつつある。しかしながら、SUMO化された標的タンパク質が、どのように他の細胞内因子に認識されるのか、あるいは、認識タンパク質がどのようにして下流イベントを誘導するのか、SUMO修飾による機能変換の最も本質的なこと(SUMOコードの解読機構)は明らかにされていない。本研究では前研究助成期間(平成1516年度)に見いだしたSUMO結合因子の中から、MCAF1に着目し、MCAF-1がSUMO化因子をどのように認識して、相互作用を引き起こすのか、そしてそうした相互作用がいかにして核内複合体の形成・維持・崩壊といったリモデリングプロセスを制御するのか、を明らかにした。また前研究助成期間に引き続き、核膜孔成分であるSUMO E3リガーゼRanBP2による核-細胞質間輸送の調節機序を生化学・分子生物学・細胞生物学的な手法を用い複合的に解明した。特に、前研究助成期間に見いだした核膜孔に濃縮しているRING型ユビキチンリガーゼとSUMO E3リガーゼとの協調的な働きに焦点を当てて、核膜孔・核輸送の制御におけるSUMOとユビキチンのクロストークの重要性を明らかにした。