hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
エタノール放出発熱ポリマーによる微小スリガラス状肺癌の局所硬化治療法の基礎的検討

この研究では、微量の水で反応が開始され樹脂が硬化したのちにCTとMRI装置のもとで可視化できる液状シリコン系樹脂のプロトタイプ合成に成功した。さらに細胞膜親和性を向上させるため、細胞膜上の脂質レシチンに注目し、より組織浸潤性のある液状硬化樹脂開発した。以上から、固形癌治療剤として、2017年にPCT特許出願を行った。今後、樹脂注入に必要な穿刺針などの医療機器の開発も進めることで、最新の高分子科学技術を用いて微小肺がんの外来局所治療を開発することで医療に貢献したい。高齢者や合併症を有する患者に対する消極的縮小手術や放射線治療などの代替治療法として、エタノール放出ポリマーによる局所硬化治療法の確立を目指し基礎的件検討を行った。これは、微小肺癌に対し経皮的にポリマー樹脂を注入し、重合反応の過程の熱や生成物で癌細胞の死滅を目指す治療法である。まず、研究協力者の東レ・メディカルと本法で用いる樹脂の開発を行った。従来経皮的肺マーキングで用いられている20Gよりも小さい穿刺針を用いて肺に注入可能な、粘度が低く、注入後は生体内で緩徐に硬化し血管内に拡散されない、かつ、CTガイド下での注入を想定しX線非透過性となるように樹脂を設計した。この樹脂を用いて、動物実験で生体内(正常肺)での硬化樹脂の分布、組織反応について検証した。SDラットを全身麻酔下に開胸しラット肺に樹脂を注入した。開発した2液からなる樹脂の割合により、注入後25分程度で樹脂が肺内で硬化することが確認できた。樹脂注入後のラット肺を摘出し、HE染色を用いた組織学的評価を行ったところ、注入した樹脂は期待通り既存の肺胞構造に充満するように分布し、非注入部の残存肺胞構造と明瞭に区別しえた。一部に圧排性と思われる肺胞壁の破壊を伴う部位も散見した。樹脂注入後の経時的な組織反応を観察すると、注入直後に急性の反応は乏しく、14日、28日と経過する中で間質の線維化など異物反応と思われる反応が確認できたが、樹脂と接する肺胞上皮細胞の壊死は確認できなかった。注入した樹脂の空間分布および画像的な評価を行うために、同様の実験で得た樹脂注入ラット肺をハインツマン法で固定し、名古屋大学の森健策教授と共同でマイクロCTを用いた解析を行った。マイクロCT画像上で樹脂は高CT値の領域として同定でき、肺胞に樹脂が充満したHE標本に近い像が得られた。注入部位から少し離れた気道もしくは肺胞内に樹脂の散布像が見られた。開発した樹脂の生体内での反応を確認するために、次年度に予定していたラットを用いた動物実験を予定より早く開始している。この結果からフィードバックして、さらに樹脂の改良を進めている。ラットを用いた動物実験で得られた硬化樹脂の分布や組織反応の結果をフィードバックし、本提案手法の遂行に必要な粘性や組織障害性などの要件を満たす樹脂の開発・改良を進めていく。注入樹脂による組織反応の評価法のひとつとして、造影剤を用いたマイクロCTによる解析方法も検討していく。小動物(ラット)での樹脂注入部位の硬化および組織障害性が確認できれば、大動物(ブタ)での検証へ進んでいきたい。呼吸器外科学本提案手法に関する樹脂の開発およびそれに伴う動物実験に関する費用を予定していたが、実験結果からフィードバック後に、初年度最終で実施を予定していた樹脂の改良およびそれに伴う動物実験が年度内に完了しなかったため。生じた次年度使用額は、上記のとおり予定していた樹脂の改良および動物実験を行い、その費用にあてたい。
植物性食品のテクスチャーに及ぼす温度および圧力効果

平成12年度において植物性食品のテクスチャーに及ぼす温度効果と圧力効果を検討するためにダイコンを試料として加熱の前処理による硬化を圧力と加熱処理で比較した。常温で400MPaの加圧処理および加圧後に放置した試料と60°Cで加熱処理および加熱後放置した試料をさらに99.5°Cで加熱し、テクスチャー特性を官能検査および機器測定により測定した結果、圧力処理および60°C加熱処理ともにその後の加熱においては軟化を抑制し、これらの前処理によって硬化が起ることが示された。またその硬化の程度は60°C加熱の方が圧力処理よりも大きかった。これらの前処理によって起る硬化の機構を解明するために前処理後の各試料について成分および細胞壁多糖類の分析を行った。平成13年度も引き続き一連の実験を行い、未処理に比べて60°C加熱試料では水溶性ペクチンの減少がみられ、圧力処理ともにヘキサメタリン酸可溶性画分の増加が認められた。ペクチンのエステル化度は未処理に比べ圧力処理で低く、60°C加熱でさらに低下した。水分はいずれも変化がみられなかった。ペクチン各画分の金属イオンを測定した結果、圧力処理、60°C加熱ともにヘキサメタリン酸可溶性画分で増加がみられ、塩酸可溶性画分で減少する傾向がみられた。タンパク質は塩酸可溶性ペクチンと0.2%NaOH可溶性画分に多く存在したことからペクチン中のタンパク質はセルロース等と結合していることが示唆された。全体として圧力処理では各画分1g中のタンパク質が減少、60°C加熱では増加する傾向がみられた。AIS1g中でみるといずれの処理もほとんど変化がみられなかった。0.2-17.5%NaOH不溶タンパク質の測定を行った結果、60°C加熱または圧力処理および処理後の放置によってタンパク質の溶解性が変化しており、タンパク質の不溶化が硬化に関与していることが示唆された。本研究は植物性食品のテクスチャーに及ぼす温度効果と圧力効果を検討し、加熱の前処理による硬さの変化とその機構および硬さの最適化の方法を構築することを目的としたものである。平成12年度は試料をダイコンとし、60°Cで加熱処理および加熱後に放置した試料と400MPaで加圧処理および加圧後に放置した試料を99.5°Cで加熱し、テクスチャーを官能検査により評価し、嗜好特性に及ぼす熱と圧力による加熱前処理の影響を比較した。その結果、同一加熱時間においては圧力の方が熱よりも前処理による硬化の影響が緩やかであった。前処理後の各試料について成分分析および細胞壁多糖類の分析を行った。細胞壁多糖類の分析をする際はアルコール不溶性画分を調製した。60°Cで予備加熱した試料と400MPaで加圧した試料のペクチンを分画した結果、未処理に比べ予備加熱では水溶性ペクチンの減少がみられ、予備加熱、圧力処理共にヘキサメタリン酸可溶性画分の増加が認められた。ペクチンのエステル化度を測定した結果、未処理よ圧力処理で低下し、予備加熱処理でさらに低下した。水分はほとんど変化がみられなかった。以上の結果、60°Cで加熱処理および加熱後に放置した試料と400MPaで加圧処理および加圧後に放置した試料ではテクスチャーにやや違いがみられ、硬化に対して、本条件では圧力より温度効果の方がやや大きいこと、それに対応してペクチンの変化もやや予備加熱の方が明らかであることがわかった。なお、本実験において細胞壁多糖類および水分に関する測定は硬化の機構を考える上で重要である。そのため凍結乾燥装置および水分活性測定装置を新規購入した。

なお、申請時は現有の超高圧装置の主要な部分が老朽化のため、その部分を新規に購入することを希望したが、研究の過程において部分的修理を行いつつ実験を行うことが可能であったため、現在ない前述の装置を優先的に購入し、研究を進めた。植物性食品のテクスチャーに及ぼす温度効果と圧力効果を比較検討し、調理加工における野菜等の硬さの制御に資する知見を得ることを目的とした。ダイコンを試料として加熱の前処理による硬化を圧力と加熱処理で比較した。常温で400MPaの加圧処理および加圧後に放置した試料と60°Cで加熱処理および加熱後放置した試料をさらに99.5°Cで加熱し、テクスチャー特性を官能検査および機器測定により測定した結果、圧力処理および60°C加熱処理ともにその後の加熱においては軟化を抑制し、これらの前処理によって硬化が起ることが示された。またその硬化の程度は60°C加熱の方が圧力処理よりも大きかった。これらの前処理によって起る硬化の機構を解明するために前処理後の各試料について成分および細胞壁多糖類の分析を行った。その結果、未処理に比べて60°C加熱試料では水溶性ペクチンに減少がみられ、60°C加熱およぴ圧力加熱ともにヘキサメタリン酸可溶性画分の増加が認められた。ペクチンのエステル化度は未処理に比べ圧力処理で低く、60°C加熱でさらに低下した。水分はいずれも変化がみられなかった。ペクチン各画分の金属イオンを測定した結果、圧力処理、60°C加熱ともにヘキサメタリン酸可溶性画分で増加がみられ、塩酸可溶性画分で減少する傾向がみられた。タンパク質は塩酸可溶性ペクチンと0.2%NaOH可溶性画分に多く存在したことからペクチン中のタンパク質はセルロース等と結合していることが示唆された。全体として圧力処理では各画分1g中のタンパク質が減少、60°C加熱では増加する傾向がみられた。AIS1g中でみるといずれの処理もほとんど変化がみられなかった。0.2-17.5%NaOH不溶タンパク質の測定を行った結果、60°C加熱または圧力処理および処理後の放置によってタンパク質の溶解性が変化しており、タンパク質の不溶化が硬化に関与していることが示唆された。
病原真菌クリプトコックス細胞の生存と死の分子解析:細胞周期制御と真菌細菌相互作用

真菌クリプトコックスの細胞周期制御の鍵分子、G1サイクリンの分子機能解析を行い、また、本菌の細胞周期制御と低酸素ストレス状態における環境応答との連関の解析を進めた。更に、真菌クリプトコックス・細菌スタフィロコッカス相互作用における真菌細胞死を誘導する細菌側トリッガー、トリオースリン酸イソメラーゼ分子がブドウ球菌真菌クリプトコックスの細胞周期制御の鍵分子、G1サイクリンの分子機能解析を行い、また、本菌の細胞周期制御と低酸素ストレス状態における環境応答との連関の解析を進めた。更に、真菌クリプトコックス・細菌スタフィロコッカス相互作用における真菌細胞死を誘導する細菌側トリッガー、トリオースリン酸イソメラーゼ分子がブドウ球菌真核生物で細胞周期制御に関わる中心分子としては、サイクリン依存性タンパク質リン酸化酵素及びその制御因子サイクリン分子が知られているが、我々は病原真菌Cryptococcus neoformansよりそれらを分子クローニングして構造機能解析を進めている。今年度、主に、モデル酵母S. cerevisiaeのGlサイクリン変異体へのC. neoformansGlサイクリン遺伝子の導入と解析を進めた。S. cerevisiaには、3種の、いわゆる、Glサイクリン分子が知られており、それぞれの欠損変異体に、我々がクローニングした1種類のC.neoformansGlサイクリン遺伝子(それが本菌では唯一のGlサイクリン遺伝子と想定している)を導入したところ、それらの増殖曲線はほぼ野生型と同程度に回復したが、細胞の形態については、一部異常が見られ、本菌の細胞周期制御機構におけるGlサイクリン遺伝子の機能についてさらに考察を進めた。また、我々はC. neoformasと他の菌種との相互作用に着目したところ、細菌・黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus細胞がC. neoformansへ付着し、C. neoformansの死滅が誘導される現象を兄いだし、両細胞の付着に関与する各細胞表層物質の解析を行った結果、C. neoformans側では莢膜多糖類の主成分グルクロノキシロマンナン(GXM)が、S. aureus側では解糖系酵素トリオースリン酸イソメラーゼ(TPI)が相互作用に関わっていることを示している。そこで、今年度、主にGXMのS. aureus細胞への結合を免疫電子顕微鏡法により検討した。すなわち、S. aureus細胞とGXM、抗GXMウサギ抗体、金コロイド標識プロテインAを順次反応させ走査電子顕微鏡で観察した。その結果、S. aureu細胞表層にGXMとの反応を示す金粒子が観察された。しかし、さらに最適な反応条件を検討して設定する必要があった。真菌Cryptococcus neoformansは、エイズ患者の直接死因としても重要な病原酵母であり、野外,動物体内という極めて異なる環境において生存する能力を有する。平成21年度には、C.neoformansの細胞周期制御の中心に位置するCdk1ホモロッグ(サイクリン依存性キナーゼ1)とそれに相互作用するサイクリンホモロッグをゲノムから見出しこれらの遺伝子の構造機能解析を更に進めた。G1サイクリンは1つCnCLN1破壊株の細胞は異常な形態を示し、幅広く細胞の形態形成や生理的機能に影響を及ぼし、本菌にとって極めて重要な遺伝子であることが示唆された。また、Agrobacterium法を用いて病原酵母C.neoformansのランダム挿入遺伝子変異体ライブラリーを構築し、構築した遺伝子変異体クローンの低酸素状態への応答解析などを通して、低酸素ストレス応答に関与する候補遺伝子を探った。候補遺伝子が数個、確認され、遺伝子配列解析およびデータ検索を行って候補遺伝子を同定した。そして特に、そのうちの1遺伝子について本菌の低酸素ストレスに対する環境応答のシグナル伝達機構における意義につき、これまでの文献からの情報を踏まえて、考察を加えた。更に、我々は真菌・C.neoformans細胞と他の菌種細胞との相互作用に着目したところ、細菌・黄色ブドウ球菌Staphylococcusaureus細胞がC.neoformansへ付着し、C.neoformansの死滅が誘導される現象を見いだし、分子的解析を進めているが、一般的に細胞質に局在して機能していると言われる解糖系酵素トリオースホスフェートイソメラゼTriose phosphate isomerase(TPI)がブドウ球菌では細胞表層にも確かに局在することを免疫電子顕微鏡解析法や細胞凝集反応などを用いて実験的に確認することを目指し、我々のこれまでの想定どおり、TPIがブドウ球菌では細胞表層にも確かに局在することを、実験的手法により明白に示した。Cryptococcus neoformansには特異な細胞周期制御現象が観察され、我々は細胞周期制御の中心に位置するCdk1(サイクリン依存性キナーゼ1)とそれと相互作用する制御因子サイクリン類について解析を進めている。CnCln1分子は本菌では唯一のG1サイクリン遺伝子であると思われたが、その遺伝子破壊株が得られたことより、本菌の生存には必須ではないことが示された。CnCln1遺伝子破壊株は「出芽時期が遅れ、細胞は大型化する」等「in vitro低酸素環境下」や「in vivo感染時」と類似した極めて異常な形態・特徴的な変化を示し,CnCln1は,細胞の大きさと形態,出芽と細胞分裂のタイミング、DNA合成開始のタイミング、37°Cでの生育遅滞など幅広く細胞の形態形成や生理的機能に大きな影響を及ぼす極めて重要な細胞機能制御遺伝子であることが示された。また、CnCdk1とCnCln1の結合について,その構造機能相関解析を行い、生理的意義についても考察した。本菌CnCln1の遺伝子をSaccharomyces cerevisiaeにおいて発現させその機能を検証しS.cerevisiaeのG1

サイクリンScCln1,ScCln2,ScClin3との分子構造・機能の比較、S.cerevisiaeのサイクリン依存性キナーゼScCDK1とCnCln1との間の結合などについてそのバイオインフォマティックス的解析を行い、その結果を踏まえて分子間結合相関の生理的な意義を考察した。更に、C.neoformansは肺で感染後、脳髄膜へ移行して病原性を発揮して行く際、高酸素環境から低酸素環境への酸素欠乏ストレス条件に打ち勝ってはじめて増殖して行くが、本菌ゲノムへのランダム挿入遺伝子変異体ライブラリーを構築し変異体の低酸素状態への応答解析などを通して、本菌において低酸素ストレス応答に関与する遺伝子の同定を行った。そのうちの一つとして転写因子を同定し、分子生物学的、生化学的、細胞学的解析を進め、本分子の低酸素環境ストレス応答機構における意義を考察するとともに、その遺伝子破壊株を用いたマウス病原性試験も実施するなどして考察を進めた。
ヌクレオシド糖部同族体の系統的エナンチオ制御合成

各種のヌクレオシド糖鎖部をエナンチオ制御下に形成させ得るキラル合成素子として2種のビシクロ[2.2.1]ヘプタン骨格を持つ単位1および2を想定し,それぞれを効果的に合成する手法の開発ならびに実用的活用という2点から合成研究を行った.1の合成については入手容易なジシクロペンタジエンをまずマンガン(III)トリアセテートにより酸化してexo-アセテート(3)とし,ついでリパーゼ存在下の加水分解条件での分割,ならびにアセテート(3)より得られるラセミアルコール(4)のトルエン中リパーゼ存在下イソプロペニルアセテートによるアシル化分割のそれぞれを経由するキラル体の合成法を開発した.さらにWharton転位反応を用いる両対掌体間の相互反転法(enantiomerization)も見出した.一方,2についてはベンゾキノンから2工程で大量に得られるメソ型対称性を持つendo-ジオール体(5)がリパーゼ存在下アセトニトリル中酢酸ビニールによって高収率かつほぼ完全な選択性で不斉アシル化非対称化が起り(-)-モノアセテート体(6)が得られることを見出した.ピバロイル化後,脱アセチル化することによって実質的に対掌体として機能する(+)-モノピバレート体(7)にも変換した.前者から抗ウィルス性ヌクレオシドaristeromycinおよびneplanocin-Aのカルボサイクリックフラノース部中間体,後者からサイクリトールconduritol Cおよびeutypoxide Bのエナンチオ制御合成を達成した.各種のヌクレオシド糖鎖部をエナンチオ制御下に形成させ得るキラル合成素子として2種のビシクロ[2.2.1]ヘプタン骨格を持つ単位1および2を想定し,それぞれを効果的に合成する手法の開発ならびに実用的活用という2点から合成研究を行った.1の合成については入手容易なジシクロペンタジエンをまずマンガン(III)トリアセテートにより酸化してexo-アセテート(3)とし,ついでリパーゼ存在下の加水分解条件での分割,ならびにアセテート(3)より得られるラセミアルコール(4)のトルエン中リパーゼ存在下イソプロペニルアセテートによるアシル化分割のそれぞれを経由するキラル体の合成法を開発した.さらにWharton転位反応を用いる両対掌体間の相互反転法(enantiomerization)も見出した.一方,2についてはベンゾキノンから2工程で大量に得られるメソ型対称性を持つendo-ジオール体(5)がリパーゼ存在下アセトニトリル中酢酸ビニールによって高収率かつほぼ完全な選択性で不斉アシル化非対称化が起り(-)-モノアセテート体(6)が得られることを見出した.ピバロイル化後,脱アセチル化することによって実質的に対掌体として機能する(+)-モノピバレート体(7)にも変換した.前者から抗ウィルス性ヌクレオシドaristeromycinおよびneplanocin-Aのカルボサイクリックフラノース部中間体,後者からサイクリトールconduritol Cおよびeutypoxide Bのエナンチオ制御合成を達成した.
遺伝子組換えアマゴをモデルにしたオミクス解析に基づくシグナル伝達で計る安全性評価

可食部位で発現する筋肉遺伝子の発現解析:遺伝子組換えアマゴとそれのコントロールである非組換え体の可食部位である筋肉で発現する遺伝子43800個の中から体重変化と遺伝子組換えの変化をF-値と一般化Nairの分布を使って、主効果である成長(体重増加)と共に変化する遺伝子群と遺伝子組換えにより統計的に有意に変化する遺伝子群の選抜を行った結果、其々1704個と2083個が選抜された。更にこれらの遺伝子をシグナル伝達による解析を行う為にヒトに対応する遺伝子を再度選抜した結果、910個と1114個が抽出されました。これらを用いてシグナル伝達の解析をした結果、遺伝子組換えによるシグナル伝達は33個検出された。その中でも非組換え魚間でのパターンと組換え魚間のパターンで異なり、更に組換え魚と非組換え魚との比較で大きく異なるパターンを示したものはDopamine receptor signaling, Melatonin signaling, phospholipase signalingなどであり、組換えアマゴでのみ増加していた。一方、体重変化の主効果で選抜された遺伝子群のシグナル伝達は遺伝子組換えでは見られなかったActin cytoskeleton signaling, ILK signaling, PPARα/RXRαActivation,P38MAPKsignalingが選抜された。組換えによる選抜された遺伝子群のシグナル伝達から推測された病態としては筋肉組織の変異や死が増加し、オートファジーの増加、線維化の増加、脂肪酸代謝の減少が見られた(森、関)。その他、イメージングMSによる肝臓組織のATP関連の解析を行った。その結果、遺伝子組換えアマゴではATP,ADP,AMPの含量が非組換え体に較べて減少していることが明らかになった(井上)。大学の状況が変化してきているため、研究以外の仕事が大幅に増えている。そのため予定以上の研究活動を展開する事ができない状況である。ただ、データーはそれなりに出ており、その年の目標としていたことよりも大切な発見があればそれを優先してしまう為、別な展開に研究活動は進んで発展していく。現在は筋肉やミトコンドリアに関する解析を進めている。まだ多くのデーターが解析途中として残っているが、目処は立っている。以前から見出していた遺伝子組換え魚のミトコンドリアの変異に関してどの様な事がミトコンドリアに起きているのかをゲノムのレベルから解析を進める予定である。また、遺伝子組換えアマゴの心臓が大きく変化していることから、心臓の筋肉がどの様なことになっているのかをタンパク解析とシグナル伝達から解析を行いたい。成長ホルモン(GH)遺伝子組換えサケは5倍から40倍の速度で成長することが知られている。我々のGH遺伝子組換え(GH transgenic)アマゴもControlに比べ、約6倍の成長を示すが、肝臓の形態異常を示した。また組換え体では脂質の異化促進が見られるが、ATP含量は組換え体で低く、エネルギー代謝に関して不明な点が多い。そのため、本研究では可食部位の筋肉を中心に発現遺伝子のトランスクリプト-ム解析を行った。コントロールとしてはサイズが同じ非組換え体を用いて、遺伝子発現を2元配置の分散分析を用いて解析し、その解析データーに基づいてシグナルトランスダクションの解析を行った。その結果、遺伝子組換え体とコントロールは魚体重に応じて正または負に一定の割合で変化する9個のシグナル伝達を得ることができた。本来は筋肉の解析を行う予定であったが、トラブルのため実験が行うことが出来なかった。そのため、GH組換えアマゴのエネルギー代謝を解明するため、肝臓のプロテオーム解析を行った。その結果、iTRAQを用いた肝臓の蛋白発現解析で132個のタンパク質が同定できた。脂質関連酵素については⊿-9デサチュラーゼ、APMAPがHomo個体で減少し、Fatty acid binding protein、ApolipoproteinA-1が増加した。電子伝達系酵素についてはNADH-ubiquinone oxidoreductase、ATP synthase、CoxII、CoxIII、CoxIVで全ての電子伝達系酵素で増加した。また血管拡張関連タンパク質で血管拡張を促すタンパク質はHomo個体で増加していた。また炎症系マーカータンパク質はHomo個体で炎症マーカーが増加し、炎症抑制マーカーが減少した。筋肉組織のiTRAQを用いたプロテオーム解析が出来なかったため、やや遅れているとの判断をした。この理由はサンプルの保存中にトラブルが起こり、サンプルのプロテオーム解析が出来なくなってしまった点にある。しかしながら、今年度に新しく準備したサンプルを用いて解析を行う予定である。

一方、体重変化の主効果で選抜された遺伝子群のシグナル伝達は遺伝子組換えでは見られなかったActin cytoskeleton signaling, ILK signaling, PPARα/RXRαActivation,P38MAPKsignalingが選抜された。組換えによる選抜された遺伝子群のシグナル伝達から推測された病態としては筋肉組織の変異や死が増加し、オートファジーの増加、線維化の増加、脂肪酸代謝の減少が見られた(森、関)。その他、イメージングMSによる肝臓組織のATP関連の解析を行った。その結果、遺伝子組換えアマゴではATP,ADP,AMPの含量が非組換え体に較べて減少していることが明らかになった(井上)。大学の状況が変化してきているため、研究以外の仕事が大幅に増えている。そのため予定以上の研究活動を展開する事ができない状況である。ただ、データーはそれなりに出ており、その年の目標としていたことよりも大切な発見があればそれを優先してしまう為、別な展開に研究活動は進んで発展していく。現在は筋肉やミトコンドリアに関する解析を進めている。まだ多くのデーターが解析途中として残っているが、目処は立っている。現在行っている可食部位(筋肉組織)や心臓組織のiTRAQを用いたプロテオームの解析を行う予定である。また心臓、筋肉や肝臓組織でのイメージングMSによるメタボローム解析を行う予定である。これら特定部位の代謝産物や蛋白の質量分析を行い、組換え魚と非組換え魚の筋肉で何が違うのかを明らかにする。イメージングMSを用いた可食部位(筋肉組織)のリピドミクス。筋肉には多くの脂肪が蓄積しているが、組換え魚と非組換え魚では脂質組成が異なる。蓄積している中性脂肪に結合している脂肪酸の種類からその代謝産物までも明らかにする。これにより統合オミクスを基にしたシグナル伝達を解析する。GH組換え体ではアスパラギン酸輸送体であるミトコンドリア内膜にあるシトリン蛋白の異常がメタボローム解析と大規模遺伝子発現解析の結果から予測される為、それを明らかにする。以前から見出していた遺伝子組換え魚のミトコンドリアの変異に関してどの様な事がミトコンドリアに起きているのかをゲノムのレベルから解析を進める予定である。また、遺伝子組換えアマゴの心臓が大きく変化していることから、心臓の筋肉がどの様なことになっているのかをタンパク解析とシグナル伝達から解析を行いたい。
記憶を取り入れた歴史文化都市のプラットフォームの策定

本研究の目的は、歴史文化都市の『歴史・文化面』のデータ化に適した新しいプラットフォームを考案することにある。プラットフォームには、データには3Dレーザースキャナにより空間の構造物や自然に対してレーザーを照射して得られる点群データを用いる。点群は3次元座標とその場所の色が正確かつ単純化せずに表現され、空間の物理的な要素がすべて実物のように精巧に描かれる。一方、一般にはポリゴンデータ(点群)から寸法の定義や編集を行い、線画により単純化したCADデータを作成しようとするリバースモデリングの技術は、多くの企業で追及されているが、これでは単純化、置換の過程で、『歴史・文化面』において大切な質的要素が失われる。本研究では、データを単純化せず点群のまま扱い、都市の質的要素が損なわれない『歴史・文化面』のデータを構築することが特徴であり、それには点群データの質的要素が保存され活用できるかどうかが大切となる。そこで本年度は、要素技術の一つである点群データの質的要素を用いた分析手法の研究を行い、点群データの活用の可能性について確認した。具体的には、街路景観の印象評価においてまとまり感が大切であることに着目し、京都市の街路を対象として、歩行者の注視傾向を取り入れながら色彩の物理量と人の印象評価の関係を点群を用いて分析し、騒色とされる色彩の範囲を明らかにした。街路における色彩のまとまりについて定量的に分析する方法を試行し、人の注視傾向に基づいて色彩のまとまりや騒色の範囲を明らかにして景観の規制誘導において寄与する知見を得た。本研究の要素技術の一つである、点群の質的要素についての研究を行った。具体的には、3次元点群モデルを用いて含まれる質的要素を大量の情報を一括かつ定量的に分析する方法である。これを提案し試行した。街路景観の印象評価においてまとまり感が大切であることに着目し、京都市の街路を対象として、歩行者の注視傾向を取り入れながら色彩の物理量と人の印象評価の関係を点群を用いて分析し、騒色とされる色彩の範囲を明らかにした。まず、注視点計測装置を用いて、歩行者の視線を捉え、細街路では街路の両側の建物への注視は2階レベルに留まり、一方幅員20mを超える幹線通りは5階以上に注視点が集中する傾向があること、注視される範囲は人の安定注視野の範囲であることを明らかにした。次に印象評価においてまとまりがあるとされる街路において、彩度3.0以下かつ明度7.0以上の数値を有すること、またこの結果は既往研究と一致していることを明らかにした。最後に騒色の範囲としては彩度3.0以上かつ明度4.0以下であることを明らかにしたことに加え、景観にまとまりがあっても色彩が印象評価に影響を及ぼすことを考察した。以上のように、要素技術に関連して、点群に含まれる質的要素の一つである色彩について、注視点計測装置を組み合わせて、印象評価と分析について一定の成果を挙げることができたと云える。昨年度は、点群を「場所」として、点群の持つ質的要素について確認を行った。引き続き、点群の質的要素と印象評価の関係に関する研究を継続すると共に学会にて発表を行う。加えてもう一つの要素技術である「場所」に合わせて「住民の記憶」を記録する方法についても研究を進める。これには都市の『歴史・文化面』の質的要素となる「住民の記憶」の抽出には、模型を用いたヒアリング方法を導入する。一般に個々の「住民の記憶」をいかに抽出するかが問題となるが、模型を用いた独自のヒアリング方法により質的要素の抽出を試行し、「住民の記憶」から質的要素を得る方法を考案し、試行する予定である。

街路景観の印象評価においてまとまり感が大切であることに着目し、京都市の街路を対象として、歩行者の注視傾向を取り入れながら色彩の物理量と人の印象評価の関係を点群を用いて分析し、騒色とされる色彩の範囲を明らかにした。まず、注視点計測装置を用いて、歩行者の視線を捉え、細街路では街路の両側の建物への注視は2階レベルに留まり、一方幅員20mを超える幹線通りは5階以上に注視点が集中する傾向があること、注視される範囲は人の安定注視野の範囲であることを明らかにした。次に印象評価においてまとまりがあるとされる街路において、彩度3.0以下かつ明度7.0以上の数値を有すること、またこの結果は既往研究と一致していることを明らかにした。最後に騒色の範囲としては彩度3.0以上かつ明度4.0以下であることを明らかにしたことに加え、景観にまとまりがあっても色彩が印象評価に影響を及ぼすことを考察した。以上のように、要素技術に関連して、点群に含まれる質的要素の一つである色彩について、注視点計測装置を組み合わせて、印象評価と分析について一定の成果を挙げることができたと云える。昨年度は、点群を「場所」として、点群の持つ質的要素について確認を行った。引き続き、点群の質的要素と印象評価の関係に関する研究を継続すると共に学会にて発表を行う。加えてもう一つの要素技術である「場所」に合わせて「住民の記憶」を記録する方法についても研究を進める。これには都市の『歴史・文化面』の質的要素となる「住民の記憶」の抽出には、模型を用いたヒアリング方法を導入する。一般に個々の「住民の記憶」をいかに抽出するかが問題となるが、模型を用いた独自のヒアリング方法により質的要素の抽出を試行し、「住民の記憶」から質的要素を得る方法を考案し、試行する予定である。データベースの準備よりも解析手法の試行に重きをおいたため、購入備品を抑えた。本年度は解析用のPC,データベース用のHDなどの購入により、予定通りの予算執行を計画している。
NKT細胞による炎症制御を活用した梗塞後心破裂の画期的な新規予防法の開発

心筋梗塞急性期の重篤な致死性合併症である心破裂には、サイトカインを主体とする炎症が重要な役割をはたしていることが知られている。ナチュラルキラーT(NKT)細胞は、TNF-αやIFN-γなどの炎症惹起性Th1サイトカインとIL-10やIL-4などの抗炎症性Th2サイトカインのTh1/Th2バランスを調節し、生体における炎症制御という役割を担っている。本研究によりα-ガラクトシルセラミド(GalCer)によるNKT細胞の機能制御は心筋梗塞急性期における合併症の新たな治療法となる可能性が示された。本研究では、梗塞後心破裂における心筋炎症は、NKT細胞の機能低下に起因する炎症制御機構の破綻が原因であるという仮説を検証するとともに、NKT細胞によるTh1/Th2バランスの適正化を介した新規の梗塞後心破裂の予防法の可能性について虚血再灌流モデルと梗塞後心不全モデルを用いて検討した。虚血再灌流モデルでは、マウスに虚血再灌流(45分虚血・24時間再灌流)を行った。再灌流前30分にα-ガラクトシルセラミド(GalCer)を投与すると梗塞サイズが有意に縮小し、この効果にIL-10が密接に関連することが明らかとなった。さらに、内因性NKT細胞の役割を検討するためNKT細胞が欠損したJα欠損マウスを用いたところ、同様に虚血再灌流障害が抑制された。梗塞後心不全モデルでは、α-GalCer投与により左室リモデリング・心不全が有意に抑制された。さらに、梗塞後心破裂の発生率も抑制される傾向をみとめた。以上より、α-GalCerによるNKT細胞の機能制御は、心筋梗塞急性期における合併症の新たな治療法となる可能性が示唆された。
アクチナイド磁性体のスピン軌道磁気モーメントの多角的理論研究

前年度より行ってきた強磁性体USに対し行ってきた研究を、USe,UTeへ拡張した。即ち、Uの5f,6d,7s軌道、S,Se,Teのs,p軌道を考慮し、電子間相互作用としてU5f軌道内の多重極相互作用、5fスピン・軌道相互作用を考慮した拡張ハバ-ド模型をハートレー・フォック近似で取り扱うことにより、Uの5f軌道のスピン・軌道磁気モーメントを計算した。電子の原子間移行積分は、常磁性状態での密度汎関数法局所近似(LDAと略す)に基づく第一原理計算により得られたバンド構造をもとに決め、多重極相互作用を表すF^0以外のスレーター積分は高エネルギー分光の結果をもとに決めた。F^0を5f全磁気モーメントの実験と合うように決めた計算の結果、US,USe,UTeそれぞれに対し、スピン・軌道磁気モーメントは互いに反平行であり、後者は前者の2倍程度で、実験とよく対応していることを示した。また、ハートレー・フォック近似において、数演算子に加えてそれ以外の期待値を考慮することが、スピン双極子モーメントを見積もる上で非常に重要であることを示した。このことは、USで観測されているU3d-4fX線吸収磁気円二色性実験を説明する上でも重要であることが確認されている。3d遷移金属系で大きな軌道磁気モーメントを持つことで知られている第2種反強磁性体FeO,CoOに対して、Fe,Coの3d軌道と酸素の2p軌道を考慮した同様な計算を行い、CoOに関しては第2種構造の範囲内で種々の多重スピン密度波構造の相対的安定性を調べた。その結果、バンド効果を考慮しても、以前から1イオン模型で指摘されているように、Fe,Coの軌道磁気モーメントが1μ_B近い値を取り得ることを示した。また、CoOの磁気構造として、以前から考えられているcolinearな磁気構造以外に、中性子実験で指摘されているnon-collinearな構造もハートレー・フォック近似の解として存在することを示した。1.拡張ハバ-ト模型に基づくUSの5f磁気状態NaCl構造を持つ強磁性体USに対し、Uの5f, 6d, 7s軌道-Sの3s,3p軌道を考慮し、電子間相互作用としてU5f軌道相互内の多重極作用、5fスピン軌道作用を考慮した拡張ハバ-ド模型をハートレー・フォック近似で取り扱うことにより、Uの5f軌道のスピン・軌道磁気モーメントを計算した。電子の原子間移行積分等は、常磁性状態での密度汎関数法局所近似(LDAと略す)に基づく第一原理計算により得られたバンド構造を参考に決め、適当な電子間相互作用の大きさを仮定した計算の結果、この系のスピン・軌道磁気モーメントは互いに反平行であり、後者は前者の2倍程度になり得ることを示した。また、得られた結果を用いて、UのM_<4,5>X線吸収磁気円二色性(MCDと略す)の実験が説明できることを示した。一方、LDAに基づく第一原理計算には、軌道磁気モーメントをセルフコンシステントに計算する理論的枠組みは存在せず、それを摂動論的にしか取り扱えないため、それを過小評価する傾向があることが知られている。従って、この結果は、大きい軌道磁気モーメントが存在する系の磁性を議論する上で、何らかの手がかりを与えるものと期待される。2.多体的配置間相互作用模型に基づくUSの5f磁気状態とX線吸収MCD強磁性体

USで最近測定されたUのM_<4, 5>X線吸収MCDスペクトルを、電子間多重極相互作用を考慮した不純物アンダーソン模型に基づき解析した。この系のMCDは、Uイオンの状態として、5f^2, 5f^3のいずれを仮定しても説明出来ない。また、結晶場を考慮しても、それほどうまく説明できない。この計算では、交換磁場のもとでの5f^2と5f^3の間の強い配置間相互作用を考慮することにより、ある程度MCDの実験が説明出来ることを示した。NaCl構造を持つ強磁性体US,USe,UTeに対し、Uの5f,6d,7s軌道、S,Se,Teのs,p軌道を考慮し、電子間相互作用としてU5f軌道内の多重極相互作用、5fスピン・軌跡相互作用を考慮した拡張ハバ-ド模型をハートレー・フォック近似で取り扱うことにより、Uの5f軌道のスピン・軌道磁気モーメントを計算した。電子の原子間移行積分は、常磁性状態での密度汎関数法局所近似(LDAと略す)に基づく第一原理計算により得られたバンド構造をもとに決め、多重極相互作用を表すF^0以外のスレーター積分は高エネルギー分光の結果をもとに決めた。F^0を5f全磁気モーメントの実験と合うように決めた計算の結果、US,USe,UTeそれぞれに対し、スピン・軌道磁気モーメントは互いに反平行であり、後者は前者の2倍程度で、実験とよく対応していることを示した。USに対しては、得られた固有値、固有関数をもとに、Fermiの黄金則を用いて、U M_<4,5>X線吸収磁気円二色性の実験が説明できることを示した。我々は、3d遷移金属系で大きな軌道磁気モーメントを持つことで知られている第2種反強磁性体FeO,CoOに対しても、Fe,Coの3d軌道と酸素の2p軌道を考慮した同様な計算を行った。CoOの関しては第2種構造の範囲内で種々の多重スピン密度波構造の相対的安定性を調べた。その結果、バンド効果を考慮しても、以前から1イオン模型で指摘されているように、Fe,Coの軌道磁気モーメントが1μ_B近い値を取り得ることを示した。LDAに基づく現在の第一原理計算には、軌道磁気モーメントをセルフコシステントに計算する理論的枠組みは存在せず、それを摂動論的にしか取り扱えないため、それを過小評価する傾向があることが知られている。これらの計算結果は、我々の方法が大きい軌道磁気モーメントが存在する系の磁性を議論する上で、一つの有力な方法であることを示している。
高速親水化ソフト界面が構築できるポリマーの創製と分子インプリンティング法への応用

高分子はバルクのみならず表面・界面として、また溶液として機能発現する材料である。高分子量であるため、機能発現のための構造変化にある程度の時間を必要としており、この高分子特有の緩和現象の改善が求あられている。特に分子運動性に基づく特性変換が迅速に誘起されれば、多様な応用に向けた展開が可能になる。本新学術領域研究では、水との接触を一つの外部刺激として捉え、高分子薄膜の高速親水化とこれに同期して特定の分子を溶液中から捕捉する基盤技術の検討を行った。これまでに非晶性の疎水性高分子鎖と親水性高分子鎖との共重合体において、表面の親水-疎水性の応答時間の向上を見いだしたきた。本年度は分子の取り込みを強化するための表面化学修飾について、モデルタンパク質を用いて検討した。高い分子運動性が期待される非晶性の疎水性高分手鎖を基盤とし、これに親水性高分手鎖あるいは疎水基、両親媒性分子を導入した高分子を創製した。具体的には、親水性高分子としてポリ(エチレングリコール)モノメチルエーテル(mPEG,平均分子量5,000および350g/mol)、疎水基としてコレステロール(CH)、両親媒性分子としてリトコール酸(LA)およびコール酸(CA)を選択した。それぞれの分子が有する本酸基から、環状モノマーデであるトリメチレンカーボネートを重合し、分子量が2-3万程度の種々の高分子を得た。タンパク質の固定化に必要となるカルボキシル基を持たないコレステロールを末端に有する高分子の場合では、ドライプロセスにおいて2.8・g/cm^2の固定化量であった。これは、化学的に固定化されたのではなく、物理吸着によるものと考えられる。アルブミンの単層飽和吸着量が約0.9・g/cm^2であると報告されているため、膜内部にもアルブミンが潜り込んでいることが示唆された。さらにコレステロールの場合、ウエットプロセスによって固定化量は増大した。コレステロール部が膜内部に潜り込んだため、表面近傍は非晶性のポリ(トリメチレンカーボネート)が濃縮しそおり、アルブミンの拡散経路が増大し、物理吸着が膜内部に広がったと考えられる。固定化の前に水に浸漬する処理を施すことにより、コレステロール誘導体が膜内部に潜り込む。この膜の膨潤の過程で、タンパク質溶液の透過経路が確保され、膜内部まで固定化が進行したと考えられる。以上のように、分子の膜への取り込みが単層吸着よりもはるかに高いレベルで達成でさることが明らかとなった。本研究では、高分子の相分離現象を駆動力として、表面特性を外部の湿潤状態に応答して変化する高分子を設計している。特に、疎水性かつ非晶性のポリ(トリメチレンカーボネート)(PTMC)に親水性高分子鎖あるいは機能性分子を導入することにより、基材表面を自在に親水化あるいは疎水化できることを見いだした。環状モノマーであるトリメチレンカーボネート(TMC)は、塩基性の有機触媒存在下において水酸基を開始点として開環重合が進行する。これを利用して、親水性高分子であるポリエチレングリコール(平均分子量2,000および6,000)の両末端からTMCの開環重合を行い親水-疎水型の高分子を合成した。得られた高分子をガラス基板にコーティングして、表面特性の一つである静的接触角測定を外部の湿潤環境を変化させながら経時的に追跡した。その結果、乾燥環境では接触角が60度を超えており、比較的疎水性であった。一方、湿潤環境に曝した後では、経時的に接触角が50度まで低下し、親水化することが明らかとなった。これらの結果は、ポリエチレングリコールモノメチルエーテル(mPEG)のように片末端にのみ水酸基を有する場合と比較して応答性が緩慢であった。これは、親水鎖の両端に疎水鎖であるPTMCが結合したことで親水鎖の運動性が束縛されたためであると考えられた。親水鎖の濃縮をさらに解析するために、mPEGを有する親水-疎水高分子を非極性溶媒に溶解し、極性溶媒であるメタノール中に滴下して高分子会合体を得ることを試みた。この結果、メタノールへの滴下時に超音波を連続的に照射するとともに撹拌することにより局分子コロイドが形成することが明らかとなった.得られたコロイドは、両溶媒であった非極性溶媒の流去後においても、1ヶ月以上にわたって分散安定性を有していた.このコロイドは極性溶媒中においてmPEG鎖がコロイドの最表面に濃縮していると考えられた。ここに有機色素であるベーシックブルーを溶解させたところ、コロイド内部に取り込まれたことにより、上澄み中の色素の吸光度が低下する現象を新たに見いだした。このことは、分子インプリンティング法への応用にあたり、テンプレート分子の抽出・除去の効率を高めることができると考えられた。これまでに非晶性の疎水性高分子鎖と親水性高分子鎖との共

重合体において、表面の親水-疎水性の応答時間の向上を見いだしたきた。本年度は分子の取り込みを強化するための表面化学修飾について、モデルタンパク質を用いて検討した。高い分子運動性が期待される非晶性の疎水性高分手鎖を基盤とし、これに親水性高分手鎖あるいは疎水基、両親媒性分子を導入した高分子を創製した。具体的には、親水性高分子としてポリ(エチレングリコール)モノメチルエーテル(mPEG,平均分子量5,000および350g/mol)、疎水基としてコレステロール(CH)、両親媒性分子としてリトコール酸(LA)およびコール酸(CA)を選択した。それぞれの分子が有する本酸基から、環状モノマーデであるトリメチレンカーボネートを重合し、分子量が2-3万程度の種々の高分子を得た。タンパク質の固定化に必要となるカルボキシル基を持たないコレステロールを末端に有する高分子の場合では、ドライプロセスにおいて2.8・g/cm^2の固定化量であった。これは、化学的に固定化されたのではなく、物理吸着によるものと考えられる。アルブミンの単層飽和吸着量が約0.9・g/cm^2であると報告されているため、膜内部にもアルブミンが潜り込んでいることが示唆された。さらにコレステロールの場合、ウエットプロセスによって固定化量は増大した。コレステロール部が膜内部に潜り込んだため、表面近傍は非晶性のポリ(トリメチレンカーボネート)が濃縮しそおり、アルブミンの拡散経路が増大し、物理吸着が膜内部に広がったと考えられる。固定化の前に水に浸漬する処理を施すことにより、コレステロール誘導体が膜内部に潜り込む。この膜の膨潤の過程で、タンパク質溶液の透過経路が確保され、膜内部まで固定化が進行したと考えられる。以上のように、分子の膜への取り込みが単層吸着よりもはるかに高いレベルで達成でさることが明らかとなった。
生体におけるシグナル活性in vivoイメージングマウスライブラリの樹立と応用

我々はガン、免疫異常、炎症などの多くの疾患に重要な役割を果たしていると考えられるNF-κBシグナルに注目し、そのシグナル活性を検出するためのシステム、改良型NF-κBレポーターシステム(NATシステム)を構築し、さらにそのレポータートランスジェニックマウスを作製した。また同様の手法でがんや発生、さらには神経形成にも重要な働きをNotchシグナルに対してもレポーターシステムとそのトランスジェニックマウスを作製し(cNotch mouse)、現在解析中である。全ての生物において、シグナル伝達システムの厳密な制御は、生命を維持することに決定的に重要であるといえる。そこで我々は、本研究において生体内でこれらのシグナル活性を蛍光・発光によりイメージング・観察するためのシステム構築を目指し、さらにこのシステムを様々なシグナル活性変化を検出するレポーターとして活用することで、個体の形態形成から恒常性維持までに至るあらゆる生命現象を対象とした幅広い研究に対応させることを目的とした。まず我々はガン、免疫異常、炎症などの多くの疾患に重要な役割を果たしていると考えられているNF-κBシグナルに注目し、そのシグナル活性を検出するためのシステム、改良型NF-κBレポーターシステム(NATシステム)を構築した。その結果、従来のNF-κBシグナルレポーターシステムに対し検出感度で18倍、特異性で5倍高い値を示したことから(lmmunology Letters ; 2007)、さらに我々は最終的な目標である"生体内におけるNF-κBシグナル活性のin vivoイメージング"を可能にするため、報告したシステムを用いて10系統以上のレポータートランスジェニックマウスの作製を行った。しかしこれらのマウス全てで有意なシグナル活性検出能を示さなかったことから、何らかのサイレンシングが起こっているのではないかと考えた。そこで遺伝子が不活性化される可能性が低いと考えられるニワトリへとプロモーター配列を変更し、引き続き6系統のレポータートランスジェニックマウスを作製した(cNAT mouse)。その結果、1系統でS/N比30倍の高感度でNF-κBシグナルを検出することに成功し、現在はその解析を行うとともにNF-κBシグナルに異常を来す遺伝子改変マウスと交配することで、検討を行っている。また、がんや発生、さらには神経形成にも重要な働きをNotchシグナルに対しても同様の手順で5系統のレポータートランスジェニックマウスを作製し(cNotchR mouse)、現在解析中である。まず我々は多くの疾患に重要な役割を果たしていると考えられているNF-κBシグナルに注目し、そのシグナル活性を検出するためのシステム、NATシステムを構築した。その結果、従来のNF-κBシグナルレポーターシステムに対し検出感度で18倍、特異性で5倍高い値を示した(Immunology Letters ; 2007)。さらに我々は最終的な目標である"生体内におけるNF-κBシグナル活性のin vivoイメージング"を可能にするため、NATシステムを用いて10系統以上のレポータートランスジェニックマウスの作製を行ったが、全系統でシグナル活性検出能を示さなかったことから、何らかのサイレンシングが起こっているのではないかと考えた。その結果、1系統でS/N比30倍の高感度でNF-κBシグナルを検出することに成功し、現在はその解析を行うとともにNF-κBシグナルに異常を来す遺伝子改変マウスと交配して検討を行っている(投稿準備中)。また、がんや発生にも重要なNotchシグナルに対しても、同様の手順で5系統のレポータートランスジェニックマウスを作製し(cNotchR mouse)、現在解析中である。
『万葉集』の総合的研究(注釈を中心とする)

本研究の主たる目的は、『万葉集』の新たな注釈の完成を目指すところにあった。これまでの『万葉集』の研究は、厳密な訓詁にもとづく本文批判やそれに依拠する訓みの確定が大きな成果をあげてきたが、そうしたいわば伝統的な方法に、表現論と称する新たな視点を取り入れ、従来のものとは違う斬新な注釈を作成することが、ここでの最終目標となる。当初は、研究計画の三年間で全巻の完成を目指す予定であったが、結果的には巻9までの注釈を完成することにとどまった。しかしながら、膨大な研究史の蓄積をもつ『万葉集』の全訳注を三年間で完成することは大きな無理があり、これを巻9まで完成させえたことは、実績として誇ってよいことだと考えている。とりあえずは、その一部を報告書として提出し、残りの完成をできるだけすみやかに果たしたいと考えている。データベース化が将来可能となるように、訳注はすべてパソコン上で、テキスト形式によって作成した。いずれ、ホームページ上でも公開が可能になるよう配慮したい。古代の表現論理に立脚した新たな解釈を呈示することに意を用いたが、さまざまな点でこれまでの解釈を修正するような成果をあげることができたと自負している。とくに歌ことばの解説にあたっては、語誌的な記述を充実させ、それによって大きな特色が出せたと思っている。なお、注釈をすすめる中で得られた知見の一部を多くの論文として発表し、また中国、韓国の学会においてもその成果の口頭発表を行った。放送大学用の教材『上代の日本文学』を編集・刊行したが、本研究の成果を充分に取り入れることができた。本研究の主たる目的は、「万葉集』の新たな全訳注の完成を目指すところにある。訓詁を主体とする伝的な方法に、表現論と称する新たな視点を取り入れ、従来のものとは違う斬新な注釈を作成することが、ここでの最終目標になる。平成13年度は、研究計画の初年度ということもあり、基礎的な準備作業に時間を割いたために、巻3までの訳注を完成するにとどまった。なお、データベース化が将来果たせるよう、訳注はすべてパソコン上で、テキスト形式によりて作成している。なお、訳注をすすめる中で得られた知見の一部を、著書『額田王』、編著書『万葉への7文学史万葉からの文学史』として刊行した。前者は、表現史の視点かち額田王の和歌の作品論的研究を試みたもの、後者は古代和歌の展開の様相を、物語世界との関連をたどりつつ論じたものである。単独の論文としては、「古代吉野論のために」を執筆、古代の吉野がもつ特殊な位置をあきらかにした。また「景戒と憶良と」を執筆、「病」をめぐる『日本霊異記』撰者景戒と山上憶良との姿勢の違いを示すことで、両者の精神史的な位置をあきらかにした。また、中国北京の日本学研究中心で開催された国際源氏物語研究集会に参加し、「魂と心と物の怪と」と題する研究発表を行い、『万葉集』に現れた「魂」と「心」の問題が、『源氏物語』の生霊の問題にまで通底していることを論じた。本研究の主たる目的は、『万葉集』の新たな全訳注の完成を目指すところにある。訓詁を主体とする伝統的な方法に、表現論と称する新たな視点を取り入れ、従来のものとは違う斬新な注釈を作成することが、ここでの最終目標となる。平成14年度は、研究計画の二年目にあたるが、巻6までの訳注を完成するにとどまった。基礎的な本文校訂作業、訓の確定、諸注の整理等に予期した以上の時間を必要としたために、当初の到達目標を大幅に下回る結果となった。来年度は本研究の最終年度にあたるが、巻10までの完成を目指すことに目標を修正したい。

なお、データベース化が将来果たせるよう、訳注はすべてパソコン上で、テキスト形式によって作成している。なお、訳注をすすめる中で得られた知見の一部を、「魂と心と物の怪と」「山上憶良「子等を思ふ歌」について」「「春愁三首」を読む」などの論文として発表した。また、古代文学会例会において「「記紀」に見るヤマトタケルの東征」の題で口頭発表を行い、その内容を同題で『解釈と鑑賞』に掲載した。魂と心の関係を探ることで、古代人の精神史の一端を明らかにし、また山上憶良における「宿縁」としての親子関係の意味を考察し、「春愁三首」の表現が古代の和歌としていかに独自であるかを論じた。口頭発表では、古代の文学に東国が占める位置の特殊性について論じた。『万葉集一、二』(週刊日本の古典を見る)の監修を行い、最新の『万葉集』研究の成果をわかりやすく示した。本研究の主たる目的は、『万葉集』の新たな全訳注の完成を目指すところにある。訓詁を主体とする伝統的な方法に、表現論と称する新たな視点を取り入れ、従来のものとは違う斬新な注釈を作成することが、ここでの最終目標となる。平成15年度は、研究計画の最終年度のあたるが、結果的に巻9までの訳注を完成するにとどまった。しかしながら、汗牛充棟もただならぬ研究史の蓄積をもつ『万葉集』の全訳注を三年間で完成することには無理があり、これを巻9まで完成させえたことは、実績として誇ってよいことではないかと考える。とりあえずは、その一部を報告書として提出し、残りの完成をできるだけすみやかに果たしたいと考えている。データベース化が将来可能となるように、訳注はすべてパソコン上で、テキスト形式によって作成している。なお、訳注をすすめる中で得られた知見の一部を、「万葉集と古今集」「環境、言葉、文学」「古代文学の中の『源氏物語』」などの論文として発表した。最初の論文は、『万葉集』と『古今集』の表現の違いを論じたもの。二つ目の論文は、『万葉集』に歌われた世界がいかに現実と食い違っているかを論じたもの。最後の論文は、『源氏物語』の「いろごのみ」を『万葉集』の歌と対比しつつ論じたもので、韓国外国語大学で開催された『源氏物語』国際会議における口頭発表をまとめたものである。放送大学の印刷教材『上代の日本文学』を編集・刊行し、本研究の成果を縦横に取り入れることができた。