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中世フランス語版キケロ『修辞学』の言語地理学的・文献学的語彙研究

中世フランス語版キケロ『修辞学』と、この翻案が基にしているキケロ『発想論』と偽キケロ『ヘレンニウス宛修辞学』の比較作業を完成させ、単語・表現のレベルでの翻案の手法を明確にする。当初の研究計画に従い、平成29年度に以下のように研究を推進する予定である。これまでの研究に基づき、中世フランス語版キケロ『修辞学』のテキスト確定を、上述のシャンティイのコンデ博物館所蔵第433番写本のマイクロフィルムと、Elisa Guadagniniによる校訂版とを比較検討する作業を基に完成させる。各種辞書・先行研究における中世フランス語版キケロ『修辞学』の引用再検討の作業を完成させ、それらの解釈の妥当性を文献学的に調査し、従来の知見がいかに補足できるかをまとめる。中世フランス語版キケロ『修辞学』に含まれる、歴史的・地理的に興味深い単語・表現の収集を完成させ、各種辞書・言語地図を活用しつつ、それらの語彙の意義を明確にする。中世フランス語版キケロ『修辞学』と、この翻案の基になったキケロ『発想論』と偽キケロ『ヘレンニウス宛修辞学』の比較作業を完成させ、単語・表現のレベルでの翻案の手法を明確にする。文献学にとって必須の作業である、ラテン語、フランス語諸作品の校訂版の批判的検討を続け、その問題点、意義を明らかにする。人文学
アルツハイマー型痴呆のアポリポ蛋白E多型と脳病変の局在に関する研究

アルツハイマー型痴呆の危険因子であり、老人斑形成に影響を与えるアポリポ蛋白E多型が、画像診断とくにSPECTからみた脳病変の局在性に与える影響について検討した。まず、各種痴呆疾患におけるアポリポ蛋白E多型について、等電点電気泳動法を用いて測定した。対象は、非痴呆老人30例(平均年齢80歳)、アルツハイマー型痴呆67例、そのうち65歳以前の早期発症型(AD)29例、65歳以降の晩期発症型(SDAT)38例、ピック病9例、脳血管性痴呆26例ある.アルツハイマー型痴呆発症の危険因子であるε^4遺伝子頻度は、対照群0.07、アルツハイマー型痴呆群0.30(うちAD群0.21、SDAT群0.37)、ピック病0.22、脳血管性痴呆0.12であり、アルツハイマー型痴呆で有意に高頻度で、とくにSDATで高かった.また、少なくとも一つのε^4遺伝子を有する率は、対照群13%、アルツハイマー型痴呆54%(うちAD38%、SDAT66%)、ピック病44%、脳血管性痴呆23%であり、アルツハイマー型痴呆のうちのSDATで突出して高頻度であった。次いで、SPECT(Xe-133またはTc-99m-ECDまたはTc-99m-HMPAO)でみた脳血流分布を、少なくとも一つのε^4遺伝子を有する群と有さない群の2群に分けて比較すると、ε^4(+)群では、ε^4(-)群と比較して、側頭葉および前頭葉での血流が有意に低下していた。また、ε^4(-)群では、ε^4(+)群と比較して、頭頂葉の血流が低下している傾向がみられた。このことから、(1)ε^4遺伝子は、アルツハイマー型痴呆の側頭葉および前頭葉病変の形成に影響を与え、これはとくに晩期発症型で関係している、(2)アルツハイマー型痴呆の頭頂葉病変の形成には、ε^4遺伝子以外の要因が関与しており、早期発症型との関連がある、ことが示唆された。アルツハイマー型痴呆におけるApoE多型と画像診断からみた病変分布との関係について検討した。対象は非痴呆老人(対照)30例(平均年齢80±10歳)、アルツハイマー型痴呆50例、うち早期発症型(AD)22例(同60±5歳)、晩期発症型(SDAT)28例(同79±7歳)、ピック病9例(63±7歳)、脳血管性痴呆26例(同85±5歳)であった。ε4アリルの頻度は、対照0.07、アルツハイマー型痴呆全体で0.25、ADで0.18、SDATで0.30、ピック病0.22、脳血管性痴呆0.12で、対照と比較してSDATでは有意に高頻度、DAT全体、ピック病では、頻度が高い傾向がみられた。ApoE4は、アルツハイマー型痴呆のうちで、晩期発症型との関係が深いと考えられた。ついで、対照群(21例)、SDATε4(-)群(8例)、SDATε4(+)群(13例)の3群に分けて、CTあるいはMRI上の、脳室の大きさの計測値を比較した。SDATでは脳室は全般的に拡大するが、相対的な下角の拡大の程度を評価するために、下角/体部比を検討したところ、対象群4.7±2.6%、ε4(-)群では、6.4±4.1%、ε4(+)群では、10.6±6.5%(いずれも右側)であり、ε4(+)群では対照群と比較して有意に増大しており、ε4(-)群と比較しても増大している傾向がみられた。以上から、ε4は側脳室下角の拡大と関係した側頭葉病変との関係があることが示唆された。同様にSPECTからみた脳血流量との関係では、視察的にはε4(+)群ではε4(-)群と比較して(アルツハイマー型痴呆群全体)、ε4(+)群では前頭側頭葉の血流低下のパターンを示すものが有意に多く、前頭側頭葉/頭頂葉比でみると、有意ではないがε4(+)群で相対的に前頭側頭葉の低下傾向が示された。対象は、非痴呆老人30例(平均年齢80歳)、アルツハイマー型痴呆67例、そのうち65歳以前の早期発症型(AD)29例、65歳以降の晩期発症型(SDAT)38例、ピック病9例、脳血管性痴呆26例ある.アルツハイマー型痴呆発症の危険因子であるε^4遺伝子頻度は、対照群0.07、アルツハイマー型痴呆群0.30(うちAD群0.21、SDAT群0.37)、ピック病0.22、脳血管性痴呆0.12であり、アルツハイマー型痴呆で有意に高頻度で、とくにSDATで高かった.また、少なくとも一つのε^4

遺伝子を有する率は、対照群13%、アルツハイマー型痴呆54%(うちAD38%、SDAT66%)、ピック病44%、脳血管性痴呆23%であり、アルツハイマー型痴呆のうちのSDATで突出して高頻度であった。次いで、SPECT(Xe-133またはTc-99m-ECDまたはTc-99m-HMPAO)でみた脳血流分布を、少なくとも一つのε^4遺伝子を有する群と有さない群の2群に分けて比較すると、ε^4(+)群では、ε^4(-)群と比較して、側頭葉および前頭葉での血流が有意に低下していた。また、ε^4(-)群では、ε^4(+)群と比較して、頭頂葉の血流が低下している傾向がみられた。このことから、(1)ε^4遺伝子は、アルツハイマー型痴呆の側頭葉および前頭葉病変の形成に影響を与え、これはとくに晩期発症型で関係している、(2)アルツハイマー型痴呆の頭頂葉病変の形成には、ε^4遺伝子以外の要因が関与しており、早期発症型との関連がある、ことが示唆された。
塩素イオン透過機能を持つ新規rCLCA分子の唾液腺における局在と生理機能の解明

上皮細胞のCl^-チャネルはイオン輸送,ひいては水輸送の調節によって生体の恒常性の維持に寄与している。私たちは、マウスCLCA(mCLCA)の配列に相同性の高いPCR産物をもとにして、ラット回腸からCLCA mRNAをクローニングした(rCLCA)。哺乳細胞強制発現系(HEK293細胞)において、この分子がniflumic acid感受性のCa^<2+>活性化Cl^-透過機能を有することを見出した。発現細胞のTriton X-100可溶性膜画分から120kDaと86kDaのタンパクがイムノブロヅティングによって検出された。特異的抗体を用いた免疫細胞染色やビオチンによる膜表面標識法により、86kDaタンパクの細胞膜での局在が明らかになった。さらに、N-glycosidase Fの処置による分子量のシフトの結果、一次配列から予測される分子量(100kDaと75kDa)にN型糖鎖が付加されていることが明らかになった。rCLCAタンパクの組織発現を免疫染色法によって詳細に検討した結果、顎下腺と舌下腺においては導管系上皮の細胞表面および細胞内に発現がみられた。腺房部には陽性像は検出できなかった。rCLCA抗体に陽性の約120-130kDa並びに90kDaのN型糖タンパクはTriton X-100可溶性膜画分から検出されたが、細胞質画分からは検出されなかった。rCLCA siRNAを片側の舌下乳頭の唾液腺開口部に逆行性に注入したラットにおいて、ムスカリン受容体刺激により分泌される同側顎下腺由来の唾液Cl^-濃度が対照側に比して有意に増加した。以上の結果から、rCLCAは唾液腺導管上皮細胞に発現してCl^-再吸収に関与すると考えられた。次にTetR制御によるrCLCAの安定発現HEK293細胞株を利用してrCLCAの細胞内局在を詳細に検討した。rCLCAはRab5やRab11で標識される初期、あるいはリサイクリング・エンドソームにも存在することが示され、その局在はエンドサイトーシスさせたトランスフェリン受容体の局在と一致することが明らかになった。以上より、rCLCAが細胞内輸送小胞に局在し、膜へのリサイクリングを受けることが示唆された。これらの研究成果を基盤にして、唾液腺におけるCl^-チャネル関連タンパクのイオン輸送並びにその他の機能への関与について更に研究を進め、水輸送制御機構の解明に発展させることが必要であると思われる。近年,唾液分泌の維持が高齢者のQOLを考える上で重要な課題とされてきている.唾液生成に於いて唾液腺上皮細胞の水輸送やそれを駆動するCl^-輸送機能が重要であることが報告されている.

そこで,口腔内のCl^-輸送に関与する分子を明らかにする目的で,ラットからクローニングしたCLCA(rCLCA)の組織局在と機能を調べ,タンパクの性質を強制発現系にて検討した.rCLCAタンパクは903アミノ酸残基と推定され,マウスCLCA(mCLCA)1と2の配列に相同性が高かった.rCLCA cDNAを導入したHEK293細胞の可溶性膜画分から,N型糖鎖が付加された120kDaと86kDaのタンパク(後者が主な成分)がイムノブロット法によって検出された.免疫細胞染色やビオチンによる膜表面標識法により,86kDaタンパクの細胞膜での局在が明らかになった.免疫組織染色法により,顎下腺,舌下腺においては導管系上皮の細胞表面(管腔側)および細胞内にrCLCAタンパクの発現がみられた.特に,線条部/顆粒管レベルの小葉内の小導管に最も強い陽性像がみられた.顎下腺のrCLCAタンパクはリコンビナントタンパクと同様にN型糖鎖付加を受けることが示された.さらに,rCLCAを導入したHEK293細胞は,niflumic acid感受性の外向き整流性Ca^<2+>活性化Cl^-透過機能を有した.rCLCA siRNAを片側の舌下乳頭の唾液腺開口部に逆行性に注入したラットにおいて,ムスカリン受容体刺激により分泌される同側顎下腺由来の唾液Cl^-濃度が対照側に比して有意に増加した.以上の結果から,rCLCAは唾液腺導管上皮細胞に発現してCl^-再吸収に関与することによって,最終唾液の低張化などの唾液分泌の恒常性に寄与すると考えられた.高齢化に伴って口腔乾燥症は増加することが予測されるため,唾液生成におけるCl^-チャネル関連タンパクの関与について更に研究を進め,口腔内でのイオンあるいは水輸送を亢進又は阻害する薬物の探索に発展させることが必要であると思われる.臨床医学での口腔機能の重要性が喚起される中で、口腔乾燥を防ぎ感染や炎症を予防する唾液の分泌機構を研究することは重要である。近年申請者は、新規Ca^<2+>活性化Cl^-チャネル関連分子rCLCAのcDNAをクローニングし、その遺伝子発現がCa^<2+>活性化Cl^-電流を惹起することを明らかにした。ラット唾液腺では未だチャネル分子の同定がなされていないが、rCLCAが特異的に顎下腺導管上皮細胞に局在し、rCLCA siRNAを唾液腺開口部に逆行性に注入すると唾液Cl^-濃度が有意に増加した結果から、rCLCAが唾液腺においてCl^-再吸収に寄与すると考えられた。rCLCA分子の細胞内での局在と機能を明確にするために、TetR制御によるrCLCAの安定発現HEK293細胞株を樹立してrCLCAの性質を詳細に検討した。特異的なポリクローナル抗体を用いた免疫染色法やWestern blotによって、翻訳後修飾(N型糖鎖の付加とプロテオリシス)で産生した86kDaタンパクは細胞膜および細胞内小器官膜に局在することが明らかになった。さらには、その一部は切り出されて細胞外へ分泌することが認められた。密度勾配遠心によって細胞内小器官の分離をすると,early endosomeマーカーで認識される密度画分に分布することがわかった。以上の結果から、rCLCAの細胞内局在と機能との対応は当初想像していたよりも複雑であり、上皮細胞におけるrCLCAの多機能性に関与する可能性があった。糖尿病などの病態に伴って口腔機能の変化が予測されるため、唾液腺におけるCl^-チャネル関連タンパクのイオン輸送並びにその他の機能への関与について更に研究を進め、口腔機能を制御する薬物の探索に発展させることが必要であると思われる。
スペクトル取得型オゾンゾンデによるオゾン、二酸化窒素、二酸化塩素、一酸化臭素観測

新たに開発した、二酸化窒素、OClO,BrOも測定可能な観測器を用いてオゾンと二酸化窒素の実証観測を行うことを目的としたが、2010年度の観測直前に新型観測器のデータ書き出しが停止する問題が発生し、2011年度には原因をほぼ解明し、回路等の改修を行った。2012年度に再度観測準備を進めたが気象条件により観測を断念した。研究期間内に気球観測は行えなかったため、二酸化窒素については地上で日出時と南中時に測定したデータを用いて模擬的に解析を行い、成層圏コラム量は導出出来そうであることを確認した。これまでに開発していたスペクトル取得型光学オゾンゾンデによる観測を5月に宇宙航空研究開発機構宇宙科学研究所の大気球観測として北海道大樹町にて行う予定で実際に観測準備を行ったが、観測予定日当日の放球直前にCPUからのデータ書き出し命令がストップするトラブルが発生し、5月の観測は断念して観測器を持ち帰った。その後原因究明のため、長時間動作させたり観測時と同様に実際に電波を送信しながら動作させたりといったテストを繰り返したが、一度もデータ書き出しが止まることはなく現象は再現しなかった。そのため、8-9月の観測時期にはスペクトル取得型光学オゾンゾンデによる観測はあきらめ、従来型のフィルター型光学オゾンゾンデによる観測を行い、高度46.8kmまでのオゾン観測には成功した。これにより、2007年まで観測していた三陸での結果との比較から三陸と大樹の観測場所の違いによるオゾン高度分布の違いは少なく、一連の時系列データとして扱っても問題なさそうであることが分かった。スペクトル取得型光学オゾンゾンデについては宇宙科学研究所気球グループと協議し、5月以降全く不具合が発生しないもののそのままもう一度観測を行うのは確実性に欠けるため、同仕様の観測器をもう一台製作し、万一再び同じトラブルが発生した場合にはすぐ取り替えて観測できる態勢とした上で、来年度以降に再び観測に挑戦することとなった。そのため、現有と同仕様のスペクトル取得型光学オゾンゾンデをもう一台製作した。また、23年度の大気球観測に備え宇宙科学研究所に大気球観測の申請を行った。昨年度トラブルが発生した装置の長時間動作試験、低温・高湿度下での動作試験等を行ったが一度も装置は止まらず、トラブルは再現しなかった。しかし、温度試験用にキセノンランプを点灯したところその高圧電源の立ち上がり時にデータ書き出しがストップするというトラブルが再現した。そこで、観測器をメーカーに持ち込み、キセノンランプ用高圧電源およびノイズ発生装置を用いて試験したところ、高周波の電波ノイズが発生した際にこのトラブルが起きることが確認された。ようやく原因が分かったので、装置はノイズ対策を施すために現在メーカーにて修理中である。昨年度に新たに製作したもう一台の観測器については、室内にて正常動作することを確認した。その後、温度・気圧試験を行う予定であったが、上記のノイズによるトラブルは同じく再現するため、こちらもノイズ対策のためメーカーで修理中で、温度・気圧試験は対策終了後来年度に行うこととした。二酸化窒素観測可能性については、地上観測用に購入した同仕様の分光器とデータ取得用PC、レンズ等を用いて、大学構内にて太陽光が仙台市街地上空を通る日の出直後および大気中を通過するパスの光路長が最も短くなる南中時に観測を行った。これらの差分スペクトルから二酸化窒素の吸収量が同定できるか解析を進めているところである。また、24年度の大気球観測に備え宇宙科学研究所に大気球観測の申請を行った。幸い今回は採択され、24年9月の大樹町での観測に向け準備を始めている。我々の研究室では、独自に開発した光学オゾンゾンデを宇宙科学研究所の薄型高高度気球と組み合わせて上部成層圏オゾン高度分布観測を1994年から行ってきたが、本研究は申請者らが平成19-21年度に基盤研究C「スペクトル取得型光学オゾンゾンデの開発」により開発した、二酸化窒素、OClO, BrOも測定可能な新型観測器を用いてオゾンと二酸化窒素の同時観測を行い、再注目されているオゾンホール反応系の解明に資する観測を実証することを目的としていた。しかし、平成22年度の観測直前に新型観測器のデータ書き出しが停止する問題が発生し、この年の観測は断念した。平成23年度には原因をほぼ解明し、強烈な電磁ノイズが発生した場合には装置の停止を回避できないことが分かったので、万一装置が停止した場合は数秒後に自動的に再起動するよう回路等の改修を行った。平成24年度は、まずノイズ発生器等を用いて試験を行い、装置が停止しても確実に再起動することを確認した。その後、宇宙科学研究所の真空チャンバーや恒温槽を使用して装置の温度・気圧試験を行い、観測器に若干の改修をして観測に備えた。本年度は9月に北海道大樹町での放球が予定されていたので、8月末から大樹町で観測準備を進めた。

準備は問題なく進んだが、本年度は太平洋高気圧が例年になく長く勢力を保ったせいか大樹町付近の風向が全く観測に適した状況にならず、結局9月後半まで待った結果観測を断念した。今回は我々の気球のみならず予定した気球観測は全て中止となったが、これは初めてのことで、かなり特殊な気象条件であったようである。結局本課題の研究期間内に気球観測は行えなかったため、二酸化窒素については地上で日出時と南中時に測定したデータを用いて模擬的に解析を行い、成層圏コラム量は導出出来そうであることを確認した。その検討結果は宇宙科学研究所の大気球シンポジウムで発表した。装置が止まるトラブルがなかなか再発せず、その原因究明が進まなかったため。しかし、ようやく高周波ノイズにより止まることが分かったため、来年度には対策を施し観測ができる見通しが立った。24年度が最終年度であるため、記入しない。装置トラブルの原因がようやく分かり、来年度の大樹町での観測の申請も通ったので、24年度には対策済み観測器と予備機の2台体制で臨める見込みとなり、日本での検証観測は無事行えそうである。また、二酸化窒素の解析手法も現在地上で測定した模擬的な観測データを用いて検討中である。本研究課題では実際の極域での観測を行うには至らないが、日本での観測から二酸化窒素をオゾンと同時に観測する手法を確立する見込みは立ってきたため、最終年度である24年度は実際の観測データから二酸化窒素とオゾンを導出する予定である。
分子動力学計算による密度ゆらぎの分子論とその実験的検証

PVT曲線や溶質の溶解度等の諸物性と密接な関係を有していると考えられ、超臨界流体を特徴づける最も重要な物理的性質のひとつである臨界点近傍における大きな密度ゆらぎの現象の解明に焦点を絞り、分子動力学計算と中性子小角散乱実験の双方から系統的な研究を進め、これまで全く未知であったその密度ゆらぎに対するミクロスコピックな分子論的描像に関するいくつかの新たな知見を得た。用いた試料は、二酸化炭素及びキセノンである。高エネ研の中性子源を用い、中性子小角散乱実験はWINK分光器を用い、また広角散乱実験はHIT分光器を用いて行った。また、密度ゆらぎの検討のためのMD計算は、超臨界キセノン分子約2万個の系に対し、LJポテンシャルでの臨界点より約15K高い温度で行った。中性子散乱実験に関しては、二つの分光器を合わせ用いることにより、0.018A^<-1>から30A^<-1>まで3桁半に及ぶ広いQ領域での構造因子S(Q)の測定に成功した。ここにおいて、密度ゆらぎの大きな超臨界流体の構造に関する測定手法のひとつが確立されたということができる。この構造因子S(Q)のフーリエ変換として、あるいはMD計算からの軌跡に基づいた直接計算から求めた動径分布関数g(r)は、いずれも1からの系統的偏りを示し、ここにおいて密度ゆらぎを反映した実験量を示し得たということになる。特に、MD計算からの分子の投影図の直接観察、またボロノイ多面体解析、またその他の様々な統計力学関数から流体中における分子クラスターの生成が確認され、さらにはその大きさの分布を構成分子数や占有体積の分布により定量化した。そこでは、分布関数の関数形が、フラクショナルな指数関数となるということを見いだし、前年度までに行った、確率論モデルにおける取り扱いとの良好な対応を示した。
ヒトの低体温誘導物質の分離・同定・合成と低体温誘導機序の解明

当該研究期間中に主に以下の45点について検討を行った。1、患者さん血清にある低体温誘導物質とアルブミンを分離するため、疎水性クロマトグラフィーを試みた。得られた疎水性の異なる二分画の分離は完全ではなく、両方の分画に患者さんに特異的なバンドが存在するものの、高疎水性分画(アルブミンをあまり含まない分画:LA)のアルブミン含量を低疎水性分画(アルブミンを多く含む分画:HA)の1/5以下とすることができた。それぞれの分画をラットの腹腔内に投与すると、HA分画、LA分画ともそれぞれ3匹中1匹で体温が下降した。2、LA分画の二次元電気泳動により患者さんに特異的と思われるスポットが幾つか出現した。それぞれのスポットを切り出し、マススペクトル測定を行い、得られたスペクトルのピークをMascot Searchにかけて該当するタンパク質を二種類同定した。3、対象となるタンパク質は入手可能であった。それぞれのタンパク質を一定時間トリプシン処理しフラグメント化した。それらサンプルをラットに投与したところ、あるサンプルで(以後タンパク質Aとする)は5匹中2匹で腹腔内温が下降した。4、フラグメント化したタンパク質Aを電気泳動にかけたところ、患者さんの血清に見られる特異的なバンド部分はCB染色では確認されず、銀染色でわずかに認められる程度であった。これらサンプルをラットに投与しても腹腔内温は明確には低下しなかった。そこで、タンパク質Aをフラグメント化する方法を変更し、患者さんの血清に見られる特異的なバンド部分に相当するバンドを強く発現させた。しかし、その投与によってもラットの腹腔内温は十分には低下しなかった。5、患者さん血清のプロテアーゼ活性を測定した。対照として数名の健康成人男女の血清のプロテアーゼ活性を測定したところ、患者さん血清の活性が2倍以上高い可能性が示唆された。昨年度までは患者さん血清に存在する低体温誘導物質のおおよその分子量を決定し、当該物質がアルブミンアフィニティーカラム(HiTrap Blue^<TM>)への吸着分画に存在することを確認した。また、電気泳動により当該分画に患者さんに特異的なバンドがある可能性を見出した。しかし、HiTrap Blue^<TM>への吸着分画にはアルブミンが多量に含まれており、電気泳動による血清タンパク質の分析やそれに引き続く質量分析が困難な状態であった。そこで、本年度は電気泳動で見出された患者さんに特異的と考えられるタンパク質とアルブミンを分離するため、HiTrap Phenyl FF^<TM>カラムによる疎水性クロマトグラフィーを試みた。そこで、それぞれの分画にPBSを加えて3mlのサンプルとし、自由行動下のラットの腹腔内に投与した(n=3、ラット一匹あたり1ml)。しかし、HA分画、LA分画ともそれぞれ1匹で約1.0°Cの体温下降が誘導されたが、残りの計4匹では明確な体温の低下は見られなかった。LA分画の二次元電気泳動では患者さんに特異的と思われるスポットが幾つか出現した。それぞれのスポットを切り出し、マススペクトル測定を行い、得られたスペクトルのピークをMascot Searchにかけて該当するタンパク質を同定した。

本年度は患者さん血清からアルブミンを除去する方法の再検討をするとともに、昨年度マススペクトル測定で得られたピークに該当する幾つかのタンパク質について以下の検討を行った。1、サンプルの調整対象となるタンパク質は入手可能であったため、特段合成は行わなかった。それぞれのタンパク質を一定時間トリプシン処理しフラグメント化した。PBSで一晩透析しサンプルのpHおよび量を調整した(各0.7ml)。次いで、それぞれのサンプルを電気泳動にかけ、患者さん血清に特徴的に見られるスポットに一致する分子量領域に新たなスポットが現れるか否かを検討した。2、サンプル投与によるラットの腹腔内温の変化ウィスター系雄ラットを用いた。ラットは環境温23°C、明暗周期12:12時間、自由摂水・摂食下でプラスチックケージにて一匹ずつ飼育した。ラットをペントバルビタールで麻酔し、開腹後、小動物用の体温送信機を腹腔内に留置した。10日間以上の回復期間の後、ラットの腹腔内へ調整したサンプルをそれぞれ投与し、投与前後の腹腔内温と行動量をテレメトリーシステムにより1分毎、7時間測定した。対照実験としてトリプシンおよびトリプシンインヒビターを加えたPBSをラットの腹腔内に投与した。対照実験ではラットの腹腔内温および行動量は変化しなかった。サンプルはそれぞれ3匹のラットに投与したが、あるサンプルでは3匹中1匹で腹腔内温が1.5°C程度下降した。この間、行動量に顕著な変化は無かった。これら腹腔内温と行動量の経時的変化は患者さん血清投与によるラットのそれら変化と類似していた。本年度は昨年度低体温を誘導したタンパク質(以下タンパク質Aと記載する)のフラグメントおよび、患者さん血清の特性について以下の検討を行った。1、サンプルの調整とその投与によるラットの腹腔内温の変化・昨年と同様にタンパク質Aを一定時間トリプシン処理しフラグメント化し、サンプルを電気泳動にかけたところ、患者さんの血清に見られる特異的なバンド部分はCB染色では確認されず、銀染色でわずかに認められる程度であった。これらサンプルを昨年度と同様な方法でラットに投与しても腹腔内温は明確には低下しなかった。・サンプルの透析方法やサンプルのpHおよび量の調整方法を変更して同様の検討を行ったが、患者さんの血清に見られる特異的なバンド部分に相当するバンドの発現は弱く、その投与によりラットの腹腔内温は低下しなかった。・処理するトリプシンの量を調整してタンパク質Aをフラグメント化したところ、患者さんの血清に見られる特異的なバンド部分に相当するバンドが強く発現した。しかし、その投与によってもラットの腹腔内温は十分には低下しなかった。・健康成人の血清をタンパク質Aと同様の方法で処理したサンプルをラットに投与したが、腹腔内温の低下は明確には確認されなかった。2、患者さん血清のプロテアーゼ活性をN-Benzoyl-L-arginine ethyl ester (BAEE)を基質として測定した。対照として数名の健康成人男女の血清のプロテアーゼ活性を測定したところ、患者さん血清の活性が2倍以上高い可能性が示唆された。
構音機能時の電気的パラトグムと舌圧を活用した嚥下・構音障害の訓練体系の検討

電気的パラトグラムと舌圧測定システムを併用し作製した義歯による,構音・摂食・嚥下機能改善のための基礎資料を得るため,成人有歯顎者を対象に,構音時と嚥下時の舌圧の関係を調査した.その結果,舌と口蓋との接触状況が定量的に記録できることが明らかとなった.今後更なる検討を要するが,構音時と嚥下時の舌圧および舌接触状況をより詳細に比較・検討することにより,電気的パラトグラムを用いた構音訓練を主体とした構音・嚥下機能改善の可能性が示唆された.電気的パラトグラムと舌圧測定システムを併用し作製した義歯による,構音・摂食・嚥下機能改善のための基礎資料を得るため,成人有歯顎者を対象に,構音時と嚥下時の舌圧の関係を調査した.その結果,舌と口蓋との接触状況が定量的に記録できることが明らかとなった.今後更なる検討を要するが,構音時と嚥下時の舌圧および舌接触状況をより詳細に比較・検討することにより,電気的パラトグラムを用いた構音訓練を主体とした構音・嚥下機能改善の可能性が示唆された.本研究は,正常な成人有歯顎者を基準に,構音・摂食・嚥下障害をもつ高齢者や舌切除者,および脳中枢に障害を持つ中途障害者に対象に,EPG(電気的パラトグラム)と舌圧測定システムを併用し作製した義歯を用いた場合の構音訓練への有用性・問題点を検討する.またWin-EPG・Systemを応用した構音・摂食・嚥下機能と歩行など身体機能改善のための新たな訓練システムの構築を目指すことを目的とする.平成21年度は,新たな舌接触(EPG)システムと舌圧測定システムの開発とその臨床応用の検討を行った.具体的には,以下の2点について検討を行った.2)分担者の笹川らによって開発した舌圧測定システムを用いて,製作した舌接触口蓋床義歯の口蓋部などの舌圧を測定し,日本語子音を用いて作製した舌接触部分と舌圧の関係を調査.結果は,以下の通りである.1)新たな訓練機器の開発の基礎資料をえるため,英国で使用されているWin-EPG・Systemを購入した,そしてそのための人工口蓋板も作製し,その有効性や問題点の検討を行った.その結果,口蓋板の厚みや長さ,および電極の配置などに改善の余地が認められた.2)従来の市販されている舌圧測定の場合,その厚みが厚く,またセンサの数も56個と少ないのが現状である.これに対して,笹川が開発した舌圧センサは厚さが約0.6mm,測定点数は1632点であり,より詳細に舌圧測定が可能と思われる.しかし,現時点では口蓋部の3次元形状への適合やセンサ感度に関して,まだ改良が必要である.本研究は,正常な成人有歯顎者を基準に,構音・摂食・嚥下障害をもつ高齢者や舌切除者,および脳中枢に障害を持つ中途障害者に対象に,EPG(電気的パラトグラム)と舌圧測定システムを併用し作製した義歯を用いた場合の構音訓練への有用性・問題点を検討する.またWin-BPG・Systemを応用した構音・摂食・嚥下機能と歩行など身体機能改善のための新たな訓練システムの構築を目指すことを目的とする.平成22年度は,新たな舌接触(EPG)システムと舌圧測定システムの開発とその臨床応用の検討を行った.具体的には,以下の2点について検討を行った.1.分担者の笹川らによって開発した舌圧測定システムを用いて,製作した舌接触口蓋床義歯の口蓋部などの舌圧を測定し,日本語子音を用いて作製した舌接触部分と舌圧の関係を調査2.標準的パラトグラムを目標として口蓋部の形態形成可能な舌半側切除者を対象に口蓋床義歯装着前後の構音・摂食・嚥下機能の評価をする.結果は,以下の通りである.1.従来の市販されている舌圧測定と比較して,笹川が開発した舌圧センサは厚さが約0.6mmと薄く,測定点数も1632点で多く,より詳細に舌圧測定が可能と思われる.しかし,口蓋部の3次元形状への適合やセンサ感度に関して難点が多く,まだ改良が必要である.2.口蓋床義歯装着前後を比較すると,パラトグラムの観察および発語明瞭度から,口蓋床義歯装着による構音機能の改善が観察された.また,摂食・嚥下機能に関しても,「タ」・「キ」・「カ」を応用した口蓋形態形成法により,その改善が確認された.本研究は,正常な成人有歯顎者を基準に,構音・摂食・嚥下障害をもつ高齢者や舌切除者,および脳中枢に障害を持つ中途障害者に対象に,EPG(電気的パラトグラム)と舌圧測定システムを併用し作製した義歯を用いた場合の構音訓練への有用性・問題点を検討する.またWin-EPG・Systemを応用した構音・摂食・嚥下機能と歩行など身体機能改善のための新たな訓練システムの構築を目指すことを目的とした.平成23年度は,EPGシステムと舌圧測定システムの開発とその臨床応用の検討を,以下の2点について行った.1.分担者の笹川らによって開発した舌圧測定システムに関して,舌圧測定の再現性を高めるための改良を行う.

具体的には口蓋部への舌圧センサの設置方法と,その感度の改良.また,測定部位と測定点数の修正を行う.2.製作した舌接触口蓋床義歯の口蓋部などの舌圧を測定し,日本語子音を用いて作製した舌接触部分と舌圧の関係を調査.結果は,以下の通りである.1.舌圧測定の再現性を高めるために,これまで直接口蓋部に貼付していたセンサを,口蓋部石膏模型に圧接し作製した厚み0.25mmの塩化ビニルシート上に貼付することにより,口蓋部の3次元形状への適合の改善がなされた.また,口蓋全体への貼付は困難であったため,測定部位を口蓋前方部から正中,および口蓋左右側面とし,測定点数を27点とした.2.改良した舌圧センサを用いて発音時と嚥下時の舌圧測定が可能だった.また,発音時と嚥下時の舌圧を比較すると,前者の方が有意に小さい値となった.
聴覚伝導路特異的細胞外マトリックスBral2による聴覚伝達維持機構の解析

脳には、神経細胞とグリア細胞が存在する。その細胞間をうめる物質として、細胞外マトリックス(ECM)が存在する。ECMには、ヒアルロン酸やプロテオグリカンなどがある。脳では、それらは特に神経細胞膜周囲とランビエ絞輪に多く存在している。Bra12は、聴覚系の神経伝導路(耳から脳に刺激が伝わる経路)に存在するECMである。ヒアルロン酸,プロテオグリカンと一緒に複合体を作って存在している。今回の研究から、その複合体が刺激を伝えるために必要であること、Bralは複合体を形成する時に鍵となる分子であることが強く示唆された。Bral 2欠損マウスでは、CSPG複合体の崩壊とともにGAG鎖がストックできる水分子量が低下し、細胞をとりまくGAGのゲルが崩壊している可能性が考えられる。その結果イオンを神経活動の場にストックすることが出来ず、神経伝達に影響を及ぼす可能性が考えられる。従って、脳内の細胞外物質拡散係数(ADCwおよびADC_<TMA>)の計測を行った。まず、同様なメカニズムが働いているが、分子間相互作用がより単純であると考えられるBral1欠損マウスで計測した。その結果、Bral1欠損マウスでは拡散係数が有意に低下していた。即ち、細胞外での物質が拡散し易くなっており、GAGのゲルが崩壊していることが強く示唆された。その結果を踏まえて、Bral2欠損マウスの計測をおこなった。Bral2はBrel1に比べて相互作用する分子が多く、また神経核による違いも見られる。従って、もう少し個体数を加えて、更に正確なデータをとる必要がある。次年度は、個体数を増やして神経核ごとの違いなどを調べる予定にしている。(II) Bral2欠損マウスにおける聴覚検査の測定聴覚伝導路のある特定の神経核が障害を受けるのか、あるいは全ての神経核に障害が見られるのか、またその程度の度合いをBAEP他聴覚検査により調べた。この研究は、チェコ科学アカデミーのJosef Syka教授との共同研究により進行中である。その結果、Bral2マウスには、ある特定の周波数に聴覚障害があることがわかった。今後、更にその原因究明を進める予定にしている。突然のマウス感染事故により当該マウスを再作製する必要に迫られた。既に再作製が終わり、順調に繁殖している。(I) Bral2を中心とするCSPG複合体と伝逹に関わる分子等との関連CSPG複合体は巨大分子のため機能ドメインが多く、多機能分子として知られるため、その役割についてはいくつかの可能性を探る必要性がある。今回、Bral2欠損マウスにおいて、この複合体を構成する分子の変化が神経核によって異なることを突き止めた。つまり、神経核によって複合体の形成様式が異なるのではないかという仮説が立てられる。また、これらの局在の変化に伴って、タンパク量の発現が変化が見られるかどうかをウェスタンブロットにより検証したが、特に変化は見られなかった。更に、聴覚伝導路に見られるチャネルであるKv3.1b及び、ペリニューロナルネットとともに発現が見られるパルブアルブミンの発現を調べた。これらについては特に発現に変化がなかったので、複合体はこれらの局在にとくに役割を果たしていないことがわかった。(II) Bral2を中心とするCSPG複合体欠損が細胞外スペース(ECS)に及ぼする影響Bral2欠損マウスでは、CSPG複合体の崩壊とともにGAG鎖がストックできる水分子量が低下し、細胞をとりまくGAGのゲルが崩壌している可能性が考えられる。従って、脳内の細胞外物質拡散係数(ADCwおよびADCTMA)の計測を行う。まず、Bral2の発現箇所が聴覚伝導路と言う、物質拡散係数を計測しにくい場所にある。従って、より計測のし易いランビエ絞輸に発現するBral1欠損マウスの拡散係数を測ることで、Bral2のその役割を推し量ろうとした。その結果、Bral1欠損マウスでは、拡散係数が速くなる、即ちGAGのゲルが崩壊していると推測される結果が得られた。Bral1欠損マウスでは、神経伝導速度に異常が見られるため、CSPG複合体が微小環境調整に関わっているのではないか、という結論にいたり、論文化を図った(Bekku et al., J Neuroscience, 2010)。更に、現在、この結果をもとに、Bral2欠損マウスの拡散係数を計測中である。計測箇所に電極を打ち込むことが難しく、継続して計測個体数を増やしていく必要がある。(III) Bral2を中心とするCSPG複合体がシナプス形成に及ぼす影響(I)の結果を受け、CSPG複合体がシナプスの固定化あるいは安定化の役割を担っているのではないかと考え、電子顕微鏡での観察を行った。
キャビティ内に官能基を有する二環性化合物を利用した新規な機能性反応場の開発

カリックス[6]アレーンの1,4-位をm-キシレン誘導体で架橋した新規なbowl型化合物の合成法を確立し、X線結晶構造解析、NMR、分子力場計算などの手法を用いて、それらが従来のカリックス[6]アレーンにない構造的特性を有することを明らかにした。特に、これらの分子においては、カリックスアレーンを利用する際にしばしば問題となるコンホメーションの変化が架橋によりかなり規制されていることがわかった。この架橋カリックス[6]アレーン骨格を有するt-ブチルスルホキシドを合成し、その熱分解を行うことにより安定なスルフェン酸(RSOH)の合成に成功した。この熱分解は、固相、溶液中いずれにおいても可能であり、トルエン中では定量的に進行した。得られたスルフェン酸は、80°C、4時間の条件においても変化を示さないなど高い熱安定性を有しており、架橋カリックス[6]アレーン骨格が、その空孔内に導入された高反応性化学種の安定化のための反応場として効果的に機能することが示された。また、芳香族スルフェン酸としては初めて、X線結晶構造解析に成功した。同様の手法によりセレネン酸(RSeOH)の合成についても検討し、現在までにその前駆体としてこの骨格を有するn-ブチルセレニドを合成している。アリールベンジルエーテル骨格を有するbowl型二環性シクロファンの系については、チオールの酸化について検討した。0.5モル当量の臭素により酸化したところ、対応するジスルフィドは生成せず、回収されたチオール以外にスルフェニルブロミドが定量的に得られた。一方、この反応で臭素酸化の後0.5モル当量の1-ブタンチオールを作用させたところ対応するジスルフィドが得られた。これらの結果から、bowl型二環性骨格が可能基の他分子との反応性を維持しつつ、その自己縮合を効果的に抑制していることが示された。
大規模災害後の避難先定住プロセスに関する研究　環境移行を考慮した復興計画に向けて

大規模災害後には、被災地から住宅資源のある都市への市町村を跨いだ広域避難が一部で生じるものの、それらを選択する世帯の情報は乏しく、現行制度による支援体制も十分とは言えない。本研究では、東日本大震災後に仙台市、盛岡市に移動した被災世帯およびそれら世帯を支援する組織へのインタビュー、アンケート調査等から、居住地・住まいの選択やその後の暮らしについて実態と課題を把握し、今後の知見とする。
心筋細胞障害における脂肪酸結合蛋白の生理的および病的意義

(目的)脂肪酸結合蛋白質(fatty acid binding protein;FABP)は分子量約15,500の脂肪酸担体蛋白質で,脂肪酸の輸送・代謝に関係するといわれている.心筋においてFABPが肥大や虚血等種々の病態において重要な役割を果たすことが予測される.本研究の目的は,高血圧性心肥大及びその退縮の心筋脂肪代謝に及ぼす影響を解析することにある.(結果)(1)血圧は対照群れに比べ, N, H, E群で有意に上昇が抑制された.(2)心重量も対照群に比べ, N, H, E群で有意に上昇が抑制された.(3)細胞質脂肪酸結合能は対照群では増加したが, N, H, E群では対照群に比べ有意に増加が抑制された.(4)細胞質脂肪酸結合能の増加はゲルろ過パターン及びScatchard plotよりFABP濃度の増加によるものと考えられた.(5)肥大心退縮の程度とFABP量の変動との間には有意の相関があった.(考案)心肥大を支配する因子と心筋内FABP量を支配する因子との間に密接な関係があると考えられた,圧負荷肥大心筋でのFABP量の増加は,細胞内脂肪酸量増加に対する緩衡作用であると考えた.(結論)心筋FABP量は圧負荷肥大心筋で増加(降圧薬による心肥大の退縮と共に減少した.(目的)脂肪酸結合蛋白質(fatty acid binding protein;FABP)は分子量約15,500の脂肪酸担体蛋白質で,脂肪酸の輸送・代謝に関係するといわれている.心筋においてFABPが肥大や虚血等種々の病態において重要な役割を果たすことが予測される.本研究の目的は,高血圧性心肥大及びその退縮の心筋脂肪代謝に及ぼす影響を解析することにある.(結果)(1)血圧は対照群れに比べ, N, H, E群で有意に上昇が抑制された.(2)心重量も対照群に比べ, N, H, E群で有意に上昇が抑制された.(3)細胞質脂肪酸結合能は対照群では増加したが, N, H, E群では対照群に比べ有意に増加が抑制された.(4)細胞質脂肪酸結合能の増加はゲルろ過パターン及びScatchard plotよりFABP濃度の増加によるものと考えられた.(5)肥大心退縮の程度とFABP量の変動との間には有意の相関があった.(考案)心肥大を支配する因子と心筋内FABP量を支配する因子との間に密接な関係があると考えられた,圧負荷肥大心筋でのFABP量の増加は,細胞内脂肪酸量増加に対する緩衡作用であると考えた.(結論)心筋FABP量は圧負荷肥大心筋で増加(降圧薬による心肥大の退縮と共に減少した.
神経画像と分子遺伝の組み合わせによる人格特性の脳基盤の統合的解明

155名の健常成人を対象に1.5TMRIの撮像を行い、人格質問紙TCIにより協調性傾向(cooperativeness)を評価した。voxel-based morphometry(VBM)を用いて全脳にわたって脳灰白質体積とcooperativeness得点の相関を求めた。次に、190名の健常成人を対象として、manual tracing法による海馬・扁桃体体積と、OXTR遺伝子多型との関連について調べた。その結果、女性に特異的にcooperativeness得点と有意な正の相関を示したのは、bilateral pIFG, left amPFCであった。次に、海馬・扁桃体に関心領域を設定し、社会的相互性の障害が基本障害である自閉症との関連が示唆されているOXTR遺伝子多型rs2254298と海馬・扁桃体MRI体積の関連を検討した。その結果、自閉症へのリスクアレルとの報告があるA carriers(N=154)はGG(N=36)に比べて、両側扁桃体体積が有意に大きかった(F[1,188]=4.54,p=0.034)が、海馬体積には差がなかった。ヒトの協調性に関連する人格特性の神経生物学的背景として、いわゆる社会性脳回路が関与し、その関係に性差があること、社会行動に重要な役割を担う扁桃体体積とOXTR遺伝子多型の有意な関連を示唆するという本研究の結果は、人格特性にかかわる遺伝子-中間表現型-表現型の階層的関係の存在を例証するものである。ヒトの思考・感情・行動様式に個体差を生み出し、社会・文化の多様性の創出に貢献するとともに、その逸脱が精神障害への脆弱性ともなりうる人格をとりあげ、神経画像学と分子遺伝学を双方向的に組み合わせることにより、人格の脳基盤と統合的に解明することを目指した。具体的には、ディメンジョナルモデルによる人格尺度(Temperament and Character Inventoryなど)、マルチモダリティ神経画像計測による脳機能・構造(struchval & functional MRI, diffusiontensor imaging, NIRS, EEG, MEGなど)、遺伝子多型(モノアミン系代謝関連、神経伝達物質受容体関連、神経成長因子関連遺伝子など)の関連を検討した。平成18年度は、神経画像と採血のサンプル収集は、MRI(N=180)、MEG(N=50)、NIRS(N=60)と順調であり、モノアミン系代謝関連、神経伝達物質受容体関連、神経成長因子関連遺伝子などのSNP解析を進めた。MRIについて、VBM法を用いて損害回避傾向(harm avoidance)との関連を検討したところ、海馬体積と損害回避傾向に有意な負の相関を認めた(Yamasue et al., Cereb Cortex, in press)。また、協調性との関連については、社会的認知をつかさどる脳部位との有意な正の相関を認めた。またこれらの相関は、男女間で有意な差を認めた。これらの結果から、人格特性の背景をなす遺伝子多型と脳形態・機能の関連について検討を進める見通しをえた。
距離画像を用いた物体認識システムの構築に関する研究

本研究は,科学研究費補助金(奨励研究(A))のもと,人工の視覚機能を実現するために必要とされる効率的で高精度な特徴抽出・統合機構を構築することを目的に研究を行った.そして,対象に距離画像を考え,主に次の2つのテーマに取り組んできた.1.最適な曲面モデルによる対象物体に関する曲面関数の推定及び形状解析(特徴抽出機構)この研究では,実測画像における計測雑音や対象物体の不連続性といった形状変化にも対処するため,繰り返し型B-スプライン曲面当てはめ法を構築した.そして,実画像に基づく実験のもと高精度な曲面関数の推定が可能であることを確認した.また,これまで3-D Deformable Modelを用いた解析に仕様していた正則化問題にB-スプライン基底関数を導入することにより,B-スプライン曲面モデルを用いた新たな曲面復元法を構築したほか,これとB-スプラインウェーブレットを結び付けることにより多重解像度解析を行うといった新たな拡張性を見出した.2.特徴量の統合による物体形状の最適な記述(特徴統合機構)この研究では物体形状の簡潔かつ効率的な記述を行うために,対象物体に対して似た形状を持つ領域ごとに分割するセグメンテーション手法の開発を行った.特に,1.の曲面関数の推定結果より得られる曲率情報量をもとに混合確率アルゴリズムによるクラスタリング手法を実現し,そのクラスタ生成に計測雑音を考慮に入れることによってロバストなセグメンテーション手法を構築した.一方,この構築されたグメンテーション手法は曲率情報のみを使用したものであったため,実験よりエッジ付近での良好なセグメンテーションが困難であることが確認された.そこで,基本競合系を拡張した競合モデルを用いて1.で得られる曲率情報のみならずエッジなどの他の情報をも統合しうるネットワークモデルを考え定式化を行った.今後,アルゴリズムの実装化を行う予定である.本研究は,科学研究費補助金(奨励研究(A))のもと,人工の視覚機能を実現するために必要とされる効率的で高精度な特徴抽出・統合機構を構築することを目的に研究を行った.そして,対象に距離画像を考え,主に次の2つのテーマに取り組んできた.1.最適な曲面モデルによる対象物体に関する曲面関数の推定及び形状解析(特徴抽出機構)この研究では,実測画像における計測雑音や対象物体の不連続性といった形状変化にも対処するため,繰り返し型B-スプライン曲面当てはめ法を構築した.そして,実画像に基づく実験のもと高精度な曲面関数の推定が可能であることを確認した.また,これまで3-D Deformable Modelを用いた解析に仕様していた正則化問題にB-スプライン基底関数を導入することにより,B-スプライン曲面モデルを用いた新たな曲面復元法を構築したほか,これとB-スプラインウェーブレットを結び付けることにより多重解像度解析を行うといった新たな拡張性を見出した.2.特徴量の統合による物体形状の最適な記述(特徴統合機構)この研究では物体形状の簡潔かつ効率的な記述を行うために,対象物体に対して似た形状を持つ領域ごとに分割するセグメンテーション手法の開発を行った.特に,1.の曲面関数の推定結果より得られる曲率情報量をもとに混合確率アルゴリズムによるクラスタリング手法を実現し,そのクラスタ生成に計測雑音を考慮に入れることによってロバストなセグメンテーション手法を構築した.一方,この構築されたグメンテーション手法は曲率情報のみを使用したものであったため,実験よりエッジ付近での良好なセグメンテーションが困難であることが確認された.そこで,基本競合系を拡張した競合モデルを用いて1.で得られる曲率情報のみならずエッジなどの他の情報をも統合しうるネットワークモデルを考え定式化を行った.今後,アルゴリズムの実装化を行う予定である.
シナプス前終末におけるアセチルコリン受容体のフィ-ドバック修飾機存の研究

1.シナプス伝達効率測定法の開発鶏胚毛様体神経節のシナプス伝達の修飾機序を研究する目的で、シナプス伝達効率を測定する手法を開発した。孵化14ー15日の鶏胚から毛様体神経節を動眼神経、毛様体神経と共に摘出し、動眼神経に吸引刺激電極を、毛様体神経と神経節の一部に吸引記録電極を付着させた。動眼神経を短い電気パルスで刺激することにより、シナプス前線維の活動電位とシナプス後細胞の応答が同時に記録された。両者の比は、シナプス伝達効率の指標として優れており、外液カルシウム濃度に対する依存性を調べることにより、シナプス伝達修飾物質の作用部位が、シナプス前終末のカルシウム流入にあるのか、それ以降に存在するのかを判別することができる。更に、シナプス伝達修飾物質の作用部位が、シナプス前終末にあるのか、シナプス後細胞の受容体に存在するのかを判定する目的で、シナプス後細胞にパッチ電極法を適用して、シナプス電流を測定する手法を開発した。現在、これらの新しい手法を用いて、アセチルコリンその他の修飾物質の作用を検討中である。2.シナプス前終末の膜電位の測定アセチルコリンがシナプス前終前にフィ-ルドバック修飾を行うときに、膜電位が変化するかを検討する目的で、シナプス前終末の静止膜電位と活動電位を測定した。細胞内液に近い組成を持つパッチ電極でホ-ルセル状態下に電流固定記録を行った。シナプス前終末の静止膜電位は、平均-61mV、活動電位は、80mVだった。Kチャネルを阻害することにより、活動電位の幅の延長が認められた。電位固定下に、シナプス前終末から、ナトリウム電流とカルシウム電流が測定された。更に、シナプス前終末には、2種類のカルシウムチャネルが共存していることが分かった。各チャネルに対する修飾物質の作用を今後検討する。
条件表現に関する対照方言学的研究

本研究は,日本語方言の条件表現の体系を,形態的・統語的・意味的・談話的側面から総合的・統一的に記述し,そのようにして記述した複数の方言の体系を対照することによって,日本語諸方言の条件表現に見られる,広義の文法的特徴の共通点と相違点を明らかにすることを目的とした。この目的のために今年度(第2年度)は,(1)分析資料としての方言文字化資料のテキストデータベース化,を継続し,(2)音声資料のメディアコンバート,を完了した。(1)は,研究者を対象にモニター公開し,共有の研究資源とする可能性を探った。また,(3)各地の方言文字化資料から条件文を構成する接続形式を拾い出し,(4)口頭発表「方言の極限系のとりたて」(2000.8.28,東西言語文化の類型論研究会,於:筑波大学)の中で,その分析結果に一部触れた。さらに,(5)臨地面接調査のための地域対応版調査票を作成し,(6)山口県下関市において,高年層話者を対象に臨地調査を行った。条件表現のうち順接仮定条件表現については,談話論的要因の関わり方に方言間で違いがあるという見通しに立って,「期待/反期待」という発話の意図が関与的な方言と非関与的な方言,同一の状況を「条件関係」として表現する方言と「継起関係」として表現する方言,といった観点から各地方言の分析を行った。また,共通語の「なら」にあたる意味で「バ」を用いる方言,順接仮定条件と原因理由を同じ形で表す方言などについて,接続形式の共時的な意味の広がりと,歴史的な変化の過程について考察を行った。本研究は,日本語方言の条件表現の体系を,形態的・系統的・意味的・談話的側面から総合的・統一的に記述し,それら複数の方言の体系を対照することによって,日本語諸方言の条件表現に見られる,広義の文法的特徴の共通点と相違点を明らかにすることを目的とする。この目的のために,今年度はまず,(1)分析資料としての方言文字化資料のテキストデータベース化,(2)音声資料のメディアコンバートを開始した。また,(3)各地の方言文字化資料から条件文を構成する接続形式を拾い出し,(4)そのうち特に,高知県南国市方言の接続形式の意味・用法に関してやや詳しい考察を加え,「接続助詞「バ」の意味・用法の方言間対照」(於:青葉ことばの会,1999.12.18)として口頭発表を行った。さらに,(5)臨地面接調査のための調査票の改訂版を作成し,(6)鹿児島市と大阪市において高年層話者を対象に臨地調査を行った。方言文字化資料と臨地調査の結果から,条件表現のうち順接仮定条件表現については,談話論的要因の関わり方に方言間で違いのあることが見出された。「期待/反期待」という発話の意図が関与的な方言と非関与的な方言,同一の状況を「条件関係」として表現する方言と「継起関係」として表現する方言,といった類型の存在が明らかになりつつある。他の側面からの要因についても,類型化につながる事実を積み重ねる方向で,データの収集と分析を進めた。