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クリティカル・シンキングの教育:方法と実践

1 )クリティカル・シンキング(CT)の教育に関して、英語圏のみならず、フランス語圏(フランス及びカナダ、ケベック州)においても実地に調査研究を行い、さまざまな方法論を学び、またその実践を体験することができた。3 )アジアの教育風土に適応したCTを模索するために、日本-アジア間の比較研究の相方を求めて東南アジア諸国(シンガポール、マレーシア、タイ)の諸大学におけるCT教育の実態について調査研究を行い、とくにチュラロンコン大学(バンコク)との共同研究を準備することができた。1)クリティカル・シンキング(Critical Thinking : CT)の標準理論を形成するために、CTの教育実践に関して進んでいる英語圏のみならず、仏語圏、独語圏における研究と教育実践についての資料を収集した。また国内におけるCTの研究と教育実践についても資料を収集、調査を行った。2)大阪大学の全学共通教育において、CTを内容とする講義(2学期専門教育基礎科目哲学基礎B・担当望月)と演習(2学期基礎ゼミ「クリティカル・シンキングの技法」・担当荻原、望月)を行った。授業においては、Web-CTを利用し、またとくに基礎ゼミの授業では学生のプレゼンテーションをビデオ録画してフィードバックを図った。4)荻原と望月が、シンガポール国立大学(NUS)におけるCTの教育実践を視察し、またマレーシア科学大学(USM)でCTの教育実践についてのセミナーを行う(3月19日25日)。1)昨年度に引き続いて、東南アジア諸国の大学でクリティカル・シンキング(Critical Thinking: CT)の教育が、どのようなしかたで適応され、実践されているのかを調査・研究した。荻原と望月が、チュラロンコン大学(タイ・バンコク)及びモンクット王工科大学トンブリ校(タイ・バンコク)におけるCTの教育実践を視察した。また、その成果をまとめて大阪大学大学教育実践センター紀要第4号に公表した。(6月)2)荻原と望月が、フランス・ブルゴーニュ地方のラ・シャペル・サンタンドレで1週間にわたって開催された、哲学実践研究所(代表:Oscar Brenifier)主催のセミナー"The Art of Questioning"に参加し、問いの実践的技法を学んだ。(7月)3)研究協力者(鈴木径一郎・大阪大学文学部)を得て、収集した、主として英語のCT教科書を調査し、既存の教科書の類型化を試みた。1)クリティカル・シンキングの教育に「問いの技法」(The art of questioning: cf. http://www.brenifier.com)を応用する方法について研究した。これにより、対話的批判的思考(dialogical critical thinking)の実践へ方途を開くことができる。問いは、問題のidentification、problematization、conceptualizationの過程を含み、問う者と答える者との対話的コミュニケーションのプロセスを通して段階的に深められる。このプロセスは、必ずしも問題の解決を目指すものではなく、それを通して問題が問題となる地平の展望、概念の獲得を目指すものである。2)同時に、クリティカル・シンキングの教育に「子供のための哲学(P4C: Philosophy for Children)を応用する方法についても研究した。リチャード・アントン氏(カール大帝ユニバーシティカレッジ講師、ベルギー・アントワープ)を招き、「思考筋を鍛える」と題したワークショップを開催し、ソクラティック・ダイアログを応用した対話的批判の実践を試みた。
有害元素広域的環境汚染に伴う人体暴露調査研究のための高能率分析システムの開発

1.平成15年度においては、爪試料の無標準・無調製分析法が完成し、それはフィリピン等における「有害元素広域的環境汚染に伴う人体暴露評価」研究に応用された。さらに「三検出器同時分析システム」を用いた、フッ素を含む多元素同時定量分析法」を確立し、砒素・水銀等以上に中毒患者が多いと言われているフッ素と、他の元素の相関を調べることが可能となった。本法は、中国におけるフッ素・砒素の複合汚染問題に応用され、毛髪中フッ素濃度と、砒素・マンガン濃度の強い相関が明らかになった。本法はさらに、植物、海産物、菌類、水道水などの分析に応用され、環境科学、食品学等の分野において強力な研究手段としての地位を築いている。2.平成16年度においては、外付けソフト多重波高分析器が導入され、三検出器からの測定データの高速解析システムが確立された。そのため極めて高効率で多試料の分析が可能となり、バングラデッシュ、中国、モンゴル、カザフスタン等の汚染地域住民から採取された2000を超える毛髪、尿、爪の分析が行われ、体内暴露に関する有益な情報を得ることができた。また、毛髪、尿、血液、爪に加え、1μ以下の髄液、唾液、汗、涙、鼻汁の定量分析法が新たに確立され、より多角的な人体暴露評価が可能となっている。さらに、分担者の千葉を中心として日本の沿岸地域住民の食事からの有害元素摂取の調査研究が、本システムを用いて開始された。それに加え、植物の葉、きのこなどの環境試料に対して液体窒素を用い、我々により開発された粉末内部標準法を応用する手法が開発され、これらの試料中の揮発性元素の分析も可能となった。爪試料の試料調製法・測定法の確立:爪試料の洗浄法が検討され、アセトン中の超音波洗浄法が確立された。小規模金鉱山鉱夫の爪試料に対しても同法は有効であるが、傷に金属粒が埋め込まれた試料に対し、希塩酸中での超音波洗浄法も開発された。先細りに切断した爪の先端部にのみビームを当てる条件下で、精度の良い分析が可能となることが確認された。本法により多試料の高効率分析が可能となり、既に開発されている尿、毛髪、血液試料分析法と組み合わせた有害元素人体暴露の総合的評価が可能となった。高効率解析システムの構築:本科研費によりWindows機用外付け波高分析器(以下MCA)が購入され、ネットワーク上のどのコンピュータからも解析可能となるシステムが構築された。世良による解析プログラムSAPIXにも、新データ形式に対応する改良が加えられた。従来、異なるMCAシステムで得られるX線スペクトルを共通の形式に変換するプログラムを働かせねばならなかったが、今後、新システムと同機種のMCAをネットワーク上のwindows機で使うことにより、3検出器からのスペクトルが、直ちに解析可能となった。三検出器同時計測システムによるフッ素分析法の確立:以前に購入されたGe検出器を用いたフッ素定量分析法が新たに確立され、Na以上の元素に加えフッ素の定量分析も可能となった。フッ素は砒素、水銀と並び広域的環境汚染をもたらす元素として注目されている。フッ素分析が可能となったことにより、当システムにより調査研究が可能な課題がさらに拡大された。本法は既に、飲料水、人骨、家畜飼料等の環境試料分析に応用されている。引き続き、フッ素分析の効率化を計るためのシステム改良を行う予定である。

さらに「三検出器同時分析システム」を用いた、フッ素を含む多元素同時定量分析法」を確立し、砒素・水銀等以上に中毒患者が多いと言われているフッ素と、他の元素の相関を調べることが可能となった。本法は、中国におけるフッ素・砒素の複合汚染問題に応用され、毛髪中フッ素濃度と、砒素・マンガン濃度の強い相関が明らかになった。本法はさらに、植物、海産物、菌類、水道水などの分析に応用され、環境科学、食品学等の分野において強力な研究手段としての地位を築いている。2.平成16年度においては、外付けソフト多重波高分析器が導入され、三検出器からの測定データの高速解析システムが確立された。そのため極めて高効率で多試料の分析が可能となり、バングラデッシュ、中国、モンゴル、カザフスタン等の汚染地域住民から採取された2000を超える毛髪、尿、爪の分析が行われ、体内暴露に関する有益な情報を得ることができた。また、毛髪、尿、血液、爪に加え、1μl以下の髄液、唾液、汗、涙、鼻汁の定量分析法が新たに確立され、より多角的な人体暴露評価が可能となっている。さらに、分担者の千葉を中心として日本の沿岸地域住民の食事からの有害元素摂取の調査研究が、本システムを用いて開始された。それに加え、植物の葉、きのこなどの環境試料に対して液体窒素を用い、我々により開発された粉末内部標準法を応用する手法が開発され、これらの試料中の揮発性元素の分析も可能となった。
代謝モード解析を基軸とした麻酔薬が膵β細胞のインスリン分泌へ与える影響の研究

吸入麻酔薬がglucose stimulated insulin secretion(GSIS)を抑制するメカニズムを明らかにするために行われた。マウスインスリノーマ細胞株のMIN6を使用してGSISを確認する実験系を確立した。ブドウ糖の消費による低酸素はイソフルランとセボフルランにより抑制された。ミトコンドリアが酸素消費すると細胞内低酸素になり、HIF-1が活性化します。HIF-1の活性化もイソフルランとセボフルランにより抑制された。それにより細胞内のATPの上昇が抑制され、インスリンの分泌が抑制された。吸入麻酔薬のセボフルランとイソフルランでMIN6におけるGSIS実験系の確立をした。グルコース類似物2-DGによるGSIS阻害の確認した。ミトコンドリア電子伝達系阻害薬(ロテノン,アンチマイシンA)ATP合成酵素阻害薬(オリゴマイシン)のGSISを阻害した。細胞内代謝産物(ATP、ピルビン酸、乳酸)のアッセイ系を確立した。K+-ATPチャネル閉口剤(SU合剤グリベンクラミド)によりインスリン分泌は亢進した。電位依存性カルシウムチャネル阻害薬のGSISに与える影響の確認を行った。吸入麻酔薬のセボフルランとイソフルランでGSISにおける酸素代謝・HIF-1活性化の変化の検討を行った。20%酸素分圧下でグルコース刺激が酸素消費量,細胞内酸素分圧に与える影響の検討をした。20%酸素分圧下でグルコース刺激が転写因子HIF-1の活性化に与える影響の検討をした。また、この現象が麻酔薬共存下で受ける影響を検討した。セボフルランとイソフルランが細胞内代謝産物(ATP、ピルビン酸、乳酸)に与える影響の検討をした。1%, 5%酸素分圧下でGSISがいかなる影響を受けるかの検討をした。HIF-1活性の外因的な亢進・抑制させた場合のGSISへの影響の検討をした。その結果論文報告ができたため。吸入麻酔薬のセボフルランとイソフルランでMIN6におけるGlucose Stimulated Insulin Secration(GSIS)実験系の確立をした。20%酸素分圧下でグルコース刺激が酸素消費量,細胞内酸素分圧に与える影響の検討した。20%酸素分圧下でグルコース刺激が転写因子HIF-1の活性化に与える影響の検討した。セボフルランとイソフルランが細胞内代謝産物(ATP、ピルビン酸、乳酸)に与える影響の検討した。1%, 5%酸素分圧下でGSISがいかなる影響を受けるかの検討。HIF-1活性の外因的な亢進・抑制させた場合のGSISへの影響の検討した。その結果論文報告、学会への発表等ができた。グルコース類似物2-DGによるGSIS阻害の確認。ミトコンドリア電子伝達系阻害薬(ロテノン,アンチマイシンA)ATP合成酵素阻害薬(オリゴマイシン)のGSISを阻害の検討。細胞内代謝産物(ATP、ピルビン酸、乳酸)のアッセイ系を確立。K+-ATPチャネル閉口剤(SU合剤グリベンクラミド)によりインスリン分泌の検討。電位依存性カルシウムチャネル阻害薬のGSISに与える影響の確認。20%酸素分圧下でグルコース刺激が酸素消費量,細胞内酸素分圧に与える影響の検討。20%酸素分圧下でグルコース刺激が転写因子HIF-1の活性化に与える影響の検討。また、この現象が麻酔薬共存下で受ける影響を検討する。セボフルランとイソフルランが細胞内代謝産物(ATP、ピルビン酸、乳酸)に与える影響の検討。1%, 5%

酸素分圧下でGSISがいかなる影響を受けるかの検討。HIF-1活性の外因的な亢進・抑制させた場合のGSISへの影響の検討。以上のことをその他の各種周術期使用薬剤でGSISに与える影響の検討を行う。麻酔次年度使用額が生じた理由は、初年度で研究成果が学会発表水準まで達しなかったため学会旅費を使用しなかったことや、物品の使用品が若干予定より少なかったことが挙げられる。使用計画としては、学会への参加のための旅費に使用すること、実験のための物品購入に使用することなどを計画している。
日本プレ近代思想の系譜学・発展的研究

本研究は、まず、必要な基礎文献の収集、複写および整理を進めた。各研究者は、各自の分担を調整しながら、日本プレ近代思想の系譜をあとづけるべくそれぞれの研究を実施した。さらに研究チームは、あわせて2回の、学術的なワークショップを開いた。すなわち、研究協力者・伊藤祐吏、野口良平の両氏の研究成果を検討し、研究代表者(橋爪)の論文“One Step Further from Max Weber"を吟味するなどした。この英文の論文は、山崎闇齋の正統論に加え、伊藤仁斎、荻生徂徠らの新儒学、本居宣長の国学を合わせた効果が、プロテスタント改革派のそれに匹敵するという見解を明らかにするもので、報告書に所載してある。研究協力者、伊東祐吏は「丸山眞男と『近代の越克』」、「丸山眞男と『開国』」の二本の論文において、戦前期における「近代の超克」から「近代化の不徹底」への丸山の転回、開国論文や古層論文における無思想の理解の不徹底、の意味するところを明らかにした。同じく野口良平は「二つの世界の往還」において、中里介山『大菩薩峠』を受動的な関係性が能動的関係性へ転回する近代の本質をテーマとするものと読み解いた。これらの研究により日本プレ近代の系譜のこれまで明らかにされなかった側面が照射され、新たな像を明らかにしたと結論できる。本年度は、本研究に必要な基礎的文献の収集、複写および整理をまず行なった。特に、これまで漏れていた中国関係の文献や、日本思想に関して英語で書かれた文献にも注意を払った。つぎに、日本プレ近代思想の特質を明らかにするため、研究支援者の最近の業績をふまえた学際的なワークショップを実施した。すなわち、伊東祐吏の論文「戦後知識人と「当事者意識」の欠如について」は、戦後知識人の当事者意識の欠如を問題とし、明治近代知識人ならびに江戸期プレ近代知識人の特質を浮かび上がらせている。また、野口良平の論文「『大菩薩峠』と虚無の思想」は、中里介山の小説『大菩薩峠』を読解するなかから、明治民権運動の挫折とその時代背景を読み解き、プレ近代思想の構造を逆照射している。これら両名を含む研究チームのワークショップを通じて、日本プレ近代思想を再構成する作業枠組みが準備された。さらに、研究代表者ならびに研究協力者、支援者は分担して、荻生徂来、本居宣長、浅見絅斎ら、幕末期に先行する文書の系譜学的な整理と解析を進めた。この作業の成果は、来年度に報告書にまとめられるはずである。本年度は、前年度にひき続き、必要な基礎文献の収集、複写および整理を行なった。また、各研究者は、各自の分担を調整しながら、日本プレ近代思想の系譜をあとづけるべく研究を進めた。さらに研究チームは、最終報告書をまとめる準備のため、前年度と同様に、平成20年3月、研究支援者の最近の業績をふまえた学際的なワークショップを開いた。すなわち、伊藤祐吏、野口良平の両氏の最終報告書の構想を検討し、さらに研究代表者(橋爪)の論文"One Step Furtherfrom Max Weber"を吟味した。この英文の論文は、山崎闇斎の正統論に加え、伊藤仁斎、荻生徂徠らの新儒学、本居宣長の国学を合わせた効果が、プロテスタント改革派のそれに匹敵するという見解を明らかにするものである。研究代表者ならびに研究協力者、支援者らは分担して、研究計画書にのべたプランに従って、幕末期に前後する業績の系譜学的な整理と分析を進めており、まもなく研究報告書としてまとめることができると期待している。
血管壁の障害・リモデリング過程における細胞相互反応に関する分子病態学的研究

脈硬化、血栓症や糖尿病性血管病変など病的血管リモデリングについての分子病態解明と、その新規治療法の確立が医学的・社会的急務である現状を踏まえ本年度研究を行った。その結果、動脈硬化進展における血管新生に関連し、動脈硬化を含めた病的血管リモデリングの発生病態を炎症・修復反応として総括しうる事、その誘導因子としてVEGFを中心としたサイトカインネットワークによる細胞間相互作用が重要な事を明らかにした。また、急性下肢虚血動物モデルでの外来性VEGF、FGF2による側副血行路発達促進効果の検討より、血管新生の最終作用因子はVEGFであるが、血流増加にはFGF-2など他の血管新生因子の協調作用が不可欠で、血管新生因子(VEGF、HGF、FGF-2)にはFGF-2→HGF→VEGFという階層性がある事を示唆した。この時、FGF-2によるHGF発現は、MAPK系を介する事が判明した。またラット肺高血圧症モデルにおける肺血管リモデリングには血管壁を中心としたマクロファージ浸潤による組織改変が重要であることを明らかにしたほか、性関節リウマチにおける血管新生の病態学的意義に関連し、ラットアジュバント関節炎モデル(AIA)の検討より、FGF-2がAIAの発生・進展における中心的な調節因子であり、これの機能制御はRAの新たな治療戦略となり得ることを明らかにした。今後は、こうした病的血管リモデリング基礎の研究成果を元に、関連諸疾患に対し、治療アプリケーションの早期開発が望まれるところである。さしあたって、本研究成果により「下肢虚血に対するSeV-FGF2遺伝子導入による血管新生療法」を九州大学学内倫理委員会に申請し(審査中)、臨床応用の準備段階にあるが、ほかの成果についても、臨床応用に向けさらに発展・応用させていく予定である。血管の細胞機能の崩壊は、血栓性疾患や種々の疾患の発症に深く関わるため、その解明は現在の最重要課題である。敗血症では、こうした内皮機能が傷害され内皮由来のNO産生の低下が推測されており、まずこれが凝固の活性化に伴う血栓形成など敗血症の病態形成にどのような関わりを持つか解明するため、ラットDICモデルを用い、NOと血栓形成との関連について検討した。NOの産生阻害は、コントロール群に比較して血栓形成の多発傾向を認め、血栓を伴う糸球体の割合は、2.5%から70.4%まで激増する(p<0.0001)。こうした血栓をもつ糸球体の出現頻度の増加は、NOドナー投与で29.3%まで軽減でき(p<0.0001)、尿細管壊死などの臓器障害も軽減することが病理組織化学的、血液生化学的データにも観察された。また、免疫組織化学的観察により、NOの産生動態は、浸潤白血球やクッパー細胞でのTNF-αやTF、PAI-1発現にも影響を与えた。これらは、DICの発症過程での内皮由来のNOの抗凝固的機能を示唆している。このほか血管の細胞機能の制御法として、近年病的血管に対して血管壁への遺伝子治療が検討されているが、今のところ導入べクター、標的遺伝子など多くの問題を残している。そこで我々は新規かつ有効な遺伝子治療法の確立のため、ディファレンシャルディスプレイによる標的遺伝子の探索を現在進行中であり、今後絞り込みの作業に入る予定である。また、導入べクターの開発に関しては、組換え型センダイウイルスベクターその他のべクターの可能性を探索中で、現在その特徴づけのためのデータ集積を行っており、近い将来その妥当性の有無について明らかにする予定である。血管の細胞機能の崩壊は、血栓性疾患や種々の疾患の発症に深く関わるため、その解明は現在解決すべき最重要課題のひとつである。近年、血管の細胞機能の制御法として、病的血管に対して血管壁への遺伝子治療が検討されているが、今のところ導入ベクター、標的遺伝子など多くの問題を残している。

そこで今回我々は、病的血管の有効な遺伝子治療法の確立を視野に、新規ベクターとして組換え型センダイウイルスの実用化に向けての基礎データの収集と、血管リモデリング機序とその制御について検討した。まず組換え型センダイウイルスの生理学的有効性については、血管壁細胞(平滑筋細胞、内皮細胞)ヘアデノウイルスを凌駕する遺伝子導入効率を示した。さらに、in vitroでは増殖期、非増殖期によらず感染が成立し比較的長期(2ヶ月)の安定発現が観察された。また、導入も細胞への短時間の接触で完了する利点も判明した。ヒト血管壁へのex vivo遺伝子導入実験では、内皮細胞へは90%以上、中膜平滑筋は40%以上(内膜の肥厚が無い場合)の遺伝子導入が可能と判明した。アデノウイルスと同様に肥厚内膜への導入は困難であったものの、このように既存ベクターにはない極めて優れた利点が判明した。また、血管壁のリモデリング機序に関連しては、慢性的NO産生阻害モデルの解析から、NF-kBの重要性やMCP-1活性制御による血管壁の炎症や内膜肥厚の抑制への有効性が明らかとなった。さらに、培養腫瘍細胞によるSp-1のデコイ遺伝子導入実験で、血管内皮細胞増殖因子や組織因子等の腫瘍性血管新生に重要な因子の制御が可能であることが明らかになった。これらの結果から、血管リモデリング機序の一端の解明と新たな制御の可能性が示唆された。動脈硬化、血栓症や糖尿病性血管病変など病的血管リモデリングについての分子病態解明と、その新規治療法の確立が医学的・社会的急務である現状を踏まえ本年度研究を行った。その結果、動脈硬化進展における血管新生に関連し、動脈硬化を含めた病的血管リモデリングの発生病態を炎症・修復反応として総括しうる事、その誘導因子としてVEGFを中心としたサイトカインネットワークによる細胞間相互作用が重要な事を明らかにした。また、急性下肢虚血動物モデルでの外来性VEGF、FGF-2による側副血行路発達促進効果の検討より、血管新生の最終作用因子はVEGFであるが、血流増加にはFGF-2など他の血管新生因子の協調作用が不可欠で、血管新生因子(VEGF、HGF、FGF-2)にはFGF-2→HGF→VEGFという階層性がある事を示唆した。この時、FGF-2によるHGF発現は、MAPK系を介する事が判明した。またラット肺高血圧症モデルにおける肺血管リモデリングには血管壁を中心としたマクロファージ浸潤による組織改変が重要であることを明らかにしたほか、性関節リウマチにおける血管新生の病態学的意義に関連し、ラットアジュバント関節炎モデル(AIA)の検討より、FGF-2がAIAの発生・進展における中心的な調節因子であり、これの機能制御はRAの新たな治療戦略となり得ることを明らかにした。今後は、こうした病的血管リモデリング基礎の研究成果を元に、関連諸疾患に対し、治療アプリケーションの早期開発が望まれるところである。さしあたって、本研究成果により「下肢虚血に対するSeV-FGF2遺伝子導入による血管新生療法」を九州大学学内倫理委員会に申請し(審査中)、臨床応用の準備段階にあるが、ほかの成果についても、臨床応用に向けさらに発展・応用させていく予定である。
植物の新たな感染防御応答因子の探索とその機能解析

病原菌の感染に対する植物の防御応答において、新規な抵抗性関連因子を見いだし、これら因子の防御応答における機能を解明することを本研究の目的とした。ジャガイモ植物あるいはタバコ植物とジヤガイモ疫病菌菌体壁成分エリシターの系を確立し、防御応答時に特異的に発現が誘導される遺伝子のスクリーニングを行った。得られたクローンには、1)タバコ葉を用いたデイファレンシャルハイブリダイゼーション法により、SAR8.2、グリシンリッチタンパク質、エクステンシン、アシルトランスフェラーゼの各遺伝子、2)ジヤガイモ塊茎を用いたサブトラクション法により、感染特異的(PR)タンパク質、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、アミノシクロプロパンカルボン酸オキシダーゼの各遺伝子や傷害誘導性遺伝子、3)ジャガイモ塊茎を用いたディファレンシャルハイブリダイゼーション法により、チラミンヒドロキシシンナモイルトランスフェラーゼ、グルコース6-リン酸デヒドロゲナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼの各遺伝子や防御関連遺伝子がそれぞれ含まれていた。また、タバコ葉を用いたディファレンシャルディスプレイ法により単離した新規遺伝子の機能解析を行った。1種は新たなエリシター応答性シトクロムP450遺伝子であり、CYP82E1と名付けたこの遺伝子は、菌侵入時の障壁物質やファイトアレキシンの合成に関わる新規な二次代謝系酵素遺伝子である可能性が高い。他の1種はエリシター誘導性のレセプター様タンパク質をコードしており、トマトの抵抗性遺伝子であるCf遺伝子群と高い相同性を示し、EILP(Elicitor-Inducible LRR Protein)遺伝子と名付けた。EILP過剰発現タバコ植物において、各種エリシターに対する応答性および病原菌に対する抵抗性が上昇したという結果は、EILPは感染応答時に二次的に情報シグナルを増幅することにより応答性を高めるレセプター様タンパク質であることを示した。まず、タバコ葉に疫病菌菌体壁成分エリシター(HWC)を処理し、種々の抵抗反応、すなわち(1)初期抵抗反応としてのフェニルアラニンアンモニアリアーゼ(PAL)遺伝子の発現、(2)後期抵抗反応としての感染特異的(PR)タンパク質の発現、(3)過敏感細胞死などを確認して実験系を確立した。この系を用いて抵抗反応誘導時に特異的に発現する遺伝子の単離をDifferential Display法により試みた。その際、購入した微量高速遠心機を試料調製に、ゲル撮影装置を試料分析に用いた。HWC処理および水処理タバコ葉から全RNAを経時的に抽出し、132種のランダムプライマーを用いてRT-PCRを行い、HWC処理タバコ葉のRNAを鋳型とした場合に特異的に増幅したPCR産物を得た。うち2種の断片をプローブとしてHWC処理12時間後のタバコ葉より作製したcDNAライブラリーをスクリーニングした。1種は新たなエリシター応答性シトクロムP450遺伝子であり、CYP82E1と名付けた。他の1種D44-12遺伝子はトマト葉かび病菌に対するトマトの抵抗性遺伝子であるCf遺伝子群と高い相同性を示し、ロイシンリッチリピート(LRR)や膜貫通領域といった特徴的な構造を有した。そこで、本遺伝子をEILP(Elicitor-Inducible LRR Receptor-Like Protein)遺伝子と名付けた。EILEの発現は傷処理では全く誘導されず、サリチル酸処理の場合に24時間後をピークとして認められた。また、非病原菌であるダイズ斑点細菌病菌(Pseudomonas syringae pv.glycinea)

接種葉では接種後12-24時間をピークとする一過的な発現誘導が認められたのに対し、病原菌であるタバコ野火病菌(P.syringae pv.tabaci)接種葉では接種後36時間に発現誘導が認められた。EILPは病害ストレスに対する感受性を高めるためのレセプターである可能性が考えられた。植物の抵抗反応誘導機構についての新たな知見を得るため、タバコあるいはジャガイモ植物とジャガイモ疫病菌菌体壁成分エリシター(HWC)の系を用い、防御応答時に特異的に発現誘導される遺伝子のスクリーニングを行った。まず、先に確立したタバコ植物の系を用いて、抵抗反応誘導時に特異的に発現する遺伝子の単離をDifferential hybridization法により試みた。水あるいはHWCの処理後6、12時間のタバコ葉全RNAからプローブcDNAを作製し、HWC処理12時間後のタバコ葉から作製したcDNAライブラリーの各コロニーから調製したプラスミドDNAとハイブリダイズした。200cDNAクローンのうち、HWC処理タバコ葉のcDNAプローブと特異的にハイブリダイズした6クローンを得た。EIG-B39とEIG-D14はSAR8.2、EIG-G7はグリシンリッチタンパク質、EIG-I30はエクステンシン、EIG-I24はアシルトランスフェラーゼ、EIG-J7は未知タンパク質であった。ノーザン解析により、いずれも非病原菌であるダイズ斑点細菌病菌接種葉やサリチル酸処理葉において発現が認められた。次に、HWC未処理および処理後3、6時間のジャガイモ塊茎より全RNAを抽出し、Subtraction法を用いたクローニングを行った。120クローンのうち63クローンが既知遺伝子と相同性を示し、感染特異的(PR)タンパク質、グルタチオン-S-トランスフェラーゼ、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ、アミノシクロプロパンカルボン酸オキシダーゼの各遺伝子や傷処理誘導性遺伝子が含まれていた。HWCやアラキドン酸処理に応答したこれら遺伝子の発現の増加がノーザン解析により認められた。疫病菌接種時の応答性を調べたところ、親和性菌と非親和性菌の接種により異なる発現パターンを示す遺伝子が4種存在した。植物の抵抗反応誘導機構についての新たな知見を得るため、防御応答時に特異的に発現誘導される遺伝子のスクリーニングを前年に引き続き行った。ジャガイモ植物とジャガイモ疫病菌菌体壁成分エリシター(HWC)の系を用い、抵抗反応誘導時に特異的に発現する遺伝子の単離をDifferential Hybridization法により試みた。既知遺伝子と相同性を示すクローンが得られ、チラミンヒドロキシシンナモイルトランスフェラーゼ、グルコース6-リン酸でヒドロゲナーゼ、ピルビン酸デカルボキシラーゼの各遺伝子の発現の増加がノーザン解析により認められた。
自律神経末梢組織におけるペースメーカーの多様性と類似性

心臓に限らず自律神経末梢各組織の運動は、それぞれ自律しており、この活動を神経が統合的に修飾するという共通の形式をとっている。本研究では、その中心となるペースメーカー機構を解明し、さらには自律神経末梢各組織における多様性や類似性を検討することを目的とする。平成15-17年度の研究期間中において、小腸及び胃から作製した細胞小塊標本(直径100-300μm程度)を用いて、ペースメーカー機能の中心となるc-Kit陽性間質細胞(=Cajalの間質細胞:ICC)における自発性の細胞内Caオシレーションの特性について研究を進めた。小腸と胃の細胞小塊標本において、c-Kit陽性間質細胞のペースメーカーCaオシレーションは、どちらもRyanodine受容体、IP3受容体からのCa放出が関与し、さらにはTRP familyチャネルが起源と思われる細胞外からのCa流入が必要であることが本研究より明らかにされた。さらにICCは、平滑筋タイプのスルフォニル尿素受容体(SUR2B)ではなく、膵β細胞タイプスルフォニル尿素受容体(SUR1)を介して、ATP感受性Kチャネルによる修飾を受けることが示された。このことは、腸管運動と膵β細胞からのインスリン放出が協調して、生体のエネルギーレベルを調節するという、新しい生理連関メカニズムを示唆した。私たちはまた、名古屋大学病院の患者様から摘出されたc-Kit陽性間質細胞の腫瘍(Gastrointestinal stromal tumor : GIST)を、酵素処理によって単離して、膜電流とCa活動を記録するとともに、RT-PCRによって発現するイオンチャネルを検討した。ペースメーカーCaオシレーションに重要な役割を演じるいくつかのイオンチャネルは、この腫瘍で保たれていた。1)まず、マウス小腸の摘出筋層(筋層間神経叢含む)を細切した後、collagenaseなどの酵素処理によって100-300μm程度の細胞小塊を作成して培養した。この標本は3日から1週間程度自発性興奮を保っている。Dihydropyridine (DHP) Ca拮抗薬であるnifedipine存在下で見られるCaオシレーションは、ペースメーカー細胞であるCajalの間質細胞(=c-Kit陽性間質細胞)に由来することを確かめた。そして、薬物依存性から、このCaオシレーションでは、細胞内Ca遊離チャネルであるryanodine受容体、IP3受容体及び細胞外からのCa流入経路であるTRP familyチャネルが共同で働くことがわかった。また単離したc-Kit陽性細胞をRT-PCRした結果、ryanodine受容体では主にRyR3が発現し、FKBP12及びFKBP12.6とともに存在することが見つかった。2)小腸だけでなく胃の摘出筋層からも培養細胞小塊標本を作成することに成功した。この標本のCaオシレーションにも、小腸のものと同様に、ryanodine受容体、IP3受容体及びTRP familyチャネルが重要な働きをすることが確かめられた。3)手術で得られた十二指腸原発のCajal間質細胞の腫瘍(インフォームドコンセントにより同意)を酵素処理して培養した。この培養細胞の性質をpatch clamp, Ca測定、RT-PCR等の方法で調べた。平成16年度は、小腸だけではなくその他の組織での自発性活動のメカニズム解明にも積極的に取り組んだ。

マウス小腸及び胃の摘出筋層(筋層間神経叢含む)を細切した後、分解酵素処理によっり100-300μm程度の細胞小塊を作成して培養した。このようにして作製した胃の細胞小塊標本においても、自発性の収縮活動を記録し、さらにc-Kit陽性間質細胞(=Cajalの間質細胞)における自発性のペースメーカーCaオシレーションを観察した。興味深いことに、この100-300μm程度の小さな細胞小塊標本においても、胃と小腸ではそれぞれ内在する自発性興奮頻度は、組織レベルでの活動を反映した。(興奮頻度は胃において1分間に数回、小腸では10-30回程度であった。)小腸と胃の細胞小塊標本において、c-Kit陽性間質細胞のペースメーカーCaオシレーションは、どちらもRyanodine受容体、IP3受容体からのCa放出が関与し、さらにはTRP familyチャネルが起源と思われる細胞外からのCa流入が必要であることが本研究より明らかにされた。このほかに、膀胱平滑筋は副交感神経作動薬であるCChを投与すると自発性内向き電流を発生し、このメカニズムにRyanodine受容体が重要な働きをすることを明らかにした。また、モルモットのリンパ管での自発性収縮記録とc-Kit陽性細胞の分布を観察した。心臓に限らず自律神経末梢各組織の運動は、それぞれ自律しており、この活動を神経が統合的に修飾するという共通の形式をとっている。本研究では、その中心となるペースメーカー機構を解明し、さらには自律神経末梢各組織における多様性や類似性を検討することを目的とする。平成17年度は、小腸から作製した細胞小塊標本(直径100-300μm程度)を用いて、ペースメーカー機能の中心となるc-Kit陽性間質細胞(=Cajalの間質細胞:ICC)における自発性の細胞内Caオシレーションの特性について研究を進めた。平滑筋の自発性収縮は2B型スルフォニル尿素受容体(SUR2B)の活性化薬であるcromakalimを投与すると平滑筋の自発性収縮はほぼ完全に抑制されたが、ICCの細胞内Caオシレーションは保たれた。一方、1型スルフォニル尿素受容体(SUR1)の活性化薬であるdiazoxideを投与により、ICCのペースメーカーCaオシレーションは消失した。これらの結果は、ICCには膵臓β細胞と同様のATP感受性Kチャネルが存在して、その活動を修飾しすることを示唆した。さらに、RT-PCRと免疫化学染色でも、この結果は支持された。腸管運動と膵β細胞からのインスリン放出が協調して、生体のエネルギーレベルを調節することが示唆された。私たちはまた、名古屋大学病院の患者様から摘出されたc-Kit陽性間質細胞の腫瘍(Gastrointestinal stromal tumor : GIST)を、酵素処理によって単離して、膜電流とCa活動を記録するとともに、RT-PCRによって発現するイオンチャネルを検討した。ペースメーカーCaオシレーションに重要な役割を演じるいくつかのイオンチャネルは、この腫瘍で保たれていることが分かった。
遺伝的プログラミングのバイオ情報処理への応用

本研究は、マイクロアレイデータで得られた発現データからの遺伝子ネットワークの推定を目的とする。とくに、複数の異種モデルを用いることを前提として、集団学習のアプローチによりモデルを統合してより頑強な推定手法を構築する。具体的には、異種モデルの推定結果を動的(競合的)に組み合わせる一方で、静的(協調的)に統合して新たな推定と仮説を生成する。またバギングやブースティングなどの機械学習の手法により、与えられたマイクロアレイデータからブートストラップ法(例題からの復元抽出)を繰り返して擬似的にデータ(仮説)を作り、複数の機械を独立に学習し、多数決により頑強な学習手法を確立することを試みた。
固定化酵素超薄膜の新規製造法の開発

本研究では固定化酵素膜の耐久性向上に主眼をおいて、ビオチン標識酵素とアビジンを用いた新しい固定化酵素薄膜の製造法の開発を研究した。本法による固定化酵素膜の製造時の条件(溶液濃度、温度、pH,処理時間、洗浄時間)を最適化することにより、グルコースオキシダーゼ(GOx)を用いた場合には数ヶ月の使用に耐える性能の酵素薄膜を製造することが可能であった。次に、高耐久性の実現と、薄膜内に多量の酵素を固定化することを目的として、アビジンとともに合成ポリマーを同時に使用することを企画し、ポリマー・アビジン複合膜の調製を検討した。ビオチンで標識したポリアミン類を用いると、ポリエチレンイミン(PEI)やポリアリルアミン(PAA)では多量のアビジンが固定化できることが判明した。また、ポリアニオン類を用いるとこれらのポリマーをビオチン標識することなく、静電引力によりアビジンとともに薄膜状にすることが可能であった。この場合には、ポリビニル硫酸やポリスチレンスルホン酸などの柔軟な構造のポリマーを用いると多量のアビジンを固定化することが可能であった。これらのポリマーとGOx修飾アビジンを固定化して薄膜とすると、GOxは薄膜中でも酵素活性を保持していることがわかった。この薄膜では、合成ポリマーによりGOxが保護されているため堅固な酵素薄膜となった。また、一般にこれらの酵素薄膜は、製造および保存に際して常に湿潤状態にしておくことが性能保持にとって必要であった。本研究により、アビジンとビオチン標識酵素を用いた固定化酵素薄膜の製造や保存の方法が基本的に確立され、実用的な耐久性の酵素膜の開発に有用な知見を得ることができた。本研究では、我々が既に開発した新しい酵素固定化法の実用化を図ることを目的として、とくに耐久性の改善を第一に検討した。酵素の固定化はアビジンとビオチンを用いる方法によった。本法では、用いる酵素をビオチンで修飾することが必要であるが、その際の修飾条件を種々検討した。さらに、酵素を固定化するときの酵素溶液の濃度、温度、pH、処理時間などを系統的に検討し最適の条件を確率した。しかし、最適条件にて製造した酵素膜でも、酵素としてグルコースオキシダーゼを用いた場合には酵素膜は適度の耐久性を示したが、その他の酵素を用いたときは実用化に充分な耐久性の酵素膜を得るに至らなかった。酵素膜の耐久性を改善する目的で、酵素膜に合成ポリマーを組み込むことを検討した。このための基礎的検討として、ビオチンで標識したポリアミンとアビジンを薄膜とすることを検討した。ポリエチレンイミン(PEI)、ポリアリルアミン(PAA)、およびポリアミドアミンデンドリマ-(PAMAM)を用いたところ、これらポリマーの立体構造の相違に応じて薄膜に固定化されるアビジンの量が異なることが判明した。すなわち、球状のPAMAMではアビジンはほぼ単分子層で固定化され、分枝状のPEIではポリマー鎖中に単分子層の5培程度の多量のアビジンが固定化された。直鎖状のPAAの場合には、PEIとPAAのほぼ中間的な挙動が観察された。これらの合成ポリマーとグルコースオキシダーゼ修飾アビジンを用いて、酵素薄膜を製造して酵素の触媒活性を調べたところ、満足できる触媒活性を示すことが明らかになった。これらの酵素膜では酵素が合成ポリマーの分子鎖により保護されているため耐久性が向上するものと考えられる。他の酵素についても同様の方法で酵素膜を製造してその性能を評価する予定である。前年度に引き続き、ビオチン標識酵素の調製法の検討、および酵素累積膜の製造条件の最適化、を中心に研究を行った。ビオチン標識酵素の調製に際しては水溶性ビオチン試薬を用いる方法が良好な結果を与えることがわかった。濃度や処理時間などの細部についてはさらに検討が必要である。

酵素累積膜の製造条件の検討を行い、固定化される酵素量を制御する目的で、新たにポリアミンを用いる方法を検討した。モデル系として、ビオチン標識ポリアミンとアビジンの累積膜を検討した。ポリアミンとして、分子形状の異なる3種類のポリアミン(直鎖状ボリアリルアミンPAA、分岐状ポリエチレンイミンPEI、および球状ポリアミドアミンデンドリマーPAMAM)を用いて、それぞれの累積膜構造の相違を調べた。その結果、ポリマーの分子形状が異なると形成されるポリアミン・アビジン累積膜の構造が著しく異なることが明らかになった。すなわち、PEIを用いるとアビジンはPEIの分岐構造に侵入して大量のアビジンが累積された。一方、PAMAMの場合にはコンパクトな球状構造のために、累積されるアビジンはほぼ単分子層となった。PAAでは両者の中間的挙動が観測された。これらの結果は、酵素などのタンパク質を累積膜として固定化する際に、構造の異なるポリマー材料を利用することにより、タンパク質の固定化量をかなり精密に制御することが可能であることを示唆している。本研究ではこれまでに酵素を単分子層として累積することを念頭に研究を展開してきたが、本法を応用することにより触媒活性の制御も可能と思われ、新しい展開が可能であることがわかった。アビジンとビオチン標識酵素を用いて調製した酵素超薄膜の製造・保存条件の検討、およびバイオセンサーへの応用として信号増幅の可能性の検討を行った。酵素薄膜の製造の際に、途中で酵素膜を乾燥状態にすると良好な酵素膜が製造できないことが明らかになった。従って、酵素膜製造の一連の工程を全て湿潤状態で行う必要が認められた。また、製造した酵素膜の保存に際しても、膜を乾燥状態にすると酵素膜の性能劣化が著しく加速されることがわかった。これらは、酵素活性自体の低下ではなく、酵素膜構造の劣化や基板からの酵素膜の剥離などに起因するものと推定された。また、本法により20層程度の累積膜を調整すると信号増幅に有用であることがわかった。微小電極センサーへの応用可能性が示唆された。さらに、堅固な構造の薄膜の中に多量の酵素を固定化する方法として、合成高分子である各種ポリアニオンとアビジンの薄膜製造法を検討した。その結果、ポリスチレンスルホン酸やポリビニル硫酸を用いると多量のアビジンを薄膜中に固定化することができた。また、デキストラン硫酸を用いると、アビジンはほぼ単分子層で固定化する事が可能であった。これらの薄膜中でも、アビジンはビオチンに対する結合特性を保持しており、ビオチン標識酵素を多量に固定化するために有効である。また、これらの薄膜は合成高分子を用いているために耐久性に優れており、実用センサーの開発にとり有用な材料となる。
造血発生における組織横断的造血幹細胞動態の理解

造血システムを維持する造血幹細胞は発生過程において様々な造血組織を横断的に移動しながら、恒常的数に達するまで自己複製分裂を繰り返し、最終的に成人造血の場である骨髄に定着する。誕生直前に骨髄造血が始まるとされるが、造血幹細胞がどのように異なる組織間を移行し、骨髄へと定着して恒常的な造血を開始するのか、その詳細なメカニズムは明らかとなっていない。本研究では、造血幹細胞トレーサーマウスを用いて造血幹細胞の組織間分布、組織内配置、数を組織イメージング技術で定性的かつ定量的に解析し、数理モデルから導かれる予測に基づき、組織横断的な造血幹細胞の遊走機序をシングルセル解析により構成的に理解する。得られる結果は、造血幹細胞の末梢血動員、移植後の骨髄再建などの再生医療において有用な知見となりうる。まずはじめに胎児期における造血幹細胞の組織転移を検討した。その結果、造血幹細胞の数は誕生前後で肝臓でピークに達したのち、脾臓や骨髄へと移行して行くことが明らかとなった。また、細胞周期は臓器に関わらず誕生前後において造血幹細胞は非常に盛んに分裂を繰り返していた。これらの結果を元に現在、数理モデルの確立を行っており、今後臓器間の機能的関係性についてアプローチする。また、HSCに蛍光色素tdTomatoを高発現させたマウス(HLF-tdTomato)を用いて組織イメージング技術を行い、胎児骨髄を観察した。その結果、誕生前後の骨髄において造血幹細胞は骨髄内だけでなく髄外にも集積を認め、シングルセルRNA-seqから遺伝子発現の異なる造血幹細胞群であることが示唆された。今後はその生物学意義について機能解析を進めていく予定である。当初、手がかりとして顕微鏡でのデータがメインであったが、その後のコラボレーション展開により数理モデルや組織イメージングが確立され、研究が進んだ。また、イメージングのために必要なマウスの交配も進み、材料や技術的基盤が整ったため。骨髄外に集積する造血幹細胞の性質の解明に向けて、試験管内コロニー形成能や移植後の骨髄再建能を中心に機能的解析を進めていく。組織イメージングについては様々なニッチレポーターを用いてデータの取得とディープラーニング技術を用いた定量化を進めていく。さらに、シングルRNA-seqから示唆される造血幹細胞クラスターについて、制御因子の同定に取り組んでいく。
遠地トリガリングを利用した深部低周波微動のメカニズム解明と震源域の物理状態の推定

西南日本のプレートの沈み込み帯で発生する深部低周波微動が,2003年十勝沖地震,2004年スマトラ-アンダマン地震,2008年四川・〓川地震等による地震波によって誘発される現象を解明し,深さ約30-40kmにおけるプレート境界の物理状態を明らかにした.西南日本のプレートの沈み込み帯で発生する深部低周波微動が,2003年十勝沖地震,2004年スマトラ-アンダマン地震,2008年四川・〓川地震等による地震波によって誘発される現象を解明し,深さ約30-40kmにおけるプレート境界の物理状態を明らかにした.2004年スマトラ地震及び2003年十勝沖地震により放射された地震波によって、西日本で遠地トリガリングされた深部低周波地震・微動の発生メカニズムを調べた。深部低周波地震・微動はプレートの沈み込み帯での現象であり、巨大地震を伴う一連のプレート境界での地球科学的現象を理解するためには、この現象のメカニズム解明が必要不可欠である。主としてHi-netの地震波形記録を解析した。表面波の周期に呼応して誘発微動の振幅が変化していることから、表面波によるトリガリングである。誘発された微動の震源の再決定を行い、より鮮明な震源分布を得た。スペクトル解析により、周期約20秒の表面波によって顕著に誘発されていることが確認された。観測された表面波から、直接、導出した表面波のカーネルを介して地下の歪み・応力の時間変化を抽出する手法を考案した。表面波の中でも、剪断歪みを伴うLove波より、剪断と体積歪みを伴うRayleigh波の方が微動発生との相関が高いように見えた。鉛直伸張・水平収縮の歪み変化に対して最も大きな微動が観測されることが分かった。更に微動はプレート境界に平行な断層運動によって生じると仮定し、クーロン破壊応力変化を求めることで、微動の発生が説明できた。特に2003年十勝沖地震の場合、剪断応力のみを伴うLove波との相関が低いため、やはり体積変化が大きな役割を果たしていると思われ、これは微動の発生に流体が関与していることを示す。応力変化と微動の振幅について定量的な関係から、更にメカニズムの詳細を調べるために、UC Santa CruzのEmily Brodsky氏と議論を行った。深部低周波地震・微動が、巨大地震の表面波によって動的に誘発される現象を利用することで、微動発生メカニズムを調査した。去年度までに、2003年十勝沖地震及び2004年スマトラ・アンダマン地震のRayleigh波通過に伴い、主として体積歪み或いは法線応力が変化することによって、西南日本で観測される深部低周波微動・地震が誘発され、しかもその規模が歪みの大きさに対応して変化していることが明らかとなっていた。地下の震源付近の歪変化を、地表で観測された地震波形と理論的に導出したカーネルを用いて求め、誘発された微動の輻射エネルギーとの関係を定量的に精査した。剪断歪み成分のみを含むS波やLove波ではなく、Rayleigh波で顕著に誘発されることから、流体の関与と間隙水圧が関与していることを確かめ、発生メカニズムのモデルを考えるにあたり、すべり速度・状態依存摩擦構成則を採用した。その結果、深さ約30kmのプレート境界付近に位置する震源域近傍に、スラブから脱水して存在する流体の大きな寄与がなければ、微動の発生が説明できないことを明らかにした。また2008年中に発生した四川・〓川地震によっても微動の誘発が確認された。いくつかの西南日本における事例を、北米のカスケードの沈み込み帯の微動誘発の事例と比較することで、西南日本、東北日本、及びカスケードでの沈み込み帯における流体の分布に相違があることが示唆された。
風土記の基礎的研究

本研究のテーマの一つである風土記受容について『風土記受容史研究』(笠間書院2008)を刊行、同書は奈良時代の風土記編纂から江戸末期までの風土記受容の史的変遷を明らかにしたもので、2009年第26回上代文学会賞を受賞した。また17世紀中期の地下歌人・下河辺長流の著作を中心として、当時における風土記観を考察した。さらに18世紀初頭の風土記を巡る知的ネットワークとして、前田綱紀と京都の知識人の仲介者的役割を果たした菅真静の事蹟を明らかにした。本研究は、和銅6(713)年撰進詔により編纂された風土記について、以下の二つの観点から編纂当時の風土記の姿、及び風土記伝来・受容の歴史を明らかにすることを目的とする。1、風土記本文の復元13世紀後半成立の『釈日本紀』を中心とした風土記逸文の本文研究により、風土記本文の確定をすすめる。2、風土記をめぐる知の継承の解明風土記の受容という観点から、歌学・神道・国学等のサークルにおける、風土記をめぐる知の継承を明らかにする。本研究では、主に13世紀中14世紀初、近世初期における風土記の伝来・風土記観について考察する。本年度の成果として、2008年2月に単行書『風土記受容史研究』(笠間書院)を出版した。本書は、奈良時代の風土記編纂時から江戸末期まで、風土記受容の史的変遷の具体的様相を明らかにしたものであり、受容という観点から風土記を捉えた研究は従来になく、今後の風土記研究はもとより、日本における地誌観等の解明に大きく寄与するものである。出版化にあたる補足調査として、2007年11月に京都・奈良に赴いた。その際に奈良国立博物館の見学、資料収集等を実施、その成果が「「風土記」の世界-地方へのまなざし-」(『文学』第9巻第1号2008・1)である。本論文は風土記記事にあらわれる編纂者「国司」および「郡司」の眼差しを記事より具体的に読み解くとともに、風土記編纂の意図を探究したものである。また京都では、江戸中期、その編著『万葉緯』において、風土記逸文の収集を初めて本格的に行った人物、今井似閑の関連地を調査した。さらにその後、似閑の菩提寺である黒谷・金戒光明寺や似閑の子孫の方等に聞き取り調査を行った。次年度はこれらの情報を元に、似閑関係の史料調査を行う予定である。本年は前年度に行えなかった写本調査として、大阪府立中之島図書館において、契沖、下河辺長流関係の風土記を中心とした写本調査、また三重・本居宣長記念館における宣長関係、および津市周辺にて谷川士清関係資料の閲覧を行った。また中世歌学・神道関係の基本文献を収集した。さらに前年度以前より進めていた近世中期における風土記受容の研究を進め、その成果を「知の仲介者-菅真静『自叙伝』を中心に-」(『日本文学』第57巻第10号2008・10)として発表した。そしてこれまでの研究成果については、上代文学会・古事記学会合同大会(平成21年5月)、鈴木健一編『近世の知』(森話社平成22年発刊予定)等で発表する予定である。さらに風土記受容研究の基本資料として、調査写本についてのデータベース化を進めている。これらの研究によって、風土記に留まらず当時における知のネットワークが具体的に解明されていくことは必至である。
中国古代における社会分業の諸相

3篇の小論の概略を記する。第1篇は「春秋期における農と庶人-四民分業の一端として-」であり本稿の概要は以下の如くである。春秋時代及び周代においては、庶人は農耕者を示す場合もあり、商工業者を含むこともあったが、殊に特徴的なことは在官者も庶人と称されていたことである。庶人の中には在官者と非在官者があったことになる。これに対して戦国期以降では庶人には在官者を含む用例はなくなり、農工商など単に平民を示す用法となる。即ち、春秋期には農耕者層が「農」のほか、「庶人」とも称され、その一方で庶人は役人に仕官した者が含まれることもあったことが窺える。第2篇の「左伝商義釈例-商と賈をめぐって-」では、資料的基盤研究とした。本稿では中国古代の「士農工商」の身分構成に関し、「商」の用例について、『左伝』の史料を通して分析し、併せて商業行為を示す「賈」と比較検討した。両手は国名・人名等の用法では共通だが、商業関係については、「商」は商業、「賈」は此等に加えて、価格、売買及び派生的抽象概念をもつ。商を行商、賈を店売とする旧来の解釈は、『左伝』では適合せず、商と賈は等しく商業行為一般を示すと解すべきである。但し「商農工賈」の一文については、商と賈に商業規模の相違を想定する必要がある。尚、戦国時代以降に多出する「商賈」の語は『左伝』には見られず、商と賈が大略同意味を持ちながら別記されるのが『左伝』の通例である。第3篇の「中国古代における士農工商の形成」では、「士農工商」の序列は『左伝』ではまだ不一定であり、『国語』(斉語)で初めて「士農工商」の用語が現れたのであり、春秋・戦国時代を経過する中で形成されていったことが察せられ、『史記』『漢書』では「士農工商」の順序が定着したものとして用いられていることが判明される。研究課題「中国古代における社会分業の諸相」関して、平成11年の研究の実施については、その史料調査として東洋文庫における収集をふまえ、また中国での実地調査及び史料の確認について北京図書館等で善本史料を実見することが出来、一定の成果を収めることができた。これらに依拠して今年度の研究計画として挙げた「春秋時代の農と庶人の研究」を進めたことにより、論稿として「春秋期における農と庶人」の完成を見た。その結論部分の大略を次に示す。即ち、春秋時代あるいは周代をも含めて、庶人は農耕者を示す場合もあり、商工業者を含むこともあったが、殊に特色的なことは在官者も庶人と称されていたことである。これに対して戦国期以降では庶人には在官の者を含む意味はなくなり、農工商など単に平民を示す用法となる。ということは庶人が非在官であり、士以上の大夫・卿などとの区別が明確化し、延いては士大夫と庶人の相違が判然化したことを意味するものである。