hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
細胞死シグナルと増殖・分化シグナル相互作用の解析

FLASH/casp8ap2の解析を行い、FLASHの発現抑制によって、細胞周期のS期進行が停止しすること、FLASHはARS2(arsenite resisitant protein 2)という分子と会合し、ARS2の発現抑制によっても、細胞周期のS期進行が阻害されることを示した。さらに、FLASHの細胞周期進行活性は、ARS2との会合によって媒介されていることを明らかにした。Death receptorの下流でcaspase-8の活性化を制御する分子として我々が発見・クローニングした巨大分子FLASHが細胞増殖のS期進行に必須の分子であることを見いだしたので、そのS期進行に関わる分子機構を明らかにすることを目的に、またFLASHのconditionalノックアウトマウスを作製・解析することによってその生理機能を明らかにすることを目的に研究を行い下記の結果を得た。A)Tetリプレッサーとレンチウイルスベクターのシステムを用いてFLASH特異的shRNAの発現誘導系を構築し、FLASHのノックダウン誘導によって細胞周期のS期進行が停滞するヒトKB細胞由来株を作製した。B)上記KB細胞株にEGFPで標識したマウスFLASHをレンチウイルスベクターによって導入し、FLASHノックダウンによる表現系がレスキューされることを確認した。さらに、各種欠失変異体FLASHを発現させることにより、従来重要とされていたC末端はS期進行に必須ではないことを明らかにした。C)FLASHと会合する候補分子を、上記C末端欠失変異体FLASHと共免疫沈降する分子としてLC-MS/MS解析で3種類同定した。これらの分子のノックダウンをKB細胞で誘導したところ、一つの分子の発現抑制によって細胞周期S期の進行が停滞した。この分子とFLASHとの結合が細胞周期のS期進行に必須であることを示す実験を行っている。e)FLASHコンディショナルノックアウトマウスの作製のためのコンストラクトを作製し、ヘテロ接合体ES細胞を作製した。我々が発見したDeath receptorであるFasの下流でcaspase-8の活性化を制御する分子として我々が発見・クローニングした巨大分子FLASHが細胞増殖のS期進行に必須の分子であることを見いだしたので、そのS期進行に関わる分子機構を明らかにすべく解析を行った。そして、以下の結果を得た。a)FLASHのN末端のコイルドコイルドメインおよび、C末端側から徐々に削った欠失変異体を作製し、C末端にEGFPを融合した分子として、レンチウイルスベクターでFLASHの発現抑制を抑制できる上記2種類の細胞株に発現させ、FLASHの発現抑制による細胞周期のS期停止にN末端領域が関わるが、C末端領域は関わらないことを示した。そして、FLASH発現抑制による細胞周期停止を回復できるFLASHのC末端欠失変異体と会合する分子としてARS2(arsenite resisntant protein 2)を共免疫沈降法と質量分析法によって同定した。b)同定したFLASHの会合分子ARS2をshRNA発現法で発現抑制すると、FLASHの発現抑制と同じ細胞周期のS期進行の停止という表現系を示した。c)FLASHコンディショナルノックアウトマウスを作製すべく、組み換え型ES細胞を作製した。d)FLASHをコンディショナルにノックダウンできるES細胞株を樹立し、ES細胞やin vitroで分化させた細胞においてFLASHのノックアウトを誘導し、その効果の解析を開始した。
グローバル金融危機下の外国人投資家の行動と日本の株式の脆弱性

本研究の目的は、グローバル金融危機下における外国人投資家の投資行動とその日本の株価へのインパクトを分析することで、これまで学術的には明確に認識されてこなかった、外国人投資家が保有比率を高めていることに伴い生じている、日本の株式のリスク要因を明らかにすることである。今後グローバル金融危機が勃発した際に、大規模な外国人投資家の売り圧力と、結果としての強い短期的な株価下落圧力に晒されやすいのがどのような属性を持った株式であるのかを、2008年度の金融危機の際の経験を踏まえて、外国人投資家の保有構造から明らかにすることが本研究の眼目である。平成29年度及び平成30年度は、本研究の第一段階として、2008年度のグローバル金融危機の時期における外国人投資家の投資行動と、その株価へのインパクトにつき、予備的な調査を行った。調査結果が示すところによれば、2008年度に外国人投資家が持ち株比率を大幅に減らした株式は、短期的な負の超過リターン及びボラティリティの増加を経験している。我々はKim and Iwasawa(2016)において、韓国の株式を対象として上の点を調査したが、その結果と整合的な結果であった。したがって、ここまでの結果は想定通りである。平成31年度は、本研究の第二段階として、グローバル金融危機の時期における外国人投資家の行動を、金融危機以前の外国人投資家の行動によって予測することを目標とする探索を行う。平成30年度は、本研究の第一段階として、2008年度のグローバル金融危機の時期における外国人投資家の投資行動と、その株価へのインパクトにつき、予備的な調査を行うことを目標としていた。実際には、計画した調査を行い、また調査結果は、Kim and Iwasawa(2016)の結果と整合的な結果であり、当初想定通りのものであった。したがって、ここまでの進捗はおおむね順調であるといえる。これまでおおむね順調に推移しているので、今後も当初計画に沿った形で研究を進める。平成31年度は、グローバル金融危機の時期における外国人投資家の行動を、金融危機以前の外国人投資家の行動によって予測することを目標とする探索を行う。平成29年度は、本研究の第一段階として、2008年度のグローバル金融危機の時期における外国人投資家の投資行動と、その株価へのインパクトにつき、予備的な調査を行った。平成30年度以降は、本研究は第二段階として、グローバル金融危機の時期における外国人投資家の行動を、金融危機以前の外国人投資家の行動によって予測することを目標とする探索を行う。平成29年度は、本研究の第一段階として、2008年度のグローバル金融危機の時期における外国人投資家の投資行動と、その株価へのインパクトにつき、予備的な調査を行うことを目標としていた。

平成30年度は、本研究の第一段階として、2008年度のグローバル金融危機の時期における外国人投資家の投資行動と、その株価へのインパクトにつき、予備的な調査を行うことを目標としていた。実際には、計画した調査を行い、また調査結果は、Kim and Iwasawa(2016)の結果と整合的な結果であり、当初想定通りのものであった。したがって、ここまでの進捗はおおむね順調であるといえる。これまでおおむね順調に推移しているので、今後も当初計画に沿った形で研究を進める。平成30年度は、グローバル金融危機の時期における外国人投資家の行動を、金融危機以前の外国人投資家の行動によって予測することを目標とする探索を行う。平成31年度は、グローバル金融危機の時期における外国人投資家の行動を、金融危機以前の外国人投資家の行動によって予測することを目標とする探索を行う。物品費の代替としてデータベースを購入したが、当初計画より安く入手することができた。次年度に物品費の補足として使用する計画である。
日本列島北部の更新世/完新世移行期における居住形態と文化形成に関する研究

日本列島では北海道と本州以南で、寒冷乾燥気候の卓越した氷期の更新世から温暖湿潤気候の完新世への移行に伴う人類の適応行動が異なると予想されるため、その具体的な様相の解明を試みた.その結果、本州以南では、いち早く更新世末に土器文化が開始され、完新世初頭(1万年前)には定住生活・文化の確立が見られたが、温暖化が遅れて進行した北海道では、更新世以来の遊動型狩猟採集生活が継続し、8000年前になってようやく本州系の土器文化の定着をみたことが明らかとなった日本列島では北海道と本州以南で、寒冷乾燥気候の卓越した氷期の更新世から温暖湿潤気候の完新世への移行に伴う人類の適応行動が異なると予想されるため、その具体的な様相の解明を試みた.その結果、本州以南では、いち早く更新世末に土器文化が開始され、完新世初頭(1万年前)には定住生活・文化の確立が見られたが、温暖化が遅れて進行した北海道では、更新世以来の遊動型狩猟採集生活が継続し、8000年前になってようやく本州系の土器文化の定着をみたことが明らかとなった世界規模で興起した環境変動である更新世/完新世移行期は、考古学的には旧石器時代から新石器時代への過渡期に相当する人類史上の最大の画期のひとつである。北海道を中心とする列島北部は、本州以南よりも定住的な居住様式の発達が遅れたため、特異な文化形成の移行プロセスを有している。本研究では、いまだ十分に解明されていないこのプロセスを具体的に明らかにすることを目的としている。研究初年度にあたる平成17年度は、居住形態論の具体的な分析を意図して、10月に3週間、北海道富良野市に所在する東麓郷1遺跡の発掘調査を実施した。同遺跡は、20年前に第1次調査が実施されており、北海道ではほぼ唯一の、移行期段階の土器を有する有舌尖頭器石器群を検出したことで知られているため、その具体的な様相の確認と新たな資料の取得を目的とした発掘調査を行った。当時得られていなかった環境・資源等のデータの取得と、実施されていない年代測定資料の採取等も行った。出土資料と併せて、現在整理・分析中である。またこの遺跡の調査は、来年度以降も継続して実施する予定である。発掘調査とは別に、北海道および周辺地域の資料調査と既存資料の整理や、考古学的・古環境学的データの収集と整理も並行して実施した。世界規模で興起した環境変動である更新世/完新世移行期は、考古学的には旧石器時代から新石器時代への過渡期に相当する人類史上最大の画期の一つである。北海道を中心とする列島北部は、本州以南よりも定住的な居住様式の発達が遅れる。特に北海道は、更新世には大陸から張り出す「古北海道半島」であったため、特異な文化形成の移行プロセスを有している。本研究は、いまだ十分には解明されていないこのプロセスを具体的に明らかにすることを目的としている。研究第二年度にあたる平成18年度は、17年度に発掘調査を行った富良野市東麓郷1遺跡の資料整理を行った。また平成19年度に発掘予定の調査遺跡の候補地を探るため、10月に北見市地域での一般調査を実施した。その結果堆積環境の良好な北見市吉井沢遺跡をその候補遺跡に選定した。また、40年ほど前に東京大学が発掘調査を実施したが簡単な略報しか報告されていない北見市紅葉山遺跡の資料整理を行った。これらの成果はプロジェクト終了時に刊行予定の成果報告書に収録を予定している。これらの資料整理とは別に、ロシア沿海州等の周辺地域の資料調査や、古環境データの収集、年代測定データの収集等も合わせて実施した。更新世/完新世移行期は,全地球規模の環境変動に伴う人類史上の一大画期である。北海道を中心とする列島北部は,本州以南がいち早く縄文化した後も,約5000年間にわたって旧石器時代的な遊動生活が継続していた。この間特異な文化形成が行われていたと推定されているが,その実態は十分には解明されていない。その具体的な内容について,主として遺跡に残された居住形態の痕跡から,往時の人間集団によって採用されていた生業,生活行動戦略の実態を解明し文化形成の内実を明らかにすることを目的としている。研究第三年度にあたる平成19年度は,昨年までの研究に引き続き,調査と資料整理を継続して実施した。10月には昨年度予備調査を行った北見市吉井沢遺跡の本調査を実施し,道内では例が少ない未撹乱の文化層から,後期細石刃石器群期に唇する忍路子石器群の良好な遺物集中の検出に成功した。12月にかけて,同遺跡の予備的な資料整理を行い,17年度に調査した富良野市東麓郷1遺跡の基礎整理と分析をほぼ終了した。また東京大学が所蔵する北見市紅葉山遺跡出土資料の分析を継続して行っている。これらの成果は,プロジェクト終了時に刊行を計画している成果報告書に収録を予定している。また,昨年度に引き続き,4月に東京大学において,全国から第一線で活躍している研究者を集めた公開シンポジウム『縄文文化の成立-草創期から早期へ-』を開催した。予稿集を刊行したが,昨年度と今年度の二回のシンポジウムの成果を合わせた形で,本年5月に論集『縄文化の構造変動』(六一書房)を刊行する予定である。更新世/

完新世移行期は、地球規模で見られる氷期から現世にかけての気候・自然環境の大変動期にあだり、同時に人類文化・社会の一大画期に相当する。日本列島もその例外ではないが、北海道を中心とする北部地域と本州以南の地域では、その移行期に時間的なズレがあり、文化的内容も異なる。本研究は、当該地域の自然環境.・年代データを蓄積し、人類活動の展開と総合することにより、その具体的な実態を明らかにすることを目的とした。研究は主として、4度の公開シンポジウムの開催、既存考古・自然環境データの解析、核心的遺跡の発掘調査(2箇所)、既存資料の再整理の4点から実施した。その結果、本州以南では,1万年前の完新世初頭では、すでに温暖湿潤な安定した気候環境に推移し、同時に今日の動植物相への移行を完了していたのに対して、北海道ではこの移行が遅れ、8000年前の縄文時代早期中葉に完成する。そのため考古学的な文化の移行の様相も異なり、本州以南では、15000年前に縄文時代が開始され、更新世末期の晩氷期を通じて草創期の土器文化が継続し、完新世初頭で縄文早期に移行するが、対照的に北海道では、晩氷期も後期旧石器時代と同様の細石刃文化が継続し、完新世初頭には遺跡がほぼなくなり、8000年前になってやっと縄文早期の土器文化が登場することがわかちた。つまり、本州以南では、いち早く縄文型の定着・定住生活が開始されるが、一方北海道では、8000年前まで旧石器的な遊動型の生活行動が続いていたことを示している。これらの成果は、4冊のシンポジウム論集と1冊の研究書の公刊として公開した。
アルツハイマー病原因遺伝子プレセリニン機能障害によるシナプス変性機構の解明

家族性アルツハイマー病の原因遺伝子である、プレセニリン1のシナプスにおける働きに着目し、本研究期間中に以下のことを明らかにした。1)プレセニリン1はカドヘリンを神経細胞の興奮性伝達に応じて切断し、核シグナルを伝える働きがあること。2)プレセニリン1がシナプス結合に必須の細胞接着分子であるN-カドヘリンと結合し、細胞生存的なシグナルを伝える働きがあること。3)この結合の強度はリン酸化酵素であるGSKによってプレセニリン1のC末端がリン酸化をうけることで調節されていること。4)GSKによるリン酸化は、プレセニリンによるカドヘリンの切断を抑制する作用もあること。5)このカドヘリン切断は、アミロイド蛋白で神経細胞を処置することでも同様に抑制されること。以上の結果より、プレセニリン1がシナプス部において、カドヘリンと結合、あるいは切断を行うことで、シナプス結合の強度を調節し、その可塑性に寄与している可能性に加え、シナプス結合自体がプレセニリン1を介して、神経細胞生存的なシグナルを伝えている可能性が示唆された。さらに、カドヘリンは、プレセニリン1との結合を介してその高次構造を変化させ、毒性の強いAβ42の産生を減少させる機能を持っていることを明らかにして、シナプス結合、シナプス活動が、ダイレクトにアルツハイマー病の原因と考えられるアミロイド産生に影響を与えている可能性を示した。また、アルツハイマー病において活性が上昇していると考えられるGSKは、このシグナル伝達を抑制することで病態に関与している可能性があること、また、アルツハイマー病の脳内で増加していると考えられるアミロイド蛋白も、プレセニリンによるシナプス結合の調節を阻害することで病態に関与している可能性があることが示唆された。以上の結果は、アルツハイマー病をシナプスの病気ととらえ直し、その病態と治療を探る上で重要な知見と考えられる。
不同沈下した小規模建築物への発泡ウレタン杭による急速沈下修正工法の実用化

本研究の目的は,発泡ウレタン杭の実用化である.発泡ウレタン杭を実用化させるためには,支持力特性および発泡圧力による地盤内の影響を把握しなければならない.そこで,支持力特性は発泡ウレタン杭を模擬した剛性の低い模型杭を用いて載荷実験を実施した,また,発泡圧力による地盤の影響は,発泡ウレタン杭を模擬した孔内水平載荷実験と発泡圧力の伝達を把握するために発泡ウレタンの注入実験を実施した.結果として,模型実験により,支持力特性および発泡圧力の伝達範囲について確かめた.本研究の目的は,不同沈下による被害を受けた小規模建築物における硬質発泡ウレタン杭を用いた急速沈下修正工法の実用化である.24年度の研究では,適切な設計を行う上で硬質発泡ウレタン杭の支持力特性および支持力メカニズムの把握が重要となる.硬質発泡ウレタンは,既存で使用されているソイルセメントや鋼管に比べ比重が低く水中でも浮かぶ特性を持っている.その一方で,ソイルセメント杭や鋼管杭に比べ剛性が低く圧縮性が高い性質を持ち合わせているため,構造物の接地圧力が高いと,硬質発泡ウレタン杭が変形し十分な支持力が発揮できないと危惧される.そこで実験では,硬質発泡ウレタン杭を模擬した比較的に圧縮性の高い模型杭と,その比較のため鋼管杭を模擬した圧縮性の低い模型杭を用い鉛直載荷実験を実施し,支持力挙動を把握した.また,模型実験を結果から,荷重伝達法を用い硬質発泡ウレタン杭の支持力挙動を解析した.その結果,比較的圧縮性の高い硬質発泡ウレタン杭を用いても対象とする地盤が軟弱であれば,住宅などの接地圧力が小さい構造物であれば,十分に支持力を担保できることが確認できた。また,実験では,パイルド・ラフト(杭付きべた基礎)構造形式についても実験を実施しており,単杭の載荷実験とパイルド・ラフト基礎形式の載荷実験を比較すると硬質発泡ウレタン杭を模擬した模型杭では,1本当たりの支持力がパイルド・ラフト基礎形式の方が高い支持力を得られることが実験結果から確認できた.本研究の目的は,不同沈下により被害を受けた小規模構造物における硬質発泡ウレタン杭を用いた急速沈下修正工法の実用化である.実用化にあたり,硬質発泡ウレタン杭の支持力特性および杭を作製する際に生じる発泡圧力が地盤に与える影響の把握が重要となる.硬質発泡ウレタンは,既存で使用されているソイルセメントや鋼管杭に比べ比重が低く水中において浮かぶ特性を持っている.その一方で,それらの杭に比べ剛性が低く圧縮性が高い性質を併せ持っている.そのため,構造物の接地圧力が高いと,硬質発泡ウレタン杭が変形し十分な支持力が発揮できないことが危惧される.23年度は,発泡ウレタン杭を模擬した,孔内水平載荷装置を作製し,模型地盤および現地盤で実施して水平地盤応力と水平地盤反力との関係を調べた. 24年度は,硬質発泡ウレタン杭の支持力特性を把握するために模型実験を実施した.模型実験では,硬質発泡ウレタンを模擬した比較的圧縮性が高い模型杭とその比較のため鋼管杭を模擬した比較的圧縮性が低い模型杭を用い鉛直載荷実験を実施し,支持力特性を把握した.また,模型実験結果から,荷重伝達法を用い硬質発泡ウレタン杭の支持力挙動を解析した.25年度は,発泡によって地盤の押し広げた際の周面摩擦力に与える影響を空洞化膨張理論に基づく解析および心材と発泡ウレタンとの摩擦力について検討を行った.心材と発泡ウレタンとの摩擦力については,実物の硬質発泡ウレタン杭を作製し,その杭を高さ20cmに切り分け,芯材を鉛直載荷することで摩擦力を計測した.当初予定した手法と一部異なる手法を用いたが,目的としていた硬質発泡ウレタン杭を用いた急速沈下修正工法の実用化にむけて概ね十分な成果が得られた.これらの結果を基に今後は実地盤で硬質発泡ウレタン杭を作製し,支持力特性を調べ実用化に向けて研究を進める予定である.本研究の目的は,発泡ウレタン杭の実用化である.発泡ウレタン杭を実用化させるためには,支持力特性および発泡圧力による地盤内の影響を把握しなければならない.そこで,支持力特性は発泡ウレタン杭を模擬した剛性の低い模型杭を用いて載荷実験を実施した,また,発泡圧力による地盤の影響は,発泡ウレタン杭を模擬した孔内水平載荷実験と発泡圧力の伝達を把握するために発泡ウレタンの注入実験を実施した.結果として,模型実験により,支持力特性および発泡圧力の伝達範囲について確かめた.本研究の目的は,不同沈下による被害を受けた小規模建築物における硬質発泡ウレタン杭を用いた急速沈下修正工法の実用化である.23年度の研究実施計画は,適切な設計を行う上で発泡圧力に対する地盤応力の変化およびその影響範囲の把握である.硬質発泡ウレタン杭を模擬した簡易水平載荷装置を用いて実地盤で実施し,水平方向の地盤剛性と発泡圧力についての相互作用の確認を行った.硬質発泡ウレタン杭は,円筒状に掘削した穴にイソシアネートとポリオールの2種類の薬液を混合・攪拌させながら注入することで,体積が膨張し杭状に発泡ウレタンが生成される.この発泡ウレタンが生成される際に発する膨張圧力により周辺地盤を締め固め,杭状地盤改良体と地盤の間の摩擦力が増加し住宅を支持することが期待できる.硬質発泡ウレタンの性質として,薬液の注入体積と発泡した後の体積との比に応じて発泡時の圧力が決まる.硬質発泡ウレタン杭の設計を行う際に地盤の水平方向の圧力-変位特性が判れば,適切な注入量や発泡ウレタン杭の出来高が予測できる.

そこで,地盤の水平方向の圧力-変位特性を確かめるために,硬質発泡ウレタン杭を模擬した,簡易孔内水平載荷装置を模型地盤および実地盤で実施した.実地盤で行った実験から,地盤の水平方向の変形特性と硬質発泡ウレタン杭を模擬した装置の水平方向の圧力と体積変化との関係性が得られた.これらの実験結果と硬質発泡ウレタンの体積比-発泡圧力関係と比較したところ高い相関性が見られた.23年度の研究のまとめとして,簡易水平載荷装置を用いることにより,水平方向の圧力-変位特性の把握できる可能性が見いだされた.また,硬質発泡ウレタンの性質である体積比ー発泡圧力の関係と合わせることにより,硬質発泡ウレタン杭の設計に適用できることが示唆された.本研究の目的は,不同沈下による被害を受けた小規模建築物における硬質発泡ウレタン杭を用いた急速沈下修正工法の実用化である.24年度の目標であった硬質発泡ウレタン杭の支持力特性をおおむね把握することができた.これまで行ってきた地盤剛性と発泡圧力についての相互作用と支持力特性を組み合わせることによって,実用化に向けた硬質発泡ウレタン杭の設計方法が提案できる.しかし,硬質発泡ウレタン杭の支持力の解析および地盤剛性と発泡圧力についての相互作用の検証が十分とはいえないが,おおむね順調に進展しているといえる.本研究の目的は,不同沈下による被害を受けた小規模建築物における硬質発泡ウレタン杭を用いた急速沈下修正工法の実用化である.23年度の目標であった地盤剛性と発泡圧力についての相互作用の確認が行え,実用化に向けた硬質発泡ウレタン杭の設計方法が提案できる.しかし,拘束圧を変化させた模型実験での検証が足りないが,おおむね順調に進展しているといえる.平成25年度は,硬質発泡ウレタン杭の支持力の解析の精度を高めるために,引き続き模型地盤で鉛直載荷実験を実施し,その結果と解析結果を照らし合わせ解析精度を向上させる.また,地盤の変形特性は,土質の種類などでも大きく異なるため,引き続き,硬質発泡ウレタン杭を模擬した簡易水平載荷装置を用いて実地盤で実施し,水平方向の地盤剛性と発泡圧力についての相互作用の確認を行う.平成24年度は,拘束圧を変化させた模型地盤で実験を実施し,地盤剛性と発泡圧力についての相互作用の検証と遠心載荷試験を実施し硬質発泡ウレタン杭の支持力特性を確認を行う.なお模型杭については,23年度研究で得られた知見から,杭径等を決定し実験を実施する.また,地盤の変形特性は,土質の種類などでも大きく異なるため,引き続き,硬質発泡ウレタン杭を模擬した簡易水平載荷装置を用いて実地盤で実施し,水平方向の地盤剛性と発泡圧力についての相互作用の確認を行う.物品費については,予定通り執行し,計画通りに研究を進める予定である.設備備品経費として,遠心載荷実験における鉛直載荷装置の製作する.遠心場での装置のため,特殊な加工が必要となるため,実験の条件および用途に合わせた物となる.また,消耗品として,鉛直支持力を計測するためのロードセル等をを購入する予定である.なお,分担者が研究費の執行を行えなかった理由としては,地盤剛性と発泡圧力についての相互作用を確認するための実験に時間がかかり,拘束圧を変化させた模型実験での検証実験が十分に実施できなかったためである.従って,実験を実施するにあたり,注入装置等を購入する.
脳高次機能の発達と老化の制御に共通する分子機構の解明

変異マウスの解析から大脳皮質に高発現する転写抑制因子RP58の発現減少は、学習記憶障害を惹起することを見出し、「RP58量が、高次脳機能を量的に規定している」ことを着想した。本研究では、RP58発現低下マウス、及びRP58の発現量を時期特異的に自在に増減させうる変異マウスを用いて、一つの転写抑制因子の発現減少が、なぜ脳機能不全を惹起するのかを解明する。その結果、知的能力獲得と喪失に共通する、もしくは、特徴付ける分子の同定を目指す。本研究は、知的能力の分子メカニズムの解明を目指すもので、将来、知的障害と加齢性脳障害の予防・治療法の抜本的開発の基礎的知見を提供する。RP58ヘテロマウスは加齢早期(4ー5ヶ月令)での空間認知機能の低下、新たに脳波により「物体認識時のガンマ波の増加」が著明に減弱していることを見い出した。また組織解析によりミクログリアの活性化を報告したが、同時にssDNA陽性のニューロンが増加していることを見出した。DNA修復マーカーであるガンマH2AXも陽性であった。したがって、RP58ヘテロマウスでは、加齢早期に老齢期に見られる二本鎖DNA損傷が増加、あるいはその修復の低下が考えられる。RP58の発現低下が二本鎖DNA損傷を増加させるということは、体細胞変異による老化や発ガンに直接的に関与する可能性があり興味深い。またミクログリアの活性の異常亢進を抑制するために離乳直後よりドキシサイクリンを投与すると、認知機能低下を防止し、RP58変異による知的障害の治療法となる可能性があるRP58TetOマウスとActin-tTSマウスを交配することで、RP58発現が低下し、多動などの行動異常が確認された。さらに生後3Wまでドキシサイクリン含有えさでRP58の発現低下を抑制し、その後、RP58を低下させたところ、物体位置認識異常が検出された。このことは、脳の形成以降のRP58の必要性を示している。RP58ヘテロマウスで、各種の脳老化マーカーが早期に出現することを確認した。またTeTO・tTS及びTeTO・tTA系によって、RP58発現を人為的に制御し、行動異常を検出することができたため。RP58の減少により、DNA修復が低下するメカニズムを明らかにする。また、TeT0・tTA系によりRP58の発現を上昇させることで、脳老化を防げるか否か検証する。
中国近代文献学―余嘉錫の総合的研究

中国近代の代表的な文献学者である、余嘉錫(1884-1955)に関する総合的研究を遂行し、その著書『目録学発微』を研究し、翻訳・注釈・解題を作成し、古勝隆一・嘉瀬達男・内山直樹訳『目録学発微』(平凡社、2013年)として出版した。同時に、中国の北京大学に収蔵されている余嘉錫旧蔵書についても、調査を行った。本研究計画では、中国近代の代表的文献学者である余嘉錫(1884-1956)に関する総合的な研究をおこない、それにより、古代から近代に至るまでの中国文献学を総括し、今日の文献学研究を反省することを目指している。本年度は、その初年度に当たり、具体的な計画の遂行方法について、議論を重ね、以下の4点について、実績を挙げることができた。(1)計画の遂行方法についての合意形成。本研究計画では、研究代表者と2名の研究分担者とともに、2名の研究協力者、1名の海外研究協力者を置くが、2010年6月、国内にいる5名のメンバー全員が集い、今後の研究計画の実施について議論を深めた。(2)『四庫提要辨証』の解読を開始した。役割分担を決め、具体的な作業を開始した。(3) 2010年9月、2名のメンバーが、海外研究協力者の協力を得て、北京大学の中国古代史研究中心図書館に収められる余嘉錫の旧蔵書、「読已見書斎」の調査を行い、多くの知見を得た。(4)申請書に記入したとおり、ウェブサイト「中国近代文献学-余嘉錫の総合的研究」(http://yujiaxi.wordpress.com/)を開設した。今後とも、情報の更新や、さらなる内容の充実が必要であるが、初年度中にサイトを設け、情報発信ならびに学術交流の場を得ることができたことは、本年度における最大の成果であると考える。以上の4点について、おおむね所期の計画通りに進行しており、順調に研究に着手することができたと考えている。本研究においては、次の4点を達成することにより、中国古典文献学の基本的な視座を得ることを目的とする。(1)余嘉錫文献学の最大の成果、『四庫提要弁証』二十四巻を精密に読解し、特に方法論にかかわる叙述を抽出・整理して体系化するとともに、その具体的応用の諸相を個別の文献に即して例示する。(2)余嘉錫を同時代の代表的文献学者と比較し、また同時代の学術的背景と照合することにより、余嘉錫文献学を中国文献学史および中国近代学術の中に正確に位置づけ、さらに今日の文献学研究に対するその貢献を明らかにする。(3)中国における現地調査(資料調査・聞き取り調査)を含め、綿密な情報蒐集を実施し、余嘉錫に関する伝記史料の集成、ならびに余嘉錫の著作目録、詳細な年譜の作成を行う。(4)上記の成果を印刷物およびウェブサイト上で積極的に公開し、各方面から意見を徴する。上記の研究計画に基づき、本年度は、以下の通り、研究を進展させる。(1)前年度に引き続き、『四庫提要弁証』二十四巻の読解と分析を継続する。得られた知見は、順次、ウェブサイト「中国近代文献学-余嘉錫の総合的研究」(http://yujiaxi.wordpress.com/上にて公開する。(2)中国文献学史および中国近代学術のなかに余嘉錫を位置づけるため、民国期に多数刊行された学術雑誌(『輔仁学誌』『国学季刊』など)を蒐集し、それらのうちから有益な論文を発掘し、リストを作製して読解を進める。また、特に近代文献学の到達点を清朝のそれとの比較において明らかにするため、清朝文献学の重要著作を蒐集し、読解する。(3)余嘉錫に関する研究のため、中国北京市、北京大学において現地調査を行う。(4)余嘉錫の著作『目録學發微』の訳注を完成させる。まず、余嘉錫の代表的な著書であり、その文献学を知る重要な手がかりである、『目録学発微』を翻訳・注釈し、解題を付した、『目録学発微』(平凡社、2013年)を出版することができた。余嘉錫の文献学についての十分な研究に基づき、専門的知識を盛り込んだ訳注となったものと自負する。この日本語訳に付した古勝隆一「解題」は、余嘉錫目録学に関する重要な知見を提示したものである。なお、この翻訳については、慶應義塾大学斯道文庫の高橋智教授が、『東方』第393号(2013年10月)誌上にて書評のうえ紹介されている。我が国においては現在の段階で、余嘉錫の文献学については、本研究計画の研究代表者・研究分担者がもっとも積極的に研究を進めていることを内外に示すことができたものと自負する。あわせて、『古書通例』『目録学発微』の両書につき、国内外の各図書館の蔵本を踏まえた上で、系統的な調査を完了することができた。この成果は、嘉瀬達男

「余嘉錫『古書通例』『目録学発微』の版本と成立過程」、『小樽商科大学人文研究』第124号(2012年)として世に問うことができた。次に、中華人民共和国の北京大学に所蔵されている余嘉錫氏旧蔵書について、2010年9月、現地を訪問し予備的な調査を行うこともできた。そして、これらの成果を「中国近代文献学ー余嘉錫の総合的研究」として、ウェブ上で公開することができ、一般読者への社会還元の役割を果たしている。平成24年度は、研究代表者がドイツ・ミュンスター大学にてアレクサンダー・フォン・フンボルト学者として訪問研究を行ったため、研究分担者との研究集会を催すことはできなかった。しかし本研究にとっては、大きな進展があった。それは余嘉錫の著書である『目録学発微』を、研究代表者と研究分担者2名の協力によって訳出し終えたことである。余嘉錫文献学研究にとっては、大きな意義のある成果となろう。同書は、25年度内に正式に出版される予定である。『目録学発微』訳出の基礎として、研究分担者である嘉瀬達男が「余嘉錫『古書通例』『目録学発微』の版本と成立過程」(『小樽商科大学人文研究』124)を発表し、たいへん複雑な同書諸版の関係を解明しえたのも、本年度の重要な成果である。また、研究計画の主要な柱である『四庫提要辨証』の読解・分析も着実に進んだ。総じて、研究計画が順調に進んだ一年であった。研究代表者、研究分担者、研究協力者が互いに遠隔地に居住しているため、デジタル環境を整備して研究協力を活性化することが必要であったが、これについては、ウェブ上のプラットフォームの整備が十分にできたことが、研究を円滑に進めている。昨年度は資料の電子化も終了した。今後は、これらの基盤をもとに、研究成果を蓄積してゆく。25年度が最終年度であるため、記入しない。研究集会が催せなかったことは、当初の計画をはずれるものであった。しかし、本研究の研究計画に盛り込んでいなかった『目録学発微』を完訳し、詳しい注釈を付けられたことの学術的意義は大きいと考える。今後の研究の推進方法については、すでに、計画段階で定めたとおりであり、特に変更点はない。来年度が最終年度であるため、来年度において、研究計画を完成させる予定である。まず第一に『四庫提要辨証』の読解・分析を完成させ、ウェブサイト「中国近代文献学ー余嘉錫の総合的研究」上(http://yujiaxi.wordpress.com/)に公開すること。第二に『目録学発微』を正式に出版すること。第三に、この研究計画により得られたさまざまな知見を、上記のウェブサイトにて公開し、広く一般の方に成果を還元すること。以上の方法により、この研究計画を完成させたい。
キュルテペ出土の粘土板文書及びカマン・カレホユック出土の印影の保存修復と研究

1)カマン・カレホユックの発掘調査:第1518次調査(20002003年)は文化編年の構築を主目的とする北発掘区を中心として、主に第III層(紀元前2千年紀)の建築遺構を調査した。印影付粘土塊が多数出土している「円形遺構1」については第16次調査で発掘を完了し、周囲の建築遺構、特に古ヒッタイト時代(IIIb層)の大遺構との関連に調査の重点が置かれた。2)保存修復:発掘現場、主には遺跡近くのアナトリア考古学研究所内の施設で出土遺物の保存修復を行った。粘土板文書や印影などの土製品に関しては接合等の物理的処置、薬品による材質強化などの保存処理を施した。また焼成用の炉を用いて焼成実験を行い、土製品の保存に適した焼成温度、焼成時間のデータの蓄積に努めた。3)化学分析:主に蛍光X線分析装置による粘土の化学組成の分析が行われ、時代によって化学組成に顕著な変化のみられることが明らかにされた。4)古アッシリア商業文書の研究:キュルテペ文書の調査研究は、アンカラのアナトリア文明博物館で主に粘土板文書の筆写作業を行った。筆写作業は出土年別に進められ、2000年に1981年、1982年に出土した文書、また2001年、2002年には1996年に出土した文書、都合約150点を筆写した。文書の内容は商取引に関する書簡、債務証書、裁判記録が中心となるが、その中にはキュルテペ文書の年代付けに関わる重要な文書も含まれている。また2001年の第16次調査では、キュルテペ文書と同時代の文書がカマン・カレホユックからも出土した。5)印章資料の研究:カマン・カレホユック北発掘区の「円形遺構1」出土の印影付粘土塊の研究を中心に行なった。印影の特徴からそのほとんどは前15世紀末から前14世紀中頃のヒッタイト`中王国'時代末期に年代付けられ、ヒッタイト印章研究の貴重な資料となっている。20002003年は印面の象形文字、装飾の形式分類、写真撮影、図面作成を進めるとともに、他遺跡出土の資料との比較考察を通して、そのヒッタイト印章全体における位置付け、地方的特性などをより明確にしていくことに努めた。1.発掘調査:第15次カマン・カレホユックの発掘調査は、中央アナトリアの文化編年の構築を目的としている北区で実施した。今次の調査では、古ヒッタイト時代(III層b)の大遺構(神殿址?)と'円形遺構'、および古アッシリア時代(III層c)の遺構などが主な調査対象となった。印影の多数出土している'円形遺構'については、東側の部分の発掘を行い、一部を残してほぼ完掘した。また新たに2基の'円形遺構'が確認されている。(2000年7月9月)2.保存修復:保存修復作業は、カマン・カレホユック遺跡近くにあるアナトリア考古学研究所内の施設で行った。'円形遺構

'出土の印影の保存修復は、第14次調査までに出土している印影を含めて早急に保存処理する必要のあるもの、資料価値の高いものを中心に進められた。またキュルテペ出土の古アッシリア時代の粘土板文書に関しては、保存状況の悪い約100点について破損部の接合などの応急的な処置がとられた。(2000年7月10月)3.キュルテペ文書の研究:アンカラのアナトリア文明博物館所蔵のキュルテペ文書の調査研究は、主として1981年および1982年に出土した50点余りの粘土板文書の筆写作業を行った。文書の内容は商取引に関する書簡、債務証書などが中心となるが、その中にはキュルテペ文書の年代付けに重要な意味をもつものも含まれている。(2000年8月)4.印影の研究: '円形遺構'出土の印影の数はすでに一千点余りに達し、今次の調査でも破片を含めて約100点が発見されている。今回の調査では、新たに出土した印影を中心に分類、整理作業、写真撮影を行うとともに、一部図面の作製に入った。印面に記される文字は通常「ヒッタイト象形文字」であるが、今回初めて楔形文字の書かれている例が確認され、注目されている。(2000年9月10月)1.発掘調査:第16次カマン・カレホユック発掘調査は、15次調査に引き続き北区のIII層(紀元前2千年紀)の遺構を中心に行われた。今回の調査では古ヒッタイト時代(III層b)の大遺構と'円形遺構'との関係、ヒッタイト帝国期(III層a)の遺構の確認など、III層の層序的前後関係の把握に重点が置かれ、また印影の多数出土している'円形遺構'の発掘を完了した。今回出土した遺物の中では、特に古アッシリア商人居留地時代のほぼ完形の粘土板文書が注目される。(2001年6月9月)2.保存修復:発掘現場、主には遺跡近くのアナトリア考古学研究所内の施設で行った。'円形遺構'出土の印影については、接合等の物理的処置、薬品による材質強化などの保存処理を施すとともに、胎土の化学組成に関する分析が行われた。またキュルテペから数十枚の粘土板文書が火を受けて塊状に固まったものが持ち込まれ、その分離、保存処置が構じられた。なお日本から輸送された焼成用の窯による焼成実験は技術的な問題もあり、本年は準備段階にとどまった。(2001年7月10月)3.古アッシリア文書の研究:本年は、1996年にキュルテペのカールム(アッシリア人商業居留区)から出土した粘土板文書のうち58点について研究を行った(於アンカラのアナトリア文明博物館)。その大半は印影をもつ粘土の封筒に覆われた債務証書及び書簡であることが確認された。(2001年8月)4.印影の研究:引き続き'円形遺構'出土の印影の分類、整理作業、図面作成を行った。また従来の写真撮影に新たにデジタルカメラによる撮影を加えて、コンピューター処理の簡略化を進めた。(2001年9月10月)1.発掘調査:2002年度第17次調査も文化編年の構築を主目的とする北発掘区を中心として、主に第III層(紀元前2千年紀)の建築遺構を調査した。"円形遺構"(印影が多数出土したものとは別)の床面から麦が大量に検出され、この遺構が貯蔵庫であった可能性が強まった。また遺丘周辺の磁気探査により同様な"円形遺構"の存在が新たに確認された。(2002年6月9月)2.保存修復:発掘現場近くのアナトリア考古学研究所内の施設で、引き続き出土遺物の保存修復作業が行われた。日本から搬入した窯による焼成実験を本格化し、データーの蓄積に努めた。ただ窯の温度調節にやや難があり、今後の課題となった。また今次調査で出土した遺物だけでなく、クルシェヒルの博物館に収められている2001年度迄に出土した重要遺物についても必要に応じて保存処理が施された。
非金属歯科材料アレルギーを対象としたパッチテスト用試薬開発とその基礎に関する研究

本研究の目的は、研究代表者等が過去に行ってきた金属アレルギー治療を通して蓄積された知見を基に、アレルゲン検索の対象を金属以外の歯科材料にも広げるため、パッチテスト用の試薬を開発すること、およびその基礎的な背景を検索することであった。1.現在使用されている各種歯科材料の単一成分を抽出し、抗原性を調べるために、汎用されている歯科材料の成分分析を試みたが、微量成分の特定には至らず、製造業者の協力も得られなかった。そこで、臨床的には各単一成分として使用することが無いという判断の下、実際に臨床で使用する歯科材料(65名)、またはそこに含まれる単独成分(24名)を試料として、アレルギー外来を訪れた患者(89名)および健常者(10名)にパッチテストを行った。その結果、何らかのアレルギーが疑われた患者ではレジンに対して7%程度の陽性率があり、また健常者でも明らかな陽性が存在した。その他の材料や成分に対しても若干の陽性がみられ、非金属歯科材料に対するアレルギーの存在も無視できないと考えられた。2.金属アレルギー発症メカニズムの解明を目的としてプロテオミクス解析を行った。健常者2名、金属アレルギー患者3名の末梢血よりリンパ球を採取し、蛋白抽出後に2次元電気泳動を行って5者を比較した。その結果、健常者と金属アレルギー患者の間で発現に差があると考えられる蛋白が10数種類抽出された。今後これら蛋白を質量分析により同定し、より詳細な検討を加える予定である。本研究の目的は、研究代表者等が過去に行ってきた金属アレルギー治療を通して蓄積された知見を基に、アレルゲン検索の対象を金属以外の歯科材料にも広げるため、パッチテスト用の試薬を開発すること、およびその基礎的な背景を検索することである。当初の平成13年度の研究実施計画では、以下の4項目に関する研究を予定していた。「現在使用されている各種歯科材料の単一成分を各種解析により分析し、このうち30種類程度を選定すること」、「ラットを用いた実験により、溶液中でレジンから溶出する物質の抗原性を検索すること」、「DNAチップを用いて、アレルギー患者から採取したT-cellの関連蛋白発現のプロファイルを取ること」、「金属イオンのキャリアー蛋白の検索をすること」。しかしながら、研究代表者の所属機関が平成13年11月をもって代わったこと、および本補助金の交付決定が平成13年12月であったことから、現在は「現在使用されている各種歯科材料の単一成分を各種解析により分析し、このうち30種類程度を選定すること」に着手したばかりである。平成14年度は、本来の13年度の実験計画を含め、可能な限り迅速に研究を遂行する予定である。上記の通り、「現在使用されている各種歯科材料の単一成分を各種解析により分析し、このうち30種類程度を選定すること」には既に着手しており、また「金属イオンのキャリアー蛋白の検索をすること」に関しても直ちに研究に着手できる状態であることから、これらに関しては当初の予定通りの成果が期待できる。さらに、「ラットを用いた実験により、溶液中でレジンから溶出する物質の抗原性を検索すること」およぴ「DNAチップを用いて、アレルギー患者から採取したT-cellの関連蛋白発現のプロファイルを取ること」に関しても比較的早期に着手できる見込みである。当初の平成14年度以降の研究実施計画では、以下の4項目に関する研究を予定していた。

しかしながら、研究代表者の所属機関が平成13年11月をもって代わったこと、および本補助金の交付決定が平成13年12月であったことから、進行が遅れており、未だ結果は得られていない。現在までに「現在使用されている各種歯科材料の単一成分を各種解析により分析し、このうち30種類程度を選定すること」に関し、汎用されている歯科材料の成分分析を試みたが、微量成分の特定に至っておらず、製造業者の協力も得られていない。そこで、臨床的には各単一成分として使用することが無いという判断の下、実際に使用する材料として、パッチテストを行った場合に、どの程度の陽性率があるかを検索中である。平成15年度は、他の3項目すなわち、「金属イオンのキャリアー蛋白の検索をすること」、「ラットを用いた実験により、溶液中でレジンから溶出する物質の抗原性を検索すること」および「DNAチップを用いて、アレルギー患者から採取したT-cellの関連蛋白発現のプロファイルを取ること」に関しても早期に結果を出せるように積極的に取り組みたい。本研究の目的は、研究代表者等が過去に行ってきた金属アレルギー治療を通して蓄積された知見を基に、アレルゲン検索の対象を金属以外の歯科材料にも広げるため、パッチテスト用の試薬を開発すること、およびその基礎的な背景を検索することであった。1.現在使用されている各種歯科材料の単一成分を抽出し、抗原性を調べるために、汎用されている歯科材料の成分分析を試みたが、微量成分の特定には至らず、製造業者の協力も得られなかった。そこで、臨床的には各単一成分として使用することが無いという判断の下、実際に臨床で使用する歯科材料(68名)、またはそこに含まれる単独成分(50名)を試料として、アレルギー外来を訪れた患者(117名)および健常者(10名)にパッチテストを行った。その結果、何らかのアレルギーが疑われた患者ではレジンに対して7%程度の陽性率があり、また健常者でも明らかな陽性が存在した。その他の材料や成分に対しても若干の陽性がみられ、非金属歯科材料に対するアレルギーの存在も無視できないと考えられた。2.金属アレルギー発症メカニズムの解明を目的としてプロテオミクス解析を行った。健常者2名、金属アレルギー患者3名の末梢血よりリンパ球を採取し、蛋白抽出後に2次元電気泳動を行って5者を比較した。その結果、健常者と金属アレルギー患者の間で発現に差があると考えられる蛋白が10数種類抽出された。
紫外線照射後の発癌機序におけるFEN1の役割について

FEN1蛋白の発現をsiRNAを使って細胞内で枯渇させることで細胞の成長にどのような影響があるかを検証した。その結果、正常なp53を欠損したT24細胞では、FEN1欠乏によって老化が著名に促進された。しかしながら、この細胞に正常なp53をトランスフェクションしてやるとFEN1欠乏による老化が抑制された。一方、正常のp53遺伝子をもつHT116細胞をつかって同じようにFEN1を欠乏させると老化促進は認められず、細胞はアポトーシスをおこした。しかしながら、p53を欠損したHT116細胞ではFEN1を細胞から枯渇させても老化もアポトーシスも起こさなかったが、電離放射線によりDNA障害を誘導すると、老化が著名に促進された。これらの結果は、FEN1欠損による老化の促進はp53依存性に生じていることが示唆された。したがって、今回の研究によって示された事実が紫外線照射による腫瘍発生に大きく関与していると考えられる。研究計画に準じて本年度は(1)FEN1マウスに紫外線を照射し、腫瘍発生実験を継続すると共に(2)FEN1を欠損させた場合の細胞分裂能に与える影響を検討した。後者の目的の為に、FEN1siRNAを用いてHela細胞のFEN1発現を効率良く抑制する実験系を確立した。この系ではFEN1siRNA処理後、72h-144hに亘り、FEN1の発現を殆ど完全に抑えることができた。この間、細胞は徐々にその分裂能力が低下し、144h後には全く分裂しなくなった。これと合わせて、細胞では老化(senescence)がおこっていることを示す指標であるβ-galactosidaseの発現が上昇し、144h後では100%に近い細胞で老化をおこしていることを確かめた。これとは別に、shart hair-pin RNA(sh RNA)を用いても同様の結果が得られたが、この場合はsiRNAを用いた系と異なり、老化の程度は低かった。これらの結果より、FEN1の活性がなくなることで、細胞の老化が促進することが推測された。そこで、次に老化と密接な関係があるとされているtelomere構造におけるFEN1の役割について検討した。すなわち、FEN1活性がなくなることでtelomere構造に欠陥が生じ、その結果、老化を促進させる歯車がまわりだすのではないかと考えた。この点に関してはまだ解析中であるが、現時点では、(a)FEN1がtelomere構造と結合しているらしいこと(b)FEN1の発現をおさえることで、老化の促進に関与している細胞周期関連p21の発現誘導やp38のリン酸化抑制を引きおこしていることを確認している。来年度以降もひきつづいてFEN1が紫外線照射によるtelomere構造の維持に深く関与していることを確認するための分子遺伝学的実験を行い、紫外線による悪性腫瘍発生のメカニズムとFEN1との関係について解析を続けたい。研究成果は、in vitroの実験にその大部分を割いたものとなった。したがって、マウス個体レベルでの評価は実施出来なかった。これは、使用したFEN-1欠損マウスでは、FEN1の抑制が不十分であったことが研究の経過中に明らかになったためである。しかしながら、in vitro実験を充実させることで、データの獲得には予想していたほどの支障は生じなかった。該当年度にて、得られた結果は以下のとおりである。FEN1欠損により誘導される老化促進現象がp53に依存しているかどうかの検討を行った。この目的でわれわれはp53機能が失われていないBJ細胞をつかって、T24細胞の場合と同様の解析を行った。その結果、p53の機能が保たれている環境においても、FEN1を欠損させることで老化を誘導することが可能であることがわかった。siRNAを使ってFEN1を枯渇させると、p53の発現レベルが増加した。P53機能をもともと欠損しているT24における場合と同様に、BJ細胞においても、FEN1はテロメアDNA上にも局在していた。FEN1を欠損させたBJ細胞においてもβ-galactosidaseの発現が時間の経過と共に増加し、老化が促進されていることが確認できた。この細胞の場合もテロメアの長さの短縮は認められなかった。更に重要なことは、FEN1の発現を枯渇させることでBJ細胞において誘導された老化は、p53依存性であることがわかった点である。

これは、FEN1の発現を抑制したBJ細胞のp53蛋白発現をp53siRNAを使って同時に抑えてやると、FENI siRNAにより誘導された老化促進をほとんどベースラインレベルにまで抑制できたことにより示唆された。しかしながら、BJ細胞での老化促進はテロメアDNAの2重差切断を伴っていないなど、p53依存性で起こるFEN1欠損による老化促進とp53非依存性で起こるそれとの間には機構上明らかな違いがあると考えられた。1.FEN1 siRNAにより48時間以内にT24細胞のFEN1を枯渇させることができた。このFEN1欠損細胞は48時間後には老化が起こっていることを示唆する形態を呈していた。。これを確かめるため、SA-β-galactoshidaseの発現レベルを解析したところ、FEN1が枯渇して72時間後までにほぼ100%の細胞でSA-β-galactosidaseが発現していた。更に細胞周期を調べると、FEN1を欠損させたT24細胞では、p21の発現が増加し、p38のリン酸化が抑制されていた。一方、p16の発現レベルには影響は認められなかった。さらに、老化促進の際、テロメアの長さに変化は起こっていないことを確認した。したがって、これらの結果は、FEN1をknockdownさせると、T24細胞では老化が促進されることが確かめられた。2.つぎに、FEN1がテロメアにおいてどのような働きをしているかを確かめた。テロメアに特有のタンパク質であるTRF1に対する抗体をつかってテロメアDNAを分離した後、FEN1抗体を用いてDot Blot解析を行い、テロメア構造にFEN1が含まれていること、さらには共焦点顕微鏡をつかって、FEN1蛋白がTRF1と存在していることを確認した。さらに、FEN1を枯渇させた際にテロメアDNAではH2AXのリン酸化が起こっていることがわかった。これらの結果、テロメアからFEN1が働かなくなることで、テロメアではDNA二重鎖の切断が起こっていることが示唆された。3.最後に、FEN1欠損によって誘導される老化促進現象におけるp53の関与について検討した。この目的でわれわれはp53機能が失われていないBJ細胞をつかって、T24細胞の場合と同様の解析を行った。その結果、p53の機能が保たれている環境においても、FEN1を欠損させることで老化を誘導することが可能であることがわかった。さらに、FEN1の発現を枯渇させることでBJ細胞において誘導された老化は、p53依存性であることを見出した。