hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
諸分野の専門的手法を用いての位相的性質の研究

位相空間論において,積空間の正規性は1950年代以来多くの話題を提供し,興味ある研究として続けられてきている。これに関連し、これまで因子空間を距離空間やコンパクト空間としていたものをK-解析的空間にして研究を進め,それを特徴づけるものとして弱P-空間の概念を導入し,同様な結果が得られることを示した.その論文は1993年6月に発行され(雑誌の都合で発行年は1991年になっている.)その後新たな話題として取り上げられ,因子空間として無理数全体のつくる非常に具体的な空間の時と同じであることが分かった.それは又無理数空間との積の正規性とリンデレーフ性の関連の問題となり,それが集合論的公理と深く関わっていることが知られ,数学基礎論の分野との共同作業的な様相を呈してきている.これは,これからも継続していきたい研究課題である.解析学における双対の概念を用いて位相的性質の研究を続けてきたが,これについても一応の成果を得ることができた.この方面では完備性の特徴づけが最も注目される問題として残っているが,他にもいろいろの位相的性質を対象として取り上げることができると思われ,これからも続けていく予定である.以上,位相数学の分野の専門家のみならず,数学基礎論特に集合論方面の専門家や関数解析学の研究者達と学内外において意見交換や情報交換さらには共同研究を進めることができたことは非常に有意義であった.代数学的手法を用いるまでには至らなかったが,双対線形空間を利用する際には有用に思われる.今後,この様な観点から位相的性質の研究も進めたい.位相空間論において,積空間の正規性は1950年代以来多くの話題を提供し,興味ある研究として続けられてきている。これに関連し、これまで因子空間を距離空間やコンパクト空間としていたものをK-解析的空間にして研究を進め,それを特徴づけるものとして弱P-空間の概念を導入し,同様な結果が得られることを示した.その論文は1993年6月に発行され(雑誌の都合で発行年は1991年になっている.)その後新たな話題として取り上げられ,因子空間として無理数全体のつくる非常に具体的な空間の時と同じであることが分かった.それは又無理数空間との積の正規性とリンデレーフ性の関連の問題となり,それが集合論的公理と深く関わっていることが知られ,数学基礎論の分野との共同作業的な様相を呈してきている.これは,これからも継続していきたい研究課題である.解析学における双対の概念を用いて位相的性質の研究を続けてきたが,これについても一応の成果を得ることができた.この方面では完備性の特徴づけが最も注目される問題として残っているが,他にもいろいろの位相的性質を対象として取り上げることができると思われ,これからも続けていく予定である.以上,位相数学の分野の専門家のみならず,数学基礎論特に集合論方面の専門家や関数解析学の研究者達と学内外において意見交換や情報交換さらには共同研究を進めることができたことは非常に有意義であった.代数学的手法を用いるまでには至らなかったが,双対線形空間を利用する際には有用に思われる.今後,この様な観点から位相的性質の研究も進めたい.
壮年期都市部住民に対する健康づくり支援システム構築のための実証的研究

本研究は、都市部在住の壮年期国民健康保険被保険者に対し、ソーシャル・マーケティングにもとづく健康づくり支援システムを開発するための第一段階として、対象集団のセグメンテーション方法について検討したものである。本研究により、生活習慣病予防対策においては3040歳代をターゲットとすることが必要であり、特に女性については居住地区ごとの対策が重要であることが示唆された。また、健診受診に関する保健信念は4因子から構成され、中でも「健診受診の障害認知」を低減することが、健診受診促進に奏功する可能性が示された。本研究は都市部在住の壮年期住民を対象に、ソーシャル・マーケティング理論の枠組みを用いて、保健行動の決定要因とニーズ、健康課題に基づく対象の細分化を行い、各セグメントの特性に応じた生活習慣病予防を中心とする健康づくり支援システムを実証的に開発し、新たな地域看護活動の方法論を提示することを目的としている。本年度は、対象フィールドの健診受診推進ターゲット候補の選定を行うことを目的に、国保被保険者の特定健診並びに30歳代生活習慣病予防健診結果データベースから、男女別に脳心血管疾患に関わる生理的指標と生活習慣、行動変容のステージを分析し、重要な介入時期について検討した。分析対象とした健診受診者は男性12,399名、女性18,741名である。結果、男性は、4050歳代でBMI、脂質代謝悪化のピークを迎え、60歳代以降低下するが、収縮期血圧、糖代謝は年代の上昇とともに悪化し続けた。女性では、4050歳代にかけて、LDLコレステロールと収縮期血圧に大きな悪化が認められた。好ましくない生活習慣を有する者の割合は、男女ともに40歳代で高いが、行動変容の関心期準備期にあたる者の割合も40歳代が最も高かった。したがって、3040歳代を健診受診推進ターゲットとすることが効果的であると考えられた。そのため、30歳代健診受診者を対象とし、健診受診行動に関わる要因を明らかにすることを目的としてインタビュー調査を実施し、現在、質的帰納的アプローチにより分析を行っている。(1)壮年期住民への生活習慣病予防を中心とする健康づくり支援にむけて、対象のセグメンテーションを行うため、約3万人分のA市特定健康診査結果を用いて、生活習慣病の有所見率と居住地区との関連性について、年代別男女別に分析した。結果、多くの項目の有所見率について、女性において居住地区との強い関連性が認められ、その地域性に明らかな性差が存在することが示された。このため、女性は男性に比して、居住地域の環境や文化に強く影響を受け、これが生活習慣病発症に関連している可能性が示唆され、性差に基づく対象のセグメンテーションの必要性を示した。(2)健診受診に関わる保健信念尺度の開発に向けて、30歳代生活習慣病予防健診受診者18名を対象にin-depthインタビューを行い、質的帰納的に分析した。インタビューと分析の枠組みにはhealth belief modelを用いた。対象者は自身の健康状態には問題が少ないため、周りの人の健康状態や情報から、健康を失う可能性や重大性を自覚していた。また、健康は今の当たり前の生活を支えるものととらえられていた。また対象者は、自分の全身状態への興味関心から健診を受診しており、一方障害要因の根底には、健康意識の欠落が存在することが示された。このため、健診受診を促進するためには、自身の健康への興味の育成が必要であり、これにはより若い時期からの介入が必要と考えられた。また、健診受診の直接のきっかけは個人宛て通知であったが、間接のきっかけは、日頃の周りの人からの働きかけや影響であり、人とのつながりの重要性が示された。(3)健診受診に関わる保健信念尺度の開発に向けて、(2)で得られた結果をもとに、健診受診に関わる保健信念尺度案を作成し、3050歳代の全国1200名の男女を対象に、インターネット調査を実施した。平成24年度には引き続き追加調査を実施し、尺度開発を行う予定である。【目的】壮年期層の生活習慣病健診受診率向上に向けて、国民健康保険被保険者(以下、国保)、被用者保険被保険者(以下、被用者保険)の2群間の健診受診に関わる特性の比較を行うとともに、健診受診に関わる保健信念の構造を明らかにし、健診受診との関連性を検討した。【方法】web調査会社の3059歳の男女登録モニターから9,356名を無作為抽出し、調査案内を電子メール配信し、回答期間内に回答した先着2,809名を解析対象とした。調査項目は、医療保険の種類、基本属性、保健行動、主観的健康感等と、健診受診に関する保健信念である。1)国保、被用者保険の2群間において、その特性を比較検討するため、比較分析を行った。

2)健診受診に関わる保健信念の構造を明らかにし、健診受診との関連性を検討するため、健診受診に関わる保健信念36項目について、因子分析を行い、同定された各因子と過去1年間の健診受診の有無、これまでの健診受診頻度、並びに今後の健診受診の意向の間で相関を求めた。【結果と考察】1)国保では、健康度が低く、望ましい保健行動が取られていない割合も高いことが示された。国保では、未婚率の高さや経済状況の厳しさ、また学歴の低さとともに、幸福感の低さが認められ、今後これら背景因子を踏まえた、健診受診促進策の検討が必要であると考えられた。また、「健康を失う可能性の自覚」以外の全ての健診受診に関する保健信念のコンストラクトにおいて、国保と被用者保険との間で有意差が認められた。2)因子分析の結果、健診受診の保健信念は「健診受診の障害」、「病気への不安」、「健康の必要性」、「健診への親和性」の4因子構造を示した。健診受診との相関が最も強いのは「健診受診の障害」であり、壮年期層の健診受診促進には、「健診受診の障害」を取り除くことが最も有効であることが示唆された。壮年期住民への生活習慣病予防を中心とする健康づくり支援対象のセグメンテーションに向けた分析については、A市保健医療センターの協力を得て、3万人規模の特定健診データの分析を進めており、新規性の高い知見も得られている。一方、健診受診行動に関連する要因の分析については、当初A市国保被保険者を対象とした住民調査を計画していたが、実施の調整に時間を要したため、インターネット調査に計画変更を行った。これにより、予定の遅れは最小限に抑えられ、かつ、通常極めて回収率の低い世代を対象とした、大規模なデータ収集が行えた。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度には、健診受診行動に関する保健信念尺度の開発に向け、インタネット調査データを1000名程度追加し、分析、尺度開発を進める。また、本尺度を用いて、健診受診行動の決定要因を明らかにし、これまで得られた知見等統合して、生活習慣病予防を中心とした健康づくり支援に向けた壮年期住民のセグメンテーションを行い、対象特性に応じた支援策の検討を進める。
亜鉛欠乏によるカーボニックアンヒドラーゼ活性低下の機構とイネ植物体への影響の解明

今年度においては葉内亜鉛濃度の減少によるイネ葉内のカーボニックアンヒドラーゼ活性の低下が酵素含量の低下によっているのか、あるいは活性化率の低下によっているのかを探るとともに、mRNAの発現量と酵素含量との関係を調べることにより、カーボニックアンヒドラーゼのターンオーバーがどの程度でどのような機構によって活性の低下がおきているかを検討することを目的とした。その結果、1.イネ由来カーボニックアンヒドラーゼcDNAを導入したプラスミドにより大腸菌を形質転換し、カーボニツクアンヒドラーゼを発現させ、これよりポリクローナル抗体を作成した。2.葉内の亜鉛濃度の減少につれてカーボニックアンヒドラーゼ活性は低下するが、その影響は、気孔拡散抵抗や炭酸固定酵素サイトの炭酸固定抵抗には現れなかった。また光合成もあまり変化しなかった。3.イネ葉内の亜鉛濃度の減少につれてカーボニックアンヒドラーゼのmRNAの発現は低下していた。またその低下程度は活性とほぼ同じで、発現の段階での制御を受けていると考えられた。4.カーボニックアンヒドラーゼ活性とリブロースビスホスフェートカルボキシラーゼ活性との協調性は亜鉛欠乏イネにおいては見られず、カーボニックアンヒドラーゼ活性だけが低下していた。5.カーボニックアンヒドラーゼ含量とmRNAの発現量との間の関係はある程度見られ、カーボニックアンヒドラーゼ活性の低下が酵素含量の低下によっていると考えられた。今年度においては葉内亜鉛濃度の減少によるイネ葉内のカーボニックアンヒドラーゼ活性の低下程度を探るとともに、亜鉛イオン減少がカーボニックアンヒドラーゼ活性に直接影響を及ぼしているのか、またはmRNAの発現の段階で制御しているのかをノーザンハイブルダイゼーション法を用いて検討した。また、気孔底から炭酸固定酵素サイトまでの"二酸化炭素の流れ"を安定同位体の炭素(13C)を使用することによって算出し、カーボニックアンヒドラーゼ活性低下が光合成にどのような影響を及ぼすかを検討した。その結果、1.葉内の亜鉛濃度の減少につれてカーボニックアンヒドラーゼ活性は低下し、最大14%まで低下した。2.カーボニックアンヒドラーゼ活性の低下の影響は、気孔拡散抵抗や炭酸固定酵素サイトの炭酸固定抵抗には現れなかった。3.カーボニックアンヒドラーゼ活性の低下につれて気孔底から炭酸固定酵素サイトまでの二酸化炭素の移動抵抗は増大し、最大で正常葉の2倍の値になった。また二酸化炭素の移動抵抗の全抵抗に対する寄与率も増大した。カーボニックアンヒドラーゼはクロロプラスト内に偏在することから、クロロプラスト内の二酸化炭素の移動に貢献していると考えられた。4.一般に報告されているカーボニックアンヒドラーゼ活性とリブロースビスホスフェートカルボキシラーゼ活性との協調性は亜鉛欠乏イネにおいては見られず、カーボニックアンヒドラーゼ活性だけが低下していた。5.イネ葉内の亜鉛濃度の減少につれてカーボニックアンヒドラーゼのmRNAの発現は低下していた。
ウシにおける暑熱環境下での雌生殖器周囲の温度勾配と繁殖性との関連について

本研究では暑熱環境下での雌生殖器の温度維持機序を解明し、世界における暑熱期や暑熱ストレス環境下の繁殖性および畜産生産性の改善に寄与することを目的とする。雌において生殖器周囲には直腸温、子宮温、卵巣温、卵胞温の順に温度が低くなる温度勾配機序があり、この温度勾配の撹乱と排卵不全との関連が報告されている。この温度勾配については性周期を通しての動態や、卵胞発育不全、卵巣嚢腫などの繁殖障害との関連は不明である。本研究では、心拍変動解析をストレス指標として、生殖器周囲の温度勾配の変化を明らかにし、性周期のどの時期に暑熱ストレスの影響により温度勾配が破綻しやすいのかを解明する。本研究では暑熱環境下での雌生殖器の温度維持機序を解明し、世界における暑熱期や暑熱ストレス環境下の繁殖性および畜産生産性の改善に寄与することを目的としている。人医療でストレス評価に利用される心拍変動解析から得られる暑熱ストレス評価値を指標として、生殖器周囲の温度勾配が性周期を通してどのように変化するのか、性周期のどの時期に暑熱ストレスの影響により温度勾配が破綻しやすいのかを明らかにし、また、生殖器周囲の温度勾配と卵胞発育不全、排卵不全との関係を解明する。本年度はデータ収集に重要な実験の方法について、確立を目指した。雌において報告がある生殖器周囲の温度勾配(直腸温、子宮温、卵巣温、卵胞温の順に温度が低い)を長期間モニタリングできる手法と、心拍の変動から環境ストレスを定量する方法について検討し、今後の研究に使用可能な方法を確立した。具体的には以下の2つの方法を確立した。1:膣切開法と左ケン部切開法を併用した針金型温度プローブの腹腔内臓器留置法。2:ホルター心電計を使用した心拍変動解析による環境ストレスの評価法。上記の実験手法1を使用し、牛における黄体期の膣、子宮、卵巣には黄体期を通して温度勾配が維持されていること、また、体温と同調した日中に高く夜に低く推移する日内の温度変化を示すことを確認した。また、実験手法2を使用し、環境ストレス評価について、心拍変動解析の分類にクラスター解析を用いることにより同一環境下でも個体により心拍変動の時系列変化が異なることを示した。ストレス環境下ではどの個体も同じような変化パターンを示す可能性が示された。このことは、客観的に個体のストレス量を区別できる可能性を示している。本方法は初めて牛で継時的に卵巣実質の温度を長期間記録する方法であり、今後の研究に大きく寄与すると考えられる。本研究ではこれまでの国内外の報告から想定される以下の仮説について検証を行っている。1:生殖器の温度勾配は血流量の関係から卵胞が急速に大きくなる卵胞期に大きく、黄体期に小さい。2:外気温の影響を受け、生殖器温度の日内変化が存在する。3:卵胞発育不全の個体はこの温度勾配が性周期を通して小さく、排卵不全の個体は主席卵胞発育時からこの温度勾配が正常個体よりも小さい。4:心拍変動解析による暑熱ストレスと生殖器の温度勾配は負に相関する。このうち、本年度では上記の仮説を検討するための実験方法の確立を行なった。具体的には以下である、1:膣切開法と左ケン部切開法を併用した温度計の腹腔内臓器留置法。当初は膣切開のみでの留置方法を検討したが、卵巣にピンポイントに設置できなかったことから、最終的には左ケン部切開法を併用した。この方法では、センサーを使用したこれまでの腹腔温度のモニタリングとは異なり卵巣、子宮などの臓器にピンポイントに針金型温度プローブを設置することで、個別かつ同時に各臓器の温度情報を生体から得られることを示した。また、侵襲性についても確認し、子宮については目立った異常が見られず、対側卵巣は正常な卵巣活動が観察でき、また温度計を設置した卵巣も温度プローブを取り外した後は正常な卵巣活動が確認できた。牛における心拍変動解析を検討し、その中でも周波数解析の時系列変化のパターンが暑熱環境下において個体間で差がある可能性を示している。この結果は本方法が同一環境下で各個体のストレスを客観的に検討できることを示しており、今後の客観的なストレス評価につながると考えられる。以上より実験手法についての検討は順調に終了していることから概ね順調に進展していると判断している。初年度で確立した長期に卵巣温度を記録する方法を用いて、膣、子宮、卵巣の温度を21日の性周期を通して経時的に観察することで、卵胞期または黄体期における生殖器の温度勾配の変化を観察する。同時に卵巣、子宮の状態を超音波画像診断装置で観察し、カラードップラー法を用いて血流の測定を行う。次年度は日本だけでなく、名古屋大学カンボジアサテライトキャンパス附属農場の乳用種と肉用種についても卵胞期、黄体期における卵巣、子宮の温度、血流の検討を行う。このことによって、日本では観察できない持続的な暑熱環境下での卵巣、子宮の温度変化、血流の変化を観察し、個体間の差異を検討する。<実験1:21日の性周期を通した卵巣動態と生殖器の温度勾配の測定>・卵巣動態を経直腸超音波検査により観察する、同時にカラードップラー法を用いて血流の検討を行う。生殖器の温度勾配の測定は今年度に確立した新規法と経腟採卵針内に通した針金型温度プローブ先端を穿刺する方法を用いて行う。

後者の方法では、経腟で子宮、卵巣、卵胞、黄体などの卵巣構造物の温度も合わせて測定する。直腸温、膣温は持続的に電子体温計にて測定する。本実験は暑熱環境と快適環境(春季、秋季)で行う。また、カンボジアの付属農場でも同様に検討する。<実験2:心拍変動解析と卵胞発育、生殖器の温度勾配の測定>前述の実験に並行して心拍変動解析をホルター心電計の記録データを使っておこなう。24時間連続して心電図を記録し、専用のプログラムにて解析を行う。カンボジア、日本でそれぞれ行い、各環境におけるストレス感受性について環境の違い、品種間の違いを検討する。以上の計画で、本課題の研究を進めていく。本研究では暑熱環境下での雌生殖器の温度維持機序を解明し、世界における暑熱期や暑熱ストレス環境下の繁殖性および畜産生産性の改善に寄与することを目的とする。雌において生殖器周囲には直腸温、子宮温、卵巣温、卵胞温の順に温度が低くなる温度勾配機序があり、この温度勾配の撹乱と排卵不全との関連が報告されている。この温度勾配については性周期を通しての動態や、卵胞発育不全、卵巣嚢腫などの繁殖障害との関連は不明である。本研究では、心拍変動解析をストレス指標として、生殖器周囲の温度勾配の変化を明らかにし、性周期のどの時期に暑熱ストレスの影響により温度勾配が破綻しやすいのかを解明する。本研究では暑熱環境下での雌生殖器の温度維持機序を解明し、世界における暑熱期や暑熱ストレス環境下の繁殖性および畜産生産性の改善に寄与することを目的としている。人医療でストレス評価に利用される心拍変動解析から得られる暑熱ストレス評価値を指標として、生殖器周囲の温度勾配が性周期を通してどのように変化するのか、性周期のどの時期に暑熱ストレスの影響により温度勾配が破綻しやすいのかを明らかにし、また、生殖器周囲の温度勾配と卵胞発育不全、排卵不全との関係を解明する。本年度はデータ収集に重要な実験の方法について、確立を目指した。雌において報告がある生殖器周囲の温度勾配(直腸温、子宮温、卵巣温、卵胞温の順に温度が低い)を長期間モニタリングできる手法と、心拍の変動から環境ストレスを定量する方法について検討し、今後の研究に使用可能な方法を確立した。具体的には以下の2つの方法を確立した。1:膣切開法と左ケン部切開法を併用した針金型温度プローブの腹腔内臓器留置法。2:ホルター心電計を使用した心拍変動解析による環境ストレスの評価法。上記の実験手法1を使用し、牛における黄体期の膣、子宮、卵巣には黄体期を通して温度勾配が維持されていること、また、体温と同調した日中に高く夜に低く推移する日内の温度変化を示すことを確認した。また、実験手法2を使用し、環境ストレス評価について、心拍変動解析の分類にクラスター解析を用いることにより同一環境下でも個体により心拍変動の時系列変化が異なることを示した。ストレス環境下ではどの個体も同じような変化パターンを示す可能性が示された。このことは、客観的に個体のストレス量を区別できる可能性を示している。本方法は初めて牛で継時的に卵巣実質の温度を長期間記録する方法であり、今後の研究に大きく寄与すると考えられる。本研究ではこれまでの国内外の報告から想定される以下の仮説について検証を行っている。1:生殖器の温度勾配は血流量の関係から卵胞が急速に大きくなる卵胞期に大きく、黄体期に小さい。
イネデンプン集積抑制酵素発現制御体の高CO_2応答に関する研究

平成23年度の研究成果は下記の通りである。(1)イネ澱粉代謝関連糖タンパク質のプラスチド局在化機構の解明:イネヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ糖タンパク質アイソザイム(NPP1、2、3、6)の遺伝子にGFPを連結し、イネ細胞に導入、発現させ、それらの葉緑体局在化能をレーザー共焦点蛍光顕微鏡で観察した。NPP2-GFPとNPP6-GFPはNPP1-GFPと同様に葉緑体に局在したが、NPP3-GFPは葉緑体局在化能を持たないことが明らかになった。NPP1、2および6のN-グライコーム解析から、NPP糖タンパク質のプラスチドターゲティングにトランスゴルジが深く関与することが推察された。さらに、トランスゴルジマーカー遺伝子ST-mRFPをイネに導入し、その挙動を観察したところ、NPP1強発現下でST-mRFP標識膜小胞が活発に葉緑体に取り込まれることが見いだされた。これらの結果から、NPP糖タンパク質のプラスチド局在化機構にトランスゴルジ体-プラスチド間の膜交通が重要な役割を果たしていることが強く示唆された。(2)イネ澱粉集積抑制酵素機能欠損変異体の澱粉集積特性に及ぼす高CO_2濃度および高温の影響:植物CO_2インキュベータを用いてTos17挿入変異体npp1(日本晴)の初期成長期(1017d)の生重量と澱粉蓄積量に及ぼす高CO_2濃度(1,200ppm)、高温(昼12h,33°C、夜12h,28°C)の影響を調べた。npp1変異体シュートにおいては、対照条件(光:300μmol/m^2/sec、CO_2濃度:400ppm、温度:昼12h,28°C、夜12h,23°C)から高CO2条件に移すと顕著な生重量と澱粉蓄積量の増加が観察された。澱粉蓄積については高CO_2・高温条件に置くと増加傾向がより高まることが見いだされた。このnpp1変異体の高CO_2応答機構を探るために、iTRAQ標識法を用いた定量的ショットガンプロテオミクス解析を試みた。高CO_2条件下においてnpp1変異体のタンパク質発現は野生型に比べて大きく変動することが観察され、npp1変異体が高CO_2に敏感に応答しているものと考えられた。(1)イネデンプン代謝関連糖タンパク質のプラスチド局在化機構の解明については、プラスチド糖タンパク質NPPのN-グライコーム解析が進んだ。(2)イネ野生型およびデンプン集積抑制酵素機能欠損変異体のデンプン集積特性に及ぼす高CO_2濃度および高温の影響については、npp1変異体が高CO_2環境下で高効率に緑葉デンプンを集積することが明らかになった。以上の研究成果が得られていることから、本研究課題はおおむね順調に進展していると判断される。平成24年度以降の研究計画としては、植物CO_2インキュベーターを用いてnpp1幼植物体におけるショ糖・澱粉蓄積が最大となる最適なCO2濃度、温度、光、湿度並びに窒素添加条件の決定を試みる。また、平成24年8月に竣工予定のバイオトロン群(L4.5 x W4.5 x H1.82.2m: CO_2濃度制御型4基、通常型4基;L4.5x W9 x H1.82.2m:通常型1基)を用いてスケールアップして最適条件の確認を行う。AmyI-1遺伝子の機能欠損イネ(amyI-1:日本晴Tos17挿入変異体)についてもnpp1と同様にショ糖・澱粉蓄積に対する高CO_2・高温環境の影響を調べる予定である。本研究課題では、糖タンパク質として知られているイネデンプン集積抑制酵素のプラスチド局在化機構の解明および本酵素の機能発現に及ぼす高CO_2濃度および高温の影響を明らかにすること、さらに、高CO_2濃度、高温下における野生型およびデンプン集積抑制酵素の発現制御体の形質調査で得られた知見を基に、本ストレス条件下におけるイネデンプン集積強化法を探ることを目的としている。平成22年度の研究成果は下記の通りである。(1)イネデンプン代謝関連糖タンパク質のプラスチド局在化機構の解明:ヌクレオチドピロボスファターゼ/ホスホジエステラーゼ(NPP)1のN-末端シグナル配列は分泌経路に入るために必要であるが葉緑体局在化には十分ではなく、タンパク質の内部領域(308-478アミノ酸残基)が葉緑体局在化に必須であることが分かった。葉緑体局在型NPP1のN-結合型糖鎖の77%がフコースやキシロース残基を含む複合型糖鎖であったことから、大部分のNPP1はゴルジ装置のトランス区画を介して葉緑体に輸送、局在化するものと考えられた。(2)イネ野生型およびデンプン集積抑制酵素機能欠損変異体のデンプン集積特性に及ぼす高CO_2濃度および高温の影響:ADP-グルコース加水分解型、NPP1遺伝子のTos17挿入変異体npp1の緑葉同化デンプン含量は野生型に比べ1.771.96倍に増加し、npp6変異体の種子デンプン含量については1.241.27倍に増加することが分かった。続いて、npp

1変異体の初期成長期(1017d)のデンプンおよびショ糖の蓄積量に及ぼす高CO_2濃度(1,200ppm)、高温(昼14h,33°C、夜10h,28°C)の影響を調べたところ、イネシュートにおけるNPP1の生理機能が対照条件(CO_2濃度400ppm、昼14h,28°C、夜10h,23°C)と高CO_2濃度、高温条件下とでは異なることを示唆する結果が得られた。平成23年度の研究成果は下記の通りである。(1)イネ澱粉代謝関連糖タンパク質のプラスチド局在化機構の解明:イネヌクレオチドピロホスファターゼ/ホスホジエステラーゼ糖タンパク質アイソザイム(NPP1、2、3、6)の遺伝子にGFPを連結し、イネ細胞に導入、発現させ、それらの葉緑体局在化能をレーザー共焦点蛍光顕微鏡で観察した。NPP2-GFPとNPP6-GFPはNPP1-GFPと同様に葉緑体に局在したが、NPP3-GFPは葉緑体局在化能を持たないことが明らかになった。NPP1、2および6のN-グライコーム解析から、NPP糖タンパク質のプラスチドターゲティングにトランスゴルジが深く関与することが推察された。さらに、トランスゴルジマーカー遺伝子ST-mRFPをイネに導入し、その挙動を観察したところ、NPP1強発現下でST-mRFP標識膜小胞が活発に葉緑体に取り込まれることが見いだされた。これらの結果から、NPP糖タンパク質のプラスチド局在化機構にトランスゴルジ体-プラスチド間の膜交通が重要な役割を果たしていることが強く示唆された。(2)イネ澱粉集積抑制酵素機能欠損変異体の澱粉集積特性に及ぼす高CO_2濃度および高温の影響:植物CO_2インキュベータを用いてTos17挿入変異体npp1(日本晴)の初期成長期(1017d)の生重量と澱粉蓄積量に及ぼす高CO_2濃度(1,200ppm)、高温(昼12h,33°C、夜12h,28°C)の影響を調べた。npp1変異体シュートにおいては、対照条件(光:300μmol/m^2/sec、CO_2濃度:400ppm、温度:昼12h,28°C、夜12h,23°C)から高CO2条件に移すと顕著な生重量と澱粉蓄積量の増加が観察された。澱粉蓄積については高CO_2・高温条件に置くと増加傾向がより高まることが見いだされた。このnpp1変異体の高CO_2応答機構を探るために、iTRAQ標識法を用いた定量的ショットガンプロテオミクス解析を試みた。高CO_2条件下においてnpp1変異体のタンパク質発現は野生型に比べて大きく変動することが観察され、npp1変異体が高CO_2に敏感に応答しているものと考えられた。(1)イネデンプン代謝関連糖タンパク質のプラスチド局在化機構の解明については、プラスチド糖タンパク質NPPのN-グライコーム解析が進んだ。(2)イネ野生型およびデンプン集積抑制酵素機能欠損変異体のデンプン集積特性に及ぼす高CO_2濃度および高温の影響については、npp1変異体が高CO_2環境下で高効率に緑葉デンプンを集積することが明らかになった。以上の研究成果が得られていることから、本研究課題はおおむね順調に進展していると判断される。平成24年度以降の研究計画としては、植物CO_2インキュベーターを用いてnpp1幼植物体におけるショ糖・澱粉蓄積が最大となる最適なCO2濃度、温度、光、湿度並びに窒素添加条件の決定を試みる。また、平成24年8月に竣工予定のバイオトロン群(L4.5 x W4.5 x H1.82.2m: CO_2濃度制御型4基、通常型4基;L4.5x W9 x H1.82.2m:通常型1基)を用いてスケールアップして最適条件の確認を行う。AmyI-
光学活性七員環を含む非ベンゼン系芳香族化合物の有機金属錯体の研究

七員環を含む非ベンゼン系化合物のFe(CO)_3錯体について以下のような成果を得た。1)ヘプタフルベンFe(CO)_3の合成原料になりうる6ーホルミルシクロヘプタトリエン・Fe(CO)_3を合成し光学分割用HPLCで分割できることを明かにした。現在この化合物から光学活性のヘプタフルベンへの誘導を検討している。2)7ーメチルトロポン・Fe(CO)_3をLーメントールを利用して光学分割した。この中間体として光学活性の2ーメチルトロポン・Fe(CO)_3を作りジアステレオマーの7ーメチル体とは符号の反対の旋光度を持つことを明かにした。この光学活性錯体を原料にしたFe_2(CO)_9を働かせると今まで知られていなかった光学活性なトロポンの複核錯体2ーメチルトロポン・Fe_2(CO)_6を作ることができた。あわせてこの時の反応機構も明かにすることができた。3)トロポンや7位に置換基のあるトロポン誘導体のFe(CO)_3錯体からβートロポンの鉄錯体への変換法を確立した。この錯体を出発原料として6位に置換基を持ったトロポンのFe(CO)_3錯体に変換する条件を見いだした。6ーメチルトロポン・Fe(CO)_3については光学分割用カラムを使用したHPLCで光学分割しその旋光度やCDスペクトルを測定することができた。更に、この錯体は40°C以上で3ーメチル体ヘハプトトロピーを起こすことを明かにした。4)光学活性なホモヘプタフルバレン・Fe(CO)_3との比較のために光学活性ホモヘプタフルバレンを合成した。絶対配置を明かにし、旋光度や円二色性スペクトルの結果とMO計算からホモヘプタフルバレンの立体配座も明かにすることができた。5)6位に置換基をもているトロポンのFe(CO)_3錯体からヘプタフルバレン類を合成し現在その光学活性体を得る方法を検討している。
現代英国社会における「法」と「文化表象」のナラティブの反射関係

本研究は、イギリスの法廷での傍聴、日本での法律相談や裁判員評議を分析し、市民の日常的想像力と法的想像力(法的論理)との反射関係の一端を検討することができた。さらに「法」行為の<ナラティブ>と<フィクション(文学・映画)のナラティブ>における「法」とを比較研究を、エスノメソドロジーという文学領域では新しい方法論を援用して、実際の法廷言説とフィクションの言説を分析比較し、法とフィクションにおける相互反映関係の検討して、多価値社会におけるあらたな法構築の可能性を展望した。本研究の目的は「法」と「文学(映画・テレビドラマ)」との関係を<ナラティブ>による共同体の文化表象という同一性において捉え、法のナラティブ的規範性と文学の想像的ナラティブとの異種交配のトランスレーション過程から、新たな共同体の倫理を探求するということであり、文学テキストと実際の法行為をナラティブとエスノメソドロジーの観点から分析するということが主たる方法である。本年度、研究代表者は、「実施計画書」では19世紀後半から20世紀初頭の法に関わる文学作品を分析研究する予定であったが、「偽証」を含む「証言」を記すという形で過去の重大事件を回想する「語り」と、その「証言」の真偽を考察する「語り」という二つの語りで構築されている現代小説(2008年)を計画通り、夏季にイギリスに滞在し、イギリスの裁判を傍聴し、実際法廷での「語り」の考察例を用意し、バリスター兼ジャッジのClaire Jenkins氏のインタヴューも行った。このインタヴューの概要は平成22年度にまとめて出版する予定だが、現実の法廷と一般市民のイメージを形成するフィクションの法廷の差異に言及しており、フィクションと現実の法行為の反射関係を考察する本研究に重要なものである。研究分担者は「"生ける法(Law in Action)-エスノメソドロジーの視点から)」「"ラディカルな"弁護士の法律事務所という現象」「クライアントに有罪答弁をするよう説得すること」(すべてマックス・トラバース著)の翻訳を出版して実際の法行為のナラティブ分析の重要な参照項を用意した。また、介護保険のテーマではあるが、ビデオ録画データに基づくエスノグラフィー的、エスノメソドロジーによる研究分析を実際行った。これは、法行為ヘエスノメソドロジー的アプローチに繋がっていくものである。本研究の目的は「法」と「文学(映画・テレビドラマ)」との関係を<ナラティブ>による共同体の文化表象という同一性において捉え、法のナラティブ的規範性と文学の想像的ナラティブとの異種交配のトランスレーション過程から、新たな共同体の倫理を探求するということであり、文学テキストと実際の法行為をナラティヴとエスノメソドロジーの観点から分析するということが主たる方法である。本年度、研究代表者は計画通り、夏季にイギリスに滞在し、イギリスの裁判を、特に多民族共存から発生する犯罪に注目して傍聴、実際法廷での「語り」の考察例を用意した。結婚によって英国に入ってきた外国人が離婚に際してどのような条件があれば英国での居住権を確保できるかという問題にかかわるものである。バリスター兼ジャッジのClaire Jenkins氏のインタヴューも引き続き行い、このインタヴューの概要と注を予定通り平成22年度にまとめて出版した。また、12月に韓国で開催された韓国英文学会にて、小説、演劇、詩という文学のさまざまな形式で表現された歴史的事件とフィクションの関係を考察するワークショップを企画し、他2名の研究者と発表した。研究分担者は「医療の「患者参加」の共訳し、解説を執筆した。医療者と患者とのインフォームドコンセントの問題に深くかかわっており、法と契約の問題である。それが行われるコミュニケーションの分析について、会話分析を用いていた。患者の主体的に語る病のストーリーをどのように医療者が掬い取っていけるのか、という問題を含む法と病の語りの分析である。本研究は、イギリスの法廷における「法」行為のくナラティブ>と「文学・映画などフィクションのナラティブ」における「法」とを比較研究して行くことで、実際の「法」行為の<ナラティブ>と「文学・フィクションのナラティブ」との相互作用、反射関係について、エスノメソドロジーに基づく会話分析・言説分析>という文学領域では新しい方法論を利用して、実際の法廷言説とフィクションの言説とを、経験的に分析することに依拠しつつ、多文化社会の新たな「モラル」構築への方向性を探求する点で、斬新な特徴と意義を有する研究となることを目的とした。23年度、本研究代表者は4月、英国サセックス大学で開催されたSocio-Legal Studies Associationの学会に参加し「法」と「文学」学問領域横断的な研究の重要性と有効性を再確認した。とりわけ「記憶」によって過去の罪が議論されるということ、他者(異文化など)への「想像力」が将来の法の改正につながる可能性など、「倫理」を検討することについて、20世紀末以降とりわけ注目されてきている「記憶」「想像力」の役割に着目した。

その観点から、7月ベルギーで開催された国際アイルランド文学学会では北アイルランドの作品を取り上げて「文学」による「罪」の「解放」と「癒し」について論じた。共同研究者は主としてエスノメソドロジーと会話分析の研究方法を使った相互行為論的な法社会学の観点から、日常的ナラティブと法的ナラティブとがせめぎ合う場所として、法律相談や裁判員評議を取り上げてそのビデオデータの詳細な分析から、市民の日常的想像力(常識的推論)と法的想像力(法的論理)との反射関係の一端を検討することができた。こうした研究から得られた知見は、法とフィクションにおける相互反映関係の検討へと展開させることができるだろう。
光操作とiPS細胞を用いたパーキンソン病に対する自律調節性神経細胞移植療法の開発

本課題では、興奮・抑制が制御可能な光遺伝学(Optogenetics)の技術を応用した、ドパミン放出調整が可能なiPSC由来ドパミン神経細胞を移植し、PD症状の電気生理学的バイオマーカーである局所フィールド電位(Local field potential; LFP)に応じて、ドパミン放出を自律的にコントロールするパーキンソン病(PD)の自律調節性神経細胞移植療法の開発を目指した。研究全体の計画として、ステップ1では、研究代表者らが開発した、フィーダーフリー条件で培養されたヒトiPSCをドパミン神経細胞へ誘導する技術を用いてドパミン神経細胞へ分化させ、青色光で脱分極させるChannelrhodopsinと、黄色光で過分極させるarchaerhodopsinを、ウイルスベクターを用いて発現させ、光反応性ドパミン神経細胞を樹立することを目指した。ステップ2では、PD・ジスキネジアモデルマウスにおける光反応性iPSC由来ドパミン神経細胞のドパミン放出の評価と、行動評価を行い、ステップ3で、PD・ジスキネジアモデルマウスの基底核(視床下核および淡蒼球)に記録電極を挿入しLFPの変化を測定し、オフの指標であるβバンドおよびジスキネジアの指標であるγバンドの強さと、運動症状の相関を調べ、それを基に、ステップ2で得られた運動症状改善に必要な光制御を行うための光刺激強度とLFP信号の関係を検討する。初年度は主にステップ1と、ステップ2に着手した。次年度以降はステップ1で樹立した、光反応性ドパミン神経細胞を用いてステップ2のモデルマウス作成および光反応性ドパミン神経細胞移植および光操作による運動症状の制御の検討を進めていく。また、ステップ3のジスキネジアモデルマウスのLFP測定の準備を進めていく。初年度はステップ1の、ヒトiPSCへ、ウイルスベクターをもちいて、光蛋白を発現させる条件の検討を行い、また、ステップ2の、PD・ジスキネジアモデルマウスにおけるiPSC由来ドパミン神経細胞移植と、行動評価を行えたため、おおむね順調に進展している。次年度以降はステップ1で樹立した、光反応性ドパミン神経細胞のin vitro Fast-scan cyclic voltammetry法によるドパミン放出の測定を行い、青色光および黄色光による光反応を確認し、光反応性ドパミン神経細胞の品質を確認するとともに、ステップ2のPD・ジスキネジアモデルマウス作成および光反応性ドパミン神経細胞移植および光操作による運動症状の制御の検討を進めていく。多くの試薬がこれまでの在庫を使用することで節約できたため、使用額がやや計画よりも少なかった。本年度使用しなかった分は、次年度に試薬の使用が増える予定であるため、次年度使用分で購入を予定している。
再発性消化器癌患者の腹部愁訴とその軽減法-とくに腹痛と皮膚温度との関係について-

再発性消化器癌患者にとって、耐え難い苦痛とは終日持続する腹痛であり、鎮痛剤でもってしてもこれを完全に消失させることはできない。従って患者の欲求に応えるためには、疼痛発生の実態を十分把握した上で対処する必要がある。経験上、局所の皮膚温度は種々の身体状況によって変化することが知られている。すなわち、炎症の際には局所は高温域に、また動脈の閉塞性疾患では低温域となり、いずれも疼痛が起こる。疼痛緩和のために、しばしば用いられる援助として、温・冷湿布があげられるが、その効果に関しては十分知られていない。そこで、基礎実験として、上・下肢を罨法により、加温あるいは冷却すると、反対側の非罨法側上・下肢にも高温域あるいは低温域が生じ、皮膚の表面温度や深部温度、さらには血流量にも変化が起こってくることが判明した。この変化は温熱の求心性刺激が自律神経の反射によって、遠心性刺激として他の部位に伝えられるもので、介在効果と理解した。なお、罨法材料として蒸しタオル、寒・温両用湿布剤(コールド・ホットパック)、温熱パップ剤(モムホット)、貼布型温熱湿布(サーモシップ)について検索したが、材料による差もあり、その適用を十分考える必要があった。本疾患患者47名の愁訴追跡から、終末期愁訴として疼痛、全身倦怠感その他の身体的なにびに精神的苦痛が浮上したが、これらの4愁訴を緩和させるための看護プログラムを作成した。プログラム内容は患者苦痛の具体的な把握であるが、患者の言動と表情を基とした4段階方式の評価で、各愁訴につき03点、総計で012点を配した。また行動評価として、自立運動から終日臥床までを5段階に分け012点を配した。患者のQOL(Quality of Life)は行動評価-愁訴総合評価として表わし、-12+12点を配した。従って患者のQOLを向上させるためには愁訴を可及的に緩和し、行動範囲を拡大させる必要があった。癌性疼痛に対しては対症療法といっても、発生要因に適確に反応するものでなければ、これを抑えることは困難である場合が多い。今回、罨法療法の疼痛緩和に関する皮膚効果を検討するため、皮膚温と皮膚血流量の観点から基礎実験を行った。罨法材料としては蒸しタオル、寒温両用湿布剤(ホットパック)、温感パップ剤(モムホット)、貼布型温熱シップ(サ-モシップ)の4種を使用した。罨法部は左前腕の肘窩部とし、保温効果をみるためタオルで腕の全域を被覆した場合と非被覆の場合の皮膚効果につきそれぞれ追跡した。さらに上記罨法部を氷頸(氷嚢を環状にし頸部に使用)を用いて冷刺激を加えた後、肘窩部の中枢側と末梢側をそれぞれ別個に暖め、冷刺激部の皮膚温が冷刺激前の皮膚温に戻るまで観察した。罨法時間は蒸しタオル20分、ホットパック20分、モムホット90分、サ-モシップ300分とした。その結果、前記4種の罨法材料中、モムホットを除く他の3種では皮膚温、皮膚血流量共に上昇した。皮膚温の上昇と温熱持続の点で優れた罨法材料はサ-モシップであった。モムホットは冷刺激効果を有し、皮膚温は下降した。前記4種の罨法剤使用時、タオル被覆により皮膚温と皮膚血流量はいずれも上昇し、罨法効果があると判定した。

サ-モグラフィ-による皮膚効果判定では、非罨法側(右腕)の前腕は罨法側(左腕)の前腕に極めて類似の反応を示しているのが観察された。これは自律神経機能の関与によるものと推測したが、疼痛個所に損傷があり罨法療法が加えられない場合、反対側に罨法することにより、疼痛個所に罨法するのと同様の効果が得られる可能性があることを示唆する興味ある所見と判断した。消化器癌再発患者の愁訴実態調査により、生活ニ-ズの中で最も高値を示したのが生理的因子で、その関与率は60100%であった。その内、疼痛の占拠率は2040%で、疼痛緩和が患者のQOL(生活充足度)を大きく左右した。前年度の研究で罨法の介在効果を示唆する結果を報告したが、本年度は皮膚表面温度と深部温度、血流量の面からも、介在効果の実在を検索した。顕著な変化を示したのは温罨法で、表面温度と血流量に関してはホットパックとサ-モシップは共に類似の反応を示し、上昇した。しかし深部温度についてはサ-モンシップは冷罨法効果を有し、ホットパックと異なる反応を呈した。冷罨法剤としてのコ-ルドパックは今回の実験では局所効果が顕著に現われ、介在効果は不確実であった。動脈血流障害実験ではアイスパックを用いて15分間下肢を冷却させることが、最も効果的であり、これを採用した。回復実験で最も効果な援助方法は、足浴と蒸しタオル併用であり、援助開始後40分で血流量は冷却開始前の状態にまで回復し、以後は上昇した。表面温度については援助開始後60分で冷却前の状態となり、以後は上昇した。しかし深部温度に関しては回復傾向は早期には出現せず、援助開始後70分を経ても回復しなかった。なおマッサ-ジ単独では、いずれの面での測定でも回復は遅く、効果は認められなかった。また障害患者での罨法援助は3分間という時間内で行った。動脈閉塞度に関係があり、重症例での回復は望めなかったが、軽症例では部分的に改善所見が得られた。消化器癌再発患者中最もサ-モグラフィ-によく反映したのは、癌腫の壁側腹膜への浸潤、皮膚転移、尾骨浸潤など皮膚表面から測定が可能な範囲内の変化に限定され、いずれも高温域に傾いていた。次年度は臨床例について、種々の資料を集め検索する予定である。再発性消化器癌患者38名における腹部愁訴の実態について調査した。患者の内訳は、胃癌群13名、大腸癌群12名、肝・胆・膵癌群12名、その他の悪性腫瘍群3名であった。最終入院となった期間を前、中、後期に3等分し、愁訴や症状を分析した。冬期を通じて多かったのは疼痛で、前期は85.5、中期68.5、後期66.8%となった。23名の死亡退院例につき、疼痛出現度を調査すると、前期93.5、中期79.5、後期86.3%となり、疼痛も激烈であった。全症例についていて疼痛を訴える回数を調査すると、前期1.3±1.1、中期1.2±1.0、後期0.8±0.8回となり、前期と後期の間には0.01<P<0.05の有意差をもち後期が低下していた。死亡例についても同様の傾向が見出された。ついで頻度の高い愁訴は全身倦怠感で、前・後期に高く、中期に低かった鎮痛剤の使用状況を調査すると、前期はボルタレン坐薬とペンタジンが優位となり、中期ではボルタレン坐薬のほかにも多種鎮痛剤の併用が目立った。後期では麻薬の多用が著しく、前期の2倍も使用された。鎮痛剤の日内使用状況は、午前中は少なく、午後からはボルタレン坐薬の使用が増え、ペンタジン、麻薬の順になった。深夜からはペンタジンの使用が顕著となった。
劣駆動ロボットの移動制御技術を応用した物体搬送・動的操作システム

劣駆動ロボットの運動生成と移動制御に関する技術を効果的に応用することで、革新的な物体搬送・動的操作システムの設計開発に資する理論的基礎を構築する。主に匍匐型前進・後退運動をする移動ロボットとリミットサイクル歩行・ステルス歩行をする脚移動ロボットの二つを駆動源あるい搬送対象物体として考え、これらのロボットのために構築されてきた運動生成・制御理論を物体搬送・動的操作系の問題へと拡張・変換する。また、上記の研究を通して得られた新たな知見を、劣駆動移動ロボットの運動生成・制御技術へと還元する。
癌源細胞を中心とした細胞分化・脱分化によるde novo原発性肝癌とその制御

肝内胆管癌ではgankyrinの発現増強がみられ、その発現とOct4及びOV6の発現には正の相関があり、それらの発現が高い症例は外科切除後の予後が不良であった。細胞株では,gankyrinの発現増強による変化はみられないものの、それをknockdownするとOct4の発現減弱とOV6陽性細胞数の減少がみられ、sphere形成能の減弱もみられたことから、肝内胆管癌ではgankyrinが細胞脱分化から誘導された癌源細胞の維持に重要な役割を果たしていることが示唆された。また、microRNA214がgankyrin発現を調節し、それを増強することで細胞分化が誘導されることを肝細胞癌において見出した。nduced pluripotent stem cells (iPS細胞)の確立以来,終末分化をとげた細胞のリプログラミングで幹細胞が誘導しうることが示された。肝臓でも成熟肝細胞の脱分化から前駆細胞が誘導されること,また肝細胞癌細胞の脱分化で癌源細胞(tumor-initiating cells)が誘導されることが主にin vitroで示されている。in vivoでも成熟肝・胆管細胞の脱分化から癌源細胞(de novo癌)が誘導され,また,原発性肝癌内でも癌源細胞を中心にダイナミックに分化・脱分化が起こり,腫瘍のheterogeneityあるいは外科治療後の再発に関連している可能性がある。そこで,臨床検体を用いて、すでに報告のある肝前駆細胞あるいは原発性肝癌の分化・脱分化シグナルであるgankyrin,HNF4α,Wntシグナル,Notchシグナル,SgIGSFなどの発現を検討している。現在までに45例の肝内胆管癌症例について主にgankyrinの発現を検討したところ高発現例を29例に認め、それらの外科切除後予後が有意に不良であることを明らかにした。さらに、肝前駆細胞あるいは原発性肝癌癌源細胞の表面マーカーであるOct4,OV6の発現とgankyrinの発現には正の相関がみられることを見出した。そこで、次に肝内胆管癌の細胞株HuCCT-1, HuH-28, IHGGKについてgankyrinの発現をwestern blotでしらべ、OV6陽性細胞をFACSにて検討したところ、HuCCT-1, IHGGKではgankyrinの発現とともにOV6陽性細胞が多く含まれるのに対し、HuH-28ではOV6陽性細胞数が少ないことが明らかになったため、それぞれの細胞株でgnkyrinをknock-in, knock-downすべく準備している。induced pluripotent stem cells (iPS細胞)の確立以来,終末分化をとげた細胞のリプログラミングで幹細胞が誘導しうることが示された。昨年度までに肝内胆管癌切除症例において,主に肝細胞癌の脱分化に関与し癌源細胞を誘導しているとされるgankyrinに注目して解析,gankyrinの発現と,肝前駆細胞あるいは原発性肝癌癌源細胞の表面マーカーであるOct4,OV6の発現には正の相関があり,肝内胆管癌細胞株においては,gankyrinの発現をknockdownすることによってOct4の発現減弱、OV6陽性細胞数の減少がみられるとともにsphere形成能の減弱も見出した。今年度は,その発癌にウイルスの関与しないnonBnonCの背景肝に発生した肝細胞癌(NBNC HCC)について注目し,gankyrinの発現とそれを制御しているとされるmicroRNA214について解析を加えた。その結果,NBNC HCCではmicroRNA214がdownregulateされており,microRNA214低発現症例ではgankyrinが高発現している症例が多いことが,mRNAおよびタンパクレベルで明らかになった。さらに肝細胞癌細胞株にてmicroRNA214を強制発現させるとgankyrinの発現が低下し,Oct4やCD133発現細胞数の減弱が認められることを明らかにした。医歯薬系外科系臨床医学・消化器外科学概ね順調に進展しているが、細胞株への遺伝子導入の準備に時間がかかっており、やや遅れがでている。また、並行して行う予定であったマイクロRNAについては、そのRNA抽出を現在行っている所で、その準備の時間を要し、やや遅れがでている。今後も引き続き研究目的に沿って臨床検体および細胞株を用いて癌における分化、脱分化の解析を進める。マイクロRNAについては網羅的検討は時間を要すため、gankyrinと関連するmiR214に着目して検討することとした。