hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
大きな電気物性異方性をもつビスマス層状構造化合物の設計と開発

この方法により、試料の色が半導体に特徴的な青灰色から黒色に変化し、常温での比抵抗の値は、約10^<12>Ωcmから10^610^4Ωcmに低下した。2.配向性多結晶体の作製:半導体化剤としてのNbを添加した原料粉体の仮焼成、粉砕の後、ドクターブレード法により厚膜作製、焼成を行ったが、結晶配向性に優れた試料は作成できなかった。そのため、KC1を融剤としたフラックス法により、微少な単結晶の作製を試みた。その結果、直径が13μm程度、厚さが1μm程度の板状微結晶が合成された。その板状結晶と有機溶媒を用いて厚膜作製、アルゴン中での焼成を行い、厚さ約70μmの配向性多結晶厚膜が作製された。配向性は厚膜の基板に接する面で大きい現象が観察された。平成5年度は、得られた半導性配向多結晶体の電気物性評価、半導性の単結晶合成とその物性評価を行い、機能素子への展開を試みる計画である。ビスマス層状構造化合物は、ビスマス層と擬ペロブスカイトブロックが積層された結晶構造を持つ。本研究は、この化合物を用いて、方向により誘電性、導電性などの電気物性が大きく異なる材料を設計、開発することを目的としている。平成5年度は、チタン酸ビスマス(Bi_4Ti_3O_<12>)、チタン酸バリウムビスマス(BaBi_4Ti_4O_<15>)の単結晶を作製し、それらの電気的異方性を調べ、その異方性を生じさせるビスマス層の本質的特性を明かとした。1.チタン酸ビスマス:フラックス法により作製した単結晶で誘電性、導電性を測定した結果、室温から720°Cの温度範囲で、ビスマス層に平行なa(b)軸方向の方がビスマス層に垂直なc軸方向より誘電率、導電率ともに大きく、誘電率で10倍(676°C;キュリー温度)、導電率で約10^3倍(150°C)という異方性が示された。また、無配向多結晶体では、誘電率、導電率ともに単結晶の両方向での値の中間の値を示すことを確認した。2.チタン酸バリウムビスマス:溶融徐冷法により作製した単結晶について測定した結果、チタン酸ビスマスと同様に、a(b)軸方向の方がc軸方向より誘電率、導電率ともに大きく、誘電率で58倍(420°C;キュリー温度)、導電率で約10倍(150°C)という異方性が示された。このチタン酸バリウムビスマスの単結晶の電気的異方性は、本研究で初めて明かとなったものである。3.ビスマス層の役割:ビスマス層と擬ペロブスカイトブロックの存在比率の異なる上記2種の異方性、及び、交流インピーダンスによりそれぞれの部分の電気容量を分離して求めた結果より、ビスマス層は、誘電率の小さな常誘電体の性質を持ち、さらに、導電キャリアーに対し電位障壁として作用する絶縁層の性質を持っていることが明かとなった。これらの成果は、層状構造化合物の物性制御および異方性を積極的に利用した機能素子の設計を行う上で極めて有用であり、重要な意義を持つものである。
リンパ行性癌転移モデルラットを用いた癌転移の分子機構解析

本研究は、ラット腹水肝癌AH109Aから異なる臓器へとリンパ行性転移を示す細胞株を分離し、それらの細胞株において異なる発現パターンを示す遺伝子を単離し、その性質を解析することを目的としている。昨年度までの研究により既知遺伝子1種、新規遺伝子2種が得られており、今年度はこれらの内、新規遺伝子2種の構造解析と、申請者が一昨年度までに同様の研究により得ていた既知遺伝子であるstathmin遺伝子の機能解析を行った。そのためにAH109AのcDNA libraryを作製し、プラークハイブリダイゼーション法とファージDNAのアーム部分と得られている部分配列の一部をprimerとしたPCR法の2種の方法により、上記2種を新規遺伝子の全長cDNAの取得を試みた。しかし、より長いcDNA断片を取得したものの全長を得ることはできなかった。今後、全長の取得と機能解析に向けてさらに研究を進める予定である。一方、stathmin遺伝子については、既知の配列を元に全翻訳領域を含むcDNAをRT-PCR法により取得した後、発現ベクターにサブクローニングしたものをAH109Aにtransfectして、stathmin高発現AH109Aを作製した。この細胞は、ベクターのみtransfectした対照細胞に比べて、増殖能には大きな違いはないものの、培養器に接着した際の偽足形成が抑制され、またin vitroでの浸潤能も顕著に低下していた。さらに、尾静脈注射によりラットに移植したところ、対照細胞は肺を始め多くの臓器に転移巣を形成したのに対して、全く転移巣を形成せず、癌転移が完全に抑制された。stathminは細胞増殖との関わりにおいて研究が進められており、主として微小菅重合・脱重合の過程において中心的な役割を果たしていることが知られているが、癌転移との関わりについては全く報告されていない。しかし、本研究により得られた結果は、stathminが癌転移に深く関与していることを示しており、全く新しい知見である。さらにこの結果はstathminが今後の癌転移治療の新しい標的となりうる可能性をも示していると考えられる。本研究は、ラット腹水肝癌AH109Aより異なる臓器へとリンパ行性転移を示す細胞株を分離し、それらの細胞株において発現パターンの異なっている遺伝子を単離し、その性質を解析することを目的としている。本年度の研究により以下のような実績が得られている。すなわち、肺および腸間膜のリンパ節に転移した細胞を分離する操作を3回繰り返し、肺および腸間膜転移性AH109A細胞株を得た。これらの細胞株の臓器特異性を、転移先臓器由来の細胞である肺由来線維芽細胞および腸間膜由来中皮細胞を用いて検討したところ、肺転移性AH109Aは前者に高い親和性を示し、一方腸間膜転移性AH109Aは後者に高い親和性を示した。しかし、両細胞株を再び皮下移植し、in vivoでの転移能を検討したところ、肺転移性AH109Aは肺特異的な転移パターンを示したが、腸間膜転移性AH109Aは腸間膜特異的とは言えない転移パターンを示した。これは皮下移植による転移モデルでは、脈管系に浸潤した癌細胞が血流によりまず肺へと到達し、その後他の臓器へ向かうという動向を示すため、腸間膜に親和性の高い癌細胞は肺に到達した時点で多くの細胞が生着できず死滅したためと考えられる。次にこれら2種の細胞株において異なる発現パターンを示す遺伝子のdifferential display法による単離を試みた。その結果、現在までに3種のcDNAが得られている。そのうちの一つはmouse capping protein β-subunit isoform 2(CPβ2)と95%以上の高いホモロジーを示したことからrat CP β2そのものであると考えられた。また他の2つは既知の遺伝子とは有意な相同性のない新規遺伝子であった。来年度は、引き続きクローニングを行うとともに、これらの遺伝子の全長cDNAの取得、機能解析を行う予定である。

stathminは細胞増殖との関わりにおいて研究が進められており、主として微小菅重合・脱重合の過程において中心的な役割を果たしていることが知られているが、癌転移との関わりについては全く報告されていない。しかし、本研究により得られた結果は、stathminが癌転移に深く関与していることを示しており、全く新しい知見である。さらにこの結果はstathminが今後の癌転移治療の新しい標的となりうる可能性をも示していると考えられる。
モワット－ウィルソン症候群原因遺伝子SIP1の脳の高次機能におけるその機能解析

(1)モワットウィルソン症候群モデルマウスの作製を検討するために、コンディショナルノックアウト法を用いて、de novo型の変異モデルマウスを作出し、近交系マウスのgenetic backgroundを有した形でその表現型を検討した。(2)SIP1と同じZfhx1転写制御因子ファミリーに属するδEF1に関してもそそのfloxマウスを作製し、出生後の脳における機能について検討する。SIP1と同時に二重floxマウスを作製し解析することで、Zfhx1転写制御因子ファミリー全体としての機能を明らかにする。(1)SIP1 floxマウスを用いて、成体の脳における機能を知る目的で、タモキシフェン存在下の神経細胞でcreが働くようになる、Nestin-creERT2マウスと交配し、Nestin-creERT2によるSIP1コンディショナルノックアウトマウスの作製を行った。成体脳においては、SIP1は主に海馬錐体細胞での発現が強く、海馬でのSIP1の機能を検討することになる。現在、その形態的影響があるのかどうか観察しているところである。また、ヒトのモワットーウィルソン症候群の患者においては知的障害が必ず観察されることから、このコンディショナルマウスにおいても、学習や記憶に異状が起こることが考えられる。そこで、このコンディショナルマウスを用いて、行動学的試験も行う予定である。(2)SIP1と同じZfhx1転写制御因子ファミリーに属するδEF1は、SIP1と重複した機能を持ち、例えばある組織ではSIP1の機能を補償している可能性は高い。δEF1のnull型のKOマウスは出生までしか生存しないために、その後の脳におけるδEF1の機能を解析することが出来ない。そこでδEF1に関してもfloxマウスを作製し、出生後の脳における機能について検討することは有益な情報となる。現在、下記のストラテジーを用いて、δEF1 floxを作成中である。SIP1 floxマウスと同様の形となるように、δEF1タンパクのおよそ半分をコードし、zinc-finger等の重要な領域を含むエキソン6をLoxP配列で挟む形のflox alleleを作製する。作製したベクターを用いて、常法に従いδEF1 floxマウスを作製している。δEF1の場合は脳幹、嗅球、小脳において発現が高く、それら組織の形態と同時に、機能に関する検討を行動学的試験を用いて検討する予定である。シンドローム型の重度知的障害であるMowat-Wilson syndromeはSIP1遺伝子のde novo変異が原因となり引き起こされる。このモデルマウスであるSip1ヘテロ変異マウスは純系のC57BL/6系統の遺伝背景では系統維持することが難しかった。そこで我々は、系統維持を必要としないde novo変異型のSip1ヘテロ変異マウスを作製する系を構築し、その結果として安定的にこのマウスを得ることができるようになった。本年度はこのSip1 de novoヘテロ変異マウスにおいて、Mowat-Wilson syndromeで見られる重度知的障害と関連する症状観察されるかどうか調べるために、行動解析等を行った。その結果、Sip1 de nvoヘテロ変異マウスは、open field試験において自発行動量の低下を、高架式十字迷路試験では不安様行動を、3チャンバー試験では社会性行動の低下を示すことを明らかにした。しかし、重度知的障害との関連を想定した学習記憶を調べる実験では、少なくとも恐怖条件付け用いたシャトルアボイダンス試験において異常は観察されなかった。一方、空間認知に対する学習記憶を調べるバーンズ迷路実験において、このマウスは、実験を繰り返すことにより顕著な不動反応を示すことが見出され、本変異マウスにおける情動の変化が学習記憶能力に影響を及ぼす可能性が考えられた。尚、本結果は遺伝学分野の雑誌であるHum. Mol. Genet.において発表した。今年度は研究実績の概要に述べた計画の他に、Nestin-creERT2、CamKII-ERT2マウスを用いたコンディショナルノックアウトを行う予定であったが、タモキシフェンの投与量等の条件検討等に時間がかかり、実際のコンディショナルノックアウトを得るまでに至らなかった。これに関しては、28年度に結果を得られる予定である。本研究課題では以下の項目に関して、研究計画を立てて解析を行ってきた。それぞれの項目ごとに、得られた成果を記した。(1)SIP1-EGFPマウスを利用して、特に出生後の脳におけるSIP1の発現パターンを、組織、細胞、および細胞内局在を含めて詳細に解析する:これについては、ほぼその解析を終了した。SIP1は大脳皮質、嗅球、海馬、において発現が高く、皮質の第4層、5層の特定の神経細胞に発現が見られた。また中脳水道周辺の縫線核に発現が観察され、その一部はセロトニン産生神経細胞にも発現が観察され、これらの神経細胞の形成や機能にSIP1が何らかの役割を担っていることが示唆された。(2) SIP1 flox/flox(またはflox/+); CamKIIa-creER/+マウス、およびSIP1 flox/flox(またはflox/+);tau-crePR/+マウス、あるいはSIP1 flox/flox(またはflox/+); Nestin-creERT2)を用いて、出生後の脳の構築と機能に関して組織学的、行動学的解析を行う:これらに関して、まず組織学的解析を行った。CamKIIa

-creERマウス、およびNestin-creERT2マウスと交配させて、得られたSIP1 flox/flox(またはflox/+); CamKIIa-creER+マウス、あるいは、はSIP1 flox/flox(またはflox/+); Nestin-creERT2+の遺伝子型を持つマウスに関して、まず胎仔と新生仔における脳の組織学的解析を行ったがいずれも異常は観察されなかった。さらにこれらの成体マウスを用いて行動学的解析を行ったがこれらも対照群と比較して変化を観察することはなかった。(1)モワットウィルソン症候群モデルマウスの作製を検討するために、コンディショナルノックアウト法を用いて、de novo型の変異モデルマウスを作出し、近交系マウスのgenetic backgroundを有した形でその表現型を検討した。(2)SIP1と同じZfhx1転写制御因子ファミリーに属するδEF1に関してもそそのfloxマウスを作製し、出生後の脳における機能について検討する。SIP1と同時に二重floxマウスを作製し解析することで、Zfhx1転写制御因子ファミリー全体としての機能を明らかにする。マウスの交配などが予定通り進まないことなどが多い。実験以外の研究所内の仕事もいくつかあり、それらにも時間を取られることが多い。1Sip1 de nvoヘテロ変異マウスにおいて観察された行動異常が、脳のどの部位あるいはどの種の神経細胞によるものかを、種々のcreマウスを用いることで、明らかにする。2SIP1と同じファミリーに属するδEF1遺伝子のfloxマウスの作製を行う。発生生物学現在のところ、当初の計画通りに進める予定である。次年度使用額が生じているが、残額3,988円であり、前倒し額も含めてほぼ使用している。マウス交配の実験がやや遅れており、その為の、マウス購入や、床敷きチップ、マウス用飼料の購入が必要では無かったため。上記理由により、計画を書くにはあたらない。次年度のマウス購入、床敷きチップ、飼料の購入に充てる。
結合型アスパラギン酸異性化は老化の新たな指標となりうるか？

代謝機能の低い加齢組織、構成タンパク質凝集体内には、異性化アスパラギン酸残基(異性化Asp)が蓄積する。これらアスパラギン酸の異性化率は白内障などの加齢性タンパク質異常凝性疾患と相関するが、その定量解析は困難である。逆に、容易な定量解析法を実現できれば、その値を新たな指標とした老化関連疾患の早期予防対策が可能となる。我々は、これまでLC-MS/MSを用いた異性化Asp分析手法を開発し利用してきた。本手法では、異性化Aspの測定に、Selected ion monitoring(SIM)法の原理を用いていた。そのため、選択した分子量を有する物質のみを検出することから高感度である一方、定量性に関してはバックグランドの取り込みによるS/N比の低下などが障害となっていた。そこで、この問題に対し、本年度はMultiple Reaction monitoring(MRM)法をベースとする質量分析装置を用いたAsp異性化率の測定法開発に取り組んだ。MRM手法では綿密な条件決定を必須とするが、複数の条件で物質を検出するため、夾雑成分の多い分析においてバックグラウンドを取り除くことが可能であり定量性に優れる。また、SIM法では分析不可能であった同一分子量かつ、LC上で同一溶出時間を示すペプチド中Asp残基の分析も可能となる。本年度は、実際に複数の条件を最適化、確立した分析条件を用いて、加齢に伴い増加する水晶体構成タンパク質凝集体内αA-クリスタリン中のAsp151異性化率を年代別に定量比較した。加えて、同部位のAspを種々の他アミノ酸に置換したリコンビナントクリスタリンを大腸菌を用いて作製し、野生型との比較から、該当Asp部位(Asp151)がクリスタリン熱安定性や、クリスタリンが有するシャペロン様機能に寄与していることを明らかにした。これまでのD/L分析手法を改良し、各年代の加齢性ヒト水晶体へと用いた。現時点までの成果として、βB2-クリスタリン中における部位特異的なAsp異性化と、水晶体タンパク質凝集体内αA-クリスタリン中のAsp58, Asp151における顕著な異性化を見出している。特に、αA-クリスタリン中のAsp151に関してはαA-クリスタリンC末端側領域ループ部分に存在することから、本Asp異性化がクリスタリン分子間の相互作用へと影響を及ぼすことが予想された。したがって、これを証明するべく、Asp151を種々の他アミノ酸を導入したαA-クリスタリンを作成し、生化学的解析へと用いた。その結果、Asp151部位の変化はαA-クリスタリン凝集サイズには影響を及ぼさない一方で、該当部位の荷電状態に変化があった場合、熱安定性や、クリスタリン機能低下を引き起こすことが明らかとなった((Takata T et al. (2019) Exp Eye Res))。このように、加齢性白内障の一因となるタンパク質中アミノ酸分子レベルの変化(Asp異性化)を同定しながら、その影響を徐々に明らかにしつつある。したがって、現段階で本研究は、概ね順調に進展していると考えている。加齢性白内障の原因となる水晶体構成各タンパク質中のアミノ酸化学変化部位の同定は進行している。しかしながら、実際のタンパク質中に、そのような化学変化(例えばAsp異性化)が生じた場合に、生体に及ぼされる影響を証明するためのフィードバック実験は未だ進行していない。したがって、今後はその部分を詰めてゆく。現在、タンパク質と異性化Asp含有ペプチドを発現タンパク質ライゲーション法で連結することで、異性化Asp含有水晶体構成タンパク質を作出中である。本手法を用いて、任意の部位に異性化Aspを導入したタンパク質を作出し、このタンパク質の性質を野生型と比較する事で、実際に水晶体内構成タンパク質中におけるAsp異性化の意義を示す。また、これまでに開発改良を加えてきたLC-MS/MSをベースとした異性化分析手法は、同一質量を有しながらもLC上で分離するピーク数と、酵素処理後の消失ピークから異性化Asp有無を確認するボトムアップ式結合型異性化Asp分析手法であった。本手法にMRM法を採用した場合でも、異性化Asp含有ピーク溶出時間が重複した場合に分析が不可能な点、D-β-Asp由来のペプチドピークの検出が困難な点などの課題は残る。したがって、全種類の異性化Aspを直接、質量分析にて検出定量することのできるトップダウン式の結合型異性化Asp分析手法の開発を進めたいと考えている。近代生命科学のトピックの一つとして、加齢後の生体内タンパク質中において新しく見出されてきた構成要素、D型アミノ酸の存在を挙げる。これは、生体内タンパク質を構成するアミノ酸残基中、グリシンを除くアミノ酸全てに鏡像異性体が存在しうるという事実を指す。アミノ酸の中でも、特有の異性化機構を有するアスパラギン酸残基(Asp: L-α-Asp)は生体内条件下でD-Asp化が顕著に進行し、加齢に応じ生体内に蓄積する。この際、同時にL-β-Asp, D-α-Asp, D-β-Aspへとそれぞれ異性化は進行し、L-α-Aspと合わせて計4種類の形態をとる。おそらく、通常のタンパク質中に異常型であるD-Aspなどが蓄積することで、タンパク質構造の局所的変化が起こり、タンパク質機能不全が生じると予想される。しかしながら、これまで加齢性疾患とD型アミノ酸との相関性が示唆されている一方、その相関性を裏付ける実験的証拠は存在しない。

実験的な裏付けが進行しない原因は、D型アミノ酸を導入したタンパク質を生合成する技術が存在しない点にある。本研究では、加齢後ヒト眼球内の水晶体組織に着目し、その主要構成タンパク質クリスタリン中において、加齢依存的に増加するAsp異性化部位の同定に取り組んだ。加えて、異性化同定部位のAspを種々の他アミノ酸に置換したリコンビナントクリスタリンを大腸菌を用いて作成し、野生型との比較を行った。その結果、該当Asp部位(Asp58)の化学的性質変化(疎水性の変化)がクリスタリン凝集を引き起こすことが明らかとなった。各年代(7歳84歳)の加齢性ヒト水晶体より抽出した巨大分子量凝集体内に含まれるαA-クリスタリン中を単離して、新たに開発したD/L分析手法へと用いた。その結果、αA-クリスタリン中のAsp58異性化が年齢依存的に増加していることが判明した。加えて、別クリスタリンサブユニット(βB2-クリスタリン)中においても異性化Asp部位を見出している(Takata T et al.(2018) BBA. in press)。Asp58に関してはαA-クリスタリン中のN末端側領域部分に存在することから、本Asp異性化が、クリスタリン分子間の相互作用へと影響を及ぼすことが予想された。これを証明するべく、種々の変異を導入したαA-クリスタリンを作成し、生化学的解析へと用いた。その結果、Asp58部位の疎水性変化がαA-クリスタリンの凝集サイズに影響を及ぼすことが明らかとなった(Takata T et al.(2018) FEBS J. in press)。したがって、現段階で本研究は、概ね順調に進展していると考えている。代謝機能の低い加齢組織、構成タンパク質凝集体内には、異性化アスパラギン酸残基(異性化Asp)が蓄積する。これらアスパラギン酸の異性化率は白内障などの加齢性タンパク質異常凝性疾患と相関するが、その定量解析は困難である。逆に、容易な定量解析法を実現できれば、その値を新たな指標とした老化関連疾患の早期予防対策が可能となる。我々は、これまでLC-MS/MSを用いた異性化Asp分析手法を開発し利用してきた。本手法では、異性化Aspの測定に、Selected ion monitoring(SIM)法の原理を用いていた。そのため、選択した分子量を有する物質のみを検出することから高感度である一方、定量性に関してはバックグランドの取り込みによるS/N比の低下などが障害となっていた。そこで、この問題に対し、本年度はMultiple Reaction monitoring(MRM)法をベースとする質量分析装置を用いたAsp異性化率の測定法開発に取り組んだ。MRM手法では綿密な条件決定を必須とするが、複数の条件で物質を検出するため、夾雑成分の多い分析においてバックグラウンドを取り除くことが可能であり定量性に優れる。また、SIM法では分析不可能であった同一分子量かつ、LC上で同一溶出時間を示すペプチド中Asp残基の分析も可能となる。本年度は、実際に複数の条件を最適化、確立した分析条件を用いて、加齢に伴い増加する水晶体構成タンパク質凝集体内αA-クリスタリン中のAsp151異性化率を年代別に定量比較した。
抗体を活用した肺癌の早期診断に有用なマーカー候補タンパク質の網羅的探索

今年度は25年度に獲得した自己抗体のバリデーションに重点を置き実験を施行した。多くの論文にて報告のある精製タンパク質を抗原に用いた自己抗体測定を施行したが、検出可能な自己抗体と検出困難な自己抗体が存在することを認めた。そこで、精製タンパク質に翻訳後修飾が含まれていないことが原因の一つであることを推測し、腫瘍細胞のタンパク質を用いた自己抗体測定を行った(すなわち、腫瘍細胞を2次元電気泳動法:2-DE法によりタンパク質を単離し、そこで得られたポリアクリルアミドゲルからタンパク質を抽出した)。ANXA2は平成25年度の研究において獲得した分子であるが、本分子に対する自己抗体は精製タンパク質を用いてバリデーションを行っても健常者と肺癌患者間に有意な相関を認めない。2-DE法と免疫ブロット法を組み合わせてANXA2について詳細に解析したところ、2-DEゲル上において様々な等電点・分子量に反応が認められ、本分子は多数の翻訳後修飾を受けていることが明らかとなった。そこで翻訳後修飾を考慮し、腫瘍細胞から抽出したANXA2タンパク質を用いた自己抗体測定を行ったところ、抗原タンパク質の修飾度合いにより反応する自己抗体が異なることが明らかとなった。翻訳後修飾と自己抗体については詳細な解析が未だ行われていない。本年度の研究により、自己抗体解析の展開を翻訳後修飾の分野まで広げることができた。現在ここまでの研究を投稿論文の形でまとめているところである。26年度が最終年度であるため、記入しない。自己抗体は腫瘍マーカーとして特に早期発見が期待されているが、現状では報告の大半が腫瘍組織及び細胞に焦点を当てており、腫瘍間質には着目していない。Micke Pらが報告[Micke P et al.Lung Cancer 2004 ; suppl 2 : S163-S175]しているように、腫瘍細胞は自身単体だけではなく、周りを取り巻く微小環境を構成する血管内皮細胞や腫瘍関連線維芽細胞等と密接に連携して増殖している。平成25年度は肺癌患者3例の組織及び血清を対象とし、プロテオーム解析により、多数の自己抗体を検出した。免疫染色の結果、特に腫瘍問質のみに局在する抗原に対する自己抗体も獲得することができた。本年度の研究は、腫瘍の浸潤や転移を早期に発見、又は術後の再発や転移を予測できる可能性がある。次年度にあたる平成26年度は本年度に獲得した自己抗体の血中濃度を測定し、臨床データとの相関を深く検討し、臨床応用に近づけるべく研究を行っていく予定である。以上平成25年度の成果は、ヒトプロテオーム研究の中枢であるHUPO主催の国際学会であるHUPO 12th Annual World Congressにて示説発表を行い、海外の研究者と活発に議論を交わした。また病理学の大規模な学会である日本病理学会にも参加し、本研究に対する有益なアドバイスをいただくことができた共に、多くの先生方と活発な討論を行うことができた。さらにここまでの成果に関してはBiomedical Research誌へ投稿し、受理された(Kobayashi M etal. Biomed Res 2014 ; 35:133-143)。平成25年度の交付申請書に記載した実験計画にて計画した全ての工程を計画通り施行することができた。さらに本年度検出することができたAnnexin A2については、肺癌患者と健常者で自己抗体の持つエピトープが異なる可能性も考えられたことから、本年度の研究は計画以上に進展したと考えている。今後は平成25年度に検出、着目した4種の自己抗原について、多数例の肺癌患者及び健常者血清中の自己抗体相対濃度を測定する。その際、癌患者と健常者で自己抗体の認識するエピトープが異なる可能性が考えられたことから、抗原タンパク質は合成したものと腫瘍細胞より抽出したものの2種を用いる予定である。尚、上記実験に際しては手技・方法は全て確立しているため、遂行上の問題点は無い。
挿入歌を手がかりとした近世英国演劇の文化史的再読可能性に関する研究

本研究の成果は以下の3点に要約できる。1.楽曲がもつ文字とは異なる楽譜という異質で高度な伝達形式に依存する性格、書記による体験の共有の困難さを利用して、演劇は、舞台は版本にたいする優位性を保とうとした。2.挿入歌は韻律、メロディ、演奏形態などの制約を通じて、主として喜劇作品において、身体性に依存しようとする道化役者の暴走を制御した可能性がある。3.挿入歌は劇の中にありながら、プロットの外、観客の「いま」への参照性も付与されている。このことにより、台詞の言外の意味作用(パロディ、アイロニー、諷刺)の効果が醸し出される可能性も少なくない。国内各地の研究機関での準備的なリサーチを経て、大英図書館で、主として初期近代英国の楽曲に関するデータを閲覧取材し電子データ化を行った。当該年度の研究の過程で、体液の理論や錬金術などを接点とした音楽と数学の言説の関係の深さについて発見するところが多く、このことにより、演劇作品を媒介として音楽・空間表象がさらに数学的な記号論理とも共鳴しつつ、大きな表象文化の層を形成していることが次第に明らかになってきた。このことが演劇研究に与える影響は、上演空間論の問題にとどまらず、おそらくは作品理解にも新たな切り口をもたらしうるとの手応えを感じている。本年度の研究の具体的成果としては、挿入歌が演劇のプロットを相対化するメカニズムを考察することから開始された研究が、演劇作品の物語的時間(プロットの時間)と舞台上での表象の時間(あえて、「上演の時間」とは区別する)との間にずれを招き入れるきっかけとしての楽曲の効果についての考察を経て、台詞そのものの反復を媒介とした変容、ずれにたいして観客の意識を引き寄せてゆくメカニズムについての、より緻密で多元的なひろがりへと接続されたことが、なによりの収穫であったと考えている。その詳細は、今後精密な議論へと纏め直される必要があるのだが、とりいそぎ第一報として、「近世初期英文学におけるエコー系譜についての覚え書き」『岩手大学英語教育論集』No. 16に、論文として公表した。近代初期英国における、音楽と数学の言説の出会いは、さらにもうひとつのより大きな問題、すなわち時間の概念の近代化というより大きな問題へと発展する可能性を持っている。研究最終年度には、挿入歌の機能に関する考察の先に、次の研究課題として、時間論への展望を持つことができると思われる。前年度のリサーチの結果解明されてきた、近代初期ヨーロッパにおける音楽と数学、天文学の言説の相関について、さらに調査を重ねる一年となった。主として1当時の英国における音楽理論に纏わる文献を読み解く過程で、錬金術やカバラなど、「魔術」として近代科学的合理主義の言説にその座を明け渡すことになる知の体系の彼方に、ピタゴラスやアリストテレスの言説が強い影響を与えていること、2それらの言説がいくつかの演劇作品の挿入歌の意味作用に、こんにちでは忘却され失われてしまっている効果が期待されている可能性について考察した。これらのいわば「忘れられた」音楽の効果についての知見は、たとえばシェイクスピア『テンペスト』における音楽の効果が、プロスペローの魔術の本質にかかわるものであること、さらに同作品がmasque(宮廷仮面劇)の構造をなぞり、かつ放棄するデザインをおそらくは意図的に纏っていることなどの仮説へと展開されることになろう。さらに、王政復古期、さらには王立協会の設立などで、急激に進む科学的合理主義が、逆説的ではあるが、劇中音楽の形骸化・記号的退行をもたらす様子についても、その手がかりを得つつある。近代は音楽の魔術性を喪失したのだ。上記の知見を得るために、当該年度においては研究者にとって膨大というべき史料の精査が不可欠であったこともあり、年度内にその実績を論文や学会発表のかたちで残すことができなかったが、次年度以降、順次成果は公表できるものと確信している。また、当該年度の研究を通じて、貴重な一次資料の所在について、アメリカのFolger Shakespeare Libraryや英国British Libraryなどに具体的な情報を得ることができた。この準備状況を経て、次年度は海外での一次資料の閲読を中心とした活動を行う。これにより、本研究は当初の計画に概ね沿ったかたちで続行可能と思われる。初期近代英国演劇、とりわけ商業演劇においては、挿入歌の楽曲の部分がそのためだけに作曲される機会は相対的には多いとは言えないことが、残存する楽曲のタイトルの調査から、当初推測された。だがその一方で、劇的な曲名や歌曲の歌詞に見られる演劇作品の台詞との一致(あるいは反映)が、それら楽曲が演劇上演に際して用いられた可能性について示唆するところ大でもある。舞台と歌曲・楽曲とは、(戯曲の版本と、より高度な製版技術を要求し、それゆえ戯曲台本ほど流通、残存しにくかった楽譜との関係を考慮してなお)空間・時間芸術としての現象的側面を共有していた。

その祝祭性を記述し固定することで(本というかたちで)所有しようとする市民社会の(資本の論理に駆動された)欲望がすくいきれなかったいくつかの要素について考察した。挿入歌が演出において大きな意味を持ち始める様子を、ト書きの充実度のみを手がかりに論ずることは危険である。他方、たとえばシェイクスピア劇におけるケンプ、あるいはタールトンといった身体性を売りにしていた役者と、台本における「詩行」とのせめぎあいをてがかりとして、韻文が役者のオーバーアクションを規制しようとしていた可能性を考察することも可能であるように思われる。宮廷仮面劇やバロック・オペラのように音楽性をより強調し、特化した様式が確立され独自の深化・進化をたどっていったことにより、「挿入歌をもつ演劇」は、消費文化としての演劇史の観点からは、衰退してゆくことになる。だがオペラが楽曲によって展開してゆくのとは正反対に、挿入歌がプロットを立ち止まらせるとき、演劇はその様式にたいして否応なしに自覚的であることを迫られる。Richard BromeやJohn Gayは、挿入歌が作劇術のみならずプロットの必然にも寄与することを例証した希有な例であろう。それはまさに、ジャンルの交差点だったのである。近世英文学内容的には、本計画当初には到達していなかった新たな問題系への視点を得ることができた点で、当初計画を上回る成果を上げている。しかしその反面、当初計画にあった楽曲、歌曲と演劇作品との具体的な同定作業は、やや困難に直面していることも否めない。しかしながら、大英図書館でのリサーチを通じて一気に情報が質・量ともに向上したので、研究最終年度においては、当初計画を達成することは十分に可能であると考えている。成果の発表という観点からも、初年度は達成できなかった論文による中間報告を実現することができた点でも、当初計画にたいする初年度の遅れは十分に取り戻せたと考えている。また、最終年度を迎えるにあたり、次の研究テーマへの連続性・発展性へのたしかな手がかりを掴んでいることからも、本研究の達成度は概ね順調であると考えられるだろう。前年度までに解明された、演劇における音楽のコンテクストとしての数学的思想の体系の重要性について、本年度はより具体的、かつ体系的な調査を行うことができた。年度内にその成果を活字や学会発表で公開することができなかったことだけは想定外であったが、それはむしろ、研究すべき対象の規模・多様性に起因することであり、次年度以降の研究の奥行きを保証してくれる豊かな鉱脈を探り当てたことの証左であると考えている。また、本年度の調査によって、海外の稀覯史料の所在情報なども明確なものとなり、これによって、次年度は効率的な調査旅行を計画することが可能となった。劇中の挿入歌を研究対象とする本計画において、当初クリアすべき大きな問題のひとつであった、楽曲情報の検索・整理・再生・評価の方法については、パソコン上に構築したデータベースにmp3形式のファイルで格納し、iPodを用いて検索・再生を容易にできるシステムを構築したことで、方法論的には一応の解決をみた。この点も、今年度の達成度について評価できる点であると確信している。
中枢神経系ミエリンタンパクを指標とする脊椎動物の進化の研究

中枢神経系ミエリンタンパクPLP(プロテオリピドタンパク)、MBP(ミエリン塩基性タンパク)、およびCNP(2',3'-環状ヌクレオチド3'-フォスフォジエステラーゼ)について、以下のような結果を得た。1鳥類両生類のCNPのcDNAクローニングとウェスタンブロット解析を行なった。魚類CNPのクローニングには成功していない。ウシガエルからはCNP1型のcDNAが、ニワトリからはCNP2型のcDNAが分離された。ウェスタンブロット解析によると、ウシガエルではCNP1と思われる一種類のアイソフォームのみが、ニワトリではCNP2の特異抗体と反応するメジャーバンドが検出された。2 CNPのアミノ酸置換率を脊椎動物の分岐年代に対してプロットすると、アミノ酸置換はほぼ時間に比例して起こっていることがわかった。ところが、同時にプロットしたPLPとMBPはほぼ時計様のアミノ酸置換とは著しく隔たった変化を示した。すなわち、PLPとMBPは3億年以上前には現在よりずっと速い速度で進化していたことが明らかになった。cDNAのヌクレオチド配列について同義置換と非同義置換を比較したところ、3億年以上前にはPLPとMBPの両遺伝子に正の淘汰がはたらいていた可能性が示唆された。3 PCRによりシ-ラカンスPLP/DM20遺伝子の断片が得られた。今後、シ-ラカンスの進化上の位置を分子レベルで探るために役立つと思われる。
CRISPRiシステムを用いたシス制御領域の新規機能解析法の確立

シス制御領域の胚発生におけるin vivoでの機能を、短期間で効率よく解析する有効な実験手法はいまだ確立されていない。そこで、ヌクレアーゼ活性欠失型Cas9(dCas9 )を用いたCRISPRiによって、シス制御領域の機能解析が可能かどうかを、ツメガエル胚を用いて検討した。ルシフェラーゼレポーターアッセイの結果、dCas9をmRNAの顕微注入によって発現させても、タンパク質をそのまま顕微注入しても、レポーターの発現にCRISPRiはほとんど影響を与えなかった。この結果は、ツメガエル胚に内在する転写制御装置が、DNAに結合しているdCas9を容易に押し出してしまうことを意味している。CRISPRiシステムを発生学実験に応用し、シス制御領域の機能解析を試みるため、実験に用いる各種dCas9コンストラクトを作成した。そこからmRNAを合成し、Xenopus胚に顕微注入して、各コンストラクトの細胞内局在を、共焦点顕微鏡により観察した。その結果、NLSを融合したコンストラクトは効率よく核に局在していること、GR融合型コンストラクトはDEXの付加によって核へと移行していくことが確認された。また、Western blotting解析により、dCas9コンストラクトは全長タンパク質が合成されていることも示された。NLS融合型、GR融合型、どちらもVP16もしくはenRを付加したものを同時に作成しており、それぞれ人工転写活性化因子、人工転写抑制因子として働くことが期待される。標的配列に対するgRNAコンストラクトとしては、まずLuciferase reporterの転写抑制用gRNAを作成した。さらに、シス制御領域の標的配列として、GAL4UAS、TOPFLASH、Xenopus tropicalis gscのU1領域、Xenopus tropicalis wnt8aのU1領域、に対するgRNAコンストラクトを作成した。CRISPRiシステムを発生学実験に応用し、シス制御領域の機能解析を試みるため、Xenopus胚を用いた予備実験を行った。まずは、Luciferaseレポーター遺伝子の転写開始部位付近に設計した転写抑制用gRNAを用い、既報のCRISPRiシステムがXenopus胚で機能するかどうかを検討した。しかしながら、種々のコンストラクトのmRNA、gRNAをを様々な濃度で顕微注入してLuciferaseアッセイを行ったものの、目立った抑制効果が見られなかった。さらに、シス制御領域の標的配列として、TOPFLASHレポーターのTcf結合サイトに対するgRNAコンストラクトの効果もLuciferaseアッセイで検討したが、顕著な抑制効果を示す結果は得られなかった。連携協力者の協力の元、goosecoid遺伝子のプロモーターをつないだレポーターコンストラクトと、同プロモーター内の既知の転写因子結合配列に設計したgRNAコンストラクトを用いて、Xenopus胚を用いたLuciferaseアッセイも行ったが、こちらでも抑制効果は検出されなかった。これらの結果は、Xenopus胚において、外来レポーターDNAに対してCRISPRiシステムが十分に機能しないことを示唆している。外来レポーターを用いた予備実験で思うような結果が得られず、実験計画の大幅な変更が必要となってしまった。内在シス制御領域に対する解析に切り替える必要があったが、十分な進展を得られなかった。したがって、残念ながら「遅れている」という達成度になった。ツメガエル胚に対してmRNAを顕微注入する代わりに、dCas9およびCas9タンパク質を各種gRNAとともに顕微注入し、ルシフェラーゼレポーター解析によってその効果を検討した。その結果、Cas9タンパク質を注入した場合はレポーターの発現が阻害されたものの、dCas9タンパク質では阻害されなかった。この結果は、Cas9タンパク質によってレポーターDNAが切断されればレポーターの発現量が下がるものの、dCas9タンパク質が結合するだけでは、内在の転写制御タンパク質によって押し出され、阻害効果をもたらさないことを意味している。したがって、dCas9を用いたシス制御領域の機能解析実験は、少なくともツメガエル胚では有効な手段となりえないことが示された。当初の予定通り、実験に用いる各種コンストラクトを作成し、dCas9の核局在は確認できたが、実際にCRISPRiを試すまでには至らなかった。また、ツメガエル胚以外での解析も進んでいないため、「やや遅れている」という達成度になった。しかし、外来レポーターを用いた実験はすぐにでも始められる状況であり、内在のシス制御領域に対する解析に移るのにそれほどの遅れはないと考えられる。外来レポーターに対するCRISPRi実験は成果が得られなかったため、内在のゲノムDNAに対してCRISPRiが作用しうるかどうかを検討する。解析対象動物はXenopusに絞り、実験手法の確立を目指す。まずは、転写活性化ドメインや、転写抑制ドメインを融合させたdCas9コンストラクトを用いて、特定の遺伝子の発現亢進および抑制ができるかどうかを検討する。これらの実験によって、CRISPRiシステムが胚発生における遺伝子発現調節ツールとして機能するかどうかを明らかにする。発現の増減そのものは原腸胚でのin situハイブリダイゼーションで確認し、後期胚で表現型が得られるかどうかも合わせて検討する。

解析対象遺伝子として、腹側での機能亢進で二次軸を作ると考えられるsiamoisと、背側での機能阻害でサイクロプスの表現型が得られると期待されるgoosecoidを解析する。これらの実験で良好な結果が得られれば、シス制御領域(CRM)の機能阻害実験を試み、CRMi実験の実現性を検討する。解析対象遺伝子としては、多くの時期特異的エンハンサーが同定されているotx2を用いる。発生生物学・進化生物学まず、完成したコンストラクトを用いて、外来レポーターに対してCRISPRiが有効かどうかを早急に確認する。実験を効率よく進めるため、研究協力者(東京大学・平良眞規准教授)にコンストラクトを送付し、これら予備実験への協力を依頼する。その後、内在の遺伝子発現制御に対して、CRISPRiが作用しうるかどうかを検討する。ツメガエル胚以外での解析は、ホヤ胚にしぼり、brachyuryの発現制御機構に対するCRISPRiの効果を検討する。ヒストン修飾酵素を融合したdCas9は未作成なので、これも作成し、局所的なエピジェネティック操作が可能かどうかだけでも検討する。当初予備実験として計画していた単純な実験系で思うような結果が出ず、実験条件や検討方法の大幅な見直しが必要となった。また、研究代表者のその他の研究業務の多忙、および平成26年7月に生まれた第一子の養育により、研究計画が大きく遅延した。研究協力者も、他の業務に多忙を極め、思うような協力が得られなかった。したがって、本研究課題の補助事業期間の延長が必要となった。本研究課題の目的をより精緻に達成するため、追加実験を行う。次年度使用額は、実験動物(アフリカツメガエル)や実験に必要な試薬およびプラスチック・ガラス器具を購入するための消耗品費に充てる。
熱帯アジアにおけるアブラヤシ小農の自律性と持続可能性

本年度は、協力者の葉山がフィリピン南部での現地調査を行ったほか、祖田・生方・葉山がマレーシア・サラワク州での共同調査を2度行った。いずれも現地調査を中心とした方法で、これまで明らかにされてこなかった状況を把握することが可能になった。フィリピンにおいては、貧困対策としてのアブラヤシ栽培への期待がかかっているものの、初期投資や土地確保の困難があり、またココヤシ栽培中心の生業形態の転換が難しく、小農の重要な生業となりえていない状況が明らかになってきた。政策的にも、輸出産品としてのココヤシとどのようにバランスをとってアブラヤシを補助していくべきかの方針が明瞭になっておらず、貧困解消のツールとしての意義は、現在までのところ、明確になっていない。マレーシア・サラワク州での調査においては、従来のプランテーション優位の状況に対して、小農たちがアブラヤシ生産者団体を設立するといった新たな動きが見られたほか、国際市場を意識した認証制度の導入にも積極的に動いており、対プランテーションを意識した小農の自律性確保の諸戦略を見出すことができた。とくに、認証制度は、環境保全と労働者福祉を主眼に置いた新制度であり、小農がこれに翻弄されながらも、従来とは全く異なる生業として営農することを意識しつつあることは、大きな変化であると思われる。昨年度までの、マレーシア、タイ、フィリピンでの調査経験から、これらの比較検討を行うことで、小農にとってのアブラヤシ栽培が、どのような可能性とリスクを持ち得るのかを検討する材料はおおよそ整ったと考えられる。これらをもとに、東南アジアの小農の展開可能性についての学会発表および論文執筆を準備中である。2016年度は、アブラヤシ小農に関する情報収集を行うと同時に、2度の現地調査を行った。具体的には、第1回目の現地調査として、9月にタイ南部におけるアブラヤシ小農の卓越地域で行った。この調査では、研究協力者の生方史数(岡山大学)と代表者の祖田亮次が現地訪問し、農業局やその他機関の担当者にアブラヤシ栽培の現状についての聞き取りを行うと同時に、統計的資料を得ることができた。また、いくつかのアブラヤシ小農の農園を視察し、栽培方法や流通方法、土地利用状況などについての聞き取りを行ったほか、農民組合の会議に参加して、現在の小農経営にとってどのような問題点があるのかについて把握することができた。2017年3月には、祖田が単独でマレーシア・サラワク州での現地調査を行った。サラワク州では、アブラヤシ小農のフロンティア地区であるビントゥル省とシブ省の複数の小農農園を訪れ、聞き取り調査を行った。とくに、小農による栽培本数の増加状況や、農園経営の際の労働力調達についての聞き取りを中心に行い、インドネシア人などの外国人労働力が在地社会に入り込んでいる状況について確認した。タイ南部においては、小農育成の観点から、公的機関による様々な支援があり、プランテーションとは異なる形での小農の活性化可能性を見ることができた。また、タイ全体の農業政策のなかにおけるアブラヤシの位置づけについて、一定の資料を得ることができた。一方、サラワクにおいては、公的機関の支援はなく、プランテーション企業との関係性において小農自身のフォーマル/インフォーマルな工夫が経営のあり方を左右していることが明らかになった。本年は、フィリピン南部での調査実施を考えていたが、調査対象地の治安情勢の悪化と、研究協力者の状況変化(在外研究で不在)から、調査地をタイ南部とマレーシア・サラワク州としたが、想定していた情報の入手はできた。各地の小農アブラヤシ栽培卓越地域の比較検討の指標として、小農の規模、栽培方法、流通方法、労働力調達、公的機関の支援・助成の有無、従来の正業との連続性/非連続性などについて、一定の情報を得ることができたので、2017年におけるフィリピンでの調査の方法についても、一定の見通しを得ることができた。研究協力者の葉山アツコ(久留米大学)・生方史数(岡山大学)と数回の打ち合わせを行い、それぞれの進捗状況について意見交換を行った。現地調査は、生方・祖田によるタイ南部スラタニ周辺での調査、葉山によるフィリピン・ミンダナオでの調査、および祖田・葉山・生方によるマレーシア・サラワクでの調査を行った。タイ南部においては、エビ養殖やココヤシから転換したアブラヤシ小農の経営戦略について調査を行ったほか、多生業農家にとってのアブラヤシの位置づけなどについても情報を得ることができた。また、ミャンマー人労働者の使用形態や、仲買人との関係性についての調査も行い、マレーシア・サラワクとの相違点を確認した。フィリピン南部では、貧困対策としてアブラヤシ栽培が推奨されているが、貧困地域での栽培が多く治安の問題を抱えている。そうしたなかで「盗まれにくい作物」として認識されている点は興味深い。その他、マレーシアからの苗の輸入状況や、山地民労働力の参入状況、搾油工場の分布と小農の販売過程などについての情報を得た。マレーシア・サラワク州では、政府系プランテーションの周辺における小農のあり方についての調査を行った。従来の企業ー小農関係とは異なる、小農の経営状況についての新たな情報を得た。また、マレーシア独自の認証制度の導入計画や、内陸先住民たちによる小農アブラヤシ協会の設立といった、小農をめぐる新しい動向について関係者からインタビューを行うことができた。3地域における状況が比較可能になる程度に情報を収集できつつあるなかで、各地の状況の相違が明瞭になってきたため、調査項目の再調整に関して祖田・葉山・生方で議論を行っている。

本年度はフィリピン南部、タイ南部、マレーシア・サラワク州の3地域におけるアブラヤシ小農の調査を行うことができた。これによって、比較すべきポイントや今後の調査の課題等が明瞭化できつつある。代表者と研究協力者の3名での共同調査は、当初、フィリピンで行うことも想定していたが、治安の問題などから集団での行動が困難と判断されたため、現地語を習得している葉山が単独で行った。そのため今年度の共同調査はマレーシア・サラワクで行うことになったが、それぞれの知見を有効に交換・活用することができ、有意義な調査となった。本年度は、協力者の葉山がフィリピン南部での現地調査を行ったほか、祖田・生方・葉山がマレーシア・サラワク州での共同調査を2度行った。いずれも現地調査を中心とした方法で、これまで明らかにされてこなかった状況を把握することが可能になった。フィリピンにおいては、貧困対策としてのアブラヤシ栽培への期待がかかっているものの、初期投資や土地確保の困難があり、またココヤシ栽培中心の生業形態の転換が難しく、小農の重要な生業となりえていない状況が明らかになってきた。政策的にも、輸出産品としてのココヤシとどのようにバランスをとってアブラヤシを補助していくべきかの方針が明瞭になっておらず、貧困解消のツールとしての意義は、現在までのところ、明確になっていない。マレーシア・サラワク州での調査においては、従来のプランテーション優位の状況に対して、小農たちがアブラヤシ生産者団体を設立するといった新たな動きが見られたほか、国際市場を意識した認証制度の導入にも積極的に動いており、対プランテーションを意識した小農の自律性確保の諸戦略を見出すことができた。とくに、認証制度は、環境保全と労働者福祉を主眼に置いた新制度であり、小農がこれに翻弄されながらも、従来とは全く異なる生業として営農することを意識しつつあることは、大きな変化であると思われる。昨年度までの、マレーシア、タイ、フィリピンでの調査経験から、これらの比較検討を行うことで、小農にとってのアブラヤシ栽培が、どのような可能性とリスクを持ち得るのかを検討する材料はおおよそ整ったと考えられる。これらをもとに、東南アジアの小農の展開可能性についての学会発表および論文執筆を準備中である。2017年度は、マレーシア・サラワク州、およびタイ南部における調査で得られた情報をもとに、フィリピンでの調査項目について再度検討を行う。それらの情報をもとに比較を行うことで、政策的・環境的条件の相違を検討すると同時に、共通点を抽出することで、東南アジアにおけるアブラヤシ小農の成立条件を、より一般性のある形で提示する。2018年度は、これらの情報をもとに、プランテーションー小農関係について議論を進める予定である。夏までに打ち合わせを行い、比較研究のための調査項目の確認を行う。また、夏季休暇中あるいは冬期休暇中の共同調査の時期と方法について確定する。各自の各地域での調査は、これまで通り継続する。2018年度はフィリピン南部での共同調査を予定しているが、治安の問題等を考慮して、タイ南部かマレーシア・サラワク州での調査に振り替える可能性もある。年度末には、それぞれの調査をもとに、3地域を比較検討する論文の執筆について議論する。
寄主-寄生者メタ個体群系の共進化的動態の解明

(1)寄主-寄生蜂系における寄生蜂の寄生効率と変動性・持続性の関係今年度は、寄主-寄生者のメタ個体群系で、寄生蜂の寄生行動の違いによって寄生効率が変わることにより、構成種の個体数変動性と系の持続性がどのように変化するかを調べた。実験は嶋田が担当した。その結果、寄生効率が高くなりすぎると、構成種の個体数変動の振幅が大きくなり、また平均個体数も低下して、全体として、系の持続性が弱まることが分かった。M.Crawley教授とM.Bonsall講師をインペリアルカレッジから招聘し、この実験系の挙動をめぐって、研究打ち合わせを行った。(2)寄主-寄生蜂系における共進化動態変化に伴う進化的側面の解析として、嶋田が寄生昆虫-細胞内共生微生物の野外・実験系で、また、Godfrayの寄主昆虫-共生微生物系の実験をそれぞれの部署で行った。そのデータをもとに、巌佐・佐々木グループが寄主-寄生者系の進化をゲーム理論モデルで解析した。また、M.BonsallはH9年度まで研究分担者に加わっていた津田みどり(九大・理・助手)の実験系を対象に、寄主-寄生者系の共進化動態をモデル解析した。(3)寄主-寄生蜂系の群集構造の解析Godfrayは植物-アブラムシ-寄生蜂系で、嶋田はマメ科-マメゾウムシ-寄生蜂系で、それぞれ群集構造の定量的調査を行い、嶋田がインペリアルカレッジに出張して、M.Hassell・Godfrayと共に研究打ち合わせを行った。(1)寄主-寄生者系の動態変化と持続性強化機構今年度は、寄主・寄生者のメタ固体群系で、双方ともに固体群動態の中で相互作用を受けながら共進化的に変化する実態を、長期実験系での解析を開始した。研究協力者として、寄主-寄生者系の空間構造モデルが専門の佐藤一憲助教授(静岡大)をプリンスト、大へ、また時系列解析が専門の津田みどり(東大、学振・特別研究員)を米国国立生態学研究所へ派遣した。さらに、寄生峰の行動解析が専門のP.Haccou講師(ライデン大)を東大・九大に招聘した。(2)寄生-寄生者系における共進化動態変化に伴う進化的側面の解析として、本年度は、嶋田の寄主昆虫-寄生峰系の実験、Godfrayの寄主昆虫-共生微生物系の実験をそれぞれの部署で行い、そのデータをもとに、巌佐・佐々木グループが寄主-寄生者系の進化をゲーム理論モデルで解析した。研究協力者として、長期実験系が専門の藤井宏一教授(筑波大)をウイスコンシン大へ、寄生者の進化が専門の原口佳大(九大、学振、特別研究員)と寄生峰の繁殖戦略が専門の小林彩(東大・院生)をインペリアルカレッジに派遣した。また、寄主-寄生者系の系統解析が専門のT.Barraclough初級講師(インペリアルカレッジ)を東大・九大に招聘した。(1)寄主-寄生蜂系における寄生蜂の寄生効率と変動性・持続性の関係今年度は、寄主ー寄生蜂系のメタ個体群系で、寄生蜂の寄生行動の違いによって寄生効率が変わることにより、構成種の個体数変動性と系の持続性がどのように変化するかを調べた。M.Crawley教授とM.Bonsall講師をインぺリアルカレッジから招聘し、この実験系の挙動をめぐって、研究打ち合わせを行った。

また、M.BonsallはH9年度まで研究分担者に加わっていた津田みどり(九大・理・助手)の実験系を対象に、寄主-寄生者系の共進化動態をモデル解析した。(3)寄主-寄生蜂系の群集構造の解析Godfrayは植物-アブラムシ-寄生蜂系で、嶋田はマメ科-マメゾウムシ-寄生蜂系で、それぞれ群集構造の定量的調査を行い、嶋田がインペリアルカレッジに出張して、M.Hassell-Godfrayと共に研究打ち合わせを行った。