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内陸アジアにおける法華経の展開

本年度の研究実績としては、チベット語訳『妙法蓮華註』の和訳を完成し、その漢文の『法華玄賛』との比定を終了した。その成果については、第1章後半を「チベット語訳『妙法蓮華註』「序品」和訳(2)」として『身延山大学仏教学部紀要』第19号に、第2章後半を「チベット語訳『妙法蓮華註』「方便品」和訳(2)」として『身延論叢』第24号に、第3章を「チベット語訳『妙法蓮華註』「譬喩品」和訳」として『日蓮仏教研究』第10号に発表した。これにより、チベット語訳テキスト全体の日本語訳とそれに対応する漢文の比定を公表した。翻訳作業と並行して、チベット語訳校訂テキストとして、デルゲ版、チョネ版、ナルタン版、北京版、金写版の校訂テキストを作成し、経典の引用文に従いナンバリングした上で、対応する漢文を並列する作業を行った。このテキストについては、校正作業を行った上で、身延山大学国際日蓮学研究所の『法華経研究叢書』として出版する予定である。また、前年度に作業を行った内陸アジアにおける『法華経』と『法華玄賛』の伝播に関する研究成果は、立正佼成会において開催された第23回国際法華経セミナーにおいて「The Lotus sutra in the inner Asia」のタイトルで発表を行った。本研究の目的は、中国に伝播した法華思想がチベットにおいてどのように展開したのかを解明することである。その基礎資料として中国法相宗の基による『法華玄賛』のチベット語訳を取り上げ、『法華玄賛』とヴァスバンドゥの『法華論』のチベット伝播に関する文献学的研究、漢文文献からチベット語訳の語彙に関する言語学的研究、チベットにおける法華思想の受容という思想史的研究を行う。それにより、大乗経典の内陸アジアにおける展開に関する研究方法を提示することを意図している。本年度の研究実績としては、基による漢文『法華玄賛』のチベット語訳の翻訳研究については、第1章から第4章の和訳と漢文との対応箇所の比定作業を行い、このうち第4章を完成し、その成果を『大崎学報』に発表した。この翻訳作業に並行して、チベット語の諸版本を比較対照した上でのチベット語訳校訂テキスト作成のための準備作業も継続的に行った。また、『法華玄賛』のチベット語訳における引用文献を調査し、漢文からの翻訳が省略されていない文献を特定した。これらは、チベット語訳では「注釈書より('grel pa)」の言葉で引用されているものであり、そのうちの49例中39例がヴァスバンドゥの『法華論』に確認できた。これは、チベット語訳者による漢訳『法華論』の認識を裏付けるものであることから、チベットにおける『法華論』のチベット語訳に関する情報を分析した。この結果については、6月にノルウェイのベルゲン大学で開催された国際チベット学会と9月に東京大学で開催された日本印度学仏教学会で発表した。『法華玄賛』のチベット語訳の翻訳研究については、全11章中残り第1章からの3章となっている。ただし、この3章の分量が全体の60%に及ぶが、すでに部分的に終了している箇所もある。また、翻訳と並行して、チベット語訳の諸版の対照と漢文からのチベット語訳の訳語データのサンプルの集積も並行して行うことで、校訂テキスト作成の準備作業も行っている。これらのことから、現時点で研究計画は、おおむね順調に進展していると考えることができる。本研究の目的は、中国に伝播した法華思想がちべっと内陸アジアにおいてどのように展開したのかを解明することである。その資料として中国法相宗の基による『法華玄賛』のチベット語を訳を取り上げ、漢文からチベット語に翻訳する語彙データの収集という言語学的研究と、チベットとその周辺地域における法華経の受容という思想的研究を行うことで、大乗経典の内陸アジアにおける展開に関する研究方法を提示することを意図している。本年度の研究実績としては、『法華玄賛』の未読部分である第1章の後半から第3章の翻訳と漢文の比定作業を行った。このうち、第1章前半を「チベット語訳『妙法蓮華註』「序品」和訳(1)」として『身延山大学仏教学部紀要』第18号に、第2章前半を「チベット語訳『妙法蓮華註』「方便品」和訳(1)」として『身延論叢』第23号に発表した。翻訳作業と並行して、チベット語訳校訂テキスト作成のための準備作業も行った。また、内陸アジアにおける『法華経』と『法華玄賛』に関するデータを収集分析した。特に、トルファンなどから出土したウイグル語訳の文献について考察を行った。これについては、次年度に東京で行われる国際法華経セミナーで発表する予定である。また、本研究課題の方法論を提示するために、漢文の『法華玄賛』のチベット語の特徴について、8月にカナダのトロント大学で開催された国際仏教学会において「A Commentary on the Lotus sutra translatedfrom Chinese into Tibetan」のタイトルで発表を行った。『法華玄賛』のチベット語訳の翻訳研究について、第3章を残すのみとなり、この部分もすでに着手しており、最終年度の前半ですべての解読を終了する予定である。翻訳と並行して、チベット語訳の諸版の対照と漢文からのチベット語訳の訳語データのサンプルの集積も並行して行っており、校訂テキスト作成の準備作業も行っている。

本年度の研究実績としては、チベット語訳『妙法蓮華註』の和訳を完成し、その漢文の『法華玄賛』との比定を終了した。その成果については、第1章後半を「チベット語訳『妙法蓮華註』「序品」和訳(2)」として『身延山大学仏教学部紀要』第19号に、第2章後半を「チベット語訳『妙法蓮華註』「方便品」和訳(2)」として『身延論叢』第24号に、第3章を「チベット語訳『妙法蓮華註』「譬喩品」和訳」として『日蓮仏教研究』第10号に発表した。これにより、チベット語訳テキスト全体の日本語訳とそれに対応する漢文の比定を公表した。翻訳作業と並行して、チベット語訳校訂テキストとして、デルゲ版、チョネ版、ナルタン版、北京版、金写版の校訂テキストを作成し、経典の引用文に従いナンバリングした上で、対応する漢文を並列する作業を行った。このテキストについては、校正作業を行った上で、身延山大学国際日蓮学研究所の『法華経研究叢書』として出版する予定である。また、前年度に作業を行った内陸アジアにおける『法華経』と『法華玄賛』の伝播に関する研究成果は、立正佼成会において開催された第23回国際法華経セミナーにおいて「The Lotus sutra in the inner Asia」のタイトルで発表を行った。最終年度の校訂テキスト作成作業に余裕をもたせるために、次年度は残りの章の翻訳研究を集中的に行う。また、作業を効率的に進めるために、場合によっては、チベット語諸版の対照などの単純作業について専門的知識を有する研究者に作業協力を依頼することも考える。また、本研究課題の研究方法が他の仏教文献研究においても意義のあることを提示するために、漢文の『法華玄賛』がチベット語に翻訳された特徴とその背景について考察を行い、その成果を8月にカナダのトロント大学で開催される国際仏教学会において発表する予定である。最終年度の本年は、これまでの翻訳研究に基づいて、チベット語校訂テキストを作成する予定である。漢文の対応箇所などについてはすでに特定済みなので、これらの資料に基づいて『法華玄賛』のチベット語訳、漢文をセクションごとに並べ、対応する『法華経』のサンスクリット、チベット語訳、漢文を提示する形でテキストを作成する。その作業を効率的に進めるために、チベット語諸版の対照などの単純作業について専門的知識を有する研究者に作業協力を依頼する予定である。また、内陸アジアにおける『法華経』の展開について、6月に東京で開催される国際法華経セミナーで発表する予定である。
カルボニル化合物の脱カルボニル化・脱炭酸反応によるフラグメントカップリング

本研究では、高難度分子変換として、単純カルボニル化合物の脱カルボニル化および脱炭酸反応の開発を目指している。いずれの変換反応も、環ひずみやアリル化合物など反応性の高い限定的な化合物でしか達成されておらず、単純なケトン、エステルを原料に用いる反応の開発を目標とする。原料の入手容易性から、これらの反応はクロスカップリングを補完する新しい炭素ー炭素結合あるいは炭素ーヘテロ原子結合形成反応となり得る。これらの反応の実現には、炭素ー炭素、及び炭素ー酸素という不活性結合の活性化が鍵となるため、そのための基盤研究についても実施した。具体的には以下の3つの反応を開発した。1.ニッケル触媒による芳香族カルバメートの脱炭酸アミノ化反応:芳香族カルバメートをNi(cod)2触媒と適切な二座ホスフィン配位子の存在下で160 °C、14 h反応させることで目的とする脱炭酸アミノ化体が得られることがわかった。配位子としては、A01班澤村G(北大)で開発されたポリスチレン担持型のPS-DPPBz配位子を用いた時に最も良い結果を与えた。特筆すべきことに、本反応ではフリーのアミン用いずにアミノ化が進行するため、ホルミル基を持つ基質にも適用可能である。2.ニッケル触媒によるアニソール誘導体の還元的切断反応:ニッケル触媒によるアミノボランを還元剤として用いるメトキシ基の還元的切断反応を開発した。アニソールのC-O結合切断反応では、しばしば単環化合物の反応性の低さが問題となるが、本触媒条件ではそれらの低反応性の基質に対しても効率よく反応が進行する。3.イリジウム触媒による酸フッ化物をアリール源とする脱カルボニル化型CーHアリール化反応:ニッケル触媒とBrettPhos配位子の存在下、酸フッ化物とアレーンあるいはキノリンを反応させると脱カルボニル化を経てC-Hアリール化が進行することを見出した。単純なカルボニル化合物からの触媒的脱炭酸、脱カルボニル化反応として、カルバメートからのCーN結合形成反応を開発することができた。新学術領域研究の特質である共同研究により達成できた点が評価できる。さらに結合活性化に関する基盤研究も進捗した。予定通り、他の単純カルボニル化合物の脱炭酸、脱カルボニル化反応を推進するとともに、共同研究を通じて反応機構解析を進める。
若年・中堅層の看護師に焦点を当てた転職の成果と課題の検証

看護師の転職意思決定モデルは,<認知的態度>では「自分の看護実践能力が高まる」「今よりも仕事から充実感を得られる」「自己実現の手段を得る」「私が看護師として達成すべき目標が今よりも明らかになる」の4項目,<主観的規範>では「家族」1項目,<行動の統制感>では「年齢」「思い立った時に転職すること」「人脈」3項目の計8項目から構成される。この8項目は,個人が職業人生において何を大切にして,誰の意見を尊重して生きていきたいかが反映されていた。臨床現場において看護管理者は,看護師との面談の場でモデルを構成する8項目の側面から,転職意思の程度を査定することができると考える。加藤(2019)は,人は満足と幸福の選択で満足を選び,幸福を捨てると述べている。衣食住の満足や面子を保つ満足を得るために自らが幸福になることを捨てるという。職場への満足やコミットメントを示しながら転職を選ぶ者は,彼らの価値観で職業人生を幸福に生きるための岐路に立っているのではないか。それならば,どのような価値観が彼らの転職を促すのかを把握することはリテンション・マネジメントにおいて重要である。また,「行動の統制感」を構成する「思い立った時に転職すること」への自信は転職行動を引き起こす誘因であることが示された。この「思い立った時に転職すること」への自信が高い看護師は,今後のキャリアや将来のビジョンが見えない状態で転職意思を高め,転職行動に移る可能性があるため,転職行動を予測する上で重要な項目である。今後,本モデルを活用することで,従来の組織側の問題点の改善を目指すリテンション・マネジメントだけではなく,転職意思を高める個人側の要因という視点からスタッフを観察することで,看護師一人ひとりに合ったリテンション・マネジメントの検討を可能にすると考える。職務満足感と幸福感との関連を測定するための尺度選定、もしくは尺度作成に向けて文献調査中であるが、職務満足感および幸福感それぞれの先行研究についての調査が不十分であるため。職務満足感および幸福感の先行研究をまとめ、本研究において使用する尺度選定またはこれらの関連項目を文献より抽出し尺度を作成する。尺度選定後は、調査研究への参加施設を無作為に抽出し、一次調査への参加同意書・説明書を発送する。昨年度の研究進行状況がやや遅れたこと、人件費でデータ入力する予定であったところを自身で実施したため。
ハイブリッド脂質の界線吸着より紐解く生体膜のナノドメイン形成原理

生体膜のラフトと呼ばれるナノドメインは、膜の高度な機能の場として注目されている。ドメインの境界線にはpN程度の過剰エネルギー;線張力が生じており、線張力に寄与する以下の2つの因子;界線を収縮させる“接触エネルギー“と界線を伸長させる"双極子間斥力"の拮抗によりドメインの形態(形状とサイズ)が決まると予想されている。そこで本研究では、生体膜のモデルとしてリン脂質やコレステロールからなる単分子膜や二分子膜を対象に選び、ドメイン形成や形態と線張力との関わりを詳細に検討した。1.単分子膜系:界面張力法、X線反射率法、ブリュースター角顕微鏡を組み合わせることで、コレステロールとリン脂質が凝集した高分子密度膜領域にリン脂質に富む数μm程度の低密度ドメインが分散した不均一構造を形成することが判明した。ドメイン内外の正確な組成も定量することに成功し、ドメイン形態がドメイン内外の分子混合状態と相関していることを実証した。その一方で、接触エネルギーと双極子間斥力を見積もるのに使われる従来の理論式が、混合系における両物性値を算出するのに適しておらず、更なる改良が必要であることも見出された。2.二分子膜系:前年度末、コーネル大学にて行った飽和脂質、不飽和脂質及びコレステロールからなる二分子膜を対象とした線張力計測実験の結果を再解析した。その結果、ドメイン内外の厚みの差が線張力に大きな影響を与えることを実験的に見出した。一方で、実験値と従来の理論より算出された理論値との値は大きく隔たっており、こちらの系でも理論式の見直しが必要であることが示唆された。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は、生体膜ラフトの様な微小ドメインの分散構造形成原理を線張力の観点から紐解くことである。リン脂質/コレステロールからなる生体膜を模した油/水界面膜や二分子膜ベシクル等でのドメイン形態(サイズ・形状)は、ドメイン境界に生じる線張力により定まると提唱されており、流動性等のドメイン物性、対流等の場の影響、そして線張力のオーダーといった条件に適した線張力計測基盤を構築することが求められる。また、界面活性分子が界面張力を低下させミクロ液滴が安定に分散した構造をもたらすことから、線張力を低下させ微小ドメインの分散構造をもたらす界線活性分子の存在が予想される。そのため、本研究では、まずドメイン形態/線張力間の相関を明らかにし、更に、界線活性分子による線張力への影響を検証する。1:二分子膜ベシクルを対象とした蛍光顕微鏡観察実験では、ドメインの境界線で熱揺らぎが観測された。揺らぎのフーリエ級数解析するコードを作成し、実際に線張力の定量まで成功した。2:油/水界面膜の観察はブリュースター角顕微鏡によって実施された。対流等の場の影響を抑えるため、均一恒温ができる様に環境を整えたところ、ドメインの観察に成功した。この結果、ドメインは固体様で熱揺らぎしておらず、上の計測法が適用できないことが判明した。これを踏まえ、界面に電場を作り変形させたドメインの形状緩和過程を追跡し線張力を定量する手法に着手するに至っている。これらに加え、飽和リン脂質/不飽和リン脂質/コレステロールからなる3成分ベシクル系を対象に、ドメイン内外の組成が調べられ、ドメインは飽和リン脂質に富み、周囲の領域は不飽和リン脂質に富むことが確かめられている。従って、次年度の研究では、この系における界線活性分子の候補として飽和鎖/不飽和鎖を併せ持つハイブリッドリン脂質を用いて、界線活性分子が線張力に及ぼす効果を検証する。今年度は、油/水界面膜のドメイン構造観察に成功したことと、二分子膜ベシクル系での線張力計測法の確立したことの、2つの大きな成果を挙げた。油/水界面膜のブリュースター顕微鏡観察(BAM)は気/液界面に比べ極めて難しかったが、界面でのブリュースター角とガラス窓の不均一性による干渉の抑制を考慮した新規BAM用セル、及び温度制御用ジャケットの設計・作製に取り組み、問題解決を図った。また、ドメインの物性より既に構築済みの線張力計測法で線張力を定量することはできなかったが、新たな計測法を着想し、実際に導入しつつある。二分子膜系を対象とした研究の際には、コーネル大学のFeigenson教授の下に留学し、蛍光顕微鏡によるドメイン観察法を習熟し、線張力計測法の意見交換を積極的に行った。帰国後、ドメイン観察や線張力定量に成功する等、留学先で培ったノウハウや知識を自身が所属する研究グループに還元している。

ドメイン内外の正確な組成も定量することに成功し、ドメイン形態がドメイン内外の分子混合状態と相関していることを実証した。その一方で、接触エネルギーと双極子間斥力を見積もるのに使われる従来の理論式が、混合系における両物性値を算出するのに適しておらず、更なる改良が必要であることも見出された。2.二分子膜系:前年度末、コーネル大学にて行った飽和脂質、不飽和脂質及びコレステロールからなる二分子膜を対象とした線張力計測実験の結果を再解析した。その結果、ドメイン内外の厚みの差が線張力に大きな影響を与えることを実験的に見出した。一方で、実験値と従来の理論より算出された理論値との値は大きく隔たっており、こちらの系でも理論式の見直しが必要であることが示唆された。今年度の研究結果を踏まえ、来年度は次の研究を実施する;1.液/液界面膜での線張力計測に向けた取り組みを継続する。また、種々の系で線張力を計測し、単分子膜系におけるドメイン形態/線張力間の相関や線張力に最も影響を与える因子を評価する。2.飽和リン脂質/不飽和リン脂質/コレステロールからなる二分子膜ベシクルにハイブリッドリン脂質を混合させ、界線活性分子が線張力に及ぼす影響を評価する。界線活性分子がどのように線張力に影響を及ぼすかを明確にするため、二分子膜ベシクル系のドメイン内外の物性評価ができる中性子線散乱実験や蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)法や、線張力を生み出す因子を解明するために線張力計測用解析コードの改良にも着手したい。実際に微小ドメイン分散構造が確認された場合、構造情報から分散エントロピーを評価し、ドメイン分散構造の熱力学的安定性まで評価する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
二次電子ならびに反射電子モード走査型電子顕微鏡による尿細胞診の確立

本研究は、膀胱癌の効率の良い早期診断のために、従来の光学顕微鏡による情報に加えて、走査型電子顕微鏡(SEM)による細胞表面の超微形態学的情報、ならびに、免疫学的標識法による細胞表面の糖鎖を含む抗原情報を有機的に組合せた新しい尿細胞診の方法論を確立することを目的とした。(1)LMとSEMとの同一視野対比法により、SEMによる尿中剥離細胞に関するgrading systemを作成し、判定の妥当性に検討を加えた。その結果、臨床応用にたえるgrading systemが確立された。(2)SEMに関しては、判定の正確性と迅速化の目的で、通常の二次電子モードに加えて、反射電子モードの併用を検討したが、反射電子モードによる情報は、LM情報にまさるものではなかった。(3)二次電子モードではバクテリオファジT4と金コロイド、反射電子モードでは金コロイドをマーカーとして、尿路上皮細胞の癌化にともなう糖鎖変化ならびにモノクロナール抗体による癌抗原を免疫組織学的に標識することで、尿細胞診の判定に癌化にともなう機能的変化の要素を加味出来るか否かについて検討した。その結果、尿細胞診における免疫学的標識法としては、金コロイドをマーカーとする反射電子モードSEMが最も優れることが明らかとなった。そこで、金コロイド標識を行なった細胞において、同一視野の二次電子モードによる三次元的画像と二次元的画像である反射電子モードによる組成像とを、二分割した画面の上下に取り出し、2種類の信号の有利な点のみを組合せて細胞診の判定を行なうことが、最も効率の良い方法であることが判明した。本細胞診においては、従来のパパニコロ染色によるLMでの細胞診では、診断しえなかった分化型乳頭状癌の診断効率が飛躍的に向上するだけでなく、その判定に癌化にともなう細胞の機能的脱分化の要素を組入れることが可能であり、極めて有用性の高いユニークな方法論であると考えられた。膀胱癌の早期診断において尿細胞診は優れた方法論のひとつではあるものの、現在のパパニコロ染色による光学顕微鏡の判定では最も頻度の高い分化型乳頭状癌の正確な診断、ならびに、malignant Potencialの判定が不可能であり、新しい法方論が必要である。本研究の目的は、(1)走査電子顕微鏡(SEM)を用いて、分化型乳頭状癌を含む膀胱癌細胞表面に存在するpleomorphic microvilliの診断的意義を他の表面微細構造、細胞の三次元的形態変化との関連において再確認する。(2)細胞診の判定を単に形態的変化のみでなく、機能的変化も加味するため、癌化に伴う血液型抗原、レクチン・レセプターなどの細胞表面複合糖質の変化を免疫組織化学的手法を用いSEMで解析することであり、最終的には集検を含めた臨床応用可能な新しい細胞診の確立を目指す3年計画の研究である。初年度は補助金によりGWアニューラー形反射電子検出器(日製産業,タイプ30PH)を、教室所有のSEM(S-570)に組込んだ。この際、分解能の向上をはかるため日立製作所永谷博士の協力を得て、本邦初のインレンズ方式の新しいシステムとした。これにより反射電子像の分解能は飛躍的に向上し、金コロイド粒子をマーカーとする反射電子モードによる免疫電顕は、従来我々が使用してきたバクテリオファージをマーカーとする二次電子モードによる免疫電顕よりも実験目的に適合していることが判明した。しかも、両マーカーを併用する二重染色法も可能となり、以後これらの方法を使用し、細胞診の判定に細胞の機能的変化の要素を組込んでいく予定である。

一方、反射電子モードによる細胞質内の情報の質は、尿中剥離細胞という極めてヘテロの細胞集団では、凹凸情報に強く影響されかならずも有用とは言えず、形態学的grading systemとしては、二次電子モードSEMと光学顕微鏡とを併用して我々が考案したもの(J.Election Microsc.32,1983)で充分であると考えられた。現在までの研究に結果,走査型電子顕微鏡(SEM)による尿中剥離細胞の細胞診にためのgrading systemは,我々の以前の報告(J.Electron Microsc.32;27,1983)通りのもので,臨床的に応用可能であることが判明した.しかも,この形態学的grading systemに機能的変化の要素を組込むための免疫学的標識法の応用も可能であることが明らかとなった.反射電子に関しては,補助金によりGWアニュラー形反射電子検出器(日製産業,タイプ30)を教室所有の走査電子顕微鏡(Sー570)に組込み,イン・レンズ方式で使用できるシステムとした.しかし,反射電子モードによる細胞内の情報の質は,尿中剥離細胞という極めてヘテロの細胞集団では凹凸情報に強く左右され,かならずしも有用とは言えなかった.一方,金コロイド標識における標識の有無は,反射電子モードによる像が二次元的であることより,三次元的画像で判定するT_4標識法に比して簡便であり,判定の迅速化という点においては極めて優れていた.しかも,同一視野の反射電子像と二次電子像を同一画面に上下に分割して表示することも容易に可能であり,反射電子モードで標識細胞のスクリーニングを行い.その細胞の三次元的画像を二次電子モードで観察するという両システムの長所のみを組み合わせて細胞診の判定に利用しうることが明らかとなった.また,膀胱癌特異モノクロナール抗体による癌抗原の検出も上記システムで実施しうることが実験的に証明されたので,今後はT_4標識法による剥離上皮細胞における血液型抗原の消失をはじめとする細胞膜の癌性糖鎖不全の検出と金コロイド標識による癌特異抗原の栄時検索を行う予定である.前年度までの研究の結果、二次電子モードSEMによる尿細胞診の形態学的grading systemは確立されたので、本年度は免疫走査電子顕微鏡法の応用について検討した。二次電子モードによる標識法は、バクテリオファジT4をマーカーとする方法、ならびに、金コロイドをマーカーとする方法を用いた。一方、反射電子モードによる標識法は、金コロイドをマーカーとする方法を用いた。なお、標識は全て間接法で行なった。ABO血液型抗原に対する抗体は、A,B,H各抗原に対応する抗体、ならびに、レクチンを用いた。膀胱癌に対する抗体は、マウスのLeu-M_1、ならびに、MoAb-No.10(弘前大学、高橋氏より供与)の各モノクロナール抗体を用いた。バクテリオファジT4をマーカーとする二次電子モードSEMにおいて、尿中剥離細胞における血液型抗原、ならびに、癌抗原の標識は容易に可能であり、細胞診の判定に血液型抗原ならびに癌抗原の有無を加味して判定しうる方法論が確立された。しかし、観察に長時間を要し、多数の検体を短時間に処理するという点では問題が残った。同様に、金コロイド標識(40nm)も二次電子モードで可能であったが、金コイロドのサイズがバクテリアファジT4よりもさらに小さいこともあり、迅速化という点では問題の解決法とはなりえなかった。
ウイルス感染類似刺激による急性膵炎発症の分子機構

IRF2遺伝子欠損マウスでは合成二重鎖RNA投与によって再現よく急性膵炎が惹起されるが、この本態は電子顕微鏡やTUNEL染色による検討からアポトーシスであることを確認した。また、他の諸臓器においては肝臓で一部細胞浸潤が見られる他は異常が見られず膵臓特異的な現象であると言える。アポトーシスが惹起されることからアポトーシス関連遺伝子の2'5'OAS, PKR, ICE, FasやFasリガンドの膵臓での発現を検討したが異常は見られていない。また、二重鎖RNAの受容体と言われるTLR3を含めたTLRファミリーの膵臓での発現にも異常は見られていない。これまでに検討した中でIRF2遺伝子欠損マウス特異的に発現の異常が見られたのはPSTI(pancreatic secretory trypsin inhibitor)の異常昂進のみであり、合成二重鎖の刺激の有無にかかわらず見られた。恐らくこれは慢性の膵炎にたいするネガティブフィードバック機構が働いているためと思われる。一方、CCK類似体であるcaerulein投与による膵炎発症実験では、IRF2遺伝子欠損マウスは極めて耐性であることからCCK受容体を介したシグナル伝達に異常があると考えられる。ただしCCK受容体発現には異常はみられていない。IRF2遺伝子欠損マウスでは少量のインターフェロンが局所で出ていることが示唆されているが、インターフェロン受容体I型とIRF2の二重遺伝子欠損マウスにおいても膵炎は惹起されるところからインターフェロンの関与は薄いと考えられる。またTNF受容体p55欠損マウスとIRF2の二重遺伝子欠損マウス結果からTNFの関与も否定的である。この膵炎は野生型マウスへのdominant negativeIRF2アデノウイルスベクターの感染でも再現できる。また、誘導は合成二重鎖RNAではなく抗エイズウイルス薬として用いられるヌクレオチド系逆転写酵素阻害剤のジダノシンにても起こることを予備実験で確認できたことからIRF2がない状態の膵臓ではウイルスやヌクレオシド系物質に感受性が高くなっていると予想される。IRFファミリー遺伝子のうちのIRF-2遺伝子を欠損したマウスはウイルス感染によって致死性の膵炎を発症する。同様の現象は合成二重鎖RNAを投与することでも再現される。このIRF-2の膵炎における分子機構を探るために、まず古くから実験的膵炎に用いられてきたcaeruleinを腹腔内投与し検討した。その結果、IRF-2遺伝子欠損マウスは野生型に比べてcaerulein誘発性の膵炎に対しては抵抗性であることが判明した。電顕で検討したところIRF-2遺伝子欠損マウスではzymogen顆粒が極性をなくした形で膵外分泌細胞細胞質に蓄積しているもののcaerulein刺激による脱顆粒が生じにくいことが判明した。さらにアミラーゼレベルの変動をみても遺伝子欠損マウスではcaerulein刺激による影響が少なく、電顕での観察結果を裏付けることとなった。この原因を探るためにcaeruleinが結合するCCK受容体(CCKRA, CCKRB)の膵臓における発現を調べてみたが遺伝子欠損マウスで低下しているという所見は得られなかった。現在、遺伝子欠損マウスおよび野生型の膵臓からmRNAを抽出してsubtractive hybridazationによって発現に差のある遺伝子群の単離の準備を進めているところである。

以上の知見からIRF-2が膵炎発症を防ぐ役割をもっていることが示唆されたが、一方で生来野生型であった膵臓がIRF-2の発現をなくした場合も検討した。現在までに得られた知見では野生型膵臓腫瘍にIRF-2のアンチセンス処理を行うことで合成二重鎖刺激によるアポトーシス誘導が見られる。また、同様の現象は野生型マウスの腹腔にIRF-2のアンチセンス投与を行うことでも再現され、遺伝子型が野生型であっても何らかの原因によってIRF-2の低下がおこればウイルス感染によって膵炎が誘発されてくる可能性が示唆された。IRF2遺伝子欠損マウスでは合成二重鎖RNA投与によって再現よく急性膵炎が惹起されるが、この本態は電子顕微鏡やTUNEL染色による検討からアポトーシスであることを確認した。また、他の諸臓器においては肝臓で一部細胞浸潤が見られる他は異常が見られず膵臓特異的な現象であると言える。アポトーシスが惹起されることからアポトーシス関連遺伝子の2'5'OAS, PKR, ICE, FasやFasリガンドの膵臓での発現を検討したが異常は見られていない。また、二重鎖RNAの受容体と言われるTLR3を含めたTLRファミリーの膵臓での発現にも異常は見られていない。これまでに検討した中でIRF2遺伝子欠損マウス特異的に発現の異常が見られたのはPSTI(pancreatic secretory trypsin inhibitor)の異常昂進のみであり、合成二重鎖の刺激の有無にかかわらず見られた。恐らくこれは慢性の膵炎にたいするネガティブフイードバック機構が働いているためと思われる。一方、CCK類似体であるcaerulein投与による膵炎発症実験では、IRF2遺伝子欠損マウスは極めて耐性であることからCCK受容体を介したシグナル伝達に異常があると考えられる。ただしCCK受容体発現には異常はみられていない。IRF2遺伝子欠損マウスでは少量のインターフェロンが局所で出ていることが示唆されているが、インターフェロン受容体I型とIRF2の二重遺伝子欠損マウスにおいても膵炎は惹起されるところからインターフェロンの関与は薄いと考えられる。またTNF受容体p55欠損マウスとIRF2の二重遺伝子欠損マウス結果からTNFの関与も否定的である。この膵炎は野生型マウスへのdominant negativeIRF2アデノウイルスベクターの感染でも再現できる。また、誘導は合成二重鎖RNAではなく抗エイズウイルス薬として用いられるヌクレオチド系逆転写酵素阻害剤のジダノシンにても起こることを予備実験で確認できたことからIRF2がない状態の膵臓ではウイルスやヌクレオシド系物質に感受性が高くなっていると予想される。
過疎・高齢化する傾斜地集落における住環境変容の実態把握と提案

和歌山県の典型的な漁村である雑賀崎の集落についての変容のありさまを調査分析し、傾斜環境における生活空間の変容について検討した。本研究では1971年に行われた雑賀崎集落内中ノ丁筋の間取り調査資料(旧資料)のフィールドノート)をもとに、同一地区中ノ丁筋の間取り実測調査を1998年、1999年の2年間にわたり実施した。新調査により得られた結果を図面化し、それを参照資料として旧資料にも同様の図面化によるデータ化を施し、双方の資料を部屋の大きさ、床仕上げ、機能変化について比較し、約30年間にわたる家屋変容の実態と特質を明らかにした。集落レベルにおいては、傾斜地に立地する集落の変容とその特質を捉えるため、代用特性としての陸屋根と勾配屋根の変遷を、航空写真による数量的把握によって分析することを方法とした。この方法を採用する理由は、集落外からの景観が2階建の柱梁ラーメン構造の住宅集落のように見えるにもかかわらず、その内部においては勾配屋根による住居形式が多数残存しており、新旧の生活空間が交差しつつ、変容を続けていることによる。ここに得られた客観的知見にたいし、生活環境における住民意識を分析し、過疎・高齢化する傾斜地集落における住環境の長所や問題点を抽出した。またこれに並行して木造住宅の可能性を求め、狭小な敷地における木造架構の可能性を追求した。当研究では、和歌山県の典型的な漁村である雑賀崎の集落について変容のありさまを調査分析し、傾斜環境における生活空間の可能性について検討を加えようとするものである。1971年、この集落の中ノ丁と呼ばれる急階段状の路地について、両側の密集する住宅のすべてにわたり、内部の間取り調査がされた。その1次資料は不完全なまま残されており、これをもとにCADによる図面化を行い、基礎資料の不備を補完・再整備作業が続行しておりほぼ完了に近づいている。また街路の実測調査を実施し、同時に、現在の状況を全戸にわたり再調査を行い、これを同じように準次CADによる図面化としてデジタルデータ化している。またアンケート調査も実施し、これを整理中である。現在はこれら調査によって解明された変容の大きさと方向性を、実態と意識の両面にわたり分析することにより、現在集落が意識していなかった長所や問題点を抽出する作業の過程にあり、そこに変容を発生させる力学がどのようなかたちで現れているか検証しようとしている。これをもとに21世紀に向けた農山漁村住環境のモデルを提示することが出来れば、現存する多くの「不便である」と見なされている集落において、見捨てられつつある膨大な「住」における現存資産を有効に生かすことにつながっていくことが可能であると考えている。
硬化性胆管炎に対する腸内フローラを介した治療法の探索

野生型マウスにメトロニダゾールとネオマイシンを投与し、糞便中の細菌について培養法と16S rRNAを用いた定量的PCRで測定した。抗生剤の3週間の投与により糞便1gあたりの細菌数が10^8.5+/-0.3から10^7.0+/-0.2まで減少した。マッコンキー培地で培養された腸内細菌科細菌は10^6.5+/-0.5から10^5.1+/-0.3まで減少した。この条件下で原発性硬化性胆管炎モデルであるKRT19陽性細胞誘導性CDH1ノックアウトマウスモデルに抗生剤投与後タモキシフェンの投与によって肝内胆管傷害を誘導した。抗生剤投与中のマウスでは体重減少が減弱していた。タモキシフェン投与後3w時点で肝組織を摘出しHE染色で病理像を検討した。通常飲水群では既報のごとく門脈周囲、とくに胆管を中心にリンパ球を中心とする炎症細胞浸潤が誘導され、硬化性胆管炎類似の病理像と考えられた。この炎症反応はメトロニダゾール+ネオマイシンによる抗生剤投与群では著明に減弱していた。さらにシリウスレッド染色によって線維化について検討した。通常飲水群では門脈および胆管周囲に鮮明な膠原繊維の沈着がみられたが、抗生剤投与群では淡い色素の沈着にとどまっていた。免疫染色で病変の特徴を検討した。通常飲水群ではKRT19陽性の胆管襞の肥厚がみられた。CD45陽性リンパ球は通常飲水群で著明に胆管周囲への浸潤がみられたが、抗生剤投与群ではCD45陽性リンパ球は減少していた。抗生剤投与による腸内細菌叢の変化を明らかにした。またKRT19陽性細胞誘導性CDH1ノックアウトマウスモデルを用いて胆管炎を安定的に誘導し、解析することが可能となっている。さらに抗生剤投与による胆管炎の変化について部分的に解析を開始している。メトロニダゾールとネオマイシン投与群において腸内細菌叢でとくに変化している細菌を同定し、培養する。またその細菌が胆管炎に与える影響を解明するために培養した細菌を抗生剤前投与したマウスに移植し、タモキシフェンによる遺伝子変異を誘導し胆管病理像を検討する。また腸内細菌叢が胆管炎に影響するメカニズムを解析するために、腸管透過性について抗生剤投与や細菌移植によって変化がみられるか測定する。また高脂肪食などの栄養素や、自律神経、ホルモンなどの臓器間連関が胆管炎と腸内細菌叢に与える影響について、それぞれの刺激因子を投与して検討する。研究者の異動等により、当初予定の通りに研究が進展せず、次年度に持ち越すこととなった。
ガラクトサミンを用いたエンドトキシンショック低感受性マウスの解析

D-ガラクトサミン(GalN)は細菌外膜のリポ多糖(LPS)とともに、マウスに投与すると肝臓に著しい障害が誘導され、24時間以内に致死が誘導される。このモデルでは、LPSによって誘導されるサイトカインのひとつTNF-alpha(TNF)が主なファクターであることが、既に明らかにされており、誘導時にLPSの代わりにTNFがGalNとともに投与される。NC/Ngaマウス(NC)は、conventionalな飼育で、アトピー性皮膚炎が自然発症するマウスであることがわかっており、現在アトピー性皮膚炎の自然発症マウスとして確立されている。我々はLPS(10μg)plus GalN(20mg)を用いて、NCマウスに投与したところ、すべてのNCマウスが生存した。このとき、コントロールとしてBalb/cマウス(Balb)を使用したところ、すべてのマウスに死亡が確認された。NCマウスを用いて、どのようにしてGalNを用いたエンドトキシンショックモデルに低感受性となっているかを調べて、TNFによる肝細胞のアポトーシス誘導のメカニズムに関係するファクターについて検討した。コントロールのBalbマウスの肝臓でCaspase 3とCaspase 8の活性がLPS或いはTNF plus GalNの投与で上昇するのに対して、NCマウスでは上昇しないことがわかった。この結果が、肝細胞自体によるものか、或いは他の原因によるものかどうかを調べるために、BalbとNCマウスから還流法によって、肝細胞のみをとりだして、数時間培養し、TNF plus GalNへの感受性を、GalNの濃度を変えて調べた。GalN自体に肝細胞に対して毒性があるため、GalNの濃度は0-10mMで実験した。GalNは1mMの低濃度でもBalbの肝細胞がTNFによりアポトーシス誘導されたのに対して、NCでは明らかなアポトーシスは誘導されなかった。但し、GalNが5-10mMでは両者に明らかな差はなかった。TNFによるアポトーシス誘導やサイトカイン産生も含めて、TNFへの反応性に、両者の肝臓や腹腔細胞で大きな差がないと考えられたため、GalNによるTNFへの感作に両者において差があることが考えられ、GalNへの感受性について現在も検討中である。ガラクトサミン(D-GalN)とリポ多糖(LPS)を用いたエンドトキシンモデルは、劇症肝炎モデルとしても、実験的に確立されており、エンドトキシンショック(E-S)のメカニズムを検討するのに、頻用されている。NC/ngaマウス(NC)は、アトピー性皮膚炎の自然発症モデルとして知られており、主に皮膚科領域でアトピーのメカニズムの検索に使われている。今回、D-GalNとLPSをNCに投与したところ、全てのマウスが生存し、E-Sに耐性が見られた。そこで、このメカニズムについて、調べた。D-GalNとLPS投与で認められる肝臓の傷害が、controlのBalb/cマウス(Balb)に比べ、有意に少なく、肝細胞のアポトーシスも少なかった。また、Caspase3、8の活性化も明らかに、低かった。D-GalNとLPS投与による実験モデルでは、TNF-α(TNF)とIFN-γ(IFN)が重要な役割を果たすことが知られている。そこで、D-GalNとLPSを投与し、TNFとIFNを調べたところ、TNFの産生は両者に差はなかったが、IFNの産生はNCで低いことがわかった。D-GalNとLPSによるE-SはD-GalNとTNFを使っても同様の反応が見られることが知られている。そこで、D-GalNとTNFをNCに投与したところ、D-GalNとLPS投与と同様に、肝臓の傷害が有意に少なかった。このことは、何らかの理由で、NCがTNFによる細胞傷害を受けにくいことが考えられる。TNFとほぼ同様の肝傷害のモデルとして、抗Fas抗体(Jo2)の投与がある。NCにJo2の投与をしたところ、Balb同様の致死反応、肝傷害がみられた。このことは、Fasに対する反応がNCで正常に働くことを示している。FasとTNFへの反応では、一部を除いて、ほとんどが共通のシグナルを使うので、両者で異なる部分が何らかの理由でD-GalNとTNFによる反応をNCが受けにくくなっていると考えられる。今後、このメカニズムについて検討を進める予定である。これと平行し、新たなE-Sモデルを検討したところ、LPSとガラクトシルセラミドの投与により、肺を中心に傷害が起きるより臨床に近い実験モデルを見いだした。

NCマウスを用いて、どのようにしてGalNを用いたエンドトキシンショックモデルに低感受性となっているかを調べて、TNFによる肝細胞のアポトーシス誘導のメカニズムに関係するファクターについて検討した。コントロールのBalbマウスの肝臓でCaspase 3とCaspase 8の活性がLPS或いはTNF plus GalNの投与で上昇するのに対して、NCマウスでは上昇しないことがわかった。この結果が、肝細胞自体によるものか、或いは他の原因によるものかどうかを調べるために、BalbとNCマウスから還流法によって、肝細胞のみをとりだして、数時間培養し、TNF plus GalNへの感受性を、GalNの濃度を変えて調べた。GalN自体に肝細胞に対して毒性があるため、GalNの濃度は0-10mMで実験した。GalNは1mMの低濃度でもBalbの肝細胞がTNFによりアポトーシス誘導されたのに対して、NCでは明らかなアポトーシスは誘導されなかった。但し、GalNが5-10mMでは両者に明らかな差はなかった。TNFによるアポトーシス誘導やサイトカイン産生も含めて、TNFへの反応性に、両者の肝臓や腹腔細胞で大きな差がないと考えられたため、GalNによるTNFへの感作に両者において差があることが考えられ、GalNへの感受性について現在も検討中である。
低周波交番・回転高磁界における遺伝子および生化学反応への影響評価の研究

本研究では,多くの電磁界生体実験に用いられている変動磁場での環境に加え,多くの電気機器において用いられる回転磁界を発生する(1)生体実験評価装置を開発し今後の実験に供するとともに,線虫の用いた(2)2種類の遺伝子反応への影響評価を行った。以下,本研究により得られた結果について列記する。1.生体実験用回転磁界環境発生装置の開発回転磁界での影響を評価する目的で生体実験用の回転磁界発生装置を製作,完成した。装置は,直行する2磁極からなりそれぞれには2相の電源を印加する。実験空間は,60mm径,高さ30mmであり,インキュベータで恒温にされ,50mm径のシャーレを設置することができる。磁束密度は,商用周波数,50mT以下,変動率5%以下である。2.ミスマッチ修復への交流磁界の影響評価交番高磁界環境下(f=60Hz,最大B=1.0T)において,発がん・催奇形性に最も重要なミスマッチ修復に関して,in vitroミスマッチ修復系を作成し磁界を加えない系との比較を行ったが,統計的処理の結果,ミスマッチ修復系への影響は認められなかった。3.熱・磁界による複合刺激による熱ショック蛋白質の発現線虫(Celegans,PC72ubIn5)による熱ショック蛋白質の発現系を用いて,熱と磁界の複合刺激による磁界の生体影響を定量的に評価することができた。線虫の飼育温度を変化させるとともに,磁界を印加し線虫の熱ショック蛋白質発現割合を検討した。その結果,120分間,B=0.5および0.3Tの磁界を印加することにより,磁界を印加しない場合に比べそれぞれ2.9度,2.2度の温度シフトが観察された。本研究では,まずこれまでの変動強磁場での環境に加え,多くの電気機器において用いられる回転磁界を発生する実験環境を発生する生体実験評価装置を製作し,遺伝子ならびに生化学反応への影響評価を系統的に行う。以下今年度に行った結果について列記する。1.回転磁界環境発生装置の開発一般に知られている交番磁界(直線磁界)に対して,回転磁界での影響を評価する目的で生体実験用の回転磁界発生装置を設計し製作した。製作した装置は,直行する2磁極からなりそれぞれには2相の電源を印加する。実験室間は,60mm径,高さ30mmであり,インキュベータで恒温にされ,50mm径のシャーレを設置することができる。磁束密度は,50mT以下である。2.遺伝子発現への交流磁界の影響1.0Tの低周波交番高磁界下でのin vitro転写反応の合成速度,エラー出現頻度への追試実験を行ったが,これまでの結果と同様,いずれの結果も影響を認められなかった。3.ミスマッチ修復への交流磁界の影響同様な磁界環境下において,発がん・催奇形性に最も重要なミスマッチ修復に関して,in vitroミスマッチ修復系を作成したが,いずれの結果も影響を認められなかった。4.熱・磁界による相乗効果による熱ショックタンパク質の発現線虫(Celegans,PC72ubIn5)による熱ショックタンパク質の発現について,我々のグループは以前に1.0Tの交流磁界による影響を認めた。これを基に,熱と磁界による相乗効果について実験を行った。その結果,これまでに磁界(0.5T,120min)の印加により.熱ショックタンパク質の発現の増加と磁界効果が1°C以下程度に相当する結果を得た。これらについては,次年度さらに磁界強度,印加時間を変えて行い追試を行う。
NF-кB阻害薬による尿路結石治療に向けた基礎的研究

これまで私たちは、尿路結石の成因を動脈硬化症との類似点、特にNF-κBとの関連から解明しようと研究を重ねてきた。その結果、NF-κBにより誘導される多くの蛋白(OPN、MCP-1等)が炎症を惹起し、マクロファージが誘導され、結石関連蛋白を貪食した後、泡沫化し、シュウ酸カルシウム等と結合して結石の核となることを証明してきた。さらにわれわれは、腎尿細管細胞で、酸化ストレスやシュウ酸刺激がNF-κBを活性化することを見いだした。最近では、尿路結石形成時に、マクロファージが誘導され、M1マクロファージとM2マクロファージではその作用に相違があること、アポトーシスに陥った尿細管細胞のミトコンドリアが崩壊して結石原基となることを電顕で確認している。最終的に、種々の刺激によりマクロファージを中心とした炎症反応が連鎖的に起こり、結石形成につながると考えられる。現在の生活習慣は、脂肪蓄積・肥満を介して、糖尿病、高脂血症、高血圧、動脈硬化症といった生活習慣病を引き起こす。本研究では、尿路結石症の病態にアディポサイトカインの遺伝子発現が関連していることを明らかにし、治療への応用が可能であることを証明した。さらに、動脈硬化症の発生・進展への関与が報告されているサイトカイン、接着分子、NF-κB・RANK- RANKLシグナル伝達系が尿路結石形成でも同様の働きをしていると考え研究を行った。RANK- RANKLシグナル伝達系の尿路結石形成への関与は証明できなかった。NF-κBは、酸化ストレスなど多くの細胞外刺激により活性化された。引き続いて、炎症性サイトカイン、マクロファージの活性化が促進され、NF-κBが、尿路結石形成に重要な役割を果たすことが確認された。尿路結石症は生活習慣病の一つであり、その発症機序、転写因子NF-κBによって病態形成が促進されること、炎症との関連、オステオポンチンの関与など、動脈硬化症と多くの共通点をもつ。現代の生活習慣は、脂肪蓄積・肥満を介して、糖尿病、高脂血症、高血圧、動脈硬化症といった生活習慣病を引き起こす。そこで、動脈硬化症の発生・進展への関与が報告されているサイトカイン、接着分子、NF-κB・RANK-RANKLシグナル伝達系が尿路結石形成でも同様の働きをしているか否かを調べた。最初に、尿細管細胞株でのNF-κBの活性化およびRANKL、結石関連蛋白の発現の検討を行った。種々の酸化ストレス、炎症性サイトカイン刺激、シュウ酸負荷により尿細管細胞株(MDCK, NRK52E)においてNF-κBの活性化が証明された。さらに、結石関連蛋白であるオステオポンチン(OPN)の発現が誘導された。しかし、RANKLの発現誘導は認められなかった。次に、結石形成モデル動物でのNF-κBの活性化およびRANKL、結石関連蛋白の発現の検討を行った。尿細管細胞株での検討と同様にシュウ酸前駆物質の投与によりNF-κBの活性化が証明された。さらに、結石関連蛋白であるオステオポンチン(OPN)の発現が誘導され、結石形成部位においてマクロファージの遊走がみられた。また、新規NF-κB阻害薬としてIKKα阻害剤、IKKβ阻害剤を用いて、尿細管細胞におけるNF-κB活性化への影響を調べた。いずれの薬剤でもNF-κB活性化阻害は認められたが、特にIKKβ阻害剤で有意に阻害効果が強かった。

これまでの検討から尿路結石形成には動脈硬化症と同様にNF-κBが深く関与しており、NF-κB阻害剤による結石形成予防が期待できると考えられる。種々の酸化ストレスにより、尿細管細胞株;NRK52E,MDCK細胞でNF-κB・RANK-RANKLシグナル伝達系が活性化されているか否か、Western Blotting,免疫組織染色により確認した。いずれも、細胞株での発現増強、核内への移行は促進されていた。さらに、尿路結石形成モデルマウスを用いて、NF-κBの活性化(p65サブユニットの核内移行)を確認した。しかし、RANK-RANKLシグナル伝達系が活性化は証明できなかった。NF-κB・RANK-RANKL結合阻害剤および動脈硬化症、骨粗鬆症治療薬として結石治療の臨床応用可能な薬剤であるPDTC,NBD(NEMO binding domain),WP9QY,ビスフォスフォネート,OPGを腎尿細管細胞株(MDCK,NRK-52E)に添加したときの細胞障害をMTT assayで確認した。これらの薬剤での細胞障害は軽微で、臨床で使用しても問題にならないレベルであった。細胞とシュウ酸カルシウム結晶との結合能をシンチレーションカウンターにて測定したところ、NF-κB結合阻害剤(特にIKK阻害剤)により抑制されることが確認された。これはNF-κBのシグナル伝達系で発現促進される結石マトリクス(オステオポンチン)、炎症性サイトカイン(IL-1,TNF)、MCP-1などが抑制を受けたためと考えられる。以上に加え、酸化ストレスによる細胞障害にミトコンドリア機能が重要な役割を担っていることも証明した。これまで私たちは、尿路結石の成因を動脈硬化症との類似点、特にNF-κBとの関連から解明しようと研究を重ねてきた。その結果、NF-κBにより誘導される多くの蛋白(OPN、MCP-1等)が炎症を惹起し、マクロファージが誘導され、結石関連蛋白を貪食した後、泡沫化し、シュウ酸カルシウム等と結合して結石の核となることを証明してきた。さらにわれわれは、腎尿細管細胞で、酸化ストレスやシュウ酸刺激がNF-κBを活性化することを見いだした。最近では、尿路結石形成時に、マクロファージが誘導され、M1マクロファージとM2マクロファージではその作用に相違があること、アポトーシスに陥った尿細管細胞のミトコンドリアが崩壊して結石原基となることを電顕で確認している。最終的に、種々の刺激によりマクロファージを中心とした炎症反応が連鎖的に起こり、結石形成につながると考えられる現在の生活習慣は、脂肪蓄積・肥満を介して、糖尿病、高脂血症、高血圧、動脈硬化症といった生活習慣病を引き起こす。本研究では、尿路結石症の病態にアディポサイトカインの遺伝子発現が関連していることを明らかにし、治療への応用が可能であることを証明した。さらに、動脈硬化症の発生・進展への関与が報告されているサイトカイン、接着分子、NF-κB・RANK- RANKLシグナル伝達系が尿路結石形成でも同様の働きをしていると考え研究を行った。RANK- RANKLシグナル伝達系の尿路結石形成への関与は証明できなかった。NF-κBは、酸化ストレスなど多くの細胞外刺激により活性化された。引き続いて、炎症性サイトカイン、マクロファージの活性化が促進され、NF-κBが、尿路結石形成に重要な役割を果たすことが確認された。In vitroでの研究は順調に進んでいる。今後、臨床応用に向けて動物モデルを用いた実験を進めていく。今後は順次、学会発表、論文発表を行っていく予定である。24年度が最終年度であるため、記入しない。