hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新しい膜融合蛋白の精製および遺伝子クローニング

既に昨年度までの研究において、HTLV-I感染細胞ILT8M2と非感染細胞Molt-4の混合培養により生じるsyncytium細胞をラットに免疫することにより、syncytium形成を著明に増強するモノクローナル抗体(mAbR21)を得た。mAbR21が認識する分子(R21分子)はflowcytometryにより主にT cell及びFibroblast表面に検出され、Immunoblottingではほとんどすべてのcell lineにおいて55kDあるいは36kDaのバンドとして検出された。さらにmAbR21を固相化したアフィニティーカラムを用いてウシ胎児血清から17kDaの蛋白(R21分子)を精製した。その部分アミノ酸シークエンスから、R21分子は今まで報告にない新しいCXCケモカインである可能性が高い。現在、精製R21蛋白やリコンビナントR21蛋白を作製してR21分子の膜融合における作用機構の詳細な解析を進めている。また、ウイルスの侵入を効率よく阻止するHTLV-1gp21(transmembrane peptide)由来のペプチドも同定し、ペプチドによる膜融合阻止機構をgp21蛋白の3次構造の解析に基づき行っている。
3軸足底圧センサを用いた成人期扁平足患者における足底剪断力測定

後脛骨筋腱機能不全症は、扁平足変形とそれに伴う足首、足部の痛みで歩行に支障がでる疾患である。インソールなどの装具や変形矯正手術は、治療効果があることが知られるが、変形矯正の度合いを客観的に表す指標がないため、矯正の目標値などは不明確なままである。本研究では小型の3軸圧センサをインソール内に配置し、後脛骨筋腱機能不全症患者の歩行時にかかる足底圧を測定することで、治療効果や病態の定量化を試みる。
レ-ザ光化学・光工学技術を用いた血管病変診断・治療システケの開発

1.蛍光物質:蛍光物質の検索において3種類動脈硬化に特異的に集積することが確かめられた。まずへマトポルフイリン誘導体、テトラサイクリン系抗生物質2種であった。これらをin vivoにおいて投与し集積の度合が動脈硬化に応じて蛍光量の違いがあることは判明したが、個々のアルブミン値・脂質値により動脈硬化の度合以外にさらに影響されることも解った。これにより同じ程度の動脈硬化でもこれらの因子に影響され蛍光量の違いが出てくることになった。これらを現在補正中である。2.動脈硬化診断:蛍光面において蛍光スペクトラムにレ-ザ-照射面全体のその蛍光面の動脈硬化の動脈硬化の程度を表現できるようになった。しかし蛍光スペクトラムによる診断において動脈硬化自体の自家蛍光が問題となった。テトラサイクリン系の抗生物質および自家蛍光は波長として近くこれを分割するフイルタ-を考案中である。これがない場合高感度カメラによる面での診断が不可能となる。カメラがキャッチした個々の画素での動脈硬化の判定が自家蛍光に阻害されることが判明した。しかしヘマトポルフイリンは動脈の自動蛍光に影響されることなく高感度カメラでの観察がある程度可能であった。3.内視鏡:内視鏡として直径2.8mmは動脈硬化モデルである兎には不適で目的とする動脈に挿入できなかった。このためさらに我々が目的とする装置が組み込まれたさらに細口径の内視鏡開発が必要であった。しかし診断用レ-ザとしてNd:YAGレ-ザ-第3高調波の355nmを使用しているが、これを導光するフアイバ-の軟性がなく折れ易いためさらに細口径の内視鏡の開発は現在検討中である。4.個々の機材に上記に述べたごとくそれぞれの問題点はあるが、機材の統合は概ね問題なく解決できた。機器の概要:診断用レ-ザ-、治療用レ-ザ-、内視鏡、画像高速演算処理装置を購入。1.本装置は細口径の光学ファイバ-を介し低出力色素可変レ-ザ-光を参照光として各種励起物質を病変部に取り込ませて励起光のスペクトラムを解析した。現在診断学としてこの励起光を光学ファイバ-にて抽出後1画面として捉え動脈硬化部位の遍在性の観察を行っている最中である。しかし画面処理能力が遅くこのソフトウェアに対する改良が必要でありさらに血管内壁の状況に応じた治療を選択する情報源としての装置をシステム化最中である。(情報入力)2.抗生物質の一部テトラサイクリンやポルフィリンの誘導体の一部には動脈硬化血管内壁に特異的に集積しさらにレ-ザ-光照射下では特異的な光を発することを確かめており、解析の結果動脈硬化部位により蛍光強度の違いがあることが認められた。3.治療には動脈硬化の程度に応じてレ-ザ-光の波長、出力、照射時間を検討している最中である。(出力装置)4.in vitroにおいてレ-ザ-に置ける治療効果及び治療により生じた組織の障害を同様に診断し、予後との関連を解析中であり資料として情報収集の段階である。5.情報入力・解析・出力装置の効率的な結合最中である。
グラフ理論を用いた箙ゲージ理論の解析と新しい時空像の探求

(1)ヴォーテックスのモジュライ空間体積を超対称性ゲージ理論の立場から導出した。超対称ゲージ理論のヒッグス相においてある種の同変コホモロジー演算子の期待値を考えると、局所化の方法によりヴォーテックスモジュライ空間の体積を与えることが示される。一方、同じ演算子の期待値をクーロン相において評価すると簡単な留数積分に帰着し、厳密にモジュライ空間の体積を求めることができる。今年度の研究では、これらヒッグス相とクーロン相における評価の等価性を局所化の方法の結合定数の普遍性から厳密に証明することに成功した。この研究結果はPTEPに論文として投稿し、掲載が決定されている。(2)ヴォーテックスのモジュライ空間体積の計算の手法をクイバーゲージ理論に拡張を行った。クイバーケージ理論とはゲージ群と物質場の表現が有向線分グラフ(クイバー図)によって規定されるゲージ理論である。このクイバーゲージ理論におけるヴォーテックスBPS方程式を考え、そのモジュライ空間体積の局所化の方法による導出を試みた。現時点でいくつかの具体的な例についての計算を行っているが、将来的にはグラフ理論の手法を用いて、より一般的な公式の導出を行っている。(3) 2次元リーマン面を分割したグラフ上(離散空間)でゲージ理論を考え、その性質を数値計算で調べた。特に、超対称性やR対称性などのグローバル対称性について、連続極限においてどのように回復するのかについて研究を行った。研究では、グラフ理論の考え方を用いてグラフ上の保存カレントやWard-Takahashi恒等式などの物理量を定義し、数値計算でどのように測定するのかについての考察を行った。現在は数値計算のためのモンテカルロシミュレーションデータの収集を行っている。クイバーゲージ理論のヴォーテックスのモジュライ空間体積については、計算手法自体は確立しているが、クイバー図のパターンに応じての分類が細かく、系統立てた研究が困難な状況である。より系統的な研究が行えるよう、クイバーゲージ理論の性質の分類や精査に予定より多くの時間を要してしまった。一方、数値計算を用いた計算では、ディラック演算子の逆行列の評価においてグラフの分割が細かくなると計算コストが非常に大きくなる問題に直面している。これは連続極限を取っていく際に根本的な問題となるので、現在、計算アルゴリズムの改良などに取り組んでいる。また、使用している大型計算機の使用期限や切り替えなどの問題もあり、計画通り数値計算を行えていないのが現状である。クイバーゲージ理論におけるヴォーテックスの性質については未知の部分が多いが、ある特定の例についての先行研究が存在するので、その研究結果と比較し、具体的な計算を確認しながら研究を進めていく。一方、計算結果の一般的な拡張については、グラフ理論の手法を用いることが有用だと考えられるので、物理量の計算などにグラフ理論の考え方を取り入れて、より系統的に研究が進められるよう定式化を行っていく。数値計算を用いた研究の方では、新しい大型計算機使用の目処が立ったので、今後はアルゴリズムの改良や並列化を進めて数値計算時間の確保に努めていきたい。また、モンテカルロシミュレーションデータの収集と同時並行で、グラフ上のゲージ理論の対称性や性質について、局所化の方法なども交えながら理論的な側面からの解析も進めていく。1.グラフ上の2次元超対称ゲージ理論の構成と解析2次元のRiemann面を離散化(単体分割)した空間上で、超対称ゲージ理論を構成し、その理論的性質の解析を行った。離散化したRiemann面上の場の理論は、グラフ理論における接続行列やラプラシアン行列を用いることで系統的かつ簡潔的に記述することができる。特に、理論を経路積分し、分配関数や演算子の期待値等、物理量を計算する場合に、フェルミオン場のゼロモード(接続行列の核)の存在が重要になるが、グラフ理論を用いると、これらゼロモードの存在を個数を含めて正確に示すことができた。さらに、ゼロモードの解析で重要であった接続行列に対して、微分演算子の指数定理を離散空間上に一般化したものを構成した。この指数定理と熱核法等を用いて解析すると、グラフのノード(頂点)の数が多くなった連続極限時に2次元のRiemann面に漸近するか、グラフと理論の「次元性」についても一定の理解を得ることができた。この研究実績については、現在、論文を執筆中である。2.グラフ理論で構成した超対称ゲージ理論の数値的解析1.の項で述べた、離散化されたRiemann面としてのグラフ上で構成された超対称ゲージ理論を、モンテカルロ法を用いて数値的に解析を行なっている。特に、グラフ理論を用いることで明らかになった理論におけるフェルミオン・ゼロモードの存在とその数値計算上の役割について、経路積分測度に起因するアノマリーとの関連を含めて研究を行っている。当初、海外の研究者を含む数人の共同研究で研究を行っていたが、当該年度に研究者の異動等、不測の事態が重なってしまった。特に、時差のため、海外の研究者とネット会議等を通じた研究のための会合の時間が確保できず、進捗の遅滞が発生している。

今年度の研究では、これらヒッグス相とクーロン相における評価の等価性を局所化の方法の結合定数の普遍性から厳密に証明することに成功した。この研究結果はPTEPに論文として投稿し、掲載が決定されている。(2)ヴォーテックスのモジュライ空間体積の計算の手法をクイバーゲージ理論に拡張を行った。クイバーケージ理論とはゲージ群と物質場の表現が有向線分グラフ(クイバー図)によって規定されるゲージ理論である。このクイバーゲージ理論におけるヴォーテックスBPS方程式を考え、そのモジュライ空間体積の局所化の方法による導出を試みた。現時点でいくつかの具体的な例についての計算を行っているが、将来的にはグラフ理論の手法を用いて、より一般的な公式の導出を行っている。(3) 2次元リーマン面を分割したグラフ上(離散空間)でゲージ理論を考え、その性質を数値計算で調べた。特に、超対称性やR対称性などのグローバル対称性について、連続極限においてどのように回復するのかについて研究を行った。研究では、グラフ理論の考え方を用いてグラフ上の保存カレントやWard-Takahashi恒等式などの物理量を定義し、数値計算でどのように測定するのかについての考察を行った。現在は数値計算のためのモンテカルロシミュレーションデータの収集を行っている。クイバーゲージ理論のヴォーテックスのモジュライ空間体積については、計算手法自体は確立しているが、クイバー図のパターンに応じての分類が細かく、系統立てた研究が困難な状況である。より系統的な研究が行えるよう、クイバーゲージ理論の性質の分類や精査に予定より多くの時間を要してしまった。一方、数値計算を用いた計算では、ディラック演算子の逆行列の評価においてグラフの分割が細かくなると計算コストが非常に大きくなる問題に直面している。これは連続極限を取っていく際に根本的な問題となるので、現在、計算アルゴリズムの改良などに取り組んでいる。また、使用している大型計算機の使用期限や切り替えなどの問題もあり、計画通り数値計算を行えていないのが現状である。新年度に入り、研究会合のやりとりもある程度可能となっており、今後は研究打ち合わせの時間を確保して本研究課題の進捗状況の遅れを取り戻したい。特に、現時点で成果が得られている研究結果に関しては、今年度中に早急に論文としてまとめ、公表する。クイバーゲージ理論におけるヴォーテックスの性質については未知の部分が多いが、ある特定の例についての先行研究が存在するので、その研究結果と比較し、具体的な計算を確認しながら研究を進めていく。一方、計算結果の一般的な拡張については、グラフ理論の手法を用いることが有用だと考えられるので、物理量の計算などにグラフ理論の考え方を取り入れて、より系統的に研究が進められるよう定式化を行っていく。数値計算を用いた研究の方では、新しい大型計算機使用の目処が立ったので、今後はアルゴリズムの改良や並列化を進めて数値計算時間の確保に努めていきたい。
完全マイナーを持つ曲面上のグラフの構造に関する研究

本研究では,固定された曲面に埋め込まれたグラフがどんな完全グラフK_nをマイナーとして持つかどうかという問題を扱った.この問題は一般に難解であり,この問題とグラフ彩色を関連付けた問題はHadwiger予想として知られており,現在における重要な未解決問題の1つとして残っている.私たちの研究では,曲面上のグラフを三角形分割に限定し,種数3までの向き付け可能曲面と種数4までの向き付け不可能曲面の三角形分割に対して, K_6マイナーが存在するための条件をある特定の部分グラフの有無により特徴付けた.そのために,私たちは曲面上の既約三角形分割の完全リストと局所変形の理論を用いた.本研究では,固定された曲面に埋め込まれたグラフがどんな完全グラフK_nをマイナーとして持つかどうかという問題を扱った.この問題は一般に難解であり,この問題とグラフ彩色を関連付けた問題はHadwiger予想として知られており,現在における重要な未解決問題の1つとして残っている.私たちの研究では,曲面上のグラフを三角形分割に限定し,種数3までの向き付け可能曲面と種数4までの向き付け不可能曲面の三角形分割に対して, K_6マイナーが存在するための条件をある特定の部分グラフの有無により特徴付けた.そのために,私たちは曲面上の既約三角形分割の完全リストと局所変形の理論を用いた.「自然数nに対して,どんなグラフがn頂点の完全グラフKnをマイナーとして持つか.」これは,与えられたグラフのある種の稠密度を測る問題であり,たいへん基本的かつ重要な問いである.本問題は,1943年にHadwigerにより提起され,n≧5の場合が解決された.しかしながら,グラフマイナー理論全盛の現在に至っても,n≧6の場合は未解決である.そして,本研究は,この問題について,グラフの曲面への埋め込み可能性を絡めるとどのような事実が導けるかをという問題に取り組んだ.これまでの研究により,射影平面とトーラスの三角形分割が,K6-マイナーを持つための必要十分条件はただ1つの禁止部分グラフによって特徴付けられることがわかっていた.本研究では,種数2の向き付け可能な閉曲面と種数3,4の向き付け不可能な閉曲面の三角形分割がK6-マイナーを持つための必要十分条件を求めた.(そのためには,数百万個の既約三角形分割のそれぞれについて,K6-マイナーの有無を計算機で求め,それを糸口として,三角形分割の構造を特定してゆくという作業が必要であった.)それらの曲面では,K6-マイナーを持たない三角形分割は,K6-マイナーを持たないトーラスの三角形分割とそのような射影平面の三角形分割を適当に貼り合わせて得られるという事実を述べており,興味深い事実であると言える.現在の手法では,既約三角形分割を用いているため,それらが完全に決定されている曲面しか扱うことができないが,何らかの新手法の開発が切に求められ,それらを今後の課題としたい.「自然数nに対して,どんなグラフがn頂点の完全グラフKnをマイナーとして持つか.」これは,与えられたグラフのある種の稠密度を測る問題であり,たいへん基本的かつ重要な問いである.本問題は,1943年にHadwigerにより提起され,n≧5の場合が解決された.しかしながら,グラフマイナー理論全盛の現在に至っても,n≧6の場合は未解決である.そして,本研究は,この問題について,グラフの曲面への埋め込み可能性を絡めるとどのような事実が導けるかをという問題に取り組んだ.昨年度は既約三角形分割の完全リストをもとに,クラインの壷,ダブルトーラス,種数3,4の向き付け不可能曲面のK6マイナーを持つ三角形分割を構成的に特徴付けることに成功したのだが,本年度はそれらに関する進展は得られなかった.しかしながら,与えられた曲面上のグラフの中のK_6マイナーを探すための道具となる「グラフの向き付け」から,トーラス上の四角形分割のある種の分解定理を証明することに成功し,トーラス上の2部グラフ的四角形分割は,その放射状グラフを考えると,それがハミルトン閉路を持つことを証明することに成功した.これは,長年未解決である「Nash-Williamの予想(トーラス的4-連結グラフはハミルトン閉路を持つ)」の部分的解決に対応する.一方,そこで考えたトーラス上の2部グラフ的四角形分割の分解定理から,トーラス上の2部グラフは5ページの本型埋め込みを持つことを証明することができた.このことは,これまで停滞気味だった位相幾何学的条件により与えられたグラフの本型埋め込みに導けるページ数についての研究を再開するものであり,たいへん意味がある結果であるといえる.「自然数nに対して,どんなグラフがn頂点の完全グラフKnをマイナーとして持つか.」これは,与えられたグラフのある種の稠密度を測る問題であり,たいへん基本的かつ重要な問いである.本問題は,1943年にHadwigerにより提起され,現在までに,n≦6の場合が解決された.そして,本研究では,この問題について,グラフの曲面への埋め込み可能性を絡めるとどのような事実が導けるかについて考えた.本年度までに,既約三角形分割の完全リストをもとに,クラインの壷,ダブルトーラス,種数3,4の向き付け不可能曲面のK6マイナーを持つ三角形分割を構成的に特徴付けることに成功したのだが,本年度はそれらに関する進展は得られなかった.本年度は,曲面上のグラフに関するマイナー関係を,閉路の長さの偶奇性について強めた概念である「奇マイナー」に関する研究に取り組んだ.私はこれまで,曲面上の偶埋め込み(各面が偶角形の曲面地図)をしばしば研究対象としてきた.

しかしながら,偶埋め込みのマイナー関係をは必ずしも偶埋め込みにはならないので,本研究において偶埋め込みを扱ったとしても,埋め込みの偶性からは特に興味深い結論は得られない.そこで,私は奇マイナーという概念を導入し,その関係により,曲面上の偶埋め込みを分類しようと考えた.したがって,今年度の研究成果として,曲面上の偶埋め込みについて奇マイナーに関する基礎理論を整備し,射影平面の偶埋め込みがK4-奇マイナーを持つための条件と,トーラス上の偶埋め込みがK5-奇マイナーを持つための条件を与えることができた.一般の曲面上の偶埋め込みの奇マイナーを扱うとき,この関係は曲面上の埋め込みの偶性だけでなく,グラフのサイクルパリティを保存することがわかる.したがって,そのためにはサイクルパリティという代数的不変量のさらなる解析が必要となる.これについては,来年度以降の研究課題としたい.
重症筋無力症における興奮収縮連関障害の解明

本研究の成果は2つありもう一つは重症筋無力症において咬筋の興奮収縮連関障害と咬合力の関係を明らかにしたことである.一部の重症筋無力症患者では咬筋の興奮収縮連関が障害されており,治療後の咬合力の増加に興奮収縮連関の機能的回復が関与していると考えられた.本研究の成果は2つありもう一つは重症筋無力症において咬筋の興奮収縮連関障害と咬合力の関係を明らかにしたことである.一部の重症筋無力症患者では咬筋の興奮収縮連関が障害されており,治療後の咬合力の増加に興奮収縮連関の機能的回復が関与していると考えられた.研究計画の初年度である平成22年度は、初めに咬筋の興奮収縮連関時間(E-C coupling time ; ECCT)測定法と感圧測定シートを用いた咬合力測定法を確立し、ECCTと咬合力の正常値を構築した。次に、重症筋無力症(myasthenia gravis ; MG)を対象として、咬筋反復刺激試験の減衰率(% decrement)、ECCTおよび咬合力を経時的に測定し、自己抗体との関連や各種薬剤の治療効果を検討した。咬筋を対象とした% decrementやECCTの測定法は,簡便で安全であり再現性のある記録が可能であった。治療前後で経時的に検査しえたMG 20例において治療後に咬合力の増加とともに% decrementとECCTが改善し、単回帰分析では、% decrement、ECCT、咬合力の間に相関を認めた。ECCTの延長は興奮収縮連関の障害だけではなく、終板での伝達効率の低下や筋線維自体の障害でも起こりうると考えられた。しかしながら、% decrementに異常がなくてもECCTの延長がみられる症例や,% decrementや咬筋の複合筋活動電位に有意な変化がなくても治療直後からECCTが短縮する症例を認めた。このことから,ECCTは終板での伝達効率や筋線維の病理学的変化と独立して変化しており、興奮収縮連関の機能を直接的に評価する指標になりうると考えられた。つまり、少なくとも一部のMG患者においては、ECCTの短縮を伴う咬合力の増加が興奮収縮連関の機能的改善を反映していると思われた。さらに、抗リアノジン受容体抗体やFK506(タクロリムス)が興奮収縮連関の機能不全あるいは機能改善と関連している可能性が示唆され、次年度にその確証を得るための研究計画を立案した。以上の成果は平成22年度内に英文論文2編と和文論文1編にまとめられ、平成22年11月の国際学会シンポジウムで発表された。1.抗リアノジン(RyR)抗体による興奮収縮連関障害重症筋無力症(myasthenia gravis : MG)26例を抗RyR抗体陽性群12例/陰性群14例に分け、ステロイドや免疫抑制剤(FK506,シクロスポリン)投与あるいは免疫グロブリン大量静注療法、血液浄化療法の治療内容にかかわらず、反復刺激試験の%decrementが正常な時のデータを解析した。前年度の研究から興奮収縮連関時間(excitation-contraction coupling time : ECCT)は興奮収縮連関だけではなく、シナプスでの伝達効率の変化や筋線維の病理学的変化にも影響を受けることが明らかになったが、本研究では、電気的シナプス接続、咬筋の複合筋活動電位、病期あるいはMG重症度に関して抗RyR陽性群/陰性群で有意差がない条件が設定された。このように純粋に興奮収縮連関障害を評価することができる条件設定においても、抗RyR抗体陰性群に対して抗RyR抗体陽性群で有意にECCTの延長がみられた。このことから抗RyR抗体はシナプスでの伝達障害や筋線維障害とは無関係に興奮収縮連関を障害すると考えられた。2.FK506投与によるECCTの改善FK506には本来の免疫抑制作用のほかに興奮収縮連関を促通する効果があると報告されている。この効果を実証するため、20例のMG患者においてFK506投与前後で、経時的に感圧シートを用いた咬筋力、反復刺激試験および咬筋ECCTの測定を行なった。咬筋の複合筋活動電位や反復刺激試験の結果はFK506投与前後で有意な変化を示さなかったが、ECCTは12例で投与後2週以内に、8例で投与後4週以内に有意な短縮を認めた。FK506投与後早期にみられる有意なECCTの短縮はFK506の興奮収縮連関促通作用を示していると考えられた。以上の成果は平成23年度内に英文論文2編と和文論文(総説)1編にまとめられ、平成23年11月11日の国内学会シンポジウム(静岡)と同年11月16日の国際学会(マラケシュ、モロッコ)で発表された。1.長期観察症例のまとめプレドニゾロン(PSL)最高用量時にMinimal Manifestations (MM)に達した群は現在も重症度が低くQOLも高かった。MM非達成例は副作用のためPSL増量困難やPSL減量を余儀なくされており、PSL20mg/日以上の投与期間が長期化すると咬合力を含めた予後が不良であった。早期からのCalcineurin inhibitorsの併用によってPSL最高用量が抑えられると良好な治療効果が得られていた。本研究結果は次年度ウィーンでの世界神経学会で発表する(演題登録済み)。2.咬筋神経終板のsafetyfactorの検討

三叉神経咬筋枝の微少電気刺激による単線維筋電図において2Hzから10Hzへ刺激頻度を上げると、咬筋ではブロック率が有意に低下する終板がみられた。この現象は眼輪筋や総指伸筋の終板ではみられず、被験筋によってsafety factorに差があると考えられた。前年度までに我々が開発した咬筋の興奮収縮連関時間検査法を四肢の骨格筋に応用するには、被検筋ごとのsafety factorの差に注意する必要がある。3.短母指外転筋(APB)におけるstaircase現象解析法の開発APBの複合筋活動電位と母指に装着した加速度計による運動誘発波形(MRP)を同時記録し、最大上刺激による安静時の最大加速度を計測した。次に正中神経を手根部でテタヌス刺激後あるいはAPBの随意収縮後に再検し、反復刺激後増強による最大加速度の変化を調べた。健常者では随意的な強収縮後でもテタヌス刺激後でもMRPに150-200%の反復刺激後増強がみられた。これに対してMGの罹患筋では、反復刺激後増強の減衰・消失がみられた。MGでは、反復刺激後に筋形質内のCa2+が増加することによって興奮収縮連関が促進し,筋収縮力が増大する現象が障害されていると考えられた。平成23年度の研究目的にかかげていた「抗RyR抗体による興奮収縮連関障害」と「FK506による興奮収縮連関促通作用」をどちらも実証することができた。これらの研究成果は当初の予定を越え、英文論文2編と総説(和文)1編にまとめられ、国内学会だけではなく、国際学会でも発表するに至った。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成22年度からの一連の研究で、1)MGの病態に興奮収縮連関障害が関与していること、2)興奮収縮連関障害は筋力低下と相関していること、3)興奮収縮連関に重要な役割をはたしているリアノジン受容体(RyR)に対する自己抗体(抗RyR抗体)が興奮収縮連関を障害すること、4)免疫抑制剤としてMG治療に用いられているFK506に興奮収縮連関促通作用があること、が明らかとなった。しかし、これらの実証に用いられた被検筋は咬筋であり、四肢の骨格筋で同様の結果が得られるかどうか不明である。また咬筋の検査には特殊な刺激電極を必要とするため、一般の臨床検査としては普及しづらいと考えられる。次年度は四肢筋を被検筋として、さらに簡便に興奮収縮連関障害を検出するための方法の開発に取り組むこと予定である。
公開買付法制の比較法研究

本研究の目的は、近時のわが国における企業組織再編法制の整備を背景に、今後の企業買収法制のあり方を模索することにある。平成15年度における基礎資料の収集および分析作業に基づき、平成16年度には、主として、公開買付の局面における株主等の関係者の利害調整という観点から、欧州および米国における企業買収法制とそこでの立法資料・裁判例・学説等にみられる議論の調査・分析を行った。この間、わが国では平成17年の新会社法の制定に向けた動きや、わが国企業をめぐる企業買収に関する新たな動向が生じており、上記の調査・分析はこうした動向に随時注目しつつ行われた。EUにおいては、2004年の公開買付に関する指令の採択を受けて、各加盟国での国内法化に向けた動きがみられる。本研究では、上記指令において図られた加盟国法の調和と今後も残されうる相違等について整理・分析するとともに、加盟国法のうち英国法に着目し、とりわけ上記指令に対応した英国における取組みの状況を整理・分析した。これにより欧州型の強制的公開買付制度、公開買付に対する防御措置の制限をはじめ、欧州における公開買付をめぐる各種規制の状況、さらに欧州の諸規制間の相互関係等について、わが国の法制整備に向けた議論のための知見が得られた。アメリカについては、企業買収の局面での防御措置のあり方等をめぐる判例法の整理・分析を行った上、ウィリアムズ法の制定前の時期から、それ以後にかけて、情報開示規制等に関して企業買収の局面で関係者の利益のバランスがいかに図られてきたかについて、分析を試みた。これによりアメリカにおける企業買収法をとくに連邦法の見地から全体として検証し、わが国の法制整備に向けた議論のための知見が得られた。わが国公開買付法制の整備や欧米法の整理分析に関してとりまとめた研究成果は、平成17年に専門誌に掲載したほか、論文として準備中のものがある。本研究の目的は、近時の企業組織再編法制の整備を基礎とした企業買収法制の模索、とりわけ関係者の適切な利害調整のあり方の探求にある。本年度は、この目的のもとで、主として企業買収をめぐる法に関する欧米の基礎文献・資料等の収集を行い、得られた情報の整理及び分析・検討を進めた。本年度の動向が注目された欧州における公開買付に関する第13指令案については、2003年12月に欧州議会の承認がなされ、採択・発効への最終過程に入っている。これまでの検討によれば、同指令は欧州における公開買付ルール全体のハーモナイゼーションという観点からは相当程度限定的なものとなることが見込まれる。しかし、本年度に我が国で現われた敵対的な株式公開買付事案及び日本法の現状に関する分析結果に照らすと、公開買付の局面における買収者並びに対象会社の経営陣及び株主の衡平な利害調整をはかる観点から、前記指令における衡平な価格(equitable price)の主への支払に関するルール及び企業買収に対する防衛措置に関するルールの内容及びその形成過程に関してさらなる分析・検討を深めてゆく必要があることが明らかになった。他方、引き続き企業買収に関する米国法及び英国法の分析・検討を進める必要があるが、欧州における上記指令をめぐる議論の分析からは、公開買付関係者の利害調整に関する考え方においては欧州内部でも重要な相違が残されることが明らかになっており、調和とともに相違をも重視し、欧米法の形成要因のさらなる分析を通じて、日本法における関係者の利害調整の考え方を慎重に模索する必要があることが示唆された。本年度は、主として、公開買付の局面における株主等の関係者の利害調整という観点から、欧州および米国における企業買収法制とそこでの立法資料・裁判例・学説等にみられる議論の調査・分析を行った。

この作業は、わが国で平成17年に予定される新たな会社法の制定に向けた動きや、わが国企業をめぐる企業買収の新動向に随時注目しつつ行われた。EUでは、テイクオーバーに関する会社法第13指令を受けて各加盟国での法整備に向けた動きがみられる。本研究では、上記指令において図られた加盟国法の調和と今後も残されうる相違につき整理・分析するとともに、加盟国法のうち英国法に着目し、上記指令以前・以後の英国における法の状況を整理・分析した。これによりシティ・コードにみられる敵対的企業買収に対する防衛措置の規制状況や、会社法やシティ・コードの情報開示規制等につき、わが国の法制整備に向けた議論のための知見が得られた。アメリカについては、近時のわが国での議論でも、防衛措置のあり方等をめぐり欧州法とともに参照されているため、企業買収の局面での経営陣の行為規制に関する判例法の整理・分析を行った。また、アメリカではウィリアムズ法の制定以来、情報開示規制等に関して企業買収の局面で関係者の利益のバランスがいかに図られてきたかにつき分析を行った。これらの作業によりアメリカにおける企業買収法を州法・連邦法を通じた全体として検証し、今後の議論のための知見が得られた。以上に基づき、わが国公開買付法制の整備に向けた提言や欧米法の整理・分析に関してとりまとめた研究成果を、平成17年に専門誌に寄稿する予定となっている。
広帯域増幅器を擁する身体装着型ディジタルレコーダの試作と応用ソフトの開発

認知神経科学や行動神経科学などの分野においては、自然の生活状態を含む諸々の環境下で生体情報計測を行うことが重要である。それを実現するための多チャンネル広帯域携帯型デジタルポリグラフシステムを開発し、その有効性を評価することが本研究の目的である。その仕様は、最大サンプリング周波数:1kHz、大容量フラッシュメモリカード装備、入力換算ノイズレベル:p-p2μV(300Hzまで)、チャネル数:24チャネル、本体重量:300g、連続計測時間:24時間以上、通過帯域・ゲイン:プログラマブル、刺激・計測・標本化パラメータ:適応的設定可、などである。回路はCMOSで製作した。製作は(株)ディジテックス研究所に依頼した。また、波形ビューアソフト及びデータフォーマット変換ソフトを製作した。さらに、ヒトおよび自由行動下の動物からの脳波計測実験を行ってシステムの有効性を確かめた。その成果を以下にまとめる。(1)睡眠障害などの不定愁訴を伴う歯科治療患者を対象とした計測実験を行い、治療前後で不定愁訴の改善が見られるかどうか客観評価を行った。その結果、ポリソムノグラフにより睡眠の質が改善していることが裏付けられた。(2)システムの広帯域特性・多チャネル特性を生かして、スパイク状の電位であるレム睡眠時の急速眼球運動に先行する電位(RAPPs)をヒトの睡眠脳波とともに多チャネルで計測した。併せて覚醒時のサッケードに先行するスパイク電位(PsSP)も比較のために多チャネルで計測した。これによりPAPPsとPsSPの生理学的発生源を突き止めた。(3)ラットの自由行動下の眼電図、海馬、脳幹の脳波を同時計測し、レム睡眠時の海馬θ波とPGO波および急速眼球運動の時間関係を明らかにした。以上の成果はいずれもディジタルポリグラフの広帯域特性、多チャネル特性、大容量特性によって初めてもたらされたものであり、医学・生物学分野での有効性が示された。認知神経科学、行動神経科学、非侵襲的脳活動計測などの分野においては、自然の生活状態を含む諸々の環境下で生体情報計測を行なうことが重要である。ヒトや動物から得られる多チャンネル広帯域神経情報をエリアシングフリーで基本的ディジタル処理を行って、メモリカードに記録する身体装着可能な装置を開発し、その性能を評価することが本研究の目的である。そのために先ず、神経科学という応用分野を考慮し、取り扱うべき信号種、それぞれの信号が持つ周波数帯域、増幅器の入力換算雑音レベル、チャンネル数、メモリ容量、などを決定した。A/D変換器と一体化した低雑音演算増幅器の選択とアンチ・エリアシング・フィルタ回路の検討、さらに、標本化、ディジタルフィルタ処理、およびリサンプリング、大容量フラッシュメモリへの格納処理などを行うゲートアレーを設計製作するとともに、これらの回路を動作させるためのファームウエア・プログラムを作成した。製作は全て専門メーカの(株)ディジテックス研究所に依頼した。具体的には次のようなシステムを実現した。(1)最大サンプリング周波数: 1kHz(2)大容量フラッシュメモリカード装備(3)入力換算ノイズレベル: p-p2μV(300Hzまで)(4)チャンネル数: 24チャンネル(5)本体重量: 300g (6)連続計測時間: 24時間以上(7)通過帯域、ゲイン:プログラマブル(8)刺激・計測・標本化パラメータ:適応的設定可。基本ソフトとしては計測したポリグラフ信号波形を確認するための波形ビューアソフト及びMATLAB(MathWorks, Inc)対応のデータフォーマット変換ソフトを製作した。

また、本システムを用いて睡眠障害などの不定愁訴を伴う歯科治療患者を対象とした計測実験を行ない、治療前後での不定愁訴の改善がみられるかどうか客観評価を行なった。その結果、ポリソムノグラフにより睡眠の質が改善していることが裏付けられた。測定実験にあたっては、ヒトを対象とした実験に関する倫理規定を順守するとともに、インフォームドコンセントを得た。認知神経科学、行動神経科学、非侵襲的脳活動計測などの分野においては、自然の生活状態を含む諸々の環境下で生体情報計測を行うことが重要である。ヒトや動物から得られる多チャンネル広帯域神経情報をエリアシングフリーで基本的ディジタル処理を行って、メモリカードに記録する身体装着可能な装置を開発し、その性能を評価することが本研究の目的である。今年度はヒトおよび自由行動下の動物からの脳波計測実験を行ってシステムの有効性を確かめた。その成果を以下にまとめる。(1)ポリグラフの広帯域特性・多チャネル特性を生かして、スパイク状の電位であるレム睡眠時の急速眼球運動に先行するRAPPs(REMs anticipatory phasic potential)をヒトの睡眠脳波とともに多チャネルで計測した。併せて覚醒時のサッケードに先行するスパイク電位(PsSP)も比較のために多チャネルで計測した。これによりPAPPsとPsSPの顔面上のトポグラフが類似していることを突き止めた。また、PsSPの振幅が眼球運動の大きさに比例して増加するのに対して、RAPPsに関してはそのような比例関係がみられないこと、PsSPの振幅は眼球運動の最大加速度、最大速度、振幅との相関が高いのに対して、RAPPsでは最大加速度とのみ相関を有していたことなどが明らかになった。これらの結果より、両電位の発生源は共通で、外眼筋を支配する動眼神経を伝導する活動電位がつくるダイポールであることを示唆した。また、レム睡眠時の急速眼球運動の神経支配の一端を明らかにすることができた。(2)ネコとラットの自由行動下の海馬、視床の脳波を同時計測し、レム睡眠時の相動性現象の代表である海馬Θ波とPGO(Ponto-Geniculo-Occipital)波の同期現象を明らかにした。また、PGO波発生のΘ波位相依存性、及びそれに伴うΘ波の加速現象を発見した。これらにより両現象の生成メカニズムや同期現象の生物学的意義についても考察した。以上の結果はいずれもディジタルポリグラフの広帯域特性、多チャネル特性、大容量特性によって初めてもたらされたものであり、その神経科学分野での有効性が示された。ヒトや動物から得られる多チャンネル広帯域神経情報をエリアシングフリーで基本的ディジタル処理を行って、メモリカードに記録する装置を開発し、その性能を評価することが本研究の目的である。今年度は動物からの脳活動計測実験を行ってシステムの有効性を確かめた。
代謝ネットワーク制御に基づくバイオ燃料化に適した木質の分子育種

非可食資源である木質からのバイオ燃料製造においては、木質成分の構造上の問題に起因して酵素糖化が著しく阻害されている。本研究ではバイオ液体燃料製造に適する木質の作出を目的として、木質形成代謝を統御する因子を明らかにし、その知見に基づき細胞壁を改変した木質バイオマスを作出した。その結果、リグニンの量と構造が酵素糖化性に及ぼす影響に関する基本的知見が得られ、今後の分子育種に対する指針が得られた。木質からのバイオエタノールと化成品の製造の第一段階は、いずれも木質多糖成分の糖化(多糖分解によるグルコースなどの生産)であるが、リグニンが多糖を被覆していること、及び木質成分が全体として強固な集合構造を形成していることなど、木質成分の構造上の問題に起因して糖化が著しく阻害されている。すなわち、糖化以降の段階の技術革新に加え、原料改質が重要な標的となっており、長年に亘り木質科学分野で培われてきた木質細胞壁に関する知見の活用が希求されている。そこで、本研究ではバイオエタノール製造に適する木質の作出を目的として、木質形成代謝の統御ネットワーク機構解明に基づいて、木質細胞壁成分の量、構造、及び全体の存在状態を制御することにより、高効率糖化を可能とする木質バイオマスの作出を図る。本研究ではバイオエタノール製造に適する木質の作出を目的として、木質形成代謝の統御ネットワーク機構解明に基づいて、木質細胞壁成分の量、構造、及び全体の存在状態を制御することにより、高効率糖化を可能とする木質バイオマスの作出を図る。本年度は、まず、シロイヌナズナを材料として用い、リグニン合成経路であるケイヒ酸モノリグノール経路上の鍵酵素の一つであるCCoAOMTと共発現する転写因子の候補遺伝子5種を、遺伝子共発現ネットワーク解析により絞り込んだ。次いで、これら5種の候補遺伝子から擬陽性を除くため、それぞれの遺伝子の発現を制御した組換え(形質転換)シロイヌナズナ植物体を作成した。得られた組換えシロイヌナズナにつき、リグニンおよびリグニン合成前駆体を常法に従って分析したところ、特定のリグニン前駆体の生成を促進或いは減少している組換え体が得られた。以上により、リグニン生合成を含めた細胞壁構築の制御に関わる転写因子をコードすることが強く示唆される遺伝子が得られた。次年度以降は、本遺伝子の機能をさらに詳細に検証し、本遺伝子を用いた、高効率糖化を可能とする木質バイオマスの作出を目指す。今年度は、ポプラマイクロアレイデータの解析、形質転換コンストラクトの作成、1種類の転写因子遺伝子の過剰発現体の作出を行った。まず、既に公表されているポプラの器官別のマイクロアレイデータをRMA法によって正規化し、相関係数の解析により、二次木部で特異的に発現している転写因子遺伝子を23種類絞り込んだ。次に、3種類の転写因子遺伝子を選び、これら遺伝子の過剰発現および発現抑制コンストラクトの作成を行った。すなわち、3種類の転写因子遺伝子各々につき、CaMV35Sプロモーターの制御下、コード領域のC-末端の終止コドンの直前にVP16転写活性化ドメインを挿入した過剰発現用コンストラクトと、SRDX転写抑制化ドメインを挿入した発現抑制用コンストラクトを作成した。さらに、アグロバクテリウムを介した形質転換により、1種類の転写因子遺伝子の過剰発現用コンストラクトをポプラに導入し、10系統の過剰発現個体を得た。昨年度までに、シロイヌナズナにおける遺伝子共発現ネットワーク解析を行ない、細胞壁形成制御遺伝子の候補を絞り込んだが、今年度は、その候補遺伝子の中からRINGフィンガータンパク質をコードする遺伝子について詳細に解析した。まず、形質転換体のリグニン芳香核構造解析のためのミクロハイスループットリグニン分析法を確立した。次いで、プロモーター:GUSコンストラクト導入個体においてGUS染色パターンを調べたところ、この遺伝子は、花茎の維管束間繊維や胚軸の二次木部において、二次壁形成の初期に強く発現していることを見出した。次に、過剰発現発現およびノックアウト変異体の花茎における遺伝子発現を調べたところ、セルロース、ヘミセルロース、リグニンの各酵素遺伝子の遺伝子発現が野生型と比べ変異体において変化していた。また、この遺伝子にYFPを接続したコンストラクトをシロイヌナズナのプロトプラストで発現させ、蛍光顕微鏡で観察したところ、YFPシグナルは、細胞膜に局在した。さらに、この遺伝子のリコンビナントタンパク質を用いてユビキチン化反応を行ったところ、自己ユビキチン化反応を触媒した。また、デュアルルシフェラーゼアッセイおよびゲルシフトアッセイにより、この遺伝子は二次壁形成のマスター転写因子であるMYB46によって直接的に転写活性化を受けることが示された。以上より、このRINGフィンガータンパク質は、二次壁形成に関与するユビキチンリガーゼであることを明らかにした。今年度は、これまでのシロイヌナズナを用いた木質形成統御遺伝子の機能解析研究を実用植物(イネとポプラ)に展開し、実用形質転換植物の生産する木質の酵素糖化効率を評価する研究を開始した。

イネについては、木質成分合成酵素遺伝子の発現パターンと相関の高い転写因子遺伝子をデータベース検索により選抜し、選抜された転写因子遺伝子の発現解析および機能解析と、発現を制御した形質転換体の栽培実験を行った。具体的には、リグニン合成酵素遺伝子であるCOMTや4CL、セルロース合成酵素遺伝子であるCesA、キシラン合成酵素遺伝子であるGT43Bなどの細胞壁合成酵素遺伝子の発現パターンと相関の高い転写因子遺伝子をデータベース上で調べ、醗B転写因子遺伝子が多く含まれていることを見出した。そこで、これらの蝦B転写因子遺伝子の転写活性化能について、イネ培養細胞への一過的形質転換を用いたデュアルルシフェラーゼアッセイによって調べ、4種類の転写因子遺伝子のうち、2種類は転写活性化能が高く、2種類は転写活性化能が低いことを明らかにした。また、転写活性化能の低い2種類の転写因子は、皮層繊維が急速に発達する出穂期の稗で特異的に発現していることを見出した。4種類の転写因子が各々活性化する下流遺伝子を明らかにするため、COMT、CesA、GT43BなどのプロモーターをPCRによってクローニングし、デュアルルシフェラーゼ用コンストラクトの作成を進めるとともに、以前作出したこれらの転写因子の過剰発現体の栽培を開始した。ポプラについては、一昨年度に本研究課題で作出した、転写因子過剰発現および発現抑制形質転換体を組換え温室で1年間栽培し、幹の木材の部分を収穫後粉末化し、木質成分と酵素糖化効率を調べるためのサンプルを調製した。非可食資源である木質からのバイオ燃料製造の各工程については、リグニンが多糖を被覆していること、及び木質成分が全体として強固な集合構造を形成していることなど、木質成分の構造上の問題に起因して糖化が著しく阻害されている。そこで、本研究ではバイオ燃料製造に適する木質の作出を目的として、木質形成代謝の統御ネットワーク機構解明に基づいて、木質細胞壁成分の量、構造、及び全体の存在状態を制御することにより、高効率糖化を可能とする木質バイオマスの作出に向けた研究を遂行してきた。今年度は、これまでのシロイヌナズナを用いた木質形成統御遺伝子の機能解析研究を実用植物へ展開する研究を昨年度に引き続いて行った。実用植物であり、イネ科バイオマス植物のモデルでもあるイネを使って、昨年度実施した共発現遺伝子ネットワーク解析により見出された4種類のMYB転写因子につき、デュアルルシフェラーゼアッセイを用いて、代表的な二次壁成分(セルロース、ヘミセルロース、リグニン)の合成酵素遺伝子(CesA, GT43B、CAldOMT)に対する転写活性を調べた。その結果、3種類の転写因子は、セルロース合成酵素遺伝子(CesA)に対する転写活性を示した。この3種類の転写因子のうちの1つは、シロイヌナズナにおいてリグニン生合成を特異的に制御すると示されているMYB転写因子のイネオーソログであると考えられるため、イネとシロイヌナズナでは、二次壁成分生合成遺伝子に対するMYB転写因子による転写制御機構が異なっている可能性が考えられる。また、転写因子遺伝子の発現を制御した形質転換イネの細胞壁成分分析と酵素糖化効率を求め、形質転換木質バイオマスのバイオ燃料化に対する適性を評価した。
代数的可積分系のP-解析的手法による研究

本研究課題の目的は、特別なタイプのp-線型微分方程式について、その解の構造をp-解析的手法で調べること、パンルベVI型方程式の代数解をp-解析的に調べること、超越的な解を持つ可積分系も有限体上では代数的可積分系となることがあるので、適当なモデルを作り数理実験を行うこと、p-解析の意味で代数的可積分系であるような可積分系を構成すること、線形の場合をモデルとして、p-線形微分方程式の一般論を目指すこと、の5点である。2年間の研究を通して、研究総括は研究代表者が行い、研究分担者は他分野の研究者との交流による情報と知見の収集、および共同研究の準備を行った。研究代表者は、パンルヴェI型方程式について以下のような結果を得た。パンルヴェI型方程式の一般解であるパンルヴェ超越関数は解析的には古典関数では表すことができない超越関数であるが、この事実をp-解析の対場から見直すと、標数が5の場合には代数的に可積分であることがわかる。具体的には、原点の周りの級数解は代数関数で表され、また無限遠点における形式級数解もp-解析の意味で収束し代数関数となる。同様な結果はパンルヴェII型方程式についても成り立つ。この場合の鍵になる標数は3である。さらに、他のタイプのパンルヴェ方程式の代数解について、共同研究により次の結果を得た。すなわち、パンルヴェ方程式はある2階線型常微分方程式のホロノミック変形で特徴付けられるが、代数解を代入すると、これらの線型方程式は古典関数で表され、そのモノドロミーを具体的に決定することができる。これらの結果は現在論文を準備中である。いずれの結果も解析的な研究が大いに参考になった。研究分担者の関連する研究は文献表に挙げた通りである。本研究課題は、以下のような具体的な課題を目的とする、(1)P-線型微分方程式について、その解の構造をP-解析的手法で調べること、(2>パンルヴェVI型方程式は、その特殊解として豊富な代数解を持つが、これらの代数解をP-解析的に調べること。(3)超越的な解を特つ可積分系も有限体上では代数的可積分系となることがあるので、適当なモデルを作り数理実験を行うこと。(4)P-解析の意味で代数的可積分系であるような可積分系を構成すること。(5)数理的現象の意味を明確にするために、線形常微分方程式の場合をモデルとして、P-線形微分方程式の一般論を目指すこと。数理実験で現れる現象の背後にある数学的な楠造を、少なくとも得られた現象については明らかにすることにより、上記の目的を達成し、手法としても数学的対象としても発展させることが目標である。既に知られている数理実験の結果の数学的意味付けを明らかにしつつ、さらにコンピュータ等を利用して新しい数理現象を発見するべく実験的考察を続けている。研究期間を通して、数理実験とその結果の解析が中心印な仕事となる。初年度である平威13年度には、研究目的の欄にある、(2)、(3)の数理実験と数学的研究(1)を進めている。並行して(4)と(5)の研究の方向を定めることは研究代表者の役割である。研究分担者は具体的な手法と課題を明確にすることを目標としている。2年間を通して研究総括は研究代表者が行うが、研究分担者は必要に応じて他分野の研究者との交流による情報と知見の収集、および共同研究の準備と実行を進めているところである。また、本研究計画を推進するため,諸分野の研究者が直接討論をおこない,アイディアの交換に努めている。この研究計画の実現により、上記(5)にある代数的可積分系のP-解析理論の構築に一歩進むことができ、それにより可積分系から代数学にわたる分野横断的な研究者の新しいグループが構築できれば、本研究課題の目的は達成されたことになる。そのような段階までどのくらい近づけるかどうかが次年度の課題となるであろう。

すなわち、パンルヴェ方程式はある2階線型常微分方程式のホロノミック変形で特徴付けられるが、代数解を代入すると、これらの線型方程式は古典関数で表され、そのモノドロミーを具体的に決定することができる。これらの結果は現在論文を準備中である。いずれの結果も解析的な研究が大いに参考になった。研究分担者の関連する研究は文献表に挙げた通りである。
DNA/RNAヘテロ2本鎖核酸を切断するヌクレアーゼの同定および作用機序解明

核酸医薬品は大きな可能性を秘めた新規医薬品として、抗体医薬品や再生医療と同様に精力的に研究されている。近年、新規核酸医薬品であるHDO(DNA/RNAヘテロ2本鎖核酸)が報告された。HDOは既存の核酸医薬として劇的な活性向上を示したが、HDOによる遺伝子発現制御機構は、ほとんど何もわかっていない。本研究代表者はまずトコフェロール結合HDO(Toc-HDO)と新規結合タンパク質を同定するためのアッセイ系を確立した。この新規に立ち上げたアッセイ系を利用して、Toc-HDOに結合すると考えられる、ANXA5およびCA8の2つの候補タンパク質を見つけだした。続いて同定したANXA5およびCA8タンパク質を手がかりに、さらなる網羅的探索を行なった。CA8に対する免疫沈降、続く銀染色によるタンパク質の可視化から、CA8に結合するタンパク質と見つけだした。この結合タンパク質は、その後のMS解析の結果から、TPM3(Tropomyosin 3)であることが明らかとなった。CA8がTPM3と結合することは、世界で初めての報告である。さらにToc-HDOを切断するタンパク質を見つけ出すために、バイオインフォマティクス解析を行った。数多くの候補タンパク質の中から、RNase H活性を有すると考えられるAPEX1およびFEN1タンパク質を見出した。従って、これらToc-HDOに結合すると考えられるANXA5,CA8,APEX1,FEN1およびTPM3に関して、Toc-HDOとの結合などの詳細な検討する事を目的に、大腸菌内でリコンビナントタンパク質を発現させ、HisタグもしくはGSTを用いて精製した。現在は、これら精製タンパク質を用いて、様々な解析を行っている。予備実験で同定したANXA5とCA8に結合するタンパク質を網羅的に解析するために、それぞれのタンパク質に対する抗体で免疫沈降を試みた。残念ながらANXA5に対する市販の2種類の抗体いずれもが、免疫沈降をさせることができなかった。一方で、CA8に対する免疫沈降は界面活性剤あり・なしいずれの条件でもうまく沈降させることに成功した。そこでCA8に対して免疫沈降を行い、銀染色による結合タンパク質の可視化、続く結合タンパク質の切り出しを行った。その後のMS解析の結果から、結合タンパク質はTPM3(Toropomyosin 3)であることが明らかとなった。CA8とTPM3との結合は、世界で初めての報告である。続いて、異なったアプローチ法、特にバイオインフォマティクスを用いた解析から、TOc-HDOを切断すると考えられるAPEX1およびFEN1を見つけだした。現在は、大腸菌によるリコンビナントタンパク質を発現および精製しており、これらリコンビナントタンパク質を用いて、Toc-HDOとの結合や切断などの詳細な検討を行っている。以上の理由から、順調に進行していると考えている。Toc-HDOとの結合が考えられる候補タンパク質に対して、リコンビナントタンパク質を作成・精製する。精製後のリコンビナントタンパク質を用いて詳細な検討を行う。結合解析でポジティブな結果が得られたタンパク質に対して、培養細胞を用いて、細胞内でToc-HDOによる遺伝子発現制御にどのように関わっているかを検討する。用いる細胞はマウス由来のHepa1-6細胞を考えており、Hepa1-6細胞に対してsiRNA処理を行い、候補タンパク質のノックダウンを行う。WB法により目的タンパク質のノックダウンを確認し、ノックダウンが確認された細胞を用いて、Toc-HDOをgymnosis法により処理する。処理48時間後にRNAを回収し、その後はRT-qPCRを用いて目的の遺伝子発現量を定量し、比較検討する。また同定タンパク質間のタンパク質-タンパク質結合を解析するために、IP-WBや蛍光顕微鏡によるタンパク質の共局在を確認する予定である。