hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
運動・ストレス・老化に関する新規バイオマーカーの開発と機能解析

今年度は持久性運動と老化マウスモデルから得られた骨格筋サンプルに転写・翻訳動態の網羅的解析を適応し、共発現遺伝子ネットワーク解析(WGCNA)を行うことで、翻訳動態特異的なネットワークおよび翻訳調節に寄与する新しい遺伝子(遺伝子x)を発見した。現在はどのように遺伝子群xが翻訳を調節しているのかを実験的に検証しようとしている。また、老化マウスおよびそのトレーニングのサンプルの解析によって加齢やトレーニングとの関連が認められたmiRNAを複数同定することができたので、今後はそれらのmiRNAがどのような機能をもつかについて解析を進める。以上のように、網羅的解析から運動・老化・トレーニングに関連する分子がリストアップされ、それらの分子の機能解析が進められつつあり、おおむね順調に進展していると言える。今年度の実績として、マウス運動モデルに加え、加齢マウスモデルであるSAMP8の骨格筋サンプルを用いて、転写・翻訳動態における網羅的解析を行った。さらに、骨格筋におけるシステムレベルでのネットワーク変化を捉えるために、共発現遺伝子ネットワーク解析(WGCNA)を行い、興味深い遺伝子の新機能を発見した。WGCNAでは、発現パターンが強く相関する遺伝子どうしは一つの共発現遺伝子ネットワークを形成するという考えに基づいている。同一のネットワーク内の遺伝子群は似たような機能を有していることが多い。そのため、機能未知であった遺伝子も近傍の既知遺伝子の機能からその働きを推測することができる。このようなネットワークレベルでの解析を転写・翻訳動態データに行ったところ、翻訳動態特異的な(転写動態では見られない遺伝子間の)ネットワークを発見した。そのうちの一つには、リボソーム複合体や翻訳に関わる遺伝子がエンリッチされていた。このネットワークを詳細に検討したところ、これまでリボソームや翻訳とは全く関係性が認められていない遺伝子も当該ネットワークに存在していること判明した(遺伝子x)。また、昨年度老化とトレーニングの関連が認められたマイクロRNA(miRNA)について、その機能を解析するため骨格筋細胞にて当該miRNAを操作し、その表現型を検討した。遺伝子・タンパク質の発現はリアルタイムPCR、ウェスタンブロット法、免疫組織染色法等にて評価し、細胞機能と細胞内外の情報伝達経路の連動について解析を行った。本研究では、網羅的な翻訳動態解析が可能なリボソームプロファイリングと網羅的転写動態解析を活用して、マウスの運動モデルにおいて運動トレーニングに対する骨格筋適応のメカニズムを網羅的見知から解明することを目的としている。前年度までの検討により、共発現遺伝子ネットワーク解析(WGCNA)によって推測された新規翻訳調節因子の遺伝子xは、翻訳を調節していることが示されたため、遺伝子xによる具体的な作用機序を解明するために、共免疫沈降などによって、相互作用するタンパク質の検出を行う。
タイ文学の展開・発展と社会(1938-1958)

平成14年度平成17年度実施計画にそって研究を実施し、目的としていた極めて貴重な以下の研究成果を得た。また本研究成果を基盤にしたさらに高次元の課題で、本研究の集大成化を図る今後の研究方針が得られたことは、今後の国の内外の研究に少なからず資するものと確信する。1.学術資料としての文芸誌の調査、収集、再評価を図る実証的研究、及び研究対象の原本、文学作品、関連文学作品、文献史料の調査、収集の成果所在不明であった当該文芸誌『アクソーンサーン』や『ワンナカディーサーン』について、その所在、内容(発行年、巻、号数等)の確認ができ、マイクロジャケットで入手後、CD化した。また関連文芸誌『エーカチョン』、『スパープブルット』、『セーナースックサー・レ・ペーウィッタヤーサート』、『ラックウィッタヤー』をマイクロフィルムで入手、研究対象の原本、文学作品、関連文学作品、文献史料についても調査と収集を積極的に図り、成果を充実化させた。2.タイ側共同研究者、及び国の内外の専門家より助言、レクチャーを聴講資料の入手、分析、考察、研究成果の公開等についてタイ、及びイギリスの専門家より助言、レクチャーを拝受し、また意見交換を行った。3.思想、文化、歴史観点からの新しい研究アプローチによる分析、考察、及び研究成果の公開上記入手資料を分析、考察し、成果の一部を英文で執筆した。また研究内容の充実と国際化を図るため、研究過程での成果、及び関連作家について国の内外で発表した(2003年、タイ国立開発行政大学院大学他)。さらに国際学会EUROSEA(2004年)をはじめ、国の内外の学会、研究会に積極的に参加し、研究の視野を広げ、学際研究の向上に努めた。4.関連作家の文学活動追究:セーニー・サオワポン作『敗者の勝利』の翻訳出版学術界のみならず、研究成果の社会への還元、及びタイ、日本両国の友好と文化理解促進という観点から、タイ文学史上の上記名作を翻訳出版した。本研究課題に関し、初年度である平成14年度は研究実施計画にそって1)研究対象期の発行文芸誌、文学作品に関する資料、文献の調査、収集、2)国の内外(タイ、及びイギリス)の専門家よりレクチャー拝受・意見交換、関係者、及びその遺族との会見、3)関連作家の文学活動追跡調査、4)調査結果分析着手等、を中心に行った。なかでもその所在が不明で散逸の危機に瀕していた当該研究対象文芸誌の一つ「アクソーンサーン」(創始者スパー・シリマーノンとシーブーラパー)の所在追究に専念し、その結果、当該文芸誌の一部はシリマーノン家に、一部はタイ国立図書館に保存され、またその他に極く数部であるがタイの歴史研究者とマティチョン新聞社に存在することが判明した。*タイ国立図書館保存されている「アクソーンサーン」の発行年、巻、号数を確認。しかしながら本文芸誌は破損の危機にあるため閲覧はマイクロジャケットを通してのみ可能。マイクロジャケットの購入は可能であるが、然るべき公的手続きを必要とするとのことで、結局、入手手続きを帰国後に残すこととなった。*研究対象期の発行文芸誌、文学作品に関する資料、文献の調査、収集年2回開催されるブックフェアー(タイ教育省主催)や国の内外の古書店、大学ブックセンター等で当時の政治的理由で発禁処分になり入手に困難を極めていた文学作品をはじめ、研究課題に関係する図書、資料、文献を収集。*専門家よりレクチャー拝受、意見交換によって学際研究に進展をみ、またその他研究会にも参加。【総括】

研究対象の要の一つとする月刊誌「アクソーンサーン」の全てが国立図書館とシリマーノン家、及び上記私的所有者のもとで完全に保存されていることになるのかどうかは次年度調査に継続するが、本年度、懸案の同誌所在が確認された成果は今後の研究の確たる基盤となり非常に貴重である、本研究課題に関し、第2年度である平成15年度は研究実施計画にそって1)研究対象期の発行文芸誌、文学作品に関する資料、文献の調査、収集、2)国の内外(タイ、及びイギリス)の専門家よりレクチャー拝受・意見交換、関係者、及びその遺族との会見、3)関連作家の文学活動追跡調査、以上3点を継続実施し、また4)調査結果分析、に着手した。なかでも昨年までの調査でその所在が不明で散逸の危機に瀕していた当該研究対象文芸誌の一つ「アクソーンサーン」(創始者スパー・シリマーノンとシーブーラパー)の所在が明らかになったので、追究に専念した。特に本年度は当該文芸誌の一部が保存されているシリマーノン家とタイ国立図書館を中心に所在資料の内容確認を行った。その他に極く数部であるがタイの歴史研究者とマティチョン新聞社に存在することが判明しているが、これらについては次年度の調査に継続する。*シリマーノン家訪問ほぼ全巻を保存していた。しかしながら、遺族の厚意により閲覧は可能であったが、写真コピーは許可されていないため、時間的な制約上、内容の詳細な確認までには至らなかった。*タイ国立図書館保存されている「アクソーンサーン」の発行年、巻、号数を確認後、閲覧はマイクロジャケットを通してのみ可能だったため、マイクロジャケット購入の公的手続きに入った。手続きには然るべき文書等を必要としたため、マイクロジャケットが入手できるまで半年ほどを要した。しかし、同マイクロジャケットを実際にみることができる機器が本大学、および関係機関になく、マイクロジャケットからマイクロフィルムにするか、あるいはCD化という新たな次の作業を経なければならない困難に直面した。検討した結果、専門家の助言のもとに、現在CD化を進めており、完成は次年度の予定である。*研究対象期のその他の発行文芸誌、文学作品に関する資料、文献の調査、収集継続国の内外(タイ、およびロンドン、上海)の古書店、大学ブックセンター等で当時の政治的理由で発禁処分になり入手に困難を極めていた文学作品をはじめ、研究課題に関係する図書、資料、文献を収集。*タイ、及びイギリスの専門家よりレクチャー拝受、意見交換によって学際研究に進展をみ、またその他研究会にも積極的に参加した。*研究課題に関するこれまでの調査結果を分析し、研究過程の一部をタイ国立行政開発大学院大学で発表した。本研究課題に関し、第3年度である平成16年度は研究実施計画にそって1)研究対象期の発行文芸誌、文学作品に関する資料、文献の調査、収集、2)国の内外(タイ、及びイギリス)の専門家よりレクチャー拝受・意見交換、関係者との会見、3)関連作家の文学活動追跡調査、4)調査結果分析、以上4点を継続実施した。なかでもこれまでの調査研究でその所在が明らかになり、マイクロジャケットで入手した当該研究対象文芸誌の一つ「アクソーンサーン」(創始者スパー・シリマーノンとシーブーラパー)のCD化を実施し、文芸誌の内容研究に着手した。当該文芸誌はシリマーノン
アルツハイマー型痴呆モデルラットの体温調節機能解析とDHAの改善効果

痴呆患者では真冬に窓を開け放したり、真夏に何枚も服を着たりと、温熱感覚、快・不快感の喪失のために行動性体温調節機能が障害されることは良く知られている。しかし、それらについての科学的な実証は少なく、また、体温低下時の代謝性熱産生反応、上昇時の発汗などの熱放散反応である自律性調節についての研究はほとんどなされていない。しかし、行動性調節が障害されている患者にとって、自律性調節が正常に保たれているかどうかは重要であり、検討すべき研究であるといえる。そこで、本年度は本研究の目的の一つである、アルツハイマー型痴呆が体温調節機能に及ぼす影響について考察するため、申請者の研究グループによって確立されている側脳室へのヒトアミロイドβ-蛋白(Aβ)持続注入によりアルツハイマー型痴呆モデルラットを作製し、また、本モデルラットの空間認知学習機能が低下することをシャトルアボイダンス法、放射状迷路法を用い確認した。(1)ラットは環境温24°C、明暗周期12:12時間、自由飲水・摂食下でプラスチックケージにて一匹ずつ飼育する。(2)麻酔下、Aβ持続注入用のミニ浸透圧ポンプを背部皮下に留置し、そのカニューレを右側脳室へ挿入・固定する。同時に、Aβ沈着促進のため、塩化アルミニウム溶液を左側脳室へ投与する。(3)2週間の期間をおきAβを沈着させる。その後、Aβ注入群と非注入群の空間認知学習機能を放射状迷路法により比較する。空間認知機能を確認したところ、短期記憶の低下は見られる一方、長期記憶には変化がみられないという結果となり、これまで申請者の研究グループが提示してきた結果とほぼ同じ傾向を得た。そこで、現在は空間認知機能低下確認済みの動物を用い、自律性および行動性体温調節機能について解析中である。
マクロ／メゾ／ミクロスケールを完全連成した織物複合材料の強度解析手法の構築と実証

本研究では、織物複合材料の設計・評価技術のさらなる高度化に資するために、織物複合材料のマクロ(積層板)/メゾ(織構造)/ミクロ構造(繊維と母材)における損傷挙動を相互に連成可能な理論・手法を構築し、その解析コードを開発することを目的としている。また実験により、開発手法の定量的な妥当性を確認する。上記の目的を達成するために、本研究において取り組むべき課題として、(1)マクロ/メゾ/ミクロスケールを全て連成し、かつ損傷を考慮可能な強度解析手法の理論構築、(2)上記手法の解析コストの削減、(3)複合材料内部のランダム性の考慮、(4)上記手法の実験的検証、の4点が挙げられる。そこで、平成30年度ではまず、3つのスケールを全て連成した解析手法の発展として、熱残留応力解析への拡張を行った。これにより温度変化に伴う織物複合材料全体における線膨張係数の非線形性を材料単体の特性から高精度に解析できるようになった。また、織物複合材料の熱膨張実験の結果の比較により、上記解析の妥当性も確認した。次に、ネスティングを有する平織複合材料の弾-粘塑性解析と積層ずれ依存性の調査を行った。具体的には、平織複合材料において、成型時に発生しうる内部構造であるネスティングにおいて積層ずれも発生することに着目し、それらを考慮可能な境界条件を考案し、それを上記マルチスケール解析手法に組み込むことが成功した。これにより積層ずれが上記材料の応力-ひずみ関係にどれだけ影響を与えるかを実験することなく推定できるようになった。本研究では、織物複合材料の設計・評価技術をさらに向上すべく、その高精度な強度解析手法の開発および実証を目的としている。平成30年度においては、まず昨年度実現したマクロ/メゾ/ミクロスケールの連成解析を、熱履歴がかかった場合の熱残留応力解析に拡張し、その解析結果を実験結果と比較することによりその妥当性確認を行った。研究概要で述べた結果は、従来考慮できていなかった繊維束内部の母材の非線形性を考慮可能であるから得られたものであり、査読付き英語論文にも掲載された。次に、昨年度提案したネスティングを有する平織複合材料の基本セルおよびその境界条件を、複合材料内部のランダム性として重要な積層ずれの影響も考慮できるような境界条件へ拡張し、平織複合材料の弾-粘塑性解析を実施した。このように今までに計算コストを軽減しつつ、ネスティングおよび積層ずれが共存した解析を実施した例はないだけではなく、研究概要で述べた結果を実験から得ようとすると、その試験片や試験機等が特別製となり、膨大なコストがかかるから、本手法は非常に実用的であるといえる。この点が評価され、学会にて表彰を受けた。加えて、実験結果との比較解析で使用する織物複合材料の材料定数を取得するため、複数の種類の平織複合材料や綾織複合材料の短冊形試験片を使用して静的引張試験を実施した。上記のように進捗はあるものの、繊維束内の繊維分布のランダム性の考慮の考慮や損傷挙進展解析に関しては、プログラム作成やそのデバックは行っている状態であるから、十分な成果を得ることはできていないため、上記のように自己評価をする。研究計画調書に記載したように、平成31年度においては、平成30年度で実現した3つのスケールを連成した均質化法に、適切な損傷判定則を導入する。加えてマクロスケールに使用構造部材を想定した有限要素モデルの適用も試みる。この導入に伴い、計算コストが膨大となることが予想されるから、作成した解析コードに並列計算手法の導入も検討する。具体的には、解析コードの最適化やOpenMPを用いた並列化を実施し、解析時間の削減を図る。また平成30年度に引き続き、必要な場合に織物複合材料の材料試験を実施する。これにより損傷進展解析に用いる不足した各種パラメータを取得する。上記の目的を達成するために、本研究において取り組むべき課題として、(1)マクロ/メゾ/ミクロスケールを全て連成し、かつ損傷を考慮可能な強度解析手法の理論構築、(2)上記手法の解析コストの削減、(3)織構造内における繊維分布のランダム性の考慮、(4)上記手法の実験的検証、の4点が挙げられる。そこで、平成29年度ではまず、繊維束内部のミクロ構造を考慮可能にする織物複合材料のマクロ/メゾ/ミクロ均質化弾-粘塑性解析手法を構築するとともに、今まで考慮できなかったネスティング構造を表現できるモデル形状および境界条件を新規提案した。加えて、材料試験の実施と各種パラメータの同定・検証を行った。その結果を用いて、上記解析手法の妥当性を検証することに成功した。次に、これまで取り組んできた損傷進展解析手法を、成型時の熱残留応力を考慮できる形へと発展させるとともに、その手法を基本的な織構造である平織のみならず綾織、朱子織複合材料へ適用し、積層ずれ依存性を調査した。その結果、積層ずれにより強度が大きくばらつくことを見出す等、工学的に有用な知見を得た。平成29年度においては、ミクロスケールの導入と各スケールとの連成を実現し、かつ工学的実用に値する解析コストにするために、解析領域を低減する必要があった。

これらのことに関しては、上記「研究実績の概要」で述べたように、3つのスケールを連成するだけではなく、解析領域が膨大となるため従来解析では考慮されないのが一般的であったネスティングを、新規解析領域の導入により解析可能とし、これらの点については目標が達成された。一方、繊維束内の繊維分布のランダム性の考慮については、まだ十分な成果を得ることはできていないが、同じく重要なランダム性である積層ずれを有する様々な織物複合材料に対して、熱残留応力を考慮した損傷進展解析を実施できたことから、上記のように自己評価をする。本研究では、織物複合材料の設計・評価技術のさらなる高度化に資するために、織物複合材料のマクロ(積層板)/メゾ(織構造)/ミクロ構造(繊維と母材)における損傷挙動を相互に連成可能な理論・手法を構築し、その解析コードを開発することを目的としている。また実験により、開発手法の定量的な妥当性を確認する。上記の目的を達成するために、本研究において取り組むべき課題として、(1)マクロ/メゾ/ミクロスケールを全て連成し、かつ損傷を考慮可能な強度解析手法の理論構築、(2)上記手法の解析コストの削減、(3)複合材料内部のランダム性の考慮、(4)上記手法の実験的検証、の4点が挙げられる。そこで、平成30年度ではまず、3つのスケールを全て連成した解析手法の発展として、熱残留応力解析への拡張を行った。これにより温度変化に伴う織物複合材料全体における線膨張係数の非線形性を材料単体の特性から高精度に解析できるようになった。また、織物複合材料の熱膨張実験の結果の比較により、上記解析の妥当性も確認した。次に、ネスティングを有する平織複合材料の弾-粘塑性解析と積層ずれ依存性の調査を行った。具体的には、平織複合材料において、成型時に発生しうる内部構造であるネスティングにおいて積層ずれも発生することに着目し、それらを考慮可能な境界条件を考案し、それを上記マルチスケール解析手法に組み込むことが成功した。これにより積層ずれが上記材料の応力-ひずみ関係にどれだけ影響を与えるかを実験することなく推定できるようになった。本研究では、織物複合材料の設計・評価技術をさらに向上すべく、その高精度な強度解析手法の開発および実証を目的としている。平成30年度においては、まず昨年度実現したマクロ/メゾ/ミクロスケールの連成解析を、熱履歴がかかった場合の熱残留応力解析に拡張し、その解析結果を実験結果と比較することによりその妥当性確認を行った。研究概要で述べた結果は、従来考慮できていなかった繊維束内部の母材の非線形性を考慮可能であるから得られたものであり、査読付き英語論文にも掲載された。次に、昨年度提案したネスティングを有する平織複合材料の基本セルおよびその境界条件を、複合材料内部のランダム性として重要な積層ずれの影響も考慮できるような境界条件へ拡張し、平織複合材料の弾-粘塑性解析を実施した。このように今までに計算コストを軽減しつつ、ネスティングおよび積層ずれが共存した解析を実施した例はないだけではなく、研究概要で述べた結果を実験から得ようとすると、その試験片や試験機等が特別製となり、膨大なコストがかかるから、本手法は非常に実用的であるといえる。この点が評価され、学会にて表彰を受けた。
『三国志演義』諸版本における批評の総合的研究

まず『李笠翁批閲三国志』(「李漁本」)を取り上げた。李漁本の本文を他の『三国志演義』諸本と比較して、その特徴を考察した。その結果、李漁本の本文は基本的には『李卓吾先生批評三国志』(「李卓吾評本」)の一本を底本にしているが、その文章中に毛宗崗本の本文を参考にして底本の文章を書き改めている個所があること、しかしそれは毛宗崗本に従った底本の文章の修訂なのではなく、李漁本独自で底本を修訂する過程において毛宗崗本を参考にすることもあったためであること、を明らかにした。その上で李漁本の批評について、李卓吾評本・毛宗崗本の批評と比較して、李漁本の批評の付けられ方を考察した。その結果、李漁本において批評を付ける場合、基本的には李漁本独自で批評を付けようとしていたこと、その中で内容の充実した批評である毛宗崗本の批評も取り入れていったこと、を明らかにした。以上の研究成果をまとめて、「『李笠翁批閲三国志』について」という一本の論文を執筆した。(現在掲載する雑誌を検討中である。)さらに『鍾伯敬先生批評三国志』(「鍾伯敬本」)を取り上げて、その中に見られる批評と「李卓吾評本」の批評との比較した。その結果、鍾伯敬本の批評は李卓吾評本の批評を基礎にして書かれていること、中には李卓吾評本の批評をそのまま引用したりほぼ同様のことを述べる批評もあるが、その一方で李卓吾評本の批評とは全く逆の批評が書かれている場合もあること、そしてそのことから明末期において『三国志演義』の受容の仕方にもさまざまな立場があったこと、を明らかにした。以上の研究を現在論文としてまとめているところである。その他、以上の研究を進めていく過程において、『三国志演義』の周辺の作品として『水滸伝』について調べたところ、その一版本『京本忠義伝』について新たな知見を得たので、それについても論文としてまとめた。
食材の調理状態を非破壊的かつ経時的に三次元分析し可視化するフードスキャナ

本研究の目的は、食品内部の成分や状態の分布を空間的かつ非破壊的に分析可能なフードスキャナー装置を開発することである。この目標を達成するために、「1.多成分分析対応型フードスキャナの光源部の改良」、および「2.他成分分析対応型フードスキャナーの演算部の改良」ならびに「3.食品成分の屈折率を網羅的に分析するための装置の製作」を遂行することを目的とした。「1.多成分分析対応型フードスキャナの光源部の改良」は、研究計画当初の予定ではこれまでに構築してきた試験用装置に可視光レーザーを導入し、さらに広帯域用の光学部品に換装して高速分析に対応した。既製品の調達ではなく独自に光源を開発したことで、フードスキャナー装置の開発により適した仕様とすることができ、結果として分析精度と分析の速さに貢献する光源を得ることができた。「2.他成分分析対応型フードスキャナーの演算部の改良」では、演算用のソフトウェアを調達し、従来のプログラムでは対応できていなかった高解像度分析をおこなうことができるようになった。具体的には、500×500ピクセルの分析を1秒以内に遂行できるようになった。「3.食品成分の屈折率を網羅的に分析するための装置の製作」では、可視光全域にわたり食品成分の屈折率測定を可能にする装置を開発した。これにより、来年度に予定している食品成分の屈折率の網羅的測定を滞りなく遂行することができる。対象とする食品成分は、おもに糖質および灰分を扱う予定である。本年度予定した研究計画の3つの実施項目に関して計画どおり遂行できた。すでに来年度以降予定している研究課題の実施に着手している。来年度研究実施課題として、「4.食品成分の屈折率の網羅的測定」を予定している。分析結果をデータベース化する予定である。
HHV-6初感染ならびに再活性化の病態解明と制御に関する総合的研究

1)突発疹患児における経時的リンパ球増殖反応の推移:抹消血単核球からのHHV-6分離陽性、血清抗体価陽転によりウイルス初感染が証明された突発疹患児かた経時的に検体採取。HHV-6に対するリンパ球増殖反応をBrdUの取り込みを指標としたassay系で調べた。各病気におけるS.I.(HHV-6抗原刺激/Mock感染抗原の刺激)の平均値は(S.I.=5.1)と比較して低値であった。2)HHV-6初感染後の免疫制御:1)の実験対象において、PHAに刺激による特異的リンパ球増殖反応を解析した。その結果、急性期では平均S.I.=10.2であったのに対し、感染後1週間ではS.I.=6.8、感染後1ヶ月でS.I.=8.9と低下しており、感染後1週間から1ヶ月にかけて非特異的免疫反応の低下が起きていることが示唆された。3)高純度なウイルス抗原液作製:in-vivoの解析を実施するには、バックグラウンド値を低下させる必要があり、より純度の高いウイルス抗原を作製するために、HHV-6感染細胞をSPGAmediumに溶解後、ショ糖密度勾配遠心法によるウイルス粒子を精製。これを抗原として使用した場合、多くのヒトでバックグラウンド値を示し、ウイルス細胞作製時に使用する臍帯血単核球のHLA型が影響していることが予想された。1)抗原作成:突発疹患児より分離したHHV-6 variant B(FG-18株)を臍帯血単核球に接種後、PHA.IL-2存在下で培養し5日目に最大の巨細胞形成(約90%の細胞がHHV-6モノクロナール抗体OHV-3を用いた間接蛍光抗体法で抗原陽性)を示したところで遠心分離。細胞成分をPBSに再溶解し細胞浮遊液(1×10^6/ml)を作成。それを超音波処理後遠心し、上清成分を抗原液として使用。対照として非感染臍帯血単核球を同様に処理し使用。2)リンパ球増殖反応測定法の至的条件設定:Cell Proliferation ELISAキット(Boehringer Mannheim社)を使用した。健康成人を対象として上記方法にて作成したHHV-6抗原、Mock感染抗原を用いてリンパ球増殖反応測定のための至的条件を検討。抗原濃度(希釈系列:16倍、32倍、64倍、128倍、256倍、512倍)、被検リンパ球の培養期間(3日、5日、7日)、採血方法(ヘパリン採血、EDTA採血)、検体輸送方法(4゚C保存と常温保存)、BrdUを加えた後の培養期間(2時間、4時間、6時間、O/N)について検討した。その結果、抗原濃度は16倍から64倍まで使用可能であったため以後の実験は抗原液を64倍希釈して使用することにした。リンパ球培養期間は5日、採血方法はヘパリン採血、BrdUを加えた後はO/Nで培養した結果が良好であった。3)臍帯血、健康成人ならびにHHV-6初感染時リンパ球増殖反応:Stimulation Index(HHV-6抗原刺激/Mock感染抗原刺激)の平均値は以下のとおりであった。健康成人(14例)=5.1、臍帯血(16例)=1.1、突発疹急性期(14例)=1.2、突発疹罹患後1週間(12例)=1.3、突発疹罹患後1ヶ月(8例)=1.8。

3)高純度なウイルス抗原液作製:in-vivoの解析を実施するには、バックグラウンド値を低下させる必要があり、より純度の高いウイルス抗原を作製するために、HHV-6感染細胞をSPGAmediumに溶解後、ショ糖密度勾配遠心法によるウイルス粒子を精製。これを抗原として使用した場合、多くのヒトでバックグラウンド値を示し、ウイルス細胞作製時に使用する臍帯血単核球のHLA型が影響していることが予想された。1)突発疹患児における経時的なリンパ球増殖反応の推移:末梢血単核球からのHHV-6分離陽性、血清抗体価陽転によりウイルス初感染が証明された突発疹患児から経時的に検体採取。前年度確立したHHV-6に対するリンパ球増殖反応測定システムを用いて解析した。その結果、各病期でのStimulation Index(HHV-6抗原刺激/Mock感染抗原刺激)の平均値は以下の通りであった。突発疹急性期(22例)=1.2、突発疹罹患後1週間(22例)=1.3、突発疹罹患後1ケ月(19例)=1.9、突発疹罹患後半年(8例)=1.7。少なくとも、昨年度の研究で得られた健康成人の値(S.I.=5.1)と比較して回復期においても低値であった。今後の長期的フォローアップが必要と考えられる。2)HHV-6初感染後の免疫抑制:1)の実験経過中、非特異的なリンパ球刺激に対する反応を調べるため、得られた検体の一部を使用しPHA刺激によるリンパ球増殖反応の解析を実施した。その結果(S.I.=PHA刺激時の値/Mock感染抗原刺激の値)、急性期では平均S.I.=10.2であったのに対し、感染後一週間ではS.I.=6.8、感染後1ケ月でS.I.=8.9と感染後1週間からlケ月にかけて非特異的な免疫反応の低下が起きていることが示唆された。3)より純度の高いウイルス抗原作製:これまでの実験結果から、突発疹患児を対象にした場合ウイルス特異的リンパ球増殖反応が解析できたが、各測定時のばらつきが大きく、今後さらに免疫抑制状態患児を対象に解析を行うためにはより純度の高いウイルス抗原が必要と考えられた。そこで、HHV-6感染臍帯血リンパ球をSPGA mediumに溶解し-80°C保存、そこからショ糖密度勾配遠心法にてウイルス粒子を精製することを試みた。現在、精製に必要なHHV-6感染臍帯血リンパ球を大量に作成中。1)高純度なウイルス抗原液作製:in-vivoの実験を実施するにあたり、バックグラウンド値を低下させる必要が生じた。そこで、より純度の高いウイルス抗原液を作製するため、HHV-6感染臍帯血単核球をSPGAmediumに溶解後、ショ糖密度勾配遠心法にてウイルス粒子を精製して抗原液として使用した。その結果、約80%のヒトにおいて、バックグラウンドが減少することが確認された。しかしながら、約20%のヒトでは、相変わらず高いバックグラウンド値が観察された。これは、ウイルス抗原液作製のために使用した臍帯血単核球の保持していたHLA型が影響していると推測された。2)K562細胞への感染実験:K562細胞は、細胞表面にHLAを発現していないリンパ球系細胞である。上記実験1)にて問題となった高バックグラウンド値の問題を解決するために、HLAの発現していないK562細胞でのウイルス抗原の精製を試みた。高力価のHHV-6液を作製し、K562細胞への感染実験を実施した。MOI=0.1で感染させ、IEA/ex3抗体を用いた間接蛍光抗体法で感染の有無を確認した。
光による葉緑体遺伝子の転写後制御機構に関する生化学的研究

光シグナル受容体の一つで独自のDNAを有する葉緑体は、光により多くの遺伝子発現が誘導される。我々は光による葉緑体遺伝子の発現制御機構についてプロテインキナーゼ(PKase)に視点をおいて解析してきた。これまでに、遺伝子発現調節に機能するとされるカゼインキナーゼII(CK-II)と、その特異基質としてmRNAの3′末端プロセッシングを制御する分子量34kDaのRNA結合因子(p34)をホウレンソウ葉緑体中に見いだし、CK-IIによるp34のリン酸化が葉緑体遺伝子の転写後制御機構に重要な生理的な役割を持つことを明らかにしている。そこで平成6年度は、p34の効率的な精製法を確立し、さらにp34と相互作用を持つ因子の検索を生化学的に行うことにより、最終的に葉緑体遺伝子の転写後制御のメカニズムを解明することを目的として研究を行った。2.精製p34画分中にはCK-II活性が検出され、p34は葉緑体中でCK-IIと複合体を形成していることが考えられた。3.確立した精製法による解析から、CK-IIの特異基質となるRNA結合因子(33-39kDa)は植物種に共通して存在することが明らかになった。4.p34の精製過程でCK-II-p34に対して強い親和性を持つ分子量46kDaのPKase(PK-46)を新たに見いだした。5.PK-46は分子量24kDaのRNA結合性タンパク質をin vitroでリン酸化することが明らかになった。以上の結果から、CK-IIによるRNA結合因子のリン酸化を介した葉緑体遺伝子の転写後制御機構は、植物種に共通して存在し、さらに本機構にはPKaseを中心とした数種の因子が関与していることが考えられた。
組織間学習における阻害・促進要因の実証的解明

本研究では,認知のバイアスやヒューリスティックスによって,経験の蓄積が必ずしもルーティーンの変化,すなわち組織学習をもたらさないことを明らかにした。具体的には,「ほぼ同じ経験バイアス」という,他者がある失敗経験をしても,自らがそれと同じではないが,ほぼ同じような経験を行った場合,その他者の失敗に対する傾注が弱くなるために代理学習が発生しないという理論を構築し,原子力発電所データを用い実証した。本研究の目的は,組織間学習を促進・抑制する要因を体系的に解明し,実証的に検証を行うことである。組織間学習とは,組織自らの過去の経験に基づいて発生する経験学習とは異なり,他組織経験の観察,関連情報のエンコード,因果関係の推測に基づく学習の形態を意味する。この研究を通じ,「対岸の火事」をどうすれば「他山の石」に変えることができるのか,よりよく他の組織の経験から学習できる条件とは何か,を明らかにしていくことを目的としている。平成22年度では,分析が不足していた組織学習の認知的な側面に関する文献調査を行った。特に,認知のバイアスやヒューリスティックスによって,経験の蓄積が必ずしもルーティーンの変化,すなわち組織学習をもたらさないケースに関する文献を読み進めた。その1つには,ホットストーブ現象と呼ばれるものがあり,これは,ある行為が失敗をもたらしたとき,マネージャーはその行為と失敗の因果関係を誤って理解し,本当であれば別の理由で失敗したにもかかわらず,その行為が失敗の元凶と考えてしまうことである。このように自らが経験をしても学習が必ずしも円滑には行われないことから,代理学習や組織間学習においては,このような学習の失敗がより頻繁に発生していると考えられる。これらの文献調査に加えて,ヒアリング調査をいくつか行った。これらの調査では,他社の経験を企業はどのように見ているのか,そして,どのように学ぶのか,についてのプロセスを調査した。平成23年度では,前年度の分析から導出した仮説を検討した。具体的には,認知のバイアスやヒューリスティックスによって,経験の蓄積が必ずしもルーティーンの変化,すなわち組織学習をもたらさない可能性について検討を行った。具体的には,「ほぼ同じ経験バイアス」という,他者がある失敗経験をしても,自らがそれと同じではないが,ほぼ同じような経験を行った場合,その他者の失敗に対する傾注が弱くなるために代理学習が発生しない,という仮説である。この仮説を論文として執筆し,海外ジャーナルにおいて掲載を行った。仮説の検証には日本の原子力発電所における法律で報告の義務のある事故に関するデータを用いた。データは,日本原子力発電の東海原子力発電所が創設された1966年から2006年までのものを収集した。原子力発電所は高信頼性組織と呼ばれており,失敗による学習ではなく,他者の経験から学習することが重要である。そのため,このコンテクストのデータを使用した。前年度までに,理論研究,仮説の導出,実証研究,研究報告というプロセスを終わらせることができた。その結果認知のバイアスやヒューリスティックスによって,経験の蓄積が必ずしもルーティーンの変化,すなわち組織学習をもたらさないことが明らかになった。具体的には,「ほぼ同じ経験バイアス」という,他者がある失敗経験をしても,自らがそれと同じではないが,ほぼ同じような経験を行った場合,その他者の失敗に対する傾注が弱くなるために代理学習が発生しないことを示すことができた。本年度はこれらを踏まえ,さらに組織と企業の意思決定を社会・行動科学アプローチから解明することに尽力した。1つは,米国の証券アナリストが出す収益予想に関するデータを用いた研究プロジェクトである。ここでは,アナリストが2つ以上の共通の銘柄を担当したときに発生するコンタクトに着目し,多ポイント・コンタクトが大胆な予想(穴予想)につながるメカニズムを明らかにしようとしている。もう1つは,組織間ネットワークにおける認知的資源の役割を,マッチングのよい提携先の探索という観点から明らかにしようとしている。

これらのいずれの研究でも,構造的アプローチによる組織分析の中に,認知的限界や認知的資源という考えを投入し,これにより,構造的アプローチが非明示的に前提とする全知全能なるマネージャー像を緩和させた理論構築を行っている。分析に基づいた論文の執筆が終了,また,掲載が決定しているため。24年度が最終年度であるため、記入しない。当面の短期的な課題については,ある程度の解決を持っているが,研究を進めるプロセスにおいて新しい問題が明らかになってきた。特に,認知的問題,認知的バイアスの問題が組織間関係,組織間のインターアクションのコンテクストにおいて掘り下げられていないことが明らかとなった。今後は,この点について問題の掘り下げを行っていこうと考えている。
新奇メチル水銀選択的阻害薬によるメチル水銀細胞傷害性分子標的の解析

メチル水銀(MeHg)は、脳神経系を障害する環境汚染物質である。本研究は抗MeHg剤としてのオレアノール酸3-グルコシド(OA3Glu)の分子標的の同定及びその機能解析を目的とした。MeHgは、ヒト腸管上皮細胞(Caco-2細胞)において、アミノ酸トランスポーターであるlat1とlat2の両発現を誘導したが、OA3Gluは、lat1のみを誘導した。一方、OA3GluとMeHgの同時処理では、lat1の発現が増強した。本研究により、OA3Gluの分子標的はLAT1であり、LAT1を介したシステムにより細胞内のMeHgが減少し、その結果として抗メチル水銀活性を発揮している可能性が考えられた。本研究の背景として、オレアナン系サポニン化合物の一つであるオレアノール酸3-グルコシド(OA3Glu)とメチル水銀の併用経口投与実験(in vivo)により、マウス脳・肝臓・腎臓の水銀濃度がOA3Glu併用投与で減少したことから、OA3Gluがメチル水銀の解毒薬となる可能性を支持する知見を得ていた。本研究では、新奇メチル水銀選択的阻害剤であるOA3Gluを用いた細胞障害性分子標的の同定を指向し、メチル水銀の細胞障害作用に対する機能解析を目的とした。H28年度は、Caco-2細胞によるメチル水銀に対する細胞毒性評価系を用いて、メチル水銀濃度依存的な細胞死がOA3Gluにより抑制されることを明らかにした。続いて、siRNAライブラリーの解析に先行して、膜トランスポーターであるlarge amino acid transporter (LAT)のメチル水銀の取り込みに対するOA3Gluの影響を検討する目的で、内在性のLAT1及びLAT2をsiRNAによりノックダウンさせ、放射標識したメチル水銀の細胞内取り込みを評価した。さらに、これらの解析に加え、メチル水銀ばく露依存的なユビキチン化タンパク質の蓄積を見出すとともに、メチル水銀ばく露特異的に発現が増加する標的分子を見出した。本研究は、メチル水銀選択的阻害剤OA3Gluの標的分子の探索、標的分子の安定発現細胞株の樹立、およびそれら細胞株を用いた機能解析を遂行するものである。H28年度は、メチル水銀の取り込みに寄与しているLAT分子に注目した変動分子の解析をした結果、メチル水銀ばく露に応じて発現が上昇する標的分子を同定した。さらに、標的分子の安定発現細胞の樹立の着手に至っていることから、現在の進捗状況について、おおむね順調に進展していると判断した。本研究は、メチル水銀(MeHg)に対する膜トランスポーターの役割及び、オレアナン系サポニンの一つであるオレアノール酸3-グルコシド(OA3Glu)の抗MeHg作用の分子標的を明らかにすることを目的とし、以下の成果を得た。我々は、(1)ヒト神経芽細胞株であるSH-SY5Yにメチル水銀(MeHg)をばく露すると、膜トランスポーターであるlarge amino acid transporter (LAT1, 2)の発現が誘導されること、(2)OA3Gluは抗MeHg作用を示す一方で、MeHgばく露によりLAT1の発現が強く誘導されること、(3)OA3GluとMeHgの同時ばく露により相乗的にLAT1の発現が増強することを見出した。OA3Gluの類似化合物であるhederin(オレアノール酸の3位に糖鎖が2つ結合)処理ではLAT1の発現誘導が認められず、抗MeHg作用も示さなかったことから、OA3Gluのオレアノール酸の3位に単糖が結合していることが抗メチル水銀活性発現に必須であることが考えられた。これらの研究成果は、OA3Gluの分子標的の解明と低濃度MeHgの解毒薬・予防薬の展開のための分子基盤になると考えている。次年度は、メチル水銀選択的阻害剤OA3Gluの標的分子の探索を継続して行い、随時、標的分子の安定発現細胞株の樹立、およびそれら細胞株を用いた機能解析を実施する。先行して着手している安定発現細胞株については、細胞株の樹立後、メチル水銀に対する感受性、及び、メチル水銀の細胞障害性に対するOA3Gluの影響について解析を進める。さらに遺伝子ノックダウン法を併せて行い、メチル水銀の細胞障害作用に対する機能解析を進める予定である。公衆衛生学
超ウラン元素の加水分解と錯生成に関する研究

ネプツニウムをはじめとする超ウラン元素の地中移行挙動は、高レベル放射性廃棄物深地層処分の安全性評価上きわめて重要な要素である。しかしながら、これらの元素は一般に処分環境下の水溶液中で複雑な化学挙動を示し、その解明はいまなお不十分である。超ウラン元素は、その特有の化学的な特性から、酸化還元条件に鋭敏であり、水溶液中で加水分解反応や錯生成反応を起しやすいのである。本研究においては、処分環境下の水溶液中における超ウラン元素の化学挙動を明らかにするため、超ウラン元素の加水分解と錯生成反応等について検討した。得られた成果は以下の通りである。(1)Np(VI)の溶解度に対する炭酸イオンの影響を測定し、Np(VI)の加水分解生成物やヒドロオキシ炭酸錯体の生成に関する新たな知見を得た。(2)加水分解反応や炭酸イオンによる錯生成反応の熱力学データを系統的な観点から評価するため、新たに剛体球モデルを適用した。測定された熱力学データの妥当性の検証および未知のデータの予測において、本モデルが有用であることを示した。(3)有機酸による錯生成反応を検討するため、市販のフミン酸を用いてNp(VI)との錯生成反応を測定した。得られた結果が複数サイトモデルで良く説明できることを見出した。(4)岩石への吸着挙動を解明するため、Np(V)およびCsの石英への分配係数を測定し、電気二重層モデルを適用して検討した。その結果、モデルの妥当性が確認され、分配係数のpHおよびイオン強度依存性は石英表面で競争して起こるいくつかの吸着平衡反応を考慮することにより説明できることが明らかとなった。原子力先進諸国の処分開発プログラムでもこれらを重視した研究開発体制が組まれている。申請者らは、従来から、処分環境下の水溶液中における超ウラン元素の化学挙動を明らかにするため、特にネプツニウムについて実験的な研究を進めてきた。本研究においては、これらの研究に引続き、超ウラン元素の加水分解と錯生成反応についてさらに検討を深めることを目的としている。本年度は、以下の成果を得た。(1)従来からの研究に引続き、Np(VI)の溶解度に対する炭酸イオンの影響を測定した。Np(VI)の加水分解生成物やヒドロオキシ炭酸錯体の生成に関する新たな知見を得た。(3)有機酸による錯生成反応を検討するため、市販のフミン酸を用いてNp(V)との錯生成反応を測定した。超ウラン元素は、その特有の化学的な特性から、酸化還元条件に鋭敏であり、水溶液中で加水分解反応や錯生成反応を起こしやすいのである。

申請者らは、従来から、処分環境下の水溶液中における超ウラン元素の化学挙動を明らかにするため、特にネプツニウムについて実験的な研究を進めている。本研究においては、これらの研究に引続き、超ウラン元素の加水分解と錯生成反応についてさらに検討を深めることを目的とした。前年度は、熱力学データの理論的検討、Np(VI)の加水分解反応と錯生成反応の測定、フミン酸によるNp(V)の錯生成反応の測定などを進め、一定の成果を得た。本年度は、研究の目的を岩石への吸着挙動の解明へと展開して、以下の成果を得た。Np(V)の石英への分配係数は、pHの増加とともに増加し、イオン強度の増加とともに減少することが報告されている。これらの依存性を物理的な観点から明らかにするため、電気二重層モデルを適用して検討した。その結果、モデルは妥当なものであり、Np(V)の分配係数の依存性は石英表面で競争して起こるいくつかの吸着平衡反応を考慮することにより説明できることが明らかとなった。Np(V)の吸着反応の平衡定数などを求め、吸着のメカニズムを推定した。また、比較検討のため、Gsの石英への分配係数を測定し、同様のモデルを適用して解析した。結果は良好であり、モデルの有望性が確認された。
子宮頸がん等に関する知識・意識及び予防行動の実態とセルフエスティームとの関連性

<研究目的>実態に即し予防行動に結びつく効果的な予防教育プログラム構築の基盤形成を目的に、大学生における子宮頸がん及び性感染症に関する知識・意識並びに性行動についての実態を明らかにする。また、コンドーム使用に関するセルフエフィカシースケールを用いて(1)との関連性及びセルフエスティームとの関連性について明らかにする。<研究方法>対象者を平成23年度本学小白川キャンパス学生全員(約5000名)とし、4月の健康診断時に無記名式アンケート調査を実施した。調査内容は、(1)子宮頸がんに関する知識・意識(2)性感染症に関する知識・意識(3)性行動・予防行動(4)セルフエスティームスケール全般項目(5)コンドーム使用に関するセルフエフィカシースケール(日本性感染症学会誌第18巻第1号2007 p58-63を引用)とする。(2)(3)は2005年財団法人日本性教育協会で実施された「第6回青少年の性行動全国調査」等に準じ、本学独自のアンケート内容を作成した。得られたデータは統計用ソフトウェアSPSS Vol.19で解析した。<研究成果>子宮頸がん及び性感染症に関する基本的知識についてはどちらも7割程度の正解率であった。子宮頸がん予防に対する意識は、女子よりも男子の方がやや高く、子宮頸がんは女性の健康問題ではありながらも、女子学生の中にはワクチン接種やがん検診を今後受けたいと考えていない者がいることが憂慮される。その要因を解明するためにワクチン接種・がん検診の敷居を高くしている問題点や不安要因についても今後調査しなければならないと考える。HPVワクチン接種希望や子宮頸がん検診希望と子宮頸がんに関する知識との間に関連性は認められなかった。また、性行為時に毎回コンドームを使用している学生は8割程度であり、性行為経験年数が高くなるに連れて、若干の使用頻度低下がみられた。コンドーム使用に関するセルフエフィカシー及びセルフエスティームとの関連性は認められなかった。性行為経験者においては、知識の度合いに関わりなく、性行為時に性行為時に性感染症を意識する者が半数以下であり、性感染症検査希望についても6割程度であった。性行為が感染経路となる子宮頸がんや性感染症について、年齢が上がるにつれて性行為経験率が高くなる大学生の時期に、学生達に予防教育をより一層徹底して行っていきたいと考える。そのために今回の調査結果を基に実態に即した予防教育プログラムの構築を次年度に行いたい。
アルコキシアレンオキシドを反応性中間体とする新炭素-炭素結合形成反応の開発

アルコキシアレンは、対応するプロパルギルアルコールから容易に調製でき、ブチルリチウム等の強塩基を用いる事により容易に位置選択的に脱プロトン化できることから、アレニルリチウム種の生成を経るアレニル化剤として有用な試薬であり、α,β-不飽和アルデヒドのアシルアニオン等価体として有機合成上幅広く利用されている。しかしながらアルコキシアレンの酸性条件下における不安定さから、アレニル化以外の反応による有機合成への応用はほとんど報告されていない。本研究では過酸などの酸性度の弱い試薬との反応に着眼し、位置選択的にエポキシ化し、アルコキシアレンオキシドに導き、TiI_4で選択的にアルコキシアセトンのエノラートを生成し、有機合成上有用なアルドール型炭素-炭素結合形成反応に展開した。具体的にはアルコキシアレンをm-CPBAなどの有機過酸化物により反応系内でエポキシ化し、ルイス酸で処理する事によりエノラートに位置特異的に変換し、種々の求電子試薬と反応させる事により、新規炭素-炭素結合形成反応の開発を行なった。さらにアルコキシアレンオキシドの求核試薬としての利用、すなわちα,β-ジアルコキシケトンを与えるアセタールとの反応のルイス酸および反応条件の最適化を行い、他の求電子試薬との反応へと拡張し、高選択的な炭素-炭素結合形成反応を確立した。また、本反応の反応活性種としては、α-アルコキシ-α-ヨードケトンまたはヘミアセタール誘導体が考えられることから、求電子試薬としての利用も詳細に検討した。
造血システムにおけるU2AF1遺伝子変異の役割および分子機序の解明

骨髄異形成症候群で高頻度に認められるU2AF1 S34F変異の機能を検討するために、U2af1 S34F変異条件的ノックインマウスの解析を行った。当初、FLEXスイッチによる条件的ノックインマウスを作成したが、Vav1-cre・Mx-creマウスとの交配で、十分な当該遺伝子座の組換えおよびU2af1変異アレルの発現が認めらなかった。また、造血組織における各造血細胞系列における表現型の違いも認めなかった。そのため、U2af1変異アレル発現を改善するために、変異を入れたエクソンの5'側にloxPに挟まれたSTOP配列を挿入した条件的ノックインマウスを新たに作成した。現在、本マウスの解析中である。骨髄異形成症候群において高頻度認められるU2AF1 S34F変異の造血系における機能を検討するために、U2af1 S34F変異条件的ノックインマウスの解析を行った。まず、本ノックインマウスをVav1-creマウスと交配させ、その産仔の末梢血および骨髄を採取しゲノムDNAとRNAを抽出した後に、U2af1遺伝子座のゲノム組換えおよびU2af1変異アレルの発現を評価した。その結果、当該遺伝子座の組換えおよびU2af1変異アレルの発現が確認できなかった。当該条件的ノックインマウスの遺伝子改変部位のシーケンスを確認したが問題なかったため、Vav1-creマウスにおけるcreリコンビナーゼの発現が不十分なために遺伝子組み換え効率が不良であると考えて、次にMx-creマウスと交配させてその産仔を解析する方針とした。その産仔にpIpCを投与した4週後に、末梢血および骨髄を採取し同様に解析したところ、1020%程度の当該遺伝子座の組換えとU2af1 S34Fの遺伝子発現を認めた。組み換え効率の改善を図るためにpIpC投与条件の検討を行ったが、組み換え効率は同等であった。そのため、このpIpC投与条件において解析を進める方針とし、末梢血や骨髄・脾臓などの造血組織における各造血細胞系列の評価をフローサイトメトリーなどを用いて行った。その結果、U2af1 S34F変異型と野生型で造血系の表現型に違いを認めなかった。この結果の解釈としては、U2af1 S34F変異が造血系に与える影響がほとんどない、またはS34Fアレルの発現が低いために表現型を検出できなかった、という両方の可能性が考えられた。骨髄異形成症候群において高頻度に認められるU2AF1 S34F変異の造血系における機能を検討するために、U2af1 S34F変異条件的ノックインマウスの解析を行った。当初、loxP部位の向きによりCreリコンビナーゼがDNA断片を切り出したり、反転したりする性質を利用して、野生型loxPと変異型loxPを導入することにより(FLEXスイッチ)、Cre非存在下では野生型アレルを発現するが、Cre存在下では野生型アレルは消失し、変異型アレルが発現する条件的ノックインマウスを作成した。しかし、Vav1-creマウスとの交配では、当該遺伝子座の組換えおよびU2af1変異アレルの発現が確認出来ず、Mx-creマウスとの交配では、10-20%程度の当該遺伝子座の組換えとU2af1変異アレルの発現を認めたのみであった。後者のマウスを用いて末梢血や骨髄・脾臓などの造血組織における各造血細胞系列の評価をフローサイトメトリーにより用いて行ったが、表現型に違いを認めなかった。この原因として、S34F変異アレルの発現が低いために表現型を検出できなかった可能性が考えられたため、U2AF1変異が存在するエクソン2の5'側にloxPに挟まれたSTOP配列を挿入し、その3'側に変異アレルを挿入したエクソン2を導入した条件的ノックインマウスを作成した。このマウスでは、Cre非存在下では遺伝子改変アレルはU2af1を発現せず、Cre存在下では変異型アレルを発現する。この遺伝子ターゲティング戦略は、FLEXスイッチと比較して、Cre非存在下でU2af1を発現しないという欠点を持つが、loxPに挟まれた領域の組換え効率は高くなることが期待でき、より高率なU2af1発現が得られることが望まれる。現在、作成済みのマウスをキメラマウスが得られており、今後Cre発現マウスと交配予定である。当初、計画したU2af1 S34F変異条件的ノックインマウスとVav1-creマウスの産仔における遺伝子組み換えおよび変異アレルの発現が認められなかった。そのため、他のCreマウスと交配させる必要が生じた。

血液内科学上記の問題を打開する目的でMx-creマウスとも交配させたが、この産仔においても変異アレルの発現を認めるものの、十分でない可能性がある。今後は、現在得られている産仔の解析を進めると同時に、別の戦略による条件的ノックインマウスの作成を検討している。