hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
モノクロ-ナル抗体を用いた低分子生理活性ペプチドの超高感度測定法の開発及び実用化

I.生理活性ペプチドに対するモノクロ-ナル抗体の調整本研究の目標の達成には、分子量5,000以下の生理活性ペプチドの異なるエピト-プを認識し、高親和性を有するモノクロ-ナル抗体の調整が不可欠である。ナトリウム利尿ペプチドファミリ-(ANP、BNP、CNP)、エンドセリンファミリ-(ETー1、ETー2、ETー3)、バゾプレッシン(AVP)、オピオイドペプチド等に、10^<ー9>10^<ー11>Mの親和性を持ちエピト-プの異なるモノクロ-ナル抗体の調整に成功した。ANPは分子量約3,000で、disulfide結合による環状構造を中央部に持つペプチドであるが、我々はANPに対するN端部、環状構造部、C端部を認識するモノクロ-ナル抗体を組み合わせて検討し、環状構造部とC端部認識抗体を用いて、最少検出量0.01fmol/tubeのSandwich EIAの開発に成功した。III.イムノラジオメトリックアッセイ(IRMA)の開発ANPに対する環状構造部認識抗体を酵素(ペルオキシダ-ゼ)標識する代わりに、放射性ヨ-ドで標識してIRMAの開発に成功した。このIRMAの最少検出量は0.03fmol/tubeであり、Sandwich EIAに匹敵するものであった。BNPに対しても同程度の最少検出量のIRMAの開発に成功した。IV.超高感度測定法の実用化本研究で開発されたSandwich EIAとIRMAは、従来の研究や臨床検査に用いられてきているラジオイムノアッセイ(RIA)と比較して、最少検出量が10100倍高感度で、ANPとBNPの血中濃度を無抽出で測定可能であり、実用化が充分に期待できる段階まで来ている。従来よりホルモンの測定に多用されてきたラジオイムノアッセイ(RIA)より測定感度が1001000倍以上高感度である低分子生理活性ペプチドの超高感度測定法の開発と実用化を目的として、ナトリウム利尿ペプチドファミリ-(ANP、BNP、CNP)、エンドセリン(ET)ファミリ-(ETー1、ETー2、ETー3)バゾプレッシン(AVP)等に対するモノクロ-ナル抗体の開発を行なった。特にサンドイッチ酵素抗体法(EIA)やイムノラジオメトリックアッセイ(IRMA)の開発のためには低分子生理活性ペプチドの異なるエピト-プを認識するモノクロ-ナル抗体の開発が必要なので、上記生理活性ペプチドの種々のフラグメントを化学合成して、carrier蛋白であるウシサイログロブリンとconjugateし、Balb/cマウスに免疫した。血清抗体価の上昇を確認したマウスの脾細胞をマウスミエロ-マ細胞X63Ag8.653と細胞融合して、ハイブリド-マを調整し、限界希釈法にてモノクロ-ナル抗体産生ハイブリド-マをクロ-ニングした。本年度までに開発できたモノクロ-ナル抗体はANP8種類、ヒトBNP2種類、ブタBNP2種類、ラットBNP3種類、エンドセリン5種類、AVP5種類であり、これらの結合定数Kaはすべて10^<-9>10^<-11>Mと高親和性であり、エピト-プも異なっている。このうち、ANPではEIAとIRMAに利用可能なモノクロ-ナル抗体が確認できており、現時点での最少検出量は、EIAで0.01fmol/tube、IRMAで0.05fmol/tubeまで検出可能になってきており、実用化が期待できる段階にきている。現在、他の生理活性ペプチドのEIA、IRMAについても検討を続けている。

心房性ナトリウム利尿ペプチド(ANP)は分子量約3,000で、disulfide結合による環状構造を中央部に持つペプチドであるが、我々はANPに対するN端部、環状構造部、C端部を認識するモノクロ-ナル抗体を去年までに開発していたので、これらの抗体の組み合わせを検討し、ペルオキシダ-ゼ標識にした環状構造部とC端部認識固相化抗体を用いて、最少検出量0.01fmol/tubeのSandwich EIAの開発に成功した。II.イムノラジオメトリックアッセイ(IRMA)の開発ANPに対する環状構造部認識抗体を酵素(ペルオキシダ-ゼ)標識する代わりに、放射性ヨ-ドで標識してIRMAの開発に成功した。このIRMAの最少検出量は0.03fmol/tubeであり、Sandwich EIAに匹敵するものであった。BNPに対しても同程度の最少検出量を示すIRMAの開発に成功した。III.超高感度測定法の実用化本研究で開発されたSandwich EIAとIRMAは、従来の研究や臨床検査に用いられてきているラジオイムノアッセイ(RIA)と比較して、最少検出量が10100倍高感度で、ANPとBNPのヒトの血中濃度を無抽出操作で測定可能であり、実用化が充分に期待できる段階まで来ている。
メタヒューリスティクスの謎の解明とその応用

メタヒューリスティクスが経験的に良い解を導き出してくれていることは多くの研究でも示されている.しかし,なぜ,メタヒューリスティクスが良い解を導き出してくれるのかは一つの謎であるともいえる.そこで本研究では,時系列解析の手法を用いて,メタヒューリスティクスに対する問題の解構造を分析しその特徴的な性質を取り出す.それによりメタヒューリスティクスの各手法の性能を理論的に推定しその性能を明らかにするとともに,その能力の謎を解き明かすことを目指す.また,そこから得られた理論的知見をもとにした新アルゴリズムの設計を展開する.組合せ最適化問題はスケジューリング問題、配置問題など様々な意思決定の問題で利用されている。この組合せ最適化問題を解くための有力な手法として遺伝アルゴリズム、タブーサーチなどを主とするメタヒューリスティクスがある。そして、これらが経験的に良い解を導き出してくれていることは多くの研究でも示されている通りである。しかし、なぜ、メタヒューリスティクスが良い解を導き出してくれるのかは一つの謎であるともいえる。そこで本研究では、時系列解析の手法を用いて、メタヒューリスティクスに対する問題の解構造を分析し、その特徴的な性質を取り出したい。それによりメタヒューリスティクスの各手法の性能を理論的に推定しその性能を明らかにするとともに、その能力の謎を解き明かすことを目指す。本年度においては、前年度で検討した近傍構造の汎用的解析モデルを用いて、どの問題に対しても対応可能なLocal Searchの確率的解析モデルの構築を目指し研究を進めている。具体的には、Eikekder等の確率的解析法をフレームワークとして、本研究の汎用的解析のモデルを組み込むことによりその解析を実現した。また、今回は、汎用的近傍モデルにおいても、微調整を加え,より精度の高い結果を目指している。そして、この解析において,Local Searchにより得られる解の値,および要求される反復数の推定値に基づきアルゴリズムの振る舞いを検討した。また、昨年度、近傍構造がコーシー分布の形状を示す場合、強力な探索が実現されることが見いだされ、その調査的実験を行った。本年度は、このコーシー分布型近傍構造のモデルを構築し、粒子最適化法に組み込むことにより、その有効性を解析することを行い、さらに改善を可能とする知見を得た。組合せ最適化問題はスケジューリング問題、配置問題など様々な意思決定の問題で利用されている。本年度においては、前年度までに提案している汎用的解析モデルの修正をはかり、より精度の高いモデルが構築された。このモデルにより、Local Searchにより得られる解の値,および要求される反復数の特徴的な値が、より精度を増し推定可能となる。また、その精度を検証するために多くの数値実験を行い、そのモデルの可能性が論じられた。また、近傍解がコーシー分布などを用いた特徴的な解移動により、強力な探索能力が得られることが前年度までの研究で明らかになった。そこで、さらに近傍構造自身に特徴的な変化を与え、より強化した探索力を持つ手法を粒子群最適化法によって実験検証しその可能性を検討している段階である。そこで本研究では、時系列解析の手法を用いて、メタヒューリスティクスに対する問題の解構造を分析しその特徴的な性質を取り出したい。本年度においては、解の質、およびステップ数などのメタヒューリスティクスの性能を確率的に解析するために必要な近傍の特性分析モデルを検討した。まず、時系列モデルを用いて解空間の特性を分析する。その上で、それらの特性値を用いて、近傍構造のモデルを構築して解の近傍の特徴を明らかにした。近傍と特徴を明らかにすることは、今後の研究において基盤となる実質的なモデルを構築することにあたる。また、この段階は本研究の重要なポイントであり、多分に試行錯誤的な研究段階であるので、並行して随時研究を行っていく予定である。また、近傍構造がコーシー分布の形状を示す場合、強力な探索が実現されることが示されている。そこで、その近傍の特性を解析し、それに基づく発見的解法(粒子群最適化法)の構築などをあわせて行った。その結果、従来手法より有効な結果を導出する新たなアプローチを提案できた。

そして、これらが経験的に良い解を導き出してくれていることは多くの研究でも示されている通りである。しかし、なぜ、メタヒューリスティクスが良い解を導き出してくれるのかは一つの謎であるともいえる。そこで本研究では、時系列解析の手法を用いて、メタヒューリスティクスに対する問題の解構造を分析し、その特徴的な性質を取り出したい。それによりメタヒューリスティクスの各手法の性能を理論的に推定しその性能を明らかにするとともに、その能力の謎を解き明かすことを目指す。本年度においては、様々なメタヒューリスティクスに対して、理論的推定値である解空間の特徴、近傍の性能、そのアルゴリズムが求める解の値、要するステップ数などを分析し比較評価した。同時に、詳細な実験的分析を行い理論的分析と比較評価を行いその正当性、問題点を明らかにした。その上で、理論的解析の実用的な評価点をまとめ上げ、実際の問題に対する評価分析への利用をはかった。また、メタヒューリスティクスを制御するパラメータ値の理論的検討を加え、その特徴などを分析した。さらに、コーシー分布型近傍を用いた発見的解法を構築し、評価実験においてもその有効性を確認した。組合せ最適化問題はスケジューリング問題、配置問題など様々な意思決定の問題で利用されている。この組合せ最適化問題を解くための有力な手法として遺伝アルゴリズム、タブーサーチなどを主とするメタヒューリスティクスがある。そこで本研究では、メタヒューリスティクスに対する問題の解空間構造を分析し、その特徴的な性質がAR(1)プロセスであることを仮定し解空間の統計量を取り出す。本年度においては、Local Searchを中心に近傍の性能、そのアルゴリズムが求める解の値、要するステップ数などを再度検証し、モデルの修正を行った。特に、論文としてまとめるために改めて総合的に数値実験を行い、客観的なデータの収得、および理論モデルの正当性を検証した。その上で、理論的解析の実用的な評価点をまとめ上げ、かつ他のメタヒューリスティクスへの応用などの提案、その検証実験を行った。また、メタヒューリスティクスを制御するパラメータ値に関して、総合的な数値実験を行い推奨するパラメータを評価分析した。この値を用いて、今後理論的に推定される推奨パラメータとの比較分析を行う予定である。特に、この段階では、本研究で扱っている粒子群最適化法などを対象に評価実験を試みている。
食品中のPP-PPO反応系による口臭・体臭の消去

生の果物や野菜と同様に、茄でた野菜や茶飲料を用いても口臭や体臭を効果的に消去できることを証明するために、茄でて食べる野菜9種類のポリフェノール(PP)量、ポリフェノールオキシダーゼ(PPO)活性量、抗酸化活性、メルカプタン補足能を測定し、さらに、飲料、生の果物、生および茄でた野菜による生体内消臭作用を調べた。その結果、キク科の野菜では、2分間茄でた場合、PP含量があまり減少せずにクロロゲン酸類が多量に含まれ、少量のPPO活性も残存してメルカプタン補足能を示した。生体内消臭作用では、アリルメルカプタンに対して比較的消去作用が強いものが多く、アリルメチルスルフィドに対しては、ゴボウ、ウド及びホウレンソウで消去活性が高かった。尿中のアリルメチルスルフィド量は、茄でたウドの場合に僅かに他よりも軽減された。PPを多く含む野菜では、短時間茄でた場合、抗酸化作用及び消臭作用の両方に効果があり、機能的な食品として利用範囲が広がることが分かった。生の食材では、プルーンで消臭効果が大きかった。飲料の生体内消臭効果では、アスコルビン酸を多く含む緑茶では効果がなく、アリルメルカプタンに対しては紅茶とウーロン茶が、アリルメチルスルフィドに対してはウーロン茶とマテ茶の作用が強いことが明らかになった。茄で野菜や飲料では、生の果物や野菜に比べて悪臭軽減効果は弱いという結果になったが、摂取量や摂取頻度を増やすことによりさらに悪臭軽減効果が期待される。以上の研究結果から、PPやPPOを多量に含む生の果物や野菜だけでなく、調理加工したこれらの食品を利用することによって、実際に口臭や体臭を安全、簡便しかも効果的に消去あるいは軽減できることが明確になった。酵素的消臭法が生体内においても実際に効果のある消臭方法であることを証明するために、ニンニクを食べたときに生成し潜在的な不快臭となる微量のアリルメチルスルフィドやアリルメルカプタンの増減を精密に定量した。先ず、呼気中の微量の悪臭成分を分析するために、ガスを炎光光度検出器付ガスクロマトグラフ(FPD-GC)へ導入する方法を検討した結果、濃縮せずにガスサンプラーを用いてそのままの呼気を導入する方が良い結果が得られることが分かった。次に、実際には被験者3人(22歳の女、23歳の男女)にニンニクを摂取させ、さらに、各種食品(リンゴ、プルーン、チコリ、マッシュルーム、茹でたフキノトウ)を食べさせた後、6時間経時的に生体内サンプルである呼気をニオイ袋に捕集した。FPD-GCを用い、不快臭を分析した。同時に、尿も採取しヘッドスペースガスを分析した。その結果、被験者によって効果は異なった。2人では、プルーンの消臭効果が最も大きく、次いでリンゴ、チコリの順で、マッシュルームと茹でたフキノトウではあまり効果はなかった。もうひとりでは、全く逆の結果になり、男女の生理的な違いや個人差がかなり大きいことも分かった。さらに、調理・加工品と消臭の関係を明らかにするために、茹で野菜の消臭効果等も一部検討した。すなわち、野菜を茹でる前後でPP量やPPO活性量の変化量を定量し、試験管内での消臭効果(メルカプタン補足能)を調べた結果、茹で時間が短い場合には、PPは多量に残存しており、また、PPO活性量もわずかに存在して酵素的消臭効果も発揮できることが明らかになった。今後、調理加工と消臭の関係を詳しく調べるとともに、PPを多く含む飲料による生体内での実際の効果を調べ、効果的な消臭方法を提示する予定である。

通常、茄でて食べる野菜中のPP量、PPO活性量、抗酸化活性、メルカプタン補足能及び生体内消臭作用を調べた。また、カテキン茶(緑茶、紅茶、ウーロン茶)及びクロロゲン酸茶(苦丁茶、マテ茶)による生体内消臭作用も調べた。その結果、茄で野菜では、キク科のゴボウ、シュンギク、ヨモギ、フキノトウにおいて茄でた後もPP含量があまり減少せず、クロロゲン酸類が多量に含まれていた。従って、抗酸化能が高かった。2分間茄でた場合、フキノトウでは、約10%のPPO活性が残存し比較的強いメルカプタン補足能を示した。生体内消臭作用では、ゴボウ、ヨモギ、フキノトウ、ウド、ナス、ホウレンソウでアリルメルカプタンに対して比較的消去作用が強く、アリルメチルスルフィドに対しては、ゴボウ、ウド及びホウレンソウで消去活性が高かった。尿中のアリルメチルスルフィド量は、茄でたウドの場合に僅かに他よりも軽減された。PPを多く含む野菜では、短時間茄でた場合、抗酸化作用及び消臭作用の両方に効果があり、機能的な食品として利用範囲が広がることが分かった。飲料の生体内消臭効果は、アスコルビン酸を多く含む緑茶では効果がなく、アリルメルカプタンに対しては紅茶とウーロン茶が、アリルメチルスルフイドに対してはウーロン茶とマテ茶の作用が強いことが明らかになった。尿中の悪臭軽減効果では、カテキン茶よりも苦丁茶やマテ茶のクロロゲン酸茶の方が高かった。茄で野菜や飲料では、生の果物や野菜に比べて悪臭軽減効果は弱いという結果になったが、摂取量や摂取頻度を増やすことによりさらに悪臭軽減効果が期待される。2年間の研究結果から、PPやPPOを多量に含む生の果物や野菜だけでなく、調理加工したこれらの食品を利用した場合にも、実際に口臭や体臭に対して消去或は軽減効果があり、酵素的消臭法は、安全、簡便で誰でも利用できる消臭方法であることが明確になった。
臭化メチルの代替化学物質の人体影響及び環境負荷に関する影響評価手法の開発

臭化メチルはオゾン破壊化学物質としてその製造や使用が規制されるようになってから、ポスト臭化メチルとして様々な土壌燻蒸剤が提案されてきたが、MITC(メチルイソチオシアネート)もその有力な化学物質であり、高知県では早くからその使用が検討されてきた。本研究では、このMITCの人体影響及び環境負荷に関する影響評価手法を開発することとを目的として、高知県で使用されているMITC(商品名ダゾメット剤)による薫蒸作業を対象にして、高知県内の農家25戸38名を対象にしてMITCを用いた土壌薫蒸作業における職業性曝露の評価について、薬剤散布時、土壌混和作業、マルチ撤去作業までの期間でのハウス内作業時、苗の植え付け時と、作業の経過ごとに個人曝露の状態を評価した。薫蒸作業時には灌水に伴うMITCの化学反応により、作業時間の長い場合に曝露量が多く、眼や皮膚の刺激症状や呼吸症状を訴えており、明らかな皮膚障害を残した事例も散見された。また、MITC散布直後より、土壌より出される排水中にMITC及びアンモニア、二流化炭素等を検出しており、分析結果からもその後、数ヶ月にわたって土壌中及び排水中に、約一ヶ月程度にわたり、これらの化学物質を検出した。散布された多くのMITCはアンモニア、二流化炭素として環境中に拡散していると考えられ、環境への負荷も大きいことが確認できた。農業者へのアンケート調査では、燻蒸前後に眼・皮膚・呼吸器等の粘膜症状や頭痛・めまい等の中枢神経症状の訴えが高く、農業者自身は健康障害への不安感が強い。今後は、長期的なMITC使用に伴う健康障害の発生の有無を監視していく必要がある。研究初年度は購入したガスクロマトグラフ質量検出器GCMS-QP5050A(島津製)を用いて臭化メチルの代替化学物質であるMITC(メチル・イソ・チオ・シアネート)の低濃度定量検出限界と他の農薬との混合試料における定量検出状況について検討を行った。GCMS-QP5050Aを用いたMITCの検出限界については、標準試料をもとにしてできるだけ低濃度のMITCが検出できる条件を検討した。通常、土壌薫蒸に用いられるMITCのサンプリングには個人サンプラー用ポンプを用いた方法がとられるが、もともと使用されているMITCは、ダゾメット剤という混合化合物が紫外線と水によって開環して二硫化炭素とアンモニア、MITCに分解することによって生じる。そのため、環境中のサンプル試料にはこれらの化学物質が混入しており、分別して定量化する必要がある。もちろん、MITC以外の化学物質も生体影響や環境負荷の強いことで知られているものである。アンモニアは水に溶けやすいため、作業環境中のサンプリングをMITCと二硫化炭素に絞って定量する手法の開発を試みた。実験室レベルでは、生体影響と環境負荷の基準値の100分の1程度まで可能であることが確認できた。現在、環境中の存在が示唆される農薬との混合試料における定量分析を行うために、数種類の農薬を対象としてGCMS上におけるスペクトルの分離状況を確認しており、次年度にかけては環境試料中の分析に移れる予定である。研究次年度は、初年度に引き続いてダゾメット剤による薫蒸作業を対象にして、人体影響と環境負荷の程度を評価する。高知県農業技術課の協力を得ながら、高知県内の農家11戸を対象にしてMITC(メチルイソチオシアネート)を用いた土壌薫蒸作業における職業性曝露の評価について薫蒸作業時、苗の植え付けまでの期間でのハウス内作業時、苗の植え付け時と、作業の経過ごとに個人曝露の状態を評価した。薫蒸作業時には灌水に伴うダゾメット剤の化学反応により、作業時間の長い場合に曝露量が多い傾向にあったが、調査数が少なく、統計的検出力が弱いため、有意差は認められなかった。

また、ダゾメット剤散布直後より、ハウスから出される排水中にMITC及びアンモニア、二流化炭素等を検出しているか、もともと農家が使用してきた肥料中の窒素化合物が存在するため、分析手法の精度を上げる必要がある。ハウス外でのMITCの気中濃度は検出限界以下であった。いずれにしても、土壌薫蒸剤として使用されているMITCは確実に環境中にも水系をとして拡散していることがわかった。MITC使用の農業者の健康影響等については、現在アンケート調査を実施しており、次年度にさらに対象を広げて同様の調査を実施し、評価する予定である。臭化メチルはオゾン破壊化学物質としてその製造や使用が規制されるようになってから、ポスト臭化メチルとして様々な土壌燻蒸剤が提案されてきたが、MITC(メチルイソチオシアネート)もその有力な化学物質であり、高知県では早くからその使用が検討されてきた。本研究では、このMITCの人体影響及び環境負荷に関する影響評価手法を開発することとを目的として、高知県で使用されているダゾメット剤による薫蒸作業を対象にして、高知県内の農家25戸を対象にしてMITCを用いた土壌薫蒸作業における職業性曝露の評価について、薫蒸作業時、苗の植え付けまでの期間でのハウス内作業時、苗の植え付け時と、作業の経過ごとに個人曝露の状態を評価した。薫蒸作業時には灌水に伴うダゾメット剤の化学反応により、作業時間の長い場合に曝露量が多く、眼や皮膚の刺激症状や呼吸症状を訴えており、明らかな皮膚障害を残した事例も散見された。また、ダゾメット剤散布直後より、ハウスから出される排水中にMITC及びアンモニア、二流化炭素等を検出しており、分析結果からもその後、数ヶ月にわたって土壌中、数日程度にわたり、排水中にこれらの化学物質を検出した。散布された多くのMITCはアンモニア、二流化炭素として気中に拡散しているものと考えられ、環境への負荷も大きいことが確認できた。農業者へのアンケート調査では、燻蒸前後に眼・皮膚・呼吸器等の粘膜症状や頭痛・めまい等の中枢神経症状の訴えが高く、農業者自身は健康障害への不安感が強い。今後は、長期的なMITC使用に伴う健康障害の発生の有無を監視していく必要がある。
線形モデルによる放射線加齢の数量化に関する研究

老化促進モデルマウスと考えられているSAM-P/1の血清成分を経時的に測定し、放射線加齢の有無およびその現れ方を調べた。SAM-P/1の血清成分のうち、総コレステロール、無機リン、アルブミン、血糖、GOTは測定値と週齢の間に有意な線形関係が認められ、SAM-P/1の加齢の指標として利用できることが判明した。前述の5項目について、照射線量(0,2,3,4Gy)別に、測定値の週齢に対する線形回帰式を求め、回帰係数を比較した結果、以下の知見を得た。1.無機リンでは、放射線による加齢促進が認められ。その現れ方は、線形関係における傾きを変化させるaccelerated agingである。2.無機リンでは、1Gyの放射線によ、測定値の週齢に対する傾きが約46%急峻になる。3.総コレステロール、アルブミン、血糖、GOTでは放射線による加齢促進は認められない。SAM-P/1の血清成分の中で放射線加齢の有無に違いがあったことから、放射線加齢の出現は加齢の指標とした項目によって差があると考えられる。また、ヒト(放射線技師)で観察された、放射線加齢の現れ方がpremature agingであったのに対して、本研究ではaccelerated agingが観察されたことから、ヒトとSAM-P/1では放射線加齢が異なる可能性が示唆された。本研究で得られた知見を、より確かなものにするために、異なる照射線量での実験および他の系統のマウスを使った実験が必要であると考えられる。平成3年度中の研究経過と得られた知見および今後の研究の展開は次の通りである。1.平成3年度中の研究経過(1)老化促進モデルマウスであるSAMーP/1(平均寿命10ケ月程度)を本学動物実験センタ-でconventionalな条件下で、兄妹交配により雄が40匹になるまで繁殖させた。(平成3年12月末)(2)5週齢から10週齢の間1週間おきに、体重を測定するとともに眼下静脈より毛細管を用いて採血し、血清分離後、総コレステロ-ル、無機リン、アルブミン、血糖、GOT、GPTを測定した。10週齢に達した時点でマウス8匹ずつに0,2,3,4,5Gyの放射線を全身照射した。(平成4年1月1旬3月上旬)(3)10週齢以後は、2週間おきに体重測定と血清成分測定を続けている。(平成4年3月下旬)(4)各測定により得られた結果については、資料センタ-のコンピュ-タに入力を続けている。2.平成3年度中に得られた知見(1)眼下静脈より毛細管を用いて採血を行おうとする場合、麻酔が深過ぎると採血量が少なくなる。(2)採血はすべてほぼ同じ時刻に行ったが、採血直前の餌の食べ具合などにより、同一個体でもバラツク。3.今後の改善点と研究の展開採血を行う前に一定時間餌を与えないようにするとともに、血清成分の測定を行う際には、始めに市販の標準血清を測定し測定装置の精度管理を行いながら、10ケ月齢または死亡まで体重測定と血清成分の測定を河い、当初の目的である放射線加齢の有無およびその数量化を試みる。1.無機リンでは、放射線による加齢促進が認められ、その現れ方は、線形関係における傾きを変化させるaccelerated agingである。

2.無機リンでは、1Gyの放射線によ、測定値の週齢に対する傾きが約46%急峻になる。3.総コレステロール、アルブミン、血糖、GOTでは放射線による加齢促進は認められない。SAM-P/1の血清成分の中で放射線加齢の有無に違いがあったことから、放射線加齢の出現は加齢の指標とした項目によって差があると考えられる。また、ヒト(放射線技師)で観察された、放射線加齢の現れ方がpremature agingであったのに対して、本研究ではaccelerated agingが観察されたことから、ヒトとSAM-P/1では放射線加齢が異なる可能性が示唆された。本研究で得られた知見を、より確かなものにするために、異なる照射線量での実験および他の系統のマウスを使った実験が必要であると考えられる。
各種歯周病原性嫌気性細菌のヒト歯周組織由来線維芽細胞代謝に対する作用の研究

歯周病原性細菌の構築成分が線維芽細胞の代謝生理に対してどのように作用するかの研究を行なうために次のステップの研究計画をもった。1.各種歯周病原性細菌の全菌体および構築成分の調製2.ヒト歯周組織の線維芽細胞の調製,増殖および保存3.細菌構築成分に対する線維芽細胞の代謝生理1と2は主として60年度の研究課題として、61年度は3の課題に集中した。〈知見〉各種病型の歯周炎罹患歯肉から調製した線維芽細胞(成人性歯周炎,3株;重度進行性歯周炎,2株;若年性歯周炎,1株)および正常歯肉に由来する線維芽細胞に対するBacteroides ginawalis(Bg)およびActinobacillus actinomycetemcomitans(Aa)の全菌体抽出物の作用を、1.細胞形態の変化,2.細胞付着能,および3.DNA合成能の面から調べ、次の結果を得た。1.細胞形態の変化:若年性歯周炎由来細胞はAa抽出物によって、重度進行性歯周炎由来細胞の1株はBg抽出物によって著明な形態変化を受けた。2.細胞付着能:若年性歯周炎由来細胞はAa抽出物によって強く細胞付着能が阻害された。3.DNA合成能:線維芽細胞はすべて、細菌抽出物によって、濃度依存性にDNA合成が抑えられた。若年性歯周炎由来細胞と重度進行性歯周炎由来細胞の1株は、Aa抽出物によってとりわけ著明にDNA合成が抑えられた。〈研究成果ならびに今後の展開〉歯肉線維芽細胞はドナーの病能によって、代謝生理が異なると考えられる。また、若年性歯周炎由来細胞はAa抽出物によって、各種代謝機能が抑えられることも示唆された。線維芽細胞のドナーを増やして、歯周病の病型別に調べる系統的研究に発展させたい。
重み付き多変数Hardy空間の研究

重み付き多変数Hardy空間を主として次の三つの立場から研究し、それぞれ一定の成果をあげた。(1)予測理論、(2)特異積分作用素の理論、(3)正則関数の境界値予測理論としては、予測誤差を円板上でいくつかの重みについて決定した。特異積分作用素としては重みがHelson-Szegoの条件を満足するとき、重みの付かない場合の結果を応用した。正則関数の境界値としては、一変数で知られていた結果を多変数へ拡張した。(1)(20年度)n=1の時の、予測誤差を与えるSzegoの定理、シフト不変部分空間を決したBeurlingの定理とToeplitz作用素の可逆性の特徴付けを与えるWidom-Devinatzの定理の間にある深い関係を明らかにする。(2)(21年度)n≧2の時の、Szegoの定理、Beurlingの定理とWidom-Devinatzの定理に相当するものを捜し、互いの関係を明らかにする。(3)(22年度)n≧2の時に、重み付きHardy空間におけるシフト不変部分空間をHankel型作用素を用いて研究する。1.ある自然な公理を満足する、複素平面の単位円板上の正則関数のなすHilbert空間Hを定義して、H上の二つの積分作用素A, Bと掛け算作用素Cを考え、Fredholmになるときを研究している。またA, B, Cの関係を調べている。この公理を満たす空間は重み付きHardy空間、重み付きBergman空間、重み付きDirichleし空間等重要な具体的な空間を特別な場合として含む。2.一般的な関数環から定義される抽象的Hardy空間(Hilbert空間である)上のToeplitz作用素の不変部分空間を研究している。関数環がある意味で十分多くのinner関数を含むときに三の結果を得ている。関数環に属するシンボルをもつToeplitz作用素(これはsubnomal作用素となる)の不変部分空間と一般的なTeolitz作用素の不変部分空間との関係を明らかにしている。これらの結果は一変数と多変数のHardy空間上のToeplitz作用素に適用されている。3.以前にHardy空間上のToeplitz作用素がhyponormaiになるsymbolの一般的な条件を、Cowenの定理から与えた。この条件はsymbolが三角多項式のときその係数を調べることに何人かの研究者によって使われた。この研究ではCaratheodory-Schurの補間定理を用いてそのsymbolの零点による特徴付けを与えている。4.Banach空間Eのその閉部分空間による商空間上のmultiplierを、Eのmultiplierを用いて研究している。Eがいくつかの特別なBanach空間の場合に研究しているが、特にEが重み付きHardy空間(必ずしもHilbert空間ではない・・Hilbert空間の場合はSarasonによって研究された)の場合にそのmultiplierを決定している。また一般的なEについて、その商空間が2次元のときにmultiplierを決定している。1. l1補間問題を一般のF-空間で研究して、Banach空間の場合に一つの必要十分条件を与えている。それを円板上の正則関数のなすBanach空間、F-空間に適用している。2.単位円板上の正則関数のなす部分空間の上で定義される2つの自然な積分作用素を研究し、その2つの作用素の関係を明らかにすることにより、それらの作用素の有界性を調べている。3.一般化されたRiesz射影とそれから自然に定義されるToplitz作用素、特異積分作用素の可逆性とHankel作用素のノルムが研究されている。4.二変数の前方シフト不変部分空間の片方の変数のwandering部分空間を詳しく調べることによって、前方シフトと後方シフト不変部分空間を研究している。1.特異積分作用素のノルムと本質的ノルムを研究した。私は重みがないL^2空間の場合に、ノルムと本質的ノルムの完全に決定したことがある。この研究では重みがあるL^2空間のノルムと本質的ノルムを上と下から重みが付かないL^2空間上の与えられたものから一意に決定される他の特異積分作用素を用いて評価している。2.二変数のHilbert-Hardy空間の不変部分空間のwandering部分空間のmultiplierが座標関数のときは、私によって証明されていたが、任意の有界関数がいつmultiplierになるかを研究した。3. Szegoの定理はそのスペクトルが単位円版の境界上にあるときは完全にSzego自身によって証明された。この定理はWienerによって予測理論に応用された。この研究では、スペクトルが必ずしも境界上にないときに研究した。その予測誤差はスペクトルが境界上にあるときとは、著しく異なっていることがわかった。n=2のときの重みの付かないHardy空間H^2(T^2)上のToeplitz作用素のスペクトルを研究して、自共役のときそれをsymbolを用いて完全に描き、重みの付いたHardy空間H2(T2)上でのToeplitz作用素のスペクトルの研究への道すじをつけた。

n=1のときの重みの付かないL^2(T)上の特異積分作用素のスペクトルを、重みの付かないHardy空間H^2(T)上のToeplitz、作用素のスペクトルを用いて研究した。作用素が自己共役のときそれをsymbolを用いて.完全に描いた。その方法は重みの付いた場合にも用いることができることが期待される。特異積分作用素はHardy空間H^2(Tn)Toeplitz作用素とHankel作用素の二つの性質を合せもつ。Toeplitz、Hankel作用素が正規作用素となsymbolはn=1のときは決定されていて良く知られている。この研究では、n=1の場合に特異積分作用素が正規作用素となるのはいつかを調べた。これはToeplitz作用素やHankel作用素のとき比較すると、はるかに難しいが、特別な場合に完全に解決した。一般的な場合に解決の方向を見つけた。重みの付かないHardy空間H^2(T^2)上のToeplitz作用素がhyponormalとなるsymbolを研究した。しかしn=1のときの強立な道具であったSarasonのgeneralized interpolationに相当する定理がn≧2のときには知られていないので、それを証明する努力をしたが得られなかった。それで、その定理を避ける方法を取ったが、n=1のときと著しく状況が異なることを発見した。重み付き多変数Hardy空間Hpの研究では、主として次の(1)(3)について研究した。(1)H2上の多項式近似(2)H11上の有界線形汎関数(3)H2上の具体的な有界線形作用素。(1)定数1を平均が零となる多項式で重み付きで近似する問題を考えたが、一般的な関数環の設定で研究した。これはSzegoの定理といわれるが、予測理論に応用された。本研究では、一変数の時でさえ新しい、近似または予測誤差の色々な重みについてのさまざまな表現を与えた。(2)n=2のときにH1上の有界線形汎関数のノルムを到達するH^1の関数を描く極値問題を考えた。n=1のときは私自身によって30年以上も以前に核が連続のときに、その極値問題の解空間は完全に描かれた。これをn=2に対して証明する事はできなかったが、解空間がouter関数を含む時には完全に描くことができた。(3)(a)n=2のときに、shift作用素の普遍部分空間Mのクロス交換子Vを研究し、V2が零となるときMを調べた。(b)n=2のときに、Toeplitz作用素のselfcommutatorが非負となるときを研究した。(c)n=2のとき、Toeplitz作用素のspectrumとpoint spectrumを研究し、成果をあげた。(d)一般のnで特異積分作用素のノルムをあたえた。重みの付かないHardy空間H2(T2)上のToeplitz作用素で、そのシンボルが実数値関数であるときにそのスペクトルを決定できた。そこで用いた証明の方法は、重みの付いたHardy空間H^2(T^2,μ)上へ一般化することは可能と思えるので(2)を付けた。24年度が最終年度であるため、記入しない。
腎膜輸送・体液調節因子とその異常に関する病態生化学的、分子生物学的研究

腎臓にあって、体液調節、血圧調節に関与することが示唆されているレニン結合蛋白質(RnBP)及びDーアミノ酸オキシダ-ゼ(DAO)について、遺伝子構造の決定、遺伝子発現、試験管内及びアフリカツメ蛙卵細胞による組換え蛋白質の発現を行い、さらに、部位特異的変異誘発による組換え変異体蛋白質の作成による機能異常や、遺伝子発現調節の解析を行った。RnBPについては、ブタ及びラット腎臓、ヒト腫瘍細胞のcDNAライブラリ-から、それぞれのRnBP cDNAを単離し、塩基配列を決定した。コ-ドされているRnBPの一次構造は相互に約80%の相同性を有し、また、構造上の特徴として、一次構造中に1ケ所、高い疎水性領域とそれに続くロイシンジッパ-構造が認められ、3種動物のRnBPでよく保存されていた。ロイシンジッパ-構造の2ロイシン残基をアスパラギン酸に置換した組換え変異体をブタRnBPについて発現させ、その機能を解析した結果、本蛋白質のもつレニンとの複合体形成、レニン活性の阻害、RnBP二量体形成の各機能が消失していることが見出され、ロイシンジッパ-構造がこれら機能に関与することが判明した。DAOについては、ヒト、ウサギ、マウス腎臓のDAO cDNAを単離し、塩基配列を決定した。すでに得ているブタDAO cDNAを含めて、コ-ドされているアミノ酸配列を比較した結果、相互に約80%の高い相同性が認められた。しかし、発現、精製したヒト、ウサギ、マウスの組換体DAOの基質親和性及び比活性はブタDAOに比して著しく低く、また、ウサギDAOの遺伝子発現過程で強い翻訳抑制が認められたが、他のDAOでは認められず、遺伝子発現から蛋白機能まで、動物種間の多陽性が示された。また、疾患モデルとして、単アミノ酸置換組換え変異体DAO(Tyrー228→Phe,Hisー307→Leu)2種を作成した。これらの変異体は著しく低い比活性を示し、これら2アミノ酸残基の機能発現上の重要性が示唆された。ブタレニン結合蛋白質(RnBP)の主な生合成部位は腎臓であるが、本研究では、RnBPが腎臓以外の組織で発現しているかどうかを検討した。RnBP mRNAの翻訳はポリ(A)RNAをS-メチオニンとともにウサギ網状赤血球ライゼートを用いて行い、その産物を抗RnBP抗体を用いて解析した。その結果、検出感度を上げることによって、副腎、下垂体、肝臓でもRnBPの生合成が行なわれていることが示された。また、ラットとヒトの腎mRNAをよういた解析から、これら動物の腎臓においてもRnBPに相当する蛋白の生合成が示され、本蛋白質が種を越えて普遍的に発現していることが示唆された。D-アミノ酸オキシダーゼ(DAO)の人工変異体、DNAは、一塩基置換合成オリゴヌクレオチドと、DAO cDNAフラグメントを用いて、Eckstain法により作成、さらに、網状赤血球ライゼートを用いたin vitro合成系で変異体DAO蛋白質を得た。すでに、Lys(204)、Tyr(224)、Tyr(228)、His(307)の置換について検討しているが、今回は、Tyr(55)をPheに、Met(110)及びHis(217)をLeuに置換した変異体DAOを作成した。

これらの残基は、化学修飾による解析からDAO活性に関与することが示唆されているものであるが、今回得られた3種の変異体はいずれも正常型と同様のDAO活性を示すことが判明した。したがって、これら3残基は直接活性に関与していないことが強く示唆された。ヒトDAO遺伝子につい、て腎mRNAよりcDNAライブラリーを作成し、クローニングを行ってDAO cDNAの塩基配列を決定した。その結果、組織DAO活性がブタの約1/200であるにかかわらず、塩基配列は全体として84.4%の相同性があり、また、ブタのMet(110)が、Thrであることが判明した。さらに、ヒト腎臓DNAのEcoR1によるサザンブロットから、約12kbのDNAフラグメントが同定され、ヒトにおいても単一の染色体として存在することが示された。ブタ腎cDNAライブラリ-から、レニン結合蛋白質をコ-ドするcDNAクロ-ンを単離し、その塩基配列を決定した。このcDNAは1342塩基からなり、アミノ酸402個からなるレニン結合蛋白質をコ-ドするものであった。また、本蛋白質がシグナルペプチドをもたず、分子内にロイシンジッパ-構造を有することも判明した。さらに、in vitroで発現させたこの蛋白がレニンと高分子型レニンを形成することも判明した。Dーアミノ酸オキシダ-ゼ(DAO)については、ウサギ腎臓についてcDNAのクロ-ニングを行い、DAO活性の検出されないこの組織においてもDAO遺伝子が存在し、コ-ドされているDAO蛋白はブタと同一の347個のアミノ酸からなり、その配列は80%の相同性を有することが判明した。また、ウサギ腎臓には3種のmRNAが存在すること、in vitroでの転写によりDAO RNAは生成するが、翻訳されないことが示され、ウサギ腎臓でのDAO蛋白の発現が翻訳段階で抑制されていることが示唆された。前年度得たDAO cDNAおよびその部位特異的突然変異体を用いて、これらDAOの大量発現系を確立した。すなわち、DAOコ-ド領域を含むcDNA断片をpUC19に挿入し、そのSallーEcoRI断片を平滑断端化してpKKー223ー3発現ベクタ-に挿入、その5'領域を極端に短かくしてからpUC19に再び挿入して大腸菌に移入、DAO蛋白を発現させた。wild、mutant型とも、121の培養液から、抽出、硫安分画、陰イオン交換クロマトグラフィ-、高速液体クロマトグラフィ-によるゲルろ過によって精製を行い、約1020mgのDAOが得られた。ヒトDAO遺伝子については、前年度、ヒトDNAのEcoRIによるサザンブロットからDAOをコ-ドするDNA断片を得たが、その塩基配列について解析を行い、DAO cDNAの3'側に4個のエクソンと蛋白N末端部分を含む長いエクソン1個の存在が明らかとなった。(1)ヒトウイルムス腫瘍細胞及びラット腎臓のcDNAライブラリ-から、レニン結合蛋白質(RnBP)のcDNAクロ-ンを単離し、それぞれの塩基配列を決定した。コ-ドされているRnBP蛋白の一次構造は、前年度得たブタのそれと高い相同性を示し、ブタRnBPについて示された、高い疎水性部位とそれに続く4ロイシン残基からなるロイシンジッパ-構造が、ヒト及びラットRnBPについてもよく保存されていた。また、ブタRnBPについて、ロイシンジッパ-の2ロイシン残基をAspに変換したRnBPを、in vitro及びアフリカツメ蛙卵細胞中で、変異体mRNAから発現させ、このRnBP変異体が、レニンとの複合体形
慢性肝疾患における肝細胞障害と肝内凝固亢進状態の関連性に関する検討

慢性の肝細胞障害に、微小循環障害がどのように関与するのかを検討した。フォン・ウィルブランド因子(vWF)、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体、プロテインC、プロテインS抗原を測定したが、多くの凝固因子が連動して動いている症例は稀であり、生体内で凝固因子系の暴走に対する多重の制御機構の存在が示唆された。肝生検検体を用いたvWFの免疫染色は、肝組織中の類洞に特異的で、肝組織全体に観察された。肝疾患で高値を示すPAI-1は、同様に類洞が染色された。肝障害時には凝固亢進状態に陥っており、微小血栓が形成されやすい状況が存在し、一部の症例においてトロンビンが過剰産生されていることが明らかとなった。本年度は、慢性肝炎急性増悪期、肝硬変の非代償期への移行時期の血液サンプルの採取、可能な症例においては肝生検組織の採取を行い、凝固因子の動態について検討した。その結果、線維化の進行とともにフォンウィルブランド因子(vWF-Ag)は有意に増加した。さらに、ALT高値例において、vWF-Agの高値例が認められた。さらに、少数例ではあるが他の凝固因子も測定した。TATの増加が認められた症例は5/22であり、プロトロンビンフラグメントF1+2は1/22に高値を認め、プロテインCは4/22、プロテインSは9/22例に低値を認めた。これらの結果から、肝細胞障害時においては凝固亢進状態に陥っている可能性が示唆された。ただし、それぞれのマーカーが連動して動いている症例はまれであり、生体内で凝固因子系の暴走に対する多重の制御機構が働いている結果と推測できた。今回検討した全症例はFibroscanやAPRIなどの他の線維化診断マーカーを用いて肝硬度を測定し、一部の症例は肝生検を行った。vWF-AgはAPRIなどの他の線維化診断マーカーと弱い正の相関性が示された。また、造影超音波による門脈血流量および流速の測定法を確立した。肝組織内の微小血栓の存在により門脈血流量や流速を造影超音波・ドップラー法を用いて計測が可能であった。測定は、Philips iU22の専用解析ソフトQLABを使用しTICを解析し、肝内の関心領域の血流量を解析し、最高輝度に達するまでの時間をTime to Peakを指標として用いた。併せて、脈管系における血栓の有無を検索したが、今回、測定した症例には大血管内の血栓は存在しなかった。今後はこの結果を踏まえ、さらに多数例での検討を行っていることと、一部の症例についてはその時期の肝生検サンプルを用いた免疫染色を開始している。自己免疫性肝炎(AIH)11例、NASH8例、B型肝疾患(HBV)15例、C型肝疾患(HCV)27例を対象に、血漿のフォン・ウィルブランド因子抗原定量(vWF)、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体(TAT)、プロトロンビンフラグメントF1+2、プロテインC(PC)、プロテインS抗原量(PS)を測定し、肝組織のvWF、PAI-1、Fibrinogenの発現について免疫染色を行い検討した。その結果、vWFはAIH, HBV, HCVにおいて7/11, 8/15, 14/27で高値であったが、NASHでは4/8で低値であった。TATはそれぞれ3/11, 3/15, 4/27, 2/8に高値で、PCは2/11, 6/11, 10/27, 0/8、PSは1/11, 3/11, 9/27, 0/8で低値であった。vWFはNASHでは他の3群に比し、有意に低値であり、AIHが最も高値であり、HBV, HCVにおいてはALTの急性増悪時や慢性肝不全の症例で高値となった。肝組織の免疫染色は血液データと必ずしも一致しないが、vWF、PAI-1は類洞に染色された。この結果から、肝障害時には凝固亢進状態に陥っており、vWF高値、PC, PS低値から微小血栓が形成されやすい状況が存在し、TAT, F1+2の成績から一部の症例においてトロンビンが過剰産生されていることが明らかとなった。過凝固状態と微小血栓形成が肝障害の増悪に関連していることが、臨床例に於いても実証された。劇症肝炎にみられる広範肝壊死は、凝固亢進から生じる微小循環障害が有力な機序である。本研究は、慢性の肝細胞障害に、微小循環障害がどのように関与するのか検討した。血漿中の凝固因子であるフォン・ウィルブランド因子(vWF)、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体(TAT)、プロトロンビンフラグメントF1+2、プロテインC(PC)、プロテインS抗原(PS)を測定したが、多くの凝固因子が連動して動いている症例は稀であり、生体内での凝固因子系の暴走に対する多重の制御機構の存在が示唆された。また肝疾患で高値を示すPAI-Iは、同様に類洞が染色された。肝臓で産生される糖タンパクのフィブリノーゲンは、血小板凝集による止血に重要な因子であるが、これは肝細胞がすりガラス状に染色された。

血漿中の凝固因子、肝組織中の局在より、肝障害次には凝固亢進状態に陥っており、vWF高値、PC、PS低値から微小血栓が形成されやすい状況が存在し、TAT、F1+2の結果から一部の症例においてトロンビンが過剰産生されていることが明らかとなった。今回検討した症例の一部でFibroscanやAPRIなどの他の線維化マーカーを用いて肝硬度を測定した。vWFは、APRIなどの各種線維化診断マーカーと弱い正の相関性を示した。また、造影超音波による門脈血流量および流速の測定法を行った。肝組織内の微小血栓の存在は、門脈血流量や流速を低下させることが予測されたが、造影超音波・ドップラー法を用いての計測は困難であった。当初予測していたよりも凝固因子に異常をきたす症例はかなり限定され、ALT300IU以上の高度の異常例でないと凝固亢進状態に至らない。よって、このような臨床検体を確保することが困難であり、研究成果をあげる上での大きな障害となった。慢性の肝細胞障害に、微小循環障害がどのように関与するのかを検討した。フォン・ウィルブランド因子(vWF)、トロンビン・アンチトロンビンIII複合体、プロテインC、プロテインS抗原を測定したが、多くの凝固因子が連動して動いている症例は稀であり、生体内で凝固因子系の暴走に対する多重の制御機構の存在が示唆された。肝生検検体を用いたvWFの免疫染色は、肝組織中の類洞に特異的で、肝組織全体に観察された。肝疾患で高値を示すPAI-1は、同様に類洞が染色された。肝障害時には凝固亢進状態に陥っており、微小血栓が形成されやすい状況が存在し、一部の症例においてトロンビンが過剰産生されていることが明らかとなった。臨床例における肝障害と凝固亢進による肝細胞壊死の関連性が実証された。基礎研究における肝障害モデルでの同様の検討は報告されているが、臨床例での検証は皆無である。特に、重症肝障害には凝固亢進状態が肝細胞障害に関与しており、その臨床的指標としてvWFが有用であることが明らかになった。研究開始時の達成目標が、肝障害の機序解明と臨床的指標の確立であったため、当初の目標を十分に達成したと考えている。肝疾患今回の検討は、血漿のvWF, TAT, F1+F2, PC, PS,肝組織のvWF、PAI-1、Fibrinogenの検討に限られており、複雑な凝固線溶系の異常の全貌が解明されたわけではない。現在、論文化を企画しており、それに際し不足している成績を追加していく予定である。造影超音波による門脈血流量および流速の測定法を確立できたことは、大きな成果である。しかし、大きな血栓は検出できるが今回問題にするような肝小葉内血栓は、当初の予測通りこの機器では検出感度以下であった。一方、血液マーカーにおいて、慢性肝炎や肝硬変症例においても凝固亢進の病態が存在することが明らかになり、急性増悪との関連が示唆されたことは大きな成果である。しかし、当初予測していたよりも凝固因子に異常をきたす症例はかなり限定されることが明らかとなった。すなわち、ALT値でいえば300IU以上の高度の異常例でないと凝固亢進状態に至らないため、当初予定していた症例数を確保できていない。また、肝硬変において肝壊死が進行し肝不全に陥る時期にも過凝固状態に陥り、病態の進展に影響を及ぼすと推測できるが、このような症例も比較的まれである。さらに、これらの病態に陥っている症例では、肝生検のリスクが高いため、実臨床において組織学的な検討も行い難いことも判明した。慢性肝炎の急性増悪期や肝硬変の非代償化の時期、すなわち肝臓の壊死が比較的大きく生じる時期には、過凝固状態が生じており、本来は免疫反応で始まった肝細胞壊死が広範な領域の肝壊死につながる可能性が示唆された。
乱流希薄予混合旋回火炎から生じる燃焼騒音の発生・変調メカニズムの解明

航空機用や産業用に用いられるガスタービンエンジンから発生する騒音は,ファンや排気ジェットを音源とする流体騒音と燃料/酸化剤の発熱反応を音源とする燃焼騒音とに大別される.近年,流体騒音の低減が着実に進んでいる一方で,燃焼騒音の寄与率が急激に上昇し,その低減が喫緊の課題とされている.しかし,燃焼騒音については,その発生メカニズムすら十分に理解されていない.また,燃焼騒音は壁反射や乱流渦等の外的因子により変調するが,その影響についてはこれまで議論されていない.本研究では,水素の乱流希薄予混合旋回火炎を対象に実験と数値解析を併用することより,燃焼騒音の発生・変調メカニズムを明らかにすることを目指す.航空機用や産業用に用いられるガスタービンエンジンから発生する騒音は,ファンや排気ジェットを音源とする流体騒音と燃料/酸化剤の発熱反応を音源とする燃焼騒音とに大別される.近年,流体騒音の低減が着実に進んでいる一方で,燃焼騒音の寄与率が急激に上昇し,その低減が喫緊の課題とされている.しかし,燃焼騒音については,その発生メカニズムすら十分に理解されていない.また,燃焼騒音は壁反射や乱流渦等の外的因子により変調するが,その影響についてはこれまで議論されていない.本研究では,水素の乱流希薄予混合旋回火炎を対象に実験と数値解析を併用することより,燃焼騒音の発生・変調メカニズムを明らかにすることを目指す.