hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
薬剤師の倫理観に基づくコミュニケーション資質向上のための研究

さまざまな職場に勤務する薬剤師が、一定水準以上の倫理的な判断ができるよう、薬剤師向けケース・アプローチの構築を目指してきた。本研究において、臨床に勤務する薬剤師や薬学生が、いつ出遭うともわからない具体的かつリアリティに富んだケースを15例作成すると共に、「5分割表」という倫理検討シートを開発して、薬剤師・薬学生に対する職業倫理を試行した。これらの成果は『薬剤師のモラルディレンマ』として書籍化、近刊の予定である。さらに、自らが正しいと判断したことを、他者に齟齬なく伝えられるだけのコミュニケーション力を養成するために、『薬剤師の倫理・コミュニケーション(仮題)』が発刊の見通しである。本書は、患者と薬剤師、医師と薬剤師のやり取りを描いたシナリオをベースとしており、どんな職場の薬剤師であっても周囲の仲間とすぐに取り組めるようなスタイルで執筆している。これらの書籍や薬業界における倫理・コミュニケーション教育のツールとして活用されるものと期待される。本研究は,薬剤師の倫理とコミュニケーションの関係について探求してきた。本年は韓国,インド,イギリスの薬剤師倫理規定を入手し,翻訳に取り組んで,諸外国の職務規範から薬剤師に求められる倫理を模索した。現場で起こりうる倫理的ジレンマのケースを20余作成した。同時に,社会学,人間学,人類学などの人文学的アプローチから薬剤師の倫理・コミュニケーションを検証してきた。人文学的な視点から薬剤師の職務を考えてみると,薬学の領域では見えてこなかった側面が明確になってきた。本年の研究で辿り着いたひとつの答えは,欧米で医療従事者を対象に積極的に展開されている医療人文学教育プログラム(Medical Humanities Education Program)の重要性である。本プログラムをなす科目として論理およびコミュニケーションが位置づ}ナられていると判明した。薬剤師が倫理観を根幹とする対人コミュニケーションを図るには,倫理の重要性を訴えるのでも,コミュニケーションのテクニックを極めるのでもなく,いのちに関わる医薬品を取り扱う者として,薬剤師として働くことの社会的な重みを感じながら,患者・顧客と接せられることである。薬剤師が具体的な事例を用いてその先にいる患者・顧客をイメージし,トレーニングできるような薬剤師向けの医療人文学教育ツールの開発が必要である。以上のような成果を著書,実務者の購読する雑誌に発信してきた。引き続き倫理学者・心理学者からの助言を仰ぎながら,医療職種の倫理関連書籍,社会調査などを通して、今後こうした教育を求める。さらに,本年はフリーアナウンサーの協力を得て,コミュニケーションを図る際,医療従事者の声が患者・顧客に与える影響の大きさを知り,薬剤師向けのe-learningのコンテンツを開発した。本研究は,薬剤師の倫理とコミュニケーションの関係について引き続き探求してきた。本年は医学教育関連の研修会やワークショップに積極的に参加し,医師との議論を繰り返し行うことで、薬剤師の倫理・コミュニケーション教育を模索した。昨年から作成しているモラルディレンマのケースを追加すると共に、薬剤師が取り組みやすいケースの検討法を開発して、実際に試用してみた。この教育法の展開により、コ・メディカルである薬剤師が職務上のモラルディレンマを解決するには、コミュニケーションが極めて重要な位置づけにあることが判明した。つまり、医師は自由に治療方針を決定できるのに対し、薬剤師が望む薬物治療を遂行するには、必ず医師の承諾を得る必要があるために、より広いコミュニケーションスキルが必要なのである。また,本年は医療人文学教育の国際シンポジウム(アメリカ、Drew University)に参加し、これらの教育プログラムが臨床の現場で医療従事者を対象として、どのように実践されているか視察した。さらに、社会学的手法(量的)を用いて,各種薬学会の会場で薬剤師の職業意識に関する調査を行った。加えて、薬学生ならびに看護学生に対し、職業と患者の死に関する意識調査を行った。次年度は、これら調査の結果から薬剤師および薬学生が自らの職業に対して、どのような意識をもっているのかを分析し、薬剤師の倫理観とプロフェッショナリズムの関係を明確化する。本年は平成19年度に実施した薬剤師,薬学生ならびに看護学生の職業意識と倫理に関する調査結果の分析を行い,薬剤師の倫理観とプロフェッショナリズムの関係を明確化に努めた。医学教育を担当している医師とのシンポジウムや合同勉強会の企画・開催を行なって,なぜ医師と薬剤師,患者がわかりあえないのか意見交換する座談会の機会を設けたり,多職種参加のワークショップに積極的に参加して,臨床倫理の諸問題を解決するトレーニングを積んで,薬剤師のプロフェッショナリズムを模索した。また, 2008年から執筆してきたモラルディレンマを書籍化すると共に,新たなケース検討法のッールとして本研究において開発・使用してきた5分割表の理論化を試みた。

ケース・アプローチにおける5分割表の活用により,患者QOLの正しい理解と測定が極めて重要であることがわかり, WHOもQOLの測定方法の1つとして認めている,アイルランド王立外科大学で開発されたSEI-QoLの理解・習得に努めた。薬剤師に限らず,医療従事者が職務上のモラルディレンマを解決するには,「他者との関わりの仕方=コミュニケーション」が極めて重要な位置づけにある。本研究を通じて,コミュニケーションの根幹には倫理が脈々と息づいていると確信した。本研究は今年度で終了するが,倫理とコミュニケーションの関係性について,調査研究を進めていきたい。
小児悪性脳腫瘍に対するWT1ペプチドワクチンを中心とした複合免疫療法の検証

我々の研究グループは成人悪性神経膠腫に対してがんワクチン療法であるWT1療法に加えて免疫チェックポイント阻害剤などを併用する複合免疫療法(以下WT1複合免疫療法)について、臨床検体および動物モデルを用いた基礎研究を実施しその有効性と安全性を検証している。しかし小児悪性脳腫瘍に対する複合免疫療法のエビデンスは乏しい状態である。本研究ではこれまでの研究成果を土台とし、小児悪性脳腫瘍の臨床検体における免疫応答を解析する。さらに動物モデルを用いて小児悪性脳腫瘍に対する複合免疫療法の安全性及び有効性を検討することにより、本治療の臨床試験に向けての基礎的背景を構築し、適応拡大の可能性を探索する。
身体的弱者の安全性・居住性からみた扉および開口部の評価システムの開発

本研究では,通りやすさに関連する要因として,人の動作に関しては,通過時の閉動作の有無,通過時の速さ,通行方向の各要因を,また,戸に関しては,力学的開閉性状,戸の形式に加え,さらに,把手に関する要因を研究対象とした。官能検査手法を適用して,通りやすさ尺度を構成するとともに,通りやすさに及ぼす上記の諸要因の影響を考察した。その結果,戸の力学的開閉性状を検討するうえで考慮すべき要因は閉動作の有無,通過時の速さ,戸の形式であることを明らかにした。また合わせて,戸の力学的開閉性状の定量化のための基礎データとして,試料戸の開閉時に発生する加速度,荷重,変位を測定した。次に,測定した戸の開閉時の力学的基礎データと通りやすさ尺度との対応を検討した。その結果,実情に即した,通過時の速さおよび通過時の戸の開き区間を反映した,戸の開閉時の平均的動荷重により通りやすさからみた戸の力学的開閉性状の定量化が可能であることを示した。また,クローザの有無すなわち閉動作の有無により,上記の平均的動荷重の補正係数を設定し,閉動作の有無,通過時の速さ,戸の形式別に,最適な荷重特性値を提示した。最後に,以上を取りまとめ,戸の形式,開閉方向,把手の形式によらない,通りやすさからみた戸の力学的開閉性状の相対的評価方法を提示した。「通行性からみた扉の力学的開閉性の評価システム」に関しては,健常者に加え身体的弱者に対しても同評価システムの適用範囲を拡張するため,健常者と身体的弱者の双方を含む通行者層を対象として,同じ試料扉群に対する通行性の心理学的評価および動作達成度を求めた。身体的弱者としては,上半身が健常で介護者の介護なしに車椅子の利用が可能な身障者,車椅子での通行に介護者の介護が必要な身障者,および上肢の機能に障害を持つ身障者を対象とした。なお,評価システムの骨子を確立することを主眼とする本年度の研究においては,実験の効率上,上肢に障害を持つ身障者としては健常者に上肢の機能を制限するための模擬装具を装着させた「模擬身障者」を被験者とした。実験の結果,扉の形態および身体的弱者の身体の機能上の属性ごとに,扉を通行する際の難易の程度の相違に関する比較用の補正係数として「扉の形態係数」および「通行者の身体属性係数」を提案し,実用的な範囲において扉の力学的開閉性の評価を人間の属性別に的確に行うための基礎資料を提示した。次に,「操作性からみた扉の把手の形状・寸法の評価システム」に関しても,前述の評価システムに関する検討と同様に,健常者と身体的弱者の双方を含む通行者層を対象として,同じ試料把手群に対する操作性の心理学的評価および動作達成度を求めた。特に上肢の機能・能力が種々相違する通行者を対象とした場合の,通行者の操作牲に関する属性を定量的に表現するため,種々の扉と把手の組み合わせに関して開閉動作の動作達成度を求めた。実験の結果,操作性に関する通行者の身体属性を表示するための指標として,代表的な形態の扉と把手の組み合わせに関する動作達成度を説明変数とする実験式を提案した。さらに,この提案式に基づき,通行者の身体属性が異なる場合も把手の操作性の推定が可能であることを検証した。「はさまれ時の安全性からみた扉・扉枠の形状・かたさの評価システム」に関しては,はさまれ時の集中荷重を測定可能な模擬身体部位を基幹部とする評価システムを開発した。同システムの開発では,まず,はさまれ時において重度の傷害事故が起きやすい部位として手の指を選定し,本物の指の形状・寸法や動的変形特性に関するデータを基礎資料として測定・収集し,その結果に基づき「模擬指」を試作した。また,はさまれ時に模擬指の骨相当部表面に作用する集中荷重を,市販の圧力測定シートを準用し測定することとした。

次に,安全性の序列が自明な模擬扉・扉枠の一群に対して模擬指の模擬はさまれ実験を行い,模擬指から測定される集中荷重の大小により安全性の相対評価が可能であることを検証した。「衝突時の安全性からみた扉・扉枠・把手の形状・かたさの評価システム」に関しては,衝突時において重要な身体部位である頭部を模した頭部モデルを基幹部とする評価システムを開発した。同システムは,既存の平坦部の測定装置に対して改良を加えたもので,扉・扉枠および把手などの出隅部・曲面部の安全性の序列を,頭部モデルの骨相当部表面に作用する集中荷重の大小として測定・相対評価するものである。集中荷重の測定手法は「模擬指」の場合と同様とした。「安全性からみた開口部の視認性の評価システム」に関しては,光透過性の開口部材料の視認性,および扉・扉枠の立体的視認性に関し,画像解析法に基づく評価システムを開発した。同システムは,視力をパラメータとして評価水準が可変であり,健常者だけでなく視覚的弱者にも対応可能である。
アクティブ・ラーニングとしてのディベート：初学者向け論題作成と質疑応答教授法開発

本研究は、日本での教室ディベートとアクティブ・ラーニングの実践は直結していないと指摘する。これには日本の文化的背景、指導者と学習者の関係性、ディベート経験のある指導者の不足、使用言語といった日本の教育現場独自の状況が要因となっている。本研究は、アクティブ・ラーニングとして無批判に行われている現在のディベート教育を精査し、日本の学習者の特性により即したアクティブ・ラーニング型ディベート教授法を開発する。ディベート教育が扱う内容は多岐に渡るが、本研究はアクティブ・ラーニングにおいて特に重要な論題作成と質疑応答の教授法開発を目指す。
コールタール中の有用成分の高効率分離精製

本研究では、これまでに、コールタールの重質成分、アントラセン油、キノリン油、粗製ナフタリン、メチルナフタリン油等を研究対象として、各留分の脱窒素・脱硫精製ならびにナフトール類、アクリジン、イソキノリン、ベンゾチオフェン等の有用成分の濃縮分離を試み、再生可能な金属硫酸塩等の固体酸使用、各種溶剤抽出の組み合わせ、選択的部分水素化反応の設計、あるいは超臨界流体利用によって目的とする有用成分の濃縮分離が可能であることを明らかにした。本年度は、粗製ナフタリン及びメチルナフタリン油を用いて、各々ベンゾチオフェンの選択的二量化分離及びキノリン、イソキノリンの親規分離回収プロセスの開発を目的として、超臨界炭酸ガスを利用する装置、プロセス設計を行った。その結果、固体酸(主としてシリガゲル担持硫酸アルミニウム)を用いて超臨界炭酸ガス条件下においてメチルナフタリン油から塩基性窒素化合物(キノリン、イソキノリン等)の分離・回収を試み、固体酸を充填した固定床流通式反応器を使用することにより、窒素化合物の吸着分離によるメチルナフタリンの脱窒素精製と高圧超臨界炭酸ガス及びエントレーナー(主にメタノール)流通による窒素化合物の濃縮分離の連続プロセス設計が可能であることが明らかになった。また、超臨界炭酸ガス条件下でベンゾチオフェンの選択的二量化反応が進行することが解かった。今後、最適固体酸触媒の探索と再生・繰り返し使用工程の設計が重要な課題である。本研究は、コ-ルタ-ル中に含有される多環芳香族炭化水素,含硫黄含窒素芳香族化合物などの有用成分の分離精製のみならず,工業原料として利用価値の高い三、四、五環性部分水素化芳香族化合物等の有用化合物の選択反応を利用したつくり込みにより有用成分の高度利用が可能になると同時に、分離精製条件の設定範囲を拡大することが可能であるとの考えに基づいて新しいタイプの高効率分離法の開発を目的としている。本年度は、主として三、四、五環性部分水素化芳香族化合物,ジベンヅチオフェン,カルバゾ-ル,アクリジン等の含硫黄、含窒素化合物を目的化合物とするコ-ルタ-ル中の有用成分の濃縮あるいは特定有用成分の選択反応によるつくり込みを検討した。1)コ-ルタ-ル中に含有される四環性のピレン,フルオランテンをNi-No触媒を用いて部分水素化し、水素供与性溶剤,耐熱性ポリマ-原料、炭素液晶材料として有用なジヒドロ体及びテトラヒドロ体を、高選択率・高収率で合成することができた。2)シリカゲル担持金属硫酸塩を用いるコ-ルタ-ルピッチの脱窒素吸着処理により、塩基性のアクリジン誘導体と非塩基性のカルバゾ-ル誘導体を分別し、高度に脱窒素精製されたニ-ドルコ-クス製造用の良質原料を調製することができた。3)メタノ-ルを用いる抽出と引き続くヘキサン析出によって、コ-ルタ-ル中のフェノ-ル類、ピロ-ル類を濃縮分離することができた。このような溶媒抽出の組み合せは、目的生成物を高度に分離できる可能性を有するとともに、超臨界抽出に用いる極性溶媒を一成分とする混合溶媒の探索試験として有用である。本研究は、コールタール中に含有される多環芳香族炭化水素、含硫黄、含窒素芳香族化合物などの有用成分を分離精製するだけでなく、化学工業原料として利用価値の高い25環性部分水素化芳香族化合物等の有用化合物の選択反応を利用したつくり込みにより有用成分の高度利用を可能にし、分離精製条件の設定範囲を拡大できるとの考えに基づいて、新しいタイプの高効率分離精製法を開発することを目的としている。本年度は、ナフタリン油,キノリン油,メチルナフタリン油ならびにアントラセン油を用いて、各留分に含まれる有用成分の濃縮分離を試み、次のような成果が得られた。1)ナフタリン油に少量含まれ、かつ付加価値の高いベンゾチオフェン、インドールを、強酸性を有する金属硫酸塩を用いる吸着分離回収法により、高濃度に濃縮できる可能性を見い出した。

目的化合物のオリゴメリゼーション反応を利用する反応・吸着分離法についても検討を進めている。2)キノリン油中のキノリン,イソキノリンの物性(結晶性,塩基性)の差を利用して、各化合物の濃縮法を探索し、水素化による物性差の増大と固体酸吸着の組み合せが有用であることを明らかにした。3)メチルナフタリン中の1-メチルナフタリンから2-メチルナフタリンへの異性化反応を、固体酸共存下の超臨界流体(炭酸ガス)条件下で促進できることを見い出した。4)アントラセン油中のアクリジンを、金属硫酸塩固体酸による吸着濃縮と引き続く硫酸塩の結晶性の差による分別結晶により、分離濃縮できることを明らかにした。本研究では、これまでに、コールタールの重質成分、アントラセン油、キノリン油、粗製ナフタリン、メチルナフタリン油等を研究対象として、各留分の脱窒素・脱硫精製ならびにナフトール類、アクリジン、イソキノリン、ベンゾチオフェン等の有用成分の濃縮分離を試み、再生可能な金属硫酸塩等の固体酸使用、各種溶剤抽出の組み合わせ、選択的部分水素化反応の設計、あるいは超臨界流体利用によって目的とする有用成分の濃縮分離が可能であることを明らかにした。本年度は、粗製ナフタリン及びメチルナフタリン油を用いて、各々ベンゾチオフェンの選択的二量化分離及びキノリン、イソキノリンの新規分離回収プロセスの開発を目的として、超臨界炭酸ガスを利用する装置、プロセス設計を行った。その結果、固体酸(主としてシリガゲル担持硫酸アルミニウム)を用いて超臨界炭酸ガス条件下においてメチルナフタリン油から塩基性窒素化合物(キノリン、イソキノリン等)の分離・回収を試み、固体酸を充填した固定床流通式反応器を使用することにより、窒素化合物の吸着分離によるメチルナフタリンの脱窒素精製と高圧超臨界炭酸ガス及びエントレーナー(主にメタノール)流通による窒素化合物の濃縮分離の連続プロセス設計が可能であることが明らかになった。また、超臨界炭酸ガス条件下でベンゾチオフェンの選択的二量化反応が進行することが解かった。今後、最適固体酸触媒の探索と再生・繰り返し使用工程の設計が重要な課題である。
新規ハロアルキルリン酸加水分解酵素のペリプラズム移行経路とＮ末端修飾意義の解明

難分解性含塩素化合物リン酸トリス(1,3-ジクロロプロピル)(TDCPP)分解菌Sphingomonas sp. TDK1が有するハロアルキルリン酸加水分解酵素は,他の有機リン加水分解酵素とは明らかに異なる特徴をいくつも有している.本研究では本酵素がこれまでの有機リン加水分解酵素とは異なる経路で菌体外に分泌されている可能性を示し、本分泌に関わる重要なアミノ酸残基も同定した。また、TDK1株のドラフトゲノム解析を通して推定ピログルタミン酸酸化酵素遺伝子がTDK1株に存在することを明らかにし,本酵素のN末端は菌体内で酵素的にピログルタミン酸化されていることを示した.Sphingomonas sp TDK1から単離に成功した難分解性含塩素化合物・リン酸トリス(1,3-ジクロロプロピル)(TDCPP)を分解するハロアルキルリン酸加水分解酵素は,これまでに分解報告のない有機リン化合物を基質とするだけでなく,そのペリプラズムへの輸送経路,N末端アミノ酸修飾など,他のバクテリア酵素とは異なる,非常に特異な性質をいくつも有していることが明らかになった.本研究では,これらの中でも特に新規性の高い,ペリプラズム輸送経路とN末端タンパク質修飾の酵素学的・生理的意義を解明することを目的としている.平成25年度は以下の研究業績をあげた.次世代シークエンサーを用いたTDK1株のドラフトゲノム解析で,タンパク質のペリプラズム輸送で重要な役割を果たすtatC,secA,secY遺伝子,および,N末端修飾に関わると考えられる推定ピログルタミン酸酸化酵素(グルタミニルシクラーゼ)など,本研究課題で目的としていた全ての遺伝子を同定した.次に,N末端修飾が酵素活性に与える影響を解析するため,簡便に精製可能であり,さらに,N末端のピログルタミン酸化が起こらない,大腸菌におけるHisタグ融合酵素発現系を構築し,本発現酵素が活性体として発現することを確認した.また,前年度の局在解析ではpETシステムによる当該酵素の過剰発現がその局在に影響を与えた可能性が考えられたことから,発現量を調節可能なアラビノース誘導型pBadシステムを用いた当該酵素の大腸菌発現系を構築し,局在解析を試みた.その結果,当該酵素活性はサイトゾルにのみ認められ,当該酵素はこれまでに報告のない挙動を示す事が明らかになった.本結果が伸長シグナルペプチドの機能に由来するかについて今後解析を行なう.難分解性含塩素化合物リン酸トリス(1,3-ジクロロプロピル)(TDCPP)分解菌Sphingomonas sp. TDK1が有するハロアルキルリン酸加水分解酵素は,他の有機リン加水分解酵素とは明らかに異なる特徴をいくつも有している.本研究では本酵素がこれまでの有機リン加水分解酵素とは異なる経路で菌体外に分泌されている可能性を示し、本分泌に関わる重要なアミノ酸残基も同定した。また、TDK1株のドラフトゲノム解析を通して推定ピログルタミン酸酸化酵素遺伝子がTDK1株に存在することを明らかにし,本酵素のN末端は菌体内で酵素的にピログルタミン酸化されていることを示した.Sphingomonas sp TDK1から単離に成功した,難分解性含塩素化合物・リン酸トリス(1,3-ジクロロプロピル)(TDCPP)を分解するハロアルキルリン酸加水分解酵素は,これまでに分解報告のない有機リン化合物を基質とするだけでなく,そのペリプラズムへの輸送経路,N末端アミノ酸修飾など,他のバクテリア酵素とは異なる,非常に特異な性質をいくつも有していることが明らかになった.本研究では,これらの中でも特に新規性の高い,ペリプラズム輸送経路とN末端タンパク質修飾の酵素学的・生理的意義を解明することを目的としている.平成24年度は以下の研究業績をあげた.まず,当該酵素のシグナル配列が本酵素活性にどのような影響を与えるか確認するため,シグナル配列欠損酵素発現系を構築した.大腸菌組換え体の無細胞抽出液を用いてTDCPP分解活性測定を行った結果,シグナル配列を欠損させた発現系において完全に活性が認められなくなった.本結果はサイトゾル内においてフォールディングすることができないタンパク質の特徴を表したものと考えられ,dHADの推定シグナル配列はSec経路によるペリプラズム間隙へのタンパク質輸送を指示している可能性を強く示唆した.次に,既に構築されているpETシステムによる当該酵素発現大腸菌での細胞分画法を確立し,その局在について酵素活性測定とウエスタンブロットで解析を行なった.その結果,本酵素は細胞質とペリプラズムの両画分でほぼ等量存在することが明らかになった.本結果について,大腸菌での過剰発現がその局在に大きな影響を与えた可能性も考えられるため,次年度以降,発現量の調節可能な発現系を構築し,再度局在に関する検討を行なう.Sphingomonas sp. TDK1から単離に成功した難分解性含塩素化合物・リン酸トリス(1,3-ジクロロプロピル)(TDCPP)を分解するハロアルキルリン酸加水分解酵素は,これまでに分解報告のない有機リン化合物を基質とするだけでなく,そのペリプラズムへの輸送経路,N末端アミノ酸修飾など,他のバクテリア酵素とは異なる,非常に特異な性質をいくつも有していることが明らかになった.本研究では,これらの中でも特に新規性の高い,ペリプラズム輸送経路とN末端タンパク質修飾の酵素学的・生理的意義を解明することを目的として,以下の業績をあげた.1.本酵素のペリプラズム輸送経路の推定を行うため,pET大腸菌発現系,および,発現量を調整可能なpBad大腸菌発現系を構築し,その局在を解析した.

その結果,pET発現系において本酵素はペリプラズムとサイトゾルにほぼ等量存在し,pBad発現系では本酵素はサイトゾル画分にのみ局在することが明らかになった.また,本年度は本シグナルペプチドにおいて重要なアミノ酸残基の同定を行い,一般的なsec依存的なシグナルペプチド間で高度に保存されている塩基性アミノ酸残基が酵素活性に重要な役割を果たすことを明らかにした.2.N末端のピログルタミン酸化が起こらない,大腸菌におけるHisタグ融合酵素発現系を構築した.本年度は本Hisタグ融合酵素の種々の精製条件の検討を行い,溶出イミダゾール濃度や透析バッファー組成を最適化することで,Hisタグ融合酵素が活性を有したままで均一に精製できる事を明らかにした.3.次世代シークエンサーを用いたTDK1株のドラフトゲノム解析で,タンパク質のペリプラズム輸送で重要な役割を果たすtatABC,secDF,secYEG遺伝子,および,N末端修飾に関わると考えられる推定ピログルタミン酸酸化酵素(グルタミニルシクラーゼ)など,本研究課題で目的としていた全ての遺伝子を同定した.応用微生物学TDK1株のドラフトゲノム解析により本研究課題で目的としていた全ての遺伝子を同定し,N末端タンパク質修飾の酵素学的意義の解明やペリプラズム輸送経路解析のための新規大腸菌発現系の構築にも成功している.また,発現量を調節可能なアラビノース誘導型pBadシステムでの大腸菌発現系を用いた局在解析では,これまでに報告のない酵素の局在性が確認されるなど,新しい知見も得られている.これらの結果は本研究課題の研究成果,及び,今後の研究遂行及びに大きく寄与するものであり,本研究は概ね順調に進展していると判断した.本研究課題の大きな目的の一つであるペリプラズム輸送経路に関して,大腸菌を用いた検討ではあるが,Tat経路依存的にペリプラズムに移行する既報の有機リン加水分解酵素と異なる経路で移行している可能性を示した事は大きな成果といえる.また,当該酵素の局在解析に関しても,明瞭な結果は得られていないものの,当該酵素発現大腸菌における分画条件の最適化や免疫測定法のための抗体作成・最適解析条件も確立することができた.以上の結果は今後の本研究課題の遂行及び研究成果に大きく寄与するものであり,本研究は概ね順調に進展していると判断した.前年度は本研究課題全体に関与する遺伝子の同定,ペリプラズム移行経路の解析,および,N末端ピログルタミン酸化意義の解明のための大腸菌発現系の構築を行なってきた.今後については,前年度の研究をさらに発展させると共にN末端修飾が酵素活性に及ぼす影響と伸長
心の発達:認知的成長の機構

本研究は、就学期までの児童における概念発達と言語発達を対象にそこに作用している生得的機構及びその外界との相互作用の種類と役割を解明し、また関連する認知発達障害の機構を明らかにすることを目標とした。総括班のもとに概念発達、言語発達、認知発達障害の3つの班を設けて研究を推進し、総括班は班間の研究の連絡、調整、成果のとりまとめ、公表等にあたった。本研究では特に、発達心理学、認知心理学、神経心理学を中心とする広い意味の心理学およびその周辺領域の研究者が一つのグループをなして寄与することが重要であり、特に背景を異にする研究者の相互理解、交流を心がけた。具体的には平成912年度の各年度末に3日間の成果報告会を開き、毎回約400ページの論文集(成果報告書)を印刷、関連領域の研究者に配布した。又、広い視点からのシンポジウムの開催やニューズレターの発行を行った。特に平成12年度には、全体的な研究とりまとめと評価を目的として約10名の海外からの拓聘研究者を含めた国際シンポジウム「Development of Mind」(8月30日9月1日慶應大学)を開催して国際的にも評価された。なお、本研究に関しては平成13年度に研究者以外の一般社会人を対象に「大学と科学」公開シンポジウム:『心の発達、ことばの発達;子供はなにをどのように学ぶのか』(10月27日(土)・28日(日)、大阪・千里ライフサイエンスセンター)を開催し、研究成果を報告した。また、4年間の成果をとりまとめた「研究成果報告書」を印刷し関連分野に配布した。本重点領域研究では、就学期までの児童における概念発達、言語発達を対象にそこに作用している生得的機構、及びその外界との相互作用の種類と役割を明らかにすることを目的に以下のように三つの班の研究課題を設定・検討した。概念発達班では、まず、幼児における素朴理論(素朴物理学、素朴心理学、素朴生物学)の獲得、特に素朴生物学の成立と他の領域との関連が研究課題として設定された。又障害児における素朴心理学(他者理解)についても問題が提起された。言語発達班の対象領域は音声・言語・形態・統語・語用論等を多岐にわたるが、心理レベルでの言語獲得理論・言語発達理論の構築という目標に向かって研究を推進する様、計画された。そこでは、言語の種固有性、種均一性、領域固有性などが問題となる。認知発達障害班は、基礎的な研究と臨床的な研究の相互作用により、障害の本質を理解し、行動改善の新しい道を探ることを目指し、主要な特徴として行動改善の為のコンピュータの利用と、機能的脳画像の利用が計画された。研究の全体的、基礎的指針について平成9年10月公開講演会「心とは何か一心の発達研究に向けて-」(10月京都)を開催し、現時点での問題の所在、方法論等について討論し、班員間の共通理解の設定をはかった。また、年度初めの相互連絡のための全体会議(6月東京)と年度末の全体成果報告会(1月東京)を開催するとともに班間にまたがる話題として本年度は特に「障害者の他者理解」(10月京都)及び「語意発達と概念発達」(1月東京)を取り上げ特別講演会、シンポジウムを開催した。本特定領域研究では、就学期までの児童における概念発達、言語発達及び認知発達障害を対象に三つの研究設定して研究を進めている。各班の研究成果の発表と相互連絡のために平成10年度は6月(東京)、10月(神戸)に全体会議を開催し、1月(東京)に成果報告会を開催した。言語発達班についてはシンポジウム「言語理論からのアプローチ」、講演会「位置の認識と状態の認識」、Tomas Roeper教授(University of Massachusetts)による特別講演「言語発達と心の理論」等において言語獲得の研究においてどのような言語能力が問題となるかについて指針が得られた。

概念発達班についてはシンポジウム「認知発達における社会・文化的環境の役割」を開催、James G.Green教授(Stanford University)を招待して講演会「Situative View of Cognitive Growth」を行い認知発達における社会・文化的要因の研究が今後の重要な研究領域になると考えられた。又、ワークショップ「心の理論から素朴心理学へ」を開催し、「心の理論」研究について新しい方向が示された。発達障害班を中心に「機能的脳画像研究の現在」を開催、E.Roland教授(Karolinska Inst.)による特別講演「Structual divisions and functional fields of the cerebral cortex of man」では最新の画像解析の手法について知識が得られた。研究発表ではFMRIによる乳幼児の脳発達、発達障害児の脳機能画像(学習障害児、言語特異的機能障害児、聴覚障害者等)、コミュニケーションの基礎となる視線や感情認知等に関する研究成果が報告討論された。又これと関連して障害児の言語能力改善支援プログラムの研究にも成果が得られている。本特定領域研究では、就学期までの児童における概念発達、言語発達及び認知発達障害を対象に三つの研究設定して研究を進めている。各班の研究成果の発表と相互連絡のために平成11年度は6月(東京)、10月(京都)に全体会議を開催し、1月(東京)に成果報告会を開催した。まず、6月の会議においては、「心の発達」研究に関連した今後の研究課題の一つとして、年少児における対人関係の理解の問題を取り上げ、シンポジウム「少子高齢社会における心の問題一対人関係を中心に」を開催した。「日本人の子育てはどう変容したか?」(正高・京大)他の発表・討論があった。これを受けて6月にシンポジウム「心の可塑性と認知的成長の促進:発達障害研究からのアプローチ」10月に講演会「変動する社会における人間形成」を開催した。又、10月には人の認知発達と動物の認知発達の比較研究を中心としてシンポジウム「動物は理論を持つか」を開催し、「概念から理論ヘ-動物認知研究の新段階-」(渡辺・慶応大学)他の研究発表があった。1月の会議ではシンポジウム「脳機能画像研究」を開催した。三次元知覚等、認知機能に関する基礎的研究成果がまとめて発表されると同時に「聴覚野における音声情報処理機能の発達的変化」(今泉・東京大学)「言語音処理の神経基盤:脳磁場(MEG)を指標とした検討」(小山・岡崎生理学研)「固有名詞を想起中の脳の賦活部位」(辰巳・東京都老人総合研究所)等言語機能に関する脳機能画像研究の成果が検討された。又、教育場面における認知発達の研究に関連し、シンポジウム「教室でのディスコース・子どもの説明のスタイル」を開催し、「説明における知識と推論の発達」(内田・お茶大)等日米比較を中心に授業のスタイルと児童の説明における推論機能発達の研究の可能性が討論された。本特定領域研究では、就学期までの児童における概念発達、言語発達、認知発達障害を対象に三つの研究班を設定して研究を進めている。平成12年度は成果の取りまとめを中心に研究発表会などを開催した。一月の成果報告会では講演会及びジンポジウムにより「心の生得性と社会文化依存性」、「音声言語機能の発達」、言語獲得理論の課題と展望」、「言語・認知の障害と脳の機能」について取りまとめの討論を行った。
咽頭弓分節化に伴い周期的に発現変動する遺伝子の分子計時機構解明

脊椎動物の胎児期に現れる咽頭弓は、発生に伴い頭側から尾部側へ順次分節が進行する。マウスのRipply3遺伝子は、まず咽頭弓の分節化予定域で強く発現し、分節化が完了すると減弱し、次の分節化予定域で再び発現が強まるという特徴的な周期性を示す。本研究は、咽頭弓分節にともなうRipply3の周期的発現変化を生み出す分子機構の解明を試みた。In vivo及びin vitro解析の結果、Ripply3遺伝子のプロモーター活性はTbx1により活性化し、逆にRipply3により抑制された。これらの結果は、Ripply3の周期的な発現が自身のネガティブフィードバックにより調節されている可能性を示唆した。脊椎動物の発生過程では57対の咽頭弓が、発生の進行とともに頭側から尾側に向かって順次作られて行く。各咽頭弓は内胚葉と外胚葉が接した咽頭嚢および咽頭裂と呼ばれる構造によって区切られており、このようなスリットの周期的な形成が咽頭弓の構造的分節性のもととなっている。マウスのRipply3遺伝子は、分節化予定領域の咽頭内胚葉と咽頭外胚葉でまず強く発現し、その後形成された咽頭嚢とそれに隣接する外胚葉に発現する。より尾側の咽頭内胚葉と外胚葉での発現は強く、各咽頭弓の形成のタイミングに呼応するかのように発現のON/OFFを繰り返していることがin situ hybridizationによる解析から示唆された。そこで本研究は、さらに咽頭弓分節にともなうRipply3の時間的な発現変化を生み出す分子メカニズムを解明することが目的である。昨年度までに作製したRipply3プロモーターGFPトランスジェニックマウスは、咽頭弓の分節化に伴って内胚葉と外胚葉でGFPを特異的に発現し、そして周期的にGFPの発現がON/OFFしながら後方へシフトしていた。この結果から、少なくとも上流6kbの配列内には発現の周期的ON/OFFを制御する因子が作用する配列があると予想された。平成24年度は、この上流6kbをルシフェラーゼレポーターにつなぎ、培養細胞を用いて、Ripply3プロモーターに対する活性化因子として転写因子Tbx1の影響を調べた。その結果、Tbx1は量依存的にRipply3のプロモーター活性を上昇させることを見いだした。また、Ripply3をTbx1と共発現させると量依存的にRipply3自身のプロモーター活性を抑制した。これらの結果は、Tbx1によるRipply3の活性化とRipply3自身のネガティブフィードバックによる発現調節機構が存在する可能性が示唆された。脊椎動物の胎児期に現れる咽頭弓は、発生に伴い頭部側から尾部側へと順次分節形成が進行する。マウスのRipply3遺伝子は、咽頭弓分節化予定領域の内胚葉と外胚葉でまず強く発現し、分節化が起こるとしだいに減弱し、次の分節予定域で再び発現が強まるといった特徴的な周期性を示す。本研究は、咽頭弓分節に伴うRipply3の時空間的な発現変化を生み出す分子メカニズムを解明することが目的である。昨年度までの解析において、作製したRipply3プロモーターEGFPトランスジェニック(Tg)マウスでは、まず第1咽頭弓の分節化に伴い外胚葉と内胚葉でEGFPが特異的に発現し、そして周期的にEGFPの発現がOn/Offしながら後方の咽頭弓へシフトすることを見出した。また、このプロモーター配列をルシフェラーゼレポーターにつなぎ、培養細胞を用いてRipply3プロモーターに対する転写因子の影響を調べた結果、Tbx1は量依存的にプロモーター活性を上昇させた。一方、Ripply3は量依存的にTbx1の転写活性を抑制したことから、Ripply3の発現を調節するネガティブフィードバック機構が存在することが示唆された。平成25年度は、Ripply3 KOマウスとRipply3プロモーターEGFPTgマウスの複合変異体を作製し、in vivoにおいてRipply3プロモーターの活性制御機構を解析した。その結果、予想どおり野生型に比べてRipply3 KOマウスの遺伝的背景では、EGFPの発現は咽頭弓分節に伴ったスリット状にみえず、むしろ後方の咽頭弓分節予定領域まで連続して広がり、蛍光強度も上昇していた。また、Tbx1 KOマウスではRipply3の発現低下が観察されることを考え合わせると、in vivoにおいてRipply3の発現周期性が自身のネガティブフィードバックにより調節されている可能性が示唆された。

マウスのRipply3遺伝子は、咽頭弓分節化予定領域の内胚葉と外胚葉でまず強く発現し、その後形成された咽頭嚢とそれに隣接する外胚葉に発現し、そして徐々に消失する。このようにRipply3の発現は、各咽頭弓の形成のタイミングに呼応するかのように発現のON/OFFを繰り返していることがin situ hybridizationによる解析からわかってきた。そこで本研究は、咽頭弓分節にともなうRipply3の周期的な発現変化を生み出す分子メカニズムを解明することが目的である。平成23年度は、マウスRipply3遺伝子のプロモーター配列にGFPをつないだトランスジェニックマウスを作製し、咽頭弓の内胚葉と外胚葉でGFPを特異的に発現するラインを複数系統スクリーニングした。これらトランスジェニックマウス胚において、咽頭弓分節にともないGFPの発現が周期的に後方へシフトしていくことが観察できた。現在、マウス胚の全胚培養系の確立を試みており、今後その系を用いてGFPシグナルの時空間的変動をタイムラプス蛍光顕微鏡を用いて追跡する。またRipply3 mRNAに対するin situ hybridizationを体節数に応じて細かいステージで行ったところ、Ripply3 mRNAの発現とGFPタンパク質の発現に若干のタイムラグがあることがわかった。以上の結果から、少なくともRipply3の上流域には発現の周期的ON/OFFを制御する因子が作用する配列があると予想された。平成24年度までの解析から、マウスRipply3遺伝子のプロモーター配列(6kb内)にRipply3の周期的な発現のON/OFFを制御する領域があることが示唆された。このプロモーター領域をルシフェラーゼにつなぎ、培養細胞系を用いてレポーターアッセイを行ったところ、Ripply3の発現を直接的に活性化する転写因子の候補としてTbx1を見出した。またRipply3による自身のプロモーターに対するネガティブフィードバックによる発現抑制があることが示唆された。このことは、Ripply3遺伝子の発現活性化と抑制に関わる分子機構の解明につながると期待される。このレポーターシステムは、今後、Tbx1の結合配列の絞り込みのみならず、新たな転写制御因子複合体の解析にも有用である。また、RIpply3のプロモーター活性はGFPトランスジェニックマウスの蛍光として組織、個体レベルでも解析可能であり、in vivoのデータと合わせて実験データを検証していくシステムがすでにできあがっている。以上から、研究の進行状況はおおむね順調と考えられる。マウスRipply3遺伝子のプロモーター配列にGFPをつないだトランスジェニックマウスを作製し、咽頭弓の内胚葉と外胚葉でGFPを特異的に発現するラインを得たことにより、ライブイメージングが可能となった。また、Ripply3の上流プロモーター配列にRipply3の周期的な発現のON/OFFを制御する領域があることが示唆されたことで、制御因子を絞り込む足掛かりができた。今後、in vivoおよびin vitroの系を用いてRipply3の発現に関わる分子計時機構を解明できる。ゆえに、本計画はおおむね順調に進んでいると考えられる。
超高齢期における慢性腎臓病のバイオマーカーと臨床的意義の検討

本研究では超高齢者におけるCKDの臨床的意義および診断バイオマーカーを明らかにする目的で、85歳以上の超高齢者542名からなるコホート(本邦最大規模)を確立した。血清シスタチンC濃度、クレアチニン濃度から推定糸球体濾過率(eGFR)を計算した結果、いずれも微量アルブミン尿、貧血、副甲状腺ホルモンと関連したが、血清シスタチン濃度によるeGFRのみが頸動脈プラークと有意な関連を示し、超高齢者のCKDのバイオマーカーおよび心血管性疾患予測因子として有用である可能性が示された。本研究は超高齢者の心身の健康、QOLに資する要因を医学領域、心理社会学領域、環境領域から多面的に研究する包括的疫学調査において、特に超高齢者のCKDの評価法とその臨床的意義に焦点を当て検討する3年間の前向きコホート研究である。平成21年度は85歳以上高齢者の磯調査を行い、500名のコホートを確立することを目標としたが、この年代の調査がわが国にはほとんど行われていなかったこと、世界的な社会の高齢化に対る関心が高まっていることなどから本調査への国民の期待が大きく、新聞(東京新聞、地方新聞)に関連記事が掲載されるなどの効果もあり、目標を上回る542名の基礎調査を完了した。85歳以上高齢者の疫学調査は海外でも近年さかんになってきているが、ほとんどの調査が高齢者の自宅で行う訪問調査であり、高度な医療機器を使った測定や歯科調査は行われていない。本研究では調査会場である病院と高齢者自宅までの送迎を確保したことにより参加者542名のうち、460名が病院で調査を受けることができた。これにより、世界で初めてこの年代の頚動脈エコー法による動脈硬化評価、歯科医による詳細な口腔機能評価に成功し、平成22年以降、この解析を進める。本研究は85歳以上の一般住民を病院で調査した点、歯科、心理学者、老年医学が共同して包括的な評価を行った点が画期的であり、方法論(Study protocol)についての論文を投稿中である(BMC Geriatrics)。本研究は超高齢者(85歳以上)の心身の健康、QOLに資する要因を医学領域、心理社会学領域、環境領域から多面的に研究する包括的疫学調査において、特に超高齢者のCKDの評価法とその臨床的意義に焦点を当て検討する3年間の前向きコホート研究である。平成21年12月までに542名の超高齢者の基礎調査を終了した。これまでこの年代の疫学調査は世界的に見ても限られており、特に我が国においては最大規模の調査となった。慢性腎臓病のバイオマーカーの解析を行うに際し、まず調査が適切な方法論に基づいて科学的根拠(エビデンス)を生み出しうるものであることを国内外に示す必要があり、今年度は調査の方法論について論文にまとめた(Arai Y, et al. BMC Geriatrics 2010;10:35)。また、最初の236名について、慢性腎臓病で低下することが知られている血清ビタミンD濃度と病歴、運動・食習慣、血液生化学指標の関連を検討し、ビタミンD濃度が脂ののった魚の摂取量と有意な関連を示すことを明らかにした(Sumiya C, et al. J AM Geriatr Soc 2010;58:242)。また、慢性腎臓病のバイオマーカーであり、動脈硬化性疾患の危険因子でもあるシスタチンC濃度が85歳以上の高齢者においても慢性腎臓病の指標として有用であることを示した(日本腎臓病学会にてポスター発表)。これらの解析は平成21年7月までに基礎調査が終了した236例について行われた。平成22年9月には542名全体のデーターベースが完了し、この集団の解析において口腔機能と全身の骨格筋機能、血液バイオマーカーの関連を検討した論文、および食事調査票を用いた多価不飽和脂肪酸摂取量評価の妥当性について検討した論文を投稿中である本年度は初年度に行った基礎調査結果の横断的解析および、超高齢者コホート542名の電話、手紙によるフォローアップ調査(2年目)、一部の対象者に対して3年後の追跡調査(基礎調査と同じ方法による)を行った。1.横断的解析慢性腎臓病(CKD)のバイオマーカーとして血清クレアチニン、シスタチンC濃度を測定し、推定糸球体濾過率(eGFR)を算出して、微量アルブミン尿、炎症マーカー、頸動脈硬化との関連を検討した。対象者を(1)eGFR60mL/min/1.73m^2以上、(2)45-59.9mL/min/1.73m^2,(3)45mL/min/1.73m^2未満の3群に分けて医学パラメータの比較を行った。eGFRCystCが45ml/min/1.73m^2未満の群は高齢で、ADL障害率が高く、冠動脈疾患や高血圧の罹患率が高かった。

シスタチンCから計算したeGFR(eGFR_<CystC>)が45ml/min/1.73m^2未満の群はHDL-Cが低く、HbA1cが高く、微量アルブミン尿(ACR30mg/g以上)の頻度が高かった。また、intactPTHおよびカルシウム濃度が高く、ヘモグロビンが低かった。LDL-C、リン濃度には有意な差は見られなかった。eGFR_<CystC>が低下しCKDが高度となるほど頸動脈プラーク数、プラークスコアが有意に高くなり、頸動脈硬化の進行度と関連することが明らかとなった。一方、CrにもとづくCKDも同様の傾向は認めるものの有意ではなかった。これらの結果は欧文雑誌に投稿したが、アクセプトには至らなかった。2.追跡調査結果基礎調査から2年後の追跡調査(総死亡、死因別死亡)を手紙、電話によって行った。542名のうち、2年後に生存していたものは467名(86.2%)、死亡62名(11.4%)、脱落13名(2.4%)であった。また、平成20年度に基礎調査を行った約100名については3年後の追跡調査を行った。縦断的解析は全体の追跡調査が終了する平成24年末以降に行う予定である。
直鎖状ポリユビキチン鎖による細胞生死の運命決定機構の解明

細胞死が顕著に抑制されるHOIL-1L Ubリガーゼ変異体発現細胞を用いてLUBACの抗細胞死に働く新規基質の同定を試みる。またHOIL-1L Ubリガーゼ変異体発現細胞とOTULIN欠損細胞の比較を行う。前者細胞では細胞内の直鎖量は増加し、細胞死が抑制されるが、後者では直鎖は増加するものの細胞死は何故か亢進することがわかっている。両者の違いはLUBAC自身の直鎖化の有無が大きいと考えられるので、LUBAC自身の直鎖化による細胞死制御メカニズムを明らかにする。これらの解析を通して、直鎖化される基質により細胞の生死が決定されるメカニズムを探索する。
味細胞内情報伝達機構の解明

電気生理学的には薬物注入法などにより、甘味、苦味応答の発生機構は推定されているが、実際にどのような二次伝達物質の働きで味細胞内情報伝達がなされているのかを解明するために、ラジオイムノアッセイ法を用いて、マウス舌を蒸留水および各種味溶液で刺激を行い、血管潅流でグルタ-ル固定、舌を切りだし、ホモゲナイズして各舌中に含まれる^<125>|ーcーAMP,^<125>|ーcーGMP,^3HーIP_3を測定した。その結果、cーGMPは蔗糖刺激によって蒸留水刺激の約2倍に増加するが、他の味刺激ではほとんど変化しないことが、cーAMPは蔗糖刺激でわずかに増加するが他の味刺激とほとんど変らないことが、IP_3は苦み刺激で蒸留水刺激の約2.5倍に、また食塩刺激では約0.8倍、蔗糖刺激では約2倍というような変化をすることが解った。これらの測定結果には舌の筋組織等に含まれる分も多量に存在しているので、今回は単一乳頭(味雷)を用いてさらに細かい測定をした。そこで、ラジオライムノアッセイ法を用いて、マウス舌を蒸留水、蔗糖液、食塩液、キニ-ネ液、塩酸液刺激を行い、その際に乳頭を切り出してcーAMP,cーGMP,IP_3の濃度を測定してみた。舌は各溶液で刺激しながら血管潅流によりグルタ-ル固定し、乳頭を切りだし、ホモゲナイズして各標本中に含まれる^<125>|cーAMP,^<125>|ーcーGMP,^3HーIP_3を測定してみた。その結果、cーGMPは蔗糖刺激によって蒸留水刺激の約2倍に増加するが、他の味刺激ではほとんど変化しないことが解かった。cーAMPは蔗糖刺激でも蒸留水でも他の味刺激とほとんど変らないことが解った。IP_3は特にキニ-ネ(苦み)刺激で蒸留水刺激の約2倍に、しかし食塩刺激、蔗糖刺激では蒸留水の場合とほとんど変化のないことが解った。従って蔗糖応答発生にはcーGMPがまた苦味応答発生にはIP_3が関与しているらしいことが強く推定される結果が得られた。味細胞は各種味刺激に対して様々な応答を発生するが、確実な細胞内記録では蔗糖刺激に対して脱分極性電位変化を発生し、その際膜低抗は増大する。このことは細胞内薬物注入によりcーGMPが細胞内二次伝達物質として働き、TEA注入によって膜のK^+イオン透過性が減少することから、蔗糖が味細胞受容膜に吸着することにより細胞内二次伝達物質としてのcーGMP濃度が増加して膜のK^+イオンの透過性を減少させると推定された。さらにIP_3。細胞内に注入すると蔗糖応答、苦味応答とよく似た電位変化が記録できるが、これは多分苦味応答と関連していると電気生理学的には強く推定される。実際に味細胞内でIP_3濃度が苦味刺激によって増加するかどうかは不明である。

同様にcーGMP濃度も実際に蔗糖刺激で増加するかどうかは不明である。それらの濃度が本当に増加するかどうかを知る必要がある。そこで、ラジオイムノアッセイ法を用いて、マウス舌を蒸留水、蔗糖液、食塩液、キニ-ネ液、塩酸液刺激を行い、その際のcーAMP,cーGMP,IP_3の濃度を測定してみた。舌は各溶液で刺激しながら血管潅流によりグルタ-ル固定し、舌を切りだし、ホモゲナイズして各舌中に含まれる^<125>IーcーAMP, ^<125>IーcーGMP, ^3HーIP_3を測定してみた。その結果、cーGMPは蔗糖刺激によって蒸留水刺激の約2倍に増加するが、他の味刺激ではほとんど変化しないことが解った。cーAMPは蔗糖刺激でわずかに増加するが他の味刺激とほとんど変らないことが解った。IP_3は特にキニ-ネ(苦み)刺激で蒸留水刺激の約2.5倍に、また食塩刺激では約0.8倍、蔗糖刺激では約0.6倍、塩酸刺激では約2倍というような変化をすることが解った。従って蔗糖応答発生にはcーGMPがまた苦味応答発生にはIP_3が関与しているらしいことが強く推定されるが、これらの測定結果には舌の筋組織等に含まれる分も多量に存在しているので、今後は単一乳頭もしくは味蕾を用いてさらに細かい測定をする必要がある。味細胞は各種味刺激に対して様々な応答を発生するが、確実な細胞内記録では蔗糖刺激に対して脱分極性電位変化を発生し、その際膜低抗は増大する。このことは細胞内薬物注入によりcーGMPが細胞内二次伝達物質として働き、TEA注入によって膜のK^+イオン透過性が減少することから、蔗糖が味細胞受容膜に吸着することにより細胞内二次伝達物質としてのcーGMP濃度が増加して膜のK^+イオンの透過性を減少させると推定された。さらにIP_3を細胞内に注入すると蔗糖応答,苦味応答とよく似た電位変化が記録できるが、これは多分苦味応答と関連していると電気生理学的には強く推定される。実際に味細胞内でIP_3濃度が苦味刺激によって増加することや、cーGMP濃度も実際に蔗糖刺激で増加するかことは舌全体をホモゲナイズするRI法により判明した。これらの測定結果には舌の筋組織等に含まれる分も多量に存在しているので、今回は単一乳頭(味雷)を用いてさらに細かい測定をした。そこで、ラジオイムノアッセイ法を用いて、マウス舌を蒸留水、蔗糖液、食塩液、キニ-ネ液、塩酸液刺激を行い、その際に乳頭を切り出してcーAMP,cーGMP,IP_3の濃度を測定してみた。舌は各容液で刺激しながら血管潅流によりグルタ-ル固定し、乳頭を切りだし、ホモゲナイズして各標本中に含まれる^<125>IーcーAMP, ^<125>IーcーGMP,3HーIP_3を測定してみた。cーAMPは蔗糖刺激でも蒸留水でも他の味刺激とほとんど変らないことが解った。IP_3は特にキニ-ネ(苦み)刺激で蒸留水刺激の約2倍に、しかし食塩刺激、蔗糖刺激では蒸留水の場合とほとんど変化のないことが解った。従って蔗糖応答発生にはcーGMPがまた苦味応答発生にはIP_3が関与しているらしいことが強く推定される結果が得られた。