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看護学の質的研究論文査読ガイドラインと査読者教育プログラムの開発

本研究は、質的研究方法を用いた看護学の学術論文掲載の量と質の向上のために、英文・和文の質的研究論文を適切に査読できる査読者の養成のための、論文査読ガイドラインと査読者教育プログラム開発を目的とした。質的研究方法を用いた看護学の研究論文は増加しており、結果の共有や統合のために、誌上発表の促進が望まれる。しかし、質的研究論文を査読できる査読者は少なく、査読のポイントや査読コメントの書き方、著者とのコミュニケーションも複雑で長期に渡ることが多い。しかし、わが国には質的研究の査読に関する教育や詳細なガイドラインが存在しない。査読者は、論文を投稿する研究者でもあり、査読者養成は誌上発表される質的研究論文の質の向上に重要な役割を果たすと考えられた。上記の目的のため、ボストンで開催されたInternationa Academy for Nursing Editors(INANE)の年次総会に参加し、創始者であるPeggy Chinn博士と面会した。博士からは、米国で査読者、編集委員、編集委員長のトレーニングをどのように始めたか、トレーニングプログラムの概要と必要性などをインタビューした。日本における査読、編集委員、編集委員長の活動の実情を伝え、今後のトレーニングにおける米国との連携の重要性について合意した。INANEでは、3日間にわたってレベルに応じたワークショップが開催されており、これらにも参加した。特にInternational Author(英語を母国語としない著者)への対応や、査読コメントについては米国の編集委員から質問があり、研究者としての考え方を伝えることができた。Peggy Chinn博士へのインタビュー日程調整のため研究費の繰り越しを行ったが、今年度実施することができた。・国内で発表された質的研究論文に関する、査読プロセスに関する調査を進めることが必要である。・米国の看護系編集委員長が集うINANE年次総会に参加し、引き続き情報収集を進める必要がある。引き続きINANEの年次総会に出席して情報収集を行うとともに、本研究で開発した査読者教育プログラムを共有するためのセミナーを開催予定である。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。海外での情報収集を査読ガイドラインに反映させ、国内の看護学の研究者と共有するためのセミナー開催を予定している。
途上国で家族が行う看護ケアと看護師の役割

途上国の家族と看護師がどのような看護ケアを分担しているのかを明らかにし,国際看護協力のあり方に示唆を与えることを目的として研究を行った。方法は青年海外協力隊員の報告書の分析と面接調査,中国とラオスでの質問紙調査であった。その結果,国によっては看護師が日本と同数程度勤務していても日常生活援助は家族が行い,看護師はそれ以外の診療の補助技術を主に行っていた。出産に関しては家族が産痛緩和ケア,心理的援助を行い,助産師は分娩の経過診断,分娩介助を行っていることが明らかになった。日本人看護師が途上国で国際看護協力を行う際,及び外国人看護師受入れの際の留意点が示唆された。H24年度は前年度に引き続きアジア諸国に派遣された青年海外協力隊隊員138人の報告書の分析を行うとともに、帰国した隊員に面接調査を行い、各国の患者家族と看護師が患者に対して行っているケアについて調査した。その結果、べッドメーキング、清潔ケア、更衣、体位変換、移送、食事介助などの日常生活援助については家族が重要な役割を果たしていることが明らかとなった。一方看護師は創傷ケア、注射、予防接種などを主に行っていた。出産に関しては、家族は産痛緩和ケア、心理的援助を行い、助産師は分娩の経過診断、分娩介助を行っていた。これらの結果については、第27回日本国際保健医療学会(H24年11月)で発表するとともに、第25回ICN4年毎大会(H25年5月メルボルン)で発表申請し、受理された。これらの結果を踏まえて現地調査を計画し、ラオス、インドネシアを候補国として交渉と準備を行った。ラオスについては研究協力病院候補が得られ、病院関係者来日時に直接協議し、研究許可申請の手続きについて確認でき、協力を依頼した。インドネシアについては研究者の一人が研究協力候補の大学及び候補病院を訪問し、関係者と協議して協力の内諾を得た。2か国については研究許可申請書類を関係者の助言を得て作成している。青年海外協力隊員に対する面接調査から得られたデータから、現地調査では構成的面接調査が適していると考えられ、調査項目について研究者間で検討を行った。青年海外協力隊員の提出した定期報告書と派遣された隊員の帰国後の面接調査の更なる分析を行った。それぞれの調査から得られた結果を厚生労働省の新人看護職員の臨床実践能力の向上に関する検討会で示された「看護技術の到達項目」の8の大項目と69の小項目に業務に照合し、家族が行うケアと看護師が行うケアについて把握した。中国に派遣された青年海外協力隊看護職隊員26名(医療機関21名、教育機関5名)の定期報告書123冊の分析の結果、中国では患者の家族が行うケアは「食事援助技術」、「排泄援助技術」、歩行や体位変換などの「活動・休息援助技術」であった。一方看護師が実施する行為については注射や点滴などの「与薬の技術」が多く、さらに創部の縫合、動脈採血などの日本の看護師が行わない行為を行っていることが明らかとなった。この結果については第28回日本国際保健医療学会(H25.11)にて発表した。これらをもとに現地調査案を作成し、中国にいる研究協力者が病院内での予備調査を試み、患者家族48名、看護師81名の協力を得た。その結果、家族と看護師がそれぞれ担っている項目については厚生労働省の検討会で提示された「看護技術の到達項目」を適用して分析でき、他国でもほぼ適用できることが推測できた。現地調査としてラオス国およびインドネシア国保健省の倫理審査を申請し、許可を得るまでに時間を要したが、ラオスについては3月下旬に許可が下り、研究期間を延長し、26年5月に実施することになった。研究者らの先行研究では、途上国には日本と異なる看護技術が存在していることが明らかとなったが、同時に、患者の家族が医療機関内で担っている役割と看護師の役割とが日本におけるそれらと異なることが示唆された。これらを踏まえて、研究者らは途上国における家族が行う看護ケアと看護師の役割を明らかにするために平成23年度は、(1)これまでに雑誌等に公表された途上国の看護に関する文献の収拾を行い、詳細に分析するとともに、(2)アジア諸国13か国で国際看護協力活動を行ってきた青年海外協力隊看護職隊員が作成した定期報告書類から、患者家族が医療機関内で行っている活動および看護師が患者のために行っていること及び行っていないことについての記述部分を抽出し、分析を行った。さらに群馬大学医学部疫学倫理審査委員会の承認を得た後、(3)途上国の医療機関での国際看護協力を実施したことのある、又は研究その他の目的で、途上国で家族や看護師が患者のために行っている看護ケアを知る機会のあった日本人看護職者に対する面接調査を行った。

分析の参考とするため、中南米での国際看護協力活動を経験した青年海外協力隊員にも面接により聞き取り調査を行い、これまでに合計7人の面接調査を行った。その結果、国によっては看護師数が日本と同等程度勤務していても、日常生活援助については家族に任せており、看護師はそれ以外の業務を中心に行っている場合があることが明らかとなった。今後さらに面接対象者を増やすことによって、これが1つの国のことであるのか、複数の国でみられる現象であるのか明確になり、各国での家族と看護師の役割の日本との共通性および相違点が明らかとなると考えられる。厚生労働省の「新人看護職員の臨床実践能力の向上に関する検討会」報告書に記載された13の大項目と69の小項目から成る「看護実践における技術的側面〔看護技術〕」の項目を参考に構成的質問紙を試作し、現地調査の質問紙案とした。中国の一病院で中国語翻訳した質問紙案を81名の看護師及び48名の患者を対象として予備調査を行った。その結果調査した病院では患者の日常生活援助についてはほぼ家族に委ねられていることがわかり、質問項目の妥当性が確認された。さらにラオス政府の倫理審査委員会の許可を得て、国立病院の看護師を対象として、質問紙調査を行った。質問紙は前述の質問紙の質問項目を英語に翻訳し、そこからラオスの協力者がラオス語に翻訳したものを用いて、100名に質問紙を配布し、97名から回答を得た(回収率97%)が、回答の不備等により、60名の回答についてのみ分析した。その結果25%以上の看護師が「家族が行うケア」と回答した項目は食事援助、排泄援助、活動・休息援助、清潔・衣生活援助、.苦痛の・安楽確保であり、日常生活の援助に関する項目であった。一方、80%以上の看護師が「看護師が行うケア」と回答した項目は、環境調整、呼吸・循環を整える、創傷管理、与薬、救命救急処置、症状・生体機能管理、感染防止、安全確保であった。看護師は診療の補助に関わる技術を中心に行い,食事、排泄、清潔の援助に関しては家族が役割を担っているのではないかと推察された。この結果は論文として作成し投稿中である。他のアジア諸国での調査が今後の課題である。多くの日本人看護師が途上国で国際協力活動を行い、また途上国の看護師が日本で看護師として働く機会が拡大されつつあるが、途上国での看護活動にお日本で働くいて看護師の担う役割は日本とは異な点があることを視野に入れて看護活動を行うこと、および外国人看護師への理解が必要であると考える。国際看護学現地調査を行うにあたって、各国の研究許可を得るための手続きが非常に煩雑であるため、当初計画より時間を要している。かねてよりラオス国およびインドネシア国での現地調査を計画して準備し、倫理申請を行っていたが、当初の予定より時間がかかり、ラオス国については平成26年3月に許可がおり、インドネシア国については依然として許可を待っている状態であるため、現地調査が平成25年度内に実施できなかった。文献および青年海外協力隊員による報告書の分析、および面接結果に基づいて、現地調査の準備を始める予定であり、平成23年度の現地調査の候補国を中国として現地側と折衝していた。しかし最終的に調査予定地の省の外事部の許可がおりなかったこと、及び日中関係に関する日本人政治家の発言に中国側が敏感に反応していた時期でもあり、他に訪問許可の内諾を得ていた医療機関があったが、23年度内の渡航は中止することにした。そのため23年度に予定していた現地調査(調査の準備)が行えなかった。
イギリス・ロマン主義文学における「オリエント」の包摂と「ヨーロッパ」文学の創出

本研究では、イギリス・ロマン派文学がオリエントを包摂することによって、近代ヨーロッパ文学という革新的詩作を創出する契機を得たことを明らかにした。具体的には、明治時代の日本というオリエントにおいて、イギリス・ロマン主義文学が受容された際に顕著になった東西の文学的、美学的差異は、イギリス・ロマン主義文学が主客の二項対立的な認識構造における主体的自律的自己をその存立要件とすることであった。しかし、キーツの詩作におけるオリエントのイメージは、ヨーロッパとオリエントが遭遇し融合する主客混交の世界観によって形成されており、その混交性こそが知の自由な循環を促す革新的詩作をもたらしたことを明らかにした。本年度は、ロマン主義の詩人たちが新たなる「ヨーロッパ」文学の形成という視座から、近代ヨーロッパ文学の創出を模索したことを考察した。特にシェリーらに信奉された自由主義思想とヨーロッパという地理的空間との関係をダンテの『神曲』を通して考察し、ロマン派第二世代の詩人たちが目指した「ヨーロッパ」文学の意義を明らかにした。イタリアの批評家ウーゴ・フォスコロによる批評に顕著なように、ダンテはヨーロッパ文学史の枠組みの中で捉えられ、ダンテの近代性は近代ヨーロッパ文学の創始をなすと考えられた。ダンテの近代性とは、コールリッジやシェリングが評価するように、詩人の自己とその内面的感情の表出に内在し、さらにその自己の感情と情熱の表出こそが『神曲』の全体的統一を支えていることであった。『神曲』において具現化される、こうした個人的自己と全体性、個別と普遍の共存は、国家間における国力の拮抗や思想の対立を宥和へと導き、普遍的理性によって連帯する個々人の平等な存在のあり方を示すものであった。ロマン派第二世代の詩人たちは、ダンテの詩が呈示する、個別と普遍との間を往還する知の循環を「ヨーロッパ」という地理的空間に応用し、そこで生み出される近代ヨーロッパ文学の可能性を模索したことを具体的に考察した。本年度はまた、「オリエント」とロマン主義文学との関係を考察するために、明治の日本におけるキーツの詩の受容についての論考をまとめた。西洋の言説によって形成されたオリエントではなく、オリエントの場においていかに西洋が受容されたかという観点から「オリエント」の考察を行った。特に、日本の近代詩人たちが、中国由来の伝統的な美学的規範を捨象し、外界と自己という二分化された西洋的美学的視点の中で、詩人の内的世界が強い感情の発露とともに拡張し、外界とのダイナミックな融合を果たす場において、詩的「風景」を生み出すことを論じた。本年度の研究においては、以下の2点についての研究成果を得た。まず、昨年度より継続するオリエントの側における西洋文学の受容についての考察を深めた。特に明治時代の日本の詩歌において、イギリス・ロマン派の詩が受容された際に、当時の詩人たちは、漢文脈の中で涵養されてきた、風景の中に埋没する自己を、外界を歌うために自律した自己として立ち上げるという認識の変容を経験し、ロマン主義的な「風景」を成立させるに至ったことを明らかにした。すなわち、イギリス・ロマン主義文学と明治期の日本というオリエントの文学との相違は、漢文学と西洋文学の成り立ちの相違を反映し、自己と外界という二項対立構造についての認識や、社会と個人との関係という認識における相違であったことを明らかにした。次に、イギリスの文学的伝統にイタリアの文学を移植するという、イギリス・ロマン派第二世代の詩人たちの保持した創造性について考察を深めた。彼らの創造性は、「イギリスらしさ」にとっての脅威となり得えたが、敢えて、汎ヨーロッパ的知の興隆を希求し、新しい近代ヨーロッパ文学の創出を図ったのである。特に、キーツの詩において、党派や国の美学的趣味の相違を超え、哲学的知を共有し、近代ヨーロッパ文学を立ち上げていくという理念は、当時の医学的知識に基づく、循環する感覚刺激と相互に作用する神経組織という身体空間と符号することになる。汎ヨーロッパ的知の哲学が医学的、身体的知の体系と交錯する時、全ての人間に黙約的備わった身体というリベラルな空間性と、循環する神経組織によって可能になる共感的コミュニケーションの力とが、革新的な創造性を生み出すことを明らかにした。本年度は、昨年度北米ロマン派学会の国際大会Romantic Connections (於東京大学)において口頭発表した論文が、欧米のロマン派研究を牽引する電子ジャーナルであるRomantic Circlesに掲載されることが決定し、大きな成果を残すことができた。また、英国のロマン派学会の国際大会Romantic Imprints (Cardiff University, 16 July)において、口頭発表を行い、国際学会での発表、国際レベルの学術誌での論文刊行という成果は、計画をしていた達成度以上に進展しているといえる。本年度は、これまでの研究において明らかにしてきた、ロマン派詩人たちの模索した近代「ヨーロッパ」文学の創出という観点と、イギリス・ロマン主義文学がオリエントに与えた影響という観点をさらに発展させ、イギリス・ロマン主義文学がいかに「オリエント」をレトリックとして援用し、詩的革新性をどのように打ち出したかについて明らかにした。これまでの研究においては、オリエントや、ヨーロッパのオリエントともいえるイタリアを含む地理的空間において、知の自由な循環を希求する、近代ヨーロッパ文学の創出を目指したロマン主義文学に、その革新性を見出した。さらに、オリエントとしての19世紀日本において、イギリス・ロマン主義文学がどのように大きな影響力をもって受容されていったかについて明らかにすることによって、ロマン主義文学の革新性を浮き彫りにした。

したがって、本年度は、オリエントとイギリス・ロマン主義文学の関係を捉える際に、革新性という要素を鍵に、イギリス・ロマン主義文学がいかに「オリエント」を包摂していったかについて明らかにした。特に本年度は、キーツの詩においてオリエントとは、イギリスの狭隘な空間性を超え、伝統的な美学的規範を逸脱する、過剰ともいえる奔放なイメージを獲得するための場であったことを明らかにした。具体的には、キーツの詩にみるオリエントは、ヨーロッパという優位に立つ視座から、占有し、自己定位のために眺めるという、オリエンタリスト的視点によってのみ成立する場ではなかった。そうした視点とは対照的に、キーツのオリエントとは、ヨーロッパとオリエントが遭遇し融合するという異種混交の世界観を保持する新しい詩的イメージを提供する場として機能し、その猥雑な混交性が、当時正統だと見なされた美学的規範を敢えて侵犯するレトリックとなり、革新性をもたらしたことを明らかにした。本研究では、イギリス・ロマン派文学がオリエントを包摂することによって、近代ヨーロッパ文学という革新的詩作を創出する契機を得たことを明らかにした。具体的には、明治時代の日本というオリエントにおいて、イギリス・ロマン主義文学が受容された際に顕著になった東西の文学的、美学的差異は、イギリス・ロマン主義文学が主客の二項対立的な認識構造における主体的自律的自己をその存立要件とすることであった。しかし、キーツの詩作におけるオリエントのイメージは、ヨーロッパとオリエントが遭遇し融合する主客混交の世界観によって形成されており、その混交性こそが知の自由な循環を促す革新的詩作をもたらしたことを明らかにした。本年度は、ロマン主義文学とオリエントとの関係を考察した論文「風景の創出ー日本近代詩におけるキーツの影響」を北米ロマン派学会の国際大会Romantic Connections (於東京大学、2014年6月15日)にて口頭発表をし、その論考が優秀な論文として評価され、欧米のロマン派研究において最新の研究内容と高いレベルを維持するRomantic Circlesという電子媒体の論説集に今後掲載される予定であり、初年度より、国際学会での発表、国際レベルの学術誌への論文投稿という成果は、計画をしていた達成度以上に進展しているといえる。これまでの研究において、「オリエント」文学とロマン主義文学との関係、近代ヨーロッパ文学の創出といったテーマについての考察を行ってきたが、最終年度は、ロマン派文学における「オリエント」の包摂の在り方、またヨーロッパの内なる「オリエント」としてのイタリア文学の受容の在り方との関連性についての考察を行う予定である。そして、こうした研究の最終成果を、沖縄イギリス・ロマン派文学研究会と九州イギリス・ロマン派文学研究会の合同研究会にて発表し、それをもとに国内外の学術誌にて論文として発表する予定である。
環境適応反応の中枢神経機構における脳内サイトカインの役割

本研究では、生体の環境適応反応の制御機構における脳内サイトカインの役割とその重要性について、3年間(平成8年度10年度)にわたり研究を行い、以下の点が明らかになった。(1)脳内のサイトカインは、感染などの炎症のみならず、拘束ストレスや暑熱寒冷暴露などの非炎症性ストレスによっても産生が増強されることを、ノーザンブロットや定量的PCR法で明らかにした。(2)温度ストレスによって視床下部視索前野(MPO)で産生されるc-fosタンパクは、おそらく体温調節に関与する脳内物質をコードする遺伝子の転写に影響を与えることによって、体温を上昇させる方向に作用することを、c-fo mRNAに対するアンチセンスオリゴDNAを用いて明らかにした。(3)脾臓のナチュラルキラー(NK)細胞活性を抑制性に制御する脾臓交感神経の活動(SSNA)は、これまで明らかにしたMPOや室傍核(PVN)以外に、視床下部外側野(LHA)や腹内側核(VMH)によっても部位特異的に影響される。また、サイトカインの二字媒介物質であるプロスタグランディンE2(PGE2)、及びそれに引き続いて活性化されるCRF系は、SSNAを上昇させることを明らかにした。(4)拘束ストレスによる脾臓NK細胞活性の低下は、脳内で産生されるIL-1βの作用を介していることを示した。(5) Tリンパ球依存性の遅延型過敏症であるアレルギー性接触性皮膚炎は、副腎皮質ホルモン及び侵害受容神経線維の存在によって、発症は抑制されるが免疫反応の終結はむしろ遅延した。(6) TNF-α、及びIL-1βは、視床下部や脳幹の迷走神経節前ニューロンに作用して、ニューロン活動を変化させるとこから、体温調整や摂食を制御していると考えられた。(7)海馬スライス標本において、IL-6は長期増強現象を抑制するが、その作用機序の一つとして、グルタミン酸による自発性興奮性内向き電流の振幅の低下があると考えられた。(8)急性単離したMPOニューロンにおいて、グルタミン酸はNMDA受容体を介して流入したCa^<2+>によって活性化される外向きのK^+電流(Ca^<2+>依存性K^+電流)を賦活化した。(9)マウス海馬スライスにおいて、Stem Cell Factor(SCF)は、おそらくアラキドン酸やPGE2などの逆行性神経伝導物質の産生を介して、苔状線維-CA3回路におけるペアードパルスファシリテーションに、テタヌス刺激を加えた時と同様の変化を起させることを示した。1.脳内サイトカイン産生促進因子の解析:マウスに2時間の拘束ストレスを加え、直後に脳を大脳皮質、海馬、視床下部のブロックに分け、ノーザンブロッティング法でインターフェロンα(IFN α)のmRNAを検出したところ、海馬で明らかにIFN αmRNAの発現が増加していた。2.サイトカイン及びその産生制御因子によって発現する環境適応反応の解析:(1)ラットc-fos蛋白のmRNAにおいて開始コドン領域を含む

15塩基に対してホスホロチオエイト化したアンチセンスオリゴDNA(AOD)を作成した後、FITCによる蛍光標識を行い、ラットの内側視索前野(MPO)に微量注入して、3、6、12時間後に脳を取りだして検索したところ、3時間後にはAODがニューロン内に取り込まれているのを確認した。AOD注入によって、行動学的な変化は特になかった。(2)ラット両側海馬の背側部(CA1領域)にIFN αを微量注入したところ、モリスの水迷路テストにおいて、コントロール群と比較して有意に空間認知学習が低下していた。(3)脾臓交感神経の活動は、脳内プロスタグランディンE2→CRFニューロンの活性化を介して増強することが明らかになった。3.サイトカイン及びその二次的産物の神経細胞に対する作用機序:(1)バイブレーション法によって急性単離したMPOニューロンにおいて、保持電位を-60mVにした時にNMDAによって誘発される内向き電流は、IFN αの同時投与によって影響を受けなかった。(2)ラット海馬のスライス標本を用い、Schaffer側枝-CA1回路のテタヌス刺激による長期増強(LTP)現象が、IL-6をテタヌス刺激の5分前から10分間投与しておくと、IL-6受容体を介して著明に抑制されることを明らかにした。IL-6は、テスト刺激に対する応答自体、及びLTP成立後には、作用がなかった。本研究の目的は、環境適応反応の中枢神経機構における情報伝達物質としての脳内サイトカインの重要性について、(1)脳内サイトカイン産生系に対する環境ストレスの影響、(2)脳内サイトカインによって発現する環境ストレス適応反応(体温調節、免疫機能)の神経生理学的解析、およびび(3)脳内サイトカインの中枢神経細胞に対する作用機序の細胞レベルでの解析、などの点について検討することである。本年度は、次の4点を明らかにした。(1)ラットに拘束ストレスを与え、経時的に脳を取りだし、海馬、視床下部、および下垂体のIL-1βmRNAを定量的PCR法にて測定したところ、拘束開始後30分から、視床下部および下垂体でIL-1βmRNAの発現が増加することを明らかにした。(2)マウスに1時間の拘束ストレスを加えたときの脾臓ナチュラルキラー細胞活性の低下が、脳室内IL-1β中和抗体の前投与によって阻害されることから、拘束ストレスによる細胞性免疫抑制機序の一つとして、脳内IL-1βの産生があることを明らかにした。(3)ラットc-fos蛋白のmRNAにおいて開始コドン領域を含む15塩基に対してホスホロチオエイト化したアンチセンスオリゴDNA(AOD)をラットの内側視索前野(MPO)に微量注入し、2時間の暑熱(室温33°C)、および寒冷(5°C)暴露したところ、センスオリゴDNA投与群と比較して、暑熱暴露による体温の上昇が抑制され、また寒冷暴露による体温低下がさらに強く起こることを明らかにした。(4)マウス海馬のスライス標本を用い、スライスパッチ法によるCA1領域錐体細胞の興奮性シナプス電流(EPSC)を記録しながら、マウスIL-6を潅流投与すると、EPSCの振幅が減少することを明らかにした。さらに、テトロドトキシン投与で得られるミニチュアEPSCに対しても、IL-6が同様の作用を持つことを明らかにした。
ガン特異的TCR遺伝子を簡便・迅速に取得するシステムの構築

TCR遺伝子治療においては、いかにして個々の患者から迅速にガン特異的TCR遺伝子を取得するかが重要な課題の1つである。本研究では「ガン特異的TCR遺伝子を簡便・迅速に取得するシステムの構築」を目的として研究を行った。初年度は、単一T細胞からTCR cDNAを効率よく簡便に増幅するために、One-step multiplex RT-PCRを用いた方法を確立した。これにより、ヒトおよびマウスの単一T細胞から、80%以上の効率でTCRαβcDNAの増幅が可能となった。また、TCRの機能を迅速に解析するために遺伝子改変細胞(293T-Luc)を作製した。この細胞を用いたルシフェラーゼ・レポーターアッセイにより、最短4日でTCRの抗原特異性を評価することが可能となった。また、C57BL/6マウスのB16F10メラノーマ腫瘍浸潤T細胞(TIL)を取得し、それらから我々のPCR法により迅速・簡便にTCR cDNAの増幅が可能であることを確認した。次年度は、5匹の担癌マウスから取得したCD8+CD137+ TIL由来TCR遺伝子(13種類)をレトロウイルスベクターを用いてマウス脾臓由来のT細胞に遺伝子導入した。そして、そのT細胞とB16F10を共培養し細胞傷害活性を検討した。その結果、9種類のTCR遺伝子導入T細胞においてB16F10に対する細胞障害活性が認められらた。次に、ルシフェラーゼを恒常的に発現するB16F10細胞株B16F10-Lucを作成し、この細胞を用いてマウスの肺転移モデルによりTCRの細胞傷害活性能を評価した。in vitroで細胞障害活性の高かった2種類のTCR遺伝子導入細胞T細胞を用いてB16F10-Lucの肺転移を、5匹のマウスで解析した。その結果、2種類のTCR遺伝子導入細胞T細胞はコントロールに比べ優位にB16F10-Lucの肺転移を抑制することが示された。TCR遺伝子治療はガン免疫療法の一種であり、ガン患者から取得したガン細胞特異的TCR遺伝子を用いて、人為的にガン細胞特異的T細胞を作成し、それを患者へ投与することでガン治療を行う。この治療法においては、いかにして個々の患者から迅速にガン特異的TCR遺伝子を取得するかが重要な課題の1つである。そこで、本研究では「ガン特異的TCR遺伝子を簡便・迅速に取得するシステムの構築」を目的としている。27年度は、(1)TCRの遺伝子増幅法の改良、(2)培養細胞を用いたTCR機能評価系の作製、(3)マウスメラノーマ特異的TCR遺伝子の取得。上記の3課題に取り組んだ。(1)単一T細胞から完全なTCRのcDNAを効率よく増幅するために、IMGT(http://www.imgt.org)より、ヒトおよびマウスのTCRの翻訳開始コドンを含むリーダー配列の遺伝子配列を取得して、TCRαおよびβの完全なcDNAの増幅が可能なプライマーのセットを作製した。これらのプライマーセットを用いて、ヒトおよびマウスの単一T細胞から、80%以上の効率でTCRαとβをペアで増幅が可能であることを確認した。(2) TCRの機能をルシフェラーゼ・レポーターアッセイで評価するために、TCRの機能的な発現に必要なCD3複合体、CD8、またTCRの活性化シグナル伝達に必要な分子SYK、NFAT-C2、およびNFAT応答配列-ルシフェラーゼ遺伝子をHEK293T細胞へ遺伝子導入し、それらの安定発現細胞株293T-Lucを作成した。この293T-Luc細胞へ、EBウイルス由来のBRLF1ペプチド抗原に特異的なヒトのTCRを遺伝子導入し、TCRの抗原特異性を評価できることを確認した。また、メラノーマ抗原であるTRP2ペプチド抗原に特異的なマウスのTCRでも、293T-Lucを用いてTCRの抗原特異性が可能であることを確認した。(3) 5匹のC57BL/6の側腹にB16F10メラノーマ細胞を移植して形成させた腫瘍より、腫瘍浸潤T細胞を取得し、(1)で確立した方法を用いて個々の単一T細胞からTCR遺伝子を増幅した。本年度の3つの課題のうち、(1)TCRの遺伝子増幅法の改良、(2)培養細胞を用いた機能評価系の作製、上記の2課題に関しては計画通りに研究が進み、想定していた成果が、ほぼ100%得られている。課題(3)マウスメラノーマ特異的TCR遺伝子の取得に関しては、腫瘍浸潤T細胞からのTCR遺伝子の取得までは完了し、現在クローニングしたTCR遺伝子を課題(2)で作製した細胞へ遺伝子導入し、B16F10メラノーマ細胞に対する特異性の解析を進めているところである。課題(3)に関しては、想定した目標の60%程度まで到達している。以上より、概ね順調に進展していると判断した。

また、TCRの機能を迅速に解析するために遺伝子改変細胞(293T-Luc)を作製した。この細胞を用いたルシフェラーゼ・レポーターアッセイにより、最短4日でTCRの抗原特異性を評価することが可能となった。また、C57BL/6マウスのB16F10メラノーマ腫瘍浸潤T細胞(TIL)を取得し、それらから我々のPCR法により迅速・簡便にTCR cDNAの増幅が可能であることを確認した。次年度は、5匹の担癌マウスから取得したCD8+CD137+ TIL由来TCR遺伝子(13種類)をレトロウイルスベクターを用いてマウス脾臓由来のT細胞に遺伝子導入した。そして、そのT細胞とB16F10を共培養し細胞傷害活性を検討した。その結果、9種類のTCR遺伝子導入T細胞においてB16F10に対する細胞障害活性が認められらた。次に、ルシフェラーゼを恒常的に発現するB16F10細胞株B16F10-Lucを作成し、この細胞を用いてマウスの肺転移モデルによりTCRの細胞傷害活性能を評価した。in vitroで細胞障害活性の高かった2種類のTCR遺伝子導入細胞T細胞を用いてB16F10-Lucの肺転移を、5匹のマウスで解析した。その結果、2種類のTCR遺伝子導入細胞T細胞はコントロールに比べ優位にB16F10-Lucの肺転移を抑制することが示された。ほぼ当初の研究計画の通り研究を推進する。次年度は、引き続き293T-Luc細胞を用いてB16F10移植マウスからクローングしたTCRのB16F10細胞に対する特異性の解析を進める。もし、293T-Luc細胞での抗原特異性の解析が困難な場合には、その他のT細胞株、あるいはマウスの脾臓から調整したT細胞を用いることで、クローニングしたTCRの抗原特異性の解析を行うことを検討する。その後、(1)in vitroにおけるB16F10特異的TCRの細胞傷害活性能の評価、(2)in vivoにおけるB16F10特異的TCRの細胞傷害活性能の評価を行っていく。(1)TCRの遺伝子増幅法の改良。(2)培養細胞を用いた機能評価系構築。上記の課題が順調に進んだ為、それらの実験に購入予定であった試薬等の費用の繰越が生じた。また、課題(3)マウスメラノーマ特異的TCR遺伝子の取得において、293T-Lucを用いた抗原特異性の評価が未完了で継続中であり、それらの実験に必要な試薬類の費用も繰越となっている。次年度も、引き続き遺伝子導入試薬等、研究に必要な試薬の購入が必要となるので、それらの購入を予定している。
世界に通用する日本型品性・品格教育の開発支援

義務教育の9年一貫でよい習慣づくりを,学区を挙げて日本で最初の取り組んでいるA教育委員会の取り組みを,専門家チームで支援し,世界に通用する人づくりを目指した.品格教育への疑問は,専門家チームにより端的な文書で回答した.また,米国の専門家をお招きしてご助言も頂いた.これらの結果,この取り組みは,世界基準でみても優れた点を持つ取り組みであることがわかり,品格教育への基本的な疑問はかなり解消された.義務教育の9年一貫でよい習慣づくりを,学区を挙げて日本で最初の取り組んでいるA教育委員会の取り組みを,専門家チームで支援し,世界に通用する人づくりを目指した.品格教育への疑問は,専門家チームにより端的な文書で回答した.また,米国の専門家をお招きしてご助言も頂いた.これらの結果,この取り組みは,世界基準でみても優れた点を持つ取り組みであることがわかり,品格教育への基本的な疑問はかなり解消された.本研究は世田谷区の教育長の依頼で申請するもので,日本初の品性・品格教育を,21世紀型の国際社会に通用するものにするために,研究者の専門的知識で支援することが目的である。そのための方策として,(1)教員研修会,保護者説明会等,「人格の完成を目指して」の取り組みに関わる行事で普及のため,区内の学校より依頼があれば,品格教育に関する指導・助言をこちらの経費で行う,(2)区が直面した困難さについて,教育心理学,教育哲学,特別支援,視覚伝達デザインの立場から資料・知識提供を行う,(3)米国の専門家をお招きし,世界的な視点で実践のコメントを頂き,アメリカにはないよい点を指摘して頂く等を通して,日本型の品性・品格教育を創ってゆくことであった。区では研究ブロック(中学校とその周辺の小学校)を指定している。そのブロックは,全区で共通の理解の下で取り組みができるような教材,教育方法の開発などに取り組んでいる。そこで我々はその研究指定ブロックとの関係を中心に,教材開発,教育方法について視察させていただいた。加えて,教職員研修会,PTA研修会,中学区での生徒向けの講演会,区の教育説明会等で話をする中で,多くの方に共通して見られる品格教育への誤解,鍵となる考え方が次第に明確になってきた。そこでこれらをわれわれのチームで「品格教育;よい行為の習慣をつくる,もう一つの教育」にまとめ,現在,印刷中となっている。外国人の招聘については,一人分しか予算が確保できなかったこと,春から準備を始めたこと等でスケジュールの調整がうまくゆかず,来年度,お二人を招聘することにした。研究の目的は,日本で最初に学区をあげて取り組む品格教育(character education)を,世界に通用する教育にするための支援を行うことであった。本年度は,米国の専門家をお招きした。昨年度お招きする予定の先生が,都合で来日できなかったので,今年はお二人を同時にお招きすることになった。具体的には,大学で品格教育を教え,教員研修を行っている大学教員の専門家と,全米で品格教育優秀校に選ばれた学校の担当指導主事の2名であった。これらの方に,学区で取り組む品格教育に取り組んで6年になる日本の学校を視察してご意見を頂いた。その際,日本での担当指導主事の方に,今後の課題として感じている点を事前にお伝えし,米国の専門家にお伝えした。また,米国の専門家には,この学区の6年間の取り組みを前もってお伝えすることで,視察が有効な物になるように力を尽くした。これらの事前準備の後,小学校,中学校の視察をさせて頂いた。そして,総評,優れている点,今後の展開のためのアドバイスに加えて,事前に打診のあった,保護者や地域との連携についてご意見を頂いた。これらについては,視察させて頂いた学校と教育委員会に,日本語に翻訳した報告書を届けた。加えて,今後の取り組みの展開に生かせるように,米国での取り組みについて紹介する資料も届けた。実際に,日本にお招きすることができ,日本で当たり前に取り組まれていることが,品格教育の良い教材になることも指摘して頂くことができた。科研費を繰り越したことで,大学で教える理論家と,現場の実践家を同時にお招きすることができた。結果として,日本の教育現場の管理職,教育委員会の方との対話の中で,理論面,実践面での多彩なアイディアを頂くことができた。本研究の目的は,日本で最初に学区を揚げて取り組む品格教育(character education)を,世界に通用する教育にするための支援することであった。品格教育とは,家庭と地域と学校で連携して,民族や就航を超え,人類に共通な徳に関わるよい習慣を子ども達に身につけされる地域連携型の教育活動である。つまり,これが身につけば,世界に通用する教育を行うことにも繋がる。本研究は,ある区の教育長より依頼を受け,この取り組みに教育心理学,道徳教育,特別支援,視覚教育伝達デザインの視点から資料を提供して支援そた。その際,品格教育が本来持っている,国際性を生かし,国際社会で通用するひと作りをおこなうために,米国の専門家をお招きして,世界に通用するひと作りに足らない点,また優れている点を指摘してもらい,義務教育9年間でのひと作りの理論的,実践的な基礎の確立を目指すものである。

具体的には大学で品格教育を教え,教員研修を行っている専門家と,全米で品格教育優秀校に選ばれた学校の担当指導主事の2名である。これらの方に,学区で品格教育に取り組んで6年目になる日本の学校を視察してご意見を頂いた。その際,日本での担当の指導主事の方に,特に今後の課題として感じている点を事前に打診して,米国の専門家にお伝えした。また,米国の専門家の方には,この学区の6年間の取り組みについて翻訳したものをお届けした。これらの事前準備の後,小学校,中学校を視察させていただいた。そして,総評,優れている点,今後の展開のためのアドバイス,加えて,事前に打診のあった,保護者や地域との連携についてご意見を頂いた。これらについては視察させていただいた学校と教育委員会に報告書の翻訳し,今後の取り組みの展開に生かせるように,アメリカの学校の取り組みについての資料も添えてお届けした。昨年度,お招きする方を平成24年度にお招きし,理論家と実践家のお二人に来て頂いた結果,多彩な討論をすることができ,多くの示唆を得ることができた。教育現場への米国専門家の報告も,理論に偏らない,実践的なものとなったと考えている。これらのことから,おおむね順調に進展したと考えている。24年度が最終年度であるため、記入しない。平成24年度に,品格教育に関わるタイプの違うお二人を米国よりお招きしたこと,事前にこちらが聞きたいことをお尋ねしたことで,日本での品格教育の実践については,かなり基本的なことがわかってきた。米国からの視察で,日本の良さもわかってきた。今後は,これらの知見を,どのように,多くの学校に普及して行くか,その方法を考えたい。
CA125とカリクレイン遺伝子定量システムを用いた新規卵巣癌バイオマーカーの開発

本研究は、CA125とカリクレインに着目し、卵巣癌の早期診断や予後の推定に有用な新しいバイオマーカーとして臨床応用することを目的としている。我々は従来CA125遺伝子のクローニングとその解析を行い、その特徴的遺伝子構造を明らかとした。そして既存のCA125抗体OC125およびM11の抗原決定基は、CA125リピートドメインを構成するそれぞれのリピート構造に存在し、そのアッセイシステムはCA125分子の正確な定量には適していないことが示された。そこで、CA125特異的認識部位としてN末端ドメインに着目し、N末端ドメインを標的とするreal time PCR法によるCA125遺伝子定量法を開発し、リピートドメインを標的とするCA125遺伝子発現量と比較検討した。その結果,N末端ドメインを標的とするアッセイの方が早期卵巣癌を高率に検出し、卵巣癌早期診断に有用と考えられた。次に、卵巣癌の進展機構に深く関わるセリンプロテアーゼとして、分泌型セリンプロテアーゼのカリクレイン(KLK)に着目し、正常卵巣および卵巣癌組織におけるKLK5,6,7,8,10,11,14のmRNA発現レベルを検討した。その結果、各カリクレインは,卵巣癌の進展機構に伴い発現変化を示し、卵巣癌予後因子としての有用性も認められた。特に,KLK5、KLK7は卵巣癌の進展に伴い発現上昇し、また、KLK5,KLK11,KLK14はその高発現が卵巣癌予後不良因子となった。このように、カリクレインファミリーは癌細胞から分泌され,癌細胞周囲のproteolytic cascadeの活性化や非活性化を行う複雑なカスケードを形成し、卵巣癌の進展に重要な役割を果たしている。これらのセリンプロテアーゼは卵巣癌の進展や予後を予測する新しいバイオマーカーとなり得るものと考えられる。
レーザー分光による癌細胞遺伝子変異の検出おけるその治療的応用

正常及び癌の培養細胞について、レーザー分光学的手法を用いて、各々の細胞構造の差異を解析した。正常細胞として、線維芽細胞(NIH3T3細胞)を、癌細胞としては、前記のNIH3T3細胞に癌遺伝子を組み込んだ細胞(RetII,a1-1)を用い、それぞれの細胞について吸収スペクトル、及び発光スペクトルを測定した。可視・紫外領域における吸収・発光スペクトルについては、各々の細胞に特徴的なスペクトルは得られているが、正常及び癌細胞の間で明らかな差異が認められていなかった。赤外領域の吸収・発光スペクトルについては、フーリエ変換赤外分光器をもちいて解析することにより、細胞の分子構造レベルでの差異を検討することが可能ではあるが、培養細胞という生命体を分光学的に測定する手法はなく、生体に含まれる水分が誤差の原因となるため、正確な測定法を確立するのは困難であった。我々は、測定誤差を最小限にするための簡便な手法の確立につとめ、各々の細胞株における特徴的なスペクトル曲線を得た。ところが、どうしても水分の誤差が避けられないスペクトル域が存在し、この領域における細胞間の吸収・発光スペクトルの差異を求めるのは困難であった。水分の誤差を避けて測定可能な部分に関しては、細胞間に特徴的な差異は認められす、この結果、正常細胞と癌細胞との間の明確な差を検出するには至っていないのが現状である。本年度の研究計画としては、正常および癌の培養細胞について、これをレーザー分光学的手法により、それぞれの細胞構造、ひいては分子構造レベルでの違いを解析するのが目標であった。正常細胞として線維芽細胞(NIH3T3細胞)、癌細胞としては、前記のNIH3T3細胞に発癌遺伝子を組み込んだ細胞(Ret II,a1-1)を用いて、それぞれの細胞についての吸収スペクトル、および発光スペクトルを測定した。まず、可視域における吸収、発光スペクトルにおいては、正常および癌細胞の間で、明らかな差異が得られなかった。ただし、細胞に特徴的な吸収、発光スペクトルは得られているので、これをさらに解析し、細胞構造などの知見を得ることは可能であろうと思われ、今後の課題とするところである。同様に紫外領域の吸収、発光スペクトルについても、両者の細胞に特徴的な吸収、発光スペクトルが得られたが、明らかな差異は見いだせなかった。現在は、フーリエ変換赤外分光器を用いた赤外領域の吸収スペクトルを測定しており、これによって細胞の分子構造レベルでの差異を解析しているところである。培養細胞という生命体を分光学的に測定するという試みは、いままであまり行われておらず、特に標準的な手法がないため、まず測定法から考える必要があったが、実験開始当初は、誤差の少ない効果的な測定を行うために試行錯誤の連続であった。分子レベルの差異を解析するためにもより正確な測定法を樹立させる必要があり、これも今後の課題の一つである。正常および癌の培養細胞について、レーザー分光学的手段を用いて、各々の細胞構造の差異を解析する事を目標とした。正常細胞として線維芽細胞(NIH3T3細胞)、癌細胞としては、前記のNIH3T3細胞に発癌遺伝子を組み込んだ細胞(Retll,a1-1)を用いて、それぞれの細胞についての吸収スペクトル、および発光スペクトルを測定した。昨年度の研究過程において、可視域、および紫外領域における吸収、発光スペクトルについては、各々の細胞株に特徴的な吸収、発光スペクトルは得られてはいるものの、正常および癌細胞の間で、明らかな差異が得られない事が判明している。そこで本年は、主に赤外領域の吸収、発光スペクトルに注目した。すなわち、フーリエ変換赤外分光器を用いて赤外領域の吸収スペクトルを測定する事により、細胞の分子構造レベルでの差異を解析することができる。赤外領域において、培養細胞という生命体を分光学的に測定する手法はなく、生体に含まれる水分が誤差の原因となるため、正確な測定法を確立するまでが困難であった。が、試行錯誤ののちにこれを確立し、各々の細胞株における特徴的なスペクトル曲線を得るに至った。が、水分の誤差を避けて測定し得る波数においては、細胞間相互に明らかな差異は認められなかった。

これまでの研究成果は、第53回日本癌学会(1994年10月19-20日、名古屋)にて報告した。正常及び癌の培養細胞について、レーザー分光学的手法を用いて、各々の細胞構造の差異を解析することを目標とした。正常細胞として、線維芽細胞(NIH3T3細胞)を、癌細胞としては、前期のNIH3T3細胞に癌遺伝子を組み込んだ細胞(Ret ll,al-1)を用いて、それぞれの細胞について吸収スペクトル、及び発光スペクトルを測定した。昨年度までの研究成果として、可視・紫外領域における吸収・発光スペクトルについては、各々の細胞に特徴的なスペクトルは得られているが、正常及び癌細胞の間で明らかな差異が認められていなかった。また、赤外領域の吸収・発光スペクトルについては、フーリエ変換赤外分光器をもちいて解析することにより、細胞の分子構造レベルでの差異を検討することが可能なことから、本年度はこのレベルでの解析を重点的に行うことにした。培養細胞という生命体を分光学的に測定する手法はなく、生体に含まれる水分が誤差の原因となるため、正確な測定法を確立するのは困難である。我々は、測定誤差を最小限にするための簡便な手法の確立につとめ、各々の細胞株における特徴的なスペクトル曲線を得た。が、どうしても水分の誤差が避けられないスペクトル域が存在し、この領域における細胞間の吸収・発光スペクトルの差異を求めるのは困難である。水分の誤差を避けて測定可能な部分に関しては、細胞間に特徴的な差異は認められなかった。
生体内骨誘導用光硬化型レジン-BMP複合体の開発

骨形成因子(BMP)と生体移植用レジンとを複合化し、生体内において、個々の症例に対して適切な3次元的形状に新生骨を誘導する新規移植材料を開発することを研究目的とした。すなわち、X線マイクロCTからの3次元DATAを元に、3次元形態を反映したレジンスキャフォールドを3次元造形システムにより作製後、これに骨形成因子を複合化し、生体内で新生骨を誘導するシステムを構築した。この結果3次元形態を有するスキャフォールドの周囲に新生骨を誘導することに成功した。以下の4項目の実験を行なった。(1)既開発光硬化型レジンの改良による光造形可能なレジンのスクリーニングこれまでの蓄積を元にEMA系光硬化型レジンによる試料円盤を作製し、この円盤上において細胞培養試験、並びに皮下移植試験を行なった。いずれの試験結果からも本実験レジンは生物学的親和性を示し、光造形用の基本材料として使用可能であることが示唆された。しかしながら、この円盤上において未分化筋肉細胞の培養を行なったところ、培養筋肉は全数が死滅し、器官培養において重篤な影響を与える因子が本材料中に含有されている可能性が生じてきた。このため、再度、本EMA系レジンの毒性について詳細を次年度実験することになった。(2)新規開発光増形用レジンの生体安全性の評価前項に記述したように、一般的な安全性評価法では本レジンは必要条件を満たしていることが判明したが、再生医療用の材料として使用するにはさらに器官培養系において精査する必要が生じた。(3)BMPの作製本実験グループにおいては定常的な作業として、本年はcrudeBMPを2000mg作製した。水溶性化を同時に行なったがその収量が800mg程度になり、不純物の混入を検討している。(4)コーンビーム型マイクロX線CTによる骨欠損部の3次元データ取り込みと光造形汎用市販プログラムを用いてスキャフォールドのモデリングを行ない、これを元にSTLデータに変換し、光造形システムによりスキャフォールドの形を作製した。ただし、本年度は実際の骨欠損部の大きさに合わせたモデリングではなく、仮想のモデルを使用した。このように初年度はシステム全体の構築を行なったが、中心核である光硬化型レジンの生体安全性に疑問が生じたため、次年度も継続して改良を重ねることとした。また、最悪の事態を想定して、高分子粉末そのものから光造形を行なうことも次年度は想定することとした。(1)光造形可能なレジンの再スクリーニング昨年度の結果を受けて、再度新規開発のEMA系光硬化型レジンの生体親和性に関する実験を行なった。いずれもISO 10993シリーズ等における生体安全性試験においてin vivo, in vitroの試験結果は良好であり、移植用材料として使用可能であることが示唆されたが、器官培養系では全く新組織の誘導が認められなかった。この結果を受けて、当初の予定を変更し、重合型の材料によるスキャフォールドの作製を中止し、新たに既重合済の粉体ポリマーによる積層造形を行なうこととした。(2)既重合済の粉体ポリマーによる積層造形の生体安全性の評価基本ポリマーと造形浩を変更したことを受けて、製作物の生体安全性試験を行なった。試験方法はISO 10993等に基づいて実施した。現在の結果では、Agar Diffusion Testなどにおいて良好な結果を示しており、移植可能との判断をしている。この材料上における器官培養に関しては実験続行中である。(3)BMPの骨誘導実験BMPによる3次元的な新生骨誘導を詳細に知ることは、スキャフォールドとの複合化においてキーポイントとなるため、初期の誘導状況を調べた。その結果、新生骨はBMPと初期に接触した部分から内側に誘導され、外側に新生骨が誘導されるのではないことが解った。この情報はきわめて重要であり、次年度の実験に反映することとする。(4)マイクロX線CTによる骨欠損部の3次元データ取り込みと光造形基本レジン材料の変更に伴い、実際にBMPによる新生骨部分の光造形を試験的に行なった。製作物はCTデータを良好に反映し、モニターによる観察よりも多方向からの観察が可能であることが判明した。一連の作製技術は今年度の実験により確立したので、次年度は最終目標である複合材料の新生骨誘導に関して実験を行なう。昨年度にスキャフォールド材料の大幅な変更を行い、レジン系スキャフォールドの残留モノマーの影響を排除可能なシステムに変更した。すなわち3次元スキャフォールド作製システムを積層焼結型の造形法(SLS)に変更し、再度実験を開始した。その結果、3Dモデリングにより望む形状のスキャフォールドの作製は可能となった。また、顎骨模型からX線CTにより得られたSTLデータから望む形状の3D構造体を作製することも可能となり、試験的に歯科の義歯床に相当する部分の作製を行い、通常の技工作製物と同等の形状を有する3Dレジン造形物を得られることを確認した。

また、積層焼結型造形法の素材レジンの生体安全性試験をISO10993-5に準じて検索した結果、コントロール試料と同等の安全性が確認された。これら一連の結果を受けて、移植用の円筒形のスキャフォールドを設計し、これにBMPを複合化し、DDYマウスに大腿部筋膜間空隙に移植した。その結果、移植3週間後に移植全例において新生骨誘導が生じることを確認した。ただし、新生骨誘導は円筒形内部にまでは生じておらず、この原因は既に昨年度発見したとおりスキャフォールドのごく表面にのみBMPなど組織誘導性cytokineを複合化しなければ、円筒形の内部に新生骨が形成されないことの裏付けとなった。このため、スキャフォールドの表面処理を行い、スキャフォールド細孔の表面にのみBMPを吸着する技術の開発が直近の大きな課題となることが示唆された。現在、さらに実験動物の骨欠損部分にBMP複合スキャフォールドを移植する実験も継続しており、本年度得られた成果は当初の研究目的をほぼ充足したと考える。本研究の実績からさらにプラズマ表面処理の導入あるいは低粘性の多糖類キャリアーの使用等が不可欠であることも判明しており、今後の研究においてきわめて重要なデータの蓄積を行なうことができた。
民間説話の場所認識についての文化地理学的研究

1、蛇聟入・苧環型の昔話および伝説の資料収集:本年度は『日本伝説大系』『日本昔話大成』に加えて『日本昔話通観』に基づき、鳥取県・宮城県・大分県・鹿児島県・岩手県・福岡県・福井県・石川県の各県立図書館および市町村立図書館において資料調査を行った。伝説が伝承されている地域については、当該地域の市町村誌および関係地図等を市町村役場、教育委員会において購入した。結果、上記の『日本伝説大系』『日本昔話大成』『日本昔話通観』において簡略化されて上げられている事例を全文確認し、さらにそれらを上回る数の文献を得ることが出来た。また昔話として挙げられている事例のいくつかが、実際は伝説であることも確認出来た。更に今年度は本説話の古典資料および海外の類似説話も収集した。2、伝説の現地調査:本伝説で語られる場所を具体的に地図上において確認するため、現地における資料調査および聞き取り調査を行った。現地調査を行い伝承される場所の確認が出来たのは、大分県佐賀関町・臼杵市・津久見市・大野町・緒方町、福岡県二丈町、岩手県雫石町・宮城県本吉町・中田町・志津川町、鹿児島県宇検村・大和村・喜界町、福井県今庄町・永平寺町。伝承地の明治期の地籍図撮影をし、フィルムスキャナーで判読加工作業が出来たのは、鳥取県用瀬町大字金屋(明治27年)・日南町大字多里・河原町大字湯谷・牛戸(明治24年)である。なお撮影された地籍図の保存にはMOドライブを使用した。3、データベースの作成:前年度および今年度の収集資料のデータベースを作成した。昔話については「蛇の棲家/娘の家/解決/儀礼/話型/来訪男/教訓」、伝説については「蛇の棲家/所在地/記念物/娘の家/所在地/記念物/解決/儀礼/来訪男」の項目を立てて分類し、一覧表および分布図を作成した。1、蛇聟入・苧環型の昔話および伝説の資料収集:『日本伝説大系』『日本昔話大成』に基づいて、本昔話・伝説をともに伝承している、鳥取県・宮城県・静岡県・沖縄県・高知県・愛媛県の各県立図書館および市町村立図書館において、市町村誌をはじめ地方発行の民話関係の出版物を中心に、本昔話および伝説の資料調査を行った。また購入可能な文献および関係地図については、市町村役場、教育委員会および地方出版社において出来るだけ購入した。さらに訪問の出来なかった県(福井・岐阜・奈良・大分・福岡・宮崎)、また昔話だけを伝承している地域に関しては、古本屋を通じて文献を購入した。結果、上記の伝説大系および昔話大成において簡略化されて上げられている事例を全文確認し、さらにそれらを上回る数の文献を得ることが出来た。現地調査を行い伝承される場所の確認が出来たのは、鳥取県河原町・智頭町・日南町・用瀬町、宮城県気仙沼市、静岡県大東町・小笠町・春日町・水窪町、沖縄県平良市・宜野湾市・読谷村・西原村・名護市・仲尾次村、高知県池川町・香北町・佐川町・中村市・室戸市・三原市、愛媛県川内町・西条市・広田村・河辺村・城川町・重信町である。3、昔話のテキスト分析を中心とした主人公の行動と語られる風景の関係図の作成:現段階において得られた結果からは、昔話の蛇の棲み家とされる場所が心理的領域においては意識と無意識の境界に位置するのに対して、伝説の場所が現実世界における人間と自然の境界に位置しているという関連性が見い出せた。

昔話については「蛇の棲家/娘の家/解決/儀礼/話型/来訪男/教訓」、伝説については「蛇の棲家/所在地/記念物/娘の家/所在地/記念物/解決/儀礼/来訪男」の項目を立てて分類し、一覧表および分布図を作成した。