hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ジアシルグリセロールキナーゼζによる新たな糖尿病発症機構の解明とその解除薬の開発

我々は、DGKζがIRS-1と結合することによって、既知のインスリンシグナル活性化とは独立にGLUT4の細胞膜移行を制御していることを明らかにした。さらに、DGKζ結合タンパク質であるPIP5K1αはDGKζと結合することによってGLUT4の細胞膜移行を促進していることが明らかとなった。IRS-1とDGKζの結合を検出するELISAキットを用いて、IRS-1とDGKζの結合を阻害する低分子化合物を30種類以上単離した。そのうちの一つの化合物Aは、細胞に添加することによって、IRS-1とDGKζの結合を阻害し、TNF-αによって誘導されたインスリン抵抗性を解除することを明らかにした。インスリンは、糖利用を促進するホルモンで、その作用の低下(インスリン抵抗性)は2型糖尿病を発症させる。インスリンは受容体に結合すると、受容体チロシンキナーゼを活性化、インスリン受容体基質(IRS)をリン酸化し、これを引き金として下流シグナルが活性化する。その結果、4型糖輸送体(GLUT4)が細胞膜へ移行し糖の膜透過誘導など、広範なインスリン活性が発現する。申請者らは、IRS結合タンパク質として同定したジアシルグリセロールキナーゼζ(DGKζ)がIRSと結合した状態では未知のメカニズムでGLUT4の細胞膜移行を阻害している、更に、いくつかのインスリン抵抗性モデル細胞では、DGKζ分子に何らかの分子内修飾が起こることによってIRSとの相互作用量が増加し、GLUT4の細胞膜移行を抑制する効果が強まる、その結果インスリン抵抗性が発症することを明らかにした。そこで本研究では、(1)インスリン抵抗性細胞でIRSとDGKζの結合が増加する分子機構を解明すると同時に、(2)DGKζがGLUT4の細胞膜移行を抑制する分子機構を解明する。最終的には(3)我々の提唱した機序で発症したインスリン抵抗性を解除する低分子化合物を探索し、抗糖尿病薬として機能することを証明する。H24年度には、DGKζと結合するタンパク質の網羅的探索を試みた。FLAGDGKζを293T細胞に過剰発現し、細胞抽出液からFLAG-agarose-beadsによってFLAGDGKζを免疫沈降し、沈降物を銀染色によって結合タンパク質を可視化した。その結果、その結果、10種類以上のDGKζ結合タンパク質の単離に成功した。現在はそれぞれのタンパク質のcDNAをクローングし、結合の確認を行っている。また、DGKζとIRS1の結合を阻害する低分子化合物を理化学研究所の伊藤博士との共同研究で21種類単離に成功した。CHO細胞にこれらの低分子化合物を添加し、IRS1とDGKζの結合を測定したところ、#10と#11の添加によってIRS1免疫沈降物中のDGKζ量が減少していることを見いだした。今年度は、DGKζと結合するタンパク質を単離した。そのタンパク質群と、既知のDGKζ結合タンパク質の中から、特にPI4Pの5位をリン酸化する酵素PIP5K1αに注目し研究を行った。PIP5K1αの発現抑制はDGKζの発現抑制と同様にGLUT4の細胞膜移行を抑制した。またPIP5K1αの過剰発現は、DGKζの過剰発現と同様に、インスリンシグナルには大きな影響を与えずにGLUT4の細胞膜移行を促進した。このことから、PIP5K1αはDGKζと協同してGLUT4の細胞膜移行を促進していると考えられた。さらに、DGKζとPIP5K1αの活性は相互に制御し合っており、DGKζとIRS-1との結合を阻害することによって、インスリン刺激非依存的にGLUT4の細胞膜移行が促進され、さらに、PIP5K1αの活性が未知の機構によって促進されていた。さらにインスリン刺激によってDGKζおよびPIP5K1αがIRS-1から遊離することも考え合わせると、インスリン刺激のない基底状態では、IRS-1と結合したDGKζはGLUT4の細胞膜移行を阻害する機能を有しており、この活性によりGLUT4は細胞膜に移行しない。ところが、インスリン刺激によってIRS-1からDGKζが遊離すると、DGKζによるGLUT4の細胞膜移行阻害活性が失われ、さらにDGKζがPIP5K1αを活性化し、その結果GLUT4の細胞膜移行を促進するという分子機構が明らかとなった。これまで我々は、DGKζの発現抑制実験や過剰発現実験から、DGKζがIRS-1と相互作用することによって古典的インスリンシグナルとは独立にGLUT4の細胞膜移行を制御していること、IRS1と結合したDGKζがインスリンシグナルとは独立し、GLUT4の細胞膜移行を阻害していることを明らかにしてきた。そこで本研究では、DGKζがGLUT4の細胞膜移行を制御する分子メカニズムを解明し、さらに、DGKζとIRS1の結合を調節することによって糖尿病の一因であるインスリン抵抗性を解除する薬剤を単離することを目的としている。本年度は、DGKζの結合タンパク質であるPIP5K1αもまたGLUT4の細胞膜移行を正に制御していることを新たに発見した。続いて、DGKζとIRS1の結合を阻害する低分子化合物の機能解析を行った。GST-IRS1とFLAG-DGKζの結合をプレートで検出するキットを作製し、添加によってこの結合が阻害される低分子化合物をスクリーニングした。このスクリーニングによって単離された20種類の化合物のうちのいくつかが、TNF-α処理によって誘導されるGLUT4の細胞膜移行および糖取り込みの抑制を解除することが明らかとなった。

その時のインスリンシグナルを解析したところ、TNF-α処理によって抑制されたインスリンシグナルも回復していることがわかった。我々はこれとは独立し、IRS1と結合するGKAP42がIRS-1のチロシンリン酸化の維持に必要であることを示している。そのため、低分子化合物によるインスリンシグナルの回復には、新規IRS1結合タンパク質GKAP42が関与していると考えられた。本研究の目的は、新規IRS-1結合タンパク質であるDGKζがGLUT4の細胞膜移行における働きを明らかにすることである。詳細な解析の結果、インスリン刺激のない状態では、IRS-1とDGKζが結合しており、GLUT4の細胞膜移行を阻害している。一方、インスリン刺激によってDGKζがIRS-1から遊離し、その結果、DGKζがGLUT4の細胞膜移行を促進することを見出した。ところが、最近になって、DGKζと結合するPIP5K1αがDGKζと同時にインスリン刺激によってIRS-1複合体から遊離し、インスリン依存的なGLUT4の細胞膜移行の促進していることを明らかにした。このようにPIP5K1αも新たにGLUT4の細胞膜移行に関与していることが明らかとなってきたため、今年度はPIP5K1αの活性測定を行った。その結果、DGKζの過剰発現ではPIP5K1αの活性が抑制され、DGKζの過剰発現、PIP5K1αの過剰発現、DGKζとIRS-1の結合阻害では、PIP5K1αの活性が顕著に促進した。この結果は、GLUT4の細胞膜移行活性と強い相関を示しており、PIP5K1αの活性化がGLUT4の細胞膜移行に非常に重要な役割を果たしていることを示している。IRS-1とDGKζの結合阻害剤添加によって、TNF-aにより引き起こされるインスリン抵抗性が解除されることも併せると、1IRS-1複合体に含まれるDGKζおよびPIP5K1αは既知のインスリンシグナルとは独立してGLUT4の細胞膜移行を調節していること。2この複合体が、TNF-αによって引き起こされるインスリン抵抗性に重要な役割を果たしていること、3さらにIRS-1とDGKζの結合阻害剤が抗糖尿病薬の有力な候補となること、を示すことができた。我々は、DGKζがIRS-1と結合することによって、既知のインスリンシグナル活性化とは独立にGLUT4の細胞膜移行を制御していることを明らかにした。さらに、DGKζ結合タンパク質であるPIP5K1αはDGKζと結合することによってGLUT4の細胞膜移行を促進していることが明らかとなった。IRS-1とDGKζの結合を検出するELISAキットを用いて、IRS-1とDGKζの結合を阻害する低分子化合物を30種類以上単離した。そのうちの一つの化合物Aは、細胞に添加することによって、IRS-1とDGKζの結合を阻害し、TNF-αによって誘導されたインスリン抵抗性を解除することを明らかにした。この研究の目的はIRS1とDGKζの結合を制御することによりインスリン抵抗性を解除する抗糖尿病薬の開発である。我々は、新たにIRS-1とDGKζの結合を阻害するような低分子化合物を単離し、その一つがインスリン抵抗性を解除することを発見した。さらに、この低分子化合物はDGKζばかりでなく、GKAP42の結合も制御していると考えられ、予想しなかった新たな発見をすることができた。
NMR法によるヘム蛋白質の軽水接触表面の研究

1.対称型NMR試料管の開発:磁場解析をもとに対称型のNMR試料管を提唱した。まずシム調整用として上下に溶媒槽のあるミクロ試料管を試作し、実用上のいろいろな問題点を摘出した。そして磁場調整したガラス材質の弱点を克服するために、熱処理法などの製法に工夫を積み重ね、実用化に成功した。今後他の溶媒に対応できる簡易対称型ミクロ試料管の開発と実用化が課題として残っている。2.11パルス法による選択励起法の開発:軽水溶液を選択励起法で測定する方法は非常に沢山の方法が提唱されているが、いずれも一長一短があり、実際には非常に測定が難しいものとされている。申請者はスペクトルの位相歪みに着目し、一番測定が簡単で位相歪みの少ない、11パルス法の改良を試みた。そして非対称11パルスの1次結合法を考案し、ベ-スラインの歪みを消去するだけでなく、1331パルスに匹敵する信号抑圧比を得ることに成功した。3.非選択的完全飽和法の開発:他核のNMR測定の目的に幾つかの方法が知られているが、いずれも数%の信号残りが除去できなかった。そこでprogressive safuration pulse法とWaugh pulse法を同時に適用する方法を考察し、信号の完全飽和に成功した。4.常磁性イオン存在下における新しい緩和機構の存在:軽水中の常磁性イオンは、軽水の核スピンを飽和すると、電子スピンの占有率が変化すると思われる実験結果を得た。これは従来知られていなかった新しい緩和機構である。5.分子表面残基の選択的測定法の開発:常磁性物質存在下、非選択的飽和後の回復過程を測定し、近傍に存在する緩和速度増大部分を測定することで、常磁性物質に接触し得る分子表面残基の選択的測定に成功した。今後ヘム蛋白質のNMRスペクトルの帰属に応用する予定である。(1)軽水測定用NMR試料管の試作・改良を行った。昨年度までに対称型NMR試料管の概念を提出し、一応の目的を達成したが、試作品は取り扱いが難しく、熟練しないと使いこなせなかった。それは磁化率を調整するために、上下プラグに溶媒を充填する形式だったためである。今回はより実用性を求めて、磁化率を調整したガラス棒を用いる構造を採用した。この改良によって壊れにくくなり、取り扱いが簡単になっただけでなく、価格も1/4になった。ただし水溶液以外の試料には使えないので、一般性は失われた。しかし現在のシステムは(イ)温度変化実験のとき特にデッドボリュームが多くなる。(ロ)脱気やガス交換ができないという欠点をかかえている。これらの改良も含めて64年度に実用化を目指して試作・実験を行う予定である。(2)選択的励起パルス列の実験を行い、目標の信号抑制比を得ることに成功した。つまり非対称の11パルス列を組み合わせる方法を開発し、広い範囲にわたって位相の歪みがなく、平坦なベースラインのスペクトルを得ることができた。従来数多くの選択的励起パルス列が提唱されているが、申請者は本来消えるべき軽水の信号が何故残るのかという問題に取り組み、それを軽水信号の放射減衰という概念でまとめた。この概念のもとに、軽水信号の放射減衰を逆に利用し、消えずに残った軽水信号を互いに打ち消し合う方法を提唱した。この方法を利用すると、11パルスという最も単純なパルス列で必要十分な信号抑制比が得られることを証明した。(第27回NMR討論会に報告、J.Mag、Res.に投稿中)

(3)上記の方法を使い、差NOE(核オーバハウザ効果)の予備実験に着手し、軽水中でも信号の微小な強度変化が極めて鋭敏に検出できる見通しを得た。現在低分子のモデル化合物について実験を行い、予想外の極めて興味深い知見を得つつある。(1)対称型NMR試料管の改良を行ない、完全に実用レベルに達した。昨年度提案した簡易型ミクロ試料管は機械強度に問題があることが判明し、製作過程を再検討し、欠点を最小限のコスト増で解決することができた。更に脱気、ガス交換可能で分解能に影響しない構造を工夫し、実用新案を申請した。この型の試料管は使用法が若干難しくなるので、改良の余地がある。従って今後数名のNMR研究者に配布して、デ-タを採取する予定である。さらに三重管構成のミクロ試料管を考案したが、今後実用化へ向けて試料改良を続ける予定である。(2)常磁性イオン存在下における新しい緩和機構を発見した。軽水中の微量常磁性イオンは、軽水の核スピンを飽和すると、電子スピンの分布を変えて代3物質の核スピンの緩和に関与するメカニズムが存在するらしい。これは個体では知られていたが、液体では知られていなかった新しい現象である。(3)非選択的に^1Hのスピンを完全飽和するパルス系列を考案した。従来の照射法はいずれも試料の発熱なしに、スペクトルの飽和が困難でしかもかなり照射もれがあることが分かった。そこで2つのパルス系列を並列して同時に行なう新しい方法を考案し、完全飽和法を得た。(4)常磁性物質存在下における分子表面残基の選択的観測法を開発した。上記のパルス系列を用いて、飽和回復を観測することにより、常磁性物質による緩和速増大を利用した。この方法により分子表面残基と思われるスペクトルを選択的に抽出することができた。(5)反磁性シグナルに埋れた常磁性シフト信号の抽出を可能にした。上記のパルス系列を用いて、全く同様の方法で常磁性シフト信号をかなり選択的に抽出することができた。今後これらの方法の応用をはかる予定である。
クロマグロの高速持続遊泳に特異的な筋形成の分子機構

今年度は申請書の研究予定通り、次世代シーケンサを用いたRNAseq解析で得られた深部血合筋を含むクロマグロ体幹部骨格筋3部位および心筋のトランスクリプトームデータを基に、各筋肉部位に特異的な遺伝子の抽出を行った。その結果、背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋及び心筋の4部位より、それぞれ、371,727、236,418、1,673,731および2,168,155であった。各筋肉部位から得られた全455 Mbpの配列情報を用いて、CLC Genomics Workbenchソフトウェアを用いたde novoアセンブリの結果、118,259個のコンティグ( > 50 bp )が形成された。この118,259個のコンティグをリファレンスとして、背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋および心筋のRawデータをマッピングしたところ、118,259個のコンティグのうち、896個が背側普通筋に、792個が表層血合筋、8,823個が深部血合筋、そして28,451個が心筋特異的なものとしてマップされた。解析はまだ途中であるが、各部位に特異的に発現する遺伝子が複数同定され、ここにはクロマグロ特有の筋肉である深部血合筋に特異的なものも含まれた。これらのコンティグのうちRPKMが100以上のものは、背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋及び心筋でそれぞれ106、257、32、および233個であった。深部血合筋に特異的に検出された32個のコンティグの演繹アミノ酸配列についてNCBIのnon-redundant protein databaseに対しBLAST検索に供したところ、既報のタンパク質と相同性を示したコンティグの内、本研究の主要解析対象であるミオシン重鎖の一部をコードすると思われるコンティグが3個含まれた。これらの遺伝子につき、発現開始時期や発現部位などを解析していく必要がある。これら成果は、2014年にパリで開催された国際学会「the FEBS-EMBO Paris 2014 Conference」で発表した。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。本研究では、クロマグロの筋形成や筋成長の過程を、種々の分子マーカーを用いた組織学的解折で詳細に記載し、各筋肉がどのような発生の系譜を持ち、どのように成長するのか、その詳細を明らかにするとともに、MYIIの発現を指標としたトランスクリプトーム解析で、クロマグロの筋形成や筋成長過程で働く分子ネットワークの全体像を明らかにすることを目的として、実験を進めている。昨年度はクロマグロの筋形成に伴うMYHおよび関連分子の発現パターンの解析のため、次世代シーケンサーを用いてトランスクリプトーム解析を行った。クロマグロのヨコワ3個体の普通筋、表層血合筋、深部血合筋および心筋のよりcDNAライブラリーを作製しIonPGMシーケンサでシーケンスを行った。得られた配列情報のうち、Q20 (evaluation measure of base calls)以上のものがそれぞれ、41.61、21.97、133.81および209.71Mbpで、リード数はそれぞれ、371,727、236,418、1,673,731および2,168,155であった。クロマグロ背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋および心筋から得られた全455 Mbpの配列情報を用いて、CLCGenomics Workbenchソフトウェアを用いたde novoアセンブリの結果、23,777個のコンティグが形成された。200 bp以上のコンティグは23,465個あったが、このうち1,834個のコンティグの演繹アミノ酸配列をNCBIのnon-redundantタンパク質データベースに対するBLAST検索に供し、アノテーションを行ったところ、うち855個のコンティグが何らかの既報の配列と相同性を示した。ここにはMYHをコードすると思われるコンティグが24個存在しており、うち一つは既に我々が全長を同定した速筋型のMYH (myhf1)と配列が一致した。また、マイオスタチン、トロポニン、トロポミオシンやα-actinなど筋分化や筋収縮運動に関係する遺伝子が40個存在していた。クロマグロ深部血合筋におけるトランスクリプト一ム解析で得られたコンティグの演繹アミノ酸配列をBLAST検索に供した結果、MYH7bに相当するコンティグが5個得られた。MYH7bは、哺乳類と魚類で報告されている遅筋/心筋型MYHの一つであり、同遺伝子中にある小分子RNAを介し、筋肉のタイプ特異的な遺伝子の転写制御にも関与することが知られている。これらcontigに対し、得られたリードのマッピングを行い、クロマグロ背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋および心筋の4部位でMYH7bに相当するコンティグが発現しているかを確認したところ、いずれについても背側普通筋では発現が全く見られなかった。さらに、RT-PCRおよびリアルタイムPCRを行った結果、MYH7bに相当するcontigについて普通筋では転写産物は検出されず、遅筋および心筋に特異的な発現が確認された。また、2個のコンティグは深部血合筋でのみ検出され、深部血合筋の形成との関わりに興味がもたれた。

今年度は申請書の研究予定通り、次世代シーケンサを用いたRNAseq解析で得られた深部血合筋を含むクロマグロ体幹部骨格筋3部位および心筋のトランスクリプトームデータを基に、各筋肉部位に特異的な遺伝子の抽出を行った。その結果、背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋及び心筋の4部位より、それぞれ、371,727、236,418、1,673,731および2,168,155であった。各筋肉部位から得られた全455 Mbpの配列情報を用いて、CLC Genomics Workbenchソフトウェアを用いたde novoアセンブリの結果、118,259個のコンティグ( > 50 bp )が形成された。この118,259個のコンティグをリファレンスとして、背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋および心筋のRawデータをマッピングしたところ、118,259個のコンティグのうち、896個が背側普通筋に、792個が表層血合筋、8,823個が深部血合筋、そして28,451個が心筋特異的なものとしてマップされた。解析はまだ途中であるが、各部位に特異的に発現する遺伝子が複数同定され、ここにはクロマグロ特有の筋肉である深部血合筋に特異的なものも含まれた。これらのコンティグのうちRPKMが100以上のものは、背側普通筋、表層血合筋、深部血合筋及び心筋でそれぞれ106、257、32、および233個であった。深部血合筋に特異的に検出された32個のコンティグの演繹アミノ酸配列についてNCBIのnon-redundant protein databaseに対しBLAST検索に供したところ、既報のタンパク質と相同性を示したコンティグの内、本研究の主要解析対象であるミオシン重鎖の一部をコードすると思われるコンティグが3個含まれた。これらの遺伝子につき、発現開始時期や発現部位などを解析していく必要がある。これら成果は、2014年にパリで開催された国際学会「the FEBS-EMBO Paris 2014 Conference」で発表した。翌年度、交付申請を辞退するため、記入しない。当初の計画通り、次世代シーケンサーを用いてクロマグロ部位別のシーケンスデータを得ることができた。現在、その解析を進めている。また、稚魚、幼魚等成長段階に応じた個体を用いて発現解析を行う予定であったが、サンプルの入手が困難であったため進まなかったが、今年度、入手できそうな目星が立ったため、そのまま実験を継続する。得られたトランスクリプトームデータを基に筋肉の特定の部位、特に深部血合筋に特異的に発現する遺伝子をスクリーニングし、稚魚、幼魚、成魚等成長段階のクロマグロの筋肉におけるこれら遺伝子の発現パターンをin situ hybridizationやリアルタイムPCRで調べる。また、同試料を用いて、モデル生物で明らかにされているMYHの発現に影響するSox6やmiRNA499などを含む筋形成および筋成長ネットワーク分子の発現パターンを、in situ hybridizationや抗体を用いた免疫染色等で調べ、各部位の筋肉の発達や成長過程を観察する。これら結果から、クロマグロ特有の分子ネットワークを解析するとともに、MYHの発現と連動する新規遺伝子のスクリーニングを行う。
キラルネマチック液晶場でのらせん状共役系高分子の合成と物性

本研究では、キラルネマチック液晶を溶媒とする不斉異方性反応場でアセチレンの重合を行い、高分子鎖およびそれらの束であるフィブリルがらせん構造をもつ高導電性のポリアセチレン薄膜を合成した。走査型電子顕微鏡(SEM)および原子間力走査型プローブ顕微鏡(SPM)観察により、得られたポリアセチレン薄膜はそのフィブリルがそれぞれR-体とS-体のキラルネマチック液晶のらせんのねじれ向きと同じ方向に巻いていることを確認した。しかも局所領域において配向していることが明らかになった。さらに、円偏光二色性法(CD)スペクトルの測定において、共役ポリエンにおけるπ→π^*遷移の波長領域に正と負のコットン効果が起こることより、共役ポリエン主鎖そのものがヘリカル構造をしていることを示された。さらに,ヨウ素ドープ後のCDスペクトルからも共役ポリエンにおけるπ→π^*遷移の波長領域に正と負のコットン効果が起こることより、共役ポリエン主鎖そのもののヘリカル構造が保持されていることを明らかにした。これらの結果は、キラリティーをもたないモノマーであっても不斉異方性反応場で重合することにより、ヘリカル構造を持つ高分子を合成することができることを示唆している。トランス含有率は8090%で、ヨウ素ドープ後の電気伝導度は約15004300S/cmと高い値を示すことから、ヘリカル構造を持つポリアセチレンは分子ソレノイドとして応用することが期待できる。さらに、それぞれ左巻きと右巻きのヘリカル構造持つポリアセチレンから互いに逆の誘起磁極が生じることも予想される。ポリアセチレンのフィプリルのねじれの向きはキラルネマチック液晶のそれと一致することがわかった。キラリティーをもたないアセチレン分子でも不斉異方性反応場で重合することにより、共役系主鎖が左右どちらか一方向にねじれたヘリカル構造を付与できることを示した。キラルネマチック液晶に基づく不斉異方性反応場はここで述べたポリアセチレンの構造規制に留まらず、その他の重合反応あるいは広く化学反応における配向制御にも利用できると期待される。本研究では、ヘリカルポリアセチレンの合成法の確立と、その電磁気的および光学的性質を明らかにすることを目的とする。本年度は、らせん構造を有するキラルネマチック液晶を溶媒とする不斉異方性反応場を構築し、この反応場でアセチレンの重合を行い、高分子鎖およびそれらの束であるフィブリルがらせん構造をもつ高導電性ヘリカルポリアセチレンの合成に初めて成功した。キラルネマチック液晶は、新規な軸性キラルバイノール誘導体および不斉中心をもつフェニルシクロヘキシル系化合物をキラルドーパントとして、等重量比の二種類のフェニルシクロヘキシル系ネマチック液晶混合物に添加することにより調製した。この不斉異方性反応場でチーグラーナッタ触媒(Ti(O-n-Bu_4)-Et_3Al))を用いてアセチレンを重合した。円偏光二色性(CD)スペクトルおよび走査型電子顕微鏡(SEM)観察により、ポリアセチレンの主鎖およびそれらの束であるフィブリルのねじれの向きはキラルネマチック液晶のそれと一致することがわかった。このことは、キラリティーをもたないアセチレン分子でもキラルネマチック液晶反応場で重合することにより、共役系主鎖が規則的にらせんを巻いた液晶分子をガイドに重合が進行し、as-grownでらせん構造をもつポリアセチレンが形成できることを示した。同時に、ヘリカルポリアセチレンのらせん度合いは、キラルドーパントのらせん度合いによって制御できることが明らかになった。合成したヘリカルポリアセチレン薄膜は、ヨウ素ドーピング後1.5-4.3×10^3S/cmと高い電気伝導度を示すのみならず、ヨウ素ドーピング処理や熱異性化後もらせん構造を保たれることがわかった。このようなヘリカルポリアセチレンは,その高い導電性と特異ならせん構造のため,分子電磁石ともいうべき分子ソレノイドとしての電磁気的性質や,従来のない光学的二次非線形性を有する新規材料になり得ると期待される。

トランス含有率は8090%で、ヨウ素ドープ後の電気伝導度は約15004300S/cmと高い値を示すことから、ヘリカル構造を持つポリアセチレンは分子ソレノイドとして応用することが期待できる。さらに、それぞれ左巻きと右巻きのヘリカル構造持つポリアセチレンから互いに逆の誘起磁極が生じることも予想される。ポリアセチレンのフィプリルのねじれの向きはキラルネマチック液晶のそれと一致することがわかった。キラリティーをもたないアセチレン分子でも不斉異方性反応場で重合することにより、共役系主鎖が左右どちらか一方向にねじれたヘリカル構造を付与できることを示した。キラルネマチック液晶に基づく不斉異方性反応場はここで述べたポリアセチレンの構造規制に留まらず、その他の重合反応あるいは広く化学反応における配向制御にも利用できると期待される。本研究では、キラルネマチック液晶を溶媒とする不斉異方性反応場でアセチレンの重合を行い、高分子鎖およびそれらの束であるフィブリルがらせん構造をもつ高導電性のポリアセチレン薄膜を合成した。走査型電子顕微鏡(SEM)および原子間力走査型プローブ顕微鏡(SPM)観察により、得られたポリアセチレン薄膜はそのフィブリルがそれぞれR-体とS-体のキラルネマチック液晶のらせんのねじれ向きと同じ方向に巻いていることを確認した。しかも局所領域において配向していることが明らかになった。さらに、円偏光二色性法(CD)スペクトルの測定において、共役ポリエンにおけるπ→π^*遷移の波長領域に正と負のコットン効果が起こることより、共役ポリエン主鎖そのものがヘリカル構造をしていることを示された。さらに,ヨウ素ドープ後のCDスペクトルからも共役ポリエンにおけるπ→π^*遷移の波長領域に正と負のコットン効果が起こることより、共役ポリエン主鎖そのもののヘリカル構造が保持されていることを明らかにした。これらの結果は、キラリティーをもたないモノマーであっても不斉異方性反応場で重合することにより、ヘリカル構造を持つ高分子を合成することができることを示唆している。
トマト周年栽培における冷房効果・暖房コスト推定モデルの開発

本研究では、近年拡大しつつある大規模温室での安定的な周年生産における複合環境制御技術の確立のために、園芸施設の環境制御に必要なコスト、具体的には夏季に蒸発冷却法の一種である細霧冷房を用いた場合の冷房効果、および冬季における暖房にかかるコストを推定するモデルを開発し、年間を通じた運用コストの推定をおこなった。その結果、年間の環境制御にかかるコストを地域ごとに推定することが可能となった。本研究では,近年拡大しつつある大規模温室での安定的な周年生産における複合環境制御技術の確立のために,園芸施設の環境制御に必要なコスト,具体的には夏季に蒸発冷却法の一種である細霧冷房を用いた場合の冷房効果,および冬季における暖房にかかるコストを推定するモデルを開発し,年間を通じた運用コストを推定することを目的としている。今年度は主に冷房についての実験を行い,その結果を基に温室内環境シミュレーションモデルを開発した。実際に,細霧発生機構が異なる細霧冷房装置を備えた2棟の実験温室においてトマトを栽培し,細霧冷房運転時の温室内外の気象条件およびトマト植物体の蒸散速度を測定し,温室内の全蒸発散速度および温室緒元との関係を把握した。様々な温室内外環境要因と植物の蒸散速度の関係を調査した結果,日射量と最も相関が高かったことから,日射量から蒸散速度を推定する回帰式を得た。この推定式は,温室内の植物の蒸散速度を最大誤差20%程度で推定することができた。この推定式を温室内環境シミュレーションモデルに組み込むことにより,様々な繁茂状態の温室内環境をシミュレートすることが可能となり,その推定誤差は気温,相対湿度それぞれ1°C以下および10%以下であった。この程度の誤差であれば,実用上問題ないと考えられるため,実際の夏季の冷房について,温室内環境を高精度の推定する手法を開発することができたと言える。また,このモデルは効果的な冷房設計をする際に有効な手段になり得ると考えられる。また,暖房時の温室内環境および燃料使用量の推定も行い,通年を通じての温室内環境の推定が可能となった。
アスペクト情報に基づくセンシングと操作の統合による物体の理解

ロボットのハンド・指による物体操作過程において,3次元的な物体にはその位置・姿勢が存在するので,物体への視線や操作方向の変化は,視覚,触覚センサより取得される視覚像(画像)ならびに触覚像が変化する.これらの像は物体の「様相」を表現するもので,両者の統合化は新たな物体の表現,識別機能を与える.そこで,本研究では指の触覚センサを用いた触覚センシングの側面よりこの問題を考えて,平行2本指ハンドのある操作方向より物体把握を行って取得される触覚像について注目を行った.特に,平行2本指ハンドによって物体を把持して触覚像を取得し,物体の形状ならびに把持状態の検出と把持物体に作用する外力の大きさ,作用点の識別手法を確立した.触覚像は指の表面上に2次元配列として構成された触覚センサの各センサ要素によって取得されるので,センサ表面と垂直な力成分そしてセンサ表面上の2本の座標軸回りのモーメント成分からなる合計3軸成分が計測可能であることを示した.また,この3軸成分の符号と把持物体の幾何情報を用いたハンドの動作によって,外力の力成分と作用点位置の6軸成分を把持物体が直方体となるとき,これを一意に決定するロボット動作生成アルゴリズムを提案した.本手法は従来力覚センサを用いて行われる検出を触覚センサによって同様のことが可能となり,触覚センサの新たな機能が展開されるものと考えられる.ロボットのハンド・指による物体操作過程において,3次元的な物体にはその位置・姿勢が存在するので,物体への視線や操作方向の変化は,視覚,触覚センサより取得される視覚像(画像)ならびに触覚像が変化する.これらの像は物体の「様相」を表現するもので,両者の統合化は新たな物体の表現,識別機能を与える.そこで,本研究では指の触覚センサを用いた触覚センシングの側面よりこの問題を考えて,平行2本指ハンドのある操作方向より物体把握を行って取得される触覚像について注目を行った.特に,平行2本指ハンドによって物体を把持して触覚像を取得し,物体の形状ならびに把持状態の検出と把持物体に作用する外力の大きさ,作用点の識別手法を確立した.触覚像は指の表面上に2次元配列として構成された触覚センサの各センサ要素によって取得されるので,センサ表面と垂直な力成分そしてセンサ表面上の2本の座標軸回りのモーメント成分からなる合計3軸成分が計測可能であることを示した.また,この3軸成分の符号と把持物体の幾何情報を用いたハンドの動作によって,外力の力成分と作用点位置の6軸成分を把持物体が直方体となるとき,これを一意に決定するロボット動作生成アルゴリズムを提案した.本手法は従来力覚センサを用いて行われる検出を触覚センサによって同様のことが可能となり,触覚センサの新たな機能が展開されるものと考えられる.
胎児・新生児ラットの末梢肺動脈の薬剤感受性に関する研究

5%CO_2-95%N_2でガス化したKrebs-Henseleit液(A液)のPO_2が22-25mmHgで,体内の肺動脈血に相当することを予備実験にて確認した.妊娠ラットを妊娠18.5日及び20.5日にペントバルビタール麻酔下に帝切し、4°Cに調整したA液中にて胎仔を開胸後,実体顕微鏡下で肺動脈,末梢肺動脈,動脈管および大動脈を一塊に摘出することは問題なく行えるようになった.ところが比較的単離しやすい左肺動脈に比べ右肺動脈の単離は技術的に難しく,安定した検体が得にくいことから実験には不適当と判断し,以後は左肺動脈のみを実験に用いることとした.単離した左肺動脈を37°CのA液中で30分安定させてから測定を行った.まず,酸素分圧が末梢肺動脈の拡張に及ぼす影響をみるために5%O_2-5%CO_2-90%N_2でガス化しPO_280-90mmHgに調整したB液を用意し,37°CのAとB液を用いて潅流実験を行った.30分A液中で安定させた時点で,光学顕微鏡下で末梢肺動脈の内径をビデオデッキに出力し,ついでB液に変更後の内腔の変化を経時的に記録した.この時点で主に2点が問題となった.1点はA液中で安定させた時点で既に内径の個体差が大きい点であり,もう1点は酸素分圧の高いB液に変更すると,次第に肺動脈内膜の辺縁が光学顕微鏡にて確認しにくくなってしまうことであった.前者に関しては,個体により5分で単離のすむものから20分かかるものもあったため,単離操作に要する時間に個体差があることが一因であるかと考えられた.このため単離を繰り返し操作の熟練を待って同様の実験を行ったが,やはり個体差は有意であり,その原因に関しての検討が必要となった.後者に関しては測定開始時点で内腔が確認できても,時間経過により血管の位置が微妙に変化してしまうこと,また血管内腔に微小気泡ができてしまうことが問題と思われた.現在は光学系の改良と内腔の確認を容易にするために色素の注入等の工夫を試行している.5%CO_2-95%N_2でガス化したKrebs-Henseleit液(A液)のPO_2が22-25mmHgで,体内の肺動脈血に相当することを予備実験にて確認した.妊娠ラットを妊娠18.5日及び20.5日にペントバルビタール麻酔下に帝切し、4°Cに調整したA液中にて胎仔を開胸後,実体顕微鏡下で肺動脈,末梢肺動脈,動脈管および大動脈を一塊に摘出することは問題なく行えるようになった.ところが比較的単離しやすい左肺動脈に比べ右肺動脈の単離は技術的に難しく,安定した検体が得にくいことから実験には不適当と判断し,以後は左肺動脈のみを実験に用いることとした.単離した左肺動脈を37°CのA液中で30分安定させてから測定を行った.まず,酸素分圧が末梢肺動脈の拡張に及ぼす影響をみるために5%O_2-5%CO_2-90%N_2でガス化しPO_280-90mmHgに調整したB液を用意し,37°CのAとB液を用いて潅流実験を行った.30分A液中で安定させた時点で,光学顕微鏡下で末梢肺動脈の内径をビデオデッキに出力し,ついでB液に変更後の内腔の変化を経時的に記録した.この時点で主に2点が問題となった.1点はA液中で安定させた時点で既に内径の個体差が大きい点であり,もう1点は酸素分圧の高いB液に変更すると,次第に肺動脈内膜の辺縁が光学顕微鏡にて確認しにくくなってしまうことであった.前者に関しては,個体により5分で単離のすむものから20分かかるものもあったため,単離操作に要する時間に個体差があることが一因であるかと考えられた.このため単離を繰り返し操作の熟練を待って同様の実験を行ったが,やはり個体差は有意であり,その原因に関しての検討が必要となった.後者に関しては測定開始時点で内腔が確認できても,時間経過により血管の位置が微妙に変化してしまうこと,また血管内腔に微小気泡ができてしまうことが問題と思われた.現在は光学系の改良と内腔の確認を容易にするために色素の注入等の工夫を試行している.
ヒト細胞におけるX染色体制御機構の解明

本申請の目的は、二本のX染色体が転写的に活性化している(XaXa)女性ドナー由来ヒト人工多能性幹細胞(hiPS細胞)を再現性よく作製する技術を確立し、ヒトにおけるX染色体制御機構を解明する基礎を構築することにある。これまでの研究から、hiPS細胞の培養条件を最適化することで再現性良くXaXaであるような(XaXa-like)hiPS細胞を複数樹立することに成功した。そこで、これらのXaXa-like hiPS細胞がXaXaであることを立証する為に、1)X関連遺伝子のRNA-FISHによる転写直後の転写産物検出、2)RNA-seqによる発現量およびSNP発現解析、そして3)ATAC-seqによるX染色体クロマチン構造の解析、を行った。その結果、XaXaであると思われたhiPS細胞が一本のX染色体のみが転写活性化しているXaXiである可能性が強まった。XaXaは、受精卵が数回の卵割後に形成する胚盤胞(blastocyst)の内部細胞塊中に存在する多能性細胞の特徴である。XaXa-likeなhiPS細胞を誘導する培養条件を再検証する為に、マウス多能性幹細胞を用いて解析を行ったところ、その培養条件が2細胞期で見られる遺伝子発現を活性化することを明らかにした。マウスにおける2細胞期の遺伝子発現は、受精直後の胚性ゲノム活性化(zygotic genome activation, ZGA)として位置づけられ、細胞の全能性と関連がある。全能性は、多能性が体を形成するすべての細胞に分化する能力を表すのに対して、それに加えて胎盤などの胚体外組織をも形成する能力を示す。2細胞期で見られる遺伝子発現が活性化している細胞群をさらに培養したところ、胚盤胞のような形態と遺伝子発現をもつ構造を自発的に形成することを明らかにした。また、本研究に関連して国際学会で招待講演を行った。研究は概ね計画通りに行っているが、結果は当初の予想と異なっていた。この為、当初の予定を変更して、XaXaを誘導する為の培養条件を再検討した。その結果、予想外の現象を観察し、その現象を明らかにする為の実験を重ね、全能性に関連した遺伝子発現が誘導されていることを明らかにした。マウス多能性幹細胞を用いた解析で、自発的に形成された、遺伝子発現や形態が胚盤胞に類似した構造物の解析をさらに進める。また、同様の培養条件がヒト多能性幹細胞中でも2細胞期に見られる遺伝子群の発現を誘導する可能性がある。そこでヒトの2細胞期、あるいはZGA、をモニターする為のレポータシステムを開発し、そのレポーターをもとに培養条件の最適化を行う。この最適化によりXaXa hiPS細胞が樹立できれば当初予定した実験を行う。本研究の目的は、二本のX染色体が転写的に活性化している(XaXa)女性ドナー由来ヒト人工多能性幹細胞(hiPS細胞)を再現性よく作製する技術を確立し、ヒトにおけるX染色体制御機構解明を目指す研究の基礎を構築することにある。そこで、これらのXaXa-like hiPS細胞がXaXaであることを立証する為に、1)X関連遺伝子に対するRNA-FISHを用いた転写直後産物検出、2)RNA-seqによる発現量およびSNP発現解析、そして3)ATAC-seqによるX染色体クロマチン構造解析、を行った。1)の結果から、XaXa-like hiPS細胞がXaXaでない可能性が示唆された。しかし、2)および3)の解析(途中)結果からはXaXaである可能性も考えられた。X染色体転写活性化状態は多能性幹細胞の分化状態を反映する。真にXaXa細胞であるなら分化誘導とともに活性化していた一本のX染色体が不活性化(X不活性化)される。XaXa-like hiPS細胞を通常のhiPS細胞培養条件に戻すと、一本のXが不活性化されることが示唆されていた。そこでX不活性化が実際に起こっていることを確認する為にそのマーカーであるXISTの発現解析を行った。その結果、RNA-FISHや発現量解析からはXISTの誘導を検出することはできなかった。この理由として分化誘導が不十分であることが考えられた。そこで、さらに分化を進めることを目的にhiPS細胞から心筋、ケラチノサイトや肝細胞等へ効率良く分化誘導する条件検討を行った。これらの検討結果を一部使った論文を現在、投稿中である。また本研究に関連した学会口頭発表および日本語総説執筆を行った。研究は概ね計画通りに進展しているが、結果の解釈が計画時の仮説と異なる可能性がある。この為、次年度以降の研究計画に影響を与える可能性がある。そこで昨年度、より詳細なX染色体転写活性化状態を明らかにする為に、計画当初は予定していなかったATAC-seqを行った。現在、RNA-seqの結果も併せて、その解析を行っている。これらの解析を通して、X染色体活性化状態について早急に結論を出し、次年度以降の研究を行う予定である。本申請の目的は、二本のX染色体が転写的に活性化している(XaXa)女性ドナー由来ヒト

人工多能性幹細胞(hiPS細胞)を再現性よく作製する技術を確立し、ヒトにおけるX染色体制御機構を解明する基礎を構築することにある。これまでの研究から、hiPS細胞の培養条件を最適化することで再現性良くXaXaであるような(XaXa-like)hiPS細胞を複数樹立することに成功した。そこで、これらのXaXa-like hiPS細胞がXaXaであることを立証する為に、1)X関連遺伝子のRNA-FISHによる転写直後の転写産物検出、2)RNA-seqによる発現量およびSNP発現解析、そして3)ATAC-seqによるX染色体クロマチン構造の解析、を行った。その結果、XaXaであると思われたhiPS細胞が一本のX染色体のみが転写活性化しているXaXiである可能性が強まった。XaXaは、受精卵が数回の卵割後に形成する胚盤胞(blastocyst)の内部細胞塊中に存在する多能性細胞の特徴である。XaXa-likeなhiPS細胞を誘導する培養条件を再検証する為に、マウス多能性幹細胞を用いて解析を行ったところ、その培養条件が2細胞期で見られる遺伝子発現を活性化することを明らかにした。マウスにおける2細胞期の遺伝子発現は、受精直後の胚性ゲノム活性化(zygotic genome activation, ZGA)として位置づけられ、細胞の全能性と関連がある。全能性は、多能性が体を形成するすべての細胞に分化する能力を表すのに対して、それに加えて胎盤などの胚体外組織をも形成する能力を示す。2細胞期で見られる遺伝子発現が活性化している細胞群をさらに培養したところ、胚盤胞のような形態と遺伝子発現をもつ構造を自発的に形成することを明らかにした。また、本研究に関連して国際学会で招待講演を行った。研究は概ね計画通りに行っているが、結果は当初の予想と異なっていた。この為、当初の予定を変更して、XaXaを誘導する為の培養条件を再検討した。その結果、予想外の現象を観察し、その現象を明らかにする為の実験を重ね、全能性に関連した遺伝子発現が誘導されていることを明らかにした。現在、行っているATAC-seqおよびRNA-seqの詳細な解析結果をもとに、樹立したhiPS細胞におけるX染色体転写状態を明らかにする。細胞がXaXaであれば、申請書に記載した通り、不活性化しているX染色体の再活性化に関わるシグナル伝達経路の解析を進める。また昨年度に確立した分化誘導システムを用いて、分化時のX不活性化誘導を検証し、不活性化に関わるシグナルの解析を行う。一方、XaXaでなければ、これも申請書に予備的実験として記載した通り、X染色体上で起こっているクロマチン構造変化、エピジェネティック変化と転写の関係、そしてシグナル伝達経路の関係に焦点を当て研究を行う予定である。マウス多能性幹細胞を用いた解析で、自発的に形成された、遺伝子発現や形態が胚盤胞に類似した構造物の解析をさらに進める。また、同様の培養条件がヒト多能性幹細胞中でも2細胞期に見られる遺伝子群の発現を誘導する可能性がある。そこでヒトの2細胞期、あるいはZGA、をモニターする為のレポータシステムを開発し、そのレポーターをもとに培養条件の最適化を行う。この最適化によりXaXa hiPS細胞が樹立できれば当初予定した実験を行う。3年計画で1年終了時点の為。
前近代東アジアにおける日本関係史料の研究

本研究では、ロシア及び東アジア諸国に所在する前近代日本関係史料の系統的な調査研究と、史料および史料情報の収集をおこない、日本関係史料目録の作成を行った。また国際研究集会を開催して成果の充実と発表を図った。1.主な海外調査機関:<ロシア連邦>国立海軍文書館・国立歴史文書館・科学アカデミー東洋学研究所・科学アカデミー文書館(以上サンクトペテルブルグ市)、ロシア帝国外交文書館(モスクワ市)ほか、<大韓民国>国史編纂委員会・ソウル大学奎章閣、釜山大学図書室ほか、<中華人民共和国>中国第一歴史档案館ほか。2.史料および史料情報の収集・整理・翻訳:(1)本研究で作成した在外日本関係史料目録は、「ロシア所在日本関係史料目録」・「ロシア国立歴史文書館所蔵日本関係史料解説目録」・「ロシア海軍文書館所蔵日本関係史料目録」・「ロシア国立科学アカデミー所蔵日本関係史料目録」・「ロシア科学アカデミー東洋学研究所所蔵日本関係手稿本目録」・「箱館駐在ロシア領事ゴシケヴィッチ関係史料目録」・「中国第一歴史档案館所蔵日本関係清朝档案目録(軍機処録副の部)」などである。このうち中国第一歴史档案館からは2367件4939カットのデジタル画像を得た。(2)とくに国内外に所在する漢文史料(正史実録・地方志・個人文集など)の調査をおこない、日本関係記事の抽出によるデータ蓄積をはかったほか、インドネシア国立文書館所蔵日本関係史料調査のための日本商館文書からの索引目録作成などをおこなった。3.研究発表・国際研究集会:(1)開催した研究発表会は計16回におよび、発表報告は67本である。このうち国際研究集会が10回、報告39本となっている。とくにロシア歴史文書館長・海軍文書館長らを招聘した「日露関係史料をめぐる国際研究集会」は毎年開催し、2004年度からは日本学士院と共催した。2006年度には、中国第一歴史档案館長らを招聘して「日本関係清代档案をめぐる国際研究集会」を開催した。(2)本研究に直接関係する発表論文は18本におよび、さらに2本が2007年度中に公刊される。(3)収集した史料(および史料画像・目録等)は東京大学史料編纂所で研究者への公開利用がはかられ、またすでに史料集などの形で発表されている。また、海外出張調査の記録は各年次の『東京大学史料編纂所所報』に掲載した。4.報告集の作成:これまでの活動成果を研究成果報告書(A4版・1197頁)にとりまとめた。本研究の目的は、前近代東アジアにおける日本関係史料の系統的・組織的な調査と収集を行ない、東アジア各地に所在する日本史史料の全体構造に見通しをつけることにある。

今年度は、「前近代日本の史料遺産プロジェクト」(研究代表者:石上英一)、「日本史史料が結ぶ東アジア日本学研究の交流推進プロジェクト」(研究代表者:保谷)などと連携して以下のような史料調査および史料情報収集活動をおこなった。1)海外出張調査・サンクトペテルブルグ市(ロシア連邦)に出張し、ロシア国立海軍文書館・同歴史文書館・同海軍中央博物館・科学アカデミー東洋学研究所の日本関係史料を調査し、複写コピーを持ちかえった。・モスクワ市(ロシア連邦)に出張し、ロシア帝国外交史料館の日本関係史料を調査し、複製を依頼した(後日、約500枚を受理)。・スペイン王国・ポルトガル共和国・イタリア共和国に出張し、スペイン王立武器庫博物館(マドリッド市)・王立史学士院文書館(同)・ポルトガル国立図書館(リスボン市)・マルチャーナ国立文書館(ベネチア市)・ベネチア国立文書館(ベネチア市)・バチカン図書館(バチカン市国)の、主に戦国から近世初期にかけての遣欧使節・対外交渉に関する日本関係史料の調査を行った。2)ロシア史料と史料情報収集・ロシア国立海軍文書館の日本関係史料目録を現在作成中であり、歴史文書館の日本関係史料の解説目録作成も次年度より作成作業に入る。科学アカデミー東洋学研究所(サンクトペテルブルグ支部)の日本関係写本史料目録は作成済み(別途経費)。これまでに収集したロシア語史料および目録類はそれぞれ解読および翻訳作業を継続している。3)漢文史料の情報整理・大日本史料等に用いた漢籍史料の典拠情報を整理し、さらに400件以上におよぶ日本関係記事の抽出作業を行なった。4)研究集会等・計4回の研究集会をおこない、また研究所主催の日露関係史料国際研究集会の中核をになって活動した。本研究の目的は、前近代東アジアにおける日本関係史料の系統的・組織的な調査と収集を行ない、東アジア各地等に所在する日本史史料の全体構造に見通しをつけることにある。今年度も「日本史史料が結ぶ東アジア日本学研究の交流推進プロジェクト」(研究代表者:保谷)などと連携して以下のような史料調査および史料情報収集活動をおこなった。1)海外出張調査・サンクトペテルブルグ市(ロシア連邦)に出張し、ロシア国立海軍文書館・同歴史文書館・同科学アカデミー文書館・科学アカデミー東洋学研究所等の日本関係史料を閲覧調査し、複写して収集した。・大韓民国に出張し、釜山大学図書館古典資料室・国立海洋遺物展示館・国史編纂委員会などで日本関係史料の調査をおこなった。・パリ(フランス)に出張し、コレージュ・ド・フランス所蔵の日本関係古写真コレクション等を調査して高精度デジタル画像で収集した。2)ロシア史料と史料情報収集・ロシア国立海軍文書館の日本関係史料目録およびモスクワ所在日本関係史料目録等を現地研究者に委託して作成し、この翻訳作業をおこなった。歴史文書館および科学アカデミー文書館の日本関係史料目録についても同様に作成中である。3)漢文史料の情報整理・主に室町期(第6・7編)を中心に大日本史料等に用いた漢文史料を抽出し、史料学的検討を加えたほか、さらに中韓の文集類から日本関係記事の抽出・蓄積作業を行なった。4)研究集会等・計4回の研究集会をおこない、また年度末には「日露関係史料をめぐる国際研究集会2005」(史料編纂所・日本学士院共催、外務省認定「日露修好150周年記念事業」)を開催した。