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日記文の指導についての歴史的研究(明治8年から23年)

平成14年度における文献調査の概要は、以下の通りである。明治12年から20年までに刊行された読本や文法・漢文・綴方・習字関係の文献調査、及びそれらの分析・検討を行った。主たる文献は、以下のものであった。明治12年→『島田一郎梅雨日記初五編』(岡本起泉)、『棧雲峡兩日記并詩草』(竹添光鴻)、『小学文法書巻之一三』(中島操編)、『文章規範続々4巻』(張〓撰)、『開化用文日用必携』(西野古海)、『開化初学用文』(青木輔清)明治13年→『文章規範評林字義註解正17巻』(謝枋得編)、『文章規範評林字義註解続17巻』(鄒守益編)明治14年→『小学日本文典巻上・下』(大槻修二)、『小学日本文典入門巻之1』(林甕臣)、『文章叢話巻上・中・下』(結城顕彦)、『や万登文範』(小野田孝吾)「文学的・紀行的」日記が散見されたことは収穫であった。長編が多く、解読という基礎作業に時間がかかり、日記文の指導に直接つながるような記述内容を今のところは見つけるにいたっていない。この範囲内で検討したところ、明治8年から23年までは、日記文の指導論を生むまでの胎動的段階として位置付けられると考えられる。やはりこの時期には、定義文・論説文・記事文・叙事文などを書くこと、つまり記録していく文体が重んじられたのである。この点をして、日記文の指導論を生むまでの胎動的段階と捉えたのである。平成12年度の文献調査の結果は、以下のとおりである。明治8年から12年までに刊行された読本や文法・漢文・綴方・習字関係の文献調査、及びそれらの分析・検討を行った。【明治8年刊】『書読日用文』(文部省編)、『作文捷径』(西野古海編)【明治9年刊】『作文方法上下』(林多一郎・中島操編)、『作文のこころへ』(岡松甍谷)【明治10年刊】『京都府下小学生徒秀華文鈔』(水原幸次郎編)、『初学作文法』(羽山尚徳)、『上等作文軌範』(高橋敬十郎)【明治11年刊】『頭書類語小学作文五百題一・二・三・四』(安井乙熊編)、『下等小学公私作文階梯』(藤田守編)、『小学必需作文一助』(横山莠)【明治12年刊】『小学文林上下』(早川光蔵編)、『小学記事文例』(岩崎恒義)長編が多く、解読という基礎作業に時間がかかり、日記文の指導に直接つながるような記述内容を見つけるにいたっていない。明治8年から12年までは、日記文の指導論を生むまでの胎動的段階として位置付けられる。明治元年から7年までの傾向は続いており、漢作文中心の定義文、論説文などの叙事的文体による文章が尊重されている。前年度報告書でも触れたように、「例」と「理」の意識が、書かれた内容を支えている。このような基本的文章制作態度が重んじられていたことは、自己の記録としての日記を書くという態度に通じるものであろう。平成13年度における文献調査の概要は、以下のとおりである。明治13年から23年までに刊行された読本や文法・漢文・綴方・習字関係の文献調査、及びそれらの分析・検討を行った。明治13年→『小学科用女私用文』(前田覚治郎)、『初学紀要文』(塩野入安)明治22年→『京都教育品展覧会出品秀華作文』(加藤辰治)、『学窓桜鳴集』(竹内廉)明治23年→『作文初問』(村田峯次郎)、『少年文範上・下』(榊信一郎)他長編が多く、解読という基礎作業に時間がかかり、日記文の指導に直接つながるような記述内容を今のところは見つけるにいたっていない。その範囲内で検討したところ、明治8年から23年までは、日記文の指導論を生むまでの胎動的段階として位置付けられると考えられる。例えば、以下のような事実がある。○『京都教育品展覧会出品秀華作文』の場合は「定義文」という部門がある。○『学窓桜鳴集』の場合は「ノ記」「ノ説」という文章がある。○『少年文範』の場合は「記事門」「論門」「説文」という部門がある。○『睦廻友』では「記事文」「定義文」という部門がある。この時期には、定義文・論説文・記事文・叙事文などを書くこと、つまり記録していく文体が重んじられたのである。

明治12年→『島田一郎梅雨日記初五編』(岡本起泉)、『棧雲峡兩日記并詩草』(竹添光鴻)、『小学文法書巻之一三』(中島操編)、『文章規範続々4巻』(張〓撰)、『開化用文日用必携』(西野古海)、『開化初学用文』(青木輔清)明治13年→『文章規範評林字義註解正17巻』(謝枋得編)、『文章規範評林字義註解続17巻』(鄒守益編)明治14年→『小学日本文典巻上・下』(大槻修二)、『小学日本文典入門巻之1』(林甕臣)、『文章叢話巻上・中・下』(結城顕彦)、『や万登文範』(小野田孝吾)「文学的・紀行的」日記が散見されたことは収穫であった。長編が多く、解読という基礎作業に時間がかかり、日記文の指導に直接つながるような記述内容を今のところは見つけるにいたっていない。この範囲内で検討したところ、明治8年から23年までは、日記文の指導論を生むまでの胎動的段階として位置付けられると考えられる。やはりこの時期には、定義文・論説文・記事文・叙事文などを書くこと、つまり記録していく文体が重んじられたのである。この点をして、日記文の指導論を生むまでの胎動的段階と捉えたのである。
微小傾角基板を用いた単一電子トンネル・デバイスの研究

(1)高精度微小傾角基板における原子層ステップ-テラス構造の作成(100)面を主体とした主要低指数面からの傾き、大きさを変化させた高精度微小傾角シリコン基板を超高真空中通電加熱処理することにより、単原子層及び2原子層ステップ-テラス構造を再現性良く作成するのに成功した。(2)グループ傾斜側面を利用した単電子トランジスタの設計及び試作シリコン(100)面を異方性エッチングすることにより近接して形成される基板を超高真空中通電加熱処理することにより、単原子層及び2原子層(111)面で挟まれる微小領域に自己整合工程を用いてリセス構造を形成することにより表面反転層を電界誘起により形成して、量子ドットを実現せしめることにより、高密度集積化に適した単電子トランジスタが製作可能であることを提案した。現在までに2次元容量解析シミュレーションによって素子の寸法、材料設計を行い、その設計に基づいて素子を作成し、その電気的特性の評価を行うまでに至っている。一方、素子寸法を更に微細化するために、電子線露光装置を立ち上げ、最小線幅0.05μm程度の極微細パターン作成を可能とした。(3)非対称トンネル障壁を有する単電子素子の設計及び試作非対称のポテンシャルを使用するトンネル障壁の導入により、電子の移動に方向性を持たせ、また、障壁の容量とトンネル抵抗とを独立に制御することが可能となり、単電子トランジスタの設計の自由度が大幅に向上することを提案し、且つ、シミュレーションにより確認した。非対称トンネル障壁が、cmosロジックのような従来型論理回路のみならず、2分決定ダイヤグラム(BDD)ような非ブール代数型論理回路に対しても有用であることを示すことに成功した。(1)微小傾角基板によるステップ構造の作成と単一電子トンネル・デバイス作成の基礎実験半導体基板としては(100)シリコン基板と本研究経費で購入した試料研磨装置等を用いて作成した(100)に対し、4°ないし5°傾斜させた微小傾角シリコン基板を使用した。エッチング液としては水・エチレンジアミン-パイロカテロール混合溶液(EPW)と水酸化カリウムを使用したが、EPWで5°傾斜基板を1時間エッチングすることにより、部分的にステップ構造を実現することができた。KOHで4°傾斜させたシリコン基板を2分間沸化水素酸で処理して30分間エッチングした場合、垂直に交差する2面を側面とする扇形のエッチ・ピットが得られ、その利用方法を検討中である。(2)トンネル現象のクーロン・ブロッケードの測定GaAs/AlGaAsヘテロ接合界面における2次元電子ガスのトンネル現象については、スプリット・ゲート型の素子を作成し、^3He-^4He希釈冷凍機を用いて10mKにおいて58Teslaの磁界の下でクーロン・ブロッケードによる振動現象を観測した。なお、3Tesla近傍での抵抗のゆらぎから量子ドット内の電流閉路にかかわるAharanov-Bohm効果を測定した。(3)単一電子トンネル・トランジスタの構造基本設計の研究単一電子トンネル・トランジスタの基本的な構造についてシリコン表面のSiO_2膜をマスクにして、KOHの異方性エッチングを用いてシリコン基板内に凹部をつくり単一電子トンネル・トランジスタを作成する場合のマスク・パターンを設計し、自己整合、シャドゥイング技術を用いて、微細なリソグラフィに依存しないで構成する方法を検討した。(100)面を<110>方向に4°傾けたシリコン基板を超高真空中で通電フラッシングすることにより、単電子層及び2原子層ステップを有し、テラス長が80Å程度の基板の製作に成功したことを走査型トンネル顕微鏡で観察することに成功し、さらにこれに電極用金属を斜め蒸着によりshadowingにより原子層ステップで分離された微小キャパシタンス列を作成することを試みている。また、シリコン基板を5%の酸素を含むアルゴン雰囲気中で1350°C,10時間加熱することにより、ジャイアント原子層のステップを作成することも検討している。

単一電子トランジスタの試作としてはシリコン(100)面をエチレン・ジアミン・ピロカテコールの水溶液を用いた異方性エッチングにより近接して形成される(111)面で挾まれる微小領域に表面反転層を電界誘起により形成して量子ドットを形成する方法を考案し、(111)面で挾まれる微小領域の作成に成功している。単一電子トランジスタの動作特性上の一つの問題点は、量子ドット中に電子を局在させるためにトンネル抵抗を大きくとるとCRの時定数が大きくなって動作速度が遅くなり且つトンネル電流が小さくなることである。そこでトンネル電流を決める電位障壁は薄くしてトンネル電流を大きくし、電子の局在性を確保し、キャパシタンスを決める電位障壁は厚くして、量子ドット中に存在する電子のトンネル抵抗を大きくし、キャパシタンスを小さくして動作速度を上げる構造を考案し、計算機シミュレーションにより、その動作を確かめることに成功した。また、この2重障壁構造はトンネル電流・電圧特性に非対称性が現れることが予想されるので、2分木法による単一電子回路の構成に際し電子の転送に方向性を持たせることができ、単一電子回路の構成を容易にすることができることも明らかになっている。(1)高精度微小傾角基板における原子層ステップ構造の作成(100)面を主体とした主要低指数面からの傾き、大きさを変化させた高精度微小傾角シリコン基板を超高真空中通電加熱処理することにより、単原子層及び2原子層ステップ構造を作成するのに成功し、走査型トンネル顕微鏡で確認した。(2)グループ傾斜側面を利用した単電子トランジスタの試作シリコン(100)面をエチレン・ジアミン・ピロカテコールの水溶液を用いた異方性エッチングにより近接して形成される(111)面で挟まれる微小領域に表面反転層を電界誘起により形成して量子ドットを形成する方法により作成する単電子トランジスタに関して、2次元容量解析シミュレーション等によって素子の寸法、材料設計を行い、その設計に基づいて素子を作成し、現在までに3端子測定によりその電気的特性の評価を行うまでに至っている。一方、素子寸法を更に微細化することにより量子効果の発現をより容易にするために、電子線露光により最小線幅0.05μm程度の極微細パターン作成を可能とした。(3)単電子トランジスタ動作のコンピュータシミュレーション単電子トランジスタの実用化の障害となる、動作速度、動作温度、ファンアウト間に必然的に生じるトレードオフの問題点を解決すべく提案した非対称トンネル障壁の導入により、電子の移動に方向性を持たせ、また、障壁の容量とトンネル抵抗とを独立に制御することが可能となる。この着想に基づく素子に関してはシミュレーションにより既にその動作を確認済みであり、CMOSロジックのような従来型論理回路において特性を向上させるのみならず、2分決定ダイヤグラム(BDD)のような非ブール代数型論理回路に対してもその有用性を示すことに成功している。
チックへの行動療法及び行動実験を通じたチックと感覚現象の病態解明

平成30年度は、ハビットリバーサル法を中心とするチックへの包括的行動療法(Comprehensive Behavior Intervention for Tics:CBIT)の実施と、CBITにバイオフィードバックを加えた新しいチックへの行動療法を実施するための準備を行った。CBITを受ける参加者を募るため、日本トゥレット協会の医療講演会において、CBITについて、自身のアメリカでの研修内容も含めて報告した。また、東大病院に現在通院中の当事者の方に対して、CBITを予備的に実施し、その前後で評価を行った。当初の予定では従来のCBITを45名ほどに実施したのち、バイオフィードバックを加えた修正版のCBITを本年度中に数名に実施する予定であった。しかし、倫理委員会における申請やその申請が認められるまでに予想外に時間がかかったことや、申請者の妊娠および出産が重なったために、従来のCBITを45名ほどに実施するというところまでしか目標を達成できなかった。CBITを実施した対象者の中には、チックに対する脳深部刺激療法(DBS)という脳外科手術が必要となるほどチックが重症であり、DBS実施後にもチック症状がほとんど改善しなかった難治性の重症患者やチック症状のために入院が必要となるほど重症な対象者が存在した。また、昨年度にWoods氏のスーパーバイズを受けながらCBITを実施した児童のフォローアップセッションを行い、CBIT実施から半年後も十分な改善を維持していることを確認した。このような実践の中で、CBITの効果は、クライアントによって効果が表れる時期や効果の内容が異なることが示唆された。そのため、今後CBITの効果研究を行うにあたって、チック症状の頻度だけでなく、チックのコントロール力や生活の質、強迫症状など幅広く評価することが大事であることが示唆された倫理委員会における申請やその申請が認められるまでに予想外に時間がかかったことや、申請者の妊娠および出産が重なったために、特別研究員としての本来の研究を行う時間の他に、若手研究に申請した内容を研究する時間を十分にとることができなかった。また、実際に従来のCBITを当事者に対して行う中で、1人の対象者に費やす時間的コストが高く、介入者が申請者1人だけではCBITに参加できる人数がかなり限られてしまうこと、通学や仕事などの関係でCBITを受けたいのに受けることができない当事者が一定数いること等の限界が見えてきた。今後の研究は、1.現在行われているCBITの効果を高めること、2.現在行われているCBITをより多くの当事者が受けられるようになること、の2点を目指す。1点目については、今年度実施したCBITの事例を分析し、どのような事例では上手くいくのか、より効果を高めるにはどのような介入の工夫が必要か評価していく。特に、若手研究では2,のCBITをより多くの当事者が受けられるようになることに重点をおいて研究する。ある程度チック症状が軽症な当事者や、通勤や通学で時間が取れない当事者に対して、夏休みに短時間で集中的に対面でのCBITを行い、その後はテレビ電話等でフォローアップを行う等、CBITをより柔軟に行う方法を模索し、その効果を検討する。Tic Helperというウェブベースで実施するCBITの翻訳とその効果の検討を行うことも検討している。また、CBITができる介入者を増やしていく。さらに、より多くの当事者にCBITという選択肢を知ってもらい、研究に参加してもらうために、チック及びチックへの対処方法、CBITについて分かりやすく解説したホームページを作成する。申請者の所属先の病院に直接来院していない当事者の方やその保護者も、ホームページを見るだけでチックについての心理教育を十分に受けることができるような内容を考えており、対象者のリクルートのみでなく、研究を社会に還元していくという意義がある。また、これまでのCBITの事例を分析し、CBITの前後の評価を工夫することで、トゥレット症候群の病態解明につながる知見を得ることも目指す。さらに、申請者が以前行っていた感覚現象とチック、抑制能力の関連を調べる行動実験の例数を増やし、再解析の上、投稿を目指す。

そのため、今後CBITの効果研究を行うにあたって、チック症状の頻度だけでなく、チックのコントロール力や生活の質、強迫症状など幅広く評価することが大事であることが示唆された倫理委員会における申請やその申請が認められるまでに予想外に時間がかかったことや、申請者の妊娠および出産が重なったために、特別研究員としての本来の研究を行う時間の他に、若手研究に申請した内容を研究する時間を十分にとることができなかった。また、実際に従来のCBITを当事者に対して行う中で、1人の対象者に費やす時間的コストが高く、介入者が申請者1人だけではCBITに参加できる人数がかなり限られてしまうこと、通学や仕事などの関係でCBITを受けたいのに受けることができない当事者が一定数いること等の限界が見えてきた。今後の研究は、1.現在行われているCBITの効果を高めること、2.現在行われているCBITをより多くの当事者が受けられるようになること、の2点を目指す。1点目については、今年度実施したCBITの事例を分析し、どのような事例では上手くいくのか、より効果を高めるにはどのような介入の工夫が必要か評価していく。特に、若手研究では2,のCBITをより多くの当事者が受けられるようになることに重点をおいて研究する。ある程度チック症状が軽症な当事者や、通勤や通学で時間が取れない当事者に対して、夏休みに短時間で集中的に対面でのCBITを行い、その後はテレビ電話等でフォローアップを行う等、CBITをより柔軟に行う方法を模索し、その効果を検討する。Tic Helperというウェブベースで実施するCBITの翻訳とその効果の検討を行うことも検討している。また、CBITができる介入者を増やしていく。さらに、より多くの当事者にCBITという選択肢を知ってもらい、研究に参加してもらうために、チック及びチックへの対処方法、CBITについて分かりやすく解説したホームページを作成する。申請者の所属先の病院に直接来院していない当事者の方やその保護者も、ホームページを見るだけでチックについての心理教育を十分に受けることができるような内容を考えており、対象者のリクルートのみでなく、研究を社会に還元していくという意義がある。また、これまでのCBITの事例を分析し、CBITの前後の評価を工夫することで、トゥレット症候群の病態解明につながる知見を得ることも目指す。さらに、申請者が以前行っていた感覚現象とチック、抑制能力の関連を調べる行動実験の例数を増やし、再解析の上、投稿を目指す。平成30年度に申請者が妊娠し、妊娠中に自宅安静や入院を必要とした経緯があったため、若手研究のための十分な時間を割くことができなかった。平成31年度には、平成30年度に予定していた研究参加者のリクルートと研究成果の公表を兼ねたチック及びチックへの認知行動療法に関するホームページの作成や、コンピュータベースでのCBITであるtic helperを翻訳し、効果研究を行うことを予定している。
有限要素法と境界要素法の併用法による導体運動を伴う渦電流場の三次元解析

本研究は電気機器設計に対する応用を前提とした三次元電磁界の有力な数値解析手法の開発を目指しており、特に現在まで長期にわたり本研究代表者が開発してきた有限要素・境界要素併用法の導体運動を伴う渦電流場問題への拡張が具体的な目標である。三次元解析では未知数の個数が急増するため、反復計算により導体運動を伴う電磁現象をステップ毎に解析していく上で膨大な計算時間を要する。したがって解析精度を落とすことなく未知数の個数を減らす工夫が重要である。本研究の対象である有限要素・境界要素併用法は広大な空気領域を境界法である境界要素法で定式化するため、未知数の少なさの点で大変有利である。この併用法の長所を更にのばす目的で、磁界の強さHと磁気スカラポテンシャルψを考察物理量とするH-ψ法を提案し、さらに未知数減少を最優先としたψを極力多用する定式化や複雑な励磁電流分布への対応を考慮したHによる定式化等に成功した。また有限要素法と境界要素法の接合に適し、かつ未知変数のさらなる減少に有効な辺要素を定式化に導入し、H、ψ以外の様々な物理量を未知変数として採用することを可能にした。具体的には有限要素法領域に磁気ベクトルポテンシャルA、変形磁気ベクトルポテンシャルA^*、電界の強さEなどを適用した新たな定式化の開発に成功し、各定式化の得失も明らかにした。これら全ての併用法に対して、実測値が公表されている数種の三次元渦電流場検証モデルの解析を行い有効性を確認した。このような基礎理論の開発と並行して三次元電磁界解析の導体運動を伴う実際の電気機器への応用も試みた。具体的には、リニア誘導機における縁効果や二次導体の移動速度のもたらす影響などの数値解析を行い、機器の特性改善の指針となる有効な解析結果を得て、各併用法の妥当性と有効性を確認した。以上、研究期間を通じて予定通り研究を進めることができた。
詳述年表形式によるラフカディオ・ハーン伝の編纂-来日以前を中心に-

本研究の最終目標は、ラフカディオ・ハーン(小泉八雲)の54年の生涯を可能なかぎり克明に調査し、彼の軌跡を月日単位で詳述した年表形式によるハーン伝の編纂を目指すことにある。本研究では、彼の活動の来日以前のヨーロッパ・アメリカ時代に焦点を絞り、これを2期に分けて、彼がその間に著した著作や親しい友人や文通者に宛てた書簡、それに彼をめぐる人々の関係文書を基本資料として、彼の言動と心情の軌跡をつぶさに辿り、日々の営みを詳細綿密に再現することに努めた。1、基本文献の調査既刊の全著作集、草稿、書簡、ハーンをめぐる人々の証言・日記、当時の新聞・雑誌記事などの第一次資料の精読を行ない、彼の思想および行動の軌跡を考証した。2、資料の間覧と収集自筆書簡、草稿、取材ノート類などの最重要資料については、当初の計画では、ハーン・コレクションを有するアメリカの諸機関から資料の取り寄せを行なうつもりでいたが、国内の研究機関「八雲会」が既にマイクロ・フィルムを所有していて、閲覧と貸与の協力が得られたので、原文判読とタイプアウトの作業を行なった。成果の発表これまでアメリカや日本の研究雑誌の中で分散して、あるいは断片的に発表されてきた書簡類を、未刊のものと合わせて、発表年代順に配列し直してハーンの言動の軌跡と心情の推移をつぶさに考察し、その研究の一部を三篇の論文にまとめて発表した。全資料の集大成成果を集大成して、A4版277頁の報告書にまとめあげた。主要点:(1)初の年表形式による詳細なハーン伝、(2)研究者の便宜を図るための詳細な注釈の記述と典拠の明示、(3)題材収集の経緯および作品制作過程の解明、(4)定説の見直しと誤謬の修正、(5)ハーンの活動の空白部分を埋める新説と新事実の発見本研究の最終目標は、ラフカディオ・ハーン(小泉八雲)の54年の生涯を可能なかぎり克明に調査し、彼の軌跡を月日単位で詳述した年表形式によるハーン伝の編纂を目指すことにある。主要点:(1)初の年表形式による詳細なハーン伝、(2)研究者の便宜を図るための詳細な注釈の記述と典拠の明示、(3)題材収集の経緯および作品制作過程の解明、(4)定説の見直しと誤謬の修正、(5)ハーンの活動の空白部分を埋める新説と新事実の発見ラフカディオ・ハーン(小泉八雲)の来日以前の軌跡を2期に分け、本年度は、彼の青年期までのギリシャ、イギリス、フランス時代(1850-68)の軌跡を重点的に考証した。1、基本文献の調査既刊の全著作集、草稿・書簡、ハーンをめぐる人々の書簡・日記、当時の新聞・雑誌記事などの第一次資料の精読を行ない、彼の思想と行動の軌跡を考証した。2、資料の閲覧と収集国立国会図書館、新宿歴史博物館、松蔭女子学院大学図書館、島根大学図書館、松江市立図書館、小泉八雲記念館にて資料の閲覧と収集を行った。また、設備備品として購入したミニ・マイクロフイルム・リーダーを駆使してハーンの書簡や取材メモ類の原文の判読とタイプアウトの作業を行った。3、成果と問題点(1)幼少期の足跡については新たな事実は発現できなかった。(2)フランス滞在の時期と期間については、定説に大きな疑念を抱いていたが、これを覆す有力な論拠が得られなかった。(3)青年期の思想形成の推移をある程度解明することができた。(4)過去に発表した自説の見直しと若干の誤謬の訂正を行なった。研究機関誌へ成果の一部を発表した。ラフィカディオ・ハーン(小泉八雲)の来日以前の軌跡を2期に分け、本年度は、アメリカ時代(1869-90)における活動の軌跡を重点的に考証した。基本文献の調査1、前年度に引き続き、既刊の全著作集、草稿、書簡、ハーンをめぐる人々の書簡・日記、当時の新聞・雑誌記事等の第一次資料の精読を継続して行ない、彼の思想と行動の軌跡を考証した。

2、資料の閲覧と収集自筆書簡、草稿、取材ノート類なでのうち、未刊のものについては、当初の計画では、ハーン・コレクションを有するアメリカの諸機関から資料の取り寄せを行なうつもりでいたが、国内の研究機関「八雲会」が既にマイクロ・フィルムを所有していて、閲覧と貸与の協力が得られたので、設備備品費で購入したマイクロ・フィルム・リーダーを駆使した、原文判読とタイプアウト作業を行なった。3、成果の発表これまでアメリカや日本の研究雑誌の中で分散して、あるいは断片的に発表されてきた書簡類を、未刊のものと合わせて、発表年代順に配列し直してハーンの言動の軌跡と信条の推移をつぶさに考察し、その一部の所属の機関誌に発表するとともに、二年間の成果をA4版277頁の「研究成果報告書」にまとめた。
国際規制の合意形成に関する分析-食品安全をテーマに

本研究は、食品安全規制の相違に起因する紛争が国際問題化する中、GM食品の安全性をめぐる国際合意を事例として、食品安全規制をめぐる国際関係の特質を明らかにするとともに、国際的な合意形成のメカニズム・リスクガバナンスのあり方について分析した。最終年度である本年度は、かかる問題意識に基づくこれまでの研究を、関係機関の実務家(OECD、FAO、コーデックス、欧州委員会、米国FDA(食品医薬品局)等)へのインタビューにより検証した。その成果については、以下のとおり、学会(社会技術論学会)にて発表するとともに論文にまとめた(近刊)。GM食品の商品化とそれに伴う関係主体の多様化という環境条件の変化は、GM食品の安全性に関する国際政策システムの再編と変容をもたらした。この再編と変容のプロセスで重要な役割を果たしたのが、第1に「交渉の場(国際機関)」の特質・ルール(科学的議論の重要性、交渉の正当性を確保する要因(参加主体の包括性、協議実施機関のマンデート、透明性)の意義)、第2に、再編を促すアクター(特に議長国)の国際的なポジションと能力である。また、GM食品については総じて深刻な意見対立が存在すると思われているが、安全性に関する「科学的」議論(リスク評価のアプローチや手法のコアな部分)については科学者や規制当局者間の国際的なコンセンサスの形成が相対的に可能であり、調和が漸進的に進展していることが指摘できる。これに対して、いかにリスクを管理するのかという「政策的な」議論(リスク管理)については、社会的文化的経済的考慮に基づく国内規制の相違が存在し、それが国際的な合意を困難にしていることが明らかとなった。今後は、こうした「科学的」議論における国際合意の進展が、国家間の「政策的」な議論の調和に如何なる影響を及ぼすのかに留意して研究することを課題としたい。本研究の目的は、食品安全分野における国際規制を形成・促進・阻害する要因について国際政治的観点から解明し、今後のリスクガバナンスのあり方について検討することである。この目的を達成するに当たり、課題に関連する既存研究の文献調査と、実証研究のための食品安全に関する情報収集及びインタビュー活動(政府関係者、科学者、業界関係者、国内外の学術関係者)を実施した。具体的には、遺伝子組み換え食品の安全性評価の形成過程を事例として、80年代半ばから現在に至るまでの国際レベルで展開された様々な議論を調査した。その結果、(1)規制の形成過程における「科学・技術と政治」の相互作用が重要であり、また、(2)最終的に規制を策定する国際機関の特質や内部でのパワーポリティクスの重要性に加えて、そこに至る以前の段階の諸要素(「交渉の場」の選定段階での国際交渉や、交渉に先行して様々なフォーラムで形成されるフォーマル・インフォーマルなコンセンサス等)が及ぼす作用も重要である点が明らかとなった。今後は、これらの要素がいかなるメカニズムで規制の形成に影響をもたらしているのかを、理論的に考察するとともに実証的に検証する。更に、規制の相違に起因する実際の紛争や調整は、バイラテラルの関係から生じることから、国際機関レベルにおける合意形成のあり方の研究と並行して、具体的な事例として日中間の食品規制をめぐる関係(日本におけるポジティブリスト制度の導入が中国の食品安全体制に及ぼす影響)についても調査を実施し、07年マカオで開催されたシンポジウムにおいて研究成果を発表した。本年度は他業務の関連で、食品の国際規格を策定しているコーデックスの部会にテクニカルアドバイザーとして参加する機会を得た。こうした実務経験で得られた現場感覚や人脈も今後の研究に反映し、現場と学問の相互作用をバランスよく行いたい。
腸管上皮細胞の物質輸送・透過特性に影響する食品因子の解析

ヒト結腸癌由来培養細胞Caco-2を用い、腸管での輸送/透過というプロセスを短期的(Shrt-term),あるいは長期的(Long-term)に調節するような食品由来因子の検索を行った。まず透過性膜上に単層培養したCaco-2をユッシングチャンバーにセットし,粘膜側に糖,アミノ酸,ペプチドなどの栄養素を添加した時の粘膜側と基底膜側の間に生じる電位差や短絡電流の測定装置を構築した。また,細胞層の電気抵抗(R)や螢光物質透過量の測定から細胞間経路による物質透過性変化を観察した。Caco-2では,培養日数の経過に伴い,密着結合が形成されてRが上昇するとともに,ペプチドの輸送活性や刷子縁膜酸素活性が上昇した。Caco-2の機能をlong-termに調節する因子を食品中から検索するために、Caco-2の無血清培養を試みた結果,Caco-2は無血培地でもほぼ同様の増殖性を示した。この無血清培養Caco-2細胞(Caco-2-SF)は,刷子縁膜酵素やペプチド輸送担体を発現していることも認められた。しかし,Caco-2-SF細胞層のRは著しく低下し,物質透過性の増大が観察されるとともに,粘膜側から基底膜側への栄養素の輸送がほとんど行われなくなることが見出された。このようなCaco-2-SF細胞層におけるRの低下,透過性の増大などは血清の添加などにより回復することから,本細胞は腸管上皮における細胞間コミュニケーション,吸収機能,透過性などを調節する因子の研究に有用なものであると考えられた。long-termの因子に対し,細胞に直接作用して,直ちに腸管の吸収透過性をモジュレートするshort-termの因子についても検討することにした。透過性膜上に培養した通常のCaca-2粘膜側に試料を加え,直ちにRの変化を測定するという実験系を用いて各種の食品素材を分析した結果,ある種の野菜,果実の抽出物中にRを変化させる活性が見出され,細胞間ジャンクションの構造変化を短時間で誘起する食品成分の存在が示唆された。
スラウェシ島の湖沼性淡水魚における体色の多様化と類似化に関する研究

赤道直下のスラウェシ島に分布するメダカ科魚類とサヨリ科魚類の体色を調べたところ,メダカもサヨリも異なる湖に生息する集団間で体側の赤色の面積も体内のカロテノイド量も大きく異なるが,同じ湖に生息するメダカとサヨリはそれらが類似していることがわかった.しかし,メスの眼球で発現している赤色を感受するオプシン遺伝子の発現量は,メダカでは集団間で大きく異なっていたが,サヨリではそうした違いが見られなかった.これらの結果は,メダカとサヨリの赤色の多様化と類似化が,センサリードライブによる収斂進化を反映していないことを示唆している.赤道直下のスラウェシ島の湖沼性淡水魚の多くは,異なる湖に生息する近縁姉妹種間で体色が質的に大きく異なるが,同じ湖に生息する種は分類群を超えて体色が類似している.これは,センサリーバイアスによる収斂進化の結果を反映しているかもしれない.本研究は,本島の異なる湖に生息するメダカ科,サヨリ科,およびハゼ科魚類を対象に,各湖の光環境,各種のオスの体色,および体色に対するメスの選好性の間の相関の有無からその可能性を検討する.さらに,各種のメスの眼球で発現している遺伝子の発現量と配列の解析から,色覚の平行進化をもたらす共通の原因遺伝子の探索も行い,体色の多様化と類似化の遺伝基盤にも迫る.26年度は,スラウェシ島南東部およびムナ島の8つの地点からメダカ(Oryzias woworae種群)とサヨリ(Nomorhamphus種群)の採集を行った.採集した成魚を活かした状態で室内に持ち帰り,雌雄判別の後に分光計を用いて,体表と鰭(胸鰭および尾鰭)の光反射特性を測定したところ,集団間でメダカもサヨリも体色の青みと鰭の赤みが大きく異なることがわかった.興味深いことに,鰭の赤みはメダカとサヨリとで平行的に変異しており,同一種群の集団間レベルでも体色が収斂進化していることが示唆された.また,各生息地の水の光透過特性(トランスミッタンス)ならびに日射強度(イラディアンス)を測定したところ,鰭の赤みの強いメダカやサヨリの生息する湖/河川は,短波長側の光線が優占する傾向にあることがわかった.これは,体色の収斂進化を強く支持している.赤道直下のスラウェシ島の湖沼性淡水魚の多くは,異なる湖に生息する近縁姉妹種間で体色が質的に大きく異なるが,同じ湖に生息する種は分類群を超えて体色が類似している.これは,センサリーバイアスによる収斂進化の結果を反映しているかもしれない.本研究は,本島の異なる湖に生息するメダカ科,サヨリ科,およびハゼ科魚類を対象に,各湖の光環境,各種のオスの体色,および体色に対するメスの選好性の間の相関の有無からその可能性を検討する.さらに,各種のメスの眼球で発現している遺伝子の発現量と配列の解析から,色覚の平行進化をもたらす共通の原因遺伝子の探索も行い,体色の多様化と類似化の遺伝基盤にも迫る.本年度は,昨年度に採集したスラウェシ島南東部およびムナ島のメダカ(Oryzias woworae種群)8集団とサヨリ(Nomorhamphus種群)4集団の眼球で発現している遺伝子の網羅的発現解析を行った.RNA-Seqを用いて眼球で発現しているオプシン遺伝子8種類の相対的発現量を比較したところ,メダカでは,各生息地の水の光透過特性(トランスミッタンス)ならびに日射強度(イラディアンス)と相関した各オプシンの発現パターンが見られ,環境光に対する適応進化が示唆されたが,アミノ酸配列に集団間で大きな違いは見られなかった.サヨリでもRNA-Seqは終了しており,発現量とアミノ酸の配列解析を進めている.今後は,メダカとサヨリの発現量の比較解析を行う予定である.赤道直下のスラウェシ島に分布するメダカ科魚類とサヨリ科魚類の体色を調べたところ,メダカもサヨリも異なる湖に生息する集団間で体側の赤色の面積も体内のカロテノイド量も大きく異なるが,同じ湖に生息するメダカとサヨリはそれらが類似していることがわかった.しかし,メスの眼球で発現している赤色を感受するオプシン遺伝子の発現量は,メダカでは集団間で大きく異なっていたが,サヨリではそうした違いが見られなかった.これらの結果は,メダカとサヨリの赤色の多様化と類似化が,センサリードライブによる収斂進化を反映していないことを示唆している.現地での採集・調査も首尾良く終了し,予定していたデータを採取することができた.また,種間レベルでのみ想定した体色の収斂進化が,集団間レベルでも進化していることが強く示唆され,新しい知見も得ることができた.同時に,眼球の遺伝子発現解析のためのサンプルも採取して日本に持ち帰ることができた.研究目的に沿って,おおむね順調に進展していると評価した.進化生態学今後は,眼球での遺伝子発現解析ように採取してきたサンプルの処理を進める予定である.また,スラウェシ島の黄色いメダカやサヨリが分布している地域にも採集・調査に出かけ,本年度に得られた上の知見と比較して,種間レベルでの収斂進化のメカニズムを解明していく予定である.RNAの解析を次年度に回したため,その機材や薬品の費用だけ物品費が安くなった.
ヒト及びニホンザルにおける成人T細胞白血病ウィルスの母児間垂直感染に関する研究

本研究は成人T細胞白血病ウイルス母児間垂直感染の実態及びその予防方法の解明を目的として発足した。当初の計画ではヒトのみならずニホンザルをも対象としたが、捕獲入手困難なため現在まで専らヒトのみで研究が進められてきた。昭和60年及び61年の2年間に、1)ATLA抗体検査法の比較(PA,ELISAWB法),2)沖縄県,岩手県及び千葉県の婦人,特に妊婦におけるATLVキャリアーの疫学的調査,3)ATLV家族内集積検索による垂直感染並びに夫妻間感染状況の検討,4)婦人科悪性腫瘍患者におけるATLV保有率の検討,等を行ってきたが、その成績の概要は以下の如くである。1)PA法とELISA法におけるATLA抗体陽性一致率は86.4%,陰性一致率は100%,合計88.9%の一致率で、WB法による確認テストではPA法で偽陽性率が高い傾向が認められた。又、PA法力価(【2^n】)の上昇と共にELISA法測定値(Cut-off Index)も増加する傾向にあったが、【2^(4-6)】群で75%(8例中6例)に、【2^(12)】を越える群で30例中2例(6.7%)にELISA法陰性はみられた。2)岩手県田野畑村の年令6才-90才の婦人400人におけるATLA抗体保有率は7.3%で、加令と共に上昇し、80才以上では33.3%(12例中4例)に達した。3)沖縄県石垣島,岩手県(釜石市、大船渡市)及び千葉県(HBsAgキャリアー)における妊婦のATLA抗体保有率はそれぞれ6.9%,5.9%,及び0.8%であった。4)ATLVキャリアー妊婦の出産の出生児9名においてATLA抗体の消長を検索したが、2名の児を除いて臍帯血より陽性を呈し、以後加令と共に漸減し、生後6ケ月まで陽性が維持された。5)ATLA抗体陽性妊婦7家族におけるATLA抗体保有率は59.2%(49例中29例)の高率で、特に母(80.0%),祖母(66.7%),及び同胞(68.4%)で極めて高い陽性率が得られた。6)千葉県における子宮頸癌45症例,卵巣悪性腫瘍30症例の計75症例においてATLA抗体陽性者は一例も検出されず、悪性腫瘍とATLV感染との相関は得られなかった。
食道癌におけるVasohibin発現の悪性度診断への応用と新規治療法の開発

VASH-1のリキッドバイオプシーへの応用に関する検討(1)検体の採取と保存:食道癌患者から採取した血漿と尿は凍結保存し,手術で摘出した腫瘍組織はホルマリン固定後にパラフィン包埋ブロックとして保存する.検体採取の時期は,手術患者は術前,術後1か月,再発時とし,化学療法や化学放射線療法を受ける患者は治療の前後とした.2019年4月26日時点で採血・採尿の検体数は106例となった.(3)血液・尿中の濃度測定:血漿は上記ELISA法で血漿中VASH-1濃度を測定し,臨床腫瘍学的因子との関連性について検討した.(4)2017年2月から2019年1月までに当院にて治療を開始した食道扁平上皮癌患者86例を対象として検討した.血漿VASH-1濃度の平均値は,腫瘍径50mm以上の症例は,腫瘍径50mm未満の症例に比べて高値であった(腫瘍径50mm以上2401±1470fmol/ml,腫瘍径50mm以下1746±1318fmol/ml, P=0.04).年齢、性別、TNM Stage、PET-CTの原発巣のSUVmax、化学療法の奏効率、術後再発の有無、予後に関しては有意差を認めなかった.血漿VASH-1濃度高値は,瘍径の増大など,腫瘍の増殖と関連していると考えられた.検体採取に多少の時間を要しているが,有意な結果が得られている.引き続き,検体採取(採血と採尿)を進めて,上記ELISA法で血漿中VASH-1濃度を測定し,臨床腫瘍学的因子との関連性について検討する.VASH-2に関しては,Mybiosource社のVASH-2 ELISA Kitを使用し,血漿濃度の測定を開始している.また,手術摘出検体の病理組織は抗VASH-1,2抗体を用いた免疫組織化学染色を行なっており,今後は腫瘍組織におけるVASH-1,2の発現と血漿中のVASH-1,2濃度,臨床腫瘍学的因子との関連から,リキッドバイオプシーとしての血漿VASH-1,2濃度の意義を検討していく.VASH-1のリキッドバイオプシーへの応用に関する検討(1)検体の採取と保存:食道癌患者から採取した血漿と尿は凍結保存し,手術で摘出した腫瘍組織はホルマリン固定後にパラフィン包埋ブロックとして保存する.検体採取の時期は,手術患者は術前,術後1か月,再発時とし,化学療法や化学放射線療法を受ける患者は治療の前後とした.2018年4月9日時点で採血・採尿の検体数は73例となった.(3)血液・尿中の濃度測定:血漿は上記ELISA法で血漿中VASH-1濃度を測定し,臨床腫瘍学的因子との関連性について検討した.(4) 2017年2月から8月までに当院にて治療を開始した食道扁平上皮癌患者22例を対象として検討した.血漿VASH1濃度の平均値は,腫瘍径30mm以上の症例は,腫瘍径30mm未満の症例に比べて高値であった(腫瘍径30mm以上1334±642fmol/ml,腫瘍径30mm未満761±203fmol/ml, P=0.02),また,リンパ節転移陽性例は,陰性例に比べて,血漿VASH1濃度の平均値は高値であった(リンパ節転移陽性例1325±648fmol/ml,リンパ節転移陰性例826±182mol/ml, P=0.02).年齢,性別,TNM Stage,術前のPET-CT検査における原発巣のSUVmaxにおいては有意差を認めなかった.血漿VASH1濃度高値は,腫瘍径の増大やリンパ節転移など,腫瘍の増殖と関連していると考えられた.検体採取に多少の時間を要しているが、有意な結果が得られている。VASH-1のリキッドバイオプシーへの応用に関する検討(1)検体の採取と保存:食道癌患者から採取した血漿と尿は凍結保存し,手術で摘出した腫瘍組織はホルマリン固定後にパラフィン包埋ブロックとして保存する.検体採取の時期は,手術患者は術前,術後1か月,再発時とし,化学療法や化学放射線療法を受ける患者は治療の前後とした.2019年4月26日時点で採血・採尿の検体数は106例となった.(3)血液・尿中の濃度測定:血漿は上記ELISA法で血漿中VASH-1濃度を測定し,臨床腫瘍学的因子との関連性について検討した.(4)2017年2月から2019年1月までに当院にて治療を開始した食道扁平上皮癌患者86例を対象として検討した.血漿VASH-1濃度の平均値は,腫瘍径50mm以上の症例は,腫瘍径50mm未満の症例に比べて高値であった(腫瘍径50mm以上2401±1470fmol/ml,腫瘍径50mm以下1746±1318fmol/ml, P=0.04).年齢、性別、TNM Stage、PET-CTの原発巣のSUVmax、化学療法の奏効率、術後再発の有無、予後に関しては有意差を認めなかった.血漿VASH-1濃度高値は,瘍径の増大など,腫瘍の増殖と関連していると考えられた.検体採取に多少の時間を要しているが,有意な結果が得られている.

引き続き,検体採取(採血と採尿)を進めて,上記ELISA法で血漿中VASH-1濃度を測定し,臨床腫瘍学的因子との関連性について検討する.引き続き,検体採取(採血と採尿)を進めて,上記ELISA法で血漿中VASH-1濃度を測定し,臨床腫瘍学的因子との関連性について検討する.VASH-2に関しては,Mybiosource社のVASH-2 ELISA Kitを使用し,血漿濃度の測定を開始している.また,手術摘出検体の病理組織は抗VASH-1,2抗体を用いた免疫組織化学染色を行なっており,今後は腫瘍組織におけるVASH-1,2の発現と血漿中のVASH-1,2濃度,臨床腫瘍学的因子との関連から,リキッドバイオプシーとしての血漿VASH-1,2濃度の意義を検討していく.VASH抗体の染色がうまくいかずにテストを繰り替えしていたため、試薬の購入時期を延期した。年度末に抗体の染色が軌道に乗ったので、新年度にて試薬の購入に充てる。
ゲーテのガイスト概念の究明――雰囲気の思想史のために

精神、霊、気風などさまざまに翻訳されるドイツ語のガイスト概念は、雰囲気的にひろがる「曰く言いがたいもの」を表しうる語である。とはいえその意味は、一八世紀から一九世紀にかけて急速に内面化・知性化・抽象化していったとされる。本研究では、ゲーテがまさにこの時代にガイスト概念の雰囲気的性格を「時」を媒介にして捉えなおし、「時を湛える雰囲気」というイメージを浮かび上がらせたという仮説を立て、これを検証する。
精子と卵子の融合に不可欠なチロシン硫酸化蛋白の同定

近年、一部の分泌蛋白または膜結合蛋白の特定チロシンの水酸基が硫酸化されることが明らかとなり、硫酸化チロシンが蛋白間分子結合に関与し、リン酸化と並ぶ重要な翻訳後修飾と考えられるようになってきた。哺乳類は2種類のチロシン硫酸化を触媒する酵素Tyrosylprotein sulfotransferase(TPST1,TPST2)を持ち、このうちTpst2遺伝子を欠損するノックアウトマウスは、精子の数、運動性、先体反応には異常はないが、卵子との膜融合能力に異常があり不妊となることから、卵子との融合に重要な精子蛋白のチロシン側鎖がTPST2によって硫酸化されることが示唆された。本研究では当該蛋白の同定を試みた。近年、分泌蛋白または膜結合蛋白の特定チロシンが硫酸化されることが明らかとなり、硫酸化チロシンが蛋白間分子結合に関与し重要な翻訳後修飾と考えられるようになってきた。哺乳類は2種類のチロシン硫酸化を触媒する酵素Tyrosylprotein sulfotransferase(TPST1, TPST2)を持ち、このうちTpst2遺伝子を欠損するノックアウト(KO)マウスは、精子の数、運動性、先体反応には異常はないが、卵子との膜融合能力に異常があり不妊となることから、卵子との融合に重要な精子蛋白のチロシン側鎖がTPST2によって硫酸化されることが示唆された。本研究はTPST2によってチロシン硫酸化を受ける精子の蛋白をプロテオーム解析によって同定し、いまだ不明な点が多い精子-卵子の相互認識機構の分子基盤を解明する。精巣においてTPST1とTPST2は同等に発現しているため、TPST2欠損によって雄性不妊が起こる理由として、TPST1とTPST2の特定蛋白への特異性に違いがあることが考えられる。TPST2によって選択的にチロシン硫酸化を受ける蛋白を同定するためには、Tpst1 KOとTpst2 KOマウスの精巣で発現する蛋白のチロシン硫酸化の有無を調べることが必須である。しかしTpst1 KOは、正常マウスに比べ小さく、子宮内致死のため出産数が少ない。また、Tpst2 KOマウスは甲状腺機能低下症を発症し精巣の発達に影響を与える。またTpst1/Tpst2ダブルKOマウスは出生直前に致死となる。そこで、これらの症状の精巣に対する影響を完全に排除するために、Tpst1およびTpst2コンディショナルKOマウスを作出する。現在、ターゲッティングベクターをES細胞に導入し、相同組換え体を単離した。今後、このES細胞をマウス胚盤胞に移植し、キメラマウスを経てKOマウスを得て、解析に供する予定である。Tpst2遺伝子を欠損するノックアウト(KO)マウスは、精子の数、運動性、先体反応には異常はないが、卵子との膜融合能力に異常があり不妊となることから、卵子との融合に重要な精子蛋白のチロシン側鎖がTPST2によって硫酸化されることが示唆された。平成22年度はES細胞をマウス胚盤胞に移植し、複数のキメラマウスを得た。今後germline transmissionを確認しKOマウスの解析を行なう予定である。Tpst2遺伝子を欠損するノックアウト(KO)マウスは、卵子との膜融合能力に異常があり不妊となることから、卵子との融合に重要な精子蛋白のチロシン側鎖がTPST2によって硫酸化されることが示唆された。本研究はTPST2によってチロシン硫酸化を受ける精子の蛋白をプロテオーム解析によって同定し、いまだ不明な点が多い精子-卵子の相互認識機構の分子基盤を解明することを目的とした。

精巣においてTPST1とTPST2は同等に発現しているため、TPST2欠損によって雄性不妊が起こる理由として、TPST1とTPST2の特定蛋白への特異性に違いがあることが考えられる。TPST2によって選択的にチロシン硫酸化を受ける蛋白を同定するためには、Tpst1 KOとTpst2 KOマウスの精巣で発現する蛋白のチロシン硫酸化の有無を調べることが必須である。しかしTpst1 KOは、正常マウスに比べ小さく、子宮内致死のため出産数が少ない。また、Tpst2 KOマウスは甲状腺機能低下症を発症し精巣の発達に影響を与える。またTpst1/Tpst2ダブルKOマウスは出生直前に致死となる。そこで、これらの症状の精巣に対する影響を完全に排除するために、Tpst2コンディショナルKOマウスを作出することを試みた。研究期間内にTpst2 floxed ES細胞をマウス胚盤胞に移植し、複数のキメラマウスを得た。しかし、研究期間内にKOマウスの作出ができなかったため、Tpst2のhypomorphic変異であるgrtマウスの精巣蛋白を抽出し、受精の際の卵子と精子の形質膜の融合のために必要とされる分子のうち、精子側で発現するIzumo蛋白の発現をwestern blotにて比較した。しかしながらgrtマウスの発現量は正常マウスと同等であり、また、免疫沈降したIzumo蛋白に対して、チロシン硫酸特異的抗体を用いたwestern blotを行ったが、バンドは検出されず、Izumo蛋白がチロシンの硫酸化を受けていないことが示唆された。また、チロシン硫酸特異的抗体を用いた免疫沈降によって、grtマウスでは、約50-60KDaの蛋白の発現が低下していることが明らかとなった。今後、この蛋白の同定とTPST2特異的チロシン硫酸化を受けるか否かを解析する予定である。
ゼノバイオティックスの取り込みと排出輸送がシンクロナイズした生体防御機構

本研究は、オリゴペプチド、有機アニオンおよび有機カチオン系薬物を輸送する一次性(ABC)トランスポーターおよび二次性のトランスポーターが、生体外異物(ゼノバイオティックス)の細胞内取り込みおよび排出に関わるシンクロナイズした生体防御のシステムの一つとして機能しているかを明らかにすることを目的とした。グレパフロキサシンは経口投与後の吸収率が良好なニューキノロン抗菌薬である。本薬物は胆汁クリアランスが高い特徴を持ち、遺伝子欠損ラットEHBRを用いた検討からMRP2の基質であると考えられている。そこで、HEBRを用いて消化管吸収過程に関わる分子メカニズムを解析した。小腸組織をUssing型チャンバーに装着し、グレパフロキサシンの経組織輸送を測定したところ、正常ラットにおいては分泌方向の輸送が吸収方向の2倍高かったが、EHBRにおいて分泌輸送は顕著に低下していた。正常ラットでみられた分泌輸送はMRP2阻害剤およびABCトランスポーターMDR1の阻害剤に感受性であった。肝臓においてMRP2はグレパフロキサシンの抱合代謝物の胆汁排泄に働くことが明らかにされている。また、昨年度の我々の研究により、グレパフロキサシンは小腸上皮細胞刷子縁膜に発現するMDR1によっても排泄されることが明らかにされている。これら2つの分泌型トランスポーターの基質となる一方で、前述のように本薬物は優れた消化管吸収性を示すことから、吸収方向にも何らかの非常に強力なトランスポーターが関与する可能性が強く示唆される。以上のことから、グレパフロキサシンの消化管吸収過程には、細胞取り込みに働く未同定のトランスポーター、グレパフロキサシンの細胞への侵入に対して防御的に働くMDR1、さらにおそらく細胞に取り込み後に未変化体および代謝物の分泌輸送に関与するMRP2がシンクロナイズして働いているものと考えられた。薬物の経口吸収や異物排泄に関わる小腸上皮細胞の種々トランスポーターと薬物代謝酵素に着目して、薬物処理や栄養条件の変化による各遺伝子の発現変動を定量的に解析した。現在までにヒト小腸における薬物の膜透過を評価するin vitroモデルとして最も汎用されているCaco-2細胞において、PEPT1の発現はクエルセチンにより増加する傾向が見られた。MDR1はall-trans-レチノイン酸を添加した場合に発現量が顕著に上昇した。低グルコース条件でもMDR1の発現は上昇した。CYP3A4の発現は、L-リジンやアスコルビン酸,all-trans-レチノイン酸を添加した場合に上昇する傾向が見られた。核レセプターSXRのリガンドであり、SXRを介してMDR1とCYP3A4の発現を誘導することが知られているリファンピンやパクリタキセルは、両遺伝子を誘導しなかった。しかし、同じく消化管由来のLS180細胞においては、両薬物はいずれもMDR1とCYP3A4を誘導した。両細胞におけるSXRの発現をRT-PCRにより検討したところ、LS180細胞ではSXRの発現が見られたのに対して、Caco-2細胞には発現が見られなかった。all-trans-レチノイン酸によるMDR1の発現誘導はCaco-2およびLS180のいずれの細胞でも観察されたことから,all-trans-レチノイン酸による発現誘導はSXRとは異なる経路を介したメカニズムによる現象であると考えられた。本研究より、Caco-2細胞は薬物の消化管吸収性を評価するのに繁用されているが、SXRを介する発現誘導を目的とする実験系としては適切ではないことが明らかとなった。薬物投与による遺伝子発現変動は,今後薬物動態を解析する上で重要な情報であるので、in vivoにおける併用される薬物によって誘導される発現変動を適確に反映するin vitro実験系を新たに確立する必要があると考えられた。