hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
脳・中枢神経系に発現する甲状腺ホルモン代謝酵素の構造及び発現調節機序の解明

甲状腺より主に分泌される主な甲状腺ホルモンであるthyroxine(T4)は、prohormoneであると考えられ、代謝酵素であるiodothyronine deiodinaseにより、3,5,3'-triiodothyronine(T3)に変換されてその作用を発現する。T4よりT3への転換を触媒するdeiodinaseは、臓器分布や生化学特性の違いにより、Type1及びType2の2種類のサブタイプが存在する。我々は、ラット脳cDNA Iibraryより、ラットType2deiodinase cDNA全長約5kbを単離し報告した(論文1)。更に、培養ダリア細胞をもちいて、Type2 deioninaseの発現調節の研究を行い、従来報告されてきた、cAMPの刺激のみならず、CGMPの刺激によっても、Type2 deiodinase mRNAレベルが増加する事、CGMPをsecond messengerとするatrial natriuretic peptideや、C-type natriureticpeptideによってもType2 deiodinase活性が増加する事を報告した(論文1)。更に、培養ダリア細胞に、ニコチンを添加する事により、Type2 deiodinase活性が増加する事を見いだし報告した(論文2)。一方、従来より、実験的糖尿病ラットにおいては、血中T3値が低下し、肝臓、腎臓のType1 deiodinase活性が低下する事が報告されている。我々は、糖尿病状態におけるType1 deiodinase活性の低下が、主に翻訳前のレベルで来している事を見いだし報告した(論文3)。更に、肝臓、腎臓におけるType1 deiodinaseの発現が、他の多くの系のマウスの約10%程度しかない遺伝的Type1 deiodinase低発現マウスであるC3IIマウスにおいても、実験的に糖尿病状態とする事により、肝臓、腎臓のType1 deiodinaseの発現が更に低下する事を見いだし報告した(論文4)。更に、ヒト末梢単核球より、Type1 deiodinase mRNAレベルをRT-PCR法により測定する方法を確立し、バセドウ病患者の末梢単核球のType1 deiodinase mRNAレベルは正常健康人のそれと比べて有意に高値である事を報告した(論文5)。
マリアナ・トラフ北端部の地殻形成過程に関する岩石学的研究

典型的な背弧海盆であるマリアナ・トラフ北端部でドレッジされた玄武岩について岩石学的検討をおこない、背弧海盆下マントルで発生するマグマの特質の解明を試みた。また、背弧海盆下のマントルは海洋リンスフェアの沈み込みの場であり、ここでのマグマの発生は沈み込む海洋リンスフェアより放出される物質に著しく影響される。この観点より、本研究では国際深海掘削計画(ODP)第111節航海で採取したHole504B玄武岩についても合わせて検討をおこなった。明らかになった事柄は次の諸点である。1.マリアナ・トラフ玄武岩の主要成分の含有量は基本的には典型的な深海性ソレアイトと類似している。しかし、ほぼ同じMgO含有量を持つ深海性ソレアイトに比較してTiO_2、(FeO+Fe_2O_3)に乏しく、Na_2O、K_2O、AL_2O_3、H_2Oに富む。2.大部分のマリアナ・トラフ玄武岩は、カンラン石-斜長石-透輝石-石英四面体において一気圧無水条件でのカンラン石-斜長石-単斜輝石共融曲線に沿って分布し、低圧下でカンラン石、斜長石、単斜輝石に飽和している。3.最も末分化なマリアナ・トラフ玄武岩は低いFeO/MgO比を示し、マントルを構成するカンラン石と平衡に共存できる。5.低温での変質作用により隠微晶質の石基や初生鉱物の粒間、劈開に沿ってスメクタイト、緑泥石、アクチノ閃石、滑石等が生成している。マリアノ・トラフ玄武岩の性質は比較的アルカリ金属、H_2Oに富むマントルに由来することを示している。このようなマントルの形成は沈み込む海洋地殻より放出される物質の混成作用によるとすると都合がよい。本研究で得られたデータを用いて、今後このようなモデルのより定量的な検討を試みる必要があろう。
機能プロテオミクスを用いたカルモデュリン標的分子の網羅的同定と情報伝達機構の解明

ラット脳組織よりカルモデュリンーGST融合タンパク質を用いたカルモデュリン標的分子の網羅的単離法およびLC-MS/ MSを使用することにより、WolframinとPRG. 1の二つの新規カルモデュリン標的分子の同定に成功した。さらに、この新規カルモデュリン標的分子の生化学的解析によりWolfram症候群をきたす遺伝子変異がWolframinのカルモデュリン結合性を失うことを明らかにした。生体内において細胞内カルシウムの細胞内情報伝達因子としての重要性は疑う余地はなく、中枢神経系においても神経伝達物質の放出さらには、遺伝子発現調節にいたる様々な独立した細胞内反応機構を介して、統合的に高次機能を制御していると考えられる。このカルシウムシグナル伝達機構の中でも、カルモデュリン(CaM)を介した経路は中心的な役割を果たしている。本研究においては、質量分析法を用いた機能プロテオミクスによりCa^<2+>/CaM複合体の結合標的分子の網羅的同定をラット脳より行った。その結果、既知の36種類のCaM-結合タンパク質とWolframinを新規のCaM-結合タンパク質として同定した。Wolframinは若年性糖尿病や進行性両側生視神経萎縮を主徴とする常染色体劣性遺伝病であるWolfram症候群の原因遣伝子(WFS1)の遺伝子産物である。本研究よりWolframinが試験管内、培養細胞においてもCa^<2+>/CaM複合体と相互作用する事が明らかになった。また相互作用する分子内の領域は細胞質内に存在すると考えられる。さらにはWolfram症候群に関連した遺伝子変異のうち、3つの異なる変異はWolframinのCaM-結合を完全に消失させる事から、Wolframinの正常な機能にはCa^<2+>/CaM複合体との相互作用が必要である事が推定された。前年度(平成21年度)において、質量分析法を用いた機能プロテオミクスによりCa^<2+>/CaM複合体の結合標的分子の網羅的同定をラット脳より行った。その結果、既知の36種類のCaM-結合タンパク質と新規のCaM-結合タンパク質としてWolframinを同定した。さらに得られた新規CaM-結合タンパク質の候補分子群を解析した結果、本年度はPRG-1 (plasticity related gene 1)を新たなCaM-結合タンパク質として同定するに至った。本研究よりPRG-1が試験管内においてCa^<2+>/CaM複合体と高親和性(Kd=8nM)に相互作用するのみならず、培養細胞においてもその相互作用が確認された。またCa^<2+>/CaM複合体と相互作用する分子内のSer554-Gln588の領域を特定し、その中でもTrp559とIle578がCa^<2+>/CaM複合体との結合に重要であることを変異体を用いたSPR解析や合成ペプチドを用いた蛍光測定により明らかにした。さらにはPRG-1の免疫染色より,PRG-1は中枢神経系特に海馬に豊富に存在し、海馬神経細胞の樹状突起のシナプス後膜に局在することが明らかとなり、ポストシナプスにおけるPRG-1の機能はCa^<2+>/CaM複合体との相互作用により制御される事が推定された。細胞外からの刺激に応答した細胞内カルシウムイオンの濃度上昇は筋収縮、分泌反応、神経伝達物質の放出さらには遺伝子発現にいたるまで多元的に生理作用を調節する。本研究では、細胞内カルシウムを介したシグナル伝達における信号変換分子であるカルモデュリン(CaM)との新しい細胞内情報伝達機構を網羅的に探索、解析する。加えて、これらカルシウム受容分子によるタンパク質リン酸化、脱リン酸化反応の新たな機能制御についての個別解析を行い、カルシウムシグナル伝達の包括的なシステムバイオロジーの枠組みを明らかにすることを目的とした。本年度は、CaMの標的酵素の一つであるCaM-依存性リン酸化酵素、CaMKKの機能制御について検討した。その結果、CaMKK分子は細胞内において自己リン酸化していることが明らかとなった。また遺伝子改変酵素の解析から、CaMKK分子の自己リン酸化反応は分子間反応ではなく、分子内反応であることが判明した。そこでこの自己リン酸化アミノ酸残基をノーベル賞技術である質量分析法により同定したところ、Thr482であった。このThr482の自己リン酸化の生理的意義を解明する為にThr482をAlaに変異させたところ、自己抑制機能が強まるという結果を得、CaMKKの分子内自己リン酸化は本酵素の活性化メカニズムに大きく関与している事が明らかとなった。さらには、新しいCaMKKの基質分子探索を目的として、ATP類似化合物をリン酸基供与体として使用できるCaMKK変異体を作成した。この変異体を用いることで新規のCaMKK基質Syndapin Iを同定した。

CaMKKは試験管内、培養細胞においてSyndapin IのThr355をリン酸化する事が明らかとなり、CaMKKを介した新しい細胞内カルシウムシグナル伝達経路の存在が示唆された。
iPS 細胞を用いた肝幹細胞の単離及び成人型肝細胞への効率的な分化手法の確立

本研究は、ヒト線維芽細胞由来iPS細胞を用いて既に確立した肝分化誘導法に対し、化学物質及び遺伝子導入の両面から改良を加え、成人型肝細胞に匹敵する肝分化iPS細胞を作製することを目的に検討を行った。肝特異的転写因子群の中でも、HNF6遺伝子をiPS細胞の肝分化誘導過程中に導入することで、肝分化iPS細胞の成熟性が向上する可能性を見出した。また、ヒト成人肝細胞において主要な薬物代謝酵素であるCYP3A4が、HNF6遺伝子の導入で著しく上昇し、その発現量は酵素活性が認められるレベルに達した。本研究は、iPS細胞の肝分化誘導法の改良に加え、これまでに報告されていないHNF6によるCYP3A4の発現調節機構が存在する可能性を見出した。本年度は、既に確立しているiPS細胞の肝分化誘導法に対し、平成23年度に行った化学物質による誘導法の改良を加え、遺伝子導入による肝分化誘導法の更なる改良を行った。遺伝子導入による肝分化誘導法の改良は、iPS細胞の肝分化誘導過程中にHNF6発現アデノウイルス(AdHNF6)を用いて検討を行った。肝分化誘導過程(25日間)のうち、115日→18日、219日→22日、322日→25日、419日→25日について感染時期を検討した結果、4の条件において、CYP3A4 mRNA発現量は、約1400倍の上昇が認められ、ヒト成人肝細胞におけるCYP3A4発現量の約1/10程度に達した。さらに、HNF6遺伝子導入前には認められなかったテストステロンの6β-水酸化活性を有すことも確認された。他のCYP分子種についてもmRNA発現量の測定を行ったところ、CYP1A2及びCYP3A7においてmRNA発現量の上昇が確認された。次に、c/EBPα等の他の肝特異的転写因子についても検討を行ったが、HNF6遺伝子導入ほどの効果が認められる遺伝子は現時点までに同定されていない。次に、胎児肝細胞と比較して成人肝細胞において発現量が高いことが報告されているマイクロRNA(miRNA)について検討を行った。10種類のmiRNAを対象とし、肝分化誘導過程中に導入した結果、let-7cにおいて、CYP3A4 mRNA発現量の約30倍の上昇が認められた。また、miR-99a、miR-125b、miR-192についてもCYP3A4 mRNA発現量の上昇が確認された。本年度は、遺伝子導入による肝分化誘導法の改良に成功し、得られた肝分化iPS細胞はCYP3A4の酵素活性を有するレベルに達した。さらに、miRNAによる新たな分化誘導法の検討においても良好な結果が得られていることから、十分な成果が得られたと考えられる。本年度は、既に確立しているiPS細胞の肝分化誘導法について、化学物質による誘導法の改良を行った。「内胚葉系細胞への分化」におけるNaBの効果は、種々の条件検討の結果、最終的な薬物代謝酵素発現量に大きな差は認められなかったが、分化誘導開始5日目に行う継代において、0.5 mM NaBの5日間処理が最も内胚葉系細胞の生存率が高かった。また、「肝細胞への誘導」におけるマトリゲルは、30倍希釈に設定した。「肝細胞の成熟」段階における、1%DMSO添加変法ランフォード培地の効果を検討した結果、通常、この段階で使用するHGF/OSM/DEX添加変法ランフォード培地(分化成熟培地)に匹敵する肝分化マーカー(ALB、AFP、HNF4α)mRNAの発現量の上昇が認められた。従って、1%DMSOは、肝分化マーカーに対してHGF/OSM/DEXに匹敵する発現誘導効果があることが明らかとなった。また、CYP、トランスポーター及び転写因子のmRNA発現に対するDMSOの効果についても同様の検討を行った。その結果、CYP2C9、CYP2C19、MRP6、NTCP、ARNT、RXRα、CARのmRNA発現量の上昇が確認された。一方、CYP1A1、CYP3A4、CYP3A7、MRP2、MRP3、OATP1B1、OATP1B3、PXR mRNAの発現量は減少し、OCT1及びAhRに関しては影響がないことが示された。さらに、変法ランフォード培地成分のうち、肝臓細胞増殖因子とエタノールアミンについて検討を行った。その結果、エタノールアミンを追加添加した分化成熟培地において、RXRαのみmRNA発現量の著しい上昇が認められた。

また本年度は、HPLC及びP450-Gloによる主要CYP分子種の酵素活性測定系の確立、さらに次年度に検討予定である遺伝子導入による肝分化誘導法の改良にも着手し、良好な結果得ている。本年度は、「化学物質による肝分化誘導法の改良」及び「肝分化iPS細胞の機能的解析」を申請計画通り遂行した。特に、「化学物質による肝分化誘導法の改良」においては、DMSOが、肝分化マーカーやCYP等に対しHGF/OSM/DEXに匹敵する発現誘導効果を示すことを見出すことができた。作製した肝分化iPS細胞に関しては、CYP、トランスポーター、転写因子のmRNA発現量を詳細に解析し、HPLC及びP450-GloによるCYPの酵素活性測定についても着手した。さらに、次年度に予定している「遺伝子導入による肝分化誘導法の改良」のうち、HNF-6について検討した結果、良好な結果を得ている。従って、本年度は、申請通り研究が進行しているうえ、次年度の計画の一部にも着手しいていることから、概ね順調に進行していると考える。次年度は、「遺伝子導入による肝分化誘導法の改良」を主な研究課題とする。本年度に既に着手しているHNF-6発現アデノウイルスを用いて、肝分化誘導過程中の導入時期や導入量等を詳細に検討する。これで確立された条件を基準とし、他の遺伝子(HEX、SOX17及びc/EBPα)についても検討を行う。また、既にHNF-6導入による肝分化誘導効率の向上の可能性が見出せていることから、肝特異的転写因子の中でもkey regulatorとして機能しているHNF1α、HNF3β、HNF4αやCYP3A4の発現調節に関与することが報告されているHNF3γについても検討対象とする。さらに、近年、マイクロRNAについても肝細胞の分化成熟に重要な機能を有していることが報告されたことから、特に成熟した肝細胞において発現量の高いマイクロRNAについても検討を行う。最終的にこれらを組み合わせることで、機能性の高い肝分化iPS細胞を樹立する。次年度は、本年度と同様に主にiPS細胞の肝分化誘導にかかる培養関連試薬に研究費を使用する(約70万円)。また、肝分化iPS細胞については、リアルタイムPCRによるmRNA発現量測定並びにHPLC、LC/MS/MS、P450-Gloを用いたCYPの酵素活性測定を行うため、これについても研究費を使用する(約40万円)。遺伝子を導入するためのアデノウイルス発現系やマイクロRNAは既に作製及び所有しているため、大きく研究費を使用する予定はない。但し、マイクロRNAに関しては、新たに有用性の高いものが同定された場合は、随時追加していく予定である。また、得られた成果は学会及び学術雑誌において発表するため、これに関する予算も計上する(35万円)。
X線CT検査における臓器に即した被ばく低減機構の被写体厚特性の検討

研究目的胸部X腺CT検査において乳房への被ばくは軽視できるものではない,近年,体前面120度の出力線量を減少させることによる,臓器に即した被ばく低減機構(以下,X-CARE)が開発され,この機構を用いることにより,胸部CT検査における被検者の乳房線量を劇的に低減することが出来るようになった,これまでの研究により,X-CARE適用時の乳房線量の低減率は30%程度であり,ノイズやアーチファクトの増加などの画像への影響もみられないことを確認してきた.しかし,被写体が異なる場合には動作特性が異なるため,その場合の被ばく低減効果や画像への影響について,さらに検討を行う必要がある,本研究は,X-CAREを適用した場合の被写体厚特性(画質,出力線量など)について詳細に検討することで,臨床的に有用な被ばく低減技術としての普及や更なる開発を促進することを目的とした.研究方法1被写体厚の違いによる出力線量の測定体厚の異なる被写体厚可変ファントム及び大小の円形ファントムの中心にCTチェンバーを設置し,X-CAREを用いてそれぞれの出力線量を測定することにより,被写体厚が異なる場合の出力線量の変化を調べる.2被写体厚の違いによるノイズ特性の変化に関する検討被写体厚可変ファントムの線量を変えてX-CAREを用いて撮像し、断面内にROIを置いてSD値分布を求め、被写体厚が異なる場合のノイズの変化を調べた,研究成果被写体は大きさの違いによって低減率に大きな変化は生じなかったが,位置決め画像で得られた被写体の形の違いにより体前面120度における出力線量の低減率に差が生じた,また小さい被写体に対して少ない線量で撮像した場合,装置の寝台の吸収により,十分な線量が担保できなくなる可能性が示唆された.若年の日本人女性は,世界的に見ても痩せ型が多い傾向がある.よって臨床においてこの機構を用いる場合,線量不足に注意してCT-AECの併用や設定線量の調整など適宜行い使用する必要があることが証明された.研究目的胸部X腺CT検査において乳房への被ばくは軽視できるものではない,近年,体前面120度の出力線量を減少させることによる,臓器に即した被ばく低減機構(以下,X-CARE)が開発され,この機構を用いることにより,胸部CT検査における被検者の乳房線量を劇的に低減することが出来るようになった,これまでの研究により,X-CARE適用時の乳房線量の低減率は30%程度であり,ノイズやアーチファクトの増加などの画像への影響もみられないことを確認してきた.しかし,被写体が異なる場合には動作特性が異なるため,その場合の被ばく低減効果や画像への影響について,さらに検討を行う必要がある,本研究は,X-CAREを適用した場合の被写体厚特性(画質,出力線量など)について詳細に検討することで,臨床的に有用な被ばく低減技術としての普及や更なる開発を促進することを目的とした.研究方法1被写体厚の違いによる出力線量の測定体厚の異なる被写体厚可変ファントム及び大小の円形ファントムの中心にCTチェンバーを設置し,X-CAREを用いてそれぞれの出力線量を測定することにより,被写体厚が異なる場合の出力線量の変化を調べる.2被写体厚の違いによるノイズ特性の変化に関する検討被写体厚可変ファントムの線量を変えてX-CAREを用いて撮像し、断面内にROIを置いてSD値分布を求め、被写体厚が異なる場合のノイズの変化を調べた,研究成果被写体は大きさの違いによって低減率に大きな変化は生じなかったが,位置決め画像で得られた被写体の形の違いにより体前面120度における出力線量の低減率に差が生じた,また小さい被写体に対して少ない線量で撮像した場合,装置の寝台の吸収により,十分な線量が担保できなくなる可能性が示唆された.若年の日本人女性は,世界的に見ても痩せ型が多い傾向がある.よって臨床においてこの機構を用いる場合,線量不足に注意してCT-AECの併用や設定線量の調整など適宜行い使用する必要があることが証明された.
新規降圧ペプチド"アドレノメデュリン"と"PAMP"の病態生理学的意義の解明

"アドレノメデユリン(AM)と"PAMP"は1993年にヒト褐色細胞腫より発見された共通の前駆体より生合成される強力な血管拡張性の降圧ペプチドである。AM-PAMPは副腎磁質以外に心血管系の主要な組織で広く産生され、新しい降圧ペプチドとして循環調節に重要な機能を果たしている可能性が示唆されている。本研究では新規循環調節ペプチドであるAMとPAMPの病態生理学的意義を解明するための研究を行っている。AMの新たな作用として、AMは心筋の蛋白合成を著明に抑制することが明らかにした。一方、心筋細胞でのAMの生合成分泌には、アンジオテンシンIIによるC-キナーゼの活性化と細胞内Caイオンの増加が重要であることが明かとなった。これらの事実は心筋で生合成されたAMが心筋自体に作用して心筋の蛋白合成抑制を抑制する事が推定され、現在その機序やAM受容体との関連について検討している。AMの降圧活性にはAMのリング構造とC末のアミド構造の両者が必須である。本研究ではAMのリング構造を認識するRIAを確立し、分子型の定性を行い、ウシ副腎髄質よりAM(11-26)を内在性の昇圧ペプチドとして同定した。AM(11-26)は強力な昇圧活性を示し、生体内で循環調節に関与している可能性が示唆された。ヒト血中を循環しているAM免疫活性は成熟型AM(mAM)が合成される前の中間体のAM-Gly(iAM)であることを証明した。降圧活性を有するmAMは主に下肢の血管床や心臓で産生、分泌され、肺循環でクリアランスされていることが明らかとなった。mAMが特に静脈系で高濃度に循環していることは、mAMの主な作用が体液量、肺血管抵抗の調節に関与していると推察された。今後各種疾患におけるmAMとtotalAMの血中濃度が明らかにされてくると思われる。“アドレノメデュリン(AM)"と“PAMP"は1993年にヒト褐色細胞腫より発見された共通の前駆体より生合成される強力な血管拡張性の降圧ペプチドである。AM・PAMPは副腎髄質以外に心血管系の主要な組織で広く産生され、新しい降圧ペプチドとして循環調節に重要な機能を果たしている可能性が示唆されている。本研究では新規循環調節ペプチドであるAMとPAMPの病態生理学的意義を解明するための研究を行った。昨年までに報告していたAMの急性投与実験に追加し、慢性投与実験を行った。浸透圧ミニポンプを用いて、AMを腎血管性高血圧モデル(2K1C)ラットおよび正常血圧コントロールラットに経静脈的に慢性投与したところ、2K1Cラットおよび正常血圧コントロールラットともに投与後2日目より、降圧が認められ2週間安定した降圧を示した。さらに、血漿レニン活性およびアルドステロン活性が有意に抑制されていた。また、このときの血中AM濃度は生理的AM濃度であった。さらに、AMの新たな作用として、AMは心筋の蛋白合成を著明に抑制することが明らかになった。AMは心筋細胞で生合成されオートクリンやパラクリン的に心筋肥大等の病態に関与していることが可能性が明らかになった。また、PAMPの研究ではPAMPのC末近傍を認識する高感度かつ特異的RIAを確立し、生体内分布を検討したところ、高濃度のPAMP免疫活性が副腎髄質に認められ、その他の組織にも低濃度であるが、広く分布していた。

また、免疫活性を検討したところ、副腎髄質には今までに知られていた20個のアミノ酸よりなるPAMP[1-20]以外に別の免疫活性が認められ、この免疫活性を単離構造決定し、降圧活性を有したPAMP[9-20](PAMP-12)であることを明らかにした。PAMPの生合成機序として、生体内ではPAMP[1-20]以外にPAMP[9-20]が新たな降圧ペプチドとして生合成されていることが示唆され興味深い。“アドレノメデュリン(AM)"と“PAMP"は1993年にヒト褐色細胞腫より発見された共通の前駆体より生合成される強力な血管拡張性の降圧ペプチドである。AM・PAMPは副腎髄質以外に心血管系の主要な組織で広く産生され、新しい降圧ペプチドとして循環調節に重要な機能を果たしている可能性が示唆されている。本研究では新規循環調節ペプチドであるAMとPAMPの病態生理学的意義を解明するための研究を行っている。各種高血圧患者(本態性高血圧,腎血管性高血圧,原発性アルドステロン症)におけるAMおよびPAMP血中濃度について検討した。その結果、特に腎血管性高血圧では患者背景に関係なく一様にAM、PAMPの増加がみられた。ヒト血中を循環しているAM免疫活性は成熟型AM(mAM)が合成される前の中間体のAM-Gly(iAM)であることが判明した。さらに、mAMの測定系を確立し、心不全患者の血中AM免疫活性を検討したところ、mAMは心不全の重症度に従い有意に増加した。また、AMの新たな作用として、AMは心筋の蛋白合成を著明に抑制することが明らかになった。AMは心筋細胞で生合成されオートクリンやパラクリン的に心筋肥大等の病態に関与していることが可能性が明らかになった。PAMPの研究ではPAMPのC末近傍を認識する高感度かつ特異的RIAを確立し、生体内分布を検討したところ、高濃度のPAMP免疫活性が副腎髄質に認められ、その他の組織にも低濃度であるが、広く分布していた。また、免疫活性を検討したところ、副腎髄質には今までに知られていた20個のアミノ酸よりなるPAMP[1-20](PAMP-20)以外に別の免疫活性が認められ、この免疫活性を単離構造決定し、降圧活性を有したPAMP[9-20](PAMP-12)であることを明らかにした。さらに、高血圧症の患者では、血中PAMP-12が増加しているという興味ある結果が得られた。"アドレノメデュリン(AM)"と"PAMP"は1993年にヒト褐色細胞腫より発見された共通の前躯体より生合成される強力な血管拡張性の降圧ペプチドである。AM・PAMPは副腎髄質以外に心血管系のの主要な組織で広く産生され、新しい降圧ペプチドとして循環調節に重要な機能を果たしている可能性が示唆されている。AMの新たな作用として、AMは心筋の蛋白合成を著明に抑制することが明らかにした。一方、心筋細胞でのAMの生合成分泌には、アンジオテンシンIIによるC-キナーゼの活性化と細胞内Caイオンの増加が重要であることが明かとなった。これらの事実は心筋で生合成されたAMが心筋自体に作用して心筋の蛋白合成抑制を抑制する事が推定され、現在その機序やAM受容体との関連について検討している。AMの降圧活性にはAMのリング構造とC末のアミド構造の両者が必須である。本研究ではAMのリング構造を認識するRIAを確立し、分子型の定性を行い、ウシ副腎髄質よりAM(11-26)を内在性の昇圧ペプチドとして同定した。
SH波入射による強い上下動の発生を伴う地形効果の観測

秋田大学側の第三紀層よりなる手形山の斜面を利用して地震動増幅の地形効果を観測する為に,勝島製作所製の地震計(PK-110,固有周期1秒,上下動1成分,水平動2成分)を全面的に修理・検定,ホールシア-ス製の地震計(HS-10,固有周期1秒,上下動1成分,水平動2成分)を整備した.併せてデータ収集用のケーブル(8チャンネル),大型バッテリ-,ラック,工具,電子部品を購入し,検定用ブリッジやコネクターボックスを自主製作して地震計測装置を組み上げた.記録用のデジタルレコーダー(TEAC社製,DR-F1)が最大8チャンネルなので,観測点は三成分2点とし別にトリガー用にGeo-space社製の上下動成分を使用した.一点(HS-10)は手形山斜面の上端にある山林の中に,もう一点は斜面下端にあたる秋田大学鉱山学部付属鉱業博物館入口付近に設置した.平成5年夏は釧路市における合同微動観測に参加した関係上,これらの地震計の設置作業は9月に行った.従って観測の開始は9月下旬であった.当初は片一方をレファレス点とし,もう一方を移動観測点として斜面上各点で観測するつもりであったが,次の理由で移動は断念した.それは,担っている近地の小地震の発生頻度が低い為思ったほどの数の地震記録が得られない事である.これに加えて,低気圧通過時等で海が荒れている時は微動レベルが高くなり小振幅の地震は観測が難しくなる.結局年末までに記録した近地の小地震は4個程度である.ちなみに,北海道南西部沖地震の余震や三陸沖での中規模な地震は数多く記録されている.これらの記録から,以下の事が推定される.即ち住宅地の中の自然斜面としては割と急な手形山斜面であるが地形効果でのSH波による上下動を顕著に示すには傾斜がゆるい.逆に言えば,通常の自然斜面ではその様な現象は被害を起こすほどの効果を持たない.ただ,これは一つの傾斜についての事例からの推定なので,今後も色々な条件の斜面・地形での応答効果を観測・理論計算の両面から明らかにしてゆく努力は続けるべきである.秋田大学側の第三紀層よりなる手形山の斜面を利用して地震動増幅の地形効果を観測する為に,勝島製作所製の地震計(PK-110,固有周期1秒,上下動1成分,水平動2成分)を全面的に修理・検定,ホールシア-ス製の地震計(HS-10,固有周期1秒,上下動1成分,水平動2成分)を整備した.併せてデータ収集用のケーブル(8チャンネル),大型バッテリ-,ラック,工具,電子部品を購入し,検定用ブリッジやコネクターボックスを自主製作して地震計測装置を組み上げた.記録用のデジタルレコーダー(TEAC社製,DR-F1)が最大8チャンネルなので,観測点は三成分2点とし別にトリガー用にGeo-space社製の上下動成分を使用した.一点(HS-10)は手形山斜面の上端にある山林の中に,もう一点は斜面下端にあたる秋田大学鉱山学部付属鉱業博物館入口付近に設置した.平成5年夏は釧路市における合同微動観測に参加した関係上,これらの地震計の設置作業は9月に行った.従って観測の開始は9月下旬であった.当初は片一方をレファレス点とし,もう一方を移動観測点として斜面上各点で観測するつもりであったが,次の理由で移動は断念した.それは,担っている近地の小地震の発生頻度が低い為思ったほどの数の地震記録が得られない事である.これに加えて,低気圧通過時等で海が荒れている時は微動レベルが高くなり小振幅の地震は観測が難しくなる.結局年末までに記録した近地の小地震は4個程度である.ちなみに,北海道南西部沖地震の余震や三陸沖での中規模な地震は数多く記録されている.これらの記録から,以下の事が推定される.即ち住宅地の中の自然斜面としては割と急な手形山斜面であるが地形効果でのSH波による上下動を顕著に示すには傾斜がゆるい.逆に言えば,通常の自然斜面ではその様な現象は被害を起こすほどの効果を持たない.ただ,これは一つの傾斜についての事例からの推定なので,今後も色々な条件の斜面・地形での応答効果を観測・理論計算の両面から明らかにしてゆく努力は続けるべきである.
微視構造を考慮した弾塑性体の変形解析手法の開発

微視構造として、すべりベクトルを極性ベクトルとして導入した偶応力弾塑性理論について、2年度にわたって理論的な考察を加えた(材料学会塑性力学分科会にて口頭発表)。最近注目されている高次ひずみ勾配を取入れた有限要素法との関連について検討した。個々の微視構造を代表する具体的モデルによって対象となる構成関係が異なることから、微視構造を考慮した弾塑性構成式の具体的な例として微視的空孔を含む材料(多孔質材料)を取上げ、そのモデル材料としての多孔平板の弾塑性変形挙動を調べた。すなわち、空孔が規則的に配列する場合、不規則に配列する場合の各々について、アルミニュウム板材から多孔平板試験片を作成し各種の実験を行った。規則的な配列状態については個々の空孔の変更と負荷形態の関係を中心に実験的検討を加え、空孔の変形の主軸は初期配置形態によらずほぼ主応力方向一致するが、変形量は配置形態に依存することなどが明らかになった。また空孔が不規則に分布する場合については、昨年度提唱した分布形態の定量化手法にさらに統計的な考察を加えることにより損傷テンソルを求め、巨視的な降状応力の推定ができることを示した。さらに、変形の局所化現象が構成式の特性に著しく影響を受けることから、微視構造の相違が変形の局所化に及ぼす影響についても検討を行った。多孔平板に関するこれらの検討結果は、機械学会東海支部講演会、同全国大会講演会、応用力学連合講演会でそれぞれ口頭発表を行い、論文投稿の準備中である。本年度は,物体中の微視構造としてのすべりベクトルを極性ベクトル(Director)と考えた多極性物質の新たな弾塑性構成関係を導き,この理論がMindlinによる偶応力弾性理論を自然な形で弾塑性理論まで拡張したものであることを示した.従来の塑性論と同様に塑性ひずみ速度成分に関する法線則が成り立つことなども併せて示し,これらの結果は現在論文投稿の準備中である.また,この構成関係を組み込んだ偶応力有限要素法プログラムを平行して作成中であり,偶応力を考慮した弾性変形部分についてはほぼ完成し,今後塑性変形部分について検討,改良を加える予定である.さらに,微視構造を考慮した弾塑性構成式の具体的な例として微視空孔を取り上げ,そのモデル材としての多孔平板の弾塑性挙動を調べた.すなわち,規則的に空孔が配列する多孔平板,不規則に配列する多孔平板をそれぞれアルミニュム板材から各種作成し,負荷方向と空孔配列形態が変形に及ぼす影響,特に巨視的な降伏応力の配列形態依存性などを中心に実験的検討を行った.このような多孔平板の降伏応力における異方性は,研究代表者等がすでに提唱している損傷テンソルを導入した異方性Gursonの降伏関数によって第一近似として定量的に表わすことができることを実験的に確認した.また不規則に空孔が分布する場合については,空孔分布領域のボロノイ分割とステレオロジーの手法によって,を取り入れ分布形態を定量化する方法を提案し,その有効性の実証実験を引き続き行っている.多孔平板に関するこれらの検討結果の一部は,機械学会材料力学講演会,同九州中国四国支部合同講演会において講演発表を行った.微視構造としてすべりベクトルを極性ベクトルとして導入した偶応力弾塑性理論について,昨年度に引き続き理論的な考察を加えた(材料学会塑性力学分科会にて口頭発表).最近注目されている高次ひずみ勾配を取入れた有限要素法との関連について検討した.個々の微視構造を代表する具体的モデルによって対象となる構成関係が異なることから,微視構造を考慮した弾塑性構成式の具体的な例として微視的空孔を含む材料(多孔質材料)を取上げ,そのモデル材としての多孔平板の弾塑性変形挙動を調べた.すなわち,空孔が規則的に配列する場合,不規則に配列する場合の各々について,アルミニュウム板材から多孔平板試験片を作成し各種の実験を行った.

規則的な配列状態については個々の空孔の変形と負荷形態の関係を中心に実験的検討を加え,空孔の変形の主軸は初期配置形態によらずほぼ主応力方向一致するが,変形量は配置形態に依存することなどが明らかになった.また空孔が不規則に分布する場合については,昨年度提唱した分布形態の定量化手法にさらに統計的な考察を加えることにより損傷テンソルを求め,巨視的な降伏応力の推定ができることを示した.さらに,変形の局所化現象が構成式の特性に著しく影響を受けることから,微視構造の相違が変形の局所化に及ぼす影響についても検討を行った.多孔平板に関するこれらの検討結果は,機械学会東海支部講演会,同全国大会講演会,応用力学連合講演会でそれぞれ口頭発表を行ない論文投稿の準備中である.
ウイルス感染宿主因子としてのチロシンキナーゼAblの新しい役割

我々はウイルスや真菌・結核菌などの病原体に対する新しい宿主因子として、チロシンキナーゼAblとSyk、さらにその関連分子であるAbl会合分子アダプタータンパク質3BP2の役割について研究を進めてきた。本研究課題の計画調書提出後、ゲノム編集(CRISPR/Cas9システム)によりSTAT16とIRF9を欠損する培養肝細胞を作成し、STAT1がインターフェロンλによるC型肝炎ウイルス(HCV)の複製抑制に不可欠であることを明らかにした。この成果を踏まえて、ゲノム編集による様々な宿主因子の欠損細胞を用いて、ウイルスの生活環における宿主因子の役割について解析することを計画している。昨年度はゲノム編集によりAblを欠損する培養肝細胞(Huh7.5細胞)を樹立した。Abl欠損細胞と対照細胞とを用いて、HCVの感染から子ウイルス出芽までの生活環への影響について検証を行ったところ、Abl欠損細胞株は対照細胞と比べウイルス産生能が低下していることが明らかとなった。現在、Abl欠損細胞株に再びAblを構成的に発現する細胞株の樹立を試みており、ウイルス産生能が回復するかどうかを検討する予定である。さらにAblとHCVの非構造タンパク質NS5Aを一過性に強制発現したところ、NS5AはAblの活性化因子としても作用することが示唆された。また現在研究を進めている3BP2の役割については、培養マクロファージを用いた研究が昨年度までに完了したため、今年度は3BP2がSykの基質であることを明らかにした。現在ゲノム編集により変異型3BP2(Sykによるリン酸化部位に変異を加えたもの)のノックインマウスを作成中である。昨年の報告書にも記載したが、我々のグループのほかにHCVの肝細胞への侵入過程においてもAblが関与するとの報告が他のグループからなされた。よってAbl欠損Huh7.5細胞の樹立を研究計画のなかで優先することとした。Abl欠損細胞と対照細胞とを用いて、HCVの感染から子ウイルス出芽までの生活環への影響について網羅的に検証を行った。その結果、Abl欠損細胞株では細胞内でのウイルス粒子形成への影響は見られなかったが、細胞外へのウイルス産生能は低下していることが明らかとなった。現在、Abl欠損細胞株に再びAblタンパク質を構成的に発現するような安定細胞株の樹立を試みており、Abl欠損細胞で見られたウイルス産生能の低下が回復するかどうかを検討する予定である。一方、チロシンキナーゼAbl結合タンパク質であるアダプタータンパク質3BP2については、培養マクロファージを用いた研究が完了し、今年度は新たに3BP2がSyk基質であること、さらに183番目のチロシンがSykによるリン酸化部位であることを再構成実験によって証明した。現在ゲノム編集により変異型3BP2(Sykによるリン酸化部位である183番目のチロシン残基をフェニルアラニンに置換したもの)ノックインマウス、さらに3BP2ノックアウトマウスを作成中である。次年度も当初の研究計画に従い、以下のように推進する予定である。当初の計画通り、Abl欠損細胞と対照細胞とを用いて、感染後にインターフェロンを投与することにより、インターフェロン刺激遺伝子(ISG)についてマイクロアレイにより網羅的解析を行い、定量PCRやプロテオーム解析によりAbl制御性の新規ISGを同定する。更にゲノム編集により新規ISG欠損細胞を作成し、Abl阻害薬であるイマチニブの効果についても同時に検証する。アダプタータンパク質3BP2についてはゲノム編集による変異型3BP2のノックインマウスと3BP2欠損マウスを樹立する。遺伝子改変マウスの樹立にはバッククロスの過程で一定の時間を要するために、本年度は1年間をほぼそのために費やした。次年度は広く免疫系細胞の分化・成熟や免疫応答に対する影響について解析を進める予定である。我々はウイルスや真菌・結核菌などの病原体に対する新しい宿主因子として、チロシンキナーゼAblとSyk、さらにその関連分子の役割について研究を進めてきた。本研究課題の計画調書提出後、ゲノム編集(CRISPR/Cas9システム)によりSTAT16とIRF9を欠損する培養肝細胞を作成し、STAT1がインターフェロンλによるHCVの複製抑制に不可欠であることを解明し報告した(Yamauchi, et al. Sci. Rep. 2016)。平成29年度は、Ablを欠損する培養肝細胞(Huh7.5細胞)を樹立した。今後はこれまでの成果をさらに進めて、Abl欠損細胞と対照細胞を用いて、ウイルスの感染から子ウイルス出芽までの生活環への影響について検証する。さらにAblの下流に位置するインターフェロン刺激遺伝子(ISG)を同定し、できればゲノム編集により新規ISG欠損細胞を作成する。また本年度は実施できなかったウイルス粒子形成調節におけるチロシンキナーゼの役割についての生化学・組織学的解析を行う予定である。また現在研究を進めているAbl会合分子アダプタータンパク質3BP2の役割について、ゲノム編集により培養単球細胞を用いて作成したさまざまなチロシンキナーゼ、3BP2欠損細胞を樹立し、インターフェロンγによるマクロファージへの分化誘導後に抗原刺激に対する応答性の違いを明らかにし報告した(Chihara, et al. Sci. Rep. 2017)。今後は新たに変異型3BP2ノックインマウスなどの動物モデルを作成し、解析を続ける予定である。さらに結核菌受容体であるMincleがマスト細胞上に発現することを見出し、MincleがチロシンキナーゼSykを介して、結核菌に対する免疫応答を行っていることを明らかにし報告した(Honjoh, et al. Sci. Rep. 2017)。

研究計画書では平成29年度にウイルス粒子形成過程の生化学的解析、細胞内ウイルス分布の組織学的解析を行う予定であったが、我々が報告したウイルス粒子形成過程のほかに、新たにウイルス侵入過程においてもAblが関与するとの報告が他のグループからなされた(Min, et al. Front Microbiol 2017)。そこでAbl欠損Huh7.5細胞の樹立を優先し、2種類のガイドRNAを用いてそれぞれノックアウト細胞を樹立した。従来われわれは肝臓組織に発現するもう一種類のチロシンキナーゼSykがHCVの非構造タンパク質NS5Aと相互作用する可能性を指摘している(Inubushi, et al. J Gen Virol 2008)。その点を鑑み、Ablに加えてSykのノックアウトも試みたが、Huh7.5細胞ではウエスタンブロットで検出できるほどのSykが発現しないことが明らかとなった。またチロシンキナーゼAbl結合タンパク質として知られるアダプタータンパク質3BP2については平成30年度に計画していた単球系の培養細胞であるU937細胞を用いた実験が予想以上に進展した。貪食の受容体(FcRγ)、チロシンキナーゼ(Syk、Hck、Src)、3BP2の各欠損細胞、さらに3BP2欠損細胞に野生型、リン酸化部位変異型、タンキラーゼ耐性変異型3BP2を発現させた細胞をマクロファージに分化させ、貪食作用やサイトカイン産生を解析するとともに、遺伝子発現プロファイルをマイクロアレイで解析し、論文として報告した(Chihara, et al. Sci. Rep. 2017)。我々はウイルスや真菌・結核菌などの病原体に対する新しい宿主因子として、チロシンキナーゼAblとSyk、さらにその関連分子であるAbl会合分子アダプタータンパク質3BP2の役割について研究を進めてきた。本研究課題の計画調書提出後、ゲノム編集(CRISPR/Cas9システム)によりSTAT16とIRF9を欠損する培養肝細胞を作成し、STAT1がインターフェロンλによるC型肝炎ウイルス(HCV)の複製抑制に不可欠であることを明らかにした。この成果を踏まえて、ゲノム編集による様々な宿主因子の欠損細胞を用いて、ウイルスの生活環における宿主因子の役割について解析することを計画している。昨年度はゲノム編集によりAblを欠損する培養肝細胞(Huh7.5細胞)を樹立した。Abl欠損細胞と対照細胞とを用いて、HCVの感染から子ウイルス出芽までの生活環への影響について検証を行ったところ、Abl欠損細胞株は対照細胞と比べウイルス産生能が低下していることが明らかとなった。現在、Abl欠損細胞株に再びAblを構成的に発現する細胞株の樹立を試みており、ウイルス産生能が回復するかどうかを検討する予定である。さらにAblとHCVの非構造タンパク質NS5Aを一過性に強制発現したところ、NS5AはAblの活性化因子としても作用することが示唆された。また現在研究を進めている3BP2の役割については、培養マクロファージを用いた研究が昨年度までに完了したため、今年度は3BP2がSykの基質であることを明らかにした。
高性能なナノポーラス複合金属を基軸にしたエネルギー貯蔵デバイスの創成

(抄録なし)脱合金化プロセスとは、電解液中で合金中の特定の元素のみを溶出する方法、いわゆる脱成分腐食である。この脱合金化プロセスは古くから防食・腐食分野においてはよく知られている現象である。最近の研究によって、この自然腐食を用いることで、自己組織化するナノメートルオーダーの気孔・セル柱を有するナノポーラス金属を容易に作製できることが明らかとなっている。これまでは、ナノポーラス金を主体に研究を行ってきた。しかしながら、将来の産業化を考慮した場合、貴金属より安価で汎用な金属に置き換えたほうがよい。本研究では、代替金属として、導電性のよいニッケルをベースにナノポーラス金属を作製し、貴金属を全く使わないユビキタスなナノポーラス金属を基板とすることで、経済効率的且つ技術移転が見込まれる汎用性を兼ね備えたスーパーキャパシタを創製した。まず、Mn_<70>Ni_<30>固溶体合金を室温での冷間圧延で10micronの厚さの合金箔にできることを見出した。そこで、最適な腐食条件で脱合金化することで均一厚さのナノポーラスニッケル箔の作製を試みた。(NH_4)_2SO_4電解液を用い、種々の電解液濃度、腐食時間、腐食温度を系統的に変えることで、ナノポーラスニッケルの微細構造を最適化した。その結果、クラックなどのない広面積のナノポーラスニッケルの作製がすることができ、ピンセットなどで容易にハンドリングができた。このことは、ナノポーラスニッケルを応用する上で非常なステップである。1M KOH溶液でキャパシタンス特性を評価した結果、面積あたりの比容量を計算すると1.51.7F/cm^2で他の報告値より高く、高いサイクル安定性を有していることが分かった。電子顕微鏡観察から微細組織は表面がNiOに酸化しており、これが活性物質として寄与できることが示唆された。ナノポーラスニッケルのスーパーキャパシタの作製が順調に進んでおり、実験的障害がこれまでない。スケジュール通りこのまま、順調に進展していくと思われる。ナノポーラスニッケルベースのスーパーキャパシタの性能改善を引き続き行う。(抄録なし)
沖縄県住民におけるHTLV-I感染者の肺病変に関する研究

HTLV-Iの侵淫地である沖縄県において、びまん性汎細気管支炎(DPB)を含めた慢性気道疾患患者をHTLV-I陽性者と陰性者に分け、両群間で臨床的に比較検討した。その結果、喫煙歴、HLA-Bw54、副鼻腔炎の有無、寒冷凝集素価、起炎菌、1秒量、動脈血酸素濃度などの臨床的パラメーターは両群間で有意差を認めなかった。免疫学的指標として、PPD皮内反応、末梢血のCD3、CD4/CD8比、血清可溶性IL-2レセプターについては有意差を認めなかったが、末梢血リンパ球の自己増殖反応がHTLV-I陽性者の中に高率にみられた。また、DPB症例においてマクロライド治療前後で血清可溶性IL-2レセプターを測定したところ、陰性群では治療後に低下傾向がみられたが、陽性群では治療後に高値となった症例がみられ全体的には一定の傾向はみられなかった。4人のHTLV-I感染者のBALF中よりウイルス感染T細胞株を樹立した。これらの細胞は、インビトロ培養において同一患者末梢血由来のT細胞株に比較して早期にCD3/抗原受容体複合体の発現低下が観察され、それに伴って抗原受容体を介した刺激によるIL-2産生能も低下した。また、これらのT細胞は無刺激でも大量のIL-6、TNF-αを産生しており、肺病変形成に関与している可能性が考えられたので、SCIDマウスの気管内にT細胞株を接種することでHTLV-I関連肺疾患(HAB)モデルの作製を試みた。しかし、今回の試みでは、接種されたT細胞は速やかに肺から失われ、4週後にはウイルスが検出されなくなり、持続感染モデルを作製するには至らなかった。また、観察した限りでは肺内に目立った変化は認められなかった。今後、今回の検討をもとに改良を加えつつ、HABモデルの作製を引き続き試みたいと考える。当科に1988年1993年までの6年間に入院した患者の中でHTLV-I抗体陽性者は294人で総入院患者の16.8%を占めていた。男性163人、女性131人で男女比は1.24:1であった。平均年齢は59.1±15.3才で抗体陰性者の51.0±16.0才に比べやや高い傾向にあった。主要な呼吸器疾患との関係では、HTLV-I抗体陽性者の中でびまん性汎細気管支炎(DPB)、特発性間質性肺炎(IIP)、慢性気管支炎、肺結核症の発生頻度は各々1.36%、4.08%、6.12%、4.42%であり、抗体陰性者の0.34%、1.30%、2.33%、2.60%に比べ高い傾向にあった。しかし膠原病にともなった間質性肺炎や薬剤性肺炎の場合は抗体陽性者の0.34%、陰性者の0.69%のように特発性の場合と異なっていた。一方、原発性肺癌、気管支喘息、サルコイドーシスでは抗体陽性者の5.28%、3.06%、0.70%に対して、陰性者は4.91%、5.21%、1.13%であり差がないかむしろ抗体陰性者の方が多い傾向にあった。このようにDPB、IIP、慢性気管支炎、肺結核症ではHTLV-I感染と何らかの関係があるように思われた。

さらに、DPBの場合年齢が抗体陽性者54.8±14.6才、陰性者74.8±2.3才と有意に若く、本ウィルスに感染することにより発病が促進される可能性が考えられ興味深い。しかしIIPでは抗体陽性者61.4±8.9才、陰性者60.8±9.0才と差がなかった。基礎的研究として、HTLV-I抗体陽性者のBALFよりコンビナントIL-2の存在下にT細胞株を樹立し、同時期に同一患者の末梢血より樹立したT細胞株と表面マーカーを比較検討したところ2例において末梢血に比べBALF中のT細胞のCD3の発現量の減少が観察された。本ウィルス感染細胞が発癌する過程でCD3の発現量が減少することが知られていることから、末梢血に先立って肺内で感染細胞が発癌する可能性も考えられた。次年度には、これらの細胞のproviral DNAのintegrationの有無とmonoclonalityについて解析していきたい。またBALFより樹立したT細胞株をSCIDマウスに移入することにより肺病変の形成を有無についても調べたい。HTLV-Iの侵淫地である沖縄県において、びまん性汎細気管支炎(DPB)を含めた慢性気道疾患患者をHTLV-I陽性者と陰性者に分け、両群間で臨床的に比較検討した。その結果、喫煙歴、HLA-Bw54、副鼻腔炎の有無、寒冷凝集素価、起炎菌、1秒量、動脈血酸素濃度などの臨床的パラメーターは両群間で有意差を認めなかった。免疫学的指標として、PPD皮内反応、末梢血のCD3、CD4/CD8比、血清可溶性IL-2レセプターについては有意差を認めなかったが、末梢血リンパ球の自己増殖反応がHTLV-I陽性者の中に高率にみられた。また、DPB症例においてマクロライド治療前後で血清可溶性IL-2レセプターを測定したところ、陰性群では治療後に低下傾向はみられたが、陽性群では治療後に高値となった症例がみられ全体的には一定の傾向はみられなかった。4人のHTLV-I感染者のBALF中よりウイルス感染T細胞株を樹立した。これらの細胞はin vitro培養において同一患者末梢血由来のT細胞株に比較して早期にCD3/抗原受容体の発現低下が観察され、それに伴って抗原受容体を介した刺激によるIL-2産生能も低下した。また、これらのT細胞は無刺激でも大量のIL-6、TNF-αを産生しており肺病変形成に関与している可能性が考えられたので、SCIDマウスの気管内に接触することでHTLV-I関連肺疾患(HAB)モデルの作製を試みた。しかし、今回の試みでは接種されたT細胞は速やかに肺内から失われ、4週後にはウイルスが検出されなくなり、持続感染モデルを作製することはできなかった。また、観察した限りでは肺内に目立った変化は認められなかった。