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奄美諸島方言と南九州方言の対照方言語彙論的研究

奄美諸島方言と南九州方言との語彙の対照研究を通して,日本の二大方言である本土方言と琉球方言の異質性と同一性を明らかにすることが本研究の目的であった。そのために,南九州方言と奄美諸島各地で,身体部位称語彙の調査をおこない比較考察した。従来の語彙研究では,たとえば琉球方言のmi:には,本土方言の「目(め)」をあててことたれりとしていたが,その内実は単純ではない。本研究では,目の複合語や慣用句まで,目に関わる表現すべてを対象にして抜き出し考察を進めた。その結果,「目」の意味が観念的であるのに対して,琉球方言では,「目」そのものの部位の機能を残したまま把握のしかたをしていることが多い。「目から火が出る」「目を三角にする」「目の色をかえる」「目尻がさがる」「目をふせる」「目もくれない」などの,「目」の中核的意味からの比喩的派生的言いかたが,本土方言(全国共通語)ではさかえている。それに対して,琉球方言では,mi:turarjun(目をとられる→目が眩む)mi: utigikunajun(目が落ちそうになる→注目する)など,身体部位としての「目」の意味が残っている。本土方言の「目」と琉球方言のmi:(目)には,われわれの想像以上の差が見てとれる。身体部位称全般にわたっての,このような観点からの対照研究が求められる。奄美諸島方言と南九州方言との語彙の対照研究を通して,本土方言と琉球方言との同質性と異質性とを明らかにすることが,本研究の目的である。本年度は,奄美諸島方言の身体語彙と副詞語彙の調査を集中的におこなった。すなわち,大島郡龍郷町,和泊町,徳之島町,与論町において,フィールドワークを実施した。これらのデータの処理と本土方言との対照は次年度以降の課題である。本研究に関連したものとして,1997年8月22日に,第3回「沖縄研究国際シンポジウム」において,「琉球方言の目の表現」について発表した。これは,本土方言の「目」と琉球方言の[mi:],「対応形」ではあるが,「記述語」ではないとの趣旨の発表である。従来は,[mi:]に「目」の訳語をあててことたれりとしていた。しかし,「目」と[mi:]とは詳細に検討していくとかなりの意味用法差が認められるのである。このような研究を積み重ねていくと,従来の体系の比較をしていく語彙研究から,意味用法の詳細な対応比較を通した方言語彙の対照研究が可能となる。語彙の対照研究を通して、本土方言と琉球方言の同質性と異質性とを明らかにすることが、本研究の目的である。初年度は、奄美諸島方言の身体語彙と副詞語彙の調査を集中的におこなった。本年度は、本土方言の代表として、鹿児島県の2地点(肝属郡根占町,川辺郡知覧町)の身体語彙の調査をおこなった。各地点でそれぞれ160語前後の身体部位称に関する語彙を収集した。これらを構造化して,奄美諸島方言との比較していくことが次年度の課題である。今年度はまた,文献調査として『鹿児島県方言辞典』の身体部位称をすべて抜き出しカード化した。調査では把握できない特異な表現を補足することができた。従来の対照研究は,たとえば「手」について,奄美方言の「ティー」を当てて,ことたれりとしていた。しかし,本土方言で,たとえば「手八丁口八丁」という言いかたがあるが,これに対応する奄美方言は「ミーハッチョークチハッチョー」(目八丁口八丁)であり,「手」と「目」で用法が違うのである。このような研究を積み重ねていくことによって,本土方言と琉球方言の身体部位称語彙の詳細な対照研究が可能となると考えている。本土方言と琉球方言(奄美諸島方言)との対照方言語彙論の展開として,身体部位称の「目」(mi:)をもとに具体的な考察をおこなった。従来の語彙研究では,琉球方言のmi:には,本土方言の「目(め)」をあててことたれりとしていたが,その内実は単純ではない。

本研究では,目の複合語や慣用句まで,目の表現すべてを対象にして抜き出し考察を進めた。その結果,本土方言では「目」の意味が観念的であるのに対して,琉球方言では,「目」そのものの部位の機能を残したままの把握のしかたをしていることが多い。「目から火が出る」「目を三角にする」「目の色をかえる」「目尻がさがる」「目をふせる」「目もくれない」などの「目」の中核的意味からの比喩的派生的言いかたが,本土方言ではさかえている。琉球方言にはこのような例は認められない。それに対して,琉球方言では,mi:turarjun(目をとられる→目が眩む)mi:putigikunajun(目が落ちそうになる→注目する)など,身体部位としての目(mi:)の意味が残った用法にとどまっている。本土方言の「目」と琉球方言のmi:には,われわれの想像以上の差異が見てとれる。身体部位称全体にわたって,このような対照研究が継続される必要がある。
異方向空間周波数ノイズを利用した角度・距離依存ハイブリッド画像の生成法の開発

ハイブリッド画像は,重ね合わせた2枚の画像において距離により見え方が異なる画像である.本研究は、従来のハイブリッド画像の生成方法に加えて,距離のみならず任意の角度においても必要な情報のみを表示可能とする新規のハイブリッド画像の作成が実現する研究である.空間周波数フィルタリングに異方向ノイズを付加する手法の開発,コントラスト感度調節等の各種画像処理方法アルゴリズムの最適化により実施する.本研究の成果は,簡便な方法で必要な距離および角度において異なる情報を提示できる新たなディスプレイ方法に発展する可能性を秘めている.ハイブリッド画像は,重ね合わせた2枚の画像において距離により見え方が異なる画像である.本研究は、従来のハイブリッド画像の生成方法に加えて,距離のみならず任意の角度においても必要な情報のみを表示可能とする新規のハイブリッド画像の作成が実現する研究である.空間周波数フィルタリングに異方向ノイズを付加する手法の開発,コントラスト感度調節等の各種画像処理方法アルゴリズムの最適化により実施する.本研究の成果は,簡便な方法で必要な距離および角度において異なる情報を提示できる新たなディスプレイ方法に発展する可能性を秘めている.
フラストレート反強磁性体における量子スピン液体状態の研究

磁気秩序のないスピン系における熱ホール効果は理論的に期待されていたが、実際熱ホール効果が観測できるかは実験的に明らかにされてはいなかった。スピン液体における熱ホール効果の測定が行われた物質として、例えばEtMe3Sb[Pd(dmit)2]2、Tb2Ti2O7がある。前者では測定誤差の範囲内で熱ホール効果は確認できておらず、後者では熱ホール効果が観測できたものの、測定温度がスピン系の交換相互作用のスケールよりも大きく、スピン液体相のもつスピン相関と熱ホール効果の関連性が不明であった。そこで、私たちは、EtMe3Sb[Pd(dmit)2]2の測定時よりも小さなホール角でも観測できるよう装置を改良した。試料以外の熱ホール効果を抑えるために試料の熱浴には熱伝導率の高い絶縁体であるフッ化リチウムを用い、試料には熱流と平行の方向に1020%程度もの温度差がつく程度の大きな熱流を流した。これらの工夫により1/1000倍小さな熱ホール角でも測定できるまでに装置を改良することができた。さらに、交換相互作用の大きさが60 K程度であり、測定温度を変化させることで高温のスピン相関のない常磁性相から、スピン相関の発達したスピン液体相、さらに低温での磁気秩序相までアクセスできるボルボサイトを測定試料に用いることで、スピン相関と熱ホール効果の関係を観察した。その結果、有限の熱ホール効果を観測することができた。熱ホール伝導度は交換相互作用の温度スケールよりも高温の領域では0で、試料を冷却していくにつれて負の値になる。また磁化率がピークを持つ温度で熱ホール伝導度も同様にピークをもつ。これらの結果は、熱ホール効果を担うキャリアがスピン励起であり、磁場によって流れが曲げられるエキゾチックなものであることを示している。この成果をまとめた論文は現在査読中である。27年度が最終年度であるため、記入しない。本年度の主な成果は、熱ホール効果測定システムの立ち上げに成功したということである。これまでの理論的な研究によって、量子スピン液体のモデルが数多く提案されてきたが、その中でも実験結果との対応から多くの注目を集めているモデルに、準粒子であるスピノンがフェルミ面をつくっていると考える理論がある。このモデルを考えた場合、量子スピン液体物質は絶縁体で、その励起も電荷を持たないものであるにもかかわらず磁場に応答してローレンツカと同等の力を受け熱ホール効果が起こる可能性があることが理論的に指摘されている。したがって、量子スピン液体物質において熱ホール効果を測定することができれば、量子スピン液体の性質を明らかにする上で大きなブレイクスルーとなることは間違いない。熱ホール効果の測定には非常に精密な熱測定技術が求められる。そこで、これまでも量子スピン液体の熱伝導率測定などにおいて顕著な成果を挙げている東京大学物性研究所の山下穣准教授と共同で、山下研究室所有の温度可変インサートと16T超伝導マグネットを用いた熱ホール効果測定システムを開発した。研究実施計画通り本年度中に測定システムの組み立て、熱伝導率が既知の試料を用いたテストランを終えている。現在、非常にフラストレーションの強いカゴメ格子反強磁性体であるVolborthieの熱伝導率・熱ホール効果の測定を平成25年度から継続して行っており、平成26年度中にさらなる成果が見込まれている。本年度はじめに、昨年度完成させた熱ホール伝導度測定システムを用いてボルボサイトの熱ホール伝導度の測定を行った。電荷の自由度のない磁性体での熱ホール効果は、限られた条件下でのみ起こることが予言されており、もしボルボサイトで熱ホール効果が起こることが示せたならば、ボルボサイトの磁気状態に強い制約を課すことができる。実験の結果、有限の熱ホール効果を観測することができたが、熱浴に使用していた銅のもつバックグラウンドの熱ホール効果が無視できないことがわかった。この問題を解決すべく、私は測定で主に問題となる1K以上の領域において熱伝導率のよい絶縁体で測定セルを作りなおすことを検討した。そして、フッ化リチウム(LiF)を用いることで、要求する性能を満たすことを見出した。実際に、測定セルのうち問題となっている部分をフッ化リチウムで置き換え、測定試料をのせずにバックグラウンドの熱ホール伝導度を測定したところ、これまで見えていたボルボサイトの横方向の反対称的な温度差に比べてバックグラウンドを1桁程度小さく抑えることに成功した。この改良した測定セルを用い、再度ボルボサイトの熱ホール効果の測定を行った。その結果、バックグラウンドのシグナルより充分大きな熱ホール効果を観測することができた。また、熱ホール伝導度の温度依存性も測定し、熱ホール伝導度は20K付近にピークをもつことを見出した。磁化率も20K付近にピークをもつことから、磁気的な相関の発達と熱ホール伝導度の増減の関係性について議論できる可能性があると考えている。ここまでの結果について、下に示す通り日本物理学会、アメリカ物理学会で発表を行った。今後は熱ホール効果の起源に関する考察を行い、結果を平成27年度中に論文にまとめて投稿する予定である。

前者では測定誤差の範囲内で熱ホール効果は確認できておらず、後者では熱ホール効果が観測できたものの、測定温度がスピン系の交換相互作用のスケールよりも大きく、スピン液体相のもつスピン相関と熱ホール効果の関連性が不明であった。そこで、私たちは、EtMe3Sb[Pd(dmit)2]2の測定時よりも小さなホール角でも観測できるよう装置を改良した。試料以外の熱ホール効果を抑えるために試料の熱浴には熱伝導率の高い絶縁体であるフッ化リチウムを用い、試料には熱流と平行の方向に1020%程度もの温度差がつく程度の大きな熱流を流した。これらの工夫により1/1000倍小さな熱ホール角でも測定できるまでに装置を改良することができた。さらに、交換相互作用の大きさが60 K程度であり、測定温度を変化させることで高温のスピン相関のない常磁性相から、スピン相関の発達したスピン液体相、さらに低温での磁気秩序相までアクセスできるボルボサイトを測定試料に用いることで、スピン相関と熱ホール効果の関係を観察した。その結果、有限の熱ホール効果を観測することができた。熱ホール伝導度は交換相互作用の温度スケールよりも高温の領域では0で、試料を冷却していくにつれて負の値になる。また磁化率がピークを持つ温度で熱ホール伝導度も同様にピークをもつ。これらの結果は、熱ホール効果を担うキャリアがスピン励起であり、磁場によって流れが曲げられるエキゾチックなものであることを示している。この成果をまとめた論文は現在査読中である。特別研究員申請時に提出した申請書では量子スピン液体物質EtMe3Sb[Pd(dmit)2]2の熱ホール効果の測定を行う予定であるとしていた。計画から物質を変更しボルボサイトを測定試料に選んだが、実際に熱ホール効果を観測することができている。よって研究は順調に進展していると言える。27年度が最終年度であるため、記入しない。ボルボサイトについて確かな知見が得られたので、結果についてまとめて学会誌で発表する予定である。さらに、最近報告されている新しいスピン液体物質についても熱ホール効果の測定を行いたい。平成25年度中に測定システムを確立する計画であったが、その目標が達成されたため。熱ホール効果測定システムが確立されたので、今後は種々の量子スピン液体候補物質の熱ホール効果測定を行っていく予定である。具体的には、現在継続して測定中であるカゴメ格子反強磁性体のVolborthite、最近発見された新たな量子スピン液体の候補物質であるκ-(ET)_2Ag_2(CN)_2などの熱ホール効果・熱伝導率を測定し、それらの物質中で実現されている状態の性質を解明する上で重要な知見を得ることを目指す。
キチン誘導体を用いた担持形式の異なる徐放性医薬開発に関する研究

生体内消化性キチン誘導体であるカルボキシメチル-キチン(CM-キチン)を担体とする高分子化医薬による医薬輸送について実用化を目指した研究を行った。医薬をCM-キチンにペンダントする場合、スペーサーと医薬間の結合を分子設計することにより、皮下注射でも生体内で2次元加水分解を受けて血管内で医薬の活性化の起こることを明らかにした。また、CM-キチンはカルシウムイオン存在下でベンジル基を持つ医薬類を特異的に吸着すること、更にこの吸着によりCM-キチンが高分子量を保つ間は吸着した医薬の安定化に寄与する事も見いだした。この際プロドラッグを吸着させると、やはり2次元加水分解が起こることも見いだした。一方、CM-キチン水溶液に3価の鉄イオンを添加すると共存する医薬を巻き込んでゲル化が起こることも見いだした。しかも添加する鉄イオンが2価であれば全く影響なくゾル状態であり、医薬との均一混合が非常に楽である。しかしこれらの方法では、高分子量の医薬を包接する事は出来ないので、この場合はカルシウムイオンによる吸着と3価鉄イオンによる包接との協同作用で医薬或いはプロドラッグの包接に成功した。更に多孔性キトサンビーズをN-アセチル化後、インスリンを濃縮吸着させる手法についても研究し、糖尿病ネズミに経口投与でかなりの効果が観測できた。また海草由来の多糖であるアルギン酸にインスリンを高濃度で包含させたままで紡糸後細粉化する手法についても研究し前記ネズミに経口投与し非常に良い結果を得た。この様に水溶性で生体内消化性のCM-キチンは徐放性医薬の担体として好適であることを示し、更に実用化の障害となる毒性についても^<14>C標識CM-キチンや蛍光標識CM-キチンを用いて詳しく研究し低毒性であると共に静脈注射により骨髄細胞とくに顆粒球とマクロファージに集積されることを見いだし実用化へ明るい見通しをつけた。キチン誘導体の中でも6ー0ーカルボキシメチルキチン(CMーキチン)が生体内消化性も高く、その上カルシウムイオンと強固な錯体を形成してフェニルアラニン等の中性アミノ酸の疎水性側鎖を特異的に吸着する様になることを見出し,この性貭を医薬の二次元活性化に利用することを考え研究を行った。CMーキチンの側鎖カルボキシル基の一部に特別なスペ-サ-を径由して医薬を結合させ高分子医薬とした。この場合スペ-サ--医薬高の結合が消化性でないとCMーキチンが生体内消化を受けたのみで不活性なプロドラッグが血中へ放出される。しかしスペ-サ--医薬間の結合が生体内の地種の酵素で切られる様に設計すると血中へ放出されたプロドラッグが血中の酵素の作用で加水分解されて活性な医薬が血中生成し各臓器へ運ばれ効界が出現する様になる。しかし医薬の担体が低分子化される前に医薬が活性化されてしまうと徐放効果は期待出来ないことになる。これら諸点を考え伴せスペ-サ--医薬間の結合にエステル結合とアミド結合を選びスペ-サ-にクエンルアラニン,アラニン,非天然型アミノ酸等を取り上げ高分子医薬を合成しモデル系で生体内安定化因子について研究した。一方CMーキチンが3価の鉄イオン存在下でゲル化する性貭を利用して医薬(ネオカルチノスタチンと言うタン白貭性制ガン剤)を包接化する研究を行い,好収率で包接化する方法を見出しマウスを使った実験も行った。またCMー

キチンを硫酸化すると低毒性で低抗血検性の誘導体になることからこれをガン細胞転移阻止剤として使う研究を行いマウスで約85%の阻止率になることを見出した。Fe^<3+>イオン-カルボキシメチルキチン(CM-キチン)による高分子量制ガン剤(ネオカルチノスタチン、NCS)の包接化の条件について詳しく研究したところ、1530mM Fe^<3+>及び2550mM Ca^<2+>存在下でCM-キチン-NCS混合物をゲル化するとNCSを効率よく包接化できることを見いだした。これは、NCSが高分子量のためFe3+単独の条件下では包接化が不完全なため、Ca^<2+>キレ-トCM-キチン中性アミノ酸吸着特性による補助効果を利用したところ約50%以上の効率でNCSを包接化できた。さらにこのNCS包接化高分子試薬をリゾチ-ム共存下in vitroでの徐放性について観察し、所期の効果が確認できた。またマウスを使ってのin vivoテストでも皮下注射により48時間(2日)以上にわたり徐放効果が確認できた。一方CM-キチンにフェニルアラニンをスペ-サ-としてモデル医薬を結合したペンダント型高分子医薬では、スペ-サ-のアミノ酸構成に依存はするが、CM-キチンによる包接化のためリゾチ-ム共存下でなければ、モデル医薬の放出が観測できないことが多かった。この場合、予めリゾチ-ムで高分子医薬の担体部(CM-キチン)を種々のサイズに加水分解してからモデル医薬放出について調べたところ、分子量に大きく依存し分子量4,000以下になると放出速度が急速に上昇することを見いだした。高分子医薬ではこの様な現象は初めて観測されたもので、第5回キチン・キトサン国際学会での発表では大いに注目された。このため本年4月5日10日米国サンフランシスコで行われるアメリカ化学会のセルロ-ス部門で招待講演に指定された。またすでにCarbohydrate Polymers紙に投稿受理されている。本年度はこの題目で3つの国際学会で発表している。生体内消化性キチン誘導体であるカルボキシメチル-キチン(CMーキチン)を担体とする高分子化医薬による医薬輸送について実用化を目指した研究を行った。医薬をCMーキチンにペンダントする場合、スペーサーと医薬間の結合を分子設計することにより、皮下注射でも生体内で2次元加水分解を受けて血管内で医薬の活性化の起こることを明らかにした。また、CMーキチンはカルシウムイオン存在下でベンジル基を持つ医薬類を特異的に吸着すること、更にこの吸着によりCMーキチンが高分子量を保つ間は吸着した医薬の安定化の寄与する事も見いだした。この際プロドラッグを吸着させると、やはり2次元加水分解が起こることも見いだした。一方、CMーキチン水溶液に3価の鉄イオンを添加すると共存する医薬を巻き込んでゲル化が起こることも見いだした。しかも添加する鉄イオンが2価であれば全く影響なくゾル状態であり、医薬との均一混合が非常に楽である。しかしこれらの方法では、高分子量の医薬を包接する事は出来ないので、この場合はカルシウムイオンによる吸着と3価鉄イオンによる包接との協同作用で医薬或いはプロドラッグの包接に成功した。更に多孔性キトサンビーズをNーアセチル化後、インスリンを濃縮吸着させる手法についても研究し、糖尿病ネズミに経口投与でかなりの効果が観測できた。
皮膚創傷実験のモデル動物としてスンクスの可能性を検証する

本研究の目的は、トガリネズミ科のスンクス(Suncus murinus)が皮膚創傷の実験モデルとして利用される可能性を形態学的視点で探ることである。スンクスの皮膚の緩さは、体幹の全域を覆う皮幹筋の重層的な発達と皮下脂肪の少なさに起因する。体幹背側の皮下には、脊柱の両脇を縦走する特徴的な動脈路が確認された。こうしたラット等とは異なる皮下構造を踏まえたうえで、皮膚創傷の実験モデルとしてスンクスを利用することは、比較動物学的な意義をもつと考える。前年度は注入標本による皮下血管の走行観察、皮神経の染色、および皮幹筋の剖出を行ったが、新知見に加えていくつかの疑問点が出てきたため、今年度も形態学的観察を継続した。血管系に関しては、創傷実験を行いやすい体幹背側皮下の分布範囲を観察するだけでなく、深部血管との繋がりを探索した。動脈系では、脊柱の両側に沿う縦走路の主要な供給源が、深部の深腸骨回旋動脈と胸背動脈の皮枝であることが明らかとなった。肋間動脈はこの縦走路に吻合するものの、脊髄神経後枝の伴行血管としての性格が強く、皮下への供給源としては弱いと考えられた。縦走路は皮幹筋表層と真皮の間を走り、これから内・外方に延びる横走細枝が皮膚への末梢枝であった。深腸骨回旋動静脈の走行については、ヒト、ラットおよびノウサギとの比較解剖学的検討を行い、スンクスにおける起始(流入)位置と体幹分布の特徴を2学会で発表した。背側の皮神経が皮幹筋を貫通する位置は縦走血管路の近辺であり、ここで内・外方へと分岐し、皮幹筋の表層を分節的に広がっていた。スンクスの皮幹筋はよく発達するが、重層的でその解釈は難しく、従来は簡易な記載が多かった。今年度の観察で、スンクスでは腕背筋とその誘導層が体幹背側を広く覆うこと、顔面神経領域の皮筋に連続すること、背側浅層の皮幹筋が肩甲骨や上腕骨への付着を有すること、会陰部で背腹の皮幹筋線維が連続すること、などが明らかになった。このような皮幹筋の発達と、肩甲骨および寛骨周囲の豊富な脂肪体の存在により、スンクス皮膚の大きな可動性がもたらされると考えられた。皮下の血管・神経は皮幹筋表層で末梢の広がりをもち、皮下実験では皮幹筋の形態理解が結果を左右する因子になることが示唆された。今年度内で十分な実験は実施できなかったが、前記のような形態学的特徴を踏まえれば、スンクスを皮膚創傷のモデル動物として活用する道が開けると考える。本研究の目的は、皮膚創傷の動物実験モデルとしてスンクスが利用可能かどうかを形態学的視点から探ることである。その第一段階として平成23年度は、皮下組織に分布する血管・神経・筋の走行や相互の位置関係を詳細に把握する作業を実施した。本年度は、既に保有しているスンクス24個体を材料として、注入標本による血管の走行観察、皮神経のSihler染色、および皮幹筋の剖出を行った。左心室あるいは腹大動脈から着色ラテックスを注入した材料により、体幹背側を中心とした皮下の動脈走行を詳細に観察した。背側皮下には、肩甲骨と寛骨それぞれの前・後端位に、浅層への動脈湧出点が見られた。これらの動脈は前後方向に延びて互いに吻合し、脊柱の両脇に明瞭な縦走路を形成していた。この動脈幹と直交する方向に延びる多くの細枝が、体幹背側皮下の全域を覆うように分布し、正中線上では左右側の吻合も確認された。これら横走枝の末梢では、脊髄神経皮枝との伴行関係が見られた。一方、静脈系では、体幹尾側における皮下の還流経路として深腸骨回旋静脈の重要性が認識されたため、比較解剖学的な検索を追加した。スンクスの皮幹筋の主体となるのは、腕腹筋と腕背筋であった。これらはともに上腕骨に起始し、それぞれ体幹腹側と背側の真皮、皮下組織あるいは筋膜に停止していた。このほかに、基本層を構成する両筋から分化したと考えられる薄い筋が最浅層に存在しており、体幹のほぼ全域が皮幹筋に覆われていると見なされた。皮幹筋は全て、尾側胸筋神経に支配されていた。皮神経としては、脊髄神経腹側枝・背側枝およびそれぞれの内側皮枝・外側皮枝の分節的な配列が観察された。このような形態学的データは、次年度に予定している皮膚創傷実験を行うに当たって、段階的な条件設定や結果の評価・解釈の基礎資料になると考える。初年度は、スンクス皮下組織の構造に関する形態学的な基礎資料を得ることが目標であった。

当初期待していた新材料の無償提供がなく、既存の標本を用いた作業が主となった。新鮮材料ではないため、組織標本の作製に手間取り、現時点では構造模型の作成に至っていない。その作業の進行を急いでおり、肉眼的所見も十分に得られているので、次年度の計画を進めるに当たっては支障ないものと考えている。初年度に得られた形態学的な基礎資料に基づき、以下の研究を行う。1.創傷治癒実験(作創位置と条件の設定、創の作成、治癒状態の観察)2.治癒所見の形態学的な評価3.動物モデルとしての有効性の判定4.報告書の作成と成果発表次年度は、以下の項目で経費を使用する計画である。1.スンクスの新鮮個体を入手するための購入費用と飼育費用2.観察切片作製のための研究補助者の雇用3.成果発表のための1回分の旅費4.報告書印刷費
ヒトにおける母乳への薬物移行性とその評価

【研究目的】薬物の母乳への移行性に関して、臨床で有用となる情報が報告されている薬物は限られている。臨床現場では、薬物治療が必要な基礎疾患をもった産後の患者が授乳を希望することも多い。そうした母親からは、薬物の母乳移行性の情報が求められている現状があり、薬剤師として信頼性の高い情報提供の必要性を感じている。そこで、本研究では必要な情報収集の手がかりとして、当院で行っている妊娠・授乳に関するお薬相談の実態を調査し、伝達する情報の構築を開始した。【研究方法】独立行政法人国立成育医療研究センターの事業の一つである厚生労働省事業「妊娠と薬情報センター」でのお薬相談に対し、当院でも拠点病院として事業に加わっていることから、その相談内容についてまず調査を行った。【研究成果】・患者の服用薬剤数は46剤が約半数を占め、特に薬剤数が多いと妊娠前から薬剤に関する不安をより感じやすいと考えられた。・薬の種類は、精神科用薬が相談の上位を占めた。多剤併用療法や、疾患の特性により相談件数が多かった可能性が考えられる。また、抗てんかん薬(バルプロ酸など)も上位を示した。抗てんかん薬には催奇形性が問題となるものもあるが、発作を起こさないための薬物治療も重要であり、患者からの相談希望が多かったと考えられる。・授乳に関しては、出産が近づいてからの相談が多かった。胎児への薬剤の影響についての不安が、出産が近づくにつれて、母乳育児が可能かどうかという不安へ移行したものと思われる。授乳に関する相談は、薬剤を使用するには母乳を中止しなければならないと思っている患者が多い印象を受けた。そのため、臨床報告が乏しい薬剤のみではなく、母親が不安を感じている場合には濃度測定を行うなど、対象薬剤を限定せずに母乳への移行性を評価してもよいと思われた。
実世界シミュレーションによるコミュニケーションの支援

本研究課題では,公共空間のような大規模実環境における多数の人々の行動のトラッキング,シミュレーション,及びナビゲーションを実現するソフトウェアモジュールを開発し,実世界シミュレーションをユーザインタフェースとするコミュニケーション支援システムの開発環境を構築した.まず,実環境に備え付けられたセンサーから取得される位置や移動速度などのコンテキスト情報を,仮想的な公共空間内のアバターの行動にマッピングする方式を考案し実装した.そして,この実環境アバターを含む仮想公共空間をタッチスクリーン上に表示し,ポインティング操作によって指定する人々の携帯電話に対して音声チャンネルの接続や電子メールの送信が可能なようにした.次に,この群集ナビゲーションシステムの設計・評価を行うための参加型シミュレーションを開発した.まず実環境アバターを,コンピュータが制御する社会的エージェントやデスクトップ環境のユーザが操作する仮想空間アバターと共通の行動モジュールによってシミュレートできるようにするため,入力フォーマットの統合と入力インタフェースの実装を行った.そして,駅構内における群集避難のシミュレーションを構築し,そこにデスクトップユーザや実際の駅にいるユーザがアバターとして参加できるようにした.このシミュレーションと群集ナビゲーションシステムを接続し,少数の被験者によって大規模な群集避難誘導の実験を仮想的に行えるようにした.この実験環境では,被験者は実際に手に持った携帯電話を通して誘導案内を受けとると同時に,仮想現実感や拡張現実感を与えるインタフェースを通じてシミュレーションの中で避難を行う.これを用いて群集ナビゲーションシステムの評価テストを行い,実験環境の有効性を確認した.本研究課題では,公共空間のような大規模実環境における多数の人々の行動のトラッキング,シミュレーション,及びナビゲーションを実現するソフトウェアモジュールを開発し,実世界シミュレーションをユーザインタフェースとするコミュニケーション支援システムの開発環境を構築した.まず,実環境に備え付けられたセンサーから取得される位置や移動速度などのコンテキスト情報を,仮想的な公共空間内のアバターの行動にマッピングする方式を考案し実装した.そして,この実環境アバターを含む仮想公共空間をタッチスクリーン上に表示し,ポインティング操作によって指定する人々の携帯電話に対して音声チャンネルの接続や電子メールの送信が可能なようにした.次に,この群集ナビゲーションシステムの設計・評価を行うための参加型シミュレーションを開発した.まず実環境アバターを,コンピュータが制御する社会的エージェントやデスクトップ環境のユーザが操作する仮想空間アバターと共通の行動モジュールによってシミュレートできるようにするため,入力フォーマットの統合と入力インタフェースの実装を行った.そして,駅構内における群集避難のシミュレーションを構築し,そこにデスクトップユーザや実際の駅にいるユーザがアバターとして参加できるようにした.このシミュレーションと群集ナビゲーションシステムを接続し,少数の被験者によって大規模な群集避難誘導の実験を仮想的に行えるようにした.この実験環境では,被験者は実際に手に持った携帯電話を通して誘導案内を受けとると同時に,仮想現実感や拡張現実感を与えるインタフェースを通じてシミュレーションの中で避難を行う.これを用いて群集ナビゲーションシステムの評価テストを行い,実験環境の有効性を確認した.
パーキンソン病におけるα-synucleinと酸化ストレスの共同作用機序

昨年度の研究によりHNEのα-synuclein付加サイトを決定する為、リコンビナントwild type α-synucleinを作製し、in vitroにてHNEと反応させ、抗α-synuclein抗体と抗HNE抗体を用いて、western blottingでα-synucleinの凝集を確認し、MS及びMS/MSにて一個の付加サイト(H50)を見つけた。又、wild type α-synucleinと同様、H50Rのmutant蛋白質を作製、H50Rとlysine(K)からarginine(R)に変化した15種類のdouble mutant蛋白質を作製した。α-Synucleinに含まれた15個のlysine残基の中、少なくとも一ヵ所はH50Rと共働き、HNEの付加複合体が形成されていることを推測した。それぞれの蛋白質はwild type α-synuclein、H50R α-synucleinと同様、HNEとin vitro反応をした。結果として、明らかな変化を見つけられなかった。今年度では、Lysine同土はHNEと付加複合体が形成されていることを推測した。同じsynucleinfamilyであるβ-synucleinとHNEのin vitro反応を調べた。β-Synucleinの中、Q50でありながらもα-synucleinと同様にHNEによる凝集パターンを示したことで、H65はHNEに対し、β-synucleinの一つの修飾サイトと考えた。又、α-SynucleinのH50とβ-synucleinのH65との間に存在しているK58とK60は最も付加複合体形成に参与する可能性が高いと考えた。これを確認するため、K58R、K60Rα-synuclein蛋白質を作製したが、的確なbinding siteは見つからなかった。更に、K58R及びK60R以外のmutant α-synuclein蛋白質を作製し、K60R及びK58R以外のmutantα-synuclein蛋白質を作製したが、H50Rα-synucleinと同様、HNEとin vi tro反応をした。結果として、明らかな変化を見い出せなかった。Lysine同土はHNEとの付加複合体が非常に不安定と考えられる。これからは追加実験を行うと共に、これまでの研究成果を論文に纏める予定である。HNEのα-synuclein付加サイトを決定する為に、リコンビナントwild type α-synucleinを作製し、in vitroにてHNEと反応させ、抗α-synuclein抗体と抗HNE抗体を用い、western blottingでα-synucleinの凝集を確認した。MS及びMS/MSにて一個の付加サイト(H50)を見つけた。Wild type α-synucleinと同様、H50Rのmutantタンパク質を作製し、同様にin vitro反応を行った。Western blottingで反映されていた凝集パターンはwild type α-synucleinと明らかな変化を示さなかった。また、ドーパミン神経細胞SH-SY5Yにつき、wild typeとH50Rのα-synucleinをそれぞれover expressionし、HNEをかけ、濃度とタイムコースにおいても両者のcell viabilityにおける明らかな差を見出せなかった。ということは、HNEのα-synuclein付加サイトはH50以外にも存在することが推測されている。また、western blotting上で、monomer、dimer、oligomer、polymer、それぞれのバンドをみつけたことにより、α-synucleinにおいてはHNEの付加複合体が形成されていることを示した。共同研究者である名古屋大学の内田先生のアドバイスにより、α-synucleinタンパクの中、7個のKTKEGV repeatを含めて14個のリシン(K)残基も存在することにもかかわらず、唯一に存在しているヒスチジン(H)残基に付加したことはHNE-K結合はHNE-H結合よりはるかに弱く、MS解析の際、消化する前にリシン(K)残基-(CH_2)_4-NH_3^+の中、-NH_2-K結合を保護しなかったからであると考える。これからはMS解析前、保護剤を添加処理し、酸化ストレスに修飾されたポイント付加サイトを見つけることを期待している。上記の結果は、研究代表者により、第45回日本神経学会総会、第8回国際パーキンソン病および運動障害学会で発表された。昨年度の研究によりHNEのα-synuclein付加サイトを決定する為、リコンビナントwild typeα-synucleinを作製し、in vitroにてHNEと反応させ、抗α-synuclein抗体と抗HNE抗体を用いて、western blottingでα-synucleinの凝集を確認し、MS及びMS/MSにて一個の付加サイト(H50)を見つけた。但し、in vitro反応とドーパミン神経細胞SH-SY5Yについたin vivoの研究ではHNEのα-synuclein付加サイトはH50以外にも存在することが推測されていた。本年度ではwild type α-synucleinと同様、H50Rのmutant蛋白質を作製、また、H50Rとlysine(K)からarginine(R)に変化した15種類のdouble mutant蛋白質を作製した。α-Synucleinに含まれた15個のlysine残基の中、少なくとも一カ所はH50Rと共働き、HNEの付加複合体が形成されていることを推測した。Lysine同士はHNEと付加複合体が形成されていることを推測した。

また、同じsynuclein familyであるβ-synucleinとHNEのin vitro反応を調べた。β-Synucleinの中、Q50でありながらもα-synucleinと同様にHNEによる凝集パターンを示したことで、H65はHNEに対し、β-synucleinの一つ修飾サイトと考えた。α-SynucleinのH50とβ-synucleinのH65との間に存在しているK58とK60は最も付加複合体形成に参与する可能性が高いと考えた。これからはK58R、K60R α-synuclein蛋白質を作製し、的確なbinding siteをみつけることを期待している。上記の結果は、研究代表者により、第46回日本神経学会総会で発表された。昨年度の研究によりHNEのα-synuclein付加サイトを決定する為、リコンビナントwild type α-synucleinを作製し、in vitroにてHNEと反応させ、抗α-synuclein抗体と抗HNE抗体を用いて、western blottingでα-synucleinの凝集を確認し、MS及びMS/MSにて一個の付加サイト(H50)を見つけた。又、wild type α-synucleinと同様、H50Rのmutant蛋白質を作製、H50Rとlysine(K)からarginine(R)に変化した15種類のdouble mutant蛋白質を作製した。α-Synucleinに含まれた15個のlysine残基の中、少なくとも一ヵ所はH50Rと共働き、HNEの付加複合体が形成されていることを推測した。それぞれの蛋白質はwild type α-synuclein、H50R α-synucleinと同様、HNEとin vitro反応をした。結果として、明らかな変化を見つけられなかった。今年度では、Lysine同土はHNEと付加複合体が形成されていることを推測した。同じsynucleinfamilyであるβ-synucleinとHNEのin vitro反応を調べた。β-Synucleinの中、Q50でありながらもα-synucleinと同様にHNEによる凝集パターンを示したことで、H65はHNEに対し、β-synucleinの一つの修飾サイトと考えた。又、α-SynucleinのH50とβ-synucleinのH65との間に存在しているK58とK60は最も付加複合体形成に参与する可能性が高いと考えた。これを確認するため、K58R、K60Rα-synuclein蛋白質を作製したが、的確なbinding siteは見つからなかった。更に、K58R及びK60R以外のmutant α-synuclein蛋白質を作製し、K60R及びK58R以外のmutantα-synuclein蛋白質を作製したが、H50Rα-synucleinと同様、HNEとin vi tro反応をした。結果として、明らかな変化を見い出せなかった。Lysine同土はHNEとの付加複合体が非常に不安定と考えられる。
1930、40年代における日本-アジア国際関係史

本年は主に日本語一次史料の収集に努め、その成果として(1)「外務省『大東亜共栄圏』構想の形成過程」(『歴史学研究』798号、2005年2月)、および(2)「(仮題)『帝国』と『独立』」(『年報・日本現代史』第10巻、2005年5月刊行予定)をまとめた。(1)では、主に外務省外交史料館所蔵の外交史料を使用することで、1940年7月当初の「大東亜共栄圏」構想は、第二次欧州戦争後の講和会議を見据えながら、戦勝国ドイツによる東南アジア再編の可能性を「排除」することを目的として登場する「外交スローガン」であり、対米政策というよりもむしろ対独政策であったことを実証した。(2)では、(1)で考察したような外交スローガンが、内実を持った実体を備えていく過程を、政策的実体化、国際法的実体化、言説的実体化の三側面において分析した。従来の「大東亜共栄圏」研究においては、日本の「欺瞞」を暴くという観点から、ともすれば日本の「指導」という側面ばかりが着目されてきたが、本稿では、「反帝国主義」を掲げる「大東亜共栄圏」構想において必要不可欠であった「自主独立」というロジックが、実体化の過程において常に「日本に抗う主体」を登場させ、彼らの「抗う声」は共振しながら「大東亜共栄圏」を巡る政策や言説において反響し、日本の「指導」を脅かしていたことを実証した。以上、本年度は主に1940年代の日本-東南アジア関係を規定した「大東亜共栄圏」について実証を進めた。
スキンブロッティング法による局所筋の炎症反応と筋グリコーゲン動態の評価法の開発

スキンブロッティング法を用い、筋運動後の炎症マーカーとしてクレアチンキナーゼの測定を行った。ウエイトトレーニングの経験のある男子学生9名を対象に、高強度上腕屈曲運動(80%1RM相当負荷で1セット10回を3セット)を行わせ、運動前後および2時間後、24時間後、48時間後に血液検査およびスキンブロッティングを行い、クレアチンキナーゼの変化を調査した。スキンブロッティングは上腕二頭筋の中間部でサンプリングを行った。その結果血中クレアチンキナーゼ濃度は運動直後から増加し、スキンブロッティング法による上腕二頭筋中間部のクレアチンキナーゼは運動2時間後で増加傾向が見られた。これらの結果から、全身性の血中クレアチン濃度と運動を行う筋におけるスキンブロッティング法でのクレアチンキナーゼの反応には時間的な差が生じることが示唆された。しかしながら、高強度運動時の筋損傷マーカーとなるクレアチンキナーゼをスキンブロッティング法により定量化できる可能性が示唆された。インターロイキンー6(IL-6)や腫瘍壊死因子α(TNF-α)などのサイトカインについても血中濃度とスキンブロッティング法による測定値との間に相関性があることも期待される。これらのことからスキンブロッティング法により、非侵襲的に筋運動直後のリカバリーを評価することができるものと期待される。この評価により、競技会やトレーニング後の適切なコンディション評価およびリカバリーの処方が行われると期待される。スキンブロッティング法の実施環境の整備がおおむね完了した。本年度は動物モデルを使用して、筋における炎症性(インターロイキン1β、TNFα)や抗炎症性(IL-10、IL-1ra)サイトカインをスキンブロッティング法により採取することを予定していた。スキンブロッティング法の実施環境整備に遅れがでたことにより、動物モデルからのサンプル採取に遅れがでたため、スポーツ活動実施中に生じた受傷部位のサンプリングおよび対照としての安静時のサンプリングを先に行うこととし、現在そのサンプルの取得を実施して、スキンブロッティング法による測定を実施しているところである。スポーツ活動における筋の損傷は外傷によるものと、主として伸張性収縮による損傷とに大別される。両方に共通して筋から皮膚表面に滲出すると期待されるものとしてアルブミンとクレアチンキナーゼがあげられる。そのため今後、直近ではこの2つのマーカーをスキンブロテッィング法で検出できるように測定法を確立させることを目指すこととする。この2つのマーカーをほかのマーカーよりも先に測定可能であることを確認することで、その他のマーカーの検出技術向上につなげられると考えられる。また、外傷時のサンプルを取得することができたたため、スキンブロッティング法によるの非侵襲性の筋のコンディション評価が可能になると期待される。それによって、次のスポーツパフォーマンス発揮のためのリカバリー方策を検討することも可能になると期待される。動物モデルの入手が予定通りできなかったため。スキンブロッティング法の実施環境の整備がおおむね完了し、肘関節屈曲運動後の急性的なクレアチンキナーゼ(CK)の反応をスキンブロッティング法で確認することができた。本年度は高強度筋運動後の作動筋における炎症性(インターロイキン1β、TNFα)や抗炎症性(IL-10、IL-1ra)サイトカインの経時的変化をスキンブロッティング法により評価することを予定していた。スキンブロッティング法による各炎症性、抗炎症性サイトカインの反応評価の確認に遅れがでたことにより、スポーツ活動実施中に生じた受傷部位のサンプリングおよび対照としての安静時のサンプリングを先に行い、両条件間でのCKの急性的な反応を確認することを優先した。現在そのほかの炎症性および抗炎症性サイトカインを含めて筋運動後の経時的反応をスキンブロッティングによる評価と血液による評価で比較することを実施している。血液による各マーカー、サイトカインの経時的反応とスキンブロッティングによる反応に相関があることを確認し、スポーツ外傷受傷部位、高強度筋運動後の各炎症性、抗炎症性マーカーおよびサイトカインの評価をスキンブロッティングで行うことで非侵襲的かつ簡便に競技スポーツにおけるコンディション評価に用いられることが期待される。研究対象者の確保において予定の調整に遅れが生じたためスキンブロッティング法を用い、筋運動後の炎症マーカーとしてクレアチンキナーゼの測定を行った。

筋の外傷時に加えて、筋の伸張性収縮を伴う筋活動(高強度ウェイトトレーニング時など)時のサンプル採取を行い、スキンブロッティング法による局所筋のタンパク評価を確立する。また、アルブミン、クレアチンキナーゼ以外のほかの炎症性、抗炎症性サイトカインの評価も可能となるよう、測定法の検証を行う。高強度筋活動を行う対象者を確保して、筋運動後のクレアチンキナーゼや炎症性、抗炎症性サイトカインの経時的反応を血液による測定値と比較して、相関性を確認する。それに基づき、さまざまな運動条件時の各サイトカインの反応をスキンブロッティング法により確認する。動物モデルの実験が実施できなかったため研究対象者の確保が十分にできず、それに伴う謝金、消耗品などの支出が少なくなったため。動物モデルの取得により、抗体等の購入にあてる
抗菌性モノマーの歯面塗布材への応用に関する研究

我々は従来より非溶出型抗菌性コンポジットレジンの開発を目指して研究を続けてきた。そして、抗菌剤にメタクリル基を導入することにより、重合性のある抗菌剤すなわち抗菌性モノマーを2種類合成した。これまでの研究により、抗菌性モノマーを添加したコンポジットレジンは抗菌剤を溶出しないにもかかわらず、その表面で抗菌性を発揮し、表面に接触した細菌を殺菌することが明らかになっている。今回は抗菌性モノマーをシーラント材に配合して、非溶出型抗菌性歯面・根面塗布材を試作し、諸性質を検討した。抗菌性モノマーの1つであるMDPB(4級アンモニウム塩である臭化ドデシルピリジニウムにメタクリル基を導入したもの)を市販の光重合型フィッシャーシーラント(ティースメイトA,クラレ)にそれぞれ0.5%,1%および2%(重量部)溶解させ3種類の塗布材を調製した。各塗布材を光重合後、赤外線吸収スペクトルを測定し重合率を算出したが、3種ともMDPB不添加のコントロールの重合率との間に有意差を認めず、この程度のMDPBの添加は重合に影響しないことが明らかとなった。しかし、試作塗布材のベースに用いたティースメイトAが、フィラーを含まないフィッシャーシーラントであるため、円盤型モールドに填入し、ストリップスで圧接して光重合しても表面にはかなりの量の未重合層があるもようで、S.mutansに対する阻止斑形成試験を行うと、3種とも阻止斑を生じた。そこでアルコール洗浄により未重合層を除去した結果、阻止斑の形成はみられなくなり、しかも試料下面での菌の増殖は抑制され、非溶出型の抗菌性が確認された。臨床応用に際して問題となる変着色についても検討した。MDPB不添加のコントロールと比較して、より強く黄色方向へ変色する傾向が認められたが、着色はコントロールより少ないことが明らかとなった。
音源と文字を定位する知能移動ロボット

環境には,看板などの文字情報や種々の音があり,我々に対し情報を提供している(アフォーダンス).本研究では,文字や音の情報を環境認識に積極的に利用するために,シーン内の文字と音源の位置を特定する方法を研究した.画像からの文字の抽出は,文字の高コントラストと高い空間周波数,文字のアスペクト比や文字列の直線性などの,文字と文字列の一般的特徴を利用して行った.また,文字板に対する観察者の方向を消失点から推定する方法も検討した.音源の定位では,音源が障害物の背後にありロボットから見えない場合を考えた.音の回折点を推定し,回折点に移動後再度方向を推定することで,物体背後の音源を定位する.提案手法を移動ロボットにインプリメントし,手法の有効性を実験で確かめた.環境には,看板などの文字情報や種々の音があり,我々に対し情報を提供している(アフォーダンス).本研究では,文字や音の情報を環境認識に積極的に利用するために,シーン内の文字と音源の位置を特定する方法を研究した.画像からの文字の抽出は,文字の高コントラストと高い空間周波数,文字のアスペクト比や文字列の直線性などの,文字と文字列の一般的特徴を利用して行った.また,文字板に対する観察者の方向を消失点から推定する方法も検討した.音源の定位では,音源が障害物の背後にありロボットから見えない場合を考えた.音の回折点を推定し,回折点に移動後再度方向を推定することで,物体背後の音源を定位する.提案手法を移動ロボットにインプリメントし,手法の有効性を実験で確かめた.
白血病細胞分化誘導の分子生物学的機構の解明とその臨床応用ーSecond messengerの役割と核酸代謝の形質変換を中心としてー

1.Secondmessengerの役割(1)1,25(OH)_2D_3(D_3),TPAによりHLー60細胞をmonocyte系細胞に分化誘導させると細胞内遊離Ca^2濃度([Ca^<2+>]i)は1分以内というshort termでみても、3日間というlong termでみても上昇が認められた。又、[Ca^<2+>]iのshort termでの上昇はCa拮抗剤及びprotein kinase C(PKーC)阻害剤により抑制された。一方、Retinoic acidによりmyelo系に分化誘導された時には[Ca^<2+>]iに変化は認められなかった。(2)増殖及び分化においてD_3に対する反応性の違うHLー60のsubcloneを用い、D_3を作用させた時の1,25(OH)_2D_3 receptor(VDR)mRNAとcーmyc mRNAの変化を観察したところ、VDR mRNAは分化と、cーmyc mRNAは増殖と関係がある事が示唆された。(3)PKーC阻害剤のK252aはHLー60の増殖及びDNA合成を濃度依存性に抑制し、各種分化誘導物質による分化誘導作用を増強した。(4)我々が樹立した骨髄性白血病細胞株TIー1はTPAによりmonocyte系細胞に、heminによりerythro系細胞に分化誘導され、それぞれ濃度依存性に細胞増殖が抑制される事が示された。2.核酸代謝学的解析ヒトのdehyrothymine dehydrogenase(DHTDH)の全塩基配列を決定する目的で、まずラット肝より塩谷らの方法を用いてDHTDHを精製した。精製した蛋白の断片より、アミノ酸配列を決定し、特異的塩基配列を合成した。このオリゴDNAを用いて、ヒトspleen DNA libraryよりスクリ-ニングを行い、DHTDHの全塩基配列を決定した。このDHTDHcDNA断片をprobeとしてHLー60,U937細胞のTPAによる分化誘導時のDHTDH mRNAの発現を経時的に観察したところ、mRNAに発現は分化誘導形質の発現よりも早い時期に起こる事が確認された。我々は既に、これらの細胞の分化誘導時にDHTDH蛋白量の増加が早期に起こる事を報告しているが、今回この蛋白量の増加はmRNAの増加によるものである事が明らかになった。HL60細胞の分化の機序の解明の為,カルシウム指示薬Furaー2AMを用いて,分化誘導後の細胞内カルシウムイオン濃度(〔Ca^<2+>〕i)を,1分以内の短時間の系と,24,48,72時間の経時的変化を長時間の系にて観察した。HL60細胞を1α,25(OH)_2D_3,フォルボ-ルエステル(TPA)及び1α,25(OH)_2D_3の新しい誘導体であるoxaー1α,25(OH)_2D_3(oxa体)により単球系に分化誘導させると,短時間の系,長時間の系共に〔Ca^<2+>〕iの著明な上昇が認められた。一方,HL60細胞を顆粒球系に分化誘導させるretinoic acid,dimethylsulfoxide(DNSO)ではいずれの系でも〔Ca^<2+>〕iの上昇は認められなかった。

即ち,HL60細胞の単球系への分化に際して〔Ca^<2+>〕iの上昇の重要性が示唆された。〔Ca^<2+>〕iの上昇の機序の解明の為,EGTA,カルシウム拮抗剤(diltiazem,verapamil),Cーキナ-ゼ阻害剤(staurosporin)の存在下で1α,25(OH)_2D_3,TPAを作用させ〔Ca^<2+>〕iの変化を検索した。EGTA,カルシウム拮抗剤,Cーキナ-ゼ阻害剤のいずれによっても〔Ca^<2+>〕iの上昇が阻害された。この事は,1α,25(OH)_2D_3による〔Ca^<2+>〕iの上昇が,細胞外よりカルシウムチャンネルを介して流入するCa^<2+>に起因すると共に,Cーキナ-ゼにより制御されている事を示唆している。2.核酸代謝学的解析TPA処理及び非処理HL60細胞を固定後,エチジウムブロマイドで核内DNAを,dihydrothymine dehydrogenase(DHT DH)に対するモノクロ-ナル抗体を用いた間接蛍光抗体法により細胞質をそれぞれ染色し,Flow cytometry 2 colorーanalysis法を用いて,cell cycleの各phaseにおけるDHT DHの酵素蛋白量を比較定量した。その結果,G1期の細胞ではDHT DHの酵素蛋白量がS期に比し増大している事が示唆された。1.Secondmessengerの役割(1)1,25(OH)_2D_3(D_3),TPAによりHLー60細胞をmoncyte系細胞に分化誘導させると細胞内遊離Ca^2濃度([Ca^<2+>]i)は1分以内というshort termでみても、3日間というlong termでみても上昇が認められた。又、[Ca^<2+>]iのshort termでの上昇はCa拮抗剤及びprotein kinase C(PKーC)阻害剤により抑制された。一方、Retinoic acidによりmyelo系に分化誘導された時には[Ca^<2+>]iに変化は認めれなかった。(2)増殖及び分化においてD_3に対する反応性の違うHLー60のsubcloneを用い、D_3を作用させた時の1,25(OH)_2D_3 receptor(VDR)mRNAとcーmyc mRNAの変化を観察したところ、VDR mRNAは分化と、cーmyc mRNAは増殖と関係がある事が示された。(3)PKーC阻害剤のK252aはHLー60の増殖及びDNA合成を濃度依存性に抑制し、各種分化誘導物質による分化誘導作用を増強した。(4)我々が樹立した骨髄性白血病細胞株TIー1はTPAによりmonocyte系細胞に、heminによりerythro系細胞に分化誘導され、それぞれ濃度依存性に細胞増殖が抑制される事が示された。2.核酸代謝学的解析ヒトのdehyrothymine dehydrogenase(DHTDH)の全塩基配列を決定する目的で、まずラット肝より塩谷らの方法を用いてDHTDHを精製した。精製した蛋白の断片より、アミノ酸配列を決定し、特異的塩基配列を合成した。このオリゴDNAを用いて、ヒトspleen DNA libraryよりスクリ-ニングを行い、DHTDHの全塩基配列を決定した。このDHTDHcDNA