hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
リベット列接合に於るマルチサイトクラック防止を目的とした新工法の評価に関する研究

本研究は日航ジャンボ機の無残な墜落事故や飛行中に機首後方部分の床から上全てが前後数メートルに亘って吹飛んだアロハ航空機の事故の様な与圧機体の破壊を防止する必要が有ると言う事を背景とするもので、その原因とされる"マルチサイトクラック"と呼ばれるパネルの接合部分の数百個ものリベット穴列が金属疲労により一気に破断する現象を防止する為の、研究代表者の特許出願済みの提案の有効性を検証せんとするものである。同提案は、これ等の事故が「例え機体に亀裂が入ったとしても必ずフレームやストリンガで止まり、決して大事には至る筈が無い」と言う、機体の"フェールセーフ神話"を無残に打砕いたと言う事実に対処すべく、コンクリート施工の世界では数十年も前から常識とされている"プレストレス工法"を応用して、フレームやストリンガに「もう一働き」させる事によってフェールセーフ性を回復させる事をポイントとするものである。リベット列接合を模したテストピースに対する引張り疲労試験を中心として、この提案の有効性を実証すべく、6本支柱の架台に、ACサーボモーターで駆動する6トン級スクリュージャッキ、10トン級ロードセル及び、これらを2チャンネルのRS232C接続でコントロールするパソコンとから成る疲労試験システムを手作りして疲労試験を行った。各実験に於いて、亀裂が発生した後は、55KHz迄収音出来る特殊マイクロフォンと71KHz迄解析出来るカラーサウンドアナライザ、及び、カラープリンタとから成る音響解析システムによって放射超音波の解析を行った。繰返して実験を行ったが、作成した疲労試験機が寸法的に小さ過ぎた事と、テストピース用として用いたアルミ材料の硬度が不足していた事との為、遺憾ながら期待していた様な成果は得られなかった。一方、静的な応力上の効果を確めるべく光弾性実験を行い、大いに期待の持てる結果を得た。◎本研究は、今も記憶に新しい、日航ジャンボ機の無惨な墜落事故や、機首後方部分のデッキから上の全てが飛行中に吹飛んだハワイのアロハ航空機の事故の様な、与圧機能を備えた機体の破壊を防止する必要があると言う事が背景となっているものであり、その原因とされている“マルチサイトクラック"と呼ばれる、パネルの接合部分の数百個ものリベット穴列が金属疲労の為、一気に破断する現象を防止する為の研究代表者の提案(特許出願済み)の有効性を検証しようとするものである。◎これらの事故が「例え、機体に亀裂が入ってもフレームやストリンガーで止まり、決して大事には至る筈が無い」と言う、機体に対する“フェイルセーフ神話"を無惨に打砕いてしまったと言う事実をむしろヒントとし、コンクリートの世界では以前から常識とされているPC工法を応用して問題のフレームやストリンガーにもう一働きして貰う事により効果を上げようと言うのが代表者の新提案のポイントであったのだが、◎このアイデアをテストピースの形態に具体化し、且つ、信頼性の高い疲労試験のデーターを得るには、(1)かなりの幅のテストピースを精度良く作成する事が必要であり、且つ、(2)この、かなりの幅のテストピースの全幅に亘って均一に応力を印加出来る様にする事が必要であるが、特に、この二番目の条件をクリヤーする事が予想以上に難しいと言う事が思考、検討を加える過程で明らかとなり、研究の順調な進捗が滞っているが、現在、幾通りかのアイデアが浮上中であり来年度にはその中から実現性の有る物を選び出して実際の応力印加試験に漕ぎ着けられるものと考えている段階である。◎一方、アコースティックエミッションを解析するツールとして、これ迄にドイツ製の2チャンネルのカラーサウンドアナライザーの導入を済ませた。

◎本研究は日航ジャンボ機の無惨な墜落事故や機首後方部分の床から上の全てが飛行中に吹飛んだアロハ航空機の事故の様な与圧機能を備えた機体の破壊を防止する必要があると言う事を背景とするものであり、その原因とされている“マルチサイトクラック"と呼ばれる、パネルの接合部分の数百個ものリベット穴列が金属疲労により一気に破断する現象を防止する為の、研究代表者の特許出願済みの提案の有効性を検証しようとするものである。◎これらの事故が「例え機体に亀裂が入っても、フレームやストリンガーで止まり決して大事には至る筈が無い」と言う、機体に対する′′フェイルセーフ神話"を無惨に打砕いたと言う事実に注目し、コンクリートの世界では以前から常識とされているプレストレス工法を応用して問題のフレームやストリンガーにもう一働きさせる事により所期の効果を上げようと言うのが新提案のポイントであったのだが、◎研究を実施する上で中心的役割を果たす筈であった斉藤所有の疲労試験機が動作不全状態となり、且つ、経年機であった為に修理も不可能と言う事で撤去せざるを得ず研究が頓挫しかかった。◎近隣の鹿児島県工業技術センターの疲労試験機の借用利用等も検討したが本研究が必要としている様な、ある程度の大きさの寸法を持ったテストピースを試験出来るだけの寸法の装置で無く、やむなく本研究の推進に適合する様な寸法の試験機を各種の部品を組み合わせて予算の範囲内で手作りする以外にないと言う事になり、6本柱の架台を新設計すると共に、800ワットACサーボモーター駆動の6トン級スクリュウジャッキ、10トン級ロードセル、及び、コントロール用のパソコンを買い集めて疲労試験システムを構築した。◎又、計画していた光弾性実験については斉藤所有の加熱炉が小型であり、やはり、本研究の実施には適さなかった為外部に委託して実験を行い一応の成果を見た。◎本研究は日航ジャンボ機の無残な墜落事故や機首後方部分の床から上全てが吹飛んだアロハ航空機の事故の様な与圧機機体の破壊を防止する必要があると言う事を背景とするものであり、その原因とされる、"マルチサイトクラック"と呼ばれる、パネルの接合部分の数百個ものリベット穴列が金属疲労により一気に破断する現象を防止する為の、研究代表者の特許出願済みの提案の有効性を検証せんとするものである。◎提案は、これ等の事故が「例え機体に亀裂が入っても、必ずフレームやストリンガーで止まり、決して大事には至る筈がない」と言う機体の"フェールセーフ神話"を無残に打砕いたと言う点に着目し、コンクリートの世界では常識とされるプレストレス工法を応用して、フレームやストリンガーに"もう一働き"させる事をポイントとするものである。◎そこで、リベット列接合を模したテストピースによる疲労試験を中心としてこの提案の有効性を実証すべく研究を開始したが、本校に設置されていた大形疲労試験機が動作不能状態となった為、止無く前年度に、6本支柱の架台に、ACサーボモーターで駆動駆動する6トン級スクリュージャッキ、10トン級ロードセル及び、RS232C接続でコントロールするパソコンとから成る疲労試験システムを急遽手作りした。◎本年度これに、植村、南金山が設計したテストピース接合治具を取付け、実疲労試験を実施せんとした所、このシステムが中々思う様に動作せず、遂にパソコン用のコントロールプログラムを外注する事となった。◎その結果、一応の動作が確保されるに至りはしたものの、その後も突発的に誤動作を起し、テストピースを破壊してしまうと言う事故が止められず、研究が大幅に遅れる事態となった。
初代培養神経細胞を用いたアルツハイマ-病起因・誘発物質の同定とその性状の解析

アルツハイマ-病の病因については不明の点が多いが、従来から主として行われてきた形態学的研究の外に、最近では遺伝子レベルでの解析及び神経化学的研究が活発に行われる様になって来ている。本研究ではアルツハイマ-病患者で特に萎縮・変性が強いとされる脳内コリン作働性ニュ-ロンを取り上げ、初代培養したコリン作働性ニュ-ロンに対して抑制的に働く因子がアルツハイマ-患者剖検脳内に存在するかどうかを検討した。1.剖検脳内のニュ-ロン発育又は維持阻害物質を神経細胞系を用いて検討する場合には、まず培地内物質、特に培地に加えた諸種血清蛋白との相互作用が問題となる。従って無血清培地を用いてマウス大脳皮質から得たニュ-ロンの初代培養を試みたところ、710日間は確実に生存することが判明した。2.アルツハイマ-病と確定診断した患者の大脳皮質側頭葉剖検脳の水抽水物を作製し、これを上記1で得た初代培養神経細胞系に適用したところ、明らかな発育抑制を示す物質が検出された。この物質はコリン作働性ニュ-ロンに対して比較的選択性のある抑制を示すものであり、初代培養神経細胞系に適用すると、アセチルコリン含量低下、コリンアセチルトランスフェラ-ゼ活性抑制及びアセチルコリン・ムスカリン受容体の低下などを招来した。上記の各実験を成功させるためには、まず十分量のアルツハイマ-病患者剖検脳組織及びこれの対照となる剖検脳組織を得ることが必要である。現在国内各医療機関を通じてその入手を計ると共に、米国ハ-バ-ド大学医学部Bird教授(神経病理学)の協力を得て、米国からも入手する準備を整えているところである。
骨におけるインスリン様成長因子及びその結合蛋白の分泌・作用調節機構に関する研究

IGFBP-3値はそれぞれCGHD 1.27±1.02;PGHD2.53±1.25;NESS2.16±1.14mg/l(mean±SD)と,GHDの重症度と平行したIGFBP-3の低値を認めた.血中IGF-I値とは直接法,抽出法とも正の相関を認めた.また,夜間入眠時3時間平均GH濃度とも正の相関を認めた.年齢分布では正常児に比べて低値の傾向はあったが,低身長児においても正常児同様低年齢から思春期に近い値を示した.以上より,血中IGFBP-3濃度はGHの分泌不全状態を良好に反映していると考えられ,従来のスクリーニング法に加えIGFBP-3を併用することによりGHD児の鋭敏なスクリーニングが可能になると考えられた.なかでも,低年齢の時点から思春期に近い濃度を示すことから,特に就学前のGHD児の早期発見に有用と考えられた.IGFBP-3値はそれぞれCGHD 1.27±1.02;PGHD2.53±1.25;NESS2.16±1.14mg/l(mean±SD)と,GHDの重症度と平行したIGFBP-3の低値を認めた.血中IGF-I値とは直接法,抽出法とも正の相関を認めた.また,夜間入眠時3時間平均GH濃度とも正の相関を認めた.年齢分布では正常児に比べて低値の傾向はあったが,低身長児においても正常児同様低年齢から思春期に近い値を示した.以上より,血中IGFBP-3濃度はGHの分泌不全状態を良好に反映していると考えられ,従来のスクリーニング法に加えIGFBP-3を併用することによりGHD児の鋭敏なスクリーニングが可能になると考えられた.なかでも,低年齢の時点から思春期に近い濃度を示すことから,特に就学前のGHD児の早期発見に有用と考えられた.
偏心傾斜荷重に対するサクション基礎の安定性に関する研究

本研究では,傾斜荷重を受けるサクション基礎の支持力特性機構について,アルミ棒積層地盤を用いた傾斜載荷試験および有限要素解析を行った.結果,(1)サクション基礎の水平極限支持力は,内外径比が小さくなるにしたがって大きくなり,D/B=1.1,鉛直極限支持力44.1Nの場合,中実基礎に比べて,45割低下する.(2)根入れ幅比が大きくなる.および相対密度が密になるにしたがって,水平極限支持力は大きくなる.(3)基礎の側面,基礎直下にくさびとして,ひずみが発生する.しかし,基礎周辺に近い部分にのみ,ひずみが発生している.(4)根入れ幅比が小さくなるほど,すべり破壊に移行し,根入れ幅比,傾斜角が大きくなるほど,くさび破壊に移行する.浮き上がり破壊は,その過渡領域に存在する.(5)同荷重を受けた場合,根入れ幅比が小さいと,内外径比が大きくなるほど,変位量が小さく,根入れ幅比が大きくなると,内外径比が小さくなるほど,変位量が小さくなる.また,偏心荷重を受けるサクション基礎の支持力特性について,アルミ棒積層地盤を模型地盤として用い,サクション基礎および中実基礎に関する偏心載荷実験を行った.結果,(1)鉛直極限支持力は,偏心量が増加するほど小さくなる.(2)偏心載荷における,中実基礎に対するサクション基礎の極限支持力の割合は,開口率の増加にしたがって,また,根入れ幅比が小さくなるにつれて大きく減少する.(3)各抵抗成分の分担率はある一定の割合に収束する.(4)基礎沈下直後は,偏心方向とは逆方向(左側)の先端抵抗が発揮される.その後,左側の基礎先端部を中心に基礎が回転し,徐々に右側の側壁による周面抵抗が発揮される.(5)偏心量の小さいケースにおいては,両端の基礎先端部直下に大きなひずみが生じるが,偏心量の大きなケースでは,基礎先端部直下にはあまり大きなひずみは生じない.(6)偏心載荷の場合は,地表面付近まで影響が及び,ひずみが発生している.一方,中心軸載荷の場合は,地表面付近には全くひずみは発生していない.更に,サクション基礎の引抜きに対する支持力特性について,粘性土地盤を用いた実験を行い,サクションの発生分布や引抜き時の破壊モードについて明らかにした.本研究では,傾斜荷重を受けるサクション基礎の支持力特性機構について,アルミ棒積層地盤を用いた傾斜載荷試験および有限要素解析を行った.結果,(1)サクション基礎の水平極限支持力は,内外径比が小さくなるにしたがって大きくなり,D/B=1.1,鉛直極限支持力44.1Nの場合,中実基礎に比べて,45割低下する.(2)根入れ幅比が大きくなる.および相対密度が密になるにしたがって,水平極限支持力は大きくなる.(3)基礎の側面,基礎直下にくさびとして,ひずみが発生する.しかし,基礎周辺に近い部分にのみ,ひずみが発生している.(4)根入れ幅比が小さくなるほど,すべり破壊に移行し,根入れ幅比,傾斜角が大きくなるほど,くさび破壊に移行する.浮き上がり破壊は,その過渡領域に存在する.(5)同荷重を受けた場合,根入れ幅比が小さいと,内外径比が大きくなるほど,変位量が小さく,根入れ幅比が大きくなると,内外径比が小さくなるほど,変位量が小さくなる.また,偏心荷重を受けるサクション基礎の支持力特性について,アルミ棒積層地盤を模型地盤として用い,サクション基礎および中実基礎に関する偏心載荷実験を行った.結果,(1)鉛直極限支持力は,偏心量が増加するほど小さくなる.(2)偏心載荷における,中実基礎に対するサクション基礎の極限支持力の割合は,開口率の増加にしたがって,また,根入れ幅比が小さくなるにつれて大きく減少する.(3)各抵抗成分の分担率はある一定の割合に収束する.(4)基礎沈下直後は,偏心方向とは逆方向(左側)の先端抵抗が発揮される.その後,左側の基礎先端部を中心に基礎が回転し,徐々に右側の側壁による周面抵抗が発揮される.(5)偏心量の小さいケースにおいては,両端の基礎先端部直下に大きなひずみが生じるが,偏心量の大きなケースでは,基礎先端部直下にはあまり大きなひずみは生じない.(6)偏心載荷の場合は,地表面付近まで影響が及び,ひずみが発生している.一方,中心軸載荷の場合は,地表面付近には全くひずみは発生していない.更に,サクション基礎の引抜きに対する支持力特性について,粘性土地盤を用いた実験を行い,サクションの発生分布や引抜き時の破壊モードについて明らかにした.サクション基礎は、静水圧以下の水圧(サクション)を利用して海底地盤中に根入れする新型の基礎である。サクション基礎の内部の地盤は、閉塞効果からなる圧縮やヒービングによる膨張によって攪乱されるため、同様な形状の中実基礎とは異なる支持力特性を有する。そこで、本研究では波を仮想した傾斜荷重を受けたさいのサクション基礎の支持力特性を明らかにすることを目的として、アルミ棒積層地盤を用いて傾斜載荷試験を行った。傾斜荷重を受けたサクション基礎の支持力に関する結論をまとめると以下のようになる。1)同じ鉛直荷重におけるサクション基礎の水平支持力は、開口率が小さくなるにしたがって大きくなり、根入れ幅比1.1、鉛直荷重44.1Nの場合、中実基礎に比べて45割低下する。2)根入れ幅比が大きくなるにしたがって、同じ鉛直荷重における水平支持力は大きくなる。

3)今回の実験では、基礎内部の地盤が基礎と一体化して移動するため、中実基礎と同様に、サクション基礎の水平支持力は移動方向側の基礎側壁の外面において担われる。4)基礎の側面、基礎直下にくさびとしてひずみが発生する。しかし、基礎周辺に近い部分にのみひずみが発生している。さらに、本研究では、サクション基礎の引き抜き時の抵抗力に関する模型実験も同時に行った。サクション基礎の引き抜き抵抗に関する結論をまとめると以下のようになる。5)引抜き抵抗力のピークとサクションのピークは、ずれて生じる。6)サクション基礎の引抜き強度のピークは、粘土地盤の圧密の有無によりピークの発生する引抜き量が異なる。7)サクション基礎の引抜き強度は、根入れ幅比及び引抜き速度が大きくなると大きくなる。8)破壊モードCに関して、サクションを考慮した支持力公式を導出した。本研究では,傾斜荷重を受けるサクション基礎の支持力特性機構について,アルミ棒積層地盤を用いた傾斜載荷試験および有限要素解析を行った.結果,(1)サクション基礎の水平極限支持力は,内外径比が小さくなるにしたがって大きくなり,D/B=1.1,鉛直極限支持力44.1Nの場合,中実基礎に比べて,45割低下する.(2)根入れ幅比が大きくなる,および相対密度が密になるにしたがって,水平極限支持力は大きくなる.(3)基礎の側面,基礎直下にくさびとして,ひずみが発生する.しかし,基礎周辺に近い部分にのみ,ひずみが発生している.(4)根入れ幅比が小さくなるほど,すべり破壊に移行し,根入れ幅比,傾斜角が大きくなるほど,くさび破壊に移行する.浮き上がり破壊は,その過渡領域に存在する.(5)同荷重を受けた場合,根入れ幅比が小さいと,内外径比が大きくなるほど,変位量が小さく,根入れ幅比が大きくなると,内外径比が小さくなるほど,変位量が小さくなる.また,偏心荷重を受けるサクション基礎の支持力特性について,アルミ棒積層地盤を模型地盤として用い,サクション基礎および中実基礎に関する偏心載荷実験を行った.結果,(1)鉛直極限支持力は,偏心量が増加するほど小さくなる.(2)偏心載荷における,中実基礎に対するサクション基礎の極限支持力の割合は,開口率の増加にしたがって,また,根入れ幅比が小さくなるにつれて大きく減少する.(3)各抵抗成分の分担率はある一定の割合に収束する.(4)基礎沈下直後は,偏心方向とは逆方向(左側)の先端抵抗が発揮される.その後,左側の基礎先端部を中心に基礎が回転し,徐々に右側の側壁による周面抵抗が発揮される.(5)偏心量の小さいケースにおいては,両端の基礎先端部直下に大きなひずみが生じるが,偏心量の大きなケースでは,基礎先端部直下にはあまり大きなひずみは生じない.(6)偏心載荷の場合は,地表面付近まで影響が及び,ひずみが発生している.一方,中心軸載荷の場合は,地表面付近には全くひずみは発生していない.更に,サクション基礎の引抜きに対する支持力特性について,粘性土地盤を用いた実験を行い,サクションの発生分布や引抜き時の破壊モードについて明らかにした.
江戸時代雅楽の演奏様式の研究

報告書は、第I部と第II部より構成され、第I部では演奏様式論、第II部では江戸時代末期の雅楽演奏の実態について記されている。第I部第1章は、雅楽の術語についてのフィロロジカルな研究を通じて、雅楽が江戸時代に礼楽思想の影響で精神修養の手段として評価されるようになったため、それにふさわしい荘重様式が作り出された過程について考察した。それは、音楽的には演奏様式の緩除化に他ならなかった。すなわち、『楽家録』では拍を4分して、演奏に際しての当り所を説明する。このような拍分割の発想はそれまでの楽書に見られないところであり、これは江戸時代の雅楽の演奏速度が遅くなっていたことを傍証するものである。第2章は、演奏様式の歴史的変遷について、楽譜、演奏、音楽ソフトによる実験演奏により考察した。古譜をそのまま演奏した場合の軽快さに対し、現行の演奏慣習のもつ威儀的性格、様式化は18世紀に成立したものと思われる。実験演奏では、速度とリズム・パターンとがそれぞれ一般的性格と具体的事象の表出に関ることを明らかにした。第II部第1章は、江戸時代に成立したと思われる雅楽譜の構成曲目を調査した結果、江戸時代末期には演奏されていた雅楽の曲目は「八十八曲」に数曲を加えたもので、これは明治21年に選定曲を追加して完成された『明治選定譜』の構成曲目と同じであったということを明らかにした。第2章においては、江戸時代に、雅楽が中央から地方へと、どのような手段、方法により伝播したのかについて『楽所日記』の記録をもとに調査を行った。その結果、中央の三方楽所楽人が、地方への雅楽の伝播について熱心に関っていたこと、さらに、これについては真宗寺院の僧侶たちが深く関っていたことが明らかとなり、また、武家の間でもかなり広く雅楽が伝習されていたことも確認された。資料蒐集について打合せを行ない.関係機関に錯本増所蔵状況を照会し、直接調査を行なった。1991年7月京都大学図書館の江戸期写活を調来、12月には国会図書館(南谷)、92年2月に蓬左文庫他(馬渕)、八雲本降(南谷)を調査した。該当資料の約8割方をコピ-で入手し.既に架蔵されているものとあわせて.楽譜の構造分析を行ない.レパ-トリの江戸期における実際をコンピュ-タ入力し、雅楽曲目のデ-タ、ベ-ス化を開始(南谷及研究補助員)。他方,楽所日記その他から楽人の素人愛好家との関係などを解明する仕事を南谷が行なった。67世紀の問に楽譜の構造で見られる特徴として.それまでの楽譜を複本作製したにすぎないものと.管絃用曲目を主として字した、新しい構成のものとの分化をあげることができる。これは楽人の舞楽用楽譜の他に管絃御遊の伝統を受けた.礼楽思想にサポ-トされた素人愛好家ー堂上公家のみでなく.広く一般士民にまで及ぶーのための楽譜が必要とされたことの結果である。これはまた楽所日記などで.楽人がそれら愛好家の要求にこたえて地方スリをし、また楽譜を写して送るなどの実例が見られる。こういったことは堂然雅楽演奏様式に影響する。熊沢瀋山,見原益行,太宰春台,松平定信などの記述から、雅楽が次第に緩徐化し、それが様式の変化に対して決定的な役割を果したことは明らかである(馬渕「糸竹初心集の研究」

第2部店2章1礼楽思想と雅楽理念、夕2上演地録と演奏様式)が.それは地方で素人愛好家の雅楽実習の普及、一般化と相関することでもあったことは明らかである。(ミュ-ジックソフトによる演奏様式の実験は.4年度.マキントシュ購入をまって実施する。)1.各種古写譜を京大図書館・国会図書館その他からコピーで取り寄せ(文献複写)古譜の構成(調分類、曲目配列順、曲目の取捨、等)をデータベース化し比較検討した。その結果(1)古譜の保存伝承を意図する忠実な写譜(複本作製)事業というものが存在し、これは江戸時代雅楽の実際とは関係がないものと認められる。(2)舞楽用と管弦用に分化する傾向がある。舞楽用は古譜の系譜につながるものであるが、楽科伶人の日常の使用のためのものであったのに対し、管弦用は、禮楽思想による「雅楽」のための、中上層武家の教養としての音楽実践用のもので、ここに一つの新しい演奏様式の発生の機縁が認められる。(3)したがって、調分類も変化し、管弦譜ではいわゆる六調子に整理されている。2.マキントシュ(ソフトはCubase及びNotator)による試行の結果、演奏様式を最初に規定するものはテンポであり、リズム・パタンであるとわかったので、楽家録に記載されている打物譜パタンをすべて五線譜化して入力させ、それにとりあえず三管を、メリカリなし(平調越殿楽、壱越調武徳楽)、現行旋律によるもの(双調柳花苑、春庭花)の二通り入力させ(アルバイト謝金)、テンポを変化させて演奏した結果、盆踊りの平俗さから、いわゆる雅楽の荘重様式までさまざまな様式が出現した。この方向では今後も作業を継続する。3.この様式の変化の裏づけとして、実際にどのような機会にどのような演奏者が何を演奏していたのかを、各種古記録から検証した。
不均一系における電子移動速度のエネルギー・ギャップ則

本研究では電極反応における電子移動速度のエネルギー・ギャップ依存性(エネルギー・ギャップ則という)が均一系のものに比べてどのように変わるかをモンテカルロシミュレーション計算により調べた。その結果次のことが明らかにされた。電極表面に電荷が存在するときに、始状態(反応体の電荷が0)の自由エネルギー曲線の曲率は終状態(反応体の電荷が+I)の自由エネルギー曲線の曲率の約1.5倍になった。均一系反応ではこの比が約1.1であるので、電極界面では誘導飽和のために非線形性が増大していると考えられる。このことを確かめるために電解質イオンと溶媒分子の電極表面からの分布を求めた。その結果、半径23Aの電極表面の円内に、28個の負イオンと11個の正イオンと49個の溶媒分子が吸着していることが明らかになった。これはいわゆるヘルムホルツ層を構成しており、非線形現象を生み出している。吸着層の外側は電解質イオンの濃度勾配のゆるやかな変化があり、グイ-チャップマン層を構成する。また、電極表面に電荷が存在しないときには電解質イオンの電極表面への吸着量は少なく、均一系と余り変わった分子環境を作っていないことも明らかにされた。備品で購入したパーソナルコンピュータはモンテカルロシミュレーションに役立てた。本年度の研究だけではまだ十分成果を得ておらず来年度以後の研究の基礎としての意味があると思われる。
四肢の発生における細胞間シグナル因子のネットワーク

パターン形成の分子メカニズムを解明するために、ニワトリ胚の肢芽でレトロウイルスベクターを用いて種々の遺伝子を異所的に発現し、四肢パターンに対する影響を調べた。タイプI(BRK-1、BRK-2)、タイプII(BRK-3)のBMPレセプターのうち、BRK-1は肢芽間充織で弱く発現し、一方BRK-2は肢芽中心部の凝集した間充織で局所的に発現し、発生が進むと指骨の先端部で強く発現する。BRK-3は指の間の間充織および頂堤で発現が見られる。キナーゼドメインを欠失した優性欠損型(DN)のレセプター、BRK-2-DN/BRK-3-DNをレトロウイルスベクター(RCAS)を用いて肢芽全体で発現させると軟骨分化が抑制され、その結果骨のパターンに異常が見られる。骨の欠損は後部側先端部で優先的に起こり、前腕では尺骨が欠損する。先端部の指骨、中手骨の欠失も後部側でより顕著である。しかしこれらは単独では効果が見られないので、BRK-2/BRK-3のレセプター系が指骨のパターン形成に関係していると考えられる。リガンドのBMP-2、BMP-7のみならずレセプターのBRK-2もSonic hedgehog(Shh)によって発現誘導されること、またShhからPatched/Smoothenedへの系は短距離のシグナルとして働くことなどから、BMPはShhの下流で働く前後のパターン形成に関与する遠距離のシグナルであると推定される。肢芽で発現するLIMドメインを持つホメオドメイン蛋白質(LIM-HD)をコードする遺伝子をニワトリ胚で同定し、その発現パターンを調べた。LH-2サブファミリーのうちLH-2Aは遠近軸に関して、LH-2Bは前後軸に関して固有の発現パターンを示すことを見出した。特に、LH-2Bはステージ1830で肢芽の前側半分の間充織で一貫して発現し、これはShhによって発現抑制がかかる。RCASを用いてこれを肢芽全体で発現すると、四肢の骨のパターンには影響が見られなかったが、後部の羽芽のパターンが前部の形質に変換した。このことは、LH-2Bが肢芽において外皮の形質を決める因子であることを示唆する。
イネの窒素情報伝達と代謝に関わる未熟非緑色器官におけるプラスチド機能の解明

イネの窒素転流は、成育や生産性に直接関わる。老化器官からの転流と、若い器官での再利用に関わる高次機能に焦点をあて、グルタミン情報伝達系の分子実体の解明と、窒素利用効率向上戦略に関わる高次機能発現の分子基盤を確立した。グルタミン情報受容体候補分子の特性、GS1;1遺伝子破壊変異体のメタボローム解析、根の伸長を促進するQTLなどから、窒素利用におけるイネの高次機能の発現に関する理解が格段に深まった。イネにおける窒素転流は、成育や生産性に直接関わる。老化器官からの窒素転流と、若い器官における窒素再利用に関わる高次機能に焦点をあて、特にグルタミンを情報物質とした情報伝達系の分子実体の解明と、個体としての窒素利用効率向上戦略に関わる高次機能発現の分子基盤を確立することを目的に、本年度は以下の成果を得た。1.イネにおいてGln情報伝達系に関わることが期待されるPII様タンパク質に着目し、研究を進めた。PII様タンパク質遺伝子は1コピーであり、遺伝子産物は葉緑体に局在していた。PII様タンパク質と相互作用するタンパク質を、酵母ツーハイブリッド法で検索した結果、PII様タンパク質そのものと、N-アセチルグルタミン酸キナーゼ(AGK)が同定された。AGKタンパク質も葉緑体に局在していることを確認し、in vivoでも相互作用することが期待された。現在、RNAi法によるノックダウンイネを作出し、トランスクリプトーム解析を進めている。2.イネの老化器官からの窒素転流に重要な機能を持つと考えられるサイトゾル型グルタミン合成酵素遺伝子(OsGS1;1-1;3)の発現を調べ、特に葉身で発現が高いOsGS1;1遺伝子破壊変異体をTos17ミュータントパネルから複数得た。この変異体は、極めて異常な表現型を示し、また同遺伝子を変異体に導入することで、表現型は相補されることが判明した。3.コシヒカリを遺伝背景として、第2染色体の一部約40cMがインド型イネKasalathに置換された系統C-22を用いて、QTL解析で観察されたGS1タンパク質含量や穂数に関する表現型が実際に検出されることを、ガラス室ならびに圃場での栽培で示した。1.イネの老化器官からの窒素転流に重要な機能を持つことが示唆されていたサイトゾル型グルタミン合成酵素(OsGS1;1)遺伝子がレトロトランスポゾンTos17の挿入により破壊された変異体について、詳細に解析した。この変異体は、極端な成育遅延や登熟障害を示した。この表現型がOsGS1;1の欠損によることを、この遺伝子のプロモーター制御下にcDNAを連結したキメラ遺伝子を導入することで機能相補されることから証明した。これらの結果をまとめて、国際学術雑誌に公表した。現在、トランスクリプトームとメタボローム解析を行っている。2.シンク器官のプラスチドで転流窒素の再利用を行うNADHグルタミン酸合成酵素の反応に、炭素骨格である2-オキソグルタル酸を供給する代謝系を、イネの根を用いて詳細に調べ、発現時期や発現場所の類似性から、ミトコンドリアに局在するイソクエン酸脱水素酵素であることを示し、その成果を国際学術雑誌に公表した。3.イネの窒素利用効率や農業形質を決定する遺伝子単離を目的に、QTL領域の一部の染色体がインド型イネKasalathに置換された系統を多数作出し、第2、6、11染色体にあるこれらの原因遺伝子単離を目指して解析を進めた。1)Glnセンサー機能が期待されるACR7とACR9の機能解析ACR7タンパク質の若い葉身維管束柔細胞での核膜局在や、分子シャペロンHSP18.0-CIIタンパク質との相互作用などに関して、PCPに報告した(Hayakawa et al.2006)。同様に若い葉身で転写産物蓄積量が多いACR9は、核の可溶性画分に局在することを確認した。ACR9の機能解析を進めるにあたり、等温滴定カロリメトリーによるGln結合能の評価やRNAiノックダウンイネの作出を開始した。2)OsGS1;1

遺伝子破壊変異体のトランスクリプトーム解析イネの老化器官からの窒素転流に重要な機能を持つと考えられるサイトゾル型グルタミン合成酵素遺伝子の中で、特に葉身で発現が高いOsGS1;1遺伝子破壊変異体の解析結果を昨年報告した(Tabuchi et al.2005)。今年度はこの変異体を用いて、トランスクリプトーム解析拠点の支援を受け、解析を進めた。シロイヌナズナとは異なり、発現量の増減した遺伝子のアノテーションが容易ではなく、解析に時間を要したがこれらの遺伝子群を整理した。ゲノム情報から新規に見いだされたNADH-GOGAT2のcDNAを単離した。NADH-GOGAT1と極めて類似したタンパク質であり、トランジット配列の類似性から、本タンパク質もプラスチド/葉緑体に局在しているものと考えられた。OsNADH-GOGAT1の未熟器官での特異的な発現とは異なり、OsNADH-GOGAT2は成熟葉身や葉鞘で主に発現が観察された。穎果特異的に発現するOsGS1;3に関して、発芽過程での発現様式をプロモーター::GUSの形質転換種子で観察した。OsGS1;3は吸水前から主にアリユーロン層で発現しており、OsGS1;2の胚盤での発現とは異なっていた。イネにおける窒素転流は、成育や生産性に直接関わる。老化器官からの窒素転流と、若い器官における窒素再利用に関わる高次機能に焦点をあて、特にグルタミンを情報物質とした情報伝達系の分子実体の解明と、個体としての窒素利用効率向上戦略に関わる高次機能発現の分子基盤を確立することを目的に、本年度は以下の成果を得た。1) Glnセンサー機能が期待されるACR7とACR9の機能解析ACR9タンパク質の機能解明のため、組織内局在を免疫学的に調べ、その分布がGlnで発現制御を受けるNADH-GOGAT1タンパク質と極めて類似していることを見いだし、その成果を報告した(Kudo et al.印刷中)。現在、RNAi法を用いて、ACR9遺伝子ノックダウンイネを作出中である。これらの小遺伝子族の発現様式を詳細に調べ、窒素代謝における役割分担を論議し、招待論文としてその成果を公表した(Tabuchi et al.2007)。また、OsGS1;1遺伝子破壊変異体を用いて、トランスクリプトームとメタボローム解析を行い、発現の変動する遺伝子や代謝産物の同定を行った。また、それぞれの遺伝子破壊変異体のスクリーニングを行い、変異体候補となるラインを複数得た。3)窒素利用効率向上順遺伝学的解析から、第6染色体に見いだされた、根長と窒素吸収を促進する遺伝子をQTL領域から単離した。ACR9タンパク質の機能解明のため、ACR9遺伝子ノックダウンイネを作出し、トランスクリプトーム解析を行った。その結果、Glnで制御を受ける可能性のある複数の遺伝子をスクリーニングできた。また、酵母を用いて、ACR9と相互作用する転写因子様タンパク質を同定できた。もう一方のセンサー候補であるACTPK4の発現用式の解析や、レトロトランスポゾン1bs17挿入による遺伝子破壊変異体を獲得し、このタンパク質の機能解析を行った。まだ、Glnセンサーである確証は得られていない。
青少年スポーツ活動における保護者の問題行為の発生機序と対処過程

本研究の目的は,1保護者の問題行為の発生機序と効果的な対処方法を理論的,実践的に検討することを通して,2保護者の問題行為への効果的な対処プログラムを開発することであった.平成30年度は,保護者の問題行為に対する対処を含めた指導者向けの研修プログラムを作成し,それを実施した.平成29年度調査において,「不平不満」「暴力的言動」「現場介入」の3下位尺度からなる保護者の問題行為尺度が作成された.そして,それらは指導者のストレス反応の表出に影響を及ぼしていることが明らかとなっていた.これらの研究結果を踏まえて,保護者の問題行為である「不平不満」「暴力的言動」「現場介入」に関わる情報提供とそれへのストレス対処を内容に含めた研修プログラムを作成した.実施対象は協力が得られた7団体であった.研修プログラム参加者は青少年スポーツ指導者であり,各研修プログラムでは15名から50名程度の参加者があった.実施時間は90分から150分の範囲であった.また,研修プログラム実施後にプログラムに対する所感等を求める調査を実施した.調査内容は,1)年間の研修会実施回数,2)研修会の開催時期,3)過去の研修会の研修内容,4)保護者や指導者に関する問題の有無とその内容,5)本研修プログラムへの期待,6)本研修プログラムで校があると感じた内容,7)本研修プログラムで取り入れてほしい内容,等であった.今後は,これらの調査内容を参考にするなどして研修プログラムを再構成するとともに,研修プログラム参加前後における指導者の心理的ストレスの推移,あるいは保護者自体の変化を調査内容に新たに加え,保護者の問題行為に対する効果的な対処プログラムの開発に努めていく.本研究の目的は,1保護者の問題行為の発生機序と効果的な対処方法を理論的,実践的に検討することを通して,2保護者の問題行為への効果的な対処プログラムを開発することであった.平成27年度は,実態把握調査を行い,現存する保護者の問題行為の種類やその影響等を理解するための質問紙調査を行った.スポーツ活動を行っている子供を持つ保護者等161名を調査対象として質問紙調査を行った.自由記述方式で回答が314個得られ,それらをKJ法を用いてカテゴリーを形成した.その結果,スポーツ活動における保護者の問題行為やその発生に関係する出来事として以下の内容が提示された.それらは,「当番への不満」(記述例:試合の度に様々な当番を任される),「非協力」(記述例:当番に協力しない保護者がいる),「子供への批判」(記述例:自分の子供以外の選手を批判する),「審判への批判」(記述例:試合中に審判の判定に文句をつける),「監督・コーチとの対立」(記述例:指導者の指導方針を批判する),「保護者間の不和」(記述例:仲間に入れない保護者がいる),「自分の子供中心の支援」(記述例:自分の子供ばかりに声をかけたりアドバイスをしたりする),「応援のマナー」(記述例:相手チームをののしるような応援をする),「日常のマナー」(記述例:服装やたばこのマナーが見苦しい),「暴言・暴力」(記述例:自分の子供に暴力をふるう)等であった.これらの内容を構成する記述群を参考にして,平成28年度に行う尺度作成のための調査項目を選定した.予定された計画に沿っておおむね研究が進められている.平成27年度の最大の目標は,平成28年度に実施予定の尺度作成のための調査準備を行うことであった.現在までにそのための調査項目が得られており,速やかに尺度作成のための調査を実施できる.本研究の目的は,1保護者の問題行為の発生機序と効果的な対処方法を理論的,実践的に検討することを通して,2保護者の問題行為への効果的な対処プログラムを開発することであった.平成28年度は,保護者の問題行為の発生と対処に関わる理論的枠組みの検討と測定尺度の検討を行った.既に前年度の調査によって,スポーツ活動における保護者の問題行為やその発生に関係する出来事として「当番への不満」「非協力」「子供への批判」「審判への批判」「監督・コーチとの対立」「保護者間の不和」「自分の子供中心の支援」「応援のマナー」「日常のマナー」「暴言・暴力」に関わる内容が示されていた.これらの内容項目の検討を行い,青少年スポーツ活動における保護者の問題行為の尺度を構成する項目群の選定と分類を行った.その結果,青少年スポーツ活動における保護者の問題行為は「非協力」(項目例:保護者が分担している役割や当番に協力的ではない),「子供への批判」(項目例:他の子供のプレーの悪口を言う),「監督・コーチへの批判」(項目例:選手起用についての不平不満を言う),「現場介入」(項目例:練習や試合中に監督・コーチを無視して子供と接する),「嫌がらせ」(項目例:保護者の間で派閥やグループがある),「活動時のマナー」(項目例:応援中のマナーがよくない),「自分の子供中心の支援」(項目例:練習中,自分の子供にだけ指導をする),「子供への暴言暴力」(項目例:練習や試合で子供に強い口調で注意をする)の8つの下位グループ,30項目を導いた.予定された計画に沿っておおむね研究が進められている.平成28年度の最大の目標は,平成29年度に実施予定の保護者の問題行為の発生機序と対処過程の検討を行うための測定尺度の作成を行うことであった.

平成28年度の調査によって,測定のための項目は厳選されている.ただし,その妥当性と信頼性の検討はまだ行われていないが,これは平成29年度調査の中で実施される.本研究の目的は,1保護者の問題行為の発生機序と効果的な対処方法を理論的,実践的に検討することを通して,2保護者の問題行為への効果的な対処プログラムを開発することであった.平成29年度は,保護者の問題行為の尺度化と保護者の問題行為と指導者の心理的ストレスとの関連性の検討を行った.具体的には,以下の3つの調査が行われた.調査1では,保護者の問題行為を表す30項目に対して探索的因子分析を行い,保護者の問題行為尺度の作成を行った.調査対象者は,保護者94名,スポーツ指導者109名の合計203名であった.因子分析の結果,以下の3因子が抽出された.第一因子は「不平不満」,第二因子は「暴力的言動」,第三因子は「現場介入」であった.これら3因子を下位尺度とする保護者の問題行為尺度が作られた.調査2では,保護者の問題行為尺度に対し確認的因子分析を行い,構成概念妥当性の検討を行った.調査対象者は,保護者51名,指導者119名の合計170名であった.その結果,モデル適合度指標は,GFI=.923,AGFI=.856,CFI=.971,RMSEA=.097を示した.これらの各指標を総合的に判断したところ,一定の適合性が認められると考えられた.また,それぞれの潜在変数から観測変数へのパス係数はいずれも十分な値であった.このように,保護者の問題行為尺度の構成概念妥当性が検討された.調査3では,保護者の問題行為と指導者の心理的ストレス反応の関連性を検討した.調査対象者は指導者182名であった.重回帰分析を行った結果,保護者の問題行為と指導者のストレス反応の間には有意な正の影響が示された.予定された計画に沿っておおむね研究が進められている.平成29年度の最大の目標は,平成30年度に実施予定の保護者の問題行為への効果的対処プログラムの開発に向けた理論的根拠を得ることであった.その目標は十分に達成された.ただし,「保護者の問題行為の発生機序と対処過程モデル」を構築するまでには追加の調査が必要である.これは平成30年度調査の中で実施される.本研究の目的は,1保護者の問題行為の発生機序と効果的な対処方法を理論的,実践的に検討することを通して,2保護者の問題行為への効果的な対処プログラムを開発することであった.平成30年度は,保護者の問題行為に対する対処を含めた指導者向けの研修プログラムを作成し,それを実施した.平成29年度調査において,「不平不満」「暴力的言動」「現場介入」の3下位尺度からなる保護者の問題行為尺度が作成された.そして,それらは指導者のストレス反応の表出に影響を及ぼしていることが明らかとなっていた.これらの研究結果を踏まえて,保護者の問題行為である「不平不満」「暴力的言動」「現場介入」に関わる情報提供とそれへのストレス対処を内容に含めた研修プログラムを作成した.実施対象は協力が得られた7団体であった.研修プログラム参加者は青少年スポーツ指導者であり,各研修プログラムでは15名から50名程度の参加者があった.実施時間は90分から150分の範囲であった.また,研修プログラム実施後にプログラムに対する所感等を求める調査を実施した.調査内容は,1)年間の研修会実施回数,2)研修会の開催時期,3)過去の研修会の研修内容,4)保護者や指導者に関する問題の有無とその内容,5)本研修プログラムへの期待,6)本研修プログラムで校があると感じた内容,7)本研修プログラムで取り入れてほしい内容,等であった.
シクリッドにおけるオス集団内色彩二型の維持機構の解明

Cyprichromisという魚のオスには、同じ集団の中に二つの色彩型が存在する。黄尾型と青尾型である。本研究は、この色彩二型が異型交配によって維持されているとする仮説の検証を目的とする。今回の研究課題では、オス色彩の遺伝的基盤を突き止めるための基礎を構築した。異型交配は進化学的・生理学的に注目されている現象である。本研究は、当該分野の発展に貢献することが期待される。本年度行ったことは、主に以下の3点である。1)異型交配の例を発表した。本研究課題では、Cyprichromis coloratusにオスに見られる集団内色彩二型を利用して遺伝子をマッピングを試みている。このオス色彩二型が維持されるには、異型交配が関係していることが予想される。そこで、ペアの観察が容易な近縁種Perissodus microlepisにおいて異型交配が行われていることを示した。野生集団において明確な異型交配が観察されたのは本研究が世界初である。2)採集調査を行った。10月20日12月2日にザンビアのムプルングを訪れ、タンガニイカ湖でC. coloratオスの青尾型を37個体、黄尾型を32個体採集した。この数は遺伝子探索に十分であると考える。しかしもし足りなければ、来年度の調査でさらに採集する。3)遺伝子の探索を開始した。先行研究によって、C.coloratusに近縁なシクリッド3種の連鎖地図が作成されている。本研究は、これらの連鎖地図と、その作成に使用された遺伝子マーカーを用いてオスの色彩型とメスの好み型をマッピングしようとするものである。本年度は、マイクロサテライトとSNP併せて20マーカーの遺伝子型を特定した。またこれとは別に、近縁種で色彩変異との関係が示唆されている遺伝子のエクソン領域をシーケンスした。これまでのところ、オスの色彩間に有意な違いの見られるマーカーは見つかっていない。しかし、連鎖3番と12番に載っている複数のマーカーにおいてP値が低い傾向にあった。今後の探索に期待が持てると考える。本研究は、タンガニイカ湖に生息シクリッドCyprichromis属のオスに見りれる集団内色彩二型が、どのように維持されるかを解明しようとするものである。この研究は、進化生物学における大きなトピックの一つ「性選択による種分化」の仕組みと密接に関係すると考えられ、本研究を行う意義は大きい。今年度(21年度)に行った内容は、主に以下の3点である。1)野生個体群から得られたC. coloratusの青尾型オスと黄尾型オスの間で、アリル頻度が異なるマイクロサテライトマーカーを探索した。これにより、候補となる一つのマーカーを見つけた。しかし、まだ精度が低いため、今後さらに多くのマーカーを調査する必要がある。2)ザンビア・ムプルングにおける現地調査でC. leptosomaの青尾型オスと黄尾型オスを採集した。この種においても、色彩型間でアリル頻度に差が見られるマーカーを探索する。3) C. leptosomaの飼育と繁殖を軌道に乗せることにほぼ成功した。本種の飼育繁殖は一般に難しいことから、当初は「研究実施計画」に含めていなかった。しかし飼育実験を行うことにより、上述の野生集団の解析よりも確実にオス色彩およびメス好みの遺伝子を探索することが可能となる。このため、20年度末から熱帯魚愛好家の協力を得て飼育繁殖を試み、いまでは実験に供する目処が立つまでになった。現在、黄尾型しか出現しない飼育家系のメスと野生の青尾型オスの交配実験を進めており、F2(孫世代)を86個体得たところである。今後はさらにF2を増やし、遺伝子地図を作製して、オス色彩およびメス好みの関連解析を行う。このように今年度は、当初の計画にあった野生集団の解析の他に、実験室で交配実験を行う目処を立てることができた。これにより、本計画の目的である色彩二型の維持機構の解明を、多面的に調査検証することが期待される。タンガニイカ湖に生息する遊泳性シクリッドCyprichromisでは、オスの色彩に明瞭な集団内二型が見られる。しかし、その適応的意議(二型があることの利点)や、二型の維持機構(どうして片方の型だけにならないのか?どうして三型以上にならないのか?)は全く分かっていない。本研究の目的は、この集団内色彩二型の維持機構の解明である。二型の維持機構を解明する第一段階として、オス色彩の遺伝的基盤の解明を考えている。これまで、野生集団を用いた関連分析において、色彩遺伝子と連鎖する有力な候補遺伝子マーカーが見つかっている。しかしシグナルが弱く、色彩の遺伝的基盤を結論づけるには至っていない。そこで、より精度の高い連鎖解析を行うことにした。この解析では、遺伝的分離を示す世代の集団を養成しなければならない。

このため本年度は交配家系を確立し、解析に十分な数のF2個体を得た(オスが全て黄尾型になる家系のメスと青尾型オスを掛け合わせた家系)。F1(子供世代)のオスは全て青尾型で、F2(孫世代)のオスでは青尾型と黄尾型の両方が出現している。中間型が出現していないため、色彩がメンデル遺伝と関係していると考えられる。このF2は、23年度から採択された基盤研究(B)において遺伝的に調査し、遺伝領域の探索を行う。また本年度は、アフリカの現地における採集調査も行った。この調査では、連鎖解析の結果を野生個体で検証するためのサンプルを採集した。この魚は、オスの色彩が派手で二型があるが、メスは地味で二型はない。このため、オスの色彩二型の維持機構にメスによる配偶者選択が関係していると考えられる。本研究は、アフリカ古代湖シクリッドの性選択による種分化の解明にも貢献するだろう。
赤痢アメーバに対するヒトモノクローナル抗体のファージ発現系による作製

新たに開発した発現ベクターを用い、赤痢アメーバに対するヒトモノクローナル抗体の作製を試みた。また、ベクターの評価を目的に、ハイブリドーマを出発材料にして大腸菌によるマウスモノクローナル抗体の作製について検討した。1.マウスFabの作製赤痢アメーバ表面の150-kDa抗原を認識するマウスモノクローナル抗体EH3015(κ型L鎖を持つlgG1)を産生するハイブリドーマよりmRNAを単離した。マウスFab増幅用のプライマーを作製し、γ_1型H鎖のFd領域とκ型L鎖をコードする遺伝子をRT-PCRにてそれぞれ増幅した。増幅産物を組み込んだ発現ベクターから、ファージの外被蛋白をコードするGIII部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。このFabは、ELISA、間接蛍光抗体法、ウェスタンブロット法において、ハイブリドーマが産生する抗体と同様の特異性を示し、in vitro系において赤痢アメーバのヒト赤血球に対する接着能と貧食能を抑制できた。従って、このベクターは抗体遺伝子の発現に有用であると思われた。2.ヒトFabの作製赤痢アメーバに対して比較的高い抗体価を持つヒトのリンパ球からmRNAを単離し、ヒトのH鎖(γ)とL鎖(κ、λ)のFab領域をコードする遺伝子を増幅した。κ鎖とγ鎖をコードする遺伝子断片を発現ベクターに組込んで大腸菌にトランスフォームし、ヘルパーフォージを感染させてファージディスプレイライブラリーを作製した。赤痢アメーバの粗抗原を用いて3回のパニングを行った後、GIII部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。弱陽性も含めると、約42%のクローンが抗赤痢アメーバヒト抗体を産生していることが確認された。また、ベクターの評価を目的に、マウスハイブリドーマを出発材料にし、大腸菌による抗赤痢アメーバマウスモノクローナル抗体の作製について検討した。マウスFabの作製赤痢アメーバに対するマウスモノクローナル抗体(κ型L鎖を持つIgG1)を産生するハイブリドーマよりmRNAを単離した。マウスFab増幅用のプライマーを作製し、γ_1型H鎖のFd領域とκ型L鎖をRT-PCRにてそれぞれ増幅した。増幅産物を組み込んだ発現ベクターから、ファージの外被蛋白をコードするG_<III>部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。菌破砕上清は間接蛍光抗体法において赤痢アメーバ虫体と強く反応した。このFabは、in vitro系において赤痢アメーバのヒト赤血球に対する接触能と貪食能を有意に抑制できた。ヒトFabの作製赤痢アメーバに対して比較的高い抗体価を持つヒトのリンパ球から、mRNAを単離し、ヒトのH鎖(γ)とL鎖(κ、λ)のFab領域をコードする遺伝子の増幅を試みた。κ鎖に比べてλ鎖遺伝子の増幅効率は悪かったので、κ鎖とγ鎖をコードする遺伝子断片を発現ベクターに組込んで大腸菌にトランスフォームし、ヘルパーファージを感染させてファージディスプレイライブラリーを作製した。赤痢アメーバの粗抗原を用いて3回のパニングを行った後、G_<III>部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。菌破砕上清の赤痢アメーバ粗抗原に対する反応をELISAにて検討したところ、弱陽性も含めると約半数のクローンが赤痢アメーバに対するヒト抗体を産生していた。1.マウスFabの作製赤痢アメーバ表面の150-kDa抗原を認識するマウス

モノクローナル抗体EH3015(κ型L鎖を持つ1gG1)を産生するハイブリドーマよりmRNAを単離した。マウスFab増幅用のプライマーを作製し、γ1型H鎖のFb領域とκ型L鎖をコードする遺伝子をRT-PCRにてそれぞれ増幅した。増幅産物を組み込んだ発現ベクターから、ファージの外被蛋白をコードするGIII部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。このFabは、ELISA、間接蛍光抗体法、ウェスタンブロット法において、ハイブリドーマが産生する抗体と同様の特異性を示し、in vitro系において赤痢アメーバのヒト赤血球に対する接着能と貧食能を抑制できた。従って、このベクターは抗体遺伝子の発現に有用であると思われた。2.ヒトFabの作製赤痢アメーバに対して比較的高い抗体価を持つヒトのリンパ球からmRNAを単離し、ヒトのH鎖(γ)とL鎖(κ、λ)のFab領域をコードする遺伝子を増幅した、κ鎖とγ鎖をコードする遺伝子断片を発現ベクターに取組んで大腸菌にトランスフォームし、ヘルパーファージを感染させてファージディスプレイライブラリーを作製した。赤痢アメーバの粗抗原を用いて3回のパニングを行った後、GIII部分を除いて大腸菌に導入し、可溶性のFabとして発現させた。弱陽性も含めると、約42%のクローンが抗赤痢アメーバヒト抗体を産生していることが確認された。