hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
低成長時代における社会資本としての公共文化施設の効果と整備手法の適合性評価

前年度は低成長社会において鍵となる「経済の外部性」の概念とそれを実際に産出していると考えられる第三世代型の舞台芸術施設の特徴についてスタディしたが、今年度は具体的なフィールドにおいてその検証を行った。施設の影響が把握しやすい、生活圏の独立性が高く、比較的単純な構成をもつ中山間地の中から「ゆだ文化創造館」を有する「岩手県湯田町」をフィールドとすることとした。調査は、町全体での施設の受容状況を探るアンケートと、個々人の内面の変化を探るヒアリングの二段階で行った。前者は、町内を主な生活圏とする二世代、中学生(全中学生108名)と、高齢者(老人クラブから60名を任意抽出)を対象に、後者は前述二層に主婦、旅館経営者を加えた内から29名を抽出して行った。中学生は演劇を自らの生活世界の延長として捉えている一方、高齢者は日常生活が多様化する切掛けとして捕らえているなど世代によって性質は異なるものの、施設の存在によって実際に生活が変容しているようである。さらに施設事業が、集落間のコミュニケーションの契機としても認識されており、広域コミュニティ形成に寄与している様相を把握した。さらに個別インタビューから、演劇に対する意識の向上、ホールを拠点とする他地区との交流といった直接的な効果が、家庭や教育などと他の契機と関わりつつ時間をかけて個々人の中で熟成され、二次的な効果(活動圏の拡張、自己の再確認、進路選択の拡張)に発展する例が確認されるなど、ライフヒストリーの中で、相発的変化がおこっていることも明らかになった。これらの出方はひとそれぞれに違うが、相互コミュニケーションのポテンシャルをあげている点では共通しており、生活全般に影響が及んでいる。本調査によって、パットナムらが指摘するような社会関係資本が創出されることが、舞台芸術施設による外部性効果の主体であることが、一部確認されたと言える。(注:文中のアンケート・ヒアリング、個別インタビューは協力者の同意を得て行ったものである。)初年度は外部性に関連のあると思われる施設の訪問調査と文献調査をあわせて、外部性が経済波及(建設事業、周辺への人の誘導、ビジネスインキュベーション)、教育、コミュニケーション基盤等にまとめられることを明らかにした。二年目は中山間地域の舞台芸術施設に対する事例調査を通して、対象施設が実際に世代間交流を促進させている状況を捉え、先に明らかにした外部性の内、コミュニケーション基盤が重要なことを知った。最終年度では、都市における情報施設を対象に事例調査を行った。それによると施設のデザイン価値の評価が高く、中山間地域とは違った方向でコミュニケーション基盤や教育といった外部性要素を支援していることが推察できた。このデザイン価値は、外部性の別要素である威信価値と反する方向性を持っており、外部性の項目間でも背反する性向があることを捉えた。また、外部性を生み出しうる施設の評価項目が示す傾向は、既存の公共施設とは異なり、公園と商業施設という異なる傾向を示す両者の性質を併せ持っていることも明らかになり、これらから既存施設の枠組みの外に外部性を確保する鍵が潜んでいることがわかった。最終段階として、ここまでの知を総合すると共に、低成長に適応した手法として期待されているPFIを例にどのような条件が整えるべきかをシミュレートした。
糖尿病のリハビリテーションー運動療法の中枢効果

糖尿病モデル動物(db/dbマウス)は高血糖により特に視床下部のオレキシン神経細胞の活動の指標となるc-fos蛋白の出現でみると低下が認められた。次にこの神経活動低下を回復させる方法を検討したところ、1日30分4日のトレッドミル運動(6 m/分速度)で、糖尿病マウスの視床下部神経細胞の低下した活動が回復した。さらに同時にオレキシンmRNAの上昇が認められた。次に糖尿病マウスに高蛋白食摂餌と運動療法を組み合わせ、高蛋白食運動群で萎縮が大幅に回復した。また膵臓β細胞のアポトーシスに関連して出現する物質ganglioside GM3を見つけた。糖尿病動物は高血糖により起こる全身への様々な障害と平行して、エネルギー代謝等に関与する脳機能の低下がおこる。特に視床下部にある摂食中枢の神経細胞の働きが大きく低下していることがその原因であることを、実験動物を用いて神経科学的に証明することを目的とした。今年度は糖尿病動物に運動療法を施すと、上記の低下していた摂食中枢の神経細胞の働きが正常に近くなるか、エネルギー代謝も同様に回復するか、さらに何日間その効果が続くかを顕微鏡的・分子生物学的・行動学的に研究した。【方法】2型糖尿病を示すdb/dbマウスを用い、ヒトでの運動療法に似るように動物をトレッドミル上を、速度は歩きよりやや速い(67m/分)速度で、1日30分間、4日間走らせた。最終運動終了直後とさらにその2日後にも犠牲死させ、以下の検討をした。脳の視床下部にある摂食関連神経であるオレキシン神経細胞とMCH神経細胞をターゲットとし、これらの神経の活動性の変化を核内に出現するc-fos蛋白をマーカーとして免疫組織化学的方法により詳細に検討した。さらにオレキシン、MCH, NPY等のmRNAの変化をRT-PCRで検討した。【結果】高血糖を示すdb/dbマウスの脳内では安静時ではオレキシン神経細胞の核内に出現するc-fos蛋白は、コントロールのdb/mマウス比較して大幅に減少していた。運動直後のdb/dbマウスでc-fos蛋白は増加し、数量は正常動物に近くなった。さらに本研究費で購入したマウスの自発運動解析システムを用いマウスの行動を観察したが、4日間の短時間トレッドミル運動では運動量の変化は見られなかった。しかし回転車を使って自由に運動させた糖尿病マウスでは1日の総運動量が2倍に上昇していた。糖尿病は高血糖により起こる全身への様々な障害と平行して、エネルギー代謝等に関与する脳機能の低下がおこる。特に視床下部にある摂食中枢の神経細胞の働きが大きく低下していることがその原因の一因であることを、実験動物を用いて神経科学的に証明することを目的とした。昨年度は糖尿病動物に運動療法を施すと、上記の低下していた摂食中枢の神経細胞の働きが正常に近くなり、さらにその効果が数日間続くことを顕微鏡的・分子生物学的・行動学的に証明した。今年度はさらに高蛋白食による栄養療法を検討した。【方法】昨年と同様、2型糖尿病を示すdb/dbマウスを用い、高蛋白食摂餌群と普通食群にわけ4週間後に犠牲死させ、以下の検討をした。脳の視床下部にある摂食関連神経であるオレキシン神経細胞をターゲットとし、これらの神経の活動性の変化を核内に出現するc-fos蛋白をマーカーとして免疫組織化学的方法により詳細に検討した。さらに骨格筋の萎縮の改善を検討するため、ひらめ筋を含む下腿三頭筋を摘出し、筋線維をミオシンtype1,type2線維の抗体を用いて免疫組織化学的に検討した。【結果】高血糖を示すdb/dbマウスの脳内では普通食ではオレキシン神経細胞の核内に出現するc-fos蛋白は、コントロールのdb/mマウス比較して大幅に減少していた。高蛋白食摂餌群のdb/dbマウスではc-fos蛋白はやや増加したが、コントロール群より低下したままであり、高蛋白食のみでの中枢効果は少なかった。一方ひらめ筋は高蛋白食群で萎縮が中程度に回復し、糖尿病動物において高蛋白食の効果が認められた。特に視床下部にある摂食中枢の神経細胞の働きが大きく低下していることがその原因の一つであることを、実験動物を用いて神経科学的に証明することを目的とした。一昨年度は糖尿病動物に運動療法を施すと、上記の低下していた摂食中枢の神経細胞の働きが正常に近くなり、さらにその効果が数日間続くことを顕微鏡的・分子生物学的・行動学的に証明した。昨年度はさらに高蛋白食が末梢組織で効果を示すことを報告した。今年度は糖尿病マウスに高蛋白食摂餌と運動療法を組み合わせ検討した。【方法】

昨年と同様、2型糖尿病を示すdb/dbマウスを用い、高蛋白食摂餌群と普通食群にわけた。さらに各自ケージに回転車を装着した運動群と、安静群の計4グループにわけた。運動群は回転運動数をモニターしながら4週間後に犠牲死させた。脳の視床下部にある摂食関連神経であるオレキシン神経細胞をターゲットとし、これらの神経の活動性の変化を核内に出現するc-fos蛋白をマーカーとして免疫組織化学的方法により詳細に検討した。さらに骨格筋の萎縮の程度を検討するため、ひらめ筋を含む下腿三頭筋を摘出し、筋線維の大きさの比較、筋タイプをミオシンtype1,type2抗体を用いて免疫組織化学的に染色し、遅筋、速筋のタイプ別の変化も検討した。【結果】高血糖を示すdb/dbマウスの脳内では普通食ではオレキシン神経細胞の核内に出現するc-fos蛋白は、コントロールのdb/mマウス比較して大幅に減少したが、高蛋白食摂餌群のうちdb/dbマウス運動群ではc-fos蛋白は増加した。骨格筋は高蛋白食運動群で萎縮が大幅に回復し、糖尿病において運動と高蛋白食の効果が認められた。また膵臓β細胞のアポトーシスに関連する物質を見つけ、以後糖尿病防止研究に発展させる予定である。昨年度は糖尿病動物にトレッドミルで運動療法を施し、低下していた摂食中枢の神経細胞の活動が正常に近くなり、さらにその効果が数日間続くことを顕微鏡的・分子生物学的・行動学的に証明した。今年度はさらに2型糖尿病を示すdb/dbマウスを用い、栄養療法を検討した。今年度は運動負荷なしでの検討で、高蛋白食摂餌群と普通食群にわけ飼育した。中枢効果は脳の視床下部にある摂食関連神経であるオレキシン神経細胞の活動性の変化を核内に出現するc-fos蛋白の出現を検討した結果、普通食群糖尿病マウスはコントロールマウスと比較してc-fos蛋白は大幅に減少し、神経活動が低下していたが、高蛋白食摂餌群のdb/dbマウスではc-fos蛋白はやや増加した。しかしコントロール群までは増加しなかった。さらに骨格筋の萎縮の程度を検討するため、ひらめ筋を摘出し、ミオシンtype1,type2線維の抗体を用いて免疫組織化学的に検討した結果、骨格筋は高蛋白食群で萎縮が中程度に回復したことを明らかにし、糖尿病を栄養療法面から再考するまで進展した。来年度はさらに糖尿病動物における運動と高蛋白食の組み合わせる実験をする予定である。以上より糖尿病動物に栄養的な検討も必要であると発展し、順調に進展している。24年度が最終年度であるため、記入しない。糖尿病モデル動物を用いて、トレッドミルでの運動で中枢での効果を認め、その効果は数日続くことを明らかにした。さらに今年度後半から自身のケージ内で、自由に運動できる装置(回転車)を導入し、運動する時間や運動量を測定しながら、糖尿病モデル動物での中枢神経系の回復を検討し始めている。来年度はこの自発的運動を組み合わせ、糖尿病の症状の軽減の度合いを検討していく予定である。また今年度は高蛋白食を中心に栄養との関連を発展させた。
エビデンスに基づく熱中症の診療指針の確立に向けての疫学調査と分析

これまでの熱中症の疫学調査は、熱中症の発症状況や予防に対して重点が置かれていたこともあり、冷却法の相互比較や冷却後の集中治療、感染症との鑑別や治療を検討する大規模調査は行われていない。諸外国でも被害の状況を伝える報告があっても、熱中症の診断や治療に関する内容は乏しい。本研究は、日本救急医学会熱中症と低体温に関する委員会が実施してきた熱中症の全国規模の疫学調査(Heatstroke STUDY)を引き継ぎ、熱中症の重症度の新基準、重症例と軽症例の双方にとって最適な治療法に関する全国規模の疫学調査を行い、熱中症の標準的治療の確立を目指す。
戦後日華外交史における経済的要因の検討ー日華断交時期までを対象にー

平成30年度の研究実施状況を主に1国内外での史料調査及び2学会報告、3論文執筆の3点に分け、以下ではそれぞれの項目について説明する。1国内外での史料調査:国内では、外務省外交史料館において既に公開済みである戦後外交記録を閲覧した他、「特定歴史公文書等利用申請」を行い新たな外交史料の発掘も継続的におこなってきた。また国立国会図書館憲政資料室では、岸信介、石井光次郎など台湾と密接な関係を有した政治家の個人文書を収集した。海外では、台湾とアメリカにおいて史料調査を実施した。台湾においては、中国国民党文化宣伝委員会党史館、国史館総統副総統文物館、中央研究院近代史研究所档案館などの档案館、そして台湾大学図書館、国家図書館、国立公共資訊図書館などの図書館へ赴き、日本では閲覧できない中国語史料を閲覧した。アメリカにおいては、カリフォルニア州スタンフォード大学フーヴァー研究所、東アジア図書館などにおいて史料調査を実施した。フーヴァー研究所に所蔵される『蒋介石日記』などをはじめとする中華民国政府(以下、国府)要人の私文書を収集した。2学会報告:今年度は、史学会大会東洋史部会と中国研究所定例研究会などでの国内における報告、そして新潟大学・淡江大学共催・日台国際ワークショップにおいて海外報告を行った。3論文執筆:今年度は、まず国内において『東洋学報』に学術論文「中華民国政府の大陸反攻と対外政策機構(1950-1958)ー海外対匪闘争工作統一指導委員会を事例にー」を投稿し、掲載許可をいただいた。当該論文は、1970年代に国際的孤立を迎えた国府外交の失敗の一因を探るため、1950年代の大陸反攻政策のなか、その対外政策機構がどのように改革されたについて検討したものである。また、台湾において出版される予定の論文集に会議論文を投稿し、主編者である国立政治大学台湾史研究所より掲載を許可された。本研究の目的は、植民地時期以来の経済関係という構造的要因がいかに戦後の日華外交関係において作用したのかを明らかにすることである。そのためこれまでは主に、1国内外での史料調査及び2学会報告、3論文執筆を行ってきた。1国内外での史料調査では、まず日本において日本側の外交文書や各政治家の個人文書を収集することができた。そして台湾においては中華民国外交部档案や経済档案、そして中国国民党の档案、などを集めることができた。さらにアメリカでの調査では『蒋介石日記』などの国府要人の日記を閲覧できた。2学会報告については、史学会大会東洋史部会と中国研究所定例研究会の他、新潟大学・淡江大学共催・日台国際ワークショップにおいて報告することができた。3論文執筆については、史料収集の成果や学会報告で得られたコメントなどを元に国内外の学術雑誌や論文集へ投稿することができた。令和元年度は最終年度となるため、引き続き史料収集に力を注いでいきたいと考えている。これまで収集した史料は主に1960年代前半までが中心であった。日華断交時期までを対象とする本研究課題の完成のためには、さらに史料を収集していく必要がある。またマルチアーカイバルな視点から日華関係を考察するため、今後はNARA(アメリカ国立公文書館)などでも調査を実施していきたいと考える。そして、これまで収集した史料の分析も同時に進め、査読誌への投稿を積極的に行っていきたい。

1国内外での史料調査では、まず日本において日本側の外交文書や各政治家の個人文書を収集することができた。そして台湾においては中華民国外交部档案や経済档案、そして中国国民党の档案、などを集めることができた。さらにアメリカでの調査では『蒋介石日記』などの国府要人の日記を閲覧できた。2学会報告については、史学会大会東洋史部会と中国研究所定例研究会の他、新潟大学・淡江大学共催・日台国際ワークショップにおいて報告することができた。3論文執筆については、史料収集の成果や学会報告で得られたコメントなどを元に国内外の学術雑誌や論文集へ投稿することができた。令和元年度は最終年度となるため、引き続き史料収集に力を注いでいきたいと考えている。これまで収集した史料は主に1960年代前半までが中心であった。日華断交時期までを対象とする本研究課題の完成のためには、さらに史料を収集していく必要がある。またマルチアーカイバルな視点から日華関係を考察するため、今後はNARA(アメリカ国立公文書館)などでも調査を実施していきたいと考える。そして、これまで収集した史料の分析も同時に進め、査読誌への投稿を積極的に行っていきたい。
言語・認知障害の診断・治療評価のための三次元脳機能局在解析・映像システムの開発

昨年度に続き,言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの開発を進めた.1.神経・シナプス回路モデルに基づく三次元脳機能局在解析法の開発に関し,昨年度において構成した皮質-皮質下モデルに,球面皮質上に面電流源密度法を適用して三次元機能局在の同定を行った.2.言語・認知障害の機能局在検査課題の開発に関し,各言語・認知機能に対応したパラダイムの集合として設計した検査課題に,課題遂行の特定の段階を外部から制御する方略教示のプログラムを追加した.3.言語・認知障害の治療・訓練評価法の開発に関し,薬物治療・教示学習訓練に対するデータベースをもとに,教示学習訓練と薬物治療に対する客観的評価法を開発した.4.言語・認知障害の脳機能局在診断法の開発に関し,MRI/fMRIの3次元トモグラフデータ、EEGの球面トポグラフィおよびMEG電流源の3次元動点組合せ画像から対話的に任意の映像を得る診断法の追加を行った.5.三次元脳機能局在解析・映像ルーチンの開発に関し,データオブジェクトから動画像表示を行う解析・映像ルーチンをオブジェクト指向言語(C++)により記述して完成した.6.言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの実用化に関し,多チャンネルデータ入力装置に三次元脳機能局在解析装置を付加し,上記の成果を組み込んでシステムを完成させ,臨床実験を通じて,実用化のめどを得た.本年度においては,言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの設計および基本部分の開発を目標に、以下の6項目の研究を進めた。1.皮質の層構造に着目した皮質表面電位と層内神経伝達物質動態との対応モデルを皮質-皮質下の三次元構造に適用し、基本的な脳機能局在解析法を開発した。2.言語・認知機能との障害の基本的な検査課題を開発し、文字認識、単語同定、意味同定、文理解、談話解析、状況保持の各パラダイムデータ間の差分から各脳機能モジュールの抽出を試みた。3.言語・認知障害を示す患者、特に分裂病患者への薬物治療・教示学習訓練に対する客観的指標の確立に向けてその基本部分のデータベース化を試みた。4.MRI、fMRIなどのスライスとEEG平面トポグラフィから3次元トモグラフと球面トポグラフィを構築し、MEG電流源の動点を組み合わせた診断法の基本的な開発を行った。5.ポリゴンのトポグラフデータ、ボクセルのトモグラフデータ、3次元空間内の動点という3種のデータオブジェクトから動画像表示を行う解析・映像ルーチンの基本部分を作成した。6.上記の成果およびプログラマブルDC脳波アンプを用いて基本システムを構築し、予備実験によるシステムの検討を試み、各部の改良の問題点を得た。昨年度に続き,言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの開発を進めた.1.神経・シナプス回路モデルに基づく三次元脳機能局在解析法の開発に関し,昨年度において構成した皮質-皮質下モデルに,球面皮質上に面電流源密度法を適用して三次元機能局在の同定を行った.2.言語・認知障害の機能局在検査課題の開発に関し,各言語・認知機能に対応したパラダイムの集合として設計した検査課題に,課題遂行の特定の段階を外部から制御する方略教示のプログラムを追加した.3.言語・認知障害の治療・訓練評価法の開発に関し,薬物治療・教示学習訓練に対するデータベースをもとに,教示学習訓練と薬物治療に対する客観的評価法を開発した.4.言語・認知障害の脳機能局在診断法の開発に関し,MRI/fMRIの3次元トモグラフデータ、EEGの球面トポグラフィおよびMEG電流源の3次元動点組合せ画像から対話的に任意の映像を得る診断法の追加を行った.5.三次元脳機能局在解析・映像ルーチンの開発に関し,データオブジェクトから動画像表示を行う解析・映像ルーチンをオブジェクト指向言語(C++)により記述して完成した.6.言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの実用化に関し,多チャンネルデータ入力装置に三次元脳機能局在解析装置を付加し,上記の成果を組み込んでシステムを完成させ,臨床実験を通じて,実用化のめどを得た.昨年度に続き,言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの開発を進めた.1.神経・シナプス回路モデルに基づく三次元脳機能局在解析法の開発に関し、昨年度において構成した皮質-皮質下モデルに,球面皮質上に面電流源密度法を適用して三次元機能局在の同定を行った.2.言語・認知障害の機能局在検査課題の開発に関し,各言語・認知機能に対応したパラダイムの集合として設計した検査課題に,課題遂行の特定の段階を外部から制御する方略教示のプログラムを追加した.3.言語・認知障害の治療・訓練評価法の開発に関し,薬物治療・教示学習訓練に対するデータベースをもとに,教示学習訓練と薬物治療に対する客観的評価法を開発した.4.言語・認知障害の脳機能局在診断法の開発に関し,MRI/fMRIの3次元トモグラフデータ、EEGの球面トポグラフィおよびMEG電流源の3次元動点組合せ画像から対話的に任意の映像を得る診断法の追加を行った。5.三次元脳機能局在解析・映像ルーチンの開発に関し,データオブジェクトから動画像表示を行う解析・映像ルーチンをオブジェクト指向言語(C++)により記述して完成した。

6.言語・認知障害の診断・治療のための三次元脳機能局在解析・映像システムの実用化に関し,多チャンネルデータ入力装置に三次元脳機能局在解析装置を付加し,上記の成果を組み込んでシステムを完成させ,臨床実験を通して,実用化のめどを得た.
ライノウィルス感染に伴う喘息増悪の病態解明とその制御

緒言:喘息はコントロール良好な疾患となったが、喘息増悪は今でもしばしば見られ、増悪の予防及び治療法の確立は重要と考えられる。Cadherin-relatedfamily member 3(CDHR3)は、cadherin superfamilyに属する膜貫通の糖蛋白で、気道上皮細胞に発現するが、その機能はよくわかっていない。近年、CDHR3の遺伝子変異は、小児喘息における重度な増悪と関連することが報告された。さらにCDHR3は、ライノウィルスの中で重篤病態を引き起こすとされる、C型ライノウィルスの受容体であることが判明し、喘息増悪に関与する可能性が示唆されている。今回我々は、CDHR3が、好酸球の機能を活性化させるかにつき検討した。方法:健常人の末梢血好酸球を使用した。好酸球は、デキストラン、Percoll液、及びimmunomagnetic beadsによるnegative selectionにて分離した。好酸球をCDHR3でcoatしたplateとincubateし、残存好酸球ペルオキシダーゼ測定法で接着反応を測定した。また、好酸球の活性酸素産生を、チトクローム還元法を用いて測定し、好酸球の脱顆粒は、上清のeosinophil-derived neurotoxin濃度を測定することで評価した。結果: CDHR3は好酸球の接着を誘導し、IL-5は好酸球のCDHR3への接着を増強した。さらに、CDHR3は好酸球からの活性酸素産生を誘導し、脱顆粒を誘導した。考察:今研究から、CDHR3は好酸球のエフェクター機能を活性化することが明らかとなった。CDHR3による好酸球活性化が、喘息増悪に関連する可能性が考えられた。今後CDHR3遺伝子変異の好酸球機能に与える影響について、変異蛋白の使用や変異遺伝子のtransfectionによって、検討する予定である。前述の研究実績だけでなく、現在以下のプロジェクトが進行中であり、研究全体ではやや遅れていると思われる。2ALIシステムを用いたRV-A/B/Cに対する抗ウィルスサイトカインや薬剤の効果現在IFN-βプラスミドを作成中である。IFN-λのマウス喘息モデルに対する効果を検討し、IFN-βの作用と比較検討する。抗炎症作用を示す場合は、臨床応用も念頭に置き、より良い投与経路やその作用機序を検討する2ALIシステムを用いたRV-A/B/Cに対する抗ウィルスサイトカインや薬剤の効果現在ALIシステムの立ち上げ中である。RV-A、B、Cを使用し、RVに効果が期待される薬剤(マクロライド系抗生剤、気管支拡張薬など)の治療効果の違いを調べることで、種特異的な治療法を検討する3CDHR3またはORMDL3の好酸球・好中球機能に対する影響CDHR3の好中球機能に対する影響及び、CDHR3遺伝子変異の好酸球機能に与える影響について今後検討する予定である緒言:喘息はコントロール良好な疾患となったが、喘息増悪は今でもしばしば見られ、増悪の予防及び治療法の確立は重要と考えられる。RV-A、B、Cを使用し、RVに効果が期待される薬剤(マクロライド系抗生剤、気管支拡張薬など)の治療効果の違いを調べることで、種特異的な治療法を検討する3CDHR3またはORMDL

3の好酸球・好中球機能に対する影響CDHR3の好中球機能に対する影響及び、CDHR3遺伝子変異の好酸球機能に与える影響について今後検討する予定であるALIシステムの構築に時間がかかり、現在予備実験中である。来年以降の本実験で使用させていただく
非同期式複合VLSIシステムの設計支援に関する研究

大規模かつ高性能な非同期式システムを実現するための設計支援技術を確立した。以下にその要点を述べる。1.非同期式プロセッサTITAC-2の速度性能及び電力消費の評価を行なった。この評価結果に基づき、非同期式パイプラインを高速化する指針と、電力-性能比を改善する指針を明らかにした。2.大規模な非同期式システムの設計方法論の開発と検証を目的として、非同期式スーパースカラプロセッサTITAC-3のRTL設計を行なった。従来の同期式スーパースカラよりも高い命令実行並列性を実現するカスケードALU方式を提案し、TITAC-3に採用した。TIT AC-3はIPC=1.90,285MIPSの性能が得られることをシミュレーションによって確認した。3.DCVSL(Diffential Cascode Voltage Switch Logic)の特徴を利用して休止相遅延や制御遅延を隠蔽する細粒度パイプライン方式を提案し、その評価を行なった。非同期式演算回路の高速な実現を明らかにした。演算回路にSDIモデルに基づく完了信号生成回路を付加する手法を提案し、その評価を行なった。5.テストにおける非同期式回路特有の問題であるPremature Completion Signalingの影響を少なくすることを考慮したBICS(Built-In Current Sensor)によるオンラインテスト手法を提案した。6.瞬間的なパルスを情報担体とするパルス論理によって非同期式データパス回路を実現する手法を提案した。いわゆるクロック・スキューと配線遅延のために同期式システムが直面する性能限界を突破する非同期式複合VLSIシステムの設計技術の確立を目指して、アーキテクチャと論理設計技術の両面から研究を進めた結果、今年度は以下の研究成果を得た。1)前年度に試作したMIPS-R2000相当の32ビット非同期式マイクロプロセッサの設計データを用いて非同期式パイプラインプロセッサの動作解析と性能評価を行い、パイプラインの多段化が非同期式システムにおける要求応答制御のオーバーヘッドを隠蔽するとともに遅延変動に伴う性能低下を抑制する効果があることをシミュレーションによって確認した。2)プロセッサ性能が信号伝播の平均遅延で決まる非同期式プロセッサの特性を有効に利用し得る新しいデータパスアーキテクチャとして提案した非同期式カスケードALU方式の評価を行い、その有効性を確認するとともに、複合演算化、命令再配置の最適化などによってさらに性能向上が望めることをシミュレーション実験によて明らかにした。前年度に引き続き、クロック・スキューと配線遅延のために同期式システムが直面する性能限界を突破する非同期式複合VLSIシステムの設計技術の確立を目指して研究を進め、以下の研究成果を得た。1) DCVSLと呼ばれる2線論理回路方式を使用した非同期式細粒度パイプラインデータパスの構成アルゴリズムを開発して計算機上に実装し、論理合成用ベンチマーク回路に適用して評価を行った。2) SDIモデルに基づいた非同期式VLSIシステムにおける1線式回路と2線式回路の比較を行い、遅延のばらつきが小さい場合は、1線式回路構成が有利であるとの結論が得られた。また、2線式回路の消費電力は1線式回路の約2倍となることが確認された。3)非同期式設計に用いるセルライブラリとして、DCVSL同族類ライブラリ、除算回路用セル、汎用セル、、レジスタファイル用レジスタセル、C素子、アービタ回路の設計を行った。4)同期式の除算器では、部分剰余と除数の上位数ビットのみを用いて商を求めるSRT法が広く用いられているが、非同期式回路では平均遅延が小さくなるように回路を構成することで、SRT法よりも簡単な非回復法や回復法を用いてSRT法と同等な性能の除算回路を構成できることを確認した。5) SDIモデルに基づく非同期式制御回路を設計する手法として、依存性グラフからの回路生成法とSTGからの回路生成法を提案した。この提案手法によって得られる回路の速度向上について評価を行なった。6) 2線式データパスの完了信号生成回路の構成法を提案し,それをツールとして計算機上に実装し、種々のデータパス回路に適用してその有効性を確認した。

4非同期式パルス論理の設計論を構築するため、データフローグラフからパイプライン回路を合成する手法を提案し、パルス論理で動作する非同期式プロセッサの論理設計例を示し、ペトリネットの部分グラフから順序回路を合成する手法を提案した。非同期式VLSIに適したアーキテクチャの提案とその効果を実証することと、大規模な非同期式システムの設計方法論の開発と検証を目的として非同期式スーパースカラプロセッサTITAC-3のRTL設計を行なった。分岐予測機構・命令キャッシュ・データキャッシュのそれぞれについて、シミュレーションによってその最適な方式と最適な設計パラメータを明らかにした。また、従来の同期式スーパースカラよりも高い命令実行並列性を実現するカスケードALU方式を提案した。TITAC-3は、RTLシミュレーションによってIPC(Instruction per Cycle)=1.90,285MIPSの性能が得られることを確認した。非同期式データパス回路の設計技術として、DCVSL(Differential Cascode Voltage Switch Logic)の特徴を利用して休止相遅延や制御遅延を隠蔽する細粒度パイプライン方式を提案し、最適な細粒度分割方法を明らかにし、シミュレーションによる性能評価を行なった。また、乗算器・除算器などの演算回路の非同期式による高速な実現を明らかにした。同期式論理演算回路にSDIモデルに基づく完了信号生成回路を付加する手法を提案し、その評価を行なった。
刑事立法の研究―立法のあり方の総合的検討

今年度これまでに行った研究は次のとおり。第一に、刑事立法関連の個別研究をさらに進めた。特に、改正少年法については、その研究成果の一部を、大阪市立大学インターネット講座の「少年法(2)(3)-改正少年法の内容と問題点(1)(2)」にまとめた。そこでは、改正の背景、改正法成立の経緯と改正の内容、改正法の運用状況、そして改正法へのコメント、といった項目ごとに、グラフなども用いながら、詳細に論じた。第二に、広く刑事法の現状の問題点や立法提案の把握に努めた。『刑事法演習』の原稿作成に当たり、インターネット犯罪対策の現状、サイバー犯罪条約の背景・内容、刑法・刑事訴訟法の場所的適用範囲と各国の対応、通信傍受法と口頭会話の盗聴の可否、職権濫用罪の運用状況と解釈問題、付審判請求手続きのあり方・立法提案等に関する数多くの文献に当たり、どこに問題があり、どのような改革の向がありうるかについて吟味した。第三に、イギリスの立法のあり方の検討をさらに進めた。特に警察不服審査制度の改革については、さらに文献を集め、検討を加えた。なお、昨年の自衛隊法改正で設けられた防衛秘密漏示の罪について論文を速やかに発表する予定であったが、今年度になって、組織的犯罪に関する共謀罪創設の動きが起こり、防衛秘密漏示の罪の「共謀罪」の性格についても詳細な検討が必要になったため、実現できなかった。今後の組織的犯罪に関する共謀罪創設の動きをにらみつつ、またイギリスの共謀罪のあり方をも視野にいれながら、日本における「共謀罪」の性格を検討していきたいと思っている。なお、本来なら本研究を継続していくところであるが、今年9月半ばからイギリスに在外研究に出ることになり、残念ながらこの科学研究費助成研究を中止せざるをえなくなった。しかし、在外研究中も、刑事立法のあり方の研究を続けていきたいと考えている。今年度行った研究の概要は次のとおり。第一に、従来から行ってきた刑事立法関連の研究をさらに進めた。盗聴法(通信傍受法)、性表現規制、少年法、監獄法等の研究である。たとえば、昨年の刑法学会では、性表現規制に関する報告を行い、実証的科学的研究の成果を採り入れながら、刑法の補充性・最終手段性を十分考慮に入れて立法すべきことを主張した。また、同学会の刑事立法に関するワークショップでは、盗聴法および改正少年法の立法過程を概観し、その中に含まれる問題点を指摘した。第二に、他の個別分野の刑事立法の研究として、昨年の自衛隊法改正で新たに設けられた防衛秘密漏示罪の研究を行った。国家機密法制定運動の歴史、従来の法案との相違点、自衛隊改正の立法過程などを分析・検討した。現在、論文を執筆中である。第三に、イギリスの立法のあり方の検討である。警察不服審査制度の改革、さらには、刑事裁判手続きの全面的な改革が行われつつある。これらについての資料を収集し分析に努めた。特に警察不服審査制度の改革については、日本の警祭不祥事対策との関連で大変参考になるものと考え、昨年9月と今年の2月に現地で調査を実施した。イングランド・ウェールズでは現在法案が上程されている段階で、改正の背景とともに、その立案過程についても、内務省の担当者等と会って聞き取り調査を行った。また、北アイルランドではすでに法改正がなされ一昨年から新制度が運用されており、その運用動向、特に警察と不服審査機関である警察オンブズマンとの関係について調査した。不服審査制度についても、来年度、速やかに論文の形でまとめたいと考えている。
微生物殺虫剤BTの高分子プラスミドの遺伝子構成と殺虫性タンパク質安定化機構の解析

1.高分子プラスミドpBTl-6の遺伝子構成このプラスミド上に存在する殺虫性タンパク質遺伝子として,既にcryIVAcryIVD,cytAの5種類が知られていたが,今回新たにcryIVCと相同性の高い新規遺伝子Xを発見した.X遺伝子の部分塩基配列と大腸菌のlacプロモーターを用いた高発現系の結果からX遺伝子産物は約56kDaタンパク質と推定した.また,サザンブロット解析と制限解析からpBTl-6の約1/5に相当する20kbのBamHI制限断片上にcryIVA,cryIVBとXの3つの遺伝子がクラスターを形成していると結論した.2.殺虫性タンパク質の安定化機構pBTl-6上には種々の殺虫性タンパク質の他に殺虫性タンパク質安定化因子である20kDaタンパク質もコードされている.この20kDaタンパク質の活性発現機構を解析するために,BTl130kDa殺虫性タンパク質遺伝子(cryIVAまたはその変異体)と20kDaタンパク質遺伝子とを,枯草菌およびBTlの両細胞に共形質転換して,これらの細胞内での殺虫性タンパク質の生産量や安定性を調査した.枯草菌では,20kDaタンパク質存在下においても細胞内にクリスタルを観察することができなかった.一方,BTlでは,20kDaタンパク質の有無によってクリスタル形成率が変動すること,また変動の程度がcryいVAに導入された変異の種類によって異なることが判明した.1.高分子プラスミドpBTl-6の遺伝子構成このプラスミド上に存在する殺虫性タンパク質遺伝子として,既にcryIVAcryIVD,cytAの5種類が知られていたが,今回新たにcryIVCと相同性の高い新規遺伝子Xを発見した.X遺伝子の部分塩基配列と大腸菌のlacプロモーターを用いた高発現系の結果からX遺伝子産物は約56kDaタンパク質と推定した.また,サザンブロット解析と制限解析からpBTl-6の約1/5に相当する20kbのBamHI制限断片上にcryIVA,cryIVBとXの3つの遺伝子がクラスターを形成していると結論した.2.殺虫性タンパク質の安定化機構pBTl-6上には種々の殺虫性タンパク質の他に殺虫性タンパク質安定化因子である20kDaタンパク質もコードされている.この20kDaタンパク質の活性発現機構を解析するために,BTl130kDa殺虫性タンパク質遺伝子(cryIVAまたはその変異体)と20kDaタンパク質遺伝子とを,枯草菌およびBTlの両細胞に共形質転換して,これらの細胞内での殺虫性タンパク質の生産量や安定性を調査した.枯草菌では,20kDaタンパク質存在下においても細胞内にクリスタルを観察することができなかった.一方,BTlでは,20kDaタンパク質の有無によってクリスタル形成率が変動すること,また変動の程度がcryいVAに導入された変異の種類によって異なることが判明した.
神経可塑性を制御する遺伝子の探索

野田らは、マウス脳発生に伴って発現が低下するNedd遺伝子群の解析を進め、脳虚血後のNedd2/caspase-2遺伝子の発現上昇や、Nedd5が細胞質分裂に必須の新たな細胞骨格関連蛋白質であり、アルツハイマー病のneurofibrillary tangle中に大量に含まれる事等を見出した。佐藤と神野らは、発生初期の鶏胚脳幹で脱分極性の応答と細胞内Ca2+イオン上昇を引き起こすGABA blocker非感受性の新しいGABA受容体(GABAD)を発見した。山森らは、小脳プルキンエ細胞にAMPAとcGMPを与えた際に誘導される遺伝子の一つとして、ラット脳神経系に特異的に発現する新規反復配列Bsrを発見した.平野らは、ノックアウト・マウスを用いて、グルタミン酸受容体δ2サブユニットがLTDの発現及び運動学習に関与することを示した。また、小脳細胞培養系を用いて、MAPキナーゼのLTDへの関与を示し、LTDを数日間にわたって検出できる新たな実験系の開発にも成功した。友岡らは、p53欠損マウスの小脳より、分化能を保持した細胞株を多数樹立し、その性質を調べた。福井らは、ツメガエル予定外胚葉片を材料とし、in vitroで効率良く頭部形態形成を誘導する系を確立し、この過程で発現誘導される一連の遺伝子のクローニングと発現パターンの解析を進めた。能瀬らは、ショウジョウバエの神経と筋肉の発生や結合に関与する、細胞表面蛋白質Capricious、分泌蛋白質M-spondin、転写因子Msh等を同定した。石原らは、線虫C.elegansにおいて孵化の遅延、孵化後の神経芽細胞の移動の異常を示す変異体hch-1の原因遺伝子が、Tolloid/BMP-1 familyに属する金属プロテアーゼをコードすることを明らかにした。1)ラット海馬歯状回(DG)においてLTP3及びLTP2を引起こす刺激を埋込電極から与え2時間後にDGより抽出したmRNAから一方向cDNAライブラリーを作成した。これらを互いにサブトラクトする事により、LTP3或いはLTP2刺激に伴って発現が変動する遺伝子cDNAを40クローン得た。(野田)2)ラット小脳スライスを用い、登上繊維刺激とAMP刺激(平行繊維刺激を代替)を同期して与えた時に、junB等のimmediate early genesに引続いて発現してくる遺伝子を数クローン得た。(山森)3)ラット海馬スライスCA1領域において、LTPを電位感受性色素(NK2761)を用いて光学的に検出できる系を確立した。また、鶏胚脳幹を用いて、発生に伴うNMDA受容態の機能的変化を追跡した。(神野)4)イオノトロピック・グルタミン酸受容体δ2サブユニットの欠損マウスから培養した小脳プルキンエ細胞は、グルタミン酸感受性のLTPを発現出来ない事がわかった。(平野)5)中枢神経前駆細胞の3次元培養系においてFGFが増殖・分化を促進し、またactivinがそれらを抑制することを見出した。(友岡)6)アクチビンA処理したアフリカツメガエル予定外胚葉片から、試験管内で高頻度に頭部神経構造を形成する系を確立した。(福井)7)ショウジョウバエにおけるエンハンサー・トラップ法によって単離された神経・筋特異認識関連遺伝子connectinの機能解析を進めた。(能勢)8)線虫C. elegansの介在神経異常変異株を単離する目的で、神経伝達物質受容体遺伝子プロモーター下流にGFPマーカーを継いだものを発現している株を6種作成した。(石原)

ラット海馬歯状回における、長期持続型LTP(LTP3)の誘導に伴って発現が増強する遺伝子のcDNAサブトラクション法によるクローニングを行い、各クローンの構造及び発現パターンの解析を進めた。また、LTPとの関連が示唆されている最初期遺伝子Zif268及びFos,Junの機能を修飾するMaf遺伝子の生物活性を解析した。脳発生関連遺伝子として以前に単離したICEファミリー遺伝子Nedd2の発現が、脳虚血後に一過性に上昇することがスナネズミのモデル系において見出された(野田)。LTP関連遺伝子の機能解析系の開発を目的として、ラット海馬スライスにおけるLTPを光学的に測定する方法を確立した(神野)。ラット小脳プルキンエ細胞におけるLTDに伴って発現する遺伝子のdifferential display法によるクローニングを行い、得られたクローンの構造及び発現パターンの解析を行った(山森)。ラット小脳細胞の分散培養系を用いて、LTD誘導にMAPキナーゼが関与する事を示した(平野)。p53欠損マウスより小脳由来の細胞株を多数樹立した(友岡)。アフリカツメガエル、ショウジョウバエ、線虫において神経発生関連遺伝子の探索を進め、ran(核膜輸送関連)遺伝子、P750(leucine rich repeat)遺伝子、Tolloid/BMP-1ファミリー(金属プロテアーゼ)遺伝子等を単離し、解析を進めた(福井、能勢、石原)。マウス脳の発生初期に活発に発現しているNedd遺伝子群の内、Nedd2(caspase-2)が成体スナネズミで脳虚血後一過性に発現上昇すること、Nedd4が上皮性ナトリウム・チャンネル(ENaC)の分解に関わるユビキチン蛋白リガーゼをコードすること、Nedd5が酵母からヒトまで良く保存されてたGTP-結合タンパク質をコードし、これは細胞分裂に必須の新たな細胞骨格成分である事等が見出された(野田)。小脳スライスで、平行線維と登上線維との共刺激に伴ってプルキンエ細胞内にc-Fos/JunBの発現が誘導されることを示した.また、それに引き続いて発現する遺伝子群の探索を行い10種のcDNAを得た。(山森)。光学的測定法を用い、鶏初期胚における機能的シナプスの形成とそのre-arrangementの時期に、NMDA型受容体のMg^<2+>やglycineへの感受性が大きく変化することを見出し、その空間分布の変化について明らかにした(佐藤)。小脳の長期抑圧に、グルタミン酸受容体のd2サブユニット及びMAPキナーゼが関与することを見出した(平野)。p53欠損マウスの小脳より多分化脳株、ニューロン株、グリア株などを含む様々な細胞株樹立した。この内、多くのニューロン株において性ホルモンが細胞死を誘導することを見出した。(友岡)。ツメガエル予定外胚葉片をアクチビンA処理することにより、神経誘導関連遺伝子を探索する系を確立し、10種の新規遺伝子をクローニングした(福井)。ショウジョウバエでのエンハンサートラップにより同定した新規の接着分子Capriciousが神経-筋標的認識過程に関与することを明らかにした(能勢)。C.elegans代謝型グルタミン酸受容体遺伝子(mgl-1,2)の欠損株が、それぞれ感覚応答の相互作用や飢餓条件下での応答の変化に異常を示す事を見出した(石原)。
栄養膜におけるクロマチン転写制御機構に着目した胎盤絨毛形成・妊娠維持機構の解明

胎盤の栄養膜の機能について,融合・多核化(シンシチウム化)した合胞体栄養膜の機能には未解明な点が多く残されている.本研究はシンシチウム化した核に転写活性があるか否かを見極め転写制御機構の一端を明らかにし絨毛形成や妊娠維持機構の解明に結びつけることを目的とした.結果,満期胎盤の終末絨毛を固定し蛍光免疫染色を行い,クロマチン活性を示唆する染色像を得た.絨毛癌細胞株BeWoをフォルスコリン添加して培養し細胞融合を惹起.実験的シンシチウム化モデルとして蛍光免疫染色を行い融合した核にクロマチン活性を示唆する染色像を得た.更にメチル化阻害剤5aza-dCを添加しシンシチウム化について形態的変化を観察した.本研究計画の2年目に当たる平成25年度は,前年度に引き続き絨毛癌細胞株BeWoを用いてフォルスコリン添加によって惹起された細胞融合について,脱メチル化剤である5-aza-dCを用い,メチル化に関する動態観察を行った.また,分娩時の娩出胎盤からトロホブラストを抽出し,初代培養を行う実験に着手した.胎盤の栄養膜の機能について,融合・多核化(シンシチウム化)した合胞体栄養膜の機能には未解明な点が多く残されている.本研究はシンシチウム化した核に転写活性があるか否かを見極め転写制御機構の一端を明らかにし絨毛形成や妊娠維持機構の解明に結びつけることを目的とした.結果,満期胎盤の終末絨毛を固定し蛍光免疫染色を行い,クロマチン活性を示唆する染色像を得た.絨毛癌細胞株BeWoをフォルスコリン添加して培養し細胞融合を惹起.実験的シンシチウム化モデルとして蛍光免疫染色を行い融合した核にクロマチン活性を示唆する染色像を得た.更にメチル化阻害剤5aza-dCを添加しシンシチウム化について形態的変化を観察した.本研究初年度は,絨毛癌細胞株BeWoの培養環境構築に時間を要した.これまで実験を行っていた日本医科大学付属病院産婦人科実験設備から,新規に日本医科大学多摩永山病院共同研究室に実験環境を整備した.同研究室に設置されていた培養装置,クリーンベンチを再稼働させ,実験環境の整備を行った.培養環境を安定したものとして確立した後,BeWoに対してフォルスコリン添加によって細胞融合を惹起し,融合細胞の観察を目的として蛍光免疫染色を行った.同年度終盤に,抗ヒストン抗体を購入・入手し,核の蛍光免疫染色を行った.本研究計画3年目に当たる平成26年度は、引き続き絨毛癌細胞株BeWoを用い、フォルスコリン添加によって惹起された細胞融合について、脱メチル化剤である5-aza-dCを用い、メチル化に関する形態観察を行うとともに、胎盤栄養膜の初代培養について、脱メチル化を行って、形態観察を行った。また、脱メチル化環境下での細胞融合作用について、タンパク発現の解析を試みた。産科学メチル化阻害による絨毛癌細胞株BeWoへの影響が一定しないため,再現実験が続いている.また,現状では初代培養の確立について,安定した培養結果が得られるよう繰り返し初代培養を試みている.「研究実績の概要」の項で記したように,培養環境の整備に時間を要したため初年度の研究は,当初の予定より遅延した.環境整備の遅延状況に応じ,形態観察に供する標識抗体等の購入・入手も遅延したため,帝王切開娩出胎盤検体から切り出した終末絨毛を固定して,絨毛に対して抗RNAポリメラーゼ抗体,抗ヒストン抗体などを用いた蛍光免疫染色し形態観察を行う計画も遅延した.メチル化阻害剤5-aza-dC付加によるBeWoの細胞融合への影響について,結論を得たいと考えている.初代培養について,安定した培養条件が確認された段階で,BeWo細胞同様にメチル化阻害剤を用いて細胞寿命の延長が認められることを確認したいと計画している.培養系における実験環境が初年度に確立されたため,今後は,実験計画に沿って培養細胞に対し細胞融合を促し,蛍光免疫染色を行って,詳細な観察を行っていく.とくにメチル化阻害剤添加環境下融合BeWo細胞と,対照(メチル化阻害剤無添加環境下)の融合BeWo細胞との間で比較を行うことになる.メチル化阻害剤(5-Aza-2'-deoxycytidine)の添加条件の確立が,次年度研究計画遂行にかかわるポイントの一つになると思われる.帝王切開娩出胎盤検体から切り出した終末絨毛を固定し,蛍光免疫染色・形態観察する計画については,今後,初年度に遂行すべき実験を遂行する必要があるが,十分な数の検体が見込まれることから,次年度で十分に挽回可能と考えている.安定した培養結果が得られたことを確認後,免疫染色のための抗体試薬を購入予定だった.本年度前半で培養条件を確立し,免疫染色の為各種抗体試薬を購入予定です.該当なし
腫瘍組織標的化アデノウイルスベクターの創製と癌遺伝子治療への応用

前年度の検討により、腫瘍特異的プロモーターを搭載したアデノウイルスベクター(Ad)は、有効性と安全性に優れた癌遺伝子治療用ベクターとして有用であることが示された。本年度は、これらを全身性投与可能なベクターに発展させるため、さらなる改良を試みた。まず、TERTプロモーターまたはCMVプロモーターの制御下にレポーター遺伝子を発現するAdのキャプシドを、ポリエチレングリコール(PEG)で修飾(PEG分子量5,000、修飾率95%)したPEG-Ad-TERT/Luc、PEG-Ad-CMV/Lucを構築し、腹部担癌マウスに尾静脈内投与した際のベクター粒子分布および遺伝子発現分布を解析した。その結果、ベクター粒子の分布はプロモーター改変の影響を受けずほぼ同様のパターンを示し、いずれにおいても血中滞留性の向上や腫瘍への集積性が確認された。一方、遺伝子発現については、標的組織である腫瘍における発現と、副作用の主因となる肝臓での発現の比を算出したところ、PEG-Ad-TERT/LucはPEG-Ad-CMV/Lucと比較して、最大10,000倍も高値を示し、標的外の組織では、たとえ感染しても遺伝子発現が抑えられることが判明した。このことから、PEG-Ad-TERTは、PEG修飾による体内動態制御と、プロモーター改変による遺伝子発現制御の両面から腫瘍選択性を増強されており、全身投与型ベクターとして有望であることが示唆された。次に、腫瘍組織への集積1生をさらに向上させるため、PEG鎖の先端にターゲティングリガンドを付与する新しいシステムを構築し、その有用性を評価した。αv-integrinは腫瘍血管内皮細胞および多くの腫瘍細胞に高発現していることが知られているため、integrin指向性のRGD配列を含むペプチド(YGGRGDTP)をPEG片末端に2分子付与したRGD-PEGの合成法ならびに精製法を確立した。RGD-PEGで修飾したAdは、PEG-Adと同様に血中滞留性の向上や腫瘍への集積性を示したものの、それ以上の増強は確認されなかった。癌自殺遺伝子治療においては、正常組織に対する殺細胞効果(副作用)を回避するために、導入遺伝子の発現を癌細胞特異的に制御できるベクターの開発が望まれている。そこで本研究では従来型アデノウイルスベクターと比較して、極めて効率良くメラノーマ細胞への遺伝子導入が可能なRGDファイバーミュータントアデノウイルスベクター(AdRGD)を用いたin vivoメラノーマ自殺遺伝子治療の安全性を向上させる一手段として、メラノーマ特異的遺伝子発現制御機能を付与した新規AdRGDを構築し、その有用性を評価した。まず、TyrプロモーターまたはTERTプロモーターの制御下にレポーター遺伝子を発現するAdRGDを構築し、その遺伝子発現特性を調べたところ、Tyr制御型AdRGDはメラノーマ細胞特異的に、TERT制御型AdRGDは腫瘍細胞特異的に遺伝子を発現することが確認された。そこで、各プロモーター制御下に、治療用遺伝子としてHSVtkを搭載したAdRGDを構築し、マウスメラノーマモデルに対して腫瘍内投与した際の治療効果を評価したところ、いずれもベクター用量依存的な腫瘍増殖抑制効果を示した。さらに、腫瘍内投与後の標的外組織における遺伝子発現を解析したところ、遺伝子発現に特異性の無いCMVプロモーター制御型AdRGDを投与した場合には、腫瘍のみならず種々の正常組織において高い遺伝子発現が認められたのに対し、TyrまたはTERTプロモーター制御型AdRGDを投与したマウスにおいては、いずれの正常組織においても遺伝子発現はほとんど認められなかった。これらの結果より、腫瘍特異的プロモーターを搭載したAdRGDは、有効性と安全性に優れたメラノーマ自殺遺伝子治療用ベクターとして非常に有望であることが示された。