hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
可溶型LOX-1血中濃度測定による特発性拡張型心筋症の重症度評価及び予後の検討

本研究は、当院で加療しているDCM群(10名)と非DCM群(15名)に対して以下の検討結果を得た。・心筋生検の組織切片においてLOX-1発現量は心筋細胞にヒトの検体でも確認できた。しかしながら,心不全重症度とsLOX-1濃度に相関は認められなかった。上記の患者検体を用いた検討が、データの集積・解析途中となったため、マウスを用いたドキソルビシン(DOX)投与による心筋症モデルにて、LOX-1の生理的役割を明らかにし、論文に投稿発表した。(PLoS One. 2016May 19;11(5):e0154994.)DOX投与後の野生型マウス(WT)では左室拡大,左心機能低下が認められ,LOX-1ノックアウトマウス(KO)ではこの変化が抑制された。DOX投与により心筋組織でROSの増加,KOではこの変化が抑制され,ROS産生にLOX-1の活性化が必要である事を証明した。DOX投与後のWTではp38 MAPKとNFkBのリン酸化が増強し,KOでは抑制されていた。心筋組織におけるNFkB活性化が,TNF-αやIL-1βの発現を増加させ,炎症反応を引き起こしたと考えられた。DOX投与後のWTで白血球接着因子LOX-1やVCAM-1の発現が増強しており,心筋組織への炎症細胞浸潤が促進し, ROSによる心筋組織の線維化,心筋細胞の退縮も生じた。一方KOでは抑制されていた。DOX投与後のLOX-1活性化によりERK MAPKが不活性化し,心筋細胞の縮小やサルコメア蛋白の退行性変化を導いたことが原因と考えられた。心臓ではLOX-1の発現は心筋細胞で最も多く,心筋細胞のLOX-1発現がDOXによる心筋傷害に重要な役割を果たす事を示した。以上より,LOX-1の欠失により,DOX投与後の心筋線維化,心筋細胞の退行性変化による心機能低下が抑えられるメカニズムを明らかにした。特発性拡張型心筋症の重症度をsLOX-1測定し、検討した。DCM群と非DCM群を比較検討し、sLOX-1濃度とBNP濃度、心エコーパラメーターとは相関はなかった。次にドキソルビシン(DOX)心筋症とLOX-1との関連を検討した。LOX-1ノックアウトマウス(KO)は、野生型に比して、心機能が保たれた。KOでは、ROS産生、NF-κB活性化、TNF-α産生、VCAM-1発現、白血球浸潤が押さえられた。一方、DOXによる心筋細胞の退縮が抑制された。また、LOX-1の発現は主に心筋細胞に由来した。DOX心筋症の重症度は、心筋細胞のLOX-1の発現に相関する可能性が示唆された。研究を追考するためのシステムは整った状態に平成26年度には,達することはできた。しかしながら、対照となる拡張型心筋症患者数が少なく、更に研究参加の同意を得られないケースも有り、症例数が研究開始時に予想したより少ない。このため、現時点では統計的な解析を行う時期には残念ながら至っていない。このため、研究目的達成にまでは、時間を要すると考えられる。拡張型心筋症症例の蓄積を増やすために、他施設からの協力を要請する。心不全対照群に関しては、血液検査、心エコー検査、心臓MRIの解析を進め、可溶性LOX-1濃度と、心臓の繊維化、心機能の関連を更に推し進めていく。基礎研究として、DOX誘導性拡張型心筋症をLOX-1欠損マウス、野生型マウスを用いることにより、同心筋症におけるLOX-1血中濃度を測定していく。循環器内科拡張型心筋症患者群の症例の蓄積を可能な限り早急に行う。蓄積数が満たない際には,他施設との共同研究を考慮に入れる必要がある。平成27年度は、対照群である非拡張型心筋症群を早期にサンプル収集、解析を行っていく。現在、心臓MRIによる心筋の線維化評価が可能かどうかを検討しており、心臓MRIが有用であることが明らかになった際には、本研究のsLOX-
モダリテートの極性と基本概念

1.モダル論理の修正でなく、言語現象そのものに基づくモダリテート理論の研究を目標とした。モダリテートのすべての下位カテゴリーに共通の基本概念である必然性と可能性に着目し、その現れかたの違いを左右するものとして、意味論のレベルでは副次的概念を、語用論的レベルでは言語外の情報のかかわり方を吟味したが、とくに下位カテゴリーにおける極性の現れ方の違いに着目した。2.必然性を一方の極として、それにつづく可能性のさまざまな段階をスケール上に表すことを考えた。そのスケール上で、予想に反して、肯定部分と否定部分は、内部否定、外部否定のいずれにおいてもシンメトリーにならないことが明らかにされた。スケールのめもりと言語表現との関係については論文「モダリティ(II)概念と機能」の中で言及した。可能のさまざまな程度を図示する方法としては、他に二次元的グラフ表現も試みた。3.言語現象に見られる多様な極性と、その中でのモダリテートの極性について検討した。ことに否定極性との関係を考察した。それについて論文「否定極性の対極化作用」(五十嵐との共同執筆)でその一部を明らかにしたが、否定極性とモダリテートとの関係の解明は今後更に研究を深める必要がある。4.基本概念を軸とした、認識様態性と叙実性の関係については、特に、語用論的な立場をとっている文献などを検討し、また、言語外の背景を分類することによって、それに照らして適切な解釈を可能にするというアプローチなどを検討した。モダル現象を単純なモダル・非モダルの様式としてではなく、普遍的な言語現象の一部として広い枠の中で取り扱うためには更に多くの課題が残されている。
2型糖尿病の高リスク疾患関連遺伝子による新しい病態と分子機構の解明

2型糖尿病の発症には、生活習慣以外に遺伝要因も関与している。イヌイット民族における解析から、2型糖尿病の発症に強く関わる遺伝因子として、TBC1D4遺伝子の特定の遺伝子バリアントが見出された。TBC1D4はインスリン抵抗性に関与していることは知られているが、疾患に関連した分子機構の全容は解明されていない。本研究では、この特定の遺伝子バリアントを持つ日本人の臨床像を明らかにすること、ショウジョウバエを用いてTBC1D4の分子機構と脳機能への関与を解明することを目的に行う。本研究の成果は、2型糖尿病、認知機能低下の発症予防・治療薬の開発につながると考える。
分子マーカーを利用したコムギ近縁種の遺伝資源としての変異の解明

1.分析手法の確立:分子マーカとして,酵素を利用するアイソザイム,DNA断片の多型を利用するAFLP,葉緑体DNAのフィンガープリンティングについて,それぞれ分析条件の絞り込みを行なった。これをもとにそれぞれ複数の種を対象として,変異の解析を行なった。アイソザイムはコムギ近縁野生種であるAegilops属の3種で,AFLPは普通系コムギとその祖先種の二粒系コムギとタルホコムギ,葉緑体DNAでは普通系コムギと二粒系コムギに加え,二粒系コムギの母系の祖先とされるAe.speltoidesを対象とした。とくに葉緑体DNAのフィンガープリンティングでは,二粒系コムギから普通系コムギに至る母系が2つ存在することを明らかにしたほか,これまで不明であったそれらの起原地を解明するなど,多数の新知見を得た。2.新規手法の開発:コムギ近縁種全体で利用できる新しい分子マーカーを開発するため,我々がAe.umbellulataで発見したSINE配列の解析を行なった。その結果,この配列がコムギ・エギロプス属全体のほか,それらに近縁ないくつかの属にも存在し,また普通系コムギゲノム中に約10^4コピーと多量にしかも染色体全体にわたって散在していることを明らかにした。SINE配列をマーカーとして利用する可能性が確認できたため,エギロプス属の数種およびパンコムギを材料として,クローニングとDNA配列の読み取りを行なった。その結果,SINE配列には種特異的なもの,種を超えて存在し進化の初期に増幅したと考えられるものなど様々なものがあり,分子マーカーとして有用であることを確認した。3.野生集団の予備調査:平成13年度河原・森・安井の3名で約1ヶ月,シリア・トルコ・ギリシャで予備的調査を行なった。シリア・トルコでは各研究機関と将来の研究協力について協議し,あわせて自生地の観察を行なった。ギリシャでは,エーゲ海東部の島嶼で自生地を調査し種子の収集を行なった。平成14年度には,森がトルコでコムギの祖先野生種の分布を調査した。なるべく多様な分子マーカーを扱う手法を確立するため,以下のように分担して実験を行なった。1.河原がアイソザイム分析を担当した。コムギ・エギロプス属全体で実験条件の設定を行なったあと,エギロブス属コモパイラム節の2種とAegilops umbellulataについて,種内変異を観察した。コモパイラム節の2種については,それらが遺伝的に大きく分化していること,またAe.umbellulataについては種内の遺伝的分化が地理的分布とほぼ対応していることを明らかにした。2.コムギ・エギロプス属全体で利用できる新しい分子マーカーを開発するため,安井が近年Ae.umbellulataで発見したSINE配列の解析を行なった。その結果,この配列がコムギ・エギロプス属全体のほか,それらに近縁種なライムギ属やオオムギ属にも存在し,またパンコムギゲノム中に約10^4コピーと多量にしかも染色体全体にわたって散在していることがわかった。このことからSINE配列がマーカーとして有効に利用できることが確認できたため,現在Ae.umbellulataを材料として,クローニングとDNA配列の読み取りを行なっている。3.これまでに各種の手法が使われてきた普通系コムギを対象に,森がAFLPの分析条件の検討を行なった。コムギはゲノムサイズが非常に大きいため,合計7塩基を選択塩基とするシステムを新しく開発した。

普通系コムギ・栽培二粒系コムギ・タルホコムギの計90系統を用い,10組のプライマーを使ってAFLP分析を行なった。各系統ごとに487本のバンドを読みクラスター分析を行ったところ,Triticum machaとT.speltaはそれぞれ明瞭なクラスターを形成したが,T.aestivumとT.compactumは明瞭なグループに分かれなかった。4.森はまたDNAフィンガープリンティング手法の開発を試みた。精密なフィンガープリンティングを行うため,葉緑体ゲノムに存在する24のSSR(simple sequence repeat)座を探索した。コムギの倍数種およびエギロプス属の11種43系統を用いて解析したところ,このSSR座は核ゲノムのRFLPとほぼ同等の高い多型性を示し,変異の解析に利用できることが明らかになった。1.河原・森・安井の3名で,コムギ近縁野生種の変異解明のため,7月7日から8月3日まで,シリア・トルコ・ギリシャで予備的調査を行なった。シリアでは国際乾燥地農業研究センター(ICARDA),トルコではアンカラ大学のそれぞれ担当者と将来の研究協力について打ち合わせをし,あわせて自生地の観察を行なった。ギリシャではエーゲ海東部の島嶼(レスボス,キオス,サモス)で,自生地を調査し種子の収集を行なった。2.コムギ近縁種Ae.umbellulataについて,河原が種内の形態的変異を観察し,昨年度行なったアイソザイム変異と合わせて遺伝的分化について論文をまとめた。引き続き別の種で,実験を継続しているところである。3.安井が引き続き,コムギ・エギロプス属のSINE配列の解析を行なった。Ae.umbellulataおよび別の近縁種Ae.muticaから,Auファミリーに属するSINE配列,合計34クローンを単離した。そのDNA配列から,これらのクローンが大きく3つのグループに分けられることを明らかにした。種特異的なもの,種を超えて存在し進化の初期に増幅したと考えられるものなど様々なものがあり,さらに多くのクローンを得て,マーカーとしての適性を評価する予定である。4.森は栽培コムギの起原を明らかにするため、179系統の4倍性コムギと69系統の普通系コムギを用いて葉緑体DNAのフィンガープリンティングを行った。その結果、野生二粒系コムギの栽培化が肥沃な三日月地帯の北部で行われた可能性が高いこと、また、二粒系コムギから普通系コムギに至る母系が2つ存在することが明らかになった。1.森がムギ類近縁野生種の生態遺伝学的調査のため,6月7日から6月21日までトルコで調査を行なった。トルコ共和国のガジアンテップおよびカーラマンマラシユ近くの丘陵地帯において,コムギの祖先野生種の分布と頻度を調査した。2.コムギ近縁種Aegilops caudataについて,河原がアイソザイムを使い種内の遺伝的変異を調査した。実験は完了したが,一部データの再確認を行なっているので,論文は未完成である。3.森は栽培コムギのBゲノム親とされているAe. speltoidesの種内変異を明らかにし,四倍性コムギの起原を分子レベルで考察するため,78系統のAe. speltoidesからDNAを抽出し,葉緑体DNAのフィンガープリンティングを行った。
中途難聴者のメンタルヘルスを向上するための心理的支援策の検討

本研究では,難聴者がメンタルヘルスを悪化させないような心理的支援を行うための総合的な支援策を立てることを目的として,難聴者のメンタルヘルスに大きく影響すると考えられる複数の要因をとりあげ,その影響を検討することにした。具体的には,聞こえの状況,コミュニケーション手段,健聴者による難聴者の困難の見過ごし,難聴者に対する態度などをとりあげた。言語を身につけた後に病気にかかったりケガをしたりしたことなどが理由で難聴になった者(以下、中途難聴者)は、人生の途中で聴覚が低下あるいは損なわれたことによって日常生活の中でさまざまなストレスを経験しやすい。そのため、難聴にまつわるさまざまなストレス経験がもとでメンタルヘルスを悪化させることがないように、心理的な側面からも支援を行う必要がある。そこで、中途難聴者のメンタルヘルスに大きく影響すると考えられる複数の要因についてその影響を調べて、中途難聴者がメンタルヘルスを悪化させないような心理的支援を行うための総合的な支援策をたてることを目的として本研究課題を遂行することにした。今年度においては、中途難聴者の精神的健康に影響を及ぼすことが考えられる要因として、健聴者による難聴者に対する否定的な認知および難聴にまつわるストレス経験への対処行動を主にとりあげて検討を行った。これまでに国内外で行われた関連研究についてレビューを行い、難聴者への否定的な認知の特徴や難聴がもたらすストレスへの対処行動について検討を行い、精査を行った。また、研究代表者と研究分担者が主たる報告者となって、心理学関係の学会大会において難聴や難聴者の理解を深めるための対策について考えるシンポジウムを開催した。情報の発信だけにとどまらず、指定討論者や参加したさまざまな分野の研究者と意見交換を行い、次年度以降の研究に向けての有益な情報交換を行うことができた。音声言語を身につけた後に、病気になったり怪我をしたりしたことなどが理由で難聴になった者(以下、中途難聴者)は、聴力が低下したことによって健聴であったこれまでとは異なる生活をすることになり、日常生活のさまざまな面でストレスを経験しやすい。コミュニケーションがうまくいかないことから対人関係の中で孤独感や疎外感も経験しやすいと考えられる。そのため、こうしたストレス経験からメンタルヘルスを損ねることがないように、情報保障だけでなく心理的な面でも支援をする必要がある。本研究では、中途難聴者のメンタルヘルスに影響を及ぼすことが考えられる要因について実証的に検討を行い、その結果をふまえて難聴者への心理的な支援を行うための総合的な支援策を考えることを大きな目的としている。今年度においては、難聴者の言動に対するネガティブな態度の問題、難聴者の困難を軽視してしまうなどといった健聴者側の認知の問題、難聴者に対して必要な心理的支援の内容の問題について調査や実験、インタビューなどの手法を用いて検討を行った。また、心理学関係の学術大会において、研究代表者と研究分担者が主な登壇者となり、難聴者への偏見について考えるシンポジウムを行った。現在までの研究成果について情報発信をするだけでなく、次年度の研究課題に向けて有益な意見交換、情報交換をすすめることができた。研究課題を遂行していくために、研究代表者と研究分担者の間でメーリングリストや対面での打ち合わせを通じて積極的に情報交換や意見交換を行い、それぞれが担当する研究課題を進めていくことができた。そのため、研究課題の遂行はおおむね順調に進展していると考えられる。本研究課題は、中途難聴者の心理的支援策を考えることを目的に、支援に必要な要素を明らかにするために調査やインタビューの手法を用いて検討を行うものである。最終年度にあたる本年度は、以下のような研究を行った。まず、難聴者を対象にインタビューを実施し、難聴であることにともなう困りごとや必要と考える心理的支援などについて聞きとりをした。聞き取った内容を分類、整理し、支援が必要な具体的な内容や場面が明らかとなった。次に、難聴者を対象にウェブ経由で調査を行い、聞こえの状況と精神的健康との関連を検討した。聴力が低いほど精神的健康が低いとは限らず、むしろ身体障害者手帳を取得していない難聴者の方が精神的健康の指標が低いことも示された。さらに、難聴者が日常生活でどの程度困難を抱えているのか、また、健聴者は難聴者が日常生活でどの程度困難を抱えていると考えるのかを調査した。そして、両者が考える困難の程度にずれがみられるのかどうかを検証した。その結果、難聴者が回答した困難の程度に対して、健聴者が回答した困難の程度は低く、健聴者が難聴者の困難を低く認識することが明らかになった。加えて、本研究は、難聴者の精神的健康に関与する要因についても調べ、健聴者から理解されていないと思う難聴者や、これまでに健聴者から理解してもらえていないと感じた経験がある難聴者ほど、精神的健康が低いことを示した。最後に、難聴者と健聴者の相互作用モデルに関する理論が少ないことから、コミュニケーション上のすれ違いが生じやすい異文化間相互作用モデルに関する文献を精査し、難聴者と健聴者の相互作用に影響を及ぼす要因として、不安と不確実性を抽出した。そして、健聴者と難聴者の相互作用について場面想定の質問紙を実施し、特に開示されていない難聴者との相互作用において、健聴者は不確実性と不安の高さから接触を回避しようとすることが示された。

本研究では,難聴者がメンタルヘルスを悪化させないような心理的支援を行うための総合的な支援策を立てることを目的として,難聴者のメンタルヘルスに大きく影響すると考えられる複数の要因をとりあげ,その影響を検討することにした。具体的には,聞こえの状況,コミュニケーション手段,健聴者による難聴者の困難の見過ごし,難聴者に対する態度などをとりあげた。研究課題の遂行に向けて、研究代表者と研究分担者の間で積極的な意見交換、情報交換を進めることができている。そのため、研究課題の遂行はおおむね順調に進展していると考えられる。平成28年度が本研究課題の最終年度である。最終年度には難聴者に対してどのような心理的支援を行うことが有効かについての支援策を策定することを目標としている。そのために、ひきつづき、研究計画に記載した内容に関わる調査、実験、インタビューを進めていく予定である。具体的には、難聴者に対するネガティブな態度、難聴者の困難に対する健聴者の認知、難聴者自身の難聴に対する認知、などの問題について実証的に検討を進めていく予定である。心理学今後は、当初の研究課題の研究計画に記載したテーマの調査、実験、インタビューを進めていく予定である。具体的には、難聴者のアイデンティティの問題、難聴者のストレスへの対処行動の問題、難聴者に対するネガティブな態度とその軽減方法の問題について実証的に検討を進めていくことになる。当該年度においては、資料整理やデータ整理のための研究補助者を雇い、謝金に助成金を充てることを予定していたが、当初の予定よりも研究補助者の勤務時間が少なくなり、謝金の額が計画よりも低くなったため、次年度への使用額が生じた。当該年度においては、テキストデータ専用分析ソフトウェアを購入する計画であったが、本研究課題で収集されることになるテキストデータの詳細なデータ分析をすることが可能なフリーのソフトウェアがあることがわかった。そのために、当初計画をしていたテキストデータ専用分析ソフトウェアを購入をしなかったことから次年度の使用額が発生した。次年度使用額と翌年度分として請求した金額を合わせた助成金については、次年度に予定している調査・実験・インタビューのための経費、研究補助者への謝金、研究成果への報告に使用する予定である。次年度使用額と翌年度分として請求した額と合わせた助成金については、次年度に計画している研究課題を遂行するための情報機器(パーソナルコンピュータ、ディスプレイなどの周辺機器)、研究成果発表のための出張費、研究補助者への謝礼などに主に使用する計画である。
ナノチューブ構造を有する元素ブロックの空間を利用した光機能性材料の創出

一次元の炭素同素体である単層カーボンナノチューブ(SWNT)は、それ自身がナノレベルで制御された構造を有する元素ブロックであり、有機分子材料を配列する足場としての機能が期待できる。平成26年度の研究では、共有結合修飾によるピレン二分子会合体の形成土台・撮像台、としてSWNTを活用した。具体的には、ジアゾニウム塩を用いた一段階でのアリール付加反応を用いて、ピレンダイマーをSWNT上に形成した(Py-1-SWNT)。参照系として、ヨードフェニル修飾SWNT(PhI-SWNT)を介した二段階での修飾反応によりピレンモノマーをCNT側壁に連結した(Py-2-SWNT)。さらに、Py-1-SWNTおよびPy-2-SWNTにおいて、ピレン二量体および単量体が形成されていることに対する直接的な証拠が高分解能透過型電子顕微鏡(HRTEM)測定により得られた。Py-1-SWNTのHRTEM図では、明らかに2つのピレンが会合している様子が観察された。シーケンシャルTEM測定では、SWNTの揺れが見られるにもかかわらず、ピレンは会合構造を維持しており、ピレン同士の強い相互作用が確認された。一方、Py-2-SWNTのシーケンシャルTEM測定では、ピレン単量体がSWNT側壁にスタックすることなく立ち続ける様子が見られた。ピレンとSWNTをつなぐ架橋子として、比較的短く剛直なフェニレンスペーサーを用いたためであると考えられる。これらは、フラーレン以外の多環式芳香族化合物がSWNT側壁上でHRTEMにより可視化された初めての例である。26年度が最終年度であるため、記入しない。平成25年度は、貧溶媒注入法により、フラーレン-グラフェンおよびフラーレンーナノチューブーグラフェンの二元および三元ナノカーボン複合体を作製し、その光電気化学特性評価を行った。まず、3,5- (ジ-tert-ブチル)フェニル基をアリール付加反応により修飾した可溶性の化学変換グラフェン(f-CCG)を合成した。さらに、i)f-CCGとC60のo-ジクロロベンゼン(ODCB)混合溶液への貧溶媒(アセトニトリル)の注入、ii) FTO/SnO2電極上への泳動電着、による二段階手法により、C60ーf-CCG複合膜で修飾された電極FTO/SnO2/(C60+f-CCG)mを得た。走査型電子顕微鏡でその膜構造を観察したところ、球状のC60単成分クラスターが密に充填された構造に加え、f-CCG上にC60クラスターが凝集している構造が確認された。また、FTO/SnO2/(C60+f-CCG)mを作用極として用い、湿式三極系で測定した光電流作用スペクトルでは、C60 : f-CCG = 1 : 0.4 (w/w)の時に最大で6.0%(400 nm)の外部量子収率を示した。これは、C60単成分クラスターを用いた系(5.1%)よりも有意に高くなっている。C60クラスターとグラフェンの相互作用により、酸化スズ電極への電子輸送の効率が向上したためと考えられる。次に、i)C70、末端アルキル化単層カーボンナノチューブ(f-SWNT)の貧溶媒注入法によるクラスター化、ii)f-CCG溶液の添加、iii) FTO/SnO2電極上への泳動電着、による三段階手法により、(C70+f-SWNT+f-CCG)mで修飾された酸化スズ電極を得た。上記と同様に湿式三極系で光電変換特性評価を行ったところ、f-CCGの添加により光電流発生効率が低下することがわかった。これは、f-CCGが複合膜中でf-SWNTーC70クラスターによる多孔性ネットワーク構造の形成を阻害するためと考えられる。

これらは、フラーレン以外の多環式芳香族化合物がSWNT側壁上でHRTEMにより可視化された初めての例である。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、炭素などのナノチューブ構造を有する元素ブロックを土台として、電子受容性ユニットと電子供与性ユニットを配列させた超構造体を創出し、さらに、その構造体を電極上に薄膜化して高効率な光電変換素子を構築することを目的としている。平成25年度の研究では、一次元構造のナノチューブおよび二次元構造のグラフェンを、電子受容性分子であるフラーレンが配列する元素ブロックとしての機能評価を行うことができた。したがって、本研究はおおむね順調に進展していると言える。これまでに、ジアゾニウム塩を用いたアリール付加反応を用いて、ポルフィリンなどの電子ドナーを、SWNTやC60@SWNT、グラフェンなどのナノカーボンにフェニレンをスペーサーとして連結した材料を創出してきた。SWNTおよびグラフェンを用いた場合には、ポルフィリンの励起一重項状態からエキシプレックスが生成し、電荷分離状態を生成することなく、基底状態に速やかに失活してしまうが、C60@SWNTを用いた場合には、収率は低いながらも電荷分離状態の形成が確認された。平成26年度の研究では、(i) SWNTに導入するアリール付加基の割合(修飾率)、(ii)スペーサーの構造(長さ、剛直性など)、(iii) SWNT上でのドナー分子の位置関係(孤立vs.二分子会合)、などを種々検討し、効率の良い電荷分離・電荷輸送、ひいては高効率な光電流発生の実現を目指す。つまり、(i)ではC60@SWNTの修飾率を増加させることで、SWNTの電子的特性が失われ、効率よく電荷分離を起こすことが知られているポルフィリンとフラーレンの相互作用が、SWNTの電子的影響を受けずに実現できると予想される。また(ii)では、スペーサーの長さを最適化することで、エキシプレックス状態からの電荷再結合を抑制し、電荷が解離する効率を最大化できると期待される。さらに申請者らは最近、SWNTやグラフェン上に連結された電子ドナーユニット同士が、強い相互作用を示す隣接した位置に存在する系と、相互作用しない離れた位置に存在する系を作り分ける手法の開発に成功した(論文未発表データ)。(iii)では、得られた孤立あるいは二分子会合状態での化学修飾SWNTの詳細な構造ー物性相関を解明するとともに、その手法をピーポッドに応用する。
ヒトインフルエンザウイルスにおける「新たなレセプター特異性」の分子基盤

1991年以降ニワトリ血球凝集能を欠くヒトインフルエンザウイルス(H1,H3)が、1996年以降はガチョウ血球凝集能をも欠くウイルス(H3)が分離されるようになった。本研究ではこのヒトインフルエンザウイルスのレセプター認識の変化を分子レベルで解析し、以下の結果を得た。1.HAの発現系用いて解析を行った結果、H1,H3両亜型HAがニワトリ血球との結合能を喪失したのはHA上のレセプター結合領域を構成するアミノ酸である225番目、190番目のアミノ酸が各々変化したためである事を明らかにした。2.HA1領域のアミノ酸配列を基に進化系統樹を作製し検討した結果、1.の変異はH1HAでは1986年以降、H3HAでは1990年以降に各HA上に生じていた事がわかった。3.1996年以前と以後に分離されたウイルスのHA単独でのガチョウ血球との結合能を比較検討した結果、ともにガチョウ血球に対する結合能が著しく低下しており、これは、'96年以前のウイルスのHAでは189,190番目のアミノ酸が、また'96年以降のウイルスのHAでは226番目のアミノ酸が変化した結果である事がわかった。4.'96年以前のウイルスのHAを単独で発現させている細胞をシアリダーゼ処理するとガチョウ血球との結合能が回復した事から、HA上の189,190番目のアミノ酸変化はレセプター結合領域近傍にシアル酸を含む糖鎖の付加を促し、その結果HAとガチョウ血球との結合が妨害されるが、実際には同一ウイルス粒子上のシアリダーゼがこのシアル酸を切断し、ウイルス粒子としてはガチョウ血球との結合も可能となっていた事が示唆された。5.ウイルスにより識別される血球上のレセプター分子を解析した結果、特異的に識別されているのは糖蛋白質であり、糖脂室のレセプター結合特異性への関与は少ない事が示唆された。1991年以降、ニワトリ血球凝集能を欠くインフルエンザウイルス(H1、H3両サブタイプ)が分離されるようになり、年々その数が増している。本研究ではこの「新たなレセプター特異性」のメカニズムを明らかにするため1991年以降に分離されたウイルスをグループI :ニワトリ、ガチョウ両血球に対する凝集能を維持しているウイルス、グループII :ニワトリ血球に対する凝集能を失いガチョウ血球に対する凝集能を維持しているウイルス、に分け解析を行い以下の結果を得た。(1) H1、H3型HAを各々発現ベクターを用いてCos細胞上で発現させ各HAの血球吸着能を測定した結果、両亜型の両グループHAは共にニワトリ血球に対する吸着能を失っていた。これは、グループI、IIの血球凝集性の違いがHA上のアミノ酸の違いによるものではなく、HA以外のウイルス蛋白質による事を示唆している。(2)グループI、IIのHAがニワトリ血球との結合能を失った原因を明らかにするため、発現系、部位特異的変異法を用いて解析を行った。その結果、H1、H3ともにHA上のレセプター結合領域に生じたアミノ酸変化すなわち、H1HA : 225番目のアミノ酸の変化(グリシン→アスパラギン酸)が、またH3HA : 190番目のアミノ酸変化(グルタミン酸→アスパラギン酸)が原因である事が明らかとなった。

(3)HA1領域のアミノ酸配列を基にした進化系統樹から、(2)のアミノ酸変化はH1では1986年以降、H3では1990年以降に生じ、その後ニワトリ血球に対する凝集能の喪失という性質とともに今シ-ズンまで受け継がれている事が示された。(4) H1ウイルスでは、グループIとIIのウイルスのニワトリ血球凝集性の差はHA上の糖鎖がウイルスのノイラミニダーゼにより切断されるか否かによる可能性が強く示唆された。1991年以降A型ヒトインフルエンザウィルスのレセプター結合特異性は変化し、この原因は昨年度明らかにしたが、'96年以降、H3ウィルスは更に変化しガチョウ血球に対する結合能を喪失したウィルスが分離されている。本研究では変化を続けるH3HAのレセプター結合特異性の分子レベルでの解析を行った。1.'96年以前と以後に分離されたウィルスHAのレセプター結合特異性の違いを発現系を用いて明らかにした。'96年以前に分離されたウィルスのHAはHA単独ではガチョウ血球との結合能を喪失しているが、シアリダーゼ処理によりその結合能は回復した。一方、'96年以後のウィルスのHAもガチョウ血球との結合能を喪失しているが、これはシアリダーゼ処理によっては回復しなかった。2.ガチョウ血球との結合能喪失の原因とシアリダーゼ処理の結合能への影響の意義を明らかにした。[1]変異HAの作成及び解析から'96年以前のウィルスHAのガチョウ血球との結合能喪失は189番目、190番目のアミノ酸の変化(ともに1990年以降生じた変異)が原因である事、またこの両アミノ酸の変化があってもシアリダーゼ処理によりその結合能は回復される事からこの変化がレセプター結合領域近傍にシアル酸を含む糖鎖の付加を促し、その結果HAとガチョウ血球との結合能の低下を招いた事が示唆された。[2]'96年以後に分離されたウィルスHAのガチョウ血球に対する結合能の喪失は226番目のアミノ酸変化が原因で、シアリダーゼ処理によっても結合能の回復はみられない事から少なくともシアル酸を含む糖鎖の影響はないことが示唆された。3.'96年のウィルスが認識するニワトリ血球、ガチョウ血球上の糖蛋白質、糖脂質を検討した結果、ウィルスにより特異的に確認されているのは糖蛋白質であり、糖脂質はこのレセプター結合特異性への関与は少ない事が示唆された。
イテリメン語の語彙データベース構築と比較研究ー系統・接触関係の解明に向けてー

本研究では過去に記録された語彙データおよびすでに出版された言語資料から語彙データを整理し、さらにロシア連邦カムチャツカ地方におけるフィールド調査を実施して、新たにイテリメン語北部方言の語彙を記録・収集してイテリメン語南北方言語彙データベースを構築し、英語・ロシア語・日本語・イテリメン語で検索可能なシステムとしてインターネットで公開した。また構築したデータベースに基づきイテリメン語南北方言語彙の比較研究(小野2014)を行った結果、イテリメン語北部方言と南部方言で同起源の語が全体の75%を占め、残りの25%は北部方言に固有の語が8割、南部方言に固有の語が9割を占めることが明らかになった。本年度は、これまでに収集した語彙データの整理、辞書などの既存の出版物におけるイテリメン語資料の電子化を進めた。1.これまでに収集した語彙データの整理と分析:古いワープロソフト、表計算ソフトなど、フォント・文字コードやフォーマットの異なる語彙データをUnicodeでエンコーディングし、データベースソフトウェアを使用してデータの統合を継続した。また語彙データの公開に必要なシステムの構築を開始し、障害となる問題の解決策を検討した。2.語彙データベースに付属する音声データの分析を開始した。過去のフィールド調査により得られたイテリメン語の録音データをデジタル化し、語彙データベースに使用可能な形式への加工を開始した。3時間分の録音から、375の語彙および例文の音声データ(WAV形式)の加工と整理を行った。3.昨年度ロシア科学アカデミー言語学研究所で収集した1930年代1970年代のイテリメン語の手書き資料を分析し、小野(2012)として論文を発表した。また、既存の出版物の語彙データを電子化する際のデータ構造について検討し、様々な表記に対する標準化のルールを設定した。具体的には、手書き文字の認識と電子化の際の表記の対応ルール作成、出版物によって異なる表記(キリル表記とラテン表記)の対応とその標準化および国際音声字母による表記の一元化、語彙データの出典(著作名、ページ数、話者、方言、録音資料など)に関する情報構造の検討、使用するデータベースソフトウェアの検討、成果公開のための基盤整備に着手した。本年度は前年度に引き続き、これまでに収集した語彙データの整理、辞書などの既存の出版物におけるイテリメン語資料の電子化を進めた。今年度新たに入手した出版済みイテリメン語テキスト(キリル文字ベース)の電子化を開始し、新規語彙のデータベースへの登録を行った。2.カムチャツカ半島(ロシア)におけるイテリメン語のフィールド調査を実施し、延べ45時間分の言語音声録音資料を得た。またイテリメン語話者に対する詳細な語彙調査を実施した。3.前年度に引き続き、語彙データベースに付属する音声データの分析を行った。20時間分の録音から語彙および例文の音声データ(WAV形式)の加工と整理を行った。語彙データベースへ音声データを統合するためのデータベース構造を策定し、各語彙ごとおよび例文ごとの音声データのクリッピングを行った。また音声データを使用して、話者個人、年代、方言による発音の違いを分析した。南北方言による語彙の違いやコリャーク語、ロシア語などからの借用の状況についての考察を行った。4.ロシア科学アカデミー言語学研究所で収集した1930年代1970年代のイテリメン語の手書き資料の分析を継続した。分析のためにFLExというソフトウェアを使用し、FLExを使用した語彙データベースの構築に関する論文を発表した(小野,吉岡2013)。本年度は主として過去に収集した語彙データの整理、データ構造の分析と検討を行った。1.過去に収集した語彙データの整理・分析:古いワープロソフト、表計算ソフトなど、フォント・文字コードやフォーマットの異なる語彙データをUnicodeでエンコーディングし、データベースソフトウェアを使用してデータの一元化を開始。過去のフィールド調査により収集した音声・映像をPCで分析可能な形にエンコードし、語彙音声の切り出しを行った。また文字起こしをしたテキストの形態素分析を行って発表した(小野2011)。2.新たな語彙データの収集:ロシア科学アカデミー言語学研究所を訪問し、研究所が所有する1930年代-1970年代のイテリメン語データを収集して、その電子化を行った。カード形式の手書き資料についてはスキャンしてPDF画像として電子化し、そのデータ構造の解析を開始した。さらにロシアの研究者による1980年代のイテリメン語調査の録音データを入手した。3.文献からの語彙データの整理:文献資料の語彙データを電子化する作業を開始した。4.データベース構築のためのフレームづくり:以上のような、様々な形式のデータをできるだけ統一し、データベースを構築するためのフレームの検討を開始した。自身のフィールドワークにより収集した音声・映像資料をテキストに起こす場合には、文字のエンコーディングについての標準化が確立されつつあるが、過去の研究者の手書き資料を文字に起こす作業の際のトランスクリプションおよびエンコーディングのルールについて、検討を開始したところである。本年度はこれまでにフィールドで収集した語彙データを整理し、辞書などの既存の出版物の方言別語彙データとともに語彙データベースへの登録を行った。またこれらのデータに基づいて、イテリメン語南北方言の語彙の分布に関する研究を実施した。

1.これまでに収集した語彙データの整理と分析:古いワープロソフト等、フォントや文字フォーマットの異なる語彙データをUnicodeでエンコーディングし、データベースソフトウェアを使用してデータの統合を行った。2.語彙データベースに付与する音声データの分析を実施した。過去のフィールド調査により得られたイテリメン語の録音データをデジタル化し、語彙データベースに使用可能な形式への加工を行った。具体的には15時間分の録音から語彙および例文の音声データ(WAV形式)の加工と整理をし、語彙データベースに統合するため、各語彙ごとおよび例文ごとの音声データのクリッピングを行った。3.ウェブ上で上記の語彙データベースを公開するため、ウェブ表示用のコンテンツと語彙検索システムの開発を行った。キリル表記およびラテン表記のイテリメン語辞書ページ、語彙検索システム、音節構造検索システムを開発し、それぞれのページについて日本語、英語、ロシア語版を作成した。イテリメン語のキリル変形文字などの特殊文字を入力するため、ウェブページ上にソフトキーボードを設置した。また各語彙の例文の表示・非表示や日本語訳の表示・非表示が選択できるようにした。4.作成した語彙データベースに基づいてイテリメン語南北方言の比較研究を行い、隣接するチュクチ・カムチャツカ諸語のチュクチ語、コリャーク語の語彙の分布との関連を分析して論文(小野2014)を発表した。最終年度はイテリメン語南北方言語彙データベースの編集と公開を行った。具体的には(1)これまでに出版された語彙データの整理と分析;(2)南北方言語彙の比較;(3)音声データの収集およびデータベース用音声の加工;(4)語彙データベースと音声データの統合という方法により遂行した。データベースでは南北方言による語彙の比較ができるほか、音声の確認、例文の参照、音節構造の検索ができるように工夫した。研究期間全体を通じて、本研究では過去に記録された語彙データおよび既に出版された言語資料から語彙データを整理・分析し、さらにロシア連邦カムチャツカ地方におけるフィールド調査を実施して、新たにイテリメン語北部方言の語彙を記録・収集した。具体的には、ロシア科学アカデミー言語学研究所にて収集した1930-1970年代の手書き資料のデータ構造の解析を行い、手書き文字の読み取りとデータの入力を行い、平行して過去に収集したさまざまな形式の語彙データ(古いワープロソフト、表計算ソフトなど、フォントや文字コードが異なるデータ)をUnicodeでエンコードし直して、データ形式と構造の統合を行った。フィールド調査では、ロシア・カムチャツカ地方チギリ地区チギリ村にてイテリメン語話者の協力により、延べ45時間分の録音音声資料を得た。これら古いデータと新しいデータを統合し、南北方言語彙データベースを構築して、イテリメン語南北方言における語彙の比較研究を行い、その成果を小野(2014)として発表した。
消化管の胆汁酸制御を標的とする水産由来の食生活設計による脂肪性肝疾患の予防研究

一方taurine 0.5%含有水をFxr欠損マウスに4週間摂取させると肝臓、血中のトリグリセリドの減少とALT,ALP活性の低下が認められた。Taurine 0.5%含有水10日間摂取により野生型マウスでは,消化管管腔内と門脈中でtauro-beta-muricholic acidとtaurocholic acid濃度の増加が認められ、肝臓内のこれらの胆汁酸濃度の増加も認められた。肝臓の胆汁酸合成の律速酵素のCyp7a1の発現増加が認められ、回腸のFXR標的遺伝子のFgf15やShpのmRNAレベルの減少が認められた。これらの結果はtaurine摂取は胆汁酸動態を変化させることにより消化管FXRシグナルの減弱を誘起させる可能性を示した。生活習慣病等の疾患を予防する機序に関連する消化管の胆汁酸マーカーを同定することを目的として実験した。胆汁酸マーカーを同定するためのモデル系として脂質代謝異常が認められ、脂肪性肝疾患のモデルと考えられるfarnesoid X receptor(Fxr)欠損マウスを用いた。生活習慣病を予防する機能があると考えられる魚油を用い、コントロール食(コーン油)と魚油添加食(魚油とコーン油)を4週間摂取させた。魚油添加食ではコントロール食に比べ肝臓、血清中の脂質レベルが有意に低下し、肝臓の肥大が軽減し、肝障害マーカーも有意に低下した。一方魚介類に多く含まれる機能性成分であるタウリンをFxr欠損マウスに10日間摂取させる実験系と、C57BL/6Nマウスの食餌中にリトコール酸を0.8%添加する事により胆汁うっ帯を起こさせる系にタウリンを10日間併用する実験系も実施した。Fxr欠損マウスにタウリンを摂取させると、肝臓の形態変化が認められた。またC57BL/6Nマウスにおけるリトコール酸による胆汁うっ帯型肝障害はタウリン併用により有意に軽減した。これらの事よりFxr欠損マウスへの魚油添加食を与える解析系、タウリンを与える実験系、C57BL/6Nマウスにリトコール酸とタウリンを併用する実験系により、肝臓、消化管内の胆汁酸組成変動の解析を実施する事とした。胆汁酸組成の分析系として3α-ヒドロキシデヒドロゲナーゼ(3α-HSD)固定化酵素カラムのHPLCシステムを用い、マウスで含量の多いムリコール酸を含む16種類の胆汁酸定量評価系を構築した。今後これらの実験系マウスの肝臓、消化管管腔内の胆汁酸組成を解析することにより疾患予防に関連する胆汁酸マーカーを同定していく予定である。1年目で脂肪性肝疾患モデルであるFxr欠損マウスに魚油を摂取させる実験系、タウリン処理の実験系とC57BL/6Nマウスへのタウリンと胆汁うっ帯を起こさせるリトコール酸を併用する実験系の合計3つの実験系を用いることが出来ることが明らかになった。また18種類の胆汁酸定量評価系を構築出来た事より、研究の基盤となる部分が整ったと考えられ、おおむね順調に進展していると考えられる。いか、たこ、かき等の水産物に多く含まれるタウリンによる脂肪性肝疾患の改善と胆汁酸組成変化について明らかにするため脂肪性肝疾患モデルのFxr欠損マウスに0.5%および2%タウリン含有水を4週間摂取させた。0.5%タウリン群で顕著な血清のalanine aminotransferase (ALT)活性とalkaline phosphatase(ALP)活性、triglyceride(TG)レベルの低下が、肝臓のTGとnon-esterified fatty acid(NEFA)レベルの低下が認められ、脂肪性肝疾患の改善が認められた。一方2%タウリン群では肝臓、血清のTGレベルの低下は認められたが、その他のマーカーは有意に低下しなかった。肝臓の胆汁酸組成はタウリン処置群(0.5%と2%)でtaurocholic acid (TCA)とtauro-β-muricholic acid(TβMCA)の有意な減少と、CAの有意な増加が認められた。糞中の胆汁酸組成はタウリン処置群(0.5%と2%)でdeoxycholic acid (DCA)の低下が認められ、2%タウリン群でβmuricholic acid(βMCA)の増加が認められた。野生型(C57BL/6N)マウスに2%タウリン含有水を摂取させた時の回腸上皮細胞内ではcholic acid (CA)とβMCAレベルの顕著な減少が認められ、TCAとTβMCAレベルも減少傾向となり,総胆汁酸レベルが有意に減少した。この時回腸のFXR標的遺伝子のShpやFgf15mRNAレベルの発現低下が認められ、回腸FXRシグナルが減弱している可能性が示された。本年度はタウリン処置時の研究を発展させた。一部胆汁酸の標品の入手に手間取り胆汁酸組成分析が遅れたが、タウリン処置マウスの種々の組織、血液、糞中の胆汁酸を測定した。タウリン処置による病態改善時の胆汁酸組成変化についても明らかになってきたことより、おおむね順調に進展していると考えられる。

肝臓の胆汁酸合成の律速酵素のCyp7a1の発現増加が認められ、回腸のFXR標的遺伝子のFgf15やShpのmRNAレベルの減少が認められた。これらの結果はtaurine摂取は胆汁酸動態を変化させることにより消化管FXRシグナルの減弱を誘起させる可能性を示した。Fxr欠損マウスに魚油を摂取させる実験系、タウリン処理の実験系とC57BL/6Nマウスへのタウリンと胆汁うっ帯を起こさせるリトコール酸を併用する実験系の合計3つの実験系により得られた肝臓と消化管腔内の胆汁酸組成を解析し、疾患の予防に関与する胆汁酸マーカーを同定する。さらにこの胆汁酸マーカーレベルの変動と関連する腸内細菌のポピュレーションの変化との関連を明らかにする。1.魚油添加による脂肪性肝疾患の改善時の胆汁酸組成変化を明らかにすることにより、タウリン処置の場合と比較して、共通の変動パターンを明らかにする。2.タウリンと魚油の配合食による脂肪性肝疾患の改善効果、胆汁酸組成変動のパターンを明らかにする。胆汁酸分析のためのHPLC装置の一部を購入する予定だったが、学内予算により購入できたため、その予算分が余り、次年度使用額が生じた。1年目に胆汁酸測定系を立ち上げたが、これが予想より安価に構築出来たため、繰り越し金が生じた。当該年度は予定通りの実験を実施し、予定通りの予算を使用した。最終年度では動物実験の動物の使用数を予定していたものより増やして実施する予定である。腸内細菌叢の定量分析系の構築が必要なため、その分析系の構築のための予算として使用する。
赤血球機能からみた敗血症時の血管透過性亢進制御とその異常

侵襲下に生じる血管透過性亢進は、臓器障害発症の一因である。本研究は、血小板あるいは赤血球の血管透過性亢進に対する調整力の有無を確かめることにある。マウス盲腸結紮穿孔(CLP)モデルにおいて、バイオインピーダンス法で測定した細胞外液増加率と血中可溶性VE-Cadherin濃度は正に相関した。血小板と赤血球はcadherinの正の調整因子とされるが、CLP早期は赤血球の生理学的変化は乏しく、血小板依存性のAngiopoietin-1(Ang-1)減少が顕著であった。血小板由来のAng-1含有血漿の投与は、CLPモデルの血管透過性亢進を抑制したことから、治療モジュレーションとなりうると考えられた。本研究初年度にあたり、まず1マウス(C57BL/雄)盲腸結紮穿孔(CLP)による敗血症モデルを作成した。本モデル作成にあたって、個体差および生存率が不安定となる要因を、1腹腔内脂肪による穿孔部の被覆閉鎖および2盲腸虚血の程度と考え、腹腔内脂肪切除+盲腸虚血を伴わないCLPモデルを作成した。同モデルにおいて、1)重症度に応じた赤血球の生理学的異常を明らかにした。すなわち、穿孔の程度(使用する針1826Gの相違)に応じて、CLP2448時間後に、赤血球変形能の低下(ektacytometry techniques, RheoScanによる測定)が生じることを確認した。さらに、2)敗血症時の血管透過性亢進に関する血管内皮障害の指標として、隣接する血管内皮間の接着装置障害を示唆する可溶性VE-カドヘリンの血中濃度が、侵襲度に伴い上昇することを確認した。3CLP48時間の時点で、赤血球変形能と血中可溶性VE-カドヘリン濃度との間に負の相関を認めることが判明した。現在、各組織の血管内皮あるいは細胞間の接着装置tight junctionにおけるカドヘリン発現の変化を、免疫組織学的に検討するとともに、血管透過性亢進の程度の評価を行っている。次年度においては、隣接する血管内皮間の接着装置カドヘリンの発現を調整する複数の因子、特に血中および赤血球中のスフィンゴシン1リン酸(S1P)の推移を検討することにより、赤血球の生理学的変化と赤血球のもつ血管透過性亢進調整機構の異常の有無との関係について検討を進める。敗血症時の制御困難な血管透過性亢進を調整、制御する方法について、赤血球の機能異常の側面から検討を行う予定である。盲腸結紮穿孔(CLP)モデルの作成において、重症度、生存率が一定せず、その要因を明らかにして、安定したモデルを作成するのに予定以上の時間を必要とした。現在、安定したモデルが作成でき、やや計画が遅れているものの、順調に進んでいる。前年度までに、腹腔内脂肪切除を加えた、ばらつきの少ない改変CLPモデルを作成した。このモデルにおいて、生体バイオインピーダンス法(以下BIA法)を用いて、体液分布の時間的な推移を検討した。その結果、以下の事が明らかとなった。中等度CLPモデル(虚血あり, 21G針貫通法, 36時間後生存率約75%)において、血管外水分量(ECF%)のピークは3648時間であり、生存例においては、48時間以降改善傾向となった。本モデルにおいて、BIA法上のCLP前(0h)ECF%は約4546%で、36h後のECF%はsham群で約49%、CLP群で約56%前後であった。さらに、透過性亢進の病態との関係を検討したところ、36hの時点において、BIA法におけるECF%変化率(36h-ECF%/0h-ECF%)と血中sVE-カドヘリン(血管透過性亢進に関する血管内皮障害マーカー)との間には正の相関がみられ、BIAにより血管透過性亢進状態の評価が可能と考えた。現在、血中の可溶性VE-カドヘリン(sVE-カドヘリン)と、カドヘリンの正の調整因子であるAngiopoietin-1、スフィンゴシン1リン酸(S1-P)の推移について、さらにこれらの供給源である赤血球と血小板の数的・機能的変化との関係について検討をすすめている。これまでに、36h後の血小板数とAngiopoietin-1の血中濃度との間に相関関係、一方、赤血球変形能とsVE-カドヘリンとの間にも緩やかな相関がみられことが分かった。今後、赤血球と血小板が供給源となる正の調整因子S1-Pについて、血中および赤血球中のS1-P濃度の推移と、BIAからみた体液分布の異常との関係を解析予定である。現在、CLP作成36hの段階で、生存バイアスの考慮をほとんど必要としないモデルが作成され、このモデル上で、血管透過性亢進の評価、さらに透過性亢進に関わる障害マーカー(sVEカドヘリン)の態度、および細胞間接着の正の調整因子Ang-1の推移についてある程度解析が行えた。一方、CLP後の時間経過において、赤血球変形能が変動・低下することは測定上確認できたが、赤血球機能と赤血球のS1P貯留・放出能力についての検討が遅れている。

赤血球をある基準に基づいて層別化・分類採取する予定(変形能が異なる一群が分離採取可能と予測している)であるが、その準備に予定以上の時間を要した事、また、費用面を考慮すると頻回の測定が難しいため、ある程度の手法が固まった後、S1Pの測定を行う予定とした事が、計画が当初より遅れている理由である。現在、層別の分類・採取を試みている段階であり、手法を固めて再現性が確認でき次第、計画を早急に進める予定である。侵襲下に生じる血管透過性亢進のメカニズムとその調整機構を検討するために、C57BL/6マウスを用いて、中等度の盲腸結紮穿孔モデル(CLP)を作成した。本モデル上で、36時間までの水分布状況(細胞外水分量・率等)を生体バイオインピーダンス法(BIA法)を用いて測定した。さらに血管透過性亢進を生じる一因である血管内皮細胞間の接着装置の障害程度を評価するために、血中可溶性VE-カドヘリン(s-VE-カドヘリン)を測定し、BIA法測定結果との関係を検討した。次に、血管内皮細胞間の接着装置に対する正の調整因子であるAngiopoietin-1を同モデルに投与し、BIA法測定値の変化、生体内の水分布状況の変化を確認した。本モデルにおいては、2436時間の間に、経時的に侵襲度に応じて、細胞外液量(ECW)は前値(0h値)の約110%まで増加した。この過程でs-VE-カドヘリンは経時的に増加し、ECW%変化率(36h/0h ECW%)と正の相関を示し、血中Angiopoietin-1とは負の相関を示した。Angiopoietin-1はその時点の血小板数と相関したことから、血管透過性亢進と血小板機能との関係が強く伺われた。そこで同種マウスから得た血小板から、富血小板血漿、さらに濃厚Angiopoietin-1液を作成し、CLPマウスに投与し、血小板の血管透過性亢進に対する調整効果を検討した。CLPマウス後0,12,24hにAngiopoietin-1濃厚液を投与することにで、BIA上のキャパシタンス、レジスタンスの低下の抑制と、細胞外水分量の増加が抑制された。侵襲下に生じる血管透過性亢進は、血小板によって強く制御されており、血小板をmodulateすることで、制御困難な侵襲下の血管透過性亢進を調整できる可能性が考えられた。侵襲下に生じる血管透過性亢進は、臓器障害発症の一因である。本研究は、血小板あるいは赤血球の血管透過性亢進に対する調整力の有無を確かめることにある。マウス盲腸結紮穿孔(CLP)モデルにおいて、バイオインピーダンス法で測定した細胞外液増加率と血中可溶性VE-Cadherin濃度は正に相関した。血小板と赤血球はcadherinの正の調整因子とされるが、CLP早期は赤血球の生理学的変化は乏しく、血小板依存性のAngiopoietin-1(Ang-1)減少が顕著であった。血小板由来のAng-1含有血漿の投与は、CLPモデルの血管透過性亢進を抑制したことから、治療モジュレーションとなりうると考えられた。H27年度に予定していた血中および赤血球中のスフィンゴシン1リン酸(S1P)、およびそのほかの調整因子の検討・測定を現在、開始したところである。まず、作成したモデル上でのS1Pの推移を検討し、H28年度に計画していたS1Pの赤血球からの放出・運搬に関わる因子についての変動の検討を、計画通り行う予定である。現在、作成したCLPモデルにおいて、赤血球の機能的変化が経時的に生じていることは確認できている。今後、赤血球そのものをある基準に基づいて層別に分類・採取を行い、分類赤血球毎の赤血球変形能、赤血球中のS1P測定をすすめるとともに、血中のS1P減少との関係等について検討をすすめる予定である。また、Angiopoietin-1、あるいはS1Pの豊富な濃縮血漿によって、血管透過性亢進の調整や組織学的な障害の抑制が可能かについて、BIA法による評価と組織学的な評価を通してすすめる予定である。救急集中治療