hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
粘弾性特性の導入にもとづく高分子材料の切削過程シミュレーション法の開発

高分子材料の切削過程を解析的に把握することを目的とし,材料の粘弾性特性を導入した構成方程式を定め,材料の特性定数および変形応力特性を求め,これをもとに有限要素法を用いて切削過程のシミュレーション解析を試み,その有用性を明らかにした.以下に得られた結論を述べる.1.高分子材料の構成方程式を定めるための粘弾性モデルとして,簡単な3要素固体モデルが実用的であり,材料の粘弾性挙動はこのモデルで十分表現可能なことを,硬質塩化ビニル樹脂を具体例として確かめた.2.このモデルでは,切削過程の解析に必要な3軸応力系での特性定数を,単軸応力系のそれらから容易に求められる.そして単軸応力系の特性定数は単軸圧縮・除荷試験によって求めることができる.3.塑性変形域までを包含する力学モデルとして, 3要素固体モデルに塑性要素を直列に結合した4要素粘弾塑性モデルが適用できる.4.塑性変形中のひずみ速度履歴,温度履歴は応力に影響を及ぼさず,応力は着目する点でのひずみ,ひずみ速度および温度のみで決まり,応力特性式はひとつの実験式として得られる.5.4要素粘弾塑性モデルを用いる有限要素法シミュレーション解析を定式化し,反復収束法によって定常切削状態を求めることができる.そして簡単な粘弾塑性モデルの設定にも拘わらず,解析によって得られた切削状態は実験結果とよく一致し,大せん断角,小切りくず接触長さ,小切りくずカール半径などのほか,応力分布,ひずみ分布,温度分布などについても高分子材料の切削の種々の特性をよく予測することができることを,塩化ビニル樹脂を具体例として明らかにした.高分子材料の切削過程を解析的に把握することを目的とし,材料の粘弾性特性を導入した構成方程式を定め,材料の特性定数および変形応力特性を求め,これをもとに有限要素法を用いて切削過程のシミュレーション解析を試み,その有用性を明らかにした.以下に得られた結論を述べる.1.高分子材料の構成方程式を定めるための粘弾性モデルとして,簡単な3要素固体モデルが実用的であり,材料の粘弾性挙動はこのモデルで十分表現可能なことを,硬質塩化ビニル樹脂を具体例として確かめた.2.このモデルでは,切削過程の解析に必要な3軸応力系での特性定数を,単軸応力系のそれらから容易に求められる.そして単軸応力系の特性定数は単軸圧縮・除荷試験によって求めることができる.3.塑性変形域までを包含する力学モデルとして, 3要素固体モデルに塑性要素を直列に結合した4要素粘弾塑性モデルが適用できる.4.塑性変形中のひずみ速度履歴,温度履歴は応力に影響を及ぼさず,応力は着目する点でのひずみ,ひずみ速度および温度のみで決まり,応力特性式はひとつの実験式として得られる.5.4要素粘弾塑性モデルを用いる有限要素法シミュレーション解析を定式化し,反復収束法によって定常切削状態を求めることができる.そして簡単な粘弾塑性モデルの設定にも拘わらず,解析によって得られた切削状態は実験結果とよく一致し,大せん断角,小切りくず接触長さ,小切りくずカール半径などのほか,応力分布,ひずみ分布,温度分布などについても高分子材料の切削の種々の特性をよく予測することができることを,塩化ビニル樹脂を具体例として明らかにした.高分子材料の切削過程を解析的に把握するために、材料の粘弾塑性的特性を導入した構成方程式を定め、各種高分子材料の切削過程の解析に必要な特性定数および流動応力特性を求め、これをもとに有限要素法を用いて切削過程のシミュレーション解析を実現することを目的としているが、61年度は主に硬質塩化ビニル樹脂を具体例として研究し、かなりの成果を挙げることができた。以下にその成果の概要を記す。1.高分子材料に共通の粘弾塑性変形挙動を表現する簡単な力学的モデルとしては、フォークト要素にばね要素および塑性要素を直列に結合した四要素固体モデルが実用的であり、このモデルを用いれば、三軸応力系の特性定数は単軸応力系のそれらを用いて容易に求められることが明らかとなった。2.単軸応力系の材料特性定数は、万能材料試験機による簡単な静的圧縮および除荷試験によって容易に求められることが明らかとなった。3.材料の流動応力特性は高速単軸圧縮試験によって求められ、解析に有用な流動応力特性式を求めることができた。4.境界條件である工具すくい面摩擦特性は、すくい面分割工具を用いてすくい面摩擦応力分布およびすくい面垂直応力分布を求めることによって、有用な摩擦特性式を得ることができた。5.以上で得られた特性定数および流動応力特性式、さらにすくい面摩擦特性式を用い、粘弾塑性理論にもとづく有限要素法シミュレーション解析を行ない、これを実験結果と比較検討し、この解析法によって、硬質塩化ビニル樹脂の切削過程の特性を明らかにすることが可能であることがわかった。なお、他の材料についても、62年度にさらに検討する予定である。
哺乳動物イオンチャネルの機能的発現と分子機構解析

イオンチャネル蛋白質は、様々な刺激に応じてイオンを選択的に透過することで生体電気信号の発生を制御する。このように重要な生理現象を担うイオンチャネルの機能発現の分子機構の解明には原子レベルでの構造情報が必要である。本研究では、医学・薬学分野で重要な哺乳動物由来のイオンチャネルに対して、分子の構造に詳細な情報を与える全反射赤外差分光解析を適用した。様々なカリウムチャネルの中から細胞の静止膜電位に関係するKCNK1チャネルが赤外分光解析に有望であることを明らかにし、イオン選択フィルタの構造情報を得ることに成功した。カリウムイオンチャネルKcsAに代表されるように、いくつかのX線結晶構造が報告されているが、医学・薬学分野で重要なヒト由来のイオンチャネルの構造解析は、タンパク質の機能的発現方法を含めて、極めて困難な課題である。本研究では、代表者らが中心となって開発を進めている全反射赤外分光法を哺乳動物由来イオンチャネルに適用し、イオンや分子との相互作用やゲートの開閉に関する分子振動の変化から原子レベルでの構造情報の取得を目指した。平成24年度に、種々のカリウムチャネルについて緑色蛍光タンパク質GFPとの融合タンパク質を発現し、蛍光検出ゲル濾過カラムクロマトグラフィー(FSEC解析)によりスクリーニングを行い、細胞の静止膜電位に関係するKCNK1チャネル(TWIK-1とも呼ばれる)が赤外分光解析に最も有望であることが分かった。その後、KCNK1について、カリウムイオンおよびナトリウムイオン存在下での赤外分光計測に着手した。最終年度の平成25年度は各種アルカリイオンや部位特異的変異タンパク質についての赤外分光解析も行った。その結果、赤外差スペクトルとKCNK1のイオン選択性の特性と関連づけられる結果が得られた。研究結果の一部については、日本生物物理学会においてポスター発表を行った。本研究は主に以下の2つの研究項目からなる。(1)哺乳動物イオンチャネルの蛋白質発現系構築、(2)全反射赤外差分光計測によるイオン結合誘起赤外差スペクトル計測平成24年度は哺乳動物由来のイオンチャネルの全反射赤外分光法によるイオンータンパク質間相互作用の解析を目指して、哺乳培養細胞でのイオンチャネル蛋白質の試料調製を試みた。様々なカリウムチャネルとGFPとの融合タンパク質のコンストラクトを作成し、ゲル濾過クロマトグラフィーと蛍光検出を組みあせたFSEC解析を行った。その結果、いくつかのコンストラクトで良好な結果が得られた。FSEC解析の結果、機能的な発現が良好と認められるカリウムチャネルに対して、Hisタグを結合したコンストラクトを作成し、タンパク質の大量発現を行った。界面活性剤で抽出した後に、リン脂質と混合し、透析を行うことでリポソームに再構成した。このような試料に対して、全反射赤外分光解析を行い、2種類の緩衝液(一方はカリウムイオンのみを含む、他方はナトリウムイオンのみを含む)存在下で計測した赤外吸収スペクトルの差分を解析した。その結果、細菌由来のカリウムチャネルであるKcsAと似た赤外差スペクトルが確認できた。カリウムチャネルに特徴的なイオン選択フィルターに由来するシグナルであるものと推察される。哺乳動物由来のカリウムイオンチャネルのタンパク質発現と精製に成功した。さらに、予備的ではあるがイオン結合誘起赤外差スペクトル計測にも成功している。良好な結果が得られているカリウムイオンチャネルに対して、さらに赤外分光解析を進める。様々なカリウムイオン濃度での計測を行うことで、タンパク質ーイオン間の相互作用の強さを解離定数から議論する。また、変異体を作成し、得られた信号の帰属を試みる。カリウムチャネルのタンパク質試料調製用の試薬やガラス器具等の消耗品の購入に充てる。また、分担者の中條は電気生理実験や蛍光観察実験などに必要となる試薬や光学部品などの購入に充てる。
ジルコノセン錯体を用いた高選択的触媒反応の開発

ジルコナサイクルのα位に脱離基CH_2ORを持つ場合、OR基が脱離して2重結合が生成し、アセチレン類とアリルエーテルとの分子間反応ではアセチレンのアリルジルコネーション化合物が生成することを見いだしてきた。本研究においては一つの分子内に2重結合とアリルエーテル部分を持つ分子の環化反応を試みた。出発物質はブタジエンのテロメリゼーションでパラジウムを触媒として簡単に得られる。まずジルコノセンジブチルを用いて量論反応を試みたところ、98%以上の高い収率で目的とする環化アリル化生成物が得られた。環化生成物のシス-トランスの比は30:70程度である。ジルコニウムは1倍より少し多めに用いるとこの比が変化することを見いだした。これは環化反応生成物が触媒量のシルコニウムの存在下シス体からトランス体に異性化するからである。この異性かを利用すると環化生成物のシス-トランスの比は最大で92:8にまで高めることができた。ジュルコノセンジクロリドとブチルマグネシウムとの触媒系を利用すると同様の環化反応が、触媒的に進行することを見いだした。この際、量論反応で見られたようなシス体からトランス体への異性化反応は観測されなかった。触媒反応の収率は60%から80%程度で室温で24時間以内に反応は完結することがわかった。このシス-トランスの比を向上させるため分子内に2重結合を持つ出発物質を用いたところ同様の環化反応が進行したが、量論反応でも触媒反応でもシス体のみを与えるきれいな反応になることがわかった。この2重結合の効果は一般的なものでジエンの環化反応に応用したところ全くシス体のみが得られた。このことはこれまでジエン類の環化反応で常にシス-トランスの異性体の混合物だったこれらの反応にとって大きな進展である。
直鎖状ユビキチン鎖を標的としたケモテクノロジーによる病態解析

ユビキチンのN末端を介した特殊な連結様式により形成される「直鎖状ユビキチン鎖(M1鎖コード)」は、NF-kBなどの炎症シグナルや細胞死を制御するユニークかつ希少なユビキチンコードとして、近年、大きな注目を集めている。本研究では、独自の阻害剤を含む各種研究ツールを駆使しM1鎖コードを標的としたケモテクノロジー解析を進め、生理機能と動作原理、さらに、その破綻に伴う各種病態形成の分子機序を明らかにする。
電気化学測定法による歯科用合金の腐食試験 その7

電気化学測定法は、化学物質の変化を電気化学反応としてとらえ、電位、電流あるいは電気量などを測定尺度として調べることが可能である。歯科用合金の腐食の研究において、電気化学反応の律速段階を知ることは、耐食性を評価するうえから考えて重要である。そしてそれは、実用的に耐食性を向上させるためにもきわめて大切なことである。昨年まで5年間の申請における研究で、電極と溶液の間に定常的な相対運動を起こさせる対流ボルタンメトリによって、歯科用合金の腐食機構を明らかにした。また、iR降下の補償を行なった測定ができた。さらに2ペンX-Yレコーダの購入で、回転リングディスク電極法の測定装置を揃えることができた。本年度申請の研究において、リングディスク電極を自作し、リング電極の材質と補足率の決定を行った。1.補足率は、ディスクの半径および、リンク内外の半径によって決まる電極固有の定数であるが、今回いくつかの形状で自作してみた結果、電流のリ-クがないように隙間を完全に密閉するのがうまく行かず、最適補足率の決定が行えなかった。2.リンク電極の材質を、各歯科用合金について決定することができた。補足率は、反応中間体の同定、競争反応の反応割合決定と反応速度の算出に、大変重要な役割を果たす。しかし、リングディスク電極の作製は複雑で時間を要する。円柱状電極と絶縁材料の間に溶液がしみ込み、電流のリ-クがないように密封するのに工夫が必要である。ディスク部分のみのスペア化には、さらに工夫が必要である。今後この点を改良し、組成が多岐に渡る歯科用合金の腐食速度の算出に研究を進めるものである。
TGFβによるオステオポンチン遺伝子転写調節機構の研究

本研究においてはマウスのオステオポンチン遺伝子を用い、この上流の転子開始位置より約1,000bp5'側のDNA断片を用いてクロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ(CAT)を報告遺伝子としたベクターを作製した。この作製したベクターはそれぞれ欠失遺伝子を持つ3種類のベクターに分けて作製され,それぞれを骨芽細胞様細胞ROS 17/2.8ならびにマウス由来の正常骨芽細胞様細胞MC3T3E1にトランスフェクトをした上でTGFβ1を用いた処理を行いCATアッセイの下にプロモーター活性を評価した。このコンストラクトのプロモーター活性はそれぞれの欠失の後の長さにほぼ比例するものであり,特にvitamin Dのレスポンスエレメントの存在する740bp前後の領域を欠いたものでは明らかなvitamin Dへの応答活性の消失を見た。しかしながらTGFβに対する反応は、なお残存しており、これらを解析するべく更に545bpならびに243bpの2つの短い変異についての検討を進めた。この結果TGFβによる促進活性は最も短いプロモーターについても検出され,この領域におけるTGFβによって修飾されるタンパク性因子のDNAに対する結合作用及び相互作用が推測された。DNA配列に基づくこの領域におけるコンセンサス配列は従来TGFβ反応領域として報告されているものを含んでおらず、オステオポンチンプロモーターが新しいTGFβレスポンスエレメントを介して、その発現を調節されることが推察された。またこれらのオステオポンチンの領域においては間葉系の細胞の分化を進めるHelix-Loop-Helix型の結合配列のコンセンサスであるE-Box配列(CANNTG)が存在しており、これらのCANNTGを介する発現の調節が考えられた。Helix-Loop-Helix型タンパクはvitamin Dによってその活性の発現の抑制が明らかとなり、これに対しオステオポンチンの遺伝子は鏡像的にその発現が促進される。このようなことからvitamin Dの作用の少なくとも一つは、このHelix-Loop-Helixを介する事、更に直接作用を以てオステオポンチンの遺伝子発現を促進するのみでなくオステオポンチンのE-Boxに対する抑制の解除等を介するような二次的な働きの存在が推察された。オステオポンチンはマウスの細胞培養期間中に分化を示すMC3T3E1細胞でもその分化の進展と共に発現する事が明らかとなっているが、これらの発現の増加と反対にMC3T3E1細胞の分化段階に伴って低下するHelix-Loop-Helixタンパクのldタンパクの存在が明らかとなった。MC3T3E1細胞は更にBMPはオステオポンチンを初め骨芽細胞の分化形質である遺伝子を発現するが、このBMPもまたHelix-Loop-Helixタンパクの一部であるIdの遺伝子を発現することが明らかとなった。この発現促進の時間経過は比較的短期であり、Helix-Loop-Helixタンパクのポジティブ型とネガティブ型とのバランスの下に行われることが推察され、これにより活性化された分化に正方向に働くHelix-Loop-Helixタンパクの分子群のオステオポンチンプロモーターのE-Boxに対する結合が今後検討されるべき点となった。以上オステオポンチンのプロモーター部分の解析により、この部位におけるTGFβの比較的転写開始部位近位における調節機能の存在が明らかとなり、またTGFβやBMPによる、あるいはvitamin DによるHelix-Loop-Helixタンパクのバランスの変化を介するオステオポンチンの遺伝子のプロモーター活性の調節が、この遺伝子の上流に存在するE-Box配列により仲介される可能性が示された。

オステオポンチンはマウスの細胞培養期間中に分化を示すMC3T3E1細胞でもその分化の進展と共に発現する事が明らかとなっているが、これらの発現の増加と反対にMC3T3E1細胞の分化段階に伴って低下するHelix-Loop-Helixタンパクのldタンパクの存在が明らかとなった。MC3T3E1細胞は更にBMPはオステオポンチンを初め骨芽細胞の分化形質である遺伝子を発現するが、このBMPもまたHelix-Loop-Helixタンパクの一部であるIdの遺伝子を発現することが明らかとなった。この発現促進の時間経過は比較的短期であり、Helix-Loop-Helixタンパクのポジティブ型とネガティブ型とのバランスの下に行われることが推察され、これにより活性化された分化に正方向に働くHelix-Loop-Helixタンパクの分子群のオステオポンチンプロモーターのE-Boxに対する結合が今後検討されるべき点となった。以上オステオポンチンのプロモーター部分の解析により、この部位におけるTGFβの比較的転写開始部位近位における調節機能の存在が明らかとなり、またTGFβやBMPによる、あるいはvitamin DによるHelix-Loop-Helixタンパクのバランスの変化を介するオステオポンチンの遺伝子のプロモーター活性の調節が、この遺伝子の上流に存在するE-Box配列により仲介される可能性が示された。マウスのオステオポンチン遺伝子の上流部分のPST1フラグメント約1000bpのフラグメントのクローニングを行い、さらに-777+79まで、また-543+79まで及び-253+79までの3つのDNA断片をそれぞれExo-3-mung beanヌクレアーゼ法にて作製し、これをchloramphenicol-acetyltrans-fearse(CAT)を持つPSTOV-CATベクターにクローニングし、これによる骨芽細胞様細胞MC3T3E1ならびにROS17/2.8に対するトランスフェクションを行った。トランスフェクション方式はDEAEデキストラン方式によって行った。一方、リン酸カルシウム法によるトランスフェクションも行ったがほぼ同様の結果が得られている。DEAE法式では約5μgのベクターDNAを24時間培養後のそれぞれの細胞に投与し3ないし4時間後に1分間のグリセロールショックによりこのベクターを導入した。導入後、時間経過を追って24、48、72時間後に細胞抽出液を調整し薄層クロマトグラフィーによるCATアッセイを行った。この結果それぞれの3つのフラグメントを持つプロモーターはプロモーターの長さに相応した活性を示し、この活性が時間依存性であることが明らかとなった。この活性を強力なプロモーターを持つPSV2CATと比較すると最も長い777+79までのフラグメントを持つCATベクターはPSV2に近く、また最も短い-25379までのフラグメントを持つCATベクターはPSV2CATの約1/10程度の活性を持っていた。
蛋白糖化最終産物受容体をターゲットとした糖尿病網膜症の発症メカニズムの解明

1.糖尿病網膜症の手術検体における蛋白糖化最終産物の定量増殖性糖尿病網膜症を含め様々な眼疾患の治療目的で行われた硝子体手術時に採取された検体において,蛋白糖化最終産物の量を定量した.その結果,糖尿病網膜症では,網膜剥離や黄斑円孔を含めたほかの疾患に比較して優位に硝子体中の蛋白糖化最終産物濃度が増加していることが明らかになった.また,糖尿病網膜症の中でも,糖尿病性黄斑浮腫において特に蛋白糖化最終産物濃度が増加していた.また,硝子体中の蛋白糖化最終産物濃度は,年齢や血液中のHbA1c濃度には関連が低く,糖尿病の罹患年数に関連が深いことが明らかになった.2.実験的糖尿病モデル動物における蛋白糖化最終産物の局在ストレプトゾシン投与によりインスリン欠乏型糖尿病を誘発した.また,50%ガラクトース食をラットに与え,実験的糖尿病状態を誘発した.両モデルにおいて,角膜,水晶体,網膜において蛋白糖化最終産物の沈着を観察した.これらの組織は,糖尿病によって角膜障害・白内障・網膜症を発症する糖尿病の標的組織である.よって,蛋白糖化最終産物の沈着は糖尿病合併症の引き金となりうると考えられた.また,抗酸化剤であるアミノグアニジンを内服させることにより,眼における蛋白糖化最終産物の沈着が減少することを明らかにした.このことは,糖尿病において眼局所における酸化ストレスの亢進が蛋白糖化最終産物の沈着に重要な役割を果たしていることを示しており,抗酸化薬が糖尿病眼合併症の予防に利用可能である可能性を示している.3.角結膜疾患における蛋白糖化最終産物の沈着瞼裂斑は加齢に伴う代表的な眼合併症の一つである.また,spheroid degenerationは赤道付近においては失明原因に直結する角膜の変性疾患である.我々は,旅疾患における角結膜の沈着物が蛋白糖化最終産物であることを組織学的に証明した.1.実験的糖尿病網膜症の評価系として,網膜血管の透過性,網膜血管への白血球粘着,NF-κB活性化,網膜VEGF濃度の4種類を選び,それぞれに対してマウスにも適応可能な評価実験系を確立した.具体的には,エバンスブルーを全身投与した後に網膜の血管外に漏出した量を定量することによって,網膜血管の透過性の指標とした.また,リン酸緩衝生理食塩水を灌流後に白血球を標識するフルオレセイン標識コンカナバリンAを灌流することで,血管内皮に粘着している白血球の数と局在を明らかにすることができるようになった.また,放射性同位元素を用いることなくNF-κBの活性を調べるELISA系を確立した.VEGF濃度の測定については市販のELISAキットを用いた.2.ストレプトゾシンを腹腔内投与することによって3ヶ月にわたって高血糖を誘導した後には,コントロールのマウスと比較して網膜血管の透過性は約2倍,網膜血管への白血球粘着は2.5倍,NF-κBの活性は約2倍,VEGF濃度は2倍に増大していた.3.糖尿病網膜症の発症に関わると言われるRAGE (receptor for AGE)の細胞ガイドメインのみのcDNAを作成し,バキュロウイルスに導入することでベクターを作成した.このウイルスベクターを昆虫細胞Sf9に感染させることによって,糖鎖の修飾を持った可溶化RAGEを作成することに成功した.4.ヒト臍帯血管内皮細胞を培養し,AGEを上清中に添加すると,内皮細胞における接着分子の発現が亢進することを明らかにした.またAGEと同時に可溶化RAGEを添加することによって,血管内皮における接着分子の発現の亢進は抑制された.すなわち,可溶化RAGEは,AGEとAGE受容体の相互作用を阻害することを明らかにすることができた.1.糖尿病網膜症の手術検体における蛋白糖化最終産物の定量増殖性糖尿病網膜症を含め様々な眼疾患の治療目的で行われた硝子体手術時に採取された検体において,蛋白糖化最終産物の量を定量した.その結果,糖尿病網膜症では,網膜剥離や黄斑円孔を含めたほかの疾患に比較して優位に硝子体中の蛋白糖化最終産物濃度が増加していることが明らかになった.また,糖尿病網膜症の中でも,糖尿病性黄斑浮腫において特に蛋白糖化最終産物濃度が増加していた.また,硝子体中の蛋白糖化最終産物濃度は,年齢や血液中のHbA1c濃度には関連が低く,糖尿病の罹患年数に関連が深いことが明らかになった.2.実験的糖尿病モデル動物における蛋白糖化最終産物の局在ストレプトゾシン投与によりインスリン欠乏型糖尿病を誘発した.また,50%ガラクトース食をラットに与え,実験的糖尿病状態を誘発した.両モデルにおいて,角膜,水晶体,網膜において蛋白糖化最終産物の沈着を観察した.これらの組織は,糖尿病によって角膜障害・白内障・網膜症を発症する糖尿病の標的組織である.よって,蛋白糖化最終産物の沈着は糖尿病合併症の引き金となりうると考えられた.また,抗酸化剤であるアミノグアニジンを内服させることにより,眼における蛋白糖化最終産物の沈着が減少することを明らかにした.このことは,糖尿病において眼局所における酸化ストレスの亢進が蛋白糖化最終産物の沈着に重要な役割を果たしていることを示しており,抗酸化薬が糖尿病眼合併症の予防に利用可能である可能性を示している.3.角結膜疾患における蛋白糖化最終産物の沈着瞼裂斑は加齢に伴う代表的な眼合併症の一つである.また,spheroid degenerationは赤道付近においては失明原因に直結する角膜の変性疾患である.
ラジカル共重合における選択的ドミノ型連鎖生長反応による精密構造制御

合成高分子における、分子量、立体構造、モノマー配列などの多重構造制御は、高分子化学における究極の課題である。このためには、重合過程において重合の活性を担う触媒中心のみならず、相互作用を巧みに用いて反応を制御し、重奏的に或いは独立でも、各制御を並列して担うハイブリッドな触媒系の開発が重要と考えられる。本研究ではとくに、ラジカル共重合における選択的なドミノ型反応の開発によりモノマー配列を制御し、リビングラジカル重合触媒と組み合わせることで、高度に制御されたポリマーの合成を目的としている。本年度は、反応性のビニル基を有し嵩高い構造を有するバレンセンに対して、アクリル系モノマーとの共重合を、水素結合性溶媒としてフルオロアルコールを用いて行った。とくにマレイミド誘導体との共重合において、1:1と1:2の共重合が同時に進行し、両方の連鎖からなる共重合体が生成することがわかった。さらに、RAFT重合と組み合わせることで、分子量とモノマー連鎖の同時制御を達成した。また、反応性の高いエキソメチレン型のビニル基を有し、三員環と五員環から成るサビネンについて、アクリル系モノマーとのラジカル共重合の検討を行った結果、フルオロアルコール中で、アクリル酸エステルやアクリロニトリル1:2の選択的なラジカル共重合が進行することがわかった。この重合機構として、三員環の開環や渡環などを経由するドミノ型の生長反応の可能性が示唆された。他の植物由来モノマーとして、スチレンとアクリル酸エステルと両方の骨格をもつ桂皮酸エステルに関して、他のビニルモノマーとの共重合を行った結果、桂皮酸エステルはスチレン型のラジカルで選択的な生長反応が進行することがわかった。さらに、遷移金属錯体を用いたリビングラジカル重合などにより分子量の同時制御を可能とした。本研究では、主に、水素結合や配位結合などの弱い相互作用を、天然由来の特有な骨格を有するテルペン類から誘導される非極性オレフィンモノマーと、アクリル類の極性ビニルモノマーとのラジカル共重合に用いることで、特異なモノマー配列を有する選択的なドミノ型の連鎖重合反応を開発することを目的としている。今年度は、予定としていたバレンセンやサビネンなどの共重合を検討し、選択的な共重合反応が進行することを見出した。これまでの研究成果も踏まえながら、まず、サビネンとアクリル酸エステルやアクリロニトリルとの1:2の選択的なドミノ型生長反応を、生成ポリマーの構造解析やモデル反応の解析により明らかとする。また、他の植物由来モノマーとして、同様に反応性の高いエキソメチレン基と縮環構造を有するβ-カリオフィレンや、イソソルバイドから誘導される双環ジエン化合物の重合も検討する。さらに、これらの特異的な共重合反応に、チオカルボニル化合物や光レドックス触媒をハイブリッド的に用いることでリビングラジカル共重合を達成し、モノマー配列と分子量の同時制御へと展開する。

また、他の植物由来モノマーとして、同様に反応性の高いエキソメチレン基と縮環構造を有するβ-カリオフィレンや、イソソルバイドから誘導される双環ジエン化合物の重合も検討する。さらに、これらの特異的な共重合反応に、チオカルボニル化合物や光レドックス触媒をハイブリッド的に用いることでリビングラジカル共重合を達成し、モノマー配列と分子量の同時制御へと展開する。
実用温度範囲の広いリラクサ系圧電単結晶振動子の開発

複合ペロブスカイト型圧電単結晶Pb(In_<1/3>Nb_<2/3>)O_3PbTiO_3(PIN-PT)系の育成をフラックス法で行い、得られた単結晶試料が医療画像用振動子材料として重要な電気機械結合係数k_<33>^*78%を有することを見出し、この値は250度以上の高いキュリー温度(Tc)を有する圧電単結晶材料の内では最も大きな電気磯械結合係数k_<33>^*である。更にこの電気磯械結台係数k_<33>^*の温度特性が200度までの高温で僅か5%しか減少しないことを見出した。ごれは現在実用化の最も進んだ圧電単結晶材料Pb(Zn_<1/3>Nb_<2/3>)O_3-PbTiO_3の有効温度範囲85度を遥かに凌いでいる。また設備備品である熱分析装置TGA-DTAを用い融解曲線を調べ、高温X線回折法を用いて、ペロブスカイト相の温度に伴う安定性等の熱力学的考察からPIN-PT圧電単結晶がPb(Mg_<1/3>Nb_2/3>)O_3-PbTiO_3型の合致溶融化合物である事を見出した。この様な熱力学的データを基に、フラックス法よりも再現性において優れた、実用的ブリジマン法を用いてPIN-PT圧電単結晶の育成に初めて成功した。更に、PIN-PTのTcよりも更に高いPZT並のTc温度を有する圧電単結晶材料Pb(Yb_<1/3>Nb_<2/3>)O_3TiO_3(PYN-PT)の育成にもフラックス法を用いて成功した。まだ組成もモルフォトロピック相境界近傍の一部でしかないが、今後のブリジマン法への展開と併せて、3次元医療動画像分野への基本圧電材料の一つとしての貢献が期待される。低キュリー温度から生じる低抗電界のための脱分極や長時間素子使用に伴う温度上昇のため実用使用温度範囲が制限されること等から高いキュリー温度を有する圧電強誘電体単結晶育成が注目されている。本研究ではキュリー温度が280°Cと高く、従来知られている250°C以上の圧電単結晶の中では最も電気機械結合係数k_<33>'が高い値78%であることをPb(In_<1/2>Nb_<1/2>)O_3-PbTiO_3(PIN-PT)系でつきとめた。更に、高温度200°C下でもその電気機械結合係数が僅か5%の減少に留まり、その温度特性が従来知られているPb(Zn_<1/3>Nb_<2/3>)O_3-PbTiO_3(PZN-PT)系(キュリー温度170°Cでk_<33>'が高い値)よりもはるかに優れた温度特性を有することを発見した。現在,更に高いキュリー温度400°Cを有するPb(Yb_<1/2>Nb_<1/2>)O_3-PbTiO_3(PYN-PT)系で一部単結晶化に成功した。これらはいずれも設備備品であるTGA-DTA装置(理学サーモプラス2)を用いて精度の高い熱力学データを取り、融点や液相点を組成比ごとに明らかに出来た事による。現在、更に高品質、で大型単結晶育成条件の開発に向けて熱分析結果を基に研究を進めている。また、圧電振動子の試作を行い、加工性が良いことが確かめられた。菱面体晶と正方晶のモルフォホトロピック

相境界近傍で誘電率、自発分極、抗電界等の結晶方位依存性を明らかにし、圧電材料ばかりでなくメモリー材料等としても重要であることを見出した。強誘電体に於ける圧電やメモリー等の材料探査に於ける設計指針を提案している。複合ペロブスカイト型圧電単結晶Pb(In_<1/3>Nb_<2/3>)O_3-PbTiO_3(PIN-PT)系の育成をフラックス法で行い、得られた単結晶試料が医療画像用振動子材料として重要な電気機械結合係数k_<33>^*78%を有することを見出し、この値は250度以上の高いキュリー温度(Tc)を有する圧電単結晶材料の内では最も大きな電気機械結合係数k_<33>^*である。更にこの電気機械結合係数k_<33>^*の温度特性が200度までの高温で僅か5%しか減少しないことを見出した。これは現在実用化の最も進んだ圧電単結晶材料Pb(Zn_<1/3>Nb_<2/3>)O_3 -PbTiO_3の有効温度範囲85度を遥かに凌いでいる。また設備備品である熱分析装置TGA-DTAを用い融解曲線を調べ、高温X線回折法を用いて、ペロブスカイト相の温度に伴う安定性等の熱力学的考察からPIN-PT圧電単結晶がPb(Mg_<1/3>Nb_<2/3>)O_3 -PbTiO_3型の合致溶融化合物である事を見出した。この様な熱力学的データを基に、フラックス法よりも再現性において優れた、実用的ブリジマン法を用いてPIN-PT圧電単結晶の育成に初めて成功した。更に、PIN-PTのTcよりも更に高いPZT並のTc温度を有する圧電単結晶材料Pb(Yb_<1/3>Nb_<2/3>)O_3-PbTiO_3(PYN-PT)の育成にもフラックス法を用いて成功した。まだ組成もモルフォトロピック相境界近傍の一部でしかないが、今後のブリジマン法への展開と併せて、3次元医療動画像分野への基本圧電材料の一つとしての貢献が期待される。
性ホルモン依存性がんにおける新規がん治療・診断の分子標的同定とその応用

本研究は、ホルモン依存性がんの発がん、増殖の分子機構の解明とその診断・治療への臨床応用をめざし、1)ホルモン依存性がんにおける性ホルモンの下流に存在する標的因子群の性状を分子レベルで解明し、2)遺伝子改変動物とがんへの遺伝子導入を用いてin vivoでの解析によりそのがんにおける役割を明らかにし、3)それらを分子標的として遺伝子治療、分子標的薬、早期診断への応用を計ることを目的とする。本研究で、性ホルモン標的因子を申請者が考案したgenomic binding-site cloning(GBS)法とDNAチップを応用し複数同定した。それら性ホルモン標的遺伝子の機能解析として、特にGBS法により同定されたRINGフィンガーを有するエストロゲン応答遺伝子Efpと一回膜貫通蛋白質であるEBAG9に注目した。興味深いことに、Efpがエストロゲン依存性の増殖に必須であることがノックアウト動物の表現型より明らかになった。そのメカニズムは14-3-3σを特異的に分解することにより細胞周期を進行させることにあった。本年度は、Efpが乳がんの新しい予後因子であることを示すとともに、ER陰性の悪性度の高い乳がんにおいても予後に関わることを明らかにした。EBAG9については、卵巣がん組織、腎がん、前立腺がんにおいて顕著に発現を認めることを明らかにした。さらに、EBAG9を腫瘍細胞に発現させると、腫瘍の増殖が促進されることを示した。これはEfpの場合と異なり、細胞増殖を亢進させるものではなく、腫瘍のin vivoでの増殖を促すものであった。以上本研究により、EfpとEBAG9の性ホルモン依存性がんにおける腫瘍促進的な役割を示唆し、診断・治療における分子標的としての可能性を明らかにした。それら性ホルモン標的遺伝子の機能解析として、特にRINGフィンガーをもつEfpと一回膜貫通蛋白であるEBAG9に注目した。乳がん細胞株のうちER陽性のMCF7とER陰性のMDAMB-231細胞をヌードマウスに埋め込み皮下に腫瘍形成が誘導される際に、同時にEfpのドミナントネガティブ体を遺伝子治療のモデルとしてアデノウイルスの系で導入することで腫瘍形成が抑制されることを示した。このことはEfPを過剰発現した乳がんではホルモン依存性が消失している場合でも、Efpを分子標的にして治療できることを、示唆している。一方、EBAG9に関しては、前立腺がんの予後不良の新しい予測因子であることを明らかにした。以上より、より難治性の高いER陰性乳がんにおいても、Efpが重要な役割を演じ、新しいがん治療の分子標的となりうることを示した。さらにホルモン依存性がんの新しい分子標的に対し、より実用性が高いと考えられるアデノウイルスベクターによる遺伝子治療モデルを実証し、創薬と遺伝子治療への応用が期待された。もう一つのホルモン依存性がんの分子標的であるEBAG9に関しては、前立腺がんの予後不良予測因子として、新しい診断法への応用を示した。
大規模MRIデータベース・動物モデルを用いた脳の老化、及び修飾可能因子の研究

最後に、動物実験.加齢と生活習慣病が脳に及ぼす影響に関する機序の研究については、既に興味深い知見が得られており、来年度報告までには研究成果についての発表を目指したいと考えている。まず、臨床研究1.加齢と生活習慣病が脳に及ぼす影響の臨床研究に関する進捗状況については、大枠について既に海外学会での発表を行い、現在論文執筆中であり、(2)おおむね順調に進展していると思われる。次に、臨床研究2.脳の老化に関する新たな修正可能因子の探索に関する進捗状況については、こちらも大枠について既に海外学会での発表を行い、その研究成果については学会賞の受賞に至っており、(1)当初の計画以上に進展していると考えている。最後、動物実験.加齢と生活習慣病が脳に及ぼす影響に関する機序の研究に関する進捗状況については、既に興味深い研究結果が得られているものの、発表までにはまだ多くの追加実験を要するものと思われ、(2)おおむね順調に進展している、もしくは(3)やや遅れている、と考えている。以上から、現在までの全体の研究進捗状況として、(2)おおむね順調に進展している、と判断した。まず、臨床研究1.加齢と生活習慣病が脳に及ぼす影響の臨床研究、及び、臨床研究2.脳の老化に関する新たな修正可能因子の探索については、どちらも学会発表を済ませており、早急な論文採択に至るよう執筆作業に集中する。そして、動物実験.加齢と生活習慣病が脳に及ぼす影響に関する機序の研究については、追加実験を行い次年度中の学会発表を目指す。物品購入にあたり、動物実験.加齢と生活習慣病が脳に及ぼす影響に関する機序の研究についての支出を予定より抑えることが出来たため、繰越金が発生した。学会発表という目的を達成するため、次年度に繰越金と併せて物品購入・旅費等を執行する予定である。
人工染色体を用いた哺乳動物細胞への遺伝子導入法の開発

人工染色体を哺乳動物細胞への遺伝子導入に利用するための基礎技術の開発を目的に、コロンビア大学Hieter教授とカリフォルニア大学Mitani助教授との共同研究を行った。岡崎研究室では巨大遺伝子領域を持つYACクローンを利用して細胞内で安定に維持される人工染色体(HAC)の形成を進めた。YACクローンの腕部位をヒトテロメア配列、loxP配列、哺乳動物用マーカーを持つ構造に変換した。次に、Cre/loxP組み換え反応により改変YACクローンに挿入するために100kbのアルフォイド配列を含む環状プラスミドを構築し、酵母内でのCre/loxPの組み換えを行った。組み換え後のYAC-DNAを酵母染色体DNAの混在なしに精製するために、Hieter教授とその方法を検討した。また、HACを種々の細胞でベクターとして用いるために、loxP部位を含むアルフォイドYACから形成されたHACを微小核細胞融合法によりHT1080細胞からマウスA9細胞に移動する方法を確立し、移動されたHACはA9細胞中でも安定に維持されることを確認した。Mitani研究グループとの共同研究としてヘルパー依存性アデノウイルスベクターにヒトテロメアとセントロメア・アルフォイド配列を組み込んだAd/HACベクターの構築に成功した。これをDNAとして精製した後にリポフェクション法によりHT1080細胞に導入し、得られたトランスフォーマントにおける人工染色体の形成を解析している。Ad/HAC-DNAをアデノウイルス粒子として細胞に感染させた場合に人工染色体が効率よく形成されるかどうかが今後の課題である。代表者らは、ヒト由来テロメア配列とヒト21番染色体アルフォイド配列を持つ酵母人工染色体を構築し(第一世代前駆体アルフォイドYAC)、ヒト培養細胞HT1080に導入して、ヒト細胞中で安定に維持継承されるヒト人工染色体(第一世代HAC)を形成することに成功している。この成果を基に平成10年度には、岡崎研究グループは、各種哺乳類細胞中で使用可能な選択マーカーと目的遺伝子の組み込み部位となるlox配列の挿入された、第二世代の前駆体YACを構築した。また第一世代のHACを用いて、HACをHT1080からマウス細胞A9へ移動する方法を検討し、移動させたHACがA9細胞中で維持されることを明らかにした。現在第二世代の前駆体YACを用いて、各種哨乳類細胞中で人工染色体(MAC)を形成させる実験を進めている。Mitani研究グループは、免疫原性がなく、大きなDNA断片(37kb)の導入が可能なヘルパー依存性アデノウイルスベクターに、ヒトテロメア配列・アルフォイド配列・目的遺伝子を組み込んだAd/HACベクターを構築する実験を行った。岡崎研よりテロメア配列、アルフォイド配列を提供し、条件を変えて数回の実験を行ったが、目指すベクターの構築にはまだ成功していない。この共同研究に関する打ち合わせのために、岡崎が7月に、池野が10月にUCLAを、Mitaniが10月に藤田保健衛生大学を訪問した。岡崎研究グループは、哺乳動物細胞に広く使用できる第二世代の人工染色体の構築を目的とし、平成10年度に第一世代の前駆体YACを基に各種哺乳動物細胞中で使用可能な選択マーカーと目的遺伝子の組み込みが可能なlox配列を持つ第二世代の前駆体YACを構築した。本年度はこれをヒトHT1080細胞に導入することにより、第二世代の人工染色体の形成に至った。次に巨大遺伝子をデリバリーする哺乳動物ベクターとしての可能性を調べるために、配列特異的組み換え酵素Creを用いて人工染色体のlox配列にグリーン蛍光蛋白(GFR)の遺伝子を入れ込み目的遺伝子の発現を解析した。その結果、細胞内にGFPの発現が確認され、lox配列への目的遺伝子の挿入が可能なことを明らかにした。現在GFPの発現レベルを解析している。これまでHT1080細胞においては前駆体YACを基に新奇に人工染色体が形成されたが、マウス細胞では成功していない。

このため微小核融合法(10年度に確立)を用いて、HT1080細胞内で形成された第二世代人工染色体のマウスA9細胞への移動実験を進めている。UCLAのMitani研究グループでは平成10年度より進めてきたヘルパー依存性アデノウイルスベクターにヒトテロメアとセントロメアアルフォイド配列を組み込んだAd/HAC新奇ベクターの構築に成功した。Ad/HACベクターの優位性を調べるためにHT1080細胞に導入し、人工染色体の形成実験を進めている。この共同研究に関する打合せのために岡崎が12月に、池野が平成12年2月にUCLAを訪問した。岡崎研究室では巨大遺伝子領域を持つYACクローンを利用して細胞内で安定に維持される人工染色体(HAC)を形成する研究を進めた。これまでにYACクローンの腕部位をヒトテロメア配列、lox配列、哺乳動物用マーカーを持つ構造に変換した。今年度は、Cre/lox組み換え反応により改変YACクローンに挿入するための約100kbのアルフォイド配列を含む環状プラスミドを構築し、酵母内でのCre/loxの組み換えを進めた。組み換え後のYACDNAを酵母染色体DNAの混在なしに精製するために、岡崎が10月にHieter研を訪問して方法を検討した。また、HACを種々の細胞でベクターとして用いるためにlox部位を含むアルフォイドYACから形成されたHACを微小核融合法によりHT1080細胞からマウスA9細胞に移動する事に成功し、HACはA9細胞中でも安定に維持されることを確認した。さらにHACをマイクロインジェクション法によりマウス受精卵の前核に導入する方法について岡崎が10月にCHROMOS社を訪問して検討した。Mitani研究グループはこれまでにヘルパー依存性アデノウイルスベクターにヒトテロメアとセントロメア・アルフォイド配列を組み込んだAd/HACベクターの構築に成功した。本年度はこれを精製したDNAとして通常のリポフェクション法によりHT1080細胞に導入し、得られたトランスフォーマントに人工染色体の形成が観察された。岡崎と池野は平成13年3月にMitani研を訪問し、Ad/HAC-DNAをアデノウイルス粒子として感染させた場合に人工染色体が形成されるかどうかFISHによる検討を行った。
鉛基合金/一酸化鉛/二酸化鉛固体電池のバイセル化に関する研究

本研究は、酸素イオン導電体である一酸化鉛pbOを電解質とした、新型の固体電池に関する研究である。平成7年4月から8月までは、バルク状の一酸化鉛pbOにBi^<3+>イオンなどをごく少量ドープすることで電解質としての特性が変化し、熱力学データから算出される理論値にほぼ匹敵する電池起電力が発現することを確認した。平成7年9月には、申請したスパッターリング装置(日電アネルバ、SPF-210,L-210S-F特別仕様)が納入され、正極材料である二酸化鉛と、電解質となる一酸化鉛薄膜の作製試験を開始した。前者については、酸素プラズマ中にて金属鉛をスパッターすることで、O/pb比が1.90薄膜を再現性良く作製できた。後者については、アルゴンプラズマ中で一酸化鉛をターゲットとして作製を試みたが、O/pb比は1.5前後に上昇し、X線回折でも一酸化鉛pbOと同定することができなかった。これは、アルゴンプラズマによる酸素の選択スパッターが原因と考えられる。そこで、研究では、β型pbOを真空蒸着し、これを熱処理することでα型pbOに変態させる試験を実施した。その結果、得られた薄膜はα型pbOと同定することができた。この化合物は高抵抗であるもののイオン伝導性を有するため、固体電解質として働き、電池を構成した場合には数mVの起電力を観測できた。さらに、平成8年3月現在は、電解質薄膜のイオン伝導性を高め、電池起電力を改善するために、α型pbO薄膜中に異原子価金属イオンをドープする試験を行っており、バイセル化に向けた研究が進展中である。
自然発生インターロイキン17産生ガンマデルタ型T細胞の抗原認識と分化機構

γδ型T細胞はαβ型T細胞T細胞に比べて個体発生の早期に出現し、皮膚や腸管等の上皮間に多く存在する。このうち、Vγ6を発現するγδ型T細胞は、マウスの胎生早期に胸腺において分化して生殖器官の上皮内にホーミングする。我々はこの生殖器官や腹腔内に存在するVγ6陽性γδ型T細胞が、IL-17を産生することと胎生早期の胸腺ですでにIL-17産生能を獲得していること、その分化のマスター因子としてNおtch-1/HES1経路が必須であるを明らかにしてきた。本研究では、自然発生IL-17産生γδ型T細胞の自然免疫としての感染防禦機構での役割を明らかにした。Candida albicansカンジダ全身感染後の好中球浸潤とIL-17Aの産生は感染1日目に肺においてピークを迎えた。IL-17A-/-マウスではWTマウスに比べて、肺での好中球浸潤と菌の排除が障害されていた。IL-17Aは主にγδT細胞より産生されていた。Cδ-/-マウスではIL-17A産生と好中球浸潤の障害を認めた。γδT細胞からのIL-17A産生は、γδT細胞自身による抗原の認識によるものではなく炎症局所において産生されるIL-23により誘導された。IL-23はC-type lectin receptor(CLR)タイプレクチンレセプター経路に必須の分子であるCARD9欠損下でも野生型とほぼ同程度認められたが、Toll-like receptor(TLR)経路に必須の分子であるMyD88欠損下では著明な低下を認めた。さらにTLR2が感染後のIL-23誘導に関与しており、実際TLR2-/-マウスではIL-17A産生・好中球浸潤・菌の排除がWTマウスに比べて障害されていた。自然発生IL-17A産生γδT細胞がTLR2を介して産生されるIL-23に反応してIL-17Aを産生することで好中球浸潤を誘導し感染初期防御に関わることが明らかとなった。自然発生IL-17産生γδ型T細胞の分化機構と自然免疫としての感染防禦機構は明らかにできたが、抗原認識機構ではやや遅れている。自然発生IL-17産生γδ型T細胞の胸腺での分化機構と末梢での維持機構におけるNotchシグナルの役割と自己抗原を中心とした認識抗原の同定を推進する。成体マウスにおいてIL-17産生γδT細胞は脾臓、肺、腹腔内、腸粘膜固有層に認められ、特に子宮上皮内γδT細胞はほぼすべてIL-17産生能を有していたが、皮膚や腸管上皮間に局在するγδT細胞はIL-17産生能を有していなかった。一方胎児胸腺ではすべてのγδT細胞レパトアがIL-17産生能を有していた。Th17細胞分化に必須の転写因子であるSTAT3およびRORγt欠損マウスの胸腺ではIL-17産生γδT細胞は野生型マウスと同程度存在していた。IL-17産生γδT細胞cloneを作製し網羅的解析を行った結果、Notchシグナルのターゲット分子のひとつであるHES1の発現がIL-17産生γδT細胞clone特異的に高かった。IL-17産生γδT細胞は特異的にHES1およびNotchlを発現していた。HES1欠損マウスではIL-17産生γδT細胞分化が著しく低下し、HES1の過剰発現によりγδT細胞からのIL-17産生が誘導された。以上の結果より、末梢組織において分化誘導されるTh17細胞とは異なり、自然発生IL-17産生γδT細胞はSTAT3、RORγt非依存性に胸腺にてIL-17産生能を獲得することが明らかとなった。さらに我々は自然発生IL-17産生γδT細胞の機能分化にはHES1が必須であることを見いだした。HES1のIL-17産生γδT細胞の機能分化機構は不明であるが、HES-1は転写抑制因子として知られており、IL-17産生γδT細胞が分化途中の細胞である可能性も示唆されており、Th1細胞分化への抑制にはたらいている可能性も考えられる。IL-17A-/-

マウスではWTマウスに比べて、肺での好中球浸潤と菌の排除が障害されていた。IL-17Aは主にγδT細胞より産生されていた。Cδ-/-マウスではIL-17A産生と好中球浸潤の障害を認めた。γδT細胞からのIL-17A産生は、γδT細胞自身による抗原の認識によるものではなく炎症局所において産生されるIL-23により誘導された。IL-23はC-type lectin receptor(CLR)タイプレクチンレセプター経路に必須の分子であるCARD9欠損下でも野生型とほぼ同程度認められたが、Toll-like receptor(TLR)経路に必須の分子であるMyD88欠損下では著明な低下を認めた。さらにTLR2が感染後のIL-23誘導に関与しており、実際TLR2-/-マウスではIL-17A産生・好中球浸潤・菌の排除がWTマウスに比べて障害されていた。自然発生IL-17A産生γδT細胞がTLR2を介して産生されるIL-23に反応してIL-17Aを産生することで好中球浸潤を誘導し感染初期防御に関わることが明らかとなった。自然発生IL-17産生γδ型T細胞の分化機構と自然免疫としての感染防禦機構は明らかにできたが、抗原認識機構ではやや遅れている。自然発生IL-17産生γδ型T細胞の胸腺での分化機構と末梢での維持機構におけるNotchシグナルの役割と自己抗原を中心とした認識抗原の同定を推進する。
日本における伝統演劇―ジェンダー論、文化的遺産、国家／地域のアイデンティティ―

3年目の7ヶ月間で、計画していた研究は集大成できたと思われる。先ず、歴史的観点では、大谷松竹図書館や国立劇場伝統芸能情報館図書閲覧室、早稲田大学演劇博物館貴重書閲覧室で、女で始まる演目や芸能に関わる資料の調査を継続し、日本伝統文化における男性中心の芸能や歌舞伎演目の「女性」のバージョンに関する入手可能な情報収集を完成した。国内外の学会や一般人向けの講演会で、研究結果を発表した。また研究計画の現在的観点を中心とする研究については、日本及び地域のアイデンティティを定義する上で重要な要因としての伝統芸能の検討を展開してきた。研究遂行のため以下の国内外の祭りと芸能を見学、情報収集した。広島県で行われた吉和神楽大競演会と横谷神楽を観察、広島県における神楽の特徴に関する取材をした。岩国市で開催された第41回錦帯橋祭りで江戸時代の参勤交代を模した、奴道中や大名行列、女性行列、南条踊等の踊り、岩国太鼓などの演奏を見学、現代に由来する祭りにおける伝統芸能の役割や理想的な女性性、男性性の構造を検討した。福井県弥美神社の例大祭で演じられた王の舞を見学、県の複数カ所で奉納される王の舞に関する貴重な映像や情報を得、日本の芸能の系統やコミュニティーとの関わりについての研究を行った。浅草神社で行われた三社祭で舞踊や巫女舞、お神輿の行列などを観察、映像資料収集、東京のような都会で開催される日本の祭りの特徴も検討した。第41回よこぜまつりで演じられる伝統芸能を見学、地元のコミュニティーとの関わりなどを考察した。奄美大島大和村大和浜集落や大棚集落、瀬戸内町油井集落等で行われた豊年祭で、長刀踊り、棒踊り、八月踊り、油井の豊年踊り、相撲取りなどの伝統芸能を見学、奄美独特な民族文化における芸能の役割と特徴を検討した。そして、オーストラリアにおける日本の芸能やマツリ等の調査も行い、北・南アメリカとの比較研究をした。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。本研究では、歴史的観点と現代的観点という2つの観点から日本伝統芸能を考察している。歴史的観点では、歌舞伎を中心にジェンダー論の視点からジャンル論的考察を行い、古代から現代までジェンダー概念を検証し、舞台上で男性らしさ/女性らしさの理想がどのように具現されてきたかを分析している。具体的には、女猿楽、女曲舞、女房狂言、女文楽等、研究が途上であるジャンルや、歌舞伎の「女暫」「女鳴神」「女忠臣蔵」といった演目に注目し、男性中心日本の伝統芸能や社会における「女性」の表象を探っている。現代的観点では、文化遺産としての伝統芸能という視点から、歌舞伎、能、文楽等の主流ジャンルのみならず、祭りと民俗芸能にも着目し、日本古典文化としての芸能が、日本のナショナル・アイデンティティや地域性の概念を定義付けるのに、どういうふうに重要な役割を果たしているかを考察している。平成28年度では、歴史的観点では男性中心芸能の「女性」バージョンとして、中世以来の女猿楽、女曲舞、女房狂言等、江戸、明治時代の歌舞伎における狂言師/女役者、また女猿若、女義太夫、女文楽、女剣劇等について、比較・歴史的研究を行ってきた。各資料館や図書館で調査し、上記に関する歴史的資料や情報を集めてきた。現代的観点では、祭りで演じられている民族芸能/郷土芸能について文献的調査を行い、研究対象の歌舞伎や文楽、能、狂言、様々な踊り、里神楽、子供歌舞伎、黒川能等の芸能を観察、研究してきた。歌舞伎学会や能楽学会、民俗芸能学会の例会等に参加し、研究成果は香港とインドで行われた国外大会で発表した。また、国際日本文化研究センターで開催された講演会や荒木浩教授の共同研究「投企する古典性」に参加し、日本文化や文学,社会についての知識を深めることができた。2016年11月から2017年3月までこの5ヶ月間の間、計画していた研究は順調に進んでいると思われる。まず、歴史的観点では、日文研の図書館や国立劇場伝統芸能情報館、早稲田大学演劇博物館の閲覧室、大谷松竹図書館で、江戸時代の初期から現在に至るまで歌舞伎や他の演劇ジャンル、映画における「おんな」で始まるタイトルを調べて、この興行に関する台本やプログラムなどの資料を調査し、入手可能な情報を集めてきた。想定した通り、このような興行はまことに多く、有意義な研究対象だと再確認した。この「女性」バージョンの中で一番よく知られている「女暫」について学術論文の原稿を執筆中である。ただし、現代文献では中世の女猿楽、女曲舞、女房狂言についての情報は不十分で、古典の文献をもっと詳しく調べる必要がある。これは研究を遂行する上で一つの問題である。次に、現代的観点では、研究遂行のために以下の芸能を見学、情報収集してきた:山形県庄内地方に伝わる黒川能(王祗祭で行われる)、愛知県焼津市藤守大井八幡宮で開催されている藤守の田遊び(田楽ともいう)、三重県北牟婁郡紀北町便ノ山地区種まき権兵衛の里で行われている紀北町の地域の英雄種まき権兵衛さんを弔う供養祭「種まき権兵衛祭り」で演じられている踊り、東京の浅草神社で開催されたこども歌舞伎、千葉県旭市鎌数伊勢大神宮で演じられている「鎌数の神楽」などである。演者達と面接し、写真やビデオを撮り、貴重な映像や資料を得ることができた。これらの芸能は国や県により指定重要無形民俗