hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ラミダス化石等人類進化研究を中心としたマクロ形態研究の推進と基盤充実

後者としては特に第1中足骨の機能形態論の研究を推進し、さらには距骨と手の関節構造と可動性に関する比較資料を充実した。また、咬耗ファセットの3次元分布から咀嚼運動を評価する研究を前年度から継続した。4)上記諸研究と関連し、現生の霊長類と化石類人猿標本の3次元情報化とモデル作成を進めた。特に、年度後半には、エチオピア文化省の古生物古人類研究施設にマイクロCT装置を運搬・臨時設置し、チョローラピテクス化石とラミダス猿人化石について3次元情報化を実施した。1)エチオピアのチョローラ地区の調査関連では、年代層序の残る疑問を解決するためにH26年度調査で追加採取した火山岩サンプル多数と古地磁気資料の分析を特急で進め、並行してH26年度取得の動物化石を評価し、チョローラ層の層序年代と動物相に関する一定の結論を導いた。この成果は、既存の層序年代学的枠組みを大幅に改定する重要なものとなり、H27年度後半に注目度の高い国際誌に論文発表した。また、H27年度後半期の野外調査はBetichaの類人猿化石サイトの発掘に集中し、化石包含層約30平米を発掘した。結果、類人猿とオナガザル類の重要な化石若干数を追加すると共に、H24年度以来の発掘区域を連続した20メートル(約90平米)の領域まで拡張した。チョローラピテクス化石の形態比較研究を進めると共に、ほぼ同時代のイラン産の類人猿化石の研究を進めた。2)コンソ地区関連の研究では、アシュール型石器群に関するコンソ調査報告書をエチオピアの共同研究者と最終化し、年度中に出版した。また、世界最古級の骨ハンドアックスなどについて比較分析を進めた。動物化石関連では、動物相全体の年代変化と古環境との関わりについて解析し、論文化した。並行して分類群ごとのまとめを継続した。3)ラミダス化石関連の形態進化研究では、前年度から継続して個別研究を試行錯誤した。種子骨の研究、距骨の関節面方位に関する研究、遊離歯を対象とした咬耗ファセットと咀嚼運動に関する研究、類人猿犬歯の歯髄腔を用いた年齢推定、エナメル象牙境による臼歯形態の3次元数量比較、数量モデルによるラミダス犬歯の性差推定などを進めた。4)各研究に必要な3次元スキャンデータを随時作成した。マイクロCT装置をエチオピア古生物古人類研究施設に継続臨時設置することができ、チョローラピテクス化石などの3次元情報化を発掘調査後に進めた。チョローラ地区は、人類とアフリカ類人猿が分岐した前後と思われる700万から1000万年前ごろの年代を持つ、アフリカでも稀少な調査地の一つである。特に900万から700万年前の間の時代は、人類進化史上の最後の大きな化石空白期となっているため、本研究によるチョローラ調査の意義は大きい。本研究では、代表者らが2007年に発表したチョローラの類人猿化石とその年代について、新規の地質・年代情報を得、また類人猿化石の発見数を着実に増してきた。チョローラ層の層序年代の更新においては、露頭情報と分析結果との間に複雑な相違点が生じ、その解決が必要であった。H26年度末の現地調査とH27年度の資料分析でこの問題に集中的に取り組み、結果、H27年度中に論文発表することができた。即ち、750万から900万年前の間のサハラ以南の化石群集の存在と特徴について、世界で初めて発表することができた。しかも、大型類人猿とオナガザル類の化石数は、毎年予想以上に増している。
気管支喘息治療の新しい分子標的としての細胞質フォスホリパーゼA2の検討

脂質メディエーターであるロイコトリエンやトロンボキサンは気管支喘息の増悪因子であり,これらの受容体拮抗剤は気管支喘息の治療薬として有効性が認められている。したがって,これら双方の合成を調節する細胞質フォスフォリパーゼA2(cPLA2)を阻害することは,さらに効率の良い気管支喘息の分子標的治療薬になると考えられる.我々はこれまでにcPLA_2がヒト好酸球のβ1-,β2-インテグリン依存性の接着を調節すること,さらに、抗原感作ラットを用いた実験でcPLA_2阻害剤が好酸球の肺への浸潤と気道過敏性の亢進を抑制すること等を報告してきたが,今回のテーマは,気管支喘息患者からの炎症性細胞,特に好酸球におけるcPLA_2の発現量や活性化が亢進しているのかどうかについて検討した.まず初めに好酸球のアラキドン酸産生能について検討では,健常者および気管支喘息患者それぞれ16名の末梢血好酸球を1μMのfMLPで刺激したところ,アラキドン酸の分泌能は気管支喘息群で有意に亢進していた,次に両群の末梢血好酸球2X10^6cellsを1μMのfMLP刺激して蛋白を抽出し,cPLA2活性化の違いを検討したところ,気管支喘息群は健常群に比べてfMLP刺激後に活性化の亢進を認めた(各n=12).これらの気管支喘息群末梢血好酸球のアラキドン酸産生能,cPLA2活性化の亢進が,cPLA2発現量の違いによるものか,または生体内において既にprimingされているための相違であるかを確かめるために,好酸球中のcPLA2の発現量の定量をsandwich ELISA法にて測定中した.発現量は健常群で0.36±0.13ng/10^6cells,気管支喘息群0.52±0.17ng/10^6cellsであり,気管支喘息群で発現量の亢進が有意に亢進していた.脂質メディエーターであるロイコトリエンやトロンボキサンは気管支喘息の増悪因子であり,これらの受容体拮抗剤は気管支喘息の治療薬として有効性が認められている。したがって,これら双方の合成を調節する細胞質フォスフォリパーゼA2(cPLA2)を阻害することは,さらに効率の良い気管支喘息の分子標的治療薬になると考えられる.我々はこれまでにcPLA_2がヒト好酸球のβ1-,β2-インテグリン依存性の接着を調節すること,さらに、抗原感作ラットを用いた実験でcPLA_2阻害剤が好酸球の肺への浸潤と気道過敏性の亢進を抑制すること等を報告してきたが,今回のテーマは,気管支喘息患者からの炎症性細胞,特に好酸球におけるcPLA_2の発現量や活性化が亢進しているのかどうかについて検討した.まず初めに好酸球のアラキドン酸産生能について検討では,健常者および気管支喘息患者それぞれ16名の末梢血好酸球を1μMのfMLPで刺激したところ,アラキドン酸の分泌能は気管支喘息群で有意に亢進していた,次に両群の末梢血好酸球2X10^6cellsを1μMのfMLP刺激して蛋白を抽出し,cPLA2活性化の違いを検討したところ,気管支喘息群は健常群に比べてfMLP刺激後に活性化の亢進を認めた(各n=12).これらの気管支喘息群末梢血好酸球のアラキドン酸産生能,cPLA2活性化の亢進が,cPLA2発現量の違いによるものか,または生体内において既にprimingされているための相違であるかを確かめるために,好酸球中のcPLA2の発現量の定量をsandwich ELISA法にて測定中した.発現量は健常群で0.36±0.13ng/10^6cells,気管支喘息群0.52±0.17ng/10^6cellsであり,気管支喘息群で発現量の亢進が有意に亢進していた.現在,ロイコトリエンやトロンボキサン受容体拮抗剤が気管支喘息の治療薬として有効性が認められていることから,これら双方を合成するアラキドン酸代謝系において最初の変換酵素であり,アラキドン酸の合成を調節する細胞質フォスフォリパーゼA2(cPLA_2)はさらに効率の良い気管支喘息の分子標的治療薬になると考えられる.我々はこれまでにcPLA_2がヒト好酸球β1,β2-インテグリン依存性の接着を調節すること,さらに、抗原感作ラットを用いた実験でcPLA_2阻害剤が好酸球の肺への浸潤と気道過敏性の亢進を抑制すること等を報告してきたが,今回のテーマは,気管支喘息患者からの末梢血や気管支肺胞洗浄液中の炎症性細胞,特に好酸球におけるcPLA_2、の発現量や活性化が亢進しているのかどうかについての評価である.1.まず初めに好酸球のアラキドン酸産生能について検討では,健常者および気管支喘息患者それぞれ8名の末梢血好酸球を1μMのfMLpで刺激したところ,アラキドン酸の分泌能は気管支喘息群で有意に亢進していた.2.次に両群の末梢血好酸球2X10^6cellsの蛋白を抽出し,1μMのfMLP刺激によるcPLA_2活性化の違いを検討したところ,気管支喘息群で基礎値<fMLP刺激後ともに健常群に比べて活性化の亢進を認めた.

これらの気管支喘息群末梢血好酸球のアラキドン酸産生能,cPLA_2活性化の亢進が,cPLA_2発現量の違いによるものか,または生体内において既にprimingされているための相違であるかを確かめるために,3.現在,好酸球中のcPLA_2の発現量の定量をsandwich ELISA法にて測定している.発現量は0.1ng/10^6cells単位と微量であるが,気管支喘息群で発現量の亢進している症例が含まれている.今後症例を増やし,また,real time PCR法で確認する予定である.学会報告,また論文投稿は平成15年度の予定である.ロイコトリエンやトロンボキサン受容体拮抗剤が気管支喘息の治療薬として有効性が認められていることから,これら双方の合成を調節細胞質フォスフォリパーゼA2(cPLA2)はさらに効率の良い気管支喘息の分子標的治療薬になると考えられる.我々はこれまでにcPLA_2がヒト好酸球のβ1-,β2-インテグリン依存性の接着を調節すること,さらに、抗原感作ラットを用いた実験でcPLA_2阻害剤が好酸球の肺への浸潤と気道過敏性の亢進を抑制すること等を報告してきたが,今回のテーマは,気管支喘息患者からの末梢血や気管支肺胞洗浄液中の炎症性細胞,特に好酸球におけるcPLA_2の発現量や活性化が亢進しているのかどうかについて検討している.1.まず初めに好酸球のアラキドン酸産生能について検討では,健常者および気管支喘息患者それぞれ16名の末梢血好酸球を1μMのfMLPで刺激したところ,アラキドン酸の分泌能は気管支喘息群で有意に亢進していた.2.次に両群の末梢血好酸球2X10^6cellsの蛋白を抽出し,1μMのfMLP刺激によるcPLA2活性化の違いを検討したところ、気管支喘息群で基礎値,fMLP刺激後ともに健常群に比べて活性化の亢進を認めた(各n=12).これらの気管支喘息群末梢血好酸球のアラキドン酸産生能、cPLA2活性化の亢進が,cPLA2発現量の違いによるものか,または生体内において既にprimingされているための相違であるかを確かめるために,3.現在,好酸球中のcPLA2の発現量の定量をsandwich ELISA法にて測定した.発現量は0.1ng/10^6cells単位と微量であるが,気管支喘息群で発現量の亢進が有意である(各n=8).平成16年度は症例を迫加し,また、real time PCR法で確認する予定である.学会報告,また論文投稿は平成16年度に行う予定である.脂質メディエーターであるロイコトリエンやトロンボキサンは気管支鳴息の増悪因子であり,これらの受容体拮抗剤は気管支喘息の治療薬として有効性が認められている。したがって,これら双方の合成を調節する細胞質フォスフォリパーゼA_2(cPLA_2)を阻害することは,さらに効率の良い気管支喘息の分子標的治療薬になると考えられる.我々はこれまでにcPLA_2がヒト好酸球のβ1-,β2-インテグリン依存性の接着を調節すること,さらに、抗原感作ラットを用いた実験でcPLA_2阻害剤が好酸球の肺への浸潤と気道過敏性の亢進を抑制すること等を報告してきたが,今回のテーマは,気管支喘息患者からの炎症性細胞,特に好酸球におけるcPLA_2の発現量や活性化が亢進しているのかどうかについて検討した.まず初めに好酸球のアラキドン酸産生能について検討では,健常者および気管支喘息患者それぞれ16名の末梢血好酸球を1μMのfMLPで刺激したところ,アラキドン酸の分泌能は気管支喘息群で有意に亢進していた.次に両群の末梢血好酸球2X10^6cellsを1μMのfMLP
魚類の消化機能と生物時計に関する研究

魚類の摂餌行動には顕著な日周性がみられる.しかし,これらの日周性が生物時計により駆動されているかどうかは未だ明らかにされていない.そこで本研究においては,魚類の消化機能が生物時計により制御されている可能性を検証することを目的とした.1.各種消化酵素活性の日周性の解析明暗条件ならびに恒暗条件下でニジマスを飼育し,1週間の絶食の後,消化酵素活性測定用の試料として胃,幽門垂.腸管を採取した.現在,アミラーゼならびにリパーゼ活性の測定を行っている.2.消化管におけるメラトニン機能の検討生物時計指標ホルモンであるメラトニンが消化管において産生されるかどうか検討した.RIAによる検討の結果,消化管にメラトニンが存在することが判明した.メラトニンが消化管において合成されている可能性を検討するため,メラトニン合成酵素のひとつであるarylalkylamine N-acetyltransferase(AANAT)に対する特異的抗血清を用いた免疫組織化学的検討を行った.しかしながら,ニジマス消化管(胃,幽門垂,腸)において陽性反応は認められなかった.また,AANAT遺伝子の発現の有無についてRT-PCR法を用いて検討したが.昼夜ともにAANAT mRNAは検出できなかった.さらに2-[^<125>I]iodomelatoninをリガンドとしたラジオレセプターアッセイにより消化管におけるメラトニン受容体の存在の有無について検討したが,特異的結合は認められなかった.3.摂餌同調性生物時計の存在部位の検索摂餌同調性生物時計の脳内における存在部位についてimmediate early geneの産物であるcFos抗体(Cambridge Research Biochemicals社)を用いた免疫組織化学により試みた.しかし,本抗体により実験の供試魚として用いたキンギョ脳内に陽性反応を見いだすことは出来なかった.魚類の摂餌行動には顕著な日周性がみられる.しかし,これらの日周性が生物時計により駆動されているかどうかは未だ明らかにされていない.そこで本研究においては,魚類の消化機能が生物時計により制御されている可能性を検証することを目的とした.1.各種消化酵素活性の日周性の解析明暗条件ならびに恒暗条件下でニジマスを飼育し,1週間の絶食の後,消化酵素活性測定用の試料として胃,幽門垂.腸管を採取した.現在,アミラーゼならびにリパーゼ活性の測定を行っている.2.消化管におけるメラトニン機能の検討生物時計指標ホルモンであるメラトニンが消化管において産生されるかどうか検討した.RIAによる検討の結果,消化管にメラトニンが存在することが判明した.メラトニンが消化管において合成されている可能性を検討するため,メラトニン合成酵素のひとつであるarylalkylamine N-acetyltransferase(AANAT)に対する特異的抗血清を用いた免疫組織化学的検討を行った.しかしながら,ニジマス消化管(胃,幽門垂,腸)において陽性反応は認められなかった.また,AANAT遺伝子の発現の有無についてRT-PCR法を用いて検討したが.昼夜ともにAANAT mRNAは検出できなかった.さらに2-[^<125>I]iodomelatoninをリガンドとしたラジオレセプターアッセイにより消化管におけるメラトニン受容体の存在の有無について検討したが,特異的結合は認められなかった.3.摂餌同調性生物時計の存在部位の検索摂餌同調性生物時計の脳内における存在部位についてimmediate early geneの産物であるcFos抗体(Cambridge Research Biochemicals社)を用いた免疫組織化学により試みた.しかし,本抗体により実験の供試魚として用いたキンギョ脳内に陽性反応を見いだすことは出来なかった.魚類の摂餌行動ならびに消化機能には顕著な日周性がみられる.しかしながら、これらの現象が周期的な摂餌刺激によって作り出されるのか,あるいは生物時計により駆動されているのかという点に関しては未だ明らかにされていない.本研究においては,魚類の消化機能が生物時計により制御されているかどうかを解明することを主たる目的として,本年度は以下の点について検討した.各種消化酵素活性の日周性の解析については,各種酵素活性の測定法確立を現在行うとともに,各種給餌条件で飼育したキンギョ,ニジマスから試料の収集を行っている.消化管におけるメラトニンの機能解析については、その局在を明らかにするための第一歩として、メラトニン合成酵素の一つであるserotonin N-acetyltransferase(AANAT)遺伝子を網膜からクローニングした.その配列をもとに合成ペプチド抗体の作成に成功したので,消化管にAANAT抗体に対する陽性反応が存在するかどうか免疫組織化学的検討中である.また,魚類消化管におけるメラトニンの作用部位を明らかにするために,キンギョ消化管におけるメラトニン受容体の存在の有無をラジオレセプターアッセイにより検討したが,キンギョ消化管の粗膜分画にはメラトニンアゴニストである2-[^<125>I]iodomelatoninに対する特異的結合を検出することはできなかった.摂餌同調性生物時計については,本年度はキンギョにおいて摂餌同調性生物時計が存在することを行動学的に示した.その脳内の局在についてはimmediateearly geneの産物であるcFos発現を指標に免疫組織化学的に検討中である.魚類の摂餌行動には顕著な日周性がみられる.しかし,これらの日周性が生物時計により駆動されているかどうかは未だ明らかにされていない.そこで本研究においては,魚類の消化機能が生物時計により制御されている可能性を検証することを目的とした.

明暗条件ならびに恒暗条件下でニジマスを飼育し,1週間の絶食の後,消化酵素活性測定用の試料として胃,幽門垂,腸管を採取した.現在,アミラーゼならびにリパーゼ活性の測定を行っている.消化管におけるメラトニン機能の検討生物時計指標ホルモンであるメラトニンが消化管において産生されるかどうか検討した.RIAによる検討の結果,消化管にメラトニンが存在することが判明した.メラトニンが消化管において合成されている可能性を検討するため,メラトニン合成酵素のひとつであるarylalkylamine N-acetyltransferase(AANAT)に対する特異的抗血清を用いた免疫組織化学的検討を行った.しかしながら,ニジマス消化管(胃,幽門垂,腸)において陽性反応は認められなかった.また,AANAT遺伝子の発現の有無についてRT-PCR法を用いて検討したが,昼夜ともにAANATmRNAは検出できなかった.さらに2-[^<126>I]iodomelatoninをリガンドとしたラジオレセプターアッセイにより消化管におけるメラトニン受容体の存在の有無について検討したが,特異的結合は認められなかった.摂餌同調性生物時計の脳内における存在部位についてimmediate early geneの産物であるcFos抗体(Cambridge Research Biochemicals社)を用いた免疫組織化学により試みた.しかし,本抗体により実験の供試魚として用いたキンギョ脳内に陽性反応を見いだすことは出来なかった.
政策移転と教訓導出の様態に関する研究

本研究では、政策学習と教訓導出に関する理論研究と教訓導出の規定要因に関する研究とを行った。前者に関しては、アクターの構造、学習メカニズム、政策選択へのプロセス、といった点について検討し、また、言説の概念を取り込んだ分析の枠組みについても検討を行った。後者に関しては、政策移転の事例分析をもとに、教訓導出を規定する制度的要因の確認を行った。また、それとあわせて、問題のフレーミングによる影響についても確認した。研究の2年目である平成24年度は、言説の概念に注目した政策学習の理論研究と予備調査をもとにした政策移転事例の分析を行った。政策学習の理論研究に関しては、政治的学習、社会的学習、政策志向学習、教訓導出、政府学習といった従来の政策学習の支配的概念に加えて、シュミットやハイエールらの言説及び言説政治の概念を取り込んだ形での分析枠組みの再構築を行っていった。そこでは、ハイエールが指摘する言説の因果的物語のストーリーラインという機能に注目し、問題構造のフレーミングへの影響について検討した。さらに、シュミットが指摘する言説の観念的側面での認知的機能と規範的機能、政治的相互作用の側面での調整的機能と伝達的機能に注目し、それらを政策学習のプロセスに取り込む形で分析枠組みの再構築を検討した。このような理論研究とあわせて、政策移転事例に関しても分析を進めていった。具体的には、NPM、消費者庁、インセンティブ規制導入といった事例を取り上げ、前年度からの予備調査に加え資料収集とその分析を行った。そして、それぞれの事例の政策移転のプロセスについて、大きく、問題の認識、他国からの教訓導出、制度設計、という段階において、どのような政策学習が行われたかを検討した。また、そこでは前述の具体事例をもとに、政策移転の対象である「政策理念」「組織」「政策手段」という要素においてそれぞれどのような学習が行われるかということについても検討を行った。これらの研究の成果に関しては、前述の理論研究の成果の一部を日本政治学会の学術雑誌である『年報政治学』の特集論文の理論枠組みとして発表した。研究の最終年度である平成25年度は、政策移転事例の分析をもとにした学術論文の執筆と、同論文での分析結果をもとに教訓導出概念に関する再検討を行った。政策移転事例の分析に関しては、消費者庁の政策移転事例と関連して、食品安全委員会設置についてその教訓導出過程を分析した。そこでは、1食品安全行政における問題の認識、2教訓の参照、3教訓をもとにした政策対応、という3つの段階について、どのように教訓導出が行われたかということについて検討した。そして、食品安全行政が機能しないような制度設計がなされたのかということについて、BSE問題に関する調査検討委員会での、1政策アイディアの学習の失敗、2制度化の失敗、という2つの「教訓導出の失敗」の存在を指摘した。また、政策移転の対象である「政策理念」「政策手段」という要素に関して、それぞれどのような学習が行われるかということについても他の事例をもとに検討を行った。そして、これらの事例分析をもとに、教訓導出概念についても理論的検討を行った。そこでは、まず事例分析の枠組みの検討において、教訓導出に影響を及ぼす要因として、1プログラムの独自性(uniqueness)、2制度、3資源、4プログラムの複雑性(complexity)、5変化の規模、6相互依存、7価値、といった要因を確認した。また、事例の分析結果から、従来から指摘されていた制度的要因(政策決定の場、拒否点、政策遺産)と関連する形で、「(問題の)フレーミング」によって教訓導出の様態が一定程度規定されることを確認した。これらの研究の成果に関しては、前述の事例研究の成果の一部を中央大学法学部紀要の『法学新報』に投稿し、121巻3・4号での掲載が確定した。研究初年度である平成23年度は、教訓導出を含んだ政策学習論全体の理論研究と事例の予備調査を行った。政策学習の理論研究に関しては、政治的学習、社会的学習、政策志向学習、教訓導出、政府学習といった従来の政策学習の支配的概念に関して、ベネットらの研究をもとに整理した。そして、それを踏まえた上で、政策学習概念の再構築に向けて、大きく、(1)アクターの構造、(2)学習メカニズム、(3)政策選択へのプロセス、という点から90年代以降の研究のサーベイを行った。まず、アクターの構造に関しては、認識共同体に関する研究やポスト実証主義的政策分析に関する研究等も参照しながら、(1)アクターの範囲、(2)アクター間の相互作用、について検討を行った。次に、学習メカニズムに関しては、政策決定における専門知に関する研究等も参照しながら、(1)学習の対象(知識の範囲・知識の性質)、(2)学習のプロセス(学習の契機・学習の規則性)、について検討を行った。そして、政策選択へのプロセスに関しては、新制度論に関する研究等も参照しながら、(1)知識のキャリア、(2)制度による制約、(3)政策変化のプロセス、について検討を行った。これらの理論研究に関しては、「政策学習論の再構築に向けて」という論文にまとめ、紀要『熊本大学社会文化研究』に投稿し、掲載された。

また、上述の理論研究をもとに、個別事例研究及び比較研究の分析フレームワークを構築し、事例研究の対象事例に関して資料収集を予備的に行っていった。平成23年度に行った教訓導出に関する理論研究と事例の予備調査を踏まえた上で、今年度は分析枠組みの再構築という形で理論研究をさらに発展させることができ、また、事例に関しても分析を行うことができたため、「おおむね順調に進展している」と評価した。平成23年度に予定した教訓導出に関する理論研究と事例の予備調査を行い、理論研究に関しては研究成果を公表できたため、「おおむね順調に進展している」と判断できる。平成25年度に関しては、理論研究、事例研究とも24年度の研究結果を再検討し、発展させていく。平成23年度においては事例の予備調査が若干遅れたため、それを速やかに行った後、政策移転に関する個別事例研究を行っていく。理論研究に関しては政策学習、政策移転、言説等の概念に関する研究書の購入を予定している。事例研究に関してはさらなる資料収集、関係者へのヒアリング等に関連した支出を予定している。事例の予備調査と理論研究をもとに分析フレームワークを構築し、政策移転に関する個別事例研究について、政府資料や関係者へのヒアリング等をもとに分析を行っていく。
グルタミン酸脱炭酸酵素の遺伝子改変マウスを利用したGABA神経伝達機構の研究

GABAは、グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD65とGAD67の2型存在)により合成される。出生日以降のGAD67分子の役割を明らかにする目的でGAD67誘導型ノックアウトマウスの作製を目指し、テトラサイクリントランスアクチベーターシステムについて検討し、GAD67-tTA2ノックインマウスを作製した。また、小脳皮質特異的GAD67ノックアウトマウス、GAD67とGAD65の完全型ノックアウトマウスについて解析したGABAは、グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD65とGAD67の2型存在)により合成される。また、小脳皮質特異的GAD67ノックアウトマウス、GAD67とGAD65の完全型ノックアウトマウスについて解析したGABAは、神経系における主要な抑制性伝達物質として神経の電位活動の制御に加えて、覚醒、睡眠、概日リズムや学習、運動、感覚情報処理など脳の機能を構築する上で中心的役割を果たしている。GABAは、グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD ; GAD65,GAD67の2型存在)によって合成される。本研究では、GAD遺伝子の誘導型ノックアウトマウスの作成を目指した。また、完全型ノックアウトマウスを用いて、網膜、胎児の腹壁形成と口蓋形成におけるGAD65,GAD67の役割について検討した。GAD67遺伝子完全ノックアウトマウスは、出生日に死亡するので、アダルトでのGAD67の機能が不明である。従って、tetracycline-controlled transactivator(tTA)システムを利用した誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成を目指した。誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成には、GAD67遺伝子にtTA2をノックインした遺伝子改変マウス(GAD67-tTA2マウス)が必要である。GAD67遺伝子にtTA2をノックインしたターゲティングベクターを利用して相同組み換えのおこったES細胞を胚に導入することにより、キメラマウスを作成した。キメラマウスと野生型マウスとを交配して、GAD67-tTA2マウスを作成した。今後は、tetプロモーターの下流にGAD67 cDNAを配置したトランスジェニックマウス(tet-GAD67マウス)を作成し、GAD67-tTA2マウスと交配し、誘導型GAD67ノックアウトマウスを作成する。完全型GAD65ノックアウトマウスと野生型マウスの網膜について、組織学的解析した結果、両者に差異は見られなかった。完全型GAD67ノックアウトマウスの胎児標本について検討した結果、92%(n=24)に口蓋裂、43%(n=40)に臍帯ヘルニアを観察した。一方、完全型GAD65・GAD67ダブルノックアウトマウスでは、全例(n=4)で口蓋裂と臍帯ヘルニアの両方を観察した。今後は、口蓋形成および腹壁形成において、GABAが関与する決定時期をきめる目的で誘導型ノックアウトマウスを利用する。GABAは,神経系における主要な抑制性伝達物質として神経の電位活動の制御に加えて,覚醒,睡眠,概日リズムや学習,運動,感覚情報処理など脳の機能を構築する上で中心的役割を果たしている。GABAは,グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD;GAD65,GAD67の2型存在)によって合成される。本研究では,GAD遺伝子の誘導型ノックアウトマウスの作成を目指した。また,完全型ノックアウトマウスを用いて,胎児の腹壁形成と口蓋形成におけるGAD65,GAD67の役割について検討した。GAD67遺伝子完全ノックアウトマウスは,出生日に死亡するので,アダルトでのGAD67の機能が不明である。従って,tetracycline-controlled transactivator(tTA)システムを利用した誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成を目指した。誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成には,GAD67遺伝子にtTA2をノックインしたマウス(GAD67-tTA2マウス)とtTA2が結合するtetプロモーターの下流にGAD67 cDNAを配置したトランスジェニックマウス(tet-GAD67マウス)の2種類の遺伝子改変マウスが必要である。GAD67-tTA2マウスは既に作成した。一方,tet-GAD67マウス作成に使用するコンストラクトを構築した。このコンストラクトを293-Tet-Off細胞に導入し,ウエスタン法を行い,テトラサイクリンシステムが機能することを培養細胞系で確認した。今後は,このコンストラクトを受精卵に導入することにより,tet-GAD67マウスを作成し,GAD67-tTA2マウスと交配することにより誘導型GAD67ノックアウトマウスを作成する。完全型GAD65・GAD67ダブルノックアウトマウスでは全例(n=25)で口蓋裂と臍帯ヘルニアの両方を観察し,完全型GAD67ノックアウトマウスよりも重篤であった。この結果から,口蓋形成および腹壁形成においてGAD67とGAD65の両方の分子が関与することが判明した。GABAは、神経系における主要な抑制性伝達物質として神経の電位活動の制御に加えて、覚醒、睡眠、概日リズムや学習、運動、感覚情報処理など脳の機能を構築する上で中心的役割を果たしている。GABAは、グルタミン酸脱炭酸酵素(GAD;GAD65,GAD67の2型存在)によって合成される。

GAD67遺伝子完全ノックアウトマウスは、出生日に死亡するので、アダルトでのGAD67の機能が不明である。従って、tetracycline-controlled transactivator(tTA)システムを利用した誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成を目指した。誘導型GAD67ノックアウトマウスの作成には、GAD67遺伝子にtTA2をノックインしたマウス(GAD67-tTA2マウス;既に作成)とtTA2が結合するtetプロモーターの下流にGAD67 cDNAを配置したトランスジェニックマウス(tet-GAD67マウス)の2種類の遺伝子改変マウスが必要である、tet-GAD67マウス作成に関しては、トランズジーン由来と内因性のGAD67とを区別するために、HA-tagで標識したGAD67 cDNA(HA-GAD67)が必要である。HA-GAD67とGAD67の酵素活性を比較するために、CAGプロモーターの下流にHA-GAD67あるいはGAD67を配置したプラスミドを培養細胞に導入し、培養細胞におけるGABA合成量を免疫染色法で測定した。一方、麻酔薬の作用とGABA神経伝達との関係を明らかにするために、完全型GAD65ノックアウトマウスを用いて検討した。プロポフォールによる立ち直り反射消失と尾撤去反射消失の持続時間が野生型マウスに比較して完全型GAD65ノックアウトマウスで減少しており、プロポフォールの効果にはGAD65分子が関与することを明らかにした。
近代イギリスにおける感受性文学と誤認―女性、言語、社会制度

「感受性」が「誤認」を生み出す過程を医学や経験論、身体論を含めて多面的に分析し、その文化的、社会的、政治的意味と問題を、1819世紀初期のイギリス文学、特に女性文学に焦点を当て解明する。事実の「歪曲」や他者への「偏見」も生み出す感受性の「誤認」は「共感」や「想像力」を喚起する原動力として機能する一方で、女性や植民地における被支配者など社会的弱者に抑圧的な社会制度構築を助長した。女性作家らがいかにこの「誤認」を意識しながら、その制度への批判を試みたかを検証する。人工知能が人間的機能を侵食しつつある現代において、人間の創造力の根源にある「誤認」を「人文学」の枠組みで捉え直すことも射程に入れる。
フラストレート系遷移金属酸化物における重い電子系的挙動と量子スピン液体状態の探索

本研究では、Na_xCo_2O_4系に着目し、研究を行ってきた。この系は層状構造を持つ金属伝導体であり、大きな熱起電力を示すことから元々は熱電変換材料として注目されている物質である。本研究では、この系の良質試料をフローティングゾーン法で作製し、低温物性を精密に調べた。特に近年注目されてきたスピネル酸化物LiV_2O_4(γ=420mJ/molK^2)と詳細に比較・検討し、重い電子系的な挙動の有無を検証した。まず、帯磁率では15K付近に幅広なピークが見られ、ピーク付近の磁場依存性(H≦7 T)も含めて、LiV_2O_4の帯磁率の振舞と非常に類似していることがわかった。また電気抵抗は金属的で、低温ではρ=ρ_0+AT^2の式に従い、他の重い電子系と同様にフェルミ液体の挙動を示すことがわかったた。さらに比熱測定ではC/Tの値がT=2Kで約60mJ/molK^2であることがわかった。ウィルソン比はRw=2.7(強相関系では通常Rw=2前後)、またA/γ^210^<-4>[μΩcm/K^2/(mJ/molK^<-2>)^2]であり、門脇-Woodsの関係よりも一桁大きくなった。A/γ^2については単結晶試料を使えばもう少し下がるのではと考えている。また、このような特性を示す試料のNa濃度はx1.5であることをプラズマ発光分析により明らかにした。以上のようにNa_<1.5>Co_2O_4では、LiV_2O_4と同様に、帯磁率の幅広のピークを伴いながら有効質量の増大したフェルミ液体の形成が起こることがわかった。Na_xCo_2O_4系ではCoサイトが三角格子を形成しており、有効質量の増大にはフラストレーションの関与が期待される。現在、類似系であるLi_xCo_2O_4系について、Li濃度xを1≦x≦2まで系統的に変化させた試料の合成に成功し、様々な測定を通して重い電子系的挙動の有無の検証に取り組んでいる。今後、他のフラストレート系遷移金属酸化物についても物性探索を行い、d電子系における重い電子系的挙動の起源の解明を目指す。本研究では、Na_xCo_2O_4に着目した。今年度は、この系の良質試料をフローティングゾーン法で作製し、低温物性を精密に調べた。まず、測定に用いた試料はNa濃度x1.5であることがプラズマ発光分析により明らかになった。帯磁率では15K付近に幅広なピークが見られ、ピーク付近の磁場依存性(H≦7T)も含めて、LiV_2O_4の帯磁率の振舞と非常に類似していることがわかった。また電気抵抗は金属的で、低温ではρ=ρ_0+AT^2の式に従い、他の重い電子系と同様にフェルミ液体の挙動を示すことがわかった。今後は、Na_<1.5>Co_2O_4のホール係数の温度変化を調べるとともにNa濃度xに対する物性の変化を追跡する。またこのような挙動を示す他の遷移金属酸化物の例の探索・発見を試み、d電子系における重い電子系的挙動の起源の解明を目指す。

さらに比熱測定ではC/Tの値がT=2Kで約60mJ/molK^2であることがわかった。ウィルソン比はRw=2.7(強相関系では通常Rw=2前後)、またA/γ^210^<-4>[μΩcm/K^2/(mJ/molK^<-2>)^2]であり、門脇-Woodsの関係よりも一桁大きくなった。A/γ^2については単結晶試料を使えばもう少し下がるのではと考えている。また、このような特性を示す試料のNa濃度はx1.5であることをプラズマ発光分析により明らかにした。以上のようにNa_<1.5>Co_2O_4では、LiV_2O_4と同様に、帯磁率の幅広のピークを伴いながら有効質量の増大したフェルミ液体の形成が起こることがわかった。Na_xCo_2O_4系ではCoサイトが三角格子を形成しており、有効質量の増大にはフラストレーションの関与が期待される。現在、類似系であるLi_xCo_2O_4系について、Li濃度xを1≦x≦2まで系統的に変化させた試料の合成に成功し、様々な測定を通して重い電子系的挙動の有無の検証に取り組んでいる。今後、他のフラストレート系遷移金属酸化物についても物性探索を行い、d電子系における重い電子系的挙動の起源の解明を目指す。
非線形発展方程式の解の存在についての研究

Bruckによって研究されたtype(γ)と呼ばれる非拡大写像の性質を詳しく研究し、非拡大半群に対する共通不動点への強収束定理について一連の結果をバナッハ空間において得た。共通不動点への収束定理については、弱収束を示した結果は色々あったが、余分な条件を付けずに強収束を得た結果はほとんどなかったので、画期的な結果である。強収束定理を証明する際に用いた手法を活用することにより、10数年間未解決であったamenable半群に対する非線形エルゴード定理をバナッハ空間で証明した。線形写像の半群に対しては、60年代にDayが結果を得ているが、その非拡大半群への拡張である。また、バナッハ空間において、非線形発展方程式u'(t)+Au(t)∋f(t,u(t))+h(t)に対する周期解についてコアシブ条件のもとで存在定理を得た。これはヒルベルト空間において得られていたCascaval-Vrabieの結果をバナッハ空間に拡張しとことになる。さらに、同じ発展方程式に対して変分構造やコアシブ条件を仮定せずに鞍点型の条件のもとで周期解の存在を写像度の理論を用いて得た。u'(t)+Au(t)∋f(t,u(t))+h(t)の形のままでは写像度を計算することは難しいので、方程式をホモトピー変形で線形な方程式に直し、その線形方程式の写像度を調べるという方法で解決した。この結果から楕円型方程式についても解の存在を得ている。数理解析研究所の研究集会や台湾での国際会議(ICMAA2000)で発表したが論文は投稿中である。バナッハ空間において、非拡大半群に対する共通不動点への強収束定理について一連の結果を得た。共通不動点への収束定理については、弱収束を示した結果は色々あったが、余分な条件を付けずに強収束を得た結果はほとんどなかった。ポイントとなったことは、meanを用いて収束する点列をうまく定義したことである。一般の非拡大半群に対して定義をするのは難しいので、バナッハ空間の閉凸集合上の非拡大写像Tに対して強収束する点列{X_n}の構成法を示すと、{a_n}を[0,1]の数列、出発点x_0およびyをCの任意の点とし、X_<n+1>=a_ny+(1-a_n)(n+1)^<-1>Σ^n_<i=0>T^ix_nとすることである。また、強収束定理を証明する際に用いた補助定理を活用することにより、10数年間未解決であったamenable半群に対する非線形エルゴール定理をバナッハ空間で証明した。ポイントとなったことは、Bruckによって研究されたtype(γ)と呼ばれる非拡大写像の性質を詳しく調べたことである。さらに、バナッハ空間において、非線形発展方程式u'(t)+Au(t)∋f(t)に対する周期解の存在についての結果を得た。ヒルベルト空間において得られていたCascaval-Vrabieの結果をバナッハ空間に拡張し、porous medium方程式に対する周期解に応用した。ポイントとなったことは、カラテオドリ写像fを局所リプシッツな関数で近似することである。
海洋混合層の微細構造の観測とその数値モデル化に向けて

本研究は海洋の表層混合層を観測し、その動態を数値モデルによりシュミレートすることを目的として計画した。この目的のため、混合層内の乱流を直接観測しなければならない。そこで、我々は自由落下型の乱流観測装置の開発を行ってきた。この観測装置(Turblence ocean Microstructure Aquisition Profiler,TurboMAP)は、本研究を通したびたび改良を加え、現在はかなり過酷な条件でもデータを取得することが出来るようになった。TurboMAPは乱流シェアー・水温の微細構造ばかりでなく、高解像度の蛍光光度計及び濁度計を搭載しており、植物プランクトンや水中懸濁物質の微細な分布状態を計測することが出来る。これらのパラメータを同時に計測し、そのデータ解析等の手法を確立することができた。小型蛍光光度・濁度計の解像度の検証や他の観測測器との比較を行なうため、室内実験を行い検討した。この結果、空間的には約2cmで解像でき、一般的に自然界に存在する蛍光光度の測定範囲を充分測定できることが解った。観測結果によれば、蛍光光度の微細な分布状態は乱流から強い影響を受けていることが解った。蛍光光度のスペクトルは、乱流のそれよりも大きいスケールでスペクトルレベルが低下しでいることが解った。このことは蛍光光度の起源となる植物プランクトンが、乱流下で局所的に固まって存在することを示唆している。本研究では、さらに過去に蓄積したデータをもとに混合層内への取り込み現象を明らかにする試みも行なわれてきた。取り込み現象のひとつであるKelvin-Helmholtz不安定を実測データより見出して、数値実験の結果と比較することに成功した。観測したBillowは、数値実験より得られた動的特徴とよく一致していた。これらの観測結果を数値モデルの中で再現するために、Mello-YamadaのClosure Modelを用いて乱流の動態を表現し、植物プランクトンや懸濁物質の分布状態をランダムウオークモデルによって扱うことを試みている。風と対流の影響によって植物プランクトンの生産の様子がどのように影響をうけるのかを調べてきた。また、Mello-YamadaのClosure Modelと簡単なEkman層のモデルとの比較もおこなった。これらの一連の数値実験なかから拡散係数が空間的に変化する場合、一般的なランダムウオークの手法では粒子が偏ったところに集まる傾向があることが分かった。TurbMAPの開発はヴィクトリア大学のLueck教授の技術指導のもとにすすめている。平成10年5月にLueck教授は来日し、本研究代表者(山崎)とともにTurbMAPの制作にあたっているAlec電子を訪問した。この時の技術指導のおかげでTurbMAPは、国際的にも第一級の海洋観測装置として仕上がってきている。この観測装置の予備実験は、8月に広島県呉市の近海で、10月には日光の中禅寺湖で小型の船舶から行った。さらに、11月には東京水産大学の研究・練習船青鷹丸を用いて実験を計画したが、荒天のため実行不能となり断念した。平成11年3月には、今年度最後の予備実験を琵琶湖で予定している。

TurbMAPは一般的なCTD及び乱流の成分ばかりでなく、微細に分布したクロロフィルや濁度も計測できるように設計した。装置は自由落下型のもので、毎秒約50センチ-メートルで降下する。この回収は、装置に接続してあるケブラーケーブルを巻き取ることで行う。このため、ケーブルが切れて回収不能になる危険性があるため外洋での使用についてはいまのところ慎重である。Mello-Yamadaのclosure modelは米国で開発されたものを入手して、我々の目的にあったものに改良を加えているところである。現在は、館山湾坂田沖に、東京水産大学が設置した気象・海象観測装置から得た現場でのデータとの比較をおこなっており、物理量が正しく計算されているか検討している。本研究は、現在開発中の乱流観測装置(Turbuernce-Microstructure Acquisition Profiler:TurbMAP)を用いて表層混合層内の乱流・拡散過程を観測し、これらの過程が混合層内の動体にはたす役割を解明するのが目的である。さらにこれらの観測結果をもとに、これまで頻繁に利用されてきたMellow-Yamada closure modelの混合層モデルの妥当性について検討する。昨年度より、Lueck教授の技術協力を受けて開発をすすめているTurbMAPは、昨年度の現場実験の成果をもとにさらに改良が加えられ、本年度は3回の現場実験をおこなった。まず、第一回目は、改良後の初テストを本学研究練習船青鷹丸により相模湾で行った。第一回目の実験により、乱流測定プローブに問題があることが判明し、再度、Lueck教授の技術協力を求め解決にあたった。第二回目の実験は夜間の対流現象観測する目的で、24時間観測を琵琶湖北湖の中央部で行った。さらに、三回目の実験を、本学練習船神鷹丸により小笠原海城で行った。これらの一連の現場実験から、湾内や湖などの静穏状態においては、乱流及びクロロフィル・濁度の微細構造を測定することができることを確認した。しかし外洋のうねりを伴う条件の場合では、これまでのウインチ及び回収ケーブルでは不十分であることが判明した。現在、この部分の改良をすすめているところである。第2回目の琵琶湖での実験は対象にしていた対流現象を捕らえることが出来た。観測は、10分間隔でほぼ20時間行い、夜間の対流混合層の発達状態を詳細に観測することが出来た。現在は、このデータの解析をすすめ、混合層の数値モデル(Mellow-Yamada closure model)と比較できるようなデータベースを作成中である。またMellow-Yamada closure modelとランダムウオークによる植物プランクトンの生態モデルを我々のワークステーションでシミュレートできるように数値実験の環境を整えることに成功した。本研究は海洋の表層混合層を観測し、その動態を数値モデルによりシュミレートすることを目的として計画した。この目的のため、混合層内の乱流を直接観測しなければならない。
ミジンコの生殖機構からみた有性生殖と単為生殖の進化

ミジンコは、環境の変化に応答して単為生殖と有性生殖を使い分けているが、いずれの生殖様式でも2倍体の個体が生まれる。本研究では、この2つの生殖様式が卵形成過程のどの段階がどのように異なることで実現するのかを解明することを目的としている。有性生殖様式については、昨年度までに得たオスの誘導や交尾についての知見をもとに受精の時期や場所、卵形成時の減数分裂過程を記載すべく経時的なサンプリングと組織標本の観察を進めている。さらに、マイクロサテライトマーカーを用いて、交配が起こりやすい系統の組み合わせや、交配を安定的に誘導できる条件を検討している。単為生殖については、第1減数分裂が途中で停止しスキップする「減数しない減数分裂」が起こることがわかっているが、分裂の停止への関与が予想される細胞周期制御関連因子の阻害剤を用いた実験を進めている。さらに、生殖様式の分子機構を解析するために、ミジンコにおいて初となる人工制限酵素TALEN(Transcription activator-like effector nuclease)を用いた標的遺伝子の破壊(ノックアウト)法を確立した。これらの成果は、BMC Biotechnology誌に掲載され、Highly accessed paperに認定された(Hiruta et al., 2014)。さらにノックイン法の確立に着手し、ミジンコのゲノム編集基盤の整備を進めている。これらの技術により、生殖細胞特異的な遺伝子発現および機能解析やヒストンなどの標識による減数分裂時の染色体挙動の解析を展開していく予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。ミジンコは、環境変化に応じて単為生殖と有性生殖を使い分けている。この2つの生殖様式が卵形成過程のどの段階がどのように異なることで実現するのかを解明することを目的としている。まず、有性生殖においては減数分裂が起こると考えられるが、受精の時期や場所についても明らかではない。有性生殖様式を解析する基盤となるオスの誘導や交尾についての条件を検討し、また、複数の有性生殖系統のマイクロサテライトマーカーの選定を行い、交配の有無について検証できるようになった。これらの成果については、電子書籍に掲載される(Hiruta et al., in press)。単為生殖については、第1減数分裂を途中でスキップする減数しない減数分裂が起こることがわかっているが、その細胞学的な特徴を明らかにすべく、分裂装置の構成や挙動を解析した。その結果、中心体のない樽型の分裂装置が観察され、通常の紡錘体とは異なりγチューブリンは中心体のあるはずの両極ではなく紡錘糸上に局在していた。その後、卵割が開始するまでに新規に中心体が形成される。これらの成果は、国際誌に掲載された(Hiruta and Tochinai, 2012)。さらに、遺伝子の機能解析やトランスジェニック体の作出などに応用可能なマイクロインジェクション法の確立を目指した。産卵直後の胚を親個体の育房から取り出しても正常に発生する培養条件を検討し、続いてRNA干渉法(RNAi)を試みた。ホメオボックスを持つ転写因子で、節足動物では付属肢の遠位部形成に関わるDistal-less(Dll)遺伝子のノックダウンを行った。その結果、近縁種であるオオミジンコと同様に付属肢の遠位部の形成阻害等の表現型が得られ、遺伝子の発現解析等の結果からも、RNAiが機能していることが示された。今後は、確立した手法を国際誌へと投稿し、各生殖様式の分子機構の解明に利用していく。まず、有性生殖様式を解析する基盤となるオスの誘導や交尾についての条件を検討し整理した。これらの成果は、書籍に1章をあてて掲載された(Hiruta et al., 2014)。さらに、有性生殖系統のマイクロサテライトマーカーの選定により交配の有無について検証できるようになったので、交尾後の卵を採取し、交配が起こりやすい系統の組み合わせを探索している。また、受精の時期や場所、卵形成時の減数分裂過程を記載するため、経時的なサンプリングと組織標本の観察を進めている。単為生殖については、第1減数分裂が途中で停止しスキップする「減数しない減数分裂」が起こることがわかっているが、分裂の停止への関与が予想されるMAPKの阻害剤を用いた実験を進めている。また、ミジンコは乾燥や寒冷に耐性のある休眠卵を主に有性生殖で産むが、単為生殖で産む系統もいる。この単為発生する休眠卵は、通常の単為発生卵との比較に重要な示唆を与えてくれると考え、休眠卵形成過程の記載に必要なステージ表を作成した。この成果は、国際誌に掲載された(Hiruta and Tochinai, 2014)。さらに、生殖様式の分子機構を解析するために、ミジンコにおいて初となるマイクロインジェクションによる初期胚でのRNA干渉法を確立した。これらの成果は、BMC Biotechnology誌に掲載され、Highly accessed paperに認定された(Hiruta et al., 2013)。さらに、標的遺伝子のノックアウトやノックインを可能にするため、人工制限酵素を用いたゲノム編集法の確立に着手した。

ミジンコは、環境の変化に応答して単為生殖と有性生殖を使い分けているが、いずれの生殖様式でも2倍体の個体が生まれる。本研究では、この2つの生殖様式が卵形成過程のどの段階がどのように異なることで実現するのかを解明することを目的としている。有性生殖様式については、昨年度までに得たオスの誘導や交尾についての知見をもとに受精の時期や場所、卵形成時の減数分裂過程を記載すべく経時的なサンプリングと組織標本の観察を進めている。さらに、マイクロサテライトマーカーを用いて、交配が起こりやすい系統の組み合わせや、交配を安定的に誘導できる条件を検討している。単為生殖については、第1減数分裂が途中で停止しスキップする「減数しない減数分裂」が起こることがわかっているが、分裂の停止への関与が予想される細胞周期制御関連因子の阻害剤を用いた実験を進めている。さらに、生殖様式の分子機構を解析するために、ミジンコにおいて初となる人工制限酵素TALEN(Transcription activator-like effector nuclease)を用いた標的遺伝子の破壊(ノックアウト)法を確立した。これらの成果は、BMC Biotechnology誌に掲載され、Highly accessed paperに認定された(Hiruta et al., 2014)。さらにノックイン法の確立に着手し、ミジンコのゲノム編集基盤の整備を進めている。これらの技術により、生殖細胞特異的な遺伝子発現および機能解析やヒストンなどの標識による減数分裂時の染色体挙動の解析を展開していく予定である。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の二本柱である有性生殖と単為生殖それぞれの生殖様式について、卵形成過程に注目した解析を行った。有性生殖様式については、卵形成時の減数分裂過程を細胞組織形態学的な手法を用いて記載を進めている。単為生殖様式については、分裂装置の構成要素であるγチューブリンの局在の特徴を明らかにした。また、それぞれの生殖様式の分子機構を明らかにするために用いる、マイクロインジェクション法を確立した。本研究の二本柱である有性生殖と単為生殖様式について、卵形成過程に注目した解析を継続している。有性生殖様式については、受精と減数分裂の過程を細胞組織形態学的な手法を用いて記載を進めている。単為生殖様式については、分裂制御に関与すると予想される因子の阻害剤等を用いた解析を行っている。また、それぞれの生殖様式の分子機構を明らかにするために用いる、マイクロインジェクションによるRNA干渉法を確立するとともに、逆遺伝学的解析を可能にするゲノム編集法の確立に取り組み、着実に研究を進めている。有性生殖様式については、引き続き細胞組織形態学的な手法を用いて卵形成過程および受精の記載を進め、国際誌へ投稿する。単為生殖様式については、第1分裂の停止に関わると考えられるMAPK経路の阻害剤等を用いた解析を行い、本来であればスキップされる第1減数分裂が有性生殖のときと同様に完了するのかどうかも検証する。また、各生殖様式の分子機構を解析する基盤として卵巣の体外培養と人工授精を検討しているが現時点において実現が困難である。
カルシウムイオンによる血小板細胞内顆粒分泌の制御機構

電場効果により細胞膜透過性を高めたウシ血小版は、Mg-ATP存在下、細胞外に加えるカルシウムに依存してセロトニンを分泌する。カルシウムによる分泌反応の制御機構を明らかにするため、はじめに分泌反応に伴う細胞内構造の変化を電子顕微鏡を用いて調べた。その結果、多くの分泌顆粒はカルシウ刺激によらず、マイクロフィラメント構造と相互作用しており、細胞膜近傍に存在していることが明らかになった。他方、高濃度カルシウム処理-カルパイン活性化により分泌能を失った血小板標品ではマイクロフィラメントが断片化し、細胞膜からはがれ、顆粒との相互作用も失っていた。顆粒とマイクロフィラメントの相互作用は血小板から単離した顆粒分画の電子顕微鏡および蛍光顕微鏡による観察からも明らかにされた。また顆粒分画にアクチンが存在することはSDS電気泳動による分析から確かめられた。さらに。カルシウム前処理により分泌能を失った血小板から分離した顆粒分画にはマイクロフィラメントはほとんど含まれず、SDS電気泳動による分析からミオシン、分子量8.8万タンパク質とアクチンが顕著に減少していることが分かった。つぎに分泌能を失った血小板で、どのようなタンパク質成分が変化しているか調べた。その結果、アクチン結合タンパク質としてフィラミンと分子量8.8万タンパク質がカルシウム前処理により減少していることが分かった。これらの結果は、マイクロフィラメント構造には顆粒を分泌可能な保持する役割があり、分子量8.8万の新しく見い出されたアクチン結合タンパク質が、顆粒とマイクロフィラメントの結合に関与していることを示唆している。今後このタンパク質を分離・精製することにより、カルシウムイオンによる顆粒分泌反応の分子レベルでの機構が明らかにされることが期待される。さらに。