hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
新生代の主要な環境変動に対応した大量種分化の研究

また,ユーラシア大陸,東アジアおよび東南アジアの島嶼域に生息するイノシシ属の全ての種についてシトクロームb遺伝子の全領域の配列決定を行い,系統解析を行った.イノシシ属の種分化は,新第三紀以降の主要な気候変動期であるメッシニア期(5Ma),北極海氷床形成期(2.3Ma),氷河性更新世の開始(0.9Ma),更新世の氷期・間氷期に対応して種分化はイベント的に行われたことが明確に示された.今年度,海生軟体動物のキサゴ類,ウミニナ類を対象とした分子系統学的解析においても種分化のタイミングは,新第三紀以降における気候変動の著しい待期とよい一致を示すという結果を得た.これらの成果より,種分化は気候変動(環境変動)に励起され一斉に生じているという本研究課題の作業仮説が支持された.一方,化石記録の調査に関しては,日本の鮮新-更新世の暖流系動物群の模式である掛川動物群について海洋環境の変遷に伴う種構成の時間的変遷について種分化の観点から解析するとともに,掛川動物群のモノグラフを完成し出版した.また,宮崎県及び南西諸島の新第三系の軟体動物化石群についても,層序学的な見直しを行い動物群の時空分布について新知見を得て論文に公表した.陸生哺乳類(シカ科,ウシ科,イノシシ科),海生哺乳類(海牛類,クジラ類,鰭脚類),魚類(スズキ類)ならびに海生軟体動物(腹足類キサゴ類,サザエ類,ウミニナ類,エゾバイ類)の系統解析に有効なミトコンドリアDNAの12SRNA遺伝子,16SRNA遺伝子,Cytochrome b遺伝子領域をPCR(DNA増幅反応)によって増幅,塩基配列を決定し近隣結合法,最大節約法により分子系統樹を作成した。また,それぞれの系統群における信頼のおける化石記録を基準年代(reference date)として,系統の分岐時期(年代)を算定した。陸生哺乳類(シカ科,イノシシ科),海生哺乳類(クジラ類),魚類(スズキ類)ならびに海生軟体動物(腹足類キサゴ類)については成果をまとめ,国際誌(一部国内誌)に印刷した。また,ウシ科,海牛類,鰭脚類,ウミニナ類,エゾバイ類については原稿を作成し投稿の準備を進めている。一方,種分化に関連する基礎データをまとめるため,新生代の日本の暖流系動物群の変遷過程のアウトラインをこれまでの成果をもとに補足調査しまとめあげた。この研究では,分類グループ毎に新しい種が出現する層準(年代)を整理し種のレンジチャートを作成した。この成果は論文にまとめ,現在投稿準備中である。以上の研究の結果として,海・陸生態系,分類群をとわず,種分化のタイミングは新生代における顕著な気候変動期に対応して,同時多発的に生じていることが確認できた。
医療の意思決定プロセスにおける患者・家族と共にある日本の看護実践モデルの構築

医療で患者の自己決定が求められるなか、看護師は家族から病名や予後を伝えないように依頼を受けている。一般成人も医療には家族を含めた意思決定を希望し、専門的知識を必要とする医療行為では医師の意見を、終末期の医療行為では自己が、延命治療では家族の意見を多く取り入れる傾向にある。入院患者とその家族は、医師や家族とともに相談し患者が決める意思決定方法が最も多いが、様々な方法を望んでおり、患者と家族の意向が必ずしも同じではない。患者の判断能力や自律性、家族の代理決定能力、患者にとっての最善について見極め、患者と家族の対話をはかることが求められる。本研究は、医療の重要な意思決定プロセスにおける患者・家族と共にある日本の看護実践モデルを構築することを最終的な目的としている。平成21年度は研究協力者であるNolan博士らの研究チームによってDCPS修正版が日本語訳され、その日本語訳の確認とBack translationが行われた。また、前年度までに行った本調査に関連した研究の結果について多面的な分析を行った。その結果、2施設の患者128名とその家族員41名は、両方とも医療の重要な意思決定プロセスへの患者とその家族の参加を求めており、意思決定能力のある患者に対する意思決定方法はさまざまであった。同じ2施設に勤務する看護師279名と医師73名の三分の一は、少なくとも1回患者の病名や予後の未告知に関する家族からの要望を経験し、大多数の看護師や医師は、意思決定能力のある患者に対して家族が意思決定をしてもよいと認識していた。一般成人303人の調査では、6割以上がセカンドオピニオンを知らないまたは言葉しか知らず、現実的にその内容や方法まで認知していなかった。約半数が過去にセカンドオピニオンを求めてみたいと思った経験があったが、その旨を主治医に申し出た者は多くなかった。過半数が、主治医に何も言わず他の医師に意見を求め、求めたいと思いながらも実際には他の医師に意見を求めず、主治医への遠慮など心理的要因が影響していた。医療に関する意思決定において、たとえ意思決定能力のある患者であっても、患者のみならず家族の参加も必要である場合が多いことが再確認され、このような葛藤を緩和するための患者・家族と共にある看護実践を追求していくことが今後の課題である。本研究は、医療に対して行う重要な倫理的意思決定において、患者・家族の自律性への好み、家族関与の実態とその影響要因や家族機能との関連性、および患者や家族と看護師の意思決定様式に関する認識とどの様な状況でどのような対処方法を取っているのか、その根拠を明らかにすることを目的としている。そして、医療の重要な意思決定プロセスにおける患者・家族と共にある日本の看護実践モデルを構築することを最終的な目的としている。平成22年度は、Decision Control Preferences Scale (DCPS)修正版の日本語訳とBack translationの確認が、研究協力者であるNolan博士と連絡を取りながら行われた。そして、Nolan博士らの研究チームと米国にて会議を持ち、今後のDCPS修正版(日本語版)の運用方法や研究の進め方について討議を行い、米国の数か所で運用されているDCPSの運用状況や研究結果の会議への参加、また、実際の臨床場面におけるDCPS使用の視察となどを行い、今後の研究の進め方を確認した。こうした検討結果を踏まえ、日本における現地調査の準備を進めるとともに、学会等を通して様々な看護学者とともに、特に多民族で構成されているハワイやアメリカ合衆国の現状、日本との相違や看護実践モデルに関する理論的精査における専門的知識や情報を交換しながら、意見交換を行った。グローバルな視点での医療制度改革と看護実践について情報を得ることができ、社会文化的側面に配慮した意思決定における文化的相違や類似性の可能性について討議した。本研究は、医療に対して行う重要な倫理的意思決定において、患者・家族の自律性への好み、家族関与の実態とその影響要因や家族機能との関連性、および患者や家族と看護師の意思決定様式に関する認識を明らかにし、医療の重要な意思決定プロセスにおける患者・家族と共にある日本の看護実践モデルを構築することを最終的な目的としている。平成23年度は、一般成人20組を対象に無記名自記式質問紙調査を行い、医療の意思決定の意向は「医師や家族とともに十分に相談した後に、患者さんが最終的に決める」が最も多く、患者に意思決定能力がある場合でも代理決定を行ってもよいと大半の者が回答した。脳卒中では自己の意思決定度が低く、末期がん時の自分の意思決定度は最も高く家族・医師よりも高かった。早期がんの意思決定度に職業や宗教、家族機能の側面が影響していた。また、Decision Control Preferences Scale(DCPS)は、一般成人のペアで意思決定度に相違がみられた。

一方、4つの小規模病院に勤務している看護師108名の無記名自記式質問紙調査から、病名未告知の依頼を受けた看護師は約5割、予後未告知の依頼は2割に経験があり、スタッフナースだけでなく管理者にも依頼を受けた経験があった。臨床看護師は、患者の意思決定には最終的に患者自身の意思を尊重したいものが大半であり、医療の意思決定プロセスには家族の役割があり、看護師のジレンマが想定される。さらに、「看護実践の倫理-倫理的意思決定のためのガイド」の共著者であり、国際的に活躍しておられる看護倫理学者である、Megan-Jane Johnstone教授に、10月17日「人間の死に対する恐怖とその終末医療における倫理的意思決定への影響」と題して講演を行った。倫理的意思決定について、終末医療における死の恐怖の影響や文化的相違についてJohnstone教授とともに討議した。本研究の目的は、医療に対して行う重要な倫理的意思決定において、患者・家族の自律性への好み、家族関与の実態とその影響要因や家族機能との関連性、および患者や家族と看護師の意思決定様式に関する認識とどの様な状況でどのような対処方法を取っているのか、その根拠を明らかにすることである。そして、医療の重要な意思決定のプロセスにおける患者・家族と共にある日本の看護実践モデルを構築することである。研究協力者であるMarie T. Nolan氏と連携を取りながら、一般成人とその家族を対象に、DCPS修正版(日本語版)の信頼性と妥当性の検証と医療行為の意思決定度や自律性への好み、家族機能との関連性の探求を目的とし面接調査結果、ならびに小規模病院に勤務している臨床看護師におけるがんの病名や予後の未告知の依頼や対処の状況・患者や家族の意思決定に対する認識を明らかにすることを目的とした質問紙調査行い、その結果を分析し公表した。総合病院で現に健康問題を持って入院している患者と家族を対象に構造的質問紙を用いて面接調査を行うために、研究参加者を募る病院の施設内倫理委員会の承認後、診療科長や看護部長・看護師長に許可を得て、研究参加者に質問紙を配布し面接している。そして、交流集会等により研究結果を討議する機会を持ち、意思決定能力のある患者とその家族への医療における意思決定支援には課題は依然としてあり、どのようにその意思決定支援を行っていくのかが看護師の責務であることがわかった。一般成人のペアでご協力をいただける研究参加者の方の確保が難しく、臨床看護師への調査も同時に行ったため。24年度が最終年度であるため、記入しない。今後、総合病院で現に健康問題を持って入院して8週間以内の患者から研究参加者を募る。1病院で研究参加者が十分に得られなければ、できるだけ早期に別の病院に協力を依頼する。また、交流集会もしくはシンポジウム等を企画し、医療に対して行う重要な倫理的意思決定において、患者・家族の自律性への好み、家族関与の実態とその影響要因や家族機能との関連性における本研究結果を公表するとともに、医療の重要な意思決定プロセスにおける患者・家族と共にある日本の看護実践モデルへの示唆を得る。
霊長類の蝸牛におけるマイトファジーの生理的意義

蝸牛における活性酸素種(ROS)による酸化ストレスは細胞死を引き起こし、内耳性難聴を惹起することが知られている。ROSの産生は好気呼吸の場であるミトコンドリアの障害に一因するが、細胞内ではその恒常性の維持のため、異常ミトコンドリアの一部を選択的なオートファジー(マイトファジー)により分解・処理する経路が存在することが明らかにされてきた。本研究では恒常的マイトファジーが内耳保護作用を持つ可能性を考え、コモンマーモセットを用いた霊長類蝸牛におけるミトコンドリア動態の基礎的検討を行う。
骨格筋の発生・再生過程における新規プロテアーゼRAMPの機能解析

申請者は骨格筋萎縮の進行に関与する因子の同定を目的として,ジストロフィン遺伝子に欠損があるmdxマウス骨格筋の遺伝子発現解析を行った。その結果,野生型マウスの骨格筋に比べて,mdxマウスの骨格筋で発現が高い,機能未知の遺伝子RAMP(regeneration-associated muscle protease)を同定した。RAMPmRNAはマウスの脳と骨格筋に発現が高かった。さらに,薬剤処理により損傷した骨格筋の再生時にRAMPmRNAの発現が誘導された。筋再生時におけるRAMPの機能を明らかにするため,RAMP遺伝子ホモ欠損マウスの作成を試みたところ,胎生致死であることが明らかになった。本年度はRAMPの機能を明らかにするために,骨格筋特異的にRAMP遺伝子を欠損するコンディショナルノックアウトマウスの作成に着手した。現在,ターゲティングベクターの作成を行っている。また,RAMPの機能を明らかにするために,RAMP mRNAの発現が高いマウス線維芽細胞を用いた実験を行った。siRNAによりRAMPの発現を抑制すると,細胞の増殖が抑えられることがわかった。現在,再検討を行っており,同様の結果が得られた場合は,どのようなメカニズムで細胞増殖が抑制されるのか明らかにしていく予定である。また,RAMP遺伝子ホモ欠損マウスは胎生致死であったことから,その原因を明らかにするため,胎生期のRAMP遺伝子ホモ欠損胚を同定し,切片を作製した。現在のところ原因は明らかにできていない。今後,検討する予定である。重篤な症状を示すDuchenne型筋ジストロフィー(DMD)患者に筋萎縮や筋力低下をもたらす因子や、DMDのモデルマウスであるmdxマウスの筋再生を促進する因子の候補としてRAMPを同定した。筋再生過程でのRAMPの機能を明らかにする為にRAMP遺伝子ホモ欠損マウスを作成したが、胎生致死であるため解析に用いることは出来なかった。そこで、RAMP遺伝子ヘテロ欠損/mdxマウスを作成し、mdxマウスと比較検討した。筋損傷のマーカーであるクレアチンキナーゼ活性を測定したところ、両者に大きな違いは見られなかった。さらに、骨格筋の組織切片を作成して観察したところ、筋変性や再生に大きな違いは見られなかった。筋再生におけるRAMPの機能を明らかにするためには、筋特異的RAMP遺伝子コンディショナルノックアウトマウスの作成が必要であることが分かった。また、RMAP遺伝子ホモ欠損マウスが胎生致死になる原因を明らかにする為に、RMAP mRNAの発現をin situ hybridizationにより検討した。その結果、RAMP mRNAは胎生10.5日胚の肢芽に強く発現していることが明らかになった。これらのことより、RAMPはマウス発生過程でも重要な働きをしていることが明らかになった。次に、RAMPはトリプシン様セリンプロテアーゼドメインを持つこことから、酵素活性を持つかどうか検討した。COS7細胞にtagを付けたRAMP cDNAを導入し、大量のRAMP組換え体を精製し、いくつかの市販されているいくつかの基質ペプチドと混合してみたが、酵素活性を検出することは出来なかった。さらに検討が必要であると思われる。
生体内光源物質特性分布を画像化する技術の高度化に関する研究

新薬開発などにおけるコストと犠牲動物の低減を目指し,分子イメージング技術の一つである蛍光トモグラフィー法の高度化を目的として,画像再構成法の開発とシミュレーション,および,生体模擬試料やマウスを用いた実験を行った.画像再構成法の新しい手法を開発し,実験によりその手法を実証することができた.結果として,マウス体内に埋め込んだ蛍光物質の濃度分布に関する断層画像を得た.新薬開発などにおけるコストと犠牲動物の低減を目指し,分子イメージング技術の一つである蛍光トモグラフィー法の高度化を目的として,画像再構成法の開発とシミュレーション,および,生体模擬試料やマウスを用いた実験を行った.画像再構成法の新しい手法を開発し,実験によりその手法を実証することができた.結果として,マウス体内に埋め込んだ蛍光物質の濃度分布に関する断層画像を得た.蛍光・生物発光トモグラフィは蛍光・発光標識した物質を小動物に導入し,その体内分布を断層像として無侵襲に調べるものであり,薬剤等の分子機能,代謝などを定量的にイメージングできる,ヒトを対象とする臨床試験の前段階として行われる小動物試験において,必要とされる小動物の数や期間,労力を削減し,高効率化できる手段として期待されている,平成19年度は研究実施計画通り,以下の3項目について研究を行った.(1)蛍光トモグラフィアルゴリズムの高度化これまでに構築した蛍光トモグラフィ画像を再構成するアルゴリズムはピコ秒時間分解計測により取得したデータから特徴を抽出し,有効に利用して2次元の画像を再構成するものであった.平成19年度はこのアルゴリズムを,3次元で蛍光物質濃度と蛍光寿命を画像化するために修正,拡張を行った.また,情報量が豊富な時間分解波形をそのまま利用して媒体中の光学特性値と蛍光物質濃度分布を同時に再構成するアルゴリズムや,計測が比較的容易な連続光データを用いた光源強度分布再構成法についても成果を得た.(2)生体模擬試料を用いたアルゴリズムの検証実験エポキシ樹脂などを用いた生体模擬試料を作成して実験を行い,蛍光物質濃度のトモグラフィ画像を再構成しアルゴリズムを検証した.実験に用いた蛍光物質(インドシアニングリーン)の蛍光寿命などの蛍光特性の測定も行った,(3)小動物を用いた実験による蛍光トモグラフィ画像の取得次年度以降行われる小動物を用いた実験に向けて,励起光照射や蛍光測定に用いられる光ファイバーホルダーなどの設計と作製,蛍光測定から励起光の影響を除去する光学フィルタの最適化などを行った.実際に生体模擬試料を用いた計測を行い,小動物を用いた測定に向けて有用な知見を得た.蛍光・生物発光トモグラフィは蛍光・発光標識した薬剤を小動物に導入し,その体内分布を断層像として無侵襲に調べるものであり,薬剤等の機能,代謝などを定量的にイメージングできる.ヒトを対象とする臨床試験の前段階として行われる小動物試験において,必要とされる小動物の数や期間,労力を削減し,高効率化できる手段として期待されている.平成20年度は研究実施計画通り,以下の3項目について研究を行った.(1)蛍光トモグラフィアルゴリズムの高度化これまでに構築した蛍光トモグラフィ画像を再構成するアルゴリズムは2次元の画像を再構成するものであった.平成20年度はこのアルゴリズムを,3次元で蛍光物質濃度と蛍光寿命を画像化するための修正,拡張を行った.また,ファントム実験の条件を組み込むようにプログラムを改良した.(2)生体模擬試料を用いたアルゴリズムの検証実験ポリアセタール樹脂と脂肪乳剤を用いた円柱状の生体模擬試料を作成して実験を行い,ピコ秒時間分解計測データから脂肪乳剤中に混入した蛍光物質(インドシアニングリーン)の濃度をトモグラフィ画像として再構成し,アルゴリズムを検証した.また,実験に用いた蛍光物質を純水,脂肪乳剤,またはラテックス微粒子浮遊液に混入させたときの蛍光・吸収スペクトルおよび蛍光寿命を測定した.(3)小動物を用いた実験による蛍光トモグラフィ画像の取得次年度に行う小動物を用いた実験では,マウスを用いることとし,マウスを実験中に保持する用具の設計を行った.また,励起光照射や蛍光測定に用いられる光ファイバーホルダーなどを取り付けるための部品の設計,蛍光測定において励起光の影響を除去する光学フィルタの最適化と取り付け法の設計などを行った.さらに,実際に生体模擬試料を用いた計測を行い,小動物を用いた測定に向けて準備を整えた.蛍光・生物発光トモグラフィは蛍光・発光標識した薬剤を小動物に導入し,その体内分布を断層像として無侵襲に調べるものであり,薬剤等の機能,代謝などを定量的にイメージングできる.ヒトを対象とする臨床試験の前段階として行われる小動物試験において,必要とされる小動物の数や期間,労力を削減し,高効率化できる手段として期待されている.平成21年度は研究実施計画通り,以下の3項目について研究を行った.(1)蛍光トモグラフィアルゴリズムの高度化前年度までの研究においては,ピコ秒時間分解計測により取得したデータから蛍光トモグラフィの画像を再構築するアルゴリズムとして,Total lightの概念を用いたアルゴリズムを新たに構築し,生体模擬試料を用いてアルゴリズムを実証した平成21年度においては,このアルゴリズムを発展させ,2次元から3次元への拡張.および,蛍光寿命の画像化を検討した.(2)生体模擬試料を用いたアルゴリズムの検証実験前年度までの研究では,構築したアルゴリズムを検証するため,直径が約30mmの円柱型樹脂を基材とし,内部に直径4mmの蛍光物質のある模擬試料を用い,蛍光物質の画像化実験を行った.測定された膨大な実験データから上記のアルゴリズムにより,蛍光物質濃度の断層画像を再構成することができた.

平成21年度には,実験手法の改良を行ってノイズが少なく再現性の良いデータを得て,質の高い再構成画像を得ることができた.(3)小動物を用いた実験による蛍光トモグラフィ画像の取得生体模擬試料を用いた実験などに基づき,平成21年度は小動物を用いた実験を行った.麻酔されたマウスを対象とし,それを事件装置に組み込むホルダーなどを製作し,蛍光物質のカプセルをマウス皮膚上に留置したり,腹部に埋め込んで,蛍光物質の画像化を行った.カプセルをマウス皮膚上に留置した場合にはホルダーとマウスの間の微小な間隙の影響により良い画像が得られなかったが,腹部に埋め込んだ場合には,蛍光体の位置と濃度をほぼ画像化することができ,本研究の目標を達成することができた.
癌特異的認識分子を提示するバイオナノカプセルによるミサイル療法の開発

我々は、ヒト肝臓に対し極めて高い特異性及び感染性を有するB型肝炎ウイルス(HBV)の感染機構を担う外皮タンパク質を、組換え酵母で「バイオナノカプセル(BNC;HBV表面抗原粒子)」として大量生産し、BNC内部に遺伝子や薬剤を封入して、ヒト肝臓特異的で高効率な遺伝子・薬剤導入用ベクターとすることに成功した。これはウイルス法とリポソーム法の長所を併せ持つ新しい遺伝子及び薬物送達法である。既に我々は、(1)BNCの大量生産法、長期保存法、及びBNC内部への高効率な物質封入法、(2)肝癌移植ヌードマウスでのピンポイント遺伝子送達及びピンポイント抗癌剤送達による肝癌増殖抑制、(3)HBVエスケープ変異体を模倣した低抗原性BNC(ステルス型BNC)の開発、(4)サイトカイと又は抗体提示型BNCによるサイトカイン受容体又は抗原依存的再標的化、に成功した。今年度は(5)Homing Peptide提示型BNCに治療用遺伝子(HSV-tk)や抗癌剤(アドリアマイシン)を封入して、In Vivo (Xenograft)において尾静脈から投与して、ヒト大腸癌、ヒト肺癌、ヒト扁平上皮癌に対する治療効果を示すことに成功し、(6)癌特異的抗体及び癌特異的糖鎖認識レクチン提示型BNCに治療用遺伝子(HSV-tk)や抗癌剤(アドリアマイシン)を封入して、In Vivo(Xenograft)において尾静脈から投与して、前項と同じ治療効果を示すことに成功した。さらに、(7)Extruderを使用して上記BNCの粒子径を微調整することにより、In Vivo (Xenograft)における治療効果を最適化することに成功した。我々は、ヒト肝臓に対し極めて高い特異性及び感染性を有するB型肝炎ウイルス(HBV)の感染機構を担う外皮タンパク質を、組換え酵母で「バイオナノカプセル(BNC;旧名中空バイオナノ粒子;HBV表面抗原粒子)」として大量生産し、BNC内部に遺伝子や薬剤を封入して、ヒト肝臓特異的で高効率な遺伝子・薬剤導入用ベクターとすることに成功した。これはウイルス法とリボソーム法の長所を併せ持つ新しい遺伝子及び薬物送達法である。既に我々は、(1)BNCの大量生産法、長期保存法、及びBNC内部への高効率な物質封入法、(2)肝癌移植ヌードマウスでのピンポイント遺伝子送達及びピンポイント抗癌剤送達による肝癌増殖抑制、(3)HBVエスケープ変異体を模倣した低抗原性BNC(ステルス型BNC)の開発、(4)サイトカイン又は抗体提示型BNCによるサイトカイン受容体又は抗原依存的再標的化、に成功している。今年度は、以下の通りの成果を得た。(1)Homing Peptide提示型BNCのIn Vivoでの効果確認:独自に単離した3種類のHoming Peptide(それぞれヒト大腸癌、ヒト肺癌、ヒト扁平上皮癌に対する)をBNC表面に提示させ、担癌マウスの各癌組織に治療用遺伝子(HSV-tk)や抗癌剤(アドリアマイシン)を静脈を介して送達し、治療効果を示すことを確認した。(2)抗体及びレクチン提示型BNCのIn Vivoでの効果確認:Protein A由来IgG結合ドメイン(ZZタグ)を提示するBNC及びストレプトアビジン結合ドメイン(ストレプトタグ)を提示するBNCを用いて、癌特異的抗体及び癌特異的糖鎖認識レクチンをそれぞれBNC表面に提示させたものが前項と同じ効果を示すことを確認した。
近世日越交流史の再構築

日本と東南アジア、とくにベトナムとの交流を物語る近世資料を系統的に集成し、先学の研究を再検討するとともに、考古学と歴史学、美術史の垣根をこえた資料学としての日本と東南アジアの交流史の開拓を行った。その結果、既存の朱印状や安南国書の悉皆調査と資料集の刊行、朱印船絵図の刊行を行い、また、考古資料として日本国内におけるベトナム陶磁器の調査、ベトナムにあった日本町調査を実施し、考古学資料から日越交流の実態を深めた。また、九州国立博物館で研究成果を一般向けに公開した。本研究は、日本と東南アジア、とりわけベトナムとの交流を物語る近世史資料を系統的に集成し、先学の研究を再検証するとともに、考古学と史学、美術史の垣根を越えた資料学としての日本と東南アジアの交流史を開拓することを目的としている。平成24年度の実施計画として、(1)朱印状や「安南国書」の集成、(2)貿易関係文物の資料化、(3)朱印船などを描いた絵図の検証などを計画した。これに照らして、当該年度の研究成果は以下の通りである。(1)研究分担者(藤田励夫)が中心となって、国内の朱印状・「安南国書」の悉皆調査を実施した。その結果、現存する朱印状の確認をおえた。それによると戦前に確認されていた朱印状のなかで失われて可能性のあるもの、現存するものの点数を把握できたことである。また「安南国書」にかんしては、現存する数を確認し、あわせて新資料の発見とつながったことである。これらのものは、平成25年に九州国立博物館開催の"大ベトナム展"で展示中である。このことについては、次年度実績報告で詳述する。(2)研究代表者(菊池誠)がベトナム・ホイアン出土陶磁器の資料化を実施した。また、その関連で、ラオス出土日本陶磁器の調査などを実施した。東南アジア大陸部に17世紀後半の日本の陶磁器が多く確認でき、ラオス出土のものは、ベトナム-ラオス間の物資運搬ルートを想定する上で好材料となった。(3)研究代表者と研究分担者(藤田、黒田泰三)で朱印船貿易絵図の調査を実施し、その研究をまとめ、科学研究補助金(研究成果公開促進費)に申請し、平成25年度の採択をうけた。平成25年度中にその成果を刊行することになった。以上が研究成果である。本研究の目的は、日本と東南アジアの交流を物語る近世史資料を系統的に集成し、先学の研究を再検討するとともに、考古学と史学、美術史の垣根をこえた資料学としての日本と東南アジアの交流史の開拓を目的としている。そのため、朱印状や安南国書、絵馬、日本及び東南アジアで日本商人が残した貿易関係文物、漂流関係史料、伝世及び考古遺物として出土している交易品などの既知の史資料を資料化するとともに、あらたな史資料を探索し、調査研究を行う。本研究の成果は、研究者間に研究材料を広く公開し、近世対外交流史をあらたな段階へ昇華させ、日本と東南アジアの交流史にあらたなテーマを構築するものである。平成25年の調査実施は以下の通りである。1朱印状・安南国書を集成し、新たな資料を確認した。この資料を含めて藤田励夫によって「安南国日越外交文書集成」(『九州国立博物館紀要東風西風』第9号)としてまとめられた。2分担者の黒田泰三とともに『朱印船貿易絵図の研究』(思文閣出版)を出版し、絵図研究の最新成果を明らかにした。3九州国立博物館において『大ベトナム展』が開催され、代表者の菊池や藤田のベトナム関連の論文が掲載されると同時に、一般向けの講演会で講演した。4代表者の勤務する昭和女子大学においてベトナム人研究者を招へいして、日越交流をテーマにした国際シンポジウムを開催した。その他に、国内(長崎など)や海外(オランダ)の短期調査を実施した。そのため、朱印状や安南国書、絵馬、日本及び東南アジアで日本商人が残した貿易関係文物、漂流関係史料、伝世及び考古遺物として出土している交易品などの史資料を資料化するとともに、あらたな史資料を探索し、調査研究を行う。平成26年度の調査実施は下記の通りである。1国内や海外で調査を実施した。とくに海外ではベトナム・ホイアンで出土した陶磁器の実測作業を実施し、数百点の陶磁器の資料化を終了した。また、アメリカの博物館(国立スミソニアン協会、ボストン美術館、メトロポリタン美術館)所蔵のベトナム陶磁器を調査した。2平成25年に実施した国際シンポジウムの報告書(『14・15世紀海域アジアにおけるベトナム陶磁の動き』)を刊行した。また、代表者の菊池が「江戸時代のベトナム・ホイアン漂着事例」と題して、安南国漂流記の写本の翻刻・紹介を行った。本研究の目的は、日本と東南アジアの交流を物語る近世史資料を系統的に集成し、先学の研究を再検討するとともに、考古学と歴史学、美術史の垣根をこえた資料学として日本と東南アジアの交流史の開拓を目的としている。

そのため、朱印状や安南国書、絵馬、日本及び東南アジアで日本商人が残した貿易関係文物、漂流関係史料、伝世及び考古遺物として出土している交易品などの既知の史資料を資料化するとともに、あらたな史資料を探索し、調査研究を行う。本研究の成果は、研究者間に研究材料を広く公開し、近世対外交流史をあらたな段階へ昇華させ、日本と東南アジアの交流史にあらたなテーマを構築するものである。平成27年度に実施した調査などは下記の通りである。1代表者の菊池誠一がベトナム・ホーチミン市国家大学・人文社会科学大学と国際交流基金共催の国際シンポジウム(「近世期のアジアにおけるベトナムと日本」)で基調講演を行った。基調講演の内容は、これまでの科研費助成事業における研究の成果をもとにしている。2元分担者で現在、研究協力者の藤田励夫が「続安南日越外交文書集成」を著し、前年度に続き、我が国に残る日本とベトナムの外交文書を集成し、公開した。3ベトナムに漂着した日本人を取り調べた長崎奉行所の記録(写本、新出史料)を入手し、研究をはじめた。その他、国内では沖縄・久米島と石見銀山で出土したベトナム陶磁器の調査を実施した。また、ベトナムで出土した肥前陶磁器を理解するため、佐賀県陶磁文化館で実施された「近世陶磁研究会」に参加した。国外ではベトナムの短期調査を実施した。日本と東南アジア、とくにベトナムとの交流を物語る近世資料を系統的に集成し、先学の研究を再検討するとともに、考古学と歴史学、美術史の垣根をこえた資料学としての日本と東南アジアの交流史の開拓を行った。その結果、既存の朱印状や安南国書の悉皆調査と資料集の刊行、朱印船絵図の刊行を行い、また、考古資料として日本国内におけるベトナム陶磁器の調査、ベトナムにあった日本町調査を実施し、考古学資料から日越交流の実態を深めた。また、九州国立博物館で研究成果を一般向けに公開した。ベトナム人研究者を招聘し実施した国際シンポジウムの報告集を刊行したこと、また安南国漂流記の翻刻・紹介をしたこと、など計画したことが順調に進んでいる。また、海外調査では、ベトナム・ホイアン出土陶磁器の整理作業が終了し、資料の公表の段階に進んだことである。あらたにアメリカの博物館所蔵ベトナム陶磁器の調査にも手がつけられたことなど、海外調査は順調に進展しているためである。27年度が最終年度であるため、記入しない。ベトナム歴史考古学国内外の調査を引き続き推進すること、ベトナム・ホイアン出土陶磁器の資料集を刊行し、さらなる資料集成とその刊行をめざすことである。研究の目的で記した、史資料の集成であるが、ベトナム・ホイアンにおける日越交流をものがたる陶磁器の資料化の進展、絵図資料の考察を科研出版助成の採択によって本年度刊行する運びとなったこと、またベトナム「安南国書」の新発見、そうした史資料を九州国立博物館「大ベトナム展」で展示、ならびに講演会をするなど、研究面とその公開に進展があったことから。すでに、研究成果の一部は、2013年に九州国立博物館の『大ベトナム展』で一般向けに成果を公表すると同時に、近世日越交流を描いた「絵図」の研究成果は、『朱印船貿易絵図の研究』と題して、思文閣出版から刊行した。また、「安南国書」や「朱印状」の悉皆調査とその集成も、藤田によってまとめられた。そして、現地調査は順調に進展しており、その成果を順次まとめているところである。ヨーロッパ調査を予定していたが、今年に入りテロが頻発し、調査をとりやめた経緯がある。その未使用額が生じた。
障害児のための生態学的アプローチによる体育指導プログラムの開発

本研究では、実際に養護学校で行われている体育授業に関して、学習者の主体的な課題解決のために、指導者がどのような意識を持ち、どのような援助方略を用いているのか明らかにすることであった。この分析をもとにGibson(1975)の生態学的アプローチ理論を基盤とした障害を持つ子ども個々の特性が考慮できる指導プログラムの作成を行うことをも計画した。まずはじめに、兵庫県下の精神薄弱養護学校に勤務する教員104名を対象に、(1)現在行われている体育授業について、(2)障害児の体育授業観の2つの側面からアンケート調査を実施した。その結果、ほとんどの精神薄弱養護学校の小、中、高等部の体育の授業には、教員免許の種類に関係なく対象となった教員すべてが関わっていることが明らかとなった。しかしその指導カリキュラム内容は、運動会、マラソン大会などの行事を忠心に年間計画として固定化していることが多く、他の授業に比較して負担と感じている教員が少なくなかった。教員の障害児の体育授業観について12項目からなるアンケートを因子分析した結果、次のようなカテゴリーに分類された。(1)精神力重視型:体育の中でやる気や集団の中での努力を重視するタイプ、(2)体育不必要型:専門的な体育指導や運動評価よりも別の教科の授業時間を増やすというタイプ、(3)統合体育型:訓練的な体育ではなく、音楽やゲームなどと統合させた体育が望ましいというタイプ、(4)専門性重視型:体育は専門教師が指導に当たるべきと考え、また自分も積極的に講習会やワークショップに参加しようと考えているタイプこれまで精神遅滞児の運動指導の場合では、本アンケートにもあるように運動能力のなかでも体力の低さが焦点化され、それを補償するために集中的なトレーニングを行う必要性がよく説かれてきた。そのため教育実践場面では、体育での単元課題そのもの選択に重点が置かれ、「どのように」学習者が学んだのかよりも、「なにを」体育で取り上げたのかが、重視される傾向にあることが明らかとなった。生態学的アプローチ(Gibson,1975)では、運動や身体活動においても学習者の内的な探索的学習過程が重要視が強調されている。今後は、このような観点から養護学校での体育指導プログラムが構成される必要性が示唆された。
ブラックホール時空の新決定法の実用化：落下ガスの観測データを用いて

これまでの研究において、研究代表者はブラックホールに落下するガス雲からの光度変動を用いたブラックホールスピンの新しい測定法の提唱を行ない、一般相対論的放射磁気流体シミュレーションにより、現実的な系でガス雲モデルを検証し、方法論の原理的な部分を完成させた。昨年は、提唱した方法論の観測への適用をメインテーマとして研究を行った。研究代表者が独自に提唱した方法論に対する最も本質的かつ理想的な観測は、超長基線電波干渉計(VLBI)を用いた、ブラックホール候補天体のなかで最大の視半径を持つSgr A*, M87の直接撮像である。特にEvent Horizon Telescope(EHT)を用いたVLBI観測の発展によって、世界初のブラックホール近傍の撮像画像が近未来に得られる可能性が高まっている。そのため、新スピン測定法をVLBI観測の観測ターゲットに適用できるように一般化した。さらに、ブラックホールへの間欠的なガス雲の落下を想定したEHT模擬観測を実行し、スピンの測定精度と方法論の有用性を検証した。また、研究代表者は近い将来得られるであろうEHT観測に、提唱した方法論を適用するための準備を行った。まず、EHT計画のメンバーとして、ブラックホールに落下するガス雲の直接撮像観測のデータ解析・プログラム開発に携わり、実際の観測データの解析に貢献した。開発されたソフトウェアは、パブリックライブラリとして近日公開が予定されている。観測技術や解析方法の取得を完了するために、EHTの中心機関であるマサチューセッツ工科大学のヘイスタック天文台に約2ヶ月滞在した。このように研究代表者独自のブラックホールスピン測定法の理論的な提唱に加え、それを観測に適用するための準備を完了し、現在観測と理論の適応を開始している。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。これまでの研究において、申請者はブラックホールに落下するガス雲からの光度変動を用いたブラックホールスピンの新しい測定法の提唱を行なった。咋年度(採用1年目)は、この方法論の中で考慮しなかった流体効果、磁場、放射圧によるガス雲の時間変動を一般相対論的放射磁気流体シミュレーションにより取り入れ、より現実的な系でガス雲モデルを検証した。恒星質量ブラックホール近傍の比較的低温の降着円盤からの降着流の相対論的放射を一般相対論的放射磁気流体(GRRMHD)シミュレーション(Takahashi etal.2016)を用いて調べ、ガス雲からの相対論的光度変動を調べた。研究の結果、ブラックホールへの降着の新しい性質を発見した。(1)降着円盤の最内縁領域でリングまたはアーク型のガス雲が間欠的に形成され、(2)ガス雲はほぼケプラー回転速度ををもち、ブラックホールに向かってゆっくり落下する。これらのシミュレーション結果は方法論で想定したガス雲モデルの運動をよく再現している。また、ガス雲からの光度変動についても新たな発見があった。ガス雲の形成と落下による比較的長い時間スケールの変動(0.08-0.10 sec)と、非軸対称なアークガス雲からのビーミング効果による短い時間間隔を持った準周期的なフラックスピーク(0.01 sec)があることがわかった。これはブラックホール連星で観測されている高振動数の準周期振動やX線ショットといった短いタイムスケールでの光度変動を説明できる可能性がある。この研究によってブラックホール近傍で観測された現象と落下ガス雲の放射現象、さらには提唱した時空測定法を結びつけることが可能となった。落下ガス雲の運動と放射の性質を、最先端の数値シミュレーションに基づき、世界初で明らかにしたことに、この研究の独創性がある。上記の、DC2申請書類の研究計画1年目に対応する研究成果を申請者が主体となって論文にまとめ、査読付き論文誌Astrophysical Journalにて出版された。また、その中での研究成果の議論・検証を行うために積極的に国内外での発表を行った。国際会議では計2回の発表を通して、論文にまとめるための研究内容の洗練を行うことができた。さらに、提唱した方法論の観測への適用についても申請書類で示した見通しの通りの進展があった。スピン測定法で注目したガス雲の光放射に対応すると考えられる、短時間X線光度変動のピークを、ピーク時間を基準に足し合わせ、平均するショット解析の結果と提唱した方法論で注目した光度変動との比較を行い、両者の類似性を検証した。特に活動銀河核ブラックホールArk 564のショット解析に新スピン測定法を適用し、大質量ブラックホールのスピンに制限をつけることができた。以上の研究成果を博士論文としてまとめ、博士論文公聴会にて発表し、博士(理学)の学位を取得することができた。(その他の研究成果)申請者は以上のメインの研究のほかにも相対論的数値シミュレーションを駆使して関連する研究テーマに貢献することができた。水本岬希氏(東京大学)と共同研究では、理論モデルの数値シミュレーションコードの構築と計算全てを申請者が行い、観測研究者の水本岬希氏他と綿密な議論の結果、出版が決定している。このように、自身の研究テーマを常に念頭に置きつつ、関連する研究にも積極的に参加し、自身の研究に還元することに成功した。

研究代表者が独自に提唱した方法論に対する最も本質的かつ理想的な観測は、超長基線電波干渉計(VLBI)を用いた、ブラックホール候補天体のなかで最大の視半径を持つSgr A*, M87の直接撮像である。特にEvent Horizon Telescope(EHT)を用いたVLBI観測の発展によって、世界初のブラックホール近傍の撮像画像が近未来に得られる可能性が高まっている。そのため、新スピン測定法をVLBI観測の観測ターゲットに適用できるように一般化した。さらに、ブラックホールへの間欠的なガス雲の落下を想定したEHT模擬観測を実行し、スピンの測定精度と方法論の有用性を検証した。また、研究代表者は近い将来得られるであろうEHT観測に、提唱した方法論を適用するための準備を行った。まず、EHT計画のメンバーとして、ブラックホールに落下するガス雲の直接撮像観測のデータ解析・プログラム開発に携わり、実際の観測データの解析に貢献した。開発されたソフトウェアは、パブリックライブラリとして近日公開が予定されている。観測技術や解析方法の取得を完了するために、EHTの中心機関であるマサチューセッツ工科大学のヘイスタック天文台に約2ヶ月滞在した。このように研究代表者独自のブラックホールスピン測定法の理論的な提唱に加え、それを観測に適用するための準備を完了し、現在観測と理論の適応を開始している。採用1年目は研究計画通りの成果を上げ、その結果を学会や論文を通して報告することに成功した。今年度は研究計画2年目に対応する、提唱した方法論を拡張した余剰次元の検出をメインテーマとして研究を行う。余剰次元の効果を含んだ5次元ブラックホールにガス雲が落下する場合を想定した数値シミュレーションを実行する。このブラックホールに間欠的に落下するガス雲の光度変動と撮像画像を計算し、それぞれの情報を用いて2つのスピンを独立に測定する。これまでの研究から、2つのスピンは時空の異なる成分に依存するため、余剰次元の効果によって2つのスピンが異なる値を示すことが予想される。よって、見積もられた2つのスピンのズレの、余剰次元効果の強さに対する依存性を調べる。観測の想定としては将来的なVLTIやGRAVITY計画とブラックホール近傍の撮像が期待されているVLBI観測を想定する。これらの観測能力を想定した模擬観測を実行し、余剰次元の効果をどの程度の強さまで検出できるか調べる。この研究と並行して、連星ブラックホール周りの円盤の数値シミュレーションを行う。これらのブラックホールの周りにある内縁から、各ブラックホールに向かって落下するガス雲からの光度変動を計算する。この光度変動を多数回観測した場合を考え、ショット解析を行うことで平均ライトカーブを見積もり、その相対論的特徴を抜き出す。得られた相対論的効果のスピン依存性を調べ、2つのブラックホールそれぞれのスピンを独立に測定する方法を構築する。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
中枢神経系悪性リンパ腫の発生機序に関する研究

1.中枢神経系リンパ腫の発生と免疫グロブリンの遺伝子再構成に関して中枢神経系リンパ腫治療後に、頭蓋外にリンパ腫が発生してきた症例、および頭蓋内の遠隔再発が見出された症例について、昨年に引き続き両者が同じクローンであるか否かを調べた。具体的には以下の実験をおこなった。免疫グロブリンのH鎖可変部に存在する3つの超可変部(CDR1,CDR2,CDR3)のうち、特にCDR3に注目し、各サンプルのこの部位の全塩基配列を決定した。CDR3の増幅は、2段階のPCR(nested PCR)により、目的の領域を増幅させ、TAクローニングによりプラスミドに導入し、全塩基配列を決定した。加えて、新たな遺伝子の変異の有無に関して調べた。2.脳腫瘍の発生に関わる遺伝子の発現および機能に関して各種遺伝子の異常発現をスクリーニングする課程で、以下の2つの遺伝子が脳腫瘍の発生に深く関与することを明らかにした。(1)DUSP26遺伝子の発現低下が、細胞間接着の低下を引き起こし悪性化の原因となることが示唆された(Oncogene 2010)。(2)CDC25Aの発現がKi-67値と高い相関を示すことを明らかにした(J Neurooncol in press)。1.中枢神経系リンパ腫治療後に頭蓋外にリンパ腫が発生してきた症例について両者が同じクローンであるか否かに関する研究方法:免疫グロブリンのH鎖可変部に存在する3つの超可変部(CDR1,CDR2,CDR3)のうち、特にCDR3に注目し、各サンプルのこの部位の全塩基配列を決定した。症例およびサンプル:これまでに頭蓋内・外両方の組織が得られている4例に関して、ゲノムDNA、RNAを精製した。さらに、新しい症例に関してstereostatic biopsyによりサンプルを得て、組織バンクにおいて管理した。2.中枢神経系リンパ腫後に、頭蓋内の遠隔再発が見いだされた症例について初発腫瘍と再発腫瘍とがクローンであるか否かに関する研究再発が、単に初回治療時の残存細胞なのか、それとも新たな頭蓋外からの転移なのかを調べるために、上記と同様な方法を用いて、遺伝子再構成部位を調べた。
PKC機能破綻によるパーキンソン病の病態解明とパーキンソン病新規治療法への応用

PKCgammaによるCysteine string protein alpha (CSPalpa)のリン酸化がドパミン神経終末でのHSP70シャペロン活性促進、神経細胞死防止に必要であることを証明した。PKCgammaがCSPalphaの10番目と34番目のセリン(Ser)残基(Ser10/34)をリン酸化し、HSP70との結合が促進され、神経終末でのシャペロン活性を促進し、神経変性を免れることを証明した。CSPalphaのSer10, 34のリン酸欠損変異体はHSP70との結合が低下し、リン酸化模倣変異体はHSP70との結合が上昇することを証明した。本研究は、Protein kinase C (PKC)gammaの機能破綻により起こるパーキンソン病に着目し、その発症メカニズムを解明し、動物モデルを作製し、新規パーキンソン病治療法を開発することである。現在までに、PKCgammaノックアウトマウスを用いて、パーキンソン病発症に関与するPKCgammaの基質をリン酸化プロテオームにより10個同定しており、その中で、プレシナプスのシナプス小胞に局在するHSP40の1つである、Cysteine string protein(CSP)alphaに着目し、PKCgammaによるCSPalphaのリン酸化(serine 10とserine 34)がHSP70のシャペロン活性を亢進させ、SNARE複合体の1つであるSNAP25へのシャペロンの働きをすることで、ドパミン神経細胞のプレシナプスを保護し、神経変性から守っていることを示した。この結果は、ドパミン神経においてドパミン遊離に重要な働きをしているPKCgammaが同時にプレシナプスを保護することで神経変性防止に働いていることを示唆している。神経変性疾患における神経変性がプレシナプスから起こることが報告されており、またPKCのリン酸化活性が年齢依存的に低下することから、このPKCgammaによるCSPalphaのリン酸化(serine 10とserine 34)を促進させることがパーキンソン病をはじめとした神経変性疾患の治療に応用できることを示唆している。当初の目的として、リン酸化プロテオームで同定したPKCgammaの基質の中で、パーキンソン病に関連するドパミン神経細胞死に関与するCSPalphaのリン酸化部位、その神経細胞死に至るメカニズムを解明できており、また、以前に同定したbetaPIXのリン酸化がドパミン遊離に重要であることも解明できている。これらのCSPalpha,betaPIXのリン酸化部位を改変した動物モデルの作製の準備にとりかかっており、研究はおおむね順調に進捗しているといえる。PKCgammaによるCysteine string protein alpha (CSPalpha)のSerine 10, 34のリン酸化がドパミン神経終末でのHSP70シャペロン活性促進、神経細胞死防止に必要であることを証明した。ドパミン神経ではPKCgammaがCSPalphaの10番目と34番目のセリン(Ser)残基(Ser10/34)をリン酸化し、HSP70との結合が促進され、SNAP25へのシャペロン活性が上昇し、ドパミン神経終末を保護している。また、上記の細胞レベルでのことが実際にマウスの線条体においても同様に起こっていることも証明した。これらの結果はCSPalphaのSer10, 34のリン酸欠損変異体はHSP70との結合が低下(シャペロン活性が低下)し、リン酸化模倣変異体はHSP70との結合が上昇(シャペロン活性が上昇)することを意味する。これらの成果を応用すれば、神経変性疾患で初期に障害される神経終末をCSPalphaのリン酸化を通じてHSP70活性を促進することで防御することができると考えられる。現在、CSPalphaのSer34に対する特異的リン酸化抗体を作製中であり、実際にこれらのリン酸化がマウスにおいても認められることを確認する予定である。マウスレベルでのリン酸化を確認後、CSPalpha非リン酸化変異体を持つマウスを作製、解析し、パーキンソン病の新規治療法開発を行う予定である。また、すでにマウスの線条体で同定していたリン酸化基質候補であるMADD/DENNがPKCのリン酸化基質であることを同定した。パーキンソン病発症に関与するPKCgammaの基質をリン酸化プロテオームにより10個同定している。そのうちの2個については、そのパーキンソン病症状発症のメカニズムを解明している。引き続き、残り8個についても、そのリン酸化とパーキンソン病症状発症のメカニズムを解明する。また、CSPalpha,betaPIXについては、動物レベルでのリン酸化部位改変動物の作製の準備中であり、このマウスを用いて、線条体ドパミン遊離、神経細胞死などの解析を行う予定である。神経変性疾患
分裂酵母Sna41蛋白質のDNA複製前複合体への相互作用の解析

S.pombe MCMの変異体であるnda1変異株及びnda4変異株のサプレッサーの単離を行なった結果、nda4変異株のサプレッサーが12株単離できた。これらのサプレッサーは全て同じ遺伝子座に変異を生じており、この遺伝子をsna41遺伝子と名付けた。Sna41は生育に必須なDNA複製に関与し、S.cerevisiaeのCDC45と全体にわたって相同性があった。Sna41の機能解析のため、まずSna41に対する抗体作成を試みたが、抗体は作成できなかった。そこで、タグをつけたSna41を発現する株を作成し、この株を用いて細胞内局在を蛍光抗体法により調べた。Sna41はG1期において、核に存在するもの、細胞質に存在するものなど様々な局在を示した。細胞抽出液を分画し、ウエスタンブロット法で調べた結果においても各々の分画にsna41蛋白質が検出され、この蛋白質は細胞全体に局在する可能性が示された。また、sna41遺伝子の遺伝子変異の場所を、それぞれの変異株のsna41遺伝子の塩基配列を決定することにより同定した。1株では3箇所のアミノ酸に置換が起こっていたが、その他の11株では1箇所のみのアミノ酸の置換が起こっていた。単一アミノ酸の置換によって変異を生じているのは、229、231、255、410、508、553番目のアミノ酸に変異が起こった株であった。これらの変異蛋白質を認識するため、C末にタグをつけたSna41-3HA蛋白質を発現する株を作成を試みたが、単離することはできなかった。このことより、変異蛋白質は非常に不安定な蛋白質と考えられた。本研究は、まず、Sna41蛋白質の細胞周期における細胞内局在の変化を明らかとすることを目的とした。C末にHAタグをつけたSna41蛋白質を発現する組み換え遺伝子を作製し、それを分裂酵母の染色体に組み込んだ株を作製した。この細胞抽出液をHAタグに対する抗体でウエスタンブロットを行なった結果、HAタグを1つのみつないだ株では検出できなかったが、3つつないだ株ではSna41-HA蛋白質を検出することができた。後者の株を用いて、蛍光抗体法により局在を調べたが、蛋白質が検出できなかった。さらに、細胞を核と細胞質にわけてウエスタンブロットにより局在を調べた結果、どちらにも均等に存在しており、それぞれの電気泳動における移動度に差は見られなかった。Sna41蛋白質は細胞全体に局在しており、移動度を変えるような修飾は無いと思われる。さらに細胞を細かく分画して局在を調べている。これと平行して、合成ペプチドを用いて抗体を作製しており、抗体が作製したら蛍光抗体法で局在を調べる予定である。また、用いた株以外にも12株のnda4変異抑圧能をもつsna41変異株を単離しているので、これらの変異株の変異部位を同定した。各々の変異株よりグノムDNAを調製し、直接塩基配列を決定する方法を用いた。得られた塩基配列を野性型の塩基配列と比較した結果、11株はすべて1つのアミノ酸のみが置換されていた。残り1株は3つのアミノ酸が置換されており、どれが直接変異に関与するのか明らかにできなかった。これらの変異アミノ酸の場所は9種類に分類され、さらにそのうちの4種類のアミノ酸が、出芽酵母やアフリカツメガエルで相同と思われるCDC45でも保存されていた。塩基配列を決定した株はnda4変異との2重変異株なので、その変異がどのような影響を及ぼすかを調べるため、現在、後者の4種の株に関してsna41単独変異株を作製しているところである。

DNA複製開始に関与するMCM蛋白質の機能解析を行なう目的で、S.pombe MCMの変異体であるnda4変異株のサプレッサーの単離を行ない、サプレッサーを12株単離した。この変異を生じた遺伝子をsna41遺伝子と名付け、機能解析を行なった。Sna41の蛋白質を検出する系を作成するため、抗体の作成を試みたが、大腸菌における組み換え蛋白質は作成できず、また、合成ペプチドを用いてウサギを免疫したが抗体はできなかった。そこで、タグをつけたSna41を発現する株を作成し、Sna41蛋白質の検出の系を確立した。この株を用いて細胞内局在を蛍光抗体法により調べたところ、G1期において、核に存在するもの、細胞質に存在するものなど様々な局在を示した。細胞抽出液を分画し、ウエスタンブロット法で調べた結果においても各々の分画にSna41蛋白質が検出され、この蛋白質は細胞全体に局在することが示唆された。また、sna41遺伝子の遺伝子変異の場所を、それぞれの変異株のsna41遺伝子の塩基配列を決定することにより同定した。1株では3箇所のアミノ酸に置換が起こっていたが、その他の11株では1箇所のみのアミノ酸の置換が起こっていた。単一アミノ酸の置換によって変異を生じているのは、229、231、255、410、508、553番目のアミノ酸に変異が起こった株であった。アミノ酸の変異箇所は特に集中することなく、遺伝子全体に広がっていた。これらの変異蛋白質を認識するため、C末にタグをつけたSna41-3HA蛋白質を発現する株を作成を試みたが、単離することはできなかった。このことより、変異蛋白質は非常に不安定な蛋白質と考えられた。現在、これらの変異がSna41蛋白質の機能にどのように関与しているか解析を行なっている。
Muse細胞を用いた脊髄損傷に対する新しい細胞移植治療法の開発

脊髄損傷は、外的要因により脊髄神経機能が障害される重篤な疾病である。脊髄損傷患者の生活の質および社会的生産性は著しく低下してしまう。その脊髄損傷に対する治療には、損傷部位で断絶している神経軸索の再建を行うための細胞移植があげられる。本研究では、脊髄損傷に対する神経再生医療として、腫瘍形成性がなく安全で、傷害部位への遊走能を有するMuse細胞を応用する。これにより、非侵襲的な方法での脊髄損傷への新しい治療法の開発を目指す。