hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高圧下蛍光分光システムによる蛋白質の構造的揺らぎの定量的解析

本年度の主な研究成果は以下のとおりである.FRETを用いた蛋白質における局所的線圧縮率の算出とその意義の検討マッコウクジラミオグロビン(Mb)において,そのTrp14をPheに置換し,Eヘリックス末端近くのLys63をCysに置換することで,蛍光団であるAEDANSを63位に結合させたAEDANS修飾変異ミオグロビン,W14F/L63C-AEDNAS Mbを作成することに成功した.このAEDANS修飾変異ミオグロビンにおけるTrp14と,Cys63に結合したAEDANSとの間のFRET効率の圧力依存性について,昨年度に作成した高圧下蛍光分光システムを用いて検討した.この変異Mbは,295nmの励起光で発光する340nm付近のTrp残基に由来する蛍光強度が減少し,逆にAEDANS由来の460nm付近の蛍光を発するようになったことから,Trp14と63位に結合したAEDANSとの間にFRETが起こっていることが示された.これらの蛍光団間のFRET効率は,加圧に従い0.769(50気圧)から0.802(1500気圧)に上昇し,このことはTrp14とCys63位のAEDANS間の距離が加圧により短縮したことを示している.さらにこのFRET効率の定量的解析から,これら2点間の線圧縮率を求めると,3.1×10^<-10>m^2N^<-1>と見積られた.この値は,Mbの等温圧縮率から求めた3×10^<-11>m^2N^<-1>よりも大きく,また,ヘムと蛋白質表面に結合した金属錯体間の電子移動反応の圧力依存性から求めた3×10^<-11>2×10^<-10>m^2N^<-1>に比べても大きいことから,Trp14とLys63の間の構造揺らぎは大きいと考えられた.このLys63が位置しているEヘリックスはミオグロビンにおける酸素結合部位を形成しており,ヘムに結合した酸素分子と水素結合しているHis64もその隣のアミノ酸残基として位置していることを考慮すると,本研究から得られた結果は,酸素分子が効率よくヘム鉄に結合するために,Eヘリックスの構造的な揺らぎは大きいことを意味している.本年度の主な研究成果は以下のとおりである.1.高圧下蛍光分光システムの改良既設の高圧蛍光分光システムではその蛍光測定の感度が低いため,検知部であるフォトマルを更新するとともに,その光学系を改良することで,高圧下でも高感度に蛍光を測定できる分光システムを確立した.今回開発した高圧下蛍光分光システムでは,耐圧セル内に置いた蛋白質試料からのTrpの蛍光を感度良く検出することに成功した.2.FRETを用いた蛋白質における局所的線圧縮率の算出蛋白質構造の揺らぎを検出するため,分子内でFRETを起こす人工的な蛋白質を構築した.テンプレートとなる蛋白質としては,比較的その構造的な揺らぎの大きなアポミオグロビン(apoMb)を利用し,蛍光を発する2個のTrp7,Trp14のうちTrp14をPheに置換することで単一のTrpを有する変異体を作成した.この変異体におけるEヘリックス中のLys63,あるいはGヘリックス中のLys102をそれぞれCysに置換した変異apoMbを作成し,ここで導入したCysに,蛍光団であるIAEDANSを結合させた2種のFRET観測用apoMb(FRET-apoMb),W14F/L63C-AEDNAS,およびW14F/L102C-AEDNASを構築した.これらのFRET-apoMbでは,Trp7を励起することにより,Cysに結合させたAEDANSからの蛍光が観測され,Trp7とAEDANS間のFRETが起こることが確認できた.さらに,このFRET-apoMbを耐圧セル内に入れ,1.で作成した高圧下蛍光分光システムを用いて加圧下でのFRET強度の変化を追跡したところ,その強度が加圧に従い増加する領域と減少する領域が観測された.これは,Trpの励起波長でもAEDANSが励起されて,その蛍光の圧力依存性が影響している可能性を示しており,加圧によるFRET強度変化からの距離変化の検討にはこの効果を入れて解析する必要がある.本年度の主な研究成果は以下のとおりである.FRETを用いた蛋白質における局所的線圧縮率の算出とその意義の検討マッコウクジラミオグロビン(Mb)において,そのTrp14をPheに置換し,Eヘリックス末端近くのLys63をCysに置換することで,蛍光団であるAEDANSを63位に結合させたAEDANS修飾変異ミオグロビン,W14F/L63C-AEDNAS Mbを作成することに成功した.このAEDANS修飾変異ミオグロビンにおけるTrp14と,Cys63に結合したAEDANSとの間のFRET効率の圧力依存性について,昨年度に作成した高圧下蛍光分光システムを用いて検討した.この変異Mbは,295nmの励起光で発光する340nm付近のTrp残基に由来する蛍光強度が減少し,逆にAEDANS由来の460nm付近の蛍光を発するようになったことから,Trp14と63位に結合したAEDANSとの間にFRETが起こっていることが示された.

これらの蛍光団間のFRET効率は,加圧に従い0.769(50気圧)から0.802(1500気圧)に上昇し,このことはTrp14とCys63位のAEDANS間の距離が加圧により短縮したことを示している.さらにこのFRET効率の定量的解析から,これら2点間の線圧縮率を求めると,3.1×10^<-10>m^2N^<-1>と見積られた.この値は,Mbの等温圧縮率から求めた3×10^<-11>m^2N^<-1>よりも大きく,また,ヘムと蛋白質表面に結合した金属錯体間の電子移動反応の圧力依存性から求めた3×10^<-11>2×10^<-10>m^2N^<-1>に比べても大きいことから,Trp14とLys63の間の構造揺らぎは大きいと考えられた.このLys63が位置しているEヘリックスはミオグロビンにおける酸素結合部位を形成しており,ヘムに結合した酸素分子と水素結合しているHis64もその隣のアミノ酸残基として位置していることを考慮すると,本研究から得られた結果は,酸素分子が効率よくヘム鉄に結合するために,Eヘリックスの構造的な揺らぎは大きいことを意味している.
近世日本における武士像と道徳性と政治意識の相関性に関する史料復元的基礎研究

戦国期を経て泰平といわれる政治・社会体制を作り出したのは、徳川家康などを頂点とした武士階層(武家領主)である。世界史にもまれな平和な環境が二百年以上続き、民衆は「家」を単位とした仕事にいそしむことができ、その分、経済的格差も生じた。このような時代に、本来戦闘者(武者)であるものの治者という性格も持った武士層と民衆の間に共有される政治意識や道徳観が形成され、武士像も中世・戦国期から大きく変化した。身分・教諭法令を中心とした藩政史料などの武家史料と農書・家訓・意見書などの民衆・地方史料の両側面の検討から、このような結論を導出した。(1)本研究は近世日本の主たる為政者・武士と民衆・非武士層に共有された道徳性や政治意識の相関性を、いわゆる思想史に特化した史料群のみならず、地域史料(領主史料や地方史料・民衆史料など)の収集も行いながら分析し、かかる作業を通した平和な時代の武士像の解析が目的である。(2)本研究では上記の目的に則し地域史料の収集が重要な柱である。その際、両階層(領主・武士と民衆・非武士)に共有される道徳・政治意識の析出に有効と思われる、教諭書・願書・家訓・顕彰記・地誌などを中心に収集、解析する。本年度はまず九州をはじめ西日本を中心に地誌・風土記類を調査し、そのなかで武士がどのようイメージで描かれているか、またその背景に関し検討した。網羅的調査にはいたってないので素描にとどまるが、いくつか指摘できる。まず合戦故事・武士の戦死課などの検証をこれらの書籍類が意図していることである。近世は戦乱がない時代で治者としての武士像が強まった可能性(2007「江戸時代の武士のイメージ」。今年度の発表研究成果。以下同じ)があろうが、他方で合戦ないしそこで戦死した武士の姿が描かれるのは怨霊観念とともに武士が持つ武力・暴力への畏敬意識が潜在し、それが結果的に武士の暴力行動(無礼討ちなど)がなくならず(2006「書評と紹介・谷口眞子著『近世社会と法規範』」)、むしろ社会秩序や武士身分秩序を安定させる役割を果たしていたことにつながると思われる。社会差別が政策的に展開される(2007「近世大名の農政展開と社会差別」)のも、暴力性を背景にした武威の秩序維持志向との評価もできよう。しかし、武士自身に治世の実現が求められているのも事実であり、地誌・風土記類にはとくに地域開発故事に因む武士も多く登場する。領民にとっての安定した生活実現を可能にする武士の姿が描かれる点が留意される。そして武士自身も自己の家や統治対象としての領域の歴史像を自らの規範意識・道徳性を加味しながら描くようになる(2007「佐賀県近世史料第八編第三巻」)。これに止まらず、治者としての武士は領民に対しても自らの社会的立場を自覚しその役割を果たすことを促す道徳性を求めることになろう(2006「『藩』研究のビジョンをめぐって」)。本来、戦闘者である武士に自覚されるようになった治世をめぐる武士自身の道徳意識が領民にどのように共有されるのかが、今後間題になる。その意味でも領民による武士顕彰史料の発掘を継続する。九州を中心に西日本を範囲として、史料収集した。前年からの継続で網羅的収集ではないが研究主題に関し、いくつかの実績知見を得た。第一に中間身分(村役人)層が子孫に残した家職にともなう覚書類には、武士身分の権威性に依拠したよいうよりも、自らの家のいわば社会的使命として村役などに従事する自意識がみられ、武士身分による治世を家職として担う社会観が強い事例を多く指摘できる。子孫への覚書類という史料的性格を考慮すれば、積極的な武士・治者の政治支配を支える道徳認識が想定できよう。そして彼等(村役人)の政治・道徳意識が近世前期の段階で武士・治者顕彰という事象を生むことになる(2007「対馬藩田代領の扶持人と村役・町役」。今年度の研究発表・雑誌論文。以下同じ)。第二に、政治支配に関わる中間身分といっても、村役人層とともに役所支配を実質的に担う階層も形成される。彼等は第一で指摘のように、それぞれ自らの家意識を持ちながら、政治支配に関わるが、その立場は異なることになる。前者はあくまで地域社会の構成員という性格を持ち続けるが、後者は漸次、世襲化して士身分という性格を帯びるようになり、小作者、経済的没落者などへの対応なども背景に、微妙に対立する。

ここに藩側はこれら相互に社会的利害対立を生じ兼ねない諸階層への教諭が要請される(2007「社会変容と訴願・改革・教諭」)。第三にかかる時代性のなかで武士認識が変容しうる契機が想定されることである。とくに諸藩の改革にともないみられる藩主顕彰の政治的意味合い、また領民の武士・治者意識に与えた影響は看過できないと思われる(2007「近世大名家〈祖神〉考-祖先信仰の政治化-」)。(1)武士の権威に対する民衆の認識の解析を行い、そこにいわば被誘因性が指摘できる。一つは武力への畏敬が神国観と結びつき、武士の神格化を受容する動向である。とくに武功家臣の選別は、神格化という動向もともないながら、絵馬などを通じて広く民衆世界に浸透してゆく(2009「員原益軒の『武』認識とその行方」。今年度の研究発表。以下同じ)。今ひとつは士分化・役人化が地域社会におけるステータスとなる身分上昇の傾向は、武士の権威性に対する民衆層の意識を反映している。それは行政組織への参画による政治的権益の向上という側面もあろうが、士分権威が民衆層による地域でのステータス獲得、という問題も孕む(2009『近世領主支配と地域社会』)。(2)以上からすれば、民衆の武士像、政治意識は、自らが属する集団のなかの武士の位置づけ、という枠組みで捉えられる。いわばアイデンティティの問題である。家訓は民衆が持つアイデンティティのいわば単位世界のものであり、そこに士分や政治参加が家相続との関係でどのように認識されて吟るかが問題である。また、かかる自己認識は神国観、そのなかで武士像、家職意識にも連動する(2008「近世の『宗教』も政治・社会を読み解くカギ」。なお拙稿2008「『世界』と『神国』」『境界とアイデンティティ』〔岩田書院〕所収も参照)。東照宮勧請は、武家社会の頂点にあり王権という性格も持った東照権現が民衆世界で民俗神として受容される回路を創出するが(2008「武士神格化と東照宮勧請」)、これもアイデンティティの問題と捉えられよう。(3)さらに武士層が行政役に関わり自らの家との関係で上昇志向を持つことも、彼らの政治意識を考慮する際に重要であり、これは武士道徳や民衆の士分化意識の問題とも関係する(2009「近世大名家臣の役勤と人事」)。本研究は、本来は戦闘者でありなだら、近世に治者としての性格を強めた武士層とその支配対象としての非武士層の間に共有される道徳性や政治意識について武士像との関係も留意しながら、それらの相関性について検討することを目的としている。その際、従来は思想史や民俗学、領主制(藩政史)に関する研究のなかで個別的に検討されてきた諸史料を総合的に検討することを方法論的特徴と想定した。本年はこの研究の最終年度であるが、これまで集積したデータをもとに、史料編年の作業を通して基礎的フレームを提示した。一つは身分秩序と道徳をめぐる問題で、武家領主の教諭の基本思想(儒学や家職意識など)とともに、近世初期の段階から幕末期にかけて、とくに外様の広島藩と譜代の小浜藩を主軸としつつ、西日本を中心に編年的に整理した。その結果、善悪の価値観を内在した領主側の認識、「百姓」独自のものとしての生活規制の規定化、領主の「国恩」という価値観の提示、民衆層の道徳性に経済格差の原因を求める姿勢、などが教諭政策とともに段階的に形成され、武家領主は身分秩序の構築を、分限と忠孝を基軸に道徳性を内在させ行おうとしたことが解析された。これに対する民衆側の対応、社会観について、家訓や農書・意見書などにみられる地域認識の基本思想(家意識や武士像)という観点から、やはり史科データを編年的に整理した。
溶液中における銅アミド反応剤の挙動及び構造の解明

炭素-銅結合が不安定なためスペクトル測定が困難な有機銅反応剤に比べ窒素-銅結合は安定と考えられるので、銅アミド反応剤はタイムスケールが長いNMRなどの測定も容易である。よってこの銅アミド反応剤の溶液中における動的挙動・構造・会合状態などを分光学的手段、特にNMRを用いて観測・解析しようというのが本研究の目的であった。銅アミドとしてはLSA (lithium benzyltrimethylsilylamide)とヨウ化銅あるいはシアン化銅より調整した反応剤を測定サンプルとした。まず低温中の構造を解析するため-55度でNMRを測定した。13-C、14-N、29-Siの系中存在多核種の測定の結果、銅アミド反応剤は通常、銅塩とアミドの比を1対2で調整した試薬を使用するが、そのモル比から考えられる銅塩対アミドが1対2で構成された錯体を主形成しているのではないことが分かった。系中に主に存在するのは銅塩対アミドが1対1の構成を持つ錯体とその結果過剰になったLSAの混合溶液であることが明らかになった。この二つのピーク以外にもマイナ-なスペクトルが観測され、その明確な同定には到っていないが、種々の測定結果からおそらく銅塩対アミドが1対2以上の構成を持つ錯体であると現在のところ考えている。また-20度までの温度可変測定も行い、それらが平衡混合物であることも明らかにした。以上のように今まで未知であった銅アミド反応剤の低温中での存在状態を初めて明らかにすることができた。また当初計画していた正確な構造同定を行なうために測定核種をラベリングした基質、特に窒素原子を15-N濃縮した基質の合成を試みた。予備的実験として15-N濃縮の塩化アンモニウムを出発原料としての合成を試みたがうまくいかなかった。今後はガブリエル合成法によるルートの検討を計画している。
ミッドカイン(MK)の心筋虚血再灌流障害発症への関与の解明と治療への応用

MKの心筋虚血再灌流傷害に与える影響本科学研究費申請時には、MKの持つ炎症細胞遊走促進作用に着目し、MKKOマウスの虚血再灌流傷害が野生型と比較して炎症反応が抑制されるため傷害の程度が軽減されるとの仮説のもとに実験を開始した。予想通りMKの発現は梗塞周囲に認められたが、驚くべきことにMKKOマウスの虚血再灌流傷害は野生型より有意に増大しており、当初の仮説とは全く逆の結果を得た。TUNEL染色法などによるその後の解析の結果、心筋虚血再灌流時にはMKの抗アポトーシス作用が強く関与していることが示唆された。さらに炎症反応はMKKOマウスの方が著明で、アポトーシスを含む再灌流傷害の一次性変化が二次的に引き起こされる炎症反応の程度を決定づけていることも示された。以下に個々の実験結果について要点を示す。マウス心筋傷害モデル(虚血再灌流による)の作成と心機能評価腹腔麻酔後人工呼吸管理下に開胸し、左冠動脈前下行枝を30分結紮したのち再開放することで心筋虚血再灌流を作成した。24時間後に心臓超音波にて心機能を評価後、心臓を摘出し傷害面積、病理組織学的変化、傷害関連の各種蛋白発現などの比較検討を行ったところ、野生型に比べてMKKOでの著しい心機能低下が認められ、さらにMKKOにて梗塞巣周囲でのアポトーシス亢進がTUNEL染色にて確認された。傷害心筋細胞におけるシグナル伝達系に与えるMKの影響(培養心筋細胞実験)従来まで神経細胞や癌細胞で報告されていたMKの抗アポトーシス作用につき心筋細胞を用いて詳細に検討した。24時間無血清で培養した心筋細胞に対してMK蛋白100ng/mlを添加したところ、30分後にリン酸化ERKの発現が有意に増大した。このことより、心筋細胞においてもMK蛋白の添加によりERKがリン酸化されることを確認した。また培養心筋細胞に対して低酸素-再酸素化による細胞障害を加え、MK蛋白100ng/ml添加の有無によるアポトーシスの増減を評価したところ、MK蛋白添加によりBcl-2の発現が増大し、さらにアポトーシスの有意な抑制が認められた。これらの結果より心筋細胞に対してMKの抗アポトーシスが強く影響することが示唆された。MK蛋白投与による心筋傷害抑制効果の評価生体中でのMKの心筋細胞保護効果を解析するため野生型マウスに対してMK蛋白投与を行った。再灌流時に30G針にて心室筋内にMK蛋白を直接注入したところ、心臓超音波による評価ではMK蛋白投与群で有意な心機能改善を認めた。また摘出心では障害面積、病理組織学的変化のいずれにおいてもMK蛋白投与による傷害抑制効果が認められた。これらのことから、MKは虚血心筋傷害時の治療へ応用できる可能性が示唆された。

また摘出心では障害面積、病理組織学的変化のいずれにおいてもMK蛋白投与による傷害抑制効果が認められた。これらのことから、MKは虚血心筋傷害時の治療へ応用できる可能性が示唆された。野生型マウス(WT)、MKノックアウトマウス(MKK0)それぞれの左冠動脈前下行枝を60分結紮したのち再解放して心筋虚血再灌流モデルを作製した。WTでは再灌流後MK蛋白発現の経時的変化をWestern Blottingで評価し、免疫組織染色にてMK分布の状況を調べた。さらにMKKO-WT間で虚血再灌流後の障害面積、心エコー、血清CPK、TUNEL法によって障害程度の比較をおこなった。Western Blottingでは、心筋虚血再灌流6時間後からMKの上昇を認め、24時間後にピークを示した(3.2±0.8%from baseline, n=3)。また再灌流24時間後の免疫組織染色では梗塞巣周辺部に強いMKの発現を認めた。再灌流24時間後の障害面積(梗塞サイズ/虚血危険域)はMKKOが有意に大きく(58.4±5.3%,n=7, vs. 31.6±3.3%,n=6, P<0.05)、CPKも有意に高かった(1950±27 IU/l,n=8, vs. 1557±38 IU/l,n=8, P<0.05)。心エコーでは、術前および術直後はMKKO-WT間で特に差を認めなかったが、再灌流24時間後ではMKKOにおいてLVFSが有意に低下していた(19.3±1.4%,n=8, vs. 33.4±1.5%,n=8, P<0.05)。また梗塞巣周辺部位でのTUNEL陽性細胞はMKKOで有意に多く認められた(10.5±2.3%,n=5, vs. 7.2±1.1%,n=5, P<0.05)。再灌流24時間後のBcl-2上昇率はWTで高い傾向を示した。MK蛋白は心筋虚血再灌流24時間後にて発現のピークを示し、梗塞巣周辺部に強い発現を認めた。MKKOではWTと比較して虚血再灌流後の心筋障害が著しく、そのメカニズムとしてMKの抗アポトーシス作用が関与していることが示唆された。MKの心筋虚血再灌流傷害に与える影響本科学研究費申請時には、MKの持つ炎症細胞遊走促進作用に着目し、MKKOマウスの虚血再灌流傷害が野生型と比較して炎症反応が抑制されるため傷害の程度が軽減されるとの仮説のもとに実験を開始した。予想通りMKの発現は梗塞周囲に認められたが、驚くべきことにMKKOマウスの虚血再灌流傷害は野生型より有意に増大しており、当初の仮説とは全く逆の結果を得た。TUNEL染色法などによるその後の解析の結果、心筋虚血再灌流時にはMKの抗アポトーシス作用が強く関与していることが示唆された。さらに炎症反応はMKKOマウスの方が著明で、アポトーシスを含む再灌流傷害の一次性変化が二次的に引き起こされる炎症反応の程度を決定づけていることも示された。以下に個々の実験結果について要点を示す。マウス心筋傷害モデル(虚血再灌流による)の作成と心機能評価腹腔麻酔後人工呼吸管理下に開胸し、左冠動脈前下行枝を30分結紮したのち再開放することで心筋虚血再灌流を作成した。24時関後に心臓超音波にて心磯能を評価後、心臓を摘出し傷害面積、病理組織学的変化、傷害関連の各種蛋白発現などの比較検討を行ったところ、野生型に比べてMKKOでの著しい心機能低下が認められ、さらにMKKOにて梗塞巣周囲でのアポトーシス亢進がTUNEL染色にて確認された。傷害心筋細胞におけるシグナル伝達系に与えるMKの影響(培養心筋細胞実験)
RNAスプライシング分子異常における標的分子の探索

RNAスプライシング関連遺伝子変異は、骨髄異形成症候群(MDS)の分子病態に関わると推測されるが、病型により変異遺伝子に特異性があり、病型を規定していると考えられる。MDS患者由来の造血細胞を用いてRNAシーケンスによるスプライシング異常の標的分子の探索を行った。SF3B1変異例においては、3'側のスプライシングサイトが5'側にずれる特徴的な変化が様々な遺伝子に観察され、遺伝性環状鉄芽球性貧血の原因遺伝子が含まれていた。一方、SRSF2変異例においては、通常観察されないエクソンを含む転写産物が検出され、変異例で観察される遺伝子特異的な変化が表現型の形成に関与すると推測された。骨髄異形成症候群(MDS)におけるRNAスプライシング関連遺伝子の変異は、MDSの病態形成に重要な遺伝子異常と示唆されるが、その機序は不明である。SF3B1変異は、環状鉄芽球を有する病型に高頻度かつ特徴的に観察され、環状鉄芽球形成に関わる分子異常と推測される。そこで、SF3B1変異が生じることにより、鉄代謝・ヘモグロビン合成等に関わる遺伝子のRNAスプライシングに異常が生じ、環状鉄芽球が出現するとの仮説のもと、RNAシーケンスを用いたスプライシング異常の標的分子の探索を行った。50例のMDS患者由来のCD34陽性造血細胞からtotal RNAを抽出し、RNAシーケンスを行った。18例にSF3B1変異を、15例にSRSF2変異を認め、既知のスプライシング分子変異が同定されなかった16例をコントロールに解析を行った。SF3B1はU2snRNPを構成し、イントロンの3'側のブランチポイントの認識を担っているとされるが、SF3B1変異例においては、3'側のスプライシングサイト(SS)が5'側にずれる特徴的な変化が様々な遺伝子において観察された。SSがずれることにより、その遺伝子はframe shiftを生じると推測されるが、同様の変化は骨髄単核球を用いた多数例での解析でも再現された。変異例に共通して3'側のSSに変化を来す遺伝子には、鉄代謝に関わる遺伝子なども含まれ、有望な標的遺伝子候補として、現在、追加の解析を進めている。一方、SRSF2変異例においては、同様の変化は稀であったが、通常観察されないエクソンを含む転写産物が検出された。SRSF2はSF3B1同様に3'SSの認識に関わるが、エクソン上に存在するexon splicing enhancerと呼ばれる領域に結合することが知られており、生理的な機能の違いにより、変異例で観察されるスプライシング変化も異なると推測された。RNAスプライシング関連遺伝子の変異は、骨髄異形成症候群(MDS)の病態形成に重要な遺伝子異常と示唆されるが、その分子機序は明らかではない。RNAスプライシング分子としての共通する機能がMDS病態に関わっていると推測されるが、病型により変異遺伝子に特異性があり、病型を規定している可能性が考えられる。SF3B1変異は、環状鉄芽球を有する病型に高頻度かつ特徴的に観察され、環状鉄芽球形成に関わる分子のRNAスプライシングに異常が生じ、環状鉄芽球が出現するとの仮説のもと、RNAシーケンスを用いたスプライシング異常の標的分子の探索を行った。100例のMDS患者由来のCD34陽性造血細胞からtotal RNAを抽出し、RNAシーケンスを行った。32例にSF3B1変異を、18例にSRSF2変異を認め、既知のスプライシング分子変異が同定されなかった症例をコントロールに解析を行った。SF3B1変異例においては、3'側のスプライシングサイト(SS)が14塩基、5'側にずれる特徴的な変化が観察された。本異常が生じた遺伝子はフレームシフトに基づく終止コドンが途中で入り、多くの遺伝子はNMDで処理され、低発現もしくは発現されないと考えられた。変異例に共通して3'側のSSに変化を来す遺伝子には、鉄代謝に関わる標的遺伝子候補が同定されており、現在、機能解析を予定している。一方、SRSF2変異例においては、同様の変化は稀であり、通常観察されないエクソンを含む転写産物が検出され、並行して進めている変異体のノックインマウスにても同様のスプライシング変化が確認されている。SRSF2はSF3B1同様に3'SSの認識に関わるが、エクソン上に存在するexon splicing enhancerと呼ばれる領域に結合することが知られ、変異例で観察されるスプライシング変化の違いが表現型の形成に関与することが推測された。臨床検体のRNAシーケンスを通じて、本研究の目的である、スプライシング関連遺伝子変異に特徴的なRNAスプライシング異常ならびに標的遺伝子候補の同定まで達成している。

血液腫瘍学RNAシーケンス解析症例数を更に増やし、より疾患および変異遺伝子特異的な異常を絞り込むとともに、スプライシング異常の発生部位の配列解析など、候補遺伝子の更なる絞込みを行い、分子メカニズムの解明や治療への応用の可能性などにつなげていきたい。
老化による廃用性筋萎縮の回復遅延に対する細胞外因子に着目した治療戦略の構築

本研究は、廃用性筋萎縮後の再荷重が老年ラットの筋線維と基底板を損傷させることを明らかにした。再荷重後、老年ラットでは基底板を構成するcollagen IVが異所性局在を示し、さらにネクローシスを呈している筋線維が増加した。これは老化が基底板修復を障害していることを示唆する。さらに再荷重後に若年ラットではcollagen IV関連因子の発現が上昇するが老年ラットではそうではなかった。以上より廃用性筋萎縮が生じた老年ラットの筋は脆弱化しており、基底板構築を担う線維芽細胞の活性が低下していることが示唆された。線維芽細胞の老化を防ぐことが筋の回復において重要な治療戦略になることが明らかとなった。本研究では老年期の廃用性筋萎縮からの回復過程における分子機構を明らかにして、リハビリテーション的治療戦略を構築することを目的としている。平成27年度は、老化動物を用いて廃用性筋萎縮モデル動物を作成することに着手した。まず老化動物は長期飼育をしたWistarラットと、時間短縮を目的に老化促進マウスを選定した。これらの老化動物は、行動学的テストの結果、コントロール動物に比べて運動機能や筋機能が低下しており、さらに形態学的にも骨格筋の加齢現象を確認することができた。次に廃用性筋萎縮モデル動物の作成には、尾懸垂法を用いた。尾懸垂による後肢免荷で、ラットならびにマウスの両方で廃用性筋萎縮が生じることを確認した。また筋萎縮が生じる期間とその後の回復期間についても条件検討を実施した。さらに、筋萎縮からの回復過程でどのような遺伝子が変動するかを把握するため、若年Wistarラットの抗重力筋を対象にトランスクリプトーム解析を実施した。この実験により、筋萎縮からの回復過程における抗重力筋の遺伝子変動を網羅的に観察することに成功した。変動が著しい遺伝子に着目して筋萎縮からの回復に重要であろう因子を選定し、老年Wistarラットと若年Wistarラットで遺伝子変動の違いをQPCRを用いて確認した。その結果、若年動物では筋萎縮からの回復過程では基底板構造に由来する因子の発現が著明に上昇するのに対して、老年動物ではそのような変化が生じないという年齢特異的な差異が明らかとなった。この現象を形態学的に確認した結果、老年動物は萎縮からの回復過程では、基底板構造に異常が生じており、さらに多数の中心核細胞が出現することがわかった。これらのことから、老化した骨格筋の脆弱性には基底板構造の異常が関与していると考えられる。今後は、老化が骨格筋基底板構造に与える影響を詳しく解析する必要がある。当初の予定よりも老化促進マウスの飼育に時間を要したため、研究の進行はやや遅延している。本年度の研究計画は、1)老年動物を用いた廃用性筋萎縮モデル動物の作成、2)廃用性筋萎縮からの回復過程における抗重力筋の網羅的な遺伝子解析があげられる。廃用性筋萎縮モデル動物については老年Wistarラットならびに老化促進マウスを用いて作成することに成功した。次に、若年Wistarラットの抗重力筋を対象にトランスクリプトーム解析を実施し、廃用性筋萎縮からの回復過程における遺伝子変動を網羅的に観察することができた。このことから、モデル動物の作成とラットを対象とした遺伝子変動の観察については比較的順調に研究は進展している。一方で、老化促進マウスについては当初の予定よりも飼育に時間を要した。老化促進マウスを対象に尾懸垂による介入実験を実施し、筋サンプルを採取することまではできたが、トランスクリプトーム解析は平成28年度に実施することになった。実験動物は老年Wistarラットと若年Wistarラットを用いた。これらの実験動物を尾懸垂によって後肢を免荷することで廃用性筋萎縮を引き起こして、再荷重負荷によって筋萎縮の回復を促した。対象とした筋は廃用性筋萎縮が生じやすい抗重力筋であるヒラメ筋とした。廃用性筋萎縮からの回復過程において筋線維の形態学的な解析を行った結果、老年ラットの筋線維ならびにそれを取り囲む基底板が再荷重負荷によって損傷していることが明らかとなった。さらに基底板構造が損傷している筋線維はネクローシスを呈することも分かった。これらのことは、老化が筋萎縮からの回復過程に基底板構造に異常をもたらし、筋を脆弱化している事を示唆している。さらに基底板コンポーネントの産生能を年齢間で比較した結果、若年ラットは筋萎縮時から回復期にかけて基底板コンポーネントの産生が促進されるのに対して、老年ラットではそのような反応を示さないことが分かった。このことは老化が骨格筋基底板の構築能を障害していることを示唆している。老年期の廃用性筋萎縮に対する治療戦略を検討する際に、筋線維のみならずそれを取り囲む基底板すなわち細胞外マトリックスの構造を如何にして保持あるいはリモデリングを促すかが重要であることが分かった。上記実験と並行して、老化促進マウスを用いた実験を実施している。老化促進マウスに廃用性筋萎縮を引き起こして、その後の回復過程を追跡した。ヒラメ筋を対象にトランスクリプトーム解析を実施した結果、代謝やタンパク分解に関与する遺伝子の変動が老化促進マウスと対象動物で異なることを見出した。詳細なメカニズムについては、今後検証する予定である。平成28年度の研究計画は老化による萎縮筋回復の遅延における分子メカニズムの解明であった。

老化ラットを用いた実験では、萎縮筋の回復過程で骨格筋基底板コンポーネントの産生が障害されることが明らかとなった。そのメカニズムとしては基底板の分解能が老化によって亢進するのではなく、基底板コンポーネントの構成因子や機能化を促進する因子の発現が老化によって抑制されていることが分かった。このように、平成28年度は老化による萎縮筋回復の遅延における分子メカニズムの一部が明らかとなったことから、当初の研究計画がおおむね順調に進展していると考える。【目的】骨格筋が老化すると、廃用性筋萎縮の回復が遅延することが知られている。しかし、回復が遅延する原因や詳細なメカニズムには未解明な点が多く存在している。そこで老化した骨格筋に生じた廃用性筋萎縮の回復過程における分子機構を明らかにすることを目的に、3ヶ月齢ならびに20ヶ月齢の雄Wistarラットを用いて萎縮筋の回復過程を比較した。【方法】ラットの尾部を懸垂して後肢を免荷することで抗重力筋のヒラメ筋に廃用性筋萎縮を引き起こし、その後、尾懸垂から解放して後肢に再荷重負荷を加えて萎縮筋の回復を促した。その過程において後肢免荷後0日、14日、再荷重後1日、7日にヒラメ筋を採取し、形態学的観察と定量的PCRにて遺伝子発現変動の解析を行った。【結果】20ヶ月齢ラットでは回復期においてネクローシスを呈した筋線維や中心核細胞が増加しており、筋線維が損傷を受けていることがわかった。損傷した筋の微細構造を観察すると、損傷筋を取り囲む基底板が蛇行し、部分的に裂けている像が確認された。一方、3ヶ月齢ではこれらの所見は観察されなかった。さらに3ヶ月齢では、再荷重によって基底板構築に関連する複数の遺伝子発現レベルが上昇したが、20ヶ月齢では発現が変動しなかった。【考察】20ヶ月齢ラットでは回復期に基底板が損傷し、さらに基底板構築の関連因子の発現が変動しないことから、老年期では基底板の構築に必要な因子の不足によって、筋損傷が起こり回復の障害をまねくと考えられる。さらに、基底板の主成分は線維芽細胞によって産生されることから、萎縮筋の回復障害の主原因は従来の説である筋細胞の老化ではなく、“線維芽細胞の老化である"ことが示唆される。【結論】老化したヒラメ筋の回復過程では基底板関連因子の発現低下によって基底板に異常が生じ、筋の回復が遅延することが示唆された。本研究は、廃用性筋萎縮後の再荷重が老年ラットの筋線維と基底板を損傷させることを明らかにした。再荷重後、老年ラットでは基底板を構成するcollagen IVが異所性局在を示し、さらにネクローシスを呈している筋線維が増加した。これは老化が基底板修復を障害していることを示唆する。さらに再荷重後に若年ラットではcollagen IV関連因子の発現が上昇するが老年ラットではそうではなかった。以上より廃用性筋萎縮が生じた老年ラットの筋は脆弱化しており、基底板構築を担う線維芽細胞の活性が低下していることが示唆された。線維芽細胞の老化を防ぐことが筋の回復において重要な治療戦略になることが明らかとなった。今後は老化促進
癌の治療標的としてのＭｎｋ－ｅＩＦ４Ｅ経路に関する研究

申請者らはこれまでにマウスモデル並びにヒト細胞株を用いた異種移植モデルによって、セリン・スレオニンキナーゼMnk1とMnk2が、mRNAのキャップ依存的翻訳開始に必須の翻訳因子eIF4Eをリン酸化して癌を促進することを明らかにした。本研究では、さらにMnk-eIF4E経路と相互作用する新規タンパク質群を同定し、この経路に関与する新たな活性制御機構を探索することを目的とし、エピトープタグ発現精製法および質量分析法を用いて、Mnk1の相互作用タンパク質群の検索と機能解析をこころみた。結果、新規Mnk1結合タンパク質のひとつとして、分子量約130kDaの脱ユビキチン化酵素を同定した。Mnk-eIF4E経路に関与する制御機構、シグナルクロストークの詳細を明らかにするため、エピトープタグ発現精製法および質量分析法を用いて、Mnkの機能制御に関与する相互作用タンパク質群の検索と機能解析を行うことが本研究の概要である。昨年度に樹立したFlagペプチド配列が付加された野性型マウスMnk1タンパク質あるいは機能欠失型変異体タンパク質が恒常的に発現した細胞株を用いて、細胞抽出液から抗FlagM2抗体による免疫沈降を行い、Flag-Mnk1精製タンパク質複合体を得た。次にこれらをSDS-PAGEで分離後ゲル抽出を行い、プロテアーゼ処理後に質量分析法を用いて、得られたピークから含まれるペプチドのアミノ酸配列を特定した。そしてデータベース検索により、Mnk1相互作用タンパク質の同定を試みた。結果、Mnk1特異的に相互作用していると考えられるタンパク質群として、既に報告のあるMnk1の活性化酵素p38や、翻訳開始因子複合体の構成因子(eIF4G, eIF4E, eIF3)が含まれていたことから、結合タンパク質スクリーニングとして本方法が機能していると判定した。一方で、これら既知のタンパク質に加えて、以前には報告されていない新規のMnk1相互作用候補タンパク質もまた複数含まれていることが判明した。今後これらタンパク質とMnk1との結合、および機能的関連について検討を行うことを計画している。エピトープタグ発現精製法および質量分析法によりセリンスレオニンキナーゼMnk1の相互作用タンパク質群の検索を行い、新規結合タンパク質として、分子量約130kDaの脱ユビキチン化酵素を同定した。このタンパク質はp53の阻害因子MDM2やPTENを基質として、タンパク質の安定性や局在制御に関与し、腫瘍の進展に関わることが指摘されている。また、セリン残基がリン酸化をうけると核-細胞質局在が変わることが知られている。Mnk1ノックアウトマウス由来の繊維芽細胞に発現させたFlag-mouse Mnk1と、内在性のこの新規結合タンパク質との相互作用を免疫沈降により確認した。また、ヒト培養細胞株に両タンパク質のヒトホモログを過剰発現させた場合にも両者の相互作用が認められた。これら相互作用は、Mnk1のリン酸化酵素活性を欠いた変異体においても同様に観察された。この新規タンパク質をMnkノックアウト細胞と野性型のマウス繊維芽細胞それぞれに過剰発現させて、細胞レベルでの機能的関連について検討を行った。通常培養条件下で両者の細胞増殖には明らかな違いが認められなかったことから、現在ストレス下での細胞応答に関して、これら分子の相互作用が細胞機能に与える影響を解析中である。申請者らはこれまでにマウスモデル並びにヒト細胞株を用いた異種移植モデルを用いて、セリン・スレオニンキナーゼMnk1 (MAP kinase-interacting kinase 1)とMnk2が、mRNAのキャップ依存的翻訳開始に必須の翻訳因子eIF4E (eukaryotic translation initiation factor 4E)をリン酸化して癌を促進することを明らかにし、Mnk阻害剤が新規がん治療薬となる可能性を示した。Mnkの二重欠損はマウス個体発生には影響を及ぼさないため、Mnk特異的阻害剤は副作用の少ない癌治療薬になる可能性がある。一方で、Mnk-eIF4E経路に相互作用し活性制御する新規タンパク質群もまた、新たながん治療の標的になりうると考えられた。本研究ではその基盤となる研究を行う。Mnk-eIF4E経路と相互作用する新規タンパク質群を同定し、この経路に関与する新たな活性制御機構を明らかにすることを目的とする。エピトープタグ発現精製法および質量分析法を用いて、Mnkの新規活性化制御機構に関与する相互作用タンパク質群の検索とその機能解析を行う。当該年度は機能解析ツールの作製として、Flagペプチド配列が結合した野性型マウスMnk1タンパク質あるいは機能欠失型変異体(マウスMnk1の197番目と202番目のスレオニン残基をアラニンに置換した変異体)をコードするcDNA、あるいはempty vectorのいずれかをレトロウイルスの手法を用いてMnk1遺伝子欠損マウス由来の不死化線維芽

細胞に発現させ、薬剤選択によつて、これらタンパク質が恒常的に発現した細胞株を樹立、解析ツールの作製を行った。科研申請書に記載したMnk1相互作用タンパク質の同定については、少なくとも既知の結合タンパク質の多くが含まれていることが判明し、実験系が機能していると判断した。またそれ以外にもこれまでに報告のないMnk1質結合タンパク質の新規候補も含まれており、達成度としてはおおむね順調であると自己評価した。科研申請書に記載した解析ツールの作製が当初の予定どおり達成されたため、達成度としては、おおむね順調に進展していると自己評価した。同定された新規タンパク質について既存のデータベースをもとにドメイン構造の検索を行う。またMnk1タンパク質との相互作用を免疫沈降により確認する。相互作用が確認された場合には、ドメイン構造を欠いた変異体とMnkとを細胞に過剰発現させて免疫沈降を行い、相互作用の領域を同定する。野性型とMnk1欠損繊維芽細胞において、当該遺伝子を過剰発現、あるいはノックダウンさせることによる細胞生物学的な効果について検討することも計画している。それぞれの細胞抽出液からFlag-Mnk1結合蛋白質複合体を抗FlagM2抗体を用いて免疫沈降により得る。最終精製物(蛋白質複合体)をSDS-PAGEで分離後、ゲルの抽出を行いプロテアーゼ(トリプシン)処理後に質量分析法を用いて含まれるペプチドのアミノ酸配列を特定し、結合タンパク質の同定を行う。タンパク質の同定に関して、計画どおりに進まないときには、酵母を用いたツーハイブリッド法を代替法として考えている。経費の主要な用途は、消耗品であり培地、抗生物質、ウシ血清や、培養用フラスコ、ディッシュ、ピペットなどのプラスティック器具、ガラス器具、抗体、試薬等の購入を計画している。その他同定されたタンパク質の機能解析にかかる蛋白工学関連物品が必要となる。また情報交換や学会で研究成果の公表のための出張経費を計上予定としている。
現象学と心理学における空間知覚の研究

前年度は「空間表象」という主題をめぐって19世紀後半になされた哲学、心理学等の議論を振り返り、現象学がそこで果たした役割の確認を行なったが、今年度は、20世紀の空間知覚論の考察を行なうための基礎作業を行なった。具体的には、まず、19世紀後半の自然主義の一形態としての「心理学主義」の内実を確定し、それに対して現象学が行なった批判の意義について、思想史・科学史的な観点から考察を行なった。次に、心理学主義を克服するために現象学が採用した「還元」という方法が、20世紀前半の心理学(ヴュルツブルク学派、ゲシュタルト学派)や精神医学(ボス、ビンスワンガー)にどのような影響を及ぼしたかについて、方法論的な観点から展望を得ることを試みた。こうした研究の成果は来年度以降に出版される予定である。さらに、20世紀の認知科学における〈計算主義〉と〈コネクショニズム〉との対立構図の概念的整理を行なうために、手始めとしてまず、フォーダー、ピリシンらの計算主義者が主張する心的言語の存在について批判的な分析を試みた。議論のための触媒として「カテゴリー」概念に着目し、思考の枠組みとしてのカテゴリーを哲学・言語学・認知科学がどのように捉えているかを概観し、言語の前提として現象学的な空間認知の図式が果たす役割の重要性を確認した。なお、計算主義者に対抗して提案された、コネクショニストやエマージェンティストのような新しい認知科学的立場の検討は、次年度以降に本格的に行なわれる予定である。本年度は、「空間表象(Raumvorstellung)」を主題に19世紀後半の哲学者や科学者が行なっていた議論を振り返り、そうした中で現象学がどのような役割を果たしたかを点検するという作業を行なった。具体的には、イギリス経験論に由来するヘルムホルツの空間論と新カント派の流れを汲むヘーリングの空間論との対立を展望しながら、フッサールの「空間表象」概念がその成立過程で担っていた時代的意義を明らかにすることを通して、フッサールの「空間」概念を検討した。ヘルムホルツの知覚説が分析的・実験主義的な感覚・知覚二元論であるとすれば、ヘリングのそれは我々の体験に定位した現象-元論である。これら二つの学説に対しては、ヘリングの見解を退け、ヘルムホルツの説を容認するというものが有力であったが、数学者のH.ワイルなどに見られるように、経験主義的な感覚・知覚二元論と現象主義的な知覚-元論との対立を調整しようという問題意識が、19世紀的から20世紀にかけて生じてきている。本年度の研究においては、そうした世紀の転換期に登場したフッサール現象学が、心理主義を厳しく批判することによって心理学主義的な立場から現象学的な立場への「転回」を試み、その後の実証主義科学のあり方に大きな影響を及ぼした経過を明らかにした。
大規模サンプル構築による鎖状銀河形成進化の探求

本研究の目的は、先行研究の約10倍の観測面積であるCOSMOS(Cosmic Evolution Survey)領域において鎖状銀河、特に明るい鎖状銀河の大規模な探査を行うことである。これまでに、サンプル構築に用いる銀河の形態判断プログラムの開発をし、COSMOS領域で鎖状銀河サンプルを構築している。このサンプルの中には実際には鎖状銀河でないものも含まれることが分かったため、銀河画像のコントアを変えてより信頼性のある鎖状銀河サンプルを選んだ。また、これらの形態を特異銀河の分類で一般的に用いられているジニ係数などの定量的な指標を用いることでも分類できないか確認した。その結果、この手法ではうまく鎖状銀河を分類できないことが分かった。銀河進化の中での鎖状銀河の役割を調べるためには、通常の銀河との関連性を調べる必要がある。特に、鎖状銀河がどのような形態の銀河の周辺に存在するのかが重要である。これを調べるには、周辺の銀河の形態分類を行う必要があるが、COSMOS領域には6万以上の銀河が観測されており、その全てを目視で分類することは現実的ではない。そこで、機械学習によって銀河の形態分類の自動化する手法を開発した。最終年度最終年度本研究は、先行研究の約10倍の観測面積であるCOSMOS領域において鎖状銀河、特に明るい鎖状銀河の大規模な探査、解析を行い、観測的にその形成進化モデルを制限することを目的としている。本年度では、研究計画の第一段階としていたCOSMOS領域のおける鎖状銀河サンプルの構築を行った。はじめに、サンプル構築に用いる銀河の形態判断プログラムの開発に着手した。これまでの研究では鎖状銀河を定量的に分類する手法は確立されていなかったため、先行研究の鎖状銀河サンプルを再度解析することで、鎖状銀河の形態を特徴付ける定量的な指標を探すことから始めた。この過程で、先行研究の鎖状銀河サンプルには、鎖状銀河でないものも多数混入していることが明らかになったため、それらを取り除き信頼性の高い鎖状銀河サンプルをつくりなおした。このサンプルを解析した結果、鎖状銀河を特徴付ける複数のクランプの明るさ比を組み合わせることで、鎖状銀河でない銀河を取り除くことができることが分かった。その後、開発した銀河の形態判断プログラムを用いて、COSMOS領域のおける鎖状銀河サンプルを構築した。先行研究では鎖状銀河であるかの分類は人間の目によるものであり、これが議論の客観性を損なう一因でもあった。本研究の定量的な方法での鎖状銀河のサンプル構築により、信頼性のある鎖状銀河の性質の議論が可能になる。定量的な指標で鎖状銀河を通常の銀河とを区別できることを明らかにしたのは本研究が初である。以上の研究結果に関連して、複数の学会発表(国内3、国外1)をした。COSMOS領域において鎖状銀河サンプルを構築し、これに関連した結果を複数の研究会で発表することができた。2011年度中に計画していた論文化に関しては、現在準備段階であり、その点で当初計画からやや遅れている。最終年度これまでに、COSMOS領域において定量的な指標を用いて鎖状銀河のサンプルを構築することができた。今後、これらのサンプル銀河の空間分布などを調べ鎖状銀河モデルを制限する。また、新たに公開される紫外線と赤外線の高解像度データを用いて、多波長での形態の違いについて調べる。特に、近赤外線での鎖状銀河の形態評価は鎖状銀河の特異な形態が星形成領域由来であるのかを判断するうえで重要である。最終年度
イタリアにおける美術作品の保存・修復の思想と歴史-欧米各国との比較から-

イタリアにおける美術作品の修復・保存の思想および歴史を、他の欧米諸国との比較において考察する。成果の概要は以下の通りである。シンポジウム「デュシャンと現代美術の保存・修復」の開催と記録。岡田温司「絵画の『衛生学』--保存・修復をめぐる『生政治』」ローマ大学教授ペルニオーラによる講演「現代美術の修復か、維新か?」とその記録。フリブール大学教授ストイキツァによる講演「美術館と廃墟/廃墟としての美術館」とその記録。森直義「残されている課題--ベルギーにおける絵画修復」。喜多村明里「テセウスの船--美術修復をめぐる論議と隠喩」。水野千依「イメージの活性化/無効化をめぐる身ぶりの諸相--中世からルネサンスにおけるイメージの力学」。蜷川順子「ベルギーにおける芸術作品の保存・修復の思想と歴史」。三谷理華「フレデリック・ヴィロとルーヴル美術館の絵画修復論争」。青山勝「1851年のミシオン・エリオグラフィークと写真の理念」。生田ゆき「ロンドン・ナショナル・ギャラリーにおける洗浄論争」。西田兼「クリムト作《ベートーヴェン・フリーズ》に見る総合芸術作品の修復・保存」。後藤結美子「イギリスにおける修復の理念と実践--完全洗浄をめぐって」。松原知生「残欠のフェティシズム--やきものの鑑賞における陶片・疵物考」。平芳幸浩「朽ちるモノとしての美術作品--フィラデルフィア美術館の事例をもとに」。金井直「ピーノ・パスカーリ<偽彫刻>の表面から」。今年度は初年度として、研究分担者全員で、それぞれの役割分担を確認した。概要は以下の通り。上村、喜多村、水野、松原=イタリア美術の修復と保存。蜷川、森=フランドル美術の修復と保存。平芳、金井、中谷=日本及び西洋における現代美術の修復と保存。西田=ドイツ・オーストリア美術の修復と保存。三谷=フランスの文化財政策。後藤=イギリスの修復と保存。生田=スペインの修復と保存。岡田=全体の総括。これをもとに、蜷川がベルギーおよびオランダ、森がベルギー、平芳がアメリカ合衆国、喜多村、松原、岡田がイタリアで、それぞれ別個に、美術館での調査と資料収集、学芸員や修復家との意見の交換、学界参加、各大学の美術史や修復思想の研究者との会合等にあたった。さらにこの調査をもとに、蜷川がベルギーとオランダにおけるプリミティヴ美術の保存の現状を、森がアントワープでの修復学界の内容(とりわけ、ロヒール・ファン・デル・ウェイデン作とされる《聖母子》の近年の修復について)を、それぞれ9月に報告した。一方、12月には、海外の研究協力者として、スイスのフリーブール大学からヴィクトル・ストイキツァ教授を招き、『美術館と廃墟/廃墟としての美術館』と題する講演を行ってもらった。これには、分担者ばかりでなく、一般の聴衆も参加してもらい、ストイキツァ教授と、18世紀の末におけるルーヴル美術館の誕生以来、美術館が抱えてきた問題や今後の役割について、活発な議論が交わされた。国立国際美術館で開催された『マルセル・デュシャン展』に合わせて、シンポジウム『デュシャンと現代美術の保存・修復』を同美術館で開催した(12月4日)。岡田の司会、分担者で展覧会企画者の平芳、海外協力者のマリオ・ペルニオーラ(ローマ大学)、作家の岡崎乾二郎、修復家の谷村博美の四人のパネラーにより、デュシャン以後の芸術と保存・修復をめぐる諸問題について論じ合った。その結果は、雑誌『インターコミュニケーション』(2005年2月号)に掲載された。また、4月24日には、海外協力者ペルニオーラによる講演会『現代美術の修復か維新か?』を京都大学大学院人間・環境学研究科で開催し、やはり現代芸術や建築、都市の保存等を巡って、ペルニオーラを囲んで議論した。

さらに本年度は、本研究を分担・協力する、後藤(京都市美術館)がロンドンのナショナル・ギャラリー等でウイリアム・ブレイク作品の保存・修復について、三谷(福岡市美術館)がパリの国立図書館等でフランス革命期の文化財政策について、青山(成安大学)が合衆国(ニューヨーク・ロサンゼルス等)の写真博物館や研究所で写真の保存修復について、岡田(代表者)がローマ大学でバロック美術の保存修復について、それぞれ調査と資料収集にあたった。その成果については、来年度に早々、発表会をもつ予定である。また、金井(豊田市美術館)は、『アルテ・ポーヴェラ展』の準備に併せて・戦後のイタリアの現代美術の保存修復の現状について現地で調査に当たった。本年度は、研究協力者の金井直(豊田市美術館)が、イタリアのトリノおよびミラノの各近代美術館で、イタリア現代美術、特にアルテ・ポーヴェラの修復・保存の現状の調査にあった。また、岡田(研究代表者)は、シエナの文化財保護局を訪問し、アレッサンドロ・バニョーリ氏と会見して、十四・十五世紀のトスカーナ美術の保存・修復についての情報を得た。さらに、京都大学人間・環境学研究科にて会合をもち、研究会担者の平芳(国立国際美術館)が、アメリカにおけるデュシャン作品の修復・保存の現状について、研究協力者の後藤(京都市美術館)が、イギリスにおけるウィリアム・ブレイク作品の修復・保存の現状について、調査結果の報告を行なった。また、岡田は、「修復・保存と生政治」と題して、十八世紀の末以後に芸術作品の修復や保存が制度化されるようになった、政治的で思想的な背景について、研究発表を行なった。これは、著書『芸術と生政治』(2006年4月刊行予定)に収録される。修復の世界にはまだ秘密主義が色濃く残っていて、各美術館は情報を出し惜しむ傾向にあるが、医学の場合がそうであるように、情報の公開と開かれた議論が必要であると実感される。本年度は主に、各メンバーがそれぞれ報告書作成のために、これまで進めてきた研究のまとめを行なった。その内容は以下の通りである。岡田は「絵画の「衛生学」-修復・保存の「生政治」」。上村はバニョーリの論文「謙譲の姿勢をとり悲嘆するふたりを伴った十字架上のキリスト」の翻訳。蜷川は「《ヘント祭壇画》修復の歴史」。喜多村は、ブランディの修復思想の再検討。水野は、イタリア中世末期のイコンにおける塗り直しの歴史人類学的考察。平芳は、デュシャンとアメリカにおける現代美術の保存・修復の現状調査。さらに、研究協力者の生田がロンドンのナショナル・ギャラリーにおける洗浄論争について調査した。同じく金井は、アルテ・ポーヴェラを中心にしたイタリア現代美術の保存・修復についての調査をまとめた。西田は、19世紀末ウイーンの文化財保護の状況をクリムトを例に論じた。青山は、19世紀のフランスにおいて、写真という新しいメディアが文化財や歴史的建造物という概念にいかに影響を及ぼし、その保存の理念と以下にかかわっていたかを研究し論文にまとめた。松原は、日本における断片化した茶器の受容形態をを調査し、独特の保存・修復観があることを明らかにした。