hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
最適な糖尿病スクリーニング法の開発とその県レベルコホートにおける実証

未診断糖尿病発見リスクスコアを当てはめるべき集団を特定すべく、糖尿病関連因子についての検討をさらに発展させた。生活状況と糖尿病との関連を検討した結果、単身生活の日本人男性では、未診断糖尿病を有する可能性が高いことを認めた(Heianza Y, Diabet Med 2013 ; 30 : 1355-1359)。また、特に過体重、喫煙者や運動習慣の無い者において、単身生活は糖尿病と有意に関連しており、単身生活と未診断の糖尿病との関連は、部分的に、改善可能な他の生活習慣に影響されている可能性が示唆された。さらに、日本人女性では特に閉経後に加齢とは独立して糖尿病を有する可能性が高まる可能性を見出した(Heianza Y, et al. Diabetes Care 2013 ; 36 : 4007-4014)。閉経前女性と比較して、閉経後女性では、加齢、体格指標(BMI)や生活習慣因子とは独立して、糖尿病を有する可能性が有意に高かった。男性の有する糖尿病保有リスクには匹敵しないものの、閉経後女性では加齢とは独立して高血糖状態と関連する可能性が認められた。以上の結果より、単身生活の男性や閉経後女性などに対する糖尿病スクリーニングの働きかけが有効であると思われた。前年度に開発した糖尿病リスクスコアの妥当性を検証するため、新潟県の健康診査・人間ドック受診者のデータを活用したvalidation研究を今年度下旬より取り組み始めたところである。来年度中には研究結果が得られると思われる。一方、糖尿病を指摘されても、多くの者が通院治療を開始せずに糖尿病を放置していることが世界的に問題となっている。申請者らがレセプトデータを活用した糖尿病スクリーニング勧果の検証を実施した結果において、糖尿病を未治療・放置することと比較して、高血糖を指摘された後すぐに通院治療を開始・継続することは、良好な血糖コントロールに寄与することが科学的に証明された。(抄録なし)糖尿病の有病者数は著しく増加し続けており、日本人において最適な糖尿病スクリーニング方法を確立することは極めて重要な課題である。申請者は「虎の門病院健康管理センター臨床疫学研究プロジェクト(TOPICS)」における人間ドック受診者の既存のデータベースを活用し、糖尿病発症の新たな予知因子や生活習慣を解明することを目的として大規模疫学的臨床研究を実施した。その結果、申請者は、軽度の肺機能低下が既知の糖尿病発症の危険因子とは独立して、日本人2型糖尿病発症リスク増加と関連する可能性を明らかにした(Heianza Y, et al. Mayo Clin Proc 2012 ; 87 : 853-861)。また、男性において、飲酒頻度とは無関係に、1回飲酒量が多いことが、平均10年間の糖尿病発症リスクを増加させる可能性を示した(Heianza Y, et al. Am J Clin Nutr 2013 ; 97 : 561-568)。また、糖尿病予測スクリーニングスコアを開発し、その妥当性・有用性を検証した。採血不要の指標に加えて、過去2か月間ほどの平均血糖を反映する指標であるヘモグロビンAlcを導入することにより、糖尿病リスクスコアの予測能、予測リスク分類が大幅に改善することを示した(Heianza Y, et al. Diabetologia 2012 ; 55=3213-3223)。本検討において開発された血糖とヘモグロビンAlcを含む5年後の糖尿病発症を予測するスコアは、糖尿病ハイリスク群の特定に有用であると考えられた。また、糖尿病患者の約半数は未診断の状態で、自分が糖尿病であることに気がついていないことも問題となっている。申請者は、約33000名を対象として、未診断糖尿病患者を発見するための評価ツールを開発し、その妥当性を包括的に検証した。これまで欧米人において開発されたツールとも比較した。その結果、本検討において開発されたスクリーニングスコアを用いた場合、現在の未診断糖尿病患者をより正確に発見できる可能性を示した(Heianza Y, et al. J Clin Endocrinol Metab 2013 ; 98 : 1051-1060)。同時に、将来の糖尿病発症リスクに関する情報が、未診断糖尿病用の初期スクリーニングスコアでも得られることが分かった。本研究で得られたスコアは、臨床の場以外で患者本人の糖尿病リスク測定に、さらに将来の糖尿病発症予防のために追跡が必要な患者の把握に役立つ可能性があると思われ未診断糖尿病発見リスクスコアを当てはめるべき集団を特定すべく、糖尿病関連因子についての検討をさらに発展させた。

さらに、日本人女性では特に閉経後に加齢とは独立して糖尿病を有する可能性が高まる可能性を見出した(Heianza Y, et al. Diabetes Care 2013 ; 36 : 4007-4014)。閉経前女性と比較して、閉経後女性では、加齢、体格指標(BMI)や生活習慣因子とは独立して、糖尿病を有する可能性が有意に高かった。男性の有する糖尿病保有リスクには匹敵しないものの、閉経後女性では加齢とは独立して高血糖状態と関連する可能性が認められた。以上の結果より、単身生活の男性や閉経後女性などに対する糖尿病スクリーニングの働きかけが有効であると思われた。前年度に開発した糖尿病リスクスコアの妥当性を検証するため、新潟県の健康診査・人間ドック受診者のデータを活用したvalidation研究を今年度下旬より取り組み始めたところである。来年度中には研究結果が得られると思われる。一方、糖尿病を指摘されても、多くの者が通院治療を開始せずに糖尿病を放置していることが世界的に問題となっている。申請者らがレセプトデータを活用した糖尿病スクリーニング勧果の検証を実施した結果において、糖尿病を未治療・放置することと比較して、高血糖を指摘された後すぐに通院治療を開始・継続することは、良好な血糖コントロールに寄与することが科学的に証明された。本年度は、研究の目的を達成すべく着実に研究実施計画を実行に移し、得られた結果を国内・国際学会において発表するとともに、英文原著として報告した。本研究におけるエビデンスは、日本人糖尿病のスクリーニングやその発症予測に貢献すると思われる。また、学会ガイドラインの改定のなどにも大きく貢献することが期待される。今後、他の日本人集団において、TOPICSで開発されたリスクスコアの妥当性をさらに検証する必要がある。現在、他の地域における健康診断・人間ドック受診者を対象とした臨床疫学研究プロジェクトを開始する準備を行っている。また、研究を進めていくうえで、問診による心理的ストレス兆候や、単身生活などの生活状況、女性における閉経の影響などの因子が耐糖能異常に与える影響についても調査する必要が示唆された。また、糖尿病発症前の肥満指標の推移について詳細についても、検討を行うべきと考えられた。それらについて検討した結果は、現在英文原著としてまとめているところであり、来年度中には研究成果の発表が期待される。(抄録なし)
コッラード・ヴィーニの公共彫刻の政治史的・文化史的解読

中部イタリアのフィレンツェで活動した彫刻家コッラード・ヴィーニ(1888-1956年)の伝記的消息および進歩史観を、存命する三名の弟子への取材により明らかにした。またその親交の深かったホテル・バリオーニの経営者フランチェスコ・バリオーニが依頼した同ホテル開業25周年記念メダル《ケレス》を、彫刻家が抱いた進歩史観の観点から、文明の寓意と解釈した。さらに、《ケレス》、北米の墓地のための《キリスト磔刑》、南イタリアのシチリア州ラグーサの郵政電信庁舎を飾る女性擬人像の個人像習作を初公刊し、女性擬人像の主題を同庁舎設計者マッツォーニの残した文書に基づき初めて特定し、図像分析を行った。当該年度は、特にフィレンツェの彫刻家コッラード・ヴィーニが一九三二年に制作し、現在シチリア州ラグーサの郵政電信庁舎(アンジョロ・マッツォーニ設計、一九三八年落成)を飾る、十一体の彫像(九体の女性寓意像と二体の兵士像)の研究を進展させた。そのため、7月末ー9月、12月、3月後半の計三度にわたりイタリアでの実地調査を実施した。まずトレント・ロヴェレート近現代美術館マッツォーニ文庫の中に、マッツォーニ自身が作成したラグーサ郵政電信庁舎を飾る彫像のリストを発見し、従来図像上の解釈に諸説があった、ファサード上の九体の寓意像の意味が、通信手段と五大陸の図像であることを初めて確認した。これらの彫像は当初リグーリア州ラ・スペツィアの郵政電信庁舎に設置されたが、未来派芸術運動の圧力により設置後ほどなく撤去され、ラグーサの庁舎に転用された。そうした歴史的経緯は、フィレンツェの美術史研究所および国立中央図書館に所蔵される研究文献と、同時代の新聞資料の閲覧によって確認された。またヴィーニの彫像群の石膏習作の一部がフィレンツェの二つの個人コレクションに分散所蔵されているほか、トレント・ロヴェレート近現代美術館マッツォーニ文庫にも数点の習作の歴史的写真が保管されている。研究者はヴィーニの彫像群がラ・スペツィアからラグーサに移転した歴史的経緯と、彫像群の正しい図像的解釈およびそれを裏付ける図像史的論拠の提示、各彫像と対応する習作および歴史的写真等の図像資料の初公開を目的とする論文を起草し、『五浦論叢』(茨城大学五浦美術文化研究所紀要)第20号に掲載予定である。考察の結論として、イタリアの帝国主義的拡張という文脈に基づき、最新の「通信手段」への言及とその通信手段が結ぶ世界の「五大陸」、また「兵士」に表象される植民地への進出というファシズム期の理念の中に、彫像群の歴史的・政治的機能を位置づけた。最終年度は、7月5日から9月18日まで、12月1日から14日まで、3月18日から4月12日までの三回イタリアへの海外出張を実施した。このうち夏期の出張では、フィレンツェ美術史研究所、フィレンツェ中央図書館等で、コッラード・ヴィーニが制作し、シチリア州ラグーサの郵政電信庁舎ファサード上に設置された九体の女性擬人像の図像解釈研究を行った。またそれら擬人像のジェッソ習作(フィレンツェ、個人像)を撮影調査した。その成果は11月30日刊行『五浦論叢』(茨城大学五浦美術文化研究所紀要)第20号に「コッラード・ヴィーニ作ラグーサ郵政電信庁舎寓意像小論」(pp.1-36)として、和文・伊文併記で発表した。夏期にはまた北イタリアヴェローナのクオーレ・インマコラート・ディ・マリア聖堂ファサードを飾るヴィーニの浮彫彫刻《聖母被昇天》を撮影調査した。12月及び春期には、中部イタリア、ウンブリア州テルニ大聖堂ファサード上に設置されたヴィーニによる八体の聖人像の撮影調査を実施し、周辺の聖堂の踏査による聖人図像の検討と、フィレンツェの上記図書館での図像調査を実施した。この他、初年度と第二年度には、ヴィーニの伝記的消息と進歩史観を、存命する三名の弟子への取材により明らかにした。そして親交の深かったフィレンツェのホテル・バリオーニの経営者フランチェスコ・バリオーニが依頼した同ホテル開業25周年記念メダル《ケレス》を、彫刻家が信奉した進歩史観の観点から、文明の寓意と解釈し、個人蔵の習作を初公刊した。さらに北米の墓地のための《キリスト磔刑》の習作も初公刊した。これらの研究成果は、従来研究が進んでいなかったファシズム期公共彫刻の内包するメッセージを捉える上で重要な貢献となるが、特にモノグラフ的考察がほとんど存在しなかったヴィーニ研究史において不可欠の参照点となるはずである。

夏期(7月末から9月末)及び秋期(11月末から12月初)にフィレンツェに滞在して研究を実施した。具体的な内容は以下の通りである。まずフィレンツェの美術史研究所(Kunsthistorisches Institut in Florenz)およびハーヴァード大学付属ベレンソン研究所(Villa I Tatti)において美術史文献を調査し、コッラード・ヴィーニおよび周辺の同時代の彫刻家に関する資料を収集した。またヴィーニの弟子である画家フィオレンツォ・コペルティーニ氏を7月に取材、同じく弟子の彫刻家ヴィットーリオ・オッタネッリ氏を12月に取材した。11月末には、フィレンツェのレ・レッテレ社より刊行された美術史専門誌『ARTISTA』に、「コッラード・ヴィーニと人間の知性」(Corrado Vigni e l'intelligenza umana)と題する論文をイタリア語で発表した。論文では、上記二氏等から取材した、文明の進歩と人間の知性の健全性を信奉するヴィーニの人間性を描写し、フィレンツェのホテル・バリオーニの進歩的経営者フランチェスコ・バリオーニとの交友とそのパトロネージ、また同ホテル創立25周年を記念したヴィーニ制作によるメダルの図像《ケレス》を進歩史観的視点から解釈した。また同メダルのテラコッタ・ヴァージョンを含む画家のアトリエを捉えた1928年の歴史的写真と、同メダルの未発表テラコッタ・ヴァージョン(個人蔵)とを公刊し、両者が同一である点を実証した。さらに未発表の石膏像《キリスト磔刑》(個人蔵)を公刊し、同作品が元来北米の墓地のために制作された事実を同時代の新聞記事に基づいて明らかにするとともに、ヴィーニの人間性に基づく読解を試みた。なお論文の執筆は4月から7月にかけて行われ、9月に初校を校正した。またムジェッロ在住の個人コレクターを12月に訪問、作品調査を実施した。コッラード・ヴィーニの公共彫刻の政治史的・文化史的解読をめざした本研究課題において、すでにサバウディアの教区聖堂内に安置される《お告げの聖母》像(1935年)、ボルツァーノの全国社会保障機構会館ファサードを飾る浮彫《統帥讃歌》(1935-37年)、ラグーサ郵政電信庁舎を飾る九体の女性寓意像と二体の兵士像(1932年)、フィレンツェのホテル・バリオーニ創建二十五周年記念メダル(1928年)、北米の墓地のための《キリスト磔刑》(1932年)といった作品の図像的・文化史的・政治史的解釈を三編の論文として発表もしくは発表準備中である。特に、その中の一編はフィレンツェの美術史専門誌『アルティスタ』に掲載した。また上記作品の未発見の習作を初めて公開することができた。以上のことからも、本研究はおおむね順調に進展していると考える。二回にわたるフィレンツェでの現地調査を実施できた点で、当初の計画通り調査がなされたと判断される。加えて、最終年度である平成25年度に予定していた『ARTISTA』への論文投稿を本年度にすでに実施できた点では、当初の計画以上の進展と考えられる。とはいえ、ヴィーニの公共作品の政治史的・文化史的解読という研究目的からすれば、本論文はそのごく一部を対象としたにすぎず、今後もなお数多くの作品の研究が必須となる。本年度は現在準備中のラグーサ郵政電信庁舎寓意像についての論文を『五浦論叢』(茨城大学五浦美術文化研究所紀要)第20号に発表するための最終調整をおこなう。また本年度より、図像上の曖昧さが残るモンテカティーニ・テルメの四体の女性寓意像、カステルフランコ・ディ・ソットの戦没者慰霊碑、テルニ大聖堂ファサードを飾る聖人像、といった作品への本格的な調査を開始する。
狭隘部測定を可能にする可搬型小型α線検出器の開発

原子力施設の廃止の際のクリアランスに有用となる、狭隘部のPu汚染の測定が可能な新型のα線検出器を開発した。この検出器は厚みが従来のものより薄く、柔軟なアームにより従来は測定が不可能であった狭隘部のα線測定を可能にした。開発した検出器はPu汚染を検出するのに十分な検出効率を有し、α線の2次元分布とエネルギースペクトルを同時に取得可能であった。実際のPu粒子を測定し、精度よくその放射能が評価できることを確認した。また、妨害となる天然核種のラドン子孫核種との弁別が可能であることを確認した。本研究成果は放射線計測分野のジャーナルに論文が掲載された。平成27年度は、狭隘部の測定が可能な可搬型小型α線検出器の開発を行った。検出器部はシンチレータ、ライトガイド、光検出器で構成した。シンチレータは試験的にZnS(Ag)シンチレータを用い、光検出器にはシリコンフォトマルアレー(Si-PM Array)を用いた。シンチレータは遮光を目的としたアルミ蒸着マイラーで覆った。検出器部はケースに封入され、そのケースには可動性のアームを取り付けた。開発した検出器の基礎的な性能を評価し、エネルギー分解能は5.5MeVα線に対し40%程度と余り良くないが、空間分解能は0.4mm程度と優れていることが判った。プルトニウム粉末とラドン(222Rn)子孫核種の混在試料を測定し、バックグラウンドの222Rn濃度が高い状況下でもプルトニウムの検知ができることが明らかになった。また、検出器サイズは26mm×26mm×15mmと非常に小型であり、従来からプルトニウム汚染検知に用いられるZnS(Ag)サーベイメータでは測定が不可能で、かつ汚染の可能性の高い、グローブボックスの配管のフランジ部やバッグイン・バッグアウトポート等の汚染検知に有用であることが明らかになった。現在、可搬型小型α線検出器の開発は終了し性能評価を終了した。今後、核燃料物質取扱い施設での汚染検知に適用し、有用性を評価する。α線放出核種の汚染の検知に用いられるZnS(Ag)サーベイメータは、その検出器の大きさのため、測定する物の形状によって表面汚染の測定ができない。そこで狭隘部の測定が可能な可搬型の小型α線検出器を開発した。ZnS(Ag)シンチレータと4×4チャンネルのシリコン光電子増倍管を組み合わせ検出器を作成し、検出器サイズは26mm×26mmで厚みは12mmであった。検出器に柔軟な可動アームを取り付け狭隘部の測定を可能にした。開発した検出器はプルトニウム汚染の検知に有用なα線エネルギースペクトルとα線の2次元分布の同時測定が可能である。さらにImageJのプラグイン機能を用いることで、プルトニウム粒子の位置とその放射能が自動で評価可能である。評価した放射能は従来から用いられる放射能測定装置で評価したものを同等であった。現場ではラドン子孫核種が存在し、α線を放出するのでプルトニウムとの弁別が必要であるが、α線エネルギースペクトルを得ることでプルトニウムとラドン子孫核種の弁別ができることを確認した。開発した検出器を核燃料物質取扱施設の現場に持ち込み、実際の設備の狭隘部の直接測定が可能であることを確認した。従って開発した検出器は狭隘部のプルトニウム汚染の検知に有効であると考える。本研究の成果を論文としてまとめ、放射線計測分野のジャーナルであるRadiation Measurementsに投稿し掲載された。さらに、開発した検出器に細い角柱ライトガイドを用いることで、より狭小な領域の測定が可能となった。この検出器は、鼻腔内プルトニウム粒子の直接測定が可能な検出器として保健物理分野のジャーナルに投稿した。プルトニウム粒子の弁別が可能な最適な条件を評価する。さらにプルトニウム粒子の取扱われる施設の現場でのプルトニウム汚染の検知に適用し、既存のZnS(Ag)サーベイメータ等と比較した有用性を評価する。現場での試験で得られた課題点を開発する検出器にフィードバックしさらなる改良を目指す。総合工学当初、MPPCを6つ購入することとしていたが、基板の製作にコストがかかるため、MPPC1つの購入としたため、差額が生じた。次年度発注予定の実験用消耗品の費用に当てる。
マクロファージによるアポトーシス細胞の取り込みとそれに伴う応答の病理的意義

我々のこれまでの結果から急激かつ大量のアポトーシス細胞が現われるとマクロファージが取り込んでケモカインが産生され好中球が浸潤してくると予想し、次の結果を得た。(1)あらかじめチオグリコレート培地を注射したC3H/HeJマウスあるいはC57BL/6マウス腹腔に、アポトーシスCTLL-2細胞(C57BL/6由来)をプロピオジウムイオダイドで標識してから投与し、経時的に腹腔細胞を回収して、フローサイトメーターによって分析した。その結果7時間まで時間依存的に好中球の浸潤がみられ、ピークは5時間目であった。MIP-2の腹腔浸出液中のレベルをELISAで調べたところ、3時間目がピークであった。アポトーシス細胞はほとんどマクロファージに取り込まれており、好中球には取り込まれていなかった。この応答は、アポトーシスを起こしていないCTLL-2細胞を投与しても、程度は低いながらみられた。一方、凍結融解を繰り返すことで得たネクローシス細胞を投与すると、アポトーシス細胞のときと同様の好中球の浸潤がみられた。次に、あらかじめクロドロネートを投与して腹腔マクロファージを減少させたところ、アポトーシス細胞投与に伴う好中球浸潤もMIP-2レベルも抑制された。これらの結果から、アポトーシス細胞をマウス腹腔に投与したときの好中球の浸潤には、マクロファージによるアポトーシス細胞の取り込みとその結果産生されたMIP-2が関係しているものと考えられた。(2)低線量の放射線の全身照射は胸腺などのリンパ組織に急激かつ大量のアポトーシスを起こすことが知られている。B10Thy1.1マウスに4Gyの放射線を照射すると胸腺細胞に経時的にアポトーシスが起こり、それに伴って胸腺での好中球数の一過的増加がフローサイトメーターで検出された。好中球の浸潤は組織切片のHE染色によっても確認された。p53-/-マウスではアポトーシスも好中球の浸潤も抑制されていた。MIP-2のmRNAは好中球の浸潤がもっとも著しい照射後9時間目に検出された。以上のことから急激かつ大量のアポトーシスが生体内で起こるとそれに伴い一過的に好中球が浸潤することが判明した。あらかじめチオグリコレート培地を注射したC3H/HeJマウスあるいはC57BL/6マウス腹腔に、IL-2依存性CTLL-2細胞(C57BL/6由来)をIL-2非存在下28時間培養することで得たアポトーシス細胞をプロピオジウムイオダイド(Pl)で標識してから投与し、経時的に腹腔細胞を回収して、フローサイトメーターによって分析した。その結果7時間まで時間依存的に好中球(Gr-1陽性)の浸潤がみられ、ピークは5時間目であった。好中球に対するケモカインの一つ、MIP-2の腹腔浸出液中のレベルをELISAで調べたところ、3時間目がピークであった。アポトーシス細胞はほとんどマクロファージ(Mac-3陽性、F4/80陽性)に取り込まれており、好中球には取り込まれていなかった。

この応答は、チオグリコレート培地を注射していないマウスでも、またアポトーシスを起こしていないCTLL-2細胞を投与しても、いずれも程度は低いながらみられた。また、いずれの場合でもマクロファージの浸潤も好中球に比べると低いながらもみられたが、凍結融解を繰り返すことで得たネクローシス細胞を投与すると、好中球の浸潤はみられたものの、マクロファージはもともと存在していた数よりも減少した。これは従来から知られていたMacrophage Disappearance Reactionに相当すると思われるが、今後詳しく検討される必要がある。低線量の放射線の全身照射は胸腺などのリンパ組織に選択的にアポトーシスを起こすことが知られている。そこでこのモデルを用いて急激かつ大量のアポトーシスが起こったときの生体内での応答を調べた。B10Thy1.1マウスに4Gyの放射線を照射すると経時的にアポトーシスが起こり、それに伴って好中球数の一過的増加がフローサイトメーターで検出された。好中球の浸潤は組織切片のHE染色によっても確認された。このとき好中球は血管内皮に接着していたり内皮を通過して実質に入り込んでいたりしているように見えた。一方、マクロファージはアポトーシス細胞を取り込んでいるように見えた。放射線誘発アポトーシスはp53に依存しているので、p53-/-マウスを用いて同様の実験を行ったところ、アポトーシスが抑制されそれに伴って好中球の浸潤も抑制されていた。最後に、好中球走化性因子のひとつMIP-2のmRNAをRT-PCRで調べたところ好中球の浸潤がもっとも著しい照射後9時間目に検出された。以上のことから急激かつ大量のアポトーシスが生体内で起こるとそれに伴い一過的に好中球が浸潤することが判明した。アポトーシスがどのようにして好中球の浸潤をもたらすのか。浸潤した好中球はいかなる役割を演じているのかは、残された大きな課題である。
男子不妊症の診断法と治療法の開発:原因遺伝子の解析を含めた臨床遺伝学的な展開研究

男子不妊症の診断法と治療法の開発を目指し、基礎・臨床の両面から研究を行い、次のような知見が得られた。臨床的研究:聖マリアンナ医科大学倫理委員会承認のもとDNA収集を行い、男子不妊症患者約600名・妊孕能の確認された男性360名・健常若年男性320名のジーンバンクを構築した。このバンクを用いて以下の実験を行った。(1)Semenogelin(Sg)遺伝子のDNA配列を検討したところ、患者5名と正常人8名で、第2エクソンの一部に欠失が見られた。この欠失と精液所見に相関はなかったが、蛋白機能に差がある可能性があり、変異型蛋白を解析中である。また、SNPを検出するために有用なDNA二次元電気泳動法(TDGS)によりSg遺伝子の検索を行っているが、現在のところ技術的な問題もありSNPは確認されていない。(2)精子形成能に重要であるとされるY染色体上の3つのDNA多型分析により、男性を4つのハプロタイプに分類し、精液所見との関連を検討した。その結果、各タイプ間で精子濃度に差があることを明らかにした。基礎的研究:(1)バキュロウイルスー昆虫細胞系を用いた組換え型Sg(r-Sg)蛋白発現系、そして高純度・高活性のSg蛋白を分離する精製法の確立に成功した。このr-Sgを抗原として抗体を作製し、天然型Sgやその分解産物とも特異的に反応することを確認した。(2)Sgの機能に関する研究として、精子capacitationに対する影響を検討したところ、Sgは濃度依存性にヒト精子のcapacitationを抑制することが判明した。その作用機序はO_2^-の生成抑制であり、Sgの分解産物も同様の作用を持つことなどを明らかにした。(3)作製した抗r-Sg抗体を用い、精漿成分を特異的に検出することを目的としたアッセイ系の開発に成功した。今後更に感度および特異性を高めるよう開発を進める。男子不妊症の診断法と治療法の開発をめざし、基礎、臨床の両面から研究を行い、次のような知見が得られた。臨床的研究聖マリアンナ医科大学倫理委員会の承認のもと、男子不妊症患者のDNA収集を行い、現在約400名のジーンバンクが構築できた。これらDNAについての解析として、まずはSPMIの前駆体であるSemenogelin geneのDNA配列を検索中である。また、精子形成には多くの遺伝子が働いているが、ゲノム解析の結果から、Y染色体には精子形成に必須の遺伝子が複数かつ多コピー存在することが知られている。そこで、Y染色体DNA多型についての検討を行っている。そして、DNAと同時に患者の精漿も凍結保存しており、以後SMPI活性等を測定し、DNA異変や多型との関連性を検討してゆく。基礎的研究Semenogelinを用いた治療薬の開発を目指し、Semenogelinのrecombinant proteinの発現系の確立に取り組んだ。baculo virusにSemenogelin-I及び-IIのDNAを組込み、Sf21細胞に感染させると、感染後48時間よりSemenogelin蛋白の発現が見られ、これをNi-NTA resinを用いて90%以上の純度で精製することに成功した。精製したSemenogelinは可溶性で、SPMI活性は60U/mgとnativeなSemaenogelinとほぼ同等に高活性であった。

また、このrecombinant蛋白をウサギに免疫し、得られた血清をアフィニティーカラムで精製し、抗Semenogelin抗体を作製した。この抗体はnative,recombinant両方のSemenogelinと強く反応するだけでなく、精漿中でPSAにより分解を受けた低分子のSPMIとも特異的に反応することが判明した。これらの結果は、Int.J.Mole.Med.に発表した。男子不妊症の診断法と治療法の開発を目指し、基礎・臨床の両面から研究を行い、次のような知見が得られた。臨床研究平成10年度に引き続き、聖マリアンナ医科大学倫理委員会の承認のもとDNA収集を行い、現在約500名の男子不妊症患者ジーンバンクの構築を終えた。これらのDNAの解析として、Semenogelin geneのDNA配列を検討したところ、患者5名で第2エクソンの一部に欠失がみられたが、精液所見との相関はなく、健常人にもみられる正常変異であると考えられた。また、精子形成能に重要な役割をすると考えられているY染色体上の3つのDNA多型を分析し、不妊患者および妊孕能のあるボランティア成人男性を4種類のハプロタイプに分類し、精液所見との関連について検討した。その結果、各ハプロタイプ間で精子濃度に差があることが判明した。また無精子症の起こり易さは特定のハプロタイプと関連していることを明らかにし、J.Hum Genetに発表した。今後更に症例数を増やしてこれらの関係について詳細に検討してゆく。基礎的研究今後は、培養上清中に分泌されたSgタンパクを低圧液体クロマトグラフィーシステムを用いて回収・精製する系の確立を目指す。また、r-Sgを抗原にしてモノクローナル抗体作成を試みているが、現在のところ特異性と力価の高いクローンが得られず、更にスクリーニング中である。臨床的研究平成11年度に引き続き、男子不妊症患者のDNA収集を行い、現在約600名のジーンバンク構築を終えた。このジーンバンクを用いてTwo dimensional gene scanning(TDGS)によりSemenogelin(Sg)遺伝子の検索を行っているが、multiple PCRに問題があり、現在のところ全エクソンを同時に検出することが出来ていない。今後primerのデザインや泳動条件を検討し、一枚のゲル上で全スポットの検出を目指す。また、前年度までの研究でSgIの第2エクソンに欠失のあった健常人について、精漿中Sg蛋白を分析したところ分子量の小さいSgIが検出され、現在この蛋白を精製し、変異蛋白の機能を解析中である。基礎的研究Sgの機能に関する研究として、精子capacitationに対する影響を検討したところ、Sgは濃度依存性にヒト精子のcapacitationを抑制することが判明した。その作用機序はO_2^-の生成抑制であり、Sgが精子によって分解された分解物も同様の作用を持つことなどを明らかにし、結果をJ.Androl.に投稿し、現在印刷中である。また神奈川県警察科学捜査研究所・佐藤博士との共同研究で、r-Sgを抗原にして作製した抗体を用い、精漿成分を特異的に検出することを目的としたアッセイ系の開発に成功し、その第一報をForensic Science Int.に投稿し、現在印刷中である。
ニワトリ卵白由来リゾチームの抗体産生促進活性に関する研究

ニワトリ卵白由来リゾチームが、ハイブリドーマやリンパ球の抗体産生を促進することを明らかにしてきた。そこで本研究では、リゾチームがどのようにハイブリドーマやリンパ球の抗体産生を促進するかを明らかとするために、その作用機構の解明を目的として研究を行った。実験にはヒトIgM型モノクローナル抗体を産生するヒト型ハイブリドーマHB4C5細胞を用い、様々なタンパク質合成阻害剤で処理したHB4C5細胞へのリゾチームの抗体産生促進効果を検討した。その結果、アクチノマイシンDで転写活性を抑制されたHB4C5細胞に対してリゾチームは抗体産生促進活性を示し、その作用点が転写段階以降であることが推察された。次に、翻訳阻害剤であるシクロヘキシミド、およびフッ化ナトリウム処理したHB4C5細胞に対する効果を検討したところ、いずれの翻訳阻害剤処理によってもその活性発現が抑制を受けた。さらに、分泌抑制剤であるモネンシン処理したところ、抗体の分泌は抑制されたものの、リゾチームにより細胞内の抗体蓄積量はコントロールに対し有意に増加していた。以上のことから、リゾチームは翻訳段階を促進することによりハイブリドーマやリンパ球の抗体生産性を向上させていることが明らかとなった。リゾチームをFITCを用いて蛍光標識した後、HB4C5細胞に作用させたところリゾチームは細胞内に取り込まれており、その取り込み量は経時的に増加し、抗体産生促進活性の発現と相関していた。これらのことから、リゾチームは細胞内に取り込まれた後、翻訳段階を促進することが明らかとなった。【目的】これまでに、ヒストン、ポリリジンなどの塩基性タンパク質や塩基性ポリアミノ酸、さらにポリアミン類縁化合物がハイブリドーマやヒト末梢血リンパ球の抗体産生を促進することが明らかになっている。食品成分中にも様々な抗体産生促進因子(IPSF)が見いだされている。ニワトリ卵白に多く含まれているリゾチームも塩基性タンパク質である。そこでリゾチームのIPSF活性について検討した。【方法】ヒト型ハイブリドーマHB4C5細胞およびヒト末梢血リンパ球を用い、無血清培養下において抗体産生に及ぼすニワトリ卵白リゾチームの影響を検討した。抗体産生促進活性は、培養上清中に分泌された抗体量を酵素抗体法で定量することにより測定した。一方、酵素活性は基質としてM.luteusを用い、530nmにおける濁度減少で測定した。【結果】リゾチームを120μg/ml以上の濃度で培地中に添加することでHB4C5細胞のIgM産生促進が認められ、380μg/mlの添加濃度において13倍の促進を示した。IPSF活性は培養開始直後から認められ、5日間にわたって継続した。一方、HB4C5細胞の細胞増殖、および生存率にはほとんど影響を示さなかった。また、無血清培養下におけるヒト末梢血リンパ球のIgM産生を5.3倍、IgG産生を2.3倍促進した。100°C、30分の加熱によりリゾチームの酵素活性の90%が消失したものの、IPSF活性は80%以上保持された。また、トリプシン処理の結果、酵素活性は完全に保持されたが、IPSF活性は失われた。このことから、リゾチームのIPSF活性の発現にはその酵素活性の関与はないことが判明した。
顎顔面口腔疾患iPS細胞における病原変異遺伝子の人工ヌクレアーゼによるゲノム手術

無血清培地hESF9およびSeVdpを用いて、健常人および種々の遺伝性顎顔面口腔疾患患者由来末梢血リンパ球よりiPSCを樹立し、その細胞特性及び特定の細胞系列への分化能を無血清オーガノイド体形成法などで評価する。また、SCIDマウス背部皮下でのiPSC由来teratomaにおける3胚葉への分化能および各誘導組織像を比較検討する。次世代シークエンシング(NGS)で遺伝性疾患患者由来DNAの全ゲノム解析を行い、病原変異遺伝子及びその他の変異を明らかにし、新たな遺伝性顎顔面口腔疾患の治療法の開発を目指す。我々は、口腔顎顔面遺伝性疾患患者由来体細胞の初代培養及び初期化の全プロセスを、宿主染色体に遺伝子挿入がないセンダイウイルスベクター(SeVdp)及び当科で開発した完全無血清・フィーダーフリーの培養系を用いて行い、各種疾患特異的iPSCの樹立・長期維持に成功し、報告してきた。現在までに、基底細胞母斑症候群、Cowden症候群、鎖骨頭蓋異形成症(CCD) (Runx2, aa.R225Q)やヌーナン症候群(NS)、特異的iPS細胞を樹立してきた。特に、鎖骨頭蓋異形成症(CCD) (Runx2, aa.R225Q)やヌーナン症候群(NS) (Kras, aa.D153V)患者由来iPSCsにおいては、SCIDマウスでのテラトーマ組織における軟骨組織は、健常人iPSC由来のそれと比較し、細胞が膨化し軟骨基質が疎な患者の疾患病態を反映した組織像を示したことから、これら疾患特異的iPSCの機能解析にin vivoでのテラトーマ形成法が有用であることを示した。。今回、これらiPSCsを用いて、in vitroでの無血清培養系を用いた細胞増殖シグナル及び軟骨分化誘導解析を行い、その機能解析を行うことで疾患研究への有用性を検討した。その結果、RASの活性化率をpull down assay法及びWB法にて検討したところ、健常人iPSCと比較してNS-iPSCではRASの恒常的活性化を認めたことから、NS-iPSCではKras遺伝子の変異に基づくRASの機能亢進が生じていることが明らかとなった。また、無血清3次元培養系を用いてCCD-iPSC及びNS-iPSCから軟骨細胞への分化誘導を行ったところ、テラトーマと同様の疎な軟骨基質からなる軟骨組織を形成した。これら疾患特異的iPSCsは、疾患病態の一部をin vitro及びin vivoで再現可能であることが示された。血清や未知の成分、フィーダー細胞などの不確定要素を完全に排除した、再現性の高い本iPSC誘導・培養系は、疾患モデルの確立に有用であることが示され、各種疾患の分子・細胞レベルでの病態解明及び治療法開発への応用が期待される。各種疾患由来iPS細胞はin vitro及びin vivoにおいて疾患のphenotyoeを反映していることを明らかにしたことから、今後、そのphenotypeを指標にゲノム手術の効果を評価するアッセイ系が確立できたことから。我々は、口腔顎顔面遺伝性疾患患者由来体細胞の初代培養及び初期化の全プロセスを、宿主染色体に遺伝子挿入がないセンダイウイルスベクター(SeVdp)及び当科で開発した完全無血清・フィーダーフリーの培養系を用いて行い、各種疾患特異的iPSCの樹立・長期維持に成功している。今年度はvon Recklinghausen disease (NF1)患者2名の末梢血リンパ球より、疾患特異的NF1-iPSCsを樹立し、遺伝子診断及び発症機序の解明、さらにNF1-iPSCsの細胞特性を健常人iPSC由来のそれと比較検討した。NGS解析にてNF1-2ではNF1のexon40にCのTへの一塩基変異(NCBI:SNP: rs137854552 C>T)を明らかにし同変異はarginineのstop codonへの置換を示唆した。NF1-1ではNF1に明らかな変異を認めなかったがCEQerの結果17番染色体長腕のNF1領域のread coverageが広範囲にわたり半減していることさらにddPCR解析にてNF1のコピー数が半減していることが判明した。いずれのiPSCsにおいてもNF1蛋白の発現量はWT-iPSCsのそれと比較して約1/2に低下していた。神経分化に伴い,両NF1-iPSCsでは早期にS-100陽性細胞が出現し,さらにERKリン酸化も維持あるいは上昇傾向を示した。さらに, NF1-1-iPSCはWT-iPSCsに類似した骨分化を示したが, NF1-2-iPSCsでは骨分化が遅延していた。無血清及び無フィーダー培養系を用いてNF1-iPSCsの樹立及び長期維持に成功した。2症例のNF1間で臨床症状や経過が大きく異なるのは, NF1変異の質的差異を反映している可能性が示唆された。また,各NF1-iPSCsにおいてもNF1の欠失や変異は維持されており,さらに神経分化や軟骨・骨分化能にも差を示したことから, NF1の分子・細胞レベルでの病態解明や,疾患モデルとして創薬スクリーニングへの応用や治療法の開発研究に有用であると考えられた。

また、SCIDマウス背部皮下でのiPSC由来teratomaにおける3胚葉への分化能および各誘導組織像を比較検討する。次世代シークエンシング(NGS)で遺伝性疾患患者由来DNAの全ゲノム解析を行い、病原変異遺伝子及びその他の変異を明らかにし、新たな遺伝性顎顔面口腔疾患の治療法の開発を目指す。完全無血清培養系でのiPSC誘導・培養系は、再現性が高く、疾患モデルの確立や各種疾患の分子・細胞レベルでの病態解明及び治療法開発への応用が期待される。外科系歯学CRISPR/Cas9によるゲノム編集関係の試薬購入が次年度になったため。今年度よりCRISPR/Cas9によるゲノム編集実験を開始するので、支障なく執行できる。
ゴーヤのグリーンカーテン効果を利用した小学校における環境・食農教育キットの開発

1.ゴーヤ鉢植えキットについて府中市の小中学校、教育委員会、府中市のボランティア団体(府中PFS)並びに東京農工大学FSセンターでゴーヤプロジェクトを行っている。農工大でゴーヤの苗を作り、府中市の幼稚園、小中学校計36校に苗を配布した。また、蔓を這わせるため、パイプと網で棚を作り2階まで届く大がかりの仕掛けを作成している。しかし、設置や撤去に労力がかかるので簡単に出来ないかとの要望があり、ゴーヤを身近に観察できる鉢植え栽培ユニット「ツリー状仕立てのゴーヤ鉢植えポット」を試作した。プラスチック鉢に支柱を立て、そこに蔓を這わせた。果実の収穫も複数回行え、子どもが身近にゴーヤを楽しむには十分に効果があると思われた。また、鉢植えを並べてグリーンカーテンにしたが、風で倒れやすいのと、2mの高さではグリーンカーテンとしては少し高さが足りないことから、教室内の窓際に置いて観察と日陰の効果をねらうのに適していると考えられと。2.ゴーヤ栽培のための安全チェックシートの作成栽培管理のしおりと安全チェックシートを配布した。作業中にケガや事故を未然に防ぎ、安全に対する知識を高めてもらうためのものである。植え付け作業時に立ち会い、チェックシートの効果を検証した。安全に作業を進めるためには有効であった。3.ゴーヤ通信、ホームページの作成ゴーヤの栽培指針やゴーヤを身近に感じてもらうための情報発信として、ゴーヤ通信、ゴーヤホームページを作成した。4.ゴーヤを知るための観察指導先述の鉢植えゴーヤを用いて、ノートPCとデジタル顕微鏡を組み合わせ、雄花と雌花の違いや、まきひげ、茎、葉の特徴を観察させた。府中市立図書館主催の小学生向けの公開講座において検証した。花や葉、茎、根の役割を考えて、学習を進めるものであった。ゴーヤの果実を実際に手で取り、でこぼこや毛が生えている様子が観察できて、子どもたちも喜び大変好評を博した。
全身性エリテマトーデス患者におけるインターロイキン2レセプター発現異常の研究

全身性エリテマトーデス(SLE)患者のT細胞機能異常の原因解明を目的として、活性化リンパ球のIL-2レセプター(IL-2R)発現異常について研究し以下の知見を得た。1.SLEなど膠原病患者における末梢血リンパ球のIL-2産生能の研究IL-2産生能はSLEでは正常人に比し著明に低下していたが、強皮症では逆に亢進を認め、これがCD4陽性T細胞の異常活性化によることを明らかにした。混合性結値組織病では、この検索が臨床上有用であることを示した。2.SLE患者PHA刺激末梢リンパ球について、IL-2R発現の異常の研究(1)蛍光標識抗Tac抗体による染色法および^<125>I標識抗Tac抗体を用いてIL-2R/p55の発現を調べたところ、その発現細胞数および細胞あたりの発現数ともに正常人と有意の差は認めなかった。(2)^<125>I標識IL-2を用いたScatchard解析を行ない、SLE患者活性化リンパ球における高親和性IL-2Rの著明な発現障害を明らかにした。3.蛍光(RITC)を標識したIL-2を用いサイトフルオロメトリーで解析する新しいIL-2R検出法を開発した。この方法は主として高親和性IL-2Rを検出することを確認した。本法を用いて、SLE患者活性化リンパ球では、Tac抗原の発現は正常にも拘らず、高親和性IL-2Rの発現に障害を認め、特にCD4細胞においてその異常が著明であることを細胞レベルで明らかにした。以上まとめると、生物学的に重要な高親和性IL-2RではTacと呼ばれる55k(IL-2R/p55,α鎖)と75k(IL-2R/p75,β鎖)の2本のペプチドより構成されると考えられるが、SLE患者リンパ球はこのTac抗原は正常に発現できるにも拘らず、高親和性IL-2Rの著明な発現障害を認めた。このことは、SLE患者リンパ球には、IL-2R/p75(β鎖)発現あるいは両者の重合の欠陥などが存在することを示唆した。今年度,全身性エリテマトーデス(SLE)患者の活性化T細胞におけるIL-2レセプター(IL-2R)発現異常の研究を行い以下の結果を得た. I.SLE患者PHA刺激末梢リンパ球のIL-2産生能をヒトIL-2性依存T細胞株(Sez627)を用いて調べ,活動期SLE患者におけるIL-2産生障害を明らかにした.II.PHA刺激リンパ球の外来性IL-2に対する反応性は, SLE患者においてその活動性を問わず,正常人より有意に低下していた.III.抗IL-2R抗体である抗Tac抗体を用いてPHA刺激リンパ球のIL-2R発現を調べた. SLE患者活性化リンパ球は, Tac抗原発現率も細胞当りの発現数(エピトープ数)も,正常人と同程度であった.IV.^<125>I-標識IL-2を用い発現したIL-2Rの数や親和性を調べた.SLE患者の活性化

T細胞でも高親和性と低親和性の二種のIL-2Rが発現していたが,生物学的に重要と考えられる高親和性IL-2Rの発現数が正常人に比し有意に減少していた.V.SLE患者の高親和性IL-2R発現異常は,正常人単球やIL-2やIL-1の添加により部分的に回復したが,正常人レベルには至らなかった.以上の結果をまとめると, SLE患者活性化T細胞に発現するIL-2RはTacエピトープ数は正常であるがIL-2に対する高親和性レセプターの発現障害を認め,その異常は本来的にT細胞に存在することを明示した.近年,高親和性IL-2RはTac分子とそれ以外の分子(75K蛋白)より構成されることが明らかとなってきた.我々の結果は, SLE患者のリンパ球におけるこの75K蛋白の発現機構の異常を示唆するものであり,今後この面よりの検討を行いたい.全身性エリテマトーデス(SLE)患者のT細胞機能異常の原因解明を目的として、活性化リンパ球のILー2レセプター(ILー2R)発現異常について研究し以下の知見を得た。1.SLEなど膠原病患者における末梢血リンパ球のILー2産生能の研究ILー2産生能はSLEでは正常人に比し著明に低下していたが、強皮症では逆に亢進を認め、これがCD4陽性T細胞の異常活性化によることを明らかにした。混合性結合組織病では、この検索が臨床上有用であることを示した。2.SLE患者PHA刺激末梢リンパ球について、ILー2R発現の異常の研究(1)蛍光標識抗Tac抗体による染色法および^<125>I標識抗Tac抗体を用いてILー2R/p55の発現を調べたところ、その発現細胞数および細胞あたりの発現数ともに正常人と有意の差は認めなかった。(2)^<125>I標識ILー2を用いたScatchard解析を行ない、SLE患者活性化リンパ球における高親和性ILー2Rの著明な発現障害を明らかにした。3.蛍光(FITC)を標識したILー2を用いサイトフルオロメトリーで解析する主として高親和性ILー2Rを検出する新しいILー2R検出法を開発した。本法を用いて、SLE患者活性化リンパ球では、Tac抗原の発現は正常にも拘らず、高親和性ILー2Rの発現に障害を認め、特にCD4細胞においてその異常が著明であることを細胞レベルで明らかにした。以上まとめると、生物学的に重要な高親和性ILー2RはTacと呼ばれる55k(ILー2R/p55,α鎖)と75k(ILー2R/p75,β鎖)の2本のペプチドより構成される考えられるが、SLE患者リンパ球はこのTac抗原は正常に発現できるにも拘らず、高親和性ILー2Rの著明な発現障害を認めた。このことは、SLE患者リンパ球にはILー2R/p75(β鎖)発現あるいは両者の重合の欠陥などが存在することを示唆した。
生殖補助技術の胚発育能への影響解析と胚発育着床能向上を目的とした研究

実験動物としてマウスを用い、体外受精系、胚培養系、trophoblast outgrowth assay系、胚移植系を確立して各種物質の胚発育能への影響解析をおこなった。微小環境因子作用の検討の中に昨今問題となっている内分泌撹乱化学物質も加えた。その結果、内分泌撹乱物質として考えられているビスフェノールAの胚発育への影響を解明した点である。ビスフェノールAは体外受精の系ではnMレベルから100μMまで影響が検出されず、受精現象には作用を与える可能性は低いと判断された。ところが初期胚発育モデルへの添加で、2細胞期から8細胞期への胚広い濃度範囲(nMレベルから100μM)にわたり発育率は大きな影響を受けないにもかかわらず、2細胞期胚から胚盤胞への発育率では1-3nMでは促進効果が観察され、逆に100μMでは有意に低下した。ビスフェノールAの胚盤胞発育への用量反応性をみると100μMの高濃度における抑制作用と1-3nMの低濃度域における促進作用に分けて考えることができる。高濃度における作用は従来の毒性量による用量反応性のある部分と考えることができる。これに対して、1-3nMの低濃度域については毒性量と異なり、用量反応性を認めず作用も毒性と逆反応であると判断できた。しかもこの濃度は、環境中に存在し、ヒトの血液や卵胞液で検出される濃度と大きな差異はない。またビスフェノールAとエストロゲンのレセプターレベルの拮抗剤であるタモキシフェンの同時添加は、2細胞期から8細胞期への胚発育にはなんら影響を与えなかった。ところが胚盤胞発育率への、1-3nMの促進効果および100μMの抑制効果ともにエストロゲンのレセプターレベルの拮抗剤であるタモキシフェンの同時添加でそれぞれの効果がキャンセルされた。胚にはERα、βともに発現することも明らかにされており^<12>、ビスフェノールAの作用はERを経由するものと推察される。微小環境因子作用の検討の中に昨今問題となっている内分泌攪乱化学物質も加えた。

またビスフェノールAとエストロゲンのレセプターレベルの拮抗剤であるタモキシフェンの同時添加は、2細胞期から8細胞期への胚発育にはなんら影響を与えなかった。ところが胚盤胞発育率への、1-3nMの促進効果および100μMの抑制効果ともにエストロゲンのレセプターレベルの拮抗剤であるタモキシフェンの同時添加でそれぞれの効果がキャンセルされた。胚にはERα、βともに発現することも明らかにされており、ビスフェノールAの作用はERを経由するものと推察される。実験動物としてマウスを用い、体外受精糸、胚培養糸、trophoblast outgrowth assay系、胚移植を確立して各種物質の胚発育能への影響解析をおこなった。微小環境因子作用の検討の中に咋今問題となっている。内分泌攪乱化学物質も加えた。その結果、内分泌攪乱物質として考えられているビスフェノールAの胚発育への影響に新しい知見を得た。ビスフェノールAは体外受精の系ではnMレベルから100μMまで影響が検出されず、受精現象には作用を与える可能性は低いと判断された。ところが初期胚発育モデルヘの添加で、2細胞期から8細胞期への胚広い濃度範囲(nMレベルから、100μM)にわたり発育率は大きな影響を受けないにもかかわらず、2細胞期胚から胚盤胞への発育率では1-3nMでは促進効果が観察され、逆に100μMでは有意に低下した。ビスフェノールAの胚盤胞発育への用量反応性をみると100μMの高濃度における抑制作用と1-3nMの低濃度域における促進作用に分けて考えることができる。高濃度における作用は従来の毒性量による用量反応性のある部分と考えることができる。これに対して、1-3nMの低濃度域については毒性量と異なり、用量反応性を認めず作用も毒性と逆反応であると判断できた。しかもこの濃度は、環境中に存在し、ヒトの血液や卵胞液で検出される濃度と大きな差異はない、同様にtrophoblast outgrowthassy系における成績でも1-3nMでは促進効果が観察され、逆に100μMで有意に低下した。胚盤胞の感受性が高いことを証明する成績と考えられる。