hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
癌抑制遺伝子drsによる感染防御作用とそのメカニズムの解明

癌抑制遺伝子drsの正常細胞での生理機能解明のため、微生物感染防御における役割と作用メカニズムを解析した。drsノックアウトマウス由来の細胞では、水泡性口内炎ウイルス(VSV)などのウイルス増殖が、野生型細胞よりも亢進していた。drsはストレス応答遺伝子GADD34やTSC2と結合して、mTORシグナル伝達経路を調整し、感染細胞でのタンパク合成を抑制することで、細胞の抗ウイルス機構に寄与していることを見出した癌抑制遺伝子drsの正常細胞での生理機能解明のため、微生物感染防御における役割と作用メカニズムを解析した。drsはストレス応答遺伝子GADD34やTSC2と結合して、mTORシグナル伝達経路を調整し、感染細胞でのタンパク合成を抑制することで、細胞の抗ウイルス機構に寄与していることを見出した癌抑制遺伝子drsの感染防御作用を明らかにするためdrs knockout(KO)細胞を用いて、以下の成果を得た。(1)drs KO細胞では野生型(WT)細胞に比べ、水泡性口炎ウイルス(VSV)感染に対する感受性が亢進していた。またKO細胞へのdrs遺伝子の再導入によりこの形質が抑制されることからdrsのVSV感染防御作用を明らかにした。(2)drsはグルコース枯渇に対する細胞応答にも関与することを見いだした。このことからウイルス感染やグルコース枯渇に対するストレス応答遺伝子であるGADD34との関係に着目し、GADD34とdrsが相互作用することを明らかにした。(3)GADD34はVSV感染に関与する一方、単純ヘルペスウイルス(HSV)感染に対しては作用しないことをこれまでに明らかにしていたため、drsでも同様の現象が見られるかどうか検討した。その結果drs KO細胞ではGADD34 KO細胞とは異なり、HSV感染に対する感受性も亢進することを見いだした。またGADD34 KO細胞でのVSV感染感受性の亢進が、mTOR阻害剤であるラパマイシンによって阻害されるのに対し、drs KO細胞では阻害されなかった(4)VSV感染時、WT細胞ではリボソームS6タンパク質のリン酸化が抑制され、タンパク質合成が抑制されていたが、drs KO細胞ではこのS6リン酸化の抑制が消失していることを見いだした。S6リン酸化に関わるタンパク質のうち、mTOR下流で働くp70 S6Kの活性化には変化がなかったが、p90 RSKの活性化がdrs KO細胞で亢進している可能性を見いだし、さらに検討を続けている。以上のことから、drsがストレス応答遺伝子GADD34と相互作用することを明らかにしたが、その抗ウイルス作用についてはGADD34やmTORに非依存的なp90 RSKを介する経路が関与する可能性が示唆された。VSVやHSVはoncolytic virusとして腫瘍のウイルス療法の開発に用いられており、本研究の成果はこれらの治療法の開発にも貢献することが期待される。癌抑制遺伝子drsの感染防御作用とその分子メカニズムを明らかにするため、Drsノックアウト(KO)細胞を用いて以下の成果を得た。(1)drsによる感染防御の分子メカニズムを明らかにするため、VSV感染KO細胞を用いて、ウイルス蛋白質の合成に関わる宿主細胞側のシグナル伝達分子の解析を行った。VSV感染時の宿主細胞の蛋白合成は、KO細胞でも野生型(WT)細胞と同様に抑制されていた。この機構を調節するインターフェロン応答関連分子eIF2αのリン酸化にも差は見られなかった。一方、WT細胞ではVSV感染時にリボソームS6のリン酸化が抑制されウイルス蛋白合成が抑制されていたが、KO細胞ではS6リン酸化の抑制が消失しており、このことがウイルス蛋白合成の亢進に関与することが示唆された。(2)S6をリン酸化するRSKおよび、その上流分子であるp38のリン酸化が、KO細胞ではWT細胞に比べて亢進していた。さらにRSKとp38の特異的阻害剤によって、KO細胞でのVSV増殖の亢進が抑制された。一方、S6をリン酸化するもう一つの経路であるS6Kのリン酸化には顕著な差は認められず、S6Kの上流分子であるmTOR阻害剤ではKO細胞でのVSV増殖亢進は抑制されなかった。(3)drs遺伝子によって感染や増殖が抑制される病原体の探索を行い、レトロウイルスの感染に対してもdrsが抑制的に働くことを新たに見いだした。以上の結果からdrsはウイルス感染時に、p38-RSK-S6シグナル伝達経路を介してウイルス蛋白合成を抑制することで防御作用を示すことが示唆された。この経路が、一般的なRNAウイルス(VSV)とDNAウイルス(HSV)だけでなくレトロウイルスも含めた、多様なウイルス感染に対し、汎用に働く自然免疫の一端を担う、新しいウイルス感染防御経路である可能性を見いだした。このことが本申請研究の21年度の成果の重要性と意義である。またRSKやp38の阻害剤に汎用的な抗ウイルス作用がある可能性から、新しい抗ウイルス治療法開発への応用が期待される。このことが本研究の医学的重要性にもつながる。1、VSVを感染させた野生型(WT)およびDrs KO細胞を用いて、ウイルス蛋白質の合成に関わる宿主細胞側のシグナル伝達分子の解析を行った。

WT細胞では、ウイルス感染時に、リボソームS6蛋白質のリン酸化が抑制されていたのに対して、Drs KO細胞ではリン酸化が抑制されず、このことがDrs KO細胞でのウイルス増殖の亢進に関与していることが示唆された。これまでDrsはS6のリン酸化を制御するp38-RSK経路を調節することを見出していたが、本年度の研究において、Drsはさらに、もう一つのS6リン酸化経路である、mTOR-S6K経路の調節にも関与していることを明らかにした。2、DrsによるmTOR経路制御の分子メカニズムを明らかにするため、mTORをリン酸化するTSC1/2および、ウイルス感染時に誘導されるmTOR制御分子であるGADD34とDrsの結合について解析を行い、DrsはGADD34との結合を介してTSC1/2と複合体を形成し、DrsはGADD34と協調的にTSC2のリン酸化を抑制することを明らかにした。以上の結果から、Drsは正常細胞において、p38-RSK、mTOR-S6Kの両経路を介してS6のリン酸化を調節しており、ウイルス感染時にS6のリン酸化を抑制して、ウイルスの蛋白質合成を特異的に抑制することで、宿主のウイルス作用に寄与することが示唆された。特に、mTOR-S6K経路において、Drsはウイルス感染によって誘導されるGADD34を介して、mTOR制御分子であるTSC2と複合体を形成し、TSC2の脱リン酸化を調節することでmTOR活性を調節することが示唆された。
シナプスのスクラップビルドに発熱が与える影響の解明

脳が正常に機能するためには、適切なシナプス競合によって興奮性および抑制性シナプスの数と機能のバランス(E/Iバランス)が制御され、これが維持される必要がある。そして、このためには、貪食作用によるシナプス刈り込み能力や、シナプス剥離能力を有する脳内免疫細胞「マイクログリア」が重要な役割を果たすことが示されてきた。まず、幼児期の発熱がマイクログリア及びシナプスに与える影響を検証するため、幼児期にあたるマウスの体温を人工的に上昇させた。その結果、マイクログリアが活性化し、抑制性シナプスを優先的に貪食する様子が観察された。次に、シナプスE/Iバランスが破綻した結果として生じる代表的な脳疾患として、神経細胞の過剰な発射を要因とするてんかんが挙げられる。そこで、代表的な側頭葉てんかんモデルマウスであるカイニン酸モデルを用いて、シナプスE/Iバランス破綻におけるマイクログリアの関与を検証した。その結果、非常に興味深いことに、これらのてんかんモデルマウスにおいて、音刺激弁別試験の成績が低下し、音の有無を正確に判断できないことを発見した。また、これらのマウスでは、側頭葉の一次聴覚野に情報を伝える内側膝状体において、抑制性シナプスの密度が低下するとともに、神経活動が上昇していることが示唆された。さらに、同領域ではマイクログリアが活性化し、神経細胞の細胞体への抑制性シナプスを剥離している様子が確認された。側頭葉てんかん患者では幻聴や聴覚保続が報告されることもあり、今回の発見はその細胞生物学的メカニズムの一端を明らかにした可能性がある。平成30年度が最終年度であるため、記入しない。小児は感染症などにより頻繁に高熱を経験する。小児期の脳内では神経回路の形成が盛んに行われており、この時期の高熱は、将来の脳機能に非可逆的な影響を及ぼす可能性がある。本研究では、神経回路形成や脳機能の発達に及ぼす高熱の影響を検証するため、小児期のマウスに人工的に高熱を誘導した。恒温チャンバー内にマウスを入れ、外気の温度を上げることで高熱を誘導した。7日間の高熱処置により、海馬歯状回において、脳内免疫細胞であるマイクログリアの活性化を認めた。また、マウスの運動量・不安様行動に与える影響を見る目的でオープンフィールドテスト(OFT)、空間記憶能力を見る目的で空間物体認識試験、うつ様行動を見る目的で強制水泳試験を、この順に連続して行った。なお、高熱処置中のマウスのビデオモニタリングから、高熱処置によりけいれん発作を生じた群(Febrile Seizures; FS)と、ほとんどけいれん発作を生じなかった群(Hyperthermia; HT)が見られたため、これらを区別して解析を行った。OFTでは、マウスが新奇環境である箱の中を自由に走り回る。中央滞在時間に差は見られなかった。総走行距離については、FSと比較してHTで高かった。空間物体認識試験は4日間連続して行う試験である。この試験においてCTRLとFS、HTの間に差は見られなかった。最後に、マウスを足がつかないプールの中で泳がせる強制水泳試験を行った。強制水泳試験ではマウスの無動時間を計測する。無動は脱出できないことを学習して諦めた状態であると解釈されており、無動時間が長いほどよりうつ様状態であると考えられる。Day 5において、CTRLと比較してFSの無動時間が短かった。OFTにおいてCTRLとFSの総走行距離に差が見られないことも考慮すると、高熱処置を受けたマウスはコントロールのマウスに比べて、“抗うつ様状態"になっていると考えられる。モデル構築を完了し、研究ターゲットであるマイクログリアのプロパティ解析に至ったため。シナプス貪食に焦点を置いて研究を進める。また、シナプス貪食のリアルタイムイメージングを試みる。
顎関節部光造形モデルによる顆頭位・顆頭形態の実体的評価

1.研究成果:X線CTと光造形装置による等倍体の顎関節部の実体モデルを作製し、両側の顆頭の偏位量や方向を、モデルを手にとり視覚的に原寸大で捉えることができた.2.今後の展望:本法は3次元画像による評価法に比べ、顆頭位の判定結果を臨床的に具体化した情報として下顎位の設定や評価に反映し得ると考える.3.概要:CTはFOVを210mmに設定し、眼窩下縁から鼻下点までの範囲を1mm間隔で撮影した.次に512×512ピクセルの解像度の画像を画像処理ソフトに読み込ませ骨と皮膚の形状を抽出した.皮膚の形状はモデルと生体の位置関係を対応させるための参考とした.処理の際、骨と皮膚の認識値は再構築像の形状をモニタリングしながら最適と判断される閾値にそれぞれ設定した.頭蓋と左右の顆頭および皮膚を連結するサポート部を付与したのちデータをSTL形式で出力し0.2mmピッチで光造形を行った.今回は、72歳の女性1名に被検者として協力が得られた.口腔内は上顎が右側第二小臼歯から右側側切歯まで、下顎が左側第二小臼歯から左側側切歯まで残存し咬合支持はアイヒナーのグループCに属する、いわゆる"左右的なすれ違い咬合"を呈していた.顎関節部には特記すべき事項はない.顎関節の造形は、ゴシックアーチ描記法からそのアペックスを求めて製作した義歯の嵌合顎位で行った.造形モデルから次にような肉眼的な所見を得た.関節窩の位置は正中口蓋縫合に対してほぼ左右対称であった.顆頭の長径は左側より右側のほうが若干大きかった.後方面形態は左側がYaleのRound型、右側がAngled型で左右で異なっていた.モデルを前下方から観察すると関節隆起の形態は顆頭の形態と相似であった.また、陥凹や突起は認められなかった.関節窩と顆頭の相対的な距離は左側で1mm以下、右側では2.5から3.5mmで、左側は前上方へ右側は下方に偏位していた.最後に,今回のような左右差を個人差とするか、診療の対象とするかは現状では明確な意見がもてなかった.本研究課題は、顆頭の骨変形を伴う顎関節の顆頭位をどのように考えるか、という問いに対してCTから得られる生体の骨形態像から光造形モデルを作製しその顆頭位の実体的評価を行うことである。本年度はCT撮影と顎関節形態のオリジナルファイルおよびオリジナルファイルからDXFファイルを作製した。まず、2633歳の男性健常有歯顎者6名の顆頭安定位におけるCT撮影と、残存歯による咬合支持を失ったいわゆるアイヒナーのグループCに分類される多数歯欠損症例についてCT撮影を行い顎関節構成データのオリジナルファイルを作製した。症例は5075歳の男性2名、女性1名である。また、撮影時の下顎位はゴシックアーチを描記しアペックスの位置に規定した。症例での画像は顆頭の部位によりCT値が異なっており、健常者に比べ骨形態の輪郭が著しく不明瞭であった。そのため2値化してトレースする手法では形態の抽出が難しく、前後のスライス面の画像から推察して行った。その結果、健常者の顎関節の骨関節隙をみると12mmの隙間で関節窩と顆頭が対向する部位は関節の外側に多かった。また、欠損症例のうち1名では、片側の顆頭がいわゆる骨棘を呈していた。骨棘は水平面から観察すると顆頭中央部に存在し、関節窩と顆頭は骨棘の部分で最も接近し骨関節隙の様相も異なっていた。さらにこれらの形態情報は、リアルタイムグラフィックス上へ描出するためのオリジナルファイルからDXFファイルへ変換可能なことがわかった。次年度は、DXFファイルからSTLファイルの製作および造形装置へデータを移行する予定である。1.研究成果:X線CTと光造形装置による等倍体の顎関節部の実体モデルを作製し、両側の顆頭の偏位量や方向を、モデルを手にとり視覚的に原寸大で捉えることができた.2.今後の展望:本法は3次元画像による評価法に比べ、顆頭位の判定結果を臨床的に具体化した情報として下顎位の設定や評価に反映し得ると考える.3.概要:CTはFOVを210mmに設定し、眼窩下縁から鼻下点までの範囲を1mm間隔で撮影した.次に512×512ピクセルの解像度の画像を画像処理ソフトに読み込ませ骨と皮膚の形状を抽出した.皮膚の形状はモデルと生体の位置関係を対応させるための参考とした.処理の際、骨と皮膚の認識値は再構築像の形状をモニタリングしながら最適と判断される閾値にそれぞれ設定した.頭蓋と左右の顆頭および皮膚を連結するサポート部を付与したのちデータをSTL形式で出力し0.2mmピッチで光造形を行った.今回は、72歳の女性1名に被検者として協力が得られた.口腔内は上顎が右側第二小臼歯から右側側切歯まで、下顎が左側第二小臼歯から左側側切歯まで残存し咬合支持はアイヒナーのグループCに属する、いわゆる"左右的なすれ違い咬合"を呈していた.顎関節部には特記すべき事項はない.顎関節の造形は、ゴシックアーチ描記法からそのアペックスを求めて製作した義歯の嵌合顎位で行った.造形モデルから次にような肉眼的な所見を得た.

関節窩の位置は正中口蓋縫合に対してほぼ左右対称であった.顆頭の長径は左側より右側のほうが若干大きかった.後方面形態は左側がYaleのRound型、右側がAngled型で左右で異なっていた.モデルを前下方から観察すると関節隆起の形態は顆頭の形態と相似であった.また、陥凹や突起は認められなかった.関節窩と顆頭の相対的な距離は左側で1mm以下、右側では2.5から3.5mmで、左側は前上方へ右側は下方に偏位していた.最後に,今回のような左右差を個人差とするか、診療の対象とするかは現状では明確な意見がもてなかった.
知識共有と探求学習支援を指向したタグとリンクによるフォークソノミに関する研究

タグとリンクによるフォークソノミを実現したソーシャルブックマークシステムを試作したが,学習者によるブックマークのリンク付けが積極的に行われなかった.しかし,歴史学習のための年表システムと連携させることにより,ブックマークを利用した年表作成という目的が明確化されたことで解決できた.また,ブックマーク間の関連付けが間接的であってもリンクによるフォークソノミとして活用できることを確認できた.タグとリンクによるフォークソノミを実現したソーシャルブックマークシステムを試作したが,学習者によるブックマークのリンク付けが積極的に行われなかった.しかし,歴史学習のための年表システムと連携させることにより,ブックマークを利用した年表作成という目的が明確化されたことで解決できた.また,ブックマーク間の関連付けが間接的であってもリンクによるフォークソノミとして活用できることを確認できた.本研究の目的は,フォークソノミを知識共有と探究学習により適応させることである.そこで,フォークソノミに知識を断片化させない仕組みを実現するため,タグに加えて関連する項目間にリンク関係を持たせた新しいフォークソノミを提案した.平成18年度はまず,知識共有,探究学習支援に向けたシステムの機能分析と設計から研究を進めた.リンクによるフォークソノミを簡潔に実現するため,タグによるブックマーク管理機能を持つシンプルなソーシャルブックマークシステムの上に,ブックマーク登録時に関連項目(今ブックマークしようとしているウェブページと関連すると主観的に思われる,以前に登録したブックマーク)へのリンク関係を登録できる機能を追加した.試作システムを構築し,小規模なユーザ群における実験的な運用より得られたブックマークとリンクデータの分析を行った.ユーザインタフェースの改良を含めた試作システムの更新は随時行っている.また,ソーシャルブックマークシステムを用いた探究学習支援の歴史学習への応用として,ソーシャル年表作成システムを試作した.小規模なユーザ群での評価実験から,歴史学習に関連するブックマークデータと作成された年表の分析,ユーザビリティに関するアンケート調査を行った.これらの結果からシステム設計の見直しを行い,タグとリンクによるフォークソノミとの融合を見据えつつ,現在次バージョンを開発中である.平成18年度の研究成果の公開として,関連する国内・海外の学会等で発表した.また,本研究の成果を紹介するため,試作システムが動作する様子が見られるよう,新規ユーザ登録機能を省いた試作システムをウェブ上に暫定的に公開している.本研究の目的は,フォークソノミを知識共有と探求学習により適応させることである.そこで,フォークソノミに知識を断片化させない仕組みを実現するため,これまでのタグに依存したフォークソノミを拡張し,関連する項目間にリンク関係を持たせた新しいフォークソノミを提案した.平成19年度は,フォークソノミの知識共有と探求学習への活用事例となるソーシャル年表システムの設計と開発を中心に研究を行った.ソーシャル年表システムは,歴史の流れをつかむための学習年表を学習者が容易に作成できるものである.学習者は,1つの事象の詳細な解説を書く必要はなく,事象に関する記述のあるウェブページを関連付ければよい.このとき,複数の学習者が同じページを各学習年表の事象と関連付けることで,年表間につながりが得られる.我々は,事象へのウェブページの関連付けを容易にするために,年表作成システムとソーシャルブックマークシステムとが連動するインタフェースを構築し,これをソーシャル年表システムとした.連携するソーシャルブックーフクシステムは,前年度に設計・開発したリンクによるフォークソノミが実装されたものにも置き換えられる.また,平成19年度の研究成果の公開として,関連する国内・海外の学会等で発表した.さらに,本研究の成果を紹介するため,開発中のソーシャル年表システムをウェブ上に公開している.公開しているシステムは,ユーザ登録すれば誰でも利用可能になっている。本研究の目的は,フォークソノミを知識共有と探求学習により適応させることである.そこで,フォークソノミに知識を断片化させない仕組みを実現するため,これまでのタグに依存したフォークソノミを拡張し,関連する項目間にリンク関係を持たせた新しいフォークソノミを提案した.平成20年度は,前年度から開発を進めていたフォークソノミの知識共有と探求学習への活用事例となるソーシャル年表システムに対する評価を試みた.ソーシャル年表システムは,歴史の流れをつかむための学習年表を学習者が容易に作成できるものである.学習者は, 1つの事象の詳細な解説を書く必要はなく,事象に関する記述のあるウェブページを関連付ければよい.このとき,複数の学習者が同じページを各学習年表の事象と関連付けることで,年表間につながりが得られる.我々は,事象へのウェブページの関連付けを容易にするために,年表作成システムとソーシャルブックマークシステムとが連動するインタフェースを構築し,これをソーシャル年表システムとした.18年度に試作したリンクによるフォークソノミを実現したソーシャルブックマークシステムでは,学習者によるブックマークのリンク付けが積極的に行われなかったが,年表システムとの連携により,ブックマークを利用した年表作成という目的が明確化されたことで解決できた.また,ブックマーク間の関連付けが間接的であってもリンクによるフォークソノミとして活用できることを確認できた.
ドイツ統一後のニーダーザクセン州における政治的陶冶の教科書内容構成の研究

ニーダーザクセン州の前期中等教育段階における政治的陶冶(地理・歴史・ゾチアルクンデ)の検定教科書の内容構成を調査・分析した。地理教科書は「主題的-地域的アプローチ」に基づいて編成されている。これは、空間構造とその形成プロセスの認識の論理的順次性に基づき、学習内容を空間形成プロセスの認識、空間システムの構造認識に二段階化し編成するものである。このような教科書内容構成では、地理事象を人間による空間的行動と空間構造との相互作用をもとに認識できることが目指されているといえる。歴史教科書はヨーロッパ史を中心とした通史の枠組みに基づいて編成されている。この枠組みは伝統的なものであるが、個々の主題では、歴史事象を政治的・経済的・社会的・文化的なさまざまな諸要因からなる社会構造と関連づけることによってその原因・現象形態・結果を認識する学習が行われる。このような教科書内容構成では、歴史事象を政治的・社会的行為と社会全体の構造との相互作用をもとに認識できることが目指されているといえる。ゾチアルクンデ教科書は、家族・学校・余暇・公共生活・職業・外国との関係といった社会領域から選択された具体的なさまざまな社会生活状況によって編成されている。そして個々の社会生活状況を対象に、どのような状況がのぞましいか、それはどうすれば達成可能か、を追求する学習が行われる。このような教科書内容構成では、社会的に責任ある市民として自ら考え判断し社会過程に共同参加できることが目指されているといえる。以上のように政治的陶冶のための諸教科目の教科書は、人間行為と社会との相互作用の認識を育成することを目指す編成原理によって構成されている。これはドイツ統一をはじめとして大きく変動する社会において、民主主義的市民を育成することによって理想的な社会を構築する機能が学校教育における政治的陶冶に求められているためであると考えられる。
胃癌DNA二重鎖損傷修復機構破綻の包括的評価と臨床的意義の解明

癌関連435遺伝子で構成された癌遺伝子解析パネルにより胃癌におけるHomologous Recombination(HR)関連遺伝子異常の評価、および臨床的意義を明らかにした。課題Aでは癌遺伝子解析パネルが実施された207例の胃癌患者のうち、胃切除後に切除不能胃癌と診断され白金系抗癌剤を用いた化学療法が実施された26例の患者を対象として、原発巣の腫瘍組織におけるγH2AX-LIを評価した。しかしながら、HR関連遺伝子異常の有無とγH2AX-LI計測結果に統計学的な関連を認めなかった。課題Bでは、同26例の患者を対象として、対象患者の全奏効率、無増悪生存期間、病勢コントロール率、全生存期間について評価した。BRCA1/2遺伝子異常を12%/8%に認め、HR遺伝子異常を6例(23%)に認めた。HR破綻群では白金系抗癌剤を用いた化学療法に対して高い奏効率を示していた。HR破綻群/HR非破綻群での全奏効率、病勢コントロール率はそれぞれ60%/27%(P=0.29)、100%/47%(P=0.06)であった。HR破綻群/HR非破綻群の無増悪生存期間中央値、全生存期間中央値はそれぞれ10ヶ月/3ヶ月(P=0.021)、18ヶ月/8ヶ月(P=0.024)であった。HR遺伝子異常によるHR破綻は切除不能胃癌に対する白金系抗癌剤を用いた化学療法に奏功することと関連しており、治療後の予後良好な因子であった。課題Cでは、同26例の患者を対象として、原発巣の腫瘍組織におけるγH2AX-LIと、対象患者の臨床病理学的因子、RECISTによる腫瘍縮小効果判定、再発後の無増悪生存期間、及び全生存期間との統計学的に有意な関連は認められなかった。本研究は癌関連435遺伝子で構成された癌遺伝子解析パネルにより胃癌におけるHomologous Recombination(HR)関連遺伝子異常の評価、および臨床的意義を明らかにすることを目的とした。実験および結果の解析を終えて、課題Aでは癌遺伝子解析パネルによるHR関連遺伝子異常と、胃癌腫瘍組織におけるDNA二本鎖損傷の評価とを比較したものの、統計学的な関連は認められなかった。課題Bにおいて癌遺伝子解析パネルが実施した207例において、再発治療として白金系抗癌剤を受けた症例の検討により、HR関連遺伝子異常を認める症例では白金系抗癌剤の治療効果が高く、再発後の予後が良好であることが示された。その一方で、抗γH2AX抗体による免疫組織化学により評価された胃癌DNA二本鎖修復機構の破綻と白金系抗癌剤の治療効果との統計学的な関連は認められなかった。上記研究成果を2019年2月5日-7日の14th Academic Surgical Congress(国際学会)にて発表した。課題A・B・Cの実験および結果の解析を終えて、国際学会にて発表を行った。癌遺伝子解析パネルが実施した207例において、再発治療として白金系抗癌剤を受けた26例の検討により、HR関連遺伝子異常を認める症例では白金系抗癌剤の治療効果が高く、再発後の予後が良好であることが示された。HR関連遺伝子異常を基軸とした胃癌薬物治療の発展への足がかりとすべく、同内容を中心に論文化を行っていく。これまでの研究結果では、γH2AX-LIとHR関連遺伝子の異常の有無に関連は認められなかった。現時点で遺伝子変異データを用いてMutational signature解析は未施行であるため、今後はMutational signatureの評価を行い、HR関連遺伝子異常やγH2AX-LI、白金系抗癌剤治療との関連についても検討を加える。

課題Cでは、同26例の患者を対象として、原発巣の腫瘍組織におけるγH2AX-LIと、対象患者の臨床病理学的因子、RECISTによる腫瘍縮小効果判定、再発後の無増悪生存期間、及び全生存期間との統計学的に有意な関連は認められなかった。本研究は癌関連435遺伝子で構成された癌遺伝子解析パネルにより胃癌におけるHomologous Recombination(HR)関連遺伝子異常の評価、および臨床的意義を明らかにすることを目的とした。実験および結果の解析を終えて、課題Aでは癌遺伝子解析パネルによるHR関連遺伝子異常と、胃癌腫瘍組織におけるDNA二本鎖損傷の評価とを比較したものの、統計学的な関連は認められなかった。課題Bにおいて癌遺伝子解析パネルが実施した207例において、再発治療として白金系抗癌剤を受けた症例の検討により、HR関連遺伝子異常を認める症例では白金系抗癌剤の治療効果が高く、再発後の予後が良好であることが示された。その一方で、抗γH2AX抗体による免疫組織化学により評価された胃癌DNA二本鎖修復機構の破綻と白金系抗癌剤の治療効果との統計学的な関連は認められなかった。上記研究成果を2019年2月5日-7日の14th Academic Surgical Congress(国際学会)にて発表した。課題A・B・Cの実験および結果の解析を終えて、国際学会にて発表を行った。癌遺伝子解析パネルが実施した207例において、再発治療として白金系抗癌剤を受けた26例の検討により、HR関連遺伝子異常を認める症例では白金系抗癌剤の治療効果が高く、再発後の予後が良好であることが示された。HR関連遺伝子異常を基軸とした胃癌薬物治療の発展への足がかりとすべく、同内容を中心に論文化を行っていく。これまでの研究結果では、γH2AX-LIとHR関連遺伝子の異常の有無に関連は認められなかった。現時点で遺伝子変異データを用いてMutational signature解析は未施行であるため、今後はMutational signatureの評価を行い、HR関連遺伝子異常やγH2AX-LI、白金系抗癌剤治療との関連についても検討を加える。翌年分として請求した助成金と合わせて、蓄積した遺伝子変異データ保管用の記録媒体の購入、国内や国際学会での発表のための費用、論文作成や投稿のための費用として利用することを予定している。
肝細胞がん患者の疾病自己管理に向けた患者支援プログラムの構築

慢性肝疾患と肝細胞がん患者合計40名、看護師18名を対象とし、半構成的面接法にて面接を行い、質的帰納的分析を行った。また、文献検索により、肝臓病患者への患者教育内容について検討した。これらの分析の結果、患者の病みの体験は、5つの時期【肝治療生活が常態化する時期】【がん告知による混乱の時期】【常態化する肝がん治療へ期待する時期】【治療変更による再常態化の時期】【終末認識を持つ時期】で構成されており、その時期に沿った健康教育を行うことを中心とした患者支援プログラムを作成した。肝細胞がんは比較的多い癌といえ、癌の早期発見、治療の進歩により患者の予後は延びてきている。在院日数の短縮化などから、今後、在宅において療養生活を送る患者が増えてくると予測される。本研究では、研究の少ない肝細胞がん患者の治療を通し、身体的変化を捉えた患者の病状認識を明らかにした上で、疾病自己管理を目指すための患者支援プログラムを作成することとした、平成19年度は、肝細胞がん患者の疾病受容過程を明らかにすることを研究課題とした。これまでの研究を継続し肝細胞がん患者計20名の面接調査を行い、その内容をグランデッドセオリーアプロ千の手法を用いて分析を行った。その結果、肝細胞がん患者の疾病受容過程には、5つの時期「慢性肝疾患発症時」「がん発症時」「治療時」「治療変更時」「治療中断時」で構成されており、その中で疾病やがんに対する不安を自身で意味付けし治療に向かうために闘病意欲を奮い立たせるために、さまざまな情報収集を行ったり、対処方法を見出したりするなどの対処行動をとっていることが明らかになった。不安な気持ちと前向きに生きようとする思いが揺れ動く様子が明らかになった。平成19年度後期では、看護師18名に肝細胞がん患者の看護体験についての面接調査を行った。現在分析を行っているが、看護師のとらえた肝細胞がん患者の疾病受容過程も同様の結果であることが示唆された。今後、看護師のデータから、肝細胞がん患者の疾病に対する知識への課題を明らかにし、平成20年度は患者支援プログラムの作成を目指すことにしている。本研究の目的は、肝細胞がん患者の疾病受容過程を明らかにし、疾病受容に沿った疾病自己管理に向けた患者教育プログラムを作成することであった。肝細胞がん患者20名、看護師18名のインタビューによるデータ収集が終了した。肝細胞がん患者のデータからはグラウンデッド・セオリー・アプローチの手法を用い分析を行った。その疾病受容の5つの時期のうち後半4つは、既存理論である「がんサバイバーシップの4つ季節」と一致しており、肝細胞がんの受容過程の理論化可能であると考えられた。5つの時期に沿った患者支援プログラムの原案は作成できた。看護師18名からのデータでは、KJ法を用い、肝細胞がん患者が抱く、疾病受容における様々な課題を明らかにした。その肝細胞がん患者の看護体験についての面接調査を行った結果を踏まえ、さらに分析を進め、患者支援プログラムの精緻化を図るために、さらなる分析を進めている。
顆粒球コロニー刺激因子による好中球の増殖、分化の分子機構

本研究では,好中球の増殖と分化の分子機構を解明することを目的に,G-CSFの細胞内シグナル伝達機構および好中球特異的転写因子MZF-2による遺伝子発現制御機構を研究した。まず,MZF-2の種々の欠失変異体の解析によって転写活性化ドメインを明らかにし,そのドメイン内の複数のアミノ酸残基がMAPキナーゼ(ERK)によってリン酸化されることを見いだした。そこでThr/Ser残基についてAla置換変異を導入して解析した結果,Ser257,Ser275,Ser295がERKによってリン酸化されることが明らかになった。これらのAla置換変異体では好中球前駆細胞における転写促進活性が野生型よりも増強することから,MZF-2の転写活性化能はERK MAPキナーゼによって負の制御を受けることが示唆された。他方,酵母Rasrecruitment two-hybrid法を用いてMZF2の転写活性化ドメインに結合する核内因子を探索し,SWI2/SNF2型ATPase/helicaseドメインを持つmDominoをクローニングした。mDominoは3035アミノ酸残基から成る巨大タンパク質であり,そのC末端領域にはポリグルタミン配列を有する特徴的なドメインが存在した。mDominoの種々の欠失変異体の機能解析の結果,MZF-2はmDominoのC末端ドメインに結合すること,このドメインをLGM-1細胞で発現させるとMZF-2の転写促進活性を増強することが明らかになった。SWI2/SNF2型ATPase/helicaseファミリーはクロマチン再構成因子の構成成分としてヒストンアセチル化/脱アセチル化酵素などと相互作用することが知られており,mDominoとMZF-2の複合体形成を介したクロマチン再構成によって骨髄球分化に関わる遺伝子発現が制御される可能性が示された。研究では,好中球の増殖と分化の分子機構を解明することを目的に,G-CSFの作用による細胞内シグナル伝達機構および好中球特異的転写因子MZF-2による遺伝子発現制御機構を研究している。これまでに研究代表者らは814アミノ酸残基からなるMZF-2タンパク質の機能ドメインについて解析し,アミノ末端には転写抑制ドメインが存在すること,また,そのC未端側には転写活性化ドメインが存在することを示した。平成12年度は,まず,マウス骨髄球NFS60細胞やLG細胞で発現しているMZF-2mRNAのalternative splicingについてNorthern hybridizationやRT-PCRによる詳細な検討を行ない,これらの細胞ではアミノ末端側が短かいMZF-2タンパク質(735アミノ酸)をコードするmRNA分子種が主に発現していることを新たに見いだした。従ってこれらの細胞では負の制御領域を欠いた活性型MZF-2が発現・機能していることが明らかになった。また,転写活性化領域のみからなるMZF-2変異体が優性ネガティブに作用することなどから,転写活性化ドメインと相互作用する骨髄細胞特異的コアクチベーターの存在が示唆された。他方,MZF-2の転写活性化ドメイン内の複数のアミノ酸残基がin vitroにおいてMAPキナーゼ(ERK)によってリン酸化されることを見いだした。このドメイン内のThr/Ser残基についてAla置換変異を導入して解析した結果,Ser257,Ser275,Ser295がERKによってリン酸化されることが明らかになった。これらのAla置換変異体では好中球前駆細胞における転写促進活性が野生型よりも増強することから,MZF-2の転写活性化能はERKMAPキナーゼによって負の制御を受けることが示唆された。

昨年度までの研究では,MZF-2の機能ドメインについて解析し,その転写活性化ドメインを同定するとともに,その転写促進活性がERK MAPキナーゼによって負の制御を受けることを示した。平成13年度はMZF-2の転写活性化ドメインに結合する核内因子の探索を目的に,酵母Ras recruitment two-hybridsystemを用いてマウスLGM-1骨髄球細胞のcDNAライブラリーをスクリーニングし,SWI2/SNF2型ATPase/helicaseドメインを持つmDominoを同定した。mDominoは3035アミノ酸残基から成る巨大タンパク質であり,そのC末端領域には2カ所のポリグルタミン配列を持つ特徴的なドメイン(ポリグルタミンドメイン)が存在した。N末端にMyc-tagを接続したmDominoをCOS細胞で発現させると約350kDaの遺伝子産物が核に局在することが示された。さらに,mDominoの種々の欠失変異体の解析により,MZF-2がmDominoのポリグルタミンドメインに結合すること,このポリグルタミンドメインをLGM-1細胞で発現させるとMZF-2の転写促進活性を増強することが明らかになった。SWI2/SNF2型ATPase/helicaseファミリーはクロマチン再構成因子の構成成分としてヒストンアセチル化/脱アセチル化酵素やPolycomb/Trithorax遺伝子産物と相互作用することが知られており,mDominoとMZF-2の複合体形成によって骨髄球分化に関わる遺伝子発現が制御される可能性が示された。
歯周病原細菌代謝産物によるT細胞アポトーシス誘導機構の解析

1.ガスクロマトグラフィーでの分析結果からP. gingivalis, P. loescheii及びF. nucleatumが産生するVFAはいずれも酪酸、イソ吉草酸又はプロピオン酸が主要構成脂肪酸であった。2.胸腺細胞、Sp-T及びJurkat細胞では主要構成VFAである酪酸(BA)添加により生存率が著しく低下した。断片化率の測定からBAは胸腺細胞に対しては1.25mM以上の濃度でまた培養6時間以降に急激にアポトーシスを誘導した。Sp-T及びJurkat細胞に対しては2.5mM以上の濃度でまた培養16時間以降に急激なアポトーシスを誘導した。胸腺細胞ではCD4^+8^+細胞に、またSp-T細胞ではCD4^+T細胞にアポトーシスが誘導された。3.BAで誘導されるDNA断片化がZnSO_4及びaurintricarboxylic acid添加により阻害されることから、内因性エンドヌクレアーゼの活性化がDNAを無機能なサブユニットへと分断する最終シグナルになっていることが示唆された。更に、BAで誘導される胸腺細胞のアポトーシスはシクロヘキサミドやアクチノマイシンD添加により抑制されたことから、そのDNA断片化に新たなタンパク質やRNAの合成を伴うことが示唆された。4.BAで処理した胸腺、Sp-T及びJurkat細胞は培養2-3時間より細胞内Ca^<2+>増加を認め、またCa^<2+>キレート剤である2/AMがDNA断片化反応を抑制したことからBAによるアポトーシス誘導に細胞質Ca^<2+>濃度の上昇が関与していることが示唆された。5.BAで誘導される胸腺細胞のアポトーシスはPKC阻害剤であるH-7及びStaurosporineの添加により抑制されたがSp-T及びJurkat細胞では影響が少なかった。以上の結果からBAは胸腺、Sp-T及びJurkat細胞に対しアポトーシスを誘導した。アポトーシスを誘導する為のBAの濃度及び時間は細胞の成熟度に深く関与していることが示唆された。また、CD4^+T細胞でのより高率なアポトーシス誘導はBAによるCD4^+T細胞からのサイトカイン産生抑制という我々のこれまでのDataを裏付けるものである。更に、PKC阻害剤に対する感受性の違いからBAにより誘導される胸腺,Sp-T及びJurkat細胞のアポトーシスはその誘導機構が異なる可能性が示唆された。
骨髄間葉系幹細胞を用いた関節リウマチ、変形性膝関節症に対する新規治療戦略の開発

炎症性免疫疾患である関節リウマチや変形性膝関節症に対する細胞治療が注目され、ヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)はその一つである。炎症性・抗炎症性サイトカインの遺伝子解析の結果hMSCsを移植した動物マウスではIL-1、TNF alpha、IL-10およびTGF betaの減少を認め、抗炎症性のIL-4の増加を認めた。また、hMSCsがPACAPというタンパク質を介して炎症を調整する機序を報告した。さらに損傷組織を用いたmRNAのRT-PCRではケモカインCCL5とその受容体CCR1、CCR5の発現が14日目まで増加し、CCL5の慢性炎症への関与が示唆され、経時変化に対する治療も重要である。再生医療における細胞治療として用いられるヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)は多くの疾患に適応されつつある。近年hMSCsはその新たな作用として抗炎症作用、免疫調整作用を有する可能性が報告され、筆者らもこの点に着目して研究を継続し、hMSCsが脊髄損傷マウスにおいて抗炎症作用を有する可能性について報告した。当該研究の目的は、炎症性免疫疾患に代表される関節リウマチや半月板・軟骨損傷に起因する変形性膝関節症に対する新規治療法を開発するための基礎研究を行うことである。そこで当該年度は自己免疫性関節炎を自然発症するHTLV-1 tgマウスを用いて研究を開始した。HTLV-1 tgマウスは生後約6週齢ごろより関節の肥大が認められ始める。関節の肥大(手関節、足関節の長形・短径、指趾関節を含む小関節の腫脹、発赤)および体重の評価を8ー10週齢のマウスを用いて開始し1ヶ月ごとにこれらを評価した。さらに経時的に手関節、足関節、指関節の腫脹、発赤所見から評価を行うArthritis Scoreを用いて臨床的関節炎評価を行った。次年度以降に予定している血液生化学的検査のための検体採取方法確立のための予備実験、免疫組織化学的評価のための予備実験、CIA関節炎モデルマウス作成のための関節炎惹起用抗体カクテルの調査、予備実験、HTLV-1 tgマウス/CIA関節炎マウスへに対するhMSCs投与のためのhMSCsの培養、調整実験を行った。ヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)は細胞治療として多くの疾患に適応されつつある。近年hMSCsの機能として抗炎症作用、免疫調整作用を有することが報告され、筆者らもこの点に着目して研究を継続しhMSCsが脊髄損傷マウスにおいて抗炎症作用を有する可能性について報告した。また、このhMSCSがpituitary adenylate cyclase-activating polypeptide (PACAP)というタンパク質を介して脊髄損傷後の炎症を調節する機序について追加報告した。当該年度はHTLV-1 tgマウスを用いて関節の肥大及び体重の評価を継続し、arthritis scoreを用いて臨床的関節炎評価を継続した。さらに、hMSCsと膝関節液との共同培養を行うための前段階として、ヒト臨床において関節リウマチ、半月板損傷、変形性膝関節症に対する診断、保存加療、手術加療を行い、ヒト臨床研究につなげるための礎となる症例の治療を継続した。当該研究の目的は、ヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)の新たな作用としてわかってきている抗炎症作用、免疫調整作用に着目して、関節リウマチ、変形性関節症の新たな治療方法を開発するための基礎研究を行うことである。今年度は次年度以降に予定しているヒト膝関節内組織を採取しhMSCsとの共同培養を行うための臨床治療経験を積み、概ね予定通り進展していると思われる。ヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)は再生医療におけるソースとして多くの研究がなされている。近年hMSCsが抗炎症、免疫調整作用を有することが報告され、筆者らもこの点にも注目して研究を継続し、マウス脊髄損傷マウスモデルを用いた研究ではhMSCsがpituitary adenylate cyclase-activating polypeptide(PACAP)とういタンパク質を介して炎症を調節する機序について報告した。また関節炎を惹起するIL-1βは、関節炎のみではなく、脊髄損傷においても組織破壊、神経炎症に関与するが、その後の修復にも関与することを報告した。当該研究は関節リウマチ、半月板・軟骨損傷に起因する変形性膝関節症に対する新規治療法を開発するための研究を行うことである。当該年度は画像上の関節破壊程度や関節破壊の指標となる血清MMP-3、また全身炎症を反映するとされるCRPを測定しその関連性について検討した。また、hMSCsと膝関節組織との共同培養を行うための、ヒト膝関節液採取、滑膜等の組織採取について経験を積み手技を確立した。当該研究の目的は変形性膝関節症における新たな治療方法を開発するための基礎研究を行うことである。今年度は様々な治療を実践することを通して、その病態、原因を探ることができたが、基礎研究においてやや遅延している可能性があると思われた。近年、炎症性免疫疾患に代表される関節リウマチや半月板・軟骨損傷に起因する変形性膝関節症に対する細胞治療が注目されている。再生医療における細胞治療としてヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)は多くの疾患に適応されつつある。

近年hMSCsが抗炎症、免疫調整作用を有することが報告され、筆者らもこの点に注目して研究を継続し、マウス脊髄損傷マウスモデルを用いた研究では、IL-1はマイクログリアの古典的活性化、代替経路型活性化の両方に関与する事が示唆された。さらに、脊髄損傷動物に対しhMSCsを脊髄内に移植し、運動機能、脊髄損傷や神経再生の改善が認められる事を免疫組織化学的に確認した。IL-1を含む炎症性・抗炎症性サイトカインの遺伝子解析を行ったところhMSCsを移植した動物はマウスIL-1、TNF alpha、IL-10およびTGF betaの有意な減少を認め、抗炎症性のIL-4の有意な増加を認めた。また、hMSCsがpituitary adenylate cyclase-activating polypeptide(PCAP)というタンパク質を介して炎症を調整する機序について報告した。さらに損傷組織を用いてmRNAを抽出しRT-PCRにてケモカイン(CCL2、CCL5、CCL7、CXCL1、CXCL2、CX3CL1)および受容体(CCR1、CCR2、CCR3、CCR5、CXCR2、CX3CR1)の発現を調べたところ、ケモカインCCL2、CCL7、CXCL1、CXCL2、CX3CL1とそれらの受容体CCR2、CXCR2、CX3CR1の発現は損傷後3日目で最大となり14日目にかけて低下した。一方でCCL5とその受容体CCR1、CCR5の発現は14日目まで増加し、CCL5の慢性炎症への関与が示唆された。今後急性期から慢性期における経時的な変化に対する治療戦略について研究を進める必要がある。炎症性免疫疾患である関節リウマチや変形性膝関節症に対する細胞治療が注目され、ヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)はその一つである。炎症性・抗炎症性サイトカインの遺伝子解析の結果hMSCsを移植した動物マウスではIL-1、TNF alpha、IL-10およびTGF betaの減少を認め、抗炎症性のIL-4の増加を認めた。また、hMSCsがPACAPというタンパク質を介して炎症を調整する機序を報告した。さらに損傷組織を用いたmRNAのRT-PCRではケモカインCCL5とその受容体CCR1、CCR5の発現が14日目まで増加し、CCL5の慢性炎症への関与が示唆され、経時変化に対する治療も重要である。当該研究の目的は、再生医療における細胞治療として用いられるヒト骨髄間葉系幹細胞(hMSCs)の新たな作用としてわかってきている抗炎症作用、免疫調整作用に着目して、関節リウマチ、変形性膝関節症の新たな治療方法を開発するための基礎研究を行うことである。今年度は次年度以降に予定している血液生化学的検討、組織化学的検討に向けた動物の観察、試薬の調整を中心におおむね予定通り研究を行うことができたと思われる。引き続きHTLV-1 tgマウスの経時的関節炎評価を継続する。また、関節炎惹起抗体を用いたCIA関節炎モデルの血液生化学的検討、免疫組織化学的検討を行う。また、hMSCsをヒト膝関節組織との共同培養を行うための予備試験を行う。関連学会に積極的に参加し最新の知見を得ると同時に研究結果の発表を行っていく。引き続きのマウス関節炎モデルの経時的関節炎評価を行う。また、変形性膝関節症による関節炎に対するhMSCsの反応を調べるために、hMSCsとヒト膝関節組織との共同培養を行っていく予定である。
エンド・オブ・ライフ・ケアに携る臨床看護師に対する看護倫理教育プログラムの開発

本研究は、エンド・オブ・ライフ・ケアに携わる我が国の臨床看護師に対して、新たな看護倫理教育プログラムを開発し、そのプログラムを用いた教育的介入が看護師に及ぼす影響を、倫理的感受性、死にゆく患者に対する看護師のケア態度、ホスピス・緩和ケア病棟におけるアドバンスケアプランニングに関する態度及び実践の3指標を用いて多方面から検討した。その結果、本プログラムは、臨床看護師の死にゆく患者に対する看護師のケア態度に正の影響を及ぼし、アドバンス・ケア・プランニング(ACP)の有効性に関する認識を高め、患者の治療やケアの目標を確認するACPの実践を促す影響を及ぼす可能性があることが示唆された。平成24年度は、右の期間産前産後の休暇及び育児休業取得のため研究を中断した。中断期間:平成23年12月5日平成25年3月31日様式F-13-2を提出し、2013年2月21日に学振受理済前年度までに得られた結果をもとに、平成25年度は本研究課題において、我が国のエンド・オブ・ライフ・ケアにたずさわる臨床看護師を対象とした新たな看護倫理教育プログラムの内容を修正・増補した。また、臨床倫理の事例検討の手引きを修正した。【プログラム内容の修正】前年度までに開発した、ELNEC-J(End-of-Life Nursing Education Consortium-Japan)コアカリキュラム看護師教育プログラムに含まれる10のモジュール(学習単位)の中から、「モジュール4、エンド・オブ・ライブ・ケアにおける倫理的問題」に基づき、再編し増補した看護倫理教育プログラム案に、効果的な学習を促すカリキュラムの枠組みである教育の分類体系に基づいて、認知・感情・精神運動の各ドメインに働きかけられる要素を補充する方法について検討を重ねた。【臨床倫理の事例検討の手引きの修正】臨床倫理の事例検討用フォーマットとして、Jonsenらの臨床倫理の4分割等をもとに、看護師が臨床倫理の事例検討を行うことができるように作成した手引きについて、医療倫理、哲学の各分野における専門家による専門的知識の教授のもと、哲学の問いや思考プロセスを用いて、臨床倫理の事例検討を行うチームメンバーの思考力や議論する力を育めるような要素を追加した。本手引きをもとに研究対象となる医療施設のリーダー格である看護師が臨床倫理の事例検討を導くことにより、安全なディスカッションの場を構築しながらも、よりよい解決方策をチームで構築していけるようになることを目指す。平成23年度は本研究課題において、我が国のエンド・オブ・ライフ・ケア(EOLケア)にたずさわる臨床看護師を対象とした、新たな看護倫理教育プログラムの内容やあり方について検討した。[看護倫理教育プログラムの検討]・平成19年21年度厚生労働科学研究費補助金がん臨床研究事業「がん医療の均てん化に資する緩和医療に携わる医療従事者の育成に関する研究」班において、研究者らはEnd-of-Life Nursing Education Consortium Japan (ELNEC-J)コアカリキュラムを開発した。そのカリキュラムの10のModuleの中に、EOLケアにまつわる倫理問題をとりあげたModule 4がある。現在までに、本研究課題において、Module4に不足するコンテンツを補い、汎用性を高めるための検討を実施した。看護倫理教育プログラムに補足する内容として、EOLケアの臨床にたずさわるジェネラリストナースが、倫理問題の同定・分析・解決するのに必須とされる、医療倫理や看護倫理の知識に関して、基礎的な内容を追加することとした。また、倫理に関する用語をわかりやすく説明する必要性についても確認した。・臨床倫理の事例検討用フォーマットとして、Jonsenらの臨床倫理の4分割等をもとに、看護師が臨床倫理の事例検討を行うことができる枠組みとその手引きについて検討した。手引き作成においては、EOLケアを実践している病棟のリーダー格である看護師の協力を得て、研究対象となる医療施設のリーダー格である看護師が独自に事例検討を開催できるよう配慮した。・効果的な学習を促すカリキュラムの枠組みである教育の分類体系に基づいて、認知・感情・精神運動の各ドメインに働きかけられる要素を補充する必要性が明らかになった。前年度までに得られた結果をもとに、平成26年度は本研究課題において、我が国のエンド・オブ・ライフ・ケアに携わる臨床看護師を対象とした看護倫理教育プログラムのPilot Studyを実施し、開発した看護倫理教育プログラムの実施可能性について検証した。最初の2年間には、我が国のエンド・オブ・ライフ・ケア(以下、EOLケア)にたずさわる臨床看護師を対象とした、新たな看護倫理教育プログラム(以下、本プログラム)の内容やあり方について検討した。平成25年度には、効果的な学習を促すカリキュラムの枠組みである教育の分類体系に基づき、認知・感情・精神運動の各ドメインに働きかけられる要素を本プログラムに補充できるよう検討を重ね、平成26年度には本プログラムのパイロットスタディを実施した。平成27年度には本プログラムを2回開催し、その教育的介入が参加した看護師に及ぼす影響を倫理的感受性、死にゆく患者に対する看護師のケア態度、アドバンス・ケア・プランニング(以下、ACP)に関する認識及び実践に及ぼした影響の3つの指標を用いて検証した。解析の対象は、本プログラムに参加し、次期式質問し調査への参加に同意した看護師45名[年齢:42.7±8.8(SD)歳、臨床経験:15.6±11.3(SD)年、男性:1名、女性:44名]であった。解析の結果、本プログラムによる教育的介入による影響として、倫理的感受性には有意に変化が認められず、死にゆく患者に対する看護師のケア態度において、患者と差し迫った死について対話することを気まずく感じることが減少する傾向にあることが明らかになった。