hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
企業再編を考慮した雇用終了に関する使用者の雇用・賠償責任の比較法的研究

我が国では、労働契約の一方当事者である使用者が変動する局面があるため、雇用終了規制システムの根幹といえる使用者の雇用責任・賠償責任の要件と効果が十分に解明されておらず、救済方法が必ずしも効果的に体系化されてこなかった。今回の研究では、企業再編時における労働者が持つ使用者選択の権利を十全ならしめること等のために、立法的措置が必要であることがわかった。解雇・退職については、無効・復職だけでなく、金銭解決の方法が確立される必要がある。これまでに、3回の研究会を開催し、雇用終了等に関する日本、イギリス、ドイツ及びフランスの各法に関する検討を行い、その成果の一部については論文として公表してきた。まず、わが国の無期労働契約における解雇、有期労働契約における解雇や辞職及び期間満了による雇用終了、及び辞職・退職、並びに企業倒産時における雇用終了に関する判例の動向について整理し、その特徴及び問題点について議論した。その検討の具体的な成果として、下記の小宮論文及び根本論文を公表した。次に、解雇の金銭賠償につきドイツにおける地位確認判決に代わる金銭による解決制度の実際的運用状態について議論し、それがわが国に適用可能であるかどうかについて検討した。また、イギリスにおける補償裁定額と基礎裁定額の法的性格についての議論し、逸失利益の保障と職の喪失が必ずしも同質ではないのではないかという議論を展開した。ただ、欧州諸国における金銭補償の額の算定に際して、その方法や手続は様々であるにもかかわらず、多くの場合、勤続年数を算定の重要なファクターとしていることなどから、職(収入源)の喪失以外の補償額算定における要素及びそれらに対する法的評価のあり方については、未だ解明されていない点が多いことが改めて明確になり、今後とも本研究において継続的に検討する必要があることを確認した。また、企業の組織変動と解雇の問題に関連して、国内においてもIBM事件判決をはじめ、重要な法的論点を含んだ事例が見られたことから、それらについて議論し、その成果は、下記の本久論文として公表した。企業倒産時の雇用終了については、わが国においては、未だに研究の尽くされていない点が多く、フランスにおける企業倒産時の解雇手続に関して制度及び判例を整理するとともに、わが国における問題点を議論し、その成果として、下記の戸谷論文を公表した。本年度は、研究会を1回開催し、わが国における有期雇用契約に関する厚生労働省の研究会の動向をにらんで、ドイツの有期労働契約の法制に関して研究報告・検討をした。あわせて、欧州連合の改正事業譲渡指令及びイギリスの2006年TUPEが事業譲渡における労働契約及び雇用関係上の権利・責任の譲渡企業から譲受け企業への承継に関し、譲渡企業が倒産手続き下にある場合、どのような処理をしているのかについて検討する報告を行った。さらに、前年度の研究会の打合せに従い、小宮がイギリス、根本がドイツの雇用終了に関する現地調査を実施した。小宮現地調査については、倒産手続下にある企業の解雇について調査を行う必要があったため、当該分野を研究している、協力研究者の戸谷が随行し、ロンドン及びニューカッスルにおいて弁護士や労働組合幹部からの聞き取り調査を行った。また、根本現地調査については、ブレーメン大学、フンボルト大学、ボーフム大学において、聞き取り調査、討論を行った。なお、予定していた本久によるフランス現地調査については、事故のため、実施できなかったので、翌年度に持ち越して実施することとした。今年度の研究を踏まえて、まず子会社従業員に対する親会社の責任に関する問題を中心として企業再編時の労働関係について後記の本久論文を、またいわゆる整理解雇及び経営危機状況下における退職の問題について根本論文を、前記TUPEを中心としたイギリスにおける企業倒産手続下の事業譲渡と労働者の保護について小宮論文を、それぞれ発表した。本年度は、研究会を1回開催し、各国の雇用終了法制の動きおよび特徴について議論し、研究成果報告書のとりまとめについて検討した。今年度当初予定していたフランス現地調査の実施が諸事情により困難となり、代わってドイツ現地調査をより詳細に行うため2011年1月9日から同月13日まで連携研究者である根本がブレーメン大学(ブレーメン)およびルール・ボーフム大学(ノルトライン=ヴェストファーレン州ボーフム)に出向き、両大学付属図書館にて資料収集を行った後、ロルフ・ヴァンク教授およびインゴハム弁護士と面会して、ドイツにおける解雇法を含む雇用終了法制および企業再編について聞き取り調査を行った。また、研究代表者・小宮が本研究に基づいて執筆を進めてきた企業再編をも含めた雇用終了法について、「雇用終了の法理」を出版した。連携研究者である本久は、企業組織再編が問題となったIBM事件に関連して、「会社分割にともなう労働契約承継に際しての分割会社の協議義務の法律構成-日本IBM会社分割事件最高裁判決の検討」を労働法律旬報1732号に掲載した。連携研究者である根本は、我が国の雇用終了法制について「労働法2」を編集し、その中で「労働関係の終了」を執筆した。また、協力研究者である戸谷が本研究に関連して進めてきたフランスにおける企業倒産時の解雇に関する法制について日本労働法学会119回大会において報告を行い、併せて日本労働法学会誌第116号に投稿した。
新たなテトラヒドロビオプテリン合成酵素がヒトにも存在するか

カイコ突然変異体レモンの幼虫の脂肪体に存在する、SPRとは異なるBH_4合成酵素の詳細な検討の結果、本酵素はさらに2種類のカルボニル還元酵素によって、構成されていることが判明した。2種類のカルボニル還元酵素をCR I,CR IIとしたとき、CR IはPPH_4の6位の側鎖に存在する2つのカルボニル基のうち2'位を還元して、6-LPH_4を合成する。CR IIはPPH_4の6位の側鎖に存在する2つのカルボニル基のうち1'位を還元して、2'-OX-PH_4を合成する。両者によって合成されたテトラヒド口プテリンは6位の側鎖に残った1',2'位のカルボニル基をCR I,CR IIが更に還元してBH_4を合成する仕組みであることが明らかとなった。また、本酵素がヒトにも存在しているために、SPR欠損で生まれてきたヒトでもBH_4欠損にならないため、悪性高フェニルアラニン血症(異型フェニルケトン尿症)にならないため、本疾患の患者のスクリーニングにおいてSPR欠損の患者が見つからない原因であることが強く示唆された。すでに我々によって報告されている、セピアプテリン還元酵素(SPR)とは異なる新たなテトラヒドロビオプテリン(BH4)合成酵素の詳細な性質を検討するため、本酵素の精製を行った。精製過程に於いて、DEAE-Sepharose FFによるカラムクロマトグラフィーを行ったところ、本酵素が2種のタンパク質により、構成されていることが判明した。2種のタンパク質は、それぞれにカルボニル還元酵素活性を持っていたので、CRI,CRIIと名ずけた。CRIはBH4合成系の中間体である6-pyruvoyl tetrahydropterin(PPH4)をNADPHの存在下で6-lactoyl tetrahydropterin(6LPH4)に,CRIIはPPH4をNADPHの存在下で1'-hydroxy-2'-oxopropyl tetrahydropterin(2'-OX-PH4)にそれぞれ還元するが、単独ではPPH4をBH4にまで還元する働きを持っていないことが判明した。しかし、CRIとCRIIを混在させてPPH4に作用させるとBH4が合成された。そこで、6LPH4にCRIIを、2'-OX-PH4にCRIをNADPHの存在下でそれぞれ作用させたところ、両者ともBH4が合成された。以上の結果より、すでに報告したSPRとは異なるBH4合成酵素は、2種のカルボニル還元酵素(CRI,CRII)により構成されており、CRIはBH4合成系の中間体であるテトラ型のプテリンの6位の側鎖にそんざいする2'位の炭素のケト基を、CRIIは同じ6位の側鎖の1'位の炭素のケト基をNADPHの存在下で、それぞれ還元する活性を持ち、両者のそれぞれの還元によりBH4が合成される反応系を構成していることが、明らかになった(日本蚕糸学会第68回大会、日本動物学会第69回大会、講演)。すでに我々によって報告されている、セピアプテリン還元酵素(SPR)とは異なる新たなテトラヒドロビオプテリン(BH4)合成酵素の詳細な性質を検討したところ、SPRとは異なるBH4合成酵素は、2種のカルボニル還元酵素(CRI,CRII)により構成されており、CRIはBH4合成系の中間体である6-pyruvoyl-tetrahydropterinの6位の側鎖にそんざいする2'位の炭素のケト基を、CRIIは同じ6位の側鎖の1'位の炭素のケト基をNADPHの存在下で、それぞれ還元する活性を持つこと。また側鎖を還元された2種のテトラヒドロプテリンは、さらにCRI,CRIIにより再び還元されてBH4が合成される反応系を構成していることが明らかとなった。そこで、これら還元反応の詳細を知るために、2種のカルボニル還元酵素のうちの、CRIIの精製を最初に試みた。DEAE-Sepharoseにより、CRIとCRIIを分離した後、Red-Sepharose,Hydroxyl apatite,Sephacryl Columnを用いて、SDS-PADEで2本のバンドを示す精製品を得た。CRIIに相当するバンドをPVDF膜にブロットし、プロテインシークエンサーを用いてアミノ酸シークエンスを解析したところ、N末端より20個のアミノ酸配列を明らかにすることに成功した。
全身性アミロイドーシスの治療後の長期にわたる心機能変化と予後に与える影響の評価

変異トランスサイレチン関連のアミロイドーシス(ATTRV)の心エコーによる経年変化に関する解析を行った。ATTRvに対する治療は、肝移植及びtafamidis投与がある。追跡可能な患者96名を平均追跡期間4.6年で心病変の変化を検討した。平均壁厚>12mmを心病変ありと定義し、平均壁厚>1mm以上の肥厚を心病変の進行あり、平均壁厚ー1mm以下の壁厚減少を退縮と定義。それ以外の変化を不変と定義した。10%の患者で心病変の退縮を認め、49%の患者は不変、41%の患者で心病変の進行を認めた。これらの結果から、治療後も41%の症例で心病変の進行が認められることが明らかとなった。変異トランスサイレチン関連アミロイドーシスに関する経時的変化を明らかとした。肝移植症例とtafamidis単独投与群との経時変化の比較に関する研究成果を2019年AHA Scientific Sessionに投稿予定である。また、原発性アミロイドーシスの治療後の予後、ストレインイメージによる心アミロイドーシスの心機能障害機序に関する考察を上記学会へ投稿予定である。変異トランスサイレチン関連アミロイドーシスに関する経時的変化を肝移植症例とtafamidis単独投与群とで比較し、研究成果を2019年AHA Scientific Sessionに投稿予定である。また、原発性アミロイドーシスの治療後の予後に関しては、心病変の進行が停止ないしは退縮する症例で良好な予後を示すことが示唆され、これらを統計学的に正しいかを検証し成果を公表予定である。また、ストレインイメージによる心筋の変形パターンを解析し、心アミロイドーシスの心機能障害機序に関する考察を上記学会へ投稿予定である。原発性アミロイドーシス患者の予後予測因子を検討し、心エコー指標や、安静時心拍数が予後予測に有用であることを明らかにした。原発性アミロイドーシスの治療後の心機能変化を明らかにするため、長期的な心エコー指標の変化を検討した。病変が進行する症例がある一方で、心病変が退縮する症例もあることを明らかにした。人心房利尿ホルモンとBNPの組み合わせで、心機能を予測することができることを明らかにした。これらのデータは以下のように2017年American Heart Associationの年次学術集会で発表を行った。解析対象となるデータはすでに相当数蓄積されており、主に心臓超音波画像の解析を行っている。経過観察は現在進行中で、年間約160名の心エコーデータを記録している。原発性アミロイドーシスの心エコーによる予後予測因子に関する研究、BNPに加えてhANPを測定することで、心機能の予測が可能であることの研究、原発性アミロイドーシスの長期フォローアップ研究で、心病変が進行するグループと、不変であるグループ、心病変が退縮するグループのそれぞれの比率を明らかにした研究など、3演題が2017年American Heart Association Scientific Sessionで採択され、米国で発表を行った。家族性アミロイドーシスの長期予後、肝臓移植後の心機能変化などの詳細な研究は知られていない。これらを明らかにするため、主に心エコーを用い経時的に解析を行う。心エコーデータは、研究を推進する上で十分な数を蓄積している。老人性アミロイドーシスの標的臓器は心臓であるが、心病変がどのくらいの速度で進行するかは知られていない。現在まで蓄積したデータを経時的に解析し、心病変の進行がどの程度の速さで生じるかを主に心エコーデータを解析することで、明らかにしてゆく。ドミノ肝移植が行われたが、移植後心病変の発症の有無、どのくらいで病変が生じてくるかは、明らかにされていない。現在まで蓄積されたデータを解析することで、ドミノ肝移植の心機能に与える影響を明らかにしてゆく。

予定していた学会への出席がいくつかキャンセルとなったため、次年度使用額を生じた。次年度使用額は、平成30年度請求額と合わせて学会出席旅費、画像記録媒体の購入、統計計算ソフト購入などに充てる予定である。予定していた学会への出席がキャンセルとなったため、次年度使用額を生じた。次年度使用額は、平成31年度請求額と合わせて学会出席旅費、画像記録媒体の購入、統計計算ソフト購入などに充てる予定である。
細胞極性喪失と癌細胞除去機構エントーシスにおけるオートファジーの役割の解明

細胞極性を喪失した腫瘍細胞とその周囲の正常細胞による腫瘍原生細胞の認識並び排除機構であるエントーシスをin vivoとin vitroで評価した。肝癌細胞とp62欠損肝癌細胞を作成し、両細胞を用いエントーシスを観察した。結果、培養2日目からp62欠損肝癌細胞が肝癌細胞を貪食し、またp62欠損細胞が取り囲むように遊走し肝癌細胞の分裂・増殖を抑制する事が観察された。オートファジー機能障害はp62の過剰蓄積を介して肝細胞増殖を促進させ腫瘍化を誘導すると報告してきた。しかし増殖能を獲得した細胞が癌腫形成に至るまでの各段階にオートファジーがどのように関与するのかは不明な点が多い。そこで本研究では腫瘍化細胞の次のステップである細胞極性喪失とそれに引き続いて生じる周囲正常細胞による腫瘍原生細胞認識並びに排除機構であるエントーシスにリソソームやオートファジーがどのように関与するのかを明らかとし、腫瘍化細胞の生体内環境適応を標的とした新規治療的アプローチについて模索する。昨年度、肝細胞株と肝癌細胞株を単独にcell Trackerを用い染色後、細胞をシート化した共培養にてエントーシスがどのように生じるかを共焦点蛍光顕微鏡で評価したが、蛍光色素の染色が十分でなく、肝細胞においてエントーシスが生じているのか評価困難であった。染色による細胞障害がエントーシスの評価を困難にしているため、蛍光色素を恒常的に形質導入した肝細胞株と肝癌細胞株を作製し、共培養てにエントーシスがどのように生じるかを共焦点蛍光顕微鏡で評価することとした。また、p62欠失肝癌細胞においてエントーシスによる除去が回避されるのかを検討するためにp62欠失肝癌細胞株を用い同様に蛍光色素を形質導入させエントーシスが障害されるのかを共培養にて評価することとした。これら細胞の作製と並行して、カテプシン発現変化が細胞極性に与える影響について調べるために肝癌細胞株にカテプシン発現プラスミドを導入し、カテプシン過剰発現後の細胞極性関連蛋白の発現と局在の変化をウエスタンブロット法と免疫染色によって評価するためのカテプシンLやTFEBの発現Vectorを作製した。今年度はこれらを用い実験を進めていく。エントーシスを観察するため、JHH5細胞からオートファジー関連タンパクであるp62をノックアウトした細胞を作製した後、JHH5細胞にGFPをJHH5p62KO細胞にmcherryを恒常的に形質導入した細胞を作製しエントーシスを検討した。作製後、12wellにJHH5 GFP細胞とJHH5p62KO mcherry細胞を5×104 cellずつMIXし培養した後、24時間後より培養室内に設置されているIncCyteTM ZOOMを用い2時間おきに細胞を撮影し観察した。結果、培養開始day2day4後からJHH5p62KOmcherry細胞がJHH5 GFP細胞をcell in cellのように貪食していることが観察された。また、JHH5 GFP細胞をJHH5p62KOmcherry細胞が遊走し取り囲み、その後貪食する事も観察された。細胞極性蛋白であるpar familyや癌細胞の増殖・浸潤の調節を行うプロテインキナーゼのαPKCの評価をJHH5細胞とJHH5p62KO細胞を用いウエスタンブロットにて評価した。JHH5細胞とJHH5p62KO細胞を用い比較するとαPKCではJHH5p62KO細胞で発現の低下を認めた。αPKCとキナーゼドメインで結合する細胞極性蛋白であるPar3でも発現は低下していた。27年度は細胞極性喪失した腫瘍細胞と周囲正常細胞による腫瘍原生細胞認識並びに排除機構であるエントーシスのin vivo・in vitroでの解析を検討した。Huh1細胞とJHH5細胞を用いgenograftを施行。JHH5 WT GPFとJHH5 p62KO cherryを5000個ずつMIXさせたものをヌードマウスの右葉に移植し、2か月後に観察したが肝臓内に腫瘍化せずエントーシスは認めなかった。しかし、THLE2細胞GFPとJHH5細胞mcherryを観察前にどの程度オートファジー関連タンパクであるp62が存在するかをウエスタンブロットにて評価したところ、THLE2細胞においても肝癌細胞株であるJHH5細胞と同程度の強発現を認めた。このことからp62が強発現しているTHLE2細胞を用いオートファジーを介したエントーシスを評価することは不適格と考えた。その後p62ノックアウト細胞の作製やエントーシス観察のため癌細胞に蛍光色素を形質導入した細胞の作製に時間がかかった。肝臓今後、細胞内の細胞極性蛋白とオートファジー関連タンパクの関与を蛍光染色にて評価し、またTet-On発現誘導システムを用いgenograft腫瘍化細胞にての生体内環境適応を標的とした新規治療的アプローチについて模索する。まずエントーシスを検討するため肝細胞株と肝癌細胞株を用い、肝細胞に対してはCell Tracker Greenを肝癌細胞株に対してはCell Tracker Redを用い染色し共焦点蛍光顕微鏡にて観察した。

しかし、蛍光色素で染色した肝癌細胞株が十分にシート化せず、濃度調節を繰り返したが十分に染色やシート化せずエントーシスの評価検討が困難であった。このため、レトロウルスを用いた恒常的肝細胞株と肝癌細胞株に対しGreenとRedの蛍光色素を用い形質導入細胞株の作製を行った。Greenの形質導入細胞株の作製は完了したが、Redを形質導入株の作製に時間を擁した。現在GreenとRedの蛍光色素を形質導入した細胞株の作製が終了しており、タンパク発現などに問題ないことを評価した後エントーシスの評価を行う。細胞作製が遅れたため、p62ノックアウト細胞にTet-On発現誘導システムの作製が遅れているため。肝癌細胞株にRedの形質導入細胞の作製が終了し、タンパク発現などの評価を行っており、今後肝細胞にGreenを形質導入した細胞株と肝癌細胞にRedを形質導入した細胞株を用いてエントーシスの評価をしていく。また、カテプシン過剰モデルを作製するためのVectorも作製中は完了しており、これを用いて今後カテプシン過剰発現をさせた細胞を用いて細胞極性関連蛋白PAR3,6などの発現や局在の変化をウエスタンブロット法と免疫染色によって評価していく。Tet-On発現誘導システム導入細胞作成後、genograftを行うためのヌードマウス購入に使用。エントーシス評価による形質導入細胞株の作製に時間がかかってしまったため、25年度に行うはずであった細胞極性関連蛋白PAR3,6の抗体やPAR1などのVectorなどの購入を次年度にまわすこととなった。現在細胞極性関連蛋白PAR3,6の抗体やPAR1などのVectorなどの購入し、またメタボローム解析をするための試薬などの購入を予定している。
結晶AlGaAsの反射膜としての高反射率性能、及び、光学損失性能を評価するために必要な鏡基材のレーザー波長別吸収量評価実験、及び吸収量解析を行った。結果、準備される基材のメーカーやそのメーカーの製造条件により、予期しなかった吸収量のばらつきが見られたため、予定より多くの鏡基材サンプルを収集した上で評価実験、解析を再度行う必要が生じ、シリコン基板の性能調査を継続した。新規に、波長1.5μmで、周波数が高速調整可能なファイバーレーザー、アイソレーター、偏向素子、全反射鏡、レンズ、それらのホルダーや微調位置調整機器、EOM、AOMを用意し、二枚の鏡によってFabry-Perot共振器を形成し、その反射率特性、ロス測定の計測系を構築した。光共振器の共振制御は、Pound-Drever-Hallで行い、AOMによる1次光遮断によるFP共振器透過光の光量減衰の時定数の測定から求まるフィネスから反射率を計算するシステムを構築した。強度変調伝達関数測定では、AOMを用いて行いてFabry-Perot共振器への光強度に変調をかけ、前後の光強度の伝達関数を計測し、その1次ローパスフィルター特性からフィネスを推定し、同様に反射率を求める系となっている。透過率の測定系として、入射前後のレーザー光量の比較の他にその比較をkHz帯域の強度変調成分の比較によっても行い、精度を確認する系を構築した。反射率や損失の測定は、面内の一カ所ではなく、FP共振器を構成する平面側の鏡を上下左右にスライドさせる系も構築した。鏡基材サンプル収集、レーザー波長別吸収量評価実験、吸収量解析、レーザー光源と鏡基材の準備を行い、平成30年3月までに、実験を行う予定であった。平成29年11月、シリコン鏡基材のレーザー波長別吸収量評価実験、及び吸収量解析の結果、準備されるシリコン基材のメーカーやそのメーカーの製造条件により、予期しなかった吸収量のばらつきが見られたため、予定より多くの鏡基材サンプルを収集した上で評価実験、解析を再度行う必要が生じた。その他の実験準備については、研究実績の概要のようにおおむね予定通り進行している。鏡基材の性能評価実験を継続し、結晶AlGaAsの反射膜としての高反射率性能、及び、光学損失性能が確保できる基材の性能調査を継続する。調査後、選定された基材を利用した鏡基材の研磨を行う。目標とする局所的表面粗さは1Å以下(目標0.5Å)、表面形状は理想平面・曲面に対しλ/50以下(目標λ/100)とする。表面形状を計測するためのZYGO装置や探針接触型表面形状測定装置は、国立天文台の共同利用申請を行うことにより使用可能なので、それを利用する。表面性能が確認された後、AlGaAsコート前の表面の光散乱量の測定を、積分球を用いて行う。一方コートするAlGaAsの機械的損失測定は、大口径ウェハ型シリコン基材(1mm厚)のコート前後でのウェハの機械的Q値(損失値φの逆数)の比較から導く手段により行う。そのためのウェハ支持機構、ウェハ共振振動励起及び振動検出装置、及びそれらを格納する真空タンク一式は東大宇宙線研に既にあるため、それを利用する。
調査後、選定された基材を利用した鏡基材の研磨を行う。目標とする局所的表面粗さは1Å以下(目標0.5Å)、表面形状は理想平面・曲面に対しλ/50以下(目標λ/100)とする。表面形状を計測するためのZYGO装置や探針接触型表面形状測定装置は、国立天文台の共同利用申請を行うことにより使用可能なので、それを利用する。表面性能が確認された後、AlGaAsコート前の表面の光散乱量の測定を、積分球を用いて行う。一方コートするAlGaAsの機械的損失測定は、大口径ウェハ型シリコン基材(1mm厚)のコート前後でのウェハの機械的Q値(損失値φの逆数)の比較から導く手段により行う。そのためのウェハ支持機構、ウェハ共振振動励起及び振動検出装置、及びそれらを格納する真空タンク一式は東大宇宙線研に既にあるため、それを利用する。
低分子量G蛋白質Rhoの活性化因子KIAA380の神経突起退縮における機能解析

RhoファミリーはRho, Rac, Cdc42などからなり、がん遺伝子産物Rasと類似の蛋白質群である。これらの蛋白質は他の蛋白質とも協調しながら細胞の運動・接着の制御、分裂などの多彩な細胞現象を制御しており、Rho依存的シグナル経路の解明は種々の細胞現象の分子基盤の解明に必須と考えられる。神経細胞でのRho活性化の分子機序は従来不明であった。そこで、神経細胞でRhoが如何にして活性調節されているかの一端を解明した。私たちは世界に先駆けて、特定の細胞内蛋白質のリン酸化状態をin Vitroおよびin vivoでモニターすることが可能な抗リン酸化ペプチド抗体の作製法を開発していたが、その技術を応用してKIAA380がRho特異的活性化因子であることを同定した。さらに、神経系培養細胞におけるリゾフォスファチジン酸依存性神経突起退縮では、KIAA380によるRhoの活性化が駆動力になっていることを明らかにした。また、ドメイン解析によりKIAA380のDH/PH領域のC末側近傍に存在するプロリン・リッチ領域がKIAA380依存性形態変化に重要な役割を果たすことを見出した。私たちはさらに本研究を発展させている。すなわち、がん細胞の増殖と転移、血管新生との関連が報告されている細胞膜受容体PlexinとKIAA380が相互作用することと、Plexin受容体刺激により細胞内のRhoが活性化されることを見出している。また、この場合のRho活性化にはRacの活性も必要であることを見出している。我々は、RhoキナーゼのN末端に中間径フィラメント蛋白質ビメンチンのヘッド領域(VH)を付加したキメラ蛋白質と、VHのSer71のリン酸化を特異的に認識する抗リン酸化ペプチド抗体を用いて、Rhoキナーゼ活性をin vivoで検出するシステムを考案した。このシステムを用いてRho/Rhoキナーゼシグナル伝達系の活性化因子の同定を試み、神経系に強く発現するKIAA0380がRho特異的GDP/GTP交換因子(RhoGEF)であることを見出した。線維芽細胞を用いた強制発現実験でKIAA0380のDH/PH断片は細胞質中に分布し、ストレスファイバーの形成を誘導した。一方、DH/PHとそのC端側に存在するプロリンに富む領域を含む蛋白質断片は細胞膜の直下に局在し、cortical actinの再構築と細胞の球状化を惹起した。従って、Rhoの活性化に伴うアクチン再構成と形態変化が、RhoGEFの細胞内局在により制御される可能性が示された。さらに神経細胞Neuro2aにおいて、KIAA0380のN末端フラグメントを強制発現させたところ、リゾフォスファチジン酸(LPA)依存性の神経突起退縮が抑制された。従って、KIAA0380がLPA-G_<12/13>-Rho依存性の神経突起退縮を制御する可能性が示された。私たちは世界に先駆けて、特定の細胞内蛋白質のリン酸化状態をin vitroおよびin vivoでモニターすることが可能な抗リン酸化ペプチド抗体の作製法を開発していたが、その技術を応用してKIAA380がRho特異的活性化因子であることを同定した。

また、ドメイン解析によりKIAA380のDH/PH領域のC末側近傍に存在するプロリン・リッチ領域がKIAA380依存性形態変化に重要な役割を果たすことを見出した。私たちはさらに本研究を発展させている。すなわち、がん細胞の増殖と転移、血管新生との関連が報告されている細胞膜受容体PlexinとKIAA380が相互作用することと、Plexin受容体刺激により細胞内のRhoが活性化されることを見出している。また、この場合のRho活性化にはRacの活性も必要であることを見出している。
大脳性平衡機能検査確立を目指した複数非侵襲的脳機能検査統合システム構築

めまいや動揺病は、前庭覚・視覚・体性感覚の3つの感覚入力が、過去の経験に基づく予測入力パターンとの不一致(感覚混乱)した際に認知されると考えられている。今回、動的体平衡検査装置にて直立姿勢保持中に生じた感覚混乱による大脳皮質活動の変化を機能的近赤外線分光法(fNIRS)を用いて計測した。前庭覚に対して視覚および体性感覚入力が混乱する条件ではシルビウス裂周囲の脳領域と補足運動野が賦活化された。fNIRSで特定された大脳皮質領域間の機能的結合よりシルビウス裂周囲の脳領域と服属運動前野では感覚混乱の検出と直立保持に必要な感覚入力の寄与度の再調整がおこわなれている可能性が示唆された。本研究は、非侵襲的な脳機能検査法である機能的近赤外線分光法(NIRS)と脳波(EEG)の両者を同時に記録する独自のNIRS-EEG検査システムの構築し、被験者(健常成人ならびに一側性末梢性前庭障害患者)において各種前庭刺激に対する前庭皮質関連領域を解析し、大脳性平衡機能に臨床応用可能な検査手技ならびに解析方法を確立することを目的とする。平成26年度では、NIRS-EEG検査システムの構築を目指して、記録・解析系検査システム構築として、全頭型NIRS検査装置(NIRSSTATION島津製作所)によるNIRS検査のデータ解析において、fMRIで標準的に用いられる脳機能画像解析ソフト(Statistical Parameter Mapping(SPM))のNIRS解析プログラム(NIRS-SPM)を導入した。その結果、従来のNIRS解析では個人の脳機能画像を比較することしかできなかったが、多人数の画像を統計的に解析することが可能となった。また、記録から解析終了までのオフライン処理が短時間に完了することを目指した処理ソフト(アプライド株式会社)を試作して、実際のデータ解析に使用した。一方、EEGについては、NIRSに比べて検査機器によるノイズの影響が大きいため、本年度はシステムの確立のためのノイズ対策を行った。刺激系検査システム構築として、前庭刺激では、動的体平衡機能検査法(Equitest Neurocom)を新たな前庭刺激法として導入した。Equitestは、重心動揺と連動して前景板や床面を傾斜させることで前庭覚と視覚や体性感覚の間に感覚混乱を引き起こした場合の立体姿勢を評価するバランステストである。ノイズ対策を行い、立位条件下で初めて全頭型NIRS検査装置による脳機能評価が可能となった。本研究では、大脳性平衡機能に臨床応用可能な検査法と解析方法の確立を目指している。まず本年度の成果として、NIRS-EEG検査システム構築としての専用の実験室を新設した。実験室は2室に分かれ、NIRS-EEG検査システムと前庭刺激として動的体平衡機能検査法であるEqui-Testシステムを常設する検査室と解析用コンピュータや移動可能な前庭刺激装置(温度刺激検査、視運動性眼振検査、強大音刺激装置)を保管する解析室から構成される。検査室は、S/N比のよいEEG記録ができるように建築時にノイズ対策を十分施した。隣接する保管室から移動により複数の前庭刺激を同時に効率よく行うことを可能とした。研究成果しては、健常被検者においてEqui-Testシステムのうち、閉眼による視覚の遮断や、重心動揺と直接連動した前景板・床面の回転などの視覚や体性感覚への外乱を組み合わせて6つの感覚条件を生じさせることが可能なSensory Organizing Testを用いて、6種類の立位条件負荷時の大脳皮質血流量変化をfMRIで用いられるNIRS-SPMを用いて評価を行った。さらに、新たな解析法として、NIRS-SPMで特定された大脳皮質領域間の機能的結合を相互相関解析法で解析した。その結果の1部は、第14回姿勢と歩行研究会などで発表するとともに、Frontier Human Neuroscience誌に掲載された。現在まで、解析系・記録系検査システム構築では、1試作したデータ処理ソフトによるオフライン処理の迅速化、2NIRS-SPMによる多人数の脳機能画像の統計学的処理法の確立、3NIRS-EEG検査システム専用の実験室の新設、4大脳皮質領域間の機能的結合の解析法の確立が完了した。一方、刺激系検査システム構築では、1NIRS-EEG検査システム実験室内のEqui-Testシステムの常設、2隣接する前庭刺激装置の保管室の新設を行った。脳機能画像の新たな統計学的解析手法の導入、多彩な前庭刺激方法の効率的な運用はいずれも大脳性平衡機能検査の確立に必要である。そのため、現在までの段階はおおむね順調に進展していると自己評価した。まず本年度の成果として、病棟や一般外来でも利用可能な可動型のNIRS-EEGシステムの構築を行うため、ポータブル光脳機能イメージング装置であるLightnirs(ライトニルス)による記録を試行した。試用したライトニルスは253mmx68mmx222mmのサイズであり、重量は1600gと軽量であった。前庭刺激としては回転刺激を用いた。専用のキャリーバック内にライトニルスを入れて、回転刺激装置の一部に固定することで、左右回転刺激(加速減速3degree/sec/secを各20秒間、等回転速度60degree/secを100sec)中の脳血流を安定して記録することができた。

健康成人18名に対して両側側頭頭頂接合部(Temporo-Parietal Junction: TPJ)を中心に脳血流16チャンネル、皮膚血流2チャンネルから記録した。得られたデータは無線通信で解析用パソコンに転送され、オンラインで解析を行われた。左右方向と加速減速の計4刺激条件に対して有意に賦活化したTPJ領域をNIRS-SPMを用いて解析した。これらの研究成果の一部は、第29回バラニー学会(国際学会)、第75回日本めまい平衡医学会などで報告した。本年度の研究成果により、小サイズ・軽量化されたライトニルスを用いることは、専用の検査室内に限定されていた検査環境を大きく変化させ、日常のめまい診療に応用することが可能となると思われた。めまいや動揺病は、前庭覚・視覚・体性感覚の3つの感覚入力が、過去の経験に基づく予測入力パターンとの不一致(感覚混乱)した際に認知されると考えられている。今回、動的体平衡検査装置にて直立姿勢保持中に生じた感覚混乱による大脳皮質活動の変化を機能的近赤外線分光法(fNIRS)を用いて計測した。前庭覚に対して視覚および体性感覚入力が混乱する条件ではシルビウス裂周囲の脳領域と補足運動野が賦活化された。fNIRSで特定された大脳皮質領域間の機能的結合よりシルビウス裂周囲の脳領域と服属運動前野では感覚混乱の検出と直立保持に必要な感覚入力の寄与度の再調整がおこわなれている可能性が示唆された。本研究では、非侵襲的な脳機能検査法であるNIRSとEEGの両者を同時に記録する独自のNIRS-EEG検査システムを構築し、被験者(健常成人ならびに一側性末梢性前庭機能障害患者)において各種前庭刺激に対する前庭皮質関連領域を解析し、大脳性平衡機能に臨床応用可能な検査手技ならびに解析方法の確立を目指している。平成26年度の研究では、解析系・記録系検査システム構築として1試作したデータ処理ソフトによるオフライン処理の迅速化、2NIRS-SPMによる多人数の脳機能画像の統計学的処理が完了した。一方、刺激系検査システム構築として、動的体平衡機能検査装置であるEquiTestを導入して、立位での前庭刺激による前庭皮質関連領域の解析を初めて可能とした。その結果、NIRS-EEG検査システムにおける解析時間の短縮、脳機能画像の統計学的解析手法を確立することができた。さらに、従来の仰臥位、坐位に加え立位での前庭刺激方法の導入に成功した。これらはいずれも臨床応用可能なNIRS-EEG検査システムを構築に必要である。そのため、現在までの段階はおおむね順調に進展していると自己評価した。本年度では、NIRS検査において、立位での前庭刺激に応答する大脳前庭皮質関連領域の領域間の機能的結合についても検討を行った。次年度以降では、ノイズ対策が十分に施された検査室でEEG同時記録を行い、健常人ならびにめまい・平衡障害患者を対象にした仰臥位、坐位での前庭刺激(温度刺激、強大音刺激、視運動性刺激)により、ヒトにおいては未だ明かではない前庭皮質関連領域の局在とその意義を明らかにする。耳鼻咽喉科平成26年度の研究では、記録・解析系検査システムとして、全頭型NIRS-EEG検査システムを構築検査装置を活用した動的体平衡機能検査装置による立位での前庭刺激に対する前庭皮質関連領域の検討をNIRSを用いて実施した。
弥生時代武器の集成的研究

日本列島各地の弥生時代遺跡から出土した石製・銅製・鉄製の武器の資料を、約50箇所の主要遺跡について基礎データを集成し、使用された武器の組成(とくに飛翔武器と衝撃武器との比率)の傾向を、地域ごとに明らかにすることができた。また、同じデータから、武器の金属化の過程についても、地域ごとに詳しく確認することができた。その結果、武器の組成と金属化については、九州地方北部とそれ以外の地域で差異があり、前者の地域では衝撃武器の比率が高く、金属化が早いことが具体的に判明した。次に、武器を出土した集落遺跡の立地・規模・内容・継続期間等についてのデータを整理し、そのセトルメントパターンを分析する作業、ならびに墓群における武器副葬墓の比率や副葬内容を検討する作業を通じて、九州地方北部では武器の出現・発達期に併行して集団間および集団内の階層化が、その他の地域に比べて著しく進むことが判明した。この分析結果に、人類学による未開社会の武力抗争の研究成果を考え合わせることによって、九州地方北部とその他の地域における集団間の武力抗争には質的差異があり、前者のそれは、集団内外の階層化を助長し、階級関係や政治権力の形成過程に対して正の要因として働く性質を強く持つものと判断できた。また、弥生時代の武器の種類の時期的な変化をあとづける作業により、時期を追って武器自体の階層化が進むこと、および政治的威信財としての機能をもつ非実用的な武器群が発達してくる過程が明らかとなり、かかる特徴が、古墳時代の武器体系にじかにつながっていく状況を読みとることができた。
空間符号モアレマッチング法によるマルチスケールゲノム情報解析

空間符号化法を用いた配列比較技術に対して,符号化法の改良や専用視覚化端末の開発を通し,全ゲノム配列比較への拡張手法に関する種々の検討を行った.また,これらの手法を各種大腸菌の全ゲノムやヒト染色体などの実配列に適用し,その有効性を評価した.その結果,以下に示す成果を得た.1.単一ディスプレイ上でマッチング処理を実行するためのソフトウェアを開発し,これまでに考案した種々の符号化法を実装した.さらに,符号化画像の更新や選択配列部位の切り出しなどの様々な機能を付加させることにより,専用視覚端末の利便性を向上させた.2.長大な2配列間のマッチング結果を同時に提示するため,対象配列を一定の長さを有する部分配列に分割し,部分配列内の各塩基要素を符号パターンに反映させる出現頻度符号化法を考案した.この符号化法を用いることで,数10万塩基長に及ぶ2配列間のマッチング結果を同時に表示できることを確認した.3.出現頻度符号化法により得られる出力結果から,配列間の部分一致性や欠失・挿入だけでなく,配列内の塩基組成分布に関する様々な情報を抽出できることを新たに見出した.さらに,出現頻度符号の配色を工夫することで,DNA配列解析において重要であるGC含有量を出力結果から直感的に把握できることを実験的に確認した.4.出現頻度符号化法、およびその部分配列長の可変機能を専用端末上に実装し,微視レベルから巨視レベルまでのマルチスケールな配列比較を統合して扱える環境を構築した.この符号化法を用いて,大腸菌K-12株と病原性大腸菌O-157:H7株を比較し,全ゲノム配列から部分一致性を抽出することに成功した.空間符号化法を用いた配列比較技術に対して,符号化法の改良や専用視覚化端末の開発を通し,全ゲノム配列比較への拡張手法に関する種々の検討を行った.また,これらの手法を各種大腸菌の全ゲノムやヒト染色体などの実配列に適用し,その有効性を評価した.その結果,以下に示す成果を得た.1.単一ディスプレイ上でマッチング処理を実行するためのソフトウェアを開発し,これまでに考案した種々の符号化法を実装した.さらに,符号化画像の更新や選択配列部位の切り出しなどの様々な機能を付加させることにより,専用視覚端末の利便性を向上させた.2.長大な2配列間のマッチング結果を同時に提示するため,対象配列を一定の長さを有する部分配列に分割し,部分配列内の各塩基要素を符号パターンに反映させる出現頻度符号化法を考案した.この符号化法を用いることで,数10万塩基長に及ぶ2配列間のマッチング結果を同時に表示できることを確認した.3.出現頻度符号化法により得られる出力結果から,配列間の部分一致性や欠失・挿入だけでなく,配列内の塩基組成分布に関する様々な情報を抽出できることを新たに見出した.さらに,出現頻度符号の配色を工夫することで,DNA配列解析において重要であるGC含有量を出力結果から直感的に把握できることを実験的に確認した.4.出現頻度符号化法、およびその部分配列長の可変機能を専用端末上に実装し,微視レベルから巨視レベルまでのマルチスケールな配列比較を統合して扱える環境を構築した.この符号化法を用いて,大腸菌K-12株と病原性大腸菌O-157:H7株を比較し,全ゲノム配列から部分一致性を抽出することに成功した.
古アイスランド語における所有表現の研究

古アイスランド語の所有表現について、中世アイスランドで散文で書かれた「アイスランド人のサガ」と呼ばれる文献を対象として調査した。特に身体名称とその持ち主が同一文中に現れる構造に注目し、(1)所有の与格、(2)前置詞による所有表現、(3)所有関係を表わす動詞、の用例を中心に収集して分析した。その上で、現代アイスランド語の所有表現との対照を行ない、取り上げた表現の大まかな歴史的変遷を考察した。本年度の研究実績として,「研究発表」欄に挙げた雑誌論文一篇の内容について以下に要約しておく。本年度は,古アイスランド語の所有表現のうち,h〓ggva〓h〓fu〓honum `hew in head:ACChim:DAT'「彼の頭に斬りつける」といった例のように,前置詞の目的語である名詞句の修飾成分として所有者を表す与格名詞句が現れるものを中心に研究した。データとして,中世アイスランドで書かれた「エギルのサガ」「ニャールのサガ」「グレッティルのサガ」の3作品から用例を収集して検討した。問題となる表現の「動詞+前置詞+名詞句+与格名詞句」という構成要素について,調査で明らかになったことは,次の点に要約される:(1)前置詞の目的語については,(a)主に身体名称や物の部分を表わす普通名詞が現れ,(b)接尾辞定冠詞がつくのは稀であり,(c)修飾成分が現われる場合は「右」「左」などの限定の表現に限られる。(2)与格名詞句については,(a)代名詞や固有名詞(人名)が多く,(b)形態的・意味的に「定」であり,c修飾成分としては属格名詞の例しかなく,(d)意味的に有生性の高いものが多いが,そうでない例もある。(3)前置詞については,動作の向かう方向や起点を表わすものが多い。上記の表現の前置詞の目的語の位置に現れる名詞句の種類については特に詳しく検討し,先行研究では単に身体名称・衣類を表す名詞であるとされていたが,本研究では,どのような身体名称が高頻度で現れるかを示すリストを作った。そして,「衣類」の例が実際には極めて少ないことを指摘し,一方で,物(無生物)の部分を表す名詞が現れる場合があることを,実例を挙げて示した。本年度は、前年度からの継続で古アイスランド語の文献収集を行ない、言語データの収集と分析を進めた。また、所有に関する一般言語学的な研究書の購入も行ない、研究動向の調査を進めた。8月下旬から9月上旬にかけては、アイスランドで現地調査を行なった。古アイスランド語テキストの調査においては、所有者を表わす前置詞句を中心に分析を進めた。その結果、例えばrista a honum kvio-inn 'cut on him:DAT belly-the:ACC'「彼の腹を切り裂く」のように、動作の対象となる身体名称の前にその所有者を表わす前置詞句が現れる例が多いのに対し、lemja sundr hvert beini honum'beat asunder each bone:ACC in him:DAT'「彼の骨をことごとく折る」という例のように、身体名称の後に前置詞が置かれる例は極めて少ないことがわかった。現代アイスランド語では後者の表現も頻繁に使われ、この点で傾向が異なるということが指摘できる。なお、アイスランド滞在中の9月2日に、アイスランド大学において'Transitivity in Modern Icelandic -st Reciprocal Verbs'と題する研究発表を行なった。これはアイスランド語の特定の接尾辞をもつ一連の相互動詞において、それぞれの動詞の意味特徴と構文的特徴の違いに相関があり、そこに他動性の高低が反映されているということを論じたものである。今年度は、本計画課題の最終年度にあたり、設備備品の整備の面では、前年度までに購入ができなかったアイスランド語関連文献のほか、所有に関する一般言語学的な研究書の購入を中心に行ない、研究面では、前年度までに扱えなかった課題に中心的に取り組んだ。研究面について具体的に述べると、身体名称や身につける物が文中で所有者との関係においてどのような標示を受けるかという問題と、eiga「所有する」,hafa「もつ」といった動詞がどのような種類の目的語をとるかといった、所有関係を表わす動詞述語の問題を中心に扱った。前者については、身体名称と、剣など身に帯びている物を比べた場合、身体名称の方が何らかの形で所有者の標示を伴うことが多く、また、特に身体名称が前置詞句内に現れた場合は、所有者を与格で表わすことが非常に多くなるといった点で、身体名称が一般的な所有物と異なる傾向を示すことが判明した。後者については、動詞eigaは親族関係を表わす他、財産や人材など、持ち主がその所有に責任を負うようなものについての所有関係を表わし、動詞hafaは所有物の一時的な保持に焦点をおいた表現であることを確認した。後者に関連して、現代アイスランド語で発達している前置詞を用いた所有表現(vera me〓'be with
ルール付き遺伝的ネットワークプログラミングのアーキテクチャの研究

動的環境では、確率的な要素が多く存在するために、よく学習したエージェントも新しい環境では性能が悪化する可能性がある。なぜなら、学習したエージェントの構造は学習した環境だけに適応しているからである.複雑の動的環境に対応するためにエージェントが十分な知識を取得する必要がある。GNPルートとは、エージェントがGNP個体に通過する経路であり、通過するすべてのノードと接続先を含める。前の研究で遺伝的ネットワークプログラミング(GNP)のアーキテクチャーを強めるためにルール付GNPというGNPのためのメモリスキームを提案しています。メモリはエージェントが利用した接続をルールプールに保存し個体の適合度を用いてルールを評価します。遺伝的操作を行う前に、適合度の低い個体がGNPルールを用いて作った新しい個体で置き替えます。現在、私はGNPのために新しいメモリスキームを提案しています。提案手法では接続の代わりにいい解をメモリに保存します。いい解はノードと接続の遷移で表見し、エージェントをガイドするための連続した判定と行動と考えられます。これは一つの行動や判定の接続を連続した行動と判定に拡張します。遺伝的操作を行う前に、適度の低い個体を置き換えせず適度の低い個体の遺伝情報をメモリに保存した情報に基づき改善します。
虚血性脳障害に関与する神経回路網とニューロン・グリア相関の機序についての研究

1. fura-2でラベルした日齢7-14のラット大脳皮質スライス錐体細胞からの[Ca^<2+>]_iの光学測定をおこない、スライスを無酸素無グルコース(インビトロ虚血)人工脳脊髄液で灌流したときの[Ca^<2+>]_iの変化を大脳皮質各層で同時記録した。[Ca^<2+>]_i上昇はII/III層で最も著しく、これにはNMDAレセプターが関与していた。また、本来抑制性のGABA作用がむしろ[Ca^<2+>]_i上昇に作用していることが明らかになった。Cl^-輸送体機能を抑制した神経回路でもGABA作用が抑制から興奮に転じNMDA受容体を介した[Ca^<2+>]_i上昇を誘発することから、脳虚血時にもCl^-濃度勾配の低下により同様の病態が起こっている可能性が示唆された。2.脳虚血時のCl^-輸送体の機能変化による[Cl^-]_i変化とそれに伴うGABA作用をみる目的で、Cl^-感受性蛍光指示薬のMEQ(6-methoxy-N-ethylquinolinium iodide)を用いた光学的測定法により、脳スライスの神経細胞[Cl^-]_i変化を直接的に多点で同時に観察できる方法を開発した。この方法を用いて神経細胞[Cl^-]_iを大脳皮質各層で同時測定し、インビトロ虚血状態で実際に[Cl^-]_iの上昇が起こっていることを明らかにした。このことから脳虚血時にE_<Cl>の脱分極側へのシフトが起こりGABA作用が抑制から興奮に転じる可能性が示唆された。また、インビトロ虚血による[Cl^-]_i変化は2相性であり、Cl^-流入に先立つCl^-流出には、Na^+,K^+-2Cl^-トランスポーターの抑制が関与していた。3.ニューロン・グリア共培養を用いて、ミトコンドリア毒素の3-NPA(3-nitropropionic acid)による化学的虚血の実験を行い、fura-2によるニューロン及びグリア細胞内Ca^<2+>濃度の同時測定を行った。アストロサイトはCa^<2+>-overloadに対する脆弱性がニューロンよりも高く、そのメカニズムとしてはNa^+-Ca^<2+>exchangerの逆転がアストロサイトにおいて起こりやすくニューロンでは起こりにくいことが明らかとなった。Ca^<2+>-overloadに陥ったアストロサイトにおいて細胞膜の破綻を伴う細胞死を認めたが、ニューロンでは少なかった。以上のメカニズムとしてアストロサイトとニューロンのエネルギー産生代謝の差異が原因として考えられた。1.fura-2でラベルした日齢7-14のラット大脳皮質スライス錐体細胞からの[Ca^<2+>]_iの光学測定をおこない、スライスを無酸素無グルコース(インビトロ虚血)人工脳脊髄液で灌流したときの[Ca^<2+>]_

iの変化を大脳皮質各層で同時記録した。大脳皮質のインビトロ虚血による[Ca^<2+>]_i上昇はII/III層で最も著しく、これにはNMDAレセプターが関与していた。また、無酸素無グルコース状態では本来抑制性のGABA作用がむしろ[Ca^<2+>]_i上昇に作用していることが明らかになった。Cl^-輸送体機能を抑制した神経回路でもGABA作用が抑制から興奮に転じNMDA受容体を介した[Ca^<2+>]_i上昇を誘発することから、脳虚血時にもCl^-濃度勾配の低下により同様の病態が起こっている可能性が示唆された。2.脳虚血時のCl^-輸送体の機能変化による[Cl^-]_i変化とそれに伴うGABA作用の変化について知る目的で、Cl^-感受性蛍光指示薬のMEQを用いた光学的測定法により、大脳皮質スライス各層の神経細胞から直接的にしかも同時に[Cl^-]_i変化を測定できる方法の開発を行った。スライス中の細胞に還元型のdiH-MEQを負荷すると細胞内でMEQに酸化されるのでその蛍光強度を計ることにより[Cl^-]_iを長時間測定する事ができた。脳スライスを用いた[Cl^-]_iの光学的測定により、無酸素無グルコース状態では大脳皮質神経細胞に[Cl^-]_iの上昇が起こっていることを明らかにした。このことから脳虚血時にE_<cl>の脱分極側へのシフトが起こりGABA作用が抑制から興奮に転じていることが示唆された。これに関与するCl^-輸送体の種類、輸送の向き、それらの機能の発達過程や皮質各層での差異、さらにグリアの[Cl^-]_iホメオスタシスへの関与について現在解析を進めている。3.新生児低酸素性虚血性脳症モデルを用いたインビボの実験では発達に伴うニューロン脆弱性の変化が明らかとなり、これには血液-脳関門の脆弱性の変化が原因として考えられた。現在、血液-脳関門の脆弱性を内皮細胞-アストロサイトの脆弱性の観点から検討している。4.ミトコンドリア毒素を用いた化学的虚血の実験では、インビボ投与においてアストロサイトにニューロンよりも高い脆弱性が認められた。現在このメカニズムについて検討中である。1.ニューロン・ダリア共培養を用いて、ミトコントリア毒素の3-NPA(3-nitropropionic acid)による化学的虚血の実験を行い、fura-2によるニューロン及びグリア細胞内Ca^<2+>濃度の同時測定を行った。アストロサイトはCa^<2+>-overloadに対する脆弱性がニューロンよりも高く、そのメカニズムとしてはNa^+-Ca^<2+>exchangerの逆転がアストロサイトにおいて起こりやすくニューロンでは起こりにくいことが明らかとなった。Ca^<2+>-overloadに陥ったアストロサイトにおいて細胞膜の破綻を伴う細胞死を認めたが、ニューロンでは少なかった。アストロサイトとニューロンのエネルギー産生代謝の差異が原因として考えられた。2. Cl^-