hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
形態形成の調節機構-初期発生を制御する分子機構

アニマルキャップ(未分化細胞塊)を用いてアクチビン処理によって次の事柄が明らかになった。まずイモリのアニマルキャップをアクチビンで100ng/ml、1時間、処理した後にすぐに2枚の未分化細胞で包んでサンドウィッチにして培養すると胴尾部構造ができてきた。この構造の中には拍動する心臓もみられた。また処理後、しばらくSteinberg氏溶液中で8時間、放置し、その後、サンドウィッチすると今度は目や前脳構造をもった頭部構造がみられた。未分化細胞とアクチビン処理片だけを用いてin vitro系で初めて、体の部域をもつ構造をつくることが可能となった。またBMP-2と4についてのレセプターがクローニングされた。このレセプターをツメガエルの腹側に注入すると二次軸を形成した。更にBMP-4の受容体のレセプターの細胞内ドメインを欠失した遺伝子を注入すると中胚葉の分化がおこらなくなった。そしてBMP-2の受容体のover expressionした後、アニマルキャップを切り出して培養すると神経細胞の分化がみられた。ミドカイニン(MK)が神経の初期胚で強く発現していることがわかった。また、細胞のガン化とも深く結び付いていた。一方、アクチビンとフォリスタチンが卵黄タンパク質であるビテロゲニンとも強く結合していて、卵形成に極性をつくりながら貯蔵していることがわかった。(1)本年度はアクチビンやBMPの受容体ファミリーの初期発生におけるシグナル伝達の特異性について解析した。アクチビン受容体と考えられているALK-2、BMP受容体と考えられているALK-3およびALK-6を構成的活性型とし、初期胚の腹側あるいは背側領域に過剰発現させ、背腹軸形成に及ぼす影響について検討した。(2)細胞表層ヘパラン硫酸に親和性をもつフォリスタチン(FS)は、アクチビンのビテロゲニンへの結合能を高め、より効率的にアクチビンを卵黄小板へ移送した。また、アクチビンはツメガエル胞胚期の動物半球細胞表層にFSを介して結合した後、エンドサイトーシスにより細胞内へ取り込まれて分解された。こうしたアクチビン分解系は、ツメガエル初期発生での神経誘導に際し、アクチビンシグナルの遮断機構として働いているらしい。(3)ミッドカインの作用機構について研究し、神経突起伸長の際はシンデカンおよびNーシンデカンといったヘパラン硫酸プロテオグリカンのヘパリン様糖鎖ドメインの識別が基本的に重要であることを明らかにした。一方、サイトカン様活性を示す時はヘパリン様糖鎖の作用は間接的で13kDaの受容体が存在した。ミッドカインはアクチビンによる中胚葉誘導を阻害し、その結果頭部神経の分化を促進することも判明した。(4)イモリ精巣断片の器官培養において、ヒトIGF-Iが精原細胞の増殖を促進し、減数分裂を開始させることが明らかになった。更に、PT-PCRによって、イモリSHリセプター(FSHR)の細胞外部分をコードする約800bpのcDNAクローンを得た。(5)ホヤ胚の不等卵割に関わる構造として、Centrosome-Attracting Body(CAB)と名付けた構造を発見し、その機能を解析した。CABは胚の後極に形成され、中心体及び核を引きつけることにより不等卵割を引き起こす。
高度なデータ解析の実現のための機械学習および最適化アルゴリズムの相転移現象の解析

本研究計画では,行列およびテンソル(高次元配列)に基づくデータ解析技術(機械学習)がデータの量およびモデルの複雑さが同時に大きくなる領域においてどのように振る舞うのかを学習理論的な側面と計算量的な側面の両面から明らかにするとともに,その成果に基づいてより優れた実データ解析手法を提案することを目指した.その成果として,第一にテンソルに対する構造的シャッタンノルムと呼ぶ新しい正則化法に基づく学習アルゴリズムを提案し,その性能を明らかにした.この成果は機械学習分野の主たる国際会議であるNeural Information Processing Systems 2013(ネバダ州レイク・タホ)で発表する予定である.第二に,様々な多次元時系列解析において現れる半正定値行列の形式を取るデータに対して,半正定値テンソル分解という新しい手法を提案し,音楽音響信号解析においてその有効性を確認した.この成果はInternational Conference on Machine Learning 2013(ジョージア州アトランタ)で発表し,高い反響を得た.さらに,フランツ・キライ博士(UCL)および,ルイス・テラン博士(ベルリン自由大学)と代数および組み合わせ論に基づく低ランク行列補完の解析およびそれに基づくアルゴリズムの提案を行い,その成果の一部をJournal of Machine Learning Researchに投稿した.本研究計画では,行列およびテンソル(高次元配列)に基づくデータ解析技術(機械学習)がデータの量およびモデルの複雑さが同時に大きくなる領域においてどのように振る舞うのかを学習理論的な側面と計算量的な側面の両面から明らかにするとともに,その成果に基づいてより優れた実データ解析手法を提案することを目指した.その成果として,第一にテンソルに対する構造的シャッタンノルムと呼ぶ新しい正則化法に基づく学習アルゴリズムを提案し,その性能を明らかにした.この成果は機械学習分野の主たる国際会議であるNeural Information Processing Systems 2013(ネバダ州レイク・タホ)で発表する予定である.第二に,様々な多次元時系列解析において現れる半正定値行列の形式を取るデータに対して,半正定値テンソル分解という新しい手法を提案し,音楽音響信号解析においてその有効性を確認した.この成果はInternational Conference on Machine Learning 2013(ジョージア州アトランタ)で発表し,高い反響を得た.さらに,フランツ・キライ博士(UCL)および,ルイス・テラン博士(ベルリン自由大学)と代数および組み合わせ論に基づく低ランク行列補完の解析およびそれに基づくアルゴリズムの提案を行い,その成果の一部をJournal of Machine Learning Researchに投稿した.
経口メンケス病治療薬創出を目的とした銅錯体の薬物動態学的および製剤学的検討

メンケス病は、銅輸送タンパク質ATP7Aの遺伝子異常により銅の吸収および組織移行が低下するため、中枢神経障害など銅欠乏に由来する重篤な症状を呈し、多くが幼児期に死亡する希少疾患である。本研究は、経口投与可能なメンケス病治療薬の創出を目的としている。今年度は、メンケス病モデル動物であるマクラマウスにおいて有効性が示されているglyoxal-bis(N(4)-methylthiosemicarbazonato)-copper(II) (CuGTSM)の体内動態を検討した。ddYマウスにCuGTSMあるいはナノ粒子化CuGTSM (nCuGTSM)を経口投与した後、経時的に尾静脈から採血し、CuGTSMおよびGTSMの血漿中濃度をLC-MS/MSにより測定した。CuGTSM投与マウスにおいて、CuGTSMおよびGTSMの血漿中濃度-時間曲線下面積(AUC)はほぼ同等であり、体内で銅とGTSMに解離したことが示唆された。nCuGTSM投与群ではCuGTSM投与群と比較して、CuGTSMのAUC、GTSMのAUCおよびそれらのAUC比(GTSM/CuGTSM)がいずれも高値を示したことから、ナノ粒子化によりCuGTSMの吸収性が増大したことおよび体内での銅とGTSMへの解離が促進したことが示唆された。また、マクラマウスおよびC3H/HeNCrlマウス(対照マウス)にCuGTSMを経口投与し、その体内動態を上記と同様に検討した。対照マウスと比較して、マクラマウスではCuGTSMのAUCは低く、GTSMのAUCは高く、それらのAUC比(GTSM/CuGTSM)は高値を示したことから、マクラマウスの体内はCuGTSMが銅とGTSMに解離しやすい環境であることが推察された。特に問題なく研究を進めることができ、本研究の成果の一部について学会で発表できた。また、血中および組織中の銅の定量についても準備を進めることができた。CuGTSMを投与したマウスの血中および組織中銅濃度の検討を行う。また、CuGTSM以外の銅錯体についても同様の検討を行う予定である。一部の試薬が予定していた額より安く購入できたため、次年度使用額が生じた。次年度も同様に消耗品の購入に充てる予定である。
南方熊楠草稿資料の公刊および関連資料の総合的研究

RA4名を雇用して共同研究者とともに研究をおこなった。関西で年間12回、東京で年間11回の翻刻の研究会をおこなったが、これらの研究会には必要に応じて別地域の共同研究者およびRAが相互に出張して参加した。内容的には、南方熊楠日記のうちの1926年分11月1927年1月分の翻刻を関西でおこない、1941年7月10月分の翻刻を東京でおこなった。南方熊楠と平沼大三郎の往復書簡のうち、1926年分について南方熊楠顕彰館の叢書として出版した。19141923年分の日記の校訂を進め、2008年度から3ヵ年で4冊本として出版するための準備を整えた。2004年度に発見ざれた南方熊楠の土宜法龍宛書簡38通について、2008年度に奥山が監修して出版することとし、準備を整えた。既刊分の日記のうち、19051911年分のテクスト入力をおこなった。こうした翻刻作業と並行して、研究発表をおこなった。8月に刊行された『孫文と南方熊楠』に関る合評会を9月におこない、松居、千本、川島、小峯およびRA3名が参加した。10月から2月にかけて東京のワタリウム美術館で「クマグスの森-南方熊楠の見た宇宙」と題する展覧会をおこない、11月に同題の松居執筆のカタログを出版した。松居などによる『南方熊楠英文論文翻訳-ノーツ・アンド・クエリーズ篇』の編集を進め、2008年度に刊行する準備を整えた。4月の研究計画の採択通知後、5月8日に共同研究者による運営会議をおこない、研究方針を確認し、RAの雇用、事務局による運営体制などを決めた。この決定に従って5月中に10名のRAを雇用し、研究を開始した。従来から活動している東京および関西での南方熊楠資料翻刻のための月一回の研究会を相互出張による交流やワーキンググループ(以下WG)の結成により強化した。これらの研究会、WGにおいて日記、書簡の翻刻をおこなっている。8月には松居が英国に出張して関連資料調査をおこなったが、この結果は熊楠英文の翻訳などに活用される予定である。また8月には、関西の研究会のメンバーを中心に高野山で研究合宿をおこない、松居、千本、奥山、川島およびRA4名が参加した。9月と2月に松居およびRA1名、アルバイト2名で和歌山県田辺市の南方熊楠邸に出張して関連資料(日記および書簡)のスキャニングをおこなった。10月には、京都の高山寺から南方熊楠の最重要資料である土宜法龍宛書簡の新資料38通が発見され、高山寺との相談の結果、本科研で調査・解読をおこなうこととなった。12月にスキャニング作業をおこなってデジタルデータを作成し、3月31日に松居、奥山で記者発表、新聞・TVなど多くのメディアで報道された。この資料の翻刻作業は関西での研究会やWGでおこなっている。9月から3月にかけて『熊楠研究』第7号の編集を、本科研を用いておこなった。小峯の他、RA2名が執筆している。1月には、金山を中心として田辺市南方邸で資料保存のための調査をおこなった。松居およびRA1名が翻刻をおこなったスウィングルから南方熊楠への書簡については、『龍谷大学国際社会分化研究所紀要』に発表した。松居およびRA2名などが翻訳をおこなった『南方熊楠英文論文翻訳-『ネイチャー』篇』は、2005年夏に(株)集英社より刊行される予定である。科研のウェブサイトをhttp://stallion.world.ryukoku.ac.jp/rmatsui/に設置した。昨年度に引き続き9名のRAを雇用し、共同研究者とともに本研究の遂行にあたった。

関西で年間12回、東京で年間11回の翻刻の研究会をおこなったが、これらの研究会には必要に応じて別地域の共同研究者およびRAが相互に出張して参加した。また、RAを中心とした翻刻のためのワーキンググループ(WG)を月3回、延べ36日程度開催、このうち8月は京都、3月は田辺で合宿形式でおこなっている。内容的には、南方熊楠日記のうちの1926年分1月7月の翻刻を関西でおこない、1941年1月3月の翻刻を東京でおこなった。また、書簡資料のうちの最重要と位置づけた2004年発見の土宜法龍宛書簡の翻刻をWGを中心に進め、ほぼすべての粗翻刻を終了、うち6通に関しては松居竜五・岩崎仁編『南方熊楠の森』に解説付きで掲載している。さらに熊楠所蔵『和漢三才図会』中の書き込み、宇井縫蔵宛熊楠書簡、西表欽一郎宛書簡を翻刻し『熊楠研究』に発表した。こうした翻刻資料に基づき、共同研究者・RAによる研究が進められた。その結果、8月には千本と松居が中心となって編集し、共同研究者6名とRA3名が執筆した『國文學』南方熊楠特集が刊行された。12月には松居が中心となって翻訳をおこなった『南方熊楠英文論考--ネイチャー誌篇』が刊行された。同じ12月に刊行された『南方熊楠の森』には、共同研究者4名とRA2名が執筆した。3月刊行の『熊楠研究』には、共同研究者2名とRA3名が執筆している。これらの刊行に対して大きな反響があり、朝日、読売、日経各紙の文化面にさまざまなかたちで取り上げられた。一方、和歌山県田辺市に建設された南方熊楠顕彰館所蔵資料のスキャニングを進め、約60年分が現存する日記のほぼ半分のデジタル画像を作成した。また、すでに翻刻されている南方熊楠の論文・書簡・日記などのテクスト入力、英文・書簡資料リストのデータベース作成が進行中である。今年度は6名のRAを雇用し、共同研究者とともに本研究の遂行にあたった。関西で年間12回、東京で年間12回の翻刻の研究会をおこなったが、これらの研究会には必要に応じて別地域の共同研究者およびRAが相互に出張して参加した。また、RAを中心とした翻刻のための研究会を龍谷大学などで平均月3回、延べ30日程度開催した。内容的には、南方熊楠日記のうちの1926年分7月11月の翻刻を関西でおこない、1941年4月7月の翻刻を東京でおこなった。書簡資料のうち、土宜法龍・南方熊楠の往復書簡を編集するために土宜からの書簡の粗翻刻を終えた。また、平沼大三郎宛の熊楠の書簡に関しての翻刻をほぼ終えた。さらに、松村任三宛の熊楠書簡二通、いわゆる「南方二書」の原書簡からの翻刻をおこない出版した。こうした翻刻資料に基づいた研究を進め、さまざまなかたちで成果を発表した。まず、2006年5月に開館した田辺市の南方熊楠顕彰館開館に対して、館内展示や資料公開の準備に向けた協力をしている。9月47日に高野山大学でおこなわれた国際密教学会では、松居とRAの田村義也が英文での口頭発表をおこなった。10月7日11月26日の国立科学博物館での南方熊楠展の際にも資料協力をおこない、共同研究者の横山が講演した。12月9日の国際シンポジウム「孫文と南方熊楠」では、松居・田村が口頭発表、川島・千本がコメントをおこなった。この他に、すでに翻刻されている南方熊楠日記について、1885年1904年分をテクスト入力した。また、南方熊楠英文論文をテクスト入力して校閲をすませた。RA4名を雇用して共同研究者とともに研究をおこなった。
Myosteatosisの病態解明による膵癌新規集学的治療戦略の開発

1. in vivo治療モデルにおけるMSの成因の検証とMSが癌臨床過程に及ぼす影響の解析:マウス皮下腫瘍モデルを安定して作成することが可能となり,現在,抗がん剤(ゲムシタビン),放射線治療負荷モデルを作成.治療介入によるデータ(肝臓内脂肪量,筋肉内脂質量,体重,血糖)を集積中である.また,高脂肪食負荷マウスを用い,自発性輪廻しの基礎データを集積中である.今後,高脂肪食負荷マウスによる腫瘍モデルの作成を考慮する.2.実際の膵癌患者における身体活動量とMSとの相関関係:切除不能膵癌患者を対象として,実施の活動量を活動量計で計測し,CTで計測されるMSとの相関,化学療法の治療効果との相関を計測し,データの集積を終了した.3.膵癌術前治療患者に対する有酸素運動による介入試験:II型糖尿病患者に対する同様の介入がMSを改善させたという報告はあるが,悪性腫瘍加療中におけるMSの予防を試みた研究は存在しない.本研究期間において,術前治療期間中の膵癌患者に対する有酸素運動を中心とする術前介入のパイロット試験を終了し,骨格筋脂肪化の変化を中心とする臨床データの分析を終了し,特定臨床研究としてプロトコールを作成,倫理委員会に提出したところである.また,切除不能膵癌患者を対象とした有酸素運動(walking)による介入試験についても,準備を進めており,切除不能膵癌患者における化学療法中のMSの維持及び化学療法の忍容性,生活の質に関する臨床試験を開始予定である.1.外分泌能との関連性の検討:現在,膵頭十二指腸切除術予定症例を対象とする膵外分泌機能低下と骨格筋脂肪化との関連を調べる前向きの観察研究を策定中である.膵外分泌機能は,13C呼気膵外分泌機能試験,pancreatic function diagnostic test(PFD)にて行うこととし,外分泌機能の測定を術前,術後一ヶ月目に行い,MSとの相関,術後補助化学療法完遂率,予後との関係を他の臨床病理学的因子とともに検討する予定である.2.インスリン抵抗性についての検討:現在,膵癌切除症例,膵癌切除不能症例において,来院時のインスリン抵抗性(HOMA-R)とMSとの相関を観察研究とし,症例を集積中である.3..アディポサイトカイン測定:脂肪細胞から分泌される生理活性物質である各種アディポサイトカインの測定を行い,膵癌患者におけるMSとの関連,臨床的意義について検討を加えている.さらに現在,膵癌切除症例の大網及び皮下脂肪を術中採取し,脂肪組織内に浸潤するマクロファージのタイプ(炎症性M1マクロファージ(Mφ)と抗炎症性M2Mφの分布比率)を測定し,アディポサイトカインとの関連,MSとの関連を検証し,免疫学的側面から,MSを含めた脂肪組織の生理的活性が膵癌に与える影響の解明を試みている.4.栄養および運動介入試験:膵癌患者を対象として,栄養および有酸素運動の介入を行い,それらの臨床効果について検討している.現在,切除不能膵癌患者に対し,日常の活動性をリストバンド型活動量計を用い計測し,活動量とMS,化学療法の忍容性及び予後を評価する臨床試験を予定している.また,当科で行っている膵癌術前化学放射線療法期間中に,有酸素運動療法を週5日間行う運動介入を行い,骨格筋脂肪化の予防と改善を目的とした介入試験のプロトコールを現在策定中である.臨床試験に対する適格症例の集積に時間を要しているため.1.運動量と骨格筋脂肪化:骨格筋脂肪化(異所性脂肪)の要因の一つは,一般に運動不足による相対的栄養過多によるものであるため,実際の膵癌患者における身体活動量とMSとの相関を患者アンケート(International Physical Activity Questionnaire(IPAQ)及び,携帯できる活動量計による実生活での活動量を測定し,普段の活動量と初診時MS,さらには,術前治療中の活動量とMSの変化との関連を検討する前向きの観察試験を策定中である.2.外分泌能,インスリン抵抗性と骨格筋脂肪化:外分泌能及びインスリン抵抗性MSとの関連に関する検討を行なっており,症例を集積中である.その過程において,膵癌術後患者早期再発例,術後補助化学療法非完遂例と強い相関が確認できたため,現在論文を作成中である.3.膵癌患者を対象とした有酸素運動(walking)による介入試験: II型糖尿病患者に対する同様の介入がMSを改善させたという報告はあるが,悪性腫瘍加療中におけるMSの予防を試みた研究は存在しない.現在,術前治療期間中の膵癌患者に対する有酸素運動を中心とする術前介入のパイロット試験を遂行し,MSの変化,維持におけるデータを集積している.また,切除不能膵癌患者を対象とした有酸素運動(walking)による介入試験についても,準備を進めており,切除不能膵癌患者における化学療法中のMSの維持及び化学療法の忍容性,生活の質に関する臨床試験を開始予定である.臨床試験においては,適格症例の集積に時間を要していること.実験においては,マウス皮下腫瘍モデルを用いた治療の抗がん剤投与量,放射線治療照射寮の設定が困難であること.1. in vivo治療モデルにおけるMSの成因の検証とMSが癌臨床過程に及ぼす影響の解析:マウス皮下腫瘍モデルを安定して作成することが可能となり,現在,抗がん剤(ゲムシタビン),放射線治療負荷モデルを作成.治療介入によるデータ(肝臓内脂肪量,筋肉内脂質量,体重,血糖)を集積中である.また,高脂肪食負荷マウスを用い,自発性輪廻しの基礎データを集積中である.今後,高脂肪食負荷マウスによる腫瘍モデルの作成を考慮する.

2.実際の膵癌患者における身体活動量とMSとの相関関係:切除不能膵癌患者を対象として,実施の活動量を活動量計で計測し,CTで計測されるMSとの相関,化学療法の治療効果との相関を計測し,データの集積を終了した.3.膵癌術前治療患者に対する有酸素運動による介入試験:II型糖尿病患者に対する同様の介入がMSを改善させたという報告はあるが,悪性腫瘍加療中におけるMSの予防を試みた研究は存在しない.本研究期間において,術前治療期間中の膵癌患者に対する有酸素運動を中心とする術前介入のパイロット試験を終了し,骨格筋脂肪化の変化を中心とする臨床データの分析を終了し,特定臨床研究としてプロトコールを作成,倫理委員会に提出したところである.また,切除不能膵癌患者を対象とした有酸素運動(walking)による介入試験についても,準備を進めており,切除不能膵癌患者における化学療法中のMSの維持及び化学療法の忍容性,生活の質に関する臨床試験を開始予定である.今後.後方視的に可能である研究課題を本年度中にまとめ,論文化する.なお,前向き試験における症例集積に関しては,学外の関連施設を含め,協力を求め,試験遂行に適切な症例数を確保する.前向き試験に関しては,学内及び関連施設を含めた研究概要を説明する会を開催し,協力を要請し症例数の増加に努める.現在進行中の前向き試験の症例登録がやや遅延しており,計測に必要な機材,薬剤,試薬の使用量が想定よりすくなかったため.今後症例集積の目処が立ちつつあること,また,切除不能膵癌例での前向き観察試験を本年度中には開始する予定であり,その際,病理標本の作成,各種試薬代が必要となり,研究費を適切に使用できる見込みである.
肝虚血障害における活性酸素を利用した新しい肝腫瘍治療法の開発

(1)肝虚血再灌流障害における活性酸素の関与についての検討浮遊培養肝細胞の培養液中に、95%N_2+5%CO_2の混合ガスを噴入し低酸素状態(PO_24050mmHg)にすると、培養液中にSuperox de Dismutaseを含む群では、細胞のvaiabilityに改善傾向が見られた。また虚血肝不全ラットの死亡率を示標とした実験ではXanthine Oxidaseの阻害剤であるAllopurinolを肝不全誘導前に投与する有意な改善を示した。再灌流直前投与は無効であり、虚血時にすでに活性酸素の発生が起こったものと考えられた。ラット肝の70%肝葉を90分間阻血、再灌流するモデルを用い、血清GOT,GPT,β-Hexosaminidase、ヘパプラスチンテスト、肝組織水分量、肝壊死組織面積の定量などを示標にして、Allopurinolの効果を検討したところ、その虚血再灌流障害の軽減作用を確認した。また肝組織中のMalondialdehydeをTBA法で測定すると、Allopurinol投与群では虚血および再灌流時のMalondialdehydeの上昇を完全に抑制した。Microcalorimetoryによる虚血および再灌流ラット肝組織片の検討では、対照群では虚血90分後再灌流肝では熱量の回復がなかったが、Allopurinol投与肝では回復がみられた。以上の結果より、肝虚血再灌流障害には活性酸素の関与があり、その発生源の一つとしてXathine Oxidaseによる反応系が考えられた。(2)ウサギ大腿部移植VX_2腫瘍に対する活性酸素の抗腫瘍効果の検討大腿動脈よりHypoxanthine.Xanthine Oxidaseを持続注入し、化学反応的に活性酸素(O_2^-)を発生させた。注入前と注入後24時間での推定腫瘍体積き比較では差異は認めなかったが、組織学的には広範な壊死組織の中に島状に腫瘍細胞が散在しているのみであった。この抗腫瘍効果をfree radicalによる作用と認めるためには、今後O_2^-を消去する作用を持つSuperoxide Dismutaseの併用でこの抗腫瘍効果が失われるかなどの検討が必要である。当初,培養肝細胞に低酸素障害を誘導する方法として,ふ卵器内の酸素濃度を変化させて検討したが,培養液中の酸素分圧の低下は緩徐であり,当研究の実験モデルとして適当でないことが判明した.そこで,培養液中に直接酸素,窒素,二酸化炭素などのガスを噴入することが可能である浮遊培養法を採用した.1.ラット肝細胞の分離はコラガナーゼ灌流消化法によった. Viabilityは9095%であった(トリパンブルー色素排除試験,以下同じ). 2.95%O_2+5%CO_2の混合培養(以下,好気条件)では,培養液(RPMI-1640+10%牛血清)中の酸素分圧は450500mmHgであった.次に95%N_2+5%CO_2の混合ガス(以下,嫌気条件)に代えると約1520分で酸素分圧は3050mmHgに低下し,低酸素状態を比較的短時間で誘導することができた.3.好気条件下では,肝細胞のViabilityは培養1時間後では,約70%, 2時間後では50%に低下していた.

4.好気条件で1時間培養後,嫌気条件に代えるとViabilityは20%と著明に低下した.5.培養液にSuperoxide Dismutase(SOD)を添加すると,好気条件ではViabilityの改善はなかったが,嫌気条件でのViabilityの低下を抑制した.6.培養液中のLDH濃度は,嫌気条件下で上昇したが, SODの添加により軽度ながら抑制された.7.培養液中のLipid Peroxide(八木別法により測定)も嫌気条件下で上昇した.SODの添加は,この上昇を抑制した.以上より,肝細胞の低酸素障害における活性酸素の関与が示された.ビタミンE, Coenzyme Qなどの抗酸化剤の効果については,現在検討中である.ウサギ大腿部移植VX_2腫瘍に対し、Hypoxanthine-Xanthine Oxidase反応で発生させた活性酸素の抗腫瘍効果につき検討した。移植腫瘍は径が2cm以上になると中心壊死が見られ効果判定ができなくなるので、径が1020mmになった時点で実験に供した。血管撮影による薬液の至適動脈ルートの検討では、腫瘍血管は大腿動脈から直接分岐したものが主であり、担癌肢側にはカニュレーションできる適当な動脈枝がないので、健常側の大腿動脈を切開カニュレーションし、その先端を担癌肢の総腸骨動脈分岐部に留置し、担癌肢の血行障害のないよう配慮した。Hypoxanthine,Xanthine Oxidase反応は瞬時に進行し、活性酸素(O_2^-)を発生するので動脈注入部直前にチャンバーを間置し、これにHypoxanthine,Xanthine Oxidaseを別々に注入、反応させるよう配慮した。濃度はHypoxanthine 28mg/100ml、Xanthine Oxidase 8.4U/100mlとなるようphosphate buffer salineで希釈した。注入速度は各々0.11ml/minとし60分間注入した。対照群はphosphate buffer salineを注入した。注入前、注入終了24時間後に腫瘍の長径(a)と短径(b)を計測し、腫瘍体積をV=a・b^2で計算し比較した。また組織学的検討も行った。〔結果〕推定腫瘍体積は、実験群,対照群とも変化がなかった。組織学的検討では対照群ではViableな腫瘍細胞が塊状に融合して見られたが、実験群では多核白血球の浸潤を伴う広範な壊死巣を認めViableな腫瘍細胞は小集塊とし島状に散在するのみであった。〔考察〕組織が壊死に陥り腫瘍径の縮小となって表れるには、相当の時間を要するものと思われた。組織学的検討では、Hypoxanthine,Xanthine Oxidaseの抗腫瘍効果が見られたが、これを発生した活性酸素による効果とするためには、O_2を消去する作用を持つSuperoxide Dismutase併用で腫瘍効果が失われるかなどの検討が必要と思われた。
水痘帯状疱疹ウイルス糖タンパクの生物活性の解析

昭和6263年度に水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)の主として糖タンパク(gp)の細胞内processing及びその生物学的活性を解析した。(1)以前我々はVZVタンパクの細胞内付加について解析したが今年度は更にVZVーgpの脂肪酸付加について解析した。VZV感染細胞を[^3H]パルミチン酸でラベルし、可溶化後種々の単クローン抗体を反応させ、SDSーポリアクリルアミド電気泳動法(SDSーPAGE)にてVZV特異gpを分析した。その結果gpI-III共に脂肪酸が付加されていることが判明した。又セルレニン(脂肪酸の生合成阻害剤)を用いた実験ではVZV-gpの成熟には脂肪酸の付加が必須であることが明らかとなった。(2)VZVーgpI,II,III,IV遺伝子のコード領域を含むDNA断片をクローニングしこれらのDNA断片を更にワクチニアウイルス(VV)のチミジンキナーゼ(TK)を含むプラスミッドに組み込んだ。これらのVZV-gp領域を組み込んだVV-TKプラスミドをRKー13細胞にtransfectし、更にVVを感染させ組み換えVVを作製させた。その結果VVーgpIのみはimmuno blot法でVZV-gpの発現が確認されたが他のgpは発現しなかった。しかしNorthern blot法にてmRNAは検出されたがgpIIは若干その長さが予想されるものより短かかった。VV-gpIウイルスを細胞に感染させるとVZV感染gpとほぼ同じポリペプチッドが作製されていた。又このウイルスは免疫原性もVZVと同様であり誘導された抗体は補体存在下で中和能が見いだされた。(3)VZVーgp抗原による皮内テストの有用性を単純ヘルペス(HSV)及びVZV感染モルモットを用いて、又はHSV感染歴のある水痘患者で解析を行った。中和反応と同様に皮内テストにおいてもVZVとHSVには交叉性を認められなかった。ヒトにおいても同様の結果が得られこのことによりVZV皮内反応には水痘感染特異的であることが判明し水痘感染のスクリーニングに用いられることが示唆された。本年度の研究は水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)主要糖タンパク(gp)の細胞内での成熟過程の解析及び組換えDNA手法を用いてのgpの生物学的解析である. 1.糖タンパクの感染細胞内での脂肪酸付加によるposttranslationalprocessing:VZVgpには4種の主要gpが報告されているが我々はこの中3種のgpについて解析を行ったきた.本年は脂肪酸の付加についての解析を行った.まず感染細胞を〔^3H〕パルミチン酸でラベルレ細胞をdetergentで溶解した後モノクローン抗体を反応させ更にSDSーポリアクリルアミド電気泳動法(PAGE)にて分析した.その結果3種のgp共に脂肪酸が付加されることが判明した.この中gpIは濃くラベルされgpII,IVは少なくラベルされた.次に脂肪酸の生合成阻害剤であるセルレニンを用いてVZVの増殖及びposttranslatinal precessingに与える影響を解析した.その結果セルレニンは細胞中のタンパク合成を阻害しない範囲でもウイルスの増殖を抑え,細胞内に未熟糖タンパクを畜積させた.このことよりウイルスタンパクの成熟には脂肪酸の付加が必須であることが判明した.

2.VZV gpIのtranscriptional mapとgpIの免疫学的解析:ウイルス感染細胞よりRNAを調整しgpIを含むウイルスDNA Us領域のプローブを用いnorthern blot解析を行った.その結果ウイルス感染細胞の5.0,3.6,2.15キロベース(kb)のmRNAとgpIーDNAはハイブリダイズした.次にこれらのmRNAをハイブリッド選択法にて選択しin vitroでタンパク合成を行わせモノクローン抗体を用いて解析した結果, 215kb mRNAよりgpIタンパクが合成されることが判明した.次にgpI DNAをワクチニアウイルスDNAに組込みワクチニアウイルスとの組換えウイルスを作製した.更にこのウイルスを家兎に免疫しその抗体を用いてgpIの免疫学的解析を行った.その結果得られた抗体は補体存在下で中和能を有していた.このことよりgpIは免疫学的にも重要な糖タンパクであることが実証された.前年度にひきつづいて水痘帯状疱疹ウイルス(VZV)の糖タンパクgpI、IV以外の糖タンパクであるgpII、IIIの解析を行った。VZVの二種のenvelopeタンパク(gpII、gpIII)及びORF62(Davison & Scott,1986)の遺伝子の発現産物に対する宿主免疫反応の詳細な解析を目的としてそれらの遺伝子のコード領域を含むVZU-DNA断片を各々、ワクチニアウイルス(VV)に組み込み、それらのVZV由来遺伝子を発現する組み換えVVの作製を試みた。gpII、又はgpIIIの遺伝子を組み込んだ組み換えVV(gpII;VVgpII及びVVgpII-2、gpIII;VVgpIII)においてはImmuno Dot Blot法によって、それらの遺伝子の発現を確認することは出来なかった。Northern hybridization法によりVVgpII感染細胞からは予想し得る長さより若干短い転写産物が検出された。VVgpIII感染細胞では、検出される転写産物は適度な長さであるので、その発現の阻害は転写レベル以外に問題があると思われる。
せん断崩壊する鋼はり腹板のひずみ速度依存性と門形ラーメンの地震応答に関する実験

せん断崩壊する鋼はり腹板のひずみ速度依存性と門形ラーメンの地震応答について,2年間に亘って研究した.研究成果の概要をまとめると,以下のとおりである.1.高速せん断力載荷による腹板の弾塑性応答実験の実施,鋼板に高速せん断載荷できる実験装置を用いて,33154の幅厚比を持つ鋼腹板(約50体)の弾塑性性状に及ぼすひずみ速度依存性を実験で調べた.せん断変形角速度による抵抗せん断力の変動特性を分析することにより,以下の知見を得た.1)腹板のせん断応力τ-せん断変形角γの実験曲線は,幅厚比が大きい場合にはスリップ型,幅厚比が小さい場合には紡錘型の履歴曲線を呈した.2)抵抗せん断応力の静的曲線からの上昇分を指すせん断余応力は,せん断変形速度に比例して大きくなる.3)せん断余応力の上昇は弾性域から塑性域に至る処女履歴ループにおいて最も大きく現れる.そして,それ以降の履歴ループではひずみ硬化の影響により,ひずみ速度の影響が小さくなる。4)せん断変形角速度によるせん断余応力の上昇を近似曲線にまとめた.2.三次元汎用FEMによる鋼門形ラーメン橋脚の弾塑性応答解析の実施地震動を受けて,はり中央腹板と柱基部が損傷する1層門形ラーメンの弾塑性応答解析を実施し,はり中央腹板がせん断座屈したときのラーメン各部の損傷について考察した.数値解析の結果から,局部座屈を伴うはり中央部分と柱基部の損傷について考察し,はり腹板が損傷することにより,柱基部のダメージを軽減できることを確かめた.3,結論1)鋼腹板を用いて高速せん断力の載荷実験を実施し,ひずみ速度による抵抗せん断応力の変動特性をほぼ把握することができた.ただし,その定式化には今後若干の追加実験が必要である.2)上記のせん断応力-せん断ひずみ関係を骨組の動的弾塑性解析プログラムに組み込むことにより,橋脚の地震時崩壊挙動をさらに究明していくための準備が整った.せん断崩壊する鋼はり腹板のひずみ速度依存性と門形ラーメンの地震応答について,2年間に亘って研究した.研究成果の概要をまとめると,以下のとおりである.1.高速せん断力載荷による腹板の弾塑性応答実験の実施,鋼板に高速せん断載荷できる実験装置を用いて,33154の幅厚比を持つ鋼腹板(約50体)の弾塑性性状に及ぼすひずみ速度依存性を実験で調べた.せん断変形角速度による抵抗せん断力の変動特性を分析することにより,以下の知見を得た.1)腹板のせん断応力τ-せん断変形角γの実験曲線は,幅厚比が大きい場合にはスリップ型,幅厚比が小さい場合には紡錘型の履歴曲線を呈した.2)抵抗せん断応力の静的曲線からの上昇分を指すせん断余応力は,せん断変形速度に比例して大きくなる.3)せん断余応力の上昇は弾性域から塑性域に至る処女履歴ループにおいて最も大きく現れる.そして,それ以降の履歴ループではひずみ硬化の影響により,ひずみ速度の影響が小さくなる。4)せん断変形角速度によるせん断余応力の上昇を近似曲線にまとめた.2.三次元汎用FEMによる鋼門形ラーメン橋脚の弾塑性応答解析の実施地震動を受けて,はり中央腹板と柱基部が損傷する1層門形ラーメンの弾塑性応答解析を実施し,はり中央腹板がせん断座屈したときのラーメン各部の損傷について考察した.数値解析の結果から,局部座屈を伴うはり中央部分と柱基部の損傷について考察し,はり腹板が損傷することにより,柱基部のダメージを軽減できることを確かめた.3,結論1)鋼腹板を用いて高速せん断力の載荷実験を実施し,ひずみ速度による抵抗せん断応力の変動特性をほぼ把握することができた.ただし,その定式化には今後若干の追加実験が必要である.2)上記のせん断応力-せん断ひずみ関係を骨組の動的弾塑性解析プログラムに組み込むことにより,橋脚の地震時崩壊挙動をさらに究明していくための準備が整った.地震時に損傷すれば大きな変形速度を呈する鋼製ラーメン橋脚のはり中間部腹板に着目し,せん断力を受ける腹板の弾塑性性状に及ぼすひずみ速度依存性を実験で調べた.はり中間部腹板を純せん断力を受ける単一鋼板にモデル化し,せん断変形速度を種々変化させた実験を行った.本研究で実施した実験内容と得られた成果をまとめると,以下のとおりである.1)せん断を受ける腹板供試体としては,1辺が200mmの正方形薄鋼板(SS400材)を用いた.鋼板の周辺にフランジ・プレート枠を溶接接合している.板厚t=1.3,2.3,3.2,4.5(幅厚比b/t=44150)の供試体を計32体製作した.2)負荷,除荷,及び,応力緩和の組み合わせで,せん断変形角の時刻歴を設定し,それに対する平均せん断応力の応答を実験で求めた.3)速度効果によるせん断応力の静的曲線からの上昇分をせん断余応力と定義し,実験から得られたせん断変形角速度とせん断余応力の関係を腹板の幅厚比別に片対数グラフに表した.4)せん断余応力は初めて非弾牲域に入る処女履歴ループにおいて最も大きく現れた.

繰り返しサイクル数が大きくなると,せん断余応力は一定値に収束する傾向が見られた.5)幅厚比が大きくなると,せん断座屈波形や斜張力場の形成に起因して,せん断余応力の変動量にばらつきが見られた.6)はり中央腹板がせん断崩壊する門形ラーメンの地震応答解析に応用するため,今後実験データをさらに蓄積し,ひずみ速度による余応力の変動をせん断変形角速度とせん断余応力の関係式として表す必要がある.1.高速せん断力載荷による腹板の弾塑性応答実験鋼板に高速せん断載荷できる実験装置を用いて,幅厚比154の鋼腹板の弾塑性性状に及ぼすひずみ速度依存性を実験で調べた.せん断変形角速度による抵抗せん断力の変動特性を分析することにより,以下の知見を得た.1)腹板のせん断応力τ-せん断変形角γの実験曲線は,幅厚比が大きい場合にはスリップ型,幅厚比が小さい場合には紡錘型の履歴曲線を呈した.2)抵抗せん断応力の静的曲線からの上昇分を指すせん断余応力は,せん断変形速度に比例して大きくなった.3)弾性域から塑性域に至る処女履歴ループにおいて,せん断余応力の上昇が最も大きく現れた.4)それ以降の履歴ループでは,ひずみ硬化の影響でひずみ速度の影響が小さくなった.2.三次元汎用FEMによる鋼門形ラーメン橋脚の弾塑性応答解析地震動を受けて,はり中央腹板と柱基部が損傷する1層門形ラーメンの弾塑性応答解析を実施し,はり中央腹板がせん断座屈したときのラーメン各部の損傷について考察した.数値解析の結果から,局部座屈を伴うはり中央部分と柱基部の損傷について考察し,はり腹板が損傷することにより,柱基部のダメージを軽減できることを確かめた.3.まとめはり腹板がせん断崩壊する門形ラーメン橋脚の地震時崩壊挙動について実験と数値解析を行った.17年度の研究を通じて得られた主な結論は以下のとおりである.1)幅厚比154の実際に近い鋼腹板を用いて高速せん断力の載荷実験を実施し,ひずみ速度による抵抗せん断応力の変動特性を把握することができた.ただし,その定式化には今後若干の追加実験が必要である.2)上記のせん断応力-せん断ひずみ関係を骨組の動的弾塑性解析プログラムに組み込むことにより,橋脚の地震時崩壊挙動をさらに究明していくための準備が整った.
高圧環境下での駆動を可能とする柔軟外殻水中ロボットの力学

本研究では,外殻を樹脂とする水中ロボットの高圧環境下での運動特性評価を試みた.圧力試験機および視覚センサを利用することにより,高圧環境下でのアクチュエータおよびひれの運動特性を評価する手法を構築した.また,運動中に柔軟外殻がひれや本体に密着したまま滑らない条件下においても,可動するために必要な外殻が余分に存在すれば,ひれが運動可能であることを,幾何モデルおよび実験を通して明らかにした.本研究は,高圧力環境下での駆動を可能とする柔軟外殻水中ロボットの力学特性を明らかにすることを目的としている.本年度は,高圧環境下における機械要素の性能評価に関する知見を明らかにするため,高圧力環境下におけるアクチュエータの特性変動の計測・評価を行った.10MPa(水深1000m相当)までの範囲で測定するために,特注の圧力試験機を設計,製作した.モータは,非伸縮柔軟フィルムで覆い,絶縁流体と共にフィルム内部に封入することで,耐圧容器内でモータを動作させることが可能になった.これにより,圧力環境下でのアクチュエータの運動の様子を,視覚センサを用いた計測システムを用いて評価する手法を確立した.LEDを取り付けたサーボモータを周期運動させ,その運動の周波数特性の変化により,加圧下の特性変動を評価する.実験結果より,同程度の出力が得られるサーボモータに関しても,電子回路などの内部構成により耐圧特性に大きな差があることが明らかになった.今回使用するサーボモータは9MPa程度圧力下で動作可能であることが明らかになった.また,アクチュエータの実験に付随して,サーボモータを動作するために使用する電子回路,電源に対する耐圧特性,およびロボットを動作するために使用するセンサ(赤外線センサ,光センサ)に対する耐圧特性を測定した.その結果,今回選定したサーボモータ以外の構成要素は10MPa下で問題なく動作することが明らかになった.本年度は,高圧環境下における機械要素の性能評価に関する知見を明らかにするため,(1)高圧力環境下におけるアクチュエータの特性変動の計測・評価および(2)高圧力環境下における機械要素の浮力変動の計測・評価を実施する計画であった.(1)に関しては,10MPa(水深1000m相当)までの範囲で測定するために,特注の圧力試験機を設計,製作した.圧力試験機に使用する材料,付随する機械要素,加工法の選定に当初より時間を要したものの,ロボットに使用するサーボモータの耐圧下での特性変動に関する知見を得ることができた.実験結果より,同程度の出力が得られるサーボモータに関しても,その内部構成により耐圧特性に大きな差があることが明らかになった.またアクチュエータの実験に付随して,サーボモータを動作するために使用する電子回路,電源に対する耐圧特性,およびロボットを動作するために使用するセンサ(赤外線センサ,光センサ)に対する耐圧特性を測定した.その結果,今回選定したサーボモータ以外の構成要素は10MPa下で問題なく動作することが明らかになった.また,(2)に関しては,圧力試験機での実験時間が限られていたことから,一部達成していない.特に,ひれとして利用する柔軟要素に関する製作および特性評価を行っておらず,引き続き研究を遂行する必要がある.課題(2)に関しては一部達成できていない部分もあるが,課題(1)に関しては当初予定していたアクチュエータの特性評価のみならず,付随する構成要素の耐圧特性を明らかにしたという観点から,総合的には「研究は順調に推移している」と判断した.本研究は,高圧力環境下での駆動を可能とする柔軟外殻水中ロボットの力学特性を明らかにすることを目的としている.本年度は,高圧環境下における柔軟物体の特性評価に関する知見を明らかにするため,高圧力環境下におけるフレキシブルアームの特性変動の計測・評価を行った.高圧環境を実現するために,昨年度,アクチュエータの運動特性を評価するために特注した圧力試験機を利用した.フレキシブルアームの素材として,樹脂素材を検討した.フレキシブルアームはサーボモータに取り付けた後,非伸縮柔軟フィルムで覆い,絶縁流体と共にフィルム内部に封入することで,耐圧容器内でアームを動作させることが可能になった.本実験で使用した圧力試験機はアクリルで製作されており,その内部を視覚センサで計測することが可能である.これにより,圧力環境下でのフレキシブルアームの運動の様子を,視覚センサを用いた計測システムを用いて評価する手法を確立した.実験で使用するサーボモータの特性を考慮し,8MPaまで高圧環境下での運動特性を評価した.実験結果に基づく画像解析より,本フレキシブルアームは圧力の変動に対して,その動きに変化はないことが明らかになった.この結果から,本フレキシブルアームを利用して,高圧環境下でも推進力を得ることができることが示唆された.

したがって,本フレキシブルアームを利用して,高圧環境下で運動する水中ロボットが製作可能であることが示唆された.本研究では,外殻を樹脂とする水中ロボットの高圧環境下での運動特性評価を試みた.圧力試験機および視覚センサを利用することにより,高圧環境下でのアクチュエータおよびひれの運動特性を評価する手法を構築した.また,運動中に柔軟外殻がひれや本体に密着したまま滑らない条件下においても,可動するために必要な外殻が余分に存在すれば,ひれが運動可能であることを,幾何モデルおよび実験を通して明らかにした.前年度,達成できなかった柔軟要素の製作および特性評価を行う.魚型ロボットのひれの形状に関する知見を得るために,新規に三次元造形機を導入し,ひれを製作する予定である.性能評価後に,従来予定していた(1)高圧環境下のおけるフレキシブルアーム/パックの運動測定・解析および(2)高圧環境下のおけるロボットの性能評価を行う.フレキシブルアーム/パックを動作させるために,直流サーボモータを使用する.モータは,非伸縮柔軟フィルムで覆い,絶縁流体と共にフィルム内部に封入する.圧力環境下での揺動板の運動の様子を,視覚センサを用いた計測システムを用いて評価する.圧力は10MPa(水深1000m相当)までの範囲で測定する.運動計測には市販のカメラ(30Hzで撮像)を使用する予定である.揺動板の特性により,高時間分解能の測定システムが必要である場合には,研究室が所有する高速カメラ(最大10000Hzで撮像可能)を使用する.変位,周波数応答,減衰係数を柔軟要素の評価項目とする.これらの計測結果を,水中ロボット本体の設計指針および水中ロボット全体のモデリングを行う際に利用する.ここで,揺動板は剛体の梁であると仮定する.しかしながら,揺動板が大変形するため,梁モデルとの整合性が取れないことが懸念される.その際には,多リンクモデルを利用し,計測結果と比較する.2年間の成果を統合することで,高圧力環境下における水中ロボットによる自律探査および柔軟要素の工学的利用の礎とする.ロボティクス本研究は,高圧力環境下での駆動を可能とする柔軟外殻水中ロボットの力学特性を明らかにすることを目的にしており,水中ロボットの推進器として柔軟な揺動板(樹脂板などの薄板柔軟物)を利用する.この揺動板を,モータを用いて水中内で振動させることで魚のように推進力を得る.研究の進行にともない,水中ロボットの推進性能を比較するためには揺動板の形状が重要であるとの認識にたった.この揺動板の形状に関する知見を得るために,柔軟な樹脂材が成形可能な三次元造形機を導入し,種々の形状を有する揺動板を製作する.三次元造形機を購入するためには本年度申請分の予算では不足分が生じたため,本年度予算の一部を次年度に繰り越し,次年度の予算と合算して購入することとした.柔軟な揺動板を成形するために,フレキシブルレジンが印刷可能な三次元造形機を導入する.現在,FORMLABS社のFORM2の購入を予定している.価格は650千円を見込んでいる.前年度未使用分との差額は,次年度の消耗品費より充当する.次年度の消耗品以外の使途に変更の予定はない.
妊娠の成立と維持に関する新しい免疫担当細胞の同定と機能解析

子宮内膜および末梢血におけるNK細胞表面に発現する活性性受容体であるCD16およびNKp46と他の活性性あるいは抑制性受容体との共発現を測定し、その生理学的意義、不妊症(着床不全)・不育症への関与を解明すること、さらには免疫担当細胞の妊娠の成立および維持に関する役割を明らかにすることを目的として、以下の検討を行った。施設倫理審査委員会の承認と患者への説明と同意のもと、子宮内膜組織を着床不全患者、不育症患者より採取した。子宮内膜組織は組織破砕機を用いて物理的に単細胞レベルまで粉砕し、NK細胞浮遊液を作成のうえ、子宮内膜NK細胞表面抗原(CD16(活性性)、CD56、NKp46(活性性)、CD158a(抑制性)、NKG2A(抑制性)、NKG2C(活性性)、NKG2D(活性性))発現およびサイトカイン産生(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10)をフローサイトメトリーにて測定した。NK細胞は、CD16+/CD56dim細胞の割合の高低により2群に分類した。また免疫担当細胞の生理的サイトカイン産生測定方法の開発を目的に、精液を用いて子宮内膜NK細胞を刺激し、生理的かつカップル特異的なNK細胞産生サイトカインを測定しうることを明らかにした。さらにサイトカイン産生およびサイトカイン産生比は、免疫異常の有無で異なることを示した。末梢血、子宮内膜を用いたNK細胞における活性性および抑制性受容体共発現測定およびサイトカイン産生は行い得た。また精液による子宮内膜各種受容体による細胞分離後のサイトカイン産生が現在進行中である。翌年度以降も継続して測定していく内容であるので、翌年度予定のものに加え継続して検討を行っていきたい。精液による子宮NK細胞刺激によるカップル特異的なサイトカイン産生も測定し得た。しかし、各種受容体による細胞分離後のサイトカイン産生が十分な結果を出し得ていない。翌年度以降も継続して測定していく予定である。NK細胞表面に発現するNKp46と他の活性性あるいは抑制性レセプターの共発現を測定し、その生理学的意義、不妊症(着床不全)・不育症への関与を解明すること、子宮内膜および末梢血における免疫担当細胞が妊娠の成立および維持に関する役割を明らかにすることを目的として、以下の検討を行った。本学倫理審査委員会の承認と患者への説明と同意のもと、子宮内膜組織を不育症患者より採取した。子宮内膜組織は組織破砕機を用いて物理的に単細胞レベルまで粉砕し、NK細胞富浮遊液を作成のうえ、子宮内膜NK細胞表面抗原(CD16(活性性)、CD56、NKp46(活性性)、CD158a(抑制性)、NKG2A(抑制性)、NKG2C(活性性)、NKG2D(活性性))発現およびサイトカイン産生(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10)をフローサイトメトリーにて測定した。以上よりNKp46+NK細胞には、活性性受容体と抑制性受容体を共発現するものが存在し、それらの発現形式によりNK細胞によるサイトカイン産生が異なることがはじめて示唆された。やや遅れているものと思われる。末梢血、子宮内膜を用いたNK細胞における活性性および抑制性受容体測定およびサイトカイン産生は行い得たが、研究代表者の異動があり、各種受容体による細胞分離後のサイトカイン産生が現在進行中である。翌年度以降も継続して測定していく内容であるので、翌年予定のものに加え継続して検討を行っていきたい。NK細胞表面に発現する活性性受容体であるNKp46と同様にNK細胞に発現するその他の活性性あるいは抑制性レセプターの共発現を測定し、その生理学的意義、不妊症(着床不全)・不育症への関与を解明すること、子宮内膜および末梢血における免疫担当細胞が妊娠の成立および維持に関する役割を明らかにすることを目的として、検討を行った。本学の倫理審査委員会の承認と患者への説明と同意のもと、子宮内膜組織を不育症患者より採取、子宮内膜NK細胞表面抗原(CD16(活性性)、CD56、NKp46(活性性)、CD158a(抑制性)、NKG2A(抑制性)、NKG2C(活性性)、NKG2D(活性性))発現およびサイトカイン産生(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10)をフローサイトメトリーにて測定した。NK細胞のうち、サイトカイン産生NK細胞であるCD56bright細胞では、細胞傷害性NK細胞であるCD56dim細胞に比して、有意にNKp46とNK細胞の抑制性受容体であるNKG2A、CD158aの共発現が高値であった。これは、活性性受容体であるNKp46はNK細胞の細胞傷害機能と抑制性受容体を多く発現する機能(サイトカイン産生能)双方に関与している事を示しているものと思われる。さらに子宮内膜NK細胞の分布をみると、細胞傷害NK細胞であるCD16+/CD56dim細胞が多くなると、NKp46とNK細胞活性性受容体であるNKG2Cとを共発現する細胞が高値となった。すなわち細胞傷害性の増加は各活性性受容体の共発現の増加からも示されていることが明らかとなった。また免疫担当細胞の生理的