hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
熱帯対流圏中層における雲層の出現頻度と出現特性に関する研究

本年度は,昨年度に収集したライダーデータを以下の点に注目しながら解析をおこなった.1.各観測地点の全データを用いての雲層の出現頻度の鉛直分布を調べ,地域間の相違と環境場の系統的な違いを考慮しながら比較した.中層の雲層の出現頻度極大は,全期間平均しても,どこの観測地点でも見られており,普遍的な性質を持っていることが明らかになった.2.出現頻度の季節変動や日周期,赤道付近で卓越する季節内振動であるMadden-Julian Oscillationに伴う変動について調べた.これまでよく言われてきたように,Madden-Julian Oscillationの対流抑制期から活発期への移行期ではなく,活発期に,最も頻繁に中層の雲層が観測されることが分った.また日周期も顕著で,明け方ら午前中によく見られることが分った.3.同時に収集する降雨レーダ,雲レーダ,ウインドプロファイラなどの観測データと比較し,降水システムとの対応を調べた.Madden-Julian Oscillationの対流活発期には,層状性降水の割合が高く,中層の雲層の頻出は層状性降水に深く関係していることが分った.4.同時に収集するラジオゾンデのデータから安定層の出現頻度を調べ,それと雲層の出現頻度を比較することで,安定層との関係について調べた.中層の安定層と雲層は,同時的に観測されることが多く,昨年度数値シミュレーションで示したように,雲微物理過程による生成が強く示唆された.本年度は,熱帯域におけるライダーの長期観測データの収集と数値モデルを用いた高度5km(0°C)付近における雲層の再現実験を行った.「ライダーの長期観測データの収集」本年度収集が完了したデータは,(1)国立環境研究所保有の熱帯西部太平洋上のデータ(2)米国Pacific Northwest National Laboratory保有のダーウィン,ナウル島,マヌス島のデータである.特に(2)に関しては,雲レーダ,Ceilometer,降水量のデータも併せて収集した.また首都大学東京保有のインドネシアスマトラ島のデータに関しても取得の手続きを取った.収集データは,現時点で700GBとなり,Raid Disk装置を購入し対応した.上記(2)のデータに関して,当初は現地に赴いての収集の可能性もあったが,担当者と打ち合わせした結果,直接現地に赴いて取得するよりも問題が少ないという結論に達したため,インターネット経由で約3ヶ月程度かけて取得した.「数値モデルを用いた高度5km(0°C)付近における雲層の再現実験」シミュレーションにはNCARで開発中の非静力学モデルWRFを使用した.数値モデルでも,観測で頻繁に見られる0°C付近における雲層の再現に成功した.この雲層に関して詳細に調べると,雲の凝結生成による加熱と融解過程による冷却が0°C付近の高度で,ほぼバランスしており,因果関係として後者が,前者を促していることが分かった.このようなメカニズムで,雲層が生成されることを指摘した研究は初めてであり,このメカニズムが,熱帯で良く観測される中層(特に5km,0°C付近)の雲層の生成要因になっている可能性が強く示唆された.またこの生成メカニズムから,熱帯対流圏中層の雲層は,層状性の降水が活発なときに頻出することが考えられる.今後収集データから,この点に注目して出現特性を調べていく予定である.本年度は,昨年度に収集したライダーデータを以下の点に注目しながら解析をおこなった.1.各観測地点の全データを用いての雲層の出現頻度の鉛直分布を調べ,地域間の相違と環境場の系統的な違いを考慮しながら比較した.中層の雲層の出現頻度極大は,全期間平均しても,どこの観測地点でも見られており,普遍的な性質を持っていることが明らかになった.2.出現頻度の季節変動や日周期,赤道付近で卓越する季節内振動であるMadden-Julian Oscillationに伴う変動について調べた.これまでよく言われてきたように,Madden-Julian Oscillationの対流抑制期から活発期への移行期ではなく,活発期に,最も頻繁に中層の雲層が観測されることが分った.また日周期も顕著で,明け方ら午前中によく見られることが分った.3.同時に収集する降雨レーダ,雲レーダ,ウインドプロファイラなどの観測データと比較し,降水システムとの対応を調べた.Madden-Julian Oscillationの対流活発期には,層状性降水の割合が高く,中層の雲層の頻出は層状性降水に深く関係していることが分った.4.同時に収集するラジオゾンデのデータから安定層の出現頻度を調べ,それと雲層の出現頻度を比較することで,安定層との関係について調べた.中層の安定層と雲層は,同時的に観測されることが多く,昨年度数値シミュレーションで示したように,雲微物理過程による生成が強く示唆された.
高血圧発症因子としての脳アセチルコリン系の解析-新しい形態学的アプローチ

まず、圧受容器反射調節に関与するアセチルコリンニューロンが延髄に存在するか否かを検討した。ラットを使用し、フェニレフリン(5mg/kg)を腹腔内投与して急性的に昇圧を起こし、3時間後に脳をパラホルム固定し、発現したc-fos蛋白を免疫組織学的に染色した。同切片においてアセチルコリン神経の指標とされるコリンアセチルトランスフェラーゼの2重染色を行った。フェニレフリン処置ラットにおいて、c-fos蛋白は、孤束核、尾側腹外側部、吻側腹外側部のニューロンに発現が認められた。フェニレフリンのかわりに生理食塩水を腹腔内適用した対照のラットにおいては、延髄全域においてc-fos蛋白の発現は認められなかった。コリンアセチルトランスフェラーゼを含むニューロンは、孤束核、外側網様核、延髄尾側から吻側にかけての腹外側部、迷走神経背側核、舌下神経核、顔面神経核に認められた。c-fos蛋白とコリンアセチルトランスフェラーゼ蛋白が同居するニューロンを検索したところ、尾側腹外側部のニューロンの一部にのみ同居が認められた。以上の結果は、圧受容器反射調節に関与しているアセチルコリンニューロンが、延髄尾側腹外側部に存在することを示唆する。また、本結果は、尾側腹外側部の化学的刺激が吻側腹外側部のアセチルコリン遊離を増大させるという先の私達の生化学的実験結果とよく一致する。次に、この圧受容器反射刺激に伴い、実際、コリンアセチルトランスフェラーゼのmRNAが発現するか否かを検討した。まず、無処置ラットを使用し、脳を4%パラホルムアルデヒド固定し、凍結後、脳切片を作成した。エタノール脱水後、ハイブリダイゼーション緩衝液に溶解した43merコリンアセチルトランスフェラーゼcDNAを切片に添加し、37°Cで16時間インキュベーションした。コリンアセチルトランスフェラーゼmRNAは孤束核および偽核のニューロンにおいて強く発現していることが認められた。現在、フェニレフリン連続投与後のラットにおける同mRNA発現を検討中である。
カール・シュミットの国際秩序思想における基本概念：媒介性・敵・中立

本年度は、カール・シュミットの主権論を中心に研究を進めた。とりわけ、「主権者とは、例外状態について決断する者である」という、カール・シュミットの主権の定義の意味を明らかにする研究を行った。シュミットは、国家における主権の担い手という問題を回避する「国家主権」論への批判的視座を維持しつつも、規範主義や多元主義から提起された説得的な主権批判論に反論するなかで、この主権の定義を提示した。規範主義や多元主義が、国家を、法規範によって与えられた権限を行使する諸機関の集合体に還元することで、法を超越する主権国家という観念を批判したのに対し、シュミットは、規範なき決定としての「例外状態に関する決定」を主権者の指標とみなすことで、主権概念の再生を図る。このような主権論の背景には、媒介的世界と無媒介的世界の区別という秩序像がある。すなわち、他者の権限領域を尊重する適正な手続を通じてのみ、自らの価値や正義を実現しうる媒介的世界(正常状態)と、そのような制約を度外視して、あらゆる事実的に必要な手段を用いて価値や正義を実現しうる無媒介的世界(例外状態)との区別を基盤とする秩序像である。そして、主権者は、その境界を司る者として定義される。この研究成果は、日本政治学会『年報政治学』の編集委員による検討会議(18年9月)において報告され、討議に付された。19年度には、その内容が『年報政治学』において公表される予定である。成果公表としては、本研究の成果を含む単著著作『法と力:戦間期国際秩序思想の系譜』(名古屋大学出版会)を出版し、その内容について、関西大学法学研究所特別研究会(18年7月)および北海道大学政治研究会(19年1月)にて報告した。本研究における核心的な概念である「媒介性」について、シュミットの初期の著作の分析を通じて、研究を進めることができた。さらに、主権という側面に限ってではあるが、「媒介/無媒介」という対抗を基軸とした分析の具体的成果を論文として執筆し、すでに入稿した(発行は19年度)。したがって、研究の進展および公表の準備という点において順調に進んでいると判断できる。これまでに明らかにした「媒介/無媒介」という秩序構想が、国際法論・国際秩序論についても維持されているかどうかを検討することが19年度の課題である。規範主義や多元主義による主権批判論は、そのままの形で、国際秩序思想に展開可能である。ケルゼンにおいては、根本規範の審級を一国の憲法から国際法へと繰り上げることによって、デュギーにおいては、国際的に存在する相互依存関係に基づく法規範を考慮することによって、国家の理論を、国際秩序の理論に容易に拡張できる。それに対し、シュミットの主権論の射程は、国家における権力の担い手の問題に限定されており、それをそのままの形で、国際秩序論に拡張することは難しい。しかし、抽象的な水準で把握された媒介/無媒介の区別という秩序構造は、シュミットの国際法論にも引き継がれているように思われる。今後は、その点を明らかにすることを目指す。戦間期国際法思想史と関連づけるかたちで、カール・シュミットの法思想の基層にある概念に関する研究を進めている。戦間期国際法思想史としては、シュミット思想の理解にも密接に関連する政治的要素を包摂する反実証主義的な国際法理論の研究についての成果を公表してきた。その成果に基づき、2018年3月に東京大学より「博士」(法学)の学位を取得した。シュミット法思想に関しては、日本政治学会『政治学年報』の編集に参加し、2017年8月に行われた研究会にてシュミットの主権論に関する報告を行った。また、2019年度の日本法哲学会学術大会における報告に向け、他の報告者との間で意見の交換を行っている。シュミットを中心として取り扱う論文の公表は19年度以降に行うことを予定しているものの、上記博士論文においても、その主要テーマである動態的国際法理論を理解するうえで必要な限りにおいて、カール・シュミットの法思想についての分析を行った。カール・シュミット研究に関連する国際法思想史研究については、成果の公表も含め順調に進んできた。また、シュミットの法思想そのものについての研究も、研究期間内における成果の公表を射程に入れたスケジュールで進捗している。

この研究成果は、日本政治学会『年報政治学』の編集委員による検討会議(18年9月)において報告され、討議に付された。19年度には、その内容が『年報政治学』において公表される予定である。成果公表としては、本研究の成果を含む単著著作『法と力:戦間期国際秩序思想の系譜』(名古屋大学出版会)を出版し、その内容について、関西大学法学研究所特別研究会(18年7月)および北海道大学政治研究会(19年1月)にて報告した。本研究における核心的な概念である「媒介性」について、シュミットの初期の著作の分析を通じて、研究を進めることができた。さらに、主権という側面に限ってではあるが、「媒介/無媒介」という対抗を基軸とした分析の具体的成果を論文として執筆し、すでに入稿した(発行は19年度)。したがって、研究の進展および公表の準備という点において順調に進んでいると判断できる。18年度は、シュミットの法思想そのものについての研究を推進し、19年度における成果公表を目指す。とりわけ、『政治学年報』や日本法哲学会において予定されている成果の公表は、他の研究領域との対話を深めるために重要であり、その準備に専念したいと考えている。これまでに明らかにした「媒介/無媒介」という秩序構想が、国際法論・国際秩序論についても維持されているかどうかを検討することが19年度の課題である。規範主義や多元主義による主権批判論は、そのままの形で、国際秩序思想に展開可能である。ケルゼンにおいては、根本規範の審級を一国の憲法から国際法へと繰り上げることによって、デュギーにおいては、国際的に存在する相互依存関係に基づく法規範を考慮することによって、国家の理論を、国際秩序の理論に容易に拡張できる。それに対し、シュミットの主権論の射程は、国家における権力の担い手の問題に限定されており、それをそのままの形で、国際秩序論に拡張することは難しい。しかし、抽象的な水準で把握された媒介/無媒介の区別という秩序構造は、シュミットの国際法論にも引き継がれているように思われる。今後は、その点を明らかにすることを目指す。2017年に予定していた外国出張につき、勤務先における学部の役職に就いたこともあり、予定の期間に他の用務による出張が立て込んだため、実施できなくなり、次年度使用額が生じた。次年度使用額243,343円と2018年度分請求額60,000円を合わせた843,343円につき、2018年度には、成果報告のための外国出張費400,000円、研究会参加のための国内出張費として130,000円、講演者謝金として210,000円、消耗品として103,343円を支出する予定である。
Driver遺伝子変異を有する肺癌における、空間・時間的な腫瘍内不均一性の解明

EGFR陽性肺癌(L858R陽性)をEGF Receptorを用いて反応させ、3例(全20例)が不均一染色であった。陽性部と陰性部から核酸に対し網羅的解析を行い、一塩基多型とコピー数多型での比較では、1例目は陽性部においてEGFRとCCNE1のCNVが陰性部より高値、2例目は陽性部においてEGFRとMDM2のCNVが陰性部よりも高値、3例目はCNVの変化は認めなかった。SNVに関しては3例とも不均一性を認めなかった。陽性部と陰性部の細胞分裂と細胞死の状態の相違は、症例1はki-67ラベルインデックスが陽性部で高く、症例2はTUNEL染色で陽性部により断片化DNAによるシグナルが認められた。EGFR陽性肺癌のうち、Common mutationによる変異蛋白を標的とした抗体を用いて免疫染色を開始するにあたり、L858R特異的抗体を用いた免疫染色を先行することとした。2004年-2014年に当科で外科切除されたEGFR陽性肺癌(L858R陽性)を対象とし、FFPEスライドより脱パラフィン化し、賦活化ののちに一次抗体EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb (Cell signaling社)を用いて反応させた。2013年より以前の症例では染色性が安定しなかったため、比較的新しい2014年-2015年のEGFR陽性肺癌を対象と再設定した。評価は染色強度(score 0-3)と、それぞれの陽性細胞割合(0-100%)で行った。陽性細胞割合に関しては×200倍視野で、腫瘍細胞ごとに評価を行い、その割合を調査した。対象は24例(2014年12例/2015年12例)であり、このうち3例(12.5%)が、腫瘍内に不染帯を含む、不均一な染色を認めた。また、腫瘍全体が染色されるものの、部位ごとに染色強度に差異を認めるものは15例(62.5%)であった。腫瘍内不均一性を認めた症例において、染色性の異なる箇所からそれぞれマイクロダイセクションを行い、ゲノム抽出を進行中で、今後q-PCRや次世代シーケンスにより遺伝子発現量や変異の差異の有無を調査する予定である。2)マイクロダイセクションの手技確立に時間を要していること。2014年1月から2015年12月に当科で外科切除が行われた、EGFR陽性肺癌(L858R)を対象とし、FFPEスライドより脱パラフィン化し、賦活化の後に一次抗体EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb (Cell signaling technology社)を用いて反応させた。評価は染色強度(score 0-3)で行い200倍視下で観察し、視野毎にそれぞれのscoreの割合を10%単位で記録した。腫瘍全体を評価し、10%単位で記録した。陽性細胞が存在し、かつ陰性細胞が10%以上を占める症例を不均一染色と評価した。対象は20例であり、このうち3例(15%)は、不均一染色であった。不均一染色を示した3例について、Oncomine cancer research panelを用いて網羅的解析を行うと、EGFR (Leu858Arg)の他に、NOTCH (Glu2016Gln)とTP53(Asp186Gly)の変異が共通したSNVとして検出されたが、これらと不均一性の関係について更に解析を進めている。また、この網羅的解析を行った3症例のうち、コピー数変化として、1症例でEGFR、3症例でNPM1の増幅を認めており、これらに関しても解析を進めていく。また、進行肺癌で近年臨床応用されている免疫チェックポイント阻害剤について、腫瘍細胞のPD-L1発現が効果予測因子であることが報告されている。我々は、非小細胞肺癌の切除例に対して、PD-L1発現についても免疫組織化学染色で検討を進めているが、多くの症例でその染色に不均一性が見られることが判明している。この不均一性が腫瘍細胞に由来するものか、腫瘍微小環境に由来するものか研究を進めている。腫瘍内不均一性へのアプローチとして、実験計画時点では、EGFR変異特異的蛋白の不均一発現から、EGFR遺伝子変異の陽性細胞が偏在を解析し、EGFRチロシンキナーゼ阻害剤(TKI)に対する耐性化への関連を想定して、研究を進めていた。しかし、近年の報告では、EGFR遺伝子変異は早期に生じる変異であり、腫瘍内では均一にすべての細胞で有しているとの見解が主流であり、当初の想定との解離が見られているため、遅れている。2014年1月から2015年12月に当科で外科切除を行われた、EGFR陽性肺癌(L858R陽性)を対象とし、FFPEスライドより脱パラフィン化し、一次抗体EGF Receptor (L858R Mutant Specific) (43B2) Rabbit mAb (CST社)を用いて反応させた。評価は染色強度(score 0-3)で行い×200倍視下で観察し、腫瘍全体で染色scoreの割合を記録。対象は20例であり、このうち3例は(15%)が、不均一染色であった。

これらの陽性部と陰性部からそれぞれ核酸を抽出し、ターゲットシーケンス(Oncomine Cancer Research Panel)を行い、一塩基多型(SNV)とコピー数多型(CNV)を比較した結果、1例目は陽性部においてEGFRとCCNE1のCNVが陰性部よりも高値であった(EGFR:陽性部19.54/陰性部3.03, CCNE1:陽性部18.59/陰性部2.59)。2例目は陽性部においてEGFRとMDM2のCNVが陰性部よりも高値であった(EGFR:陽性部8.21/陰性部2.90, MDM2:陽性部6.65/陰性部4.37)。3例目はCNVの変化は認めなかった。SNVに関しては3例とも不均一性を認めなかった。次に、ki-67染色(clone MIB-1, DAKO)とTUNEL染色(Rosch)を行い、陽性部と陰性部における細胞分裂と細胞死の状態の相違を評価したところ、症例1はki-67ラベルインデックスが陽性部で陰性部よりも高く(陽性部60.5%/陰性部16.5%)、症例2はTUNEL染色で、陽性部で陰性部よりも多く断片化DNAによるシグナルが認められた。EGFR陽性肺癌(L858R陽性)をEGF Receptorを用いて反応させ、3例(全20例)が不均一染色であった。陽性部と陰性部から核酸に対し網羅的解析を行い、一塩基多型とコピー数多型での比較では、1例目は陽性部においてEGFRとCCNE1のCNVが陰性部より高値、2例目は陽性部においてEGFRとMDM2のCNVが陰性部よりも高値、3例目はCNVの変化は認めなかった。陽性部と陰性部の細胞分裂と細胞死の状態の相違は、症例1はki-67ラベルインデックスが陽性部で高く、症例2はTUNEL染色で陽性部により断片化DNAによるシグナルが認められた。2016年以降の症例に関しても、免疫染色による不均一性の評価を進めていくと同時に、マイクロダイセクションによるゲノム抽出を進め、同一腫瘍内におけるEGFRコピー数の差異を、スマートサイクラー(Takara社)を用いた半定量的q-PCRにより評価を計画している。また、Miseq (イルミナ社)による次世代シーケンスを自施設で導入予定であり、遺伝子変異、増幅の網羅的解析によって腫瘍内不均一性を証明していく。先述の通り、近年の報告から、EGFR遺伝子変異が、肺癌腫瘍内で不均一に存在しているという、当初の予想とは反する報告が多く、EGFRの変異の有無のみで腫瘍内不均一性を検討するには限界がある。smart cycler(takara社)を用いたqRCRにより、免疫染色の結果、染色性の異なる箇所からEGFR(L858R)のコピー数を解析しており、ハウスキーピング遺伝子と相対定量での評価を行い、コピー数の異なる細胞集団の存在が示唆できるかを解析中である。コピー数の差異からsubcloneの存在が確からしい場合に、次世代シーケンスやOncoscan(Thermofischer社)などの手法を応用し、腫瘍内不均一性にアプローチしていく。また、免疫染色で不均一染色を認めた症例のうち、1例は治療過程でT790M陽性のTKI耐性化をきたしており、第3世代TKIであるosimertinibを使用したが、その奏効は転移部位により解離が見られた。全く奏効しなかった転移巣からはT790Mは検出されなかった。この臨床経過からも、肺癌におけるsubclonarityは示唆され、この症例に関して更なる検討を進めていく。
RNAi機構を介したヘテロクロマチン構造形成における分裂酵母Chp1の新規機能の解析

本研究は、分裂酵母のRNAi機構を介したヘテロクロマチン形成で中心的役割を果たす因子であるChp1のクロモドメイン(Chp1-CD)がメチル化ピストン(H3K9me)とRNAの両方を認識するという発見に基づき、その認識機構の詳細を明らかにすることを目的に以下の3つの課題を遂行した。1.RNA結合能を欠損する変異型Chp1-CDのH3K9me認識能の定量的測定:昨年度に引き続き、Chp1-CDのRNA結合に関与する3つのアミノ酸残基の変異が、Chp1-CDのH3K9me認識能に与える影響を調べるため、超高感度等温滴定型カロリメータ測定を行い、結合定数を算出した。その結果、RNA結合欠損型Chp1-CDのH3K9me認識能が野生型とほぼ同程度に保持されていることが確認された。2.Chp1-CDのRNA認識能とH3K9me認識の相互関連の解析:昨年度までに示唆されていた、Chp1-CDのRNA結合能とH3K9me認識能の相乗的な関係について、EMSAによる滴定実験を行い、その結合定数を算出した。その結果、Chp1-CDのRNA結合がH3K9me添加により約10倍強くなったことから、Chp1-CDはH3K9me結合時には単体時とは異なる様式でRNAと結合することが示唆された。NMR解析の結果、RNA添加によってC-末端のα-ヘリックス領域の化学シフトが確認されたため、変異解析から、実際にこの領域がH3K9me結合時のChp1-CDのRNA結合に関与することを確認した。3.ヘテロクロマチン構造形成におけるChp1-CDのRNA結合能の意義の解析:RNAi機構を介したヘテロクロマチン構造形成におけるChp1-CDのRNA結合能の重要性を調べるため、RNA結合能を欠損させた変異Chp1を発現させ、ヘテロクロマチンタンパク質Swi6とH3K9meの局在、小分子RNAの産生、RITS複合体形成への影響を調べた。その結果、Chp1-CDのRNA結合能はRITS複合体形成には大きな影響を持たないが、Chp1のサイレンシング機能に必須であることが明らかになった。当初の予想に反し、Chp1-CDのRNA結合部位がChp1-CD単体とH3K9me結合時で異なっており、in vitroにおいてもin vivoにおいても、その解析に多くの実験手法と時間を要した。この予想外の結果と、それに伴う新たな実験の追加により、本研究の計画外の成果が得られたことは評価できる。また、当初予定していた細胞周期におけるRNA結合能の役割やChp1の化学修飾の関連性については未解析であり、今後の課題と考えられる。Chp1のクロモドメイン(Chp1-CD)とRNAとの相互作用を解析するゲルシフトアッセイにおいて、9番目のリジンがメチル化されたヒストンH3(H3K9me)ペプチドの添加による変化を解析した。その結果、RNAと結合しているChp1-CDのバンドが、H3K9meペプチドの添加によりスーパーシフトすることが確認された。これにより、Chp1-CDはメチル化ヒストンテイルとRNAの両方を同時に認識できることが示唆された。さらに、H3K9meペプチドの添加により、Chp1-CDのRNA結合が促進されることも確認された。以上より、Chp1-CDの有するRNAとH3K9meへの結合に相乗的な関係があることが示唆された。本研究での課題の一つとしてChp1-CDの三次元構造の解明を提案していたが、昨年その構造が他の研究チームにより報告された(Schalch et al.Mol.Cell 2009)。しかし、解かれた構造とRNA結合との関連は未だ明らかにされていないため、Chp1-CDのRNAとの結合様式の解明を目指し、現在タンパク質発現条件等について検討を行っている。これまでの研究から、Chp1はN末端のCDだけでなく、中央領域のRRMを介してもRNAに結合できる事を見出していた。Chp1の機能とRRMのRNA結合活性について詳細に解析するために、RRM内でRNA認識に関わる領域の特定を試みた。RRMの部分欠損タンパク質を用いたゲルシフトアッセイにより、RNA結合に必要な領域を限局していった結果、374番目のプロリンから393番目のリシンのアミノ酸配列を欠損するとRNAとの結合が見られなくなったことから、この20アミノ酸残基がRRM内のRNA認識に必須な領域であることが示唆された。本研究は、分裂酵母のRNAi機構を介したヘテロクロマチン形成で中心的役割を果たす因子であるChp1のクロモドメイン(Chp1-CD)がメチル化ヒストン(H3K9me)とRNAの両方を認識するという発見に基づき、その認識機構の詳細を明らかにすることを目的に研究を遂行している。昨年度までの研究からRNA結合に関与することが示されたChp1-CDの3つのアミノ酸残基について、これらのアミノ酸の変異がChp1-CDの既知の機能であるH3K9me認識能にどのように影響するのか定量的解析を試みた。まず、ペプチドプルダウンアッセイで各変異型タンパク質のH3K9me認識能を調べた結果、RNA結合能を欠損させても、野生型と同様にH3K9meに結合することが確認された。この結合を定量的に測定するため、蛍光偏光測定による計測を試みたが、タンパク質の凝集等の理由により正確な測定結果を得るのが困難であった。そこで、比較的低濃度の試料で測定可能な超高感度等温滴定型カロリメータ"VP-ITCシステム"による測定を試みた。

予備的な解析により野生型Chp1-CDの解離定数が計測可能であることを確認しており、変異型タンパク質についても同様に測定する予定である。また、Chp1-CDのRNA結合能とH3K9me認識能の相乗的な関係についても、VP-ITCを用いて検討する予定である。課題2.RNAi依存的ヘテロクロマチン構造形成におけるChp1の機能とそのRNA結合能の関連の解析分裂酵母のサイレンシング異常を指標にしたin vivo実験によって、昨年度までにH3K9me結合能とRNA結合能の両方を欠失した変異Chp1を発現する株では、chp1完全欠損株と同程度のサイレンシング異常を示すことを確認した。本年度は、これらの変異株のサイレンシング異常の程度を定量的に比較するため、qPCRによりマーカー遺伝子発現量を解析した。その結果、H3K9me結合能とRNA結合能の両方を欠失した変異Chp1を発現する株は、chp1完全欠損株に比べてサイレンシング解除の程度が低く、CD欠損株と同程度のサイレンシング異常を示すことが明らかになった。これより、Chp1のサイレンシング機能はCDだけでなく、他の領域も関与していることが示唆された。そこで、Chp1の中央領域に存在するがChp1の機能との関連が明らかにされていないRNA認識モチーフ(RRM)の関連を調べるため、RRM欠損株を作成しサイレンシングに対する影響を検討したところ、RRMだけを欠損させてもほとんどサイレンシング異常は示さないが、CDとRRMの両方を欠損させるとCDのみを欠損させた株に比べサイレンシングの異常が強くなる、相加的な影響を示すことが確認された。以上より、Chp1のサイレンシング機能にはCDとRRMが協調的に関与していることが示唆された。本研究は、分裂酵母のRNAi機構を介したヘテロクロマチン形成で中心的役割を果たす因子であるChp1のクロモドメイン(Chp1-CD)がメチル化ピストン(H3K9me)とRNAの両方を認識するという発見に基づき、その認識機構の詳細を明らかにすることを目的に以下の3つの課題を遂行した。1.RNA結合能を欠損する変異型Chp1-CDのH3K9me認識能の定量的測定:昨年度に引き続き、Chp1-CDのRNA結合に関与する3つのアミノ酸残基の変異が、Chp1-CDのH3K9me認識能に与える影響を調べるため、超高感度等温滴定型カロリメータ測定を行い、結合定数を算出した。その結果、RNA結合欠損型Chp1-CDのH3K9me認識能が野生型とほぼ同程度に保持されていることが確認された。2.Chp1-CDのRNA認識能とH3K9me認識の相互関連の解析:昨年度までに示唆されていた、Chp1-CDのRNA結合能とH3K9me認識能の相乗的な関係について、EMSAによる滴定実験を行い、その結合定数を算出した。その結果、Chp1-CDのRNA結合がH3K9me添加により約10倍強くなったことから、Chp1-CDはH3K9me結合時には単体時とは異なる様式でRNAと結合することが示唆された。NMR解析の結果、RNA添加によってC-末端のα-ヘリックス領域の化学シフトが確認されたため、変異解析から、実際にこの領域がH3K9me結合時のChp1-CDのRNA結合に関与することを確認した。
東南アジアの中継貿易港-シンガポールにおける日系物流企業の経営戦略

シンガポールは東インド会社に進出してから世界的な中継貿易港としての基盤を築き、しかも、東南アジアにおける貿易、金融、情報、ハイテク、造船、海運の中心的存在である。すなわち、中継貿易港、商業都市としての歴史的な繁栄の上に、外国投資と相俟って目覚しい工業化と国際的金融機能が加わり、その活発な経済活動はアジアNIEsの一員として注目を集めている。東南アジアの中継貿易港として発展してきたシンガポール港では、コンテナ貨物の8割以上を接続貨物で占めている。近年は、日系メーカーの東アジアヘの生産拠点シフトに伴う同地域の国際貿易の拡大によって、同地域のコンテナ荷動きも隆盛を呈している。東アジアのコンテナ荷動きの増大に応じて、日系国際複合一貫業者をはじめ、船社系や、航空会社系、メーカー系、輸送業者系、倉庫業者系、総合商社系が現地法人や駐在員事務所の拠点を拡充する一方、倉庫や物流センター施設の増強、内陸トラック輸送サービスの強化などハード・ソフトに相当な力を入れている。例えば、シンガポールにおける日系物流企業による自営倉庫や物流センターの運営、域内の輸配送、海外との一貫輸送窓口としての新規進出も見られる。以上を踏まえて、本論文はまず、(1)中継貿易港としてのシンガポール港の略史に触れ、そしてシンガポール・ジョホール・リアウを結ぶ「成長の三角地帯」経済圏の構想を解明し、続いてシンガポールを中継港とするハブ・アンド・スポーク・ネットワークの構築を取上げる。また、シンガポールの港湾運営政策を紹介する。さらに、シンガポールにおける日系物流企業の経営戦略を明らかにし、最後に東南アジアのコンテナ物流におけるシンガポール港の役割を検討する。・研究経過2001年6月に香港で行われたInternational Conference, IAME(International Association of Maritime Economist)でThe Rise of Container Transportationについて発表し、また、本研究(シンガポールにおける日系物流企業の経営戦略)に取り組むために、8月にマレーシアのPort Kelang港湾局などを訪問し、マレーシアとシンガポールの間の海上貨物に関する調査を行っており、シンガポールでシンガポールにおける日系企業の一部および港湾局への聞き取り調査を行ってきました。さらに、10月に韓国・釜山で行われたMarine Week 2001Symposiumに出席し、国際物流に関する資料の収集を行ってきた。・到達点今まで、研究テーマの内容の一部を構成する、(1)国際物流におけるシンガポールの地理的優位性、(2)シンガポール、マレーシアのJohore州、インドネシアのBatam島からなる成長三角洲(Growth Triangle)における国際水平・垂直分業(Horizontal, Vertical division)の補完関係、(3)シンガポールの港湾管理・運営戦略、の執筆が完成した。特に(3)に関しては、すでに『海運』2001年4月号、5月号(連載)、日本海運集会所で掲載された。・今後の研究計画2002年の8月初旬に再びシンガポールに行って、港湾視察をはじめ、各関連機関や日系物流企業への本格的な聞き取り調査を行う。実地調査を通じて集めてきた資料を整理し、今年8月末に北海道で行われる「日本港湾経済学会」全国大会で発表することになる。すなわち、中継貿易港、商業都市としての歴史的な繁栄の上に、外国投資と相侯って目覚しい工業化と国際的金融機能が加わり、その活発な経済活動はアジアNIEsの一員として注目を集めている。シンガポールは、東洋と西洋を結ぶ海上要衝という地理的優位性を生かし、他の東南アジア諸国に先駆けてインフラ整備に注力した結果、道路、港湾、空港、電力、および情報通信などのインフラ水準が相当に高く、充実度は世界のトップクラスにある。近年は、日系メーカーの東アジアへの生産拠点シフトに伴う同地域の国際貿易の拡大によって、同地域のコンテナ荷動きも隆盛を呈している。

東アジアのコンテナ荷動きの増大に応じて、日系国際複合一貫業者(NVOCCあるいは航空貨物フォワーダー)をはじめ、船社系や、航空会社系、メーカー系、輸送業者系、倉庫業者系、総合商社系が現地法人や駐在員事務所の拠点を拡充する一方、倉庫や物流センター施設の増強、内陸トラック輸送サービスの強化などハード・ソフトに相当な力を入れている。例えば、シンガポールにおける日系物流企業による自営倉庫や物流センターの運営、域内の輸配送、海外との一貫輸送窓口としての新規進出も見られる。また、国際複合一貫輸送もアジア域内貿易に対応した網の目サービスが構築され、現地法人間を結ぶキメの細かいサービスを提供し、積極的な業務展開を見せている。
授業における児童生徒の学習過程に関する国際比較分析

研究の目的は、アメリカ基礎教育協会(Council of Basic Education)が主催する『世界の学校(School Around the World)』に参加し、授業を提供することにある。参加国はアメリカ、イギリス、フランスドイツ、チェコ、ホンコンと日本である。参加者は、小学校4年、中学校2年(一部高校12年)の理科(生物)、社会科(歴史)および国語(当分、国語は除外におく)の単元レベルの授業を持ち寄り、検討し、比較することになっている。日本は次の3つのタイプの学校の授業を記録し、検討し、英訳し、提供した。(1)第1年目は、大学付属学校の授業(2)第2年目は、オープン・スペース・スクールの授業(3)第3年目は、一般校(児童・生徒数が30人前後の学級)の授業比較・検討にあたって、共通なフレームを作成し、それぞれの国がそれぞれの単元に対する基礎的なデータを提供した。また、3人の児童生徒(上位、中級、下位)の学習活動の足跡(student works)をそれぞれの単元について集約し、提供した。さらに、一つの単元の授業を約1時間のVTRに収め、授業の実際の姿を提供した。比較・分析にあたり、参加国はそれぞれのナショナル・カリキュラムを検討した。理科(生物)の指導内容にはかなり共通性が見られるが、社会科(歴史)には共通性が見られない。また、実際の授業の在り方は大きな違いがあることは、初頭から予想されるところであった。また、児童生徒の学習活動の足跡となると違いは大きく、結局、共通の比較のフレームができずに終わった。但し、共通なフレームとして、たとえばB.ブルームらの「教育目標の分類学」、あるいはメンバーの一人が提案した「思考過程」が話題になった。参加国の足の乱れは、それぞれの国の研究費の額によって引き起こされ、日本の場合、英語訳にも経費を大きくさいた。3ヶ年経過したが、比較分析はやっと緒についた段階と言ってよい。米国のCouncil of Basic Educationが主催する国際比較研究“School Around the World"プロジェクトに参加した第一年目にあたる本年は次のような授業記録を得た。愛知教育大学の附属岡崎小学校、附属名古屋中学校および附属高等学校の協力を得て、小学校4年、中学校2年および高校2年の社会(歴史)、理科(生物)および国語の授業を小ないし中単元のレベルで記録した。7単元の授業をビデオ収録し、一部、適切な部分の話し合いプロセスを分析した。また、指導案について検討した。さらに指導案に基づくそれぞれの授業のプロセスを、「課題づくり」「追求」および「まとめ」の段階に分けて、児童生徒の学習活動を分析した。これら三つの段階では、児童生徒の学習活動の記録--カードやノートのコピー、自己評価カードなど--を収集し、分析した。小学校では社会科「昔はどうだったのかな」(810時間)、理科「人のからだと運動」(8時間)、中学校では社会科「開国、日本にとって鎖国したことはよかったのか」(7時問)、理科「生命を支えるしくみ」(8時間)、高校では社会科「20世紀の戦争と日本の植民地支配」(58時間)、理科「生命活動と酵素」(58時問)、国語「日本語表記の変遷に学ぶ」(510時間)の授業を記録した。平成11年5月のワシントン会議での国際会議にこれらの単元の授業記録を持参し、他の諸国と同じフォーマットでそれぞれの授業をCD-Romにまとめることになっている。1)平成11年度は萱田小学校、卯ノ里小学校、緒川小学校、池田小学校、大府中学校、富木島中学校、田市施中学校で授業を取材した。2)教科は理科(生物)と社会(歴史)であり、学年は小学校4年、中学校2年であった。3)授業をための指導案、児童生徒の学習活動の記録および授業のビデオ収録を収集した。4)収集した授業を目標分析、学習活動分析を行った。分析はまだ途中の段階であるが単元およびねらいはほぼ共通している。しかし、その取り扱い方にはかなりの違いがある。すなわち(A)共通課題と(B)選択課題、(1)小集団による追求と(2)個人による追求の組み合わせ(A-1,B-1,A-2,B-2)よりなるパターンが読みとれた。さらに、これらのパターンにおける「教師の支援」がみられるが、そこには一定のパターンがみられなかった。5)収集した授業の一部を英訳し、アメリカ「基礎教育会」に送付し、国際比較研究のデータとした。

さらに、一つの単元の授業を約1時間のVTRに収め、授業の実際の姿を提供した。比較・分析にあたり、参加国はそれぞれのナショナル・カリキュラムを検討した。理科(生物)の指導内容にはかなり共通性が見られるが、社会科(歴史)には共通性が見られない。また、実際の授業の在り方は大きな違いがあることは、初頭から予想されるところであった。また、児童生徒の学習活動の足跡となると違いは大きく、結局、共通の比較のフレームができずに終わった。但し、共通なフレームとして、たとえばB.ブルームらの「教育目標の分類学」、あるいはメンバーの一人が提案した「思考過程」が話題になった。参加国の足の乱れは、それぞれの国の研究費の額によって引き起こされ、日本の場合、英語訳にも経費を大きくさいた。3ヶ年経過したが、比較分析はやっと緒についた段階と言ってよい。(1)平成12年度は、昨年記録した緒川小学校、卯ノ里小学佼、池田小学校、富木島中学、田布施中学校の授業記録を英語に訳出した。(2)さらに神明中学校および安下庄中学校で理科の授業を記録した。(3)訳出したものは、指導案及び抽出した3人の児童生徒の学習活動(student works)である。(4)これらの資料に各学校の紹介となるフェイスシートをつけて、アメリカの基礎教育協会(Council of Basic Education)に送付した。(5)他方、記録した授業に関して目標分析および学習活動の分析を続行した。(6)報告書を作成した。(7)以上のような研究活動に加えて、アメリカ、イギリス、フランス、ドイツより理科(生物単元)の授業に関して指導案及び三人の児童・生徒の学習活動の記録を入手することができ、授業における児童・生徒の学習過程に関する比較分析を行った。その結果、小学校理科では野外あるいは教室での動植物の収集・観察をどの国でも重視していることが分かった。ねらいとしているところは(1)動植物の生態、(2)季節の変化、(3)両者の関わりについて理解させることである。中学校の理科では(1)細胞分裂、(2)身体構造の理解が目指されていることが分かった。学習シートを用いた学習や解剖が行われている。社会科(歴史)に関しては、他国からの報告はなく、国内の研究に止まった。小学校の社会科は地域教材を活用しての郷土理解が目指されており、中学校では日本史の流れの理解が目指されている。
計算とルディクス: 論理・計算・複雑さのための一般的フレームワーク構築に向けて

本研究の主題は、線型論理から派生したルディクス("遊び"の理論)を研究し、「対話(相互作用)としての計算」の理解に役立てることにある。本年度は、過去2年間の研究の仕上げとして、下記の作業を行った。1.前年度に引き続き、線形論理証明論において重要な役割を果たす焦点化原理の分析を行った。4月に来訪したSaurin博士とともに、前年度に考案した焦点化原理の代数的表現についての最終討議を行った。成果は国際学会MFPS'10にて発表した。2.前年度に引き続き、無限的・余帰納法的な文脈で対話的完全性の研究を行った。これは数理論理学におけるラッセル・パラドックス、プログラミング理論における一般再起型の解釈、実現可能性理論における直行性の概念など、多くの重要概念を統合するものとなった。前年度に執筆した論文についての最終検討を行い、結果は論理・理論計算機科学分野において最も権威のある国際学会の一つであるLICS'10にて発表した。3.2008年-2009年度にかけて行った、伝統的なゲーデル完全性とゲーム意味論的な対話的完全性の関係をルディクスの枠組みで確立する研究について、最終版を雑誌論文の形にまとめ上げた。その際、ルディクスの体系と極性付き線型論理との対応関係について根本的な見直しを行った。論文は国際誌Logical Methodsin Computer Scienceに投稿し、受理された。本年度は以下の3点を目標としていた。1.ルディクス理論を反復に関して拡張する問題に最終解決を与える。2.計算論的ルディクスを拡張することにより、さまざまな論理学的現象にルディクスの観点から説明を与える。3.余代数理論とルディクスの関係の確立1については、予定通りにC.Faggian博士との共同研究を遂行し、ルディクスの基本定理たる充満完全性定理(統語論と意味論の完全対応)に完全な証明を与えることに成功した。成果は国際学会LICS'09に投稿し、受理された。また雑誌論文の執筆をほぼ完了し、近日中に投稿予定である。2については、ルディクスの枠組みで伝統論理学的なゲーデル完全性とゲーム意味論的な対話的完全性の間の関係を研究した。ゲーデル完全性は、どんな命題についても証明か反例モデルかのどちらか一方が存在することを主張するものであるが、そこには(現実のディベートに見られるような)証明と反例モデルの間の対話は見られない。ゲーム意味論においては、証明と反証の間の対話を伴うより現実に即した形の完全性概念の萌芽がみられるが、明確であるとは言い難い。本研究は、ルディクスの枠組みで、対話的完全欧の概念をより明確にした。その上でゲーデル完全性を導くのと類似の手法(証明探索法)を用いて対話的完全性定理を証明した。結果としてゲーデル完全性のもつさまざまな性質(特にレーヴェンハイム=スコーレム定理)が対話的な文脈にもたらされることとなった。3については、研究を継続中である。2009年度は下記の研究を行った。1.線形論理証明論において重要な役割を果たす焦点化原理について、ルディクス理論の観点から分析を行った。焦点化原報は証明探索・論理プログラミングなどの操作的な観点から説明されるのが常であるが、本研究ではある種代数的な定式化を与えることに成功した。成果はワークショップ『ゲーム・対話・相互作用』、および国際学会MFPS'10に投稿し、受理された(Basaldella, Saurin,照井の共同研究)。2.昨年度に引き続き、伝統的なゲーデル完全性とゲーム意味論的な対話的完全性の関係性をルディクスの枠組みで確立する研究を行った。昨年度の研究が伝統的な有限的・帰納的観点に根ざしていたのに対し、本年度の研究は、無限的・余帰納法的観点からそれを補完するものであり、数理論理学におけるラッセル・パラドックス、プログラミング理論における一般再起型の解釈、実現可能性理論における直交性の概念など、多くの重要概念を統合するものとなった。成果は論理・理論計算機科学分野において最も権威のある学会の一つであるLICS'10に投稿し、受理された(Basaldella,照井の共同研究)。
メタボリックシンドロームにおけるオルガネラ機能不全と腎尿細管間質障害機構の解明

前年度、vaspinが近位尿細管細胞にtunicamycinやthapsigarginで刺激した際の、小胞体ストレス亢進やオートファジー不全を軽減することを示した。本年は、その分子機構としてvaspinと相互作用する分子の同定および作用機序の解明を行った。培養細胞を用いた免疫沈降およびLC-MS/MS解析、western blotにより、vaspinはHSPA1L (Heat shock 70 kDa protein 1L)と結合することを明らかにした。さらに肝細胞や血管内皮細胞と同様に近位尿細管細胞においてもvaspinとGRP78と結合を認めた。さらにHSPA1L, GRP78はクラスリン重鎖と複合体を形成し、細胞表面での局在を確認し、これらの複合体はエンドサイトーシスに寄与すると考えられた。そしてGRP78抗体添加によりvaspinの細胞内への取り込みは抑制された。また小胞体ストレス誘導物質やパルミチン酸刺激により、形質膜のGRP78発現は亢進し、一方で高糖濃度培養では形質膜のGRP78発現は著減した。さらに、近位尿細管細胞において既知であるメガリンによるエンドサイトーシスを介したvaspinの取り込みを検討したところ、メガリンとvaspinの高親和性の結合を認めた。Vaspinは近位尿細管細胞においてメガリンのみならず細胞表面のGRP78やHSPA1Lを介して細胞内に取り込まれ、小胞体やリソソームに輸送され、オルガネラへ作用する機序が考えられた。Vaspinと相互作用する分子を明らかにし、Vaspinが近位尿細管細胞に作用する経路として、メガリンを介した経路、またGRP78やHSPA1Lを受容体としてクラスリン依存性のエンドサイトーシスの経路が明らかになった。HSPA1Lについてはこれまで殆ど機能が解明されていないため、糖尿病や肥満における近位尿細管細胞で、前述のエンドサイトーシスへの関与以外にどのような機能を有するか明らかにする。またバスピンがHSPA1Lと結合して、細胞内で作用する分子機構を解明する。また、Vaspinは肝細胞表面GRP78・DNAJC1複合体に結合することを示した。そこで近位尿細管細胞におけるDNAJC1の機能についても検討する。肥満や糖尿病を背景とした慢性腎臓病が増加し、対策が急がれている。糖尿病や肥満による糸球体障害は従来研究されているが、腎予後と強く相関する尿細管間質障害については充分に解明されているわけではない。我々は肥満や糖尿病による近位尿細管障害に着目した。そして我々が同定したアディポカインであるvaspinが、肥満や糖尿病における近位尿細管障害を抑制する可能性が示唆されたため、本研究において検討する。肥満や糖尿病では小胞体ストレスが亢進しているが、培養近位尿細管(HK2)細胞を用いて、tunicamycin(tm), thapsigargin(tg)で小胞体ストレスを誘導すると、eIF2αリン酸化やGRP78, CHOP発現の増加やアポトーシスの増強が観察され、vaspin添加によりこれらが抑制された。また、オートファジーに関わるLC3、p62もtmやtgで増加したが、vaspinはp62蓄積を抑制しオートファジ不全を軽減する可能性が示唆された。tmやtgによるNLRP3, caspase1, IL1βなどインフラマソーム活性化もvaspinにより抑制された。小胞体ストレス誘導により、ライソゾーム膜蛋白であるlamp1,lamp2, HSP70などの蛋白発現減少を認めた。既報ではライソゾーム膜障害や透過性亢進にによりカテプシンBが細胞質に放出されてNLRP3インフラマソームが活性化されることが報告されているが、HK2細胞にtm, tgを添加するとカテプシンBのライソゾームから細胞質への局在変化が観察され、vaspinによりこれが軽減された。初年度の目標である、肥満や糖尿病における近位尿細管障害を細胞内小器官の観点から検討し、vaspinによる障害抑制を示すことができた。また、tm, tgによる小胞体ストレス誘導だけでなく、飽和脂肪酸(パルミチン酸)によっても同様の結果が得られた。

Vaspinは近位尿細管細胞においてメガリンのみならず細胞表面のGRP78やHSPA1Lを介して細胞内に取り込まれ、小胞体やリソソームに輸送され、オルガネラへ作用する機序が考えられた。Vaspinと相互作用する分子を明らかにし、Vaspinが近位尿細管細胞に作用する経路として、メガリンを介した経路、またGRP78やHSPA1Lを受容体としてクラスリン依存性のエンドサイトーシスの経路が明らかになった。小胞体とミトコンドリアの連関すなわち、小胞体ストレスによるミトコンドリアへのCa2+流入増加とアポトーシスに着目して、分子機構を検討する。さらに近位尿細管においてvaspinと相互作用する分子を同定し、vaspinの作用分子機構を解明する。HSPA1Lについてはこれまで殆ど機能が解明されていないため、糖尿病や肥満における近位尿細管細胞で、前述のエンドサイトーシスへの関与以外にどのような機能を有するか明らかにする。またバスピンがHSPA1Lと結合して、細胞内で作用する分子機構を解明する。また、Vaspinは肝細胞表面GRP78・DNAJC1複合体に結合することを示した。そこで近位尿細管細胞におけるDNAJC1の機能についても検討する。