hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
高分子ナノカプセルにおけるガラス転移ダイナミックスの特性化

本研究は,厚さが数十ナノメートルの高分子からなるシェル層と,カルシウム結晶体のコア部分で構成されるカプセル微粒子の熱物性,とくにガラス転移温度(T_g)での分子運動特性を明らかにすることを目的とした。高分子シェルのガラス転移挙動はナノサイズのシェルに特有の特異なT_gの上昇や運動の協同性の減少挙動がみられることがわかった。これはコア/シェル界面の影響や高分子網目構造の不均一性などに起因することが示された。棒状の炭酸カルシウム微粒子をコア、ポリスチレンをシェルとするナノカプセルの合成を行った。モノマーなどの仕込み量を制御することにより、シェル厚の異なる試料を合成することができた。また、架橋剤の仕込み量を制御することにより、架橋密度の異なる数種の試料を合成した。さらに、界面の効果を調べるため、シランカップリング剤を添加した試料の合成も行った。以上の全ての試料について中空化した試料を塩酸処理により合成した。合成した試料の形状やサイズを調べたところ、シェル層の厚さは2080nmの範囲で制御されており、また、中空化試料についても中空構造を確認することができた。合成した全ての試料についてガラス転移温度TgなどをDSC Step-Scan法により測定した。その結果、架橋なしの試料においてはポリスチレンシェルのTgはバルク試料とほぼ一致した。一方、架橋した試料においては、Tgは対応する架橋バルク試料よりも高くなった。このような傾向はシェル層の厚さが小さいほど顕著にみられた。さらに、中空微粒子においてはコア/シェル微粒子よりもTgが低くなる傾向がみられたが、それでもなおバルクのTgよりも高いことがわかった。また、シランカップリング剤の添加によってTgの増大がみられた。以上の結果は、界面での易動度低下の効果、架橋の不均一性の効果、およびconfigurationの効果がTgに影響を与えたことが示唆された。ガラスラス転移ダイナミックスについては、まずガラス転移のシグナルがバルク試料よりもブロードになることがわかった。これは、動的特性長ξが増大することに対応する。この傾向は架橋度の増大とともに顕著にみられた。次に、冷却過程の温度変調DSC測定によりガラス転移ダイナミックス、および構造緩和過程を特徴付けるパラメタの評価手法をほぼ確立することができた。棒状の炭酸カルシウムウィスカル(長さ3μm、直径300nm)の表面に厚さ2080nmの架橋ポリスチレンシェル層を形成させた試料について、ガラス転移温度(Tg)とTgにおける特性長ξ(Tg)をstep-scan法DSC、および温度変調DSC法により評価した。得られた結果より、バルク試料に対するシェル層のTgの比は、膜厚の減少とともに増大することがわかった。これはコア/シェル界面での高分子鎖の吸着による易動度の低い層が存在することにより説明できる。しかしながら、中空試料のTgについても同様の傾向が見られた。この理由は明確ではないが、1つの原因としては、架橋の不均一性、すなわち、架橋セグメントの界面付近への集中が考えられる。また、バルク試料に対するシェル層の動的な特性長ξ(Tg)の比は、膜厚の減少とともに減少することがわかった。これは、膜厚の減少とともにガラス転移温度(あるいは易動度)の分布が幅広くなることを示唆している。得られたξ(Tg)を上記の界面近傍の易動度の低い層の厚さと同程度であると仮定すると、易動度の低い層のTgは架橋度に依存して450560K程度と見積もられた。シェル層を架橋ポリメタクリル酸メチルとしたカプセル粒子の合成を行い、Tgの測定を行った結果、架橋ポリスチレンシェルと定性的に同様の傾向がみられた。また、シェル層のモルホロジーは架橋ポリスチレンとは異なり、表面がなめらかで厚さの薄いものが得られることがわかった。これは重合のメカニズムが架橋ポリスチレンとはかなり異なることを示唆している。1.架橋したポリメタクリル酸メチル(PMMA)をシェルとする棒状カプセル微粒子のガラス転移ダイナミックスの検討を行った。その結果、シェルPMMAのガラス転移温度(Tg)は対応するバルク試料よりも高く、この傾向は架橋度の増大とともに強くなることがわかった。また、Tgにおける動的特性長は架橋度の増大とともにわずかに減少することがわかった。これらの結果は架橋の不均一性、シェル内での特異なconfiguration、コア/シェル界面での強い相互作用などに起因すると考えられる。得られたTgと特性長のデータをさらに多層モデルに基づいて解析し、界面近傍でのTgの評価を行った。以上の結果は架橋ポリスチレンシェルの結果と類似していることがわかり、棒状カプセル微粒子のシェルの熱物性の普遍的な性質が解明できた点で有意義な成果が得られたと考えられる。2.棒状ナノカプセルの重合過程について検討を行った。その結果、ポリスチレン/ジビニルベンゼン系の重合では、乳化重合と懸濁(バルク)重合が競合して起こっていることが明らかになった。

これらの割合は乳化剤の濃度に大きく依存することもわかった。3.ベシクルテンプレート法によるナノカプセルの合成を試みたが、光重合の過程で問題が生じ、カプセルの合成を確認することができなかった。そこで、別法として交互吸着法と架橋反応を組み合わせてキトサン系高分子をシェルとする棒状ナノカプセルの合成を行い、厚さ2050 nmのシェルを形成させることができた。この方法を応用すると、さらに多種類の高分子ナノカプセルについてそのガラス転移ダイナミックスを検討することが可能であり、この点で大きな成果が得られた。
脳・神経細胞の維持における核酸の酸化損傷防御機構の役割

本研究では、研究代表者の中別府がこれまでに明らかにしてきた細胞障害の原因の1つである活性酸素による酸化あるいは脱アミノ化で生じた異常塩基や異常ヌクレオチドの細胞内蓄積に注目し、酸化ストレス下で引き起こされる「神経細胞死」、あるいはその前段階の「神経細胞の機能障害」の発生機序を野生型マウス、Mth1、Ogg1、MutyhそしてItpa遺伝子欠損マウス及び細胞を用いて解析した。さらに、脳における酸化ストレス応答と海馬歯状回における神経新生の制御機構の解明を目指して、AP1転写因子のサブユニットをコードするfosB遺伝子とその標的の1つであるgalectin-1の機能解析を進め以下の成果をあげた。【1】パーキンソン病モデルマウスを用い、ドパミン神経細胞の変性における核酸の酸化損傷の意義を明らかにした。【2】ミトコンドリア毒3-ニトロプロピオン酸による線条体中型有棘神経細胞の変性に核酸の酸化損傷が関与することを明らかにした。【3】核とミトコンドリアゲノムへの酸化塩基の蓄積に起因する細胞死の制御機構を解明した。【4】ミトコンドリアヌクレオチドプールの酸化に起因する細胞死とその防御機構を明らかにした。【5】酸化的脱アミノ化を受けたプリンヌクレオシド三リン酸の浄化機構を明らかにした。【6】海馬における酸化ストレス応答と神経新生の制御にfosB遺伝子が関与することを明らかにした。【7】Galectin-1が海馬歯状回における神経新生を促進することを明らかにした。本研究では,研究代表者がこれまでに明らかにしてきた脳・神経細胞障害の原因の1つとして活性酸素による酸化あるいは脱アミノ化で生じた異常塩基や異常ヌクレオチドの細胞内蓄積により引き起こされる「神経細胞死」あるいはその前段階の「神経細胞の機能障害」の発生機序を,野生型マウス,Mth1,Ogg1,MutyhそしてItpa遺伝子欠損マウス及び細胞を用いて解析する。特に,核とミトコンドリアゲノムやRNAにおけるこれら異常塩基の蓄積、さらにヌクレオチドプールへの異常ヌクレオチドの蓄積に注目して解析し,「脳・神経細胞の維持における核酸の酸化損傷防御機構」の役割を明らかにすることを目指している。平成18年度は主に次のような成果を挙げた。(1)核酸の酸化損傷の蓄積が,細胞においては突然変異誘発や細胞周期停止、細胞死を引き起こし,個体レベルではパーキンソン病などの脳機能障害を始めとする広範な生命機能の障害をもたらすことを遺伝子改変マウスを用いて明らかにした。(2)ヒトゲノムには恒常的に酸化損傷が存在する部位が多数存在することを明らかにし、さらにこの様なゲノム領域でDNAの組換えや塩基置換変異が頻発することから、ゲノムに蓄積した酸化損傷が個体レベルの遺伝情報の多様性の原動力となっている可能性を指摘した。(3)酸化グアニンをDNAより切除するOGG1、ならびに酸化プリンヌクレオチドを分解するMTH1を各々欠損するマウス線維芽細胞株を樹立し、これらの細胞の酸化ストレス感受性と酸化ストレス誘発性細胞死のメカニズムについて解析し、核とミトコンドリアに蓄積した酸化損傷が各々独立して細胞死を引き起こすことを明らかにした。(4)パーキンソン病患者の黒質ドパミンニューロンにおけるMUTYH遺伝子の発現の解析から、パーキンソン病の黒質ドパミンニューロン特異的に発現が亢進するスプライシングバリアントを見出した。本研究では、酸化ストレス下で引き起こされる「神経細胞死」、あるいはその前段階の「神経細胞の機能障害」の発生機序を野生型マウス、Mth1、Ogg1、MutyhそしてItpa遺伝子欠損マウス及び細胞を用いて解析した。さらに、脳における酸化ストレス応答と海馬歯状回における神経新生の制御機構の解明を目指して、AP1転写因子のサブユニットをコードするfosB遺伝子とその標的の1つであるgalectin-1の機能解析を進め以下の成果を上げた。【成果1】

核とミトコンドリアゲノムDNAへに蓄積した酸化塩基(8-オキソグアニン)は複製を介してアデニンと誤対合するとそれぞれMUTYHが開始する塩基除去修復反応に依存して2つの独立した経路で細胞死を誘導することを示し、神経細胞の2つのゲノムDNAの酸化によって誘導される細胞死のメカニズムを解明した。【成果2】MTH1/OGG1二重欠損マウスにミトコンドリア毒を全身投与すると野生型に比べて顕著な行動量の低下を認め,線条体有棘神経細胞の核とミトコンドリアに8-oxoGが著明に蓄積し,神経細胞の脱落を引き起すことを明らかにした。【成果3】過剰の一酸化窒素に曝された細胞におけるミトコンドリアヌクレオチドプールの酸化を証明し、その結果誘導される細胞死を酸化プリンヌクレオシド分解酵素MTH1が効率よく抑制することを示し、MTH1欠損マウスで顕著なMPTP-誘導ドパミン神経細胞の変性脱落のメカニズムを明らかにした。【成果4】酸化的脱アミノ化を受けたプリンヌクレオシド三リン酸の浄化機構としてITPaseの意義を遣伝子欠損マウスと遺伝子欠損マウス由来の線維芽細胞株の解析から明らかにした。【成果5】転写因子FosBとΔFosBが海馬における酸化ストレス応答と神経新生の制御に関わることをノックアウトマウスとノックインマウスの解析から明らかにした。【成果6】カイニン酸投与によりマウス海馬でGalectin-1の発現が誘導されることを見いだし、その意義を遺伝子欠損マウスを用いて明らかにした。
肉腫型染色体転座をつくる。-その基礎となるDNA修復過程の演繹的証明

t(11;22)転座はユーイング肉腫の約90%に存在し、これにより生じた融合遺伝子産物EWSFLI1が発がんに寄与するものと考えられている。同様の染色体転座は造血器腫瘍でも広く認められており、染色体転座は普遍的な発がんメカニズムのひとつと考えられるが、その分子機構は明らかにされていない。染色体転座の発生においては、DNA二本鎖切断修復(DNAdouble strand break repair, DSBR)過程が重要な役割を演じていることは想像に難くない。高等哺乳動物細胞におけるDSBRについては、A.相同組換え(Homologous recombination, HR)、B.非相同末端結合(Non-homologous end-joining, NHEJ)の経路が主に知られているが、これまで染色体転座はNHEJにより生起していると考えられてきた。しかしながら、申請者の研究グループのこれまでの研究では、転座陽性肉腫細胞において、HR径路の活性化がみられることが観察されている。本研究では、HRにより肉腫型染色体転座を再構成するin vitroモデル系を構築し、転座の基礎となるDNA修復過程の詳細を演繹的に証明することを目的とする。初年度の平成30年度では、代表的転座陽性肉腫としてユーイング肉腫細胞株を用い、HRおよびNHEJの両経路の遺伝子発現を網羅的に解析した。また、ユーイング肉腫細胞の詳細な核型解析を開始した。さらにHRおよびNHEJ両経路の構成因子の蛋白レベルの発現解析も開始した。当初予定していた網羅的解析を実施でき、肉腫細胞の核型解析も開始できた。遺伝子発現解析の結果を蛋白レベルで確認する解析も行った。初年度の結果を踏まえ、核型解析と蛋白レベルの発現解析をさらに推進する。ユーイング肉腫以外の染色体転座陽性肉腫として、滑膜肉腫や横紋筋肉腫にも解析対象を広げ、肉腫型染色体転座in vitroモデル系構築に備える予定である。平行して同モデル系のためのコンストラクトの開発を進める。本年度の旅費使用額が予定より少なかったため、38070円を次年度に繰り越すこととした。
MDS, TDSを用いた電子シャワー照射による吸着分子の解離・脱離機構の解明

1)本研究費により購入したマニピュレータにより、試料の位置決め精度が向上し実験データの信頼性が上がった。また従来試料の温度は室温より上でしか実験できなかったが、現在約マイナス100°Cから1000°Cまでの範囲で、吸着脱離の実験ができるようになった。2)TDS(昇温脱離分光法)の精度を上げることを試み、特に試料の温度制御をより完全なものにした。その結果小さなピークも正確に検出できるようになった。3)MDS(励起原子脱励起分光法)のビーム強度を上げてシステムとしての測定感度を上げ、その結果として分解能を向上させることができた。4)重水素とアルカリ金属(ナトリウム、カリウム)の共吸着の系について、主にMDSとTDSにより多くの結果を得た。あらかじめ重水素を吸着させておいたシリコン表面にナトリウムを後から吸着させると、重水素のおよそ半分が脱離し、残りはNaDを形成する。5層のナトリウムを蒸着しても表面には重水素とナトリウムの結合が見られる。5)現在吸着分子の電子ビーム露光の影響を調べているが、本装置を購入してから本報告を書くまでの期間が短かったので、現在の段階ではまだ不十分である。引き続き研究を続けるどこかで結果を公表したい。
有床義歯のウェアラブルセンサー化による健康管理システム

最近,高齢者の一人暮しが増加し,高齢者の独居死が社会問題になっている.このため,高齢者の健康管理や異状通報を行うシステムの必要性が高まっている.本研究は,センサを有床義歯(入れ歯)に埋め込むことにより,高齢者の生体情報を常時計測し,異状が見つかれば,医療機関や家族に通報するシステムの実現を目指している.本研究では,温度センサと加速度センサのそれぞれを口蓋床(人工歯のない有床義歯)に埋入し,計測実験を行った.その結果,温度センサにより体温だけでなく食事の有無を,また,加速度センサにより咀嚼,歩行,転倒の状態を,判別できることが分かった.本研究は,高齢者の多くが着用している有床義歯(入れ歯)に超小型センサーを埋入することにより,高齢者の口腔内の生体情報を常時計測するシステムの実現を最終的な目標とする.平成24年度は,まず,平成23年度に購入した加速度センサーと温度センサーのそれぞれを埋入した口蓋床(有床義歯で,人工歯のない床だけのもの)を義歯床用レジンで製作した.次に,口蓋床を用いて以下の実験を行った.・温度センサーを埋入した口蓋床を45°Cの湯と17°Cの水に交互に浸した.この時の温度変化を計測した.・加速度センサーを埋入した口蓋床を用いて,様々な動作(咀嚼,歩行,転倒など)を行った際の加速度を計測した.以上の実験の結果,次のことが分かった.まず,温度センサーにより,湯や水に浸すことによる温度変化を計測できた.このことより,体温の計測だけでなく,食事を取っているかどうか(たとえば,熱い茶を飲んでいるかなど)の判断も可能と考えられた.また,湯は45°Cであったが,計測された値は最高で39°Cであった.これは,センサーの埋入に用いたレジンは熱伝導率が低く,実際の湯の温度に達する前に,水に浸したことによると思われた.17°Cの水対しても,湯の場合と同様の理由で,実際の水の温度よりも高く計測された.また,加速度センサーにより,歩行,転倒,咀嚼のそれぞれの動作に対して特徴的な加速度のパターンが計測された.このことから,加速度センサーにより,動作や異状の識別が可能と思われた.以上と並行して,ウエアラブルセンサーや生体情報計測の最近の動向も,学会などに出席し,調査した.本研究は,高齢者の多くが着用している有床義歯(入れ歯)に超小型センサーを埋入することにより,高齢者の口腔内の生体情報を常時計測するシステムの実現を最終的な目標とする.この目標を達成するため,本研究では,まず,加速度センサーと温度センサーのそれぞれを埋入した口蓋床(有床義歯で,人工歯のない床だけのもの)を義歯床用レジンで製作した.次に,口蓋床を用いて以下の実験を行った.・温度センサーを埋入した口蓋床を45°Cの湯と17°Cの水に交互に浸した.この時の温度変化を計測した.・加速度センサーを埋入した口蓋床を用いて,様々な動作(咀嚼,歩行,転倒など)を行った際の加速度を計測した.以上の実験の結果,次のことが分かった.まず,温度センサーにより,湯や水に浸すことによる温度変化を計測できた.このことより,体温の計測だけでなく,食事を取っているかどうか(たとえば,熱い茶を飲んでいるかなど)の判断も可能と考えられた.また,加速度センサーにより,歩行,転倒,咀嚼のそれぞれの動作に対して特徴的な加速度のパターンが計測された.このことから,加速度センサーにより,動作や異状の識別が可能と思われた.平成25年度は,加速度センサーにより計測したデータから,咀嚼,歩行,転倒など動作を自動的に推定する方法を検討した.当初は,市販のニューラルネットワークのソフトによりこの推定を行う予定であったが,データの受け渡しに問題があることが分かり,自動推定のためのプログラムを独自に開発した.このプログラムでは,種々の動作に対する特徴的な加速度のパターンをもとに推定するものであり,実際に推定を行い,その有効性を確認した.以上と並行して,ウエアラブルセンサーや生体情報計測の最近の動向も,学会などに出席し,調査した.最近,高齢者の一人暮しが増加し,高齢者の独居死が社会問題になっている.このため,高齢者の健康管理や異状通報を行うシステムの必要性が高まっている.本研究は,センサを有床義歯(入れ歯)に埋め込むことにより,高齢者の生体情報を常時計測し,異状が見つかれば,医療機関や家族に通報するシステムの実現を目指している.本研究では,温度センサと加速度センサのそれぞれを口蓋床(人工歯のない有床義歯)に埋入し,計測実験を行った.その結果,温度センサにより体温だけでなく食事の有無を,また,加速度センサにより咀嚼,歩行,転倒の状態を,判別できることが分かった.本研究は,高齢者の多くが着用している有床義歯(入れ歯)に超小型センサーを埋入することにより,高齢者の口腔内の生体情報を常時計測するシステムの実現を最終的な目標とする.また,センサーを埋入した有床義歯を医療の診断や治療に活用する方法も検討する.平成23年度は,まず,市販されている様々な超小型センサーを(特に,温度センサーと加速度センサーを中心に)調査した.

この時,計測したデータを体外へ送信する方法として次の2つの方法のいずれかを持つセンサーをピックアップし,本研究に利用可能と思われるものを選定した:(A)メモリ方式:1日分のデータをセンサー内のメモリに蓄積し,有床義歯を着用しない時にセンサーをコンピュータに接続し,蓄積したデータをコンピュータに転送する方法;(B)無線方式:常時,無線により体外へデータを送信する方法.具体的には,次のものを選定し,購入した:(A1)メモリー方式の温度センサー;(A2)メモリー方式の加速度センサー;(B1)無線方式で温度・加速度の両方を計測できるセンサー.センサーは有床義歯に埋入して使うことになるため,購入したセンサーのうち,A1とA2を有床義歯の材料である常温重合レジンにより封入し,その状態で計測が可能かを実験により調べた.また,温度は真値を温度計で調べることができるため,センサーを封入した状態で計測した値と真値とを比較し,計測の正確さを評価した.その結果,A1,A2とも封入した状態で計測可能であることが分かったが,封入した状態のままでは,コンピュータにデータを転送できず,封入に用いたレジンを破壊してセンサーを取り出す必要があった.また,A1では,計測した値は真値に対して時間遅れは生ずるものの,ほぼ等しい値となり,正確に計測可能であることが分かった.以上と並行して,ウエアラブルセンサーの最近の動向も,学会などに出席し,調査した.交付申請書における平成24年度の実施計画は,次の通りであった:「口蓋床を製作し,センサーを埋入する.センサーを口蓋床に埋入した状態で,計測およびデータの転送できるかを確認する.」温度センサー,加速度センサーともに計測は可能であることを確認できた.しかし,温度センサーはロガー方式でデータを転送するタイプであったが,データを転送するためには口蓋床を破壊する必要があった.また,加速度センサーは無線でデータを転送するタイプであるため,口蓋床を破壊する必要はなかったものの,加速度センサーとデータ受信機が至近距離にないとデータ送信が難しいことも分かった.以上のようにデータの転送では,いずれのセンサーも課題が残るものの,実験自体は計画通りに進んでおり,100%の達成度と考えている.また,交付申請書で最終年度(平成25年度)に予定していた「様々な動作(咀嚼,歩行,転倒など)を行った際のデータ計測」は平成24年度にすでに終えており,現在までの達成度は3年間の全計画内容の7割程度と考えている.平成23年度の実施計画は,次の通りであった:(1)適切なセンサーを調査・選定する;(2)選定したセンサーを有床義歯の材料である常温重合レジンにより封入し,その状態で計測およびデータの送信が可能かを実験により調べる;(3)ウエアラブルセンサーの最近の動向を,学会などに出席し,調査する.(1)に関しては,温度と加速度を計測するセンサーについては、ほぼ網羅的に調査できた.(2)に関しては,平成23年度は3タイプのセンサー(A1:メモリー方式の温度センサー,A2:メモリー方式の加速度センサー,B1:無線方式で温度・加速度の両方を計測できるセンサー)を購入したが,そのうち,B1(無線方式のセンサー)をレジンで封入して計測する実験はできなかった.それ以外の実験は予定通り行うことができ,実験に関しては70%近い達成度と考えている.上記の実験ができなかった理由は,封入していない状態で,計測がうまくできないことが判明したためである.
イオン移動度質量分析法による多元素クラスターの幾何構造と反応機構の解明

研究期間の第2年度であった当年度は、気相多元素クラスターの研究として、金属酸化物クラスターへの異種金属元素の担持形態とその効果について研究を行った。具体的には、酸化セリウムクラスター正イオンに金原子を組み合わせたクラスターを研究対象とした。初めに、複合クラスターを実験装置内で生成するためのクラスターイオン源を設計・製作した。クラスター生成はこれまでと同様に真空槽内でのレーザー蒸発法を用いたが、今回は複数の構成要素からなるクラスターを真空装置内に生成する必要があるため、2つの蒸発用ターゲットに同時にパルスレーザーを照射する装置を製作し、これを測定機器に接続した真空槽内に設置した。蒸発用ターゲットとして二酸化セリウムと金をセットし、製作したクラスターイオン源が設計通りの動作をすることを確認した。その上で、目的とするクラスターイオンを生成するための実験条件の検討を行い、実際に生成することに成功した。続いて、イオンドリフトセルを用いたイオン移動度質量分析法の測定を行うことで、各クラスターイオンのヘリウム原子に対する衝突断面積を決定した。複数の構成要素からなるクラスターは、各構成要素の原子数に応じて多種多様な組成のものが同時に生成するが、本研究では質量分析とイオン移動度分析を組み合わせたイオン移動度質量分析法を用いることで、質量とイオン移動度の2軸からなる2次元スペクトル上で、複雑な組成のクラスターを明瞭に分離して観測できることが見出された。実験と並行して量子化学計算を行った。観測したクラスターイオンの幾何構造の候補を求め、それらの理論的な衝突断面積を算出し、実験で得られた値と比較することで各クラスターイオンの幾何構造を検討した。理論計算から予測された構造は、AuCe2O4+が比較的コンパクトな構造を取るといった実験結果の傾向と整合した。当年度は当初の目標通り、複数の試料を同時にレーザー蒸発するクラスターイオン源の設計・製作を行い、意図通りの動作をすることを確認したうえで、実際に金と酸化セリウムを組み合わせた気相クラスターイオンを生成・観測することに成功した。そのうえで、これらのクラスターイオンの幾何構造について議論を展開することができた。さらに、前年度に予定を先行して着手していた、気相クラスターイオンに気体分子を反応させた後でイオン移動度質量分析を行う手法を、本年度製作したクラスターイオン源と組み合わせることで、複合クラスターイオン・異分子複合体という、一層複雑な多元素クラスターの研究に着手することができた。これらのことから当年度は当初の計画以上に研究が進展しているものと判断できる。最終年度にあたる次年度は、これまでの研究で手法や方法論を確立してきた、気相金属酸化物クラスターイオンの構造研究、クラスター・異分子複合体の構造研究、異種金属元素を組み合わせたクラスターイオンの構造研究、異種金属元素を含みさらに異分子と複合させたクラスターイオンの構造研究といった枠組みの中で、これまでに扱ってこなかった元素を含む系に研究を展開していく予定である。実験装置については軽微な調整や改良にとどめ、これまでに設計・製作したものを活かして研究を遂行する。また、多元素クラスターにおける衝突断面積の理論値の算出方法について、次のような課題が浮上している。従来、単一元素からなる金属クラスターや、ほぼ一定の原子数比の金属酸化物クラスターに適用されてきた、スケールされた原子半径に基づく投影近似法による理論的な衝突断面積の見積もりは、化学量論比から逸脱した金属酸化物クラスターや、複数の構成要素が様々な比で複合したクラスターのような不定比性のクラスターについては、大まかな傾向を再現することはできるものの、定量的に実験値と比較可能な値を得ることが難しいことが明らかとなっている。したがって今後はこのような理論計算の手法について改善することも目指していく。当年度は、金属酸化物クラスターの持つ特異な反応性の起源を明らかにすべく研究を遂行した。まずセリウム酸化物クラスターカチオンを研究対象とし、実験装置内で実際にそれらのイオンを生成・観測することに成功した。ヘリウムガスを充填したイオンドリフトセルを用いたイオン移動度質量分析により、各イオンの衝突断面積を決定した。実験と並行して量子化学計算を行い、セリウム酸化物クラスターカチオンの幾何構造の候補を求め、それらの理論的な衝突断面積を算出した。実験から得られた衝突断面積と理論計算から得られた衝突断面積を比較することで、各クラスターイオンの幾何構造を決定した。その結果、セリウム酸化物クラスターカチオンは従来の理論計算でエネルギー最安定とされていたものとは異なる特徴を持つ幾何構造を取ることが強く示唆された。特に、本研究で得られた幾何構造は、これまで反応の活性中心だと考えられていた末端位酸素原子に関する構造が大きく異なることから、これらのクラスターの反応性を解釈するうえで重要な知見が得られたといえる。さらに、クラスター・異分子複合体の構造研究を行うための実験装置の改造と実験に着手した。イオン移動度質量分析を行う前にクラスターイオンを気体分子と反応させるため、反応セルをクラスター源の下流に設置し、この新設した反応セルで反応実験を行うための適切な条件を探索した。この装置を用いて、セリウム酸化物クラスターカチオンにNO分子を付加し、イオン移動度質量分析を行うことで、これらの複合体の衝突断面積を測定した。上の研究と同様に、理論計算との比較からクラスター上にNO分子がどのように付加しているかを検討した。現状では次年度以降の継続的な研究を必要とする段階であるが、クラスター上に付加したNO分子がクラスター中の酸素原子と反応して二酸化窒素(NO2)分子を形成しつつある構造が1つの候補として示唆された。

当年度は当初の目標通り、セリウム酸化物クラスターについて幾何構造の研究を行い、その特異な反応性の起源について示唆を得ることができた。本研究によって、セリウム酸化物クラスターカチオンが従来の予測とは異なる幾何構造、異なる反応機構を取ることが示され、クラスターの化学反応の研究において実験科学的な幾何構造の検証が重要であるという、本課題の意義の1つが実証されたといえる。実験に基づいた構造決定が従来の予測と異なっていたことは、セリウムのようなfブロック元素を含む系における量子化学計算の困難さを示しており、本成果は計算手法の改良へとフィードバックしていける可能性をも持っている。さらに、研究計画上は次年度以降に予定していたクラスター・異分子複合体の研究に着手し、このような系についてイオン移動度質量分析法による研究が可能であることを実証し、一定の成果を収めつつある。これらのことから、当年度は当初の計画以上に研究が進展しているものと判断できる。研究期間の第2年度であった当年度は、気相多元素クラスターの研究として、金属酸化物クラスターへの異種金属元素の担持形態とその効果について研究を行った。具体的には、酸化セリウムクラスター正イオンに金原子を組み合わせたクラスターを研究対象とした。初めに、複合クラスターを実験装置内で生成するためのクラスターイオン源を設計・製作した。クラスター生成はこれまでと同様に真空槽内でのレーザー蒸発法を用いたが、今回は複数の構成要素からなるクラスターを真空装置内に生成する必要があるため、2つの蒸発用ターゲットに同時にパルスレーザーを照射する装置を製作し、これを測定機器に接続した真空槽内に設置した。蒸発用ターゲットとして二酸化セリウムと金をセットし、製作したクラスターイオン源が設計通りの動作をすることを確認した。その上で、目的とするクラスターイオンを生成するための実験条件の検討を行い、実際に生成することに成功した。続いて、イオンドリフトセルを用いたイオン移動度質量分析法の測定を行うことで、各クラスターイオンのヘリウム原子に対する衝突断面積を決定した。複数の構成要素からなるクラスターは、各構成要素の原子数に応じて多種多様な組成のものが同時に生成するが、本研究では質量分析とイオン移動度分析を組み合わせたイオン移動度質量分析法を用いることで、質量とイオン移動度の2軸からなる2次元スペクトル上で、複雑な組成のクラスターを明瞭に分離して観測できることが見出された。実験と並行して量子化学計算を行った。観測したクラスターイオンの幾何構造の候補を求め、それらの理論的な衝突断面積を算出し、実験で得られた値と比較することで各クラスターイオンの幾何構造を検討した。理論計算から予測された構造は、AuCe2O4+が比較的コンパクトな構造を取るといった実験結果の傾向と整合した。当年度は当初の目標通り、複数の試料を同時にレーザー蒸発するクラスターイオン源の設計・製作を行い、意図通りの動作をすることを確認したうえで、実際に金と酸化セリウムを組み合わせた気相クラスターイオンを生成・観測することに成功した。
全ゲノム解析とオルガノイド培養を用いた多段階肝発癌分子メカニズムの解明

本研究では、乏血性の高分化型肝細胞癌の一部がさらに悪性化し、多血性結節を形成した「結節内結節型肝細胞癌」と呼ばれる病変に着目する。結節内結節型肝細胞癌組織の乏血性病変・多血性病変からサンプルを採取し、全ゲノム解析を行うことによって、多段階発癌に重要なゲノム異常の同定を試みる。また、採取したサンプルからオルガノイド培養によりsingle cell由来のクローンを樹立し、各クローンの特徴についてトランスクリプトーム解析などにより評価する。
低酸素誘導因子により転写誘導される細胞接着分子遺伝子群の協同作用の生理的意義

低酸素によって同時に転写誘導される一連の細胞接着分子遺伝子の協同作用を解析した。またこれら以外に低酸素によって転写誘導されることがこれまで知られていなかった細胞接着分子があるかどうかについても検索した。その結果、低酸素によって糖脂質の糖部分と脂質部分に並行して変化が誘導され、糖蛋白質においても蛋白や糖側鎖に並行して変化が誘導され、これらの並行的変化が細胞の低酸素応答において互いに相乗的に機能することを示唆する成績が得られた。我々は以前に、低酸素環境により細胞内の糖鎖合成遺伝子が数多く誘導され、これによって細胞表層の糖鎖が大きく変化することを明らかにした。細胞表層の糖鎖の一部は細胞接着に関与し、この変化によって細胞の接着能が変化することを解析して報告した。今回は糖鎖を担う糖脂質分子の脂質部分に変化が起こるかどうかを解析した。細胞を低酸素状態で大量に培養してリン脂質と糖脂質を抽出し、その脂質部分の分子種を高速液体クロマトグラフィーと質量分析(HPLC-ESI-MS/MS法)によって解析した。また、低酸素状態で培養した細胞からRNAを抽出し、脂質部分の代謝に関わる一連の遺伝子の発現変化をRT-PCR法によって解析した。その結果、低酸素により糖脂質のセラミド分子種が変わり、正常なセラミドが減少し(p<0.01)、その合成前駆体であるジヒドロセラミドが出現する(p<0.01)ことが明らかになった。正常状態ではジヒドロセラミドはDES1遺伝子産物の働きで正常なセラミドへとすみやかに合成される。この合成には酸素が必要であり、このため低酸素状態では合成が低下して前駆体であるジヒドロセラミドが蓄積すると考えられる。また、脂肪酸鎖部分においても、不飽和脂肪酸が減少して長鎖の飽和脂肪酸が有意に増加することが判明した。これは長鎖脂肪酸(VLCFA)中の不飽和脂肪酸と飽和脂肪酸のモル比の著明な変化(p<0.01)として検出可能であった。不飽和脂肪酸鎖の合成にも酸素が必要とされることから、この変化は低酸素時の変化として妥当であると考えられた。こうした変化はいずれも糖脂質の疎水性を大きく増大させるものであり、これらの変化によって低酸素状態では細胞膜中での糖脂質の集合状態が変化し、糖鎖部分の変化と協同作用することによって、低酸素状態では細胞接着分子と糖脂質糖鎖との結合性が大きく変化すると考えられる。なかでも三種類の細胞接着系、すなわち、(1)セレクチンを介した細胞接着,(2)CD44を介した細胞接着,(3)フィブロネクチンを介した細胞接着、に大きな変動がもたらされる。今回は低酸素環境によりCD44を介した細胞接着に変化が起こるかどうかを解析した。細胞を低酸素状態で培養してフローサイトメトリーで解析したところ、CD44分子の細胞表層での発現には著変が見られなかった。また、CD44遺伝子の転写にも、各種バリアント型のCD44を含めて検索したが、大きな変化は検出されなかった。細胞膜標品を作成してウェスタンブロット解析を行ったところ、CD44分子の糖鎖発現に変化が認められた。抗糖鎖抗体を用いたウェスタンブロット解析によって、CD44分子が担う糖鎖の低酸素による変化をさらに解析した。また、これらの細胞接着分子は、ケモカインと共同作用を行うことが知られていることから、ケモカインリセプター発現に対する低酸素環境の影響についても解析した。とくにCCR7およびCXCR4について解析したところ、低酸素によってCXCR4遺伝子の転写が増大し、細胞表層での発現も増加することが判明した。他方、CCR7については大きな変化は観察されなかった。ケモカインの一部はシンデカン分子などが担うヘパラン硫酸をはじめとする細胞表層糖鎖に結合することが知られている。シンデカンファミリーのメンバーには低酸素で誘導される分子が存在するので、今後はより多種類のケモカインリセプターに検索を広げ、また細胞表層のケモカイン結合糖鎖の低酸素による変化の解析を合わせ行って、低酸素におけるこれら一連の分子の共同作用を総合的に解析する必要があると考えられた。我々は以前に、低酸素により糖鎖合成遺伝子が数多く誘導され、これにより細胞表層の糖鎖に大規模な変化が生じることを明らかにし、またその糖鎖の一部が細胞接着に関与し、細胞の接着能が変化することを解析して報告した。低酸素によって多数の細胞接着活性を持つ分子が変化することから、本研究では、複数の細胞接着関連遺伝子が低酸素によって同期して転写誘導されることによって細胞接着に相乗的な変化を起こす点に着目することとした。今年度は、前年度のCD44とそのリガンドであるヒアルロン酸糖鎖の低酸素による変動の解析を継続して、低酸素によって数種のヒアルロン酸代謝酵素遺伝子が著明に転写誘導されることをあらたに明らかにした。その遺伝子に対するshRNA導入細胞を作成して、この変化の細胞生物学的意義を現在解析中である。

低酸素によりCD44の特異的リガンドであるヒアルロン酸に大きな変動が起こり、CD44を介した細胞接着に有意の変化が誘導されると考えられる。また、CD44蛋白質の転写には変化がないものの、CD44蛋白質の糖側鎖に存在するセレクチンの糖鎖リガンドが低酸素により著明に増加することから、CD44のセレクチンのリガンドとしての活性も増大すると考えられる。複数の細胞接着関連遺伝子が低酸素によって同期して転写誘導されることによって、CD44とヒアルロン酸糖鎖との結合も亢進し、CD44の糖側鎖とセレクチンとの結合も亢進すると考えられる。また、初年度に我々は、低酸素によって糖脂質の脂質部分にも特有の変化が起こり、その変化は生理活性脂質であるセラミドやSIPの代謝系に関連していることを明らかにしたことから、代謝遺伝子の転写レベルと、質量分析法による物質レベルでの分析を併用して低酸素による脂質変化の解析をさらに進めた所、エイコサノイドやLPAの代謝にも深く関与するとみられる変化が検出された。
樹状細胞と腫瘍細胞のハイブリドーマによるヒト肝癌特異的免疫反応の誘導

1)C型慢性肝炎8例、B型慢性肝炎9例、肝硬変4例、肝細胞癌14例、原発性胆汁性肝硬変4例、自己免疫性肝炎3例、健常人12例の計54例の末梢血から単核球を分離した。単核球はFL1(FITC):抗CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56のcocktail、FL2(PE):抗CD11cあるいはCD123、FL3(PerCP):抗HLA-DR、FL4(APC):抗CD40あるいはCD86の各抗体を用いて染色しFACSCaliburにて4色解析した。なお、FL1陰性で、かつHLA-DR陽性の細胞群をDC-rich fractionとし、CD11c^+DCとCD123^+DCに分けて解析した。まず、末梢血単核球におけるCD11c^+DCとCD123^+DCの比率(および絶対数)の平均は、健常人が各々2.30%(54.9/μl)、0.39%(8.9/μl)に対し肝疾患患者全体では1.24%(20.4/μl)、0.25%(4.1/μl)と有意に減少していた。疾患別では、肝疾患が慢性肝炎から肝硬変へと進展するにつれてCD11c^+DCは減少したが、CD123^+DCは増加する傾向がみられた。また、肝炎の活動性が高い症例程、CD11c^+DC/CD123^+DCの比は末梢血で低く、肝内では高い傾向があったことから、肝炎に伴ってCD11c^+DCが肝内に動員されるものと推察された。一方、進行した肝細胞癌の非腫瘍部ではいずれの樹状細胞もほとんど認められない例もあり、肝内における免疫監視機構の低下が加する傾向がみられた。2)ヒト肝癌細胞と樹状細胞とのハイブリドーマは、条件を変えて試みたが樹立できなかった。3)SCID-huマウスの作成のために、T、B細胞だけでなくNK細胞機能も欠損しているNOD/SCIDマウスを用いて種々の細胞数の末梢血単核球移入を行った。その結果、移入する細胞数が多い程生着率が上がり、1x10^8個の末梢血単核球移入2週間後においては、マウス末梢血単核球の60%のCD45RO^+ヒトリンパ球であり、その大部分がCD3^+のT細胞であった。また、CD19^+Bリンパ球も2%程度認め、ヒト免疫グロブリン(IgG,IgM,IgA)も血清中に検出され、T、B両細胞が45週にわたって再構築されたが、樹状細胞を用いた免疫の試みは成功していない。1.肝疾患患者の末梢血における樹状細胞(DC)の数、表面マーカーの解析肝疾患42例、健常人12例の計54例の末梢血から単核球を分離し、単核球はFL1:抗CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56のcocktail、FL2:抗CD11cあるいはCD123、FL3:抗HLA-DR、FL4:抗CD40あるいはCD86の各抗体を用いて染色しFACSCaliburにて4色解析した。なお、FL1陰性で、かつHLA-DR陽性の細胞群をDC-rich分画とし、CD11c^+DCとCD123^+DCに分けて解析した。まず、末梢血単核球におけるCD11c^+DCとCD123^+DCの比率および絶対数の平均は、健常人が肝疾患患者と比べ有意に減少していた。ただし、肝細胞癌患者ではいずれのDCも減少し、その表面上のCD40あるいはCD86といった共刺激分子の陽性細胞率は有意に低下していた。これらの解析から、DCにはCD11c^+とCD123^+の2つのサブセットがあり、肝疾患の進展にともなって相反した変動を示すことが明らかとなった。現在、DCの培養に用いられているIL-4はCD123^+DCに対してapoptosisを誘導することが報告されているため、今後、CD123^+DCの増殖系の確立とその機能解析が必要であると考えられた。さらに、肝細胞癌患者でのDC数および共刺激分子の発現低下は、全身の抗腫瘍免疫能の低下を反映しているものと考えられた。2.肝癌細胞と樹状細胞とのハイブリドーマは、いまだに樹立までに至っていない。SCID-huマウスの作成のために、まずSCIDマウスに5x10^62x10^7個の健常人末梢血単核球を腹腔内に移入したが、その生着は5%以下であった。そこで、T、B細胞だけでなくNK細胞機能も欠損しているNOD/SCIDマウスを用いて同様の実験を試みた。末梢血単核球移入2週間後において、マウス末梢血に29.4%のCD3^+ヒトT細胞を認めた。現在、CD34^+細胞とサイトカインを用いてさらに改良中である。

単核球はFL1(FITC):抗CD3、CD14、CD16、CD19、CD20、CD56のcocktail、FL2(PE):抗CD11cあるいはCD123、FL3(PerCP):抗HLA-DR、FL4(APC):抗CD40あるいはCD86の各抗体を用いて染色しFACSCaliburにて4色解析した。なお、FL1陰性で、かつHLA-DR陽性の細胞群をDC-rich fractionとし、CD11c^+DCとCD123^+DCに分けて解析した。まず、末梢血単核球におけるCD11c^+DCとCD123^+DCの比率(および絶対数)の平均は、健常人が各々2.30%(54.9/μl)、0.39%(8.9/μl)に対し肝疾患患者全体では1.24%(20.4/μl)、0.25%(4.1/μl)と有意に減少していた。疾患別では、肝疾患が慢性肝炎から肝硬変へと進展するにつれてCD11c^+DCは減少したが、CD123^+DCは増加する傾向がみられた。また、肝炎の活動性が高い症例程、CD11c^+DC/CD123^+DCの比は末梢血で低く、肝内では高い傾向があったことから、肝炎に伴ってCD11c^+DCが肝内に動員されるものと推察された。一方、進行した肝細胞癌の非腫瘍部ではいずれの樹状細胞もほとんど認められない例もあり、肝内における免疫監視機構の低下が加する傾向がみられた。2)ヒト肝癌細胞と樹状細胞とのハイブリドーマは、条件を変えて試みたが樹立できなかった。3)SCID-huマウスの作成のために、T、B細胞だけでなくNK細胞機能も欠損しているNOD/SCIDマウスを用いて種々の細胞数の末梢血単核球移入を行った。その結果、移入する細胞数が多い程生着率が上がり、1x10^8個の末梢血単核球移入2週間後においては、マウス末梢血単核球の60%のCD45RO^+ヒトリンパ球であり、その大部分がCD3^+のT細胞であった。また、CD19^+Bリンパ球も2%程度認め、ヒト免疫グロブリン(IgG,IgM,IgA)も血清中に検出され、T、B両細胞が45週にわたって再構築されたが、樹状細胞を用いた免疫の試みは成功していない。1)平成11年度は肝疾患患者末梢血中の樹状細胞を解析したが、平成12年度は肝内の樹状細胞を解析し、末梢血のデータと比較した。C型慢性肝炎6例、B型慢性肝炎1例の計7例の肝臓から単核球を分離した。なお、FL1陰性で、かつHLA-DR陽性の細胞群をDC-rich分画とし、CD11c^+DCとCD123^+DCに分けて解析した。肝内におけるCD11c^+DC/CD123^+DCの比は症例によってかなり異なるが、一般に末梢血より高く、特に肝炎の活動性が高い例ではその比が高い傾向にあった。一方、進行した肝細胞癌の非腫瘍部では、いずれの樹状細胞も殆ど認められない例があり、肝内における免疫監視機構の低下が示唆された。今後症例数を増やし、肝内Tリンパ球の種類、活性化状態と樹状細胞サブセットがどのように関連しているかを検討してゆく予定である。2)ヒト肝癌細胞と樹状細胞とのハイブリドーマは、本年度も条件を変えて試みたが樹立できなかった。付着系の細胞(肝癌)と浮遊系の細胞(樹状細胞)との融合は困難であると考えられたが、今後、方法を変えてさらに試みてゆく予定である。3)SCID-huマウスの作成のために、T、B細胞だけでなくNK細胞機能も欠損しているNOD/SCIDマウスを用いて種々の細胞数のヒト末梢血単核球移入を行った。
東南アジア大陸部における焼畑の変容過程の比較研究

東南アジア大陸部の各国において,とくに1980年代以降になると,焼畑が衰退し常畑での農耕が拡大していた.焼畑から常畑への転換に関し、その要因を見てみると、森林保護政策なども含めた国家による広義の土地政策,除草剤・化学肥料の利用そして刈り払い機の利用など新たな農業技術の導入,換金作物栽培の拡大,などが大きな影響を与えたと考えられる.焼畑が営まれてきた地域における住民の生計維持に向けて,焼畑時代の慣習的な土地権の管理様式を土地法のなかで取り扱う方法,そして焼畑をも包含できる「自然」保護のありかたを検討してゆく必要がある.2012年度には、タイ北部および東北部、およびベトナム北部の農村において現地調査を実施した。具体的には、2012年11月および2013年1月にタイ北部の農村、2012年7月に東北タイの農村、2012年8月および12月にベトナム北部の農村を訪問し、稲作の栽培様式に着目し、焼畑の実施状況および衰退状況について調査を実施した。さらに、例えば、出稼ぎそして小規模な家畜飼育や森林産物の採集など、稲作以外におこなわれる生業および経済活動に着目し、焼畑衰退後の生計維持手段に関する調査を実施した。その研究成果について、2012年度には4編の学術論文を執筆するとともに、9回の学術発表をおこなった。とくにタイ北部のミエン族が暮らす農村における生業および経済活動の変化に関して論じた論文を出版した(MASUNO Takashi 2012. “Peasant Transitions and Changes in Livestock Husbandry: AComparison of Three Mien Villages in Northern Thailand".The Journal of Thai Studies. 12:43-63.)。この論文では、焼畑が衰退した農村において、陸稲の栽培が継続されることが多いこと、そしてブタやニワトリなどの世帯レベルでの小規模な家畜飼育が継続されていること、換金作物への食害が頻発によりウシ飼育が困難になっていることを報告した。また、小規模な家畜飼育が農業を引退した高齢者にとって重要な日々の活動になっていることを指摘した。2013年度は、本研究課題の実施最終年度である。初年度(2011年度)にはタイ北部の農村において、土地利用様式の変化に関する調査を実施し、2012年度には、タイでは北部と東北部の農村、そしてベトナム北部の農村において焼畑の衰退過程および稲の栽培様式などについて調査を実施した。そして2013年度には、2013年8月および2014年2月にタイ北部の農村、そして2013年12月にベトナム北部の農村において、2011年度および2012年度の調査に関する補足調査を実施した。その結果、タイ北部の調査村では、2012年以降になると家族の一部のメンバーではなく、一家を挙げて都市部に働きに出る世帯が増加していることが明らかになった。焼畑が衰退して以降、山村の出身者には、出稼ぎなどを通じ、都市との交流、都市への適応が必要とされていると考えられる。研究成果の一部として、アジア各地で営まれてきた焼畑およびその衰退状況などについて、現地調査および文献調査の結果をまとめた論文を執筆した(増野高司(2013)「アジアの焼畑」片岡樹・シンジルト・山田仁史(共編)『シリーズ来たるべき人類学第4巻アジアの人類学』春風社.pp.107-151.)。この論文では、アジア各国における焼畑の衰退状況を概観すると同時に、焼畑の特徴である休閑期間および、その休閑地に着目し、雑草を抑制するための技術としての焼畑、さらに焼畑と近代的な土地法および自然保護の考え方との軋轢などについて説明することから、焼畑の継続が困難になっている現状を示した。また、2013年度には『日本文化人類学会第47回研究大会』での発表(発表タイトル:タイ北部のミエン族山村における「伝統的」農業技術の衰退ー陸稲の収穫技術に着目してー)をはじめとして、合計5回の学会等での研究発表をおこなった。東南アジア大陸部の各国において,とくに1980年代以降になると,焼畑が衰退し常畑での農耕が拡大していた.焼畑から常畑への転換に関し、その要因を見てみると、森林保護政策なども含めた国家による広義の土地政策,除草剤・化学肥料の利用そして刈り払い機の利用など新たな農業技術の導入,換金作物栽培の拡大,などが大きな影響を与えたと考えられる.焼畑が営まれてきた地域における住民の生計維持に向けて,焼畑時代の慣習的な土地権の管理様式を土地法のなかで取り扱う方法,そして焼畑をも包含できる「自然」保護のありかたを検討してゆく必要がある.2011年度には,タイ北部の山村を中心に調査を実施した.具体的には,2011年6月,10月,2012年1月にタイ北部のミエン族が暮らす農村を訪問し,陸稲栽培を中心に,焼畑の衰退に着目し,その土地利用様式の変化について調査をおこなった.その研究成果について,2011年度には6編の学術論文(うち4編が査読付き)を執筆するとともに,13回の学会発表をおこなった.なかでも,2011年7月にバンコクで開催されたタイ研究に関する国際会議(The 11th International Conference on Thai Studies)では,口頭での発表(発表タイトル:Changes in the upland agriculture of a Mien hillside village, Northern Thailand.)をおこなった.

この発表では,タイ北部の山村を事例として,焼畑の衰退過程を報告するとともに,焼畑衰退後に新たな経済活動として,タイ王室の「王室プロジェクト」によりゴムノキの植林が進められていること,そしてゴム樹脂の採集および販売が開始されていることを報告した.また,タイ北部のミエン族が主食とする陸稲の栽培に関する論文を出版した(増野高司(2011)「タイ北部における陸稲の耕作地をめぐる在来知ーミエン族と陸稲との関係ー」『生き物文化誌学会ビオストーリー』15:84ー98.).この論文では,陸稲の耕作地の選択に関わる在来知識の変化について,焼畑から常畑へ農法が変化するなかで,ミエンの人びとが新たな農業技術を取り込みつつ陸稲の栽培を続けていることを指摘した.タイ北部以外では,2011年10月にベトナム北部のミエン族が暮らす山村等を訪問し,予備調査を実施し,2012年度の本調査に向けた準備を開始した.タイ北部の研究については、その成果について学会での発表を続けるとともに、学術論文として公開しつつある。また,焼畑の衰退過程について、東北タイの山村を訪問し焼畑の衰退に関し知見を得たことから、タイ北部だけでなく、広くタイにおける焼畑の衰退過程の解明に向けた分析を開始している。タイにおける研究は順調に進展しつつある。タイ北部以外の地域について、ベトナムの植物資源センター(Plant Resource Center)の協力により、2011年度の予備調査に続き、2012年度にはベトナム北部のミエン族が暮らす農村を訪問し、世帯レベルでの土地利用・資源利用に関する調査を実施することができた。現在、ベトナムでの調査結果の分析を進めるとともに論文を執筆中である。ベトナムにおける研究もきわめて順調に進みつつあると考えている。ラオスに関しては、文献収集を実施するとともに、文献研究を開始しており順調に進展している。タイ北部の研究については,その成果の一部を国際学会で発表するとともに,学術論文として報告を開始している.また,焼畑の衰退過程について,その土地利用の変化を中心にデータの収集および解析を進めるとともに,焼畑衰退後の経済活動に対する政府やNGOによる開発援助の役割についての予備調査を実施した.タイ北部での研究は順調に進行していると考えている.タイ北部以外の地域について,当初の計画では,2011年度には,ラオスでの調査に向けた準備を開始する予定だったが,ベトナムの植物資源センター(Plant Resource Center)の協力が得られることになったことから,ラオスでの調査に先んじ,ベトナム北部での調査準備を開始することにした.ベトナム北部にもミエン族が数多く分布しており,ラオスで予定していたのと同様の調査を実施することが可能である.調査を開始する国を変更したが,ベトナムでの研究も順調に進行していると考えている.タイおよびベトナムでの現地調査が、順調に進展していることから、調査および分析を継続するとともに研究成果の公開を中心に活動する予定である。