hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
プラスミノーゲン・アクチベーター・インヒビター活性阻害による線溶活性化機構の解析

血液凝固系と、これにより産生された血栓を溶解する線維素溶解(線溶)現象は密接に関連しており、凝固がおこると線溶系は強く活性化される。最近我々は、本機構の一つとして、線溶活性の重要な調節因子であるplasminogen activator inhibitor type-1(PAI-1)を活性化凝固因子が不活性化することにより線溶活性を促進するという新しい考え方を示した。本研究でこの機構の生理的な意味を解析した。活性化凝固因子であるトロンビンはPAI-1活性を中和するが、内皮細胞上でトロンビン活性を修飾するトロンボモジュリン(TM)の存在下では中和しないことを示した。またトロンビンによるPAI-1活性中和を介した線溶活性の促進は可溶性TMによって抑制されることを精製系で示した。より生理的な系であるeuglobulin clotlysis timeがCa^<++>と燐脂質により短縮する反応も、生成トロンビンによるPAI-1の不活性化によることを示し、更にこの短縮も可溶性TMで解消されることを示した。即ち、トロンビンによるPAI-1の不活性化が凝固に伴う線溶活性の増強機構の一つであるが、正常血管内皮細胞上のTMが存在すると本機構は作動しないことが示唆された。本機構は、血栓形成時に血栓上で活性化された凝固因子がPAI-1を不活性化して線溶活性を増強し過剰な血栓形成を抑制する上で重要であり、正常内皮細胞上に捕捉されたトロンビンでは本機構による線溶活性の発現は発動されないことが示唆された。これらは播種性血管内凝固症候群(DIC)の発生機序にも関与しているものと考えられた。血栓形成からの時間、凝固系活性化の部位等、時間的・空間的に異なる部位で異なる機構で凝固と線溶は密接に関連し、血栓の発育・安定・溶解を制御しているものと考えられた。血液凝固系と、これによりつくられた血栓を溶解する線維素溶解(線溶)現象は密接に関連しており、凝固がおこると線溶系は強く活性化されることが知られている。最近我々は、本機構の一つとして、線溶活性の重要な調節因子であるplasminogen activator inhibitor type-1(PAI-1)を活性化凝固因子が不活性化することに上り線溶活性を促進するという新しい考え方を示しており、この機構の生理的な意味を明かにしようとするものである。本年度の研究において、凝固カスケードの最終産生酵素であるトロンビンはPAI-1活性を中和するが、内皮細胞上に存在しトロンビン活性を修飾するトロンボモジュリンの存在下では中和しないこと示し、トロンビンによるPAI-1活性中和を介した線溶活性の促進はトロンボモジュリンの存在下では起こらないことを可溶性トロンボモジュリンを用いて精製糸で示した。凝固に伴う線溶活性の促進は、凝血塊上で過剰に産生されたトロンビンにより惹起されるが、正常な血管内皮細胞上に発現しているトロンボモジュリンに結合したトロンビンはこの活性を持たず、線溶活性の促進に関与しないことが示された訳である。これは生理的な凝固と線溶の調節に重要であると共に、血管内皮細胞が傷害された時に血管内の過剰な凝固系の活性化に伴い線溶活性が増強するという播種性血管内凝固症候群(DIC)の発生機序にも関与しているものと考えられた。来年度以降の研究において、上記反応を血漿あるいは全血を用いたcrudeな系を用いて生理的な意味合いを検証したい。

血液凝固系と、これによりつくられた血栓を溶解する線維素溶解(線溶)現象は密接に関連しておりその機構の解析が本研究の目的である。最近我々は、本機構の一つとして、線溶活性の重要な調節因子であるplasminogen activator inhibitor type-1 (PAI-1)を活性化凝固因子が不活性化することにより線溶活性を促進するという新しい考え方を示した。昨年度の研究において、凝固カスケードの最終産生酵素であるトロンビンはPAIー1活性を中和するが、内皮細胞上に存在しトロンビン活性を修飾するトロンボモジュリンの存在下では中和しないことを示し、トロンビンによるPAIー1活性中和を介した線溶活性の促進はトロンボモジュリンの存在下では起こらないことを可溶性トロンボモジュリンを用いて精製系で示した。また今年度の研究で、euglobulin clot lysis time(ECLT)がca++と燐脂質の添加により凝固系を活性化することにより短縮することがわかり、これはprothrombin欠乏血漿では認められないことから、生成トロンビンによるPAIー1の不活性化によるものと考えられた。更にこの短縮は可溶性トロンボモジュリンで延長することから、凝固に伴い線溶活性が促進することと、それがトロンボモジュリンにより解消されることがより生理的な条件下でも示された訳である。これより当該機構は生理的な凝固と線溶の調節に重要であると共に、血管内皮細胞が損害された時に血管内の過剰な凝固系の活性化に伴い線容活性が増強するという播種性血管内凝固症候群(DIC)の発生機序にも関与しているものと考えられた。最近我々は、本機構の一つとして、線溶活性の重要な調節因子であるplasminogen activator inhibitor type-1(PAI-1)を活性化凝固因子が不活性化することにより線溶活性を促進するという新しい考え方を示した。昨年度の研究において、凝固カスケードの最終産生酵素であるトロンビンはPAI-1活性を中和するが、内皮細胞上に存在しトロンビン活性を修飾するトロンボモジュリンの存在下では中和しないことを示し、トロンビンによるPAI-1活性中和を介した線溶活性の促進はトロンボモジュリンの存在下では起こらないことを可溶性トロンボモジュリンを用いて精製系て示した。また、euglobulin clot lysis time(ECLT)がCa^<++>と燐脂質の添加により短縮する反応も、生成トロンビンによるPAI-1の不活性化によることを示し、更にこの短縮も可溶性トロンボモジュリンで解消されることを示した。またCa^<++>によるECLTの短縮は活性化proteinCにより凝固系の活性化を阻害することにより消失することも示し、当該機構は生理的な凝固と線溶の調節に重要であることを示した。これらは血管内皮細胞が傷害された時に血管内の過剰な凝固系の活性化に伴い線溶活性が増強するという播種性血管内凝固症候群(DIC)の発生機序にも関与しているものと考えられた。
全く新しい方法による標的ｍＲＮＡ切断を応用した腫瘍に対する新規核酸医薬の開発

新しい方法とはすべての細胞内に存在するトランスファーRNA(tRNA)前駆体切断酵素を働かせて腫瘍の発症や進展に関与するmRNAを切断することである。標的mRNAと結合することによりtRNA前駆体と類似の構造をとるようにデザインしたsmall guide (sg) RNAを腫瘍細胞に導入しtRNA前駆体切断酵素に標的mRNAを切断させる。この方法は我々の共同研究グループが開発した方法である。この方法を用いて、複数の腫瘍増殖に関連するmRNAをターゲットとしてsgRNAの効果を複数の白血病細胞株において確認し報告した。この3年間の結果を踏まえ、今後も同方法による有効な核酸医薬の開発の検討を行う。昨年度の結果を確認した。すなわち、各種の白血病細胞株や新鮮白血病細胞に網羅的に腫瘍関連抗原のsgRNAを加えて培養した。RT/RQ-PCRを用いて、sgRNAを添加培養した白血病細胞の当該遺伝子のmRNA発現の阻害を確認するとともに、Western blottingおよびフローサイトメトリーを用いて、培養細胞の当該タンパク発現の阻害を確認した。また、sgRNAを添加培養した白血病細胞について、経時的なMTTアッセイによる細胞増殖の抑制、およびAnexin V/7AAD染色した培養細胞をフローサイトメトリーで解析することにより、sgRNAを介したアポトーシスの誘導について検討した。WT1とBcl-2において再現性の高い結果を得ることができた。Bcl-2に対するsgRNAについては、マウスゼノグラフモデルを用いたin vivoでの検討を行った。ヌードマウスの皮下に移植した人白血病細胞株に対するsgRNAの局所および尾静脈からの投与の効果について検討し、sgRNAの有効性を明らかにした。[sgRNAによる各種腫瘍細胞の細胞増殖抑制およびアポトーシス誘導についての検討]昨年度までの結果の再現性の確認を継続した。各種の白血病細胞株や新鮮白血病細胞に網羅的に腫瘍関連抗原のsgRNAを加えて培養した。sgRNAを添加培養した白血病細胞の当該遺伝子のmRNA発現の阻害を確認するとともに、培養細胞の当該タンパク発現の阻害を確認した。sgRNAを添加培養した各種腫瘍細胞株について、MTTアッセイによる細胞増殖の抑制とアポトーシスの誘導について検討した。CMLおよび多発性骨髄腫関連の細胞株においてWT1とBclー2におい増殖抑制効果、アポトーシス誘導効果を確認することができた。新鮮腫瘍細胞を対象とした検討においては再現性を確認する結果を得るまでには至っておらず、培養条件や添加条件を工夫しつつ引き続き検討したい。また、他のsgRNAの効果や腫瘍原性の作用機序が異なるいくつかの腫瘍関連遺伝子に対するsgRNAの組合せ効果についても検討を続ける。[sgRNAの腫瘍細胞傷害活性についてのマウスゼノグラフトモデルを用いた検討]Bcl-2に対するsgRNAについては、マウスゼノグラフモデルを用いたin vivoでの検討を行った。tRNaseZLはpre-tRNAの3'末端に存在する成熟tRNAに見られない身長配列を切断する酵素である。梨本らは、標的RNAに相補的な塩基配列をもつRNA(small guide RNA:sgRNA)を用いてpre-tRNAに類似した複合体を形成させtRNaseZLが標的mRNAを切断する方法を開発した。そこで、我々は、sgRNAとtRNaseZLを用いた本法が白血病における遺伝子発現の抑制に効果的であるかを検討した。始めに、WT1、PRAME、h-TERT、HMMRおよびHAGEを標的遺伝子として選択し、それぞれに対して複数のheptamer RNA構造のsgRNAをデザインして白血病細胞株培養系に添加し、増殖抑制効果およびapoptosisの誘導効果の有無を検討した。その結果、WT1sgRNAがWT1高発現細胞株K562に対して明らかに細胞増殖抑制およびapoptosis誘導効果を有することを確認した。続いて、WT1mRNAの定量解析とWT1タンパクの発現の抑制効果を検討した結果、両者ともsgRNA添加培養系において有意に抑制されることを確認した。なお、WT1mRNAに対するsgRNAとしては、結合部位の異なる四種類のsgRNAがデザインできたが、このうちの3種類のsgRNAにおいて上記の効果が確認された。当初計画では、24年度までに、複数の遺伝子を標的としたsgRNAを作成しその効果を確かめ、最終年度に分担研究者の協力を得てマウスモデルにて確認する予定であったが、マウスモデルでの実験を早めに行うことが可能であり、論文報告にも至った。新鮮白血病細胞に対する効果の確認、および、複数の腫瘍関連遺伝子に対する効果の確認が不十分であるが、当初の計画で予測した基本的な事項に関する結果は得られていると考える。腫瘍原性の作用機序が異なるいくつかの腫瘍関連遺伝子に対するsgRNAの組合せ効果を検討するとともに、抗白血病剤に対するsgRNAの作用増強効果についても検討する。

in vitroの検討で腫瘍細胞に対する細胞障害活性が認められたWT1に対するsgRNAについて、ライブラリーを固相化した細胞培養プレートを作成する。すなわち、96ウエルプレートの各ウエルに各種濃度にsgRNAを加えたメジウムを加え乾燥させる。プレート保存に最適な条件を明らかにし、MTTアッセイで各種腫瘍細胞に対する感受性試験を行うためのキットを作成する。このsgRNA感受性キットを用いて、広範な腫瘍細胞についてWT1に対するsgRNA感受性試験を行う。平成23年度当初に計画した1)各種腫瘍関連遺伝子に対する効果的なsgRNAのデザインと安定化のためのRNA修飾,2)sgRNAによる各種腫瘍細胞の細胞増殖抑制およびアポトーシス誘導についての検討について、新鮮白血病細胞やさらに複数の遺伝子を標的として検討を進める。さらに、sgRNAによる標的mRNA切断部位の確認、および、sgRNAライブラリーを固相化した細胞培養プレートによるsgRNA感受性試験などを行う、新しいsgRNAの作成、感受性測定用キットの作成sgRNA作製、細胞培養/定量PCR/タンパク発現確認/細胞増殖能確認/RACE関連の試薬、およびFACSによる細胞形質確認用抗体、などに使用する。
ポリテトラフルオロエチレン表面のナノ原子溝が誘起する高配向J会合体の研究

(1)会合体の面内分布を計測する顕微観察システムの使用方法を改良し会合体分布観察の信頼性を高め標準化した。具体的には使用する干渉フィルターや減光フィルターの組み合わせ、等を定め、配向したJ会合体の面内分布がサブミクロンレベルで把握できている。(2)J会合体は成長するグレインの周辺部等に偏在する傾向が強い事が確認できた他、PTFE配向膜のある種の状態の違いがJ会合体の成長に影響している事が確認できた。(3)分子末端だけが僅かに違う3種(ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニルアミノ)のポリアゾ系色素化合物のなかで、ジエチルアミノ体だけが安定なJ会合体をPTFE配向膜上で形成する。この興味深い劇的な置換基効果を解析するため、それぞれの単結晶を作製しそのX線回折測定を行った。現在詳細を解析中である。(4)一方これらの配向度はピロリジニルアミノ体が傑出しているが、その原因が分子動力学モデル解析から判明した。(5)さらにはポリアゾ系色素化合物の直鎖アルキル末端の長さだけを変えた10種の色素分子の分子動力学モデル解析および実験結果から、直鎖ブチル程度の長さの末端の場合に最も配向度が高まる事が既に判っていたが、その分子レベルのメカニズムが解析できた。(1)J会合体の面内分布測定技術として完成し、それを基礎に配向したJ会合体が成長するグレインの周辺部等に偏在する傾向が強い事が確認できた。(2)ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニルアミノという三つの末端は大きさや電気的性質が似ていて、わずかな違いが配向度やJ会合体の生成に影響する現象は、J会合体を作るための要因を解析する上で貴重で、大きな成果になると思われた。解析自体はまだ完全に終了していないが、既に一定の目処を得ており、確実に成果が見込める。ポリアゾ系色素化合物の末端がわずかに違う3種(ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニルアミノ)の解析を中心に、他の色素化合物の結果も含めて成果を総合的にまとめていく。具体的には単結晶構造がそれぞれのJ会合体構造を反映するという仮定のもと、単結晶構造における分子間相互作用解析からJ会合体を与えやすいジエチルアミノ末端基の効果を解明する。その上で他の色素化合物の結果を考察する。また出来れば、J会合体を与えやすいPTFEのラビング条件を明らかにし、局所的にはJ会合体だけで出来たドメインを形成する目処を得て、デバイスへの応用展開への道も開きたい。また成果の発表に注力し、内外の学会発表と論文投稿を積極的に進める。(1)既存の偏光顕微鏡に備品を加え、J会合体の分布を計測する当初予定の観察システムを構築した。当初計画の性能があり粒径1ミクロンほどの大きさの微細結晶中のJ会合体の分布を測定できる。多数の干渉フィルターを確保しており、対象とする会合体の吸収極大波長に合わせて選択が可能である。画像解析によって会合体の分布とその他のムラを出来るだけ区別できる高精度システムに仕上げた。(2)新たにポリアゾ系色素化合物の塩素置換体3種の合成を行った。(3)すでに入手済みの、ポリアゾ系色素化合物13種、ポリフェニルアセチレン系化合物1種を配向PTFE上に堆積した実験と、分子動力学計算の結果、それぞれの配向度の間には強い相関があり、当該分子動力学計算の妥当性を強く裏付けた。(4)そのうち2種の極めて高い配向度の化合物の詳細解析から、線形分子がPTFE上で配向する原因がPTFE鎖間にできるフッ素で負に帯電した原子溝に分子が捕捉される機構にあるという結論が得られた。この成果は長年追求してきたPTFE上での分子の配向機構に決定的な解を与えるものと考える。この機構によれば、フッ素の最高の電気陰性度によってのみ、強い負電荷による帯電と原子溝の形成が両立することから、PTFEの配向誘起基板としての強い効果と幅広い材料への適応力は、固有のユニークな性質で他の材料で容易に実現するものではない。(5)この成果は早速速報として日本化学会の英文速報誌ケミストリーレターに投稿し、掲載された。またこれに先立ち概要を、EMRS2017Fall(ワルシャワ)にて講演した。(1)J会合体の分布を計測する当初予定の性能の観察システムが完成している。(2)色素化合物の合成が予定通り進捗し、当初計画の通り化合物が得られた。(3)分子がPTFE上で配向する原因がPTFE鎖間にできるフッ素で負に帯電した原子溝に分子が捕捉される事にあるという極めて重要な結論が得られ、その速報も掲載できたし、国際学会で講演も出来た。この結論は本研究課題に止まらず、優れた配向誘起基板の一つのモデルを提示するものであり、おそらく他の材料で容易に実現するものではないが、巧みな分子設計によって新しい材料が発見される僅かな可能性ももたらした。研究の重要なマイルストーンに到達したと言える。

(2)J会合体は成長するグレインの周辺部等に偏在する傾向が強い事が確認できた他、PTFE配向膜のある種の状態の違いがJ会合体の成長に影響している事が確認できた。(3)分子末端だけが僅かに違う3種(ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニルアミノ)のポリアゾ系色素化合物のなかで、ジエチルアミノ体だけが安定なJ会合体をPTFE配向膜上で形成する。この興味深い劇的な置換基効果を解析するため、それぞれの単結晶を作製しそのX線回折測定を行った。現在詳細を解析中である。(4)一方これらの配向度はピロリジニルアミノ体が傑出しているが、その原因が分子動力学モデル解析から判明した。(5)さらにはポリアゾ系色素化合物の直鎖アルキル末端の長さだけを変えた10種の色素分子の分子動力学モデル解析および実験結果から、直鎖ブチル程度の長さの末端の場合に最も配向度が高まる事が既に判っていたが、その分子レベルのメカニズムが解析できた。(1)J会合体の面内分布測定技術として完成し、それを基礎に配向したJ会合体が成長するグレインの周辺部等に偏在する傾向が強い事が確認できた。(2)ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニルアミノという三つの末端は大きさや電気的性質が似ていて、わずかな違いが配向度やJ会合体の生成に影響する現象は、J会合体を作るための要因を解析する上で貴重で、大きな成果になると思われた。解析自体はまだ完全に終了していないが、既に一定の目処を得ており、確実に成果が見込める。分子動力学計算と実験結果の相関を根拠にして、末端置換基がどのように配向度に影響するかさらに解析を進める。すでにいくつかの重要な結論が得られつつあるが、それを集約して、いくつかの一般的結論を導く。それと同時にその配向現象とJ会合体形成との相関を解析する。配向現象だけでなく、色素分子それ自体の構造にも、そもそもJ会合体を形成し易い性質の大小があるはずで、その影響も大きい。内的要因と外的要因がどう会合体形成にからんでいるか、という視点で解析を進めたい。そのためにも、完成した観察システムを使い、J会合体の分布の測定を進めて、J体形成の機構を考察する。現在の仮説が正しければ、J会合体はグレインの周辺部のPTFE界面の部分に形成されるはずである。ポリアゾ系色素化合物の末端がわずかに違う3種(ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ピロリジニルアミノ)の解析を中心に、他の色素化合物の結果も含めて成果を総合的にまとめていく。具体的には単結晶構造がそれぞれのJ会合体構造を反映するという仮定のもと、単結晶構造における分子間相互作用解析からJ会合体を与えやすいジエチルアミノ末端基の効果を解明する。その上で他の色素化合物の結果を考察する。また出来れば、J会合体を与えやすいPTFEのラビング条件を明らかにし、局所的にはJ会合体だけで出来たドメインを形成する目処を得て、デバイスへの応用展開への道も開きたい。また成果の発表に注力し、内外の学会発表と論文投稿を積極的に進める。主たる理由は参加した国際学会の一つが、計画当初の予想から日程がずれこみ次年度冒頭になったため、そのための参加費、および旅費に該当する金額が翌年度に繰り越しになったため。予定していた一部の学会参加を、ある目的の調査のため次年度の別の学会に変更したため。また一部の消耗品の使用時期が次年度にずれ込んだため。
古代東アジアにおける墓制の比較研究

本研究では、中国・日本・韓国における最新の発掘資料を加味しつつ、比較考古学的観点から墓制の総合的な分析・検討をおこなった。具体的には、1.魂魄説(古代中国人の死生観)の解明、2.古代葬制の交流、3.東アジア墓制の重要な事象である木槨墓の成立と地域伝播、4.大型墳墓の出現と社会変動および巨大古墳の形成と変遷の意義について、5.装飾壁画墓の東アジア的展開、6.古代聖域の方位と景観、の6つの論点を設定した。2は埋葬施設、副葬品、埋葬頭位、赤色顔料の使用と廃絶などの古代東アジアの葬送儀礼に共通する要素に注目した。5では中国壁画墓の形成と展開過程を明らかにしたうえで、その影響が高句麗の壁画墳や朝鮮半島南部、日本列島にどのように波及したかを考察した。6ではGPSによる中国都城と陵墓の位置関係にかんするデータをもとに、中国文明の死生観や宇宙観の復元をめざした。中国と朝鮮・日本との間の人的交流や技術・文物・諸制度の導入は紀元前1世紀ごろの楽浪郡設置以降盛んになった。冊封体制下に入った高句麗,百済,倭,伽耶,新羅などの周辺諸国には青銅・鉄製武器や鏡など様々な威信財が伝来し、遠距離交易や手工業生産がおおきく発展した。このような国際情勢や地域編成の変化の結果、地域王権の象徴である大型古墳の登場が促され、高句麗・百済では方壇階段石室墳、倭では前方後円墳が創出された。本研究では中国壁画墓の意匠と地域波及を系統的に把握することにより、海を介した対外交渉と内的発展とが相関しながら独自の歴史的な生成をなしてきた古代東アジアの原像をより具体的に描くことができたと同時に、本研究の分析視点の有効性も実証できた。今後も中・日・韓地域で年々増加する古代墳墓の発掘資料を収集し、緻密な考察・分析を積み重ね、葬送儀礼の背後に潜んだ人とモノの動きを探りながら、新たな文化が受容された過程を提示したい。本年度は、以下の調査と研究発表を実施した。(1)中国陜西省商州市東龍山漢墓の発掘調査東アジアの視野で漢文化の深層を追及するため、自主企画として陜西省考古研究所と三重大学考古学研究室との連携によって商州市東龍山大型漢墓の発掘調査を2002年4月から7月実施した。その結果、地上の版築墳丘や地下で並列に造った2つの磚室墓を発掘し、古い時期から盗掘に遭ったが、残った副葬品は青銅器、銅鏡、陶器、玉器、貨幣、木製品など300点ほど出土した。それによって、前漢末(紀元前後)の地方有力者の墓であることが確認できた。墳丘の築造法や銅鏡の文様、副葬品のあり方など、大陸文化と日本の弥生・古墳時代との文化交流を解明するのに対比できる重要な手掛かりを提供した。現在、副葬品の修復作業、図版・報告書を作成中。(2)東アジア地域における巨大古墳の成立に関する調査・韓国国際学術大会での研究発表東アジア地域における巨大古墳の出現とその歴史背景を明らかにするために、まず中国・日本の巨大墳墓の資料をデータ化すると同時に、近年明らかになりつつある韓国栄山江流域の前方後円墳を現地踏査した。

それら調査と研究成果の一部を「中国古代における大型墳墓の出現と社会変動」をテーマに、2002年9月14・15日に韓国国立文化財研究所主催、韓国・中・日・ロシアの学者参加の国際学術大会『東アジアにおける大型古墳の出現と社会変動』で口頭発表をし・他国の学者との議論を重ね、東アジア地域文化の研究基盤を築くために基礎的研究となった。出版した論文集には中国語,ハングル、日本語、英語、ロシア語訳で掲載した。(3)東アジア地域研究における都城の起源問題を考察・検討・発表近年、中国黄河・長江流域で先史城郭遺跡の発見が相次ぎ、最新資料に基づいてその性格を考察・検討・発表した。黄暁芬H15年度研究実績の概要2003年7月,前年度の科研費による調査と研究の成果一部を加えて執筆した研究著書『漢墓的考古学研究』(中国語版)は、中国岳麓書社より正式に出版、発行した。8月,夏休みを利用し黄河文明の中心地である河南省,陝西省,山西省との3地域をめぐり、紀元前後200年頃の漢代、またその後に興起した魏晋南北朝時代の都城と陵墓遺跡の現場調査を行い、各地における最新な発掘情報を把握した。10月22-25日,北京大学主催の国際シンポジウム「漢唐陵墓制度研究」へ出席し、個人研究のペーパ発表を行った。11月,本課題研究の中心内容をまとめ、山口大学院の集中講義として漢文化の研究-都城と陵墓を中心に」を題に講演した。12月,陝西省考古研究所との共同研究で漢景帝陽陵のGPS測量を実施した。その後、個人の研究調査として、西安市郊外に立地する漢代長安城と高祖劉邦長陵を中心に、南の長安県,北の三原県に至る範囲の漢代遺跡GPS測量を実施し、漢代南北中軸線の存在を実地調査とGPS測量によって初めて確認できた。そして、長大な南北中軸線の存在意義とその象徴性について考古資料と文献資料を駆使して検討し、漢初「聖人法天」の理念や漢人の五行思想、宇宙観を印した記念建造物であろうと、指摘した。2004年3月,アメリカ・エール大学東亜研究センター、コロンビア大学東アジア言語・文化学部の招請を受けて訪米。25日にエール大で「漢墓の考古学的研究」を演題に、27日コロンビア大で開催したアメリカ東海岸中国上古史研究会に「漢代都城と陵墓の南北中軸線とその象徴性」を演題にそれぞれ研究発表をし、活発な討議に臨んだ。黄暁芬H16年度研究実績の概要本課題研究の一環として日・中・韓半島の発掘資料を中心に東アジア地域における木槨墓の形成過程を検討した。「中国の木槨墓の形成過程」を論題に2004年6月,『考古学ジャーナル』No.517に掲載した。8月,長江流域の都市・陵墓遺跡(新石器戦国秦漢)を中心に全地球測位システムGPSを用いた測量調査を実施し、最新考古学情報の収集や正確なデータ取得にも務めながら、中国王権国家の成立の様相を系統的に探究した。8月2023日,中国社会科学院考古研究所・山東省文物考古研究所主催の国際学術研討会『漢代考古与漢文化』(済南・章丘市)に研究発表をした。10月15日,北京大学文博学院に招かれて、本課題研究の一部「漢墓の研究」をテーマに3時間半にわたる特別講義を行った。10月1618日,中国煙台大学・中国学術研究所主催の国際学術研討会『考古発見与中国学術史研究』にて「亜州地域的木槨墓研究」をテーマに研究発表した。また、10月1924日,内蒙古博物館や当地域の郡県城市と陵墓遺跡を調査した。12月2127日,昨年に続き陜西省考古研究所との国際共同調査を再開し、漢代皇帝陵のGPS測量調査を実施したほか、個人研究としての前漢都城と陵墓遺跡のGPS測量調査を実施し、古代中国人の宇宙観と都城思想に対する認識が深まった。そして、11月2日,日本秦漢史学会2004年度大会(第16回)の講師として招かれて「前漢都城と陵墓の南北中軸線とその象徴性」をテーマに講演した(京都)。活発な討議に臨んだ。
ＧＡＴＡ転写因子群による腎臓機能維持を介した慢性腎臓病の予防戦略

腎糸球体メサンギウム細胞と腎尿細管細胞は、腎機能維持の根幹を担う細胞群である。我々は、GATA転写因子群のGATA2およびGATA3が、尿細管細胞とメサンギウム細胞に特異的に発現することを発見した。GATA3はメサンギウム細胞の維持に必須であり、GATA3を欠損すると糸球体腎炎を自然発症した。GATA2は腎集合管細胞において、水再吸収関連遺伝子群と炎症関連遺伝子群を制御することが解った。急性腎臓病誘導時には、GATA2は炎症関連遺伝子群の発現活性化に関わるため、GATA2欠損マウスでは腎臓病誘導への耐性が観られた。GATA因子阻害剤の投与は、急性腎臓病誘導時の炎症症状を抑制し腎障害を軽減した。1,腎臓の尿細管細胞特異的なGATA2欠失マウスは、尿濃縮機能障害を示し多量の低張尿を排泄する。この症状は腎集合管での水チャネルであるAqp2遺伝子、Aqp3遺伝子やバゾプレッシン受容体のAvpr2遺伝子の発現低下を伴っており、腎性尿崩症の動物モデルになることを見いだした。2,腎臓の集合管においては、GATA2とGATA3が重複して発現しているが、このような尿濃縮に関わる遺伝子群の発現変化と尿濃縮障害は、GATA3変異マウスでは認められず、GATA2変異マウスでのみ観察された。3, mRNA発現の絶対量に関して、腎臓集合管ではGATA2の方がGATA3よりも多く、腎臓集合管においてはGATA3よりもGATA2の方が、より重要な機能を有すると考えられた。4, GATA2変異マウスは腎虚血再還流刺激により誘導される腎組織障害が軽微であることを見いだした。腎臓集合管を用いた発現アレイ解析の結果、GATA2欠損腎集合管細胞では炎症細胞を遊走するサイトカインや補体因子の遺伝子発現低下が観察された。GATA2はこれら炎症を誘導するサイトカイン遺伝子群を包括的に活性化制御することで、炎症の惹起に積極的に関わっている可能性が示唆された。5,発現アレイ解析の結果から見いだされた、GATA2の制御下にあるサイトカイン遺伝子群の中には、感染防御機能を有するものも散見された。この結果から、腎尿細管でのGATA2欠損により、腎臓の感染防御機構に破綻をきたし、感染症に対して脆弱になる可能性が示唆された。1.腎尿細管細胞特異的GATA2欠失マウスに観察される尿濃縮機能障害の病態生理を解明するために、腎臓での水トランスポーターAqp2の発現レベルの変化を、定量RT-PCR、ウェスタンブロッティング、免疫組織染色による多角的な解析方法により検討した。その過程で、バゾプレッシン受容体Avpr2遺伝子の発現レベル低下を新たに発見し、転写因子GATA2が水トランスポーターの発現レベル維持とバゾプレッシン受容体シグナル経路の活性維持を介して、腎臓での体液バランス調節に包括的に貢献している可能性が明らかになった。2.腎障害のモデルである片側尿管結紮からの回復期に、一過性に尿量が増加する現象が観られる。このとき腎臓において一過性にGATA2および水トランスポーター遺伝子の発現レベルが低下することがわかった。これらの結果は腎炎等に伴う続発性尿崩症において、GATA2の発現レベル低下がその病態形成の一端を担っている可能性を示唆する。3.ビオチン化タグつきGATA2を安定導入した腎尿細管細胞株mIMCD細胞を樹立した。本細胞株を用いてクロマチンプルダウン実験を行い、GATA2がAqp2遺伝子プロモーター上のGATA配列に直接結合することを証明した。4. GATA2を欠失する尿細管細胞の発現アレー解析を行った結果、マクロファージ遊走能を有するサイトカインや、補体因子の遺伝子発現低下が観察された。それと関連し、腎尿細管細胞特異的GATA2欠失マウスでは、腎虚血再還流刺激などにより誘導される腎組織障害の重症度が、野生型マウスと比較して軽微となる傾向があることがわかった。5.腎尿路系初期発生において、膀胱尿管接合部周囲でのGATA2の発現が正常な膀胱尿管接合部の発生と、水腎症の発症予防に重要であることを明らかにした。この結果はMol Cell Biol誌に掲載された。1,腎臓病時の腎内での炎症性サイトカインは、遊走してくるマクロファージ等の炎症細胞からの分泌に加え、腎実質の細胞に由来する割合も高いと考えられてきたが、腎内でのいずれの細胞が、サイトカイン産生を担っているかは、これまで明らかでなかった。2,腎臓病時の炎症性サイトカインの、腎内での起源を調べたところ、主に集合管細胞より産生されていることが明らかとなった。3,我々は昨年度までの解析から、腎集合管細胞にジンクフィンガー型転写因子GATA2が高発現していることを見いだした。そこで、転写因子GATA2の尿細管細胞特異的な欠損マウスを用い、発現アレイ解析を行うことで腎集合管細胞内でGATA2の制御下にある遺伝子群の網羅的な解明を試みた。その結果、種々の炎症性サイトカイン関連遺伝子群の発現が、著しく低下していることを見いだした。4, GATA2を強制発現したマウス腎集合管由来細胞株のmIMCD細胞では、LPS(lipopolysaccharide)刺激時の炎症性サイトカイン発現誘導が、著しく増強することを見いだした。

この結果はGATA2が炎症誘導時の腎集合管からのサイトカイン産生を、正に制御する機能を持つことを示す。5,尿細管細胞特異的なGATA2欠損マウスでは、虚血再還流刺激時の腎障害が軽微であることを見いだした。さらに本欠損マウス腎では野生型マウスと比較し、炎症細胞の遊走が軽減しており、腎内炎症性サイトカインレベルも低く保たれていることを見いだした。6,公開されているChIP-seq解析データから、複数のサイトカイン遺伝子群の制御領域に、GATA因子の結合部位が存在することが明らかとなった。これらの結果は腎臓障害時に、GATA転写因子が腎集合管細胞において、炎症性サイトカイン遺伝子の発現を活性化させることにより、腎臓病に伴う炎症を亢進させる機能をもつ可能性を示す。メサンギウム細胞は腎糸球体内にあって糸球体係蹄を束ね、糸球体血流量を調節する機能を有する。一方で、糖尿病性腎症やIgA腎症などでは過剰なメサンギウム基質合成を示し、病態形成に深く関わる。本申請研究では、転写因子GATA3が腎メサンギウム細胞に特異的に発現し、その維持に深くかかわることを初めて明らかにし報告した。Gata3ノックアウトマウスは胎生致死となるため、低レベルのGata3を発現するGata3低発現マウスを新規に樹立した。Gata3低発現マウスは著しい腎萎縮と口蓋形成不全を呈し、新生児期に致死となったため、成体期に至らなかった。そこで、Gata3の遺伝子座を含む662kbの染色体DNA領域を有するYAC(酵母人工染色体)DNAを用いてトランスジェニックマウスを作成し、Gata3低発現マウスの腎障害と口蓋形成不全による致死性をレスキューすることを試みた。このレスキューマウス(G3YR)は成体にいたるまで生存し、腎臓も野生型コントロールマウスと同程度まで発育したが、糸球体では著しいメサンギウム増殖性糸球体腎炎が観られた。その後の解析から、662kbのGata3 YACでは腎メサンギウム細胞に充分なGata3遺伝子発現を誘導できないことが解った。G3YRマウスのメサンギウム細胞ではPDGF(血小板由来成長因子)受容体の遺伝子発現が低下しており、PDGFシグナルを介したメサンギウム細胞維持機構の破綻が、糸球体腎炎の発症に関わっていると考えられた。Gata3遺伝子に変異を持つ遺伝病(HDR症候群)家系では、メサンギウム増殖性糸球体腎炎を呈することが明らかとなってきた。本研究で樹立したGata3低発現マウスは、HDR症候群にみられる腎臓病を忠実に反映したモデル動物であり、今後の病態メカニズム解明と治療法開発に有用なツールとなると考えている。腎糸球体メサンギウム細胞と腎尿細管細胞は、腎機能維持の根幹を担う細胞群である。我々は、GATA転写因子群のGATA2およびGATA3が、尿細管細胞とメサンギウム細胞に特異的に発現することを発見した。GATA3はメサンギウム細胞の維持に必須であり、GATA3を欠損すると糸球体腎炎を自然発症した。GATA2は腎集合管細胞において、水再吸収関連遺伝子群と炎症関連遺伝子群を制御することが解った。急性腎臓病誘導時には、GATA2は炎症関連遺伝子群の発現活性化に関わるため、GATA2欠損マウスでは腎臓病誘導への耐性が観られた。GATA因子阻害剤の投与は、急性腎臓病誘導時の炎症症状を抑制し腎障害を軽減した。
アフリカを題材とする国際理解教育総合学習教材キットの開発

まず、総合学習のカリキュラム構成を「教科ベース型」「テーマベース型」「関心ベース型」の3つ分けて論じ、本研究では「テーマベース型」の教材を開発した。アフリカをテーマとしてとりあげたのは、二つの理由からである。第一にCEPS調査研究結集にもづいて21世紀に必要とされる市民的資質のうち、とくに「諸問題へのグローバルなアプローチ」「異文化に対する理解と寛容」「批判的思考」を育成することをおもなねらいとした。第二に、とくにサブサハラ地域は貧困、紛争、難民環境破壊など深刻な諸問題に直面し、先進工業諸国による援助協力の重点地域となっており、日本のODAもこの地域への協力を増大しつつある。が、日本ではアフリカに関する教材は極端に少ない。本研究では、授業展開例と指導用資料を作成しさらにスライド、民族楽器、音楽テープ、民族衣装生活用具なども実物教材として準備し、希望者には貸出を行う。本研究では、野性動物を資源として観光を基幹産業としているケニア、暮らしのなかにイスラム教が定着しているセネガル、教育開発に力を入れているザンビアの3つの国を事例とした。いずれにおいてもサブサハラの抱える諸問題だけではなく、人々の生活や文化を積極的にとりあげた。深刻な暗い側面だけではなく異なる文化を理解することのおもしろさにも目を向けてほしいからである。また、3つの国を通じて見られるアフリカ文化の共通性、さらに私たちの文化との間の共通性についても気付かせたい。上記の資質を育成するためにシミュレーション、ロールプレイ、ゲームなど多様な学習活動を組み込んだ。具体的な単元は、ケニアでは「アフリカ象の物語」「サファリに行こう」「女性の暮らしと開発」「多民族社会ケニア」、セネガルでは「人と暮らし」「暮らしの中の宗教」、ザンビアでは「人々の暮らし」「子どもと教育」である。本研究は、国際理解教育を総合的な学習として展開するために、日本ではまだ教材の少ないアフリカについて、単に地誌だけではなく、自然と人々の生活様式、伝統文化と近代化の拮抗、直面している諸問題などを含めて、多角的に理解を深めるための教材キットを作成することにある。多様なアフリカの中から地理的、文化的、歴史的な背景および今日直面している諸問題の特色を考慮して、具体的にはケニア、南アフリカ、セネガルをとりあげて資料・情報を収集、整理、分析し、基礎的データを作成した。その結果、ケニア・南アフリカ・セネガルの3地域で、次のような主眼のもとに教材を構成することとした。ケニアは、気象条件に左右される食糧生産と、国際価格の動向に支配される一次産品輸出に依存する脆弱生を克服しておらず、財政収支の悪化、対外債務の増大、年平均4%に及ぶ人口増加といった問題を抱えている。とくに、外貨獲得の大きな部分を占める観光開発に焦点をあて、社会開発における意義と人々の暮らしに見られる文化変容について思考を深めることに主眼をおく。南アフリカ共和国は、長年にわたるアパルトヘイト政策が1991年に廃止され、民主国家への道を進みつつあるが、白人と非白人の間の経済的な格差は大きく、複雑な民族構成を反映して種々の社会問題も深刻である。反アパルトヘイト闘争の歴史を踏まえながら人種主義克服への方策を追究する。セネガルは、フランス植民地時代からの落花生生産による農業が中心であるが、旱魃や一次産品価格の暴落により、財政赤字、国際収支赤字に直面している。全人口の90%以上がイスラム教徒で、人々の生活にもイスラム文化が深く浸透している。生活と宗教とのかかわりについて考えることに主眼をおく。平成10年度は、衣服、民具、装飾品、音楽などのモノ教材も組み込んで、これらの地域を対象とする指導案を構成し、その成果を発表する予定である。まず、総合学習のカリキュラム構成を「教科ベース型」

「テーマベース型」「関心ベース型」の3つに分けて論じ、本研究では「テーマベース型」の教材を開発した。アフリカをテーマとしてとりあげたのは、二つの理由からである。第一に、CEPS調査研究結果にもとづいて21世紀に必要とされる市民的資質のうち、とくに「諸問題へのグローバルなアプローチ」「異文化に対する理解と寛容」「批判的思考」を育成することをおもなねらいとした。第二に、とくにサブサハラ地域は貧困、紛争、難民環境破壊など深刻な諸問題に直面し、先進工業諸国による援助協力の重点地域となっており、日本のODAもこの地域への協力を増大しつつある。が、日本ではアフリカに関する教材は極端に少ない。本研究では、授業展開例と指導用資料を作成しさらにスライド、民族楽器、音楽テープ、民族衣装生活用具なども実物教材として準備し、希望者には貸出を行う。本研究では、野性動物を資源として観光を基幹産業としているケニア、暮らしのなかにイスラム教が定着しているセネガル、教育開発に力を入れているザンビアの3つの国を事例とした。いずれにおいてもサブサハラの抱える諸問題だけではなく、人々の生活や文化を積極的にとりあげた。深刻な暗い側面だけではなく異なる文化を理解することのおもしろさにも目を向けてほしいからである。また、3つの国を通じて見られるアフリカ文化の共通性、さらに私たちの文化との間の共通性についても気付かせたい。上記の資質を育成するためにシミュレーション、ロールプレイ、ゲームなど多様な学習活動を組み込んだ。具体的な単元は、ケニアでは「アフリカ象の物語」「サファリに行こう」「女性の暮らしと開発」「多民族社会ケニア」、セネガルでは「人と慕らし」「暮らしの中の宗教」、ザンビアでは「人々の暮らし」「子どもと教育」である。
家意識・家規範の連続性及び変容に関する歴史社会学的考察

本研究の目的は、家訓、家憲を主な資料として、明治大正期の「家」を当該社会の人々が生きた文脈においてとらえ直そうとするものであった。研究の成果として、当時の「家」、特に資本家にとっての「家」の存続には、多角化する経営体の資本を共同所有の機構によって「家」に固定するという物的資本の継承の側面と同時に、象徴財の獲得と存続が重要であったことを指摘できる。「家」は物的な継承財を超世代的に存続していく体系であったのみならず、当該社会の身分や威信の準拠体系でもあったのである。今回の研究は、主に後者、明治期における象徴財の獲得の過程を明らかにすることに重点をおいた。明治期以降の資本家の子弟の婚姻や養子の関係を具体的に監察すると、明治大正期には近世社会に見られなかった新しい通婚先が見いだされた。この点が、もっとも顕著であったのは婿養子の属性である。婚姻関係によって身分や階層を上昇させていこうとする家族の戦略は日本に限って見いだされるものではない。その際に階層を維持しようとする目的の内婚の徹底と、より優位に自身の身分を上昇させようとする上昇婚という大きく2つの戦略を指摘することができる。明治大正期の資本家に望まれ、同時に獲得が可能となった婿養子の属性は、旧華族(武家、公家)といった旧家の「伝統的」な格と、学歴エリートという新しい格であった。新しく明治大正気に獲得が可能になった象徴財を積極的に取り込む一方で、内婚による本家、分家、別家間の身分秩序の再生産も行われており、この時期の資本家たちは、それまでの「家」の存続は守る一方で、新しい社会に適合的な象徴財をも取り込むことにより、近代社会に適合的でかつ高い威信を獲得できる「家」への再編を積極的に試みていたのである。
『大唐六典』の法史学・文献学的研究(王国維手校本の検討)

『大唐六典』は、唐代の官制に関する極めて重要な史料であるが、その行用や基本的性格についてはなお未解決な問題が少なくない。本研究では、まずこれまでわが国において未紹介であった王国維手校本『大唐六典』(台湾故宮博物院蔵)の解明に焦点を当てた。同書は北平図書館旧蔵本であり、全30巻14冊、明正徳10(1515)年、李承勲蘇州刊本である。高さ28.2cm×幅16.2cm、紺色表紙、左右双辺有界、毎半葉12行、毎行20字、注は細字双行。6種の蔵印の分析から、明の趙頤光の旧蔵書を宣統2(1910)年、王国維が入手したことが分かる。本書の価値は、碩学王国維による全巻に及ぶ校注にある。その題識を読むと、本書の訛奪を正すため、日本の近衛本との対校を行い、さらに問題があると思われる箇所は原文に当たっていることが明らかである。1921年には、宋刊残本との対校を終え、巻3の欠文数百字を補った。筆者は上記の作業と関連して、この一年間関西大学図書館他18機関を訪れ、所蔵の『大唐六典』および関連文献を調査した。我が国では、これまで『大唐六典』に関しては、宋刊残本および明刊本(近衛本が基本)を利用することが通例であり、鈔本は存在自体極めて少ないと考えられ、また実際その利用もほとんど行われて来なかった。しかし今回の調査において、たとえば平松家旧蔵本(京都大学)、伊藤家旧蔵本(天理図書館)等の価値ある鈔本を見いだすことができた。さらに特筆すべきは、寛政6(1794)年の源信継校本(東北大学・内閣文庫)である。これは既知の『大唐六典』諸本とは全く異なる内容の鈔本である。今後さらに資料調査を継続し、できる限り多種の版本・鈔本を発掘し、それらの相互関係を追及して、当初の目的である『大唐六典』の行用やその基本的性格の解明を行いたいと考える。
野鼠における腸管出血性大腸菌O157の疫学的研究

腸管出血性大腸菌の疫学調査のため、捕獲した野ネズミと河川水から病原性大腸菌の分離を行った結果、山地で捕獲された野ネズミ211匹中3匹(1.4%)から家畜関連地域で捕獲した野ネズミ62匹中1匹(1.6%)より病原性大腸菌の毒素産生菌株が得られた。1例分離された大腸菌の血清型O157は病原性大腸菌ではなかった。他の病原性大腸菌株はPCRでは本菌ベロ毒素産生遺伝子が検出され、VT1毒素を産生していることが確認されたが、血清型の同定には至っていない。また、土、河川水のサンプルから効率のよい病原性大腸菌を分離する方法を検討し、実施したが環境からの病原性大腸菌の分離は出来なかった。一方実験的に土に病原性大腸菌を接種してその存在期間を調べた。、37°Cの条件では菌の消滅が以外に早く3ヶ月程でほとんど検出されなくなる。しかし、23°Cの条件では3ヶ月後もかなりの菌数が土壌より分離され、いずれの温度条件でも約1ヶ月の間はかなり高い菌数が土壌中に保持されることが判った。ウシの放牧される牧場では地面にウシの糞が落ち、またそれが踏まれることなどから湿った土壌中にも病原性大腸菌が比較的長く生残し、牧場の汚染を継続させるであろことが示唆された。さらにネズミからVero毒素抗体検出方法を検討した。野ネズミからはVT1のみに反応する血清が252例中3例、VT1+2に反応する血清が252例中4例、VT2のみに反応する血清はなかっな。合計252例中7例(2.8%)がVero毒素に対する抗体を保有していたと考えられた。また、O抗原に対する凝集検査では252例中5例(2.0%)が希釈80倍の凝集を示した。今回0157:H7のいわゆるウシと関連性の高い腸管出血性大腸菌は分離できなかった。しかし抗体を保有している個体もあることから、野ネズミでの本菌の保有も有り得ることを明らかとなった。腸管出血性大腸菌は、近年のヒト集団感染事例からも食品衛生学的に注目されるに至ったが、ネズミを始めとした野生動物等の疫学的データは不足していると考えられる。そこでヒトや家畜に最も密接な野生動物であるネズミを対象とした腸管出血性大腸菌の疫学調査を3年間かけて実施することを計画した。特に本菌の分離が報告されるウシとの関連を検討するために牧場、肥育畜舎、と畜場付近でネズミや水等をサンプリングして菌分離すること、並びにウシ分離株やヒト分離株との関連も踏まえて疫学的関連を検討することとした。すなわち、ヒト、ウシ、ネズミ、水に分布する腸管出血性大腸菌株の由来の検討を行い、それらの疫学的関連を明かとすることを目的とした。野ネズミを畜産農家およびと畜場付近で定期的に捕獲後、菌分離用に糞便採取および調査地域近辺の河川水のサンプリングをあわせて10ヶ所で実施した。野ネズミは各捕獲場所で05匹合計23匹捕獲することができた。同時に畜産とは無関係な山地でも野ネズミ108匹を捕獲した。捕獲した野ネズミと河川水から病原性大腸菌の分離を行った結果、山地で捕獲された野ネズミ5匹(4.6%)から家畜関連地域で捕獲した野ネズミ1匹(4.3%)より病原性大腸菌様の菌株が得られた。

ただし、腸管出血性大腸菌の代表的血清型0157は現在まで分離されていない。PCRでは本菌毒素産生遺伝子VTl,2の有効なプライマーはすでに報告が多数あり、また、検出キットとしてプライマーセットが市販されているので分離大腸菌について検討した。その結果明瞭な反応はなかったものの分子量の多少異なるPCR増幅産物が検出されることや毒素検出ラテックスでわずかな反応が認められることから、さらに分離大腸菌の血清型確定と毒素産生性について検討をしている。加えて、糞便および河川水のサンプルから病原性大腸菌を分離する上でサンプルの塩酸処理は他の雑菌発育を抑制し、大変有効な方法であることが確認できた。今後も残り2年間で研究計画に沿って分離菌株数を増やし、遺伝子レベルの比較により疫学データを蓄積する予定である。腸管出血性大腸菌は、近年のヒト集団感染事例からも食品衛生学的に注目されるに至ったが、ネズミを始めとした野生動物等の疫学的データは不足していると考えられる。そこでヒトや家畜に最も密接な野生動物であるネズミを対象とした腸管出血性大腸菌の疫学調査を3年間かけて実施することを計画した。野ネズミを畜産農家およびと畜場付近で定期的に捕獲後、菌分離用に糞便採取および調査地域近辺の河川水のサンプリングを実施した。野ネズミは合計35匹捕獲することができた。同時に畜産とは無関係な山地でも野ネズミ108匹(昨年と変らず)を捕獲した。捕獲した野ネズミと河川水から病原性大腸菌の分離を行った結果、山地で捕獲された野ネズミ5匹(4.6%)から家畜関連地域で捕獲した野ネズミ2匹(5.7%)より病原性大腸菌様の菌株が得られた。ただし、腸管出血大腸菌の代表的血清型O157は昨年まで分離されていなかったが、今年度野ネズミより1例分離された。現在、H抗原の決定、および毒素産生、毒素産生遺伝子の保有について検査中である。また、他の病原性大腸菌株はPCRでは本菌毒素産生遺伝子が検出され、VT1毒素を産生していることが確認されたが、血清型の同定には至っていなし。その他、PCRでは典型酌、また明瞭な反応はなかったものの、毒素検出ラテックスで反応が認められる株などが存在することから、さらに分離大腸菌の血清型確定と毒素産生性について検討をしている。今後も残り1年間で研究計画に沿って分離菌株数を増やし、遺伝子レベルの比較により疫学データを蓄積する予定である。野ネズミを畜産農家およびと畜場付近で定期的に捕獲後、菌分離用に糞便採取および調査地域近辺の河川水および牧場の土などのサンプリングを実施した。野ネズミは合計273匹捕獲することができた。捕獲した野ネズミと河川水から病原性大腸菌の分離を行った結果、山地で捕獲された野ネズミ211匹中3匹(1.4%)から家畜関連地域で捕獲した野ネズミ62匹中1匹(1.6%)より病原性大腸菌の毒素産生菌株が得られた。昨年野ネズミより1例分離された腸管出血性大腸菌の代表的血清型O157は半流動培地で運動性が認められるがH抗原の決定には至らなかった(H:7ではない)こと、および毒素産生および毒素産生遺伝子は確認されなかったので病原性大腸菌ではないと結論づけた。また、他の病原性大腸菌株はPCRでは本菌ベロ毒素
がん特異的リン酸化基質Casによる癌化・転移の制御

Cas蛋白質を欠失する線維芽細胞では、アクチンストレスファイバーの形成、細胞運動、活性型Srcによる形質転換に異常が見られ、これらの表現形質は正常Casによりレスキューされる。Casの各種欠損変異体を、発現ベクターを用いてCas欠失細胞に発現させ、Casの欠失により生じた3種類の生物学的機能の異常がそれぞれレスキューできるかどうかを解析することにより、Casのどの領域が上記のどの形質にかかわるシグナルを伝えているのかを調べた。その結果、Casの基質領域に繰り返して存在するYDxPモチーフがこれらすべてに共通して必要であることがわかった。このモチーフは、Srcファミリーキナーゼによりチロシンリン酸化を受けCrkやNckと結合することがわかっており、この領域のチロシンリン酸化による生物学的シグナル制御の重要性が明確になった。これに対しCasのSH3領域は少なくともこれらの現象に必須ではないことが示され、Fakなどと結合するこの領域を介したシグナルは少なくとも調べた生物学的機能に関してはredundantであると考えられた。Src結合領域は、細胞運動やSrcによる形質転換には重要であるが、アクチンストレスファイバーの形成には必要ないことが示され、これらのことからCasの各ドメインはいくつかの異なった生物学的機能を微妙に異なる形で制御していることが示唆された。以上実験から得られた情報からCasのリン酸化により伝えられる個々の生物現象に関連したシグナルをブロックするペプチドを設計し、腫瘍細胞に強制発現することによって腫瘍の増殖能や転移能を制御するシステムを構築中である。
NFVネットワークにおける利己的最適サービスチェイニング

近年,汎用サーバと仮想化技術を組み合わせることで多様なネットワークサービスに対応可能なNetwork Function Virtualization (NFV)技術が注目されている.NFVにより,あるネットワークサービスは一つ以上のVirtual Network Function (VNF)の組み合わせ(サービスチェイン)として実現できる.一方で,サービスチェインを利用するユーザ間でのネットワーク資源競合問題の解決が急務となっている.本研究では,ユーザが利己的にサービスチェインを選択したとしても,ネットワーク全体として最適な資源利用を達成可能な利己的最適サービスチェイニングの実現を目指す.近年,汎用サーバと仮想化技術を組み合わせることで多様なネットワークサービスに対応可能なNetwork Function Virtualization (NFV)技術が注目されている.NFVにより,あるネットワークサービスは一つ以上のVirtual Network Function (VNF)の組み合わせ(サービスチェイン)として実現できる.一方で,サービスチェインを利用するユーザ間でのネットワーク資源競合問題の解決が急務となっている.本研究では,ユーザが利己的にサービスチェインを選択したとしても,ネットワーク全体として最適な資源利用を達成可能な利己的最適サービスチェイニングの実現を目指す.