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旋毛虫感染防御反応の研究:Th2応答増強因子としてのIL-3の新たな役割

病態の進む方向は、Th応答のバランスによって、大きく変わることが近年の研究で明らかになってきた。一般に、腸管寄生線虫感染では、Th2応答が感染防御に重要な働きをしていると考えられている。腸管寄生虫症のひとつである旋毛虫感染にともなって、IgE産生や好酸球増多などTh2タイプの応答がひきおこされる。IL-3は血球幹細胞に作用し、顆粒球コロニー刺激因子として、またマスト細胞の分化増殖因子としても知られているが、寄生虫感染におけるTh2応答にIL-3がどのように関わっているのか、これまでのところ明らかになっていなかった。私たちは、本研究をとおして、旋毛虫感染マウスにおいてIL-3がTh2応答増強因子として作用し、感染防御反応を促進する因子のひとつであることを明らかにした。さらに、全身のリンパ節とパイエル板を欠損するというユニークな特徴をもつalyマウスを用いた研究から、旋毛虫感染マウスにおけるTh2応答の誘導に二次リンパ組織が重要な働きをすることを示した。また、alyの実体は、遺伝子調節タンパクNF-κBを活性化するNuclear factor inducing kinase(NIK)の点突然変異であることが最近明らかにされたことから、少なくとも旋毛虫感染では、Th2応答の誘導にこのシグナル伝達経路が重要であることが示唆された。旋毛虫感染にともなって、IgE産生や好酸球増多などTh2タイプの応答がひきおこされる。IL-3は血球幹細胞に作用し、顆粒球コロニー刺激因子として働いたり、マスト細胞の分化、増殖因子としても知られているが、寄生虫感染におけるTh2応答にIL-3がどのように関わっているのかはこれまでのところ明らかになっていなかった。私たちは、rIL-3で前処置したマウスに旋毛虫を感染させると、防御免疫の発動が早くなるとともに(Korenaga et al.,Parasitol.Res.1996)、著明にIgE,IgG1産生は促進されるがIgG2a産生は促進されないという現象を見いだした(Korenaga et al.,Immunology 1996)。このことは、旋毛虫感染マウスにおいて、IL-3がTh2応答の増強因子として作用していることを示唆している。そこで、旋毛虫感染後、rIL-3処理マウスまたは無処理マウス脾細胞を単離し、幼虫抗原や固相化抗CD3単クローン抗体刺激下で培養し、その培養上清中のサイトカインをサンドイッチELISA法により測定した。その結果、rIL-3投与量依存的にIL-4産生の増加が認められた。一方、IFN-gammaの産生は顕著な変化はなかった。rIL-3処理マウスでは対照群に比べ、IL-4産生が促進していた。また、ELISPOT assayによってもIL-4産生細胞数の増加が認められた。次に、脾細胞を種々の単クローン抗体とマグネットビーズにより分画し、それぞれのIL-4産生能を抗CD3刺激下で調べた。その結果、CD4陽性T細胞が主な産生細胞であることが示された。このことは、抗CD4単クローン抗体処理されたマウス脾細胞でIL-4産生が阻害されたことからも支持された。私たちは、rIL-3で前処置したマウスに旋毛虫を感染させると、防御免疫の発動が早くなるとともに、著明にIgE,IgG1産生は促進されるがIgG2a産生は促進されないという現象を見いだした。

そこで、旋毛虫感染後、rIL-3処理マウスまたは無処理マウス脾細胞を単離し、幼虫抗原や固相化抗CD3単クローン抗体刺激下で培養し、その培養上清中のサイトカインをELlSA法により測定した。その結果、rIL-3投与量依存的にIL-4産生の増加が認められた。一方、IFN-gammaの産生は顕著な変化はなかった。さらに、二次リンパ組織であるリンパ節やパイエル板がIL-3のTh2応答増強作用に関与しているかどうかを確かめるために、全身のリンパ節と腸管のパイエル板が欠損しているalyマウスを用いてTh2応答を調べた。その結果、alyマウスでは成虫の排除が遅れ、抗体産生も低いことがわかった。IgG2aの産生はへテロの1/3程度であったが、IgG1は殆ど検出限界に近い値であった。脾細胞を抗CD3刺激し、その培養上清中のIL-4を調べたところ、IL-3処理したalyマウスでもIL-4産生の亢進がみられず、Th2タイプの応答が欠如していた。一方、IFN-gammaの産生は対照群と同程度であった。このことから、Th2応答の誘導にはリンパ節またはパイエル板が必要な要素であることが示唆された。病態の進む方向は、Th応答のバランスによって、大きく変わることが近年の研究で明らかになってきた。一般に、腸管寄生線虫感染では、Th2応答が感染防御に重要な働きをしていると考えられている。腸管寄生虫症のひとつである旋毛虫感染にともなって、IgE産生や好酸球増多などTh2タイプの応答がひきおこされる。IL-3は血球幹細胞に作用し、顆粒球コロニー刺激因子として、またマスト細胞の分化増殖因子としても知られているが、寄生虫感染におけるTh2応答にIL-3がどのように関わっているのか、これまでのところ明らかになっていなかった。私たちは、本研究をとおして、旋毛虫感染マウスにおいてIL-3がTh2応答増強因子として作用し、感染防御反応を促進する因子のひとつであることを明らかにした。さらに、全身のリンパ節とパイエル板を欠損するというユニークな特徴をもつalyマウスを用いた研究から、旋毛虫感染マウスにおけるTh2応答の誘導に二次リンパ組織が重要な働きをすることを示した。また、alyの実体は、遺伝子調節タンパクNF-κBを活性化するNuclear factor inducing kinase(NIK)の点突然変異であることが最近明らかにされたことから、少なくとも旋毛虫感染では、Th2応答の誘導にこのシグナル伝達経路が重要であることが示唆された。
レーザー接合技術を用いた新触媒開発

本研究は、「サブナノ秒の狭線幅ジャイアントパルス光の特性を生かし、金属と担体との界面に、通常では生成し得ない活性種を発生させ、それを用いた新規触媒反応の開発を目指す」ものである。具体的には、レーザー接合により貴金属と担体との界面に生じる、低原子価卑金属(0価あるいは1価)を活性中心とする反応開発を目指す。
ナノチューブ合成とは逆のプロセスによるカーボンナノホール形成法

ナノテクノロジーに代表される材料としてカーボンナノチューブがある.その成長機構は気相を炭素源としたVLS(Vapor-Liquid-Solid)機構とされている.固相のアモルファスカーボンを炭素源としても合成可能とするSLS (Solid-Liquid-Solid)機構でも合成可能である.そこでこれらの成長機構を参考にし,触媒を介して固体を気体に相変化させるナノ加工方法を提案する.対象には,反応ガスの取り扱いが容易であることからダイヤモンドを対象とした.本研究ではナノ加工方法に必要とされる水素プラズマ発生装置の試作と,触媒を用いたダイヤモンドからグラファイトへの相変化の調査を目的とする.ナノテクノロジーに代表される材料としてカーボンナノチューブがある.その成長機構は気相を炭素源としたVLS(Vapor-Liquid-Solid)機構とされている.固相のアモルファスカーボンを炭素源としても合成可能とするSLS (Solid-Liquid-Solid)機構でも合成可能である.そこでこれらの成長機構を参考にし,触媒を介して固体を気体に相変化させるナノ加工方法を提案する.対象には,反応ガスの取り扱いが容易であることからダイヤモンドを対象とした.本研究ではナノ加工方法に必要とされる水素プラズマ発生装置の試作と,触媒を用いたダイヤモンドからグラファイトへの相変化の調査を目的とする.(1)装置の試作:ダイヤモンドを大気中で加熱すると,酸素による燃焼・鉄触媒の酸化還元反応によるダイヤモンドの加工や黒鉛化が生じるため,無酸素内で実験を行う必要がある.また,グラファイト生成の最適温度は600から1000°C程度だといわれている.したがって,装置は真空装置内に,ヒーター,基板ホルダ,レーザ導入窓,水素導入口などを取り付ける.水素プラズマを発生させるための,タングステンフィラメントを有する実験装置を試作した.作成した装置の,安定化抵抗値,極板間距離,雰囲気圧力それぞれを変更し水素プラズマが生成する条件の調査をおこなった.(2)触媒粒子への炭素の拡散:従来のSLSメカニズムによるCNT合成ではアモルファスカーボンを原料として,触媒粒子へ炭素を拡散させている.本年は,まず予察試験として作製した装置を用いて,アモルファスカーボンからからグラファイトへの相変化実験を行った.基板となる単結晶Siを,アモルファスカーボンを成膜し,その後,触媒となる鉄を成膜した.成膜した試料は真空中でアニーリングを行った.アニーリング後のSi基板表面をFE-SEMを用いて観察した.同図からワイヤー形状の生成物が確認できた.これはアモルファスカーボンがグラファイトに相変化・析出したものであると考えられる.さらに,ラマン分光分析を行った.このスペクトルからグラファイトに由来する1500cm-1付近のピークの増大が観察された.これらの結果から鉄触媒を配置してアニーリングを行うことでグラファイト結晶が析出していると考えられる.(1)水素プラズマ装置の最適化:水素プラズマ装置の安定性が不十分であったため,安定化抵抗値,極板間距離,雰囲気圧力それぞれを変更し水素プラズマが生成する条件の調査をおこなった.安定化抵抗600オーム,極板間距離20mm,雰囲気圧力0.2kPaのとき,プラズマが最も安定し,高い電流密度が得られた.(2)アモルファスカーボン(a-c)からグラファイトへの相変化のラマン分光による分析:a-cはダイヤモンドsp3結合とグラファイトsp2結合を持ち,金属触媒を用いたa-cからグラファイトへの相変化に関する研究は複数報告されている.そこで,ダイヤモンドの相変化の前段階として,a-cからグラファイトへの相変化実験を行った.基板となる単結晶Siを,アセトンを用いて超音波洗浄処理し,a-cを成膜する.その後,触媒となる鉄を成膜する.成膜した試料は真空中でアニーリングを行った.ラマン分光法により同試料の分析を行った.炭素系材料の分析では1580cm-1付近にグラファイト構造に起因するG-bandと1350cm-1付近の構造の欠陥を意味するD-bandが現れる.得られたラマンスペクトルはローレンツ関数により2ピーク分離を行い,ピークの強度比,ピーク位置を算出した.この結果から鉄触媒を配置してアニーリングを行うことでグラファイト結晶が析出していると確認した.(3)ダイヤモンドからグラファイトへの相変化:鉄膜厚5nmのとき,鉄ナノ粒子が触媒作用を示したことから,膜厚は5nmで実験を行った.SEM像から鉄薄膜が粒子化していることが確認できた.しかしながら,ワイヤー状のグラファイトは確認できなかった.ラマン分光法でも解析を行った.しかし,解析したラマンスペクトルからは1332cm-1のsp3結合に起因するダイヤモンドスペクトルのみがあらわれ,グラファイトに起因するG-bandは確認できなかった.超精密加工触媒となる鉄の成膜の膜厚が安定せず,条件出しに手間取ったため.さらに,実験に必要なレーザ発振器の故障によりこの修理に費用を充当したため,装置を手作りする部分が増えたため.道具の準備は整ったため,実験を進め,遅れを挽回していきたい.
樹状細胞を標的とした全身性エリテマトーデス新規創薬研究

induced pluripotent stem(iPS)細胞を用いた全身性エリテマトーデス(SLE)の病態解明及び新規治療標的の開発を目的として研究を継続した。SLE姉妹例より樹立したiPS細胞から分化させたCD123+樹状細胞は、健常人株と比較して、核酸刺激に対してI型IFN高産生であった。SLE患者由来株のwholeexome sequenceの結果、IFN pathwayに関連する複数の遺伝子においてアミノ酸置換を生じる変異が同定された。これらの遺伝子変異についてセルラインを用いた機能解析を行ったところ、OASLの機能獲得型変異が同定された。更にSLE患者由来iPS細胞にゲノム編集を行い、OASL変異を野生型に戻したところ、IFN産生能が低下した。現在、複数のiPS細胞株にて再現性を確認しており、またin vitroにおける核酸結合能等のOASL変異型の機能解析を進めている。この結果より、SLEの発症にかかわる新たな遺伝子変異の同定ならびに新規治療標的としてのOASLの可能性が示唆された。PADI4 KOマウスにおけるimiquimod(IMQ)塗布SLEモデルでは、腎臓への好中球遊走低下がみられた。細胞株におけるPADI4 Chip-chipのデータより、PADI4の標的としてSPAG9が同定された。PADI4 KO好中球ではSPAG9の発現が低下しており、SPAG9ヘテロ欠損好中球ではp38 MAPKリン酸化の低下、ICAM1へのadhesionの低下がみられた。これらの解析結果からはPADI4はSPAG9-p38 MAPKを介して好中球接着能を制御していることが明らかとなり、これらの系がSLEの新規治療標的となる可能性が示唆された。iPS細胞、PADI4欠損マウス解析の両プロジェクトにつき、新規の知見を見出すことができ、現在論文投稿準備中となっている。iPS細胞については、効率的なゲノム編集が可能となっており、SLEに関連する新たな複数の遺伝子変異候補についてゲノム編集を行い機能解析につなげる予定である。induced pluripotent stem cell(iPSC)を用いた全身性エリテマトーデス(SLE)の病態解明及び新規治療法の開発を目的とした研究を進めた。iPSCをintereferon(IFN)高産生CD123+樹状細胞(DC)へと分化させるプロトコールを確立した。また、このCD123+DCの分化にはTLR signal, IFN signal, mTOR signalがそれぞれ必須であることを薬剤による阻害実験で確認した。また、ゲノム編集によりSLE risk variant(IFIH1)変異をiPSCに導入することで、risk variant dependentなIFN産生、細胞死(アポトーシス)の増加、ミトコンドリア代謝の亢進を認めた。メトホルミンによるミトコンドリア代謝の阻害により、細胞死が軽減することを確認した。CD123+DCのRNAseqによるtranscriptome解析では、risk variant dependentなIFN signature geneの強い発現亢進を認めた。PADI4 KOマウスにおけるimiquimod(IMQ)塗布SLEモデルでは、腎炎の軽減を認めたが、血清dsDNA抗体値、腎臓における免疫複合体沈着にはWT, KOで差がみられなかった。一方で腎臓への好中球浸潤がKOで減少し、in vivoの移入実験でもPADI4 KO好中球の腎への遊走低下がみられた。PADI4 KO好中球のRNAseqによるtranscriptome解析ではR848刺激後のFos発現低下、MAPK pathwayの低下がみられ、in vivoの現象の理由と考えられた。これらの解析結果からはPADI4はSLEの新規治療標的と考えられ、好中球の炎症局所への遊走抑制がSLEの有効な治療戦略となる可能性が示唆された。iPSCのゲノム編集が順調に進んだため、当初の予定通り機能解析、遺伝子発現解析を十分に進めることができた。PADI4 KOマウスについては、当初予定していた実験はほぼ終了し、論文作成準備中となっている。

これらの解析結果からはPADI4はSPAG9-p38 MAPKを介して好中球接着能を制御していることが明らかとなり、これらの系がSLEの新規治療標的となる可能性が示唆された。iPS細胞、PADI4欠損マウス解析の両プロジェクトにつき、新規の知見を見出すことができ、現在論文投稿準備中となっている。ゲノム編集したiPSC由来CD123+DCを用いたSLE治療標的の同定を推進する。具体的にはRNAseqのデータ解析を進め、hubとなる遺伝子について、ゲノム編集またはshRNAによる抑制実験を行い、IFN産生の抑制が可能かを検討する。またゲノム編集後のiPSC由来CD123+DCにc-myc遺伝子を導入することで細胞株化を行い、より詳細な解析と薬剤スクリーニングを行うことができる系を確立することを目標とする。これらの検証の結果同定された治療標的について、マウスモデルを用いたSLE治療実験を行い、有効性、in vivoにおける作用機序の検討を行う。iPS細胞については、効率的なゲノム編集が可能となっており、SLEに関連する新たな複数の遺伝子変異候補についてゲノム編集を行い機能解析につなげる予定である。出張旅費に関する支出を他財源から行ったため、予算残額が発生した。引き続き本年度の出張旅費として必要額の使用を予定する出張旅費に関する支出を他財源より支出したため残額が発生した。引き続き本年度の出張経費として必要額の使用を予定する。
減速RIビームで探る高速陽子捕獲過程とX線バースト

高速陽子(rp)捕獲過程は、中性子星で発生するX線バースト現象の熱源である。本課題では、元素合成速度を律速する陽子過剰な放射性同位体の陽子捕獲断面積のデータを測定し、rp過程の時間発展を明らかにする。陽子移行反応を用いたγ線分光により共鳴状態を分光する。(1)理化学研究所RIBFのOEDOビームラインにおいてRIビームを低速制御し反応断面積を高め、(2)レート耐性の強いビーム検出器の開発、(3)液体重水素標的の開発、(4)検出効率の高いガンマ線検出器アレイの構築を行い、従来比1万倍の高統計測定手法を確立する。
強誘電性液晶を用いた大規模光集積回路用導波路形光スイッチの研究

本研究は、強誘電性液晶を用いた導波路形光スイッチの実現を目指し、それを集積した広帯域交換用光回路へ適用の道を開くことを目的とし、以下の3項目を実施した。(1)強誘電性液晶層を組み込んだチャネル導波路の製作技術の確立(2)導波路形液晶光スイッチの試作・評価(3)光スイッチの集積化による多チャンネル化の検討(1)強誘電性液晶層を組み込んだチャネル導波路の製作技術の確立プレーナ形光集積回路に適したチャネル導波路形液晶光スイッチを実現するため、次の基本要素技術の確立を行った。(1)分岐結合器,(2)曲がり導波路,(3)液晶への印加電圧用電極製作技術,(4)液晶配向制御および封入技術(2)導波路形液晶光スイッチの試作・評価上記(1)で確立した個々の基本要素技術を用いて、Mach-Zehnder干渉計形チャネル導波路光スイッチの製作技術の確立を行った。試作した導波路形光スイッチの液晶装荷部に電圧を印加することで、7dBの消光比が得られ、素子の原理動作を実証した。また、液晶装荷部の電極長が異なる素子を製作し、特性を比較することで、単位長さあたりの位相可変量の評価を行った。(3)光スイッチの集積化による多チャンネル化の検討(導波路および光スイッチの性能をもとに、集積化のための素子の最適パラメータおよび素子配置について検討を行った。3ヵ年研究計画の初年度として、強誘電性液晶を利用した導波路形光スイッチの基本要素となる液晶装荷光導波路に関する、以下の研究を実施した。(A)液晶装荷光導波路の製作技術の確立(1)導波路コア材料の検討強誘電性液晶の異常光屈折率および常屈光折率のいずれよりも高い屈折率を有する導波路コア材料を検討し、成膜技術の確立を行った。また、プリズム結合法を用いた屈折率評価設備を構築し、成膜試料の評価を行った。(2)チャネル導波路製作技術の確立光露光技術及びドライエッチングプロセスを検討し、高屈折率コア材料を有するチャネル導波路の製作技術の確立を図った。(3)液晶装荷光導波路の試作紫外線硬化樹脂による基板固定法を用いた液晶注入プロセスを確立し、強誘電性液晶をクラッド層に用いたチャネル導波路を試作した。(B)液晶装荷光導波路の評価(1)導波特性の評価試作素子への光の入射方法および出射光観測方法を検討し、測定系の構築を行い、波長633,850,1310[nm]の光の導波を確認し、導波特性を評価した。また、ファイバ入出力結合での素子挿入損失を評価した。(2)印加電界の極性による出射光の偏光状態の変化構築した出射ビーム評価設備を用いて、強誘電性液晶への印加電圧の極性による出射光の偏光状態および近視野像の変化を観測した。得られた評価結果を製作技術にフィードバックし、プロセスの改善を図った。3ヶ年計画の2年度として本年度は以下の研究を実施した。チャネル導波路形光スイッチ試作・評価チャネル導波路形光スイッチを実現するため、初年度で得られた研究成果をもとに次の基本要素の設計・試作・評価・検討を行った。(1)分岐結合器(2)曲がり導波路(3)液晶への印加電圧用電極続いて、これらの各基本要素を用いて、導波路形光スイッチを試作し、試作光スイッチの諸特性を評価・検討した。光スイッチの集積化の検討・設計導波路および光スイッチの性能をもとに、集積化のための素子の最適パラメータおよび素子配置について検討した。この検討結果を元に集積回路用光露光マスクの設計を行った。
ハマダラカのマラリア媒介能に関わる防御因子の解析

目的:マラリア媒介蚊ハマダラカ(Anopheles stephensi)の病原体認識分子(シアル酸特異的レクチン)cDNAの塩基配列を決定し、シアル酸特異的レクチンcDNAの塩基配列からアミノ酸配列を推定し構造決定を行う。マラリア媒介蚊のシアル酸特異的レクチンであるマラリア原虫認識分子を分かることにより、蚊の段階でマラリア原虫を殺す機構の一つであるプロフェノールオキシダーゼ活性化系の最初の段階を明らかにする。さらに、認識分子に相互作用するプロフェノール酸化酵素活性化系の因子のcDNAクローニングを行う。そして、蚊における病原体媒介能を人為的にコントロールする可能性を探る。成果:マラリア非媒介蚊Armigeressubalbatus由来シアル酸特異的レクチンの部分アミノ酸配列における情報から縮重プライマーを作製し、RT-PCRによってcDNAの遺伝子断片を得るように試みたが、得ることが出来ずプローブの作製は出来なかった。また、マラリア媒介蚊Anopheles stephensi由来のmRNAを精製し、リンカー/アダプタープライマー法を用いてcDNAライブラリーの作製を計画し、cDNAライブラリーの作製を試みた。その結果、インサートサイズが若干小さく、力価も低く十分なcDNAライプラリーを作製することが出来なかった。今後は、再度cDNAライブラリーの作製を試み、発現クローニング法によってシアル酸特異的レクチンのcDNAのクローニングを行う予定である。マラリア媒介蚊のシアル酸特異的レクチンであるマラリア原虫認識分子が分かることにより、蚊の段階でマラリア原虫を殺す機構の一つであるプロフェノールオキシダーゼ活性化系の最初の段階を明らかにする。成果:マラリア媒介蚊Anopheles stephensi由来のmRNAを精製し、リンカー/アダプタープライマー法を用いてcDNAライブラリーの作製を計画し、cDNAライブラリーの作製を試みた。その結果、インサートサイズが若干小さいが、cDNAライブラリーを得ることが出来た。また、マラリア非媒介蚊Armigeres subalbatus由来シアル酸特異的レクチン14.4,14.0kDaの内、14.0kDaのバンドをリジルエンドペプチダーゼで消化し、逆相キャピラリー高速液体クロマトグラフィーで分画後、高感度アミノ酸シークエンサーにて消化断片を解析した。その結果、新たな蛋白であることが分かった。今後は、Armigeres subalbatus由来シアル酸特異的レクチンcDNAの遺伝子断片をプローブとして、プラークハイブリダイゼーション法によりAnopheles stephensi由来シアル酸特異的レクチンcDNAのクローニングを行う。
教員養成分野におけるジェネリック・スキル育成のための教育的介入の検討

平成30年度には,教員養成分野におけるジェネリック・スキルを育成する授業に関する情報の収集を行った。ジェネリック・スキルに関する資料はすでに数多く収集しているが,それらを育成する実践の理論や実践のあり方に関してはさらに情報を収集する必要がある。平成30年度には,特に近年OECDで重視されている社会情動的スキルに関連する書籍や論文を収集して分析を行った。また,ベトナムの教員養成におけるジェネリック・スキルの扱われ方なども実地調査した。教育関係者や行政にかかわる人間を対象にホーチミン市ミントラン・ガーデンなどでワークショップを開き,情報を収集するとともにディスカッションを行った。さらに,教員養成分野におけるジェネリック・スキルを育成する授業を開発するために,試行的に教職科目「人間関係づくりの教材開発」(学級経営に役立つ人間関係作りの演習を理論と体験を往還させながら学び,人間関係づくりに役立つ演習を開発する実践的講座であり,社会的スキルの育成などが期待できる)において,ジェネリック・スキル育成のための授業を行った。受講者のうち「調査に協力し,教員採用試験の受験状況や結果などの利用を許可する」と回答したものについて学生証番号を記入してもらい学期始めと学期終了時に調査を行い,2回の調査結果を対応づけて分析した。協力すると答えた者は65名と多かったが(「調査に協力しない」と回答した者は2名のみ),前後のどちらかしか回答がなかった者32名,回答が不適切だった者7名で,結果として分析対象者数は26名となった。授業の第1回目と最終回の結果を比較したが,対象者が少ないこともありジェネリックスキル等の有意な伸びは確認できなかった。次年度の授業実践に活用するためにさらに詳細な分析を現在行っているところである。教員養成分野におけるジェネリック・スキルを育成する授業に関する情報の収集が順調に進み,ポジティブな結果は得られなかったものの研究期間初年度にして試行的な介入研究を行う段階にまで到達したからである。また,これまで蓄積してきた研究成果を投稿する準備も順調に進行している。平成30年度に試行的に行ったジェネリック・スキルを育成するための授業を改良した上で研究対象者(受講者)を平成30年度よりも増やして介入研究を行う予定である。また,対人スキルの育成も視野に入れ,学部内で共同研究者とともに研究を拡大させていく。予定していた物品の購入を次年度に回したため次年度使用額が生じたが,平成31年度には予定していた物品を購入できる見込みであり,それによって計画にそった支出に戻ると考えられる。
アフリカ熱帯多雨林及びサヴァンナ林の有用植物の探索とその生理活性成分の化学的研究

生物種に富む熱帯域は地球上で最も生命活動の活発な地域で,生息する生物間で多様な相互作用が存在しているものと考えられる。本研究者らはこれまで,アフリカ熱帯多雨林産植物を取り上げ,ヒトをも含む生物との相互関係を克明に調査し,種々の作用に係わる化学成分(生理活性成分)の研究を行ってきた。本年度はタンザニアサヴァンナ林に調査域を広げた。なお,多雨林での調査,ならびに生理活性成分の研究は継続して行った。1.タンザニア・マハレ山国立公園での調査:京大西田利貞らは,最近本域のチンパンジーが植物を薬用的に採食している可能性を見い出している。そこで本域では,チンパンジーの採食行動より薬用的利用と考えられる植物を調査・採取(14種)した。さらに民間伝承的利用植物17種(主として薬用)を入手した。2.カメルーン熱帯多雨林・ンコロヨン地区での調査:本域では,広く動物採食行動と民間利用を合わせ調査し,有用植物10種を入手した。さらに前回の調査研究から,化学的研究対象と指摘できた植物種の量的確保を行った。特に,シクンシ科Combretum bracteatumは強力な除草活性成分を含む種として現在化学分析中の植物である。3.生理活性物質の採索研究:チンパンジー薬用植物キク科Vernonia amygdalinaより抗住血吸虫活性を示す新規ステロイド配糖体類を明らかにした。これらは,チンパンジーの本植物採食意義を寄生虫症の観点より考察できる興味ある化合物であった.また,多雨林産鎮痛性オクナ科植物Lophira alataより抗発癌プロモーター数値を明らかにした。4.今後の展開:本年度採取した植物について,種々の生理活性試験を試みる。さらに,活性の認められた植物より活性物質の精製単離・構造決定を行う。
日本古代社会における塩の摂取と利用からみる食文化の基礎的考察

本研究は、調味料や食品保存など幅広く用いられたと考えられる塩が、実社会においてどのような形で摂取されたかに着目し、塩が「食」という面で果たした役割について明確にすることを目的としている。本年度は、これまでの研究の総括として、塩が「食」という面で果たした役割について、以下の二点を中心に研究を進めた。1、塩がどのような場面において、どのような人に摂取されたかを、史料から明確にし、その意味を検討する。2、醤などの塩を用いて作られる食品の利用や製造過程、製造場所などの検討から、塩の二次的な役割について各史料から明確にする。1については、これまで研究を進めてきた塩に関する史料をふまえ、内陸部での塩の流通と消費について考察を進めた。その中で、内陸部に位置する国として甲斐国の塩の流通と消費に着目をした。その成果は、2008年2月2日(土)に帝京大学山梨文化財研究所大ホールで開催された山梨県考古学協会2007年度研究集会「塩の考古学-ゆく塩、くる塩、古代の塩とその流通を考える-」において、「内陸部における塩の流通と消費-甲斐国を中心に-」というタイトルで口頭報告し、資料集にその内容をとして掲載した(7頁24頁)。ここでは、「六国史」などに散見する塩に関する史料から、塩の移動と輸送手段を取り上げて検討し、その結果をふまえて、内陸部の甲斐国がどのように塩を獲得していたかを考察した。ついで、2については、醤・未醤(末醤)・?などの製造方法や消費手段に着目し、塩の利用や塩との支給対象者の違いなどについて考察を加えた。現在、これらの成果を論文としてまとめている。本研究では、調味料や食品保存などに幅広く用いられたと考えられる塩が、実社会においてどのような形で摂取されたかに着目し、『和名類聚抄』・『延喜式』・各儀式書・出土木簡の検討を通して、塩の活用法や役割を明確にし、古代の食文化の一端、人々の日常生活の一端を明らかにすることを目的としている。本年度は、研究課題のうち下記の(1)・(2)の作業を中心に行った。(1)二十巻本『和名類聚抄』の飲食部塩梅類に含まれる塩に関する項目の他、塩梅類以外の飲食部・稲穀部・菓蔬部・菜蔬部に掲出された食に関する項目を取り上げ、先行研究をふまえた上で、大東急記念文庫蔵本や東京大学国語研究室蔵本などの各写本の史料調査をし、字句の校訂を行った。その上で、各項目を説明する為に引用されている書については、可能な限り原史料との比較を行った。特に漢籍に関しては、『和名類聚抄』での引用の仕方や使用頻度等にも着目した。これらの作業を通して、古代における食品の辞書的な意味を明確にすることに努めた。十巻本についても現在検討を進めている。(2)「六国史」・出土木簡・正倉院文書・『延喜式』・『日本霊異記』等の史料から、塩を用いて作られた食品名とその他の食品名を取り上げてデータ化し、さらに記載された内容から可能な限り材料・数量等の情報を加えた。食品名をデータ化することにより、史料ごとの特性やある食品がどのような場で用いられたか等の比較が可能となった。食品に関するデータは、本年度以降も出土文字資料を中心に継続して取っていきたい。現在は、(1)の作業で得られた古代における食品の辞書的な意味と(2)の実際に食された品々と比較検討し、その相異について考察を進めている。本研究は、調味料や食品保存など幅広く用いられたと考えられる塩が、実社会においてどのような形で摂取されたかに着目し、塩の活用法や役割を明確にし、古代の食文化の一端、人々の日常生活の一端を明らかにすることを目的としている。平成18年度の研究については、以下の二点を重点的に行った。まず、昨年度の研究成果を、論文としてまとめ、「日本古代社会における塩の支給-『延喜式』を中心に-」(『続日本紀研究』第364号)として発表した。これは、『延喜式』の給塩規定を主な検討対象として、各史料の支給データから、古代の給塩の特徴について論じたものである。この論文により、古代の給塩の特徴が明らかになった。ついで、食品名と材料等の一致によって得られた食品が、実際にどの場面において作られ食されたのかを、国家的な問題・各家の問題として考察することに努めた。本年度は、その対象として、塩を用いて作られる醤に注目し、国内外の史料や文献などを収集した。その成果は、「日本古代における醤の製法について」(『早稲田大学大学院文学研究科紀要』第52輯)として発表した。これは、木簡や漢籍などを用いて、古代の醤の材料や製法について再検討をしたものである。現在は、この論文での成果をふまえ、醤が作られた場所や労働力の問題について、各史料から考察を進めている。また、同時に未醤や〓などの調味料についても、醤と同様に、その材料・製法・製造場所・労働力などについて、古代の史料からの復元に努めている。

本年度は、これまでの研究の総括として、塩が「食」という面で果たした役割について、以下の二点を中心に研究を進めた。1、塩がどのような場面において、どのような人に摂取されたかを、史料から明確にし、その意味を検討する。2、醤などの塩を用いて作られる食品の利用や製造過程、製造場所などの検討から、塩の二次的な役割について各史料から明確にする。1については、これまで研究を進めてきた塩に関する史料をふまえ、内陸部での塩の流通と消費について考察を進めた。その中で、内陸部に位置する国として甲斐国の塩の流通と消費に着目をした。その成果は、2008年2月2日(土)に帝京大学山梨文化財研究所大ホールで開催された山梨県考古学協会2007年度研究集会「塩の考古学-ゆく塩、くる塩、古代の塩とその流通を考える-」において、「内陸部における塩の流通と消費-甲斐国を中心に-」というタイトルで口頭報告し、資料集にその内容をとして掲載した(7頁24頁)。ここでは、「六国史」などに散見する塩に関する史料から、塩の移動と輸送手段を取り上げて検討し、その結果をふまえて、内陸部の甲斐国がどのように塩を獲得していたかを考察した。ついで、2については、醤・未醤(末醤)・?などの製造方法や消費手段に着目し、塩の利用や塩との支給対象者の違いなどについて考察を加えた。現在、これらの成果を論文としてまとめている。
地域在住高齢者におけるバランス構造の解明とバランスの課題を判別する手続きの標準化

本研究では,地域在住高齢者の個別のバランスの課題を,Brief-BESTest(Balance Evaluation Systems Test)を用いて判別することを目的とする.検査結果からバランスの課題を判別するバランス検査はないが,Brief-BESTestはバランスを6要素として検査できる.本研究ではBrief-BESTの6要素の構造的特徴や臨床的意義を解明し,Brief-BESTestの結果からバランスの課題を判別する手続きを標準化する.このことにより,多くの地域在住高齢者に有効な転倒予防として,個別のバランスの課題へ介入する研究展開が期待できる.本研究では,地域在住高齢者の個別のバランスの課題を,Brief-BESTest(Balance Evaluation Systems Test)を用いて判別することを目的とする.検査結果からバランスの課題を判別するバランス検査はないが,Brief-BESTestはバランスを6要素として検査できる.本研究ではBrief-BESTの6要素の構造的特徴や臨床的意義を解明し,Brief-BESTestの結果からバランスの課題を判別する手続きを標準化する.このことにより,多くの地域在住高齢者に有効な転倒予防として,個別のバランスの課題へ介入する研究展開が期待できる.
PCNA・plutonium遺伝子発現制御と染色体ドメイン境界領域結合因子

1)PCNA遺伝子プロモーター内のBEAF結合サイト様配列(-87-62)に結合するタンパク因子は、その認識配列の特異性からBEAFと同一のものであると予想し、ゲルシフトアッセイにおいて抗BEAF抗体を用いたスーパーシフトアッセイを行なったが、予想に反して抗体添加の効果は認められなかった。この因子は少なくとも2種類の塩基配列を認識し、PCNA遺伝子の-87-62領域以外にもDREやURE領域、DNAポリメラーゼα遺伝子のDRE、さらにはDREF(DRE結合因子)遺伝子プロモーター内の複数の領域にも親和性を示すことが明らかとなった。私たちはこの因子をCFDD(common regulatory factor forDNA replication genes and DREF gene)と名づけた。2)PCNAプロモーター内のCFDD結合サイトに変異を導入したPCNA-lacZ融合遺伝子を用いてトランスジェニックフライの系統を複数樹立し、各発生段階におけるlacZ発現レベルの定量を行った結果、このサイトがPCNAプロモーター活性を促進する機能をもつことがわかった。
比較認知発達の観点からみた絵画的奥行知覚:運動情報と視点の影響

本年度は、2次元画像から奥行きを知覚する際の「視点」の高さの効果について、ヒトとチンパンジーの比較から検討した。ヒトでは3次元空間の探索において「地面」上の変化の方が「天井」など他の面に比べ検出しやすいことが報告されている(地面優位性効果:ground dominance effect)。地面上を二足歩行するヒトにとって、地面を見下ろすような視点から物を探索することの方が、天井を見上げるような視点から物を探索するよりも頻繁に経験するからかもしれない。ヒトは2次元画像の奥行きを知覚する際にも、現実空間と同じように「地面」上の変化を効率よく探索する。本実験では、ヒトと移動様式の異なるチンパンジーにおいても「地面優位性効果」が見られるかについて、視覚探索課題を用いて検討した。「地面」あるいは「天井」の上に複数の立方体が手前から奥に徐々に小さくなるように呈示される。課題は、その中から上面または側面の輝度が他と異なるもの(ターゲット)を検出することである。ターゲット検出に必要な反応時間を計測する。その結果、チンパンジーもヒトと同様、「地面」では奥行平面に沿った上面の輝度の差異の検出が側面に比べ速いのに対し、「天井」では上面と側面の反応時間の差が消失した。すなわち、ヒトと同様の「地面優位性効果」がチンパンジーにおいても見られた。本年度は、ヒトの乳児および、チンパンジーとヒトの成体を対象に、影の情報からの物体の3次元形状の知覚、3次元空間の知覚について検討した。ヒトの乳児を対象とした研究は、中央大学文学部の山口真美先生との共同研究として実施した。5ヶ月から8ヶ月のヒトの乳児を対象に、陰影と線分の交差の情報からの3次元形状知覚について選好注視法を用いて検討した。陰影情報と図形の輪郭の位置関係を変化させることにより成人には平面あるいは立体として知覚される図形をCRT画面上に呈示し、乳児が平面と立体のいずれを長く注視するかを調べた。その結果、7,8ヶ月齢の乳児は、陰影情報と線分の交差の手がかりから立体が知覚される方の図形を長く注視した。したがって、生後7ヶ月の乳児は、陰影と線分の交差から3次元形状を知覚することが示唆された。得られた結果を国際学会(European Conference on Visual Perception)で発表した。また、その成果を論文にまとめたものが雑誌(Vision Research)に掲載されることになった。チンパンジーを対象とした研究では、3次元空間の探索において「地面」上の変化の方が他の面に比べ検出しやすいという「地面優位性効果」が見られるかどうかについて、ヒトと比較した。課題は、テクスチャ勾配、陰影で定義された「地面」あるいは「天井」を模した奥行平面上に配置された複数の立方体の中から、立方体の上面または側面の輝度が他と異なるものを検出することであった。その結果、チンパンジーもヒトと同様、「地面」では奥行平面に沿った上面の輝度の差異の検出が側面に比べ速いのに対して「天井」では上面と側面の反応時間の差が消失するという、地面優位性効果を示唆する結果が得られた。実験の成果を国際学会(Vision Sciences Society)や日本基礎心理学会にて発表した。本年度の前半は、ヒトの乳児と成人を対象に陰影と輪郭からの3次元形状知覚の発達について検討した。この研究はユニバーシティ・カレッジ(英国)にて、ジャネット・アトキンソン教授らとの共同研究として実施した。CRTモニタに呈示される刺激の陰影情報と輪郭の位置関係を操作し、凹凸が知覚される刺激と、平面が知覚される刺激が繰り返し交互に現れる条件(3D条件)と、2種類の異なる平面刺激が交互に現れる条件(2D条件)を設けた。刺激観察中の視覚誘発電位を全頭型128チャンネル脳波計で計測し、刺激変化の時間周波数に対応した脳波成分(F1)の振幅を分析した。その結果、成人では2D条件に比べ3D条件で有意に大きなF1振幅が生じた。さらに後頭部では側頭、頭頂部よりも大きな振幅が見られた。乳児のデータについても現在解析を進めている。これらの結果を日本基礎心理学会第27回大会にて発表した。本年度の後半は、京都大学霊長類研究所にて3個体のチンパンジーを対象にエイムズの台形窓の錯視について検討した。この研究はミネソタ大学(米国)のアルバート・ヨナス教授との共同研究として実施している。3個体のチンパンジーに対し2つのおもちゃを異なる距離に呈示してより近い方に触れるよう訓練した後、テストで台形窓をチンパンジーに対して平行に呈示し、単眼、両眼条件で左右いずれの端に触れるかを記録した。その結果、単眼条件ではチンパンジーは台形窓の長い方の辺に頻繁に触れたのに対し、両眼ではそのような傾向を示さなかった。したがって、チンパンジーもヒトと同様、単眼条件では線遠近法から、両眼では両眼視差を用いて対象の距離を判断する可能性が示唆された。これらの結果の一部を国際学会(European Conference on Visual Perception)にて発表した。

ヒトは2次元画像の奥行きを知覚する際にも、現実空間と同じように「地面」上の変化を効率よく探索する。本実験では、ヒトと移動様式の異なるチンパンジーにおいても「地面優位性効果」が見られるかについて、視覚探索課題を用いて検討した。「地面」あるいは「天井」の上に複数の立方体が手前から奥に徐々に小さくなるように呈示される。課題は、その中から上面または側面の輝度が他と異なるもの(ターゲット)を検出することである。ターゲット検出に必要な反応時間を計測する。その結果、チンパンジーもヒトと同様、「地面」では奥行平面に沿った上面の輝度の差異の検出が側面に比べ速いのに対し、「天井」では上面と側面の反応時間の差が消失した。すなわち、ヒトと同様の「地面優位性効果」がチンパンジーにおいても見られた。
26Sプロテアソームのリン酸化による活性制御機構と基質をアンフォールドする機構

上記研究課題について、当初の研究計画を遂行したので報告する。26Sプロテアソームはプロテアーゼ活性を有する20SプロテアソームとATPaseサブユニットを含む制御サブユニット複合体とから構成されているが、蛋白分解におけるATP依存性の分子機構は未だに謎である。我々は、精製26Sプロテアソーム標品中に新しいSer/Thrキナーゼが会合していること、また、それがp45/Rpt6ATPaseサブユニットをリン酸化することにより、20Sプロテアソームとの会合を促進することを明らかにした。本研究では、そのリン酸化部位を特定するために、酵母とヒト培養細胞系を用いて、p45のセリン・スレオイン残基をリン酸化されないアラニン残基に置換し、その細胞の生育に及ぼす影響を調べた。その結果、アラニンへの単独変異体では、致死や生育阻害効果は見られなかった。このことは、複数箇所のリン酸化が重要である可能性と、リン酸化阻害をして会合を抑制しても致死的な影響は受けないことを示唆している。蛋白化学的な解析から,架橋剤処理により解離会合を阻害すると、ATPがなくてもユビキチン化基質を分解するという全く新しい知見が得られた。これは、蛋白分解の際に、20Sプロテアソーム部分と制御サブユニット部分が解離するのを阻止できれば、蛋白分解にATPを必要としないことを意味している。これは、リン酸化を介して会合促進することがATP依存的分解において重要であることを暗示している。基質のアンフォールド機構に関しては、蛋白分解阻害剤で前処理したプロテアソームに基質タンパク質を加えると、基質タンパク質がアンフォールドすることを、プロテアーゼに対する感受性から明らかにした。従来、基質のアンフォールドにはATPの加水分解が必要であると提唱されていたが、ATPの加水分解を阻害しても、基質のアンフォールドが起こることを見いだした。また、受精時に作用する精子プロテアソームの精製と生理機能解析もおこなった。そして精子には、細胞膜表面に結合しているプロテアソーム分子種が存在し,それが受精に重要な機能を果たすことを明らかにした。
１９世紀以前の日本と東アジアの〈仏伝文学〉をめぐる総合的比較研究

研究成果としては、第一に日本及び東アジアの〈仏伝文学〉をめぐる内外の図書館、博物館などに所蔵される資料調査を実施し、従来知られていなかった貴重な資料を相次いで発見し、収集したこと、第二にそれらの資料にもとづく研究会を日本や北京で継続させたこと、第三に〈仏伝文学〉に関する総合的なシンポジウムを立教大学で開催し、その補助的な意味をもつワークショップをアジアや欧米で複数開き、調査と研究の成果をもれなく公表し、論文集及び資料集として公刊する段階に至ったこと、等々である。1,仮目録と資料集基礎データの作成まず各種目録類や研究文献を手がかりに、日本と東アジアの<仏伝文学>に関する仮目録と資料集のための基礎リストを作成した。これにより、調査の及んでいない地域や分野、研究状況のおおよそが掌握できたといえる。2,内外の資料調査の実施上記の仮目録にもとづき、内外の資料調査を実施した。書誌データを作成、パソコンに入力、データベース化に向けて着実に資料を蓄積できた。貴重な資料はデジタルカメラ、コピー複写などの媒体で収集した。国内は和歌山県など調査対象とし、海外は北京の国家図書館、ソウルの東国大学図書館、ソウル大学図書館、ハノイの漢喃研究院、フランス国立図書館などを対象に実施した。特に、ベトナムにおける<仏伝文学>資料の発見(『釈氏源流』の喃字本)が貴重な成果で、タイの景福寺所蔵本であることも判明、今後の研究動向におおきく作用することが予想される。また、敦煌の石窟をはじめ仏伝の壁画の実地調査も実施し、絵画資料とのつらなりも視野におさめることができた。3,研究会の組織と開催上記の調査にあわせて内外の比較研究にもとづく研究会を組織し、現地の研究者と共同で資料翻刻、解読、注解作業を進めることができた。特に北京の日本学研究センターと人民大学を拠点に、明代の仏伝『釈氏源流』の研究会を開催、月例会として軌道に乗りつつある。また、韓国での研究会も実施に向けて準備会を開催し、今後の活動の足がかりを得ることができた。1.国内調査は沖縄をはじめ、和歌山県などで実施し、八相涅槃図など貴重な資料を発見することができた。また、古書目録の検索から、清朝版の『釈氏源流』の手彩色本の存在が確認できたのもおおきな収穫であった。さらに明治期の近代仏伝に関しても収集を継続しており、殊にほとんど知られていなかった仏伝の講談速記本を入手できたのも今後の研究動向にかかわる面で意義がおおきい。2.海外調査では、中国の北京国家図書館や清華大学図書館、韓国のソウル大学奎章閣、東国大学図書館、ベトナムのハノイ漢喃研究院、ホーチミン市の恵光修院、ニューヨークのメトロポリタン美術館などを対象に行った。ことにベトナムでは、従来知られていなかった刊本の挿絵付きの『釈迦如来応現録』なる伝本を複数発見、今後の研究の焦点になることが予想される貴重な成果であった。3.研究会は、昨年度からスタートした北京での『釈氏源流』の輪読会を継続的に行い、順調に進展することができた。伝本探索もさらに充実しつつあり、テキストの半分近くまで読み進めている段階である。また、韓国での研究会は具体的な実現には至らなかった。資料の調査収集と併行して準備を進めており、近々発足させる方向で検討中である。朝鮮版の『釈氏源流』の調査収集も、北京の研究会とも連動させる形で推進させた。4.国際シンポジウムに関しては、北京の日本学研究センターやハノイ大学、ソウル大学、ニューヨークのコロンビア大学等々で、講演やセミナー、研究発表等々を行い、仏伝と異界、女性と仏教、東アジアの文学圏、言葉とイメージ等々の課題から多角的多層的に検証する機会に恵まれ、総合的な成果としてまとめうる足がかりを得ることができた。最終年度に当たって以下の活動を展開し、多くの実績を積むことができた。1.7月に立教大学日本学研究所主催で、「日本と東アジアの〈仏伝文学〉と天竺世界」というテーマで国際シンポジウムを開催した。中国、台湾、韓国、ベトナムの各地から研究者を招待して、基調講演及び四つのセッションで研究発表を行い、活発な議論がかわされた。2.8月に中国西安の西北大学で唐代の長安をめぐる国際シンポジウムで小峯が長安における〈仏伝文学〉に関する講演を行い、太原で寺院の〈仏伝文学〉の壁画の調査を行った。10月にはロンドン大学、ついで1月にはパリの第七大学で、「日本と東アジアの〈仏伝文学〉」のワークショップを開催、大英図書館及びフランス国立図書館で、『釈氏源流』他〈仏伝文学〉関連の資料調査を行った。3.2月にはハノイの大学院で〈仏伝文学〉関連の講義を行い、社会科学院で〈仏伝文学〉の調査を実施し、『釈迦如来応化事蹟』のあらたな伝本を発見した。同月、アンコールワットで南伝仏教の〈仏伝文学〉

関連の壁画及び碑文の調査を行い、今後の研究展開の足がかりを得ることができた。4.3月に台北の輔仁大学で「日本と東アジアの〈仏伝文学〉」の講演会を開催、国家図書館、故宮図書館などで〈仏伝文学〉関連の資料調査を行い、『釈氏源流』及び『応化事蹟』のあらたな伝本を見いだした。5.アルバイト謝金で、日本中世の〈仏伝文学〉、新出の『釈迦如来八相次第』及びジュネーブボドメール美術館蔵『釈迦の本地』の入力作業をふまえて翻刻校合、注解を行った。以上をもとに「日本と東アジアの〈仏伝文学〉」の論文集及び資料集を公刊する計画である。26年度が最終年度であるため、記入しない。人文学26年度が最終年度であるため、記入しない。国内調査は必ずしも予定通りにいかなかったが、特に海外での調査や研究会が順調に進展しており、貴重な資料の発見もあった。総じて初年度としてはほぼ計画にそった成果をあげることができたといえる。国内、海外ともに資料の調査と収集が円滑に進展し、いくつかの貴重な資料とめぐりあうことができた。また、海外における研究会や国際シンポジウムなどの場で東アジアと日本の仏伝文学を多様で多彩な角度から検討する機会をもつことができた。以上、主に2点による。海外での調査と研究会の立ち上げをはじめ、まずまず進展しているので、計画通りに推進する予定であるが、次年度末の国際会議の開催に向けて流動的な面があり、柔軟に対処したいと思う。さまざまな場で発見できた貴重な資料群を今後どういかすかが問題で、まずはスキャンなどデータ化をすすめ、翻刻や校訂作業を推進し、できるだけ速やかに公刊し、広く学会や一般に共有しあえるようにする。また、さまざまな場で講演や発表した研究成果を個々ばらばらのままではなく、総合的体系的なかたちでまとめられるよう、さらに拡充をはかり、新年度に計画中の国際シンポジウムで仕上げをはかり、すみやかに出版できるよう対策を講じる。国内調査が計画通り進まなかったり、海外調査など当初予定していたメンバーが不参加になるなど、予定を変更せざるをえない面も若干あり、次年度に持ち越しになった。また次年度末に予定している国際会議に向けて、参加メンバーや地域がまだ不確定であるため、予算を充分確保して執行する計画である。最終年度は、規模のおおきい国際シンポジウムを予定しており、そのための旅費などの予算を確保するため、次年度に繰り越すようにした。立教大学で開催する予定の国際シンポジウムで、海外から招待するメンバーの旅費に充てる計画である。
口腔微生物由来の発癌物質(アセトアルデヒド)の臨床的評価法の確立

(平成16年度)口腔内におけるアセトアルデヒドの産生能を高感度で測定する目的で、アセトアルデヒドをヒドロキシルアミン誘導体化して、GC/MSによって測定する方法の応用を試みた。その結果、従来のHPLCによる方法に比較してより感度の高い測定が可能となった。(平成17年度)1.口腔のアセトアルドヒド測定法の疫学的研究への有用性の評価新規に考案されたCNETカートリッジを用いて、同意の得られた九州大学歯学部の学生10名について、グルコースおよびエタノール洗口後の、呼気中のアセトアルデヒド濃度をHPLCで測定したところ先に確立したGC/MSによる測定方法と同等の感度が得られた。2.アセトアルデヒド高産生者の口腔に特異的な細菌の網羅的同定法の開発平成18年度1.アセトアルデヒド産生能の疫学的調査同意の得られた九州大学歯学部学生70名を被験者として、アセトアルデヒドの産生能を測定した結果、エタノール洗口では口腔に貯留する気相中に0.42.2μg/mlのアセトアルデヒド産生が認められた。2.ヒト口腔細菌叢の網羅的解析全被験者について、TRFLP法を用いて唾液中の細菌種の網羅的解析を行い、各個人の唾液菌叢のクラスター分類を行った結果、大きく3群に分類できた。3.アセトアルデヒド産生能と口腔細菌叢との関連性の解析アセトアルデヒド産生能をクラスターにも関連付けることはできなかったが、アセトアルデヒド産生能と関連性の強いピークが1つ認められた。RDBPIIのデータベースと比較検討した結果、このピークに相当する細菌種はActinomyces属であった。平成15年度までの研究で開発したアセトアルデヒドの定量法は、口腔内におけるエタノールからのアセトアルデヒドの産生能を調べる目的で、トリフルオロメトキシベンジルを用いてアセトアルデヒドをヒドロキシルアミン誘導体化してHPLCで分離後、210nmの吸光度の測定を行うものであった。本年度の研究では、口腔内においてエタノールのみならずグルコースからのアセトアルデヒドの産生能が測定できるように、より高感度なアセトアルデヒドを測定法の開発を試みた。まず、測定感度を向上させるため、210nmの吸光度の測定に替えて、ヒドロキシルアミン誘導体化したアセトアルデヒドをGC/MSによって測定する方法の応用を試みた。本法では、5%のグルコース水溶液10mlで30秒洗口後、口腔由来の気相50mlをシリンジでTFBAカートリッジ(住化分析センター社製)に捕集し、これを1mlのアセトニトリルで溶出して、溶出液の適当量をGC/MSで分析した。本法による測定結果をHPLCで測定した場合の感度と比較険討した結果、洗口に用いるグルコースの濃度、洗口時間ならびに気相の採取量などについて、より感度の高い測定が可能な測定条件を決定できた。また、TFBAカートリッジに捕集されたアセトアルデヒドの安定性について検討を加えた結果、捕集後1週間カートリッジを常温で保存しても、測定されるアセトアルデヒド濃度に変化がないことが確認できた。現在、近年開発されたCNETカートリッジによる捕集を応用した測定方法について同様な確認実験を進めており、CENTカートリッジを用いた測定方法の有用性について検討を加えて、来年度に向けての研究方向を確立している。口腔のアセトアルドヒド測定法の疫学的研究への有用性の評価同意の得られた九州大学歯学部の学生10名を用いて、5%グルコースおよび5%エタノール10mlで30秒間洗口させ、口腔に貯留した気相50mlをCNETカートリッジで捕集し、1mlのアセトニトリルで誘導体化したアセトアルデヒドを溶出して、液体クロマトグラフィーによって測定することで、既に確立してきたGC/MSを用いたアセトアルデヒドの測定方法と同等の精度が得られたことから、本測定法が疫学調査に応用可能であることが確認できた。アセトアルデヒド高産生者の口腔に特異的な細菌の網羅的同定法の開発