hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
薬用植物における含硫黄薬理成分の生合成機構の解明

システインスルホキシド誘導体はネギ属やツルバギア属、ニンニクカズラ属等の植物が生産する発癌抑制や循環器疾患抑制に役立つ含硫黄成分である。将来的な有用物質の生物生産系の開発の観点から、これら植物におけるシステインスルホキシド誘導体の生産システムの分子レベルでの解明が期待されている。本研究ではこれら植物のトランスクリプトームと含硫黄成分プロファイルの解析に基づき、システインスルホキシド誘導体の生合成に関わる酵素遺伝子群を探索した。システインスルホキシド誘導体はネギ属やツルバギア属、ニンニクカズラ属等の植物が生産する含硫黄二次代謝物であり、植物組織の損傷に伴い酵素的および非酵素的な反応を経て多様な硫黄化合物群に変換される。こうして生じた硫黄化合物群や、システインスルホキシド誘導体やその生合成中間体は、発ガン抑制活性、免疫賦活作用、血小板凝集抑制活性、コレステロール低下作用等、重要な薬理活性を示す。本研究では、ディープトランスクリプトーム解析と硫黄代謝物プロファイル解析を統合したデータマイニングに基づいて、システインスルホキシド誘導体の生合成に関わる酵素や輸送体の同定を行う。平成26年度に行った内容は以下のとおりである。1.ネギ属植物ニンニクにおけるディープトランスクリプトーム解析と硫黄代謝物プロファイル解析、及びそれらの結果に基づく生合成関連遺伝子候補コンティグの探索を行った。現在、候補コンティグに対応する全長cDNAの単離を進めている。2.ニンニクにおけるシステインスルホキシド誘導体生合成に関わる脱グルタミル化酵素3種とS酸化酵素1種の機能解析を行った。脱グルタミル化酵素に関しては酵母組換え蛋白の酵素活性解析や細胞内局在解析の結果から、3種の酵素のシステインスルホキシド誘導体における機能分担が推定された(Yoshimoto et al., Front Plant Sci, 5:758(2015))。S酸化酵素についても酵素活性解析や細胞内及び組織局在解析の結果から生合成における機能が推測された(論文投稿準備中)。3.ツルバギア属植物Tulbaghia violacea及びニンニクカズラ属植物Mansoaalliaceaのディープトランスクリプトーム解析を行った。ネギ属やツルバギア属、ニンニクカズラ属等の植物が生産する含硫黄二次代謝物システインスルホキシド誘導体やその生合成中間体、また植物組織の損傷時にシステインスルホキシド誘導体から二次的に生じる硫黄化合物群は、抗微生物活性、抗酸化活性、発ガン抑制活性、免疫賦活作用、血小板凝集抑制作用、血圧低下作用、コレステロール低下作用等、重要な薬理活性を有する。本研究では、ディープトランスクリプトーム解析と硫黄代謝物プロファイル解析を統合したデータマイニングにより、システインスルホキシド誘導体の生合成に関与する酵素をコードする遺伝子の網羅的同定を進めている。平成27年度に行った研究内容は以下のとおりである。1.平成26年度に引き続き、ネギ属植物ニンニクのシステインスルホキシド誘導体の生合成に関わるS酸化酵素の機能を解析し、結果を論文発表した(Yoshimoto et al., Plant J, 83, 941-951, 2015)。2.ディープトランスクリプトーム解析と硫黄代謝物プロファイル解析を統合したデータマイニングに基づき、ニンニクのシステインスルホキシド誘導体の生合成において脱グリシル化反応、硫黄原子への炭素鎖の付加反応、酸化反応を触媒する酵素をコードすることが予想される遺伝子群を同定した。同定した遺伝子は、順次、cDNAクローニングを行い、大腸菌や酵母を用いた組換え蛋白発現系を構築した。3.ツルバギア属植物Tulbaghia violaceaのディープトランスクリプトーム解析で得たリードをアセンブルし、約5万8千のコンティグを得た。同様に、ニンニクカズラ属植物Mansoa alliaceaのディープトランスクリプトーム解析で得たリードをアセンブルし、約6万5千のコンティグを得た。ネギ属ニンニクに関しては、ディープトランスクリプトーム解析と硫黄代謝物プロファイル解析を統合したデータマイニングを順調に遂行でき、その結果、生合成酵素の候補遺伝子の同定とクローニングも概ね順調に進んだ。また、S酸化酵素の同定に関する論文を発表できたが、この論文の執筆・修正作業に時間を要した結果、他の研究にやや遅れが生じた。ツルバギア属植物Tulbaghia violaceaとニンニクカズラ属植物Mansoa alliaceaについては、平成26年度に得たraw dataのアセンブルによるコンティグ作成は遂行したが、データマイニングによる生合成酵素の候補遺伝子の同定はやや遅れている。以上を総合し、計画よりもやや遅れていると判断した。ネギ属やツルバギア属、ニンニクカズラ属等の植物が生合成する含硫黄二次代謝物であるシステインスルホキシド誘導体やその生合成中間体、また植物の損傷時にシステインスルホキシド誘導体から生じる硫黄化合物群は、抗微生物活性、抗酸化活性、発癌抑制作用、免疫賦活作用、血小板凝集抑制作用、血圧降下作用、コレステロールおよびトリグリセリド低下作用等、重要な薬理活性を有する。本研究ではディープトランスクリプトームデータと硫黄代謝物プロファイルの統合解析を基盤として、システインスルホキシド誘導体の生合成に関わる酵素遺伝子の同定を行った。平成28年度に行った研究内容は以下のとおりである。1.平成27年度に引き続き、ニンニクのシステインスルホキシド誘導体の生合成において脱グリシル化反応、硫黄原子への炭素鎖付加反応、酸化反応をおこなうことが予想される候補遺伝子のクローニングと機能解析を進めた。2.ディープトランスクリプトームのデータマイニングにより、ニンニクのシステインスルホキシド誘導体の生合成において硫黄原子に付加される炭素鎖の生合成に関与する遺伝子の候補を同定した。

3.ニンニクのシステインスルホキシド誘導体の生合成においてS-酸化反応を担うAsFMO1(Yoshimoto et al., Plant J, 83, 941-951, 2015)と高い配列相同性を示すタマネギのAcFMO1について機能解析を行った。4.ディープトランスクリプトームのデータマイニングにより、ツルバギア・ビオラセアやニンニクカズラのシステインスルホキシド誘導体の生合成に関与するS-酸化酵素遺伝子および脱グルタミル化酵素遺伝子の探索を行った。システインスルホキシド誘導体はネギ属やツルバギア属、ニンニクカズラ属等の植物が生産する発癌抑制や循環器疾患抑制に役立つ含硫黄成分である。将来的な有用物質の生物生産系の開発の観点から、これら植物におけるシステインスルホキシド誘導体の生産システムの分子レベルでの解明が期待されている。本研究ではこれら植物のトランスクリプトームと含硫黄成分プロファイルの解析に基づき、システインスルホキシド誘導体の生合成に関わる酵素遺伝子群を探索した。ネギ属ニンニクに関しては、ディープトランスクリプトーム解析と硫黄代謝物プロファイル解析が済み、硫黄代謝物生合成の時間的・空間的な全体像についての知見が得られるとともに新規生合成候補遺伝子が明らかにされた。また脱グルタミル化酵素3種とS酸化酵素1種の機能が同定された。これらの研究に関しては、当初の計画よりも進展している。一方、ツルバギア属Tulbaghia violaceaとニンニクカズラ属Mansoa alliaceaについては、植物の入手と栽培条件の検討に時間を要したため、ディープトランスクリプトーム解析のraw dataを得たが、データ解析や硫黄代謝物プロファイル解析は遂行できていなく、計画よりもやや遅れている。以上を総合し、おおむね順調に進展していると判断した。ネギ属ニンニクに関しては、平成27年度に同定しクローニングした生合成酵素候補遺伝子群の機能解析を行う。クローニングが済んでいない遺伝子については、クローニングを行う。ツルバギア属植物Tulbaghia violaceaとニンニクカズラ属植物Mansoa alliaceaについては、平成27年度までに得たデータのマイニングに基づき、生合成酵素の候補遺伝子の同定を進める。ニンニクとTulbaghia violacea、Mansoa alliacea間では、生合成酵素の配列相同性がある可能性が考えられる。そこで、Tulbaghia violaceaとMansoa alliaceaの生合成酵素遺伝子の絞り込みを行う際に、先行しているニンニクの候補遺伝子の機能解析の結果を参考にすることで、研究の遅れを取り戻す予定である。生合成ネギ属ニンニクに関しては、平成26年度に引き続き、データ統合解析と生合成候補遺伝子の単離ならびに機能解析を進める。ツルバギア属Tulbaghia violaceaとニンニクカズラ属
新規カルコゲン-典型元素結合化合物群の系統的な創製と物性の解明

1.セレノチオカルボン酸重アルカリ金属塩の合成と構造セレノチオカルボン酸カリウム、ルビジウム、セシウム(RCSeSM,M=K,Rb,Cs)を18-Crown Ether付加体として40-65%の収率で合成・単離できた。熱および酸素に対し比較的安定な結晶である。また個体のUV-VisスペクトルおよびX線構造解析からC-Se結合距離は2重結合性を有していることが明らかとなった。2.セレノカルボン酸砒素エステルセレノカルボン酸砒素エステルと二級アミンとの反応から対応するアンモニウム、ジアリールアシンセレノラートが好収率で合成できることを見いだした。X線構造解析からNH-Se間で水素結合を作ることが見いだされた。3.チオ及びセレノカルボン酸希望土類金属錯体の合成と構造チオ及びセレノカルボン酸希土類金属錯体{(RCOS)_3M(thf)_2及びNa(thf)M(RCOS)_4,M=lanthanidemetal)を55-90%の収率で合成・単離できた。X線構造解析からCOSおよびCSS基は何れもbidentateとして作用している。反応性は遷移金属錯体としてよりアルカリ金属塩に近いと見られた。
連合学習におけるインスリンシグナル伝達経路の機能の解明

学習はヒトのみならず全る動物が持つ、神経系の基本的な機能である。それに関わる分子とその役割を分子生物学的に記載することは脳神経系の機能を理解するための基礎として重要である。このために、我々は分子行動遺伝学のためのモデル生物である線虫C.エレガンスを用いた。線虫の塩への化学走性に関する連合学習の実験系を用い、インスリン経路が学習に必須であることを明らかにしている。本研究はその理解を深め、関連する分子についても機能を明らかにすることを目的とした。インスリン経路の機能が昂進した変異体をもとにして新たな変異体を得ることにより、G蛋白質Gqの経路がインスリン経路と拮抗して働くことが明らかとなった。また、膜貫通型グアニル酸シクラーゼが学習における行動変化に必須であることがわかった。さらに、哺乳類の細胞膜貫通型蛋白質カルシンテニンの線虫ホモログが学習に必須であり、切断されて分泌された細胞外ドメインが機能に必須であることが明らかになった。インスリンは哺乳類においては主に代謝を制御するホルモンであるが,脳にも作用し,記憶学習に関与することも示唆されている。しかしその機能の詳細は不明である。我々は線虫C.エレガンスのインスリン様シグナル伝達経路が連合学習に必須であることを見いだしている。また,インスリン受容体とその下流で働くPI3キナーゼ経路が感覚神経ASERで働くことも明らかにしている。本年度,PI3キナーゼ経路の下流因子を同定する目的で,インスリン経路の機能が昂進したdaf-18変異体のサプレッサー変異体の解析を行った。すでにGqタンパク質をコードするeg1-30の活性化型変異体が得られているが,今回新たにグアニル酸シクラーゼをコードする遺伝子の変異体が得られた。この変異体はCl-イオンに対する化学走性が低下していた。また,この遺伝子が感覚神経ASERで働くことも確認した。学習を起こさせるC1-の刺激に依存してグアニル酸シクラーゼが働くことが学習に重要であることを示唆する結果である。また,細胞特異的プロモーターを用いた変異体のレスキュー実験により,インスリンINS-1を分泌する細胞を新たに検討したところ,RIC,ASIという2つの細胞のいずれかでの正常型ins-1の発現により,ins-1変異がレスキューされることが明らかとなった。これらは飢餓シグナルを伝えている可能性があり,機能解析を進めている。チャネルロドプシンを用いてins-1分泌細胞を人為的に活性化する実験も進めたが,今のところ目だった効果は得られていない。線虫C.エレガンスの連合学習に関わる遺伝子としてcasy-1を発見した。casy-1は哺乳類のカルシンテニン/アルカデインの線虫ホモログをコードする。カルシンテニンはアルツハイマーこの蛋白質はI型膜貫通蛋白質で、細胞外ドメインに2つのカドヘリンドメインとLG/LNSドメインを持つ。casy-1変異体は、塩走性学習、嗅覚順応、温度学習、嗅覚と銅イオンの相互作用に異常を示し、高次機能の制御に中心的な役割があることが示唆された。塩走性学習について細胞特異的レスキュー実験を行ったところ、塩を受容するASER神経でcasy-1が発現することがその塩走性学習における機能に必要十分であることがわかった。インスリン/PI3キナーゼシグナル経路もASER神経で働くことがわかっている。そこで、これらの関係を明らかにするためにインスリンins-1との二重変異体を作成してその表現型を調べたところ、casy-1 ; ins-1二重変異体はそれぞれの単独変異体より強い学習欠損を示した。一方、PI3キナーゼ経路の活性が昂進しているdaf-18変異体と二重変異を作成したところ、casy-1がdaf-18の化学走性欠損を抑圧することがわかった。これらのことより、CASY-1はインスリン/PI3キナーゼ経路と並列に働くことが示唆された。カルシンテニンは細胞外ドメインで切断されることがわかっているが、ウェスタン染色によりCASY-1も細胞外ドメインで切断されること確認された。欠失遺伝子を用いたレスキュー実験により、切断され分泌された細胞外ドメイン、特にLG/LNSドメイン付近が学習に必要とわかった。この部分を用いて酵母ツーハイブリッドスクリーニングを行い、標的蛋白質の候補を多数同定した。
立ち現れる巨大娯楽空間-19世紀英国における「文化」の制度化と公共性

文化の制度化を論じるにあたり重要な課題は、多種多様な人々が文化的な体験や科学知識をいかに解釈し、それが彼らの社会生活のなかでどんな意味を持ったのかを理解することである。具体的に、今年度は、人工的に構築された動物園の「自然」が、どのように文化的な資源として整備され、利用されたのかを分析し、その成果を積極的に国内外で発表してきた。まず、動物の収集活動がイギリス帝国のネットワークに依存していたことを明らかにする一方、動物園を帝国的な制度として一面的に分析する研究を批判した。近年、帝国史研究に関連して、動物園は植民地を「他者」として差異化したり、植民地支配を正当化したりする帝国的制度であると論じる研究がある。しかし、申請者は、見物客の日記などの一次史料を体系的に分析し、このような解釈は還元論的であり、動物園のもつ多面性を捉えることはできないと主張した。さらに帝国のイデオロギーよりも、自然神学的な世界観の方が影響力を持っていたことを明らかにした。「自然」の状態に置かれた動物を観察することで、それぞれの種固有の特徴が理解され、創造主に対する畏敬の念とともに、理性の力が高まると考えられたのである。こうした教育理念は、動物学者、教育家、教師らが作成した教科書や参考書によって具体化し、広められた。しかし、当時の子供の日記や手紙からは、彼らが与えられた知識を自由に活用しながら、子供独自の様々な楽しみを生み出し、自然を理解していたことがわかった。これは、動物園の教育理念が失敗に終わったということではなく、むしろ、動物園が文化的制度として整備され、様々な目的のために利用されるようになったことを示している。また、動物園を介して科学知識が日常生活に組み込まれていく過程には、科学者だけでなく、様々な人々の主体的な関わりがあったことも明らかにした。19世紀イギリスでは,識字率の増加,印刷技術の発展,読者層の拡大により,科学の知識を獲得することが知的な余暇活動として,大衆文化の中に組み込まれていった。また、動物学会,天文学会,地質学会など,自然科学の個々の専門領域を担う科学団体が立ち現れ,「科学者」scientistという言葉が誕生し,科学の制度化が進む一方,科学研究の意義や,科学そのものの意味が積極的に議論され始めた。このような状況のなかで,1826年に設立されたロンドン動物学会は動物学の知識を生み出し,それを社会に広める科学団体として,どのように知識の大衆化に対応したのかをこの論文では明らかにした。国庫からの資金援助を受けないロンドン動物学会にとって,学会が経営するロンドン動物園は貴重な資金源だった。そのため,多額の入園料を必要とする動物園は,営利目的の興行主が用いる手法を取り入れ,科学のアミューズメント・パークへと変貌を遂げた。様々な人々が楽しみながら自然の知識を獲得するという動物園の姿が定着したのである。しかし,この動物園の変貌は,科学の知識に対する人々の考え方に大きな問題を投げかけた。動物園が見物客に提供する楽しみは,純粋に科学的な楽しみではなく,娯楽的な要素が強いと考えられたからである。こうして,動物学会の科学団体としての役割をめぐる議論の中で,科学の知識には,純粋に科学的なものと,啓蒙や教育に用いられるものとの区別が必要であると理解されるようになった。このように,知識の大衆化が進行する社会において,それまで明確な区分はないと捉えられていた科学と娯楽を対置させる議論の枠組みが現れてきたことを明らかにした。
リンガライズド・オクルージョンにおけるブレーシング・イコライザーの効果について

リンガライズド・オクルージョンにおける後方へのブレーシング・イコライザーが有床義歯の安定性にどのように関与するかを明らかにする目的で,実験用義歯にブレーシング・イコライザーの角度が10°,20°,30°と異なる咬合面形態を構成し,義歯の挙動を比較,検討した.まず,実験用義歯を製作し,空口時での咬合調整を十分に行うことによって早期接触部および,干渉部を調整した.引き続き,被験食品としてカマボコ,ピーナッツ,タクアン,ニンジンを選択し、上下顎咬合面に食品を介在させて義歯の挙動を観察した.実験方法として,インストロン型精密万能試験機(島津製作所社製オートグラフAGS-500D)を用い,クロスヘットスピード8.3mm/secで中心咬合位の状態まで咬合させた.測定部位は,切歯点(A点),左右大臼歯部義歯床研磨面(B点)に咬合平面に垂直となるようにアルミ製の四角柱を設定し測定を行った.カマボコ介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加による変位量の変化は認められなかった.ピーナッツ介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加により近心頬側に変位し,沈下量の増加が認められた.タクアン介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加により近心頬側に変位し,沈下量の増加が認められた.ニンジン介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加により近心頬側に変位し,沈下量の増加が認められた.以上の結果から,ブレーシング・イコライザーの角度は義歯の挙動に影響することが確認された.今後はこれらの結果を考慮した上で,実際の被験者での臨床研究を行いブレーシング・イコライザーの形態について検討する予定である.リンガライズド・オクルージョンにおける後方へのブレーシング・イコライザー付与部の傾斜度が有床義歯の安定性にどのように関与するかを明らかにする目的で,実験用義歯にブレーシング・イコライザー付与部の傾斜度が異なる咬合面形態を構成し,義歯の挙動を比較,検討する.実験には,エポキシ樹脂製上下無歯顎模型の床下粘膜相当部を軟性ラバーで置換した模型を使用し,咬合様式として両側性平衡型リンガライズド・オクルージョンを構成した実験用義歯で,下顎臼歯部咬合面のブレーシング・イコライザー付与部の傾斜度を10°,20°,30°としたものを各々製作した.実験には既設のインストロン型精密万能試験機(島津製作所社製オートグラフAGS-500D)を用い,等速荷重にて上顎義歯を中心咬合位の位置まで咬合させた時の下顎義歯の挙動を測定した.下顎義歯の挙動は測定部位として,切歯点と左右大臼歯部義歯床研磨面に咬合平面に垂直となるようにアルミ製の四角柱を設定し,これに対してレーザー変位計をそれぞれ直交するように設置して測定を行った.いずれの実験用義歯も咬合調整を十分に行うことによって早期接触部および,咬頭干渉部を除去した.実験の第1段階として,被験食品を咬合面間に介在させない状態で下顎義歯の挙動を測定した結果,後方のブレーシング・イコライザー付与部の傾斜度の違いによる影響はほとんど認められなかった.また,下顎義歯は等速荷重を行なった結果,前歯部と臼歯部ともに,咬合平面に対して垂直方向の沈下が認められた.今後は,実験の第2段階として,被験食品としてカマボコ,ピーナッツ,タクアン,ニンジンの被験食品を介在させ,食品介在時の下顎義歯の安定性を比較検討し,義歯に対する側方力を減少させる上で有効なブレーシング・イコライザーの形態について明らかにしていく予定である.リンガライズド・オクルージョンにおける後方へのブレーシング・イコライザーが有床義歯の安定性にどのように関与するかを明らかにする目的で,実験用義歯にブレーシング・イコライザーの角度が10°,20°,30°と異なる咬合面形態を構成し,義歯の挙動を比較,検討した.まず,実験用義歯を製作し,空口時での咬合調整を十分に行うことによって早期接触部および,干渉部を調整した.引き続き,被験食品としてカマボコ,ピーナッツ,タクアン,ニンジンを選択し、上下顎咬合面に食品を介在させて義歯の挙動を観察した.実験方法として,インストロン型精密万能試験機(島津製作所社製オートグラフAGS-500D)を用い,クロスヘットスピード8.3mm/secで中心咬合位の状態まで咬合させた.測定部位は,切歯点(A点),左右大臼歯部義歯床研磨面(B点)に咬合平面に垂直となるようにアルミ製の四角柱を設定し測定を行った.カマボコ介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加による変位量の変化は認められなかった.ピーナッツ介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加により近心頬側に変位し,沈下量の増加が認められた.タクアン介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加により近心頬側に変位し,沈下量の増加が認められた.ニンジン介在時A点およびB点はブレーシング・イコライザーの角度の増加により近心頬側に変位し,沈下量の増加が認められた.以上の結果から,ブレーシング・イコライザーの角度は義歯の挙動に影響することが確認された.今後はこれらの結果を考慮した上で,実際の被験者での臨床研究を行いブレーシング・イコライザーの形態について検討する予定である.
retプロトオンコジーンのリガンドの同定と機能解析

retプロトオンコジーンは細胞外ドメインにカドヘリン様構造を有するユニークな受容体型チロシンキナーゼをコードしている。その発現をマウス及びラット胎生期において検索すると、腸管神経系や交感神経系などの広範な末梢神経細胞と脊髄の前角細胞などの一部の中枢神経細胞に検出される。また神経系以外では中腎管や尿管芽といった腎臓の発生に関与する部位に強い発現が認められる。イギリスのグループによって作製されたret遺伝子のknockoutマウスでは腸管神経細胞の分化を全く認めないこと、腎臓の完全欠損あるいは部分欠損を生じることが報告された。これらの結果より、retプロトオンコジーンは特に腸管神経系の形成と腎臓の発生に重要な役割を果たしていることが推定された。今回われわれは米国Genentech社のグループと共同研究にてパーキンソン病の治療薬として期待されているglialcell line-derived neurotrophic facotr(CDNF)が、Retのリガンドであることを証明した。GDNFをRetが発現している神経芽細胞腫細胞株の培養上清に加えると、170kDaの細胞表面に発現するRetのチロシン燐酸化が生じた。しかしながらGDNFはRetに高アフィニティーで結合するのではなく、GPIアンカーで膜と結合するGDNFRαと名づけられた細胞表面蛋白にまず結合後、Retの活性化を誘導した。このことはphophoinositide-specific phopholipace C(PIPLC)で細胞をあらかじめ処理すると、GDNFによるRetの燐酸化が生じないことからも証明された。GDNFはさらに神経芽細胞腫においてRas-MAPK係の活性化を誘導できると同時に、一部の神経芽細胞腫細胞の分化を誘導できた。以上の結果より今後GDNF-Ret系と介した神経分化機構の解析が急速に進展するものと期待できる。
アクションリサーチによる看護職の後期高齢者フィジカルアセスメント支援システム開発

急性期病院から在宅での看取りまでの連続したケアを提供するには、施設間・他職種連携によるチームアプローチが必要で、地域で活躍している看護職の専門的な知識・技術を地域で有効活用し、看護職の専門的技術であるフィジカルアセスメント技術の維持向上が必須である。さらに、後期高齢者のフィジカルアセスメント技術は、高齢者の個別性により工夫が必要であり、高度な実践でもあり、継続可能なシステムを開発することが望まれる。本研究の目的は、A市(高齢化率25.6%平成18年8月現在)の後期高齢者の急性期から看取りまで継続した地域ケアシステム構築を視野に入れ、アクションリサーチによるA市の看護職による後期高齢者のフィジカルアセスメント支援システムを開発することである。平成20年度は、平成19年度に開拓したA市の急性期病院、回復期・リハビリ病棟、療養型病床、介護老人保健施設、介護老人福祉施設、訪問看護ステーション、グループホーム等で、職種は、看護師、保健師、助産師、ケアマネージャー等から、後期高齢者のフィジカルアセスメントに関する技術・知識・体験に関する現状把握を把握するために同意を得てインタビューを行った。インタビュー内容を質的・帰納的に分析し、A市内の看護職の後期高齢者フィジカルアセスメントは職種・活躍の場によっての技術・知識・体験・関心の相違等がみられた。その結果をもとに教育・研修ニーズを明らかにし、支援システム開発を行った。平成19年度は、文献検討、A市での研究協力施設開拓、看護職の選定を行いながら、地域住民の協力を得られるように活動し、協力体制を整えた。地域ケアシステム構築を視野に入れているため、A市全域にわたり、調査し、病院だけに偏らないように、保険師・助産師・看護師が活躍する場を選定し、協力が得られる施設を開拓した。施設開拓の過程の中で、協力可能な看護職を選定した。協力施設は、急性期病院、回復期・リハビリ病棟、療養型病床、介護老人保健施設、介護老人福祉施設、訪問看護ステーション、グループホーム等である。職種は、看護師、保険師、助産師、ケアマネージャー等であった。
デング熱、デング出血熱の新しいバイオマーカーの有用性

デングウイルス(DENV)感染者における新規バイオマーカーとしてのGalectin 9 (Gal-9)とOsteopontin (OPN)の臨床的な有用性を研究した。血漿Gal-9はDENV感染者では正常群と比べ有意に上昇し、ヒトでの報告された最高の値を示し、回復期では有意に減少した。Gal-9値はヘマトクリット値、血小板数、単球およびウイルスRNAのコピー数と相関していた。血漿OPNも9倍以上の増加を急性期で示し、回復期ではトロンビン切断型のOPNが上昇し、免疫と凝固のクロストークマーカーと思われた。故に、DENV感染における血漿Gal-9及びOPNが病態反映のマーカーである可能性を示した。(要約)Gal-9は炎症の亢進にも抑制にも働きうる両面性の免疫制御因子であり、この因子の血漿申発現量がデングウイルスの感染とデング熱またはデング出血熱発症によってどのように変化するかを特異的なELISAによって調べた。また研究の過程でGal-9を分泌して過剰免疫を抑制するT細胞を見出した。このT細胞は細胞表面にGal-9を発現しており、それを指標に同定・追跡することが可能である。この細胞を簡便に検出するために適当なモノクローナル抗体を選択し、フローサイトメトリー用の蛍光ラベル体を調製した。(成果)マニラのサンラザロ病院のデング熱患者血漿を100例以上収集でき、その解析を行っている。発熱期の血漿の入手は難しく患者が受診するcritical期(4-6日)と回復期(7-10日)の2点で解析できた。これらを用いてGalectin9(Gal-9)とOsteopontin(OPN)を測定した。両者ともにCritical期に高く、しかし回復期に有意に減少した。これよりデングウイルスが起こす急性ウイルス感染症ではOPNとGal-9が共に炎症の変化に関わることを示した。急性期では、血漿OPN値が血小板数と逆相関し、Hctとは正相関があり、OPNのデング感染症での重症化と関連し、そのマーカであることが明らかになった。また、OPNはthrombinでcleaveされ、N-half OPNを生ずることが知られているので、N-half OPNも測定したところ、N-half OPNは急性期に正常群と比べて著減した。しかし、この低下したN-half OPNが回復期に上昇するが、上昇度がそれぞればらばらであった。現在、この上昇度が高いcaseの重症度など臨床データとの相関を解析している。一方、血漿Gal-9は今までの臨床検査データとの相関がみられないが、1997年の診断とは相関する:重症度の高いDHFはDFより高いGal-9を産生する方向がある。In vitroの実験として培養細胞を用いてHIV感染に伴うGal-9,OPN産生能を検討するために23年度は、細胞株を用いたスクリーニング系を立ち上げるために、HIV感染をサポートするCD4陽性細胞8種におけるOPNの発現様式を基礎解析した。これらの細胞ではOPNプロモーター領域にOPN発現を抑制するような遺伝子変異は見当たらなかったが、おおむね発現は低下していた。また細胞によってsplice variantsの発現性が異なっていた。またsplice variantsを引き起こすようなintron置換がないことを明らかとした。これらの知見からOPNのbasal expressionのウイルス感染による誘導を検討することは有用である。また、T細胞白血病にはOPN-A variantが重要であると考えられた。Galectin-9(Gal-9)は病態により炎症の亢進にも抑制にも働くことが報告されているユニークな免疫制御因子である。我々はこの因子の血漿中濃度をELISAで測定し、その量がデング熱及びデング出血熱発症において、他の疾患ではみられないほど上昇していることを、2009年にサンラザロ病院で収集した検体で見いだした。そこで2010年のサンプルを用いて、詳細な解析を行った。感染者の62%がsecondary infectionであった。デングウイルスのサブタイプをLAMPで解析すると4型のすべてが見いだされた。またそのウイルス量もリアルタイムPCRで測定した。するとウイルス型が検出された群ではウイルス量が高く、検出されなかった群と比べて抗体量はむしろ低いことが明らかになった。また、これらの患者血漿を用いて、デングウイルスの分離を行い、遺伝子配列を決定した。これらのウイルスを用いてin vitroのウイルス感染実験の準備が順調に進んでいる。Gal-9を分泌する細胞をフローサイトメトリーで特定するために、FITC標識Gal-9を作成し多色解析によりGal-9を発現するT細胞(ThGal-9)を見出した(PlosOne PMID:23144904)。

このT細胞は細胞表面にGal-9を発現しており、それを分泌することによりTregを誘導し、Th17を抑制する。我々はさらに2011年に収集したデング熱患者の末梢血細胞の解析をして、CD4, 8細胞や、NK細胞、マクロファージがGal-9を細胞表面に発現することを明らかにした。それらの様々な細胞と血漿Gal-9の値を検索すると最も相関をしているのはGal-9を発現しているCD8細胞であり、急性デング感染症では血漿Gal-9の主な産生細胞はCD8であることを明らかにできた。デングウイルス(DENV)感染は、世界的に主要な公衆衛生問題である。その病態はサイトカインストームと呼ばれ過剰な免疫刺激状態と思われる。ガレクチン9(Gal-9)は可溶性のガラクトシド結合レクチンで、免疫調節及び抗炎症活性を持つことが報告されている。私達は2010年にマニラで発生した65例のデングウイルス感染者の血漿を収集し、血漿Gal-9及びサイトカイン・ケモカインレベル、デング遺伝子型、コピー数を検索した。さらに臨床症状とGal-9の相関も検討した。検体は発熱期と回復期にわけて採血をした。正常者は196pg/mlで発熱期ではデング熱患者は1407pg/mlでデング出血熱では2464pg/mlと有意に高値を示した。コントロールの非デング熱患者:レプトスピローシスでは616pg/mlで同じ感染性の発熱疾患であるのにもかかわらずデング熱が特異的に高値であることが示された。回復期ではデング熱、デング出血熱では有意に減少した。Gal-9値はウイルス量、単球数、炎症分子、凝固系マーカーと相関し、重症度を反映できることを示した。判別分析はeotaxin、Gal-9、IFN-alpha2及びMCP-1の組み合わせで特異性が見られた(P<0.01)。この組み合わせを用いることにより,デング出血熱の92%及びデング熱の79%を鑑別することができることがわかった。これらよりGal-9はデングウイルス感染症の新規マーカーであることを証明した。26年度が最終年度であるため、記入しない。感染症、血液学、ウイルス学26年度が最終年度であるため、記入しない。必要な抗体の調製と供給、患者血漿検体のGal-9のELISA測定をタイムリーに行った。またGal-9を産生・分泌する免疫細胞についての基礎研究より、病体解明の新たなサロゲートマーカー候補を見出した。来年度にむけ、基礎的データの回収(細胞腫による発現量の変化、genetic change)と解析が進んでいる。必要な抗体の調製と供給、患者血漿検体のGal-9のELISA測定をタイムリーに行い、デング患者の臨床データーとの解析が既に終了しており、現在はその成果を論文投稿中または作成中である。。また、デングウイルスの分離も順調に終了し、デングウイルス増殖阻止物質の発見のための感染実験系の確立と病態学の解明のための研究が進行しつつある。
西日本における結晶片岩製石棒の集成および生産と流通に関する研究

西日本の石棒は、縄文時代中期末に大型のものが伝来し、その後小型化・精製化をとげ、晩期のはじめごろ石刀へと変化し終焉を迎えたと考えられてきた。ところが最近、大阪湾沿岸地方を中心とする地域で突帯文土器にともなって結晶片岩製(泥質片岩・紅簾片岩が多い)の大型粗製石棒が相次いで発見されている。すなわち、縄文時代の最後に再び大型粗製石棒を用いた儀礼がさかんにおこなわれるようになったのである。私は、昨年度より視野を広げ、近畿から瀬戸内地域における結晶片岩製石棒を集成し、これらがどこで生産され流通したのかを明らかにし、どのような歴史的意味をもつのか、すなわち「縄文から弥生」との関わりついて考察した。今年度の調査によって、石棒の総数は46遺跡156点となり、東は岡山・愛媛・高知から西は滋賀・奈良・和歌山にいたるまでの範囲に分布することを明らかにした。さらに、これらの範囲では、紅簾片岩という特徴的な岩石を素材とした石棒が含まれている。これを利用して、石棒製作遺跡の特定をさらに補強しようとつとめた。すなわち石棒の素材産出地で、製作遺跡でもある徳島市三谷遺跡、名東遺跡付近に接してそびえる眉山を踏査し、紅簾片岩の露頭を遺跡のすぐ近くで確認した。これと、神戸市戎町遺跡・同市大開遺跡・八尾南遺跡・滋賀県米原町磯山城遺跡出土資料と肉眼での比較検討をおこない、それぞれが非常に類似していることを確認した。また、各地に分布する石棒の時期が、ほぼ縄文時代晩期末弥生時代前期初頭の土器型式で2型式にも満たない短期間に集中することを明らかにし。三谷遺跡・名東遺跡の存続期間とほぼ一致することを確認した。さらに、石棒が近畿地方最古の環濠集落である神戸市大開遺跡をはじめとする初期の弥生集落でも出土することをうけ、近畿・東部瀬戸内地域における「弥生集落」の形成は、「渡来人」「移住者」のみならず、在地の人々による積極的な関与があったと考察した。
膜結合性ヒドロゲナーゼの構造化学的研究

平成8年度は多波長異常分散法と多重同形置換法により3.0Å分解能の立体構造モデルの構築に成功した。このとき分子領域の正確な決定が位相の改良に大きく寄与した。平成9年度はこの立体構造を更に精密化し、分解能を1.8Åまで向上させることに成功した。得られた立体構造は結晶学的なR-因子が、22.9%であり非常に精度の高いものであった。その結果、分子中心付近に存在する活性部位のニッケル原子の横(2.6Å)に新たに鉄原子を、また、それより13Å離れた分子表面に、マグネシウム原子と思われる電子密度ピークの存在を確認することができた。鉄原子については異常分散効果を利用してその存在を証明し、横のニッケル原子と完全に分離して同定することができた。この活性部位の鉄原子には4本の非タンパク質由来の配位子が結合していることが分かった。これらのうち1本は1原子からなり、ニッケルと鉄原子をブリッジしていた。これは単独のイオウ原子であると考えている。また、残りの3本は2原子分子であると思われる。このヒドロゲナーゼ分子を持つ硫酸還元菌が偏性嫌気性菌であることおよび、立体構造原子パラメータ、赤外吸収スペクトル、熱脱着-マススペクトルなどの結果から総合的に判断して1本は、S=O、他の2本は、C≡Oか、C≡N、あるいはこれらの混合物ではないかと現在考えている。また水素の結合の立体化学についても今後研究を進める予定である。また、このヒドロゲナーゼ結晶は単結晶中に部分的に不均一性を持つことが放射光を用いた回折実験により明らかになった。この結果は、定量的に調査し、研究中の副産物として発表した。更に、ドイツのベルリン工科大学のル-ビッツ教授らとの協同研究ではこのヒドロゲナーゼの単結晶ESR法による研究を行った。その結果、酸化型ヒドロゲナーゼの活性中心のNi-Fe金属中心のNi原子は複数の状態の混合物であるなど多くの知見を得た。これについては更に研究を推し進めている。硫酸還元菌Desulfovibrio vulgaris Miyazaki F株のヒドロゲナーゼの結晶構造解析(空間群P2_l2_l2_l,a=101.5,b=126.5,c=66.5P90)を多重同形置換法に多波長異常分散法を組みあわせて独立に進め,1.8Å分解能における立体構造決定に成功した。このとき分子マスクを用いた溶媒領域平滑化で初期位相を改善し、最終的には2.8Å分解能で全構造を決定した。精密化はブログラム、S-PLORを用いて進め、現在1.8Å分解能の精密構造を明らかにしている。3個の鉄-イオウのクラスターは全て小サブユニットに保持され、ニッケル原子と新たに見つかった鉄原子は大サブユニットに保持されている。鉄とニッケル原子はそれぞれの原子の異常分散を測定したネイティブ結晶の回析強度データを用いて同定した。ニッケル原子は4つのイステイン残基のイオウ原子が配位し、そのうちの2つのさらに鉄原子に配位子している。また、鉄原子はさらに3本のタンパク質由来でない2原子分子により配位されているようである。電子密度を詳細に検討したところこれに加えてさらに新たな金属中心を見つけた。硫酸還元菌Desulfovibrio vulgaris Miyazaki F

株のヒドロゲナーゼの結晶構造(空間群P212121,a=101.5,b=126.5,c=66.5Å)精密化を1.8Å分解能において完了した。精密化はプログラム、X-PLORを用いて行い、1.8Åの反射57,233個における結晶学的なR-因子は0.229であった。1分子中に641個の水分子を同定した。また、新たに鉄原子およびマグネシウム原子と思われる電子密度ピークの存在を確認することができた。鉄原子については異常分散効果を利用してその存在を証明することができた。さらに、この鉄原子には4本の非タンパク質由来の配位子が結合していることが分かった。これらのうち1本は1原子からなり、ニッケルと鉄原子をブリッジしていた。これは単独のイオウ原子であると考えている。また、残りの3本は2原子分子であると思われる。このヒドロゲナーゼ分子を持つ硫酸還元菌が偏性嫌気性菌であることおよび、立体構造原子パラメータ、赤外吸収スペクトル、熱脱着-マススペクトルなどの結果から総合的に判断して1本は、S=0、他の2本は、C≡OかC≡N、あるいはこれらの混合物ではないかと考えている。マグネシウム原子はICP-AES(Inductively couppled plasma-atomic emission spectroscopy)法により同定することができた。精製酵素中にはニッケル原子1個み対して、鉄12個、マグネシウム原子0.5個を同定した。
非定常および長期記憶、非線形な時系列モデルの分析

2.長期記憶過程に従う状態変数とwhite noiseに従う観測誤差の和として表されるとした場合に、観測誤差が存在するかどうかの検定問題をセミパラメトリックモデルで考え、新たな統計量を提案した。同様な統計量にSun and Phillipsが考えた統計量があるので、モンテカルロ実験によって、彼らの統計量とここで新たに考えた統計量の性質を調べた。その結果、サイズは若干よく、検出力は同等であることがわかった。また、長期記憶過程に従っていることが知られているRVやRVが登場する前にボラティリティの代理変数として用いられていたリターンの2乗に応用し、それらに観測誤差が存在するかどうか検定をいった。以上をまとめて投稿する準備中である。(1)定常長期記憶系列における構造変化の検定、(2)長期記憶モデルのファイナンスへの適用、の2つについて研究を進めた。(1)構造変化点を既知として、平均変化、実数差分パラメータの変化、同時変化の3つの検定を考え、Lagrange multiplier (LM)統計量をtime domainで導出した。シミュレーションにより有限標本での振舞いを調べたが、特に実数差分パラメータの変化の検定でサイズ・ディストーションが大きいことがわかり、今後の課題である。以上を学会で報告した。イギリスの月次物価上昇率について分析したところ、長期記憶性があり、平均と実数差分パラメータが同時に変化している可能性があることがわかった。その際、季節性も考慮できるように検定を拡張した。これについては、現在、投稿準備中である。(2)近年、Realized Volatilityの研究が進んでいる。先行研究ではS&P 500のRealized Volatility系列に長期記憶性があることが示されている。日経225などの日本のデータについて、長期記憶モデルでの推定と検定(長期記憶性か、定常・非定常か)を行ったが、結果はモデルに依存してしまった。以上を研究会で報告した。周期性・非対称性・トレンド・構造変化などを加味したモデルの定式化を進めている。なお、(2)は東京都立大学の渡部敏明教授との共同研究である。1.Realized Volatility(RV)はより精度の高いVolatilityの指標としてAndersen and Bollerslev(1998)により提案され、近年研究が盛んに行われている。RVの計算には日中の価格変化率データが必要であり、そのため日本の株式市場についての実証研究は少ない。渡部敏明氏(日本銀行金融研究所シニアフェロー)との共同で、日経225先物データを分析した。RVの統計的性質を調べ、RVの変動のモデリング、予測精度の比較を行った。その結果、日経225のRVの対数値には先行研究と同様に長期記憶性があり、GARCHよりもARFIMAやHARのほうが、予測精度が高いことが分かった。以上をまとめた論文は現在投稿準備中である。2.RVの対数値をモデル化した場合、RVの予測をするにはRVの対数値が正規分布に従うのか確かめなければならない。Thomakos and Wang(2003)は長期記憶系列においては、よく使われるJarque-Bera検定がoversizeになることをシミュレーションにより示した。長期記憶系列をwavelet変換させると、変換後の系列は短期記憶系列になることが知られているので、wavelet変換させてからJarque-Bera検定を行えばoversizeの問題が解決されることが予想される。現在、シミュレーションの最中である。
非アルコール性脂肪性肝炎の生活習慣素因の検討と効果的な食事運動療法の確立

NASHの進行において酸化ストレスの関与が示唆されている。今年度ではNASH患者に抗酸化ビタミンの強化や食事療法の検討および肥満肝障害モデル動物の検討を行った。第1に、NASH患者の食事、身体計測、血液検査等の項目について、分析および結果検討を行った。AST、ALTはビタミンE・C投与群において6ヶ月、12ヵ月で有意に低下が認められた。身体計測値では、BMIや体脂肪率が全群において基準値を上回っており、投与開始群では、ウエスト径が12ヵ月目で有意の低下を示した。摂取エネルギー量も投与群において12ヵ月で有意に低下した。赤血球および血漿中ビタミンE濃度は、投与群において6ヶ月目以降有意に増加した。過酸化脂質濃度は、全観察期間において非投与群が有意の高値を示した。赤血球膜リン脂質脂肪酸組成は、投与群において12ヵ月でパルミチン酸、ステアリン酸が有意に増加した。n-6系PUFA総計、n-3系PUFA総計は、全群において明らかな変化が認められなかったものの、非投与群の低下傾向に比べて、投与群の値は比較的維持されていた。これらのNASH症例における12ヵ月の経過観察結果より、抗酸化ビタミン投与による炎症抑制作用の可能性が示唆された。またNASH患者に対する栄養療法として、抗酸化ビタミンの投与に加え、適切なエネルギー摂取と脂肪摂取制限による体重減少は有効と考えられた。第2に、脂肪性肝炎のモデルとして、db/dbマウスに四塩化炭素200mg/kg体重を単回投与した肥満肝障害モデルを作成し肥満高血糖がもたらす肝障害への影響を調べた。肝障害指標であるAST,ALT、あるいは肝繊維化の指標であるαIプロコラーゲンmRNA発現量は対照に比較して肥満群には有意な差は認められなかった。今年度は短期肝障害モデルで検討したところ、肥満高血糖の肝障害、線維化への明らかな影響は観察されなかった。非アルコール性脂肪肝(NASH)はアルコール飲用歴がないにもかかわらず、アルコール性肝炎に類似した繊維化を伴う肝組織炎症像を呈する疾患であり、一部の症例では慢性に進行して肝硬変にいたるといわれている。NASHの進行には脂質過酸化やフリーラジカルなどの酸化ストレスを惹起する要因が重要ではないかと考えられている。また、NASH症例では肥満に加えて,糖尿病や高脂血症のような基礎疾患を伴う例が多く、生活習慣病との関連が注目されている。このような疾患においても酸化ストレスは病態の進行に深く関わりを持つことが知られている。したがってNASHの治療には基礎疾患のコントロールや減量が食事療法を基本にした治療が有効と考えられる。本研究ではNASH患者と脂肪肝患者について身体計測や栄養素摂取状況を観察し、栄養評価を行った。今年度は第一にNASH患者の栄養状態,生活活動状況等を把握し,病態に影響する因子の解析をった。岡山県内病院に外来通院中の同意の得られたNASH症例20例,脂肪肝例4例について受診時に採血を行い,病態と酸化ストレスとの関連をみた。NASHではBMIは平均27.3、体脂肪率34.5%で過体重を認める例が多かった。このうち高脂血症は13例、糖尿病の合併をもつ者が9例であった。食事分析では両群に差は認められなかったものの、摂取エネルギー量、脂肪エネルギー比は適正量を上回っていた。NASH、脂肪肝例とも肥満例が多く、摂取栄養素量もエネルギー等過剰摂取傾向であった。血清TNF-α、IL-6、IL-10濃度において明らかな差異は両群で認められなかった。NASHの栄養療法は脂肪肝同様にエネルギーコントロールを中心とした食事療法が有効と考えられた。次年度は食事療法を基本とした各種治療法別の経過を1年間観察し、血中酸化ストレスマーカーと炎症性サイトカインを指標として観察する予定である。非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)の進行において酸化ストレスの関与することが言われている。慢性肝疾患には持続する酸化亢進を抑制することが、病態の進展抑制に重要である。そこで今年度ではNASH患者に抗酸化作用を有するビタミンの強化や食事療法、あるいは効果的な健康教育の検討を行い、肝疾患の栄養管理法について以下の項目を検討した。1、健康増進機器を利用した運動教室に参加数地域住民への健康教育の実践対象は40代から80代の健康な地区住民125人とし、運動教室の実施開始時と終了時の2回において身体測定、体力測定、骨密度測定、安静時エネルギー代謝量測定および食事頻度調査・生活活動調査を含む聞き取りアンケートを行った。安静時エネルギー代謝量は、肥満や隠れ肥満の多い60代、70歳以上が最も高値を示した。またいずれの年代においても指導後に明らかな低下は認めず、安静時エネルギー代謝の維持ができていると考えられた。ウオーキングを中心とした運動指導をおこない、自分の現状を把握することが動機付けになると考えられた。2、NASH患者への食事療法の実践前年度同調査研究に引き続き、NASH症例、脂肪肝症例について食事調査、身体計測、血液検査項目について1年間の長期観察を行った。NASH症例でほ基礎疾患を考慮したエネルギーコントロールを中心とした栄養指導を行ったところ、体重減少に伴いALTの減少した例が認められた。NASHでは肥満例が多く認められ、栄養療法は脂肪肝同様にエネルギーコントロールを中心とした食事療法が有効と考えられた。また慢性肝炎例へのビタミンE投与における効果を検討したところ、赤血球膜多価不飽和脂肪酸比率の増加が認められ、持続的炎症にともなう膜の酸化抑制の可能性が示唆された(発表論文1)。

NASH症例へのビタミンE投与の効果については次年度検討を行う。3、肥満-肝障害モデルラットを用いた検討モデルラット作成のための予備実験を行い、肝障害の確認を行った。次年度は各種炎症指標をもちいて抗酸化物質の効果を検討する。NASHの進行において酸化ストレスの関与が示唆されている。今年度ではNASH患者に抗酸化ビタミンの強化や食事療法の検討および肥満肝障害モデル動物の検討を行った。第1に、NASH患者の食事、身体計測、血液検査等の項目について、分析および結果検討を行った。AST、ALTはビタミンE・C投与群において6ヶ月、12ヵ月で有意に低下が認められた。身体計測値では、BMIや体脂肪率が全群において基準値を上回っており、投与開始群では、ウエスト径が12ヵ月目で有意の低下を示した。摂取エネルギー量も投与群において12ヵ月で有意に低下した。赤血球および血漿中ビタミンE濃度は、投与群において6ヶ月目以降有意に増加した。過酸化脂質濃度は、全観察期間において非投与群が有意の高値を示した。赤血球膜リン脂質脂肪酸組成は、投与群において12ヵ月でパルミチン酸、ステアリン酸が有意に増加した。n-6系PUFA総計、n-3系PUFA総計は、全群において明らかな変化が認められなかったものの、非投与群の低下傾向に比べて、投与群の値は比較的維持されていた。これらのNASH症例における12ヵ月の経過観察結果より、抗酸化ビタミン投与による炎症抑制作用の可能性が示唆された。またNASH患者に対する栄養療法として、抗酸化ビタミンの投与に加え、適切なエネルギー摂取と脂肪摂取制限による体重減少は有効と考えられた。第2に、脂肪性肝炎のモデルとして、db/dbマウスに四塩化炭素200mg/kg体重を単回投与した肥満肝障害モデルを作成し肥満高血糖がもたらす肝障害への影響を調べた。肝障害指標であるAST,ALT、あるいは肝繊維化の指標であるαIプロコラーゲンmRNA発現量は対照に比較して肥満群には有意な差は認められなかった。今年度は短期肝障害モデルで検討したところ、肥満高血糖の肝障害、線維化への明らかな影響は観察されなかった。
鹿児島県におけるHTLV-I関連ぶどう膜炎の臨床疫学的研究

鹿児島県においてぶどう膜炎がどのくらい発症しているのか、またその中でHTLV-Iassociate uveitisと考えられる症例がどのくらいいるかを推定するために、鹿児島県内の常勤の眼科医のいるすべての診療施設を対象として、ぶどう膜炎の実態調査を行った。1994年5月6月の2か月間、総外来患者数とぶどう膜炎患者数、およびぶどう膜炎の内訳を調べた。また、同意を得た上でぶどう膜炎患者の血液を採集し、血清の抗HTLV-I抗体をゼラチン粒子凝集法とEnzyme linked immumosolbent assey法で測定した。調査を依頼した65施設のうち31施設から調査票が回収され、回収率は47.7%であった。31施設のぶどう膜炎患者数は1か月平均351人で、そのうち新患は57.5人であった。総外来新患に占めるぶどう膜炎新患の割合は0.39%で、地域による差はなかった。ぶどう膜炎の内訳は、トキソプラズマ症7.8%、原田病5.0%、ベーチェット病4.1%、サルコイドーシス3.4%、その他8.4%で、残り71.3%は原因不明であった。血清の抗HTLV-I抗体の陽性率は、原因不明のぶどう膜炎では38/125(30.4%)で、既知のぶどう膜炎の11/63(17.5%)に比べて高かったが、有意差はなかった。これらの結果から、鹿児島県におけるぶどう膜炎の有病率は人口10万対40.4、罹患率は人口の10万対6.2と推定された。また、HTLV-I associated uveitisと考えられるぶどう膜炎の有病率は人口10万対8.8と推定された。
複数結合の高選択的連続形成反応の設計と生理活性物質合成への活用

一回の反応で複数の結合を選択的に形成させることは、反応行程をを短縮させ、効率的かつ経済的な方法となることから、現在多くの注目を集めている。研究代表者はこのようなカスケード反応として、分子内ダブルミカエル反応および分子内ミカエル・アルドール反応をすでに開発しており、本研究ではこれら反応の応用と精密化およびさらなる展開を目的として検討を行ない、以下の成果を挙げることができた。1.カッシノイド型セスキテルペン類の合成:パラジウム触媒を用いてのシクロブタノールの環拡大反応を利用してカッシノイド類であるシルペンおよび4-デオキシベルカロールの全合成を達成した。2.グミフェロリン酸および7ベータヒドロキシカウレン酸の全合成:ラジカル的なホモアリル転位反応を利用する位置および立体選択的な架橋化合物の合成法を開発し、これを利用して強力な植物生長作用を持つグミフェロリン酸および7ベータヒドロキシカウレン酸の全合成に成功した。さらにジベレリン類の合成を検討している。3.セスキテルペン・クルモリンの高効率的全合成:シクロペンテノンの4位にα,β-不飽和エステル鎖を持つ化合物を分子内ダブルミカエル反応に付して、三環性架橋化合物を立体選択的に合成した。これより三行程でクルモリンへと変換し、その超効率的全合成を完成した。4.インドールアルカロイド・タカモニンの短行程合成:分子内二重ミカエル反応を利用してムスカリン受容体に特異的に作用するインドールアルカロイドの一種タカモニンの簡易合成に成功した。