hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
１６世紀前半の聖地巡礼記に見る十字軍観・ムスリム観・イスラーム観の変容

マムルーク朝末期からオスマン帝国初期にかけての聖地周辺域の無秩序状態は、聖地巡礼者たちの中に反ムスリム感情および「十字軍」の希望を醸造させた。しかし、1530年代に入りオスマン帝国による聖地周辺域支配が安定化傾向を見せるに及んで、彼らは護衛者としての「トルコ人」に感謝の意を表するようになった。ただし、それは彼らの中から反「トルコ人」感情を払拭するには至らず、反キリスト教としてのイスラーム信仰における主役も「トルコ人」となった。経験を通じて反「トルコ人」感情も醸造させた巡礼者たちは、過去の「十字軍」ではなく、その感情を接着剤として聖地回復の希望=聖地の解放と「十字軍」の希望を接合させていった。当該年度においては、1501年1530年の間に作成された聖地巡礼記全41作品(旅行記の総数は66作品)の分析を行ったが、その結果の概要は以下の通りである。15世紀後半よりヨーロッパ世界はオスマン帝国の脅威に晒されていたが、概してヨーロッパ人は同帝国に対して恐怖という感情を抱いていた。1517年に同帝国が聖地周辺域を支配下に組み込んだ結果として、聖地巡礼者たちは不可避的にトルコ人と接したわけであるが、彼らは「護衛」という名目で金銭を「強奪」するトルコ人を体感することとなった。その結果として、トルコ人に対するヨーロッパ人たちの感情は、さらに悪化していくこととなった。このような状況の中において「十字軍観」も変容していったことが、次の二点より確認された。まず一つは、「聖墳墓の騎士」叙任という点である。かつては、あくまでも「栄誉」という枠組みからはみ出ることのなかった「聖墳墓の騎士」叙任において、対異教徒(トルコ人)ということが現実味を帯びる形で強調されていくのである。もう一つは、「十字軍の歴史」叙述という点である。かつては、あくまでも過去の出来事として切り離されていた「十字軍の歴史」が、当該時期において同時代の出来事と連続性をもって描かれるようになり、かつその叙述の中において従来は「サラセン人」・「ムーア人」と表されていた異教徒が「トルコ人」に書き換えられていったのである。以上を総合すると、オスマン帝国による聖地周辺域の支配が、新たな十字軍観を創出したと結論づけられるのである。研究代表者は、これまでに十字軍の全体像を理解するための一環として、いわゆる「後期十字軍」(14世紀以降の十字軍)の実態を解明するために、15世紀までの聖地巡礼記に着目して研究を行ってきた。本研究では、これまでの成果をさらに深化・発展させるために、16世紀前半に作成された聖地巡礼記から十字軍観およびイスラーム観を探ることを目的としてきた。考察の結果は、主題に即したもので2本、付随的なもので1本の論文、およびそれぞれ1回ずつの学会発表というかたちで公にすることができたが、その概要は以下の通りである。マムルーク朝末期からオスマン帝国初期にかけては、聖地周辺域の無秩序状態ゆえに多くの聖地巡礼者は多くの苦難を経験し、それが彼らの中に反ムスリム感情および「十字軍」の希望を醸造させた。しかし、1530年代に入りオスマン帝国による聖地周辺域の支配が安定化傾向を見せるに及んで、巡礼者たちは護衛者としての「トルコ人」に感謝の意を表するようになった。ただし、それは必ずしも彼らの中から反「トルコ人」感情を払拭するには至らず、反キリスト教としてのイスラーム信仰における主役もまた「トルコ人」となった。聖地巡礼という経験を通じて反「トルコ人」感情も醸造させた巡礼者たちは、過去の「十字軍」ではなく、その感情を接着剤として聖地回復の希望=聖地の現状からの救出と「十字軍」の希望を接合させていったのである。このようにして導かれた「十字軍」像は、概して「十字軍運動」の連続性を強調しがちである従来の見解とは異なり、16世紀に大きな転換点を迎えたものであったと解釈することを可能とする。従って、本研究で得られた成果は、十字軍史研究分野のみならず、ヨーロッパとオスマン帝国との関係を考える上でも重要な問題提起をなしていると言えよう。今年度は、年代的に見て始めの約50作品、具体的には、ピエトロ・パオロ・デイ・ルチェッラーニの作品(1500年頃作成)からメルヒオール・ツア・ギルゲンの作品(1519年作成)までの分析を行った。その結果明らかとされたのは、以下の点である。まず、当該時期において、確かに聖地巡礼を行う者の数そのものは減少傾向を見せ、かつオスマン帝国によるヨーロッパへの脅威は聖地巡礼者たちの心の中に恐怖心を生じさせた。

しかし、同帝国によるヨーロッパ侵入の結果として聖地周辺域にもたらされたヨーロッパ出身のマムルークたちの存在、および同帝国による聖地周辺域への進出の結果としてもたらされた強固な警備体制が、戦地巡礼者たちに安全かつ安心な聖地巡礼を行わせる結果を生み、さらにその結果として彼らの心の中からムスリムやトルコ人に対する恐怖心や敵意を軽減させる効果をもたらしたのであった。「聖地回復の希望」は、ヨーロッパ人たちにとっての根本的な心性ではあるが、それは必ずしも対ムスリム・トルコ人という心情とは結びつくわけではなく、また「十字軍の希望」と連関するものでもなかったのである。初年度は、史料収集に手間取ったことに起因して史料分析が当初の予定よりやや遅れたが、当該年度においてはその遅れを取り戻す以上の史料分析およびそれに基づく考察が進展したと言えるため。上記の通り、今年度は当初に予定していた対象期間の史料収集を行い得た上で、史料分析を行うことができた。史料分析の対象時期を1531年1550年に移して、引き続き検討を行っていく。その際に留意すべきは、ヨーロッパ世界の状況の変化、とりわけフランスと神聖ローマ帝国との対立が、オスマン帝国との関係にどのような影響を及ぼし、さらにそれが十字軍観に影響を及ぼしたのか、及ぼしたとすればどのように及ぼしたのか、という点であろう。基本的には、本年度に行った作業を、当初に設定した通りに対象期間を後ろにずらしながら推進していく。具体的には、平成24年度はフランシス・アルウァレスの作品(1520年作成)からマルタン・ド・ブリオンの作品(1540年作成)まで、平成25年度ではセバスティアン・ミュンスターの作品(1541年作成)からアントニオ・テンネレイロ(1550年作成)までの作品を検討対象とする。該当なし研究遂行上に必要不可欠である史料および二次文献の収集に50万円、また史料調査・収集および国内外の研究者との意見交換のために必要となる国内外旅費として40万円を使用する計画である。
抗補体薬の臨床応用に向けた網羅的解析

発作性夜間ヘモグロビン尿症に対して、抗補体薬であるエクリズマブは極めて有効に血管内溶血を阻止し、貧血を改善させるが不応例や効果不十分例もあり、新たな治療薬の開発が待たれている。我々は新規の候補薬として、抗C5作用を持つ遺伝子組換えダニ唾液タンパク質と環状ペプチド、第2経路の活性化を促進するFactor Dの阻害薬、古典経路阻害薬としてC1-インアクチベーター製剤、またC3阻害薬を入手した。これらを用いてin vitroの評価を行った結果、補体活性化経路のうち第2経路の分子を標的とすることが有効性、安全性から有望であることが示唆された。発作性夜間ヘモグロビン尿症(PNH)における補体による血管内溶血を、補体C5に対するモノクローナル抗体であるエクリズマブは、極めて有効にこれを阻止する。しかし、遺伝子多型によるエクリズマブ不応が存在することや、エクリズマブの効果が不十分な症例があり、現在様々な新規抗補体薬が開発中にある。これらの新規薬剤が実際にエクリズマブ不応例に効果があるのかを検証し、複雑な補体系の解明に繋げるのが本研究の目的である。本年度はまず、新規抗補体薬のうち抗C5薬としてCoversin (Akari社)、RA101348 (RaPharma社)、Factor D阻害薬としてACH-4100(Achillion社)を、C1阻害薬として乾燥濃縮ヒトC1-インアクチベーター製剤(Berinert&reg;, CSL Behring社)を、C3阻害薬としてCompstatinを入手した。C8、C9アプタマーに関しては、これらを作製した。補体の活性化経路は抗原・抗体反応を起点としたclassical pathway、微生物の細胞表面に存在するレクチン・マンナンを起点としたlectin pathway、補体成分C3の加水分解により起こるalternative pathwayの3つが知られている。新規抗補体薬により、どのpathwayが影響を受けるかを詳細に解析するため、各pathway特異的な評価方法の樹立に向けて取り組んでいる。またこれらの新規抗補体薬の溶血阻止効果を検討するために、試験管内で補体溶血を再現する酸性化血清溶血試験を確立し、健常者、PNH患者のサンプルを用いて検討を行った。また、エクリズマブ投与中の患者において血管外溶血の原因となる、赤血球上のC3について、FACSを用いた計測系を確立した。現在までに新規抗補体薬として抗C5薬としてCoversin (Akari社)、RA101348 (RaPharma社)を2種、Factor D阻害薬としてACH-4100(Achillion社)を、C1阻害薬として乾燥濃縮ヒトC1-インアクチベーター製剤(Berinert&reg;, CSL Behring)を、C3阻害薬としてCompstatinを入手した。補体活性化経路(classical pathway、alternative pathway, lectin pathway)のうち、PNHにおける新規抗補体薬の候補はclassical pathway、alternative pathwayに影響する。そこで、各新規抗補体薬が生体内でどの経路にどのように影響を与えるかを評価するため、classical pathway、alternative pathwayについて評価系の樹立を試みた。健常人の血清と各抗補体薬を用いたin vitroの実験では、それぞれの補体経路が各抗補体薬によりblockされることが示され、この評価系が機能することが示された。今後更に詳細に抗補体薬を評価する系の確立に取り組む予定である。試験管内で補体溶血を再現する酸性化血清溶血試験を確立し、de novoPNH患者の血球、血清を用いて新規抗補体薬の効果を検証した。Coversin、RA101348、ACH-4100、乾燥濃縮ヒトC1-インアクチベーター製剤、Compstatinの何れもがde novoPNH患者サンプルにおいて溶血阻止効果を認めた。Coversinにおいては、エクリズマブ不応例の血清を用いて酸性化血清溶血試験を行ったところ、溶血阻止効果を認め、その成果を第57回アメリカ血液学会(フロリダ)で発表した。本年度は、昨年入手した新規抗補体薬を用いて補体の活性化経路の解析手法を確立した。具体的には抗C5薬としてCoversin (Akari社)、RA101348 (RaPharma社)、Factor D阻害薬としてACH-4100(Achillion社)を、C1阻害薬として乾燥濃縮ヒトC1-インアクチベーター製剤(Berinert, CSL Behring社)を、C3阻害薬としてCompstatinを用い、C5、C8アプタマーに関しては、これらを作製し用いた。健常者、不応例(1症例)の血清を用いた実験で、各新規抗補体薬の溶血阻止効果が確認された。

補体の活性化経路は抗原・抗体反応を起点としたclassical pathway、微生物の細胞表面に存在するレクチン・マンナンを起点としたlectin pathway、補体成分C3の加水分解により起こるalternative pathwayの3つが知られている。新規抗補体薬により、どのpathwayが影響を受けるかを詳細に解析するため、Wieslabのキットを用いて各活性化経路を独立して評価する系を確立した。発作性夜間ヘモグロビン尿症(PNH)における補体による血管内溶血を、補体C5に対するモノクローナル抗体であるエクリズマブは、極めて有効に阻止する。しかし、C5の遺伝子多型によるエクリズマブ不応の存在や、補体活性化経路でC5の上流に位置するC3が、エクリズマブ投与下でPNH赤血球に蓄積し(オプソニン化)、脾臓などの網内系で破壊される(血管外溶血)などの問題があり、現在様々な新規抗補体薬が開発中にある。PNH治療において最適な治療標的がどこかを評価、検討し、複雑な補体系の解明につなげるのが本研究の目的である。本年度は昨年までに入手した、抗C5薬として遺伝子組換えダニ唾液タンパク質と環状ペプチド、第2経路の活性化を促進するFactor Dの阻害薬、古典経路阻害薬としてC1ーインアクチベーター製剤、またC3阻害薬としてCompstatinを用いて効果を検証した。健常者、PNH患者、エクリズマブ不応例の血清を用いた実験で、ダニ唾液タンパク質、環状ペプチド、Factor D阻害薬、Compstatinの溶血阻止効果を認めたが、C1-インアクチベーター製剤では十分な溶血阻止効果を認めなかった。C5阻害薬は全ての活性化経路を阻害し、Factor D阻害薬は第2経路のみを阻害すること、またC1阻害薬では第2経路の活性を抑制できないことを確認するなど、それぞれの補体活性化経路を評価する手法を確立した。抗C5薬はPNH赤血球上でC3の蓄積を招いたが、Compstatin、FactorD阻害薬では認められなかった。C3阻害薬は血管内・外溶血を阻止するが、全補体経路に影響するため感染増加などのリスクが懸念される。一方Factor D阻害薬などの第2経路標的薬は、血管内・外溶血を阻止しながら古典経路、レクチン経路が保持され、PNHに対する次世代抗補体薬として有望である可能性が示唆された。発作性夜間ヘモグロビン尿症に対して、抗補体薬であるエクリズマブは極めて有効に血管内溶血を阻止し、貧血を改善させるが不応例や効果不十分例もあり、新たな治療薬の開発が待たれている。我々は新規の候補薬として、抗C5作用を持つ遺伝子組換えダニ唾液タンパク質と環状ペプチド、第2経路の活性化を促進するFactor Dの阻害薬、古典経路阻害薬としてC1-インアクチベーター製剤、またC3阻害薬を入手した。これらを用いてin vitroの評価を行った結果、補体活性化経路のうち第2経路の分子を標的とすることが有効性、安全性から有望であることが示唆された。現在入手分に加え、新たに新規抗補体薬を入手する。複数のソリリス不応例の患者検体を用い、これらの新規抗補体薬がin vitroで溶血阻止作用があるのかを評価する。また、それぞれの新規抗補体薬が、各補体pathwayにどのような影響を与えるのかを、健常者検体、de novo PNH患者検体、ソリリス不応例それぞれを用いて、詳細に評価する経路を樹立する。
卵巣機能発現におけるゴナドトロピンレセプタ-の構造と機能に関する生化学的解析

また、ラット黄体細胞のLH/hCG receptorは大量のprogesterone(P)あるいはanti-progesterone(RU)の存在下でも結合蛋白などの構造上の変化は示さなかったが、P存在下では数、親和性の両面において低下するという機能的な変化が認められた。さらに、asialo hCG(ashCG)、deglycosylated hCG(dghCG)、normal hCG(hCG)ではhCG、ashCGでは描出されない48kDaのバンドが観察された。これをcross linkをはずしての二次元電気泳動ではdghCGのα、β両面subunitを含む物質であり、adenyl cyclase活性の違いに由来する蛋白と考えられ、receptor構造との関連において今後検討していく必要があると考えられた。1.卵巣hCG/LHレセプターの構造:現在までの数多くの研究にもかかわらず、hCG/LHのレセプターの構造は依然不明である。我々は種々の架橋試薬を用いてhCG/LHレセプターの構造を分析してきたが、hCGやLHが単一ポリペプチド鎖ではなく、2つのsubunit(α,β)から構成されていることがその解析を複雑にしている。hCGを^<125>Iで、標識するとその大部分の放射能は、α-subunitに取り込まれるが、これを用いてブタ顆粒膜細胞のhCG/LHレセプターをaffinity labelすると、DTT還元下のSDS-PAGEで136K(A),108K(B),92K(C),78K(D)の分子量を有した4個のComplexの形成が認められた。この中で(A)と(B)のバンドは極めて強かったが、(C)と(D)のバンドは弱かった。そこであらかじめβ-subunitを^<125>Iで標識した後、非標識のα-subunitと再結合させたhCGを作成し、同様にaffinity labelを行ってみると、同条件下で136K(A),116K(B),100K(C'),78K(D)のComplexが形成された。α、β各subunitの分子量がそれぞれ34K、22Kであることから、Complex(A)には両subunitが共に含まれているがComplex(B)にはαのみが、(B')にはβのみが含まれていることが推定された。すなわち、hCG/LHレセプターの分子量は136KからhCGの分子量50Kを差し引いた86Kであると考えられる。また残るComplex(C)と(D)の実態は不明であるが、最近明らかにされたTSHレセプターの構造から類推するとG蛋白の一部ではないかと推定される。2.hCG/LHレセプターの機能に及ぼすhCG糖鎖の影響:hCGの糖成分を除去すると生物活性が著しく低下することはよく知られた事実である。我々はhCGの糖成分を部分的にまたは完全に除去した誘導体を作成しそれらのホルモン活性を検討した。その結果、hCGの糖部分は血中での分解からhCGを保護することばかりでなく、c-AMP産生などの細胞内反応性に関与していることが判明した。妊娠ラットを用いたin vitro実験系におけて大量のprogesteroneあるいはantiーprogeseroneであるRU486の存在下での黄体細胞のLH/hCG receptorの変化を調べた。大量のprogesteroneを妊娠ラットに投与すると、卵巣黄体細胞におけるLH/hCG receptorは数の面では増加を示すがhCGに対する親和性が低下した。また、RU486を投与するとLH/hCG receptorは数および親和性いずれも低下することがわかった。そこで黄体細胞において先にLH/hCG結合蛋白を調べたのと同様にcross linkerを用いた実験を行なったがreceptorの構造上から特に大きな変化を認めなかった。これらの事実より、卵巣steroid hormoneはLH/hCH receptorに対して機能的には影響を及ぼすものの、構造的には大きな作用を持たないものと考えられた。また、臨床的には、体重減少性無月経患者に甲状腺ホルモン剤の投与が性機能改善に対して有効であることが示された。このことは甲状腺ホルモンが下垂体からのgonadotropinの分泌に関与するばかりでなく、卵巣におけるgonadotropin receptorに対しても何らかの作用を及ぼしている可能性が示唆され、今後検討していく必要があると考えられた。さらに、西村らは絨毛癌患者における尿中、血中のhCGの構造的相違につきゲルクロマトグラフィ法、等電点電気泳動法、Western blot法を用いて検討した。絨毛癌患者では尿中のhCGは血中に比べ、シアル酸含量が少なくなるばかりでなく、βsubunit類似の分子量23000および15000の蛋白が含まれることがわかった。このことは絨毛性疾患の患者のなかでmalignant formationしたものを鑑別することに対して非常に意義のあるものであると考えられる。
多機能蛋白としてのCFTRとその調節

Cystic fibrosis Transmembrane regulator(CFTR)は、欧米に多い嚢胞性線維症(cystic fibrosis)の原因遺伝子であることが判明し、さらに、自らがクロライド・チャネルをコードすることが分かり、いわゆるイオン・チャネル病という概念を確定する契機となった遺伝子である。我々の施設を含めて幾つかのラボから、このCFTRが心筋にも発現していることが明らかとされた。そこで電気生理実験に供することが技術的に簡単であった心筋細胞を用いてのCFTR研究を行った。また、CFTRは、ATP-binding cassetteを有する、いわゆるABC protein familyのメンバーであり、同じく、このメンバーであり最近、分子基盤が同定された、SUR(sulfonylurea receptor)の働きについても、とくにその機能調節をするATP感受性Kチャネル分子との関連で検討を進めた。Protein tyrosine kinase阻害薬であるgenisteinは、CFTR活性を抑制したが、その作用部位は、kinase inhibitionを介するものではなく、CFTRのATP-binding domainである可能性を報告した(Obayashi et al,Eur J Physiol,1999)。また、遺伝子工学的手法を用いて作成した種々のmutantsを用いて、薬剤の作用部位やABC蛋白の器質としてのATPの感受性の違いを検討した(Xie et al,Proc Natl Acad USA,1999;Horie et al,J Cardiovasc Pharma,2000;Kono et al,Eur J Physiol,2000;Haruan etal,Eur J Physiol,2000)。CFTRは、嚢胞性線維症の原因遺伝子で、6回膜貫通部分、制御部分,ATP結合部分を有するATP bindingcassette(ABC)蛋白ファミリーに属する。その本体は、Aキナーゼにより制御されるクロライドチャネルで上皮細胞でのクロライド分泌調節を行っている。同時に、CFTRは種々のチャネルやトランスポーターと連関し、その機能を調節することがわかってきた。その点で単なるチャネル蛋白にとどまらず多様な生物学的活性を持つと考えられる。その一つとして、われわれは、内向き整流カリウムチャネルの一つであるKir6.1と培養細胞上でCFTRを共発現させ、Kir6.1にスルフォニルウレア感受性が出現することを証明した。Kir6.1は、心筋、骨格筋、膵臓などで発現し、ATP感受性Kチャネルのサブユニットを形成する。Kir6.1そのものにはATP感受性がないために、その制御はβサブユニットを介して行われる。心筋において、ATP感受性Kチャネルは虚血に対する耐性を担っているが、実際我々はラット心筋梗塞モデル心で、Kir6.1のmRNA,蛋白レベルが選択的に上昇していることを発見した。最近、細胞膜のみならずミトコンドリアのATP感受性Kチャネルが、非常に重要な役割を担っていることが報告されている。われわれは、Kir6.1蛋白にtag標識、あるいはGFP標識し、その細胞内小器官での分布をconfocal顕微鏡、超遠心によるfractionationおよびimmunoblotで観察したところ、Kir6.1単独ではミトコンドリアに局在することが判明した。さらに、CFTRあるいは同じくABC蛋白ファミリーであるsulfonylurea受容体(SUR)を共発現させると、Kir6.1は、小胞体、ゴルジ、細胞膜分画に移行することが観察された。このことから、CFTR,SURは、チャネルそのもの、チャネルβサブユニットとしての働き以外に、他のタンパク質の細胞内輸送sortingにも関与していることが示唆された。CFTR(Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator)は、ABC(=ATP binding cassette)蛋白の一員であり、欧米に多い遺伝病である嚢胞性繊維症で機能異常を来すクロライド・チャネルをコードすることが、1990年前後から明らかとされた。われわれは、このCFTR isoformが心筋細胞にも発現しており、primary cultureの心筋細胞はパッチクランプ法による電流解析に適しているため、格好の研究材料を提供することを報告してきた。今回我々は、この実験系を用いてチロキシンキナーゼ(PTK)阻害薬のゲニスタインによるCFTRチャネル蛋白の活性化の機序を検討した(論文:Obayashi et al,1999)。Micromoleレベルのゲニスタインは、濃度依存的にCFTR電流を活性化したが、同時に、ゲニスタインはイソプロテレノール(ISO)によるCFTRの活性化を促進した。同様の促進作用は、PTK阻害作用のないゲニスタインのアナログであるダイドザインでも観察された。また、ゲニスタインの作用はプロテインキナーゼA(PKA)の阻害剤であるH-89存在下では、消失した。フォスフォチロシン・フォスファターゼ阻害薬であるvanadateを細胞内投与した状態でもゲニスタインは、CFTRを活性化した。一方、ゲニスタイン以外の知られているPTK阻害薬のlavendustin A,tryphostin B42,51には、CFTR活性化作用は認められなかった。以上から、ゲニスタインは、PTK活性を介するのではなく、チャネル蛋白の燐酸化に関わるPKAに依存することから、直接の作用と考えられた。

また、CFTRは、ATP-binding cassetteを有する、いわゆるABC protein familyのメンバーであり、同じく、このメンバーであり最近、分子基盤が同定された、SUR(sulfonylurea receptor)の働きについても、とくにその機能調節をするATP感受性Kチャネル分子との関連で検討を進めた。Protein tyrosine kinase阻害薬であるgenisteinは、CFTR活性を抑制したが、その作用部位は、kinase inhibitionを介するものではなく、CFTRのATP-binding domainである可能性を報告した(Obayashi et al,Eur J Physiol,1999)。また、遺伝子工学的手法を用いて作成した種々のmutantsを用いて、薬剤の作用部位やABC蛋白の器質としてのATPの感受性の違いを検討した(Xie et al,Proc Natl Acad USA,1999;Horie et al,J Cardiovasc Pharma,2000;Kono et al,Eur J Physiol,2000;Haruan etal,Eur J Physiol,2000)。
アルツハイマー病の新規発症抑制因子の研究

1)基礎研究として、CLSPおよびCLSP阻害因子14-3-3sigmaの生物学的機能の解析。2)前臨床研究としてADのCLSPシグナル活性化療法に関する前臨床試験の遂行。3)臨床研究としてCLSPとその阻害因子のAD罹患者における解析。以上の研究項目からなる研究の一年目を行なった。基礎研究/前臨床研究/臨床研究全てにわたって、最も重要な研究項目はおおむね達成した。以下変更点/問題点を述べる。基礎研究においては、CLSPが新たに発見されたAD発症遺伝子uncoordinated-5Cの機能を抑制する可能性が生じたため、当初予定していなかった研究としてこちらの研究をあらたに付け加えた。その結果は予想以上で、この遺伝子変異によって引き起こされるあらたなAD関連細胞死経路の発見につながった。一方、予備的な実験の結果から、成功が見込まれないことが確定したため、予定していた精巣細胞死に対するCLSPの効果を検証する実験を断念した。また、Humanin/CLSP signal伝達分子はSH3BP5/Apollon以外に発見できなかった。最後に、inhibitorに関する実験において、14-3-3sigma以外の6種の14-3-3分子種も細胞外に分泌されることが判明したため、研究の対象を広げて、これらの分子種もsigmaと同様に振る舞うのかどうか検証する実験を行なう必要性が生じた。前臨床試験において、CLSP transgenic miceに関する動物実験が予想外に良好な結果を示したため、組織試験など検討する事項が増えその結果その他の動物実験が十分進捗しなかった。また、14-3-3sigma以外の14-3-3分子種も阻害物質である可能性が生じたため、CLSP阻害分子の遺伝子改変動物の作成は見合わせている。臨床試験において、CLSP ELISAの感度が実際の濃度範囲で十分使用に耐えなかったため、改善を重ね,最終的には成功したが,その他の研究項目に移行できなかった。AD防御因子HN/CLSPシグナルに関する基礎研究/前臨床研究として、CLSP結合分子群の作用メカニズムを検討した。その結果、1)種々の阻害分子は系にCLSPと同等量あるいは5倍量を加えた段階から、阻害活性を示すこと、2)結合領域がHumanin-homologous domain以外の場所であること、3)結合分子が複数存在して少なくともその一部は阻害分子ではない事、を発見した。また、CLSP transgenic mouse/AD model miceはアミロイドベータレベルを低下させることなしに、海馬神経細胞のp-STAT3レベルを上昇させ、synaptic lossを抑制し、その結果AD model miceの記憶/認知障害を改善させることを見いだした。また、CLSP発現は前シナプスおよび後シナプスの重要な構成たんぱく質群のレベル低下を抑制することを見いだした。また、髄液内のCLSP濃度は3-6nMと活性を示すには十分の濃度であるが、髄液における種々のCLSPinhibitorsの総量がそれを上回ること可能性が高くなった。現在、さらなるCLSPの活性を調節する因子の基礎検討を続けている。最後に、AD病理標本を用いてHN/CLSP細胞内mediatorであるSH3BP5の発現変化解析を行ない、ADではその発現が低下することを見いだした。この事実は、ADではCLSPシグナルが減弱する可能性を示唆している。1)基礎研究として、CLSPと新たに同定したその阻害因子14-3-3の基本的な機能解析。2)前臨床試験として、CLSP transgenic AD動物モデル表現系の変化の検討。3)臨床研究として、AD罹患者由来のサンプル(髄液/脳組織)を用いて、当該分子ADにおける変動の検討。以上の項目からなる研究プロジェクトの2年目の研究を行なった。<基礎研究>あらたなCLSPの阻害因子として、14-3-3タンパク質群以外に、ApoEタンパク質群、calreticulinを見いだした。さらに、ApoE4の方がApoE3よりのCLSP阻害活性が強いことを見いだした。後者の発見はapoE4が何故ADの危険因子なのかを説明する可能性がある。また、これら阻害因子の機能を阻害する因子Xをあらたに同定した。これらCLSP阻害因子群と阻害因子阻害因子Xの複雑な関係を現在解析中である。<前臨床試験>CLSPtransgenic miceはAD model miceを交配するとAD model miceの認知症を抑制した。このメカニズムを病理解析で検討した。その結果、CLSP発現により、老人斑の低下、synaptic lossの改善が見られた.一方、Aβレベルは変化がなかった。これらの結果から、CLSPはAβとは無関係に、3量体ヒューマニン受容体を介して認知症を改善すると可能性が高いと結論された。また、CLSPをマウスに腹腔内投与すると、BBBを通過することを示した。<臨床試験>AD罹患者の脳組織を染色したところ、SH3BP5発現がやや低下している傾向が認められた。現在、この事実をNを増加させて確認中である。前臨床試験におけるCLSP transgenic miceの解析は順調だったが、基礎研究/前臨床研究/臨床研究の全般にわたって、以下の理由で進捗がやや遅れた。基礎研究において、新たなCLSP阻害因子としてApoE, calreticlinを発見した。また、阻害因子の機能を抑制する因子Xを発見した。これら一連の予想外の発見は、CLSP制御メカニズムが申請時に想定していたよりも遥かに複雑であることを意味する。結果、個々の分子の機能を明らかにする実験が必要となった。加えて、どの分子が最も重要なCLSP制御因子であるかを明らかにする実験が必要となった。

同時に、ターゲット分子の範囲の広がりに伴って、臨床研究における、実験の範囲が拡大した。一方、予定していたいくつかの研究はCLSP制御の中心的なメカニズム研究の結果が出るまで現在中断している。すなわち、CLSP阻害分子の遺伝子改変動物の作成は見合わせている。また、髄液内14-3-3sigmaのELISA測定はpendingとしている。今後も今までと同様なアプローチで研究を行う。上記に示した予定外の検討項目に関しても現在までと同様に進める。時間はかかっても進捗する可能性は高い。14-3-3sigma/beta以外の分子種の意義の結果によっては、いろいろな研究の局面で、当初の研究計画を見直す必要性が生じるが、決定的な研究計画の変更の可能性は極めて低い。中でも、遺伝子改変動物に関して、14-3-3sigma/beta以外の14-3-3分子種の意義が判明した時点で、CLSP阻害分子の遺伝子改変動物の作成を開始する予定とする。また、新たな発見としてuncoordinated-5Cの遺伝子変異とCLSP経路がリンクすることが判明したため、この分子の遺伝子改変動物作成を開始する。薬理学29年度が最終年度であるため、記入しない。基本的な研究のスキームは変わらないが、検討すべき分子の数が増えている。その結果、二年目である平成28年度の研究は予定よりも時間がかかっているが、今後は着実に研究を進めれば、正しい答えに到達する可能性が高いと考えている。今後、CLSPの機能を制御している中心分子あるいはメカニズムを同定する作業に集中する。その作業は培養細胞を用いた実験に加えて、アルツハイマー病罹患者の髄液内濃度測定を加味して行なう。同定された後、中心分子の髄液/血液内濃度を測定する。また、状況が許せばその分子による遺伝子改変動物作成を開始する。29年度が最終年度であるため、記入しない。
集団遺伝学を取り入れた種形成機構の解析

この研究では種多様化が急速に進んだと考えられる生物種群、特に東アフリカ・ビクトリア湖のシクリッド等を中心に、現存集団の遺伝的変異を解析することによって、集団のサイズや地理的構造などが、どのように種分化に寄与したかを明らかにすることを目的とする。ビクトリア湖のシクリッドについては岩場性、沿岸性の3属5種(Paralabidochromis)"rockkribensis",Lithochromis rubripinnis, L.rufus, Neochromis greenwoodi, N.rufocaudalis)でマイクロサテライト12遺伝子座の多型を調査した。沖合性二種(Haplochromis pyrrhocephalus, H.laparogramma)のデータも合わせて解析したところ、生態的に異なる岩場性・沿岸性・沖合性の種群間、及び種群内の種問に、弱いながらも階層的な遺伝的分化ができつつあることを見いだした。染色体の解析では東工大岡田グループと共同で単離したBACクローン24個のうち、20個が染色体マーカーとして使用可能なことが判明した。20個全てにおいて、マルチカラーFISH法による解析を終了させ、これら20個は18対の染色体を識別できることがわかった。一方TAARと呼ばれる化学受容体遺伝子ファミリーの進化について、9種の脊椎動物のゲノム情報を使って解析した。魚類では四足動物に較べ特に遺伝子数が増えており、また多くの遺伝子が嗅覚器官で発現していることが明らかになった。嗅覚遺伝子の分化が種の認識に関与している可能性もあり興味深い。更に、系統特異的に進化したシス転写制御領域の分子進化学を取り入れた比較ゲノムによる推定法と、トランスジェニックマウスを用いたシス転写制御領域の機能解析法の開発を行い、哺乳類特異的な転写制御領域を発見した。種分化が起こり多様化が進む過程における自然淘汰や集団の地理的構造の役割を明らかにするために、最近に種分化が進んだと考えられるビクトリア湖シクリッドと東南アジア熱帯林のフタバガキ科樹木について集団遺伝学的解析を進めた。シクリッドについては、種分化時の集団サイズと移住率を塩基配列情報も含めて最尤法により推定するために、周辺領域500塩基以上を含むマイクロサテライトマーカー(HAP-STRマーカー)を新たに約40個開発し、現在その多型性を対象種である、Yssichromis sp.およびParalabidochromis sp.について調査中である。またフタバガキ科については、特に急速に種分化しているShorea属とその近縁属について、精度の高い核遺伝子(PgiC)を使った解析を行い系統関係を明らかにした。特にRed Merantiと呼ばれるグループの中では種間で多型が共有されており、急速な種分化が遺伝子の系統関係からも明らかにされた。更にShorea属から代表的な4種(Shorea bullata, S.fallax, S.kunstleri, S.simithiana)を選び、各種から10個体以上のサンプルについてPgiCを含む4核遺伝子座での塩基配列多型を調査し、種分化時の集団サイズ及び移住・ハイブリダイゼーションの頻度を最尤法を使って推定した。その結果いずれの種も最近数百年の間に他種から分岐しており、S.fallaxが他種に較べて大きな集団を維持してきたことが明らかになった。種形成過程における自然淘汰や集団の地理的構造の役割を明らかにするために、最近に種分化が進んでいるビクトリア湖シクリッドと東南アジア熱帯林のフタバガキ科樹木について集団遺伝学的解析を進めた。ビクトリア湖のシクリッドについては、沖合性の二種、Haplochromis pyrrhocephalusとH.laparogramma、において昨年度開発した12のマイクロサテライトマーカ及びミトコンドリアDNA配列を使って、種間・集団間分化の程度を解析した。その結果マイクロサテライト遺伝子座ではこの二種間の遺伝的分化の程度は非常に低く(Fst値が0.012)、しかも同所的に存在する集団同士では殆ど分化が無いことが示された。一方ミトコンドリアDNA遺伝子座では比較的大きい分化があることが明らかになった(Fst>0.2)。この二種は婚姻色などに明らかな違いを持ち別種として認識されているが、種分化形成過程の途上にあるためかなり複雑な関係を持っていることがわかったので、今後詳細な解析を進めていく必要がある。フタバガキ科樹木についてはShorea属4種の塩基配列データについてIMモデルを使った最尤推定を行い、種分化が最近急速に起こったこと、種分化後も僅かながら種間遺伝子交流が行われている種が存在すること、祖先集団のサイズが小さいことなどを明らかにした。また魚類の種分化に嗅覚遺伝子が関与している可能性を考慮し、ゼブラフィッシュなどのゲノム情報を活用して嗅覚遺伝子族の分子進化学的解析も行い、遺伝子の分類を行った。更に近縁多種間および種内アリール間比較による遺伝子間機能部位推定方法を使って、18種の哺乳類および他の脊椎動物ゲノム間配列比較を行い、Dlx3遺伝子の鰓弓特異的エンハンサーがほ乳類で新たに進化した可能性を示唆した。この研究では種多様化が急速に進んだと考えられる生物種群、特に東アフリカ・ビクトリア湖のシクリッド等を中心に、現存集団の遺伝的変異を解析することによって、集団のサイズや地理的構造などの集団遺伝学的要因が、どのように種分化に寄与したかを明らかにすることを目的とする。

ビクトリア湖のシクリッドについては沿岸性の3属5種((Porolobidochromis) "rockkribensis", Lithochromis rubripinnis, L.rufus, Neochromis greenwoodi, N.rufocaudalis.)でミトコンドリア種内多型を調査し、前年度の沖合性二種(Yssichromis pyrrhocephalus, Y.laparogramma)と比較した。その結果、種間の遺伝的分化は見られるものの、沿岸性・沖合性の問あるいは属間の違いは見られず、種分化がこの湖では初期的な状態に有ることが示唆された。種内の集団構造についても調べたところ、沿岸性種のなかにも強く分化している種とそうでない種が有ること、殆どの種が最近集団の拡大を経ている可能性が有ることが明らかになった。また染色体については東工大岡田グループと共同で単離したBACクローン24個をプローブとして、Paralabidochromis chilotesの染色体にFISHマッピングを行った結果、17個のクローンが染色体マーカーとして使用できることを明らかにした。一方魚類の種形成の根幹の一つである交配相手の識別に重要な嗅覚について、匂い受容体遺伝子分析によって追究し、種間に大きな変異の存在することを明らかにした。更に、発生調節遺伝子転写制御領域の進化学的解析法の開発応用を行った。この研究では種多様化が急速に進んだと考えられる生物種群、特に東アフリカ・ビクトリア湖のシクリッド等を中心に、現存集団の遺伝的変異を解析することによって、集団のサイズや地理的構造などが、どのように種分化に寄与したかを明らかにすることを目的とする。ビクトリア湖のシクリッドについては岩場性、沿岸性の3属5種(Paralabidochromis)"rockkribensis",Lithochromis rubripinnis, L.rufus, Neochromis greenwoodi, N.rufocaudalis)でマイクロサテライト12遺伝子座の多型を調査した。沖合性二種(Haplochromis pyrrhocephalus, H.laparogramma)のデータも合わせて解析したところ、生態的に異なる岩場性・沿岸性・沖合性の種群間、及び種群内の種問に、弱いながらも階層的な遺伝的分化ができつつあることを見いだした。染色体の解析では東工大岡田グループと共同で単離したBACクローン24個のうち、20個が染色体マーカーとして使用可能なことが判明した。20個全てにおいて、マルチカラーFISH法による解析を終了させ、これら20個は18対の染色体を識別できることがわかった。一方TAARと呼ばれる化学受容体遺伝子ファミリーの進化について、9種の脊椎動物のゲノム情報を使って解析した。魚類では四足動物に較べ特に遺伝子数が増えており、また多くの遺伝子が嗅覚器官で発現していることが明らかになった。嗅覚遺伝子の分化が種の認識に関与している可能性もあり興味深い。更に、系統特異的に進化したシス転写制御領域の分子進化学を取り入れた比較ゲノムによる推定法と、トランスジェニックマウスを用いたシス転写制御領域の機能解析法の開発を行い、哺乳類特異的な転写制御領域を発見した。
台湾における肝内結石症と肝内胆管癌の相関に関する疫学的共同研究

1.症例対照研究1998年4月1日2000年2月18日の期間に、長庚紀念醫院(Chang Gung Memorial Hospital)で治療された肝内結石症210例、肝内結石症に合併した肝内胆管癌7例、肝内結石症を伴わない肝内胆管癌11例、長庚紀念醫院(Chang Gung Memorial Hospital)職員の出身地の近隣からのサンプリングによる健常対照者211例の調査用紙の回収を終了し、現在データーをコンピューター入力中である。情報採取法として問診票を用いた直接面接法を用いた。2.臨床病理学的研究肝内結石症患者の肝内区域胆管枝の合流様式、結石存在部位と肝内胆管癌の存在部位との相互関係の解明のため、1999年12月現在、MRIを用いた詳細な肝内区域胆管枝の解析を80例について行った。胆管上皮、肝内胆管癌の病理組織学的、免疫組織化学的研究としては、長庚紀念醫院(Chang Gung Memorial Hospital)においてこれまでに集積されたフォルマリン固定パラフィン包埋標本を用いたretrospective studyを次年度に金沢大学第二病理学教室に台湾側研究者を招聘して行うことを決定した。新鮮凍結切片を用いたprospectivestudyに関しては、標本採取についてのプロトコールの作成を終了し、標本採取を開始した。3.分子生物学的、分子疫学的研究1.症例対照研究1998年4月1日2000年2月18日の期間に、長庚紀念醫院(Chang Gung Memorial Hospital)で治療された肝内結石症210例、肝内結石症に合併した肝内胆管癌7例、肝内結石症を伴わない肝内胆管癌11例、長庚紀念醫院(Chang Gung Memorial Hospital)職員の出身地の近隣からのサンプリングによる健常対照者211例の調査用紙の回収を終了し、現在データーをコンピューター入力中である。3.分子生物学的、分子疫学的研究
ハイブリッド型水素ガスセンサ

単結晶酸化亜鉛基板上へパラジウム薄膜を作製した構造を用いて,低濃度から高濃度の水素ガス検知が可能なセンサを実現した。単結晶酸化亜鉛基板への過酸化水素処理の重要性と過酸化水素処理による単結晶酸化亜鉛基板表面への過酸化亜鉛層の形成を明らかとした。過酸化亜鉛層の形成には単結晶酸化亜鉛基板の面方位が重要であることおよび水素ガス検知に過酸化水素処理の時間やパラジウムの膜厚が影響することを明らかとした。平成24年度は,1.Pd/ZnOショットキーバリアダイオード(SBD)型水素ガスセンサの特性改善メカニズムの解明,2.Pd/ZnO構造の水素ガスセンサにおけるPd膜厚依存性の確認,3.測定可能な水素濃度範囲の確認をおこなった。1.X線回折装置や原子間力顕微鏡を利用し,過酸化水素処理を施した単結晶ZnO基板のZn面,O面およびM面をそれぞれ評価した。O面とM面において,Pd/ZnO界面にZnO2層が形成され,ZnO2層が特性改善に重要であることが明らかとなった。以上より,酸素原子を有する表面が水素ガスセンサの利用に適していると判断した。また,M面基板上におけるPdの水素ガスによる仕事関数低下量も見積もった。2.Pd/ZnO可視光透過型水素ガスセンサにおいて,異なるPd膜厚を有するセンサを作製し,その特性を比較した。Pd膜厚にセンサのOn/Off比と応答速度は依存し,適切な膜厚があることが判明した。測定に利用する計測装置,光源や受光素子の組み合わせ等の測定系に依存する部分もあり,さらなる検討が必要であると考えられる。3.SBD型とPd/ZnO可視光透過型の水素ガスセンサにおいて,測定可能な水素濃度の範囲を計測した。SBD型では,過酸化水素処理時間に測定可能な水素濃度範囲は大きく依存し,数ppmから1%程度の水素ガスを検知可能であった。Pd/ZnO可視光透過型は,数%から100%の水素ガス濃度を検知可能であった。研究期間を通じ,測定環境の整備,Pd/ZnO構造の水素ガスセンサの作製,過酸化水素処理による特性改善と過酸化水素処理のメカニズムの解明,センサに適した面方位の決定,Pdの水素ガスによる仕事関数低下量の算出,Pd膜厚の検討をおこなった。無電源化には至らなかったが,SBD型と可視光透過型のハイブリッド化で,数ppmから100%の水素ガスが測定可能となることを明らかとした。清浄な界面の作製を目指し,真空蒸着装置の改良をおこなうと同時に,イオンスパッタ法を用いたPd薄膜の作製をおこない,研究を進めた。Pd/ZnO/Alショットキーバリアダイオード(SBD)構造の水素ガスセンサにおいて,Pd電極を単結晶ZnO基板のZn面あるいはO面のどちらに形成したほうが良いかを検討した。その結果,過酸化水素水素水で表面処理を施したO面がセンサの作成に適していることを明らかにした。さらに,過酸化水素水による表面処理時間が,Pd/ZnO/Al SBDの特性に大きく影響することを明らかとした。同時に,過酸化水素水による表面処理をおこなう前の基板洗浄が重要であることも明らかとした。なお,M面基板は現状における抵抗率の観点から水素ガスセンサの作製には不向きであると判断した。また,Pd電極のサイズを検討し,本研究では直径1mmが最も適していると判断した。過酸化水素水処理の時間を検討し,on/off比が最大で6桁程のPd/ZnO/Al SBDの作製に成功した。逆方向リーク電流の大きさは水素の検出下限に大きく影響し,最も良い特性のSBDを用いて,濃度が数ppmと低濃度の水素ガスの検知に成功した。Pd/ZnO界面における水素によるPdの仕事関数低下量を明らかにした。大気中における電流-電圧特性から,熱電出放出理論に基づきPd/ZnOの障壁高さを算出したところ,約0.8 eVと見積もられた。この値は容量-電圧特性から見積もった値とほぼ同じであった。水素中ではショットキー特性がオーミック特性に変わったことから,Pd/ZnO界面における水素によるPdの仕事関数定価量は0.8 eV以上と推測される。可視光透過型の水素ガスセンサでは,水素ガスの検知に成功している。真空蒸着装置の改良に関しては,東日本大震災の影響により,大きく出遅れた形となった。しかし,イオンスパッタ装置による成膜を並行しておこない,SBDタイプの水素ガスセンサの試作,電極サイズの検討,ガスセンサに適したZnO基板の面方位の決定を終えた。Pd/ZnO/AlSBDの特性向上の手法として過酸化水素水による表面処理をおこない低濃度の水素ガス検知に成功した。処理時間がSBDの特性に大きく影響すること,検出可能な水素ガス濃度が逆方向リーク電流の大きさに依存することを明らかにした。可視光透過型水素ガスセンサに関しては,Pd/ZnO構造を試作し,予備実験も終了している。

可視光透過型においても水素ガスの検知に成功している。しかし,予備実験の段階で用いた光センサの感度が低く,測定系を改良する必要があることが判明した。また,定量的な評価も終了していない。現在,新しい光センサを取りつけるために,測定系を再度改良している。SBDの形成が順調に進んだため次年度に求める予定であった水素によるPd/ZnO界面におけるPdの仕事関数低下量も電流-電圧特性および容量-電圧特性から見積もることができた。真空蒸着装置および測定系の改良以外に関しては順調に進展していると考えられ,全体としてはおおむね順調に進展していると考えられる。SBD型の水素ガスセンサにおける解決する必要がある課題には,基板洗浄方法の確立,膜厚と水素ガスセンサの特性の関係を明らかにすることと,水素ガスセンサの無電源化が挙げられる。特性のよいPd/ZnO/AlSBDでは,紫外光による光電流が大きくなるため,無電源化に対して有利である。そのため,特性の優れたSBDを再現良く形成する方法を確立する必要がある。真空蒸着法とイオンスパッタ法を用い,清浄なPd/ZnO界面を形成できる薄膜作製方法を検討するために,初めに,ZnO基板の洗浄方法を検討する。次に過酸化水素水による表面処理を再検討する。電流-電圧特性および容量-電圧特性からPd/ZnO間の障壁高さや理想ダイオード因子を算出し,界面の状態を検討しながら研究を進める。特性の優れたSBDの作製後は,膜厚が水素ガスセンサの特性に与える影響を調べる。その後無電源化した際の水素ガスセンサの特性を評価する。可視光透過型では,測定系の改良が課題である。測定系の改良後,基礎特性を測定する。同時にSBD型と可視光透過型のハイブリッド化のためのデバイスの構造を検討し,ハイブリッド型水素ガスセンサの試作をおこなう。各消耗品の購入時の残額による端数のため,次年度使用額がわずかに発生した。次年度に消耗品(特に単結晶ZnO基板)を多く購入したいと考えている。次年度使用額は次年度予算と併せて単結晶ZnO基板の購入に優先的に充てる予定である。次年度予算は,単結晶ZnO基板およびガス等の消耗品の購入,旅費,研究成果発表費用に充てる計画である。
心肥大を伴う原因不明の突然死症例における自律神経系遺伝子異常の探索

本研究は「心肥大を伴う原因不明の突然死症例における自律神経系遺伝子異常の探索」および「法医解剖における心肥大所見と突然死リスクの層別化」を目的としている。平成30年度は大阪大学法医学教室で行われた法医解剖事例について心臓の情報を中心としたデータベースを作成すること、また心臓死以外の死因で死亡した事例をコントロール群と位置づけて、上記データベースからゲノム解析を行う症例を抽出することを目標とした。これらの目標は順調に達成された。突然死事例に限らず、全事例についてデータベース登録したことで、男女別の心重量が、従来生体で提唱されてきた日本人の平均よりも重たいことが判明した。またこのデータベース情報より、本研究の対象となっている心重量による解析対象事例の分類および抽出に成功した。また詳細な死因を検討することで、コントロール群の事例抽出も可能となった。これらの事例から血液および心筋組織を採取し全エクソーム解析およびRNAシーケンスを実施した。エクソーム解析の結果から心臓突然死群と心重量増加群において心臓病に関する既知遺伝子変異数および自律神経系に関与する遺伝子変異数に有意な差を認め、これらについて日本法医学会および日本DNA多型学会で口演で報告した。2019年度は解析が終了した全エクソームおよびトランスクリプトーム解析の結果から、自律神経に関与する遺伝子変異がその発現量にどのように影響を与えているかについて、統計学的に詳細に検討する。また遺伝子発現の上流解析やパスウェイ解析などの手段を用いて心臓突然死の分子メカニズムに迫ることを目標とする。得られた結果は日本法医学会総会および各種国際学会で発表し、得られた知見を論文として公表していくことを目標とする2018年度は1000例に及ぶ法医解剖結果のデータベース化を目標としたが、本課題については2018年10月までには終了した。引き続きデータベース情報から心重量を基準に事例を分類し、全エクソーム解析を実施した。また一部心筋組織を用いてトランスクリプトーム解析を実施した。解剖事例データベースからは大阪大学法医学教室における解剖事例においては従来提唱されてきた心重量よりも男女ともに約50g程度重量が重たいことが判明した。全エクソーム解析については心臓突然死群と心重量増加群において心臓病に関する既知遺伝子変異数および自律神経系に関与する遺伝子変異数に有意な差を認め、これらについて日本法医学会および日本DNA多型学会で口演で報告した。得られた結果は日本法医学会総会および各種国際学会で発表し、得られた知見を論文として公表していくことを目標とする。

得られた結果は日本法医学会総会および各種国際学会で発表し、得られた知見を論文として公表していくことを目標とする。残余試薬等があったため、シーケンスおよび解析にかかる経費が想定より少なかったため次年度使用額が発生した。引き続き本課題の遂行にあたってはシーケンス費用が継続的に発生するので、解析環境の維持、拡張を含め有効に利用したい。