hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
マクロベジクラー脂肪肝グラフトの脆弱性の原因究明とその対応策

血流のバランス不均衡は肝移植に於ける病態生理で良く知られている。Macrovesicular脂肪肝グラフトにおける生体内異物解毒機構において、肝小葉各Zoneにおける類洞の動脈血流調節因子は冷保存虚血再灌流障害の鍵となる可能性があることがわかった。肝動脈の虚血再還流における類洞血流の変化と解剖学的、生理学的、生化学的変化が正常肝と脂肪肝でどう異なるのかを全肝レベルから電子顕微鏡レベルにおいて解析した。Macrovesicular脂肪肝グラフトのロスが起こる病態解明に重要な知見を得た。また非Macrovesicular脂肪肝において動脈虚血再還流が果たす生理学的な新知見を得た。冷保存虚血再灌流障害におけるMacrovesicular脂肪肝グラフトにおける生体内異物解毒機構は未知であり、本研究の目的はMacrovesicular脂肪肝の虚血再還流障害に対する脆弱性の病態生理を明らかにし、その対策を確立することである。これまで、sinusoidal perfusion rateとfunctional sinusoidal densityといった古典的方法に代わるあたらしい微小循環評価方法を確立するべく、Floenizer2Dという流体力学解析ソフトを応用することで、High speed videomicroscopyを用いた全赤血球のスピードがわかるようになった。虚血再還流障害に伴うheterogenityは報告されてきたが、それが何故起こるのかは明らかではなかった。本研究はこのHeterogenityの病態生理解明に光明を見いだしたと考える。現在、類洞の入り口(門脈)から出口までの動脈クランプに伴う血流変化を全長に渡って評価する方法を模索している。低倍率で類洞全長の血流動態は観察できるがFloenizer 2Dで解析する解像度は得られない。高倍率で様々な条件を試みている。また、クランプ時間を変えて、類洞障害、あるいは類洞のheterogenityに関与する各種条件の設定を行っている。すでにコリン欠乏性脂肪肝のMrp2機能が落ちていること、正常肝の8時間冷保存で生体内異物解毒機能が落ちていることを証明している。今後、脂肪肝の温疎血による脆弱性を追求して行く。研究の第一段階は、sinusoidal perfusion rateとfunctional sinusoidal densityといった古典的方法に代わるあたらしい微小循環評価方法の確立を行うことであるが、Floenizer2Dという流体力学解析ソフトを応用することで、High speed videomicroscopyを用いた全赤血球のスピードがわかるようになった。類洞内の赤血球のスピードは5150m/secであり、肝動脈クランプで075m/sec,肝動脈クランプ解除で0300m/secとなることが分かった。肝動脈クランプ前後で類洞血流は4倍に増加する現象が世界で初めて確認された。門脈クランプでは025m/secとなるに過ぎないため、門脈血流がどのように関与しているのかを調査中である。肝動脈が類洞に流入する血流パターンは4通りであり、すなわち、グリソン内細胆管周囲の栄養血管、最終門脈枝、限界版、類洞に直接流入である。虚血再還流障害に伴う血流再開のheterogenityは報告されてきたが、それが何故起こるのかは明らかではなかった。今後、同手法を用いてMacrovesicular steatosisに伴う微小循環を解析し、続いてそれが虚血再還流によってどう変化するかを観察する。微小循環の評価をもとにそれらの変化がMrp2機能にどのような影響を与えるかを定量的に解析する。肝小葉の各zoneにおける類洞血流を測定する方法を確立した。肝動脈虚血による各時間ごとの類洞血流の変化を測定する方法を確立した。類洞血流の調節因子を同定した。肝動脈虚血による類洞血流の変化が肝小葉の各zoneでどのように変化するのかを調べた。同時に胆汁を採取し各種成分と胆汁流量の動脈クランプあるいは解除に伴う時間経過を調査した。また、それに伴う血液中の肝逸脱酵素を測定した。Macrovesicular脂肪肝と正常肝の構造的な違いを電子顕微鏡で調査した。類洞、Disse腔、Kupffer細胞、伊東細胞、毛細胆管の形態的差異を観察した。各種脂肪肝と正常肝、Eisai Hyperbilirubinemia Rat (EHBR), EHBR脂肪肝などのTXA2合成阻害剤、PPAR-γagonist投与、Gadlinium投与の有無における鉄染色、D-PAS染色、鍍銀染色、HE染色、PAS染色、VB染色、MT染色、EVG染色を行い、形態学的、生化学的解析を行った。これらが起こる病態生理学的メカニズムを検証した。

血流のバランス不均衡は肝移植術後の課題の一つであり、肝移植グラフトロスにつながる動脈再灌流障害の機序の解明につながる知見を得た。また、脂肪肝移植においてもいくつかの知見を得ることができた。肝臓生理学肝動脈が類洞に流入する血流パターンは4通りであり、すなわち、グリソン内細胆管周囲の栄養血管、最終門脈枝、限界版、類洞に直接流入である。類洞の血流評価の技術革新により、高倍率における赤血球のVerosityは確立したが、類洞全長の変化を捉える技術が確立できていない。肝小葉全体が血液を拍出する運動の中におけるheterogenityの意義を調査中である。肝機能、肝障害との関係性は資料蓄積中で、概ね順調に経過している。類洞の血流評価の技術革新により、このレベルに想定されていた時間が大幅に短縮された。Macrovesicular脂肪肝におけるMrp2の機能障害についても同時に行っており、予備実験で予想通りの結果を得ている。ただし、肝動脈血流と再疎通類洞の関係が新しく発見されたため、肝動脈血流がMacrovesicular脂肪肝でどのように変化しているのか、病理とIntravital videomicroscopyの挟み撃ちで確認して行く作業が必要となった。肝動脈クランプ時間と再還流類洞の関係、さらに肝機能との関係を詳細に調査するなど、考えれば予想より早く進展しているとは言えない。1.正常肝臓において肝小葉全体におけるheterogenityの解明。肝動脈クランプ時間と再疎通類洞が及ぼす肝機能、肝実質障害を明らかにする。前年度に引き続き、血液検体の採取、胆汁標本の採取を蓄積し、今年度ですべてまとめて解析する。2.脂肪肝において肝動脈クランプ時間と再疎通類洞に関与する因子の統計解析を行う。3.動脈クランプ解除後に発生するHeterogenityの病態生理解明、解決する手段の検索を行う最終年度にかかる費用を考えて、人件費、旅費、物品費を使用した。蓄積した資料の解析をすべて最終年度に行うことになったため、使用計画が変わった。蓄積した検体の解析をまとめて行う実験設備はすべて整っているので、新たに50万円を超える実験器具を購入する必要はない。消耗品、人件費、旅費、印刷費などに利用する
リグヴェーダにおける河川に関する文献学的研究

本研究の目的は,古インド・アーリヤ語最古の文献であるリグヴェーダ(紀元前1200年頃に編集されたものと推定)において,河川がいかなる存在に位置付けられるのかを,文献学的手法に基づき解明することである。本年度は「1.河川に関連する一般名詞」,「2.スィンドゥ」,「3.サムゥドラ(水の集合)」について研究を行った。本報告書では1及び2について概要を報告する。1.河川に関連する一般名詞:スルティ「道,河川」,アヴァニ「河床,河川」に関する用例からは,季節や地勢によって水量が変わる河川の姿を読み取ることができる。それに対し,ナディー「河川」は,諸々の河川の中でも特に「豊富な水量を有する河川」として明確に描かれる。その河岸部は理想的な生活の場と見なされ,移動生活を続けてきた往時のインド・アーリヤ人達にとっての,「移動の終着点」或いは「最初の定住地」としても強く意識される。2.スィンドゥ:リグヴェーダに登場する河川に関わる語の中で,群を抜く用例数を有するスィンドゥは,河川名「スィンドゥ(恐らくインダス川)」や,「河川,水流」を意味する一般名詞として,単数,両数,複数全ての形で,且つ男性,女性双方の形で,様々な文脈に用いられる。スィンドゥについては,先に提示したナディーとは大きく異なる特徴として,「渡り越える対象」として頻繁に描かれる点が挙げられる。この事実は,移動期に出会い,渡り越えてきた数々の河川,即ち「通過点としての河川」のイメージが,スィンドゥには強く反映されている可能性を示唆する。1,2の研究からは,半遊牧・移動生活を送っていた時代の記憶が色濃く反映された文献であるリグヴェーダに特徴的な河川観が浮き彫りになった。これらの研究の成果については日本印度学仏教学会第65回学術大会にて発表を行い,印度學仏教學研究第63巻第3号に研究論文を投稿した。26年度が最終年度であるため、記入しない。本研究の目的は,古インド・アーリヤ語最古の文献であるリグヴェーダ(紀元前1200年頃に編纂されたものと考えられる)において,河川が如何なる存在に位置づけられるのかを,文献学的手法を用いて明らかにすることである。遊牧・移住生活を営んでいた頃の記憶を未だ留める段階にあったインド・アーリヤ人が伝えた宗教文献中で,河川という生活上の重要拠点を巡って言及される「生活実態,社会背景」,「思想,世界観」そして「宗教観」について,総合的な解明を試みる。本年度は,K.F.Geldnerによるリグヴェーダ全訳のインデックスに特定の河川として登録される一連の河川の中で,スインドゥ及びラサーを除く32の河川(サラスヴァティー,サラユ,ヴィパーシュ,パルシュニー等)について,各々が言及される箇所及び関連性が看取される箇所を網羅的に調査した。諸河川に関わる個々の記述の分析を通じ,同文献に登場する河川を総覧する知見の集積が得られた。特筆すべきものについて以下に一例紹介する。リグヴェーダにおいて,河川は「戦争に関連する文脈」において頻繁に登場する傾向にあることが指摘できる。それと同時に河川が齎す「水による恩恵」を示唆する表現も散見される。これらの点は,自身の生存や財産に等しい家畜の飼育に必要不可欠な水源をもたらす河川が,競合の対象としての性格を有していたことを暗示している。河川は往時の人々の生命に直結する,切実な問題と密接に関連していることが,本年度の研究を通じて具体的に明らかになったと言える。平成24年6月30日開催の日本印度学仏教学会にて,河川の女神サラスヴァティーの男性形対応神格であるサラスヴァントをテーマに発表し,同学会学会誌にて論文(英文)を投稿した。また同年10月3日から12月6日まで,アメリカ合衆国ハーバード大学のDepartment of South Asian Studiesに滞在し,研究活動に従事した。半遊牧・移動生活を営んでいた頃の記憶を未だ留める段階にあったインド・アーリヤ人が伝えた宗教文献中で,河川という生活上の重要拠点を巡って言及される「生活実態,社会背景」,「思想,世界観」そして「宗教観」について,総合的な解明を試みる。以下に,本年度に行った研究(継続中のものを除く)について,特筆すべき三点の概略を記す。1.ラサーリグヴェーダ及びそれに後続するヴェーダ文献に登場する,神話上の河川としての特徴が色濃く伝えられるラサーについて,その全用例を対象とし,文献学的に調査した。本研究の成果については,待兼山論叢第47号哲学編に論文(英文)を投稿した。2.神々の妻達本研究は,リグヴェーダの一節において,河川の女神であるサラスヴァティーと共に登場し,「神々の妻達」として位置付けられる女神達の分析からスタートした。そのような神群を,特徴に応じて二種のグループに大別し,リグヴェーダにおける用例の分析を中心に据えつつ,さらに後続するヴェーダ文献が伝える祭式の文脈における役割にも目を向けながら精査し,一連のヴェーダ文献における女神/女性観の一端の解明を試みた。

本研究の成果については,国際学会6th International Vedic Workshopにて発表を行い,論文を投稿した(主催者側の発表によると,学会紀要は平成26年内に出版予定とのこと)。3.ガッガル川現地調査平成26年1月に,インドのハリヤーナー州シルサにあるガッガル川(サラスヴァティー川に比定されるものと考えられる)及びオットウ湖(ガッガル川の一部を堰き止めて作った人造湖)へと赴き,現地調査を行った。文献研究のみからは窺い知ることの難しい,現地の風土や気候,人々の生活の様子等を見聞した。本研究の目的は,古インド・アーリヤ語最古の文献であるリグヴェーダ(紀元前1200年頃に編集されたものと推定)において,河川がいかなる存在に位置付けられるのかを,文献学的手法に基づき解明することである。本年度は「1.河川に関連する一般名詞」,「2.スィンドゥ」,「3.サムゥドラ(水の集合)」について研究を行った。本報告書では1及び2について概要を報告する。1.河川に関連する一般名詞:スルティ「道,河川」,アヴァニ「河床,河川」に関する用例からは,季節や地勢によって水量が変わる河川の姿を読み取ることができる。それに対し,ナディー「河川」は,諸々の河川の中でも特に「豊富な水量を有する河川」として明確に描かれる。その河岸部は理想的な生活の場と見なされ,移動生活を続けてきた往時のインド・アーリヤ人達にとっての,「移動の終着点」或いは「最初の定住地」としても強く意識される。2.スィンドゥ:リグヴェーダに登場する河川に関わる語の中で,群を抜く用例数を有するスィンドゥは,河川名「スィンドゥ(恐らくインダス川)」や,「河川,水流」を意味する一般名詞として,単数,両数,複数全ての形で,且つ男性,女性双方の形で,様々な文脈に用いられる。スィンドゥについては,先に提示したナディーとは大きく異なる特徴として,「渡り越える対象」として頻繁に描かれる点が挙げられる。この事実は,移動期に出会い,渡り越えてきた数々の河川,即ち「通過点としての河川」のイメージが,スィンドゥには強く反映されている可能性を示唆する。1,2の研究からは,半遊牧・移動生活を送っていた時代の記憶が色濃く反映された文献であるリグヴェーダに特徴的な河川観が浮き彫りになった。これらの研究の成果については日本印度学仏教学会第65回学術大会にて発表を行い,印度學仏教學研究第63巻第3号に研究論文を投稿した。26年度が最終年度であるため、記入しない。リグヴェーダに登場する個々の河川に関わる文献学的手法による精査を通じ,同文献における河川像の類型を具体化することに成功した。本年度の成果は,研究全体の外堀を埋める意味合いを持つ。また,生存に直結する水を介した河川と人々との関係性という人類に共通するテーマについて,文献リグヴェーダの「証言」を提示した。前年度までに行った,特定の名を以て呼ばれる地上の河川の研究によって得られた知見を土台に,今年度はラサーという,神話的河川としてのイメージが色濃く伝えられる河川の研究を遂行した。一般的に女性名詞として語られる河川の研究を起点とし,それと関連づけて伝承される,ヴェーダ文献における女神・女性観の調査へと進んだ。当初の段階では想定していなかった,新たな研究の方向性を見出した。
マイクロ秒の時間分解能を持つ3次元配向計測顕微鏡の開発と生体分子モーターへの応用

生体分子モーターの機能には分子のブラウン運動が重要である。ブラウン運動を計測するにはマイクロ秒の時間分解能を持つ計測法が必要である。本研究では少量の光で高い精度を出せる配向計測に着目し、マイクロ秒の時間分解能を持つ3次元配向計測顕微鏡の開発を目指した。このために1.強い蛍光を発する量子ナノロッドでモーター蛋白質を標識し、2.時間分解能を制限していた機器制御を必要としない光学系を開発した。現在、この顕微鏡で分子モーターの運動を計測中である。最近の1分子計測の結果、生体分子モーターの機能には分子自身のブラウン運動が影響することが分かってきた。このブラウン運動を計測するにはマイクロ秒の時間分解能を持つ1分子計測法が必要であるが、位置決めを原理とする計測法では光シグナルが十分でない。本研究では位置決めと比較して少量の光シグナルで十分な精度を持つ配向計測に注目し、3次元配向計測顕微鏡を開発する。このために必要な、1.金ナノロッドによるモーター蛋白質の標識2.新規の暗視野顕微鏡の開発、3.3次元配向計測光学系の開発を行いモーター蛋白質ミオシンVの運動を1分子計測する。現在までに上記研究計画に記した課題3を終え、この光学系で1分子蛍光色素の配向が求められることが分かった。現在課題1を行っている。本来先に行うべきであった課題2については金ナノロッドの散乱光が蛍光色素からの蛍光と異なった挙動を示したことから金ナノロッドの光特性を見極めるため、従来型の暗視野斜光照明を導入し、課題3で開発した配向計測光学系を用いて金ナノロッドを観察している。このために必要な、1.3次元配向計測光学系の開発2.金ナノロッドによるモーター蛋白質の標識3.新規の暗視野顕微鏡の開発、を行いモーター蛋白質ミオシンVの運動を1分子計測する。昨年までに1.3次元配向光学系の開発を行った。今年はこの成果を取りまとめ特許出願した。次に2に取り掛かった。金ナノロッドによる標識は容易であると予想していたが、実際には素材の不均一性に由来する散乱光強度のばらつきや照明光の電場依存性が顕著にあらわれ、金ナノロッドの使用を断念した。このため金ナノロッドの代替として強い蛍光を発することが知られる棒状量子ドットにてモーター蛋白質を標識することとし、この合成を依頼した。現在この量子ドットは完成し、これを用いて配向計測を行っている。また3について顕微鏡を試作し、直径200ナノメートルのポリスチレンビーズを観察した。新規顕微鏡は非常に強いシグナルを得ることができ、安価なCCDカメラでも対象を観察できた。しかしながら顕微鏡筐体内の反射に由来すると思われるノイズも上昇し、高いコントラストを得ることはできなかった。改善策として得られたシグナルをデジタル処理してノイズを減少させることも考えられたが、今回の研究では分子の標識に蛍光を使用することとしたためこれ以上の改善は行わなかった。
各種増殖因子が角膜上皮細胞の細胞内微細構造および分化に及ぼす影響

三次元再構築角膜を用いて、in vitroにおいて増殖因子であるHGF,EGF,TGF-β1投与した場合起きる細胞内骨格の変化を調べ、角膜上皮細胞の分化機構に関する因子について検討した。ウシ角膜を用いて三次元再構築角膜を作製し、各増殖因子を7日間投与後、ホルマリン固定、パラフィン包埋し標本を作成した。この標本とin vivoのウシ角膜を、抗サイトケラチン(CK)抗体7,8,10,14,19,5+8,10+14+15+16+19,抗ビメンチン抗体,抗デスミン抗体,抗GFAP抗体を用いて免疫染色を行い、これら中間径フィラメントの分布を比較した。in vivoと同様の分布を示すことを分化の指標とした。CK8およびCK19は、in vivoでは基底層を除く上皮に発現するが再構築のTGF-β1群およびHGF群で同様の発現が見られた。EGF群では部分的に陽性像が見られたが表層には発現は明瞭でなかった。CK5+8はin vivoでは基底層のみに陽性となるが、再構築群では全層に陽性像が見られた。CK10+14+15+16+19は、in vivoでは陰件だが、TGF-β1群およびHGF群では基底層に陽性像が見られ、EGF群では表層にも部分的に陽性像が見られた。ビメンチンは、全群ともに角膜実質細胞にのみ陽性像が見られた。CK7,CK10,CK14,デスミン,GFAPは全群ともにすべて陰性であった。再構築角膜では、TGF-β1群およびHGF群はin vivoと同様の中間径フィラメントの発現が見られ、これらの増殖因子は細胞内骨格の分化を促進すると考えられた。さらに、TGF-β1群はHGF群と比べて発現がin vivoに類似しており、TGF-β1は強い分化作用があると考えられた。EGFは、中間径フィラメントの分布という点では、脱分化的な作用であると考えられた。
球等質空間への可視的作用と非可換調和解析への応用

簡約型実球部分群に対するカルタン分解を得ることについては、研究計画の通りに達成することができた。一方、複素簡約群のinner typeの実形による、複素球多様体への作用の可視性の問題については、本研究におけるカルタン分解の結果を利用することによってスライスを取ることはできているものの、スライス上で恒等写像であり群作用を保つような反正則微分同相写像の構成がまだ残っているため、おおむね順調、とした。2つの簡約型実球部分群に関する両側剰余類の研究や、複素簡約群の実形による複素球多様体への作用の可視性に関しては、このまま研究を続けていく。一方、球多様体上の球関数の研究については、最近のP. Delorme氏、F. Knop氏、B. Krotz氏、J. Kuit氏、E. Opdam氏、H. Schlichtkrull氏らの研究(Acta Math. 218, 2 (2017), arXiv:1711.08635 [math.RT], arXiv:1807.07541 [math.RT])を受けて、方向を修正し、リーマン対称空間上の球関数の性質を簡約型Gelfand対へと拡張することに取り組む。その手法としては、カルタン分解の研究で得られている幾何構造を利用して、対称空間上の結果に結びつけるというものを用いる。今年度はコンパクトリー群のハミルトニアンな作用について、その可視性の研究を行い、コイソトロピック性と強可視性とが同値であるという結果を得た。これら2つの性質については、複素多様体に対する可視的な作用の理論を導入した東京大学の小林俊行教授自身によって最初にその関係が考察されており(Publ. Res. Inst. Math. Sci. 41 (2005), no. 3, 497-549)、強可視性からコイソトロピック性が導かれることが証明されている。さらに、東海大学の笹木集夢准教授によって証明された、無重複線型空間へのコンパクト実形の作用は強可視的であるという結果から(Int. Math. Res. Not. IMRN 2009, no. 18, 3445-3466, 2011, no. 4, 885-929)、線型な作用については両性質が同値であることが分かっている。今年度得た結果は、これら先行結果の拡張になっている。本科学研究費を利用して2017年12月にTunisiaで行われた研究集会に参加し、上記成果について発表した際、とりわけInstitut Elie-Cartan de LorraineのWurzbacher教授から好評を得た。Wurzbacher教授はRuhr-Universitat BochumのHuckleberry教授との共著論文(Math. Ann. 286 (1990), no. 1-3, 261-280)において無重複性(簡約群の作用する空間が球多様体であること)とコイソトロピック性とが同値であることを証明しており、本研究課題と非常に深く関連している。また、本科学研究費を利用して参加した、2018年1月に鳥取で開かれた研究集会においても上記研究成果について発表を行った。複素簡約群の実形の可視的作用に関する結果という意味においては研究テーマの通りではあるが、ハミルトニアンな作用やコイソトロピック性に注目することは当初の計画にはなかったことである。予定してはいなかったものの、コンパクトリー群のハミルトニアンな作用については先行研究の拡張という形で満足すべき結果が得られたため、研究はおおむね順調に進展していると考える。実際、複素簡約群の作用する空間に対し、その幾何を考える際にも、また解析を考える際にも、運動量写像は重要な役割を果たすため、本年度のハミルトニアンな作用に関する成果は今後研究を進めていく上で有益なものとなるはずである。また、Tunisiaで開かれた5th Tunisian-Japanese Conferenceにおける講演の後、研究集会の世話人であるUniversity of SfaxのBaklouti教授から「抽象的に与えられた無重複表現に対し、可視的作用が付随するか?」という重要な質問を頂いたが、本年度の成果はこれに関連するものである。即ち、小林俊行教授によって複素多様体への作用が可視的であれば正則関数(切断)の空間は無重複であるということが証明されているため(Progr. Math., 306, 2013, 113-140)、逆に表現が無重複であれば群作用は可視的であるか?という問題が自然に考えられるが、今回の研究でこの問に対し、非常に特別な場合にではあるが、肯定的に答えたことになる。当初の研究計画の通り、複素簡約群の作用する複素球多様体に対し、inner typeの実形の作用の可視性について研究を行う。

進捗状況で述べた通り、コイソトロピック性と可視性との関連についての研究は予定にはなかったが、その一方で、本科学研究費を利用して参加した龍谷大学におけるセミナー発表の準備をしている最中に、inner typeの実形の作用の可視性に対する研究上で技術的な障害となっていた問題の一つに対し、解決の糸口を見出したため、これを利用して研究を推進していきたい。具体的には、複素多様体に対するリー群の作用の強可視性の条件に現れる反正則微分同相写像を見つける際に、本研究で用いている手法においては固定化部分群の連結成分に対する処理を行う必要があるが、当初の予定では半単純対称対の分類と簡約型球部分群の分類とを用いて、各論によって必要な性質が満たされていることを証明しようと考えていた。しかし、この議論に対する抽象的な取扱いの方針が立ったため、この方針の下研究を進めていきたいと考えている。糸口が見えたことには、龍谷大学でのセミナーの準備にあたって松木敏彦教授の仕事、特に対称対に対する両側剰余類に関する研究(J. Algebra 175 (1995), no. 3, 865-925, 197 (1997), no. 1, 49-91)をあらためてもう一度勉強したことが大きい。また、球部分群に対するカルタン分解の研究も、研究計画の通りに進めていく。2つの簡約型実球部分群に関する両側剰余類の研究や、複素簡約群の実形による複素球多様体への作用の可視性に関しては、このまま研究を続けていく。一方、球多様体上の球関数の研究については、最近のP. Delorme氏、F. Knop氏、B. Krotz氏、J. Kuit氏、E. Opdam氏、H. Schlichtkrull氏らの研究(Acta Math. 218, 2 (2017), arXiv:1711.08635 [math.RT], arXiv:1807.07541 [math.RT])を受けて、方向を修正し、リーマン対称空間上の球関数の性質を簡約型Gelfand対へと拡張することに取り組む。その手法としては、カルタン分解の研究で得られている幾何構造を利用して、対称空間上の結果に結びつけるというものを用いる。
ダイヤモンドナノ結晶による干渉性散乱を利用した中性子減速材の開発

中性子が大きさの揃った物質と散乱する場合、中性子波の干渉によりその散乱断面積が増加する。この干渉性散乱を利用した中性子反射材料としてダイヤモンドナノ結晶(DNP)が現在注目されている。近年直径5nm程度のDNPが安価に入手可能になっており、中性子反射材への応用が期待されている。本研究では市販で購入したDNP結晶を用いた。DNP結晶は密度0.5 g/cm3の通常粉末状であるが、プレス加工を行うことで1.1 g/cm3の固形に整形することに成功した。その中性子微分散乱断面積の測定を行い、干渉性散乱により断面積が12C単体の場合に比べ約2,500倍に増加することを確かめた。中性子は電荷をもたないため強い透過力を持ち、また、熱中性子のドブロイ波長が1.8Åという一般的な固体の原子間距離と同程度の波長をもつため、イメージングや中性子散乱を利用した構造解析等に幅広く用いられている。本研究では、干渉性散乱による散乱断面積増幅効果を利用した新しい概念の中性子減速材の開発とその原理実証を目的とする。中性子が結晶のような原子間隔の揃った物質と散乱する場合には中性子波の干渉により、その散乱断面積が増加することが知られている。本研究ではダイヤモンドナノ結晶を中性子減速材に組み込むことにより中性子源の効率を飛躍的に増大させることを目標とする。ダイヤモンドナノ結晶は主に産業用途として近年広く用いられており、その種類も用途によって様々なものが市販されている。ダイヤモンドナノ結晶として、その仕様からエアブラウン社のナノダイヤ結晶を選定した。J-PARC物質生命科学実験施設の高強度全散乱装置NOVAを用いて中性子散乱データを取得、評価を行う予定であったが、トラブルにより延期されている。2016年前期のビームタイムは一般課題として承認された。最適化したダイヤモンドナノ結晶減速材を実際に設計、作成し、小型中性子源減速材としての性能評価を行う予定である。パルス中性子源であるため飛行時間法から減速材内部で散乱の様子が解析可能である。平成27年度に飛行時間法の試験を行い、期待通りの性能を得た。予定ではJ-PARC中性子ビーム実験2015年後期を申請する予定であったが、中性子源トラブルのため、2015年後期の募集は中止された。2016年前期のビームタイム課題として申請を行い、承認された。以上から計画が約半年遅れている。ダイヤモンドナノ結晶はその量子的効果により小さい運動量の中性子に対して通常の1000倍以上の散乱断面積を持つ。この性能を正しく評価し新しい中性子反射材としての利用を促進することが本研究の目的である。2016年度はダイヤモンドナノ結晶の高密度サンプルの作成に成功し、その微分散乱断面積の測定した。1)ダイヤモンドナノ結晶の高密度化:ダイヤモンドナノ結晶は通常粉末状であり、0.40.5g/cm3とダイヤモンド密度の1/6程度しかない。反射材として大きな反射率を得るにはより高密度の状態であることが望ましい。そこでダイヤモンドナノ結晶の粉末を150-300MPaで加圧し、1.1g/cm3と2倍以上の密度を得ることに成功した。2)微分散乱断面積および全散乱断面積の測定:J-PARC中性子全散乱装置(NOVA)のビームタイムに公募し、2016年前期と後期の2回のビームタイムを取得した。そこでダイヤモンドナノ結晶の微分散乱断面積および全断面積を測定した。NOVAは小核から高角までの散乱中性子検出器及び透過検出器を持つ。2016年前期の実験ではパルス中性子の次パルスがオーバーラップする効果により正確なデータが取得できなかったが2016年後期には次パルスを遮蔽するテールカッターの最適化を行いこの問題を解決し、断面積の測定に成功した。微分散乱断面積の積分と全断面積は10%程度の精度で一致した。断面積は粒子サイズから計算で予測されるものと考えて矛盾のない結果が得られた。サンプルとして低密度の粉末と圧縮した個体サンプルの2つの測定を行ったが系統誤差(10%)以上の違いは見られなかった。3)中性子反射効果の粒子輸送シミュレーションによる計算:粒子輸送シミュレーション(Phits)に今回測定したダイヤモンドナノ結晶の微分散乱断面積を入力し、反射シミュレーションを行えるよう計算環境の構築を行った。2015年度後期にJPARCのビームタイムを申請予定であったが、ターゲットトラブルのため公募が出なかった。その為断面積の測定が半年ずれ込んだ。そのため計画が全体として半年送れた状態にある。ダイヤモンドは3.5 g/cm3とグラファイトの2.2 g/cm3と比べ非常に高い密度を持ち、原子核数密度という意味でもあらゆる物質の中で最大である。直径350 nmといったナノサイズのダイヤモンドは超精密研磨低砥粒や樹脂・セラミックスなどの強化成分といった工業用途に開発されており、粒径の揃った純度の高いものが近年安価に入手できるようになり、中性子反射材の材料として現実的に利用できるようになっている。本研究では2016年度に市販で購入したダイヤモンドナノ結晶の粉末を150-300MPaで加圧し、1.1g/cm3と2倍以上の密度を得ることに成功し、その微分断面積の測定をJ-PARC BL21(NOVA)で行っている。NOVAには上流、下流に2台のGEM検出器が実装されており、透過率により全断面積を測定できる。

この全断面積の測定および散乱検出器バンクでの測定値を比較し無矛盾な値を得た。2017年度はその中性子散乱断面積の運動量移行分布から粒径分布を導出する解析を行った。非干渉性散乱との比較を行うことにより、干渉性散乱は半径2.5 nmの粒子による影響が大きく、また全体の1/2程度が干渉性散乱に寄与していないということがわかった。観測された粒径分布を透過型顕微鏡画像(TEM)と比較した。結果、実際に得られた干渉のサイズはTEM像から得られた粒径よりも小さいことがわかった。実際のDNP粒径と干渉性散乱のサイズは必ずしも一致していない可能性が示唆される結果となった。中性子が大きさの揃った物質と散乱する場合、中性子波の干渉によりその散乱断面積が増加する。この干渉性散乱を利用した中性子反射材料としてダイヤモンドナノ結晶(DNP)が現在注目されている。近年直径5nm程度のDNPが安価に入手可能になっており、中性子反射材への応用が期待されている。本研究では市販で購入したDNP結晶を用いた。DNP結晶は密度0.5 g/cm3の通常粉末状であるが、プレス加工を行うことで1.1 g/cm3の固形に整形することに成功した。その中性子微分散乱断面積の測定を行い、干渉性散乱により断面積が12C単体の場合に比べ約2,500倍に増加することを確かめた。本研究の遂行のためには、ナノダイヤモンドの中性子散乱を精度良く抑えることが必要であり、可能な限り早く中性子散乱データの取得を行う予定である。また、中性子散乱以外の評価も並行して行う。評価用の中性子源KUANSは受け入れ可能な状況にある。性能評価は数種類の異なる減速材を入れ替え、その差分を測定することにより行う。ボイド、ダイヤモンドナノ結晶のみ、ポリエチレン+ダイヤモンドナノ結晶といった種類の測定を想定している。シミュレーションを用いて評価実験に最適なセットアップを構築する。KUANSにて評価実験を行い、シミュレーションと比較することで解析を行う。現在断面積の評価が実際に中性子反射材として利用するためのダイヤモンドナノ結晶を購入する。反射材として原理実証を行うための容器をシミュレーションをもとに設計、作成する。小型中性子源を用いた実験を行う。中性子物理J-PARC中性子源トラブルのため、予定していた測定ができなかった。それに伴うサンプルの選定が未実施であるため、予算の繰り越しを行う。2015年度後期にJPARCのビームタイムを申請予定であったが、ターゲットトラブルのため公募が出なかった。その為断面積の測定が半年ずれ込んだ。そのため計画が全体として半年送れた状態にある。サンプルの測定を行った後、合わせて中性子を用いないサンプルの性能試験を行う。実際に中性子反射材として利用するためのダイヤモンドナノ結晶を購入する。
多倍数性フナにおける雌性クローン生殖の分子機構

日本の多倍数性フナ(通称ギンブナ)は脊椎動物としては極めて稀な雌性生殖によって、代々雌が体細胞クローンと同等のクローン仔を産み継ぐ。これは発生生物学的に貴重であるばかりでなく、簡便かつ効率的なクローン動物の量産という応用も展望できる重要な実験動物である。このフナでは、現象面では減数第1分裂を省略して体細胞と同一ゲノムの卵を産み、更に発生の刺激の為に卵内に進入した精子の核膜は破壊されず、その結果閉じこめられた精子ゲノムは胚発生に全く関与しないことが既に知られている。本研究ではこの分子機構の解明に向けて、DNA・遺伝子の解析によって雌性生殖フナの特異なゲノム構成の分子系統学的分析を行うと共に、2倍体で通常の有性生殖を行う「2倍体ギンブナ」と雌性生殖フナとの遺伝子発現の比較から雌性生殖生殖を可能にする特異的遺伝子の探索をした。その結果、全国から集めた多数の個体、及び他亜種フナ、キンギョについて、ミトコンドリアDNAのD-ループ配列解析や、本研究で得たものと既に発見していた各種DNA(多型)マーカーの異同・存否、鋭敏なプライマーを用いたRAPD-RCRパターンを指標に、日本の3・4倍数性フナの母性ゲノムの起源をほぼ特定し、又、3倍性ゲノムが2倍体ギンブナゲノムとキンギョゲノムの双方に強く関連していることを示した。更に、主要な細胞周期関連遺伝子であるwee1遺伝子とWee1アミノ酸配列の詳細な解析を行うと共に、有性生殖・雌性生殖双方の卵巣で発現しているcDNAの相互サブトラクションで発現に差異の見られたcDNAの塩基配列解析と発現態様の解析によって、雌性生殖に関与している可能性の高い4種の遺伝子を得た。(1)雌性生殖関連遺伝子の探索雌性生殖系3倍体(3n)フナと有性生殖系2倍体(2n)フナの各卵巣で発現している遺伝子をディファレンシャルディスプレイ法により比較した。3n及び2nフナ各5個体の卵巣からmRNAを抽出し、ランダムへキサマー及びオリゴdTプライマーと逆転写酵素によりcDNAを作製した。各cDNAを鋳型として20種類の任意プライマー(デカマー)の組合せ(190通り)でPCRを行い、その増幅産物を電気泳動により分離した。発現差のみられた12ヶのバンドについてクローニングし、塩基配列を決定した。また、これらのジゴキシゲニン標識プローブを作製し、各倍数性フナに対してノーザンブロットハイブリダイゼーションを実施した。しかし、3n(または2n)フナ卵巣特異的な遺伝子発現は確認できなかった。これまで、目的の遺伝子は単離できていない。今後は、他の生物における既知の遺伝子(細胞周期関連遺伝子など)情報からいくつかの候補遺伝子を選定し、フナにおいてその遺伝子をクローニングし、倍数性による発現差異を調べることも検討する。(2)雌性生殖フナゲノムに特徴的なDNA領域の探索3nと2nの各フナからゲノムDNAを抽出し、制限酵素(BglII,HindIII,BamHI)で消化しアダプター付加後PCR増幅を行った。生じた各DNA断片(アンプリコン)を用いてサブトラクティブハイブリダイゼーションを行い(RDA:representational difference analysis法)、3n由来のDNA領域を得た。これらのクローニング、塩基配列の決定を行い、さらにプローブを作製して各種コイ科魚類のアンプリコンに対してサザンブロットハイブリダイゼーションを行った。その結果、大多数の多倍数性フナとキンギョにのみ共通するDNA多型があることがわかった。引き続きRDA法によるDNAマーカーの探索を行う。1雌性生殖関連遺伝子の探索3倍体(3n)フナが雌性発生できる大きな要因の一つは、卵成熟過程において第一減数分裂を回避していることにある。

そこで、この分子機序解明への一環として、細胞分裂周期の制御因子として知られているWee1キナーゼに注目し、そのcDNAおよび遺伝子の単離を行った。ギンブナ卵巣からRNAを抽出し、既知のXenopusおよびマウスwee1のcDNA配列情報から設定したdegenerateプライマーを用いて、RT-PCRを行い目的の断片(750bp)を得た。塩基配列決定後、3 ́および5 ́RACE法を行いそのcDNA全長の塩基配列(ORF領域1578bを含む約1.9kb)を決定した。既知生物のWee1アミノ酸配列を基に系統樹を作成したところ、本配列は体細胞分裂型ではなく減数分裂型wee1由来であることがわかった。また、cDNAの3 ́および5 ́UTR領域の配列情報からプライマーを設定してゲノムDNAを鋳型にlong-PCRを行った。その結果、12個のエキソンを含む約6.3kbpの遺伝子断片を得た。2雌性生殖フナゲノムに特徴的なDNA領域の探索国内4箇所から採集した多倍数性ギンブナ81個体をRAPD-PCR法による多型パターンに基づいて31のクローン系統に分類した。3nギンブナゲノムから2nギンブナゲノムをサブトラクション(RDA法)することにより得られた2種類のDNA分子は、ハイブリダイゼーション解析の結果、約80%のクローン系統の多倍数性ギンブナと調べたすべてのキンギョに共通して存在するDNA制限酵素多型マーカーであることがわかった。また、副次的ではあるが、キンギョゲノムをサブトラクションして得られた1種類のDNAマーカーも約80%のクローン系統の多倍数性ギンブナに存在している他は一部のキンギョにしか認められなかった。さらに、ある特定の3倍体ギンブナクローン系統と一部の2倍体にしか認められない多型マーカーも得られた。これら結果から、3nギンブナゲノムにおけるキンギョ祖先種ゲノムの強い関与と2倍体ギンブナゲノムとの共通性が示唆された。1雌性生殖関連遺伝子の探索(1)フナ卵巣から昨年度単離した減数分裂型Wee1(細泡分裂制御因子の一つ)遺伝子の発現をRT-PCRおよびノーザンハイブリダイゼーション法により調べた。その結果、卵巣組織特異的発現は確認できたが、雌性生殖系3倍体(3n)フナと有性生殖系2倍体(2n)フナで有意な発現量の差は認められなかった。(2)雌性生殖3n卵と有性生殖2n卵で発現量の異なる遺伝子を網羅的に同定するために、各卵巣から調製したcDNAを用いて相互にサブトラクションを行い、計334個の分子クローンを得た。塩基配列決定、相同性検索を行い、計236種類の遺伝子(132の既知遺伝子と104の未知遺伝子)に分類した。このうち、細抱周期に関係又はクローンが重複するもの、計11種類の遺伝子についてRT-PCRとノーザン法による発現解析を行った。その結果、1つの遺伝子(DOCK遺伝子に相同)が3n卵に、2種類の遺伝子(ApoE遺伝子に相同と機能未知)が2n卵に特徴的に発現していることか確認できた。これら3種類の遺伝子は、雌性生殖に関連する有力な候補遺伝子である。2雌性生殖系3nフナのゲノムDNAの特徴
網膜双極細胞の受容野形成のシナプス機構

【研究目的】本研究の所期の目的は,申請者らが開発したcAMP細胞内注入法によってgap junctionを遮断し,網膜双極細胞受容野形成のシナプス機構を解明することであった。ところがcGMPもまた同様な遮断効果を持つことが判明したので,急遽研究を最近トピックスとなっているnitric oxide(NO)の作用の解明に転換した。すなわちNOはcGMPの合成酵素guanylate cyclaseのactivatorであって,内皮細胞由来血管弛緩因子もNOであること,また神経系においては長期増強,記憶,神経ネットワ-クの形成などに関与すると云われており,gap junctionに対するNOの効果を明らかにすることは緊急かつ重要と考えたからである。【実験方法・結果・考察】NOはLーアルギニン:シトルリン代謝回路で発生するので,アルギニンを細胞内微小電極から電気泳動的にカメおよびコイの網膜水平細胞に注入した。少量のアルギニンの注入によってgap junctionが遮断され,細胞の入力抵抗は著明に上昇した。従って微小電極から電流を流すと細胞は容易に分極し,正確なIーV曲線を記録して,光応答の逆転電位は0mV付近と測定された。また蛍光色素Lucifer Yellowを細胞内に注入たところ,アルギニンによってdye couplingが完全に遮断されることが形態学的にも証明され,NOの作用に新たなデ-タを加えることが出来た。本法は環状ヌクレオチド注入法に比して容易に施行することが出来,将来網膜以外の神経系や非神経系組織のgap junctionの機構と,その作用の解明に広く応用されることが期待される。
ゲノム情報で解き明かすジュズカケハゼ種群の多様性と進化プロセス

本研究は,ジュズカケハゼ種群の分類と進化的重要単位を明らかにして今後の保全措置に役立てること,種群内で生じているミトコンドリアゲノムの遺伝子浸透の適応的意義と,ミトゲノムと核のミトコンドリア関連遺伝子の不和合を解消するための共進化プロセスを明らかにすることを目的とする.多数の中立的核DNA情報を取得し,頑健な系統樹または遺伝的集団構造を推定し,種や進化的重要単位などの多様性を明らかにして記載する.さらに遺伝子浸透したミトゲノムと核ゲノムの間の不和合解消のプロセスをゲノム情報に基づいて解明する.本研究で得られる知見は,今後の保全措置に役立てられるのみならず,進化生態学におけるモデルケースになる.本研究は,ジュズカケハゼ種群の分類と進化的重要単位を明らかにして今後の保全措置に役立てること,種群内で生じているミトコンドリアゲノムの遺伝子浸透の適応的意義と,ミトゲノムと核のミトコンドリア関連遺伝子の不和合を解消するための共進化プロセスを明らかにすることを目的とする.多数の中立的核DNA情報を取得し,頑健な系統樹または遺伝的集団構造を推定し,種や進化的重要単位などの多様性を明らかにして記載する.さらに遺伝子浸透したミトゲノムと核ゲノムの間の不和合解消のプロセスをゲノム情報に基づいて解明する.本研究で得られる知見は,今後の保全措置に役立てられるのみならず,進化生態学におけるモデルケースになる.
T細胞におけるTRAF5のS-パルミトイル化機序とその生理的意義の解明

昨年度までにTNF receptor-associated factor 5(TRAF5)とZdhhc15の結合に関して、TRAF5-gp130結合により見出されたTRAF5結合モチーフ(SXXE-X8-EEXXED)を介さず、アミノ末端側を介して会合していることを明らかした。また、正常マウスT細胞におけるZdhhc分子群のmRNA発現レベルの解析結果を元に最も高発現していることが示されたZdhhc18に着目し、T細胞ハイブリドーマにおけるZdhhc18ノックダウンの影響を検討したが、T細胞抗原受容体に対する特異的抗原ペプチド刺激におけるIL-2産生能に対してZdhhc18発現量の変化は有意な変化を与えなかったと報告した。本年度はTRAF5に対するS-パルミトイル化を担うDHHCファミリーパルミトイルアシル転移酵素群(PATs)を検討する目的で、正常マウスT細胞におけるmRNA発現レベルを参考に幾つかのZdhhc分子の発現ベクターを作製し、その高発現下におけるTRAF5のS-パルミトイル化レベルの変化を検証した。正常マウスT細胞ではZdhhc18の他にZdhhc5,6,7,20の発現レベルが高く、Zdhhc13やZdhhc15はそれ程高い発現レベルではなかった。比較検討のため上述したZdhhc分子群の発現ベクターを作製し、HEK293T細胞における発現を確認したところZdhhc6以外は非常に高いレベルでのタンパク質発現を確認することが出来た。これらを利用して、HEK293T細胞における幾つかのZdhhc分子群の高発現によるTRAF5のS-パルミトイル化レベルへの影響を免疫沈降acyl-biotinyl exchange(IP-ABE)法により検討を行った結果、再現性をもってS-パルミトイル化レベルを増減させるものは認められなかった。平成30年度における本研究課題の研究計画では、1:TRAF5に対するS-パルミトイル化を担うPATsの同定、2:PATsがT細胞機能に及ぼす影響の解析等を予定していた。しかしながら、申請者の研究拠点が当初の所属先から大きく研究環境が異なる国外(ガーナ共和国、ガーナ大学野口記念医学研究所ウイルス部)に移り、実験機器や設備、実験試薬の入手経路、実験材料の運搬の可否等といった研究環境が大きく変化した。そのため、予定していた上記2に関してはマウスの飼育施設が不完全でかつ実験用マウスの入手が極めて困難であるのに加え、マウスT細胞を高純度で効率的に取得する機器が施設内に存在しないなどの理由から遂行困難であった。故に、現在の研究拠点の施設に存在する機器で行える実験で、尚且つ国外に運搬可能な実験試薬・実験材料で遂行できる研究計画に関連した一部の実験を行い幾つかの新しい結果を得た。平成31年度以降は、マウスを用いる実験およびT細胞を高純度に精製する実験に関しては現在の研究拠点では遂行することが極めて困難なため帰国時を利用して日本国内で行う予定である。一方で、T細胞におけるTRAF5のS-パルミトイル化の検出は細胞溶解液を用いて行うことが可能な実験であるので、凍結した細胞溶解液をドライアイスにて運搬しその後の解析を現研究拠点行う予定である。TRAF5に対するS-パルミトイル化を担うPATsの同定においては、HEK293T細胞へのTRAF5の導入により比較的高レベルのS-パルミトイル化が認められ、それ故に共発現させたZdhhc分子群によるS-パルミトイル化の相加効果を検出するのが困難である可能性が考えられた。そのため、TRAF5安定発現細胞株もしくは同由来の単クローン化細胞株を用いた系での検討や、T細胞ハイブリドーマを用いた各種PATsのノックダウンを用いた評価系に変更することでこの問題の解決を図る予定である。また、TRAF5のS-パルミトイル化レベルと細胞内局在の関連性に関しては、当初予定していた共焦点傾向顕微鏡や超遠心を用いた手法は現在の研究拠点では困難であるため、細胞分画キットを用いて形質膜分画内外に存在する野生型および各種TRAF5変異体の発現レベルを比較する事でS-パルミトイル化による細胞内局在への影響を評価する方針に変更予定である。次に、正常マウスT細胞におけるZdhhc分子群のmRNA発現レベルの解析により最も発現レベルが高いことが示されたZdhhc18に着目し、T細胞ハイブリドーマを用いてノックダウンの影響を検討した。Zdhhc18を標的とする3種類のショートヘアピンRNA発現ベクターのうち、2種類でZdhhc18 mRNAレベルを半減させることが出来たので、MCC(moth cytochrom c)特異的T細胞ハイブリドーマのZdhhc18をノックダウンしMCCペプチド刺激に対するIL-2産生能の変化をCTLL-2細胞増殖アッセイにて測定したところ、コントロールshRNA処理群と比較してIL-2産生の有意な変化は認められなかった。平成29年度における本研究課題の研究計画では、1:T細胞におけるTRAF5のS-パルミトイル化の検出、2:TRAF5のS-パルミトイル化レベルと細胞内局在の関連性の解析、3:TRAF5のS-パルミトイル化とタンパク質安定性の関連の評価、4:GITRシグナル伝達におけるTRAF5のS-パルミトイル化の役割の解析を予定していた。しかしながら、申請者の研究拠点が国外(ガーナ共和国、ガーナ大学野口記念医学研究所ウイルス部)に移り、実験機器や設備、実験試薬の入手経路、実験材料の運搬の可否等といった研究環境が大きく変化した。

そのため、予定していた上記1-4に関しては1、3及び4:マウスの飼育施設が不完全でかつ実験用マウスの入手が極めて困難であるのに加え、マウスT細胞を高純度で効率的に取得する機器が施設内に存在しないなどの理由から遂行困難であった、2:共焦点蛍光顕微鏡および超遠心機が施設内に存在せず遂行困難であった。故に、現在の研究拠点の施設に存在する機器で行える実験で、尚且つ国外に運搬可能な実験試薬・実験材料で遂行できる平成30年度以降の研究計画に関連した一部の実験を行い幾つかの新しい結果を得た。昨年度までにTNF receptor-associated factor 5(TRAF5)とZdhhc15の結合に関して、TRAF5-gp130結合により見出されたTRAF5結合モチーフ(SXXE-X8-EEXXED)を介さず、アミノ末端側を介して会合していることを明らかした。また、正常マウスT細胞におけるZdhhc分子群のmRNA発現レベルの解析結果を元に最も高発現していることが示されたZdhhc18に着目し、T細胞ハイブリドーマにおけるZdhhc18ノックダウンの影響を検討したが、T細胞抗原受容体に対する特異的抗原ペプチド刺激におけるIL-2産生能に対してZdhhc18発現量の変化は有意な変化を与えなかったと報告した。本年度はTRAF5に対するS-パルミトイル化を担うDHHCファミリーパルミトイルアシル転移酵素群(PATs)を検討する目的で、正常マウスT細胞におけるmRNA発現レベルを参考に幾つかのZdhhc分子の発現ベクターを作製し、その高発現下におけるTRAF5のS-パルミトイル化レベルの変化を検証した。正常マウスT細胞ではZdhhc18の他にZdhhc5,6,7,20の発現レベルが高く、Zdhhc13やZdhhc15はそれ程高い発現レベルではなかった。比較検討のため上述したZdhhc分子群の発現ベクターを作製し、HEK293T細胞における発現を確認したところZdhhc6以外は非常に高いレベルでのタンパク質発現を確認することが出来た。これらを利用して、HEK293T細胞における幾つかのZdhhc分子群の高発現によるTRAF5のS-パルミトイル化レベルへの影響を免疫沈降acyl-biotinyl exchange(IP-ABE)法により検討を行った結果、再現性をもってS-パルミトイル化レベルを増減させるものは認められなかった。平成30年度における本研究課題の研究計画では、1:TRAF5に対するS-パルミトイル化を担うPATsの同定、2:PATsがT細胞機能に及ぼす影響の解析等を予定していた。しかしながら、申請者の研究拠点が当初の所属先から大きく研究環境が異なる国外(ガーナ共和国、ガーナ大学野口記念医学研究所ウイルス部)に移り、実験機器や設備、実験試薬の入手経路、実験材料の運搬の可否等といった研究環境が大きく変化した。そのため、予定していた上記2に関してはマウスの飼育施設が不完全でかつ実験用マウスの入手が極めて困難であるのに加え、マウスT細胞を高純度で効率的に取得する機器が施設内に存在しないなどの理由から遂行困難であった。故に、現在の研究拠点の施設に存在する機器で行える実験で、尚且つ国外に運搬可能な実験試薬・実験材料で遂行できる研究計画に関連した一部の実験を行い幾つかの新しい結果を得た。