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超短パルスレーザー光による非線形効果を利用した新しい分析法に関する基礎研究

フェムト秒領域における顕著な現象として、パルスの時間的広がりを生じる群速度分散(GVD)、スペクトルが広がる自己位相変調(SPM)が挙げられる。これら2つの現象を適切に利用すると、物質の有無やその存在場所に関する情報を同時に得られると予測される。本研究では、超短パルスレーザー光による非線形光学効果を利用した新しい分析法の原理について詳細に検討することを目的とした。平成14年度には、前年度に作成した数値計算シミュレーションを改良することで実際の分析系への適用を試みた。実際の分析では、水溶液中で行うことが多いとため、水の屈折率データからGVDとSPMを導くことを試みた。しかしながら、昨年度でも問題となった高速フーリエ変換(FFT)の時間分解能と周波数分解能を両立することが出来ない問題点が顕著となった。FFTによらない方式等他の計算方法も試みたが、未だに解決法を見いだせていない。また、初歩的なFFTによる計算の結果、GVDやSPMを検出が可能な程度変化させるには、現状の分析法の濃度の下限より数桁高い濃度でなければならず、実際の分析法としては現実性に乏しいことも判明した。そこで、超短パルス光を利用する他の分析法について検討した。光ファイバーを利用する顕微鏡システムに関して、生体関連分子の分析の基礎実験をCWレーザーとナノ秒パルスレーザーを用いて行った。その結果、基礎的な結果が得られ、学術雑誌に公表した。この発表した結果は、例えば細胞中は様々な屈折率の異なる分子が数多く存在するため、将来的にフェムト秒レーザーを用いることで、GVDやSPMを利用した分析実現の可能性を示唆できたと考えている。サブピコ・フェムト秒領域における顕著な現象として、群速度分散(GVD)、自己位相変調(SPM)が挙げられる。GVDは光伝搬物質の屈折率分散により生じ、パルスの時間的広がりとなって観測される現象である。SPMは光自身の電磁界強度により、光伝搬物質の屈折率が変調受け、その結果スペクトルが広がってしまう現象である。これら2つの現象を適切に利用することにより、新しい計測法を確立できる可能性があることを申請者は見出した。すなわち物質の存在する媒質中を通過したレーザー光のGVDとSPMを評価することで、物質の有無、その存在場所に関する情報を同時に得られると予測される。本研究では、超短パルスレーザー光による非線形光学効果を利用した新しい分析法を提案し、その原理について詳細に検討するとともに、基礎実験を行うことを目的とする。平成13年度には、本計測法で用いるGVD、SPM、吸収等を考慮した空間と時間に関する複雑な偏微分方程式の数値計算による解法を試みた。このために2台の高性能パーソナルコンピューターを平成13年度設備備品として購入した。計算では最初に光ファイバー中での超短パルス光の伝搬について、文献を参考にして再現を試みた。その結果、光ファイバー中におけるパルス伝搬に関しては、問題なくコンピューター上で再現できた。ただし、高速フーリエ変換(FFT)を利用するために、周波数的に詳細に見ようとすると時間情報が欠落し、時間に重きを置くと周波数情報が不足するという問題点が明らかとなった。現在、この点について改善策を検討している。また、光ファイバーは石英などの固体材料でできているが、本法は液体媒質中で行う必要があるため、計算に不可欠な種々の物理常数を集めているところである。来年度は、実際の実験条件に近い条件で数値計算を試み、その結果に基づき実験まで行いたいと計画している。
脂質マシナリーの可視化

脂質および脂質動態の可視化について、以下の成果を出した。1)ヒトの腹部大動脈瘤を質量顕微鏡で解析し、動脈外膜内のvasa vasorumがトリグリセリドの異常蓄積によるアテローム硬化を起こしていることを見出した(Tanakaら)。2)パーキンソン病モデル動物を質量顕微鏡で解析し、神経変性末端におけるスルファチドの異常蓄積を見出した(Onishiら)。3)Dorfman-Chanarin症候群の皮膚を質量顕微鏡で解析し、セラミドの代謝異常の可視化に成功した(Goto-Inoueら)。4)甲状腺癌の組織を質量顕微鏡で解析し、特定のホスファチジルコリンが癌部において増加していることを発見した(Ishikawaら)。5)バナナエビの卵巣を質量顕微鏡で観察し、卵巣成熟時の脂質組成および分布の変化を明らかにした(Chanselaら)。6)脊髄損傷モデルを質量顕微鏡で解析し、リン脂質と脂質代謝物であるプロスタグランジンの時空間的な分布変化を可視化することに成功した(Hanadaら)。7)マウス骨格筋を質量顕微鏡で解析し、筋収縮時に脂質組成が劇的に変化することを発見した(Goto-Inoueら)。8)下腿部大伏在静脈の静脈瘤を質量顕微鏡で解析し、リンパ管の消失と脂質の異常蓄積を見出した(Tanakaら)。実際のヒト病理サンプルを用いた解析では、他の手法では得ることのできない疾患の本質に迫る貴重な知見を報告できた点で医学的に非常に意義深い。動物モデルを用いた解析では、ヒトサンプルでは不可能な時間変化を捉えることに成功し、生理学的および病理学的な脂質代謝の時空間動態を提示できた点に,学術的および医学的な大きな意義がある。上記の原著報告にくわえ、質量顕微鏡による脂質解析に関する方法論の総説や解説論文を多数発表した(Miyamuraら;Saitoら;Gotoら;Nakanishiら;Setou)。24年度が最終年度であるため、記入しない。脂質および脂質動態の可視化について、以下のような成果が出た。1)統合失調症患者の死後脳を質量顕微鏡で解析し、前頭前皮質においてリン脂質の分布が異常であることを見出した(Matsumotoら報告)。2)マウスの舌を質量顕微鏡で解析しスフィンゴ脂質の特徴的分布の可視化に成功した(Enomotoら報告)。3)動脈硬化症の標本を質量顕微鏡で解析し、新しい組織病理学的特徴を見出した(Zaimaら報告)。4)正常ヒト死後脳を質量顕微鏡で解析し、大脳の灰白質と白質においてヒドロキシル化サルファチドと非ヒドロキシル化サルファチドの分布が大きく異なることを見出した(Yukiら報告)。5)TLCプロット法と質量顕微鏡を組み合わせ、ヒト脳のガングリオシド分子種の分離・同定に成功した(Valdes-Gonzalezら報告)。6)下肢静脈瘤を質量顕微鏡で解析し、脂質の局所的な蓄積とリンパ管の消失を発見した(Tanakaら報告)。7)領域の班員である新潟大学大学院医歯学総合研究科遺伝性皮膚疾患研究室との共同研究として、若年、中年、壮年期のヒトからの毛髪を質量顕微鏡で解析し、加齢に伴って変化する脂質分子種の可視化および同定に成功した(Wakiら報告)。なお本報告は加齢の分子マーカー候補を発見したとして新聞各紙で報道された。8)マウス精巣を質量顕微鏡で観察し、精巣の発達に伴う脂質分子種の分布変化を明らかにした(Goto-Inoueら報告)。9)術後脳浮腫に対する様々な灌流液の効果を質量顕微鏡により評価し、効果のある液体を同定した。この発見は今後、術後脳浮腫の予防に結びつくと期待される。10)培養神経細胞を質量顕微鏡で解析し、神経軸索の基部と遠位部においてリン脂質の分子種の組成が大きく異なること、さらにはその脂質分子種の差違がアクチン繊維のダイナミクスにより生み出されていることを発見した(Yangら報告)。これは質量顕微鏡技術により細胞生物学レベルで脂質分布が可視化された世界で初めての知見であり、質量顕微鏡の新たな可能性を示した。

実際のヒト病理サンプルを用いた解析では、他の手法では得ることのできない疾患の本質に迫る貴重な知見を報告できた点で医学的に非常に意義深い。動物モデルを用いた解析では、ヒトサンプルでは不可能な時間変化を捉えることに成功し、生理学的および病理学的な脂質代謝の時空間動態を提示できた点に,学術的および医学的な大きな意義がある。上記の原著報告にくわえ、質量顕微鏡による脂質解析に関する方法論の総説や解説論文を多数発表した(Miyamuraら;Saitoら;Gotoら;Nakanishiら;Setou)。24年度が最終年度であるため、記入しない。脂質および脂質代謝に関する報告をすでに原著論文に15報発表した。また、領域で推奨されている領域の班員同士の共同研究についても、新潟大学大学院医歯学総合研究科遺伝性皮膚疾患研究室との共同研究がすでに原著論文として公表済みである。さらに領域が推奨する若手の活躍という観点でも、学部生が筆頭著者として原著論文を発表した。以上のように、当初計画を上回る勢いで研究が進展している。当初の計画以上に研究が進展しているため、最終年度にあたる平成24年度はより挑戦的な研究に取り組みたい。例えば、脂質代謝異常による疾患の治療を目指したモデル動物の作出やその解析などが学術的にも臨床応用面でも非常に重要になると考えられる。あるいは質量顕微鏡と次世代シーケンサを組み合わせた新しい解析手法を確立し、そこから既存の概念を超える新しいブレークスルーをもたらしたい。
弱視学生支援システムを整備・拡充するための理解促進プログラムの開発

本研究の目的は、弱視学生支援システムを整備・拡充するための理解啓発プログラムを作成することであった。このため,研究1では、弱視学生が大学生活で直面する困難さ、その解決手段が何か、また、弱視学生が大学から提供してもらっているサービスが何かを調査した。研究2では弱視学生支援サービスに対する健常学生の態度構造を個人要因との関係から検討した。研究3では、弱視学生支援サービスに対する健常学生の態度を、補助具活用場面との関係から検討した。本研究により、理解啓発プログラムを開発するための基礎情報が得られた。本研究の目的は、弱視学生が求める合理的配慮の内容を具体化した上で、それに応じた学習支援サービスに対する健常学生の態度と、それを受容的に変容させる情報が何かを、補助具活用場面との関係から検討し、弱視学生支援システムを整備・拡充するための理解啓発プログラムを開発することである。平成27年度は、次年度から行う本格的研究の準備段階として、高等教育における弱視学生の支援サービスについての実態調査を当事者支援団体の協力を得て実施した。47名の弱視学生(在学生及び卒業後10年以内の者)を対象に、面接調査を実施し、(1)大学生活における困難状況、(2)その解決手段(障害開示・援助要請状況等)、(3)大学に求めた(あるいは、提供してもらった)支援サービス等について聴取し、(1)と(2)については日本特殊教育学会第53回大会、及び、第16回日本ロービジョン学会学術総会で発表した。また、(3)については研究紀要にまとめた。弱視学生は障害学生の中でも数が少なく、目立たない。そのような中、当事者支援団体(視覚障がい者ライフサポート機構“viwa")と連携をとったことにより、多くの弱視学生の実態を調査でき、次年度の質問紙作成に欠かせない支援サービスのデータベースを作成することができた。このため、おおむね、研究は順調である。本年度は、弱視学生が求める支援サービスに対する健常学生の意識と個人要因との関連を検討し、どのような健常学生がどのような支援サービスを受容・拒否しやすいかを解明した。418名の健常学生に、個別の留置き形式による質問紙調査を実施し、昨年度の事例調査に基づき作成した弱視学生の支援サービス項目(31項目)と個人要因(会話:視覚障害者との会話経験、友人:障害者の友人の有無、関心:弱視への関心の有無、職種:将来の希望職種)について尋ねた。すべての支援サービス項目に因子分析を行い、健常学生の態度構を検討したところ、授業支援に関する内容(授業支援因子:11項目)、成績評価に関する内容(成績評価因子:8項目)、組織的な支援に関する内容(組織支援因子:7項目)が抽出され、支援内容の多次元構造が確認された。どのような健常学生がどのような支援サービスを受容・拒否しやすいかを検討するため、各因子に基づく尺度を構成し、それぞれについて、尺度得点を従属変数に各個人要因を独立変数とする分散分析を行った。その結果、すべての尺度において、関心の有群が無群よりも、支援職群が一般職群よりも得点が高く、支援内容を受入やすいことが明らかになった。一方、組織支援尺度でのみ、会話の主効果が見出され,経験有群が無群の方が当該尺度の支援内容を受け入れやすいことが明らかになった。本研究の成果は、日本教育心理学会第59回総会(名古屋)でのポスター発表にて公表する予定である。平成28年度は、弱視学生支援サービスに対する健常学生の意識を測定するための尺度を構成し、それを用いて、弱視学生の支援サービスに対する健常学生の意識に及ぼす個人要因の関連を検討することを計画していた。概要で報告したとおり、計画に記した内容を順調に進め、研究実績を蓄積できていると評価できる。本研究の目的は、弱視学生が求める合理的配慮の内容を具体化した上で、それに応じた学習支援サービスに対する健常学生の態度と、それを受容的に変容させる情報が何かを、補助具活用場面との関係から検討し、弱視学生支援システムを整備・拡充するための理解啓発プログラムを開発する基礎資料を得ることであった。このため、H27年度は弱視学生の支援サービスについての実態調査を実施し、H28年度は弱視学生支援サービス尺度(授業支援尺度・成績評価尺度・組織支援尺度)を開発した。最終年度となるH29年度は、上記の尺度を活用し、弱視学生の補助具活用の違いが支援サービスに対する健常学生の態度に及ぼす効果を、支援サービス内容ごとに検討した。このため、まず弱視学生の読み、書き、移動の様子を視覚的に説明するための刺激条件、すなわち、一般補助具条件(タブレット)、伝統的補助具条件(弱視レンズ)、補助具なし条件(接近視)を作成し、それらを健常学生(N=268)に無作為に提示し、質問紙への回答を求めた。下位尺度ごとに各条件の得点を比較したところ、授業支援尺度と組織支援尺度では補助具なし条件の方が他の条件よりも有意に得点は高く、受容的態度であることが見出された。これは弱視学生が目を細めてものに近づく様子が見えにくさを伝えやすいためと推察できた。一方、成績評価尺度では、一般補助具条件が他の条件よりも得点が低く、拒否的態度であることが見出された。タブレットは一般家電であるため、見えにくさを補うための補助具類としては認知されにくいため、特に健常学生の競争意識が働きやすい成績評価に関わるサービスについては、理解が得られにくかったものと推察できた。

本研究により、弱視学生が支援サービスに対する健常学生の理解を得るためには、支援内容ごとに見えにくさを伝えるための手段を変える工夫が必要であることが示唆された。本研究の目的は、弱視学生支援システムを整備・拡充するための理解啓発プログラムを作成することであった。このため,研究1では、弱視学生が大学生活で直面する困難さ、その解決手段が何か、また、弱視学生が大学から提供してもらっているサービスが何かを調査した。研究2では弱視学生支援サービスに対する健常学生の態度構造を個人要因との関係から検討した。研究3では、弱視学生支援サービスに対する健常学生の態度を、補助具活用場面との関係から検討した。本研究により、理解啓発プログラムを開発するための基礎情報が得られた。次年度は高等教育における弱視学生の支援サービス内容を分類し、健常学生の支援意識を測定するための質問項目を作成する。その上で、弱視学生支援サービスに対する健常学生の態度に及ぼす個人要因の影響について検討を行う。平成29年度は、本年度開発した弱視学生支援サービス尺度を活用し、弱視学生の補助具活用の違いが支援サービスに対する健常学生の態度変容に及ぼす効果を、支援サービス内容ごとに比較検討する(研究3)。これにより、弱視学生がどのような補助具を使って見えにくさをアピールすれば、健常学生から理解・支援が得やすくなるかを解明する。特別支援教育平成28年度は、計画的に予算を執行したが、予定よりも消耗品が安く購入できたため、若干の次年度使用額が発生した。このため、設備・消耗品費用として、分析に用いる統計ソフト、動画刺激作成のための一般補助具(タブレット端末、拡大ソフト)及び特殊補助具(拡大読書器、弱視レンズ)が必要となる。また、昨年度までの研究成果発表、本年度の調査のための旅費が必要となる。この他、本年度の調査に用いる動画刺激を専門的に作成するため人件費(モデル謝金、動画撮影・編集担当者謝金)が必要となる。本年度の前半に上記の一般補助具及び特殊補助具を購入し、動画刺激の作成を行う。年度の後半は調査実施・分析のための人件費、成果発表のための旅費等の支出を計画している。なお、次年度使用額については、平成29年度の計画の中で使用する。
実証研究にもとづく受容論の刷新ー現代英国における文学テクストの生産・流通・受容ー

英文学研究において過去約90年間にわたり提示されてきた作品の受容をめぐる諸理論を批判的に再検討し、ある特定の歴史的・文化的文脈において文学テクストが意味を成すとはいかなる現象であるかを明らかにする。1990年代以降の英国の出版文化において一般読者とテクストとがいかに媒介されてきたかを実証的に研究することで、新たな理論の構築を目指す。
低分子量Gタンパク質Rac1の四肢形成制御機構の研究

Rac1は細胞外からのシグナルを細胞内に伝える分子スイッチとしての役割を果たしているRhoファミリー低分子量Gタンパク質である。昨年度、Rac1遺伝子を四肢未分化間葉系細胞特異的に欠損させたコンディショナルノックアウトマウスが骨の成長に重要であることを示唆した。今年度はin vitroの系で、骨芽細胞においてRac1が細胞内でどのような機能を有するか遺伝子発現の網羅的解析を行い検討した。マウス頭蓋骨由来初代培養骨芽細胞にRac1の機能を阻害する低分子化合物(NSC23766)を作用させ、マイクロアレイ解析(Affymetrix)を行った。その結果、N-Myc downergulated geneファミリーに属する遺伝子Ndrg1、タイトジャンクションに存在するタンパク質でRunx3によって発現が制御されていることが知られているClaudin1、細胞外マトリックスタンパク質で骨や歯の形成に重要であると考えられているPeriostin(Postn)、RTL3遺伝子ファミリーに属する転写調節因子Zcchc5に発現の低下が認められた。一方、抗酸化性タンパク質として知られているMetallothionein1,2 (Mt1, 2)、インテグリンファミリーIntegrin alpha 3(Itga3)、ERMファミリーに属する細胞の接着に関与すると言われているEzrinなどは発現の上昇が認められた。Rac1遺伝子を四肢未分化間葉系細胞特異的に欠損させたコンディショナルノックアウトマウスの大腿骨成長板における組織学的解析を行った。コントロールマウスの一次髄腔は石灰化前線から一次髄腔に向けて、縦方向に骨梁を形成していくが、コンディショナルノックアウトマウスでは、遅延しており、縦の分化形態にはまだ到達していなかった。また、一次髄腔において類骨の増加が見られ、皮質骨では石灰化骨の割合が非常に少なかった。これより石灰化の障害があると考えられた。以上の結果から、コンディショナルノックアウトマウスは、コントロールマウスと比較して、骨の成長が遅延していることが示唆された。Rac1遺伝子の機能を組織学的に検討できたため。Rac1遺伝子の硬組織細胞における細胞内シグナル伝達および標的遺伝子の同定を目標とする。細胞内シグナル伝達および標的遺伝子の同定を平成30年度に行うために未使用額が生じた。マイクロアレイを用いた標的遺伝子のスクリーニング実験や、細胞内シグナル伝達にかかわるであろうタンパクの過剰発現やノックダウン法実験に使用する試薬、機器、物品費にあてる予定である。
テトラヒメナのクエン酸合成酵素の多機能性

テトラヒメナの14nm繊維蛋白質の遺伝子をクローニングした結果、クエン酸合成酵素と高い類似性があることが明らかになった。そこで本年度は以下の4点について検討した。1)テトラヒメナのミトコンドリアよりクエン酸合成酵素を精製し、重合・脱重合によって精製した14nm繊維蛋白質と、酵素活性、抗原性、酵素活性に及ぼす抗14nm繊維蛋白質抗体の影響などを比較検討した。その結果、酵素活性の至適pH、至適KCl濃度、ATPによる阻害効果などが全く同じであった。抗原性も全く同じであり、クエン酸合成酵素の活性は抗14nm繊維蛋白質抗体で阻害された。以上のことより、これら2つの蛋白質は同一のものであると結論した。2)クエン酸合成酵素/14nm繊維蛋白質の重合・脱重合によって酵素活性がどのようになるかを検討した。その結果、重合すると活性は消失し、脱重合すると活性が出現することが判った。3)クエン酸合成酵素/14nm繊維蛋白質が、増殖速度が遅くなった時期から定常期にかけて、ミトコンドリア内で繊維束を形成することを発見した。定常期の細胞を新しい培養液に移すと増殖が始まり、ミトコンドリア内の繊維束が消失した。このことは細胞内の基質濃度が下がると繊維束が形成され酵素活性が低下し、基質濃度が上がると繊維束が消失し酵素活性が上昇することを示唆する。4)一つの蛋白質が全く異なる2つの機能を持つことが示唆されたが、遺伝子が1つか、あるいは類似した2つの遺伝子からそれぞれの蛋白質がコードされているのかを検討した。その結果、遺伝子もmRNAも1つであることが明らかになった。テトラヒメナの14nm繊維形成蛋白質は細胞質では細胞骨格として機能し、ミトコンドリアではクエン酸合成酵素として機能していることが示された。今年度は次の3点について検討した。1.一つの遺伝子にコードされた1種類の14nm繊維蛋白質が重合能とクエン酸合成酵素としての酵素活性を同時に持つかどうかを検討する。2.14nm繊維蛋白質が微小管と協調的に働いて接合過程の受精時の配偶核の行動をコントロールしていることが示唆されているがその実体を明らかにする。3.テトラヒメナのミトコンドリアに出現する直径1020nmの繊維の束とクエン酸合成酵素との関係を明らかにする。その結果、以下のことが明らかになった。1.14nm繊維形成蛋白質の遺伝子とmRNAの数(1)14nm繊維蛋白質の遺伝子の数の決定と、塩基配列の類似した遺伝子の存在の有無を14nm繊維蛋白質の遺伝子をプローブにして条件を変えたサザンブロッティングを行い検討した結果、ただ1つの遺伝子が存在することが明らかになった。(2)alternative splicingの結果、2つ以上のmRNAができ、2種類の蛋白質ができる可能性を調べるために14nm繊維蛋白質の遺伝子をプローブにしてノーザンブロッティングをおこないmRNAの数を調べた結果、1種類のみであることが判った。2.接合過程の受精時における14nm繊維蛋白質の機能を明らかにするために、免疫電子顕微鏡法を用いてこの蛋白質の局在性を検討することにした。そのため細胞の固定条件等を検討し、凍結技法が最も適していることが判った。現在、凍結技法を用いてさらに詳細に検討中である。3.ミトコンドリア内に出現する繊維の実体を14nm繊維蛋白質に対する抗体を用いた免疫電子顕微鏡法で検討した結果、14nm繊維蛋白質すなわちクエン酸合成酵素そのものであることが明らかになった。また繊維はほとんど全てのミトコンドリア内に存在することが判った。テトラヒメナの14nm繊維蛋白質の遺伝子をクローニングしたところ、クエン酸合成酵素と高い類似性があることが明らかになった。

1)テトラヒメナのミトコンドリアよりクエン酸合成酵素を精製し、重合・脱重合によって精製した14nm繊維蛋白質と酵素活性、酵素活性に及ぼす抗体(抗14nm繊維蛋白質)の影響、抗原性などを比較検討した。その結果、酵素活性の至適pH、至適KCl濃度、ATPによる阻害効果などが全く同じであった。抗原性も全く同じであり、クエン酸合成酵素の活性は抗14nm繊維蛋白質抗体で阻害された。以上のことより、これら2つの蛋白質は同一のものであると結論した。2)クエン酸合成酵素/14nm繊維蛋白質が、成長速度が遅くなった時期から定常期にかけて、ミトコンドリア内で繊維束を形成することを発見した。定常期の細胞を新しい培地に移すとミトコンドリア内の繊維束が消失したので、酵素活性の調節と繊維束形成の間に関連があると考えられる。3)クエン酸合成酵素/14nm繊維蛋白質の重合・脱重合によって酵素活性がどのようになるかを検討した。その結果、重合すると活性は消失し、脱重合すると、活性が出現することが判った。4)一つの蛋白質が全く異なる2つの機能を持つことが示唆されたが、遺伝子が一つかあるいは類似した2つの遺伝子からそれぞれの蛋白質がコードされているのかを検討した。その結果遺伝子も、mRNAも唯一であることが明らかになった。
アルカリイオン活性水による出土金属製品の脱塩処理法に関する研究と開発

(1)セスキカーボネート(Na2CO3・NaHCO3)水溶液への浸漬による脱塩実験(2)オートクレーブによる高温高圧状態での脱塩実験(3)アルカリイオン電解水への浸漬による脱塩実験(4)トルマリンを用いたアルカリイオン活性水への浸漬による脱塩実験(5)オートクレーブによりトルマリンに加圧ならびに加温による脱塩実験上記5種類の方法で考古資料に見られる金・銀・銅・青銅・木質のサンプルならびに刀などの鍛造品や鍋などの鋳造品、金銅装や象嵌資料、木質等の有機質の付着する資料などに対して以下の点に注目し、引き続き脱塩実験を行った。A.それぞれのサンプルを単体や組み合わせて各脱塩液に浸漬し色調の変化など影響の有無について。B.経過観察を行い脱塩処理の有効性について。オートクレーブによる脱塩では一定の脱塩効果が認められる。ただし遺物の劣化状況や有機質が付着していると遺物を損傷する危険性がある。またトルマリンの有無による効果の違いについて今回は確認できなかった。他の方法でも常温より加温、常圧より加圧の場合に脱塩促進効果が得られると考えられるが、変色や崩壊の危険性が高くなるため一定以上の効果は期待できない。今後も実験を継続してより効果的で安全性の高い脱塩処理法の確立を目指したい。14年度は予備実験ならびに試験体の作製を行った。予備実験(1)SS400(軟鋼)とFC250(片状黒鉛)の2種類の鉄板それぞれを、3%の塩化ナトリウム水溶液と3%硫酸ナトリウム水溶液に浸漬した。数回浸漬と乾燥を繰り返した後、高温高湿度下に置き腐食成生物を発生させた。(2)トルマリン水に浸漬し脱塩を行った。溶出した陰イオンはイオンクロマトグラフィーにより測定を行った。(3)腐食成生物の変化を観察した。トルマリン水に浸漬した状態からは鉄板に新たに錆が発生した様子は確認されず、安定化の方向に向かっているように見えた。トルマリン水の中でも比較的安定した状態にあると判断できることから、脱塩処理法として実用への可能性があると考えられる。試験体の作製(1)鉄粉を塩化ナトリウム(NaCL)3%水溶液に浸してから、鉄粉圧縮体(サンプルA)を作製した。(サンプル全体に塩化物イオン(CL-)が存在し、まんべんなくβ-FeOOH(赤金鉱)が発生するようにするため)(2)鉄粉を硫酸ナトリウム(Na2SO4)3%水溶液に浸してから、鉄粉圧縮体(サンプルB)を作製した。(サンプル全体に硫酸イオン(SO4-)が存在し、まんべんなくγ-FeOOH(鱗鉄鉱)が発生するようにするため)(3)鉄粉に鋳鉄資料から採取した錆を混ぜ合わせ鉄粉圧縮体(サンプルC)を作製した。(鋳鉄資料のモデルとするため)(4)サンプルA・B・Cを高湿度の環境に放置し錆を発生させた。(5)走査型電子顕微鏡・光学顕微鏡により腐食生成物の観察を行った。(6)ケイ光X線分析(XRF・現有)により腐食生成物の同定を行った。15年度は前年度に作製した試験体を用いて4種類の方法で脱塩実験を行った。(2)オートクレーブによる高温高圧状態での脱塩実験(3)アルカリイオン電解水への浸漬による脱塩実験(4)トルマリンを用いたアルカリイオン活性水への浸漬による脱塩実験現在、上記方法による脱塩実験を継続中でありデータの集積並びにこれまでのデータの整理を行っている。塩化ナトリウム(NaCL)・硫酸ナトリウム(Na2SO4)・鋳鉄資料から採取した錆、それぞれを混ぜ合わせ鉄粉圧縮体(サンプルA・B・C)について、個別に効果的な脱塩方法があるの、脱塩期間が最も短縮できる方法はどれか、逆にふさわしくない方法はあるのかなど検討中である。なお当初はトルマリンによる活性水生成のため水中の酸素量を増やす装置を検討していたが、水中の溶存酸素を増やすことは、反対に錆を進行させることになると判断し、トルマリンペレットを投入しただけの状態で脱塩を行った。しかし、オートクレーブによりトルマリンに加圧ならびに加温による刺激を与えることで、より活性した水を生成することが可能となる。そこでオートクレーブによる脱塩の際に、トルマリンを用いたアルカリイオン活性水を使用することでにかなり効果があるのではないかと考え、現在、同方法による脱塩実験について実施を検討中である。またそれぞれの脱塩方法による実際の実施例を調査し、脱塩期間やその効果、メリットとデメリットについても検証を行っている。(2)オートクレーブによる高温高圧状態での脱塩実験(3)アルカリイオン電解水への浸漬による脱塩実験(4)トルマリンを用いたアルカリイオン活性水への浸漬による脱塩実験(5)オートクレーブによりトルマリンに加圧ならびに加温による脱塩実験上記5種類の方法で考古資料に見られる金・銀・銅・青銅・木質のサンプルならびに刀などの鍛造品や鍋などの鋳造品、金銅装や象嵌資料、木質等の有機質の付着する資料などに対して以下の点に注目し、引き続き脱塩実験を行った。

またトルマリンの有無による効果の違いについて今回は確認できなかった。他の方法でも常温より加温、常圧より加圧の場合に脱塩促進効果が得られると考えられるが、変色や崩壊の危険性が高くなるため一定以上の効果は期待できない。今後も実験を継続してより効果的で安全性の高い脱塩処理法の確立を目指したい。
中国近現代における宣講活動による民衆教化に関する調査研究

皇帝の訓諭である「聖諭」を宣読し講説して民衆を教化する「聖諭宣講」は、民衆に親近感を持たせるため、近代に至って説唱(語り物)形式の民間芸能に変容していった。そうした説唱形式の「聖諭宣講」は、現代では湖北省の「漢川善書」にしか伝承されていないが、実は全国に分布して民衆教化に奏功していたと思われる。この研究ではテキストを収集することによってそれを明らかにした。「聖諭宣講」は近代に至って地方芸能に採り入れられた。この研究では、現地調査によって、湖北大鼓などの形式による「宣講」の存在を明らかにし、近現代においては、「聖諭」のみならず、「政策」宣講が行われるようになったことも具体的に明らかにした。1.漢川善書の調査ー2003年2月17日、漢川市馬口鎮廟湾村において「漢川市文化館善書宣講団」による恒例の春節の「台書」上演を記録した。演目は『奎星下界』(『包公出世』)である。漢川善書には宗教的要素はないと言われるが、宣講は『関帝桃園経』の読経から始まり、「普渡衆生」「仏光普照」という扁額を飾っており、村人は信心深く、伝統的な民間の善堂による宣講の伝統を受け継いでいる。近年の経済発展によって村民も富裕になり、寄付の額も増加して上演は演劇の衣装を身につけるようになった。テレビの普及で観衆が減ったと言うが、老人にとっては大きな楽しみであり、特に出稼ぎの人々が帰郷して一家が集う春節であるため、100人以上の村人が集まって宣講を鑑賞していた。2.聖諭宣講のテキストの収集ー民衆を教化するには民衆が親しんだ言葉や文学によって宣講する必要があるため、説唱形式の通俗的な聖諭宣講は清末に出現した。その規模は全国的であったと思われるが、これまで特殊な領域であることから、テキストの調査が進んでいない。『躋春台』というテキストが清末小説として紹介されて以来、宣講のテキストという認識は研究者になかなか芽生えないのが現実である。宣講は文学研究として認めない考えがいまだに根深い。本研究では「通俗」でなければ民衆は納得しないという観点から研究を進め、それを論証するために、説唱形式の宣講が全国に普及していたという事実をテキストの収集によって証明することに努めており、これまでに河南の『宣講拾遺』という先駆的宣講書から、吉林の『宣講大成』、四川の『宣講彙編』について執筆し、その存在を紹介した。1.2013年2月春節の台書として漢川市馬口鎮廟湾村蔡城路1号で上演された漢川善書『奎星下界』(『包公出世』)の録画資料を整理し、林宇萍・阿部泰記「漢川善書の台書上演ー『奎星下界』を例として」を発表した。これによってテキスト資料と上演資料との相違を明らかにすることができた。2.宣講書『萃美集』を収集して整理し、阿部泰記「四川の宣講書『萃美集』五巻ー物語化する案証」を発表した。これによって民国時代の宣講が聴衆を楽しませるために物語性のある案証を選ぶことになったことを明らかにした。3.宣講書『万選青銭』を収集して整理し、阿部泰記「『万選青銭』四巻ー簡易宣講書の先駆ー」を発表した。この新資料の発見によって聖諭による分類を行わない簡易宣講の発生の歴史をさらに明らかにした。4.宣講書『触目警心』を整理して、阿部泰記「『触目警心』五巻ー湖北の物語宣講書」を発表した。この宣講書には従来知られなかった宣講書が引用されており、その存在を明らかにすることにより、案証宣講の歴史をさらに詳細に説明することができた。1.伝統宣講書の調査研究大連図書館において『萃美集』五巻などの伝統宣講テキストを収集した。中国科学研究院文学研究所には清代の残本を蔵している報告があり、上海図書館にも単行本を蔵しているが、完本はこのテキストである。民国本であり、冒頭には聖諭宣講規則はなく、物語性の強い内容となっており、娯楽性を重視した現代の漢川善書の前身として位置づけることができることを検証した。中興大学主催の「話語的流動」国際学会において発表した「中日宣講聖諭的話語流動」(2012年3月17日)の中で述べた。

このほか、山東の『宣講宝銘』、河南の『宣講管規』、雲南の『千秋宝鑑』などの宣講資料を収集して論文として発表しており、因果応報をテーマとする初期の聖諭宣講の形態を明らかにした。2.漢川善書の調査研究2012年春節に漢川市に赴き、漢川善書『販馬記』等の上演を取材した。『販馬記』は継母の虐待に発する善悪の対立をテーマとするドラマであり、善堂が主催する聖諭宣講において講じられた因果応報故事ではなく神明は登場しない。これは聴衆が宗教性を必要とせず娯楽性を求めていることの証であり、出稼ぎに出て春節に帰郷する村民が団らんのひとときを過ごす大切な芸能となっている。善書の作者は老芸人で、国家級芸人に指定され、グループのメンバーも固定して若いリーダーを中心として今後の発展は約束されているように感じられた。指導機関である漢川市文化館の館長も交代して新しい出発を始めており、毎年の進展が期待されることが確認できた。皇帝の訓諭である「聖諭」を宣読し講説して民衆を教化する「聖諭宣講」は、民衆に親近感を持たせるため、近代に至って十言句の通俗詩歌を取り入れた説唱(語り物)形式の民間芸能に変容していった。従来、小説と考えられていた『躋春台』という作品も、実は説唱形式の「聖諭宣講」のテキストであった。そうした説唱形式の「聖諭宣講」は、現代では湖北省の「漢川善書」にしか伝承されていないが、もともと全国に分布して民衆教化に奏功していたと思われる。そのことは従来、具体的に明らかにされてこなかったが、この研究では、全国各地で刊行された説唱形式のテキストを収集することによって、説唱形式の「聖諭宣講」が全国的に分布していることを明らかにした。またその源流が四川省にあることを、早期のテキスト『宣講集要』が福建省で復刻されながら、四川省の方言である「西南官話」を用られていることから明らかにした。また「聖諭宣講」のテキストは、もともと「六諭」(「聖諭六訓」)や「聖諭十六条」によって「案証」(故事)を分類して収録していたが、聴衆を獲得するために、次第に物語性を重視して「聖諭」分類に拘らないテキストが編纂されるようになった。『躋春台』十巻四十話はこの類のテキストであり、「漢川善書」のテキストもおおむねこれに類する。「聖諭宣講」は近代に至って、大鼓・唸歌などの地方芸能に採り入れられた。この研究では、現地調査によって、湖北大鼓・れい州大鼓・山東大鼓・台湾唸歌・布袋戯などの形式による「宣講」の存在を明らかにし、近現代においては、「聖諭」のみならず、「政策」宣講が行われるようになったことも具体的に明らかにした。中国文学1.漢川市における聖諭宣講の現状を把握することができた。他の地域ではテレビの普及によって伝統芸能は廃れていく傾向にあるが、漢川善書は年ごとに発展していることを調査によって確認することができた。これは民衆の自発的な芸能評価の結果であり、最も理想的な伝統文化の継承現象だと考える。2.清末以来の聖諭宣講のテキストを収集することができた。日本では唯一沢田瑞穂氏が収集したテキストのみが知られ、台湾・中国・香港の学者によって紹介されたテキストがあったが、全国的に説唱形式の聖諭宣講が普及していたことは確認できていなかったが、今日のネット情報の発達によってそのことが論証できるようになった。また漢川善書への展開もこれによって説明することができるようになった。3.湖北大鼓については湖北省文化局を通じて中国第一級芸人の張明智氏を取材することができた。張明智氏は、大鼓芸能に楚劇など地方演劇を取り入れ、大胆に社会風刺をした有能な芸人である。その50篇の作品を分析して、この芸能が湖北地方において民衆に親しまれ、社会啓蒙に大きく貢献していることを立証した。4.湖南省北西部の湘北大鼓については、湘北地区を調査してその人気の高さを知った。葬儀の時に弔問客を楽しませるための喪鼓の上演は歴史演義が多いが、鼓王大会で上演される演目は現代社会が抱える問題をテーマとした創作が多いことが分かった。
C-H 閉環プロセスによる複素環構築を基軸とした未踏分子変換プロセスへの挑戦

遷移金属を利用した触媒的炭素ー水素結合官能基化(C-H官能基化)を基盤とする新規分子変換プロセスを広範に開拓することが,本研究の目的である.特に,これを利用した分子内炭素ーヘテロ原子(窒素,硫黄,酸素原子)結合形成反応(C-H閉環プロセス)による新規な複素環化合物構築法の開発が,研究の大きな柱となる.生理活性化合物あるいは機能性分子の母核として広範に存在している複素環化合物の,高効率的かつ革新的合成法の確立を目指す.最終的に,高い次元での多様性を実現できる複素環骨格構築法を系統的に確立し,新規学術分野の創製につなげる.遷移金属を利用した触媒的炭素ー水素結合官能基化(C-H官能基化)を基盤とする新規分子変換プロセスを広範に開拓することが,本研究の目的である.特に,これを利用した分子内炭素ーヘテロ原子(窒素,硫黄,酸素原子)結合形成反応(C-H閉環プロセス)による新規な複素環化合物構築法の開発が,研究の大きな柱となる.生理活性化合物あるいは機能性分子の母核として広範に存在している複素環化合物の,高効率的かつ革新的合成法の確立を目指す.最終的に,高い次元での多様性を実現できる複素環骨格構築法を系統的に確立し,新規学術分野の創製につなげる.
中世アジアの住居と集落に関する総合的研究:資料のデジタル化と学融合を目指して

平成18年度中に、研究会2回、研究発表3回、シンポジウム1回、調査旅行1回を実施した。1.鎌倉の武士住宅の研究:京都において第1回研究会を行った後、鎌倉で3回研究発表を行った。鎌倉の都市・武士住宅・町家・宗教建築に関する建築史分野の研究を総括し、考古学研究者をまじえた場で研究発表を行った。2.安土城本丸御殿復原の問題点:京都において第2回研究会を実施した後、平成19年2月24日にシンポジウムを開催した。川本は行幸と行幸御殿の歴史から安土城本丸御殿の中に、庭儀空間を持つ行幸御殿が存在するとは考えられないこと、復元された安土城の行幸御殿が行幸御殿の機能を果たせないことなどを明確にした。また、三浦は考古学的成果を総括した上で行幸御殿説を批判するとともに、安土城本丸御殿の配置計画などに関する新しい見解を発表した。一方、ゲストコメンテイターとして参加した藤田達生(三重大学)からは、文献史学の立場から安上行幸が計画されていた可能性が高いことが述べられた。3.ベトナムの住まい・集落に関する調査を実施した。平成18年12月22日30日にベトナム、ホーチミン・ホイアン・フエ・ハノイとその周辺の住まいと集落の調査を行った。ベトナムの民家が祖先を祀る空間を中心に構成されていること、空間の分化が機能に応じてではなく、人に対応する形で進んでいることなどを確認した。
オーストリア学派における主観主義的貨幣論とその政策的展開

先行する研究(Cappelen 2007)(Hoffman 1990)では収益分配に際しての公平性観念は各個人にとって不変であり、定常的であることを前提に価値関数が想定されていた。しかし本研究によれば、各個人の分配原理は個人の置かれた状況、とりわけチームメンバーとの相対収益に依存して変化する。すなわち相対収益が多かった被験者は自由主義的分配(実力に応じた分配)を採る有為な傾向があり、相対収益の低かった被験者は平等主義的な分配を採る有為な傾向が観察された。本研究の実験結果は、社会制度構築及び政策論に大きな示唆をもたらしうる。すなわち社会福祉政策や年金、保険、相続といった社会的分配過程において、多数の人々が同一の分配原理を妥当であると考えるのではなく、それぞれの置かれた立場によって分配原理を変えることを前提するならば、社会的公正関数の解釈も大きく変化するであろう。マクロレベルにおける適用は今後の研究の課題であるが、本研究で明らかにされた個人の公平性に関する主観的判断の状況依存性は、社会福祉政策に大きな示唆を与えうる。本研究課題は平成24年度が最終年度のため、記入しない。本研究におけるミクロレベル(被験者の主観的判断)の実験結果を踏まえ、今後はオーストリア学派の自生的秩序観念を踏まえたマクロ的な展開について検討する必要がある。具体的には、各個人が状況依存的な分配原理を持つとすれば、その分配原理の変化が一定の分配過程を含む公共財等の市場取引の場において機能した場合、どういった結果をもたらすか。これらの問題についてはRabin(1993)がゲーム論を用いた理論研究を行っているが、実証的研究は少ない。これらの状況を踏まえ、分配過程を含む市場取引についての経済実験を行うことで、そのマクロ的展開を検討したい。メンガーの『貨幣論集』(Carl Menger, Schriften uder Geld und Wahrungspolitik)の邦訳作業を行いつつ、一橋大学カール・メンガー文庫および慶応義塾大学所蔵のマイクロフィルムMenger Papersに残されたメンガーの所蔵文庫および手書き原稿などを調査し、メンガーが貨幣論を展開するに至った思想的/理論的背景の解明につとめた。古典文献研究につとめる一方、オーストリア学派の主観主義的経済学の現代的理解を深めることを狙いとして、オーストリア学派における主観主義的な人間行動理解、およびF.v.ヴィーザーが「思考実験(Gedankenexperiment)」と呼んだ同学派の経済学理論および方法が実験的手法(経済実験や神経経済学など)の発展した現代経済学において持ちうる意義および位置づけを探求し、今後の研究発展にあたっての予備調査とした。これを踏まえて、貨幣から流通手段に至る貨幣形態の発展過程において、信用が大きな役割を果たすというミーゼスの議論を参照しつつ(Mises 1912)、企業の現代的貨幣調達手段としての株式市場において企業のCSR活動(社会的責任活動)が投資者の利他的(倫理的)動機および、キャピタルゲインを得ようとする利己的動機(利潤最大化行動)に与える影響を実証的に検証するための経済実験の設計を行った。この経済実験はオーストリア学派貨幣論の現代的理解を深めることを企図しつつ、2011年度の研究において京都産業大学経済実験室にて遂行予定である。代表的なオーストリア学派経済学説の貨幣理論に現代的意義を与えるため、2011年11月9,12日に京都産業大学経済実験室において、また2012年2月3日名古屋工業大学において、貨幣の公平な再分配に関する経済実験を行い、その実験結果を分析した。同実験は生産過程と分配過程の2つのセクションに分け、被験者が生産過程において獲得した貨幣を、分配過程において同一グループ内のメンバーとどのように再分配するかを分析した。同実験の結果、被験者は生産過程の質の違い(実力、または運による貨幣獲得方法の違い)ではなく、同一グループ内の比較収益(他のメンバーと比較しての収益量の多寡)に依存して分配原理を変化させる傾向があるという分析結果を得た。すなわち被験者は、他のグループメンバーと比較して高い収益を得た場合は実力主義的な分配原理を採用し、低い収益の場合は平等主義的な分配原理を採用する傾向があることが統計的に有為に示された。同結果は被験者の分配原理が定常的であることを仮定する先行研究(Cappelen et al 2007)に対し、被験者の公平性に対する信念が状況依存的であることを示した点において、学術的意義を有する。また同実験結果は、ある経済主体が収益を他の経済主体と貨幣分配を行うにあたってのインセンティブを実証的に分析した点において、主観主義を根幹とするオーストリア学派貨幣理論の現代的解釈として重要である。

マクロレベルにおける適用は今後の研究の課題であるが、本研究で明らかにされた個人の公平性に関する主観的判断の状況依存性は、社会福祉政策に大きな示唆を与えうる。交付申請書において記載した経済実験について、その設計、実施、分析、論文のすべてについて順調に進展したため。また先行研究に対し独自の結果(経済主体の公平性観念の柔軟性)を験証し、同研究分野に対する有意義な学術的成果を挙げることができたため。また経済実験が不可能であった19世紀当時に生じたオーストリア学派の主観主義学説について、新しい現代的解釈を提示することができたため。本研究課題は平成24年度が最終年度のため、記入しない。今後はこれまでの実験および研究成果を踏まえ、経済主体が貨幣に対して持ちうるインセンティブの実験を継続し、加えてそこから生じうる制度分析を行う。これまでの研究成果では、貨幣分配過程における経済主体の行動分析に重点が置かれていたが、今後は同行動から生じうる金融市場制度を視座に入れつつ研究を行う。具体的には、寄付活動といった利他性、公共性に基づくインセンティブを実験に組み込み、それらの利他的インセンティブが金融市場(投資過程)に組み込まれた場合、被験者がどのように判断し行動するのか、またその結果、どういった制度(自制的秩序)が生じるのか、について研究を行う。本研究におけるミクロレベル(被験者の主観的判断)の実験結果を踏まえ、今後はオーストリア学派の自生的秩序観念を踏まえたマクロ的な展開について検討する必要がある。具体的には、各個人が状況依存的な分配原理を持つとすれば、その分配原理の変化が一定の分配過程を含む公共財等の市場取引の場において機能した場合、どういった結果をもたらすか。これらの問題についてはRabin(1993)がゲーム論を用いた理論研究を行っているが、実証的研究は少ない。これらの状況を踏まえ、分配過程を含む市場取引についての経済実験を行うことで、そのマクロ的展開を検討したい。
小分子応答性人工受容体による増殖因子シグナル伝達制御を用いた心筋再生療法の確立

Wnt分子や顆粒球コロニー刺激因子などの増殖因子は心筋細胞分化促進効果や心筋保護作用などを有しており、これらの因子によるシグナル伝達を制御することは、多能性幹細胞からの効率的な心筋細胞誘導だけでなく、移植後の生着効率の改善にも繋がると考えられる。しかし、増殖因子は、大量の分化培養に用いるには高額であり、細胞移植後に生体投与する場合も移植細胞以外に作用するため、その副作用が懸念される。これらの問題を解決する目的で、本研究では、生体において安定でかつ毒性のない小分子リガンドに応答する人工受容体を用いて増殖因子のシグナル伝達を制御する方法を開発した。心臓再生療法の基盤構築に貢献すると期待される。重症心不全に対する、人工多能性幹(iPS)細胞を用いた再生療法が期待されている。Wnt分子や顆粒球コロニー刺激因子(G-CSF)などの増殖因子は心筋細胞分化促進効果や心筋保護作用などを有しており、これらの因子によるシグナル伝達を制御することは、iPS細胞からの効率的な心筋細胞誘導だけでなく、移植後の生着効率の改善にも繋がると考えられる。しかし、増殖因子の生体投与は移植細胞以外にも作用するため、その副作用が懸念される。また、Wnt分子は、生体で安定して作用する組換え蛋白質が精製困難な状況である。そこで、本研究では、生体において安定でかつ毒性のない小分子リガンドに応答する人工受容体を用いて増殖因子のシグナル伝達を制御する方法を開発し、これを細胞治療へ応用した次世代心筋再生療法の基盤を構築する。はじめに、G-CSF結合領域あるいは細胞外ドメインすべてを、抗フルオレセイン(FL)抗体のsingle chainFv (ScFv)に置換したキメラG-CSF受容体を作製した。この受容体は、BSAに複数のFL分子を修飾したBSA-FLがリガンドとして結合すると、ホモ二量体を形成しシグナル経路を活性化すると考えられる。そこで、キメラG-CSF受容体を安定発現するマウスES細胞株を樹立し、分化培養過程で、代替リガンドであるBSA-FLにより刺激し、それぞれのシグナル経路の活性化を検証したところ、G-CSF受容体経路の下流の転写因子STAT3においてリン酸化が誘導されることを確認した。現在、iPS細胞株においても、同様の安定発現株を作成し、分化誘導後、代替リガンド刺激において心筋細胞分化効率、細胞死抑制効果などを確認中である。今後、iPS細胞株においても、同様に安定発現株を作成し、分化誘導後、代替リガンド刺激において心筋細胞分化効率、細胞死抑制効果などを確認する予定である。キメラ受容体からのシグナル伝達は、細胞外ドメインの構造の違いによって影響を受けることが予想される。そこで、本年度は、細胞外ドメインの異なる数種類のキメラ受容体を構築した。次に、本来の受容体が持つシグナル伝達能力を有していることを検証するために、STAT3のリン酸化をウェスタンブロットにより確認した。最も効率良くシグナル伝達できるキメラ受容体を、CAGプロモーターを組み込んだレンチウイルスベクターにより遺伝子導入したES細胞株を樹立することに成功した。次年度は、このキメラ受容体をiPS細胞に安定発現させ、代替リガンド刺激後の心筋細胞分化や抗アポトーシス効果を検証する予定である。上記ように、本研究では、予定通り実験計画が進行していると考えられる。

今後は、このキメラ受容体を、安定発現するiPS細胞株を樹立することにより、心代替リガンド刺激後の心筋細胞分化効率や抗アポトーシス効果を検証する予定である。さらに、分化誘導した心筋細胞を、心筋梗塞モデルのマウス心へ移植する。さらに、生体へリガンドを投与し、移植細胞でのみシグナルを一過性に活性化させることで、アポトーシス抑制による生着効率の改善を試みる。光イメージングでは、ルシフェラーゼ発光や赤色蛍光を同一個体で経時的に追跡可能であり、移植した細胞のリガンド応答性や心筋細胞としての生着率を生体で解析する。最終的には、移植片が心筋細胞として組織へどのように生着しているか、多種の細胞や奇形腫として生着していないことを確認する目的で、組織学的評価を行う。さらに、心エコーや心カテーテル法などの生理学的方法により心機能改善効果の検証も行う。iPS細胞の培養、遺伝子導入、心筋細胞分化にかかわる細胞培養実験の試薬などに関する消耗品購入に使用する。さらに、マウスを用いた心筋梗塞モデル作成のための、マウス飼育費、マウス手術にかかる麻酔薬の購入、手術道具などの購入に使用する。最後に、細胞移植後の、光イメージング施行に関わる費用、心機能評価として生理学的検査、組織学的実験、遺伝子発現などの分子生物学的実験にかかる消耗品費に使用する予定である。
数値地図情報を用いた古墳の立地に関する研究-大和盆地を事例として-

本年度は最終年度であり、研究のまとめをおこなった。まず、昨年度作成データの補充、修正をおこない、これを統台して大和古墳空間データベースを作成し、考古学研究へのGIS(地理情報システム)利用の有効性を確認した。大和古墳空間データベースは地形標高メッシュデータ、古墳位置といった空間的なデータと墳形、副葬品の内容といった非空間的なデータをもち、個々の古墳情報の検索、指定条件による古墳分布図の作成が可能である。これらの作業は研究に不可欠であるが煩雑な手順を必要としており、この制約の為現実には限定された部分への適用に留まっている。GISの利用によって容易に分布図が作成できることになり、複雑な条件の考古資料の分布を容易に描き出せることになった。この点で考古学研究へのGISの利用は有効な手段であると考えられる。また、このデータベースを利用して、古墳の立地についての検討をおこなった。標高データから得られた傾斜データと時期別の古墳分布とのオーバレイをおこない、時間的に傾斜の緩やかな場所に古墳が築かれる傾向にあること、標高も低い剖分へ下りてくることが傾向として指摘できる。また、古墳からの視界について分析をおこない、時期によって古墳の司視範囲に傾向があることを求めた。これらの点は従来より経験的に指摘されてきたことであるが、実際に数値で指摘できるところにGISを用いた研究の利点がある。これらの成果については、研究会、書籍によってその一部を公開している。
高等植物の分化成長における二成分制御系シグナル伝達因子の機能解析

1)シロイヌナズナから3種類の新規センサーキナーゼ遺伝子を分離して一次構造を確定し、これら遺伝子をAHK2,3,4(AHK=Arabidopsis histidine kinase)と名付けた。AHK遺伝子群は相互に高い相同性を示す遺伝子ファミリーを形成している。またAHK遺伝子群の発現を調べたところ、AHK4が根組織で特異的に発現していることがわかった。2)AHK4遺伝子にT-DNAが挿入された変異株を同定した。AHK4の発現が根組織特異的であることに注目した解析から、この変異株が植物ホルモンの一つであるサイトカイニンに対して非感受性を示すことを明らかにした。AHK4遺伝子を出芽酵母のセンサーキナーゼ変異株に導入したところ、各種サイトカイニン(BA,Kinetin,t-Zeatin)に依存的な生育を示し、AHK4がサイトカイニンの直接の受容体であり、リガンドとの結合がヒスチジンキナーゼ活性を正に制御することを明らかにした。。3)TCP10はTCP1などと同様に、側生器官の分化成長に直接関与すると考えられているトウモロコシのT〓1やキンギョソウのCYCと同じ構造を持つサブファミリーに属しており、機能的に重要であると考えられる。このサブファミリーに属するTCP遺伝子をシロイヌナズナのゲノムからさらに3種見出し、TCP1113と名付け、当サブファミリーに属する遺伝子群(TCP1,2,3,5,10,11,12,13)すべてのクローン化を終了でた。。