hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
慢性ウイルス感染症におけるメモリーT細胞の免疫応答と関連疾患の病態解明

本研究では、ヒトレトロウイルスであるヒトT細胞白血病ウイルス1型(HTLV-I)に着目し、HTLV-I関連疾患である脊髄症(HAM/TSP)を発症した患者におけるT細胞免疫応答を解析した。HAM/TSPではT細胞による過剰な免疫応答が疾患発症に関連している可能性が高く、また免疫抗原となるウイルスペプチドの研究が進んでおり、慢性ウイルス感染症におけるT細胞の免疫応答と関連疾患発症のメカニズムを研究するモデルとして有用である。本研究計画では、申請者が最近樹立した人工的抗原提示細胞を用いた解析法を応用し、ウイルス抗原に対する(1)CD8+T細胞による免疫応答、(2)CD4+T細胞による免疫応答、を患者血液から樹立したT細胞クローン、あるいは末梢血を用いてした。研究期間では、(1)に関してウイルス抗原に対するCD8+T細胞による免疫応答の詳細な解析を行い、HAM/TSP患者では他の慢性ウイルス感染症に比べ、CD8+T細胞において細胞障害活性の低いintermediateな分化段階を示すメモリー細胞が集積している傾向にあることがわかった。また、(2)に関しては、新たに樹立したHLA-DRB1^*0101-GFP分子を発現する人工的抗原提示細胞のコントロール実験を行った。樹立したHLA-DRB1^*0101-GFP分子を発現する人工的抗原提示細胞では良好なHLA-DRB1^*0101-GFP分子の細胞表面での発現が観察され、蛍光顕微鏡による解析ではCD4+T細胞との接着1や細胞反応が認められた。現在、ウイルス抗原特異的CD4+T細胞の機能解析を継続的に行っている。今後は研究期間内での研究結果をふまえて、慢性ウイルス感染症におけるウイルス感染のコントロール機構や免疫破綻のメカニズムを解析し、新たな発症予防.治療戦略を展開する。慢性ウイルス感染症では、Tリンパ球のうちメモリーT細胞が感染細胞のコントロールに重要な役割を担っていると考えられており、サイトメガロウイルス(CMV)、C型肝炎ウイルス(HCV)、ヒト免疫不全ウイルス(HIV-1)、ヒトT細胞白血病ウイルス(HTLV-I)などの感染者では血液中に多数のウイルス抗原特異的メモリーT細胞が存在する。感染者の体内ではウイルス抗原の持続的発現と宿主T細胞による免疫反応が認められ、無症候性キャリアでは生体内に潜伏するウイルスは、ウイルス特異的T細胞により良くコントロールされている。その一方、持続感染の間に宿主の免疫反応の破綻やウイルスに対する過剰反応が引き金になり、関連疾患を発症するに至る。ウイルス感染から関連疾患発症に至る過程は未だ解明されたとは言えず、有効な治療法の開発のためにも、慢性ウイルス感染症におけるT細胞の免疫応答を解明することは重要な課題である。本年度では、ヒト感染性レトロウイルスであるHTLV-I感染症に着目し、HTLV-I関連疾患である脊髄症(HAM/TSP)を発症した患者末梢血を用い、表面抗原マーカーCD27,CD45RA等によりウイルス特異的メモリーCD8+ T細胞をearly, intermediate, lateなどの成熟段階に細分類し、T細胞機能と免疫制御機構を検討した。その結果、HAM/TSP発症患者ではウイルス特異的メモリーCD8+ T細胞がよりearly phaseの分化段階に集積していることが明らかとなり、細胞傷害性機能の未熟なT細胞が集積していることが、免疫制御機構の異常に関連している可能性が考えられた。
アミロイドβ蛋白の産生部位の特定:ラフト画分への注目

アミロイドβ蛋白(Aβ)の脳内沈着はアルツハイマー病(AD)の中核をなす病理所見であり、その産生・沈着仮定の解明はADの治療に結びつく重要な課題である。従来Aβが細胞内で産生されることは確定的な事実としてわかってはいたが、どの細胞内小器官で産生されるかは判然としていなかった。その理由のひとつとして、Aβを変性剤で抽出した分画中に探そうとしたことがあげられる。事実最近、変性剤に不溶性の画分(ラフト)中にAβが見出されたという報告が散見される。しかし、これらの報告はいずれも培養細胞や齧歯類の脳をもちいた実験結果であり、実際のAD脳の病理をどれほど反映しているかは不明である。そこで本研究は人の脳を用いてラフト画分を精製し、その中に含まれるAβを定量する事によって、Aβの産生・沈着に於けるラフト画分の役割を検討した。対象として、AD脳および非痴呆加齢脳、ならびにオランダ型家族性脳内出血脳をもちいた。オランダ型家族性脳内出血症はAβの前駆体タンパク質の点突然変異によって生じる脳血管アミロイドーシスがその主たる病変だが、脳実質にもAβが沈着し、かつその程度も様々なことから脳内へのAβの沈着過程を考察する上で有用と考えた。実験は凍結脳を変性剤の存在下で破砕し、スクロースによる密度勾配遠心法によってラフト画分を得、ウエスタンブロッティング法によりAβを同定した。その結果(1)Aβ沈着の軽度の例でもラフト画分中にはAβが存在する、(2)ラフト画分にはAβの主要な分子種であるAβ40とAβ42の両者が存在する、(3)Aβはモノマーとしてだけではなくダイマー、さらにオリゴマーとして検出される、(4)オランダ型脳出血例にはADにくらべて長さの短いAβ(truncatedAβ)が観察される、ことが判明した。以上の結果を考慮すると、脳内Aβはラフト画分から沈着を開始し、脳内に凝集することが示唆された。アルツハイマー病(AD)の組織病理学的所見の特徴としてアミロイドβ蛋白(Aβ)の脳内沈着が挙げられる。Aβは神経細胞などの細胞内で産生され,その後細胞外に分泌されることがわかっているが,具体的な細胞内の産生部位は未だに同定されていない。我々はその候補として界面活性剤に不溶性の特殊な膜ドメインであるラフト画分に注目し同部位がAβの産生に関与している可能性を検討することとした。ラフト画分の分離法は培養細胞では確立しているが,脳をもちいた試料では未開発であることから,まず脳から生化学的に同部位を分離する方法の開発を試みた。凍結アルツハイマー病脳を1%トライトンを含む緩衝液中で粉砕し,ショ糖密度勾配中で超高速遠心分離を行い,全部で5つの画分として回収した。各画分をウエスタンブロット法で検討すると,ラフト画分のマーカー蛋白とされるフロティリン蛋白は,第2画分に局在していた。一方,Aβ40およびAβ42は第2画分と第5画分に存在した。このことから,脳内のAβの少なくとも一部はラフト画分に存在している可能性が高いことがわかった。

第5画分はペレット画分であるが,AD脳ではアミロイド線維を形成して細胞外に沈着したAβが多量に存在していることから,第5画分に存在するAβは線維塊を形成したAβである可能性が高いと考えている。興味深いことに両画分ともAβ40よりもAβ42がより多く存在していた。またいずれの画分でも,Aβは4kDのモノマーとしてばかりではなく,約7-8kDのダイマーを形成していた。アミロイドβ蛋白(Aβ)の脳内沈着はアルツハイマー病(AD)の中核をなす病理所見であり、その産生・沈着仮定の解明はADの治療に結びつく重要な課題である。従来Aβが細胞内で産生されることは確定的な事実としてわかってはいたが、どの細胞内小器官で産生されるかは判然としていなかった。その理由のひとつとして、Aβを変性剤で抽出した分画中に探そうとしたことがあげられる。事実最近、変性剤に不溶性の画分(ラフト)中にAβが見出されたという報告が散見される。しかし、これらの報告はいずれも培養細胞や齧歯類の脳をもちいた実験結果であり、実際のAD脳の病理をどれほど反映しているかは不明である。そこで本研究は人の脳を用いてラフト画分を精製し、その中に含まれるAβを定量する事によって、Aβの産生・沈着に於けるラフト画分の役割を検討した。対象として、AD脳および非痴呆加齢脳、ならびにオランダ型家族性脳内出血脳をもちいた。オランダ型家族性脳内出血症はAβの前駆体タンパク質の点突然変異によって生じる脳血管アミロイドーシスがその主たる病変だが、脳実質にもAβが沈着し、かつその程度も様々なことから脳内へのAβの沈着過程を考察する上で有用と考えた。実験は凍結脳を変性剤の存在下で破砕し、スクロースによる密度勾配遠心法によってラフト画分を得、ウエスタンブロッティング法によりAβを同定した。その結果(1)Aβ沈着の軽度の例でもラフト画分中にはAβが存在する、(2)ラフト画分にはAβの主要な分子種であるAβ40とAβ42の両者が存在する、(3)Aβはモノマーとしてだけではなくダイマー、さらにオリゴマーとして検出される、(4)オランダ型脳出血例にはADにくらべて長さの短いAβ(truncatedAβ)が観察される、ことが判明した。以上の結果を考慮すると、脳内Aβはラフト画分から沈着を開始し、脳内に凝集することが示唆された。
火星の海および表層氷の進化史：火星隕石の地球化学的解析からの制約（国際共同研究強化）

本研究では,表層水を保持していた唯一の地球外天体である火星に着目し,表層酸化過程に重要な役割を果たす,海・氷床の消失過程の解明を目指す。具体的には、年代の特定されている隕石から得られた表層水の水素同位体比を入力パラメターとする水散逸モデルを用い,各時代間で消失した表層水および氷の総量を推定する。また,各時代における水の総量(固体水+液体水)と,地形情報から推定されている海水量(液体水)との差分から,固体水と液体水の量比を推定し,惑星表面温度や大気組成といった表層環境を決定付けるパラメターに制約を与える。H30年度は、表層に水が存在していたとされる約40ー44億年前の情報を得るため、H29年度にInstitute of Meteoritics(University of New Mexico)より入手した火星隕石の水素同位体分析を行った。水素同位体分析は、引き続き共同研究先(カーネギー研究所)に設置されている二次イオン質量分析計(NanoSIMS 50L)を用いた。また、若手PDの加入により、当初予定していた水素同位体分析に加え、NanoSIMS 50Lを用いた局所での窒素同位体分析を行うことが可能となった。H30年度は、窒素同位体分析に関する予察的な検討(分析条件の最適化など)や、分析に必要な標準物質(窒素を含む深海性炭酸塩鉱物)の準備を行った。深海性炭酸塩鉱物の準備に関し、海洋研究開発機構と新たな共同研究を開始した。共同研究先のラボディレクターの死去により、当初の予定通りの分析が行えなかった。残りの分析に関してはH31年夏以降に実施予定である。H30年度より、本プロジェクトに若手PDが参画することとなった。若手PDとの作業分担を行うことで、データ解析および論文化を加速する予定である。具体的には、隕石の初期記載、同位体分析に必要は標準物質の準備の作業分担を行う代わりに、一部の論文に関しては、PDが筆頭著者となり報告を行う。内定年度:2015本研究では,表層水を保持していた唯一の地球外天体である火星に着目し,表層酸化過程に重要な役割を果たす,海・氷床の消失過程の解明を目指す。異なる惑星の表層進化過程を明らかにすることにより,普遍的な汎惑星表層進化を理解することが,本課題を含めた私の研究活動における最終目標であり,かつ研究意義となる。本研究では、下記に示す3つの研究実施計画に従い、表層に存在していた水の「消失時期」および「消失量」を決定し,火星の各地質時代における水の存在量とその状態(氷・水)を明らかにすることを目的とする。(研究計画ー1)年代の特定されている隕石から得られた表層水の水素同位体比を決定する。(研究計画ー2)水素同位体比を入力パラメターとする水散逸モデルを用い,各時代間で消失した表層水・氷の総量を推定する。(研究計画ー3)最後に、各時代における水の総量(固体水+液体水)と,地形情報から推定されている海水量(液体水)との差分から,固体水と液体水の量比を推定し,惑星表面温度や大気組成といった表層環境を決定付けるパラメターに制約を与える。H28年度は、上記の研究実施計画に従い、(1)40億年前に形成されたことが判明している火星隕石(ALH 84001)に含まれる炭酸塩に着目し、その炭酸塩に含まれる水素の同位体比をカーネギー研究所の二次イオン質量分析計(Cameca NanoSIMS 50L)を用いて決定した。(2)得られた水素同位体比から、過去40億年間での表層水の散逸量を求めた。(3)その散逸量が、地形学から推察される古海洋の体積と比較し明瞭に少ないことを示した。このことは、古海洋として存在していた水の大部分が宇宙空間へと散逸せず、現在でも地下に凍土層・含水鉱物層のような状態で存在していることを示唆している。共同研究先であるカーネギー研究所での分析が当初の計画通り進められた。H29年度は、火星の水の消失時期・消失量と密接に関係する火星大気圧の時代進化をモデル化し、表層に水が存在していたとされる約40億年前の下限大気圧(0.5 bar)を決定した(Kurokawa et al. 2018 Icarus)。また、大気モデルにおいては、水素同位体比に加え窒素同位体比が重要な入力パラメターとなることが示された。そこで、共同研究先(カーネギー研究所)に設置されている二次イオン質量分析計(NanoSIMS 50L)を用い、火星隕石中に含まれる窒素の局所同位体分析法の開発を行った。

また、本研究で使用する隕石の入手をより効率的に行うため、Institute of Meteoritics(University of New Mexico)と新たに研究協力関係を構築した新たな共同研究者の参画により、本研究で使用する隕石の入手がスムーズに行えたため。本研究では,表層水を保持していた唯一の地球外天体である火星に着目し,表層酸化過程に重要な役割を果たす,海・氷床の消失過程の解明を目指す。具体的には、年代の特定されている隕石から得られた表層水の水素同位体比を入力パラメターとする水散逸モデルを用い,各時代間で消失した表層水および氷の総量を推定する。また,各時代における水の総量(固体水+液体水)と,地形情報から推定されている海水量(液体水)との差分から,固体水と液体水の量比を推定し,惑星表面温度や大気組成といった表層環境を決定付けるパラメターに制約を与える。H30年度は、表層に水が存在していたとされる約40ー44億年前の情報を得るため、H29年度にInstitute of Meteoritics(University of New Mexico)より入手した火星隕石の水素同位体分析を行った。水素同位体分析は、引き続き共同研究先(カーネギー研究所)に設置されている二次イオン質量分析計(NanoSIMS 50L)を用いた。また、若手PDの加入により、当初予定していた水素同位体分析に加え、NanoSIMS 50Lを用いた局所での窒素同位体分析を行うことが可能となった。H30年度は、窒素同位体分析に関する予察的な検討(分析条件の最適化など)や、分析に必要な標準物質(窒素を含む深海性炭酸塩鉱物)の準備を行った。深海性炭酸塩鉱物の準備に関し、海洋研究開発機構と新たな共同研究を開始した。共同研究先のラボディレクターの死去により、当初の予定通りの分析が行えなかった。残りの分析に関してはH31年夏以降に実施予定である。ヒューストンでの滞在期間中に新たな隕石試料の手配に関する議論が行えた。H29年度はこの試料を用いて研究を遂行していく。H30年度より、本プロジェクトに若手PDが参画することとなった。若手PDとの作業分担を行うことで、データ解析および論文化を加速する予定である。具体的には、隕石の初期記載、同位体分析に必要は標準物質の準備の作業分担を行う代わりに、一部の論文に関しては、PDが筆頭著者となり報告を行う。
気候変動に対して脆弱なコミュニティにおけるアジアの私企業のもつ役割とその潜在性

東南アジアにおいて気候変動に特に脆弱なコミュニティは、同地域の人口の4分の3を占め、また世界で一番沿岸沿いの農業に依存する貧困層の人口が多い同地域において、気候変動への脆弱性の削減は急務である。本研究の結果、特に研究対象とした国々(タイ、ベトナム、インドネシアそしてフィリピン)が東南アジア地域においても特に私企業と脆弱なコミュニティのウィンウィンの関係が確保された協働事例が存在することが判明した。またこれらの事例のすべては金融・保険セクターから来ており、同セクターのもつさらなる可能性、潜在性が大きく示唆された。本研究は企業が気候変動の適応策に対してもっている可能性、そして潜在性に関する分析を目的とする。具体的には特にアジアの先進及び中進国における私企業の活動に焦点を当て、企業の活動、商品、そして技術・ノウハウがどのような形で、気候変動の影響を受けている脆弱なコミュニティに対して有用なのかを明らかにするものである。研究一年目(平成26年度)には、アジアにおいて活動拠点を置いている企業がどのような形で気候変動のリスクから生じる脆弱性の削減に寄与しているのかを調べ(以上本研究目的(1))、具体的にタイおよびベトナムにおいて聞き取り調査をし、個別の企業に関してより特定的に現地レベルでの活動について聞き取り、および調査をした((2)および(3))。また企業活動だけではなく、本研究にとって非常に大事な分野である気候変動適応分野における評価手法についても研究を重ね、国際学会での発表、論文へと結果を出してきている。本研究は企業が気候変動の適応策に対して持っている可能性そして潜在性に関する分析を目的とした。具体的にはアジアの先進および中進国における私企業の活動に焦点を当て、企業の活動、商品、そして技術・ノウハウがどのような形で、気候変動の影響を受けている脆弱なコミュニティに対して有用なのかを明らかにしてきた。研究一年目にはアジアにおいて活動拠点を置いている企業がどのような形で気候変動のリスクから生じる脆弱性の削減に寄与しているのかを調べ、具体的にタイ、ベトナムにおいて聞き取り調査を、そして他のアセアン諸国に関する分析をし、個別の企業に関してより特定的に現地レベルでの活動について聞き取り、調査をした。研究二年目では、企業に特化し、彼らの活動だけでなく、本研究にとって非常に大事な分野である気候変動適応分野における評価手法についても研究を重ね、国際学会での発表や、論文投稿も行った。ここでは、気候変動適応策分野の活動そのものではなく、それらの活動を効果的にいたらしめている背景・状況とはなんなのかに特に注目し、アセアン諸国、そしてその他の世界各国における適応策の事後評価を分析した。企業の社会責任の活動に関する様々なデータベースを参照し、特にアセアン諸国における気候リスクへの脆弱性の低減に資する企業の活動を、彼らのコア事業の商品・サービスを通して実現している例を現地調査も含めて調べ、その傾向、可能性と制限を分析し、広く学際的な場所で発表、共有をすることができた。計画通り、気候変動のリスクにさらされているアジア諸国における、私企業のコア事業の商品・サービスを通した脆弱性削減について研究を進められてきているため。気候変動分野における私企業との連携個別の企業の事例だけにとどまらず、包括的にどのような手法で気候変動適応策の評価ができるのかについてもより研究を進め、実際の企業の事例、そして将来的に潜在性のある事例モデルについてもそのマッチング(脆弱コミュニティと企業の商品・サービス)を示していく予定である。
「甘さ」に着目したマルチモーダル知覚情報の「干渉構造」解明に関する実証研究

本研究は、申請者が研究活動スタート支援研究(H2829課題番号:16H07097)で実証・提案した評価モデル(以下、「マルチモーダル干渉構造モデル」と称する)の高度化を目的とする。「マルチモーダル干渉構造モデル」では、「感覚器間・内の知覚情報一致可否」および「親近感(馴染みがもたらす情動)」が評価へどのように「干渉」するかについて明らかにする。本研究によって「感性価値」に影響する要素への効果を定量的に判断でき、より感性価値の高いデザインの提案や創造に結びつけることが可能となる。
気腫性肺嚢胞の嚢胞形成に嚢胞腎の責任遺伝子PKD-1は関与するか?

胸膜直下に気腫性嚢胞が発生し気胸に発展する機序については未だ明確に解明されていない.今回,嚢胞形成の分子機序を明らかにする目的で嚢胞性の変化を示す遺伝性疾患である嚢胞腎の責任遺伝子PKD-1に着目し,肺嚢胞における発現を検討した.1999年2月から2002年1月までに当施設にて手術を行い,遺伝子解析材料として使用する承諾を得た気胸手術によって得られた59検体を対象とした.免疫染色には、抗ヒトPKD-1ポリクローナル抗体(Santa Cruz)を用いた.気腫性肺嚢胞59例中,15例がPKD-1で染色された.肺嚢胞を単発例,多発例に分けたところ,このうち肺嚢胞が多発した症例でのPKD-1陽性率は24.4%であった.今回の検討で肺の嚢胞形成にPKD-1抗体で染色される蛋白の関連が示唆されたが,これがPKD-1蛋白かあるいはPKD-1類縁の共通エピトープを有する肺嚢胞形成に特異的な遺伝子産物かどうかは明らかではない.病理組織から蛋白を抽出しウエスタンブロットで分子量の確認を行っている.また肺嚢胞組織で免疫染色陽性となったものには当該産物に対応するmRNAが存在するはずで,このm-RNAを増幅するRT-PCR-Cloning-Sequencingにより発現している遺伝子が明らかとなる.現段階でPKD-1のmRNAの検出には至っていない.今後さらにサザンブロットによるアプローチも行いmultiple locusなプローブを用いて遺伝子の構造変異・欠失を解析する必要があると考えられた.本年度は嚢胞性の変化を示す嚢胞腎の責任遺伝子PKD-1が気腫性肺嚢胞に存在するかどうかについての検討である.遺伝子解析材料として使用する承諾を得た気胸手術によって得られた42検体を対象とした.(患者には検体採取により肺の切除範囲が変わらないことや,結果が出れば報告するなどプライバシーを厳守することで了解を得て研究を行うこととしている.)このうち16例についてヒトPKD-1モノクローナル抗体による免疫染色を行った.対照には病死した嚢胞腎を強く疑う腎の検体を用いた.平成14年度はさらに症例を重ねて条件を検討し,気腫性肺嚢胞にPKD-1遺伝子発現異常が見いだせない場合,サザンブロッティング法を行いDNA抽出し遺伝子の構造変異・欠失を解析する予定である.胸膜直下に気腫性嚢胞が発生し気胸に発展する機序については未だ明確に解明されていない.今回,嚢胞形成の分子機序を明らかにする目的で嚢胞性の変化を示す遺伝性疾患である嚢胞腎の責任遺伝子PKD-1に着目し,肺嚢胞における発現を検討した.1999年2月から2002年1月までに当施設にて手術を行い,遺伝子解析材料として使用する承諾を得た気胸手術によって得られた59検体を対象とした.免疫染色には、抗ヒトPKD-1ポリクローナル抗体(Santa Cruz)を用いた.気腫性肺嚢胞59例中,15例がPKD-1で染色された.肺嚢胞を単発例,多発例に分けたところ,このうち肺嚢胞が多発した症例でのPKD-1陽性率は24.4%であった.今回の検討で肺の嚢胞形成にPKD-1抗体で染色される蛋白の関連が示唆されたが,これがPKD-1蛋白かあるいはPKD-1類縁の共通エピトープを有する肺嚢胞形成に特異的な遺伝子産物かどうかは明らかではない.病理組織から蛋白を抽出しウエスタンブロットで分子量の確認を行っている.また肺嚢胞組織で免疫染色陽性となったものには当該産物に対応するmRNAが存在するはずで,このm-RNAを増幅するRT-PCR-Cloning-Sequencingにより発現している遺伝子が明らかとなる.現段階でPKD-1のmRNAの検出には至っていない.今後さらにサザンブロットによるアプローチも行いmultiple locusなプローブを用いて遺伝子の構造変異・欠失を解析する必要があると考えられた.
軟X線共鳴逆光電子分光による非占有d,f電子状態の研究

本研究では、軟X線領域での逆光電子分光装置を開発・整備し、遷移金属元素および希土類元素の内殻電子励起領域における共鳴逆光電子分光実験の開拓、ならびに、共鳴逆光電子放出の理論構築を目指す。そのため、10100eVの領域の光を分光検する真空紫外逆光電子分光装置、および、100-1000eVの領域の光を分光検する軟X線逆光電子分光装置の2系列を整備した。前者では、球面不等間隔回折格子を利用した発光分光器を設計・製作した。中心刻線数600本、1200本の2枚の回折格子で、上記領域をカバーする。一方後者では、通常のローランド型分光器を採用し、600本、1200本、2400本の3枚の球面等間隔回折格子を用いた。解析槽には、発光分光器の他に、X線管、希ガス放電管、電子エネルギー分析器が取り付けられており、共鳴逆光電子分光の他に、X線光電子分光実験、真空紫外光電子分光実験も可能である。また、本研究で整備した発光分光器を、広島大学放射光科学研究センターの放射光源に接続すれば、発光分光実験も可能で、電子状態の総合的な研究が可能である。本研究では、軟X線域での逆光電子分光装置を開発し、遷移金属元素および希土類元素の内殻電子励起領域における共鳴逆光電子分光実験の開拓ならびに共鳴逆電子放出の理論構築を目指す。本年度は、共鳴逆光電子分光のための分光器の設計ならびに超高真空槽の設計・製作を行った。分光器の光学系として。切り替え可能な回析格子、スリット、2次元光検出器からなるものを考え、光線追跡により最適化を行った。50μmのスリットを用いたときの分解能は、光のエネルギーが100eVのとき0.1eV以下である。超高真空槽は、逆光電子分光実験のための分光器、電子銃が収納できるほか、電子状態に対して相補的な情報を与える光電子分光、資料表面評価装置等がとりつけられるように設計している。次年度は、電子銃の整備、光検出器からの信号処理の整備を行ったあと、遷移金属化合物の共鳴逆光電子分光実験を行う。本研究では、軟X線領域での逆光電子分光装置を開発し、遷移金属元素および希土類元素の内殻電子励起領域における共鳴逆光電子分光実験の開拓ならびに共鳴逆光電子放出の理論構築を目指す。本年度は、昨年度行った共鳴光電子分光器の設計をもとに、分光装置を納めるための超高真空槽の製作、排気系の整備、光学系のアライメント、電子銃の設計を行った。分光器の光学系は、切り替え可能な回折格子、スリット、2次元光検出器よりなる。光線追跡を行った結果によると、100μmのスリットを用いたときの分解能は、光のエネルギーが100eVのとき、0.2eV以下である。He-Neレーザーを用いた光学系の調整がすでに完了しており、希ガスランプを用いた性能評価にはいる予定である。次年度は、電子銃の立ち上げ、光検出器からの信号処理の整備を行った後、遷移金属化合物の共鳴光電子分光実験を行う。昨年度までに分光装置を納めるための超高真空槽の製作、排気系の整備、電子銃の設計が完了した。本年度は、まず昨年度に設計した電子銃の立ち上げ・整備を行った。電子銃に用いているレンズ系、引き出し電極、カソードに印可する電圧の最適化を行うことにより、平行電子線の取り出し、および、共鳴逆光電子スペクトルの測定に充分な電流値を得ることに成功した。平行して球面不等間隔回折格子の組み込みを行い、He-Neレーザーを用いた光学系の調整を行った。また、光検出器の駆動および信号処理の整備も平行してすすめた。NI社のLabViewを用いて駆動および信号処理プログラムを作製し、光検出器の組み込み後、駆動試験を行ったところ、高精度で制御できることを確認した。
薬剤耐性肝炎ウイルスにおける単塩基変異株の定量測定系の開発

B型肝炎治療に用いられる核酸アナログ製剤の臨床上の問題は、耐性変異ウイルスが出現して肝炎の再燃を起こすことである。生体内には複数の変異株が混在している事が多いが、これまで、個々の変異ウイルスを正確に測定する事は困難であった。今回、複数の変異ウイルスが混在した状態でも、1カ所の塩基が変異しているウイルス株を個別に、高感度に定量することのできる新しい方法を開発した。本測定系は、他の変異株測定にも応用可能な方法である。上記課題における新規定量測定系を確立するため、当該年度においては基礎検討を進めた。まず、変異株の定量測定系を開発するために、核酸アナログ製剤(ラミブジン)に対する各耐性変異の標準測定用ライブラリーを作成し、定量検定を可能にした。次に、変異株の定量測定をMGBプローブ単独によるreal-time PCR法で施行し、本法による感度・特異度を検討した。その結果、対象株が検体中で量的優勢の場合には良好な定量性を認めるものの、比較少数の場合には正確な測定が困難であり、本法の定量測定系としての限界を明らかにした。そこで、MGBプローブとペプチド核酸を併用する新規の測定系を開発するために基礎検討を行った。本法によるペプチド核酸と相補株および非相補株に対する特異的結合性などの基礎的検討により、既報告の方法と比較して、測定感度・特異度においては同等あるいはそれ以上の有用性を有する測定系であることを明らかにした。反応液中成分の量的条件などの検討を行い、至適測定系を確立した。本測定法を用いることにより、検体中に複数種の単塩基変異ウイルスが存在する場合でも、高い感度・特異度を維持して、それぞれの変異株の定量測定が可能であることを示した。今回新たに開発した測定系を用いて患者検体の測定を行った結果、変異ウイルスの定量測定は臨床経過の評価をする場合にも重要な情報となることを明らかにした。本研究の成果は国際学会にも採択され、一部を口演として発表した。昨年度は、新規定量測定系における基礎検討を進め、real-time PCR法による変異株測定において、MGBプローブのみの測定では比較少数の変異株測定の定量性を確保できず、ペプチド核酸を併用することにより、正確な定量が可能となることを明らかにした。本年度は、この新規定量系を臨床検体の測定に導入し、臨床的有用性の評価・解析を行った。ラミブジン投与中のB型慢性肝炎患者に対する個々の症例の解析により、出現する耐性ウイルスの種類や経時的変動、さらに肝炎再燃(breakthrough hepatitis)への影響は、症例によって異なることが明らかなになった。経時的な変異株の種類や、量的な変動とその後に生ずる肝機能障害とに関連から、変異株とbreakthrough hepatitisの関係を群別化することができた。現在、保険適応下で測定可能なHBV-DNAの定量結果と比較すると、個々の変異株の経時的変動が可能となることで、発現する肝炎の時期・程度における予知・予測に関する精度が高まることが明らかにされた。さらに、種類の異なる耐性ウイルス株の増殖性や、複数の抗HBV剤に対する反応性の違いなどを、in vivoの変化から解析することができた。本方法の基礎検討結果から変異ウイルスの定量測定系の限界も明らかとなり、既報の測定系の一部において、定量性の評価が不十分であることも示唆された。現在、これらの成果に関しては論文化し投稿中である。本研究の最終年度として、薬剤耐性肝炎ウイルスにおける単塩基変異株の定量測定系の樹立と成果の公開を図った。変異株の定量測定系開発のための核酸アナログ製剤(ラミブジン)に対する各耐性変異の標準測定用ライブラリーの作成、単一変異株のreal-time PCR法による定量測定と感度・特異度の検討、MGBブローブとペプチド核酸併用による新規測定系における至適測定条件の設定、などを行い、最終的に、複数の変異ウイルスが混在する検体においても高い感度・特異度を維持した単変異ウイルスの定量測定系を確立した。さらに、本測定法を用いた臨床症例の評価を行い、breakthfough hepatitisの病態や経時的変化、肝障害との関連性などの評価に有用であることを明らかにした。これらの成果を、査読を有する雑誌に投稿し、受理、掲載された。本研究の成績により、これまで正確に評価し得なかった、混在する変異株の個別的定量的測定が可能となった。本研究では、ラミブジンに対する耐性変異株の検討を行ったが、他の核酸アナログ製剤などに対するB型肝炎耐性ウイルス株定量にも応用可能である。さらに、C型肝炎治療薬として臨床導入が予定されている蛋白分解酵素阻害剤に対する耐性変異出現は、臨床的にも重要な課題であるが、本測定法の導入は有用であると考えられる。本測定法は肝炎ウイルス定量に限定的ではなく、広範囲な臨床的有用性を有するものと考えられた。
否定・文末詞の解釈に関わるピッチパタンの確定

本研究では<否定>と<文末詞>のジャナイを取り上げ、スキジャナイ下降調のピッチを分析再合成した音声を用いた試聴実験を行って、<否定><文末詞>それぞれに聞こえるピッチパタンの範囲を明らかにした。<否定><文末詞>それぞれの用法として話者の発話意図と聞き手の解釈が一致した音声で、発話持続時間が大体同じものを選び、スキジャナイのジャとナイの母音を半音ずつ6段階に加工した。6×6×2=72個の音声をランダムに並べ試聴実験の刺激とした。初年度は<文末詞><否定>の強制選択実験と、<否定><文末詞>それぞれの用法としての音声評価実験を行った。次年度はintensityが発話意図解釈に与える影響を知るため、<文末詞>と<否定>の音声のintensityを加工して同様の試聴実験を行った。2年間の実験結果をまとめると以下の3点になる。1. <文末詞><否定>のそれぞれに判定されたピッチパタンは異なる。<否定>はキからジャにかけての下降が急激で、ナイに小山があることが特徴である。<文末詞>はキからジャにかけての下降が小さくナイの下降がなだらかで山がない。2.ピッチレンジはジャが高いと<文末詞>に、ジャ・ナイが低いと<否定>に判定される傾向がある。3. <文末詞><否定>のどちらに聞こえるかを決定するのは主としてピッチパタンであり、intensityの影響は小さい。実験に用いた刺激ではキの母音のピッチは固定したが、結果からキのピッチが高くなると、<文末詞>の判定が増えることが予測される。用法の判定にはスキジャナイのすべての母音のピッチが関与していることが明らかになった。1.目的本研究の目的は、<否定>と<文末詞>のジャナイを取り上げ、ピッチを分析・再合成した音声を刺激とした試聴実験を行って、<否定><文末詞>それぞれに(1)最適なピッチパタンの範囲と、(2)許容されるピッチパタンの範囲を明らかにし、文のピッチパタンと発話意図解釈の対応の記述を精密化することである。2.実験藤崎モデルを用いてピッチを分析・再合成した音声を作成した以下の72個の音声を試聴実験の刺激とした。<否定>スキジャナイの加工音声:/ja/のピッチ6段階×/nai/のピッチ6段階=36個<文末詞>スキジャナイの加工音声:/ja/のピッチ6段階×/nai/のピッチ6段階=36個首都圏出身の大学生を被験者として、次の3種の試聴実験を行った。(1)強制選択被験者は刺激を聞いて、その刺激が<否定>の用法か<文末詞>の用法か選択する。(2)<否定>としての評価被験者は刺激を聞いて、その刺激が<否定>の用法として適切かどうか5段階で評価する。(3)<文末詞>としての評価被験者は刺激を聞いて、その刺激が<文末詞>の用法として適切かどうか5段階で評価する。3.結果被験者の80%以上が<文末詞>または<否定>と解釈した刺激および被験者が5段階評価で4以上の評価をした刺激を<否定>または<文末詞>に聞こえる刺激とすると:

(1)本実験で加工した範囲のピッチの変動では,全体としては否定と解釈された刺激のほうが多かった。(2)<文末詞>に解釈される刺激は、元否定音声、元文末詞音声どちらを加工した刺激の場合も、jaのピッチが高いものに多い。一方,<否定>に解釈される刺激はjaのピッチがそれより低い元否定音声を加工した刺激に多い。これらの刺激音声のピッチパタンを重ねてえがくと、否定の刺激のピッチパタン(とくにkiからjaにかけての下降の曲線)は文末詞の刺激のピッチパタンの内側にあるように見える。つまり下降が早く起こり急である。ピッチパタンを細かく見ると、jaの高さが共通でnaiの高さが半音違う刺激で<否定><文末詞>の解釈が分かれている場合が見られ、発話意図解釈に関わる要因にさらに精密な検討を要する。本研究では<否定>と<文末詞>のジャナイを取り上げ、スキジャナイ下降調を例としてピッチを分析再合成した音声を用いた試聴実験を行って、<否定><文末詞>それぞれに聞こえるピッチパタンの範囲を明らかにした。<否定><文末詞>それぞれの用法として話者の発話意図と聞き手の解釈が一致した音声で、発話持続時間が大体同じ音声を材料として、スキジャナイのジャとナイの母音を半音ずつ6段階に加工した。6×6×2=72個の音声をランダムに並べたものを試聴実験の刺激として、初年度は<文末詞>と<否定>の強制選択実験と、<否定><文末詞>それぞれの用法としての音声評価実験を行った。次年度はintensityが発話意図解釈に与える影響を知るため、<文末詞>と<否定>の音声のintensityを加工して試聴実験を行った。2年間の実験結果をまとめると以下の2点になる。1.<文末詞><否定>のそれぞれに判定されたピッチパタンは異なる。<否定>に聞こえる音声はキからジャにかけての下降が急激で、ナイに小山があることが特徴である。<文末詞>ではキからジャにかけての下降が小さくナイの下降がなだらか、または最後に直角的に下がる。2.ピッチレンジではジャが高いと<文末詞>に、ジャ・ナイが低いと<否定>に判定される傾向がある。3.<文末詞><否定>のどちらに聞こえるかを決定するのは主としてピッチパタンであり、intensityの影響は小さい。実験に用いた刺激ではキの母音のピッチは固定して、ジャとナイのピッチを変えたものであった。その刺激の範囲では<否定>の判定のほうが多かった。キのピッチが高くなると、<文末詞>の判定が増えることが予測される。用法の判定にはスキジャナイのすべての母音のピッチが関与していることが明らかになった。
ファブリー病におけるマルベリー細胞定量的評価法の開発とその臨床的価値

ファブリー病は遺伝的な酵素欠損により、糖脂質が蓄積することで臓器障害をきたす。酵素補充療法は根本的な治療法であるが、臓器障害が進行した状態では治療効果が十分に得られないことが多く、早期発見が重要であるとされている。尿中マルベリー細胞はファブリー病患者に特徴的な尿沈渣成分であり診断につながった報告もある。しかしその起源や本態について不明な部分も多いのが現状である。そこで尿中マルベリー細胞の起源や本態を明らかにし、臨床的意義を明らかにする。
個体レベルでの物理的損傷に対する応答・修復メカニズムの解明

本研究は、個体レベルでの傷などに対する応答・修復メカニズムの解明を目指す。生体は損傷に対する修復能を持っている。数細胞レベルの損傷に対する組織修復は日常的に生じている一方、大きな傷をうけると、線維化の結果傷跡として残る場合もあれば、完全な組織再生が行われる場合もある。また組織損傷は全身への影響もあり、これは急性ショック症状として臨床的に問題となる。組織修復メカニズムが組織の種類や年齢に依存することは分かってきたが、そのメカニズムの詳細は未知である。本研究は、ショウジョウバエを用いて、従来、培養細胞や哺乳類では解析するのが非常に困難な、個体レベルでの損傷応答メカニズムの基本原理の解明を目指す。本年は、昨年度に引き続いて、ショウジョウバエを用いて、傷だけではなく、癌、老化、栄養異常、酸化ストレス、飢餓、DNAダメージなどさまざまなストレスに対する細胞・組織・個体の反応を調べた。このことで、今後研究をしていく上で非常に重要な実験基盤が確立された。さらに遺伝学を使ったスクリーニングを行うことで、癌や老化や栄養異常などのストレスに抵抗性のあるショウジョウバエを見いだした。現在それらの変異体の解析を行っている。また個体レベルでのストレス応答に関与していると想定される新規の分泌ペプチドの解析を行うために、分泌ペプチドの変異体や過剰発現系統を作製した。分泌ペプチドの変異体や過剰発現系統を様々なストレス下におくことで、分泌ペプチドの生理的機能を探索した。本年の研究で見つかった癌や老化などのストレスに抵抗性のあるショウジョウバエをさらに解析する。また個体レベルのストレス応答に関与していると相当される新規ペプチドの解析も継続して行う。本年は、ショウジョウバエを用いて、傷だけではなく、癌、老化、栄養異常などさまざまなストレスに対する細胞・組織・個体の反応を調べた。

現在それらの変異体の解析を行っている。また個体レベルでのストレス応答に関与していると想定される新規の分泌ペプチドの解析を行うために、分泌ペプチドの変異個体や過剰発現系統を作製した。本研究は、個体レベルでの傷などに対する応答・修復メカニズムの解明を目指す。生体は損傷に対する修復能を持っている。数細胞レベルの損傷に対する組織修復は日常的に生じている一方、大きな傷をうけると、線維化の結果傷跡として残る場合もあれば、完全な組織再生が行われる場合もある。また組織損傷は全身への影響もあり、これは急性ショック症状として臨床的に問題となる。組織修復メカニズムが組織の種類や年齢に依存することは分かってきたが、そのメカニズムの詳細は未知である。本研究は、ショウジョウバエを用いて、従来、培養細胞や哺乳類では解析するのが非常に困難な、個体レベルでの損傷応答メカニズムの基本原理の解明を目指す。本年は、昨年度に引き続いて、ショウジョウバエを用いて、傷だけではなく、癌、老化、栄養異常、酸化ストレス、飢餓などさまざまなストレスに対する細胞・組織・個体の反応を調べた。このことで、今後研究をしていく上で非常に重要な実験基盤が確立された。さらに遺伝学を使ったスクリーニングを行うことで、癌や老化や栄養異常などのストレスに抵抗性のあるショウジョウバエを見いだした。また個体レベルでのストレス応答に関与していると想定される新規の分泌ペプチドの解析を行うために、分泌ペプチドの変異体や過剰発現系統を作製した。分泌ペプチドの変異体や過剰発現系統を様々なストレス下におくことで、分泌ペプチドの生理的機能を探索した。
圧受容器反射の感度改善を介した新しい心不全治療を目指して

本研究では、頸動脈内膜剥離術によって頸動脈プラークを摘出することにより、交感神経機能、血圧変動、心機能が改善し、心不全治療につながることを証明することを目的としている。2019年3月時点で頸動脈内膜剥離術を施行された21例を対象として解析を行った。MIBG心筋シンチグラフィ、24時間心電図で評価した心臓交感神経機能は、いずれも術後に有意に改善していた。血圧変動に関しては予想と少し異なる結果となり、評価方法の見直しをしている段階である。左室収縮能に関しては術後変化はなかったが、左室拡張能、左房圧は術後に改善する傾向を認めた。本研究成果については、2019年3月に日本循環器学会総会で報告した。本結果は術前と術後3か月の時点を評価対象としているが、長期的な追跡も必要であると考えている。一方、新規超音波技術であるSuperb Microvascular Imaging (SMI)を用いて頸動脈評価を行う研究を同時進行で進めており、本研究と同様に内膜剥離術を施行した頸動脈狭窄症例9例と、高安動脈炎症例10例を、2019年3月時点で対象としている。頸動脈狭窄症の頸動脈プラークにおいて、不安定性を示唆するプラーク内新生血管を、SMIを用いて可視化し、これを病理標本とも比較してプラーク内微小血管の存在を確認した。こちらに関しては現在論文作成中である。また高安動脈炎症例において、PET-CTのFDG集積に一致する部位に頸動脈壁内新生血管をSMIを用いて証明した。こちらに関してはEuropean Heart Journal Cardiovascular Imagingに症例報告として投稿し、2019年1月受理となった。研究開始時と臨床状況が変化して頸動脈内膜剥離術を当院で施行する機会が少なくなったため、症例数が集まりにくくなってきた。そのため、対象症例を長期的に追跡することを現在試みている。また、同様の頸動脈病変を有する症例を対象に、新規超音波技術を用いて同時進行で進められる研究を現在行っている。いずれも既存の装置で保険診療の範囲内で研究を行うことが可能である。臨床統計の手法に関して、岩手県花巻市で行われている大迫研究に参加して学んでいる。今後は、本研究の結果を取りまとめて論文発表することを目標とする。ひとつは、頸動脈内膜剥離術によって頸動脈プラークを摘出することにより、交感神経機能、心機能が改善し、心不全治療につながることを公表する。また、新たに始めたSMIでの頸動脈病変評価の臨床応用のデータを蓄積して、こちらも論文作成して公表することを目標とする。今年度は既存の物品で対応できたため初期費用としての物品費がかからず、繰り越し分は次年度の物品費、論文作成費等に使用予定である。
霊長類脳における非侵襲的かつ領野選択的な遺伝子導入法の開発

本研究ではマカクザルとマーモセットを対象として、キャプシド改変型AAVベクターの静脈内投与と、マイクロバブルと経頭蓋超音波照射を利用したBBBの一過性破壊などの導入法により、霊長類脳において、非侵襲的かつ目的とする領域(あるいは部位)選択的な遺伝子操作を実現する手法を確立することを目指す。このために(1)静脈内投与における霊長類脳への遺伝子導入に適した改変AAVベクターの開発、(2)経頭蓋収束超音波照射(tFUS)を利用した、ターゲット選択的な遺伝子導入法の開発、(3)経頭蓋超音波照射を利用した、霊長類における全脳的な遺伝子導入法の開発、の3つの研究計画を遂行する。
メチオニンPETによるアルツハイマー病患者の神経細胞障害の同定

軽度から中等度のアルツハイマー病(AD)患者に対してメチオニンPET(MET)とIMP-SPECTを施行し、後部帯状回(PCC)その他の領域の脳血流(CBF)と蛋白合成(CPS)を比較したところ、PCCのCBFはCPSより有意に低かった。このことより脳血流SPECTで認められるPCCの血流低下は実際の神経細胞障害の程度以上であると考えられた。またMETでADの神経細胞の障害を評価できる可能性が示唆された。脳腫瘍などの際に臨床的に用いられている11C-メチオニンポジトロン断層画像(MET)は、神経細胞における蛋白合成(CPS)を評価できる事が知られており、近年、神経線維の遮断により障害のない遠隔部位にも機能低下像が現れる現象である遠隔効果を伴わずに神経細胞障害を評価する事が可能である事がわかった。そこで、8例の軽度中等度AD患者に対してMET及び123I-IMP-単一光子放射断層画像(IMP)を施行し、脳血流(CBF)とCPSの障害程度を比較した。対象群(HC)として、年齢、教育歴をほぼ一致させた8名の健常高齢者にIMPを実施した。各画像を、評価者によるbiasを除外するためにNEUROSTATを用いて解剖学的標準化を行った後にテンプレートMRI上に関心領域(ROI)を設定し、被験者間の核種の取り込みの差によるbiasを除外するために後頭葉との比を算出して検討した。ROIは、前頭葉、頭頂葉、内側側頭葉(MTL)、PCC、後頭葉に設定した。IMPでは、HCに対しADではPCCのみCBF低下が認められ、ADでは他の領域に比してPCCとMTLでCBFが低下していた。一方、METではIMPと比較してPCCのCPSはCBFに比して保たれていたが、他の領域と比較するとPCCとMTLではCPSは低下していた。PCCとMTLで認められたCPS低下は神経細胞障害を反映すると考えられ、PCCではCBFほどのCPSの低下が認められなかった事と併せて、神経細胞障害と遠隔効果の二つの要因によってIMPではPCCでのCBF低下が観察されるのではないかと推測された。以上より、METは遠隔効果に影響されずに神経細胞障害を評価可能であり、ADにおける機能低下の主たる原因である神経細胞障害をin vivoで評価可能なバイオマーカーとして有用ではないかと考えられた。現在、アルツハイマー病(AD)患者の脳機能障害の評価は脳血流SPECT検査で行われるのが一般的となっている。これは神経細胞機能と脳血流(CBF)とが相関するという事実に基づいてのことである。そして近年、脳血流SPECT検査をADに対して行った複数の研究で、ADでは初期から後部帯状回(PCC)のCBFの低下が認められることが明らかになった。しかしPCCは、病理学的には初期のADにおいては異常を認めにくい部位であることが知られており、両者に解離を認めることが問題となっている。そこで我々は神経細胞の蛋白合成(CPS)をin vivoで測定できる11C-メチオニンポジトロン断層画像(MET)を用いて、PCCのCPSを測定しCBFと比較した。対象は8例の軽度中等度のAD患者(年齢73.0±5.4歳、平均MMSE19.3±3.3)。この症例に対してMETと1231-IMP-単一光子放射断層画像(IMP)を施行し、PCCのCBFとCPSを比較した。対照群(HC)として、年齢、教育歴をほぼ一致させた8名の健常高齢者(MMSE28.6±1.4)にIMPを実施した。各画像を、評価者によるbiasを除外するためにNEUROSTATを用いて解剖学的標準化を行った。また被験者間の核種の取り込みの差によるbiasを除外するためにPCCのCBFとCPSはともに後頭葉との比を算出して解析に用いた。HCとADの間でIMPを比較した結果、PCCのCBFはADで有意に低下していた。ADにおいてMETとIMPとを比較した結果では、PCCのCBFはCPSより有意に低下していた。このことより脳血流SPECTで認められる血流低下は実際の神経細胞障害の程度よりも大きいことが明らかになった。またMETはADの神経細胞の障害を評価する方法として有用性であると考えられた。
線維芽細胞由来の肥満細胞増殖因子に関する研究

マウスケラチノサイト由来細胞株KCMH-1の培養上清中に含まれる因子(MGF)は、線維芽細胞との共生培養系で肥満細胞の増殖を誘導する。これまでにMGFの精製を試みてきたが、未だその因子の単離同定には至っていない。昨年までの研究で、MGFによる肥満細胞の増殖はシクロオキシゲナーゼのインヒビターであるインドメタシンで抑制され、また、線維芽細胞との共生培養において、プロスタグランディンE2を添加すると肥満細胞の増殖が惹起できることが明らかとなった。このことから、共生培養系におけるMGFによる肥満細胞の増殖には線維芽細胞におけるシクロオキシゲナーゼの活性化によるプロスタグランディンEの産生亢進が関与していることが推察された。本年度はMGF刺激を受けた線維芽細胞によるシクロオキシゲナーゼの活性化と、プロスタグランディンE2の産生増強について検討した。種々の時間MGF存在下で培養した線維芽細胞を回収し、その蛋白成分をSDS-PAGEで展開し、PVDFメンブレンに転写し、抗シクロオキシゲナーゼ-1(COX-1)抗体、・及び抗シクロオキシゲナーゼ-2(COX-2)抗体を用いて、線維芽細胞におけるそれらの発現増強の有無を検討した。その結果、MGF刺激された線維芽細胞は、COX-1またはCOX-2の発現を増強しなかった。また、MGF存在下で埼養した線維芽細胞の培養上清中のプロスタグランディンE2量は、無刺激の線維芽細胞の培養上清中と同程度しか存在しなかった。今後は共生培養系における肥満細胞増殖に、MGFおよびプロスタグランディンE2がどのような機序で作用しているかを検討する予定である。本年度は、肥満細胞一線維芽細胞の共生培養系において、MGFがいかなる細胞内シグナルの活性化を惹起するかを中心に解析を試みた。肥満細胞一線維芽細胞の共生培養系に部分精製したMGFを添加し、誘導される肥満細胞増殖に対する各種細胞内シグナル伝達阻害物質による影響を調べた。その結果、シクロオキシゲナーゼの阻害物質であるインドメタシン(10μM)の添加により、MGFによる肥満細胞増殖が抑制されることが判明した。さらに、肥満細胞一線維芽細胞の共生培養系にMGFの代わりにプロスタグランディンE2(PGE2、1μM)を添加すると、MGFと同様に肥満細胞増殖が生じた。このことから、MGFは線維芽細胞を刺激することによってシクロオキシゲナーゼを活性化し、プロスタグランディンを産生することによって肥満細胞増殖を惹起している可能性が推察された。しかしMGFの部分精製標品で刺激した線維芽細胞の上清中のPGE2をELISA法で測定すると、無刺激の上清に比較して若干の産生増強がみられるが、肥満細胞増殖を惹起し得るほどの十分な量は検出できなかった。肥満細胞一線維芽細胞の共生培養系における肥満細胞増殖に、プロスタグランディンが何らかの関与をしていることは考えられるが、MGFによる作用にどれだけ関わっているかは不明である。今後MGFの精製を進めるとともに、その作用機序の解明に向けて研究を進めて行く予定である。