hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
ISH法を用いた歯周病関連菌の局在観察と薬剤感受性試験

歯周病患者を対象に、歯周ポケット内からペーパーポイントを用いて細菌を採取し、培養法による細菌の同定を行い、歯周ポケット内細菌叢を個々の症例について明らかにした。それに続くP.gingivalisのDNA採取は、Smithらの方法によって行い、純培養を5%緬羊脱繊維素血液寒天平板培地にて得、白金耳で菌株を集菌した後、TEbuffer中に入れる。次に、-20°Cのフリーザ-に入れることにより、DNA採取用サンプルを多数の症例についてストックした。加えてISH法による薬剤感受性の検討を行うために、歯周外科処置時等に除去したポケット内縁上皮および歯牙を標本とし、P.gingivalisのDNAプローベにてハイブリッドすることにより、P.gingivalisをin situにて同定する検体を多数ストックした。また各種薬剤の感受性をin vivoで調べるため、ペーパーポイントにてサンプリングした検体自体でDNAブローベによるハイブリッドができるよう、各種プローベの特異度・鋭敏度を調べるため、現在P.gingivalisの外膜蛋白および線毛遺伝子(fim A)についてその有用性を調査中。多数の臨床分離株について、DNAシーケンスされたP.gingivalisの標準株とDNAプローベに対するハイブリッドに差異がないことまで確認した。薬剤としてはテトラサイクリン系抗生物質のテトラサイクリン、ミノサイクリン、歯科Local Drug Delivery System応用薬剤のペリオクリン、SDPについて感受性試験を行った。以上の研究で歯周組織内への侵入が明らかとなっているP.gingivalisの局在を調べ得たことにより、薬剤の効果判定のみならず、歯周外科療法前後の、歯周病関連菌の局在の変化をP.gingivalisを用いたDNAプローベにより観察することが可能なので、特にGTR法におけるメンブレン上の細菌付着が、予後に与える影響を観察中。
戦前・戦後小津安二郎直筆資料群からたどる映画成立過程研究

松竹大谷図書館・川喜多記念映画文化財団など国内各所で小津安二郎直筆資料および関連資料の閲覧を行い、関係者へのインタビューを行った。これらの調査結果を集約し、2018年現在、現存する小津安二郎直筆資料群の全体像を把握することができた。一方、各データと映画制作時期とを照合する作業は継続中であり、今後の課題となる。小津安二郎とその映画については、従来は映画を丹念に「見る」ことから、多数の論考が重ねられてきた。これに対して本研究は、映画ができるまでの過程に注目する。一次資料、とりわけ、小津による「直筆ノート」や日記、台本へのメモ書き、絵コンテなどの直筆資料を対象として、映画がいかに成立したのかを明らかにしようとするものである。本研究の前段階となる過去の調査では、小津と親しくしていた作家の台詞への助言が、『早春』(1956年)に複数採用されていたことが確認できた。このように、映画を見るかぎりでは明らかにならない背景を精査し、今日、「巨匠」として流通する小津とその映画の再検討を進めてゆく。2015年度は、4月より資料寄託先のリスト化を進め、松竹大谷図書館・川喜多記念映画文化財団・個人宅を中心に分析・検討を進めた。並行して、三重県松阪市をはじめとする新規調査先において、寄託資料の概要確認と今後の研究体制構築を進め、12月より本格的な調査・分析に着手した。この過程で、既存の文献資料からは判明しない箇所に関しては、制作に関わったプロデューサーや助監督にご協力いただき、教示を得た。資料調査・成果報告とも順調に進んでいる。調査を進める過程で、当該資料を検討するために新たな調査・内容確認の必要が生じ、これらにかける時間が必要となった。当該資料の所在確認・リスト化を中心に進めた2015年度に対して、2016年度は、以上から明らかになった対象への調査・インタビューを集中して進めた。具体的には、鎌倉文学館、松竹大谷図書館、松阪市小津安二郎青春館などでの調査、三重県・神奈川県・大阪府・京都府におけるインタビューなどである。この過程で新たに確認できた資料もあり、当該資料の分析は2017年度に引き継ぐこととした。現在までに、上記、調査・インタビューを当初の計画通り進めることができている。このうち、鎌倉文学館では、映画『彼岸花』、『秋日和』に関わる一次資料調査とともに、上記映画の原作者である里見弴が関わった、映画・演劇・テレビドラマ台本資料調査(2016年10月時点)を進めた。以上の台本への書込の有無やその内容が、映画『早春』に比較すれば極めて少なかったことから、それぞれの背景を考察し、執筆中の論考にまとめた。以上から得られた情報を、今後どのように整理し公開してゆくのかについては、フィルムアーカイブに関する先行研究からその方法を検討中である。以上から、本研究はおおむね順調に進展しているといえる。今後、さらに研究の精度を高めていきたい。2018年度は、これまで調査を進めた松竹大谷図書館・川喜多記念映画文化財団・個人宅等での資料調査結果をリストに集約した。並行して、三重県松阪市をはじめとする2015年度以降の新規調査先について、寄託資料の内容を引き続き確認した。最終年度にデータを集約し全体像をとらえられた一方、今後の課題も明らかになった。これらの一次資料、情報をどのように保存してゆくのか、演劇台本についてはすでに広く進められている台本のアーカイブ化を、映画台本および関連資料についても更にどう進めていけるかーという二点である。本研究で得られた個々のデータを元に、調査先、関係者との連携を強めつつ具体的な方法を考えてゆきたい。成果報告として、「映画横断研究(仮)第一回報告会」(2018年1月)企画・主催(東京工業大学)、「絵コンテと撮影現場ー小津安二郎の場合」兼松熈太郎監督との対談(第20回「小津安二郎記念・蓼科高原映画祭」記念「蓼科・夏の小津会」)、「映画音響批評『小津安二郎の音を語る』司会・進行(早稲田大学)、「朝二合夜五合」渡辺千明氏聴き手(「映画監督小津安二郎企画展家族の絆・中条家の人々」兼松熈太郎氏

聴き手(以上3件いずれも2017年7月)等において本研究の成果を一部報告した。並行してアメリカ、カナダ、シンガポール等でも報告を行い、国内フィルムアーカイブの現状や映画製作会社の(アーカイブを含む)広報戦略にも言及し教示を得た。今後は上記各国のアーカイブ事情との比較検討も行う予定である。松竹大谷図書館・川喜多記念映画文化財団など国内各所で小津安二郎直筆資料および関連資料の閲覧を行い、関係者へのインタビューを行った。これらの調査結果を集約し、2018年現在、現存する小津安二郎直筆資料群の全体像を把握することができた。一方、各データと映画制作時期とを照合する作業は継続中であり、今後の課題となる。東京における資料調査は2015年度にほぼ完結しつつある。2016年度は、新たに構築した三重・京都における研究協力体制を基盤として、小津の松阪滞在時資料の調査・解読を進め、その全体像を明らかにしたい。2017年度は、これまでの調査・インタビュー結果を集約し、成果および情報公開に向けての体制を整える。国内フィルムアーカイブの現状と課題から、本調査から得られたデータの集約・公開の方法を検討する。並行して、2016年度に新たに協力を得られた関係者5名から、映画の成立過程、具体的には撮影方法や音響について、インタビューを行い、教示を得たい。上記を遂行するため、これまでの調査先に加え、京都文化博物館、立命館大学アート・リサーチセンターを拠点としてフィルムアーカイブの方法・課題を検討する。その他、国内各所で調査を進める。研究成果は2017年度に出版予定の単行本および論文集に発表する予定である。表象文化論研究計画に従って使用していたが、最終残額に関しては、それ自体を旅費ほか物品購入費にあてることができなかった。研究計画に従って使用していたが、最終残額に関しては、それ自体を旅費ほか物品購入費にあてることができなかった。当初の計画に基づき、合算できる場合には本研究において必要となる旅費の一部として使用する。
静的および動的アプローチによる薬物代謝酵素の代謝活性メカニズム

前年度の研究成果から、CYP分子種に関して、三環系抗うつ薬のアミトリプチリンなどで興味深い結果が得られていたことから、アミトリプチリンを主に代謝することを同定した2C19という分子種に関して既報のSNP数種および新たに調製した各種変異体に関し、代謝活性の評価を行った。特に、2C9と2C19が性質の異なる薬物を基質とすることに着目して電荷の異なるアミノ酸をそれぞれ導入した変異体を、新規に調製して測定を行った結果、新たに、72位のアミノ酸であるグルタミン酸が、塩基性の薬物の結合および代謝には重要であることを見出した(T. Z. Attia, T. Yamashita, et al. 2014)。研究計画において、申請者はCYPとその還元酵素であるCPRとの相互作用に着目して研究を推進してきた。その中で、CPRについては完全長のものを発現および精製することに成功したため、まずはCPRが既製のものと違いがないことを確認するため、CYPの代謝活性の評価へ用いることとした。一方、CYPに関して精製および活性の有無の確認段階において興味深い知見が得られたため、本研究を主にCYPに関するものとした。3A4の獲得により、代謝される基質としてアミトリプチリンを用いて測定を行った。また、比較対象として、同様にアミトリプチリンを代謝するとされる2C19および2D6についても測定を行った。精製したCPRにおいてもCYPへの電子供給が行われることを示す代謝反応が確認された。結果、代謝が薬物の化学構造に依存して起こっていることが示唆され、各分子種の貢献度に関する知見が得られたため、論文として印刷公表に至った(T. Z. Attia, T. Yamashita, et al., 2012)。一方、これら三つの分子種2C19、2D6、および3A4について動的な知見を得るためにフランスのEcole Polytechniqueにおいて時間分解スペクトルの測定を行った。この際、主要な分子種として当研究室ですでに発現系が確立されていた2C9を用い、2C9の基質であるジクロフェナクを結合させ、基質存在の有無による一酸化炭素の結合への影響を精査した。その結果、昨年度に見られた有意な差が、2C9においては基質の存在によって、解離した一酸化炭素がより多く再結合を行うが、相同性が極めて高い2C19に対してアミトリプチリンを存在させた条件では負の相関が見られることが明らかとなった。前年度の研究から、三環系抗うつ薬のアミトリプチリンなどの代謝に貢献する数種のCYP分子種について興味深い結果を得ることに成功した(T. Z. Attia, T. Yamashita, et al. 2012)。その中で、動的なアプローチの結果から、CYP2C9と2C19との間で薬物の結合に伴う影響が相反するものであったことから、本影響を精査するため、今年度は2C9と2C19の二つの分子種に着目して研究を行った。同分子種の総アミノ酸490個の中で、43個だけ異なるアミノ酸が存在するが、さらに、その中でも両分子種間で相反する性質を持つ薬物を認識することに着目し、電荷が異なるアミノ酸に着目した。その結果、72位と241位のアミノ酸が、2C9では塩基性のリジン、2C19ではグルタミン酸であったことから、それぞれにアミノ酸を入れ替えるような変異(2C9 K72EおよびK241E、2C19 E72KおよびE241K)を導入して、既報の各分子種の基質に対する結合性および代謝活性への影響を検討した。本検討においては、酸性薬物としてジクロフェナク、イブプロフェン、フルルビプロフェンを、塩基性のものとしては、アミトリプチリン、イミプラミン、ドチエピンを用いた。酸性薬物においては2C19で薬物の結合および代謝が見られなかったため、2C9において241位のアミノ酸の重要性が示唆されたのみであった。一方、塩基性の薬物の結合性は、2C9様に変位させた2C19E72Kで有意に低下し、2C19様に変位させた2C9K72Eでは上昇が見られた。また代謝活性においても同様の傾向が見られた。一方、241位の変異においては72位の変異体で見られたほどの有意な影響が見られなかったことから、72位のアミノ酸であるグルタミン酸が、塩基性の薬物の結合および代謝には重要であることを見出した(T. Z. Attia, T. Yamashita, et al. 2014)。申請書に記載した以下の各項目に従って平成23年度の研究を遂行した。テーマ1:CYP3A4および1A2の単離精製計画に記載したようにシャペロンを用いた発現系を検討した結果、タンパク質の発現量は上昇したが、ほとんどが不活性型であった。

一方で、微量に取れた3A4を時間分解測定したところ、開始数分で活性型から不活性型へ、さらに変性も確認出来た。そこで、より低温下でのタンパク質獲得が必要であると考え、培養時の温度を下げるなどの条件検討を行ったところ、若干の改善が認められた。現在は1A2と併せ、低温での培養精製条件を検討中である。テーマ2:薬物結合に関する情報を得るため構造解析現状で獲得したCYP1A2と3A4について、薬物や癌原性物質の結合の有無による結合部位の接近について検討するため、共鳴ラマンスペクトルを測定し、基質の接近に関する知見を得た。一方、X線結晶構造解析を試みる予定であったが、研究科現有装置の故障および修理費の問題から、本計画を代謝活性の評価系へと移行させることとした(テーマ4で詳述)。テーマ3:薬物や化合物の代謝部位への接近2回におよぶ渡仏によって、現地での時間分解スペクトルの測定を行った。測定条件および手法の確立のために測定したCYP2C9および2C19では興味深い結果が見られ、同手法を用いることで基質の結合に関する知見が得られることが確認出来た。一方で、3A4については先述したように不活性型への以降が見られたため、温度の条件やタンパク質の安定な存在条件など、各種検討中である。テーマ4:代謝活性評価系の構築代謝活性の簡便な測定系を確立するために、シトクロムP450還元酵素を可溶性のタンパク質として獲得するため、膜結合領域を欠損させた変異体として設計し、大腸菌を用いて大量に獲得することに成功した。また膜結合領域を保持したままの還元酵素についても検討を行った。昨年度にCYPを主とする研究に方向転換を行い、基質の代謝に関与する分子種に関する研究を実施した。この中で、静的な条件における測定において、2C19、2D6、および3A4に着目することで基質の代謝に貢献する分子種の割合には、基質の構造が大きく寄与していることを示唆することが出来た。また、予てより発現および精製方法を検討していた完全長CPRの獲得にも成功した。1A2および3A4の発現および精製条件の更なる検討が必要ではあるものの、現時点での測定に必要な量の供給には何ら問題はない。一方、動的な知見を得るために行った測定から、2C9と2C19で有意な差が認められており、昨年度の測定によって、2C9と2C19での挙動が全く逆であることが明らかとなった。本結果が薬物に依存するものなのかCYP分子種の違いによるものなのかを同定するため、今年度は変異体を調製して精査する。現在までに変異導入部位の選択および変異導入するアミノ酸について検討が終了しており、すぐにでも変異体の作製および各種測定を実施する準備は整っている。先に述べた静的な条件での測定に関してはすでに論文という形で印刷公表に至っているため、研究をある程度は達成出来ていると考えている。また、昨年度より引き続き、1A2および3A4の更なる良好な獲得条件を検討中であり、上記の2C9および2C19での動的な知見を得るために、現時点では研究協力者であるフランスのVos博士と日程調整を試みながら、測定に必要な2C9および2C19の獲得を進めている。3A4の野生型を活性型として獲得するための発現量が少ないため、単離精製には改善が必要である。当初の計画以上に条件検討が必要であり、その点は達成には至っていない。また、前述したように当研究科現有のX線結晶構造解析装置で分解能の上昇が見られない問題が生じ、その修理には数百万単位の金銭が必要と言われている。
揺らぎ制御可能な自己組織化超分子系の探索とその制御メカニズムの解明

平成29年度のPor-COORダイマー結果をもとに以下の点について研究を進めた。(1)Por-COORダイマーの可視紫外吸収スペクトルの励起子分裂の遷移強度が実験と計算でずれてしまっていた点について、検討をおこなった。その結果、振動子強度汎関数依存性があること。カルボニル部位の些細な構造の相違が遷移強度に影響を及ぼすことを見出した。29年度にくらべると実験と計算値のズレを少なくすることに成功した。これらの結果について、国際学会(ICCC2018、仙台)において招待講演をおこなった。現在、投稿論文準備中である。(2)Por-COORの3量体と4量体について分子動力学シミュレーションにより熱力学的安定構造を検討した。その結果、三量体と四量体は不安定であり二量体+単量体もしくは、二つの二量体として存在することがわかった。この結果はTEMによる観察で大きな凝集体を生成しないことを裏付ける結果となった。(3)アルコール水混合溶媒中のPor-COOR 2個とフラーレン誘導体1個のドナーアクセプター系について、分子動力学シミュレーションをおこない熱力学安定構造について検討した。予想に反して、ポルフィリンは2量体として安定に存在せず、フラーレンを挟んだサンドイッチ型構造のみが安定となった。(4)(3)の結果を受けて、ポルフィリン2個をアルキル鎖(炭素数310)でつないだ系の熱力学的安定性の検討を開始した。自己組織化と比べてポルフィリンの面間距離が長い構造が多くより短い面間距離の構造を探索中である。29年度に問題となった励起子分裂の振動子強度比についてはおおむね解決をみた。この時点で一区切りついたので投稿論文準備中である。しかしながら、アクセプター(フラーレン誘導体)を加えた系の熱力学的安定構造は予想に反して、2個のポルフィリンがフラーレンを挟むサンドイッチ構造となった。この構造ではドナーとなるポルフィリン2量体構造が出来ないために、計画していたドナー準位の揺らぎ制御が出来ない。そのために当初計画していた完全自己組織化を諦め、2個のポルフィリンをアルキル鎖でつないだ系の検討をおこなうこととした。2個のポルフィリンをアルキル鎖でつないだ系の検討を引き続きおこなう。また、光電池特性の評価をおこなうためのプログラムとして、当初予定していたSmeagolにかわり、ASCOTの導入をおこなう。予算申請書の29年度計画に掲げた「二種類のFC-SASM系(PAM/CD/Spacer系, Por-COOR系)における光吸収線幅や励起子分裂幅等の光学特性変化、すなわち電子運動の変化が、核運動の揺らぎによる変化であることをMDおよびQM計算により直接的に明らかにする」の中で、(1)Por-COORダイマーの水エタノール混合溶液の分子動力学計算の再現性のチェックをおこない、十分な再現性があることを確認した。(2)分子動力学計算で得られた熱力学的安定構造について、QM法の一種であるTDDFT法および双極子ー双極子近似法を用いて可視吸収スペクトルにみられる励起子分裂の大きさについて検討をおこなった。その結果、TDDFT法でも双極子近似でもともに分裂幅については実験と計算でよい一致がみられたが、振動子強度については実験と計算結果が大きくずれた。この振動子強度のずれの原因については更に検討する予定である。(3)ダイマー分子を中心として、水エタノールの混合比率の濃度勾配があることを発見し、その濃度勾配に、Por-COOHとPor-COORで差があることを見出した。二量体近傍でのエタノール比率の違いが、二量体構造の安定性に影響を与えていると考えられる。ポルフィリン二量体の励起子分裂幅については当初の予想通り、MD計算で得られた熱力学的安定構造はは実験結果をよく再現した。しかし、分裂したピーク間の振動式強度の比がまだうまく再現出来ていない。再現しない理由については、ポルフィリンに特有な縮退しお互いに直交する電子構造によるものか、もしくはシミュレーションで得られた二量体の安定構造にまだ問題があるのか不明である。

(4)(3)の結果を受けて、ポルフィリン2個をアルキル鎖(炭素数310)でつないだ系の熱力学的安定性の検討を開始した。自己組織化と比べてポルフィリンの面間距離が長い構造が多くより短い面間距離の構造を探索中である。29年度に問題となった励起子分裂の振動子強度比についてはおおむね解決をみた。この時点で一区切りついたので投稿論文準備中である。しかしながら、アクセプター(フラーレン誘導体)を加えた系の熱力学的安定構造は予想に反して、2個のポルフィリンがフラーレンを挟むサンドイッチ構造となった。この構造ではドナーとなるポルフィリン2量体構造が出来ないために、計画していたドナー準位の揺らぎ制御が出来ない。そのために当初計画していた完全自己組織化を諦め、2個のポルフィリンをアルキル鎖でつないだ系の検討をおこなうこととした。二量体についての振動子強度のずれについて検討するとともに、3量体、4量体などの多量体構造の熱力学的安定性について検討をおこなっていく。2個のポルフィリンをアルキル鎖でつないだ系の検討を引き続きおこなう。また、光電池特性の評価をおこなうためのプログラムとして、当初予定していたSmeagolにかわり、ASCOTの導入をおこなう。4,546円と少額の残でしたので、次年度使用に回しました。
椎間板酵素注入療法に関する生力学的研究

〈方法〉雑種成犬(15kg前後)55頭を用い、トラベノール社製キモパパイン0.04nkat/kg,ABC社製精製コラゲナーゼ10IU/kg,Sigma社製粗製コラゲナーゼ10Sigma U/kgを経腹膜外的進入にて犬椎間板に注入した。経時的に2週間、6カ月の処理犬を作製し、これをそれぞれ短期群,長期群とし標本は椎体後方成分を除去してmotion unitを作製した。テンシロン引張り試験機,重錘,圧縮曲げ装置を使用し約20kg重の負荷試験を行った。これにより得られた負荷変形曲線、クリープ曲線をX-Yレコーダーに記録した。さらに標本は同様の負荷にて豊田工機製PMS-5M型半導体トランスデューサーを取付け、アンプを介して負荷と内圧上昇をX-Yレコーダーに描かせた。この際圧伝播には粘調なシリコンオイルを使用した。さらに標本は推間板高位で横切し、マクロ形態を観察した。また別の標本でヘマトキシリンエオシン染色、アザンマロリー染色、サフラニンO染色を行い病理学的検索を行った。〈結果〉短期群では各酵素注入群とも椎間板高の狭少化を認めた。長期群ではキモパパインでは回復を認めたが、コラゲナーゼでは狭少化したままであった。静的スチフネス、クリープ度とも短期群で大きな値をしめし、圧縮負荷に対し正常群に比し軟く反応した。これに対し長期群ではコラゲナーゼは静的ステフネス、クリープ度とも回復傾向にあったが、バラツキが大きかった。キモパパインでは回復した。内圧上昇では両酵素とも正常群に比し半分以下の値であった。病理学的検索では短期群で髄核のサフラニンO染色性が消失し、長期群ではこれが回復した。
階層的組織化による濃度傾斜型活性層の実現と有機太陽電池への応用

本研究では、有機太陽電池の高効率化をもたらすメカニズムを明らかにするために、薄膜中の分子配向性と膜厚方向におけるマクロな相分離構造の関係に着目して研究を実施した。p型高分子とn型低分子材料の膜厚方向の濃度分布を定量的に評価するために、我々が提案したエネルギー分散型X線分析(EDS)を利用した。今年度は、膜厚方向の相分離構造制御を行うために、p型高分子Poly (3-hexylthiophene-2,5-diyl)(P3HT)並びにn型分子Phenyl-C61-butyric acid methylester (PC61BM)混合系を用いて検討した。その結果、立体規則性の高いp型高分子(regioregular P3HT)にアモルファス相を形成するp型高分子(regiorandom P3HT)を添加することで求める濃度傾斜構造を実現できることが分かった。具体的には、ITO基板近傍ではp型高分子P3HTの濃度が高く,上部のAl電極に近づくにつれてn型分子PCBMの濃度が高くなることを見出した。作製した有機薄膜太陽電池は,変換効率が3.1%から3.8%に向上した。このデバイス特性の向上は短絡電流密度(Jsc)と開放電圧(voc)に起因しており、vocの向上はRRa-P3HTの深いHOMOレベルによるものである。一方、Fill factor (FF)の向上と直列抵抗(Rs)の減少は濃度傾斜構造に強く依存していることがEDS分析から明らかになった。さらに、本研究で開発した濃度傾斜構造を他のp型高分子材料(PNz4T)へと応用したところ変換効率8.9%を達成することが出来た。(理化学研究所瀧宮グループとの共同研究)。この変換恋率は、2012年時点で世界最高の変換効率9.2%(Z. He et al., Nature Photonics 2012,6, 591-595.)に迫る値である。この様に、我々は有機薄膜太陽電池の高効率化における濃度傾斜構造形成の重要性を明らかにすることが出来た。これらの結果は、我々が当初提案した積層型高分子太陽電池に留まらず、通常のバルクヘテロ構造においても濃度傾斜構造形成が不可欠であることを示すものである。(抄録なし)本研究では、活性層の膜厚方向にp型有機材料とn型有機材料の濃度傾斜構造を形成させることによって二層積層型有機薄膜太陽電池の高効率化を実現することを目的とする。活性層中に濃度傾斜構造を誘起させる方法として、(1)p型層表面のラビング処理及び(2)立体規則性の異なるp型層材料の添加を検討する。平成24年度は、バルクヘテロ型太陽電池の活性層材料として良く知られたp型共役系高分子(P3HT)とn型低分子(PCBM)を用いて、各種の二層積層型太陽電池を作製し評価した。ここで、p型層を形成した後に表面をラビング処理することによって同一材料系を用いて作製したバルクヘテロ型太陽電池を上回るエネルギー変換効率が得られることを見出した。ラビング回数を変えて作製した二層積層型太陽電池の断面構造を走査型透過型電子顕微鏡(STEM)の測定で得られる透過型電子顕微鏡(TEM)像とエネルギー分散型X線分析(EDS)を用いた元素マッピングを組み合わせて分析した結果、ラビング処理した二層積層型太陽電池では陽極側にP型材料が多く分布し、陰極に近づくに従ってn型材料の濃度が増加する理想的な濃度傾斜構造が形成されていることが分かった。次に、立体規則性の高いレジオレギュラーP3HTに立体規則性の低いレジオランダムP3HTを添加濃度を変えて混合したところ、変換効率の向上が確認された。この素子をEDS分析した結果、ラビング処理と同様の濃度傾斜構造が形成されていることが分かった。

この変換恋率は、2012年時点で世界最高の変換効率9.2%(Z. He et al., Nature Photonics 2012,6, 591-595.)に迫る値である。この様に、我々は有機薄膜太陽電池の高効率化における濃度傾斜構造形成の重要性を明らかにすることが出来た。これらの結果は、我々が当初提案した積層型高分子太陽電池に留まらず、通常のバルクヘテロ構造においても濃度傾斜構造形成が不可欠であることを示すものである。当初計画した通りに着実な進展が得られているため。今年度は、既存の材料であるP3HTとPCBMを用いたが、今後はより高性能な材料を用いる事で、より高効率の有機薄膜太陽電池の実現を目指す。(抄録なし)
日本における近代博物館の成立・展開過程に関する比較史的研究

当該年度において達成したのは、主として以下の三点である。第一に、本研究の重要課題の一つである府県立教育博物館の活動実態に関して、1870年代における福岡博物館の実態を解明した論文を全国地方教育史学会の機関紙『地方教育史研究』に投稿し、査読を経て、第34号に掲載された。この論文を通じて、19世紀後半の府県立教育博物館が文部省教育博物館の取り組みを取捨選択したこと、さらには府県議会が財政難にたえうる博物館のあり方を模索していたのではないかという仮説を引き出した。この仮説については、他の府県立教育博物館の事例をみるなかで検証していく。第二に、こちらも本研究の重要課題の一つであった文部省教育博物館の活動実態に関して、所属する研究科の紀要『名古屋大学教育発達科学研究科紀要(教育科学)』に投稿し、閲読の結果、第60巻第1号に掲載された。この論文では同館の活動に関して、学校と同館との相互関係という新たな視点から分析を行なった。第三に、アメリカとカナダにおいて資料調査を実施し、海外における近代博物館認識についてうかがえる資料を収集した。現在は収集資料を用いながら、二か国についての基礎データの整理を進めている。(抄録なし)当該年度において達成したのは、主として以下の三点である。(抄録なし)
分子結晶の電子移動を支配する因子の解明

電子供与体と電子受容体の作る電荷移動錯体や、有機イオンラジカルの結晶の中で起こる電子移動相互作用において、どのような条件が相互作用を大きくするのかを明らかにすることは、機能性分子の研究において、極めて重要なことである。MSDTPY-Au(CN)との結晶は、1:1の組成比から、すべてのMSDTPY分子が+1価になっていて、このスペクトル解析から、電荷反撥のエネルギ-Uが見積られた。TCNQおよびクロルアニルの錯体では、電荷移動が部分的におこっていることが示され、PF_6塩およびA_SF_6塩の結晶構造解析から、組成比が3:2と決定され、電荷移動量が、0.66であることが示された。分子構造の解析からも、この値が支持された。分子間の重なり積分子の計算から、電子移動相互作用の大きさが見積られ、スペクトルの解析から、緩和時間が見積られ、その積の値が、一次元電子等の局在性を示すよいパラメ-タ-となることが明らかになった。一次元電導性結晶の特性を示す重要な因子が解明されたものと、考えている。
家蚕における性に関連する形質の発現に関する研究

カイコにおける性に関連する形質の発現について、生理遺伝学的、生化学的、細胞組織学的、並びに病理学的立場から検討を行い、次の知見を得た。1.長島ら(1983)は、RIAの手法によって、カイコ雄の体内には雌に比べて多量のテストステロン様物質が存在することを明らかにした。しかし、テストステロン様物質のカイコにおける生理学的意義は不明のところが多く、その意義を明らかにするためには、この物質の正確な同定を行う必要がある。そこで生化学的手法を用いて検討を行い、テストステロン様物質はテストステロンそのものであることを明らかにした。2.カイコにおいては、雌雄によって行動の異なる貯蔵蛋白質(主としてSPー1)があるが、これを標識とし、雌雄モザイク個体を供試して検討を実施した。その結果、雌雄モザイク個体は間性的性格をもつこと、つまりカイコには性ホルモン様物質の存在することを示すものであった。3.カイコの脂肪組織の形態、性状は5齢後期以降においては、雌雄によって明らかに異なっている。5齢初期に幼若ホルモンを投与した雄カイコでは、脂肪組織の形態が雌に近い形状を示すようになる。4.カイコの核多角体ウイルス(NPV)に対する抵抗性の雌雄差について調査検討を行った。与えたウイルス量と得られた感染率のプロビットの関係からlog ID_<50>を算出し、稚蚕期から壮蚕期にわたってNPVに対する雌雄差を詳細に検討した結果、いずれも雄の方が雌に比べて明らかに抵抗性であった。5.セルソーターを駆使して、卵巣と精巣の機能について検討を行った。卵巣を雄幼虫に、精巣を雌幼虫に移植すると、移植された生殖巣の細胞周期に若干の変化が現われることが判明した。カイコにおける性分化の問題並びに性に関連する形質の発現について、生理遺伝学的、細胞組織学的及び病理学的立場から検討を行い、次の知見をえた。1.長島ら(1983)は免疫学的手法を用いて、カイコの幼虫体液中には、高等動物の性ホルモンの一種であるテストステロンが存在していることを明らかにした。今回はこのホルモンの生理学的意義を明らかにするために、【^3H】テストステロンを用い、カイコの各組織内の放射能分布を経時的に調査した。その結果、5令幼虫においては、その経過によって異なるが、放射能の取り込みは脂肪組織、中腸、絹糸腺などに多く認められた。蛹の時期においては、幼虫期に比べ各組織とも放射能の取り込みが増大した。特に脂肪組織には多量に取り込まれていることがわかった。雌雄についてみると、雄のそれは雌に比べてさらに多量であった。また、蛹化5日においては、生殖巣への取り込みが増大し、生殖巣の発達とテストステロンとの関係のあることを考えさせた。2.カイコの脂肪組織細胞においては、性の分化に従って、形態に変化の生ずることが知られている。遺伝的性モザイク個体(mo)を供試したところ、吐糸後成虫までの時期においては、経過に従ってその形態変化が認められ、雌部位脂肪細胞の形態が雄のそれに近くなる場合(吐糸1日)や、雄部位のそれが雌の形態に近くなっている場合(蛹化直後)がある。また、カイコ4令幼虫の頭胸部間を結紮してえられる早熟蚕を用い、性の分化と脂肪組織細胞の形態変化について、目下検討を行いつつある。3.カイコの伝染性軟化病に対する抵抗性の性差について、限性品種などを供試して調査したところ、雄の方が雌に比べテ明らかに抵抗性であった。カイコにおける性に関連する形質の発現に関し、生理遺伝学的並びに細胞組織学的検討を行い、次の知見を得た。

1.ラジオイムノアッセイによって、カイコの体液,脂肪組織及び生殖巣中に、テストステロン様物質が存在することを明らかにしたが(長島ら、1983)、この物質の同定並びにカイコ体内に存在する他のステロイド物質についても検索,検討を行った。各種クロマトグラフィによる分析及び同定実験によって、カイコ雄の5令幼虫の体液中には、高等動物の性ホルモンであるテストステロンが存在し、雌のそれにはエストラジオールが存在することを認めた。カイコにおいて、脊椎動物の性ホルモンの存在が雌雄によって異なることは極めて興味ある事実である。なお、その他のステロイド物質については、引き続き明年度においても詳細な検討を行う予定である。2.カイコの45令幼虫を供試して、頭胸部間結紮及び前胸腺下結紮を行い、アラタ体ホルモン(幼若ホルモン)と前胸腺ホルモン(脱皮ホルモン)の性関連形質の発現に及ぼす影響を組織学的並びに生化遺伝学的に調査した。脱皮ホルモン存在下においては、カイコの雌特異蛋白(Sp-1など)の形成は認められるが、このホルモンが存在しなければ、これら蛋白の形成は認められない。この事実は、一見脱皮ホルモンはカイコの性に関連したホルモンのように思われるが、脱皮ホルモンの働きによるカイコの成熟にともなって形成される上記性ホルモンの作用を無視することはできない。これらの点についても、今後さらに詳細な検討を行う予定である。カイコにおける性に関連する形質について,性の分化にともなうそれらの発現を生理遺伝学的,組織学的及び病理学的見地から追究し,次の結果を得た.1.昨年度明らかにしたカイコにおけるテストステロン及びエステラジオールの存在について,さらに詳細な検討を加え,これら物質の存在を一層確実なものにすることができた.2.遺伝的雌雄モザイク(mo)のうち,1/2モザイク個体のみを供試して,体液中に存在する雌雄異たんぱく質Spー1と生殖巣との関係を調査した.左右2つとも卵巣をもつもの,精巣卵巣をそれぞれ一つづつもつもの及び2つとも精巣をもつ個体について,Spー1の量を測定した.調査時期によって異なるが,2卵巣の場合は雌型を示し,精巣のみの個体は雄型であった.また精卵巣をもつものでは中間型であった.この事実は,Spー1の形成に生殖巣も関係のあることを考えさせるものである.3.頭胸部結紮蚕を作成して,脂肪組織細胞の形態変化を組織学的に観察した.この結紮処理によって,雌における細胞の形態は一般に雄のそれに近くなり,Spー1の量もそのような傾向を示した.4.限性産蚕を開いて,第2令期から5令期にいたる幼虫の核多角体病抵抗性の雌雄差を比較検討した.いずれの時期においても,雄の方が雌に比べて抵抗性であった.この結果は転座染色体の影響によるものではないかと考えられたので,この点について検討したところ,雌雄本来の生理的差異によって引き起されるものであることを確認した.当研究の期限内に,カイコの性分化の問題並びに雌雄における形質発現の差異の機構などについて,さらに一層の知見を拡げたい.カイコにおける性に関連する形質の発現に関し、生理遺伝学的並びに細胞遺伝学的検討を行い、次の知見を得た。1.カイコに存在するテストステロン様物質のカイコにおける生理学的意義は不明のところが多く、その意義を明らかにするためには、この物質の正確な同定を行う必要がある。
C-14同位体分離法の開発研究

原子力施設から発生するC-14廃棄物の減容処理のため、C-14同位体を分離濃縮する方法の研究を行った。対象とする物質が原子炉中性子減速材グラファイトであるため、その処理法として最も簡単な燃焼によって発生するCO及びCO_2を作業物質として選んだ。本研究は次の3サブテーマから成る。(1)分子軌道法を用いる炭素同位体効果の研究軽元素の同位体分離法としては錯体化学交換法が適当である。そこで本研究ではCOとCO_2錯体について分子軌道法により最適な分子構造を決定し、その分子内振動数から同位体換算分配関数比を計算した。COについては銀Ag(I)非水溶媒系、CO_2系については種々のアミンとの錯体カルバメートについて計算を行い、常温領域でも分離係数α=1.011.02を得た。(2)CO錯体系の^<13>C/^<12>C分離係数測定の研究COはCu(I)やAg(I)イオンと錯形成することが知られている。本研究では安定同位体の^<12>Cと^<13>Cについて、水溶液、及びアミン溶媒中のCu(I)Cl-CO錯体と気相CO間の平衡同位体分離係数を温度を変えて実測した。その結果-43°C、エタノールアミン/メタノール系で^<13>C/^<12>C同位体分離係数1.03を得た。これを^<14>C/^<12>Cに換算すると1.06となり、充分大きい値を得た。(3)イオン交換多段濃縮の研究CO_2アミン錯体系の多段濃縮は陰イオン交換樹脂を用いると達成できる。イオン交換樹脂を用いる多段同位体分離の基礎として、本研究では、Cu(I)及びFe(III)の塩素錯体イオンについて陰イオン交換樹脂酸化還元クロマトグラフィーを行い、Cu及びFeの同位体濃縮を観測した。これによってイオン交換多段同位体濃縮の有効性を確認した。東海発電所の炉心中の黒鉛ブロックを焼却して、生じるC-14を含んだ炭酸ガスの同位体分離する可能性について、一酸化炭素(CO気体)とCO吸着・化合物(金属CO錯体)の交換系についての炭素同位体分離法を検討した。カルボニル錯体はIR活性が強いため、実験および計算による同位体分離係数の評価が出来、Ab-initio分子軌道法による多原子錯体であるカルボニル錯体の分子振動計算をスーパーコンピューターで行った。市販の分子軌道計算ソフトウエアであるGaussian97を使うことによって、GF-Matrix法に比べ非常に簡単に計算を行うことが出来る。ここで、金属カルボニル錯体とCO分子との反応式を次のようにして計算を行った。金属カルボニルには6配位のCr,Mo,Wが知られており、ここではMoについての計算を行った。計算手法には金属錯体としてb31yp/1an12dzを用いた。はじめに、O_hの対照性を金属カルボニルに与えて構造最適化を行い、金属カルボニルおよびCOの分子内振動を求めた。この振動周波数をBigeleisen-Mayer formulaに代入し、換算分配関数を求めた。この結果、温度25°Cで、分離係数は1.0029と求められた。また、炭素同位体比を測定するための基礎実験を、現有装置であるEMD-05型の有機化合物測定用の質量分析計を用いて行った。炭酸塩をリン酸分解して炭酸ガスを発生させ、そのガスの炭素同位体比を測定することによってその再現性を1%以内で測定可能であることを確認した。さらに精度を上げるため、測定条件の最適化を検討中である。来年度以降、Cr,W,Fe,Ru,Co,Rh,Os,Re,Mn等のカルボニル錯体の計算を行い、実験および計算からの分離係数を求めて比較検討する。

(3)イオン交換多段濃縮の研究CO_2アミン錯体系の多段濃縮は陰イオン交換樹脂を用いると達成できる。イオン交換樹脂を用いる多段同位体分離の基礎として、本研究では、Cu(I)及びFe(III)の塩素錯体イオンについて陰イオン交換樹脂酸化還元クロマトグラフィーを行い、Cu及びFeの同位体濃縮を観測した。これによってイオン交換多段同位体濃縮の有効性を確認した。前回の報告書において炭素同位体分離のための基礎研究として、ab-initio計算による金属錯体/COの分子振動解析を行い、理論分離係数の評価を行った。当初、この結果を踏まえ、六配位のカルボニル錯体を実験的に扱う予定であったが、実験的な取り扱いが難しいため、本研究においては、塩化銅(I)アンモニア水溶液を触体とした、四配位のカルボニル錯体を取り上げた。気相/液相系におけるCOガス吸着における系を選択した。塩化銅(I)水溶液にCOが溶けると、Cu(I)とCOは強い錯体を作ることが知られており、大きな同位体効果が期待できると考え本系を選択した。同位体交換反応は以下のような化学反応式で示される。この系で同位体分離係数を実験的に求めた。CuCl(0.5mol/l),NH_4Cl(4.0mol/l)の混合溶液において、COを反応容器に導入し、1atmで系が平行に達するまで保持した。一定時間保持の後、系内のCOをCO_2に変換し二重収束型質量分析計を用いて^<13>C/^<12>Cの比を測定した。ガス吸着量と同位体比の変動値より同位体分離係数を算出したところ温度(5°C-28°C)の範囲で分離係数α=1.01121.0237であり、低温の時が最も高かった。温度Tと分離係数αの関係は、かつてアマルガムの系等で示された、α-1=a/T+b/T^2の経験式でフィッティング出来ることが分かった。aは軽元素の低温における分子振動の項であり、一方、bはより高温の周囲条件による項である。すなわち、化学的な同位体効果は2つの異なったタイプの同位体効果によるものである。ここで、aとbは異符号であり(a=-39.5,b=12856)、同位体偏在が逆転するいわゆるクロスポイントが存在し、その温度が325Kで有ることを明らかにした。CO錯体系の同位体効果を明らかにするためにはさらなる理論解析が必要であることが分かる。前年度まで水溶液CO-CuCO交換系について実験を行い^<13>C/^<12>C分離係数を実測した。本年度は銅以外の金属の一酸化炭素錯体との交換反応として銀に注目し、非水系、硫酸及びFSO_3Hを溶媒としたCO-AgCO交換系の同位体効果を実験により実測した。この反応系は次式で書かれる、非常な低温ではCO錯体形成が進み、2個のCOが銀に配位することが分かった。この系は非水溶媒であるため低温領域の実験が-45°Cまで可能であった.このため常温領域から-45°Cまで広い温度領域で分析した同位体分離係数は、ε=α-1=a/T^2で表される温度依存性を示すことが分かった。εの値は1.2×10^<-2>と表せた。低温において2個のCOが配位する条件でεの値も大きくなる。CO_2錯体についてはアミンと二酸化炭素の錯体カルバメートについて種々のアミンとの錯体について密度汎関数を使って構造の最適化を行い、それによって得られる分子の振動数から分子の換算分配関数比を計算し、COとアミンCO錯体の同体分離係数を理論的に計算した。
自己組織化マイクロリンクルにおける欠陥構造の時空間制御

自己組織化マイクロリンクルにおけるストライプパターンに発生する欠陥構造を画像解析する手法を確立し、静的な迷路状パターンに適用した結果、マイクロリンクルに特徴的なストライプ方向の相関を明らかにした。またストライプパターンに時間変化する外部歪みを加える装置を開発し、欠陥構造の時空間挙動を調査できる状況に至った。研究の目的:マイクロリンクルのストライプ凹凸構造における不規則構造であるトポロジカル欠陥の時空間配置を外部応力で制御する。22年度計画:欠陥構造の静的性質を表面材料や作製方法を変えて調査する。成果:本年度は、まず等方的な平面圧縮場における複雑な迷路状の欠陥構造をそのストライプパターンの統計的性質を調べることを行った。まず円筒状のシリコーンゴム基板を用意し、その円形の平滑表面に対して金属薄膜を蒸着により形成する。この表面に等方圧縮を加えるために、光彩絞り機構に基づいた等方圧縮装置を作製する。その後圧縮を加えることで迷路状の周期1μ程度のマイクロリンクル表面を得る。このパターンを光学顕微鏡にて観察し、電子画像を計算機に取り込み、解析を行う。解析はストライプ方向の空間相関について行った。その結果、ストライプ方向はそのストライプの向きに対して45度方向に対して優位は空間相関があることが見出された。この結果は、共同研究者の理論解析およびシミュレーションによっても得られ、数あるストライプ構造でもこのマイクロリンクルの系に特徴的な結果であることが解かり、共同研究者とともに論文で発表した。この結果はすなわち、欠陥構造についても関連して同様な方向相関性があることの証拠であるが、その欠陥についての解析(密度、欠陥の種類、欠陥の異方性極性、空間相関性など)は引き続き調査中であり、特徴を上手く抽出する評価法を検討中である。23年度計画:欠陥構造の動的性質を表面材料や作製方法を変えて調査する。成果:本年度は、前年度において確立されていた欠陥構造のパターン解析法によって欠陥の動的挙動についても調査することが目的であったが、そのための実験装置をデザイン、作製することができた。この表面に一軸圧縮応力を加えると、方向が揃った凹凸構造が発生する。その圧縮状態でその試料を回転させることで、実質的に1軸圧縮方向を回転させることができ、この時の欠陥挙動に注目する。この挙動を顕微鏡観察するために、観測点をできるだけ定点固定する必要がある。これを可能にするために、1軸圧縮を手動で行い歪みを固定したうえで、両側で挟んだ板を逆位相で移動することが必要であり、このための装置のデザインを行い、作製に至った。この結果動的な欠陥の運動等を観測できることが確認されたが、その本格的な解析(欠陥密度、欠陥の種類、欠陥の異方性極性、空間相関性など)は今後行う予定である。また途中得られた結果を他の研究内容共に論文化を行い、その発表も行った。動的な欠陥挙動の解析は今後この変形可能な微細凹凸構造の動的応用(凹凸構造変化に誘起される機能スイッチング等)に対する要素技術を提供できる点で重要な研究であり、本年度はその基礎知識が得られた。
蛋白質の高効率的精製・ラベル化を可能とするRecapturableリンカーの開発

プロテオミクス分野における重要な基盤技術として、プロテオームからの標的蛋白質の精製およびその選択的ラベル化技術が挙げられる。そこで本研究では、標的蛋白質の精製および選択的ラベル化を可能とするRecapturableリンカーの開発を目的とした。この結果、Recapturableリンカーの合成に成功するとともに、本リンカーの標的蛋白質モデル化合物への導入およびその選択的ラベル化を達成した。プロテオミクス分野における最も重要な基盤技術の一つとして、プロテオームからの標的タンパク質の精製およびその選択的ラベル化技術が挙げられる。タンパク質精製において、ビオチン修飾タンパク質のアビジンカラムによる精製が汎用される。しかし、本方法では多くの場合、精製後の標的タンパク質に非特異的吸着由来のタンパク質が混入する。このため、カラム溶出液中の標的タンパク質のみを選択的にラベル化することは困難を極める。さらに、ビオチン-アビジン間の結合は強固であるため、アビジンカラムからのビオチン修飾タンパク質の回収効率は非常に低い。これら問題点を克服するため、本研究では、プロテオーム中にある標的タンパク質の高効率的精製・ラベル化を可能とするRecapturableリンカーの開発を目的とした。Recapturableリンカーとは、任意の条件下で切断され、その結果生じる官能基を足がかりとして再び機能性ユニットの導入が可能なリンカーと定義する。本研究では、ビオチンと標的タンパク質の間にRecapturableリンカーを導入し、標的タンパク質のアビジンカラムからの高効率的回収をリンカー切断により達成すると共に、切断の結果生じる官能基を利用して標的タンパク質のみを選択的にラベル化する方法論の開発を目指すこととした。申請者は今年度、フッ素アニオン応答型アミノ酸の開発と、このRecapturableリンカーへの導入について検討した。この結果、(1)フッ素アニオン応答型アミノ酸の不斉合成、(2)N末端にビオチンを、C末端にアジドを有するRecapturableリンカー誘導体の合成、および(3)フッ素アニオン添加存トリガーとしたRecapturableリンカー誘導体の切断に成功した。プロテオミクス分野における最も重要な基盤技術の一つとして、プロテオーム中標的蛋白質の精製および選択的ラベル化技術が挙げられる。蛋白質精製において、ビオチン修飾蛋白質のアビジンカラムによる精製が汎用される。しかし本方法では多くの場合、精製後の標的蛋白質に非特異的吸着由来の蛋白質が混入する。このため、カラム溶出液中の標的蛋白質のみを選択的にラベル化することは困難を極める。さらにビオチン-アビジン間の結合は強固なため、アビジンカラムからのビオチン修飾蛋白質の回収効率は低い。本研究ではこれら問題を解決するため、プロテオーム中にある標的蛋白質の高効率的精製およびラベル化を可能どするRecapturableリンカーの開発を目的とした。Recapturableリンカーとは任意の条件下で切断され、その結果生じる官能基を足掛かりとして再び機能性ユニットの導入が可能なリンカーと定義する。本研究では、ビオチンと標的蛋白質結合部位の間にクリックケミストリーを用いて当該リンカーを導入し、標的蛋白質をアビジンカラムにより精製したのち、フッ素アニオンによるリンカー切断を経て標的蛋白質の高効率的回収を達成すると同時に、切断の結果生じる官能基を利用して標的蛋白質選択的にアルデヒド含有ラベル化試薬を導入する方法論の開発を目指す。申請者は昨年度、当該リンカーの合成に成功した。そこで今年度は、小分子を用いたモデル実験および精製蛋白質を用いたモデル実験を行った。この結果、当該リンカーのモデル小分子とのクリックケミストリー、フッ素アニオン処理によるリンカーの切断、および切断成績体のアルデヒド含有試薬による修飾に成功した。さらにアルキニル化モデル蛋白質の調製に成功するとともに、これへの当該リンカーの導入およびアビジンカラムへの吸着に成功した。
マウス未受精卵の凍結保存に関する研究

マウス未受精卵を1.5M DMSOと0.25Mショ糖を含む凍結培地で、-7°Cで植氷、毎分0.5°Cで-10°C-60°Cまで冷却し、液体窒素(LN_2)中で保存した場合、供試卵の融解後の回収率は各温度区で9799%であった。回収卵の生存率は、-10°C:29.0%(38/131)、-20°C:61.8%(81/131)、-30°C:39.4%(76/193)、-40°C:64.4%(116/180)、-50°C:76.0%(146/192)、-60°C:84.7%(144/170)で、温度の低下につれて有意に上昇した。生存卵の受精率は、-10°C:78.9%、-20°C:81.5%、-30°C:63.2%、-40°C:82.6%、-50°C:86.2%、-60°C:78.5%であった。受精卵の2細胞期への発生率は各温度区とも高かった(77.196.8%)が、4細胞期への発生率は-10°C区(23.3%)と-30°C区(20.8%)で他区(57.577.3%)より低かった。胚盤胞への発生率は-10°C:10.0%、-20°C:53.0%、-30°C:29.2%、-40°C:60.0%、-50°C:48.0%、-60°C:56.6%であった。-60°C区で得られた胚盤胞114個を9匹の受容雌に移植した結果、8匹が妊娠し移植胚の17.5%に当たる20匹の生存産子を得た。ショ糖を含まない凍結培地で-30°Cまで毎分0.5°Cで冷却し、LN_2中で保存した場合の回収率は95.8%、回収卵の生存率は64.2%(541/843)、生存卵の受精率は84.1%、受精卵の胚盤胞への発生率は71.3%であった。得られた胚盤胞104個を12匹に移植したところ全例が妊娠し、移植胚の48%に当たる50匹の生存産子を得た。以上の結果より、マウス未受精卵は1.5M DMSOの他に0.25Mショ糖を添加した凍結培地で-60°Cまで毎分0.5°Cで冷却することにより、脱水が促進され、融解後の生存率が改善されたが、LN_2へ浸漬するまでの時間が長くなったため発生能は低下し、供試卵の胚盤胞への発生率の改善にはつながらなかった(37.4%vs36.8%)。さらにこのようにして得られた胚盤胞の産子への発生能も明らかに低かった(17.5%vs48.0%)。今後はLN_2へ浸漬するまでの脱水に要する時間をさらに短くする凍結法を検討する必要がある。

ショ糖を含まない凍結培地で-30°Cまで毎分0.5°Cで冷却し、LN_2中で保存した場合の回収率は95.8%、回収卵の生存率は64.2%(541/843)、生存卵の受精率は84.1%、受精卵の胚盤胞への発生率は71.3%であった。得られた胚盤胞104個を12匹に移植したところ全例が妊娠し、移植胚の48%に当たる50匹の生存産子を得た。以上の結果より、マウス未受精卵は1.5M DMSOの他に0.25Mショ糖を添加した凍結培地で-60°Cまで毎分0.5°Cで冷却することにより、脱水が促進され、融解後の生存率が改善されたが、LN_2へ浸漬するまでの時間が長くなったため発生能は低下し、供試卵の胚盤胞への発生率の改善にはつながらなかった(37.4%vs36.8%)。さらにこのようにして得られた胚盤胞の産子への発生能も明らかに低かった(17.5%vs48.0%)。今後はLN_2へ浸漬するまでの脱水に要する時間をさらに短くする凍結法を検討する必要がある。