hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
地域環境保全のための農村整備計画

これからの農村地域では、豊かな自然環境や農村文化等の地域資源の保全と活用を図りながら、人と自然が共生し、活力ある農村づくりを目指す取り組みが極めて重要な課題と考えられる。本研究は、地域環境保全のための農村整備計画策定手法と整備事業推進の課題を明らかにすることを目的としたもので、その概要は次の通り。1)神戸市北区山田町を事例として、農村景観や環境保全に配慮した農村整備計画案を作成した。当地区では、貴重な文化遺産や自然環境を保全しながら、地区住民の意向に沿った地域活性化を図るための土地利用の誘導が必要であるとして、「人と自然との共生ゾーンに関する条例」に基づいた土地利用計画案を示した。2)岐阜県揖斐川町北方地区を事例として、農業用水路を活用した景観整備構想について考察した。その結果、維持管理システムの再編、非灌漑期を中心とした安定的な流量の確保、安全性への配慮が重要であることが示された。3)環境保全や景観に配慮した先進事例の現地調査から、維持管理への配慮、施設整備後の有効活用、親水性と安全性の調整、住民参加の仕組み、生態系保全のための材料や工法の選択、周辺地域の一体的整備等の重要性が指摘された。4)市民農園の類型ごとの施設整備の現状を整理し、山田町を事例として、望ましい市民農園整備の考え方を示した。本年度は3カ年の研究計画の初年度として、地域環境保全のための農村整備計画策定手法について、神戸市北区山田町を事例として、現況調査と意向調査を中心として行った。その概要は以下のとおり。1.本地区は六甲山系の北側に位置し、志染川沿いに拓けた水田地帯で、鉄道とバスを利用すれば約30分で神戸市中心部に到ることができるという交通至使の立地条件にあるが、全地区農振地域に属しており、志染川沿いの平坦部を中心として、まとまった農用地が保全されている。2.本地区の農業は水田が中心であるが、転作作物としての菊栽培が盛んで、専業農家率も比較的高く、かなりの収益をあげており、神戸市内でも農業の盛んな地域である。しかしながら、平均経営規模は55アールと小さく、また高齢化がすすんでおり、将来への展望には厳しいものがある。3.農地は圃場整備が行われていないため小区画不整形で、用排兼用水路ままであるが、農道は一応の整備が行われており、農道に接続しない農地は見あたらない。しかしながら、山間部の谷あいに位置する水田では道路が不備で、かなりの耕作放棄が見られる。4.周辺の六甲山系や丹生山系には豊富な自然が残されているほか、地区内にはハイキングコースやサイクリングコース、神社仏閣、史跡類があるが、その一方では廃屋や耕作放棄地、コンクリートブロックによる河川改修、幹線道路沿いの広告類など、本地区の自然景観に影響を与えている事例も多い。6.以上のことから、生産、生活基盤の整備とあわせて自然環境・景観の保全を図ることが本地区の重要課題であるといえる。地域環境保全のための農村整備計画策定手法を明らかにするため、神戸市北区山田町を事例として現況調査、住民意向調査等をもとにして当地区の整備計画案を作成した。1.地区の特徴神戸市中心部まで約30分と交通至便の立地条件にあるが、全域農振地域に属しており、転作作物としての菊の栽培など、農業が盛んな地区である。しかし、高齢化や都市化の進行など、将来への展望は非常に厳しい。一方、本地区の周辺には六甲山系や丹生山系など豊富な自然環境に恵まれ、ハイキングコース、神社仏閣、史跡などもあって都市住民からも親しまれている。2.計画の課題当地区の貴重な文化遺産や自然環境を保全しながら、地区住民の意向に沿った地域活性化を目指すための土地利用の誘導と、自然環境にあった生産基盤整備、生活環境整備を実現することが必要である。3.計画の概要神戸市では人と自然との共生ゾーンに関する条令により計画的な土地利用の誘導を図ることとなっている。これに基づいて本地区では、坂本集落周辺を集落居住区域、志染川沿いの農地を農業保全区域、背後山地は環境保全区域とした。

また、ジョンノ池と薬師堂周辺、志染川沿い一帯についても環境保全区域として地区景観に配慮した整備に努める。県道沿いの農地は農振白地であるところから集落居住区域とするが、当面は暫定農地として保全利用を図り、沿道の修景と環境保全に努める。富山県内8ヶ所、佐賀県内9ヶ所、長野県内6ヶ所、及び滋賀県内1ヶ所の先進事例の現地調査を行い、環境保全や景観に配慮した農村整備を進めていく上での課題や問題点を明らかにした。その結果、(1)整備目的を達成するためには維持管理が重要であり、事業の計画段階から維持管理体制、維持管理組織、費用負担等について検討しておくとともに、維持管理の容易な材料や工法の選択が極めて重要である。(2)施設整備後の活用とそれによる地域コミュニテイの活性化が重要であり、そのためには計画段階から各種イベントの開催や交流会、地元農産物の展示・販売等施設の活用方策を検討しておくことが大切である。(3)親水施設整備に当たって、安全性を重視するあまり親水施設本来の機能が失われている場合が見られた。親水性と安全性の調和の工法や計画手法の確立、計画への住民参加や利用年齢層への配慮が重要である。(4)施設整備後の管理や活用の面からは、計画段階からの住民参加を積極的に推進してゆくことが重要であるが、混住化や住民意識の多様化している今日、住民間での意見調整手法の確立が課題である。(5)生態系保全に関しては、工法や材料の選択以外に、水質の保全と冬季間の水量の確保が重要であるとともに、生態系の連続性を考慮した広域的な取り組みが不可欠である。(6)農村環境整備の実施は比較的小規模のものが多く、単独では利用効率が低く、効果発現が十分期待されないものも多い。そのため複数の事業を組み合わせ、それらの連携によって効率的な活用が図られるよう、総合的な計画が望まれる。
精子の融合能におけるメンブレントラフィックの役割

受精の融合機構については卵子上の融合因子としてCD9が最近報告されたのみで精子側の必須因子は同定されていなかった。申請者のこれまでの成果として、融合を特異的に阻害するモノクローナル抗体を用いて、世界で始めて精子側の合因子Izumoを発見した(Nature,InoueNetal,2005)。Izumoノックアウト精子は融合の準備段階である先体反応まで正常に進行するが、その後の卵子との融合が完全に阻害される。さらに融合を顕微授精法でバイパスすると正常に発生することから、Izumoはまさに精子と卵子の融合にだけ機能する世界で始めて発見された精子側の融合因子であった。平成19年度は、先体反応に伴う精子の融合因子Izumoの局在変化をmRed融合タンパク質によって可視化することにより、Izumoを指標とした精子のメンブレントラフィックをバイオイメージングできる系を確立することを目的に、この遺伝子をもつTGマウスを作製した。このマウスの精子にカルシウムイオノフォアを処理することで先体反応を誘起し、継時的にIzumoの局在変化を観察すると抗体による観察では見られなかった、先体反応中にIzumoがacrosomalcapからequatorialsegmentに移動し、最終的にtacrosomalregionに蓄積される様子が観察された。これはinvivoで採取された卵透明帯通過後の精子でも同様に観察された。またIzumoノックアウトバックグランドでこのTGを1もつ雄マウスの妊孕性が回復したことから、受精の膜融合の際に機能的なIzumoが正しく局在することを明らかにできた。今後はこれらマウスを用いてさらに詳細なIzumoの局在変化とその意義に関する解析を行う予定である。受精は生命現象の始まりという極めて重要な現象にも関わらず、分子生物学的な機構については未知の部分が多い。特に精子と卵子の融合機構については卵子上の融合因子としてCD9が最近報告されたのみで精子側の必須因子は同定されていなかった。申請者のこれまでの成果として、融合を特異的に阻害するモノクローナル抗体を用いて、世界で始めて精子側の融合因子Izumoを発見した(Nature, Inoue N et al, 2005)。Izumoノックアウト精子は融合の準備段階である先体反応まで正常に進行するが、,その後の卵子との融合が完全に阻害される。平成18年度は、先体反応に伴う精子の融合因子Izumoの局在変化をmRed融合タンパク質によって可視化することにより、Izumoを指標とした精子のメンブレントラフィックをバイオイメージングできる系を確立することを目的に、この遺伝子をもつTGマウスを作製した。さらにIzumoが精子赤道部に移動することの重要性を解析するため、常に先体内膜に存在するCD46とIzumoのキメラタンパク質を発現するTGマウスを作製した。今後はこれらTGマウスの精子を用いて、Izumoの局在変化や融合能を解析することにより、Izumoが赤道部へ移動することの融合に対する意義を明らかにしたい。
プロトン駆動力による細胞内代謝制御

食糧やエネルギー問題を解決するため、植物や藻類の「光合成の改良」は重要な課題である。現存の光合成生物は進化を遂げた局所環境に適応してプロトン駆動力によって「光エネルギーの効率的利用」と「過剰光からの防御」のバランスを調節している。本研究では、ゲノムスケール代謝モデル(GMM)の開発と光合成のシステム解析を行い、光合成をシステムとして統合理解することを目的とする。本計画班では、シアノバクテリアを実験材料に用い、光合成の素反応因子、環境に対する制御因子および光合成のメカニズム解明の成果を統合理解するシステムを開発し、光合成のシステム再最適化のための戦略立案を行うことを目的とする。また、各研究班の成果を盛り込んで光合成をシステムとして理解する道筋を明らかにする。本年度は、昨年度までに基本設計をしたシアノバクテリアSynechocystissp. PCC6803野生株(GT)株の光合成および主要な代謝反応の情報を含み細胞全体を表現するゲノムスケールモデル(GMM)を各波長の光に対する光化学系における電子伝達が予測できるモデルとして発展させた。本モデルは、暗反応と明反応を細胞全体で統一的に解析が可能なモデルとして構築した。様々な光環境における光合成電子伝達と代謝の反応を関係について解析した。細胞のクロロフィルによる吸光を測定し各波長の光の吸光を測定することで、光化学系の機能をモデルに反映することを試みた。また、タンパク質、代謝の様態を統合的に解析し、光合成と光合成以外の細胞機能の相関関係を明らかにすることで光の強さに応答して変化する光合成のシステム的理解を深めることを目的としており定量プロテオーム解析、定量メタボローム解析の実験データを得た。本計画班においては、光化学系の明反応と細胞の中枢代謝を見渡せるシステム生物学研究を展開する。本年度は昨年度開発したゲノムスケールモデルを波長の異なる光照射に対する振る舞いを予測可能なように発展させた。定量プロテオーム解析、定量メタボローム解析手法により転写制御因子の発現量が異なる細胞の解析結果を得た。これらの状況により順調に研究は進展していると考えている。今後は、シアノバクテリアSyn sp. PCC6803野生株(GT)株の光合成および主要な中枢代謝反応の情報を含むゲノムスケールモデル(GMM)によるシミュレーション結果と細胞増殖などの実験データを突き合わせて光化学系の反応を詳細に記述する形でさらに開発を進める。異なる波長の光に対する応答を詳細に解析可能なモデルを構築し、細胞増殖や光合成活性との実測データ比較により、受け取ったエネルギーの利用の仕方を議論できるシミュレーションを目指す。また、定量プロテオーム解析、定量メタボローム解析を行って、光合成と中枢代謝のシステムとしての関係を明らかにする。本年度は、シアノバクテリアSynechocystis sp. PCC6803野生株(GT)株の光合成および主要な代謝反応の情報を含み細胞全体を表現するゲノムスケールモデル(GMM)の開発を行った。主要な代謝経路の反応の大きさ、光合成における受光や電子伝達を代謝フラックス(反応の大きさ)という形で細胞全体に統一的に解析が可能なモデル構築の基盤整備を行った。反応の大きさどうしの関係を記述できる化学量論を導入し、光合成活性と細胞全体の生命活動が見渡せるモデルとして記述する方法を開発していく。また、転写制御因子を改変した株の光合成活性を測定すると同時に、細胞全体に関わる遺伝子発現、タンパク質、代謝の様態を統合的に解析し、光合成と光合成以外の細胞機能の相関関係を明らかにすることで光の強さに応答して変化する光合成のシステム的理解を深めることを目的としておりそのための基盤整備を行った。本年度はゲノムスケール代謝モデル開発の基盤整備、代謝物質やタンパク質の定量解析を開始している。また、代謝酵素の生化学解析や転写制御因子の欠損株や強発現株の培養を行って、データを取得しており、順調に研究は進展していると考えている。本年度は、シアノバクテリアSynechocystis sp. PCC6803

野生株(GT)株の光合成および主要な代謝反応の情報を含み細胞全体を表現するゲノムスケールモデル(GMM)の開発を行った。主要な代謝経路の反応の大きさ、光合成における受光や電子伝達を代謝フラックス(反応の大きさ)という形で細胞全体に統一的に解析が可能なモデル構築の基盤整備を行った。光化学系の反応を素反応レベルに分解しそれぞれの電子伝達フラックスを議論できるレベルのモデルを再構築した。また、転写制御因子を改変した株の光合成活性を測定すると同時に、細胞全体に関わる遺伝子発現、タンパク質、代謝の様態を統合的に解析し、光合成と光合成以外の細胞機能の相関関係を明らかにすることで光の強さに応答して変化する光合成のシステム的理解を深めることを目的としており定量プロテオーム解析、定量メタボローム解析の実験データを得た。本計画班においては、光化学系の明反応と細胞の中枢代謝を見渡せるシステム生物学研究を展開する。本年度はゲノムスケールモデルを再構築し、光化学系の反応を素反応レベルに精緻化して表現するモデルが構築できた。転写制御因子の役割と細胞全体への影響を調べるために、定量プロテオーム解析、定量メタボローム解析手法が確立し、順調に研究は進展していると考えている。食糧やエネルギー問題を解決するため、植物や藻類の「光合成の改良」は重要な課題である。現存の光合成生物は進化を遂げた局所環境に適応してプロトン駆動力によって「光エネルギーの効率的利用」と「過剰光からの防御」のバランスを調節している。本研究では、ゲノムスケール代謝モデル(GMM)の開発と光合成のシステム解析を行い、光合成をシステムとして統合理解することを目的とする。本計画班では、シアノバクテリアを実験材料に用い、光合成の素反応因子、環境に対する制御因子および光合成のメカニズム解明の成果を統合理解するシステムを開発し、光合成のシステム再最適化のための戦略立案を行うことを目的とする。また、各研究班の成果を盛り込んで光合成をシステムとして理解する道筋を明らかにする。本年度は、昨年度までに基本設計をしたシアノバクテリアSynechocystissp. PCC6803野生株(GT)株の光合成および主要な代謝反応の情報を含み細胞全体を表現するゲノムスケールモデル(GMM)を各波長の光に対する光化学系における電子伝達が予測できるモデルとして発展させた。本モデルは、暗反応と明反応を細胞全体で統一的に解析が可能なモデルとして構築した。様々な光環境における光合成電子伝達と代謝の反応を関係について解析した。細胞のクロロフィルによる吸光を測定し各波長の光の吸光を測定することで、光化学系の機能をモデルに反映することを試みた。また、タンパク質、代謝の様態を統合的に解析し、光合成と光合成以外の細胞機能の相関関係を明らかにすることで光の強さに応答して変化する光合成のシステム的理解を深めることを目的としており定量プロテオーム解析、定量メタボローム解析の実験データを得た。
アミロイドーシスの診断法を変革し、病態に迫る病理組織プロテオーム解析法の確立

アミロイドを作る蛋白質は36種類あり、その種類により各疾患に分類され、治療法も異なる。そのため、本疾患群の診断には、正確にアミロイド原因蛋白質を同定することが重要である。本研究では、アミロイドに特異性の高い新たな抽出法を開発し、正確にアミロイド原因蛋白質を同定できるシステムを確立するとともに、質量分析装置を用いて、ALアミロイドーシスの予後予測マーカーの開発、病態解析を行う。プロテイナーゼKを用いた解析法は、アミロイドの検出率を増加させることが明らかとなった。ALアミロイドーシスにおいて質量分析による解析で、多種のL鎖由来ペプチドを検出でき、予後予測マーカーとなりうる候補ペプチドを同定した。アミロイドーシスは、可溶性の蛋白質が難溶性のアミロイド線維へと変化し、諸臓器に沈着することで重度の臓器障害を引き起こす難治性の疾患群である。本疾患群は、アミロイドを形成する蛋白質によって各疾患に分類され、疾患ごとに治療法が異なるため、正確に診断することが極めて重要である。本研究は、アミロイドに特異性の高い新たな蛋白質抽出法を開発し、質量分析装置を用いて、病理組織切片から正確にアミロイドの病型を診断する手法を構築することを目的とする。計画初年度である平成26年度は、アミロイドに特異性の高い蛋白質抽出法を開発するために、各種界面活性剤(SDS, Zwittergennt, CHAPS)や変性剤(尿素やGnHCl)、酵素(プロテイナーゼK)を用いて検討を行った。その結果、従来法と比較して、プロテイナーゼKを蛋白質を抽出する過程で使用することで、検出される蛋白質に占めるアミロイド原因蛋白質の割合が増加した。本法は、AL, AA,FAP,SSAなど様々なアミロイドーシスの病理診断にも有効であることが明らかとなった。さらに、検討を進める中で、原因不明の角膜アミロイドーシスにおいて、質量分析装置を用いた解析法を利用することで、アミロイド原因蛋白質の同定に至り、英文として報告した(Tasaki et al., Amyloid, 2015)。また、ALアミロイドーシスの予後予測マーカーの探索および病態解析を行うために、本年度は、質量分析装置を用いて、ALアミロイドーシスのアミロイド沈着組織を解析した。その結果、ALアミロイドの患者組織には、様々なタイプの免疫グロブリン軽鎖由来の蛋白質が沈着することが明らかとなった。アミロイドーシスとは、難溶性のアミロイドと呼ばれる線維が諸臓器に沈着することによって引き起こされる難治性の疾患群である。本疾患群は、組織に沈着する原因蛋白質の種類ごとに各疾患に分類され、疾患によって治療法が大きく異なる。そのため、アミロイド沈着組織から正確に原因蛋白質を同定することが重要である。本研究では、アミロイドに特異性の高いホルマリン固定組織切片からの蛋白質抽出法を開発し、質量分析装置を用いた正確な病理組織診断法を確立することを目的とする。研究計画2年目である平成27年度は、前年度に開発したプロテイナーゼKを用いた手法のアミロイド抽出法としての有用性を検証するために、各種アミロイドーシス患者(AL, FAP, SSA, AA)組織を用いて多数例での検討を実施した。その結果、いずれのタイプのアミロイドにおいてもプロテイナーゼKで処理することで、有意にアミロイド原因蛋白質の検出される割合が増加した。そのメカニズムを明らかにするために、アミロイド沈着領域にプロテイナーゼKで処理したところ、アミロイドがその酵素消化に抵抗性を示すことがわかった。更に検討を進める中で、質量分析装置を用いた解析技術によって、FAP疑いの患者から原因蛋白質の同定に至り、英文として報告した。また、原因蛋白質不明であったアミロイドーシス患者の組織から、開発した本解析法を用いることで、新たなアミロイド原因蛋白質の候補を明らかにした。ALアミロイドーシスの予後予測マーカーの探索および病態解析を行うために、更に症例を追加し検討した。その結果、免疫グロブリンL鎖のIGLC3ペプチドの検出率が最も高いことが明らかとなった。さらに、検出ペプチドと沈着臓器には明らかな特異性はないものの、消化管および心臓でL鎖λタイプが多いことがわかった。研究の進展状況は、当初の予定通り順調である。アミロイドに特異性の高い質量分析装置を用いた診断法を開発するために、各種抽出法を検討した結果、プロテイナーゼKを用いたアミロイド抽出法を考案し、その有用性を検証した。本年度は、各種アミロイドーシス患者(AL, FAP, SSA, AAなど)組織を用いて多数例での解析を実施し、プロテイナーゼK処理が有意にアミロイド原因蛋白質の検出される割合を増加させることを明らかにした。さらに、そのメカニズムも明らかにしつつある。また、本手法を用いることで、これまで原因蛋白質不明のアミロイドーシスから新規アミロイド原因蛋白質の候補を同定した。ALアミロイドーシスにおけるバイオマーカーの開発および病態解析に関して、患者や臓器によって検出されるペプチドにバリエーションがあることがわかった。同時に、IGLC3が最も検出率が高いことが明らかとなった。さらに、予後不良の患者で、IGLC2が検出されることもわかってきた。以上のように、アミロイドに特異性の高い質量分析装置を用いた診断法の確立および、その技術を利用した新たなアミロイド原因蛋白質の同定、さらには、ALアミロイドーシスのバイオマーカーの確立および病態解明の準備が整ってきた。アミロイドーシスは、アミロイド線維が諸臓器に沈着することで臓器障害を引き起こす難治性疾患である。

アミロイドを作る蛋白質は36種類報告され、その種類により治療法が異なるため、正確にアミロイド蛋白質を同定することが極めて重要である。本研究は、アミロイドの新たな抽出法を開発し、質量分析装置を用いた正確な病理組織診断法を確立することを目的とする。前年度までにプロテイナーゼK処理のアミロイド診断法への有用性が示されたため、本年度は詳細なメカニズムを検証した。アミロイド沈着組織とプロテイナーゼKを反応させ、蛋白質の性状を銀染色法とウエスタンブロット法により検証した結果、アミロイド以外の共存蛋白質は減少する一方、アミロイド原因蛋白質は保存されることが明らかとなり、検出率向上の一因を突き止めた。また、質量分析を用いた解析により、複数の原因不明のアミロイド沈着症例から、共通の新規アミロイド原因蛋白質を同定した。現在、論文投稿準備中である。さらにALアミロイドーシスにおいて、L鎖の検出率向上を目指したデータベースの構築では、従来のデータベースに免疫グロブリンのデータが充実したImmunogeneticsを統合させることで検出率が向上する傾向が得られた。ALアミロイドーシスの予後不良マーカーの探索および病態解析に関して、症例を増やし、質量分析装置を用いて解析した結果、定常領域の検出頻度としては、IGLC3、IGKC4が比較的多く、可変領域は、λ型ではIGLV3、IGLV6が多く認められることが明らかとなり、学術雑誌に報告した。また、予後不良患者では、複数の症例でIGLC2が認められ、予後予測マーカーとなる可能性が示された。質量分析装置で同定できたL鎖の配列からペプチドを作製し、各種生化学的手法により解析したところ、本ペプチドのアミロイド形成能が確認され病態の一因を明らかにした。アミロイドを作る蛋白質は36種類あり、その種類により各疾患に分類され、治療法も異なる。そのため、本疾患群の診断には、正確にアミロイド原因蛋白質を同定することが重要である。本研究では、アミロイドに特異性の高い新たな抽出法を開発し、正確にアミロイド原因蛋白質を同定できるシステムを確立するとともに、質量分析装置を用いて、ALアミロイドーシスの予後予測マーカーの開発、病態解析を行う。プロテイナーゼKを用いた解析法は、アミロイドの検出率を増加させることが明らかとなった。ALアミロイドーシスにおいて質量分析による解析で、多種のL鎖由来ペプチドを検出でき、予後予測マーカーとなりうる候補ペプチドを同定した。アミロイドーシスにおける特異性の高い組織診断法の開発に関して、初年度は、各種蛋白質抽出法を検討した結果、プロテイナーゼKをアミロイド蛋白質の抽出過程で用いることで、質量分析装置で検出される蛋白質に占めるアミロイド原因蛋白質の割合が増加することが明らかとなった。本解析法は、各種アミロイドーシス(AL, FAP, AA, SSA)の原因蛋白質同定にも有用であることがわかった。また、プロテイナーゼKを処理することで、アルブミンやアポリポ蛋白質Eなどアミロイド沈着部位に存在する非特異的な蛋白質の検出ペプチド数が減少することがわかった。
急性炎症における髄内好中球体循環遊走と肺集積及び肺傷害に関する研究

背景:急性肺障害のfirst stepである好中球肺集積のメカニズムについては好中球変形能低下が重要であることが報告されている.急性炎症早期では骨髄内から循環血液中への好中球遊走が生じ、その後増加した好中球は変形能を低下させ、肺傷害のkey stepである好中球肺集積を引き起こすが、そのメカニズムについて好中球細胞骨格変化を中心に検討を行った.結果:平成15年度は主にラットを用いてのfMLP刺激による髄内好中球遊走に関し研究を行った。骨髄内好中球のdeformabilityは循環血中好中球より低下しており、F-actin量と相関していた、また好中球deformability低下はCytochalasin Dにより抑制されたが、colchicineでは抑制されず、好中球変形能にはactin polymerizationが重要であることが解明された.一方で作用機序としての抗凝固作用以外に抗炎症作用を有し重症敗血症にも有効であるantithrombin(AT)をラットに投与したところ好中球肺集積を抑制する結果を得た.そこで平成16年度はさらに好中球に対するATの作用機序について細胞骨格変化を中心にin vitroで検索した.その結果、fMLP刺激で好中球stiffnessは上昇したがAT前処置では有意な抑制を示した.一方、heparinase前処置でATの好中球stiffness低下作用は抑制されなかった.結語:急性肺傷害に先立つ好中球髄外遊走と肺集積のinitial stepとなる好中球変形能低下にF-actinは重要な役割を担っていると考えられた.またATのactin polymerization抑制による好中球変形能低下抑制作用にはHSPG非依存性情報伝達経路の関与が示唆され(論文投稿中)、今後そのレセプター探索を継続して研究していく予定である.背景:急性肺障害のfirst stepである好中球肺集積のメカニズムについては好中球変形能低下が重要であることが報告されている.急性炎症早期では骨髄内から循環血液中への好中球遊走が生じ、その後増加した好中球は変形能を低下させ、肺傷害のkey stepである好中球肺集積を引き起こすが、そのメカニズムについて好中球細胞骨格変化を中心に検討を行った.結果:平成15年度は主にラットを用いてのfMLP刺激による髄内好中球遊走に関し研究を行った。骨髄内好中球のdeformabilityは循環血中好中球より低下しており、F-actin量と相関していた、また好中球deformability低下はCytochalasin Dにより抑制されたが、colchicineでは抑制されず、好中球変形能にはactin polymerizationが重要であることが解明された.一方で作用機序としての抗凝固作用以外に抗炎症作用を有し重症敗血症にも有効であるantithrombin(AT)をラットに投与したところ好中球肺集積を抑制する結果を得た.そこで平成16年度はさらに好中球に対するATの作用機序について細胞骨格変化を中心にin vitroで検索した.その結果、fMLP刺激で好中球stiffnessは上昇したがAT前処置では有意な抑制を示した.一方、heparinase前処置でATの好中球stiffness低下作用は抑制されなかった.結語:急性肺傷害に先立つ好中球髄外遊走と肺集積のinitial stepとなる好中球変形能低下にF-actinは重要な役割を担っていると考えられた.またATのactin polymerization抑制による好中球変形能低下抑制作用にはHSPG非依存性情報伝達経路の関与が示唆され(論文投稿中)、今後そのレセプター探索を継続して研究していく予定である.背景・目的:急性炎症早期では循環血中の好中球増加、つまり骨髄内から循環血液中へのmatureおよびimmatureな好中球の遊走(bone marrow release)が生じている。その後増加した好中球は変形能を低下させ、肺障害のkey stepである好中球肺集積を引き起こすが、そのメカニズムについて好中球細胞骨格変化を中心に検討を行った方法:ラット尾静脈、頚静脈および頚動脈にカニュレーションし、各種抑制剤前処置後にfMLPを持続静脈内投与、経時的に動静脈血を採取した。またfilter assay systemを用い好中球deformability変化を評価、actin構造変化と定量はConforcal laser microscopeおよびFACS scanで検討した。結果:fMLP投与で好中球bonemarrow releaseが生じた。そして骨髄内好中球のdeformabilityは循環血中好中球より低下しており、F-actin定量値と相関していた。また好中球deformability低下はCytochalasin D (actin polymerization阻害剤)により抑制されたが、colchicine(微小管重合阻害剤)では抑制されなかった。一方Cdc42活性化により好中球のactin polymerizationが増加した。結語:好中球変形能低下にF-actinは重要な役割を担っていると考えられた。[背景]急性炎症早期では循環血中の好中球増加、つまり骨髄内から循環血液中へのmatureおよびimmatureな好中球の遊走(bone marrow release)が生じている.その後増加した好中球は変形能を低下させ、肺傷害のkey stepである好中球肺集積を引き起こすが、そのメカニズムについて好中球細胞骨格変化を中心に検討を行った.我々は昨年度までの研究によりラット髄内好中球と循環好中球の肺集積にはF-actinが重要であることを明らかとした.一方で作用機序としての抗凝固作用以外に抗炎症作用を有し重症敗血症にも有効であるantithrombin(AT)をラットに投与したところ好中球肺集積を抑制する結果を得た.

本年度はさらに好中球に対するATのメカニズムについて細胞骨格変化を中心にin vitroで検索した.[方法]分離ヒト好中球はα,βもしくはlatent-ATにより前処置後fMLPで刺激、2分後にfilter assayで変形能を評価し、FACS scanでF-actinを定量した.[結果]好中球stiffnessはfMLP投与により50%上昇した.しかしα,β,latent-AT前処置群ではfMLP刺激でも有意な抑制を示した.一方heparinase前処置でATによる好中球stiffness低下作用は抑制されなかった。またF-actin定量値も好中球stiffnessと有意に相関した.[結論]急性肺傷害に先立つ好中球肺集積のinitial stepとなる好中球変形能低下にF-actinは重要な役割を担っていると考えられた.またATのactin polymerization抑制による好中球変形能低下抑制作用にはheparin sulfate proteoglycan非依存性情報伝達経路の関与が示唆された.
技術的環境における希薄な身体の身体的基盤―医療と学習の相互行為分析

本研究の目的は,技術的環境における相互行為様式の習得の身体的基盤を捉えようとするものであった.2011年3月に東日本大震災,それに続く原発の爆発による多数の住民の一斉避難という,未曾有の事態が出来する.本研究では,焦点を,福島県下の避難所と応急仮設住宅において行なわれていた「足湯ボランティア」に絞り,ボランティアと避難住民との相互行為様式の諸側面(基本構造,ボランティアの反応の様式,話題の展開の様式,など)を明らかにした.ボランティアは,まったくの新人である場合もある.また,基本的に初対面者どうしの身体接触を伴う相互行為である.このような特殊な状況における相互行為の構造的基盤を明らかにした.本年度(2012年度)はおもに3つの調査研究を行なった.第1は,前年度から開始した「福島県下における避難住民とボランティアの相互行為」の調査研究である.いわゆる「足湯ボランティア」活動における相互行為をビデオに収録することを継続するとともに,2011年度までに収集したデータ(40ほどの相互行為のビデオ)を集中的に分析し,日本社会学会で報告するとともに,一冊の書物にまとめることができた(2013年6月に刊行予定).とくに震災・原発事故から一年以内のボランティア活動参加者は,初心者が多い.かれらが初めてのボランティア活動でありながら,それをやりぬいていくための,いくつかの技法(話題展開の技法,共感の技法など)を明らかにするとともに,とくに「足湯ボランティア」が初心者にとって有利な(避難住民との)コミュニケーション方法であるゆえんを明らかにした.第2は,「在宅医療における相互行為」の調査研究である.在宅マッサージの派遣会社の協力を得て,15例ほどの在宅マッサージをビデオに収録し,分析成果を一部公開することができた.この2つの研究は,身体接触を伴う相互行為の研究という共通点を持つ.身体接触を伴う相互行為の研究は,研究代表者の産婦人科における相互行為の研究を引き継ぎつつ,音声・視覚・触覚という異なる様式の資源を用いた活動の組織の研究という点で,独特の意味を持つ.在宅医療に関しては,その活動の組織を丹念に解明することで,在宅医療における「コミュニケーション教育」に資する知見を得ることができると考えている.第3は,「未就労の若者の就労支援におけるカウンセリング」の調査研究である.いわゆる「ニート」と呼ばれている若者たちの支援において,かれらがどのように自らの「コミュニケーション能力」を発揮しているかを明らかにしようと考え,とりあえず,4例ほど,ビデオ収録を行なった.本年度は,2つのフィールドを軸に展開した.ひとつは,2011年の東日本大震災とそれに続く津波・原発事故によって避難を余儀なくされた人びとボランティアとの相互行為の研究である.これは「足湯ボランティア」と呼ばれ,避難住民が足を湯につけている間に,ボランティアが手のマッサージを行なうというものである.もうひとつは,在宅マッサージにおける相互行為の研究である.これは,有資格の施術者が患者宅を訪れ,マッサージ治療を施すというものである.いずれのフィールドも,身体接触をともなう相互行為場面であり,本研究のテーマである「相互行為の身体的基盤」を解明するのにふさわしいものである.前者の研究(足湯)では,マッサージは素人のボランティアによって行なわれる.それは,簡単な指導を受ければ誰にでもできる.しかし,マッサージをしながら,初対面の避難住民と会話を進めることを,ボランティアたちはどう実現しているのか.例えば,ボランティアは,マッサージの進行を会話の進行に合わせて調節することで,会話の進行の停滞を最小化する一方,マッサージを,相互行為全体を支える基底として利用していた.この知見は,2013年7月に刊行された『共感の技法』(勁草書房)の重要な知見の1つでもあった(13章).2つの英語論文を作成し,投稿した.在宅マッサージは,それに対して,マッサージ自体が高度な技術となっている.そこでも,様々な会話が同時に進行するが,(「足湯」の場合と異なり)マッサージの進行のなかに会話の進行が埋め込まれているのが観察できた.例えば,研究協力者の須永将史は,マッサージの進行に応じて,痛みの有無を聞く質問であっても,肯定疑問文(「痛いですか」)と否定疑問文(「痛くないですか」)が体系的に使い分けられることを見出している.協力いただいた在宅医療の団体に向けた79頁の報告書をまとめ,送付した.本研究の目的は,技術的環境における相互行為様式の習得の身体的基盤を捉えようとするものであった.2011年3月に東日本大震災,それに続く原発の爆発による多数の住民の一斉避難という,未曾有の事態が出来する.本研究では,焦点を,福島県下の避難所と応急仮設住宅において行なわれていた「足湯ボランティア」に絞り,ボランティアと避難住民との相互行為様式の諸側面(基本構造,ボランティアの反応の様式,話題の展開の様式,など)を明らかにした.ボランティアは,まったくの新人である場合もある.また,基本的に初対面者どうしの身体接触を伴う相互行為である.このような特殊な状況における相互行為の構造的基盤を明らかにした.2010年10月に科学研究費の申請書を提出したあと,2011年3月に大きな震災と,それにともなう原子力発電所の爆発,炉心溶融という,あってはならい事故を,目の当たりにした.多くの避難者が,合理的な理解を超えた困難を強いらているなか,2011年度は,福島県を中心に,1つのサブ・プロジェクトを展開した.

福島市と郡山市のボランティア・コーディネータおよび各町村の社会福祉協議会の協力のもとに,現地のボランティアと避難者との相互行為(とくに「足湯」ボランティア)をビデオで録画し分析した(およそ70ほどの相互行為を収録し,ほぼ半数ほどのテープ起しが完了している)に焦点を当てた.避難所・仮設住宅という新たな環境(広い意味での技術的環境)における生活上の諸問題がどのように語られるか,ボランティアらがそのような相互行為にどのように「社会化」されていくか,というあたりを明らかにすることを,目指した.おもに2つの点に焦点を当てた.1)避難者が自ら話題を持ち出すのは,どのようにしてか.2)ボランティアの「共感的反応」は,どのように産出されるか.前者については,ボランティアの問いかけに対する避難者の短い応答,それに対するボランティアの短い応答のあと,避難者が自らの応答を拡張するという手続きが観察できた.このような手続きは,とくに「足湯」においてはマッサージが「支配的な関与」であるがゆえに有効に働くこと,このことが確認できた.後者については,共感することが困難であるような,避難者の厳しい体験の語りに対して,ボランティアたちが,直前の発話を飛び越えながら共感する手続きや,個別体験を一般化しつつ共感するという手続きを用いていることが,観察できた.2011年3月の東日本大震災を受け,同年4月に本研究の採択が決まって以来,本研究の焦点を,福島県における避難住民とボランティアの相互行為に絞ってきた.とくに「足湯ボランティア」は,身体接触を伴う相互行為という点において,相互行為における身体の意味が明らかになるような場であった.また,ボランティアの初参加者の学習という観点からも,本研究課題に非常に適合的なものであった.一方,原発事故からの避難住民にとってコミュニケーション支援はますます重要となるだろう.そのなかで,一冊の書物をすばやくまとめえたことは,計画以上の進展と評価できる.同時に,国際的に最も権威ある社会学会であるアメリカ社会学会の2013年年次大会において,このテーマに関する,代表者と研究協力者の計3本の研究報告が採択された.避難の現場において起きていることを,海外に発信するよい機会であると考えている.また,超高齢化社会において在宅医療は今後決定的に重要となるだろう.その現場にビデオを持ち込んで,15ほどの事例を収録できたことも,大きな成果である.予備調査において収録した4事例をもとに,中間報告書をまとめることもできた.東日本大震災とそれに続く原発事故による避難者と,ボランティアの相互行為に焦点を絞った研究を集中的に行なった.現地のボランティアへの知見の還元をひとつの目標としたため,データ収集,分析,知見のまとめを,急いで行ない,2011年12月までに2つの報告書を公開できた.また,この報告書をもとに,12月23日に福島大学の教室をかりて,現地ボランティアとワークショップも行なうことができた.「福島県下における避難住民とボランティアの相互行為」の研究については,8月に,国際エスノメソドロジー・会話分析学会およびアメリカ社会学会で,代表者および研究協力者により合計8本の研究発表を行なう予定である.また,まだ分析しきれていないデータについての分析も進める予定である.とくに,震災から時間がたつにしたがって相互行為のパターンにどのような違いが見えるかなども,分析の焦点となりうるだろう.
唾液腺癌の浸潤・転移抑制メカニズムにおける細胞周期チェックポイント機構の役割

唾液腺癌は高悪性度から低悪性度の腫瘍が存在する。なかでも腺様嚢胞癌および唾液腺管癌は局所浸潤性が強く、高率に遠隔転移をきたす。一方、腺房細胞癌は予後良好とされ浸潤能、転移能は低い。本研究では腺様嚢胞癌を中心として唾液腺管癌、腺房細胞癌における細胞周期チェックポイント機構において重要な役割を演じている遺伝子やその産物を細胞周期の正と負の両面から検索・解析し、腫瘍細胞の特異性を明らかにすることにある。研究材料は手術より得られた10%ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片、32例であり、腺様嚢胞癌30例、唾液腺管癌1例、腺房細胞癌1例を対象とした。癌抑制遺伝子であるp53蛋白の発現は腺様嚢胞癌12例、唾液腺管癌1例に陽性であり、腺房細胞癌では認められなかった。p53蛋白の発現と予後に関連性は認められなかった。細胞周期抑制因子であるp16、p21およびp27蛋白の発現は頸部リンパ節転移陽性例において有意に低下していた。細胞増殖能の評価に用いた抗ki-67抗体における陽性細胞率は、細胞周期抑制因子との間に関連性は認めなかった。唾液腺癌における細胞周期抑制因子の検討は、頸部リンパ節転移の指標となる可能性が考えられ、また腫瘍の悪性度は発生部位が腺管部分に近づくにつれて増加し、腺房に近くなるにつれて低下する可能性が示唆された。唾液腺癌の中でも腺様嚢胞癌は高悪性度の腫瘍であり、局所浸潤能が強く、高率に遠隔転移をきたす。そこで本腫瘍の悪性度や発癌過程における分子機構を明らかにすることで外科療法における安全域の設定や遺伝子治療などに反映することが可能となると考える。本研究では、細胞周期チェックポイント機構において重要な役割を演じている遺伝子やその産物を腺様嚢胞癌を用いて細胞周期の正と負の両面から検索・解析し、癌細胞の特異性を明らかにすることにある。研究材料は手術より得られた10%ホルマリン固定パラフィン包埋組織切片、27例を対象とした。癌抑制遺伝子であるp53蛋白の発現を免疫組織化学的手法にて検出した。その結果、12例に発現を確認したがp53蛋白の発現と予後に関連性は認められなかった。そこでp53依存性および非依存性に誘導される細胞周期抑制因子であるp21蛋白の発現を評価した。本腫瘍におけるp21はp53に依存性して発現が誘導される可能性が考えられ、また組織型が高分化になるほど発現率が増加し、さらにリンパ節転移群においてはその発現率が減少する傾向を認めた。今後、In situ hybridization法、およびin situ PCR法を用いて細胞周期を亢進させる因子(サイクリン/サイクリン依存性キナーゼ、Myc、E1A、E2F2など)あるいは抑制する因子(p15、p16、p19、p27)などの検索を行う予定である。
Semantic Webにおけるすべての人の為の高速な内容タグ付け

PIAプロジェクトには2つの重要な特徴がある。(1)専門家が構築したオントロジーを使い、人手によってアノテートされたウェブページからの機械学習に基づいてウェブを自動的にアノテートできる高性能アノテーションサーバーの構築と、(2)機械学習をサポートするためのオントロジープリミティブの集合に基づいたオントロジーサーバーのデザインである。全体の目標をかんがみて、今年度の進行状況を報告する。(1)オントロジーサーバーのためのメタオントロジの実装に成功し、その結果は2003年度のKESに掲載された。(2)同一指示アノテーションの広範なガイドラインは2004年度LRECに掲載された。(1)専門家が構築したオントロジーを使い、以前アノテーションされたウェブページの機械学習に基づいて自動的にウェブページをアノテーションする高性能アノテーションサーバーの構築。(2)機械学習をサポートするのに使われるオントロジープリミティブの集合に基づくオントロジーサーバーのデザイン。総体的目標に基づいて今年度の進行状況を報告する。(1)オントロジーサーバーのためのメタオントロジーのデザインに成功し、それはLRECに掲載された(2)同一指示のアノテーションガイドラインの初期デザインはSWFATに掲載された。(3)PIAアノテーションサーバーのデザインと開発は、SWFATに掲載され、利用者にテストされている。(4)技術用語のアノテーションの為のサポートベクターマシーンの長期テストの結果はCoNLLに掲載された。14年度、ポスドクリサーチアシスタントの採用が難しかったのでこのプロジェクトのために2人のリサーチアシスタントを採用することにした。*そのため予算の大半がPIAアノテーションサーバーの開発に使われた。これは計画どおり今ユーザーテストをおこなっているワーキングシステムを作成したソフトウェアの会社に外注できた。所有のコンピューターハードウェアリソースではSVMソフトウェアに必要な大掛かりな実験をするには十分ではないのでサーバーに加えられる4つのデュアルCPUラックを買うことにした。4つの機械のハードウェアは同じ容量のマルチCPUコンピューターを買うよりはるかに安かったし、サポートベクターマシーンの研究が十分できた。この実験成果はCoNLLに掲載され、また、『Journal of Artificial Intelligence in Medicine』の特別版に投稿された。このプロジェクトでさらに言及することはSemantic Webのアノテーションの技術に関し2つワークショップを催し成功したことである。ひとつはECAI(ヨーロッパ人工知識学会)で開かれた、「Knowledge Markup and Semantic Annotation』であり、もう一つは3月奈良で催したSemantic Web Foundations and Applications Workshop(SWFAT)である。日本ではこのようなワークショップは初めてである。*15年度にはポスドクを一人採用することができた。
極穂重型イネ品種の登熟能力向上に寄与する良登熟型遺伝子の機能解析

イネ極穂重型品種の登熟向上に貢献する良登熟型遺伝子を探索したところ,ADPグルコースピロホスホリラーゼ(AGPase)小サブユニット2座,同酵素の大サブユニット2座およびショ糖トランスポーター1座に,それぞれAPS2-2,APL2-2およびSUT1-2が候補遺伝子として検出された.これら遺伝子をもつものは,発育胚乳中でAGPase活性が高く,成熟後の登熟程度も高いことが分かった.またこれら3遺伝子の中でもAPL2-2が最も強力な作用を示すことが推察された.これら3遺伝子はインド型品種に比較的高頻度で存在していた.一方,これら遺伝子を保有しても必ずしも飛躍的多収には繋がらないことが分かった.イネ極穂重型品種の登熟向上に貢献する良登熟型遺伝子を探索したところ,ADPグルコースピロホスホリラーゼ(AGPase)小サブユニット2座,同酵素の大サブユニット2座およびショ糖トランスポーター1座に,それぞれAPS2-2,APL2-2およびSUT1-2が候補遺伝子として検出された.これら遺伝子をもつものは,発育胚乳中でAGPase活性が高く,成熟後の登熟程度も高いことが分かった.またこれら3遺伝子の中でもAPL2-2が最も強力な作用を示すことが推察された.これら3遺伝子はインド型品種に比較的高頻度で存在していた.一方,これら遺伝子を保有しても必ずしも飛躍的多収には繋がらないことが分かった.1イネ品種中生新千本/密陽23号由来組換え近交系8系統を用いて水田で通常栽培し,成熟後,比重1.00以上の穎果の割合である精籾歩合を系統間で比較した.その結果,良登熟型遺伝子.AS2-2およびSUT1-2をもつ系統は,非良登熟型遺伝子AS2-1および、SUT1-1をもつものに比べ,穂全体の精籾歩合が高いことがわかり,これら良登熟型遺伝子の登熟向上効果が確認できた.ただし,2次枝梗上穎果については有意差は認められなかった2同じ材料を用いて,出穂開花後の粒重増加速度を測定したところ,やはり,上記の良登熟型遺伝子をもつものはもたないものに比べ,粒重増加速度が速くなることが確認できた3同じ材料を用いて,出穂後10日目の発育胚乳におけるADPグルコースポロホスホリラーゼ活性を測定したところ,やはり良登熟型遺伝子をもつものはもたないものに比べ,高い酵素活性を示すことが確認できた.特にSUT1-2において酵素活性の増加が顕著であった4上記のSUT1の遺伝子型を判別できるSSRマーカーを開発した.その結果,AS2に関するIn/Delマーカーと同時に多重PCRが可能となり,2種の良登熟型遺伝子型を同時かつ容易に判別可能となった5 SUT1座の第1イントロン内にイネ内生トランスポゾンmPingが挿入された系統が見いだされたので,この系統と挿入のない品種銀坊主を用い,SUT1の遺伝子転写量を定量PCRによって測定した.その結果,両者の間に有意な差は認められなかった.これは,挿入箇所が長大な第1イントロン内であることと関連している可能性がある.今後は,上記の組換え近交系で良登熟遺伝子の転写量を測定する予定である1極穂重型品種で遺伝子型がAS2-2SUT1-2である良登熟型のものとAS2-1 Sut1-1の非良登熟型のものを通常栽培し,登熟程度として精籾歩合(比重1.00以上)と良登熟籾歩合(比重1.15以上)を測定した.その結果,これまでの年次と同様に良登熟型であるAS2-2 SUT1-2をもつものの方が非良登熟型に比べより高い登熟程度を示していた.これより,環境が変わっても良登熟型遺伝子はそれらをもつものの登熟程度を高める傾向が強いことが明らかになった.2上記のSUT1の翻訳開始点から訳400bp上流にトランスポゾンmPingが挿入された品種銀坊主と挿入されていない系統IM265を通常栽培し,出穂後10および15日目の2次枝梗上穎花の胚乳からmRNAを抽出し,定量PCRによってSUT1の発現程度を検討した.その結果,銀坊主の発現がIM265に比べてやや低下しているもののその差は有意ではなかった.今後はさらに多くの系統を供試し,SUT1の発現に対するmPing挿入の効果について検討を加える.3 A52座およびSUT1座の遺伝子型をより容易に判別できる分子マーカーおよびその検定方を確立するため,AS2座での変異箇所である翻訳開始点直前の2個のシトシンの有無を,従来のような2種類のプライマー対を別々のPCRで用いて検定する方法に替えて,新たに設計した2組のプライマーを同時に用いる方法を試みた.さらにこれらとSUT1遺伝子型を検定するSSRマーカー用プライマーも組み合わせた多重PCRによる手法にも発展させた.その結果,まだ十分な検定を行えるには至らずプライマー設計上の改良が必要であると判断された.1 APS2およびSUT1とともに極穂重型イネ品種の登熟程度に関わると考えられるADPグルコースピロホスホリラーゼ大サブユニット2(APL2)座内の塩基配列多型を極穂重型を含む6品種において再度調査した.その結果,昨年度に異なるハプロタイプすなわち対立遺伝子を持つと考えられていた南京11号は,密陽23号およびタカナリと同一のハプロタイプ,APL2-2をもつことが明らかになった.

したがって,APL2座には,登熟程度が低いアケノホシ等がもつAPL2-1,登熟程度が比較的良好である密陽23号,南京11号,タカナリ等がもつAPL2-2およびコシヒカリ等がもつAPL2-3,さらにはAPL2-4,APL2-5が,レアアレルを除くと存在することが200以上のイネ品種の遺伝子型をCAPSマーカーによって探索したところ判明した.2上記のAPS2,APL2,SUT1座において異なる遺伝子型をもつ密陽23号(APS2-2 APL2-2 SUT1-2)とアケノホシ(APS2-1 APL2-1 SUT1-1)の交雑F4世代において,穎花数/穂が200粒以上でかつ上記3座において得られる対立遺伝子の全ての組み合わせの遺伝子型のうち,APS2-1 APL2-1 SUT1-2を除く7遺伝子型の各々をもつ系統を栽培し,登熟程度を調査した.その結果,APL2-2をもつものはAPL2-1をもつものよりも,他の2座の遺伝子型如何に拘わらず,有意に高い登熟程度を示すことが明らかになった.したがって,極穂重型イネ品種の登熟程度の向上にはAPL2座の中のAPL2-2が大きく貢献する可能性がある.ただし,本実験での材料は,上記3座以外の遺伝的背景が均質ではないので,今後はこの点を解決した材料を用いて詳しく検討する必要がある.1ショ糖トランスポーター1遺伝子(SUT1)の翻訳開始点から465 bp上流に挿入されたトランスポゾンPingの登熟程度に及ぼす影響を,5挿入系統および5非挿入系統を用いて検討した.その結果,比重1.00以上の穎果の割合としても比重1.13以上の穎果の割合としても,登熟程度は本mPing挿入によって有意に低下したことが明らかになった.また,開花後の粒重増加速度も,本mPing挿入によって有意ではないものの低下した.一方,発育胚乳中のSUT1の発現量を定量PCRによって検討したところ,本mPingの挿入の影響は有意とはならなかった.これらの結果から,SUT1の上流にトランスポゾンが挿入されたことによってSUT1の機能に何らかの影響がおよび,その結果,登熟程度や粒重の発育が低下したことが推察された.一方で発育胚乳におけるSUT1発現量に影響が出なかったことについては,転写ではなく翻訳での低下,もしくはシンク器官ではなくソース器官におけるSUT1発現量の低下が考えられる.2登熟に関わると考えられるSUT1およびAPS2(AS2)に加えて過去に報告した,ADPグルコースピロホスホリラーゼ大サブユニット2遺伝子(APL2)における塩基配列のデータを詳細に検討した結果,APL2においては供試した6品種に関する限り合計4種類のハプロタイプすなわち対立遺伝子の存在が明らかになった.このうちの1遺伝子は,極穂重型品種で比較的登熟の良好である密陽23号とタカナリが同一の遺伝子(APL2-2とする)を共有していた.また同様に登熟が良好な南京11号はこのAPL2-2と一か所のみ配列が異なるAP2-4を持っていた.本遺伝子によってタカナリが良登熟表現型を示す可能性が示唆された.このようなAPL2-2を判別できるIn/Delマーカーを開発した.定量PCRの実施により登熟関連遺伝子であるAS2,SUT1の発現程度を検討できるようになった.満足のいく結果には乏しいものの,今後の発展が期待できる。また,上記遺伝子座の遺伝子型を判別する分子マーカーにも改良が加えられた.25年度が最終年度であるため、記入しない。従来のAPS2およびSUT1に加えて,新たにAPL2においても良登熟型対立遺伝子が存在する可能性が明らかになった.この遺伝子型を判別する分子マーカーも開発できた.