hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
集落形態形成にみる細菌細胞の集団行動性

細菌は、固形培地上で増殖遊走し、特異な構造・形態の集落を構築する。我々は、その形成過程を解析し、細菌が集団行動を行うことを明らかにしてきた。今回は、集団行動をビデオに記録し、タイムラプス、倍速などの処理による動態把握、特異所見の定量化と数値解析を行った。また、Serratia marcescensを使い、そのtransposon変異株を多数集め、離合集散、相互識別、相互連携、集団遊走、機能分担、全体統括と言った行動内容の機構解析を進めている。1. S. marcescensの変異株を使った遺伝解析により、この細菌が産生する界面活性物質′′serrawettin ′′が、無鞭毛菌の表面移動に機能していることを解明した。2. Proteus mirabilisの表面遊走では、最小栄養培地に加えるアミノ酸それぞれに対応した特異な集団行動が見られ、その特徴あるパターンにより、アミノ酸の種類、光学異性の逆推定も可能であった。液体培地ではアミノ酸の有無は菌の増殖に影響がなく、固形培地でアミノ酸特異的な集団行動をする理由は謎である。軟寒天培地にこの菌を点接種すると、全面占拠後の特定時期、菌は遊走移動が活発化し、モアレ様動態を経て斑点状に分布替えをする。この点状細菌集団は、分裂、融合、移動と云ったダイナミックな集団行動を行うので、行動機構の有用な解析対象として期待している。3.Bacillus subtilis集落の成長を定量数値化し解析した。その結果、自己アフィン成長界面(自己アフィン指数が0.5)であることが実証でき、ランダムパターン形成のマクロとミクロにわたる実験的解析の成功例となった。Proteus mirabilisは、硬寒天培地上で、遊走活性により特異な同心円集落を形成する。その際、菌は単独では動かず集団を組んで遊走することが知られている。我々は、この菌が、最小栄養培地上では殆ど遊走しないのに、特定のアミノ酸を添加した培地では遊走をし、しかも、アミノ酸特異的な形態の拡がり集落を形成をすることを見いだした。また、化学走性を思わせる菌の表面遊走もみている。菌の拡がり方は、放射状や、螺旋状と様々であり、特定のアミノ酸を感知した菌が、それに応じた集団行動を行なっているものと思われる。このような特徴ある集団行動を、細菌がどのような機構で可能しているのかを解析するのに、マクロ、ミクロにわたってこの集団行動を追跡した。その結果、1)この集団は、たんなる集合ではなく特異な構造性があること、2)構成要素である細菌は絶えず要因交代をしており極めてダイナミックな集団であること、3)そのダイナミックな構造が、異なる集落形態ごと特徴があること、4)長期間培養では、後半に全く異質な集落成長に変化すること、などが判明した。P.mirabilisを軟寒天培地に接種した場合、菌は更に特異な行動を示す。即ち、一度一様に拡がった菌が、随所で集合行動を行い、直径、0.5-1.0mmほどの集合体を培地上に多数出現させる。何故このような集合行動をおこすのか、未だ不明であるが、集合体の菌は、菌体が短く鞭毛が少なく、長菌多毛で活発に動き回っている集合体外部菌と際だった違いがある。細胞分化と連関した集団行動と考えられ、興味深い。

1.S.marcescensの変異株を使った遺伝解析により、この細菌が産生する界面活性物質"serrawettin"が、無鞭毛菌の表面移動に機能していることを解明した。2.Proteus mirabilisの表面遊走では、最小栄養培地に加えるアミノ酸それぞれに対応した特異な集団行動が見られ、その特徴あるパターンにより、アミノ酸の種類、光学異性の逆推定も可能であった。液体培地ではアミノ酸の有無は菌の増殖に影響がなく、固形培地でアミノ酸特異的な集団行動をする理由は謎である。軟寒天培地にこの菌を点接種すると、前面占拠後の特定時期、菌は遊走移動が活発化し、モアレ様動態を経て斑点状に分布替えをする。この点状細菌集団は、分裂、融合、移動と云ったダイナミックな集団行動を行うので、行動機構の有用な解析対象として期待している。3.Bacillus subtilis集落の成長を定量数値化し解析した。その結果、自己アフィン成長界面(自己アフィン指数が0.5)であることが実証でき、ランダムパターン形成のマクロとミクロにわたる実験的解析の成功例となった。
心筋クロライドチャネルによる細胞容量及び細胞内浸透圧調節機構の解析

1.CFTR Clチャネルに依存しない細胞容積調節機構について解析を行った。単離したモルモット心室筋細胞を標本とし、顕微ビデオ画像解析によって得られた細胞像の面積を細胞容積の指標とした。等張高KCl液中でadrenalineを作用させると細胞容積が増大するが、その後外液を高KCl液から正常タイロード液変えると細胞が縮小した。この細胞縮小にI_<Cl, swell>チャネルが関与していることが示唆された。細胞を低張タイロード液に浸すと細胞は膨化するが、その後細胞が有意に縮小する(RVD)した。いっぽう、低張の高KCl液中ではRVDは発生せず、著しい細胞膨化が起こった。これらRVDおよび高KCl低張液中での細胞膨化増強にI_<Cl, swell>チャネルが関与していることが示唆された。心筋における容積感受性Cl電流(I_<Cl,swell>)による細胞容積調節CCDカメラで撮影した細胞像をコンピュータで高速処理し、細胞輪郭の占める面積を経時的連続的に算出する方法により、モルモット心室筋細胞容積の変化を迅速に観測し、次のような成果を得た。高KCl液で脱分極させた細胞にadrenalineを作用させると、細胞の容積増加(膨化)が起こる。高KCl液中でadrenalineを除くと細胞は膨化したままであるが、そのとき外液を正常Tyrodeに戻すと膨化は消褪する(細胞縮小)。さまざまな外液の効果を検討した結果、Clの平衡電位(E_<Cl>)が膜電位(E_m)よりpositiveになる条件で、膨化した細胞の縮小が起こることがわかった。この細胞縮小はDIDS、glibenclamide、furocemideによって抑制された。以上の所見は観察された細胞縮小にI_<Cl,swell>が関与していることを示唆する。次に、心室筋細胞を正常K高Clの低張液に浸すと細胞は膨化するが、この膨化は低張液中で自然に部分的に回復すること(細胞縮小)が観察された。すなわち心室筋細胞において調節性容量減少、(RVD)が起こることが確認された。このRVDは正常K低Clの低張液中(E_<Cl>>>E_m)で増強し、高KClの低張液中(E_<Cl><E_m)ではRVDは発生せずに逆に細胞膨化が亢進した。前者RVDおよび後者細胞膨化亢進はともにDIDSによって抑制された。以上の結果から、心筋細胞もRVDを示すこと、そのRVDにI_<Cl,swell>が関与していることが示唆された。以上、心筋においてI_<Cl,swell>が細胞容積調節に関わっていることが示された。PKCのactivatorであるPDBuなどがモルモット心室筋細胞の(I_<Cl,PKA>)を増強するという報告がなされている。このPDBuの効果はここに示したATPの効果に似ており、今後はPKCのactivatorおよびinhibitorを併用した実験などを行い、ATP作用のメカニズムを解析していく予定である。
薬毒物に起因する横紋筋融解症の新規マーカー遺伝子の同定及び遺伝子診断法の確立

薬毒物摂取後に横紋筋融解症を発症するか否かは、個人の遺伝的背景の違いに由来している可能性がある。本研究では、覚せい剤等の薬毒物を摂取後に横紋筋融解症を発症したと考えられる剖検例について、原因遺伝子の変異を探索した。しかし、今回の研究で認められた遺伝子変異と横紋筋融解症の発症との関連はないものと考えられた。今後、より多くの横紋筋融解症例を集め、他の遺伝子についても調査を進めることにより、横紋筋融解症と遺伝的要因の解明が准むと考えられる。剖検時に採取した血液から常法に従ってDNAを抽出し、ダイレクトシークエンス法で変異を探索した。パラフィン包埋された組織切片(肝臓)から抽出したDNAは、ホルマリン固定時に断片化されており、140bp以下のPCR産物しか増幅されなかったため、変異の探索を断念した。ベゲタミン中毒の剖検例では、CPTII遺伝子のエキソン4にV3681のヘテロ接合体変異が認められた。CYP2D6遺伝子はCYP2D6*1 alleleとCYP2D6*2 alleleのヘテロ接合体であると考えられた。RYR1遺伝子には2つのsilent mutationが認められた。VLCAD遺伝子とCYP2C19遺伝子には変異が認められなかった。覚せい剤乱用者の剖検例(7例)では、CPTII遺伝子のエキソン4にV3681あるいはF352Cのヘテロ接合体変異あるいはホモ接合体変異が認められた。VLCAD遺伝子では3例にG43Dのヘテロ接合体変異あるいはホモ接合体変異が認められた。RYR1遺伝子では1例にAla(612)Thr変異および全例にSilent mutationが多数認められた。法医解剖症例の中から、覚せい剤が検出された18剖検例について、骨格筋のホルマリン固定パラフィン包埋サンプルからGeneChip解析が可能か否かを検討したが、ホルマリン固定時間が長かったことから、RNAが高度に分解しており、GeneChip解析は実施できなかった。覚せい剤が検出された18剖検例について、腎臓を試料として、HE染色、抗ミオグロビン(Mb)抗体、抗8-hydroxy-2^'-deoxy guanosine(8-OH-dG)抗体による免疫組織化学的染色を行った。Mbと8-OH-dGが両方とも陽性となった症例のうち、死因や死亡前の推定される病態から、外傷性の筋組織の傷害や、Methamphetamine、Mb以外に酸化障害を来たす可能性がある症例を除外した。その結果、横紋筋融解症疑い例は18剖検例中6例と考えられた。覚せい剤が検出された18剖検例及び健常人10例からDNAを抽出し、RYR1遺伝子のhot spot領域、CPT II遺伝子、VLCAD遺伝子、CYP2D6遺伝子について、ダイレクトシークエンス法で変異を探索した。覚せい剤が検出された18剖検例について、遺伝子検査の結果、RYR1遺伝子にアミノ酸置換を伴う変異が認められたのは2例であった、CPT II遺伝子は、酵素活性に関係しない変異が多くの剖検例で認められた、また、1例において、これまでに報告のない新規の変異が認められた。VLCAD遺伝子では、酵素活性に関係しない変異が6例に認められた他は、アミノ酸置換を伴う変異は認められなかった。CYP2D6遺伝弄では、活性の低いCYP2D6^*10のホモ接合体が18剖検例中3例、未報告の変異が2例に認められた。RYR1遺伝子に認められたアミノ酸置換を伴う変異とCPT II遺伝子に認められた新規の変異は、今回調査した健常人には認められなかった。
血小板由来の新規血管内皮細胞成長因子の分離とその臨床応用

われわれは血小板中に既知の成長因子とは異なる、血管内皮細胞に比較的特異的に作用する成長因子(VEPF)が存在することを報告している。本研究では、その純化精製を行い、さらに、血小板中に存在することが知られている他の成長因子との比較を行った。1.方法(1)増殖促進作用の測定培養ミニブタ大動脈内皮細胞に試料を添加した後、トリチウムチミジンのDNAへの取り込みを測定した。(2)血小板抽出液多血小板血漿に塩化アンモニウムを加えて血小板を破壊し、さらに塩化カルシウムを加えてフィブリンを除去した。これにSulfadex gelを加えて、吸着した画分は血小板由来成長因子(PDGF)の純化精製に用い、非吸着画分をVEPFの純化に用いた。2.成績VEPFはSephadexG-75で分子量60,000および20,000の位置に溶出し、等電点4.0-4.8の酸性タンパク質で、熱や酸に不安定であるが、還元剤処理に対しては安定である。純化精製には、QAE-Sephadexクロマトグラフィ-、硫安沈殿、DEAE-Sepharoseクロマトグラフィー,クロマトフォーカシング,ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー,TSK-4000カラムなどを用いた。その結果、VEPFはPDGF、上皮由来成長因子、トランスフォーミング成長因子と物質的に異なるものであることが明らかになった。
貿易と環境問題(特に農産物輸出の環境への長期的影響に関する生物経済学的考察)

本研究は資源環境経済学の分野で先駆的業績をあげたジョージェスク=レ-ゲンにより提唱されている生物経済学の立場から貿易と環境の問題について考察することを目的にする。特に、農産物の長期大量輸出が人類の長期的生存の基礎的諸条件を脅かす可能性が高いことを示す。経済学および熱力学、生態学を利用する学祭的方法論とジョージェスク=レ-ゲン生物経済学の立場を援用しながらこの問題を考察する。これをさらに発展させ、“An Unorthodox Views on Development,Ecological Degradation and North-South Trade,"という論文を専門雑誌Review of Social Economyに投稿した。まず、過去および現在進行中の環境問題の類似点と相違点を明らかにするとともに、2種類の効率性を導入し、そのうちの片方の効率性の過度の追求の結果として環境破壊が進んでいることを述べる。それから、標準的な貿易理論を批判的に考察した後、南北貿易に対する生態経済学的接近を試み、持続的発展のための3つの提案を考える。さらに、人間と自然の関わりを歴史的に考察し、環境破壊の原因は、人類が進化のスピードを速め、身体的発展(exosomatic mode of evolution)の様式を選択したことから必然的におこったことを理論的にあきらかにした。本研究は資源環境経済学の分野で先駆的業績をあげたジョージェスク=レ-ゲンによりて提唱されている生物経済学の立場から貿易と環境の問題について考察することを目的にする。特に、農産物の長期大量輸送が人類の長期的生存の基礎的諸条件を脅かす可能性がたかいことを示す。生態学および熱力学を応用したフローファンドモデルを作成するという目的は完全には達成されていない。実際のデータをこのモデルを利用して分析するときに、どのようにして適用すればいいのかという点が難点である。動態モデルを作成した場合に、非線型的関係が複雑で、計算時間が長くなりそうである。経済学および熱力学、生態学を利用する学際的方向論とジョージェスク=レ-ゲン生物経済学の立場を援用しながらこの問題を考察する。
三体結合反応の量子動力学

本研究は、分子衝突による三体結合反応とその逆過程である解離・電離反応を量子力学的に厳密に調べた。この研究では、(1)三つの粒子の(解離あるいは電離の)連続状態を扱わなければいけない、(2)分子(あるいは原子)の高い内部状態を考えなければいけない、といった厄介な問題を解決することが必要である。今年度は、三粒子の連続状態を完全な量子力学で扱うために、波束伝搬法によるプログラムコードを開発することに成功した。さらに、相対運動の動径方向の一自由度のみを古典力学的に、それ以外の自由度を全て量子力学的に扱う半古典論も導入して、量子論との比較を行った。完全な量子力学計算の例として、クーロン問題を扱ってみた。三体の連続状態に関心があるので、低エネルギー衝突でも電離チャネルが重要となる負イオン衝突を考えた。負イオンとして、エキゾティックな系ではあるが、反陽子やミュオンを選んだ。反陽子衝突は、CERNで進められている反水素生成などの反物質科学にも密接な関係がある。これらの負イオンと水素原子との衝突は三体問題であり、厳密な衝突計算が可能である。核・電子の両方に対して、Discrete variable representation法を用いて、格子点上での波束の時間発展を直接解いた。特に電子の運動に対してLaguerre多項式の分点が有効であることがわかった。これにより、核と電子の運動を同時に量子力学で対等に扱うことに成功した。本研究では、三体結合反応を研究する手段として、逆過程である衝突解離反応について調べている。衝突解離反応だと、反応前において二体衝突なので、理論的にはこの方が扱いやすいからである。詳細釣り合い原理に従えば、順過程・逆過程は区別することなく同等に考えることができる。まず、一自由度(分子間距離の動経方向)のみを古典的に扱い、それ以外の全ての自由度は量子力学で扱う半古典論を導入し,その中で厳密に解くことを行った。この半古典論をヘリウム原子と水素分子の衝突に適用した。波束の時間発展を見ることにより、ヘリウムの衝突により分子の連続状態-束縛状態間の遷移がどのようにして起こるかを詳しく知ることができた。また、連続-束縛状態間遷移で分子の回転共鳴状態が関係していることを発見した。これは、非直接三体結合に対応するものである。この共鳴状態がどのくらい三体結合に寄与しているかは今後非常に興味ある研究課題になる。次に、本手法をクーロン力の問題にも適用した。反陽子と水素原子の衝突といったエキゾティック粒子の系での電離過程、反陽子原子生成過程について調べた。普通の原子分子系と違い、負電荷の反陽子がある距離(0.639bohr)以下に近づくと断熱(ボルンオッペンハイマー)的な電子束縛状態は存在しなくなる。このため、電離過程は低エネルギー衝突でも大きな断面積を持つし、イオン化エネルギー以下では反陽子生成が主な過程になる。このような系の衝突過程を記述するのに、分子的描像は役に立たず、常套手段である量子化学的手法が使えなくなる。本手法では、電子の運動を数値的に直接解いているため、このような問題も扱うことが可能である。反陽子・水素原子衝突でも半古典論を仮定して計算を行った。しかし、低エネルギーでは古典的な仮定を置くことに問題があるし、三体結合反応を正確に記述するためには、完全に量子力学的に扱う必要がある。そこで、本年度の終盤では、完全に量子力学的に扱うことを考えた。反陽子・水素原子衝突では、計算結果が出るところまでこぎ着けた。
育児支援団体の特性に応じてカスタマイズ可能な介入プログラムの開発

本研究は、各育児支援団体が支援を行うにあたり、抱えている課題を明らかにし、育児支援団体と協働して妊娠期からの育児支援プログラムを開発し、育児支援団体が自らの支援の質を高めることを目的としている。平成30年度計画の概要は参加協力団体と共に、各団体に合わせてカスタマイズされたプログラムを試行する。試行後、対象者に対するプログラム介入の効果を評価することである。実際には、5つの育児支援団体(北海道、福島、東京、静岡、愛知)に本プログラムに協力いただいた。北海道は実施者への研修会1回、妊娠中の夫婦を対象にプログラム実施1回、福島は研修会1回、プログラム実施2回、東京はプログラム実施2回、静岡は研修会1回、プログラム実施4回、愛知は研修会1回、プログラム実施1回であった。さらに介入実施報告書を作成していただいた。その他に福島県伊達市の小学校の保護者・教員60名、福島市の育児支援従事者約80名を対象にプログラムを改変し、実施した。小学校の保護者は、ほぼ全員が「今後の生活に役立つと思うと良好な親子の関係を保つのに役立つと思うと回答し、「子供の接し方や声かけの重要性を再確認することができた」、「自分の思っている思いとは、子供の思いは違う事が改めて分かった」、「子供の話しをしっかり聞いてあげる時間を増やしていこうと思った」「子供の意外な点、意外な声が聞けて楽しく学べた」という自由記載が得られた。また、福島市の育児支援従事者からは「お互い、パパ、ママになる前に気持ちの整理をしておくことは、今後の子育てにずっと続くと思うので是非した方がいい」、「夫婦間での話し合いはもちろん、パパ同士、ママ同士の話し合いで気付くこともたくさんあると改めて感じた」という意見が得られた。現在は育児支援従事者とプログラム参加者のアンケートを回収し、データ入力作業を行っているところである。試行後、対象者に対するプログラム介入の効果を評価するところまでが、今年度の目標であったが、参加協力団体の実施時期が遅れたため、プログラム参加者の実施後アンケートの回収が遅れており、それに伴ってデータ入力と分析が遅れているため。平成31(令和元)年度は実施団体間のワークショップを開催し、各団体の試行結果を発表して共有する。さらに、育児支援団体がプログラムの質を持続的に改善していくためのガイドブックを公表し、汎用性が高くかつ支援対象者の特性に合わせてカスタマイズできるプログラムを公開する予定である。本研究の目的は各育児支援団体が支援を行うにあたり、抱えている課題を明らかにし、育児支援団体と協同して妊娠期からの育児支援プログラムを開発し、育児支援団体が自らの支援の質を高めることを目的としている。平成29年度計画の概要は育児支援団体の研究協力の募集を行い、協力が得られた団体とのラウンドテーブルディスカッションを通して現在の支援方法への困り感や今後の希望をヒアリングすること、さらに、支援団体から得られた困難感や今後の希望を考慮し、妊娠期の夫婦参加型育児支援介入プログラム「共感セッション」を改変する際のポイントを列挙した指針を作成することである。実際には日本虐待防止学会にて、すでに産後うつへの効果が確認されている妊娠期からの育児支援プログラムを発表し、発表後に研究協力団体とのミーティングを行った。プログラム参加中の参加者への緊急時対応、プログラムのタイムスケジュールの工夫、ファシリテーターの確保、参加者募集の工夫、父親の共感性をあげるための工夫、共感性の評価方法、他の育児支援プログラムとの組み合わせ等、育児支援プログラム実施の課題について、具体的に話し合う機会を得た。その後、全国組織であるコミュニティ・カウンセリング・センターの講座において育児支援プログラムの講座を開催し、プログラム実施のための具体的な資料や改変する際のポイントを提示したところ、5団体から研究協力が得られたため、今後はプログラムを実施し、実施後にプログラムの検討を行う予定である。平成30年度に向けて、5つの育児支援団体から研究に協力が得られ、プログラム実施に向けた準備ができるなど、平成29年度の計画をおおむね遂行できたため。

また、福島市の育児支援従事者からは「お互い、パパ、ママになる前に気持ちの整理をしておくことは、今後の子育てにずっと続くと思うので是非した方がいい」、「夫婦間での話し合いはもちろん、パパ同士、ママ同士の話し合いで気付くこともたくさんあると改めて感じた」という意見が得られた。現在は育児支援従事者とプログラム参加者のアンケートを回収し、データ入力作業を行っているところである。試行後、対象者に対するプログラム介入の効果を評価するところまでが、今年度の目標であったが、参加協力団体の実施時期が遅れたため、プログラム参加者の実施後アンケートの回収が遅れており、それに伴ってデータ入力と分析が遅れているため。平成30年度は5つの育児支援団体が育児支援プログラム指針を実際に改訂しながら実施予定である。研究が遂行できるように、育児支援団体の協力者と研究者全員が登録されたメーリングリストを作成し、メールを通して、各団体の進捗状況や実施に向けた課題について随時報告し、情報共有を行っていく。平成31(令和元)年度は実施団体間のワークショップを開催し、各団体の試行結果を発表して共有する。さらに、育児支援団体がプログラムの質を持続的に改善していくためのガイドブックを公表し、汎用性が高くかつ支援対象者の特性に合わせてカスタマイズできるプログラムを公開する予定である。学内の分担研究者への使用額提示と使用方法について適切な提示ができていなかったため、使用できない状況があったことが判明した。次年度は使用限度額と使用方法について連絡し、年度末には研究費使用について促す予定である。研究責任者がプログラムの実施前に研修会の講師として、協力施設に行く機会が増えたため、前倒し支払い請求を行った。
外来遺伝子の生体内発現による新しい癌化学療法の確立

癌化学療法を施行する上で,最大のネックとなっている副作用を回避,軽減し,効果の増強に資する目的で,薬剤耐性を示す外来性の遺伝子を正常骨髄に移入,発現させ,より多量の抗癌剤を与え得るか,否かについて検討を加えている.まず, methotrexate(MTX)に対する耐性を高め,かつ細胞増殖に必須の遺伝子である,ジヒトロ葉酸還元酵素(DHFR)遺伝子のcDNAを発現ベクターであるpSV2に組み込んだ.このように処理したDHFR遺伝子を,マウスNIH3T3細胞にトランスフェクトレ, MTX耐性と思われるクローンを得た.このMTXに耐性を示すNIH3T3細胞とwild typeのNIH3T3細胞のMTXに対する感受性を調べたところ, IC_<50>は,前者が2.2×10^<-6>M,後者が10^<-8>Mで, DHFR遺伝子をトランスフェクトした細胞が約50倍のMTX耐性を示した.現在この遺伝子を正常骨髄細胞にトランスフェクトし, X線照射したマウスに移入し, DHFR遺伝子の発現状態を検索中である.また外来性遺伝子導入による細胞耐性化機構を明らかにする目的で,細胞膜結合性GTP結合蛋白質の活性化および各種プロテインキナーゼによる細胞内蛋白リン酸化を指標として,細胞変化を生化学的に解析した.その結果,遺伝子導入により, (1)細胞耐性化がおこる以前にカゼインキナーゼによる分子量98K蛋白質およびプロテインキナーゼPによる分子量53K, 41K, 35K蛋白質のリン酸化が著しく促進する. (ii)遺伝子導入後直ちに, NDPーkinaseによるGTP結合蛋白質の活性化が認められた.これら生化学的変化は,導入遺伝子種,その発現量に相関し,しかも遺伝子導入後3時間以内に検出された.従って,これらの遺伝子導入による細胞耐性化は,遺伝子導入によって誘起される特異的な細胞変化であると考えられた.癌化学療法を施行する上で,最大のネックとなっている副作用を回避,軽減し,効果の増強に資する目的で,薬剤耐性を示す外来性の遺伝子を正常骨髄に移入,発現させ,より多量の抗癌剤を与え得るか,否かについて検討を加えている.まず, methotrexate(MTX)に対する耐性を高め,かつ細胞増殖に必須の遺伝子である,ジヒトロ葉酸還元酵素(DHFR)遺伝子のcDNAを発現ベクターであるpSV2に組み込んだ.このように処理したDHFR遺伝子を,マウスNIH3T3細胞にトランスフェクトレ, MTX耐性と思われるクローンを得た.このMTXに耐性を示すNIH3T3細胞とwild typeのNIH3T3細胞のMTXに対する感受性を調べたところ, IC_<50>は,前者が2.2×10^<-6>M,後者が10^<-8>Mで, DHFR遺伝子をトランスフェクトした細胞が約50倍のMTX耐性を示した.現在この遺伝子を正常骨髄細胞にトランスフェクトし, X線照射したマウスに移入し, DHFR遺伝子の発現状態を検索中である.また外来性遺伝子導入による細胞耐性化機構を明らかにする目的で,細胞膜結合性GTP結合蛋白質の活性化および各種プロテインキナーゼによる細胞内蛋白リン酸化を指標として,細胞変化を生化学的に解析した.その結果,遺伝子導入により, (1)細胞耐性化がおこる以前にカゼインキナーゼによる分子量98K蛋白質およびプロテインキナーゼPによる分子量53K, 41K, 35K蛋白質のリン酸化が著しく促進する. (ii)遺伝子導入後直ちに, NDPーkinaseによるGTP結合蛋白質の活性化が認められた.これら生化学的変化は,導入遺伝子種,その発現量に相関し,しかも遺伝子導入後3時間以内に検出された.従って,これらの遺伝子導入による細胞耐性化は,遺伝子導入によって誘起される特異的な細胞変化であると考えられた.
非眼性光感知に基づく負の光走性行動の研究

ナメクジは負の光走性行動を示し、暗い場所を好む。研究代表者は、両眼とも切除された状態のナメクジでも、暗い場所へと逃げることができることを見出していた。そして、この行動が、脳における光感知に基づくものであると考え、これを確かめる実験を行ってきた。昨年度までに、(1)眼を切除されたナメクジが暗い場所へと逃げる行動が、特に短波長の光(青色光)で引き起こされること、(2)頭部を優先的に暗い場所へと隠す傾向があること、(3)脳に複数種のオプシン遺伝子が発現していること、の3点を見出していた。そこで、最終年度は以下の実験を行い、2つの新たな事実を見出した。1.頭部には脳のみならず生殖器も存在するため、生殖器で発現しているオプシンを調べたところ、xenopsinのmRNAの発現が確認された。そこで両眼に加えて生殖器も切除されたナメクジの行動を観察したところ、それでも暗い場所へと逃げ込むことができることが判明した。つまり、頭部で光を感知している組織は生殖器ではないことが確かめられた。2.一方、脳の神経節間をつなぐconnectiveのひとつから細胞外記録を行うことで脳(食道下神経節)の波長感度を調べたところ、青色光(400-480nm)に対して高い感度を示すことが明らかとなった。以上の結果から、眼を用いずに示す負の光走性行動は、ナメクジの脳が光感知器官となって引き起こされている可能性が高まったと言える。現在は、食道下神経節に存在するどのニューロンに光感知能力があるのかを、オプシンの発現を指標として調べているところである。H28年度は、以下の3点を行った。1.単離脳が示す光応答のスペクトル特性の決定:脳の食道下神経節と大脳神経節をつなぐconnctiveから細胞外記録を行い、さまざまな波長の光に対する応答性を調べた。その結果、応答のスパイク頻度は440 nmをピークとしたスペクトル特性を示すことが明らかとなった(2016年度日本比較生理生化学会発表)。2.オプシン類に対する抗体の作成:眼にはrhodopsin(rOpn)の他、OpnA1 (Opn5)、OpnB、レチノクロムが発現していることがRT-PCRやin situ hybridizationによって確認されている。そこでこれら4種全てのオプシンタンパクに対する特異的な抗体を作成することを目指した。rhodopsinとレチノクロムに関しては、C末部分に対するペプチド抗体の作成に成功した。OpnBについては、C末部分のリコンビナントタンパクに対する抗体を作成し、免疫組織染色で使用可能であると思われる結果を得ている。OpnA1については、C末部分に対するペプチド抗体を得ているが、これを用いた免疫染色結果の信頼性を向上させるため、N末部分に対するペプチド抗体も現作成中である。3.網膜視細胞におけるβアレスチンの挙動の解析:Gタンパク共役型受容体のシグナルはアレスチンと呼ばれる細胞内シグナルタンパクによって遮断され、受容体の活性化も沈静化されることが知られている。脊椎動物や昆虫では、視覚機能に特化した視覚アレスチンが存在しており、視覚アレスチンの働きによりオプシンシグナルの不活化が起こる。しかし、その他の動物においては視覚アレスチンが無く、βアレスチンしか存在していない。そこで、βアレスチンに対する抗体を作成し、βアレスチンがナメクジの網膜に多く発現し、さらに光依存的に視細胞内の局在を変化させることが分かった(投稿準備中)。βアレスチンについては、今回の研究の副産物として思いがけず興味深い発見がなされた。しかしながら、当初予定していたOpnA1 (Opn5)の膜標品中におけるスペクトル測定については、トライしているもののデータ取得が遅れている。2年目である29年度中に結果を得たい。また、各オプシンに対する抗体の作成については概ね順調に進んでおり、これらポリクローナル抗体の特性について、H29年度中にcharacterizationを済ませる予定である。今年度は、ナメクジの網膜において機能する分子のひとつであるβアレスチンに着目し、さまざまな光環境下におけるβアレスチンの挙動について解析した。また、ナメクジが周囲環境の明暗を手掛かりとした受動回避学習を形成可能であるかについても調べた。通常、発達した眼を持つ昆虫や脊椎動物には、オプシンシグナルを素早く遮断するために働く細胞内タンパク質である視覚アレスチンが存在し、このタンパクが視細胞内を光依存的に移動することが、明順応、暗順応の分子基盤のひとつを成している。しかしながら、それほど発達した眼を持たない動物では、GPCR一般に対して機能するアレスチンであるβアレスチンしか持たない。それでは果たして、発達した眼を持たない動物では、βアレスチンも視覚アレスチンと同様に、光依存的な視細胞内の移動を示すのであろうか?本年度ではこの点を調べ、その結果、ナメクジにとって良く見えているはずの短波長の光を照射すると、βアレスチンもラブドメア層へと移動することを明らかにした。従って、視覚アレスチンを持たない多くの動物では、βアレスチンが明暗順応に関与している可能性が示唆された。また、げっ歯類等のモデル動物では、負の光走性の性質を利用して、暗所に対する恐怖条件付けを行う「受動回避学習」実験系が存在するが、同じく暗所を好むナメクジにおいても、同様な受動回避学習を形成可能であるかは不明であった。

そこで、げっ歯類で用いられているシステムを参考にして同様の装置を作成し、キニジン硫酸溶液を無条件刺激(忌避刺激)として条件付けを行った。その結果、ナメクジが暗所に到達するまでの時間が、キニジン硫酸との連合によって有意に増加することが明らかになった。さらに、この学習はコンテクスト(足場として用いているプレートの素材)に依存するものであることも明らかになった。βアレスチン、および光依存的受動回避学習の結果については、当初予定していなかった思いがけない成果であるが、予定していたOpn5に対する抗体がうまくできておらず、この点では難航している。一方、OpnB (xenopsin)とrOpn (rhodopsin)については、特異的抗体の作成と吸収スペクトル特性の決定が完了した。今後、これらのデータを足掛かりにして、非眼性光感知機構にさらに迫りたい。ナメクジは負の光走性行動を示し、暗い場所を好む。研究代表者は、両眼とも切除された状態のナメクジでも、暗い場所へと逃げることができることを見出していた。そして、この行動が、脳における光感知に基づくものであると考え、これを確かめる実験を行ってきた。昨年度までに、(1)眼を切除されたナメクジが暗い場所へと逃げる行動が、特に短波長の光(青色光)で引き起こされること、(2)頭部を優先的に暗い場所へと隠す傾向があること、(3)脳に複数種のオプシン遺伝子が発現していること、の3点を見出していた。そこで、最終年度は以下の実験を行い、2つの新たな事実を見出した。1.頭部には脳のみならず生殖器も存在するため、生殖器で発現しているオプシンを調べたところ、xenopsinのmRNAの発現が確認された。そこで両眼に加えて生殖器も切除されたナメクジの行動を観察したところ、それでも暗い場所へと逃げ込むことができることが判明した。つまり、頭部で光を感知している組織は生殖器ではないことが確かめられた。2.一方、脳の神経節間をつなぐconnectiveのひとつから細胞外記録を行うことで脳(食道下神経節)の波長感度を調べたところ、青色光(400-480nm)に対して高い感度を示すことが明らかとなった。以上の結果から、眼を用いずに示す負の光走性行動は、ナメクジの脳が光感知器官となって引き起こされている可能性が高まったと言える。現在は、食道下神経節に存在するどのニューロンに光感知能力があるのかを、オプシンの発現を指標として調べているところである。4種全てのオプシンタンパクに対する特異的な抗体を作成とcharacterizationをH29年度中に済ませ、これらを用いてナメクジの眼および脳における各タンパクの分布を明らかにする。一方、大きな計画変更には当たらないと思われるが、眼の網膜視細胞が用いている神経伝達物質についても、思いがけず明らかになりつつあり、現在鋭意解析中である。そして、当初の予定通り、少なくともOpn5とrOpnについて、膜標品中における(あるいは強制発現細胞そのものを用いて)吸収スペクトルの決定を行いたい。これは遅くともH30年度前半までには終了したい。新規のオプシンのうちの少なくとも一種について、その分子特性の一つとして光吸収スペクトルを決定したいと思い、これについては3月下旬にデータ取得に成功している。
陸上植物の絶滅と保全の生物学

植物の絶滅危惧植物種の保全生物学的理解を深めるために、以下のような研究を行った。(1)本来しばしば攪乱を受ける生育地に生活していた種が、人為的な環境の安定化の下で生育地を狭められている場合が少なくない(カワラノギク、マイヅルテンナンショウ、アサザなど)。このような種の集団の運命を予測するには、パッチ状環境を格子空間として扱うモデルが有効であり、このようなモデルの開発を行なった。またカワラノギク、マイヅルテンナンショウを材料として実際に個体群統計学的研究を行い、モデルに組み込まれたパラメータを測定し、集団の運命を予測することを試みた。今後の発展のためには、パラメータの年変動を推定し、感度分析によって変動の幅が絶滅率をどのように高めるかについて検討することが有効であると考えられる。(2)絶滅危惧植物の遺伝的変異量を、アロザイムやDNAマーカーを活用して推定した。マイヅルテンナンショウやフジバカマではきわめて遺伝的変異が少なく、遺伝的変異量の制限が環境への適応を制約している可能性が示唆された。一方、カワラノギクではかなり多量の遺伝的変異が見い出された。この結果はカワラノギクの集団サイズが、急減してはいるがまだ多量の遺伝的変異を維持するほど十分に大きいことを示すこの結果から、遺伝的変異量の年ごとの変化を調査することで、カワラノギクの有効集団サイズの変化をセンサスできるものと考えられる。(3)過去の絶滅過程を理解する方法論として、分子系統樹からクレード間の種の回転率の違いを検定する方法を開発した。この方法を使うことで、たとえば自家受粉をする系統と他家受粉をする系統で、どちらが絶滅しやすいか、といった問題を検討できる。本研究は高等植物の種の保全を研究する方法論を開発することを目的として実施されている。目的に応じて重点的に調査する対象種・対象地域を選定し研究を進めている。1絶滅危惧植物の繁殖特性マイヅルテンナンショウについて、生育地の光環境を調査し、個体が置かれている光環境が個体の生長・繁殖の主要な決定因子であることを明らかにした。マイヅルテンナンショウの目生地では課岸植生の遷移のために光環境が悪化しており、自生地の存続のためには光環境の人為的管理が必要である。カワラノギクについて、河川のはんらんによる裸地の形成が個体群の維持に重要な因子であることを明らかにした。カワラノギクの自生地では治水事業による河岸植生の安定化のために個体群が減少している。自生地の存続のためには不安定な河岸草地を維持するための人為的管理が必要である。2絶滅危惧植物の遺伝的変異マイヅルテンナンショウについて、酵素多型、およびPCR法を利用したDNA多型の調査を進め、きわめて遺伝的変異に乏しいことを明らかにした。3小笠原の固有植物と送粉昆虫固有植物とその送粉昆虫の相互適応関係が島の悟境の喬化とともにどのように変化しているかをいくつかの例について調べた。送粉昆虫の固有種は母島では多くが絶滅または絶滅寸前の状態にあり、固有植物が本来のパートナーを失っていることが明らかになった。たとえばムニンタツナミは送粉昆虫の絶滅のために種子生産ができなくなっている。本研究は、高等植物の種の保全を研究する方法論を開発することを目的として実施されている。目的に応じて重点的に調査する対象種・対象地域を選定し、研究を進めている。1絶滅危惧植物の繁殖特性昨年度に引き続いて、マイヅルテンナンショウ、サクラソウ、アサザ、カワラノギクなどの絶滅危惧種の繁殖特性を調査した。マイヅルテンナンショウ、サクラソウやアサザでは、自生地において送粉昆虫が減少し、その結果集団がほとんど栄養繁殖または自家受粉によって維持されている。

カワラノギクの場合、種子食昆虫のツツミノガが種子繁殖を制限する要因になっている。このように、送粉者や植物食者との相互関係の変化は、絶滅危惧植物の存続にとって一般的に重要な要因であると考えられる。2絶滅危惧植物の遺伝的変異今年度はカワラノギクの変異を詳しく調査した。現存している3つの水系の間ではかなり明瞭な遺伝的分化があり、水系が異なる集団間で長い間隔離されてきたことがわかった。保全上は3つの水系の集団を残すことが必要である。種子食昆虫のツツミノガの遺伝的変異についても調査したところ、カワラノギクと異なり集団間の分化が不明瞭だった。カワラノギクに比べ、ツツミノガはより大きな分散力を持つものと考えられる。このため、カワラノギクの個体数がさらに減少した場合、ツツミノガの食害がカワラノギクの減少をさらに促進する可能性がある。3小笠原の固有植物と送粉昆虫昨年度までの調査で、送粉昆虫の固有種は母島では多くが絶滅し、固有植物が本来のパートナーを失っていることを明らかにした。本年度はイチジク属の固有種3種の開花習性について継続調査を行い、イチジク属の固有種とその花粉媒介昆虫であるイチジクコバチの相互依存関係が維持されるのに必要な個体数について、基礎データを集めた。植物の絶滅危惧植物種の保全生物学的理解を深めるために、以下のような研究を行った。(1)本来しばしば攪乱を受ける成育地に生活していた種が、人為的な環境の安定化の下で成育地を狭められている場合が少なくない(カワラノギク、マイヅルテンナンショウ、アサザなど)。このような種の集団の運命を予測するには、パッチ状環境を挌子空間として扱うモデルが有効であり、このようなモデルの開発を行なった。またカワラノギク、マイズルテンナンショウを材料として実際に個体群統計学的研究を行い、モデルに組み込まれたパラメータを測定し、集団の運命を予測することを試みた。今後の発展のためには、パラメータの年変動を推定し、感度分析によって変動の幅が絶滅率をどのように高めるかについて検討することが有効であると考えられる。(2)絶滅危惧植物の遺伝的変異量を、アロザイムやDNAマーカーを活用して推定した。マイヅルテンナンショウやフジバカマではきわめて遺伝的変異が少なく、遺伝的変異量の制限が環境への適応を制約している可能性が示唆された。一方、カワラノギクではかなり多量の遺伝的変異が見い出された。この結果はカワラノギクの集団サイズが、急減してはいるがまだ多量の遺伝的変異を維持するほど十分に大きいことを示す。この結果から、遺伝的変異量の年ごとの変化を調査することで、カワラノギクの有効集団サイズの変化をセンサスできるものと考えられる。(3)過去の絶滅過程を理解する方法論として、分子系統樹からクレード間の種の回転率の違いを検定する方法を開発した。この方法を使うことで、たとえば自家受粉をする系統と他家受粉をする系統で、どちらが絶滅しやすいか、といった問題を検討できる。
難治性気道炎症性疾患におけるToll様受容体発現異常とそのメカニズムの解明

本研究では,難治性気道炎症疾患嚢胞性線維症(CF)におけるTLR2遺伝子の発現および応答性の上昇とそのメカニズムの解明を種々の方法を用いて行った.CF気道上皮細胞におけるTLR2発現上昇のメカニズムを解明することを目的とし,CF細胞におけるA)NF-κB経路の異常,B)ERストレスの過剰活性化,C)エピジェネティック遺伝子制御機構の破綻などの可能性に関して,種々の分子生物学的検討を行った.上記A)の可能性を検討するため,NF-κB阻害作用を有するIκBαのドミナント変異体を導入し,実験を行った.その結果,CF細胞におけるTLR2の発現上昇には,NF-κBのシグナル伝達経路に異常を来してはいなかった.次に,上記B)の可能性を検討するため,ERストレス誘導剤であるTunicamycin, Thapsigargin, DTTを用いてそのTLR2発現に対する影響を観察したが,全く効果を示さなかったことから,変異CFTR蓄積によるERストレスの過剰活性化は,TLR2発現に関与していなかった。最後に,上記C)の可能性を検討するため,DNA脱メチル化促進剤である5-azacytidine(5-AC)を16HBE14o-に処理したところ,TLR2プロモーター上における脱メチル化が引き起こされ,その遺伝子発現が増強されたことから,気道上皮細胞におけるTLR2の発現はDNAメチル化によって調節されていることが示唆された.さらに,bisulfiteを用いたsequence法により16HBE14o-細胞およびCFBE41o-細胞におけるTLR2プロモーター領域のDNAメチル化を数値化したところ,CFBE41o-細胞において,顕著に脱メチル化されていることを見い出した.これらの結果より,CF患者でみられる慢性気道性炎症は,TLR2のエピジェネティックな発現上昇により引き起こされている可能性が示唆された.難治性気道炎症性疾患である嚢胞性線維症(CF)病態時にTLR2遺伝子の発現上昇が起こっているか否かをquantitative RT-PCR法を用いて検討した.その結果,健常人由来の気管支上皮細胞16HBE14o-細胞に比べ,CF患者由来の気管支上皮細胞CFBE41o-細胞におけるTLR2の発現が高いことが明らかになった.次に,CFBE41o-細胞にTLR2のリガンドであるpeptidoglycan(PGN)を処理したところ,NF-κBの核内移行及び活性化および炎症性サイトカインであるIL-8やIL-1βの発現誘導が観察されたことから,CFBE41o-細胞には,機能的なTLR2が高発現していることが確認できた.CFBE41o-細胞におけるTLR2の発現上昇がどのようなメカニズムで起こっているかを検討した.最初に,CF細胞において引き起こされていることで知られるER overload response(EOR)が関与しているか否かを検討するため,EOR誘導剤であるTunicamyin, DTT, thapsigarginを,気管支上皮細胞に処理し,TLR2遺伝子発現に対する影響を観察した.その結果,16HBE14o-細胞およびCFBE41o-細胞の両細胞において,EORは誘導されたが,TLR2遺伝子の発現は影響を受けなかったことから,CFBE41o-細胞におけるTLR2遺伝子発現上昇には,EORが関与していないことが示唆された.次に,どのような細胞内シグナル分子がTLR2発現上昇に関与しているかを検討するために,各種細胞内シグナリング阻害剤をCFBE41o-細胞に処理し,そのTLR2遺伝子発現変化を観察した.その結果,CFBE41o-細胞におけるTLR2の発現上昇には,NF-κB, MAPK, PI3K,プロテアソームなどの細胞内シグナル分子は関与していないことが示唆された.本研究では,難治性気道炎症疾患嚢胞性線維症(CF)におけるTLR2遺伝子の発現および応答性の上昇とそのメカニズムの解明を種々の方法を用いて行った.CF気道上皮細胞におけるTLR2発現上昇のメカニズムを解明することを目的とし,CF細胞におけるA)NF-κB経路の異常,B)ERストレスの過剰活性化,C)エピジェネティック遺伝子制御機構の破綻などの可能性に関して,種々の分子生物学的検討を行った.上記A)の可能性を検討するため,NF-κB阻害作用を有するIκBαのドミナント変異体を導入し,実験を行った.その結果,CF細胞におけるTLR2の発現上昇には,NF-κBのシグナル伝達経路に異常を来してはいなかった.次に,上記B)の可能性を検討するため,ERストレス誘導剤であるTunicamycin, Thapsigargin, DTTを用いてそのTLR2発現に対する影響を観察したが,全く効果を示さなかったことから,変異CFTR蓄積によるERストレスの過剰活性化は,TLR2発現に関与していなかった。最後に,上記C)の可能性を検討するため,DNA脱メチル化促進剤である5-azacytidine(5-AC)を16HBE14o-に処理したところ,TLR2プロモーター上における脱メチル化が引き起こされ,その遺伝子発現が増強されたことから,気道上皮細胞におけるTLR2の発現はDNAメチル化によって調節されていることが示唆された.さらに,bisulfiteを用いたsequence法により16HBE14o-細胞およびCFBE41o-細胞におけるTLR2プロモーター領域のDNAメチル化を数値化したところ,CFBE41o-細胞において,顕著に脱メチル化されていることを見い出した.
三項関係ナラティヴ・ミ-ディアムの開発-糖尿病患者と医師の支援と教育

三項関係ナラティヴ理論では、従来の二者関係の対話ではなく、三項関係、特に人と人をむすぶ媒介機能<メデイエーター(媒介者)やミーデイアム(媒介物)>を重視する。三項関係理論による臨床支援と教育方法論を構築するための第一ステップとして、糖尿病医療を中心に、語りの共同生成を媒介するために効果的な「ミーディアム」(媒介物)を作成する多様な試みを行った。そして「ビジュアル・ナラティヴ(視覚的語り)」を用いた「病いの語りイメージ画」の手法を開発した。人と人のあいだをむすぶメデイエーター(媒介人)やミーデイアム(媒介物)を介在させる三項関係ナラティヴを推進することによって、教育と医療の新しい理論と方法論を構築することが、研究の大きな目的である。本萌芽研究では、生活習慣病の代表である糖尿病医療を事例に、まず適切なミーディアムを開発することを目的にしている。本年度は、ミーデイアム開発の基礎を固めるために、おもに次の2つの方向から萌芽研究を行った。(1)「ヴィジュアル・ナラティヴ(視覚的媒体を用いた語り)を用いたミーデイアム開発の基礎研究」イギリスのロンドン大学で開催されたMedical Narrative in Graphic Novels : Comics and Medicineに参加し、先進的な取り組みを行っている諸研究の具体例を学ぶとともに国際的に研究交換した。また、マンガ、映画、イメージ画、ストーリーなど多様なナラティヴの媒体を比較検討する研究を行った。ヴィジュアル・ナラティブのワークショップを日本心理学会で開催し、多くの研究者と意見交換しながら、ナラティヴ理論と方法論を実践的に検討した。(2)「糖尿病患者を対象とした三項関係ナラティヴ・ワークショップのパイロット・スタディ」糖尿病患者を教育・指導するため、三項関係ナラティヴ・ワークショップの実践方法を探索した。DVD教材を作成して、合計10名の患者に、1回34人程度のグループで、その教材を用いる体験型の教育を試みた。また指導後、参加者は医師や看護師などファシリテーターのもとで体験を語り合い、語りを共有することで、多声的な「協働の学び」が得られるようにした。人と人のあいだをむすぶメデイエーター(媒介人)やミーデイアム(媒介物)を介在させる三項関係ナラティヴを推進することによって、教育と医療の新しい理論と方法論を構築する。本研究では、生活習慣病の代表である糖尿病医療を事例に、適切なミーディアムを開発し、三項関係ナラティヴの理論的・方法的モデルを提案することを大きな目的にしている。本年度は、おもに次の3点にわたって、新しい理論的フレームワークと方法論の構築を試みた。1)「ビジュアル・ナラティヴを用いた三項関係」理論と方法論を下記の3つの観点から検討した。(1)治療的三項関係:医師-ミーディアム(m)-患者の三項関係(2)医師教育の三項関係:医師(経験者)」-ミーディアム(m)-医師(新参者)の三項関係(3)患者教育の三項関係:患者(経験者)-ミーディアム(m)-患者(新参者)の三項関係2)「ビジュアル・ナラティヴを用いた三項関係」の理論と方法論に関する研究発表と学際的討論。第35回口蓋裂学会総会・学術集会や日本心理学会など、医学や心理学の関連学会で、医療場面における三項関係(並ぶ関係)の意義やビジュアル・ナラティヴの方法論について研究発表し、学際的討論を行った。3)ビジュアル・ナラティヴに関する多様なメディアの資料収集と教育方法の探索。斬新なアイデアを生み出すのに役立つフィールド・ワークを行って資料収集した。美術、映画、写真、漫画、ゲームなど多様なメディアをミーディアム(媒介物)として用いる方法や、教育的ワークショップの方法を探究するため広い分野にわたって探索し、広範な文脈と関連づけて考察した。本年度は、以下の2つの観点から、2年間の実践を集大成し、理論的・方法論的検討を加えた。三項関係ミーディアムとして「病いの語り」にかんするイメージ画を用いた研究の具体的方法を検討して、ビジュアル・ナラティヴ質問調査紙を作成した。より実践的な医療教育プログラムとして現場で役立つモデルを構成し、ワークショップなどに使用する手順を考案した。さらに三項関係ナラティヴのモデルを広い文脈で使用できるように一般化し、医学関係学会や看護大学の講演やナラティヴ研究会などで提案した。1)治療的三項関係の作り方や医療教育に役立つワークショップ方法についての理論的・方法的検討を行った。本研究では、理論的には、次のような関係性をつくることが想定されていた。その関係性を実践に移すために、どのようにしたらよいか、医療教育に役立つワークショップの方法を具体的に構想した。1治療的三項関係:医師-ミーディアム-患者の三項関係。糖尿病の体験を、「過去」「現在」「未来」にわたって語る「病いの語りイメージ画」調査紙を作成する。

「病いの語りイメージ画」を使って、糖尿病患者(経験者)は、自分自身の病いの体験を医師(経験者)に語る。医師と患者は、共に「病いの語りイメージ画」を見ながら互いに質問やインタビューを行い、ナラティヴを共同生成する。同様の方法で、次の2つの関係性のなかでも使用できるような具体的方法論を策定した。2医師教育の三項関係:医師(経験者)-ミーディアム-医師(新参者)の三項関係。3患者教育の三項関係:患者(経験者)-ミーディアム-患者(新参者)の三項関係。2)上記の3種類の三項関係ミーディアムのモデルを理論的・方法的に検討し、より一般的なコミュニケーション・ツールや医療教育プログラムとして役立てられるような三項関係ナラティヴ・モデルとして提案した。糖尿病医療に限らず、ほかの医療場面においても、あるいは医療場面に限らず、「三項関係ナラティヴ」が適用できることがより明確になり、その意義も価値も具体的に明らかになってきた。当初の予定以上に、三項関係ナラティヴの理論的・方法論的検討を、個別の文脈を超えた広い視野から行うことが可能になり、モデル構成を考えられるところまで進んだ。24年度が最終年度であるため、記入しない。当初の計画では、「糖尿病医療」を中心に研究計画を考えていた。しかし、共同研究分担者の配置変換による医療現場の変化や産休や育児休暇のために、糖尿病の医療に限定した計画は一部変更をせざるをえなくなった。しかし、そのかわりに、ほかの医療場面においても、あるいは医療場面に限らずより幅広い場面で、「三項関係ナラティヴ」が適用できることがより明確になってきた。糖尿病医療やミーディアム開発に局限するのではなく、三項関係ナラティヴの理論的・方法論的検討を広い視野から行うことが可能になり、実践的モデルが提案できるところまで見通しが立てられそうである。そこで今後は、医療と教育両面に幅広く役立つモデル構成により重点を置いていきたい。
ヒト伊東細胞に由来する新たな統合織関連分子の解析

我々が樹立したヒト伊東細胞由来培養細胞株(LI90)に対し作製したモノクローナル抗体(MAI-M6G4)について免疫組織学的、分子生物学的に以下の検討を行った。MAI-M6G4は伊東細胞や平滑筋関連細胞から産生される細胞外マトリックスを認識する抗体である。ヒト正常組織や線維化病変組織に対する免疫組織学的検討結果(正常組織に比して、肝硬変症、肺線維症、腎硬化症などの線維化病巣においてMAI-M6G4の反応性が明らかに増加)より、MAI-M6G4の認識分子は臓器硬化症におけるクリティカルな分子であることが示唆された。そこでMAI-M6G4の認識分子同定のため、LI90からcDNA libraryを作製し、大腸菌により合成された蛋白をMAI-M6G4をプローブとしてスクリーニングした。その結果2つの陽性cDNA cloneが得られ、その塩基配列を調べたところ2つのcDNA cloneはいずれも糖蛋白の一種であるテネィシンをコードするものであることが判明した。これらの結果は、テネィシンが臓器硬化病変において重要な細胞外マトリックス成分の一つであることを示すものである。テネィシン分子にはpre-mRNAレベルでのalternative splicingによりいくつかのisoformが存在するが、我々が得たcDNA cloneにはこれまでに報告されていないsplicingが推測され、この点については現在解析中である。