hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
抗菌ペプチドの膜中での構造変化と相互作用の解析

微生物に対して抗菌活性を持つペプチド性の分子である抗菌ペプチドは、幅広い動物や植物の自然免疫の主要な因子の1つとして生体防御において重要な役割を担っている。抗菌ペプチドの抗菌活性発現機構は、微生物の膜構造の破壊が主要とされるが、その詳細には未知の点が多く残されている。本研究では、毒性や分解のために困難がある抗菌ペプチドの遺伝子組換え発現系の検討を進め、効率的な安定同位体標識試料の調製法を確立することにより、NMR法を活用した抗菌ペプチドと膜との相互作用解析の技術確立を進めた。安定同位体標識抗菌ペプチドを用いることで、グラム陰性菌の外膜を構成するLPSとの相互作用を明確に解析することに成功した。抗菌ペプチドの活性発現機構の解明に、NMR法による解析を応用することを目的として、まず、NMR法での解析に有効である安定同位体標識ペプチドの調製法の検討を中心に研究を進めた。組換え抗菌ペプチドの発現の際には、発現宿主に対する毒性やペプチドの分解が大きな問題となる。そこで、この抑制に効果が高いと考えられる、共発現による不溶性顆粒形成の促進技術を中心に、種々の抗菌ペプチドの安定発現技術の検討を進めた。その結果、複雑なジスルフィド結合の形成が試料調製の際に問題となる哺乳類由来defensinにおいて、発現及びリフォールディングを高効率で進める条件を見出し、安定同位体標識ペプチドの調製にも成功した。同様に複雑なジスルフィド結合の形成が試料調製において重要である、植物由来snakinについても、高効率の発現に成功した。また、線虫由来cecropin P1については、キャリアタンパク質を用いて融合ペプチドとして発現する際に、宿主内での毒性の制御にcecropin P1とキャリアタンパク質間の相互作用の制御が重要であることがを明らかにした。さらに、一連の成果により得られた安定同位体標識試料を活用した、NMR法による解析を開始した。哺乳類由来defensinについては、活性制御に重要な役割を担うと考えられている、多量体形成に関する検討を進め、その多量体形成界面に関する情報を得ることに成功した。また、cecropin P1については、グラム陰性菌の外膜構成成分であるLPSミセルとの相互作用解析を進め、その相互作用に、C末端側に存在する疎水性残基クラスターが重要な役割を担うことを新規に明らかにした。まず、NMR法による抗菌ペプチドの解析を効率的に進めるために、昨年度に引き続き、安定同位体標識ペプチドの調製法の検討を進めた。組換え抗菌ペプチドの発現の際に問題となる、発現宿主に対する毒性の回避や、発現したペプチドの分解を回避する技術の検討を積極的に進めた。まず、インセクトデフェンシンに分類される線虫由来抗菌ペプチドABF2の大量発現で開発に成功した共発現による不溶性顆粒化促進技術を哺乳類由来αデフェンシンの一種であるマウス由来crp4を対象とした発現系に応用し、効率的な試料調製技術の開発に成功し、国際学術誌に発表した。また、植物由来抗菌ペプチドであるSN1を対象として、不溶性顆粒を安定化させ発現量を増加させることにも成功した。SN1については、複雑なジスルフィド架橋の形成が試料調製上問題となるため、酵母分泌系による発現技術の開発も進め、安定な発現が可能であることを示し、NMR解析により、天然型と同等のジスルフィド結合を形成していることを証明し、その成果を国際学術誌に発表した。また、これらの成果により、調製に成功した試料を活用して、NMR法による相互作用、構造解析を進めた。まずABF2の解析では、遺伝子組換え技術を活用した安定同位体試料を活用して、C末端領域が抗菌活性を発現する際に細菌膜と相互作用する際に重要な残基の同定に成功し、活性発現機構のモデルを提唱した。また、線虫由来抗菌ペプチドCP1を対象とした解析でも、昨年度までの研究成果として得られたペプチド高発現系を活用し、安定同位体標識試料を調製、Tr-NOEを利用したLPSとの相互作用時の立体構造解析に成功した。グラム陰性菌外膜との相互作用に重要と予想されるCP1のC末端側の疎水性領域を同定し、その領域がαヘリックス構造を形成して機能を発揮することを明らかにし、この成果を国際学術誌に発表した。当初の研究実施計画に基づき、安定同位体標識抗菌ペプチドを活用したNMR法による相互作用解析、構造解析を展開し、特徴的な成果を得ることに成功しており、研究全体として概ね順調に進展しているといえる。昨年度までに構築に成功した大腸菌及び酵母を宿主とした遺伝子組換え抗菌ペプチドの試料調製技術を活用し、哺乳類由来αデフェンシンの一種、マウス由来crp4を対象として、その変異体作製による機能解析及び、共同研究としてマウスへの投与による腸管免疫への作用の検討などを進め、学会発表などを行った。crp4については、その両親媒性構造に注目し、親水性面、疎水性面それぞれの残基を選択し、塩基性残基に置換した変異体を作製することで、その立体構造と活性への影響を検討した。結果として、すべての変異体で野生型と同等の立体構造を有する試料を調製することに成功し、いずれの面での置換も活性を高める効果があることを見出した。従来までの報告から、疎水性面への親水性残基の導入は活性を低下させると予想されたが、異なる結果を得たため、αデフェンシンの活性発現機構を解明するうえで重要な知見を得たといえる。また、植物

由来抗菌得ペプチドを対象とした検討についても、酵母での発現系に関する検討結果を学会発表するとともに、新たに大腸菌を用いた高効率の発現法についても検討を行い、学会発表及び国際学術誌への論文投稿を行った。特に植物由来抗菌ペプチドについては、国際共同研究をすすめ、新たな知見を得ることに成功している。また、他の国際共同研究の成果として、カルモジュリンを融合パートナータンパク質として応用した系での抗菌ペプチドの高効率の生産に成功し、安定同位体標識抗菌ペプチドを高効率で生産する新たな技術の確立に成功した。この成果についても、国際学術誌に発表をおこなった。微生物に対して抗菌活性を持つペプチド性の分子である抗菌ペプチドは、幅広い動物や植物の自然免疫の主要な因子の1つとして生体防御において重要な役割を担っている。抗菌ペプチドの抗菌活性発現機構は、微生物の膜構造の破壊が主要とされるが、その詳細には未知の点が多く残されている。本研究では、毒性や分解のために困難がある抗菌ペプチドの遺伝子組換え発現系の検討を進め、効率的な安定同位体標識試料の調製法を確立することにより、NMR法を活用した抗菌ペプチドと膜との相互作用解析の技術確立を進めた。安定同位体標識抗菌ペプチドを用いることで、グラム陰性菌の外膜を構成するLPSとの相互作用を明確に解析することに成功した。当初の研究実施計画に基づき、初年度はNMR法による解析に安定同位体標識ペプチドの調製技術の検討を中心に研究を進めた。得られた試料を用いた解析により特徴的な成果を得ることにも成功しており、研究全体として、おおむね順調に進展しているといえる。遺伝子組換え抗菌ペプチドのNMR解析への有用性を証明する成果をあげることに成功していることから、引き続き、試料調製法の改良と応用を進めると共に、立体構造解析、相互作用解析への応用研究をさらに展開する。蛋白質科学試料の効率的な調製が研究の推進には重要な課題であるため、引き続き、試料調製法の改良を進めると共に、得られた試料を用いた解析に本格的に着手する。計画で予定していた消耗品の購入を一部、次年度以降に予定しているため。次年度、消耗品の購入を行う。次年度以降、研究計画の進捗に応じて、消耗品の購入を進める。
リズムおよび歌唱訓練を用いた英語発音指導の効果-発音の上達と学習者心理への影響

本研究では、歌唱訓練およびリズム訓練を導入した英語発音指導法の効果を調査することによって、歌唱訓練とリズムやメロディーなどの音楽的要素の訓練を通した英語音声表現教育の可能性を検証することを目的に実験を行った。日本人女子大学生54名を2つのグループに分け、統制群では、英語の発音の理論的説明に加えてある英語の歌詞を音読を中心として朗読の練習を行い、実験群では、統制群と同一の指導者によって同一の英語の歌詞をメロディーにのせて歌う訓練を実施し、指導期間の直前と直後に各被験者の英語朗読を録音した。その音声を複数のネイティブ・スピーカーに評価させ、英語発音の上達度をグループ間において比較考察するものである。平成13年3月中旬から音声の評価を行い、現在その評価を詳しく分析中である。分析では、被験者各々の発音を指導の前後で比較し、グループ間で各項目における指導前後の発音の伸びを調べる。評価の対象となる発音要素の項目は、母音・子音の発音、リズムのナチュラルさ、音のつながり、スピード、全体的印象に関する7項目とした。その結果、これまでの考察で見られる傾向としては、(1)英語の単音の発音の上達には、歌唱訓練は有効な指導手段であるとは言えないようである。逆に、(2)英語の自然なリズム、音の連結などの超音節要素、スピードや発話の全体的印象は、歌唱訓練を通して指導を受けたグループの英語のほうが従来の音読指導のグループよりも高く評価されているようである。これは昨年度の実験の結果を裏付けるものでもある。今後は、発音に上達の見られる学習者に対しては、特に音声のどの要素が上達したのかを調べる。この研究結果と考察は論文としてまとめ、平成14年度の英語教育学会等で発表する予定である。また.この研究成果の一部は平成13年夏に出版予定のオーラルパフォーマンスを使った英語教育に関する共著本の中において発表する予定である。被験者は日本人女子大学生56名で2つのグループに分かれ、統制群では、英語の発音の理論的説明に加えてある英語の歌詞を音読を中心として朗読の練習を行い、実験群では、統制群と同一の指導者によって同一の英語の歌詞をメロディーにのせて歌う訓練を実施し、指導期間の直前と直後に各被験者の英語朗読を録音した。その音声を複数のネイティブ・スピーカーに評価させ、英語発音の上達度をグループ間において比較考察した。平成12年3月中旬から現在に至り被験者各々の発音を指導の前後で比較し、グループ間で各項目における指導前後の発音の伸びを調べている。これまでに得られた傾向としては、(1)英語の単音の発音に関しては、両グループで上達度に有意な差は認められず、したがって、単音の発音の上達には、歌唱訓練は有効な指導手段であるとは言えないようである。逆に、(2)英語の自然なリズム、音の連結などの超音節要素と、スピードや発話の全体的印象に関しては、歌唱訓練を通して指導を受けたグループの英語のほうが従来の音読指導のグループよりも高く評価されているようである。今年度の実験においては、グループ間での指導の時間割り当や被験者数、被験者がこの実験以外に受けていた英語音声訓練の度合い、以前に受けていた音楽的地域や訓練の有無などに差があり、これらの被験者に対する周辺環境を調査した上で再度実験する必要があると思われるので次年度はこれらの点を踏まえてさらに研究を続けてゆきたい。なお今年度の研究の過程で得られた知識は、その一部を口頭発表として12th World Congress of Applied Linguistics(応用言語学会)で、また論文としてJACETBULLETINNo.31(大学英語教育学会紀要2000年3月15日発行)において発表した。

今後は、発音に上達の見られる学習者に対しては、特に音声のどの要素が上達したのかを調べる。この研究結果と考察は論文としてまとめ、平成14年度の英語教育学会等で発表する予定である。また.この研究成果の一部は平成13年夏に出版予定のオーラルパフォーマンスを使った英語教育に関する共著本の中において発表する予定である。
裁判員制度のための鑑定書の三次元画像化にかかる研究

平成20年度、最高検察庁が招集した「法医学に関する研究取りまとめ」検討会において、三次元画像の使用について、諮問を受けた。そこで、研究協力者である瀬尾拡史(東大医学部5年)が模擬裁判のモデル事例をもとに三次元画像による鑑定書説明図を作成し、実際、模擬裁判において使用し、好評を博した。この図は、同検討会の「とりまとめ」報告書として、全国の裁判所、検察庁、法医学教室等に送付された。また、NHKをはじめとして、いくつのメディアにより報道され、注目された。これとは別に、実際の事件の鑑定書に複雑な損傷を三次元で復元したものを添付した。平成21年5月、東京地方裁判所における裁判員裁判第一号事件の公判において、瀬尾が作成した三次元画像が証拠として採用され、裁判員、裁判官、その他の好評を博した。平成21年5月、福岡県弁護士会主催のシンポジウムにおいて、この会のために作成した三次元画像と通常の図による鑑定書のプレゼンを行い、アンケートを実施した。その結果、三次元画像の有効性が確認された。瀬尾は、各種の会において、自ら作成した三次元画像を提示し、その有効性のPRにつとめ、これらの実績が評価され、平成21年度、東京大学総長賞大賞を受賞した。
生体材料としてのリン酸カルシウム系ガラスセラミックスの開発とその応用

本研究は、CaO+P_2O_5系の一方向配向結晶化ガラス(β-メタリン酸カルシウムの結晶繊維が平行に配列)、および体積結晶化ガラス(結晶がランダムに配列)を、人工骨、人工歯冠等の整形外科・歯科の分野に応用するための、基礎研究と動物へのインプランテーションとに関するものである。本研究の特色は、通常の結晶化ガラスとは異なる組成、すなわち、生体骨の無機塩の主成分をなしているカリシウムとリンの酸化物から主として構成されている点にある。(1)人工骨用:セラミックスは一般に曲げ強度は大きいとは言えないが、最大の欠点は脆性にある。生体骨は、曲がり易く靱性に豊む。そこで、骨と結合し易いCaO+P_2O_5系で、かつ、ヤング率低く、曲げ強度の大きい一方向結晶化ガラスを試作した。表層を化学的にアパタイト化させた試料について動物実験を行なった結果、骨との結合は比較的良好であった。しかし、化学的耐久性、強度低下等の問題があり、これらの改良が実用化のためには必須である。(2)人工歯冠用:人工骨用とは異なる物性が要求される。すなわち、精密成形性、化学的耐久性、審美性等である。この研究では、第3成分としてAl_2O_3を添加した系、およびTiO_2を添加した系の結晶化ガラスの、物性、精密鋳造性、審美性等の検討を行った。両系とも人工歯冠用として実用化できる見込みを得た。また、CaO-TiO_2-P_2O_5にNa_2Oを少量添加した結晶化ガラスは、三リン酸カルシウム(TCP)が析出し、酸によってこれを溶出させると多孔性の結晶化ガラスができることを見出した。(フィルター、固定化酵素担体用などの新しい生体材料への適用が期待できる。(3)生体親和性:医学部との共同研究により、CaO-P_2O_5系、CaO-Al_2O_3-P_2O_5系、CaO-TiO_2-P_2O_5系の、動物骨へのインプランテーションの結果、為害性は認められなかった。生体用(人工骨・歯等)に用いるためのバイオセラミックスとしてのリン酸カルシウム系結晶化ガラスについて、主として、(A)一方向配向結晶化ガラス、(B)体積結晶化ガラスの2つのタイプの結晶化ガラスの調製,改良,物理測定等を行った。(A)は、β-Ca【(PO-3)-2】の結晶の約1ミクロンの直径の繊維が、試験片としての棒状試料の長さ方向に平行に並んでできた配向結晶化体である。CaO/【P_2】【O_5】<1のカルシウムの少ない方の組成では、配向は容易であるが化学的耐久性に乏しいので、これに第3成分の添加を行ない、その配向度および耐久性に与える影響を検討した。曲げ強度は、最高5,000kg/【cm^2】に達するが、一般に添加剤を加えると配向度が低下する傾向にあり、したがって強度も低下する傾向がある。耐久性は向上する組成もあるので、実際上は適当な量を目的に応じて選択する必要がある。SrO,【B_2】【O_3】,【AI_2】【O_3】,【Na_2】

Oなど試みたが、SrOが最も配向性を乱さず有効と考えられる。(B)は、結晶が、試験片中に全くランダムに析出したもので、任意の形状が容易に鋳造により得られるものである。核形成剤のいろいろの種類を試み、基本組成52CaO,2【AI_2】【O_3】46【P_2】【O_5】のときにはZr【O_2】と【Y_2】【O_3】の両者のコンビネーションがよくZr【O_2】/【Y_2】【O_3】【!】5/1(重量比)が最も有効であった。両者の複合添加により、曲げ強度は1100kg/【cm^2】から1500kg/【cm^2】へと向上し、体積結晶化は、表面失透をほとんど伴なうことなく、核形成(Zr【P_2】【O_7】が結晶核)の効果が認められた。一方、多量のTi【O_2】を添加した3成分系のCa0-Ti【O_2】-【P_2】【O_5】は、体積結晶化を示し、その結晶化の熱処理条件を検討した。CaO-TiO_2-P_2O_5の新しい結晶化ガラスは、これまでのこの研究課題でとり上げている中では、最も化学的に安定である。しかし、この系に3モル%以下程度のNa_2Oを導入すると、その結晶化ガラス中に三リン酸カルシウムが50%近く生成することがわかった。三リン酸カルシウムは(TCPともいう)骨と置換しうる物質として知られている。これは酸には易溶性である。そのため、Na_2Oを含んだCaO-TiO_2-P_2O_5系の結晶化ガラスは、酸によってそのTCPの部分が溶出して、そのあとはporousな多孔体結晶化ガラスが得られる。そこで、緻密体と多孔体の物性をしらべ、これらを動物へのインプランテーションの試験に供した。この実験は進行中である。また、単純なCaO-P_2O_5系にSiO_2を添加した系の、水への溶解速度、ならびに分析条件を検討した。その結果、シリカの添加が、ある濃度で最も溶出が大きくなる(約SiO_250%)ことがわかった。このことの、生体中使用での影響については今後慎重に検討を続ける必要が生じた。一方、CaO-P_2O_5系セラミックスが酵素存在下で水に溶出するときの、酵素存在の有無の影響をしらべる目的で、まず、溶解過程をしらべようとした。電気泳動法を併用したクロマトグラフィー的分析法の開発について検討を加えた。酵素の影響をしらべるまでには到らなかった。以上の実験の他に、本年度が最終年度であるためこれまでのデータの検討、まとめ等のディスカッションを行った。
野生ニホンザル集団における葛藤場面での行動に関する研究

葛藤解決行動は、動物が社会的文脈において発揮する認知能力(社会的知性)を明らかにする上で、非常に興味深い研究対象である。対立する2者間で、目的を調和させ、争いをうまく調整する行動は、ヒトを含む社会的動物において、普遍的に存在し、多くの類似性を持つ。そこで本研究では、ニホンザルを対象として、協力的関係を築くための、葛藤解決メカニズムを明らかにすることを目指す。ニホンザルは、気温が低くなると2個体以上の個体がお互いの胴体を接触させてハドルを形成して暖を取る(Hanya et al. 2007)。一方の個体がハドル形成を望んでいるときに、もう一方の個体も同じくハドル形成を望んでいるとは限らない。そこで本研究では、昨年度勝山ニホンザル集団(岡山県真庭市)を観察して得られたデータを分析して、ニホンザルが、成体メスに毛づくろいを行うことによって、個体間の葛藤を少なくしてハドル形成という利益を得ているのかどうかを検討した。成体メス同士でハドルを形成するときには、毛づくろい交渉後にハドルを形成することが多かった。そして、成体メス同士でハドルを形成するときには、毛づくろいを行い、そして相手からお返しの毛づくろいを受けていない時に、ハドルを形成することが多くなっていた。以上の結果から、ニホンザルがけつくろいによって葛藤を解決し、ハドル形成という利益を得ていたことが示された。この研究成果は、ハドル形成に伴う葛藤をどのように解決しているのかを示した初めての研究である。(抄録なし)葛藤解決行動は、動物が社会的文脈において発揮する認知能力(社会的知性)を明らかにする上で、非常に興味深い研究対象である。そのために、ニホンザルが、葛藤を解決するために、状況に適した行動をしているのかを明らかにする。動物の2個体間において、攻撃交渉の後で行われる毛づくろいなどの親和的行動は仲直り行動と呼ばれる。仲直り行動は、攻撃行動の後に必ず行われるわけではない。例えば、ニホンザルでは、仲の良さや、争いの原因などの要因が、仲直り行動の生起に影響している(Majolo et al.,2009)。これまでの研究では、どのような状況で仲直りするのかということが問題視され、サルが、仲直りの際に行動を使い分けているとは考えられてこなかった。ヒトは、身体接触以外にも、「ごめんなさい」と言葉で仲直りする。申請者が先行研究で示したことだが、葛藤を調整する行動は、親和行動だけではない。ニホンザルは状況や相手に応じて、葛藤を解決する行動を選択しているのではないだろうか。本年度の研究では、ニホンザルが親和行動以外の行動でも、仲直りしているのかを検討する。平成23年度は、研究課題を遂行するためのデータ収集を行った。1年間で合計225日勝山第一実験所に滞在し、フィールドワークを行った。その間、25頭のメスに関して、ビデオカメラを用いて1頭あたり15時間程度のデータ収集を行った。また、データ収集と並行して、データの分析も行っている。そのために、2種類の異なる葛藤場面に注目し、ニホンザルがそれぞれの葛藤を解決するために、状況に適した行動をしているのかを明らかにする。1つの葛藤場面として、攻撃交渉後のニホンザルの行動を調べる。例えば、ニホンザルでは、仲の良さや、争いの原因などの要因が、仲直り行動の生起に影響している(Majolo et al,,2009)。もう1つの葛藤場面は、毛づくろいを要求したにもかかわらず、毛づくろいを受けられない場面である。サルは頻繁に、相手に自分の体を向けて、毛づくろいをしてもらおうと催促をする。相手は、催促に対して協力的に毛づくろいする場合もあれば、しない場合もある。当該の2個体間での、意図の不一致から生じる葛藤を、どのように解決しているのか調べることで、サルがどのようにして協力的な社会関係を築いているのかを明らかにすることができる。

また、サルが社会関係をどのように認知しているかを明らかにすることにもつながる。研究2では、毛づくろいのお返しがない場合、ニホンザルがどのように行動するのか調べ、以下の点を明らかにする。そして、サルは、見返りを求めて毛づくろいしているのかどうか、どのようにして、毛づくろいしてもらえる協力的な関係を築いているのかを検討する。平成24年度は、研究課題を遂行するためのデータ収集を行った。1年間で合計241日神庭の滝ニホンザル観察所(岡山県真庭市)に滞在し、勝山ニホンザル集団の観察を行った。その間、30頭のメスに関して、ビデオカメラを用いて1頭あたり15時間程度のデータ収集を行った。また、データ収集と並行して、データの分析も行っている。葛藤解決行動は、動物が社会的文脈において発揮する認知能力(社会的知性)を明らかにする上で、非常に興味深い研究対象である。対立する2者間で、目的を調和させ、争いをうまく調整する行動は、ヒトを含む社会的動物において、普遍的に存在し、多くの類似性を持つ。そこで本研究では、ニホンザルを対象として、協力的関係を築くための、葛藤解決メカニズムを明らかにすることを目指す。ニホンザルは、気温が低くなると2個体以上の個体がお互いの胴体を接触させてハドルを形成して暖を取る(Hanya et al. 2007)。一方の個体がハドル形成を望んでいるときに、もう一方の個体も同じくハドル形成を望んでいるとは限らない。そこで本研究では、昨年度勝山ニホンザル集団(岡山県真庭市)を観察して得られたデータを分析して、ニホンザルが、成体メスに毛づくろいを行うことによって、個体間の葛藤を少なくしてハドル形成という利益を得ているのかどうかを検討した。成体メス同士でハドルを形成するときには、毛づくろい交渉後にハドルを形成することが多かった。そして、成体メス同士でハドルを形成するときには、毛づくろいを行い、そして相手からお返しの毛づくろいを受けていない時に、ハドルを形成することが多くなっていた。以上の結果から、ニホンザルがけつくろいによって葛藤を解決し、ハドル形成という利益を得ていたことが示された。この研究成果は、ハドル形成に伴う葛藤をどのように解決しているのかを示した初めての研究である。本研究課題は、3年間で達成される計画である。研究計画において、1年目にあたる平成23年度を、データ収集と学会での情報収集及び意見交換に費やすこととしていた。データ収集に関しては、ほぼ当初の計画通りの時間観察を行うことができた。また、学会発表では、合計4学会大会の発表において、多くの研究者と有意義な意見交換を行った。さらに、これまでの研究成果を、国際学術雑誌「Primates」に投稿するために改稿作業を進めている。以上のように当初の研究計画と現状を比較すると、研究は現在順調に進展していると言える。研究計画において、2年目にあたる平成24年度を、データ収集と学会での情報収集及び意見交換に費やすこととしていた。
フイジカルアセスメント技術実践能力獲得のためのSPを導入したOSCEシステム開発

1.OSCEの方法の開発方法を具体的に検討、実施計画を立案した。アセスメント技術の中から、臨床で活用度の高いものを評価対象技術とし、学生の状況判断力が養われるよう患者の状況を設定した。評価視点を問診、手技、患者への態度、効率性、記録、模擬患者による態度評価とし、感想を直接学生へ伝えてもらった。今回の取り組みにより、時間や人材の制約の中でも短時間とはいえ、学生全員が一対一で患者との応対を経験できる方法を提案することができた。2.模擬患者の教育システム(プログラム)の開発と実践模擬患者教育プログラム検討、教育用冊子作成、実施、実技試験後の模擬患者アンケート調査を行った。患者教育は試験のスケジュール、模擬患者の設定状況、留意点等を説明後、患者役、看護師役を研究者が演じて、具体的なイメージを持ってもらうようにした。アンケートでは、評価の難しさとともにロールプレイングの有効性が記入され、患者教育の重要性が明らかになった。また、模擬患者はナースバンク、シルバー人材センターなどに依頼したことで、地域の人材の活用、市民の看護教育への関心の高まりに結びつけることができた。3.OSCEの教育評価学生の技術習得度、OSCE経験について学生の自由記載の内容分析、学生の臨地実習における実践度、臨地実習でのフィジカルアセスメント技術実施に関するインタビューで総合的に評価した。技術試験の評価点としては、前年度に比べて低くなったが、実践力に直接結びつく評価に移行できたためと考えることができる。OSCE終了後の学生アンケートでは、臨床に近い緊張感や難かしさと同時に、実習での1活用の可能性、学生の自信に結びついたことが明らかになり、また、患者からのフィードバックの有効性を確認することができた。臨床での実施の難しさでは、結果の判断、説明、適切な技術の選択があげられたが、アセスメントの重要性、今後の課題など実施に前向きな言葉が多かった。また、今年度はOSCEの事例に用いられたアセスメント技術実施率の向上が見られた。OSCE終了後の学生アンケートでは、臨床に近い緊張感や難かしさと同時に、実習での活用の可能性、学生の自信に結びついたことが明らかになり、また、患者からのフィードバックの有効性を確認することができた。

臨床での実施の難しさでは、結果の判断、説明、適切な技術の選択があげられたが、アセスメントの重要性、今後の課題など実施に前向きな言葉が多かった。OSCEやその後の調査を通して、学生の意欲、自分自身で課題を見つけていく姿勢を感じることができ、さらに効果的なシステムの確立を目指し、検討を重ねたい。1.OSCEの方法の開発方法を具体的に検討、実施計画を立案した。アセスメント技術の中から、臨床で活用度の高いものを評価対象技術とし、学生の状況判断力が養われるよう患者の状況を設定した。評価視点を問診、手技、患者への態度、効率性、記録、模擬患者による態度評価とし、感想を直接学生へ伝えてもらった。今回の取り組みにより、時間や人材の制約の中でも短時間とはいえ、学生全員が一対一で患者との応対を経験できる方法を提案することができた。2.模擬患者の教育システム(プログラム)の開発と実践模擬患者教育プログラム検討、教育用冊子作成、実施、実技試験後の模擬患者アンケート調査を行った。患者教育は試験のスケジュール、模擬患者の設定状況、留意点等を説明後、患者役、看護師役を研究者が演じて、具体的なイメージを持ってもらうようにした。アンケートでは、評価の難しさとともにロールプレイングの有効性が記入され、患者教育の重要性が明らかになった。また、模擬患者はナースバンク、シルバー人材センターなどに依頼したことで、地域の人材の活用、市民の看護教育への関心の高まりに結びつけることができた。3.OSCEの教育評価学生の技術習得度、OSCE経験について学生の自由記載の内容分析、学生の臨地実習における実践度、臨地実習でのフィジカルアセスメント技術実施に関するインタビューで総合的に評価した。技術試験の評価点としては、前年度に比べて低くなったが、実践力に直接結びつく評価に移行できたためと考えることができる。OSCE終了後の学生アンケートでは、臨床に近い緊張感や難かしさと同時に、実習での活用の可能性、学生の自信に結びついたことが明らかになり、また、患者からのフィードバックの有効性を確認することができた。また、今年度はOSCEの事例に用いられたアセスメント技術実施率の向上が見られた。
光合成反応中心において２方向の電子移動を制御する分子機構の解明

緑色イオウ細菌反応中心PscAのL688とV689をCysに置換し、光誘起FTIR差スペクトルによる解析を行った。L688C変異体において、SーH伸縮振動バンドに由来するシグナルを同定した。導入したシステイン残基はスペシャルペアと新たに水素結合のネットワークを形成することを意味し、タイプ1反応中心ではスペシャルペア周辺の構造は高度に保存されているらしい。また極低温下、ヘリオバクテリア反応中心の閃光照射によるESRスペクトルの経時変化を測定した。その結果、P+A1-に由来するESP信号を検出することができた。この信号はエーテル処理により消滅し、A1として機能するキノンの存在が示唆された。光合成反応中心の電子移動経路には2回対称軸(C2軸)に沿って2方向存在する。今日まで紅色細菌の反応中心、植物型のPS IIおよびPS I反応中心の詳細な立体構造が報告されてきた。一方、緑色硫黄細菌やヘリオバクテリアの反応中心はホモダイマー構造をとり、2方向の電子移動経路は等価に機能している。本研究は、反応中心の2方向の電子移動がどのような因子で制御されているかを明らかにしていくことを目的としている。しかしながら当初の計画である人工的ヘテロダイマーであるStrep-PscA/His-PscA型反応中心の収率が著しく低く、現在のところ良好な結果が得られていない。そこで昨年度は、構築した変異導入系の有効性を調べるために、一次電子供与体P840の近傍にあるアミノ酸残基に変異を加え、ホモダイマー型変異体のFTIR解析を行った(現在、投稿論文を準備中である)。本年度はさらに、アンテナ色素系の配置にも着目し、励起エネルギー過程の経路を解析することにした。具体的にはタイプ1反応中心のコアタンパク質の一次構造を比較し、PsaA、PsaB、PscA、PshAのアンテナドメインの全てに保存されている3つのHis残基に注目し、H79、H164、H487をLeuに置換した部位特異的変異体を作成した。低温77Kにおいて、405nm励起による時間分解蛍光スペクトル変化を測定した。野生型では長波長側に3つの特徴的なバンド(F820、F830、F840)を検出したが、変異体ではF830あるいはF840の欠損あるいは蛍光強度低下が観測された。このことは、コアタンパク質のアンテナドメインには2つのアンテナ集団が存在していることを示唆している。現在、タイプ1およびタイプ2反応中心のエネルギー移動経路と比較しながらデータ解析を進めている。これら反応中心コアタンパクはすべてヘテロダイマーであり、2方向の電子移動経路のうち一方のみが優先的に使われている。これまで我々は、ホモダイマー型反応中心の片側の電子移動経路のみに部位特異的変異を導入するためのプラットフォーム構築に取り組んできた。しかしながら人工的ヘテロダイマーであるStrep-PscA/His-PscA型反応中心の収率が著しく低く、改善すべく取り組んでみたが、本年度中に解決することができなかった。そこで構築した系の有効性を調べるために、ホモダイマー型のままではあるが、対称な両部位に変異を導入し、野生型反応中心と比較することにした。具体的には光化学系1反応中心の一次構造とのアライメントから、一次電子供与体P840の近傍にあるアミノ酸残基、L688とV689を推定し、そのCys置換体を作製した。P840のFTIR解析では、バクテリオクロロフィルaの131位ケトン基のC=O伸縮振動バンドの低波数シフトが観測された。またP840+/P840の酸化還元電位の測定では、約30 mVのアップシフトが観測された。これらの結果は、変異導入によるP840周辺の電場構造変化を示しており、構築した部位特異的変異導入系がホモダイマー型反応中心の分子生物学的解析に十分に有効であることを示している。1.緑色硫黄細菌反応中心コアタンパクPscAの変異体作成とFTIR解析すでに平成24年度には、一次電子供与体P840の近傍にあるアミノ酸残基、L688とV689のCys置換体のFTIRによるデータ収集は完了していた。本年度は収集データの精密化とS/N比の改善を行ったところ、1回目の解析ではノイズに埋もれていたSーH伸縮振動バンドに由来するシグナルをL688C変異体において同定することができた。このL688C変異体は、ちょうどヘリオバクテリア反応中心コアタンパクPshAのCys601に相当する変異体である。我々は1997年、ヘリオバクテリア反応中心において水素結合のネットワークを介してP800と共役しているSH基の存在を明らかにしている。本研究課題を開始するに際し、PS Iとの構造機能相関を基に、当該Cys残基はP800周辺の近傍の比較的疎水的な膜貫通領域に存在するPshA/Cys601ではないかと推測した。

今回、L688C変異体のFTIR解析データは、タイプ1反応中心において、スペシャルペア周辺の構造(フォールディングモチーフ)が極めて似かよっていることを強く示唆する結果となった。2.ヘリオバクテリア反応中心のP+A1-に由来する電子スピン分極(ESP)信号の検出極低温下、ヘリオバクテリア反応中心に閃光照射することにより、ESRスペクトルの経時変化を測定した。その結果、P+A1-に由来する電子スピン分極(ESP)信号を極低温下(5ー20K)でのみ検出することができた。またこの信号はエーテル処理により消滅した。3.ヘリオバクテリア反応中心の結晶化・構造解析回折実験可能な回折強度データが得られたが(未発表)、分子置換法では位相が決定しなかった。PS Iの構造とは大きく異なっている部位の存在も期待された。1.緑色硫黄細菌反応中心コアタンパクの変異体解析L688C変異体のFTIR解析を行ったところ、期待通りにP840+形成に伴い、SーH伸縮振動バンドに由来するシグナルが検出することに成功した。このことは、タイプ1反応中心において、スペシャルペア周辺の構造(フォールディングモチーフ)が極めて似かよっていることを強く示唆するのみならず、エネルギー変換装置の基本的な構築原理は、光合成反応中心のごく初期の成立過程から不変であることを意味している。緑色硫黄細菌反応中心タンパクの変異体解析は世界でも初めての報告であり、進化的な考察を加えることにより論文としてまとめることができた。2.ヘリオバクテリア反応中心の酸化還元状態に依存した分光学的解析閃光照射後の過渡吸収測定ではFXからの電荷再結合が観測されるが、強還元条件下にするとA1ではなく、A0からの電荷再結合が観測されることが報告されている。この点は同じタイプ1反応中心であるPS Iと大きく異なる点である。今回、強還元条件下(pH10、ジチオナイト)で低温吸収スペクトル(77 K)を測定したところ、810 nmの肩が消失することが分かった。ヘリオバクテリア反応中心には6個のシステイン残基が存在するが、そのうちFX配位に関与している2個のシステイン残基(Cys432,Cys441)を除き、残り4個のシステイン残基のもつSH基の解離が影響していることが推測された。過渡吸収測定との相関性を考察するために、酸化還元状態に依存した分光学的解析を推し進めていく必要性が示唆された。3.ヘリオバクテリア反応中心の結晶化・構造解析昨年度より回折実験可能な回折強度データが得られているが(未発表)、さらなる分解能向上を目指し、界面活性剤、沈殿剤、緩衝液pH、抗凍結剤等、諸条件の再検討を行っている。位相決定を目指し、鋭意努力中である。緑色イオウ細菌反応中心PscAのL688とV689をCysに置換し、光誘起FTIR差スペクトルによる解析を行った。L688C変異体において、SーH伸縮振動バンドに由来するシグナルを同定した。導入したシステイン残基はスペシャルペアと新たに水素結合のネットワークを形成することを意味し、タイプ1反応中心ではスペシャルペア周辺の構造は高度に保存されているらしい。また極低温下、ヘリオバクテリア反応中心の閃光照射によるESRスペクトルの経時変化を測定した。その結果、P+A1-に由来するESP信号を検出することができた。
北太平洋中層水により長距離輸送される溶存鉄の起源と化学形態の解明

海洋の生物生産にとって必須栄養素である鉄の一般的な無機海水に対する溶解度は極めて低い。北太平洋中層水をはじめとしたオホーツク海および北太平洋の中層水中では、鉄が理論的溶解度を大きく超える高濃度で存在する事、中層水循環に伴い長距離輸送される事が、先行研究から示された。しかし、中層水循環に伴う長距離輸送を可能にする溶存鉄の化学形態に関する知見はほとんど無く、北太平洋における鉄循環の実状は解明されていない。本申請研究代表者は、海洋における腐植様溶存有機物の動態に関して研究成果を積み重ねてきた。特に、腐植様溶存有機物が鉄と錯形成可能な有機配位子である事に着目し、研究協力者と共同で、オホーツク海海盆域から西部北太平洋亜熱域における腐植様溶存有機物と溶存鉄の南北断面の分布を明らかにした。その結果、オホーツク海で陸起源腐植様溶存有機物と錯形成した鉄が、中層水の循環に伴い北太平洋の中層に広く輸送されている事が推察された。本申請研究では、1これらの過去に実施された観測結果の解析から、中層水循環に伴い長距離輸送される堆積物由来鉄に対する腐植様溶存有機物の貢献を明らかにする事、22018年度に実施される航海で観測および試料採取することにより、北太平洋の中層水中の溶存鉄の新たな起源を再評価する事を目的とした。2018年度に実施した解析の結果、北太平洋の中層水循環により輸送される鉄の化学形態として、腐植物質と錯形成している鉄とそうでない鉄が存在する事が示唆され、腐植物質と錯形成している鉄の方がより長距離輸送される事が分かった。また、2018年度に実施された航海で計画通りの観測および試料採取を実施する事ができた。2018年度は、海洋観測および試料採取を実施する事ができ、中層水により長距離輸送される堆積物由来鉄の化学形態を解明できた。前者は計画通りであり、後者は当初の計画を大きく上回る成果である。2019年度は、2018年度に採取した試料の分析結果を加え、統合的にデータ解析を行い、北太平洋の中層水循環により長距離輸送される溶存鉄の起源と化学形態の解明を行う。
日本統治下台湾人用国語教科書と日本人用国定国語教科書の比較研究

植民地時期の台湾では国語(日本語)教育が施され、台湾人用の国語教科書も編さんされた。本研究は台湾の教科書と日本の国定国語教科書の比較を行い、第一期を除く各時期の台湾の教科書には共に3割以上の国定関連教材が存在することを明らかにした。また教材の採択経緯や内容分析、変更された箇所の考察により、国定関連教材の特徴を解明し、それに影響を与えた統治情勢、植民地教育政策及び教科書編集体制の変更等の要因も特定した。1.今年度は台湾と日本国語教科書に関する資料を収集し、順番に比較作業を進める。現在第二期教科書の分析結果を投稿中である。分析結果によれば、第二期の台湾国語教科書には、約4割の教材が国定本関連教材であり、第四期(公学校用国語読本)・第五期教科書(国民学校用国語教科書)の3割より占める割合が多かったことがわかったのである。ただし、この4割の国定本関連教材には2つの特徴がある。一つは実学教材、公民教材、児童生活関連教材が多く採用されているが、ほぼすべての教材は台湾の編修官の手によって修正されたものであることである。もう一つ、第二期国語教科書は同学年用の第二期国定国語教科書から教材を採用する傾向にあるが、日本語能力の差でそのまま採用される教材が非常に少なく、内容も台湾人生徒用に易しく書き直されたものが殆どであった。現在、第三期の初歩分析は済んでおり、8月までに原稿にまとめる予定である。第四期と第五期の分析結果は修正した基準によって現在見直し中である。2.2013年2月に台湾での現地調査を行い、専門家の聞き取り調査も実施した。台湾図書館(旧台湾総督府図書館)にて関連資料の収集を行った。3.前年度に引き続き教材研究会を開き、各期教科書の分析結果について意見を交換し、必要な場合は追加の調査や検証も行っている。4.国定教科書の写真撮影作業を行い、全五期教科書を比較する作業の準備も済んでいる。台湾における日本植民地統治時期(1895ー1945)では「国語=日本語」教育が実施され、計全5期の台湾人用初等国語教科書が台湾総督府によって編纂された。本研究は台湾で使用された国語教科書と同時期の国定国語教科書の教材を対照・比較し、どのような教材が台湾だけのために作られたものか、どのような教材が国定教科書と同じ内容で教える必要があったかを明らかにするものである。第一期教科書の分析では、国定教科書が台湾の教科書より遅く刊行されたため、両者に共通する教材を特定し、当時台湾の社会や風土習慣が教材に与えた影響や特徴を解明した。第二期教科書の分析では台湾の国語教科書に約4割の教材が国定教科書から取り入れられていたことを明らかにした。最終年度においては主に第三期教科書の分析結果を整理し、すでに完成されている第四期と第五期台湾国語教科書の研究成果(国定教科書関連教材がともに全体の3割程度)を含む全体的な考察を行った。教材分析によれば、第三期台湾国語教科書には約5割弱(48.66%)の教材が国定教科書の関連教材であることが明らかとなった。また、教材の内容分析結果によれば、第二期第四期の教科書に最も多い国定教科書関連教材は「生活知識と実学教材」だったが、戦争が激化した第五期の教科書では、最も多い教材は「軍事・戦争教材」となった。各時期における国定関連教材の変化には、植民地の統治情勢や国語教育方針の調整及び教科書を編集する側の意図や考えが反映されている。植民地時期の台湾国語教科書は単なる語学教材でなく、実学・理科・地理・公民等各分野の初歩的知識が詰め込まれている。本研究は台湾国語教科書と国定国語教科書の関連性を解明することにより、意図的に台湾で取り込まれた、もしくは避けられた「知識」を特定することに成功した。今後はこれらの成果を踏まえ、教材による植民地教育政策の検証をさらに進めていきたい。1.教科書の撮影とデータ化:教科書の比較作業をよりスムーズに行うために、一部の教科書を撮影し、パソコンなどの電子機器類ですぐ検証・活用できるようにした。今後も必要な資料や教科書の整理作業を続ける予定である。2.これまでの比較方法を調整し、今回教科書内容の研究方針を確立した。第一期「台湾教科用書国民読本」の比較結果はすでに原稿にまとめ、現在は「平安女学院大学研究年報第12号」に投稿し、審査中である。この原稿では「台一読本」をのちに編集された「国一読本」との対照作業を行い、同じタイトルや近似するテーマを扱う教材があるかを確認し、その特徴を明らかにした。さらに、国定本からの影響がない状態で編纂された「台一読本」の分析結果は、影響を受けているほかの四期の国語教科書の対照基準にもなる。なお、第二期「公学校用国民読本」の比較作業もすでに済んでおり、現在は結果を整理し、近日中教材研究で発表する予定である。3.国内および台湾台北にある主な資料所蔵地への現地と聞き取り調査を実施した。

台湾・日本両方の教科書編集資料や教材研究資料も集めた。4.「日本統治下台湾国語教科書と国定国語教科書の教材比較分析研究会」を主催し、第一回と第二回の研究会では第一期教科書の比較分析結果を発表した。第三回の開催は8月に予定されている。5.現有第四期、第五期比較成果の翻訳と整理は予定通りに進めている。7.そのほか、本研究に関連する台湾植民地教育の研究にも参加し、教科書編纂関連の論文を発表した。1.資料収集について:教科書に関連する資料の収集はスムーズに行っている。教材や関連史料のデータ化作業も順調に進めている。2.教材分析について:第二期、第三期の教材分析が進むにつれ、比較や確認作業も量も増えたが、教科書を写真撮影やスキャンでデータ化したことにより、教科書を一冊一冊読み返す手間が省け、第四期、第五期の見直し作業へも影響も最小限に抑えることができた。3.研究成果の発表について:現在は予定通りに毎年一本ずつ論文を発表・投稿している。年度開始後、教科書資料の撮影と整理を計画に加わったが、資料調査の進行や教科書の比較作業が順調だったため、概ね予定通りに計画を実施することができた。1.資料収集:次年度から個別教材に対する分析も行う予定なので、教材編集に直接関連するものだけでなく、教材に含まれる各分野の資料も集める予定である。2.全五期教材の比較作業を進め、分析結果を原稿にまとめて投稿する。3.必要に応じて、国内外の専門家にインタービューを実施する。4.本研究が目的とした台湾国語教科書と国定国語教科書の比較研究についての結論をまとめ、報告書を作成する。なお、本研究を含めた応募者これまでの研究成果をまとめ、植民地期台湾の国語教科をテーマとする研究書を出版する準備を進める。24年度以降には以下の作業・研究を行う。1.引き続き資料を収集し、順番に比較作業を進める。2.台湾への現地と聞き取り調査を実施する。3.第二、三期教科書の分析結果をまとめ、研究会においてほかの研究者と意見を交換し、必要な場合は追加の調査や検証を行う。4.全五期の比較結果をもとに、個別研究の教材を特定する。5.本研究の横軸となる全教材の比較結果を表ごとにまとめ、時期や教科書の巻数順に検索できるように資料を作成する。25年度は計画通りに、経費を設備備品費、消耗品費、旅費、謝金、その他等の項目に分けて使用する。設備備品費は書籍と資料の保存とデータの分析に必要なものを購入する予定である。戦前の資料が中心なので、古書を購入する経費も計上する。消耗品費は収集したデータのプリントアウト、保管や史料の整理などに必要なものである。なお、最終年度なので、報告書の印刷費や製本費等の必要経費も計上する。旅費は国内外出張への必要経費である。研究代表者の勤務先の旅費支給規程により、それぞれ積算・計上する。謝金史料のデータ化やインタービュー・聞き取り調査を行うための予算である。その他は図書館でのコピー代やデジタル複写代などを含む。24年度は計画通りに、経費を「設備備品費」「消耗品費」「旅費」「謝金」などの項目に分けて使用する。なお、研究費の使用については、本務先の研究事務担当者との連絡を密に行い、適正に執行する。「設備備品費」は主に図書やパソコン関連の備品、「消耗品費」はトナーやコピー用紙などの事務用品に使う。
食道胃腸摘出標本に対するマルチモーダル計測による高次マクロ病理情報の獲得と解析

腫瘍(がん)の確定的な診断は多くの場合摘出・薄切した病理標本を顕微鏡で観察して行われるが、より一層の効率化と網羅性が求められる。本研究では、複数の光学計測装置・画像撮影装置およびマイクロCTを用いて摘出標本の微細構造、光学特性を取得する。そしてこれらの情報と従来からのミクロな病理画像との相関性を分析する。本研究は巨視と微視の間の関係を、高次マクロ病理情報を用いてホワイトボックス化する研究である。摘出腫瘍標本の診断をマルチモーダル情報の統合によって高精度で行うためのイメージング技術と画像解析技術の開発であり、複数の光学計測装置、画像撮影装置およびマイクロCTによる情報を統合した高次マクロ病理情報の取得技術の確立を目指す。巨視と微視の間の関係を高次マクロ病理情報によってホワイトボックス化する研究であり、マクロ病理学を高度に発展させる高い学術性を有する。本研究の成果は、摘出腫瘍標本を用いる診断の効率と網羅性を大幅に向上させる事が期待される。
子宮内胎児発育不全モデルラットを用いた中枢神経障害の分子生物学的研究

【研究の目的】子官内発育遅延モデルラットを用いて、低酸素性虚血ストレスを負荷し、脳の梗塞面積について検討した。更にTTC染色とHE染色の所見を比較検討した。【方法】子宮内発育遅延モデル(IUGR)動物の作成:SD系ラット母獣の腹腔内に、妊娠13日目に浸透圧ポンプを埋め込み合成トロンボキサンA2を20ng/hrで持続投与し、胎児に子宮内発育遅延を誘導した。自然分娩にて出生後、体重を測定し子宮内発育遅延動物であることを確認した。低酸素性虚血性ストレスの負荷:日令7の正常体重(コントロール)ラットとIUGRラット新生仔を、笑気+フローセン吸入麻酔下にて右総頸動脈を絹糸にて結紮した。3時間母獣に戻し回復させた後、8%酸素を2時間吸入させた。IUGRラットについては、結紮のみをおこなったもの、低酸素負荷のみをかけたものについても検討を行った。TTC染色:2の処置後、48時間後にペントバルビタールで全身麻酔をかけた後、冷生食で環流し大脳を摘出した。2mm毎に脳のスライスを作成し、1.0%TTC液にて20分染色を行った。冷10%中性ホルマリン液にて固定保存した。結果の解析:TTC染色では正常の組織は赤色に染色され、梗塞域は白くなる。赤色、白色の部位をNIH imageソフトを用いて計測し、右大脳半球の面積・梗塞面積を測定し、その比率を計算した。【結果】梗塞を起こした割合:コントロール群で5/50(50%)、IUGR(RCA結紮+低酸素)で5/16(31%)、IUGR(RCA結紮のみ)では0/4(0%)、IUGR(低酸素のみ)では0/4(0%)であった。コントロール群4匹および子宮内発育遅延群5匹に、生じた梗塞に関して比較検討した。コントロール群は26.22±14.28%、子宮内発育遅延群28.78±12.86%であった。2群間では統計学的に有意差を認めなかった。(p=0.7844)海馬CAI領域では、HE染色では神経細胞の脱落、壊死を認めたが、TCC染色では病巣として描出できなかった。【考察と結論】今回の結果は、有意差は得られなかったが、IUGR群で強い受傷があったことが示され、IUGR児の中枢神経脆弱性を示唆していると考えられた。【研究の目的】今年度は。子宮内発育遅延の状態が低酸素性虚血性のストレスに対して脆弱であるか否かを確かめるために、子宮内発育遅延モデルラットを用いて、低酸素性虚血ストレスを負荷し、脳の梗塞面積について検討した。【方法】(1)子宮内発育遅延モデル(IUGR)動物の作成:SD系ラット母獣の腹腔内に、妊娠13日目に浸透圧ポンプを埋め込み合成トロンボキサンA2を20ng/hrで持続投与し、胎児に子宮内発育遅延を誘導した。(2)低酸素性虚血性ストレスの負荷:日令7の正常体重(コントロール)ラットとIUGRラット新生仔を、笑気+フローセン吸入麻酔下にて右総頸動脈を絹糸にて結紮した。(3)TTC染色:2の処置後、48時間でペントバルビタールで全身麻酔をかけた後、冷生食で環流し大脳を摘出した。2mm毎に脳のスライスを作成し、1%TTC液にて20分染色を行った。(4)結果の解析:TTC染色では正常の組織は赤色に染色され、梗塞域は白くなる。【結果】(1)梗塞を起こした割合:コントロール群で5/50(50%)、IUGR(RCA結紮+低酸素)で5/16(31%)、IUGR(RCA結紮のみ)では0/4(0%)、IUGR(低酸素のみ)では0/4(0%)であった。(2)コントロール群4匹および子宮内発育遅延群5匹に、生じた梗塞に関して比較検討した。(p=0.7844)【考察】今回の結果では、検討した動物の数が少なく、有意差を導き出すには不十分であった。動物の数を増やし、検討を加える必要があると考える。来年度は低酸素性虚血性のストレスに際して誘導されるサイトカインの検討を加える予定である。【研究の目的】今年度は、子宮内発育遅延モデルラットを用いて、低酸素性虚血ストレスを負荷し、脳の梗塞面積について検討した。【方法】

(1)子宮内発育遅延モデル(IUGR)動物の作成:SD系ラット母獣の腹腔内に、妊娠13日目に浸透圧ポンプを埋め込み合成トロンボキサンA2を20ng/hrで持続投与し、胎児に子宮内発育遅延を誘導した。自然分娩にて出生後、体重を測定し子宮内発育遅延動物であることを確認した。(2)低酸素性虚血性ストレスの負荷:日令7の正常体重(コントロール)ラットとIUGRラット新生仔を、笑気+フローセン吸入麻酔下にて右総頸動脈を絹糸にて結紮した。3時間母獣に戻し回復させた後、8%酸素を2時間吸入させた。IUGRラットについては、結紮のみをおこなったもの、低酸素負荷のみをかけたものについても検討を行った。(3)TTC染色:2の処置後、48時間でペントバルビタールで全身麻酔をかけた後、冷生食で環流し大脳を摘出した。2mm毎に脳のスライスを作成し、1%TTC液にて20分染色を行った。冷10%中性ホルマリン液にて固定保存した。(4)結果の解析:TTC染色では正常の組織は赤色に染色され、梗塞域は白くなる。赤色、白色の部位をNIH imageソフトを用いて計測し、右大脳半球の面積・梗塞面積を測定し、その比率を計算した。【結果】(1)梗塞を起こした割合:コントロール群で5/50(50%)、IUGR(RCA結紮+低酸素)で5/16(31%)、IUGR(RCA結紮のみ)では0/4(0%)、IUGR(低酸素のみ)では0/4(0%)であった。(2)コントロール群4匹および子宮内発育遅延群5匹に、生じた梗塞に関して比較検討した。コントロール群は26.22±14.28%、子宮内発育遅延群28.78±12.86%であった。2群間では統計学的に有意差を認めなかった。(p=0007844)(3)海馬CAI領域では、HE染色では神経細胞の脱落壊死を認めたが、TCC染色では病巣として描出できなかった。【考察】今回の結果では、検討した動物の数が少なく、有意差を導き出すには不十分であった。動物の数を増やし、検討を加える必要があると考える。TCC染色とHE染色との差異がいかなる理由かは不明である。来年度は低酸素性虚血性のストレスに際して誘導されるサイトカインの検討を加える予定である。【研究の目的】子官内発育遅延モデルラットを用いて、低酸素性虚血ストレスを負荷し、脳の梗塞面積について検討した。更にTTC染色とHE染色の所見を比較検討した。【方法】子宮内発育遅延モデル(IUGR)動物の作成:SD系ラット母獣の腹腔内に、妊娠13日目に浸透圧ポンプを埋め込み合成トロンボキサンA2を20ng/hrで持続投与し、胎児に子宮内発育遅延を誘導した。低酸素性虚血性ストレスの負荷:日令7の正常体重(コントロール)ラットとIUGRラット新生仔を、笑気+フローセン吸入麻酔下にて右総頸動脈を絹糸にて結紮した。TTC染色:2の処置後、48時間後にペントバルビタールで全身麻酔をかけた後、冷生食で環流し大脳を摘出した。2mm毎に脳のスライスを作成し、1.0%TTC液にて20分染色を行った。結果の解析:TTC染色では正常の組織は赤色に染色され、梗塞域は白くなる。