hpprc/llmjp-kaken huggingface dataset:
雁皮紙および三椏紙の超長寿命化のためのヘミセルロースの役割の解明

研究協力者である学生が修了し、次の学生に研究を引き継いだが、ゼロからのスタートとなり、研究が遅れている。平成29年度の雁皮紙に対する評価に続いて、三椏紙についても同様の検討を行う。すなわち、三椏を炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウムの2種により煮熟した。同時に煮熟した試料の半分はフラットスクリーンを用いて、柔細胞をできるだけ除去した試料も作成し、除去していないものと併せ計4種の三椏紙を作製した。製造した4種の三椏紙の酸性劣化および酸化劣化挙動を検討する目的で、三椏紙を硫酸鉄溶液(低濃度、高濃度)あるいは硫酸溶液(硫酸鉄溶液のpHに合わせる)にそれぞれ浸漬後乾燥させる。これを湿熱劣化(80°C、65%rh、4週間)処理する。前者の硫酸鉄溶液は酸化と酸加水分解を、後者の硫酸溶液は酸加水分解のみの影響を評価するためである。繊維細胞からの柔細胞の分離に関しては篩分器を導入し、柔細胞分離に用いる篩の目の大きさについて予備的な検討を実施する。ゲルパーミエションクロマトグラフィー(GPC)については、蛍光ラベル化剤を用いたカルボニル基およびカルボキシル基の多糖中での分布について検討を行うために、市販の蛍光ラベル化剤を用いて予備的な検討を行う。すでに三椏紙の劣化処理は終了した。これらの試料の機械的強度、セルロースの重合度および酸化度、中性糖分析などを行うとともに、昨年導入した電気伝導度滴定によるカルボキシル基の定量を試みる。これらの結果と一昨年度に実施した雁皮紙の劣化挙動を比較して、ヘミセルロースが和紙の劣化に及ぼす影響について考察する。
造血細胞におけるチロシンキナーゼを標的としたオートファジー誘導と細胞保護効果

慢性骨髄性白血病の分子標的薬メシル酸イマチニブ(IM)は,BCR-ABLを発現していない様々な細胞株やマウス胎生線維芽細胞(MEF)に対して,自立的なアポトーシスを阻害する"保護効果"と強力なオートファジー誘導効果があることを明らかにした。IMは,シタラビン,ツニカマイシン,ボルテゾミブに拮抗し,血清除去による細胞死誘導に対してもオートファジー依存性に保護効果を発現した。一方,骨髄腫細胞や乳癌細胞に,オートファジー阻害作用のあるクラリスロマイシンとプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブとを同時に作用させると,小胞体(ER)ストレス負荷を介したアポトーシスが強力に誘導されることを明らかにした。以上より,人為的にオートファジーを誘導することにより,造血前駆細胞を含めた様々の細胞でERストレス負荷の緩和を介した細胞保護効果が得られる可能性が示唆される。申請者らは慢性骨髄性白血病(CML)の分子標的薬メシル酸イマチニブ(グリベック^R)が,他のBCR-ABLを発現しない白血病細胞株や癌細胞株では,オートファジーを強力に誘導し,かつ,細胞保護効果を発現することを発見した。さらに,murine embrinonic fibroblastを含めた正常細胞においても同様な現象が観察された(Ohtomo T, Miyazawa K.et al. Biochem.Biophy.Res.Commun.2010.)。この現象は他の一部のチロシンキナーゼ阻害剤によっても細胞種を超えて普遍的に観察される。本研究ではこのオートファジーによる細胞保護作用に着目し,システムバイオロジーの解析手法により本現象にかかわる標的チロシンキナーゼの同定を行うことを第一の目的としている。これにより今後,造血幹細胞・前駆細胞の試験管内増幅や骨髄異形成症候群・不応性貧血におけるアポトーシスを介した無効造血の抑止を含めた"オートファジー誘導療法"の確立へとさらに発展させる基盤形成としたい。本年度はイマチニブ,スニチニブ,ダサチニブ,ニロチニブを含む各種チロシンキナーゼ(TK)阻害剤によるオートファジー誘導能と細胞保護効果のスクリーニングを中心に実施し,最も細胞保護効果の優れたキナーゼ阻害剤と細胞株との組み合わせの探索を行った。その結果,イマチニブとHL-60細胞との組合せが,オートファジー誘導能と細胞保護効果において,効率性と再現性で最も優れた系であることが判明した。また,スニチニブではオートファジー誘導と細胞保護効果の両者が共に発現しないことが明らかとなった。次年度はこの系を用いて標的キナーゼの絞り込みと同定を中心に進める。さらに,murine embrinonic fibroblastを含めた正常細胞においても同様な現象が観察された(Ohtomo T,Miyazawa K. et al. Biochem. Biophy. Res. Commun.2010.)。本研究ではこのオートファジーによる細胞保護作用に着目し,本現象にかかわる標的チロシンキナーゼの同定を行うことを主目的としている。イマチニブ,スニチニブ,ダサチニブ,ニロチニブを含む各種チロシンキナーゼ(TK)阻害剤によるオートファジー誘導能と細胞保護効果のスクリーニングを中心に実施し,最も細胞保護効果の優れたキナーゼ阻害剤と細胞株との組み合わせの探索を行った。そこで,各キナーゼ阻害剤の阻害活性のスペクトルよりABL,ARG,KIT,PDGF受容体に絞り込みを行い,オートファジー誘導と細胞保護効果の生物活性を指標にsiRNAによるノックダウンを試みた。しかし,いずれのキナーゼ発現抑制においても上記の生物活性が誘導されなかった。そこで同定法の見直しを行い,機能性ナノビーズ(半田ビーズ)にイマチニブの固層化を行い,HL-60細胞の細胞内タンパク可溶液との混和を行うことでone-step精製によりイマチニブ結合タンパクの同定を行うこととした。

現在,半田ビーズへのイマチニブの固層化も終了し,精製・同定が進行中である。慢性骨髄性白血病(CML)の分子標的薬メシル酸イマチニブ(IM)は,他のBCR-ABLを発現しない白血病細胞株や癌細胞株,さらには,murine embryonic fibroblast(MEF)を含めた正常細胞においてもオートファジーを強力に誘導し,かつ,細胞保護効果を発現することを発見した。また,同様な現象は他の一部のチロシンキナーゼ阻害剤(ダサチニブ,ニロチニブ)によっても普遍的に誘導された。そこで,オートファジーの人為的制御(manipulation)に向けて,IMの標的分子の同定ならびに細胞保護効果の分子基盤の解明を試みた。オートファジー関連atg遺伝子群のノックダウン,atg5 tet-off MEF,ならびに各種オートファジー阻害剤を用いた実験系で,IMによるオートファジー誘導を遮断すると細胞保護効果は消失した。これより細胞保護効果はオートファジーに依存していることが明らかとなった。さらにHL-60細胞にtunicamycin(TM)やプロテアソーム阻害剤ボルテゾミブ(BZ)を添加すると,小胞体(ER)ストレスを介した細胞死が強力に誘導された。しかし,この系にIMを同時添加すること,TMおよびBZの殺細胞効果が著しく阻害された。これよりIMの細胞保護効果はERストレスの緩和を介して発現していることが示唆された。一方,マクロライド系抗生剤であるクラリスロマイシン(CAM)はオートファジーを阻害し,BZと併用することでERストレス負荷増大による細胞死を著しく増強することが明らかとなった。IMの標的分子の同定は,現在IM固層化ナノビーズを用いて進行中である。オートファジーの制御法の確立は,今後,造血幹細胞・前駆細胞の試験管内増幅や骨髄異形成症候群・不応性貧血における無効造血の抑止を目的とする新規治療法の開発へと発展することが大いに期待される。おおむね順調に進行し,標的キナーゼの同定のための実験系も確立できた。しかし,各種チロシンキナーゼ阻害剤の阻害活性のスペクトルから候補のキナーゼの絞り込みを行い,siRNAでノックダウンすることで同定する方法が困難であることが判明したため,下記(12)のような実験手法に変更した。24年度が最終年度であるため、記入しない。機能性ナノビーズ(半田ビーズ)にイマチニブの固層化を行い,HL-60細胞の細胞内タンパク可溶液と混和するこで,イマチニブ結合タンパクのone-step精製を行う。質量分析よりイマチニブ結合タンパクの同定を行い,siRNAでノックダウンすることで,オートファジー誘導と細胞保護効果に関与する結合タンパクの同定を行う。
着物文様としての戦争イメージに関するデータベース作成

当初の目的であるデータベースはhttp://inui-zemi.xrea.bz/として公開した。また、そもそもこのデータベースを作成する目的の一つは、これまでほとんど知られていなかった戦争イメージを配した着物を公開し、広く情報を募ることであった。よって、すべての人々がコンピュータを使用するわけでもないので、これに関する書籍を『図説着物柄にみる戦争』として2007年7月に刊行した。併せて、このコレクションの一部を展示して実物を見ていただくこととした。2007年6月29日から7月1日までの札幌紀伊国屋書店における展覧会では約1500人が来場し、8月25日から31日までの広島展では約400人、9月12日から16日の西宮展では約300人の来場があった。その他にも数カ所で310枚ずつほどを展示し、多くの方々にご覧いただくことができた。またこの展示と書籍について、朝日、毎日、読売、日経、東京、中日などの新聞や雑誌が独自に取材し、記事にした結果さまざまな方々が直接に使用した体験などを寄せて下さった、おかげで、これまでは不明だった日清期の羽裏の作例を得て、また従来は全く知られていなかったタイプの作品にも巡り会った。つまり、戦争プロパガンダを意図して作られた訳で羽に戦争文様の着物群であるが、充分に戦争への意欲をかき立てる役目を果たした実態を何人かの経験から知ることができた。また高齢の方々の中で、これを全く知らないことも多く、やはりこの種のものを着用したのは、中流以上の階層であったことも確認できた。現在もまだ本コレクションは増加中であり、今後ともこの研究を継続し、更にこの関連分野(ガラス器、玩具絵、絵葉書など)についても考察する予定である。本研究の趣旨は戦争柄着物とその関連資料についてデータベース化することである。そのために必要な作業の第一段階である資料の収集・所蔵に関する調査の9割は終了した。対象となる主たる資料の85%は申請者の所蔵品であるが、その他の所有者のうち、6件(堀内泉甫、岡本正子、磯映美、堀切辰一、上田美枝の各氏、服飾文化研究会)には本データベースへの収録の許可を得た。3件(川島織物資料館、お茶の水女子大学付属高校、田中翼氏)については問い合わせ中である。第二段階としてはそれぞれの資料に関する情報(素材、図柄の同定、着用形式・使用目的の分類、制作年の推定など)を調査することである。それについては未だ進行中という他にない。つまり、調査をすればするほどに新たな疑問点が頻出するからである。ただし、調査結果について部分的には逐次、論文の形で公表している(下記の<11。研究発表>の項目を参照)。本研究に関してこれまで公表してきた論文(「戦争柄としての旗文様」「着物文様としての大日本帝国地図」「戦争画としての桃太郎の着物」など)は布に表現された文様について考察したものが中心であったが、本年の「愛国婦人会というイメージ」では、ある特定の団体を表象するさまざまな身に付けるものを分析した。また、一般の方々の展覧に供するために2006年8月9日19日には東京都港区の平和展(男女共同参画センターにおいて実施)に45点ほどを出展し、2007年6月29日7月1日には札幌で、9月5日9日には西宮で展示する予定である。研究資料としてデータベース化することはもちろん重要ではあるが、実物をご覧いただくことによって大きさ、材質などを直に理解していただくことができると考える。また、ご覧いただいた方からの新たな情報提供もあり、展示の有効性を確認できた。第三段階として、本資料は視覚的に理解されることが重要であるという観点から、すべての資料を写真に撮る必要がある。すでに約250点については撮影が終了しており、残りの200点についても撮影し、その結果をファイルメーカーを用いてデータ化する予定である。また、本研究の成果にっいては貴志俊彦氏の「戦前期絵葉書データベース」(現時点では島根県立大学のサーバーにあるが、近々に神奈川大学に移転の予定である。すでに管理者が神奈川大学に移動したため)との交流の申し出があり、そちらとの共同作業化に向けて検討、準備中である。

つまり、戦争プロパガンダを意図して作られた訳で羽に戦争文様の着物群であるが、充分に戦争への意欲をかき立てる役目を果たした実態を何人かの経験から知ることができた。また高齢の方々の中で、これを全く知らないことも多く、やはりこの種のものを着用したのは、中流以上の階層であったことも確認できた。現在もまだ本コレクションは増加中であり、今後ともこの研究を継続し、更にこの関連分野(ガラス器、玩具絵、絵葉書など)についても考察する予定である。
サイクロフィリンA受容体を介した新規凝固薬の多面的作用の分子機序の解明

新規抗凝固薬(DOACs)によるサイクロフィリンA (CyPA)とその受容体Basiginの阻害作用を介した多面的作用の可能性について基礎的・臨床的な観点で検討を進めている。これまで全く知られていなかった、CyPA-Basigin系の著明な炎症促進作用や心血管疾患促進機構における重要性が判明し、学会発表や論文報告準備を進めている。DOACsの全く新しい薬理作用の可能性について、非常に興味深い知見が得られつつある。以上の最新の研究成果を、国内外の学会やシンポジウムで報告した(日本循環器学会総会シンポジウム、米国心臓病学会議、欧州心臓学会議)。引き続き、機序の解明を進めていく。【目的】新規抗凝固薬である直接的トロンビン阻害薬やXa阻害薬によるサイクロフィリンA (CyPA)とその受容体Basiginの阻害作用を介した多面的作用の可能性について検討することにある。これまで我々は、CyPAに関する一連の基礎的・臨床的研究を行い、CyPAが心血管病の非常に重要な標的分子であり、Rhoキナーゼ依存性に分泌され、新たに同定したBasiginを受容体として酸化ストレスを増幅することを解明した。本申請研究では、これまで全く解明されていない、CyPA-Basigin系の血小板機能・凝固系制御機構における意義および動脈硬化不安定プラーク破綻機構における役割の解明を、新規抗凝固薬の新規薬理作用の可能性を通じて明らかにする。【進捗】Xa阻害薬や直接的トロンビン阻害薬に血管内皮や血小板におけるCyPA/Basigin阻害作用があるか否かを検討するために、当科の遺伝子改変マウス(ROCK1, ROCK2, CyPA, Basigin, PAR-1)を用いた検討を進めている。細胞外CyPAの受容体Basiginは別名Extracellular MMP inducer (EMMPRIN)と呼ばれ、MMP活性化に重要な役割を有する。従って、Rhoキナーゼ依存性に分泌されたCyPAは、Basiginを介してMMP活性化による動脈硬化プラーク破綻や大動脈瘤破裂を誘導する可能性がある。また、患者由来検体を用いた臨床的意義の確認を並行して進めている。当科に集積された冠動脈硬化標本や冠動脈疾患患者の血液検体を用いて、冠動脈プラーク破綻におけるCyPA/Basigin系の意義を詳細に検討している。本研究は順調に進展しており、新規抗凝固薬のACS予防効果の機序解明のための、以下のような研究が進んでいる。1.新規抗凝固薬の多面的作用の解明:新規抗凝固薬にCyPA/Basigin系抑制を介した多面的作用を有するという我々の作業仮説は全く新しい着想であり、その仮説が実証されれば、学術的意義は非常に大きく、新規抗凝固薬による新しい抗動脈硬化治療戦略が生まれる。2.新規の薬物療法の展開:血小板活性化や血栓形成による血管内皮障害の病因としてCyPA/Basigin系を介する内皮と凝固系因子の相互作用が関与している可能性が高い。この着想はこれまで想定されていない新しい原理の発展や方法論の提案であり、全く新しい薬物療法の展開が期待される。3.新規の抗動脈硬化治療戦略の創出:これまで多くの動脈硬化性疾患の解析に用いられてきたApoE欠損マウスの炎症シグナルNF-kB活性化と表現系発現の根幹にCyPAが必須分子として存在することが、最近、明らかにされた(Nature 2012)。新規抗凝固薬によるCyPA/Basigin系活性化抑制を基盤とする新規の抗動脈硬化治療戦略の創出が期待される。

これまで全く知られていなかった、CyPA-Basigin系の著明な炎症促進作用や心血管疾患促進機構における重要性が判明し、学会発表や論文報告準備を進めている。DOACsの全く新しい薬理作用の可能性について、非常に興味深い知見が得られつつある。以上の最新の研究成果を、国内外の学会やシンポジウムで報告した(日本循環器学会総会シンポジウム、米国心臓病学会議、欧州心臓学会議)。引き続き、機序の解明を進めていく。CyPAおよびBasiginの心血管疾患促進機構における重要性は、確認済みである。しかし、両者が血小板機能制御や凝固制御機構に関わっているとする我々の仮説は十分に証明されていない。1.前述した各種の遺伝子改変マウスを用いたトロンビンによる血管内皮PAR-1活性化機構の詳細な解明。2. Rhoキナーゼは多彩な細胞内シグナル伝達機構の要にある重要分子であり、Rhoキナーゼ阻害薬は、多くの心血管疾患の治療に有効である。その作用機序の一つにトロンビンによる血管内皮Rhoキナーゼ活性化を発端としたCyPA分泌機構とPAR-1活性化による内皮機能低下の関与が想定される。トロンビン/PAR-1/Rhoキナーゼ活性化とCyPA/Basigin系の相互作用を、in vivoにおいて検討する。3.臓器特異的Basigin欠損マウス及び過剰発現マウスを用いることで、in vivoでのCyPA作用の制御機構の詳細な解析が可能である。特にMMP活性を制御するBasiginのPAR-1制御機構の解明により、CyPA/Basigin系による血小板活性化制御や凝固系制御機構が明らかになる。(B)ヒト冠動脈血管内皮細胞におけるトロンビン/CyPA/Basigin系とPAR-1シグナル伝達機構1.ヒト冠動脈血管内皮細胞を用いたトロンビンによるPAR-1活性化機構にCyPA/Basigin系がどのように関わるかを解明する(細胞実験)。2.細胞外CyPAのヒト冠動脈血管内皮細胞へのPAR-1シグナル制御機構の解明(細胞実験)医歯薬学本研究遂行にあたり、平成27年度に海外学会参加を予定していたが、国内学会のみとなったため、旅費を抑えることができた。平成28年度は、国内および海外学会への参加を計画しており、平成27年度分と併せて執行する。
ヨーロッパ言語と日本語・中国語比較による主題構造のカートグラフィー研究

本研究は、日本語・中国語、ヨーロッパ言語のデータを収集・分析するという記述的研究と、そのデータを理論言語学の枠組みであるカートグラフィー分析で検証し、普遍的な統語理論を構築するという理論的側面を併せ持つものである。「主題ー第述」構造がどの程度まで普遍的に通言語的に見られるかを明らかにすることを言語理論的研究の主眼とする。更に、言語理論により明らかになった日本語と中国語の主題構造と文構造の理解に基づいて、より効果的な中国人留学生に対する日本語教育と日本人学生に対する中国語教育を実践する方向を探るものである。
早期関節炎の治療開始基準:臨床と分子生物学の両面で治療開始のタイミングをとらえる

関節リウマチの早期診断の際に自己抗体と関節MRI所見の有用性を確認した。関節MRI検査は非造影、片手でも評価可能である。また、自己抗体とMRI骨髄浮腫を伴う診断未確定関節炎および早期関節リウマチに対して治療介入試験を実施中である。診断未確定関節炎(Undifferentiated arthritis ; UA)129症例の検討で、フォローアップ1年後75例(58.1%)が関節リウマチ(Rheumatoid arthritis ; RA)へ進展した。特に初診時抗CCP抗体とMRI上骨髄浮腫を共に認めた22例(症例全体の17.1%)は全例RAへ進展し、抗CCP抗体の代わりにIgM-RFを組み合わせでも同様であった。早期RA72症例における骨関節破壊の検討でも自己抗体と骨変化を共に認めた症例は60%と高率に進行を認めている。すなわち、自己抗体かつMRI上骨変化を認める症例はRA発症および骨関節破壊進展の高リスク群であり、積極的な治療介入を要する。この結果からUAに対する治療介入臨床研究を始動中である。UAからRA発症予測に際し、2007年報告のLeiden大学のスコア(総点14点、8点以上で1年後91%がRAへ進展、6点以下で84%がRAへ進展せず)と厚労省江口研究班RA早期診断基準案(自己抗体陽性、MRI上対称性滑膜炎、MRI上骨変化の2/3項目以上陽性でRA)を比較した。Leidenスコアが8点以上の41/43例(953%)、6点以下の23/67例(34.3%)がRAへ進展した。逆に江口研究班スコア2点以上の64例のLeidenスコアの中央値8.16点、2点未満の65例の中央値5.32点と双方のスコアに相関を認めた。私たちは両手同時撮像MRI検査での検討だが、従来は片手のみである。症状の強い手で骨変化を検討したところ症例数は若干少なくなるもののRA進展率は同様であった。以前、無造影MRI検査の報告を行い、滑膜炎は感度77.8%、特異度49。7%と偽陽性が多い一方、骨変化は各々80.7%、99.4%と造影検査とほぼ遜色なかった。以上よりMRI検査における片手・無造影検査の信頼性が確認された。関節リウマチ(以下RA)への早期治療導入は高い寛解率を示し、早期診断の重要性が高まっている。そこで私たちは関節所見、血清マーカー、関節MRIを用いて、早期関節炎の中からRAへ進展する可能性が高いグループを抽出できるRA早期診断基準案を提案した。(1)抗CCP抗体あるいはリウマトイド因子(IgM-RF)、(2)MRI上対称性滑膜炎、(3)MRI上骨変化(骨髄浮腫あるいは骨侵食)の3項目から成り立っ。今回、非造影MRI所見を用い診断基準案を検証した。結果は、感度76.0%、特異度61.1%、陽性予測値73.1%、陰性予測値64.7%、診断確度69.8%と造影MRI所見でのそれとほぼ同様の結果を得た。また、IgM-RFもしくは抗CCP抗体陽性かつMRI上骨髄浮腫陽性を満たすUAおよび発症6カ月以内の早期RA症例を対象に早期治療介入試験(Nagasaki Early Intervention Trial)を遂行中である。13症例において骨髄浮腫の経過と骨破壊進行の検討を行った。骨破壊進展群と非進展群において初診時骨髄浮腫スコアの中央値に有意差を認め、治療介入による骨髄浮腫スコア減少率が初診時の1/3以下群とそれ以外の群において1年後の骨破壊進展率に有意差を認めた。骨髄浮腫は将来の骨破壊進展を強く示唆し、治療経過の評価にも有用であった。関節MRI検査と身体所見との関連について発症2年以内のRAを対象に検討した。関節所見は圧痛と腫脹、関節MRI検査は滑膜炎と骨変化(骨髄浮腫、骨侵食)を評価した。MRI上滑膜炎や骨変化の所見が存在する割合は、圧痛かつ腫脹を認めた場合71.4%、圧痛あるいは腫脹を認めた場合57.6%、関節所見を認めない場合40.4%であり、そのうち骨変化が存在する割合は、各々16.3%、5.1%、3.6%であった(rs=0.47, p-value<0.0001)。
ストレスと循環器疾患における中枢性レギタリス様物質の役割の解明

1)中枢神経系カテコールアミン・ニューロンを6-OH-dopamineによって破壊すると視床下部のウアバイン様物質の濃度と循環血液中の濃度とも激減した。2)水泳負荷によって循環血液中および副腎のウアバイン様物質濃度ともに増加した。循環血液中コルチコステロン濃度も上昇したが、そのピークは速やかであり、ウアバイン様物質濃度の上昇の方が緩徐であった。ウアバイン様物質がストレスに関連することが明らかにされた。3)一種のストレスである急性容量負荷時に、ウアバイン様物質が血管抵抗の維持に働く可能性が推測された。4)やはり一種のストレスである高度の食塩制限時のNa貯留ホルモンであるアルドステロンの分泌/生成の調節にウアバイン様物質が働く可能性が支持された。5)過剰に産生された副腎皮質刺激ホルモンACTHによって生じるミネラロコルチコイド型高血圧で臨床的にこの昇圧機序にウアバイン様物質が重要な役割を果たす可能性を示唆した。また実験的にも同様の考え方が成り立つことを支持する成績を得た。6)本態性高血圧症患者における携帯型24時間連続血圧測定装置による血圧値と血漿Na,K値との間に有意の関連があることを見い出した。この成績はウアバイン様物質によって説明される可能性がある。7)ウアバイン様物質の作用をブロックし、血漿および骨格筋の細胞Na,K濃度への効果を観察することによって細胞膜を介するNa,K勾配の調節にウアバイン様物質が関わる可能性を明らかにした。血管平滑筋への作用によってウアバイン様物質は血管緊張度の調節に主役を務めることが強く想定される。8)体内に急速に過剰な高張のNaが添加されるストレスに際して、循環血液中および副腎、下垂体のウアバイン様物質濃度がいずれも増加した。ウアバイン様物質の作用がブロックされると正常の反応が認められなくなることから、ウアバイン様物質の役割が支持される。我々は以前から本態性高血圧の成因とくに食塩との関連に注目し、食塩により血圧が上昇する機序の解明に取り組んでいる。主に腎臓でのNa排泄の調節におけるNa+, K+-ATPase活性の調節因子としてのウアバイン様物質を追究し、種々の高血圧モデルにおけるその病態生理的役割についての情報を報告してきた。最近このウアバイン様物質が中枢神経に存在し、末梢交感神経活性の調節において重要な役割を果すことが明らかにされてきていることを考慮し、今回ストレス負荷時のウアバイン様物質の変化を検討した。ストレスが本態性高血圧においても大きな役割を有することは否定できない事実である。ラットに10分水泳ストレス負荷を行い、終了10、40、70分後に血液とともに、視床下部、下垂体、副腎を採取しウアバイン様物質濃度を既知のストレス・ホルモンとともに測定した。予想されるコルチコステロン、カテコールアミンの上昇は10分後に明らかであり、この時期に一致して副腎ウアバイン様物質の増加を認めた。血液では40分後にウアバイン様物質が増加した。また副腎ウアバイン様物質と血中エピネフリン濃度には相関関係がみられた。なお中枢神経ではウアバイン様物質濃度の変化は観察できなかった。この結果からウアバイン様物質も一種のストレス・ホルモンとして機能している可能性が示された。現在、動物実験の成績を発展させるべく高血圧患者を対象としてトレッドミル負荷試験の前後で同様の検討を進めている。

主に腎臓でのNa排泄の調節におけるNa+,K+-ATPase活性の調節因子としてのウアバイン様物質を追及し、種々の高血圧モデルにおけるその病態生理的役割についての情報を報告してきた。最近このウアバイン様物質が中枢神経に存在し、末梢交感神経活性の調節において重要な役割を果すことが明らかにされてきていることを考慮し、ストレス負荷時のウアバイン様物質の変化を検討している。ストレスが本態性高血圧においても大きな役割を有することは否定できない事実である。昨年はラットに水泳ストレス負荷を行い、ウアバイン様物質濃度を既知のストレス・ホルモンとともに測定した。コルチコステロン、カテコールアミンの上昇とともに副腎および血漿のウアバイン様物質の増加を認めた。本年は高血圧患者を対象としてトレッドミル負荷試験の前後で同様の検討を行い、やはりヒトにおいてもラットほど著明ではないがほぼ同様の血漿ウアバイン様物質の増加を観察した。またラットに異なる種類のストレスとしての高張食塩水の投与を行い、副腎および血漿のウアバイン様物質の増加を認めた。以上の結果からウアバイン様物質も一種のストレス・ホルモンとして機能している可能性が強く示唆された。また中枢神経のカテコールアミン・ニューロンを60HDAで破壊するとその局所のみならず血漿ウアバイン様物質が減少することからやはりストレスとの関連が間接的に示唆された。過剰に産生された副腎皮質刺激ホルモンACTHによって生じる高血圧はミネラロコルチコイド型高血圧に属するが、肺癌の臨床例の観察によってこの昇庄機序にウアバイン様物質が重要な役割を果たす可能性を示唆した。また実験的にも同様の考え方が成り立つことを支持する成績を得た。本態性高血庄症患者におけるABPM(携帯型24時間連続血圧測定装置)による血圧値と血漿Na,K値との間に有意の関連があることを見い出した。静療所血圧値とは明らかな関係を認めなかった。以下に述べるようにこの血漿Na,K値あるいは細胞内外のNa,K濃度勾配の調節にウアバイン様物質が関わる証拠が得られているので、この成績はウアバイン様物質によって説明される可能性がある。この点について継続的に調査中である。ウアバイン様物質の作用をブロックする手法を用いて、血漿および骨格筋の細胞Na,K濃度への効果を観察することによって細胞膜を介するNa.K勾配の調節にウアバイン様物質が関わる可能性を明らかにした。とくに血管平滑筋への作用によってウアバイン様物質は血管緊張度の調節に主役を務めることが強く想定される。体内に急速に過剰な高張のNaが添加されるというストレスに際して、循環血液中および副腎、下垂体のウアバイン様物質濃度がいずれも増加した。ウアバイン様物質の作用がプロッタされると正常の反応が認められなくなることから、ウアバイン様物質の役割が支持される。今回の知見だけでは、いまだストレスにおけるウアバイン様物質の役割の全貌の解明にはほど遠く、今後さらにより精密な手法に基づく研究の縦続が強く望まれる。
歯槽骨延長術における口蓋瘢痕および周囲軟部組織変化に関する実験的研究

口蓋瘢痕は、細胞や血管に乏しく、太く緻密な線維束が口蓋を横切るように粘膜表面に対し平行に配列し、これらが伸展性の乏しい組織としての特徴を与えている。瘢痕の存在が矯正治療における歯の移動を困難にするばかりでなく、治療後の後戻りの大きな要因と考えられる。本研究では、歯槽骨延長術における口蓋瘢痕および周囲軟部組織変化に関する3次元解析により術後の比較検討を行った。瘢痕の存在が矯正治療における歯の移動を困難にするばかりでなく、治療後の後戻りの大きな要因と考えられている。歯槽骨延長法は現在のところ、瘢痕組織と周囲軟組織の伸展、および新生骨の形成とそれにともなう咬合の再構築を同時におこなえる唯一の方法である。骨延長などの牽引ストレスを与えた場合、旺盛な細胞増殖活性や組織再生能が観察される。しかし、瘢痕組織と周囲軟組織および骨の組織延長能や延長後の代謝変化など、これら組織において延長ストレスが加わった際の変化様相や後戻りに関連する相互作用については未解明である。本研究では、骨延長による牽引力が作用した組織(特に口蓋瘢痕とその周囲軟組織および新生骨)のダイナミックな組織変化と細胞増殖活性や再生能マーカーの発現変動パターンの検討、後戻りに対する影響についての検討、ならびにそれらを利用した治療技術開発のための基礎的検討を目的とする。初年度は、実験動物としてラットを用い、実験的骨欠損を作成して口蓋瘢痕を形成させた後に骨延長術を適用する実験系を確立することを目標とした。したがって、ラットに装着可能な自作の小型骨延長器を作製した。この骨延長器は、体外との交通による影響を除外するため、非接触駆動による体内埋込型とした。本研究は、適切な保定期間で後戻りのない患者負担を最小限とする骨延長法という新規歯科矯正治療法開発へとつなげることを目的とする。瘢痕の存在は矯正治療における歯の移動を困難にするばかりでなく、治療後の後戻りの大きな要因と考えられている。組織学、生化学的研究から口蓋瘢痕は細胞や血管の組成、線維束の走行、細胞外基質に正常組織との相違をみる。さらに膠原線維を介して口蓋骨と密に接着し、これらのことが伸展性の乏しい組織としての特徴を与えている。一方で、口腔内の他の軟組織、特に筋肉や粘膜では牽引ストレスを与えた場合、旺盛な細胞増殖活性や組織再生が観察される。仮骨延長法は骨とその周囲の軟組織を含めたhistiogenesisといわれているが、口蓋瘢痕、その周囲軟組織や歯肉・歯根膜および骨における延長ストレスに伴う反応は一様ではなく実に様々な変化様相を呈し、この反応性の相違による結果が歯槽骨延長における後戻りとして表現されてくる可能性が示唆される。実験動物としてラットを用い、実験的骨欠損を作成して口蓋瘢痕を形成させた後に骨延長術を適用する実験系を確立した。本研究は、口唇口蓋裂患者の口腔機能再建の新しい治療法を考える上で極めて意義深いものと思われる。癒痕の存在は矯正治療における歯の移動を困難にするばかりでなく、治療後の後戻りの大きな要因と考えられている。口蓋療痕は、細胞や血管に乏しく、太く緻密な線維束が口蓋を横切るように粘膜表面に対し平行に配列し、これらが伸展性の乏しい組織としての特徴を与えている。癒痕の存在が矯正治療における歯の移動を困難にするばかりでなく、治療後の後戻りの大きな要因と考えられる。

実験動物としてラットを用い、実験的骨欠損を作成して口蓋瘢痕を形成させた後に骨延長術を適用する実験系を確立した。本研究は、口唇口蓋裂患者の口腔機能再建の新しい治療法を考える上で極めて意義深いものと思われる。
社会的相互交渉による創造的思考の開発

子どもの創造的思考の深まりや広まりは、一つには、自分の既有の視点や考えとは異なる問題状況に遭遇し、そこに生じる認知的葛藤を克服していく連続的な自己内対話の努力の中で、いま一つは、自分の視点や考えとは異なる他者との間に生じる認知的葛藤を克服する他者間対話に中で育まれていく。が、ある問題解決に向って同じ様な知識や経験を持つ者あるいは異なる知識や経験を持つ者が複数で一つの課題を共有し、相互に考え、行動していく社会的相互交渉事態の中には、この自己内対話や他者間対話を必然的引き起こす認知的葛藤状況が含まれている。本研究ではこの点に注目し、社会的相互交渉(SI)を体験すことによって、子どもの中にどのような手続き的知識の改善や“自己一他者"視点の分化・獲得が見られるかという観点から、創造的思考を育む認知的要因や条件を解明し、モデル開発を行なうことを目的とした。初年度においては、視点の広がりや思考の深まりにとってSI体験が重様であるとする従来の知見や理論を概観し、その中でも特に認知発達の社会的起源を強調する理論を、知的構成理論、社会的話理論、社会的学習理論、社会的葛藤理論の4つの立場に分類し、各立場の理論的位置付けを行い、将来の展望と課題について考察した。この考察を踏まえ、実験1では、SI体験の過程分析や内容分析を試みた。2年目においては、実験1の結果を踏まえ、積極的に自己内対話や他者間対話を行わせる条件を設定した時に、子どものモニタリングにどのような改善が見られるか、またその結果として、視点や思考の広まりや深まりにどんな変化が見られるかを分析した(実験2)。その結果、(1)SIを体験することによって、課題解決に必要な手続き的知識の改善のみでなく、創造的認識の基底として機能するのに必要不可欠な“自己ー他者"視点の分化・獲得にも改善が見られる。(2)手続き的知識の改善や“自己ー他者"視点の分析・獲得の水準は、どのようなSI体験をしたか、その体験内容に依存する。つまり、絶え間ない他者間対話を体験する中で、自己の視点への拘りを離れ、他者の視点との違いに気づき、その両者を一つの観点から統合するような認知的葛藤を多く体験した者ほど、著しい改善を示す。(3)全体をモニタ-する役割を取る人が出現するSI形態の中での改善が著しいが、集団全体のパフォ-マンスが上昇するSI形態と個人の知識が改善されるSI形態は必ずしも同じではない。むしろ両者の間には、逆の関係が見られる。(4)創造的思考の深まりは、“自己視点への拘り"ー“自己視点から脱却、他者視点への気づき"ー“他者視点の取り込み"ー“協応的モニタリングの誕生"という四つの位相を継時的に体験する中で育まれる。(5)創造的な思考を育むためには、自己の考え方や視点を単に対象化(外在化)させるのみでなく、その対象化した視点や考え方に再び働きかけるといった再帰的な学びの姿勢作が大切である、(6)またその再帰的な学びの姿勢は、子どもの頭の中に閉じた認識の世界ではなく、具体的な動きの世界(開かれた認知系)でより精緻化されていくことが分った。

(3)全体をモニタ-する役割を取る人が出現するSI形態の中での改善が著しいが、集団全体のパフォ-マンスが上昇するSI形態と個人の知識が改善されるSI形態は必ずしも同じではない。むしろ両者の間には、逆の関係が見られる。(4)創造的思考の深まりは、“自己視点への拘り"ー“自己視点から脱却、他者視点への気づき"ー“他者視点の取り込み"ー“協応的モニタリングの誕生"という四つの位相を継時的に体験する中で育まれる。(5)創造的な思考を育むためには、自己の考え方や視点を単に対象化(外在化)させるのみでなく、その対象化した視点や考え方に再び働きかけるといった再帰的な学びの姿勢作が大切である、(6)またその再帰的な学びの姿勢は、子どもの頭の中に閉じた認識の世界ではなく、具体的な動きの世界(開かれた認知系)でより精緻化されていくことが分った。本研究の目的は、認知的葛藤を引き起こすような社会的相互交渉による問題解決状況を設定し、そこでの各自の感情、信念、パ-ソナリティ-論理的諸側面への認知論的アプロ-チを試みる中で、状況判断や注意集中および自己統制能力の欠如に関する要因を同定し、問題の発見ー治療ー訓練ー再教育という有機的連関のもとに、創造的人間の育成ないしは創造的思考の開発モデルを構築し、それに基づき、教育体制への一つの提案を行うことである。そのために、本年度は、まず第一に、社会的相互交渉や集団討議場面での視点の切換えや矛盾葛藤を訓練、体験させる中で、創造的・独創造な思考の深まり、高まりに関与する要因を分析、同定すると同時に、相互交渉やディスカッションの展開位相を導入、展開結末といった3位相に分けた時に、各位相ではどのような認知的技能が特に重要であるかの特定化を計った。その結果、導入では、(1)自分の意見の確立、(2)相手の意見の確認や取り入れ、(3)問題の明確化;展開では、(1)場の活性化、(2)矛盾の克服、(3)視点の切換え、結末では、(1)双方の意見の一致化、(2)情報間の精緻化といった認知的因子が抽出された。第二に、各被験者の各位相に対するメタ認知的知識を診断、分析すると同時に、メタ認知的知識の水準の差異によって問題状況への関係の取り方(関係スタイル)が異なるか、場の発展や展開の仕方がどのように異なるか、さらには視点切換えの柔軟性とどんな関係にあるかを探った。その結果、メタ認知的知識水準と“場の活性化や視点切換えの柔軟性"との間には正の相関があることがわかった。子どもの創造的思考の深まりや広まりは、一つには、自分の既有の視点や考えとは異なる問題状況に遭遇し、そこに生じる認知的葛藤を克服していく連続的な自己内対話の努力の中で、いま一つは、自分の視点や考えとは異なる他者との間に生じる認知的葛藤を克服する他者間対話の中で育まれていく。が、ある問題解決に向って同じ様な知識や経験を持つ者あるいは異なる知識や経験を持つ者が複数で一つの課題を共有し、相互に考え、行動していく社会的相互交渉事態の中には、この自己内対話や他者間対話を必然的引き起こす認知的葛藤状況が含まれている。本研究ではこの点に注目し、社会的相互交渉(SI)を体験することによって、子どもの中にどのような手続き的知識の改善や“自己ー他者"視点の分化・獲得が見られるかという観点から、創造的思考を育む認知的要因や条件を解明し、モデル開発を行なうことを目的とした。その結果、(1)SIを体験することによって、課題解決に必要な手続き的知識の改善のみでなく、創造的認識の基底として機能するのに必要不可欠な“自己ー他者"視点の分化・獲得にも改善が見られる。
イシマキガイ消化管の耐熱性溶血毒産生性腸炎ビブリオ定着因子に関する研究

耐熱性溶血毒(TDH)産生性腸炎ビブリオをイシマキガイに経口投与した時の、イシマキガイ消化管の細胞性応答を走査型電子顕微鏡で観察するとともに、亜熱帯地域に属する沖縄の汽水域におけるアマオブネガイ科腹足類の分布、沖縄産の腹足類と甲殻類のTDH産生菌の保有状況を調査した。〔腹足類の分布状況〕沖縄本島北部の河川の汽水域でアマオブネガイ科腹足類の分布を調査した結果、イシマキガイは本島南部には分布しないこと、本島北部の河川の汽水域にはカノコガイ、イガカノコ、ドングリカノコ、フネアマガイ等が分布しており、イシマキガイはこれらの腹足類の分布域よりも上流の淡水域に分布していることが判明した。このことから、この地域ではイシマキガイよりも、汽水域に分布する上記4種類の腹足類が腸炎ビブリオのレゼルボアとなりうる可能性が高いと考えられる。〔TDH産生菌の分布調査〕沖縄本島北部の河川の汽水域でアマオブネガイ科腹足類を採取し、PCR法でTDH産生菌の検出を行った。しかし、TDH産生菌は検出されなかった。一方、三重県の宮川および五十鈴川で採取したイシマキガイからは各々2.1×10^5/gおよび3.0/gのTDH産生菌が検出された。〔イシマキガイ消化管へのTDH産生菌の定着〕TDH産生性腸炎ビブリオD3株を経口投与したイシマキガイ稚貝を20‰人工海水中で飼育した。経時的に貝を取り出して消化管を摘出し、固定・金蒸着を行った後、走査型電子顕微鏡で消化管粘膜の表面を観察した。その結果、消化管下部で血液細胞の遊出像が認められたが、菌の定着像は認められなかった。菌の定着部位については、さらに解析が必要である。イシマキガイはこれまでに明らかになっている耐熱性溶血毒(TDH)産生性腸炎ビブリオの唯一のレゼルボアである。しかし、本貝の消化管へのTDH産生菌の定着機構は明らかになっていない。さらに、熱帯・亜熱帯地域におけるTDH産生菌のゼルボアも明らかになっていない。そこで本年度はTDH産生菌の経口投与にともなうイシマキガイ消化管の細菌性応答を走査型電子顕微鏡で観察するとともに、亜熱帯地域に属する沖縄の汽水域におけるアマオブネガイ科巻貝類の分布調査を行った。沖縄本島の河川の汽水域でアマオブネガイ科巻貝類の分布調査を行った。その結果、イシマキガイは本島南部には分布しないこと、本島北部の満名川、我部祖河川、辺野喜川、福地川、有銘川に多数生息することが判明した。この地域にはイガカノコ、フネアマガイ等も分布しており、特に、フネアマガイは大川川と与那川で個体数が多いことから、腸炎ビブリオのレゼルボアである可能性が高い。イシマキガイとアマオブネにTDH産生性腸炎ビブリオD3株を経口投与した後、イシマキガイは20‰人工海水、アマオブネは35%人工海水中で飼育した。その結果、アマオブネの消化管下部で多数の血液細胞の遊出像が認められたが、イシマキガイの成貝では血液細胞の遊出像が稀にしか認められず、イシマキガイ稚貝では血液細胞の遊出像は全く認められなかった。この成績から、アマオブネは消化

管内の腸炎ビブリオを異物と認識しているが、イシマキガイ稚貝は消化管内の腸炎ビブリオを異物と認識していないと思われる。このことが、イシマキガイとアマオブネの消化管内における腸炎ビブリオの定着の可否につながっていると結論づけられる。耐熱性溶血毒(TDH)産生性腸炎ビブリオをイシマキガイに経口投与した時の、イシマキガイ消化管の細胞性応答を走査型電子顕微鏡で観察するとともに、亜熱帯地域に属する沖縄の汽水域におけるアマオブネガイ科腹足類の分布、沖縄産の腹足類と甲殻類のTDH産生菌の保育状況を調査した。〔腹足類の分布調査〕沖縄本島北部の河川の汽水域でアマオブネガイ科腹足類の分布を調査した結果、イシマキガイは本島南部には分布しないこと、本島北部の河川の汽水域にはカノコガイ、イガカノコ、ドングリカノコ、フネアマガイ等が分布しており、イシマキガイはこれらの腹足類の分布域よりも上流の淡水域に分布していることが判明した。このことから、この地域ではイシマキガイよりも、汽水域に分布する上記4種類の腹足類が腸炎ビブリオのレゼルボアとなりうる可能性が高いと考えられる。〔TDH産生菌の分布調査〕沖縄本島北部の河川の汽水域でアマオブネガイ科腹足類を採取し、PCR法でTDH産生菌の検出を行った。しかし、TDH産生菌は検出されなかった。一方、三重県の宮川および五十鈴川で採取したイシマキガイからは各々2.1×10^5/gおよび3.0/gのTDH産生菌が検出された。〔イシマキガイ消化管へのTDH産生菌の定着〕TDH産性腸生炎ビブリオD3株を経口投与したイシマキガイ稚貝を20%人工海水中で飼育した。経時的に貝を取り出して消化管を摘出し、固定・金蒸着を行った後、走査型電子顕微鏡で消化管粘膜の表面を観察した。その結果、消化管下部で血液細胞の遊出像が認められたが、菌の定着像は認められなかった。菌の定着部位については、さらに解析が必要である。
移植筋構成蛋白の解析による神経切断後中枢側神経変性に関する研究

神経切断後中枢側神経変性を解析する前段階として,ラット下腿骨格筋(ひらめ筋,長指伸筋)の神経を切断し,同一の神経を再吻合して,自己神経で骨格筋を再支配させ,その筋構成蛋白をピロ燐酸ポリアクリルアミドゲル電気泳動法およびそのデンシトグラムよりミオシンアイソフォームの分析を行った.その結果,1)自己神経再支配筋では,脱神経筋と異なり泳動上のバンドの濃度低下は認められなかった.2)基本的にひらめ筋では,SM,長指伸筋ではFM/IMが優位であった.3)神経再支配の途上でひらめ筋,長指伸筋ともにSMが有意に増加した.4)術後24週のSM含有率は術前と比較してひらめ筋で増加,長指伸筋で減少した.自己神経再支配モデルにおいて一過性に見られるSMの増加は,神経再支配が開始されていることを示す所見として意義がある.異所性に筋肉を移植した場合には,支配神経や緊張性が変化するため,この所見のみで神経支配の成否を論じることは難しいが,外傷や手術などにより支配神経が切断された症例でこれが一期的に再縫合を受けた場合,術後にSMが増加すれば順調に神経再支配が開始されており,逆に泳動上の濃度が低下してFM/IMは優位になれば神経縫合部に何らかの障害が存在する可能性を示唆する.したがって,このような術後のSMの一過性の増加は,神経縫合を施行された症例において,術後神経再支配の成否を判定する指標として臨床的にも十分に応用可能であると考えられた.神経切断後中枢側神経変性を解析する前段階として,ラット下腿骨格筋(ひらめ筋,長指伸筋)の神経を切断し,同一の神経を再吻合して,自己神経で骨格筋を再支配させ,その筋構成蛋白をピロ燐酸ポリアクリルアミドゲル電気泳動法およびそのデンシトグラムよりミオシンアイソフォームの分析を行った.その結果,1)自己神経再支配筋では,脱神経筋と異なり泳動上のバンドの濃度低下は認められなかった.2)基本的にひらめ筋では,SM,長指伸筋ではFM/IMが優位であった.3)神経再支配の途上でひらめ筋,長指伸筋ともにSMが有意に増加した.4)術後24週のSM含有率は術前と比較してひらめ筋で増加,長指伸筋で減少した.自己神経再支配モデルにおいて一過性に見られるSMの増加は,神経再支配が開始されていることを示す所見として意義がある.異所性に筋肉を移植した場合には,支配神経や緊張性が変化するため,この所見のみで神経支配の成否を論じることは難しいが,外傷や手術などにより支配神経が切断された症例でこれが一期的に再縫合を受けた場合,術後にSMが増加すれば順調に神経再支配が開始されており,逆に泳動上の濃度が低下してFM/IMは優位になれば神経縫合部に何らかの障害が存在する可能性を示唆する.したがって,このような術後のSMの一過性の増加は,神経縫合を施行された症例において,術後神経再支配の成否を判定する指標として臨床的にも十分に応用可能であると考えられた.
Slant immersionの研究

slant immersionは、従来の「正則部分多様体」「全実多様体」の拡張であり、新しい概念であるから、その一般的な性質を調べることもさることながら、abstruct nonsenseを避けるためにはできる限り多様な実例を構成しておくことが肝要である。筆者ならびにBang-yen Chen教授によりいくつかの例が既に示されていたが、今年度筆者は、さらに組織的に、任意の自然数n,m(2n≦m)に対し2n-cubeからC^mへのslant immersion(C^mのいかなる複素構造に関しても全実にも正則にもならず、余次元が本質的であるもの)の構成方法を示し、その結果を2つの論文に発表した。C^mの中の本質的なslant submanifoldは偶数次元でかつnoncompactであることを考慮すると、これらの構成のもつ意味は大きい。また、近年発展が著しい数学処理のためのコンピュータ・ソフトを活用して、slant immersionの視覚化も試み、その結果をベルギー・カトリック大学における微分幾何会議において発表した(Yoshihiko Tazawa,Construction and visualization of slant immersions,Geometry and Topology of Submanifolds,Belgium 9-14 July,1994)。
DNA障害修復過程におけるアラキドン酸代謝酵素15―リポキシゲナーゼの役割

昨年度、15-リポキシゲナーゼの白血病細胞におけるタンパク質発現を調べている課程で、我々は23kDaのタンパク質が、X線や紫外線の照射後数時間以内に発現上昇してくることを見出した。そして、15-リポキシゲナーゼの別のエピトープを認識する抗体では、このタンパク質の発現が検出できないことなどから、15-リポキシゲナーゼとは別のタンパク質である可能性が高いと考えた。本年度、この23kDaのタンパク質が何かを同定するために、TOF-MAS解析、タンパク質内部配列分析を行った。その結果、23kDaのタンパク質は、p54^<nrb>(nuclear RNA-binding protein,54kDa)タンパク質が切断されたN末の部分ではないかと考えられた。よって、RT-PCR法を用いてp54^<nrb>のmRNAの発現を調べた。また、p54^<nrb>のN末のエピトープを認識する抗体を作製し、23kDaのタンパク質の発現を検出する事を確認した。よって、このタンパク質はp54^<nrb>のN末部分であると同定した。アラキドン酸の直下に位置する4つの酵素、5-Lipoxygenase、12-Lipoxygenase、15-LipoxygenaseおよびCycolooxygenasは、それより下流にある代謝産物の生成を制御する酵素として重要な役割を果たしている。最近、この4つの酵素が悪性腫瘍の増殖に深く関与しているらしいことが報告された。これらの結果は、細胞増殖抑制ならびに細胞死に関して、15-LOXが何らかの重要な役割を果たしている可能性を示している。平成13年度はDNA障害を惹起する(1)電離放射線(2)紫外線および(3)化学療法剤の刺激に対し、15-LOXのa)mRNAレベルb)蛋白質レベルc)15-LOXによる代謝産物である15-HRETE並びに15(s)-HETEの変化を解析し、DNA障害と15-LOX活性化との相関を調べることに目標を置いた。15-リポキシゲナーゼの白血病細胞における蛋白発現を調べている過程で、我々は23kDaの蛋白質がX線や紫外線の照射後数時間以内に発現上昇してくることを見い出した。この蛋白はHL60細胞では放射線照射後約3時間後までに、U937細胞では照射後6時間後までに発現誘導された。また、15-リポキシゲナーゼの別のエピトープを認識する抗体ではこの蛋白の発現が検出できないことなどから、15-リポキシゲナーゼとは別の蛋白である可能性が高いと考えた。現在我々はこの蛋白質の同定と機能解析を進めているが、現時点までに知り得た情報は以下の如くである。1)少なくともU937、ならびにHL-60でX線、あるいは紫外線照射後6時間以内にこの蛋白質は発現誘導されること。2)TOF-MAS解析により、この蛋白質はセリン/スレオニンキナーゼとしてのアミノ酸配列を有していること。